(57)【要約】  本明細書中で、動物においてＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低下させるための、方法、化合物及び組成物が提供される。このような方法、化合物及び組成物は、代謝性疾患、例えば糖尿病又はその症状を処置するか、予防するか、遅延させるか又は改善するために有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号４〜５６のいずれか１つの少なくとも８個の連続核酸塩基部分を備える核酸塩基配列を有する１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１と少なくとも９０％相補性である、化合物。
【請求項２】
１２から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６、６、７、１０、１１、３３、３５、３９、４２、又は４３の内のいずれか１つの少なくとも８個の核酸塩基部分を備える核酸塩基配列を有する１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも９０％相補的である、化合物。
【請求項３】
配列番号１の核酸塩基５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２９〜７６２４８、７６２５５〜７６２７４又は９５５１３〜９５５３２の核酸塩基の等長部分に相補的な少なくとも８個の核酸塩基部分を備える核酸塩基配列を有する１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１と少なくとも９０％相補的である、化合物。
【請求項４】
１本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる、請求項１、２、又は３に記載の化合物。
【請求項５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１と少なくとも９５％相補的である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項６】
前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１と少なくとも９６％相補的である、請求項１、２又は３に記載の化合物。
【請求項７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１と少なくとも９７％相補的である、請求項１、２、又は３に記載の化合物。
【請求項８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１と少なくとも９８％相補的である、請求項１、２又は３に記載の化合物。
【請求項９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１と少なくとも９９％相補的である、請求項１、２、又は３に記載の化合物。
【請求項１０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１と少なくとも１００％相補的である、請求項１、２、又は３に記載の化合物。
【請求項１１】
少なくとも１個のヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオシドが修飾糖を備える、請求項１から１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記少なくとも１個の修飾糖が二環性糖である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記少なくとも１個の二環性糖のそれぞれが、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’又は４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’基を備える、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記少なくとも1個の二環性糖のそれぞれが、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を備える、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
少なくとも１個の修飾糖が、２’−Ｏ−メトキシエチル基を備える、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１８】
少なくとも１個のヌクレオシドが修飾核酸塩基を備える、請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記修飾核酸塩基が、５−メチルシトシンである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、：
連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を備え、
前記ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾糖を備える、
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を備え、
前記ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を備える、
請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１３個の連結デオキシヌクレオチドからなるギャップセグメントと、
２個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を備え、
前記ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を備える、
請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１４個の連結デオキシヌクレオチドからなるギャップセグメントと、
３個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
３個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を備え、
前記ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を備える、
請求項２０に記載の化合物。
【請求項２４】
各ウイングセグメントが、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１４から２５個の連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２６】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１７から２１個の連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１８から２１個の連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、２０個の連結ヌクレオシドからなる、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、又は４３の核酸塩基配列いずれからなる、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
配列番号３６の核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、
前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を備え、
前記ギャップセグメントが、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、
各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、
前記修飾オリゴヌクレオチドの各シトシン残基が５−メチルシトシンである、
化合物。
【請求項３１】
請求項１〜３０に記載の化合物又はその塩のうちのいずれか１つの化合物、及び薬学的に許容可能な担体もしくは希釈剤の内の少なくとも１つを含む、組成物。
【請求項３２】
請求項１〜３１に記載の化合物又は組成物のいずれか１つを、動物に投与することを含む方法。
【請求項３３】
前記動物がヒトである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物を投与することが、代謝性疾患又は状態の進行を、予防するか、処置するか、改善するか又は遅延させる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記疾患又は状態が糖尿病である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記疾患又は状態が２型糖尿病である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
動物において血糖値を低下させる方法であって、請求項１に記載の化合物を前記動物に投与することを備える、方法。
【請求項３８】
前記動物がヒトである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記血糖値が血漿グルコース値又は血清グルコース値である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記動物が糖尿病の動物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
動物においてＧＣＣＲが関連する疾患又は状態の発症を予防、回復又は遅延させる方法であって、治療的又は予防的有効量の請求項１〜３１のいずれか１項に記載の化合物又は組成物を前記動物に投与することを備える、方法。
【請求項４２】
前記動物がヒトである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患が代謝性疾患である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患又は状態が糖尿病である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記疾患又は状態が２型糖尿病である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
動物において血糖値上昇を低下させる方法であって、治療的又は予防的有効量の請求項１〜３１のいずれか１項に記載の化合物又は組成物を前記動物に投与することを備える、方法。
【請求項４７】
前記動物がヒトである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記血糖値が血漿グルコース値又は血清グルコース値である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記動物が糖尿病の動物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記化合物又は組成物及び第二の薬剤を同時投与することを備える、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記第二の薬剤が血糖降下剤である、請求項５０に記載の方法
【請求項５２】
前記化合物又は組成物及び前記第二の薬剤が併用投与される、請求項５１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列リスト
本願は、電子化された配列表とともに提出されている。本配列表は、３９３Ｋｂサイズであり、２０１２年９月１９日作成のＢＩＯＬ０１５９ＷＯＳＥＱ．ｔｘｔという名称のファイルとして提供される。本配列表の電子化情報はその全体において参照により本明細書中に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本明細書中で、動物においてＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低下させるための、方法、化合物及び組成物が提供される。このような方法、化合物及び組成物は、例えば、代謝性障害と関連する疾患、特に糖尿病と関連する障害を、処置するか、予防するか、遅延させるか又は改善するために有用である。
【背景技術】
【０００３】
糖尿病は、インスリン分泌不全及び／又は作用不全により特徴付けられる慢性の代謝性障害である。２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）では、インスリン抵抗性により、インスリンが糖新生の酵素の活性を制御できなくなり、多くの対象はまた、飢餓状態及び食後状態において不適切なレベルの循環グルカゴン（ＧＣ）を示す。グルカゴンは膵島のα−細胞から分泌され、肝臓グルコース産生の調整を通じてグルコースホメオスタシスを制御する（Ｑｕｅｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００８．１９９：５−１９）。
【０００４】
グルカゴンは、グルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）の活性化を介して標的組織においてその作用を発揮する。グルココルチコイド受容体は、受容体のクラスＢ  Ｇ−タンパク質共役ファミリーのメンバーである６２ｋＤａタンパク質である（Ｂｒｕｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｃｅｐｔ．Ｃｈａｎｎｅｌｓ．２００２．８：１７９−８８。ＧＣＣＲ活性化は、Ｇタンパク質（Ｇｓα及びＧｑ）によるシグナル伝達へと導き、それによりＧｓαはアデニル酸シクラーゼを活性化し、これがｃＡＭＰ産生を引き起こし、その結果、タンパク質キナーゼＡのレベルが上昇する。肝臓でのＧＣＣＲシグナル伝達の結果、グリコーゲン生成の阻害とともにグリコーゲン分解及び糖新生の誘導によって肝臓グルコース産生が増加する（Ｊｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  ２００３．  ２８４：  Ｅ６７１−Ｅ６７８。ＧＣＣＲはまた、心臓、腸管平滑筋、腎臓、脳及び脂肪組織を含む肝外の組織でも発現される（Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．  １９９５．  １６：  １１６３−１１６６）。
【０００５】
ＧＣＣＲ阻害剤の開発は、視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸の活性化を含む、全身性ＧＣＣＲの阻害に関連した望ましくない副作用により妨げられている。脳のＧＣＣＲ活性の阻害は、副腎皮質ステロイドの分泌物のフィードバック制御および結果としての増加により、副腎皮質刺激ホルモンの循環の増加を引き起こす可能性がある（Ｐｈｉｌｉｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｒｏｎｔ．  Ｈｏｒｍ．  Ｒｅｓ．  １９９１．  １９：  １−１７）。副腎皮質刺激ホルモンの循環の増加は、次いで、無数の慢性ステロイド関連の負の副作用をもたらし得る。他の研究では、ＧＣＣＲの特異不活性化により飢餓状態を延長させると低血糖となることが実証されている（Ｏｐｈｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｏｎｏｌ．２００４．１８：１３４６−１３５３）。
【０００６】
前臨床モデルにおいて、以前から、ＧＣＣＲアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与により、ＣＮＳまたは副腎におけるＧＣＣＲ  ｍＲＮＡのレベルに影響を与えることなく、肝臓および脂肪性組織中での組織に特異的な蓄積ならびにＧＣＣＲ発現の低減といった結果となることが実証されている（国際公開番号第２００５／０７１０８０号；  国際公開番号第２００７／０３５７５９号）。したがって、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ発現のアンチセンス阻害は、ＨＰＡ軸を活性化することなく、高血糖および高脂血症を改善することが示されてきた。本発明は、ＧＣＣＲ発現を調整する組成物および方法を提供する。ＧＣＣＲ発現を調整するためのアンチセンス化合物は、上述の公開特許公報に開示されている。しかしながら、さらに化合物を改善し続ける必要がある。本明細書に記載した化合物および処置方法は、ＧＣＣＲ関連障害に現在利用可能な処置の選択に関して有意な利点を提供する。
【０００７】
特許、特許出願、論文、書籍及び契約書を含むが限定されない、本願で引用される全文書又は文書の一部は、本明細書中で論じられる文書の一部に対して、ならびにそれらの全体において、参照により明確に本明細書によって組み込まれる。
【発明の概要】
【０００８】
本明細書中で、ＧＣＣＲの発現を調整し、代謝性障害に関連する疾患、特に糖尿病と関連する障害及び／又はその症状を、処置するか、予防するか、遅延させるか又は改善するための、方法、化合物及び組成物が提供される。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
詳細な説明
前述の全般的な説明及び次の詳細な説明は両方とも、例示的及び説明的なものに過ぎず、主張されるとおり、本明細書中に記載の制限となるものではないことを理解されたい。本明細書中で単数形の使用は、別段の具体的な断りがない限り、複数形を含む。本明細書中で使用される場合、「又は」の使用は、別段の断りがない限り、「及び／又は」を意味する。さらに、「含むこと」ならびに他の形態、例えば「含む」及び「含まれる」という用語の使用は限定ではない。また、具体的に別段の断りがない限り、「エレメント」又は「構成要素」などの用語は、１単位を備えるエレメント及び構成要素ならびに複数のサブユニットを備えるエレメント及び構成要素の両方を包含する。
【００１０】
本明細書中で使用されるセクション見出しは、構成的な目的のためであり、記載される主題を限定するものと解釈されるものではない。特許、特許出願、論文、書籍及び契約書を含むが限定されない、本願で引用される全文書又は文書の一部は、本明細書中で論じられる文書の一部に対して、ならびにそれらの全体において、参照により明確に本明細書によって組み込まれる。
【００１１】
定義
具体的な定めが与えられない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学及び薬剤及び薬化学に関して使用される命名法及びこれらの手順及び技術は、周知のものであり、当技術分野で一般的に使用されるものである。化学合成及び化学分析に対しては、標準的な技術が使用され得る。認められる場合、全特許、出願文書、公開出願及び他のジャーナル刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号及びＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）などのデータベースを通じて得ることができる関連配列情報及び本明細書中の開示を通じて参照される他のデータを含むが限定されない、本願で引用される全文書又は文書の一部は、本明細書中で論じられる文書の一部に対してならびにそれらの全体において、参照により組み込まれる。
【００１２】
別段の断りがない限り、次の用語は次の意味を有する：
【００１３】
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３でもある）は、フロシル環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は修飾糖である。
【００１４】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖部分を備えるヌクレオチドを意味する。
【００１５】
「３’標的部位」は、特定のアンチセンス化合物の３’−モストヌクレオチドに相補的である標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００１６】
「５’標的部位」は、特定のアンチセンス化合物の５’−モストヌクレオチドに相補的である標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００１７】
「５−メチルシトシン」は、５’位に連結されるメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは修飾核酸塩基である。
【００１８】
「約」は、ある値の±１０％以内を意味する。例えば、「マーカーが約５０％上昇し得る」ことが述べられる場合、そのマーカーが４５％から５５％上昇し得ることが示唆される。
【００１９】
「活性医薬剤」は、個体に投与された場合に治療的有益性を提供する医薬組成物中の物質を意味する。例えば、ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲに対して標的化されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、活性医薬剤である。
【００２０】
「活性標的領域」又は「標的領域」は、１以上の活性アンチセンス化合物が標的化される領域を意味する。「活性アンチセンス化合物」は、標的核酸レベル又はタンパク質レベルを低下させるアンチセンス化合物を意味する。
【００２１】
「脂肪症」又は「肥満」は、肥満しているか又は除脂肪量に対して体脂肪又は脂肪組織が過剰に高い量である状態を指す。体脂肪量は、身体全体の脂肪分布及び脂肪組織沈着の大きさ及び質量の両方に対する関心を含む。体脂肪分布は、皮下脂肪測定、ウエスト−ヒップ周囲比又は超音波、コンピューター断層撮影もしくは磁気共鳴イメージングなどの技術によって推定され得る。米国疾病管理予防センターによれば、ボディー・マス・インデックス（ＢＭＩ）が３０以上である者は肥満とみなされる。「肥満」という用語は、本明細書中で使用される場合、身体における脂肪組織の過剰な蓄積の結果として生理的要求を超えた体脂肪増加がある状態を含む。「肥満」という用語は、次の状態：成人発症肥満；食事性肥満；内因性又は炎症性肥満；内分泌肥満；家族性肥満；過剰インスリン性肥満；過形成−肥厚性肥満；性腺機能低下肥満；甲状腺機能低下症性肥満；終生肥満；病的肥満及び外因性肥満を含むが、これらに限定されない。
【００２２】
「併用投与される」は、２種類の薬剤療法の薬理学的効果が同時に患者において現れる何らかの方式での２種類の薬剤の同時投与を指す。併用投与は、両薬剤が単一の医薬組成物中で、同じ剤形で、又は同じ投与経路により投与されることを必要としない。両薬剤の効果は、それ自身同時に現れる必要はない。この効果は、しばらく重複することのみ必要であり、同時に存在する必要はない。
【００２３】
「投与すること」は、動物に薬剤を提供することを意味し、医療専門家による投与及び自己投与を含むがこれらに限定されない。
【００２４】
「薬剤」は、動物に投与された場合に治療的有益性を提供し得る活性物質を意味する。「第一の薬剤」は、本明細書中で提供される治療用化合物を意味する。例えば第一の薬剤は、ＧＣＣＲを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。「第二の薬剤」は、本明細書中に記載の第二の治療用化合物（例えばＧＣＣＲを標的とする第二のアンチセンスオリゴヌクレオチド）及び／又は非ＧＣＣＲ治療用化合物を意味する。
【００２５】
「改善」は、関連疾患、障害又は状態の少なくとも１つの指標、兆候又は症状の緩和を指す。指標の重症度は当業者にとって公知である自覚的又は他覚的尺度によって決定され得る。
【００２６】
「動物」は、ヒト、又は、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ及び、サル及びチンパンジーを含むが限定されない非ヒト霊長類を含むが限定されない、非ヒト動物を指す。
【００２７】
「アンチセンス活性」は、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリッド形成に起因する何らかの検出可能な又は測定可能な活性を指す。ある一定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸又はこのような標的核酸によりコードされるタンパク質の量又は発現の低下である。
【００２８】
「アンチセンス化合物」は、水素結合を通じて標的核酸とハイブリッド形成することが可能なオリゴマー性化合物を意味する。
【００２９】
「アンチセンス阻害」は、アンチセンス化合物の非存在下での標的核酸レベル又は標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物存在下での標的核酸レベル又は標的タンパク質レベルの低下を意味する。
【００３０】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の対応する領域又はセグメントに対するハイブリッド形成を可能にする核酸塩基配列を有する１本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
【００３１】
「二環性糖」は、２個の非ジェミナル環原子の架橋によって修飾されたフロシル環を意味する。二環性糖は修飾糖である。
【００３２】
「二環性核酸」又は「ＢＮＡ」は、ヌクレオシド又はヌクレオチドを指し、ここでヌクレオシド又はヌクレオチドのフラノース部分は、フラノース環上の２個の炭素原子を連結し、それによって二環式環系を形成する架橋を含む。
【００３３】
「キャップ構造」又は「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物の何れかの末端で組み込まれている化学修飾を意味する。
【００３４】
「化学的に別個の領域」は、同じアンチセンス化合物の別の領域と何らかの形で化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾がないヌクレオチドを有する領域と化学的に別個である。
【００３５】
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも２つの化学的に別個の領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
【００３６】
「同時投与」は、個体への２以上の薬剤の投与を意味する。この２以上の薬剤は、単一医薬組成物中であってもよいし、又は個別の医薬組成物中であってもよい。この２以上の薬剤のそれぞれは、同じか又は異なる投与経路を通じて投与され得る。同時投与は、並行又は連続投与を包含する。
【００３７】
「コレステロール」は、全動物組織の細胞膜で見出されるステロール分子である。コレステロールは、動物の血漿中で、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を含むリポタンパク質を通じて輸送されなければならない。「血漿コレステロール」は、血漿又は血清中に存在するエステル化及び／又は非エステル化コレステロールの全リポタンパク質（ＶＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）の合計を指す。
【００３８】
「相補性」は、第一の核酸の核酸塩基と第二の核酸の核酸塩基との間の対形成能を意味する。
【００３９】
「連続核酸塩基」は、互いにすぐ隣接する核酸塩基を意味する。
【００４０】
「デオキシリボヌクレオチド」は、ヌクレオチドの糖部分の２’位に水素を有するヌクレオチドを意味する。デオキシリボヌクレオチドは、何らかの様々な置換基で修飾され得る。
【００４１】
「真性糖尿病」又は「糖尿病」は、病的な代謝及びインスリンレベルが不十分であるか又はインスリン感受性低下の結果起こる、異常に高い血糖（高血糖）を特徴とする症候群である。特徴的な症状は、高血糖値ゆえの過剰な尿産生（多尿）、尿量増加を代償しようとする過剰な喉の渇き及び液体摂取増加（多飲症）、眼の視覚に対する高血糖の影響による視力障害、原因不明の体重減少及び昏睡である。
【００４２】
「糖尿病の脂質異常症」又は「脂質異常症のある２型糖尿病」は、２型糖尿病、、ならびに、一般的にはコレステロールおよびトリグリセリドなどの脂質上昇および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）などのリポタンパク質、および小型高密度ＬＤＬ粒子の増加を特徴とする状態を意味する。このような状態は、減少したＨＤＬ−Ｃにより特徴付けられても良い。
【００４３】
「希釈剤」は、薬理学的活性を欠くが、医薬的に必要であるか又は所望される、組成物中の成分を意味する。例えば注射される組成物中の希釈剤は液体、例えば食塩水溶液であり得る。
【００４４】
「脂質異常症」は、脂質及び／又はリポタンパク質過剰産生又は欠乏を含む脂質及び／又はリポタンパク質代謝の障害を指す。脂質異常症は、コレステロール及びトリグリセリドなどの脂質ならびに低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールなどのリポタンパク質の上昇により明らかになり得る。
【００４５】
「投与単位」は、医薬剤が提供される形態、例えば丸剤、錠剤又は当技術分野で公知の他の投与単位を意味する。ある一定の実施形態において、投与単位は、凍結乾燥アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。ある一定の実施形態において、投与単位は、再構成アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【００４６】
「用量」は、１回の投与又は指定の時間中に提供される医薬剤の指定の量を意味する。ある一定の実施形態において、１、２以上のボーラス、錠剤又は注射において用量が投与され得る。例えば皮下投与が所望されるある一定の実施形態において、所望の用量は、単回注射により容易に対応され得ない体積を必要とし、従って所望の用量を達成するために２回以上の注射が使用され得る。ある一定の実施形態において、長時間にわたるか又は連続的な点滴によって医薬剤が投与される。用量は、時間、日、週又は月あたりの医薬剤の量として表され得る。
【００４７】
「有効量」又は「治療的有効量」は、その薬剤を必要とする個体において所望の生理学的結果を達成するのに十分である活性医薬剤の量を意味する。有効量は、処置しようとする個体の健康及び身体状態、処置しようとする個体の分類群、組成物の処方、個体の医学的状態の評価及び他の関連因子に依存して個体間で変動し得る。
【００４８】
「完全に相補的」又は「１００％相補性」は、第一の核酸の核酸塩基配列の各核酸塩基が第二の核酸の第二の核酸塩基配列において相補的核酸塩基を有することを意味する。ある一定の実施形態において、第一の核酸はアンチセンス化合物であり、標的核酸は第二の核酸である。
【００４９】
「ギャップマー」は、ＲＮａｓｅＨ切断をサポートする複数のヌクレオシドを有する内部領域が１以上のヌクレオシドを有する外部領域間に位置するキメラアンチセンス化合物を意味し、ここで内部領域を備えるヌクレオシドは、外部領域を備えるヌクレオシドと化学的に別個である。内部領域は「ギャップセグメント」と呼ばれ得、外部領域は「ウイングセグメント」と呼ばれ得る。
【００５０】
「ギャップ拡大」は、キメラアンチセンス化合物が、１から６個のヌクレオシドを有する５’及び３’ウイングセグメント間に置かれ、それらに直接隣接する１２以上の連続的な２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有することを意味する。
【００５１】
「グルココルチコイド受容体」又は「ＧＣＣＲ」は、ＧＣＣＲの何らかの核酸又はタンパク質を意味する。
【００５２】
「ＧＣＣＲ発現」は、ＧＣＣＲをコードする遺伝子から転写されるｍＲＮＡのレベル又はｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質のレベルを意味する。ＧＣＣＲ発現は、ノザン又はウエスタンブロットなどの当技術分野で公知の方法によって決定され得る。
【００５３】
「ＧＣＣＲ核酸」は、ＧＣＣＲをコードする何らかの核酸を意味する。例えば、ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸は、ＧＣＣＲをコードするＤＮＡ配列、ＧＣＣＲをコードするＤＮＡから転写されるＲＮＡ配列（イントロン及びエクソンを備えるゲノムＤＮＡを含む。）及びＧＣＣＲをコードするｍＲＮＡ配列を含む。「ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ」は、ＧＣＣＲタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【００５４】
「グルコース」は、エネルギー源及び炎症中間体として細胞により使用される単糖である。「血漿グルコース」は、血漿中に存在するグルコースを指す。
【００５５】
「ハイブリッド形成」は、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。ある一定の実施形態において、相補的核酸分子は、アンチセンス化合物及び標的核酸を含む。
【００５６】
「高脂血症」又は「脂質異常症」は、血清脂質又は循環（血漿）脂質の上昇を特徴とする状態である。この状態は、異常に高い濃度の脂肪を示す。循環血液中の脂質分画は、コレステロール、低密度リポタンパク質、超低密度リポタンパク質及びトリグリセリドである。
【００５７】
「高トリグリセリド血症」は、トリグリセリドレベル上昇を特徴とする状態を意味する。
【００５８】
「同定する」又は「代謝疾患の動物を選択すること」は、代謝性疾患又は代謝性障害と診断されている対象を同定もしくは選択すること；又はメタボリックシンドローム、高血糖、高トリグリセリド血症、高血圧によるインスリン抵抗性上昇、インスリン感受性低下、正常値を上回る体重及び／又は正常値を上回る体脂肪又はこれらの何らかの組み合わせを含むがこれらに限定されない、代謝性疾患の何らかの症状を有する対象を同定又は選択することを意味する。このような同定は、標準的な臨床検査又は評価、例えば血清又は循環（血漿）血糖を測定すること、血清又は循環（血漿）トリグリセリドを測定すること、血圧を測定すること、体脂肪を測定すること、体重を測定することなどを含むがこれらに限定されない何らかの方法によって遂行され得る。
【００５９】
「直接隣接した」は、直接隣接したエレメント間に介入エレメントがないことを意味する。
【００６０】
「個体」、「対象」又は「動物」は、処置又は治療に対して選択されるヒト又は非ヒト動物を意味する。
【００６１】
「発現又は活性を阻害する」は、ＲＮＡ又はタンパク質の発現又は活性の低下又は阻止を指し、必ずしも発現又は活性の全消失を示すものではない。
【００６２】
「インスリン抵抗性」は、正常量のインスリンが、脂肪、筋肉及び肝臓細胞からの正常なインスリン応答を生じさせるのに不十分である状態として定義される。脂肪細胞でのインスリン抵抗性の結果、貯蔵トリグリセリドの加水分解が起こり、これが血漿中の遊離脂肪酸を増加させる。筋肉でのインスリン抵抗性は、グルコース取り込みを低下させ、その一方、肝臓でのインスリン抵抗性はグルコース貯蔵を減少させ、両影響とも血糖を上昇させるように働く。インスリン抵抗性によるインスリン及びグルコースの高血漿レベルは、メタボリックシンドローム及び２型糖尿病を誘導することが多い。
【００６３】
「インスリン感受性」は、個体がどれだけ効果的にグルコースを処理するかの尺度である。インスリン感受性が高い個体は、効果的にグルコースを処理するが、一方でインスリン感受性が低い個体はグルコースを効果的に処理しない。
【００６４】
「ヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
【００６５】
「静脈内投与」は、静脈への投与を意味する。
【００６６】
「連結ヌクレオシド」は、一緒に結合される隣接するヌクレオシドを意味する。
【００６７】
「脂質低下療法」又は「脂質低下剤」は、対象において１以上の脂質を減少させるために対象に提供される治療規制を意味する。ある一定の実施形態において、脂質低下療法は、対象においてＡｐｏＢ、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、小型高密度ＬＤＬ粒子及びＬｐ（ａ）の１以上を低下させるために提供される。脂質低下療法の例としては、スタチン、フィブラート及びＭＴＰ阻害剤が挙げられる。
【００６８】
「主要危険因子」は、特定の疾患又は状態に対するハイリスクに関与する因子を指す。ある一定の実施形態において、冠状動脈性心疾患に対する主要危険因子としては、喫煙、高血圧、低ＨＤＬ−Ｃ、冠状動脈性心疾患の家族歴、年齢及び本明細書中で開示される他の因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
「代謝性疾患」又は「代謝性障害」は、代謝機能の変化又は異常を特徴とする状態を指す。「代謝性」及び「代謝」は当技術分野で周知の用語であり、一般に生体内で起こる生化学的過程の範囲全体を含む。代謝性疾患又は障害としては、肥満、糖尿病、高血糖、前糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、糖尿病の脂質異常症もしくは高トリグリセリド血症又はこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
「メタボリックシンドローム」は、代謝性原因の脂質及び非脂質心血管系危険因子の集積を特徴とする状態を意味する。ある一定の実施形態において、メタボリックシンドロームは、次の因子のうち何れか３つの存在により判定される：胴囲が男性で１０２ｃｍ超又は女性で８８ｃｍ超であること；血清トリグリセリドが少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬであること；ＨＤＬ−Ｃが男性で４０ｍｇ／ｄＬ未満、女性で５０ｍｇ／ｄＬ未満であること；血圧が少なくとも１３０／８５ｍｍＨｇであること；及び飢餓状態においてグルコースが少なくとも１１０ｍｇ／ｄＬであること。これらの決定因子は、臨床業務で容易に測定され得る（ＪＡＭＡ，２００１，２８５：２４８６−２４９７）。
【００７１】
「ミスマッチ」又は「非相補的核酸塩基」は、第一の核酸の核酸塩基が第二又は標的核酸の対応する核酸塩基と対形成できない場合を指す。
【００７２】
「混合型脂質異常症」は、コレステロール上昇及びトリグリセリド上昇を特徴とする状態を意味する。
【００７３】
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然のヌクレオシド間結合（即ちホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換又は何らかの変化を指す。
【００７４】
「修飾核酸塩基」は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン又はウラシル以外の何らかの核酸塩基を指す。「未修飾核酸塩基」は、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）ならびにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【００７５】
「修飾ヌクレオシド」は、独立に修飾糖部又は修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【００７６】
「修飾ヌクレオチド」は、独立に修飾糖部、修飾ヌクレオシド間結合又は修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」は、独立に修飾糖部又は修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【００７７】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを備えるオリゴヌクレオチドを意味する。
【００７８】
「修飾糖」は、天然糖からの置換又は変化を指す。
【００７９】
「モチーフ」は、アンチセンス化合物における化学的に別個の領域のパターンを意味する。
【００８０】
「天然のヌクレオシド間結合」は、３’から５’のホスホジエステル結合を意味する。
【００８１】
「天然糖部」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）又はＲＮＡ（２’−ＯＨ）で見出される糖を意味する。
【００８２】
「非アルコール性脂肪肝疾患」又は「ＮＡＦＬＤ」は、過剰なアルコール使用（例えば２０ｇ／日を超えるアルコール摂取）によるものではない肝臓の脂肪炎症を特徴とする状態を意味する。ある一定の実施形態において、ＮＡＦＬＤは、インスリン抵抗性及びメタボリックシンドロームと関連する。ＮＡＦＬＤは、肝細胞における単純なトリグリセリド蓄積（肝臓脂肪症）から炎症を伴う肝臓脂肪症（脂肪性肝炎）、線維症及び肝硬変の範囲の疾患スペクトラムを包含する。
【００８３】
「非アルコール性脂肪性肝炎」（ＮＡＳＨ）は、トリグリセリド沈着を超えるＮＡＦＬＤの進行から起こる。壊死、炎症及び線維症を誘導し得る「セカンドヒット」は、ＮＡＳＨの発生に必要とされる。セカンドヒットに対する候補は、広義のカテゴリー：酸化ストレスの増加を引き起こす因子及び炎症誘発サイトカインの発現を促進する因子、に分類され得る。
【００８４】
「核酸」は、単量体のヌクレオチドから構成される分子を指す。核酸としては、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、１本鎖核酸、二重鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及びミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられる。核酸は、単一分子におけるこれらのエレメントの組み合わせも備え得る。
【００８５】
「核酸塩基」は、別の核酸の塩基と対形成することができる複素環部を意味する。
【００８６】
「核酸塩基配列」は、何らかの糖、結合又は核酸塩基修飾に依存しない、連続核酸塩基の順序を意味する。
【００８７】
「ヌクレオシド」は、糖に連結される核酸塩基を意味する。
【００８８】
「ヌクレオシド模倣物」は、例えば、モルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、二環性又は三環性糖模倣物、例えば非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣物など、オリゴマー性化合物の１以上の位置での、糖又は糖及び塩基を置き換えるために使用され、必ずしも結合を置き換えるために使用される訳ではない、構造を含む。
【００８９】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合されるリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【００９０】
「ヌクレオチド模倣物」は、例えばペプチド核酸又はモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−又は他の非ホスホジエステル結合により連結されるモルホリノ）などのオリゴマー性化合物の１以上の位置でヌクレオシド及び結合を置き換えるために使用される構造を含む。
【００９１】
「オリゴマー性化合物」又は「オリゴマー」は、２以上のサブ構造を備え、核酸分子のある領域とハイブリッド形成可能なポリマー構造を指す。ある一定の実施形態において、オリゴマー性化合物は、オリゴヌクレオシドである。ある一定の実施形態において、オリゴマー性化合物は、オリゴヌクレオチドである。ある一定の実施形態において、オリゴマー性化合物は、アンチセンス化合物である。ある一定の実施形態において、オリゴマー性化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。ある一定の実施形態において、オリゴマー性化合物は、キメラオリゴヌクレオチドである。
【００９２】
「オリゴヌクレオチド」は、それぞれが、互いに独立に修飾され得るか又は非修飾であり得る、連結ヌクレオシドのポリマーを意味する。
【００９３】
「非経口投与」は、注射又は点滴を通じた投与を意味する。非経口投与としては、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与又は頭蓋内投与、例えば、くも膜下腔又は脳室内投与が挙げられる。投与は、連続的、長期的、短期的又は間欠的であり得る。
【００９４】
「ペプチド」は、アミド結合により少なくとも２個のアミノ酸を連結することによって形成される分子を意味する。ペプチドはポリペプチド及びタンパク質を指す。
【００９５】
「医薬剤」は、個体に投与された場合に治療的有益性を提供する物質を意味する。例えば、ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲに対して標的化されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは医薬剤である。
【００９６】
「医薬組成物」は、個体への投与に適切な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、１以上の活性薬剤及び滅菌水溶液を備え得る。
【００９７】
「医薬的に許容可能な担体」は、オリゴヌクレオチドの構造を妨害しない媒体又は希釈剤を意味する。ある種のこのような担体は、対象による経口摂取のための、例えば、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ジェル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液及び薬用キャンディーとして医薬組成物が処方されるようにする。例えば、医薬的に許容可能な担体は滅菌水溶液であり得る。
【００９８】
「医薬的に許容可能な誘導体」は、本明細書中に記載の化合物の、医薬的に許容可能な塩、複合物、プロドラッグ又は異性体を包含する。
【００９９】
「医薬的に許容可能な塩」は、アンチセンス化合物の生理学的に及び医薬的に許容可能な塩、即ち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保持し、それらに望ましくない毒性効果を付与しない塩を意味する。
【０１００】
「ホスホロチオエート結合」は、非架橋酸素原子のうち１個を硫黄原子で置き換えることによってホスホジエステル結合が修飾される、ヌクレオシド間の連結を意味する。ホスホロチオエート結合は修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１０１】
「部分」は、核酸の定められた数の連続（即ち連結された）核酸塩基を意味する。ある一定の実施形態において、部分とは、標的核酸の定められた数の連続核酸塩基である。ある一定の実施形態において、部分とは、アンチセンス化合物の定められた数の連続核酸塩基である。
【０１０２】
「予防する」は、分単位から永久までの時間にわたり、疾患、障害又は状態の発症又は発生を遅延させるか又は防止することを指す。予防する、とは、疾患、障害又は状態の発生リスクを低下させることも意味する。
【０１０３】
「プロドラッグ」は、内在性酵素、他の化学物質又は条件の作用によって身体又はその細胞内で活性型に変換される、不活性型で調製される治療剤を意味する。
【０１０４】
「副作用」は、所望の効果以外の、処置に起因する生理学的反応を意味する。ある一定の実施形態において、副作用としては、注射部位の反応、肝臓機能検査異常、腎臓機能異常、肝臓毒性、腎臓毒性、中枢神経系異常、ミオパシー及び不快感が挙げられる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベル上昇は、肝臓毒性又は肝臓機能異常を示し得る。例えば、ビリルビン上昇は、肝臓毒性又は肝臓機能異常を示し得る。
【０１０５】
「１本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖に対してハイブリッド形成させられていないオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１０６】
「特異的にハイブリッド形成可能な」は、特異的な結合が所望される条件下で、即ちインビボアッセイ及び治療的処置の場合は生理学的条件下で、非標的核酸に対して、最小の影響を示すか又は影響を示さずに、アンチセンス化合物が、所望の効果を誘導するために、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間で十分な程度の相補性を有することを指す。
【０１０７】
「スタチン」は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害する薬剤を意味する。
【０１０８】
「皮下投与」は、皮膚のすぐ下への投与を意味する。
【０１０９】
「〜を標的とする」又は「標的化される」は、標的核酸と特異的にハイブリッド形成し、所望の効果を誘導するアンチセンス化合物の設計及び選択の過程を意味する。
【０１１０】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」及び「標的ＲＮＡ転写産物」は全て、アンチセンス化合物により標的化されることが可能な核酸を指す。
【０１１１】
「標的セグメント」は、アンチセンス化合物が標的化される、標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」は、標的セグメントの５’−モストヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は、標的セグメントの３’−モストヌクレオチドを指す。
【０１１２】
「治療的有効量」は、個体に治療的有益性を提供する薬剤の量を意味する。
【０１１３】
「治療的なライフスタイル変化」は、脂肪／脂肪組織量及び／又はコレステロールを低下させようとする、食事及びライフスタイルの変化を意味する。このような変化は、心疾患発生のリスクを低下させ得、１日の総カロリー、総脂肪、飽和脂肪、ポリ不飽和脂肪、単不飽和脂肪、炭水化物、タンパク質、コレステロール、不溶性繊維の食事摂取に関する推奨、ならびに身体活動に対する推奨を含み得る。
【０１１４】
「トリグリセリド」又は「ＴＧ」は、３個の脂肪酸分子と組み合わせられたグリセロールからなる脂質又は中性脂肪を意味する。
【０１１５】
「２型糖尿病」（「２型真性糖尿病」又は「糖尿病、２型」としても知られ、以前は「糖尿病２型」、「非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」、「肥満関連糖尿病」又は「成人発症糖尿病」と呼ばれていた。）は、主にインスリン抵抗性、相対的なインスリン欠乏及び高血糖を特徴とする代謝性疾患である。
【０１１６】
「処置する」は、疾患、障害又は状態の変化又は改善をもたらすために動物に医薬組成物を投与することを指す。
【０１１７】
「未修飾ヌクレオチド」は、天然の核酸塩基、糖部及びヌクレオシド間結合から構成されるヌクレオチドを意味する。ある一定の実施形態において、未修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（即ちβ−Ｄ−リボヌクレオシド）又はＤＮＡヌクレオチド（即ちβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【０１１８】
ある一定の実施形態
ある一定の実施形態は、ＧＣＣＲ発現を阻害するための、方法、化合物及び組成物を提供する。
【０１１９】
ある一定の実施形態は、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物を提供する。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸配列は、ヒトの配列である。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸は、ヌクレオチド３８１８０００〜３９８００００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２９２８９．１０（本明細書中で配列番号１として組み込まれる）に相補的である。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸は、アカゲザルの配列である。ある特定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸配列は、ヌクレオチド１３３４０００〜１４９１０００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１２０９８７．１（本明細書で配列番号２として組み込まれる）に相補的である。
【０１２０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方の等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１２から３０個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０１２１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１２から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号４から５６の何れかの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１２２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１２から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２および４３の何れかの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１２３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、ＩＳＩＳ番号４２０４７０、４２０４７６、４２６１３０、４２６１８３、４２６２６１、４２６２６２、４２６１１５、４２６１６８、４２６２４６、４２６１７２、４２６３２５および４２６２６７であるか又はこれを備える。
【０１２４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１２から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１２５】
ある一定の実施形態において、本化合物又は組成物は、ＩＳＩＳ番号４２６１１５であるか又はこれを備える。。
【０１２６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、又はその両方の等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１５から３０個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０１２７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１５から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号４から５６の何れかの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１２８】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１５から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２および４３の何れかの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１２９】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、ＩＳＩＳ番号４２０４７０、４２０４７６、４２６１３０、４２６１８３、４２６２６１、４２６２６２、４２６１１５、４２６１６８、４２６２４６、４２６１７２、４２６３２５および４２６２６７であるか又はこれを備える。
【０１３０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１５から３０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１３１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、ＩＳＩＳ番号４２６１１５であるか又はこれを備える。。
【０１３２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方の等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１６から２１個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０１３３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１６から２１個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、配列番号４から５６の何れかの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１３４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１６から２１個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２および４３の何れかの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１３５】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１６から２１個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１３６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１および２の等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１７から３５個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０１３７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、配列番号４から５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１３８】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２および４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１３９】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から３５個の連結ヌクレオチドからなり、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する。
【０１４０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、または両方と等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１７から３０個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０１４１】
ある一定の実施形態において、本明細書中に提供される化合物又は組成物は、１７から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４から５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１４２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２および４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１４３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１４４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方の等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１７から２５個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１４５】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４〜５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１４６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２および４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１４７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、 配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１４８】
ある一定の実施形態において、本明細書に記載の化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、または両方の等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１７から２４個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１４９】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２４個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４〜５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５０】
ある一定の実施形態において、本明細書中に提供される化合物又は組成物は、１７から２４個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２４個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方と等長の部分に相補的な核酸塩基配列を有する１７から２３個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１５３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２３個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４〜５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２３個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５５】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２３個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物または組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方と等長の部分と相補的な核酸塩基配列を有する１７から２２個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１５７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２２個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４〜５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５８】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２２個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１５９】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２２個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方と等長の部分と相補的な核酸塩基配列を有する１７から２１個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１６１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２１個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４から５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２１個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、１７から２１個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、または両方と等長の部分と相補的な核酸塩基配列を有する２０個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１６５】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４〜５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１６８】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１もしくは２、またはその両方の等長部分に相補的な核酸塩基配列を有する２０個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１６９】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号４〜５６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１７０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１７１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物または組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、配列番号３６の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１７２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、修飾オリゴヌクレオチドの塩を備える。
【０１７３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤をさらに備える。
【０１７４】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、本修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたり測定した場合、配列番号１および２の何れか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％相補的である。
【０１７５】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、本修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたり測定した場合、配列番号４から５６の何れか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有する。
【０１７６】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、本修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたり測定した場合、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、および４３の何れか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有する。
【０１７７】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、本修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたり測定した場合、配列番号３６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有する。
【０１７８】
ある一定の実施形態において、アンチセンス化合物又は修飾オリゴヌクレオチドは、ＧＣＣＲ核酸の領域を標的とする。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸の領域に対して標的化されるような化合物又はオリゴヌクレオチドは、その領域の等長の核酸塩基部分に相補的である連続核酸部分を有する。例えば、この部分は、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の連続核酸塩基であり得る。このような部分は、本明細書中で挙げられる領域の等長部分に相補的である。ある一定の実施形態において、このような化合物又はオリゴヌクレオチドは、以下の配列番号１のヌクレオチド領域を標的とする：３３１１６〜３３１３５、３３２９６〜３３３１５、３３６７３〜３３６９２、３３７１６〜３３７５５、３３７１６〜３３７５１、３３７１６〜３３７３５、３３７３２〜３３７５５、３３７３２〜３３７５５、３３７３６〜３３７５５、３７２１７〜３７２３６、５１８７８〜５１８９８、５１８７８〜５１８９７、５１８７９〜５１８９８、５７８２５〜５７８４６、５７８２５〜５７８４４、５７８２７〜５７８４６、５９９５１〜５９９７８、５９９５１〜５９９７５、５９９５１〜５９９７４、５９９５１〜５９９７１、５９９５１〜５９９７０、５９９５２〜５９９７８、５９９５２〜５９９７５、５９９５２〜５９９７４、５９９５２〜５９９７１、５９９５５〜５９９７８、５９９５５〜５９９７５、５９９５５〜５９９７４、５９９５６〜５９９７８、５９９５６〜５９９７５、５９９５９〜５９９７８、６０９３５〜６０９５８、６０９３５〜６０９５６、６０９３５〜６０９５５、６０９３５〜６０９５４、６０９３６〜６０９５８、６０９３６〜６０９５６、６０９３６〜６０９５５、６０９３７〜６０９５８、６０９３７〜６０９５６、６０９３９〜６０９５８、６３６７７〜６３６９８、６３６７７〜６３６９７、６３６７７〜６３６９６、６３６７８〜６３６９８、６３６７８〜６３６９７、６３６７９〜６３６９８、６５９３８〜６５９６１、６５９３８〜６５９６０、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９６１、６５９３９〜６５９６０、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９６１、６５９４０〜６５９６０、６５９４０〜６５９５９、６５９４１〜６５９６１、６５９４１〜６５９６０、６５９４２〜６５９６１、７６２２４〜７６２４８、７６２２４〜７６２４７、７６２２４〜７６２４６、７６２２４〜７６２４４、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４８、７６２２５〜７６２４７、７６２２５〜７６２４６、７６２２５〜７６２４４、７６２２７〜７６２４８、７６２２７〜７６２４７、７６２２７〜７６２４６、７６２２８〜７６２４８、７６２２８〜７６２４７、７６２２９〜７６２４８、９５５１３〜９５５３８、９５５１３〜９５５３７、９５５１３〜９５５３２、９５５１８〜９５５３８、９５５１８〜９５５３７、９５５１９〜９５５３８、１０４２４７〜１０４２６６、１０９３４６〜１０９３６８、１０９３４６〜１０９３６６、１０９３４６〜１０９３６５、１０９３４７〜１０９３６８、１０９３４７〜１０９３６６、１０９３４９〜１０９３６８、１０９４７３〜１０９４９２、１１２２１８〜１１２２４２、１１２２１８〜１１２２４１、１１２２１８〜１２２２４０、１１２２１８〜１１２２３９、１１２２１８〜１１２２３８、１１２２１８〜１１２２３７、１１２２１９〜１１２２４２、１１２２１９〜１１２２４１、１１２２１９〜１１２２４０、１１２２１９〜１１２２３９、１１２２１９〜１１２２３８、１１２２２０〜１１２２４２、１１２２２０〜１１２２４１、１１２２２０〜１１２２４０、１１２２２０〜１１２２３９、１１２２２１〜１１２２４２、１１２２２１〜１１２２４１、１１２２２１〜１１２２４０、１１２２２２〜１１２２４２、１１２２２２〜１１２２４１、１１２２２３〜１１２２４２、１１４１５４〜１１４１７８、１１４１５４〜１１４１７７、１１４１５４〜１１４１７６、１１４１５４〜１１４１７５、１１４１５４〜１１４１７４、１１４１５４〜１１４１７３、１１４１５５〜１１４１７８、１１４１５５〜１１４１７７、１１４１５５〜１１４１７６、１１４１５５〜１１４１７５、１１４１５５〜１１４１７４、１１４１５６〜１１４１７８、１１４１５６〜１１４１７７、１１４１５６〜１１４１７６、１１４１５６〜１１４１７５、１１４１５７〜１１４１７８、１１４１５７〜１１４１７７、１１４１５７〜１１４１７６、１１４１５８〜１１４１７８、１１４１５８〜１１４１７７、１１４１５９〜１１４１７８、１１４５８７〜１１４６１０、１１４５８７〜１１４６０９、１１４５８７〜１１４６０８、１１４５８７〜１１４６０６、１１４５８９〜１１４６１０、１１４５８９〜１１４６０９、１１４５８９〜１１４６０８、１１４５９０〜１１４６１０、１１４５９０〜１１４６０９、１１４５９１〜１１４６１０、１３９２８７〜１３９３０６、１４３２５９〜１４３２８０、１４３２５９〜１４３２７９、１４３２５９〜１４３２７８、１４３２６０〜１４３２８０、１４３２６０〜１４３２７９、１４３２６１〜１４３２８０、１４３７３７〜１４３７５７、１４３７３７〜１４３７５６、および１４３７３８〜１４３７５７。
【０１７９】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物又は修飾オリゴヌクレオチドは、ＧＣＣＲ核酸の領域を標的とする。ある特定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸の領域に対して標的化されるような化合物又はオリゴヌクレオチドは、この領域の等長の核酸塩基部分に対して相補的である連続核酸塩基部分を有する。例えば、この部分は、本明細書中で挙げられる領域の等長の部分に相補的な少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の連続核酸塩基部分であり得る。ある特定の実施形態において、このような化合物又はオリゴヌクレオチドは、以下の配列番号１のヌクレオチド領域を標的とする：５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８，および９５５１３〜９５５３２。
【０１８０】
ある一定の実施形態において、アンチセンス化合物又は修飾オリゴヌクレオチドは、ＧＣＣＲ核酸の領域を標的とする。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸の領域に対して標的化されるような化合物又はオリゴヌクレオチドは、この領域の等長の核酸塩基部分に相補的である連続核酸塩基部分を有する。例えば、この部分は、本明細書中で挙げられる領域の等長部分に相補的な、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の連続核酸塩基部分であり得る。ある一定の実施形態において、このような化合物又はオリゴヌクレオチドは、配列番号１の次の核酸領域を標的とする：６５９４０〜６５９５９。
【０１８１】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも５５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５５、３６１１５６、３７７１３１、４１４６４１、４１４６４８、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４７９、４２０４８８、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６３４、４２０６４４、４２０７６４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１２８、４２６１３６、４２６１４２、４２６１４３、４２６１６１、４２６１７２、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８７、４２６１８９、４２６２４６、４２６２５５、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６３、４２６２６４、４２６３２５、及び４２６３４５。
【０１８２】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも６０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５５、３６１１５６、３７７１３１、４１４６４１、４１４６４８、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４７９、４２０４８８、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６３４、４２０６４４、４２０７６４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１２８、４２６１４３、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８７、４２６２４６、４２６２５５、４２６２６１，及び４２６２６２。
【０１８３】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも６５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５５、３６１１５６、３７７１３１、４１４６４１、４１４６４８、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４７９、４２０４８８、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６３４、４２０６４４、４２０７６４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１７、４２６１２８、４２６１４３、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８７、４２６２４６、４２６２５５、及び４２６２６１。
【０１８４】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも７０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１５５、３６１１５６、３７７１３１、４１４６４１、４１４６４８、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４７９、４２０４８８、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６３４、４２０６４４、４２０７６４、４２６１１５、４２６１１７、４２６１２８、４２６１８３、及び４２６２６１。
【０１８５】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも７５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１５５、３７７１３１、４１４６４１、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４８８、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６３４、４２０６４４、及び４２０７６４。
【０１８６】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも８０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３７７１３１、４１４６４１、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７６、および４２０６３４。
【０１８７】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも８５％の阻害を示す：ＩＳＩＳＳ番号４１４６８１、４２０４５０、４２０４７６、及び４２０６３４。
【０１８８】
ある一定の実施形態において、以下のアンチセンス化合物は、配列番号１の領域、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸を標的とし、形質移入用のエレクトロポレーションを使用して３μＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号３７７１３１、４１４６４１、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６４４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１１９、４２６１２４、４２６１２８、４２６１３０、４２６１３１、４２６１３６、４２６１３７、４２６１４２、４２６１４３、４２６１４４、４２６１５０、４２６１５７、４２６１６１、４２６１６８、４２６１７１、４２６１７２、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８５、４２６１８７、４２６１８９、４２６１９９、４２６２０３、４２６２２９、４２６２４６、４２６２５５、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６３、４２６２６４、４２６２６７、４２６２８１、４２６３０１、４２６３０２、４２６３０６、４２６３２３、４２６３２４、４２６３２５、４２６３４３、４２６３４５、４２６３４６、４２６３４７、４２６４０１、４２６４０３、４２６４０４、および４２６４０５。
【０１８９】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、形質移入用のエレクトロポレーションを使用して２μＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号３７７１３１、４１４６４１、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４７６、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６４４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１１９、４２６１２８、４２６１３０、４２６１３６、４２６１３７、４２６１４２、４２６１４３、４２６１４４、４２６１５０、４２６１５７、４２６１６８、４２６１７１、４２６１７２、４２６１８３、４２６１８５、４２６１８９、４２６２０３、４２６２４６、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６３、４２６２６４、４２６２６７、４２６２８１、４２６３０１、４２６３２４、４２６３２５、４２６３４５，及び４２６３４７。
【０１９０】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、形質移入用のエレクトロポレーションを使用して１μＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号４２６１１５、４２６１２８、４２６１７２、４２６２６１、及び４２６３２５。
【０１９１】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、形質移入剤としてのリポフェクチンを使用して５０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号３７７１３１、４１４６４１、４１４６４８、４１４６８１、４２０４５０、４２０４７０、４２０４８８、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６４４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１１９、４２６１２４、４２６１２８、４２６１３０、４２６１３１、４２６１３６、４２６１３７、４２６１４２、４２６１４３、４２６１４４、４２６１５０、４２６１５７、４２６１６１、４２６１６８、４２６１７１、４２６１７２、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８５、４２６１８７、４２６１８９、４２６１９９、４２６２０３、４２６２１６、４２６２２９、４２６２４６、４２６２５５、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６３、４２６２６４、４２６２６７、４２６２７６、４２６２８１、４２６２９３、４２６３０１、４２６３０２、４２６３０６、４２６３２３、４２６３２４、４２６３２５、４２６３３１、４２６３３４、４２６３３６、４２６３３７、４２６３４３、４２６３４４、４２６３４５、４２６３４７、４２６３９０、４２６４０１、４２６４０２、４２６４０３、４２６４０４、及び４２６４０５。
【０１９２】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、形質移入剤としてのリポフェクチンを使用して４０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号３７７１３１、４１４６４１、４１４６８１、４２０４５０、４２０４９３、４２０５２２、４２０５９９、４２０６４４、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１１９、４２６１２４、４２６１２８、４２６１３０、４２６１３１、４２６１４２、４２６１４３、４２６１５７、４２６１６８、４２６１７１、４２６１７２、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８５、４２６１８７、４２６１８９、４２６１９９、４２６２０３、４２６２１６、４２６２４６、４２６２５５、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６３、４２６２６４、４２６２６７、４２６２７６、４２６２８１、４２６２９３、４２６３０１、４２６３０２、４２６３０６、４２６３２４、４２６３３１、４２６３３６、４２６３３７、４２６３４３、４２６３４４、４２６３４５、４２６３４７、４２６４０１、４２６４０２、４２６４０３、４２６４０４、及び４２６４０５。
【０１９３】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、形質移入剤としてのリポフェクチンを使用して３０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号４１４６４１、４２０４９３、４２０５９９、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１３０、４２６１３１、４２６１６８、４２６１７１、４２６１７２、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８５、４２６１８７、４２６１８９、４２６２４６、４２６２５５、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６３、４２６２６４、４２６３２４、４２６３４４、４２６３４５、及び４２６４０２。
【０１９４】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である配列番号１の領域を標的とし、形質移入剤としてのリポフェクチンを使用して２０ｎＭ未満のＩＣ５０値を示す：ＩＳＩＳ番号４１４６４１、４２６１１０、４２６１１５、４２６１１６、４２６１１７、４２６１７２、４２６１７７、４２６１８３、４２６１８７、４２６２５５、４２６２６２、及び４２６２６３。
【０１９５】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内の等長の核酸塩基部分に相補的である少なくとも８個の連続核酸塩基部分を備える、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０１９６】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内の等長の部分に相補的である、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、又は少なくとも１９個の連続核酸塩基部分を有する。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸、例えば配列番号１に対して９０％、９５％、９９％又は１００％相補的である。
【０１９７】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で６０％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０１９８】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で７０％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０１９９】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で８０％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２００】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で９０％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０１】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で９５％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０２】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で９９％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０３】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８，及び９５５１３〜９５５３２から選択される領域内で１００％相補的である少なくとも２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０４】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で６０％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０５】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で７０％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０６】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で８０％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０７】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で９０％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０８】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で９５％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２０９】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で９９％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２１０】
ある一定の実施形態は、配列番号１のヌクレオチド６５９４０〜６５９５９内で１００％相補的な２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を提供する。
【０２１１】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸の領域に対して標的化されるこのような化合物又はオリゴヌクレオチドは、配列番号１の６５９４０〜６５９５９の等長の核酸塩基部分に相補的である連続核酸塩基部分を有する。
【０２１２】
ある一定の実施形態において、配列番号１の次のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドにより標的とされる場合、少なくとも６５％阻害を示す：５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５９、６５９３８〜６５９５８、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５９、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２５〜７６２４４、７６２２９〜７６２４８、及び９５５１３〜９５５３２。
【０２１３】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも５５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０、３１、３５、３６、３７、３８、４２、４３、４５、４８、５４、及び５６。
【０２１４】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも６０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３１、３５、３６、３７、３８、及び４５。
【０２１５】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも６５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８，  １９、２０、２１、２２、２３、２４、３１、３６、３８、及び４５。
【０２１６】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも７０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２０，  ２１、２２、２３、２４、３６、及び３８。
【０２１７】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも７５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、２０、及び２２。
【０２１８】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも８０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４、５、７、１３、１６、及び２２
【０２１９】
ある一定の実施形態において、次のアンチセンス化合物は、ヒトＧＣＣＲをコードする核酸である、配列番号１の領域を標的とし、ＧＣＣＲ発現の少なくとも８５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号５、７、１３、及び１６。
【０２２０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物は、ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５６、３７７１３１、３６１１４３、及び３６１１５５（参照により本明細書中に組み込まれる国際特許公開公報第２００７／０３５７５９号で開示される。）よりも大きい治療可能性を有する。ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物は、ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５６、３７７１３１、３６１１４３、及び３６１１５５を上回る、より良好なインビボ阻害を有する。ある一定の実施形態において、本明細書で提供される化合物は、ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５６、３７７１３１、３６１１４３、及び３６１１５５を上回るより良好なインビボ阻害を有する。ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物は、ＩＳＩＳ番号３６１１３７、３６１１４１、３６１１５１、３６１１５６、３７７１３１、３６１１４３，及び３６１１５５よりも良好な忍容性プロファイルを有する。
【０２２１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物は、１本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる。
【０２２２】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５個の連結ヌクレオシドからなる。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、２１個の連結ヌクレオシドからなる。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシドからなる。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、１９個の連結ヌクレオシドからなる。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、１８個の連結ヌクレオシドからなる。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシドからなる。ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、１６個の連結ヌクレオシドからなる。
【０２２３】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である。ある一定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２２４】
ある一定の実施形態において、前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオシドは修飾核酸塩基を備える。ある一定の実施形態において、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンである。
【０２２５】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは修飾糖を備える。
【０２２６】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシド、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントからなり、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２２７】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシド、１４個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、３個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、３個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントからなり、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２２８】
ある一定の実施形態において、本修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシド、１３個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、２個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントからなり、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンは、５−メチルシトシンである。
【０２２９】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１および２の何れかの等長の部分に相補的な少なくとも８個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３０】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号２の何れかの等長の部分と相補的な少なくとも８個の連続核酸塩基を備える配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３１】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、及び４３の少なくとも１９個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３２】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号３６の少なくとも１９個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３３】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号３６の少なくとも１９個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する、２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）４個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）４個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１および２の等長部分に相補的な少なくとも８個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する２０個の連結核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは：ａ）１４個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）３個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）３個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３５】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号１のいずれかの等長部分に相補的な少なくとも８個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１３個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）２個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２及び４３の少なくとも１９個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは：ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号３６の少なくとも１９個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは、ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３８】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、配列番号３６の核酸塩基を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備え、この修飾オリゴヌクレオチドは：ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと；ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと；ｃ）６個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、を備える。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に置かれ、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖を備え、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０２３９】
ある一定の実施形態は、ＧＣＣＲ発現を阻害するための方法、化合物及び組成物を提供する。
【０２４０】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のような化合物を動物に投与することを備える、動物においてＧＣＣＲ発現を低下させる方法を提供する。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１２から３０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１５から３０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１８から２１連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１７から３５連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１７から２５連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１７から２４連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１７から２３ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１７から２２連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１７から２１連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０２４１】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のような化合物を動物に投与することを備える、動物において代謝性疾患を予防するか、改善するか又は処置する方法を提供する。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１２から３０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。代謝性疾患又は障害の例としては、糖尿病、高血糖、前糖尿病、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、糖尿病の脂質異常症もしくは高トリグリセリド血症又はこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４２】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のような化合物を動物に投与することを備える、動物において肥満を予防するか、改善するか又は処置する方法を提供する。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１２から３０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２１連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物又は組成物は、ＩＳＩＳ番号４２０４７０、４２０４７６、４２６１３０、４２６１８３、４２６２６１、４２６２６２、４２６１１５、４２６１６８、４２６２４６、４２６１７２、４２６３２５、及び４２６２６７の化合物を備える。ある一定の実施形態において、本化合物又は組成物は、ＩＳＩＳ番号４２６６１５の化合物を備える。
【０２４３】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のような化合物を動物に投与することを備える、動物において体重を減少させる方法を提供する。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１２から３０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、代謝性疾患を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、糖尿病を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、肥満を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、メタボリックシンドロームを予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、インスリン抵抗性を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、高血糖を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、ＮＡＦＬＤを予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物における体重の減少は、糖尿病の脂質異常症を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、グルコース値は、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％低下する。
【０２４４】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のような化合物を動物に投与することを備える、動物においてグルコース値を低下させる方法を提供する。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される１２から３０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、本化合物は、ＧＣＣＲに対して標的化される２０連結ヌクレオシド長の修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、代謝性疾患を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、糖尿病を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、肥満を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、メタボリックシンドロームを予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、インスリン抵抗性を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、高血糖を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、ＮＡＦＬＤを予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、動物におけるグルコース値の低下は、糖尿病の脂質異常症を予防するか、改善するか又は処置する。ある一定の実施形態において、グルコース値は、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％低下する。
【０２４５】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲは、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ヌクレオチド３８１８０００−３９８００００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２９２８９．１０に相補的であるようないずれかのヒト配列を有する（本明細書中で配列番号１として組み込まれる。）。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲは、ヌクレオチド１３３４０００−１４９１０００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１２０９８７．１に相補的なアカゲザル配列を有する（本明細書中で配列番号２として組み込まれる）。
【０２４６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、その塩及び医薬的に許容可能な担体又は希釈剤を備える。ある一定の実施形態において、本組成物は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、及び４３で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。ある一定の実施形態において、本組成物は、２０から２５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、および４３で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。ある一定の実施形態において、本組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、および４３で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。
【０２４７】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される化合物又は組成物は、その塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。ある一定の実施形態において、本組成物は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。ある一定の実施形態において、本組成物は、１７から２５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。ある一定の実施形態において、本組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤と、を備える。
【０２４８】
ある一定の実施形態は、ａ）ＧＣＣＲ関連疾患又は状態がある動物を同定し、ｂ）１２から３０個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたり測定される場合、配列番号１及び２の何れかに少なくとも９０％相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物の治療的有効量を前記動物に投与することを備える、ＧＣＣＲ関連疾患又は状態がある動物を処置するための方法を提供する。ある一定の実施形態において、動物に対して投与される化合物の治療的有効量は、動物において、ＧＣＣＲ関連疾患もしくは状態又はその症状を処置するか又は軽減する。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ関連疾患又は状態は肥満である。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ関連疾患又は状態は糖尿病である。
【０２４９】
ある一定の実施形態は、ａ）ＧＣＣＲ関連疾患又は状態がある動物を同定し、ｂ）２０個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたり測定される場合、配列番号１及び２の何れかに少なくとも１００％相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物の治療的有効量を前記動物に投与することを備える、ＧＣＣＲ関連疾患又は状態がある動物を処置するための方法を提供する。ある一定の実施形態において、動物に対して投与される化合物の治療的有効量は、動物において、ＧＣＣＲ関連疾患もしくは状態又はその症状を処置するか又は軽減する。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ関連疾患又は状態は肥満である。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ関連疾患又は状態は糖尿病である。
【０２５０】
ある一定の実施形態は、代謝性疾患を処置するか、予防するか又は改善する方法を提供する。ある一定の実施形態において、代謝性疾患は、肥満、糖尿病、高血糖、前糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、糖尿病の脂質異常症もしくは高トリグリセリド血症又はこれらの組み合わせである。
【０２５１】
ある一定の実施形態は、動物に本明細書中に記載のような化合物を投与することを備える方法を提供する。ある一定の実施形態において、本方法は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、及び４３で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを動物に投与することを備える。
【０２５２】
ある一定の実施形態は、動物に本明細書中に記載のような化合物を投与することを備える方法を提供する。ある一定の実施形態において、本方法は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号６、７、１０、１１、３３、３５、３６、３９、４２、及び４３で挙げられる核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを動物に投与することを備える。
【０２５３】
ある一定の実施形態は、動物に本明細書中に記載のような化合物を投与することを備える方法を提供する。ある一定の実施形態において、本方法は、１７から３５個の連結ヌクレオシドからなり、配列番号３６で挙げられる核酸塩基配列の間から選択される核酸塩基配列の少なくとも２０個の連続核酸塩基を備える核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを動物に投与することを備える。
【０２５４】
ある一定の実施形態において、動物はヒトである。
【０２５５】
ある一定の実施形態において、投与することは、本明細書中に記載のように、代謝性疾患の進行を、予防するか、処置するか、改善するか又は遅延させる。
【０２５６】
ある一定の実施形態において、投与することは、本明細書中に記載のように、肥満の進行を、予防するか、処置するか、改善するか又は遅延させる。
【０２５７】
ある一定の実施形態において、投与することは、本明細書中に記載のように、糖尿病の進行を、予防するか、処置するか、改善するか又は遅延させる。
【０２５８】
ある一定の実施形態において、本化合物は、第二の薬剤と同時投与される。
【０２５９】
ある一定の実施形態において、本化合物及び第二の薬剤は併用投与される。
【０２６０】
ある一定の実施形態において、投与することは非経口投与である。
【０２６１】
ある一定の実施形態は、動物においてＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ又はタンパク質発現を低下させるために本明細書中に記載のような化合物又は組成物を動物に投与することを備える、動物において、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ又はタンパク質発現を低下させるための方法をさらに提供する。ある一定の実施形態において、動物はヒトである。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ又はタンパク質発現を低下させることは、代謝性疾患の進行を、予防するか、処置するか、改善するか又は遅延させる。ある一定の実施形態において、代謝性疾患又は状態は糖尿病である。ある一定の実施形態において、代謝性疾患又は状態は肥満である。
【０２６２】
ある一定の実施形態は、代謝性疾患があるヒトを同定し、治療的有効量の本明細書中に記載のような化合物又は組成物をそのヒトに投与することを備える、代謝性疾患があるヒトを処置するための方法を提供する。ある一定の実施形態において、本処置は、メタボリックシンドローム、高血糖、高トリグリセリド血症、高血圧、グルコース値上昇、インスリン抵抗性上昇、インスリン感受性低下、正常値を上回る体重及び／又は正常値を上回る体脂肪又はこれらの何らかの組み合わせからなる群から選択される症状を軽減させる。
【０２６３】
ある一定の実施形態は、肥満であるヒトを同定し、治療的有効量の本明細書中に記載のような化合物又は組成物をそのヒトに投与することを備える、肥満であるヒトを処置するための方法を提供する。ある一定の実施形態において、本処置は、メタボリックシンドローム、高血糖、高トリグリセリド血症、高血圧、グルコース値上昇、インスリン抵抗性上昇、インスリン感受性低下、正常値を上回る体重及び／又は正常値を上回る体脂肪又はこれらの何らかの組み合わせからなる群から選択される症状を軽減する。
【０２６４】
ある一定の実施形態は、糖尿病があるヒトを同定し、治療的有効量の本明細書中に記載のような化合物又は組成物をそのヒトに投与することを備える、糖尿病があるヒトを処置するための方法を提供する。ある一定の実施形態において、本処置は、メタボリックシンドローム、高血糖、高トリグリセリド血症、高血圧、グルコース値上昇、インスリン抵抗性上昇、インスリン感受性低下、正常値を上回る体重及び／又は正常値を上回る体脂肪又はこれらの何らかの組み合わせからなる群から選択される症状を軽減する。
【０２６５】
治療的有効量の本明細書中に記載のような化合物又は組成物をヒトに投与し、それによって代謝性疾患を軽減するか又は予防することを備える、代謝性疾患を軽減するか又は予防するための方法がさらに提供される。
【０２６６】
治療的有効量の本明細書中に記載のような化合物又は組成物をヒトに投与し、それによって肥満を軽減するか又は予防することを備える、糖尿病を軽減するか又は予防するための方法がさらに提供される。
【０２６７】
治療的有効量の本明細書中に記載のような化合物又は組成物をヒトに投与し、それによって糖尿病を軽減するか又は予防することを備える、糖尿病を軽減するか又は予防するための方法がさらに提供される。
【０２６８】
代謝性疾患の症状を改善することを必要とするヒトに１７から３５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて代謝性疾患の症状を改善する、代謝性疾患の症状を改善するための方法がさらに提供される。
【０２６９】
糖尿病の症状を改善することを必要とするヒトに１７から３５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて糖尿病の症状を改善する、糖尿病の症状を改善するための方法がさらに提供される。
【０２７０】
代謝性疾患の症状を改善することを必要とするヒトに１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて代謝性疾患の症状を改善する、代謝性疾患の症状を改善するための方法がさらに提供される。
【０２７１】
糖尿病の症状を改善することを必要とするヒトに１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて糖尿病の症状を改善する、糖尿病の症状を改善するための方法がさらに提供される。
【０２７２】
代謝性疾患の症状を改善することを必要とするヒトに２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて代謝性疾患の症状を改善する、代謝性疾患の症状を改善するための方法がさらに提供される。
【０２７３】
糖尿病の症状を改善することを必要とするヒトに２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて糖尿病の症状を改善する、糖尿病の症状を改善するための方法がさらに提供される。
【０２７４】
代謝性疾患に付随する症状の進行速度を低下させることを必要とするヒトに２０から３５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて代謝性疾患の症状の進行速度を低下させる、代謝性疾患に付随する症状の進行速度を低下させるための方法がさらに提供される。
【０２７５】
糖尿病に付随する症状の進行速度を低下させることを必要とするヒトに１７から３５個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて糖尿病の症状の進行速度を低下させる、糖尿病に付随する症状の進行速度を低下させるための方法がさらに提供される。
【０２７６】
代謝性疾患に付随する症状の進行速度を低下させることを必要とするヒトに１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて代謝性疾患の症状の進行速度を低下させる、代謝性疾患に付随する症状の進行速度を低下させるための方法がさらに提供される。
【０２７７】
糖尿病に付随する症状の進行速度を低下させることを必要とするヒトに１２から３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて糖尿病の症状の進行速度を低下させる、糖尿病に付随する症状の進行速度を低下させるための方法がさらに提供される。
【０２７８】
代謝性疾患に付随する症状の進行速度を低下させることを必要とするヒトに２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて代謝性疾患の症状の進行速度を低下させる、代謝性疾患に付随する症状の進行速度を低下させるための方法がさらに提供される。
【０２７９】
糖尿病に付随する症状の進行速度を低下させることを必要とするヒトに２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを備え、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号１又は２と特異的にハイブリッド形成し、それによってヒトにおいて糖尿病の症状の進行速度を低下させる、糖尿病に付随する症状の進行速度を低下させるための方法がさらに提供される。
【０２８０】
代謝性疾患の処置、予防又は改善のための医薬の調製のための方法及び化合物も提供される。
【０２８１】
肥満の処置、予防又は改善のための医薬の調製のための方法及び化合物も提供される。
【０２８２】
糖尿病の処置、予防又は改善のための医薬の調製のための方法及び化合物も提供される。
【０２８３】
メタボリックシンドロームの処置、予防又は改善のための医薬の調製のための方法及び化合物も提供される。
【０２８４】
ある一定の実施形態は、代謝性疾患を処置するか、改善するか又は予防するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２８５】
ある一定の実施形態は、肥満を処置するか、改善するか又は予防するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２８６】
ある一定の実施形態は、糖尿病を処置するか、改善するか又は予防するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２８７】
ある一定の実施形態は、メタボリックシンドロームを処置するか、改善するか又は予防するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２８８】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療との併用療法により本明細書中に記載のような代謝性疾患を処置するか、予防するか又は改善することにおける使用のための、本明細書中に記載のような化合物を提供する。薬剤又は治療は、同時投与されるか又は併用投与され得る。
【０２８９】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療との併用療法により本明細書中に記載のように糖尿病を処置するか、予防するか又は改善することにおける使用のための、本明細書中に記載のような化合物を提供する。薬剤又は治療は、同時投与されるか又は併用投与され得る。
【０２９０】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療との併用療法により本明細書中に記載のように代謝性疾患を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。薬剤又は治療は、同時投与されるか又は併用投与され得る。
【０２９１】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療との併用療法により本明細書中に記載のように肥満を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。薬剤又は治療は、同時投与されるか又は併用投与され得る。
【０２９２】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療との併用療法により本明細書中に記載のように糖尿病を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。薬剤又は治療は、同時投与されるか又は併用投与され得る。
【０２９３】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療との併用療法により本明細書中に記載のように糖尿病を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。薬剤又は治療は、同時投与されるか又は併用投与され得る。
【０２９４】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療を連続して投与される患者において、本明細書中に記載のように代謝性疾患を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２９５】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療を連続して投与される患者において、本明細書中に記載のように肥満を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２９６】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療を連続して投与される患者において、本明細書中に記載のように糖尿病を処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２９７】
ある一定の実施形態は、本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療を連続して投与される患者において、本明細書中に記載のようにメタボリックシンドロームを処置するか、予防するか又は改善するための医薬の製造における、本明細書中に記載のような化合物の使用を提供する。
【０２９８】
ある一定の実施形態は、
（ｉ）本明細書中に記載のような化合物；及びあるいは
（ｉｉ）本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療
を備える、本明細書中に記載のように代謝性疾患を処置するか、予防するか又は改善するためのキットを提供する。
【０２９９】
ある一定の実施形態は、
（ｉ）本明細書中に記載のような化合物；及びあるいは
（ｉｉ）本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療
を備える、本明細書中に記載のように肥満を処置するか、予防するか又は改善するためのキットを提供する。
【０３００】
ある一定の実施形態は、
（ｉ）本明細書中に記載のような化合物；及びあるいは
（ｉｉ）本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療
を備える、本明細書中に記載のように糖尿病を処置するか、予防するか又は改善するためのキットを提供する。
【０３０１】
ある一定の実施形態は、
（ｉ）本明細書中に記載のような化合物；及びあるいは
（ｉｉ）本明細書中に記載のようなさらなる薬剤又は治療
を備える、本明細書中に記載のようにメタボリックシンドロームを処置するか、予防するか又は改善するためのキットを提供する。
【０３０２】
本明細書中に記載のようなキットは、本明細書中に記載のような併用療法によって本明細書中に記載のように代謝性疾患を処置するか、予防するか又は改善するために本キットを使用するための説明書をさらに含み得る。ある一定の実施形態において、代謝性疾患は肥満である。ある一定の実施形態において、代謝性疾患は糖尿病である。
【０３０３】
アンチセンス化合物
オリゴマー性化合物としては、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣物、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。オリゴマー性化合物は、標的核酸に対する「アンチセンス」であり得、つまり、水素結合を通じて標的核酸とハイブリッド形成できることを意味する。
【０３０４】
ある一定の実施形態において、アンチセンス化合物は、５’から３’方向で書かれる場合、それが標的化される標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を備える核酸塩基配列を有する。ある一定のこのような実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’方向で書かれる場合、それが標的化される標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を備える核酸塩基配列を有する。
【０３０５】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は１０から３０ヌクレオチド長である。言い換えると、アンチセンス化合物は、１０から３０個の連結核酸塩基である。その他の実施形態において、本アンチセンス化合物は、８から８０、１０から５０、１５から３０、１８から２１、２０から８０、２０から３５、２０から３０、２０から２９、２０から２８、２０から２７、２０から２６、２０から２５、２０から２４、２０から２３、２０から２２、２０から２１又は２０個の連結核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。ある一定のこのような実施形態において、本アンチセンス化合物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９もしくは８０個の連結核酸塩基長又は上記の値の何れか２つにより定められる範囲からなる修飾オリゴヌクレオチドを備える。
【０３０６】
ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、短縮形又は短縮化修飾オリゴヌクレオチドを備える。短縮形又は短縮化修飾オリゴヌクレオチドは、１個のヌクレオシドが５’末端から（５’短縮化）又はあるいは３’末端から（３’短縮化）除去されているものであり得る。短縮形又は短縮化オリゴヌクレオチドは、２個のヌクレオシドが５’末端から除去されているものであり得るか、あるいは２個のサブユニットが３’末端から除去されているものであり得る。あるいは、除去されるヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチド全体に分散させられ得、例えばアンチセンス化合物において、１個のヌクレオシドが５’末端から除去されており、１個のヌクレオシドが３’末端から除去されている。
【０３０７】
延長されたオリゴヌクレオチドにおいて１個のさらなるヌクレオシドが存在する場合、このさらなるヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの５’又は３’末端に置かれ得る。２以上のさらなるヌクレオシドが存在する場合、付加されるヌクレオシドは互いに隣接し得、例えばオリゴヌクレオチドにおいて、２個のヌクレオシドがオリゴヌクレオチドの５’末端に付加されるか（５’付加）又はあるいは３’末端に付加される（３’付加）。あるいは、付加されるヌクレオシドは、本アンチセンス化合物全体に分散させられ得、例えばオリゴヌクレオチドにおいて、１個のヌクレオシドが５’末端に付加され、１個のサブユニットが３’末端に付加される。
【０３０８】
活性を失うことなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増減させることができ及び／又はミスマッチ塩基を導入することができる。例えばＷｏｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３０５−７３０９，１９９２）において、卵細胞注入モデルにおいて標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について、１３から２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端付近に８又は１１個のミスマッチ塩基がある２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有しなかったアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも小さいが、標的ｍＲＮＡの特異的な切断を支配することができた。同様に、１又は３個のミスマッチがあるものを含め、１３個の核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて標的特異的な切断が達成された。
【０３０９】
Ｇａｕｔｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ  ２００１）は、ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡに対して１００％相補性を有し、ｂｃｌ−ｘＬ  ｍＲＮＡに対して３個のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドがインビトロ及びインビボでｂｃｌ−２及びｂｃｌ−ｘＬの両者の発現を低下させる能力を明らかにした。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで強力な抗腫瘍活性を示した。
【０３１０】
Ｍａｈｅｒ及びＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，１９８８）は、ウサギ網状赤血球アッセイにおいてヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させるその能力について、一連のタンデムな１４個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドならびに、それぞれ２又は３個のタンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列から構成される２８及び４２個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。３種類の１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは単独で、２８又は４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドよりも低いレベルではあるものの、翻訳を阻害することができた。
【０３１１】
アンチセンス化合物モチーフ
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、阻害活性の促進、標的核酸に対する結合親和性の向上又はインビボでのヌクレアーゼによる分解に対する耐性など、アンチセンス化合物特性を付与するためのパターンで編成される化学的に修飾されたサブユニット又はモチーフを有する。
【０３１２】
キメラアンチセンス化合物は、一般的には、ヌクレアーゼ分解に対する耐性向上、細胞取り込みの増加、標的核酸に対する結合親和性の向上及び／又は阻害活性向上を付与するために修飾される少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第二の領域は、場合によっては、ＲＮＡ：ＤＮＡ２本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ  Ｈに対する基質となり得る。
【０３１３】
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物とみなされる。ギャップマーにおいて、ＲＮａｓｅＨ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、内部領域のヌクレオシドと化学的に別個である複数のヌクレオチドを有する外部領域間に位置する。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは、一般に、エンドヌクレアーゼ切断に対する基質となるが、一方で、ウイングセグメントは修飾ヌクレオシドを備える。ある一定の実施形態において、ギャップマーの領域は、各個別領域を備える糖部のタイプによって区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部のタイプは、いくつかの実施形態において、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（このような２’−修飾ヌクレオシドは、とりわけ、２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ−ＣＨ３を含み得る。）及び二環性糖修飾ヌクレオシド（このような二環性糖修飾ヌクレオシドは、拘束エチルを有するものを含み得る。）を含み得る。ある一定の実施形態において、ウイングは、例えば２’−ＭＯＥ及び拘束エチルを含む、いくつかの修飾糖部を含み得る。ある一定の実施形態において、ウイングは、いくつかの修飾及び未修飾糖部を含み得る。ある一定の実施形態において、ウイングは、２’−ＭＯＥヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシド及び２’−デオキシヌクレオシドの様々な組み合わせを含み得る。
【０３１４】
各個別領域は、均一な糖部、変異又は交互の糖部を備え得る。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフは「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載されることが多く、ここで「Ｘ」は５’−ウイングの長さを表し、「Ｙ」はギャップの長さを表し、「Ｚ」は３’−ウイングの長さを表す。「Ｘ」及び「Ｚ」は、均一な、変異又は交互の糖部を備え得る。ある一定の実施形態において、「Ｘ」及び「Ｙ」は、１以上の２’−デオキシヌクレオシドを含み得る。「Ｙ」は、２’−デオキシヌクレオシドを備え得る。本明細書中で使用される場合、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」として記載されるギャップマーは、ギャップが、５’−ウイング及び３’ウイングのそれぞれに直接隣接して置かれるような立体配置を有する。従って、５’−ウイングとギャップとの間又はギャップと３’−ウイングとの間に介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書中に記載のアンチセンス化合物の何れも、ギャップマーモチーフを有し得る。ある一定の実施形態において、「Ｘ」及び「Ｚ」は同じであり、その他の実施形態においてこれらは異なる。ある一定の実施形態において、「Ｙ」は８から１５個のヌクレオシドである。Ｘ、Ｙ又はＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０以上のヌクレオシドの何れかであり得る。
【０３１５】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、３−１０−４ギャップマーモチーフを保持する。
【０３１６】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、５−１０−５ギャップマーモチーフを保持する。
【０３１７】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、５−１０−６ギャップマーモチーフを保持する。
【０３１８】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、３−１０−３ギャップマーモチーフを保持する。
【０３１９】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、４−１２−４ギャップマーモチーフを保持する。
【０３２０】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、２−１３−５ギャップマーモチーフを保持する。
【０３２１】
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲは、ヌクレオチド３８１８０００−３９８００００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２９２８９．１０に相補的であるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号のいずれかのようなヒト配列を有する（本明細書中で配列番号１として組み込まれる。）。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲは、ヌクレオチド１３３４０００−１４９１０００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１２０９８７．１に相補的であるようなアカゲザル配列を有する（本明細書中で配列番号２として組み込まれる。）。
【０３２２】
本明細書中に含有される実施例の各配列番号で述べられる配列は、糖部、ヌクレオシド間結合又は核酸塩基への何らかの修飾と無関係であることを理解されたい。そのようなものとして、配列番号により指定されるアンチセンス化合物は、独立に糖部、ヌクレオシド間結合又は核酸塩基に対する１以上の修飾を備え得る。Ｉｓｉｓ番号（Ｉｓｉｓ  Ｎｏ）により記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列及びモチーフの組み合わせを示す。
【０３２３】
ある一定の実施形態において、標的領域は、標的核酸の構造的に定められる領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロン連結、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域又は他の定められる核酸領域を包含し得る。ＧＣＣＲに対して構造的に定められる領域はＮＣＢＩなどの配列データベースからの受託番号により得ることができ、このような情報は、参照により本明細書中に組み込まれる。ある一定の実施形態において、標的領域は、標的領域内のある標的セグメントの５’標的部位から、同じ標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位の配列を包含し得る。
【０３２４】
標的化することは、所望の効果が生じるようにアンチセンス化合物がハイブリッド形成する少なくとも１つの標的セグメントの決定を含む。ある一定の実施形態において、所望の効果は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの低下である。ある一定の実施形態において、所望の効果は、標的核酸によりコードされるタンパク質レベルの低下又は標的核酸に付随する表現型の変化である。
【０３２５】
標的領域は、１以上の標的セグメントを含有し得る。標的領域内の複数の標的セグメントは重複し得る。あるいは、これらは非重複であり得る。ある一定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、約３００を超えないヌクレオチドにより分離される。ある一定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上で、約２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０もしくは１０ヌクレオチドであるか、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０もしくは１０ヌクレオチド以下であるか、又は前述の値の何れか２つにより定められる範囲である数のヌクレオチドにより分離される。ある一定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上で、５以下又は約５以下のヌクレオチドにより分離される。ある一定の実施形態において、標的セグメントは連続的である。本明細書中で列挙される５’標的部位又は３’標的部位の何れかである出発核酸を有する範囲により定められる標的領域が企図される。
【０３２６】
適切な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソン又はエクソン／イントロン連結内で見出され得る。開始コドン又は終止コドンを含有する標的セグメントもまた適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントは、開始コドン又は終止コドンなど、ある一定の構造的に定められる領域を特に排除し得る。
【０３２７】
適切な標的セグメントの決定は、ゲノム全体での標的核酸の配列と他の配列の比較を含み得る。例えば、様々な核酸間で類似性領域を同定するために、ＢＬＡＳＴアルゴリズムが使用され得る。この比較は、選択される標的核酸以外の配列（即ち、非標的又は標的外配列）と非特異的な方式でハイブリッド形成し得るアンチセンス化合物配列の選択を防ぎ得る。
【０３２８】
活性標的領域内でアンチセンス化合物の（例えば標的核酸レベルの％低下により定められるような）活性のばらつきがあり得る。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルの低下は、ＧＣＣＲ発現の阻害の指標である。ＧＣＣＲタンパク質レベルの低下もまた、標的ｍＲＮＡ発現の阻害の指標である。さらに、表現型の変化は、ＧＣＣＲ発現阻害の指標である。ある一定の実施形態において、グルコース値低下、脂質レベル低下及び体重減少は、ＧＣＣＲ発現阻害の指標であり得る。ある一定の実施形態において、代謝性疾患に付随する症状の改善は、ＧＣＣＲ発現阻害の指標であり得る。ある一定の実施形態において、糖尿病に付随する症状の改善は、ＧＣＣＲ発現阻害の指標であり得る。ある一定の実施形態において、インスリン抵抗性の低下は、ＧＣＣＲ発現阻害の指標である。ある一定の実施形態において、糖尿病バイオマーカーの低下は、ＧＣＣＲ発現阻害の指標であり得る。
【０３２９】
ハイブリッド形成
いくつかの実施形態において、ハイブリッド形成は、本明細書中で開示されるアンチセンス化合物とＧＣＣＲ核酸との間で起こる。ハイブリッド形成の最も一般的な機構は、核酸分子の相補的核酸塩基間の水素結合（例えば、ワトソン−クリック、フーグスティーン又は逆フーグスティーン水素結合）を含む。
【０３３０】
ハイブリッド形成は様々な条件下で起こり得る。ストリンジェントな条件は、配列依存的であり、ハイブリッド形成させようとする核酸分子の性質及び組成により決定される。
【０３３１】
配列が標的核酸と特異的にハイブリッド形成するか否かを決定する方法は当技術分野で周知である。ある一定の実施形態において、本明細書中で提供されるアンチセンス化合物はＧＣＣＲ核酸と特異的にハイブリッド形成可能である。
【０３３２】
相補性
アンチセンス化合物及び標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、所望の効果が生じるように（例えばＧＣＣＲ核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合し得る場合、互いに相補的である。
【０３３３】
アンチセンス化合物は、介入又は隣接セグメントがハイブリッド形成事象に含まれないように（例えばループ構造、ミスマッチ又はヘアピン構造）、ＧＣＣＲ核酸の１以上のセグメントにわたりハイブリッド形成し得る。
【０３３４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供されるアンチセンス化合物又はその特定部分は、ＧＣＣＲ核酸、標的領域、標的セグメント又はその特定部分に対して、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％相補的である。標的核酸とのアンチセンス化合物の％相補性は、従来からの方法を用いて決定され得る。
【０３３５】
例えば、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基のうち１８個が標的領域に相補的であり、従って特異的にハイブリッド形成するアンチセンス化合物は、９０％の相補性を示す。この例において、残りの非相補的核酸塩基は、密集していてもよいし又は散在していてもよいし、散在して相補的核酸塩基が間に入っていてもよく、互いに対して又は相補的核酸塩基に対して連続している必要はない。そのようなものとして、標的核酸との完全相補性の２つの領域が隣接する４個の非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、標的核酸と全体で７７．８％の相補性があり、従って本発明の範囲内に入る。標的核酸の領域とのアンチセンス化合物の％相補性は、当技術分野で公知のＢＬＡＳＴプログラム（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌｓ）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３  ４１０；Ｚｈａｎｇ及びＭａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９  ６５６）を用いて通常どおり決定され得る。％相同性、配列同一性又は相補性は、例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２  ４８９）を使用する初期設定を用いて、Ｇａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ．）によって決定され得る。
【０３３６】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供されるアンチセンス化合物又はその特定部分は、標的核酸又はその特定部分に完全に相補的（即ち１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、ＧＣＣＲ核酸、標的領域、標的セグメント又はその標的配列に完全に相補的であり得る。本明細書中で使用される場合、「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物の各核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と正確な塩基対形成可能であることを意味する。例えば、２０個の核酸塩基アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物に対して完全に相補的である標的核酸の対応する２０個の核酸塩基部分がある限り、４００核酸塩基長である標的配列に対して完全に相補的である。完全に相補的とは、第一及び／又は第二の核酸の指定の部分に関しても使用され得る。例えば、３０個の核酸塩基アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基部分は、４００核酸塩基長である標的配列に対して「完全に相補的」であり得る。３０個の核酸塩基オリゴヌクレオチドのうち２０個の核酸塩基部分は、標的配列が対応する２０個の核酸塩基部分を有し、各核酸塩基がアンチセンス化合物の２０個の核酸塩基部分に対して相補的である場合、標的配列に対して完全に相補的である。同時に３０個の核酸塩基アンチセンス化合物全体は、アンチセンス化合物の残りの１０個の核酸塩基も標的配列に相補的であるか否かに依存して、標的配列に完全に相補的である場合もない場合もある。
【０３３７】
非相補的核酸塩基の位置は、本アンチセンス化合物の５’末端又は３’末端であり得る。あるいは、非相補的核酸塩基は、本アンチセンス化合物の内部の位置であり得る。２以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、これらは連続的（即ち連結されている。）でもよいし、又は非連続的でもよい。ある実施形態において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメントに置かれる。
【０３３８】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸又はその特定部分などの標的核酸に対して、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０個の核酸塩基長であるか又はそれ以下の長さの核酸塩基であるアンチセンス化合物は、４個以下、３個以下、２個以下又は１個以下の非相補的核酸塩基を備える。
【０３３９】
ある一定の実施形態において、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０であるか又はそれ以下の核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、ＧＣＣＲ核酸又はその特定部分などの標的核酸に対して、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下又は１個以下の非相補的核酸塩基を備える。
【０３４０】
本明細書中で提供されるアンチセンス化合物はまた、標的核酸の一部に対して相補的であるものも含む。本明細書中で使用される場合、「一部」は、標的核酸の領域又はセグメント内の定められた数の連続的（即ち連結される）核酸塩基を指す。「一部」は、アンチセンス化合物の定められた数の連続核酸塩基も指し得る。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８個の核酸塩基部分に対して相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１３個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１４個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１６個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１７個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１８個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１９個の核酸塩基部分に相補的である。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも２０個の核酸塩基部分に相補的である。また、標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上の核酸塩基部分又はこれらの値のうち何れか２個により定められる範囲の核酸塩基部分に対して相補的であるアンチセンス化合物も企図される。
【０３４１】
同一性
本明細書中で提供されるアンチセンス化合物はまた、特定のヌクレオチド配列、配列番号又は具体的なＩｓｉｓ番号により表される化合物又はそれらの一部に対する定められる％同一性も有し得る。本明細書中で使用される場合、アンチセンス化合物は、それが同じ核酸塩基対形成能を有する場合、本明細書中で開示される配列と同一である。例えば開示されるＤＮＡ配列においてチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシル及びチミジンの両者ともアデニンと対形成するので、ＤＮＡ配列と同一であるとみなされる。本明細書中に記載のアンチセンス化合物ならびに本明細書中で提供されるアンチセンス化合物と非同一である塩基を有する化合物の短縮型及び延長型も企図される。非同一である塩基は互いに隣接していてもよいし、又はアンチセンス化合物全体に分散していてもよい。アンチセンス化合物の％同一性は、それが比較される配列に対して同一塩基対形成を有する塩基数に従い計算される。
【０３４２】
ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物又はその一部は、本明細書中で開示されるアンチセンス化合物又は配列番号又はその一部の１以上と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である。
【０３４３】
修飾
ヌクレオシドは塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの（塩基としても知られる）核酸塩基部分は通常、複素環塩基部である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部に共有結合されるリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むこれらのヌクレオシドの場合、リン酸基は、糖の２’、３’又は５’ヒドロキシル部分に連結され得る。オリゴヌクレオチドは、線状のポリマー性オリゴヌクレオチドを形成するために、互いに対する隣接ヌクレオシドの共有結合を通じて形成される。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は一般的には、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成すると言われる。
【０３４４】
アンチセンス化合物に対する修飾は、ヌクレオシド間結合、糖部又は核酸塩基に対する置換又は変化を包含する。修飾アンチセンス化合物は、例えば細胞取り込み促進、核酸標的に対する親和性促進、ヌクレアーゼ存在下での安定性向上又は阻害活性向上などの所望の特性ゆえに、ネイティブ型を上回り、好ましいことが多い。
【０３４５】
化学修飾ヌクレオシドは、短縮化又は短縮されたアンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸への結合親和性を向上させるためにも使用され得る。結果的に、このような化学修飾ヌクレオシドを有するより短いアンチセンス化合物を用いて同等の結果が得られ得ることが多い。
【０３４６】
修飾ヌクレオシド間結合
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然のヌクレオシド間結合は、３’から５’のホスホジエステル結合である。例えば細胞取り込み促進、核酸標的に対する親和性促進、ヌクレアーゼ存在下での安定性向上などの所望の特性ゆえに、天然のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物よりも、１以上の修飾された、即ち非天然のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物が選択されることが多い。
【０３４７】
修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合ならびにリン原子を有しないヌクレオシド間結合を含む。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合としては、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホールアミデート及びホスホロチオエートが挙げられるが、これらに限定されない。リン含有及び非リン含有結合の調製の方法は周知である。
【０３４８】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、１以上の修飾ヌクレオシド間結合を備える。ある一定の実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。ある一定の実施形態において、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０３４９】
修飾糖部
本明細書中で提供されるアンチセンス化合物は、場合によっては糖基が修飾されている１以上のヌクレオシドを含有し得る。このような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の促進、結合親和性の向上又はいくつかの他の有益な生物学的特性を本アンチセンス化合物に付与し得る。ある一定の実施形態において、ヌクレオシドは、化学的に修飾されたリボフラノース環部を備える。化学的に修飾されたリボフラノース環の例としては、置換基の付加（５’及び２’置換基を含む。）；二環性核酸（ＢＮＡ）を形成するための非ジェミナル環原子の架橋；リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）又はＣ（Ｒ１）（Ｒ）２（Ｒ＝Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又は保護基）での置換；及びそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。化学的に修飾された糖の例としては、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示される５’，２’−ビス置換ヌクレオシドに対しては、２００８年８月２１日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照）、２’−位でさらなる置換がある、Ｓでのリボシル環酸素原子の置換（米国特許出願公開第ＵＳ２００５／０１３０９２３号、２００５年６月１６日公開参照）又はＢＮＡの５’−置換（ＬＮＡが例えば５’−メチル又は５’−ビニル基で置換されている、２００７年１１月２２日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１号参照）が挙げられる。
【０３５０】
修飾糖部を有するヌクレオシドの例としては、５’−ビニル、５’−メチル（Ｒ又はＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を備えるヌクレオシドが挙げられるが、これに限定されない。２’位の置換基は、アリール、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリール、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、各Ｒｍ及びＲｎは、独立に、Ｈ又は置換もしくは未置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。）からも選択され得る。
【０３５１】
本明細書中で使用される場合、「二環性ヌクレオシド」は、二環性糖部を備える修飾ヌクレオシドを指す。二環性ヌクレオシドの例としては、４’と２’リボシル環原子との間の架橋を備えるヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。ある一定の実施形態において、本明細書中で提供されるアンチセンス化合物は、架橋が４’−２’二環性ヌクレオシドを備える、１以上の二環性ヌクレオシドを含む。このような４’−２’二環性ヌクレオシドの例としては、式：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’及びその類似体（２００８年７月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５号参照）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’及びその類似体（２００９年１月８日公開の、ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ２００９／００６４７８号参照）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’及びその類似体（２００８年１２月１１日公開の、ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ２００８／１５０７２９参照）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日公開の、米国特許出願公開第ＵＳ２００４／０１７１５７０号参照）；４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中、ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又は保護基である。）（２００８年９月２３日発行の、米国特許第７，４２７，６７２号参照）；４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４参照）；及び４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’及びその類似体（２００８年１２月８日公開の、ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ２００８／１５４４０１号参照）のうち１つが挙げられるが、これらに限定されない。また、例えば：Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８；Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２９（２６）８３６２−８３７９（２００７年７月４日）；Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７；Ｏｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３；米国特許第Ｕ．Ｓ．６，６７０，４６１号、同第７，０５３，２０７号、同第６，２６８，４９０号、同第６，７７０，７４８号、同第６，７９４，４９９号、同第７，０３４，１３３号、同第６，５２５，１９１号、同第７，３９９，８４５号；ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ２００４／１０６３５６号、ＷＯ９���／１４２２６号、ＷＯ２００５／０２１５７０号及びＷＯ２００７／１３４１８１号；米国特許出願公開第ＵＳ２００４／０１７１５７０号、ＵＳ２００７／０２８７８３１号及びＵＳ２００８／００３９６１８号；及び米国特許シリアル番号第１２／１２９，１５４号、同第６０／９８９，５７４号、同第６１／０２６，９９５号、同第６１／０２６，９９８号、同第６１／０５６，５６４号、同第６１／０８６，２３１号、同第６１／０９７，７８７号及び同第６１／０９９，８４４号；及びＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１号、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４号及びＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２号も参照のこと。前述の二環性ヌクレオシドのそれぞれは、例えばα−Ｌ−リボフラノース及びβ−Ｄ−リボフラノースを含む１以上の立体化学的糖立体配置を有するように調製され得る（ＷＯ９９／１４２２６として１９９９年３月２５日公開の、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３を参照）。
【０３５２】
ある一定の実施形態において、ＢＮＡヌクレオシドの二環性糖部としては、ペントフラノシル糖部の４’と２’位との間に少なくとも１つの架橋を有し、このような架橋が独立に、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−及び−Ｎ（Ｒａ）−（式中、
ｘは、０、１又は２であり；
ｎは、１、２、３又は４であり；
各Ｒａ及びＲｂは、独立に、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環基、置換複素環基、ヘテロアリール、置換へテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式基、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式基、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）又はスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；
各Ｊ１及びＪ２は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環基、置換複素環基、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル又は保護基である。）
から独立に選択される１又は２から４個の連結基を備える化合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３５３】
ある一定の実施形態において、二環性糖部の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−又は−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。ある一定の実施形態において、架橋は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−（式中、各Ｒは、独立にＨ、保護基又はＣ１−Ｃ１２アルキルである。）である。
【０３５４】
ある一定の実施形態において、二環性ヌクレオシドは、異性体の立体配置によってさらに定められる。例えば、４’−２’メチレン−オキシ架橋を備えるヌクレオシドは、α−Ｌ立体配置又はβ−Ｄ立体配置であり得る。以前に、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡが、アンチセンス活性を示したアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれている（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０３５５】
ある一定の実施形態において、二環性ヌクレオシドとしては、下記で示されるような、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ及び（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３５６】
【化１】
2015501155.tif 000002
式中、Ｂｘは塩基部であり、Ｒは、独立にＨ、保護基又はＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０３５７】
ある一定の実施形態において、式Ｉを有する二環性ヌクレオシド：
【化２】
2015501155.tif 000003
式中：
Ｂｘは複素環塩基部であり；
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−又は−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり；
Ｒｃは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又はアミノ保護基であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部又は支持媒体に対する共有結合である。
【０３５８】
ある一定の実施形態において、式ＩＩを有する二環性ヌクレオシド：
【化３】
2015501155.tif 000004
式中：
Ｂｘは複素環塩基部であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部又は支持媒体に対する共有結合であり；
ＺａはＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオール又は置換チオである。
ある実施形態において，置換基のそれぞれは、独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立に選択される置換基で単置換又は多置換され、各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル又は置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、Ｘは、Ｏ又はＮＪｃである。
【０３５９】
ある一定の実施形態において、式ＩＩＩを有する二環性ヌクレオシド：
【化４】
2015501155.tif 000005
式中：
Ｂｘは複素環塩基部であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部又は支持媒体に対する共有結合であり；
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル又は置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０３６０】
ある一定の実施形態において、式ＩＶを有する二環性ヌクレオシド：
【化５】
2015501155.tif 000006
式中：
Ｂｘは複素環塩基部であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部又は支持媒体に対する共有結合であり；
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル又は置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり；
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル又は置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１−Ｃ６アミノアルキル又は置換Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルであり；
ある一定の実施形態において、式Ｖを有する二環性ヌクレオシド：
【化６】
2015501155.tif 000007
式中、
Ｂｘは複素環塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部又は支持媒体に対する共有結合であり；
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆはそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであるか；
又はｑｅ及びｑｆは一緒に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
ｑｇ及びｑｈはそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又は置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
それらのオリゴマー化とのメチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ単量体アデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製ならびに核酸認識特性が記載されている（例えばＫｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０参照）。ＢＮＡ及びその調製もＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６に記載されている。
【０３６１】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ及び２’−チオ−ＢＮＡの類似体も調製されている（例えばＫｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２を参照）。核酸ポリメラーゼに対する基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド２本鎖を備えるロックドヌクレオシド類似体の調製も記載されている（例えばＷｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９９／１４２２６参照）。さらに、２’−アミノ−ＢＮＡの合成、新規の立体配座的に制限される高親和性オリゴヌクレオチド類似体が当技術分野で記載されている（例えばＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９参照）。さらに、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡが調製されており、相補的ＲＮＡ及びＤＮＡ鎖とのそれらの２本鎖の温度安定性が既に報告されている。
【０３６２】
ある一定の実施形態において、式ＶＩを有する二環性ヌクレオシド：
【化７】
2015501155.tif 000008
式中：
Ｂｘは複素環塩基部であり；
Ｔａ及びＴｂはそれぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部又は支持媒体に対する共有結合であり；
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは、独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；
ｑｉ及びｑｊ又はｑｌ及びｑｋは一緒に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又は置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
【０３６３】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋及びアルケニル類似体、架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’を有するある炭素環式二環性ヌクレオシドが記載されている（例えばＦｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３及びＡｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０参照）。それらのオリゴマー化及び生化学的研究との炭素環式二環性ヌクレオシドの合成及び調製も記載されている（例えばＳｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９参照）。
【０３６４】
本明細書中で使用される場合、「４’−２’二環性ヌクレオシド」又は「４’−２’二環性ヌクレオシド」は、２’炭素原子及び４’炭素原子を連結する架橋を備えるフラノース環を備える二環性ヌクレオシドを指す。
【０３６５】
本明細書中で使用される場合、「単環ヌクレオシド」は、二環性糖部ではない修飾糖部を備えるヌクレオシドを指す。ある一定の実施形態において、ヌクレオシドの糖部又は糖部類似体は、あらゆる位置で修飾又は置換され得る。
【０３６６】
本明細書中で使用される場合、「２’−修飾糖」は、２’位で修飾されたフラノシル糖を意味する。ある一定の実施形態において、このような修飾は、置換及び未置換アルコキシ、置換及び未置換チオアルキル、置換及び未置換アミノアルキル、置換及び未置換アルキル、置換及び未置換アリールならびに置換及び未置換アルキニルを含むが限定されないハロゲン化物から選択される置換基を含む。ある一定の実施形態において、２’修飾は、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２（式中、ｎ及びｍは１から約１０である。）を含むが限定されない置換基から選択される。他の２’−置換基はまた、Ｃ１−Ｃ１２アルキル；置換アルキル；アルケニル；アルキニル；アルカリル；アラルキル；Ｏ−アルカリル又はＯ−アラルキル；ＳＨ；ＳＣＨ３；ＯＣＮ；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ３；ＯＣＦ３；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２；Ｎ３；ＮＨ２；複素環アルキル；複素環アルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換シリル；ＲＮＡ切断基；レポーター基；挿入剤；薬物動態学的特性を向上させるための基；及びアンチセンス化合物の薬力学的特性を向上させるための基、及び同様の特性を有する他の置換基からも選択され得る。ある一定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは２’−ＭＯＥ側鎖を備える（例えばＢａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００参照）。このような２’−ＭＯＥ置換は、未修飾ヌクレオシドと、及び他の修飾ヌクレオシド、例えば２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル及びＯ−アミノプロピルなどと比較して、結合親和性が向上していることが記載されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドはまた、インビボでの使用に対して有望な特長がある遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることも示されている（例えばＭａｒｔｉｎ，Ｐ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４；Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６；Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７；及びＡｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６参照）。
【０３６７】
本明細書中で使用される場合、「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」又は「修飾ＴＨＰヌクレオシド」とは、六員のテトラヒドロピラン「糖」で、通常のヌクレオシドにおけるペントフラノシル残基が置換されているヌクレオシドを意味する（糖代理物）。修飾ＴＨＰヌクレオシドとしては、当技術分野でヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール核酸（ＡＮＡ）、マニトール核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，ＣＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００２）１０：８４１−８５４参照）、フルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と呼ばれるもの又は式Ｘを有する化合物：
【化８】
2015501155.tif 000009
（式中、式Ｘの少なくとも１つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれに対して独立に：
Ｂｘは複素環塩基部であり；
Ｔ３及びＴ４はそれぞれ独立に、本アンチセンス化合物にテトラヒドロピランヌクレオシド類似体を連結するヌクレオシド間連結基であるか、又はＴ３及びＴ４のうち一方が、本アンチセンス化合物にテトラヒドロピランヌクレオシド類似体を連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔ３及びＴ４の他方がＨ、ヒドロキシル保護基、連結される共役基又は５’もしくは３’末端基であり；
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル又は置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり；
Ｒ１及びＲ２のうち一方が水素であり、他方は、ハロゲン、置換又は未置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮから選択され、式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立にＨ又はＣ１−Ｃ６アルキルである。）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６８】
ある一定の実施形態において、式中、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ及びｑｕがそれぞれＨである、式Ｘの修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある一定の実施形態において、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ及びｑｕの少なくとも１つはＨ以外である。ある一定の実施形態において、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ及びｑｕの少なくとも１つはメチルである。ある一定の実施形態において、式中、Ｒ１及びＲ２のうち一方がＦである式ＸのＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある一定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はメトキシであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はメトキシエトキシであり、Ｒ２はＨである。
【０３６９】
本明細書中で使用される場合、「２’修飾」又は「２’置換」は、Ｈ又はＯＨを除き、２’位に置換基を備える糖を備えるヌクレオシドを指す。２’−修飾ヌクレオシドとしては、糖環の架橋を連結する２個の炭素原子が糖環の２’炭素及び別の炭素を非架橋２’置換基、例えばアリール、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリール、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）又はＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、各Ｒｍ及びＲｎは、独立にＨであるか、又は置換もしくは未置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。）など、と連結する、二環性ヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。２’−修飾ヌクレオシドは、例えば糖の他の位置に及び／又は核酸塩基において他の修飾をさらに備え得る。
【０３７０】
本明細書中で使用される場合、「２’−Ｆ」は、２’位にフルオロ基を備える糖を指す。
【０３７１】
本明細書中で使用される場合、「２’−ＯＭｅ」、「２’−ＯＣＨ３」又は「２’−Ｏ−メチル」のそれぞれは、糖環の２’位に−ＯＣＨ３基を備える糖を指す。
【０３７２】
本明細書中で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、複数個の連結ヌクレオシドを備える化合物を指す。ある一定の実施形態において、この複数のヌクレオシドの１以上が修飾されている。ある一定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／又はデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
【０３７３】
アンチセンス化合物への組み込みのためにヌクレオシドを修飾するために使用され得る多くの他の二環式及び三環式糖代理環系も、当技術分野で公知である。（例えば、総説：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｊ．Ｃ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１０，８４１−８５４参照）。このような環系は、活性を促進するための様々なさらなる置換を受け得る。
【０３７４】
修飾糖の調製のための方法は当業者にとって周知である。
【０３７５】
修飾糖部を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部（天然、修飾又はこれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリッド形成のために維持される。
ある一定の実施形態において、アンチセンス化合物は、修飾糖部を有する１以上のヌクレオチドを備える。ある一定の実施形態において、修飾糖部は２’−ＭＯＥである。ある一定の実施形態において、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオチドはギャップマーモチーフにおいて配置され得る。ある一定の実施形態において、修飾糖部はｃＥｔである。ある一定の実施形態において、ｃＥｔ修飾ヌクレオチドは、ギャップマーモチーフのウイング全体にわたり配置される。
【０３７６】
修飾核酸塩基
核酸塩基（又は塩基）修飾又は置換は、天然又は合成未修飾核酸塩基とは、構造的に区別でき、さらに機能的には交換可能である。天然及び修飾核酸塩基の両者とも、水素結合に関与することが可能である。このような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性又はいくつかの他の有益な生物学的特性をアンチセンス化合物に付与し得る。修飾核酸塩基は、合成及び天然核酸塩基、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）などを含む。５−メチルシトシン置換を含むある一定の核酸塩基置換は、アンチセンス化合物の標的核酸に対する結合親和性を向上させるために特に有用である。例えば、５−メチルシトシン置換は、核酸２本鎖安定性を０．６−１．２℃、向上させることが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．及びＬｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６−２７８）。
【０３７７】
さらなる未修飾核酸塩基としては、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの、６−メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの、２−プロピル及び他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル及びシトシン及びピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル及び他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン及び３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンが挙げられる。
【０３７８】
複素環塩基部はまた、プリン又はピリミジン塩基が他の複素環、例えば７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンで置換されるものも含み得る。アンチセンス化合物の結合親和性を向上させるために特に有用である核酸塩基としては、２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンを含め、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリンが挙げられる。
【０３７９】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物は、１以上の修飾核酸塩基を備える。ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるギャップ拡大アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１以上の修飾核酸塩基を備える。ある一定の実施形態において、修飾核酸塩基は５−メチルシトシンである。ある一定の実施形態において、各シトシンは５−メチルシトシンである。
【０３８０】
医薬組成物を処方するための組成物及び方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物又は処方物の調製のために、医薬的に許容可能な活性又は不活性物質と混合され得る。医薬組成物の処方のための組成物及び方法は、投与経路、疾患の程度又は投与されるべき用量を含むがこれらに限定されない多くの基準に依存する。
【０３８１】
アンチセンス化合物を適切な医薬的に許容可能な希釈剤又は担体と合わせることによって、医薬組成物においてＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物が利用され得る。医薬的に許容可能な希釈剤としては、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。ＰＢＳは、非経口的に送達されるべき組成物中での使用に適切な希釈剤である。従って、ある実施形態において、本明細書中に記載の方法で利用されるものは、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物と、医薬的に許容可能な希釈剤と、を備える医薬組成物である。ある一定の実施形態において、医薬的に許容可能な希釈剤はＰＢＳである。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３８２】
アンチセンス化合物を備える医薬組成物は、ヒトを含む動物に投与時、（直接又は間接的に）生物学的に活性のあるその代謝産物又は残基を提供可能である何らかの医薬的に許容可能な塩、エステル又はこのようなエステルの塩又は何らかの他のオリゴヌクレオチドを包含する。従って、本開示は、例えば、アンチセンス化合物の医薬的に許容可能な塩、プロドラッグ、このようなプロドラッグの医薬的に許容可能な塩及び他の生物学的同等物にも関する。適切な医薬的に許容可能な塩としては、ナトリウム及びカリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中に記載の化合物の医薬的に許容可能な塩は、当技術分野で周知の方法によって調製され得る。医薬的に許容可能な塩の概説については、Ｓｔａｈｌ及びＷｅｒｍｕｔｈ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００２）を参照。アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩は、ヒトへの治療的投与に対して有用であり、広く受け入れられている。従って、ある実施形態において、本明細書中に記載の化合物はナトリウム塩の形態である。
【０３８３】
活性アンチセンス化合物を生成させるために、プロドラッグは、体内の内在性ヌクレアーゼにより切断されるアンチセンス化合物の一方又は両末端におけるさらなるヌクレオシドの組み込みを含み得る。
【０３８４】
複合アンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、活性、細胞分布又は得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進する、１以上の部分又は複合物に共有結合され得る。典型的な共役基としては、コレステロール部及び脂質部が挙げられる。さらなる共役基としては、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン及び色素が挙げられる。
【０３８５】
アンチセンス化合物はまた、例えばヌクレアーゼ安定性などの特性を促進するために、アンチセンス化合物の一方又は両末端に一般に連結される１以上の安定化基を有するようにも修飾され得る。キャップ構造が安定化基に含まれる。これらの末端修飾は、エキソヌクレアーゼ分解から末端核酸を有するアンチセンス化合物を保護し、送達及び／又は細胞での局在に関与し得る。このキャップは５’−末端（５’−キャップ）もしくは３’−末端（３’−キャップ）に存在し得るか、又は両末端に存在し得る。キャップ構造は当技術分野で周知であり、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップを含む。ヌクレアーゼ安定性を付与するためにアンチセンス化合物の一方又は両末端にキャップ付加するために使用され得るさらなる３’及び５’−安定化基としては、２００３年１月１６日公開のＷＯ０３／００４６０２で開示されるものが挙げられる。
【０３８６】
細胞培養及びアンチセンス化合物処理
ＧＣＣＲ核酸のレベル、活性又は発現におけるアンチセンス化合物の影響は、インビトロで様々な細胞タイプにおいて試験され得る。このような分析に対して使用される細胞タイプは市販業者から入手可能であり（例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓｕｓ，ＶＡ；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、細胞は、市販の試薬（例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して業者の説明書に従い培養される。実例となる細胞タイプとしては、ＨｅｐＧ２細胞及び初代培養肝細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３８７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロでの試験
他のアンチセンス化合物での処理のために適切に改変され得る、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの細胞の処理のための方法が本明細書中に記載されている。
【０３８８】
一般に、培養中で細胞がおよそ６０から８０％コンフルエンシーに到達したら、アンチセンスオリゴヌクレオチドで細胞を処理する。
【０３８９】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために一般に使用されるある試薬としては、陽イオン性脂質形質移入試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度及び一般的には１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２から１２μｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）濃度を達成するために、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）と混合される。
【０３９０】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の試薬としては、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の濃度および、一般的に１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２から１２μｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）濃度を達成するために、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）と混合される。
【０３９１】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の試薬としては、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が挙げられる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の濃度及び一般的に１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２から１２μｇ／ｍＬの範囲であるＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）濃度を達成するために、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中でＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）と混合される。
【０３９２】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の技術としては、エレクトロポレーションが挙げられる。
【０３９３】
従来からの方法によって細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。細胞は、一般的には、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理から１６から２４時間後に回収するが、このときに標的核酸のタイムＲＮＡまたはタンパク質レベルを当技術分野で公知の及び本明細書中に記載の方法により測定する。一般に、複数回繰り返して処理が行われる場合、データは、繰り返し処理の平均として与えられる。
【０３９４】
使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞株によって変動する。特定の細胞株に対する最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定するための方法は当技術分野で周知である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一般的に、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ又はＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎで形質移入した場合、１ｎＭから３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、エレクトロポレーションを用いて形質移入される場合、６２５から２０，０００ｎＭの範囲のより高い濃度で使用される。
【０３９５】
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、トータル細胞性ＲＮＡ又はポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡにおいて行われ得る。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野で周知である。ＲＮＡは、例えば、製造者の推奨プロトコールに従い、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて当技術分野で周知である方法を用いて調製される。
【０３９６】
標的レベル又は発現の阻害の分析
ＧＣＣＲ核酸のレベル又は発現の阻害は、当技術分野で公知の様々な方法でアッセイされ得る。例えば、標的核酸レベルは、例えばノザンブロット分析、競合ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又は定量的リアルタイムＰＣＲによって定量され得る。ＲＮＡ分析は、トータル細胞性ＲＮＡ又はポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡにおいて行われ得る。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野で周知である。ノザンブロット分析もまた当技術分野で通常のものである。定量的リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡから入手可能であり、製造者の説明書に従い使用される市販のＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００又は７９００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて都合よく完遂され得る。
【０３９７】
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量は、製造者の説明書に従い、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００又は７９００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて、定量的リアルタイムＰＣＲにより遂行され得る。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は当技術分野で周知である。
【０３９８】
リアルタイムＰＣＲ前に、単離ＲＮＡは、逆転写酵素（ＲＴ）反応に供されるが、これは相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生成させ、次いでこれがリアルタイムＰＣＲ増幅に対して基質として使用される。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は、同じ試料ウェル中で連続的に行われる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ試薬はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から入手される。ＲＴ、リアルタイムＰＣＲ反応は当業者にとって周知の方法によって行われる。
【０３９９】
リアルタイムＰＣＲにより得られる遺伝子（又はＲＮＡ）標的量は、シクロフィリンＡなどの発現が一定である遺伝子の発現レベルの何れかを用いるか又はＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いてトータルＲＮＡを定量することによって、正規化される。シクロフィリンＡ発現は、リアルタイムＰＣＲにより、多重的に又は個別に、標的と同時に操作を行うことによって定量される。トータルＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を使用して定量される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によるＲＮＡ定量の方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８−３７４）において教示される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）蛍光を測定するために、ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００機器（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）が使用される。
【０４００】
プローブ及びプライマーは、ＧＣＣＲ核酸とハイブリッド形成するように設計される。リアルタイムＰＣＲプローブ及びプライマーを設計するための方法は、当技術分野で周知であり、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）などのソフトウェアの使用を含み得る。
【０４０１】
タンパク質レベルの分析
ＧＣＣＲ核酸のアンチセンス阻害は、ＧＣＣＲタンパク質レベルを測定することによって評価され得る。ＧＣＣＲのタンパク質レベルは、免疫沈降、ウエスタンブロット分析（免疫ブロッティング）、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えばカスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学又は蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）などの当技術分野で周知である様々な方法において評価又は定量され得る。標的に対する抗体は、抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＭＩ）など、様々なソースから特定され、入手され得るか、又は当技術分野で周知である従来のモノクローナル又はポリクローナル抗体作製方法を介して調製され得る。ヒト及びラットＧＣＣＲの検出に有用な抗体は市販されている。
【０４０２】
アンチセンス化合物のインビボ試験
アンチセンス化合物、例えば，アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それらのＧＣＣＲ発現阻害能及び表現型変化生成能を評価するために動物において試験される。試験は、正常な動物で又は実験的な疾患モデルで行われ得る。動物に対する投与の場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝食塩水などの医薬的に許容可能な希釈剤中で処方される。投与は、非経口の投与経路を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理期間後、組織からＲＮＡを単離し、ＧＣＣＲ核酸発現の変化を測定する。ＧＣＣＲタンパク質レベルの変化も測定する。
【０４０３】
ある一定の適応
ある一定の実施形態において、本明細書中に記載のような１以上の医薬組成物を投与することを備える、個体を処置する方法が本明細書中で提供される。ある一定の実施形態において、個体は代謝関連疾患を有する。
【０４０４】
下記の実施例で示されるように、本明細書中に記載のような、ＧＣＣＲに対して標的化される化合物は、メタボリックシンドローム、糖尿病、インスリン抵抗性、糖尿病の脂質異常症、高トリグリセリド血症、肥満及び体重増加を含む代謝関連疾患の生理学的症状の重症度を低下させることが示され、、例えば動物は症状が継続したが、未処置動物と比較してその症状の重症度が低下したことが示されている。ある一定の実験において、本化合物は、血糖値を低下させた。他の実験において、本化合物は糖尿病の症状を軽減する。他の実験において、本化合物は、体重増加を抑制する。他の実験において、本化合物は、高トリグリセリド血症を抑制する。ある一定の実施形態において、本化合物は、化合物の機能を回復させることにより、本明細書に記載された化合物での処置によって疾患の症状が逆転させる。ある一定の実施形態において、より長期間処置を受けた動物は、本化合物をより短期間投与された動物よりも症状の重症度が低下する。
【０４０５】
糖尿病は、多くの身体的及び生理学的兆候及び／又は症状を特徴とする。２型糖尿病に付随することが当業者にとって公知の何らかの症状は、上述の方法において上記で述べられるように、改善されるか又は調整され得る。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は、グルコース値上昇、体重増加、頻尿、異常な喉の渇き、過度の空腹、過度の疲労、視力障害、感染症の頻発、四肢の刺痛又は無感覚、皮膚の乾燥及びかゆみ、体重減少、回復が遅い痛み及び歯肉の腫脹などの身体的症状である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は、インスリン抵抗性上昇、グルコース値上昇、脂肪量増加、代謝率低下、糖クリアランス低下、耐糖能低下、インスリン感受性低下、肝臓インスリン感受性低下、脂肪組織サイズ及び重量上昇、体脂肪増加及び体重増加などの、生理学的症状である。
【０４０６】
ある一定の実施形態において、身体的兆候又は症状はグルコース値上昇である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は体重増加である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は頻尿である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は異常な喉の渇きである。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は過度の空腹である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は過度の疲労である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は視力障害である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は感染症の頻発である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は四肢の刺痛又は無感覚である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は皮膚の乾燥及びかゆみである。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は体重減少である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は回復が遅い痛みである。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は歯肉の腫脹である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状はインスリン抵抗性上昇である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状はグルコース値上昇である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は脂肪量増加である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は代謝率低下である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は糖クリアランス低下である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は耐糖能低下である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状はインスリン感受性低下である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は肝臓インスリン感受性低下である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は脂肪組織サイズ及び重量上昇である。ある一定の実施形態において、兆候又は症状は体脂肪増加である。ある一定の実施形態において、症状又は兆候は体重増加である。
【０４０７】
ある一定の実施形態において、本明細書中に記載のような１以上の医薬組成物を投与することを備える、個体を処置する方法が提供される。ある一定の実施形態において、個体は代謝関連疾患を有する。
【０４０８】
ある一定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸に対して標的化されるアンチセンス化合物の投与の結果、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％又はこれらの値のうち何れか２つにより定められる範囲、ＧＣＣＲ発現が低下する。
【０４０９】
ある一定の実施形態において、代謝関連疾患に罹患しているか又は罹患し易い患者を処置するための医薬の調製のために、ＧＣＣＲに対して標的化されるアンチセンス化合物を備える医薬組成物が使用される。
【０４１０】
ある一定の実施形態において、本明細書中に記載の方法は、配列番号３６挙げられる配列の本明細書中に記載のような連続核酸塩基部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを備える化合物を投与することを含む。ある一定の実施形態において、本化合物はＩＳＩＳ４２５１１５である。
【０４１１】
ある一定の併用療法
ある一定の実施形態において、本明細書中に記載の１以上の医薬組成物は、１以上の他の医薬剤と同時投与される。ある一定の実施形態において、このような１以上の他の医薬剤は、本明細書中に記載の１以上の医薬組成物と同じ疾患、障害又は状態を処置するように設計される。ある一定の実施形態において、このような１以上の他の医薬剤は、本明細書中に記載の１以上の医薬組成物として異なる疾患、障害又は状態を処置するように設計される。ある一定の実施形態において、このような１以上の他の医薬剤は、本明細書中に記載のような１以上の医薬組成物の望ましくない副作用を処置するように設計される。ある一定の実施形態において、１以上の医薬組成物は、他の医薬剤の望ましくない影響を処置するために別の医薬剤と同時投与される。ある一定の実施形態において、１以上の医薬組成物は、併用効果を生じさせるために別の医薬剤と同時投与される。ある一定の実施形態において、１以上の医薬組成物は、相乗的効果を生じさせるために別の医薬剤と同時投与される。
【０４１２】
ある一定の実施形態において、第一の薬剤及び１以上の第二の薬剤が同時に投与される。ある一定の実施形態において、第一の薬剤及び１以上の第二の薬剤が異なる時間に投与される。ある一定の実施形態において、第一の薬剤及び１以上の第二の薬剤は、単一の医薬処方物中で一緒に調製される。ある一定の実施形態において、第一の薬剤及び１以上の第二の薬剤は個別に調製される。
【０４１３】
ある一定の実施形態において、第二の化合物は、本明細書中に記載の医薬組成物の投与前に投与される。ある一定の実施形態において、第二の化合物は、本明細書中に記載の医薬組成物の投与後に投与される。ある一定の実施形態において、第二の化合物は、本明細書中に記載の医薬組成物として同時に投与される。ある一定の実施形態において、同時投与される第二の化合物の用量は、第二の化合物が単独で投与された場合に投与される用量と同じである。ある一定の実施形態において、同時投与される第二の化合物の用量は、第二の化合物が単独で投与された場合に投与される用量よりも少ない。ある一定の実施形態において、同時投与される第二の化合物の用量は、第二の化合物が単独で投与された場合に投与される用量よりも多い。
【０４１４】
ある一定の実施形態において、第二の化合物の同時投与は、化合物の同時投与の結果、第一の化合物を単独で投与する効果よりも効果が大きくなるように、第一の化合物の効果を促進する。ある一定の実施形態において、同時投与の結果、単独投与された場合の化合物の効果の相加である効果が得られる。ある一定の実施形態において、同時投与の結果、単独投与された場合の化合物の効果の相加的効果を超える効果が得られる。ある一定の実施形態において、第一の化合物はアンチセンス化合物である。ある一定の実施形態において、第二の化合物はアンチセンス化合物である。
【０４１５】
ある一定の実施形態において、第二の薬剤としては、グルコース低下剤が挙げられるが、これらに限定されない。グルコース低下剤としては、治療的なライフスタイル変化、ＰＰＡＲアゴニスト、ジペプチジルぺプチダーゼ（ＩＶ）阻害剤、ＧＬＰ−１類似体、インスリン又はインスリン類似体、インスリン分泌促進剤、ＳＧＬＴ２阻害剤、ヒトアミリン類似体、ビグアナイド、α−グルコシダーゼ阻害剤又はこれらの組み合わせが挙げられ得るがこれらに限定されない。グルコース低下剤としては、メトホルミン、スルホニル尿素、ロシグリタゾン、メグリチニド、チアゾリジンジオン、α−グルコシダーゼ阻害剤又はこれらの組み合わせが挙げられ得るがこれらに限定されない。スルホニル尿素は、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリド又はグリクラジドであり得る。メグリチニドは、ナテグリニド又はレパグリニドであり得る。チアゾリジンジオンは、ピオグリタゾン又はロシグリタゾンであり得る。α−グルコシダーゼは、アカルボース又はミグリトールであり得る。
【０４１６】
いくつかの実施形態において、グルコース低下治療薬はＧＬＰ−１類似体である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１類似体は、エキセンジン−４又はリラグルチドである。
【０４１７】
他の実施形態において、グルコース低下治療薬はスルホニル尿素である。いくつかの実施形態において、スルホニル尿素は、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリド又はグリクラジドである。
【０４１８】
いくつかの実施形態において、グルコース低下薬はビグアナイドである。いくつかの実施形態において、ビグアナイドはメトホルミンであり、いくつかの実施形態において、メトホルミン単独での処置後に観察される乳酸アシドーシスと比較した場合、乳酸アシドーシスを向上させることなく血糖値が低下させられる。
【０４１９】
いくつかの実施形態において、グルコース低下薬はメグリチニドである。いくつかの実施形態において、メグリチニドは、ナテグリニド又はレパグリニドである。
【０４２０】
いくつかの実施形態において、グルコース低下薬はチアゾリジンジオンである。いくつかの実施形態において、チアゾリジンジオンはピオグリタゾン、ロシグリタゾン又はトログリタゾンである。いくつかの実施形態において、ロシグリタゾン単独での処置で観察されるものよりも大きな体重増加なく、血糖値が低下させられる。
【０４２１】
いくつかの実施形態において、グルコース低下薬はα−グルコシダーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態において、α−グルコシダーゼ阻害剤は、アカルボース又はミグリトールである。
【０４２２】
ある一定の実施形態において、同時投与されるグルコース低下剤はＩＳＩＳ１１３７１５である。
【０４２３】
ある一定の実施形態において、グルコース低下療法は治療的なライフスタイル変化である。
【０４２４】
ある一定の実施形態において、第二の薬剤としては、脂質低下剤が挙げられるがこれに限定されない。脂質低下剤としては、アトロバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン及びエゼチミブが挙げられ得るがこれらに限定されない。ある一定のこのような実施形態において、脂質低下剤は、本明細書中に記載の医薬組成物の投与前に投与される。ある一定のこのような実施形態において、脂質低下剤は、本明細書中に記載の医薬組成物の投与後に投与される。ある一定のこのような実施形態において、脂質低下剤は、本明細書中に記載の医薬組成物と同時に投与される。ある一定のこのような実施形態において、同時投与される脂質低下剤の用量は、脂質低下剤が単独で投与された場合に投与される用量と同じである。ある一定のこのような実施形態において、同時投与される脂質低下剤の用量は、脂質低下剤が単独で投与された場合に投与される用量よりも少ない。ある一定のこのような実施形態において、同時投与される脂質低下剤の用量は、脂質低下剤が単独で投与された場合に投与される用量よりも多い。
【０４２５】
ある一定の実施形態において、同時投与される脂質低下剤は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤である。ある一定のこのような実施形態において、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、スタチンである。ある一定のこのような実施形態において、スタチンは、アトロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン及びロスバスタチンから選択される。
【０４２６】
ある一定の実施形態において、同時投与される脂質低下剤は、コレステロール吸収阻害剤である。ある一定のこのような実施形態において、コレステロール吸収阻害剤はエゼチミブである。
【０４２７】
ある一定の実施形態において、同時投与される脂質低下剤は、同時処方ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤及びコレステロール吸収阻害剤である。ある一定のこのような実施形態において、同時処方される脂質低下剤はエゼチミブ／シンバスタチンである。
【０４２８】
ある一定の実施形態において、同時投与される脂質低下剤は、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質阻害剤（ＭＴＰ阻害剤）である。
【０４２９】
ある一定の実施形態において、同時投与される脂質低下剤は、ＡｐｏＢに標的化されるオリゴヌクレオチドである。
【０４３０】
ある一定の実施形態において、第二の薬剤としては、抗肥満薬又は薬剤が挙げられるが、これに限定されない。このような抗肥満剤としては、オルリスタット、又はリモナバンが挙げられるが、これらに限定されず、脂肪又は体重低下剤として上述のように投与され得る。ある一定の実施形態において、本アンチセンス化合物は、食欲抑制剤と同時投与され得る。このような食欲抑制剤としては、ジエチルプロピオンテヌエート、マジンドール、オルリスタット、フェンジメトラジン、及びフェンテルミンが挙げられるが、これらに限定されず、本明細書中に記載のように投与され得る。ある一定の実施形態において、抗肥満剤は、ＣＮＳベースのもの、又はＧＬＰ−１ベースのもの、例えば以下に限定されないがリラグルチドなどである。
【０４３１】
処方物
本明細書中で提供される化合物はまた、取り込み、分布及び／又は吸収を補助するために、他の分子、分子構造又は化合物の混合物、例としてはリポソーム、受容体−標的化分子又は他の処方物と、混合、複合化又は会合させられ得る。このような取り込み、分布及び／又は吸収を補助する処方物の調製を教示する代表的な米国特許としては、それぞれ参照により本明細書中に組み込まれる、米国特許第５，１０８，９２１号；同第５，３５４，８４４号；同第５，４１６，０１６号；同第５，４５９，１２７号；同第５，５２１，２９１号；同第５，５４３，１５８号；同第５，５４７，９３２号；同第５，５８３，０２０号；同第５，５９１，７２１号；同第４，４２６，３３０号；同第４，５３４，８９９号；同第５，０１３，５５６号；同第５，１０８，９２１号；同第５，２１３，８０４号；同第５，２２７，１７０号；同第５，２６４，２２１号；同第５，３５６，６３３号；同第５，３９５，６１９号；同第５，４１６，０１６号；同第５，４１７，９７８号；同第５，４６２，８５４号；同第５，４６９，８５４号；同第５，５１２，２９５号；同第５，５２７，５２８号；同第５，５３４，２５９号；同第５，５４３，１５２号；同第５，５５６，９４８号；同第５，５８０，５７５号；及び同第５，５９５，７５６号が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３２】
本明細書中で提供されるアンチセンス化合物は、医薬組成物又は処方物中に含められ得る。本医薬組成物は、何らかの医薬的に許容可能な塩、エステルもしくはこのようなエステルの塩又はヒトを含む動物への投与時に生物学的に活性のある代謝産物もしくはその残基を（直接又は間接的に）提供することが可能である何らかの他の化合物を含み得る。
【０４３３】
「医薬的に許容可能な塩」という用語は、本明細書中で提供される化合物の生理学的に及び医薬的に許容可能な塩、即ち親化合物の所望の生物学的活性を保持し、それに対して望ましくない毒性の影響を付与しない塩を指す。「医薬的に許容可能な塩」という用語は、無機又は有機酸及び塩基を含め、医薬的に許容可能な非毒性酸又は塩基から調製される塩を含む。オリゴヌクレオチドの場合、医薬的に許容可能な塩及びそれらの使用の好ましい例は、その全体において本明細書中に組み込まれる米国特許第６，２８７，８６０号でさらに記載される。ナトリウム塩は、オリゴヌクレオチド薬の適切な形態であることが示されている。
【０４３４】
「医薬的に許容可能な誘導体」という用語は、本明細書中に記載の化合物の、医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、エステル、プロドラッグ、多型体、異性体、同位体標識される変異体を包含するが、これらに限定されない。
【０４３５】
本明細書中に記載の医薬組成物は、局所又は全身的処置が所望されるか否か及び処置しようとする領域に依存して、多くの方法で投与され得る。投与は非経口であり得る。非経口投与としては、皮下、静脈内もしくは筋肉内注射又は点滴が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４３６】
非経口投与は、肝臓及び血漿においてＧＣＣＲ発現を標的とするために好ましい。少なくとも１個の２’−Ｏ−メトキシエチル修飾があるオリゴヌクレオチドは、非経口投与に特に有用であると思われる。
【０４３７】
単位剤形で都合よく与えられ得る本明細書中に記載の医薬処方物は、製薬業界で周知の従来の技術に従い調製され得る。このような技術は、活性成分を医薬担体又は賦形剤と組み合わせる段階を含む。一般に、本処方物は、均一に及び完全に活性成分を液体担体もしくは微粉化固形担体又は両者と合わせることによって調製される。
【０４３８】
本明細書中に記載の組成物はまた、水性、非水性又は混合溶媒中の懸濁液としても処方され得る。懸濁液はまた安定化剤も含有し得る。
【０４３９】
本明細書中に記載の医薬組成物としては、溶液、乳液及びリポソーム含有処方物が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中に記載の医薬組成物及び処方物は、１以上の浸透促進剤、担体、賦形剤又は他の活性もしくは不活性成分を備え得る。
【０４４０】
処方物はリポソーム性処方物を含む。本発明において使用される場合、「リポソーム」という用語は、球形の二重層（単数又は複数）に配置される両親媒性脂質から構成される小胞を意味する。リポソームは、脂溶性材料及び送達しようとする組成物を含有する水性の内部から形成される膜を有する単層又は多重膜小胞である。陽イオン性リポソームは、安定な複合体を形成するために負に荷電しているＤＮＡ分子と相互作用すると考えられている正に荷電しているリポソームである。ｐＨ感受性であるか又は負に荷電しているリポソームは、それとの複合体ではなく、ＤＮＡを取り込むと考えられる。陽イオン性及び非陽イオン性リポソームの両者とも、細胞にＤＮＡを送達するために使用されてきた。
【０４４１】
リポソームは、「立体的に安定化された」リポソームも含み、この用語は、本明細書中で使用される場合、リポソームに組み込まれた場合に、その結果、このような特殊化した脂質を欠くリポソームと比べて循環寿命が延長される、１以上の特殊化した脂質を備えるリポソームを指す。リポソーム及びそれらの使用は、その全体において本明細書中に組み込まれる米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。
【０４４２】
別の実施形態において、処方物は食塩水処方物を含む。ある一定の実施形態において、処方物は、本明細書中に記載の化合物及び食塩水からなる。ある一定の実施形態において、処方物は、基本的に本明細書中に記載の化合物及び食塩水からなる。ある一定の実施形態において、食塩水は医薬的に許容可能なグレードの食塩水である。ある一定の実施形態において、食塩水は緩衝食塩水である。ある一定の実施形態において、食塩水はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。
【０４４３】
ある一定の実施形態において、処方物はリポソームを除外する。ある一定の実施形態において、処方物は、立体的に安定化されたリポソームを除外する。ある一定の実施形態において、処方物はリン脂質を除外する。ある一定の実施形態において、処方物は、基本的に本明細書中に記載の化合物及び食塩水からなり、リポソームを除外する。
【０４４４】
本医薬処方物及び組成物はまた界面活性剤も含み得る。界面活性剤及びそれらの使用は、その全体において本明細書中に組み込まれる米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。
【０４４５】
ある実施形態において、本発明は、核酸、特にオリゴヌクレオチドの効率的な送達に影響を及ぼすために様々な浸透促進剤を使用する。浸透促進剤及びそれらの使用は、その全体において本明細書中に組み込まれる米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。
【０４４６】
静脈内、皮下及び筋肉内注射又は点滴を含む、非経口投与のための組成物及び処方物は、緩衝液、希釈剤及び他の適切な添加物、例えば、以下に限定されないが、浸透促進剤、担体化合物及び他の医薬的に許容可能な担体又は賦形剤なども含有し得る滅菌水溶液を含み得る。
【０４４７】
別の関連実施形態において、本明細書中で提供される組成物は、第一の核酸に標的化される１以上のアンチセンス化合物、特にオリゴヌクレオチド、及び第二の核酸標的に標的化される１以上のさらなるアンチセンス化合物を含有し得る。あるいは、本明細書中で提供される組成物は、同じ核酸標的の様々な領域に標的化される２以上のアンチセンス化合物を含有し得る。アンチセンス化合物の多くの例が当技術分野で公知である。２以上の合わせられた化合物は、一緒に又は連続的に使用され得る。
【０４４８】
投薬
投薬は、処置しようとする病状の重症度及び反応性に依存し、一連の処置は、数日から数ヶ月、又は治療が効果をもたらすかもしくは病状の軽減が達成されるまで続く。最適な投薬スケジュールは、患者の身体での薬物蓄積の測定から計算され得る。最適な投与量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的効力に依存して変動し得、一般にインビトロ及びインビボ動物モデルにおいて有効であることが見出されるＥＣ５０に基づいて推定され得る。一般に、投与量は０．０１μｇから１００ｇ／ｋｇ体重であり、１日、１週間、１ヶ月もしくは１年に１回以上、又は所望の間隔で与えられ得る。良好な処置後、病状の再発を予防するために患者に維持療法を受けさせることも望ましいものであり得、この場合、オリゴヌクレオチドは、１日に１回以上、０．０１μｇから１００ｇ／ｋｇ体重の範囲の維持用量で投与される。
【０４４９】
ある一定のその好ましい実施形態に従い、具体的に本発明を記載してきたが、次の実施例は本発明を単に説明するものであり、これを限定するものではない。本願で挙げられる、参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号などはそれぞれ、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。
【０４５０】
ある一定の化合物
様々な長さの、約７６０種類の新規に設計された、及び既に開示されているアンチセンス化合物、モチーフ及びバックボーン組成物を、いくつかの細胞型におけるインビトロでのヒトＧＣＣＲ  ｍＲＮＡにおけるそれらの効果について試験した（実施例１および２）。インビトロで最も効力の高いアンチセンス化合物のうちの一部であることが既に決定されている、ＩＳＩＳ３７７１３１、ＩＳＩＳ３６１１３７、ＩＳＩＳ３６１１４１、ＩＳＩＳ３６１１５１、ＩＳＩＳ３６１１５５およびＩＳＩＳ３６１１５６を含む以前に設計された化合物（例えば、国際特許公開第２００７／０３５７５９号参照）と、新規化合物を比較した。約７６０種類の新規設計及び以前に設計されたアンチセンス化合物のうち、インビトロでの活性に基づきさらなる試験のために選択した化合物のみが提示される。
【０４５１】
これらの化合物の内１５個が選択され、さらなる新規化合物を、これら化合物に基づき設計した。３１７種類の新規化合物を、元の化合物のアップストリームおよびダウンストリーム（すなわち、ミクロウォーク（ｍｉｃｒｏｗａｌｋ））をわずかに転換した化合物を作製することにより設計した。新規化合物および元の化合物を、形質移入用のエレクトロポレーションおよび形質移入剤としてのリポフェクチンを使用してそれぞれ試験した（実施例３）。試験した３３２種類の化合物の内、インビトロでの活性に基づくさらなる研究で選択された化合物のみが提示される。この投薬反応アッセイのための７２種類の化合物を、エレクトロポレーションおよび形質移入剤としてのリポフェクチンを使用してそれぞれ試験した（実施例４）。実施例４および５において記載される投薬反応アッセイにおいて、いくつかの例示的な化合物が、ＩＳＩＳ３７７１３１といった基準となる化合物よりも効力があることが見いだされた。２９種類の化合物を、形質移入剤としてのエレクトロポレーションを用いた投薬反応アッセイを目的として選択し（実施例５）、１２種類のオリゴヌクレオチドが、インビボでの齧歯類の忍容性の研究のために選択された。ＩＳＩＳ４２０４７０（配列番号：６）、ＩＳＩＳ４２０４７６（配列番号：７）、ＩＳＩＳ４２６１１５（配列番号：３６）、ＩＳＩＳ４２６１３０（配列番号：３３）、ＩＳＩＳ４２６１６８（配列番号：３９）、ＩＳＩＳ４２６１７２（配列番号：４２）、ＩＳＩＳ４２６１８３（配列番号：１０）、ＩＳＩＳ４２６２４６（配列番号：１１）、ＩＳＩＳ４２６２６１（配列番号：１０）、ＩＳＩＳ４２６２６２（配列番号：３５）、ＩＳＩＳ４２６２６７（配列番号：４３）およびＩＳＩＳ４２６３２５（配列番号：４２）の１２種類の化合物を、ＣＤ１マウスおよびＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットモデルにおいて忍容性を目的として試験した。化合物ＩＳＩＳ３７７１３１（配列番号：４）を基準として進めた。本化合物は、配列番号１の領域５７８２５〜５７８４４、５９９５６〜５９９７５、６３６７７〜６３６９６、６５９３８〜６５９５７、６５９３９〜６５９５８、６５９４０〜６５９５９、７６２２４〜７６２４３、７６２２９〜７６２４８、７６２５５〜７６２７４、及び９５５１３〜９５５３２に相補的である。
【０４５２】
アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ及びビリルビンなどの肝臓機能マーカー及びＢＵＮ及びクレアチニンなど腎臓機能マーカーおよび炎症マーカーを測定した（実施例６及び７）。また、１２週間にわたりＣＤ／１ＧＳラットモデルにおける忍容性に対する長期的効果について１３種類の化合物をアッセイした（実施例８）。アラニントランスアミナーゼ、及びアスパラギン酸トランスアミナーゼなどの肝臓機能マーカー並びにクレアチニンに対する尿タンパク質など腎臓機能マーカーを測定した。
【０４５３】
これらの齧歯類の忍容性試験の最終評価（実施例６から８）から、さらなる試験のため、１２種類のすべての化合物を選択した。
【０４５４】
インビトロでの効力およびインビボでの忍容性を含む利点のある特性を有するため、ある一定の実施形態において、本明細書で提供される化合物は、配列番号６、７、３６、３３、３９、４２、１０、１１、３５及び４３の内の１つの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０個の連続核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する。ある一定の実施形態において、本化合物は、配列番号１の領域５７８２５〜 ５７８４４、５９９５６〜 ５９９７５、６３６７７〜 ６３６９６、６５９３８〜 ６５９５７、６５９３９〜 ６５９５８、６５９４０〜 ６５９５９、７６２２４〜 ７６２４３、７６２２５〜 ７６２４４、７６２２９〜 ７６２４８、及び９５５１３〜 ９５５３２の内の１つと等長部部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、又は少なくとも２０個の連続核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０４５５】
ある一定の実施形態において、領域を標的とするか又は列挙される配列番号において挙げられる配列の核酸塩基部分を有する化合物は、本明細書にさらに記載されるように様々な長さとすることができ、本明細書にさらに記載されるように多様なモチーフの内の１つを有することができる。ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０４７０、４２６４７６、４２６１１５、４２６１３０、４２６１６８、４２６１７２、４２６１８３、４２６２４６、４２６２６１、４２６２６２、４２６２６７、及び４２６３２５により示されるように、特異的な長さ及びモチーフを有する。  カニクイザルにおいて、これらの１２種類の化合物を活性、薬物動態学的プロファイル及び忍容性について試験した（実施例９）。一部の化合物での処置は、肝臓組織におけるＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ発現の低下を引き起こした。具体的に、ＩＳＩＳ４２０４７６、ＩＳＩＳ４２６１１５及びＩＳＩＳ４２６３２５での処置は、ＰＢＳ対照と比較して、肝臓組織でのＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ発現の顕著な低下を引き起こした。
【０４５６】
また、カニクイザルにおいて忍容性試験も実行した（実施例９）。体重および臓器の重量を測定し、ＡＬＴ、ＡＳＴ、アルカリホスファターゼ、およびビルビリンレベルを測定し、肝臓機能を評価し、ＢＵＮおよびクレアチニンレベルを測定して腎臓機能を評価し、ＣＲＰおよび免疫細胞数を測定して炎症状態を評価し、肝臓および腎臓のオリゴヌクレオチド濃度を測定して本化合物の薬物動態を評価した。ＩＳＩＳ４２６１１５での処置は、上述の全てのパラメータのベースライン値により示されるように、良好に忍容性であった。
ＩＳＩＳ  ４２０４７６，  ＩＳＩＳ  ４２６１１５，  とＩＳＩＳ  ４２６３２５の粘度をも測定して、いずれの三件の粘度は最適であることが確認さた
【０４５７】
従って、何らかの１以上の特徴が改善したアンチセンス化合物が本明細書中で提供される。ある一定の実施形態において、本明細書中に記載のような化合物は、実施例４及び５で記載されるようにエレクトロポレーションを用いてＨｅｐＧ２細胞株に送達された場合に３μＭ未満、２．５μＭ未満、２μＭ未満、１．５μＭ未満、１μＭ未満のヒト細胞におけるインビトロＩＣ５０の少なくとも１つを有するという理由で有効である。ある一定の実施形態において、本明細書に記載される化合物は、実施例４に記載されるリポフェクチン剤を使用してＨｅＰＧ２細胞に送達される場合、５０ｎＭ未満、４５ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３５ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満のヒト細胞におけるＩＣ５０の少なくとも１つを有するという理由で有効である。
【０４５８】
ある一定の実施形態において、本明細書中に記載のような化合物は、食塩水で処置された動物の５０倍以下、４０倍以下、３０倍以下、２０倍以下、１０倍以下、５倍以下、４倍以下、３倍以下もしくは２倍以下のＡＬＴもしくはＡＳＴ値の上昇；又は３０％以下、２０％以下、１５％以下、１２％以下、１０％以下、５％以下もしくは２％以下の肝臓、脾臓もしくは腎臓重量の上昇の少なくとも１つを有することにより明らかになるように、非常に忍容性が高い。
実施例
【０４５９】
非限定的開示及び参照による組み込み
ある一定の実施形態に従い、本明細書中に記載のある一定の化合物、組成物及び方法を具体的に記載してきたが、次の実施例は本明細書中に記載の化合物を単に例示するものであり、これを限定するものではない。本願で挙げられる、参考文献はそれぞれ、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。
【０４６０】
実施例１：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトグルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）のアンチセンス阻害
ヒトＧＣＣＲ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、これらをインビトロにおけるＧＣＣＲ  ｍＲＮＡでのその効果について試験した。以前に国際公開公報第２００５／０７１０８０号に記載のＩＳＩＳ３７７１３１も本アッセイに含めた。１２０ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェクチン剤を用いて、１０，０００細胞／ウェルの密度で、培養ＨｅｐＧ２細胞に形質移入した。およそ２４時間の処理時間後、細胞からＲＮＡを単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによってＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ｍＲＮＡレベルを測定するために、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ１４０８（本明細書中で配列番号５８と呼ばれるフォワード配列ＧＧＡＧＡＴＣＡＴＡＴＡＧＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＣＡＡ；本明細書中で配列番号２９と呼ばれるリバース配列ＧＧＧＴＡＧＡＧＴＣＡＴＴＣＴＣＴＧＣＴＣＡＴＴＡＡ；本明細書中で配列番号６０と呼ばれるプローブ配列ＣＴＧＴＧＴＴＴＴＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＡＴ）を使用した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量に従い、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処理対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として提示される。４６０種類のオリゴヌクレオチドを試験し、さらなる試験のために選択されたオリゴヌクレオチドのみが提示される。
【０４６１】
表１の新規に設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。このギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオシドを備え、各５個のヌクレオシドを備えるウイングセグメントが５’及び３’方向の両方に隣接する。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシド及び３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー全体にわたるヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー全体にわたるシトシン残基は全て、５−メチルシトシンである。「ヒト標的開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的化される５’−モストヌクレオシドを示す。このギャップマーは、ヒトＧＣＣＲ遺伝子配列のイントロン配列又はイントロン−エクソン連結部を標的とし、この配列は、（ヌクレオチド３８１８０００−３９８００００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２９２８９．１０と相補的な）配列番号１として示される。このデータは、配列番号１のイントロン領域に標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを有意に低下させることを示す。
【表１】
2015501155.tif 000010
【０４６２】
実施例２：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＧＣＣＲのアンチセンス阻害
ＧＣＣＲ核酸を標的化するためにさらなるアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでのＧＣＣＲ  ｍＲＮＡにおけるそれらの効果について試験した。国際公開公報第２００５／０７１０８０号に前に記述されているＩＳＩＳ３６１１３７、ＩＳＩＳ  ３６１１４１、ＩＳＩＳ３６１１５１、ＩＳＩＳ３６１１５６、ＩＳＩＳ３７７１３１、ＩＳＩＳ３６１１４３、及びＩＳＩＳ３６１１５５がこのアッセイに含められた。
１２０ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェクチン剤を用いて、１０，０００細胞／ウェルの密度の培養ＨｅｐＧ２細胞に形質移入した。およそ２４時間の処理時間後、細胞からＲＮＡを単離し、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を用いて定量的リアルタイムＰＣＲによってＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量により、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処理対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として表される。２９８種類の新規のオリゴヌクレオチドを試験し、さらなる試験のために選択されたオリゴヌクレオチドのみが提示される。
【０４６３】
表２の新規に設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。このギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを備え、５’方向及び３’方向の両方にで各５個のヌクレオシドを備えるウイングセグメントが隣接する。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシド及び３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー全体にわたるヌクレオシド間結合はホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー全体にわたるシトシン残基は全て５−メチルシトシンである。「ヒト標的開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的化される５’−モストヌクレオシドを示す。このギャップマーは、配列番号１のエクソン配列、イントロン配列、またはイントロン−エクソン連結部に標的化された。
【表２】
2015501155.tif 000011
【０４６４】
実施例３：ミクロウォーク（ｍｉｃｒｏｗａｌｋ）により設計されたオリゴヌクレオチドによるＨｅｐＧ２細胞におけるＧＣＣＲのアンチセンス阻害
表１および２に提示されるギャップマーに基づき、さらなるギャップマーを設計した。これらのギャップマーを、表１および２からの元となるギャップマーのアップストリームおよびダウンストリームをわずかに転換した（すなわち、「ミクロウォーク」）ギャップマーを作製することにより設計した。また、たとえば、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥ、及び２−１３−５ＭＯＥモチーフを有したギャップマーを作製した。これらギャップマーをインビトロで試験した。２，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用し、エレクトロポレーションを用いて、２０，０００細胞／ウェルの密度の培養ＨｅｐＧ２細胞に形質移入した。およそ２４時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによってＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。このヒトプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を使用してＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量により、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処理対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として表される。この結果が表３に提示される。
【０４６５】
また、このギャップマーを、形質移入剤としてリポフェクチンを使用して活性を試験した。５０ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェクチンを使用して１０，０００細胞／ウェルの密度で培養ＨｅｐＧ２細胞を形質移入した。およそ２４時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによりＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を使用して、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量により、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処置対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として提示される。この結果も表３に提示される。
【０４６６】
表３のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは５−１０−５ＭＯＥギャップマー、３−１４−３ＭＯＥ、又は２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。表３でアスタリスク（＊）を有するギャップマーは、元となるギャップマーであり、そこから、ギャップマーであるＩＳＩＳ  ４２６１０６−４２６４０５が、ミクロウォーク（ｍｉｃｒｏｗａｌｋ）を介して設計された。ＩＳＩＳ３７７１３１は本アッセイに含まれ、新規に設計されたギャップマーの活性が、ＩＳＩＳ３７７１３１の活性と比較された。この５−１０−５ギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオシドを備え、それぞれ５個のヌクレオシドを備えるウイングセグメントが５’方向及び３’方向の両方で隣接する。３−１４−３ギャップマーは、２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは、１４個の２’−デオキシヌクレオシドから成り、それぞれ３個のヌクレオシドを備えるウイングセグメントが５’方向及び３’方向の両方で隣接する。２−１３−５ギャップマーは、２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１３個の２’−デオキシヌクレオシドから成り、それぞれ２及び５個のヌクレオシドを備えるウイングセグメントが５’方向及び３’方向の両方で隣接する。各モチーフ（５−１０−５、３−１４−３、及び２−１１３−５）では、５’ウイングセグメントの各ヌクレオシド及び３’ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー全体にわたるヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー全体にわたるシトシン残基は全て、５−メチルシトシンである。「標的開始開始部位」は、ギャップマーが標的化される５’−モストヌクレオシドを示す。表３で列挙される各ギャップマーは、（３８１８０００−３９８００００に短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０２９２８９. １０に相補的な）配列番号１に対して標的化される。さらなる試験のために選択されたこれらのギャップマーのみが提示される。
【表３】
2015501155.tif 000012
【表３−１】
2015501155.tif 000013
【表３−２】
2015501155.tif 000014
【０４６７】
実施例４：ＨｅｐＧ２細胞でのヒトＧＣＣＲの用量依存的アンチセンス阻害
ヒトＧＣＣＲのインビトロでの有意な阻害を示す実施例３のギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞において多様な条件下で試験した。細胞を、２０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、表４で特定されるように、０．８μＭ、１．５μＭ、３．０μＭ、又は６．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドで、エレクトロポレーションを使用して形質移入した。およそ１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによってＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトＧＣＣＲプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量により、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処理対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として表される。
【０４６８】
また、このギャップマーを、形質移入剤であるリポフェクチンを使用して、ＨｅｐＧ２細胞中で、様々な用量で試験した。細胞を１０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、表５で特定されるように、１７．５ｎＭ、３５ｎＭ、７０ｎＭ又は１４０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドで、リポフェクチン剤用いて形質移入した。およそ１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによってＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ｍＲＮＡレベルを測定するために、ヒトＧＣＣＲプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を使用した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量により、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処理対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として表される。
【０４６９】
各オリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も表４及び５で提示され、これは各濃度で達成されるＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ発現の阻害％に対して、使用されるオリゴヌクレオチドの濃度をプロットすることによって計算したが、なお、これは対照と比較してＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ発現の５０％阻害が達成されたオリゴヌクレオチド濃度である。表４及び５で例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルが用量依存的に顕著に低下した。ある一定の例示的な化合物は、基準であるＩＳＩＳ３７７１３１よりもより効力があることを示した。
【表４】
2015501155.tif 000015
【表４−１】
2015501155.tif 000016
【表５】
2015501155.tif 000017
【表５−１】
2015501155.tif 000018
【０４７０】
実施例５：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＧＣＣＲの用量依存的アンチセンス阻害
実施例４から選択したギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞において様々な用量で試験した。細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、表６で特定されるように、０．５μＭ、１．０μＭ、２．０μＭ、４．０μＭ又は８．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用してエレクトロポレーションを用いて形質移入した。およそ１６時間の処理時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによってＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ｍＲＮＡレベルを測定するために、ヒトＧＣＣＲプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を使用した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定して、総ＲＮＡ含量により、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。結果は、未処理対照細胞に対するＧＣＣＲの阻害％として表される。
【０４７１】
表６で例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理した細胞においてＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルが用量依存的に低下した。ある例示的な化合物は、基準となるＩＳＩＳ  ３７７１３１よりも効力があることを示した。
【表６】
2015501155.tif 000019
【０４７２】
実施例６：ＣＤ１マウスにおけるヒトＧＣＣＲを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
ＣＤ１（登録商標）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，ＭＡ）は、多目的マウスモデルであり、安全性及び効力試験のために利用されることが多い。このマウスを、実施例５に記載されている試験から選択されたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、様々なマーカーレベルにおける変化について評価した。
【０４７３】
処置
８週齢雄のＣＤ１マウスを、１２時間の明／暗サイクルで維持し、Ｐｕｒｉｎａのマウス固形試料５００１を自由に与えるようにした。実験を開始する前に、動物は、少なくとも７日間研究施設に気候順化させた。５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３７７１３１、ＩＳＩＳ４２０４７０、ＩＳＩＳ４２０４７６、ＩＳＩＳ４２６１１５、ＩＳＩＳ４２６１３０、ＩＳＩＳ４２６１６８、ＩＳＩＳ４２６１７２、ＩＳＩＳ４２６１８３、ＩＳＩＳ４２６２４６、ＩＳＩＳ４２６２６１、ＩＳＩＳ４２６２６２、ＩＳＩＳ４２６２６７、又はＩＳＩＳ４２６３２５を、各４匹のＣＤ１マウスのグループに、４週間にわたり、１週間に２回皮下注射した。投与する前並びに投与後２、３、及び４週間後に、尾を切ることにより血液試料を収集した。各時点で最後に投与してから３日後、マウスを安楽死させ、器官及び血漿をさらなる分析のために回収した。ＩＳＩＳ４２６２６７で処置したマウスは、研究が終了する前に死亡した。したがって。ＩＳＩＳ４２６２６７で処置したマウスからの試料は、いずれのアッセイにも含められなかった。
【０４７４】
血漿化学
肝臓機能および腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼ、コレステロール、グルコース、およびトリグリセリドの血漿レベルを、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿レベルを測定し、この結果をＩＵ／Ｌで表し、表７および８に提示する。また、コレステロール、グルコース、およびトリグリセリドの血漿レベルを同一の臨床化学分析装置を用いて測定し、この結果を、表９．１０、及び１１に提示する。
【表７】
2015501155.tif 000020
【表８】
2015501155.tif 000021
【表９】
2015501155.tif 000022
【表１０】
2015501155.tif 000023
【表１１】
2015501155.tif 000024
【０４７５】
実施例７：Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおけるヒトＧＣＣＲを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、実施例６に記載される試験からのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、様々なマーカーレベルでの変化を評価した。
【０４７６】
処置
８週齢雄のラットを１２時間の明／暗サイクルで維持し、Ｐｕｒｉｎａの通常のラット用固形試料を自由に与えるようにした。実験を開始する前に、動物は、少なくとも７日間研究施設に気候順化させた。５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３７７１３１、ＩＳＩＳ  ４２０４７０、ＩＳＩＳ４２０４７６、ＩＳＩＳ４２６１１５、ＩＳＩＳ４２６１３０、ＩＳＩＳ４２６１６８、ＩＳＩＳ４２６１７２、ＩＳＩＳ４２６１８３、ＩＳＩＳ４２６２４６、ＩＳＩＳ４２６２６１、ＩＳＩＳ４２６２６２、ＩＳＩＳ４２６２６７、又はＩＳＩＳ４２６３２５を、１週間に２回、各４匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットのグループに皮下注射した。投与する前並びに投与後２、３、及び４週間後に、尾を切ることにより血液試料を収集した。各時点で最後に投与してから３日後、ラットを安楽死させ、器官及び血漿をさらなる分析のために回収した。
【０４７７】
血漿化学
肝臓機能及び腎臓機能におけるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼ、コレステロール、グルコース、及びトリグリセリドの血漿レベルを自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿レベルを測定し、この結果をＩＵ／Ｌで表し、表１２および１３に提示する。また、コレステロール、グルコース、およびトリグリセリドの血漿レベルを同一の臨床化学分析装置を用いて測定し、この結果を、ｍｇ／ｄＬで表し、表１４〜１６に提示する。「ｎ／ａ」は、特定の時点で測定されなかった血漿化学マーカーを示す。
【表１２】
2015501155.tif 000025
【表１３】
2015501155.tif 000026
【表１４】
2015501155.tif 000027
【表１５】
2015501155.tif 000028
【表１６】
2015501155.tif 000029
【０４７８】
実施例８：ＣＤ／１ＧＳラットにおけるヒトＧＣＣＲを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの長期間の忍容性
ＣＤ／１ＧＳラットを、実施例６及び７に記載した試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで１２週間処置し、多様なマーカーレベルにおける変化を評価した。
【０４７９】
８週齢雄のラットを、代謝ケージ内に配置し、１２時間の明／暗サイクルに維持し、Ｐｕｒｉｎａのラット固形試料を自由に与えるようにした。実験を開始する前に、動物は、少なくとも７日間研究施設に気候順化させた。３０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３７７１３１、ＩＳＩＳ４２０４７０、ＩＳＩＳ４２０４７６、ＩＳＩＳ４２６１１５、ＩＳＩＳ４２６１３０、ＩＳＩＳ４２６１６８、ＩＳＩＳ４２６１７２、ＩＳＩＳ４２６１８３、ＩＳＩＳ４２６２４６、ＩＳＩＳ４２６２６１、ＩＳＩＳ４２６２６２、ＩＳＩＳ４２６２６７、又はＩＳＩＳ４２６３２５を１２週間にわたって１週間に２回、各４匹のラットのグループに皮下注射した。投与する前並びに投与後２、４、６、８、１０及び１２週間後に、尾を切ることにより血液試料を収集した。各時点で最後に投与してから３日後、ラットを安楽死させ、器官及び血漿をさらなる分析のために回収した。ＩＳＩＳ４２６２６７で処置したラットは、試験が終了する前に死亡した。従って、ＩＳＩＳ４２６２６７は、さらなる試験のいずれにも含まれなかった。
【０４８０】
肝臓機能
肝臓機能に関するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ、コレステロール、グルコース、及びトリグリセリドの血漿レベルを、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を用いて測定した。第１２週でＡＬＴ及びＡＳＴの血漿レベルを測定し、表１７に提示する。この値をＰＢＳ対照の値に対する倍数単位での上昇として提示する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する予想範囲を外れる血漿化学マーカーレベルにおいて何等か変化を引き起こしたアンチセンスオリゴヌクレオチドはなかった。
【表１７】
2015501155.tif 000030
【０４８１】
腎臓機能
腎臓機能に関するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、尿タンパク質及びクレアチニンの尿素の合計の濃度を、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を用いて測定した。この結果を、１２週目に採取した比率で、ならびに比率の倍数単位での増加として、表１８に提示する。アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する予想範囲を外れる腎代謝マーカーのいずれの変化も引き起こさなかったアンチセンスオリゴヌクレオチドが、さらなる試験のために選択された。
【表１８】
2015501155.tif 000031
【０４８２】
マウスおよびラットの両方の結果は、ＩＳＩＳ４２６１１５が、ＧＣＣＲを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドに最も忍容性があることを示した。
【０４８３】
実施例９：カニクイザルにおけるヒトＧＣＣＲを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
カニクイザルを、実施例６、７、及び８に記載される試験からのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの活性および忍容性を評価した。
【０４８４】
選択されたヒトオリゴヌクレオチドは、アカゲザルの遺伝子配列と十分に交差反応性を示す。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列との間の相補性が大きいほど、ヒトオリゴヌクレオチドがアカゲザル配列と交差反応し得る可能性が大きくなる。ヒトオリゴヌクレオチドを、ヒトのエクソンに対する類似性に基づき、アカゲザル配列（ヌクレオチド１３３４０００から１４９１０００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１２０９８７．１に相補的な配列番号２）と比較し、この結果を表１９に表す。「アカゲザル開始部位」は、このギャップマーがアカゲザルの遺伝子配列に標的化する５’−モストヌクレオチドを示す。
【表１９】
2015501155.tif 000032
【０４８５】
処置
この試験は、中華人民共和国のＷｕＸｉ  ＰｈａｒｍａＴｅｃｈの試験施設で行った。２〜５週齢雄のカニクイザルを、本試験に使用する前に、結核について２回にわたり試験し、投与の開始前に、少なくとも１４日間検疫した。８ｍｇ／ｋｇ又は２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２０４７０、ＩＳＩＳ４２０４７６、ＩＳＩＳ４２６１１５、ＩＳＩＳ４２６１３０、ＩＳＩＳ４２６１６８、ＩＳＩＳ４２６１７２、ＩＳＩＳ４２６１８３、ＩＳＩＳ４２６２４６、ＩＳＩＳ４２６２６１、ＩＳＩＳ４２６２６２、ＩＳＩＳ４２６２６７、又はＩＳＩＳ４２６３２５を、第１週目に１週間に３回、次の１１週間に１週間に１回、ランダムに割り当てられた５匹のカニクイザルの２４のグループに皮下注射した。１６匹のカニクイザルの対照グループに、第１週目に１週間に３回、次の１１週間に１週間に１回、ＰＢＳを皮下注射した。
【０４８６】
試験期間の間、疾病又は苦痛の兆候についてサルを毎日観察した。この処置に対する副作用を示すいずれの動物も除去し、獣医師および試験責任者に問い合わせた。
【０４８７】
臨床的な観察及び死亡数のチェックを、投与前、および投与レジメンの間、少なくとも１日に１回実行した。体重を１週間に１度測定した。処置の５日前および試験期間の異なる日に血液試料を収集し、分析した。この動物を、血液収集前、少なくとも１３時間（一晩）飢餓状態にした。拘束した意識のある動物の末梢静脈から静脈穿刺により血液を収集した。全てのグループの屠殺を、最後の投与から４８時間目である８６日目に行った。
【０４８８】
阻害研究
ＲＮＡ分析
この試験の終わりに、プライマープローブセットｍｋＧＣＣＲ＿１（配列番号６１として本明細書に記載されるフォワード配列ＴＴＡＧＧＡＧＧＧＣＧＧＣＡＡＧＴＧ、配列番号６２として本明細書に記載されるリバース配列ＡＧＧＴＧＴＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＴＡ、配列番号６３として本明細書に記載されるプローブ配列ＴＧＣＡＧＣＡＧＴＧＡＡＡＴＧＧＧＣＡＡＡＧＧＣ）を使用してＧＣＣＲのリアルタイムＰＣＲ分析にて、ＲＮＡを肝組織から抽出した。また、このデータを、プライマープローブセットｍｋＧＣＣＲ＿５（配列番号６４として本明細書に記載されるフォワード配列ＧＧＡＧＡＴＣＡＴＡＴＡＧＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＣＡＡ、配列番号６５として本明細書に記載されるリバース配列ＧＧＧＴＡＧＡＧＴＣＡＴＴＣＴＣＴＧＣＴＣＡＴＴＡＡ、配列番号６６として本明細書に記載されるプローブ配列ＣＴＧＴＧＴＴＴＴＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＧＡＴ）を使用して分析した。この結果は、ハウスキーピング遺伝子シクロフィリンに対して正規化されたＰＢＳ対照と比較したＧＣＣＲの阻害％として提示される。表２０に示されるように、ＩＳＩＳ４２６３２５、ＩＳＩＳ４２０４７６、及びＩＳＩＳ４２６１１５での処置は、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡのレベルを有意に低下させた。
【表２０】
2015501155.tif 000033
【０４８９】
タンパク質分析
１１週目に、約１ｍＬの血液をすべての利用可能な動物から収集し、ＥＤＴＡのカリウム塩を含む試験管に配置した。この試験管を（室温、１０分間、３０００ｒｐｍで）遠心し、血漿を得た。ＧＣＣＲタンパク質レベルを、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｓｃ−１００３ラビットポリクローナル抗体を使用したウエスタン分析により血漿において測定した。この結果を表２１に提示し、ＰＢＳ対照レベルと比較した阻害パーセンテージとして表す。この結果は、ＩＳＩＳ４２６３２５、ＩＳＩＳ４２０４７６、及びＩＳＩＳ４２６１１５がＧＣＣＲタンパク質レベルを低下させたことを示している。
【表２１】
2015501155.tif 000034
【０４９０】
忍容性試験
体重及び器官重量の測定
動物の総体的な健康におけるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、第１２週に体重及び器官重量を測定した。このデータを表２２に提示する。ＩＳＩＳ４２０４７６での処置により、脾臓の重量が増加した。残りのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドでの処置は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する予想範囲を外れる顕著な変化を引き起こさなかった。
【表２２】
2015501155.tif 000035
【０４９１】
肝臓機能
肝臓の機能に関するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血液試料を、第１１週の全ての試験グループから収集した。約３ｍＬの血液を、飢餓状態の動物から収集し、血清を分離のため試験管内に配置した。３０〜８０分室温で試験管を安定化させた後、遠心（２０００ｇ×１５分、室温）することにより血清を得た。トランスアミナーゼのレベルを、Ｈｉｔａｃｈｉ−９１７／９１１化学分析器により測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴの血漿レベルを測定し、この結果を表２３に提示し、ＩＵ／Ｌで表す。アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）は、損傷した肝細胞により合成される量が増加し、また、肝疾患のマーカーでもあり、同様に測定された。また、そのデータを表２３に提示し、ｍｇ／ｄＬで表す。アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する予想範囲を外れる肝臓機能の何らかのマーカーレベルの変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドはなかった。
【表２３】
2015501155.tif 000036
【０４９２】
腎臓機能
腎臓機能に関するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血液試料を、第１１週の全ての試験グループから収集した。約３ｍＬの血液を、飢餓状態の動物から収集し、血清を分離するために試験管に配置した。３０〜８０分間室温で試験管を安定化させた後、遠心（２，０００ｇ×１５分、室温）することにより血清を得た。ＢＵＮ及びクレアチニンの濃度を、Ｈｉｔａｃｈｉ−９１７／９１１化学分析装置を使用して１１週目に測定した。この結果を表２４に提示し、ｍｇ／ｄＬで表す。アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する予想範囲を外れたこれら腎臓機能マーカーにおけるいずれかの変化をＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは引き起こさなかった。
【表２４】
2015501155.tif 000037
【０４９３】
炎症のマーカー
カニクイザルのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの何らかの炎症効果を評価するために、１１週目に血液試料を採取した。Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、肝臓内で合成され、炎症のマーカーとして機能し、Ｈｉｔａｃｈｉ−９１７／９１１化学分析装置を使用して同様に測定した。この結果を表２５に提示する。ＩＳＩＳ４２６１７２及びＩＳＩＳ４２０４７０での処置は、ＣＲＰレベルの増加を引き起こした。残りのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドでの処置は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する予想範囲を外れるいずれの変化も引き起こさなかった。
【０４９４】
約１．３ｍＬの血液を、ＥＤＴＡで処置した試験管内に収集し、血液学のパラメータの測定のために使用した。試料を、ＡＤＶＩＡ１２０血液分析計（Ｂａｙｅｒ、ＵＳＡ）を用いて、赤血球細胞（ＲＢＣ）数、白血球細胞（ＷＢＣ）数、個々の白血球細胞のパーセンテージ、例えば、単球、好中球、リンパ球の数など、ならびに血小板数及びヘマトクリット（％）について試料を分析した。このデータを表２６に提示する。ＩＳＩＳ４２６１６８及びＩＳＩＳ４２０４７６での処置により、リンパ球数が増加した。ＩＳＳＩ４２６３２５、ＩＳＩＳ４２６１７２、ＩＳＩＳ４２６２６２、及びＩＳＩＳ４２０４７０での処置により、好中球の数が増加した。残りのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドでの処置は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対して予想を超えた顕著な炎症促進性反応を引き起こさなかった。
【表２５】
2015501155.tif 000038
【表２６】
2015501155.tif 000039
【０４９５】
薬物動態試験
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長オリゴヌクレオチドの濃度ならびに総オリゴヌクレオチド濃度（分解形態を含む。）を１２週に測定した。使用された方法は、フェノール−クロロホルム（液体−液体）抽出とそれに続く固相抽出からなる既に公開されている方法（Ｌｅｅｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）の改法である。内部標準物質（ＩＳＩＳ３５５８６８、本明細書中で配列番号５７と呼ばれる、２７-マーの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ）を抽出前に添加した。およそ１．１４μｇ／ｇの定量下限（ＬＬＯＱ）の較正曲線を用いて組織試料濃度を計算した。腎臓対肝臓における濃度比率を計算した。この結果を表２７及び２８に提示し、μｇ／ｇ組織として表す。
【表２７】
2015501155.tif 000040
【表２８】
2015501155.tif 000041
【０４９６】
実施例１０：ヒトＧＣＣＲを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度の測定
４０ｃＰを超える粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドをスクリーニングして除外するために、実施例９に記載されるサルの研究で試験した３種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を測定した。４０ｃＰを超える粘度を有するオリゴヌクレオチドは粘度が高すぎて、何れの対象にも投与できない。
【０４９７】
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（３２から３５ｍｇ）をガラスバイアルに量り取り、１２０μＬの水を添加し、バイアルを５０℃で加熱することによって、アンチセンスオリゴヌクレオチドを溶解させて溶液にした。予め加熱した試料の一部（７５μＬ）をピペットで採取して微小粘度計（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）に入れた。微小粘度計の温度を２５℃に設定し、試料の粘度を測定した。８５℃で２６０ｎＭでのＵＶ読み取り（Ｃａｒｙ  ＵＶ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）のために、予め加熱した試料の別の一部（２０μＬ）をピペットで採取して１０ｍＬの水に加えた。この結果は表２９で提示され、この結果は、全アンチセンスオリゴヌクレオチド溶液が、上述の基準を下回る粘度である点で最適であることを示す。
【表２９】
2015501155.tif 000042
【０４９８】
実施例１１：アカゲザルＬＬＣ−ＭＫ２細胞におけるヒトＧＣＣＲを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与量反応の確認
実施例９に記載されるサルの研究から選択されたギャップマーを、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞の多様な投与量で試験した。試験したＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、アカゲザルＧＣＣＲ遺伝子（ヌクレオチド１３３４０００‐１４９１０００から短縮されたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１２０９８７．１に相補的な配列番号２）と交差反応性を示す。
【０４９９】
細胞を、２５，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、表３２で特定される０．０９μＭ、０．１９ｎＭ、０．３８μＭ、０．７５μＭ、１．５０μＭ、３．００μＭ、６．００μＭ又は１２．００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドで、エレクトロポレーションを使用して形質移入した。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、定量的リアルタイムＰＣＲによりＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトＧＣＣＲプライマープローブセットＲＴＳ１４０８を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、総ＲＮＡ含量によりＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルを調整した。この結果を、未処置の対照細胞と比較したＧＣＣＲの％阻害として提示する。表３０に例証されるように、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルは、試験したＩＳＩＳオリゴヌクレオチドで処置したＬＬＣ−ＭＫ２細胞において用量依存的に低下した。
【表３０】
2015501155.tif 000043
【０５００】
実施例１２：カニクイザルにおけるヒト／アカゲザルのＧＣＣＲを標的とするＩＳＩＳ４２６１１５の効果
ＩＳＩＳ４２６１１５は、非常に効力があり、かつ忍容性のあるアンチセンスオリゴヌクレオチドであることが上述の研究により示されたため、第２のカニクイザルの試験のために選択された。
【０５０１】
処置
試験前に、サルを検疫所で５週間維持し、その間、全身健康状態について動物を毎日観察した。このサルは２から３歳であり、体重は２から５ｋｇであった。無作為に割り当てられた各５匹の雄カニクイザルの１群に対して、サルの関節包内領域及び外腿に、適切なサイズのステンレス鋼投与針及びシリンジを用いてＩＳＩＳ４２６１１５を皮下注射した。最初の１週間、週に４回（第１、３、５及び７日）、負荷用量としてサルに投与し、続いて第２から１３週にわたり週に１回、４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２６１１５を投与した。最初の１週間、週に３回４回（第１、３、５及び７日）、８匹のカニクイザルの対照群にＰＢＳを皮下注射し、続いて第２週から第１３週にわたり週に１回注射した。
【０５０２】
試験期間の間、疾病又は苦痛の兆候についてサルを１日２回観察した。試験責任者による診察後、獣医学従事者によって、疼痛を緩和することに対して承認済みの鎮痛剤又は薬剤を用いて、処置、損傷又は疾病による一時的な又は軽度の疼痛又は苦痛を超えるものがある何れの動物も処置が行われた。健康状態が悪いか又は瀕死状態である危険性がある何れの動物も、さらなる監視及び安楽死の可能性に対して特定された。ケタミン／キシラジン誘導性麻酔及びペントバルビタールナトリウムの投与後、スケジュール化された動物の安楽死を放血によって第９３日に遂行した。実施例に記載のプロトコールは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）により、承認された。
【０５０３】
忍容性試験
肝臓機能
肝臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、群全てから血液試料を回収した。第９５日に、投薬から４８時間後、大腿静脈穿刺を介して血液試料を回収した。血液回収前に一晩、サルを飢餓状態にした。Ｋ２−ＥＤＴＡ抗凝固薬を含有する試験管で血液を回収し、血漿を得るために遠心した。東芝２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析装置（東芝株式会社、日本）を用いて、様々な肝臓機能マーカーのレベルを測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴの血漿レベルを測定し、この結果は表３１で提示され、ＩＵ／Ｌ単位で表される。ビリルビン、肝臓機能マーカーを同様に測定し、表３１で提示し、ｍｇ／ｄＬ単位で表す。ＩＳＩＳ４２６１１５での処置は、サルにおいて、肝臓機能に関して忍容性が良好であった。
【表３１】
2015501155.tif 000044
【０５０４】
腎臓機能
腎臓機能におけるＩＳＩＳ４２６１１５の影響を評価するために、試験群全てから血液試料を回収した。第９５日、投薬から４８時間後に、大腿静脈穿刺を介して血液試料を回収した。血液回収前に一晩、動物を飢餓状態にした。Ｋ２−ＥＤＴＡ抗凝固薬を含有する試験管で血液を回収し、血漿を得るために遠心した。東芝２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析装置（東芝株式会社、日本）を用いて、ＢＵＮ及びクレアチニン濃度を測定した。結果は表３２で提示され、ｍｇ／ｄＬ単位で表される。
【０５０５】
この血漿データは、ＩＳＩＳ４２６１１５が、サルの腎臓機能に関して忍容性が良好であったことを示す。
【表３２】
2015501155.tif 000045
実施例９に記載される試験を考慮に入れた本研究は、ＩＳＩＳ４２６１１５が、ＧＣＣＲを標的とする忍容性が良好なアンチセンスオリゴヌクレオチドであることをさらに確証する。
【配列表】
2015501155000001.app
【国際調査報告】
2015501155.tif 000046
2015501155.tif 000047
2015501155.tif 000048