(57)【要約】  本発明は、神経毒性診断、及び化学化合物のリスク層別化のための毒物学的評価の分野に関する。具体的には、本発明は神経毒性を診断する方法を開示する。本発明は、化合物が、対象においてそうした神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法及び神経毒性を治療するための薬物を同定する方法にも関する。さらに本発明は、神経毒性を診断するための装置及びキットに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経毒性を診断する方法であって、
（a）神経毒性を生じていることが疑われる対象の試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより神経毒性が診断されるステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記対象が、神経毒性を誘導する能力があることが疑われる化合物と接触させたものである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
対象において化合物が神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a）神経毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させた対象のサンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより化合物の神経毒性を誘導する能力が判定されるステップ
を含む方法。
【請求項４】
前記化合物が、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物である、請求項2又は3に記載の方法。
【請求項５】
前記リファレンスが、（i）神経毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、神経毒性を示す、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記リファレンスが、（i）神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記リファレンスが、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、神経毒性を示す、請求項7又は8に記載の方法。
【請求項１０】
神経毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a）神経毒性を治療する能力があると推測される候補物質と接触させた、神経毒性を生じている対象のサンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより神経毒性を治療する能力がある物質が同定されるステップ
を含む方法。
【請求項１１】
前記リファレンスが、（i）神経毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
試験サンプルとリファレンスの間で異なる、バイオマーカーの量が神経毒性を治療する能力がある物質を示す、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
前記リファレンスが、（i）神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する、請求項10に記載の方法。
【請求項１４】
前記リファレンスが、対象集団において計算されたバイオマーカーのリファレンスである、請求項10に記載の方法。
【請求項１５】
試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、神経毒性を治療する能力がある物質を示す、請求項13又は14に記載の方法。
【請求項１６】
対象のサンプルにおいて神経毒性を診断するための、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a若しくは12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー又は前記バイオマーカー用の検出剤の使用。
【請求項１７】
神経毒性を生じていることが疑われる対象のサンプルにおいて神経毒性を診断するための装置であって、
（a）サンプル中に存在する前記バイオマーカーの量の測定を可能にする、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤を備える分析ユニットと、それと作動可能に連結された、
（b）格納されたリファレンス、及び分析ユニットで測定された前記少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較することを可能にし、それによって神経毒性が診断されるデータ処理装置を備える評価ユニットと
を含む装置。
【請求項１８】
前記格納されたリファレンスが、神経毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置が、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在することを示し、又はリファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないことを示す、請求項17に記載の装置。
【請求項１９】
前記格納されたリファレンスが、神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置が、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在することの指標になり、又はリファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないことを示す、請求項17に記載の装置。
【請求項２０】
表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤、及び少なくとも1種のバイオマーカーに関するスタンダードであって、その濃度が、（i）神経毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するか、（ii）神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I） からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するスタンダードを含む、神経毒性の診断用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経毒性診断、及び化学化合物のリスク層別化のための毒物学的評価の分野に関する。詳細には、本発明は神経毒性を診断する方法に関する。本発明は、化合物が、対象においてそうした神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法及び神経毒性を治療するための薬物を同定する方法にも関する。さらに本発明は、神経毒性を診断するための装置及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
中枢神経系（CNS）は、体のすべての部分から受容する情報を統合し、それらの運動を調整する神経系の部分である。一部のマイナーな種は異なることもあるが、すべての哺乳動物の神経系は、同じ基本設計及び生理学的メカニズムを有する。神経組織の分布は全身において均一ではない。特に、頭蓋骨及び脊柱管内の正中線軸に沿って集中している。これらの集中はそれぞれ脳及び脊髄を形成し、中枢神経系として知られる。神経系の肉眼的検査において、灰白質及び白質の領域が見られ、灰白質は主に細胞体から構成されるのに対し、白質は主に有髄神経線維から構成される。中枢神経系は、結合組織の層、髄膜（最外層、硬膜、最内層、軟膜）及び血管を取り巻く伸長部（extensions）によって保護される。これらが中枢神経系に侵入し、離れ、血管周囲腔、Virchow-Robin腔を生じ、くも膜下腔に続く。発生学的には、神経管が過剰な示差的増殖を経て脳を形成する一方、残りは脊髄となる。脳は、前脳（prosencephalon；前脳）、中脳（mesencephalon；中脳）、及び後脳（rhombencephalon；菱脳）からなる。
【０００３】
神経系の正常な機能は、興奮性を発現するニューロンの本来持っている能力に応じて異なる。情報の伝達は、活動電位の発生の頻度及び規則性の変化に依存している。ニューロン間及びニューロンと受容細胞との間において、神経伝達物質の放出によって伝達が生じるシナプス接合部がある。一部の伝達物質は興奮性であり、他のものは抑制性である。これによりニューロン活動において良好な制御が可能となる。
【０００４】
脳はまた、機能に基づいて、同じ神経伝達物質を利用する細胞群及びそれらの軸索の連結を含む種々の経路に分けることができる。5つの主要な経路が認識されている：(1) 前脳の基底部分のコリン作動性経路は、記憶、行動及び気分に関係し、脳幹の網様体の経路は、覚醒状態に影響を及ぼし、睡眠プロセスを制御する。(2) ノルアドレナリン作動性経路は、脳橋及び髄質領域に限定されているが、中枢神経系の多くの領域、例えば辺縁系と連結している。(3) アドレナリン作動性ニューロンは、後脳の尾部に限定され、その経路はあまり理解されていない。(4) セロトニン作動性経路は、脳幹全体にわたって見出され、心血管機能、特に脳血流を調節し、睡眠プロセスを制御する。(5) ドーパミン作動性経路は、中脳及び視床下部に位置している。
【０００５】
いくつかの内因性化合物が中枢神経系において神経伝達物質として機能する。これには、次の物質：ノルエピネフリン（NE）、ドーパミン（DA）、5-ヒドロキシトリプタミン（セロトニン, 5HT）、アセチルコリン（Ach）、γアミノ酪酸（GABA）、フェニルエチルアミン、ヒスタミン、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、タウリン、及びいくつかのペプチド、例えばサブスタンスP、並びにエンケファリンが挙げられる。神経伝達物質は神経終末に蓄えられ、神経の刺激後にこれらの終末から放出される考えられる。これらの伝達物質因子の合成、これらの神経終末内での蓄積、及び生物の要求時のこれらの放出に寄与する非常に複雑な機構が存在することが知られている。
【０００６】
ドーパミンは、広範な種の動物に存在するカテコールアミン神経伝達物質である。脳内では、この置換されたフェネチルアミンが5種の既知のドーパミン受容体D1、D2、D3、D4及びD5並びにそれらのバリアントを活性化する。ドーパミンは、脳の複数の領域で産生され、視床下部によって放出される神経ホルモンでもある。ドーパミンは、脳において多くの機能、例えば行動及び認知、随意運動、意欲、罰及び報酬、プロラクチン産生の阻害、睡眠、気分、注意、作業記憶、並びに学習における重要な役割を有する。
【０００７】
グルタミン酸は、脳の主要な興奮性神経伝達物質であり、その作用は、イオンチャネルに直接的にリガンド依存性（ligand-gated）であるもの（イオンチャネル型）、及びGタンパク質と共役するものである興奮性アミノ酸受容体（EAARs）と呼ばれる複数の受容体サブタイプによって媒介される。CNSへのグルタミン酸の進入は、血液脳関門において調節される。グルタミン酸受容体は、哺乳動物中枢神経系（CNS）において興奮性神経伝達の大部分を媒介する。これらはまた、記憶及び学習における長期増強の原因となるシナプス伝達の可塑的変化、並びに発生過程における神経ネットワークの形成に関与している。
【０００８】
セロトニン（5-ヒドロキシトリプタミン, 5-HT）は、神経活動及び広範な神経心理学的プロセスを調節する。しかしながら、大部分のセロトニンは中枢神経系の外側（胃腸管、胎盤）に見出され、すべてのセロトニン受容体は脳の外側及び内部で発現される。セロトニンは、多数の生物学的プロセス、例えば心血管系、肺系統、胃腸（GI）系、及び生殖器系並びに中枢神経系（CNS）を調節し、異常調節は多くの精神障害及び神経障害の発症に関与している。セロトニンはヒトの行動プロセスの実質的にすべてを調節する。
【０００９】
ノルエピネフリン又はノルアドレナリンは、ドーパミンβ-ヒドロキシラーゼによってドーパミンから合成される。これは、ノルアドレナリン作動性ニューロンから放出される中枢神経系及び交感神経系におけるホルモン及び神経伝達物質などの多くの機能を有するカテコールアミンである。ノルエピネフリンは脳の部分に影響を及ぼし、そこで注意及び反応が制御され、攻撃・逃避反応の原因となり、直接的に心拍/血圧を上昇させ、エネルギー貯蔵からグルコース放出を誘発し、及び骨格筋への血流を増大させ、そして脳の酸素供給を高める。
【００１０】
ニコチン（メチルピリジルピロリドン）は、中枢神経系、末梢神経節及び神経筋接合部におけるシナプスにおいて、特定のタイプのコリン作動性受容体、ニコチン性受容体と結合することによりその作用を発揮し、そこでこれはアセチルコリン（AC）アゴニストとして作用する。ニコチンは、低濃度では、これらの受容体の活性を増大させる。ニコチンはまた、種々の他の神経伝達物質にも作用を有する。ニコチンは、骨格筋よりも脳内のアセチルコリン受容体に対して高い親和性を有するが、毒性用量では、これは収縮及び呼吸まひを誘導しうる。臨床的作用としては、発汗、頻脈、高血圧及び皮膚血管の収縮が挙げられる。CNSの適当な領域におけるニコチンは精神活性作用を有する。これは、CNSのニコチンサブセット及び末梢AC受容体を直接刺激する。中程度の中毒は、コリン作動性過剰の症候、例えば縮瞳、唾液分泌、排尿、排便、嘔吐、及び気道内分泌物の増加を生じる。多用量暴露では、短期間の刺激に続いて、持続性の膜脱分極に関連する神経筋遮断が迅速に生じる。死亡した場合、最も一般的なメカニズムは、末梢神経筋遮断及び心血管虚脱に起因する呼吸停止である。
【００１１】
種々の薬物及び毒物への暴露によって、中枢神経系の構造又は機能に有害な変化が誘導され、毒物学的状況における神経伝達物質作用の障害に起因する形態学的及び機能的CNS攪乱（障害）の説明は極めて複雑となり、毒性及び／又は薬理学的応答の局所及び全身発現の両方に関与している可能性がある。一般に、これらの変化は定量的又は定性的のいずれかに分類することができる。多数の天然毒物及び多くの合成分子は、ニューロン間又はニューロンと他の細胞型（特に骨格筋細胞）との間の化学伝達のプロセスを妨害することにより神経毒性を生じている。この妨害は、作用メカニズム及び影響を受けるシナプスの種類に応じて、インパルスの伝達を遮断するか、又は神経伝達の増強を生じうる。この作用は一過性又は永続性である。類似の作用を有する化合物は、通常類似の化学的及び構造的性質を有し、特定の1種のシナプスに対してのみ作用する。作用メカニズムは異なり、一部の化合物は化学伝達物質に対してアゴニスト又はアンタゴニストとして作用し、他のものは、神経伝達物質の合成若しくは放出を防止することにより又は放出後のその不活性化若しくは吸収を防止することにより作用する。
【００１２】
可能性のある作用が多様であるため、特定の神経伝達物質に対する作用に関するCNS毒性の評価はかなり複雑なプロセスである。現行方法は、強化された臨床観察、機能観察バッテリー、運動活性、病理学的及び病理組織学的検査並びに生化学的分析を通常含む。しかし、バイオマーカーは、かなり複雑に調節されており、かなり進行したステージでさえも時々変化が生じ得る。病理組織学的評価の主な欠点は、病理組織学的評価が侵襲的であり、評価が、検査する毒物学者の個々の解釈にある程度基づくので、臨床病理学/血液学測定と組み合わせた場合でさえも信頼性が低いことである（Berger 2009, The Expanded Biology of Serotonin, Annu. Rev. Med., 60, 355-366; Buckley P (1998) Chapter 9 - The nervous system, “Target organ pathology, a basic text," Turton J and Hooson J (eds) Taylor & Francis, London, United Kingdom, 1998; Mandella RC (2002) Chapter 8 - Applied Neurotoxicology, "CRC Handbook of Toxicology, 2nd edition," Derelanko MJ and Hollinger MA (eds.) Taylor & Francis, London, United Kingdom, 2002; Moser VC, Aschner M, Richardson RJ, Philbert MA (2008) Chapter 16. Toxic responses of the nervous system, 631-664, "Casarett & Doull's Toxicology, The basic science of poisons," Klaassen CD (ed.), McGraw-Hill P, 7th revised edition, New York (2008); Ozawa 1998, Glutamate receptors in the mammalian central nervous system, Progress in Neurobiology, 54, 581-618; Schulze GE (2002) Chapter 7 - Fundamental Neurotoxicology, "CRC Handbook of Toxicology, 2nd edition," Derelanko MJ and Hollinger MA (eds.) Taylor & Francis, London, United Kingdom, 2002）。
【００１３】
特定の神経伝達物質に対する作用に関してCNS毒性、特にその早期発生を効率的にかつ信頼性を持って決定するための高感度かつ特異的な方法はまだ利用可能でないが、それにもかかわらず高く評価されるであろう。生理学的及び心理学的ホメオスタシスを維持するためのその広範なメカニズムと神経系により制御される体の他の臓器系のすべてに対するその結果を考慮した場合、CNS（神経伝達物質に関連する）毒性の重要性が明らかとなる。したがって、この「マスター」系に対するダメージは、広範囲に及び、破壊的な作用にさえなりうる。さらに、欧州共同体のあらゆる種類の産業で使用されている化学化合物は、例えば、現在、REACH（化学物質の登録、評価、認可（Registration, Evaluation and Authorisation of Chemicals））を順守する必要がある。他の国では、同様の毒物学的リスク評価、例えばUSでは物質安全性データシート（Material Safety Data Sheets、MSDS）を行うことが必要である。化学化合物が特定の神経伝達物質に対する作用を有すると共にCNS毒性を誘導する可能性は、その化合物にとってリスクが高いと見なされ、その結果、その化合物は、限られた用途かつ高い安全基準に従う場合のみ利用可能であることを理解されたい。
【００１４】
眼はまた、CNSの構造物であり、同様にCNS毒性によって影響を受けうる。これは複雑な器官であるが、唯一の機能、すなわち光感知受容（photosensory reception）のみを有する。この機能に寄与する構造的要素としては以下が含まれる：（i）感覚神経網膜；（ii）光伝達構造物−角膜、水晶体、房水及び硝子体液；（iii）剛構造物−頑丈な強膜及び液体内容物を保持する前角膜；並びに（iv）ブドウ膜管−酸素及び栄養を供給する脈絡膜及び毛様体突起、及び入射光線を調節する可変の隔膜として作用する虹彩。眼の外側保護組織は、角膜、結膜及び強膜から構成される。眼球中層血管層は、虹彩、毛様体及び脈絡膜から構成される。両凸の無血管の無色でほぼ完全に透明な構造物が、小体によって虹彩の背後にぶらさがっており、これが毛様体と連結している。水晶体の小体又は提靱帯は、毛様体から生じ、水晶体赤道へ挿入する多数の線維から構成される。房水（aqueous）は水晶体の前方に、硝子体液（vitreous）は後方にある。水晶体は、半透膜に封入されて水晶体嚢となっている。
【００１５】
角膜は、その透明性のため独特である。角膜の透明性は、酸性ムコ多糖洗浄（detergence）における細胞及び膠原原線維の特別な配置に依存している。これらの因子のいずれか1つを妨害する毒物はいずれも角膜混濁を生じる可能性がある。角膜は、5つの別個の層：(1) 上皮、(2) ボーマン膜、(3) 支質、(4) デスメ膜、及び(5) 内皮から構成される。
【００１６】
眼の健康を評価するための多くの眼科的手順がある。かなり慣用的な臨床スクリーニング評価からより標的化された目的のための高機能の技法までの範囲の手順を利用可能である。眼の臨床評価は、付属器と、眼の前端構造物及び後部構造物の両方に関するものである。前端構造物又は前眼部には、角膜、虹彩、水晶体、及び前房が含まれる。後部構造物は、眼底と呼ばれ、網膜、網膜血管系、脈絡膜及び強膜を含む。
【００１７】
眼は、多くの化学物質の毒性作用を潜在的に受けやすくしている異なる生化学プロセスを有する形態学的構造と広く多様な組織タイプから構成される。毒物学的状態に関して、毒性物質による眼の構造又は機能の変化の報告例の数は肝臓でのみ超えている。したがって、毒物学的損傷後に生じる病理学的プロセスの正しい知識が極めて重要である。体の一部の臓器系とは異なり、眼における多くの既知毒性作用の生化学的及び細胞メカニズムはほとんど理解されていない。
【００１８】
全身投与による角膜傷害は、内因性又は外因性物質の沈着により生じた角膜炎、浮腫又は混濁の形態をとりうる。低タンパク質食餌におけるチロシンの投与はラットにおいて角膜炎を誘導することが報告されているが、この種の傷害における角膜炎の報告例はわずかである。
【００１９】
チロシンは、タンパク新生アミノ酸であるということのほかに、フェノール官能性のために特別な役割を有している。これは、シグナル伝達プロセスの一部であるタンパク質に存在する。これは、プロテインキナーゼ（いわゆる受容体チロシンキナーゼ）を経由して移行されるリン酸基の受容物質として機能する。ヒドロキシル基のリン酸化が、標的タンパク質の活性を変化させる。
【００２０】
実験動物における過剰なチロシン取り込みの影響への関心は、チロシン代謝の遺伝障害であるチロシン血症IIを有する個体におけるチロシンの組織及び代謝における変化を理解するために必要な基礎となっている。チロシン血症IIは、常染色体劣性遺伝し、チロシン血症と関連する肝酵素チロシンアミノトランスフェラーゼを完全に欠損し、チロシン尿症はチロシン代謝物の尿排出が高まっている。この疾患を有する個体は、生まれて数か月のうちに角膜損傷及び掌蹠びらんを有する。この疾患の理解の主な進展は、高レベルのチロシンを含有する低タンパク質食餌を与えた実験ラットの観察結果から、及びチロシン代謝の遺伝障害を有するミンクの研究から得られている。
【００２１】
高濃度の血漿及び組織チロシンは眼及び足の損傷を引き起こす。5％チロシンを含有する食餌を実験ラットに供給開始して24時間以内に、角膜に変化が生じ、これは「雪片」不透明に進行する点（ドット）として記載されている。細胞構造は変形し、角膜が厚くなり、不透明になる。チロシンを含有する低タンパク食餌を与えられたラットの角膜細胞内では結晶が確実に確認された。ラットにおけるチロシン毒性を防止する要因は、結晶形成及び角膜損傷をも防止する。
【００２２】
さらに、スルコトリオンに暴露されたラットは、部分的又はかすみがかった不透明から完全な不透明までの重症度の異なる角膜損傷を、より過度な損傷においては浮腫及び新血管形成事象と共に示した。チロシン濃度は、ラットにスルコトリオン類似体を単回用量で与えた24時間後に正常値の10倍高くなった。これはまた角膜ダメージを生じた。個々のラットにおける不透明な角膜もまた確認され、これは眼の前房における過剰なチロシンの蓄積と関連している可能性がある。
【００２３】
毒物学的研究におけるチロシンに関する眼の変化の解釈は、眼の不均一な性質のためきわめて複雑であり、異なる組織タイプの組成によって、毒性に特に感受性になっている。この解剖学的及び機能的特性のスペクトルは、毒物学において重要な種々の広範な病理学的応答を生じる。眼は、毒性化学物質に対する応答において顕著な種変動を示すことが知られている。これのため、眼毒性に関するメカニズムが一般的にあまり理解されていないこととも合わせて、実験動物における毒性化学物質の作用をヒトへ外挿することが極めて困難となっている。ヒトにおける眼の損傷を生じる化学物質の能力を同定することは価値のあることであるが、実験的な眼毒性試験に関する以外に広い一般化を可能にするためには、危険が伴う問題である。
【００２４】
可能性のある作用が多様であるため、チロシンに関する眼毒性の評価はかなり複雑なプロセスである。現行方法は、適当な照明による裸眼検査を通常含む。より詳細には、例えば直接及び間接検眼鏡、手持ち型又は卓上型細隙灯及び胃底（fundic）カメラが利用可能である。組織学のために眼を固定及び処理するには細心の注意が必要である。眼は種々の組織タイプから構成されるため、特定の目的のための理想的な固定剤は、一般的に利用可能な最良の妥協となる。局所的損傷の注意深い探索が重要であり、検眼鏡検査と組織学の組み合わせが理想的である。病理組織学的評価の主な欠点は、病理組織学的評価が侵襲的であり、評価が、検査する毒物学者の個々の解釈にある程度基づくので、臨床病理学/血液学測定と組み合わせた場合でさえも信頼性が低いことである（Benevenga NJ, Steele (1984) Adverse effects of excessive consumption of amino acids, Ann. Rev. Nutr., 4, 157-181; Fox DA, Boyes WK (2008) Chapter 17, Toxic responses of the ocular and visual system, 665-698, “Casarett & Doull’s Toxicology, The basic science of poisons," Klaassen CD (ed.), McGraw-Hill P, 7th revised edition, New York (2008); Goldsmith LA, Reed J (1976) Tyrosine-induced eye and skin lesions, a treatable genetic disease, JAMA, 236, 382-384; McCaa CS (1982) The eye and visual nervous system： Anatomy, physiology and toxicology, Environ. Health Perspect., 44, 1-8; Robinson M (1998) Chapter 15, Organs of Special Sense I： The Eye, “Target organ pathology, a basic text,” Turton J and Hooson J (eds) Taylor & Francis, London, United Kingdom, 1998）。
【００２５】
チロシンに関する眼毒性、特にその早期発生を効率的かつ信頼可能に判定するための高感度かつ特異的な方法はまだ利用可能でないが、それにもかかわらず高く評価されるであろう。視力及び健全性に対するその結果を考えれば、眼毒性の重要性は明らかとなるであろう。さらに、欧州共同体のあらゆる種類の産業で使用されている化学化合物は、例えば、現在、REACH（化学物質の登録、評価、認可（Registration, Evaluation and Authorisation of Chemicals））を順守する必要がある。他の国では、同様の毒性リスク評価、例えばUSでは物質安全性データシート（Material Safety Data Sheets、MSDS）を行うことが必要である。化学化合物が眼毒性を誘導する可能性は、その化合物にとってリスクが高いと見なされ、その結果、その化合物は、限られた用途かつ高い安全基準に従う場合のみ利用可能であることを理解されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
化学化合物の毒物学的な性質、特に神経毒性を効率的かつ信頼できる様式で評価するための高感度かつ特異的な方法はまだ利用可能でないが、それにもかかわらず高く評価されるであろう。
【００２７】
したがって、本発明の根底にある技術的課題は、前述のニーズに応じる手段及び方法を提供することと考えることができる。この技術的課題は、特許請求の範囲で特徴づけられかつ本明細書の以下に記載される実施形態によって解決される。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
したがって、本発明は、神経毒性を診断する方法であって、
（a）神経毒性を生じていることが疑われる対象の試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより神経毒性が診断されるステップ
を含む方法に関する。
【００２９】
本発明の方法の特定の実施形態において、神経毒性を診断する方法であって、
（a）神経毒性を生じていることが疑われる男性（雄）又は女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、神経毒性又はその症候のモニタリング、確認又は分類によって神経毒性を診断するステップ
を含む方法が提供される。
【００３０】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記対象は、神経毒性を誘導する能力があることが疑われる化合物と接触させたものである。
【００３１】
本発明は、対象において化合物が神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a）神経毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させた対象のサンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより化合物の神経毒性を誘導する能力が判定されるステップ
を含む方法にも関する。
【００３２】
本発明の方法の特定の実施形態において、対象において化合物が神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象を神経毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）神経毒性を誘導する能力がある化合物と接触させた男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、上記化合物が神経毒性を誘導する能力があるかを判定するステップ
を含む方法が提供される。
【００３３】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記化合物は、以下からなる群より選択される少なくとも1種の化合物である：17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）。
【００３４】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）神経毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、神経毒性を示す。
【００３５】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、神経毒性を示す。
【００３６】
本発明の方法のさらに別の実施形態では、前記リファレンスは、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、神経毒性を示す。
【００３７】
本発明は、神経毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a）神経毒性を治療する能力があると推測される候補物質と接触させた神経毒性を生じている対象のサンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより神経毒性を治療する能力がある物質が同定されるステップ
を含む方法も企図する。
【００３８】
本発明の方法の特定の実施形態において、神経毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象を神経毒性が誘発されるように神経毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）神経毒性を生じている男性（雄）若しくは女性（雌）を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、神経毒性を治療するための物質を同定及び選択するステップ
を含む方法が提供される。
【００３９】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）神経毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、及びトキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物、及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプルとリファレンスとの間で異なる、バイオマーカーの量が、神経毒性を治療する能力がある物質を示す。
【００４０】
前述の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、神経毒性を治療する能力がある物質を示す。
【００４１】
前述の方法のさらに別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、対象集団におけるバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、神経毒性を治療する能力がある物質を示す。
【００４２】
本発明は、対象のサンプルにおいて神経毒性を診断するための、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a若しくは12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー又は前記バイオマーカー用の検出剤の使用にも関する。
【００４３】
さらに、本発明は、神経毒性を生じていることが疑われる対象のサンプルにおいて神経毒性を診断するための装置であって、
（a）サンプル中に存在するバイオマーカーの量の測定を可能にする、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種の前記バイオマーカー用の検出剤を備える分析ユニットと、それと作動可能に連結された、
（b）格納されたリファレンス、及び分析ユニットで測定された前記少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較することを可能にし、それによって神経毒性が診断されるデータ処理装置を備える評価ユニットと
を具備する装置に関する。
【００４４】
本発明の装置の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、神経毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在することを示し、又はリファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないことを示す。
【００４５】
本発明の装置の別の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在することを示し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないことを示す。
【００４６】
さらに、本発明は、神経毒性の診断用キットであって、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤、及び少なくとも1種のバイオマーカーに関するスタンダードであって、その濃度が、神経毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来する又は神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するスタンダードを含むキットに関する。
【００４７】
特に本発明は、CNS毒性を診断する方法であって、
（a）CNS毒性を生じていることが疑われる対象の試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定された量をリファレンスと比較するステップであり、それによりCNS毒性が診断されるステップ
を含む方法に関する。
【００４８】
本発明の方法の特定の実施形態において、CNS毒性を診断する方法であって、
（a）CNS毒性を生じていることが疑われる男性（雄）又は女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a又は8bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、CNS毒性又はその症候のモニタリング、確認又は分類によってCNS毒性を診断するステップ
を含む方法が提供される。
【００４９】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記対象は、CNS毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させたものである。
【００５０】
本発明は、化合物が対象においてCNS毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a）CNS毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させた対象のサンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定された量をリファレンスと比較するステップであり、それにより化合物のCNS毒性誘導能力が判定されるステップ
を含む方法にも関する。
【００５１】
本発明の方法の特定の実施形態において、対象において化合物がCNS毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象をCNS毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）CNS毒性を誘導する能力がある化合物と接触させた男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a又は8bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、上記化合物がCNS毒性を誘導する能力があるかを判定するステップ
を含む方法が提供される。
【００５２】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記化合物は、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物である。
【００５３】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）CNS毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、CNS毒性の指標となる。
【００５４】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）CNS毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、CNS毒性の指標となる。
【００５５】
本発明の方法のさらに別の実施形態では、前記リファレンスは、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、CNS毒性の指標となる。
【００５６】
本発明は、CNS毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a）CNS毒性を治療する能力があると推測される候補物質と接触させたCNS毒性を生じている対象のサンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定された量をリファレンスと比較するステップであり、それによりCNS毒性を治療する能力がある物質が同定されるステップ
を含む方法も企図する。
【００５７】
本発明の方法の特定の実施形態において、CNS毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象をCNS毒性が誘発されるようにCNS毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）CNS毒性を生じている男性（雄）若しくは女性（雌）を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、CNS毒性を治療するための物質を同定及び選択するステップ
を含む方法が提供される。
【００５８】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）CNS毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて異なる、バイオマーカーの量が、CNS毒性を治療する能力がある物質の指標となる。
【００５９】
前述の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）CNS毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、CNS毒性を治療する能力がある物質の指標となる。
【００６０】
前述の方法のさらに別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、CNS毒性を治療する能力がある物質の指標となる。
【００６１】
本発明は、対象のサンプルにおいてCNS毒性を診断するための、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a若しくは8bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー又は前記バイオマーカー用の検出剤の使用にも関する。
【００６２】
さらに、本発明は、CNS毒性を生じていることが疑われる対象のサンプルにおいてCNS毒性を診断するための装置であって、
（a）サンプル中に存在するバイオマーカーの量の測定を可能にする、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤を備える分析ユニットと、それに作動可能に連結された、
（b）格納されたリファレンス、及び分析ユニットで測定された前記少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較することを可能にし、それによってCNS毒性が診断されるデータ処理装置を備える評価ユニットと
を具備する装置に関する。
【００６３】
本発明の装置の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、CNS毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、CNS毒性が存在することの指標となり、又はリファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、CNS毒性が存在しないことの指標となる。
【００６４】
本発明の装置の別の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、CNS毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン及び塩酸ジプラシドンからなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、CNS毒性が存在することの指標となり、又はリファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、CNS毒性が存在しないことの指標となる。
【００６５】
さらに、本発明は、CNS毒性の診断用キットであって、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤、及び少なくとも1種のバイオマーカーに関するスタンダードであって、その濃度が、CNS毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来する、又はCNS毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するスタンダードを含むキットに関する。
【００６６】
特に本発明は、眼毒性を診断する方法であって、
（a）眼毒性を生じていることが疑われる対象の試験サンプルにおいて、表9a、9b、9c又は9dのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定された量をリファレンスと比較するステップであり、それにより眼毒性が診断されるステップ
を含む方法に関する。
【００６７】
本発明の方法の特定の実施形態において、眼毒性を診断する方法であって：
（a）眼毒性を生じていることが疑われる男性（雄）又は女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表9a、9b、9c又は9dのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、眼毒性又はその症候のモニタリング、確認又は分類によって眼毒性を診断するステップ
を含む方法が提供される。
【００６８】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記対象は、眼毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させたものである。
【００６９】
本発明は、化合物が対象において眼毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a）眼毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させた対象のサンプルにおいて、表9a、9b、9c又は9dのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定された量をリファレンスと比較するステップであり、それにより化合物の眼毒性誘導能力が判定されるステップ
を含む方法にも関する。
【００７０】
本発明の方法の特定の実施形態において、対象において化合物が眼毒性を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象を眼毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）眼毒性を誘導する能力がある化合物と接触させた男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表9a、9b、9c又は9dのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、上記化合物が眼毒性を誘導する能力があるかを判定するステップ
を含む方法が提供される。
【００７１】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記化合物は、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物である。
【００７２】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）眼毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、眼毒性の指標となる。
【００７３】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）眼毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、眼毒性の指標となる。
【００７４】
本発明の方法のさらに別の実施形態では、前記リファレンスは、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、眼毒性の指標となる。
【００７５】
本発明は、眼毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a）眼毒性を治療する能力があると推測される候補物質と接触させた眼毒性を生じている対象のサンプルにおいて、表9a、9b、9c又は9dのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定された量をリファレンスと比較するステップであり、それにより眼毒性を治療する能力がある物質が同定されるステップ
を含む方法も企図する。
【００７６】
本発明の方法の特定の実施形態において、眼毒性を治療するための物質を同定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象を眼毒性が誘発されるように眼毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）眼毒性を生じている男性（雄）若しくは女性（雌）を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表9a、9b、9c又は9dのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、眼毒性を治療するための物質を同定及び選択するステップ
を含む方法が提供される。
【００７７】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）眼毒性を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて異なる、バイオマーカーの量が、眼毒性を治療する能力がある物質の指標となる。
【００７８】
前述の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）眼毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、眼毒性を治療できる物質の指標となる。
【００７９】
前述の方法のさらに別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、眼毒性を治療する能力がある物質の指標となる。
【００８０】
本発明は、対象のサンプルにおいて眼毒性を診断するための、表9a、9b、9c若しくは9dのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー又は前記バイオマーカー用の検出剤の使用にも関する。
【００８１】
さらに、本発明は、眼毒性を生じていることが疑われる対象のサンプルにおいて眼毒性を診断するための装置であって、
（a）サンプル中に存在するバイオマーカーの量の測定を可能にする、表9a、9b、9c又は9dのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤を備える分析ユニットと、それと作動可能に連結された、
（b）格納されたリファレンス、及び分析ユニットで測定された前記少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較することを可能にし、それによって眼毒性が診断されるデータ処理装置を備える評価ユニットと
を具備する装置に関する。
【００８２】
本発明の装置の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、眼毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、眼毒性が存在することの指標となり、又はリファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、眼毒性が存在しないことの指標となる。
【００８３】
本発明の装置の別の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、眼毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン及びNTBC（HPPDインヒビター）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、眼毒性が存在することの指標となり、又はリファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、眼毒性が存在しないことの指標となる。
【００８４】
さらに、本発明は、眼毒性の診断用キットであって、表9a、9b、9c又は9dのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤、及び少なくとも1種のバイオマーカーに関するスタンダードであって、その濃度が、眼毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来する、又は眼毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するスタンダードを含むキットに関する。
【００８５】
特に、本発明は、骨格筋神経支配刺激を診断する方法であって、
（a）骨格筋神経支配刺激を生じていることが疑われる対象の試験サンプルにおいて、表12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより骨格筋神経支配刺激が診断されるステップ
を含む方法に関する。
【００８６】
本発明の方法の特定の実施形態において、骨格筋神経支配刺激を診断する方法であって、
（a）骨格筋神経支配刺激を生じていることが疑われる男性（雄）又は女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表12a又は12bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、骨格筋神経支配刺激又はその症候のモニタリング、確認又は分類によって骨格筋神経支配刺激を診断するステップ
を含む方法が提供される。
【００８７】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記対象は、骨格筋神経支配刺激の能力があることが疑われる化合物と接触させたものである。
【００８８】
本発明は、対象において化合物が骨格筋神経支配刺激を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a）骨格筋神経支配刺激を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させた対象のサンプルにおいて、表12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより化合物の骨格筋神経支配刺激を誘導する能力が判定されるステップ
を含む方法にも関する。
【００８９】
本発明の方法の特定の実施形態において、対象において化合物が骨格筋神経支配刺激を誘導する能力があるかどうかを判定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象を骨格筋神経支配刺激を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）骨格筋神経支配刺激を誘導する能力がある化合物と接触させた男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表12a又は12bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、上記化合物が骨格筋神経支配刺激を誘導する能力があるかを判定するステップ
を含む方法が提供される。
【００９０】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記化合物は、以下からなる群より選択される少なくとも1種の化合物である：トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）。
【００９１】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）骨格筋神経支配刺激を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激を示す。
【００９２】
本発明の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）骨格筋神経支配刺激を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激を示す。
【００９３】
本発明の方法のさらに別の実施形態では、前記リファレンスは、対象集団のバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、リファレンスと比較して試験サンプルにおいて異なる、バイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激を示す。
【００９４】
本発明は、骨格筋神経支配刺激を治療するための物質を同定する方法であって、
（a）骨格筋神経支配刺激を治療する能力があると推測される候補物質と接触させた骨格筋神経支配刺激を生じている対象のサンプルにおいて、表12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ、
（b）ステップ（a）で測定した量をリファレンスと比較するステップであり、それにより骨格筋神経支配刺激を治療する能力がある物質が同定されるステップ
を含む方法も企図する。
【００９５】
本発明の方法の特定の実施形態において、骨格筋神経支配刺激を治療するための物質を同定する方法であって、
（a1）（i）男性（雄）若しくは女性（雌）対象を選択するステップ；
（ii）上記対象を筋神経支配刺激が誘発されるように筋神経支配刺激を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させるステップ；又は
（a2）筋神経支配刺激を生じている男性（雄）若しくは女性（雌）を選択するステップ；
（b）上記選択した対象から試験サンプルを取得するステップ；
（c）分析に備えて上記サンプルを前処理するステップ；
（d）上記試験サンプルにおいて、表12a又は12bのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカーの量を測定するステップ；及び
（e）ステップ（d）において測定した量をリファレンスと比較するステップ；並びに
（f）ステップ（e）の比較に基づいて、筋神経支配刺激を治療するための物質を同定及び選択するステップ
を含む方法が提供される。
【００９６】
前述の方法の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）骨格筋神経支配刺激を生じている対象若しくは対象群、又は（ii）トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプルとリファレンスとの間で異なる、バイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激を治療する能力がある物質を示す。
【００９７】
前述の方法の別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、（i）骨格筋神経支配刺激を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、又は（ii）トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激を治療する能力がある物質を示す。
【００９８】
前述の方法のさらに別の好ましい実施形態では、前記リファレンスは、対象集団におけるバイオマーカーについて計算されたリファレンスである。前記方法のより好ましい実施形態では、試験サンプル及びリファレンスにおいて本質的に同じである、バイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激を治療する能力がある物質を示す。
【００９９】
本発明は、対象のサンプルにおいて骨格筋神経支配刺激を診断するための、表12a若しくは12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー又は前記バイオマーカー用の検出剤の使用にも関する。
【０１００】
さらに、本発明は、骨格筋神経支配刺激を生じていることが疑われる対象のサンプルにおいて骨格筋神経支配刺激を診断するための装置であって、
（a）サンプル中に存在するバイオマーカーの量の測定を可能にする、表12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種の前記バイオマーカー用の検出剤を備える分析ユニットと、それと作動可能に連結された、
（b）格納されたリファレンス、及び分析ユニットで測定された前記少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較することを可能にし、それによって骨格筋神経支配刺激が診断されるデータ処理装置を備える評価ユニットと
を具備する装置に関する。
【０１０１】
本発明の装置の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、骨格筋神経支配刺激を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又はトキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激が存在することを示し、又はリファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激が存在しないことを示す。
【０１０２】
本発明の装置の別の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、骨格筋神経支配刺激を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又はトキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激が存在することを示し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、骨格筋神経支配刺激が存在しないことを示す。
【０１０３】
さらに、本発明は、骨格筋神経支配刺激の診断用キットであって、表12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー用の検出剤、及び少なくとも1種のバイオマーカーに関するスタンダードであって、その濃度が、骨格筋神経支配刺激を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来する又は骨格筋神経支配刺激を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するスタンダードを含むキットに関する。
【発明を実施するための形態】
【０１０４】
特に本発明は、以下の具体的な方法、使用、装置及びキットも企図する。
【０１０５】
以下の定義及び説明は、前記の本発明の実施形態全て及び以下に記載する実施形態に準用する。
【０１０６】
本発明に従って言及される方法は、基本的に前述のステップからなるものでもよいし、さらなるステップを含んでもよい。さらなるステップは、サンプルの前処理又はこの方法によって得られた診断結果の評価に関し得る。好ましいさらなる評価ステップは、本明細書の他の個所に記載される。この方法は、部分的に又は完全に自動化により補助することができる。例えば、バイオマーカー量の測定に係るステップは、ロボット化及び自動化読取装置によって自動化することができる。同様に、量の比較に係るステップも、実行の際に、自動的に比較するプログラムコードを備える、コンピューターなどの適切なデータ処理装置によって自動化することができる。そうした場合のリファレンスは、格納されたリファレンスから、例えばデータベースから提供される。好ましくは、この方法は、対象のサンプルについてex vivoで行われる方法であり、すなわちヒト又は動物の体に対して実施しない方法であることを理解されたい。
【０１０７】
本明細書で使用する用語「診断」は、対象が、本明細書で言及する中毒、疾患若しくは障害などの状態を生じている、又はそうした状態に関する素因を有する確率を評価することを指す。素因の診断は、対象がその後に既定の時間窓内にその状態を発症する見込みの予後又は予測として時には称される場合もある。当業者に理解されるように、そうした評価は、診断される対象の100％について正確であることが好ましいが、通常はそうではない可能性がある。しかし、この用語は、統計的に有意な一部の対象を、その状態を生じている又はその状態に関する素因を有すると特定できることを必要とする。ある一部が統計的に有意かどうかは、様々な周知の統計的な評価ツール、例えば、信頼区間の決定、p値の決定、スチューデントのt検定、マンホイットニー検定などを使用して、当業者であれば容易に判定することができる。詳細は、Dowdy及びWearden、Statistics for Research、John Wiley & Sons、New York 1983に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％又は少なくとも95％である。p値は、好ましくは、0.2、0.1、0.05である。
【０１０８】
本発明による診断は、ある状態又はその症状及びそれらの素因のモニタリング、確認及び分類も含む。モニタリングは、既に診断された状態又は素因の経過を追うことを指す。モニタリングは、例えば、その状態若しくは素因の進行の判定、その状態の進行に対する特定治療の効果の判定、又は素因を有する対象における、その状態の発症に対する予防的治療若しくは食事療法などの予防策の効果の判定を包含する。上記治療、予防手段又は食事を調整することができ、その調整の影響は、モニタリングの態様で調べることができる。さらに、状態の進行又はその素因をモニタリングする場合には、このモニタリングはまた、モニタリング頻度を決定すること、追加的な生化学的又は他の健康パラメータの測定などの追加的なモニタリング測定手段を推奨及び／又は実施することも含みうる。確認は、既に判定された状態又はその状態の素因の診断を、他の指標又はマーカーを使用して強化すること又は実証することに関する。確認はまた、一態様において、確認された状態又はその素因に基づいて治療手段の投与又は適応を含みうる。分類は、（i）例えばその状態に付随する症状の強さに応じて、その状態を様々なクラスに割り当てること、又は（ii）その状態に付随する、様々なステージ、疾患若しくは障害を区別することに関する。分類はまた、一態様において、分類された状態、症候又はその素因に基づいて治療手段の投与又は適応を含みうる。状態の素因は、リスクの程度、すなわち対象が後でその状態を発症する確率に基づいて分類することができる。さらに、分類は、好ましくは、本発明の方法によって試験すべき化合物に作用様式を割り当てることも含む。具体的には、本発明の方法によって、作用様式がまだ知られていない化合物の特異的な作用様式の判定が可能になる。これは、好ましくは、少なくとも1種のバイオマーカーに関して測定された量又は前記化合物の代表的なバイオマーカープロファイルを、リファレンスとして作用様式が知られている化合物に関して測定されたバイオマーカーの量又はバイオマーカープロファイルと比較することによって達成される。化合物の分子標的が同定されるので、作用様式の分類によって、より一層信頼できる化合物の毒性評価が可能になる。疾患又は状態の診断を目的とする本発明の方法は、毒物学的作用について化合物をスクリーニングし、それについて報告するため、並びに化合物開発、例えば安全性の増加又は薬物開発若しくは有効濃度の特定において用いることができる。
【０１０９】
本発明により、化合物を神経毒性を誘導する能力があるものとして同定することができる。そのような同定は、好ましくは、化合物の製造、取扱い、保管及び／又は輸送、並びにその用途に関する示唆を行うことを含む。そのような示唆としては、その毒性可能性、ヒト、動物及び／又は環境に対する暴露の制限にしたがって、化合物の製造、取扱い、保管、輸送及び／又は適用、標識のための安全性プロトコールを確立することを含む。さらに、化合物が神経毒性を誘発するものと同定された場合、安全性レベル、例えばLD50/LC50及び／又はED50/EC50値、及び誘導された閾値を、好ましくは決定する。
【０１１０】
本明細書で使用する用語「神経毒性」は、神経組織又は神経由来組織の任意の損傷又は障害に関する。特に、本発明により想定されるのは、中枢神経系の毒性（「CNS毒性」）又は眼の毒性（「眼毒性」）である。さらに、神経毒性はまた、末梢神経毒性、特に骨格筋神経支配刺激に関連する神経筋伝達障害の態様を含む。したがって、本明細書において使用する用語「神経毒性」は、CNS毒性、眼毒性及び末梢神経毒性、好ましくは骨格筋神経支配刺激に関連するものを一般的に包含する。好ましくは、本明細書で使用する神経毒性は、化学化合物又は薬物の投与によって誘導されるか、又はその投与の結果であり、すなわち、いわゆる毒素誘導性神経毒性である。
【０１１１】
神経毒性の前述の発現の症状及び臨床徴候は、当業者に周知であり、毒物学の標準的な書籍、例えば、H. Marquardt, S. G. Schafer, R. O. McClellan, F. Welsch (eds.), “Toxicology”, Chapter 13： The Liver, 1999, Academic Press, Londonに詳細に記載されている。
【０１１２】
本明細書において使用するCNS毒性とは、好ましくは中枢神経系の神経機能の障害を指す。神経系の正常な機能は、興奮性を発現するニューロンの本来持っている能力に応じて異なる。情報の伝達は、活動電位の発生の頻度及び規則性の変化に依存している。ニューロン間、ニューロンと受容細胞との間において、神経伝達物質の放出によって伝達が生じる際のシナプス接合部がある。一部の伝達物質は興奮性であり、他のものは抑制性である。これによりニューロン活動において良好な制御が可能となる。脳はまた、機能に基づいて、同じ神経伝達物質を利用する細胞群及びそれらの軸索の連結を含む種々の経路に分けることができる。5つの主要な経路が認識されている：(1) 前脳の基底部分のコリン作動性経路は、記憶、行動及び気分に関係し、脳幹の網様体の経路は、覚醒状態に影響を及ぼし、睡眠プロセスを制御する。(2) ノルアドレナリン作動性経路は、脳橋及び髄質領域に限定されているが、中枢神経系の多くの領域、例えば辺縁系と連結している。(3) アドレナリン作動性ニューロンは、後脳の尾部に限定され、その経路はあまり理解されていない。(4) セロトニン作動性経路は、脳幹全体にわたって見出され、心血管機能、特に脳血流を調節し、睡眠プロセスを制御する。(5) ドーパミン作動性経路は、中脳及び視床下部に位置している。CNSにおける伝達に関与する神経伝達物質としては次の物質：ノルエピネフリン（NE）、ドーパミン（DA）、5-ヒドロキシトリプタミン（セロトニン, 5HT）、アセチルコリン（ACh）、γアミノ酪酸（GABA）、フェニルエチルアミン、ヒスタミン、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、タウリン、γアミノ酪酸（GABA）、及びいくつかのペプチド、例えばサブスタンスP、並びにエンケファリンが挙げられる。ドーパミンは、広範な種の動物に存在するカテコールアミン神経伝達物質である。脳内では、この置換されたフェネチルアミンが5種の既知のドーパミン受容体D1、D2、D3、D4及びD5並びにそれらのバリアントを活性化する。ドーパミンは、脳の複数の領域で産生され、視床下部によって放出される神経ホルモンでもある。ドーパミンは、脳において多くの機能、例えば行動及び認知、随意運動、意欲、罰及び報酬、プロラクチン産生の阻害、睡眠、気分、注意、作業記憶、並びに学習における重要な役割を有する。これらの機能は、ドーパミン依存性伝達が中毒によって障害された場合に機能障害となりうる。グルタミン酸は、脳の主要な興奮性神経伝達物質であり、その作用は、イオンチャネルに直接的にリガンド依存性（ligand-gated）であるもの（イオンチャネル型）、及びGタンパク質と共役するものである興奮性アミノ酸受容体（EAARs）と呼ばれる複数の受容体サブタイプによって媒介される。CNSへのグルタミン酸の進入は、血液脳関門において調節される。グルタミン酸受容体は、哺乳動物中枢神経系（CNS）において興奮性神経伝達の大部分を媒介する。これらはまた、記憶及び学習における長期増強の原因となるシナプス伝達の可塑的変化、並びに発生過程における神経ネットワークの形成に関与している。これらの機能は、グルタミン酸依存性伝達が中毒により障害された場合に機能障害となりうる。セロトニン（5-ヒドロキシトリプタミン, 5-HT）は、神経活動及び広範な神経��理学的プロセスを調節する。しかしながら、大部分のセロトニンは中枢神経系の外側（胃腸管、胎盤）に見出され、すべてのセロトニン受容体は脳の外側及び内部で発現される。セロトニンは、多数の生物学的プロセス、例えば心血管系、肺系統、胃腸（GI）系、及び生殖器系並びに中枢神経系（CNS）を調節し、異常調節は多くの精神障害及び神経障害の発症に関与している。セロトニンはヒトの行動プロセスの実質的にすべてを調節する。これらの機能は、5-HT依存性伝達が中毒により障害された場合に機能障害となりうる。ノルエピネフリン又はノルアドレナリンは、ドーパミンβ-ヒドロキシラーゼによってドーパミンから合成される。これは、ノルアドレナリン作動性ニューロンから放出される中枢神経系及び交感神経系におけるホルモン及び神経伝達物質などの多くの機能を有するカテコールアミンである。ノルエピネフリンは脳の部分に影響を及ぼし、そこで注意及び反応が制御され、攻撃・逃避反応の原因となり、直接的に心拍/血圧を上昇させ、エネルギー貯蔵からグルコース放出を誘発し、及び骨格筋への血流を増大させ、そして脳の酸素供給を高める。これらの機能は、ノルエピネフリン依存性伝達が中毒により障害された場合に機能障害となりうる。ニコチン（メチルピリジルピロリドン）は、中枢神経系、末梢神経節及び神経筋接合部におけるシナプスにおいて、特定のタイプのコリン作動性受容体、ニコチン性受容体と結合することによりその作用を発揮し、そこでこれはアセチルコリン（AC）アゴニストとして作用する。ニコチンは、低濃度では、これらの受容体の活性を増大させる。ニコチンはまた、種々の他の神経伝達物質にも作用を有する。ニコチンは、骨格筋よりも脳内のアセチルコリン受容体に対して高い親和性を有するが、毒性用量では、これは収縮及び呼吸まひを誘導しうる。臨床的作用としては、発汗、頻脈、高血圧及び皮膚血管の収縮が挙げられる。CNSの適当な領域におけるニコチンは精神活性作用を有する。これは、CNSのニコチンサブセット及び末梢AC受容体を直接刺激する。中程度の中毒は、コリン作動性過剰の症候、例えば縮瞳、唾液分泌、排尿、排便、嘔吐、及び気道内分泌物の増加を生じる。多用量暴露では、短期間の刺激に続いて、持続性の膜脱分極に関連する神経筋遮断が迅速に生じる。死亡した場合、最も一般的なメカニズムは、末梢神経筋遮断及び心血管虚脱に起因する呼吸停止である。これらの機能は、ニコチン依存性伝達が中毒により障害された場合に機能障害となりうる。以前に議論されているように、種々の薬物及び毒物への暴露によって、中枢神経系の構造又は機能に有害な変化が誘導され、毒物学的状況における神経伝達物質作用の障害に起因する形態学的及び機能的CNS攪乱（障害）の説明は極めて複雑となり、毒性及び／又は薬理学的応答の局所及び全身発現の両方に関与している可能性がある。一般に、これらの変化は定量的又は定性的のいずれかに分類することができる。多数の天然毒物及び多くの合成分子は、ニューロン間又はニューロンと他の細胞型（特に骨格筋細胞）との間の化学伝達のプロセスを妨害することにより神経毒性を生じている。この妨害は、作用メカニズム及び影響を受けるシナプスの種類に応じて、インパルスの伝達を遮断するか、又は神経伝達の増強を生じうる。この作用は一過性又は永続性である。類似の作用を有する化合物は、通常類似の化学的及び構造的性質を有し、特定の1種のシナプスに対してのみ作用する。作用メカニズムは異なり、一部の化合物は化学伝達物質に対してアゴニスト又はアンタゴニストとして作用し、他のものは、神経伝達物質の合成若しくは放出を防止することにより又は放出後のその不活性化若しくは吸収を防止することにより作用する。
【０１１３】
好ましくは、神経毒性がCNS毒性である場合は、本発明の方法によって測定される少なくとも1種のバイオマーカーは、表1a、1b、1c、1d、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8a又は8bのうちのいずれか1つから選択される。より好ましくは、前記CNS毒性は、GABA依存性伝達、ドーパミン依存性伝達、及び／又はセロトニン依存性伝達の障害と関連している。
【０１１４】
より好ましくは、上記少なくとも1種のバイオマーカーが表1a、1b、1c又は1dに示されるバイオマーカーから選択される場合、前記CNS毒性はGABA依存性伝達の障害を特徴としている。
【０１１５】
より好ましくは、上記少なくとも1種のバイオマーカーが表3a、3b、4a、4b、6a、6b、6c又は6dに示されるバイオマーカーから選択される場合、前記CNS毒性はドーパミン依存性伝達の障害を特徴としている。
【０１１６】
またより好ましくは、上記少なくとも1種のバイオマーカーが表5a、5b、7a、7b、8a、8b、8c又は8dに示されるバイオマーカーから選択される場合、前記CNS毒性はセロトニン依存性伝達レベルの障害を特徴としている。
【０１１７】
より好ましくは、上記少なくとも1種のバイオマーカーが表2a又は2bに示されるバイオマーカーから選択される場合、前記CNS毒性は神経刺激作用と関連している。
【０１１８】
本明細書において使用する眼毒性とは、好ましくは眼の機能障害を指す。眼もCNSの構造物であり、同様にCNS毒性によって影響を受けうる。これは複雑な器官であるが、唯一の機能、すなわち光感知受容（photosensory reception）のみを有する。好ましい眼毒性の結果としては、全身投与による角膜傷害があり、内因性又は外因性物質の沈着により生じた角膜炎、浮腫又は混濁の形態をとりうる。低タンパク質食餌におけるチロシンの投与はラットにおいて角膜炎を誘導することが報告されているが、この種の傷害における角膜炎の報告例はわずかである。別の結果がチロシン代謝障害によって生じる。チロシンは、タンパク新生アミノ酸であるということのほかに、フェノール官能性のために特別な役割を有している。これは、シグナル伝達プロセスの一部であるタンパク質に存在する。これは、プロテインキナーゼ（いわゆる受容体チロシンキナーゼ）を経由して移行されるリン酸基の受容物質として機能する。ヒドロキシル基のリン酸化が、標的タンパク質の活性を変化させる。実験動物における過剰なチロシン取り込みの影響への関心は、チロシン代謝の遺伝障害であるチロシン血症IIを有する個体におけるチロシンの組織及び代謝における変化を理解するために必要な基礎となっている。チロシン血症IIは、常染色体劣性遺伝し、チロシン血症と関連する肝酵素チロシンアミノトランスフェラーゼを完全に欠損し、チロシン尿症はチロシン代謝物の尿排出が高まっている。この疾患を有する個体は、生まれて数か月のうちに角膜損傷及び掌蹠びらんを有する。この疾患の理解の主な進展は、高レベルのチロシンを含有する低タンパク質食餌を与えた実験ラットの観察結果から、及びチロシン代謝の遺伝障害を有するミンクの研究から得られている。高濃度の血漿及び組織チロシンは眼及び足の損傷を引き起こす。5％チロシンを含有する食餌を実験ラットに供給開始して24時間以内に、角膜に変化が生じ、これは「雪片」不透明に進行する点（ドット）として記載されている。細胞構造は変形し、角膜が厚くなり、不透明になる。チロシンを含有する低タンパク食餌を与えられたラットの角膜細胞内では結晶が確実に確認された。ラットにおけるチロシン毒性を防止する要因は、結晶形成及び角膜損傷をも防止する。さらに、スルコトリオンに暴露されたラットは、部分的又はかすみがかった不透明から完全な不透明までの重症度の異なる角膜損傷を、より過度な損傷においては浮腫及び新血管形成事象と共に示した。チロシン濃度は、ラットにスルコトリオン類似体を単回用量で与えた24時間後に正常値の10倍高くなった。これはまた角膜ダメージを生じた。個々のラットにおける不透明な角膜もまた確認され、これは眼の前房における過剰なチロシンの蓄積と関連している可能性がある。毒物学的研究におけるチロシンに関する眼の変化の解釈は、眼の不均一な性質のためきわめて複雑であり、異なる組織タイプの組成によって、毒性に特に感受性になっている。この解剖学的及び機能的特徴のスペクトルは、毒物学において重要な種々の広範な病理学的応答を生じる。眼は、毒性化学物質に対する応答において顕著な種変動を示すことが知られている。これのため、眼毒性に関するメカニズムが一般的にあまり理解されていないこととも合わせて、実験動物における毒性化学物質の作用をヒトへ外挿することが極めて困難となっている。ヒトにおける眼の損傷を生じる化学物質の能力を同定することは価値のあることであるが、実験的な眼毒性試験に関する以外に広い一般化を可能にするためには、危険が伴う問題である。
【０１１９】
好ましくは、本発明の方法により測定すべき上記少なくとも1種のバイオマーカーは、神経毒性が眼毒性である場合には、表9a、9b、9c又は9dのいずれか1つから選択される。
【０１２０】
より好ましくは、上記少なくとも1種のバイオマーカーが表9に示されるバイオマーカーから選択される場合には、上記眼毒性は幻覚剤持続性認知障害（HPPD）の阻害と関連する。
【０１２１】
好ましくは、本発明の方法により測定すべき上記少なくとも1種のバイオマーカーは、神経毒性が骨格筋神経支配刺激である場合には、表12a又は12bのいずれか1つから選択される。
【０１２２】
本明細書において参照する「骨格筋神経支配刺激」という用語は、神経筋伝達障害によって生じた骨格筋活動の非生理的かつ不適切な刺激を包含する。骨格筋活動の非生理的かつ不適切な刺激は、好ましくは、筋細胞の代謝障害、特にエネルギー蓄積の障害を生じる。
【０１２３】
各バイオマーカーが、診断について見かけ上統計的に独立した予測因子であるので、表に列挙されているバイオマーカーのうちの2種以上の組み合わせは、さらに診断を強化することが本発明によって見出された。さらに、マーカー存在量に対する他の組織からの影響が相殺されるので、神経毒性に対する特異性も有意に増大する。したがって、本明細書で使用する用語「少なくとも1」は、好ましくは、添付の表のうちのいずれか1つで言及されるバイオマーカーの、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9又は少なくとも10の組み合わせを指す。好ましくは、それらの表のうちのいずれか1つで列挙される全てのバイオマーカーが、本発明の方法に従って組み合わせて測定される。
【０１２４】
それぞれの表の神経毒性に関するバイオマーカーの好ましい群又は組み合わせ、及び表中で言及される指標に関するバイオマーカーの好ましい群又は組み合わせは、以下の通りである：
表1a及び1b（CNS GABA受容体アゴニスト）：
リン酸（無機及び有機リン酸）、ホスファチジルコリン（C16：0,C22：6）、ホスファチジルコリン（C16：0,C20：4）、システイン又は3-インドキシル硫酸。  
表1c及び1d（CNS GABA受容体アゴニスト）：
グルタミン酸、システイン、コエンザイム Q9、ミオイノシトール又はイソロイシン。
【０１２５】
表2a及び2b（CNS 精神刺激薬）：
コリンプラズマロゲン No 03、DAG（C18：1,C18：2）、グルタミン酸、イソロイシン又はTAG No 07。
【０１２６】
表3a及び3b（CNS 抗精神病薬（ドーパミン受容体遮断））：
トレオン酸、ミオイノシトール-2-リン酸, 脂質画分、トリプトファン、グリシン又は3-メトキシチロシン。
【０１２７】
表4a及び4b（CNSドーパミンアンタゴニスト）：
ホスファチジルコリン（C16：0,C16：0）、ドコサペンタエン酸（C22：cis[7,10,13,16,19]5）、ホスファチジルコリン（C16：1,C18：2）、セラミド（d18：1,C24：1）又はミオイノシトール, 脂質画分。
【０１２８】
表5a及び5b（CNS受容体遮断（セロトニン-ドーパミン）：
グルタミン、ガラクトース, 脂質画分、バリン、ロイシン又はイソロイシン。
【０１２９】
表6a及び6b（神経系ドーパミンアゴニスト）：
セラミド（d18：1,C24：1）、16-メチルヘプタデカン酸、ホモバニリン酸（HVA）、コリンプラズマロゲン No 03又は17-メチルオクタデカン酸。  
表6c及び6d（神経系セロトニン受容体アンタゴニスト）：
ドコサペンタエン酸（C22：cis[7,10,13,16,19]5）、ホスファチジルコリン（C16：0,C16：0）、ホスファチジルコリン（C16：0,C22：6）、ドコサヘキサエン酸（C22：cis[4,7,10,13,16,19]6）又はホスファチジルコリン No 02。
【０１３０】
表7a及び7b（神経系セロトニン再取り込み阻害）：
セロトニン（5-HT）、4-ヒドロキシスフィンガニン（t18：0, フィトスフィンゴシン）, 総、アドレナリン（エピネフリン）、スレオニン又はグルタミン酸。
【０１３１】
表8a及び8b（神経系セロトニン再取り込み阻害）：
4-ヒドロキシスフィンガニン（t18：0, フィトスフィンゴシン）, 総、DAG（C18：1,C18：2）、セロトニン（5-HT）、セラミド（d18：1,C24：1）又はスレオ-スフィンゴシン。
表8c及び8d（神経系ドーパミンアゴニスト）：
16-メチルヘプタデカン酸、セラミド（d18：1,C24：1）、ホスファチジルコリン（C16：0,C20：4）、ピルビン酸又は17-メチルオクタデカン酸。
【０１３２】
表9a及び9b（眼HPPD阻害）：
4-ヒドロキシフェニルピルビン酸、グルタミン、5-オキソプロリン、チロシン又はグリシン。  
表9c及び9d（眼HPPD阻害）：
チロシン、スレオニン、グルタミン、リジン又はシトルリン。
【０１３３】
したがって好ましくは、少なくとも1種のバイオマーカーは、前述の群から選択される少なくとも1種のバイオマーカーであり、又は少なくとも1種のバイオマーカーは、前述の群のバイオマーカーからなる若しくはそれを含むバイオマーカーの組み合わせである。前述のバイオマーカー及びバイオマーカーの組み合わせは、より詳細に付属の実施例で記載されるように、特に高い診断価値を有する重要なバイオマーカーとして同定された。
【０１３４】
さらに、他のバイオマーカー又は既知の代謝物、遺伝子変異、転写産物及び/若しくはタンパク質の量若しくは酵素活性を含めた臨床的パラメーターをさらに加えて測定してもよい。そうした、本発明の方法によって測定することができる追加的な臨床的又は生化学的パラメーターは、当技術分野で周知である。
【０１３５】
本明細書で使用する用語「バイオマーカー」は、サンプル中の存在又は濃度が、ある状態、好ましくは本明細書で言及する神経毒性の有無又は強さの指標になる化学化合物を指す。好ましくは、化学化合物は、代謝物又はそれに由来するアナライトである。アナライトは、生物で見出される実際の代謝物と同一であり得る化学化合物である。しかし、この用語は、内因的に生成される、又は単離若しくはサンプルの前処理の間、若しくは本発明の方法の実施の結果として、例えば、精製及び/若しくは測定ステップの間に生成されるそのような代謝物の誘導体も含む。特定の場合では、アナライトは、溶解度などの化学的性質によりさらに特徴づけられる。前記性質のため、アナライトは、精製及び/又は測定プロセス中に得られる極性又は脂質画分中に生じ得る。したがって、化学的性質、好ましくは溶解度は、精製及び/又は測定プロセス中に得られる極性又は脂質画分のいずれかの中にアナライトを生じる。したがって、前記化学的性質、特に、精製及び/又は測定プロセス中に得られる極性画分又は脂質画分のいずれかの中のアナライトの発生として考慮される溶解度は、アナライトをさらに特徴づけ、その同定を補助する。こうした化学的性質を判定及び考慮することができる方法についての詳細は、以下に記載される付属の実施例に見出される。好ましくは、アナライトは、定性的及び定量的な様式で代謝物を表し、これによって、対象又は少なくとも前記対象の試験サンプル中の代謝物の有無又は量に関する決定が必然的に可能になる。バイオマーカー、アナライト及び代謝物は、本明細書では単数形で言及されるが、これらの用語の複数形も含み、すなわち、同一分子種の複数のバイオマーカー、アナライト又は代謝物分子を指す。さらに、本発明においてバイオマーカーは、必ずしも1つの分子種に対応するとは限らない。むしろ、バイオマーカーは、化合物の立体異性体又は鏡像異性体を含み得る。さらに、バイオマーカーは、異性体分子のある生物学的クラスの異性体の総和を表すこともできる。前記異性体は、場合によっては同一の分析的特徴を示すものとし、したがって、以下に記載される付属の実施例で適用されるものを含めた種々の分析方法によって区別できない。しかし、異性体は、少なくとも同一の和公式パラメーターを有するので、例えば脂質の場合には、脂肪酸及び/又はスフィンゴ塩基部分において、同一の鎖長並びに同一の二重結合数を有する。
【０１３６】
本明細書で使用する用語「試験サンプル」は、本発明の方法による神経毒性の診断に使用されるサンプルを指す。好ましくは、前記試験サンプルは生物サンプルである。生物源からのサンプル（すなわち生物サンプル）は、複数の代謝物を通常含む。本発明の方法で使用する好ましい生物サンプルは、体液、好ましくは、血液、血漿、血清、唾液、胆汁、尿若しくは脳脊髄液からのサンプル、又は例えば生検によって、細胞、組織若しくは臓器から、好ましくは肝臓から得られるサンプルである。より好ましくは、サンプルは、血液、血漿又は血清サンプルであり、最も好ましくは、血漿サンプルである。生物サンプルは、本明細書の他の個所で明記される対象に由来する。前述の様々な種類の生物サンプルを得るための技術は、当技術分野で周知である。例えば、血液サンプルは採血によって得ることができるが、組織又は臓器サンプルは、例えば生検によって得ることになる。
【０１３７】
好ましくは、前述のサンプルは、前処理してから本発明の方法で使用する。より詳細に以下に記載するように、前記前処理は、化合物を遊離若しくは分離する又は過剰な材料若しくは廃物を除去するのに必要となる処理を含み得る。適切な技術は、遠心分離、抽出、分画、限外濾過、タンパク質沈殿、それに続く化合物の濾過及び精製並びに/又は濃縮を含む。さらに、化合物の分析に適した形状又は濃度で化合物を提供するために、他の前処理が行われる。例えば、ガスクロマトグラフィー連結質量分析を本発明の方法で使用する場合は、前記ガスクロマトグラフィーより前に化合物を誘導体化することが必要となる。適切かつ必要な前処理は、本発明の方法の実施に使用する手段に依存し、当業者に周知である。先に記載したように前処理されたサンプルも、本発明によって使用される用語「サンプル」に含まれる。
【０１３８】
本明細書で使用する用語「対象」は、動物、好ましくは哺乳動物、例えばマウス、ラット、モルモット、ウサギ、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、サル又はウシなど、さらに、好ましくはヒトに関する。より好ましくは、対象はげっ歯類であり、最も好ましくはラットである。本発明の方法を適用して診断することができる他の動物は、魚類、鳥類又は爬虫類である。好ましくは、前記対象は、神経毒性を誘導する能力があることが疑われる化合物と接触したか、又は接触させたものである。神経毒性を誘導する能力があると疑われる化合物と接触させた対象は、例えば化合物の毒性に関するスクリーニングアッセイで使用する、例えばラットなどの実験動物でもよい。神経毒性を誘導する能力がある化合物と接触したことが疑われる対象は、適切な治療を選択するために診断される対象でもあり得る。好ましくは、本明細書で使用する神経毒性を誘導する能力がある化合物は、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）である。
【０１３９】
好ましくは、対象が女性（雌）の場合は、本発明の方法によって測定される少なくとも1種のバイオマーカーは、表1c、1d、4a、4b、5a、5b、6a、6b、6c、6d、7a、7b、8c、8d、9c又は9dのうちのいずれか1つから選択される。
【０１４０】
好ましくは、対象が男性（雄）の場合は、本発明の方法によって測定される少なくとも1種のバイオマーカーは、表1a、1b、2a、2b、3a、3b、8a、8b、9a ,9b、12a又は12bのうちのいずれか1つから選択される。
【０１４１】
本明細書で使用する用語「量を測定する」は、バイオマーカー、すなわち代謝物又はアナライトの少なくとも1つの特徴的な特性を測定することを指す。本発明による特徴的な特性は、生化学的性質を含めた、バイオマーカーの物理的及び/又は化学的性質を特徴づける特性である。そうした性質としては、例えば、分子量、粘性、密度、電荷、スピン、光学活性、色、蛍光、化学発光、元素組成、化学構造、他の化合物と反応する能力、生物学的読み取りシステムで応答（例えばレポーター遺伝子の誘導）を惹起する能力などが挙げられる。前記性質に関する値は、特徴的な特性としての役割を果たすことができ、当技術分野で周知の技術によって測定することができる。さらに、特徴的な特性は、標準的な操作、例えば乗算、除算又は対数計算などの数学的計算によってバイオマーカーの物理的及び/又は化学的性質の値から導かれる任意の特性でもよい。最も好ましくは、少なくとも1つの特徴的な特性によって、バイオマーカー及びその量の測定及び/又は化学的な同定が可能になる。したがって、特性値は、好ましくは、特性値が導かれるバイオマーカーの存在量に関する情報も含む。例えば、バイオマーカーの特性値は、質量スペクトルのピークでもよい。そうしたピークは、バイオマーカーの特徴的な情報、すなわちm/z（質量電荷比）情報及びサンプル中の前記バイオマーカーの存在量（すなわちその量）に関する強度値を含有する。
【０１４２】
先に論じたように、好ましくは、本発明の方法によって測定される少なくとも1種のバイオマーカーは、定量的に又は半定量的に測定することができる。定量的な測定については、バイオマーカーの絶対量又は正確な量のいずれかが測定されるか、あるいは本明細書の上記で言及した特徴的な特性（複数可）に関して測定された値に基づいて、バイオマーカーの相対量が測定される。相対量は、バイオマーカーの正確な量が測定できない又は測定すべきでない場合に、測定することができる。前記の場合では、バイオマーカーの存在量が第2の量で前記バイオマーカーを含む第2のサンプルに対して増大又は低下しているのかを判定することができる。したがって、バイオマーカーの定量分析は、バイオマーカーの半定量分析と呼ばれることもある分析も含む。
【０１４３】
さらに、本発明の方法で使用される測定は、好ましくは、先に言及された分析ステップより前に、化合物分離ステップの使用を含む。好ましくは、前記化合物分離ステップによって、サンプルに含まれる少なくとも1種のバイオマーカーの時間分解分離がもたらされる。したがって、本発明に従って好ましく使用される適切な分離技術には、全てのクロマトグラフィー分離技術、例えば、液体クロマトグラフィー（LC）、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）、ガスクロマトグラフィー（GC）、薄層クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー又はアフィニティークロマトグラフィーが含まれる。こうした技術は、当技術分野で周知であり、当業者であれば容易に適用することができる。最も好ましくは、LC及び/又はGCが本発明の方法で想定されるクロマトグラフィー技術である。バイオマーカーのそうした測定に適切な装置は、当技術分野で周知である。好ましくは、質量分析が使用され、特に、ガスクロマトグラフィー質量分析（GC-MS）、液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS）、直接注入質量分析若しくはフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析（FT-ICR-MS）、キャピラリー電気泳動質量分析（CE-MS）、高速液体クロマトグラフィー連結質量分析（HPLC-MS）、四重極質量分析、MS-MS又はMS-MS-MSなどの任意の逐次連結質量分析、誘導結合プラズマ質量分析（ICP-MS）、熱分解質量分析（Py-MS）、イオン移動度質量分析又は飛行時間型質量分析（TOF）が使用される。最も好ましくは、以下で詳細に記載されるように、LC-MS及び/又はGC-MSが使用される。前記技術は、例えば、Nissen 1995、Journal of Chromatography A、703： 37〜57、米国特許第4,540,884号又は米国特許第5,397,894号に開示されており、その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。質量分析技術の代わりとして又はそれに加えて、以下の技術を化合物の測定に使用することができる：核磁気共鳴（NMR）、磁気共鳴画像（MRI）、フーリエ変換赤外分析（FT-IR）、紫外（UV）分光、屈折率（RI）、蛍光検出、放射化学的検出、電気化学的検出、光散乱（LS）、分散ラマン分光法又は炎イオン化検出（FID）。こうした技術は当業者に周知であり、容易に適用することができる。好ましくは、本発明の方法は、自動化によって補助されるものとする。例えば、サンプルの処理又は前処理は、ロボットによって自動化することができる。好ましくは、データの処理及び比較は、適切なコンピュータープログラム及びデータベースによって補助される。先に本明細書に記載した自動化によって、ハイスループット法で本発明の方法を使用することが可能になる。
【０１４４】
さらに、バイオマーカーは、特異的な化学的又は生物学的アッセイによって測定することもできる。前記アッセイは、サンプル中のバイオマーカーの特異的な検出を可能にする手段を含むものとする。好ましくは、前記手段は、他の化合物と反応するバイオマーカーの能力、又は生物学的読み取りシステムにおいて応答（例えばレポーター遺伝子の誘導）を惹起するその能力に基づいて、バイオマーカーの化学構造を特異的に認識することができるか、又はバイオマーカーを特異的に同定することができる。バイオマーカーの化学構造を特異的に認識することができる手段は、好ましくは、バイオマーカーに特異的に結合する検出剤、より好ましくは、化学構造物と特異的に相互作用する抗体又は他のタンパク質、例えば受容体又は酵素又はアプタマーである。例えば、特異的な抗体は、抗原としてバイオマーカーを使用して、当技術分野で周知の方法によって得ることができる。本明細書で言及する抗体には、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方、及びそれらのフラグメント、例えば、抗原又はハプテンと結合することができるFv、Fab及びF(ab)2フラグメントが含まれる。本発明は、所望の抗原特異性を示す非ヒトドナー抗体のアミノ酸配列をヒトアクセプター抗体の配列と組み合わせた、ヒト化ハイブリッド抗体も含む。さらに、単鎖抗体が包含される。ドナー配列は、少なくともドナーの抗原結合アミノ酸残基を通常含むが、他の構造的及び/又はドナー抗体の機能的に関連性のあるアミノ酸残基もまた含んでもよい。そうしたハイブリッドは、当技術分野で周知のいくつかの方法によって調製することができる。代謝物を特異的に認識することができる適切なタンパク質は、好ましくは、前記バイオマーカーの代謝変換に関与する酵素である。前記酵素は、バイオマーカー、例えば代謝物を基質として使用してもよいし、基質をバイオマーカー、例えば代謝物に変換してもよい。さらに、前記抗体は、バイオマーカーを特異的に認識するオリゴペプチドを生成するための基礎として使用することができる。こうしたオリゴペプチドは、例えば、酵素の結合ドメイン又は前記バイオマーカーに対するポケットを含むものとする。適切な抗体及び/又は酵素に基づくアッセイは、RIA（放射免疫測定法）、ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、電気化学発光サンドイッチ免疫アッセイ（ECLIA）、解離促進ランタニド蛍光免疫アッセイ（DELFIA）又は固相免疫試験でもよい。バイオマーカーに特異的に結合するアプタマーは、当技術分野で周知の方法で生成することができる（Ellington 1990、Nature 346：818〜822; Vater 2003、Curr Opin Drug Discov Devel 6(2)： 253〜261）。さらに、バイオマーカーは、他の化合物と反応するその能力に基づいて、すなわち特異的な化学反応によって、同定することもできる。さらに、バイオマーカーは、生物学的読み取りシステムで応答を惹起するその能力のため、サンプル中で測定することができる。生物学的な応答は、サンプルに含まれる代謝物の存在及び/又は代謝物の量を示す読み取り値として検出されるものとする。生物学的な応答は、例えば、細胞又は生物の遺伝子発現誘導又は表現型応答でもよい。
【０１４５】
用語「リファレンス」は、少なくとも1種のバイオマーカーの特徴的な特性の値を指し、好ましくは、神経毒性と相関し得る前記バイオマーカーの量の指標になる値を指す。
【０１４６】
好ましくは、そうしたリファレンスは、神経毒性を生じている対象若しくは対象群に由来するサンプル、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させた対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られる。対象又は対象群は、化合物が生物学的に利用可能である限り、局所又は全身の各投与様式で前記化合物に接触させることができる。
【０１４７】
好ましくは、前述の化合物は、リファレンスが以下の付属の実施例及び表に記載されているように得られる対象又は対象群の個体に投与することができる。
【０１４８】
特に、本明細書で言及する17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン又は塩酸ジプラシドンは、CNS毒性を誘導する能力がある化合物であり、一方、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン or NTBC（HPPDインヒビター）は、眼毒性を誘導することができる。トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）は、骨格筋神経支配刺激を誘導する能力がある化合物である。
【０１４９】
あるいは、とはいえ同様に好ましいことであるが、リファレンスは、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させていない対象若しくは対象群に由来するサンプル、又は神経毒性に関して、より好ましくは他の疾患に関しても、健康な対象若しくはそうした対象の群に由来するサンプルから得ることができる。
【０１５０】
リファレンスは、バイオマーカーの量について上で記載したように測定することができる。特に、好ましくは、リファレンスは、本明細書で言及する一群の対象のサンプルから得られ、これは、その群の各個体由来のサンプル中の少なくとも1種のバイオマーカー（複数可）それぞれの相対量又は絶対量を別々に測定し、その後に、本明細書の他の個所で言及される統計的技術を使用して、前記相対量若しくは絶対量に対する中央値若しくは平均値又はそれらから得られる任意のパラメーターを決定することによって得られる。あるいは、好ましくは、本明細書で言及するように、リファレンスは、対象群のサンプル混合物由来のサンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーそれぞれに対する相対量又は絶対量を測定することによって得ることができる。好ましくは、そうした混合物は、前記群の各個体から得られるサンプル由来の等容量の部分からなる。
【０１５１】
さらに、また好ましくは、リファレンスは計算されたリファレンスでもよく、最も好ましくは、個体集団に由来する少なくとも1種のバイオマーカーのそれぞれの相対量又は絶対量に対する平均値又は中央値でもよい。前記個体集団は、本発明の方法によって検査される対象が由来する集団である。しかし、計算されたリファレンスを決定するために検査する対象集団は、好ましくは、見かけ上健康な対象（例えば未処理）からなるか、又は前記集団内に試験対象（複数可）が存在することに起因する平均値又は中央値の有意な変化に対して統計的に耐える（statistically resistant）のに十分な大きさの、見かけ上健康な多数の対象を含むことを理解されたい。前記集団の個体の少なくとも1種のバイオマーカーの絶対量又は相対量は、本明細書の他の個所で明記されるように判定することができる。適切なリファレンス値、好ましくは平均値又は中央値を計算する方法は、当技術分野で周知である。適切なリファレンスを計算するための他の技術としては、受信者動作特性（ROC）曲線計算を用いる最適化が挙げられ、これは、当技術分野で同様に周知であり、対象の所与のコホートに基づく所与の特異性及び感受性を有するアッセイ系について、容易に実施することができる。先に言及した集団又は対象群は、複数の対象、好ましくは、少なくとも5、10、50、100、1,000又は10,000の対象、最大で集団全てまでを含む。より好ましくは、この文脈において言及される対象群は、所与の集団を統計的に代表する大きさを有する対象群、すなわち統計的に代表的なサンプルである。本発明の方法によって診断される対象及び前記複数の対象の対象は同一種であり、好ましくは同じ性別であることを理解されたい。
【０１５２】
より好ましくは、リファレンスは、データベースなどの適切なデータ記憶媒体に格納されるので、その後の診断にも利用可能である。これによって、神経毒性の素因を効率的に診断することが可能になる。なぜなら、対応するリファレンスサンプルが得られた対象が（実際に）神経毒性を発症したことが、（その後に）一度確認されれば、適切なリファレンス結果をデータベース中で特定することができるからである。
【０１５３】
用語「比較する」は、少なくとも1種のバイオマーカーの定性的又は定量的な測定量が、リファレンスと同じであるか又はそれと異なるかを評価することを指す。
【０１５４】
リファレンス結果が、神経毒性を生じている対象若しくは対象群に由来するサンプル、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）と接触させた対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られた場合は、神経毒性は、試験サンプル及び前述のリファレンスから得られる量の間の同一度又は類似度に基づいて、すなわち、少なくとも1種のバイオマーカーに関する同一の定性的又は定量的な組成に基づいて診断することができる。同じ量は、統計的に有意には異ならない量を含み、好ましくは、少なくともリファレンスの1〜99パーセンタイル、5〜95パーセンタイル、10〜90パーセンタイル、20〜80パーセンタイル、30〜70パーセンタイル、40〜60パーセンタイルの区間内、より好ましくは、リファレンスの50、60、70、80、90又は95パーセンタイルである。神経毒性を生じている対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）と接触させた対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンスは、神経毒性を診断するために、又は対象において化合物が神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定するために、本発明の方法で適用することができる。そのような場合では、好ましくは、リファレンスと本質的に同じである、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在すること又は神経毒性を誘導する能力がある化合物が存在することを示し、一方で、リファレンスと異なる、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないこと又は神経毒性を誘導する能力がある化合物が存在しないことを示す。
【０１５５】
さらに、神経毒性を生じている対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）と接触させた対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンスは、神経毒性を治療するための物質を同定するのに適用することができる。そのような場合では、好ましくは、リファレンスと異なる、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性を治療するのに適した物質を示し、一方で、リファレンスと本質的に同じである、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性を治療する能力がない物質を示す。
【０１５６】
リファレンス結果が、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させていない対象若しくは対象群のサンプル、又は神経毒性を生じていない対象若しくは対象群のサンプルから得られる場合は、前記神経毒性は、試験サンプルから得られる試験量と前述のリファレンスの差異、すなわち、少なくとも1種のバイオマーカーに関する定性的又は定量的な組成における差異に基づいて診断することができる。
【０１５７】
上で明記した計算されたリファレンスが使用される場合も、同じことが当てはまる。
【０１５８】
差異は、少なくとも1種のバイオマーカーの絶対量又は相対量の増大（バイオマーカーのアップレギュレーションと称されることもある。実施例も参照されたい。）であってもよいし、前記量のいずれかの低下若しくは検出可能なバイオマーカーの量が存在しないこと（バイオマーカーのダウンレギュレーションと称されることもある。実施例も参照されたい。）であってもよい。好ましくは、相対量又は絶対量の差異は有意であり、すなわち、リファレンスの45〜55パーセンタイル、40〜60パーセンタイル、30〜70パーセンタイル、20〜80パーセンタイル、10〜90パーセンタイル、5〜95パーセンタイル、1〜99パーセンタイルの区間外である。
【０１５９】
17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させていない対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンス、又は神経毒性を生じていない対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンスは、神経毒性を診断するために、又は対象において化合物が神経毒性を誘導する能力を有するかどうかを判定するために、本発明の方法で適用することができる。そのような場合では、好ましくは、リファレンスと異なる、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在すること又は神経毒性を誘導する能力がある化合物が存在することを示し、一方で、リファレンスと本質的に同じである、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないこと又は神経毒性を誘導する能力がある化合物が存在しないことを示す。さらに、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させていない対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンス、又は神経毒性を生じていない対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られるリファレンスは、神経毒性を治療するための物質を同定するのに適用することができる。そのような場合では、好ましくは、リファレンスと本質的に同じである、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性を治療するのに適した物質を示し、一方で、リファレンスと異なる、少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性を治療するのに適さない物質を示す。
【０１６０】
好ましいリファレンスは、付属の表で言及されるもの又は以下の付属の実施例で生成することができるものである。さらに、相対的差異、すなわち個々のバイオマーカーに対する量の増大又は低下は、好ましくは、以下の表に列挙されるものである。さらに、好ましくは、観察される差異の程度、すなわち増大又は低下は、好ましくは、以下の表に示される因子による増大又は低下である。
【０１６１】
好ましくは、表1a、1c、2a、3a、4a、5a、6a、6c、7a、8a、8c、9a、9c又は12aから選択される場合の少なくとも1種のバイオマーカーは、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させていない対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られたリファレンス、又はこの表で示した健常な対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られたリファレンスに対して増大する。
【０１６２】
好ましくは、表1b、1d、2b、3b、4b、5b、6b、6d、7b、8b、8d、9b、9d又は12bから選択される場合の少なくとも1種のバイオマーカーは、17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）に接触させていない対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られたリファレンス、又はこの表で示した健常な対象若しくは対象群に由来するサンプルから得られたリファレンスに対して低下する。
【０１６３】
好ましくは、比較は自動化によって補助される。例えば、2つの異なるデータセット（例えば、特徴的な特性（複数可）の値を含むデータセット）を比較するためのアルゴリズムを含む適切なコンピュータープログラムを使用することができる。そうしたコンピュータープログラム及びアルゴリズムは、当技術分野で周知である。上記にもかかわらず、手動で比較することもできる。
【０１６４】
用語「神経毒性を治療するための物質」は、本明細書の他の個所で言及される神経毒性を誘導する生物学的機序を直接的に妨げることができる化合物を指す。あるいは、神経毒性に付随する症状の発症又は進行を妨げることができる化合物も好ましい。本発明の方法によって同定される物質は、有機及び無機化学物質、例えば、低分子、ポリヌクレオチド、siRNA、リボザイム若しくはマイクロRNA分子を含めたオリゴヌクレオチド、ペプチド、抗体を含めたポリペプチド又は他の人工的若しくは生物学的な高分子、例えばアプタマーなどでもよい。好ましくは、この物質は、薬物、プロドラッグ又は薬物若しくはプロドラッグを開発するためのリード物質として適する。したがって、本発明の一態様において、本方法は、同定及び選択した物質を、さらなる臨床開発のために薬物、プロドラッグ又は薬物若しくはプロドラッグ候補であると同定及び／又は確認するステップをさらに含んでもよい。そのような臨床開発は、好ましくは、物質の薬理学的研究、物質の毒物学的判定、動物及びヒトにおける薬物試験（すべてのフェーズの臨床試験を含む）などである。
【０１６５】
本発明の方法が、神経毒性の治療のための薬物の同定、又は化合物の毒物学的評価（すなわち、化合物が神経毒性を誘導する能力があるかどうかの判定）のために使用されることになる場合は、統計的理由のために、複数の対象の試験サンプルが検査され得ることを理解されたい。好ましくは、試験対象のそうしたコホート内のメタボロームは、例えば検査化合物以外の因子によって引き起こされる差異を回避するために、できるだけ類似しているものとする。前記方法に使用する対象は、好ましくはげっ歯類などの実験動物、より好ましくはラットである。前記実験動物は、好ましくは、本発明の方法が終了した後で屠殺するものとすることをさらに理解されたい。コホート試験の対象及びリファレンス動物の全ては、いかなる特異な環境上の影響も回避するために、同一条件下で維持されるものとする。そうした動物を提供する適切な条件及び方法は、WO2007/014825号に詳細に記載されている。前記条件は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６６】
したがって、神経毒性、特にCNS毒性、眼毒性及び／又は末梢神経毒性（骨格筋神経支配刺激に関連する神経筋伝達障害を含む）を治療するための物質の同定を目的とした本発明の方法は、好ましくは、追加的なステップを含む。好ましくは、さらなるステップは、その薬理学的及び／又は毒物学的パラメータ、例えばED50/EC50及び／又はLD50/LC50閾値を特定するために物質を用いた前臨床試験を実施すること、例えば物質及び同定された物質の薬学的に許容される形態での製剤の治療効果及び安全性を判定するために、臨床試験を実施することを含む。
【０１６７】
物質は、好ましくは、局所又は全身投与用に製剤化することができる。慣用的には、薬物は、筋内又は皮下投与される。しかしながら、物質の性質及び作用機構に応じて、ほかの経路によっても同様に投与することができる。物質は、好ましくは、投与のために慣用の投与剤形に製剤化され、同定された物質と標準的な薬学的担体とを慣用の手順に従って混合することによって調製される。これらの手順は、所望の調製物に適するように成分の混合、造粒、及び圧縮、又は溶解を含みうる。薬学的に許容される担体又は希釈剤の形態及び性質は、混合しようとする有効成分の量、投与経路及び他の周知の変数によって決まることが理解されよう。担体は、製剤の他の成分と適合可能であり、その受容者に有害ではないという点で許容可能である必要がある。使用される薬学的担体は、固体、ゲル又は液体を含みうる。限定するものではないが、固体担体の例は、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などである。限定するものではないが、液体担体の例は、リン酸緩衝化生理食塩水、シロップ、油、水、エマルジョン、種々のタイプの湿潤剤などである。同様に、担体又は希釈剤は、当技術分野で周知の時間遅延物質、例えばモノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリンを単独で又はワックスと共に含んでもよい。好適な担体は、上述したもの及び当技術分野で周知の他のものを含み、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvaniaを参照のこと。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択される。限定するものではないが、そのような希釈剤の例は、蒸留水、生理学的食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、及びハンクス溶液である。さらに、医薬組成物又は製剤はまた、他の担体、アジュバント、又は非毒性で治療薬ではない非免疫原性の安定剤などを含んでもよい。薬物としての物質の製剤化は、品質、医薬安全性及び有効性を保証するためにGMP標準化条件などの条件下で行うことが理解されよう。
【０１６８】
好ましくは、本発明の方法は本発明の装置により実装され得る。本明細書で使用する装置は、少なくとも前述のユニットを備えるものとする。装置のユニットは、互いに作動可能に連結される。作動的にユニットを連結する方法は、装置中に備えられるユニットの種類に依存する。例えば、少なくとも1種のバイオマーカーを定性的又は定量的に自動的に測定するための手段が分析ユニット中に適用される場合は、前記自動的な作動ユニットによって得られるデータは、診断を容易にするために、評価ユニットによって、例えば、データ処理装置であるコンピューターで動作するコンピュータープログラムによって処理することができる。好ましくは、そのような場合は、これらのユニットは単一装置に備えられる。しかし、分析ユニットと評価ユニットは、物理的に離れていてもよい。そのような場合では、作動的な連結は、データ伝達を可能にする、ユニット間の有線接続及び無線接続によって達成することができる。無線接続は、無線LAN（WLAN）又はインターネットを使用することができる。有線接続は、ユニット間の光及び非光ケーブル接続によって達成することができる。好ましくは、有線接続に使用するケーブルは、ハイスループットなデータ転送に適する。
【０１６９】
少なくとも1種のバイオマーカーを測定するための好ましい分析ユニットは、本明細書の他の個所で明記されるような、少なくとも1種のバイオマーカーを特異的に認識する検出剤、例えば抗体、タンパク質又はアプタマーなど、及び前記検出剤を試験サンプルと接触させるゾーンを備える。検出剤は、ゾーン上に固定化して接触させてもよいし、サンプルをローディングした後に前記ゾーンに加えてもよい。好ましくは、分析ユニットは、検出剤と少なくとも1種のバイオマーカーの複合物の量を定性的及び/又は定量的に測定するように適合させるものとする。検出剤が少なくとも1種のバイオマーカーへ結合する際に、少なくとも1種のバイオマーカー、検出剤のいずれか又は両方の少なくとも1つの測定可能な物理的又は化学的性質が変化し、その結果、好ましくは分析ユニットに備えられる検出器によって前記変化を測定できることを理解されたい。しかし、試験ストリップなどの分析ユニットを使用する場合は、検出器及び分析ユニットは、測定のためだけに結合させられる分離したコンポーネントでもよい。少なくとも1つの測定可能な物理的又は化学的性質において検出された変化に基づいて、分析ユニットは、本明細書の他の個所で明記される少なくとも1種のバイオマーカーに関する強度値を計算することができる。次いで、さらに処理及び評価するために、前記強度値を評価ユニットに伝達することができる。最も好ましくは、本明細書の他の個所で明記される検出剤を使用して、少なくとも1種のバイオマーカーの量をELISA、EIA又はRIAに基づく技術によって判定することができる。あるいは、本明細書で言及する分析ユニットは、好ましくは、クロマトグラフィー装置などのバイオマーカーを分離するための手段、及び分光測定装置などのバイオマーカーを測定するための手段を備える。適切な装置は、詳細に先に記載されている。本発明のシステムで使用する化合物分離用の好ましい手段としては、クロマトグラフィー装置、より好ましくは液体クロマトグラフィー装置、HPLC装置及び/又はガスクロマトグラフィー装置が挙げられる。化合物測定用の好ましい装置は、質量分析装置、より好ましくは、GC-MS、LC-MS、直接注入質量分析装置、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四重極質量分析装置、（MS-MS若しくはMS-MS-MSを含めた）逐次連結質量分析装置、ICP-MS、Py-MS又はTOFを含む。好ましくは、分離及び測定の手段は互いに連結される。最も好ましくは、LC-MS及び/又はGC-MSが、本発明によって言及される分析ユニットで使用される。
【０１７０】
好ましくは、本発明の装置の評価ユニットは、本明細書の他の個所で明記されるように、比較を実施するためのルールを実行するように適合させたデータ処理装置又はコンピューターを備える。さらに、好ましくは、評価ユニットは、リファレンスを格納したデータベースを備える。本明細書で使用するデータベースは、適切な記憶媒体のデータ集合を備える。さらに、データベースは、好ましくはデータベース管理システムをさらに備える。好ましくは、データベース管理システムは、ネットワーク型、階層型又はオブジェクト指向型データベース管理システムである。さらに、データベースは、連邦データベースでもよいし、統合データベースでもよい。より好ましくは、データベースは、分散（連邦）システムとして、例えばクライアントサーバシステムとして実装される。より好ましくは、データベースは、検索アルゴリズムが、試験データセットをデータ集合に含まれるデータセットと比較できるように構築される。具体的には、そうしたアルゴリズムを使用することによって、神経毒性の指標になる類似又は同一のデータセットについてデータベースを検索することができる（例えばクエリ検索）。したがって、同一又は類似のデータセットをデータ集合中に特定することができる場合は、試験データセットは神経毒性と関係があることになる。評価ユニットは、好ましくは、神経毒性の確定診断に基づく治療的若しくは予防的な介入又は生活習慣の適応に対する助言を有するさらなるデータベースを備えてもよいし、それに作動可能に連結されてもよい。好ましくは、神経毒性を治療又は予防するために、試験サンプルを得た対象に対する適切な助言を特定する目的で、評価ユニットによって得られた診断結果を用いて前記のさらなるデータベースを自動的に検索することができる。
【０１７１】
本発明の装置の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、神経毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在することを示し、又はリファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないことを示す。
【０１７２】
本発明の装置の別の好ましい実施形態では、前記格納されたリファレンスは、神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群に由来するリファレンス、又は17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物若しくは酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来するリファレンスであり、前記データ処理装置は、分析ユニットで測定された少なくとも1種のバイオマーカーの量を格納されたリファレンスと比較するための指示を実行し、リファレンスと比較して異なる、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在することを示し、又はリファレンスと比較して本質的に同じである、試験サンプル中の少なくとも1種のバイオマーカーの量が、神経毒性が存在しないことを示す。
【０１７３】
したがって、助言を行うエキスパートシステムが含まれる場合は特に、メディカルスタッフ若しくは検査室スタッフ又は患者が特別な医学知識なしで装置を使用することもできる。この装置は、携帯型に適合させることができるので、患者の近くでの用途にも適する。
【０１７４】
用語「キット」は、好ましくは別々に又は単一の容器内に提供される、前述の構成要素の集合を指す。容器は、本発明の方法の実施に関する指示も備える。こうした指示は、取扱説明書の形でもよいし、コンピューター又はデータ処理装置上に実装される場合には、本発明の方法で言及される比較を実施でき、それに応じて診断を確定するためのコンピュータープログラムコードによって提供されてもよい。コンピュータープログラムコードは、データ記憶媒体若しくは装置、例えば光若しくは磁気記憶媒体（例えば、コンパクトディスク（CD）、CD-ROM、ハードディスク、光記録媒体若しくはディスケット）上に、又はコンピューター若しくはデータ処理装置上に直接的に提供することができる。本発明のキットに関して言及される「スタンダード」は、溶液中に存在する又は既定の溶液量中に溶解されている場合の少なくとも1種のバイオマーカーの量であり、これは（i）神経毒性を生じていることが分かっている対象若しくは対象群、若しくは17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させた対象若しくは対象群中に存在する少なくとも1種のバイオマーカーの量、又は（ii）神経毒性を生じていないことが分かっている対象若しくは対象群、若しくは17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物及び酢酸タリウム（I）からなる群より選択される少なくとも1種の化合物と接触させていない対象若しくは対象群に由来する少なくとも1種のバイオマーカーの量に類似している。
【０１７５】
好都合なことに、本明細書に明記される少なくとも1種のバイオマーカーの量によって、神経毒性、具体的には17-α-エチニルエストラジオール、アポモルヒネ、[3-(4,5-ジヒドロ-イソオキサゾール-3-イル)-4-メチルスルホニル-2-クロロフェニル](5-ヒドロキシ-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)メタノン、メシル酸ブロモクリプチン、カベルゴリン、クロルプロマジン、シタロプラム臭化水素酸塩、硫酸デキストロアンフェタミン、エスシタロプラムシュウ酸塩、塩酸フルオキセチン、NTBC（HPPDインヒビター）、オランザピン、パロキセチン塩酸塩、ペントバルビタールナトリウム i.p.、ペントキシフィリン、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、クエチアピンフマル酸塩、塩酸ラロキシフェン、リスペリドン、塩酸セレギリン、塩酸セルトラリン、塩酸ジプラシドン、トキサフェン、グリピジド、酢酸鉛三水和物又は酢酸タリウム（I）によって誘導される神経毒性の診断が可能になることが、本発明の根底となる研究において見出されている。本方法の特異性及び正確性は、前述のバイオマーカーの数を増加させて測定することによって又はさらにその全てを測定することによって、より一層向上する。こうした特異的なバイオマーカーに関するメタボロームの定量的及び/又は定性的組成の変化は、神経毒性の他の徴候が臨床的に明らかになる前でさえ、神経毒性を示す。神経毒性を診断するのに現在使用されている形態的、生理的及び生化学的なパラメーターは、本発明で提供するバイオマーカー測定と比較すると、特異性及び感受性が低い。本発明によって、化合物の神経毒性を、より効率的かつ確実に評価することができる。さらに、前述の知見に基づいて、神経毒性の治療に有用な薬物のスクリーニングアッセイが実行可能である。概して、本発明は、神経毒性を診断するための、化合物が神経毒性を誘導する能力があるかどうかを判定するための、又は神経毒性を治療する能力がある物質を同定するための、対象のサンプルにおける表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a若しくは12bのうちのいずれか1つから選択される少なくとも1種のバイオマーカー又は前記バイオマーカー用の検出剤の使用を企図する。さらに、本発明は概して、神経毒性の治療に対して感受性である対象を同定するための、対象のサンプルにおける少なくとも1種のバイオマーカー、又はそのバイオマーカーの検出剤の使用を企図する。本発明のこの文脈において使用するのに好ましい検出剤は、本明細書の他の個所で言及されるものである。さらに好都合なことに、発明の方法は装置中に実装することができる。さらに、本方法を実施できるようにするキットを提供することができる。
【０１７６】
本発明は、表1a、1b、1c、1d、1e、1f、2a、2b、3a、3b、3c、3d、3e、3f、3g、4a、4b、4c、4d、5a、5b、5c、5d、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、9c、9d、12a又は12bのうちのいずれか1つに列挙されるバイオマーカーに対する特性値を含むデータ集合にも関する。用語「データ集合」は、物理的及び/又は論理的にグループ化され得るデータの集合を指す。したがって、データ集合は、単一のデータ記憶媒体又は互いに作動可能に連結された物理的に離れたデータ記憶媒体に実装することができる。好ましくは、データ集合は、データベースによって実装される。したがって、本明細書で使用するデータベースは、適切な記憶媒体上にデータ集合を備える。さらに、好ましくは、データベースはデータベース管理システムをさらに備える。好ましくは、データベース管理システムは、ネットワーク型、階層型又はオブジェクト指向型のデータベース管理システムである。さらに、データベースは、連邦データベースでも統合データベースでもよい。より好ましくは、データベースは、分散（連邦）システムとして、例えばクライアントサーバシステムとして実装される。より好ましくは、データベースは、検索アルゴリズムが試験データセットをデータ集合に含まれるデータセットと比較できるように構築される。具体的には、そうしたアルゴリズムを使用することによって、神経毒性の指標になる類似の又は同一のデータセットについてデータベースを検索することができる（例えばクエリ検索）。したがって、同一又は類似のデータセットをデータ集合中に特定することができる場合は、試験データセットは神経毒性と関係があることになる。結果として、データ集合から得られる情報を使用して、対象から得られる試験データセットに基づいて神経毒性を診断することができる。
【０１７７】
さらに、本発明は、前記データ集合を備えるデータ記憶媒体に関する。本明細書で使用する用語「データ記憶媒体」は、CD、CD-ROM、ハードディスク、光記録媒体又はディスケットなどの単一の物理エンティティに基づくデータ記憶媒体を包含する。さらにこの用語は、好ましくはクエリ検索に適切なやり方で、前述のデータ集合を提供するように互いに作動可能に連結された、物理的に別個の実体からなるデータ記憶媒体をさらに含む。
【０１７８】
本発明はまた、
（a）サンプルの少なくとも1種のバイオマーカーの特性値を比較するための手段と、それに作動可能に連結された、
（b）本発明のデータ記憶媒体と
を含むシステムに関する。
【０１７９】
本明細書で使用する用語「システム」は、互いに作動可能に連結される異なる手段に関する。前記手段は、単一装置に実装されてもよいし、互いに作動可能に連結された物理的に別個の装置に実装されてもよい。好ましくは、バイオマーカーの特性値を比較するための手段は、上で言及したような比較アルゴリズムに基づいて作動する。好ましくは、データ記憶媒体は、前述のデータ集合又はデータベースを備え、各記憶データセットが神経毒性の指標になる。したがって、本発明のシステムによって、試験データセットがデータ記憶媒体に格納されるデータ集合に含まれるかどうかを特定することが可能になる。結果として、本発明のシステムは、神経毒性診断の診断手段として適用することができる。本システムの好ましい実施形態では、サンプルのバイオマーカーの特性値を測定するための手段が含まれる。用語「バイオマーカーの特性値を測定するための手段」は、好ましくは、質量分析装置、ELISA装置、NMR装置又はアナライトについて化学的若しくは生物学的アッセイを実施するための装置などの、バイオマーカーを測定するための前述の装置に関する。
【０１８０】
先に言及した全ての参考文献は、その開示内容全体及び先の記述で明確に言及したその具体的な開示内容に関して、参考により本明細書に組み込むものとする。
【０１８１】
以下の実施例は、本発明を説明する目的のためにすぎない。これらは、いかなる観点においても本発明の範囲を限定するものと何ら解釈されるべきでない。
【実施例】
【０１８２】
神経毒性に関連するバイオマーカー
各5匹の雄及び雌ラットの群に、示した化合物（化合物、投与量及び投与詳細について以下の表10を参照のこと）を28日間にわたって1日1回投与した。
【０１８３】
本研究の各投与群は、性別あたり5匹のラットからなっていた。それぞれ5匹の雄及び雌の動物の追加的な群を対照とした。処理期間の開始前に、供給時に62〜64日齢の動物を、居住及び環境条件に7日間順応させた。動物集団の全ての動物を、同一の一定温度（20〜24±3℃）及び同一の一定湿度（30〜70％）下で維持した。動物集団の動物は、不断給餌させた。使用する餌には、化学物質又は微生物の混入物は基本的に含まれていなかった。飲料水も自由に与えた。したがって、欧州飲料水指令（European Drinking Water Directive）98/83/EGに規定されている通り、水には、化学物質及び微生物の混入物は含まれていなかった。照明期間は、12時間明期、続いて12時間暗期（6：00から18：00までの12時間明期及び18：00から6：00までの12時間暗期）とした。本研究は、ドイツ動物保護法及び欧州理事会指令86/609/EEに従って、AAALACに認可された実験室で実施した。試験系は、げっ歯類での28日間反復投与経口毒性試験について化学物質を試験するために、OECD 407指針に従ってアレンジした。試験物質（表1〜9の化合物）を、表10に記載されるように用量決定し、投与した。
【０１８４】
7日目、14日目及び28日目の朝に、絶食させた麻酔下の動物の眼窩後静脈叢から採血した。抗凝血剤としてEDTAを用いて、各動物から1mlの血液を採取した。このサンプルを遠心分離して、血漿を生成した。全ての血漿サンプルをN2雰囲気で覆い、次いで分析まで-80℃で保管した。
【０１８５】
質量分析に基づく代謝物プロファイリング分析のために、血漿サンプルを抽出し、極性及び非極性（脂質）画分を得た。GC-MS分析のために、非極性画分を酸性条件下でメタノールで処理して、脂肪酸メチルエステルを得た。O-メチル-ヒドロキシアミン塩酸塩及びピリジンを用いて両画分をさらに誘導体化してオキソ基をO-メチルオキシムに変換し、その後にシリル化剤を用いて誘導体化してから分析した。LC-MS分析では、両画分を適切な溶媒混合液中で再構成した。HPLCは、逆相分離カラムによって勾配溶出で実施した。WO2003073464号に記載されるように、フルスクリーン分析と並行して、標的及び高感度MRM（多重反応モニタリング）プロファイリングを可能にする質量分析検出を適用した。
【０１８６】
ステロイド及びその代謝物は、オンラインのSPE-LC-MS（固相抽出LC-MS）によって測定した。カテコールアミン及びその代謝物は、Yamadaら（Yamada 2002, Journal of Analytical Toxicology, 26(1)： 17-22）によって記載されるように、オンラインのSPE-LC-MSによって測定した。
【０１８７】
総合的な分析検証ステップに続いて、各アナライトに関するデータを、プールサンプル由来のデータに対して標準化した。これらのサンプルは、プロセス変動を説明するために、全プロセスを通して並行して処理した。性別、処理期間及び代謝物に対して特異的な処理群値の有意性を、処理群の平均と対応する未処理の対照群の平均をWELCH試験を用いて比較することによって判定し、対照に対する処理比及びp値を用いて定量化した。
【０１８８】
毒性パターン毎の最も重要なバイオマーカーを、以下の表のアナライトの序列化によって同定した。したがって、所与のパターンのリファレンス処理における代謝変化（表に示す）を、関係のない処理における同一代謝物の変化と比較した。各代謝物について、リファレンス及び対照処理からT値を得て、Welch試験によって比較して、これら2群に有意差があるかどうかを評価した。それぞれのT値の最大絶対値を選んで、そのパターンに対する最も重要な代謝物を示した。
【０１８９】
ラットを処理した後の、神経毒性の指標となる血漿代謝物群の変化を以下の表に示す。
【０１９０】
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【国際調査報告】
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