(57)【要約】  式Ｉのピリダジノン化合物又はその放射性標識誘導体。（Ｉ）式中、Ｒ’はアルキル又はＡｒであり、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、又はアルコキシハロで置換されており、Ｒ2は独立にアルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝０）アルキル、−Ｃ（＝０）アリール、−Ｃ（＝０）ヘテロアリール、−Ｃ（＝０）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝０）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝０）（ＣＨ2）nハロ、−Ｃ（＝０）（ＣＨ2）nヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）nハロで置換されており、Ｒ3及びＲ4は独立に水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールであり、Ａｒはアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、ｎは０〜１０の整数である。これらの化合物はアルツハイマー病におけるタウ病理学のイメージングプローブとして有用である。かかる化合物を含む組成物及び製造方法も記載されている。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物又はその放射性標識誘導体。
【化１】
2015507617.tif 000109
式中、
Ｒ1は、アルキル又はＡｒであり、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、又はアルコキシハロで置換されており、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）nハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）nヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）nハロで置換されており、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、
ｎは、０〜１０の整数である。
【請求項２】
Ａｒが次式からなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【化２】
2015507617.tif 000110
【請求項３】
式（Ｉａ）の化合物又はその放射性標識誘導体。
【化３】
2015507617.tif 000111
式中、
Ｒ1は、アルキル又はＡｒであり、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、又はアルコキシハロで置換されており、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合によりアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pハロで置換されており、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり、
ｐは、０〜１０の整数である。
【請求項４】
式（Ｉｂ）の化合物又はその放射性標識誘導体。
【化４】
2015507617.tif 000112
式中、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pハロで置換されており、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり、
ｐは、０〜１０の整数であり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【請求項５】
式（Ｉｃ）の化合物又はその放射性標識誘導体。
【化５】
2015507617.tif 000113
式中、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）nハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）nヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）nハロで置換されており、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【請求項６】
式（Ｉｄａ）、（Ｉｄｂ）、若しくは（Ｉｄｃ）の化合物、又はその放射性標識誘導体。
【化６】
2015507617.tif 000114
式中、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pハロで置換されており、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はヘテロアリールであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【請求項７】
式（Ｉｅａ）、（Ｉｅｂ）若しくは（Ｉｅｃ）の化合物、又はその放射性標識誘導体。
【化７】
2015507617.tif 000115
式中、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pハロで置換されており、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【請求項８】
式（Ｉｆ）の化合物又はその放射性標識誘導体。
【化８】
2015507617.tif 000116
式中、
Ｒ3及びＲ4は、各々、式（Ｉ）の化合物に対して本明細書中で定義されている通りであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数であり、
Ｒ6及びＲ7は、独立に、水素、アルキル、若しくはアルキニルであるか、又はこれらが結合している窒素と一緒になって、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、若しくはヘテロアリールハロで置換されているヘテロアリール若しくはヘテロシクロアルキルを形成する。
【請求項９】
次式の化合物。
【化９】
2015507617.tif 000117
【請求項１０】
次式の化合物。
【化１０】
2015507617.tif 000118
【請求項１１】
次式の化合物。
【化１１】
2015507617.tif 000119
【請求項１２】
次式の化合物。
【化１２】
2015507617.tif 000120
式中、Ｉ*は123Ｉ、124Ｉ、又は125Ｉである。
【請求項１３】
次式の化合物。
【化１３】
2015507617.tif 000121
【請求項１４】
次式の化合物。
【化１４】
2015507617.tif 000122
【請求項１５】
次式の化合物。
【化１５】
2015507617.tif 000123
【請求項１６】
次式の化合物。
【化１６】
2015507617.tif 000124
【請求項１７】
請求項１乃至請求項１６のいずれか１項記載の化合物及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む組成物。
【請求項１８】
請求項１乃至請求項１６のいずれか１項記載の化合物を製造する方法。
【請求項１９】
請求項１乃至請求項１６のいずれか１項記載の化合物又はその医薬組成物を使用するイメージング方法。
【請求項２０】
請求項１乃至請求項１６のいずれか１項記載の化合物又はその医薬組成物を使用する、インビトロ及び／又はインビボでタウ集合体を検出する方法。
【請求項２１】
式（ＩＩ）の化合物。
【化１７】
2015507617.tif 000125
式中、
Ｒ1は、アルキル又はＡｒであり、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、アルコキシハロ又はアルキルオキシＯＰｇで置換されており、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pＯＰｇ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであり、場合によりアルキル、アルキルハロ、アルキルＯＰｇ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（ＣＨ2）pハロ、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pＯＰｇで置換されており、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり、
ｐは、０〜１０の整数であり、
Ｐｇは、Ｈ又は保護若しくは脱離基である。
【請求項２２】
次式の化合物。
【化１８】
2015507617.tif 000126
【請求項２３】
次式の化合物。
【化１９】
2015507617.tif 000127
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性標識ピリダジノン化合物、その組成物、かかる化合物の製造方法、及び、殊にアルツハイマー病に関連する場合のタウ病理のイメージングプローブとしてのその使用に関する。本発明の化合物は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）又は単一光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングに使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は高齢者の認知症の最も普遍的な原因であり、死後の神経病理学に基づいて最終的に診断され病期分類される。ＡＤの病理学的特徴は実質的な神経細胞の脱落であり、アミロイド班の沈着と神経原線維変化（neurofibrillary tangle、ＮＦＴ）を伴う。
【０００３】
ＮＦＴは微小管随伴タンパク質タウから構成される線維状集合体からなる。多くの文献は、タウ集合体（ＮＦＴ）又はＮＦＴの生成の方がアミロイド班よりもＡＤの進行により密接に関連していることを示唆している（Ｂｒａａｋ，Ｈ．ら，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｈａｎｇｅｓ．Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ，８２，２３９−２５９，１９９１）。報告によると、新皮質のアミロイド沈着及び認知症の兆候を検出することが可能になるより１０年以上も前にある領域（深部側頭葉）でタウ集合体又は神経原線維の病変が見られる。このタウの病変は認知症の臨床症状又は兆候の提示前に起こり、認知症の重症度と関連している。これらの属性により、タウ集合体は、ＡＤの早期診断のための潜在的に優れた手法となる。それ故、これらの病変又はＮＦＴの生体内検出はＡＤの診断のため、及び病気の進行を追跡するために有用であることが立証されよう。
【０００４】
ＮＦＴイメージングプローブを発見する際の困難な問題の１つは、クロスベータシート構造を含有する他のタンパク質集合体（例えば、アミロイド班）に対する選択性である。最近になって、Ｋｕｄｏらは、インビトロで、アミロイドよりも凝集したタウに対する選択性について化合物をスクリーニングした。ＢＦ−１７０とＢＦ−１５８は、Ａβ１−４２アミロイドよりもタウ集合体に対して三倍選択的であったと記載されている。
【０００５】
【化１】
2015507617.tif 000002
【０００６】
（Ｋｕｄｏ，Ｙ．，ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，２５（４７）：１０８５７−１０８６２）。これらの化合物及びその他のキノリン誘導体はまた、米国特許出願公開第２００５／０００９８６５号（現在は米国特許第７１１８７３０号）において、タウタンパク質が蓄積する病気の画像診断のための診断プローブとしても記載されている。これらのプローブは放射性核種で標識することができる。
【０００７】
国際公開第２０１１／０３７９８５号には、タウ集合体のアミノチエノピリダジン阻害剤について記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第６１６９０８７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、当技術分野では、ＮＦＴのためのイメージング剤として使用することができる他の化合物に対するニーズが相変わらず存在している。以下に説明する本発明はかかるニーズに応える。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、アルツハイマー病におけるタウ病理のイメージングプローブとして使用される新規なピリダジノン化合物を提供する。本発明の化合物は、インビトロ及びインビボのイメージング目的に使用できるように放射性標識することができる。
【００１１】
本発明は、次式Ｉの化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００１２】
【化２】
2015507617.tif 000003
【００１３】
式中、
Ｒ1は、アルキル又はＡｒであって、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、又はアルコキシハロで置換されていてもよく、
Ｒ2は、独立に、水素、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであって、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pハロで置換されていてもよく、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、ヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、
ｐは、０〜１０、好ましくは０〜５、より好ましくは０〜３の整数である。
【００１４】
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物又はその放射性標識誘導体及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物又はその放射性標識誘導体を作成する方法を提供する。
【００１６】
さらに本発明、式（Ｉ）の化合物の放射性標識誘導体又はその医薬組成物を用いるイメージング方法を提供する。
【００１７】
さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物の放射性標識誘導体又はその医薬組成物を用いてインビトロ及び／又はインビボでタウ集合体を検出する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、１２．８分(min)で溶離する生成物３７*を示す分取用ＨＰＬＣクロマトグラムである（上：２５４ｎｍにおけるＵＶチャネル、下：放射能チャネル）。
【図２】図２は、７．２分で溶離する生成物３７*を示す分析用ＨＰＬＣクロマトグラムである（上：２５４ｎｍにおけるＵＶチャネル、下：放射能チャネル）。
【図３】図３は、６．８分で溶離する生成物３８*を示す分析用ＨＰＬＣクロマトグラムである（上：２５４ｎｍにおけるＵＶチャネル、下：放射能チャネル）。
【図４】図４は、６．８分で溶離する生成物３８*及び６．７分のアルコールを加えた(spiked)標準化合物１９Ｆ−３８を示す分析用ＨＰＬＣクロマトグラムである（上：２５４ｎｍにおけるＵＶチャネル、下：放射能チャネル）。
【図５】図５は、ヒトＡＤ組織切片の組織学を示す。多数のタウ＋ＮＦＴ（Ａ−Ｂ、矢印）及びＡβ＋班（Ｅ−Ｆ、矢印）をＡＤ組織切片で観察した。加えて、ＮＦＴ（Ｃ、矢印）及び老人斑（Ｄ、矢印）も、ガリアス(Gallyas)銀染色で標識組織切片（Ｅ−Ｆ）で観察した。１０ｘ：Ａ、Ｃ、Ｅ、スケールバー１００μＭ；２０ｘ：Ｂ、Ｄ、Ｆ、スケールバー：Ａ、２５μＭ。
【図６】図６は、ＡＤ組織内のＮＦＴ及び班に対する新規な化合物の結合を示す。３８（Ａ、Ｂ）は高い試験濃度でＮＦＴ（Ａ）と班（Ｂ）の両方に結合する。同様に、１０５（Ｃ、Ｄ）も高い試験濃度でＮＦＴ（Ｃ、Ｄ）及び班（Ｄ）と結合する。より低い濃度において、両方の化合物は優先的にＮＦＴと結合する（表３）。矢印＝ＮＦＴ、*＝班。Ａ及びＣ：４０ｘ、Ｂ及びＤ：２０ｘ。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、本明細書に記載の式（Ｉ）のピリダジノン化合物を提供する。
【００２０】
本発明の好ましい実施形態では、Ａｒが次式のものである上記式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２１】
【化３】
2015507617.tif 000004
【００２２】
本発明の好ましい実施形態では、Ｒ1のＡｒが次式のものである上記式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２３】
【化４】
2015507617.tif 000005
【００２４】
好ましくは、Ａｒは次式のものである。
【００２５】
【化５】
2015507617.tif 000006
【００２６】
本発明は、次式（Ｉａ）を有する式（Ｉ）の化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００２７】
【化６】
2015507617.tif 000007
【００２８】
式中、
Ｒ1は、アルキル又はＡｒであって、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、又はアルコキシハロで置換されていてもよく、
Ｒ2は、独立に、水素、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであって、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリール（ＣＨ2）pハロで置換されていてもよく、
Ｒ3及びＲ4は、独立に水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、ヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、
ｐは、０〜１０、好ましくは０〜５、より好ましくは０〜３の整数である。
【００２９】
本発明は、次式（Ｉｂ）を有する式（Ｉ）の化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００３０】
【化７】
2015507617.tif 000008
【００３１】
式中、
Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は各々が式（Ｉ）の化合物に対して本明細書で定義した通りであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【００３２】
本発明は、次式（Ｉｃ）を有する式（Ｉ）の化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００３３】
【化８】
2015507617.tif 000009
【００３４】
式中、
Ｒ2は、式（Ｉ）の化合物に対して本明細書中で定義した通りであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【００３５】
本発明は、次式（Ｉｄａ）、（Ｉｄｂ）又は（Ｉｄｃ）を有する式（Ｉ）の化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００３６】
【化９】
2015507617.tif 000010
【００３７】
式中、
Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、各々式（Ｉ）の化合物に対して本明細書中で定義されている通りであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【００３８】
本発明は、次式（Ｉｅａ）、（Ｉｅｂ）又は（Ｉｅｃ）を有する式（Ｉ）の化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００３９】
【化１０】
2015507617.tif 000011
【００４０】
式中、
Ｒ2は、式（Ｉ）の化合物に対して本明細書中で定義されている通りであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数である。
【００４１】
本発明は、次式（Ｉｆ）を有する式（Ｉ）の化合物、又はその放射性標識誘導体を提供する。
【００４２】
【化１１】
2015507617.tif 000012
【００４３】
式中、
Ｒ3及びＲ4は、各々が式（Ｉ）の化合物に対して本明細書中で定義されている通りであり、
Ｒ5は、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、又はアミドであり、
ｎは、０〜５の整数であり、
Ｒ6及びＲ7は、独立に、水素、アルキル、若しくはアルキニルであるか、又は、これらが結合している窒素と一緒になって、場合により１以上のアルキル、アルキルハロ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、若しくはヘテロアリールハロで置換されていてもよいヘテロアリール若しくはヘテロシクロアルキルを形成する。
【００４４】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００４５】
【化１２】
2015507617.tif 000013
【００４６】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００４７】
【化１３】
2015507617.tif 000014
【００４８】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００４９】
【化１４】
2015507617.tif 000015
【００５０】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００５１】
【化１５】
2015507617.tif 000016
【００５２】
式中、Ｉ*は、123Ｉ、124Ｉ、又は125Ｉであり、より好ましくは123Ｉ又は125Ｉであり、より好ましくは123Ｉである。
【００５３】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００５４】
【化１６】
2015507617.tif 000017
【００５５】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００５６】
【化１７】
2015507617.tif 000018
【００５７】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００５８】
【化１８】
2015507617.tif 000019
【００５９】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００６０】
【化１９】
2015507617.tif 000020
【００６１】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００６２】
【化２０】
2015507617.tif 000021
【００６３】
本発明の１以上の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は次式のものである。
【００６４】
【化２１】
2015507617.tif 000022
【００６５】
本発明によると、本明細書に記載の本発明の化合物に対して、ハロゲンはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩから選択され、好ましくはＦである。
【００６６】
本発明は、本明細書に記載の本発明の化合物の放射性標識誘導体を提供する。本発明によると、本発明の化合物の「放射性標識誘導体」又は「その放射性標識誘導体」は、放射性核種を含む本明細書に記載の本発明の化合物（すなわち、放射性核種で放射性標識本発明の化合物）である。例として、式（Ｉ）の化合物の放射性標識誘導体は、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＡｒの少なくとも１つが放射性核種を含む本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物である。放射性核種は当技術分野で公知のあらゆる放射性同位体を意味する。好ましくは、放射性核種はイメージング（例えば、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ）に適した放射性同位体である。一実施形態では、放射性核種はＰＥＴイメージングに適した放射性同位体である。さらにより好ましくは、放射性核種は11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、68Ｇａ、62Ｃｕ、18Ｆ、76Ｂｒ、124Ｉ、又は125Ｉであり、さらにより好ましくは放射性核種は18Ｆである。
【００６７】
一実施形態では、放射性核種はＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性同位体である。さらにより好ましくは、放射性核種は99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、201Ｔｌ、123Ｉ、又は133Ｘｅであり、さらにより好ましくは放射性核種は99mＴｃ又は123Ｉである。
【００６８】
中間体
本発明は、次式ＩＩの前駆体又は中間体化合物を提供する。
【００６９】
【化２２】
2015507617.tif 000023
【００７０】
式中、
Ｒ1は、アルキル又はＡｒであって、場合により１以上のアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロアルコキシ、酸、エステル、アミノ、ニトロ、アミド、アルコキシハロ又はアルキルオキシＯＰｇで置換されていてもよく、
Ｒ2は、独立に、アルキル、アルキニル、エステル、アミノ、アミド、酸、アリール、ヘテロアリール、アミノアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）アリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ヘテロシクロアルキルＡｒ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pＯＰｇ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pハロ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ2）pヘテロシクリル、又は−ＳＯ2Ａｒであって、場合によりアルキル、アルキルハロ、アルキルＯＰｇ、ハロゲン、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（ＣＨ2）pハロ、若しくはヘテロアリール（ＣＨ2）pＯＰｇで置換されていてもよく、
Ｒ3及びＲ4は、独立に水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はヘテロアリールであり、
Ａｒは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり、
ｐは、０〜１０、好ましくは０〜５、より好ましくは０〜３の整数であり、
Ｐｇは、Ｈ、保護又は脱離基である。
【００７１】
保護又は脱離基は当技術分野で公知のいかなる保護又は脱離基でもよい。適切な保護又は脱離基の例として、限定されることはないが、トシレート（ＯＴｓ）、ＢＯＣ、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、アセチル（Ａｃ）及びパラメトキシベンジル（ＰＭＢ）がある。
【００７２】
本発明の前駆体又は中間体化合物の例には次式のものがある。
【００７３】
【化２３】
2015507617.tif 000024
【００７４】
本発明はさらに、次式の前駆体又は中間体化合物を提供する。
【００７５】
【化２４】
2015507617.tif 000025
【００７６】
医薬又は放射性医薬組成物
本発明は、本明細書に記載の本発明の化合物を薬学的に許容される担体、賦形剤、又は生体適合性の担体と共に含む医薬又は放射性医薬組成物を提供する。本発明によると、本発明の化合物が放射性標識誘導体である場合、その医薬組成物は放射性医薬組成物である。
【００７７】
本発明はさらに、哺乳類への投与に適した、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は生体適合性の担体と共に本明細書に記載の本発明の化合物を含む医薬又は放射性医薬組成物を提供する。
【００７８】
当業者には理解されるように、薬学的に許容される担体又は賦形剤は当技術分野で公知のあらゆる薬学的に許容される担体又は賦形剤であることができる。
【００７９】
「生体適合性の担体」は、得られる医薬組成物が生理学的に容認できる、例えば毒性又は過度の不快感を伴うことなく哺乳類の身体に投与することができるように、本発明の化合物を懸濁又は溶解させることができるあらゆる流体、殊に液体であることができる。生体適合性の担体は、無菌の、発熱因子を含まない注射用水のような注射可能な担体液体、（最終の注射用生成物が低張でないか又は等張であるように好都合にバランスを取ることができる）生理的食塩水のような水溶液、１以上の張度調節物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性の対イオンとの塩）の水溶液、糖（例えば、ブドウ糖又はショ糖）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）、又はその他の非イオン性ポリオール材料（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）が適している。また、生体適合性の担体は、エタノールのような生体適合性の有機溶媒も含み得る。かかる有機溶媒は、より親油性の化合物又は製剤を可溶化するのに有用である。好ましくは、生体適合性の担体は発熱因子を含まない注射用水、等張の生理的食塩水又は水性エタノール溶液である。静脈内注射用の生体適合性の担体のｐＨは４．０〜１０．５の範囲が適切である。
【００８０】
本医薬又は放射性医薬組成物は、非経口的に、すなわち注射により投与することができ、水溶液であるのが最も好ましい。かかる組成物は場合により、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン又はＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ若しくはリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はパラ−アミノ安息香酸）のようなさらなる成分を含有し得る。本発明の化合物が放射性医薬組成物として提供される場合、前記化合物の調製方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要とされる工程、例えば、有機溶媒の除去、生体適合性の緩衝剤及び任意のさらなる成分の添加を含み得る。非経口の投与の場合、放射性医薬組成物が無菌で非発熱性であることを確保するための工程も必要とされる。かかる工程は当業者には周知である。
【００８１】
本発明の化合物の調製
本発明の化合物は、限定されることはないが求核性芳香族置換、求核性脂肪族置換、及びクリックケミストリーを始めとして当技術分野で公知の任意の手段によって調製することができる。
【００８２】
本発明の一実施形態では、本発明の化合物は、所望のハロゲン又は放射性核種による適当な脱離基の求核性芳香族置換又は求核性脂肪族置換によってハロゲン化するか又は放射性核種で放射性標識することができる。求核性芳香族置換に適した脱離基の例としては、限定されることはないが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＮＯ2、ＡｒＩ+及び+Ｎ（Ｒ）4がある。求核性脂肪族置換に適した脱離基の例としては、限定されることはないが、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＴｓ（トシレート）、ＯＴｆ（トリフレート）、ＢｓＯ（ブロシレート(brosylate)）、ＯＭｓ（メシレート）、及びＮｓＯ（ノシレート(nosylate)）がある。
【００８３】
本発明の一実施形態では、本発明の化合物は活性化芳香環を介して18Ｆで直接標識することができる。このアプローチでは放射性標識中主要なアミノ基の保護が必要であろう。
【００８４】
一実施形態では、本発明の化合物は次のスキームＩに従って製造することができる。
【００８５】
【化２５】
2015507617.tif 000026
【００８６】
一実施形態では、本発明の化合物は次のスキームＩＩに従って製造することができる。
【００８７】
【化２６】
2015507617.tif 000027
【００８８】
一実施形態では、本発明の化合物は次のスキームＩＩＩに従って製造することができる。
【００８９】
【化２７】
2015507617.tif 000028
【００９０】
一実施形態では、本発明の化合物は次のスキームＩＶに従って製造することができる。
【００９１】
【化２８】
2015507617.tif 000029
【００９２】
例として、放射性同位体［18Ｆ］−フッ素イオン（18Ｆ-）は通常、核反応18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆで水溶液として得られ、陽イオン性対イオンの添加及びその後の水の除去によって反応性にされる。適切な陽イオン性対イオンは18Ｆ-の溶解性を維持するのに充分な無水の反応溶媒中への溶解度を有するべきである。従って、使用されている対イオンとしては、ルビジウム若しくはセシウムのような大きいが柔らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドで錯化したカリウム、又はテトラアルキルアンモニウム塩がある。好ましい対イオンは、無水の溶媒中への良好な溶解性及び高まった18Ｆ-反応性の点からＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドで錯体化したカリウムである。18Ｆはまた、ハロゲン又はトシレート基のような適切な脱離基の求核置換によって導入することもできる。周知の18Ｆ標識技術のより詳細な考察は「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」（２００３；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ：Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ及びＣ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ編）の第６章に見ることができる。同様の方法を用いて、本明細書に記載のＰＥＴ及びＳＰＥＣＴ放射性同位体を含む他の放射性同位体で本発明の化合物を放射性標識することができる。
【００９３】
自動化合成
一実施形態では、各々本明細書に記載されている本発明の放射性標識誘導体の製造方法は自動化される。例えば、本発明の［18Ｆ］−標識化合物は、自動放射合成装置を用いて自動モードで便利に製造することができる。ＴＲＡＣＥＲｌａｂ（商標）（例えば、ＴＲＡＣＥＲｌａｂ（商標）ＭＸ）及びＦＡＳＴｌａｂ（商標）（どちらもＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ．製）を始めとしてかかるプラットフォーム装置の幾つかの市販の例がある。かかる装置は一般に、放射合成を実行するために装置に嵌められ、放射化学が実行される、多くの場合使い捨て式の「カセット」を含む。カセットは通常、流体経路、反応容器、及び試薬バイアルを受け取るための口、並びに放射合成後のクリーンアップ工程で使用される固相抽出カートリッジを含む。場合により、本発明のさらなる実施形態では、自動放射合成装置は高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）に連結することができる。本発明は、従って、本発明の化合物の自動化合成のためのカセットを提供する。
【００９４】
イメージング方法
本明細書に記載されている本発明の放射性標識誘導体は、ＮＦＴ又はタウ集合体に結合し、存在するＮＦＴ／タウ集合体の量を確認するのを助けることができ、その量はＡＤの病期と関連付けることができる。
【００９５】
こうして本発明は、本明細書に記載されている本発明の放射性標識誘導体を被験体に投与し、前記被験体の前記本発明の放射性標識誘導体を検出するステップを含むイメージング方法を提供する。本発明はさらに、本明細書に記載されている本発明の放射性標識誘導体を用いてインビトロ又はインビボでタウ集合体を検出する方法を提供する。それ故、本発明は、アルツハイマー病の早期の検出及び診断のためのより良好な手段を提供する。また、本発明は、アルツハイマー病の進行及び処置の効果をモニターするためのより良好な手段も提供する。
【００９６】
当業者には理解されるように、イメージングのタイプ（例えば、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ）は放射性同位体種類によって決定される。例えば、本発明の放射性標識誘導体が18Ｆを含有する場合は、ＰＥＴイメージングに適切であろう。
【００９７】
従って、本発明は、
ｉ）本明細書に定義されている本発明の放射性標識誘導体を被験体に投与し、
ii）前記本発明の放射性標識誘導体を前記被験体のＮＦＴに結合させ、
iii）前記結合した本発明の放射性標識誘導体の前記放射性同位体により放出される信号を検出し、
iv）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成し、
ｖ）前記被験体の前記タウ集合体の分布及び程度を決定する
ステップを含む、タウ集合体をインビトロ又はインビボで検出する方法を提供する。
【００９８】
本発明の放射性標識誘導体を「投与する」ステップは、非経口的に行うのが好ましく、静脈内に行うのが最も好ましい。静脈内経路は、被験体の身体全体に化合物を送達するために最も効率的な方法である。静脈内投与は実質的に物理的な介入もないし被験体に対する実質的な健康のリスクもない。本発明の放射性標識誘導体は本明細書に定義されている本発明の放射性医薬組成物として投与するのが好ましい。投与ステップは、本発明のイメージング方法の完全な定義には必要ではない。従って、本発明のイメージング方法はまた、本発明の放射性標識誘導体が予め投与されている被験体に対して行われる上に定義したステップ（ii）〜（ｖ）を含むものと理解することもできる。
【００９９】
投与ステップの後、検出ステップの前に、本発明の放射性標識誘導体をタウ集合体に結合させる。例えば、被験体が完全な(intact)哺乳動物である場合、本発明の放射性標識誘導体は哺乳動物の身体を通って動力学的に移動し、様々な組織と接触する。本発明の放射性標識誘導体はタウ集合体に接触するとそのタウ集合体と結合する。
【０１００】
本発明の方法の「検出する」ステップは、本発明の放射性標識誘導体内にある放射性同位体により放出される信号を、この信号に対して感度のある検出器、例えばＰＥＴカメラによって検出することを含む。この検出ステップはまた、信号データの獲得としても理解することができる。
【０１０１】
本発明の方法の「生成」ステップは、獲得した信号データに再構成アルゴリズムを適用してデータセットを生成するコンピューターによって行われる。次に、このデータセットを処理して、放射性同位体から放出された信号の位置及び／又は量を示す画像を生成する。この放出された信号は酵素又は新生物組織の量と直接関連しているので、生成した画像を評価することによって「決定」ステップを実施することができる。
【０１０２】
本発明の「被験体」はヒト又は動物の被験体であることができる。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインビボの完全な哺乳類身体である。殊に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。
【０１０３】
「タウ集合体に関連する病態」はＭＣＩ（軽度認知障害）、認知症又はアルツハイマー病であることができる。
【実施例】
【０１０４】
特に断らない限り、全ての材料は市販のものである。略語は次の意味を有する。
ＢＩＮＡＰ            １，２−ジ（ナフタレン−２−イル）−１，１，２，２−テトラフェニルジホスフィン
ＢＯＰ                （ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＣＭ                ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ            Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ                ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ              ジメチルスルホキシド
ＨＰＬＣ              高速液体クロマトグラフィー
Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ    ４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサン
ＰＢＳ                リン酸緩衝生理食塩水
ＱＣ  ＨＰＬＣ        品質管理高速液体クロマトグラフィー
ＴＬＣ                薄層クロマトグラフィー
ＴＦＡ                トリフルオロ酢酸
実施例１
【０１０５】
【化２９】
2015507617.tif 000030
【０１０６】
スキームＡ．18Ｆ−３７又は３７*の放射合成
フッ素−１８は、濃縮［18Ｏ］Ｈ2Ｏを含有する標的のプロトン照射により18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆ核反応を用いてサイクロトロンで生成する。Ｗｈｅａｔｏｎバイアル（３ｍＬ）に、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（５ｍｇ、１３．３μｍｏｌ）、炭酸カリウム（１ｍｇ、７．２μｍｏｌ）、アセトニトリル（１ｍＬ）、及び18Ｆ−含有水（１００μＬ、３３５ＭＢｑ）を入れる。バイアルを１００℃に加熱し、窒素流（１００ｍＬ／分）を用いて溶媒を除く。アセトニトリル（０．５ｍＬ）を加え、再び窒素流を用いて蒸発乾固する。この手順を二回繰り返す。バイアルを室温まで冷却し、無水ＤＭＳＯ（０．２ｍＬ）中トシレート３８（２．０ｍｇ、３．６μｍｏｌ）の溶液を加える（スキームＡ）。この反応混合物を１００℃に１５分加熱する。調製用ＨＰＬＣ（Ｌｕｎａ  Ｃ１８  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、５μ、５０×４．６ｍｍ、溶媒Ａ：Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量３．０ｍＬ／分、ＵＶ：２５４ｎｍ、勾配：１５分で２０〜９０％Ｂ）により精製する。単離生成物（図１、未補正の放射化学収率＝１９％）を水（３ｍＬ）で希釈し、エタノール（５ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）でフラッシュすることにより活性化されているｔＣ１８  ＳｅｐＰａｋ  Ｌｉｇｈｔカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ）に通す。カートリッジを水（５ｍＬ）で溶離し、窒素（１００  ｍＬ／分で１分）でフラッシュする。エタノールでＰＢＳ溶液中に溶離することにより18Ｆ−３７又は３７*（５０ＭＢｑ）が８９％の製剤回収率（崩壊に対して補正済）で得られる。ＱＣ  ＨＰＬＣ（Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、２．６μ、５０×４．６ｍｍ、溶媒Ａ：Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量１．０ｍＬ／分、ＵＶ：２５４ｎｍ、勾配：１５分で２０〜９０％Ｂ）は、放射化学純度９８％の18Ｆ−３７又は３７*を示している（図２）。
【０１０７】
実施例２
【０１０８】
【化３０】
2015507617.tif 000031
【０１０９】
スキームＢ．18Ｆ−３８又は３８*の放射合成
実施例１に記載したように、［18Ｆ］フッ化物をＷｈｅａｔｏｎバイアルで共沸乾燥させる。バイアルを室温まで冷却し、無水ＤＭＳＯ（０．２ｍＬ）中トシレート３９（２．０ｍｇ、３．７μｍｏｌ）の溶液を加える（スキームＢ）。反応混合物を１５分間１００℃に加熱する。１分、５分、及び１５分後、粗反応混合物のアリコート（１０μＬ）をＨＰＬＣ移動相（１００μＬ、３５％溶媒Ｂ）中にクエンチする。分析用ＨＰＬＣ（Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、２．６μ、５０×４．６ｍｍ、溶媒Ａ：Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量１．０ｍＬ／分、ＵＶ：２５４ｎｍ、勾配：１５分で２０〜９０％Ｂ）で、18Ｆ−３８又は３８*の形成が明らかである（図３）。非放射性参照化合物の注入により、生成物18Ｆ−３８又は３８*としての放射活性信号が確認される（図４）。
【０１１０】
実施例３
フッ素−１８は、実施例１に記載されているように生成させ、Ｗｈｅａｔｏｎバイアルで共沸乾燥させる。［18Ｆ］テトラブチルアンモニウムフルオリドハイドロジェンカーボネート（ＴＢＡＦ）及び［18Ｆ］Ｆ-／ＫＨＣＯ3／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘのような代わりの相間移動系を、無水ＤＭＳＯ（０．２ｍＬ）に溶解したトシレート３９（２．０ｍｇ、３．７μｍｏｌ）を適用する。反応混合物を１００℃に加熱するか、又はマイクロ波（５０Ｗ、設定温度９０℃）を照射する。表１に、放射化学最適化のための経時変化研究をまとめて示す。
【０１１１】
【表１】
2015507617.tif 000032
【０１１２】
実施例４．化合物５７の調製
スキーム５
【０１１３】
【化３１】
2015507617.tif 000033
【０１１４】
４ａ．化合物５５の調製
【０１１５】
【化３２】
2015507617.tif 000034
【０１１６】
５４（２５０ｍｇ、０．７８８ｍｍｏｌ）（下記実施例１３に従って調製）、２−（ピペリジン−４−イル）エタノール（１２２ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）、及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート試薬（５２３ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の混合物を無水のＤＭＳＯ（１０ｍＬ）に溶解し、これにＤＩＰＥＡ（２０４ｍｇ、１．５７６ｍｍｏｌ、０．２７ｍＬ）を加えた。この反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣をジエチルエーテルと共に一晩撹拌した。沈殿をろ過し、乾燥させて３００ｍｇ（８５％）の５５を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ21Ｈ24Ｎ4Ｏ4Ｓに対する計算値４２８、実測値４２９．５（Ｍ＋Ｈ）+
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．３（２Ｈ、ｍ、ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ）、１．５（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨＣＨ2ＣＨ2）、１．８（３Ｈ、ｍ、ＣＨ2ＣＨＣＨ2）、２．８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、３．１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１５  ＨｚＮＣＨ2ＣＨ2）、３．５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＣＨ2ＯＨ）、３．７２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）、３．８６（３Ｈ、ｓ、ＡｒＯＣＨ3）、４．１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、４．７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、６．６６（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、６．９８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び７．４５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）。
【０１１７】
４ｂ．化合物５６の調製
【０１１８】
【化３３】
2015507617.tif 000035
【０１１９】
５５（３００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を無水のクロロホルム（２０ｍＬ）に溶解し、ＣＨＣｌ3（５ｍＬ）で希釈したジエチルアミノイオウトリフルオリド（１１３ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を０℃で１０分かけて滴下して加えた。反応は１０分毎にＴＬＣでモニターした。その後反応混合物を過剰のＣＨＣｌ3（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をろ過し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を、アセトニトリル：メタノール（５０：５０）及び２０％酢酸アンモニウム（ｐＨ４．３）を用いた半分取用ＨＰＬＣにより精製した。プールした画分に１％ＨＣｌ溶液（５ｍＬ）を加えた後、凍結乾燥して４０ｍｇ（１３％）を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ21Ｈ23ＦＮ4Ｏ3Ｓに対する計算値４３０．５０、実測値４３１．４（Ｍ＋Ｈ）+
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．６（７Ｈ、ｍ、環ＮＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、２．７３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、３．０５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、３．７７（３Ｈ、ｓ、ＡｒＯＣＨ3）、４．０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、４．４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、４．５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、４．６４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、６．５８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、６．８９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び７．３５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）。
【０１２０】
４ｃ．化合物５７の調製
【０１２１】
【化３４】
2015507617.tif 000036
【０１２２】
５５（４５０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭとジオキサン（２０ｍＬ）の１：１混合物に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２５６ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加えた。ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈したメタンスルホニルクロリド（１２０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を１ｈにわたって加えた。反応混合物を室温で２ｈ撹拌した。その後反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）とブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して９０ｍｇ（１７％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ22Ｈ26Ｎ4Ｏ6Ｓ2に対する計算値５０６．６０、実測値５０６．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．３（４Ｈ、ｍ、環ＮＣＨ2ＣＨ2ＣＨＣＨ2ＣＨ2）、１．７（３Ｈ、ｍ、ＣＨＣＨ2ＣＨ2ＯＭｓ）、２．７５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、３．０（３Ｈ、ｓ、ＳＯ2ＣＨ3）、３．１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、３．８（３Ｈ、ｓ、ＡｒＯＣＨ3）、４．１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、４．３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）、４．７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2）、６．６（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、６．９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び７．４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）。
【０１２３】
実施例５．化合物５９の調製
【０１２４】
【化３５】
2015507617.tif 000037
【０１２５】
５ａ．化合物５９の調製
【０１２６】
【化３６】
2015507617.tif 000038
【０１２７】
５８（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）（実施例１３ｆに従って調製）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ  ＮａＯＨ溶液（１７．４ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）とエピフルオロヒドリン（２６ｍｇ、０．３４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１００℃マイクロ波中で３ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させし、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して３２ｍｇ（２６％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ19Ｈ21ＦＮ4Ｏ4Ｓに対する計算値４２０．４６、実測値４２０．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．１５（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、４．０５（４Ｈ、ｍ、ＡｒＯＣＨ2ＣＨ及びＣＨ（ＣＨ3）2）、４．４６（１Ｈ、ｍ、ＦＣＨ2ＣＨ）、４．５６（１Ｈ、ｍ、ＦＣＨ2ＣＨ）、５．５（１Ｈ、ｓ、ＣＨＯＨ）、７．０４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．１８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．５５（２Ｈ、ｓ、ＣＨＮＨ2）、７．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＯＮＨ）。
【０１２８】
実施例６．化合物６０の調製
【０１２９】
【化３７】
2015507617.tif 000039
【０１３０】
５８（６００ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）（実施例１３ｆに従って調製）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（８４８ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）とグリシジルトシレート（３９７．３ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させし、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して８０ｍｇ（１１％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ19Ｈ20Ｎ4Ｏ4Ｓに対する計算値４００．１２、実測値４０１．２（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２２（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、２．７８（１Ｈ、ｍ、ＯＣＨ2ＣＨ）、２．９３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＯＣＨ2ＣＨ）、３．３８（１Ｈ、ｍ、ＣＨ2ＣＨＣＨ2）、４．０（１Ｈ、ｍ、ＡｒＯＣＨ2）、４．２（１Ｈ、ｍ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、４．３（１Ｈ、ｄｄ，Ｊ１＝９Ｈｚ、Ｊ２＝３Ｈｚ、ＡｒＯＣＨ2）、６．１５（２Ｈ、ｓ、ＣＮＨ2）、６．９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＣＨＮＨ）、７．０２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び７．５８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）。
【０１３１】
実施例７．化合物６１の調製
【０１３２】
【化３８】
2015507617.tif 000040
【０１３３】
５８（４００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）（実施例１３ｆに従って調製）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（５６８ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）及びブロモフルオロプロパン（１６２ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１５ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して８５ｍｇ（１８％）の９８．３％所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ19Ｈ21ＦＮ4Ｏ3Ｓに対する計算値４０４．４６、実測値４０５．２（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２２（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、２．１５（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2）、２．２４（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2）、４．１５（３Ｈ、ｍ、ＡｒＯＣＨ2及びＣＨ（ＣＨ3）2）、４．５８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＦＣＨ2）、４．７４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＦＣＨ2）、６．２（２Ｈ、ｓ、ＣＮＨ2）、６．９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＣＨＮＨ）、７．０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び７．５７（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）。
【０１３４】
実施例８．化合物６２の調製
【０１３５】
【化３９】
2015507617.tif 000041
【０１３６】
５８（３００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）（実施例１３ｆに従って調製）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（２８３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）及び１，３−プロパンジオールジ−ｐ−トシレート（３３５ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１５ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して１１０ｍｇ（２３％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ26Ｈ28Ｎ4Ｏ6Ｓ2に対する計算値５５６．６５、実測値５５７．２（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δH  １．１５（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、２．０６（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2）、２．３８（３Ｈ、ｓ、ＡｒＣＨ3）、３．９６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＳＯ3ＣＨ2）、４．０６（１Ｈ、ｍ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、４．２２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＯＣＨ2）、６．９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．１９（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．４２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＴｓＣＨ）、７．５５（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、７．７８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＴｓＣＨ）及び７．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＨＣＨ）。
【０１３７】
実施例９．化合物６４の調製
【０１３８】
【化４０】
2015507617.tif 000042
【０１３９】
９ａ．化合物６３の調製
【０１４０】
【化４１】
2015507617.tif 000043
【０１４１】
５８（４００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）（実施例１３ｆに従って調製）をジオキサンとクロロホルム（２５ｍＬ）の１：１混合物に溶解し、ジメチルアミノピリジン（２２１ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（２５３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、ジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して３００ｍｇ（５８％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ21Ｈ24Ｎ4Ｏ5Ｓに対する計算値４４４．５０、実測値４４４．３（Ｍ＋）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２５（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、１．６０（９Ｈ、ｓ、ＮＨ（ＣＨ3）3）、４．２（１Ｈ、ｍ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、６．９２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＮＨＣＨ）、７．３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．５５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び７．６１（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）。
【０１４２】
９ｂ．化合物６４の調製
【０１４３】
【化４２】
2015507617.tif 000044
【０１４４】
６３（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解し、炭酸セシウム（３３ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）とフルオロエチルトシレート（１５ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１５ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して１０ｍｇの所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ27ＦＮ4Ｏ5Ｓに対する計算値４９０．５５、実測値４９１．０（Ｍ＋）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、１．４５（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、４．１５（１Ｈ、ｍ、ＣＨ（ＣＨ3）2）、４．２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＯＣＨ2）、４．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＯＣＨ2）、４．６８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＦＣＨ2）、４．７８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＦＣＨ2）、６．９０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＮＨＣＨ）、７．０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４０（２Ｈ、、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、８．０６（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）及び１０．０（１Ｈ、ｓ、ＮＨＢｏｃ）。
【０１４５】
実施例１０．化合物６７の調製
【０１４６】
【化４３】
2015507617.tif 000045
【０１４７】
１０ａ．化合物６５の調製
【０１４８】
【化４４】
2015507617.tif 000046
【０１４９】
５−ブロモ−２−フルオロピリジン（１．５ｇ、８．５２ｍｍｏｌ）及びナトリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシド（１．２２ｇ、１２．７９ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）に溶解し、ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．５８ｇ、８．５２ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガスを反応混合物中に５分パージし、ＢＩＮＡＰ（０．３１８ｇ、０．５１１ｍｍｏｌ）を加え、続いて酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．０３８ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を還流下で６ｈ撹拌した。その後反応混合物を水で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して１．０ｇの所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ20ＦＮ3Ｏ2に対する計算値２８１．３３、実測値２８１．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．４（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、３．０（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．５（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、６．８０（１Ｈ、ｍ、ＡｒＣＨ）、７．３（１Ｈ、ｍ、ＡｒＣＨ）及び７．７（１Ｈ、ｓ、ＡｒＣＨ）。
【０１５０】
１０ｂ．化合物６６の調製
【０１５１】
【化４５】
2015507617.tif 000047
【０１５２】
６５（６５０ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、５℃に冷却した。ＤＣＭ中２０％ＴＦＡの溶液５ｍＬを反応物に滴下して加えた。反応混合物を３ｈ撹拌した。その後反応混合物を過剰のＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で、続いてブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮して５００ｍｇの所望の生成物を得た。
【０１５３】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ9Ｈ12ＦＮ3に対する計算値１８１．２１、実測値１８１．７（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH  ３．２６（４Ｈ、ｍ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．３８（４Ｈ、ｍ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、７．１（１Ｈ、ｍ、ＡｒＣＨ）、７．７（１Ｈ、ｍ、ＡｒＣＨ）、７．９（１Ｈ、ｓ、ＡｒＣＨ）及び９．０（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）。
【０１５４】
１０ｃ．化合物６７の調製
【０１５５】
【化４６】
2015507617.tif 000048
【０１５６】
無水のＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中の５４（３００ｍｇ、０．９４５ｍｍｏｌ）、６６（１７１ｍｇ、０．９４５ｍｍｏｌ）及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート試薬（６２７ｍｇ、１．４１８ｍｍｏｌ）の混合物をＤＩＰＥＡ（２４４ｍｇ、１．８９１ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応物の経過をＬＣＭＳによりモニターした。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣をジエチルエーテルと共に一晩撹拌した。沈殿をろ過し、乾燥させて６０ｍｇ（１３％）の６７を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ21ＦＮ6Ｏ3Ｓに対する計算値４８０．５１、実測値４８１．０（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH  ３．１（２Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．３５（２Ｈ、ｍ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．７（２Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．８（５Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ及びＡｒＯＣＨ3）、６．６（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨＣＨ）、６．９８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．０５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．５５（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、７．６０（１Ｈ、ｓ、ＡｒＣＨ）及び７．８５（１Ｈ、ｓ、ＡｒＣＨ）。
【０１５７】
実施例１１．化合物７０の調製
【０１５８】
【化４７】
2015507617.tif 000049
【０１５９】
１１ａ．化合物６８の調製
【０１６０】
【化４８】
2015507617.tif 000050
【０１６１】
５−ブロモ−２−ニトロピリジン（１．０ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．１ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）をＮ−メチルピロリジンに溶解し、１２０℃で１８ｈ撹拌した。その後反応混合物を３０℃に冷却し、水で希釈し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して４００ｍｇの所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ20Ｎ4Ｏ4に対する計算値３０８．３３、イオン化せず。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．４（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、３．３８（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．５８（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、７．１４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ１＝５Ｈｚ、Ｊ２＝１０ＨＺ、ＡｒＣＨ）、８．０６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び８．１１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）。
【０１６２】
１１ｂ．化合物６９の調製
【０１６３】
【化４９】
2015507617.tif 000051
【０１６４】
６８（４００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、５℃に冷却した。ＤＣＭ中２０％ＴＦＡの溶液５ｍＬを滴下して加えた。反応混合物を３ｈ撹拌した。その後反応混合物を過剰のＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で、続いてブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して２００ｍｇ（７４％）の所望の生成物を得た。
【０１６５】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ９Ｈ１２Ｎ４Ｏ２に対する計算値２０８．２２、実測値２０８．７（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１６６】
１１ｃ．化合物７０の調製
【０１６７】
【化５０】
2015507617.tif 000052
【０１６８】
無水のＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中の５４（３０５ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、６９（２００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート試薬（６３７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の混合物をＤＩＰＥＡ（０．６７ｍＬ、３．８４ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１２ｈ撹拌した。反応物の経過をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して４０ｍｇの所望の生成物を得た。
【０１６９】
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ21Ｎ7Ｏ5Ｓに対する計算値５０７．５２、実測値：５０８．０（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）：δH  ３．５５（２Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．７（２Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．７５（２Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．８（５Ｈ、ｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｎ及びＡｒＯＣＨ3）、６．７４（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨＣＨ）、６．９８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．５６（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、８．１８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）及び８．２６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＡｒＣＨ）。
【０１７０】
実施例１２．化合物７４の調製
【０１７１】
【化５１】
2015507617.tif 000053
【０１７２】
１２ａ．化合物７１の調製
【０１７３】
【化５２】
2015507617.tif 000054
【０１７４】
４−アミノフェノール（５ｇ、４５．８７ｍｍｏｌ）を、３７％塩酸（７ｍＬ）、エタノール（１５ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合物に溶解した。反応混合物を氷水浴中で０℃に冷却した後、水（１０ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（３．２１ｇ、４５．８７ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。得られた混合物を０℃で２０分撹拌した。水（５０ｍＬ）中の酢酸ナトリウム（２４．９５ｇ、１８３．４９ｍｍｏｌ）及びアセト酢酸エチル（５．９６ｇ、４５．８７ｍｍｏｌ、５．８４ｍＬ）を加え、反応混合物を０℃で２ｈ撹拌した。沈殿した固体をろ過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させて６ｇ（５２％）の所望の生成物を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ12Ｈ14Ｎ2Ｏ4に対する計算値２５０．１、実測値２５０．６（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）：δH  １．３５−１．４１（３Ｈ、ｍ、ＯＣＨ3）、２．４７（３Ｈ、ｓ、ＣＨ2ＣＨ3）、４．３０−４．３９（２Ｈ、ｍ、Ｏ−ＣＨ2）、６．８２−６．８８（２Ｈ、ｍ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）及び７．３０−７．３９（２Ｈ、ｍ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）。
【０１７５】
１２ｂ．化合物７２の調製
【０１７６】
【化５３】
2015507617.tif 000055
【０１７７】
酢酸（６ｍＬ）中の７１（２．０ｇ、８ｍｍｏｌ）、シアノ酢酸エチル（１．８１ｇ、１６ｍｍｏｌ、１．７０ｍＬ）及び酢酸アンモニウム（２．４６ｇ、３１．９１ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波下で１２０℃に４５分加熱した。得られた混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。粗化合物をヘキサン（３×５０ｍＬ）で洗浄し、ろ過して１．８ｇ（７８％）を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ15Ｈ13Ｎ3Ｏ4に対する計算値２９９．０、実測値２９８．５（Ｍ−Ｈ）-。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＣＮ）：δH  １．２６（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、２．５９（３Ｈ、ｓ、ＣＨ3）、４．２９（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．８７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び７．３０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）。
【０１７８】
１２ｃ．化合物７３の調製
【０１７９】
【化５４】
2015507617.tif 000056
【０１８０】
エタノール（６ｍＬ）中の７１（２ｇ、６．３８ｍｍｏｌ）、イオウ（０．３０ｇ、９．２４ｍｍｏｌ）、及びモルホリン（１．１ｇ、１２．６７ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）の混合物をマイクロ波中で１２０℃に３０分加熱した。混合物を冷却した後、生成した沈殿をろ過した。熱エタノールから再結晶して１．３ｇ（５９％）を淡褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ15Ｈ13Ｎ3Ｏ4Ｓに対する計算値３３１．０、実測値３３１．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δH  １．２９（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、４．３１（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．８３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）、７．０８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．２６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）及び７．５９（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）。
【０１８１】
１２ｄ．化合物７４の調製
【０１８２】
【化５５】
2015507617.tif 000057
【０１８３】
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）中の７３（２ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化リチウム一水和物（０．１ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳによりモニターした。その後、１ＮのＨＣｌを用いて反応物のｐＨを６に調節し、水性層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させて１．２ｇ（６６％）の所望の生成物を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ13Ｈ9Ｎ3Ｏ4Ｓに対する計算値３０３．３、実測値３０３．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δH  ３．１６（１Ｈ、ｓ、ＯＨ）、６．８０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）、７．１４（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．２２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）及び７．３５（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）。
【０１８４】
実施例１３．化合物７９の調製
【０１８５】
【化５６】
2015507617.tif 000058
【０１８６】
１３ａ．化合物７５の調製
【０１８７】
【化５７】
2015507617.tif 000059
【０１８８】
ｐ−アニシジン（２ｇ、１６．２３ｍｍｏｌ）を、３７％塩酸（３ｍＬ）、エタノール（５ｍＬ）及び水（３ｍＬ）の混合物に溶解した。反応混合物を氷水浴中で０℃に冷却した後水（７ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（１．１２ｇ、１６．２３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。得られた混合物を０℃で２０分撹拌した。水（２０ｍＬ）中の酢酸ナトリウム（８．６１ｇ、６３．２７ｍｍｏｌ）及びアセト酢酸エチル（２．１ｇ、１６．１３ｍｍｏｌ、２ｍＬ）を加え、反応混合物を０℃で２ｈ撹拌した。次いで、沈殿した固体をろ過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させて４ｇ（９３％）を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ13Ｈ16Ｎ2Ｏ4に対する計算値２６４．１、実測値２６５．１（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．３２（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、２．５１（２Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、３．７５（３Ｈ、ｓ、フェニル−ＯＣＨ3）、４．２２−４．３２（２Ｈ、ｍ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．８４−６．８８（２Ｈ、ｍ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．２０−７．２５（１Ｈ、ｍ、フェニル−２Ｈ）及び７．２９−７．３２（１Ｈ、ｍ、フェニル−５Ｈ）。
【０１８９】
１３ｂ．化合物７６の調製
【０１９０】
【化５８】
2015507617.tif 000060
【０１９１】
酢酸（５ｍＬ）中の７５（２．０ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）、シアノ酢酸エチル（１．７１ｇ、１５．１１ｍｍｏｌ、１．６１ｍＬ）及び酢酸アンモニウム（２．３３ｇ、３０．２２ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波中１２０℃で４５分照射した。得られた混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空下で蒸発させ。粗化合物をエタノール中で加熱し、熱いうちにろ過して２ｇ（８６％）を暗黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ16Ｈ15Ｎ3Ｏ4に対する計算値３１３．３、実測値３１２．５（Ｍ−Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．３９（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、２．７４（３Ｈ、ｓ、ＣＮＣＣＣＨ3）、３．８５（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．４１（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．９９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）及び７．５５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び４Ｈ）。
【０１９２】
１３ｃ．化合物７７の調製
【０１９３】
【化５９】
2015507617.tif 000061
【０１９４】
エタノール（７ｍＬ）中の７６（２ｇ、６．３８ｍｍｏｌ）、イオウ（０．３０ｇ、９．２４ｍｍｏｌ）、及びモルホリン（１．１ｇ、１２．６７ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）の混合物をマイクロ波中で２５分１３０℃に加熱した。反応物の経過をＨＰＬＣでモニターした。その後混合物を冷却し、生成した沈殿をろ過した。粗生成物をエタノールで再結晶して０．５３０ｇ（２４％）の生成物を淡褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ16Ｈ15Ｎ3Ｏ4Ｓに対する計算値３４５．０、実測値３４６．０（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δH  １．４４（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、３．８７（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．４６（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．２１（１Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、７．０１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．３０（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）及び７．５１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び４Ｈ）。
【０１９５】
１３ｄ．化合物５４の調製
【０１９６】
【化６０】
2015507617.tif 000062
【０１９７】
水酸化リチウム一水和物（０．１ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）中の７７（０．５０ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応物の経過をＨＰＬＣでモニターした。その後１ＮのＨＣｌを用いて反応物のｐＨを６に調節し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸発させて０．３５ｇ（７７％）の所望の生成物を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ11Ｎ3Ｏ4Ｓに対する計算値３１７．３、実測値３１８．６（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）：δH  ３．８６（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、６．８０（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、７．０２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．２０（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）及び７．４６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び４Ｈ）。
【０１９８】
１３ｅ．化合物７８の調製
【０１９９】
【化６１】
2015507617.tif 000063
【０２００】
無水ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の５４（０．３５ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）、イソ−プロピルアミン（０．１３ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、０．１８ｍＬ）、及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート試薬（０．７３ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の混合物にＤＩＰＥＡ（０．２８ｇ、２．１６ｍｍｏｌ、０．３８ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応物の経過をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物を水（２５ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をジクロロメタン（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣をジエチルエーテルと共に一晩撹拌した。沈殿をろ過し、乾燥させて０．３０ｇ（９０％）を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ17Ｈ18Ｎ4Ｏ3Ｓに対する計算値３５８．１、実測値３５９．１（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２３（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、（ＣＨ3）2ＣＨ３．８４（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．１６−４．２３（１Ｈ、ｍ、（ＣＨ3）2ＣＨ）、６．９１−７．０８（５Ｈ、ｍ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ、ＳＣＨ、ＮＨ2）及び７．４０−７．４６（２Ｈ、ｍ、フェニル−２Ｈ及び４Ｈ）。
【０２０１】
１３ｆ．化合物５８の調製
【０２０２】
【化６２】
2015507617.tif 000064
【０２０３】
７８（０．２２ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）に、メタンスルホン酸（４ｍＬ）とメチオニン（０．２７ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３日間撹拌した。反応物の経過をＬＣＭＳでモニターした。その後反応物を氷中に注ぎ入れ、沈殿した固体を遠心分離で回収した。生成物を酢酸エチルに溶解し、重炭酸塩水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させて１６０ｍｇ（８０％）を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ16Ｈ16Ｎ4Ｏ3Ｓに対する計算値３４４．０、実測値３４５．０（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．１４（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、２Ｘ（ＣＨ3）2ＣＨ）、４．０５（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、（ＣＨ3）2ＣＨ）、６．８２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．１７（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．３４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び４Ｈ）、７．５２（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）及び７．８７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＨ）。
【０２０４】
１３ｇ．化合物７９の調製
【０２０５】
【化６３】
2015507617.tif 000065
【０２０６】
無水アセトニトリル（２０ｍＬ）中の５８（０．３０ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）に、炭酸セシウム（０．４２ｇ、１．２９ｍｍｏｌ）及びエチレンジトシレート（０．３９ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃に１６ｈ加熱した。反応混合物を水（２５ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。粗化合物を、水と酢酸アンモニウムを勾配溶媒とした半分取用(semi-prep)を用いて精製した。画分を凍結乾燥させて７７ｍｇ（１６％）を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ25Ｈ26Ｎ5Ｏ6Ｓ2に対する計算値５４２．１、実測値５４２．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２２（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＨＣＨ（ＣＨ2）3）、２．４６（３Ｈ、ｓ、ＣＨ3）、４．１６−４．２３（３Ｈ、ｍ、ＮＨＣＨ（ＣＨ2）3及びＳＯ2ＯＣＨ2ＣＨ2）、４．３７−４．４３（２Ｈ、ｍ、ＳＯ2ＯＣＨ2ＣＨ2）、６．１３（２Ｈ、ｓ、ＮＨ２）、６．８９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．２８−７．４９（２Ｈ、ｍ、トシルフェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．５８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．７３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び７．８３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、トシルフェニル−２Ｈ及び６Ｈ）。
【０２０７】
実施例１４．化合物８１の調製
【０２０８】
【化６４】
2015507617.tif 000066
【０２０９】
１４ａ．化合物８０の調製
【０２１０】
【化６５】
2015507617.tif 000067
【０２１１】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）をエーテルとメタノールの５０：５０混合物（１０ｍｌ）中に入れ、濃ＨＣｌ（１ｍＬ）を１０分にわたって滴下して加えた。反応混合物を１ｈ撹拌した。溶媒を蒸発させた。水を無水のアセトニトリル（３×２０ｍＬ）との共沸混合物として除去し、遊離のアミンを塩酸塩として得た。５４（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）（実施例１３ｄに従って調製）をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、ピペリジン−４−イルメタノール塩酸塩（３６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４０．７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、０．０５ｍｌ）及び（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）オキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（１０５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×１５ｍＬ）で抽出した。有機層をろ過し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濃縮して３５ｍｇ（４６％）の所望の生成物を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ20Ｈ22Ｎ4Ｏ4Ｓに対する計算値４１４．１、実測値４１５．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２１２】
１４ｂ．化合物８１の調製
【０２１３】
【化６６】
2015507617.tif 000068
【０２１４】
８０（３５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を無水のクロロホルム（２０ｍｌ）に溶解し、ＣＨＣｌ3（５ｍｌ）で希釈したジエチルアミノイオウトリフルオリド（０．１１ｍＬ、０．８４ｍｍｏｌ）を０℃で１０分にわたって滴下して加えた。反応を１０分毎にＴＬＣでモニターした。その後反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をろ過し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、アセトニトリル：メタノール（５０：５０）及び２０％酢酸アンモニウム（ｐＨ４．３）を用いた半分取用ＨＰＬＣにより精製した。プールした画分に１％ＨＣｌ溶液（５ｍＬ）を加えた後凍結乾燥して５０ｍｇ（１３％）の所要の化合物を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ20Ｈ21ＦＮ4Ｏ3Ｓに対する計算値４１６．１、実測値４１７．１（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δH  １．０７−１．２８（２Ｈ、ｍ、ＦＣＨ2ＣＨＣＨ2ＣＨ2）、１．６１−１．８３（２Ｈ、ｍ、ＦＣＨ2ＣＨＣＨ2ＣＨ2）、１．８８−２．０７（１Ｈ、ｍ、ＣＨ）、２．７４−２．９１（２Ｈ、ｍ、ＯＮＣＨ2ＣＨ2）、３．０３−３．１７（ＯＮＣＨ2ＣＨ2）、３．７９（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．３０（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３Ｈｚ及び１５Ｈｚ、ＣＨ2Ｆ）、６．６２（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、６．９９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）、７．３８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）及び７．５４（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）。
【０２１５】
実施例１５．化合物８２の調製
【０２１６】
【化６７】
2015507617.tif 000069
【０２１７】
７８（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、炭酸セシウム（９０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に維持し、ヨウ化メチル（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、０．０１７ｍＬ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、１０分かけてゆっくり滴下して加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空下で蒸発させた。中性のアルミナ上、ヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）（０〜３０％）（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分で溶離することで精製して所望の生成物１９ｍｇ（３５％）を淡黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ19Ｈ22Ｎ4Ｏ3Ｓに対する計算値３８６．１、実測値３８６．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２２（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2）、３．１４（６Ｈ、ｓ、Ｎ（ＣＨ3）2）、３．８５（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．１５−４．２７（１Ｈ、ｍ、ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2）、６．９４−７．０４（３Ｈ、ｍ、ＳＣＨ及びフェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．４３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び８．０２（１Ｈ、ｓ、ＣＯＮＨ）。
【０２１８】
実施例１６．化合物８７の調製
【０２１９】
【化６８】
2015507617.tif 000070
【０２２０】
１６ａ．化合物８３の調製
【０２２１】
【化６９】
2015507617.tif 000071
【０２２２】
７７（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をジオキサン（７ｍＬ）に溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（０．３５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。ジオキサン（３ｍＬ）に溶解したＢｏｃ無水物（６９ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を室温で滴下して反応混合物に加え、４ｈ撹拌した。反応物の経過をＨＰＬＣでモニターし、ジオキサンを留去し、粗反応混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空下で蒸留して粗化合物を得た。中性アルミナ上でヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）（０〜１５％）（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分で溶離する精製により、所望の生成物５５ｍｇ（４３％）を淡黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ21Ｈ23Ｎ3Ｏ6Ｓに対する計算値４４５．３、実測値４４５．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．４３（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、１．５３（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、３．８５（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．４６（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．９７−７．０１（２Ｈ、ｍ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．４７−７．５１（２Ｈ、ｍ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）、７．７８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）及び１０．１７（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）。
【０２２３】
１６ｂ．化合物８４の調製
【０２２４】
【化７０】
2015507617.tif 000072
【０２２５】
８３（５５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を２ｍＬの無水ジメチルホルムアミド中に溶解し、炭酸セシウム（４８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。１ｍＬのＤＭＦに溶解したヨウ化メチル（１９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、０．００８ｍＬ）を０℃で滴下して反応混合物に加えた。反応混合物を室温で４ｈ撹拌した。反応混合物を水（３×２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空下で蒸留して粗化合物を得た。中性アルミナ上でヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）（０〜２５％）（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分で溶離することで精製して所望の生成物３０ｍｇ（５３％）を淡黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ22Ｈ25Ｎ3Ｏ6Ｓに対する計算値４５９．１、実測値４５９．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．３２−１．４０（１２Ｈ、ｍ、ＣＨ2ＣＨ3及びＯ（ＣＨ3）3）、３．２６（３Ｈ、ｓ、ＮＣＨ3）、３．７７（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．３９（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＣＨ2ＣＨ3）、６．８９−６．９３（２Ｈ、ｍ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．３９−７．４３（２Ｈ、ｍ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び８．２６（１Ｈ、ｓ、ＣＨ）。
【０２２６】
１６ｃ．化合物８５の調製
【０２２７】
【化７１】
2015507617.tif 000073
【０２２８】
８４（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を水とテトラヒドロフラン（３ｍＬ、（１：１））の混合物に溶解し、水酸化リチウム（４．７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣでモニターした。テトラヒドロフランを留去し、ｐＨ６に達するまで１ＮのＨＣｌを加えた。水性層を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸留して所望の２２ｍｇ（７８％）の生成物を淡黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ20Ｈ21Ｎ3Ｏ6Ｓに対する計算値４３１．１、実測値４３１．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．４４（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、３．３３（３Ｈ、ｓ、ＮＣＨ3）、３．８３（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、６．９６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．４１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び８．４９（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）。
【０２２９】
１６ｄ．化合物８６の調製
【０２３０】
【化７２】
2015507617.tif 000074
【０２３１】
８５（２２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、イソ−プロピルアミン（４．５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、０．００６ｍＬ）、及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート試薬（４５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を無水のＤＭＳＯ（２ｍＬ）に懸濁させ、ＤＩＰＥＡ（１３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、０．０１７ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、得られた混合物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣をジエチルエーテルと共に一晩撹拌した。この粗化合物１９ｍｇ（９１％）を直接次の反応に用いた。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ28Ｎ4Ｏ5Ｓに対する計算値４７２．１、実測値４７２．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２４（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、１．４３−１．４９（６Ｈ、ｍ、ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2）、３．３１（３Ｈ、ｓ、ＮＣＨ3）、３．８５（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．１８−４．２６（１Ｈ、ｍ、ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2）、６．９９−７．０２（２Ｈ、ｍ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．４２−７．４５（２Ｈ、ｍ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び８．６８（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）。
【０２３２】
１６ｅ．化合物８７の調製
【０２３３】
【化７３】
2015507617.tif 000075
【０２３４】
８６（１９ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解し、１ｍＬのトリフルオロ酢酸を加えた。反応物を室温で４ｈ撹拌した。反応混合物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（５ｍＬ）で抽出した。水性層を飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、ジクロロメタン（２×４５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸留して１２ｍｇの粗化合物を得た。酢酸エチル及びヘキサンを用いて再結晶化させて９ｍｇ（５８％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ18Ｈ20Ｎ4Ｏ3Ｓに対する計算値３７２．１、実測値３７２．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．２２（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＨＣＨ（ＣＨ2）3）、３．０４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＨＣＨ3）、３．８６（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．１４−４．２７（１Ｈ、ｍ、ＮＨＣＨ（ＣＨ2）3）、６．９３（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、６．９９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．４３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び７．５２（１Ｈ、ｓ、ＣＯＮＨ）。
【０２３５】
実施例１７．化合物９１の調製
【０２３６】
【化７４】
2015507617.tif 000076
【０２３７】
１７ａ．化合物８８の調製
【０２３８】
【化７５】
2015507617.tif 000077
【０２３９】
１−Ｂｏｃ−ピペラジン（１ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）及び２，６−ジフルオロピリジン（０．６１ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（０．８１ｇ、８．０５ｍｍｏｌ、１．１２ｍＬ）を加えた。混合物を１６ｈ還流加熱した。冷却し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（１５ｍＬ）で反応をクエンチした。１０分後水（６０ｍＬ）で希釈し、混合物を酢酸エチル（３×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、蒸発させた。ダーク油を一晩高真空下にして残留するＤＭＦを除去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン（Ａ）：ＥｔＯＡｃ（Ｂ）（０〜１５％（Ｂ）、１２ｇ、１２ｍＬ／分）を用いて溶離して所望の生成物０．８ｇ（５３％）を粘稠な黄色の油として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ20ＦＮ3Ｏ2に対する計算値２８１．２、実測値２８２．１（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４０】
１７ｂ．化合物８９の調製
【０２４１】
【化７６】
2015507617.tif 000078
【０２４２】
８８（７００ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で４ｈ撹拌した。反応を水でクエンチし、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和した。水性層をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、蒸発させて所望の生成物３３０ｍｇ（７３％）を黄色の油として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ9Ｈ12ＦＮ3に対する計算値１８１．１、実測値１８１．９（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２４３】
１７ｃ．化合物９０の調製
【０２４４】
【化７７】
2015507617.tif 000079
【０２４５】
無水ＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中の５４（０．３９ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）（実施例１３ｄに従って調製）、８９（０．３３ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート試薬（０．８１ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（０．３２ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、０．４３ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１６ｈ撹拌した。反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。反応混合物を水（２５ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し、真空下で蒸発させた。中性アルミナ上でヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）（０〜４０％）（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分を用いて溶離することで精製して所望の生成物０．２９ｇ（４７％）を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ21ＦＮ6Ｏ3Ｓに対する計算値４８０．１、実測値４８０．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δH  ３．４８−３．７７（８Ｈ、Ｎ（ＣＨ2）2（ＣＨ2）2Ｎ）、３．８０（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、６．３１（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、６．７２（２Ｈ、ｓ、ＮＨ2）、７．００（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フルオロピリジル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．４２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．５６（２Ｈ、ｓ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）及び７．７０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、フルオロピリジル−４Ｈ）。
【０２４６】
１７ｄ．化合物９１の調製
【０２４７】
【化７８】
2015507617.tif 000080
【０２４８】
９０（６０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（１．２ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を加えた。ジオキサン（３ｍＬ）に溶解したＢｏｃ無水物（３０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を反応混合物に滴下して加え、５０℃に２ｈ加熱した。ジオキサンを留去し、粗反応混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、水（１５ｍＬ）、ブライン（５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空下で蒸発させて粗化合物を得た。中性アルミナ上で、ヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）（０〜２０％）（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分により溶離する精製を行って所望の生成物１０ｍｇ（１３％）を淡黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ28Ｈ29ＦＮ6Ｏ5Ｓに対する計算値５８０．１、実測値５８０．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δH  １．５４（９Ｈ、ｓ、Ｏ（ＣＨ3）3）、３．５８−３．６９（４Ｈ、ｍ、ＯＮ（ＣＨ2）2（ＣＨ2）2Ｎ）、３．７７−３．８２（２Ｈ、ｍ、ＯＮ（ＣＨ2）2ＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、３．８６（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、３．８９−３．９５（２Ｈ、ｍ、ＯＮ（ＣＨ2）2ＣＨ2ＣＨ2Ｎ）、６．２２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３Ｈｚ及び６Ｈｚ、フルオロピリジル−３Ｈ）、６．４２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝３Ｈｚ及び６Ｈｚ、フルオロピリジル−５Ｈ）、６．９４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ、フェニル−３Ｈ及び５Ｈ）、７．３１（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．４３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ、フェニル−２Ｈ及び６Ｈ）、７．５６（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝６Ｈｚ、フルオロピリジル−４Ｈ）及び１０．１３（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）。
【０２４９】
実施例１８．５−アミノ−Ｎ−（２−フルオロエチル）−３−（４−メトキシフェニル）−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ［３，４−ｄ］ピリダジン−１−カルボキサミド（９２）の調製
【０２５０】
【化７９】
2015507617.tif 000081
【０２５１】
５−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ［３，４−ｄ］ピリダジン−１−カルボン酸（７５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（１５７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及び２−フルオロエタナミニウムクロリド（４７．１ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を無水のＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍｌ、０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を２０℃で２４ｈ撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせたＤＣＭをブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をジクロロメタン（Ａ）：メタノール（Ｂ）（０．５〜１０Ｂ、１０ｇ、２５ＣＶ、３０ｍＬ／分）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーで精製して生成物を黄色の固体（５０ｍｇ、５８％）として得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ16Ｈ15ＦＮ4Ｏ3Ｓに対する計算値３６２．１、実測値３６３．３（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ、クロロホルム−Ｄ）  δH  ７．５４（ｓ、１Ｈ、Ｓ−ＣＨ）、７．４８−７．３８（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−Ｈ）、７．０４−６．９５（ｍ、２Ｈ、Ａｒ−Ｈ）、６．１４（ｂｒ  ｓ、２Ｈ、Ｎ−Ｈ2）、４．５６（ｄｔ、Ｊ＝４８Ｈｚ及び４．８Ｈｚ、２Ｈ、Ｆ−ＣＨ2）、３．８５（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ3）、３．８０−３．５９（ｍ、２Ｈ、ＮＣＨ2）及び３．４９（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、ＮＨ）。
13Ｃ  ＮＭＲ（７６ＭＨｚ、クロロホルム−Ｄ）  δC  １６３．２（Ｃ−ＮＨ２）、１６１．１（ＮＨＣ＝Ｏ）、１５９．８（Ｃ−ＯＭｅ）、１５９．１（Ｃ＝Ｏ）、１３４．４、１３３．５、１２７．４（２×Ａｒ−ＣＨ）、１２６．８、１１４．２（２×Ａｒ−ＣＨ）、１０７．４、１０６．０（ＳＣＨ）、８２．６（ｄ、Ｊ＝１６８．１Ｈｚ、Ｃ−Ｆ）、５５．７（ＯＣＨ3）及び３９．８（ｄ、Ｊ＝２０．３Ｈｚ、ＮＨＣＨ2）。
【０２５２】
実施例１９．（Ｒ）−７−アミノ−４−（３−フルオロピロリジン−１−カルボニル）−２−（４−メトキシフェニル）チエノ［３，４−ｄ］ピリダジン−１（２Ｈ）−オン（９３）の調製
【０２５３】
【化８０】
2015507617.tif 000082
【０２５４】
５−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ［３，４−ｄ］ピリダジン−１−カルボン酸（７５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（１５７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）−３−フルオロピロリジン−１−イウムクロリド（２９．７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１．５ｍｌ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍｌ、０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を２０℃で２４ｈ撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせたＤＣＭ抽出物をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣を、ジクロロメタン（Ａ）：メタノール（Ｂ）（０．５〜１０Ｂ、２５ｇ、２５ＣＶ、４０ｍＬ／分）により溶離するシリカゲルクロマトグラフィーで精製して生成物を黄色の固体として（６０ｍｇ、６５％）得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ18Ｈ17ＦＮ4Ｏ3Ｓに対する計算値３８８．１、実測値３８９．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２５５】
実施例２０．（Ｓ）−７−アミノ−４−（３−フルオロピロリジン−１−カルボニル）−２−（４−メトキシフェニル）チエノ［３，４−ｄ］ピリダジン−１（２Ｈ）−オン（９４）の調製
【０２５６】
【化８１】
2015507617.tif 000083
【０２５７】
５−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−４−オキソ−３，４−ジヒドロチエノ［３，４−ｄ］ピリダジン−１−カルボン酸（７５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（１５７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−３−フルオロピロリジン−１−イウムクロリド（２９．７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を無水のＤＭＳＯ（１．５ｍｌ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍｌ、０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を２０℃で２４ｈ撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせたＤＣＭをブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水の硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をジクロロメタン（Ａ）：メタノール（Ｂ）（０．５〜１０Ｂ、２５ｇ、２５ＣＶ、４０ｍＬ／分）で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して生成物を黄色の固体（５０ｍｇ、５５％）として得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ18Ｈ17ＦＮ4Ｏ3Ｓに対する計算値３８８．１、実測値３８９．２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０２５８】
実施例２１．化合物９９の調製
【０２５９】
【化８２】
2015507617.tif 000084
【０２６０】
２１ａ．化合物９５の調製
【０２６１】
【化８３】
2015507617.tif 000085
【０２６２】
７６（４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）（実施例１３ｂに従って調製）をエタノール（６６ｍＬ）と水（２５ｍＬ）の混合物に懸濁させた。０．５１１ｇ（１２．７ｍｍｏｌ）の水酸化ナトリウムを反応物に加えた。反応物を室温で１６ｈ撹拌した。反応物を真空下で濃縮してエタノールを除去した。残渣を水（１００ｍＬ）に溶解し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄して不純物を除いた。１ＮのＨＣｌを加えることにより、水性反応物のｐＨをｐＨ２に調節した。得られた沈殿をろ過し、６０℃のオーブン内に保って２．４ｇ（６３％）の所望の生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ11Ｎ3Ｏ4に対する計算値２８５．１、実測値２８５．８（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯＤ6）：δH  ２．６５（３Ｈ、ｓ、ＣＨ3ＣＣＣＮ）、３．８３（３Ｈ、ｓ、Ｏ−ＣＨ3）、７．０９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、Ａｒ−３−ＣＨ及びＡｒ−５−ＣＨ）、７．５１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−２−ＣＨ及びＡｒ−６−ＣＨ）。
【０２６３】
２１ｂ．化合物９６の調製
【０２６４】
【化８４】
2015507617.tif 000086
【０２６５】
９５（２ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）をｔ−ブタノール：ＤＭＦ（４０ｍＬ、（１：１））の混合物に懸濁させた。この反応物に、トリエチルアミン（１．０６ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ、１．４５８ｍＬ）を加えた。反応物を冷却し、トリフェニルホスホリルアジド（２．３１ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を０℃でさらに１０分撹拌し、１００℃でさらに５ｈ加熱し始めた。反応物を水（３０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（５×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4（１５ｇ）上で乾燥させた。有機層を蒸発させ、アルミナカラムクロマトグラフィーによりヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）、（０〜４０（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分）で溶離して精製し、純粋な生成物１．０ｇ（４０％）を黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ18Ｈ20Ｎ4Ｏ4に対する計算値３５６．１、実測値３５７．１５（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．５３（９Ｈ、ｓ、ＯＣ（ＣＨ3）3）、２．５５（３Ｈ、ｓ，ＣＮＣＣＣＨ3）、３．８７（３Ｈ、ｓ、Ｏ−ＣＨ3）、６．６０（１Ｈ、ｂｓ、ＮＨＣＯＯＣ（ＣＨ3）3）、６．９８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−３−ＣＨ及びＡｒ−５−ＣＨ）及び７．５３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−２−ＣＨ及びＡｒ−６−ＣＨ）。
【０２６６】
２１ｃ．化合物９７の調製
【０２６７】
【化８５】
2015507617.tif 000087
【０２６８】
９６（０．５０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中に入れ、水素化ナトリウム（０．０４ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を加え、次いでフルオロエチルトシレート（０．４６ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１２ｈ９５℃に加熱した。その後反応物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（４×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、無水のＮａ2ＳＯ4（１５ｇ）上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。粗物質をアルミナカラムクロマトグラフィーでヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）、（０〜５０（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分）で溶離して精製し、純粋な生成物０．３０ｇ（５３％）を褐色の液体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ20Ｈ23ＦＮ4Ｏ4に対する計算値４０２．１、実測値４０２．９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．４９（９Ｈ、ｂｓ、ＯＣ（ＣＨ3）3）、２．５０（３Ｈ、ｓ，ＣＮＣＣＣＨ3）、３．８９（３Ｈ、ｓ，Ｏ−ＣＨ3）、３．９５−４．２５（２Ｈ、ｂｓ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ）、４．４６（２Ｈ、ｍ、ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ），７．０１（２Ｈ、ｍ、Ａｒ−３−ＣＨ及びＡｒ−５−ＣＨ）及び７．５５（２Ｈ、ｍ、Ａｒ−２−ＣＨ及びＡｒ−６−ＣＨ）。
【０２６９】
２１ｄ．化合物９８の調製
【０２７０】
【化８６】
2015507617.tif 000088
【０２７１】
９７（０．２９ｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）に懸濁させ、イオウ（０．０３ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）とモルホリン（０．１４ｇ、１．４３ｍｍｏｌ、０．１４ｍＬ）を加えた。次に反応物をマイクロ波中で３５分１００℃に加熱した。エタノールを反応物から蒸発させた後酢酸エチル（３×１０ｍＬ）と水（３×１０ｍＬ）に分配した。次に、合わせた有機層を無水のＮａ2ＳＯ4（１０ｇ）上で乾燥させ、蒸発乾固した。その後粗物質をアルミナカラムクロマトグラフィーでヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）、（０〜６０（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分）で溶離して精製し、純粋な生成物０．１５ｇ（４８％）を褐色がかった液体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ20Ｈ23ＦＮ4Ｏ4Ｓに対する計算値４３４．１４、実測値４３４．９（Ｍ＋Ｈ）+
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．４５（９Ｈ、ｓ、ＯＣ（ＣＨ3）3）、３．８６（３Ｈ、ｓ、Ｏ−ＣＨ3）、３．９８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨaＨbＣＨ2Ｆ）、４．０３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨaＨbＣＨ2Ｆ）、４．５９（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨaＨbＦ）、４．６８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨaＨbＦ）、６．１４（２Ｈ、ｂｓ、ＳＣＮＨ2）、６．４４（１Ｈ、ｓ、ＣＣＨＳ）、６．９９（２Ｈ、ｍ、Ａｒ−３−ＣＨ及びＡｒ−５−ＣＨ）及び７．４８（２Ｈ、ｍ、Ａｒ−２−ＣＨ及びＡｒ−６−ＣＨ）。
【０２７２】
２１ｅ．化合物９９の調製
【０２７３】
【化８７】
2015507617.tif 000089
【０２７４】
９８（０．１５０ｇ、０．３４５ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解し、氷−塩混合物を用いて０℃に冷却した。反応物に、トリフルオロ酢酸：ジクロロメタン（５ｍＬ、１：１）を加えた。反応物をＲＴで１２ｈ撹拌し、水（５ｍＬ）でクエンチし、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液（５ｍＬ）で塩基性にした。有機層をＤＣＭ（４×５ｍＬ）で抽出し、無水のＮａ2ＳＯ4（５ｇ）上で乾燥させ、蒸発乾固した。その後粗物質をアルミナカラムクロマトグラフィーによりヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）、（０〜６０（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分）で溶離して精製し、純粋な生成物０．０６ｇ（５４％）をオフホワイトの固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ15Ｈ15ＦＮ4Ｏ2Ｓに対する計算値３３４．１、実測値３３４．８（Ｍ＋Ｈ）+
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  ３．６６（１Ｈ、ｍ、ＮＣＨaＨbＣＨ2Ｆ）、３．７２（１Ｈ、ｍ、ＮＣＨaＨbＣＨ2Ｆ）、３．８６（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、４．４２（１Ｈ、ｂｓ、ＦＣＨ2ＣＨ2ＮＨ）、４．６２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＮＣＨ2ＣＨaＨbＦ）、４．７２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ  ＮＣＨ2ＣＨaＨbＦ）、６．２０（２Ｈ、ｂｓ、ＳＣＮＨ2）、６．３７（１Ｈ、ｓ、ＣＣＨＳ）、６．９７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−３−ＣＨ及びＡｒ−５−ＣＨ）及び７．５５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−２−ＣＨ及びＡｒ−６−ＣＨ）。
【０２７５】
実施例２２．化合物１００の調製
【０２７６】
【化８８】
2015507617.tif 000090
【０２７７】
９６（０．２ｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）中に入れ、イオウ（０．０２７ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）とモルホリン（０．０９８ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、０．０９８ｍＬ）を加えた。次に反応物をマイクロ波中で３５分１００℃に加熱した。反応物からエタノールを蒸発させた後酢酸エチル（３×１５ｍＬ）と水（３×１５ｍＬ）に分配した。その後合わせた有機層を無水のＮａ2ＳＯ4（１０ｇ）上で乾燥させ、蒸発乾固した。次に粗物質をアルミナカラムクロマトグラフィーによりヘキサン（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）、（０〜６０（Ｂ）、８ｇ、１２ｍＬ／分）で溶離することで精製して純粋な生成物０．０７ｇ（３２％）を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ18Ｈ20Ｎ4Ｏ4Ｓに対する計算値３８８．１、実測値３８８．９（Ｍ＋Ｈ）+
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：δH  １．５３（９Ｈ，ｓ、ＯＣ（ＣＨ3）3）、３．８５（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、６．６５（１Ｈ、ｂｓ、ＮＨＣＯＯＣ（ＣＨ3）3）、６．７６（１Ｈ、ｓ、ＣＣＨＳ）、６．９８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−３−ＣＨ及びＡｒ−５−ＣＨ）及び７．４８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、Ａｒ−２−ＣＨ及びＡｒ−６−ＣＨ）。
【０２７８】
実施例２３．化合物１０４の調製
【０２７９】
【化８９】
2015507617.tif 000091
【０２８０】
２３ａ．化合物１０１の調製
【０２８１】
【化９０】
2015507617.tif 000092
【０２８２】
ｐ−アニシジン（２ｇ、１６．２３ｍｍｏｌ）を３７％塩酸（３ｍＬ）、エタノール（５ｍＬ）及び水（３ｍＬ）の混合物に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、水（７ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（１．１２ｇ、１６．２３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。得られた混合物を０℃で２０分撹拌した。水（２０ｍＬ）中の酢酸ナトリウム（８．６１ｇ、６３．２７ｍｍｏｌ）及びｔ−ブチルアセトアセテート（２．５６ｇ、１６．２３ｍｍｏｌ、２ｍＬ）を加え、反応混合物を０℃で２ｈ撹拌した。生成した沈殿をろ過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させて４．０８ｇ（８０％）を褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ13Ｈ16Ｎ2Ｏ4に対する計算値２７８．２、実測値２７７（Ｍ-）。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ  １．６（５Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ３）３）、１．６２（４Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ３）３）、２．４８（１．６７Ｈ、ｓ、ＣＯＣＨ３）、２．５６（１．２７Ｈ、ｓ、ＣＯＣＨ３）、６．９（２Ｈ、ｍ、フェニル−ＣＨ）、７．２６（１Ｈ、ｄ、ｊ＝１０ｈｚ、フェニル−ＣＨ）及び７．３３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０ｈｚ、フェニル−ＣＨ）。
【０２８３】
２３ｂ．化合物１０２の調製
【０２８４】
【化９１】
2015507617.tif 000093
【０２８５】
ｔ−ブタノール（５ｍＬ）中の１０１（４．０ｇ、１４．３９ｍｍｏｌ）、シアノ酢酸エチル（３．２５ｇ、２８．７８ｍｍｏｌ、１．６１ｍＬ）及び酢酸アンモニウム（４．４３ｇ、５７．５６ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波中１００℃で４５分照射した。得られた混合物を蒸留してｔ−ブタノールを除去した後水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。粗化合物をエタノール中で加熱し、熱いうちにろ過して２．８ｇ（６０％）を暗黄色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ16Ｈ15Ｎ3Ｏ4に対する計算値３２７．１２、実測値３２８．１（Ｍ＋Ｈ）+
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ  １．６２（９Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ３）３）、２．７２（３Ｈ、ｓ、ＣＮＣＣＣＨ３）、６．９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ  ＡｒＣＨ３）。
【０２８６】
２３ｃ．化合物１０３の調製
【０２８７】
【化９２】
2015507617.tif 000094
【０２８８】
ｔｅｒｔ−ブタノール（７ｍＬ）中の１０２（２．８ｇ、８．５６ｍｍｏｌ）、イオウ（０．４２ｇ、１２．４０ｍｍｏｌ）及びモルホリン（１．３ｇ、１７．１２ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）の混合物をマイクロ波中で３０分１００℃に加熱した。混合物を冷却した後、生成した沈殿をろ過し、エタノールを用いて洗浄して０．７６ｇ（２５％）を淡褐色の固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ16Ｈ15Ｎ3Ｏ4Ｓに対する計算値３５９．０９、実測値３６０．０９（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ  １．５５（９Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ3）3）、６．６４（１Ｈ、ｓ、ＡｒＣＨ）、６．８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＨ）、７．０（１Ｈ、ｓ、ＳＣＨ）、７．３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＨ）。
【０２８９】
２３ｄ．化合物１０４の調製
【０２９０】
【化９３】
2015507617.tif 000095
【０２９１】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の１０３（０．７６ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）、フルオロエチルトシレート（０．９２ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１．２２ｇ、６．３５ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で１６ｈ撹拌した。２５ｍＬの水中に入れて反応をクエンチし、ジクロロメタン（２５ｍＬ×２）を用いて抽出した。硫酸ナトリウムを用いて有機層を乾燥させし、濃縮乾固して０．４２ｇの粗生成物を得た。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１９Ｈ２０ＦＮ３Ｏ４Ｓに対する計算値４０５．１２、実測値４０６．１２（Ｍ＋Ｈ）+。
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ  １．６４（９Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ３）３）、４．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．７５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＦＣＨ２）、４．８５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＦＣＨ２）、７．０２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．１５（１Ｈ、ｓ  ＳＣＨ）、７．５５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ  ＡｒＣＨ）。
【０２９２】
実施例２４  化合物１０５の調製
【０２９３】
【化９４】
2015507617.tif 000096
【０２９４】
化合物１０５は、ｐ−アニシジンではなく４−ニトロアニリンから始めて、実施例１３に示したものと同じ経路を用いて調製した。
【０２９５】
実施例２５．化合物［18Ｆ］５６の調製
【０２９６】
【化９５】
2015507617.tif 000097
【０２９７】
［18Ｆ］フッ素は、実施例１に記載したようにＷｈｅａｔｏｎバイアルで共沸乾燥させる。バイアルを室温に冷却し、無水のＤＭＳＯ（０．２ｍＬ）中のメシレート５７（２．０ｍｇ、３．９μｍｏｌ）の溶液を加える。反応混合物を１５分１００℃に加熱する。反応生成物［18Ｆ］５６は、実施例１に記載したように単離し処方する。
【０２９８】
実施例２６．化合物［18Ｆ］５９の調製
【０２９９】
【化９６】
2015507617.tif 000098
【０３００】
化合物［18Ｆ］５９は、公表プロトコル（Ｒ．Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒら、Ｔｅｔｒ．Ｌｅｔｔ．５２（２０１１）１９７３−１９７６）に従ってｔｅｒｔ−アミルアルコール中の［18Ｆ］フッ素／Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘを用いたエポキシド６０の求核性開環反応により得られる。
【０３０１】
実施例２７．化合物［18Ｆ］１０６の調製
【０３０２】
【化９７】
2015507617.tif 000099
【０３０３】
［18Ｆ］２−フルオロエチルアミンの溶液（１００μＬアセトニトリル、Ｍ．Ｇｌａｓｅｒら、Ｊ．Ｌａｅｌ．Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０１２、５５、３２６−３３１の方法に従って得られる）を、酸５４（２．０ｍｇ、６．３μｍｏｌ）、ＢＯＰ（４．２ｍｇ、９．４μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（５７μＬ、３２５μｍｏｌ）の混合物に加える。３０分室温でインキュベーションした後調製用ＨＰＬＣによりアミド［18Ｆ］１０６を単離する。
【０３０４】
実施例２８．化合物［18Ｆ］６７及び［18Ｆ］９０の調製
【０３０５】
【化９８】
2015507617.tif 000100
【０３０６】
化合物［18Ｆ］９０は、ニトロ前駆体７０を、Ａ．Ｍａｉｓｏｎｉａｌら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５４、２０１１、２７４５−２７６６）により記載されている手順に従ってＤＭＳＯ中で錯化したＫ［18Ｆ］Ｆ−Ｋ222−カーボネートと反応させることによって得られる。化合物［18Ｆ］６７は同様に調製される。
【０３０７】
実施例２９．化合物［18Ｆ］９２の調製
【０３０８】
【化９９】
2015507617.tif 000101
【０３０９】
標識用試薬［18Ｆ］フルオロエチルトシレートはＷ．Ｗａｄｓａｋら（Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３４、２００７、１０１９−１０２８）に記載された公知のプロトコルに従って得られる。その後のＮ−アルキル化及び脱保護により、Ｅ．Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒら（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１３、２００３、２６８７−２６９２）により記載されているように、［18Ｆ］９２が提供される。
【０３１０】
実施例３０．化合物［18Ｆ］９３及び［18Ｆ］９４の調製
【０３１１】
【化１００】
2015507617.tif 000102
【０３１２】
化合物［18Ｆ］９３及び［18Ｆ］９３は、対応するメシレート前駆体から、Ｘ．−Ｓ．Ｈｅら（Ｊ．Ｌａｂｅｌ．Ｃｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．３３、１９９３、５７３−５８１）により記載されている手順に従ってＤＭＳＯ中で錯化したＫ［18Ｆ］Ｆ−Ｋ222−カーボネートと反応させることによって得られる。
【０３１３】
実施例３１．
全般
幾つかの新規な化合物を、アルツハイマー病の脳組織におけるタウ＋神経原線維変化に結合する能力、インビトロＡＤＭＥ特性及びインビボでの脳取込に関してスクリーニングした。まとめると、結果は、本発明の所定の化合物が、優先的に変化(tangle)に結合し、インビトロで代謝的に安定であり、放射性標識することができ、そして齧歯動物モデルにおいて高い脳取込を有することを立証している。従って、かかる化合物はタウイメージング剤として望ましい特性を示す。
【０３１４】
１  材料と方法
１．１  ヒト組織
アルツハイマー病（ＡＤ）患者及び健常対照の嗅内皮質に由来するヒト脳組織試料はＴｉｓｓｕｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、Ｇｌａｓｇｏｗ、ＵＫ）から得た。書面によるインフォームドコンセントの後組織試料を集め、組織バンクで試験片を切り裂き、死後３〜１８ｈの時間間隔で凍結保存のためにスナップ凍結した。凍結した組織をＴｉｓｓｕｅＴｅｋ（登録商標）（ＶＷＲ）に包埋し、Ｍｉｃｒｏｍ  ＨＭ５６０クライオスタット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて薄片に切った。連続した１２ｍｍ切片をＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ（登録商標）＋ガラススライド（ＶＷＲ）上に固定し、−７０℃で保存した。
【０３１５】
１．２  免疫組織化学
ヒト組織切片内のタウ＋神経原線維変化（ＮＦＴ）及びβ−アミロイド（Ａβ）＋班の存在及び位置を確かめるために、試験片全体の２０番目毎の組織切片を、凝集し過リン酸化したタウ及び凝集したＡβに対して生じた抗体による免疫組織化学標識のために処理した。
【０３１６】
簡単にいうと、組織切片を解凍し、氷冷７０％エタノール中に固定した。固定後及びその後の全てのインキュベーション工程間に全ての組織切片をＰＢＳで濯いだ。固定後、組織切片を先ずＨ2Ｏ2でインキュベートした（ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）キット、Ｄａｋｏ）。Ａβ免疫組織化学のために処理すべき組織切片は、７０％ギ酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中で１０分インキュベーションすることにより抗原回復のためにさらに処理した。その後全ての組織切片を１０％正常ヤギ血清（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）と共にインキュベートして非特異的標識をブロックした。このブロック工程の後、組織切片を、タウ（ＡＴ８、マウスモノクローナル抗体、１：２０希釈、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又はＡβ（４Ｇ８、マウスモノクローナル抗体、１：１００希釈、Ｃｏｖａｎｃｅ）に対する一次抗体と共に１ｈ室温（ＲＴ）でインキュベートした。
【０３１７】
一次抗体と共にインキュベーションした後、組織切片を、マウスＩｇＧに対するホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートした二次抗体と共にＲＴで３０分インキュベートした。続いて、色原体３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）と共に２−３分インキュベーションした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）  ＨＲＰキットを二次標識のために用いた（Ｄａｋｏ）。最後に、切片をヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ）で対比染色し、脱水し、ＤＰＸ封入剤（ＶＷＲ）中に固定した。タウ及びＡβで標識組織切片の画像を、Ｌｅｉｃａ顕微鏡に接続されたＮｉｋｏｎデジタルカメラを用い、かつＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｄソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。画像はＰｈｏｔｏｓｈｏｐ（登録商標）ソフトウェア（Ａｄｏｂｅ）でさらに処理した。
【０３１８】
１．３  Ｇａｌｌｙａｓ銀染色
慣用の免疫組織化学は一次抗体による特異的な抗原の存在及び検出に依拠している。例えば、１．２でＮＦＴの免疫組織化学検出のために用いたタウ抗体（ＡＴ８）は過リン酸化タウ集合体の特異的な構造(conformation)を検出するが、成熟度がより低いタウ集合体は検出しない（Ａｕｇｕｓｔｉｎａｃｋら、２００２）。同様に、さらにリン酸化されると、構造の変化が生じ、ＡＴ８特異的タウ抗原の損失が起こる（Ａｕｇｕｓｔｉｎａｃｋら、２００２、Ｊｅｇａｎａｔｈａｎら、２００８）。従って、１つの抗原に依拠しないＧａｌｌｙａｓ銀染色のような異なる方法を使用するのが、ＮＦＴを検出し標識するためのより感受性で正確な方法であることが示唆された（Ｒｏｓｅｎｗａｌｄら、１９９３、Ｃｕｌｌｅｎら、１９９６、Ｕｃｈｉｈａｒａら、２００１、Ｕｃｈｉｈａｒａ、２００７）。従って、タウ＋及びＡβ＋免疫組織化学に加えて、Ｇａｌｌｙａｓ銀染色のために処理されたスライドに隣接する組織切片を免疫組織化学に使用する。
【０３１９】
簡単にいうと、組織切片を解凍し、中性緩衝ホルマリン（ＶＷＲ）中に１０分固定し、先ずＰＢＳで、次にｄＨ2Ｏで洗浄した。特に断らない限り、組織切片は、続いて起こるインキュベーション工程の各々の間にｄＨ2Ｏで濯いだ。組織切片を、先ず５％過ヨウ素酸中で５分、次にアルカリ性ヨウ化銀溶液中で１分インキュベートした。続いて、０．５％酢酸で１０分洗浄し、次いで組織切片を顕色剤溶液中で５〜３０分インキュベートした。次に組織切片を０．５％酢酸中で洗浄し、ｄＨ2Ｏで濯いだ。続いて、０．１％塩化金溶液中で５分、次いで１％チオ硫酸ナトリウム溶液中で５分インキュベーションした。次に、組織切片を水道水で濯ぎ、０．１％ケルンエヒトロート(nuclear fast red)で２分対比染色した。
【０３２０】
最後に、組織切片を水道水で濯ぎ、脱水し、ＤＰＸ封入剤（ＶＷＲ）に固定した。Ｇａｌｌｙａｓ銀染色のための全ての試薬は特に断らない限りＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから調達した。タウ及びＡβで標識組織切片の画像は、Ｌｅｉｃａ顕微鏡に接続されたＮｉｋｏｎデジタルカメラを用い、かつＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｄソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。画像はＰｈｏｔｏｓｈｏｐ（登録商標）ソフトウェア（Ａｄｏｂｅ）でさらに処理した。
【０３２１】
１．４  組織結合アッセイ
ヒトＡＤ組織中のタウ＋ＮＦＴ及びＡβ＋班に対する化合物の結合は蛍光に基づいて評価した。全ての試験化合物は生来の蛍光を有しており、従ってＡＤ組織中のＮＦＴ／班への化合物の結合は蛍光顕微鏡を用いて検出することができる。２つの参照化合物ＰｉＢ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ化合物Ｂ（ＰｉＢ）及びＦＤＤＮＰ（蛍光プローブ２−（１−（２−（Ｎ−（２−フルオロエチル）−Ｎ−メチルアミノ）−ナフタレン−６−イル）−エチリデン）−マロノニトリル）をスクリーニングに含ませた。ＰｉＢはＡβ＋班に優先的に結合することが報告されており（Ｉｋｏｎｏｍｏｖｉｃら、２００８）、一方ＦＤＤＮＰはＮＦＴ及び班の両方に結合する（Ａｇｄｅｐｐａら、２００１）。さらに、Ｂａｌｌａｔｏｒｅらにより最初に報告されたタウ集合阻害剤（Ｂａｌｌａｔｏｒｅら、２０１０）であるアミノチエノピラジジン化合物（ＡＴＰＺ）も組織上でスクリーニングした。
【０３２２】
簡単にいうと、組織切片を解凍し、氷冷した７０％エタノール中に固定した。固定後及びその後の全てのインキュベーション工程間全ての組織切片をＰＢＳで濯いだ。自己蛍光をクエンチするために、組織切片を先ずＰＢＳ中で１２分０．２５％ＫＭｎＯ4（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）と共に、次にＰＢＳ中０．１％Ｋ2Ｓ2Ｏ5／０．１％シュウ酸（いずれの試薬もＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）内で１分インキュベートした。組織切片をＰＢＳ中２％ＢＳＡで１０分ブロックした後、１００μＭ濃度の試験化合物と共に１ｈＲＴでインキュベートした。１００μＭで陽性の結合を示す化合物を、その後より低い試験濃度１０μＭ及び１μＭを用いたアッセイでさらに試験した。最後に組織切片をＰＢＳで濯ぎ、ＳｌｏｗＦａｄｅ（登録商標）封入剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に固定した。標識組織切片の画像を、Ｌｅｉｃａ顕微鏡に接続されたＮｉｋｏｎデジタルカメラを用い、かつＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｄソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ）を用いて取り込んだ。画像はＰｈｏｔｏｓｈｏｐ（登録商標）ソフトウェア（Ａｄｏｂｅ）でさらに処理した。
【０３２３】
１．５  インビトロＡＤＭＥスクリーニング
インビボ特性の予測のためのインビトロＡＤＭＥアッセイのパネルを用いて試験化合物をスクリーニングした。次のアッセイを使用した。平行人工膜透過アッセイ(parallel artificial membrane permeability assay)（ＰＡＭＰＡ）で細胞膜通過を決定し、ヒト又はラット血漿の存在下での化合物の安定性、ヒト又はラット肝ミクロソームの存在下での化合物の安定性、及びヒト血漿及びラット脳ホモジネート内のタンパク質への結合の決定。インビボで高い脳取込を有することが報告されている２つの化合物との比較を可能にするために、ＰｉＢ（Ｉｋｏｎｏｍｏｖｉｃら、２００８）及びＡＴＰＺ（Ｂａｌｌａｔｏｒｅら、２０１０）をスクリーニングに含めた。
【０３２４】
１．５．１  ＰＡＭＰＡ
ＰＡＭＰＡアッセイを使用して、ホスファチジルコリンバリアを貫通する化合物の通過を測定することによって、その化合物がどの程度うまく細胞膜を横切るかを決定する。透過係数＞−６は、脂質膜を横切る高い透過性を示し、化合物の血液脳関門を横切る能力を示す。
【０３２５】
２％ホスファチジルコリン溶液を塗布したＰＤＶＦ膜上で１０μＭ溶液をＲＴで５ｈインキュベートした。ＬＣ−ＭＳを用いて膜透過を測定した。
【０３２６】
１．５．２  タンパク質結合アッセイ
タンパク質結合アッセイでは、インビボにおける血液又は脳内の化合物の遊離の（非結合）画分の見積が得られる。血液内の化合物の高いタンパク質結合は、血液脳関門を横切る通過に潜在的に利用できない可能性があり、低下させる可能性があることを示すのに対して、脳内のタンパク質への高い結合は非特異的結合と遅い排泄を示す。このアッセイに対して望ましい基準は結合した試験化合物の＜９９％である。
【０３２７】
先ず試験化合物をＤＭＳＯ中に５０μＭの濃度に溶解した。続いて、ヒト血漿及びラット脳ホモジネートの試料中でインキュベーションした（最終試験濃度１μＭ）。５及び３０分インキュベーション後迅速平衡透析によって試料中の化合物のタンパク質への結合を決定した。
【０３２８】
１．５．３  肝ミクロソーム安定性アッセイ
肝ミクロソーム安定性アッセイにより、インビボにおける化合物の安定性及び代謝速度の評価が得られる。このアッセイに対する望ましい基準は３０分後親化合物の＞５０％である。
【０３２９】
１μＭの化合物溶液をラット又はヒト肝ミクロソーム（２０ｍｇ／ｍｌ）と共に３７℃でインキュベートし、５及び３０分のインキュベーション後ＬＣ−ＭＳを用いてインキュベーション後に残留する親化合物の量を決定した。
【０３３０】
１．６  インビボにおける非放射性生体内分布
全ての動物研究はローカルルール及び規制に従った。試験化合物は、ナイーブな雄性Ｗｉｓｔａｒラットの尾静脈を通して静脈内（ｉ．ｖ）注射によって投与した（５０μｇ試験化合物／ラット）。注射後（ｐ．ｉ）２、１０、３０、６０分で首の脱臼により動物を犠牲にした。脳と血漿を各動物から集めた。血漿と脳ホモジネート内の試験化合物の濃度をＬＳ−ＭＳを用いて測定し、％化合物／ｇ（％ＩＤ／ｇ）として計算した。
【０３３１】
１．７  放射性標識化合物によるインビボ生体内分布
全ての動物研究はローカルルール及び規制に従った。［18Ｆ］−放射性標識化合物は、ナイーブな雄性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの尾静脈を通してｉ．ｖ注射した（２ＭＢｑ／マウス）。ｐ．ｉ．２、１０、３０及び６０分で首の脱臼により動物を犠牲にした。次に、動物を解剖し、Ｗａｌｌａｃ  γカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を用いて臓器、組織及び血液の放射能を測定した。試験片の化合物濃度を％ＩＤ／ｇとして計算した。
【０３３２】
２．  結果
２．１  ヒトＡＤ組織の組織学
２０番目毎の切片をタウ又はＡβのために標識してヒト組織切片中のタウ＋ＮＦＴ及びＡβ＋班の存在及び程度を確かめた。隣接する組織切片を、Ｇａｌｌｙａｓ銀染色を用いて処理した。この染色はＮＦＴ及び老人斑を標識するための感受性の方法であって、検出のための抗体に依存しない。
【０３３３】
多数のタウ＋ＮＦＴ及び老人斑、並びにＡβ＋班が全てのＡＤ試験片で観察された。対照的に、対照被験体からの組織切片ではＮＦＴも班も観察されなかった。ＮＦＴ及び老人斑はＧａｌｌｙａｓ銀染色で標識組織切片でも観察された。タウ＋免疫組織化学と比較して、より成熟したＮＦＴがＧａｌｌｙａｓ銀染色で検出された。ＮＦＴ及び班の典型的な形態は図５に示されている。
【０３３４】
２．２  ヒトＡＤ組織に結合する化合物のスクリーニング
化合物とヒトＡＤ組織のタウ＋ＮＦＴ及びＡβ＋班との結合を蛍光に基づいて評価した。全ての試験化合物は生来の蛍光を有しており、従って化合物とＡＤ組織のＮＦＴ／班の結合は蛍光顕微鏡を用いて検出することができる。組織アッセイの結果は表２、表３、及び表４にまとめて示す。
【０３３５】
高い試験濃度では、両方の参照化合物（ＰｉＢ及びＦＤＤＮＰ）とＮＦＴ及び班の両方との結合が検出された（表２）。より低い試験濃度で、ＰｉＢは班のみと結合した。これらの結果は予想された通りであり、文献（Ａｇｄｅｐｐａら、２００１、Ｉｋｏｎｏｍｏｖｉｃら、２００８、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、２００９）の報告により支持される。
【０３３６】
試験した新規な化合物の幾つかはＮＦＴとの結合が観察された（表２、表３、及び表４）。最も顕著なのは試験化合物３８及び１０５であり（表１、図６（３８Ａ−Ｂ、１０５Ｃ−Ｄ））、これらは高い試験濃度でＮＦＴ及び班の両方と結合するが、より低い試験濃度ではＮＦＴと優先的に結合する。
【０３３７】
２．３  インビトロＡＤＭＥスクリーニング
インビボ特性の予測のために、複数のインビトロアッセイを用いて、所定の化合物をスクリーニングした。
【０３３８】
結果は表３にまとめて示す。データは、このクラスのスクリーニングした新規な化合物の大部分がイメージング剤として望ましいインビトロ基準を満たしており、これらの化合物がＢＢＢを横切りインビボで代謝的に安定であると予測されることを示唆している。
【０３３９】
２．４  非放射性生体内分布
選択した化合物を、ラットでの非放射性の生体内分布を用いてスクリーニングして脳の取込を決定した。結果をまとめて表６に示す。データは、３８及び９９についてはｐ．ｉ後２分で０．２％ＩＤ／ｇ未満の取込を示し、これはかなりの脳取込を示唆しているが、１０６は低い。さらに、３８及び９９のクリアランス比は迅速な脳取込に続く迅速なクリアランスを示している。ラットでの非放射性の生体内分布の場合、イメージング剤としてのベンチマーク基準はｐ．ｉ後２分で脳取込＞０．２％ＩＤ／ｇ、及びクリアランス比＞２である。
【０３４０】
２．５  ［18Ｆ］−放射化合物での生体内分布
所定の化合物を放射性標識し、マウスでの生体内分布のために使用して脳の取込を決定した。結果をまとめて表７に示す。データは、［18Ｆ］−３８（すなわち３８*）の場合ｐ．ｉ後２分で１％ＩＤ／ｇ未満の取込を示している。さらに、［18Ｆ］−３８（すなわち３８*）に対するクリアランス比は迅速な脳取込とそれに続く迅速なクリアランスを示している。放射性標識した化合物のマウスでの生体内分布の場合、イメージング剤として必要とされる最低の基準はｐ．ｉ後２分での脳取込＞１％ＩＤ／ｇ及びクリアランス比＞２である。
【０３４１】
【表２】
2015507617.tif 000103
【０３４２】
【表３】
2015507617.tif 000104
【０３４３】
【表４】
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【０３４４】
【表５】
2015507617.tif 000106
【０３４５】
【表６】
2015507617.tif 000107
【０３４６】
【表７】
2015507617.tif 000108
【０３４７】
参考文献
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上記で論じた及び／又は引用した特許、雑誌論文、刊行物及びその他の文献は全て援用により本明細書の一部をなす。
【図１】
2015507617.tif 000128
【図２】
2015507617.tif 000129
【図３】
2015507617.tif 000130
【図４】
2015507617.tif 000131
【図５】
2015507617.tif 000132
【図６】
2015507617.tif 000133
【国際調査報告】
2015507617.tif 000134
2015507617.tif 000135
2015507617.tif 000136