(57)【要約】  本発明は、金属が金又は銀である部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩の調製方法であって、以下の工程：ａ）金属が金又は銀とは異なる高分子量グリコサミノグリカン金属塩を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程と；ｂ）過酸化水素を用いて漂白する工程と；ｃ）金属イオン交換する工程とを含む調製方法に関する。本発明はまた、前記方法により得られる部分的に解重合したグリコサミノグリカン金又は銀塩、その経口又は局所薬学的又は化粧品用組成物、創傷、瘢痕、熱傷、皮膚の微生物感染症及び炎症性プロセスを治療及び／又は予防するためのその薬学的使用、並びに皮膚ケアへのその化粧学的使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
金属が金又は銀である部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩の調製方法であって、以下の工程：
ａ）金属が金又は銀とは異なる高分子量グリコサミノグリカン金属塩を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程と；
ｂ）前の工程で得られた生成物を過酸化水素を用いて漂白する工程と；
ｃ）金又は銀の供給源を使用することにより、前の工程で得られた生成物を金又は銀について金属イオン交換する工程と
を含む調製方法。
【請求項２】
前記工程ａ）で得られた生成物を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程ａ’）を更に含み、但し、前記解重合剤は前記工程ａ）で使用されるものとは異なる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程ａ’）で得られた生成物を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程ａ’’）を更に含み、但し、前記解重合剤は前記工程ａ）及びａ’）で使用されるものとは異なる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記工程ａ）の前記解重合剤が過マンガン酸カリウムであり、前記工程ａ’）の前記解重合剤が水酸化ナトリウムであり、前記工程ａ’’）の前記解重合剤が過酸化水素である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記工程ａ）の前記高分子量グリコサミノグリカン金属塩が、１００００〜５００００ダルトンからなる分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム、及び５００００〜２５０００００ダルトンからなる分子量を有するヒアルロン酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記過マンガン酸カリウムの量が、前記高分子量グリコサミノグリカン金属塩の重量の５〜３０重量％からなる、請求項３から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
過マンガン酸カリウムを用いた前記解重合が、７〜１０からなるｐＨ、６０〜９５℃からなる温度及び０．５〜２時間からなる期間で行われる、請求項３から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
水酸化ナトリウムを用いた前記解重合が、前記高分子量グリコサミノグリカン金属塩の重量の１０〜２０重量％からなる量で塩化ナトリウムの存在下で行われる、請求項３から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
水酸化ナトリウムを用いた前記解重合が、３５〜５５℃からなる温度、８〜１１からなるｐＨ、及び６〜１５時間からなる期間で行われる、請求項３から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
過酸化水素を用いた前記解重合で、前記過酸化水素の量が前記高分子量グリコサミノグリカン金属塩の重量の５〜２５重量％からなる、請求項３から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
水酸化ナトリウムを用いた前記解重合が、２０〜３５℃からなる温度及び９〜１１からなるｐＨで行われる、請求項３から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記工程ｂ）の前記過酸化水素の量が前記高分子量グリコサミノグリカン金属塩の重量の４５〜６０重量％で構成され、前記反応が５．０〜７．５からなるｐＨで行われる、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記工程ｃ）の前記金又は銀の供給源の量が、前記高分子量グリコサミノグリカン金属塩に関して化学量論的である、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１から１３の何れか一項に記載の調製方法により得られる、金属が金又は銀である部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項１５】
金属が銀である、請求項１４に記載のグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項１６】
金属が金である、請求項１４に記載のグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項１７】
グリコサミノグリカンが、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群から選択される、請求項１４から１６の何れか一項に記載のグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項１８】
金属が銀であり、グリコサミノグリカンがコンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸からなる群から選択される、請求項１４に記載のグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項１９】
金属が金であり、グリコサミノグリカンがコンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸からなる群から選択される、請求項１４に記載のグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項２０】
１種又は複数の薬学的に又は化粧学的に許容される賦形剤又は担体と共に請求項１４から１９の何れか一項に記載の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩の有効量を含む薬学的又は化粧品用組成物。
【請求項２１】
経口組成物である、請求項２０に記載の薬学的又は化粧品用組成物。
【請求項２２】
局所組成物である、請求項２０に記載の薬学的又は化粧品用組成物。
【請求項２３】
粉末又はヒドロゲル形態の、請求項２２に記載の局所薬学的又は化粧品用組成物。
【請求項２４】
アルギニンを更に含む、請求項２０から２３の何れか一項に記載の薬学的又は化粧品用組成物。
【請求項２５】
創傷、瘢痕及び熱傷の治療に使用するための請求項１４から１９の何れか一項に記載の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項２６】
皮膚の微生物感染症及び炎症性プロセスの治療及び／又は予防に使用するための請求項１４から１９の何れか一項に記載の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項２７】
前記皮膚の炎症性プロセスがざ瘡又は乾癬である、請求項２６に記載の使用のための部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩。
【請求項２８】
皮膚ケアのための、請求項２２から２４の何れか一項に記載の局所化粧料組成物の使用。
【請求項２９】
前記皮膚ケアが、次の症状：肌荒れ、カサカサ肌、つっぱり、皮膚の乾燥、あかぎれ、弾力欠如及び老化の少なくとも１つの改善を含む、請求項２８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬学及び化粧品の分野に関し、特に、本発明は部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩に関する。本発明はまた、前記塩の調製方法、これらを含有する経口及び局所医薬及び化粧料組成物、並びにこれらの薬学的及び化粧学的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
貴金属の抗菌剤としての使用、特に単純銀塩の主に表在性感染症、特に病原体の予防及び局所治療への使用が知られている。しかしながら、銀塩の施用は、貯蔵困難性及び／又は色の暗化（これはかなりの審美的欠点であり、その化粧学的及び医学的施用を限定する）をもたらす固有の構造不安定性及び／又は光感受性のために限定されてきた。
【０００３】
様々な金属の中でとりわけ銀グリコサミノグリカン誘導体も知られている。例えば、文献米国特許出願公開第２０１０３１７６１７号明細書は、銀ナノ粒子が周囲のグリコサミノグリカンマトリックス中に埋め込まれている、グリコサミノグリカン又はグルコースと結合した銀ナノ粒子を含む複合材料を記載している。前記ナノ粒子を、創傷又は熱傷への局所施用による抗菌剤として、及びコーティングプラスチック、カテーテル又は外科用器具のためにも使用することができる。
【０００４】
文献国際公開第８７０５５１７号パンフレットは、微生物増殖の阻害に使用するためのヒアルロン酸の重金属塩（銀、金、セリウム及びタングステンを含む）を記載している。
【０００５】
最後に、コンドロイチン硫酸銀を熱傷の治療に使用することができることが文献中国特許第１６８７１４１号明細書からも知られている。この文献に記載されている塩中の銀含量は１９〜３３％であり、ナトリウム含量は０．５％未満であり、硝酸塩含量は１００ｐｐｍ未満である。更に、文献欧州特許第１８７８７５４号明細書は、ヘパリン銀塩の使用及び熱傷の治療へのその使用を記載している。この文献に記載されている塩中の銀含量は２５〜４５％であり、ナトリウム含量は２．５％未満であり、硝酸塩含量は０．１％未満である。
【０００６】
しかしながら、前文献に記載されているグリコサミノグリカン銀及び金誘導体は、適当な光安定性を有さない。そのため、安定であり、高い抗菌活性を有するグリコサミノグリカン由来の生成物を見出すことが必要である。
【発明の概要】
【０００７】
本発明者らは、化学解重合、漂白及びイオン交換工程を含む本発明の方法により得られる部分的に解重合したグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）金属塩が、他の類似の高分子量非解重合塩とは異なり、良好な抗菌活性及び感光した場合に安定であることを発見した。
【０００８】
本発明の塩の安定性のこの改善は、本発明の方法により調製した部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀の光安定性を、例えば、文献中国特許第１６８７１４１号明細書に記載されているものなどの非解重合コンドロイチン硫酸銀と比較する実施例で証明される。この結果は、部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀が、非解重合生成物とは異なり環境光への露光下で安定であることを示している。
【０００９】
更に、本発明の塩の局所施用は、例えば、硝酸銀などの他の既知の銀塩の有害効果を有さず、更に、実施例で証明されるように、既存の熱傷の治療にも有用である。したがって、硝酸銀の使用は、皮膚に施用すると、刺激、掻痒感及び灼熱感をもたらすが、本発明の部分的に解重合したグリコサミノグリカン塩の局所施用は、硝酸銀により引き起こされた熱傷を治癒するのに有用である。
【００１０】
更に、本発明の部分的に解重合したグリコサミノグリカン塩はまた、特に、非解重合生成物に対して低い粘度を有し、結果として、優れた吸収を有するという利点も有する。前記優れた吸収により、生成物の高い有効性がもたらされ、結果として必要とされる生成物の用量を減少させることができるだろう。
【００１１】
本発明の部分的に解重合したグリコサミノグリカン塩を、その調製方法により定義することができる。塩とその調製方法の両方が、本発明の一部と考えられ、以下に詳細に説明される。
【００１２】
そのため、本発明の一態様は、金属が金又は銀である部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩の調製方法であって、以下の工程：
ａ）金属が金又は銀とは異なる高分子量グリコサミノグリカン金属塩を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程と；
ｂ）前の工程で得られた生成物を過酸化水素を用いて漂白する工程と；
ｃ）金又は銀の供給源を使用することにより、前の工程で得られた生成物を金又は銀について金属イオン交換する工程と
を含む調製方法に関する。
【００１３】
出発高分子量グリコサミノグリカン金属塩は、商業的に入手可能である、又は例えば、ＧＡＧの最高濃度を見出すことができる軟骨組織からの有機組織の抽出及び精製法により得ることができる。これらは、ウシ、ブタの気管、ニワトリ、アヒル、ウシもしくはブタの鼻、ウシの肩甲骨、トリの足、サメのヒレ−頭部−脊椎−尾、ブタもしくはウシの腸管粘膜（ヘパリンの場合）、ニワトリのトサカ及びブタの皮膚であり得る。ＧＡＧの他の可能な供給源は、目、静脈、臍帯等である。高分子量グリコサミノグリカン金属塩の前記抽出及び精製法は、当業者に周知である。
【００１４】
高分子量グリコサミノグリカン塩の金属は金及び銀とは異なり、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、鉄、中でも好ましくはナトリウムであり得る。グリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン又はヘパラン硫酸、好ましくはコンドロイチン硫酸又はヒアルロン酸であり得る。好ましい実施態様では、高分子量グリコサミノグリカン金属塩は、コンドロイチン硫酸ナトリウム及びヒアルロン酸ナトリウムからなる群から選択される。
【００１５】
「高分子量グリコサミノグリカン」という表現は、いかなる解重合法も受けていない精製グリコサミノグリカンを指す。本発明の目的のために、「高分子量グリコサミノグリカン」及び「非解重合グリコサミノグリカン」という表現は互換的に使用される。
【００１６】
高分子量グリコサミノグリカン金属塩の分子量は、使用するグリコサミノグリカンの種類及び金属の種類に依存する。例えば、出発グリコサミノグリカンがコンドロイチン硫酸である場合、非解重合塩の分子量は１００００〜５００００ダルトンで構成され；出発グリコサミノグリカンがヒアルロン酸である場合、非解重合塩の分子量は５００００〜２５０００００ダルトンで構成され；出発グリコサミノグリカンがデルマタン硫酸である場合、非解重合塩の分子量は２００００〜３００００ダルトンで構成され；出発グリコサミノグリカンがケラタン硫酸である場合、非解重合塩の分子量は５０００〜１００００ダルトンで構成され；出発グリコサミノグリカンがヘパリン又はヘパランである場合、非解重合塩の分子量は３０００〜３００００ダルトンからなる。
【００１７】
好ましい実施態様では、高分子量グリコサミノグリカン金属塩は、１００００〜５００００ダルトンからなる分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム、又は５００００〜２５０００００ダルトンからなる分子量を有するヒアルロン酸ナトリウムである。
【００１８】
本発明の解重合法は、解重合剤が過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素から選択される少なくとも１つの解重合工程と；１つの漂白工程と；１つの金属イオン交換工程とを含む。これらの工程は連続的に又はこれらの各々の後に行うことができ、生成物の単離を含むことができる精製工程を場合により行うことができる。
【００１９】
本発明の方法は、２つ以上の解重合工程を含んでもよい。特に、本発明の方法は、１つ、２つ又は３つの解重合工程を含んでもよく、各解重合工程の解重合剤は過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素から選択され、但し、本方法が２つ以上の解重合工程を含む場合、異なる解重合剤が各工程で使用される。
【００２０】
したがって、特定の実施態様では、本発明の方法は、工程ａ）で得られた生成物を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程ａ’）を更に含み、但し、解重合剤は工程ａ）で使用されるものとは異なる。より具体的には、本発明の方法は、工程ａ’）で得られた生成物を、過マンガン酸カリウム、水酸化ナトリウム及び過酸化水素からなる群から選択される解重合剤を用いて解重合する工程ａ’’）を更に含み、但し、解重合剤は工程ａ）及びａ’）で使用されるものとは異なる。
【００２１】
好ましくは、工程ａ）の解重合剤は過マンガン酸カリウムであり、工程ａ’）の解重合剤は水酸化ナトリウムであり、工程ａ’’）の解重合剤は過酸化水素である。したがって、好ましい実施態様では、本発明の方法は、
ａ）金属が金又は銀とは異なる高分子量グリコサミノグリカン金属塩を、過マンガン酸カリウムを用いて解重合する工程と；
ａ’）工程ａ）の生成物を水酸化ナトリウムを用いて解重合する工程と；
ａ’’）工程ａ’）の生成物を過酸化水素を用いて解重合する工程と；
ｂ）前の工程で得られた生成物を過酸化水素を用いて漂白する工程と；
ｃ）金又は銀の供給源を使用することにより、前の工程で得られた生成物を金又は銀について金属イオン交換する工程と
を含む。
【００２２】
上記３つの工程を含む解重合法の利点は、この方法が分解することなく非解重合生成物の特性を維持した生成物をもたらす、すなわち、解重合生成物が、例えば、保湿及び抗炎症特性、創傷治癒、抗凝固、骨関節症／骨粗鬆症の対症療法等などの特性を維持していることである。
【００２３】
本発明は特に、上記３つの工程を含む化学解重合に関するが、解重合は他の酸化法を通して又はコンドロイチナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリナーゼ等などの各グリコサミノグリカンに特異的な酵素を用いて行うこともできるだろう。
【００２４】
過マンガン酸カリウムを用いた解重合工程は、金属が金又は銀とは異なる高分子量グリコサミノグリカン塩又は部分的に解重合したグリコサミノグリカン塩を適当な溶媒、好ましくは水中で反応させる工程を含む。
【００２５】
好ましい実施態様では、過マンガン酸カリウムの量は、出発非解重合グリコサミノグリカン塩の重量の５〜３０重量％、より好ましくは１０〜２５重量％、より好ましくは２０重量％からなる。別の好ましい実施態様では、この反応は、７〜１０、より好ましくは８〜９からなり、より好ましくは８．５のｐＨで行われる。別の好ましい実施態様では、反応は、好ましくは６０〜９５℃、より好ましくは７０〜９５℃からなり、より好ましくは８０℃の温度で加熱することにより行われる。別の好ましい実施態様では、反応は、好ましくは０．５〜２時間からなり、より好ましくは１時間の適当な期間行われる。
【００２６】
場合により、過マンガン酸カリウムを用いた解重合工程後に得られた溶液を濾過して固体不純物を除去することができる。
【００２７】
水酸化ナトリウムを用いた解重合工程は、高分子量グリコサミノグリカン塩又は部分的に解重合したグリコサミノグリカン塩を適当な溶媒、好ましくは水中で反応させる工程を含む。
【００２８】
特定の実施態様では、使用する水酸化ナトリウムは、好ましくは３０％（重量／体積）の水溶液である。別の好ましい実施態様では、水酸化ナトリウムの量は、ｐＨを８〜１１、より好ましくは９〜１１からなる値に調整するのに必要な量である。
【００２９】
好ましい実施態様では、水酸化ナトリウムを用いた解重合工程は、塩化ナトリウム又はカリウムなどの無機塩の存在下で行われる。より好ましい実施態様では、無機塩は塩化ナトリウムである。より好ましい実施態様では、塩化ナトリウムの量は、出発非解重合グリコサミノグリカン塩の重量の１０〜２０重量％、より好ましくは１３〜１７重量％、より好ましくは１５重量％からなる。別の好ましい実施態様では、反応は、好ましくは３５〜５５℃、より好ましくは４０〜５０℃からなり、より好ましくは４５℃の温度で加熱することにより行われる。別の好ましい実施態様では、反応は、６〜１５時間、より好ましくは１０〜１２時間からなる期間行われる。
【００３０】
過酸化水素を用いた解重合工程は、高分子量グリコサミノグリカン塩又は部分的に解重合したグリコサミノグリカン塩を適当な溶媒、好ましくは水中で反応させる工程を含む。
【００３１】
好ましい実施態様では、本発明の方法は、以下の３つの解重合工程：ａ）金属が金又は銀とは異なる高分子量グリコサミノグリカン金属塩を、過マンガン酸カリウムを用いて解重合する工程と；ａ’）工程ａ）の生成物を水酸化ナトリウムを用いて解重合する工程と；ａ’’）工程ａ’）の生成物を過酸化水素を用いて解重合する工程とを含む。これらの解重合工程法は、前記の条件で行うことができる。工程ａ）の生成物を単離せず、生成物が溶液中にある場合、必要に応じてｐＨを調整して、工程ａ’）を工程ａ）と同じ溶媒中で行ってもよい。工程ａ’）の生成物を単離せず、生成物が溶液中にある場合、必要に応じてｐＨを調整して、工程ａ’’）を工程ａ’）と同じ溶媒中で行ってもよい。
【００３２】
好ましい実施態様では、解重合工程の過酸化水素の量は、出発非解重合グリコサミノグリカン塩の重量の５〜２５重量％、より好ましくは１０〜２０重量％、より好ましくは１５重量％からなる。別の好ましい実施態様では、この反応は、９〜１１、より好ましくは１０〜１１からなるｐＨで行われる。別の好ましい実施態様では、反応は、適当な温度、好ましくは２０〜３５℃、より好ましくは２５〜３０℃で行われる。特定の実施態様では、反応は、０．５〜２時間、より好ましくは１〜２時間からなる期間行われる。
【００３３】
工程ａ）、ａ’）又はａ’’）の解重合生成物を、場合により漂白工程の前に精製することができる。前記精製は、前の工程で得られた溶液を濾過して固体不純物を除去することを含んでもよい。更に又はあるいは、精製は、有機溶媒を使用した生成物の沈殿及び生成物の単離を含んでもよい。好ましい実施態様では、沈殿は、５．０〜７．５、より好ましくは５．５〜６．０からなるｐＨで行われる。ｐＨの調整は、例えば、酢酸、塩酸又は硫酸のような酸を添加することにより行うことができる。有機溶媒は、中でも、メタノール、エタノール、アセトン又はこれらの混合物であり得る。部分的に解重合したグリコサミノグリカン金又は銀塩の単離は、例えば、濾過、遠心分離又はデカンテーションにより行うことができる。特定の実施態様では、塩の沈殿のために使用する有機溶媒は、エタノール又はメタノールである。
【００３４】
漂白工程は、前の工程で得られた生成物を適当な溶媒、好ましくは水中で過酸化水素と反応させることにより行われる。前の工程の生成物を単離せず、生成物が溶液中にある場合、必要に応じてｐＨを調整して、工程ｂ）を前の工程と同じ溶媒中で行ってもよい。
【００３５】
好ましい実施態様では、漂白工程の過酸化水素の量は、出発非解重合グリコサミノグリカン塩の重量の４５〜６０重量％、より好ましくは５０〜６０重量％、より好ましくは５０重量％からなる。別の好ましい実施態様では、この反応は、５．０〜７．５、より好ましくは５．５〜６．０からなるｐＨで行われる。特定の実施態様では、反応は、適当な温度、好ましくは２０〜４５℃、より好ましくは３０〜４５℃で行われる。別の特定の実施態様では、反応は、５〜１５分、より好ましくは１０〜１５分からなる期間行われる。
【００３６】
イオン交換工程は、工程ｂ）で得られた生成物を適当な溶媒、好ましくは水中で金又は銀の供給源と反応させることにより行われる。好ましい実施態様では、反応は、例えば、露光などの、銀又は金の酸化を防ぐ条件下で行われる。工程ｂ）の生成物を単離せず、生成物が溶液中にある場合、工程ｃ）を工程ｂ）と同じ溶媒中で行ってもよい。
【００３７】
イオン交換工程は、溶液中で又はイオン交換樹脂を使用して行うことができる。好ましい実施態様では、イオン交換は溶液中で行われる。イオン交換が行われる溶媒に可溶性の任意の金又は銀塩を、金又は銀の供給源として使用することができる。特定の実施態様では、銀塩は硝酸銀であり、金塩は塩化金である。好ましい実施態様では、イオン交換を行うための金又は銀の供給源の量は、出発高分子量グリコサミノグリカン塩中の金属イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム又は亜鉛）の含量、及び工程ｃ）に使用する金又は銀塩中の金又は銀の含量を考慮することにより計算される。好ましい実施態様では、工程ｃ）の金又は銀の供給源の量は、高分子量グリコサミノグリカン金属塩に関して化学量論的である。そのため、この場合、出発高分子量グリコサミノグリカン金属塩中の金属含量（％）は既知のはずである。
【００３８】
例えば、６％のナトリウムを含有するコンドロイチン硫酸ナトリウム（ＮａＣＳ）２．５ｇ及び硝酸銀からコンドロイチン硫酸銀（ＡｇＣＳ）を調製する場合、計算は以下のようになされるだろう：
2015507070.tif 000002
【００３９】
また、６％のナトリウムを含有するコンドロイチン硫酸ナトリウム（ＮａＣＳ）２．５ｇ及び塩化金からコンドロイチン硫酸金（ＡｕＣＳ）を調製する場合、計算は以下のようになされるだろう：
2015507070.tif 000003
【００４０】
他の金もしくは銀塩又は他のグリコサミノグリカンを使用する場合も、計算は同様になされるだろう。
【００４１】
工程ｃ）の生成物を場合により精製することができる。前記精製は、工程ｃ）で得られた溶液を濾過して固体不純物を除去することを含んでもよい。更に又はあるいは、精製は、前記のように有機溶媒を使用した生成物の沈殿及び生成物の単離を含んでもよい。
【００４２】
場合により精製した工程ｃ）の生成物を、銀又は金の酸化を防ぐ条件下、例えば、露光を回避して乾燥及び包装することができる。
【００４３】
部分的に解重合したグリコサミノグリカン金又は銀塩の調製方法を行うための具体的な条件に関して、当業者であれば、本発明の説明及び実施例に照らして前に示した方法の工程の各々のパラメータをどのように調整するか分かるだろう。
【００４４】
更に、本発明はまた、上記方法により得られる生成物に関する。したがって、本発明の別の態様は、前に定義される工程ａ）、ｂ）及びｃ）を含む調製方法により得られる、金属が金又は銀ではない部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩に関する。
【００４５】
本発明の「方法により得られる」部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩という表現は、本明細書において、部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩をその調製方法によって定義するために使用され、前に定義される工程ａ）、ｂ）及びｃ）を含む調製方法を通して得ることができる生成物を指す。本発明の目的のために、「得られる」、「得られた」という表現及び類似の等価の表現は、互換的に使用され、いずれにせよ、「得られる」という表現は「得られた」という表現を包含する。
【００４６】
グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は、酸性糖及びアミノ糖を含む二糖の１単位の反復を含有する、分枝を含まない多糖である。アミノ糖はＤ−グルコサミン（Ｇｌｃ）又はＤ−ガラクトサミン（Ｇａｌ）であってもよく、アミノ基がアセチル化されていてもよく（Ｎａｃ）、４もしくは６炭素又は非アセチル化窒素に硫酸基を有することもできる。酸性糖はＤ−グルクロン酸（ＧｌｃＵＡ）、Ｌ−イズロン酸（ＩｄＵＡ）又はガラクトース（Ｇａｌ）であり得る。
【００４７】
グリコサミノグリカンの例としては、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸及びヘパラン硫酸が挙げられる。
【００４８】
コンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）及びグルクロン酸（ＧｌｃＵＡ）二糖を含むグリコサミノグリカンである。Ｎ−アセチルガラクトサミンの４位及び６位の水酸基が硫酸化されて２種の異性体：コンドロイチン４−硫酸及びコンドロイチン６−硫酸をもたらすことができる。
【００４９】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）及びグルクロン酸（ＧｌｃＵＡ）二糖を含むグリコサミノグリカンである。
【００５０】
ヘパリンは、グルクロン酸（ＧｌｃＵＡ）もしくはＬ−イズロン酸（ＩｄＵＡ）及びＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）二糖を含むグリコサミノグリカンである。ヘパラン硫酸は、ヘパリンのものと類似の１つの二糖反復単位を含有するが、Ｎ−アセチル基が多く、Ｎ−硫酸基が少なく、低い程度のＯ−硫酸基を含有する。
【００５１】
ケラタン硫酸（ＫＳ）は、ガラクトース（Ｇａｌ）及びＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）二糖を含むグリコサミノグリカンである。硫酸の含量は可変であり、硫酸エステルはガラクトースとヘキソサミンの両方の６炭素に存在することができる。２種の異なる型のケラタン、角膜から単離されたケラタン硫酸Ｉ、及び軟骨から単離されたケラタン硫酸ＩＩが知られている。
【００５２】
デルマタン硫酸（ＤＳ）は、Ｌ−イズロン酸（ＩｄＵＡ）及びＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）二糖を含むグリコサミノグリカンである。
【００５３】
本発明で使用する「部分的に解重合したグリコサミノグリカン」という表現は、解重合法に供されて、結果として解重合から得られた生成物の分子量が出発生成物の分子量よりも低くなったグリコサミノグリカンを指す。好ましくは、「部分的に解重合したグリコサミノグリカン」という表現は、少なくとも上記の工程ａ）を含む解重合法に供されたグリコサミノグリカンを指す。例えば、コンドロイチン硫酸の場合、高分子量コンドロイチン硫酸塩の分子量は１００００〜５００００ダルトンからなる一方で、出発化合物の分子量に応じて及び部分的に解重合した生成物の分子量が非解重合生成物の分子量よりも常に低いことを考慮して、本発明の部分的に解重合したコンドロイチン硫酸金又は銀塩は５０００〜２５０００ダルトンからなる分子量を有する。例えば、ヒアルロン酸の場合、高分子量ヒアルロン酸塩の分子量は５００００〜２５０００００ダルトンからなる一方で、出発化合物の分子量に応じて及び部分的に解重合した生成物の分子量が非解重合生成物の分子量よりも常に低いことを考慮して、本発明の部分的に解重合したヒアルロン酸金又は銀は５０００〜５００００ダルトンからなる分子量を有する。
【００５４】
好ましい実施態様では、部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩のグリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群から選択される。より好ましい実施態様では、グリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸又はヒアルロン酸である。
【００５５】
好ましい実施態様では、本発明は、部分的に解重合したグリコサミノグリカン銀塩に関する。より好ましい実施態様では、グリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群から選択される。更により好ましい実施態様では、グリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸からなる群から選択される。
【００５６】
別の好ましい実施態様では、本発明は、部分的に解重合したグリコサミノグリカン金塩に関する。より好ましい実施態様では、グリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群から選択される。更により好ましい実施態様では、グリコサミノグリカンは、コンドロイチン硫酸及びヒアルロン酸からなる群から選択される。
【００５７】
別の好ましい実施態様では、部分的に解重合したグリコサミノグリカン銀塩中の銀重量含量は、２〜１０％からなる。
【００５８】
別の好ましい実施態様では、部分的に解重合したグリコサミノグリカン金塩中の金重量含量は、２〜８％からなる。
【００５９】
別の好ましい実施態様では、本発明は、−１２．０°〜−３０．０°；より好ましくは−１２．０°〜−２０．０°、−２０．０°〜−３０．０°又は−１５．０°〜−２５．０°からなる比旋光度、６〜１０％からなる銀重量含量、５０００〜２５０００ダルトンからなる分子量及び１重量％で水に溶解すると５．５〜７．５からなるｐＨを特徴とするコンドロイチン硫酸銀に関する。
【００６０】
別の好ましい実施態様では、本発明は、−１２．０°〜−３０．０°；より好ましくは−１２．０°〜−２０．０°、−２０．０°〜−３０．０°又は−１５．０°〜−２５．０°からなる比旋光度、６〜１０％からなる金重量含量、５０００〜２５０００ダルトンからなる分子量及び１重量％で水に溶解すると５．５〜７．５からなるｐＨを特徴とするコンドロイチン硫酸金に関する。
【００６１】
別の好ましい実施態様では、本発明は、２〜８％からなる銀重量含量、５０００〜５００００ダルトンからなる分子量及び１重量％で水に溶解すると５．０〜８．０からなるｐＨを特徴とするヒアルロン酸銀に関する。
【００６２】
別の好ましい実施態様では、本発明は、２〜８％からなる金重量含量、５０００〜５００００ダルトンからなる分子量及び１重量％で水に溶解すると５．０〜８．０からなるｐＨを特徴とするヒアルロン酸金に関する。
【００６３】
本発明の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩は、薬学的又は化粧品用組成物の一部を形成し得る。したがって、本発明の別の態様は、１種又は複数の薬学的に又は化粧学的に許容される賦形剤又は担体と共に有効量の上に定義される部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩を含む薬学的又は化粧品用組成物に関する。
【００６４】
特定の実施態様では、本発明の薬学的又は化粧品用組成物は経口組成物である。
【００６５】
好ましい実施態様では、本発明の薬学的又は化粧品用組成物は局所組成物である。
【００６６】
特定の実施態様では、組成物はアルギニンを更に含む。別の特定の実施態様では、組成物は、１種又は複数の賦形剤又は担体と共に有効量の上に定義される部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩からなる。別の特定の実施態様では、組成物は、１種又は複数の賦形剤又は担体と共に有効量の上に定義される部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩及びアルギニンからなる。
【００６７】
本明細書で使用する「有効量」という表現は、その施用後に化粧学的又は治療効果を提供する生成物の量に関する。治療効果を提供する有効量（ここでは治療上有効量とも言及する）は、投与すると、向けられた疾患の症状の１つ又は複数の発症を予防する又はある程度軽減するのに十分な化合物の量である。本発明により投与される化合物の具体的な用量は、投与化合物、投与経路、治療する具体的な状態及び類似の考慮点を含む、症例を取り囲む具体的な状態に応じて変化し得る。
【００６８】
「薬学的に許容される賦形剤又は担体」という表現は、賦形剤又は担体が薬学的又は医学的使用のための組成物を調製するのに適していることを意味する。各成分は、医薬組成物の他の成分と適合性であるという意味で薬学的に許容されなければならない。各成分はまた、合理的リスク／ベネフィット関係と調和して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性又は他の問題もしくは合併症なしにヒト及び動物の組織又は器官と接触して使用するのに適していなければならない。
【００６９】
「化粧学的に許容される賦形剤又は担体」という表現は、賦形剤又は担体が化粧学的使用のための組成物を調製するのに適していることを意味する。各成分は、化粧料組成物の他の成分と適合性であるという意味で化粧学的に許容されなければならない。各成分はまた、合理的リスク／ベネフィット関係と調和して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性又は他の問題もしくは合併症なしにヒト及び動物の組織又は器官と接触して使用するのに適していなければならない。
【００７０】
本発明の局所製剤は、皮膚に直接、又は他の方法により施用、例えば、温度及び／又は圧力に感受性のマトリックス、フィルム又は体液に可溶性の固体ビヒクルなどにカプセル化することができる。
【００７１】
局所組成物の例としては、クリーム、ゲル、ヒドロゲル、包帯剤、シャンプー、染料、ペースト、軟膏、ポマード、粉末、液体もしくは半液体製剤及び類似の組成物が挙げられる。前記組成物の施用は、エアロゾルによって、例えば、噴射剤を用いて、もしくはポンプ噴霧器の場合など噴射剤を用いずに、又は液滴、ローションの形態もしくは半固体として行ってもよい。更に、適当な量の有効成分を含有した硬膏、包帯、ガーゼパッド及び類似の被覆を使用してもよい。特定の実施態様では、局所組成物は粉末又はヒドロゲル形態である。
【００７２】
特定の実施態様では、局所組成物は、１種又は複数の薬学的に許容される賦形剤又は担体と共に有効量の前に定義される部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩を含む医薬組成物である。
【００７３】
別の特定の実施態様では、局所組成物は、１種又は複数の化粧学的に許容される賦形剤又は担体と共に有効量の前に定義される部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩を含む化粧料組成物である。
【００７４】
上に定義される局所組成物は、保湿剤、皮膚軟化薬、乳化剤、増粘剤、湿潤剤、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、保存料又はこれらの混合物を含む、局所投与に適当な医薬又は化粧料賦形剤又は担体を含む。使用する賦形剤又は担体は、皮膚に対する親和性を有し、耐容性が良好で、安定であり、所望の稠度及び施用の容易さをもたらすのに適した量で使用される。
【００７５】
本発明は特に局所及び経口製剤に関するが、頬側、耳、目、眼科用及び注射用投与などの上記の塩の他の施用も本発明の一部を形成する。更に、本発明はまた、医療器具に適用するため又はコーティング組成物に組み込むための上記の塩の組成物に関する。
【００７６】
本発明の塩は、創傷、瘢痕及び熱傷の治療に有用である。これらの塩はまた、皮膚の微生物感染症及び炎症性プロセス（例えば、ざ瘡及び乾癬など）の治療及び／又は予防に有用である。
【００７７】
そのため、本発明の別の態様は、創傷、瘢痕及び熱傷を治療するための医薬品を調製するための上記の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩の使用に関する。前記態様は、創傷、瘢痕及び熱傷の治療に使用するための上記の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩として製剤化することもできる。薬学的に許容される賦形剤又は担体と共に治療上有効量の上記の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩をヒトを含む患者に投与する工程を含む、創傷、瘢痕及び熱傷を治療する方法も本発明の一部である。
【００７８】
本発明の別の態様は、皮膚の微生物感染症及び炎症性プロセス（ざ瘡及び乾癬を含む）を治療及び／又は予防するための医薬品を調製するための上記の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩の使用に関する。前記態様は、皮膚の微生物感染症及び炎症性プロセス（ざ瘡及び乾癬を含む）の治療及び／又は予防に使用するための上記の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩として製剤化することもできる。薬学的に許容される賦形剤又は担体と共に治療上有効量の上記の部分的に解重合したグリコサミノグリカン金属塩をヒトを含む患者に投与する工程を含む、皮膚の微生物感染症及び炎症性プロセス（ざ瘡及び乾癬を含む）を治療及び／又は予防する方法も本発明の一部である。
【００７９】
本発明の塩はまた、特に、保湿剤及び皮膚再生剤として、皮膚ケアのための化粧品分野で有用である。特定の実施態様では、皮膚ケアは、以下の症状の少なくとも１つの改善を含む：肌荒れ（roughness）、カサカサ肌（flakiness）、つっぱり（tightness）、皮膚の乾燥（dryness）、あかぎれ（chapping）、弾力欠如及び老化。
【００８０】
特定の実施態様では、本発明の塩は、上に示される薬学的及び化粧学的使用にアルギニンと共に使用される。
【００８１】
明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって、「含む」という単語及びこの単語の変形は、他の技術的特徴、添加剤、成分又は工程を排除することを意図されていない。更に、「含む」という用語は、「からなる」の場合を包含する。本発明の追加の目的、利点及び特徴は、明細書を検討すると当業者に明らかになる、又は本発明の実施により習得することができる。以下の実施例は実例として提供され、これらは本発明を限定するものとなることを意図されていない。更に、本発明は、本明細書に記載する特定の及び好ましい実施態様の全ての可能な組合せを網羅する。
【実施例】
【００８２】
実施例１：部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀
ＫＭｎＯ４を用いた解重合
２５０００及び４００００ダルトンからなる分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム（２．５ｇ）を攪拌下で水（２５ｍＬ）に溶解した。総体積を測定し、ＮａＯＨ３０％（重量／体積）を用いてｐＨを８．５に調整した。いったんｐＨを調整したら、これを８５℃の温度に加熱した。ＫＭｎＯ４を攪拌下でゆっくり添加した（出発グリコサミノグリカンの量に対して２０重量％）。これをこの温度で１時間攪拌下に維持した。溶液を０．８ミクロンのフィルターを通して濾過した。
【００８３】
ＮａＯＨを用いた解重合
ＮａＯＨ３０％（重量／体積）を用いて、前の工程で得られた溶液のｐＨを１１に調整した。得られた溶液の体液を測定し、（総体積に対して）１．５％のＮａＣｌを溶解するまで攪拌下で添加した。温度を４５℃に調整した。これをこの温度で１２時間攪拌下に維持した。
【００８４】
Ｈ２Ｏ２を用いた解重合
前の工程で得られた溶液を、２５℃の温度に達するまで冷却させ、総体積を測定した。ｐＨが１０〜１１の間であることを確認した。総体積に対して１．５％（重量／体積）のＨ２Ｏ２を攪拌下でゆっくり添加した。これをこの温度で１時間攪拌下に維持した。溶液を０．８ミクロンのフィルターを通して濾過した。酢酸を用いてｐＨを６に調整した（濾過液）。
【００８５】
溶媒を用いた沈殿
前の工程で得られた濾過液の総体積を測定した。（前に測定した体積に対して）３倍体積のエタノールを攪拌下でゆっくり添加した。これを１５分間攪拌した。攪拌を停止し、３時間（完全な沈殿まで）静止させた。
【００８６】
漂白
得られた沈殿をデカンテーションにより分離し、残留溶媒の最大限の除去を確保した。いったん沈殿を分離したら、これを溶解の最初の工程と同量の水で溶解した。これを完全に溶解するまで攪拌した。いったん溶解したら、Ｈ２Ｏ２３０％（重量／体積）を攪拌下でゆっくり添加した。添加した量は、最初に使用したグリコサミノグリカンの重量の５０重量％の量であった（１．２５ｇのＨ２Ｏ２）。これを室温で１０分間攪拌した。
【００８７】
銀塩を用いたイオン交換
硝酸銀０．２４ｇを攪拌下でゆっくり添加した。これを５分間（完全な溶解及び均質化まで）攪拌した。
【００８８】
溶媒を用いた沈殿
前の工程で得られた溶液の総体積を測定した。（前に測定した体積に対して）３倍体積のエタノールを攪拌下でゆっくり添加した。これを１５分間攪拌させた。攪拌を停止し、これを３時間静止させた。
【００８９】
脱水及び乾燥
沈殿をデカンテーションにより分離し、残留溶媒の最大限可能な除去を確保した。いったん沈殿を分離したら、エタノールを沈殿上に添加した。添加すべき量は、最初に使用したグリコサミノグリカンの量×６＝添加すべき溶媒の量であった。これを完全に均質化するまで激しく攪拌した。これを２０分間攪拌した。攪拌を停止し、これを２時間静止させた。沈殿をデカンテーションにより分離し、その後濾過して、残留溶媒の最大限の除去を確保した。いったん沈殿を分離したら、エタノールを沈殿上に添加した。添加する量は、最初に使用したグリコサミノグリカンの量×６＝添加する溶媒の量であった。これを完全に均質化するまで激しく攪拌した。これを２０分間攪拌した。攪拌を停止し、これを最低２時間静止させた。沈殿を濾過により分離した。残留溶媒の最大限の除去を確認した。いったん沈殿を分離したら、これを、生成物の水分が１０％未満になるまで７５℃の温度でオーブンで乾燥させ、二重袋に入れた。
【００９０】
実施例２：部分的に解重合したヒアルロン酸銀
１００００００ダルトンより大きい分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム（２ｇ）の水（１４５ｍＬ）中溶液から始めて、実施例１に記載する方法と同様に所望の生成物を得た。イオン交換工程に添加した量は硝酸銀０．１３ｇであった。
【００９１】
実施例３：部分的に解重合したコンドロイチン硫酸金
２５０００及び４００００Ｄａからなる分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム１ｇの水（１０ｍＬ）中溶液から始めて、硝酸銀を塩化金（０．１２ｇ）で置換することにより、実施例１に記載する方法と同様に所望の生成物を得た。
【００９２】
実施例４：部分的に解重合したヒアルロン酸金
１００００００ダルトンより大きい分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム（２ｇ）の水（１４５ｍＬ）中溶液から始めて、硝酸銀を塩化金（０．１６ｇ）で置換することにより、実施例１に記載する方法と同様に所望の生成物を得た。
【００９３】
比較実施例５：部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（漂白剤：メタ重亜硫酸ナトリウム）
２５０００及び４００００Ｄａからなる分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム１ｇの水（１０ｍＬ）中溶液から始めて、漂白工程の過酸化水素をメタ重亜硫酸ナトリウム（０．５ｇ）で置換することにより、実施例１に記載する方法と同様に所望の生成物を得た。
【００９４】
比較実施例６：部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（漂白剤：チオ硫酸ナトリウム）
２５０００及び４００００Ｄａからなる分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム１ｇの水（１０ｍＬ）中溶液から始めて、漂白工程の過酸化水素をチオ硫酸ナトリウム（０．１ｇ）で置換することにより、実施例１に記載する方法と同様に所望の生成物を得た。
【００９５】
比較実施例７：部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（漂白工程なし）
実施例１に記載する方法と同様であるが、ｐＨ７でＨ２Ｏ２を用いた解重合工程を行い、漂白工程を行わずに所望の生成物を得た。
【００９６】
比較実施例８：高分子量コンドロイチン硫酸銀
２５０００と４００００ダルトンとの間の分子量を有するコンドロイチン硫酸ナトリウム（１ｇ）を攪拌下で水（１０ｍＬ）に溶解した。総体積を測定し、ＮａＯＨ３０％（重量／体積）を用いてｐＨを６に調整した。硝酸銀０．１ｇを攪拌下でゆっくり添加した。これを５分間（完全な溶解及び均質化まで）攪拌した。総体積を測定した。（前に測定した体積に対して）２倍体積のエタノールを攪拌下でゆっくり添加した。これを１０分間攪拌させた。攪拌を停止し、これを３時間静止させた。
【００９７】
比較実施例９：高分子量ヒアルロン酸銀
１００００００ダルトンより大きい分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム（２ｇ）を攪拌下で水（１４５ｍＬ）に溶解した。総体積を測定し、ＮａＯＨ３０％（重量／体積）を用いてｐＨを６に調整した。硝酸銀０．１ｇを攪拌下でゆっくり添加した。これを５分間（完全な溶解及び均質化まで）攪拌した。総体積を測定した。（前に測定した体積に対して）２倍体積のエタノールを攪拌下でゆっくり添加した。これを１０分間攪拌させた。攪拌を停止し、これを３時間静止させた。
【００９８】
安定性試験
実施例１及び比較実施例５〜８で得られた沈殿生成物を暗所（戸棚の中）で１時間保護した。この時、生成物の目視検査を行い、生成物を再度暗所で保護した。１２時間後、生成物の目視をもう一度行った。次いで、生成物を環境光に露光した。５時間後、生成物の目視を行った。
【００９９】
結果は、解重合工程及び過酸化水素を用いた漂白工程を含む実施例１の生成物について、色が、暗所で１時間後と暗所で１２時間後の両方で白色であり、環境光への露光の５時間後に白色のままであることを示した。解重合工程及びメタ重亜硫酸ナトリウムを用いた漂白工程を含む比較実施例５の生成物の場合、色は、暗所で１時間後赤味を帯びており、暗所で１２時間後赤味を帯びた〜黒色であり、環境光への露光の５時間後に黒色であった。解重合工程及びチオ硫酸ナトリウムを用いた漂白工程を含む比較実施例６の生成物の場合、色は、暗所で１時間後と暗所で１２時間後の両方で黒色であり、環境光への露光の５時間後に黒色のままであった。解重合工程を含むが漂白工程を含まない比較実施例７の生成物の場合、色は、暗所で１時間後及び暗所で１２時間後白色であるが、環境光への露光の５時間後に暗赤色になった。最後に解重合工程も漂白工程を含まない比較実施例８の生成物について、色は、暗所で１時間後及び暗所で１２時間後白色であるが、環境光への露光の５時間後に暗赤色になった。
【０１００】
得られた結果は、本発明の生成物（実施例１）が、特に、中国特許第１６８７１４１号明細書に記載されている先行技術の生成物（比較実施例８）と比較して、環境光に露光すると５時間安定なままであるので、安定性における重要な改善を有することを示している。他方、部分的に解重合した塩の調製方法の条件のいずれかを変化させると（例えば、漂白剤を変える場合又は漂白工程を行わない場合）、得られる生成物は５時間の期間で光に対して安定ではない。
【０１０１】
抗菌活性の試験
この試験の目的は、微生物大腸菌及び黄色ブドウ球菌への抗菌活性を確認することであった。この目的のために、以下の生成物の水溶液を別々に調製した：
−２５０００と４００００ダルトンとの間の分子量を有する海由来の商業的に入手可能なコンドロイチン硫酸ナトリウム。欧州薬局方（０１／２００９：２０６４）に記載されている生成物（比較実施例１０）；
−高分子量コンドロイチン硫酸銀（比較実施例８）；
−部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（実施例１）；
−高分子量ヒアルロン酸銀（比較実施例９）；
−部分的に解重合したヒアルロン酸銀（実施例２）；
−ＡｇＮＯ３（比較実施例１１）；
−部分的に解重合したコンドロイチン硫酸金（実施例３）；
−部分的に解重合したヒアルロン酸金（実施例４）；及び
−２５０００と４００００との間の分子量を有する海由来の商業的に入手可能なコンドロイチン硫酸ナトリウム１ｇとＡｇＮＯ３０．１ｇの混合物（比較実施例１２）。
【０１０２】
コンドロイチン硫酸由来の生成物を１０％（重量／体積）で溶解した。ヒアルロン酸由来の生成物を１．４％（重量／体積）で溶解した。生成物の残りについては、完全に溶解するまで水を添加した。
【０１０３】
生成物の各々、並びに対照（水）を、黄色ブドウ球菌及び大腸菌を含むプレートに塗布した。生成物を黄色ブドウ球菌及び大腸菌のための標準条件下でインキュベートした。結果を輪紋又はハロー直径で表し、これは以下のとおりとなった：比較実施例１０については、これは大腸菌で０及び黄色ブドウ球菌で０であった；比較実施例８については、これは大腸菌で７及び黄色ブドウ球菌で８であった；実施例１については、これは大腸菌で７及び黄色ブドウ球菌で６であった；比較実施例９については、これは大腸菌で８及び黄色ブドウ球菌で８であった；実施例２については、これは大腸菌で７及び黄色ブドウ球菌で６であった；比較実施例１１については、これは大腸菌で８及び黄色ブドウ球菌で６であった；実施例３については、これは大腸菌で９及び黄色ブドウ球菌で８であった；対照については、これは大腸菌で０及び黄色ブドウ球菌で０であった；実施例４については、これは大腸菌で４及び黄色ブドウ球菌で６であった；そして比較実施例１２については、これは大腸菌で７及び黄色ブドウ球菌で５であった。
【０１０４】
得られた結果により、金（実施例３及び４）並びに銀（実施例１及び２）を用いた本発明の生成物が硝酸銀と類似の抗菌活性を有することが確認された。
【０１０５】
毒性学及び熱傷への有効性の予備試験
この試験の目的は、毒性（局所）及び熱傷への有効性を評価することであった。刺激、炎症及び／又は暗化を含む、異なる生成物が引き起こすおそれがある副作用を、目視及び写真により評価した。評価した生成物は以下であった：
−２５０００と４００００ダルトンとの間の分子量を有する海由来の商業的に入手可能なコンドロイチン硫酸ナトリウム。欧州薬局方（０１／２００９：２０６４）に記載されている生成物（比較実施例１０）；
−部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（実施例１）；
−保湿クリームに溶解／混合した部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（実施例１ｃ）；
−部分的に解重合したヒアルロン酸銀（実施例２）；
−ＡｇＮＯ３（比較実施例１１）；及び
−部分的に解重合したコンドロイチン硫酸金（実施例３）。
【０１０６】
コンドロイチン硫酸由来の生成物を１０％（重量／体積）で水に溶解した。ヒアルロン酸由来の生成物を１．４％（重量／体積）で溶解した。硝酸銀については、完全に溶解するまで水を添加した。実施例１ｃの生成物を保湿クリームと混合した。
【０１０７】
全生成物を、「腕の上部領域」（上腕二頭筋）及び腹部（肋骨の領域）に施用した。実施例１、２及び３の生成物を、「腕の下部領域」にも施用した。施用後、以下の頻度で目視を行った：１０分、３０分、６０分、８時間、３日、４日、７日及び９日。
【０１０８】
処理領域を異なる種の光（太陽、白熱電球、蛍光）に１０分間露光した。いずれの場合も暗化は観察されなかった。腹部を１０分後に光から保護した。「腕の上部領域」を最高８時間まで露光下のままとした。「腕の下部領域」は環境光に連続露光した。
【０１０９】
得られた結果によると、比較実施例１０の生成物の施用では、１０分及び３０分で、「腕の上部領域」と腹部の両方にカラメル化した外観が観察された。６０分、８時間、２４時間、４８時間、３日、４日、７日及び９日で行われた対照では、部位のいずれにも（「腕の上部領域」／腹部）関連する結果は観察されなかった。
【０１１０】
実施例１、１ｃ、２及び３の生成物の施用は、１０分、３０分、６０分、８時間、２４時間、４８時間、３日、４日、７日及び９日で行われた目視のいずれでも、生成物を施用した領域のいずれの関連する挙動も示さなかった。
【０１１１】
比較実施例１１の生成物の施用では、１０分及び３０分で、「腕の上部領域」と腹部の両方に刺激が観察された。６０分後、生成物を施用した部位に刺激、掻痒感及び灼熱感があった。８時間後、刺激、掻痒感、灼熱感及びハローもしくは輪紋があった。３日目の後、熱傷の輪紋の直径の増加が観察された。この時点で、実施例１の生成物を腹部の熱傷に施用した。実施例１の生成物の１日２回の施用を熱傷に次の３日間行った。４日目の後、熱傷の輪紋の直径の増加が「腕の上部領域」で観察され、実施例１で処理した熱傷のほぼ完全な消失が腹部で観察された。７日目の後、熱傷の輪紋の直径が「腕の上部領域」で増加した。この時点で、実施例２の生成物を「腕の上部領域」の熱傷に施用した。実施例２の生成物の１日３回の施用を熱傷に行った。９日目の後、「腕の上部領域」の実施例２の生成物で処理した熱傷はほぼ完全に消失した。
【０１１２】
得られた結果と一致して、及び硝酸銀とは異なり、本発明の実施例１、１ｃ、２及び３の生成物は、暗化、刺激、掻痒感又は炎症の問題を有さなかった。更に、本発明の実施例１及び２の生成物を用いて行った有効性の試験により、これらが熱傷又は創傷を有する皮膚表面の治療の改善をもたらすことが確認された。
【０１１３】
急性経口毒性学試験
部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（実施例１）の急性経口毒性学試験を行って、経口毒性を評価及び対応する分類（ＧＨＳ、化学物質及び混合物に関する世界調和分類システム）を同定した。試験はＯＥＣＤガイドライン第４２０号（固定用量）にしたがって行った。このガイドラインにしたがって解釈された結果は、生成物、部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀が、２０００／ｋｇを超える半数致死経口用量（ＬＤ５０）を有し、ＧＨＳ分類（化学物質及び混合物に関する世界調和分類システム）５、すなわち、あまり毒性のないグループに含まれ得ることを示した。
【０１１４】
吸収試験
本発明の解重合化合物及び非解重合化合物の吸収についての比較試験を行った。これを行うために、部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（実施例１）及び高分子量コンドロイチン硫酸銀（比較実施例８）を同じ濃度（１０％（重量／体積））で水に別々に溶解した。いったん生成物が完全に溶解したら、実施例１の生成物の粘度が比較実施例８の生成物の粘度よりも低いことが認められた。各生成物１０ｍＬをセルロース紙に塗布した。実施例１の生成物が比較実施例８の生成物よりも速く吸収されることが認められた。このことを考慮して、吸収を目的に、セルロース紙での挙動を、有機組織（皮膚）に「外挿する」ことができ、この結果で、本発明の解重合生成物が非解重合生成物よりも優れた吸収を有すると結論づけられる。
【０１１５】
粘度試験
試験の目的は、得られた部分的に解重合した生成物の粘度が、出発生成物（非解重合）の粘度よりも低いことを確認することであった。評価した生成物は以下であった：
−高分子量コンドロイチン硫酸銀（比較実施例８）；
−部分的に解重合したコンドロイチン硫酸銀（実施例１）；
−高分子量ヒアルロン酸銀（比較実施例９）及び
−部分的に解重合したヒアルロン酸銀（実施例２）。
【０１１６】
以下のパラメータを評価した：溶解時間、外観（視覚法）及び移動時間。
【０１１７】
各生成物０．０１ｇを長さ１１．５ｃｍ及び直径１ｃｍの試験管内の蒸留水０．５ｍＬに別々に溶解した。いったん生成物が完全に溶解したら、管の位置を反転させて移動時間を調べた。
【０１１８】
溶解制御：部分的に解重合した生成物は１０秒未満で溶解したが、非解重合生成物は溶解するのに３分超かかった。そのため、部分的に解重合した生成物の溶解は非解重合生成物よりも速く、このことが部分的に解重合した生成物に容易に適用できる及び操作できるという利点を与えていると結論づけられる。
【０１１９】
外観制御：管の位置を反転させると（１８０°回転）、部分的に解重合した生成物の溶液の粘度が非解重合生成物の溶液よりも明らかに低いことが視覚的に認識された。
【０１２０】
移動制御：管の位置を反転させると（１８０°回転）、移動時間が以下の結果で測定された：比較実施例８の移動時間は３０秒であった；実施例１の移動時間は１秒であった；比較実施例９の移動時間は５分であった；そして最後に、実施例２の移動時間は１秒であった。
【０１２１】
粘度と分子量との間の関係を考慮すると、部分的に解重合した生成物の分子量が非解重合生成物よりも実質的に低いと定量的に結論づけられる。グリコサミノグリカンの分子量を有する測定に使用する方法の１つは、固有粘度の確認及びマルク−ホウインク定数／比による分子量の決定による。
【０１２２】
引用文献
−米国特許出願公開第２０１０３１７６１７号明細書
−中国特許１６８７１４１号明細書
−欧州特許１８７８７５４号明細書
−国際公開第８７０５５１７号パンフレット
【国際調査報告】
2015507070.tif 000004
2015507070.tif 000005