(57)【要約】  本発明は、過分極13Ｃ−乳酸塩を含むイメージング媒体を用いる13Ｃ−ＭＲ検出方法及び前記方法で使用するための、過分極13Ｃ1−乳酸塩を含むイメージング媒体に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
過分極13Ｃ−乳酸塩を含むイメージング媒体を用いる13Ｃ−ＭＲ検出方法。
【請求項２】
13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩及び13Ｃ−アラニンの信号、好ましくは13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号が検出される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記信号を用いて代謝プロファイルが生成される、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
当該方法がインビボ13Ｃ−ＭＲ検出方法であり、前記代謝プロファイルがヒト又はヒト以外の動物の生体の代謝プロファイルである、請求項３記載の方法。
【請求項５】
当該方法がインビトロ13Ｃ−ＭＲ検出方法であり、前記代謝プロファイルが細胞培養物中の細胞、身体試料、エクスビボ組織又は単離器官の代謝プロファイルである、請求項３記載の方法。
【請求項６】
13Ｃ1−乳酸ナトリウム又は13Ｃ1−乳酸、トリチルラジカル及び任意には常磁性金属イオンを含んでなる組成物。
【請求項７】
前記13Ｃ1−乳酸ナトリウム又は13Ｃ1−乳酸が13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム又は13Ｃ1−Ｌ−乳酸である、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
前記常磁性金属イオンが存在し、Ｇｄ3+を含む常磁性キレートである、請求項６又は請求項７記載の組成物。
【請求項９】
前記トリチルラジカルが下記式（１）のトリチルラジカルである、請求項６乃至請求項８のいずれか１項記載の組成物。
【化１】
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（式中、
Ｍは水素又は１当量の陽イオンを表し、
Ｒ１は同一又は異なるものであって、１以上のヒドロキシル基で任意に置換された直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ6−アルキル基或いは−(ＣＨ2)n−Ｘ−Ｒ２基（式中、ｎは１、２又は３であり、ＸはＯ又はＳであり、Ｒ２は１以上のヒドロキシル基で任意に置換された直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ4−アルキル基である。）を表す。）
【請求項１０】
動的核分極で使用するための、請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１１】
過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウム又は過分極13Ｃ1−乳酸、トリチルラジカル及び任意には常磁性金属イオンを含んでなる組成物であって、当該組成物が請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の組成物の動的核分極によって得られる、組成物。
【請求項１２】
過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウム、好ましくは13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムを含んでなるイメージング媒体。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法で使用するための、請求項１２記載のイメージング媒体。
【請求項１４】
過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過分極13Ｃ−乳酸塩を含むイメージング媒体を用いる13Ｃ−ＭＲ検出方法及び前記方法で使用するための、過分極13Ｃ1−乳酸塩を含むイメージング媒体に関する。
【背景技術】
【０００２】
磁気共鳴（ＭＲ）イメージング（ＭＲＩ）は、非侵襲的にかつ患者及び医療従事者を潜在的に有害な放射線（例えばＸ線）に暴露することなく患者の身体又はその一部の画像を得ることができるので、医師にとって特に魅力的なイメージング技法となっている。高画質の画像並びに良好な空間的及び時間的分解能が得られるので、ＭＲＩは軟組織及び器官の好適なイメージング技法である。
【０００３】
ＭＲＩは、ＭＲ造影剤を使用しても使用しなくても実施できる。しかし、コントラスト増強ＭＲＩでは、通常ははるかに微小な組織変化の検出が可能となり、したがってそれは例えば微小な腫瘍や転移のような初期組織変化を検出するための強力なツールとなる。
【０００４】
ＭＲＩでは、数種類の造影剤が使用されてきた。水溶性の常磁性金属キレート剤（例えば、Ｏｍｎｉｓｃａｎ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）のようなガドリニウムキレート剤）は、広く使用されているＭＲ造影剤である。これらは、低分子量であるため、血管系に投与した場合に細胞外スペース（即ち、血液及び間質組織）中に急速に分布する。これらはまた、比較的速やかに体外に排出される。
【０００５】
他方、血液プールＭＲ造影剤（例えば超常磁性酸化鉄粒子）は、長時間にわたって血管系内に保持される。これらは、肝臓内のコントラストを高めるばかりでなく、毛細血管の透過性異常（例えば、腫瘍血管形成の結果として生じる腫瘍中の「漏出性」毛細血管壁）を検出するためにも極めて有用であることが判明している。
【０００６】
国際公開第９９／３５５０８号には、高Ｔ1剤の過分極溶液をＭＲＩ造影剤として使用する患者のＭＲ検査方法が開示されている。「過分極」という用語は、高Ｔ1剤中に存在するＮＭＲ活性核（即ち、非ゼロ核スピンを有する核、好ましくは13Ｃ−又は15Ｎ−核）の核分極を増強させることを意味する。ＮＭＲ活性核の核分極を増強させると、これらの核の励起核スピン状態と基底核スピン状態との母集団差が顕著に増加し、それによってＭＲ信号強度が１００倍以上に増幅される。過分極した13Ｃ及び／又は15Ｎ濃縮高Ｔ1剤を使用する場合、13Ｃ及び／又は15Ｎの天然存在比は無視できるほどに低いのでバックグラウンド信号からの干渉は本質的に存在せず、したがって画像コントラストは有利に高くなる。通常のＭＲＩ造影剤とこれらの過分極高Ｔ1剤との主な相違点は、前者ではコントラストの差が体内の水プロトンの緩和時間に影響を及ぼすことで誘起されるのに対し、後者の種類の薬剤は得られる信号がもっぱら薬剤に由来しているので非放射性トレーサーと見なし得ることである。
【０００７】
国際公開第９９／３５５０８号には、非内因性及び内因性化合物を含め、ＭＲイメージング剤として使用可能な各種の高Ｔ1剤が開示されている。後者の例として、正常な代謝サイクル中の中間体が挙げられ、これらは代謝活性のイメージングのために好ましいと述べられている。代謝活性のインビボイメージングにより、組織の代謝状態に関する情報を得ることができ、前記情報は例えば健常組織と罹患組織とを識別するために使用できる。
【０００８】
例えば、ピルビン酸塩はクエン酸回路中で役割を果たす化合物であり、過分極13Ｃ−ピルビン酸塩からその代謝産物である過分極13Ｃ−乳酸塩、過分極13Ｃ−重炭酸塩及び過分極13Ｃ−アラニンへの転化は人体内における代謝過程のインビボＭＲ研究のために使用できる。過分極13Ｃ−ピルビン酸塩は、例えば、国際公開第２００６／０１１８１０号に詳述されているようなインビボ腫瘍イメージングのためのＭＲイメージング剤、及び国際公開第２００６／０５４９０３号に詳述されているようにＭＲイメージングで心筋組織の生存度を評価するためのＭＲイメージング剤として使用できる。
【０００９】
過分極13Ｃ−ピルビン酸塩からその代謝産物である過分極13Ｃ−乳酸塩、過分極13Ｃ−重炭酸塩及び過分極13Ｃ−アラニンへの代謝転化は、出発化合物（即ち、過分極13Ｃ1−ピルビン酸塩）及びその代謝産物からの信号検出を可能にするのに十分速いことが判明しているので、人体内における代謝過程のインビボＭＲ研究のために使用できる。アラニン、重炭酸塩及び乳酸塩の量は、検査対象である組織の代謝状態に依存する。過分極13Ｃ−乳酸塩、過分極13Ｃ−重炭酸塩及び過分極13Ｃ−アラニンのＭＲ信号強度は、これらの化合物の量及び検出時における分極の残存率に関係しているので、過分極13Ｃ−ピルビン酸塩から過分極13Ｃ−乳酸塩、過分極13Ｃ−重炭酸塩及び過分極13Ｃ−アラニンへの転化をモニターすることにより、非侵襲的なＭＲイメージング又はＭＲ分光法を用いることでヒト又はヒト以外の動物の体内における代謝過程をインビボで調べることが可能である。
【００１０】
様々なピルビン酸塩代謝産物に由来するＭＲ信号振幅は、組織の種類に応じて変化する。アラニン、乳酸塩、重炭酸塩及びピルビン酸塩によって形成される特有の代謝ピークパターンは、検査対象である組織の代謝状態に関するフィンガープリントとして使用できる。
【００１１】
しかし、インビボイメージング剤として好適な過分極13Ｃ−ピルビン酸塩の製造には問題がないわけではない。過分極13Ｃ−ピルビン酸塩は、好ましくは、国際公開第２００６／０１１８０９号（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす）に詳述されているような13Ｃ−ピルビン酸又は13Ｃ−ピルビン酸塩の動的核分極（ＤＮＰ）によって得られる。
【００１２】
13Ｃ−ピルビン酸は凍結／冷却時に結晶化しないので、13Ｃ−ピルビン酸の使用は分極プロセスを簡略化する（結晶化は低い動的核分極しかもたらさないか或いは分極を全くもたらさない）。その結果、ＤＮＰプロセス用の組成物を調製するために溶媒及び／又はガラス形成剤は不要であり、したがって高度に濃縮された13Ｃ−ピルビン酸試料を使用することができる。しかし、そのｐＨは低いので、強ピルビン酸中で安定なＤＮＰ剤を使用する必要がある。さらに、分極後の固体過分極13Ｃ−ピルビン酸を溶解して13Ｃ−ピルビン酸塩に転化させるために強塩基が必要である。強ピルビン酸及び強塩基はいずれも、化合物が接触する材料（例えば、溶解媒質溜め、チューブなど）の注意深い選択を要求する。
【００１３】
別法として、13Ｃ−ピルビン酸塩をＤＮＰプロセスで使用することもできる。残念ながら、13Ｃ−ピルビン酸ナトリウムは凍結／冷却時に結晶化し、そのためにガラス形成剤を添加することが必要である。過分極13Ｃ−ピルビン酸塩をインビボイメージング剤として使用するつもりであれば、ピルビン酸塩及びガラス形成剤を含む組成物中のピルビン酸塩濃度は好ましくない程度に低い。その上、インビボでの使用のためにはガラス形成剤を除去することも必要である。
【００１４】
したがって、ＤＮＰのために使用できる好ましい塩は、国際公開第２００７／１１１５１５号に詳述されているように、ＮＨ4+、Ｋ+、Ｒｂ+、Ｃｓ+、Ｃａ2+、Ｓｒ2+及びＢａ2+からなる群からの無機陽イオン、好ましくはＮＨ4+、Ｋ+、Ｒｂ+又はＣｓ+、さらに好ましくはＫ+、Ｒｂ+又はＣｓ+、最も好ましくはＣｓ+を含む13Ｃ−ピルビン酸塩である。これらの塩の多くは商業的に入手できず、別途に合成する必要がある。さらに、過分極13Ｃ−ピルビン酸塩をインビボＭＲイメージングで使用するならば、ＮＨ4+、Ｋ+、Ｒｂ+、Ｃｓ+、Ｃａ2+、Ｓｒ2+及びＢａ2+からなる群からの無機陽イオンを、Ｎａ+又はメグルミンのような生理学的許容性が非常に高い陽イオンと交換することが好ましい。したがって、固体過分極13Ｃ−ピルビン酸塩の液化後に追加の段階が必要となり、その間に分極が減衰する。
【００１５】
他の好ましい塩は、国際公開第２００７／０６９９０９号に詳述されているように、有機アミン又はアミノ化合物の13Ｃ−ピルビン酸塩（好ましくは、ＴＲＩＳ−13Ｃ1−ピルベート又はメグルミン−13Ｃ1−ピルベート）である。これらの塩もまた、別途に合成する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】国際公開第９９／３５５０８号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００６／０１１８１０号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００６／０５４９０３号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００６／０１１８０９号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００７／１１１５１５号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００７／０６９９０９号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００７／０６４２２６号パンフレット
【特許文献８】国際公開第９２／０１９３７号パンフレット
【特許文献９】国際公開第２００８／０２６９３７号パンフレット
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Chen A. P. et al, Magnetic Resonance Imaging, Vol.26, No.6,2008, pp.721-726
【発明の概要】
【００１８】
我々はこのたび、ＭＲイメージング及び／又はＭＲ分光法におけるイメージング剤として、過分極13Ｃ−ピルビン酸塩の代わりに過分極13Ｃ−乳酸塩を使用できることを見出した。
【００１９】
13Ｃ−乳酸ナトリウムは、冷却／凍結時に結晶化しないので、ＤＮＰ用として直接使用できる商業的に入手可能な化合物である。これは試料中にガラス形成剤及び／又は多量の溶媒を使用する必要性を排除するので、高度に濃縮された試料を調製してＤＮＰプロセスで使用することができる。さらに、13Ｃ−乳酸ナトリウムはｐＨ中性であり、したがって各種のＤＮＰ剤が使用できる。乳酸塩は内因性化合物であり、ヒト血液中におけるその濃度はかなり高く（１〜３ｍＭ）、局所濃度は１０ｍＭ以上である。したがって、乳酸塩は許容性が非常に高く、過分極13Ｃ−乳酸塩をイメージング剤として使用することは安全性の観点から有利である。
【００２０】
かくして、第１の態様では、本発明は過分極13Ｃ−乳酸塩を含むイメージング媒体を用いる13Ｃ−ＭＲ検出方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、マウス（全身）の13Ｃ−ＭＲ分光イメージングで検出された13Ｃ1−乳酸塩、13Ｃ1−アラニン、13Ｃ1−ピルビン酸塩及び13Ｃ1−重炭酸塩の信号強度を経時的に示している。
【図２】図２は、13Ｃ1−乳酸塩（１８３．７ｐｐｍ）、13Ｃ1−アラニン（１７７．０ｐｐｍ）及び13Ｃ1−ピルビン酸塩（１７１．６ｐｐｍ）の信号強度を経時的に示す３０の13Ｃ−ＭＲ走査例の重ね合わせプロットである。13Ｃ1−重炭酸塩の信号強度は表示ｐｐｍ範囲の外部にあり、したがって示されていない。
【図３】図３は、マウス肝臓の13Ｃ−ＭＲ分光イメージングで検出された13Ｃ1−乳酸塩、13Ｃ1−アラニン及び13Ｃ1−ピルビン酸塩の信号強度を経時的に示している。
【図４】図４は、13Ｃ1−乳酸塩（１８３．７ｐｐｍ）、13Ｃ1−アラニン（１７７．０ｐｐｍ）、13Ｃ1−ピルビン酸塩（１７１．６ｐｐｍ）及び13Ｃ1−重炭酸塩（３０．０ｐｐｍ）の信号強度を示す２０の独立した13Ｃ−ＭＲ走査例の総合13Ｃ−ＭＲスペクトルである。
【図５】図５は、マウス心臓の13Ｃ−ＭＲ分光イメージングで検出された13Ｃ1−乳酸塩、13Ｃ1−アラニン、13Ｃ1−ピルビン酸塩及び13Ｃ1−重炭酸塩の信号強度を経時的に示している。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
「13Ｃ−ＭＲ検出」という用語は、13Ｃ−ＭＲイメージング又は13Ｃ−ＭＲ分光法或いは13Ｃ−ＭＲイメージングと13Ｃ−ＭＲ分光法の組合せ（即ち、13Ｃ−ＭＲ分光イメージング）を意味する。この用語はさらに、様々な時点における13Ｃ−ＭＲ分光イメージングも意味する。
【００２３】
「イメージング媒体」という用語は、ＭＲ活性剤（即ち、イメージング剤）として過分極13Ｃ−乳酸塩を含む液体組成物を意味する。本発明に係るイメージング媒体は、13Ｃ−ＭＲ検出方法におけるイメージング媒体として使用できる。
【００２４】
本発明の方法で使用するイメージング媒体は、インビボ13Ｃ−ＭＲ検出（即ち、ヒト又はヒト以外の動物の生体内での13Ｃ−ＭＲ検出）用のイメージング媒体として使用できる。さらに、本発明の方法で使用するイメージング媒体は、例えば、細胞培養物、身体試料（例えば尿、唾液又は血液）、エクスビボ組織（例えば、生検で得られるエクスビボ組織）又は単離器官中でのインビトロ13Ｃ−ＭＲ検出用のイメージング媒体としても使用できる。
【００２５】
「乳酸塩」及び「乳酸」という用語は、特記しない限り、Ｌ−異性体（Ｌ−乳酸塩、Ｌ−乳酸）、Ｄ−異性体（Ｄ−乳酸塩、Ｄ−乳酸）並びにＬ−及びＤ−異性体の混合物（Ｄ／Ｌ−乳酸塩、Ｄ／Ｌ−乳酸）（例えば、Ｄ−及びＬ−異性体のラセミ混合物）を意味する。Ｄ−乳酸塩及びＬ−乳酸塩は、異なる酵素（即ち、それぞれＤ−及びＬ−乳酸デヒドロゲナーゼ）によってピルビン酸塩に転化される。しかし、いずれの異性体に関しても生成される代謝産物はピルビン酸塩、乳酸塩、アラニン及び重炭酸塩であり、したがって本発明の方法では両方の異性体が使用できる。
【００２６】
かくして、本発明に係るイメージング媒体は、過分極13Ｃ−Ｌ−乳酸塩又は過分極13Ｃ−Ｄ−乳酸塩或いはこれらの混合物（例えば、過分極13Ｃ−Ｄ／Ｌ−乳酸塩のラセミ混合物）を含み得る。好ましい実施形態では、本発明に係るイメージング媒体は過分極13Ｃ−Ｌ−乳酸塩又は過分極13Ｃ−Ｌ−乳酸塩と過分極13Ｃ−Ｄ−乳酸塩の混合物を含み、さらに好ましくはラセミ混合物を含んでいる。最も好ましい実施形態では、本発明に係るイメージング媒体は過分極13Ｃ−Ｌ−乳酸塩を含んでいる。
【００２７】
「13Ｃ−乳酸塩」という用語は、13Ｃで同位体濃された（即ち、13Ｃ同位体の量が天然存在比より多い）13Ｃ−乳酸の塩を意味する。特記しない限り、「13Ｃ−乳酸塩」及び「13Ｃ−乳酸」という用語は、分子中に存在する３つの炭素原子のいずれかの位置（即ち、Ｃ１位置及び／又はＣ２位置及び／又はＣ３位置）において13Ｃ−濃縮された化合物を意味する。
【００２８】
本発明の方法で使用する過分極13Ｃ−乳酸塩の同位体濃縮度は、好ましくは７５％以上、さらに好ましくは８０％以上、特に好ましくは９０％以上であり、９０％を超える同位体濃縮度が最も好ましい。理想的には、濃縮度は１００％である。本発明の方法で使用する13Ｃ−乳酸塩は、Ｃ１位置（以下13Ｃ1−乳酸塩と表示する）、Ｃ２位置（以下13Ｃ2−乳酸塩と表示する）、Ｃ３位置（以下13Ｃ3−乳酸塩と表示する）、Ｃ１及びＣ２位置（以下13Ｃ1,2−乳酸塩と表示する）、Ｃ１及びＣ３位置（13Ｃ1,3−乳酸塩と表示する）、Ｃ２及びＣ３位置（以下13Ｃ2,3−乳酸塩と表示する）又はＣ１、Ｃ２及びＣ３位置（以下13Ｃ1,2,3−乳酸塩と表示する）において同位体濃縮することができる。13Ｃ1−乳酸塩は他のＣ位置で同位体濃縮された13Ｃ−乳酸塩に比べて３７℃のヒト全血中で高い（即ち、長い）Ｔ1緩和を有するので、Ｃ１位置での同位体濃縮が最も好ましい。
【００２９】
好ましい実施形態では、本発明に係るイメージング媒体は過分極13Ｃ−乳酸ナトリウムを含み、さらに好ましくは13Ｃ1−乳酸ナトリウムを含んでいる。
【００３０】
「過分極」及び「分極」という用語は以後は互換的に使用され、０．１％を超え、さらに好ましくは１％を超え、最も好ましくは１０％を超える核分極レベルを意味する。
【００３１】
分極レベルは、例えば、固体過分極13Ｃ−乳酸塩（例えば、13Ｃ−乳酸塩の動的核分極（ＤＮＰ）によって得られる固体過分極13Ｃ−乳酸塩）の固体状態13Ｃ−ＮＭＲ測定によって決定できる。固体状態13Ｃ−ＮＭＲ測定は、好ましくは小さいフリップ角を用いる単パルス取得ＮＭＲシーケンスからなる。ＮＭＲスペクトル中の過分極13Ｃ−乳酸塩の信号強度を、分極プロセス前に取得したＮＭＲスペクトル中の13Ｃ−乳酸塩の信号強度と比較する。次いで、ＤＮＰ前後における信号強度の比から分極レベルを計算する。
【００３２】
同様に、溶解した過分極13Ｃ−乳酸塩に関する分極レベルは、液体状態ＮＭＲ測定によって決定できる。この場合にも、溶解した過分極13Ｃ−乳酸塩の信号強度を分極前の溶解13Ｃ−乳酸塩の信号強度と比較する。次いで、分極前後における13Ｃ−乳酸塩の信号強度の比から分極レベルを計算する。
【００３３】
ＮＭＲ活性13Ｃ核の過分極は、例えば国際公開第９８／３０９１８号、同第９９／２４０８０号及び同第９９／３５５０８号（これらの開示内容はいずれも援用によって本明細書の内容の一部をなす）に記載されている様々な方法によって達成でき、当技術分野で公知の過分極方法には、希ガスからの分極移動、「ブルートフォース（ｂｒｕｔｅ  ｆｏｒｃｅ）」、スピン冷凍、パラ水素法及び動的核分極（ＤＮＰ）がある。
【００３４】
過分極13Ｃ−乳酸塩を得るためには、13Ｃ−乳酸塩を直接に分極させることが好ましい。また、13Ｃ−乳酸を分極させることもできるが、分極13Ｃ−乳酸を（例えば、塩基での中和により）分極13Ｃ−乳酸塩に転化させることが必要である。13Ｃ−乳酸塩（例えば、13Ｃ−乳酸ナトリウム）は商業的に入手できる。13Ｃ−乳酸もまた、商業的に入手できる。それは、商業的に入手できる13Ｃ−乳酸塩（例えば、商業的に入手できる13Ｃ−乳酸ナトリウム）へのプロトン付加によっても得ることができる。
【００３５】
過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための１つの方法は、国際公開第９８／３０９１８号に記載されている過分極希ガスからの分極移動である。非ゼロ核スピンを有する希ガスは、円偏光の使用によって過分極させることができる。過分極希ガス（好ましくはＨｅ又はＸｅ或いはかかるガスの混合物）を用いて13Ｃ核の過分極を達成することができる。過分極ガスは気相中にあってもよく、液体／溶媒中に溶解されてもよく、或いは過分極ガス自体を溶媒として使用してもよい。別法として、ガスを冷却固体表面上に凝縮させ、この形態で使用してもよいし、或いは昇華させてもよい。過分極ガスと13Ｃ−乳酸塩又は13Ｃ−乳酸とを緊密に混合することが好ましい。
【００３６】
過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための別の方法は、非常に低い温度及び高い磁場での熱力学的平衡化によって13Ｃ核に分極を付与するものである。過分極は、ＮＭＲ分光計の動作磁場及び温度に比べ、非常に高い磁場及び非常に低い温度（ブルートフォース）の使用によって達成される。使用する磁場強度はできるだけ高くすべきであり、好適には１Ｔより高く、好ましくは５Ｔより高く、さらに好ましくは１５Ｔ以上であり、特に好ましくは２０Ｔ以上である。温度は非常に低くすべきであり、例えば４．２Ｋ以下、好ましくは１．５Ｋ以下、さらに好ましくは１．０Ｋ以下、特に好ましくは１００ｍＫ以下である。
【００３７】
過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための別の方法は、スピン冷凍法である。この方法は、スピン冷凍分極による固体化合物又は系のスピン分極をカバーする。かかる系には、三次若しくはそれ以上の対称軸をもつ好適な結晶質常磁性物質（例えば、Ｎｉ2+、ランタニド又はアクチニドイオン）がドープされるか、或いは緊密に混合される。共鳴励起磁場を全く加えないので均一な磁場は必要とされず、その計装はＤＮＰのために必要なものより簡単である。このプロセスは、磁場の方向に直角な軸の周りで試料を物理的に回転させることによって実施される。この方法に関する前提条件は、常磁性種が高度に異方性のｇ因子をもつことである。試料回転の結果として、電子常磁性共鳴が核スピンと接触し、核スピン温度の低下をもたらす。試料回転は、核スピン分極が新たな平衡に達するまで実施される。
【００３８】
好ましい実施形態では、過分極13Ｃ−乳酸塩を得るためにＤＮＰ（動的核分極）が使用される。ＤＮＰでは、分極させるべき化合物中のＭＲ活性核の分極は、不対電子を含む化合物である分極剤又はいわゆるＤＮＰ剤によって達成される。ＤＮＰプロセス中には、通常はマイクロ波放射の形態でエネルギーが供給され、これがまずＤＮＰ剤を励起する。基底状態への崩壊に際して、ＤＮＰ剤の不対電子から分極させるべき化合物のＮＭＲ活性核（例えば、13Ｃ−乳酸塩中の13Ｃ核）への分極の移動が起こる。一般に、ＤＮＰプロセスでは中程度の又は高い磁場及び非常に低い温度が使用されるのであって、例えばＤＮＰプロセスは液体ヘリウム及び約１Ｔ以上の磁場中で実施される。別法として、中程度の磁場及び十分な分極増強が達成される任意の温度を使用することもできる。ＤＮＰ技法は、例えば国際公開第９８／５８２７２号及び同第０１／９６８９５号に一層詳しく記載されており、これらの開示内容はいずれも援用によって本明細書の内容の一部をなしている。
【００３９】
ＤＮＰ法によって化学的実在物（即ち、化合物）を分極させるためには、分極させるべき化合物及びＤＮＰ剤を含む組成物を調製し、次いでこれを凍結して分極用のＤＮＰ分極装置内に挿入する。分極後、凍結した固体過分極組成物は、融解又は適当な溶解媒質中への溶解によって急速に液体状態に移行される。溶解が好ましく、凍結過分極組成物の溶解プロセス及びそのための好適な装置は国際公開第０２／３７１３２号に詳述されている。融解プロセス及び融解用の好適な装置は、例えば国際公開第０２／３６００５号に記載されている。
【００４０】
分極させるべき化合物中に高い分極レベルを得るためには、ＤＮＰプロセス中に前記化合物とＤＮＰ剤とが緊密に接触している必要がある。凍結又は冷却時に組成物が結晶化するならば、それに当てはまらない。結晶化を避けるためには、組成物中にガラス形成剤を存在させる必要があり、或いは凍結時に結晶化せずにガラスを形成する化合物を分極用として選択する必要がある。13Ｃ−乳酸ナトリウムを含む組成物は凍結／冷却時に結晶化しないので、13Ｃ−乳酸ナトリウム特に好ましい。
【００４１】
一実施形態では、ＤＮＰ法によって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として13Ｃ−乳酸、好ましくは13Ｃ1−乳酸が使用される。前記13Ｃ−乳酸は、13Ｃ−Ｌ−乳酸、13Ｃ−Ｄ−乳酸又はこれらの混合物（例えば、13Ｃ−Ｄ／Ｌ−乳酸のラセミ混合物）であり得る。好ましい実施形態では、前記13Ｃ−乳酸は13Ｃ−Ｌ−乳酸又は13Ｃ−Ｌ−乳酸と13Ｃ−Ｄ−乳酸の混合物であり、さらに好ましくはラセミ混合物である。最も好ましい実施形態では、前記13Ｃ−乳酸は13Ｃ−Ｌ−乳酸である。
【００４２】
好ましい実施形態では、ＤＮＰ法によって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として13Ｃ−乳酸塩、好ましくは13Ｃ1−乳酸塩が使用される。前記13Ｃ−乳酸塩は、13Ｃ−Ｌ−乳酸塩、13Ｃ−Ｄ−乳酸塩又はこれらの混合物（例えば、13Ｃ−Ｄ／Ｌ−乳酸塩のラセミ混合物）であり得る。好ましい実施形態では、前記13Ｃ−乳酸塩は13Ｃ−Ｌ−乳酸塩又は13Ｃ−Ｌ−乳酸塩と13Ｃ−Ｄ−乳酸塩の混合物であり、さらに好ましくはラセミ混合物である。最も好ましい実施形態では、前記13Ｃ−乳酸塩は13Ｃ−Ｌ−乳酸塩である。好適な13Ｃ−乳酸塩は、13Ｃ−乳酸ナトリウム並びにＮＨ4+、Ｋ+、Ｒｂ+、Ｃｓ+、Ｃａ2+、Ｓｒ2+及びＢａ2+からなる群からの無機陽イオンを含む13Ｃ−乳酸塩である。後者の塩は、国際公開第２００７／１１１５１５号（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす）に詳述されている。別法として、国際公開第２００７／０６９９０９号（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす）に詳述されているように、有機アミン又はアミノ化合物の13Ｃ−乳酸塩（好ましくは、ＴＲＩＳ−13Ｃ−ラクテート又はメグルミン−13Ｃ−ラクテート）も使用できる。最も好ましい実施形態では、ＤＮＰ法によって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として13Ｃ−乳酸ナトリウム、さらに好ましくは13Ｃ1−乳酸ナトリウム、最も好ましくは13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムが使用される。
【００４３】
ＤＮＰによる13Ｃ−乳酸塩の過分極のためには、13Ｃ−乳酸塩又は13Ｃ−乳酸及びＤＮＰ剤を含む組成物が調製される。
【００４４】
ＤＮＰ剤は、その選択が13Ｃ−乳酸塩中に達成できる分極レベルに大きな影響を与えるので、ＤＮＰプロセスにおいて決定的な役割を果たす。各種のＤＮＰ剤（国際公開第９９／３５５０８号では「ＯＭＲＩ造影剤」と呼ばれている）が知られている。国際公開第９９／３５５０８号、同第８８／１０４１９号、同第９０／００９０４号、同第９１／１２０２４号、同第９３／０２７１１号又は同第９６／３９３６７号に記載されているような酸素系、硫黄系又は炭素系の安定なトリチルラジカルを使用したところ、各種の様々な試料中に高い分極レベルが得られた。
【００４５】
好ましい実施形態では、本発明の方法で使用する過分極13Ｃ−乳酸塩はＤＮＰによって得られ、使用するＤＮＰ剤はトリチルラジカルである。上記に略述した通り、ＤＮＰ剤（即ち、トリチルラジカル）の大きい電子スピン分極は電子のラーモア周波数に近いマイクロ波照射によって13Ｃ−乳酸塩又は13Ｃ−乳酸中の核の核スピン分極に変換される。マイクロ波は、ｅ−ｅ及びｅ−ｎ遷移による電子スピン系と核スピン系との間の連絡を刺激する。効果的なＤＮＰのためには、即ち13Ｃ−乳酸塩又は13Ｃ−乳酸中に高い分極レベルを達成するためには、トリチルラジカルはこれらの化合物中で安定かつ可溶であって、13Ｃ−乳酸塩／13Ｃ−乳酸とトリチルラジカルとの緊密な接触を達成するものでなければならない。かかる緊密な接触は、上述した電子スピン系と核スピン系との間の連絡のために必要である。
【００４６】
好ましい実施形態では、トリチルラジカルは下記式（１）のラジカルである。
【００４７】
【化１】
2010534498.tif 000003
【００４８】
式中、
Ｍは水素又は１当量の陽イオンを表し、
Ｒ１は同一又は異なるものであって、１以上のヒドロキシル基で任意に置換された直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ6−アルキル基或いは−(ＣＨ2)n−Ｘ−Ｒ２基（式中、ｎは１、２又は３であり、ＸはＯ又はＳであり、Ｒ２は１以上のヒドロキシル基で任意に置換された直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ4−アルキル基である。）を表す。
【００４９】
好ましい実施形態では、Ｍは水素又は１当量の生理学的に許容される陽イオンを表す。「生理学的に許容される陽イオン」という用語は、ヒト又はヒト以外の動物の生体によって許容される陽イオンを意味する。好ましくは、Ｍは水素又はアルカリ陽イオン、アンモニウムイオン又は有機アミンイオン（例えばメグルミン）を表す。最も好ましくは、Ｍは水素又はナトリウムを表す。
【００５０】
ＤＮＰ法によって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として13Ｃ−乳酸塩を使用するならば、Ｒ１は好ましくは同一であり、さらに好ましくは直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ4−アルキル基、最も好ましくはメチル、エチル又はイソプロピルである。或いは、Ｒ１は好ましくは同一であり、さらに好ましくは１以上のヒドロキシル基で置換された直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ4−アルキル基、最も好ましくは−ＣＨ2−ＣＨ2−ＯＨである。或いは、Ｒ１は好ましくは同一であり、−ＣＨ2−ＯＣ2Ｈ4ＯＨを表す。
【００５１】
ＤＮＰ法によって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として13Ｃ−乳酸を使用するならば、Ｒ１は同一又は異なるもの、好ましくは同一であり、好ましくは−ＣＨ2−ＯＣＨ3、−ＣＨ2−ＯＣ2Ｈ5、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＯＣＨ3、−ＣＨ2−ＳＣＨ3、−ＣＨ2−ＳＣ2Ｈ5又は−ＣＨ2−ＣＨ2−ＳＣＨ3、最も好ましくは−ＣＨ2−ＣＨ2−ＯＣＨ3を表す。
【００５２】
上述した式（１）のトリチルラジカルは、国際公開第８８／１０４１９号、同第９０／００９０４号、同第９１／１２０２４号、同第９３／０２７１１号、同第９６／３９３６７号、同第９７／０９６３３号、同第９８／３９２７７号及び同第２００６／０１１８１１号に詳述されているようにして合成できる。
【００５３】
ＤＮＰプロセスのためには、出発原料である13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩（以下「試料」という）とＤＮＰ剤（好ましくはトリチルラジカル、さらに好ましくは式（１）のトリチルラジカル）との溶液が調製される。試料中へのＤＮＰ剤の溶解を促進するために溶媒又は溶媒混合物が使用できる。しかし、過分極13Ｃ−乳酸塩をインビボ13Ｃ−ＭＲ検出用のイメージング剤として使用するのであれば、溶媒の量を最小限に抑えるか、或いは可能ならば溶媒の使用を避けることが好ましい。インビボイメージング剤として使用するためには、過分極13Ｃ−乳酸塩は通常比較的高い濃度で投与される。即ち、ＤＮＰプロセスで高度に濃縮された試料を使用するのが好ましく、したがって溶媒の量を最小限に抑えることが好ましい。これに関連して、試料を含む組成物（即ち、ＤＮＰ剤、試料及び必要ならば溶媒）の質量をできるだけ小さく保つことも重要である。例えば13Ｃ−ＭＲ検出用のイメージング剤として使用するため、ＤＮＰプロセス後に過分極13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩を含む固体組成物を溶解によって液体状態に変える場合、大きい質量は溶解プロセスの効率に悪影響を及ぼす。これは、溶解プロセスにおける溶解媒質の体積が一定である場合、組成物の質量が増加すると溶解媒質と組成物の質量との比が減少するという事実に原因する。さらに、ある種の溶媒を使用した場合には、これらの溶媒が生理学的に許容されない可能性があるので、ＭＲイメージング剤として使用する過分極13Ｃ−乳酸塩をヒト又はヒト以外の動物患者に投与する前に溶媒の除去が必要とされることがある。
【００５４】
ＤＮＰによって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として13Ｃ−乳酸を使用するならば、好ましくは13Ｃ−乳酸中にＤＮＰ剤（好ましくはトリチルラジカル、さらに好ましくは式（１）のトリチルラジカル）を溶解した溶液が調製される。13Ｃ−Ｌ−乳酸と13Ｃ−Ｄ−乳酸との混合物は、室温で液体であるか（13Ｃ−Ｄ／Ｌ−乳酸のラセミ混合物は約１７℃の融点を有する）、或いは純粋な異性体の融点とラセミ化合物の融点との間（即ち、１７〜５３℃）の融点を有する。室温で液体である13Ｃ−Ｌ−乳酸と13Ｃ−Ｄ−乳酸との混合物を使用するならば、さらに溶媒を添加することなしにＤＮＰ剤を前記液体に溶解することが好ましい。しかし、溶媒を添加するのであれば、良好なガラス形成剤である溶媒（例えば、グリセロール）を使用することが好ましい。13Ｃ−Ｌ−乳酸と13Ｃ−Ｄ−乳酸との混合物を使用するか、或いは（共に約５３℃の融点を有する）13Ｃ−Ｌ−乳酸又は13Ｃ−Ｄ−乳酸を使用する場合には、この混合物或いは13Ｃ−Ｌ−乳酸又は13Ｃ−Ｄ−乳酸を好ましくは穏やかな加温の下で融解し、融解された混合物或いは13Ｃ−Ｌ−乳酸又は13Ｃ−Ｄ−乳酸中にＤＮＰ剤を溶解する。好ましくは、溶媒を添加しない。しかし、溶媒を添加するのであれば、少量の水及び／又は良好なガラス形成剤である溶媒（例えば、グリセロール）を添加することが好ましい。化合物の緊密な混合は、当技術分野で公知のいくつかの手段（例えば、撹拌、渦動（渦動混合）又は音波処理）によって促進できる。
【００５５】
ＤＮＰによって過分極13Ｃ−乳酸塩を得るための出発原料として、室温で固体である13Ｃ−乳酸塩を使用するならば、ＤＮＰ剤及び13Ｃ−乳酸塩の溶液を調製するために溶媒を添加しなければならない。好ましくは水性キャリヤー、最も好ましくは水を溶媒として使用する。一実施形態では、ＤＮＰ剤を溶解し、次いで溶解したＤＮＰ剤中に13Ｃ−乳酸塩を溶解する。別の実施形態では、13Ｃ−乳酸塩を溶媒に溶解し、次いで溶解した13Ｃ−乳酸塩中にＤＮＰ剤を溶解する。１０頁の最初の段落に述べた13Ｃ−乳酸塩（即ち、13Ｃ−乳酸ナトリウム、ＮＨ4+、Ｋ+、Ｒｂ+、Ｃｓ+、Ｃａ2+、Ｓｒ2+及びＢａ2+からなる群からの無機陽イオンを含む13Ｃ−乳酸塩、並びに有機アミン又はアミノ化合物の13Ｃ−乳酸塩）を使用すれば、これらの13Ｃ−乳酸塩を含む組成物は冷却／凍結時に結晶化しないので、ガラス形成剤を添加しなくて済む。この場合にも、化合物の緊密な混合は、当技術分野で公知のいくつかの手段（例えば、撹拌、渦動又は音波処理）によって促進できる。
【００５６】
本発明の方法で使用する過分極13Ｃ−乳酸塩がＤＮＰによって得られる場合、13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩及びＤＮＰ剤を含む分極させるべき組成物はさらに常磁性金属イオンを含み得る。常磁性金属イオンの存在は、国際公開第２００７／０６４２２６号（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす）に詳述されているように、ＤＮＰによって分極させるべき化合物中の分極レベルを増大させ得ることが判明している。「常磁性金属イオン」という用語は、塩及び常磁性キレートの形態の常磁性金属イオンを意味する。常磁性キレートとは、キレーター及び常磁性金属イオンを含む化学的実在物であって、前記常磁性金属イオン及び前記キレーターが錯体を形成しているものをいう。
【００５７】
好ましい実施形態では、常磁性金属イオンは常磁性金属イオンとしてＧｄ3+を含む化合物、好ましくはキレーター及び常磁性金属イオンとしてのＧｄ3+を含む常磁性キレートである。さらに好ましい実施形態では、前記常磁性金属イオンは分極させるべき組成物中に可溶かつ安定である。
【００５８】
前述したＤＮＰ剤の場合と同じく、分極させるべき13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩は常磁性金属イオンにも緊密に接触していなければならない。13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩、ＤＮＰ剤及び常磁性金属イオンを含むＤＮＰ用の組成物は、いくつかの方法で得ることができる。第１の実施形態では、13Ｃ−乳酸塩を好適な溶媒に溶解して溶液を得る。別法として、前頁に記載したような液状又は融解13Ｃ−乳酸を使用する。このような13Ｃ−乳酸塩の溶液又は液状／融解13Ｃ−乳酸にＤＮＰ剤を添加して溶解する。ＤＮＰ剤（好ましくはトリチルラジカル）は固体又は溶液として添加できるが、好ましくは固体として添加する。次の段階では、常磁性金属イオンを添加する。常磁性金属イオンは固体又は溶液として添加できるが、好ましくは固体として添加する。別の実施形態では、ＤＮＰ剤及び常磁性金属イオンを好適な溶媒に溶解し、この溶液を13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩に添加する。さらに別の実施形態では、ＤＮＰ剤（又は常磁性金属イオン）を好適な溶媒に溶解し、13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩に添加する。次の段階では、この溶液に常磁性金属イオン（又はＤＮＰ剤）を固体又は溶液として添加し、好ましくは固体として添加する。好ましくは、常磁性金属イオン（又はＤＮＰ剤）を溶解するための溶媒の量は最小限に抑える。この場合にも、化合物の緊密な混合は、当技術分野で公知のいくつかの手段（例えば、撹拌、渦動又は音波処理）によって促進できる。
【００５９】
トリチルラジカルをＤＮＰ剤として使用するならば、組成物中のかかるトリチルラジカルの好適な濃度は、ＤＮＰのために使用される組成物中において１〜２５ｍＭ、好ましくは２〜２０ｍＭ、さらに好ましくは１０〜１５ｍＭである。常磁性金属イオンが組成物に添加されるならば、かかる常磁性金属イオンの好適な濃度は組成物中において０．１〜６ｍＭ（金属イオン）であり、０．５〜４ｍＭの濃度が好ましい。
【００６０】
13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩、ＤＮＰ剤及び任意には常磁性金属イオンを含む組成物を調製した後、当技術分野で公知の方法によって前記組成物が凍結される。例えば、フリーザー内で凍結するか、液体窒素中で凍結するか、或いは単にＤＮＰ分極装置内に配置するだけでも液体ヘリウムによって凍結される。任意には、組成物を分極装置内に挿入する前にそれを「ビーズ」として凍結することができる。かかるビーズは、組成物を液体窒素中に滴下することで得られる。かかるビーズは一層効率よく溶解することが認められた。これは、例えば過分極13Ｃ−乳酸塩をインビボ13Ｃ−ＭＲ検出方法で使用することが意図される場合、多量の13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩を分極させる際に特に適している。
【００６１】
組成物中に常磁性金属イオンが存在する場合、前記組成物を凍結前にガス抜きすることができる。ガス抜きは、例えば組成物中にヘリウムガスを（例えば２〜１５分間）吹き込むことで行うことができるが、他の公知常法で実施することもできる。
【００６２】
ＤＮＰ技法は、例えば国際公開第９８／５８２７２号及び同第０１／９６８９５号（これらの開示内容はいずれも援用によって本明細書の内容の一部をなす）に記載されている。一般に、ＤＮＰプロセスでは中程度の又は高い磁場及び極低温が使用され、例えば液体ヘリウム及び約１Ｔ以上の磁場中でＤＮＰプロセスが実施される。別法として、中程度の磁場及び十分な分極増強が達成される任意の温度を使用することもできる。好ましい実施形態では、ＤＮＰプロセスは液体ヘリウム及び約１Ｔ以上の磁場中で実施される。好適な分極ユニットは、例えば国際公開第０２／３７１３２号に記載されている。好ましい実施形態では、分極ユニットはクライオスタット及び分極手段（例えば、超伝導磁石のような磁場発生手段に取り囲まれた中心ボア内のマイクロ波源に導波管で連結されたマイクロ波チャンバー）を含んでいる。ボアは、垂直方向下方に、少なくとも磁場強度が試料核の分極を引き起こすのに十分な高さ（例えば１〜２５Ｔ）を有する超伝導磁石近傍の「Ｐ」領域のレベルまで延在している。プローブ（即ち、分極させるべき凍結組成物）用のボアは、好ましくは密封可能であり、低圧（例えば１ｍｂａｒ以下の程度の圧力）まで排気できる。着脱自在の輸送管のようなプローブ導入手段をボアの内部に収容することができ、この管はボアの頂部からＰ領域にあるマイクロ波チャンバー内の位置まで挿入することができる。Ｐ領域は、液体ヘリウムで分極を引き起こすのに十分な低温（好ましくは０．１〜１００Ｋ、さらに好ましくは０．５〜１０Ｋ、最も好ましくは１〜５Ｋ程度の温度）に冷却されている。プローブ導入手段は、好ましくは、ボア内に部分真空を保持できるようにその上端が任意適宜の方法で密封可能である。プローブ保持カップのようなプローブ保持容器を、プローブ導入手段の下端の内部に着脱自在に取り付けることができる。プローブ保持容器は、好ましくは比熱容量が低くかつ極低温特性に優れた軽量材料（例えばＫｅｌＦ（ポリクロロトリフルオロエチレン）又はＰＥＥＫ（ポリエーテルエーテルケトン））で作られている。それは、２以上のプローブを収容できるように設計することができる。
【００６３】
プローブをプローブ保持容器内に挿入し、液体ヘリウム中に浸漬し、マイクロ波で照射する。マイクロ波周波数はＤＮＰ剤のＥＰＲ線から決定できるが、これは２８．０ＧＨｚ／Ｔのように磁石の磁場強度に依存する。最適マイクロ波周波数は、最大ＮＭＲ信号に関する周波数を調整することで決定できる。好ましくは、最適マイクロ波周波数は３．３５Ｔに充電された磁石に対しては約９４ＧＨｚであり、４Ｔに充電された磁石に対しては１１０ＧＨｚであり、５Ｔに充電された磁石に対しては１４０ＧＨｚであり、７Ｔに充電された磁石に対しては２００ＧＨｚである。出力は、プローブサイズに応じて５０〜２００ｍＷの範囲内で選択できる。分極レベルは、前述したようにして（例えば、マイクロ波照射中に固体状態13Ｃ−ＮＭＲ信号を取得することにより）モニターできる。一般に、ＮＭＲ信号を時間に対して示すグラフ中に飽和曲線が得られる。したがって、最適分極レベルに到達した時点を決定することが可能である。固体状態13Ｃ−ＮＭＲ測定は、好適には小さいフリップ角を用いる単パルス取得ＮＭＲシーケンスからなる。動的核分極された核（13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩中の13Ｃ核）の信号強度を、ＤＮＰ前の13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩中の13Ｃ核の信号強度と比較する。次いで、ＤＮＰ前後における信号強度の比から分極レベルを計算する。
【００６４】
ＤＮＰプロセス後、過分極13Ｃ−乳酸又は13Ｃ−乳酸塩を含む凍結固体組成物は固体状態から液体状態に移行される（即ち、液化される）。これは、適当な溶媒又は溶媒混合物（溶解媒質）に溶解すること或いは（例えば、熱の形態でエネルギーを加えて）固体組成物を融解することによって実施できる。溶解が好ましく、溶解プロセス及びそのための好適な装置は国際公開第０２／３７１３２号に詳述されている。融解プロセス及び融解用の好適な装置は、例えば国際公開第０２／３６００５号に記載されている。簡単に述べれば、分極装置から物理的に分離しているか、或いは分極装置及び溶解ユニット／融解ユニットを含む装置の一部である溶解ユニット／融解ユニットが使用される。好ましい実施形態では、緩和を改善して過分極の最大値を保持するため、溶解／融解は高い磁場中（例えば、分離装置内）で実施される。磁場の節点は避けるべきであり、低い磁場は上記の対策を講じても緩和の増大をもたらすことがある。
【００６５】
動的核分極用の出発原料として13Ｃ−乳酸塩を使用し、かつ13Ｃ−乳酸塩を含む固体組成物を溶解によって液化する場合には、特に好ましくは13Ｃ−乳酸塩をインビボ13Ｃ−ＭＲ検出用のイメージング媒体中に使用する予定であれば、水性キャリヤー、好ましくは生理学的に許容されかつ薬学的に容認される水性キャリヤー（例えば、水、緩衝液又は食塩水）が溶媒として好適に使用される。インビトロ用途のためには、例えば、ＤＭＳＯ又はメタノール或いは水性キャリヤー及び非水性溶媒を含む混合物（例えば、ＤＭＳＯと水との混合物又はメタノールと水との混合物）のような非水性溶媒又は溶媒混合物も使用できる。
【００６６】
動的核分極用の出発原料として13Ｃ−乳酸を使用した場合には、得られた過分極13Ｃ−乳酸を13Ｃ−乳酸塩に転化させなければならない。過分極13Ｃ−乳酸を含む固体組成物を溶解によって液化する場合には、溶解媒質は好ましくは水性キャリヤー（例えば、水又は緩衝液、好ましくは生理学的に許容される緩衝液）であり、或いは水性キャリヤー（例えば、水又は緩衝液、好ましくは生理学的に許容される緩衝液）を含む。「緩衝溶液」及び「緩衝液」という用語は、以後は互換的に使用される。本願の文脈中では、「緩衝液」は１種以上の緩衝液を意味し、緩衝液の混合物も包含する。
【００６７】
好ましい緩衝液は生理学的に許容される緩衝液であり、さらに好ましくは約７〜８のｐＨ範囲内で緩衝作用を有する緩衝液、例えばリン酸塩緩緩衝液（ＫＨ2ＰＯ4／Ｎａ2ＨＰＯ4）、ＡＣＥＳ、ＰＩＰＥＳ、イミダゾール／ＨＣｌ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳ、ＴＥＳ、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＰＳ又はＴＲＩＣＩＮである。
【００６８】
過分極13Ｃ−乳酸を過分極13Ｃ−乳酸塩に転化させるためには、13Ｃ−乳酸を適宜に塩基と反応させる。一実施形態では、13Ｃ−乳酸を塩基と反応させて13Ｃ−乳酸塩に転化させ、続いて水性キャリヤーを添加する。別の好ましい実施形態では、水性キャリヤー及び塩基を合わせて１つの溶液とし、この溶液を13Ｃ−乳酸に添加することで、それを溶解すると同時に13Ｃ−乳酸塩に転化させる。好ましい実施形態では、塩基はＮａＯＨ、Ｎａ2ＣＯ3又はＮａＨＣＯ3の水溶液であり、最も好ましくはＮａＯＨの水溶液である。
【００６９】
別の好ましい実施形態では、水性キャリヤー又は（該当する場合には）複合水性キャリヤー／塩基溶液は、さらに遊離常磁性イオンを結合又は錯体化し得る１種以上の化合物（例えば、ＤＴＰＡ又はＥＤＴＡのようなキレート化剤）を含んでいる。
【００７０】
過分極がＤＮＰ法によって実施される場合、過分極13Ｃ−乳酸塩を含む液体からＤＮＰ剤（好ましくはトリチルラジカル）及び任意の常磁性金属イオンが除去されることがある。過分極13Ｃ−乳酸塩をインビボで使用するためのイメージング媒体中に使用する予定であれば、これらの化合物を除去することが好ましい。ＤＮＰ用の出発原料として13Ｃ−乳酸を使用した場合には、まず過分極13Ｃ−乳酸を13Ｃ−乳酸塩に転化させ、転化が行われた後にＤＮＰ剤及び任意の常磁性金属イオンを除去することが好ましい。
【００７１】
トリチルラジカル及び常磁性金属イオンを除去するために有用な方法は当技術分野で公知であり、国際公開第２００７／０６４２２６号及び同第２００６／０１１８０９号に記載されている。
【００７２】
好ましい実施形態では、本発明の方法で使用する過分極13Ｃ−乳酸塩は、13Ｃ−乳酸ナトリウム（好ましくは13Ｃ1−乳酸ナトリウム、さらに好ましくは13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム）、式（１）のトリチルラジカル及び任意にはＧｄ3+を含む常磁性キレートを含む組成物の動的核分極によって得られる。この好ましい実施形態では、トリチルラジカル及び（使用するならば）Ｇｄ3+を含む常磁性キレートの溶液を調製する。溶解したトリチルラジカル及び任意の溶解した常磁性キレートを13Ｃ−乳酸ナトリウムに添加し、この組成物を好ましくは音波処理又は渦動混合することですべての化合物の緊密な混合を促進する。
【００７３】
本発明の方法に係るイメージング媒体は、インビトロ13Ｃ−ＭＲ検出（例えば、ヒト又はヒト以外の動物の身体から導かれる細胞培養物、身体試料、エクスビボ組織或いは単離器官中での13Ｃ−ＭＲ検出）用のイメージング媒体として使用できる。この目的のためには、イメージング媒体は、例えば、細胞培養物、尿や血液や唾液のような試料、生検組織のようなエクスビボ組織又は単離器官に添加するのに適した組成物として提供される。かかるイメージング媒体は、イメージング剤（即ち、ＭＲ活性剤である過分極13Ｃ−乳酸塩）に加えて、インビトロ細胞又は組織アッセイに適合しかつそのために使用される溶媒（例えば、ＤＭＳＯ又はメタノール或いは水性キャリヤー及び非水性溶媒を含む溶媒混合物（例えば、ＤＭＳＯと水又は緩衝液との混合物或いはメタノールと水又は緩衝液との混合物））を含むことが好ましい。当業者には自明の通り、かかるイメージング媒体中には薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤及び製剤化補助剤が存在し得るが、かかる目的のために必要なわけではない。
【００７４】
さらに、本発明の方法に係るイメージング媒体は、インビボ13Ｃ−ＭＲ検出（即ち、ヒト又はヒト以外の動物の生体に関して実施される13Ｃ−ＭＲ検出）用のイメージング媒体として使用できる。この目的のためには、イメージング媒体はヒト又はヒト以外の動物の生体への投与に適している必要がある。したがって、かかるイメージング媒体は、イメージング剤（即ち、ＭＲ活性剤である過分極13Ｃ−乳酸塩）に加えて、水性キャリヤー、好ましくは生理学的に許容されかつ薬学的に容認される水性キャリヤー（例えば、水、緩衝液又は食塩水）を含むことが好ましい。かかるイメージング媒体はさらに、通常の薬学的又は獣医学的キャリヤー又は賦形剤（例えば、ヒト医学又は獣医学における診断用組成物に関して常用されている安定剤、重量オスモル濃度調整剤、可溶化剤などの製剤化補助剤）を含むことができる。
【００７５】
本発明の方法で使用するイメージング媒体をインビボ13Ｃ−ＭＲ検出（即ち、ヒト又はヒト以外の動物の生体内での13Ｃ−ＭＲ検出）のために使用するならば、前記イメージング媒体は好ましくは前記生体に非経口的に（好ましくは静脈内に）投与される。一般に、検査すべき生体はＭＲ磁石内に配置される。専用の13Ｃ−ＭＲ  ＲＦコイルが、検査対象領域をカバーするように配置される。イメージング媒体の用量及び濃度は、毒性及び投与経路のような一連の因子に依存する。投与後４００秒未満、好ましくは１２０秒未満、さらに好ましくは投与後６０秒未満、特に好ましくは２０〜５０秒に、検査対象体積をエンコードするＭＲイメージングシーケンスを複合した周波数及び空間選択的な方法で適用する。ＭＲシーケンスの正確な適用時間は、検査対象体積及び化学種に大きく依存する。
【００７６】
本発明に係る13Ｃ−ＭＲ検出方法では、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を検出することが好ましい。ＭＲ検出可能な13Ｃ−標識化合物は、過分極13Ｃ−乳酸塩又は13Ｃ−ピルビン酸塩のどちらをイメージング剤として使用する場合にも同一である。このことは下記スキーム１（式中、＊は13Ｃ−標識を表す。）中に13Ｃ−乳酸塩及び13Ｃ−ピルビン酸塩に関して示されている。スキーム１の左側には、過分極13Ｃ−ピルビン酸塩（太字、出発化合物）並びにその代謝産物である13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩のＭＲ検出可能信号が示されており、スキーム１の右側には、過分極13Ｃ−乳酸塩（太字、出発化合物）並びにその代謝産物である13Ｃ−ピルビン酸塩のＭＲ検出可能信号が示されている。後者はさらに代謝されて13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩になる。
【００７７】
【化２】
2010534498.tif 000004
【００７８】
かくして、好ましい実施形態では、過分極13Ｃ−乳酸塩を含むイメージング媒体を用いる13Ｃ−ＭＲ検出方法であって、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩及び13Ｃ−アラニンの信号、好ましくは13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を検出する方法が提供される。
【００７９】
本発明の文脈中における「信号」という用語は、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩を表す13Ｃ−ＭＲスペクトル中のピークの、ノイズに対するＭＲ信号振幅又は積分又はピーク面積をいう。好ましい実施形態では、信号はピーク面積である。
【００８０】
本発明の方法の好ましい実施形態では、上述した13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を用いて代謝プロファイルが生成される。
【００８１】
一実施形態では、上述した13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を用いて、ヒト又はヒト以外の動物の生体の代謝プロファイルが生成される。前記代謝プロファイルは、全身から導くことができ、例えば全身のインビボ13Ｃ−ＭＲ検出によって得ることができる。別法として、前記代謝プロファイルは、検査対象領域（即ち、前記ヒト又はヒト以外の動物の生体の特定の組織、器官又は部分）から生成される。
【００８２】
別の実施形態では、上述した13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を用いて、細胞培養物中の細胞、尿や血液や唾液のような試料、生検組織のようなエクスビボ組織又は単離器官の代謝プロファイルが生成される。その場合、前記代謝プロファイルはインビトロ13Ｃ−ＭＲ検出によって生成される。
【００８３】
かくして、好ましい実施形態では、過分極13Ｃ−乳酸塩を含むイメージング媒体を用いる13Ｃ−ＭＲ検出方法であって、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩及び13Ｃ−アラニンの信号、好ましくは13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を検出し、前記信号を用いて代謝プロファイルを生成する方法が提供される。
【００８４】
好適には、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩及び13Ｃ−アラニンの信号を用いて前記代謝プロファイルが生成される。好ましい実施形態では、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩の信号を用いて代謝プロファイルが生成される。以後、「13Ｃ−標識化合物」という用語は、13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩及び13Ｃ−アラニンを表すために使用され、好ましい実施形態では13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び13Ｃ−重炭酸塩を表すために使用される。
【００８５】
一実施形態では、13Ｃ−標識化合物のスペクトル信号強度を用いて代謝プロファイルが生成される。別の実施形態では、13Ｃ−標識化合物のスペクトル信号積分を用いて代謝プロファイルが生成される。別の実施形態では、13Ｃ−標識化合物の個別画像からの信号強度を用いて代謝プロファイルが生成される。さらに別の実施形態では、２以上の時点で13Ｃ−標識化合物の信号強度を求めることで13Ｃ−標識化合物の変化速度が計算される。
【００８６】
別の実施形態では、代謝プロファイルは13Ｃ−標識化合物の処理信号データ（例えば、多重ＭＲ検出の信号パターン（即ち、スペクトル又は画像）から導き出される信号の比、補正信号或いは動力学的又は代謝速度定数情報）を含むか、或いはかかる処理信号データを用いて生成される。かくして、好ましい実施形態では、補正13Ｃ−乳酸塩信号（即ち、13Ｃ−乳酸塩／13Ｃ−アラニン信号及び／又は13Ｃ−乳酸塩／13Ｃ−ピルビン酸塩信号及び／又は13Ｃ−乳酸塩／13Ｃ−重炭酸塩信号）が代謝プロファイル中に含まれるか、或いはそれを用いて代謝プロファイルが生成される。さらに別の好ましい実施形態では、補正13Ｃ−乳酸塩／総13Ｃ−炭素信号が代謝プロファイル中に含まれるか、或いはそれを用いて代謝プロファイルが生成される。ここで、総13Ｃ−炭素信号は13Ｃ−乳酸塩、13Ｃ−ピルビン酸塩、13Ｃ−アラニン及び任意には13Ｃ−重炭酸塩の信号の和である。
【００８７】
本発明に係る方法の好ましい実施形態で生成された代謝プロファイルは、検査すべき生体、生体部分、細胞、組織、身体試料などの代謝状態又は活性に関する情報を提供し、前記情報は例えば疾患を同定し、疾患の経過をモニターし、及び／又は病態を判定し、或いは治療の正否をモニターするために以後の段階で使用できる。
【００８８】
かかる疾患は腫瘍であり得る。これは、腫瘍組織が通常は健常組織より高い代謝活性によって特徴づけられるからである。かかる高い代謝活性は、腫瘍又は腫瘍のエクスビボ試料の代謝プロファイルを健常組織（例えば、周囲組織又は健常エクスビボ組織）の代謝プロファイルと比較することで判定でき、代謝プロファイル中に13Ｃ−標識化合物の高い信号又は高い補正13Ｃ−乳酸塩信号又は高い代謝速度となって現れることがある。
【００８９】
別の疾患は心臓の虚血であり得る。これは、虚血心筋組織が通常は健常心筋組織より低い代謝活性によって特徴づけられるからである。この場合にも、かかる低い代謝活性は、虚血心筋組織の代謝プロファイルを健常心筋組織の代謝プロファイルと比較することで判定できる。
【００９０】
さらに別の疾患は、肝線維症又は肝硬変のような肝臓関連疾患であり得る。すべての乳酸塩代謝の６０％は肝臓で起こり、肝疾患での細胞死のため、肝臓の罹患領域では13Ｃ−標識乳酸塩代謝産物の信号が減少すると予想される。したがって、罹患した肝臓の代謝プロファイルは、13Ｃ−アラニン及び任意には13Ｃ−ピルビン酸塩からの信号の顕著な減少、高い補正13Ｃ−アラニン信号、或いは高い13Ｃ−アラニン／13Ｃ−乳酸塩比又は13Ｃ−アラニン／総炭素比を示すであろう。
【００９１】
本発明の方法でＤ−乳酸塩を使用すれば、敗血症、虚血及び糖尿病のような疾患並びに外傷のような状態を同定することができる（例えば、Ｓ．Ｍ．Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１５４，（１９８６），６５８−６６４、Ｍ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．１６７，（１９９４），５７５−５７８、Ｚ．Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｎ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｊ．１６，（２００１），２０９−２１３、及びＹ．Ｋｏｎｄｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２，（１９９２），４０７−４１４を参照されたい）。
【００９２】
本発明のさらに別の態様は、13Ｃ1−乳酸ナトリウム又は13Ｃ1−乳酸、トリチルラジカル及び任意には常磁性金属イオンを含んでなる組成物である。
【００９３】
第１の実施形態では、前記組成物は13Ｃ1−乳酸ナトリウム、トリチルラジカル及び任意には常磁性金属イオンを含んでいる。好ましい実施形態では、前記13Ｃ1−乳酸ナトリウムは13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムである。別の好ましい実施形態では、前記トリチルラジカルは式（１）のトリチルラジカルである。式中、Ｍは水素又はナトリウムを表し、Ｒ１は好ましくは同一であり、さらに好ましくは直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ4−アルキル基、最も好ましくはメチル、エチル又はイソプロピルである。或いは、Ｒ１は好ましくは同一であり、さらに好ましくは１つのヒドロキシル基で置換された直鎖又は枝分れＣ1〜Ｃ4−アルキル基、最も好ましくは−ＣＨ2−ＣＨ2−ＯＨである。或いは、Ｒ１は好ましくは同一であり、−ＣＨ2−ＯＣ2Ｈ4ＯＨを表す。
【００９４】
別の好ましい実施形態では、前記組成物は常磁性金属イオンを含み、前記常磁性金属イオンは好ましくは常磁性金属イオンとしてＧｄ3+を含む化合物、好ましくはキレーター及び常磁性金属イオンとしてのＧｄ3+を含む常磁性キレートである。最も好ましい実施形態では、本発明に係る組成物は13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム、式（１）のトリチルラジカル及び常磁性金属イオンを含んでいる。好適には、前記組成物はさらに１種以上の溶媒を含み、好ましくは水性キャリヤー、最も好ましくは水が溶媒として使用される。上述の組成物は、動的核分極（ＤＮＰ）によって高い分極レベルで過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウムを得るために使用できる。第２の実施形態では、前記組成物は13Ｃ1−乳酸、トリチルラジカル及び任意には常磁性金属イオンを含んでいる。好ましい実施形態では、前記13Ｃ1−乳酸は13Ｃ1−Ｌ−乳酸である。別の好ましい実施形態では、前記トリチルラジカルは式（１）のトリチルラジカルである。式中、Ｍは水素又はナトリウムを表し、Ｒ１は同一又は異なるもの、好ましくは同一であり、好ましくは−ＣＨ2−ＯＣＨ3、−ＣＨ2−ＯＣ2Ｈ5、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＯＣＨ3、−ＣＨ2−ＳＣＨ3、−ＣＨ2−ＳＣ2Ｈ5又は−ＣＨ2−ＣＨ2−ＳＣＨ3、最も好ましくは−ＣＨ2−ＣＨ2−ＯＣＨ3を表す。別の好ましい実施形態では、前記組成物は常磁性金属イオンを含み、前記常磁性金属イオンは好ましくは常磁性金属イオンとしてＧｄ3+を含む化合物、好ましくはキレーター及び常磁性金属イオンとしてのＧｄ3+を含む常磁性キレートである。最も好ましい実施形態では、本発明に係る組成物は13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム、式（１）のトリチルラジカル及び常磁性金属イオンを含んでいる。前記組成物はさらに１種以上の溶媒を含むことができ、好ましくは水性キャリヤー、最も好ましくは水が溶媒として使用される。上述の組成物は、動的核分極（ＤＮＰ）によって高い分極レベルで過分極13Ｃ1−乳酸を得るために使用できる。前記過分極13Ｃ1−乳酸は、塩基（例えば、ＮａＯＨ）と共に溶解することで過分極13Ｃ1−乳酸塩に転化させることができる。
【００９５】
本発明のさらに別の態様は、過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウム又は過分極13Ｃ1−乳酸、トリチルラジカル及び任意には常磁性金属イオンを含んでなる組成物であって、当該組成物が動的核分極によって得られるものである。好ましい実施形態では、前記過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウムは13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムであり、前記過分極13Ｃ1−乳酸は13Ｃ1−Ｌ−乳酸である。
【００９６】
本発明のさらに別の態様は、過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム又は過分極13Ｃ1−Ｄ−乳酸ナトリウム、好ましくは過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムである。
【００９７】
本発明のさらに別の態様は、過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウム及び／又は過分極13Ｃ1−Ｄ−乳酸ナトリウム、好ましくは過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムを含んでなるイメージング媒体である。
【００９８】
本発明に係るイメージング媒体は、13Ｃ−ＭＲ検出におけるイメージング媒体として使用できる。
【００９９】
本発明に係るイメージング媒体は、インビトロ13Ｃ−ＭＲ検出（例えば、ヒト又はヒト以外の動物の身体から導かれる細胞培養物、試料、エクスビボ組織又は単離器官の13Ｃ−ＭＲ検出）用のイメージング媒体として使用できる。この目的のためには、イメージング媒体は、例えば、細胞培養物、尿や血液や唾液のような試料、生検組織のようなエクスビボ組織又は単離器官に添加するのに適した組成物として提供される。かかるイメージング媒体は、イメージング剤である過分極13Ｃ−乳酸塩に加えて、インビトロ細胞又は組織アッセイに適合しかつそのために使用される溶媒（例えば、ＤＭＳＯ又はメタノール或いは水性キャリヤー及び非水性溶媒を含む溶媒混合物（例えば、ＤＭＳＯと水又は緩衝液との混合物或いはメタノールと水又は緩衝液との混合物））を含むことが好ましい。当業者には自明の通り、かかるイメージング媒体中には薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤及び製剤化補助剤が存在し得るが、かかる目的のために必要なわけではない。
【０１００】
さらに、本発明に係るイメージング媒体は、インビボ13Ｃ−ＭＲ検出（即ち、ヒト又はヒト以外の動物の生体に関して実施される13Ｃ−ＭＲ検出）用のイメージング媒体として使用できる。この目的のためには、イメージング媒体はヒト又はヒト以外の動物の生体への投与に適している必要がある。したがって、かかるイメージング媒体は、イメージング剤（即ち、ＭＲ活性剤である過分極13Ｃ−乳酸塩）に加えて、水性キャリヤー、好ましくは生理学的に許容されかつ薬学的に容認される水性キャリヤー（例えば、水、緩衝液又は食塩水）を含むことが好ましい。かかるイメージング媒体はさらに、通常の薬学的又は獣医学的キャリヤー又は賦形剤（例えば、ヒト医学又は獣医学における診断用組成物に関して常用されている安定剤、重量オスモル濃度調整剤、可溶化剤などの製剤化補助剤）を含むことができる。
【実施例】
【０１０１】
以下の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【０１０２】
実施例１ａ  常磁性金属イオンとしてのＧｄキレート及びＤＮＰ剤としてトリチルラジカルの存在下でのＤＮＰ法による過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムの製造
マイクロ試験管に13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム溶液（７８．５ｍｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ社、５０％ｗ／ｗ  13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム）を加えた。管のキャップを針で穿刺し、溶液を液体窒素中で凍結した。管をフラスコに入れ、凍結乾燥機に連結した。乾燥後、管は４１ｍｇの乾燥13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム（約０．３６ｍｍｏｌ、粘着性物質）を含んでいた。国際公開第９８／３９２７７号の実施例７に従って合成したトリス（８−カルボキシ−２，２，６，６−テトラ（ヒドロキシエチル）ベンゾ［１，２−４，５’］ビス−（１，３）ジチオール−４−イル）メチルナトリウム塩（トリチルラジカル）の１４５ｍＭ水溶液を調製し、この溶液の３．５μｌを管中の乾燥13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムに添加した。さらに、国際公開第２００７／０６４２２６号の実施例４に従って合成した１，３，５−トリス（Ｎ−（ＤＯ３Ａ−アセトアミド）−Ｎ−メチル−４−アミノ−２−メチルフェニル）−［１，３，５］トリアジナン−２，４，６−トリオンのＧｄキレート（常磁性金属イオン）の５ｍＭ水溶液を調製し、13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム及びトリチルラジカルを含む試験管にこの溶液の２．０μｌを添加した。得られた組成物を音波処理及び渦動混合することですべての化合物を溶解した。組成物を管から試料カップに移し、試料カップをＤＮＰ分極装置内に挿入した。ＤＮＰ条件下、３．３５Ｔの磁場中において１．２Ｋでマイクロ波（９４ＧＨｚ）を照射して組成物を分極させた。分極は固体状態13Ｃ−ＮＭＲによって追跡され、固体状態分極は２０％と測定された。
【０１０３】
実施例１ｂ  過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体の製造
６０分の動的核分極後、得られた凍結分極組成物を６ｍｌのリン酸塩緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．４、１００ｍｇ／ｌ  ＥＤＴＡ）に溶解した。溶解組成物を含む最終溶液のｐＨは７．４±０．１であった。前記最終溶液中の13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム濃度は６０±２ｍＭであった。
【０１０４】
液体状態分極は、４００ＭＨｚでの液体状態13Ｃ−ＮＭＲによって１８〜２０％と測定された。
【０１０５】
実施例２  常磁性金属イオンとしてのＧｄキレート及びＤＮＰ剤としてトリチルラジカルの存在下でのＤＮＰ法による過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムの製造並びに過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体の製造
水／グリセロール混合物（７５：２５）を用いてトリチル溶液及びＧｄキレート溶液を調製した点を除き、実施例１ａと同様にして実施例２を実施した。固体状態分極は１７〜２０％と測定された。得られた凍結分極組成物を実施例１ｂに記載したようにして溶解した。液体状態分極は１５〜２０％と測定された。最終溶液中の13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム濃度は３０〜５０ｍＭであった。
【０１０６】
実施例３  常磁性金属イオンとしてのＧｄキレート及びＤＮＰ剤としてトリチルラジカルの存在下でのＤＮＰ法による過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムの製造並びに過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体の製造
水／グリセロール混合物（５０：５０）を用いてトリチル溶液及びＧｄキレート溶液を調製した点を除き、実施例１ａと同様にして実施例３を実施した。固体状態分極は２５％と測定された。得られた凍結分極組成物を実施例１ｂに記載したようにして溶解した。液体状態分極は２５％と測定された。最終溶液中の13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウム濃度は３０ｍＭであった。
【０１０７】
実施例４  常磁性金属イオンとしてのＧｄキレート及びＤＮＰ剤としてトリチルラジカルの存在下でのＤＮＰ法による過分極13Ｃ1−Ｌ−乳酸の製造
５００μｌの濃Ｈ2ＳＯ4を２ｍｌの水に溶解した冷却溶液に１．５ｍｍｏｌの13Ｃ1−Ｌ−乳酸ナトリウムを溶解する。得られた混合物をジエチルエーテルで連続的に抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過する。濾液を真空中で濃縮し、13Ｃ1−Ｌ−乳酸を得る。
【０１０８】
13Ｃ1−Ｌ−乳酸（０．４ｍｍｏｌ）を穏やかに融解し、国際公開第２００６／０１１８１０号の実施例１に記載されているようにして合成したトリス（８−カルボキシ−２，２，６，６−（テトラ（メトキシエチル）ベンゾ［１，２−４，５’］ビス−（１，３）ジチオール−４−イル）メチルナトリウム塩を添加することで、前記13Ｃ1−Ｌ−乳酸中に１０ｍＭ濃度のトリチルラジカルを得る。さらに、国際公開第２００７／０６４２２６号の実施例４に従って合成した１，３，５−トリス（Ｎ−（ＤＯ３Ａ−アセトアミド）−Ｎ−メチル−４−アミノ−２−メチルフェニル）−［１，３，５］トリアジナン−２，４，６−トリオンのＧｄキレート（常磁性金属イオン）の５ｍＭ水溶液を調製し、13Ｃ1−Ｌ−乳酸及びトリチルラジカルを含む試験管にこの溶液の２．０μｌを添加する。得られた組成物を音波処理及び渦動混合することですべての化合物を溶解する。組成物を管から試料カップに移し、試料カップをＤＮＰ分極装置内に挿入する。ＤＮＰ条件下、３．３５Ｔの磁場中において１．２Ｋでマイクロ波（９４ＧＨｚ）を照射して組成物を分極させた。分極は固体状態13Ｃ−ＮＭＲによって追跡された。
【０１０９】
実施例５ａ  常磁性金属イオンとしてのＧｄキレート及びＤＮＰ剤としてトリチルラジカルの存在下でのＤＮＰ法による過分極Ｄ−乳酸の製造
マイクロ試験管に、２１．７ｍｇのＤ−乳酸（０．２４ｍｍｏｌ）を４μｌの水と共に加えた。国際公開第９８／３９２７７号の実施例７に従って合成したトリス（８−カルボキシ−２，２，６，６−テトラ（ヒドロキシエチル）ベンゾ［１，２−４，５’］ビス−（１，３）ジチオール−４−イル）メチルナトリウム塩（トリチルラジカル）の１３９μｍｏｌ／ｇ水溶液を調製し、この溶液の２．９ｍｇをマイクロ試験管に添加した。さらに、国際公開第２００７／０６４２２６号の実施例４に従って合成した１，３，５−トリス（Ｎ−（ＤＯ３Ａ−アセトアミド）−Ｎ−メチル−４−アミノ−２−メチルフェニル）−［１，３，５］トリアジナン−２，４，６−トリオンのＧｄキレート（常磁性金属イオン）の１４．６μｍｏｌ／ｇ水溶液を調製し、Ｄ−乳酸及びトリチルラジカルを含む試験管にこの溶液の１．２６ｍｇを添加した。得られた組成物を音波処理及び渦動混合することですべての化合物を溶解した。組成物を管から試料カップに移し、試料カップをＤＮＰ分極装置内に挿入した。ＤＮＰ条件下、３．３５Ｔの磁場中において１．２Ｋでマイクロ波（９４ＧＨｚ）を照射して組成物を分極させた。
【０１１０】
実施例５ｂ  過分極Ｄ−乳酸塩を含むイメージング媒体の製造
一晩の動的核分極後、得られた凍結分極組成物を６ｍｌのリン酸塩緩衝液（４０ｍＭ、ｐＨ７．３、ＮａＣｌで２００ｍＭに合わせた重量オスモル濃度、１００ｍｇ／ｌ  ＥＤＴＡ、１ｅｑ  ＮａＯＨ）に溶解した。溶解組成物を含む最終溶液のｐＨは７．１であった。前記最終溶液中のＤ−乳酸塩濃度は４０ｍＭであった。
【０１１１】
液体状態分極は、４００ＭＨｚでの液体状態13Ｃ−ＮＭＲによって１４％と測定された。液体状態緩和（９．４ＴでのＴ1）は４４秒と測定された。
【０１１２】
実施例６  過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体を用いたインビトロ13Ｃ−ＭＲ分光法
実施例１に記載したようにしてイメージング媒体を製造し、２５μｌのイメージング媒体（２．７ｍＭ  13Ｃ1−乳酸ナトリウム）を１０Ｍ  Ｈｅｐ−Ｇ２細胞中に混入した。１５度のＲＦパルスを用いて、13Ｃ−ＭＲスペクトルの動的セットを５秒ごとに取得した。明らかに、13Ｃ1−ピルビン酸塩は時間の経過と共に蓄積した。平均転化率は０．３％であり、ピーク転化率（０．４％）は実験開始から約２０秒後であった。
【０１１３】
実施例７  過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体を用いたマウス（全身）でのインビボ13Ｃ−ＭＲ分光法
実施例１に記載したようにして製造したイメージング媒体の２００μｌを、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに６秒かけて注射した。前記イメージング媒体中の13Ｃ1−乳酸ナトリウム濃度は６０〜９０ｍＭであり、実験では３頭の動物を用いた。（プロトン及び炭素に対して同調させた）ラットサイズの全身コイルを動物の上方に配置し、９．４Ｔの磁石内で13Ｃ−ＭＲ分光法を実施した。１５度のＲＦパルスを用いて、13Ｃ−ＭＲスペクトルの動的セット（全部で３０）を３秒ごとに取得した。顕著な量の代謝が見られ、最も早いピークは13Ｃ1−ピルビン酸塩（13Ｃ1−乳酸塩信号の約２％）であり、それより後の時点で13Ｃ1−アラニン（13Ｃ1−乳酸塩信号の約１．５％）が認められた。13Ｃ1−重炭酸塩（13Ｃ1−乳酸塩信号の約０．５％）は、13Ｃ1−ピルビン酸塩とほぼ同じピーク時点に認められた（図１）。図２は、３０の取得スペクトルのすべてを示す重ね合わせプロットである。ＭＲスペクトルから下記の減衰時間を計算した。即ち、13Ｃ1−ピルビン酸塩は２３秒、13Ｃ1−アラニンは３３秒、13Ｃ1−重炭酸塩は２４秒であった。
【０１１４】
実施例８  過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体を用いたマウス（肝臓）でのインビボ13Ｃ−ＭＲ分光法
実施例１に記載したようにして製造したイメージング媒体の２００μｌを、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに６秒かけて注射した。前記イメージング媒体中の13Ｃ1−乳酸ナトリウム濃度は約６０ｍＭであった。（プロトン及び炭素に対して同調させた）表面コイルを動物の肝臓の上方に配置し、９．４Ｔの磁石内で13Ｃ−ＭＲ分光法を実施した。３０度のＲＦパルスを用いて、13Ｃ−ＭＲスペクトルの動的セット（全部で２０）を５秒ごとに取得した。この場合にも顕著な量の代謝が見られ、まず13Ｃ1−ピルビン酸塩（13Ｃ1−乳酸塩信号の約３％）、次いでそれより後の時点で13Ｃ1−アラニン（13Ｃ1−乳酸塩信号の約３．５％）が認められた（図３）。13Ｃ1−重炭酸塩は非常に低いレベルしか認められず、これは図４中において３０ｐｐｍの位置に見ることができる。図４は、２０の取得ＭＲスペクトルの総合スペクトルを示している。
【０１１５】
実施例９  過分極13Ｃ1−乳酸ナトリウムを含むイメージング媒体を用いたマウス（心臓）でのインビボ13Ｃ−ＭＲ分光法
実施例１に記載したようにして製造したイメージング媒体の２００μｌを、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに６秒かけて注射した。前記イメージング媒体中の13Ｃ1−乳酸ナトリウム濃度は約６０ｍＭであり、実験では２頭の動物を用いた。（プロトン及び炭素に対して同調させた）表面コイルを動物の心臓の上方に配置し、９．４Ｔの磁石内で13Ｃ−ＭＲ分光法を実施した。３０度のＲＦパルスを用いて、13Ｃ−ＭＲスペクトルの動的セット（全部で２０）を５秒ごとに取得した。この場合にも顕著な量の代謝が見られ、まず13Ｃ1−ピルビン酸塩（13Ｃ1−乳酸塩信号の約２％）、次いでそれより後の時点で13Ｃ1−アラニンが認められた。13Ｃ1−重炭酸塩（13Ｃ1−乳酸塩信号の約０．５％）は、13Ｃ1−ピルビン酸塩とほぼ同じピーク時点に認められた（図５）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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