(57)【要約】  本発明は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象、好ましくはヒトに投与することを含む方法と、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための医薬組成物を製造するための式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用と、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療における式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用とに関する。【化５】2015512416.tif 000010
2015512416.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法：
【化３】
2015512416.tif 000008
［式中、
Ａは、
【化４】
2015512416.tif 000009
からなる群から選択されるヘテロアリールを表し、
Ｒ１は、以下の置換基の１つを表し：（１）非置換または置換、好ましくは置換のＣ１〜Ｃ７アルキル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜９個の以下の部分：重水素、フルオロ、または１〜２個の以下の部分：Ｃ３〜Ｃ５シクロアルキルから独立して選択される）；（２）任意に置換されていてもよいＣ３〜Ｃ５シクロアルキル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜４個の以下の部分：重水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル（好ましくはメチル）、フルオロ、シアノ、アミノカルボニルから独立して選択される）；（３）任意に置換されていてもよいフェニル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜２個の以下の部分：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ７アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ７アルキルアミノカルボニル、ジ（Ｃ１〜Ｃ７アルキル）アミノカルボニル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシから独立して選択される）；（４）任意に一置換または二置換されていてもよいアミン（ここで、前記置換基は、以下の部分：重水素、Ｃ１〜Ｃ７アルキル（非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシの群から選択される１個以上の置換基で置換されている）、フェニルスルホニル（非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、ジ（Ｃ１〜Ｃ７アルキル）アミノ−Ｃ１〜Ｃ７アルコキシで置換されている）から独立して選択される）；（５）置換スルホニル（ここで、前記置換基は、以下の部分：Ｃ１〜Ｃ７アルキル（非置換であるか、または重水素、フルオロの群から選択される１個以上の置換基で置換されている）、ピロリジノ（非置換であるか、または重水素、ヒドロキシ、オキソの群から選択される１個以上の置換基、特に１個のオキソで置換されている）から選択される）；（６）フルオロ、クロロ；
Ｒ２は、水素を表し；
Ｒ３は、（１）水素、（２）フルオロ、クロロ、（３）任意に置換されていてもよいメチル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜３個の以下の部分：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノから独立して選択される）を表し；
ただし（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛５−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−ピリミジン−４−イル］−４−メチル−チアゾール−２−イル｝−アミド）を除く］。
【請求項２】
前記式（Ｉ）の化合物が、化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）または薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記式（Ｉ）の化合物が、０．１〜約５００ｍｇの１日用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療するのに使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、および任意に少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物または医薬。
【請求項５】
神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項６】
神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療における、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項７】
前記式（Ｉ）の化合物が、化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）または薬学的に許容されるその塩である、請求項５または６に記載の使用。
【請求項８】
神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
前記式（Ｉ）の化合物が、化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）または薬学的に許容されるその塩である、請求項８に記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象、好ましくはヒトに投与することを含む方法と、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための医薬組成物を製造するための式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用と、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療における式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用とに関する。
【背景技術】
【０００２】
神経芽細胞腫は、副腎、首、胸または脊髄の神経組織において悪性（癌）細胞が形成する疾患である。神経芽細胞腫は、最も一般的な頭蓋外の小児癌であり、乳児期に起こる最も一般的な腫瘍である。それは、神経芽細胞（多能性交感神経細胞）から生じる交感神経系の胚性悪性腫瘍である。発生中の胚において、これらの細胞は陥入し、中枢神経軸に沿って移動し、交感神経節、副腎髄質および他の部位に集合し、たとえば、副腎、首、胸または脊髄の神経組織において悪性（癌）細胞が形成する。
【０００３】
神経芽細胞腫は、多くの場合、副腎の神経組織から発症する。上腹部の背面の各腎臓の上部に１つずつ、２つの副腎が存在する。副腎は、心拍数、血圧、血糖、およびストレスに対する身体の反応の仕方の制御を助ける重要なホルモンを産生する。神経芽細胞腫は、胸から、首の脊椎近くの神経組織から、または脊髄から発症することもある。神経芽細胞腫は、最も多くの場合、小児期早期に、通常は５歳未満の子供に発症する。それは、出生前に形成する場合もあるが、通常は、後になって、腫瘍が増殖し始め、症状を引き起こすときに発見される。
【０００４】
胎児発育期の神経芽細胞の起源および移動パターンは、これらの腫瘍が起こる多数の解剖学的部位を説明する；腫瘍の位置は年齢とともに変化するようである。腫瘍は、腹腔で起こることもあり（たとえば、４０％副腎、２５％傍脊椎神経節）、または他の部位を侵すこともある（たとえば、１５％胸部、５％骨盤、３％頸部腫瘍、１２％混合型）。
【０００５】
神経芽細胞腫が診断されるときまでに、癌は、最も多くの場合リンパ節、骨、骨髄、肝臓および皮膚に、転移（拡散）しているのが通常である。小さな腫瘍が出生前超音波検査で乳児において検出されているが、大部分の患者は、腫瘍増殖に関連する徴候および症状を呈する。大きな腹部腫瘍は、多くの場合、腹囲の増加および他の局所症状（たとえば疼痛）をもたらす。傍脊椎ダンベル型腫瘍は、脊柱管へ伸長し、脊髄を侵害し、神経機能障害を引き起こし得る。
【０００６】
ユーイング肉腫は、骨または骨の近くで起こる、まれな癌性の腫瘍である。ユーイング肉腫は、典型的に子供および青年が罹患するが、通常は思春期に発生する。ユーイング肉腫は、骨ユーイング腫瘍（骨ユーイング肉腫）、骨外性ユーイング腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（末梢性神経上皮腫）、およびアスキン腫瘍を包含する４つの異なるタイプの癌の群である。これらの腫瘍は、同じタイプの幹細胞を起源とする。
【０００７】
横紋筋肉腫は、骨に付着している、筋肉のまれな癌性の腫瘍である。この腫瘍の最も一般的な位置は、頭頸部の構造、尿生殖路、および腕または脚である。米国では、２１歳未満の子供において毎年およそ３５０の横紋筋肉腫の症例が診断されており、子供における一般的な軟部組織腫瘍である。
【発明の概要】
【０００８】
医療は進歩しているものの、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫および横紋筋肉腫を患う患者には、改善された治療が依然として必要である。
【０００９】
本発明によれば、式（Ｉ）のアルファアイソフォーム特異的ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）３キナーゼ阻害化合物、特に（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（以後、「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫および横紋筋肉腫の有効な治療のために有用であることが発見された。
【００１０】
本発明は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
好ましい本発明の化合物は、ＷＯ２０１０／０２９０８２に具体的に記載される化合物である。非常に好ましい本発明の化合物は、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（以後、「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩である。
【００１２】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、および任意に少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物または医薬を提供する。
【００１３】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１４】
本発明はさらに、患者において神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の進行を遅延させる方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００１６】
本発明はさらに、それを必要とする患者において神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の進行を遅延させるのに使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００１７】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療における、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００１８】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】化合物Ｉによる治療時の神経芽細胞腫細胞株（ＣＨＰ−２１２、ＩＭＲ−３２、ＫＥＬＬＹ、ＳＫ−Ｎ−ＳＨ、ＫＰ−Ｎ−ＳＩ９ｓ、ＳＩＭＡ、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ、ＳＫ−Ｎ−ＢＥ（２）、ＳＫ−Ｎ−ＤＺ、およびＳＫ−Ｎ−ＦＩ）の感受性を、両側のフィッシャーの正確確率検定を使用して示す図である。両側のフィッシャーの正確確率検定は、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）のＡｍａｘ（阻害％）と化合物ＩのＥＣ５０との比較を提供する。
【図２】化合物Ｉによる治療時のユーイング肉腫細胞株（ＨＳ８２２．Ｔ、ＭＨＨ−ＥＳ−１、ＳＫ−ＥＳ−１、およびＴＣ−７１）の感受性を、両側のフィッシャーの正確確率検定を使用して示す図である。両側のフィッシャーの正確確率検定は、化合物ＩのＡｍａｘ（阻害％）と化合物ＩのＥＣ５０との比較を提供する。
【図３】化合物Ｉによる治療時の横紋筋肉腫細胞株（Ｇ４０１、Ｇ４０２、Ａ６７３、Ｈｓ７２９、ＫＹＭ−１、ＲＤ、ＲＨ−４１、ＳＪＲＨ３０、ＴＥ１２５．Ｔ、およびＴＥ６１７．Ｔ）の感受性を、両側のフィッシャーの正確確率検定を使用して示す図である。両側のフィッシャーの正確確率検定は、化合物ＩのＡｍａｘ（阻害％）と化合物ＩのＥＣ５０との比較を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２１】
本明細書で使用されるいくつかの用語について、下記に説明する。本発明の化合物は、標準的な命名法を使用して記載される。別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００２２】
以下の一般的定義は、別段の規定がない限り、本明細書において適用されるものとする。
【００２３】
用語「含む」および「包含する」は、別段の注記がない限り、そのオープンエンドでかつ非限定的な意味で本明細書では使用される。
【００２４】
本発明の説明に関連する（とりわけ、以下の特許請求の範囲に関連する）用語「１つの（a）」および「１つの（an）」および「その（the）」ならびに同様の言及は、本明細書で別段の指示がない限り、または明らかに文脈と矛盾しない限り、単数形と複数形の両方に及ぶと解釈されるべきである。化合物、塩などについて複数形が使用される場合、これは、単一の化合物、塩なども意味するとみなされる。
【００２５】
用語「ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤」は、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（「ＰＩ３キナーゼ」）を標的とする、減少させるまたは阻害する化合物を指すと本明細書では定義される。ＰＩ３キナーゼ活性は、多数のホルモンおよび増殖因子の刺激、たとえば、インスリン、血小板由来増殖因子、インスリン様増殖因子、上皮細胞増殖因子、コロニー刺激因子および肝細胞増殖因子に応答して増加することが示されており、細胞増殖および形質転換に関連するプロセスに関与している。
【００２６】
用語「医薬組成物」は、温血動物、たとえば、哺乳類またはヒトが罹患しているある特定の疾患または状態を予防または治療するために温血動物に投与される、少なくとも１種の有効成分または治療剤を含有する混合物または溶液を指すと本明細書では定義される。
【００２７】
用語「薬学的に許容される」は、正当な医学的判断の範囲内で、妥当なベネフィット／リスク比に見合って過度の毒性、刺激、アレルギー応答および他の問題となる合併症がなく、温血動物、たとえば、哺乳類またはヒトの組織との接触に好適である化合物、材料、組成物および／または剤形を指すと本明細書では定義される。
【００２８】
句「治療有効量」は、それを必要とする温血動物の活動、機能および応答における臨床的に重大な欠陥を少なくとも約１５パーセント、好ましくは少なくとも５０パーセント、より好ましくは少なくとも９０パーセント低減する、最も好ましくは予防するのに十分な量を意味するよう本明細書では使用される。あるいは、治療有効量は、それを必要とする温血動物において臨床的に重大な状態／症状の改善を引き起こすのに十分なものである。
【００２９】
本明細書で使用される用語「治療すること」または「治療」は、対象における少なくとも１つの症状を軽減する、低減するもしくは緩和するまたは疾患の進行の遅延をもたらす治療を含む。たとえば、治療は、障害の１つもしくはいくつかの症状の減退または癌などの障害の完全な根絶であり得る。本発明の意味の範囲内において、用語「治療する」は、発病（すなわち、疾患の臨床兆候に先立つ期間）を抑止する、遅延させる、および／または疾患を発生または悪化させるリスクを低減することも示す。用語「保護する」は、対象における疾患の発生または持続または重症化を、適切に、予防する、遅延させるもしくは治療すること、またはそれらのすべてを意味するよう本明細書では使用される。
【００３０】
用語「対象」とは、動物を指す。典型的には、動物は、哺乳類である。対象とは、たとえば、霊長類（たとえば、ヒト、男性または女性）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類なども指す。いくつかの実施形態では、対象は、霊長類である。さらに他の実施形態では、対象は、ヒトである。
【００３１】
３つのクラスのＰＩ３キナーゼ（Ｉ〜ＩＩＩ）が存在し、現在８つのファミリーメンバーが知られている。クラスＩ酵素は、調節（ｐ８５）ドメインおよび触媒（ｐ１１０）サブユニットを有するヘテロ二量体からなり、該サブユニットには、４つのアイソフォーム：ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δおよびｐ１１０γが存在する。αおよびβアイソフォームは、普遍的に発現される；αは上流で主に受容体チロシンキナーゼに結合し、βはＧタンパク質共役受容体と受容体チロシンキナーゼの両方からのシグナルを媒介することができる。δおよびγアイソフォームは、主としてリンパ球で発現され、免疫応答の調節において重要な役割を果たす。
【００３２】
ＰＩ３Ｋシグナル伝達における機能獲得は、多くのタイプのヒト癌において一般的であり、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子の不活性化、一部の受容体チロシンキナーゼ（たとえば、ｅｒｂＢ３、ｅｒｂＢ２、ＥＧＦＲ）の増幅／過剰発現または活性化変異、ＡＫＴを含有するゲノム領域の増幅、ＰＩＫ３ＣＡ（ｐ１１０αをコードする遺伝子）の増幅、およびｐ１１０αにおける変異が挙げられる。多様な固形腫瘍タイプの３０％超はＰＩＫ３ＣＡの変異を含有することが近年発見された。こうした変異頻度から、ＰＩＫ３ＣＡは、ヒト癌において同定される最も一般的に変異する遺伝子の１つである。
【００３３】
国際特許出願ＷＯ２０１０／０２９０８２は、特異的２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体を記載しており、それは、ＰＩ３キナーゼ（ホスファチジルイノシトール３キナーゼ）に対して阻害活性を有することが発見されている。本発明に好適な特異的２−カルボキサミドシクロアミノウレア誘導体、その調製およびそれを含有する好適な製剤は、ＷＯ２０１０／０２９０８２に記載されており、式（Ｉ）の化合物が挙げられる：
【００３４】
【化１】
2015512416.tif 000003
［式中、
Ａは、
【００３５】
【化２】
2015512416.tif 000004
からなる群から選択されるヘテロアリールを表し、
Ｒ１は、以下の置換基の１つを表し：（１）非置換または置換、好ましくは置換のＣ１〜Ｃ７アルキル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜９個の以下の部分：重水素、フルオロ、または１〜２個の以下の部分：Ｃ３〜Ｃ５シクロアルキルから独立して選択される）；（２）任意に置換されていてもよいＣ３〜Ｃ５シクロアルキル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜４個の以下の部分：重水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル（好ましくはメチル）、フルオロ、シアノ、アミノカルボニルから独立して選択される）；（３）任意に置換されていてもよいフェニル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜２個の以下の部分：重水素、ハロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ７アルキル）アミノ、Ｃ１〜Ｃ７アルキルアミノカルボニル、ジ（Ｃ１〜Ｃ７アルキル）アミノカルボニル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシから独立して選択される）；（４）任意に一置換または二置換されていてもよいアミン（ここで、前記置換基は、以下の部分：重水素、Ｃ１〜Ｃ７アルキル（非置換であるか、または重水素、フルオロ、クロロ、ヒドロキシの群から選択される１個以上の置換基で置換されている）、フェニルスルホニル（非置換であるか、または１個以上、好ましくは１個のＣ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、ジ（Ｃ１〜Ｃ７アルキル）アミノ−Ｃ１〜Ｃ７アルコキシで置換されている）から独立して選択される）；（５）置換スルホニル（ここで、前記置換基は、以下の部分：Ｃ１〜Ｃ７アルキル（非置換であるか、または重水素、フルオロの群から選択される１個以上の置換基で置換されている）、ピロリジノ（非置換であるか、または重水素、ヒドロキシ、オキソの群から選択される１個以上の置換基、特に１個のオキソで置換されている）から選択される）；（６）フルオロ、クロロ；、
Ｒ２は、水素を表し；
Ｒ３は、（１）水素、（２）フルオロ、クロロ、（３）任意に置換されていてもよいメチル（ここで、前記置換基は、１個以上、好ましくは１〜３個の以下の部分：重水素、フルオロ、クロロ、ジメチルアミノから独立して選択される）を表し；
ただし（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛５−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル）−ピリミジン−４−イル］−４−メチル−チアゾール−２−イル｝−アミド）を除く］。
【００３６】
ＷＯ２０１０／０２９０８２に開示されているように、式（Ｉ）の化合物は、特に有利な薬理学的特性を有し、他のタイプと比較して、ＰＩ３キナーゼアルファサブタイプに対して改善された選択性を示すことが発見されている。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物の定義において使用される基および記号は、ＷＯ２０１０／０２９０８２に開示される意味を有し、その公報は、参照によりその全体が本出願に組み込まれる。
【００３８】
好ましい本発明の化合物は、ＷＯ２０１０／０２９０８２に具体的に記載される化合物である。非常に好ましい本発明の化合物は、（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（以後、「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩である。（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）の合成は、ＷＯ２０１０／０２９０８２に実施例１５として記載されている。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物は、遊離塩基または薬学的に許容されるその塩の形態で使用してもよい。用語「塩」（「またはその塩」が意味するもの）は、単独でまたは式（Ｉ）の遊離化合物との混合物として存在することができ、好ましくは薬学的に許容される塩である。そのような塩は、たとえば、塩基性窒素原子を有する式（Ｉ）の化合物から、好ましくは有機または無機酸との、酸付加塩として形成され、とりわけ、薬学的に許容される塩である。好適な無機酸は、たとえば、ハロゲン酸、例として塩酸、硫酸、またはリン酸である。好適な有機酸は、たとえば、カルボン酸またはスルホン酸、例として、フマル酸またはメタンスルホン酸である。単離または精製のためには、薬学的に許容されない塩、たとえば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療的使用のためには、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみが用いられ（適用可能な場合は、医薬調製物の形態で）、したがって、これらが好ましい。遊離形態の新規化合物と、たとえば、新規化合物の精製または同定において、中間体として使用することができる塩を包含するその塩の形態の新規化合物との間の密接な関係性から見て、上記および下記の遊離化合物への言及はいずれも、適切かつ好都合な場合、対応する塩についても言及しているものと理解されるべきである。式（Ｉ）の化合物の塩は、好ましくは薬学的に許容される塩であり、薬学的に許容される塩を形成する好適な対イオンは、当分野で公知である。
【００４０】
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療するために使用され得る。
【００４１】
神経芽細胞腫は、副腎、首、胸または脊髄の神経組織において悪性（癌）細胞が形成する疾患である。
【００４２】
ユーイング肉腫は、骨または骨の近くで起こり、子供および青年を襲う、まれな癌性腫瘍である。ユーイング肉腫は、骨ユーイング腫瘍（骨ユーイング肉腫）、骨外性ユーイング腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（末梢性神経上皮腫）およびアスキン腫瘍を包含する４つの異なるタイプの癌の群である。これらの腫瘍はすべて、同じタイプの幹細胞に由来する。
【００４３】
横紋筋肉腫は、骨に付着している、筋肉のまれで癌性の腫瘍である。この腫瘍は、最も一般的には、頭頸部の構造、尿生殖路、および腕または脚に位置する。
【００４４】
したがって、一実施形態では、本発明は、神経芽細胞腫を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００４５】
さらなる実施形態では、本発明は、ユーイング肉腫を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００４６】
さらなる実施形態では、本発明は、横紋筋肉腫を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物、特に化合物Ｉは、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を１種以上の薬学的に許容される担体または希釈剤、とりわけ、腸内または非経口適用に好適なものとともに含む、対象、特にヒトを包含する哺乳類（温血動物）への経腸、たとえば経口または直腸、および非経口投与に好適な医薬組成物または医薬として投与され得る。
【００４８】
経腸または非経口投与用の併用療法のための医薬組成物または医薬は、たとえば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤もしくは坐剤、またはアンプル剤などの単位剤形のものである。別段の指示がない限り、これらは、それ自体公知の様式で、たとえば、従来の混合、造粒、糖衣、溶解または凍結乾燥プロセスによって調製される。必要な有効量は、複数の投与量単位の投与により到達され得るため、各剤形の個々の用量中に含有される組合せ対象の単位含有量が、それ自体で有効量を構成する必要はないことは認識されよう。
【００４９】
したがって、本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩、および任意に少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物または医薬を提供する。好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、化合物Ｉである。さらなる好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩は、それを必要とする対象に治療有効用量で投与される。
【００５０】
用語「担体」とは、それとともに化合物が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。そのような医薬担体は、滅菌液体、たとえば、水、および油、例として、石油、動物、植物または合成の起源のもの、たとえば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであってよい。水または水溶液食塩溶液ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液は、特に注射溶液用の、担体として用いられることが好ましい。好適な医薬担体は、E. W. Martinによる「Remington's Pharmaceutical Sciences」に記載されている。
【００５１】
許容される賦形剤は、無毒性であり、投与を補助し、式Ｉの化合物の治療的利益に悪影響を及ぼさないものである。そのような賦形剤は、任意の、固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合には当業者が一般に利用可能なガス状賦形剤であってもよい。
【００５２】
固体医薬賦形剤としては、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどが挙げられる。
【００５３】
液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、および多様な油、例として、石油、動物、植物または合成の起源のもの、たとえば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などから選択され得る。好ましい液体担体、特に注射溶液用のものとしては、水、生理食塩水、水性デキストロースおよびグリコールが挙げられる。
【００５４】
圧縮ガスを使用して、式（Ｉ）の化合物をエアロゾル形態に分散させてもよい。このために好適な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。他の好適な医薬賦形剤およびその製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences、E. W. Martin編（Mack Publishing Company、第18版、1990）に記載されている。
【００５５】
製剤中の化合物の量は、当業者に用いられる全範囲内で変化し得る。典型的には、製剤は、重量パーセント（ｗｔ％）基準で、製剤全体に対して約０．０１〜９９．９９ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物を含有し、残部は１種以上の好適な医薬賦形剤である。好ましくは、化合物は、約１〜８０ｗｔ％のレベルで存在する。
【００５６】
好適な医薬組成物は、たとえば、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の有効成分を含有し得る。本発明に従い投与される式（Ｉ）の化合物の実際の量は、数々の因子、たとえば、治療される疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用される化合物の効力、投与の経路および形態、ならびに他の因子によって決まる。薬物は、１日に複数回、好ましくは１日に１回または２回投与することができる。これらの因子はすべて、担当臨床医の技量の範囲内である。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）は、体重当たり約０．０３〜約１００．０ｍｇ／ｋｇ、たとえば、体重当たり約０．０３〜約１０．０ｍｇ／ｋｇの１日投与量で経口投与され得る。大型哺乳類、たとえばヒトにおける指示される１日投与量は、約０．５ｍｇ〜約３ｇ、たとえば、約５ｍｇ〜約１．５ｇの範囲であり、たとえば、１日４回までの分割用量でまたは徐放形態で、首尾よく投与される。経口投与用の好適な単位剤形は、およそ０．１〜約５００ｍｇ、たとえば、約１．０〜約５００ｍｇの有効成分、約１０．０〜４００ｍｇの有効成分を含む。
【００５８】
別段の記述がない限り、式（Ｉ）の化合物は、増殖性障害の治療のためのそのようなＰＩ３キナーゼ阻害剤を含む製品の製品情報において規定される投与量で、またはとりわけそのような製品情報が利用可能でない場合には、用量設定試験において決定される投与量で使用される。
【００５９】
ヒト患者における好適な臨床研究は、たとえば、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を有する患者における非盲検非無作為化研究である。そのような研究は、特に、治療計画の構成要素の１つのみによる治療と比較して、特許請求される治療方法が優れていることを証明する。神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫に対する有益な効果は、これらの研究の結果から直接（たとえば、ＲＦＳ、もしくは無増悪生存期間−ＰＦＳ）またはそれ自体当業者に公知である研究デザインの変更により決定することができる。
【００６０】
さらなる実施形態では、本発明は、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌を治療する方法であって、治療有効量の化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００６１】
さらなる実施形態では、本発明は、患者において神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の進行を遅延させる方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００６２】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、化合物Ｉである。
【００６３】
さらなる実施形態では、本発明はさらに、それを必要とする患者において神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の進行を遅延させるのに使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００６４】
さらなる実施形態では、本発明はさらに、それを必要とする患者において神経芽細胞腫の進行を遅延させるのに使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００６５】
さらなる実施形態では、本発明はさらに、それを必要とする患者においてユーイング肉腫の進行を遅延させるのに使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００６６】
さらなる実施形態では、本発明はさらに、それを必要とする患者において横紋筋肉腫の進行を遅延させるのに使用するための医薬組成物または医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００６７】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療における、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、化合物Ｉである。
【００６８】
本発明はさらに、神経芽細胞腫の治療における式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００６９】
本発明はさらに、ユーイング肉腫の治療における式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００７０】
本発明はさらに、横紋筋肉腫の治療における式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００７１】
さらなる実施形態では、本発明はさらに、それを必要とする患者において神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００７２】
本発明はさらに、それを必要とする患者において神経芽細胞腫の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００７３】
本発明はさらに、それを必要とする患者においてユーイング肉腫の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００７４】
本発明はさらに、それを必要とする患者において横紋筋肉腫の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００７５】
本発明はさらに、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００７６】
本発明はさらに、神経芽細胞腫の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００７７】
本発明はさらに、ユーイング肉腫の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００７８】
本発明はさらに、横紋筋肉腫の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００７９】
さらなる実施形態では、本発明は、それを必要とする患者において神経芽細胞腫、ユーイング肉腫または横紋筋肉腫からなる群から選択される癌の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）に関する。
【００８０】
本発明は、それを必要とする患者において神経芽細胞腫の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）に関する。
【００８１】
本発明は、それを必要とする患者においてユーイング肉腫の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）に関する。
【００８２】
本発明は、それを必要とする患者において横紋筋肉腫の進行を遅延させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物、特に化合物（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）に関する。
【００８３】
以下の実施例は、上記の本発明を例示するものであるが、決して本発明の範囲を限定しようとするものではない。それ自体該当技術分野の当業者に公知の他の試験モデルも、特許請求される発明の有益な効果を決定することができる。
【００８４】
以下の実施例では、以下の一般的手順を使用して、化合物Ｉに対する特定の神経芽細胞腫細胞株の感受性を判定する。
【実施例】
【００８５】
一般的手順：
材料
細胞培養：細胞株は、商業的供給源、たとえば、ＡＴＣＣおよびＤＳＭＺから得られる。試験されるすべての細胞株は、供給業者の推奨通り、ＲＰＭＩまたはＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養する。細胞株は、Ｔ−１７５または３層Ｔ−１７５「トリプル」フラスコ中で、しばしばロボット（ＣｏｍｐａｃＴ−Ｔｈｅ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  Ｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ）により行われる標準的な組織培養技術を使用して培養する。すべての細胞株は、凍結ストックから解凍し、３７Ｃ、５％ＣＯ２で増殖させる。ＴｒｙｐＬＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して接着性細胞株を剥離し、１：３希釈で少なくとも１回の継代、通常は２から３回の継代によって増殖させた後、それらをアッセイマイクロタイタープレートに加える。細胞の計数および生存率は、ＶｉＣｅｌｌカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｕｒｅ）によるトリパン色素排除法を使用して測定する。すべての細胞株は、ＰＣＲ検出（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒａｄｉｌ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ）を使用して、マイコプラズマについて試験され、マイコプラズマを含まないことが示される。
【００８６】
化合物調製：（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（「化合物Ｉ」）を、２ｍＭの９０％ＤＭＳＯ／１０％水に溶解し、長期保存の場合は−２０℃で、続けて数日の場合は室温で保存する。溶液をマイクロタイタープレートに配置し、３．１６倍にさらに７回段階希釈し、２ｍＭ〜６３６ｎＭの濃度範囲を得る。ＵＶ吸着および主要なＵＶピークの質量を検査する標準的なＬＣ−質量分析法を使用して、小分子および溶液の純度を検査する。
【００８７】
アッセイの自動化
すべてのアッセイは自動化され、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＧＮＦ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｎｆｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／）により構築された超高スループットスクリーニングシステムにより実施する。細胞株を、１５３６ウェル組織培養処理（Tissue culture treated）プレートに、５ｕＬの最終体積およびウェル当たり２５０個の細胞の濃度で分注する。１２〜２４時間にわたり、細胞を接着させ増殖を開始させる；次いで、２０ｎＬの材料を送達するよう較正されたスロットピン（Ｖ＆Ｐ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖｐ−ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）を使用して、小分子を細胞に移送する。これにより、８ｕＭ〜２．５ｎＭの最終小分子濃度範囲および０．４％を少し下回る最終ＤＭＳＯ濃度がもたらされる。細胞−小分子混合物を、７２〜８４時間インキュベートする。ウェル中のＡＴＰの量を測定するＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、発光をＶｉｅｗＬｕｘプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。すべてのプレートにおいて、ビヒクルのみおよび陽性対照のプロテオソーム阻害剤であるＭＧ１３２  １μＭを含有するウェルを含めた。生の値は、０％がビヒクルウェルの中央値に相当し、１００％が陽性対照の中央値に相当するようにプレートごとの基準で「正規化された」パーセントである。「正規化された」データをさらに、独自の表面パターンモデルを使用して補正して、エッジおよび領域効果（edge and region effects）を取り除く（Ｈｅｌｉｏｓにおいて）。すべてのデータを分析し、Ｈｅｌｉｏｓデータシステムに保存し、その後ＡｖａｌｏｎおよびＭａｇｍａデータベースにロードする。
【００８８】
変曲点（ＥＣ５０）およびＡｍａｘの決定：細胞株用量応答曲線は、最大効果レベル（Ａｍａｘ）曲率変曲点（ＥＣ５０）とともにＨｉｌｌシグモイド関数により表される。
【００８９】
統計分析：多様な系統／遺伝／経路因子と化合物Ｉの薬理学的感受性との間の関連性の統計分析は、フィッシャーの正確確率検定を使用して行う。
【００９０】
感受性分析：
化合物Ｉに対する多様な癌細胞株の感受性を決定するため、細胞増殖に対する化合物の用量の増加の効果を、広範な癌細胞株パネルにおいて調査する。細胞を１５３６ウェルマイクロタイタープレートに播種し、３倍ずつ０．００２５〜８ｕＭまで変動させた化合物Ｉの濃度で７２時間インキュベートする。このインキュベーションの後、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏを使用して相対細胞数を決定し、５９４の細胞株にわたる８点用量応答曲線を生成する。ＥＣ５０（変曲点）およびＡｍａｘ（最大観察応答）は、それらの曲線に基づき決定され、この報告では２つのパラメータの組合せを使用して化合物の効力を評価する。
【００９１】
これらの実験のために応答性細胞株の集団を定義するため、化合物Ｉに対する細胞株の感受性を、６μｍｏｌ／Ｌ未満のＥＣ５０および−３５％未満のＡｍａｘというカットオフ値により定義する。多くの細胞株が化合物Ｉに対する部分的応答を示すが、一部の事例では、総細胞数の５０％低減（これは、ＩＣ５０の定義である）に到達しなくても応答が多くの事例で強固でありかつ信頼できるという観察に基づき、ＩＣ５０よりもＥＣ５０が選択される。これは、ＰＩＫ３ＣＡシグナルが、それらのモデルにおいて単一の薬剤として完全な腫瘍退縮を誘導するのに必要であるが、十分でない可能性があることを示唆する。最大応答が非常に薄く、ノイズとの区別が困難である細胞系を除外するため、＜−３５％のＡｍａｘが選択される。
【００９２】
実施例１：化合物Ｉに対する神経芽細胞腫細胞株の感受性
化合物Ｉに対する神経芽細胞腫細胞株の感受性を判定するため、上述の一般的手順に従う。以下の神経芽細胞腫細胞株が使用される：ＣＨＰ−２１２、ＩＭＲ−３２、ＫＥＬＬＹ、ＳＫ−Ｎ−ＳＨ、ＫＰ−Ｎ−ＳＩ９ｓ（ＫＲＡＳ変異を有する）、ＳＩＭＡ、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ、ＳＫ−Ｎ−ＢＥ（２）、ＳＫ−Ｎ−ＤＺ、およびＳＫ−Ｎ−ＦＩ。ＣＨＰ−２１２、ＫＥＬＬＹ、ＳＫ−Ｎ−ＳＨおよびＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、野生型ＢＲＡＦである。ＩＭＲ−３２およびＳＫ−Ｎ−ＢＥ（２）細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型および増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型である。ＳＩＭＡ、ＳＫ−Ｎ−ＤＺおよびＳＫ−Ｎ−ＦＩ細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、および野生型ＰＩＫ３ＣＡである。ＫＰ−Ｎ−ＳＩ９ｓ細胞株は、ＫＲＡＳ変異を有しており、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、野生型ＢＲＡＦである。
【００９３】
薬理学的プロファイリング結果を、表１にまとめ、図１に両側のフィッシャーの正確確率検定として表示する。両側のフィッシャーの正確確率検定は、化合物ＩのＡｍａｘ（阻害％）と化合物ＩのＥＣ５０との比較を提供する。
【００９４】
【表１】
2015512416.tif 000005
【００９５】
結果は、ＳＫ−Ｎ−ＳＨ、ＫＰ−Ｎ−ＳＩ９ｓおよびＳＫ−Ｎ−ＤＺ神経芽細胞腫細胞株が、化合物Ｉに対して感受性であることを実証している。これらの結果に基づき、化合物Ｉは、神経芽細胞腫の治療に使用され得ることが結論付けられる。
【００９６】
実施例２：化合物Ｉに対するユーイング肉腫細胞株の感受性
化合物Ｉに対するユーイング肉腫細胞株の感受性を判定するため、上述の一般的手順に従う。以下のユーイング肉腫細胞株が使用される：Ｈｓ８２２．Ｔ、ＭＨＨ−ＥＳ−１（増幅ＰＩＫ３ＣＡを有する）、ＳＫ−ＥＳ−１、およびＴＣ−７１。ＭＨＨ−ＥＳ−１は、増幅ＰＩＫ３ＣＡを有しており、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、野生型ＢＲＡＦである。ＳＫ−ＥＳ−１細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、野生型ＢＲＡＦである。ＴＣ−７１細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型およびＰＩＫ３ＣＡについて正常型である。
【００９７】
薬理学的プロファイリング結果を、表２にまとめ、図２に両側のフィッシャーの正確確率検定として表示する。両側のフィッシャーの正確確率検定は、化合物ＩのＡｍａｘ（阻害％）と化合物ＩのＥＣ５０との比較を提供する。
【００９８】
【表２】
2015512416.tif 000006
【００９９】
結果は、ＨＳ８２２．Ｔ、ＭＨＨ−ＥＳ−１およびＳＫ−ＥＳ−１ユーイング肉腫細胞株が、化合物Ｉに対して感受性であることを実証している。これらの結果に基づき、化合物Ｉは、ユーイング肉腫の治療に使用され得ることが結論付けられる。
【０１００】
実施例３：化合物Ｉに対する横紋筋肉腫細胞株の感受性
化合物Ｉに対する横紋筋肉腫細胞株の感受性を判定するため、上述の一般的手順に従う。以下の横紋筋肉腫細胞株が使用される：Ｇ−４０１（横紋筋）、Ｇ−４０２（平滑筋芽細胞腫）、Ａ−６７３、Ｈｓ７２９、ＫＹＭ−１、ＲＤ、ＲＨ−４１、ＳＪＲＨ３０、ＴＥ１２５．Ｔ、およびＴＥ６１７．Ｔ。
【０１０１】
Ｇ−４０１細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、および野生型ＢＲＡＦである。Ｇ−４０２およびＴＥ６１７．Ｔ細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型である。Ａ６７３細胞株は、ＥＧＦＲおよび増幅ＥｒｂＢ２について変異型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＢＲＡＦである。Ｈｓ７２９、ＲＤ、ＳＪＲＨ３０細胞株は、増幅ＥｒｂＢ２について正常型、増幅ＰＩＫ３ＣＡについて正常型、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、野生型ＢＲＡＦである。ＫＹＭ−１細胞株は、野生型ＫＲＡＳ、野生型ＰＴＥＮ、野生型ＰＩＫ３ＣＡ、野生型ＥＧＦＲ、野生型ＢＲＡＦである。
【０１０２】
薬理学的プロファイリング結果を、表３にまとめ、図３に両側のフィッシャーの正確確率検定として表示する。両側のフィッシャーの正確確率検定は、化合物ＩのＡｍａｘ（阻害％）と化合物ＩのＥＣ５０との比較を提供する。
【０１０３】
【表３】
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【０１０４】
結果は、Ａ６７３、ＲＤ、ＲＨ−４１、ＳＪＲＨ３０およびＴＥ６１７．Ｔ横紋筋肉腫細胞株が、化合物Ｉに対して感受性であることを実証している。これらの結果に基づき、化合物Ｉは、横紋筋肉腫の治療に使用され得ることが結論付けられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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