(57)【要約】【課題】望ましい医薬的特徴を有するタンパク質凝集の阻害剤を提供する。【解決手段】本発明は、あるフェニル−尿素及びフェニル−カルバメート誘導体、それらを含む医薬組成物、及びそれらを使用する方法に関連し、タンパク質凝集を防止、逆行、遅延又は阻害する方法、及びパーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体病、及び多系統萎縮症などの神経変性疾患を含むタンパク質凝集と関連した病気を処置する方法を含む。【選択図】図１
2015515465.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物又はその医薬的に許容可能な塩：
2015515465.tif 000054
式Ｉの化合物において、
Ｈｅｔは二環式ヘテロアリールであり（ここで、少なくとも１つの環原子はＮであり、かつ、前記ヘテロアリールは非置換であるか又は１以上のＲａ置換基で置換され、各Ｒａは、独立してヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、又はハロ−Ｃ１−４アルコキシであり）；
Ｘは−ＣＨ２−Ｒｚであり（ここで、Ｒｚは不在、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＨ−であり）；
Ｗ及びＹの一方はＮＨであり、かつ他方はＯ又はＮＨであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｒ１は、−ＮＲｂＲｃ；グアニジノ；一環式ヘテロアリール又は一環式ヘテロシクロアルキルであり
（式−ＮＲｂＲｃにおいて、Ｒｂ及びＲｃは各々独立してＨ又はＣ１−４アルキルであり、
一環式ヘテロアリールにおいて、少なくとも１つの環原子はＮであり、かつ、前記ヘテロアリールは非置換であるか又は１以上のＲｄ置換基（各Ｒｄは、独立してヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、又はハロ−Ｃ１−４アルコキシ）で置換され、
一環式ヘテロシクロアルキルにおいて、少なくとも１つの環原子はＮであり、かつ、前記ヘテロシクロアルキルは非置換であるか又は１以上のＲｅ置換基（各Ｒｅは、独立してヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ−Ｃ１−４アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル、又は−ＣＯ２Ｃ１−４アルキル）で置換される）；
ｎは０、１、２、３、又は４であり；
Ｒ２は、不在であるか、又はヒドロキシル、メトキシ、もしくはトリフルオロメトキシであり；そして
Ｒ３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、又はＣ３−８シクロアルコキシである（ここで、前記シクロアルコキシは非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、及びハロ−Ｃ１−４アルコキシからなる群から選択される１以上の置換基で置換される）。
【請求項２】
Ｈｅｔが、少なくとも１つの窒素環原子を有する８員の二環式ヘテロアリールであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｈｅｔが、１Ｈ−インドリル、１Ｈ−ベンゾイミダゾリル、５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジニル又は１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピラジニルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−又は−ＣＨ２ＮＨ−であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、又は−ＣＨ２Ｏ−であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＷがＯであり、かつ、ＹがＮＨであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ＷがＮＨであり、かつ、ＹがＯであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ及びＹが、両者ともにＮＨであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ＺがＯであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
式Ｉの化合物において、Ｒ１が、
アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、又はグアニジノであるか；
ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、又はテトラゾリル（各々非置換であるか、又は、１又は２つのＲｄ置換基で置換される）であるか；又は
ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソ−チオモルホリニル、又はジオキソ−チオモルホリニル（各々非置換であるか、又は、１又は２つのＲｅ置換基で置換される）であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、
アミノ又はグアニジノであるか、又は
ピロリル、イミダゾリル、ピペリジニル、又はピペラジニル（各々非置換であるか、又は、１又は２つのＣ１−４アルキル基で置換される）であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
ｎが２であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が不在であるか又はＯＨであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、又はシクロヘキシルオキシであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３がエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロペンチルオキシ、又はシクロヘキシルオキシであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
式ＩＩの化合物又はその医薬的に許容可能な塩：
2015515465.tif 000055
式ＩＩの化合物において、
Ｈｅｔ１は、二環式ヘテロアリールであり（ここで、少なくとも１つの環原子はＮである）；
Ｘ１は−（ＣＨ２）１−２−又は−ＣＨ２Ｏ−であり；
Ｗ１及びＹ１の一方はＮＨであり、かつ他方はＯ又はＮＨであり；
Ｙ１は、位置「ａ」又は位置「ｂ」においてフェニルに結合し；
Ｚ１はＯ又はＳであり；
Ｒ１１は、アミノ；一環式ヘテロアリール又は一環式ヘテロシクロアルキルであり
（ここで、一環式ヘテロアリールの少なくとも１つの環原子がＮであり、
ヘテロシクロアルキルは、少なくとも１つの環原子がＮであり、かつ、非置換であるか又は１又は２つのＣ１−４アルキル基で置換され）；
Ｙ１がフェニル環の位置「ａ」において結合する場合には、
Ｒ１２は、Ｃ２−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ３−７シクロアルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ又はヒドロキシであり；かつ
Ｒ１４はＨであり；そして
Ｙ１がフェニル環の位置「ｂ」において結合する場合には、
Ｒ１２はＨであり；
Ｒ１３はＣ２−４アルキルであり；かつ
Ｒ１４はＨ又はヒドロキシルである。
【請求項１７】
以下の化合物からなる群から選択される化合物及びその医薬的に許容可能な塩：
３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−アミノエチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エチル）−３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）尿素；
４−（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）ウレイド）エチル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨウ化物；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）尿素；
１−（３−ブチル−５−（（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）メチル）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピラジン−２−イル）メチル）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−イソプロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−シクロプロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−（シクロペンチルオキシ）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−（シクロヘキシルオキシ）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−メトキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート；
Ｏ−（３−（（５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−イル）メトキシ）−５−プロピルフェニル）（２−（１Ｈ−ピロール−２−イル）エチル）カルバモチオアート；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−５−イソプロピルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）チオ尿素；
２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル（３−（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−５−イソプロピルフェニル）カルバメート；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−メトキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
３−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）ウレイド）プロパンイミドアミド；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）チオ尿素；及び
２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）カルバメート。
【請求項１８】
（ａ）少なくとも１つの式Ｉの化合物又はその医薬的に許容可能な塩、及び（ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１９】
タンパク質凝集に関連した病気又は健康状態を処置する方法であって、
有効量の式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ又はその医薬的に許容可能な塩を該処置の必要がある被験者に対して投与することを含む方法。
【請求項２０】
病気又は健康状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、前頭側頭型認知症、レビー小体型痴呆、ＰＤ痴呆、多系統萎縮症及び筋萎縮性側索硬化症であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、あるフェニル−尿素及びフェニル−カルバメート誘導体、それらを含む医薬組成物、及びタンパク質凝集を防止、逆行、遅延又は阻害する方法を含むそれらを使用する方法、そしてパーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体病及び多系統萎縮症などの神経変性疾患を含むタンパク質凝集に関連した病気を処置する方法に関連する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）及び前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）などの加齢個体群の神経変性疾患は、米国及びヨーロッパ連合だけで２０００万を上回る人々に影響を及ぼし、高齢者の死因の上位にランキングされる。これらの神経疾患に共通の特徴は、タンパク質の慢性的蓄積から神経毒性凝集体が生じることである。各病気は、影響を受けた特徴的な神経細胞の個体群、関与する特定のタンパク質凝集体、神経変性に由来する臨床上の特徴によって特徴付けられる。
【０００３】
研究は、タンパク質凝集の開始ステージ（複数）がターゲットタンパク質の突然変異又は翻訳後修飾（例えば、ニトロシル化、酸化）と関連し、次に、相互作用を促進する異常な立体構造、及び同様の誤った折りたたみ構造のタンパク質をもたらすことを示唆する。異常なタンパク質は、凝集して二量体、三量体、及びより高次の多量体（「可溶性のオリゴマー」とも称される）を形成し、シナプスの機能を破壊し得る。さらに、凝集体は、細胞膜に固定（アンカー）され、球状オリゴマー（膜に孔を形成し得る）及び／又は原繊維前駆体（プロトフィブリル）又は原繊維を形成する。これらのより大きい不溶性原繊維は、生理活性オリゴマーの貯留器としても機能し得る。
【０００４】
これらの神経変性疾患に関連する特定のタンパク質は、個性及びソースが異なる。例えば、ＡＤにおいて、神経毒性凝集体は、分泌型タンパク質アミロイド−β（Ａβ）を含む。特発性パーキンソン病（ＩＰＤ）、レビー小体型痴呆（ＬＢＤ）、ＰＤ痴呆（ＰＤＤ）、及び多系統萎縮症（ＭＳＡ）において、神経毒性凝集体は、α−シヌクレイン（ＳＹＮ）（通常状態下では細胞内のシナプスタンパク質である）を含む。ＦＴＤ及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）において、神経毒性凝集体は、ｔａｕ、ＴＤＰ−４３又はＳＯＤ１などの他の細胞内タンパク質に由来する。ＡＤなどのある病気に関して、ＳＹＮは一次タンパク質で（with the primary protein）凝集する。従って、ＳＹＮ凝集に干渉する化合物は、神経変性疾患の種々の病因に対して影響を与え得る。
【０００５】
２つのメカニズムが、これらの神経変性のプロセスに関連する。第１に、誤った折りたたみ構造のタンパク質及び／又は凝集体化したタンパク質は、種々の細胞膜構造に固定される。誤った折りたたみ構造の分子又は凝集体化した分子の細胞膜又はオルガネラ（例えば、ミトコンドリア又はリソソーム）の膜への結合は、タンパク質の転写、自食現象（オートファジー）、ミトコンドリア機能、及び孔（ポア）の形成に干渉し得る。一例を挙げると、神経毒性ＳＹＮは凝集し、そしてシヌクレインタンパク質のＣ末端領域の特徴的な部分によって細胞膜中の脂質と相互作用する。この領域に対して結合する化合物は、タンパク質−タンパク質又はタンパク質−脂質の相互作用を阻害することができ、従って、神経毒性ＳＹＮのオリゴマー化及び膜相互作用をブロックすることに使用され得る。第２のプロセスにおいて、凝集体化したタンパク質は、固定されたサブユニットから放出され、そして隣接する細胞へ伝搬する。この毒性タンパク質凝集体の細胞から細胞への伝搬は、次に、神経変性の解剖学的進行及び症状の悪化の原因となり得る。ターゲットタンパク質と相互作用する小分子製剤は、放出及び／又は増殖を制限することができ、従って凝集体化したタンパク質の神経毒性の影響を低減させることができる。従って、そのような化合物は、ＡＤ、ＰＤ、ＬＢＤ、ＭＳＡ及び関連した神経変性の状態についての新たなる治療を提供することができる。
【０００６】
望ましい医薬的特徴を有するタンパク質凝集の阻害剤に関するニーズは依然として存在する。あるフェニル−尿素及びカルバメート誘導体がタンパク質凝集を調節する活性を有することが、本発明の脈絡において見出されている。
【発明の概要】
【０００７】
１つの視点において、本発明は、 以下の式（Ｉ）化学物質（エンティティ）又はその医薬的に許容可能な塩に関連する： 
2015515465.tif 000003
式Ｉの化合物において、
Ｈｅｔは二環式ヘテロアリールであり（ここで、少なくとも１つの環原子はＮであり、かつ、前記ヘテロアリールは非置換であるか又は１以上のＲａ置換基で置換され、各Ｒａは、独立してヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、又はハロ−Ｃ１−４アルコキシであり）；
Ｘは−ＣＨ２−Ｒｚであり（ここで、Ｒｚは不在、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＨ−であり）；
Ｗ及びＹの一方はＮＨであり、かつ他方はＯ又はＮＨであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｒ１は、−ＮＲｂＲｃ；グアニジノ；一環式ヘテロアリール又は一環式ヘテロシクロアルキルであり
（式−ＮＲｂＲｃにおいて、Ｒｂ及びＲｃは各々独立してＨ又はＣ１−４アルキルであり、
一環式ヘテロアリールにおいて、少なくとも１つの環原子はＮであり、かつ、前記ヘテロアリールは非置換であるか又は１以上のＲｄ置換基（各Ｒｄは、独立してヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、又はハロ−Ｃ１−４アルコキシ）で置換され、
一環式ヘテロシクロアルキルにおいて、少なくとも１つの環原子はＮであり、かつ、前記ヘテロシクロアルキルは非置換であるか又は１以上のＲｅ置換基（各Ｒｅは、独立してヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ−Ｃ１−４アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル、又は−ＣＯ２Ｃ１−４アルキル）で置換される）；
ｎは０、１、２、３、又は４であり；
Ｒ２は、不在であるか、又はヒドロキシル、メトキシ、もしくはトリフルオロメトキシであり；そして
Ｒ３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、又はＣ３−８シクロアルコキシである（ここで、前記シクロアルコキシは非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、及びハロ−Ｃ１−４アルコキシからなる群から独立して選択される１以上の置換基で置換される）。
【０００８】
ある実施形態において式（Ｉ）の化合物は、以下の詳細な記載に記載又は例示されたものの種類（species）から選択される化合物である。
【０００９】
更なる視点において、本発明は、式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ又はその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物に関連する。本発明の医薬組成物は医薬的に許容可能な賦形剤を更に含むことができる。本発明は、薬剤として使用するための式Ｉの化合物又はその医薬的に許容可能な塩でもある。
【００１０】
他の視点において、本発明は、タンパク質凝集に関連した神経変性疾患又は状態を処置する方法へ向けられ、有効量の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容可能な塩をかかる処置の必要がある被験者に対して投与することを含む。
【００１１】
他の視点において、本発明は、タンパク質凝集に関連した病気又は健康状態を処置する方法に向けられ、有効量の式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ又はその医薬的に許容可能な塩を処置の必要がある被験者に対して投与することを含む。本発明は、そのような病気及び健康状態の処置のための薬剤の調製における式Ｉの化合物の使用、及び、そのような病気及び健康状態の処置のためのそのような化合物及び塩の使用にも向けられる。
【００１２】
更なる他の視点において、本発明は、細胞と、有効量の式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ又はその塩、及び／又は本発明の医薬組成物の少なくとも１つとを接触させることを含む、細胞内でのタンパク質又はペプチド凝集物の蓄積に干渉する方法、又は、細胞内でのタンパク質又はペプチドの凝集を防止、遅延、逆行、又は阻害する方法に関連する（ここで接触は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボである）。
【００１３】
本発明の更なる実施形態、特徴、及び利点は、以下の詳細な記載及び本発明の実施を介して明らかになるだろう。
【００１４】
簡潔化のために、この明細書において引用した特許文献を含む刊行物の開示は、本願に引用によって組み込まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、無細胞Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ系におけるシヌクレインに関する実施例２［の化合物］の効果を免疫ブロットにより表す。
【００１６】
【図２】図２は、神経細胞系におけるシヌクレイン蓄積および増殖（propagation）に関する実施例２［の化合物］の効果を示す。
【００１７】
【図３】図３Ａ−Ｄは、細胞ベースチューブリン（神経突起の長さ）、カルシウム、カルセイン及びＭＴＴアッセイにおける実施例２［の化合物］の効果を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
いくつかの式（Ｉ）の実施形態において、Ｈｅｔは、少なくとも１つの窒素環原子を有する８員の二環式ヘテロアリールである。他の実施形態において、Ｈｅｔは、１Ｈ−インドリル、１Ｈ−ベンゾイミダゾリル、５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジニル、又は１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピラジニルである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、Ｘは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、又は−ＣＨ２ＮＨ−である。他の実施形態において、Ｘは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、又は−ＣＨ２Ｏ−である。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ＷはＯであり、かつ、ＹはＮＨである。他の実施形態において、ＷはＮＨであり、かつ、ＹはＯである。更なる実施形態において、Ｘ及びＹは、両者ともにＮＨである。
【００２１】
いくつかの実施形態において、ＺはＯである。
【００２２】
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、又はグアニジノであるか；ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、又はテトラゾリル（各々非置換であるか、又は、１又は２つのＲｄ置換基では置換される）であるか；又はピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、アゼパニル、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソ−チオモルホリニル、又はジオキソ−チオモルホリニル、（各々非置換であるか、又は、１又は２つのＲｅ置換基で置換される）である。他の実施形態において、Ｒ１は、アミノ又はグアニジノであるか、又はピロリル、イミダゾリル、ピペリジニル、又はピペラジニル（各々非置換であるか、又は、１又は２つのＣ１−４アルキル基で置換される）である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、ｎは２である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、不在であるか又はＯＨである。
【００２５】
他の実施形態において、Ｒ３は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、又はシクロヘキシルオキシである。他の実施形態において、Ｒ３は、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロペンチルオキシ、又はシクロヘキシルオキシである。更なる他の実施形態において、Ｒ３はエチル又はブチルである。
【００２６】
本発明の更なる実施形態において、式ＩＩの化合物又はその医薬的に許容可能な塩が提供される：
2015515465.tif 000004
式ＩＩの化合物において、
Ｈｅｔ１は、二環式ヘテロアリールであり（ここで、少なくとも１つの環原子はＮである）；
Ｘ１は−（ＣＨ２）１−２−又は−ＣＨ２Ｏ−であり；
Ｗ１及びＹ１の一方はＮＨであり、かつ他方はＯ又はＮＨであり；
Ｙ１は、位置「ａ」又は位置「ｂ」においてフェニルに結合し；
Ｚ１はＯ又はＳであり；
Ｒ１１は、アミノ；一環式ヘテロアリール又は一環式ヘテロシクロアルキルであり
（ここで、一環式ヘテロアリールの少なくとも１つの環原子がＮであり、
ヘテロシクロアルキルは、少なくとも１つの環原子がＮであり、かつ非置換であるか又は１又は２つのＣ１−４アルキル基で置換され）；
Ｙ１がフェニル環の位置「ａ」において結合する場合には、
Ｒ１２は、Ｃ２−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、又はＣ３−７シクロアルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ又はヒドロキシであり；かつ
Ｒ１４はＨであり；そして
Ｙ１がフェニル環の位置「ｂ」において結合する場合には、
Ｒ１２はＨであり；
Ｒ１３はＣ２−４アルキルであり；かつ
Ｒ１４はＨ又はヒドロキシルである。
【００２７】
更なる実施形態において、本発明は、以下の式（Ｉ−Ａ）の化学物質又はその医薬的に許容可能な塩に関連する：
2015515465.tif 000005
式（Ｉ−Ａ）において
Ｙは、Ｏ又はＮＨであり；
Ｒ１は、１又は２つのメチル基で置換されたアミノ、イミダゾリル、及びピペラジン−１−イルからなる群から選択され；
Ｒ２は、不在であるか又はヒドロキシルであり；
Ｒ３は、Ｃ１−６アルキルであり；そして
ｍは０又は１である。
【００２８】
更なる実施形態において、本発明は、少なくとも１つの炭素が１１Ｃで置換され、及び／又は少なくとも１つの水素が１８Ｆで置換された式（Ｉ−Ａ）の化合物に関連する。他の実施形態において、１又は２つの炭素が１１Ｃで置換される。他の実施形態において、１又は２つの水素が１８Ｆで置換される。
【００２９】
いくつかの実施形態において、１１Ｃは、インドール又はフェニル炭素である。他の実施形態において、１１Ｃは、インドール及びフェニル環の間のメチレン基、又はＲ１に結合されるエチレン基に組み込まれる。他の実施形態において、１１Ｃ同位体はカルボニル炭素である。更なる他の実施形態において、１１Ｃは、Ｒ１又はＲ３に組み込まれる。更なる他の実施形態において、１１Ｃは、末端メチル炭素（−１１ＣＨ３）である。
【００３０】
他の実施形態において、１８Ｆは、インドール又はフェニル基上の置換基である。他の実施形態において、１８Ｆは、インドール及びフェニル環の間のメチレン基、又はＲ１に結合したエチレン基に組み込まれる。更なる他の実施形態において、１８Ｆは、Ｒ１又はＲ３に組み込まれる。更なる他の実施形態において、１８Ｆは、末端メチル基（−Ｃ（１８Ｆ）ｘ（Ｈ）３−ｘ）である。
【００３１】
他の実施形態において、本発明は、以下の化合物からなる群から選択される化合物及びその医薬的に許容可能な塩に向けられる：
2015515465.tif 000006
３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート；
2015515465.tif 000007
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000008
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000009
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−アミノエチル）尿素；
2015515465.tif 000010
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000011
１−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エチル）−３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）尿素；
2015515465.tif 000012
４−（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）ウレイド）エチル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨウ化物；
2015515465.tif 000013
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000014
１−（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000015
１−（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（ピペリジン−４−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000016
１−（３−（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）メチル）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素
2015515465.tif 000017
１−（３−（（１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピラジン−２−イル）メチル）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000018
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−イソプロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000019
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−シクロプロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000020
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−（シクロペンチルオキシ）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000021
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−（シクロヘキシルオキシ）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000022
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−メトキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000023
３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート；
2015515465.tif 000024
Ｏ−（３−（（５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−７−イル）メトキシ）−５−プロピルフェニル）（２−（１Ｈ−ピロール−２−イル）エチル）カルバモチオアート；
2015515465.tif 000025
１−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000026
１−（３−（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−５−イソプロピルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）チオ尿素；
2015515465.tif 000027
２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル（３−（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）−５−イソプロピルフェニル）カルバメート；
2015515465.tif 000028
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−メトキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000029
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000030
３−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）ウレイド）プロパンイミドアミド；
2015515465.tif 000031
１−（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
2015515465.tif 000032
１−（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）チオ尿素；及び
2015515465.tif 000033
２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル（３−（（１Ｈ−インドール−２−イル）メトキシ）−５−プロポキシフェニル）カルバメート。
【００３２】
他の視点において、本発明は、以下の化合物からなる群から選択される化合物及びその医薬的に許容可能な塩に関連する：
３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−アミノエチル）尿素；
１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素；
１−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エチル）−３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）尿素；及び
４−（２−（３−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）ウレイド）エチル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨウ化物。
【００３３】
一般的な定義
他に定義されない限り、本願において使用した全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明の分野における通常の知識を有する者によって一般的に理解されるものと同一の意味を有する。本願において言及される全ての特許、出願、公開出願及び他の刊行物は、それらの全体が引用によって組み込まれる。この節に記載の定義が本願に引用によって組み込まれる特許、出願、又は他の刊行物に記載の定義に反する又は矛盾する場合には、この節に記載の定義が、引用によって本願に組み込まれる定義よりも優先される。
【００３４】
本願において使用した用語「含む（including）」、「含む（containing）」及び「含む（comprising）」は、それらの開放的意味合い（非限定的意味合い）で使用される。
【００３５】
より簡潔な記載を提供するために、本願において提供されるいくつかの定量的な表現は、用語「約」で修飾されない。用語「約」が明確に使用されているか否かにかかわらず、本願に記載の全ての量が、実際の所与の値を意味するとともに、本発明の分野における通常の知識に基づいて合理的に推測されるその所与の値の近似値も意味し、そのような所与の値に関する実験条件及び／又は測定条件に起因する均等値及び近似値を含むことが理解される。収量がパーセンテージとして与えられる場合には、そのような収量は、特定の化学量論的な条件の下で取得され得る同一物（エンティティ）の最大量に関して収量が与えられているもの（エンティティ）の量を意味する。パーセンテージとして与えられている濃度は、異なる態様で示されない限り質量比を意味する。
【００３６】
化学的定義
用語「アルキル」は、鎖内に１〜１２炭素原子を有する直鎖又は分枝状鎖のアルキル基を意味する。アルキル基の例は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、及び本発明の分野における通常の知識を考慮した基を含み、本願において提供される教示は、上述の例のいずれか１つの均等物として考慮される。
【００３７】
用語「アルコキシ」は、酸素原子に結合した上記定義のアルキル基を意味する。アルコキシ基は、酸素原子を介して親構造に結合される。
【００３８】
用語「アミノ」は、ＮＨ２基を意味する。
【００３９】
用語「シクロアルキル」は、炭素環式化合物あたりに３〜１２個の環原子を有する飽和した又は部分的に飽和した、一環式、融合ポリ環状、架橋ポリ環状又はスピロポリ環状の炭素環式化合物を意味する。シクロアルキル基の具体例は、以下のもの（適切に結合した部分（モイエティ）の形状）を含む：
2015515465.tif 000034
。
【００４０】
用語「シクロアルコキシ」は、酸素原子に結合した上記定義のシクロアルキルを意味する。シクロシクロアルコキシ基は、酸素原子を介して親構造に結合される。
【００４１】
「ヘテロシクロアルキル」は、飽和又は部分的に飽和しており、環状構造あたり炭素原子及び窒素、酸素及び硫黄から選択される３個までのヘテロ原子から選択される３〜１２環原子を有する一環式の又は融合、架橋構造又はスピロポリ環状の環状構造を意味する。環状構造は、炭素又は硫黄の環メンバー上に任意的に（optionally）２つのオキソ基を含むことができる。具体的なエンティティ （適切に結合した部分（モイエティ）の形状）は、以下のものを含む：
2015515465.tif 000035
。
【００４２】
用語「ヘテロアリール」は、ヘテロ環式化合物あたり３〜１２個の環原子を有する一環式、融合二環式又は融合ポリ環状の芳香族ヘテロ環式化合物（環状構造は、炭素原子及び４個までの窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子から選択される環原子を有する）を意味する。ヘテロアリール基の具体的な例は、以下のもの（エンティティ）（適切に結合した部分（モイエティ）の形状）を含む：
2015515465.tif 000036
。
【００４３】
本発明の技術分野における通常の知識を有する者は、上記にリスト又は示したヘテロアリール、シクロアルキル、及びヘテロシクロアルキル基の種類は記載し尽くされておらず、これらの定義された用語の範囲（scope）内の追加の種類も選択され得ることを認識するだろう。
【００４４】
用語「ハロゲン」は、塩素、フッ素、臭素、又はヨウ素を示す。用語「ハロ」は、クロロ、フルオロ、ブロモ又はヨードを示す。用語「ハロアルキル」は、１個以上のハロゲン原子で置換された上記定義のアルキルを意味する。用語「ハロアルコキシ」は、１個以上のハロゲン原子で置換された上記定義のアルコキシを意味する。
【００４５】
用語「置換（substituted）」とは、特定の基又はモイエティが１個以上の置換基を有することを意味する。用語「非置換（unsubstituted）」とは、特定の基が置換基を有さないことを意味する。用語「任意的に置換され（optionally substituted）」とは、特定の基が、非置換であるか、又は１個以上の置換基によって置換されることを意味する。用語「置換」が構造システムを記載することに使用される場合には、置換が、システム上のいずれかの結合価許容位置（valency-allowed position）において生じることを意味する。
【００４６】
本願に記載される式は、構造式の化合物を示すとともに、あるバリエーション又は形状を示すことが意図される。例えば、本願における所与の式は、ラセミの形状、又は１以上の鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは幾何学異性体、又はそれらの混合物を含むことが意図される。更に、本願におけるいずれかの所与の式は、そのような化合物の水和物、溶媒和物もしくは多形体、又はそれらの混合物も言及することが意図される。
【００４７】
本願におけるいずれかの所与の式は、化合物の非ラベル形状及び化合物放射線同位体的にラベルされた形状を示すことも意図される。放射線同位体的にラベルされた化合物は、１個以上の原子が選択した原子質量又は質量数を有する原子によって置換されることを除いて、本願における所与の式によって表される構造を有する。本発明の化合物に組み込まれ得る放射線同位体の例は、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、及び１２５Ｉなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素及びヨウ素の放射線同位体をそれぞれ含む。そのような放射線同位体的にラベルされた化合物は、代謝の研究（好ましくは１４Ｃを用いる）、反応キネティック研究（例えば２Ｈ又は３Ｈを用いる）、薬剤又は基質組織分布アッセイを含む検出又はイメージン技術［ポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）又は単一フォトン放出型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）など］において、又は、患者の放射処置において有用である。特に、１８Ｆ又は１１Ｃでラベルされた化合物は、特にＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究に好まれ得る。ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴ研究は、例えば、Brooks, D.J., “Positron Emission Tomography and Single-Photon Emission Computed Tomography in Central Nervous System Drug Development,” NeuroRx 2005, 2(2), 226-236、及びその中の引用文献によって記載されるように実行され得る。更に、重水素（すなわち、２Ｈ）などのより重い同位体での置換は、より大きな代謝安定性に起因するある治療上の利点（例えば、増加したインビボの半減期又は減少した投与必要量）をもたらし得る。この発明の放射線同位体的にラベルされた化合物及びそのプロドラッグは、一般的には、スキーム又は実施例に開示された手法、及び放射線同位体的にラベルされていない試薬と、容易に利用可能な放射線同位体的にラベルされた試薬とを置き換えることによる以下に記載した調製を実行することによって調製され得る。
【００４８】
本願において置換基のクラスに適用するときに、ｊ＞ｉでの命名法「Ｃｉ−ｊ」は、炭素メンバーの各々に関して、そして炭素メンバーの数（ｉ及びｊを含むｉからｊまで）の１つずつについて、この発明の実施形態が独立して実現されることを意味する。一例を挙げると、用語Ｃ１−３は、１つの炭素メンバー（Ｃ１）を有する実施形態、２つの炭素メンバー（Ｃ２）を有する実施形態、及び３つの炭素メンバー（Ｃ３）を有する実施形態を独立して言及する。
【００４９】
本願において言及されるいずれかの二重置換基は、１つを上回るそのような可能性が許容されるときに、種々の結合可能性を含むことを意図する。例えば、本願において、二重置換基−Ａ−Ｂ−（ここではＡ≠Ｂ）の参照は、第１の置換されたメンバーに結合したＡ及び第２の置換されたメンバーに結合したＢを有するそのような二重置換基を言及し、そしてそれは、第２の置換されたメンバーに結合したＡ及び第１の置換されたメンバーに結合したＢを有するそのような二重置換基も意味する。
【００５０】
本発明は、式（Ｉ）によって示される化合物（好ましくは上記の化合物及び本願に例示された特徴的な化合物）の医薬的に許容可能な塩も含み、そして、そのような塩を含む医薬組成物及びそのような塩を使用する方法も含む。
【００５１】
「医薬的に許容可能な塩」は、無毒性であるか、生物学的に許容可能であるか、又は被験者への投与に生物学的に適切である本願に示した化合物の遊離酸又は塩基の塩を意味することが意図される。一般的には、S.M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts,” J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19を参照。好ましい医薬的に許容可能な塩は、薬学的に有効でかつ被験者の組織との接触に適切であり、過度の毒性、刺激（irritation）又はアレルギー性の応答が無いものである。本願に記載の化合物は、十分に塩基性の基、両方のタイプの官能基、又は１つを上回る各タイプ、を有することができ、従っていくつかの無機又は有機の塩基及び無機の及び有機の酸と反応して、医薬的に許容可能な塩を形成する。
【００５２】
医薬的に許容可能な塩の例は以下のものを含む：スルファート（硫酸塩類）、ピロスルファート（ピロ硫酸塩類）、ビスルファート（硫酸水素塩）、サルファイト（亜硫酸塩類）、ビサルファイト（亜硫酸水素塩類）、ホスファート（リン酸塩類）、モノヒドロゲン−ホスファート（リン酸水素塩類）、ジヒドロゲンホスファート（リン酸二水素塩類）、メタホスファート（メタリン酸塩類）、ピロホスファート（ピロリン酸塩類）、クロリド（塩化物の塩類）、ブロミド（臭化物の塩類）、ヨード（ヨウ化物の塩類）、アセタート（酢酸塩類）、プロピオナート（プロピオン酸塩類）、デカノアート（デカン酸塩類）、カプリラート（カプリル酸塩類）、アクリラート（アクリル酸塩類）、ホルマート（ぎ酸塩類）、イソブチラート（イソ酪酸塩類）、カプロアート（カプロン酸塩類）、ヘプタノアート（ヘプタン酸塩類）、プロピオラート（プロピオル酸塩類）、オキサラート（シュウ酸塩類）、マロナート（マロン酸塩類）、スクシナート（コハク酸塩類）、スベラート（スベリン酸塩類）、セバカート（セバシン酸塩類）、フマラート（フマル酸）、マレアート（マレイン酸塩類）、ブチン−１，４−ジオアート（塩類）、ヘキシン−１，６−ジオアート（塩類）、ベンゾアート（安息香酸塩類）、クロロベンゾアート（クロロ安息香酸塩類）、メチルベンゾアート（メチル安息香酸塩類）、ジニトロベンゾアート（ジニトロ安息香酸塩類）、ヒドロキシベンゾアート（ヒドロキシ安息香酸塩類）、メトキシベンゾアート（メトキシ安息香酸塩類）、フタラート（フタル酸塩類）、スルホナート（スルホン酸塩類）、メチルスルホナート（メチルスルホン酸塩類）、プロピルスルホナート（プロピルスルホン酸塩類）、ベシラート（ベシル酸塩類）、キシレンスルホナート（キシレンスルホン酸塩類）、ナフタレン−１−スルホナート（塩類）、ナフタレン−２−スルホナート（塩類）、フェニルアセタート（フェニル酢酸塩類）、フェニルプロピオナート（フェニルプロピオン酸塩類）、フェニルブチラート（フェニル酪酸塩類）、シトレート（クエン酸塩類）、ラクタート（乳酸塩類）、γ−ヒドロキシブチラート（塩類）、グリコラート（グリコール酸塩類）、タータラート（酒石酸塩類）及びマンデレート（マンデル酸塩類）。
【００５３】
塩基性窒素を含む式（Ｉ）の化合物に関して、医薬的に許容可能な塩は、利用可能な本発明の技術分野におけるいずれかの適切な方法によって調製され得る（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、硝酸、ホウ酸、リン酸及び同様のものなどの無機の酸での遊離塩基の処理、又は酢酸、フェニル酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、イセチオン酸、こはく酸、吉草酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、オレイン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、ピラノシジル酸（グルクロン酸又はガラクツロン酸など）、α−ヒドロキシ酸（マンデル酸、クエン酸又は酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸又はグルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、ナフトエ酸又はけい皮酸など）、スルホン酸（ラウリルスルホン酸、p−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、又はエタンスルホン酸など）などの有機の酸での遊離塩基の処理、又は本願の例示された所与のものなどの酸のいずれかの相溶性混合物及び本発明の分野における通常レベルの知識を有する者によって考慮される均等物又は許容可能な置換物とみなされるいずれかの他の酸及びその混合物での遊離塩基の処理）。
【００５４】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容可能なプロドラッグ及びそのような医薬的に許容可能なプロドラッグを採用する処置方法にも関連する。用語「プロドラッグ」は、設計した化合物の前駆物質を意味し、加溶媒分解又は酵素切断などの化学的又は生理学的なプロセスを介して、又は生理学的な状態の下で（例えば、生理学的なｐＨのもとへ移動されると式（Ｉ）の化合物へ転換する）、被験者への投与の後に、インビボにおいて当該化合物を生成する。「医薬的に許容可能なプロドラッグ」は、無毒性であり、生物学的に許容可能であり、及び／又は、被験者への投与に生物学的に適する。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製のための具体的な手法は、例えば、“Design of Prodrugs”, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985に記載される。
【００５５】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の医薬的に活性な代謝産物及び本発明の方法におけるそのような代謝産物の使用にも関連する。「医薬的に活性な代謝産物」は、式（Ｉ）の化合物又はその塩の代謝の本体の薬学的に活性な製造物を意味する。化合物のプロドラッグ及び活性な代謝産物は、本発明の技術分野におけるルーチン的な既知の又は利用可能な技術を使用して決定され得る。例えば、Bertolini et al., J. Med. Chem. 1997, 40, 2011-2016; Shan et al., J. Pharm. Sci. 1997, 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res. 1995, 34, 220-230; Bodor, Adv. Drug Res. 1984, 13, 255-331; Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985); 及び Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)を参照。
【００５６】
医薬組成物
処置目的に関して、本願に記載の化合物を含む医薬組成物は、１以上の医薬的に許容可能な賦形剤を更に含み得る。医薬的に許容可能な賦形剤は、無毒性であり及び／又は被験者への投与に生物学的に適する物質である。そのような賦形剤は、本願に記載の化合物の投与を促進し、有効成分と両立できる（compatible）。医薬的に許容可能な賦形剤の例は、安定化剤、潤滑剤、界面活性剤、希釈液、抗酸化剤、結合剤、カラーリング剤、充填剤、乳化剤又は味覚改変剤を含む。好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は無菌組成物である。医薬組成物は、既知の組成物化する技術又は本発明の技術分野における通常の知識を有する者に利用可能な技術を使用して調製され得る。
【００５７】
無菌組成物も、本発明によって考えられ、そのような組成物を管理する国及び地方の規制に従う組成物を含む。
【００５８】
本願に記載の医薬組成物及び化合物は、種々の投与形態の調製に関する本発明の技術分野において知られた従来の方法に従って、適切な医薬的溶媒又は担体の溶液、エマルジョン、懸濁液あるいは分散剤として、又は、固体の担体と一緒に丸薬、錠剤、ロゼンジ、座薬、サシェ（小袋）、ドラジェ（糖衣錠）、顆粒、粉末、再構成用の粉末あるいはカプセルとして製剤化され得る。本発明の医薬組成物は、経口の、非経口の、直腸内の、経鼻の、局所的なあるいは眼球の経路による、又は吸入によるなどの適切な送達経路によって投与され得る。好ましくは、組成物は、静脈内投与又は経口投与用に製剤化される。
【００５９】
経口投与に関して、本発明の化合物は、錠剤あるいはカプセルなど固体の形状で、又は溶液、エマルジョン又は懸濁液として提供され得る。経口の組成物を調製するために、本発明の化合物は、例えば、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ（１日）、又は約０．０５〜約２０ｍｇ／ｋｇ（１日）又は約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ（１日）の投与量をもたらすように製剤化され得る。経口の錠剤は、希釈液、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味料 薬剤、香味料 薬剤、カラーリング剤及び保存料などの両立可能な医薬的に許容可能な賦形剤と混合した有効成分（単数又は複数）を含み得る。適切な不活性充填剤は、炭酸ナトリウム及び炭酸カルシウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カルシウム、ラクトース、デンプン、糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトール、及び同様のものを含む。液体経口賦形剤の例は、エタノール、グリセロール、水及び同様のものを含む。デンプン、ポリビニル−ピロリドン（ＰＶＰ）、ナトリウムデンプングリコラート、微結晶性セルロース及びアルギン酸は、崩壊剤の例である。結合剤は、デンプン及びゼラチンを含み得る。潤滑剤は、存在する場合には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクであり得る。所望であれば、錠剤は、胃腸管での吸収を遅延させるためにグリセリルモノステアラート又はグリセリルジステアラートなどの材料でコーティングされ得るし、又は腸溶性コーティングでコーティングされ得る。
【００６０】
経口投与用のカプセルは、ハード及びソフトなゼラチンカプセルを含む。ハードゼラチンカプセルを調製するために、有効成分（単数又は複数）は、固体の、半固体の又は液体の希釈液と混合され得る。ソフトゼラチンカプセルは、水、ピーナッツ油又はオリーブ油などの油、液体パラフィン、短鎖脂肪酸のモノグリセリド及びジグリセリド混合物、ポリエチレングリコール４００又はプロピレングリコールと有効成分とを混合することによって調製され得る。
【００６１】
経口投与用の液体は、懸濁液、溶液、エマルジョンあるいはシロップの形状であり得るし、又は、使用の前に水又は他の適切なビヒクルで再構成するように凍結乾燥されるか又は乾燥製造物として存在し得る。そのような液体組成物は、任意的に（optionally）以下のものを含むことができる：懸濁剤（例えば、ソルビトール、メチルセルロース、ナトリウムアルギネート、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アルミニウムステアラートゲル及び同様のもの）などの医薬的に許容可能な賦形剤；非水性ビヒクル、例えば、油（例えば、アーモンド油又は分画化されたココナッツ油）、プロピレングリコール、エチルアルコール又は水；保存料（例えば、メチル又はプロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート又はソルビン酸）；レシチンなどの湿潤剤；及び、所望の場合には、香味料又はカラーリング剤。
【００６２】
本発明の組成物は、座薬として直腸内投与用に製剤化され得る。静脈内の、筋肉内の、腹腔内の、鼻腔内の、又は皮下の経路を含む非経口の使用のために、本発明の薬剤は、適切なｐＨへ緩衝された溶液及び等張性の無菌水溶液又は懸濁液中で、又は非経口的に許容可能な油中で提供され得る。適切な水性ビヒクルは、リンガー液及び等張の塩化ナトリウムを含む。そのような形態は、アンプル又は使い捨て可能な注射デバイスなどのユニットドーズ形態、適切な投与量が取り出され得るバイアルなどのマルチドーズ形態、又は注射可能な製剤を調製することに使用され得る固体の形態又は前濃縮物で存在し得る。具体的な注射量は、数分間〜数日間の期間にわたって、医薬の担体と混合した薬剤の約１〜１０００μｇ／ｋｇ／分にわたる。
【００６３】
径鼻、吸入又は経口投与に関して、本発明の医薬組成物は、例えば、適切な担体も含むスプレー剤を使用して投与され得る。
【００６４】
局所的な適用に関して、本発明の化合物は、好ましくはクリームあるいは軟膏、又は局所的な投与に適する類似のビヒクルとして製剤化される。局所的な投与に関して、本発明の化合物は、ビヒクルに対する薬剤の約０．１％〜約１０％の濃度で医薬担体と混合され得る。本発明の薬剤の投与の他のモードは、経皮的な送達を行うようにパッチ製剤を利用し得る。
【００６５】
本願において使用した用語「処置する」又は「処置」は、「予防的な」及び「治癒的な」処置の両方を含む。「予防的な」処置は、病気、病気の兆候、もしくは医療的状態の発症の延期、出現し得る兆候を抑制すること、病気もしくは兆候の発症又は再発のリスクを減少させることを示すことを意図する。「治癒的な」処置は、重篤度を低減させること、もしくは存在する病気、兆候、又は状態の悪化を抑制することを含む。従って、処置は、存在する病状の悪化を回復させる又は防止すること、更なる症状の発生を防止すること、潜在的な全身性の症状の発生を回復させる又は防止すること、疾患又は病気を阻害すること、例えば、疾患又は病気の発生を阻止すること、疾患又は病気を軽減すること、疾患又は病気を後退させること、病気もしくは疾患によって生じた状態を軽減すること、又は病気もしくは疾患の症状を停止することを含む。
【００６６】
用語「被験者」は、そのような処置の必要がある哺乳類の患者（ヒトなど）を意味する。
【００６７】
タンパク質凝集によって特徴付けられる神経変性疾患の例は、アルツハイマー病、パーキンソン病、前頭側頭型認知症、レビー小体型痴呆、ＰＤ痴呆、多系統萎縮症及び筋萎縮性側索硬化症を含む。
【００６８】
１つの視点において、本発明の化合物及び医薬組成物は、α−シヌクレイン、β−アミロイド、及び／又はｔａｕタンパク質凝集体を特異的にターゲットする。従って、これらの化合物及び医薬組成物は、α−シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はｔａｕタンパク質の凝集を防止する、逆行させる、遅延させる又は阻害することに使用することができ、そして、凝集、例えば、α−シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はｔａｕタンパク質の凝集などに関連した又は凝集によって生じた変性型の神経疾患を処置する本発明の方法において使用され得る。好ましい実施形態において、本発明の方法は、α−シヌクレイン、β−アミロイド、及び／又はｔａｕタンパク質の凝集と関連した神経変性疾患をターゲットする。好ましい実施形態において、処置の方法は、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体病又は多系統萎縮症をターゲットする。本発明の化合物、組成物及び方法は、タンパク質凝集に次ぐ、神経細胞の細胞死などの有害な影響を軽減することにも使用される。
【００６９】
他の視点において、本発明の化合物、組成物及び方法は、シヌクレイン凝集体をターゲットすることに使用される。本発明はいずれかの特定の作用のメカニズムによって限定されないが、シヌクレイン凝集体は、病気のプロセスの初期において、タンパク質のミスアライメントによって生じ、タンパク質多量体を形成させると考えられる。モノマーユニットの数が増加すると、凝集体化したタンパク質は、孔（ポア）様の形状を採ることができ、神経細胞のメンブレンに埋まって、イオンフロー及び細胞恒常性維持を破壊し得る。
【００７０】
本発明の阻害性の方法において、「有効量」は、タンパク質凝集を減少させる、進行を遅延させる又は逆行させることに十分な量を意味する。凝集の量の測定は、以下に記載したものなどのルーチン的な解析方法によって実行され得る。そのような調節（modulation）は、多種多様なセッティングにおいて有用であり、インビトロアッセイを含む。そのような方法において、細胞は、好ましくは神経細胞である。
【００７１】
本発明の処置方法において、「有効量」は、そのような処置を必要とする被験者の所望の治療上の利益を一般的にもたらすのに十分な量又はドーズを意味する。本発明の化合物の有効量又はドーズは、モデリング、投与量の漸増又は臨床治験などのルーチン的な方法によって、ルーチン的な要素、例えば、投与又は薬剤送達のモード又は経路、薬剤の動態、重篤度及び感染の原因、被験者の健康状態、状態及び体重、及び処置する医師の判断を考慮して確認され得る。投与量の例は、１日あたりに被験者の体重のキログラムあたりの活性剤の約１μｇ〜２ｍｇの範囲、好ましくは約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、又は約１〜３５ｍｇ／ｋｇ／日、又は約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日である。総投与量は、単一の又は分割された投与ユニット（例えば、ＢＩＤ、ＴＩＤ、ＱＩＤ）で与えられ得る。
【００７２】
一度患者の病気の改善が生じると、投与量は、予防的な又は維持的な処置用に調節され得る。例えば、投与量又は投与頻度、又はそれらの両方は、症状の関数（function）として、所望の治療上の又は予防的な効果が維持されるレベルまで減少され得る。もちろん、症状が適切なレベルまで緩和した場合には、処置は休止され得る。しかしながら、患者は、いずれかの症状の再発のため、長期間の断続的な処置を必要とし得る。患者は、長期間ベースの慢性の処置も必要とし得る。
【００７３】
薬剤の組み合わせ
本願に記載の本発明の化合物（複数）は、神経変性疾患の処置において１つ以上の追加の有効成分との組み合わせで、医薬組成物又は方法において使用され得る。例えば、追加の有効成分は、神経変性疾患を処置することに有効であることが既知の又は発見されたものであり、病気と関連した他のターゲットに対して活性な以下のものを含むが、それらに限定されない：ａ）タンパク質のミスフォールディングに対する化合物（これらのタンパク質の生成を減少させる薬剤、それらのクリアランスを増加させる薬剤、又はそれらの凝集及び／又は増加を変化させる薬剤など）；ｂ）そのような疾患の症状を処置する化合物（例えば、ドーパミン補充療法）；及びｃ）相補的なメカニズムによって神経保護剤として作用する薬剤（例えば、自食現象をターゲッティングするもの、抗酸化性のもの、及びアデノシンＡ２Ａアンタゴニストなどの他のメカニズムによって作用するもの）。
【００７４】
例えば、追加の有効成分は、神経変性疾患を処置することに有効であることが既知の又は発見されたものであり、病気と関連した他のターゲットに対して活性な以下のものを含むが、それらに限定されない：ａ）タンパク質のミスフォールディングの異なるメカニズムをターゲットする化合物（凝集及び／又は増加など）；ｂ）そのような疾患の症状を処置する化合物（例えば、ドーパミン補充療法）；及びｃ）相補的なメカニズムによって神経保護剤として作用する薬剤（例えば、自食現象をターゲッティングするもの、抗酸化性のもの、及びアデノシンＡ２Ａアンタゴニスト）。
【００７５】
例えば、本発明の組成物、製剤及び処置の方法は他の薬剤又は医薬製剤、例えば、タンパク質凝集に関連した又はタンパク質凝集（例えば、シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はｔａｕタンパク質凝集）によって生じた変性型の神経疾患（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病（ＡＤ）、レビー小体病（ＬＢＤ）及び多系統萎縮症（ＭＳＡ）、又は関連した症状又は状態）を処置する又は緩和することに有用な他の活性作用物質を更に含むことができる。例えば、本発明の医薬組成物は１つ以上のそのような活性作用物質を更に含むことができ、そして、処置の方法は有効量の１つ以上のそのような活性作用物質を更に投与することを含み得る。ある実施形態において、更なる活性作用物質は、抗生物質（例えば、抗細菌の又は静菌的なペプチド又はタンパク質）例えば、グラム陽性菌又はグラム陰性菌に対して有効なもの、流動体（fluids）、サイトカイン、免疫調節剤、抗炎症剤、コラーゲン様ドメイン、フィブリノーゲン様ドメイン又は炭水化物結合ドメインを含むペプチド又はタンパク質などの補体活性化剤（例えば、フィコリン）、及び同様のもの及びその組み合わせであり得る。追加の活性作用物質は、ドーパミン治療剤、カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、認知改善剤（アセチルコリンエステラーゼ阻害剤又はメマンチンなど）、アデノシン２Ａ受容体アンタゴニスト、β−セクレターゼ阻害剤、又はγ−セクレターゼ阻害剤を含む、そのような組成物及び方法において有用なものを含む。特定の実施形態において、少なくとも１つの本発明の化合物は、医薬組成物において又は処置の方法において、以下のものからなる群から選択される１つ以上の薬剤と組み合わせられ得る：タクリン（コグネックス）、ドネペジル（アリセプト）、リバスチグミン（イクセロン）、ガランタミン（レミニール）、フィゾスチグミン、ネオスチグミン、イコペジル（ＣＰ−１１８９５４、５，７−ジヒドロ−３−［２−［１−（フェニルメチル）−４−ピペリジニル］エチル］−６Ｈ−ピロロ−［４，５−ｆ−］−１，２−ベンゾイソキサゾール−６−オンマレアート）、ＥＲ−１２７５２８（４−［（５，６−ジメトキシ−２−フルオロ−１−インダノン）−２−イル］メチル−１−（３−フルオロベンジル）ピペリジンヒドロクロリド）、ザナペジル（ＴＡＫ−１４７；３−［１−（フェニルメチル）ピペリジン−４−イル］−１−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１−ベンゾアゼピン−８−イル）−１−プロパンフマラート）、メトリホナート（Ｔ−５８８；（−）−Ｒ−．α．−［［２−（ジメチルアミノ）エトキシ］メチル］ベンゾ［ｂ］チオフェン−５−メタノールヒドロクロリド）、ＦＫ−９６０（Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド−ヒドラート）、ＴＣＨ−３４６（Ｎ−メチル−Ｎ−２−pyropinyldibenz［ｂ，ｆ］oxepine−１０−メタンミン）、ＳＤＺ−２２０−５８１（Ｓ）−．α．−アミノ−５−（ホスホノメチル）−［１、１’−ビフェニル］−３−プロピオン酸）、メマンチン（ナメンダ／Ｅｘｉｂａ）及び１，３，３，５，５−ペンタメチルシクロヘキサン−１−アミン（ネラメキサン）、タ���ンフルルビル（フルリザン）、トラミプロセート（アルツヘメド）、クリオキノール、ＰＢＴ−２（8-hydroxyquinilone誘導体）、１−（２−（２−ナフチル）エチル）−４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン、フペルジンＡ、ポサチレリン、リュープロリド又はその誘導体、イスプロニクリン、（３−アミノプロピル）（Ｎ−ブチル）ホスフィン酸（ＳＧＳ−７４２）、Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジニル））−４−ペンテン−２−アミン（イスプロニクリン）、１−デカンアミニウム，Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−Ｎ−メチル−Ｎ−オクチル−分子内塩（ＺＴ−１）、サリチレート、アスピリン、アモキシプリン、ベノリラート、コリンマグネシウムサリチレート、ジフルニサル、フェイスラミン、メチルサリチレート、マグネシウムサリチレート、サリチルサリチレート、ジクロフェナク、アセクロフェナク、アセメタシン、ブロムフェナク、エトドラク、インドメタシン、ナブメトン、スリンダク、トルメチン、イブプロフェン、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ケトロラク、ロキソプロフェン、ナプロキセン、チアプロフェン酸、スプロフェン、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フェニルブタゾン、アザプロパゾン、メタミゾール、オキシフェンブタゾン、スルフィンプラゾン、ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、テノキシカム、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、ニメスリド、アリールアルカン酸、２−アリールプロピオン酸（プロフェン）、Ｎ−アリールアントラニル酸（フェナム酸）、ピラゾリジン誘導体、オキシカム、ＣＯＸ−２阻害剤、スルホンアニリド、必須脂肪酸及びミノザック（２−（４−（４−メチル−６−フェニルピリダジン−３−イル）ピペラジン−１−イル）ピリミジンジヒドロクロリドヒドラート）又はその組み合わせ。そのような組み合わせは、効果を増加させる、他の病状を回復させる、１以上の副作用を減少させる、又は必要とされる本発明の化合物の投与量を減少させる役割を果たし得る。追加の有効成分が、本発明の化合物とは別個の医薬組成物において投与され得るし、又は本発明の化合物と一緒に単一の医薬組成物に含まれ得る。更なる有効成分は、本発明の化合物と同時に、投与前に、又は投与後に投与され得る。
【００７６】
化学合成
本発明の方法において有用な化学物質の例は、以下のそれらの一般的な調製及び以下の特定の例についての具体的な合成のスキームを参照することによって記載されるだろう。技術者は、本願の種々の化合物を取得するために、所望の製造物を製造することに適するような保護の有り又は無しで、最終的に所望の置換基が反応スキームを介してもたらされるように、出発材料が適切に選択され得ることを認識するだろう。あるいは、最終的に所望の置換基の代わりに、反応スキームを介してもたらされ、そして、所望の置換基で適切に置換され得る適切な基を採用することが必要であるか又は望まれ得る。更に、本発明の技術分野における通常の知識を有する者は、以下のスキームに示されたトランスフォーメーションが、特定のペンダント基の機能と両立できるいずれかの順番で実行され得ることを認識するだろう。一般的なスキームにおいて記載される反応の各々は、好ましくは、０ ℃から使用される有機溶媒の還流温度までの温度で実行される。他に特定されない限り、式（Ｉ）の参照は、上記定義のように可変である。本願に記載の放射線同位体的にラベルされた化合物は、適切にラベルされた出発材料を使用して、以下に記載した方法に従って調製される。そのような材料は、放射標識された化学試薬の市販供給者から一般的に利用可能である。
【００７７】
スキームＡ
2015515465.tif 000037
式Ｉの化合物は、そのような化合物の尿素、カルバメート、チオ尿素又はチオカルバメートアームの導入を示すスキームＡに従って調製され得る。化合物Ａは、適切なクロロホルマート試薬ＡＯＣＯＣｌと、次にアルコール又はアミンを含むＲ１−と反応され、カルバメート又は尿素が導入され得る。あるいは、化合物Ａは、統合クロロホルマート試薬Ｒ１（ＣＨ２）ｎＷＣＯＣｌ又はイソシアナート試薬Ｒ１（ＣＨ２）ｎＷ＝Ｃ＝Ｓと反応され得る。典型的には、これらのカップリング反応は、ジクロロメタンなどの溶媒中でトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの第３級アミン塩基の存在下で実行される。
【００７８】
スキームＢ
2015515465.tif 000038
化合物Ａは、Ｒ３置換基が導入されるスキームＢに従って調製され得る。ＧがＯＨである化合物Ｂは、化合物Ａそのものである。そのような化合物は、アルキルハライド又はシクロアルキルハライドなどの適切なアルキル化剤でアルキル化され、Ｒ３がアルコキシ又はシクロアルコキシである化合物を形成し得る。Ｇが−ＣＨＯ又はその誘導体である化合物Ｂは、＝ＰＰｈ３＋Ｂｒ−などの適切なウィッティヒ試薬と反応され、Ｇがアルケニル基である化合物を形成し、水素及び適切な触媒の存在下で還元されて、Ｒ３がアルキルである化合物を形成し得る。
【００７９】
スキームＣ
2015515465.tif 000039
化合物Ａは、Ｒ２置換基が導入されるスキームＣに従っても調製され得る。Ｇ’が不在又はＯＨである化合物Ｃは、化合物Ａそのものである。Ｇ’がＯＨである場合に、そのような化合物Ｃは、光延条件の下でメチルヨウ化物と反応されて、メトキシ基Ｒ２を形成し得るか、又は例えば、Shimizu et al. Angew. Chem. Int. Ed. Eng. 2005, 44, 214-231に記載されるように、対応するジチオカルボナートを介してトリフルオロメチルエーテルへ転換され得る。
【００８０】
スキームＤ
2015515465.tif 000040
化合物Ａ（又はＲ２及び／又はＲ３がそれぞれＧ’及びＧである類似体）は、スキームＤに示されるように調製され得る。ＲがＯＨ、ＳＨ又はＮＨ２である場合に、そのような化合物は、Ｈｅｔ−ＣＨ２Ｂｒ、Ｈｅｔ−ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ又はＨｅｔ−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ及び同様のものなどの適切なＨｅｔ−を含む試薬でアルキル化され、Ｈｅｔ−Ｘ−サブユニットを導入し得る。化合物ＡにおけるＨｅｔ−Ｘ−基が炭素原子を介してフェニル環に連結される場合には、Ｈｅｔ−Ｘ−基は、適切に置換されたフェニル環上の芳香族置換反応を使用して導入され得る（例えば、以下の実施例２参照）。Ｈｅｔがベンズイミダゾール環である場合には、これらの化合物は、２−リチオベンズイミダゾールを調製し、そしてアルキル化反応を実行することによって合成され得る（例えば、Katritzky A. R.; Akutagawa K. J. Org. Chem. 1989, 54, 2949-2952に記載されるように）。あるいは、Ｒが−ＣＨ２ＯＨである場合には、求核性のＨｅｔ−基が、トリフルオロ酢酸などの適切な酸の存在下においてアルキル化反応を介して導入され得る（例えば、以下の実施例３参照）。
【実施例】
【００８１】
以下の実施例は、例示のために提示するが、本発明を制限するためのものではない。
実施例１：３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート
2015515465.tif 000041
【００８２】
ステップ１．ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（Ｂｏｃ2Ｏ）（６５．２ｇ，０．２ｍｏｌ）を０℃で、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中、１Ｈ−インドール−３−カルボアルデヒド（２９．２ｇ，０．２ｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１．２８ｇ，０．０１ｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（３０．３ｇ，０．３ｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。混合液を室温で終夜撹拌した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、有機層をＨ２Ｏ（３×５０ｍＬ）及び塩水（brine）（５０ｍＬ）で洗浄し、そして無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ろ過後、ろ液を濃縮し、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（４４ｇ，９０％）を生じた。１ＨＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣ１３）δ：１．７１（ｓ，９Ｈ），７．４４−７．２５ (ｍ，２Ｈ)，８．１５（ｄ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，１Ｈ）, １０．１（ｓ, １Ｈ）。
【００８３】
ステップ２．水素化ホウ素ナトリウム（１６．６ｇ，０．４５ｍｏｌ）を、エタノール（５０ｍＬ）中、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（４４ｇ，０．１７ｍｏｌ）の溶液に０℃で加えた。混合液を、３時間室温で撹拌した。ろ過後、ろ液をエバポレートし、エタノールを取り除いた。残渣を、酢酸エチル（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）の間で分離した。水層を、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして真空中で濃縮しｔｅｒｔ−ブチル  ３−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（４０ｇ，９５％）を生じた。１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．５９（ｓ，９Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），７．１９（ｔ，１Ｈ），７．２５（ｔ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ）。
【００８４】
ステップ３．Ｂｒ２（３．３４ｍＬ，６６ｍｍｏｌ）を、０℃に冷却したＣＣｌ４（１５０ｍＬ）中トリフェニルフォスフィン（１８．８６ｇ，７２ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。生じたオレンジイエローの懸濁液を０℃で２０分間撹拌した。ＣＣｌ４（５０ｍＬ）中の化合物、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（１４．８ｇ，６０ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間にわたり加えた。生じた混合液を、１時間、室温で撹拌した。固体をろ過で取り出し、そしてろ液を濃縮し、化合物ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（ブロモメチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（１５．２６ｇ，８２．３％）を生じた。１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．５９（ｓ，９Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝０．８Ｈｚ），７．２６−７．３１（ｍ，１Ｈ），７．６０−７．６２（ｍ， ２Ｈ），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ）。
【００８５】
ステップ４．１−メチルピペラジン（９．０ｇ，９０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（６０ｍＬ）、Ｋ２ＣＯ３（６０．０ｇ，４３０．０ｍｍｏｌ）、及び２−クロロアセトニトリル（７．２ｇ，９５ｍｍｏｌ）の混合液を、室温で、終夜撹拌した。酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、そして懸濁液をろ過した。ろ液を、真空で濃縮し、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）アセトニトリルを黒いオイルとして生じ（１．２５ｇ，９９％）、直接次のステップで使用した。
【００８６】
ステップ５．乾燥ＴＨＦ（３００ｍＬ）中、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）アセトニトリル（１１．２ｇ，８０．４ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中、水酸化アルミニウムリチウム（３．３ｇ，８７ｍｍｏｌ）の撹拌された懸濁液にゆっくりと加えた。混合液を１時間、室温で撹拌した。混合液を氷浴槽（ice bath）中で冷却し、そしてＨ２Ｏ（３．３ｍＬ）及び２０％ＮａＯH溶液（３．３ｍＬ）を順に加えた。２０分間撹拌した後、混合液をろ過し、そして溶媒をエバポレートした。残渣を酢酸エチルに溶解し、そして無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒をエバポレートし、乾燥させ、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタンアミン（１．１５ｇ，９９％）をオイルとして生じた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３）δ：２．２１（ｓ，３Ｈ），２．２０−２．６０ （ｍ，１０Ｈ），２．７１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【００８７】
ステップ６．ｎ−ＢｕＬｉ（１３．６８ｍＬ，２．５Ｍ）を、０℃、窒素下で、乾燥ＴＨＦ（３４２ｍＬ）中、ｎ− Ｃ３Ｈ７ＰＰｈ３Ｂｒ（１３．２ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合液を０℃で、２時間撹拌し、そして−７８℃に冷却し、３，５−ジメトキシベンズアルデヒド（５．７ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を還流状態で終夜加熱した。混合液を飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし（quenched）、そして酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濃縮した。残渣をカラムによって精製し（５：１の石油エーテル（petroleum ether）／酢酸エチルで溶出する）、（Ｅ）−１−（ブタ−１−エン−１−イル）−３，５−ジメトキシベンゼン（５ｇ，７５．７％）を生じた。 １ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．１２−１．０５（ｍ，３Ｈ），２．４０−２．２０（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），５．６９−５．６３（ｍ，１Ｈ），６．３７−６．２７（ｍ，２Ｈ），６．４５（ｓ，１Ｈ），６．５２（ｓ，１Ｈ）。
【００８８】
ステップ７．Ｐｄ／Ｃ（〜１０％）をエタノール（５０ｍＬ）中、（Ｅ）−１−（ブタ−１−エン−１−イル）−３，５−ジメトキシベンゼン （４．８ｇ，２５ｍｍｏl）の溶液に加えた。反応混合液を２５℃で水素下で３時間撹拌した。珪藻土のパッド（pad）を通してろ過した後、残渣を濃縮し、１−ブチル−３，５−ジメトキシベンゼン（３．５ｇ，７２％）を生じた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：０．９３（ｔ，３Ｈ），１．３９−１．３４（ｍ，２Ｈ），１．６４−１．５６（ｍ，２Ｈ），２．５６（ｔ，２Ｈ），６．３１ （ｓ，１Ｈ），６．３６（ｓ，１Ｈ）。
【００８９】
ステップ８．ＢＢｒ３（２４．２ｇ，９６．６ｍｏｌ）を０℃で、ジクロロメタン（７５ｍＬ）中、１−ブチル−３，５−ジメトキシベンゼン（７．５ｇ，３８．６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。反応混合液を室温で終夜撹拌した。混合液をＨ２Ｏでクエンチし、そしてＮａＨＣＯ３で中和した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、そして有機層を水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濃縮した。残渣をカラムによって精製し（５：１の石油エーテル／酢酸エチルで溶出する）、５−ブチルベンゼン−１，３−ジオール（５ｇ，７８％）を生じた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：０．９１（ｔ，３Ｈ），１．３３（ｍ，２Ｈ），１．５７（ｍ， ２Ｈ），２．４９（ｔ，２Ｈ），４．６４（ｓ，２Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），６．２４（ｓ，２Ｈ）。
【００９０】
ステップ９．１０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、５−ブチルベンゼン−１，３−ジオール（６４０ｍｇ，３．８ｍｍｏｌ）及びｔ−ＢｕＯＫ（８５１ｍｇ，７．６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３０分間撹拌した。１０ｍＬのＤＭＦ中、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（ブロモメチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（１．２ｇ，３．８ｍｍｏｌ）の溶液をこの溶液に加えた。反応混合液を、終夜撹拌し、そして５００ｍＬのジクロロメタンで希釈した。反応混合液を、塩水（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮し、粗生産物とし、カラムにより精製し（１：１の石油エーテル／酢酸エチルで溶出する）、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（３−ブチル−５−ヒドロキシフェノキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（３００ｍｇ，２０％）を生じた。
【００９１】
ステップ１０．ジイソプロピルエチルアミン（６５０ｍｇ，５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）中、４−ニトロフェニルクロロホルマート（５００ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（３−ブチル−５−ヒドロキシフェノキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（１ｇ，２．５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。溶液を３０分間撹拌し、そして、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタンアミン（１．４ｇ，１０ｍｍｏｌ）で室温で処理した。反応混合液を室温で終夜撹拌し、そして１００ｍＬのジクロロメタンで希釈した。反応混合液を塩水（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮し、粗生産物とし、分取ＨＰＬＣ（preparative HPLC）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（３−ブチル−５−（（（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバモイル）オキシ）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（５４０ｍｇ，４０％）を提供した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：０．８３７（ｔ，３Ｈ），１．２７（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｓ，９Ｈ），２．４９（ｔ，２Ｈ），２．７４（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｍ，１０Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），６．１７（ｔ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｍ，１Ｈ），７．５６（ｍ，２Ｈ），８．０７（ｍ，１Ｈ）。
【００９２】
ステップ１１．５Ｍ  ＨＣｌ−ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中、ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（３−ブチル−５−（（（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバモイル）オキシ）フェノキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキシラート（１．１３ｇ，２ｍｍｏｌ）を−７８℃で１０分間撹拌し、そして濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣにより精製し、３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メトキシ）−５−ブチルフェニル  （２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）カルバメート（２７０ｍｇ）を提供した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：０．９２（ｔ，３Ｈ），１．３４（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｍ，２Ｈ），２．５０（ｍ，４Ｈ），２．６６（ｍ，７Ｈ），３．０１（ｍ，４Ｈ），３．３１（ｔ，２Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），６．５５（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｍ，１Ｈ）。
【００９３】
実施例２：１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素
2015515465.tif 000042
ステップ１．ｎ−ＢｕＬｉ（５２０ｍＬ，１．２７４ｍｏｌ，ヘキサン中２．５Ｍ溶液）を７００ｍＬの乾燥メタノールに激しい撹拌をしながら−７８℃で、Ｎ２下で滴下により加えた。添加が完了した後、混合液を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、そして残渣を１Ｌのヘキサメチルフォスフォルアミドに溶解し、そして氷浴槽で冷却した。３，５−ジニトロ安息香酸（１００ｇ，０．４７２ｍｏｌ）を撹拌している溶液に加えた。混合液を、室温で５時間撹拌しそして８０℃で１２時間撹拌した。反応混合液を室温に冷却し、２ＬのＨ２Ｏで希釈し、６００ｍＬの水性Ｈ２ＳＯ４（６Ｍ）で酸性化し（acidified）、そしてメチル  ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３Ｌ）で抽出した。有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして濃縮し、３−メトキシ−５−ニトロ安息香酸（６００ｇ，８１％，８バッチ）を生じた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  ３．９１（ｓ，３Ｈ），７．７８−７．７９ （ｍ，１Ｈ），７．９０−７．９１（ｔ，１Ｈ），８．１７−８．１８（ｍ，１Ｈ）。
【００９４】
ステップ２．ＢＨ３・ＴＨＦ（ＴＨＦ中１Ｍ，９３４ｍＬ，０．９３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（７００ｍＬ）中、３−メトキシ−５−ニトロ安息香酸（８０ｇ，０．４０６ｍｏｌ）の３℃溶液に加えた。３℃で１時間撹拌した後、混合液を室温に温め、そして１２時間撹拌した。混合液を１１２ｍＬの１：１の酢酸／Ｈ２Ｏの添加によりクエンチした。溶媒を取り除き、そして残渣を１．５Ｌの氷冷飽和水性ＮａＨＣＯ３に、激しく撹拌しながら、２０分間にわたり注ぎ入れた。固体をろ過し、そして乾燥させ、（３−メトキシ−５−ニトロフェニル）メタノール（３１０ｇ，８３％，５バッチ）を提供した。
【００９５】
ステップ３．ピリジニウムジクロマート（３８２ｇ，１．０２ｍｏｌ）及びシリカゲル（３８２ｇ）を１０℃未満で、ＣＨ２Ｃｌ２（１．５Ｌ）中（３−メトキシ−５−ニトロフェニル）メタノール（７５ｇ，０．４１ｍｏｌ）の溶液に加えた。室温で３時間撹拌した後、ＴＬＣ解析により、出発材料が完全に消費されたことを示した（３：１  石油／酢酸エチル，Ｒｆ  ０．６）。ＣＨ２Ｃｌ２を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィにより混合液を精製し、３−メトキシ−５−ニトロベンズアルデヒドを、黄色い固体として提供した（１７０ｇ，７６％，３バッチ）。
【００９６】
ステップ４．ｎ−ＢｕＬｉ（１４８ｍＬ，０．３７ｍｏｌ，ヘキサン中２．５Ｍ溶液）を、ＴＨＦ（５００ｍＬ）中、プロピルトリフェニルフォスフィンブロミド（４２ｇ，０．３７ｍｏｌ）の懸濁液に、氷浴槽温度で３０分間にわたって滴下して加えた。ＴＨＦ（３００ｍＬ）中、３−メトキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（６７ｇ，０．３７ｍｏｌ）の溶液を撹拌している溶液に滴下して加えた。混合液を１２時間撹拌した。混合液を氷水に注ぎ入れ、そして酢酸エチル（１Ｌ）で抽出した。有機相を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして残渣を、溶離液（eluent）として石油エーテル／酢酸エチル（５０：１）を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィに供し、（Ｅ）−１−（ブタ−１−エン−１−イル）−３−メトキシ−５−ニトロベンゼン（１０３ｇ，５３％、３バッチ）を茶色いオイルとして提供した。
【００９７】
ステップ５．Ｐｄ（ＯＨ）２（２０ｇ） をアルゴン雰囲気下で、メタノール（１Ｌ）中、（Ｅ）−１−（ブタ−１−エン−１−イル）−３−メトキシ−５−ニトロベンゼン（５０ｇ，０．２８２ｍｏｌ）の溶液に加えた。混合液を４５℃のＨ２雰囲気の５０ｐｓｉ下で１２時間撹拌した。ろ過後、減圧下で溶媒を除去し、３−ブチル−５−メトキシアニリン（７４ｇ，７３％，２バッチ）を提供した。
【００９８】
ステップ６．ＢＢｒ３（１２１ｇ，４８９ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で−７８℃で、ジクロロメタン（５００ｍＬ）中、３−ブチル−５−メトキシアニリン（３５ｇ，１９６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。反応混合液を６時間室温で撹拌した。混合液をＨ２Ｏでクエンチし、ＮａＨＣＯ３で中和した。ジクロロメタン（５００ｍＬ）を加え、そして有機層を塩水（５００ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し（５：１の石油エーテル／酢酸エチルで溶出する）、３−アミノ−５−ブチルフェノール（４０ｇ，６２％）を茶色の固体として生じた。
【００９９】
ステップ７．ＴＨＦ中、１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジン（９．２ｇ，３６．４ｍｍｏｌ）の溶液を、１時間にわたり、氷浴槽温度でＴＨＦ（８０ｍＬ）中、３−アミノ−５−ブチルフェノール（５ｇ，３０．３ｍｍｏｌ）、（１Ｈ−インドール−３−イル）−メタノール（５．３ｇ，３６．４ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ３（９．５ｇ，３６．４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。混合液を濃縮し、そして分取ＨＰＬＣにより精製して、２−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−アミノ−３−ブチルフェノール（１０．５ｇ，クルード（crude），８バッチ）を提供した。
【０１００】
ステップ８．４−ニトロフェニルクロロホルマート（１．４ｇ，６．８ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのＴＨＦ中、２−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−５−アミノ−３−ブチルフェノール（２ｇ，６．８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．９ｇ，６．８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。溶液を３０分間撹拌し、次いで２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタンアミン（１．９ｇ，１３．６ｍｍｏl）を室温で加えた。反応混合液を２時間、室温で撹拌した。反応混合液を濃縮した後、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素（３．４ｇ，３６％，３バッチ）を白い固体として提供した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：０．７５−０．７９（ｔ，３Ｈ），１．２１（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｍ，２Ｈ），２．２０（ｍ，３Ｈ），２．３４−２．４３ （ｍ，１０Ｈ），２．４７−２．５０（ｍ，２Ｈ），３．１５−３．１６（ｄ，Ｊ ＝６．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ），５．９５（ｓ，１Ｈ），６．５４−６．５５（ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），１０．６０（ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０１】
実施例３：１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素
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ステップ１．ＭｅＩ（１２０ｇ，０．８ｍｏｌ）を、アセトニトリル（５００ｍＬ）中、２−ブロモ−４−ニトロ安息香酸（１００．０ｇ，０．４ｍｏｌ）及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８０ｇ，０．６ｍｍｏl）の溶液に、０℃で滴下して加えた。生じた混合液を２５℃で１２時間撹拌した。混合液を濃縮し、そして、３００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、２Ｎ  ＨＣｌ（３×１００ｍＬ）、２Ｎ  ＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）、及び塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、そして濃縮し、メチル  ２−ブロモ−ニトロベンゾアート（１０４ｇ，１００％）を白い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：４．０１（ｓ，３Ｈ），７．９３−７．９５（ｄ，Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ，１Ｈ），８．２２−８．２４（ｍ，１Ｈ），８．５３−８．５４（ｍ，１Ｈ）.
【０１０２】
ステップ２．トルエン／エタノール（１：１，８２０ｍＬ）中、メチル  ２−ブロモ−ニトロベンゾアート（２２．０ｇ，８４．６ｍｍｏｌ）、ビニルボロン[酸]無水物ピリジン複合体（vinylboronic anhydride pyridine complex）（２０．２ｇ，８４．１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４．９ｇ，４．３３ｍｍｏｌ），およびＫ２ＣＯ３（４６．５ｇ，３３６．８ｍｍｏｌ）の混合液をＮ２下で９０℃で２時間撹拌した。反応混合液を濃縮し、そして残渣を酢酸エチルおよび水で分離した（partitioned）。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した、そして残渣をカラムクロマトグラフィ（１０：１  石油エーテル／酢酸エチル）により精製し、エチル  ４−ニトロ−２−ビニルベンゾアート（１４ｇ，７６．６％）を黄色い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．３２−１．３６（ｍ，３Ｈ），４．３１−４．３６（ｍ，２Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），５．４１−５．４４（ｄ，１Ｈ），５．７１−５．７５（ｄ，１Ｈ），７．３３−７．３７（ｍ，１Ｈ），７．８８−７．９０ （ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，１Ｈ），７．９８−８．０１（ｍ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ）。
【０１０３】
ステップ３．ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）中、エチル  ４−ニトロ−２−ビニルベンゾアート（１５．８ｇ，７１．５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＯＨ）２（８．０ｇ）の混合液を、Ｈ２下で２５℃で４時間撹拌した。反応混合液は、珪藻土のパッドを通してろ過し、そしてろ液を濃縮し、エチル−４−アミノ−２−エチルベンゾアート（１３．１ｇ，９５％）を黄色い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ： １．１９−１．２２（ｔ，３Ｈ），１．３３−１．３４（ｍ，３Ｈ），２．９１−２．９７（ｑ，２Ｈ），４．２６−４．３１ （ｑ，２Ｈ），６．４６−６．５０（ｍ，２Ｈ），７．９１−７．８１（ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０４】
ステップ４．ＴＨＦ（１００ｍＬ）中、エチル−４−アミノ−２−エチルベンゾアート（１３．１ｇ，６７．８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中、ＬｉＡｌＨ４（７．８ｇ，２０３．７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＮ２下で滴下して加えた。添加が完了した後、反応混合液を室温で１２時間撹拌した。反応混合液を冷却し、Ｈ２Ｏ（７ｍＬ）、１５％  ＮａＯＨ（７．８ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２４ｍＬ）でクエンチした。次に、溶液をろ過し、濃縮し、（４−アミノ−２−エチルフェニル）メタノール（８．３ｇ，８１％）を黄色い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．１９−１．３０（ｔ，３Ｈ），２．６４−２．７２（ｍ，２Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），７．５２−７．５４（ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４，８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１２−７．１４（ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１２−７．１４（ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０５】
ステップ５．トリフルオロ酢酸（１．４ｍＬ）を、ジクロロエタン（２００ｍＬ）中、（４−アミノ−２−エチルフェニル）メタノール（８．３７ｇ，５５．４３ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−インドール（１２．９７ｇ，１１０．８６ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。添加の後、反応混合液を５０℃で１２時間撹拌した。反応混合液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（５：１  石油エーテル／酢酸エチル）で精製し、４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルアニリン（５．２ｇ，３７％）を黄色い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．０８−１．１１（ｔ，３Ｈ），２．５１−２．５６（ｑ，２Ｈ），３．９３（ｓ，２Ｈ），６．３９−６．４２（ｄｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．６２−６．６３（ｍ，１Ｈ），６．８９−６．９１（ｄ，Ｊ ＝ ８ Ｈｚ，１Ｈ），７．００−７．０４（ｍ，１Ｈ），７．０９−７．２９（ｍ，１Ｈ），７．４８２−７．４８３（ｍ，１Ｈ），７．５０１−７．５０３（ｄ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０６】
ステップ６．ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｇ，３．２ｍｍｏl）（１６ｍＬ）をＴＨＦ中、４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルアニリン（０．８ｇ，３．２ｍｍｏl）及び４−ニトロフェニルカルボノクロリダート（０．６４ｇ，３．２ｍｍｏl）の溶液に２０℃で加え、生じた溶液を３０分間撹拌した。次に、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタンアミン（０．９ｇ，６．４ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。添加が完了した後、混合液を２０℃で１２時間撹拌した。混合液を濃縮し、そして分取ＨＰＬＣにより精製し、１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素（０．３３ｇ，２６％）を黄色い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：１．１３−１．１７（ｔ，３Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．４８−２．７１（ｍ，１０Ｈ），３．２９−３．３２（ｍ，２Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｓ，１Ｈ），６．９２−６．９６（ｍ, １Ｈ），７．０２−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．２９−７．３１（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３９−７．４１（ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ，１Ｈ）； ＭＳ （Ｍ＋１＋）： ２２０．３。
【０１０７】
実施例４：１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−アミノエチル）尿素
2015515465.tif 000044
ステップ１．ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｇ，１６ｍＬ，３．２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルアニリン（０．８ｇ，３．２ｍｍｏｌ）及び４−ニトロフェニルカルボノクロリダート（０．６４ｇ，３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、２０℃で加え、生じた溶液を３０分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カルバメート（１．０ｇ，６．４ｍｍｏl）をこの溶液に加えた。添加の後、混合液を２０℃で１２時間撹拌した。混合液を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製し、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）ウレイド）エチル）カルバメート（０．９０ｇ，６４％）を茶色い固体として生じた。１ＨＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １．１７−１．２０（ｔ，３Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），２．６４−２．６９（ｑ，２Ｈ），３．３３−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．３６−３．３５（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｓ，２Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），５．２２（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｓ，１Ｈ），６．９９−７．００（ｍ，１Ｈ），７．０２−７．１２（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．３７（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５３−７．５６（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ）。
【０１０８】
ステップ２．ＣＨ２Ｃｌ２（１０４ｍＬ）中、トリフルオロ酢酸（９ｍＬ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）ウレイド）エチル）カルバメート（０．８ｇ，１．８ｍｍｏｌ）の溶液に０℃でゆっくりと加えた。添加が完了した後、混合液を１０℃で１２時間、撹拌した。混合液を濃縮し、そして分取ＨＰＬCにより精製して１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−アミノエチル）尿素（０．１０ｇ，１６％）を黄色い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：１．１４−１．１７（ｔ，３Ｈ），２．６３−２．６９（ｑ，２Ｈ），２．７５−２．７８（ｔ，２Ｈ），３．２５−３．２８（ｔ，２Ｈ），４．０２（ｓ，２Ｈ），６．７３（ｓ，１Ｈ），６．９２−６．９６（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），７．２９−７．３１ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．４０−７．４２（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ）．  ＭＳ（Ｍ＋１＋）： ３３７．１。
【０１０９】
実施例５：１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（ピペラジン−１−イル）エチル）尿素
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ステップ１．ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｇ，１６ｍＬ，３．２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中、４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルアニリン（０．８ｇ，３．２ｍｍｏｌ）及び４−ニトロフェニル  カルボノクロリダート（０．６４ｇ，３．２ｍｍｏl）の溶液に２５℃で加えて、生じた溶液を３０分間撹拌した。次に、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−アミノエチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（１．５ｇ，６．４ｍｍｏｌ）を上記溶液に加えた。生じた混合液を２５℃で１２時間撹拌した。混合液を濃縮し、そして分取ＨＰＬＣにより精製して、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）ウレイド）エチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（１．３ｇ，８０％）を白い固体として生じた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．１６−１．１８（ｔ，３Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），２．３６−２．３８（ｍ，４Ｈ），２．４９−２．５２（ｔ，２Ｈ），２．６４−２．６９（ｑ，２Ｈ），３．３１−３．３７（ｍ，６Ｈ），４．０６（ｓ，２Ｈ），５．３６（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），７．０１−７．０８（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．３５（ｍ，３Ｈ），７．３５−７．３７（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．５６（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ）。
【０１１０】
ステップ２．ＣＨ２Ｃｌ２（９０ｍＬ）中、トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）をｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）ウレイド）エチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（０．８ｇ，１．６ｍｍｏｌ）の溶液に０℃でゆっくりと加えた。添加が完了した後、混合液を１０℃で１２時間撹拌した。混合液を濃縮し、そして、分取ＨＰＬCにより精製して、１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素（０．１５ｇ，２３％）を黄色い固体として生じた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ  １．１４−１．１８（ｔ，３Ｈ），２．５４−２．５７（ｔ，２Ｈ），２．６６−２．６７（ｍ，６Ｈ），３．１１−３．０９（ｍ，４Ｈ），３．３４−３．２３（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｓ，２Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），６．９２−６．９４（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．１２（ｓ， １Ｈ），７．３０−７．３２（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３９−７．４１（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ）．ＭＳ（Ｍ＋１＋）：４０６．２。
【０１１１】
実施例６：１−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エチル）−３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）尿素
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ジイソプロピルエチルアミン（２．６ｇ，２０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルアニリン（１．０ｇ，４ｍｍｏl）及び４−ニトロフェニル  カルボノクロリダート（０．８ｇ，４．０ｍｍｏl）の溶液に２５℃で加え、生じた溶液を３０分間撹拌した。２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エタンアミン  ジヒドロクロリド（０．９ｇ，８．０ｍｍｏｌ）を上記溶液に加え、混合液を２５℃で１２時間撹拌した。混合液を濃縮し、そして分取ＨＰＬCにより精製して、１−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エチル）−３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−エチルフェニル）尿素（０．２３ｇ，１５％）を黄色い固体として生じた。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：１．１３−１．１７（ｔ，３Ｈ），２．６３−２．６８（ｑ，２Ｈ），２．９１−２．９５（ｔ，２Ｈ），３．４８−３．５１（ｔ，３Ｈ），４．０２（ｓ，２Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），６．９２−６．９３（ｍ，１Ｈ），７．０４−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．３２（ｄ，Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３６−７．４０（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋１＋）： ３８８．２。
【０１１２】
実施例７：４−（２−（３−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）ウレイド）エチル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨウ化物
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メチルヨウ化物（８３ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中、１−（４−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−ブチル−５−ヒドロキシフェニル）−３−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）尿素（２５０ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２２３ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ）の混合液に０℃で加えた。反応混合液を室温で１０時間撹拌した。混合液を氷水に注ぎ入れ、沈殿した固体をろ過し、そしてメチル  ｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄し、４−（２−（３−（３−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−２−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）ウレイド）エチル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウム  クロリド（１５０ｍｇ，５８％）を白い固体として提供した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：０．７４７−０．７８３（ｔ，３Ｈ），１．１８７−１．１．２２３（ｍ，２Ｈ），１．２８２−１．３３９（ｍ，２Ｈ），２．４８４−２．３８６（ｍ，４Ｈ），２．７６３（ｍ，４Ｈ），３．１６６−３．１１４（ｍ，８Ｈ），３．４４４（ｓ，４Ｈ），３．８４８（ｓ，２Ｈ），６．６５１−６．６１９ （ｍ，２Ｈ），６．７４４−６．７３２（ｄ，Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０８−６．８７０ （ｍ，１Ｈ），７．００７−６．９６８（ｍ，２Ｈ），７．２６９−７．２４９（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４８−７．５２８（ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，１Ｈ），９．０３１（ｓ，１Ｈ），９．１４１（ｓ，１Ｈ），１０．７１（ｓ，１Ｈ）。
【０１１３】
次の化合物は、一般的なスキーム及び実施例における上記のものに類似する方法を使用して調製されることができる。
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【０１１４】
実施例２６：Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ無細胞（cell-free）アッセイ及び細胞ベース（cell-based）アッセイ
無細胞アッセイ。遺伝子組み換えα−シヌクレイン（synuclein）（１０μＭ）を３７℃で１６時間インキュベートし、そして５６℃で６時間、テスト化合物と共にインキュベートする。対照実験を、α−シヌクレインを認識しない不活性（inactive）な化合物、β−及びγ−シヌクレインおよび変異α−シヌクレイン分子で行う。インキュベーションの後、混合液をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で泳動し、次に、α−シヌクレイン抗体での免疫ブロットテストを行う。実施例２［の化合物］は、α−シヌクレインのオリゴマーへの凝集を濃度依存的に阻害することが可能である（図１）。
【０１１５】
細胞ベースアッセイ。α−シヌクレイン（野生型）又は空ベクター（対照）を発現するレンチウイルス（ＬＶ）で感染させた神経細胞系を０、０．１、１及び１０μＭの濃度のテスト化合物に２４時間暴露する。免疫ブロット及び共焦点顕微鏡によりα−シヌクレイン凝集に関して細胞を解析する。免疫ブロットによって、対照と比較すると、ＬＶ−α−シヌクレイン感染神経細胞は、可溶性及び不溶性フラクションにおいてダイマー、トリマー及びテトラマーに相当する（consistent with）オリゴマー並びにＳＹＮモノマー（１４ｋＤａ）の高レベルの発現を示す。実施例２［の化合物］で処置した後、様々なフラクションにおいて凝集のレベルの５０−６０％の減少が生じた。ビヒクル（vehicle）又は対照不活性化合物での処置は、α−シヌクレインのレベルに関して効果が無かった。同様に、共焦点顕微鏡によって、ＬＶ−空ベクター対照と比較して、ＬＶ−α−シヌクレインに感染した神経細胞は、高レベルのα−シヌクレイン蓄積を示した（ＳＹＮｔｇマウスおよびＰＤを患う患者の脳において観察されるものに類似する）（図２）。実施例２［の化合物］で処置した後、神経細胞の本体及び神経突起において凝集のレベルの６０−６５％の減少が生じた（図２）。ビヒクル又は対照不活性化合物での処置は、α−シヌクレインのレベルに関して効果が無かった。
【０１１６】
α−シヌクレイを高レベルで発現する神経細胞は、チューブリンＩＩＩに対する抗体で解析した場合、神経突起の成長（neurite outgrowth）の減少を示した。実施例２［の化合物］の処置（０．１及び１．０μＭ）は、神経突起の伸長における有害な効果を緩和し、そして細胞形態が改善した（図３Ａ）。ビヒクル又は対照不活性化合物での処置は、保護的な効果を有さなかった。
【０１１７】
次に、神経活性（neuronal activity）における効果を確認するために、細胞をＬＶ−α−シヌクレインで２４時間感染させ、血清フリー培地中で実施例２［の化合物］で０、０．０１、０．１及び１μＭにおいて２４時間処置し、Ｆｌｕｏ−４又はカルセイン（calcein）でロードし、そしてＦＬＩＰＲアッセイにより解析し、Ｃａ２＋及びカルセインレベルを決定した。ＬＶ−空ベクター対照と比較して、ＬＶ−α−シヌクレインに感染した神経細胞は、２５〜３０％高いＣａ２＋のレベルを示した（図３Ｂ）。実施例２［の化合物］での処置は、濃度依存的に、Ｃａ２＋の濃度を、ＬＶ−α−シヌクレインで感染していない細胞の濃度に回復させた（図３Ｂ）。ビヒクル又は対照不活性化合物での処置は、Ｃａ２＋レベルにおける効果を有さなかった。ＬＶ−空ベクター対照と比較して、ＬＶ−α−シヌクレイン感染神経細胞は、細胞質におけるカルセイン保持（calcein retention）において５０％の減少を示した（図３Ｃ）。実施例２［の化合物］での処置は、濃度依存的に、カルセインのレベルに関するα−シヌクレインの効果を逆転させた（図３Ｃ）。ビヒクル又は対照不活性化合物での処置は、カルセインレベルを回復させる（re-establish）ことができなかった。最後に、神経の生存に関する実施例２［の化合物］の効果を実験するために、ＭＴＴ細胞の生存率アッセイを行った。この研究は、１０μＭでは軽度（mild）の毒性が観察されたが、０．１−１０μＭの範囲のドーズでは実施例２［の化合物］の毒性効果は何も示されなかった（図３Ｄ）。無細胞アッセイ及び細胞ベースアッセイの全ては、少なくとも３回繰り返し、実験はサンプルの固有性（identity）をブラインドする（blinded）ように行われた。
【０１１８】
膜完全性（membrane integrity）に関するカルセインアッセイでテストされた化合物のデータは、次の表に表される。
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【０１１９】
実施例２７：Ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ
テスト化合物のＩｎ  ｖｉｖｏ効果は、α−シヌクレイン遺伝子組み換え（Ｔｇ）マウスで評価する。マウスを、α−シヌクレイン凝集及び神経変性（neurodegeneration）に関して、行動学的に（behaviorally）、神経病理学的に、そして生化学的に解析する。血液及びＣＳＦを、α−シヌクレイン及びテスト化合物のレベルに関して、質量分析及びＮＭＲによって解析する。混合Ｃ５７Ｂｌ６／ＤＢＡバックグラウンドにおけるＴｈｙ１プロモータ下で野生型ヒトα−シヌクレインを過剰発現するＰＤのＴｇマウスモデルを使用する（Rockenstein et al., 2002）（６１系統ｔｇマウスと称される）。このＴｇマウスは、３ヶ月の年齢で始まる、進行性のＰＤ様運動障害及び、（アルファ−シヌクレイン凝集及びシナプティックマーカー（synaptic markers）（複数）の減少を含む）神経病理学的なインデックス（複数）を示す（Fleming et al., 2004）。その結果、３ヶ月の年齢で動物に開始される処置及び運動行動（motor behaviors）（ａ−シヌクレイン凝集及び神経変性に関する神経病理学的な及び生化学的な測定並びに、歩行活動（locomotor activity）及びラウンドビームパフォーマンステスト（round beam performance test））を、処置の３か月後の６か月の年齢で評価する。
【０１２０】
化合物投与：テスト化合物を、ビヒクル溶液に溶解し、そして体重１０グラム当たり０．１ｃｃの容積で投与する。動物は９０日間、ビヒクル又は１０ｍｇ／ｋｇのテスト化合物を月曜日−金曜日の毎日、腹腔内注入を受ける。行動評価（Behavioral assessment）を、開始の日又は処理の約８０日に行う。
【０１２１】
歩行活動装置（Locomotor Activity Apparatus）およびテスト手順：歩行活動データは、Ｋｉｎｄｅｒ  ＳｍａｒｔＦｒａｍｅ  Ｃａｇｅ  Ｒａｃｋ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｍｏｎｉｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ（Kinder Scientific, Poway, CA）を使用して、連続４日間にわたり収集する。歩行活動テストレジメンは、連続４日間において４つのセッション（各１５分）からなる。各テスト日に、各個別の動物を、テストチャンバ内に置き、そしてデータ回収を即座に開始する。データを処理（process）し、そしてその後の、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA）を使用した解析およびグラフ化のためにＭＳ Ｅｘｃｅｌ にインポートする。各動物に関して解析される自発的な歩行活動に関する依存的な測定（dependent measures）は、調査育成（investigatory rearings）、［ラウンドビームを渡った］渡り走行総距離（total distance travelled）、端部に留まる時間の％、中央に留まる時間の％、および接触走性（thigmotaxis）を含む。各測定に関して群の平均を導き、そして被験者間因子（between-subjects factors）として遺伝子型及び処置群を使用する２要因ＡＮＯＶＡにより解析する。主要な効果又は相互作用のイベントにおいて、事後比較（post hoc comparisons）を、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較テスト（multiple comparisons test）を使用して行う。統計学的有意性に関する基準はｐ＜０．０５である。
【０１２２】
ラウンドビーム装置及びテスト手順：ラウンドビームデータは、テストベンチの上方に１７．５から２２．５ｃｍ上昇する平滑なアクリル製フレーム上に置かれる取り外し可能な２つのＤｅｌｒｉｎ（登録商標）ａｃｅｔｅｌプラスチック棒（３ｃｍ及び１ｃｍの直径）からなる特注の装置を使用して回収する。各動物を、各トライアルの間に短い休憩を入れながら、１メートルのビームＡ（３ｃｍ）及び［ビーム］Ｄ（１ｃｍ）のそれぞれについて３回のトライアルを、連続してテストした。手動のカウンターを使用して、マークされた線を越える明確な足の滑り（foot slip）ごとに、実験者によりカウントする。更に、各トライアルについて、［ラウンドビームを］渡る前方向の距離（ビームの側面にマークされた１０ｃｍのセクション（複数）を使用して評価し、そしてスコアをつける）及び落ちるまでの時間（latency to fall）（最大６０秒）を各動物について記録する。トライアルは、動物がビームから落ちた（fall off）時、最大の許容時間（６０秒）に達した時、又は、全ての距離を渡った時に終了する。生データを手で記録し、そして次のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA）を使用する解析及びグラフ化のためにＭＳ Ｅｘｃｅｌに入力する。各直径のビームでの能力についての（直径）依存的な測定は、足の滑りの＃（番号記号）、渡った前方向の距離、及び落ちるまでの時間を含む。これらの測定は各動物について測定し、そして、平均値±標準誤差（ＳＥＭ）として表す。群平均を各測定に関して決定し、そして、被験者間因子として遺伝子型及び処置群を使用する２要因ＡＮＯＶＡにより解析する。主要な効果又は相互作用のイベントにおいて、事後比較（post hoc comparisons）を、Ｂｏｎｆｅｒｏｎｎｉの多重比較テストを使用して行う。統計学的有意性に関する基準はｐ＜０．０５である。
【０１２３】
神経病理学：行動評価および処置の完了時に、組織回収、プロセシング及びイメージングの方法を、前に記載（報告）されるように（Masliah et al., 2000）行う。略述すると、脳及び末梢組織を取り除きそして、サジタリー［sic, sagitally］に分割する。右側の半脳（hemibrain）は、神経病理学解析のためにリン酸緩衝４％ＰＦＡ（ｐＨ  ７．４）で、４℃で４８時間、後固定し（post-fixed）、一方、左側の半脳は、スナップ凍結（snap-frozen）し、そして、次のＲＮＡ及びタンパク質解析のために−７０℃で保存する。落下固定した（drop fixed）半脳を、次に、ビブラトームを使用して連続的に４０μＭの厚さの冠状切片に切断する。切片を浮遊させ（free-floated）、そして４℃で一次抗体と共に終夜インキュベートする。一次抗体の特異性を確認するために、一次抗体の無い（欠損した、deleted）状態、免疫前血清（preimmune serum）のある状態、又は２０倍超過の対応するペプチドで４８時間予め吸着させた（preadsorbed）一次抗体で、終夜インキュベートした切片について対照実験を行う。プロティナーゼＫ消化に続いて行われるオリゴマーの研究と共に、アルファ−シヌクレインの免疫標識研究（Immunolabeling studies）をポリクローナルウサギ抗アルファ−シヌクレイン抗体（１：１０００；Millipore, Temecula, CA）を使用して行う。神経変性関連マーカーの免疫標識研究は、ＮｅｕＮ（１：１０００，ＡＢＮ７８）、ＭＡＰ２（１：４０，ＡＢ５６２２）、シナプトフィジン（１：１００，ＭＡＢ５２５８）及びＧＦＡＰ（１：５００，ＡＢ５８０４）抗体に対する抗体（Millipore, Temecula, CA）を利用する。イメージング及び解析を、Ｍａｓｌｉａｈらにより前に記載（報告）されるように（Masliah et al., 2000）、ｔｇおよび非ｔｇマウスからの、ブラインドコードされた（blindcoded）切片について行う。 
【０１２４】
Ｅｘ  ｖｉｖｏウエスタンブロットタンパク質解析：マウスの脳のホモジネートの細胞質（可溶性）フラクション及び膜（不溶性）フラクションのプロセシングを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析について前に記載（報告）されるように（Hashimoto et al., 2001）行う。略述すると、各フラクションについて２０μｇを、４−１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Invitrogen, Carlsbad, CA）を使用してライン毎にロードする。ＰＤＧＦ膜（Millipore, Temecula, CA）への電気泳動に続いて（１）ブロッキング、（２）一次抗体とのインキュベーション；（３）二次抗体とのインキュベーション；（４）ＥＣＬ可視化（PerkinElmer, Wellseley, MA）；（４）ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA）を使用して行うグラフ化及び統計学的な解析を用いたＶｅｒｓａＤｏｃゲルイメージングシステム（Bio-Rad, Hercules, CA）を使用してイメージング及び解析を行う。
【０１２５】
生物学的な手順に関するリファレンス文献：
1) Fleming SM, Salcedo J, Fernagut PO, Rockenstein E, Masliah E, Levine MS, Chesselet MF (2004) Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human alpha-synuclein.  J Neurosci., 24(42):9434-40.
2) Hashimoto M, Rockenstein E, Mante M, Mallory M, Masliah E (2001)  beta-Synuclein inhibits alpha-synuclein aggregation: a possible role as an anti-parkinsonian factor.  Neuron, 32(2):213-23.
3) Masliah E, Rockenstein E, Veinbergs I, Mallory M, Hashimoto M, Takeda A, Sagara, Sisk A, Mucke L (2000) Dopaminergic loss and inclusion body formation in alpha-synuclein mice: implications for neurodegenerative disorders. Science 287:1265-1269.
4) Rockenstein E, Mallory M, Hashimoto M, Song D, Shults CW, Lang I, Masliah E (2002) Differential neuropathological alterations in transgenic mice expressing alpha-synuclein from the platelet-derived growth factor and Thy-1 promoters. J Neurosci Res., 68(5):568-78.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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