(57)【要約】本発明は、ＰＤＧＦ−Ｃ抗原に結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲα受容体への結合を阻害し、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化を阻害することが可能な抗体に関する。このような抗体の用途も開示されている。これらには癌の治療が含まれる。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原ＰＤＧＦ−Ｃに結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲαへの結合を阻害し、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化を阻害する単離モノクローナル抗体。
【請求項２】
配列番号９６によって定義されるペプチドに結合している、請求項１に記載の単離抗体。
【請求項３】
（ｉ）それぞれ配列番号２６、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；ならびにそれぞれ配列番号３５〜３７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１〜３；
（ｉｉ）配列番号２２または２３で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；それぞれ配列番号２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２７または２８で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９、３０または３１で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３２、３３または３４で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号２２、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９または３０で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３２または３３で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）それぞれ配列番号２３〜２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２８で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３１で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３４で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｖ）それぞれ配列番号３８、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３０で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３３で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）のいずれかの親和性成熟抗体
相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列の以下の組み合わせのうちの１つをさらに含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の単離抗体。
【請求項４】
哺乳類抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項１または３に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗原に対する結合親和性が維持される条件で、さらに単一特異性または多特異性である一価または多価の抗体である、請求項１〜４のいずれかに一項に記載の抗体。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体の抗原結合断片。
【請求項７】
請求項１〜５に記載の抗体をコードするか、または請求項６に記載の抗原結合断片をコードする単離核酸。
【請求項８】
薬剤として使用するための請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸。
【請求項９】
追加の治療剤と組み合わせた薬剤として使用するための請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸。
【請求項１０】
請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸のうちの少なくとも１つを含み、さらに薬学的に許容可能な希釈剤、担体またはアジュバントのうちの少なくとも１つを含む医薬組成物。
【請求項１１】
追加の治療剤をさらに含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
良性、前悪性もしくは悪性の腫瘍を治療または阻害するのに使用するための請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸。
【請求項１３】
眼障害を予防、治療または阻害するのに使用するための請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸。
【請求項１４】
血管新生によって特徴付けられる障害を予防、治療または阻害するのに使用するための請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸。
【請求項１５】
追加の治療薬との併用療法の一部である薬剤として使用するための請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸。
【請求項１６】
請求項７に記載の単離核酸を含む単離宿主細胞。
【請求項１７】
請求項１〜５に記載の抗体または請求項６に記載の抗原結合断片を発現する単離宿主細胞。
【請求項１８】
（ｉ）前記抗体もしくは抗体断片の組換え発現によって、または前記抗体もしくは抗体断片の化学合成によって前記抗体もしくは抗体断片の粗調製物を取得するステップと、
（ｉｉ）（ｉ）で取得した粗調製物から前記抗体または抗体断片を精製するステップと
を含む、請求項１〜５に記載の抗体または請求項６に記載の抗原結合断片を産生する方法。
【請求項１９】
（ｉ）前記抗体の組換え発現によって、または前記抗体の化学合成によって前記断片を含む抗体の粗調製物を取得するステップと、
（ｉｉ）（ｉ）で取得した粗調製物から前記抗体を精製するステップと、
（ｉｉｉ）（ｉｉ）で精製した抗体から抗原結合断片を単離するステップと
を含む、請求項１〜５に記載の抗体または請求項６に記載の抗原結合断片を産生する方法。
【請求項２０】
請求項１〜５に記載の抗体または請求項６に記載の抗原結合断片の誘導体。
【請求項２１】
請求項１〜５に記載の抗体、請求項６に記載の抗原結合断片または請求項７に記載の核酸の薬剤の製造における使用。
【請求項２２】
（ｉ）ＣＤＲの外側の領域に最大１６個の変異を有する配列番号１８〜２１のいずれか１つに示される可変重鎖；
（ｉｉ）ＣＤＲの外側の領域に最大９個の変異を有する配列番号１４〜１７のいずれか１つに示される可変軽鎖；
（ｉｉｉ）Ｖａｌ５Ｌｅｕ、Ａｓｐ１０Ｇｌｙ、Ｌｙｓ１３Ｇｌｎ、Ｌｙｓ１９Ａｒｇ、Ａｓｐ４２Ｇｌｙ、Ａｒｇ４４Ｇｌｙ、Ｓｅｒ７４Ａｓｎ、Ｓｅｒ８４Ａｓｎ、Ｌｙｓ８７Ａｒｇ、Ｓｅｒ８８Ａｌａ、Ｍｅｔ９３Ｖａｌ、および／またはＴｈｒ１１４Ｌｅｕの変異のうちの１以上を有する配列番号１８に示される可変重鎖；
（ｉｖ）Ｖａｌ５Ｌｅｕ、Ａｓｐ１０Ｇｌｙ、Ｌｙｓ１３Ｇｌｎ、Ｌｙｓ１９Ａｒｇ、Ａｓｐ４２Ｇｌｙ、Ａｒｇ４４Ｇｌｙ、Ｐｈｅ８０Ｔｙｒ、Ｓｅｒ８４Ａｓｎ、Ｌｙｓ８７Ａｒｇ、Ｓｅｒ８８Ａｌａ、Ｉｌｅ９３Ｖａｌ、Ｖａｌ９７Ａｌａ、および／またはＴｈｒ１１４Ｌｅｕの変異のうちの１以上を有する配列番号２０に示される可変重鎖；
（ｖ）Ｖａｌ５Ｌｅｕ、Ａｓｐ１０Ｇｌｙ、Ｌｙｓ１３Ｇｌｎ、Ｌｙｓ１９Ａｒｇ、Ａｓｐ４２Ｇｌｙ、Ａｒｇ４４Ｇｌｙ、Ｓｅｒ７４Ａｓｎ、Ｓｅｒ７７Ａｓｎ、Ｓｅｒ８４Ａｓｎ、Ｓｅｒ８８Ａｌａ、Ｉｌｅ９３Ｖａｌ、および／またはＴｈｒ１１４Ｌｅｕの変異のうちの１以上を有する配列番号２１に示される可変重鎖；
（ｖｉ）Ｌｅｕ３Ｖａｌ、Ｔｈｒ７Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１４Ｔｈｒ、Ａｓｐ１７Ｇｌｎ、Ｇｌｎ１８Ｐｒｏ、Ｌｙｓ５０Ａｒｇ、Ｌｅｕ８８Ｖａｌおよび／またはＧｌｙ１０５Ｇｌｎの変異のうちの１以上を有する配列番号１５に示される可変軽鎖；
（ｖｉｉ）Ｌｅｕ３Ｖａｌ、Ｔｈｒ７Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１４Ｔｈｒ、Ａｓｐ１７Ｇｌｎ、Ｇｌｎ１８Ｐｒｏ、Ａｌａ４５Ｐｒｏ、Ｌｙｓ５０Ａｒｇ、Ｌｅｕ８８Ｖａｌおよび／またはＧｌｙ１０５Ｇｌｎの変異のうちの１以上を有する配列番号１６に示される可変軽鎖；
（ｖｉｉｉ）Ｌｅｕ３Ｖａｌ、Ｔｈｒ７Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１４Ｔｈｒ、Ａｓｐ１７Ｇｌｎ、Ｇｌｎ１８Ｐｒｏ、Ａｓｎ５０Ａｒｇ、Ｌｅｕ８８Ｖａｌおよび／またはＧｌｙ１０５Ｇｌｎの変異のうちの１以上を有する配列番号１７に示される可変軽鎖
のうちの少なくとも１つを含む、請求項４に記載のヒト化抗体またはその断片。
【請求項２３】
配列番号１０２によって定義される可変重鎖と、配列番号１０３によって定義される可変軽鎖とを含む、請求項２２に記載のヒト化抗体もしくはその断片、またはその断片。
【請求項２４】
配列番号１０４によって定義される可変重鎖と、配列番号１０５によって定義される可変軽鎖とを含む、請求項２２に記載のヒト化抗体もしくはその断片、またはその断片。
【請求項２５】
配列番号１０６によって定義される可変重鎖と、配列番号１０７によって定義される可変軽鎖とを含む、請求項２２に記載のヒト化抗体もしくはその断片、またはその断片。
【請求項２６】
１０ｎＭ以下の解離定数によって特徴づけられる高い親和性でＰＤＧＦ−Ｃに結合する、請求項１〜５に記載の抗体または請求項６に記載の抗原結合断片。
【請求項２７】
ＬＭＢＰ９４８３ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体２Ｄ３）、ＬＭＢＰ９４８４ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体５Ａ２）、ＬＭＢＰ９４８５ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体５Ｈ７）、ＬＭＢＰ９４８６ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体１６Ｂ１）、またはＬＭＢＰ９４８７ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体２９Ｈ１）として寄託されたハイブリドーマ細胞である、請求項１７に記載の単離宿主細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＤＧＦ−Ｃ抗原に結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲα受容体への結合を阻害し、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化を阻害することが可能な抗体に関する。このような抗体の用途も開示されている。そのような用途には癌の治療が含まれる。
【背景技術】
【０００２】
血小板由来成長因子Ｃ（ＰＤＧＦ−Ｃ）は、ヒトでは、３４５個のアミノ酸のタンパク質であり、３２３個のアミノ酸のタンパク質として分泌される（Ｈａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．２０００，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ４７５：９７−１０２；Ｌｉ ＆ Ｅｒｉｋｓｓｏｎ ２００３，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １４，９１−９８）。血小板由来成長因子Ｃは、ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、およびＰＤＧＦ−Ｄからなる血小板由来増殖因子ファミリーのメンバーである（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．２０００，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２：３０２−３０９；Ｂｅｒｇｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．２００１，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：５１２−５１６；Ｌａ Ｒｏｃｈｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．２００１，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，３：５１７−５２１）。これら４種類のＰＤＧＦに特徴的なシステインノットモチーフは、ホモまたはヘテロ二量体のいずれか（ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦ−ＤＤ）の形成の鍵となる（Ｌａ Ｒｏｃｈｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．２００１，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：５１７−５２１；Ｂｅｒｇｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．２００１，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：５１２−５１６）。
【０００３】
これらの４種類の成長因子は、保存されたシステインノットモチーフに加え、配列相同性を示す。４種類のＰＤＧＦは、単量体の形では不活性である。ＰＤＧＦ−Ｃの場合には、潜在型成長因子として分泌され、Ｎ末端ＣＵＢドメインのタンパク質分解的除去は、その受容体への結合および活性化に必要である。ＣＵＢドメインは、生物学的に活性があるとの報告があるが、ＣＵＢドメインは、分泌されたＰＤＧＦ−Ｃを局所化し、その活性を抑制することの両方に機能するというのが一般的な考えである（Ｒｅｉｇｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．２００５，ＦＥＢＳ Ｊ ２７２：５７２３−５７４１）。ＰＤＧＦ−Ｃを活性化することができるプロテアーゼには、プラスミンおよび組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）が含まれる（Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．２００７，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ４８：２３３５−２３４２；Ｌｅｉ ２００８，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ ｓｃｉ ４９：４２−４８）。
【０００４】
ＰＤＧＦ−Ｃは、ホモ二量体のＰＤＧＦ受容体アルファ（ＰＤＧＦＲα）、および場合によってはヘテロ二量体のＰＤＧＦＲα／βによって生物学的プロセスを調節する。この受容体の細胞外領域は５つの免疫グロブリン様ドメインからなるが、細胞内部分はチロシンキナーゼドメインである。受容体に結合しているＰＤＧＦ−ＣＣは、チロシンキナーゼドメインの活性を増強することによって、増殖、移動、収縮および生存などの細胞応答を誘発する細胞内シグナル伝達事象を開始する（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．２０００，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２：３０２−３０９）。したがって、ＰＤＧＦ−Ｃは、哺乳類の発展および健康に必要な多数の生物学的プロセスに必須である細胞応答の宿主に関わる細胞内シグナル伝達事象を活性化させる。マウスのノックアウト研究により、ＰＤＧＦ−Ｃが口蓋形成に必要であることが示されている（Ｆｒｅｄｒｉｋｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｒｅｖ １５：１９７−２０４；Ｒｅｉｇｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．２００５，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：１７１１４−１７１２０）。ＰＤＧＦＲキナーゼの構成的活性化、ＰＤＧＦＲキナーゼの活性化変異、ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦＲの過剰発現による自己分泌シグナル伝達などのＰＤＧＦ／ＰＤＧＦＲシステムの異常は、いくつかのヒトの疾患、特に、骨肉腫、肺癌、神経膠腫、および悪性星状細胞腫を含む悪性腫瘍、ならびに髄芽腫の一因となる（Ｌｏｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ ２００２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２：３７２９−３７３５；Ｅｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．１９９９，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８：２４８１−２４８８；Ｚｗｅｒｎｅｒ ＆ Ｍａｙ ２００２，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２１：３８４７−３８５４）。ＰＤＧＦ−Ｃは、形質転換細胞因子であり、腫瘍細胞の生存および増殖、癌関連線維芽細胞に関する走化性、ならびに腫瘍血管新生を含むいくつかの機構を介して腫瘍増殖を促進する。ＰＤＧＦ−Ｃは、ヌードマウスにおいて腫瘍を誘導し、足場依存性成長を活性化し、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞の強力な形質転換成長因子であることが示されている（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．２００２，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：１５０１−１５１０）。インビボでの腫瘍形成は、部分的には、腫瘍血管新生の間接的な刺激を促進するＰＤＧＦＣ媒介性ＶＥＧＦ発現によって説明することができる。最後に、ＰＤＧＦ−Ｃは、化学療法に耐性を示す癌腫瘍において上方制御される。癌の前臨床モデルでは、ｓｉＲＮＡによって媒介されるＰＤＧＦ−Ｃレベルの減少が、シスプラチンに対する耐性を逆転させる(Ｙａｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１０，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １２６：４３７−４４９)。
【０００５】
ＰＤＧＦ−Ｃは、ＶＥＧＦ−Ｅ（国際公開第９９／４７６７７号）またはＺＶＥＧＦ３（国際公開第００／３４４７４号）と呼ばれていた。ＰＤＧＦ−Ｃ活性に対抗する抗体（または二重特異性の抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体）の使用が提案されている（国際公開第９９／４７６７７、国際公開第００／３４４７４号、国際公開第０１／２８５８６号、国際公開第２００５／０１１７４２号、国際公開第００／１８２１２号、国際公開第２００５／０８７８１２号）が、抗腫瘍形成または抗血管形成活性が示された特異的モノクローナル抗体は未だ報告されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、高い親和性で抗原ＰＤＧＦ−Ｃに結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲαへの結合を阻害することができ、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化を阻害することが可能な単離されたモノクローナル抗体に関する。上記の抗体は、特に、配列番号９６によって定義されるペプチドに結合する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
高い親和性で抗原ＰＤＧＦ−Ｃに結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲαへの結合を阻害することができ、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化を阻害することが可能な代表的な単離抗体は、
（ｉ）それぞれ配列番号２６、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；ならびにそれぞれ配列番号３５〜３７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１〜３；
（ｉｉ）配列番号２２または２３で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；それぞれ配列番号２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２７または２８で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９、３０または３１で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３２、３３または３４で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号２２、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９または３０で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３２または３３で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）それぞれ配列番号２３〜２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２８で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３１で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３４で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｖ）それぞれ配列番号３８、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３０で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３３で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）のいずれかの親和性成熟抗体
の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列の組み合わせのうちのいずれか１つを含む抗体を含む。
【０００８】
上記のいずれかの抗体は、哺乳類抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体であってもよい。さらに、上記のいずれかの抗体は、一価または多価の抗体であってもよく、さらに、抗原ＰＤＧＦ−Ｃへの結合およびＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化の阻害が維持されるという条件で単一特異性または多特異性であってもよい。
【０００９】
また、本発明は、上記のいずれかの抗体の抗原結合断片も包含する。
【００１０】
さらに、本発明は、上記の抗体または抗原結合断片のいずれかをコードする単離された核酸に関する。
【発明の効果】
【００１１】
上記の抗体のいずれか、それらの抗原結合断片またはそれらのいずれかをコードする核酸は、薬剤として使用することが意図される。このような使用は、単回使用（単独療法）でも、追加の治療薬と組み合わせた使用（併用療法）であってもよいってもよい。この目的のために、上記の抗体の少なくとも１つ、それらの抗原結合断片またはそれらのいずれかをコードする核酸は、薬学的に許容可能な担体、および必要に応じて、追加の治療薬を含み得る医薬組成物に製剤化されてもよい。前記薬剤は、癌、眼障害および血管新生を特徴とする障害の治療に意図されている。
【００１２】
上記の核酸のいずれかを含むベクター、ならびにこのようなベクターを含み、かつ／または上記の抗体もしくはその抗原結合断片のいずれかを発現する宿主細胞は、上記抗体またはその抗原結合断片のいずれかを産生するための方法がそうであるように、本発明のさらなる一部である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおいてヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化に対する５種類の抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１の阻害活性を示すグラフである。アクチベーターＰＤＧＦ−Ｃは、そのＥＣ８０値で適用された（実施例４参照）。（アクチベーターの有無に関わらず）抗体を含まない対照も含まれる。
【図２】ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおいてヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化に対する抗ヒトＰＤＧＦ−ＣポリクローナルヤギＩｇＧ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社のカタログ番号ＡＦ１５６０）の阻害活性を示すグラフである。アクチベーターＰＤＧＦ−Ｃは、そのＥＣ８０値で適用された（実施例４参照）。（アクチベーターの有無に関わらず）抗体を含まない対照も含まれる。
【図３】ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおいて組換えヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化に対する組換えヒトＰＤＧＦＲαＦＣキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社のカタログ番号６７６５−ＰＲ）の阻害活性を示すグラフである。アクチベーターＰＤＧＦ−Ｃは、そのＥＣ８０値で適用された（実施例４参照）。（アクチベーターの有無に関わらず）受容体を含まない対照も含まれる。
【図４】競合ＥＬＩＳＡ設定で決定されるように、抗ＰＤＧＦ−Ｃモノクローナル抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１がＰＤＧＦ−Ｃのその受容体への結合に干渉することを示すグラフである（実施例５参照）。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
用語「ＰＤＧＦ−Ｃ」（血小板由来成長因子Ｃ）は、ＰＤＧＦ−ＣＣとも称され得る一般用語として本明細書で使用する。ＰＤＧＦ−Ｃは、モノマーを示すのに対し、ＰＤＧＦ−ＣＣは、ＰＤＧＦ−Ｃのホモ二量体形態を示す。
【００１５】
治療標的としてのＰＤＧＦ−Ｃに対する作用により、高い親和性で抗原ＰＤＧＦ−Ｃに結合し（実施例３および９参照）、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲαへの結合を阻害することができ（実施例５参照）、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα（ＰＤＧＦ受容体α）の活性化を阻害することが可能な（実施例４および９参照）一連の単離されたモノクローナル抗体の発明につながった。代表的な抗体の治療可能性は、抗体による神経膠芽腫腫瘍成長のインビボ阻害によって示された（実施例７参照）。いずれも現在入手可能ではないとおり、このような治療可能性を有するこのような抗体の必要性が当技術分野に明らかにまだ存在する。
【００１６】
高い親和性で抗原ＰＤＧＦ−Ｃに結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲαへの結合を阻害することができ、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化を阻害することが可能な代表的な単離抗体は、配列番号９６によって定義される配列を有するペプチドに結合する抗体を含む。特に、配列番号９６へのこれらの抗体の結合は、ＥＬＩＳＡにより決定することができる。このようなＥＬＩＳＡにおいて、ＰＤＧＦ−Ｃへの前記抗体の結合は、シグナル対バックグラウンド比が３（３）以上である場合が多いことによって特徴付けられる。本明細書で使用する特定の分析条件は、実施例６および表６の説明文に概説する。ＰＤＧＦ−Ｃに対する代表的な抗体の親和性はナノモル範囲であり、特にこの親和性は、１０ｎＭ以下、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下の解離定数ＫＤ、例えば、０．５ｎＭ〜２．５ｎＭ、０．５ｎＭ〜５ｎＭ、もしくは０．５ｎＭ〜１０ｎＭのＫＤ（すなわち、下限が０．５ｎＭであり、上限が２．５ｎＭ、５ｎＭもしくは１０ｎＭから選択される）、または０．１ｎＭ〜２．５ｎＭ、０．１ｎＭ〜５ｎＭもしくは０．１ｎＭ〜１０ｎＭのＫＤ（すなわち、下限が０．１ｎＭであり、上限が２．５ｎＭ、５ｎＭもしくは１０ｎＭから選択される）によって特徴付けられる。このような親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴によって決定することができる。本明細書で使用する特定の分析条件は、実施例３で概説する。
【００１７】
高い親和性で抗原ＰＤＧＦ−Ｃに結合し、ＰＤＧＦ−ＣのＰＤＧＦＲαへの結合を阻害することができ、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化を阻害することが可能な代表的な単離抗体は、
（ｉ）それぞれ配列番号２６、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３（すなわち、ＣＤＲ１は配列番号２６で定義され、ＣＤＲ２は配列番号２４で定義され、ＣＤＲ３は配列番号２５で定義される）；ならびにそれぞれ配列番号３５〜３７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１〜３；
（ｉｉ）配列番号２２または２３で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；それぞれ配列番号２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２７または２８で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９、３０または３１で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３２、３３または３４で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号２２、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９または３０で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３２または３３で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）それぞれ配列番号２３〜２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２８で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３１で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３４で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；
（ｖ）それぞれ配列番号３８、２４および２５で定義されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１〜３；配列番号２７で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３０で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；ならびに配列番号３３で定義されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；または
（ｖｉ）（ｉ）〜（ｖ）のいずれかの親和性成熟抗体
の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列の組み合わせのうちのいずれか１つを含む抗体を含む。
【００１８】
上記のいずれかの抗体は、哺乳類抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体であってもよい。さらに、上記のいずれかの抗体は、一価または多価の抗体であってもよく、さらに、抗原ＰＤＧＦ−Ｃへの結合およびＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲαの活性化の阻害が維持されるという条件で単一特異性または多特異性であってもよい。
【００１９】
また、本発明は、上記のいずれかの抗体の抗原結合断片も包含する。
【００２０】
本明細書で使用する用語「抗体」は、その産生が免疫系（免疫グロブリンまたはＩｇＧ）によって誘導される任意の天然に存在する抗体または抗原結合タンパク質を指す。「従来の」抗体は、ジスルフィド結合によって共に連結された２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、１つの軽鎖は、ジスルフィド結合により重鎖のそれぞれに連結されている。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に、いくつかの定常ドメイン（抗体のクラスに依存して３つまたは４つの定常ドメインのＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４）が続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他端に定常ドメイン（ＣＬ）を有し、軽鎖の定常ドメインは、それぞれ重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは、それぞれ重鎖の可変ドメインと整列する。この種類の抗体は、２つのみの重鎖（したがって、軽鎖を欠く）からなる「特殊な」天然に存在する種類の抗体と共にラクダ、ヒトコブラクダおよびラマに存在する。他の「特殊な」天然に存在する抗体は、テンジクザメ（コモリザメ科）およびオオセ（オオセ科）の血清中に存在する。これらの後者の抗体は、新規Ｉｇ抗原受容体（ＩｇＮＡＲ）と呼ばれている。これらは、５の定常ドメイン（ＣＮＡＲ）および１つの可変ドメイン（ＶＮＡＲ）からなるジスルフィド結合ホモ二量体である。これには軽鎖は含まれず、個々の可変ドメインは、溶液中で独立しており、疎水性界面を越えて結合するようには思われない（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．１９９５，Ｎａｔｕｒｅ ３７４，１６８−１７３；Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．２００１，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３８，３１３−３２６；Ｄｉａｚ ｅｔ Ａｌ．２００２，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５４，５０１−５１２；Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２７０，３５４３−３５５４）。ラクダ科の動物およびサメの抗体に特徴的な重鎖二量体の構造により、これらは、「重鎖ミニ抗体」（ｍｎＨＣＡｂ）または単に「ミニ抗体」（ｍｎＡｂ）と呼ばれることもある（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ ２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２３，１１２６−１１３６）。（それぞれ、約１６〜２１個のアミノ酸、および約１６〜２７個のアミノ酸を含む）ラクダ抗体およびサメ抗体の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）は、通常、（約９個のアミノ酸を含む）マウスＶＨ領域のＣＤＲ３よりも長い（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ７，１１２９−１１３５；Ｄｏｏｌｅｙ ＆ Ｆｌａｊｎｉｋ ２００５，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３５，９３６−９４５）。軽鎖がないと、これらの重鎖抗体は、Ｖａｂ（ラクダ抗体）またはＶ−ＮＡＲ（サメ抗体）と呼ばれる重鎖免疫グロブリンの可変抗原結合ドメインである単一ドメインによってそれらの抗原に結合する。これらの無傷で、独立して機能的な最小抗原結合断片Ｖａｂは、ナノ抗体またはナノボディーと呼ばれる（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ２００１，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４，２７７−３０２）。場合により、多価（二価、三価、四価および五価など）のＶａｂおよび／またはＶ−ＮＡＲドメインが、それらの潜在的により高い細胞の摂取および保持によって好まれ、国際公開第２０１０／０３３９１３号などに記載の組換え技術または化学的手段によって作製することができる。軽鎖および／または重鎖の可変ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与している。天然に存在する軽鎖および重鎖の可変ドメインは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって連結された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）という同様の一般構造を有する（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、米国立衛生研究所、公衆衛生局、メリーランド州ベセスダ）。軽鎖または重鎖のＣＤＲは、ＦＲによって近接して保持され、抗原結合部位の形成に寄与している。
【００２１】
本明細書で使用する用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、一般に、古典的な４つの鎖の抗体の軽鎖および重鎖の超可変領域を指し、カバットルール、より具体的には、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／で利用可能な、より具体的には「配列を調べることによってＣＤＲを同定する方法（Ｈｏｗ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ＣＤＲｓ ｂｙ ｌｏｏｋｉｎｇ ａｔ ａ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」の節のカバットルールによって定義される。ＣＤＲ領域を決定するための代替ルールは、コチアシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ １９８７，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６，９０１−９１７）で定義された。例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ（１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ １８，５０９）によって提案されるように、さらなる代替ルールは、統合されたＣＤＲ決定システムに従う。
【００２２】
抗体は、２つのＩｇＧ間にチオエーテル結合を導入することによる化学的ホモ二量体化（例えば、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４，７５０９−７５１４；国際公開第９９／０２５６７号；Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３，２５６０−２５６５）、重鎖のカルボキシ末端に１以上のシステインを遺伝子工学処理した後の分子間ジスルフィド結合を介した２量体化または重合（例えば、Ｓｈｏｐｅｓ １９９２，Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ １４８，２９１８−２９２２；国際公開第９１／１９５１５号；Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ １９９４，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２，６８３−６８８）を含むいくつかの手段によって、それらの抗原結合価を増加させるために改変されている。
【００２３】
二重特異性抗体または二機能性抗体は、二重特異性抗体の所望の特異性を有するマウスモノクローナル抗体を発現する２つの異なるハイブリドーマ細胞株の体細胞融合に基づくクアドローマ技術を用いて産生されている（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ＆ Ｃｕｅｌｌｏ １９８３， Ｎａｔｕｒｅ ３０５，５３７−５４０）。あるいは、二重特異性抗体または二機能性抗体は、２つの異なるｍＡｂまたはＡｂ断片の化学結合により産生することができる（Ｓｔａｅｒｚ ｅｔ ａｌ．１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４，６２８−６３１；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９，８１−８３）。さらに、組換え二重特異性抗体または二機能性抗体のフォーマットが開発されている（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ ｅｔ ａｌ．２００１，Ｂｉｏｍｏｌ Ｅｎｇ １８，３１−４０）。それらの中には、タンデム型の一本鎖Ｆｖ分子および異なる抗原を認識する２つの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を根幹とするダイアボディがある（Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，４７−５２参照）。タンデム型のｓｃＦｖ分子（ｔａＦｖ）において、追加のペプチドリンカーを有する２つのｓｃＦｖ分子は、単に共に連結されている。様々なリンカーを用いて、２つのｓｃＦｖ断片および最大６３個の残基長を有するリンカーを連結することができる（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．２００１，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９，４２３−４７４）。非常に短いＡｌａ３リンカーまたはグリシン／セリンに富む長いリンカーを用いて、細菌におけるタンデム型の可溶性ｓｃＦｖ分子の発現が達成されており（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．２０００，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４，６４９５−６５０２；Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０，４８０２−４８０９；Ｋａｒｎｉ ｅｔ ａｌ．２００２，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ １２５，１３４−１４０）、それに対する好ましいリンカーは、Ａｒｎｄｔ ＆ Ｋｒａｕｓｓ（２００３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０７，３０５−３２１）に記載されるようなものであってもよい。
【００２４】
ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインを連結するリンカーの長さを約５残基まで減少させることによってｓｃＦｖ断片から産生される（Ｐｅｉｐｐ ＆ Ｖａｌｅｒｉｕｓ ２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３０，５０７−５１１)。このリンカーサイズの減少は、ＶＨおよびＶＬドメインの交差対合による２つのポリペプチド鎖の二量体化を促進する。二重特異性ダイアボディは、構造ＶＨＡ−ＶＬＢとＶＨＢ−ＶＬＡ（ＶＨ−ＶＬ配置）またはＶＬＡ−ＶＨＢとＶＬＢ−ＶＨＡ（ＶＬ−ＶＨ配置）のいずれかを有する２つのポリペプチド鎖を同じ細胞内で発現させることによって産生される。トリアボディおよびテトラボディなどの多価「ボディ」も存在する。
【００２５】
不活性なホモ二量体形成の問題を回避するために、二重特異性ダイアボディの生成を強制する１つのアプローチは、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）ダイアボディの産生である（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９３，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４−６４４８）。アミノ酸変化によって、大きなノブがＶＨドメイン内に遺伝子工学処理され、相補的な穴（ホール）がＶＬドメイン内に遺伝子工学処理される。
【００２６】
一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、二重特異性ダイアボディ様分子の形成を改善するための代替法を表す（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ １９９７，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ４５，１２８−１３０；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２，２１−３６）。二重特異性一本鎖ダイアボディは、２つのダイアボディ形成ポリペプチド鎖を約１５個のアミノ酸残基長を有する追加の中央リンカーと連結することによって産生される。その結果、単量体の一本鎖ダイアボディに相当する分子量（５０〜６０ｋＤａ）を有する全ての分子は二重特異性である。
【００２７】
ダイアボディは、ジダイアボディ（ｄｉｄｉａｂｏｄｙ）と名付けられたよりＩｇ様の分子を生成するために、Ｆｃと融合させることができる（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９，２８５６−２８６５）。さらに、ＩｇＧの重鎖中の２つのＦａｂリピートを含み、４個の抗原分子を結合することができる多価抗体構築物について説明されている（国際公開第０１７７３４２Ａ１号、およびＭｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０，４８５４−４８６１参照）。
【００２８】
用語「抗体断片」は、親抗体が結合するのと同じ抗原に結合するような抗体（親抗体）の１以上の断片（通常、１以上のＣＤＲ）を含む任意の分子を指す。抗体断片には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、（ｓｃＦｖなどの）一本鎖抗体分子、F（ａｂ’）２、単一可変ＶＨドメイン、および単一可変ＶＬドメインが含まれる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ ２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２３，１１２６−１１３６）。この用語はさらに、ミクロ抗体、すなわち、通常は１つのみのＣＤＲを含む親抗体の最小認識単位を含む（Ｈｅａｐ ｅｔ ａｌ．２００５，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ８６，１７９１−１８００）。いずれの断片も、多価および／または多特異性のより大きな分子、例えば、単一特異性または二重特異性のＦａｂ２、単一特異性または三重特異性Ｆａｂ３、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ（単一特異性または二重特異性）、ダイアボディ（単一特異性または二重特異性）、トリアボディ（例えば、三価の単一特異性）、テトラボディ（例えば、四価の単一特異性））、およびミニボディなどに組み込むことができる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ ２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２３，１１２６−１１３６）。いずれの断片も、例えば、サメ抗体のＶ−ＮＡＲドメインまたはラクダ抗体のＶｈＨドメイン（ナノボディー）にさらに組み込むことができる。これらの全ては、用語「抗体断片」に含まれる。
【００２９】
用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団を指す。典型的には、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５−４９７）に記載のハイブリドーマ法によって作製することができるか、または組換えＤＮＡ法によって作製することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）。また、モノクローナル抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５２，６２４−６２８）もしくはＭａｒｋｓら（１９９１，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２２，５８１−５９７）に記載の技術を用いて、またはさらに他の技術もしくは科学技術によりファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【００３０】
用語「キメラ抗体」は、抗体が所望の生物学的活性を示す限り、同じ種の抗体（例えば、異なるクラスの抗体）、または異なる種の抗体、ならびにそのような抗体の断片に由来する部分と共に接合される抗体を指す（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９８４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８１，６８５１−６８５５）。例えば、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。
【００３１】
本発明の抗体の代表的なヒト化抗体は、
（ｉ）ＣＤＲの外側の領域に最大１６個の変異を有する配列番号１８〜２１のいずれか１つに示される可変重鎖；
（ｉｉ）ＣＤＲの外側の領域に最大９個の変異を有する配列番号１４〜１７のいずれか１つに示される可変軽鎖；
（ｉｉｉ）Ｖａｌ５Ｌｅｕ、Ａｓｐ１０Ｇｌｙ、Ｌｙｓ１３Ｇｌｎ、Ｌｙｓ１９Ａｒｇ、Ａｓｐ４２Ｇｌｙ、Ａｒｇ４４Ｇｌｙ、Ｓｅｒ７４Ａｓｎ、Ｓｅｒ８４Ａｓｎ、Ｌｙｓ８７Ａｒｇ、Ｓｅｒ８８Ａｌａ、Ｍｅｔ９３Ｖａｌ、および／またはＴｈｒ１１４Ｌｅｕの変異のうちの１以上を有する配列番号１８に示される可変重鎖；
（ｉｖ）Ｖａｌ５Ｌｅｕ、Ａｓｐ１０Ｇｌｙ、Ｌｙｓ１３Ｇｌｎ、Ｌｙｓ１９Ａｒｇ、Ａｓｐ４２Ｇｌｙ、Ａｒｇ４４Ｇｌｙ、Ｐｈｅ８０Ｔｙｒ、Ｓｅｒ８４Ａｓｎ、Ｌｙｓ８７Ａｒｇ、Ｓｅｒ８８Ａｌａ、Ｉｌｅ９３Ｖａｌ、Ｖａｌ９７Ａｌａ、および／またはＴｈｒ１１４Ｌｅｕの変異のうちの１以上を有する配列番号２０に示される可変重鎖；
（ｖ）Ｖａｌ５Ｌｅｕ、Ａｓｐ１０Ｇｌｙ、Ｌｙｓ１３Ｇｌｎ、Ｌｙｓ１９Ａｒｇ、Ａｓｐ４２Ｇｌｙ、Ａｒｇ４４Ｇｌｙ、Ｓｅｒ７４Ａｓｎ、Ｓｅｒ７７Ａｓｎ、Ｓｅｒ８４Ａｓｎ、Ｓｅｒ８８Ａｌａ、Ｉｌｅ９３Ｖａｌ、および／またはＴｈｒ１１４Ｌｅｕのうちの１以上を有する配列番号２１に示される可変重鎖；
（ｖｉ）Ｌｅｕ３Ｖａｌ、Ｔｈｒ７Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１４Ｔｈｒ、Ａｓｐ１７Ｇｌｎ、Ｇｌｎ１８Ｐｒｏ、Ｌｙｓ５０Ａｒｇ、Ｌｅｕ８８Ｖａｌおよび／またはＧｌｙ１０５Ｇｌｎの変異のうちの１以上を有する配列番号１５に示される可変軽鎖；
（ｖｉｉ）Ｌｅｕ３Ｖａｌ、Ｔｈｒ７Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１４Ｔｈｒ、Ａｓｐ１７Ｇｌｎ、Ｇｌｎ１８Ｐｒｏ、Ａｌａ４５Ｐｒｏ、Ｌｙｓ５０Ａｒｇ、Ｌｅｕ８８Ｖａｌおよび／またはＧｌｙ１０５Ｇｌｎの変異のうちの１以上を有する配列番号１６に示される可変軽鎖；
（ｖｉｉｉ）Ｌｅｕ３Ｖａｌ、Ｔｈｒ７Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１４Ｔｈｒ、Ａｓｐ１７Ｇｌｎ、Ｇｌｎ１８Ｐｒｏ、Ａｓｎ５０Ａｒｇ、Ｌｅｕ８８Ｖａｌおよび／またはＧｌｙ１０５Ｇｌｎの変異のうちの１以上を有する配列番号１７に示される可変軽鎖
のうちの少なくとも１つを含み得る。
【００３２】
本発明の抗体のヒト化抗体の特定の例としては、（ｉ）配列番号１０２によって定義される可変重鎖および配列番号１０３によって定義される可変軽鎖、（ｉｉ）配列番号１０４によって定義される可変重鎖および配列番号１０５によって定義される可変軽鎖、または（ｉｉｉ）配列番号１０６によって定義される可変重鎖および配列番号１０７によって定義される可変軽鎖が挙げられる。これらのヒト化抗体のいずれかの抗原結合断片も、本発明の対象である。
【００３３】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体であり、かつ／またはヒト抗体を作製するための技術のいずれかを用いて作製される。ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリーからの選択などによって当技術分野で公知の様々な技術を用いて産生することができる（例えば、Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４，３０９−３１４（１９９６）；Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５，６１５７−６１６２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ＆Ｗｉｎｔｅｒ １９９１，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７，３８１−３８８；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．１９９１，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２２，５８１−５９７）。また、ヒト抗体は、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が、部分的または完全に不活性化されたマウスにヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製することもできる。抗原投与時に、ヒト抗体産生が観察される（例えば、米国特許第５，５４５，８０７、米国特許第５，５４５，８０６号、米国特許第５，５６９，８２５号、米国特許第５，６２５，１２６号、米国特許第５，６３３，４２５号、米国特許第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０，７７９−７８３；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８５６−８５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ １９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８１２−８１３；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４，８４５−８５１；Ｌｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｈｕｓｚａｒ １９９５，Ｉｎｔｅｒｎａｔ Ｒｅｖ ｌｍｍｕｎｏｌ １３，６５−９３）。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を産生するヒトリンパ球の不死化によって調製することができ、このようなリンパ球は個体から回収することができるか、またはインビトロで免疫化されていてもよい（例えば、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．１９８５，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９１，Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ １４７，８６−９５；米国特許第５，７５０，３７３号）。
【００３４】
本明細書で使用する用語「配列番号Ｘで定義される／配列番号Ｘによって定義される」とは、配列番号Ｘに示されるアミノ酸またはヌクレオチドの配列からなる生物学的配列を指す。例えば、配列番号Ｘで定義される／配列番号Ｘによって定義される抗原は、配列番号Ｘに示されるアミノ酸配列からなる。さらなる例としては、配列番号Ｘを含むアミノ酸配列が挙げられ、これは、配列番号Ｘに示されるアミノ酸配列よりも長いが、配列番号Ｘに示されるアミノ酸配列を完全に含むアミノ酸配列（配列番号Ｘに示されるアミノ酸配列は、より長いアミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端に位置し得るか、もしくはより長いアミノ酸配列の中に組み込まれ得る）、または配列番号Ｘに示されるアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を指す。
【００３５】
本発明はさらに、抗原ＰＤＧＦ−Ｃに対する親和性が増加した抗体を選択するための方法であって、（ｉ）上記の抗体のいずれかを親和性成熟プロセスに供するステップと、（ｉｉ）抗原ＰＤＧＦ−Ｃに対する親和性が増加した抗体を選択するステップと、を含む方法を含む。
【００３６】
「親和性成熟抗体」は、親抗体に適用される親和性成熟プロセスの結果である。親和性成熟抗体は、通常、１以上のＣＤＲ領域内を含む、１以上のアミノ酸位置においてその親抗体とは異なり、前記差異によって、同じ抗原に対する親抗体の親和性と比較して、抗原に対する親和性成熟抗体の親和性が改善される。親和性成熟プロセスには、例えば、Ｍａｒｋｓら（１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０，７７９−７８３、ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｙ ＶＨ ａｎｄ ＶＬ ｄｏｍａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）に記載のものが含まれる。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓら（１９９４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１，３８０９−３８１３）、Ｓｃｈｉｅｒら（１９９６，Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５）、Ｙｅｌｔｏｎら（１９９５，Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ １５５，１９９４−２００４）、Ｊａｃｋｓｏｎら（１９９５，Ｊ ｌｍｍｕｎｏｌ １５４，３３１０−３３１９）、Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６，８８９−８９６）に記載されている。
【００３７】
本発明の抗体の誘導体、または前記抗体の抗原結合断片の誘導体には、適切な標識で標識された抗体もしくはその断片が含まれるが、これらに限定されず、前記標識は、例えば、酵素タイプ、比色タイプ、化学発光タイプ、蛍光タイプ、または放射性タイプのものであってもよい。本発明の抗体の誘導体は、一般的に、前記抗体またはその断片を別の化合物と結合させることによって生じる全ての分子を含む。このような他の化合物は、例えば、安定性（例えば、半減期）および／または抗体もしくは抗体断片の溶解性を増加させるために用いることができ、プロドラッグをその活性形態に変換できる（例えば、化学療法で使用するための）酵素であってもよく、またはそれ自体が細胞増殖抑制性および／もしくは細胞傷害性の特性を有していてもよい。代表的な誘導体化の修飾には、ペグ化、（架橋部位を作成するために）抗体または抗体断片の骨格中への天然に存在しないシステインの（挿入もしくは変異による）導入、および（合成または組換え手段を介した）グリコシル化などが含まれる。誘導のさらなる例としては、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体）などの細胞傷害性薬剤（細胞の機能を阻害もしくは阻止するか、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質）、化学療法剤、ならびに細菌、真菌、植物もしくは動物起源の小分子毒素または酵素活性のある毒素などの毒素（これらの断片および／もしくは変異体も含む）の結合が挙げられる。本発明の抗体の他の誘導体には、二重特異性抗体が含まれる。一方では、このような抗体は、（上記の）ＰＤＧＦ−Ｃタンパク質に特異的であり、他方では、第２の抗原に特異的である。この第２の抗原は、例えば、当該技術分野で認められた全ての腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原であってもよい。このようなＰＤＧＦ−Ｃ抗体および腫瘍抗原二重特異性抗体は、ＰＤＧＦ−Ｃ発現細胞を死滅させる効率を高めることができる。典型的には、二重特異性抗体のＰＤＧＦ−Ｃ特異性は、本発明の抗体の軽鎖もしくは重鎖可変ドメインの１以上、または軽鎖および／もしくは重鎖可変ドメインのＣＤＲの１以上を含むことによって獲得される。
【００３８】
本発明はさらに、上記のＰＤＧＦ−Ｃ結合抗体またはその抗原結合断片のいずれかをコードする単離核酸に関する。遺伝コードに多少精通している人なら、任意のタンパク質配列をヌクレオチド配列に翻訳することができるであろう。さらに、このような「逆翻訳（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）」または「逆翻訳（ｂａｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）」を実行するためのツールは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｓｍｓ２／ｒｅｖ＿ｔｒａｎｓ．ｈｔｍｌ、もしくはｈｔｔｐ：／／ａｒｂｌ．ｃｖｍｂｓ．ｃｏｌｏｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／ｍｏｌｋｉｔ／ｒｔｒａｎｓｌａｔｅ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ、またはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｎｔｅｌｅｃｈｏｎ．ｃｏｍ／２００８／１０／ｂａｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ−ｔｏｏｌ／などが広く利用可能である。必要に応じて、所定の種へのヌクレオチド配列の適応、すなわち、所定の種における発現を最適化するためのコドン使用の適応も、今日では周知であり、また自由にアクセス可能なウェブツールは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊｐ／ｃｏｄｏｎ／上のコドン使用データベース、またはｈｔｔｐ：／／ｇｅｎｏｍｅｓ．ｕｒｖ．ｅｓ／ＯＰＴＩＭＩＺＥＲ／（１５０以上の原核生物種）などが利用可能である。
【００３９】
上記の抗体のいずれか、それらの抗原結合断片またはそれらのいずれかをコードする核酸は、薬剤としての使用が意図される。このような使用は、単回使用（単独療法）または追加の治療薬と組み合わせた使用（併用療法）で有り得る。この目的のために、上記の抗体の少なくとも１つ、それらの抗原結合断片またはそれらのいずれか１つをコードする核酸は、さらに薬学的に許容可能な担体、および必要に応じて、追加の治療薬を含み得る医薬組成物に製剤化されてもよい。
【００４０】
どのような形態または製剤であっても、上記の抗体のいずれか、それらの抗原結合断片またはそれらのいずれかをコードする核酸は、キットの一部であってもよい。典型的には、このようなキットは、別の成分または他の成分を含んでもよく、それらの全てが医薬組成物である必要はない。非医薬成分は、例えば、上記の抗体、抗原結合断片またはそれらのいずれかをコードする核酸に関する情報を含むリーフレットであってもよい。キットは、併用療法の異なる活性物質を含んでもよい（後述参照）。
【００４１】
前記薬剤は、例えば、良性、前悪性もしくは悪性の腫瘍、眼障害、および、血管新生を特徴とする障害の予防、阻害または治療に意図される。
【００４２】
「癌」は、悪性新生物の腫瘍を指し、（内臓を裏打ちする、すなわち覆う皮膚または組織で発生；皮膚癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、および卵巣癌、上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、黒色腫、乳頭腫、および腺腫を含む）細胞癌、（骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他の結合組織もしくは支持組織で発生；骨組織および軟組織の癌、ならびに骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、横紋筋肉腫および線維肉腫を含む）肉腫、（骨髄などの血液形成組織中で始まり、多数の異常な血液細胞を産生させ、血液に侵入させる；白血病、リンパ芽球性白血病（ＡＬＬおよびＣＬＬ）、骨髄性白血病（ＡＭＬおよびＣＭＬ）、Ｔ細胞白血病、およびヘアリー細胞白血病を含む）白血病、（免疫系の細胞から始まる；リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、β細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、およびリンパ球増殖性リンパ腫を含む）リンパ腫および骨髄腫、（脳および脊髄の組織で発生；脳および脊髄の腫瘍、神経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、および原始神経外胚葉性腫瘍を含む）中枢神経系の癌、ならびに（通常は、上記の細胞型から生じ、元は癌細胞が発症していなかった組織中に現在存在する）転移性癌を含む。癌の特定の例としては、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）またはＨｅｒ２／ｎｅｕの遺伝子を発現していないトリプルネガティブ乳癌が挙げられる。
【００４３】
「眼障害」には、糖尿病性網膜症（非増殖性または増殖性）、加齢黄斑浮腫、虹彩ルベオーシス（虹彩における新しい異常血管の成長）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ；目の脈絡膜層における新しい血管の成長）、変性黄斑症、角膜血管新生、血管新生緑内障、未熟児網膜症、過形成硝子体症候群が含まれる。
【００４４】
新血管形成、血管新生または病理学的血管新生（全ては互換的に使用される）を特徴とする障害は、異常な部位における新しい血管形成（毛細血管の内殖および内皮増殖）、いわゆる「血管新生疾患」に特有な所見を特徴とする障害または疾患を指す。新血管形成を特徴とする障害の広範なリストは、Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ ２００３（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９、６５３−６６０）の表１に示され、腫瘍および眼障害に加えて、感染症、自己免疫障害、血管奇形、ディジョージ症候群、ＨＨＴ、海綿状血管腫、アテローム性動脈硬化症、移植動脈症、肥満、乾癬、いぼ、アレルギー性皮膚炎、瘢痕ケロイド、化膿性肉芽腫、水疱形成疾患、肺高血圧症、喘息、鼻ポリープ、炎症性腸疾患および歯周病、腹水、腹膜癒着、子宮内膜症、子宮出血、卵巣嚢胞、卵巣過剰刺激、関節炎、滑膜炎、骨髄炎、ならびに骨棘形成を含む。
【００４５】
本明細書で使用する用語「併用療法」は、任意の種類の組合せを指す。技術的に利用可能であり、臨床的に重要な２種類以上の異なる活性物質がある場合、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸であるものを、単一の薬剤または製剤中に組み合わせることができる。あるいは、２種類以上の異なる活性物質は、逐次投与（複数可）および／または同時投与（複数可）を含み得る所定の投与計画で患者に投与されるべき個々の薬剤として提供される（その際、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸を含まない薬剤は、依然として２種類以上の他の活性物質の組み合わせであってもよい）。他の活性物質の複数回投与が必要とされる可能性が十分にあり、そのうちの１つは、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸の投与と同時であってもよい。これは、特に、前記他の活性物質の薬物動態が、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸の薬物動態とは全く異なる場合であってもよい。例えば、抗体は、実際には、比較的長い半減期を有するという意味で好ましい薬物動態を有するという利点を有する。２種類の薬剤の連続投与は、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸の投与が、他の活性物質または薬剤のうちの少なくとも１つの投与の前後であることを意味する。明らかに、上記のいずれかは、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸の複数回投与が必要とされる場合にも当てはまる。
【００４６】
追加の活性物質または薬剤は、所望の疾患または障害の予防、抑制または治療に有用であると当技術分野で認識されている任意の薬剤であってもよい。一般に、追加の活性物質または薬剤は、例えば、（例えば、合成アプタマー、ｓｉＲＮＡ、およびアンチセンスＲＮＡなどを含む酵素もしくはタンパク質、ＤＮＡまたはＲＮＡを標的とする）化学剤、化学療法剤（例えば、一般的な細胞増殖抑制剤または細胞傷害剤）、生物学的薬剤（例えば、抗体もしくはその断片またはタンパク質骨格系分子）、抗炎症剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、抗ヒスタミン薬、麻酔薬、散瞳を誘導するための薬剤、ならびに毛様体筋麻痺を誘導するための薬剤であってもよい。この追加の活性物質または薬剤は、さらに、（例えば、いくつかの癌の治療における）照射または（例えば、いくつかの眼疾患の治療における）レーザー治療であってもよい。
【００４７】
抗血管新生剤の例としては、抗ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）抗体もしくは抗ＰｌＧＦ（胎盤増殖因子）抗体などの抗体（またはその断片）、ならびにマクジェン（ペガプタニブナトリウム）、トリプトファニルｔＲＮＡ合成酵素（ＴｒｐＲＳ）、アネコルタブアセテート、コンブレスタチンＡ４プロドラッグ、ＡｄＰＥＤＦ（色素上皮由来因子を発現することができるアデノベクター）、ＶＥＧＦ受容体−２の阻害剤、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦまたはＴＧＦ−β、シロリムス（ラパマイシン）およびエンドスタチンの阻害剤などの薬剤が挙げられる。
【００４８】
癌または眼障害の治療に使用される承認された生物学的薬剤の例としては、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、ラニビズマブ（抗ＶＥＧＦ）、アフリバセプト（またはＶＥＧＦトラップアイ）、リツキシマブおよびイブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２）、ゲムツズマブオゾガマイシン（抗ＣＤ３３）、ならびにアレムツズマブ（抗ＣＤ５２）が挙げられる。
【００４９】
癌の治療に有用な化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロールメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（例えば、ブラタシンおよびブラタシノン）；（合成アナログトポテカンを含む）カンプトテシン；ブリオスタチン；カリスタチン；（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシンの合成類似体を含む）ＣＣ−１ ０６５；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；（合成類似体のＫＷ−２１８９およびＣＢＩ−ＴＭＩを含む）デュオカルマイシン；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソ尿素化合物；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγ１Ｉおよびカリケアマイシンθ１Ｉ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．１９９４，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ３３，１８３−１８６）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、（モルホリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）などの抗生物質；メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝産物；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）などの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎物質（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）；フォリン酸などの葉酸補充液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシンおよびアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２'，２''−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｌａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）ブリストル・マイヤーズスクイブ社オンコロジー、ニュージャージー州プリンストン）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ローン・プーランローラー、アントニー、フランス）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；シスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤のＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；カペシタビン；および薬学的に許容可能な塩、上記のいずれかの酸もしくは誘導体が挙げられる。例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフ��ン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（ファレストン）を含む抗エストロゲン剤、ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤、薬学的に許容可能な塩、上記のいずれかの酸もしくは誘導体などの腫瘍においてホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤も含まれる。
【００５０】
抗炎症剤の例としては、ステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン）および非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ；例えば、アセトアミノフェン、イブプロフェン、アスピリン）が挙げられる。
【００５１】
抗ウイルス剤の例としては、トリフルリジン、ビダラビン、アシクロビル、バラシクロビル、ファムシクロビル、およびドクスウリジンが挙げられる。
【００５２】
抗菌剤または抗生物質の例としては、アンピシリン、ペニシリン、テトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、フラマイセチン、ガチフロキサシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、バシトラシン、ネオマイシンおよびポリミキシンが挙げられる。
【００５３】
抗真菌性（ａｎｔｉ−ｍｙｃｏｔｉｃ）／静真菌／抗真菌（ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ）剤の例としては、フルコナゾール、アンホテリシン、クロトリマゾール、エコナゾール、イトラコナゾール、ミコナゾール、５−フルオロシトシン、ケトコナゾールおよびナタマイシンが挙げられる。
【００５４】
抗有糸分裂剤の例としては、マイトマイシンＣおよび５−フルオロウラシルが挙げられる。
【００５５】
抗ヒスタミン薬の例としては、ケトチフェンフマル酸塩およびフェニラミンマレイン酸塩が挙げられる。
【００５６】
麻酔薬の例としては、ベンゾカイン、ブタンベン、ジブカイン、リドカイン、オキシブプロカイン、プラモキシン、プロパラカイン、プロキシメタカイン、テトラカインおよびアメソカインが挙げられる。
【００５７】
眼科用途または使用のために、他の補助薬剤または補助薬物を、散瞳／瞳孔拡張を誘発する薬剤（例えば、スコポラミン、アトロピンもしくはトロピカミド）、および／または毛様体筋麻痺（眼の焦点調節筋の麻痺）を誘発する薬剤を含む本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸と併せて使用することができる。潤滑剤は、眼科設定でも必要になることがあり、このようなものには、プロピレングリセロール、グリセリン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、大豆レシチン、ポリビニルアルコール、白色ワセリン、鉱油、ポビドン、カルボポール９８０、ポリソルベート８０、およびデキストラン７０が含まれる。さらに、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸は、後部硝子体剥離（ＰＶＤ）を誘導することができる薬剤と組み合わせて使用することができる。眼の血管新生阻害は、実際、ＰＶＤを誘導した後により有効であることが示された（Ｌｅｅ ａｎｄ Ｋｏｈ ２０１１，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １１８，１０１−１１０）。ＰＶＤを誘導することができる薬剤には、プラスミンおよびマイクロプラスミンが含まれる（米国特許第５，３０４，１１８号、国際公開第２００４／０５２２２８号）。
【００５８】
血管新生緑内障を治療または阻害する場合には、眼内圧を制御するための薬剤も、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片またはそれらのいずれかをコードする核酸と組み合わせて使用してもよい。このような薬物には、アドレナリン遮断薬（β遮断薬またはベタキソロール、カルテオロール、レボブノロール、メチプラノロール（ｍｅｔｉｐａｎｏｌｏｌ）およびチモロール）、アドレナリン刺激薬（アプラクロニジン、エピネフリン、ヒドロキシアンフェタミン、フェニレフリン、ナファゾリンおよびテトラヒドロザリンなどの交感神経刺激薬）、（全身アセトゾラミド（ａｃｅｔｏｚｏｌａｍｉｄｅ）、および局所ブリンゾラミドおよびドルゾラミドなどの）炭酸脱水酵素阻害剤、縮瞳薬（コリン作動性刺激剤、カルバコールおよびピロカルピンなどの副交感神経作動薬）、（グリセリンおよびマンニトールなどの）浸透剤、プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類似体（プロスタミド、ビマトプロスト、ウノプロストンイソプロピル、トラボプロスト、ラタノプロスト、天然プロスタグランジン、プロスタグランジンＦ２α、およびＦＰプロスタノイド受容体アゴニスト）が含まれる。
【００５９】
本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片、またはそれらのいずれかをコードする核酸は、薬剤の製造のために使用することができる。したがって、この活性物質は、「薬学的に許容可能な製剤」に製剤化される必要があり得る。一般に、このような製剤は、製剤化される１以上の有効成分と適合する担体、希釈剤またはアジュバントを含む組成物であり、全製剤は、所望の組織または器官などにおける所望の使用に適合する。薬学的に許容可能な製剤ならびにそれらの作製法の例は、例えば、レミントンの薬学（例えば、第２０版；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００）または任意の薬局方ハンドブック（例えば、米国薬局方、ヨーロッパ薬局方、もしくは国際薬局方）の中で見つけることができる。
【００６０】
「希釈剤、担体またはアジュバント」は、それ自体、組成物を受け取る個体に有害な抗体の産生を誘導しない任意の適切な賦形剤、希釈剤、担体および／またはアジュバントである。典型的には、（希釈剤、担体およびアジュバントなどの）薬学的に許容可能な化合物は、例えば、薬局方ハンドブック（例えば、米国薬局方、ヨーロッパ薬局方、もしくは国際薬局方）の中で見つけることができる。
【００６１】
「希釈剤」、またはより具体的には「薬学的に許容可能な希釈剤」には、水、生理食塩水、生理学的塩溶液、グリセロール、およびエタノールなどの希釈剤が含まれる。湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質、防腐剤などの補助物質は、このような希釈剤の中に含まれ得る。
【００６２】
（薬学的に許容可能な）担体またはアジュバントは、例えば、本発明に係る抗体またはその断片の長期間にわたる連続放出（徐放製剤）を提供することによって、本発明に係る抗体またはその断片によって誘発される応答を増強することができる。用語「アジュバント」は、通常、他の薬剤（例えば、薬物、ワクチン）の効果を変更する（好ましくは増大する）薬理学的または免疫学的薬剤を指すが、それらによって与えられる直接的な影響があったとしてもわずかである。本発明の活性化合物または成分を吸着することができるアジュバントの一例として水酸化アルミニウム（ミョウバン）が挙げられる。さらに、多くの他のアジュバントが、当技術分野において公知であり、使用することができる。用語「薬学的に許容可能な担体」は、例えば、前記組成物を溶解、分散もしくは拡散することによって処理される遺伝子座への適用もしくは転移を促進するためか、かつ／またはその有効性を損なうことなくその貯蔵、輸送もしくは取り扱いを促進するために、有効成分が製剤化される全ての材料もしくは物質を意味する。それらは、任意のおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤ならびに抗真菌剤（例えば、ソルビン酸もしくはクロロブタノール）、ならびに（糖または塩化ナトリウムなどの）等張剤など、すなわち、担体を受け取る対象に永久的な損傷を引き起こさない担体および添加剤を、これらが薬務と一致しているという条件で含み得る。追加の成分は、組成物中の有効成分の作用持続時間を調節するために含めてもよい。薬学的に許容可能な担体は、固体もしくは液体または液体を形成するための圧縮された気体であってよく、すなわち、本発明の組成物は、濃縮物、エマルジョン、液剤、顆粒、粉剤、スプレー剤、エアロゾル剤、懸濁剤、軟膏、クリーム、錠剤、ペレットまたは粉末として適切に使用することができる。前記医薬組成物およびそれらの製剤での使用に適した医薬担体は、当業者に周知であり、本発明の範囲内にそれらの選択に対する特定の制限はない。本発明の医薬組成物は、例えば、一段階または多段階手順で、選択された担体材料、必要に応じて、界面活性剤などの他の添加剤と有効成分とを均一に混合、コーティングおよび／または粉砕することにより任意の既知の方法で調製することができる。また、本発明の医薬組成物は、例えば、通常約１〜１０μｍの直径を有する微小球の形態でそれらを取得するために微粉化により、すなわち有効成分の制御放出または持続放出用のマイクロカプセルの製造のために調製することもできる。
【００６３】
本発明に係る薬剤は、液体溶液または懸濁液として、注射用に調製することができる。注射は、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、皮内、表皮内の注射であってもよい。眼への局所投与の場合には、硝子体内注射、前房への注射または結膜下注射が実行されてもよい。また、この組成物は、移植、坐剤、経口摂取、腸への適用、吸入、エアロゾル、点眼薬、鼻用スプレーもしくは滴滴、またはステントなどの医療デバイスを介した投与などの他の種類の投与に適するように調製することもできる。注射前に液体ビヒクルに溶解するか、または懸濁するのに適した固体形態を調製することもできる。また、この調製物は、その効果を高めるためのリポソーム中に乳化またはカプセル化することもできる。この調製物は、ボーラス用量として、または持続注入によって対象に投与することができる。また、この調製物は、例えば、浸透圧ミニポンプを介して、連続的に投与することもできる。
【００６４】
所望の疾患もしくは障害を治療、予防または阻害する目的のために、所望の疾患もしくは障害を治療、予防または阻害するための方法において、本発明に係る有効量の抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片、またはこれらのいずれかをコードする核酸は、それを必要とする対象に投与される。組成物中の活性物質の「有効量」は、所望のもしくは目標とされる医学的適応を予防もしくは治療または低減するのに適切な応答を誘発するのに必要かつ十分な前記物質の量である。このような応答は、投与計画または投与スケジュールの一部として組成物の連続（時間的）投与を必要とすることは当業者には明らかであろう。有効量は、治療される個体の健康および身体的状態、治療される個体の年齢（例えば、乳児のための投薬は、成人の場合よりも低くてよい）、治療される個体の分類群（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、霊長類など）、効果的に応答する個体システムの能力、所望の応答の程度を、活性物質の製剤、治療する医師の評価、ならびに他の関連因子に応じて変化し得る。さらに、有効量は、単剤療法または併用療法において使用されているか否かに依存して変化し得る。本発明の活性物質（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体、その断片もしくは誘導体またはそれらのいずれかをコードする核酸）の有効量は、日常的な試験によって決定され得る比較的広い範囲内に入ることが予想される。通常、この量は、０．０１〜１０００μｇ／用量、より具体的には０．１〜１００μｇ／用量で変化する。あるいは、活性物質は、１μｇ／体重ｋｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇ、もしくは１０μｇ／体重ｋｇ〜５ｍｇ／体重ｋｇの間の用量、または１００μｇ／体重ｋｇ〜２ｍｇ／体重ｋｇの間の用量で投与することができる。投薬治療は、単回用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであってもよい。活性物質が連続的に投与される場合には、投与される用量は、１〜１００μｇ／ｋｇ／分、１〜５０μｇ／ｋｇ／分、５〜５０μｇ／ｋｇ／分、または５〜２０μｇ／ｋｇ／分であってもよい。
【００６５】
本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片、またはこれらのいずれかをコードする核酸の（有効量の）予防的投与は、例えば、眼科設定に有用であってもよい。実際には、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片、またはこれらのいずれかをコードする核酸による治療に応答する眼疾患または眼障害の場合に、対象は、単眼においてこのような疾患または障害を患っている可能性がある。しかし、このような場合において、同じ対象のもう一方の他の目は、同じ疾患または障害を発症しやすいことが当技術分野で公知である。このような場合には、影響を受けていない眼は、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片、またはこれらのいずれかをコードする核酸で予防的に治療することができる。
【００６６】
「治療」は、未治療のままの疾患もしくは障害の進行または予想される進行と比較したときの、疾患もしくは障害の進行の任意の割合の減少または遅延を指す。より望ましくは、治療によって、疾患もしくは障害の進行が無し／ゼロ（すなわち、「阻害」）になるか、または既に発症した疾患もしくは障害の任意の速度が低下する。
【００６７】
本発明はさらに、診断ツールとして使用するための本発明に係る抗体もしくはその断片、またはそれらのいずれかの誘導体に関する。本発明に係る抗体（もしくはその断片、またはそれらのいずれかの誘導体）を用いることができる１つの代表的な診断法は、腫瘍細胞と疑われる（例えば、生検などによって単離された）単離細胞中のＰＤＧＦ−Ｃタンパク質の検出である。特に過剰発現している場合には、単離細胞におけるＰＤＧＦ−Ｃの存在は、その後、腫瘍細胞を根絶するための治療に抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体を適用するための基準として使用することができる。
【００６８】
本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体またはその断片をコードする単離核酸は、組換えベクター、特に、発現ベクターに含まれ得る。
【００６９】
本発明のさらなる態様は、本発明に係る抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体もしくはその断片を発現する単離細胞株または組換え宿主細胞に関する。前記宿主細胞は、前記抗体またはその断片を発現することができる任意の細胞であってもよい。適切な宿主細胞には、（ＨＥＫ２９３などの）培養された哺乳類細胞または昆虫細胞、培養された植物細胞またはトランスジェニック植物、サッカロミセス、シゾサッカロミセス、ピキア、ハンゼヌラ、トルロプシスなどの酵母、および細菌細胞が含まれるが、これらに限定されない。本発明の抗体またはその機能的に同等な断片の発現は、一過的または構成的であってもよい。特に、宿主細胞は、上記のものなどのハイブリドーマ細胞株である。
【００７０】
本発明の別の態様は、本発明の抗体を発現するハイブリドーマ細胞株、特に、生物寄託登録番号がＬＭＢＰ ９４８３ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体２Ｄ３）、ＬＭＢＰ ９４８４ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体５Ａ２）、ＬＭＢＰ ９４８５ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体５Ｈ７）、ＬＭＢＰ ９４８６ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体１６Ｂ１）、またはＬＭＢＰ ９４８７ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体２９Ｈ１）のいずれかであるハイブリドーマ細胞株を包含する。これらの寄託は、２０１２年３月１５日に、ベルギーのベルギー微生物保存機関／分子生物学プラスミドコレクション研究室（Ｂｅｌｇｉａｎ Ｃｏ−ｏｒｄｉｎａｔｅｄ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｓ／Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ−Ｐｌａｓｍｉｄ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＢＣＣＭ／ＬＭＢＰ），Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｐａｒｋ ９２７，９０５２ Ｇｅｎｔ（Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ））においてブダペスト条約の条件下で行われた。
【００７１】
上記のＰＤＧＦ−Ｃ結合抗体、またはその抗原結合断片の産生法は、本発明の不可欠の態様を形成する。詳細には、この方法は、
（ｉ）前記抗体もしくは抗体断片の組換え発現によって、または前記抗体もしくは抗体断片の化学合成によって前記抗体もしくは抗体断片の粗調製物を取得するステップと、
（ｉｉ）（ｉ）で取得した粗調製物から前記抗体または抗体断片を精製するステップと
を含むことができる。
【００７２】
あるいは、ＰＤＧＦ−Ｃに結合する本発明の抗体の抗原結合断片は、
（ｉ）前記抗体の組換え発現によって、または前記抗体の化学合成によって前記断片を含む抗体の粗調製物を取得するステップと、
（ｉｉ）（ｉ）で取得した粗調製物から前記抗体を精製するステップと、
（ｉｉｉ）（ｉｉ）で精製した抗体から抗原結合断片を単離するステップと
を含む方法により取得または産生することができる。
【実施例】
【００７３】
本明細書の以下に含まれる実施例は、本発明を示すものであり、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【００７４】
実施例１
ＰＤＧＦ−Ｃでの免疫化ならびにハイブリドーマの生成および選択
雌のＢａｌｂ／ｃマウスを、組換えヒトＰＤＧＦ−Ｃで免疫した（抗原の２回の皮下注射、それぞれ５０μｇ、最初の注射は完全フロイントアジュバントであり、第２の注射は不完全フロイントアジュバントである）。
【００７５】
血液試料をマウスの尾から採取し、抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体の存在について血清をＥＬＩＳＡによって試験した。簡単に述べると、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌのヒトＰＤＧＦ−Ｃ（１００μｌ／ウェル、４℃）で一晩コーティングした。これらのプレートを室温で１時間、１％ＢＳＡでブロックし、血清試料（１００μｌ／ウェル）を（１／５００倍〜１／３２０００の範囲の希釈で）これらのプレートに添加し、室温で２時間抗体と結合させた。結合した抗体を、ＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ社、１００μｌ／ウェル、室温で１時間）、続いてＯＰＤとの反応により検出した。
【００７６】
第２の皮下注射後９ヶ月目に、不完全フロイントアジュバント中の抗原５０μｇの第３の皮下注射をマウスに行い、第３の皮下注射後７週目に、生理食塩水緩衝液中の抗原５０μｇの最終腹腔内注射をマウスに行い、融合を行った。マウスを屠殺し、Ｇａｌｆｒｅ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３，３−４６，１９８１）の手順に従って、脾臓細胞をＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させた。ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）培地中の選択後、陽性クローンを上記のようにＥＬＩＳＡによる培養上清のスクリーニングによって選択した。
【００７７】
陽性クローンを増殖させ、さらなる特徴づけを可能にするために、抗体をプロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。
【００７８】
実施例２．マウスモノクローナル抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体のＶＨおよびＶＬ鎖をコードするｃＤＮＡのクローニング
キアゲン社（オランダ国ヴェンロー）のＲＮｅａｓｙミニキットを用いて、５〜１０×１０６個のハイブリドーマ細胞からＲＮＡを単離し、キアゲン社（オランダ国ヴェンロー）のＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ逆転写キットを用いてｃＤＮＡを調製した。それぞれ、リーダー配列および定常領域に特異的なプライマーを用いてＰＣＲを行った。したがって、可変領域はＰＣＲ産物に含まれていたが、プライマー配列を含んでいなかった。表１に示すようなプライマーの組み合わせを、ハイブリドーマ２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１、２９Ｈ１のそれぞれに対して使用した。
【００７９】
【表１】
2015515487.tif 000002
【００８０】
ＶＨおよびＶＬ鎖を増幅するために、２５μｌ反応でＡｃｃｕＰｒｉｍｅ  Ｐｆｘスーパーミックス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州カールスバッド）と共にタッチダウンＰＣＲプロトコルを用いた。９５℃で３０秒後、９５℃で３０秒、６４℃で３０秒および６８℃で１分を３サイクル、続いて、９５℃で３０秒、６１℃で３０秒および６８℃で１分を３サイクル、９５℃で３０秒、５８℃で３０秒および６８℃で１分を３サイクル、９５℃で３０秒、５５℃で３０秒および６８℃で１分を３サイクル、９５℃で３０秒、５２℃で３０秒および６８℃で１分を２５サイクル行い、７２℃で５分間により終了した。
【００８１】
得られたＰＣＲ産物をゲルから単離し、ｐＣＲ４Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州カールスバッド）に挿入し、ＢｉｇＤｙｅターミネーターＶ３．１サイクルシークエンシングキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて、Ｍ１３フォワード（−２０）プライマー（ＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧ；配列番号５）およびＭ１３リバースプライマー（ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣ；配列番号６）で配列決定を行った。
【００８２】
精製したハイブリドーマ５Ｈ７上清からの重鎖配列および軽鎖配列を、Ｎ末端配列決定のためにＥｕｒｏｓｅｑｕｅｎｃｅ社（オランダ国フローニンゲン）に送った。軽鎖配列は、Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ（配列番号７）であり、重鎖配列は、Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ（配列番号８）であることが分かった。これらの結果は、全５種類のクローン抗体について、本明細書の以下に記載のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に対応する。
【００８３】
軽鎖可変ドメインのｃＤＮＡ配列
ハイブリドーマ２Ｄ３（ＩｇＧ１、κ）、５Ａ２（ＩｇＧ２b、κ）、２９Ｈ１（ＩｇＧ１、κ）および１６Ｂ１（ＩｇＧ１、κ）
ｇａｔｇｔｔｔｔｇａｔｇａｃｃｃａａａｃｔｃｃａｃｔｃｔｃｃｃｔｇｃｃｔｇｔｃａｇｔｃｔｔｇｇａｇａｔｃａａｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｔｇｃａｇａｔｃｔａａｔｃａｇａＳｃａｔｔｇｔａｃａｔａｇｔａａｔｇｇａｇａｃａｃｃｔａｔｔｔａｇａａｔｇｇｔａｃｃｔｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｔｃｃａａａＫｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｃａａａｇｔｔｔｃｃａａｃｃｇａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｇａｃａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃａｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃａｃｔｃａａｇａｔｃａｇｃａｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇａｔｃｔｇｇｇａｇｔｔｔａｔｔａｃｔｇｃｔｔｔｃａａｇｇｔｔｃａｃａｔｇｔｔｃｃｔｃｃｃａｃｇｔｔｃｇｇａｇｇｇｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａａａｔａａａａ（配列番号９）。上記において、位置Ｓは、２Ｄ３ではｃであり、５Ａ２、１６Ｂ１および２９Ｈ１ではｇであり、位置Ｋは、５Ａ２および１６Ｂ１ではｇであり、２Ｄ３および２９Ｈ１ではｔである。
ハイブリドーマ５Ｈ７（ＩｇＧ１、κ）
ｇａｔｇｔｔｔｔｇａｔｇａｃｃｃａａａｃｔｃｃａｃｔｃｔｃｃｃｔｇｃｃｔｇｔｃａｇｔｃｔｔｇｇａｇａｔｃａａｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｔｔｇｃａｇａｔｃｔａｇｔｃａｇａｃｃａｔｔｇｔａｃａｔａｇｔｇａｔｇｇａａｃｃａｃｃｔａｔｔｔａｇａａｔｇｇｔａｃｃｔｔｃａｇａａａｇｃａｇｇｃｃａｇｔｃｔｃｃａａａｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｃａａａｇｔｔｔｃｃａａｃｃｇａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｇａｃａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃａｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃａｃｔｃａａｇａｔｃａｇｃａｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｇａｇｇａｔｃｔｇｇｇａｇｔｔｔａｔｔａｃｔｇｃｔｔｔｃａａｇｇｔｔｃａｃａｔｇｔｔｃｃｔｃｃｃａｃｇｔｔｃｇｇａｇｇｇｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａａａｔａａａａ（配列番号１０）
【００８４】
重鎖可変ドメインのｃＤＮＡ配列
ハイブリドーマ２Ｄ３（ＩｇＧ１、κ）および１６Ｂ１（ＩｇＧ１、κ）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａＲｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｔａｇｔｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔｇａａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｔｔｔｃａｇｔａａｃｔａｔｇｇｃａｔｇｔｃｔｔｇｇｇｔｔｃｇｃｃａｇａｃｔｃｃａｇａｃａａｇａｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｇｃａａｃｃａｔｔｇｇｔａｇｔｇｇｔｇｇｔａｇｔｔａｃａｃｃｔａｃｔａｔｃｃＲｇａｃａｇｔｇｔｇａａｇｇｇｇｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａｇｔｇｃｃａａｇａａｃａｃｃｃｔｇｔａｃｃｔｇｃａａａｔｇａｇｃａｇｔｃｔｇａａｇｔｃｔｇａｇｇａｃａｃａｇｃｃａｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃａａｇａｃａｇｇｃｃｃｃｃｃｔｃｔｇｇｇａｃｔａｃｔｃｔｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｃａｃｃａｃｔｃｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃｇ（配列番号１１）。上記において、２つの位置Ｒは、２Ｄ３ではｇであり、１６Ｂ１ではａである。
ハイブリドーマ５Ａ２（ＩｇＧ２ｂ、κ）、２９Ｈ１（ＩｇＧ１、κ）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａａｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｔａｇｔｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔｇａａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｔｔｔｃａｇｔａａｃｔａｔｇｇｃａｔｇｔｃｔｔｇｇｇｔｔｃｇｃｃａｇａｃｔｃｃａｇａｃａａｇａｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｇｃａａｃｃａｔｔｇｇｔａｇｔｇｇｔｇｇｔｃａｔｔａｃａｃｃｔａｃｔａｔｃｃａｇａｃａｇｔｇｔｇａａｇｇｇｇｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａｇｔｇｃｃａａｇａｇｃａｃｃｃｔｇｔａｃｃｔｇｃａａａｔｇａｇｃａｇｔｃｔｇａＲｇｔｃｔｇａＳｇａｃａｃａｇｃｃａｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃａａｇａｃａｇｇｃｃｃｃｃｃｔｃｔｇｇｇａｃｔｇｃｔｃｔｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｃａｃｃａｃｔｃｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃｇ（配列番号１２）。上記において、位置Ｒは、５Ａ２ではａであり、２９Ｈ１ではｇであり、位置Ｓは、５Ａ２ではｇであり、２９Ｈ１ではｃである。
ハイブリドーマ５Ｈ７（ＩｇＧ１、κ）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｔａｇｔｇａａｇｃｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔｇａａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｔｔｔｃａｇｔａｇｃｔａｔｇｇｃａｔｇｔｃｔｔｇｇｇｔｔｃｇｃｃａｇａｃｔｃｃａｇａｃａａｇａｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｇｃａａｃｃａｔｔｇｇｔｔａｔｇｇｔｇｇｔａｇｔｔｔｃａｃｃｔａｃｔａｔｃｃａｇａｔａｇｔａｔｇａａｇｇｇｇｃｇｃｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｇｃｃａａｇａａｃａｃｃｃｔｇｔｔｃｃｔｇｃａａａｔｇａｇｃａｇｔｃｔｇａａｇｔｃｔｇａｇｇａｃａｃａｇｃｃａｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｔａａｇａｃａｇｇｃｃｃｃｃｃｔｃｔｇｇｇａｃｔａｃｔｔｔｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｃａｃｃａｃｔｃｔｃａｃａｇｔｃｔｃｃｔｃａ（配列番号１３）
【００８５】
軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
ハイブリドーマ２Ｄ３（ＩｇＧ１、κ）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＮＱＴＩＶＨＳＮＧＤＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＮＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１４）
ハイブリドーマ５Ａ２（ＩｇＧ２ｂ、κ）＝１６Ｂ１（ＩｇＧ１、κ）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＮＱＳＩＶＨＳＮＧＤＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５）
ハイブリドーマ５Ｈ７（ＩｇＧ１、κ）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＤＧＴＴＹＬＥＷＹＬＱＫＡＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１６）
ハイブリドーマ２９Ｈ１（ＩｇＧ１、κ）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＮＱＳＩＶＨＳＮＧＤＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＮＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７）
【００８６】
重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
ハイブリドーマ２Ｄ３（ＩｇＧ１、κ）＝１６Ｂ１（ＩｇＧ１、κ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＤＫＲＬＥＷＶＡＴＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＱＡＰＬＷＤＹＳＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１８）
ハイブリドーマ５Ａ２（ＩｇＧ２ｂ、κ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＤＫＲＬＥＷＶＡＴＩＧＳＧＧＨＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＳＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＱＡＰＬＷＤＣＳＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１９）
ハイブリドーマ５Ｈ７（ＩｇＧ１、κ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＤＫＲＬＥＷＶＡＴＩＧＹＧＧＳＦＴＹＹＰＤＳＭＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＶＲＱＡＰＬＷＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２０）
ハイブリドーマ２９Ｈ１（ＩｇＧ１、κ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＤＫＲＬＥＷＶＡＴＩＧＳＧＧＨＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＳＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＤＤＴＡＩＹＹＣＡＲＱＡＰＬＷＤＣＳＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１）
【００８７】
上記のモノクローナル抗体中の相補性決定領域（ＣＤＲ）を表２および表３に示す。
【００８８】
【表２】
2015515487.tif 000003
【００８９】
全５種類のハイブリドーマのＣＤＲ１配列間の類似性に基づき（全て、さらに同一の軽鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有し、同一または類似の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する）、一般化されたＣＤＲ１配列ＲＳＸＱＸＩＶＨＳＸＧＸＴＹＬＥ（配列番号２６、位置３のＸはＡｓｎまたはＳｅｒであり、位置５のＸはＳｅｒまたはＴｈｒであり、位置１０のＸはＡｓｐまたはＡｓｎであり、位置１２のＸはＡｓｐまたはＴｈｒである）を設計することができる。
【００９０】
【表３】
2015515487.tif 000004
【００９１】
全５種類のハイブリドーマ（全て、さらに同一または類似の重鎖ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有し、同一または類似の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する）のＣＤＲ１配列間の類似性に基づき、一般化されたＣＤＲ１配列ＸＹＧＭＳ（配列番号３５、ＸはＡｓｎまたはＳｅｒである）を設計することができる。
【００９２】
全５種類のハイブリドーマ（全て、さらに同一または類似の重鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ３配列を有し、同一または類似の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する）のＣＤＲ２配列間の類似性に基づき、一般化されたＣＤＲ２配列ＴＩＧＸＧＧＸＸＴＹＹＰＤＳＸＫＧ（配列番号３６、位置４のＸはＳｅｒまたはＴｙｒであり、位置７のＸはＳｅｒまたはＨｉｓであり、位置８のＸはＰｈｅまたはＴｙｒであり、位置１５のＸはＶａｌまたはＭｅｔである）を設計することができる。
【００９３】
全５種類のハイブリドーマ（全て、さらに同一または類似の重鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を有し、同一または類似の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を有する）のＣＤＲ３配列間の類似性に基づき、一般化されたＣＤＲ３配列ＱＡＰＬＷＤＸＸＤＹ（配列番号３７、位置７のＸはＣｙｓまたはＴｙｒであり、位置８のＸはＳｅｒまたはＰｈｅである）を設計することができる。
【００９４】
本発明の上記の抗体を発現するハイブリドーマ細胞株は、登録番号ＬＭＢＰ９４８３ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体２Ｄ３）、ＬＭＢＰ９４８４ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体５Ａ２）、ＬＭＢＰ９４８５ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体５Ｈ７）、ＬＭＢＰ９４８６ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体１６Ｂ１）、およびＬＭＢＰ９４８７ＣＢ（抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体２９Ｈ１）の下、２０１２年３月１５日に、ベルギーのベルギー微生物保存機関／分子生物学プラスミドコレクション研究室（（ＢＣＣＭ／ＬＭＢＰ）、Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｐａｒｋ ９２７、９０５２ Ｇｅｎｔ（Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ））においてブダペスト条約の条件下で寄託された。
【００９５】
実施例３：抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体のＰＤＧＦ−Ｃとの結合に対する親和性
２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１抗体の親和性を、表面プラズモン共鳴を用いて決定した。
【００９６】
異なる抗体を、標準的なアミン化学を用いて１６８０ ＲＵの密度で、それぞれ別々にＣＭ５チップにコーティングした。異なる濃度（２００ｎＭ、１７５ｎＭ、１５０ｎＭ、１２５ｎＭ、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、および０ｎＭ）のＰＤＧＦ−Ｃ（Ｒ＆Ｄシステムズ社、カタログ番号１６８７−ＣＣ／ＣＦ）を、コーティング抗体上に５分間注入し、次いで、緩衝液を１０分間流して、捕捉抗原の解離を監視した。各実行の間に、グリシン−塩酸、ｐＨ２．５を単回注入して表面を再生した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアの助けを借りて、１：１の相互作用と仮定してセンサーグラムを分析することによって親和性を得た。実験は、ビアコア３０００機器を用いて行った。親和性データを表４にまとめる。
【００９７】
【表４】
2015515487.tif 000005
【００９８】
実施例４．ヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化に対する抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体の阻害活性
ＰＤＧＦＲαアッセイの原理
ヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化に対する抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体の阻害活性を評価するために、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社のＰＤＧＦＲα（９３−０８２３Ｃ３）用のＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）受容体チロシンキナーゼアッセイを用いた。このアッセイは、β−ガラクトシド（β−ｇａｌ）酵素が２つの不活性断片に分割されているＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社が所有する酵素断片相補性（ＥＦＣ）技術に基づく。β−ｇａｌの小さな補体断片であるＰｒｏＬｉｎｋ（商標）タグ（ＰＫ）は、受容体チロシンキナーゼＰＤＧＦＲαの細胞内Ｃ末端に組換えにより融合されている。酵素アクセプターのＥＡと呼ばれるβ−ｇａｌの大部分は、ＳＨ２（Ｓｒｃホモロジー２）ホスホチロシン結合ドメインと共発現される。この受容体のリガンド誘導活性化により、受容体の二量体化および細胞内クロスリン酸化が生じる。その後、ＳＨ２ドメインがリン酸化受容体に特異的に結合することにより、２つのβ−ｇａｌ断片のＰＫおよびＥＡが補完され、機能的なβ−ｇａｌ酵素が形成される。β−ｇａｌ基質の添加後に、容易に検出可能な化学発光シグナルが産生され、これは受容体活性化に直接的に相関する。ＬｕｍｉＬＩＴＥ（商標）マイクロプレートリーダーは、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社の全てのＥＦＣベースアッセイと完全に適合性があるので使用される。
【００９９】
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイの方法
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイでは、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社のＵ２ＯＳ ＰＤＧＦＲα ＰＬＣＧ１（ＳＨ２ドメインの供給源としてのホスホリパーゼＣγ）細胞を使用した。凍結細胞を液体窒素中で保存した。解凍時に、予め温めた解凍培地（すなわち、選択用抗生物質ジェネテシンおよびハイグロマイシンＢを含まない培養培地）に細胞を再懸濁した。３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターで４８時間培養した後、解凍培地を培養培地（ＭＥＭイーグル１×（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製３０−２００３）、１０％ウシ胎児血清（Ｐｅｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製ＳＨ３００７１．０３）、１×ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製１０３７８−０１６）、２５０μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製１０６８７−０１０）、５００μｇ／ｍｌのジェネテシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製１０１３１−０３５））で置換した。コンフルエンスに達した後、Ａｃｃｕｔａｓｅ（ＰＡＡ社製Ｌ１１−００７）を使用して、２〜３日ごとに３分の１希釈で細胞を継代した。ルーチン培養中、細胞を非コンフルエント状態で維持した。
【０１００】
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおいて、最大１０継代まで培養したＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社のＵ２ＯＳ ＰＤＧＦＲα ＰＬＣＧ１細胞を用いた。底が透明である９６ウェルの白色培養処理マイクロプレート（コーニング社製３６１０）の１ウェルあたり１００μｌ中２０，０００個の細胞で細胞を播種した。ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）細胞プレーティング１６試薬（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社製９３−０５６３Ｒ１６）を種培地として用いた。３７℃、５％ＣＯ２での培養２４時間後に、細胞を刺激するために、細胞プレーティング１６試薬中の５倍濃縮アゴニスト溶液を１ウェルあたり２５μｌ使用した。Ｒ＆Ｄシステムズ社の組換えヒトＰＤＧＦ−Ｃ（１６８７−ＣＣ／ＣＦ；Ｖａｌ２３５−Ｇｌｙ３４５）を、アゴニストとして適用した。室温で３時間インキュベーションした後、６０μｌのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）検出試薬（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）社製９３−０００１；１部がＧａｌａｃｔｏｎ Ｓｔａｒ（登録商標）基質、５部がＥｍｅｒａｌｄ ＩＩ（商標）溶液、および１９部がＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）細胞アッセイ緩衝液）を添加した。細胞をさらに１時間室温の暗所に置いた後、発光をＬｕｍｉＬＩＴＥ（商標）マイクロプレートリーダーで測定した。グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）（登録商標）ソフトウェアを用いて、可変勾配を有するアゴニスト用量反応のシグモイド曲線を作成するために、得られた蛍光値を使用して非線形回帰分析を行った。ヒトＰＤＧＦ−ＣのＥＣ５０（すなわち、最大半量有効濃度）およびＥＣ８０値（すなわち、最大応答の８０％を与える有効濃度）を計算した。
【０１０１】
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおける抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体の阻害活性
最初に、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおけるヒトＰＤＧＦ−Ｃのアゴニスト用量反応曲線を作成し、ＥＣ５０およびＥＣ８０値を決定した。異なる実験の中で、ヒトＰＤＧＦ−Ｃは、低ナノモル範囲（５〜２０ｎＭ）内にＥＣ５０値を有する非常に強力なアゴニストであった。その結果、抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体を用いる実験中に、２０〜５０ｎＭの範囲のＥＣ８０値を使用した。
【０１０２】
ヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化に対する抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体の阻害活性を評価するために、細胞プレーティング１６試薬で調製した抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体およびＥＣ８０のヒトＰＤＧＦ−Ｃの６倍濃縮溶液を等量混合し、上記のようにアッセイを実施した。陽性対照として、抗ヒトＰＤＧＦ−ＣポリクローナルヤギＩｇＧ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製ＡＦ１５６０）および組換えヒトＰＤＧＦＲα Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製６７６５−ＰＲ）を用いた。マウスモノクローナル抗体ＩｇＧ１（抗ＫＬＨ抗体;Ａｂｃａｍ社製ａｂ３４６０７）およびＩｇＧ２b（抗ＧＳＴ抗体;Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製ｓｃ−５７７５３）の抗体は、アイソタイプ対照として使用した。全ての条件を二重に試験した。測定された発光に基づいて、アンタゴニスト用量反応曲線を得、ＩＣ５０値（すなわち、最大半量阻害濃度）をグラフパッドプリズム（登録商標）ソフトウェアを用いて算出した。５種類の抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１を、最初にＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおいて５０μｇ／ｍｌ、１６．６７μｇ／ｍｌ、５．５６μｇ／ｍｌおよび１．８５μｇ／ｍｌの４種類の異なる濃度で試験した。最高濃度では、全ての抗体は、ヒトＰＤＧＦ−Ｃ（図１）によってＰＤＧＦＲαの活性化を完全に遮断することができた。これらの抗体は、抗ヒトＰＤＧＦ−ＣポリクローナルヤギＩｇＧ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製ＡＦ１５６０）よりも強力であり、組換えヒトＰＤＧＦＲα Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製６７６５−ＰＲ）と同等の活性があった（図２および図３）。マウスモノクローナルＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂのアイソタイプ対照抗体は、ヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化の阻害を示さなかった（データは示さず）。
【０１０３】
５種類の抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１も、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤＧＦＲαアッセイにおいて異なる濃度で試験した。５０μｇ／ｍｌから始めて２．５４ｎｇ／ｍｌまでの一連の３倍希釈の１０点を調査した。アンタゴニスト用量反応曲線を作成し、ＩＣ５０値を決定した。５種類の抗ヒトＰＤＧＦ−Ｃ抗体は、低ナノモル範囲のＩＣ５０値を有するので、ヒトＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化の非常に強力な阻害剤として同定される。市販の抗ＰＤＧＦ−Ｃの抗体のいくつかも、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲα活性化を阻害する。
【０１０４】
【表５】
2015515487.tif 000006
【０１０５】
図１から、１．８５μｇ／ｍＬの濃度の抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１のみが、ＰＤＧＦ−Ｃによるそれぞれ４９％、３０％、３２％、３８％および２３％のＰＤＧＦＲα活性化を可能にすることを導き出すことができる（１００％値は任意の抗体の非存在下で測定した）。本明細書の上記に記載のアッセイに、マウスモノクローナル抗体１２Ｅ５および１９Ｆ１２の２種類の抗体を組み込んだ同じアッセイ（同じ実験、したがって、全ての結果の１：１比較が可能である）に、他の同定されたＰＤＧＦ−Ｃ結合モノクローナル抗体を組み込んだ。これらは、ＰＤＧＦ−Ｃによるそれぞれ８２％および８０％のほぼ完全なＰＤＧＦＲα活性化が測定されるとおり、１．８５μｇ／ｍＬの濃度で阻害をほとんど発揮しない。
【０１０６】
実施例５．抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体は、ＰＤＧＦ−Ｃのその受容体ＰＤＧＦＲαへの結合を阻止する
競合ＥＬＩＳＡを用いて、抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体が阻害活性を示すか否か、すなわち、抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体がＰＤＧＦ−Ｃのその受容体ＰＤＧＦＲαへの結合を阻止できるか否かを評価した。
【０１０７】
組換えヒトＰＤＧＦ−Ｒα／ＦｃおよびヒトＰＤＧＦ−Ｃは、Ｒ＆Ｄシステムズ社から購入した。供給者によって推奨されるように、凍結乾燥したＰＤＧＦ−Ｃを４ｍＭのＨＣｌ中１ｍｇ／ｍｌで可溶化し、次いで、この溶液を２０ｍＭ  ＮａＯＨの添加によって中和して、ＰＤＧＦ−Ｃをビオチン化した。Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（ＥＺ−リンクＳｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を１５倍のモル過剰でＰＤＧＦ−Ｃ上に添加し、混合物を２時間氷上に置いた。
【０１０８】
ＥＬＩＳＡプレートをこの受容体でコーティングした（ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ、１ウェルあたり１００μｌ、４℃で一晩インキュベーション）。これらのウェルを、２００μｌのブロッキング緩衝液を用いて室温で１時間ブロックした。使用直前に、これらのプレートをＰＢＳＴ（０．００４％のｔｗｅｅｎ８０を補充したＰＢＳ）で３回洗浄した。ビオチン化ＰＤＧＦ−Ｃ（０．１μｇ／ｍｌの最終濃度）を、ＰＢＳＴＡ（１％アルブミンを補充したＰＢＳＴ）中で試験される抗体（ＰＤＧＦ−Ｃより１０倍モル過剰）と予めインキュベートし、これらの試料１００μｌを関係するウェルに添加し、プレートを加湿チャンバーにおいて室温で２時間インキュベートした。次いで、これらのウェルをＰＢＳＴで５回洗浄した。ＰＢＳＴＡで１：２００に希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｒ＆Ｄシステムズ社）１００マイクロリットルをこれらのウェルに添加し、室温で２０分間インキュベートし、次いで、これらのウェルをＰＢＳＴで５回再度洗浄した。ＨＲＰ活性の検出を、１ステップウルトラＴＭＢ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ社）１００μｌを用いて行った。暗所で５０分間インキュベートした後、反応を２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４１００μｌの添加によって停止し、これらのプレートを４５０ｎｍで読み取った。得られたシグナルを、抗体の非存在下で得られたものと比較した。図４は、５種類のモノクローナル抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体のそれぞれが、ＰＤＧＦ−Ｃのその受容体ＰＤＧＦＲαへの結合を阻害することが可能なことを示している。
【０１０９】
実施例６．抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体によって認識されるＰＤＧＦ−Ｃエピトープの決定
ヒトＰＤＧＦ−Ｃ分子全体をカバーする１５マー（１５−ｍｅｒ）のオーバーラッピングペプチドへの抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の結合をＥＬＩＳＡ法により評価した。この分析に含まれる抗体は、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦ−Ｒαの活性化を強力に阻害する５種類の抗体、すなわちモノクローナル抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１である。ＰＤＧＦ−Ｃに結合可能であるが、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦ−Ｒαの活性化を阻害しないか、またはほとんど阻害しない２種類の抗体、すなわち、モノクローナル抗体１２Ｅ５（ＩｇＧ１）および１９Ｆ１２（ＩｇＧ２b）がさらに含まれる（実施例４参照）。最後に、市販のモノクローナル抗体ｓｃ−８０２９０（アミノ酸残基２３０〜３４５をカバーする免疫原であるマウスＰＤＧＦ−Ｃに対するラットモノクローナル抗体；サンタクルズ社）およびＭＡＢ１５６０（アミノ酸残基２３５〜３４５をカバーする免疫原であるヒトＰＤＧＦ−Ｃに対するマウスモノクローナル抗体；Ｒ＆Ｄシステムズ社）が含まれ、このうち、ＭＡＢ１５６０のみが、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦ−Ｒα活性化の阻害を示す（実施例４参照）。全ての抗体について、それらがヒトＰＤＧＦ−Ｃに結合し、試験される全ての抗体の完全長ヒトＰＤＧＦ−Ｃへの結合が、以下に記載のように同定されたペプチドのいずれかに結合する場合よりも効率的であることが確認された。
【０１１０】
データを表６にまとめる。抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７および２９Ｈ１のエピトープをペプチド番号５８にマップし、抗体１９Ｆ１２のエピトープをペプチド番号４９にマップした。同様に、市販の抗体ｓｃ−８０２９０（サンタクルズ社）の結合がペプチド番号４４、４９、５０および５１に対して観察された。これとは対照的、抗体１６Ｂ１および１２Ｅ５、ならびに市販の抗体ＭＡＢ１５６０（Ｒ＆Ｄシステムズ社）のエピトープは、これらの抗体が立体構造エピトープを認識する可能性があるため、このアプローチで特定することができなかった。抗体５Ａ２および１９Ｆ１２の有意な結合も、ペプチド番号９および２７に対して検出された。しかし、これらの２つのペプチドは、一貫して平均バックグラウンドよりも高いシグナルを与えるが、これは試験抗体に関係がないことはここで強調されるべきである。これは、対照実験により、コーティングペプチドへの二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ）の無視できない結合によるものであることが明らかにされた（図示せず）。付け加えると、このような結合は、程度は低いが、ペプチド番号４９、５０および５１について、ＳＣ−８０２９０抗体の結合を検出するために使用したヤギ抗ラットＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体でも観察された。したがって、後者の抗体のエピトープはペプチド番号４４に限定される可能性がある。
【０１１１】
モノクローナル抗体１９Ｆ１２および市販のモノクローナル抗体ｓｃ−８０２９０は、弱い阻害剤であるか、またはＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦ−Ｒα活性化の阻害剤ではない（実施例４参照）が、それにもかかわらず、ＰＤＧＦ−Ｃ（ヒトＰＤＧＦ−Ｃのアミノ酸２３５〜３４５）の成長因子ドメイン、より具体的にはペプチド番号４９（１９Ｆ１２）およびペプチド番号４４ならびにペプチド番号４９〜５１（ＳＣ−８０２９０）に結合する。一方、モノクローナル抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７および２９Ｈ１は、明らかに、ヒトＰＤＧＦ−Ｃの成長因子ドメインの同じエピトープ、すなわちペプチド番号５８に結合し、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦ−Ｒα活性化を強く阻害する。最後に、ＰＤＧＦ−Ｃ上のモノクローナル抗体１６Ｂ１の結合部位は、完全に不明である（使用される免疫原に関する入手可能な情報に基づいて、市販のモノクローナル抗体ＭＡＢ１５６０は、ＰＤＧＦ−Ｃの成長因子ドメインに結合しなければならないが、ここでは明らかではない）。つまり、これらのデータは、ＰＤＧＦ−Ｃ、またはＰＤＧＦ−Ｃの成長因子ドメインに結合する抗体のみが、ＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦ−Ｒα活性化を阻害することが可能なわけではないことを示している。
【０１１２】
表６．Ｎ末端ビオチン化形態で合成され、１０μｇ／ｍＬの濃度でニュートラアビジン（ｎｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ ｐｌａｔｅ）プレート（サーモサイエンティフィック社、カタログ番号１５１２７）上にコーティングされた指示ペプチド。表に記載の抗体を１μｇ／ｍＬの濃度で各ウェルの中でインキュベートし、洗浄後に、適切なＨＲＰ標識二次抗体（ｓｃ−８０２９０を除く全ての抗体に対してヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ、およびｓｃ−８０２９０に対してヤギ抗ラットＩｇＧ−ＨＲＰ）を使用して、標準的なＥＬＩＳＡフォーマットで検出した。各抗体は少なくとも二回、最大４回試験した。表の「＋」は、バックグラウンドに対するシグナルが３を超える場合が少なくとも一度発見および確認されたことを示す。バックグラウンドシグナルは、一次抗体および二次抗体の両方を用いてペプチドの非存在下で測定した。これは、免疫原として使用したタンパク質の割合を表すので、抗体ｓｃ−８０２９０およびＭＡＢ１５６０は、ペプチド４２〜６３に対してのみ試験した。
【０１１３】
【表６】
2015515487.tif 000007
2015515487.tif 000008
2015515487.tif 000009
【０１１４】
実施例７．抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の抗腫瘍活性
雌のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスまたはＳＣＩＤマウス（１グループ当たりｎ＝１０匹のマウス、治療群および対照群）の皮下に移植したヒト異種移植神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、または結腸癌に対して、抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の抗腫瘍活性を（４および１０ｍｇ／ｋｇなどの）２つの用量レベルで評価する。腫瘍サイズが１５０ｍｍ３の体積に達した時に治療を開始する。対照群において腫瘍が１０００ｍｍ３の体積に達するまで、抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体を、週に２回、腹腔内に投与する。対照群はＰＢＳのみで処理する。
【０１１５】
雌のＳＣＩＤベージュマウスに移植した神経膠芽腫Ｕ１１８に対する抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の抗腫瘍効果
抗体の抗腫瘍活性の評価のために、動物を秤量し、ノギスを用いて腫瘍を週に２回測定した。腫瘍重量は、式質量（ｍｇ）＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２]／２、を用いて計算した。抗腫瘍活性の評価は、２０ｍｇ／ｋｇの単回投与で行った。２０％の体重減少（ｂｗｌ）または１０％以上の薬物死を引き起こす用量は、過度の毒性用量と考えられた。動物の体重は腫瘍重量を含んでいた。主要有効性エンドポイントは、腫瘍増殖阻害（％ＴＧＩ）である。それぞれの治療群（Ｔ）および対照群（Ｃ）の腫瘍体積変化を、各腫瘍について、指定された観察日の腫瘍体積から最初の治療日（診断日）の腫瘍体積を減算して計算する。治療群について中央値ΔＴを計算し、対照群について中央値ΔＣを計算する。次に、ΔＴ／ΔＣ比を計算し、以下のようにＴＧＩの百分率として表す。
ΔＴ＝Ｔｔ−Ｔ０
ΔＣ＝Ｃｔ−Ｃ０
％ＴＧＩ＝［１−（中央値（Ｔｔ−Ｔ０）／中央値（Ｃｔ−Ｃ０）］×１００
【０１１６】
２９Ｈ１、５Ａ２および１６Ｂ１の抗腫瘍効果を、ＰＤＧＦ−Ｃおよびその受容体ＰＤＧＦＲαの両方を発現し、雌のＳＣＩＤベージュマウスに皮下移植した測定可能な神経膠芽腫Ｕ１１８に対して評価した。対照群はＰＢＳのみで処理した。抗体を腹腔内（ＩＰ）注射により投与し、腫瘍移植後２８日目に治療を開始し、週に２回行った。２９Ｈ１および５Ａ２による治療は、腫瘍体重減少がなく、耐容性良好であり、神経膠芽腫Ｕ１１８に対して抗腫瘍活性を示し、５６日目に２９Ｈ１（ＴＧＩ＝５３．０％）および５Ａ２（ＴＧＩ＝５８．５％）についてより高い阻害が観察された。１６Ｂ１の腹腔内投与は、評価される異なる時点で腫瘍成長を阻止することができなかった。
【０１１７】
【表７】
2015515487.tif 000010
【０１１８】
実施例８．別の抗癌薬と組み合わせた抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の抗腫瘍活性
併用療法の有効性は、治療の相乗効果を決定することによって確立することができる。２種類の薬剤（本発明の抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体のうちの少なくとも１つである薬剤）の組み合わせは、その最大耐量（ＭＴＤ）で単独で使用される成分のそれぞれに対して治療的に優れている場合に、治療の相乗効果を示す。組み合わせの有効性を示すために、問題の研究における個々の成分のそれぞれの最大耐量と、組み合わせの最大耐量とを比較する必要があり得る。
【０１１９】
この効果は、治療群の腫瘍体積（および／または腫瘍重量、実施例６参照）を対照群の腫瘍体積で割り、１００を乗じることによって計算される％ＴＧＩ（腫瘍増殖阻害）を決定することによって定量化され得る。毒性は、薬物によって引き起こされる１５％を超える体重減少または１０％を超える死亡を誘導する用量で公表される。使用される別の基準は反応速度であり、部分的退縮（ＰＲ）は、５０％を超える初期腫瘍負荷の回帰に対応し、完全退縮（ＣＲ）は触診の限界以下の回帰に対応する。データを、当業者に公知の統計ツールを用いて分析する。
【０１２０】
本発明の抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体のうちの少なくとも１つと化学療法との組み合わせの腫瘍増殖阻害における有効性は、免疫不全動物に、神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、または結腸癌の細胞株を皮下移植する方法により実験的に決定することができる。腫瘍サイズが１５０ｍｍ３の体積に達した時に治療を開始する。対照群の腫瘍が１０００ｍｍ３の体積に達するまで、週２回、３〜５用量レベルで抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体を腹腔内投与する。３用量レベルでのドキソルビシン、シスプラチンまたはタキサンによる化学療法を、パイロット研究において以前に決定された最良の治療スケジュールを用いて抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体と同時に開始する。最大体重減少に達成するまで、異なる動物群を週に３または４回秤量し、その後、これらの群を、試験終了まで少なくとも週に１回秤量する。腫瘍が約２ｇに到達するまで、または腫瘍が２ｇに達する前に死亡した場合には動物が死亡するまで、腫瘍を週に２または３回測定する。屠殺時に動物を解剖する。
【０１２１】
化学療法および抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体単独、ならびにそれらの最適な用量で使用される組み合わせによる治療で得られた結果を、当業者に公知の統計ツールを用いて分析する。
【０１２２】
実施例９．マウス抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体のヒト化
ヒトに注射すると、マウス抗体は、ヒト抗マウス抗体反応を誘導することができ、これは治療効果を妨げ得る。この反応を制限するために、マウス抗体を、ヒト化と呼ばれるプロセスで内因性ヒト配列により似たものにする。マウスおよびヒト抗体配列を比較し、必要に応じて、マウスアミノ酸残基をヒトアミノ酸残基で置換する。親和性および安定性などの特性に悪影響を及ぼす置換は回避され、マウス抗体のヒト化変異体を親和性の維持について評価する。
【０１２３】
最初のステップでは、マウス抗体２Ｄ３、５Ａ２、５Ｈ７、１６Ｂ１および２９Ｈ１の構造を、プログラムＭＯＥ（ケミカル・コンピューティング・グループ社、カナダ）を使用してモデル化した。抗体の鋳型配列は、目的の抗体配列との高度な相同性に基づいて、ＰＤＢ（タンパク質データバンク、ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／）から選択した。この段階中で最も高い相同性を有する配列が選択されるので、鋳型の開始点には制限がない。これを重鎖および軽鎖可変領域配列について個々に行い、重鎖および軽鎖可変領域配列の両方に対して良好な相同性を有する鋳型を選択した。配列は相同性が高いことから、基本の鋳型は、１ＩＧＦ全てについて同じである。側鎖が同一である場合には、側鎖は鋳型のように維持された。異なる場合には、エネルギー的に最も良い方向で側鎖を位置付けるために、デッドエンド除去法を適用した。（ＭＯＥにおいて、カバットおよびコチアによるＣＤＲ領域決定の混合物である）ＣＤＲをモデリングするために、ＣＤＲループは、ＰＤＢから同じ鋳型または異なる抗体から取得することができる。（ｉ）ＣＤＲ中の残基についてベスト（＝最低）のＢ因子；（ｉｉ）鋳型構造の残りの部分と対比したＣＤＲの幾何学；（ｉｉｉ）ＣＤＲのＲフリー値を超える最適なＲ、の基準を用いて、最良のＣＤＲループを選択した。最終モデルを取得するために、全ての残基を、必要なマウス配列および最適化されたエネルギーに変更した。２次構造を計算し、全ての側鎖の相対近接性を計算することによって溶媒に曝されたＶＨおよびＶＬ残基を同定した。
【０１２４】
次のステップでは、ヒト配列とマウス配列を比較するために、標的配列と高い相同性を有するヒトモノクローナル配列を、ヒトタンパク質のデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）内のｂｌａｓｔｐ検索で検索した。これらの配列のいくつかは、ヒトタンパク質に結合する抗体であるため除外されるが、抗体はおそらくヒト抗体ではなかった。または抗体は、すでにヒト化されたマウス抗体であった。
【０１２５】
マウスとヒトの配列間に差があり、ＣＤＲから５Å以上離れており、２５％を超える相対近接性を有する側鎖をヒト化のために考慮した。グラフィカルなステレオ装備画面上での目視検査により、全てのこれらの残基をヒト変異型への変異について調べた。全体的な３次元構造を妨げない残基を、ヒトの対応残基への変化のために考慮した。
【０１２６】
したがって、以下の表に示すように、最も類似したヒト抗体に存在するそれらの対応物に変異させることができる重鎖可変領域中の最大１６残基および軽鎖可変領域中の最大９残基を同定した。
【０１２７】
表８．ヒト化のために考慮されたマウスモノクローナル抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の残基
残基の番号は、実施例２に記載の配列に対応する（例えば、２Ｄ３の「Ｈ５」は、実施例２の２Ｄ３の重鎖配列のアミノ酸５、すなわち、配列番号１８の５番目のアミノ酸である）。
【０１２８】
８．１．重鎖可変領域
【表８】
2015515487.tif 000011
【０１２９】
８．２．軽鎖可変領域
【表９】
2015515487.tif 000012
【０１３０】
表８に基づいて、以下のヒト化抗体（記載されたアミノ酸配列および核酸配列）を産生した。これらは代表的なヒト化抗体として役立つ。
【０１３１】
ヒト化５Ｈ７抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体
重鎖可変領域
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＧＹＧＧＳＦＴＹＹＰＤＳＭＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＰＬＷＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＬＴＶＳＳ（配列番号１０２）
軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＤＧＴＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１０３）
【０１３２】
ヒト化１６Ｂ１抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体
重鎖可変領域
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＰＬＷＤＹＳＤＹＷＧＱＧＴＬＬＴＶＳＳ（配列番号１０４）
軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＮＱＳＩＶＨＳＮＧＤＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１０５）
【０１３３】
ヒト化２９Ｈ１抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体
重鎖可変領域
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＩＧＳＧＧＨＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＰＬＷＤＣＳＤＹＷＧＱＧＴＬＬＴＶＳＳ（配列番号１０６）
軽鎖可変領域
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＩＶＨＳＤＧＴＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１０７）
【０１３４】
ヒト化抗体のＤＮＡ配列：
ヒト化５Ｈ７抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体
重鎖可変領域
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＣＴＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＧＣＡＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＴＣＴＴＧＧＧＴＴＣＧＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＧＣＴＡＴＧＧＴＧＧＧＡＧＴＴＴＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＴＣＡＡＴＧＡＡＧＧＧＡＣＧＣＴＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＧＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＡＴＴＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１０８）
軽鎖可変領域
ＧＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＴＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＴＡＧＣＴＧＴＣＧＣＴＣＴＡＧＣＣＡＧＡＣＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＡＧＴＧＡＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣＴＴＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＴＣＣＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ（配列番号１０９）
【０１３５】
ヒト化１６Ｂ１抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体
重鎖可変領域
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＣＴＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＧＣＡＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＧＴＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＴＣＴＴＧＧＧＴＴＣＧＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＴＴＡＴＡＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＧＡＣＧＣＴＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＧＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＡＴＴＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１１０）
軽鎖可変領域
ＧＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＴＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＴＡＧＣＴＧＴＣＧＣＴＣＴＡＡＣＣＡＧＡＧＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＧＣＧＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣＴＴＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＴＣＣＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ（配列番号１１１）
【０１３６】
ヒト化２９Ｈ１抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体
重鎖可変領域
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＣＴＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＧＣＡＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＧＴＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＴＣＴＴＧＧＧＴＴＣＧＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＧＧＧＣＡＣＴＡＴＡＣＣＴＡＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＧＡＣＧＣＴＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＧＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＧＧＡＣＴＧＴＡＧＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＡＴＴＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１１２）
軽鎖可変領域
ＧＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＴＴＧＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＴＡＧＣＴＧＴＣＧＣＴＣＴＡＧＣＣＡＧＡＣＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＡＧＴＧＡＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣＴＴＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＴＣＣＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ（配列番号１１３）
【０１３７】
ＰＤＧＦ−Ｃに対する上記の代表的なヒト化抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の親和性を（実施例３のように）分析し、その後、実施例４に記載のインビトロバイオアッセイでこのヒト化抗体を評価した。結果をそれぞれ表９および表１０にまとめる。ヒト化抗体５Ｈ７（の調製）における技術的問題は、この抗体が高い親和性でＰＤＧＦ−Ｃに結合しているが、ＰＤＧＦＲ−αの活性化を明らかに阻害していない理由を説明することができる。このことはさらに研究中である。
【０１３８】
表９．ＰＤＧＦ−Ｃに対するヒト化抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の親和性
【表１０】
2015515487.tif 000013
【０１３９】
表１０．ヒト化抗ＰＤＧＦ−Ｃ抗体の存在下でのＰＤＧＦ−ＣによるＰＤＧＦＲ−α活性化の阻害
【表１１】
2015515487.tif 000014
「＊」：３回の別々の測定の平均値；「ｎａｄ」：決定不能
【図１】
2015515487.tif 000015
【図２】
2015515487.tif 000016
【図３】
2015515487.tif 000017
【図４】
2015515487.tif 000018
【配列表】
2015515487000001.app
【国際調査報告】
2015515487.tif 000019
2015515487.tif 000020
2015515487.tif 000021