(57)【要約】  本発明は、対象について加齢性軽度炎症に罹患するリスクを予測するための方法であって、ａ）対象に由来する生体試料を用意するステップ、ｂ）８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物などからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを、前記試料において決定するステップ、ｃ）少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを基準レベルと比較するステップ、及びｄ）バイオマーカーのレベルがそれぞれの基準レベルと有意に異なる場合に、前記対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高いかどうかを決定するステップを含む方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象について加齢性軽度炎症に罹患するリスクを予測するための方法であって、
ａ）対象に由来する生体試料を用意するステップ、
ｂ）前記試料において、
８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、
８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、
７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、
５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物、
オクタデカノイルカルニチン（Ｃ１８）、及び
トリプトファン
からなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定するステップ、
ｃ）少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを基準レベルと比較するステップ、及び
ｄ）バイオマーカーのレベルがそれぞれの基準レベルと有意に異なる場合に、前記対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高いかどうかを決定するステップ
を含む方法。
【請求項２】
１つ又は複数のバイオマーカーは、８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物、及びオクタデカノイルカルニチン（Ｃ１８）からなる群から選択され、
前記決定された１つ又は複数のレベルが基準レベルよりも有意に高い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高く、及び／又は前記決定された１つ又は複数のレベルが基準レベルと等しいか又はそれよりも低い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が低い、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
バイオマーカーはトリプトファンであり、
前記決定されたレベルが基準レベルよりも有意に低い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高く、及び／又は前記決定されたレベルが基準レベルと等しいか又はそれよりも高い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が低い、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも２つのバイオマーカーのレベル、例えば少なくとも３つのバイオマーカーのレベル、例えば少なくとも４つのバイオマーカーのレベル、例えば少なくとも５つのバイオマーカーのレベル、又は例えば６つのバイオマーカーのすべてのレベルが決定される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ（Ｏ−４２：０））であり、及び／又は
８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ（４２：６））であり、及び／又は
７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ（Ｏ−３８：６））であり、及び／又は
５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ（１８：０））である、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記生体試料は、血漿、全血、血清、唾液、尿などの体液、又は組織生検試料などの組織試料である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
バイオマーカーのレベルは生体試料中のバイオマーカーの濃度である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
加齢性軽度炎症に罹患するリスクは、試料採取から２４か月の期間内、例えば１２か月以内、例えば８か月以内、例えば６か月以内、例えば４か月以内、例えば２か月以内、例えば１か月以内のリスクである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
対象は、ヒトなどの哺乳動物；霊長類を含む非ヒト種；ヒツジ、ウシ、ブタ、ウマ、ロバ、ヤギなどの家畜動物；マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスターなどの実験動物；又はイヌ、ネコなどのコンパニオンアニマルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
決定されるリスクは、軽度炎症（例えば慢性軽度炎症）により定義される１つ又は複数の状態に罹患するリスクでもある、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
状態は、２型糖尿病、高血圧、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、乾癬、嚢胞性線維症、骨粗鬆症、変形性関節症、関節リウマチ、サルコペニア、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、及びパーキンソン病からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
対象は、２０歳を超えている、例えば３０歳を超えている、例えば４０歳を超えている、例えば５０歳を超えている、例えば６０歳を超えている、又は例えば７０歳を超えているヒトである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクを低下させるための処置の効果を決定するための方法であって、
処置前に得られた、対象に由来する第１の生体試料を用意し、請求項１〜１２のいずれか一項に従って、加齢性軽度炎症に罹患する第１のリスクを決定するステップ、
処置後又は処置中に得られた、対象に由来する第２の生体試料を用意し、請求項１〜１２のいずれか一項に従って、加齢性軽度炎症に罹患する第２のリスクを決定するステップ、及び
第１のリスクを第２のリスクと比較し、そのことにより処置の効果の評価を行うステップ
を含む方法。
【請求項１４】
第１の決定されたリスクと比較した、第２の決定されたリスクにおける有意に増加したリスクは、処置が加齢性軽度炎症に罹患するリスクを増加させていることの指標であり、又は
第１の決定されたリスクと比較した、第２の決定されたリスクにおける変化していないリスクは、処置が加齢性軽度炎症に罹患するリスクに影響しないことの指標であり、又は
第１の決定されたリスクと比較した、第２の決定されたリスクにおける有意に低下したリスクは、処置が加齢性軽度炎症に罹患するリスクを低下させていることの指標である、
請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
処置は食餌による処置又は薬物による処置である、請求項１３又は１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、対象について加齢性軽度炎症（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｌｏｗ−ｇｒａｄｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）に罹患するリスクを予測するためのバイオマーカーに関する。
【発明の背景】
【０００２】
先進国における人口の高齢化は、虚弱で依存的な人の増加に関連する社会経済的な問題を発生させる。加齢は（慢性）軽度炎症のレベルの増加と関連付けられている。持続性の炎症状態は、加齢に関連する状態、例えば、２型糖尿病、高血圧、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、乾癬、嚢胞性線維症、骨粗鬆症、変形性関節症、関節リウマチ、サルコペニア、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病及びパーキンソン病のリスクファクターと考えられる。これと一致して、炎症性メディエーターが高齢対象における虚弱症候群（ｆｒａｉｌｔｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び関連の状態と関連付けられる。
【０００３】
炎症の管理は「良好な」加齢をもたらす。
【０００４】
炎症状態を評価するために、通常、炎症マーカー（例えば、α−２−マクログロブリン、フィブリノゲン、アルブミン）の血中レベルなどのいくつかの指標がモニターされる。
【０００５】
例えば、広く使用されている炎症のマーカーであるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の増加は心血管リスク及び認知障害のリスクを予測できる。しかし、ＣＲＰ及び他のマーカーの欠点は、それらが炎症の発症後にのみ増加することである。したがって、この時点で不可逆的な損傷が既に生じている可能性が高く、この段階を過ぎて予防的手段が成功する可能性は低い。これらのマーカー以外では、代謝的アプローチが、炎症の進行と関連付けられる特徴的な代謝サインを提供する上で極めて有用であろう。体液の代謝物プロファイリングは、疾患進行、薬理学的又は栄養学的介入の結果としての、所与の対象における生理学的又は病態生理学的変化をモニターする低侵襲の方法であり得る。代謝物は、全身の代謝過程を反映する小分子であり、所与の表現型の最も代表的な尺度として位置付けられている。
【０００６】
したがって、（慢性）軽度炎症に罹患するリスクを評価する改善された方法は有益であろう。
【発明の概要】
【０００７】
本発明者らは、対象について加齢性軽度炎症に罹患するリスクを予測するのに使用され得る、バイオマーカーの特定のセットを同定した。これは、潜在的な慢性炎症の発症前の早期段階にある対象を同定するのに特に有用であり得る。上述のように、他の炎症バイオマーカーは軽度炎症の発症後に存在する。あるいは、少なくとも炎症が他の臨床的手段によっても決定され得る場合に存在するにすぎない。
【０００８】
すなわち、本発明の目的は、加齢性軽度炎症のための早期バイオマーカーの提供に関する。
【０００９】
本発明は、特に、発症後の検出に関する先行技術の上述の問題を解決するバイオマーカーのセットを提供することを目的とする。
【００１０】
本発明の一態様は、対象について加齢性軽度炎症に罹患するリスクを予測するための方法であって、
ａ）対象に由来する生体試料を用意するステップ、
ｂ）前記試料において、
８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、
８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、
７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、
５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物、
オクタデカノイルカルニチン（Ｃ１８）、及び
トリプトファン
からなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定するステップ、
ｃ）少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを基準レベルと比較するステップ、及び
ｄ）バイオマーカーのレベルがそれぞれの基準レベルと有意に異なる場合に、前記対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高いかどうかを決定するステップ
を含む方法に関する。
【００１１】
本発明の他の一態様は、対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクを低下させるための処置の効果を決定するための方法であって、
処置前に得られた、対象に由来する第１の生体試料を用意し、本発明に従って、加齢性軽度炎症に罹患する第１のリスクを決定するステップ、
処置後又は処置中に得られた、対象に由来する第２の生体試料を用意し、本発明に従って、加齢性軽度炎症に罹患する第２のリスクを決定するステップ、及び
第１のリスクを第２のリスクと比較し、そのことにより処置の効果の評価を行うステップ
を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】Ｆｉｇ．１：  炎症の発症の早期指標を示す。アラニン食餌下のＮＩｔｏＩ動物（実験中に非炎症から炎症に進展した動物）に由来する代謝物を選択した。濃度中央値（実線）及びそのブートストラップ信頼区間（点線）をプロットした。濃度単位（ｙ軸）をμＭで表した。
【図２】Ｆｉｇ．２：  炎症の発症の早期指標を示す。アラニン食餌下のＮＩｔｏＩ動物（実験中に非炎症から炎症に進展した動物）に由来する代謝物を選択した。濃度中央値（実線）及びそのブートストラップ信頼区間（点線）をプロットした。濃度単位（ｙ軸）をμＭで表した。
【図３】Ｆｉｇ．３：  炎症の発症の早期指標を示す。アラニン食餌下のＮＩｔｏＩ動物（実験中に非炎症から炎症に進展した動物）に由来する代謝物を選択した。濃度中央値（実線）及びそのブートストラップ信頼区間（点線）をプロットした。濃度単位（ｙ軸）をμＭで表した。
【図４】Ｆｉｇ．４：  持続性非炎症（ｎ＝１２）、非炎症から炎症（進展）、及び炎症（ｎ＝７）動物の間の、６つの代謝物に関する時点１及び６（−１３〜１４週）でのボックスプロットを示す。濃度単位をμＭで表した。
【図５】Ｆｉｇ．５：  持続性非炎症（ｎ＝１２）、非炎症から炎症（進展）、及び炎症（ｎ＝７）動物の間の、６つの代謝物に関する時点１及び６（−１３〜１４週）でのボックスプロットを示す。濃度単位をμＭで表した。
【図６】Ｆｉｇ．６：  持続性非炎症（ｎ＝１２）、非炎症から炎症（進展）、及び炎症（ｎ＝７）動物の間の、６つの代謝物に関する時点１及び６（−１３〜１４週）でのボックスプロットを示す。濃度単位をμＭで表した。
【発明の詳細な説明】
【００１３】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００１４】
第１の態様において、本発明は、対象について加齢性軽度炎症に罹患するリスクを予測するための方法であって、
ａ）対象に由来する生体試料を用意するステップ、
ｂ）前記試料において、
８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、
８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、
７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、
５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物、
オクタデカノイルカルニチン（Ｃ１８）、及び
トリプトファン
からなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定するステップ、
ｃ）少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを基準レベルと比較するステップ、
ｄ）バイオマーカーのレベルがそれぞれの基準レベルと有意に異なる場合に、前記対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高いかどうかを決定するステップ
を含む方法に関する。
【００１５】
本発明において、「軽度炎症」（“ｌｏｗ−ｇｒａｄｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ”）という用語は、基準値と比較した、かつ観察可能な炎症（例えば、発赤、腫脹、疼痛）の非存在下における、１つ又は複数の急性期応答バイオマーカー（例えば、Ｃ反応性タンパク質、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、オロソムコイド、フィブリノゲン）のレベルの増加、及び／又は１つ又は複数の炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、ＩＦＮガンマ）のレベルの上昇、及び／又は血漿粘度、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）及び／又は白血球数の増加、及び／又は血清アルブミンのレベルの減少により特徴付けられる。
【００１６】
特定の一実施形態において、軽度炎症は、１つ又は複数の前述のマーカーの上昇により特徴付けられる。さらなる特定の一実施形態において、軽度炎症は、例えば粒子強化免疫比濁法（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｙ  ａｓｓａｙ）（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて測定される、１ｍｇ／ｌより高い（特に３ｍｇ／ｌを超える）ｈｓ−ＣＲＰレベルとして特徴付けられ得る。これらの特定の実施形態は、対象がヒトである場合により適切であり得る。
【００１７】
一実施形態において、８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ（Ｏ−４２：０））である。
【００１８】
他の一実施形態において、８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ（４２：６））である。
【００１９】
さらなる一実施形態において、７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ（Ｏ−３８：６））である。
【００２０】
さらなる一実施形態において、５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物は、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ（１８：０））である。
【００２１】
概して、上記化合物は該化合物の塩又は付加物も含み得ることが理解されるべきである。
【００２２】
リスクの評価に当たって、本発明のバイオマーカーのレベルにおける（基準レベルと比較した）変化は、上記バイオマーカーの異なるサブグループ間で異なり得る。一実施形態において、１つ又は複数のバイオマーカーは、８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、５２２〜５２５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、モノアシルホスファチジルコリンである化合物、及びオクタデカノイルカルニチン（Ｃ１８）からなる群から選択され、
前記決定された１つ又は複数のレベルが基準レベルよりも有意に高い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高く、及び／又は前記決定された１つ又は複数のレベルが基準レベルと等しいか又はそれよりも低い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が低い。
【００２３】
他の一実施形態において、バイオマーカーは、ホスファチジルコリン（ＰＣ（Ｏ−４２：０））、ホスファチジルコリン（ＰＣ（４２：６））、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ（１８：０））、ホスファチジルコリン（ＰＣ（Ｏ−３８：６））、又はオクタデカノイルカルニチン（Ｃ１８）である。
【００２４】
他の一実施形態において、バイオマーカーはトリプトファンであり、
前記決定されたレベルが基準レベルよりも有意に低い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が高く、及び／又は前記決定されたレベルが基準レベルと等しいか又はそれよりも高い場合には、前記対象は加齢性軽度炎症に罹患するリスクがある可能性が低い。さらなる一実施形態において、バイオマーカーはトリプトファンである。
【００２５】
分析の強度を改善するために、複数のバイオマーカーのレベルを決定することが有利であり得る。すなわち、一実施形態では、少なくとも２つのバイオマーカーのレベル、例えば少なくとも３つのバイオマーカーのレベル、例えば少なくとも４つのバイオマーカーのレベル、例えば少なくとも５つのバイオマーカーのレベル、又は例えば６つのバイオマーカーのすべてのレベルが決定される。
【００２６】
さらなる一実施形態において、８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物のうちの少なくとも１つのレベルが決定される。さらなる一実施形態において、８５９〜８６３ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物、８６１〜８６５ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、ジアシルホスファチジルコリンである化合物、７９１〜７９４ｇ／ｍｏｌの間の分子量を有し、アルキルアシルホスファチジルコリンである化合物からなる群から選択される少なくとも２つのバイオマーカー、例えば３つのバイオマーカーのすべてのレベルが決定される。
【００２７】
対象が正常を超えるリスクを有するかどうかを決定するためにカットオフが確立される必要がある（基準レベル）。このカットオフは、研究室により、医師により、又はケースバイケースで各対象により確立され得る。
【００２８】
カットオフレベルは、パーセンタイル、平均プラスマイナス標準偏差、中央値の倍数、患者固有のリスク、又は当業者に知られている他の方法を含む複数の方法を用いて確立され得る。
【００２９】
多変量判別分析及び他のリスク評価を、市販のコンピュータープログラム統計パッケージＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓシステム（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．により製造販売）、又は多変量統計分析の他の方法、又は当業者に知られている他の統計ソフトウェアパッケージ若しくはスクリーニングソフトウェアで実施できる。
【００３０】
当業者には明らかなように、上述の実施形態のいずれにおいても、陽性のリスクカットオフレベルを変化させること、又は母集団中の異なるサブグループに適用され得る異なる先験的なリスクを使用することは、各対象の判別分析の結果を変化させ得る。
【００３１】
試料（例えば血漿試料）中の特定のバイオマーカーのレベルを基準レベルと比較する場合、それらのレベルは異なる（基準値より上若しくは下）か等しいかのいずれかであり得る。しかし、今日の検出技術を使用する場合、異なる試料から得られた発現レベルにおけるノイズ及び変動のために、異なる又は等しい結果の正確な定義は困難なものとなり得る。したがって、２つ以上のレベルが異なるか等しいかを評価する通常の方法は統計を伴う。
【００３２】
統計は、有意に異なる発現レベル及び有意に等しい発現レベルの評価を可能にする。統計的方法は、関数／統計アルゴリズムをデータのセットに適用することを含む。統計理論は、統計量を試料の関数（関数自体は試料の分布から独立している。）として定義する。この用語は、関数自体及び所与の試料に関する関数の値の両方に使用される。データセットに適用される、一般に使用される統計的検定又は方法は、ｔ検定、ｆ検定、又はデータを比較するさらに高度な検定及び方法を含む。そのような検定又は方法を使用することによって、２つ以上の試料が有意に異なるか有意に等しいかの結論を出すことが可能になる。
【００３３】
有意性は、当業者に知られている標準的な統計的方法により決定され得る。
【００３４】
一実施形態において、基準レベルは非炎症群の対象の平均値である。他の一実施形態において、基準レベルは、同一対象について決定されるレベルであって、該対象は炎症ではないと決定された１つ又は複数のより早期の時点で決定されるレベルである。
【００３５】
選択される基準レベルは、検定が適用される対象に応じて変動し得る。当技術分野で知られているように、異なる特異度又は感度が所望されれば、選択される基準レベルは変動し得る。
【００３６】
すなわち、一実施形態において、前記基準レベルは所望の感度及び特異度に基づいて決定される。
【００３７】
本明細書において、感度は、診断検査と同様に、正しく陽性と同定される実際の陽性の割合の尺度、すなわち、加齢性軽度炎症の素因を有するリスクがあるものと同定される対象のパーセンテージを指す。通常、検査の感度は、標的障害に罹患する総数のうちの真陽性の割合として記述できる。標的障害に罹患するすべての対象は、（検出された）真陽性（ＴＰ）及び（検出されていない）偽陰性（ＦＮ）の総計である。
【００３８】
本明細書において、特異度は、正しく同定される陰性の割合の尺度、すなわち、加齢性軽度炎症の素因についてリスクが正常であるものと同定される対象のパーセンテージを指す。理想的な診断検査は、１００％の特異度を有する、すなわち、加齢性軽度炎症の素因についてより高いリスクを有する対象のみを検出し、それ故、偽陽性の結果を全く検出しない検査であって、かつ１００％の感度を有する、すなわち、加齢性軽度炎症の素因を有するすべての哺乳動物を検出し、それ故、偽陰性の結果を全く検出しない検査である。
【００３９】
どのような試験に関しても、通常は尺度間でトレードオフがある。例えば、欠陥について試験する製造の場面では、ほぼすべての欠陥部品を同定する可能性を増加させる（高感度）ために、機能する部品を廃棄する（低特異度）リスクを取ることがある。このトレードオフはＲＯＣ曲線を用いて図示することができる。
【００４０】
感度及び特異度を選択することによって、検出方法において最適な結果を得ることが可能である。正常を下回る繁殖能力を有する哺乳動物を区別する識別値を決定する際に、当業者は特異度のレベルを予め決定しておく必要がある。理想的な診断検査は、１００％の特異度を有し、それ故、偽陽性の結果を全く検出せず、かつ１００％の感度を有し、それ故、偽陰性の結果を全く検出しない検査である。しかし、生物学的な多様性のために、相当数の偽陰性の結果を含むことのない感度１００％の方法を期待することはできない。
【００４１】
選択される特異度は、所与の研究／母集団において所与の機関により許容され得る偽陽性例のパーセンテージを決定する。特異度を減少させることにより感度の増加が実現される。例えば、９５％の特異度の場合、５％の偽陽性例が生じる。
【００４２】
当業者に概して理解されるように、スクリーニングの方法は意思決定のプロセスであり、それ故、選択される特異度及び感度は、所与の機関／臨床関係者により最適な結果と考えられるものに依存する。
【００４３】
本発明の（生体）試料とは、対象から得られた試料を指す。試料は、生検試料又は体液試料（例えば血液試料）であり得る。試料は、本発明の方法のいずれかに供される前に加工されていてもよい。例えば、試料のサブフラクションは、例えば血漿試料のように単離されていてもよい。すなわち、一実施形態において、生体試料は、血漿、全血、血清、唾液、尿などの体液、又は組織生検試料などの組織試料である。
【００４４】
バイオマーカーのレベルは、異なるパラメータ、例えば濃度又は活性を指し得る。一実施形態において、バイオマーカーのレベルは生体試料中のバイオマーカーの濃度である。生体試料中のバイオマーカーのレベルは異なる手段により評価され得る。すなわち、一実施形態において、バイオマーカーのレベルは質量分析（例えば、ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ）により決定される。
【００４５】
加齢性軽度炎症に罹患するリスクは試料採取から一定期間内のリスクと特定され得る。すなわち、一実施形態において、加齢性軽度炎症に罹患するリスクは、試料採取から２４か月、例えば試料採取から１２か月の期間内、例えば８か月以内、例えば６か月以内、例えば４か月以内、例えば２か月以内、例えば１か月以内のリスクである。
【００４６】
軽度炎症は、多数の状態に罹患する対象において存在する。すなわち、一実施形態において、決定されるリスクはまた、軽度炎症、例えば加齢性（慢性）軽度炎症により定義される１つ又は複数の状態に罹患するリスクでもある。さらなる一実施形態において、この状態は、２型糖尿病、高血圧、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、乾癬、嚢胞性線維症、骨粗鬆症、変形性関節症、関節リウマチ、サルコペニア、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、アルツハイマー病、及びパーキンソン病からなる群から選択される。したがって、加齢性軽度炎症に罹患するリスクがあるかどうかを試験される対象は、上記状態のうちの１つに罹患するリスクがあるとも判断され得る。また、加齢性軽度炎症に罹患するリスクがあるかどうかを試験される対象は、慢性軽度炎症に罹患するリスクがあるとも判断され得る。
【００４７】
本発明において、「対象」という用語は、哺乳動物、例えばヒト又は非ヒト種を含む。それ故、本発明は、ヒト医療における適用可能性を有し、また、家畜、獣医学及び野生生物への適用性を有する。すなわち、さらなる一実施形態において、対象は、ヒトなどの哺乳動物；霊長類を含む非ヒト種；ヒツジ、ウシ、ブタ、ウマ、ロバ、ヤギなどの家畜動物；マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスターなどの実験動物；又はイヌ、ネコなどのコンパニオンアニマルである。
【００４８】
「加齢性軽度炎症」という用語は、加齢の結果として例えば代謝及び／又は免疫学的状態に関して身体機能が障害されたヒト対象における軽度炎症を指す。すなわち、一実施形態において、対象は、２０歳を超えている、例えば３０歳を超えている、例えば４０歳を超えている、例えば５０歳を超えている、例えば６０歳を超えている、又は例えば７０歳を超えているヒトである。概して、そのような対象は５０歳を超えている。しかし、ヒトの場合、代謝又は免疫学的状態に関してより速い加齢をもたらす疾患に罹患していることもある。
【００４９】
加齢性軽度炎症に罹患するリスクを低下させるための処置が開始されることもあるので、そのような処置の効果を評価できることは有利であり得る。すなわち、他の一態様において、本発明は、対象について、加齢性軽度炎症に罹患するリスクを低下させるための処置の効果を決定するための方法であって、
処置前に得られた、対象に由来する第１の生体試料を用意し、本発明に従って、加齢性軽度炎症に罹患する第１のリスクを決定するステップ、
処置後又は処置中に得られた、対象に由来する第２の生体試料を用意し、本発明に従って、加齢性軽度炎症に罹患する第２のリスクを決定するステップ、及び
第１のリスクを第２のリスクと比較し、そのことにより処置の効果の評価を行うステップ
を含む方法に関する。
【００５０】
処置の効果の評価は、リスクの変化を経時的に評価することによって行われ得る。必要な場合には、他の時点で得られたさらなる生体試料を用意してもよい。決定される経時的なリスクの変化は提供される処置に依存し得、それ故、そのような処置が継続されるべきかどうかを決定する上で有用であり得る。処置自体は本発明の一部でないことが理解されるべきである。すなわち、一実施形態において、
第１の決定されたリスクと比較した、第２の決定されたリスクにおける有意に増加したリスクは、処置が加齢性軽度炎症に罹患するリスクを増加させていることの指標であり、又は
第１の決定されたリスクと比較した、第２の決定されたリスクにおける変化していないリスクは、処置が加齢性軽度炎症に罹患するリスクに影響しないことの指標であり、又は
第１の決定されたリスクと比較した、第２の決定されたリスクにおける有意に低下したリスクは、処置が加齢性軽度炎症に罹患するリスクを低下させていることの指標である。
【００５１】
本発明の方法を用いて異なるタイプの処置が評価される。一実施形態において、処置は食餌による処置又は薬物による処置である。処置自体は本発明の一部を形成しないことが理解されるべきである。食餌による処置は、動物性及び／又は植物性食品、飲料、栄養フォーミュラ、臨床栄養用組成物、水、ジュース若しくはミルクの添加により再構成される栄養粉末、機能性食品、食品添加物、食品成分、乳製品、ゲル、又はペットフードの形態であり得る。そのような製品は経口的、経腸的又は非経口的に投与され得る。
【００５２】
本発明の態様の１つに関して記載される実施形態及び特徴は、本発明の他の態様にも適用されることに留意すべきである。
【００５３】
本明細書で引用された特許及び非特許文献は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００５４】
本発明を、以下の非限定的な実施例においてさらに詳細に説明する。
【００５５】
［実施例１］
加齢ラットモデル：
ウィスターラットを１８〜２４月齢の間、観察した。血液試料を種々の分析のために異なる時点で採取した。２１月齢の時に、ラットを、軽度炎症を評価するための血漿α２−マクログロブリンの測定値が反映された非炎症及び炎症の２つの群に分けた。
【００５６】
メタボローム解析：
アシルカルニチン（ｎ＝４１）、アミノ酸（ｎ＝１４）、グリセロリン脂質（ｎ＝９２）、スフィンゴ脂質（ｎ＝１５）及びヘキソース（ｎ＝１，Ｃ６Ｈ１２Ｏ６）を含む１６３の代謝物の定量分析を、同位体希釈ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して、選択されたラット血漿試料において行った。これらの代謝物のマイクロモル濃度レベルを、一般に認められている臨床的測定で特定の代謝物の潜在的相関（及び／又は早期予測マーカー）を評価するために、（各採血について）α２−マクログロブリンに対する多変量回帰により評価した。教師なし（ｎｏｎ−ｓｕｐｅｒｖｉｓｅｄ）及び教師あり（ｓｕｐｅｒｖｉｓｅｄ）アプローチを用いて統計データ処理を行った。
【００５７】
実験研究デザイン：
動物研究は、Ｎｅｓｔｌｅ動物福祉ポリシーに準拠して、Ｆｒｅｎｃｈ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ’ｓ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って行われた。雄ウィスターラットを通常の動物施設で飼育した。１８月齢の時に、制御された条件（温度２１℃，相対湿度５５％，２０：００に始まる１２時間の暗期）下でラットを集合ケージ（１ケージ当たり３〜４匹）に維持し、水及び標準食餌を自由に摂取させた。この期間の標準食餌は、１６％のタンパク質、３％の脂肪、６０％の炭水化物、１２％の水、繊維、ビタミン、及びミネラルからなっていた。２１月齢から始めて１４週間、ラットにアラニン添加食餌を摂取させた。
【００５８】
臨床的測定及びメタボノミクス解析のために血液試料を特定の時点で採取した。８２ｍｇ／ｌより高いα２−マクログロブリンの血中濃度を示すラットを軽度炎症とし、α２−マクログロブリンが８２ｍｇ／ｌより低いものを非炎症ラットとした。加齢性軽度炎症の早期マーカーを同定するために、最初に（すなわち実験前期間中）非炎症であったラット及び実験期間中（すなわち２１月齢から１４週間）に炎症となったラットを調査した。これらは全部で１６匹の動物に対応した。検証のために、持続性炎症及び持続性非炎症の動物からの代謝データも使用した。
【００５９】
メタボロミクス解析：
全部で１６３の代謝物を、ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳにより同位体標識された内部標準（ＩＳ）（Ｂｉｏｃｒａｔｅｓ  Ｉｎｃ．，インスブルック，オーストリア）を使用してラット血漿試料において定量した。既知のＩＳに対する分析物のピーク面積比（ＭｅｔＩＱソフトウェア（Ｂｉｏｃｒａｔｅｓ  Ｉｎｃ．）により生成）から代謝物濃度を計算した。定量的データの標準的な前処理として、データのクリーンアップを適用していくつかの変数について過剰な未知量を除去した。このステップでは、各変数の未決定値（定量限界（ＬＯＱ）を下回る濃度と主に関連付けられる。）の該変数の最小値による置換、及び最初に１５％を超える非決定を示した場合の該変数の完全除去が行われた。このクリーンアップが完了すると、６つまでの代謝物、すなわち５つのアシルカルニチン（Ｃ３−ＯＨ、Ｃ３：１、Ｃ４：１、Ｃ５：１、Ｃ５：１−ＤＣ）及び１つのリゾホスファチジルコリン（ｌｙｓｏＰＣ  ａ  Ｃ６：０）が全リストから最終的に除外された。多変量解析前に、すべての変数（代謝物濃度）を中心化し、単位分散（ｕｎｉｔ  ｖａｒｉａｎｃｅ）に尺度化した。炎症の発症と関連付けられる代謝サインを提供する可能性が最も高い代謝物のプールを同定するために、血漿代謝物濃度とα２−マクログロブリンの濃度（対数変換）との間の２つの多変量回帰モデル（潜在構造への正射影（Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｌａｔｅｎｔ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ），ＯＰＬＳ）の結果を評価した。モデルは、標準食餌及びアラニン食餌の両方の条件において、非炎症から炎症状態に進展する動物における代謝の変化を捕捉した。
【００６０】
［結果］
両方のモデルに共通する、射影における変数重要度（Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ：ＶＩＰ）が０．９を超える関連化合物を、標準食餌下での炎症の発症と関連付けられる代謝サインとした。この共通部分は２４種までの化合物をもたらした。さらに、代謝物のこのセットをスクリーニングして、その濃度が実験の最初と最後の間で有意に異なるレベルにあるかどうかを決定した。この目的のために、選択された代謝物データに、対応のないマン−ホイットニーＵ検定を適用した。時点１（−１３週）及び時点６（１４週）の間の各代謝物と関連付けられる有意性Ｐ値を計算し、その後、Ｐ値により順位付けした（表１）。偽陰性（第二種過誤）の確率を低下させるために、閾値として０．２０未満のＰ値を選択した。このデータは「進展群」の１３匹の動物についてのものである。
【００６１】
【表１】
2015513099.tif 000003
【００６２】
この選択により、リストは、１つのアミノ酸（Ｔｒｐ）、１つのアシルカルニチン（Ｃ１８）及び４つのリン脂質（ＰＣ（Ｏ−４２：０）、ＰＣ（Ｃ４２：６）、ＬＰＣ（１８：０）、ＰＣ（Ｏ−３８：６））を含む６つの代謝物まで減縮した。その動態学的プロファイルを個別に評価した。これらの化合物のすべてが、定性的に関連するとみなし得る変化を実験時系列に沿って示した（Ｆｉｇ．１〜３）。
【００６３】
進展動物群における知見を検証するために、６つの選択された代謝物の各々の濃度変化を、持続性非炎症（ＮＩ）及び炎症（Ｉ）の両方の動物群について評価した。同時に、これらの変化を時点１及び時点６の間で検討した（Ｆｉｇ．４〜６）。
【００６４】
解釈のさらなる強化のために、表１に記載の代謝物の各々についての時点１及び時点６のＰ値を非炎症対炎症に関して決定し、また、非炎症群及び炎症群のＰ値を決定した（表２）。
【００６５】
【表２】
2015513099.tif 000004
【００６６】
［結論］
Ｆｉｇ．１〜３に示されるデータは、経時的にこれらのバイオマーカーのレベルをモニターして、軽度炎症をもたらす調節不全の特定の傾向（すなわち増加又は減少）を同定することが可能であることを示している。
【００６７】
持続性非炎症及び炎症の動物からのＦｉｇ．４〜６のデータは、いくつかの代謝物が、非炎症群ではどの時点においても安定した濃度レベルを有するが、炎症群では濃度レベルが増加することを示している。４つの代謝物、すなわちＰＣ（Ｏ−４２：０）、ＰＣ（４２：６）、ＰＣ（Ｏ−３８：６）及びアシルカルニチンＣ１８がこの挙動を示した。実際、３つのリン脂質（ＰＣ（Ｏ−４２：０）、ＰＣ（４２：６）、ＰＣ（Ｏ−３８：６）及び１つのアシルカルニチン（Ｃ１８）は炎症ラットでは時点６で濃度の増加を示したが、非炎症ラットでは時点１での濃度の中央値がほぼそのまま維持された。
【００６８】
加齢は軽度炎症と関連付けられる交絡因子であり得る。この場合、バイオマーカーは、非炎症及び炎症群のいずれにおいても両方の時点で異なる中央濃度レベルを示すはずである。２つの代謝物、すなわちＬＰＣ（１８：０）及びＴｒｐがこの挙動を示した。実際、非炎症群は、両方の時点でＬＰＣ（１８：０）の濃度の増加を示したが、Ｔｒｐでは逆であった。そのような傾向は炎症群でも確認された。
【００６９】
表２に示されるデータは、各時点でのラット群（非炎症、炎症）間の比較の有意性を示している。各群についての時点間の差異も示されている。いずれも、炎症の挙動を加齢から分離することを目的としたものである。
【００７０】
結論として、これらの結果は、表１に記載の代謝物が実際に加齢性軽度炎症のための早期バイオマーカーであることを明確に示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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