(57)【要約】【課題】モノクローナル抗体療法の開発における共通の問題は、ＦａｂおよびＦｃＲ結合にもかかわらず、十分な有効性がないことである。【解決手段】  本発明は、ストラドボディ（ｓｔｒａｄｏｂｏｄｙ）と称される生物学的に活性なタンパク質を伴う。本ストラドボディは、ストラドボディ多量体を作製する２つ以上のドメインを有する。本ストラドボディは、抗原結合能力およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する能力の両方を有し、疾患の治療および予防において有用である。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆａｂドメインと、１つ以上のＦｃドメインと、１つ以上の多量体化ドメインと、を含むストラドボディ（ｓｔｒａｄｏｂｏｄｙ）であって、前記１つ以上の多量体化ドメインが、前記ストラドボディを多量体化することが可能である、前記ストラドボディ。
【請求項２】
２つのＦｃドメインを含み、前記１つ以上の多量体化ドメインが、前記２つのＦｃドメインを分離する、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項３】
前記１つ以上の多量体化ドメインのうちの少なくとも１つは、前記Ｆｃ領域のカルボキシ末端に位置する、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項４】
前記１つ以上の多量体化ドメインが、独立して、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、およびＧＰＰ反復からなる群から選択される、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項５】
前記ストラドボディが、少なくとも１つのＩｇＧ２ヒンジドメインを含み、前記ＩｇＧ２ヒンジドメインのアミノ酸配列が、配列番号３に少なくとも８０％の相同であり、前記ＩｇＧ２ヒンジが、前記ストラドボディを多量体化することが可能である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項６】
前記ストラドボディが、少なくとも１つのイソロイシンジッパーを含み、前記少なくとも１つのイソロイシンジッパーのアミノ酸配列が、配列番号３２に少なくとも８０％相同であり、前記イソロイシンジッパーが、前記ストラドボディを多量体化することが可能である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項７】
前記ストラドボディが、２つの多量体化ドメインを含む、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項８】
前記２つの多量体化ドメインが、イソロイシンジッパー、およびＩｇＧ２ヒンジである、請求項７に記載のストラドボディ。
【請求項９】
前記２つの多量体化ドメインが、２つのＦｃドメインを分離する、請求項８に記載のストラドボディ。
【請求項１０】
前記２つの多量体化ドメインが、前記Ｆｃ領域のカルボキシ末端に位置する、請求項８に記載のストラドボディ。
【請求項１１】
前記ストラドボディが、３つの多量体化ドメインを含む、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１２】
前記ストラドボディが、４つの多量体化ドメインを含む、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのＦｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１４】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、およびＩｇＧ１ＣＨ３を含む、請求項１３に記載のストラドボディ。
【請求項１５】
前記１つ以上のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ２ヒンジを含む、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１６】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む、請求項１５に記載のストラドボディ。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのＩｇＧ１  Ｆｃドメインのアミノ酸配列が、配列番号２に少なくとも８０％相同である、請求項１３に記載のストラドボディ。
【請求項１８】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項１９】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２０】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２１】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２２】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）Ｇ４Ｓドメインと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２３】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｄ）Ｇ４Ｓドメインと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２４】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）Ｇ４Ｓドメインと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２５】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、
（ｄ）Ｇ４Ｓドメインと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２６】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＧＰＰドメインと、
（ｄ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２７】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＧＰＰドメインと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２８】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｄ）ＧＰＰドメインと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項２９】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）ＧＰＰドメインと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項３０】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）第１のＦｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、
（ｄ）ＧＰＰドメインと、
（ｅ）第２のＦｃドメインと、を含む、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項３１】
前記第１および第２のＦｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項１８〜３０のいずれか一項に記載のストラドボディ。
【請求項３２】
前記ストラドボディのアミノ酸配列が、配列番号３３に少なくとも８０％相同である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項３３】
前記ストラドボディのアミノ酸配列が、配列番号３５に少なくとも８０％相同である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項３４】
前記ストラドボディのアミノ酸配列が、配列番号３７に少なくとも８０％相同である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項３５】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項３６】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項３７】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項３８】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項３９】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）Ｇ４Ｓドメインと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４０】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）Ｇ４Ｓドメインと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４１】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｄ）ドメイン連結と、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４２】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ドメイン連結と、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４３】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｃ）Ｆｃドメインと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、
（ｅ）ドメイン連結と、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４４】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｃ）Ｆｃドメインと、
（ｄ）ドメイン連結と、
（ｅ）イソロイシンジッパーと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４５】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ＧＰＰドメインと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４６】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ＧＰＰドメインと、
（ｄ）ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４７】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ＩｇＧ２ヒンジと、
（ｄ）ＧＰＰドメインと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４８】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）ＧＰＰドメインと、
（ｄ）イソロイシンジッパーと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項４９】
前記ストラドボディが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、
（ａ）Ｆａｂドメインと、
（ｂ）Ｆｃドメインと、
（ｃ）イソロイシンジッパーと、
（ｄ）ＧＰＰドメインと、を含む、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項５０】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項３５〜４９のいずれか一項に記載のストラドボディ。
【請求項５１】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む、請求項５０に記載のストラドボディ。
【請求項５２】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ２ヒンジを含む、請求項３５〜４９のいずれか一項に記載のストラドボディ。
【請求項５３】
前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む、請求項５２に記載のストラドボディ。
【請求項５４】
前記Ｆａｂドメインが、ＥＧＦＲに特異的である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項５５】
前記Ｆａｂドメインのアミノ酸配列が、配列番号３１に少なくとも８０％相同である、請求項５４に記載のストラドボディ。
【請求項５６】
前記Ｆａｂドメインが、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項５７】
前記Ｆａｂドメインのアミノ酸配列が、配列番号３４に少なくとも８０％相同である、請求項５６に記載のストラドボディ。
【請求項５８】
前記Ｆａｂドメインが、ＣＤ２０に特異的である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項５９】
前記Ｆａｂドメインのアミノ酸配列が、配列番号３６に少なくとも８０％相同である、請求項５８に記載のストラドボディ。
【請求項６０】
前記２つ以上のＦｃドメインが、ＦｃγＲに結合することが可能である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項６１】
ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩＩＩａである、請求項６０に記載のストラドボディ。
【請求項６２】
対象における免疫応答を調節する方法であって、前記対象に有効量の請求項１に記載のストラドボディを投与することを含む、前記方法。
【請求項６３】
炎症性疾患、自己免疫疾患、感染症、または癌の治療を必要とする対象にそれを行う方法であって、前記対象に有効量の請求項１に記載のストラドボディを投与することを含む、前記方法。
【請求項６４】
前記対象が、ヒトである、請求項６２または６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ストラドボディが、前記対象に、静脈内投与、皮下投与、経口投与、経鼻投与、腹腔内投与、舌下投与、口腔内投与、経皮投与、皮下もしくは真皮下移植によって、または筋肉内投与される、請求項６２または６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記ストラドボディが、約０．５ｍｇ／Ｋｇ〜約５０ｍｇ／Ｋｇの用量で静脈内投与される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記対象が癌を有する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６８】
癌が、結腸直腸癌、頭頸部癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症、重鎖病、神経内分泌腫瘍、および神経鞘腫からなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記対象が、自己免疫または炎症性疾患を有し、前記自己免疫または炎症性疾患が、特発性血小板減少性紫斑病、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、多発性硬化症、視神経炎、川崎病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、心筋症、反応性関節炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、移植片対宿主病、および１型糖尿病からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項７０】
前記対象が、感染性疾患を有し、前記感染症が、カンジダ症、カンジダ性敗血症、アスペルギルス症、連鎖球菌性肺炎、連鎖球菌性皮膚および口腔咽頭の状態、グラム陰性敗血症、結核、単核球症、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルスに起因する呼吸器疾患、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、マラリア、住血吸虫症、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、バンコマイシン耐性腸球菌、カルバペネム耐性およびカルバペネマーゼ産生腸内細菌、マイコバクテリア疾患、ならびにトリパノソーマ症からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項７１】
前記ストラドボディが、１つ以上の追加の医薬製剤および／または治療薬の投与前、投与中、または投与後に投与される、請求項６２または６３に記載の方法。
【請求項７２】
前記ストラドボディが、２つ以上のＦｃドメインを分離する以外の位置に１つ以上の多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞毒性を示す、請求項２に記載のストラドボディ。
【請求項７３】
前記ストラドボディが、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域のカルボキシ末端以外の位置に１つ以上の多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞毒性を示す、請求項３に記載のストラドボディ。
【請求項７４】
前記ストラドボディが、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞死滅を示す、請求項７に記載のストラドボディ。
【請求項７５】
前記ストラドボディが、イソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジではない２つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞死滅を示す、請求項８に記載のストラドボディ。
【請求項７６】
前記細胞死滅が、ＡＤＣＣによって媒介される、請求項７２または７３に記載のストラドボディ。
【請求項７７】
前記細胞死滅が、ＣＤＣによって媒介される、請求項７２または７３に記載のストラドボディ。
【請求項７８】
前記細胞死滅が、ＤＣによって媒介される、請求項７２または７３に記載のストラドボディ。
【請求項７９】
Ｆａｂドメインと、２つ以上のＦｃドメインと、２つの多量体化ドメインと、を含むストラドボディであって、前記２つの多量体化ドメインが、２つ以上のＦｃドメインを分離し、前記ストラドボディが、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞死滅を示す、前記ストラドボディ。
【請求項８０】
２つ以上のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項７９に記載のストラドボディ。
【請求項８１】
Ｆａｂドメインと、１つ以上のＦｃドメインと、２つの多量体化ドメインと、を含むストラドボディであって、前記２つの多量体化ドメインが、Ｆｃ領域のカルボキシ端に位置し、前記ストラドボディが、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞死滅を示す、前記ストラドボディ。
【請求項８２】
１つ以上のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項８１に記載のストラドボディ。
【請求項８３】
２つの多量体化ドメインが、イソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジである、請求項７９〜８１に記載のストラドボディ。
【請求項８４】
前記ストラドボディが、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した細胞死滅を示す、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項８５】
前記細胞死滅が、ＡＤＣＣによって媒介される、請求項８４に記載のストラドボディ。
【請求項８６】
前記細胞死滅が、ＣＤＣによって媒介される、請求項８４に記載のストラドボディ。
【請求項８７】
前記細胞死滅が、ＤＣによって媒介される、請求項８４に記載のストラドボディ。
【請求項８８】
前記ストラドボディが、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した細胞増殖の阻害を示す、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項８９】
前記ストラドボディが、１つ以上の危険信号をさらに含む、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項９０】
前記危険信号が、ＣＤ４０−Ｌ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮα、細胞内ヌクレオチドＡＴＰもしくはＵＴＰ、長非メチル化ＣｐＧ配列、熱ショックタンパク質、反応性酸素中間体、血管作用性小腸ペプチド、メタロプロテアーゼ−９、ヘパラン硫酸の分解生成物、ヒアルロン酸の小さな分解生成物、ＬＤＬ由来リン脂質、ＬＯＸ−１、尿酸、高移動度グループボックス１、インフラマソーム、ＩＬ−１α、Ｓ１００タンパク質、肝細胞癌由来成長因子、ＩＬ−１α、高濃度のアデノシン５′−トリホスファターゼ、β−Ｄ−グルコピラノシルセラミド、ＩＬ−３３、金ナノ粒子等のナノ粒子、およびＦ−アクチンからなる群から選択される、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項９１】
請求項８９に記載のストラドボディを投与することを含む、請求項６２または６３に記載の方法。
【請求項９２】
治療前、治療中、または治療後に危険信号を含む追加のストラドボディを投与することをさらに含む、請求項６２または６３に記載の方法。
【請求項９３】
前記Ｆａｂドメインが、ＥＧＦＲに特異的である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項９４】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号３１に少なくとも８０％相同である、請求項９３に記載のストラドボディ。
【請求項９５】
前記Ｆａｂドメインが、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに特異的である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項９６】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号３４に少なくとも８０％相同である、請求項９５に記載のストラドボディ。
【請求項９７】
前記Ｆａｂドメインが、ＣＤ２０に特異的である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項９８】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号３６に少なくとも８０％相同である、請求項９７に記載のストラドボディ。
【請求項９９】
前記Ｆａｂドメインが、ＥＧＦＲに特異的である、請求項３５に記載のストラドボディ。
【請求項１００】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号３１に少なくとも８０％相同である、請求項９９に記載のストラドボディ。
【請求項１０１】
前記Ｆａｂドメインが、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに特異的である、請求項３５に記載のストラドボディ。
【請求項１０２】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号３４に少なくとも８０％相同である、請求項１０１に記載のストラドボディ。
【請求項１０３】
前記Ｆａｂドメインが、ＣＤ２０に特異的である、請求項３５に記載のストラドボディ。
【請求項１０４】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号３６に少なくとも８０％相同である、請求項１０３に記載のストラドボディ。
【請求項１０５】
配列番号３５に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１０６】
前記アミノ酸配列が、配列番号３５に少なくとも９５％相同である、請求項１０５に記載のストラドボディ。
【請求項１０７】
前記アミノ酸配列が、配列番号３５である、請求項１０６に記載のストラドボディ。
【請求項１０８】
配列番号３３に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１０９】
前記アミノ酸配列が、配列番号３３に少なくとも９５％相同である、請求項１０８に記載のストラドボディ。
【請求項１１０】
前記アミノ酸配列が、配列番号３３である、請求項１０９に記載のストラドボディ。
【請求項１１１】
配列番号３７に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１１２】
前記アミノ酸配列が、配列番号３７に少なくとも９５％相同である、請求項１１１に記載のストラドボディ。
【請求項１１３】
前記アミノ酸配列が、配列番号３７である、請求項１１２に記載のストラドボディ。
【請求項１１４】
配列番号６６に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１１５】
前記アミノ酸配列が、配列番号６６に少なくとも９５％相同である、請求項１１４に記載のストラドボディ。
【請求項１１６】
前記アミノ酸配列が、配列番号６６である、請求項１１５に記載のストラドボディ。
【請求項１１７】
配列番号９１に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１１８】
前記アミノ酸配列が、配列番号９１に少なくとも９５％相同である、請求項１１７に記載のストラドボディ。
【請求項１１９】
前記アミノ酸配列が、配列番号９１である、請求項１１８に記載のストラドボディ。
【請求項１２０】
配列番号７０に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１２１】
前記アミノ酸配列が、配列番号７０に少なくとも９５％相同である、請求項１２０に記載のストラドボディ。
【請求項１２２】
前記アミノ酸配列が、配列番号７０である、請求項１２１に記載のストラドボディ。
【請求項１２３】
配列番号７６に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１２４】
前記アミノ酸配列が、配列番号７６に少なくとも９５％相同である、請求項１２３に記載のストラドボディ。
【請求項１２５】
前記アミノ酸配列が、配列番号７６である、請求項１２４に記載のストラドボディ。
【請求項１２６】
配列番号８７に少なくとも８０％相同であるアミノ酸配列を有する、ストラドボディ。
【請求項１２７】
前記アミノ酸配列が、配列番号８７に少なくとも９５％相同である、請求項１２６に記載のストラドボディ。
【請求項１２８】
前記アミノ酸配列が、配列番号８７である、請求項１２７に記載のストラドボディ。
【請求項１２９】
前記Ｆａｂドメインが、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーに特異的である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１３０】
前記ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーが、ＴＮＦ、リンホトキシン（ＬＴ）、リンホトキシンβ（ＬＴβ）、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ９５、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンド、４−１ＢＢリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＮＣＥ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、Ｂｌｙｓ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲリガンド、ＥＤＡ−Ａ１、およびＥＤＡ−Ａ２からなる群から選択される、請求項１２９に記載のストラドボディ。
【請求項１３１】
前記ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーが、ＴＮＦである、請求項１３０に記載のストラドボディ。
【請求項１３２】
前記Ｆａｂドメインのアミノ酸配列が、配列番号６７に少なくとも８０％相同である、請求項１３１に記載のストラドボディ。
【請求項１３３】
前記Ｆａｂドメインが、ＴＮＦに特異的である、請求項１８に記載のストラドボディ。
【請求項１３４】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号６７に少なくとも８０％相同である、請求項１３３に記載のストラドボディ。
【請求項１３５】
前記Ｆａｂドメインが、ＴＮＦに特異的である、請求項３５に記載のストラドボディ。
【請求項１３６】
前記Ｆａｂのアミノ酸配列が、配列番号６７に少なくとも８０％相同である、請求項１３５に記載のストラドボディ。
【請求項１３７】
前記Ｆａｂドメインが、サイトカインに特異的である、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１３８】
前記サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−８、およびＩＬ−１７からなる群から選択される、請求項１３７に記載のストラドボディ。
【請求項１３９】
前記ストラドボディが、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した補体結合を示す、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１４０】
前記ストラドボディが、同一のＦａｂを共有するモノクローナル抗体と比較して、増強した補体結合を示す、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１４１】
補体結合のＥＣ５０値が、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、前記ストラドボディにおいて少なくとも１０倍低い、請求項１３９また１４０に記載のストラドボディ。
【請求項１４２】
補体結合のＥＣ５０値が、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、前記ストラドボディにおいて少なくとも２０倍低い、請求項１３９また１４０に記載のストラドボディ。
【請求項１４３】
前記ストラドボディが、細胞死滅を示し、前記細胞死滅の量が、前記Ｆａｂに応じて変動する、請求項１に記載のストラドボディ。
【請求項１４４】
前記細胞死滅が、ＡＤＣＣによって媒介される、請求項１４３に記載のストラドボディ。
【請求項１４５】
前記細胞死滅が、ＣＤＣによって媒介される、請求項１４３に記載のストラドボディ。
【請求項１４６】
前記細胞死滅が、ＤＣによって媒介される、請求項１４３に記載のストラドボディ。
【請求項１４７】
多量体化ストラドボディを含む組成物であって、前記ストラドボディが、請求項１８〜３０のいずれか一項に記載のストラドボディから選択される、前記組成物。
【請求項１４８】
少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つのストラドボティを含む、請求項１４７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］  本願は、２０１２年８月２０日に出願された米国仮出願第６１／６９１，０５７号、および２０１３年３月１４日に出願された米国仮出願第６１／７８５，１４４号に対して優先権を主張し、これらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
［電子的に提出されたテキストファイルの説明］  本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：ＧＬＩＫ＿００９＿０１ＵＳ＿３１０９７５＿２０４８＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日付：２０１３年３月１２日、ファイルサイズは３２９キロバイト）。  
【０００３】
本発明は、概して、免疫学、自己免疫、炎症、感染症、腫瘍免疫学の分野に関する。より具体的には、本発明は、免疫グロブリンＦｃドメインおよびＦａｂドメインを含む生物学的に活性な生物摸倣分子、そのような生物摸倣物を含む組成物、ならびにそのような生物摸倣物を作製し、使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）療法は、医薬上重要かつ成長している分野である。３０を超えるモノクローナル抗体が、種々の免疫学的疾患、感染症、および癌に関して、米国また欧州のいずれかにおいて承認されており、さらに数百が調査中である。しかしながら、モノクローナル抗体療法の開発における共通の問題は、ＦａｂおよびＦｃＲ結合にもかかわらず、十分な有効性がないことである。有効性を達成するために高用量が必要とされることが多いため、有害な副作用が、一般的に、治療用抗体と関連している。さらに、腫瘍および他の標的抗原の低いまたは変化した発現、ならびに抗体の標的または抗体結合の下流作用に影響を与える遺伝的変異は、抗体療法を無効にする可能性がある。一例として、モノクローナル抗体トラスツズマブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕの乳癌抗原に対して特異的に指向され、商品名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）として市販されているｍＡｂであり、乳癌の治療のために米国食品医薬品局によって承認されている。トラスツズマブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕが高度に発現される患者において有効であり得るが、乳癌患者の約９０％は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを高度に発現すると分類されない腫瘍を有する。別の例として、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して特異的に指向され、商品名Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）として市販されているｍＡｂであるセツキシマブは、結腸癌の治療のために米国食品医薬品局によって承認されている。セツキシマブは、ＥＧＦＲを遮断し、下流ＫＲＡＳタンパク質依存性腫瘍増殖経路を抑止する。臨床的観点から、セツキシマブは、腫瘍が野生型（ＷＴ）ＫＲＡＳを有する患者における全体的な応答速度ならびに無増悪生存期間を改善することができる。残念なことに、３０〜６０％の結腸癌患者は、コドン１２または１３ＫＲＡＳ変異を有する腫瘍を有し、最近の臨床試験は、変異したＫＲＡＳを有する患者がセツキシマブによる治療から恩恵を受けないことを示唆している（Ａｌｌｅｇｒａ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００９  Ａｐｒ  ２０；２７（１２）：２０９１−６に要約されている）。したがって、癌の治療において、ならびに自己免疫障害および炎症性疾患の治療において、新たな抗体様に基づく治療が必要とされている。
【０００５】
抗体による免疫細胞上、特にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のＦｃ受容体、特にＦｃγＲＩＩＩａ等の低親和性受容体の会合および凝集は、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）として知られるプロセスにおいて、標的腫瘍または細胞の活性化、脱顆粒、および溶解をもたらす。免疫系の標的とされる腫瘍細胞および他の細胞は、細胞毒性につながる、抗体が補体に結合する補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を通して、またはＮＫ細胞もしくは補体の不在下で、抗体の抗原への直接結合によって生じる直接細胞毒性（ＤＣ）を通して、あるいはアポトーシスの誘導または細胞成長もしくはプロセスの干渉等の他の機構によっても死滅させることができる。ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＤＣ、および腫瘍細胞または他の細胞を死滅させる他の機構を増大させる手段を特定し、それによってｍＡｂ療法の有効性を増加させることが、現在当該技術分野において必要である。特に、細胞死滅のための補体依存性経路が完全に機能する場合、ＣＤＣは、癌細胞および他の標的細胞を死滅させるための有効な方法であり得る。しかしながら、多くの細胞は、細胞膜修復機構、および補体経路を阻害するＣＤ５９等の調節タンパク質によりＣＤＣに耐性である。例えば、Ｂ細胞リンパ腫および白血病細胞上のＣＤ２０の高い発現レベルにもかかわらず、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する多くの患者は、少なくとも部分的に補体阻害の機構により、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるリツキシマブによる治療に応答しないか、または耐性になる（Ｈａｒｊｕｎｐａａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００  ５１；６３４−６４１）。したがって、ＣＤＣを増大させることができる分子が特に必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、免疫グロブリンＦｃドメイン、Ｆａｂドメイン、および多量体化ドメインを含む生物学的に活性な生物摸倣分子、そのような生物摸倣物を含む組成物、ならびにそのような生物摸倣物を作製し、使用する方法に関する。これらの生物模倣物は、モノクローナル抗体が使用されるか、または既に臨床使用中であり得る癌、炎症、自己免疫、および感染症の状態を治療するための幅広い用途を有する。本発明の生物模倣物は、Ｆａｂが本発明の生物模倣物に含まれるＦａｂと同一であるｍＡｂと比較して、より強力な抗体媒介細胞毒性、補体媒介細胞毒性、および補体ｃ１ｑ結合であるという利点を有する。本発明の生物摸倣物はまた、Ｆａｂが同じ抗原に対して特異的であるｍＡｂと比較して、より強力な補体依存性細胞毒性および直接細胞毒性であるという利点も有する。
【０００７】
国際公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号は、好ましくは、ストラドマー（ｓｔｒａｄｏｍｅｒ）との関連で、癌、自己免疫疾患、および他の炎症状態、ならびに感染症を含む病的状態を治療するために１つ以上のＦａｂドメインが結合される、２つ以上のＦｃドメインを含む生物摸倣分子の使用を開示する。国際公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。国際公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号に開示されるＦａｂを含む分子は、「ストラドボディ（ｓｔｒａｄｏｂｏｄｙ）」と称され、モノクローナル抗体のＦａｂ部分の抗原結合性質、およびストラドマーのＦｃ受容体結合性質を保有する。したがって、これらのストラドボディは、エフェクター細胞上の複数のＦｃγ受容体を同時に結合、架橋、および活性化し、Ｆｃ変異誘発、脱フコシル化、または個々のｍＡｂと個々のＦｃγ受容体との間の親和性を改善する他の方法を介して最適化される場合でも、個々のＦｃγ受容体に結合する個々のｍＡｂまたは免疫グロブリンＦｃ骨格によって達成することができない結合力を引き起こす。エフェクター細胞上のＦｃγ受容体の多価結合は、低エピトープ発現の環境において特に重要である。低エピトープ発現は、Ｆｃの十分な密度、つまり、エフェクター細胞上の低親和性Ｆｃγ受容体の下流活性化を引き起こすためにエフェクター細胞上に十分に近接するＦｃγ受容体結合事象をもたらすには分離し過ぎているｍＡｂＦａｂ結合事象につながる。しかしながら、本明細書に開示される、ＦａｂおよびＦｃドメインに加えて１つ以上の多量体化ドメインを含むことにより、ストラドボディのＦｃγＲ結合活性を増強し、結合力の解離遅延特性、ならびに抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、補体媒介細胞毒性（ＣＤＣ）直接細胞毒性（ＤＣ）、強い補体ｃ１ｑ結合、および／または他の細胞毒性機構をもたらす。特に、多量体化ドメインは、２つのＦｃドメイン間、または本明細書に開示されるストラドボディのＦｃ領域のカルボキシ末端に位置する。意外にも、２つの特定の多量体化ドメインであるイソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジを含むストラドボディは、特に強い多量体化、標的細胞に対する高い細胞毒性、および高ｃ１ｑ結合をもたらした。
【０００８】
Ｎａｇａｓｈｉｍａら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１１１（４）：３９１−６（２０１１）およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４５（１０）：２７５２−６３（２００８））は、国際公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号によって先駆けて着手された、それらが由来する、即ち、同一のＦａｂ領域を含む親モノクローナル抗体に対して増強されたＡＤＣＣをもたらしたＦｃドメインのタンデム反復を有する連続ストラドボディを説明した。しかしながら、本発明のストラドボディは、多量体化ドメイン（複数可）により、ＦｃγＲを同時に結合することができるＦｃドメインの数を同時に増強し、最終的に、Ｎａｇａｓｈｉｍａおよび別の箇所に記載されるものなどの非多量体化化合物と比較した場合、はるかに優れた結合および細胞毒性につながるストラドボディホモ二量体の多量体化につながる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関する。さらなる実施形態では、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができる。一実施形態では、１つ以上の多量体化ドメインのうちの少なくとも１つは、２つ以上のＦｃドメインを分離する。別の実施形態では、１つ以上の多量体化ドメインのうちの少なくとも１つは、Ｆｃ領域のカルボキシ末端に位置する。好ましい実施形態では、１つ以上のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができる。別の実施形態では、多量体化ドメインは、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、およびＧＰＰ反復からなる群から独立して選択される。別の実施形態では、ストラドボディは、２つの多量体化ドメインを含む。さらなる実施形態では、２つの多量体化ドメインは、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、およびＧＰＰ反復からなる群から独立して選択される。尚さらなる実施形態では、２つの多量体化ドメインは、イソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジである。尚さらなる実施形態では、２つの多量体化ドメインは、両方ともＩｇＧ２ヒンジである。別の実施形態では、２つの多量体化ドメインは、両方ともイソロイシンジッパーである。別の実施形態では、ストラドボディは、３つの多量体化ドメインを含む。尚別の実施形態では、ストラドボディは、４つ以上の多量体化ドメインを含む。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、１つ以上の多量体化ドメインのうちの少なくとも１つは、イソロイシンジッパーである。さらなる実施形態では、少なくとも１つのイソロイシンジッパーは、配列番号３２により、ストラドボディを多量体化することができる。別の実施形態では、１つ以上の多量体化ドメインのうちの少なくとも１つは、ＩｇＧ２ヒンジドメインである。さらなる実施形態では、少なくとも１つのＩｇＧ２ヒンジドメインは、配列番号３により、ストラドボディを多量体化することができる。別の実施形態では、１つ以上の多量体化ドメインのうちの少なくとも１つは、ＧＰＰドメインである。さらなる実施形態では、少なくとも１つのＧＰＰドメインは、配列番号２６によるアミノ酸配列を含み、ストラドボディを多量体化することができる。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができる。さらなる実施形態では、少なくとも１つのＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインであり、少なくとも１つのＦｃドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ２およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１  ＣＨ２、およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む。別の実施形態では、ストラドボディは、２つ以上のＦｃドメインを含む。さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインの各々は、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインの各々は、ＩｇＧ３  Ｆｃドメインである。さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインの各々は、ＩｇＧ２  Ｆｃドメインである。さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインの各々は、ＩｇＧ４  Ｆｃドメインである。さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン、およびＩｇＧ２  Ｆｃドメイン、ＩｇＧ３  ＦｃドメインまたはＩｇＧ４  Ｆｃドメインから構成される。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、第１の多量体化ドメイン、第２の多量体化ドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインのうちの少なくとも１つは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃドメインを含む。特に好ましい実施形態の１つでは、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃドメインは一緒に、配列番号６９によるアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、第２のＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、第２のイソロイシンジッパー、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、Ｇ４Ｓドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、Ｇ４Ｓドメイン、第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、Ｇ４Ｓドメイン、イソロイシンジッパー、第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、Ｇ４Ｓドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＧＰＰドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＧＰＰドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、ＧＰＰドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形���では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、ＧＰＰドメイン、イソロイシンジッパー、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、ＧＰＰドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。当業者は、本明細書に記載される多量体化ドメインの代わりに他の多量体化ドメインが使用され得ることを認識するだろう。
【００１４】
さらなる実施形態では、第１および第２のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。別の実施形態では、少なくとも１つのＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ２およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む。さらなる実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ヒンジをさらに含む。
【００１５】
一実施形態では、本発明は、多量体化ストラドボディを含む組成物に関し、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、第１の多量体化ドメイン、第２の多量体化ドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。
【００１６】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、単一のＦｃドメイン、第１の多量体化ドメイン、および第２の多量体化ドメインを含む。さらなる実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、単一のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、およびＩｇＧ２ヒンジを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、およびイソロイシンジッパーを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、およびＩｇＧ２ヒンジを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＩｇＧ２ヒンジを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、およびイソロイシンジッパーを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、イソロイシンジッパー、および第２のイソロイシンジッパーを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、Ｇ４Ｓドメイン、およびＩｇＧ２ヒンジを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、およびＧ４Ｓドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、Ｇ４Ｓドメイン、およびイソロイシンジッパーを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、イソロイシンジッパー、およびＧ４Ｓドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ドメイン連結部、およびＩｇＧ２ヒンジを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ドメイン連結部、およびイソロイシンジッパーを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、およびドメイン連結部を含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、イソロイシンジッパー、およびドメイン連結部を含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、およびＧＰＰドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＧＰＰドメイン、およびＩｇＧ２ヒンジを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ヒンジ、およびＧＰＰドメインを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、ＧＰＰドメイン、およびイソロイシンジッパーを含む。別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、イソロイシンジッパー、およびＧＰＰドメインを含む。当業者は、本明細書に記載される多量体化ドメインの代わりに他の多量体化ドメインが使用され得ることを認識するだろう。
【００１７】
さらなる実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。さらなる実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ２およびＩｇＧ１  ＣＨ３を含む。尚さらなる実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ヒンジをさらに含む。
【００１８】
一実施形態では、本発明は、多量体化ストラドボディを含む組成物に関し、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、Ｆｃドメイン、第１の多量体化ドメイン、および第２の多量体化ドメインを含む。
【００１９】
別の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、２つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含む。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、１つ以上の多量体化ドメイン、および第２のＦｃドメインを含む。別の実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含む。さらなる実施形態では、ストラドボディは、Ｆｃ領域のＣ末端に１つ以上の多量体化ドメインをさらに含む。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインのうちの１つ以上は、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００２１】
一実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、Ｆａｂドメインは、ＥＧＦＲに特異的である。一実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３１に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３１に少なくとも９０％相同である。尚さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３１に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３１に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３１である。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３３に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３３に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３３に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３３に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号３３に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号３３である。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７０に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７０に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７０に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７０に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号７０に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号７０である。
【００２４】
別の実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、Ｆａｂドメインは、ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗原に特異的である。一実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３４に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３４に少なくとも９０％相同である。尚さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３４に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３４に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３４である。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００２５】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３５に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３５に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３５に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３５に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号３５に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号３５である。当業者は、ストラドボディ、特に多量体化ストラドボディが任意の腫瘍抗原に対して指向されるＦａｂを用いて容易に産生され得ることを理解するだろう。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号９１に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号９１に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号９１に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号９１に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号９１に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号９１である。
【００２７】
別の実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、Ｆａｂドメインは、ＣＤ２０に特異的である。一実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３６に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３６に少なくとも９０％相同である。尚さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３６に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３６に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号３６である。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００２８】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３７に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３７に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３７に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３７に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号３７に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号３７である。
【００２９】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７６に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７６に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７６に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号７６に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号７６に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号７６である。
【００３０】
一実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、Ｆａｂドメインは、ＴＮＦスーパーファミリーメンバーに特異的である。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーとしては、これらに限定されないが、ＴＮＦ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、リンホトキシン（ＬＴ）、リンホトキシンβ（ＬＴβ）、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ９５／Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ７０）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ１３７／４−１ＢＢリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫ／アポ−３、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ／Ｂｌｙｓ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ、ＧＩＴＲリガンド、ＥＤＡ−Ａ１、およびＥＤＡ−Ａ２が挙げられる。一実施形態では、ストラドボディは、ＴＮＦに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗ＴＮＦストラドボディ、例えば、ストラドボディＧＢ７５４２）。別の実施形態では、ストラドボディは、Ｂｌｙｓに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗Ｂｌｙｓストラドボディ）。別の実施形態では、ストラドボディは、ＴＲＡＩＬに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗ＴＲＡＩＬストラドボディ）。別の実施形態では、ストラドボディは、ＯＸ４０Ｌに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗ＯＸ４０Ｌストラドボディ）。別の実施形態では、ストラドボディは、４−１ＢＢに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗４−１ＢＢストラドボディ）。別の実施形態では、ストラドボディは、ＡＰＲＩＬに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗ＡＰＲＩＬストラドボディ）。別の実施形態では、ストラドボディは、ＴＲＡＮＣＥに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗ＴＲＡＮＣＥストラドボディ）。別の実施形態では、ストラドボディは、ＬＴβに特異的であるＦａｂドメインを含み（即ち、抗ＬＴβストラドボディ）、別の実施形態では、ストラドボディは、ＣＤ４０Ｌに特異的であるＦａｂドメインを含む（即ち、抗ＣＤ４０Ｌストラドボディ）。当業者は、ストラドボディ、特に多量体化ストラドボディが任意の免疫細胞表面受容体に対して指向されるＦａｂを用いて容易に産生され得ることを理解するだろう。
【００３１】
別の実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、Ｆａｂドメインは、ＴＮＦに特異的である。一実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号６７に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号６７に少なくとも９０％相同である。尚さらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号６７に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号６７に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、Ｆａｂドメインのアミノ酸配列は、配列番号６７である。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインである。
【００３２】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号６６に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号６６に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号６６に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号６６に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号６６に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号６６である。当業者は、ストラドボディ、特に多量体化ストラドボディが任意のサイトカインまたは可溶性受容体に対して指向されるＦａｂを用いて容易に産生され得ることを理解するだろう。
【００３３】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号８７に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号８７に少なくとも８５％相同である。尚さらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号８７に少なくとも９０％相同である。またさらなる実施形態では、ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号８７に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号８７に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、アミノ酸配列は、配列番号８７である。
【００３４】
一実施形態では、本発明のストラドボディは、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、またはＩＬ−２３に特異的であるＦａｂドメインを含む。一実施形態では、本発明のストラドボディは、サイトカインに特異的なＦａｂドメインを含み、ストラドボディは、炎症または自己免疫疾患の治療または予防に有用である。例えば、一実施形態では、ストラドボディは、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−８、または抗ＩＬ−１７ストラドボディである。当業者は、ストラドボディ、特に多量体化ストラドボディが任意のインターロイキンまたはインターフェロンに対して指向されるＦａｂを用いて容易に産生され得ることを理解するだろう。
【００３５】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、１つ以上の感染症抗原に対して指向されるＦａｂを含む。当業者は、ストラドボディ、特に多量体化ストラドボディが任意の感染症抗原に対して指向されるＦａｂを用いて容易に産生され得ることを理解するだろう。当業者は、ストラドボディ、特に多量体化ストラドボディが感染症の治療もしくは予防のための臨床使用に使用され得る、または既に臨床使用中であるモノクローナル抗体に由来するＦａｂを用いて容易に産生され得ることをさらに理解するだろう。
【００３６】
例えば、多量体化ストラドボディは、ウイルスの中和、細菌もしくは細菌毒素の中和、ウイルスの宿主細胞への侵入の阻止、病原菌によって誘発される免疫阻害機構の阻止、病原菌によって誘発される免疫病原性応答の阻止、または感染症を治療もしくは予防する他の手段のために臨床使用に使用され得る、または既に臨床使用中であるモノクローナル抗体に由来するＦａｂを用いて産生され得る。感染症の治療もしくは予防のために臨床使用中の、または臨床使用の開発中である例示的なモノクローナル抗体としては、これらに限定されないが、パリビズマブおよびモタビズマブ（これらの両方は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）糖タンパク質Ｆに特異的である）；イバリズマブ（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の宿主細胞への侵入を阻止するための抗ＣＤ４抗体）；プロ１４０およびＣＣＲ５ｍＡｂ００４（宿主細胞へのＨＩＶの侵入を阻止するための抗ＣＣＲ５抗体）；Ｆ１０５（ウイルス侵入にも使用されるＨＩＶの外被糖タンパク質ｇｐ１２０を中和するための抗ｇｐ１２０抗体）；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）外被糖タンパク質Ｈに特異的であるセビルマブ；バビツキシマブ（Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を中和するために使用される抗ホスファチジルセリン抗体）；ニボルマブ（ＭＤＸ１１０６／ＢＭＳ９３６５５８／ＯＮＯ−４５３８としても知られる）およびピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ−０１１としても知られる）（これらの両方は、免疫細胞上の免疫阻害分子ＰＤ−１に特異的であり、ＨＣＶ感染において免疫調節抗体として使用される）；ＭＢＬ−ＨＣＶ１（ＨＣＶ構造タンパク質Ｅ２に特異的なＨＣＶ中和抗体）；フォラビルマブ（糖タンパク質Ｇに特異的な狂犬病ウイルス中和抗体）；ＥＴＩ−２０４（アンチム）、ラキシバクマブ、およびＡＶＰ  ２１Ｄ９（これらの各々が炭疽菌保護抗原に特異的な炭疽菌毒素中和抗体）；ブドウ球菌および他の細菌感染、特に多剤耐性感染に有用であるＳＡＲ２７９３５６および他の抗ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）抗体；抗リポテイコ酸に特異的であり、ブドウ球菌感染の予防に使用されるパギバキシマブ；凝集因子Ａに特異的であり、ブドウ球菌感染に有用でもあるテフィバズマブ（ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）；ウルトキサズマブ（大腸菌感染のための抗志賀様毒素２Ｂ抗体）；大腸菌ＳＴＥＣ毒素Ｓｔｘ１およびＳｔｘ２の中和のための２つのｍＡｂであるｃａＳｔｘ１およびｃａＳｔｘ２のカクテルであるシガマブ（ｓｈｉｇａｍａｂｓ）；ＭＫ３４１５Ａとして知られる２つの抗体のカクテルとして一緒に投与され得るアクトクスマブ（ａｃｔｏｘｕｍａｂ）（抗クロストリジウム・ディフィシルエンテロトキシンＡ）およびベズロトクスマブ（ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）（抗Ｃ．ディフィシルエンテロトキシンＢ）；パノバクマブ（緑膿菌感染に使用される抗ＬＰＳ抗体）；ＫＢ００１（緑膿菌感染に使用される抗３型分泌系抗体）；および１８Ｂ７（クリプトコッカス（Ｃｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）・ネオフォルマンス感染のための抗莢膜多糖抗体）が挙げられる。
【００３７】
一実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含むストラドボディに関し、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができ、２つ以上のＦｃドメインは、ＦｃγＲに結合することができる。さらなる実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩＩＩａである。さらなる実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩａは、エフェクター細胞上にある。またさらなる実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩａは、ＮＫ細胞上にある。別の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩａは、マクロファージ上にある。別の実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩＩｂである。さらなる実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂは、Ｂ細胞上にある。別の実施形態では、ＦｃγＲＩＩｂは、樹状細胞上にある。
【００３８】
さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインのアミノ酸配列は、配列番号２に少なくとも８０％相同である。さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインのアミノ酸配列は、配列番号２に少なくとも９０％相同である。尚さらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインのアミノ酸配列は、配列番号２に少なくとも９５％相同である。またさらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインのアミノ酸配列は、配列番号２に少なくとも９９％相同である。またさらなる実施形態では、２つ以上のＦｃドメインのアミノ酸配列は、配列番号２である。
【００３９】
一態様では、本発明は、対象における免疫応答を調節する方法に関し、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含む有効量のストラドボディを対象に投与することを含み、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができる。
【００４０】
一実施形態では、本発明は、炎症疾患もしくは自己免疫疾患、感染症、または癌の治療を必要とする対象にそれを行う方法に関し、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含む有効量のストラドボディを対象に投与することを含み、１つ以上の多量体化ドメインは、前記ストラドボディを多量体化することができる。さらなる実施形態では、対象は癌を有する。尚さらなる実施形態では、癌は、結腸直腸癌、頭頸部癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症、重鎖病、神経内分泌腫瘍、および神経鞘腫からなる群から選択される。
【００４１】
別の実施形態では、対象は、自己免疫疾患または炎症性疾患を有する。さらなる実施形態では、自己免疫疾患または炎症性疾患は、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球形成不全、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫、後天性フォンビルブランド病、意義不明の多発性骨髄腫およびモノクローナル免疫グロブリン血症、アルツハイマー病、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球癆、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫媒介好中球減少症、血小板輸血不応状態、  新生児の輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病、エバンス症候群、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗−／ＧＭＩに関連した下位運動神経症候群、脱髄、多発性硬化症、視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型に関連した脊髄症、自己免疫糖尿病性ニューロパチー、急性特発性自律神経障害ニューロパチー、川崎病、関節リウマチ、フェルティ症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、自発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自発性流産、全身性エリテマトーデス、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、ぶどう膜炎、中毒性表皮壊死融解症、壊疽、肉芽腫、自己免疫性皮膚水疱症（尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および落葉状天疱瘡を含む）、白斑症、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、全身性硬化症（びまん性および限局型皮膚全身性硬化症を含む）、アトピー性皮膚炎（特にステロイド依存）、封入体筋炎、壊死性筋膜炎、炎症性筋疾患、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）筋症、傍腫瘍性壊死性筋症、Ｘ連鎖性空胞性筋症、ペナシラミン誘導多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、心筋症、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、特発性肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ウィップル病、潰瘍性大腸炎、硬化性胆管炎、移植片対宿主病、抗体媒介移植片拒絶反応、骨髄移植後拒絶反応、感染症後炎症、リンパ腫、白血病、異常増殖、喘息、抗β細胞抗体を伴う１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎（ｍｉｃｒｏｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｓ）、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発動脈炎、および多臓器不全からなる群から選択される。
【００４２】
本発明はさらに、これらに限定されないが、細菌、菌類、寄生虫、およびウイルス因子によって引き起こされるものを含む感染症の治療に有効な方法および組成物を含む。そのような感染性因子の例としては、以下のものが含まれる：ブドウ球菌、連鎖球菌科、ナイセリア科（ｎｅｉｓｓｅｒｉａａｃｅａｅ）、球菌、腸内細菌科、シュードモナス科、ビブリオ科、カンピロバクター、パスツレラ科、ボルデテラ、フランシセラ、ブルセラ、レジオネラ科、バクテロイデス科、クロストリジウム、コリネバクテリウム、プロピオニバクテリウム、グラム陽性桿菌、炭疽菌、放線菌、ノカルジア、マイコバクテリウム、トレポネーマ、ボレリア、レプトスピラ、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、リケッチア、クラミジア、他のグラム陽性桿菌、他のグラム陰性桿菌、全身性真菌症、他の日和見真菌症、原生動物、線虫、吸虫、条虫、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルスおよびエプスタイン・バーウイルス、および帯状疱疹ウイルスを含む）、ポックスウイルス、パポバウイルス、肝炎ウイルス、パピローマウイルス、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、およびインフルエンザＣを含む）、パラミクソウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、レオウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、ブニヤウイルス、ラブドウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ヒト免疫不全ウイルスおよびレトロウイルス。例示的な感染症は、カンジダ症、カンジダ性敗血症、アスペルギルス症、連鎖球菌性肺炎、連鎖球菌性皮膚および口腔咽頭の状態、グラム陰性敗血症、結核、単核球症、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルスに起因する呼吸器疾患、マラリア、住血吸虫症、およびトリパノソーマ症を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
さらなる実施形態では、ストラドボディは、静脈内投与、皮下投与、経口投与、経鼻投与、腹腔内投与、舌下投与、口腔内投与、経皮投与、皮下もしくは真皮下移植によって、十二指腸内投与、または筋肉内投与される。一実施形態では、ストラドボディは、静脈内投与される。本発明のストラドボディの増強した有効性のため、いくつかの実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、低用量で静脈内投与され得る。一実施形態では、ストラドボディは、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶの用量で静脈内投与される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約１００ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。またさらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．５ｍｇ／Ｋｇ〜約５０ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約２５ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約５ｍｇ／Ｋｇ〜約１５ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。一実施形態では、ストラドボディは、皮下投与される。本発明のストラドボディの増強した有効性のため、いくつかの実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、低用量で皮下投与され得る。一実施形態では、ストラドボディは、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜約１０００ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱの用量で皮下投与される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．２ｍｇ／Ｋｇ〜約１５０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。またさらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．５ｍｇ／Ｋｇ〜約８０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約２ｍｇ／Ｋｇ〜約５０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約５ｍｇ／Ｋｇ〜約３０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、モノクローナル抗体の前、それと同時に、またはその後に投与される。尚さらなる実施形態では、モノクローナル抗体の前、それと同時に、またはその後に投与されるストラドボディは、モノクローナル抗体と同じ抗原に対して指向されるＦａｂを有する。尚さらなる実施形態では、モノクローナル抗体の前、それと同時に、またはその後に投与されるストラドボディは、モノクローナル抗体とは異なる抗原に対して指向されるＦａｂを有する。
【００４４】
さらなる実施形態では、ストラドボディは、１つ以上の追加の医薬製剤および／または治療薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。さらなる実施形態では、追加の薬学的に活性な薬剤は、ステロイド；モノクローナル抗体、融合タンパク質、または抗サイトカイン等の生物学的抗自己免疫薬；非生物学的抗自己免疫薬；免疫抑制剤；抗生物質；および抗ウイルス剤；サイトカイン；またはさもなければ免疫調節因子として作用することが可能な薬剤を含む。尚さらなる実施形態では、ステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、コルチゾン、デキサメタゾン、モメタゾン（ｍｏｍｅｔｅｓｏｎｅ）、テストステロン、エストロゲン、オキサンドロロン、フルチカゾン、ブデソニド、ベクラメタゾン、アルブテロール、またはレバルブテロールである。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、化学療法剤の投与前、投与中、または投与後に投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディおよび追加の治療薬は、一緒に投与される場合、治療上の相乗効果を示す。一実施形態では、ストラドボディは、追加の治療薬の投与前に投与される。別の実施形態では、ストラドボディは、追加の治療薬の投与と同時に投与される。尚別の実施形態では、ストラドボディは、追加の治療薬の投与後に投与される。一実施形態では、ストラドボディは、危険信号の投与前に投与される。別の実施形態では、ストラドボディは、危険信号の投与と同時に投与される。尚別の実施形態では、ストラドボディは、危険信号の投与後に投与される。
【００４５】
別の実施形態では、ストラドボディは、種特異的またはキメラストラドボディ分子を用いて、ヒト、ヒト以外の霊長類（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル）、魚類、および爬虫類を治療するために投与される。さらに別の実施形態において、ヒトは、成人または子供である。尚別の実施形態では、ストラドボディは、自己免疫疾患を予防するために投与される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、ペットおよび家畜において、ワクチン関連自己免疫状態を予防するために投与される。
【００４６】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した細胞死滅を示す。一実施形態では、増強した細胞死滅は、ＡＤＣＣによって媒介される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも５倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも１０倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２０倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、増強した細胞死滅は、ＣＤＣによって媒介される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも５倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも１０倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２０倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、増強した細胞死滅は、ＤＣによって媒介される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２倍高いＤＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも５倍高いＤＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも１０倍高いＤＣを示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２０倍高いＤＣを示す。
【００４７】
一実施形態では、ストラドボディは、２つ以上の多量体化ドメインを含有し、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞死滅を示す。一実施形態では、細胞死滅は、ＡＤＣＣによって媒介される。さらなる実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも２倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも５倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも１０倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも２０倍高いＡＤＣＣを示す。別の実施形態では、増強した細胞死滅は、ＣＤＣによって媒介される。さらなる実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも２倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも５倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも１０倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも２０倍高いＣＤＣを示す。別の実施形態では、増強した細胞死滅は、ＤＣによって媒介される。さらなる実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも２倍高いＤＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも５倍高いＤＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも１０倍高いＤＣを示す。別の実施形態では、２つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、少なくとも２０倍高いＤＣを示す。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した細胞増殖の阻害を示す。一実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、細胞増殖を少なくとも１０％多く阻害する。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、細胞増殖を少なくとも２０％多く阻害する。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、細胞増殖を少なくとも５０％多く阻害する。別の実施形態では、本発明は、２つ以上の多量体化ドメインを含有するストラドボディに関し、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、増強した細胞増殖の阻害を示す。一実施形態では、ストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、細胞増殖を少なくとも１０％多く阻害する。別の実施形態では、ストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、細胞増殖を少なくとも２０％多く阻害する。別の実施形態では、ストラドボディは、１つの多量体化ドメインを含有するストラドボディと比較して、細胞増殖を少なくとも５０％多く阻害する。
【００４９】
一実施形態では、本発明は、ストラドボディに関し、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した補体結合を示す。さらなる実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、増強した補体結合を示す。一実施形態では、増強した補体結合は、Ｃ１ｑに結合する。一実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２倍高い増強した補体結合を示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも５倍高い増強した補体結合を示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも１０倍高い増強した補体結合を示す。別の実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２０倍高い増強した補体結合を示す。一実施形態では、増強した補体結合は、ＥＣ５０値によって測定される。一実施形態では、補体結合のＥＣ５０値は、ストラドボディに関して、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも５倍低い。別の実施形態では、補体結合のＥＣ５０値は、ストラドボディに関して、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも１０倍低い。さらなる実施形態では、補体結合のＥＣ５０値は、ストラドボディに関して、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、少なくとも２０倍低い。一実施形態では、多量体化ストラドボディは、同じ抗原に特異的な非多量体化ストラドボディに対して、増加した補体結合を示す。別の実施形態では、多量体化ストラドボディは、補体結合に関して、同じ抗原に特異的な非多量体化ストラドボディに対して、低いＥＣ５０値を示す。さらなる実施形態では、多量体化ストラドボディのＥＣ５０値は、多量体化ストラドボディに関して、非多量体化ストラドボディと比較して、少なくとも２倍低い。さらなる実施形態では、多量体化ストラドボディのＥＣ５０値は、多量体化ストラドボディに関して、非多量体化ストラドボディと比較して、少なくとも５倍低い。
【００５０】
一実施形態では、ストラドボディによって示される補体結合のレベルは、Ｆａｂにより変動する。よって、一実施形態では、同一の多量体化ドメインおよび同一のＦｃ領域を有するが、異なるＦａｂを有する２つのストラドボディは、異なるレベルの補体結合を示す。一実施形態では、抗ＣＤ２０Ｆａｂを有する多量体化ストラドボディは、抗ＣＤ２０Ｆａｂとして同一の多量体化ドメインおよび同一のＦｃ領域を有するが、抗ＴＮＦまたは抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｆａｂを有する多量体化ストラドボディと比較して、劇的に高い補体結合を示す。
【００５１】
一実施形態では、本発明は、多量体化ストラドボディを含む組成物に関する。さらなる実施形態では、組成物は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０以上のストラドボディを含む。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】多量体化連続ストラドボディおよび多量体化Ｃ末端ストラドボディならびにストラドボディを構成する構成ブロックの概略図である。
【図２】連続ストラドボディの一般的な構造の概略図である。
【図３】示される多量体化または連結ドメインのうちの１つ以上を有する構築物を図示するいくつかの連続ストラドボディの構造の概略図である。
【図４】連続ストラドボディ構築物の図解である。
【図５】示される多量体化ドメインのうちの１つ以上を有する構築物を図示するいくつかの多量体化Ｃ末端ストラドボディの構造の概略図である。
【図６】多量体化Ｃ末端ストラドボディ構築物の図解である。
【図７】イソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジによって分離された２つのＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含む本発明の好ましいストラドボディの構造の概略図である。
【図８】未改変抗体ＧＢ２５００と比較した、示されるＣ末端多量体化ストラドボディの多量体の形成を示す非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。
【図９】未改変抗体ＧＢ２５００と比較した、示される連続ストラドボディの多量体の形成を示す非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。
【図１０】エフェクターに対する標的細胞比の範囲の標的細胞の死滅パーセントにより測定される、未改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体ＧＢ２５００と比較した、示されるストラドボディのＡＤＣＣを示す。
【図１１】ストラドボディ濃度の範囲の標的細胞の死滅パーセントにより測定される、未改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体ＧＢ２５００と比較した、示されるストラドボディのＡＤＣＣ用量応答を示す。
【図１２】各示されるストラドボディまたは未改変抗体ＧＢ２５００のＦｃγＲＩＩＩａへの結合およびそれからの解離を示す代表的なプラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）データを示す。
【図１３】試験されたストラドボディの全てまたは未改変抗体ＧＢ２５００のＦｃγＲＩＩＩａ結合データを示す。
【図１４】示されるストラドボディのＢｉａｃｏｒｅ結合（ＲＵ）とＡＤＣＣ活性との間の相関関係を示す。ＡＤＣＣ活性は、各ストラドボディのＧＢ２５００に対する倍率差の平均として表される。
【図１５】Ｍｏｎｏ  Ｑカラム上のイオン交換クロマトグラフィーによって構築されたストラドボディの精製結果を示す。列ＳＢは、未分画ストラドボディである；溶出クロマトグラム上のピーク１、２、３（右側のパネル）は、非変性ゲルによって分析された（左側のパネル）。
【図１６】未改変抗体ＧＢ２５００と比較した、示される連続ストラドボディの多量体の形成を示す非還元（上のパネル）および還元（下のパネル）ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【図１７】親抗体ＧＢ２５００または示される連続ストラドボディのＦｃγＲＩＩＩａへの結合を示す。ＧＢ２５００（ＨＥＫまたｈＣＨＯ細胞中で成長させた）は、３３３３〜２０８ｎＭの範囲の濃度で試験された。連続ストラドボディＧＢ２５２４、ＧＢ２５３８、ＧＢ２５４０、ＧＢ２５４２、ＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５は、２００〜１２．５ｎＭの範囲の濃度で試験された。
【図１８】ストラドボディまたはそれらの対応するモノクローナル抗体で処置されたヒトＰＢＭＣ−ＳＣＩＤ（ｈｕ−ＰＢＭＣ  ＳＣＩＤ）マウスを伴う研究の実験的なフローチャートの概略図である。
【図１９】ＰＢＳ、ＧＢ４５００、ＧＢ４５６３、またはＧＢ４５４２で処置したｈｕ−ＰＢＭＣ  ＳＣＩＤマウスにおける経時的なヒトＩｇＭの血清レベルを示す。
【図２０】ＰＢＳ、ＧＢ４５００、ＧＢ４５６３、またはＧＢ４５４２で処置したｈｕ−ＰＢＭＣ  ＳＣＩＤマウスにおける経時的な末梢血中のヒトＢ細胞の数を示す。
【図２１】ＰＢＳ、ＧＢ４５００、ＧＢ４５６３、またはＧＢ４５４２で処置したｈｕ−ＰＢＭＣ  ＳＣＩＤマウスの脾臓におけるヒトＢ細胞の数を示す。
【図２２】抗体またはストラドボディの示される濃度でのＧＢ４５００またはＧＢ４５４２により媒介される細胞増殖の阻害パーセントをμｇ／ｍＬで示す。ＧＢ４５００対ＧＢ４５４２の統計的有意性は、Ｔ検定を用いて計算された；＊ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．００５。
【図２３】示されるｐｍｏｌ／ｍＬでの抗体またはストラドボディのＧＢ４５００またはＧＢ４５４２によって媒介される細胞増殖の阻害パーセントを示す。
【図２４】抗体またはストラドボディの示される濃度でのＧＢ４５００、ＧＢ４５９６、またはＧＢ４５４２によって媒介される補体依存細胞毒性パーセントをμｇ／ｍＬで示す。
【図２５】示されるｐｍｏｌ／ｍＬでの抗体もしくはストラドボディのＧＢ４５００またはＧＢ４５４２によって媒介される補体依存細胞毒性パーセントを示す。
【図２６】マウスＲａｊｉ−ＳＣＩＤリンパ腫モデルにおける、ＣｐＧを有する、もしくは有さないＰＢＳ、ＧＢ４５００、またはＧＢ４５４２の腫瘍内注射後の経時的な平均腫瘍量を示す。
【図２７】マウスＲａｊｉ−ＳＣＩＤリンパ腫モデルにおける、ＣｐＧを有する、もしくは有さないＰＢＳ、ＧＢ４５００、またはＧＢ４５４２の腫瘍内注射後の経時的な中央腫瘍量を示す。
【図２８】示されるストラドボディまたは抗体濃度での吸光度（４５０ｎｍ）により測定された、抗体ＧＢ２５００、ストラドボディＧＢ２５４２、抗体ＧＢ７５００、ストラドボディＧＢ７５４２、抗体ＧＢ４５００、およびストラドボディＧＢ４５４２の補体Ｃ１ｑ結合を示す。
【図２９】抗体ＧＢ２５００、ストラドボディＧＢ２５４２、抗体ＧＢ７５００、ストラドボディＧＢ７５４２、抗体ＧＢ４５００、およびストラドボディＧＢ４５４２の補体Ｃ１ｑへの結合についてのＥＣ５０値を示す。
【図３０】抗体ＧＢ２５００、ストラドボディＧＢ２５４２、ＧＢ２５５４、およびＧＢ２５５５の補体Ｃ１ｑ結合を示す。ＧＢ２５４２は、多量体化ストラドボディであり、ＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５は、いずれの多量体化ドメインも含有しない直鎖ストラドボディである。
【図３１】抗体ＧＢ２５００、多量体化ストラドボディＧＢ２５４２、ならびに非多量体化ストラドボディＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５の補体Ｃ１ｑへの結合についてのＥＣ５０値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
［発明の詳細な説明］  
明細書に記載されるＦｃＲ結合能力を有する抗原結合化合物の合理的な分子設計に対するアプローチは、同じ抗原に対して特異性を有するｍＡｂと比較して、抗体媒介細胞毒性、補体依存細胞毒性、直接細胞毒性、および細胞毒性の他の機構を含む細胞毒性の誘導に意外にもより効率的である免疫学的に活性な生物摸倣物（複数可）の組換えおよび／または生化学的な作製を含む。本化合物は、例えば、癌、自己免疫疾患および炎症性疾患ならびに感染症を治療するための有用性を有する。各実施形態は、特定の例示的な実施形態と共に以下に詳細に説明される。
【００５４】
本明細書で使用される、用語「ａ」または「ａｎ」の使用は、請求項および／または本明細書において、用語「含む」と共に使用される場合、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、および「１つまたは２つ以上」の意味とも同じである。
【００５５】
本明細書で使用される、用語「生物模倣物」、「生物摸倣分子」、「生物模倣化合物」、および関連用語は、プールされたヒト静脈内免疫グロブリン（「ｈＩＶＩＧ」）、モノクローナル抗体、または抗体のＦｃもしくはＦａｂ断片等の別の化合物の機能を模倣する人為的化合物を指す。「生物学的に活性な」生物模倣物は、それらの天然に存在する対応物と同じまたは類似している生物学的活性を保有する化合物である。「天然に存在する」とは、通常、生物において見出される、分子またはその一部分を意味する。天然に存在するとは、実質的に天然に存在することも意味する。「免疫学的に活性な」生物摸倣物は、抗体、サイトカイン、インターロイキン、および当該技術分野において既知の他の免疫学的分子等、天然に存在する免疫学的に活性な分子と同じ、または類似する免疫学的活性を示す生物摸倣物である。好ましい実施形態では、本発明の生物摸倣物は、本明細書に定義されるストラドボディである。
【００５６】
「相同」とは、所与の核酸またはアミノ酸配列の配列全体にわたる同一性を意味する。例えば、「８０％相同」とは、所与の配列が主張される配列と約８０％の同一性を共有し、挿入、欠失、置換、およびフレームシフトを含むことができることを意味する。当業者は、配列アラインメントが配列の全長にわたって同一性を決定するための挿入および欠失を考慮するために行われ得ることを理解するだろう。
【００５７】
本発明の免疫学的に活性な生物模倣物は、１つ以上の抗原に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、本発明の免疫学的に活性な生物模倣物は、二重特異的抗体と同様に、２つの異なる抗原に結合することが可能である。他の実施形態では、本発明の免疫学的に活性な生物模倣物は、３つの異なる抗原に結合することが可能である。本発明の生物摸倣物は、ＩｇＧ  Ｆｃドメインの１つ以上の免疫調節活性も保有し、ＦｃＲｎ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＳＩＧＮ−Ｒ１ならびに／またはＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶを含むＦｃγＲに結合することが可能である少なくとも第１のＦｃドメインを有する。いくつかの実施形態では、本発明の生物摸倣物は、ＦｃＲｎ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＳＩＧＮ−Ｒ１ならびに／またはＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶを含むＦｃγＲに結合することが可能である第２のＦｃドメインを保有する。したがって、多量体化される場合、免疫学的に活性な生物模倣物は、少なくとも２つの二量体構造を含有し、各々、１つ以上の抗原に結合する能力、ならびにＦｃＲｎ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＳＩＧＮ−Ｒ１および／またはＦＣγＲのうちの１つ以上に結合する能力を保有する。
【００５８】
以下の段落では、構造的にも機能的にも本発明の生物模倣物の構成ブロックを定義し、生物摸倣物自体を定義する。しかしながら、最初に、上述のように、本発明の生物摸倣物の各々が少なくとも２つのＦｃドメイン、および少なくとも１つのＦａｂドメインを有することに留意することが役立つ。最小でも、Ｆｃドメインは、機能的Ｆｃγ受容体結合部位を形成するために会合する２つのペプチド鎖またはアーム（単量体）を含む二量体ポリペプチド（またはより大きなポリペプチドの二量体領域）である。したがって、本明細書に論じられる個々のＦｃ断片およびＦｃドメインの機能形態は、一般的に、二量体（または多量体）形態で存在する。本明細書に論じられる個々の断片およびドメインの単量体は、機能的二量体構造を形成するために、第２の鎖またはアームと会合しなければならない単一鎖またはアームである。
【００５９】
Ｆｃ領域およびＦａｂ領域
「Ｆｃ断片」は、免疫グロブリンのカルボキシ末端に常に見出されるタンパク質領域またはタンパク質折り畳み構造を説明するために使用される専門用語である。Ｆｃ断片は、抗体の重鎖のカルボキシ末端部分からなる。Ｆｃ断片における鎖の各々は、長さが約２２０〜２６５個のアミノ酸であり、鎖は、多くの場合、ジスルフィド結合を介して連結される。Ｆｃ断片は、多くの場合、１つ以上の独立した構造的折り畳みまたは機能的サブドメインを含有する。特に、Ｆｃ断片は、Ｆｃγ受容体に結合する最小構造として本明細書に定義されるＦｃドメインを包含する。単離されたＦｃ断片は、二量体化される２つのＦｃ断片の単量体から構成される（例えば、抗体の重鎖の２つのカルボキシ末端部分、本明細書においてさらに定義される）。２つのＦＣ断片の単量体が会合する場合、得られるＦｃ断片は、Ｆｃγ受容体結合活性を有する。
【００６０】
「Ｆａｂ断片」は、抗体の抗原結合ドメインを含有するタンパク質領域またはタンパク質折り畳み構造を説明するために使用される専門用語である。Ｆａｂ断片は、重鎖及び軽鎖の両方から構成され、長さが約２００〜２５０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ断片は、親抗体の可変領域およびＣＨ１領域から構成される。Ｆａｂ断片は、不完全および不十分なプロセスである酵素消化、例えばパパイン消化の使用を通してモノクローナル抗体のＦｃ断片から単離することができる（Ｍｉｈａｅｓｃｏ  Ｃ  ａｎｄ  Ｓｅｌｉｇｍａｎｎ  Ｍ．Ｐａｐａｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＭ  Ｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ  １２７，４３１−４５３（１９６８）を参照）。Ｆａｂ断片およびＦｃ断片は一緒に、ここでは完全な抗体を意味する、ホロ抗体を構成する。
【００６１】
「Ｆｃ部分断片」は、抗体の全Ｆｃ断片未満を含有するが、尚、Ｆｃγ受容体結合活性を含む、Ｆｃ断片と同じ活性を有するのに十分な構造を保持するドメインである。したがって、Ｆｃ部分断片は、Ｆｃ部分ドメインが由来する抗体のアイソタイプにより、ヒンジ領域の一部分もしくは全て、ＣＨ２ドメインの一部分もしくは全て、ＣＨ３ドメインの一部分もしくは全て、および／またはＣＨ４ドメインの一部分もしくは全てを欠いてよい。Ｆｃ部分断片の例としては、ＩｇＧ３の上部、コア、および下部ヒンジ領域に加えＣＨ２ドメインを含む分子を含む（Ｔａｎ，ＬＫ，Ｓｈｏｐｅｓ，ＲＪ，Ｏｉ，ＶＴ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＳＬ，Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｉｎｇｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ＣＩｑ  ｂｉｎｄｉｎｇ，ａｎｄ  ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９９０  Ｊａｎｕａｒｙ；８７（１）：１６２−１６６）。したがって、この例では、Ｆｃ部分断片は、ＩｇＧ３のＦｃ断片に存在するＣＨ３ドメインを欠く。Ｆｃ部分断片の別の例は、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む分子を含む。この例では、Ｆｃ部分断片は、ＩｇＧ１に存在するヒンジドメインを欠く。Ｆｃ部分断片は、２つのＦｃ部分断片単量体から構成される。本明細書においてさらに定義されるように、２つのそのようなＦｃ部分断片単量体が会合する場合、得られるＦｃ部分断片は、Ｆｃγ受容体結合活性を有する。
【００６２】
用語「Ｆａｂドメイン」は、抗原に結合することができる最小領域（より大きなポリペプチドとの関連で）または最も小さいタンパク質折り畳み構造（単離されたタンパク質との関連で）を説明する。Ｆａｂドメインは、分子を抗原に結合させるＦａｂ断片の最小結合領域である。「Ｆａｂドメイン」は、本明細書において、「Ｆａｂ」と交換可能に使用される。
【００６３】
本明細書で使用される、「Ｆｃドメイン」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する、またはそれによって結合され得る最小領域（より大きなポリペプチドとの関連で）または最も小さいタンパク質折り畳み構造（単離されたタンパク質との関連で）を説明する。Ｆｃ断片およびＦｃ部分断片の両方において、Ｆｃドメインは、分子をＦｃ受容体に結合させる最小結合領域である。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体によって結合される別個のホモ二量体ポリペプチドに限定され得るが、ＦｃドメインがＦｃ断片の一部分または全て、ならびにＦｃ部分断片の一部分または全てであり得ることも明らかである。用語「Ｆｃドメイン」が本発明において使用される場合、２つ以上のＦｃドメインを意味するものとして当業者に認識されるだろう。Ｆｃドメインは、２つのＦｃドメイン単量体から構成される。本明細書においてさらに定義されるように、２つのそのようなＦｃドメイン単量体が会合する場合、得られるＦｃドメインは、Ｆｃ受容体結合活性を有する。よって、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体を結合することができる二量体構造である。
【００６４】
本明細書で使用される、「Ｆｃ部分ドメイン」は、Ｆｃドメインの一部分を説明する。Ｆｃ部分ドメインは、個々の重鎖定常領域ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン）、および異なる免疫グロブリンクラスおよびサブクラスのヒンジ領域を含む。したがって、本発明のヒトＦｃ部分ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥのＣＨ１ドメイン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥのＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥのＣＨ３ドメイン、ＩｇＭおよびＩｇＥのＣＨ４ドメイン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥのヒンジ領域を含む。他の種における対応するＦｃ部分ドメインは、その種に存在する免疫グロブリンおよびその命名に依存する。好ましい一実施形態では、本発明のＦｃ部分ドメインは、ＩｇＧ１のＣＨ１、ＣＨ２、およびヒンジドメインを含む。別の好ましい実施形態では、本発明のＦｃ部分ドメインは、ＩｇＧ１のＣＨ１、ＣＨ２、およびヒンジドメイン、ならびにＩｇＧ２のヒンジドメインを含む。本発明のＦｃ部分ドメインは、これらのドメインおよびヒンジのうちの２つ以上の組み合わせをさらに含むことができる。しかしながら、本発明の個々のＦｃ部分ドメインおよびその組み合わせは、ＦｃγＲに結合する能力を欠く。したがって、Ｆｃ部分ドメインおよびその組み合わせは、Ｆｃドメイン未満を含む。Ｆｃ部分ドメインは、Ｆｃγ受容体結合活性を有するペプチドを形成するように一緒に連結され得、したがって、Ｆｃドメインを形成する。本発明において、Ｆｃ部分ドメインは、本明細書に定義される、本発明の生物摸倣物を作製するために、構成ブロックとしてＦｃドメインと共に使用される。各Ｆｃ部分ドメインは、２つのＦｃ部分ドメイン単量体から構成される。２つのそのようなＦｃ部分ドメイン単量体が会合する場合、Ｆｃ部分ドメインが形成される。
【００６５】
上述のように、Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、およびＦｃ部分ドメインの各々は、二量体タンパク質またはドメインである。したがって、これらの分子の各々は、二量体タンパク質またはドメインを形成するために会合する２つの単量体から構成される。ホモ二量体形態の特性および活性が上述されたが、単量体ペプチドは、以下に論じられる。
【００６６】
本明細書で使用する「Ｆｃ断片単量体」は、別のＦｃ断片単量体と会合する場合、Ｆｃ断片を含む単鎖タンパク質である。したがって、Ｆｃ断片単量体は、このようにホロ抗体のＦｃ断片を構成する抗体の重鎖のうちの１つのカルボキシ末端部分である（例えば、ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む重鎖の近接部分）。一実施形態では、Ｆｃ断片単量体は、最小でも、ペプチドを形成するために近接して連結されるヒンジ領域の１鎖（ヒンジ単量体）、ＣＨ２ドメインの１鎖（ＣＨ２ドメイン単量体）、およびＣＨ３ドメインの１鎖（ＣＨ３ドメイン単量体）を含む。別の実施形態では、Ｆｃ断片単量体は、ペプチドを形成するために近接して連結されるヒンジ領域の少なくとも１鎖、ＣＨ２ドメインの１鎖、ＣＨ３ドメインの１鎖、およびＣＨ４ドメインの１鎖（ＣＨ４ドメイン単量体）を含む。一実施形態では、ＣＨ２、ＣＨ３、およびヒンジドメインは、異なるアイソタイプからである。特定の実施形態では、Ｆｃ断片単量体は、ＩｇＧ２ヒンジドメイン、ならびにＩｇＧ１  ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含有する。
【００６７】
本明細書で使用される、「Ｆｃドメイン単量体」は、別のＦｃドメイン単量体と会合する場合、Ｆｃγ受容体に結合することができるＦｃドメインを含む単鎖タンパク質を説明する。２つのＦｃドメイン単量体の会合は、１つのＦｃドメインを作製する。Ｆｃドメインの片側のみを含むＦｃドメイン単量体単独では、Ｆｃγ受容体に結合することができない。
【００６８】
本明細書で使用される、「Ｆｃ部分ドメイン単量体」は、別のＦｃ部分ドメイン単量体と会合する場合は、Ｆｃ部分ドメインを含む単鎖タンパク質を説明する。２つのＦｃ部分ドメイン単量体の会合は、１つのＦｃ部分ドメインを作製する。
【００６９】
ストラドマー
本発明のストラドボディは、ストラドマーおよびＦａｂドメインから構成される。一実施形態では、本発明のストラドボディは、多量体化ストラドマーおよびＦａｂドメインから構成される。ストラドマーは、２つ以上のＦｃ受容体、好ましくは、２つ以上のＦｃγ受容体に結合することが可能な、より好ましくは、Ｆｃドメインに対して有意に改善された結合を示す、最も好ましくは、親和性の遅延解離特性を示す生物摸倣化合物である。一実施形態では、本発明のストラドボディは、ＮＫ細胞等のエフェクター細胞、ならびに未成熟樹状細胞およびマクロファージ等の単球由来細胞上のＦｃＲｎ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＳＩＧＮ−Ｒ１および／またはＦｃγ受容体に結合するために使用される。別の実施形態では、本発明のストラドボディは、Ｂ細胞上のＦｃγＲＩＩｂ受容体に結合するために使用される。一実施形態では、Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＩＩＩａ等の低親和性Ｆｃγ受容体である。物理的なストラドマー高次構造は、米国特許出願公開第２０１０／０２３９６３３号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／０１６０７３号に以前に記載されており、その両方は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７０】
「連続ストラドマー」は、会合する場合、２つ以上のＦｃγ受容体に結合することが可能である２つ以上のＦｃドメインを形成する２つの直鎖ストラドマー単量体から構成される二量体ポリペプチドである。連続ストラドマーは、好ましくは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４以上のＦｃドメイン、ならびにＦｃ部分ドメインを有する。Ｆｃドメインおよび／またはＦｃ部分ドメインは、本明細書においてさらに定義されるように、ドメイン連結によって連結され得る。
【００７１】
明らかであるように、上述のＦｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、およびＦｃ部分ドメインは、様々なストラドマー高次構造の構成に使用される。また上述されるように、本明細書に記載されるストラドボディを含むストラドマーである二量体構造を形成するために自己会合するのは、個々のＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体である。さらに、ストラドマーは、本発明のストラドボディを形成するために、Ｆａｂドメインと会合する。
【００７２】
本明細書で使用される、用語「ストラドマー単量体」または「ストラドマー単位」は、少なくとも第２のストラドマー単量体と会合する場合、少なくとも２つのＦｃドメインを含むポリペプチドを形成する単一の近接ペプチド分子を指す。ストラドマー単量体は、ストラドマー間単量体連結によってストラドマーを形成するように会合されるか、またはそれらは、共有結合および非共有結合を介した自己組織化を通してストラドマーを形成することができる。
【００７３】
ストラドマー単量体は、ストラドマーを形成するために別のストラドマー単量体と会合する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４以上のＦｃドメインを形成するアミノ酸配列を有し得る。ストラドマー単量体は、ストラドマーを形成するために別のストラドマー単量体と会合する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４以上のＦｃ部分ドメインを形成するアミノ酸配列をさらに有し得る。
【００７４】
ストラドマーとの関連で、ＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを形成するストラドマー単量体の領域は、単純に、ストラドマー単量体分子の連続する領域のカルボキシ末端からアミノ末端にかけて配置され得る。特定のＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体の配置は、２つのストラドマー単量体の会合時に、２つの機能Ｆｃドメインの形成を可能にする。
【００７５】
Ｆｃドメインは、ＦｃＲｎ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＳＩＧＮ−Ｒ１および／またはＦｃγ受容体に結合するその能力によって機能的に定義され得る。本発明の化合物は、ＩｇＧ１  Ｆｃ対照より高い親和性および／または非常に高い結合力で、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、および／またはＳＩＧＮ−Ｒ１を含む同族の標準Ｆｃ受容体に結合する。あるいは、本発明の化合物は、ＩｇＧ１  Ｆｃの位置２９７の点変異の結果として、Ｆｃ標準受容体より新生児受容体ＦｃＲｎに優先的に結合する。結果として、Ｆｃドメインの特定のアミノ酸配列は、Ｆｃドメインを含むＦｃ部分ドメインに基づき変動する。しかしながら、本発明の一実施形態では、Ｆｃドメインは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域およびＣＨ２ドメインを含む。さらなる好ましい実施形態では、Ｆｃドメインは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。さらなる実施形態では、Ｆｃドメインは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインを含む。さらに別の実施形態では、Ｆｃドメインは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ４ドメインを含む。さらに好ましい実施形態では、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。好ましい実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含有する（配列番号２）。別の好ましい実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含有する（配列番号１９）。
【００７６】
ドメイン連結  
上述のように、「ドメイン連結」は、本発明のストラドボディの個々のストラドマー単量体の各々を含むＦｃドメイン単量体および／またはＦｃ部分ドメイン単量体間のペプチド連結である。ドメイン連結は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上のアミノ酸であってよい。ドメイン連結は、それらの天然配列にあるＦｃ部分ドメイン単量体間では生じない。つまり、ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン等のＦｃドメイン単量体の連結された天然に近接する部分が使用される場合、これらのＦｃ部分ドメイン単量体は、近接配列を含み、これらの要素間にドメイン連結は必要とされない。対照的に、例えば、２つ以上のＦｃドメイン単量体または部分Ｆｃドメイン単量体が個々のストラドマー単量体を形成するために天然に存在しない様式で連結される場合、ドメイン連結を使用することができる。例としては、ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３／Ｌ／ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３を含むストラドマーの個々のストラドマー単量体を作製する（ここで、「Ｌ」は、ドメイン連結である）、２つのヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３ペプチド間の連結であろう。記載される様々な場合において、ドメイン連結は、抗体のＦｃドメイン単量体において、ヒンジとＣＨドメインを結合する重鎖の天然に存在する部分のうちの１つであってよい。あるいは、ドメイン連結は、個々のストラドマー単量体のＦｃドメイン単量体と部分Ｆｃドメイン単量体との間の必要な空間および柔軟性を提供し、本発明のストラドボディを構成するストラドマーを形成するために、個々のストラドマー単量体を互いに対合させる任意の他のアミノ酸配列であってよい。例示的なドメイン連結は、ＧＳリンカー配列である。ＧＳリンカー配列は、ＧＧＧＧＳの１つ、２つ、３つ、４つ以上の反復を含んでよい。好ましくは、ＧＳリンカー配列は、ＧＧＧＧＳの３つ（Ｇ３Ｓ）または４つ（Ｇ４Ｓ）の反復を含んでよい。
【００７７】
いくつかの実施形態では、各免疫学的に活性な生物摸倣化合物は、好ましくは、制限空間領域内の免疫学的に活性な生物摸倣物のＦｃドメインを維持するように機能し、例えば、免疫学的に活性な生物摸倣物内のＦｃドメインへの共結合を通してＦｃγＲを凝集することにより、ＦｃγＲ活性化活動を容易にするストラドボディの各ストラドマー単量体において、少なくとも１つのドメイン連結を含有する。好ましくは、ドメイン連結は、ＩｇＧ分子のヒンジドメインによって提供されるものと同じか、またはそれ以上の程度の高次構造可変性を可能にする。上記連結の全ては、当該分野において周知である。
【００７８】
ストラドマー単量体間連結  本発明の生物摸倣化合物に見られる個別の連結は、本発明のストラドボディを含む２つ以上の個々のストラドマー単量体間に生じる「ストラドマー単量体間連結」である。ドメイン連結は、生物摸倣化合物の個々のストラドマー単量体を含むＦｃドメイン単量体および部分Ｆｃドメイン単量体を互いに連結するように機能する短いアミノ酸配列であるが、ストラドマー単量体間連結は、生物摸倣化合物を含む２つ以上の個々のストラドマー単量体を結合するように機能する。ストラドマー単量体間連結は、個々のストラドマー単量体の安定した会合を可能にするいずれの連結であってよい。いくつかの実施形態では、ストラドマー単量体間連結は、ストラドマー単量体間の共有結合であってよい。あるいは、ストラドマー単量体間のストラドマー単量体内連結は、直接的な化学架橋によるものであってよい。好ましい実施形態では、ストラドマー単量体構造は、本発明のストラドボディを含む自己会合ストラドマーを作製するために、Ｆｃドメイン単量体間の自然な自己組織化性質をうまく利用する。当業者は、ストラドマー単量体間連結が、２つ以上の個々のストラドボディ単量体が本発明の多量体化ストラドボディを含むストラドボディの生物摸倣化合物を形成することを可能にし、得られる化合物が２つ以上のＦｃγＲを架橋する能力を有することを理解する。
【００７９】
上述のように、好ましい実施形態では、ストラドマーを形成するストラドマー単量体間連結は、ストラドマー単量体の自己組織化に起因する連結である。一実施形態では、ストラドマーを含む２つのストラドマー単量体は、ストラドマーを含む２つの個々のストラドマー単量体が配列において同一であるように、同一のペプチドである。しかしながら、当業者は、他の実施形態が、ストラドマー単量体がアミノ酸配列において互いに異なるストラドマーを含むことを理解する。
【００８０】
２つのストラドマー単量体は、例えば、対合がストラドマー単量体において同一のＦｃ部分ドメイン単量体間で生じるように、平行に整合することによりストラドマーを形成することができる。しかしながら、本発明は、対合が非同一Ｆｃ部分ドメイン単量体間で生じる実施形態、および対合がストラドマー単量体において同一Ｆｃ部分ドメイン単量体間で生じるが、２つのストラドマー単量体の整合がオフセットである実施形態も含む。
【００８１】
多量体化ドメイン  多量体化ドメインは、二量体タンパク質をさらに多量体化させるペプチド配列を含み得る。本明細書で使用される、「多量体化」は、複数（即ち、２つ以上）の個々のストラドボディホモ二量体を一緒に連結または結合することを指す。例えば、ストラドボディは、少なくとも１つのストラドボディホモ二量体（即ち、１つ以上のＦｃドメインおよび１つ以上のＦａｂドメインを含む少なくとも１つのホモ二量体ポリペプチド）が多量体化ドメインを介して少なくとも１つの他のストラドボディホモ二量体に結合される場合、多量体化される。ペプチド多量体化ドメインの例としては、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、コラーゲングリシン−プロリン−プロリン反復（「ＧＰＰ」）、および亜鉛フィンガーが挙げられる。ペプチド多量体化に対するグリコシル化の影響は、当該分野において十分に記載されている（例えば、Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｃ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ／Ｖ  ｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｈａｒｖｅｙ  Ｒ．Ｇｒａｌｎｉｃｋ，Ｓｙｂｉｌ  Ｂ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｍａｒｇａｒｅｔ  Ｅ．Ｒｉｃｋ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．９，［Ｐａｒｔ  １：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ］（Ｍａｙ  １，１９８３），ｐｐ．２７７１−２７７４；Ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｉｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｉｔｓ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ．Ｋｉｍｉｅ  Ａｓａｎｕｍａ，Ｆｕｍｉｏ  Ａｒｉｓａｋａ  ａｎｄ  Ｈａｒｕｋｏ  Ｏｇａｗａ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｖｏｌｕｍｅ  １２２３，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００１，Ｐａｇｅｓ  ９７−１０１）。
【００８２】
好ましい一実施形態では、多量体化ドメインは、ＩｇＧ２ヒンジである。当該技術分野において公知である、ヒトＩｇＧ２のヒンジ領域は、共有結合二量体を形成することができる（Ｙｏｏ，Ｅ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０，３１３４−３１３８（２００３）；Ｓａｌｆｅｌｄ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５，１３６９−１３７２（２００７））。ＩｇＧ２の二量体形成は、潜在的に、Ｃ−Ｃ結合によってＩｇＧ２ヒンジ構造を通して媒介され（Ｙｏｏら、２００３）、ヒンジ構造だけで二量体形成を媒介することができることを示唆する。しかしながら、ヒト血清中に見られるＩｇＧ２二量体の量は限られている。ホモ二量体の二量体を超えたＩｇＧ２の多量体化の定量的証拠はない（Ｙｏｏら、２００３）。つまり、ヒト血清において高次多量体化を形成する未変性ＩｇＧ２は見出されていない。
【００８３】
ヒトＩｇＧ２ヒンジ単量体のアミノ酸配列は、次の通りである：ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３）。配列番号３の４つのシステインのいずれか１つの変異は、大幅に減少したストラドボディの多量体化に関連し得る。ＩｇＧ２ヒンジ単量体の２つのＣ−Ｘ−Ｘ−Ｃ部分がある。したがって、本発明のストラドボディは、Ｆｃドメイン単量体と共に、ＩｇＧ２ヒンジ単量体の完全な１２個のアミノ酸配列か、または４つのアミノ酸コアのいずれか、もしくはその両方のいずれかを含み得る。コア構造のＸ−Ｘは任意のアミノ酸であってよいが、好ましい実施形態では、Ｘ−Ｘ配列はＶ−ＥまたはＰ−Ｐである当業者は、ＩｇＧ２ヒンジ単量体が、ＩｇＧ２ヒンジ配列の全てならびにＩｇＧ２  ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン単量体配列の一部もしくは全てを含む、コアの４つのアミノ酸構造に加えて、ヒンジ配列の任意の部分から構成され得ることを理解する。理論に拘束されることなく、１つのストラドボディホモ二量体のＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインは、別のストラドボディホモ二量体の任意の部分と相互作用することによって多量体を形成することができる。つまり、１つのストラドボディホモ二量体のＩｇＧ２ヒンジは、別のストラドボディホモ二量体のＩｇＧ２ヒンジに結合することによって多量体化され、それによって、天然のＩｇＧ１  Ｆｃに対して増加したＦｃ受容体への機能的結合を維持しながらホモ二量体の二量体または高次多量体を形成することができる。あるいは、１つのストラドボディホモ二量体のＩｇＧ２ヒンジドメインは、別のストラドボディホモ二量体のＩｇＧ１ヒンジに結合し、それによって、天然のＩｇＧ１  Ｆｃに対して増加したＦｃ受容体への機能的結合を維持しながらホモ二量体の二量体または高次多量体を形成することができる。天然のＩｇＧ１  Ｆｃに対して増加したＦｃ受容体への機能的結合を維持しながらホモ二量体の二量体または高次多量体を形成するために、１つのストラドボディホモ二量体のＩｇＧ２ヒンジドメインがＩｇＧ１  Ｆｃドメインの別の部分、即ち、別のストラドボディホモ二量体のＣＨ２またはＣＨ３ドメインに結合することも可能である。
【００８４】
別の好ましい実施形態では、ロイシンジッパーは、多量体化ドメインとして使用され得る。別の好ましい実施形態では、イソロイシンジッパーは、多量体化ドメイとして使用され得る。ロイシンおよびイソロイシンジッパー（コイルドコイルドメイン）は、タンパク質の二量体、三量体、および四量体の形成を容易にすることが知られている（Ｈａｒｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６２：１４０１−１４０７（１９９３）、Ｏ’Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：５３８（１９８９））。
【００８５】
当業者は、異なる種類のロイシンおよびイソロイシンジッパーが使用され得ることを理解するが、一実施形態では、記載されるように（Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＭｏＩ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３１１２−３１２１（２００７）、Ｈａｒｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６２：１４０１−１４０７（１９９３））、修飾されたＧＣＮ４転写制御因子からのイソロイシンジッパーが使用される：  ＧＧＧＳＩＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫＫＬＩＧＥＲＧＨＧＧＧ（配列番号５）。別の実施形態では、イソロイシンジッパーの配列が使用される：ＧＧＧＳＩＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫＫＬＩＧＥＲＧＨＤＩ（配列番号３２）。これらのイソロイシンジッパー配列は、Ｆｃドメイン単量体の多量体化に使用され得るいくつかの可能な配列のうちの単に２つである。配列番号５または３２に示される配列全体が使用され得るが、配列の下線部分は、本発明のストラドボディに使用され得るイソロイシンジッパーのコア配列を表す。したがって、本発明のストラドボディを含むストラドマー単量体は、１つ以上のＦｃドメイン単量体と共に、イソロイシンジッパーの完全なアミノ酸配列または２８個のアミノ酸コアのいずれかを含み得る。当業者は、イソロイシンジッパーが、２８個のコアのアミノ酸構造に加えて、ジッパーの任意の部分から構成され得、したがって、２８個より多いが、配列番号５または３２の配列全体より少ないアミノ酸から構成され得ることも理解する。
【００８６】
別の好ましい実施形態では、ＧＰＰ反復は、多量体化ドメインとして使用され得る。ＧＰＰは、コラーゲンタンパク質をもたらす（タンパク質結合）ヒトコラーゲンに見られるアミノ酸配列である。当業者は、異なる種類のＧＰＰ反復が多量体化ドメインとして使用され得ることを理解するが、好ましい実施形態では、記載されるように（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ  ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３７９６  ｖｏｌ  ２２  ２００８）、グリシン−プロリン−プロリン反復が使用される（配列番号２６）。このグリシン−プロリン−プロリン反復配列は、ストラドボディの多量体化に使用され得るいくつかの可能な配列のうちの単に１つである。配列番号２６に示される配列全体が使用され得るが、Ｆｃドメイン単量体を多量体化するために、異なる長さの反復を使用することも可能であってよい。同様に、ＧＰＰ反復内に異なるアミノ酸を含有する反復も置換され得る。
【００８７】
ストラドボディ  本発明は、ストラドボディ、およびストラドボディを作製し、使用する方法を対象とする。本明細書で使用される、「ストラドボディ」は、１つ以上のＦａｂドメインが結合される、２つ以上のＦｃドメインを含む分子を指す。したがって、そのようなＦａｂドメインおよびＦｃドメインによって、ストラドボディは、抗原結合能およびＦｃγ受容体結合活性の両方を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃγ受容体活性は、未変性構造のホロ抗体のＦｃ部分と等しいまたはそれより大きいＦｃγＲに結合し、架橋する能力によるものであってよい。ストラドボディのＦａｂ部分は、重鎖および軽鎖の両方を含み得る。可変重鎖および軽鎖は、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４等の任意の適合性免疫グロブリンから独立してもよく、同じまたは異なるアイソタイプからであってよいが、好ましくは、同じＩｇアイソタイプからである。軽鎖のカッパまたはラムダは、異なるＩｇアイソタイプからであってよい。いくつかの実施形態では、ストラドボディは、ストラドマー同様、２つ以上のＦｃγＲに結合し、免疫機能を調節することができる。一実施形態では、本発明のストラドボディは、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含み、１つ以上の多量体化ドメインの少なくとも１つは、２つ以上のＦｃドメインを分離するか、またはＦｃ領域のカルボキシ末端に位置する。用語「Ｆｃ領域」は、本明細書において、Ｆｃドメイン、ドメイン連結、および多量体化ドメインを含むストラドボディの領域を指すように使用される。したがって、Ｆｃ領域は、Ｆａｂドメインを含まないストラドボディの領域である。多量体化ドメインは、上述され、それらが天然に存在するタンパク質においてタンパク質の多量体化を引き起こすことが知られているアミノ酸配列である。一実施形態では、多量体化ドメインは、ＩｇＧヒンジ、イソロイシンジッパー、またはそれらの組み合わせであってよい。特定の実施形態では、ストラドボディは、Ｆａｂ、第１のＦｃドメイン、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、および第２のＦｃドメインから構成される。Ｆａｂは、未変性免疫グロブリン構造に見られる重鎖および軽鎖の両方を含む。
【００８８】
本発明のストラドボディは、連続ストラドボディまたはＣ末端ストラドボディのいずれかとして分類され得る。これらのストラドボディの一般的な構造は、図１に示される。本発明の連続およびＣ末端ストラドボディは、好ましくは、Ｆａｂドメイン、１つ以上のＦｃドメイン、および１つ以上の多量体化ドメインを含む。例えば、本発明の連続およびＣ末端ストラドボディは、好ましくは、Ｆａｂドメイン、１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＦｃドメイン、および１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つの多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明の連続およびＣ末端ストラドボディは、１つ以上のスペーサーまたは柔軟なリンカーをさらに含む。連続ストラドボディは、好ましくは、２つ以上のＦｃドメインを含む。例えば、連続ストラドボディは、好ましくは、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＦｃドメインを含む。
【００８９】
連続ストラドボディは、キメラ重鎖に２つ以上のＦｃドメインを組み込むことにより複数の低親和性ＦｃγＲを同時に結合し、架橋するように設計された。Ｆｃドメインは、１つ以上の異なる、もしくは同じ多量体化ドメイン、スペーサー、および／または柔軟なリンカーによって分離される。連続ストラドボディは、多量体化連続ストラドボディまたは非多量体化連続ストラドボディのいずれかであってよい。多量体化連続ストラドボディは、多量体の形成に関連する少なくとも１つの多量体化ドメインを含む。多量体化ドメインは、上述され、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、コラーゲンＧＰＰ、および亜鉛フィンガーを含む。非多量体化連続ストラドボディは、多量体化ドメインを含まない場合があるが、Ｇ４Ｓリンカー等の１つ以上のドメイン連結を含み得る。いくつかの実施形態では、多量体化連続ストラドボディは、１つ以上の多量体化ドメインおよび１つ以上のドメイン連結の両方を含む。連続ストラドボディの一般的な構造は、図２に示される。示される多量体化ドメインおよび／またはリンカードメイン（ＩＬＺはイソロイシンジッパーを指し、２ＨはＩｇＧ２ヒンジを指し、Ｇ４Ｓはアミノ酸配列Ｇｌｙ４Ｓｅｒを指す）のうちの１つ以上を含む例示的な連続ストラドボディ構築物のより具体的な構造は、図３に示される。ＥＧＦＲに特異的なＦａｂ領域を含む連続ストラドボディ構築物は、下の表１に示される。ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的なＦａｂ領域、またはＣＤ２０に特異的なＦａｂ領域を含む連続ストラドボディ構築物は、図４および下の表１に示される。
【００９０】
Ｃ末端多量体化ストラドボディは、Ｆｃ領域のＣ末端に１つ以上の多量体化ドメインを組み込み、それによって、複数のＦｃ受容体と同時に相互作用することができるストラドボディ複合体の形成を促進することによって、複数の低親和性ＦｃγＲに同時に結合し、架橋するように設計された。Ｃ末端ストラドボディの例示的な構造は、図５に示される。抗ＥＧＦＲ  Ｆａｂを含むＣ末端多量体化ストラドボディは、図６および下の表１に示される。抗ＣＤ２０  Ｆａｂを含むＣ末端多量体化ストラドボディ構築物も、図６および下の表１に示される。Ｃ末端ストラドボディにおいて、重鎖のＦｃ領域は、Ｃ末端側上に１つ以上の異なる、もしくは同じ多量体化ドメイン、スペーサー、または柔軟なリンカーを有する。示されるＣ末端ストラドボディは、多量体化ドメインおよび精製タグを含有する構築物も含む。
【表１Ａ】
2015527366.tif 000003
【表１Ｂ】
2015527366.tif 000004
【００９１】
当業者は、上述の特定のストラドボディが例示であり、ストラドマーおよびストラドマー構成ブロックの様々な構造ならびに組み合わせを有する連続ストラドボディ、例えば、１つ以上の多量体化ドメインおよび２つ以上のＦｃドメインを含む連続多量体化Ｃ末端ストラドボディが可能であることを認識する。連続多量体化Ｃ末端ストラドボディは、２つのＦｃドメイン間に１つ以上の多量体化ドメイン、およびＦｃ領域のＣ末端に１つ以上の多量体化ドメインを含み得る。
【００９２】
ストラドボディは、Ｆａｂ部分の抗原結合性質および上述のストラドマー性質を保有する。そのような組み合わせは、高い割合の患者においてＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはＤＣを誘導する、特に低エピトープ発現の環境において（例えば、腫瘍がＨＥＲ２／ｎｅｕ高発現物（ｅｘｐｒｅｓｓｏｒ）として分類されない乳癌患者の９０％）、ホロ抗体のＦｃ骨格によって達成され得るよりも高い割合で、エフェクター細胞上のＦｃγに結合する、それを架橋する、およびそれを活性化するように機能する。上記に示される、１つ以上の抗原結合Ｆａｂドメインは、ストラドボディを形成するために、ストラドマーに付加され得る。
【００９３】
意外にも、２つのＦｃドメイン間（例えば、それぞれ、配列番号３５、３３、３７、および６６に対応するＧＢ２５４２、ＧＢ３５４２、ＧＢ４５４２、およびＧＢ７５４２）、またはＦｃ領域のカルボキシ末端に位置する（例えば、それぞれ、配列番号９１、７０、７６、および８７に対応するＧＢ２５４７、ＧＢ３５４７、ＧＢ４５４７、およびＧＢ７５４７）１つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディが、優れた多量体化を示すだけでなく、親ｍＡｂおよび多量体化ドメインを有さない、またはＦｃ領域のＮ末端に位置する１つ以上の多量体化ドメインを有するストラドボディの両方と比較して、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＤＣ、および他の細胞毒性機構を含む、優れた結合および優れた細胞毒性も示すことを我々は発見した。特に、イソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジの両方を含むストラドボディは、特に強いＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＤＣ、ならびに特に強いｃ１ｑ結合を生じた。予想外に、これらの２つの多量体化ドメインが２つのＦｃドメイン間に位置する場合、多量体化、ＦｃγＲへの結合、およびＡＤＣＣ、ＣＤＣ、およびＤＣの結果ならびにｃ１ｑ結合は特に頑強であった。
【００９４】
意外にも、Ｆａｂの存在が、ストラドボディを含む単離されたストラドマーに対して、得られるストラドボディが多量体化する能力を劇的に変えることができることを我々は発見した。より具体的には、Ｎ末端多量体化ドメインを有するストラドマーは、十分に多量体化し、十分に機能することができるが、国際公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号に開示される、同じストラドマーから構成されるストラドボディは、十分に多量体化されないか、全く多量体化されない場合がある。逆に、１つ以上の多量体化ドメインを有する連続ストラドボディ、または１つ以上のＣ末端多量体化ドメインを有するストラドボディがそのようなストラドボディを含むストラドマーよりも良好に多量体化することが可能である。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、危険信号または損傷信号をさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、危険信号または損傷信号と同時に、または同じ治療サイクルで患者に投与される。ＰｒａｄｅｕおよびＣｏｏｐｅｒ（Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：  Ａｒｔｉｃｌｅ  ２８７，１−９  （２０１２）が、最近、そのような危険信号または損傷信号を再調査した。一実施形態では、本発明のストラドボディ内に含まれる、もしくはそれと共に投与され得る危険信号または損傷信号は、ＣＤ４０−Ｌ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮα、細胞内ヌクレオチドＡＴＰもしくはＵＴＰ、長い非メチル化ＣｐＧ配列、熱ショックタンパク質、反応性酸素中間体、血管作用性小腸ペプチド、メタロプロテイナーゼ−９、ヘパラン硫酸の分解生成物、ヒアルロン酸の小さな分解生成物、ＬＤＬ由来リン脂質、またはＬＯＸ−１を含む内在性信号を含む。別の実施形態では、本発明のストラドボディ内に含まれる、もしくはそれと共に投与され得る危険信号または損傷信号は、尿酸、高移動度グループボックス１、インフラマソーム（パターン認識受容体を含有する多タンパク質複合体）、ＩＬ−１α、Ｓ１００タンパク質、肝細胞癌由来成長因子、ＩＬ−１α、高濃度のアデノシン５′−トリホスファターゼ、β−Ｄ−グルコピラノシルセラミド、ＩＬ−３３、金ナノ粒子等のナノ粒子、またはＦ−アクチンを含む。特に好ましい実施形態では、本発明のストラドボディは、血管作用性小腸ペプチド、メタロプロテイナーゼ−９、熱ショックタンパク質、高移動度グループ１、Ｓ１００、ＩＬ−１α、肝細胞癌由来成長因子、それらのペプチドと少なくとも７０％のアミノ酸配列類似性を共有するペプチド、およびそれらのペプチドの断片であるペプチドを含む、ストラドボディのカルボキシ末端にペプチド危険信号または損傷信号を含む。
【００９６】
いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、ＥＧＦＲに特異的であるＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ特異的Ｆａｂは、モノクローナル抗体セツキシマブに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号３１に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的であるＦａｂを含む。他の実施形態では、ストラドボディは、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体トラスツズマブに由来するＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号３４に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、ＣＤ２０に特異的であるＦａｂを含む。他の実施形態では、ストラドボディは、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブに由来するＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号３６に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、ＴＮＦに特異的であるＦａｂを含む。他の実施形態では、ストラドボディは、抗ＴＮＦノクローナル抗体アダリムマブに由来するＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号６７に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本発明のストラドボディは、２つ以上のＦａｂを含む。さらなる実施形態では、２つ以上のＦａｂの各々は、異なる抗原に特異的である。例えば、ストラドボディは、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２／ｎｅｕ；ＣＤ３およびＣＤ１９；ＣＤ３およびＣＤ２０；ＣＤ３および癌胎児抗原；ＣＤ３およびＥＧＦＲ；ならびにそれらの組み合わせに特異的であるＦａｂを含み得る。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、ストラドボディは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、Ｆａｂドメイン、第１のＩｇＧ１  ＣＨ２、第１のＩｇＧ１ＣＨ３、イソロイシンジッパー、ＩｇＧ２ヒンジ、第２のＩｇＧ１  ＣＨ２、および第２のＩｇＧ１ＣＨ３を含む（図７）。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、本発明のストラドボディは、配列番号１によるリーダーアミノ酸配列、配列番号３１によるＥＧＦＲ特異的可変領域およびＣＨ２領域アミノ酸配列、配列番号２によるＩｇＧ１  Ｆｃドメイン、配列番号３２によるイソロイシンジッパー、ならびに配列番号３によるＩｇＧ２ヒンジを含む。
【０１０３】
別の実施形態では、全ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３３による（表２の構築物ＧＢ３５４２）。一実施形態では、ストラドボディは、配列番号３３に少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【０１０４】
別の実施形態では、全ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３５による（表２の構築物ＧＢ２５４２）。一実施形態では、ストラドボディは、配列番号３５に少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【０１０５】
別の実施形態では、全ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号３７による（表２の構築物ＧＢ４５４２）。一実施形態では、ストラドボディは、配列番号３７に少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【０１０６】
別の実施形態では、全ストラドボディのアミノ酸配列は、配列番号６６による（表２の構築物ＧＢ７５４２）。一実施形態では、ストラドボディは、配列番号６６に少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同である。
【表２Ａ】
2015527366.tif 000005
【表２Ｂ】
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【表２Ｃ】
2015527366.tif 000007
【０１０７】
本明細書に開示されるストラドボディは、様々な種のいずれかに由来し得ることを理解する。実際、本発明のいずれか１つの生物摸倣分子におけるＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインは、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ以上）の種からの免疫グロブリンに由来し得る。しかしながら、それらは、一般的に、単一種に由来する。加えて、本明細書に開示される方法のいずれか（例えば、治療方法）が任意の種に適用され得ることを理解する。一般に、関心の種に適用される生物模倣物の成分は全て、その種に由来する。しかしながら、全ての成分が異なる種のものであるか、または２つ以上の種（関連する方法が適用される種を含むまたは含まない）からである生物摸倣物も使用され得る。
【０１０８】
本発明のストラドボディのＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを含む特定のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４ドメイン、およびヒンジ領域は、それらが由来する免疫グロブリンサブクラスならびに生物の両方に関して、独立して選択され得る。したがって、本明細書に開示されるストラドボディは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ１、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＭ、マウスＩｇＧ２ａ、またはイヌＩｇＧａもしくはＩｇＧｂ等の様々な免疫グロブリン型に独立して由来するＦｃドメインおよび部分Ｆｃドメインを含み得る。好ましくは、ヒト治療に関して、本発明のＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。同様に、各Ｆｃドメインおよび部分Ｆｃドメインは、種特異的またはキメラストラドボディ分子を産生するために、様々な種、好ましくは、哺乳類種に由来し得、ヒト以外の霊長類、（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル）、魚類、および爬虫類を含む。
【０１０９】
Ｆａｂは、ヒト定常領域およびマウス、ラット、ウサギ、サル、またはヤギ抗体からの可変領域等のヒト以外の可変領域から構成されるキメラ構造であってよい。当業者は、現在利用可能であり、そのような構築のための科学論文に記載される方法を用いて、ストラドボディの中に組み込むための様々なＦａｂキメラ構造を作製することができるだろう。個々のＦａｂドメイン、Ｆｃドメイン、および部分Ｆｃドメインもヒト化され得る。したがって、「ヒト化」ストラドボディは、「ヒト化」モノクローナル抗体に類似して設計され得る。
【０１１０】
当業者は、異なるＦｃドメインおよび部分Ｆｃドメインが異なる種類の機能性を提供することを理解するだろう。例えば、ＦｃγＲは、ＩｇＧ免疫グロブリンに特異的に結合し、他のクラスの免疫グロブリンにあまり良好に結合しない。したがって、複数のＦｃγ受容体結合能を有するストラドボディを設計することを意図する当業者は、低ＩｇＧヒンジ領域および／またはＩｇＧ  ＣＨ２＆ＣＨ３ドメインにそれらを含む、十分に特徴付けされたＩｇＧのＦｃγ受容体結合配列を少なくとも組み込むストラドマーＦｃドメインを設計するだろう。当業者は、様々な有害な結果が、ＩｇＡ注入に関連するアナフィラキシー等の特定のＩｇドメインの使用に関連し得ることも理解するだろう。本明細書に開示される生物模倣物は、一般的に、そのような作用を回避するように設計されるべきであるが、特定の状況では、そのような作用が望ましい場合がある。
【０１１１】
本発明は、ＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインの天然に存在するアミノ酸配列とは異なるアミノ酸を有するＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを含むストラドボディも包含する。本発明の生物摸倣化合物に含むのに好ましいＦｃドメインは、ホロ−Ｆｃγ受容体またはＦｃγＲの可溶性細胞外ドメイン部分のいずれかに測定可能な特異的結合親和性を有する。多くのＦｃドメインおよびＦｃドメイン単量体の一次アミノ酸配列およびＸ線結晶学構造が、当該技術分野において利用可能である。例えば、Ｗｏｏｆ  ＪＭ，Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ．Ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｌｌｕｍｉｎａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００４  Ｆｅｂ；４（２）：８９−９９を参照。Ｆｃγ受容体結合能を有する代表的なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１からのＦｃドメインを含む（配列番号２）。これらの未変性配列は、機能的な配列の部位特異的変異誘発のマッピングを含む広範な構造−機能分析を受けた。これらの以前の構造−機能研究および利用可能な結晶学データに基づき、当業者は、ＦｃドメインのＦｃγＲ受容体結合能を維持しながら、機能性Ｆｃドメイン配列変異型を設計することができる。例えば、システイン残基は、単量体間のスルフィド結合を増強するために付加されるか、またはストラドボディホモ二量体を含むストラドマーホモ二量体間の相互作用を変えるために削除され得る。
【０１１２】
加えて、本発明は、Ｆａｂドメインが由来する抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸を有するＦａｂドメインを含むストラドボディを包含する。本発明の生物摸倣化合物に含むためのＦａｂドメインは、特定の抗原に対して測定可能な特異的結合親和性を有する。好ましくは、生物模倣化合物は、対応する未改変抗体の結合親和性よりも大きい結合親和性を有する。
【０１１３】
アミノ酸変化は、ストラドボディのＦｃγ受容体または抗原への結合親和性を減少させる、増加させる、または未変化に維持することができる。好ましくは、そのようなアミノ酸変化は、保存アミノ酸置換であるが、そのような変化は、欠失、付加、および他の置換を含む。保存アミノ酸置換は、典型的には、次のグループ内の変化を含む：グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシン、およびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリン、およびスレオニン；リジン、ヒスチジン、およびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン。加えて、アミノ酸変化は、例えば、システイン残基の付加によって、多量体の強度を高めることができる。
【０１１４】
アミノ酸変化は、天然に存在するか、または例えば、部位特異的変異誘発によって導入することができる。アミノ酸変化は、Ｆｃドメインがその受容体結合機能および生物学的活性を維持し、Ｆａｂドメインがその抗原結合機能および生物学的活性を維持する限り、Ｆｃドメイン  またはＦａｂドメイン内のどの場所でも生じることができる。好ましい実施形態では、多型または変異は、増強した受容体／抗原結合および／または増強した多量体化または生物学的機能につながる。Ｆｃドメインに関して、多型／変異は、好ましくは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）にあるようなＥＵ付番によるアミノ酸位置２３３〜４３５のうちの１つ以上で生じる。これらのアミノ酸位置における特定の多型／変異は、当該分野において周知であり、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．  （２００１）「Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ，ＦｃγＲＩＩＩ  ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＦｃγＲ，」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１−６６０１に見出すことができ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１５】
上記から、本発明のストラドボディは、（ａ）天然に存在するＦａｂおよびＦｃドメインのみ、（ｂ）天然に存在するＦａｂおよびＦｃドメインと、改変されたアミノ酸配列を有するＦａｂおよびＦｃドメインの混合物、ならびに（ｃ）改変されたアミノ酸配列を有するＦａｂおよびＦｃドメインのみを有するストラドボディを含むことを理解する。必要なのは、天然に存在する配列を有するＦａｂおよびＦｃドメインを含む、対応するストラドボディが抗原およびＦｃγＲ受容体に結合する能力の少なくとも２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、もしくは１００％、またはさらにはそれ以上を有する改変されたアミノ酸配列を含有するストラドボディである。
【０１１６】
本発明のストラドボディに生じる前述のＦｃγ受容体抗原結合部位は、未変性配列に対して変更された結合能力および親和性を有する結合部位を予想通りに誘導するために、遺伝子操作を通して順に変更され得る。例えば、生物摸倣化合物のＦｃγＲＩＩｂへのＦｃドメイン結合を減少させる一方で、ＦＣγＲＩＩＩａへの結合を増加させるか、またはその逆、あるいは生物摸倣化合物のＦｃγＲＩＩｂへのＦｃドメイン結合を減少させる一方で、ＦｃＲｎへの結合を増加させるか、またはその逆である特定の残基が変更され得る。ヒトＩｇＧ  Ｆｃγ受容体結合配列のための広範な変異誘発に基づく構造−機能分析の例は、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌ．Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ，ＦｃγＲＩＩＩ，ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＦｃγＲ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｆｅｂ  ２００１；２７６：６５９１−６６０４である。同様の研究が、マウスのＩｇＧ  Ｆｃ（ｍＩｇＧ  Ｆｃ）に対して実施されてきた。種間の未変性ＩｇＧ  Ｆｃドメインの構造および一次配列相同性に基づき、当業者は、特定のＦｃγ受容体特異性および結合親和性を有する結合部位を設計するために、ヒトＩｇＧ  ＦｃおよびマウスＩｇＧ  Ｆｃの広範な構造−機能知識を、本発明の生物摸倣化合物における全ての未変性Ｆｃγ受容体結合部位配列の合理的な変異誘発に変換することができる。
【０１１７】
アミノ酸配列の組成に加えて、Ｆｃドメインの炭水化物含量は、Ｆｃドメインの構造およびＦｃγＲとの結合相互作用に重要な役割を果たすことが知られている。例えば、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌ．Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｌａｃｋ  ｏｆ  Ｆｕｃｏｓｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  Ｎ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  ＦｃＦｃγＲＩＩＩ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｊｕｌ  ２００２；  ２７７：２６７３３  −  ２６７４０（ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ２０２０６９２００）、Ａｎｎ  Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｓｈｅｒｉｅ  Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｃ２−  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｎ  Ｉｇ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ：  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｕｓｅ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  Ｍｕｔａｎｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  Ｏｖａｒｙ  Ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ａｐｒ  １９９８；１６０：３３９３−３４０２を参照。同様に、抗体のフコシル化の程度は、抗原結合及びＡＤＣＣにおいて役割を果たすことが知られている。例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ａｎｄ  Ｓａｔｏｈ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ．Ｍａｂｓ．２００９  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；１（３）：２３０−２３６を参照。炭水化物含有量は、例えば、特定の細胞系またはインビトロ酵素修飾を含む特定のタンパク質発現系を用いて制御することができる。いくつかの実施形態では、ストラドボディは脱フコシル化される。脱フコシル化は、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＩｇＧ１  Ｆｃの親和性を改善することが知られている。したがって、本発明は、ドメインが得られるホロ抗体の未変性炭水化物含量を有するストラドボディ、ならびに変更された炭水化物含量を有するそれらのストラドボディ化合物を含む。別の実施形態では、修飾された細胞系は、好ましいグリコシル化パターンを生成するために使用される。別の実施形態では、化学酵素的グリコシル化は、非天然の糖を含む、好ましいグリコシル化パターンを生成するために使用される。別の実施形態では、ストラドボディの多量体成分は、同じストラドボディのホモ二量体性成分と比較して、異なるグリコシル化パターンを特徴とする。好ましい実施形態では、ストラドボディは、Ｆｃ受容体結合を増強するグリコシル化パターンを含む多量体について富化される。
【０１１８】
Ｆｃ部分ドメインのポリペプチド鎖に加えて、多量体化領域またはグリコシル化の変化は、ＦｃドメインのＦｃγ受容体への増強した結合を可能にするＦｃドメインにおける立体構造変化を作り出すことができる。したがって、ポリペプチドに対する一見非常に小さな変化も、複数のＦｃγ受容体もしくはＦｃＲｎ受容体の増強した結合を可能にするストラドボディ、または複数のＦｃγ受容体もしくはＦｃＲｎ受容体に結合する減少した能力を有するストラドボディを作製することができる。
【０１１９】
当業者は、本発明の実施形態に使用されるＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインが完全長型である必要はないことをさらに認識するだろう。つまり、本発明は、本発明のストラドボディを含む特定のＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体のアミノ末端、カルボキシ末端、また中間からアミノ酸を欠くＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体の使用を包含する。
【０１２０】
例えば、Ｆｃγ受容体のヒトＩｇＧ免疫グロブリンの結合部位が記載されている（例えば、Ｒａｄａｅｖ，Ｓ．，Ｓｕｎ，  Ｐ．，２００１．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ  ｂｙ  ＦｃγＲｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３８，１０７３−１０８３、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ．  ａｌ．，２００１．Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  ＦｃγＲＩ，ＦｃγＲＩＩ，ＦｃγＲＩＩＩ，ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＦｃγＲ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９），６５９１−６６０４）。その知識に基づき、それらの免疫グロブリンのＦｃドメインからアミノ酸を除去し、Ｆｃドメインと受容体との間の結合相互作用に対する作用を決定することができる。したがって、本発明は、Ｒａｄａｅｖ，Ｓ．，Ｓｕｎ，Ｐ．，２００１に定義される低ヒンジおよびＣＨ２の位置２３３〜３３８を包含するアミノ酸の少なくとも約９０％を有するＩｇＧ  Ｆｃドメインを包含する。
【０１２１】
本発明のＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃ部分ドメインは、ヒンジ領域の全てまたは一部、ＣＨ２ドメインの全てまたは一部、およびＣＨ３ドメインの全てまたは一部を含み得る。
【０１２２】
ヒンジ領域の一部、ＣＨ２ドメインの一部、またはＣＨ３ドメインの一部のみを有するＩｇＧ  Ｆｃ部分ドメインは、Ｆｃ部分ドメイン単量体から構築される。したがって、本発明は、ヒンジ領域のＮ末端またはヒンジ領域のＣ末端に由来するＩｇＧヒンジ領域単量体を含む。したがって、それらは、例えば、ヒンジ領域の５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、または６２個（ＩｇＧ１に関しては最大１５個、ＩｇＧ２に関しては最大１２個、ＩｇＧ３に関しては最大６２個、ＩｇＧ４に関しては最大１２個）のアミノ酸を含有し得る。
【０１２３】
本発明は、ＣＨ２ドメインのＮ末端またはＣＨ２ドメインのＣ末端に由来するＩｇＧ  ＣＨ２ドメイン単量体も含む。したがって、それらは、例えば、ＣＨ２ドメインの５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、８０個、８１個、８２個、８３個、８４個、８５個、８６個、８７個、８８個、８９個、９０個、９１個、９２個、９３個、９４個、９５個、９６個、９７個、９８個、９９個、１００個、１０１個、１０２個、１０３個、１０４個、１０５個、１０６個、１０７個、１０８個、１０９個、または１１０個（ＩｇＧ１およびＩｇＧ３に関しては最大１１０個、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４に関しては最大１０９個）のアミノ酸を含有し得る。
【０１２４】
本発明は、ＣＨ３ドメインのＮ末端またはＣＨ３ドメインのＣ末端に由来するＩｇＧ  ＣＨ３ドメイン単量体をさらに含む。したがって、それらは、例えば、ＣＨ３ドメインの５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、８０個、８１個、８２個、８３個、８４個、８５個、８６個、８７個、８８個、８９個、９０個、９１個、９２個、９３個、９４個、９５個、９６個、９７個、９８個、９９個、１００個、１０１個、１０２個、１０３個、１０４個、１０５個、１０６個、または１０７個（ＩｇＧ１およびＩｇＧ３に関しては最大１０６個、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４に関しては最大１０７個）のアミノ酸を含有し得る。
【０１２５】
本明細書で使用される、用語「単離された」ポリペプチドまたはペプチドは、天然に存在する対応物を有さないか、または例えば、膵臓、肝臓、脾臓、卵巣、精巣、筋肉、関節組織、神経組織、消化器組織、もしくは乳房組織、または腫瘍組織（例えば、乳癌組織）等の組織、または血液、血清、または尿等の体液において天然にそれに付随する成分から分離または精製されたかのいずれかのポリペプチド、またはペプチドを指す。典型的には、ポリペプチドまたはペプチドは、それが天然に付随するタンパク質および他の天然に存在する有機分子を含まない、少なくとも７０乾燥重量％である場合、「単離された」と見なされる。好ましくは、本発明のポリペプチド（またはペプチド）の調製物は、それぞれ、本発明の少なくとも８０乾燥重量％、より好ましくは少なくとも９０乾燥重量％、最も好ましくは少なくとも９９乾燥重量％のポリペプチド（ペプチド）である。化学的に合成されるポリペプチドまたはペプチドは、その性質上、それに天然に付随する成分から分離されるため、合成ポリペプチドまたはペプチドは「単離される」。
【０１２６】
本発明の単離されたポリペプチド（またはペプチド）は、例えば、天然源から（例えば、組織または体液から）抽出することにより、ポリペプチドもしくはペプチドをコードする組換え核酸の発現により、または化学合成により得ることができる。それが天然に起源する供給源とは異なる細胞系において生成されるポリペプチドまたはペプチドは、それに天然に付随する成分を必ずしも含まないため、「単離される」。単離または純度の程度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析によって測定することができる。
【０１２７】
薬学的組成物  本明細書に記載されるストラドボディ組成物の投与は、経口的、非経口的、または局所的に任意の一般的な経路を介してである。例示的な経路としては、経口、経鼻、口腔、直腸、膣、眼、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、腫瘍内、脊髄内、髄腔内、関節内、動脈内、くも膜下、舌下、口腔粘膜、気管支、リンパ管、子宮内、皮下、腫瘍内、縫合糸等の埋め込み型デバイス上もしくは埋め込み型ポリマー等の埋め込み型デバイス内への組み込み、硬膜内、皮質内、または皮膚があげられるか、これらに限定されない。そような組成物は通常、本明細書に記載される薬学的に許容される組成物として投与されるだろう。好ましい実施形態では、単離されたストラドボディは、静脈内または皮下投与される。
【０１２８】
本明細書で使用される、「薬学的に許容される担体」は、任意および全ての溶剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤等を含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質および薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒質または薬剤が本発明のベクターまたは細胞と不適合である場合を除き、治療組成物におけるその使用が想定される。補助的な活性成分もまた、組成物中に組み込むことができる。
【０１２９】
本発明のストラドボディ組成物は、中性または塩の形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩は、酸添加塩（タンパク質の遊離アミノ基と共に形成された）、および例えば、塩酸もしくはリン酸等の無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等の有機酸と共に形成されたものを含む。遊離カルボキシル基と共に形成された塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄等の無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基に由来してもよい。
【０１３０】
減菌注射液は、必要な量のストラドボディを、必要に応じて上述の様々な他の成分を含む適切な溶媒に組み込み、続いて濾過減菌することにより調製される。一般に、分散液は、様々な減菌活性成分を、基本的な分散媒および上述のものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことにより調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合では、調製の好ましい方法は、活性成分に、その事前に滅菌濾過された溶液からの任意の所望される追加成分を加えた粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥技術である。
【０１３１】
さらに、一実施形態は、経口投与に好適なストラドボディ組成物であり、不活性希釈剤と共に、またはそれなしで薬学的に許容される担体において提供される。担体は、同化可能な、または食用であるべきであり、液体、半固体、即ち、ペースト、または固体担体を含む。任意の従来の媒質、薬剤、希釈剤、または担体が、受容者、またはそれに含有されるストラドボディ調製物の治療有効性に対して有害である場合を除き、本発明の方法の実践に使用するための経口投与可能なストラドボディ組成物におけるその使用は適切である。担体または希釈剤の例としては、脂肪、油、水、生理食塩溶液、脂質、リポソーム、樹脂、結合剤、充填剤等、またはそれらの組み合わせが挙げられる。本明細書で使用される、用語「経口投与」は、経口、口腔、経腸、または胃内投与を含む。
【０１３２】
一実施形態では、ストラドボディ組成物は、任意の簡便かつ実用的な様式で、即ち、溶液、懸濁、乳化、混合、カプセル封入、マイクロカプセル封入、吸収等により担体と組み合わされる。そのような手順は、当業者にとって日常的である。
【０１３３】
特定の実施形態では、粉末形態のストラドボディ組成物は、半固体または固体担体と組み合わされるか、または十分に混合される。混合は、粉砕等の任意の簡便な様式で行うことができる。胃を通した治療活性の損失、即ち、胃における変性から組成物を保護するために、安定剤が混合プロセスにおいて添加され得る。経口投与可能な組成物に使用するための安定化剤の例としては、緩衝剤、胃酸の分泌に対する拮抗薬、グリシンおよびリジン等のアミノ酸、デキストロース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトース、ソルビトール、マンニトール等の炭水化物、タンパク質分解性酵素阻害剤等が挙げられる。より好ましくは、経口投与される組成物に関して、安定剤はまた、胃酸の分泌に対する拮抗薬を含むこともできる。
【０１３４】
さらに、半固体または固体の担体と組み合わされる経口投与用のストラドボディ組成物はさらに、硬質または軟質ゼラチンカプセル、錠剤、またはピルに製剤化され得る。より好ましくは、ゼラチンカプセル、錠剤、またはピルは、腸溶コーティングされる。腸溶コーティングは、ｐＨが酸性である胃または腸上部における組成物の変性を防ぐ。即ち、米国特許第５，６２９，００１号を参照。小腸に到達すると、その中の塩基性ｐＨは、コーティングを溶解し、組成物が、腸の細胞、例えば、パイエル板Ｍ細胞と相互作用するように放出されるのを可能にする。
【０１３５】
別の実施形態では、粉末形態のストラドボディ組成物は、免疫学的に活性な生物模倣物をカプセル封入する、または免疫学的に活性な生物模倣物が結合されるナノ粒子を作製する材料と組み合わされるか、または十分に混合される。各ナノ粒子は、１００ミクロン以下の大きさを有する。ナノ粒子は、そうでなければ経口的に生体利用可能ではないであろう免疫学的に活性な生物模倣物の消化器吸収を可能にする粘膜付着性質を有し得る。
【０１３６】
別の実施形態では、粉末組成物は、安定剤と共に、またはそれなしで、液体担体、即ち、水または生理食塩溶液等と組み合わされる。
【０１３７】
使用され得る特定のストラドボディ製剤は、緩衝液の組成が次の通りであるカリウムを含まない低張リン酸塩に基づく緩衝液中の免疫学的に活性な生物摸倣タンパク質の溶液である：６ｍＭのリン酸二水素ナトリウム一水和物、９ｍＭのリン酸水素ナトリウム七水和物、５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０＋／−０．１。低張緩衝液中の免疫学的に活性な生物模倣タンパク質の濃度は、１０マイクログラム／ｍｌ〜１００ミリグラム／ｍｌの範囲であってよい。この製剤は、任意の投与経路、例えば、これに限定されないが、静脈内投与を介して投与され得る。
【０１３８】
さらに、半固体の担体と組み合わされる局所投与用のストラドボディ組成物はさらに、クリームまたはゲル軟膏に製剤化され得る。ゲル軟膏を形成するための好ましい担体は、ゲルポリマーである。本発明のゲル組成物を製造するために使用される好ましいポリマーは、カルボポール、カルボキシメチルセルロース、およびプルロニックポリマーを含むが、これらに限定されない。具体的には、粉末ストラドボディ組成物は、皮膚上または皮膚下の疾患の治療のための皮膚への適用のために、０．５重量／容量％〜５重量／容量％の強度のカルボポール９８０等の重合剤を含有する水性ゲルと組み合わされる。本明細書で使用される、用語「局所投与」は、皮膚、表皮、皮下、または粘膜表面への適用を含む。
【０１３９】
さらに、ストラドボディ組成物は、皮下または真皮下注入用のポリマーに製剤化され得る。埋め込み型薬物注入ポリマーの好ましい製剤は、一般的に安全とみなされる薬剤であり、例えば、架橋デキストラン（Ｓａｍａｎｔｈａ  Ｈａｒｔ，Ｍａｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｈｅｓｉｓ，「Ｅｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｄｅｘｔｒａｎ  Ｇｅｌ：Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｕｎｅ  ８，２００９）、デキストラン−チラミン（Ｊｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．Ｐａｒｔ  Ａ．１６（８）：２４２９−４０），デキストラン−ポリエチレングリコール（Ｊｕｋｅｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．  Ｐａｒｔ  Ａ．，１６（２）：５６５−７３）、またはデキストラン−グルタルアルデヒド（Ｂｒｏｎｄｓｔｅｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，５３：７−１３）を含み得る。当業者は、ポリマーまたはヒドロゲル内に固定されたストラドボディを組み込み、孔径を所望の直径に制御することにより、多くの類似するポリマーおよびヒドロゲルが形成され得ることを知っているだろう。
【０１４０】
製剤化の際、溶液は、症状の改善または矯正をもたらすのに治療的に有効である投薬製剤に適合する様式で、およびそのような量で投与される。製剤は、摂取可能な溶液、薬物放出カプセル等の様々な剤形で容易に投与される。投薬量におけるある程度の変動は、治療される対象の状態に応じて生じ得る。投与責任者は、いずれにしても、個々の対象の適切な用量を決定することができる。その上、ヒトへの投与に関して、調製物は、ＦＤＡ生物製剤評価センター（ＦＤＡ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）の基準によって要求される減菌性、一般的な安全性、および純度基準を満たす。
【０１４１】
投与経路は、治療される疾患の位置および性質により自然に変動し、例えば、皮内、経皮、真皮下、非経口、経鼻、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、腫瘍内、灌流、洗浄、直接注射、および経口投与を含み得る。
【０１４２】
本明細書で使用される、用語「非経口投与」は、化合物が腸を介して吸収を伴うことなく対象に吸収される任意の投与形態を含む。本発明において使用される例示的な非経口投与は、筋肉内、静脈内、腹腔内、腫瘍内、眼内、経鼻、または関節内投与を含むが、これらに限定されない。
【０１４３】
加えて、本発明のストラドボディは、任意に、別の薬学的薬剤の前、その間、またはその後に投与され得る。
【０１４４】
以下は、様々な医薬製剤カテゴリーの具体的な例、および具体的な例示的疾患の示される好ましい投与経路である。
【０１４５】
口腔または舌下溶性錠剤：狭心症、結節性多発動脈炎。
【０１４６】
静脈内：特発性血小板減少性紫斑病、封入体筋炎、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、壊死性筋膜炎、天疱瘡、壊疽、皮膚筋炎、肉芽腫、リンパ腫、敗血症、再生不良性貧血、多臓器不全、意義不明の多発性骨髄腫およびモノクローナル免疫グロブリン血症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、炎症性筋疾患、血栓性血小板減少性紫斑病、筋炎、貧血、異常増殖、溶血性貧血、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型に関連した脊髄症、白血病、多発性硬化症、および視神経炎、喘息、表皮壊死融解症、ランバート・イートン筋無力症候群、重症筋無力症、ニューロパチー、ぶどう膜炎、ギラン・バレー症候群、移植片対宿主病、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症、および抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫糖尿病性ニューロパチー、急性特発性自律神経障害ニューロパチー、フォークト・小柳・原田症候群、多巣性運動ニューロパチー、抗−／ＧＭＩに関連した下位運動神経症候群、脱髄、膜性増殖性糸球体腎炎、心筋症、川崎病、関節リウマチ、およびエバンス症候群ＩＭ−ＩＴＰ、ＣＩＤＰ、ＭＳ、皮膚筋炎、重症筋無力症、筋ジストロフィー。本明細書で使用される、用語「静脈内投与」は、静脈内注射又は注入を介して本発明の化合物または組成物を全身循環に送達するための全ての技術を含む。
【０１４７】
皮膚ゲル、ローション、クリーム、またはパッチ：白斑症、帯状疱疹、挫瘡、口唇炎乾癬。
【０１４８】
直腸坐剤、ゲル、または注入：潰瘍性大腸炎、クローン病、痔の炎症。
【０１４９】
ピル、トローチ剤、カプセル封入、または腸溶コーティングを伴う経口：クローン病、セリアック病、過敏性腸症候群、炎症性肝疾患、バレット食道。
【０１５０】
皮質内：癲癇、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病。
【０１５１】
腹腔内注入または移植片：子宮内膜症。
【０１５２】
膣内ゲルまたは坐剤：細菌、トリコモナス、または真菌性膣炎。
【０１５３】
医療デバイス：冠動脈ステント上へのコーティング、人工関節。
【０１５４】
本明細書に記載されるストラドボディは、少なくとも１日１回、毎週、隔週、もしくは毎月、または潜在的により少ない頻度で投与され得る。最初の投薬相が第２の投薬相の約０．１％〜約３００％を含む二相投薬計画が使用され得る。本発明のストラドボディの増強した有効性のため、いくつかの実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、低用量で静脈内投与され得る。有効なストラドボディ用量は、一般的に、Ｆａｂがストラドボディと同じである有効モノクローナル抗体の約１％〜約５００％、より好ましくは、約５０％〜約１００％の有効モノクローナル抗体用量である。臨床癌治療に有効なモノクローナル抗体用量は変動する。Ｈｅｒ−２／ｎｅｕモノクローナル抗体に関して、用量は、一般的に、７〜２１日ごとに投与される約２ｍｇ／Ｋｇ〜約４ｍｇ／Ｋｇの範囲である。ＥＧＦＲモノクローナル抗体に関して、用量は、一般的に、７〜２１日ごとに投与される約５ｍｇ／Ｋｇ〜２５ｍｇ／Ｋｇである約２５０〜４００ｍｇ／平方メートルの範囲である。
【０１５５】
一実施形態では、ストラドボディは、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶの用量で静脈内投与される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約１００ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。またさらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．５ｍｇ／Ｋｇ〜約５０ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約２５ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約５ｍｇ／Ｋｇ〜約１５ｍｇ／Ｋｇ  ＩＶで投与される。一実施形態では、ストラドボディは、皮下投与される。本発明のストラドボディの増強した有効性のため、いくつかの実施形態では、ストラドボディは、同じ抗原に特異的なモノクローナル抗体と比較して、低用量で皮下投与され得る。一実施形態では、ストラドボディは、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜約１０００ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱの用量で皮下投与される。さらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．２ｍｇ／Ｋｇ〜約１５０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。またさらなる実施形態では、ストラドボディは、約０．５ｍｇ／Ｋｇ〜約８０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約２ｍｇ／Ｋｇ〜約５０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。尚さらなる実施形態では、ストラドボディは、約５ｍｇ／Ｋｇ〜約３０ｍｇ／Ｋｇ  ＳＱで投与される。
【０１５６】
ストラドボディの治療用途  合理的な設計と、インビトロおよびインビボの検証に基づき、本発明のストラドボディは、自己免疫疾患および炎症性疾患ならびに感染の生物免疫療法等の様々な他の状況における癌の治療および免疫機能の調節に重要な生物製剤として機能する。本明細書に記載される免疫学的に活性な生物模倣物による治療に好適な医学的状態は、モノクローナル抗体が使用され得るか、既に臨床使用中である癌または炎症性疾患のものを含む。
【０１５７】
加えて、ストラドボディによる治療から恩恵を受ける炎症性成分を有する例示的な医学的状態は、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、アテローム発生、心筋梗塞、脳卒中、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルスに関連した炎症、副腎白質ジストロフィー、および癲癇障害、特にラスムッセン症候群、ウエスト症候群、およびレノックス・ガストー症候群を含むウイルス感染後の脳炎に関連すると考えられるものを含む。
【０１５８】
本明細書に記載される単離されたストラドボディを用いた療法に対する一般的なアプローチは、治療を達成するために、疾患または状態を有する対象に治療有効量の単離された免疫学的に活性な生物摸倣物を投与することである。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、サイトカインネットワークの不均衡による炎症性疾患、病原性自己抗体もしくは自己攻撃性Ｔ細胞によって媒介される自己免疫障害、または慢性再発性障害もしくはプロセスの急性期または慢性期として広く分類され得る。
【０１５９】
「免疫調節活性」、「免疫応答の調節」、「免疫系の調節」、および「免疫調節」は、その細胞型内の細胞型の成熟もしくは他の細胞型への成熟を含む、１つ以上の免疫細胞の活性、能力、および相対数を変更することによって、免疫系を変更することを意味する。例えば、未成熟単球の免疫調節は、より成熟した単球、樹状細胞、マクロファージ、または破骨細胞のより大きな集団をもたらすことができ、その全てが未成熟単球に由来する。別の例として、記憶Ｂ細胞の免疫調節は、特定の抗体の産生における同時減少を伴う、ある特定の記憶Ｂ細胞の選択的アポトーシスにつながる可能性がある。別の例として、ＮＫ細胞の免疫調節は、増強した抗体依存性細胞毒性につながる場合がある。別の例として、免疫調節活性は、ＣＤ８β＋／ＣＤ１１ｃ＋細胞等の、さもなければ高レベルで発現されない可能性がある表現型の細胞集団の増加につながる場合がある。別の例として、免疫調節活性は、ＩＬ−６およびＩＬ−８等の自己免疫疾患において一般的に上昇する炎症誘発性サイトカインまたはサイトカインの減少につながる場合ある。別の例として、免疫調節活性は、ＮＫＴ細胞の活性化、その後のＴＧＦ−βの分泌および開裂につながる場合がある。例えば、免疫細胞受容体は、免疫学的に活性な生物模倣物によって結合され、別に「免疫調製の活性化」と称される、様々な免疫細胞の変化を誘導する細胞内シグナル伝達を活性化することができる。受容体の活性化を防止するために免疫細胞受容体を遮断することは、「免疫調節」にも包含され、別に「阻害免疫調節」と称され得る。
【０１６０】
本明細書で使用される、用語「治療する」および「治療」は、対象が疾患、もしくは状態、または疾患もしくは状態の症状の改善を有するように、対象に治療有効量の本発明のストラドボディを投与することを指す。改善は、疾患、もしくは状態、または疾患もしくは状態の症状の任意の改善または矯正である。改善は、観察可能または測定可能な改善であるか、または対象の一般的な健康感覚の改善であってよい。したがって、当業者は、治療が疾患状態を改善し得るが、疾患の完全な治癒ではない可能性があることを理解する。具体的には、対象における改善は、炎症の減少；Ｃ反応性タンパク質等の炎症研究用マーカーの減少；自己抗体、または血小板数、白血球数、もしくは赤血球数等の自己免疫マーカーの改善、発疹または紫斑の減少、衰弱、しびれ、もしくは刺痛の減少、高血糖の患者におけるグルコースレベルの増加、関節痛、炎症、腫れ、もしくは分解の減少、痙攣および下痢の頻度と量の減少、狭心症の減少、組織炎症の減少、または発作頻度の減少のうちの１つ以上により明らかである自己免疫の減少；癌腫瘍負荷量の減少、腫瘍の進行までの時間の増加、癌の痛みの減少、生存増加または生活の質の向上；または骨粗しょう症の進行の遅れもしくは改善のうちの１つ以上を含み得る。
【０１６１】
本明細書で使用される、用語「治療有効量」または「有効量」は、疾患または状態の症状の改善または矯正をもたらす量を指す。
【０１６２】
本明細書で使用される、「予防」は、疾患の症状の完全な防止、疾患の症状の開始の遅延、または後に発症した疾患症状の重症度の低下を意味し得る。
【０１６３】
用語「対象」は、本明細書において、用語「患者」と交換可能に使用され、本発明のストラドボディが本明細書に記載される方法により投与される任意の哺乳類対象を意味するようにとられる。特定の実施形態では、本開示の方法は、ヒト対象を治療するために採用される。本開示の方法は、ヒト以外の霊長類（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル）、魚類、および爬虫類を治療するためにも採用され得る。
【０１６４】
特に、本発明のストラドボディは、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、血管炎、酒さ、挫瘡、湿疹、心筋炎および心筋の他の症状、全身性エリテマトーデス、糖尿病、脊椎症、滑膜線維芽細胞、および骨髄間質；骨量の減少；パジェット病、骨巨細胞腫；多発性骨髄腫；乳癌；廃用性骨減少症；栄養失調、歯周病、ゴーシェ病、ランゲルハンス細胞組織球症、脊髄損傷、急性化膿性関節炎、骨軟化症、クッシング症候群、単骨性線維性骨異形成症、多骨性線維性骨異形成症、歯周再建、および骨折；サルコイドーシス；溶骨性骨癌、肺癌、腎臓癌、および直腸癌；骨転移、骨痛管理、および液性悪性高カルシウム血症、ならびに強直性脊椎炎、および他の脊椎関節症；移植拒絶反応、ウイルス感染、血液学的異常増殖、および新生物様状態、例えば、ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、毛様細胞白血病、およびリンパ形質細胞性白血病）、リンパ球前駆細胞の腫瘍（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫を含む）、胸腺腫、成熟ＴおよびＮＫ細胞の腫瘍（末梢Ｔ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫、および大顆粒リンパ球性白血病を含む）、ランゲルハンス細胞組織球症、急性骨髄性白血病（成熟を伴うＡＭＬ、分化を伴わないＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、および急性単球性白血病を含む）等の骨髄異常増殖、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄増殖性疾患（慢性骨髄性白血病を含む）、中枢神経系の腫瘍、例えば、脳腫瘍（神経膠腫、神経芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫、および網膜芽細胞腫）、固形腫瘍（鼻咽頭癌、基底細胞癌、膵癌、胆管の癌、カポジ肉腫、精巣癌、子宮、膣もしくは子宮頸癌、卵巣癌、原発性肝癌、または子宮体癌）、血管系の腫瘍（血管肉腫及び血管周囲細胞腫））、または他の癌を含むが、これらに限定されない状態を治療するために使用され得る。
【０１６５】
本発明のストラドボディは、自己免疫疾患を治療するために使用され得る。本明細書で使用される、用語「自己免疫疾患」は、８０を超える多様な群の疾患および状態を指す。これらの疾患および状態の全てにおいて、根本的な問題は、身体の免疫系が身体自体を攻撃することである。自己免疫疾患は、結合組織、神経、筋肉、内分泌系、皮膚、血液、ならびに呼吸器および消化器系を含む、すべての主要な身体系に影響を及ぼす。自己免疫疾患は、例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、重症筋無力症、および１型糖尿病を含む。
【０１６６】
本発明の組成物および方法を用いて治療可能な疾患または状態は、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球形成不全、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫、後天性フォンビルブランド病、意義不明の多発性骨髄腫およびモノクローナル免疫グロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球癆、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫媒介好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児の輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病、またはエバンス症候群を含むが、これらに限定されない血液免疫学的プロセスであってよい。
【０１６７】
疾患または状態はまた、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗−／ＧＭＩに関連した下位運動神経症候群、脱髄、多発性硬化症、および視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型に関連した脊髄症、自己免疫糖尿病性ニューロパチー、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、または急性特発性自律神経障害ニューロパチーを含むが、これらに限定されない神経免疫学的プロセスであってもよい。
【０１６８】
疾患または状態はまた、川崎病、関節リウマチ、フェルティ症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、自発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自発性流産、全身性エリテマトーデス、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、またはぶどう膜炎を含むが、これらに限定されないリウマチ性疾患プロセスであってもよい。
【０１６９】
疾患または状態はまた、中毒性表皮壊死融解症、壊疽、肉芽腫、自己免疫性皮膚水疱症（尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および落葉状天疱瘡を含む）、白斑症、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、全身性硬化症（びまん性および限局型皮膚全身性硬化症を含む）、またはアトピー性皮膚炎（特にステロイド依存性）を含むが、これらに限定されない皮膚免疫学的疾患プロセスであってもよい。
【０１７０】
疾患または状態はまた、封入体筋炎、壊死性筋膜炎、炎症性筋疾患、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）筋症、傍腫瘍性壊死性筋症、Ｘ連鎖性空胞性筋症、ペナシラミン誘導多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、または心筋症を含むが、これらに限定されない筋骨格免疫学的疾患プロセスであってもよい。
【０１７１】
疾患または状態はまた、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、特発性肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ウィップル病、潰瘍性大腸炎、または硬化性胆管炎を含むが、これらに限定されない消化器免疫学的疾患プロセスであってもよい。
【０１７２】
疾患または状態はまた、移植片対宿主病、移植片の抗体媒介性拒絶反応、骨髄移植後拒絶反応、感染後の疾患の炎症、リンパ腫、白血病、異常増殖、喘息、抗β細胞抗体を伴う１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発動脈炎、または多臓器不全であってもよい。
【０１７３】
免疫学的障害を治療するための臨床利用性に加えて、ストラドボディは、感染症、癌、および炎症性疾患の治療における治療用途を有する。ストラドボディは、本質的に、任意の対応する治療用抗体のための既知のプロトコルに従い使用され得る。ストラドボディは、一般的に、癌におけるＡＤＣＣ、または自己免疫疾患におけるサイトカイン放出の減少を伴う単球およびＤＣ成熟の減少等のモノクローナル抗体によってエフェクター細胞に示される作用を増強し、それによって、例えば、ストラドボディのＦａｂ部分の供給源モノクローナル抗体を用いて生じるであろう免疫応答と比較して、癌に対する免疫応答を強化するように設計される。
【０１７４】
感染症は、細菌、菌類、寄生虫、およびウイルス因子によって引き起こされるものを含むが、これらに限定されない。そのような感染性因子の例としては、以下のものが含まれる：ブドウ球菌、連鎖球菌科、ナイセリア科（ｎｅｉｓｓｅｒｉａａｃｅａｅ）、球菌、腸内細菌科、シュードモナス科、ビブリオ科、カンピロバクター、パスツレラ科、ボルデテラ、フランシセラ、ブルセラ、レジオネラ科、バクテロイデス科、クロストリジウム、コリネバクテリウム、プロピオニバクテリウム、グラム陽性桿菌、炭疽菌、放線菌、ノカルジア、マイコバクテリウム、トレポネーマ、ボレリア、レプトスピラ、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、リケッチア、クラミジア、他のグラム陽性桿菌、他のグラム陰性桿菌、全身性真菌症、他の日和見真菌症、原生動物、線虫、吸虫、条虫、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルスおよびエプスタイン・バーウイルス、および帯状疱疹ウイルスを含む）、ポックスウイルス、パポバウイルス、肝炎ウイルス、パピローマウイルス、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、およびインフルエンザＣを含む）、パラミクソウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、レオウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、ブニヤウイルス、ラブドウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ヒト免疫不全ウイルスおよびレトロウイルス。例示的な感染症は、カンジダ症、カンジダ性敗血症、アスペルギルス症、連鎖球菌性肺炎、連鎖球菌性皮膚および口腔咽頭の状態、グラム陰性敗血症、結核、単核球症、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルスに起因する呼吸器疾患、マラリア、住血吸虫症、およびトリパノソーマ症を含むが、これらに限定されない。
【０１７５】
本明細書において、「癌」は、典型的には、未制御の細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか、またはそれを説明する。癌の例としては、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫を含む）、骨巨細胞腫、神経内分泌腫瘍、中皮腫、脊索腫、滑膜腫、神経鞘腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫、白血病、およびリンパ性悪性腫瘍を含むが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例としては、扁平細胞癌（例えば、上皮扁平細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌、小細胞肺癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃もしくは胃部の癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮体癌もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道の腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症、重鎖病、神経内分泌腫瘍、神経鞘腫、および他の細胞腫、頭頸部癌、急性骨髄性白血病（成熟を伴うＡＭＬ、分化を伴わないＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、および急性単球性白血病を含む）等の骨髄異常増殖、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄増殖性疾患（慢性骨髄性白血病を含む）、中枢神経系の腫瘍、例えば、脳腫瘍（神経膠腫、神経芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫、および網膜芽細胞腫）、固形腫瘍（鼻咽頭癌、基底細胞癌、膵癌、胆管の癌、カポジ肉腫、精巣癌、子宮、膣もしくは子宮頸癌、卵巣癌、原発性肝癌、または子宮体癌）、血管系の腫瘍（血管肉腫及び血管周囲細胞腫）、血液学的異常増殖、および新生物様状態、例えば、ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、毛様細胞白血病、およびリンパ形質細胞性白血病）、リンパ球前駆細胞の腫瘍（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫を含む）、胸腺腫、成熟ＴおよびＮＫ細胞の腫瘍（末梢Ｔ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫、および大顆粒リンパ球性白血病を含む）、溶骨性骨癌、ならびに骨転移が挙げられる。
【０１７６】
抗体は、ストラドボディが設計され得るＦａｂドメインを含む。例示的なモノクローナル抗体としては、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ（ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アフェリモマブ、アフツムマブ（ａｆｕｔｕｚｕｍａｂ）、アラシズマブペゴル、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アルツモマブペンペンテテート、アマツキシマブ（ａｍａｔｕｘｉｍａｂ）、アナツモマブマフェナトックス（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アンルキンズマブ（ａｎｒｕｋｉｎｚｕｍａｂ）（ＩＭＡ−６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ（ａｒｃｉｔｕｍｏｍａｂ）、アセリズマブ（ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、アティヌマブ（ａｔｉｎｕｍａｂ）、ａｔｌｉｚｕｍａｂ（トシリズマブ）、アトロリムマブ（ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ（ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）、ベクツモマブ（ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）、ベリムマブ、ベンラリズマブ（ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベシレソマブ（ｂｅｓｉｌｅｓｏｍａｂ）、ベバシズマブ、ビシロマブ（ｂｉｃｉｒｏｍａｂ）、ビバツズマブ（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）メルタンシン、ブリナツモマブ（ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブロソズマブ（ｂｌｏｓｏｚｕｍａｂ）、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ（ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）、ブロダルマブ（ｂｒｏｄａｌｕｍａｂ）、カナキヌマブ（ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ）、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン（ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、カプロマブペンデチド（ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、カルルマブ（ｃａｒｌｕｍａｂ）、カツマキソマブ（ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、ＣＣ４９、セデリズマブ（ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボダトックス（ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、シクスツムマブ（ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、クレノリキシマブ、リバツズマブテトラキセタン（ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、コナツムマブ（ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）、クレネズマブ（ｃｒｅｎｅｚｕｍａｂ）、ＣＲ６２６１、ダセツズマブ（ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリズマブ、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダラツムマブ（ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、デノスマブ、デツモマブ（ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ドルリモマブアリトクス（ｄｏｒｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、ドロジツマブ（ｄｒｏｚｉｔｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エクリズマブ、エドバコマブ（ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ（ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エルシリモマブ（ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、エナバツズマブ（ｅｎａｖａｔｕｚｕｍａｂ）、エンリモマブ（ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）ペゴル、エノキズマブ（ｅｎｏｋｉｚｕｍａｂ）、エンシツキシマブ（ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ）、エピツモマブシツキセタン（ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ  ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エプラツズマブ、エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、エトロリズマブ（ｅｔｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、エキシビビルマブ（ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ファノレソマブ（ｆａｎｏｌｅｓｏｍａｂ）、ファラリモマブ（ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ）、ファーレツズマブ（ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フェザキヌマブ（ｆｅｚａｋｉｎｕｍａｂ）、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ（ｆｉｇｉｔｕｍｕｍａｂ）、フランボツマブ（ｆｌａｎｖｏｔｕｍａｂ）、フォントリズマブ（ｆｏｎｔｏｌｉｚｕｍａｂ）、フォラルマブ（ｆｏｒａｌｕｍａｂ）、フォラビルマブ（ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、フレソリムマブ（ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、フルラヌマブ（ｆｕｌｒａｎｕｍａｂ）、ガリキシマブ、ガニツマブ（ｇａｎｉｔｕｍａｂ）、ガンテネルマブ（ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、ガビリモマブ（ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）、ゲムツズマブ、ゲボキズマブ（ｇｅｖｏｋｉｚｕｍａｂ）、ギレンツキシマブ（ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、グレンバツムマブ（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ）ベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ（ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、ＧＳ６６２４、イバリズマブ（ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ（ｉｃｒｕｃｕｍａｂ）、イゴボマブ（ｉｇｏｖｏｍａｂ）、イミシロマブ（ｉｍｃｉｒｏｍａｂ）、インダツキシマブラブタンシン（ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ  ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、インフリキシマブ、インテツムマブ（ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）、イノリモマブ（ｉｎｏｌｉｍｏｍａｂ）、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ（ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、イトリズマブ（ｉｔｏｌｉｚｕｍａｂ）、イクセキズマブ（ｉｘｅｋｉｚｕｍａｂ）、ケリキシマブ（ｋｅｌｉｘｉｍａｂ）、ラベツズマブ、レブリキズマブ（ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、レマレソマブ（ｌｅｍａｌｅｓｏｍａｂ）、レルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、レクサツムマブ（ｌｅｘａｔｕｍｕｍａｂ）、リビビルマブ（ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、リンツズマブ（ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）、ロルボツズマブ（ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）メルタンシン、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ルミリキシマブ（ｌｕｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、マパツムマブ、マスリモマブ（ｍａｓｌｉｍｏｍａｂ）、マブリリムマブ（ｍａｖｒｉｌｉｍｕｍａｂ）、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ミラツズマブ（ｍｉｌａｔｕｚｕｍａｂ）、ミンレツモマブ（ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミツモマブ（ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、モガムリズマブ、モロリムマブ（ｍｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス（ｍｏｘｅｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｓｕｄｏｔｏｘ）、ムロモナブＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス（ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナミルマブ（ｎａｍｉｌｕｍａｂ）、ナプツモマブエスタフェナトクス（ｎａｐｔｕｍｏｍａｂ  ｅｓｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナルナツマブ（ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ナタリズマブ、ネバク���ブ（ｎｅｂａｃｕｍａｂ）、ネシツムマブ（ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、  ネレリモマブ（ｎｅｒｅｌｉｍｏｍａｂ）、ニモツズマブ、ノフェツモマブメルペンタン（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ  ｍｅｒｐｅｎｔａｎ）、オクレリズマブ、オデュリモマブ（ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オファツムマブ、オララツマブ（ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、オロキズマブ（ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ、オナルツズマブ（ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）、オポルツズマブモナトクス（ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ  ｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ、オテリキシズマブ（ｏｔｅｌｉｘｉｚｕｍａｂ）、オキセルマブ（ｏｘｅｌｕｍａｂ）、オゾラリズマブ（ｏｚｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、パギバキシマブ（ｐａｇｉｂａｘｉｍａｂ）、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ（ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）、パスコリズマブ（ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、パテクリズマブ（ｐａｔｅｃｌｉｚｕｍａｂ）、ペムツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ピンツモマブ（ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、ポネズマブ（ｐｏｎｅｚｕｍａｂ）、プリリキシマブ（ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）、プリツムマブ（ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ＰＲＯ１４０、ラコツモマブ（ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ（ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、ラニビズマブ、ラキシバクマブ（ｒａｘｉｂａｃｕｍａｂ）、レガビルマブ（ｒｅｇａｖｉｒｕｍａｂ）、レスリズマブ（ｒｅｓｌｉｚｕｍａｂ）、リロツムマブ（ｒｉｌｏｔｕｍｕｍａｂ）、リツキシマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、ロレデュマブ（ｒｏｌｅｄｕｍａｂ）、ロモソズマブ（ｒｏｍｏｓｏｚｕｍａｂ）、ロンタリズマブ（ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ（ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、サマリズマブ（ｓａｍａｌｉｚｕｍａｂ）、サリルマブ（ｓａｒｉｌｕｍａｂ）、サツモマブエンデチド（ｓａｔｕｍｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ）、セクキヌマブ（ｓｅｃｕｋｉｎｕｍａｂ）、セビルマブ（ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、シブロツズマブ、シファリムマブ（ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、シルツキシマブ（ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、シプリズマブ、シルクマブ（ｓｉｒｕｋｕｍａｂ）、ソラネズマブ（ｓｏｌａｎｅｚｕｍａｂ）、ソネプシズマブ（ｓｏｎｅｐｃｉｚｕｍａｂ）、ソンツズマブ（ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、スタムルマブ（ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）、スレソマブ（ｓｕｌｅｓｏｍａｂ）、スビズマブ（ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）、タバルマブ（ｔａｂａｌｕｍａｂ）、タカツズマブテトラキセタン（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タドシズマブ（ｔａｄｏｃｉｚｕｍａｂ）、タリズマブ（ｔａｌｉｚｕｍａｂ）、タネズマブ（ｔａｎｅｚｕｍａｂ）、タプリツモマブパプトクス（ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｐｔｏｘ）、テフィバズマブ（ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、テリモマブアリトクス（ｔｅｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、テナツモマブ（ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テネリキシマブ（ｔｅｎｅｌｉｘｉｍａｂ）、テプリズマブ（ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ）、テプロツムマブ（ｔ��ｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ））、チガツズマブ（ｔｉｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ＴＮＸ−６５０、トシリズマブ（＝アトリズマブ（ａｔｌｉｚｕｍａｂ））、トラリズマブ（ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、トシツモマブ、トラロキヌマブ（ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ（ｔｒｅｇａｌｉｚｕｍａｂ）、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）、ツコツズマブセルモロイキン（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツビルマブ（ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）、ウブリツキシマブ（ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ウルトキサズマブ（ｕｒｔｏｘａｚｕｍａｂ）、ウステキヌマブ、バパリキシマブ（ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ）、バテリズマブ（ｖａｔｅｌｉｚｕｍｂａ）、ベドリズマブ（ｖｅｄｏｌｉｚｕｍａｂ）、ベルツズマブ、ベパリモマブ（ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ベセンキュマブ（ｖｅｓｅｎｃｕｍａｂ）、ビシリズマブ（ｖｉｓｉｌｉｚｕｍａｂ）、ボロシキシマブ（ｖｏｌｏｃｉｘｉｍａｂ）、ボツムマブ（ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ジラリムマブ（ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、およびゾリモマブアリトックス（ｚｏｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７７】
本発明のストラドボディは、サイトカインに特異的であってよい。例えば、本発明のストラドボディは、インターフェロン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、またはＩＦＮβ等）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、またはＩＬ−２３に特異的であってよい。一実施形態では、本発明のストラドボディは、サイトカインに特異的であり、１つ以上の炎症性疾患または自己免疫疾患の治療または防止に有用である。例えば、一実施形態では、ストラドボディは、抗ＩＬ−２、抗ＩＬ−８、または抗ＩＬ−１７ストラドボディである。
【０１７８】
本明細書で使用される、用語「自己免疫疾患」は、８０を超える多様な群の慢性疾患を指す。これらの疾患の全てにおいて、根本的な問題は、身体の免疫系が身体自体を攻撃することである。自己免疫疾患は、結合組織、神経、筋肉、内分泌系、皮膚、血液、ならびに呼吸器および消化器系を含む、すべての主要な身体系に影響を及ぼす。
【０１７９】
自己免疫疾患または状態は、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球形成不全、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫、後天性フォンビルブランド病、意義不明の多発性骨髄腫およびモノクローナル免疫グロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球癆、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫媒介好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児の輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病、またはエバンス症候群を含むが、これらに限定されない血液免疫学的プロセスであってよい。
【０１８０】
自己免疫疾患または状態は、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗−／ＧＭＩに関連した下位運動神経症候群、脱髄、多発性硬化症、および視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型に関連した脊髄症、自己免疫糖尿病性ニューロパチー、または急性特発性自律神経障害ニューロパチーを含むが、これらに限定されない神経免疫学的プロセスであってよい。
【０１８１】
自己免疫疾患または状態は、川崎病、関節リウマチ、フェルティ症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、自発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自発性流産、全身性エリテマトーデス、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、またはぶどう膜炎を含むが、これらに限定されないリウマチ性疾患プロセスであってよい。
【０１８２】
自己免疫疾患または状態は、中毒性表皮壊死融解症、壊疽、肉芽腫、自己免疫性皮膚水疱症（尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、および落葉状天疱瘡を含む）、白斑症、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、全身性硬化症（びまん性および限局型皮膚全身性硬化症を含む）、またはアトピー性皮膚炎（特にステロイド依存性）を含むが、これらに限定されない皮膚免疫学的疾患プロセスであってよい。
【０１８３】
自己免疫疾患または状態は、封入体筋炎、壊死性筋膜炎、炎症性筋疾患、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）筋症、傍腫瘍性壊死性筋症、Ｘ連鎖性空胞性筋症、ペナシラミン誘導多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、または心筋症を含むが、これらに限定されない筋骨格免疫学的疾患プロセスであってよい。
【０１８４】
自己免疫疾患または状態は、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、特発性肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ウィップル病、潰瘍性大腸炎、または硬化性胆管炎を含むが、これらに限定されない消化器免疫学的疾患プロセスであってよい。
【０１８５】
自己免疫疾患または状態は、移植片対宿主病、抗体媒介移植片拒絶反応、骨髄移植後拒絶反応、感染症後炎症、リンパ腫、白血病、異常増殖、喘息、抗β細胞抗体を伴う１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発動脈炎、または多臓器不全であってよい。
【０１８６】
別の実施形態では、本明細書に記載されるストラドボディは、血液が患者から引き出され、患者に戻される前に約１時間半〜約３時間の時間期間、ストラドボディと過渡的に接触するプライミングシステムにおいて利用することができる。この形態の細胞療法では、エフェクター細胞のストラドボディへの曝露を通してエフェクター細胞を調節するために、患者自身のエフェクター細胞が、エクスビボでマトリックス上に固定されるストラドボディに曝露される。調節されたエフェクター細胞を含む血液が再び患者に注入される。そのようなプライミングシステムは、多数の臨床的および治療的用途を有し得る。
【０１８７】
本明細書に開示されるストラドボディは、免疫応答プロファイルにおける特定の変化に影響を及ぼすために、様々な状況の免疫系応答を変更するように容易に適用することもできる。対象の免疫応答を変更するか、または調節することは、免疫応答の割合または成分を増加、減少または変更することを指す。例えば、サイトカインの産生または分泌レベルは、ＦｃγＲの、これらの受容体と相互作用するように設計されたストラドボディとの適切な組み合わせを標的とすることによって、所望に応じて増加または減少させることができる。抗体の産生を増加または減少させることもでき、２つ以上のサイトカインまたは免疫細胞受容体の比率を変化させるか、またはさらなるサイトカインもしくは抗体の型を産生させてもよい。免疫応答はまた、本明細書に開示される免疫学的に活性な生物摸倣物によって調節されない免疫応答と比較して、単球マクロファージ由来細胞の食作用の可能性の増加もしくは減少、破骨細胞機能の増加もしくは減少、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）による抗原提示の増加もしくは減少、ＮＫ細胞機能の増加もしくは減少、Ｂ細胞の増加もしくは減少、Ｂ細胞機能の増加もしくは減少を含む、ＦｃγＲを発現する免疫細胞のエフェクター機能であってもよい。
【０１８８】
好ましい実施形態では、癌、または自己免疫もしくは炎症性疾患、あるいは感染症を有する対象は、本明細書に記載される治療有効量のストラドボディを対象に投与するステップを含む、かれらの免疫応答が変更され、治療有効量のストラドボディは、対象における免疫応答を変更する。理想的には、この介入は、対象における疾患または状態を治療する。免疫応答の変更は、応答の増加または減少であってよく、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−７、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−αのうちのいずれかのレベルを含む、サイトカインレベルの変更を伴い得る。好ましい実施形態において、Ｉｌ−６またはＩＬ−８は、療法に応答して減少する。特に好ましい実施形態において、Ｉｌ−６およびＩＬ−８は、療法に持続応答して減少する。しかしながら、本発明は、記載の生物摸倣物の任意の特定の作用機構に限定されない。免疫応答の変更は、対象における自己抗体レベルの変更であってよい。免疫応答の変更は、対象における自己攻撃性Ｔ細胞レベルの変更であってよい。
【０１８９】
例えば、自己免疫疾患におけるＴＮＦ−αの産生量の減少は、治療効果を有し得る。この実用的な用途は、尋常性乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、および強直性脊椎炎を治療することが臨床的に証明されている抗ＴＮＦ−α抗体療法（例えば、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））である。これらの自己免疫疾患は、異なる病因を有するが、炎症および免疫細胞活性に関連する疾患プロセスの主要な免疫学的成分を共有する。ＴＮＦ−α産生を減少させるように設計されたストラドボディは、同様に、これらおよび多くの他の自己免疫疾患に有効である。免疫応答のプロファイルの変更はまた、例えば、対象自身の組織を標的とする自己抗体の抗体産生の減少、または対象における自己攻撃性Ｔ細胞レベルの変更をもたらすための、直接的または間接的な調節であってもよい。例えば、多発性硬化症は、インターフェロンβ療法によって治療され得る自己反応性Ｔ細胞を伴う自己免疫障害である。例えば、Ｚａｆｒａｎｓｋａｙａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ＣＤ４＋  ａｎｄ  ＣＤ８＋  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００７  Ｍａｙ；１２１（ｌ）：２９−３９−Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｄｅｃ  １８を参照。自己反応性Ｔ細胞レベルを減少させるように設計されたストラドボディは、同様に、多発性硬化症に有効であり、自己反応性Ｔ細胞を伴う他の自己免疫疾患に有効であり得る。
【０１９０】
本明細書に記載されるストラドボディは、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、単球、もしくはＮＫ細胞を含む免疫細胞からの共刺激分子の発現を調節するため、またはこれらの同じ免疫細胞において、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）を含む分化、成熟、もしくはサイトカイン分泌を阻害する、またはインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）もしくはインターロイキン−６（ＩＬ−６）を含むサイトカイン分泌を増加するために使用され得る。当業者は、免疫細胞を免疫学的に活性な生物摸倣物に曝露し、免疫細胞機能の調節を測定することにより、免疫学的に活性な生物摸倣物の有効性を確認することもでき、免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、または単球である。一実施形態では、免疫細胞は、インビトロで免疫学的に活性な生物模倣物に曝露され、細胞表面受容体またはサイトカイン産生の量を決定するステップをさらに含み、細胞表面受容体またはサイトカイン産生の量における変化は、免疫細胞機能の調節を示す。別の実施形態において、免疫細胞は、自己免疫疾患のモデル動物においてインビボで免疫学的に活性な生物模倣物に曝露され、自己免疫疾患における改善の程度を評価するステップをさらに含む。本明細書に記載されるストラドボディは、Ｂ細胞からの共刺激分子の発現を調節するために使用され得る。
【０１９１】
本発明の方法は、任意の動物種に適用することができ、Ｆｃ試薬のＩｇＧ由来部分が作製されるＩｇＧ分子は、任意の動物種からであってよい。当然のことながら、関連する動物種は、ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子が生じるものである。一般的に、本方法が適用される種、および本方法においてＦｃ試薬のＩｇＧ由来部分が使用される種は、同じである。しかしながら、それらは必ずしも同じではない。関連する動物種は、好ましくは、哺乳類であり、これらは、限定されないが、ヒト、ヒト以外の霊長類（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、ウマ、ウシ動物（例えば、雄牛、乳牛、または牛）、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、スナネズミ、ハムスター、ラット、およびマウスを含む。哺乳類以外の種としては、例えば、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル）および魚類を含む。
【０１９２】
本明細書に開示されるストラドボディは、いくつかのさらなる用途および使用を有する。
【実施例】
【０１９３】
実施例１．ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的ストラドボディの産生および精製  トラスツズマブ可変およびＣＨ１領域をコードする合成ＤＮＡ構築物は、Ｂｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）から入手し、ＰＣＲによって、完全トラスツズマブ抗体重鎖をコードするリーディングフレームを生成するために、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域を含有する対応するＦｃ領域に融合された。ｃＤＮＡは、哺乳類細胞における発現のために、発現ベクターｐＯｐｔｉＶｅｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内にクローニングされた。同時に、トラスツズマブ軽鎖を含有する同様の合成構築物を得、ベクターｐｃＤＮＡ３．３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内にクローニングした。ストラドボディ重鎖構築物は、多量体化ドメインおよびリンカー領域をコードするプライマーを用いて、テンプレートとしてトラスツズマブ重鎖を使用して、オーバーラップＰＣＲにより生成された。ＰＣＲ産物は、ストラドボディ発現構築物を生成するために、ＴＡクローニングによりｐＯｐｔｉＶｅｃ発現ベクター内にクローニングされた。ＴＡクローニング後、全ての構築物は、完全なコードフレームの配列決定、ならびに周囲の配列によって確認された。ストラドボディタンパク質発現に関して、大規模なＤＮＡプラスミド単離が、内毒素を含まないプラスミド精製キット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  Ｎａｇｅｌ）によって実施され、タンパク質が、一過性のタンパク質発現により２９３−Ｔ  ＨＥＫまたはＣＨＯ細胞において産生された。ストラドボディタンパク質は、重鎖および軽鎖ＤＮＡ構築物の同時トランスフェクションにより発現された。ストラドボディタンパク質は、タンパク質Ｇ親和性クロマトグラフィーを用いて、ＡＫＴＡｘｐｒｅｓｓでＦＰＬＣ、続いてＨｉＰｒｅｐ脱塩カラム（ＧＥ  ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で脱塩することにより精製された。ストラドボディ構築物は表３に示される。
【０１９４】
ストラドボディ多量体の形成を観察するために、精製したストラドボディは、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルによって分析された。未改変抗体ＧＢ２５００に対して高分子量のバンドは、いくつかの構築物において、多量体形成を示した。図８に示されるように、いくつかのＣ末端ストラドボディは、非改変タンパク質に対して高分子量バンドを示した。特に、いくつかの高分子量バンドは、構築物ＧＢ２５４７の分析時に検出された。連続ストラドボディ構築物も試験された。図９に示されるように、いくつかの連続ストラドボディ構築物、特に多量体化連続ストラドボディＧＢ２５４２は、非改変抗体ＧＢ２５００に対して高分子量バンドを示した。
【０１９５】
ＨＥＲ２／ｎｅｕ以外の標的に対して指向された他のストラドボディが、類似する様式で産生、精製、および分析された。これらの他のストラドボディは、ＥＧＦＲに対して指向されたＧＢ３５００シリーズ、ＣＤ２０に対して指向されたＧＢ４５００シリーズ、およびＴＮＦに対して指向されたＧＢ７５００シリーズを含む。
【０１９６】
実施例２．ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的ストラドボディの細胞毒性および結合活性  抗体依存性細胞毒性は、未改変抗体ＧＢ２５００と比較して、いくつかのストラドボディについて決定された。ＡＤＣＣアッセイは、標的細胞系として低ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現腫瘍細胞系ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を用いて、エフェクター細胞として新たに単離したＮＫ細胞上で実施された。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、Ｃｒ−５１で放射活性標識され、続いて、次の５つの溶液のうちの１つと共に１時間インキュベートされた：培地のみ、非結合ヒトＩｇＧ１を含有する培地、モノクローナル抗体ＧＢ２５００を含有する培地、および試験されるストラドボディを含有する培地。次いで、様々なＮＫ細胞対腫瘍細胞の割合で、細胞を新たに単離したヒトＮＫ細胞と共に４時間沈着させ（ｐｌａｔｅｄ  ｏｕｔ）、細胞がペレット化された後、培地中に放出されたＣｒ−５１の量によって、死滅量が測定された。
【０１９７】
ＧＢ２５００を含む合計１８のタンパク質の各々からの１〜４つの独立して発現および精製されたタンパク質バッチが試験された。試験されたエフェクター細胞対標的細胞の割合は、５０：１、２５：１、１２．５：１、および６．５：１であった。ＮＫ収率が可能である場合、１００：１の割合が使用された。図１０は、増加したＡＤＣＣがエフェクター細胞対標的細胞の範囲にわたってＧＢ２５００に対してＧＢ２５４２で観察されたことを示す、ＡＤＣＣデータの代表的な例を示す。図１０は、ＧＢ２５００の２つの異なる独立して精製されたバッチの変動も示す。
【０１９８】
１２全ての抗ＨＥＲ２／ｎｅｕストラドボディおよびＧＢ２５００の収集されたＡＤＣＣデータが表３に示される。表３の各行は、精製され、試験されたストラドボディのバッチを表す（例えば、ＧＢ２５４２の４つのバッチが産生され、試験された）。データは、示されるエフェクター細胞対標的細胞の割合で、示されるドナーから単離されたＮＫ細胞による死滅パーセントとして表される。
【０１９９】
研究の結果は、意外にも、新規ストラドボディおよびトラスツズマブ抗体ＧＢ２５００は同一のＦａｂを共有するが、いくつかのストラドボディはＡＤＣＣ応答において有意により強力であったことを示した。ＧＢ２５４２は、ＡＤＣＣアッセイにおいて特に強力であった。この特定の実験におけるＡＤＣＣ応答の順位は次の通りであった：ＧＢ２５４２（２つの多量体化ドメインを有する多量体化連続ストラドボディ＞ＧＢ２５４７（２つの多量体化ドメインを有する多量体化Ｃ末端ストラドボディ）＞ＧＢ２５５０（１つの  多量体化ドメインを有する多量体化Ｃ末端ストラドボディ）＞ＧＢ２５００＞ヒトアイソトープ対照および培地対照。
【表３】
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【０２００】
エフェクター細胞対標的細胞比応答ＡＤＣＣに加えて、ストラドボディ濃度応答ＡＤＣＣの分析が行われた。ＡＤＣＣアッセイは、ストラドボディの用量応答を評価するために、０．４〜４０００ｎｇ／ｍＬまで変動するストラドボディおよびＨＥＲ／２−ｎｅｕ抗体の濃度を用いて実施された。ＮＫ細胞対ＭＤＡ−ＭＢ−２３１標的細胞の割合は、これらの実験に関して、２５：１の一定に保たれた。研究の結果は図１１に示される。濃度依存分析は、トラスツズマブ抗体（ＧＢ２５００）に対して、ストラドボディ、特にＧＢ２５４２のＡＤＣＣ活性の増加を確認した。この実験に基づき、多量体化連続ストラドボディＧＢ２５４２は、２つの分子が同じＦａｂを共有するという事実にも関わらず、ＡＤＣＣにおいて、ＧＢ２５００よりも２対数以上強力であると推定された。
【０２０１】
Ｂｉａｃｏｒｅ３０００システムを用いてプラズモン共鳴により測定される、ＧＢ２５００と比較したストラドボディの結合強度が評価された。組換えヒトＦｃγＲＩＩＩａは、１０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ５．０中３ｕｇ／ｍｌに希釈され、ＣＭ５チップのフローセル上に手動で固定化された。ストラドボディまたはＧＢ２５００は、ＨＢＳ−ＥＰ（０．０１  Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を用いて１μＭに希釈され、以下のように固定化ヒトＦｃγＲＩＩＩａ上で灌流された。フローセルの活性化後、３ｕｇ／ｍｌのタンパク質を、ＲＵ（共鳴単位）が４００に達するまで５μｌ／分の流速で１μｌの増分で注入した。フローセルは、その後、１Ｍのエタノールアミンで遮断された。ブランク対照として別のフローセルが使用された。典型的には、２０μｌの希釈された試料が２０μｌ／分の流速で注入された。フローセルの再生は、２０μｌ／分で、泳動緩衝液ＨＢＳ−ＥＰで延長洗浄することにより実施された。
【０２０２】
結合データの例は図１２に示される。親抗体ＧＢ２５００、高結合剤／高ＡＤＣＣストラドボディＧＢ２５４２（多量体化連続）およびＧＢ２５４７（多量体化Ｃ末端）、および低結合剤／低ＡＤＣＣストラドボディＧＢ２５５４（非多量体化連続）の結合曲線が示される。比較として、マウスＦｃに基づく抗体ＭＢ２５００の結合曲線が、非／低結合剤の例として含まれる。結合強度の順位は、図１３に示される。ストラドボディのいくつかは、ＧＢ２５００より高いＲＵ最大値を有する。加えて、このアッセイのＧＢ２５４２は、最も高いＲＵｍａｘ、および中でも最も遅い解離速度を有した。
【０２０３】
次に、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたＡＤＣＣ活性と結合との間の相関関係が評価された。ＡＤＣＣ活性は、モノクローナル抗体ＧＢ２５００のＡＤＣＣ活性に対して倍率差として計算された。２つのＧＢ２５００バッチが同じドナーに関して同じ実験において測定された場合、平均ＡＤＣＣは、ＡＤＣＣの平均倍率差を計算するために使用された。結合は、ＲＵｍａｘとして測定され、データは図１４に示される。ストラドボディのいくつかに関して、親抗体より高いＡＤＣＣにおける平均倍率増加があった（ＧＢ２５００＝１）。データセットは幾分量が制限され、ＡＤＣＣ活性においてある程度の差異が観察されたが、結合とＡＤＣＣ活性との間に全体として相関関係があるように思われた。重要なことには、ＧＢ２５４２（２つの多量体化ドメインを有する多量体化連続）、ＧＢ２５２４（１つの多量体化ドメインおよび１つのリンカーを有する多量体化連続）、ＧＢ２５４７（２つの多量体化ドメインを有する多量体化Ｃ末端）、およびＧＢ２５４０（１つの多量体化ドメインを有する多量体化連続）を含む高ＡＤＣＣ／高結合ストラドボディのうちのいくつかに関して、高次形態は、多量体形成、受容体結合、およびＡＤＣＣ活性の間の相関関係を示す非変性ゲル上で容易に観察可能であった。
【０２０４】
全体として、研究の結果は、ストラドボディ構築物のいくつかが、試験された全てのストラドボディと同じＦａｂを共有するモノクローナル抗体ＧＢ２５００と比較して、高いＡＤＣＣ、および強い結合活性を示したことを示した。最も高いＡＤＣＣおよび最も強い結合活性を示すストラドボディ構築物は、２つのＦｃドメイン間に位置するイソロイシンジッパー多量体化ドメインおよびＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインを含むＧＢ２５４２であった。加えて、プラズモン共鳴およびＡＤＣＣ活性によって測定された結合間に有意な程度の相関関係があった。
【０２０５】
ＨＥＲ２／ｎｅｕ以外の標的に対して指向される他のストラドボディは、類似する様式で、細胞毒性および結合に関して評価される。これらの他のストラドボディは、ＥＧＦＲに対して指向されたＧＢ３５００シリーズ、ＣＤ２０に対して指向されたＧＢ４５００シリーズ、およびＴＮＦに対して指向されたＧＢ７５００シリーズを含む。
【０２０６】
実施例３．ストラドボディのさらなる精製
ストラドボディ多量体および単量体が良好に分離され得るかを判断するために、Ｍｏｎｏ  Ｑカラムのイオン交換クロマトグラフィーによりＧＢ２０５４を精製した。  
図１５に示される研究の結果は、高次多量体が単量体から分離され得ることを示した。多量体のピークは未分画ピークにおいて容易に識別されないが（レーンＳＢ）、イオン交換後に容易に検出可能であった。理論に拘束されることなく、ストラドボディ多量体の精製が化合物の効力を増加すると考えられる。
【０２０７】
実施例４．多量体化ドメインを有するストラドボディの多量体化およびＦｃγＲＩＩＩａ結合の増強  連続ストラドボディ化合物の多量体化をより厳密に評価するために、高感度ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル方法が、ストラドボディ構築物の多量体化を、互いにおよびＨＥＲ２モノクローナル抗体構築物ＧＢ２５００と比較するために使用された。４〜１２％のゲルは非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに使用され、１２％のゲルは還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに使用された。全ての試料は、２μｇで装填され、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色前に約２．３時間、１５０Ｖで実行された。
【０２０８】
図１６に示されるように、対照ｍＡｂ  ＧＢ２５００（レーン１）、および２つのＩｇＧ１  Ｆｃ領域間に非多量体化リンカーを有する非多量体化連続ストラドボディ構築物ＧＢ２５５５（レーン７）は、多量体化しなかった。同様に、２つのＩｇＧ１  Ｆｃ領域間にＧ４Ｓリンカードメインを有する非多量体化連続ストラドボディ構築物ＧＢ２５５４（レーン６）は、ほとんど多量体化を示さなかった。一部の多量体化は、２つのＩｇＧ１  Ｆｃ領域間に、それぞれ、イソロイシンジッパーまたはＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインを有する多量体化連続ストラドボディ構築物ＧＢ２５３８（レーン３）およびＧＢ２５４０（レーン４）において明らかであった。多量体化連続ストラドボディ構築物ＧＢ２５２４（レーン２）は、２つのＩｇＧ１  Ｆｃ領域間にＧ４ＳリンカードメインおよびＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインを有するが、多量体化は不十分であった。多量体化の程度が低いＧＢ２５３８、ＧＢ２５４０、およびＧＢ２５２４とは対照的に、２つのＩｇＧ１  Ｆｃ領域間にイソロイシンジッパーおよびＩｇＧ２ヒンジを有する多量体化連続ストラドボディ構築物ＧＢ２５４２は、多量の多量体化（レーン５）を示した。
【０２０９】
ＧＢ２５００親抗体および連続ストラドボディ構築物の各々のＦｃγＲＩＩＩａへの結合を分析するために、精製されたＦｃγＲＩＩＩａ−Ｈｉｓが１０μｇ／ｍｌでＦｏｒｔｅＢｉｏ抗ペンタＨｉｓセンサ（カタログ＃１８−５０７７）上に負荷された結合分析が実施された。ＧＢ２５００（ＨＥＫ細胞において産生）、ＧＢ２５２４、ＧＢ２５３８、ＧＢ２５４０、ＧＢ２５４２、ＧＢ２５５４、またはＧＢ２５５５は、結合速度（Ｋｏｎ）を測定するために１×動態緩衝液（ＦｏｒｔｅＢｉｏカタログ＃１８−５０３２）中の受容体と共にインキュベートされ、センサチップは、解離速度（Ｋｄｉｓ）を測定するために後に結合緩衝液に移された。ＧＢ２５００抗体は、３３３３〜２０８ｎＭの範囲の濃度で試験され、ストラドボディは、２００〜１２．５ｎＭの範囲の濃度で試験された。ＫＤは、ＦｏｒｔｅＢｉｏ分析ソフトウェアを用いて結合および解離速度から計算された。表４および図１７に示されるように、多量体化連続ストラドボディＧＢ２５４２およびＧＢ２５３８は、最も低いＫＤ、したがって、最高の結合能力を示した。
【表４】
2015527366.tif 000009
【０２１０】
Ｈｅｒ２／ｎｅｕ以外の標的に対して指向された他のストラドボディからの結合データは、類似体である。これらの他のストラドボディは、ＥＧＦＲに対して指向されたＧＢ３５００シリーズ、ＣＤ２０に対して指向されたＧＢ４５００シリーズ、およびＴＮＦに対して指向されたＧＢ７５００シリーズを含む。
【０２１１】
研究の結果は、ＧＢ２５４２が対照ｍＡｂおよび上記に報告される試験された他の全ての連続ストラドボディ構築物と比較して優れた多量体化を示したことを確認した。加えて、ＧＢ２５４２およびＧＢ２５３８は、最も強力なＦｃγＲＩＩＩａへの結合を示した。共に、ＧＢ２５４２の優れた多量体化およびＦｃγＲＩＩＩａ結合能力を示すデータは、ＧＢ２５４２で観察された優れたＡＤＣＣに関して、上記に提示されたデータを支持した。
【０２１２】
実施例５．多量体化ストラドボディは、インビボマウスモデルにおいて、末梢血中の血清ＩｇＭおよびＢ細胞を減少させる  ０週に、５×１０７ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を重度の複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに腹腔内注射した。２〜１０週に、ＰＢＳ、ＧＢ４５００（毎週１０ｎＭ）、ＧＢ４５６３（毎週１．７ｎＭ）、またはＧＢ４５４２（毎週１．４ｎＭ）をマウスに腹腔内注射した。ＧＢ４５００は、週に３回注射されたが、ＰＢＳ、ＧＢ４５６３、およびＧＢ４５４２はそれぞれ、週に１回注射された。したがって、ストラドボディは、モノクローナル抗体に対してあまり頻繁に投与されなかっただけでなく、低いモル用量で与えられた。モル濃度は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥから推定された分子量に基づいた。血液試料を、ヒトＰＢＭＣの養子移入に対して、第１、２、３、５、７、９、１０、１２、１６、および２０週目に採取され、Ｂ細胞数および血清ヒトＩｇＭに関して評価された。研究の終点（即ち、２１週目）で、マウスを安楽死させ、脾臓を採取し、Ｂ細胞の数を評価した。実験的なフローチャートが図１８に概略的に示される。
【０２１３】
ＰＢＳ、ＧＢ４５００、ＧＢ４５６３、またはＧＢ４５４２で処置されたマウスの血清中のヒトＩｇＭは、ＥＬＩＳＡによって評価された。ストラドボディＧＢ４５６３およびＧＢ４５４２は、ヒトＩｇＭレベルの減少において、モノクローナル抗体ＧＢ４５００と同じくらい有効であった（図１９）。
【０２１４】
ＰＢＳ、ＧＢ４５００、ＧＢ４５６３、またはＧＢ４５４２で処置されたマウスから採取した末梢血１ｍＬ当たりのヒトＢ細胞の数は、フローサイトメトリーによって評価された。ストラドボディＧＢ４５６３およびＧＢ４５４２は、末梢血中のヒトＢ細胞の減少において、モノクローナル抗体ＧＢ４５００と少なくとも同じくらい有効であった（図２０）。
【０２１５】
研究終了時に、マウスを安楽死させ、脾臓中のＢ細胞を、フローサイトメトリーによって計数した。ストラドボディＧＢ４５６３は、脾臓に存在するヒトＢ細胞数の減少において、モノクローナル抗体ＧＢ４５００と同じくらい有効であった。ストラドボディＧＢ４５４２は、脾臓に存在するヒトＢ細胞数の減少において、モノクローナル抗体ＧＢ４５００より有効であった（図２１）。
【０２１６】
研究の結果は、ストラドボディＧＢ４５６３およびＧＢ４５４２がモノクローナル抗体ＧＢ４５００と比較して低用量で投与されたという事実にも関わらず、ストラドボディは、血清ヒトＩｇＭレベルの減少およびヒトＢ細胞数の減少の両方において少なくとも有効であったことを示した。加えて、抗ＣＤ２０ストラドボディＧＢ４５４２は、対応する抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＧＢ４５００より良好にＢ細胞の枯渇を誘導した。
【０２１７】
実施例６．多量体化ストラドボディはＢ細胞リンパ腫細胞系の増殖を阻害する  Ｂ細胞リンパ腫細胞（Ｄａｕｄｉ、Ｒａｍｏｓ、４５４Ｂ、および９２４Ｂ細胞系）は、様々な濃度のヒトＩｇＧ（負の対照）、モノクローナル抗体ＧＢ４５００、またはストラドボディＧＢ４５４２の存在下で３日間培養された。０．５μｃｉの３Ｈ−ＴｄＲが培養物に添加され、３Ｈ−ＴｄＲの取り込みは、１６時間後に補正計数毎分（ＣＣＰＭ）で測定された。細胞増殖の阻害は、式：（１−実験条件ＣＣＰＭ／未処置ＣＣＰＭ）ｘ１００％を用いて計算された。研究の結果は、３つの独立した実験の代表例である図２２および２３に示される。ＧＢ４５４２は、μｇ／ｍＬ（図２２）またはモル（図２３）で測定される全ての濃度で、全てのＢリンパ球細胞系において、少なくともＧＢ４５００と同じくらい細胞増殖の直接的阻害で有効であった。ＧＢ４５４２は、μｇ／ｍＬの濃度範囲およびｐｍｏｌ／ｍＬの範囲で、Ｒａｍｏｓ細胞、４５４Ｂ細胞、および９２４Ｂ細胞の直接阻害で有意により有効であった（図２２および２３）。
【０２１８】
研究の結果は、対応する抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＧＢ４５００と比較して、抗ＣＤ２０ストラドボディＧＢ４５４２がＢ細胞リンパ腫細胞系の増殖の増強された阻害を媒介したことを示した。
【０２１９】
実施例７．多量体化ストラドボディはＢ細胞リンパ腫細胞系のＣＤＣを媒介する  Ｂ細胞リンパ腫細胞（Ｄａｕｄｉ、Ｒａｍｏｓ、４５４Ｂ、および９２４Ｂ細胞系）は、様々な濃度のヒトＩｇＧ（負の対照）、モノクローナル抗体ＧＢ４５００、またはストラドボディＧＢ４５４２もしくはＧＢ４５９６の存在下、およびウサギ補体の存在下もしくは不在下で１時間培養された。細胞毒性の程度は、アネキシンＶ／７−ＡＡＤ染色のフローサイトメトリー分析により測定された。研究の結果は、２つの独立した実験の代表例である図２４および２５に示される。ストラドボディＧＢ４５９６は、μｇ／ｍＬ（図２４）またはモル（図２５）で測定される全ての濃度で、モノクローナル抗体ＧＢ４５００と同じくらいＣＤＣで有効であった。際立って、ストラドボディＧＢ４５４２は、μｇ／ｍＬ（図２４）またはモル（図２５）で測定される、試験された全ての濃度で、モノクローナル抗体ＧＢ４５００より有効であった。
【０２２０】
研究の結果は、その対応する抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＧＢ４５００と比較して、Ｂ細胞リンパ腫細胞系が抗ＣＤ２０ストラドボディＧＢ４５４２の存在下でＣＤＣに対して増加した感受性を示すことを示した。これらの作用は、従来のモノクローナル抗体濃度より少なくとも１対数桁低いストラドボディ濃度で生じる。
【０２２１】
共に、データは、対応するモノクローナル抗体と比較した場合、ストラドボディが等しいまたは優れたＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＤＣ、およびＢリンパ腫細胞系の増殖の阻害を誘導することを示した。ストラドボディの優れた活性は、ストラドボディがモノクローナル抗体の濃度に対して低い濃度で試験された場合でも存在した。これらの結果は、本発明のストラドボディが従来のモノクローナル抗体または他の抗原結合分子に対して治療利益を提供することを示した。
【０２２２】
実施例８．多量体化ストラドボディは、インビボマウスモデルにおいて平均腫瘍量を減少させる  研究は、同一のＦａｂを共有する抗ＣＤ２０モノクローナル抗体に対して、ＣＤ２０特異的ストラドボディがインビボで腫瘍細胞死滅を示す程度を評価するために行われた。０週に、５×１０７Ｒａｊｉ細胞を重度の複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに皮下注射した。１０日目に、腫瘍量が１００ｍｍ３に達し、ＣＤ２０特異的ストラドボディ（ＧＢ４５４２）またはモノクローナル抗体（ＧＢ４５００）治療が開始された。等モルのＧＢ４５４２（１３．５ｍｇ／ｋｇ）またはＧＢ４５００（１０ｍｇ／ｋｇ）が、ＣｐＧ（注射当たり１００μｇ）と共に、またはＣｐＧ（ＰＢＳ）を用いずに腫瘍内注射により１日４回投与された。対照マウスは、ＰＢＳ単独で、またはＣｐＧを含むＰＢＳを受けた。腫瘍の大きさをを１〜３日ごとに測定した。腫瘍の大きさは、幅２×長さ／２として計算された。腫瘍量が２０００ｍ３に達した場合、マウスを安楽死させた。
【０２２３】
研究の結果は、図２６および２７に示される。ＣｐＧを含むＧＢ４５４２群およびＣｐＧを含むＧＢ４５００群の両方に関して、平均（図２６）および中央（図２７）腫瘍量は、研究を通してベースラインレベルまたはその付近を維持した。ＣｐＧの不在下でのＧＢ４５００による処置は、ＰＢＳ群が測定された安楽死前の最後の時点で、ＰＢＳ群の約半分の腫瘍量をもたらした（図２６および２７の両方の１８日目）。さらに、ＣｐＧの不在下でのＧＢ４５００による処置は、１８日目のＰＢＳ／ＣｐＧ群と比較して等しい平均（図２６）および中央（図２７）腫瘍量、ならびに最終時点（２３日目）のＰＢＳ／ＣｐＧ群に対して、わずかに低い平均腫瘍量（図２６）または約半分の中央腫瘍量（図２７）のみをもたらした。対照的に、ＣｐＧの不在下でのＧＢ４５４２による処置は、ＧＢ４５００単独で処置されたマウスにおける腫瘍量に対して、２３日目まで平均ならびに中央腫瘍量の大幅な減少をもたらした（それぞれ、図２６および２７）。研究の結果は、したがって、ＧＢ４５４２がインビボでの平均腫瘍に関して、対応するモノクローナル抗体に対して優れた結果を示すことを示す。
【０２２４】
実施例９．ストラドボディは関節炎のインビボマウスモデルにおける炎症を減少させる  コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルは、マウスにおけるＩＩ型コラーゲン関節炎に関連した炎症、パンヌス形成、軟骨破壊、および骨吸収の阻害においてストラドボディの有効性を決定するために採用された。
【０２２５】
雄マウスは、イソフルランで麻酔され、研究の研究０日目および２１日目に、フロイントの完全アジュバント（補足の結核菌、４ｍｇ／ｍＬ；Ｄｉｆｃｏを含む）中１５０μｌのウシＩＩ型コラーゲンを皮内投与された。このモデルでは、関節炎の発症は、試験１８〜３５日目に生じる。マウスは、以下の臨床採点尺度を使用して疾患の臨床徴候について監視される。
０＝正常
１＝後足もしくは前足関節１つが冒されているか、または最小限のびまん性紅斑および腫脹
２＝後足もしくは前足関節２つが冒されているか、または軽度のびまん性紅斑および腫脹
３＝後足もしくは前足関節３つが冒されているか、または中程度のびまん性紅斑および腫脹
４＝顕著なびまん性紅斑および腫脹、または４つの指関節が冒されている
５＝足全体の重度のびまん性紅斑および重度の腫脹、指を曲げることができない
【０２２６】
マウスの１群（ｎ＝４）は、無処置である（即ち、コラーゲンを投与されない）。マウスの他の全ての群は、下の表５に示される用量でＰＢＳ、ＧＢ７５００（抗ＴＮＦモノクローナル抗体）、ＧＢ７５４２（抗ＴＮＦ多量体化ストラドボディ）、ＧＢ４５００（抗ＣＤ２０モノクローナル抗体）、またはＧＢ４５４２（抗ＣＤ２０多量体化ストラドボディ）の静脈内注射を受けるために、コラーゲン投与後無作為化される。
【表５】
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【０２２７】
マウスは、腫脹が少なくとも１つの足において明らかに確立された後（即ち、少なくとも１の臨床採点；動物が１の臨床採点に類別される１日目は関節炎１日目と指定される）、５つの治療群のうちの１つに無作為化される。
【０２２８】
ＰＢＳ、ＧＢ７５００、ＧＢ７５４２、ＧＢ４５００、またはＧＢ４５４２での処置は、無作為化後に開始され、１０日間続けられた。体重は、関節炎１、３、５、７、９、および１１日目に決定され、足スコアは、関節炎１〜１１日目の各々に対して決定される。血漿、血清、および全血は、例えば、抗コラーゲンＥＬＩＳＡアッセイを用いて、薬物動態および／または抗コラーゲン応答を測定するために、様々な研究日に収集される。動物は、関節炎１１日目に剖検される。関節を含む組織を収集し、組織学的に分析される。
【０２２９】
足スコアの臨床データは、関節炎日の投薬曲線下面積（ＡＵＣ）を測定することによって分析される。ＡＵＣの計算に関して、各マウスの毎日の平均スコアは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌに入力され、疾患の発症後から終了日までの治療日間の面積が計算される。各群の平均が決定され、関節炎対照からの阻害％は、以下の式を用いて計算される。
阻害％＝Ａ−Ｂ／Ａ×１００
Ａ＝平均疾病対照−平均正常
Ｂ＝平均処置−平均正常
【０２３０】
データは、スチューデントｔ検定またはマンホイットニーＵ検定（ノンパラメトリック）を使用して分析される。適切であれば、データは、適切な複数の生（未変換）データと共に、一元配置分散分析（一元配置ＡＮＯＶＡ）またはクラスカル・ワリス検定（ノンパラメトリック）を用いて、全ての群にわたってさらに分析される。統計的試験は、データの正規性および等分散性に関してある特定の仮定を立て、試験がこれらの仮定に違反して生じた場合、さらなる分析が必要になる場合がある。全ての試験の有意性は、ｐ≦０．０５に設定される。
【０２３１】
研究の結果は、ストラドボディがストラドボディと同一のＦａｂを共有するモノクローナル抗体に対してＣＩＡの優れた治療を提供することを示す。具体的には、研究は、多量体化抗ＣＤ２０ストラドボディおよび多量体化抗ＴＮＦストラドボディによる治療が、それぞれ、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体または抗ＴＮＦモノクローナル抗体に対して、ＣＩＡの発達および／進行の減少をもたらすことを示す。研究は、ストラドボディおよびその対応するモノクローナル抗体が同一のＦａｂを共有するという事実にも関わらず、ストラドボディを用いたＣＩＡの治療が対応するモノクローナル抗体より優れていることを示す。
【０２３２】
実施例１０．多量体化ストラドボディは、同じＦａｂを共有する対応するモノクローナル抗体または非多量体化ストラドボディに対して、優れたＣ１ｑ補体結合を示す  補体結合アッセイは、多量体化ストラドボディと同じＦａｂを有する対応するモノクローナル抗体に対して、３つの多量体化ストラドボディのＣ１ｑ結合を比較するために行われた。
【０２３３】
ＥＬＩＳＡプレートを、４℃で一晩、１００μＬの補体成分Ｃ１ｑヒト血清（Ｓｉｇｍａカタログ＃：Ｃ１７４０−０．５ＭＧ）容量のＰＢＳ中１μｇ／ｍＬでコーティングした。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した。非特異的結合は、１％のＢＳＡおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ溶液を含有するＰＢＳを用いて、室温で２時間、遮断された。次いで、コーティングしたウェルを、室温で２時間、様々な濃度の実験化合物と共にインキュベートした。プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎを含有するＰＢＳで３回洗浄し、検出試薬として１：５０００のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（カタログ＃５５５８６９，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＳｔｒｅｐｄａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ（カタログ＃：７１００−０５  ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）と共に１時間室温でインキュベートした。ウェルを３回洗浄し、標準的なＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ検出法で検出し、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
【０２３４】
ＧＢ４５４２および同じＦａｂを共有する対応するｍＡｂ（ＧＢ４５００）、ＧＢ７５４２および同じＦａｂを共有する対応するｍＡｂ（ＧＢ７５００）、ならびにＧＢ２５４２および同じＦａｂを共有する対応するｍＡｂ（ＧＢ２５００）が、補体Ｃ１ｑ結合について試験された。意外にも、試験した多量体化抗体の３つ全て（ＧＢ４５４２、ＧＢ７４４２、およびＧＢ２５４２）は、それらの対応するｍＡｂに対して、指数関数的に高い補体Ｃ１ｑ結合を示した（図２８）。特に、ＧＢ４５４２は、非常に高い補体Ｃ１ｑ結合レベルを示した。ＧＢ４５４２、ＧＢ７５４２、およびＧＢ２５４２は各々、同一の多量体化ドメインおよびＦｃ領域を共有し、各々が異なるＦａｂを有するという点でのみ異なる。したがって、予想外に、多量体化ストラドボディ上のＦａｂは、補体Ｃ１ｑ結合のレベルに影響を及ぼす。
【０２３５】
データは、市販のソフトウェアであるＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍ  ５を用いて曲線適合により対数変換され、ＥＣ５０（ｕｇ／ｍｌ）は、試験された各分子について計算された。ＥＣ５０は、半数効果濃度であり、最大応答の半分を与える分子の濃度を指す。際立って、各ストラドボディのＥＣ５０は、対応する抗体のＥＣ５０より１０〜２０倍低かった（図２９）。具体的には、ストラドボディＧＢ７５４２のＥＣ５０は、８．６９であり、一方、対応するｍＡｂ  ＧＢ７５００は、２０２．０であった。ストラドボディＧＢ４５４２のＥＣ５０は、３．２５であり、一方、対応するｍＡｂ  ＧＢ４５００のＥＣ５０は、３４．５であった。そしてストラドボディＧＢ２５４２のＥＣ５０は、１１．０であり、一方、ｍＡｂ  ＧＢ２５００のＥＣ５０は、この分子によって示されるＣ１ｑ結合レベルが非常に低いため測定することができなかった（図２９）。したがって、半数相補結合応答を得るために必要とされるストラドボディの濃度は、半数相補結合応答を達成するために同じＦａｂを有するモノクローナル抗体が必要とする濃度より少なくとも１０〜２０倍低かった。加えて、半数相補結合応答を得るために必要とされるストラドボディの濃度は、ストラドボディのＦａｂによって影響を受け、多量体化およびＦｃ領域よるものだけではない。さらに、それらの多量体化対応物または同じＦａｂを共有する対応するモノクローナル抗体に対して、非多量体化ストラドボディの補体Ｃ１ｑ結合能を評価するために、補体結合アッセイが行われた。補体Ｃ１ｑ結合を評価するために、補体アッセイは、ＧＢ２５００、ＧＢ２５４２、および直鎖非多量体化ストラドボディＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５を用いて、上述のように行われ、その４つ全ては、同じ抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ  Ｆａｂを共有する。非多量体化ストラドボディＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５は各々、モノクローナル抗体ＧＢ２５００に対して優れたＣ１ｑ結合を示すが（図３０）、多量体化ストラドボディＧＢ２５４２は、非多量体化ストラドボディのいずれかと比較して、はるかに優れた補体Ｃ１ｑ結合を示した（図３０）。さらに、多量体化ストラドボディＧＢ２５４２のＥＣ５０値は、ＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５のＥＣ５０値より２．５〜７．０倍低かった。具体的には、ＧＢ２５４２の補体Ｃ１ｑ結合のＥＣ５０値は、３．８３であり、一方、ＧＢ２５５４およびＧＢ２５５５の補体Ｃ１ｑ結合のＥＣ５０値は、それぞれ、２６．４および９．４５であった（図３１）。
【０２３６】
研究の結果は、予想外に、多量体化ストラドボディが同じＦａｂを共有する対応するモノクローナル抗体に対して劇的に優れた補体結合を示したことを示した。結果は、非多量体化ストラドボディが同じＦａｂを共有する対応するモノクローナル抗体に対して優れた補体結合を示すが、多量体化ストラドボディが、同じＦａｂを共有する非多量体化ストラドボディに対してはるかに優れた補体結合を示すことも示した。最後に、本研究は、多量体化ストラドボディ上のＦａｂがＣ１ｑ結合の量に劇的に影響を及ぼすことを示した。
【０２３７】
本出願を通して引用される全ての文書、特許、特許出願、刊行物、製品説明、およびプロトコルは、全ての目的に関して参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２３８】
本明細書に図示され、説明される実施形態は、単に、本発明を作製し、使用するために発明者らが知っている最良の方法を当業者に教示することを意図している。上記の教示に照らして、当業者によって理解されるように、本発明の上記の実施形態の修正および変形は、本発明から逸脱することなく可能である。したがって、特許請求およびそれらの等価物の範囲内で、本発明は、具体的に説明されものとは異なる方法で実施できることが理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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