(57)【要約】環境ストレッサーにより引き起こされる障害を軽減する組成物であって、前記ストレッサーは、紫外線放射により引き起こされる障害を含み、前記組成物は、有効量のイデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルを含む。いくつかの実施形態において、これらの組成物は、人間の皮膚に局所的に塗布可能である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルを含む
ことを特徴とする調合物。
【請求項２】
（ａ）前記イデベノンまたはその誘導体が、前記調合物の総重量に基づいて０．０００１〜５．０重量％であり、
（ｂ）前記Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルが、前記調合物の総重量に基づいて０．０００１〜１０．０重量％であり、
（ｃ）前記エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルが、前記調合物の総重量に基づいて０．０００１〜１０．０重量％である
請求項１に記載の調合物。
【請求項３】
前記イデベノンまたはその誘導体が以下の式である
請求項２に記載の調合物。
【化１】
2015528499.tif 000017
【請求項４】
皮膚変化を防止する方法であって、
局所用製剤を皮膚に塗布するステップを含み、前記製剤が、有効量のイデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルを含む
ことを特徴とする方法。
【請求項５】
炎症性サイトカインのＵＶ誘発を阻害する方法であって、
請求項１に記載の調合物を生物に投与するステップを含む方法において、前記生物がＵＶ放射に曝露されている方法。
【請求項６】
前記投与が、前記調合物を前記生物に局所的に塗布することによるものである
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記調合物が、前記生物の皮膚領域に塗布される
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカインが、ＩＬ−６またはＴＮＦ−αまたはそれらの組み合わせを含む
請求項５に記載の方法。
【請求項９】
日焼け細胞の形成を抑制する方法であって、
請求項１に記載の調合物の有効量を生物に投与するステップを含む方法において、前記生物がＵＶ放射に曝露されている方法。
【請求項１０】
炎症を処置する方法であって、
請求項１に記載の調合物の有効量を、それを必要とする人間に投与するステップを含む方法。
【請求項１１】
ＤＮＡ損傷を修復する方法であって、
請求項１の調合物の有効量を、それを必要とする人間に投与するステップを含む方法。
【請求項１２】
ヒトの皮膚を処置する方法であって、
請求項１の調合物を含む組成物の有効量を、前記ヒトの皮膚に局所的に塗布するステップを含む方法において、前記処置が、フリーラジカルの捕捉を含む方法。
【請求項１３】
ヒトの皮膚を処置する方法であって、
請求項１の調合物を含む組成物の有効量を、前記ヒトの皮膚に局所的に塗布するステップを含む方法において、前記処置が、抗酸化作用を含む方法。
【請求項１４】
前記抗酸化作用が皮膚の老化を防止する
請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ヒトの皮膚を処置する方法であって、
請求項１の調合物を含む組成物の有効量を、前記ヒトの皮膚に局所的に塗布するステップを含む方法において、前記処置が、ＵＶ誘発炎症性サイトカイン及びＭＭＰ生成の少なくとも１つを軽減する方法。
【請求項１６】
前記処置がＵＶ誘発炎症性サイトカイン及びＭＭＰ生成の両方を軽減する
請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環境ストレッサーによる障害から保護する分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、太陽からの紫外線（ＵＶ）放射など、絶えずさまざまな環境ストレッサーからの攻撃を受けている。これらのストレッサーは皮膚に障害を引き起こす可能性があり、この障害が、年齢とともに蓄積し、慢性炎症、ＤＮＡ損傷及び反応性酸化ストレス（ＲＯＳ）をもたらす可能性がある。
【０００３】
環境ストレッサーから保護するために、かつ、これらのストレッサーが引き起こす障害を修復するために、特定の有効成分を含有する局所化粧品及び外皮用剤が開発されてきた。例えば、イデベノンは皮膚の老化を防ぐ強力な酸化防止剤であることが発見されている。この化合物は、その利点ゆえに、市販の顔用美容液Ｐｒｅｖａｇｅ（登録商標）に含有されている。
【０００４】
多くの消費者がＰｒｅｖａｇｅ（登録商標）使用の利点を認識しているものの、環境ストレッサーが引き起こす悪影響を防止または改善する新しい改良調合物を提供する方法が常に模索されている。本発明はこの目的に向けたものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第６，７５６，０４５号
【特許文献２】米国特許第８，１７３，７０３号
【特許文献３】米国特許第５，０４３，２６８号
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１０／０２４７４６１号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００９／０１９２３３２号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｄ．Ｈ．ＭｃＤａｎｉｅｌ ｅｔ ａｌ．２００５ ＪＣＤ，４：１０〜１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、皮膚障害から保護する調合物と、これらの調合物を製造及び使用する方法とを提供する。本発明のさまざまな実施形態により、使用者は環境ストレッサーが引き起こす障害から保護及び／または障害を補修することができるものを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の実施形態に従って、本発明は以下を含有する調合物を対象とする：（１）イデベノンまたはその誘導体と、（２）Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、（３）エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステル。
【０００９】
第２の実施形態に従って、本発明は、皮膚の変化を予防または皮膚への障害を軽減する方法を対象とし、以下を含む調合物を生物（例えばヒト）に投与するステップを含む：イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステル。
【００１０】
第３の実施形態に従って、本発明は、皮膚状態または美容上の必要性を処置するのに有効な薬剤の製造における組成物または調合物の使用を提供する。この薬剤は、それを必要とするヒトなどの対象者における炎症を処置すること、炎症の重症度を軽減すること、及び／または炎症の発生を遅らせるための方法で使用することができ、この方法は、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、担体と、任意選択で追加的な有効成分とを含む有効量の調合物を投与するステップを含む。さらなる実施態様において、本発明は、それを必要とするヒトなどの対象者における炎症を処置するため、炎症の重症度を軽減するため、及び／または炎症の発生を遅らせるための方法を提供し、この方法は、提供された調合物を投与するステップを含む。
【００１１】
本発明のさまざまな実施形態は、以下の利点の１つまたは複数を提供する：（１）ＩＬ−６及びＴＮＦ−αの相乗的減少、（２）ＭＭＰ−１及びＩＬ−６の濃度を調節することによる老化防止及び抗炎症効果、（３）ＵＶＢ誘発日焼け細胞形成及びＩＬ−６生成の防止。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のさまざまな実施形態について以下に詳細に言及し、これらの例は図を添えて説明する。以下の説明では、本発明を十分に理解できるよう具体的な詳細を数多く示す。しかしながら、別段の指示がない限り、または文脈から黙示されない限り、この詳細は例示を目的としており、決して本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではない。
【００１３】
１つの実施形態に従って、本発明は美容用または皮膚科学用のいずれかであり得るような、以下を含む調合物を対象とする：（１）イデベノンまたはその誘導体と、（２）Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、（３）エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステル。用語「調合物」は、溶液、懸濁液、クリーム、軟膏、粉末またはその他の組み合わせ、例えば、列挙した成分のそれぞれを含有する混合物を意味する。さらに、調合物は、固体、液体、ゲル、またはその組み合わせであってよい。
【００１４】
当業者であれば理解できるように、分子または薬学的に許容される塩もしくはそのエステルについて言及する場合、この分子は、主にもしくはもっぱらｐＨ中性型で、または主にもしくはもっぱら酸性型（例えばカルボン酸基を有する）で、または主にもしくはもっぱら基本形態で、または主にもしくはもっぱら塩形態で、または異なる形態の何らかの組み合わせで存在してよい。異なる形態の量は、標準的な均衡方程式と、調合物の環境条件と、調合物の他の構成成分により決定してよい。
【００１５】
用語「薬学的に許容される塩」は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などなく、ヒト及び下等動物の組織と接触しての使用に適しており、かつ、妥当なリスク／ベネフィット比に相応する塩を意味する。薬学的に許容される塩は、当技術分野でよく知られている。そのような塩は、本発明の化合物の最終単離及び精製中にｉｎ ｓｉｔｕで、または別個に（例えば遊離塩基の機能と適切な有機塩または無機塩とを反応させることにより）製造できる。
【００１６】
別法として、または追加的に、塩は化合物の調合中に形成してよい。薬学的に許容される非毒性酸付加塩の例として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸などの無機塩により、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸などの有機酸により、またはイオン交換など当技術分野で用いられる他の方法を使用して形成されるアミノ基の塩がある。その他の薬学的に許容される塩は、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩を含む。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む。さらに薬学的に許容される塩は、適切な場合、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、ならびにハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩及びアリールスルホン酸塩などの対イオンを用いて形成されたアミンカチオンを含む。
【００１７】
用語「薬学的に許容されるエステル」は、ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解されるエステルを意味し、人体で容易に分解されて親化合物またはその塩を放出するエステルを含む。適切なエステル基は、例えば、脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸及びアルカン二酸に由来するもの（ここで、各アルキルまたはアルケニル基は有利には６個以下の炭素原子を有する）を含む。具体的なエステルの例には、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、ブチル酸エステル、アクリル酸エステル、エチルコハク酸エステルを含む。特定の実施形態において、エステルはエステラーゼなどの酵素により開裂される。
【００１８】
好ましくは、各構成成分は有効量で存在する。「有効量」は、当業者が理解するように、調合物が投与された人間に所望の効果をもたらすのに必要な量を意味する。この量は、その調合物が投与される部位の大きさ、及びその調合物が投与される人間が曝露されることになる、または曝露されている１つまたは複数の環境ストレッサーの程度によって異なる可能性がある。例えば、いくつかの実施形態において、有効量は、以下の１つまたは複数をもたらすために必要な量であってよい：ＵＶ誘発炎症及び光障害からの保護、ＩＬ−６の減少、ＴＮＦ−αの減少、ＭＭＰ−１及びＩＬ−６の濃度を調節することによる老化防止及び抗炎症特性、ＵＶＢ誘発日焼け細胞形成。「ＭＭＰ−１」はマトリックスメタロプロテアーゼを意味する。「ＩＬ−６」はインターロイキン６を意味する。「ＴＮＦ−α」は腫瘍壊死因子アルファを意味する。
【００１９】
当業者は、単位用量を決定することにより本発明による組成物の薬学的に有効な量を判断できる。本明細書で使用するとき、「単位用量」は、最大反応の５０％の反応を引き起こすのに必要な（すなわちＥＤ５０）本発明による組成物の量を意味する。単位用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系からから得られる用量反応曲線から外挿することにより算定できる。
【００２０】
イデベノンはＰｒｅｖａｇｅ（登録商標）顔用美容液の主たる美容用機能性成分であるとともに、皮膚の老化を防止できる強力な抗酸化物質であることが示されている。また、抗炎症特性も有する。用語「イデベノン」は、６−（１０−ヒドロキシデシル）−２，３−ジメトキシ−５−メチル−１，４−ベンゾキノンを意味し、２−（１０−ヒドロキシデシル）−５，６−ジメトキシ−３−メチル−シクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンとしても知られる。化学構造は以下のように表される。
【００２１】
【化１】
2015528499.tif 000002
【００２２】
局所に塗布する組成物の一部としてのイデベノンの使用は、２００４年６月２９日に特許を取得した特許文献１に開示されており、この特許の開示全体が参照により本明細書に援用される。
【００２３】
イデベノンの誘導体は、以下の化学式によって定義されるカルボン酸置換誘導体及びその塩を含むが、これに限定されない。
【００２４】
【化２】
2015528499.tif 000003
【００２５】
上式で、Ｒ1はＣ2-22、Ｃ2-10、Ｃ2-5、Ｃ14-20またはＣ15-18の直鎖糖酸または分枝糖酸であり、糖酸の２つ以上のヒドロキシ基が、それぞれ個別にＣ1-22カルボン酸と置換されている。好ましくは、糖酸の２、３、４または５つのヒドロキシ基が、それぞれ個別にＣ1-22カルボン酸と置換されている。本発明の好ましいイデベノン化合物は、より少ないヒドロキシ基がより長鎖のカルボン酸と置換されているか、または、より多くのヒドロキシ基がより短鎖のカルボン酸と置換されている。
【００２６】
本発明に使用するのに適したカルボン酸は、モノカルボン酸及びポリカルボン酸を含む。カルボン酸は、直鎖飽和カルボン酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸）または短鎖不飽和モノカルボン酸（例えばアクリル酸）であってよい。
【００２７】
好ましくは、本発明のカルボン酸は脂肪酸（例えば、共役脂肪酸、中鎖から長鎖の飽和及び不飽和モノカルボン酸、例えばドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸）である。本発明で使用されるカルボン酸は、アミノ酸、ケト酸（例えば、ピルビン酸、アセト酢酸）、芳香族カルボン酸（例えば、安息香酸、サリチル酸）、ジカルボン酸（例えば、アルダル酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸など）、トリカルボン酸（例えば、クエン酸、イソクエン酸、アコニット酸、プロパン−１，２，３−トリカルボン酸［例えば、トリカルバリル酸、カルバリル酸］）、アルファヒドロキシカルボン酸（例えば、グリコール酸、乳酸、ヒドロキシアクリル酸、オキシ酪酸、グリセリン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸）、及びヒアルロン酸も含む。
【００２８】
「糖酸」は、２つ以上のカルボキシル基と置換された、直鎖または分枝、飽和または不飽和、置換または非置換のＣ2-22（好ましくはＣ2-10、より好ましくはＣ2-5）アルキル基として定義され、２つ以上のカルボキシル基のヒドロキシ官能基は、それぞれ個別にＣ1-22カルボン酸（好ましくはＣ14-20、より好ましくはＣ15-18）と置換されている。用語「分枝」は、メチル、エチルまたはプロピルなどの１つまたは複数の低級アルキル基が直鎖アルキル基に結合していることを意味する。好ましくは、糖酸の２、３、４または５つのヒドロキシ基が、それぞれ個別にＣ1-22カルボン酸と置換されている。
【００２９】
イデベノンの誘導体の限定されない一例が、イデベノンジパルミトイルグリセラートである。イデベノンジパルミトイルグリセラートを製造する方法は、２０１２年５月８日に特許を取得した特許文献２に開示されており、この特許の開示全体が参照により本明細書に援用される。この構造の化学式は以下のように表される。
【００３０】
【化３】
2015528499.tif 000004
【００３１】
イデベノンの他の誘導体は、１つまたは複数の原子を別の原子または原子団と置き換えることにより形成できる。例えば、メトキシ基の１つまたは両方を、非置換または置換である他のアルキルオキシ基と置き換えてよい。加えて、他に指定のない限り、または文脈から明らかである場合を除き、イデベノンの誘導体は、薬学的に許容されるイデベノンの塩とエステルとを含む。
用語「エルゴチオネイン」は、３−（２−スルファニリデン−１，３−ジヒドロイミダゾール−４−イル）−２−（トリメチルアザニウミル）プロパノエイトを意味する。その化学構造は以下のように表される。
【００３２】
【化４】
2015528499.tif 000005
【００３３】
エルゴチオネインはフリーラジカル捕捉能を有する。したがって、有利には、ＵＶ放射や他の発癌物質などの環境ストレッサーにより引き起こされる障害を補修するためにこれを使用できる。
【００３４】
Ａｒａｚｉｎｅ（登録商標）として市販されているＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインは抗炎症特性を示し、炎症誘発性メディエーターの放出と、炎症細胞の移動及び活性化とを阻害する。それ自体が、局所に投与すると、ＵＶＡまたはＵＶＢにより誘発される局所炎症を阻害できる。その化学構造は以下のように表される。
【００３５】
【化５】
2015528499.tif 000006
【００３６】
Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインはシステイン誘導体である。１９９１年８月２７日に特許を取得した特許文献３に記載されているように（この特許の開示は参照により本明細書に援用される）、システイン誘導体のクラス（Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインはシステイン誘導体の一種である）は、特定の種類のメチルトランスフェラーゼ酵素、つまりプレニルシステインメチルトランスフェラーゼ酵素の基質として機能する能力を有する。これらの酵素は、メチル基のＳ−アデノシルメチオニンからタンパク質及びペプチドのＣ末端カルボン酸基（Ｃ末端にプレニル化システイン残基を有するＧＴＰ結合タンパク質を含む）への移動を触媒する。Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインは、天然基質よりも好ましい基質として機能することにより前述の酵素を阻害する。Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインの活性については、２０１０年９月３０日に公開された特許文献４に詳しく記載されており、この特許出願公開の開示全体が参照により本明細書に援用される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインは錯体で結合相手と会合しているが、別の実施形態では結合相手と会合していない。本明細書で使用するとき、用語「結合相手」は、錯体でＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システイン化合物と非共有的に会合している作用物質を意味する。いくつかの実施形態では、結合相手とＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システイン化合物との会合は水溶液中で安定している。いくつかの実施形態では、結合相手とＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システイン化合物との会合は水溶液中で安定していない。いくつかの実施形態では、結合相手とＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システイン化合物との会合は配位錯体の形状をとる。いくつかの実施形態では、結合相手は金属、テクネチウム同位体、塩基性窒素を含む小分子、局所鎮痛剤、アヘン剤、モルフィン様作用薬、抗がん剤及び／または眼圧降下剤である。結合相手及び錯体の例は、２０１０年９月３０日に公開された特許文献４の段落［０１７８］〜［０２２２］に記載されており、これらは参照により本明細書に援用される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、イデベノンまたはその誘導体の量は、それが含まれる調合物の総重量に基づいて０．０００１〜５．０重量％、０．００１〜５．０重量％、０．０１〜５．０重量％、０．１〜５．０重量％、１．０〜５．０重量％または２．０〜４．０重量％である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩またはエステルの量は、それが含まれる調合物の総重量に基づいて０．０００１〜１０．０重量％、０．００１〜１０．０重量％、０．０１〜１０．０重量％、０．１〜１０．０重量％、１．０〜１０．０重量％、２．０〜８．０重量％または４．０〜６．０重量％である。
【００４０】
いくつかの実施形態では、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩またはエステルの量は、それが含まれる調合物の総重量に基づいて０．０００１〜１０．０重量％、０．００１〜１０．０重量％、０．０１〜１０．０重量％、０．１〜１０．０重量％、１．０〜１０．０重量％、２．０〜８．０重量％または４．０〜６．０重量％である。
【００４１】
限定されない例示を目的として、いくつかの実施形態では、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとの重量比は、約１：０．５〜３：０．５〜３、または１：１．５〜３：１．５〜３、例えば約１：２：２である。別の実施形態では、構成成分はおおよそ同じモル比で、または、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとのモル比が約１：０．５〜３：０．５〜３または１：１．５〜３：１．５〜３で存在する。
【００４２】
イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステル（総称して「有効成分」という）とを組み合わせることにより、炎症性サイトカインのＵＶ誘発を、これらの化合物それぞれの既知の活性に基づいて期待されるよりも大幅に阻害できる。
【００４３】
イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとを組み合わせてから人間に投与すると、ＵＶＢの障害作用に対する相乗効果がある。この効果により、未照射細胞の対照群と比べてＵＶＢにより誘発されるＩＬ−６及びＴＮＦ−αの発現を減少させることができる。驚くことに、この効果は３つの化合物を一つずつ順に細胞に加えたときには観察されず、これらの要素は一緒に調合して塗布すると、別々に塗布したときよりも有意に高い抗炎症特性を示すことが示唆される。例えば、表１の成分の全部とは言わずとも１つまたは複数を含有する美容液として、これらの有効成分の配合物を事前混合して塗布してもよい。表１の第２カラムには、各構成成分の重量パーセント例を示す。第３カラムには、これらの成分の幅を示す。第３カラムの広い範囲には、第２カラムの例が端点の１つ、すなわち、ある範囲のより小さなまたはより大きな端点となり、反対側の端点が第３カラムの端点の１つにより定義されるような部分範囲が含まれることを、当業者は容易に理解できよう。
【００４４】
調合物は、例えば薬学的に許容されるような担体を含んでもよい。担体は調合物を送達する作用物質または溶媒であり、賦形剤と見なすことができる。好ましくは、投与に適するほど十分に高純度かつ十分に低毒性である。（薬学的な）担体は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、充填剤（例えば、乳糖及び他の糖、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリル酸塩、リン酸水素カルシウムなど）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、水素化植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）、崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウムなど）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）であってよいが、これらに限定されない。本発明の組成物のための他の適切な（薬学的な）担体は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどを含むが、これらに限定されない。
【００４５】
任意選択で、調合物は保湿剤を含む。本明細書で使用するとき、「保湿剤」は、皮膚または粘膜に水分を加える、またはその水分状態を元に戻す物質を意味する。本発明に適した保湿剤（保水剤と呼ばれることも多い）の代表例として、グアニジン、グリコール酸及びグリコール酸塩、各種アロエベラ、アラントイン、ウラゾール、例えばソルビトール、グリセロール、ヘキサントリオール、ポリプロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコールなどの多価アルコール、ポリエチレングリコール、糖及びデンプン及びその誘導体、ヒアルロン酸、ラクトアミドモノエタノールアミン、アセトアミドモノエタノールアミン、ならびにそれらの任意の組み合わせがあるが、これらに限定されない。
【００４６】
同じく任意選択で、調合物は香料を含んでもよい。本明細書で使用するとき、「香料」は心地良い香りを有する物質を意味する。適切な香料は、ユーカリ油、合成樟脳、ペパーミント油、チョウジ油、ラベンダー、カモミールなどを含むが、これらに限定されない。
【００４７】
上述の通り、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとを事前混合すると、相乗的結果が認められたため、「混合前配合」の一部を、すなわち、少なくとも有効成分のすべてを先に組み合わせてから、細胞または生物に塗布する。混合前配合を行う場合、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルのすべてを同時に組み合わせてもよく、または、成分のうちの２つを先に組み合わせ、その後で３つめの成分を最初の２つに組み合わせてもよい。さらに、美容液成分のすべて、または他の追加成分を事前に組み合わせてから、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとの混合物とに組み合わせてもよく、または、１つまたは複数の美容液成分または他の追加成分を含むサブセットを、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとに組み合わせてもよい。いくつかの実施形態では、混合は機械的な方法により、室温（約２０〜２５℃）で、中性ｐＨ （約７．０）で行う。しかしながら、皮膚のｐＨは約５．５であるため、いくつかの実施形態では、結果として生じる調合物はｐＨ値が４．０〜７．０または５．０〜６．０となることがある。当業者が知っているように、ｐＨ調整剤には、例えばアジピン酸、グリシン、クエン酸、水酸化カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、及び緩衝剤があり、これらの薬剤を、調合物のｐＨを調製するのに使用できる。
【００４８】
任意選択で、調合物は、所望の日焼け防止指数（ＳＰＦ値）またはＵＶフィルタをもたらす１つまたは複数のビタミン、または１つまたは複数の化合物、例えばｐ−アミノ安息香酸及びその塩及びその誘導体（エチルエステル、イソブチルエステル、グリセリルエステル、ｐ−ジメチルアミノ安息香酸）、アントラニル酸塩（すなわち、ｏ−アミノベンゾアート、メチルエステル、メンチルエステル、フェニルエステル、ベンジルエステル、フェニルエチルエステル、リナリルエステル、テルピニルエステル、シクロヘキセニルエステル）、サリチル酸塩（アミルエステル、フェニルエステル、オクチルエステル、ベンジルエステル、メンチルエステル、グリセリルエステル、ジプロピレングリコールエステル）、桂皮酸誘導体（メンチルエステル、ベンジルエステル、α−フェニルシンナモニトリル、ブチルシンナモイルピルベート）、ジヒドロキシケイ皮酸誘導体（ウンベリフェロン、メチルウムベリフェロン、メチルアセトウンベリフェロン）、トリヒドロキシケイ皮酸誘導体（エスクレチン、メチルエスクレチン、ダフネチン及びグルコシド、エスクリン及びダフニン）、炭化水素（ジフェニルブタジエン、スチルベン）、ジベンザルアセトン及びベンザルアセトフェノン、ナフトールスルホン酸塩（２−ナフトール−３，６−ジスルホン酸のナトリウム塩、２−ナフトール−６，８−ジスルホン酸のナトリウム塩）、ジヒドロキシ−ナフトエ酸及びその塩、ｏ−及びｐ−ヒドロキシビフェニルジスルホン酸塩、クマリン誘導体（７−ヒドロキシ、７−メチル、３−フェニル）、ジアゾール（２−アセチル−３−ブロモインダゾール、フェニルベンゾオキサゾール、メチルナフトオキサゾール、さまざまなアリールベンゾチアゾール）、キニーネ塩（重硫酸塩、硫酸塩、塩化物、オレイン酸塩、タンニン酸塩）、キノリン誘導体（８−ヒドロキシキノリン塩、２−フェニルキノリン）、ヒドロキシ置換またはメトキシ置換ベンゾフェノン、尿酸及びビロ尿酸、タンニン酸及びその誘導体（例えば、ヘキサエチルエーテル）、（ブチルカルビトール）（６−プロピルピペロニル）エーテル、ヒドロキノン、ベンゾフェノン（オキシベンゼン、スルイソベンゼン、ジオキシベンゼン、ベンゾレゾルシノール、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４，４’−ジメトキシベンゾフェノン、オクタベンゾン、４−イソプロピルジベンゾイルメタン、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、エトクリレン、オクトクリレン、［３−（４’−メチルベンジリデンボルナン−２−オン）及び４−イソプロピル−ジベンゾイルメタン、ならびにその組み合わせを有してよい。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明は、イデベノンまたはその誘導体と、Ｎ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルと、エルゴチオネインまたは薬学的に許容されるその塩もしくはエステルとに加えて、さらに追加の酸化防止剤またはその塩もしくはエステルを含む調合物を含み、これらの酸化防止剤またはその塩もしくはエステルの例には、アスコルビン酸（ビタミンＣ）及びその塩、脂肪酸のアスコルビン酸エステル、アスコルビン酸誘導体（例えば、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸リン酸ナトリウム、アスコルビン酸ソルベート）、トコフェロール（ビタミンＥ）、ソルビン酸トコフェロール、酢酸トコフェロール、トコフェロールの他のエステル、ブチル化ヒドロキシ安息香酸及びその塩、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（Ｔｒｏｌｏｘ［登録商標］という商品名で市販されている）、没食子酸及びそのアルキルエステル、特に没食子酸プロピル、尿酸ならびにその塩及びアルキルエステル、ソルビン酸及びその塩、リポ酸、アミン（例えば、Ν、Ν−ジエチルヒドロキシルアミン及びアミノグアニジン）、スルフヒドリル化合物（例えば、グルタチオン）、ジヒドロキシフマル酸及びその塩、ピドロ酸グリシン、ピドロ酸アルギニン、ノルジヒドログアイアレチン酸、バイオフラビノイド、クルクミン、リシン、メチオニン、プロリン、スーパーオキシドジスムターゼ、シリマリン、茶抽出物、ブドウの皮及び種子の抽出物、メラニン、ローズマリー抽出物を含むが、これらに限定されない。
【００５０】
追加として、または別法として、調合物は、鎮痛性または抗炎症性化合物、例えば、イブプロフェン、ジクロフェナク、カプサイシン、サリチル酸塩、ケトプロフェン、フェルビナク、ピロキシカム、コルチコステロイド及びＮＳＡＩＤ（非ステロイド抗炎症薬）をさらに含んでよい。コルチコステロイドの例には、グルココルチコステロイド、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレジノセ、及びトリアムシノロンを含むが、これらに限定されない。
【００５１】
他の調合物は抗真菌薬をさらに含んでもよい。抗真菌薬の例には、アンホテリシンＢ、カンジシジン、デルモスタチン、フィリピン、フンギクロミン、ハチマイシン、ハマイシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ナイスタチン、ペチロシン、ペリマイシン、アザセリン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ネオマイシン、ピロールニトリン、シッカニン、ツベルシジン、ビリジン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、クロルミダゾール、クロコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、イマザリル、フェンチコナゾール、フルトリマゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、トルシクラート、トリンダート、トルナフテート、フルコナゾール、イトラコナゾール、サペルコナゾール、テルコナゾール、アクリゾルシン、アモロルフィン、ビフェナミン、ブロモサリシルクロルアニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロルフェネシン、シクロピロクス、クロキシキン、コパラフィネート、ジアムタゾール、エキサラミド、フルシトシン、ハレタゾール、ヘキセチジン、ロフルカルバン、ニフラテル、ヨウ化カリウム、プロピオン酸、ピリチオン、サリチルアニリド、プロピオン酸ナトリウム、スルベンチン、テノニトロゾール、トリアセチン、ユジョチオン、ウンデシレン酸、プロピオン酸亜鉛を含むが、これらに限定されない。
【００５２】
他の調合物は抗ウイルス薬をさらに含んでもよい。抗ウイルス薬の例には、アシクロビル、シドフォビル、シタラビン、ジデオキシアデノシン、ジダノシン、エドクスジン、ファムシクロビル、フロクスウリジン、ガンシクロビル、イドクスウリジン、イノシンプラノベクス、ラミブジン、ＭＡＤＵ、ペンシクロビル、ソリブジン、スタブジン、トリフルリジン、バラシクロビル、ビダラビン、ザルシタビン、ジドブジン、アセマンナン、アセチルロイシン、アマンタジン、アミジノマイシン、デラビルジン、ホスカルネット、インジナビル、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、ケトキサール、リゾチーム、メチサゾン、モロキシジン、ネビラピン、ポドフィロトキシン、リバビリン、リマンタジン、リトナビル２、サキナビル、スタリマイシン、スタトロン、タイロマンタジン、ジドブジン（ＡＺＴ）、キセナゾ酸を含むが、これらに限定されない。
【００５３】
他の調合物は鎮痒薬をさらに含んでもよい。適切な鎮痒薬は、メトジラジン及びトリメプラジンの薬学的に許容される塩を含むが、これらに限定されない。
【００５４】
他の調合物は麻酔薬をさらに含んでもよい。本発明との関連で使用するのに適した麻酔薬の限定されない例には、リドカイン、ブピバカイン、クロロプロカイン、ジブカイン、エチドカイン、メピバカイン、テトラカイン、ジクロニン、ヘキシルカイン、プロカイン、コカイン、ケタミン、プラモキシン、フェノールの薬学的に許容される塩を含む。
【００５５】
他の調合物は抗原虫薬をさらに含んでもよい。抗原虫薬は、主に原虫症の処置に用いられる、原虫の増殖を阻害または原虫を駆除する能力を有する化学物質群である。抗原虫薬の例には、ピリメタミン（Ｄａｒａｐｒｉｍ［登録商標］）、スルファジアジン、ロイコボリンを含むが、これらに限定されない。
【００５６】
またさらに、またはさらなる別法として、調合物はｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）またはｓｉＲＮＡ（低分子干渉リボ核酸）を含んでもよい。ｓｉＲＮＡは、ヘアピンを形成する１本の鎖から、または２本の異なる鎖から形成される二本鎖分子である。オーバーハングは任意であり、存在する場合は、通常６個以下のヌクレオチドを有し、オリゴヌクレオチド鎖のいずれかの末端に存在してよい。二本鎖領域は通常長さが１８〜３０塩基対であり、その中は、通常、完全な相補性、または１〜４の不適正塩基対を除く相補性がある。ｍｉｃｒｏＲＮＡは、一般に一本鎖で、長さが１７〜２５ヌクレオチドである。例えば、ＩＬ−６及び／またはＴＮＦ−αを標的とする１つまたは複数のｓｉＲＮＡを含むことができる。
【００５７】
以下の段落に、本発明の調合物に任意選択で存在できる追加の有効成分を記載する。これらの作用物質の１つまたは複数を含むことができ、含む場合は、これらは好ましくは有効量で存在する。
【００５８】
結果として生じる調合物は、好ましくは局所塗布が可能な形態、例えばクリームや軟膏である。局所組成物の使用は、皮膚に一定または不定間隔で塗布するステップを含んでよい。この塗布は、例えば１週間に３〜１４回、毎日、または１日に２回、顔に対し行ってよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３０日間、または少なくとも６ヵ月間塗布する。例えば手、または布やブラシなどの塗布手段を用いて調合物を塗布してもよい。上述の通り、本発明の調合物は、炎症を処置するのに使用してもよい。用語「処置する」は、状態の進行を抑制する、実質的に阻害する、遅らせる、または回復させること、実質的に症状を改善すること、有害な刺激から保護すること、または健康を全般的に促進することを意味する。
【００５９】
局所組成物の塗布により、環境ストレッサーから保護したり特定の障害を修復したりできる。影響を軽減できる環境ストレッサーには、放射線、例えばＵＶＡ放射線、ＵＶＢ放射線、ガンマ放射線、赤外線放射線、化学物質、汚染、タバコの煙、自動車の排気ガス、特定の化粧水、特定の化粧品、熱、寒さ、風、アレルゲン、ウイルス、細菌、真菌及びその他の炎症誘発性の作用物質を含むことができるが、これらに限定されない。修復できる障害の種類には、炎症、皮膚の発赤、皮膚の褐色化、皮膚のしわ、ＤＮＡ損傷が含まれるが、これらに限定されない。本発明の調合物の作用方法はフリーラジカル捕捉である。しかしながら、本発明は、組成物が軽減または保護する障害の種類に限定されない。
【００６０】
本明細書で説明するさまざまな実施形態の任意の特徴は、他に指定のない限り、開示される他の任意の実施形態に関連して説明される特徴と関連して使用できる。したがって、さまざまな、または特定の実施形態に関連して説明される特徴は、そのような排他性が明記されているか、または文脈から黙示されない限り、本明細書に開示される他の実施形態に関連して不適切であると解釈されない。
【００６１】
【表１】
2015528499.tif 000007
【実施例１】
【００６２】
配合を行い、有効性を測定する方法
イデベノン及びエルゴチオネインを、それぞれＡｐｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ（Ａｂｉｎｇｄｏｎ、英国オックスフォードシャー州）及びＢａｒｎｅｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏｒｐ．（Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ Ｃｌｉｆｆｓ、米国ニュージャージー州）とから入手した。Ａｒａｚｉｎｅ（登録商標）は、２００９年７月３０日に公開された特許文献５に従って、Ｓｉｇｎｕｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｎｍｏｕｔｈ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、米国ニュージャージー州）で合成した。すべての化学物質はＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ １１００）、1Ｈ及び13Ｃ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ及び１２５ＭＨｚ、Ｂｒｕｋｅｒ）で構造の同一性について分析し、分析ＨＰＣＬ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００；米国カリフォルニア州サンタクララ）で＞９５％純度を確認した。その他の作用物質はすべてＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（米国ミズーリ州セントルイス）から購入した。
有機溶剤はＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（米国ニューハンプシャー州ハンプトン）から購入した。
【００６３】
ヒト皮膚におけるＵＶ誘発炎症の影響を評価するために、初代細胞単層培養を、異なる種類のＵＶ放射線、すなわちＵＶＢとＵＶＡとに曝露した。初代ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）にＵＶＡ（３５０ｎｍ）を照射し、正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）にＵＶＢ（３０５ｎｍ）を照射した。ＨＤＦはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）基礎培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国ニューヨーク州グランドアイランド）で培養し、１０ｖ／ｖ ％ウシ胎児血清 （ＦＢＳ）（添加培地という）を３７℃で５％ ＣＯ2を用いて添加した。ＮＨＥＫはＥｐｉｌｉｆｅ（登録商標）基礎培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、米国ニューヨーク州グランドアイランド）で培養し、６０μΜカルシウム、０．２ｖ／ｖ ％ウシ下垂体抽出物（ＢＰＥ）、５μｇ／ｍＬウシインシュリン、０．１８μｇ／ｍＬヒドロコルチゾン、５μｇ／ｍＬウシトランスフェリン、５μｇ／ｍＬ、０．２ｎｇ／ｍＬヒト上皮増殖因子（添加培地という）を３７℃で５％ ＣＯ2を用いて添加した。
【００６４】
化合物処理中にこれらの作用物質の免疫調節作用が生じないように、増殖添加剤を加えずにＤＭＥＭまたはＥｐｉｌｉｆｅ（登録商標）基礎培地に細胞を保持した（枯渇培地という）。細胞は、２４ウェルプレートに３．８×１０4細胞／ウェルの濃度でプレーティングした。細胞を固着させた（２４時間）後、培地を枯渇培地に変えた。
【００６５】
２４時間後、枯渇培地を取り除き、０．１ｖ／ｖ ％で０．３、１．０μΜ最終濃度のイデベノン、Ａｒａｚｉｎｅ（登録商標）、エルゴチオネイン、キネチン、リポ酸、コエンザイムＱ１０、ビタミンＣ、ビタミンＥを含む新鮮な枯渇培地を二重ウェルにセットした。「配合」試験用に、イデベノン、Ａｒａｚｉｎｅ（登録商標）及びエルゴチオネイン（モル比が１：１：１）の調合物を調製し、培地に混合した。事前処理の６時間後、炎症誘発性反応を誘発するために、事前処理した培地を取り除き、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に交換した。細胞は、化合物なしで、プラスチックの蓋を使わず、Ｄａａｖｌｉｎ ＵＶ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｕｎｉｔ（Ｂｒｙａｎ、米国オハイオ州）を用いて単一波長のＵＶＡ（３５０ｎｍ、１２．５ Ｊ／ｃｍ2）またはＵＶＢ（３０５ｎｍ、２５ｍＪ／ｃｍ2）に曝露した。
【００６６】
ＵＶ照射直後に、細胞を新たにデプレーティングした培地に２４時間置いた。細胞培養は、
３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムの還元により生存率を調べ（ＭＴＳアッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州マディソン）、化合及びＵＶ照射後の生存細胞の割合を決定した。非照射細胞及びＵＶ照射細胞から培地上清を採取し、炎症誘発性メディエーターの刺激性放出について酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によりアッセイした。ＮＨＥＫは、適切なタンパク質標準（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国カリフォルニア州サンノゼ）を用いて、インターロイキン−６（ＩＬ−６）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の濃度についてアッセイした。ＨＤＦは、適切なタンパク質標準（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国ミネソタ州ミネアポリス）を用いて、ＩＬ−６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはプロマトリックスメタロプロテアーゼ１（ｐｒｏ−ＭＭＰ−１）の濃度についてアッセイした。
【実施例２】
【００６７】
混合前配合と混合後配合
ＮＨＥＫ細胞を、イデベノンとＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインとエルゴチオネインとを１μΜ〜０．３μΜの濃度で含む培地で培養し、次いでＵＶＢ（２５ｍＪ／ｃｍ2）を照射して、細胞に塗布することで化合物が相加効果を有したかを評価した。対照群には未照射細胞を用いた。２４時間後、細胞培地に炎症誘発性メディエーターが存在するかについてＥＬＩＳＡによりアッセイした。図２に示すように、３つの化合物を事前混合した後に一緒に細胞に加えると、ＵＶＢによって誘発されるＩＬ−６及びＴＮＦ−α発現に対する相乗阻害効果がもたらされた。この３つの化合物を一つずつ順に細胞に加えた場合には、これは認められなかった（「混合後配合」）。驚くことに、３つの化合物すべての「混合後配合」は、ＩＬ−６に対しては３つの化合物のうちの２つについて、ＴＮＦ−αに対しては３つの化合物すべてについて、個々の化合物の活性よりも悪かった。したがって、イデベノンとＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインとエルゴチオネインは、一緒に調合し塗布すると、別々に塗布するよりも有意に高い抗炎症特性を示す。
【００６８】
【表２】
2015528499.tif 000008
【００６９】
実施例３〜１０では、本発明は、イデベノンとエルゴチオネインとＮ−アセチル−Ｓ−ファルネシル−Ｌ−システインとの配合物（「配合物」）の抗酸化能と、一般的に使用される他の老化防止成分の抗酸化能とを、５つの環境防止指数（ＥＰＦ）アッセイ（非特許文献１）を用いて調査した。さらに、ＥＰＦの範囲を拡大し、炎症防止指数（ＩＰＦ）を測定した。
【００７０】
培養した初代正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）とヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）とをＵＶＡ及びＵＶＢ照射に曝露し、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及びｐｒｏ−ＭＭＰ−１をアップレギュレートした。１８０ポイントスコアリングシステム（測定したエンドポイントごとに２０ポイント）を用いると、配合物が１６５となり、抗酸化防止（これにより抗酸化作用を有する）、ならびにＵＶ誘発炎症性サイトカイン及びＭＭＰ生成の減少において、試験した他のすべての成分より優れているという結果が示される。試験した他の成分は、フェルラ酸（１３０）、ビタミンＥ（９５）、リポ酸（９４）、ユビキノン（８７）、ビタミンＣ（７３）及びキネチン（７２）を含む。配合物の強力な抗炎症及び抗酸化特性を考えると、配合物は、環境障害によって引き起こされる皮膚の老化を防止するための成分の最適な組み合わせである。
【実施例３】
【００７１】
ラジカル捕捉能
このアッセイでは、メトミオグロビンによる２，２'−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）*のＡＢＴＳ*+への酸化を阻害する能力について、試験成分の全般的な抗酸化能を分析した。効果的な酸化阻害に比例する程度の７５０ｎｍでの光学濃度（ＯＤ）の抑制を試験した。ＥＰＦスコアリングシステムは、上述したＭａｃＤａｎｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００５の最低有効濃度に基づいており、スコアは以下のように割り当てた：１０-3 Ｍ＝５；１０-4 Ｍ＝１５；１０-5 Ｍ＝２０。結果を以下の表３に示す。
【００７２】
【表３】
2015528499.tif 000009
【実施例４】
【００７３】
一次酸化副生成物を測定するＬＤＬ酸化促進系
ヒトＬＤＬを、ハムＦ−１０培地においてＣｕＳＯ4酸化系を用いて０．１ｍＭの材料あり、またはなしで酸化させた。脂質過酸化は、試験成分を用いた２４時間培養の後に、第一鉄イオンから第二鉄イオンを生成する酸化還元反応をそのまま利用してクロロホルム抽出ヒドロペルオキシドを測定することにより定量化し、色原体としてチオシアン酸イオンを用いて検出し、標準ヒドロペルオキシド溶液に基づく効果的な過酸化阻害に比例する程度の５００ｎｍでの光学濃度（ＯＤ）の変化として表した。結果を以下の表４に示す。
【００７４】
【表４】
2015528499.tif 000010
【実施例５】
【００７５】
二次酸化副生成物を測定するミクロソーム酸化促進系
ラット肝ミクロソームを、ＮＡＤＰＨ／ＡＤＰ／Ｆｅ3+酸化系を用いて０．１ｍＭの試験成分あり、またはなしで酸化させた。二次酸化生成物は、２４時間培養の後に、チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）の生成をそのまま利用してＭＤＡ当量を測定することにより定量化した。結果は、ＭＤＡ−ＴＢＡ生成標準である１，１，３，３−テトラエトキシプロパンに基づく過酸化阻害に比例する程度の５３２ｎｍでの光学濃度（ＯＤ）の変化として表す。結果を以下の表５に示す。
【００７６】
【表５】
2015528499.tif 000011
【実施例６】
【００７７】
ＵＶＢ誘発ＤＮＡ損傷（チミンダイマーの形成）
初代ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を各試験成分（１μＭ）の存在下で６時間培養してから取り除き、ＵＶＢ照射（２００ｍＪ／ｃｍ2）した。細胞は１時間後に固定し、抗チミンダイマー抗体で染色した。染色された円形細胞を、蛍光顕微鏡を用いて計数した。ＮＨＥＫの細胞毒性は認められなかった。結果を以下の表６に示す。
【００７８】
【表６】
2015528499.tif 000012
【実施例７】
【００７９】
ＥｐｉＤｅｒｍ（登録商標）を用いたＵＶＢ誘発日焼け細胞（ＳＢＣ）形成 
ＥｐｉＤｅｒｍ（登録商標）インサート（ＭａｔＴｅｋ［登録商標］）を、各試験成分の存在下で６時間局所的に処理し、次いで成分を取り除き、インサートに２００ｍＪ／ｃｍ2のＵＶＢを照射した後、２４時間後のＨ＆Ｅ染色のために固定した。日焼け細胞（ＳＢＣ）（白い矢印）の数を数えた。化合物はすべて１ｍＭで試験した。示した濃度で３Ｄ皮膚の細胞毒性は認められなかった。結果を以下の表７に示す。
【００８０】
【表７】
2015528499.tif 000013
【実施例８】
【００８１】
ＵＶＢ誘発炎症性サイトカイン放出（ＩＬ−６及びＴＮＦ−α）
抗炎症特性についてこれらの抗酸化物質を試験するために、初代ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、各成分の存在下で６時間培養した。次いで成分を取り除き、細胞に２５ｍＪ／ｃｍ2のＵＶＢを照射した。２４時間後に培地上清を採取し、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αについてＥＬＩＳＡで分析した。成分はすべて１μＭで試験した。示した濃度でＮＨＥＫの細胞毒性は認められなかった。結果を以下の表８に示す。
【００８２】
【表８】
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【実施例９】
【００８３】
ＵＶＡ誘発ＩＬ−６及びＭＰＰ−１生成
抗炎症及び老化防止特性についてこれらの抗酸化物質を試験するために、ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）を、各成分の存在下で６時間培養した。次いで成分を取り除き、細胞に１２．５Ｊ／ｃｍ2のＵＶＡを照射した。２４時間後に培地上清を採取し、ＩＬ−６及びｐｒｏ−ＭＭＰ−１についてＥＬＩＳＡで分析した。成分はすべて１μＭで試験した。示した濃度でＨＤＦの細胞毒性は認められなかった。結果を以下の表９に示す。
【００８４】
【表９】
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【実施例１０】
【００８５】
総ＥＰＦスコアの概要
以下の表１０にＥＰＦスコアの概要を示す。（表の見出しの数字は、データを得た実施例の番号）。表に示すように：（１）配合物は、試験した成分の中で、環境障害によって引き起こされる皮膚の老化を最高に防止する；（２）配合物は、試験した中で、皮膚細胞へのＵＶＡ及びＵＶＢ誘発障害を防止する最強の抗炎症活性を有する；（３）配合物は、最高の環境防止指数（ＥＰＦ）を獲得していることから、スキンケア保護のための有望な新製品であることが示される。
【００８６】
【表１０】
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【国際調査報告】
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