(57)【要約】本発明は、プリドピジンとして知られるドパミン作動性安定剤と、テトラベナジンとして知られる小胞体モノアミン輸送体２型（ＶＭＡＴ）の阻害剤との治療的に有効な組み合わせを含んでなる新規医薬組成物に関する。本発明に従う使用のための医薬組成物は、運動障害の治療、特にハンチントン病、ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群または遅発性ジスキネジーに関連した運動障害における、テトラベナジンの症状的治療効果の改善、および副作用低減のために特に有用であると考えられる。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
運動障害に罹患している被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法。
【請求項２】
肥満、肥満関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患している被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法。
【請求項３】
請求項１〜２の何れか１項に記載の方法であって、前記量は一緒に摂取したときに、前記被験者を治療するために、各薬剤を同じ量で単独投与したときよりも有効である方法。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の方法であって、単独で摂取したときの前記量のテトラベナジンもしくはその医薬的に許容可能な塩、および単独で摂取したときの前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、または単独で摂取したときのこのような各量は、前記被験者を治療するために有効ではない方法。
【請求項５】
ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の被験者への定期的投与による１以上の副作用を低減または予防する方法であって、前記被験者に対して、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記１以上の副作用は、抑鬱、自殺傾向、静坐不能、不穏状態、心的動揺、パーキンソニズム、鎮静、傾眠、および嚥下障害から選択される方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、当該副作用がパーキンソニズムである方法。
【請求項８】
請求項５〜７の何れか１項に記載の方法であって、前記被験者は運動障害に罹患している方法。
【請求項９】
請求項１〜８の何れか１項に記載の方法であって、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は経口投与により投与される方法。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか１項に記載の方法であって、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日投与される方法。
【請求項１１】
請求項１〜９の何れか１項に記載の方法であって、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日２回投与される方法。
【請求項１２】
請求項１〜９の何れか１項に記載の方法であって、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日３回投与される方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１日当たり０．０５ｍｇ／ｋｇ〜１日当たり０．２０ｍｇ／ｋｇである方法。
【請求項１４】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１日当たり５〜１００ｍｇ／ｋｇである方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は１２．５ｍｇ／日、２５ｍｇ／日、３７．５ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、  ７５ｍｇ／日、または１００ｍｇ／日である方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５の何れか１項に記載の方法であって、前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は経口投与により投与される方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日投与される方法。
【請求項１８】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日２回投与される方法。
【請求項１９】
請求項１〜１８の何れか１項に記載の方法であって、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１日当たり１．５μｍｏｌ／ｋｇ〜１日当たり２０μｍｏｌ／ｋｇである方法。
【請求項２０】
請求項１〜１８の何れか１項に記載の方法であって、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は１日当たり１０〜１００ｍｇである方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は１０ｍｇ／ｄａｙ、２０ｍｇ／ｄａｙ、２２．５ｍｇ／ｄａｙ、４５ｍｇ／ｄａｙ、または９０ｍｇ／ｄａｙである方法。
【請求項２２】
請求項１、３、４または８〜２１の何れか１項に記載の方法であって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである方法。
【請求項２３】
請求項１、３、４または８〜２２の何れか１項に記載の方法であって、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、前記運動障害の症状を緩和するのに有効である方法。 
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、前記症状は舞踏病である方法。
【請求項２５】
請求項１〜２４の何れか１項に記載の方法であって、前記被験者は、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の投与を開始する前にテトラベナジン療法を受けている方法。
【請求項２６】
請求項１〜２５の何れか１項に記載の方法であって、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩および前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、同時に投与される方法。
【請求項２７】
請求項１〜２６の何れか１項に記載の方法であって、前記被験者はヒト患者である方法。
【請求項２８】
ａ）ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能なキャリアを含有する第一の医薬組成物と、
ｂ）ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能なキャリアを含有する第二の医薬組成物と、
ｃ）運動障害に罹患している被験者を治療するために、前記第一および第二の医薬組成物を一緒に使用するための指示書
を具備してなるパッケージ。
【請求項２９】
請求項２８に記載のパッケージであって、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するためのパッケージ。
【請求項３０】
請求項２８〜２９の何れか１項に記載パッケージであって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーであるパッケージ。
【請求項３１】
運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の付加療法として、またはこれとの併用療法において使用するためのプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩。
【請求項３２】
請求項３１に従って使用するためのプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩 であって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである使用。 
【請求項３３】
ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、少なくとも一つの医薬的に許容可能なキャリアを含有する医薬組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の医薬組成物であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量が５〜１００ｍｇである医薬組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の医薬組成物であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量が、５ｍｇ、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、３７．５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、または１００ｍｇである医薬組成物。
【請求項３６】
請求項３２〜３５の何れか１項に記載の医薬組成物であって、前記プリドピジン またはその医薬的に許容可能な塩の量は１０〜１００ｍｇである医薬組成物。
【請求項３７】
請求項３６に記載の医薬組成物であって、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は１０ｍｇ、２２．５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇである医薬組成物。
【請求項３８】
請求項３３〜３７の何れか１項に記載の医薬組成物であって、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するための医薬組成物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の医薬組成物であって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである医薬組成物。
【請求項４０】
請求項３３〜３７の何れか１項に記載の医薬組成物であって、肥満、肥満関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患している被験者を治療または緩和することにおいて使用するための医薬組成物。
【請求項４１】
運動障害に罹患している被験者を治療するための併用剤の調製における、
ａ）ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および
ｂ）ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩
の使用であって、
前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩が同時に、または同時存在的に投与される使用。
【請求項４２】
請求項４１に記載の使用であって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである使用。
【請求項４３】
ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩と併用して、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するための、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、前記被験者に対して、前記医薬組成物および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することにより使用するための医薬組成物。
【請求項４４】
ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と併用して、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するための、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、前記被験者に対して、前記医薬組成物および前記量のテトラベナジンンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することにより使用するための医薬組成物。
【請求項４５】
請求項４３〜４４の何れか１項に記載の医薬組成物であって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである医薬組成物。
【請求項４６】
運動障害に罹患している被験者の治療のための、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩および前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、同時に、別々にまたは逐次的に投与されるもの。
【請求項４７】
前記運動障害がハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである、請求項４６に記載のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩。
【請求項４８】
運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する製品。
【請求項４９】
請求項４８に記載のプロダクトであって、前記運動障害はハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである製品。
【発明の詳細な説明】
【関連技術の相互参照】
【０００１】
本願は、２０１３年３月１４日提出の米国仮出願番号６１／７８３，７３０、２０１２年４月１７日提出の米国仮出願番号６１／６２５，１９２、および２０１２年４月４日提出の米国仮出願番号６１／６２０，２０３の優先権を主張するものであり、これらの全体の内容を本明細書の一部として本願に援用する。
【０００２】
本願の全体を通して種々の刊行物が引用されるが、これら引用された刊行物の開示は、ここに記載する発明日における当該技術の状態をより十分に記述するために、その全体を本明細書の一部として本願に援用する。
【発明の背景】
【０００３】
プリドピジン（Pridopidine）、即ち、４−（３−メタンスルホニル−フェニル）−１−プロピル−ピペリジンは、ハンチントン病の治療のために現在臨床開発中の医薬物質である。この化合物は、ＷＯ０１／４６１４５において最初に記載された。
【０００４】
プリドピジンはドパミン作動性の安定剤であり、速い解離速度を有する競合的ドパミンＤ２受容体拮抗作用を示す（Dyhring, 2010）。インビボにおいて、プリドピジンは線条体および前頭皮質におけるドパミンのターンオーバーおよび放出を増大させる（Poten, 2010; Pettersson 2010）。行動的影響には、覚醒剤に誘導された機能亢進の拮抗作用が含まれ、これは抗精神病薬特性を示唆するが、自発的運動活性に対する阻害効果は示唆されない（Ponten, 2010; Natesan 2006; Nilsson, 2004）。
【０００５】
テトラベンジン、即ち、（ＳＳ，ＲＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オンは、一定の運動障害の対症療法のために使用される医薬物質である（FDA Label for XENAZINE (Tetrabenzine) 07/06/2011）。 テトラベナジンは、小胞体モノアミン輸送体２型（ＶＭＡＴ）の阻害剤であり、これは脳におけるモノアミン神経伝達物質の小胞体保存をブロックし、それによってドパミン、セロトニンおよびノルエピレフィリンのシナプス放出の減少を導く（Paleacu, 2007）。このモノアミン作動性神経伝達の低下は、例えば運動および報酬を含むドパミン依存性機能の抑制に関連している。この運動の抑制は、例えばハンチントン病、遅発性ジスキネジー、およびトゥーレット病において不随意運動を緩和するために、治療的に使用される。しかし、テトラベナジンでの治療には重篤な副作用が伴う。このような副作用には、パーキンソニズム、即ち、硬直および運動機能損傷、抑鬱、並びに機能的能力障害が含まれる。
【０００６】
例えば、ハンチントン病の臨床的徴候の一部として生じる舞踏病およびジスキネジアのような不随意運動は、間接的な皮質−線条体−視床経路における活動損傷に関連すると信じられている。従って、このような不随意運動に対するテトラベナジンの有益な効果は、前記間接的経路における中型有棘ニューロン上のドパミンＤ２受容体での減少した緊張に起因するものであり、テトラベナジンにより生じるドパミン伝達の低下の結果として生じるものである。この減少したドパミンＤ２受容体緊張は、これら中型有棘ニューロンの阻害低下に導き、従って、前記間接的経路の増大した活性を導く。従って、ドパミンＤ２アンタゴニストはまた、ＨＤにおける舞踏病を緩和するために頻繁に使用される（Steward 2001）。
【０００７】
＜併用療法＞
運動障害のような所定の状態を治療するための二つの薬剤の投与は、多くの潜在的な問題を呈示する。二つの薬物の間のインビボでの相互作用は複雑である。何れか単一の薬物の効果は、その吸収、分布および排泄に関連する。二つの薬物が身体内に導入されると、各薬物は他方の薬物の吸収、分布および排泄に影響し、従って、他方の薬物の効果を変更させる可能性がある。例えば、一方の薬物が、他方の薬物の排泄代謝経路に関与する酵素の産生を活性化または誘導する可能性がある（Guidance for Industry, 1999）。一つの例において、ＧＡおよびインターフェロン（ＩＦＮ）の併用投与は、何れかの療法の臨床的有効性を抑制することが実験的に示されている（Brod 2000）。もう一つの実験では、ＩＦＮ−βとの併用療法におけるプレドニゾンの追加は、そのアップレギュレータ効果を打消すことが報告された。従って、同じ状態を治療するために二つの薬物が投与されるときには、ヒト被験体において、各々が他方の治療活性を補完するか、影響しないか、または妨害するかは予測がつかない。
【０００８】
二つの薬物の間の相互作用は、各薬物の初期の治療活性に影響し得るだけでなく、該相互作用は毒性代謝物のレベルを増大する可能性がある（Guidance for Industry, 1999）。この相互作用はまた、各薬物の副作用を増強または低下させるかも知れない。従って、疾病を治療するために二つの薬物を投与する際、各薬物の副作用プロファイルに如何なる変化が生じるかは予測不能である。一例において、ナタリズマブとインターフェロンβ―１ａの併用は、予期しない副作用のリスクを増大させることが観察された（Vollmer, 2008; Rudick 2006; Kleinschmidt-DeMasters, 2005; Langer-Gould 2005）。
【０００９】
加えて、二つの薬物間の相互作用の影響が、何時顕在化するに至るかを正確に予測することは困難である。例えば、薬物間の代謝的相互作用は、第二の薬物の最初の投与時に、二つの薬物が定常状態濃度に達した後、または二つの薬物の一方の中断時に明らかになる可能性がある（Guidance for Industry, 1999）。
【００１０】
従って、本願出願時の当該技術の状態は、二つの薬物の併用療法の効果、とりわけ、プリドピジンおよびテトラベナジンの併用療法の効果は、併用研究の結果が入手可能になるまでは予測することができないというものである。
【発明の概要】
【００１１】
今回、驚くべきことに、プリドピジンは、テトラベナジンにより生じる行動阻害を反転させ得る一方、プリドピジンの主要な薬理学的効果、即ち、ドパミンＤ２受容体阻害を維持できることが見出された。これらの発見は、プリドピジンおよびテトラベナジンの同時投与がテトラベナジンの治療的に有益な効果を改善すること、即ち、不随意運動を更に緩和すると共に、有害な運動効果および情動効果を低減することを示唆する。
【００１２】
本発明は、運動障害に罹患している被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１３】
本発明はまた、肥満、肥満関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患している被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、およびある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１４】
本発明はまた、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を被験者に定期的に投与することの１以上の副作用を低減または防止する方法であって、前記被験者に対して、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、
ａ）ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能なキャリアを含有する第一の医薬組成物と、
ｂ）ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能なキャリアを含有する第二の医薬組成物と、
ｃ）運動障害に罹患している被験者を治療するために、前記第一および第二の医薬組成物を一緒に使用するための指示書
を具備してなるパッケージを提供する。
【００１６】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の付加療法として、またはこれと併用して使用するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を提供する。
【００１７】
本発明はまた、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、少なくとも一つの医薬的に許容可能なキャリアを含有する医薬組成物を提供する。
【００１８】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者を治療するための併用剤の調製における、
ａ）ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および
ｂ）ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩
の使用であって、
前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩が同時に、または同時存在的に投与される使用を提供する。
【００１９】
本発明はまた、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩と併用して、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するための、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、前記被験者に対して、前記医薬組成物および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することにより使用するための医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明はまた、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と併用して、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するための、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、前記被験者に対して、前記医薬組成物および前記量のテトラベナジンンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することにより使用するための医薬組成物を提供する。
【００２１】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者の治療のための、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩であって、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩および前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、同時に、別々にまたは逐次的に投与されるものを提供する。
【００２２】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する製品を提供する。
【００２３】
本発明はまた、肥満症、肥満症関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患した被験者を治療する方法であって、前記被験者に対して、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを投与することを含んでなり、前記量は一緒に摂取するときに前記哺乳動物を治療するのに有効である方法を提供する。
【００２４】
本発明はまた、ヒトを含む哺乳動物における肥満または肥満関連障害の治療、予防または緩和のため、およびプリドピジンの心臓血管系副作用の治療、予防または緩和のための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩；およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを提供する。
【００２５】
もう一つの側面において、本発明は、運動障害の治療、予防または緩和のための医薬として使用するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩；およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを提供する。
【００２６】
もう一つの側面において、本発明は、医薬として使用するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩；およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを提供する。
【００２７】
もう一つの側面において、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における肥満または肥満関連障害の治療、予防または緩和のため、およびプリドピジンの心臓血管系副作用の治療、予防または緩和のための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩；およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを提供する。
【００２８】
もう一つの側面において、本発明は、ヒトを含む哺乳動物の運動障害の治療、予防または緩和のための医薬を製造するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩；およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００２９】
もう一つの実施形態において、本発明は、運動障害の治療、予防または緩和のために、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物と一緒の併用療法において使用するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物を提供する。
【００３０】
もう一つの側面において、本発明は、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を、１以上のアジュバント、賦形剤、キャリアおよび／または希釈剤と共に含有する医薬組成物を提供する。
【００３１】
もう一つの側面において、本発明は、ヒトを含む生きた動物の身体における運動障害の治療、予防または緩和の方法であって、それを必要としている斯かる生きた動物身体に対して、治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩との併用療法において、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を投与する工程を具備してなる方法を提供する。
【００３２】
もう一つの実施形態において、本発明は、少なくとも二つの別々の単位投与量形態（Ａ）および（Ｂ）を含んでなる部分のキットであって、（Ａ）はプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有してなり；また（Ｂ）はテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩含有してなり；また任意に、（Ｃ）それを必要としている患者に対して（Ａ）のプリドピジンおよび（Ｂ）のテトラベナジンを同時、逐次的または別々に投与するための指示書を備えてなるキットを提供する。
【００３３】
もう一つの側面において、本発明は、（Ａ）プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する第一の医薬投与形態と；（Ｂ）テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する第二の医薬投与形態と備えてなる工業製品であって；ここで該製品は第一および第二の医薬投与形態を含んでいる工業製品を提供する。
【００３４】
もう一つの側面において、本発明は、運動障害に罹患した被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を投与することを含んでなり、前記量は一緒に摂取したときに前記ヒト患者を治療するのに有効である方法を提供する。
【００３５】
もう一つの側面において、本発明は、肥満もしくは肥満関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患しているヒトを含む哺乳動物を治療する方法であって、前記被験者に対して、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を投与することを含んでなり、前記量は一緒に摂取したときに前記哺乳動物を治療するのに有効である方法。
【００３６】
本発明の他の目的は、以下の詳細な説明および実施例から当業者に明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
添付の図面を参照することにより、本発明を更に例証する。
【図１】テトラベナジンについて、平均対照群値のパーセンテージとして表した自発的運動活性（ＬＭＡ）。活性は、各記録された期間についての投与量により示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は担体（グルコース５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたテトラベナジン（０．３７、０．６４、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図２】線条体ＤＯＰＡＣ（３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸）に対するテトラベナジンの効果。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体（グルコース５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたテトラベナジン（０．３７、０．６４、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図３】テトラベナジンでの治療後に、平均対照群値のパーセンテージとして表されたＡｒｃ遺伝子発現（Ａｒｃ・ｍＲＮＡレベルまたはＡｒｃ）。発現は、投与量によって、および領域（線条体ａｒｃ（ａｒｃＳ）または前頭皮質ａｒｃ（ａｒｃＦ））によって示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体（グルコース；５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたテトラベナジン（０．３７、０．６４、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図４】プリドピジンについて、平均対照群値のパーセンテージとして表した自発的運動活性（ＬＭＡ）。活性は、各記録された期間についての投与量により示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は担体（グルコース５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたプリドピジン（１１、３３、および１００μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図５】線条体ＤＯＰＡＣに対するプリドピジン（ＮＳ３００１６）の影響。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体（塩水、ＮａＣｌ；０．９％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたプリドピジン（１１、３３、および１００μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図６】プリドピジンでの治療後に、平均対照群値のパーセンテージとして表されたＡｒｃ遺伝子発現。発現は、投与量によって、および領域（線条体ａｒｃ（ａｒｃＳ）または前頭皮質ａｒｃ（ａｒｃＦ））によって示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体（塩水；ＮａＣｌ、０．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたプリドピジン（１１、３３、および１００μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図７】ハロペリドールについて、平均対照群値のパーセンテージとして表した自発的運動活性（ＬＭＡ）。活性は、各記録された期間についての投与量により示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は担体（グルコース５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたハロペリドール（０．１２、０．３７、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図８】ハロペリドールについて、平均対照群値のパーセンテージとして表した自発的運動活性（ＬＭＡ）。活性は、各記録された期間についての投与量により示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝４）。これら治療群は担体（グルコース５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたハロペリドール（０．０４、０．１２、０．３７、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図９】線条体ＤＯＰＡＣに対するハロペリドールの効果。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体（グルコース５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたハロペリドール（０．１２、０．３７、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１０】ハロペリドールでの治療後に、平均対照群値のパーセンテージとして表されたＡｒｃ遺伝子発現。発現は、投与量によって、および領域（線条体ａｒｃ（ａｒｃＳ）または前頭皮質ａｒｃ（ａｒｃＦ））によって示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体（グルコース；５．５％ｖ／ｗ）、および三つの投与量で試験されたハロペリドール（０．１２、０．３７、および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１１】テトラベナジン＋プリドピジンについて、平均対照群値のパーセンテージとして表した自発的運動活性（ＬＭＡ）。活性は、各記録された期間についての投与量により示される。この実験は、次の二つの方法のうちの一つで完成される。（１）「プロセスＢＳ８１」、ここでは動物が四つの異なる治療群に分配され（ｎ＝５）、治療群は担体１：１（０．９％ｖ／ｗ塩水；ＮａＣｌ  ＋  数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなり、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇからなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたプリドピジンからなっていた。（２）「プロセスＴＡ２８４」、ここでは動物が四つの異なる治療群に分配され（ｎ＝１０）、治療群は担体１：１（塩水；０．９％ｖ／ｗ・ＮａＣｌ  ＋  数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなり、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇ）からなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたプリドピジンからなっていた。この実験からは、脳組織は採取されなかった。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１２】テトラベナジンに誘導された線条体ドパミン増大に対するプリドピジンの効果。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体１：１（塩水；ＮａＣｌ・０．９％ｖ／ｗ、数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなっており、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇ）からなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたプリドピジン（ＮＳ３００１６）からなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１３】テトラベナジン＋プリドピジンでの治療後に、平均対照群値のパーセンテージとして表されたＡｒｃ遺伝子発現。発現は、投与量によって、および領域（線条体ａｒｃ（ａｒｃＳ）または前頭皮質ａｒｃ（ａｒｃＦ））によって示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体１：１（塩水；ＮａＣｌ・０．９％ｖ／ｗ、数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなっており、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇ）からなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたプリドピジンからなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１４】テトラベナジン＋ハロペリドールについて、平均対照群値のパーセンテージとして表した自発的運動活性（ＬＭＡ）。活性は、各記録された期間についての投与量により示される。動物は四つの異なる治療群に分配され（ｎ＝５）た。治療群は担体１：１（０．９％ｖ／ｗ塩水；ＮａＣｌ  ＋  数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなり、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇからなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたハロペリドールからなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１５】テトラベナジンに誘導された線条体ドパミン増大に対するハロペリドールの効果。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体１：１（塩水；ＮａＣｌ・０．９％ｖ／ｗ、数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなっており、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇ）からなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたハロペリドールからなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【図１６】テトラベナジン＋ハロペリドールでの治療後に、平均対照群値のパーセンテージとして表されたＡｒｃ遺伝子発現。発現は、投与量によって、および領域（線条体ａｒｃ（ａｒｃＳ）または前頭皮質ａｒｃ（ａｒｃＦ））によって示される。動物は、四つの異なる治療群に分配された（ｎ＝５）。これら治療群は、担体１：１（塩水；ＮａＣｌ・０．９％ｖ／ｗ、数滴のＨＡｃを伴う５．５％グルコース）からなっており、第二の群は単一投与量のテトラベナジン（０．６４ｍｇ／ｋｇ）からなり、第三および第四の群は単一投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇ）のテトラベナジンと共に二つの投与量（０．０４および０．１２μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたハロペリドールからなっていた。全ての化合物は、運動活性記録の開始前４分の時点において、５ｍＬ／ｋｇの容積で皮下注射された。
【発明の詳細な説明】
【００３８】
本発明は、運動障害の治療、予防または緩和のための、プリドピジンおよびテトラベナジンを使用する併用療法に関する。
【００３９】
プリドピジンの効果は、テトラベナジンと併用して与えられるときには、第一に、プリドピジンの主な薬理学的効果、即ち、ドパミンＤ２受容体阻害は、テトラベナジンとの同時投与の下でもやはり存在することを示唆している。これは、テトラベナジンで治療されたラットにおいて、プリドピジンにより誘導された線条体ＤＯＰＡＣの更なる増大に反映される。線条体Ｄ２受容体における減少した緊張が、テトラベナジンが例えばハンチントン病、トゥーレット障害および遅発性ジスキネジーにおける不随意運動を軽減できることについての提案される機構であるとすれば、このことは、テトラベナジンをプリドピジンと併用することによって、これらの障害において追加の臨床的利益が与えられることを示唆する。
【００４０】
第二に、プリドピジンは、テトラベナジンによって惹起される行動阻害を反転させる。この行動阻害は、テトラベナジンの使用を制限する幾つかの厄介なドパミン関連の副作用、特にパーキンソニズム、即ち低下した運動性だけでなく、恐らくは抑鬱気分のような明瞭な運動的副作用の前臨床的相関現象である。なお、このテトラベナジンにより誘発される行動阻害の反転は、プリドピジンのような、ドパミンＤ２受容体において純粋な拮抗剤として作用する化合物から予測されるものではなく、ドパミンＤ２拮抗剤のハロペリドールを用いて行われた同様の研究においては観察されなかった。むしろ、ハロペリドールとの同時治療は、運動活性を更に低下させた。
【００４１】
従って、これら前臨床的行動データは、プリドピジンが、テトラベナジンの有害な運動的および情動的効果を打ち消し得るであろうことを意味している。
【００４２】
本発明は、運動障害に罹患している被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００４３】
本発明はまた、肥満、肥満関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患している被験者を治療する方法であって、該被験者に対して、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、およびある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００４４】
一つの実施形態において、前記量は、一緒に摂取されたときには、同じ量で各薬剤を単独で投与されたときよりも、前記患者を治療するために更に有効である。
【００４５】
一つの実施形態において、単独で摂取されるときの前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量、および単独で摂取されるときの前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量、または単独で摂取されるときの各々のこのような量は、前記被験者を治療するために有効ではない。
【００４６】
本発明はまた、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を被験者に定期的に投与することの１以上の副作用を低減または防止する方法であって、前記被験者に対して、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００４７】
一つの実施形態において、前記１以上の副作用は、抑鬱、自殺傾向、正座不能、不穏状態、心的動揺、パーキンソンニズム、鎮静、傾眠、および嚥下障害から選択される。
【００４８】
一つの実施形態において、前記副作用はパーキンソニズムである。
【００４９】
一つの実施形態において、前記被験者は運動障害に罹患している。
【００５０】
一つの実施形態において、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、経口投与により投与される。
【００５１】
一つの実施形態において、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日投与される。
【００５２】
一つの実施形態において、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日２回投与される。
【００５３】
一つの実施形態において、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日３回投与される。
【００５４】
一つの実施形態において、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日〜０．２０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００５５】
一つの実施形態において、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、５〜１００ｍｇ／日である。
【００５６】
一つの実施形態において、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１２．５ｍｇ／日、２５ｍｇ／日、３７．５ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、７５ｍｇ／日、または１００ｍｇ／日である。
【００５７】
一つの実施形態において、前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、経口投与により投与される。
【００５８】
一つの実施形態において、前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日投与される。
【００５９】
一つの実施形態において、前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は毎日２回投与される。
【００６０】
一つの実施形態において、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１．５μｍｏｌ／ｋｇ／日〜２０μｍｏｌ／ｋｇ／日である。
【００６１】
一つの実施形態において、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１０〜１００ｍｇ／日である。
【００６２】
一つの実施形態において、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、２２．５ｍｇ／日、４５ｍｇ／日または９０ｍｇ／日である。
【００６３】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである。
【００６４】
一つの実施形態において、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、ぉ呼び前記量のプリ度ピリジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、前記運動障害の症状を緩和するために有効である。
【００６５】
一つの実施形態において、前記症状は舞踏病である。
【００６６】
一つの実施形態において、前記被験者は、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の投与を開始する前にテトラベナジン療法を受けている。
【００６７】
一つの実施形態において、前記被験者は、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の投与を開始する前にテトラベナジン療法を受けている。
【００６８】
一つの実施形態において、前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩 および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、同時に投与される。
【００６９】
一つの実施形態において、前記被験者はヒト患者である。
【００７０】
本発明はまた、
ａ）ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能なキャリアを含有する第一の医薬組成物と、
ｂ）ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能なキャリアを含有する第二の医薬組成物と、
ｃ）運動障害に罹患している被験者を治療するために、前記第一および第二の医薬組成物を一緒に使用するための指示書
を具備してなるパッケージを提供する。
【００７１】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである。
【００７２】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の付加療法として、またはそれとの併用で使用するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を提供する。
【００７３】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである。
【００７４】
本発明はまた、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、少なくとも一つの医薬的に許容可能なキャリアを含有する医薬組成物を提供する。
【００７５】
一つの実施形態において、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、５〜１００ｍｇである。
【００７６】
一つの実施形態において、前記テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、５ｍｇ、６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、３７．５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、または１００ｍｇである。
【００７７】
一つの実施形態において、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１０〜１００ｍｇである。
【００７８】
一つの実施形態において、前記プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩の量は、１０ｍｇ、２２．５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇである。
【００７９】
一つの実施形態において、前記医薬組成物は、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて使用するためのものである。
【００８０】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである。
【００８１】
一つの実施形態において、前記医薬組成物は、肥満、肥満関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患している患者を治療、予防または緩和することにおいて使用するためのものである。
【００８２】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者を治療するための併用剤の調製における、
ａ）ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および
ｂ）ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩
の使用であって、
前記量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩が同時に、または同時存在的に投与される使用を提供する。
【００８３】
本発明はまた、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩と併用して、運動障害に罹患している患者を治療することにおいて使用するための、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、前記被験者に対して、前記医薬組成物および前記量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することにより使用するための医薬組成物を提供する。
【００８４】
本発明はまた、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と併用して、運動障害に罹患している患者を治療することにおいて使用するための、ある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、前記被験者に対して、前記医薬組成物および前記量のテトラベナジンンまたはその医薬的に許容可能な塩を定期的に投与することにより使用するための医薬組成物を提供する。
【００８５】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである。
【００８６】
本発明はまた、運動障害に罹患している被験者を治療することにおいて、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、ある量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびある量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含む製品を提供する。
【００８７】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーである。
【００８８】
本発明はまた、肥満症、肥満症関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患した患者を治療する方法であって、前記患者に対して、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを投与することを含んでなり、前記量は一緒に摂取するときに前記被験者を治療するのに有効である方法を提供する。
【００８９】
一つの実施形態において、前記被験者はヒト患者である。
【００９０】
本発明はまた、ヒトを含む哺乳動物における肥満または肥満関連障害の治療、予防または緩和のため、およびプリドピジンの心臓血管系副作用の治療、予防または緩和のための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩；およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを提供する。
【００９１】
もう一つの側面において、本発明は、運動障害の治療、予防または緩和のために、医薬的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩が、医薬的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と一緒に投与される併用療法に関する。
【００９２】
好ましい実施形態において、前記多動性運動障害は、ハンチントン病、ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーから生じる不随意多動性運動障害、中でもハンチントン病から生じる不随意多動性運動障害である。
【００９３】
もう一つの側面から見ると、本発明は、医薬として使用するための、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩およびテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを提供する。
【００９４】
もう一つの側面において、本発明は、ヒトを含む哺乳動物の運動障害を治療、予防または緩和するための医薬の製造のための、
ｉ）プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および
ｉｉ）トラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩
の使用に関する。
【００９５】
もう一つの側面において、本発明は、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物であって、多動性運動障害の治療、予防または緩和のために、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩との併用療法において使用するための医薬組成物を提供する。
【００９６】
もう一つの側面において、本発明は、生きた動物における多動性運動障害を治療、予防または緩和するための方法であって、それを必要としている該動物の身体に、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩との併用療法において、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を投与することを含んでなる方法を提供する。
【００９７】
もう一つの側面において、本発明は、治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩と、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する医薬組成物を提供する。
【００９８】
更なる側面において、本発明は、少なくとも二つの別々の単位投与量形態（Ａ）および（Ｂ）を備えてなる複数部分のキットであって、（Ａ）はプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含んでなり；また（Ｂ）はテトラベナジンまたは医薬的に許容可能な塩を含んでなり、また任意に、それを必要としている患者に対して前記（Ａ）のプリドピジンおよび前記（Ｂ）のテトラベナジンを同時に、逐次的に、または別々に投与するための指示書を備えてなるキットを提供する。
【００９９】
更なる側面において、本発明は、（Ａ）プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する第一の医薬投与形態と；（Ｂ）テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する第二の医薬投与形態とを備えてなる工業製品であって、該製品は第一および第二の医薬投与形態を含んでなる製品を提供する。
【０１００】
更なる側面において、本発明は、運動障害に罹患している被験者を治療する方法であって、前記被験者に対して、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を投与することを含んでなり、前記量は一緒に摂取したときに前記ヒト患者を治療するために有効である方法を提供する。
【０１０１】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病、ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーから生じる不随意多動性運動障害である。
【０１０２】
一つの実施形態において、前記運動障害は、ハンチントン病から生じる不随意多動性運動障害である。
【０１０３】
更なる側面において、本発明は、肥満症、肥満症関連障害、またはプリドピジンの心臓血管系副作用に罹患したヒトを含む哺乳動物を治療する方法であって、前記被験者に対して、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩および治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩の組合せを投与することを含んでなり、前記量は一緒に摂取するときに前記被験者を治療するのに有効である方法を提供する。
【０１０４】
一つの実施形態において、前記治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および前記治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、経口投与される。
【０１０５】
一つの実施形態において、前記治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および前記治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、静脈内投与される。
【０１０６】
一つの実施形態において、前記治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩、および前記治療的有効量のテトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩は、角質層を通しての薬物の直接浸透によって投与される。
【０１０７】
プリドピジン含有医薬は、テトラベナジンと同時に、逐次的方法で、または別々の投与によって適用されてよい。好ましくは、プリドピジンはテトラベナジンと同時に与えられる。
【０１０８】
現在のところ、プリドピジンは、毎日約０．０１〜１０００ｍｇ・ＡＰＩの範囲、より好ましくは毎日約１〜５００ｍｇ・ＡＰＩの範囲、更に好ましくは毎日約１０〜２００ｍｇ・ＡＰＩの範囲の治療的有効量で使用（テトラベナジンと同時投与）されてよいと考えられている。
【０１０９】
現在のところ、テトラベナジンは、毎日約０．０１〜１０００ｍｇ・ＡＰＩの範囲、より好ましくは毎日約１〜５００ｍｇ・ＡＰＩの範囲、更に好ましくは毎日約１０〜２００ｍｇ・ＡＰＩの範囲の治療的有効量で使用（プリドピジンと同時投与）されてよいと考えられている。
【０１１０】
プリドピジンおよびテトラベナジンは、何れか慣用的経路により同時投与されてよい。好ましい実施形態において、プリドピジンおよびテトラベナジンは経口、静脈内、血管内、腹腔内、皮下、筋肉内、吸入で、局所的、パッチ、または座薬の何れかによって投与される。
【０１１１】
より好ましい実施形態において、プリドピジンおよびテトラベナジンは経口（ｐ．ｏ．）で投与される。
【０１１２】
もう一つのより好ましい実施形態において、プリドピジンおよびテトラベナジンは静脈内（ｉ．ｖ．）に投与される。
【０１１３】
もう一つの実施形態において、プリドピジンおよびテトラベナジンは皮下（ｓ．ｃ．）注射により投与される。
【０１１４】
ここに記載した２以上の実施形態の如何なる組み合わせも、本発明の範囲内にあるものとみなされる。
【０１１５】
＜医薬的に許容可能な塩＞
本発明に従って使用するための活性化合物は、意図した投与に適した如何なる形態で与えられてもよい。適切な形態には、本発明の化合物の医薬的に（即ち、生理学的に）許容可能な塩、およびプレドラッグまたはプロドラッグの形態が含まれる。
【０１１６】
医薬的に許容可能な付加塩の例には、無毒の無機および有機酸付加塩、例えば塩酸塩、臭素酸塩、亜硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、蟻酸塩、酢酸塩、アコニット酸塩、アスコルビン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、桂皮酸塩、クエン酸塩、パモ酸塩、エナント酸塩、フマル酸塩、グルタミン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロンさん塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、フタル酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トルエン−ｐ−スルホン酸塩等が含まれるが、これらに限定されない。このような塩は、当該技術分野において記載された周知の方法により形成されてよい。
【０１１７】
＜医薬組成物＞
本発明に従って使用するための化合物は原料化合物の形態で投与してもよいが、活性成分を、任意に生理学的に許容可能な塩の形態で、１以上のアジュバント、賦形剤、キャリア、バッファー、希釈剤、および／または他の環尿的医薬助剤と共に、医薬組成物中に導入するのが好ましい。
【０１１８】
好ましい実施形態において、本発明は、活性化合物またはその医薬的に許容可能な塩もしくは誘導体を、そのための１以上の医薬的に許容可能なキャリアと共に、また任意に当該技術で知られ且つ使用されている他の治療剤および／または予防剤成分と共に含有する医薬組成物を提供する。キャリアは、製剤の他の成分と適合可能で且つレシピエントに対して有毒でないという意味において、「許容可能」でなければならない。
【０１１９】
本発明の医薬組成物は、望ましい療法に適した従来の如何なる経路により投与されてもよい。好ましい投与経路には、特に錠剤、カプセル、ドラジェー、粉末、または液体の形態での経口投与、および特に皮内、皮下、筋肉内、または静脈内注射による非経腸的投与が含まれる。本発明の医薬組成物は、当業者が、望ましい製剤に適した標準の方法および慣用的技術の使用により製造できる。望ましいときには、活性成分の持続放出を与えるために適合された組成物を用いてもよい。
【０１２０】
製剤および投与のための技術に関する更なる詳細は、レミングトンの薬学（Remington’s Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, PA)）の最新版に見ることができる。
【０１２１】
活性成分の各々の実際の投与量は、治療すべき疾患の性質および重篤度、正確な投与モード、投与形態に依存して主治医の裁量の範囲内であり、また望ましい治療効果を生じるために本発明の特別な環境に対する投与量滴定によって変化する可能性がある。しかし、当該化合物および抗肥満化合物のための下記の投与量が適切と考えられる。
【０１２２】
当該化合物の投与量は、ＡＰＩ（活性医薬成分）として決定、即ち、有利塩基として計算される。
【０１２３】
毎日約０．１〜２ｍｇＡＰＩ、好ましくは毎日約０．２５〜１ｍｇＡＰＩ、特に毎日０．２５、０．５または１．０ｍｇＡＰＩの範囲の１日投与量は、治療的処置のために適切である。当該化合物の１日投与量は、１回または数回の投与、例えば１日２回で投与されてよい。一つの実施形態において、１日投与量は一回の服用により投与される。
【０１２４】
抗肥満化合物の毎日投与量は、現在のところ、実際の化合物に応じて約０．１〜５００ｍｇの活性成分の範囲にあると考えられる。より詳細には、投与量間隔は、毎日約０．１〜２ｍｇ、約１〜１０ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約２５〜１００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇおよび約約１００〜５００ｍｇであってよい。抗肥満化合物の１日投与量は、１日当たり１回〜数回、例えば２回で投与されてよい。一つの実施形態において、この１日投与量は１回で投与されてよい。
【０１２５】
ここで用いるとき、目的を達成するために有効な量における「有効な」とは、本開示の仕方で使用したときに、合理的な利益／リスク比に釣り合って、過度な副作用（毒性、刺激、またはアレルギー反応）を伴わずに指示された治療応答を生じるために十分な、ある成分の量を意味する。例えば、運動障害を治療するために有効な量である。特定の有効量は、治療すべき特別な症状、患者の身体的状態、治療される哺乳動物のタイプ、治療の継続期間、併用療法（もしあれば）、および用いる特定の製剤、および当該化合物またはその誘導体の構造と共に変化するであろう。
【０１２６】
ここで用いるとき、「治療」すること、または「治療する」とは、例えば、障害および／または疾患の阻害、退行または停止を誘導することを包含する。ここで用いるとき、患者における疾患進行または疾患合併の「阻害」とは、被験者における疾患進行および／または疾患合併を防止または減少させることを意味する。
【０１２７】
ここで用いるとき、「併用」とは、同時投与または同時存在的投与の何れかによる療法において使用するための薬剤の集合を意味する。同時投与とは、プリドピジンおよびテトラベナジンの混合物（真の混合物、懸濁液、エマルジョンまたは他の物理的組み合わせの何れか）の投与を言う。この場合、併用は、前記混合物、または投与の直前に組み合わされる別々の容器のプリドピジンおよびテトラベナジンであってよい。同時存在的投与とは、プリドンおよびテトラベナジンの別々の同時投与、またはプリドピジンまたはテトラベナジンの何れか単独の活性に対して相乗的活性または相加的以上の活性が観察される十分に近接した時間での投与を言う。
【０１２８】
ここで使用するとき、「ＤＯＰＡＣ」は、３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸である。
【０１２９】
ここで使用するとき、「ＬＭＡ」は、運動活性である。
【０１３０】
ここで使用するとき、「ＴＢＺ」はテトラベナジンである。
【０１３１】
＜複数部分の医薬キット＞
本発明によれば、少なくとも２つの別々の単位投与量形態（Ａ）および（Ｂ）を含んでなる複数部分のキットであって：
（Ａ）は、プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有してなり；また
（Ｂ）は、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩含有してなり；
更に任意に、（Ｃ）それを必要としている患者に対して前記（Ａ）のプリドピジンおよび前記（Ｂ）のテトラベナジンを同時、逐次的または別々に投与するための指示書を備えてなるキットもまた提供される。
【０１３２】
本発明に従って使用するためのプリドピジンおよび本発明に従って使用するためのテトラベナジンは、好ましくは、他と組み合わせて投与のために適した形態で提供されてよい。これは、２つの製剤の一方または他方が（任意に反復して）他の成分の投与に先立って、該投与の後に、および／または該投与と同時に投与されてよい場合を含むことを意図している。
【０１３３】
また、本発明に従って使用するためのプリドピジンおよび本発明に従って使用するためのテトラベナジンは、組み合わせた形で、別々に、または別々かつ逐次的に投与されてよく、ここでの逐次的投与は時間的に近接し、または時間的に遠く離れている。これには特に、２つの製剤が時間的に十分に近接して投与される（必要に応じ反復して）場合が含まれるが、これは患者にとって、関連症状の治療期間において同じ治療コースに亘って、二つの製剤の何れかが単独で（必要に応じ反復して）投与される場合よりも、遥かに有益だからである。併用が特定の症状の治療に関して、および治療コースに亘って、より大きな利益を提供するかどうかの決定は、治療または予防すべき症状に依存するであろうが、日常的には、当業者によって達成されてよい。
【０１３４】
この文脈で使用されるとき、「同時に投与される」および「〜と同じ時に投与される」とは、プリドピジンおよびテトラベナジンの個別の投与量が、相互に４８時間以内、例えば２４時間以内に投与されることを含むものである。
【０１３５】
二つの成分を相互に合体させることは、成分（Ａ）および（Ｂ）が別々の製剤として与えられること（即ち、相互に独立に）を含むものであり、これらはその後に併用療法において相互に組み合わせて使用するために一緒にされ；または併用療法において相互に関連して使用するために、「組み合わせパック」の別々の成分として一緒に包装および提示される。
【０１３６】
本発明によれば、（Ａ）プリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する第一の医薬投与形態と；（Ｂ）テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩を含有する第二の医薬投与形態と備えてなる工業製品であって；ここで該製品は第一および第二の医薬投与形態を含んでいる工業製品もまた提供される。
【０１３７】
＜方法または療法＞
もう一つの側面において、本発明は、ヒトを含む生きた動物の身体における多動性運動障害の治療、予防または緩和の方法であって、それを必要としているこのような生きた動物身体に対して、テトラベナジンまたはその医薬的に許容可能な塩との併用療法において、治療的有効量のプリドピジンまたはその医薬的に許容可能な塩を投与する工程を含んでなる方法を提供する。
【０１３８】
多動性運動障害は、特に、ハンチントン病、 ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群、または遅発性ジスキネジーから生じる不随意運動障害であり得る。
【０１３９】
好ましい実施形態において、前記多動性運動障害は、ハンチントン病から生じる不随意運動障害である。
【０１４０】
＜実施例への導入＞
運動機能は、基底神経節および視床を含む皮質下構造に大脳皮質を接続する複雑な回路によって制御される。この回路内の一つの主要な経路は、前記皮質を、ドパミンＤ２型受容体を発現する線条体ＧＡＢＡ作動性中型有刺ニューロンの集団を介して、皮質、線条体、および視唱を接続する閉じたフィードバックループを形成する所謂「間接的経路」である。この経路は動作の負の調節体として機能し、過剰動作の抑制にとって重要である。ドパミンは、阻害的ドパミンＤ２受容体によって間接的経路を調節し、これら受容体における増大したドパミン緊張が前記間接的経路の低下した活性を導き、従って動作を抑制する低下した能力を導くようになっている。他方、減少したドパミン緊張は、動作のより強い抑制と関連付けられた前記間接的経路の増大した活性へと導く。
【０１４１】
運動制御に関与するもう一つの重要な皮質-線条体-視床経路は、所謂「直接経路」であり、ドパミンＤ１型受容体を発現する線条体ＧＡＢＡ作動性中型有刺ニューロンを介して、閉じた正のフィードバックループを形成するものである。この直接的経路は、随意運動の選択および起動に関与する運動機能の正のモジュレータある。Ｄ１型受容体において作動するドパミンは、直接的経路における線条体ＧＡＢＡ作動性ニューロンを刺激し、それによって運動性を向上させる。逆に、これらＤ１受容体におけるドパミン緊張の低下は、随意運動を行うための能力低下を導く。
【０１４２】
また、テトラベナジンでの治療から生じるドパミン信号伝達の一般的な低下は、他のドパミン依存性機能をも低下させる。特に、ドパミンＤ１受容体を発現する線条体ニューロンを備えた直接的経路におけるドパミン緊張もまた低下されて、直接的経路の弱体化をもたらし、従って、随意運動を行う能力低下させる。更に、テトラベナジンにより誘導されたドパミン枯渇は、ドパミン依存性の運動および報酬を損ない易く、これはテトラベナジンの鬱促進副作用の基礎をなすものと仮定されている。
【０１４３】
プリドピジンが、アゴニスト活性を持たないドパミンＤ２受容体での純粋な拮抗剤であるとすれば、プリドピジンおよびテトラベナジンの治療的併用によってドパミンＤ２受容体における緊張の更なる低下を導き、従って、テトラベナジンだけでの治療に比較して、全体の運動活性を更に低下させることが予測される。
【実施例】
【０１４４】
以下の実施例を参照して本発明を更に例示するが、これら実施例は如何なる意味においても、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定しようとするものではない。
【０１４５】
下記の実施例では、運動活性に関するプリドピジンとテトラベナジンの間の相互作用を研究する。ドパミンおよびＤＯＰＡＣの線条体レベルも測定した。テトラベナジンは、ＶＭＡＴの阻害の直接的な結果として、ドパミンの組織レベルを低減する。両方の化合物とも、投与量に依存して、インビボでの線条体ＤＯＰＡＣレベルを増大させ、ドパミンＤ２受容体における減少した緊張を反映させる（Ponten 2010, Reches, 1983）。更に、即時初期遺伝子Ａｒｃの発現に対する影響（活動-調節される細胞骨格関連タンパク質／活動-調節される遺伝子３．１）を、前頭皮質および線条体において測定した。Ａｒｃ遺伝子発現は、シナプス活性を反映するバイオマーカーである（Steward, 2001; Kawashima 2009）。プリドピジンの効果を古典的ドパミンＤ２受容体アンタゴニストの効果と比較するために、テトラベナジンおよびドパミンＤ２アンタゴニストハプロタイプを用いた相互作用実験も行った。
【０１４６】
１）  運動活性、線条体ＤＯＰＡＣおよびＡｒｃに対するテトラベナジンの影響
テトラベナジンを、  ０．３７、０．６４および１．１ｍｇ／ｋｇで皮下に与えた。投与後、ＬＭＡを６０分間記録した。その後、ラットを屠殺し、脳を回収した。脳組織の解析には、線条体におけるＤＯＰＡＣ、および前頭皮質および線条体におけるＡｒｃ・ｍＲＮＡが含まれていた。
【０１４７】
テトラベナジンは、運動活性を低下させた（図１）。テトラベナジンは、投与量とは独立に自発的運動活性を阻害した。全時間の記録を考慮すると、１．１ｍｇ／ｋｇのテトラベナジン投与量群は、担体対照群平均の４０％への顕著な減少を示した（Ｐ＜０．０１）。最初の１５分の間に、１．１および０．３７ｍｇ／ｋｇテトラベナジン投与量群の両方について顕著な減少（Ｐ＜０．０５）が見られたのに対して、投与後１５〜６０分間については、０．６４および１．１ｍｇ／ｋｇにおいて顕著な効果が観察された。運動活性の低下は、ＶＭＡＴ２の阻害により生じる減少したドパミン伝達を反映している。
【０１４８】
テトラベナジン投与量は、独立に、試験した全ての投与量において統計的に顕著な効果を伴って、線条体ＤＯＰＡＣを増大させる。ＤＯＰＡＣにおける増大は、テトラベナジンで治療されたラットにおける減少したドパミン伝達による、ドパミンＤ２受容体における減少した緊張のニューロンマーカーである。表１および図２を参照のこと。
【０１４９】
線条体および皮質におけるＡｒｃ：  テトラベナジンは線条体Ａｒｃを増大させ、前頭皮質Ａｒｃを低下させる。テトラベナジンは、投与量に依存して線条体におけるＡｒｃ・ｍＲＮＡを増大させ、試験された最大投与量（１．１ｍｇ／ｋｇ）では担体対照群平均の１４７％に達する。前頭皮質において、担体対照群平均の６６％へのＡｒｃ・ｍＲＮＡの顕著な低下が、１．１ｍｇ／ｋｇのテトラベナジン投与量において観察された（Ｐ＜０．０５）。０．６４ｍｇ／ｋｇのテトラベナジン投与量において、前頭皮質ｍＲＮＡにおける減少傾向が見られた（対照群平均の８３％、ｐ＝０．１４）。図３参照。この線条体におけるＡｒｃの増大は、ドパミンＤ２受容体における緊張減少による可能性が最も高い。前頭皮質におけるＡｒｃ減少は、ドパミンＤ１受容体における減少した緊張に導く皮質におけるドパミン伝達減少に関連するようである。
【０１５０】
２）  運動活性、線条体ＤＯＰＡＣ、およびＡｒｃに対するプリドピジンの影響
プリドピジンを、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇで皮下に与えた。プリドピジンは、自発的運動活性に対する阻害効果を示さなかった。温和な投与量の３３μｍｏｌ／ｋｇにおいて、完全な６０分の記録期間に亘り、運動活性の僅かな増大が観察された。図４参照。全時間の記録が試験されたとき、３３μｍｏｌ／ｋｇのプリドピジン投与量群について、担体対照群平均の１３８％までの運動活性の顕著な増加が観察された（Ｐ＜０．０５）。最初の１５分の間は、１１μｍｏｌ／ｋｇのプリドピジン投与群について顕著な増大が見られたのに対して、投与後１５〜６０分の期間については、有意な効果は観察されなかった。
【０１５１】
プリドピジンは、試験した全ての投与量において統計的に有意な効果を伴って、線条体ＤＯＰＡＣを投与量依存的に増大させた。ＤＯＰＡＣにおける増大は、プリドピジンによって働くドパミンＤ２受容体拮抗作用に起因して、ドパミンＤ２受容体における低下した緊張のニューロンマーカーである。図５および表１を参照されたい。
【０１５２】
プリドピジンは、線条体および皮質ａｒｃ遺伝子発現を投与量依存的に増大させ、試験された最大投与量において統計的有意性に達した。プリドピジンは、前頭皮質におけるＡｒｃ・ｍＲＮＡレベルを、  ３３μｍｏｌ／ｋｇおよび１００μｍｏｌ／ｋｇの投与量において、それぞれ担体対照群平均の１４９％（ｐ＜０．０１）および２２２％（ｐ＜０．００１）にまで投与量依存的に増大させた（図６）。プリドピジンは、線条体におけるＡｒｃ・ｍＲＮＡを投与量依存的に増大させた。関連の対照群平均と比較すると、レベルは１６８％および２５３％に達した（プリドピジン３３μｍｏｌ／ｋｇおよび１００μｍｏｌ／ｋｇの両方の投与量について、ｐ＜０．０１）。（図６）。この線条体におけるＡｒｃ増大は、ドパミンＤ２受容体における低下した緊張によるものである可能性が最も高い。前頭皮質におけるＡｒｃ増大は、Ｄ１ドパミン受容体での増大した緊張へと導く皮質での増大したドパミン伝達に関連する可能性が高い。
【０１５３】
３）  運動活性、線条体ＤＯＰＡＣ、およびＡｒｃに対するハロペリドールの効果
ハロペリドールが、０．１２、０．３７および１．１ｍｇ／ｋｇで皮下に与えられた（図７参照）。低投与量での効果を評価する追加の実験において、０．０４、０．１２、０．３７および１．１ｍｇが与えられた（図３０２参照）。ハロペリドールは、自発的運動活性に対して投与量依存的な阻害効果を示した。０．１２ｍｇ／ｋｇ以上の投与量において統計的に有意な効果が観察されたが、試験された最低投与量０．０４ｍｇ／ｋｇでは、このような効果は観察されなかった。
【０１５４】
より詳細に言えば、充分な時間の記録を考慮したときには、０．３７および１．１ｍｇ／ｋｇのハロペリドール投与量群は、担体対照群平均の約３５％への有意な減少を示した（ｐ＜０．０５）。最初の１５分の間、０．３７および１．１ｍｇ／ｋｇハロペリドール投与量群の両方について有意な減少（ｐ＜０．０５）が見られたのに対して、投与後１５〜６０分の間については、１．１ｍｇ／ｋｇ投与量群のみについて顕著な効果（ｐ＜０．０５）が観察された
ハロペリドールは、投与量依存的に線条体ＤＯＰＡＣを増大させ、試験した全ての投与量において統計的に有意な効果を伴った。このＤＯＰＡＣにおける増大は、ドパミンＤ２受容体拮抗作用に起因して、ドパミンＤ２受容体における低下した緊張のニューロンマーカーである。表１および図９を参照されたい。
【０１５５】
ハロペリドールは、線条体におけるＡｒｃ・ｍＲＮＡを投与量依存的に増大させ、０．１２ｍｇ／ｋｇ、０．３７ｍｇ／ｋｇ、および１．１ｍｇ／ｋｇ投与量において、それぞれ担体体操群平均の２６２％（Ｐ＜０．０１）、３３１％（Ｐ＜０．００１）、４０９％（Ｐ＜０．０１）に到達させた。この線条体におけるＡｒｃ増大は、ドパミンＤ２受容体における低下した緊張によるものである可能性が最も高い。ハロペリドールの皮質Ａｒｃ遺伝子発現に対する有意な効果はなかった。図１０を参照されたい。
【表１】
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【０１５６】
要約すると、三つの全ての抗ドパミン作動性化合物は増大した線条体ＤＯＰＡＣ、および増大した線条体ａｒｃ遺伝子発現を生じ、両者の効果はドパミンＤ２受容体での減少した緊張に関連している可能性が最も高いのに対して、プリドピジンは、運動活性を阻害しない点において独特であった。プリドピジンをハロペリドールまたはテトラベナジンから識別するもう一つの特徴は、それが皮質Ａｒｃ遺伝子発現を増大させたことである。
【０１５７】
＜併用実験＞
ドパミンンが部分的に欠乏した動物に投与したときのドパミンＤ２アンタゴニストの効果を試験するために、ハロペリドールおよびプリドピジンを、線条体ＤＯＰＡＣおよび運動活性に対して最大未満ではあるが顕著な効果を生じる投与量のテトラベナジンと併用した。
【０１５８】
４）  テトラベナジンに誘導された運動活性低下、線条体ドパミン増大、およびＡｒｃに対するプリドピジンの効果
プリドピジンおよびテトラベナジン相互作用実験において、プリドピジンは、０．６４ｍｇ／ｋｇのテトラベナジンと併用して、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇで与えられた。図１１参照。運動の記録によって、プリドピジンはテトラベナジンにより誘導された行動阻害を反転させることが示された。しかし、線条体にＤＯＰＡＣに対する効果は相加的であった；即ち、プリドピジンの同時投与は、線条体ＤＯＰＡＣを更に増大させた。
【０１５９】
運動阻害については、充分な時間の記録について（Ｐ＜０．００１）、並びに０〜１５分の期間（Ｐ＜０．０１）および１５〜６０分の期間（Ｐ＜０．０１）の両方で、テトラベナジン対照群 vs.担体処置対照において顕著な減少があった。十分な時間の記録を考慮すると、プリドピジンは、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ投与量群の両方において、テトラベナジンにより誘導された運動阻害を反転させ、それぞれ、テトラベナジン対照平均の１３５％（Ｐ＜０．０５）および１３７％（Ｐ＜０．０１）に達した。０〜１５分、並びに１５〜６０分の期間の間に、この反転効果は、プリドピジン１００μｍｏｌ／ｋｇ投与量群について有意性なレベルに達した。このことは、線条体Ｄ２受容体での緊張が、モノアミンが欠乏した動物にプリドピジンを加えたときに更に減少することを示している。図１１参照。
【０１６０】
テトラベナジン０．６４ｍｇ／ｋｇが、プリドピジン３３μｍｏｌ／ｋｇまたは１００μｍｏｌ／ｋｇと併用された場合の相互作用実験においては、担体処理された対照群と比較して、テトラベナジンに誘導された線条体ＤＯＰＡＣレベルの有意な増大が見られた（ｐ＜０．０１；表１）。プリドピジンは、線条体におけるＤＯＰＡＣレベルを更に増大し、１００μｍｏｌ／ｋｇ投与量でテトラベナジン対照群平均の１５５％に到達した。表１および図１２を参照されたい。
【０１６１】
同様に、線条体Ａｒｃ発現は、プリドピジンを加えることによって更に増大した。対照的に、テトラベナジンにより誘導されたＡｒｃ減少は、プリドピジンによって打ち消された。
【０１６２】
プリドピジンは、図１３に示すように、テトラベナジンにより誘導された前頭皮質Ａｒｃの減少を反転させた。より詳細に言えば、テトラベナジンは、相互作用実験において用いた０．６４ｍｇ／ｋｇ用量では、線条体Ａｒｃ・ｍＲＮＡに対して有意な効果を有していなかった。プリドピジンは、テトラベナジンと共に同時投与されたときに、線条体Ａｒｃを投与量依存的に増加させ、プリドピジンの３３μｍｏｌ／ｋｇ、および１００μｍｏｌ／ｋｇ投与量において、それぞれテトラベナジンン対照群平均の１４４％（Ｐ＜０．０５）および２０７％（Ｐ＜０．０１）に到達させた。
【０１６３】
テトラベナジンは、前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡにおける顕著な減少を誘導し（Ｐ＜０．０５）、これは、テトラベナジンを用いた投与量応答実験において観察された０．６４ｍｇ／ｋｇ服用量での前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡの減少傾向（図３）に一致している。プリドピジンは、投与量に依存して、テトラベナジンにより誘導された前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡの減少を反転させた。３３μｍｏｌ／ｋｇおよび１００μｍｏｌ／ｋｇのプリドピジンにおいて、Ａｒｃ・ｍＲＮＡはそれぞれ、テトラベナジン対照群平均の１２５％（Ｐ＜０．０５）および１９３％（Ｐ＜０．０５）にまで増加した。
【０１６４】
５）テトラベナジンに誘導された運動活性低下、線条体ドパミン増加、およびＡｒｃに対するハロペリドールの効果
ハロペリドールおよびテトラベナジンの相互作用実験において、ハロペリドールは、０．６４ｍｇ／ｋｇのテトラベナジンと併用して、０．０４および０．１２ｍｇ／ｋｇで与えられた。
【０１６５】
運動の記録は、ハロペリドールが、テトラベナジンで治療された動物における運動活性を更に低下させることを示した。より詳細に言えば、全時間に亘る運動記録によって、ハロペリドールは、０．０４および０．１２ｍｇ／ｋｇの両方の投与量において、テトラベナジンで治療されたラットにおける運動活性を、テトラベナジン対照群平均の５１％および４１％にまで顕著に（Ｐ＜０．０１）減少させることが示された。記録の最初の１５分間について、この減少効果は、０．０４ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０１）および０．１２ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）の両方で有意であったのに対して、１５〜６０分の期間については、０．１２ｍｇ／ｋｇの投与量についてのみ有意であった（Ｐ＜０．０５）。図１４参照。
【０１６６】
線条体ＤＯＰＡＣに対する効果は相加的であった；即ち、ハロペリドールのテトラベナジンとの同時投与は、線条体ＤＯＰＡＣの追加の増大を生じた。テトラベナジン０．６４ｍｇ／ｋｇをハロペリドール０．０４ｍｇ／ｋｇまたは０．１２ｍｇ／ｋｇと併用した相互作用実験において、テトラベナジンは、担体で治療された対照群と比較して、線条体ＤＯＰＡＣレベルの有意な増大を誘導した（ｐ＜０．００１；表１）。更に、ハロペリドールは線条体におけるＤＯＰＡＣレベルを増大させ、０．０４ｍｇ／ｋｇおよび０．１２ｍｇ／ｋｇの投与量において、それぞれ、テトラベナジン対照群平均の１７８％および２１８％に達した（両方の投与量について、ｐ＜０．００１）。表１および図１５を参照のこと。
【０１６７】
テトラベナジンと同時治療されたラットにおいて、皮質Ａｒｃ遺伝子発現に対するハロペリドールの有意な効果はなかった。ハロペリドールは、テトラベナジンで治療された動物において、線条体Ａｒｃを更に増大させた（図１６）。テトラベナジンは、相互作用実験に使用された０．６４ｍｇ／ｋｇ用量において、線条体Ａｒｃ・ｍＲＮＡに対して有意な効果を持たなかった。ハロペリドールは、テトラベナジンと同時されたときに線条体Ａｒｃを投与量依存的に増大させ、ハロペリドールの０．０４ｍｇ／ｋｇ、および０．１２ｍｇ／ｋｇ投与量において、それぞれテトラベナジン対照群平均の２７２％（Ｐ＜０．００１）および４００％（Ｐ＜０．００１）に達した。
【０１６８】
テトラベナジンは、前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡを増大させる傾向にあり（Ｐ＝０．０８）、これはテトラベナジンを用いた投与量応答実験で観察された前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡの減少傾向（図３）、およびプリドピジンおよびテトラベナジンを用いた相互作用実験で観察された有意な減少（図１３）と一致した。テトラベナジン治療された動物において、前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡに対するハロペリドールの有意な効果はなかった。
【０１６９】
＜試験方法＞
本発明に従って使用するための化合物を評価するために、以下の試験が用いられた。
【０１７０】
動物
Ｂ＆Ｋスカンブル社（ソレンツナ、スエーデン国）から入手した雄のスプラグ-ドーリーラット（ＩＢＢＳ５８）、チャールズリバー社（ケルン、ドイツ国）から入手したスプラグドーリーラット（ＫＲ１０４，ＢＳ３１）、またはタコニック社（Ｅｊｂｙ，デンマーク国）から入手したスプラグドーリーラット（ＢＳ８５，ＢＳ８１，ＫＲ２１９，ＴＡ２８４）を用いた。ラットは、到着時の体重が１６０〜１８０ｇであった。運動研究よび組織神経化学研究の時点において、ラットの体重は２２０〜２６０ｇであった。動物は、１つの檻あたり５匹で動物を収容し、０．６：００〜１８：００の間で点灯照明した。全ての実験は、スエーデン動物保護法に従い、且つヨーテボリ市地域動物倫理委員会の承認を得て行われた。
【０１７１】
薬物投与
ＩＢＢＳ５８：  動物を四つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝５）。これらの治療群は、担体（塩水；ＮａＣｌ、０．９％ｖ／ｗ）、および３つの投与量（１１、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたＡＣＲ１６からなっていた。
【０１７２】
ＢＳ３１：  動物を四つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝５）。これらの治療群は、担体（グルコース、５．５％ｖ／ｗ）および３つの投与量で試験されたハロペリドール（０．１２、０．３７および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）であった。
【０１７３】
ＫＲ１０４：  動物を五つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝４）。これらの治療群は、担体（グルコース、５．５％ｖ／ｗ）および４つの投与量で試験されたハロペリドール（０．０４、０．１２、０．３７および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）であった。
【０１７４】
ＫＲ２１９：  動物を四つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝５）。これらの治療群は、担体（グルコース、５．５％ｖ／ｗ）および３つの投与量で試験されたテトラベナジン（０．３７、０．６４および１．１μｍｏｌ／ｋｇ）であった。
【０１７５】
ＢＳ８１：  動物を四つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝５）。これらの治療群は、担体１：１（塩水；０．９％ｖ／ｗのＮａＣｌ  ＋  ５．５％グルコース、数滴のＨＡｃを添加）からなり、第二の群は単一投与量のテトラベナジンからなり（０．６４ｍｇ／ｋｇ）、第三および第四の治療群は２つの投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇの単一投与量のテトラベナジンと共に、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたＮＳ３００１６からなっていた。
【０１７６】
ＴＡ２８４：  動物を四つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝１０）。これらの治療群は、担体１：１（塩水；０．９％ｖ／ｗのＮａＣｌ  ＋  ５．５％グルコース、数滴のＨＡｃを添加）からなり、第二の群は単一投与量のテトラベナジンからなり（０．６４ｍｇ／ｋｇ）、第三および第四の治療群は２つの投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇの単一投与量のテトラベナジンと共に、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたＮＳ３００１６からなっていた。この実験では、脳組織は採取されなかった。
【０１７７】
ＢＳ８５：  動物を四つの異なる治療群に割り当てた（ｎ＝５）。 これらの治療群は、担体１：１（塩水；０．９％ｖ／ｗのＮａＣｌ  ＋  ５．５％グルコース、数滴のＨＡｃを添加）からなり、第二の群は単一投与量のテトラベナジンからなり（０．６４ｍｇ／ｋｇ）、第三および第四の治療群は２つの投与量（０．６４ｍｇ／ｋｇの単一投与量のテトラベナジンと共に、３３および１００μｍｏｌ／ｋｇ）で試験されたハロペリドールからなっていた。
【０１７８】
全ての化合物は、５ｍｌ／ｋｇを運動活性記録の開始４分前に皮下注射した。
【０１７９】
インビボ試験：行動
行動活性は、オミテック社（Omnitech）のディジスキャン分析器、およびディジタルインターフェースボード（NB DIO-24, National Instruments, USA）を備えたアップル社のマッキントッシュ（登録商標）コンピュータに接続された、８つのディジスキャン活動モニター（RXYZM (16) TAO, Omnitech Electronics, Columbus, OH, USA）を使用して測定される。それぞれの活動モニターは、光線センサを備えた二次金属フレームからなる。行動活性の測定の間は、ラットはマットを敷いた黒色床の透明なアクリル製の檻（Ｗ×Ｌ×Ｈ：４１×４１×３０ｃｍ）の中に入れられ、次いで、これを活性モニターの中に配置される。各活性モニターには３列の赤外光線センサが装備されており、各列は１６個のセンサからなっている。２つの列は、檻の床の前縁および側縁に沿って９０°の角度で配置され、第３の列は、垂直活動を測定するために床から１０ｃｍ上に配置される。光線センサは、２．５ｃｍ離間される。各活動モニターは、弱いハウス照明およびファンを含む同一の音および光減衰ボックス（Ｗ×Ｌ×Ｈ：５５×５５×４５ｃｍ）の中に収納される。
【０１８０】
コンピュータソフトウエアは、オブジェクト指向プログラミング（LabVIEWTM, National instruments, Austin, TX, USA）を使用して書き込まれる。
【０１８１】
各時間における動物の位置（重力の水平中心および垂直活動）を表す、各活動モニターからの行動データは、２５Ｈｚのサンプリング周波数で記録され、特注で書かれたＬＡＢＶｉｅｗTMアプリケーションを使用して収集される。各記録セッションから得られたデータは保存され、また移動した距離に関して解析される。各行動記録セッションは、被験化合物の注射後約４分から開始して６０分間継続される。その結果は、任意長さ単位で、カウント／６０分、カウント／４５分またはカウント／１５分として提示される。スチューデントのｔ検定を使用して、対照群に対する統計的比較が行われる。
【０１８２】
インビボ試験：神経化学
行動的活動セッションの直後に、ラットを断頭し、それらの脳を迅速に取り出し、氷冷ペトリ皿に載置する。
【０１８３】
脳を、線条体、辺縁領域（側坐核-核および殻の両方、扁桃体、嗅覚結節、および腹側淡蒼球）、前頭皮質および海馬に切断する。組織サンプルを直ちに凍結し、これを過塩素酸（Ｐｃａ）（０．１Ｍ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）（５．３７ｍＭ）グルタチオン（ＧＳＨ）（０．６５ｍＭ）および内部標準としてのα−メチルドパミン（０．２５μＭ）と共にホモジナイズするまで、−８０℃で保存した。デジタル超音波八世紀（Branson Digital Sonifier 250-D）を使用して、線条体および辺縁領域からの組織をホモジナイズした。皮質組織は、ウルトラ・ツラックスＴ２５（Ultra Turrax T25）ホモジナイザーを使用してホモジナイズした。全てのサンプルを、＋４℃で１０分間、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。皮質組織を、ムンクテル（Munktell）濾紙５．５ｃｍ品質１Ｆで濾過した。組織溶出物を、ＨＰＬＣ分離および電気化学的検出（ＨＰＬＣ／ＥＣ）により、モノアミン伝達物質［ノルエピネフィリン（ＮＡ）、ドパミン（ＤＡ）５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ）］、並びにそれらのアミン代謝物［ノルメタンフリン（ＮＭ）、３−メトキシチラミン（３−ＭＴ）］および酸代謝物［３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡＣ）、５−ヒドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）、ホモバニリン酸（ＨＶＡ）］の組織濃度に関して分析した。ストック標準品（ＤＡ、ＮＡ、５−ＨＴ、３−ＭＴ、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ、ＨＩＡＡ、５００μｇ／ｍＬ）および内部標準（ＡＭＤＡ、５００μｇ／ｍＬ）を３月毎に１回調製する。５−ＨＴおよび５ＨＩＡＡを、ミリＱ水（milliQ water）中に溶解する。ＤＡ、ＮＡ、ＤＯＰＡＣ、ＮＭ、３−ＭＴおよびＨＶＡを、０．０１Ｍ・ＨＣｌ中に溶解する。５−ＨＴ、５−ＨＩＡＡ、ＮＭおよびＨＶＡを冷蔵庫の中に保存する；ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、ＮＡおよび３−ＭＴは冷凍機中に保持する。０．００５μｇ／ｍＬの濃度にホモジナイズ溶液中に希釈された標準品を含有する分析用の標準溶液を、毎日調製する。
【０１８４】
この分析法は、アミン専用または酸専用の二つのクロマトグラフィー分離に基づいている。二つのクロマトグラフィー系は、該二つのシステムに対する同時注入のための１０ポート弁および二つのサンプルループを備えた、共通の自動注入器を共有している。両方のシステムには逆相カラム（Luna C18(2), dp 3 μm, 50 x 2 mm i.d., Phenomenex）が装備されており、ガラス状炭素電極（MF-1000, Bioanalytical Systems, Inc.）上での二つの電位において電気化学検出が達成される。該カラムの流出物はＴコネクタを介して検出セルまたは廃棄物出口へと通される。これは、廃棄物出口または検出器出口の何れかをブロックする二つの電磁弁によって達成される。クロマトグラフィー前面が検出器に達するのを防止することによって、より良好な検出条件が達成される。酸システムのための水性移動相（0.4 ml/min）は、クエン酸１４ｍＭ、クエン酸ナトリウム１０ｍＭ、ＭｅＯＨ１５％（ｖ／ｖ）およびＥＤＴＡ０．１ｍＭを含有している。Ａｇ／ＡｇＣｌ対照に対する検出電位は０．４５および０．６０Ｖである。アミン系のための水イオン対移動相（0.5 mL/min）は、クエン酸５ｍＭ、クエン酸ナトリウム１０ｍＭ、ＭｅＯＨ９％（ｖ／ｖ）、ＭｅＣＮ１０．５％ｖ／ｖ）、デカン硫酸０．４５ｍＭ、およびＥＤＴＡ０．１ｍＭを含有している。Ａｇ／ＡｇＣｌ対照に対する検出電位は０．４５および０．６５Ｖである。
【０１８５】
ＰＣＲ
図３、図１３および図１６に示したデータのために、以下の方法を使用した。
【０１８６】
イソチオシアン酸グアニジン法（Chomczynski, 1987）によって、全ＲＮＡを調製する。ＲＮＡペレットをＭＱ水中に溶解し、−８０°で保存する。このサンプル濃度を、ＮａｎｏＤｒｏｐ・ＮＤ−１０００によって分光測定的に決定する。ｒ−ＲＮＡの品質指示数（quality indicator number）および一体性数（integrity number）は、エクスペリオン（Experion; Bio-Rad）を用いてランダムスケールで測定した。
【０１８７】
スーパースクリプト（SuperScript III）キット（Invitrogen）を使用することにより、二段階逆転写を行なう。１μｇの全ＲＮＡを、ＤＥＰＣ処理水で１０μＬに容積を調節した５μＬの２×ＲＴ反応混合物、１μＬのＲＴ酵素混合物を用いて逆転写する。１Ｕの大腸菌ＲＮａｓｅＨを加える。ｃＤＮＡを４０倍に希釈し、-２０°で保存する。
【０１８８】
三つの配列（興味の対照である一つの遺伝子および二つの参照遺伝子）を、三重ＰＣＲ反応で一緒に増幅する。リアルタイムＰＣＲ測定について：５μＬのｃＤＮＡ反応を、１０μＬの量子（Quanta）緩衝液、３．５μＬのＭＱ、０．１５μＭの各プライマーおよび０．１μＭの各プローブを含有する２０μＬの反応混合物中で増幅する。リアルタイムＰＣＲ測定は、全ての遺伝子について、以下の装置を使用して、ＣＦＸ９６（Ｂｉｏｒａｄ社）上で測定する：９５℃しいで３分の前インキュベーションの後、９５℃１５秒間で４０サイクルの変性、６０℃で１分間のアニーリングおよび鎖伸長。
【０１８９】
参照遺伝子はＨＰＲＴおよびシクロフィリンである。
【０１９０】
ａｒｃの測定について、プライマーおよびプローブの配列は以下の通りである。
【０１９１】
活性が調節された遺伝子（Ａｒｃ）（受付番号Ｕ１９８６６）
センス：  5’- GGA GTT CAA GAA GGA GTT TC-3’  
アンチセンス：  5’- CCA CAT ACA GTG TCT GGT A -3’  
プローブ：  CCG CTT ACG CCA GAG GAA CT  
色素：  5’FAM  
クエンチャー：  3’BHQ1
生成物サイズ：  149
ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）（受付番号ＡＦ００１２８２）
センス：  5’- AGG GAT TTG AAT CAT GTT TG -3’
アンチセンス：  5’- CTG CTA GTT CTT TAC TGG C -3’
プローブ：  TGT AGA TTC AAC TTG CCG CTG TC 
色素：  5'HEX 
クエンチャー：  3’BHQ1
生成物サイズ：  １２１
シクロフィリンＡ（受付番号Ｍ１９５３３）
センス：  5’- CTG GAC CAA ACA CAA ATG-3’ 
アンチセンス：  5’- ATG CCT TCT TTC ACC TTC -3’ 
プローブ：  TTG CCA TCC AGC CAC TCA GT 
色素：  5'テキサス赤 
クエンチャー：  3’BHQ2
生成物サイズ：  １００
正しいＰＣＲ生成物は、アガロースゲル電気泳動（２％）によって確認される。ＰＣＲ生成物は、キアゲン社（Qiagen；Valencia, CA, USA）から入手したＰＣＲ精製キットにより精製される。全ての遺伝子は、ドイツ国ＭＷＧにおいて配列決定される。問題の遺伝子の量は、二つの参照遺伝子ＨＰＲＴおよびシクロフィリンＡを用いて正規化される。
【０１９２】
図６に示したデータについて、逆転写およびＰＣＲは以下のようにして行われた：
逆転写はサーモスクリプトキット（ThermoScript kit；Invitrogen）を使用することにより行われる。１μｇの全ＲＮＡを２５ｐｍｏｌのオリゴ（ｄＴ）、６２．５んｇのランダムヘキサマー、７．５ＵのサーモスクリプトＲＴ、１０ＵのＲＮａｓｅＯｕｔ、２μＬの５×ｃＤＮＡ合成バッファー、１ｍＭのｄＮＴＰ、０．０５ＭのＤＴＴを用いて逆転写し、ＤＥＰＣ処理水を用いて容積を１０μＬに調節する。次いで、ｃＤＮＡを４０倍に希釈し、−２０℃で保存する。
【０１９３】
リアルタイムの一重ＰＣＲ測定：  ０．７μＬのｃＤＮＡ反応を、１×ｐｃｒバッファー、０．２ｍＭのｄＮＴＰ、３．７ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１５ｍＭのＳＹＢＲ緑、０．４μＭのプライマー、および１ＵのＴａｑポリメラーゼを含有する２５μＬの反応混合物中で増幅する。リアルタイムＰＣＲは、全ての遺伝子について、次の条件を使用してＩサイクラ―（Icycler；Biorad）上で測定する：９５℃で６０秒の前インキュベーションの後、４０サイクルの９５℃で２０秒の変性、５６℃で２０秒のアニール、７２℃で３０秒の鎖伸長。
【０１９４】
Ａｒｃ・ｍＲＮＡの分析：  テトラベナジン、プリドピジン、およびハロペリドールの投与量−応答研究および相互作用研究
イソチオシアン酸全グアニジン法（Schaefer 1984）により、全ＲＮＡを調製した。ＲＮＡペレットを超純粋の中に溶解し、−８０℃で保存した。ＲＮＡ濃度を、ナノドロップＮＤ−１０００（Thermo Scientific, Waltham, Massachusetts, USA）を使用して分光学的測定により決定した。ｒ−ＲＮＡの品質指示数（quality indicator number）および一体性数（integrity number）は、エクスペリオン電気泳動システム（Experion; Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA）を用いてランダムスケールで測定した。スーパースクリプト（SuperScript）IIIキット、またはサーモスクリプト（ThermoScript）キット（両者共に、Life Technologies Europe BV, Stockholm, Swedenから入手）を用いて逆転写を行った。テトラベナジンについて、投与量−応答研究および相互作用研究のために、１μｇのＲＮＡを、５μＬの２×ＲＴ反応混合物および１μＬのＲＴ酵素ミックス（スーパースクリプトIIIキット）を用いて逆転写した；プリドピジンおよびハロペリドールを用いた研究について、１μｇのＲＮＡを、２５ｐｍｏｌのオリゴ（ｄＴ）、６２．５ｎｇのランダムヘキサマー、７．５Ｕのサーモスクリプト逆転写酵素、１０ＵのＲＮａｓｅＯｕｔ、２μＬの５×ｃＤＮＡ合成バッファー、１ｍＭのｄＮＴＰ、および０．０５Ｍのジチオスレイトールと共にサーモスクリプトキットを使用して逆転写した。全ての研究において、ｃＤＮＡ容積は、ジエチルピロカーボネート処理した水で１０μＬに調節した。大腸菌ＲＮａｓｅＨ（１Ｕ）を加え、次いでｃＤＮＡを４０倍に希釈して、−２０℃で保存した。
【０１９５】
ＡｒｃのｃＤＮＡおよび二つの参照遺伝子、即ち、ヒポキサンチン−グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）およびシクロフィリンＡを、三重反応（テトラベナジン研究）または三つの一重反応（プリドピジンおよびハロペリドールを用いた研究）でのリアルタイムＰＣＲによって増幅した。三重リアルタイムＰＣＲについては、５μＬのｃＤＮＡを、１０μｌ量子バッファー（Quanta BioSciences Inc., Gaithersburg, Maryland, USA）、３．５μＬの超純水、０．１５μＭの各プライマーおよび０．１μＭの各プローブ（使用したプライマーおよびプローブの配列は表３に詳述した）を含有する２０μＬの反応混合物中で増幅させた。この三重リアルタイムＰＣＲの生成物は、全ての遺伝子について、以下の条件を使用してＣＦＸ９６システム（Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA）上で検出された：９５℃で３分間の前インキュベーションの後、４０サイクルの９５℃で１５秒間の変性、６０℃で１分間のアニールおよび伸長。一重のリアルタイムＰＣＲ測定については、０．７μＬのｃＤＮＡを、１×ＰＣＲバッファ、０．２ｍＭのｄＮＴＰｓ、３．７ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１５ｍＭのＳＹＢＦ緑、０．４μＭのプライマー（表２）、および１ＵのＴａｑポリメラーゼを含有する２５μＬの反応混合物中で増幅させた。全ての遺伝子について、次の条件でＩサイクラ―検出システム（Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA）を使用した：９５℃で６０秒間の前インキュベーションの後、４０サイクルの９５℃で２０秒間の変性、５６℃で２０秒間のアニールおよび７２℃で３０秒の伸長。正確には、寸法で分類されたＰＣＲ生成物は、アガロースゲル（２％）中での電気泳動により確認された：次いで、該生成物はキアゲン社（Valencia, CA, USA）から入手したＰＣＲ精製キットで精製された（Valencia, CA, USA）。全ての遺伝子を、ＭＷＧバイオテック社（Ebersberg, Germany）において配列決定した。Ａｒｃ・ｍＲＮＡの量を、精製されたＰＣＲ生成物の６回の連続的な４倍希釈を使用して、全ての遺伝子について構築された標準曲
線により、前記二つの参照遺伝子の量に対して正規化した。
【０１９６】
プライマー：
ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）（受付番号ＡＦ００１２８２）
センス：  5’-GGC CAG ACT TGT TGG ATT TG-3’
アンチセンス：  5’-CCG CTG TCT TTT AGG CTT TG-3’
シクロフィリンＡ（受け継げ番号Ｍ１９５３３）
センス：  5’-GTC TCT TTT CGC CGC TTG CT-3’
アンチセンス：  5’-TCT GCT GTC TTT GGA ACT TTG TCT G-3’ 
活性調節された遺伝子（Ａｒｃ）（受付番号Ｕ１９８６６）
センス：  5’- GTC CCA GAT CCA GAA CCA CA-3’
アンチセンス：  5’- CCT CCT CAG CGT CCA CAT AC-3’
最初のＤＮＡ量を、６回の連続４倍希釈を使用して、全ての遺伝子について構築された標準曲線により定量する。
【０１９７】
図１０に示したデータについて、ＰＣＲをＭｙＩＱサーマルサイクラ―（Biorad）上で実行した点を除き、図６のデータの場合と同じ方法を適用した。
【０１９８】
実施例の考察
プリドピジンは、テトラベナジンにより誘導された行動阻害を反転させることが示された。この効果はハロペリドールでは共有されず、この場合はテトラベナジンで治療された動物における運動活性を減少させる。相互作用実験によって、更に、テトラベナジンと同時投与されたときには、プリドピジンおよびハロペリドールの両者がそれらの特徴的な神経化学的効果、即ち、線条体ＤＯＰＡＣにおける増大を維持することが示された。同様に、プリドピジンおよびハロペリドールによって誘導される線条体ａｒｃ・ｍＲＮＡレベルにおける付随的増大は、テトラベナジンとの相互作用実験において維持された。
【０１９９】
運動抑制および増大した線条体ＤＯＰＡＣに加えて、テトラベナジンは、線条体ドパミンレベルにおける投与量依存的な増大を示し、これはプリドピジンまたはハロペリドールの同時投与によっては影響されなかった。更に、テトラベナジンは、前頭皮質Ａｒｃ・ｍＲＮＡレベルにおける投与量依存的な増大を生じた。この効果は、プリドピジンによって投与量依存的に打ち消されたが、ハロペリドールによっては打ち消されなかった。
【０２００】
プリドピジンは、テトラベナジンにより誘導された行動抑鬱を打ち消した。以前のデータと符合して、テトラベナジンおよびハロペリドールの両者は、自発的運動活性に対して明確に阻害的であり（Satou 2001, Schaefer 1984）、これに対してプリドピジンはこのような効果を示さなかった。ラットにおけるこの自発的運動活性に対する阻害効果の欠如は、プリドピジンの特徴的な薬理学的プロファイルの一部である（Ponten 2010）。
【０２０１】
ドパミンＤ２受容体でのプリドピジンの薬理学的効果は、テトラベナジンと同時投与されるときにも存在した。神経化学的分析によって、試験された全ての３つの化合物は、以前の結果に沿って、線条体ＤＯＰＡＣにおける投与量依存的増加を生じ、適用された最高投与量における対照レベルの約２５０〜３００％に達することが示された。線条体ＤＯＰＡＣにおける増大は、ドパミンＤ２アンタゴニスト、並びに低い本来的活性を備えた部分的アゴニストおよびモノアミン枯渇性化合物を含む、一般に中心ドパミンＤ２受容体において減少した緊張を生じる化合物の共通の特徴である（Jordan, 2004; Roffler-Tarlov 1971）。従って、線条体ＤＯＰＡＣに見られる増加は、試験された化合物の各々のコア的な薬理学的効果を表す。相互作用実験において、ハロペリドールおよびプリドピジンの両者は、テトラベナジンと同時投与されたときに、線条体ＤＯＰＡＣにおいて追加の上昇を生じる。このことは、プリドピジンおよびハロペリドールの主要な効果が、部分的にモノアミンが欠乏したラットにおいても未だ存在することを強く示唆する。更に、プリドピジンがテトラベナジンの運動抑制効果を反転させるという事実にも拘わらず、それらが同時に投与されたときに、テトラベナジンの有意な効果として誘導されたドパミンの組織レベルの減少はプリドピジンによって影響されず、それがテトラベナジン自体の薬理学的効果を毀損しないことが示された。
【０２０２】
全体として、ＤＯＰＡＣだけでなくドパミンレベルに対する３つの全化合物の典型的な神経化学的効果が、本研究の全体に亘って存在し、ドパミン作動性伝達に対する各化合物のコア的効果が保持されることを示している。
【０２０３】
プリドピジン同時投与により皮質において増大したＡｒｃ・ｍＲＮＡは、テトラベナジンに誘導された運動抑制の反転を説明する補助になり得るであろう。プリドピジンおよびハロペリドールの識別のために特に関連した追加のバイオマーカーとして、Ａｒｃ・ｍＲＮＡが、前頭皮質および線条体において測定された。Ａｒｃは、シナプス活性化およびＮＭＤＡ受容体信号伝達に関連した初期遺伝子であり、幾つかのドパミンＤ２アンタゴニスト、並びにドパミン作動性安定剤に応答し、線条体において増大することが以前に報告されている。しかしながら、Ａｒｃ遺伝子発現に対するテトラベナジンの影響に関しては、以前に報告されていない。実施例に示したように、テトラベナジンは、線条体Ａｒｃの有意な増大を誘導する。プリドピジンおよびハロペリドールの効果よりも大きさは幾分小さいが、この効果は、テトラベナジンで治療された動物においても、減少した線条体ドパミン伝達に関連する可能性がある。ＤＯＰＡＣの場合と同様に、テトラベナジンおよびプリドピジンの両者は、テトラベナジンで治療されたラットにおけると同様に、未処置ラットにおいても、線条体Ａｒｃに対して同様の効果を生じた。
【０２０４】
前頭皮質において、テトラベナジンは、投与量に依存してＡｒｃ遺伝子発現を低減し、相互作用実験のために使用した以上の投与量において有意な効果を生じた。プリドピジンおよびハロペリドールの投与量応答研究により、前頭皮質ａｒｃ遺伝子の発現のプリドピジンによる投与量依存的増大が示されたが、ハロペリドールの効果は示されなかった。前頭皮質ａｒｃ遺伝子発現を増大するプリドピジンの能力は、テトラベナジンで治療されたラットにおいても明らかであった。従って、プリドピジンをハロペリドールおよび他の分類のドパミンＤ２アンタゴニストを区別するこの薬理学的効果は、部分的なモノアミン欠乏に際しても維持された。それは、テトラベナジン治療ラットにおける行動阻害を打ち消すプリドピジンの能力に寄与し得る、或る程度の皮質シナプス活性化を表していると想定される。この解釈のサポートとして、プリドピジンは、前頭皮質における自然に活性な錐体細胞の発火を増大させることが示されている。
【０２０５】
実施例は、プリドピジンがテトラベナジンと同時投与されるときに、プリドピジンの効果が維持されることを明瞭に示しているが、プリドピジンおよびテトラベナジンの併用は、副作用の如何なる徴候も生じなかった。対照的に、ハロペリドールおよびテトラベナジンの併用は顕著な行動抑制を生じ、これはハンチント病の患者のテトラベナジンおよび神経遮断薬での同時治療に関する注意事項に対する現在の推奨に一致して、このような併用を受けたヒトにおける過剰な抗ドパミン作動性運動副作用のリスクを示唆するであろう。
【０２０６】
線条体におけるドパミンレベルの要約
ドパミンの線条体組織レベルに対する異なる治療の影響が、表１に与えられている。テトラベナジンは、線条体ドパミンにおける投与量依存的低下を誘導した。実施した研究の全体を通して、テトラベナジンは、相互作用実験において使用した投与量の０．６４ｍｇ／ｋｇにおいて線条体ドパミンを有意に低減し、担体対照群平均の約５０％に到達させた。プリドピジンおよびハロペリドールの両者は、試験した最も高い投与量において、線条体ドパミンのより小さい減少を生じた。相互作用実験において、線条体ドパミンに対するテトラベナジンの効果は、プリドピジンまたはハロペリドールでの同時治療によって本質的が影響を受けなかった。
【０２０７】
要約すれば、プリドピジンは、ドパミンＤ２受容体拮抗作用に関するプリドピジンの中核的な神経化学効果は保持しながら、モノアミンを欠乏させる化合物であるテトラベナジンによって誘導された行動阻害を反転させた。従って、テトラベナジンに加えてプリドピジンが投与されるときには、線条体ドパミンＤ２受容体における緊張が更に減少するにも拘わらず、テトラベナジンの運動抑制効果はプリドピジンによって緩和される。プリドピジンはまた、テトラベナジンにより誘導された前頭皮質Ａｒｃ遺伝子発現の減少を反転させた。暫定的に言えば、これは、部分的にモノアミンが欠乏した兵活性のラットにおいて、プリドピジンの運動刺激効果に寄与し得る皮質ニューロン活性の活性化を反映するものである。
【表２】
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【０２０８】
【表３】
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【参考資料】
【０２０９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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