(57)【要約】ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物、ならびにそのようなリポソーム組成物を作製および使用する方法が記載される。これらのリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べてｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を改善し、所望の薬力学的プロファイルを提供し、ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物以上の抗腫瘍活性を提供することにより、ペプチドエポキシケトン化合物の治療域を向上させる。さらに、本発明を支持するように行われた実験は、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の改善された耐容性を示した。【選択図】図８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームを含む水溶液
を含む薬学的リポソーム組成物であって、
前記リポソームは、
（ｉ）約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物であって、前記リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物と、（ｉｉ）約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質であって、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびこれらの組合せからなる群から選択されるリン脂質を含む総脂質と、を含み、前記リポソームは、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有する、組成物。
【請求項２】
前記リン脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリンを含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３】
前記リン脂質は、スフィンゴミエリンを含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４】
前記リン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項５】
前記リン脂質は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項６】
前記リン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項７】
前記リン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）を含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項８】
前記リン脂質は、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項９】
前記総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％の前記リン脂質を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１０】
前記総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％の前記リン脂質を含む、請求項９に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１１】
前記総脂質は、約５０重量％〜約７５重量％の前記リン脂質を含む、請求項９に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１２】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１３】
前記総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１２に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１４】
前記総脂質は、約５重量％〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１２に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１５】
前記総脂質は、約８重量％〜約２０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１２に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１６】
約９０重量％の前記リン脂質〜約７５重量％の前記リン脂質、および約１０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１２に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１７】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１８】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項１７に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、リン脂質であり、前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項１７に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２０】
前記総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２１】
前記総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項２０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２２】
前記総脂質は、約１５重量％〜約４０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項２０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２３】
前記総脂質は、約１５重量％〜約３０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項２０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２４】
前記総脂質は、約９０重量％〜約５０重量％の前記リン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％の前記コレステロールまたは誘導体を含む、請求項２０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２５】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２６】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項２０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２７】
前記総脂質は、約８３．３重量％の前記リン脂質〜約５７重量％の前記リン脂質、約８．３３重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項２６に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２８】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項２７に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項２７〜２８のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、リン脂質である、請求項２９に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３１】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項３０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３２】
約０．５重量％〜約３５重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および約９９．５重量％〜約６５重量％の前記総脂質を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３３】
約１重量％〜約３０重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および約９９重量％〜約７０重量％の前記総脂質を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３４】
約１重量％〜約２５重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および約９９重量％〜約７５重量％の前記総脂質を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３５】
前記リポソームの前記平均サイズは、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンである、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３６】
前記リポソームの前記平均サイズは、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンからなる群から選択される、請求項３５に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３７】
前記水溶液は、ｐＨ調整剤をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３８】
前記水溶液は、等張性を維持するための薬剤をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３９】
前記リポソームは、前記リポソームの内部水性コア内に、前記ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４０】
前記可溶化剤は、シクロデキストリンであり、前記リポソーム組成物の前記リポソームは、前記リポソームの前記内部水性コア内に、前記シクロデキストリンと複合化した前記ペプチドエポキシケトン化合物を含む、請求項３９に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４１】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項４０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４２】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンである、請求項４１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４３】
前記シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項４１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４４】
前記リポソーム組成物の水溶液は、約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０のｐＨを有する、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４５】
前記ｐＨは、ヒト生理ｐＨである、請求項４４に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４６】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４７】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４８】
前記請求項のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される、乾燥薬学的組成物。
【請求項４９】
乾燥薬学的組成物であって、
約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物と、（ｉｉ）約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質とを含み、前記総脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびこれらの組合せからなる群から選択されるリン脂質を含む組成物。
【請求項５０】
前記総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％の前記リン脂質を含む、請求項４９に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５１】
前記総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％の前記リン脂質を含む、請求項５０に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５２】
前記総脂質は、約５０重量％〜約７５重量％の前記リン脂質を含む、請求項５０に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５３】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項４９に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５４】
前記総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項５３に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５５】
前記総脂質は、約５重量％〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項５３に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５６】
前記総脂質は、約８重量％〜約２０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項５３に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５７】
約９０重量％の前記リン脂質〜約７５重量％の前記リン脂質、および約１０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項５３に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５８】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項５３〜５７のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項５９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項５８に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、リン脂質であり、前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項５８に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６１】
前記総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体をさらに含む、請求項４９に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６２】
前記総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項６１に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６３】
前記総脂質は、約１５重量％〜約４０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項６１に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６４】
前記総脂質は、約１５重量％〜約３０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項６１に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６５】
前記総脂質は、約９０重量％〜約５０重量％の前記リン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％の前記コレステロールまたは誘導体を含む、請求項６１に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６６】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６７】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項６１に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６８】
前記総脂質は、約８３．３重量％の前記リン脂質〜約５７重量％の前記リン脂質、約８．３３重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項６７に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項６９】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項６８に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項６７〜６９のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７１】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、リン脂質である、請求項７０に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７２】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項７１に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７３】
約０．５重量％〜約３５重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および約９９．５重量％〜約６５重量％の前記総脂質を含む、請求項４９〜７２のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７４】
約１重量％〜約３０重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および約９９重量％〜約７０重量％の前記総脂質を含む、請求項４９〜７２のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７５】
約１重量％〜約２５重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および約９９重量％〜約７５重量％の前記総脂質を含む、請求項４９〜７２のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７６】
ｐＨ調整剤をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７７】
等張性を維持するための薬剤をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７８】
シクロデキストリンをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項７９】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項７８に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８０】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンである、請求項７９に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８１】
前記シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項７９に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８２】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８３】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、前記請求項のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８４】
追加的賦形剤をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８５】
追加的賦形剤は抗凍結剤、糖、ガラス転移調節剤、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上の賦形剤を含む、請求項８４に記載の乾燥薬学的組成物。
【請求項８６】
薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、
請求項４９〜８５のいずれか一項に記載の乾燥薬学的組成物を水溶液で再構成して、リポソームを形成することを含み、前記薬学的リポソーム組成物は、リポソームを含む前記水溶液を含む方法。
【請求項８７】
請求項８６に記載の方法により作製される薬学的リポソーム組成物。
【請求項８８】
前記リポソームは、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有する、請求項８７に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項８９】
前記リポソームの前記平均サイズは、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンである、請求項８８に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項９０】
前記リポソームの前記平均サイズは、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンからなる群から選択される、請求項８９に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項９１】
薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、
総脂質を含む乾燥フィルムを調製することであって、前記総脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるリン脂質を含む、調製することと、
前記乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液で再水和し、前記水溶液中に分散したリポソームを含む前記リポソーム組成物を形成することであって、前記リポソームは、（ｉ）前記リポソーム内に捕捉された約０．５重量％〜約５０重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９．５重量％〜約５０重量％の前記総脂質を含む、形成すること、とを含む方法。
【請求項９２】
前記総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％の前記リン脂質を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％の前記リン脂質を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記総脂質は、約５０重量％〜約７５重量％の前記リン脂質を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９６】
前記総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記総脂質は、約５重量％〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記総脂質は、約８重量％〜約２０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
前記総脂質は、約９０重量％の前記リン脂質〜約７５重量％の前記リン脂質、および約１０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項１００】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項９５〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体をさらに含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記総脂質は、約１５重量％〜約４０重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記総脂質は、約１５重量％〜約３０重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
前記総脂質は、約９０重量％〜約５０重量％の前記リン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％の前記コレステロールまたは誘導体を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０８】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項１０３〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
前記総脂質は、約８３．３重量％の前記リン脂質〜約５７重量％の前記リン脂質、約８．３３重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項１０９〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、リン脂質である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１５】
前記リポソームは、（ｉ）約０．５重量％〜約３５重量％の前記リポソーム内に捕捉された前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９．５重量％〜約６５重量％の前記総脂質を含む、請求項９１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記リポソームは、（ｉ）約１重量％〜約３０重量％の前記リポソーム内に捕捉された前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９重量％〜約７０重量％の前記総脂質を含む、請求項９１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記リポソームは、（ｉ）約１重量％〜約２５重量％の前記リポソーム内に捕捉された前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９重量％〜約７５重量％の前記総脂質を含む、請求項９１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記可溶化剤は、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９１〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記可溶化剤は、化合物を含み、前記化合物は、シクロデキストリンであり、前記リポソーム組成物の前記リポソームは、前記リポソームの内部水性コア内に、前記シクロデキストリンと複合化した前記ペプチドエポキシケトン化合物を含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記可溶化剤は、ｐＨ調整剤を含み、前記水溶液は、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３のｐＨを有する、請求項９１〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記水溶液の前記ｐＨは、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ２である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記水溶液の前記ｐＨは、約ｐＨ１〜約ｐＨ２である、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記可溶化剤は、共溶媒を含む、請求項９１〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
透析、脱塩、緩衝液交換、またはゲル濾過をさらに含む、請求項９１〜１２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含む、請求項９１〜１２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンからなる群から選択される平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記リポソーム組成物は、封入水溶液および非封入水溶液を含む、請求項９１〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記乾燥フィルムを再水和して前記リポソーム組成物を形成した後、前記非封入水溶液から前記ペプチドエポキシケトン化合物を除去することをさらに含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記非封入水溶液から前記ペプチドエポキシケトン化合物を除去するために、透析、超遠心分離、またはゲル濾過が使用される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記乾燥フィルムを再水和して前記リポソーム組成物を形成した後、前記水溶液を約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０のｐＨに調整することをさらに含む、請求項９１〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
前記乾燥フィルムを再水和して前記リポソーム組成物を形成した後、前記水溶液をヒト生理ｐＨに調整することをさらに含む、請求項９１〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
前記乾燥フィルムを再水和して前記リポソーム組成物を形成した後、等張性を維持するための薬剤を前記水溶液に添加することをさらに含む、請求項９１〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、請求項９１〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、請求項９１〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
請求項９１〜１３６のいずれか一項に記載の方法により作製される薬学的リポソーム組成物であって、前記水溶液中に分散したリポソームを含み、前記リポソームは、前記リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含む、リポソーム組成物。
【請求項１３８】
請求項１３７に記載の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される乾燥薬学的組成物。
【請求項１３９】
薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、
溶媒および総脂質を含む脂質溶液を調製することであって、前記総脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるリン脂質を含む、調製することと、
前記脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液に注入し、前記水溶液中に分散したリポソームを含む前記リポソーム組成物を形成することであって、前記リポソームは、（ｉ）前記リポソーム内に捕捉された約０．５重量％〜約５０重量％の前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９．５重量％〜約５０重量％の前記総脂質を含む、形成すること、とを含む方法。
【請求項１４０】
前記総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％の前記リン脂質を含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％の前記リン脂質を含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記総脂質は、約５０重量％〜約７５重量％の前記リン脂質を含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４４】
前記総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
前記総脂質は、約５重量％〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４６】
前記総脂質は、約８重量％〜約２０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４７】
前記総脂質は、約９０重量％の前記リン脂質〜約７５重量％の前記リン脂質、および約１０重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４８】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項１４３〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５１】
前記総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体をさらに含む、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１５２】
前記総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記総脂質は、約１５重量％〜約４０重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５４】
前記総脂質は、約１５重量％〜約３０重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５５】
前記総脂質は、約９０重量％〜約５０重量％の前記リン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％の前記コレステロールまたは誘導体を含む、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５６】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項１５１〜１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５７】
前記総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５８】
前記総脂質は、約８３．３重量％の前記リン脂質〜約５７重量％の前記リン脂質、約８．３３重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の前記親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％の前記コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
前記コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである、請求項１５８に記載の方法。
【請求項１６０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、親水性ポリマーおよび脂質を含み、前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項１５７〜１５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、リン脂質である、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
前記リポソームは、（ｉ）約０．５重量％〜約３５重量％の前記リポソーム内に捕捉された前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９．５重量％〜約６５重量％の前記総脂質を含む、請求項１３９〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
前記リポソームは、（ｉ）約１重量％〜約３０重量％の前記リポソーム内に捕捉された前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９重量％〜約７０重量％の前記総脂質を含む、請求項１３９〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
前記リポソームは、（ｉ）約１重量％〜約２５重量％の前記リポソーム内に捕捉された前記ペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９重量％〜約７５重量％の前記総脂質を含む、請求項１３９〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
前記溶媒は、有機溶媒である、請求項１３９〜１６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
前記溶媒は、エタノールである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
前記可溶化剤は、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１３９〜１６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
前記可溶化剤は、化合物を含み、前記化合物は、シクロデキストリンであり、前記リポソーム組成物の前記リポソームは、前記リポソームの内部水性コア内に、前記シクロデキストリンと複合化した前記ペプチドエポキシケトン化合物を含む、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
前記可溶化剤は、ｐＨ調整剤を含み、前記水溶液は、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３のｐＨを有する、請求項１３９〜１７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７２】
前記水溶液の前記ｐＨは、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ２である、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
前記水溶液の前記ｐＨは、約ｐＨ１〜約ｐＨ２である、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
前記可溶化剤は、共溶媒を含む、請求項１３９〜１７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７５】
透析、脱塩、緩衝液交換、またはゲル濾過をさらに含む、請求項１３９〜１７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７６】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含む、請求項１３９〜１７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７７】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７８】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンからなる群から選択される平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
前記リポソーム組成物は、封入水溶液および非封入水溶液を含む、請求項１３９〜１７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８０】
前記脂質溶液を前記水溶液に注入して前記リポソーム組成物を形成した後、前記非封入水溶液から前記ペプチドエポキシケトン化合物を除去することをさらに含む、請求項１７９に記載の方法。
【請求項１８１】
前記非封入水溶液から前記ペプチドエポキシケトン化合物を除去するために、透析、超遠心分離、またはゲル濾過が使用される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記脂質溶液を前記水溶液に注入して前記リポソーム組成物を形成した後、前記水溶液を約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０のｐＨに調整することをさらに含む、請求項１３９〜１８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８３】
前記脂質溶液を前記水溶液に注入して前記リポソーム組成物を形成した後、前記水溶液をヒト生理ｐＨに調整することをさらに含む、請求項１３９〜１８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８４】
前記脂質溶液を前記水溶液に注入して前記リポソーム組成物を形成した後、等張性を維持するための薬剤を前記水溶液に添加することをさらに含む、請求項１３９〜１８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８５】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、請求項１３９〜１８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８６】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、請求項１３９〜１８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８７】
請求項１３９〜１８６のいずれか一項に記載の方法により作製される薬学的リポソーム組成物であって、前記水溶液中に分散したリポソームを含み、前記リポソームは、前記リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含む、リポソーム組成物。
【請求項１８８】
請求項１８７に記載の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される乾燥薬学的組成物。
【請求項１８９】
処置を必要とする対象における多発性骨髄腫を処置する方法であって、
治療上効果的な量の、請求項１〜４７、８７〜９０、１３７、または１８７のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法。
【請求項１９０】
治療上効果的な量の化学療法剤の同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む、請求項１８９に記載の方法。
【請求項１９１】
処置を必要とする対象における固形腫瘍を処置する方法であって、
治療上効果的な量の、請求項１〜４７、８７〜９０、１３７、または１８７のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法。
【請求項１９２】
治療上効果的な量の化学療法剤の同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む、請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
処置を必要とする対象における疾患または状態を処置する方法であって、
治療上効果的な量の、請求項１〜４７、８７〜９０、１３７、または１８７のいずれか一項に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法。
【請求項１９４】
治療上効果的な量の化学療法剤、サイトカイン、ステロイド、または免疫療法薬の同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む、請求項１９３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、現在係属中である２０１２年７月１８出願の米国仮特許出願第６１／６７３，０１７号、および現在係属中である２０１３年３月１５日出願の米国仮特許出願第６１／７９４，６０３号の利益を主張し、これらは共に、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、概して、ペプチドエポキシケトン化合物を含む薬学的リポソーム組成物に関する。本発明の態様は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む安定な薬学的リポソーム組成物を作製するために方法、薬学的リポソーム組成物を使用する方法、および薬学的リポソーム組成物から作製されるペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物を含む。
【背景技術】
【０００３】
真核生物において、タンパク質分解は、破壊の標的となるタンパク質が７６アミノ酸のポリペプチドユビキチンに結合するユビキチン経路によって主に媒介される。標的とされると、ユビキチン化タンパク質は、次いで、３つの主要なタンパク質分解活性の作用によりタンパク質を短鎖ペプチドに切断する多触媒性プロテアーゼである２６Ｓプロテアソームの基質として機能する。細胞内タンパク質代謝回転における一般的機能を有する一方で、プロテアソーム媒介分解はまた、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩの提示、アポトーシス、細胞増殖調節、ＮＦ−κＢ活性化、抗原処理、および炎症性シグナルの伝達等の多くのプロセスにおいて重要な役割を果たす。
【０００４】
２０Ｓプロテアソームは、４つのリングに組織化した２８のサブユニットを含む７００ｋＤａの円筒形状多触媒性プロテアーゼ複合体である。酵母および他の真核生物において、７つの異なるαサブユニットが外側リングを形成し、７つの異なるβサブユニットが内側リングを構成する。αサブユニットは、１９Ｓ（ＰＡ７００）および１１Ｓ（ＰＡ２８）調節複合体の結合部位、ならびに２つのβサブユニットリングにより形成された内部タンパク質分解チャンバの物理的バリアとして機能する。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、プロテアソームは、２６Ｓ粒子（「２６Ｓプロテアソーム」）として存在すると考えられる。Ｉｎ  ｖｉｖｏ実験では、プロテアソームの２０Ｓ形態の阻害を、２６Ｓプロテアソームの阻害と容易に関連付けることができることが示されている。粒子形成中のβサブユニットのアミノ末端プロ配列の切断は、触媒求核剤として機能するアミノ末端トレオニン残基を露出させる。
【０００５】
したがって、プロテアソームにおける触媒活性を担うサブユニットは、アミノ末端求核性残基を有し、これらのサブユニットは、Ｎ末端求核剤（Ｎｔｎ）ヒドロラーゼのファミリーに属する（求核性Ｎ末端残基は、例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、または他の求核性部分である）。このファミリーは、例えば、ペニシリンＧアシラーゼ（ＰＧＡ）、ペニシリンＶアシラーゼ（ＰＶＡ）、グルタミンＰＲＰＰアミドトランスフェラーゼ（ＧＡＴ）、および細菌性グルコシルアスパラギナーゼを含む。遍在的に発現したβサブユニットに加えて、高等脊椎動物はまた、３つのインターフェロンγ誘導性βサブユニット（ＬＭＰ７、ＬＭＰ２およびＭＥＣＬ１）を有し、これらは、その通常の相当物である、それぞれβ５、β１およびβ２を置き換え、したがってプロテアソームの触媒活性を改変する。
【０００６】
異なるペプチド基質の使用により、大型疎水性残基の後を切断するキモトリプシン様活性（ＣＴ−Ｌ）、塩基性残基の後を切断するトリプシン様活性（Ｔ−Ｌ）、および酸性残基の後を切断するカスパーゼ様（Ｃ−Ｌ）という３つの主要なタンパク質分解活性が、真核生物２０Ｓプロテアソームに対して定義されている。主要なプロテアソームタンパク質分解活性には、異なる触媒部位が寄与すると思われるが、これは、阻害剤、βサブユニットにおける点突然変異、およびインターフェロンγ誘導性βサブユニットの交換が、様々な程度でこれらの活性を改変するためである。
【０００７】
プロテアソーム活性を阻害するために使用され、癌、特に多発性骨髄腫に対して効果的であることが示されている小分子のいくつかの例がある。しかしながら、それらの化合物は、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物とは異なり、一般に、細胞および分子レベルでのプロテアソームの役割を探求および利用するために、したがってその治療活性を最大化するために必要な、特異性、安定性、または有効性を欠いている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、概して、ペプチドエポキシケトン化合物を含む薬学的リポソーム組成物、そのようなリポソーム組成物を作製する方法、そのようなリポソーム組成物を使用する方法、ペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物、ならびにそのような乾燥薬学的組成物を作製および使用する方法に関する。
【０００９】
一態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物に関する。いくつかの実施形態において、薬学的リポソーム組成物は、リポソーム捕捉ペプチドエポキシケトン化合物を含む。そのような薬学的組成物は、典型的には、リポソームを含む水溶液を含み、リポソームは、約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物、および約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質を含む（約０．００５：０．９９５〜約０．５：０．５のペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比）。
【００１０】
好ましい実施形態において、総脂質は、リン脂質、例えばＬ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせを含む。総脂質は、例えば、親水性ポリマー誘導体化脂質、および／またはコレステロールもしくはコレステロール誘導体をさらに含んでもよい。
【００１１】
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物のリポソームは、典型的には、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有する。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態において、リポソーム組成物は、リポソームの内部水性コア内に、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含むリポソームを含む。いくつかの実施形態において、可溶化剤は、化合物（例えば、シクロデキストリン）であり、リポソーム組成物のリポソームは、リポソームの内部水性コア内に、化合物（例えば、シクロデキストリン）と複合化したペプチドエポキシケトン化合物を含む。
【００１３】
本発明の薬学的リポソーム組成物はまた、１種以上の賦形剤を含んでもよい。
【００１４】
他の態様において、本発明は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物に関する。そのような乾燥薬学的組成物は、典型的には、本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物の脱水により作製される。
【００１５】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物を作製する方法に関する。薬学的リポソーム組成物を作製する１つの方法は、総脂質を含む乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液で再水和し、水溶液中に分散したリポソームを含むリポソーム組成物を形成することとを含む。典型的には、水溶液は、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む。薬学的リポソーム組成物を作製する別の方法は、総脂質および溶媒を含む脂質溶液を調製することと、脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液に注入することとを含む。典型的には、水溶液は、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、リポソーム内に封入されていないペプチドエポキシケトン化合物は、薬学的リポソーム組成物から除去される。
【００１７】
他の態様において、本発明は、本発明の方法により作製されるペプチドエポキシケトン化合物を含む薬学的リポソーム組成物、それから作製される乾燥薬学的組成物、および乾燥薬学的組成物から作製されるペプチドエポキシケトン化合物を含む再構成されたリポソーム組成物に関する。
【００１８】
さらなる態様において、本発明は、治療を必要とする対象において疾患または状態を処置する方法であって、治療上効果的な量の、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームを含む薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態において、治療する方法は、治療上効果的な量の別の治療薬剤、例えば、化学療法剤、サイトカイン、ステロイド、免疫療法薬、またはそれらの組み合わせの同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む。
【００１９】
当業者は、本明細書における開示を考慮して、本発明のこれらの、または他の実施形態を容易に思い付くだろう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】選択された例示的リポソーム組成物（組成物ＡからＧ；表２Ａ）の特定の実験製剤およびＨＰＬＣ特性決定データを示す表であり、これらは、本明細書における実施例および表に示される関連データを生成するために使用された。例示的リポソーム組成物ＡからＧの公称濃度が、表２Ａに示される。図１における薬物対脂質の比（薬物：脂質比（％））は、薬物（カーフィルゾミブ）の重量を、薬物の重量＋リン脂質の重量で除したものを採用することにより計算されたが、より従来的な計算は、薬物の重量対総脂質（例えば、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、コレステロール；例えば、表３を参照されたい）の重量の比である。図１における特定の実験製剤に対する薬物：総脂質比のより従来的な計算は、表２Ｂに示される。ＨＰＬＣ特性決定データの列は、以下の通りである：「ｎ」は、アッセイされる繰り返し試料の数であり、「％Ｄｉｆｆ」は、理論的薬物濃度と平均実験薬物濃度との間の差のパーセントであり、「ＳＤ」は、実験的に決定された薬物濃度の標準偏差であり、「％ＲＳＤ」は、実験的に決定された薬物濃度の相対標準偏差％である。図１における「プール」されたデータの行は、特定のリポソーム組成物の２つの別個のバッチが、単一バッチのリポソーム組成物に組み合わされた場合を表す（例えば、「６００５−４５Ａ／Ｂプール」は、組成物Ｃ（６００５−４５Ａ）および組成物Ｃ（６００５−４５Ｂ）を組み合わせることにより調製されたリポソーム組成物Ｃを表す）。
【図２Ａ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、全血（主に赤血球）中のプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ、本明細書においてＳＢＥ−Ｂ−ＣＤとも呼ばれる）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないプラセボビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示し、第３のバーは、８時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示し、第４のバーは、２４時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示す。図において斜線模様のバーとして示される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物（ＣＦＺを含むリポソーム（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物（ペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ、組成物Ｅ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。エラーバーは、一方向で示されている。
【図２Ｂ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、副腎組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、注射用ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（非リポソーム）のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示し、第３のバーは、８時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示し、第４のバーは、２４時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示す。図において斜線模様のバーとして示される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物（ＣＦＺを含むリポソーム（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物（ペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ、組成物Ｅ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。エラーバーは、一方向で示されている。
【図２Ｃ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、肝組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、注射用ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（非リポソーム）のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブ組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブ組成物のデータを示す。図において斜線模様のバーとして示される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物（ＣＦＺを含むリポソーム（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物（ペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ、組成物Ｅ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。エラーバーは、一方向で示されている。
【図２Ｄ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、心臓組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、注射用ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（非リポソーム）のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示し、第３のバーは、８時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示し、第４のバーは、２４時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータを示す。図において斜線模様のバーとして示される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物（ＣＦＺを含むリポソーム（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物（ペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ、組成物Ｅ））のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。エラーバーは、一方向で示されている。
【図３Ａ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、全血（主に赤血球）中のプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。エラーバーは、一方向で示されている。
【図３Ｂ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、心臓組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。エラーバーは、一方向で示されている。
【図３Ｃ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、肝組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。エラーバーは、一方向で示されている。
【図３Ｄ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、副腎組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。エラーバーは、一方向で示されている。
【図４】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物の循環半減期に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、μｍｏｌ／Ｌ単位のカーフィルゾミブの濃度（濃度（μｍｏｌ／Ｌ））であり、横軸は、分単位の時間（時間（分））である。×を含む白い正方形を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の投与に対応する。黒い正方形を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤを含む。黒丸を伴う線は、１５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤを含む。エラーバーは、双方向で示されている。
【図５Ａ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、全血（主に赤血球）中のプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。エラーバーは、双方向で示されている。
【図５Ｂ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、心臓組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。エラーバーは、双方向で示されている。
【図５Ｃ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、肝組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。エラーバーは、双方向で示されている。
【図５Ｄ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学反応に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、副腎組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）および１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。エラーバーは、双方向で示されている。
【図６】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物の循環半減期に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、μｍｏｌ／Ｌ単位のカーフィルゾミブの濃度（濃度（μｍｏｌ／Ｌ））であり、横軸は、分単位の投薬後の時間（投与後の時間（分））である。白丸を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の投与に対応する。黒い正方形を伴う線は、１５ｍｇ／ｋｇの、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むリポソームを含む、カーフィルゾミブのリポソーム組成物の投与に対応する。エラーバーは、一方向で示されている。
【図７】マウス異種移植片腫瘍モデルにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物の投薬頻度に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ｍｍ３単位の腫瘍体積（腫瘍体積（ｍｍ３））であり、横軸は、腫瘍負荷後の日数（日）である。白丸を伴う線（図中、３０日目で一番上の線）は、ビヒクル（１２．５ｍｇ／ｍＬのＥＰＣ、３．１ｍｇ／ｍＬのコレステロール、１．２ｍｇ／ｍＬのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥを含み、カーフィルゾミブを含まないリポソーム）の週１回の投与に対応し、白い正方形を伴う線は、各週の１日目および２日目に投与された、５ｍｇ／ｋｇの非リポソームカーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物（非リポソーム）に対応し、黒丸を伴う線は、各週の１日目および２日目に投与された、１０ｍｇ／ｋｇのカーフィルゾミブの用量を提供する、ｐＬ−６＝２ｍｇ／ｍＬのＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍＬのスフィンゴミエリン、３．２ｍｇ／ｍＬのコレステロール、１．３ｍｇ／ｍＬのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥの投与に対応する。白い三角形を伴う線は、週１回投与された、１５ｍｇ／ｋｇのカーフィルゾミブの用量を提供する、ｐＬ−６＝２ｍｇ／ｍＬのＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍＬのスフィンゴミエリン、３．２ｍｇ／ｍＬのコレステロール、１．３ｍｇ／ｍＬのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥの投与に対応する。この図は、３１日目までのデータを示すエラーバーは、一方向で示されている。
【図８】図７に対応するグラフであるが、但し図８は、３８日目（すなわち、図７と比べて２つの追加の時点）までのデータを示す。エラーバーは、一方向で示されている。
【図９】マウス異種移植腫瘍モデルにおける、捕捉されたカーフィルゾミブを含むリポソームを含む、カーフィルゾミブのリポソーム組成物（組成物Ｃ；２ｍｇ／ｍｌのＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍｌのＥＰＣ）の用量および投薬頻度に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ｍｍ３単位の腫瘍体積（腫瘍体積（ｍｍ３））であり、横軸は、腫瘍負荷後の日数（腫瘍負荷後日数）である。黒丸を伴う線（図中、３０日目で一番上の線）は、ビヒクル（１２．５ｍｇ／ｍＬのＥＰＣを含む空のリポソーム）の週１回の投与（ＱＷ）に対応し、黒い正方形を伴う線は、各週の１日目および２日目（ＱＤｘ２）に投与された、５ｍｇ／ｋｇの非リポソームＣＦＺ組成物に対応する。白い菱形を伴う線は、各週の１日目および２日目（ＱＤｘ２）に投与された、５ｍｇ／ｋｇのリポソーム組成物Ｃに対応する。白い三角形を伴う線は、各週の１日目および２日目（ＱＤｘ２）に投与された、１０ｍｇ／ｋｇのリポソーム組成物Ｃに対応する。白丸を伴う線は、週１回（ＱＷ）投与された、１５ｍｇ／ｋｇのリポソーム組成物Ｃに対応する。エラーバーは、一方向で示されている。
【図１０】マウス異種移植腫瘍モデルにおける、捕捉されたカーフィルゾミブを含むリポソームを含む、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物（組成物Ｇ；２ｍｇ／ｍｌのＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍｌのＥＰＣ、１．３ｍｇ／ｍｌのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ、３．１ｍｇ／ｍｌのコレステロール）の用量および投薬頻度に関連するデータを示す。図において、縦軸は、ｍｍ３単位の腫瘍体積（腫瘍体積（ｍｍ３））であり、横軸は、腫瘍負荷後の日数である。×を含む白丸を伴う線（図中、４０日目で一番上の線）は、ビヒクル（１２．５ｍｇ／ｍＬのＥＰＣ、１０％のｍＰＥＧ、２５％のコレステロールを含む空のリポソーム）の週１回の投与に対応し、白い三角形を伴う線は、各週の１日目および２日目に投与された、５ｍｇ／ｋｇの非リポソームＣＦＺ組成物に対応する。白い正方形を伴う線は、各週の１日目および２日目に投与された、１０ｍｇ／ｋｇのリポソーム組成物Ｇに対応する。黒丸を伴う線は、週１回投与された１５ｍｇ／ｋｇのリポソーム組成物Ｇに対応する。エラーバーは、一方向で示されている。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本明細書において引用される全ての特許、刊行物および特許出願は、各個別の特許、刊行物、または特許出願が、全ての目的において、明確かつ個別に参照により全体的に組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２２】
１．０．０  定義
本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものであり、制限することを意図しないことを理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別様に明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「１種の脂質」への言及は、１種以上の脂質または脂質の混合物を含み、「１種のリン脂質」への言及は、１種以上の脂質またはリン脂質の混合物を含み、「１種のコレステロールまたはコレステロール誘導体」への言及は、１種以上のコレステロールもしくはコレステロール誘導体、またはコレステロールおよびコレステロール誘導体の混合物を含み、「１種の親水性ポリマー誘導体化脂質」への言及は、１種以上の親水性ポリマー誘導体化脂質、または親水性ポリマー誘導体化脂質の混合物を含み、「親水性ポリマー」への言及は、１種以上の親水性ポリマー、または親水性ポリマーの混合物を含み、「１種の薬剤」への言及は、１種以上の薬剤を含む、等である。
【００２３】
別段に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載の方法および材料と同様または同等の他の方法および材料を、本発明の実践において使用することができるが、本明細書において好ましい材料および方法が説明される。
【００２４】
本発明を説明および請求する上で、以下の用語が、以下に記載される定義に従って使用される。
【００２５】
「酵素」という用語は、本明細書において使用される場合、触媒様式で化学反応を行う、任意の部分的または完全にタンパク質性の分子を指す。そのような酵素は、天然酵素、融合酵素、プロ酵素、アポ酵素、変性酵素、ファルネシル化酵素、ユビキチン化酵素、脂肪酸アシル化酵素、ゲランゲラニル化酵素、ＧＰＩ結合酵素、脂質結合酵素、プレニル化酵素、自然発生的または人工的に生成された突然変異酵素、側鎖または骨格が改変された酵素、リーダー配列を有する酵素、ならびに、プロテオグリカンおよびプロテオリポソーム等の非タンパク質性の材料と複合化した酵素であってもよい。酵素は、自然発現、促進された発現、クローニング、様々な液体ベースおよび固体ベースのペプチド合成、ならびに当業者に知られた同様の方法を含む任意の手段により作製され得る。
【００２６】
「Ｃｘ−ｙアルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、例えばトリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチル等のハロアルキル基を含む、鎖内にｘ個からｙ個の炭素を含有する直鎖アルキルおよび分岐鎖アルキル基を含む、置換または非置換の飽和炭化水素基を指す。Ｃ０アルキルは、基が末端位置にある場合は水素を、内部にある場合は結合を示す。「Ｃ２−ｙアルケニル」および「Ｃ２−ｙアルキニル」という用語は、長さおよび可能な置換においてアルキルに類似するが、それぞれ少なくとも１つの二重または三重結合を含有する、置換または非置換の不飽和脂肪族基を指す。
【００２７】
「アルコキシ」という用語は、本明細書において使用される場合、結合した酸素を有するアルキル基を指す。代表的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等を含む。
【００２８】
「エーテル」という用語は、本明細書において使用される場合、酸素により共有結合した２つの炭化水素を指す。したがって、アルキルをエーテル化するアルキルの置換基は、アルコキシであるか、またはそれに類似する。
【００２９】
「Ｃ１−６アルコキシアルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、アルコキシ基で置換され、それによりエーテルを形成するＣ１−６アルキル基を指す。
【００３０】
「Ｃ１−６アラルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、アリール基で置換されたＣ１−６アルキル基を指す。
【００３１】
「アミン」および「アミノ」という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認識されており、非置換および置換両方のアミン、ならびにその塩、例えば、一般式：
【化１】
2015524411.tif 000003
で表すことができる部分を指し、
式中、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１０’は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８を表し、または、Ｒ９およびＲ１０は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、環構造内に４個から８個の原子を有するヘテロ環を完成させ、Ｒ８は、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリルまたはポリシクリルを表し、ｍは、ゼロまたは１から８の整数である。好ましい実施形態において、Ｒ９またはＲ１０の１つだけがカルボニルであってもよく、例えば、Ｒ９、Ｒ１０、および窒素は、一緒になってイミドを形成しない。さらにより好ましい実施形態において、Ｒ９およびＲ１０（および任意選択でＲ１０’）は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、または−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８を表す。ある特定の実施形態において、アミノ基は塩基性であり、すなわち、プロトン化形態は、ｐＫａ≧７．００を有する。
【００３２】
「アミド（ａｍｉｄｅ）」および「アミド（ａｍｉｄｏ）」という用語は、アミノ置換カルボニルを指し、一般式：
【化２】
2015524411.tif 000004
で表すことができる部分を含むものとして、当該技術分野において認識されており、
式中、Ｒ９、Ｒ１０は、上で定義された通りである。アミドの好ましい実施形態は、不安定となり得るイミドを含まない。
【００３３】
「アリール」という用語は、本明細書において使用される場合、環の各原子が炭素である、５員、６員、および７員置換または非置換単環式芳香族基を指す。「アリール」という用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つが芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。アリール基は、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリン等を含む。
【００３４】
「炭素環」および「カルボシクリル」という用語は、本明細書において使用される場合、環の各原子が炭素である非芳香族置換または非置換環を指す。「炭素環」および「カルボシクリル」という用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つが炭素環であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。
【００３５】
「カルボニル」という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認識されており、一般式：
【化３】
2015524411.tif 000005
で表すことができる部分を指し、
式中、Ｘは、結合であるか、または酸素もしくは硫黄を表し、Ｒ１１は、水素、アルキル、アルケニル、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８、または薬学的に許容される塩を表し、Ｒ１１’は、水素、アルキル、アルケニル、または−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８を表し、ｍおよびＲ８は、上で定義された通りである。Ｘが酸素であり、Ｒ１１またはＲ１１’が水素でない場合、式は、「エステル」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ１１が水素である場合、式は、「カルボン酸」を表す。
【００３６】
「Ｃ１−６ヘテロアラルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、ヘテロアリール基で置換されたＣ１−６アルキル基を指す。
【００３７】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書において使用される場合、環構造が１個から４個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の芳香族の５員から７員環構造、より好ましくは、５員から６員環を指す。「ヘテロアリール」という用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つがヘテロ芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。ヘテロアリール基は、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン等を含む。
【００３８】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書において使用される場合、炭素または水素以外の任意の元素の原子を指す。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、リン、および硫黄である。
【００３９】
「ヘテロシクリル」および「ヘテロ環式基」という用語は、本明細書において使用される場合、環構造が１個から４個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の非芳香族の３員から１０員環構造、より好ましくは３員から７員環を指す。「ヘテロシクリル」および「ヘテロ環式環」という用語用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つがヘテロ環であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。ヘテロシクリル基は、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタム等を含む。
【００４０】
「Ｃ１−６ヒドロキシアルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒドロキシ基で置換されたＣ１−６アルキル基を指す。
【００４１】
「チオエーテル」という用語は、本明細書において使用される場合、結合した硫黄部分を有するアルキル基を指す。好ましい実施形態において、「チオエーテル」は、−−Ｓ−アルキルで表現される。代表的なチオエーテル基は、メチルチオ、エチルチオ等を含む。
【００４２】
「置換された」という用語は、本明細書において使用される場合、骨格の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有する部分を指す。「置換」または「〜で置換された」という用語は、そのような置換が、置換された原子および置換基の許容される価数に従い、置換が安定な化合物、例えば、例として再配列、環化、削除等による転換を自発的に生じない安定な化合物をもたらすという暗黙の条件を含む。本明細書において使用される場合、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことが企図される。幅広い態様において、許容される置換基は、非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式およびヘテロ環式、芳香族および非芳香族の、有機化合物の置換基を含む。許容される置換基は、適切な有機化合物に対して１つ以上であってもよく、また同じまたは異なってもよい。本発明の目的において、窒素等のヘテロ原子は、ヘテロ原子の価数を満足する、水素置換基、および／または本明細書に記載の任意の許容される有機化合物の置換基を有してもよい。置換基は、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、もしくはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、もしくはチオホルメート）、アルコキシ、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含み得る。当業者には、炭化水素鎖上で置換された部分が、適切な場合はそれ自体置換されてもよいことが理解される。
【００４３】
「阻害剤」という用語は、本明細書において使用される場合、酵素の活性をブロックまたは低減する化合物を指す（例えば、ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ、Ｂｏｃ−ＬＬＲ−ＡＭＣおよびＺ−ＬＬＥ−ＡＭＣ等の標準的蛍光性ペプチド基質のタンパク質分解切断の阻害、２０Ｓプロテアソームの様々な触媒活性の阻害）。阻害剤は、競合的、不競合的、または非競合的阻害により作用し得る。阻害剤は、可逆的または不可逆的に結合することができ、したがって、この用語は、酵素の自殺基質である化合物を含む。阻害剤は、酵素の活性部位上またはその近くの１つ以上の部位を修飾することができ、または、阻害剤は、酵素上の他の箇所において構造変化をもたらすことができる。
【００４４】
「ペプチド」という用語は、本明細書において使用される場合、標準的α−置換基を有する標準的アミド結合だけでなく、一般に使用されるペプチド模倣薬、他の修飾された結合、非自然発生的側鎖、および側鎖修飾、例えば米国特許第７，４１７，０４２号に記載のようなものも指す。
【００４５】
「ポリシクリル」および「多環式」という用語は、本明細書において使用される場合、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリル）を指し、例えば、環は「融合環」である。多環の環のそれぞれは、置換または非置換であってもよい。
【００４６】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書において使用される場合、生理学的条件下で治療活性薬剤に変換される化合物を指す。プロドラッグを作製するための一般的方法は、生理学的条件下で加水分解して所望の分子を顕現させる選択された部分を含めることである。他の実施形態において、プロドラッグは、宿主動物の酵素活性により変換される。
【００４７】
「予防」という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認識されており、局所再発（例えば、疼痛）、癌等の疾患、心不全等の複合症候群、または他の任意の医学的状態等の状態に関連して使用される場合、当該技術分野において十分理解されており、組成物を施されない対象と比較した、対象における医学的状態の症状の頻度を低減、またはその発症を遅延させる組成物の投与を含む。したがって、癌の予防は、例として、例えば統計的および／または臨床的に有意な量だけ、処置されていない対照集団と比べて予防処置を受けている患者の集団における検出可能な癌性増殖の数を低減すること、および／または、処置されていない対照集団に対して処置された集団における検出可能な癌性増殖の出現を遅延させることを含む。感染症の予防は、例えば、処置されていない対照集団と比較して、処置された集団における感染症の診断の数を低減すること、および／または、処置されていない対照集団と比較して、処置された集団における感染症の症状の発症を遅延させることを含む。疼痛の予防は、例えば、処置されていない対照集団と比較して、処置された集団における対象が経験する痛みの感覚の強さを低減する、または代替としてその感覚を遅延させることを含む。
【００４８】
「癌」という用語は、本明細書において使用される場合、血液、骨、および固形腫瘍を含むがそれらに限定されない。
【００４９】
「自己免疫疾患」および「自己免疫障害」は、本明細書において使用される場合、個人自身の組織から生じる、およびそれに対する疾患または障害を指す。
【００５０】
「移植片」という用語は、本明細書において使用される場合、受容者への移植のための、ドナーから得られた生物由来物質を指す。
【００５１】
「予防的または治療的」処置という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認められており、対象に対する主題の組成物の１種以上の投与を指す。望ましくない状態（例えば、対象の疾患または他の望ましくない状態）の臨床症状の前に投与される場合、処置は予防的であり（すなわち、望ましくない状態の発現から対象を保護する）、一方、望ましくない状態の症状の後に投与される場合、処置は治療的である（すなわち、既存の望ましくない状態またはその副作用を消失、改善、または安定化させることが意図される）。
【００５２】
「プロテアソーム」という用語は、本明細書において使用される場合、免疫および構成プロテアソームを指す。
【００５３】
「治療上効果的な量」という用語は、本明細書において使用される場合、（哺乳動物、好ましくはヒトに対する）所望の投薬計画の一部として投与される場合、例えば任意の医療処置に適用される妥当な利益／リスク比で、疾患または状態が処置されるために、または化粧品目的において臨床的に許容される標準に従う、症状を軽減する、状態を改善する、または疾患状態の発症を抑える調製物中の化合物（複数を含む）（例えば、ペプチドエポキシケトン化合物）の量を指す。
【００５４】
「処置する」および「処置」という用語は、本明細書において使用される場合、対象の状態を改善または安定化する様式で、状態の症状、臨床兆候、および基礎病理を逆転、低減、または停止させることを指す。
【００５５】
「両親媒性脂質」という用語は、本明細書において使用される場合、構造的には主に脂質様（疎水性）であるが、一方の端部において、極性領域、荷電領域、または極性および荷電領域の組み合わせ（親水性）を有する分子を指す。親水性領域は、頭部基と呼ばれ、脂質部分は、尾部基（複数を含む）として知られる。両親媒性脂質の例は、リン脂質、糖脂質、およびスフィンゴ脂質を含む。
【００５６】
「親水性ポリマー」および「水溶性ポリマー」という用語は、本明細書において使用される場合、リポソームを遮蔽し、それによりリポソーム循環半減期を向上させるために使用されるポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または他のポリエトキシル化ポリマーを指す。「親水性ポリマー」は、リポソームで非共有結合的に会合した遊離親水性ポリマー、およびリポソームの成分に複合体化または共有結合した親水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ誘導体化脂質）を包含する。追加の例示的親水性ポリマーは、ポリビニルアルコール、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリアクリルアミド、ポリグリセロール、ポリ（オキサゾリン）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド））、ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、およびポリ（アミノ酸）（ＰＡＡ）（例えば、ポリ（ヒドロキシエチルｌ−グルタミン）−Ｎ−スクシニルジオクタデシルアミン（ＰＨＥＧ−ＤＯＤＡＳｕｃ）およびポリ（ヒドロキシル−エチルｌ−アスパラギン）−ＤＯＤＡＳｕｃ（ＰＨＥＡ−ＤＯＤＡＳｕｃ）を含む）を含むが、それらに限定されない。
【００５７】
「遊離ステロール」という用語は、本明細書において使用される場合、別の化合物に共有結合していないステロールを指す。「遊離コレステロール」は、ステロール修飾両親媒性脂質化合物中の部分として共有結合していないコレステロールを指す。
【００５８】
「ステロール」および「ステロイドアルコール」は、本明細書において使用される場合、遊離ヒドロキシルを有するステロイドまたはその誘導体のサブグループを指す。例示的なステロールは、コレステロールおよびその誘導体のクラス、植物ステロールおよびその誘導体のクラス、ならびに真菌ステロールおよびその誘導体のクラスを含むが、それらに限定されない。ステロールは、天然または合成であってもよい。
【００５９】
「ステロール修飾両親媒性脂質」という用語は、本明細書において使用される場合、親水性頭部基、および少なくとも１つがステロールである２つ以上の疎水性尾部を有する、両親媒性脂質化合物を指す。「ステロール修飾両親媒性リン脂質」は、ホスフェート含有部分を含むステロール修飾両親媒性脂質、例えばホスホコリンまたはホスホグリセロールを指す。
【００６０】
「治療薬剤」という用語は、本明細書において使用される場合、薬物および医薬品を含む治療薬として試験、開発または応用において使用される薬剤を指す。
【００６１】
「薬物」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または他の異常な状態の診断、処置、または予防において使用される任意の化学化合物（例えば、ペプチドエポキシケトン化合物）を指す。
【００６２】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書において使用される場合、生理学的条件下で治療活性薬剤に変換される化合物を指す。プロドラッグを作製するための一般的方法は、生理学的条件下で加水分解して所望の分子を顕現させる選択された部分を含めることである。他の実施形態において、プロドラッグは、対象の酵素活性により変換される。
【００６３】
「治療上許容される」および「薬学的に許容される」という用語は、本明細書において使用される場合、生物学的に、または別様に望ましくない物質を指し、すなわち、その物質は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、または、組成物に任意の他の成分と悪い相互作用を生じることなく、活性成分と共に対象に投与され得る。
【００６４】
「エマルション」という用語は、本明細書において使用される場合、２種の非混和性（ブレンド不可能な）物質の混合物を指す。
【００６５】
「二重層」という用語は、本明細書において使用される場合、２つの分子層として配置された両親媒性脂質分子（多くはリン脂質）で構成される構造を指し、疎水性尾部は内側に、極性頭部基は外表面にある。
【００６６】
「単層」という用語は、本明細書において使用される場合、両親媒性分子の単一分子層を指し、頭部基は一方の側に配列し、疎水性基は反対側にある。
【００６７】
「リポソーム」という用語は、本明細書において使用される場合、脂質二重層を含む小胞、例えば、両親媒性脂質（例えば、リン脂質またはその誘導体）が水中に分配された場合に形成される閉じた小胞を指す。本発明のリポソームは、典型的には、１種以上のリン脂質を含み、また界面活性剤特性を有する混合脂質鎖を含んでもよい（例えば、卵ホスファチジルエタノールアミン）。リポソームは、不健康組織（例えば、腫瘍または新生細胞）への結合を標的化するために表面リガンドを使用し得る。リポソームは、典型的には水性コアを有する。
【００６８】
「捕捉された」という用語は、本明細書において使用される場合、ペプチドエポキシケトン化合物のリポソーム二重層および／またはリポソームの内部水性体積（リポソームの水性コアとも呼ばれる）との非共有結合的会合を指す。
【００６９】
「リポソーム組成物」および「リポソーム含有組成物」は、本明細書において同義的に使用され、脂質（例えば、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、ステロール成分、例えばコレステロール、およびそれらの組み合わせ）ならびにペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム製剤または混合物を指し、そのようなリポソーム混合物または製剤は、追加の賦形剤をさらに含んでもよい。リポソーム組成物は、典型的には、リポソームを含む水溶液を含む。封入水溶液は、リポソームの水性コア内の水溶液である。非封入水溶液は、リポソームが分散した水溶液である。
【００７０】
「賦形剤」という用語は、本明細書において使用される場合、典型的には、本発明のリポソーム組成物の製剤化または投与において使用される任意の薬理学的に不活性な物質、例えば、リン脂質、緩衝剤、担体、またはビヒクル（例えば希釈剤）等を指す。本発明の実践において有用な賦形剤の例は、本明細書に記載されている。
【００７１】
「ｐＨ調整剤」という用語は、本明細書において使用される場合、水溶液のｐＨを修正するために使用される任意の薬剤を指す。ｐＨは、酸性化剤（例えば酸）およびアルカリ化剤（例えば酸の塩または塩基）を使用することにより調整される。酸性化剤は、ｐＨを低下させるために製剤中で使用され、アルカリ化剤は、ｐＨを増加させるために使用される。ｐＨ調整剤は、緩衝系（例えば、酸および塩基の組み合わせ）を含む。本発明の薬学的組成物は、組成物の調製（すなわち、バルク溶液）のために、または治療薬投与のための再構成後に所望のｐＨを達成するために、これらの薬剤の１種以上を含有してもよい。
【００７２】
「可溶化剤」という用語は、本明細書において使用される場合、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度を増加させる薬剤、典型的には化合物、ｐＨ調整剤、または共溶媒を指す。
【００７３】
「生理学的条件」という用語は、本明細書において使用される場合、生細胞に適合する条件、例えば、温度、ｐＨ、塩分等の主に水性の条件を指す。
【００７４】
「治療組成物」、「薬学的組成物」、「治療調製物」、および「薬学的調製物」という用語は、本明細書において同義的に使用され、対象、典型的にはヒトへの適用または投与に好適な本発明のリポソーム組成物を包含する。一般に、そのような組成物は、安全で、滅菌または無菌であり、好ましくは、対象における望ましくない反応を惹起し得る汚染物質を含まない（すなわち、組成物を構成する化合物（複数を含む）は、薬学的に許容される）。組成物は、経口（すなわち、口もしくは消化管により投与される）または非経口（例えば、口腔内、直腸内、経皮、経粘膜、皮下、静脈内、腹腔内、皮内、気管内、くも膜下、経肺等）を含む複数の異なる投与経路による、それを必要とする対象への適用または投与のために製剤化され得る。
【００７５】
「無菌条件」という用語は、本明細書において使用される場合、典型的には、製造品が病原体により汚染されない製造または処理条件を指す。
【００７６】
「対象」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒト、ならびにアカゲザル、チンパンジーおよび他の類人猿やサル種等の非ヒト霊長類を含む他の霊長類；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ等の家畜；イヌおよびネコ等の家庭用哺乳類；マウス、ラットおよびモルモット等のげっ歯類を含む実験動物；ニワトリ、シチメンチョウおよびその他の家禽、カモ、ガン等の、家畜、野生および狩猟鳥を含む鳥等を制限なく含む、脊索動物亜門の任意のメンバーを指す。この用語は、特定の年齢を示さない。したがって、成体、若年、および新生個体が含まれることが意図される。
【００７７】
２．０．０  発明の概要
本発明を詳細に説明する前に、本発明は、特定の種類のリポソーム、特定の薬物源、特定の脂質、特定のポリマー等に限定されないことを理解されたいが、これは、そのような詳細が、本明細書の教示を鑑みて選択され得るためである。また、本明細書において使用される用語は、単に本発明の特定の実施形態を説明するためのものであり、制限することを意図しないことを理解されたい。
【００７８】
ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）は、広範な疾患および状態の処置に有用なプロテアソーム阻害剤である。現在、注射用のカーフィルゾミブは、スラリー法を使用して、カーフィルゾミブ原薬を、クエン酸を含むスルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）中に溶解させてバルク溶液を形成し、次いでこれが凍結乾燥されて再構成および注射に好適な凍結乾燥カーフィルゾミブを生成することにより調製されている。
【００７９】
しかしながら、カーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物を静脈内投与すると、急速な代謝により半減期が短くなる。カーフィルゾミブの排出は、主に肝外であり、カーフィルゾミブは、主としてペプチダーゼ切断およびエポキシド加水分解により排除される。したがって、治療計画において週に複数回の注射が使用される。さらに、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物の使用は、その最善のプロファイルの活性に影響し得るカーフィルゾミブの用量増加を制限し得る。
【００８０】
リポソームは、典型的にはリン脂質を含む球状小胞であり、極性頭部基が内部および外部水相に向かって配向した１つ以上の同心円脂質二重層により封入された内部水性体積を有する。天然のリン脂質は、体内で自然に発生し、細胞膜の主要な構成成分であるため、生体適合性および生分解性である。リポソームは、水性コア内および／または脂質二重層内に薬物を捕捉することにより、薬物担体として機能し得る。リポソームは、サイズに幅があり、単層または多層小胞として存在し得る。
【００８１】
本出願は、ペプチドエポキシケトンプロテアソーム阻害剤を組み込んだ様々な薬学的リポソーム組成物の開発の成功を記載している。本発明のいくつかの態様において、ペプチドエポキシケトン化合物の捕捉が説明される。本発明の他の態様において、リポソームの内部水性コアへのペプチドエポキシケトン化合物の組み込みが説明される。本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非ポソーム組成物と比べてｉｎ  ｖｉｖｏ半減期（例えば、血漿半減期）を改善し、所望の薬力学的プロファイル（例えば、生体内分布、プロテアソームキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）活性阻害、および選択された組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性の長期阻害）を提供し、ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物以上の抗腫瘍活性を提供することにより、ペプチドエポキシケトン化合物の治療域を向上させる。さらに、本発明を支持するように行われた実験は、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の改善された耐容性を示した（例えば、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比較した、最大耐性用量の改善）。
【００８２】
本発明の薬学的リポソーム組成物は、典型的には、滅菌または無菌組成物として調製され、対象への投与に好適な薬学的リポソーム組成物を作製する方法は、典型的には、滅菌または無菌条件下で行われる。本発明の薬学的リポソーム組成物の最終滅菌もまた使用され得る。
【００８３】
第１の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物に関する。いくつかの実施形態において、薬学的リポソーム組成物は、リポソーム捕捉ペプチドエポキシケトン化合物を含む。そのような薬学的組成物は、典型的には、リポソームを含む水溶液を含み、リポソームは、約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物、および約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質を含む（約０．００５：０．９９５〜約０．５：０．５のペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比）。好ましい実施形態において、総脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるリン脂質を含む。
【００８４】
本発明の薬学的リポソーム組成物の実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比は、約０．００５：０．９９５〜約０．３５：０．６５（重量パーセントで、約０．５重量％〜約３５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９．５重量％〜約６５重量％の総脂質）、好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．３０：０．７０（重量パーセントで、約１重量％〜約３０重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７０重量％の総脂質）、ならびにより好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．２５：０．７５（重量パーセントで、約１重量％〜約２５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７５重量％の総脂質）である。
【００８５】
本発明の薬学的リポソーム組成物のいくつかの実施形態において、リポソームの総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％のリン脂質を含む。本発明の薬学的リポソーム組成物の好ましい実施形態において、リン脂質の重量パーセントは、以下を含むがそれらに限定されない：リポソームの総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％のリン脂質、好ましくは約５０重量％〜約７５重量％のリン脂質を含む。
【００８６】
さらなる実施形態において、リポソームの総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質を含み、例えば、総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、約５重量％〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および好ましくは約８重量％〜約２０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質を含む。例示的な実施形態は、約９０重量％のリン脂質〜約７５重量％のリン脂質、および約１０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質（約０．９：０．１：０〜約０．７５：０．２５：０のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含む薬学的リポソーム組成物のリポソームを含むが、それらに限定されない。総脂質が親水性ポリマー誘導体化脂質を含む実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、例えば、コレステロールまたはリン脂質である。いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ）である。
【００８７】
さらなる実施形態において、リポソームの総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体を含み、総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、約１５重量％〜約４０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、好ましくは約１５重量％〜約３０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約９０重量％〜約５０重量％のリン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたは誘導体（約０．９：０：０．１〜約０．５：０：０．５のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含む薬学的リポソーム組成物のリポソームを含むが、それらに限定されない。総脂質がコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む好ましい実施形態において、コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである。
【００８８】
追加の実施形態において、リポソームの総脂質は、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、およびコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約８３．３重量％のリン脂質〜約５７重量％のリン脂質、約８．３３重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体（約０．８３３：０．０８３３：０．０８３３〜約０．５７：０．１４：０．２９のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）の総脂質を含む薬学的リポソーム組成物のリポソームを含むが、それらに限定されない。
【００８９】
本発明のリポソーム組成物のリポソームは、典型的には、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロン、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロン、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンの平均サイズを有する。
【００９０】
リポソームの脂質は、いくつかの実施形態において、例えば約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む。
【００９１】
また、リポソームが分散した水溶液は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝剤）および／または等張性を維持するための薬剤を含むがそれらに限定されない、１種以上の賦形剤を含んでもよい。
【００９２】
本発明のこの第１の態様の他の実施形態において、リポソーム組成物は、リポソームの内部水性コア内に、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含むリポソームを含む。いくつかの実施形態において、可溶化剤は、化合物（例えば、シクロデキストリン）であり、リポソーム組成物のリポソームは、リポソームの内部水性コア内に、化合物（例えば、シクロデキストリン）と複合化したペプチドエポキシケトン化合物を含む。化合物である好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、例えば、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである。
【００９３】
本発明の薬学的リポソーム組成物はまた、水溶液が約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０のｐＨに調整されたリポソーム組成物を含み得る。好ましくは、水溶液は、ヒト生理ｐＨに調整される。
【００９４】
本発明のリポソーム組成物における使用のためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【００９５】
ペプチドエポキシケトン化合物を含む薬学的リポソーム組成物の好ましい実施形態は、ペプチドエポキシケトン化合物−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、ペプチドエポキシケトン化合物−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、およびペプチドエポキシケトン化合物−ＨＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【００９６】
第２の態様において、本発明は、本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される乾燥薬学的組成物に関する。
【００９７】
第３の態様において、本発明は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物に関する。本発明のこの第３の態様の一実施形態は、約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物、および約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質（約０．００５：０．９９５〜約０．５：０．５のペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比）を含む乾燥薬学的組成物である。好ましい実施形態において、総脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるリン脂質を含む。
【００９８】
本発明の乾燥薬学的組成物の実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比は、約０．００５：０．９９５〜約０．３５：０．６５（重量パーセントで、約０．５重量％〜約３５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９．５重量％〜約６５重量％の総脂質）、好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．３０：０．７０（重量パーセントで、約１重量％〜約３０重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７０重量％の総脂質）、ならびにより好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．２５：０．７５（重量パーセントで、約１重量％〜約２５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７５重量％の総脂質）である。
【００９９】
本発明の乾燥薬学的組成物のいくつかの実施形態において、総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％のリン脂質を含む。本発明の乾燥薬学的組成物の好ましい実施形態において、リン脂質の重量パーセントは、以下を含むがそれらに限定されない：総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％のリン脂質、好ましくは約５０重量％〜約７５重量％のリン脂質を含む。
【０１００】
さらなる実施形態において、乾燥薬学的組成物の総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質を含み、例えば、総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、約５重量％〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および好ましくは約８重量％〜約２０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質を含む。例示的な実施形態は、約９０重量％のリン脂質〜約７５重量％のリン脂質、および約１０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質（約０．９：０．１：０〜約０．７５：０．２５：０のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含む乾燥薬学的組成物を含むが、それらに限定されない。総脂質が親水性ポリマー誘導体化脂質を含む実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、例えば、コレステロールまたはリン脂質である。いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ）である。
【０１０１】
さらなる実施形態において、乾燥薬学的組成物の総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体を含み、総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、約１５重量％〜約４０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、好ましくは約１５重量％〜約３０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約９０重量％〜約５０重量％のリン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたは誘導体（約０．９：０：０．１〜約０．５：０：０．５のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含む乾燥薬学的組成物を含むが、それらに限定されない。総脂質がコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む好ましい実施形態において、コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである。
【０１０２】
追加の実施形態において、乾燥薬学的組成物の総脂質は、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、およびコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約８３．３重量％のリン脂質〜約５７重量％のリン脂質、約８．３３重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体（約０．８３３：０．０８３３：０．０８３３〜約０．５７：０．１４：０．２９のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）の総脂質を含む乾燥薬学的組成物を含むが、それらに限定されない。
【０１０３】
乾燥薬学的組成物は、いくつかの実施形態において、例えば約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む。
【０１０４】
また、ペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝剤）および／または等張性を維持するための薬剤を含むがそれらに限定されない、１種以上の賦形剤を含んでもよい。
【０１０５】
本発明のこの第３の態様の他の実施形態において、乾燥薬学的組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物およびシクロデキストリンを含む。好ましいシクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンを含む。
【０１０６】
本発明の乾燥薬学的組成物における使用のためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。乾燥薬学的組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、乾燥薬学的組成物は、追加の賦形剤、例えば抗凍結剤（例えば、グリセロール、ジメチルアミン、ジメチルスルホキシド）、ガラス転移調節剤（例えば、糖、ポリオール、ポリマー、アミノ酸）、それらの組み合わせ、および／または他の安定化賦形剤をさらに含む。
【０１０８】
ペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物の好ましい実施形態は、ペプチドエポキシケトン化合物−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、ペプチドエポキシケトン化合物−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、およびペプチドエポキシケトン化合物−ＨＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【０１０９】
第４の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、ペプチドエポキシケトン化合物および脂質を含む乾燥薬学的組成物（例えば、本発明の第３の態様において説明されるもの）を、水溶液を使用して再構成して、リポソームを形成することを含み、薬学的リポソーム組成物は、リポソームを含む水溶液を含む方法に関する。
【０１１０】
第５の態様において、本発明は、本発明の第４の態様において説明される方法により作製される薬学的リポソーム組成物に関する。薬学的リポソーム組成物のリポソームは、例えば、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロン、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロン、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンの平均サイズを有するリポソームを有する。
【０１１１】
第６の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、総脂質を含む乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液で再水和し、薬学的リポソーム組成物を形成することとを含む方法に関する。典型的には、方法は、総脂質を含む乾燥フィルムを調製することを含み、総脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるリン脂質を含む。乾燥フィルムは、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液で再水和され、水溶液中に分散したリポソームを含む薬学的リポソーム組成物を形成し、リポソームは、（ｉ）リポソーム内に捕捉された約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質（すなわち、約０．００５：０．９９５〜約０．５：０．５のペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比）を含む。
【０１１２】
本発明のこの第６の態様の方法の実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比は、約０．００５：０．９９５〜約０．３５：０．６５（重量パーセントで、約０．５重量％〜約３５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９．５重量％〜約６５重量％の総脂質）、好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．３０：０．７０（重量パーセントで、約１重量％〜約３０重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７０重量％の総脂質）、ならびにより好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．２５：０．７５（重量パーセントで、約１重量％〜約２５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７５重量％の総脂質）である。
【０１１３】
本発明のこの第６の態様の方法のいくつかの実施形態において、総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％のリン脂質を含む。方法の好ましい実施形態において、リン脂質の重量パーセントは、以下を含むがそれらに限定されない：総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％のリン脂質、好ましくは約５０重量％〜約７５重量％のリン脂質を含む。
【０１１４】
方法のさらなる実施形態において、総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質を含み、例えば、総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、約５重量％〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および好ましくは約８重量％〜約２０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質を含む。例示的な実施形態は、総脂質が、約９０重量％のリン脂質〜約７５重量％のリン脂質、および約１０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質（約０．９：０．１：０〜約０．７５：０．２５：０のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含むことを含むが、これに限定されない。総脂質が親水性ポリマー誘導体化脂質を含む実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、例えば、コレステロールまたはリン脂質である。いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ）である。
【０１１５】
本発明のこの第６の態様の方法のさらなる実施形態において、総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体を含み、総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、約１５重量％〜約４０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、好ましくは約１５重量％〜約３０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約９０重量％〜約５０重量％のリン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたは誘導体（約０．９：０：０．１〜約０．５：０：０．５のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含む総脂質を含むが、これに限定されない。総脂質がコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む好ましい実施形態において、コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである。
【０１１６】
方法の追加の実施形態において、総脂質は、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、およびコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約８３．３重量％のリン脂質〜約５７重量％のリン脂質、約８．３３重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体（約０．８３３：０．０８３３：０．０８３３〜約０．５７：０．１４：０．２９のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）の総脂質を含むが、これに限定されない。
【０１１７】
本発明のこの第６の態様の方法のいくつかの実施形態において、可溶化剤は、例えば、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、可溶化剤は、化合物（例えば、シクロデキストリン）であり、リポソーム組成物のリポソームは、リポソームの内部水性コア内に、化合物（例えば、シクロデキストリン）と複合化したペプチドエポキシケトン化合物を含む。化合物である好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、例えば、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである。他の実施形態において、可溶化剤は、ｐＨ調整剤を含み、水溶液は、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ２、および好ましくは約ｐＨ１〜約ｐＨ２のｐＨを有する。さらなる実施形態において、可溶化剤は、共溶媒を含む。
【０１１８】
本発明のこの第６の態様の方法は、透析、脱塩、緩衝液交換、および／またはゲル濾過をさらに含んでもよい。
【０１１９】
方法は、リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズ、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロンの平均サイズ、および好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含んでもよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、方法は、リポソーム組成物（リポソーム組成物は、リポソーム内に封入された水溶液およびリポソーム内に封入されていない水溶液、すなわち、非封入水溶液を含む）を形成した後に、リポソームが分散した非封入水溶液からペプチドエポキシケトン化合物を除去することをさらに含む。非封入水溶液からのペプチドエポキシケトン化合物の除去は、例えば、透析、超遠心分離、ゲル濾過、またはそれらの組み合わせを使用して達成され得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、方法は、乾燥フィルムを再水和してリポソーム組成物を形成した後、水溶液のｐＨを調整することをさらに含む。ｐＨは、例えば、約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０のｐＨ、好ましくはヒト生理ｐＨに調整され得る。
【０１２２】
方法は、乾燥フィルムを再水和してリポソーム組成物を形成した後、水溶液に１種以上の賦形剤、例えば、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝剤）および／または等張性を維持するための薬剤を添加することをさらに含んでもよい。
【０１２３】
方法における使用のためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【０１２４】
第７の態様において、本発明は、本発明の第６の態様の方法により作製される薬学的リポソーム組成物であって、水溶液中に分散したリポソームを含み、リポソームは、リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含む、リポソーム組成物に関する。
【０１２５】
第８の態様において、本発明は、本発明の第７の態様の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される乾燥薬学的組成物に関する。
【０１２６】
第９の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、脂質溶液を調製することと、脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液に注入することとを含む方法に関する。脂質溶液は、溶媒および総脂質を含む。総脂質は、典型的には、リン脂質、例えばＬ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、スフィンゴミエリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびそれらの組み合わせを含む。典型的には、方法は、脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液に注入し、薬学的リポソーム組成物を形成することを含む。薬学的リポソーム組成物は、水溶液中に分散したリポソームを含み、リポソームは、（ｉ）リポソーム内に捕捉された約０．５重量％〜約５０重量％のペプチドエポキシケトン化合物、および（ｉｉ）約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質（約０．００５：０．９９５〜約０．５：０．５のペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比）を含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、溶媒は、有機溶媒、例えば、アルコール（例えば、エタノール）である。
【０１２８】
本発明のこの第９の態様の方法の実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比は、約０．００５：０．９９５〜約０．３５：０．６５（重量パーセントで、約０．５重量％〜約３５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９．５重量％〜約６５重量％の総脂質）、好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．３０：０．７０（重量パーセントで、約１重量％〜約３０重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７０重量％の総脂質）、ならびにより好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．２５：０．７５（重量パーセントで、約１重量％〜約２５重量％のペプチドエポキシケトン化合物および約９９重量％〜約７５重量％の総脂質）である。
【０１２９】
本発明のこの第９の態様の方法のいくつかの実施形態において、総脂質は、約２０重量％〜約１００重量％のリン脂質を含む。方法の好ましい実施形態において、リン脂質の重量パーセントは、以下を含むがそれらに限定されない：総脂質は、約３０重量％〜約９０重量％のリン脂質、好ましくは約５０重量％〜約７５重量％のリン脂質を含む。
【０１３０】
方法のさらなる実施形態において、総脂質は、親水性ポリマー誘導体化脂質を含み、例えば、総脂質は、約０．１重量％〜約３０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、約５重量％〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および好ましくは約８重量％〜約２０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質を含む。例示的な実施形態は、総脂質が、約９０重量％のリン脂質〜約７５重量％のリン脂質、および約１０重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約２５重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質（約０．９：０．１：０〜約０．７５：０．２５：０のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含むことを含むが、これに限定されない。総脂質が親水性ポリマー誘導体化脂質を含む実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、例えば、コレステロールまたはリン脂質である。いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ）である。
【０１３１】
本発明のこの第９の態様のさらなる実施形態において、総脂質は、コレステロールまたはコレステロール誘導体を含み、総脂質は、約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、約１５重量％〜約４０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体、好ましくは約１５重量％〜約３０重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約９０重量％〜約５０重量％のリン脂質、および約１０重量％〜約５０重量％のコレステロールまたは誘導体（約０．９：０：０．１〜約０．５：０：０．５のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）を含む総脂質を含むが、これに限定されない。総脂質がコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む好ましい実施形態において、コレステロールまたはコレステロール誘導体は、コレステロールである。
【０１３２】
方法の追加の実施形態において、総脂質は、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、およびコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。例示的な実施形態は、約８３．３重量％のリン脂質〜約５７重量％のリン脂質、約８．３３重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質〜約１４重量％の親水性ポリマー誘導体化脂質、および約８．３３重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体〜約２９重量％のコレステロールまたはコレステロール誘導体（約０．８３３：０．０８３３：０．０８３３〜約０．５７：０．１４：０．２９のリン脂質：親水性ポリマー誘導体化脂質：｛コレステロールまたはコレステロール誘導体｝の総脂質重量比）の総脂質を含むが、これに限定されない。
【０１３３】
本発明のこの第９の態様の方法のいくつかの実施形態において、可溶化剤は、例えば、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、可溶化剤は、化合物（例えば、シクロデキストリン）であり、リポソーム組成物のリポソームは、リポソームの内部水性コア内に、化合物（例えば、シクロデキストリン）と複合化したペプチドエポキシケトン化合物を含む。化合物である好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、例えば、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである。他の実施形態において、可溶化剤は、ｐＨ調整剤を含み、水溶液は、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ２、および好ましくは約ｐＨ１〜約ｐＨ２のｐＨを有する。さらなる実施形態において、可溶化剤は、共溶媒を含む。
【０１３４】
本発明のこの第９の態様の方法は、透析、脱塩、緩衝液交換、および／またはゲル濾過をさらに含んでもよい。
【０１３５】
方法は、リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズ、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロンの平均サイズ、および好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含んでもよい。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、方法は、リポソーム組成物（リポソーム組成物は、リポソーム内に封入された水溶液およびリポソーム内に封入されていない水溶液、すなわち、非封入水溶液を含む）を形成した後に、リポソームが分散した非封入水溶液からペプチドエポキシケトン化合物を除去することをさらに含む。非封入水溶液からのペプチドエポキシケトン化合物の除去は、例えば、透析、超遠心分離、ゲル濾過、またはそれらの組み合わせを使用して達成され得る。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、方法は、脂質溶液を水溶液に注入してリポソーム組成物を形成した後、水溶液のｐＨを調整することをさらに含む。ｐＨは、例えば、約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０のｐＨ、好ましくはヒトの生理ｐＨに調整され得る。
【０１３８】
方法は、脂質溶液を水溶液に注入してリポソーム組成物を形成した後、水溶液に１種以上の賦形剤、例えば、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝剤）および／または等張性を維持するための薬剤を添加することをさらに含んでもよい。
【０１３９】
方法における使用のためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【０１４０】
第１０の態様において、本発明は、本発明の第９の態様の方法により作製される薬学的リポソーム組成物であって、水溶液中に分散したリポソームを含み、リポソームは、リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含む、リポソーム組成物に関する。
【０１４１】
第１１の態様において、本発明は、本発明の第１０の態様の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される乾燥薬学的組成物に関する。
【０１４２】
第１２の態様において、本発明は、処置を必要とする対象における疾患または状態を処置する方法であって、治療上効果的な量の、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームを含む本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態において、処置する方法は、治療上効果的な量の別の治療薬剤、例えば、化学療法剤、サイトカイン、ステロイド、免疫療法薬、またはそれらの組み合わせの同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む。ペプチドエポキシケトン化合物を含む本発明の薬学的リポソーム組成物を使用して処置される疾患または状態の例は、多発性骨髄腫、固形腫瘍、感染症、および自己免疫疾患を含むが、それらに限定されない。
【０１４３】
３．０．０  薬学的組成物
本発明は、ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）およびそのプロドラッグを含む薬学的リポソーム組成物、ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）およびそのプロドラッグを含む乾燥薬学的組成物、ならびにそのような組成物を作製および使用する方法に関する。
【０１４４】
３．１．０  ペプチドエポキシケトン化合物
本発明の実践において有用なペプチドエポキシケトン化合物の例は、米国特許第７，４１７，０４２号に記載されており、式Ｉ：
【化４】
2015524411.tif 000006
の構造を有するペプチドエポキシケトン化合物を含むが、これらに限定されず、
式中、Ｘは、Ｏ、ＮＨ、またはＮ−アルキルであり、Ｙは、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｏ、またはＣ（Ｒ９）２であり、Ｚは、ＯまたはＣ（Ｒ９）２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、全て水素であり、各Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシアルキル、アリール、およびＣ１−６アラルキルから選択され、そのそれぞれは、アルキル、アミド、アミン、カルボン酸またはその薬学的に許容される塩、カルボキシルエステル、チオール、およびチオエーテルから選択される基で、任意選択で置換され、ｍは、０から２の整数であり、ｎは、０から２の整数である。これらの化合物を説明するために使用される用語は、「定義」の項でさらに説明されている。
【０１４５】
本発明の実践において有用な特定のペプチドエポキシケトン化合物の例は、式ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶを有する以下の化合物を含む（以下の化合物における「Ｐｈ」は、フェニル基を表す）。
【０１４６】
【化５】
2015524411.tif 000007
【０１４７】
【化６】
2015524411.tif 000008
【０１４８】
【化７】
2015524411.tif 000009
【０１４９】
本発明の好ましい実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物は、式Ｖを有するカーフィルゾミブである。：
【０１５０】
【化８】
2015524411.tif 000010
【０１５１】
本発明のリポソーム組成物において、ペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比（薬物重量：総脂質重量）は、典型的には、約０．００５：０．９９５〜約０．５：０．５（重量パーセント（重量％）で、約０．５重量％〜約５０重量％の薬物および約９９．５重量％〜約５０重量％の総脂質）である。好ましい実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比は、約０．００５：０．９９５〜約０．３５：０．６５（重量パーセントで、約０．５重量％〜約３５重量％の薬物および約９９．５重量％〜約６５重量％の総脂質）、好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．３０：０．７０（重量パーセントで、約１重量％〜約３０重量％の薬物および約９９重量％〜約７０重量％の総脂質）、ならびにより好ましくは約０．０１：０．９９〜約０．２５：０．７５（重量パーセントで、約１重量％〜約２５重量％の薬物および約９９重量％〜約７５重量％の総脂質）である。
【０１５２】
３．２．０  リポソーム成分
本発明の実践において使用される脂質の種類は、リン脂質、ステロール、ならびにそれらの修飾物および誘導体を含むが、それらに限定されない。また、追加の両親媒性脂質が、本発明の実践において使用されてもよい。
【０１５３】
本発明の実践における使用に好ましい小胞形成両親媒性脂質は、リン脂質およびその誘導体を含む。リン脂質は、一般に、中性、カチオン性、およびアニオン性の３つのクラスに分類される。
【０１５４】
本発明の実践において有用なリン脂質の例は、ホスファチジルコリン、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、または水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ））、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ジオレイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（またはジオレイルホスファチジルコリン）（ＤＯＰＣ）、ジオレイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、１，２−ジレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート（ＤＯＰＡ）、１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＰＰＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＭＰＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＳＰＧ）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン：Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン：Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン：リシルホスファチジルグリセロール、スフィンゴ脂質（例えば、スフィンゴミエリン）、およびそれらの混合物を含むが、それらに限定されない。
【０１５５】
本発明の実践において有用なさらなる小胞形成脂質は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ−Ｎ−ｔｒｉエチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ−２−（スペルミンカルボキサミド）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）、Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、ステアリルアミン、ジセチルホスフェート、β−オレイル−γ−パルミトイル、およびそれらの混合物を含む。
【０１５６】
本発明の実践における使用に好適な脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（例えば、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、または水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ））、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＳＰＧ）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、スフィンゴミエリン（ＳＰＨ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、およびそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、リポソームの脂質は、約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質、約３０重量パーセント〜約９０重量パーセントのリン脂質、好ましくは約５０重量パーセント〜約７５重量パーセントのリン脂質を含む。
【０１５７】
リポソームを安定化させるために、様々なステロールおよびその誘導体（例えば、コレステロール）を使用することができる。ステロール修飾両親媒性脂質は、当該技術分野において知られている（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０１７７１５６号を参照されたい）。本発明の実践における使用のためのステロール、例えばコレステロールはまた、様々な親水性ポリマーで誘導体化されていてもよい（ＰＥＧ−コレステロール誘導体；例えば、米国特許第６，２７０，８０６号を参照されたい）。本発明の一実施形態において、ステロールまたはその誘導体は、脂質二重層を安定化させるためにリポソーム組成物に添加することができる。本発明の実践における使用に好ましいステロールは、コレステロールおよびその誘導体（例えば、コレステロールヘミスクシネート、ヒドロキシコレステロール、コレステン、ケトコレスタノール、酢酸コレステリル、リノール酸コレステリル、ドデカン酸コレステリル、パルミチン酸コレステリル、チオコレステロール、リシン系コレステロール、ヒドロキシエチル化カチオン性コレステロール）である。例えば、本発明のリポソーム組成物のリポソームの脂質は、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロール、約１５重量パーセント〜約４０重量パーセントのコレステロール、好ましくは約１５重量パーセント〜約３０重量パーセントのコレステロールを含んでもよい。
【０１５８】
他の実施形態において、コレステロールは、特定の器官または細胞型により認識されるように設計されたリガンド、例えば長鎖脂肪酸、アミノ酸、オリゴ糖、ホルモン、アミノ酸誘導体、タンパク質、糖タンパク質、修飾タンパク質等で化学修飾される。得られるリポソームは、特定の器官または細胞型への標的化に好適である（例えば、米国特許第４，５４４，５４５号を参照されたい）。
【０１５９】
使用され得る標的化因子を含むリポソーム組成物の追加の例は、本明細書の教示を鑑みて、米国特許第５，０４９，３９０号、米国特許第５，７８０，０５２号、米国特許第５，７８６，２１４号、米国特許第５，８３０，６８６号、米国特許第６，０５６，９７３号、米国特許第６，１１０，６６６号、米国特許第６，１７７，０５９号、米国特許第６，２４５，４２７号、米国特許第６，３１６，０２４号、米国特許第６，５２４，６１３号、米国特許第６，５３０，９４４号、米国特許第６，７４９，８６３号、米国特許第６，８０３，３６０号、米国特許第６，９６０，５６０号、米国特許第７，０６０，２９１号、米国特許第７，１０１，９８５号、および米国特許出願第２００２／０１９８１６４号、米国特許出願第２００３／００２７７７９号、米国特許出願第２００３／０２２０２８４号、米国特許出願第２００３／０２２４０３７号、米国特許出願第２００３／０２２８２８５号、米国特許出願第２００３／１４３７４２号、および米国特許出願第２００４／００２２８４２号を含む。
【０１６０】
滅菌安定化は、様々な親水性ポリマーまたは親水性糖脂質、例えばポリエチレングリコールおよびガングリオシドＧＭ１によりリポソームに付与されるコロイド安定性を指す。リポソームは、ＰＥＧ−ＰＥ、ＧＭ１、または全身循環において比較的長い半減期を示すような別の糖脂質もしくはポリマーを含有してもよい。ＰＥＧおよび他のポリエトキシル化ポリマー等の親水性ポリマーが、リポソームの循環半減期を向上させるためにリポソームを遮蔽するために使用され得る。そのような親水性ポリマーは、リポソームと非共有結合的に会合させてもよく、または、リポソームの特定の成分に複合体化もしくは共有結合してもよい（例えば、ＰＥＧ誘導体化脂質、例えば１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ））。追加の例示的親水性ポリマーは、ポリビニルアルコール、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリグリセロール、ポリアキソズリン、ポリアミノ酸（ＰＡＡ）、およびそれらの混合物を含むが、それらに限定されない。
【０１６１】
本明細書に記載のリポソーム組成物のいくつかの実施形態において、リポソームの脂質は、約０．１重量パーセント〜約３０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質、約５重量パーセント〜約２５重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質、好ましくは約８重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質を含んでもよい。本発明の実践における使用に好適な親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（例えば、モノメトキシポリエチレングリコールに複合体化したリン脂質、例えば、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ））である。
【０１６２】
使用され得るリポソーム組成物の追加の例は、本明細書の教示を鑑みて、米国特許第４，７８９，６３３号、米国特許第４，９２５，６６１号、米国特許第４，９８３，３９７号、米国特許第５，０１３，５５６号、米国特許第５，５３４，２４１号、米国特許第５，５９３，６２２号、米国特許第５，６４８，４７８号、米国特許第５，６７６，９７１号、米国特許第５，７５６，０６９号、米国特許第５，８３４，０１２号、米国特許第５，８４６，４５８号、米国特許第５，８９１，４６８号、米国特許第５，９４５，１２２号、米国特許第６，０５６，９７３号、米国特許第６，０５７，２９９号、米国特許第６，０７７，８３４号、米国特許第６，１２６，９６６号、米国特許第６，１５３，５９６号、米国特許第６，２８７，５９３号、米国特許第６，３１６，０２４号、米国特許第６，３８７，３９７号、米国特許第６，４７６，０６８号、米国特許第６，５８６，５５９号、米国特許第６，６２７，２１８号、米国特許第６，７２３，３３８号、米国特許第６，８９７，１９６号、米国特許第６，９３６，２７２号、米国特許第６，９６０，５６０号、米国特許第７，１２２，２０２号、米国特許第７，３１１，９２４号、米国特許第７，３６１，６４０号、および米国特許第７，９０１，７０８号、ならびに米国特許出願公開第２００３／００７２７９４号、米国特許出願公開第２００３／００８２２２８号、米国特許出願公開第２００３／０１６６６０１号、米国特許出願公開第２００３／０２０３８６５号、米国特許出願公開第２００３／０２１５４９０号、米国特許出願公開第２００３／０２２４０３７号、米国特許出願公開第２００４／００２２８４２号、米国特許出願公開第２００４／０２３４５８８号、および米国特許出願公開第２００５／０１３６０６４号を含む。
【０１６３】
リポソーム組成物は、典型的には、リポソーム捕捉ペプチドエポキシケトン化合物および水性担体を含む。
【０１６４】
本発明の実践において有用な典型的な賦形剤は、担体またはビヒクル（例えば、水または緩衝水溶液）、ｐＨ調整剤、酸化防止剤（例えば、α−トコフェロール、メチオニン、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルドロキシルトルエン、および没食子酸プロピル、ならびにそれらの混合物）、等張性を維持するための薬剤（例えば、塩化ナトリウム、糖、ポリオール（糖アルコール）、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、およびそれらの混合物）、１種以上の糖（例えば、トレハロース、マルトース、スクロース、ラクトース、マンノース、デキストロース、フルクトース等）または糖アルコール（例えば、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、マンニトール、グリセロール等）、アルコール（例えば、エタノール、ｔ−ブタノール等）、および保存剤（アルコール、安息香酸、サリチル酸、フェノールおよびその誘導体（例えば、クレゾール、ｐ−クレゾール、ｍ−クレゾールおよびｏ−クレゾール）、セトリミド、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）、ならびにそれらの混合物）を含むが、それらに限定されない。
【０１６５】
本発明の実践において有用なｐＨ調整剤は、塩酸、水酸化ナトリウム、クエン酸、フタル酸、酢酸、アスコルビン酸、ホスフェート、グルタメート、コハク酸ナトリウムまたはカリウム、タルトレート、ヒスチジン、リン酸ナトリウムまたはカリウム、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、硫酸、およびリン酸を含むが、それらに限定されない。酸および塩基／塩の両方を含む緩衝剤もまた使用され得る。好ましいｐＨ調整剤は、硫酸およびリン酸を含む。
【０１６６】
本発明の好ましい実施形態において、リポソームは、緩衝水溶液（例えば、再水和媒体としての、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））、０．９％生理食塩水、５％デキストロース、１０％スクロース、または注射用蒸留水（ＷＦＩ））を使用して再水和され得る。いくつかの実施形態において、リポソーム組成物の水相のｐＨは、例えば、おおよそヒト生理ｐＨ（すなわち、約ｐＨ６．５〜約ｐＨ７．５）まで調整される。水相中に典型的に存在する賦形剤は、緩衝系、等張性を維持するための薬剤、糖、糖アルコール、および／または保存剤を含むが、それらに限定されない。
【０１６７】
ペプチドエポキシケトンのリポソーム組成物の例示的実施形態は、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−コレステロール、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ−コレステロール、カーフィルゾミブ−ＤＰＰＣ、カーフィルゾミブ−ＤＰＰＣ−コレステロール、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【０１６８】
さらなる例は、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ、およびカーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むがそれらに限定されない、ペプチドエポキシケトンのペグ化リポソーム組成物を含む。
【０１６９】
ペプチドエポキシケトンのリポソーム組成物の好ましい実施形態は、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、およびカーフィルゾミブ−ＨＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【０１７０】
本発明のリポソーム組成物の実施形態の例は、実施例１、７、１０、および１１に記載されている。さらに、薬物：総脂質の重量パーセントおよび比の範囲の例は、表Ｉに示されており、総脂質重量パーセントおよび総脂質重量比の範囲の例は、表ＩＩに示されている。したがって、本発明のリポソーム組成物の好ましい実施形態の追加の例は、表Ｉから薬物：総脂質の組み合わせを選択することと、それを表ＩＩからの総脂質の組み合わせと組み合わせることとを含む（例えば、実施例１、表３を参照されたい）。
【０１７１】
【表１】
2015524411.tif 000011
2015524411.tif 000012
【０１７２】
【表２】
2015524411.tif 000013
【０１７３】
４．０．０  リポソーム組成物の調製
リポソームは、逆相蒸発法を含む、様々な技術（例えば、Ｓｚｏｋａ，Ｆ．，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｖｅｓｉｃｌｅｓ（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ），”  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｕｎｅ  １９８０，９：４６７−５０８、米国特許第４，２３５，８７１号）により調製され得る。逆相蒸発小胞は、最初に、約２〜４ミクロンの典型的平均サイズを有する。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、リポソームは、単純な脂質フィルム水和技術により形成される（例えば、実施例１および２を参照されたい）。この手順において、本明細書に記載の種類のリポソーム形成脂質およびペプチドエポキシケトン化合物の混合物は、好適な有機溶媒に溶解され、容器内で蒸発されて薄いフィルムを形成し、次いで水性媒体により被覆される。脂質フィルムは水和して、典型的には約０．１ミクロンから１０ミクロンのサイズを有する小胞を形成する。
【０１７５】
本発明の他の実施形態は、疎水性で非水溶性のペプチドエポキシケトン化合物を、リポソームの内部水性コア内に受動的に封入する方法を含む。そのような水性コアへの封入は、１種以上の可溶化剤を使用して促進され得る。可溶化剤は、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度を増加させる。可溶化剤は、例えば、可溶化を促進するための化合物（例えば、シクロデキストリン）、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせを含む。リポソームの内部水性コアにペプチドエポキシケトン化合物を封入する利点は、化学的および生物学的分解からのより高い保護、より遅い拡散、ならびに薬物放出プロファイルの延長を含む。さらに、実験の項において後述されるように、本発明のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べてｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を改善し、所望の薬力学的プロファイルを提供し、ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物以上の抗腫瘍活性を提供することにより、ペプチドエポキシケトン化合物の治療域を向上させる。さらに、本発明のリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の改善された耐容性を示した。
【０１７６】
シクロデキストリンは、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度を促進するための化合物の一例である。シクロデキストリンは、荷電もしくは中性であっても、天然（シクロデキストリンα、β、γ、δ、ε）であっても、分岐していても、または重合していてもよい。ある特定の態様において、シクロデキストリンは、例えば、アルキル、アリール、アリールアルキル、グリコシド等の基による１つ以上のヒドロキシプロピルの置換によって、または、アルコールもしくは脂肪酸でのエーテル化、エステル化によって、化学修飾されてもよい。これらの基のうち、特に好ましいのは、ヒドロキシプロピル、メチル、およびスルホブチルエーテル基からのものである（例えば、Ｓｔｅｌｌａ  Ｖ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．３６（１）：３０−４２（２００８）を参照されたい）。ある特定の態様において、シクロデキストリンは、６つ、７つまたは８つのグルコピラノース単位を含む。
【０１７７】
シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、およびγ−シクロデキストリンを含む。好適なα−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリンおよびヒドロキシエチル−α−シクロデキストリンを含むが、それらに限定されない。好適なβ−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（例えば、２−ヒドロキシプロピルシクロデキストリン）、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、ジヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、２，６−ジ−Ｏ−メチル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ランダムメチル化シクロデキストリン、および硫酸化β−シクロデキストリンを含むが、それらに限定されない。好適なγ−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン、ジヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ヒドロキシエチルγ−シクロデキストリン、および硫酸化γ−シクロデキストリンを含む。
【０１７８】
本発明の実践における使用に好ましいシクロデキストリンは、β−シクロデキストリン（例えば、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤまたはＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと略される；例えば、ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）（Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、米国特許第４，５３５，１５２号、米国特許第４，７２７，０６４号、米国特許第５，１３４，１２７号、米国特許第５，１７３，４８１号も参照されたい）、または、ヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ；Ｊａｎｓｓｅｎ、Ｔｉｔｕｓｖｉｌｌｅ  ＮＪ；Ｇｏｕｌｄ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４３（１０）：１４５１−９（２００５）もまた参照されたい）；米国特許第４，９２０，２１４号、米国特許第５，３８５，８９１号、米国特許第５，７１８，９０５号、および米国特許第６，０４６，１７７号もまた参照されたい）を含む。
【０１７９】
ペプチドエポキシケトン化合物は、多くの場合疎水性であり、水に対する低い溶解度を有する。ペプチドエポキシケトン化合物は、酸性溶液に対し増加した水溶解度を有する。したがって、ペプチドエポキシケトン化合物が溶解されている水溶液のｐＨを低下させると、水可溶化を向上させることができる。例えば、水溶液のｐＨは、ｐＨ調整剤を使用して約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３のｐＨに、好ましくは、酸、例えば塩酸を使用して約ｐＨ０．５〜約ｐＨ２のｐＨに低下され得る。ｐＨ調整剤の例は、上に列挙されている。ペプチドエポキシケトン化合物の可溶化に好適なｐＨ調整剤は、塩酸、クエン酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、酢酸、リン酸、および／またはマレイン酸を含むが、それらに限定されない。可溶化に好適なｐＨは、典型的には、約ｐＨ１〜約ｐＨ２である。
【０１８０】
さらに、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度は、共溶媒可溶化の使用により増加され得る。可溶化剤としての共溶媒の例は、ジメチルスルホキシド、メチルピロリドン、ジメチルイミダゾリジノン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール、ジメチルホルムアミド、およびそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない。好ましい共溶媒は、ジメチルスルホキシド、メチルピロリドン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール、ジメチルホルムアミド、およびそれらの組み合わせを含む。
【０１８１】
上述のように、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度は、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせを含むがそれらに限定されない可溶化剤の使用により増加され得る。
【０１８２】
リポソームへの薬物の投入を促進するために、金属および金属イオンを使用することができる（例えば、ＷＯ／２００３／０２８６９７ならびに米国特許第５，４６６，４６７号、米国特許第５，６６３，３８７号および米国特許第５，８３７，２８２号を参照されたい）。そのような金属および金属イオンは、二価金属カチオンおよび遷移金属（例えば、Ｍｎ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｖ、Ｔｉ、Ｃｒ、Ｒｈ、Ｒｕ、Ｍｏ、およびＰｄ）を含むが、それらに限定されない。薬物は、典型的には金属／薬物複合体形成の結果、遷移金属含有リポソーム内に安定して捕捉され得る（例えば、Ｒａｍｓａｙ  Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２３（１２）：２７９９−８０８（２００６）を参照されたい）。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、リポソームは、薄型フィルム水和法に続く、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液を使用した水和によって形成される。そのような方法において、脂質フィルムが形成され、脂質フィルムは、例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（例えば、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、または水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ））、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＳＰＧ）、１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、スフィンゴミエリン（ＳＰＨ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）に複合体化したリン脂質、およびコレステロールを含むがそれらに限定されない脂質のいずれか１種または組み合わせを含む。脂質は、典型的には、有機溶媒（例えば、メタノール：クロロホルム）中に溶解され、続いて溶媒が除去されて脂質フィルムが形成される。
【０１８４】
ペプチドエポキシケトン化合物は、例えば、約１％〜約６０％（ｗ／ｗ）、好ましくは約５％〜約４０％の可溶化剤（例えば、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリン）を含む水溶液中に可溶化される。水溶液はまた、例えば、ｐＨ調整剤（例えば、クエン酸緩衝液、約ｐＨ３、もしくはグリシン−ＨＣｌ；約ｐＨ２）および／またはペプチドエポキシケトン化合物の可溶化のための共溶媒を含んでもよい。薬物水溶液は、脂質フィルムを再水和させるために使用される。再水和の際、自己集合性小胞が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液の内部水性体積（すなわち、水性コア）を封入する同心円状の脂質二重層を形成する。非封入遊離薬物は、例えば遠心分離により除去することができ、リポソーム組成物は、例えばリン酸緩衝生理食塩水で洗浄され得る。実施例７は、この方法に従うリポソーム組成物の作製を説明している。
【０１８５】
他の実施形態において、リポソームは、脂質溶液注入法により形成され、ここで脂質溶液は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液中に注入される。この方法は、典型的には、水溶液中の可溶化剤（例えば、共溶媒可溶化を伴う、または伴わないｐＨ制御）を使用して、ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、異なる固体状態、例えば結晶性または非晶質の）を可溶化することを含む。脂質は、溶媒、例えば有機溶媒（例えば、アルコール（例えば、エタノール）またはエーテル）中に溶解され、続いて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液中に、撹拌しながら注入される。リポソーム小胞は、水溶液への注入後、少量の水溶液を小胞の内部水性区画（複数を含む）内に捕捉しながら形成される。実施例１０は、この方法い従うリポソーム組成物の作製を説明している。この方法の１つの利点は、それが拡張可能であることである。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、例えばｐＨ調整ならびに／または溶媒および／もしくは共溶媒の除去のために、本発明の方法は、透析、脱塩、緩衝液交換、および／またはゲル濾過を使用してリポソーム組成物を処理することをさらに含む。
【０１８７】
本発明のリポソーム組成物は、一般に、脂質、ペプチドエポキシケトン化合物、および水溶液の不均質混合物を含有し、リポソームは、実質的に均一なサイズであり、約１ミクロン未満、好ましくは約０．０１ミクロン〜約１．０ミクロン、好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロン、約０．０５ミクロン〜約０．２０ミクロン、約０．０５ミクロン〜約０．１５ミクロン、および好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．１０ミクロンの平均サイズを有する。いくつかの実施形態において、本発明のリポソーム組成物のリポソームは、約０．２ミクロン未満の平均直径を有する。サイズ調整は、より大きなリポソームを排除し、最適な薬物動態学的特性を有する決められたサイズ範囲をもたらすのに役立つ。
【０１８８】
１つの効果的な小胞のサイズ調整法は、０．０３〜０．２ミクロンの範囲内、典型的には０．０５、０．０８、０．１または０．２ミクロンの選択された均一細孔サイズを有する一連のポリカーボネート膜を通して、リポソームの水性懸濁液を押し出すことを含む。膜の細孔サイズは、大まかに、その膜を通した押し出しにより生成されるリポソームの最大サイズに対応し、特に、調製物は、同じ膜を通して２回以上押し出される。リポソームは、リポソームサイズの段階的低減を達成するために、連続的により小さい細孔を有する膜を通して押し出されてもよい。このリポソームサイズ調整の方法は、均一サイズの小胞組成物の調製において使用される。より最近の方法は、非対称セラミックフィルタを通した押し出しを含む（例えば、米国特許第４，７３７，３２３号を参照されたい）。均質化法もまた、０．１ミクロン以下のサイズまでリポソームを微細化するのに有用である。
【０１８９】
浴またはプローブ超音波照射によるリポソーム懸濁液の超音波処理は、約０．０５ミクロン未満のサイズの微小単層小胞（ＳＵＶ）までの段階的サイズ低減をもたらすために使用され得る。均質化は、粗大リポソームをより微小なリポソームに断片化するためにせん断エネルギーに依存する別の方法である。典型的な均質化手順において、小胞は、標準的なエマルションホモジナイザを通して、選択されたリポソームサイズ、典型的には約０．１ミクロン〜０．５ミクロンが観察されるまで再循環される。両方の方法において、粒子サイズ分布は、従来のレーザビーム粒子サイズ識別により監視され得る。さらなるサイズ調整法は、マイクロフルイダイザの使用を含む。
【０１９０】
遠心分離および分子篩クロマトグラフィーは、１ミクロン未満の選択された閾値を下回る粒子サイズを有するリポソーム懸濁液を生成するために利用可能な他の方法である。これらの２つの方法は、粗大粒子の微小粒子への変換ではなく、より粗大なリポソームの選択的除去を含む。
【０１９１】
本発明のリポソーム組成物の調製、再水和、および特性決定の例は、本明細書における実施例１、実施例２、実施例３、実施例７、実施例１０、および実施例１１に示されている。
【０１９２】
一態様において、本発明は、本明細書に記載のリポソーム組成物の調製のための方法を含む。一実施形態において、リポソーム組成物を作製する方法は、脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を好適な溶媒中で混合（典型的には溶解）することと、溶媒を蒸発させて乾燥フィルムを生成することと、乾燥フィルム（この実施形態においては脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を含む）を再水和してリポソームを形成することと、リポソームをサイズ調整することとを含む。別の実施形態において、リポソーム組成物を作製する方法は、リポソーム化合物を含む乾燥フィルムを生成し、続いてペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤（例えば、ｐＨ調整剤、および／または共溶媒）を含む水溶液を使用して再水和する、薄型フィルム水和法を含む。さらに別の実施形態において、リポソーム組成物を作製する方法は、脂質（複数を含む）を溶媒（複数を含む）に溶解することと、得られた脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤（例えば、ｐＨ調整剤、および／または共溶媒）を含む水溶液に注入することとを含む。さらに別の実施形態において、薬物をリポソーム内に投入するための遠隔投入法（例えば、ｐＨ勾配投入を使用して；例えば、Ａｖｎｉｒ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，５８（１）：１１９−１２９（２００８）、Ｃｅｈ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｌｌｏｉｄ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８５（１）：９−１８（１９９７）、Ｖｅｍｕｒｉ  Ｓ，，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４６（１０）：７７８−８３（１９９４）、Ｄｏｓ  Ｓａｎｔｏｓ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１６６１：４７−６０（２００４）を参照されたい）を使用して、本明細書に記載のリポソーム組成物が調製される。遠隔投入法は、典型的には、薄型フィルム再水和法と比較して、リポソームへのより高い薬物投入をもたらす。
【０１９３】
本発明はまた、本明細書に記載の方法により作製されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を含む。
【０１９４】
１種以上の脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物は、例えば凍結乾燥、デシケーション、フリーズドライ、噴霧乾燥、または同様の方法によって本明細書に記載のリポソーム組成物を乾燥させることにより形成され得る。いくつかの実施形態において、乾燥薬学的組成物は、追加的賦形剤、例えば抗凍結剤（例えば、グリセロール、ジメチルアミン、ジメチルスルホキシド）、ガラス転移調節剤（例えば、糖、ポリオール、ポリマー、アミノ酸）、および／または他の安定化賦形剤をさらに含む。そのような乾燥薬学的組成物は、本発明の方法における使用のために再水和され得る。そのような乾燥薬学的組成物の再構成のために使用される再水和媒体は、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、等張性を維持するための薬剤、糖、糖アルコール、アルコール、および／または保存剤を含み得るが、それらに限定されない。
【０１９５】
５．０．０  本発明のリポソーム組成物の使用
プロテアソーム阻害の生物学的影響は、数多くある。プロテアソーム阻害は、増殖性疾患、神経毒性／変性疾患、アルツハイマー病、虚血状態、炎症、自己免疫疾患、ＨＩＶ、癌、臓器移植片拒絶反応、敗血ショック、抗原提示阻害、ウイルス遺伝子発現の低下、寄生虫感染、アシドーシスに関連した状態、黄斑変性、肺疾患、筋肉消耗疾患、線維性疾患、骨および毛髪成長疾患を含むがそれらに限定されない、数多くの疾患の予防および／または治療として提案されている。したがって、エポキシケトンクラスの分子等の非常に有効なプロテアソーム特異的化合物のための薬学製剤は、対象に薬物を投与し、これらの状態を処置する手段を提供する。
【０１９６】
細胞レベルにおいて、様々なプロテアソーム阻害剤による細胞の処理後に、ポリユビキチン化タンパク質、細胞形態変化、およびアポトーシスが報告されている。プロテアソーム阻害剤はまた、可能な抗腫瘍治療戦略として提案されている。抗腫瘍化合物に対するスクリーンにおいてエポキソマイシンが最初に特定されたという事実は、プロテアソームを抗腫瘍化学療法標的として実証するものである。したがって、これらのリポソーム組成物は、癌の処置に有用である。
【０１９７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルの両方において、悪性細胞が一般にプロテアソーム阻害の影響を受けやすいことが示されている。実際に、プロテアソーム阻害は、多発性骨髄腫の処置のための治療戦略としてすでに実証されている。これは、極めて増殖性の悪性細胞の、急速にタンパク質を除去するためのプロテアソーム系への依存性に一部起因し得る（Ｒｏｌｆｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５：５−１７（１９９７）、Ａｄａｍｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ４：３４９−３６０（２００４））。したがって、本明細書において、癌を処置する方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療上効果的な量の、本明細書において提供されるようなペプチドエポキシケトン化合物のリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。
【０１９８】
癌は、膀胱、血液、骨、脳、乳房、頚部、胸部、結腸、子宮内膜、食堂、眼、頭部、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、口、頸、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、腎、皮膚、胃、精巣、喉、および子宮の癌を含むがそれらに限定されない、血液、骨、器官、皮膚組織および血管系の疾患を指す。具体的な癌は、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病、成熟Ｂ細胞新生物（小リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、びまん性リンパ形質細胞性リンパ腫（例えばワルデンストローム大グロブリン血症）、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、モノクローナル免疫グロブリン沈着疾患、重鎖疾患、結節外周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫及びバーキットリンパ腫／白血病）、成熟Ｔ細胞及びナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞新生物（Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大顆粒球性リンパ球性白血病、進行性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、結節外ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾臓Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫（セザリー症候群）、原発性皮膚退生大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽細胞性リンパ節症、不特定の末梢Ｔ細胞リンパ腫及び退生大細胞リンパ腫）、ホジキンリンパ腫（結節性硬化症、混合細胞充実性、リンパ球リッチ、リンパ球枯渇又は非枯渇型、結節性リンパ球優勢型）、骨髄腫（多発性骨髄腫、無痛性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫）、慢性骨髄増殖性疾患、異形成脊髄／骨髄増殖性疾患、異形成脊髄症候群、免疫不全関連リンパ球増殖性障害、組織球性及び樹状細胞新生物、肥満細胞症、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、悪性巨細胞腫、骨髄腫骨疾患、骨肉腫、乳癌（ホルモン依存型、ホルモン独立型）、婦人科系の癌（頚部、子宮内膜、卵管、妊娠性栄養膜疾患、卵巣、腹腔、子宮、膣及び外陰部）、基底細胞癌腫（ＢＣＣ）、扁平細胞癌腫（ＳＣＣ）、悪性黒色腫、隆起性皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫、星状細胞腫、毛様細胞性星状細胞腫、胎生期奇形性神経表皮腫瘍、乏突起膠腫、上衣細胞腫、多形性グリア芽細胞腫、混合膠腫、乏星状細胞腫、髄芽腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞種、胚細胞腫、奇形腫、悪性中皮腫（腹腔内中皮腫、心臓周囲中皮腫、胸膜中皮腫）、胃−腸管−膵臓又は胃腸膵臓の神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ−ＮＥＴ）、カルチノイド、膵臓内分泌腺腫瘍（ＰＥＴ）、結腸直腸腺癌、結腸直腸癌腫、進行性神経内分泌腺腫瘍、平滑筋肉腫膠様腺癌、印鑑細胞腺癌、肝細胞癌腫、胆管癌、肝芽細胞腫、血管腫、肝腺腫、局所結節性過形成（結節性再生性過形成、過誤腫）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（扁平細胞肺癌、腺癌、大細胞肺癌）、小細胞肺癌腫、甲状腺癌、前立腺癌（ホルモン不応性、アンドロゲン非依存性、アンドロゲン依存性、ホルモン非感受性）、および軟組織肉腫（線維肉腫、悪性線維性ヒスチオサイトーマ、皮膚線維肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫平滑筋肉腫、血管内皮腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍／神経線維肉腫、骨格外骨肉腫）を含むが、それらに限定されない。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物、またはそれを含む薬学的組成物は、対象における多発性骨髄腫を処置するために投与され得る。例えば、多発性骨髄腫は、難治性および／または難治性多発性骨髄腫を含み得る。
【０２００】
造血およびリンパ系組織の多くの腫瘍は、細胞増殖、または特定の型の細胞の増加を特徴とする。慢性骨髄増殖性疾患（ＣＭＰＤ）は、骨髄細胞系列の１つ以上の骨髄中の増殖を特徴とするクローン性造血幹細胞障害であり、末梢血中の顆粒球、赤血球および／または血小板の数の増加をもたらす。したがって、そのような疾患の処置のためのプロテアソーム阻害剤の使用は魅力的であり、試験されている（Ｃｉｌｌｏｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９２：１１２４−１２２９（２００７））。ＣＭＰＤは、慢性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、真性赤血球増加症、慢性特発性骨髄線維症、本態性血小板血症、および分類不可能な慢性骨髄増殖性疾患を含み得る。本明細書において、ＣＭＰＤを処置する方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。
【０２０１】
異形成脊髄／骨髄増殖性疾患、例えば慢性骨髄単球性白血病、異型慢性骨髄性白血病、若年性骨髄単球性白血病および分類不可能な異形成脊髄／骨髄増殖性疾患は、骨髄細胞系列の１つ以上の増殖に起因する骨髄の細胞過多を特徴とする。本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物でプロテアソームを阻害することは、これらの異形成脊髄／骨髄増殖性疾患の処置を必要とする対象に、治療上効果的な量のリポソーム組成物を提供することにより、そのような処置に役立ち得る。
【０２０２】
異形成脊髄症候群（ＭＤＳ）は、主要な骨髄細胞株の１つ以上における異形成および非効果的な造血を特徴とする造血幹細胞障害の群を指す。これらの血液悪性腫瘍におけるプロテアソーム阻害剤によるＮＦ−ｋＢの標的化は、アポトーシスを誘引し、それにより悪性細胞を死滅させる（Ｂｒａｕｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １３：７４８−７５８（２００６））。本明細書において、ＭＤＳを処置するための方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療上効果的な量の、本明細書において提供されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。ＭＤＳは、難治性貧血、環状鉄芽球を伴う難治性貧血、多分化異形成を伴う難治性血球減少、過剰芽細胞を伴う難治性貧血、分類不可能な骨髄異形成症候群、および単離された欠失（５ｑ）染色体異常に関連した骨髄異形成症候群を含む。
【０２０３】
肥満細胞症は、脂肪細胞の増殖、および１つ以上の器官系におけるその後の蓄積である。肥満細胞症は、皮膚肥満細胞症、無痛性全身性肥満細胞症（ＩＳＭ）、関連したクローン性血液学的非肥満細胞系統疾患を伴う全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）、進行性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）、肥満細胞肉腫（ＭＣＳ）および皮膚外肥満細胞腫を含むが、それらに限定されない。本明細書において、さらに、肥満細胞症を処置するための方法であって、肥満細胞症と診断された対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示される化合物を投与することを含む方法が提供される。
【０２０４】
プロテアソームはＮＦ−κＢを調節し、一方これは免疫および炎症反応に関与する遺伝子を調節する。例えば、ＮＦ−κＢは、免疫グロブリン軽鎖κ遺伝子、ＩＬ−２受容体α鎖遺伝子、クラスＩ主要組織適合性複合体遺伝子、ならびに、例えばＩＬ−２、ＩＬ−６、顆粒球コロニー刺激因子、およびＩＦＮ−βをコードする複数のサイトカイン遺伝子の発現に必要である（Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７８：７７３−７８５（１９９４））。したがって、本明細書において、ＩＬ−２、ＭＨＣ−Ｉ、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮ−βまたは他の以前に言及されたタンパク質のいずれかの発現のレベルに影響を与える方法が提供され、各方法は、対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む。
【０２０５】
また、本明細書において、対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、治療上効果的な量の、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物のリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。自己免疫疾患または障害の例は、乾癬および皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患等の炎症反応；全身性強皮症および硬化症；炎症性腸疾患に関連した反応（例えばクローン病および潰瘍性大腸炎）；呼吸困難症候群（成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）を含む）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；腎炎；湿疹および喘息等のアレルギー状態、ならびにＴ細胞の浸潤および慢性の炎症反応を含む他の状態；アテローム性硬化症；白血球接着不全；関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病またはインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年発症性糖尿病；ならびに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症および脈管炎で典型的に見られるサイトカインおよびＴリンパ球によって媒介される急性および遅延型過敏症に関連する免疫反応；悪性貧血（アジソン病）；白血球の血管外遊出が関与する疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症障害；多発性器官損傷症候群；溶血性貧血（低温グロブリン血症またはクームス陽性貧血を含むがそれらに限定されない）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブズ病；ランバート−イートン筋無力症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫多腺性内分泌障害；ライター病；スティフマン症候群；ベヘート病；巨細胞性動脈炎；免疫複合体性腎炎；ＩｇＡネフロパシー；ＩｇＭ多発性神経炎；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）または自己免疫血小板減少症を含むが、それらに限定されない。
【０２０６】
免疫系は、ウイルス感染している、発癌性形質転換を生じている、またはその表面によく分からないペプチドを提示している自己細胞をスクリーニングする。細胞内タンパク質分解は、Ｔリンパ球への提示のための小ペプチドを生成し、ＭＨＣクラスＩ媒介免疫応答を誘引する。したがって、本明細書において、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物を含むポソーム組成物を、細胞における抗原提示を阻害または改変するための免疫調節薬として使用する方法であって、細胞を本明細書に記載の化合物に暴露する（または対象に投与する）ことを含む方法が提供される。特定の実施形態は、移植片対宿主病または宿主対移植片病等の移植片または移植関連疾患を処置する方法であって、治療上効果的な量の本明細書に記載の化合物を投与することを含む方法を含む。移植片は、例えば、島細胞等の単離された細胞；新生児の羊膜、骨髄、造血前駆細胞、および眼組織、例えば角膜組織等の組織；ならびに、皮膚、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺葉、肺、腎臓、管状臓器（例えば、腸、血管または食道）等の器官等の広範な材料を含む。管状臓器は、食道、血管、または胆管の損傷した部分を置き換えるために使用され得る。皮膚移植片は、火傷だけでなく、損傷した腸への包帯材として、または横隔膜ヘルニア等のある特定の欠陥を閉じるために使用され得る。移植片は、死体からであるか生きた提供者からであるかを問わず、ヒトを含む任意の哺乳動物源から得られる。いくつかの場合において、提供者および受容者は、同じ対象である。いくつかの実施形態において、移植片は、骨髄または器官、例えば心臓であり、移植片の提供者および宿主は、ＨＬＡクラスＩＩ抗原について一致させられる。
【０２０７】
組織球性細胞および樹枝状細胞新生物は、リンパ球への抗原の処理および提示において大きな役割を担う食細胞および補助細胞から生じる。樹枝状細胞におけるプロテアソーム含量の枯渇は、その抗原誘導反応を改変することが示されている（Ｃｈａｐａｔｔｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００６）６６：５４６１−５４６８）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、組織球性細胞および樹枝状細胞新生物を有する対象に投与され得る。組織球性細胞および樹枝状細胞新生物は、組織球肉腫、ランゲルハンス細胞組織球増加症、ランゲルハンス細胞肉腫、指状嵌入性樹枝状細胞肉腫／腫瘍、濾胞樹状細胞肉腫／腫瘍および不特定樹枝状細胞肉腫を含む。
【０２０８】
プロテアソームの阻害は、細胞型が増殖する疾患および免疫疾患の処置に有益であることが示されており、これにより、いくつかの実施形態において、治療上効果的な量の、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、原発性免疫不全障害（ＰＩＤ）に関連したリンパ増殖性疾患（ＬＰＤ）の処置が提供される。Ｂ細胞およびＴ細胞新生物ならびにリンパ腫を含むリンパ増殖性疾患の発生の増加に関連した免疫不全の最も一般的な臨床状況は、原発性免疫不全症候群および他の原発性免疫疾患、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染、固形臓器または骨髄同種移植を受けた対象における医原性免疫抑制、ならびにメトトレキサート処置に関連した医原性免疫抑制である。ＬＰＤに一般的に関連した他のＰＩＤは、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴ）、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳ）、分類不能型免疫不全症（ＣＶＩＤ）、重症複合型免疫不全症（ＳＣＩＤ）、Ｘ連鎖リンパ増殖性疾患（ＸＬＰ）、ナイミーヘン染色体不安定症候群（ＮＢＳ）、高ＩｇＭ症候群、および自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）であるが、それらに限定されない。
【０２０９】
プロテアソーム阻害はまた、ＮＦ−κＢ活性化の阻害およびｐ５３レベルの安定化に関連している。したがって、本明細書において提供される組成物はまた、ＮＦ−κＢ活性化を阻害し、細胞培養物中のｐ５３レベルを安定化するために使用され得る。ＮＦ−κＢは、炎症の主要調節因子であるため、抗炎症治療的介入のための魅力的な標的である。したがって、本明細書において提供されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、ＣＯＰＤ、乾癬、喘息、気管支炎、気腫、および嚢胞性線維症を含むがそれらに限定されない、炎症に関連した状態の処置に有用となり得る。
【０２１０】
ペプチドエポキシケトン化合物を含む開示されるリポソーム組成物は、筋肉消耗のように、プロテアソームのタンパク質分解機能により直接媒介される、またはＮＦ−κＢのように、プロテアソームにより処理されるタンパク質により間接的に媒介される状態を処置するために使用され得る。プロテアソームは、細胞制御（例えば、細胞周期、遺伝子転写、および代謝経路）、細胞間連絡、ならびに免疫反応（例えば、抗原提示）に関連するタンパク質（例えば、酵素）の急速な排除および翻訳後処理に関与する。以下で考察される具体例は、β−アミロイドタンパク質および調節タンパク質、例えばサイクリンおよび転写因子ＮＦ−κＢを含む。
【０２１１】
本発明の一実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、癌の処置に有用である。本発明の化合物はまた、ＮＦ−κＢ活性化を阻害し、細胞培養物中のｐ５３レベルを安定化するために使用され得る。
【０２１２】
本発明の一実施形態において、リポソーム組成物は、ＣＯＰＤ、乾癬、気管支炎、気腫、および嚢胞性線維症を含むがそれらに限定されない、慢性炎症に関連した状態の処置における抗炎症治療的介入に使用され得る。
【０２１３】
本発明の別の実施形態において、リポソーム組成物は、卒中；神経系への虚血性損傷；神経外傷（例えば衝撃による脳の損傷、脊髄損傷、および神経系への外傷性損傷）；多発性硬化症およびお他の免疫媒介型ニューロパチー（例えばギラン−バレー症候群及びその異型、急性運動軸策性ニューロパチー、急性炎症性脱髄性多発性神経炎、およびフィッシャー症候群）；ＨＩＶ／ＡＩＤＳの痴呆症候群；アキソノミー；尿病性ニューロパチー；パーキンソン病；ハンチントン病；多発性硬化症；細菌性、寄生虫性、真菌性、およびウイルス性髄膜炎；脳炎；血管性痴呆；多発性梗塞性痴呆；レヴィー小体性痴呆；ピックス病などの前葉体性痴呆；皮質下痴呆（例えばハンチントンまたは進行性核上麻痺）；局所性皮質性萎縮症候群（例えば原発性感情鈍麻）；代謝毒性痴呆（例えば慢性甲状腺機能低下症またはＢ１２欠損症）；ならびに感染によって引き起こされる痴呆（例えば梅毒または慢性髄膜炎）を含むがそれらに限定されない、神経変性疾患および状態を処置するために使用され得る。
【０２１４】
アルツハイマー病は、老人斑および脳血管におけるβ−アミロイドタンパク質（β−ＡＰ）の細胞外沈着物を特徴とする。β−ＡＰは、アミロイドタンパク質前駆体（ＡＰＰ）から得られる３９から４２アミノ酸のペプチド断片である。ＡＰＰの少なくとも３つのアイソフォームが知られている（６９５、７５１、および７７０アミノ酸）。ｍＲＮＡの選択的スプライシングがアイソフォームを生成し、正常処理はβ−ＡＰ配列の部分に影響し、それによりβ−ＡＰの生成を防止する。プロテアソームによる異常タンパク質処理は、アルツハイマー脳における多量のβ−ＡＰに寄与すると考えられている。ラットにおけるＡＰＰ処理酵素は、約１０種類の異なるサブユニット（２２ｋＤａ〜３２ｋＤａ）を含有する。２５ｋＤａのサブユニットは、Ｘ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−Ｘ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−ＳｅｒのＮ末端配列を有し、これは、ヒトマクロパインのβ−サブユニットと同一である（Ｋｏｊｉｍａ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｄ．Ｅｕｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．３０４：５７−６０（１９９２））。ＡＰＰ処理酵素は、Ｇｌｎ１５−−Ｌｙｓ１６結合で切断し、酵素はまた、カルシウムイオンの存在下において、Ｍｅｔ−１−−Ａｓｐ１結合およびＡｓｐ１−−Ａｌａ２結合で切断して、β−ＡＰの細胞外ドメインを放出する。
【０２１５】
本発明のさらに別の実施形態において、リポソーム組成物は、対象に、効果的な量の本明細書において開示されるペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物を投与することを含む、アルツハイマー病の処置として使用され得る。そのような場合、リポソーム組成物は、β−ＡＰ処理速度を低減し、β−ＡＰプラーク形成速度を低減し、β−ＡＰ生成速度を低減し、アルツハイマー病の臨床兆候を低減する。
【０２１６】
プロテアソームは、網状赤血球の成熟化および線維芽細胞の増殖において、多くのタンパク質を分解する。インスリンまたは血清が欠乏した細胞において、タンパク質分解の速度はほぼ倍増する。プロテアソームの阻害は、タンパク質分解を低減し、それにより、筋肉タンパク質損失および腎臓または肝臓への窒素負荷の両方を低減する。本明細書において提供されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、癌、慢性感染性疾患、熱、筋肉の不使用（萎縮症）および脱神経、神経損傷、絶食、アシドーシスに関連する腎不全、ならびに肝不全等の状態の処置に有用である。例えば、米国特許第５，３４０，７３６号を参照されたい。処置の方法は、細胞における筋肉タンパク質分解の速度を低減することと、細胞内タンパク質分解の速度を低減することと、細胞内のｐ５３タンパク質の分解の速度を低減することと、ｐ５３関連癌の成長を阻害することとを含む。これらの方法はそれぞれ、細胞（ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ、例えば対象における筋肉）を、効果的な量の本明細書において開示される薬学的リポソーム組成物に接触させることを含む。
【０２１７】
本発明の他の実施形態は、悪液質および筋肉消耗疾患、癌、慢性感染性疾患、熱、筋肉の不使用（萎縮症）および脱神経、神経損傷、絶食、アシドーシスに関連する腎不全、糖尿病、ならびに肝不全を処置するための方法に関する。本発明の実施形態は、細胞における筋肉タンパク質分解の速度を低減するため、細胞内タンパク質分解の速度を低減するため、細胞内のｐ５３タンパク質の分解の速度を低減するため、およびｐ５３関連癌の成長を阻害するための方法を包含する。
【０２１８】
線維症は、線維芽細胞の過剰増殖性の成長から生じる瘢痕組織の過剰および持続性の形成であり、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路の活性化に関連する。線維症は、細胞外基質の広範囲の堆積が関与し、事実上任意の組織内で、またはいくつかの異なる組織にわたって生じ得る。通常、ＴＧＦ−β刺激後に標的遺伝子の転写を活性化する細胞内シグナル伝達タンパク質（Ｓｍａｄ）のレベルは、プロテアソーム活性により調節される。しかしながら、ＴＧＦ−βシグナル伝達成分の分解の促進が、癌および他の過剰増殖状態において観察されている。
【０２１９】
プロテアソームにより処理される別のタンパク質は、Ｒｅｌタンパク質ファミリーのメンバーであるＮＦ−κＢである。転写活性化因子タンパク質のＲｅｌファミリーは、２つの群に分けることができる。第１の群は、タンパク質分解処理を必要とし、ｐ５０（ＮＦ−κＢ１、１０５ｋＤａ）およびｐ５２（ＮＦ−κ２、１００ｋＤａ）を含む。第２の群は、タンパク質分解処理を必要とせず、ｐ６５（ＲｅｌＡ、Ｒｅｌ（ｃ−Ｒｅｌ）、およびＲｅｌＢ）を含む。ホモ二量体およびヘテロ二量体の両方が、Ｒｅｌファミリーメンバーにより形成され得、例えば、ＮＦ−κＢは、ｐ５０〜ｐ６５ヘテロ二量体である。ＩκＢおよびｐ１０５のリン酸化およびユビキチン化の後、２つのタンパク質がそれぞれ分解および処理され、細胞質から核に移行する活性ＮＦ−κＢを生成する。また、ユビキチン化ｐ１０５は、精製プロテアソームにより処理される（Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７８：７７３−７８５（１９９４））。活性ＮＦ−κＢは、他の転写活性化因子、および例えばＨＭＧ  Ｉ（Ｙ）と立体特異的エンハンサー複合体を形成し、特定遺伝子の選択的発現を誘引する。
【０２２０】
ＮＦ−κＢは、免疫および炎症反応、ならびに分裂事象に関与する遺伝子を調節する。例えば、ＮＦ−κＢは、免疫グロブリン軽鎖κ遺伝子、ＩＬ−２受容体α鎖遺伝子、クラスＩ主要組織適合性複合体遺伝子、ならびに、例えばＩＬ−２、ＩＬ−６、顆粒球コロニー刺激因子、およびＩＦＮ−βをコードする複数のサイトカイン遺伝子の発現に必要である（Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７８：７７３−７８５（１９９４））。いくつかの実施形態は、ＩＬ−２、ＭＨＣ−Ｉ、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＦＮ−βまたは他の以前に言及されたタンパク質のいずれかの発現のレベルに影響を与える方法が提供され、各方法は、対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む。ｐ５０を含む複合体は、急性炎症および免疫反応の急速な調節因子である（Ｔｈａｎｏｓ，Ｄ．ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．，Ｃｅｌｌ  ８０：５２９−５３２（１９９５））。
【０２２１】
ＮＦ−κＢはまた、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、ＩＣＡＭ、およびＶＣＡＭ−１をコードする細胞接着遺伝子の発現に関与する（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｔ．，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．６８：４９９−５０８（１９９３））。いくつかの実施形態において、細胞接着（例えば、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、ＩＣＡＭ、またはＶＣＡＭ−１により媒介される細胞接着）を阻害するための方法であって、細胞を、効果的な量の、本明細書において開示されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に接触させる（または対象に投与する）ことを含む方法が提供される。
【０２２２】
本発明のある特定の実施形態は、過剰増殖状態、例えば糖尿病性網膜症、黄斑変性、糖尿病性ネフロパシー、糸球体硬化症、ＩｇＡネフロパシー、肝硬変、胆管閉鎖症、鬱血性心不全、強皮症、放射線誘導線維症、ならびに肺線維症（特発性肺線維症、膠原血管病、サルコイドーシス、間質性肺疾患、および外因性肺障害）を処置するための方法に関する。火傷患者の処置は、多くの場合線維症により妨げられ、したがって、本発明の追加の実施形態は、火傷の処置のための、ペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物の局所的または全身投与である。手術後の創縫合は、多くの場合、外観を損なう瘢痕を伴うが、これは線維症の阻害により予防され得る。したがって、ある特定の実施形態において、本発明は、瘢痕化の予防または低減のための方法に関する。
【０２２３】
虚血および再かん流傷害は、体の組織に到達する酸素が欠乏した状態である低酸素症をもたらす。この状態は、Ｉκ−Ｂαの分解の増加を引き起こし、それによりＮＦ−κＢの活性化をもたらす。低酸素症をもたらす損傷の重症度は、プロテアソーム阻害剤の投与により低減され得ることが示されている。したがって、本明細書において、虚血状態または再かん流傷害を処置する方法であって、そのような処置を必要とする対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。
【０２２４】
本発明の特定の実施形態は、体の組織に到達する酸素の欠乏である低酸素症に関連した虚血および再かん流傷害を処置する方法に関する。そのような傷害または状態の例は、急性冠症候群（不安定プラーク）、動脈閉塞性疾患（心臓、脳、末梢動脈および血管閉塞）、アテローム性動脈硬化（冠動脈硬化、冠動脈疾患）、梗塞、心不全、膵臓炎、心筋肥大、狭窄、および再狭窄を含むが、それらに限定されない。
【０２２５】
ＮＦ−κＢはまた、ＨＩＶエンハンサー／プロモーターに特異的に結合する。ｍａｃ２３９のＮｅｆと比較すると、ｐｂｊ１４のＨＩＶ調節タンパク質Ｎｅｆは、タンパク質キナーゼ結合を制御する領域において、２つのアミノ酸だけ異なる。タンパク質キナーゼは、ＩκＢのリン酸化をシグナル伝達し、ユビキチン−プロテアソーム経路を介してＩκＢ分解を誘発すると考えられる。分解後、ＮＦ−κＢは核内に放出され、そのようにしてＨＩＶの転写を向上させる（Ｃｏｈｅｎ，Ｊ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６７：９６０（１９９５））。本明細書において、対象におけるＨＩＶ感染を阻害または低減するための方法、およびウイルス遺伝子発現のレベルを低下させるための方法が提供され、各方法は、対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む。
【０２２６】
本発明の２つのさらなる実施形態は、対象におけるＨＩＶ感染を阻害または低減するための方法、およびウイルス遺伝子発現のレベルを低下させるための方法である。
【０２２７】
ウイルス感染は、多くの疾患の病理に寄与する。持続的な心筋炎および拡張型心筋症等の心臓状態は、コクサッキーウイルスＢ３に関連づけられている。感染したマウスの心臓の比較全ゲノムマイクロアレイ分析において、特定のプロテアソームサブユニットが、慢性心筋炎に罹患したマウスの心臓において均一に上方調節されていた（Ｓｚａｌａｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６８：１５４２−５２（２００６））。いくつかのウイルスは、ウイルスがエンドソームからサイトゾル内に放出されるウイルス侵入ステップにおいて、ユビキチン−プロテアソーム系を利用した。マウス肝炎（ＭＨＶ）は、コロナウイルス科に属し、これはまた、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロンウイルスを含む。ＹｕおよびＬａｉ（Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７９：６４４−６４８（２００５））は、ＭＨＶに感染した細胞のプロテアソーム阻害剤による処置が、ウイルス複製の減少をもたらし、未処置細胞のものと比較したウイルス価の低減に関連することを示した。ヘパドナウイルス科のメンバーであるヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、同様に、伝播するのにウイルスコードエンベロープタンパク質を必要とする。プロテアソーム分解経路の阻害は、分泌されるエンベロープタンパク質の量の大幅な低減をもたらす（Ｓｉｍｓｅｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７９：１２９１４−１２９２０（２００５））。ＨＢＶに加えて、他の肝炎ウイルス（Ａ、Ｃ、ＤおよびＥ）もまた、分泌、形態形成および発病にユビキチン−プロテアソーム分解経路を利用し得る。したがって、ある特定の実施形態において、ＳＡＲＳまたはＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型およびＥ型肝炎等のウイルス感染を処置するための方法であって、細胞を、効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に接触させる（または対象に投与する）ことを含む方法が提供される。
【０２２８】
ＴＮＦα等のリポ多糖体（ＬＰＳ）誘導サイトカインの過剰産生は、敗血ショックに関連したプロセスの中心となると考えられている。さらに、ＬＰＳによる細胞の活性化における第１のステップは、特定膜受容体へのＬＰＳの結合であることが、一般に認められている。２０Ｓプロテアソーム複合体のα−およびβ−サブユニットは、ＬＰＳ結合タンパク質として特定されており、これは、ＬＰＳ誘導シグナル伝達が、敗血症の処置または予防における重要な治療標的となり得ることを示唆している（Ｑｕｒｅｓｈｉ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１７１：１５１５−１５２５（２００３））。
【０２２９】
ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、敗血ショックを予防および／または処置するためのＴＮＦαの阻害に使用され得る。
【０２３０】
細胞内タンパク質分解は、Ｔリンパ球への提示のための小ペプチドを生成し、ＭＨＣクラスＩ媒介免疫応答を誘引する。免疫系は、ウイルス感染している、または発癌性形質転換を生じている自己細胞をスクリーニングする。一実施形態は、細胞における抗原提示を阻害するための方法であって、細胞を、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に暴露することを含む方法である。さらなる実施形態は、対象の免疫系を抑制する（例えば、移植拒絶反応、アレルギー、喘息を阻害する）ための方法であって、対象に、治療上効果的な量の、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法である。本明細書において提供されるリポソーム組成物はまた、紅斑性狼瘡、関節リウマチ、多発性硬化症、ならびに潰瘍性大腸炎およびクローン病等の炎症性腸疾患等の自己免疫疾患を処置するために使用され得る。
【０２３１】
別の実施形態は、プロテアソームまたは多触媒性活性を有する他のＮｔｎにより産生される抗原ペプチドのレパートリーを改変するための方法である。例えば、２０ＳプロテアソームのＰＧＰＨ活性が選択的に阻害される場合、いかなる酵素阻害もなしに、または、例えば、プロテアソームのキモトリプシン様活性の選択的阻害と共に産生および提示されるものとは異なるセットの抗原ペプチドが、プロテアソームにより産生され、細胞の表面上のＭＨＣ分子において提示される。
【０２３２】
本発明の追加の実施形態は、細胞における抗原提示を阻害するための方法である。そのような方法において、リポソーム組成物は、アレルギー、喘息、器官／組織拒絶反応（移植片対宿主病）、ならびに、紅斑性狼瘡、関節リウマチ、乾癬、多発性硬化症、および炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病）を含むがそれらに限定されない自己免疫疾患等の免疫関連状態を処置するために使用される。したがって、さらなる実施形態は、対象の免疫系を抑制する（例えば、移植拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、および喘息を阻害する）ための方法であって、対象に、効果的な量の、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法である。
【０２３３】
ある特定のプロテアソーム阻害剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでのユビキチン化ＮＦ−κＢの分解および処理の両方をブロックする。プロテアソーム阻害剤はまた、ＩκＢ−α分解およびＮＦ−κＢ活性化をブロックする（Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ７８：７７３−７８５（１９９４）、およびＴｒａｅｎｃｋｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：５４３３−５４４１（１９９４））。いくつかの実施形態において、ＩκＢ−α分解を阻害するための方法であって、細胞を、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に接触させることを含む方法が提供される。さらなる実施形態は、細胞、筋肉、器官、または対象におけるＮＦ−κＢの細胞内含有量を低減するための方法であって、細胞、筋肉、器官、または対象を、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に接触させることを含む方法である。
【０２３４】
タンパク質分解処理を必要とする他の真核生物転写因子は、基本転写因子ＴＦＩＩＡ、単純ヘルペスウイルスＶＰ１６付属タンパク質（宿主細胞因子）、ウイルス誘導ＩＦＮ調節因子２タンパク質、および膜結合ステロール調節要素結合タンパク質１を含む。
【０２３５】
さらに、本明細書において、サイクリン依存性真核細胞周期に影響を与えるための方法であって、細胞（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）を、本明細書において開示されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に暴露することを含む方法が提供される。サイクリンは、細胞周期制御に関連するタンパク質である。プロテアソームは、サイクリンの分解に関与する。サイクリンの例は、有糸分裂サイクリン、Ｇ１サイクリン、およびサイクリンＢを含む。サイクリンの分解により、細胞は、１つの細胞周期段階（例えば、有糸分裂）から出て、別の段階（例えば、細胞分裂）に入ることができる。全てのサイクリンは、ｐ３４ｃｄｃ２タンパク質キナーゼまたは関連キナーゼに関連していると考えられる。タンパク質分解標的化シグナルは、アミノ酸４２−ＲＡＡＬＧＮＩＳＥＮ−５０（破壊ボックス）に限局される。サイクリンは、ユビキチンリガーゼの影響を受けやすい形態に変換されること、または、サイクリン特異的リガーゼは、有糸分裂の間活性化されることの証拠がある（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．，Ｃｅｌｌ，７９：１３−２１（１９９４））。プロテアソームの阻害は、サイクリン分解を阻害し、したがって、例えばサイクリン関連癌における細胞増殖を阻害する（Ｋｕｍａｔｏｒｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：７０７１−７０７５（１９９０））。本明細書において、対象における増殖性疾患（例えば、癌、乾癬、または再狭窄）を処置するための方法であって、対象に、治療上効果的な量の本明細書において開示される組成物を投与することを含む方法が提供される。また、本明細書において、対象におけるサイクリン関連炎症を処置するための方法であって、対象に、治療上効果的な量の、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。
【０２３６】
追加の実施形態は、腫瘍性タンパク質のプロテアソーム依存的調節に影響を与えるための方法、および癌増殖を処置または阻害する方法を含み、各方法は、細胞（ｉｎ  ｖｉｖｏ、例えば対象内、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ）を、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に暴露することを含む。ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８誘導Ｅ６タンパク質は、ＡＴＰおよびユビキチン依存的複合体化、ならびに粗網状赤血球溶血液中のｐ５３の分解を刺激する。劣性癌遺伝子ｐ５３は、突然変異熱不安定性Ｅ１を有する細胞株において、非許容温度で蓄積することが示されている。ｐ５３のレベルの上昇は、アポトーシスをもたらし得る。ユビキチン系により分解されるプロト腫瘍性タンパク質は、ｃ−Ｍｏｓ、ｃ−Ｆｏｓ、およびｃ−Ｊｕｎを含む。一実施形態は、ｐ５３関連アポトーシスを処置するための方法であって、対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法である。
【０２３７】
本発明の一実施形態は、ＩκＢ−α分解を阻害するための方法であって、細胞をリポソーム組成物と接触させることを含む方法である。さらなる実施形態は、細胞、筋肉、器官、または対象におけるＮＦ−κＢの細胞内含有量を低減するための方法であって、細胞、筋肉、器官、または対象を、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物に接触させることを含む方法である。
【０２３８】
本発明のさらなる実施形態は、対象における増殖性疾患（例えば、癌、乾癬、または再狭窄）を処置するための方法であって、対象に、効果的な量のリポソーム組成物を投与することを含む方法である。本発明はまた、対象におけるサイクリン関連炎症を処置するための方法を包含する。
【０２３９】
本発明の別の実施形態は、ｐ５３関連アポトーシスを処置するための方法である。
【０２４０】
これらの寄生虫のプロテアソームは、主として、細胞分化および複製活性に関連すると考えられている（Ｐａｕｇａｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．１９（２）：５５−５９（２００３））。さらに、エントアメーバ種は、プロテアソーム阻害剤に暴露されると、被嚢形成能力を失うことが示されている（Ｇｏｎｚａｌｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．２８，Ｓｐｅｃ  Ｎｏ：１３９−１４０（１９９７））。寄生虫疾患の処置におけるプロテアソーム阻害剤として有用な他の化合物は、ＷＯ９８／１０７７９に記載されている。
【０２４１】
ある特定の実施形態において、開示される組成物は、寄生虫内でプロテアソーム活性を不可逆的に阻害する。そのような不可逆的阻害は、赤血球および白血球において回復することなく、酵素活性におけるシャットダウンを誘導することが示されている。ある特定のそのような実施形態において、血液細胞の長い半減期は、寄生虫への反復的暴露に対する治療に関して、長期的保護を提供し得る。ある特定の実施形態において、血液細胞の長い半減期は、将来の感染に対する化学的予防に関して、長期的保護を提供し得る。
【０２４２】
ある特定の実施形態において、本発明のリポソーム組成物は、マラリヤ属（マラリアを引き起こす熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、および卵形マラリア原虫を含む）、トリパノソーマ属（シャーガス病を引き起こすクルーズトリパノソーマ、およびアフリカ睡眠病を引き起こすブルーストリパノソーマを含む）、リーシュマニア属（アマゾンリーシュマニア、ドノバンリーシュマニア、幼児リーシュマニア、メキシコリーシュマニア等を含む）、ニューモシスチスカリニ（ＡＩＤＳおよび他の免疫抑制患者において肺炎を引き起こすことが知られている原生動物）、トキソプラズマ原虫、赤痢アメーバ、エントアメーバインバデンス、およびランブル鞭毛虫から選択される寄生原生動物により引き起こされる、ヒトにおける感染症等の寄生虫感染の処置に有用である。ある特定の実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物を含む開示されるリポソーム組成物は、プラスモディウムヘルマニ、クリプトスポリジウム属、単包条虫、アイメリアテネラ、ザルコシスティスニューローナ、およびアカパンカビから選択される寄生原生動物により引き起こされる、動物および家畜における寄生虫感染の処置に有用である。
【０２４３】
原核生物は、真核生物２０Ｓプロテアソーム粒子と同等のものを有する。原核生物２０Ｓ粒子のサブユニット組成は、真核生物のサブユニット組成よりも単純であるにもかかわらず、この粒子は、同様の様式でペプチド結合を加水分解する能力を有する。例えば、ペプチド結合への求核性攻撃は、β−サブユニットのＮ末端上のトレオニン残基を介して生じる。いくつかの実施形態において、原核生物感染を処置する方法であって、対象に、治療上効果的な量の、本明細書において開示されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。原核生物感染は、マイコバクテリア（例えば、結核、ハンセン病もしくはブルーリ潰瘍）または古細菌によりもたらされる疾患を含み得る。
【０２４４】
また、２０Ｓプロテアソームに結合する阻害剤は、骨組織培養における骨形成を刺激することが示されている。さらに、そのような阻害剤がマウスに全身投与された場合、ある特定のプロテアソーム阻害剤は、骨量および骨形成速度を７０％超増加させた（Ｇａｒｒｅｔｔ，Ｉ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１：１７７１−１７８２（２００３））ことから、ユビキチン−プロテアソーム機構が骨芽細胞分化および骨形成を調節することが示唆されている。したがって、ペプチドエポキシケトン化合物を含む開示されるリポソーム組成物は、骨粗しょう症等の骨損失に関連した疾患の処置および／または予防において有用となり得る。
【０２４５】
本明細書において、癌、自己免疫疾患、移植片または移植関連状態、神経変性疾患、線維症関連状態、虚血関連状態、感染症（ウイルス、寄生虫、または原核生物）、および骨損失に関連する疾患から選択される疾患または状態を処置するための方法であって、治療上効果的な量の、本明細書において提供されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を投与することを含む方法が提供される。
【０２４６】
骨組織は、骨細胞を刺激するための能力を有する因子の優れた源である。したがって、ウシ骨組織の抽出物は、骨の構造的完全性の維持を担う構造タンパク質だけでなく、骨細胞の増殖を刺激し得る生物活性骨成長因子を含有する。これらの後者の因子には、最近説明された、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）と呼ばれるタンパク質のファミリーがある。これらの成長因子は全て、他の種類の細胞、および骨細胞に対する効果を有し（例えば、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）が、発生中に毛包内に差次的に発現することの証拠を説明している、Ｈａｒｄｙ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓ  Ｇｅｎｅｔ  ８：５５−６１（１９９２）を参照されたい）、成熟毛包内のＢＭＰ−２発現は、成熟化の間、および細胞増殖期間後にも生じる（ＢＭＰ−２および骨細胞内の他の物質の発現に対するＴＧＦ−βの効果を説明している、Ｈａｒｄｙ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９２、上記参照）、Ｈａｒｒｉｓ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ  ９：８５５−８６３（１９９４））。したがって、本明細書において提供されるようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物はまた、毛包成長刺激にも有用となり得る。
【０２４７】
本発明の一実施形態において、リポソーム組成物は、骨粗しょう症等の骨損失に関連した疾患の処置および／または予防において有用となり得る。
【０２４８】
最後に、ペプチドエポキシケトン化合物を含む開示されるリポソーム組成物はまた、プロテアソームを含むＮｔｎヒドロラーゼにより処理されるタンパク質（例えば、酵素、転写因子）のスクリーニングのための診断薬（例えば、診断キット内の、または臨床検査室における使用のための）として有用である。開示されるリポソーム組成物はまた、Ｘ／ＭＢ１サブユニットまたはα鎖に特異的に結合するための、およびそれに関連したタンパク質分解活性を阻害するための研究試薬として有用である。例えば、プロテアソームの他のサブユニットの活性（およびその特異的阻害剤）が決定され得る。
【０２４９】
本発明の薬学的組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の実際の投薬レベルは、対象に毒性となることなく、特定の対象、組成、および投与形態に対する所望の治療反応を達成するのに効果的なペプチドエポキシケトン化合物の量を得るように変動され得る。
【０２５０】
薬学的に許容される混合物中のペプチドエポキシケトン化合物の濃度は、投与される化合物の用量、使用される化合物（複数を含む）の薬物動態学的特性、および投与経路を含むいくつかの因子に依存して変動する。一般に、本発明のリポソーム組成物は、非経口投与用の水溶液として提供され得る。典型的な用量範囲は、１日当たり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重のペプチドエポキシケトン化合物である。例示的な用量範囲は、約１０ｍｇ／ｍ２〜約１５０ｍｇ／ｍ２（ｍｇ／ｍ２、リポソーム組成物が投与される対象の体表面の平方メートル当たりのミリグラム）のペプチドエポキシケトン化合物、好ましくは約１５ｍｇ／ｍ２〜約７０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは約１５ｍｇ／ｍ２〜約５６ｍｇ／ｍ２である。本発明のリポソーム組成物の投与は、典型的には週１回または２回の静脈内投与であり、単回用量または分割用量で投与され得る。各分割用量は、同じまたは異なるペプチドエポキシケトン化合物を含有し得る。用量は、患者の健康全般、ならびに選択されたペプチドエポキシケトン化合物（複数を含む）の組成および投与経路を含む、いくつかの因子に依存する効果的な量である。本発明のリポソーム組成物の投薬形態（単位用量とも呼ばれる）は、典型的には、約２０ｍｇ〜約３００ｍｇのペプチドエポキシケトン化合物、好ましくは約３０ｍｇ〜約１４０ｍｇ、より好ましくは約３０ｍｇ〜約１１２ｍｇを含む使い捨てバイアルである。
【０２５１】
本発明の別の態様は、１種以上の他の治療薬剤がペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物と共に投与される併用処置を提供する。そのような併用処置は、処置の個々の成分の同時、逐次的、または別個の投薬により達成され得る。
【０２５２】
本発明のある特定の実施形態において、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物は、１種以上の他のプロテアソーム阻害剤（複数を含む）を含む併用処置の一部として使用される。
【０２５３】
他の実施形態において、本発明のリポソーム組成物は、化学療法薬を含む併用処置の一部である。好適な化学療法薬は、天然生成物、例えばビンカアルカロイド（すなわち、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンオレルビン）、パクリタキセル、エピジポドフィロトキシン（すなわち、エトポシド、テニポシド）、抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびイダルビシン）、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）およびマイトマイシン、酵素（全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、自身のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を枯渇させる、Ｌ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤、例えば窒素マスタード（メクロレタミン、シクロホスファミドおよびそのアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、スルホン酸アルキル（ブスルファン）、ニトロソ尿素（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びそのアナログ、ストレプトゾシン）、トラゼン−デカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖／抗有糸分裂抗代謝剤、例えば葉酸アナログ（メトトレキサート）、ピリミジンアナログ（フルオロウラシル、フロクスウリジン、およびシタラビン）、プリンアナログ及び関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２−クロロデオキシアデノシン）；アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール、エキセメスタンおよびレトロゾール）；ならびに白金配位複合体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトーテン、アミノグルテチミド；ヒストン脱アセチチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤（トリコスタチン、酪酸ナトリウム、アピシダン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド）；ホルモン（すなわち、エストロゲン）およびホルモン作動薬、例えば黄体化ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作動薬（ゴセレリン、ロイプロリド、およびトリプトレリン）を含み得る。他の化学療法剤は、レナリドミド、メクロレタミン、カンプトテシン、イホスファミド、タモキシフェン、ラロキシフェン、ゲムシタビン、ナベルビン、または前述のものの任意のアナログまたは誘導改変体を含み得る。
【０２５４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のヒストン脱アセチチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤（例えば、トリコスタチン、酪酸ナトリウム、アピシダン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド（「ＳＡＨＡ」（ボリノスタット））、トリコスタチンＡ、デプシペプチド、アピシジン、Ａ−１６１９０６、スクリプタイド、ＰＸＤ−１０１、ＣＨＡＰ、酪酸、デプデシン、オキサムフラチン、フェニルブチレート、バルプロ酸、ＭＳ２７５（Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシ−カルボニル）アミノメチル］ベンズアミド）、ＬＡＱ８２４／ＬＢＨ５８９、ＣＩ９９４、ＭＧＣＤ０１０３、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット；例えば、ＳＡＨＡ、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット）と併せて投与される。
【０２５５】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のＤＮＡ結合／細胞毒性薬（例えば、ザリプシス（Ｚａｌｙｐｓｉｓ））と併せて投与される。
【０２５６】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のタキサン（例えば、ドセタキセル、および／またはパクリタキセル）と併せて投与される。
【０２５７】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、デキサメタゾンと併せて投与される。例えば、処置は、第１の処置サイクルの間、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の全用量の前に、および、用量増加を伴う処置サイクルの間、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の全用量の前に、デキサメタゾン４ｍｇを経口または静脈内で前投薬して、注入反応の発生および重篤性を低減することを含んでもよい。そのようなデキサメタゾン前投薬（例えば、４ｍｇ経口または静脈内）は、そのような反応が後続の処置サイクルの間に発生または再発する場合に施される。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、本発明は、処置を必要とする対象における癌（例えば、多発性骨髄腫または固形腫瘍）を処置する方法に関する。方法は、典型的には、治療上効果的な量の本発明の薬学的リポソーム組成物（例えば、カーフィルゾミブを含む）を投与することを含み、さらに、治療上効果的な量の化学療法剤の同時、逐次的、または別個の投与を含んでもよい。
【０２５９】
本発明のある特定の実施形態において、本明細書に記載のリポソーム組成物は、サイトカインを含む併用処置において使用される。サイトカインは、インターフェロン−γ、インターフェロン−α、およびインターフェロン−β；インターロイキン１〜８、１０、および１２；顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β；ならびにＴＧＦ−βを含むが、それらに限定されない。
【０２６０】
本発明の実施形態は、本明細書に記載のリポソーム組成物およびステロイドを組み込んだ併用処置を含む。好適なステロイドは、２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメタゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフプレドネート、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチル、フルコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコルタール、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、エタボン酸ロテプレドノール、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２５−ジエチルアミノアセテート、プレドニゾロンリン酸ナトリウム、プレドニゾン、プレドニバル、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、並びにそれらの塩及び／又は誘導体を含み得るが、それらに限定されない。
【０２６１】
本発明のある特定の実施形態において、本明細書に記載のリポソーム組成物は、免疫療法薬を含む併用処置の一部である。好適な免疫療法薬は、ＭＤＲ調整剤（ベラパミル、バルスポーダル、ビリコダル、タリクイダル、ラニクイダル）、シクロスポリン、サリドマイド、およびモノクローナル抗体を含み得るが、それらに限定されない。モノクローナル抗体は、裸であっても、または複合体化されてもよく、例えば、リツキシマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ゲムツヅマブオゾガマイシン、ベバシズマブ、セツキシマブ、エルロチニブおよびトラスツズマブであってもよい。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の本開示のリポソーム組成物は、レナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｕｍｍｉｔ、ＮＪ）と併せて投与される。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むポソーム組成物は、１種以上のトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド）と併せて投与される。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１つ以上のｍ−ＴＯＲ阻害剤（例えば、ＣＣＩ−７７９、ＡＰ２３５７３およびＲＡＤ−００１）と併せて投与される。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のタンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、イマチニブ、ダサチニブ、スニチニブ、パゾパニブ、およびニロチニブ；例えば、ソラフェニブ）と併せて投与される。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のＣＤＫ阻害剤（例えば、ジナシクリブ）と併せて投与される。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のＫＳＰ（Ｅｇ５）阻害剤（例えば、Ａｒｒａｙ  ５２０）と併せて投与される。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のＰＩ１３デルタ阻害剤（例えば、ＧＳ−１１０１  ＰＩ３Ｋ）と併せて投与される。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上の二重阻害剤：ＰＩ３Ｋデルタおよびガンマ阻害剤（例えば、ＣＡＬ−１３０）と併せて投与される。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のマルチキナーゼ阻害剤（例えば、ＴＧ０２）と併せて投与される。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、１種以上のＰＩ３Ｋデルタ阻害剤（例えば、ＴＧＲ−１２０２）と併せて投与される。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、以下と併せて投与される。
（ｉ）以下の１つ以上：
１種以上の第２の化学療法剤（例えば、１種以上のＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＳＡＨＡ、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット）；１種以上の窒素マスタード（例えば、メルファラン）；１種以上のＤＮＡ結合／細胞毒性薬（例えば、ジラプシス（Ｚｙｌａｐｓｉｓ））；１種以上のタキサン（例えば、ドセタキセル）；１種以上の抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびイダルビシン；例えば、ドキソルビシン）；
１種以上の他のペプチドエポキシケトン化合物（例えば、式（Ｉ）〜（Ｖ）の別の化合物）；
１種以上のサイトカイン；
１種以上の免疫療法薬（例えば、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））；
１種以上のトポイソメラーゼ阻害剤；
１種以上のｍ−ＴＯＲ阻害剤；
１種以上のタンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ）；
１種以上のＣＤＫ阻害剤（例えば、ジナシクリブ）；
１種以上のＫＳＰ（Ｅｇ５）阻害剤（例えば、Ａｒｒａｙ  ５２０）；
１種以上のＰＩ１３デルタ阻害剤（例えば、ＧＳ−１１０１  ＰＩ３Ｋ）；
１種以上の二重阻害剤：ＰＩ３Ｋデルタおよびガンマ阻害剤（例えば、ＣＡＬ−１３０）；
１種以上のマルチキナーゼ阻害剤（例えば、ＴＧ０２）；
１種以上のＰＩ３Ｋデルタ阻害剤（例えば、ＴＧＲ−１２０２）；
ならびに、
（ｉｉ）１種以上のステロイド（例えば、デキサメタゾン）。
【０２７２】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載のようなペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、以下と併せて投与される：
（ｉ）以下のうちの１つ：
１種以上の第２の化学療法剤（例えば、１種以上のＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＳＡＨＡ、ＡＣＹ−１２１５、パノビノスタット）；１種以上の窒素マスタード（例えば、メルファラン）；１種以上のＤＮＡ結合／細胞毒性薬（例えば、ジラプシス（Ｚｙｌａｐｓｉｓ））；１種以上のタキサン（例えば、ドセタキセル）；１種以上の抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびイダルビシン；例えば、ドキソルビシン）；
１種以上の他のペプチドエポキシケトン化合物（例えば、式（Ｉ）〜（Ｖ）の別の化合物）；
１種以上のサイトカイン；
１種以上の免疫療法薬（例えば、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））；
１種以上のトポイソメラーゼ阻害剤；
１種以上のｍ−ＴＯＲ阻害剤；
１種以上のタンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ）；
１種以上のＣＤＫ阻害剤（例えば、ジナシクリブ）；
１種以上のＫＳＰ（Ｅｇ５）阻害剤（例えば、Ａｒｒａｙ  ５２０）；
１種以上のＰＩ１３デルタ阻害剤（例えば、ＧＳ−１１０１  ＰＩ３Ｋ）；
１種以上の二重阻害剤：ＰＩ３Ｋデルタおよびガンマ阻害剤（例えば、ＣＡＬ−１３０）；
１種以上のマルチキナーゼ阻害剤（例えば、ＴＧ０２）；
１種以上のＰＩ３Ｋデルタ阻害剤（例えば、ＴＧＲ−１２０２）；
ならびに、
（ｉｉ）デキサメタゾン。
【０２７３】
本発明を支持するように行われた実験は、本発明のリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて増加した最大耐性用量（ＭＴＤ）を提供することを示した。例えば、マウスにおいて、第１のリポソーム組成物は、ＭＴＤにおける２．５倍の増加をもたらし、第２のリポソーム組成物は、５０％の増加をもたらした。ラットにおいては、リポソーム組成物は、耐容性の増加をもたらした（実施例４）。血液および組織内のプロテアソーム阻害により測定される生体内分布は、様々な組成物にわたって同様であった（実施例５、図２Ａ〜２Ｄ；実施例８、図３Ａ〜３Ｄ；実施例１１、図５Ａ〜５Ｄ）。さらに、本発明のリポソームペプチドエポキシケトン化合物組成物は、マウスおよびラットにおいて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比較して、それぞれ約３から５倍、および７倍増加した暴露（ＡＵＣ）を提供した。この増加した暴露は、血漿クリアランスの増加の結果であった（実施例６）。
【０２７４】
さらに、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、注射用非リポソームＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物と比較して、カーフィルゾミブの最大耐性用量（ＭＴＤ）を、マウスにおいて１０ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇに５０％増加させることにより、向上した耐容性を示した。これらの結果は、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、注射用非リポソームＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物と比べて、より低い最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）でより長期間にわたりカーフィルゾミブを放出することを示している。
【０２７５】
また、水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を有するリポソームを含むリポソーム組成物は、いくつかのマウス組織において、２４時間で遅延したプロテアソーム回復をもたらし、一方、現在の薬物製品（すなわち、注射用非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）は、投薬後２４時間までにプロテアソーム阻害からの回復をもたらした（実施例８、図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃ、図３Ｄ）。これらの結果は、リポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物の長期暴露を提供することを支持している。
【０２７６】
非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物中で送達された場合、カーフィルゾミブの血漿濃度は急速に降下し、投薬から１時間後では検出不可能であった（実施例１１、図６）。カーフィルゾミブが、リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物として送達された場合、全身暴露は、投薬から２４時間後までの間、検出可能な全薬物（封入または放出の両方）を伴って延長された（実施例１１、図６）。これらのデータは、リポソーム内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、非リポソームペプチドエポキシケトン化合物組成物と比べて、より大きな暴露およびより長期の循環をもたらしたことを示している。
【０２７７】
さらに、非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物中で送達された場合、カーフィルゾミブの血漿濃度は急速に降下し、投薬から１時間後には検出不可能であった（実施例９、図４）。カーフィルゾミブが、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物として送達された場合、全身暴露は、投薬から２４時間後までの間、検出可能な全薬物（封入および放出の両方）を伴って延長された（実施例９、図４）。これらのデータは、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、注射用の非リポソームペプチドエポキシケトン化合物組成物と比べて、大幅により大きな暴露およびより長期の循環をもたらしたことを示している。
【０２７８】
また、本発明のリポソーム組成物は、同じペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比較して、抗腫瘍効果を維持し、さらに、本発明のリポソーム組成物は、同じペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比較して、低減された投薬頻度で抗腫瘍効果を維持する（実施例１１、図７、図８；実施例１２、図９、図１０）。
【０２７９】
実施例１３は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む有利なリポソーム組成物のスクリーニングおよび選択のための例示的な基準を説明している。本発明のリポソーム組成物、および本発明の方法により生成されるリポソーム組成物は、例えば、薬物動態データ（例えば、血漿半減期および血漿濃度時間曲線下面積）、薬力学的プロファイル（例えば、生体内分布、最大ＣＴ−Ｌ活性阻害、および組織内での長期阻害）、ならびに抗腫瘍活性（例えば、ヒト腫瘍異種移植片げっ歯類試験において評価されるように）に基づいてスクリーニングされる。
【０２８０】
したがって、実施例におけるデータは、本発明のリポソーム組成物が、生体内分布に影響することなく、長期暴露をもたらしたことを示している。また、ペプチドエポキシケトン化合物の耐容性は、恐らくは高濃度の遊離薬物への暴露の低減に起因して、動物において向上した。本発明のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、現在の非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物と比べて、以下の改善を提供する：プロテアソーム回復を遅延させることによる、ペプチドエポキシケトン化合物の改善された薬力学的プロファイル；クリアランスを減少させ、血漿半減期を延長することによる、改善された薬物動態プロファイル；ペプチドエポキシケトン化合物の改善された安全性プロファイル（すなわち、耐容性）；および低減された投薬頻度。
【０２８１】
実験
以下の例は、当業者に、本発明を実践する方法の完全な開示および説明を提供するために記載されるものであり、本発明者が発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。使用される数値（例えば、量、濃度、パーセント変化等）に対する正確さを確保する努力がなされているが、いくつかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段に指定されない限り、温度は摂氏温度であり、気圧は、大気圧また大気圧に近い気圧である。
【０２８２】
本発明の方法を実践するために使用される組成物は、医薬製品に必要とされる含量および純度の仕様を満たす。
【０２８３】
１．０  材料および方法
リポソーム懸濁液の粒子サイズ低減
再水和されたリポソーム懸濁液の粒子サイズ低減または解砕は、超音波照射（２０分から６０分）により、または高圧均質化／マイクロフルイダイザ（３０，０００ｐｓｉまで）により行うことができる。
【０２８４】
ＨＰＬＣアッセイによる含量決定
リポソーム懸濁液は、有機溶媒、例えばメタノールと混合して、脂質を溶解し、カーフィルゾミブを遊離させることができる。溶液は、０．２μｍＰＴＦＥフィルタで濾過してから、ＨＰＬＣ分析することができる。
【０２８５】
カーフィルゾミブ含量は、表１中の方法に従い、過塩素酸ナトリウム緩衝液、０．１Ｍ、ｐＨ３．１およびアセトニトリル（５０：５０ｖ／ｖ）を使用して、勾配ＨＰＬＣアッセイにより決定することができる。
【０２８６】
【表３】
2015524411.tif 000014
【０２８７】
リポソーム形態
リポソーム組成物の小胞サイズ、形状および表面形態は、走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）および透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）により決定することができる。
【０２８８】
リポソーム／カーフィルゾミブ固体状態
偏光顕微鏡法、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）、および凍結割断電子顕微鏡法を使用して、小胞の相挙動を解明することができる。
【０２８９】
リポソームのサイズおよび分布
偏光顕微鏡法、動的光散乱、およびＴＥＭを使用して、リポソーム組成物のリポソームのサイズおよびサイズ分布範囲を決定することができる。
【０２９０】
遊離薬物の決定
カーフィルゾミブは、極めて低い水溶解度を有するため、遊離薬物に対する捕捉薬物の量は、偏光顕微鏡に基づいて定性的に決定することができる。遊離薬物は、その極めて低い水溶解度に起因して水性媒体中で沈殿し、その沈殿した物質は、偏光顕微鏡を使用して観察することができる。
【０２９１】
スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン
スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）、例えば、ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）は、合成的に生成することができ、および／または、例えばＬｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡから市販されている。
【０２９２】
２．０  実施例
実施例１
薄型脂質フィルム内に分子レベルで分散したカーフィルゾミブの調製
リポソームカーフィルゾミブを作製するために、示された比率の以下の材料を、好適なサイズの丸底フラスコに加えた：０．０５：０．９５〜０．１７：０．８３の薬物対総脂質重量比。総脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、および／またはスフィンゴミエリン（ＳＰＨ）を単独で、またはコレステロールと共に含む。コレステロールが添加される場合、リン脂質対コレステロール重量比（リン脂質：コレステロール）は、０．９：０．１〜０．５：０．５である。適切な体積のリン酸緩衝生理食塩水を使用して脂質フィルムを再水和し、それぞれ１ｍｇ／ｍＬおよび２ｍｇ／ｍＬの標的カーフィルゾミブ濃度をもたらした。
【０２９３】
ペグ化リポソームカーフィルゾミブを作製するために、示された比率の以下の材料を、好適なサイズの丸底フラスコに加えた：０．１１：０．８９〜０．１６：０．８４の薬物対総脂質重量比。リン脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＣ、ＳＰＨ、ＤＳＰＥ、またはそれらの組み合わせを含む。ＰＥＧ誘導体化脂質が存在する場合（例えば、ＰＥＧ誘導体化リン脂質）、全脂質の典型的な重量比（リン脂質：ＰＥＧ誘導体化脂質）は、０．９：０．１〜０．７５：０．２５である。さらに、コレステロールもまた添加される場合、総脂質の典型的な重量比（リン脂質：ＰＥＧ誘導体化脂質：コレステロール）は、０．８３３：０．０８３３：０．０８３３〜０．５７：０．１４：０．２９である。適切な体積のリン酸緩衝生理食塩水を使用して脂質フィルムを再水和し、２ｍｇ／ｍＬの標的カーフィルゾミブ濃度をもたらした。
【０２９４】
脂質およびカーフィルゾミブを溶解するために、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの溶解脂質を達成するために十分である適切な体積の有機溶媒（例えば、クロロホルム：ＭｅＯＨ（６０：４０または５０：５０ｖ／ｖ））を、フラスコに加えた。フラスコを５０〜１００ｒｐｍで回転するロータリーエバポレーターに取り付け、使用した脂質の最高ゲル−液晶相転移（Ｔｃ）温度より高く設定された水浴内に浸した。卵ホスファチジルコリンのＴｃは、室温を下回る（−１５℃〜−７℃）が、ＥＰＣに使用された浴の温度は、約４５℃から５０℃であった。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥに対しては、水浴温度は、それぞれ５５℃超、４１℃超、および５０℃超に設定されるべきである。
【０２９５】
フラスコを、水浴内で約１分間回転させ、平衡化した。１０トル未満の低圧まで徐々に真空引きし、沈殿物を伴わずに、フラスコの壁上に薄型乾燥フィルムを得た。いかなる残留溶媒も除去するために、フラスコを室温で数時間から一晩、高真空下に供した。
表２Ａは、例示的なリポソームカーフィルゾミブ組成物（リポソームカーフィルゾミブ組成物、Ｌ−ＣＦＺ；ペグ化リポソームカーフィルゾミブ組成物、ｐＬ−ＣＦＺ）および対照組成物（すなわち、「空の」リポソーム）の成分の公称濃度を示す。
【０２９６】
【表４】
2015524411.tif 000015
＊全薬物含量は、処理中に除去されなかった非封入薬物を含み得る。
【０２９７】
例示的なリポソーム組成物ＡからＨの公称濃度を、表２Ａに示す。
【０２９８】
図１中の薬物対脂質比（薬物：脂質比（％））は、薬物（カーフィルゾミブ）の重量プラスリン脂質の重量で除した薬物の重量（薬物重量／（薬物重量＋リン脂質重量））を採用することにより計算された。しかしながら、より従来的な計算は、薬物の重量対総脂質（例えば、リン脂質、親水性ポリマー誘導体化脂質、コレステロール；例えば、表３を参照されたい）の重量の比である。図１における特定の実験製剤に対する薬物：総脂質比のより従来的な計算は、表２Ｂに示される。
【０２９９】
【表５】
2015524411.tif 000016
2015524411.tif 000017
１＝（リン脂質重量／総脂質重量：ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ重量／総脂質重量：コレステロール重量／総脂質重量）
【０３００】
表３は、本発明のリポソームカーフィルゾミブ組成物および対照組成物（すなわち、「空の」リポソーム）において使用される成分の例示的範囲を示す。表中、好ましいリン脂質は、ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＣ、ＳＰＨ、ＤＳＰＥ、またはそれらの組み合わせを含む。
【０３０１】
【表６】
2015524411.tif 000018
2015524411.tif 000019
【０３０２】
実施例２
脂質水和
薄型フィルムが形成された丸底フラスコを、最高ゲル−液晶相転移より高く設定された水浴内に浸した。ＥＰＣが使用された場合、再水和は、室温で生じた。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥにおいては、水浴温度は、それぞれ５５℃超、４１℃超、および５０℃超に設定されるべきである。適切な体積のリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２、または注射用蒸留水を、脂質フィルムに添加し、所望の標的カーフィルゾミブ濃度または用量を達成した。必要に応じて、断続的にボルテックスしながらフラスコを穏やかに撹拌または振とうし、フラスコ壁からの水和の完了を促進するために、適切なＴｃ温度で１分から２分間、水浴内で超音波照射した。
【０３０３】
フィルムが分散した後、混合物をバイアルに移し、さらに２０分から４０分間、Ｔｃを超える水浴中で超音波照射し、リポソームをサイズ調整した。ＥＰＣが使用された場合、超音波照射器内の水浴の温度は、室温付近に維持された。水和後、脂質懸濁液は、僅かに濁った、または乳状の溶液として観察された。
【０３０４】
図１は、後述の試験において使用された本発明の例示的なリポソームカーフィルゾミブ組成物および対照組成物（すなわち、「空の」リポソーム）の組成を記載している。例示的リポソーム組成物ＡからＧの公称濃度は、表２Ａに示される。
【０３０５】
実施例３
リポソームの特性決定
再水和されたリポソーム懸濁液の粒子サイズ低減および／または解砕は、超音波照射（２０分から６０分）により行われた。
【０３０６】
例示的なリポソームカーフィルゾミブ組成物のＣＦＺ含量は、上述のようにＨＰＬＣにより決定された。リポソーム組成物は、脂質およびカーフィルゾミブを溶解するために、それぞれメタノール中に希釈した。溶液は、０．２μｍＰＴＦＥフィルタで濾過してから、ＨＰＬＣ分析した。調製されたロット（図１）の理論的および実験的リポソーム薬物濃度の間のパーセント差異は、典型的には２％以下であった（１２％の差異を有していた第１のロットの１つを除く）。ＨＰＬＣ分析の結果を、図１に示す。
【０３０７】
偏光顕微鏡に基づき、ほぼ全ての薬物がリポソーム内に捕捉されたことが、定量的に決定された。いかなる遊離薬物も、１μｇ／ｍＬ未満のその極めて低い水溶解度に起因して水性媒体中で沈殿し、いかなる沈殿した物質も、偏光顕微鏡下で容易に観察することができる。視認可能な沈殿物は、偏光顕微鏡下では観察されなかった。
【０３０８】
実施例４
リポソームカーフィルゾミブの耐容性
リポソーム（Ｌ−ＣＦＺ）またはペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ）カーフィルゾミブ組成物中に組み込まれたカーフィルゾミブの耐容性を、マウスおよびラットの両方において、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ、ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤとも呼ばれる）、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化されたカーフィルゾミブの注射用組成物を使用して達成された、最大耐性用量（ＭＴＤ）より上で評価した（例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）。
【０３０９】
実施例２において調製され、実施例３において特性決定されたリポソーム組成物を、適切な体積の水性媒体で再水和し、約１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌの範囲内の標的カーフィルゾミブ濃度を達成した（図１における組成データを参照されたい）。Ｌ−ＣＦＺおよびｐＬ−ＣＦＺ組成物の両方の毒性を、マウスにおいて試験した（表４）。Ｌ−ＣＦＺの毒性を、ラットにおいて試験した（表５）。
【０３１０】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（７〜８週齢；５／コホート）に、以下のように静脈内投薬した：１５ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（７．５ｍＬ／ｋｇ）；１０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（５ｍＬ／ｋｇ）；１０ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（５ｍＬ／ｋｇ）；１５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（７．５ｍＬ／ｋｇ）；１５ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（７．５ｍＬ／ｋｇ）；２０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１０ｍＬ／ｋｇ）；２０ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（１０ｍＬ／ｋｇ）；２５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１２．５ｍＬ／ｋｇ）；２５ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（１２．５ｍＬ／ｋｇ）；３０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１５ｍＬ／ｋｇ）；３５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１７．５ｍＬ／ｋｇ）；または空のリポソーム（１５ｍＬ／ｋｇ）。）。次いで、生存を７日間の期間にわたり監視した。マウスの生存率、リポソーム組成物、および処置に使用された投薬は、表４に示される通りであった。
【０３１１】
【表７】
2015524411.tif 000020
2015524411.tif 000021
【０３１２】
体重約２５０〜３００グラムの雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（５／コホート）に、以下を静脈内投薬した：８ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物）（５ｍＬ／ｋｇ）；８ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（４ｍＬ／ｋｇ）；１０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（５ｍＬ／ｋｇ）；１２．５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（６ｍＬ／ｋｇ）；または空のリポソーム（５ｍＬ／ｋｇ）。次いで、生存を７日間の期間にわたり監視した。投薬されたラットの生存率は、表５に示される通りであった。
【０３１３】
【表８】
2015524411.tif 000022
【０３１４】
リポソームカーフィルゾミブは、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ系カーフィルゾミブ組成物と比較して、マウスにおけるカーフィルゾミブの最大耐性用量（ＭＴＤ）を、リポソームカーフィルゾミブ組成物の場合約２．５倍、ペグ化リポソームカーフィルゾミブ組成物の場合０．５倍増加させることにより、耐容性を大幅に向上させた（表４）。ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化されたカーフィルゾミブ（７ｍｇ／ｋｇ）と比較して、リポソームカーフィルゾミブＬ−ＣＦＺ（１０ｍｇ／ｋｇ）において、ＭＴＤの若干の増加のみが観察された。
【０３１５】
これらのデータは、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて、ペプチドエポキシケトン化合物の最大耐性用量（ＭＴＤ）を増加させることにより、耐容性を大幅に向上させたことを示している。
【０３１６】
実施例５
ＣＦＺリポソーム組成物の薬力学反応
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化されたカーフィルゾミブ（ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）（  １０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化されたカーフィルゾミブの非リポソーム注射用組成物（例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）を使用）、空のリポソーム（組成物Ｄ）、ＣＦＺを含むリポソーム（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ）、およびペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ、組成物Ｅ）の薬力学反応を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて評価した。
【０３１７】
マウス（時点当たり３匹のマウス）に、１０ｍｇ／ｋｇの用量を、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で投与した。薬力学的試験のための血液試料および組織を、各組成物の投与から１時間後、８時間後、および２４時間後に採取した。プロテアソームのキモトリプシン様活性を定量するために、蛍光発生基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ［Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＡＭＣ｛ＡＭＣ＝７−アミド４−メチルクマリン｝］；Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、全血（主に赤血球）（図２Ａを参照されたい）、副腎（図２Ｂを参照されたい）、肝臓（図２Ｃを参照されたい）、および心臓（図２Ｄを参照されたい）におけるプロテアソーム活性の測定により、薬力学反応を決定した。全ての試料は、適切なビヒクル（すなわち、ＣＦＺを含まない対応する組成物）に対して正規化され、ビヒクルの時点は、投薬から１時間後であった。各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つの組織試料を評価した。
【０３１８】
１０ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投薬は、全血および全ての組織において、１時間以内に８０％超の急速なプロテアソーム阻害をもたらした。プロテアソーム阻害からの同様の完全な回復は、血液および心臓を除く試験した全ての組織において、投薬から２４時間後に観察され、全ての組成物に対して、８〜２４時間のｔ１／２で生じた。リポソームおよびペグ化リポソームの両方で心臓において観察されたより遅い回復は、心臓組織がデポとして機能し得ることを示唆している。予測されるように、カーフィルゾミブの不可逆的結合、および赤血球が新たなプロテアソームを合成しないことに起因して、血液においてはプロテアソーム活性の回復が見られなかった。
【０３１９】
これらの観察は、全血および組織におけるプロテアソーム活性の阻害が急速であり、組成物にわたって同様であることを示している。リポソーム組成物は、ＣＦＺの生体内分布に悪影響を及ぼさなかった。
【０３２０】
実施例６
リポソームＣＦＺの循環半減期
リポソームＣＦＺの循環半減期を、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化された５ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ（非リポソーム）または１５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブ組成物の単回静脈内注射後の、７〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３／時点）において評価した。
【０３２１】
ＣＦＺが、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤを含有する組成物中で５ｍｇ／ｋｇで送達された場合、血漿濃度は経時的に急速に降下し、６０分後には、定量限界未満（ＢＬＯＱ；定量限界−ＬＯＱ）まで低下する。最終血漿半減期（ｔ１／２）は、約２０分であった。
【０３２２】
【表９】
2015524411.tif 000023
2015524411.tif 000024
【０３２３】
リポソーム組成物中で１５ｍｇ／ｋｇで送達された場合（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ、またはｐＬ−ＣＦＺ−Ｃｈｏｌ、組成物Ｇを使用、投薬体積１５０μＬ）、投薬から６時間後に検出可能なＣＦＺが観察された（表７）。
【０３２４】
【表１０】
2015524411.tif 000025
【０３２５】
ｔ１／２は、リポソームＣＦＺおよびペグ化リポソームＣＦＺ組成物のそれぞれにおいて、それぞれ１４０分および２０１分であった。リポソームＣＦＺ組成物対ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤのデータは、ペプチドエポキシケトン化合物の循環半減期を大幅に向上させるリポソームの能力を明確に示している。
【０３２６】
リポソームＣＦＺの循環半減期はまた、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化された８ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ、または８ｍｇ／ｋｇリポソームＣＦＺの単回静脈内注射後の、体重約２５０〜３００グラムの雄Ｓｐｒａｇ−Ｄａｗｌｅｙラット（３／時点）においても評価した。マウスと同様に、ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤが送達された場合、ラットにおいて血漿濃度の急速な降下が観察され（表８）、血漿ｔ１／２は１７分であった。ＣＦＺがリポソーム組成物（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ、図１、４ｍＬ／ｋｇの投薬体積）中で同じ投薬レベルで送達された場合、投薬から４時間後に検出可能なＣＦＺが観察され（表８）、ｔ１／２は約５０分であった。
【０３２７】
【表１１】
2015524411.tif 000026
【０３２８】
表９および表１０に示されるデータは、ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと比較して、リポソームＣＦＺ組成物（Ｌ−ＣＦＺ組成物Ｃ）およびペグ化リポソームＣＦＺ組成物（ｐＬ−ＣＦＺ組成物Ｅ）に対する暴露（ＡＵＣ）が、マウスおよびラットにおいて、それぞれ約５から７倍および２０倍増加したことを示している。
【０３２９】
【表１２】
2015524411.tif 000027
2015524411.tif 000028
【０３３０】
【表１３】
2015524411.tif 000029
【０３３１】
ＡＵＣは、薬物クリアランス速度を測定することにより決定されるため、増加したＡＵＣは有意であり、これらのデータは、本発明のリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物のクリアランスを減少させていることを示している。これらのデータは、非リポソームＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物に対する、リポソーム組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の暴露期間の延長を示している。
【０３３２】
実施例７
薄型脂質フィルムの調製、および、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したペプチドエポキシケトン化合物が投入された水性コアを含むリポソームの調製における使用
ペグ化リポソームフィルムを作製するために、示された比率の以下の材料を、好適なサイズの丸底フラスコに加えた。総脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＣ、ＳＰＨ、ＤＳＰＥ、またはそれらの組み合わせを含み、ＰＥＧ誘導体化脂質（例えば、ＰＥＧ誘導体化リン脂質）は、０．９：０．１〜０．７５：０．２５の重量比（リン脂質：ＰＥＧ誘導体化脂質）であり、または、コレステロールが添加される場合、リン脂質対ＰＥＧ誘導体化脂質対コレステロール重量比（リン脂質：ＰＥＧ誘導体化脂質：コレステロール）は、０．８３：０．０８３：０．０８３〜０．５７：０．１４：０．２９である。
【０３３３】
脂質を溶解するために、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの溶解脂質を達成するために十分である適切な体積の有機溶媒（例えば、クロロホルム：ＭｅＯＨ（６０：４０ｖ／ｖ））を、フラスコに加えた。フラスコを１００ｒｐｍで回転するロータリーエバポレーターに取り付け、使用した脂質の最高ゲル−液晶相転移（Ｔｃ）温度より高く設定された水浴内に浸した。卵ホスファチジルコリンのＴｃは、室温を下回る（−１５℃から−７℃）が、ＥＰＣに使用された浴の温度は、約４５℃から５０℃であった。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥに対しては、水浴温度は、それぞれ５５℃超、４１℃超、および５０℃超に設定されるべきである。相転移温度がない場合、水浴温度は３５〜４５℃に設定される。
【０３３４】
フラスコを、水浴内で約１分間回転させ、平衡化した。１０トル未満の低圧まで徐々に真空引きし、沈殿物を伴わずに、フラスコの壁上に薄型乾燥フィルムを得た（典型的には約３０分間）。いかなる残留溶媒も除去するために、フラスコを室温で数時間から一晩、高真空下に供した。
【０３３５】
スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ）との複合体形成により、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を水溶液中に可溶化した。過剰のカーフィルゾミブを、２０％ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤおよび２０ｍＭクエン酸の水溶液に添加した。ＣＦＺの可溶化に必要な場合は、溶液のｐＨを１Ｎ  ＨＣｌで約ｐＨ２．５に調整した。混合物を約１０分間超音波照射し、磁気撹拌棒を使用して１時間以上撹拌してから、０．２μｍフィルタを通して濾過し、過剰の溶解していない薬物を除去した。濾過後、溶液のｐＨを、ｐＨ３．５から５に調整した。このＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したＣＦＺの水溶液を使用して、薄型脂質フィルムを再水和した。
【０３３６】
小胞が再水和されたら、３１０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離およびＰＢＳでの洗浄により、または、８〜１０ｋＤのＭＷＣＯを有する膜を使用して４８時間まで透析することにより、非封入遊離薬物を除去した。
【０３３７】
表１１は、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含む、例示的なリポソーム組成物の成分の公称濃度を示す。
【０３３８】
【表１４】
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＊１００％薬物封入を仮定
＊全薬物含量は、処理中に除去されなかった非封入薬物を含み得る。
【０３３９】
実施例８
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したペプチドエポキシケトン化合物が投入された水性コアを含むリポソームを含むＣＦＺリポソーム組成物の薬力学反応
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物の薬力学反応を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて評価した。
【０３４０】
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）、または、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物の薬力学反応を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウス（ａｐＬ−１１（１５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合）、実施例７；およびａｐＬ−１１（５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合）、実施例７）において評価した。マウス（時点当たり３匹のマウス）に、５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇの用量の非リポソームカーフィルゾミブ、または５ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブを、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で溶液として投与した。薬力学的試験のための血液試料および組織を、１０ｍｇ／ｋｇでの非リポソーム組成物の投与から０、１、８、および１４時間後；５ｍｇ／ｋｇでの非リポソーム組成物の投与から０、１、４、６、８および２４時間後；ならびに、５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇでのリポソーム組成物の投与から０、１、４、６、および２４時間後に採取した。各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つの組織試料を評価した。プロテアソームのキモトリプシン様活性を定量するために、蛍光発生基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ；Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、全血（主に赤血球）、副腎、肝臓、および心臓におけるプロテアソーム活性の測定により、薬力学反応を決定した。全ての試料は、ＣＦＺを含まない対応するビヒクルに対して正規化され、ビヒクル試料時点測定は、投薬から１時間後であった。
【０３４１】
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）の、５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇでの単回投薬、または、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物（ａｐＬ−１１）の、５ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇでの単回投薬は、全血および全ての他の組織において、１時間以内にプロテアソーム活性の急速な阻害をもたらした。１５ｍｇ／ｋｇでの投薬ではプロテアソーム活性のより大きな阻害が観察され、これは、全ての組織、すなわち全血（主に赤血球）（図３Ａを参照されたい）、心臓（図３Ｂを参照されたい）、肝臓（図３Ｃを参照されたい）、および副腎（図３Ｄ）を参照されたい）において、１時間でプロテアソーム活性の８０％超の阻害をもたらした。プロテアソーム阻害からの同様のほぼ完全な回復は、血液および心臓を除く試験した全ての組織において、投薬から２４時間後に観察され、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）の５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの両方の投薬レベルに対して、６〜２４時間のｔ１／２で生じた。副腎においては、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物に対し、５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇの両方でプロテアソーム活性の回復の遅延が観察されたが、この結果は、ＣＦＺの長期暴露を示唆している。予測されるように、カーフィルゾミブの不可逆的結合、および赤血球が新たなプロテアソームを合成しないことに起因して、血液においてはプロテアソーム活性の回復が見られなかった。
【０３４２】
これらの観察は、全血および組織におけるプロテアソーム活性の阻害が急速であり、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物とリポソーム組成物との間で同様であったことを示している。さらに、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤと複合化したペプチドエポキシケトン化合物が投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物による、副腎におけるプロテアソーム活性の回復の遅延は、非リポソーム組成物に対する、リポソーム組成物での延長された暴露を示唆している。さらに、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物の生体内分布に悪影響を及ぼさなかった。
【０３４３】
実施例９
リポソームＣＦＺの循環半減期
リポソームＣＦＺの循環半減期を、以下の単回静脈内注射後の、７〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３／時点）において評価した：１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標））、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化された５ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ（ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ；非リポソーム）；５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブ組成物ａｐＬ−１１（実施例７；ａｐＬ−１１（５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合））および１５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブ組成物ａｐＬ−１１（実施例７；ａｐＬ−１１（１５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合））。
【０３４４】
図４に示されるように、注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の血漿濃度は、静脈内ボーラス投与後、急速で広範囲の代謝により急速に降下した（図４：×を含む白い正方形は、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の投与に対応する）。５ｍｇ／ｋｇで投薬されたカーフィルゾミブの半減期は約２０分であり、カーフィルゾミブは投薬から１時間後には検出不可能であった。
【０３４５】
リポソーム組成物中で送達された場合、カーフィルゾミブへの暴露期間は大幅に延長された（図４、黒い正方形は、５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１（実施例７）、ペグ化リポソームの水性コアがカーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤを含むカーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応し；黒丸は、１５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１（実施例７）、ペグ化リポソームの水性コアがカーフィルゾミブおよびＳＢＥ−Ｂ−ＣＤを含むカーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応する）。全薬物（封止および放出）は、投薬から２４時間後まで検出可能であった。これは、組織におけるプロテアソーム回復の観察された遅延と一致する。
【０３４６】
リポソームＣＦＺ組成物対ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（非リポソーム）のデータは、ペプチドエポキシケトン化合物の循環半減期を大幅に向上させるリポソーム組成物の能力を示す。さらに、データは、非リポソームＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物に対する、リポソーム組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の暴露期間の延長を示している。
【０３４７】
実施例１０
ｐＨ制御およびエタノール注入法を使用した、ペプチドエポキシケトンが投入された水性コアを含むリポソームの調製
エタノール注入法を使用してリポソーム組成物を作製するために、示された比率の以下の材料を使用した。リン脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＣ、ＳＰＨ、ＤＳＰＥ、またはそれらの組み合わせを含む。ＰＥＧ誘導体化脂質が存在する場合（例えば、ＰＥＧ誘導体化リン脂質）、全脂質の典型的な重量比（リン脂質：ＰＥＧ誘導体化脂質）は、０．９：０．１〜０．７５：０．２５である。さらに、コレステロールもまた添加される場合、総脂質の典型的な重量比（リン脂質：ＰＥＧ誘導体化脂質：コレステロール）は、０．８３３：０．０８３３：０．０８３３〜０．５７：０．１４：０．２９である。
【０３４８】
エタノール注入法において使用される他の材料は、以下を含む：無水エタノール；１Ｎ  ＨＣｌ；カーフィルゾミブ（結晶質または非晶質）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｓｙｒｉｎｇｅ  Ｇａｓｔｉｇｈｔ、２２ゲージ；透析キット、Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）Ｇ２（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｒａｎｃｈｏ  Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，ＣＡ）分画分子量（ＭＷＣＯ）８〜１０ｋＤ；注射用蒸留水（ＷＦＩ）；およびリン酸緩衝生理食塩水１×（ＰＢＳ）。
【０３４９】
脂質／エタノール溶液は、以下のように調製した：１２５  ｍｇ／ｍＬ卵スフィンゴミエリン、３１．２５ｍｇ／ｍＬコレステロール、１２．５ｍｇ／ｍＬ  ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥを含有する２ｍＬのエタノール。必要に応じて、脂質／エタノール溶液を数回超音波照射し、溶解を促進させた。
【０３５０】
ＣＦＺの水溶液は、以下のように調製した：１０ｍＬの０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液を調製し（約ｐＨ１）、溶解度を超えるＣＦＺを添加した。水溶液を、加熱水浴（約３０℃）内で２０〜３０分間超音波照射した。ｐＨ１での近似的なカーフィルゾミブ溶解度は、１．８ｍｇ／ｍＬである。溶解していない過剰の薬物を、０．２μｍフィルタを通して濾過することにより除去し、外見上透明な溶液を生成した。
【０３５１】
代替として、非晶質カーフィルゾミブを、共溶媒として６％（ｖ／ｖ）エタノールを含む０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液中に溶解し、次いで温めた水浴内で溶液が透明となるまで超音波照射することにより、カーフィルゾミブの過飽和溶液を調製した。
【０３５２】
１ｍＬの脂質−エタノール溶液を、９ｍＬのＣＦＺの水溶液（上述の方法の１つにより調製される）中に、磁気撹拌棒を使用して撹拌しながら急速に注入することにより、リポソームを形成した。撹拌は、５〜１０分間継続した。溶液のｐＨは、約ｐＨ１であった。透析キット（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）Ｇ２）ＭＷＣＯ  ８〜１０ｋＤを使用して、得られた溶液を、１２時間から１６時間、リン酸緩衝生理食塩水（またはＷＦＩ）に対して透析した。約６〜８時間後、バルク透析溶液を、新鮮なＰＢＳまたはＷＦＩで置き換えた。透析されたリポソーム含有組成物の溶液のｐＨは、約ｐＨ３から３．５であった。リポソームを含む水溶液のｐＨを、水酸化ナトリウムで、ｐＨ３．５から生理ｐＨの、約ｐＨ６．８に調整した。
【０３５３】
表１２は、例示的なリポソーム組成物の成分の公称濃度を示す。
【０３５４】
【表１５】
2015524411.tif 000031
＊１００％薬物封入を仮定
＊全薬物含量は、処理中に除去されなかった非封入薬物を含み得る。

【０３５５】
実施例１１
捕捉されたペプチドエポキシケトンを含むリポソームは、抗腫瘍反応を誘引する
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームを含むリポソーム組成物の抗癌作用を評価するために、マウス異種移植片腫瘍モデルにおいて、例示的なリポソーム組成物を試験した。
【０３５６】
リポソーム組成物は、実施例１および実施例２に記載の方法により作製した。リポソーム組成は、以下の通りであった：ｐＬ６（組成物Ｈの特定の製剤；表２Ａ）＝２ｍｇ／ｍＬ  ＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍＬスフィンゴミエリン、３．２ｍｇ／ｍＬコレステロール、１．３ｍｇ／ｍＬ  ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ。
【０３５７】
まず、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）およびｐＬ−６、ＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物の薬力学反応を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて評価した。
【０３５８】
マウス（時点当たり３匹のマウス）に、１０ｍｇ／ｋｇのＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化されたカーフィルゾミブ（非リポソーム）または１５ｍｇ／ｋｇのｐＬ−６、ＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物の用量を、７．５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で溶液として投与した。薬力学的試験のための血液試料および組織を、リポソーム組成物の投与から０時間、１時間、４時間、６時間および２４時間後に、非リポソーム組成物に対しては０時間、１時間、８時間、および２４時間後に採取した。各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つの組織試料を評価した。プロテアソームのキモトリプシン様活性を定量するために、蛍光発生基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ；Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、全血（主に赤血球）、副腎、肝臓、および心臓におけるプロテアソーム活性の測定により、薬力学反応を決定した。全ての試料は、ＣＦＺを含まない対応するビヒクルに対して正規化され、ビヒクル試料時点測定は、投薬から１時間後であった。
【０３５９】
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）の１０ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤ）での単回投薬、または、捕捉されたＣＦＺを含むリポソームを含むリポソーム組成物（ｐＬ−６）の１５ｍｇ／ｋｇでの単回投薬は、全血および全ての他の組織、すなわち全血（主に赤血球）（図５Ａを参照されたい）、心臓（図５Ｂを参照されたい）、肝臓（図５Ｃを参照されたい）、および副腎（図５Ｄを参照されたい）において、１時間以内にプロテアソーム活性の８０％超の急速阻害をもたらした。プロテアソーム阻害からの同様の完全な回復は、血液および心臓を除く試験した全ての組織において、投薬から２４時間後に観察され、非リポソーム注射用ＣＦＺに対して、６〜２４時間のｔ１／２で生じた。副腎においては、リポソーム組成物ｐＬ−６に対し、プロテアソーム活性の回復の遅延が観察されたが、これは、ＣＦＺの長期暴露を示唆している。予測されるように、カーフィルゾミブの不可逆的結合、および赤血球が新たなプロテアソームを合成しないことに起因して、血液においてはプロテアソーム活性の回復が見られなかった。
【０３６０】
これらの観察は、全血および組織におけるプロテアソーム活性の阻害が急速であり、組成物にわたって同様であることを示している。副腎におけるプロテアソーム活性の回復の遅延は、リポソーム組成物での延長された暴露を示唆している。リポソーム組成物は、ＣＦＺの生体内分布に悪影響を及ぼさなかった。
【０３６１】
第２に、リポソームＣＦＺの循環半減期を、以下の単回静脈内注射後の、７〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３／時点）において評価した：５ｍｇ／ｋｇで投与された、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）；および、１５ｍｇ／ｋｇで投与されたｐＬ−６、ＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物。
【０３６２】
図６に示されるように、注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の血漿濃度は、静脈内ボーラス投与後に急速に降下し、１時間後には定量限界未満であった。半減期は、約２０分であった。これは、急速で広範囲の代謝に起因する（図６、白丸を伴う線）。
【０３６３】
ｐＬ−６リポソーム組成物中で送達された場合、カーフィルゾミブへの暴露期間は、大幅に延長された（図６、黒い正方形）。全薬物（封入および放出）の血漿濃度は徐々に降下し、投薬から２４時間後まで検出可能であった。これは、組織におけるプロテアソーム回復の観察された遅延と一致する。
【０３６４】
リポソームＣＦＺ組成物対ＣＦＺ  ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ（非リポソーム）のデータは、ペプチドエポキシケトン化合物の循環半減期を大幅に向上させるリポソーム組成物の能力を示す。さらに、データは、非リポソームＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ組成物に対する、リポソーム組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の暴露期間の延長を示している。
【０３６５】
第３に、ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）、およびＣＦＺが投入されたリポソームを含むｐＬ−６リポソーム組成物の抗腫瘍反応を、マウスにおいて評価した。腫瘍は、ベージュヌードＸＩＤ（ＢＮＸ）マウス（群当たりｎ＝８）の右脇腹へのＲＬ細胞（ヒト非ホジキンＢ細胞リンパ腫細胞；継代数＜９および移植時の生存率＞９５％）の皮下注射により確立した。ＲＬ試験において、０．１ｍＬの体積中に１×１０７細胞を含有する細胞懸濁液を注射した。マウスを処置群に無作為割り当てし、腫瘍が約１００ｍｍ３（ＲＬ）に達したら投薬を開始した。最長垂直直径を記録することにより、腫瘍を週３回測定し、Ｖ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２の式を使用して腫瘍体積を計算した。
【０３６６】
ＲＬ細胞から得られた確立されたヒト腫瘍異種移植片を保有するＢＮＸマウスを、非リポソームカーフィルゾミブまたはリポソームカーフィルゾミブで処置した。週１回（ＱＷ）スケジュールまたは各週に２日連続して１日１回投与される投薬（ＱＤ×２）スケジュールで、薬物を投与した。群サイズは、Ｎ＝８マウス／群であった。
【０３６７】
結果を、図７（３１日目までのデータ）および図８（３８日目までのデータ、すなわち、図７と比べて２つの追加の時点）に示す。図中に示されたデータは、カーフィルゾミブを含むリポソーム組成物ｐＬ−６の週１回の静脈内投与（ＱＷ）（図７／図８、リポソーム組成物１５ｍｇ／ｋｇ、ＱＷ、白い三角）およびリポソーム組成物ｐＬ−６のＱＤ×２投与（図７／図８、リポソーム組成物、１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ、ＱＤ×２、黒丸）が、１日目／２日目のスケジュール（すなわち、ＱＤ×２）で投与されたＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；図７／図８、ＱＤ×２、５ｍｇ／ｋｇ、白い四角）と同様の抗腫瘍反応を誘引したことを示している。一元配置ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後分析（有意性はｐ＜０．００１であった）により、処置群とビヒクル対照との間の統計比較を行った。図７および図８の両方に示されるデータは、週１回１５ｍｇ／ｋｇで投与されたリポソーム組成物が、ＱＤ×２で投与されたリポソームまたは非リポソーム組成物と同程度に有効であったことを示している。
【０３６８】
この実施例におけるデータは、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて低減された投薬頻度でも、有効性を維持することを示している。
【０３６９】
実施例１２
捕捉されたペプチドエポキシケトンを含む追加のリポソーム組成物を使用した、抗腫瘍反応の誘引
Ａ．組成物Ｃ
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）、およびＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物Ｃの抗腫瘍反応を、マウスにおいて評価した。腫瘍は、ＢＮＸマウス（群当たりｎ＝８）の右脇腹へのＲＬ細胞（ヒト非ホジキンＢ細胞リンパ腫細胞；継代数＜９および移植時の生存率＞９５％）の皮下注射により確立した。ＲＬ試験において、０．１ｍＬの体積中に１×１０７細胞を含有する細胞懸濁液を注射した。マウスを処置群に無作為割り当てし、腫瘍が約１００ｍｍ３（ＲＬ）に達したら投薬を開始した。最長垂直直径を記録することにより、腫瘍を週３回測定し、Ｖ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２の式を使用して腫瘍体積を計算した。
【０３７０】
ＲＬ細胞から得られた確立されたヒト腫瘍異種移植片を保有するＢＮＸマウスを、非リポソームカーフィルゾミブまたはリポソームカーフィルゾミブで処置した。週１回（ＱＷ）スケジュールまたは各週に２日連続して１日１回投与される投薬（ＱＤ×２）スケジュールで、薬物を投与した。群サイズは、Ｎ＝８マウス／群であった。
【０３７１】
結果を図９に示す。図中に示されたデータは、カーフィルゾミブを含むリポソーム組成物Ｃの週１回の静脈内投与（図９、リポソーム組成物１５ｍｇ／ｋｇ、ＱＷ、白丸）およびリポソーム組成物のＱＤ×２投与（図９、リポソーム組成物、５ｍｇ／ｋｇ、白い菱形、および１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×２、白い三角）が、１日目／２日目のスケジュール（すなわち、ＱＤ×２）で投与されたＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；図９、ＱＤ×２、５ｍｇ／ｋｇ、黒い四角）と同様の抗腫瘍反応を誘引したことを示している。一元配置ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後分析により、処置群とビヒクル対照との間の統計比較を行った（有意性はｐ＜０．００１であった）。図９に示されるデータは、週１回（ＱＷ）１５ｍｇ／ｋｇで投与されたリポソーム組成物が、週２回（ＱＤ×２）投与されたリポソームまたは非リポソーム組成物と同程度に有効であったことを示している。
【０３７２】
この実施例におけるデータは、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて低減された投薬頻度でも、有効性を維持することを示している。
【０３７３】
Ｂ．組成物Ｇ
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）、およびＣＦＺが投入されたリポソームを含むペグ化リポソーム組成物Ｇの抗腫瘍反応を、マウスにおいて評価した。腫瘍は、ＢＮＸマウス（群当たりｎ＝８）の右脇腹へのＲＬ細胞（ヒト非ホジキンＢ細胞リンパ腫細胞；継代数＜９および移植時の生存率＞９５％）の皮下注射により確立した。ＲＬ試験において、０．１ｍＬの体積中に１×１０７細胞を含有する細胞懸濁液を注射した。マウスを処置群に無作為割り当てし、腫瘍が約１００ｍｍ３（ＲＬ）に達したら投薬を開始した。最長垂直直径を記録することにより、腫瘍を週３回測定し、Ｖ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２の式を使用して腫瘍体積を計算した。
【０３７４】
ＲＬ細胞から得られた確立されたヒト腫瘍異種移植片を保有するＢＮＸマウスを、非リポソームカーフィルゾミブまたはペグ化リポソームカーフィルゾミブで処置した。週１回（ＱＷ）スケジュールまたは各週に２日連続して１日１回投与される投薬（ＱＤ×２）スケジュールで、薬物を投与した。群サイズは、Ｎ＝８マウス／群であった。
【０３７５】
結果を図１０に示す。図中に示されたデータは、カーフィルゾミブを含むリポソーム組成物Ｇの週１回の静脈内投与（図１０、リポソーム組成物１５ｍｇ／ｋｇ、ＱＷ、黒丸）およびリポソーム組成物のＱＤ×２投与（図１０、リポソーム組成物、１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×２、白い四角）が、１日目／２日目のスケジュール（すなわち、ＱＤ×２）で投与されたＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；図１０、ＱＤ×２、５ｍｇ／ｋｇ、白い三角）と同様の抗腫瘍反応を誘引したことを示している。一元配置ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後分析（有意性はｐ＜０．００１であった）により、処置群とビヒクル対照との間の統計比較を行った。図１０に示されるデータは、週１回１５ｍｇ／ｋｇで投与されたリポソーム組成物が、ＱＤ×２で投与されたリポソームまたは非リポソーム組成物と同程度に有効であったことを示している。
【０３７６】
この実施例におけるデータは、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて低減された投薬頻度でも、有効性を維持することを示している。


【０３７７】
実施例１３
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の例示的な基準
ペプチドエポキシケトン化合物を含む有利なリポソーム組成物のスクリーニングおよび選択のための例示的な基準は、以下を含むが、それらに限定されない。
【０３７８】
Ａ．血漿半減期／薬物動態データ
ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）を含む本発明の好ましいリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物（例えば、１０％スルホブチルエーテルベータ−シクロデキストリンおよび１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化されたカーフィルゾミブの非リポソーム組成物）と比べて、血漿半減期を延長し、より長い暴露期間を提供する。
【０３７９】
血漿半減期（ｔ１／２）および血漿濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）を含む薬物動態パラメータの決定のための方法は、本明細書において説明される（例えば、実施例６；実施例９、図４；実施例１１、図６）。典型的には、薬物動態パラメータは、げっ歯類試験から（例えば、マウスまたはラットを使用して）得られる。薬物動態パラメータを得るための１つのそのようなスクリーニング試験は、以下の通りである。
【０３８０】
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の血漿ｔ１／２が、スクリーニングされているペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の単回静脈内注射後の７〜８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３〜１０マウス／時点）において評価される。リポソーム組成物は、典型的には、１つ以上の薬物用量で（例えば、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）投与される。さらに、比較のために、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非ポソーム組成物が、１つ以上の薬物用量で（例えば、０．５〜１５ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）含まれてもよい。
【０３８１】
ペプチドエポキシケトン化合物の血漿濃度は、選択された期間にわたる複数の時点で評価される（例えば、図４に示されるように）。このデータから、ペプチドエポキシケトン化合物の半減期が、標準的計算により決定される。ＡＵＣは、標準的計算を使用して、薬物クリアランス速度を測定することにより決定される。
【０３８２】
Ｂ．薬力学的プロファイル
ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）を含む本発明の好ましいリポソーム組成物は、（ｉ）ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）を含む非リポソーム組成物と比べて少なくとも同等またはより良好な生体内分布、（ｉｉ）カーフィルゾミブの非リポソーム組成物と比べて少なくとも同等またはより良好な２０Ｓプロテアソームのキモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）活性の最大阻害、および（ｉｉｉ）組織におけるＣＴ−Ｌ活性の長期阻害（例えば、ビヒクルと比較した、投薬後のＣＴ−Ｌ活性の完全回復の防止であり、（ａ）１つ以上の選択された標的組織（例えば、副腎組織）において、ＣＴ−Ｌ活性の阻害が観察され、（ｂ）１つ以上の選択された標的組織（例えば、副腎組織）において、投薬後４時間超、好ましくは少なくとも６時間、ＣＴ−Ｌ活性の阻害からの完全回復が防止される）を含む薬力学的プロファイルを示す。
【０３８３】
生体内分布、最大ＣＴ−Ｌ活性阻害、および組織における長期阻害を含む薬力学的データの決定のための方法は、本明細書において説明される（例えば、実施例５、図２Ａ〜２Ｄ；実施例８、図３Ａ〜３Ｄ；実施例１１、隋５Ａ〜５Ｄを参照されたい）。典型的には、薬力学的データは、げっ歯類試験から（例えば、マウスまたはラットを使用して）得られる。薬力学的データを得るための１つのそのような試験は、以下の通りである。
【０３８４】
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の薬力学反応が、スクリーニングされている（例えば、ペプチドエポキシケトン化合物を含む）リポソーム組成物の単回静脈内注射後の７〜８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３〜１０マウス／時点）において評価される。リポソーム組成物は、典型的には、１つ以上の薬物用量で（例えば、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）投与される。さらに、比較のために、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非ポソーム組成物が、１つ以上の薬物用量で（例えば、０．５〜１５ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）含まれてもよい。
【０３８５】
選択された薬物用量（複数を含む）のリポソーム組成物を、マウスに投与する。  薬力学的試験のための血液試料および組織を、ペプチドエポキシケトン化合物を含む各用量のリポソーム組成物の投与後、選択された期間（例えば、０．２５〜１６８時間；例えば、図５Ａ〜５Ｄを参照されたい）にわたる複数の時点で採取する。典型的には、薬物を含まない対応する対照リポソーム組成物が、対照として含まれる。蛍光発生ペプチド基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ、Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、血液および組織（例えば、全血（主に赤血球）、副腎組織、肝臓組織、心臓組織、およびそれらの組み合わせ）におけるプロテアソーム活性の経時的測定により、薬力学反応を決定する。全ての試料は、適切なビヒクル（すなわち、カーフィルゾミブを含まない対応する組成物）に対して正規化される。典型的には、プロテアソームのキモトリプシン様活性に関し、各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つから５つの組織試料が評価される。
【０３８６】
リポソーム組成物の生体内分布は、それぞれの評価された組織におけるＣＴ−Ｌ活性の阻害に基いて決定される。ＣＴ−Ｌ活性の最大阻害は、非リポソームペプチドエポキシケトン化合物と比べて決定される。組織（例えば、副腎組織）における阻害の時間およびＣＴ−Ｌ活性の完全回復の時間の長さは、組織試料に基づいて経時的に評価される。
【０３８７】
Ｃ．抗腫瘍活性
ペプチドエポキシケトンペプチド（例えば、カーフィルゾミブ）を含む本発明の好ましいリポソーム組成物は、ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて、ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）の非リポソーム組成物以上の抗腫瘍活性を示す。
【０３８８】
抗腫瘍活性の決定のための方法は、本明細書において説明される（例えば、実施例１１、図７、図８；実施例１２、図９、図１０を参照されたい）。典型的には、抗腫瘍データは、ヒト腫瘍異種移植片げっ歯類試験から（例えば、マウスまたはラットを使用して）得られる。抗腫瘍活性を得るための１つのそのような試験は、以下の通りである。
【０３８９】
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の抗腫瘍活性は、マウスにおいて評価される。リポソーム組成物は、典型的には、１つ以上の薬物用量で（例えば、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）投与される。さらに、比較のために、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非ポソーム組成物が、１つ以上の薬物用量で（例えば、０．５〜１５ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）含まれてもよい。
【０３９０】
腫瘍は、ＢＮＸマウス（群当たりｎ＝３〜１０）の右脇腹へのＲＬ細胞（ヒト非ホジキンＢ細胞リンパ腫細胞；継代数＜９および移植時の生存率＞９５％）の皮下注射により確立する。ＲＬ試験において、０．１ｍＬの体積中に１×１０７細胞を含有する細胞懸濁液を注射する。マウスを処置群に無作為割り当てし、腫瘍が約１００ｍｍ３（ＲＬ）に達したら投薬を開始する。最長垂直直径を記録することにより、腫瘍を週３回測定し、Ｖ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２の式を使用して腫瘍体積を計算する。
【０３９１】
ＲＬ細胞から得られた確立されたヒト腫瘍異種移植片を保有するＢＮＸマウスを、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物で処置する。典型的には、比較のために、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非ポソーム組成物が、１つ以上の薬物用量で（例えば、２〜１５ｍｇ／ｋｇのペプチドエポキシケトン化合物の用量範囲にわたり）含まれる。薬物は、典型的には、週１回（ＱＷ）スケジュールおよび／または各週に２日連続１日１回投与される投薬（ＱＤ×２）スケジュールで投与される。ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物の投与後、選択された期間（例えば、１〜１００日）にわたる複数の時点（例えば、図８に示される）で、腫瘍が測定され、腫瘍体積が決定される。典型的には、薬物を含まない対応する対照リポソーム組成物が、対照として含まれる。組成物の抗腫瘍活性は、腫瘍体積の経時的測定により決定される。
【０３９２】
処置群とビヒクル対照との間の統計比較は、典型的には、一元配置ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後分析により行う。
【０３９３】
当業者には明らかなように、本発明の精神および範囲から逸脱せずに、上記実施形態の様々な修正および変形を行うことができる。そのような修正および変形は、本発明の範囲内である。
【図１】
2015524411.tif 000032
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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