(57)【要約】【解決手段】  本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌の活発な腸内増殖を助けるための食品組成物であり、乳酸菌及び前記菌株の栄養源としてタガトースを含有するシンバイオティック食品組成物に関するものである。  より具体的に、本発明はプロバイオティクスとしてラクトバチルス・カゼイ、又はラクトバチルス・ラムノサス菌株を含有し、プリバイオティクスとしてタガトースを含有するシンバイオティック食品組成物に関するものである。
2015512269.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タガトース及びラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）を含有する、食品組成物。
【請求項２】
前記ラクトバチルス・カゼイは、ラクトバチルス・カゼイシロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１及びラクトバチルス・カゼイ−０１(R)からなる群より選ばれた少なくとも１種である、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項３】
前記組成物１００重量部に対して、
タガトースを０超過〜２０重量部、ラクトバチルス・カゼイを０超過〜１重量部で含有する、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項４】
全組成物１００重量部に対して、
タガトース０を超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・カゼイを０超過〜１重量部；
脱脂粉乳を０超過〜１０重量部；及び
精製水を５０ないし９９重量部；
で含有する、請求項１に記載の発酵乳組成物。
【請求項５】
タガトース及びラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含有する、食品組成物。
【請求項６】
前記ラクトバチルス・ラムノサスは、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧである、請求項５に記載の食品組成物。
【請求項７】
前記組成物１００重量部に対して、
タガトースを０超過〜２０重量部、ラクトバチルス・ラムノサスを０超過〜１重量部で含有する、請求項５に記載の食品組成物。
【請求項８】
全組成物１００重量部に対して、
タガトースを０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・ラムノサスを０超過〜１重量部；
原乳を５０ないし９９重量部；
ペクチンを０超過〜１重量部；及び
精製水を０超過〜５０重量部；
で含有する、請求項５に記載の濃厚発酵乳組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌の活発な腸内増殖を助けるための食品組成物であり、乳酸菌と前記菌株の栄養源としてタガトースを含有するシンバイオティック食品組成物に関するものである。
【０００２】
より具体的に、本発明は、プロバイオティクスとしてラクトバチルス・カゼイ、又はラクトバチルス・ラムノサス菌株を含有し、プリバイオティクスとしてタガトースを含有するシンバイオティック食品組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）というのは、人間や動物などの宿主の健康に有益な効果を表す生きている微生物、又はその成分を表す用語であり、これを接種する宿主に腸内細菌らの均衡を持たせるなどの有益さを提供してくれることが知られている。
【０００４】
一般的に、プロバイオティクスは乳酸菌やビフィズス菌のような有益菌及びイーストをその範囲に含み、その中でラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ビフィドバクテリア（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ストレップトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）などの属（ｇｅｎｕｓ）に属する乳酸菌が多く研究に用いられている。
【０００５】
乳酸菌（ＬＡＢ、ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ）はＧＲＡＳ（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ ｓａｆｅ）として各種の発酵食品をつくるために歴史深く活用されてきた。乳酸菌は乳糖（ｌａｃｔｏｓｅ）を始め各種の糖を基質として利用しこれを乳酸（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）に転換し、このような過程を通じて食品に酸っぱさを与えることとｐＨを低下させることにより有害な微生物の成長を抑制することもある。乳酸菌は抗菌効果だけでなく、宿主の腸内菌叢（ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ）を調節して様々な腸疾患を抑制、免疫力を増強するなど、多くの面で人間に有益な効果を表すため、乳酸菌を多様な食品素材として開発するための関心が高い。
【０００６】
乳酸菌は代表的なプロバイオティクスであり、発酵乳製品を製品を中心に様々な発酵食品、醤類、医薬品、家畜飼料の添加剤などにまで人類生活に幅広く活用されている。最近では乳酸菌の栄養的効果とともに宿主の腸内で乳酸菌の多様な健康機能性を中心とする研究が多く行われている。
【０００７】
乳酸菌の生体内活性を増加させるため、生菌に該当するプロバイオティクスと、これらの栄養源になるプリバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ）を混合したシンバイオティクス（ｓｙｎｂｉｏｔｉｃｓ）に関する研究が行われてきた。しかし、従来のシンバイオティクスにおいて用いられるプリバイオティクスは宿主の消化器官で相当の消化が進められてしまい、プロバイオティクスの栄養供給源として効率的に作用しない問題と、プリバイオティクスの種特異性がないため特定の乳酸菌の活性を増加させようとする際には不効率である問題があった。
【０００８】
一方、タガトースは果糖の異性体であり、自然的に生成される低カロリーの天然糖である。タガトースは砂糖と同じ程度の甘みを有し甘味度は砂糖の約９２％程度であるが、カロリーの面では砂糖の３８％くらいに過ぎなく、ＧＩ（Ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｉｎｄｅｘ、グリセミック指数）は砂糖の約４％に過ぎないため砂糖の代替甘味料として脚光を浴びている。
【０００９】
また、タガトースをプリバイオティクスに使用できる可能性に関して、韓国登録特許第１０―０６２０４７７号で開示されたが、タガトースが実質的に適用できるプロバイオティクスの範囲などの具体的な適用方案に関する研究はほとんど行われていない現状である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、プリバイオティクスとしてタガトースを含有し、プロバイオティクスとして前記タガトースを特異的に利用できるラクトバチルス属の特定乳酸菌を含有するシンバイオティクスを提供することにより、これを接種した宿主の腸内において特定乳酸菌が優位的に増殖するのを助ける、食品組成物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌の活発な腸内増殖を助けるための食品組成物であり、乳酸菌及び前記菌株の栄養源としてタガトースを含有するシンバイオティック食品の組成物に関するものである。
【００１２】
本発明のある実施様態において、タガトース及びラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）を含有する食品組成物が提供される。
【００１３】
本発明のさらなる実施様態において、前記ラクトバチルス・カゼイはラクトバチルス・カゼイシロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１及びラクトバチルス・カゼイ−０１(R)からなる群より選ばれる少なくとも１種である、食品組成物が提供される。
【００１４】
本発明のさらなる実施様態において、前記組成物１００重量部に対して、
タガトースが０超過〜２０重量部、ラクトバチルス・カゼイが０超過〜１重量部である食品組成物が提供される。
【００１５】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対し、
タガトースを０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・カゼイを０超過〜１重量部；
脱脂粉乳を０超過〜１０重量部；及び
精製水を５０ないし９９重量部；
を含有する、発酵乳組成物が提供される。
【００１６】
本発明のさらなる実施様態において、タガトース及びラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含有する食品組成物が提供される。
【００１７】
本発明のさらなる実施様態において、前記ラクトバチルス・ラムノサスはラクトバチルス・ラムノサスＧＧである、食品組成物が提供される。
【００１８】
本発明のさらなる実施様態において、前記組成物１００重量部に対し、
タガトースを０超過〜２０重量部、ラクトバチルス・ラムノサスを０超過〜１重量部を含有する、食品組成物が提供される。
【００１９】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対して、
タガトース０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・ラムノサス０超過〜１重量部；
原乳５０ないし９９重量部；
ペクチン０超過〜１重量部；及び
精製水０超過〜５０重量部；
を含有する、濃厚発酵乳組成物が提供される。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、プリバイオティクスとしてタガトースを含有し、プロバイオティクスとして前記タガトースを特異的に利用できるラクトバチルス属の特定乳酸菌を含有するシンバイオティクスを提供することにより、これを摂取した宿主の腸内に特定乳酸菌が優位的に増殖できるようにする効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ラクトバチルス・カゼイの生長曲線を示す。
【図２】図２は、ラクトバチルス・カゼイシロタの生長曲線を示す。
【図３】図３は、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１の生長曲線を示す。
【図４】図４は、ラクトバチルス・カゼイ−０１(R)の生長曲線を示す。
【図５】図５は、ラクトバチルス・ラムノサスの生長曲線を示す。
【図６】図６は、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧの生長曲線を示す。
【図７】図７は、ペディオコッカス・ペントサセウスの生長曲線を示す。
【図８】図８は、ラクトバチルス・ファルシミニスの生長曲線を示す。
【図９】図９は、ラクトバチルス・アシドフィルスの生長曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
下記で、本発明に関して、より詳しく説明する。本明細書に記載のない内容は、本発明の技術分野又は類似分野の熟練者なら十分に認識と類推できるものであり、その説明を省略する。
【００２３】
本発明のある実施形態において、タガトース及びラクトバチルス属の乳酸菌を含む食品組成物が提供される。
【００２４】
本発明のさらなる実施様態において、タガトース、ラクトバチルス属の乳酸菌、原乳、ペクチン及び精製水を含む食品組成物が提供される。
【００２５】
前記食品組成物は、特に限りはなく、様々な種類の食品又は食品組成物として活用できる。
【００２６】
前記食品組成物は、好ましくは乳製品類として活用でき、例えば発酵乳、及び／又は、濃厚発酵乳などに活用できる。
【００２７】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対し、
タガトース０超過〜２０重量部；及び
ラクトバチルス属の乳酸菌０超過〜１重量部；
を含有する食品組成物が提供される。
【００２８】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対し、
タガトース０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス属の乳酸菌０超過〜１重量部；
原乳５０ないし９９重量部、より好ましくは７０ないし９０重量部；
ペクチン０超過〜１重量部、より好ましくは０超過〜０．５重量部；及び
精製水０超過〜５０重量部、より好ましくは１ないし１０重量部；
を含有する、濃厚発酵乳組成物が提供される。
【００２９】
本発明における原乳（ｒａｗ ｍｉｌｋ）は、当該技術分野で通常的に認識される用語として用いられる用語であり、乳牛から絞られた牛乳の意味である。
【００３０】
本発明におけるペクチン（Ｐｅｃｔｉｎ）は、当該技術分野で通常的に認識される用語として用いられるものであり、陸上動植物の中に広く分布されていて、特にリンゴやシトラスフルッツ（レモン、ライム、オレンジなど）などから水溶抽出して得られる精製された多糖類炭水化物を意味する。
【００３１】
前記濃厚発酵乳組成物は、（混合）脱脂粉乳、砂糖、果糖、ブドウ糖、（濃縮）果汁又は香辛料加工品などを更に含むことができる。
【００３２】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対し、
タガトース０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス属の乳酸菌０超過〜１重量部；
脱脂粉乳０超過〜１０重量部、より好ましくは３ないし５重量部；及び
精製水５０ないし９９重量部、より好ましくは８０ないし９５重量部；
を含有する発酵乳組成物が提供される。
【００３３】
本発明においての脱脂粉乳は、当該技術分野で通常的に認識される用語として用いられるものであり、牛乳から脂肪成分を分離して除去したものをいう。本発明においての脱脂粉乳は、混合脱脂粉乳であることもあり、混合脱脂粉乳は脱脂粉乳、又は脱脂粉乳と全脂粉乳が混合された粉乳に、例えば穀粉（米粉など）、穀類加工品（小麦粉など）、ココア加工品又は乳清粉末などの食品添加物などを混合・加工して粉末化したものを意味する。
【００３４】
前記発酵乳組成物は、ブドウ糖、砂糖又は香辛料加工品などをさらに含むことができる。
【００３５】
本発明において用いられるラクトバチルス属の乳酸菌は、好ましくはラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）又はラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）などがある。
【００３６】
前記菌株らは他の菌株に比べて宿主内でタガトースを栄養源として利用する能力が優れていて、タガトースをプリバイオティクスとするシンバイオティック組成物のプロバイオティクスとして効率的に活用でき、それにより宿主の腸内菌の均衡を持たせることと、特に前記菌株らが宿主の腸内において優位的になることで宿主の代謝活動などに肯定的効果を表す利点がある。
【００３７】
特に、上述の乳酸菌らの中で、ラクトバチルス・カゼイとラクトバチルス・ラムノサスは、整腸作用以外にも免疫に係る様々な機能性、及び抗癌効果などの人体に有益な効用を表すことが知られていて、全世界的に多様な製品として商用化されている。
【００３８】
前記ラクトバチルス・カゼイは、乳酸菌に属する公知の菌株であり、ラクトバチルス・カゼイシロタ、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１、ラクトバチルス・カゼイ−０１(R)などが含まれる（Ｋａｚｕｍａｓａ Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ外， 「Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｍｉｌｋ ｂｅｖｅｒａｇｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｔｒａｉｎ Ｓｈｉｒｏｔａ ｏｎ ｄｅｆｅｃａｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ， ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｉｔｈ ｓｏｆｔ ｓｔｏｏｌｓ」， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＶＯＬ． １１０ Ｎｏ．５， ５４７−５５２， ２０１０； Ｃｈｕ−Ｔｉｎｇ Ｌｉｕ外， 「Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｎｄ ａｎｔｉｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ０１」， Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７２１（２０１１）１５７−１６２； Ｍａｉｊａ Ｓａｘｅｌｉｎ 外， 「Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍｉｃｒｏｂｅｓ： ｆｒｏｍ ｍａｒｋｅｔｓ ｔｏ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ」， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００５， １６：２０４−２１１； Ａｎｔｏｎｉｓ Ａｍｐａｔｚｏｇｌｏｕ 外， 「Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｉｄ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｓｕｖｉｖａｌ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＧＧ」， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ， ５２（２０１０） ６５−７０；など参照）。
【００３９】
本発明において用いられる前記ラクトバチルス・カゼイは、好ましくはラクトバチルス・カゼイシロタ、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１、及びラクトバチルス・カゼイ−０１(R)からなる群より選ばれ、これらは、一つ又は二つ以上を共に使用することができる。
【００４０】
本発明において用いられる前記ラクトバチルス・ラムノサスは、好ましくはラクトバチルス・ラムノサスＧＧである。
【００４１】
下記で、実施例を記述することにより、本発明をより詳しく説明する。ただし、下記の実施例は本発明の一つの例示に過ぎなく、本発明の内容がこれらに限定して解釈されるものではない。
【００４２】
実施例１
タガトースの利用能力が優秀な乳酸菌を選別
公知の乳酸菌菌株（商業菌株２５０種、人分離菌株２５種、及び市販されている乳加工品から分離した菌株１１０種）を対象として、タガトースの利用能力を評価した。
【００４３】
（１）菌株の分離
前記３８５種の乳酸菌菌株を選択培地に純粋培養（各菌株の菌数が１０8ないし１０9ｃｆｕ／ｍｌ程度の停止期の培養液１％）により接種し、３７℃のインキュベーターで１８時間培養し、３次継代して、活力が最適点である状態で実験を行った。
【００４４】
（２）培養培地の製造
前記各乳酸菌菌株のタガトース利用能力を評価するため、ペプトン５ｇ、酢酸ナトリウム三水化物２．５ｇ、硫酸マグネシウム七水化物０．５ｍｌ、硫酸マンガン四水化物０．５ｍｌ、ツイン ８０ ５ｍｌ、クエン酸ニアンモニウム（ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）１ｇ、リン酸ニカルシウム（ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）１ｇ、及び蒸留水４８０ｍｌからなる最小培地を用いた。
【００４５】
前記培地を１２１℃で１５分間滅菌処理した後、これを３個の試料に分けて、各々に５０％のタガトース溶液２０ｍｌ、５０％のブドウ糖溶液２０ｍｌ、５０％のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ、Ｆｒｕｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）溶液２０ｍｌを添加して液体培地を製造した。
【００４６】
（３）培養
前記製造された培地に前記培養した各乳酸菌菌株を１％接種し３７℃のインキュベーターで２４時間培養した。その後、ＥＬＩＳＡリーダーを用いて各々の吸光度を測定し、希釈液を利用した平板培養により菌数を測定する方式でタガトースの利用能力を評価した。
【００４７】
実施例２
実施例１の結果により優秀な菌株を同定
上記実施例１で培養された各乳酸菌菌株の中で、タガトース利用能力の優れた１９種を選別し、これらの１６ｓ ｒＤＮＡを分離・同定した。
【００４８】
前記培養された各乳酸菌の培養液を２ｍｌ採取して（Ｏ．Ｄ（６００）：０．８ないし１．０）１３，０００ ｒｐｍで１分間遠心分離し上澄液を除去した。これに冷蔵保管中のプリバッファー（１５μｌのＲNａｓｅを含む）５０ μｌとライソザイム（ｌｙｓｏｚｙｍｅ）溶液３μｌをよく混合し細胞ペレットにした。
【００４９】
これを３７℃で１５分間静置させ、５分ごとに上下を返しながら反応させた。その後、これに冷蔵保管したＧ−バッファー（２１０μｌ ＲNａｓｅ Ａ、タンパク質分解酵素Ｋ溶液を含む）２５０μｌを加えて完全に混合した。
【００５０】
これを６５℃で１５分間静置させ、５分ごとに上下を返しながら反応させた。その後、これに冷蔵保管中の結合バッファー（ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）を２５０μｌ加えて完全に混合した。
【００５１】
その後、細胞分解物をカラムに８００μｌ以下でローディングし、１３，０００ｒｐｍで１分間遠心分離した後、洗浄のためウォッシュバッファーＡ（２１ｍｌの純粋エタノール（ａｂｓｏｌｕｔｅ ＥｔＯＨ）を含む）５００μｌをカラムに入れて、更に１３，０００ｒｐｍで１分間遠心分離した。
【００５２】
その後、溶液を除去した後１．５ｍｌの新しいエッペンドルフチューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆｆ−ｔｕｂｅ）の上にＧ−スピンカラムを静置した。その後、５０μｌないし２００μｌの溶離バッファーを膜に直接ローディングして、常温で１分静置した後、遠心分離しｇＤＮＡを得た。
【００５３】
検体からＤＮＡを抽出した後、細菌に共通的に存在する１６ｓ ｒＲＮＡや２３Ｓ ｒＲＮＡ、又は１６ｓ ｒＲＮＡと２３Ｓ ｒＲＮＡの間のインタフェース配列をＰＣＲにより増幅した後蛍光末端配列分析法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）を行った。その後、シークエンスゲル（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｇｅｌ）で電気泳動によりＤＮＡを分離し自動シーケンサー（ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ）を用いて塩基配列のヌクレオチド成分をした。その後、その塩基配列の結果をコンピュータに入力し、コンピュータにある菌種別ＤＮＡ塩基配列と比較して菌種を同定した。
【００５４】
総３８５種の菌株の中で、タガトースの利用能力が最も優れている菌株１９種を選別し、これらの１６ｓ ｒＤＮＡを分離し上述のように同定した結果、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）９種、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）６種、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）２種、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）１種、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）１種を確認することができた。
【００５５】
選別された１９種の菌株は、下表１に示した。表１に示したとおり、これらの中で、ラクトバチルス・カゼイシロタ（Ｌ． ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１（Ｌ．ｃａｓｅｉ ＤＮ１１４００１）、ラクトバチルス・カゼイ−０１（Ｌ．ｃａｓｅｉ−０１）、及びラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（Ｌ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＧＧ）が他の菌株に比べてタガトースの利用能力がとりわけ優れていることがわかった。
【００５６】
【表１】
2015512269.tif 000003
【００５７】
実施例３
実施例２で同定された乳酸菌菌株の一部において、他のプリバイオティクスの利用能力
上記実施例２で同定された菌株１９種の中、タガトース利用能力がとりわけ優れている９種の菌株を利用し、タガトース以外の他のプリバイオティクスに対する利用能力を評価し、比較分析した。
【００５８】
本評価のため、実施例１で使用した培地の製造において、タガトース以外に、陽性対照群としてブドウ糖、陰性対照群としてフラクトオリゴ糖、ラクティトール（ｌａｃｔｉｔｏｌ）、ラクチュロース（ｌａｃｔｕｌｏｓｅ）、キシリトール（ｘｙｌｉｔｏｌ）を用いた。
【００５９】
前記各培地に実施例２で同定したラクトバチルス・カゼイ（図１）、ラクトバチルス・カゼイシロタ（図２）、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１（図３）、ラクトバチルス・カゼイ−０１(R)（図４）、ラクトバチルス・ラムノサス（図５）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（図６）、ペディオコッカス・ペントサセウス（図７）、ラクトバチルス・ファルシミニス（図８）、及びラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌ． ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）（図９）を各々接種し、３７℃で、０時間、５時間、１０時間、２４時間、４８時間培養した後の生菌数を測定し各々の生長曲線（ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｒｖｅ）を導出した。
【００６０】
タガトースを効率的に利用する乳酸菌菌株の上記生長曲線を比較した結果、ブドウ糖、タガトース、及びラクチュロースは類似の傾向を示したが、フラクトオリゴ糖及びラクティトールの場合にはその利用能力が低下することがわかった。
【００６１】
実施例４
タガトース及びラクトバチルス・ラムノサス乳酸菌を含有するシンバイオティック濃厚発酵乳組成物の製造
プリバイオティクスとしてタガトースを含有し、プロバイオティクスとしてラクトバチルス・ラムノサスＧＧ菌株を含有するシンバイオティック濃厚発酵乳（糊状発酵乳、液状発酵乳など）食品組成物を製造するため、下記のような方法により下表２の組成の濃厚発酵乳を製造した。
【００６２】
先ず、原乳及び（混合）脱脂粉乳を配合割合により配合し１５０ｂａｒの圧力で均質（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ）した後、熱交換器を通過させて殺菌した後、４０℃で冷却し、上記実施例２で得たラクトバチルス・ラムノサスＧＧ菌株とストレップトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）を接種した。その後、６時間発酵した後、ｐＨが４．６になったときカードを粉砕しながら冷却し、この際、液状タイプの濃厚発酵乳は１５０ｂａｒの圧力で更に均質化して培養液を製造した。
【００６３】
一方、これとは別に、タガトース、白砂糖（果糖又はブドウ糖により代替可能）、イチゴ濃縮果汁、又はイチゴ果肉、ペクチン、イチゴ香、及び精製水を配合し、これを殺菌・冷却しシロップ又はジャムを製造した。
【００６４】
製造した前記培養液とシロップ又はジャムを一定割合で混合した後、これを１０℃以下で冷蔵保管した。
【００６５】
【表２】
2015512269.tif 000004
【００６６】
実施例５
タガトース及びラクトバチルス・カゼイ乳酸菌を含有するシンバイオティック発酵乳組成物の製造
プリバイオティクスとしてタガトースを含有し、プロバイオティクスとしてラクトバチルス・カゼイ−０１(R)菌株を含有するシンバイオティック発酵乳（液状発酵乳など）の食品組成物を製造するため、下記の方法により下表５の組成で濃厚発酵乳を製造した。
【００６７】
先ず、（混合）脱脂粉乳、含水結晶ブドウ糖、精製水を配合し、これを１０５℃で９０分殺菌した後４０℃に冷却し実施例２で得たラクトバチルス・カゼイ−０１(R)を接種した。その後、５日間発酵させｐＨ３．６になったとき冷却し培養液を製造した。培養液の組成は下表３に示す。
【００６８】
一方、これとは別に、タガトース、白砂糖（果糖により代替可能）、精製水を配合し殺菌・冷却してシロップを製造した。シロップの組成は下表４に示す。
【００６９】
製造した前記培養液とシロップを１：１の割合で混合した後、これを更に精製水と１：１で混合しながら少量のヨーグルト香を加えた後、１０℃以下で冷蔵保管した。
【００７０】
最終的に製造した発酵乳組成物の組成は、下表５に示す。
【００７１】
【表３】
2015512269.tif 000005
【００７２】
【表４】
2015512269.tif 000006
【００７３】
【表５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年10月3日(2014.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タガトース及びラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）を含有する、食品組成物。
【請求項２】
前記ラクトバチルス・カゼイは、ラクトバチルス・カゼイシロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カゼイＤＮ１１４００１及びラクトバチルス・カゼイ−０１(R)からなる群より選ばれた少なくとも１種である、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項３】
前記組成物１００重量部に対して、
タガトースを０超過〜２０重量部、ラクトバチルス・カゼイを０超過〜１重量部で含有する、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項４】
全組成物１００重量部に対して、
タガトース０を超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・カゼイを０超過〜１重量部；
脱脂粉乳を０超過〜１０重量部；及び
精製水を５０ないし９９重量部；
で含有する、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項５】
タガトース及びラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含有する、食品組成物。
【請求項６】
前記ラクトバチルス・ラムノサスは、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧである、請求項５に記載の食品組成物。
【請求項７】
前記組成物１００重量部に対して、
タガトースを０超過〜２０重量部、ラクトバチルス・ラムノサスを０超過〜１重量部で含有する、請求項５に記載の食品組成物。
【請求項８】
全組成物１００重量部に対して、
タガトースを０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・ラムノサスを０超過〜１重量部；
原乳を５０ないし９９重量部；
ペクチンを０超過〜１重量部；及び
精製水を０超過〜５０重量部；
で含有する、請求項５に記載の食品乳組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対し、
タガトースを０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・カゼイを０超過〜１重量部；
脱脂粉乳を０超過〜１０重量部；及び
精製水を５０ないし９９重量部；
を含有する、食品組成物が提供される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明のさらなる実施様態において、全組成物１００重量部に対して、
タガトース０超過〜２０重量部；
ラクトバチルス・ラムノサス０超過〜１重量部；
原乳５０ないし９９重量部；
ペクチン０超過〜１重量部；及び
精製水０超過〜５０重量部；
を含有する、食品組成物が提供される。
【国際調査報告】
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