(57)【要約】  本発明は、幼児または乳児の粘膜免疫を向上させるための使用のための、Ｂ細胞活性化因子を提供する。さらに、本発明は、幼児または乳児の粘膜免疫の刺激用のＢ細胞活性化因子を含んでいる、経口投与のための調製物を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
幼児または乳児の粘膜免疫を向上させるための使用のためのＢ細胞活性化因子。
【請求項２】
Ｂ細胞活性化因子を含んでいることを特徴とする、幼児または乳児の粘膜免疫の刺激用の、経口投与のための調製物。
【請求項３】
Ｂ細胞活性化因子を含んでいる幼児調乳または乳児調乳である、請求項２に記載の調製物。
【請求項４】
経口投与用の、Ｂ細胞活性化因子の水中の懸濁液である、請求項２に記載の調製物。
【請求項５】
調製物１ｍｌあたり、２００〜３５００ｐｇのＢ細胞活性化因子を含んでいる、請求項２に記載の調製物。
【請求項６】
調製物１ｍｌあたり、４００〜２５００ｐｇのＢ細胞活性化因子を含んでいる、請求項５に記載の調製物。
【請求項７】
調製物１ｍｌあたり、５００または２０００ｐｇのＢ細胞活性化因子を含んでいる、請求項２に記載の調製物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、幼児または乳児の免疫の向上における使用のためのＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、およびＢＡＦＦを含んでいる経口調製物に関する。
〔背景技術〕
Ｂ細胞は体液性免疫反応ならびに細胞性免疫反応において重要な役割を担っている。未成熟Ｂ細胞は骨髄内で発生し、脾臓へ移動し、そこで移行（transitional)Ｂ細胞となる。それらのうちいくつかは成熟Ｂ細胞へとさらに分化する。一般的に、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）の存在は、Ｂ細胞の正常な発達のために、本質的に重要である。
【０００２】
ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）ファミリーのメンバーである、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ（ＢＬｙＳ、Ｔａｌｌ−１またはＴＮＦＳＦ１３とも呼ばれる））は、Ｂ細胞の生存および成熟を制御する重要なサイトカインである。ＢＡＦＦはＢ細胞における抗体の特定のサブクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥなど）の生産を誘導し、免疫学的なクラススイッチ反応にも関与している。ＢＡＦＦを必要とする経路における異常なシグナリングは、多数の疾患（例えば体液性免疫レベルおよび細胞性免疫レベルの両方において生じる調節不全における、アレルギー、自己免疫疾患、感染、ならびにいくつかの癌疾患と密接に関連していると思われる（Cerutti A, Puga I, Cols M: Innate control of B cell responses. Trends Immunol. 2011 May; 32(5):202-11; Lied GA, Berstad A.: 48. Functional and clinical aspects of the B-cell-activating factor (BAFF): a narrative review. Scand J Immunol. 2011 Jan;73(1):1-7.; Cancro MP: The BLyS family of ligands and receptors: an archetype for niche-specific homeostatic regulation. Immunol Rev. 2004 Dec;202:237-49）。
【０００３】
ＢＡＦＦは多数の免疫賦活性反応において重要な因子である。Tertilら（Tertilt C, Joh J, Krause A, Chou P, Schneeweiss K, Crystal RG, Worgall S. Expression of B-cell activating factor enhances protective immunity of a vaccine against Pseudomonas aeruginosa. Infect Immun. 2009 Jul;77(7):3044-55）は、インビボにおけるＢＡＦＦの一過性的に増大した発現は、抗原特異的な体液性免疫を向上させることが可能であり、そのため細胞外の細菌に対する抗体の誘導用のワクチンにおいて極めて有用であり得ると２００９年に報告した。著者らは、不活化細菌を用いてワクチン接種したとき、ＢＡＦＦの短期間の増加によってPseudomonas aeruginosaに対する免疫反応が亢進されることを指摘し、また、ＢＡＦＦはその免疫賦活効果のために、ワクチンにおける有効なアジュバントとして使用され得ることを示している。
【０００４】
人工栄養を与えられる幼児（授乳年齢の小児）または乳児（授乳年齢の哺乳類の子）の消化管における粘膜免疫は、母乳で育てた幼児または乳児のものと比較して損なわれており、母乳で育てられていない乳児または幼児の、消化管の感染の著しい高発生率の原因となる。
〔発明の開示〕
本発明の対象は、幼児または乳児の粘膜免疫の向上における使用のためのＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）である。
【０００５】
本発明の対象は、幼児または乳児の粘膜免疫を向上させるための薬剤の製造のためのＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）の使用である。
【０００６】
さらに、本発明の対象は幼児または乳児へＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）を投与する工程を包含する、幼児または乳児の粘膜免疫を向上させるための方法である。
【０００７】
幼児は０〜２歳までの範囲に相当する、授乳年齢の小児である。
【０００８】
乳児は授乳年齢の哺乳類の子である。
【０００９】
本発明の構成中で、驚くべきことに特に人間において母乳中に有意な量でＢＡＦＦが分泌されていることが見出された。母乳中のＢＡＦＦのレベルは、出産後すぐ、母親の血清中の循環値の２５倍を超える極値に達し、これらのレベルは授乳期間の間、連続的な指数関数的減少を示す。初乳中のＢＡＦＦの存在は、出生後早期においてＢ細胞に強力な成熟シグナルを与えるが、一方このシグナルの重要性は子の特異免疫の増加に伴い出産からの時間経過と共に減少する。ＢＡＦＦは局所的に産生された抗体が修飾されるメカニズムである、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ抗体サブタイプの生理学的クラススイッチに関与し、そのため、母乳へのＢＡＦＦの放出は新生児の消化管粘膜リンパ組織（ＧＡＬＴ）中のＢ細胞に影響し、このことにより幼児に外部環境からの感染に対する重要な防御を与える。ＢＡＦＦは新生児におけるＢ細胞の蓄積および成熟、ならびにＧＡＬＴ中のＩｇＡの腸管内生成の増加を引き起こす。
【００１０】
本発明のさらなる対象は、ＢＡＦＦを含んでいる、幼児または乳児の粘膜免疫の刺激用の、経口投与のための調製物である。好ましい実施形態では、ＢＡＦＦを含んでいる幼児調乳もしくは乳児調乳、またはＢＡＦＦの水中の懸濁液である。
【００１１】
粘膜免疫を向上させるための調製物は、幼児または乳児の高頻度の人工栄養（すなわち０〜２歳の間の年齢範囲における）用途である。好ましい実施形態では、調製物は０〜６か月の間の年齢の幼児用である。
【００１２】
本発明の好ましい実施形態では、調製物は、調製物１ｍｌあたり２００〜３５００ｐｇのＢＡＦＦを含んでおり、より好ましくは４００〜２５００ｐｇ／ｍｌ、最も好ましくは５００〜２０００ｐｇ／ｍｌ含んでいる。
【００１３】
幼児調乳は、牛乳または他の動物の乳および/または幼児の栄養に好適であると承認されている他の成分に基づいた製品である。製造業者の説明書に合わせて最終的な消費のために調製された幼児調乳は、１００ｍｌあたり２５０ｋＪの最少エネルギー価を有するべきであるが、エネルギー価は１００ｍｌあたり２９５ｋＪを超えるべきではなく、それぞれ１００ｋｃａｌあたり、表１に規定さている栄養素の最少から最大のレベルを含んでいるべきである（Koletzko B, Baker S, Cleghorn G, Neto UF, Gopalan S, Hernell O, Hock QS, Jirapinyo P, Lonnerdal B, Pencharz P, Pzyrembel H, Ramirez-Mayans J, Shamir R, Turck D, Yamashiro Y, Zong-Yi D.: Global standard for the composition of infant formula: recommendations of an ESPGHAN coordinated international expert group. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2005 Nov;41(5):584-99）。
【００１４】
世界保健機構（ＷＨＯ）と提携した国連食糧農業機関（ＦＡＯ）のコーデックス委員会は、消費者の健康が守られ、適切な生産工程が国際的に保証されるように、食品のための基準を長期間にわたって開発し、関連したテキストを作成している。幼児調乳におけるコーデックス規格の基準は、１９７０年代における利用可能な科学知識に基づいて１９８１年に採用され、現在改訂されている。この過程の一部として、コーデックス委員会の栄養・特殊用途の食品部会（Nutrition and Foods for Special Dietary Uses）は、科学的分析に基づき、対象に関して存在する科学報告書を考慮した、幼児用調製粉乳中の栄養レベルについて提案をするために、国際科学者共同体との協議過程を開始することを、栄養に関するＥＳＰＧＨＡＮ委員会に依頼した。従ってＥＳＰＧＨＡＮ委員会は、幼児用調製粉乳の組成物に関する新規な推奨（表１）を２００５年に承認した国際的な専門家団体を創設した。
【００１５】
そのため幼児用調製粉乳の成分は当業者に十分に知られている。
【００１６】
【表１】
2015527352.tif 000002
【００１７】
2015527352.tif 000003
【００１８】
母乳に対して最大の類似性を目指す幼児用調製粉乳の製造における傾向があることを考慮すれば、幼児用調製粉乳におけるＢＡＦＦのレベルは人間の母乳における動態レベルを模倣すべきであるということは、適切かつ論理的である：そのため、本発明に係る調製物が、幼児用調製粉乳である場合は、調製乳１ｍｌあたり１５００〜３５００ｐｇのＢＡＦＦを含んでいることが特に推奨され、０〜３か月齢の小児に対しては、好ましくは２０００ｐｇ／ｍｌ、および３〜６か月齢の小児に対しては、４００〜８００ｐｇ／ｍｌ、好ましくは５００ｐｇ／ｍｌを含んでいることが推奨される。
【００１９】
特に、本発明に係る調製物は、未熟新生児および母乳で育てられていない新生児、ならびに幼児用調製粉乳を用いている年長の幼児における粘膜免疫の刺激に好適である。含まれているＢＡＦＦは、記憶Ｂ細胞のプールの発達および生理学的ミクロビオームの形成のために非常に重要であり得るために、調製物は０〜６か月齢の幼児にとって特に重要である。
【００２０】
ＢＡＦＦによる幼児用調製粉乳の栄養強化の利点は、小児の十分な粘膜免疫の形成の迅速な開始、十分なマイクロバイオームの形成ならびに消化管内で使用された調合物の個々の成分に対する耐性の急速な発生である。
【００２１】
本発明は人の医薬および栄養ならびに獣医学の医薬および栄養のために有用である。
〔図面の簡単な説明〕
図１は、出産からの時間経過に対する授乳中の母親の血清中のＢＡＦＦの含量を示している。
【００２２】
図２は、出産からの時間経過に対する授乳中の母親の母乳中のＢＡＦＦの含量を示している。
〔発明の実施例〕
[実施例１]
自然発生の、合併症を伴わない生理学的妊娠であって、かつ、新生児の大きさが妊娠期間（ＡＧＡ）において適切であった、７人の授乳中の女性からの母乳および抹消静脈血のサンプルを取得し、サンプルを常に組で採取した：母乳−母親の静脈血；この採取を出産時（乳が既に存在する場合）、出産後１〜３日目、１２〜１４日目、２８〜３０日目、８８〜９０日目、および１７８〜１８０日目に行った。調査の全持続期間中、小児には完全に母乳のみ与えた。調査のための適格性のための基準は以下を含む：Ａ）自然妊娠、Ｂ）合併症を伴わない一回の妊娠、Ｃ）合併症を伴わない自然分娩、Ｄ）ＷＨＯの定義に基づいた妊娠２４〜２８週の間の経口ブドウ糖負荷試験（ｏＧＴＴ）の正常な結果、およびＥ）妊娠期間（ＡＧＡ）に対して適切な大きさの胎児。本調査は、ヘルシンキ宣言に従って、ブルノのマサリク大学の医学部の倫理委員会によって承認されている。乳を、調査の所定の時点において両方の乳房から手動の抽出によって採取し、可能な場合が５ｍｌの乳を採取した（特に時点１および２においては、採取され得る限りの初乳を採取した）。母親の血清中および母乳中のＢＡＦＦタンパク質の濃度を、製造業者の指示書に従って、ＢＡＦＦ  ＥＬＩＳＡ（R&D Systems, Inc. Minneapolis, USA）試験セットを使用して決定した。解凍された乳のサンプルを、まず０℃で１５分間１２０００ｘｇで遠心分離によって脱脂し、続いて試験範囲（６２．５〜４０００ｐｇ/ｍｌ）を得るために較正溶媒によって繰り返し４０回以上希釈した。試験間および試験内の変動係数（ＣＶ)は、３．３８ｐｇ/ｍｌの検出限界を伴って、母乳中のＢＡＦＦに対し、６．０％未満および母親の血清中のＢＡＦＦに対し９．０％未満であった。
【００２３】
全期間中の調査を受けた全ての群の女性についての母乳中のＢＡＦＦタンパク質の分析は、モニタリングされた時点の間のＢＡＦＦの濃度において有意な変化を示さなかった［Ｆ（５；３８）＝３．０９，ｐ＝０．６８］が、母乳中の濃度は調査の継続期間中劇的に変化した［Ｆ（５；４２）＝３３．０８，ｐ＝０．００００００１］。母乳中ではＢＡＦＦの一定の存在が観察されたが、乳中のＢＡＦＦの平均濃度は出産時において、血清中のものよりおよそ２５倍高く［平均±ＳＤ：３２７０６±２６１７２ｐｇ／ｍｌ］、１〜３日目において、６倍高く［平均±ＳＤ：８７６９±２４８１ｐｇ／ｍｌ］、１２〜１４日目において、乳中および母親の血清中で、およそ同一であり［平均±ＳＤ：１４９３±８９２ｐｇ／ｍｌ］、その後、乳中のＢＡＦＦのレベルは母親の抹消血液中で観察されたレベル以下に低下した。２８〜３０日目において、［平均±ＳＤ：１０９１±５２６ｐｇ／ｍｌ］、８８〜９０日目において［平均±ＳＤ：４４５±２４５ｐｇ／ｍｌ］、および１７８〜１８０日目において［平均±ＳＤ：３５４±３３５ｐｇ／ｍｌ］。添付した図面は、モニタリング下にある期間の血清中のＢＡＦＦの含量の変化（図１）および母乳中のＢＡＦＦの含量の変化（図２）を示す。
【００２４】
［実施例２］
早期人工栄養（出産後２か月目の終わりまで）のための幼児用調製粉乳に基づいた調製物の組成。幼児用調製粉乳は、当業者に十分に知られた調製方法を用いて調製される。
【００２５】
【表２】
2015527352.tif 000004
【００２６】
2015527352.tif 000005
【００２７】
［実施例３］
継続的な人工栄養（出産後２か月目の終わりから）のための幼児用調製粉乳に基づいた調製物の組成。幼児用調製粉乳は当業者に十分に知られた調製方法を用いて調製される。
【００２８】
【表３】
2015527352.tif 000006
【００２９】
2015527352.tif 000007
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、出産からの時間経過に対する授乳中の母親の血清中のＢＡＦＦの含量を示している。
【図２】図２は、出産からの時間経過に対する授乳中の母親の母乳中のＢＡＦＦの含量を示している。
【図１】
2015527352.tif 000008
【図２】
2015527352.tif 000009
【国際調査報告】
2015527352.tif 000010
2015527352.tif 000011
2015527352.tif 000012