(57)【要約】  本発明は、ヒトの癌を治療する方法、およびこのような治療に有用な医薬の組み合わせに関する。特に、この方法は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを、癌の治療が必要なヒトに投与することを含む癌治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）下記構造（Ｉ）の化合物：
【化１】
2015533165.tif 000023
またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｉｉ）下記構造（ＩＩ）の化合物：
【化２】
2015533165.tif 000024
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との組み合わせ。
【請求項２】
請求項１に記載の組み合わせと、薬学的に許容可能な一以上の担体とを含む、組み合わせキット。
【請求項３】
構造（Ｉ）の化合物の量が、１０ｍｇ〜１，０００ｍｇから選択される量であり、該量が１日に１回または２回投与され、かつ構造（ＩＩ）の化合物の量が、０．１ｍｇ〜５ｍｇから選択される量であり、該量が１日に１回投与される、請求項１または２に記載の組み合わせ。
【請求項４】
癌を治療するための一以上の医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組み合わせの使用。
【請求項５】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との治療に有効な量の組み合わせをヒトにｉｎ  ｖｉｖｏで投与することを含み、この組み合わせが、所定時間内に投与され、この組み合わせが、ある継続期間にわたって投与される、癌の治療が必要なヒトの癌を治療する方法。
【請求項６】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩の量が、約２０ｍｇ〜約８００ｍｇから選択され、該量が、１日に１回または２回投与され、かつ
Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量が、約０．１２５ｍｇ〜約５ｍｇから選択され、該量が１日に１回投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩の量が、約２０ｍｇ〜約５００ｍｇから選択され、該量が１日に１回または２回投与され、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドの量が、約０．１２５ｍｇ〜約４ｍｇから選択され、該量が１日に１回投与され、この組み合わせが、少なくとも連続した１４日間投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩およびＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、連続した１〜３日間、互いに１２時間以内に投与され、その後、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩が連続した３〜７日間投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との治療に有効な量の組み合わせを、ヒトにｉｎ  ｖｉｖｏで投与することを含み、この組み合わせが、所定時間内に投与され、この組み合わせが、所定の期間に渡り投与される、癌の治療が必要なヒトにおいて、脳腫瘍（神経膠腫）、神経膠芽腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、カウデン病、レミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽細胞腫、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓の癌、黒色腫、卵巣、膵臓、前立腺の癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺癌、Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞型白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞性リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌から選択される癌を治療する方法。
【請求項１０】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩の量が、約１０ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択され、該量が１日に１回または２回投与され、かつＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量が、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇから選択され、該量が１日に１回投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
５２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩の量が、約２０ｍｇ〜約８００ｍｇから選択され、該量が１日に１回または２回投与され、かつＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドの量が、約０．１２５ｍｇ〜約４ｍｇから選択され、該量が１日に１回投与され、この組み合わせが、連続した少なくとも１４日間投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩およびＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、連続した１〜３日間、互いに１２時間以内に投与され、その後、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミド塩酸塩が連続した３〜７日間投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との治療に有効な量の組み合わせを、ヒトにｉｎ  ｖｉｖｏで投与することを含み、この組み合わせの化合物が逐次投与される、癌の治療が必要なヒトにおいて、脳腫瘍（神経膠腫）、神経膠芽腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、カウデン病、レミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽細胞腫、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓の癌、黒色腫、卵巣、膵臓、前立腺の癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺、Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞型白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞性リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌から選択される癌を治療する方法。
【請求項１８】
５２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩の量が、約１０ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択され、かつＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量が、約０．１２５ｍｇ〜約５ｍｇから選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩の量が、約２０ｍｇ〜約８００ｍｇから選択され、かつＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の量が、約０．１２５ｍｇ〜約４ｍｇから選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドが、連続した１〜３０日間投与され、その後、１〜１４日間の任意の休薬期間、その後、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、１〜３０日間投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
５２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドが、連続した１〜２１日間投与され、その後、３〜１０日間の休薬期間、その後、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが１〜２１日間投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
癌が、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺、乳房、膵臓、腎細胞癌、卵巣、頭頸部および子宮内膜の癌から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドおよびＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、連続した２日間、互いに１２時間以内に投与され、その後、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドが、連続した４〜６日間投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項６に記載の方法。
【請求項２８】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドおよびＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、７日間のうち２日間、互いに１２時間以内に投与され、７日間のその他の日の間に、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドが単独で投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項７に記載の方法。
【請求項２９】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドおよびＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、連続した２日間に互いに１２時間以内に投与され、その後、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドが、連続した４〜６日間投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項１２に記載の方法。
【請求項３０】
２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドおよびＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドジメチルスルホキシドが、７日間のうち２日間、互いに１２時間以内に投与され、７日間のその他の日の間に、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドが単独で投与され、場合により、その後に、１回以上の繰り返し投薬サイクルを行う、請求項１１に記載の方法。
【請求項３１】
ＦＡＫ阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩と、ＭＥＫ阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩とを含む、組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
技術分野
本発明は、哺乳動物の癌を治療する方法、およびこのような治療に有用な組み合わせに関する。特に、本発明は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤の一種である２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、分裂促進因子活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼ／細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）の一種であるキナーゼ（本明細書では以下、ＭＥＫと称する）阻害剤であるＮ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる新規組み合わせ、これらを含む医薬組成物、および癌の治療においてこのような組み合わせを使用する方法に関する。
【０００２】
背景技術
一般的に、癌は、細胞分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する正常なプロセスの脱制御から生じる。アポトーシス（プログラム細胞死）は、胚発生、および種々の疾患（例えば神経変性疾患、心血管疾患および癌）の発病に重要な役割を果たす。アポトーシスのキナーゼ制御を伴う最も一般的な研究された経路の１つは、核の細胞表面での成長因子受容体からの細胞内シグナル伝達である ADDIN ENRef （ＣｒｅｗｓおよびＥｒｉｋｓｏｎ、Ｃｅｌｌ、７４：２１５−１７、１９９３）。
【０００３】
チロシンキナーゼは、細胞増殖、細胞の生存および細胞遊走を含む多くの細胞プロセスの制御に重要な役割を果たす。特定のチロシンキナーゼが突然変異によって活性化するか、または、多くのヒトの癌で異常に発現することが知られている。例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、乳房、肺、脳、扁平上皮癌、胃および他のヒトの癌において、変異しているか、および／または過剰に発現していることがわかっている。ＥＧＦＲのチロシンキナーゼ活性の選択的な阻害剤は、変異および／または過剰発現したＥＧＦＲを含む癌の治療において臨床的な価値があることが示されてきた。従って、特定のチロシンキナーゼの選択的な阻害剤は、増殖性疾患、例えば、癌の治療に有用である。
【０００４】
ＦＡＫ（ＰＴＫ２遺伝子によってコードされる）は、インテグリンおよび成長因子受容体からのシグナルを取り込む非受容体チロシンキナーゼである。ＦＡＫは、細胞の生存、増殖、付着、遊走および浸潤の制御に役割を果たすことが報告されてきた（ＭｃＬｅａｎら、２００５、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ５：５０５−５１５）。さらに、ＦＡＫは、複数のチロシン残基のリン酸化によって制御され、活性化される。ＦＡＫ  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の過剰発現は、限定されないが、乳房、結腸、甲状腺、肺、卵巣および前立腺の癌を含む多くのヒト固形腫瘍で示されているだけではなく、限定されないが、白血病、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む血液由来の癌も含む（Ｏｗｅｎｓら、１９９５、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：２７５２−２７５５；Ａｇｏｃｈｉｙａら、１９９９、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：５６４６−５６５３；Ｇａｂａｒｒｏ−Ｎｉｅｃｋｏら、２００３、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．２２：３５９−３７４；Ｒｅｃｈｅｒら、２００４、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６４：３１９１−３１９７；ＺｈａｏおよびＧｕａｎ、２８：３５−４９、２００９、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．）。さらに顕著には、リン酸化されたＦＡＫが、正常な組織と比較して悪性度が増すという証拠があり（Ｇｒｉｓａｒｕ−Ｇｒａｎｏｖｓｋｙら、２００５、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１３：３７２−３７８）、転移の予後マーカーをあらわすことができる。ＦＡＫ活性は、進行した転移性ヒト癌に明らかに関与している（ＺｈａｏおよびＧｕａｎ、２８：３５−４９、２００９、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．）。
【０００５】
ＭＥＫは、Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル変換経路を媒介するキナーゼとしての細胞増殖の制御に関与することが知られており、Ｒａｆファミリー（Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆなど）は、ＭＥＫファミリー（ＭＥＫ−１、ＭＥＫ−２など）を活性化し、ＭＥＫファミリーは、ＥＲＫファミリー（ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２）を活性化させる。
【０００６】
癌、特に、直腸結腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌などにおけるＲａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル変換経路の活性化は、頻繁に観察されてきた。
【０００７】
それに加え、シグナル分子、例えば、成長因子、サイトカインなどによって作られるシグナルによって、ＭＥＫ−ＥＲＫの活性化に向かうため、これらの機能の阻害剤は、上流のキナーゼ、例えば、ＲＴＫおよびＲａｆの機能の抑制よりも、Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル変換をもっと効果的に抑制すると考えられる。
【０００８】
さらに、ＭＥＫ阻害活性を有する化合物が、ＥＲＫ１／２活性の阻害および細胞増殖の抑制を効果的に誘発することも知られており（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｖｏｌ．２７６、Ｎｏ．４、ｐｐ．２６８６−２６９２、２００１）、この化合物は、望ましくない細胞増殖、例えば、腫瘍の発生および／または癌によって引き起こされる疾患に対する影響を示すと予想される。
【０００９】
癌の影響を被った個体のもっと効果的および／または向上した治療を提供する新規治療を提供することが有用であろう。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の一態様は、
（ｉ）構造（Ｉ）の化合物：
【化１】
2015533165.tif 000002
またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｉｉ）構造（ＩＩ）の化合物：
【化２】
2015533165.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物との組み合わせを提供する。
【００１１】
本発明の一態様は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたは薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物との治療に有効な量の組み合わせをヒトにｉｎ  ｖｉｖｏで投与することを含む、癌の治療が必要なヒトの癌を治療する方法を提供する。
【００１２】
本発明の一態様は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたは薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物との治療に有効な量の組み合わせをヒトにｉｎ  ｖｉｖｏで投与することを含み、この組み合わせが、所定時間内に投与され、この組み合わせが、ある継続期間にわたって投与される、癌の治療が必要なヒトの癌を治療する方法を提供する。
【００１３】
本発明の一態様は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたは薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物との治療に有効な量の組み合わせをヒトにｉｎ  ｖｉｖｏで投与することを含み、この組み合わせの化合物が逐次投与される、癌の治療が必要なヒトの癌を治療する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、Ｍｅｒｏ−８２細胞の増殖に対する、化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ａと化合物Ｂとの組み合わせによる細胞増殖阻害の用量応答曲線を示す。
【図２】図２は、ＮＣＩ−Ｈ２０５２細胞の増殖に対する、化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ａと化合物Ｂとの組み合わせによる細胞増殖阻害の用量応答曲線を示す。
【図３】図３は、ＮＯ３６細胞の増殖に対する、化合物Ａ、化合物Ｂまたは化合物Ａと化合物Ｂとの組み合わせによる細胞増殖阻害の用量応答曲線を示す。
【図４】図４は、複数の中皮腫細胞株の増殖に対する、単一の薬剤として、または組み合わせた状態の化合物Ａおよび化合物Ｂについて、細胞集団の正味の変化を示す。
【図５】図５は、複数の中皮腫細胞株において、化合物Ａと化合物Ｂとの組み合わせからのｄＥＣ５０値と比較した化合物ＡのｄＥＣ５０値についての死亡ＥＣ５０（ｄＥＣ５０）値を示す。
【図６】図６は、複数の中皮腫細胞株において、化合物Ａと化合物Ｂとの組み合わせからの死亡ＥＣ５０（ｄＥＣ５０）値と比較した化合物ＢのｄＥＣ５０値についてのｄＥＣ５０値を示す。
【発明の具体的説明】
【００１５】
本発明は、抗増殖活性を示す組み合わせを用いて癌を治療する方法に関する。適切には、この方法は、構造（Ｉ）：
【化３】
2015533165.tif 000004
によって表される化合物２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩、適切には塩酸塩（本明細書で以下、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩）と、構造（ＩＩ）：
【化４】
2015533165.tif 000005
によって表される化合物Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミド、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物（本明細書で以下、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切にはそのジメチルスルホキシド溶媒和物）とを同時に投与することによって癌を治療することに関する。
【００１６】
国際出願日が２００９年１０月２７日の国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ０９／６２１６３号、国際公開日が２０１０年６月３日の国際公開番号ＷＯ２０１０／０６２５７８号において、特に、癌の治療においてＦＡＫ活性の阻害剤として有用であるとして、化合物Ａが、その薬学的に許容可能な塩とともに開示され、請求され、その開示内容全体が引用することにより本明細書の開示の範囲とされ、化合物Ａは、実施例４１ａまたは４１ｂの化合物である。化合物Ａおよびその塩酸塩は、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０９／６２１６３号に記載したように調製することができる。
【００１７】
化合物Ｂは、国際出願日が２００５年６月１０日の国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号、国際出願日が２００５年１２月２２日の国際公開番号ＷＯ２００５／１２１１４２号において、特に、癌の治療においてＭＥＫ活性の阻害剤として有用であるとして、化合物Ｂが、その薬学的に許容可能な塩および溶媒和物とともに開示され、請求され、その開示内容全体が引用することにより本明細書の開示の範囲とされ、化合物Ｂは、実施例４−１の化合物である。化合物Ｂは、国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号に記載されるように調製することができる。化合物Ｂは、２００６年１月１９日に公開された米国特許公開第ＵＳ２００６／００１４７６８号に記載されるように調製することができ、この開示内容は、引用することにより本明細書の開示の範囲とされる。
【００１８】
適切には、化合物Ｂは、ジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。適切には、化合物Ｂは、ナトリウム塩の形態である。適切には、化合物Ｂは、水和物、酢酸、エタノール、ニトロメタン、クロロベンゼン、１−ペンタノール（１−ｐｅｎｔａｎｃｉ）、イソプロピルアルコール、エチレングリコールおよび３−メチル−１−ブタノールから選択される溶媒和物の形態である。これらの溶媒和物および塩の形態を、国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号または米国特許公開第ＵＳ  ２００６／００１４７６８号の記載から、当業者によって調製することができる。
【００１９】
本発明の治療に有効な量の組み合わせの投与は、この組み合わせが、治療に有効な量の要素化合物を個々に投与したときと比較して、以下の１つ以上の優れた特性を与えるという点で、個々の要素化合物よりも有利である。（ｉ）最も有効な単一薬剤よりも抗癌効果が高い、（ｉｉ）相乗的または高度に相乗的な抗癌活性、（ｉｉｉ）低い副作用プロフィールとともに、優れた抗癌活性を与える投薬プロトコル、（ｉｖ）毒性の影響のプロフィールの低減、（ｖ）治療自由度の増加、または（ｖｉ）片方または両方の要素化合物のバイオアベイラビリティの増加。
【００２０】
本発明の化合物は、１つ以上のキラル原子を含んでいてもよく、または、そうでなければ２個のエナンチオマーとして存在することができる場合もある。従って、本発明の化合物は、エナンチオマー混合物および精製されたエナンチオマーまたはエナンチオマーを豊富に含む混合物を含む。また、すべての互変異性体および互変異性体の混合物が、化合物Ａおよびその薬学的に許容可能な塩並びに化合物Ｂおよび薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の範囲に含まれることが理解される。
【００２１】
本発明の化合物は、溶媒和物を形成してもよく、溶媒和物は、溶質（本発明では、化合物Ａまたはその塩および／または化合物Ｂまたはその塩）と溶媒とによって作られる化学量論量が変化する複合体であると理解される。本発明の目的のためのこのような溶媒は、溶質の生体活性を妨害しないだろう。適切な溶媒の例としては、限定されないが、水、メタノール、ジメチルスルホキシド、エタノールおよび酢酸が挙げられる。適切には、使用される溶媒は、薬学的に許容可能な溶媒である。適切には、使用される溶媒は、水またはジメチルスルホキシドである。
【００２２】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、当業者によって簡単に調製される。
【００２３】
また、本発明において、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、および／または化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物がプロドラッグとして投与される本発明の組み合わせを用いて癌を治療する方法が想定される。本発明の化合物の薬学的に許容可能なプロドラッグは、当業者によって簡単に調製される。
【００２４】
投薬プロトコルを参照するとき、「日」、「１日あたり」などの用語は、午前零時に開始し、次の午前零時で終わるカレンダー上の１日の中の時間を指す。
【００２５】
「治療する」という用語およびその派生語は、本明細書で使用する場合、治療目的の治療を意味する。特定の条件に関し、治療することは、（１）その状態の１つ以上の生物学的徴候の状態を軽減または予防すること、（２）（ａ）その状態を引き起こすか、その状態の原因となる生物学的カスケードの１つ以上の点または（ｂ）その状態の１つ以上の生物学的徴候を妨害すること、（３）その状態またはその治療に関連する１つ以上の症状、効果または副作用を緩和すること、または（４）その状態またはその状態の１つ以上の生物学的徴候の進行を遅らせることを意味する。これにより、予防目的の治療も想定される。当業者は、「予防」が絶対的な用語ではないことを理解するだろう。医学において、「予防」は、ある状態またはその生物学的徴候の可能性または重篤度を実質的に下げるために薬物を予防的に投与すること、またはこのような状態または生物学的徴候の発生を遅らせることを指すと理解される。予防目的の治療は、例えば、ある被験体が、癌になるリスクが高いと考えられるとき、例えば、ある被験体が、癌の強い家族歴を有する場合、またはある被験体が発癌物質に曝露したときに適している。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「有効な量」という用語は、例えば、研究者または医師によって求められている組織、系、動物またはヒトの生体応答または医学的応答を誘発する薬物または医薬薬剤の量を意味する。さらに、「治療に有効な量」という用語は、このような量を投与されていない対応する被験体と比較した場合に、疾患、障害または副作用の治療、治癒、予防または軽減を向上させ、またはある疾患または障害の進行速度を下げる任意の量を意味する。この用語は、その範囲内に通常の生理学的機能を高めるのに有効な量も含む。
【００２７】
「組み合わせ」という用語およびその派生語とは、本明細書で使用する場合、治療に有効な量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の同時投与、または任意の様式の別個の逐次投与のいずれかを意味する。好ましくは、投与が同時ではない場合、化合物を互いに近接する近い時間に投与する。さらに、化合物を同じ投薬形態で投与するかどうかは問題ではなく、例えば、ある化合物を局所的に投与してもよく、他の化合物を経口投与してもよい。適切には、両方の化合物を経口投与する。
【００２８】
「組み合わせキット」という用語は、本明細書で使用する場合、本発明の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを投与するために用いられる単一または複数の医薬組成物を意味する。両方の化合物を同時に投与する場合、組み合わせキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを単一の医薬組成物、例えば、錠剤、または別個の医薬組成物に含んでいてもよい。化合物が同時に投与されない場合、組み合わせキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを別個の医薬組成物に含むだろう。組み合わせキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物とを、１個の包装の別個の医薬組成物に、または別個の包装の別個の医薬組成物に含んでいてもよい。
【００２９】
一側面において、
薬学的に許容可能な担体と関連して、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、
薬学的に許容可能な担体と関連して、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物といった要素を含む組み合わせキットが提供される。
【００３０】
本発明の一態様において、組み合わせキットは、
薬学的に許容可能な担体と関連して、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、
薬学的に許容可能な担体と関連して、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩といった要素を含み、
これらの要素は、逐次投与、別個の投与および／または同時投与に適した形態で提供される。
【００３１】
一態様において、組み合わせキットは、
薬学的に許容可能な担体と関連して、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を含む第１の容器と、
薬学的に許容可能な担体と関連して、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含む第２の容器と、
第１の容器および第２の容器を入れるための容器手段とを含む。
【００３２】
「組み合わせキット」は、例えば、投薬量および投薬指示のような指示によって与えられてもよい。このような投薬量および投薬指示は、医師に提供される種類のものであってもよく（例えば、薬物製品のラベル）、または、医師によって提供される種類のものであってもよい（例えば、患者に対する指示）。
【００３３】
別段の定めのない限り、本明細書に記載するすべての投薬プロトコルにおいて、投与される化合物の投与計画書は、治療の開始によって始まり、治療の終了によって終わる必要はなく、両方の化合物を投与する連続日数と、場合により、単一の要素化合物のみを投与する連続日数のみを必要とするか、または化合物の投与量を含む示された投薬プロトコルは、一連の治療中に同時に起こる。
【００３４】
本明細書で使用する場合、「化合物Ａ２」という用語は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を意味する。
【００３５】
本明細書で使用する場合、「化合物Ｂ２」という用語は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を意味する。
【００３６】
「負荷投与」という用語は、本明細書で使用する場合、薬物の血中濃度をすばやく上げるために被験体に投与される維持投薬よりも高い投薬量を有する化合物Ａ２または化合物Ｂ２の単回投薬または短期間の投薬計画を意味すると理解されるだろう。適切には、本発明で使用するための短期間の投薬計画は、１〜１４日間、適切には１〜７日間、適切には１〜３日間、適切には３日間、適切には２日間、適切には１日間であろう。ある態様では、「負荷投与」は、薬物の血中濃度を治療に有効なレベルまで上げることができる。ある態様では、「負荷投与」は、その薬物の維持投薬と組み合わせ、薬物の血中濃度を治療に有効なレベルまで上げることができる。「負荷投与」は、１日に１回、または１日に１回より多く（例えば、１日に４回まで）投与することができる。適切には、「負荷投与」は、１日に１回投与されるだろう。適切には、負荷投与は、維持投薬の２〜１００倍の量、適切には２〜１０倍、適切には２〜５倍、適切には２倍、適切には３倍、適切には４倍、適切には５倍の量であろう。適切には、負荷投与は、１〜１４日間、適切には１〜７日間、適切には１〜５日間、適切には１〜３日間、適切には１日間、適切には２日間、適切には３日間投与し、その後、維持投与プロトコルを行う。
【００３７】
「維持投薬」という用語は、本明細書で使用する場合、連続的に投与される投薬（例えば、少なくとも２回）を意味すると理解され、化合物の血中濃度を治療に有効なレベルまでゆっくりと上げること、または、このような治療に有効なレベルを維持することを意図している。維持投薬は、一般的に、１日に１回投与され、維持投薬の１日投薬量は、負荷投与の１日合計投薬量よりも少ない。
【００３８】
適切には、本発明の組み合わせは、「所定時間」内に投与される。
【００３９】
「所定時間」という用語およびその派生語とは、本明細書で使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方と、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方との投与間隔を意味する。別段の定めのない限り、所定時間は、同時投与を含んでいてもよい。本発明の両方の化合物を１日に１回投与する場合、所定時間は、１日の間に化合物Ａ２および化合物Ｂ２を投与するタイミングを指す。本発明の片方または両方の化合物を１日に１回より多く投与する場合、所定時間は、所定の日のそれぞれの化合物の最初の投与に基づいて計算される。本発明の化合物のすべての投与を所定の日の間の最初の投与に続けて行うことは、所定時間を計算するときに考慮しない。
【００４０】
適切には、化合物を「所定時間」内に投与し、同時には投与しない場合、両方とも互いに約２４時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約２４時間であり、適切には、両方とも互いに約１２時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約１２時間であり、適切には、両方とも互いに約１１時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約１１時間であり、適切には、両方とも互いに約１０時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約１０時間であり、適切には、両方とも互いに約９時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約９時間であり、適切には、両方とも互いに約８時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約８時間であり、適切には、両方とも互いに約７時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約７時間であり、適切には、両方とも互いに約６時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約６時間であり、適切には、両方とも互いに約５時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約５時間であり、適切には、両方とも互いに約４時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約４時間であり、適切には、両方とも互いに約３時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約３時間であり、適切には、両方とも互いに約２時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約２時間であり、適切には、両方とも互いに約１時間以内に投与し、この場合には、所定時間は、約１時間であろう。本明細書で使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を約４５分より短い間隔で投与することは、同時投与であると考えられる。
【００４１】
適切には、本発明の組み合わせを「所定時間」に渡り投与する場合、化合物は、ある「継続期間」に一緒に投与されるだろう。
【００４２】
「継続期間」という用語およびその派生語は、本明細書で使用する場合、本発明の両方の化合物を、示した連続した日数、「所定時間」内に投与し、場合により、その後、連続した日数、１つの要素化合物のみを投与することを意味する。
【００４３】
「所定時間」投与することに関し、
適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも１日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも２日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも３日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した７日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した１０日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも１０日間であり、適切には、両方の化合物を一連の治療中に、少なくとも連続した１４日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも１４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２１日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも２１日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２８日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも２８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３０日間、所定時間内に投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも３０日間である。一連の治療中に、両方の化合物を３０日間にわたって所定時間内に投与する場合、この治療は、長期治療と考え、事象が変わるまで続ける場合（例えば、癌の状態の再評価、または患者の状態の変化）、プロトコルの修正を是認する。
【００４４】
さらに、「所定時間」投与することに関し、
適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも２日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも３日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも６日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも３日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した６日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した６日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも１０日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した１１日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した１０日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した７日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した１４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した２１日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３０日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した３７日間であろう。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した１〜３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを連続した３〜７日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した３〜６日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを連続した１〜４日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを連続した２日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ａ２のみを連続した３〜７日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物が、７日のうち１〜３日間、所定時間内に投与され、７日間の他の日の間に、Ａ２が単独で投与されるだろう。適切には、一連の治療中に、両方の化合物は、７日間のうち２日間、所定時間内に投与され、７日間の他の日の間に、Ａ２が単独で投与されるだろう。
【００４５】
さらに、「所定時間」投与することに関し、
適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも２日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも３日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも６日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも１日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも３日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した６日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも４日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した６日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも１０日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した５日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した１１日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも１日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した６日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した７日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した３日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した８日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した４日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した５日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した１０日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した７日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した２日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した９日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した１４日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した２１日間であり、適切には、一連の治療中に、両方の化合物を少なくとも連続した３０日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを少なくとも連続した７日間投与し、この場合には、継続期間は、少なくとも連続した３７日間であろう。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した１〜３日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを連続した３〜７日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した３〜６日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを連続した１〜４日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した５日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを連続した２日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を連続した２日間、所定時間内に投与し、次いで、化合物Ｂ２のみを連続した３〜７日間投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を７日間のうち１〜３日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。適切には、一連の治療中に、両方の化合物を７日間のうち２日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。
【００４６】
さらに、「所定時間」投与することに関し、
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち１〜３日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ａ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００４７】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち１〜３日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００４８】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち３日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ａ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００４９】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち３日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５０】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち２日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ａ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５１】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち２日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５２】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち１日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ａ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５３】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、７日間のうち１日間、所定時間内に投与し、７日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。適切には、この７日間のプロトコルを２サイクルすなわち１４日間繰り返し、適切には、４サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５４】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、１４日間のうち１〜５日間、所定時間内に投与し、１４日間のその他の日の間に、化合物Ａ２を単独で投与する。適切には、この１４日間のプロトコルを２サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５５】
適切には、一連の治療中に、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を、１４日間のうち１〜５日間、所定時間内に投与し、１４日間のその他の日の間に、化合物Ｂ２を単独で投与する。適切には、この１４日間のプロトコルを２サイクルすなわち２８日間繰り返し、適切には、連続して投与するために繰り返す。
【００５６】
適切には、化合物を「所定時間」中に投与しない場合、これらを逐次投与する。「逐次投与」という用語およびその派生語とは、本明細書で使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方を連続して１日以上投与し、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方をその後に連続して１日以上投与することを意味する。他の意味であると定義されない限り、「逐次投与」および本明細書に記載するすべての投薬プロトコルは、治療の開始によって始まり、治療の終了によって終わる必要はなく、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を投与した後、次いで、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の投与のみを必要とするか、または示される投薬プロトコルが、一連の治療中にいくつかの時間点で起こる。また、本発明において、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方と、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方を逐次投与する間に利用される休薬期間が想定される。本明細書で使用する場合、休薬期間は、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方を逐次投与した後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方を投与する前の期間であり、化合物Ａ２も化合物Ｂ２も投与されない。適切には、休薬期間は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間および１４日間から選択される日数であろう。
【００５７】
逐次投与に関し、
適切には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方を連続した１〜３０日間投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方を連続した１〜３０日間投与する。適切には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方を連続した１〜２１日間投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方を連続した１〜２１日間投与する。適切には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方を連続した１〜１４日間投与し、次いで、１〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方を連続した１〜１４日間投与する。適切には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の片方を連続した２〜７日間投与し、次いで、２〜１０日間休薬し、次いで、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方を連続した２〜７日間投与する。
【００５８】
適切には、化合物Ｂ２を、連続して最初に投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ａ２を投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した１〜２１日間投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ａ２を連続した１〜２１日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した３〜２１日間投与し、次いで、１〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ａ２を連続した３〜２１日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した３〜２１日間投与し、次いで、３〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ａ２を連続した３〜２１日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した２１日間投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ａ２を連続した１４日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した１４日間投与し、次いで、１〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ａ２を連続した１４日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した７日間投与し、次いで、３〜１０日間休薬し、次いで、化合物Ａ２を連続した７日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した３日間投与し、次いで、３〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ａ２を連続した７日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を連続した３日間投与し、次いで、３〜１０日間休薬し、次いで、化合物Ａ２を連続した３日間投与する。
【００５９】
適切には、化合物Ａ２を連続して最初に投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ｂ２を投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した１〜２１日間投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ｂ２を連続した１〜２１日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した３〜２１日間投与し、次いで、１〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ｂ２を連続した３〜２１日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した３〜２１日間投与し、次いで、３〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ｂ２を連続した３〜２１日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した２１日間投与し、次いで、場合により休薬期間、次いで、化合物Ｂ２を連続した１４日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した１４日間投与し、次いで、１〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ｂ２を連続した１４日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した７日間投与し、次いで、３〜１０日間休薬し、次いで、化合物Ｂ２を連続した７日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した３日間投与し、次いで、３〜１４日間休薬し、次いで、化合物Ｂ２を連続した７日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した３日間投与し、次いで、３〜１０日間休薬し、次いで、化合物Ｂ２を連続した３日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した７日間投与し、次いで、化合物Ｂ２を１日間投与する。適切には、化合物Ａ２を連続した６日間投与し、次いで、化合物Ｂ２を１日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を１日間投与し、次いで、化合物Ａ２を連続した７日間投与する。適切には、化合物Ｂ２を１日間投与し、次いで、化合物Ａ２を連続した６日間投与する。
【００６０】
「所定時間」の投与および「逐次」投与の後に、繰り返し投薬してもよく、または、交互投薬プロトコルを行ってもよく、繰り返し投薬または交互投薬プロトコルの前に休薬期間があってもよいことが理解される。
【００６１】
適切には、本発明の組み合わせの一部として投与される化合物Ａ２の量は、約１０ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択され、適切には、この量は、約２０ｍｇ〜約９００ｍｇから選択され、適切には、この量は、約２０ｍｇ〜約８００ｍｇから選択され、適切には、この量は、約２０ｍｇ〜約５００ｍｇから選択され、適切には、この量は、約２０ｍｇであり、適切には、この量は、約４０ｍｇであり、適切には、この量は、約６０ｍｇであり、適切には、この量は、約８０ｍｇであり、適切には、この量は、約１００ｍｇであり、適切には、この量は、約１２０ｍｇであり、適切には、この量は、約１４０ｍｇであり、適切には、この量は、約１６０ｍｇであり、適切には、この量は、約１８０ｍｇであり、適切には、この量は、約２００ｍｇであり、適切には、この量は、約２２０ｍｇであり、適切には、この量は、約２５０ｍｇであり、適切には、この量は、約２７０ｍｇであり、適切には、この量は、約２９０ｍｇであり、適切には、この量は、約３１０ｍｇであり、適切には、この量は、約３３０ｍｇであり、適切には、この量は、約３５０ｍｇであり、適切には、この量は、約３７０ｍｇであり、適切には、この量は、約３９０ｍｇであり、適切には、この量は、約４１０ｍｇであり、適切には、この量は、約４５０ｍｇであり、適切には、この量は、約５００ｍｇであり、適切には、この量は、約５５０ｍｇであり、適切には、この量は、約６００ｍｇであり、適切には、この量は、約６５０ｍｇであり、適切には、この量は、約７００ｍｇであり、適切には、この量は、約７５０ｍｇであり、適切には、この量は、約８００ｍｇであり、適切には、この量は、約８５０ｍｇであり、適切には、この量は、約９００ｍｇであり、適切には、この量は、約９５０ｍｇであり、適切には、この量は、１０００ｍｇであろう。適切には、選択した量の化合物Ａ２を１日に１〜４回投与する。適切には、選択した量の化合物Ａ２を１日に２回投与する。適切には、選択した量の化合物Ａ２を１日に１回投与する。
【００６２】
適切には、本発明の組み合わせの一部として投与される化合物Ｂ２の量は、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇから選択される量であり；適切には、この量は、約０．１２５ｍｇ〜約４ｍｇから選択され、適切には、この量は、約０．１２５ｍｇ〜約３ｍｇから選択され、適切には、この量は、約０．１２５ｍｇ〜約２ｍｇから選択される。例えば、本発明の組み合わせの一部として投与される化合物Ｂ２の量は、０．１ｍｇ、０．１２５ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３７５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６２５ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８７５ｍｇ、１．０ｍｇ、１．１２５ｍｇ、１．２５ｍｇ、１．５ｍｇ、１．７５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４ｍｇ、４．２５ｍｇ、４．５ｍｇ、４．７５ｍｇ、５ｍｇであってもよい。適切には、選択した量の化合物Ｂ２を、１つ以上の錠剤で１日に１〜３回投与する。適切には、選択した量の化合物Ｂ２を、１つ以上の錠剤で１日に２回投与する。適切には、選択した量の化合物Ｂ２を、１つ以上の錠剤で１日に１回投与する。
【００６３】
本明細書で使用する場合、化合物Ａ２および化合物Ｂ２について特定したすべての量が、投薬あたりの遊離化合物または塩になっていない化合物の投与量として示される。
【００６４】
本発明の方法を、癌治療の他の治療方法とともに使用してもよい。
【００６５】
治療に使用するために、治療に有効な量の本発明の組み合わせを、原料である化学物質として投与してもよいが、組み合わせが単一または複数の医薬組成物として存在することが好ましい。従って、本発明は、さらに、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２と、１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の組み合わせは、上に記載したとおりである。担体は、製剤の他の成分と相溶性であり、医薬を配合することができ、その受容者に有害ではないという観点で許容されなければならない。本発明の別の態様に従って、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２と、１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを混合することを含む、医薬製剤を調製するためのプロセスも提供される。上述のように、利用される医薬の組み合わせのこのような要素は、別個の医薬組成物で存在していてもよく、または、１つの医薬製剤に一緒に配合されていてもよい。
【００６６】
医薬製剤は、単位投薬量あたり、所定量の活性成分を含有する単位投薬形態で存在していてもよい。当業者に知られているように、投薬あたりの活性成分の量は、治療される状態、投与経路、患者の年齢、体重および状態によって変わるだろう。好ましい単位投薬製剤は、１日あたりの投薬量または投薬量の一部を含有するか、またはその活性成分の適切な一部を含有するものである。さらに、このような医薬製剤を、薬学分野でよく知られている任意の方法によって調製してもよい。
【００６７】
化合物Ａ２および化合物Ｂ２を任意の適切な経路で投与してもよい。適切な経路としては、経口、直腸、経鼻、局所（頬および舌下を含む）、膣および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内および硬膜外を含む）が挙げられる。好ましい経路は、例えば、この組み合わせの受容者の状態および治療される癌によって変わってもよいことが理解されるだろう。投与されるそれぞれの薬剤を、同じ経路または異なる経路によって投与してもよく、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を医薬組成物／製剤に一緒に混合してもよいことも理解されるだろう。適切には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２を別個の医薬組成物で投与する。
【００６８】
本発明の化合物または組み合わせを、簡便な投薬形態（例えば、カプセル、錠剤または注射可能な調剤薬）に組み込む。固体または液体の医薬担体を使用する。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、テラアルバ、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸が挙げられる。液体担体としては、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、生理食塩水および水が挙げられる。同様に、担体は、持続放出性材料、例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートを単独で、またはワックスとともに含んでいてもよい。固体担体の量は、広範囲に変動するが、適切には、投薬単位あたり、約２５ｍｇ〜約１ｇであってもよい。液体担体を使用する場合、調剤薬は、適切には、シロップ、エリキシル剤、エマルション、軟質ゼラチンカプセル、注射可能な滅菌液体、例えば、アンプル、または水性または非水性の液体懸濁物の形態であってもよい。
【００６９】
例えば、錠剤またはカプセルの形態で経口投与する場合、活性薬物成分を、経口用の非毒性の薬学的に許容可能な不活性担体、例えば、エタノール、グリセロール、水などと合わせてもよい。化合物を適切な微細な粒径になるまで粉砕し、同様に粉砕した医薬担体、例えば、食用炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトール）と混合することによって、粉末を調製する。香味剤、防腐剤、分散剤および着色剤も存在していてもよい。
【００７０】
上述の成分に加え、製剤は、対象となる製剤の種類に関する技術分野で従来からある他の薬剤を含んでいてもよいことを理解すべきであり、例えば、経口投与に適切な製剤は、香味剤を含んでいてもよい。
【００７１】
示したように、治療に有効な量の本発明の組み合わせ（化合物Ｂ２と組み合わせた化合物Ａ２）をヒトに投与する。典型的には、投与された本発明の薬剤の治療に有効な量は、例えば、被験体の年齢および体重、治療を必要とする正確な状態、状態の重篤度、製剤の性質および投与経路のような多くの因子に依存して変わるだろう。最終的に、治療に有効な量は、主治医の自由選択であろう。
【００７２】
一般的に既知の手順の効能、有利な特性および相乗的な特性について、本発明の組み合わせを試験する。
【００７３】
適切には、本発明は、脳腫瘍（神経膠腫）、神経膠芽腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、カウデン病、レミット−デュクロス病、乳癌、炎症性乳癌、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽細胞腫、結腸、頭頸部、腎臓、肺、肝臓の癌、黒色腫、卵巣、膵臓、前立腺の癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺癌、Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞型白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞性リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、頬粘膜癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌から選択される癌を治療するか、またはこれらの癌の重篤度を下げるための方法に関する。
【００７４】
適切には、中皮腫は、悪性の進行した中皮腫、悪性ＮＯＳ中皮腫、悪性胸膜中皮腫、ＭＡＰＫ経路の活性化を伴う中皮腫、測定可能な病変を伴う、再発性または進行性および／または切除不能な悪性胸膜中皮腫を含んでもよい。
【００７５】
適切には、本発明は、中皮腫、肺、黒色腫、神経膠芽腫、甲状腺癌、乳癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣癌、頭頸部癌、子宮内膜癌から選択される癌を治療するか、またはこれらの癌の重篤度を下げるための方法に関する。
【００７６】
適切には、本発明は、卵巣癌、乳癌、肺癌、中皮腫および神経膠芽腫から選択される癌を治療するか、またはこれらの癌の重篤度を下げるための方法に関する。
【００７７】
本発明は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む組み合わせを提供する。
【００７８】
本発明は、治療に使用するための、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む組み合わせも提供する。
【００７９】
本発明は、癌の治療に使用するための、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む組み合わせも提供する。
【００８０】
本発明は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む医薬組成物も提供する。
【００８１】
本発明は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む組み合わせキットも提供する。
【００８２】
本発明は、医薬の製造において、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む組み合わせの使用も提供する。
【００８３】
本発明は、癌を治療するための医薬の製造において、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物とを含む組み合わせの使用も提供する。
【００８４】
本発明は、２−［（５−クロロ−２−｛［３−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］アミノ｝−４−ピリジニル）アミノ］−Ｎ−（メチルオキシ）ベンズアミドまたはその薬学的に許容可能な塩と、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、適切には、そのジメチルスルホキシド溶媒和物との組み合わせを、これを必要とする被験体に投与することを含む、癌を治療する方法も提供する。
【実施例】
【００８５】
（試薬および方法）
（ヒト細胞株）
これらの試験に５種類のヒト中皮腫細胞株を使用した。１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウムを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中、標準的な細胞培養条件で細胞を増殖させた。中皮腫細胞株は、Ｍｅｒｏ−１４、Ｍｅｒｏ−８２、ＮＣＩ−Ｈ２０５２、ＮＯ３６およびＯＮＥ５８であった。
【００８６】
（足場非依存性増殖−死亡アッセイ）
化合物ＡまたはＢに対する細胞応答を、細胞増殖の阻害度と細胞集団の正味の変化を定量する足場非依存性増殖において評価した。このアッセイは、黒色で底部が透明の未処理３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ７８１０９６番）で行った。アッセイ中に細胞がプレートに付着するのを防ぐために、処理された非組織培養物またはＬｏｗ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔプレートを使用することが重要である。簡単に言うと、このアッセイを以下のように行った。
【００８７】
５グラムのメチルセルロース（Ｓｉｇｍａ  Ｍ０５１２番）を４９５ｍＬの細胞培養培地に溶解することによって、メチルセルロース溶液の１％（重量／体積）ストックを調製した。ここで、ガラス容器に入れ、オートクレーブで滅菌し、冷却したメチルセルロースに、１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウムを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を加えた。細胞が、増殖のために異なる細胞培養培地を必要とする場合には、培地を置き換えることができる。この溶解は、滅菌状態を維持しつつ、４℃で激しく攪拌して、多くは１日かかった。
【００８８】
最終容積４８μＬ中、０．６５％メチルセルロース（最終濃度）および１０００細胞／ウェルのアッセイ条件で、細胞を３８４ウェルプレートに接種した。この接種は、培養物から集めた細胞を希釈し、１％メチルセルロースを含む増殖培地に再懸濁させる（２．０８３３×１０４細胞／ｍＬに希釈）ことによって達成された。ひっくり返すことによって細胞を混合し、均一に分布させ、気泡を分散させ、４８μＬを、ポジティブディスプレイスメント式ピペットを用いてウェルに入れた。このプレートを、５％ＣＯ２を含有する細胞培養インキュベータに３７℃で置いた。
【００８９】
第１列に、２０μＬのストック化合物溶液、他のウェルに、１０μＬのＤＭＳＯを入れ、ＤＭＳＯでの化合物の段階希釈を３８４ウェルプレート中で行った。化合物ウェルから１０μＬを、ＤＭＳＯを含有するウェルに移し、混合し、プレート全体にわたって、１０μＬを移しつつ、段階希釈を続けた。次いで、このＤＭＳＯで希釈した化合物４μＬを、１０５μＬの適切な増殖培地を含有する新しい３８４ウェルプレートに加えた。この「化合物プレート」を使用し、メチルセルロース中に細胞を含有するアッセイプレートに投薬した。
【００９０】
組み合わせ実験のための、２０μＬのストック化合物溶液は、所定の比率での化合物Ａと化合物Ｂとの混合物であった。一例では、１対１の比率の場合、１０ｕｌの化合物Ａを４０ｍＭで、１０ｕｌの化合物Ｂを４０ｍＭで混合し、化合物Ａおよび化合物Ｂの両方を濃度２０ｍＭで含む２０ｕｌのストック化合物溶液を作成した。８対１の比率の場合、１０ｕｌの化合物Ａを４０ｍＭで、５ｕｌの化合物Ｂを１０ｍＭで、さらに５ｕｌのＤＭＳＯを混合し、化合物Ａの濃度が２０ｍＭ、化合物Ｂの濃度が２．５ｍＭの２０ｕｌのストック化合物溶液に混合した。段階希釈および化合物プレートの希釈を上述のように行った。
【００９１】
「化合物プレート」のそれぞれのウェルからの２μＬを、メチルセルロース中に４８μＬの細胞を含有する「細胞プレート」の個々のウェルに加え、アッセイを開始した。これらのアッセイプレートを細胞培養インキュベータに６日間置いた。１個の「細胞プレート」をランダムに選択し、残りの細胞プレートに化合物を加えたときに、Ｃｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ（ＣＴＧ）を用いて現像し（以下を参照）、これをゼロ時間（Ｔ０）のプレートと表し、すなわち、化合物を添加したときの細胞数を表す。
【００９２】
６日後にアッセイを停止し、それぞれのプレートの底部に黒色のステッカーを貼り付けて光を遮断し、２５μＬのＣＴＧを加え、次いで、プレートを室温で２０分間インキュベートすることによってプレートを培養した。ＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）で、発光プロトコルを用い、プレートをスキャンした。
【００９３】
結果を、Ｔ０値の百分率として表し、化合物濃度に対してプロットした。すべての値は、「細胞を含まない」バックグラウンドを引き算し、Ｔ０値を１００％に正規化し、化合物を添加したときの細胞数を表す。４パラメータ曲線のフィッティング式を用い、濃度応答曲線をフィッティングし、増殖を５０％阻害した濃度（ｇＩＣ５０）を決定することによって、細胞応答を決定した。ｇＩＣ５０値は、増殖ウインドウ（Ｔ０からＤＭＳＯコントロールの増殖まで）の中点である。ｇＩＣ１００値は、１００％の増殖阻害に必要な化合物濃度である。集合の正味の変化の測定値は、Ｔ０値（１００％）を、濃度応答曲線のフィッティングから決定されたＹｍｉｎ値から引き算することによって決定されるＹｍｉｎ−Ｔ０値によって定量した。正の値は、正味の細胞増殖を示し、負の値は、正味の細胞死を表す。細胞死を誘発するのに必要な化合物濃度を定量するために、死亡ＥＣ５０（ｄＥＣ５０）を決定し、この値は、Ｔ０値に対し、細胞集団が５０％減少した化合物濃度であると定義される。
【００９４】
相互に排他的であるという推定および相互に排他的ではないという推定の両方を用い、組み合わせ指数（ＣＩ）値を決定することによって、組み合わせの結果を解析した（１２）。
相互に排他的な式
【数１】
2015533165.tif 000006
および相互に排他的ではない式
【数２】
2015533165.tif 000007
【００９５】
ＸＣ５０は、増殖−死亡分析からのそれぞれのパラメータ（ｇＩＣ５０またはｇＩＣ１００またはｄＥＣ５０のいずれか）を使用し、ＣＩ値を計算することを示す。Ａ＋Ｂは、Ａの濃度に対する組み合わせのＸＣ５０値を表し、Ｂ＋Ａは、組み合わせ中のＢの濃度に対する組み合わせのＸＣ５０値を表す。
【００９６】
（結果）
足場非依存性増殖−死亡アッセイにおいて、５種類のヒト中皮腫細胞株におけるＦＡＫ阻害剤（ＦＡＫｉ、化合物Ａ）およびＭＥＫ阻害剤（ＭＥＫｉ、化合物Ｂ）ならびにＦＡＫｉおよびＭＥＫｉの組み合わせを評価した。３種類の細胞株についての濃度応答曲線を図１〜図３に示す。図１は、それぞれの１種類の薬剤および組み合わせに対するＭｅｒｏ−８２細胞の応答を含む。組み合わせの濃度応答曲線を２つ示し、組み合わせ中の化合物Ａの濃度または組み合わせ中の化合物Ｂの濃度に対する応答を表す。図２は、ＮＣＩ−Ｈ２０５２中皮腫細胞の応答を表し、図３は、ＮＯ３６細胞の応答を表す。３種類すべての細胞株について、組み合わせに対する曲線のフィッティングは、それぞれの単一の薬剤活性と比較して、低い濃度の方にシフトした（「左側にシフトした」）。これらの結果は、単一薬剤による治療と比較して、組み合わせたときに明確な利点を示す。
【００９７】
細胞の増殖および死亡の応答を定量するための曲線のフィッティングから誘導されるパラメータを、５種類すべての中皮腫細胞株について表１に示す。表１Ａは、化合物Ａの単一薬剤のパラメータを示し、表１Ｂは、化合物Ａと化合物Ｂの組み合わせの結果を含む。表１Ｂの誘導されたパラメータの値は、組み合わせ中の化合物Ａの濃度に基づく。化合物Ｂの単一薬剤の活性を表１Ｃに示し、表１Ｄは、化合物Ｂと化合物Ａの組み合わせの結果を含む。表１Ｄの値は、組み合わせ中の化合物Ｂの濃度である。これらの値から、組み合わせ指数（ＣＩ）値を決定し、表２に示す。
【００９８】
ＣＩ値は、ＦＡＫ阻害剤とＭＥＫ阻害剤の組み合わせによって、足場非依存性条件で増殖させた５種類の中皮腫細胞株の４つで、相乗的に増殖を阻害したことを示す。ＣＩ値が小さいほど、組み合わせの相乗効果が高い。効力の相乗効果の結果は、相互に排他的である計算（表２Ａ）および相互に排他的ではない計算（表２Ｂ）からのデータを比較することによってわかるように、排他性の推定にかかわらず、同じであった。ｇＩＣ５０値およびｇＩＣ１００値の両方のＣＩ値を用いた増殖阻害の相乗的な応答を観察し、「左にシフトした」濃度応答曲線と一致していた（図１）。
【００９９】
生体応答および化合物濃度に対し、ＣＩ値によって定義される相乗的な応答を関連付けるために、同等の生物学的応答を達成するために、組み合わせと、それぞれの単一の薬剤との間の、化合物濃度の差を決定した（表３）。表３Ａは、増殖阻害（ｇＩＣ５０値およびｇＩＣ１００値）および細胞死の誘発（ｄＥＣ５０値）について、化合物Ａのみを使用したときと比較して、化合物Ｂと組み合わせて使用したとき、化合物Ａが何分の一に減少したかを示す。表３Ｂは、化合物Ｂを単独で使用したときと比較して、化合物Ａと組み合わせて使用される化合物Ｂが何分の一に減少したかを示す。評価する細胞株およびパラメータについて、増殖阻害および細胞死の同等の応答を達成するために、単一薬剤と比較して、組み合わせて使用したときに、ＦＡＫ阻害剤について平均で約３０分の１に減少し、ＭＥＫ阻害剤について約５分の１に減少した。
【０１００】
足場非依存性増殖−死亡アッセイは、細胞を化合物に６日間曝露した。この処理中の細胞集団の正味の変化を、Ｙｍｉｎ−Ｔ０パラメータを用いて定量した。図４は、化合物Ａ、化合物Ｂおよびその組み合わせを用いたそれぞれの細胞株のＹｍｉｎ−Ｔ０をプロットする。化合物Ａは、一般的に、細胞増殖抑制性であるが、Ｍｅｒｏ−１４細胞株およびＭｅｒｏ−８２細胞株は、細胞死の証拠があった（Ｙｍｉｎ−Ｔ０＜−５０％）。化合物Ｂは、５種類の細胞株のうち３種類で細胞毒性であることがわかった（Ｙｍｉｎ−Ｔ０＜−５０％）が、化合物Ａと化合物Ｂの組み合わせによって、５種類すべての中皮腫細胞株について、正味の細胞死を生じた（図４）。
【０１０１】
化合物Ａと化合物Ｂの組み合わせを用いて観察された細胞死の上昇も、５０％の正味の細胞死を誘発するのに必要な化合物の量（ｄＥＣ５０）に関連して定量し、それぞれの単一薬剤と直接的に比較した（図５および図６）。図５は、化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせのｄＥＣ５０と比較した化合物ＡのｄＥＣ５０をプロットし、図６は、化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせのｄＥＣ５０と比較した化合物ＢのｄＥＣ５０をプロットする。この組み合わせのいずれかの薬剤の量は、単一の薬剤のみと比較して大きく減少し、このことは、中皮腫細胞株で観察された相乗的な活性と一致している。
【０１０２】
表
表１：
足場非依存性増殖−死亡アッセイで解析した中皮腫細胞株の濃度応答曲線からパラメータを決定した。表１Ａは、単一薬剤として使用した化合物Ａからのパラメータ値を含み、表１Ｂは、混合物中の化合物Ａの濃度に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせからの値を含む。表１Ｃは、単一薬剤として使用した化合物Ｂからのパラメータ値を含み、表１Ｄは、混合物中の化合物Ｂの濃度に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせからの値を含む。
【表１】
2015533165.tif 000008
【表２】
2015533165.tif 000009
【表３】
2015533165.tif 000010
【表４】
2015533165.tif 000011
【０１０３】
表２
それぞれの細胞株の濃度応答曲線から決定されたそれぞれのパラメータ（ｇＩＣ５０、ｇＩＣ１００、ｄＥＣ５０）について、組み合わせ指数（ＣＩ）値を計算した。０．８５未満の値は、相乗的な応答を反映し、０．８５〜１．２の値は、相加的な応答を反映し、１．２を超える値は、拮抗する応答を反映している。ＣＩ値は、４つのパラメータの１つを濃度応答曲線から誘導することができない場合には決定することができなかった。（Ａ）化合物の相互排他的な相互作用を推定して決定されたＣＩ値、および（Ｂ）相互排他的ではない相互作用を推定して決定されたＣＩ値。
【表５】
2015533165.tif 000012
【表６】
2015533165.tif 000013
【０１０４】
表３
増殖阻害（ｇＩＣ５０およびｇＩＣ１００）および正味の細胞死（ｄＥＣ５０）の同じ生物学的応答について、それぞれの単一薬剤と比較して、組み合わせの化合物濃度において何倍変化するかの計算。（Ａ）単一薬剤としての化合物Ａに対する、組み合わせ中の化合物Ａが何分の一に低下するか、および（Ｂ）単一薬剤としての化合物Ｂに対する、組み合わせ中の化合物Ａが何分の一に低下するか。
【表７】
2015533165.tif 000014
【０１０５】
図面
（図１〜３）
（図１）Ｍｅｒｏ−８２細胞、（図２）ＮＣＩ−Ｈ２０５２細胞および（図３）ＮＯ３６細胞における、化合物Ａ（□）、化合物Ｂ（○）、化合物Ａの濃度に対する化合物Ａ＋化合物Ｂの組み合わせ
【数３】
2015533165.tif 000015
および化合物Ｂの濃度に対するこの組み合わせ（●）の濃度応答曲線。この比率を固定した濃度応答解析において、そのモル比は、８：１（化合物Ａ：化合物Ｂ）であった。１００％の水平線およびＴ０と示されているのは、化合物を添加したときの細胞数を表し、約２７５％〜約３７５％の水平線は、ＤＭＳＯのみで処理された対照細胞の増殖を表す。
【０１０６】
（図４）
単一薬剤としての化合物Ａ
【数４】
2015533165.tif 000016
および化合物Ｂ
【数５】
2015533165.tif 000017
または組み合わせ
【数６】
2015533165.tif 000018
に対する細胞集団の正味の変化。０％のＹｍｉｎ−Ｔ０値は、アッセイ期間に細胞数に正味の変化がないことを示し、負の値は、正味の細胞死を示し、正の値は、実験中の細胞数の増加を示す。
【０１０７】
（図５および図６）
中皮腫細胞株において、それぞれの単一の薬剤およびＦＡＫ阻害剤とＭＥＫ阻害剤の組み合わせについての死亡ＥＣ５０（ｄＥＣ５０）値。（図５）は、化合物Ａと化合物Ｂの組み合わせからのｄＥＣ５０値
【数７】
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と比較した化合物ＡのｄＥＣ５０値。
【数８】
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（図６）は、化合物Ａと化合物Ｂの組み合わせからのｄＥＣ５０値
【数９】
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と比較した化合物ＢのｄＥＣ５０値。
【数１０】
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活性がないためにｄＥＣ５０値を決定することができなかった場合、このアッセイで使用した最大濃度の化合物を使用し、グラフで視覚化した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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