(57)【要約】  本発明は、（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミンまたはケタミンのようなＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療の候補である患者を選択し、それによってＮＭＤＡアンタゴニストに対する応答可能性の増加または減少を予測する方法を提供する。本発明は、ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２として知られている４つの一塩基多型（ＳＮＰ）部位のいずれかにおけるＧＡＢＲ−Ａ２の配列を決定する方法を提供する。この方法は、これらのＧＡＢＲ−Ａ２のＳＮＰにおける配列を決定するために最適化されたＡＲＭＳプライマー、および特定のＳＮＰを決定するのに好適なプライマーまたはプローブを含む診断キットも提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療のために患者を選択する方法であって、前記患者からの核酸含有試料中で、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型（ＳＮＰ）の位置ｒｓ３７５６００７、および／またはｒｓ１１５０３０１６、および／またはｒｓ１７５３７３５９、および／またはｒｓ１３７２４７２におけるヌクレオチドを決定することを含み、ここで、ｒｓ３７５６００７にシトシン、またはｒｓ１１５０３０１６にチミン、またはｒｓ１１５０３０１６にチミン、またはｒｓ１３７２４７２にチミンがある場合、前記患者は、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療のために選択される、上記方法。
【請求項２】
（ａ）うつ病および／または不安の治療が必要な患者を選択する工程であって、該患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２のいずれか１つにマイナーアレルを保持すると同定されている、上記工程；および
（ｂ）該患者をＮＭＤＡアンタゴニストで治療することを推奨する工程
を含む、治療を推奨する方法。
【請求項３】
ＮＭＤＡアンタゴニスト薬は、（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミンおよびケタミンからなる群より選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＮＭＤＡアンタゴニスト薬は、（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミンである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
うつ病および／または不安は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単一または再発性のうつ病エピソード、治療抵抗性うつ病（ＴＲＤ）、双極性うつ病、全般性不安障害（ＧＡＤ）、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会不安障害から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
核酸含有試料は、固形組織試料または生物学的流体試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の位置ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２におけるヌクレオチドは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、対立遺伝子特異的プローブもしくはプライマーを用いたハイブリダイゼーション、対立遺伝子特異的増幅（増幅抵抗突然変異系−ＡＲＭＳのような）、酵素による突然変異検出、質量分析、一本鎖高次構造多型、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）、ＷＡＶＥ分析、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動、高解像度融解もしくは温度勾配ゲル電気泳動または核酸の配列決定によって決定される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の位置ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２におけるヌクレオチドは、配列決定または対立遺伝子特異的増幅によって決定される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
うつ病に罹った患者が、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療に有利に応答する可能性があるかどうかを予測するための、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２のＳＮＰのいずれか１つにおけるヌクレオチドを決定することができるオリゴヌクレオチドプライマーの使用。
【請求項１０】
（ａ）うつ病治療が必要な患者を選択する工程であって、該患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシンを保持すると同定されている、上記工程；および
（ｂ）該患者をＮＭＤＡアンタゴニストで治療する工程
を含む、治療方法。
【請求項１１】
うつ病または不安に罹った患者に、有効量のＮＭＤＡアンタゴニスト薬を投与する工程であって、該患者の細胞性ＤＮＡが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２のいずれかにマイナーアレルを含むことが決定されている、上記工程を含む、うつ病または不安に罹った患者の治療方法。
【請求項１２】
（ａ）ＮＭＤＡアンタゴニストを含有するパッケージを製造する工程；および
（ｂ）患者のうつ病を治療するためにＮＭＤＡアンタゴニストの使用を推奨するラベルまたは挿入印刷物をパッケージに入れる工程であって、該患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシンを含む、上記工程
を含む、市販薬の製造方法。
【請求項１３】
ＮＭＤＡアンタゴニストは、（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミンおよびケタミンから選択される、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
１人またはそれ以上の患者におけるうつ病または不安の治療で使用するためのＮＭＤＡアンタゴニストであって、該患者の細胞性ＤＮＡが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のｒｓ３７５６００７として知られている一塩基多型にシトシンを持つと決定されている、上記ＮＭＤＡアンタゴニスト。
【請求項１５】
（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミンおよびケタミンから選択される、請求項１４に記載のＮＭＤＡアンタゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、［（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミン］のようなＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療の候補である患者を選択し、それによってＮＭＤＡアンタゴニスト薬に対する応答可能性の増加または減少を予測する方法、およびこのような患者を治療する方法に関する。本発明の一部は、ＧＡＢＲ−Ａ２（ＧＡＢＡ受容体のアルファ−２サブユニット）核酸配列内の様々な部位に存在する特定の多型（複数可）を決定することに関与する。また、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療に対して起こり得る応答を予測するために、これらのＳＮＰを検出することができるプライマー、プローブ、およびキットの使用も本発明の一部である。
【背景技術】
【０００２】
大うつ病性障害（ＭＤＤ）は、１つまたはそれ以上のうつ病エピソードの存在を特徴とし、躁病、混合または軽躁病エピソードの既往がない精神医学的状態である。ＭＤＤ発症には遺伝学的要素が関連するという証拠があるが、明確な遺伝のパターンは未だ解明されていない。
【０００３】
現在のところ、米国では、ＭＤＤ治療のために２５種より多くの薬剤が承認されている。多様な抗うつ薬が利用可能性であるが、臨床試験では、十分な投与量、持続時間、およびコンプライアンスにもかかわらず、大うつ病患者の３０％から４０％が、第一選択の抗うつ薬治療に応答しないことが示されている。さらに、現在の治療では、抗うつ作用の開始においてかなりのラグタイムがある。新規の改良されたＭＤＤ治療剤を開発する必要があるのは明らかである。現行の療法よりも作用の開始が早く、現行の療法に等しいかまたはそれより優れた忍容性プロファイルを有するうつ病療法は、患者が症状に苦しむ時間と自殺行為に関連するリスクの両方を低減させることができるより優れた代替治療をもたらすであろう（非特許文献１）。
【０００４】
ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストのケタミンは、ＭＤＤ患者において急速な抗うつ作用を有することが研究から示されている（非特許文献２および非特許文献３）。
【０００５】
（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミン（化合物Ａ）は、低親和性のグルタミン酸アンタゴニスト（ＮＭＤＡ受容体のＮＲ１Ａ／２Ａサブタイプで３５０ｎＭのＩＣ５０）であり、５００人より多くのヒト志願者および患者において極めて良好な忍容性を有し、ケタミン曝露でみられる精神異常作用に相当する精神異常作用を引き起こす性質がほとんどないことが示されている（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６）。化合物Ａは特許文献１に開示されており、そのうつ病治療における使用は特許文献２に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＷＯ９３／２００５２
【特許文献２】ＷＯ００／００５４０
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｔｈａｓｅ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、６３：９５〜１０３、２００２
【非特許文献２】Ｂｅｒｍａｎら、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、４７（４）：３５１〜３５４、２０００
【非特許文献３】Ｚａｒａｔｅら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、６３（８）：８５６〜８６４、２００６
【非特許文献４】Ｔｏｒｖａｌｄｓｓｏｎら、Ｓｌｅｅｐ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１４：１４９〜１５５、２００５
【非特許文献５】Ｌｅｅｓら、Ｓｔｒｏｋｅ  ３２２：４６６〜４７２、２００１
【非特許文献６】Ｄｉｅｎｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２４９：５６１〜５６８、２００２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
個別化医療の目的は、どの治療が個体にとって最良の結果をもたらすのかを予測することである。現在のところ、抗うつ薬の起こり得る利点を個々の患者ごとに判断することは不可能である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書に記載の発明において、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬の化合物Ａに対する例えばＭＤＤなどのうつ病または不安を有する患者の応答の程度に影響を与える、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の特定の一塩基多型（ＳＮＰ）が同定された。ＮＭＤＡアンタゴニスト薬の化合物Ａで治療されたものにおいて、ＳＮＰのｒｓ３７５６００７、ｒｓ１３７２４７２、ｒｓ１１５０３０１６、およびｒｓ１７５３７３５９のそれぞれのマイナーアレルが、改良された結果に関連することが見出された。ＳＮＰのｒｓ３７５６００７が、特に強い関連を有することが見出された。実際に、この遺伝学的関連は、複数のテストに合わせて調整が適用されたとしても有意性を保つ（１６の独立したマーカー遺伝子座ごとに調整した後、Ｐ＝０．０３３６）。例えば化合物ＡなどのＮＭＤＡアンタゴニスト薬で治療する前の、これらの列挙されたＳＮＰ位置（例えばＳＮＰのｒｓ３７５６００７）に関するＭＤＤ患者の遺伝学的試験は、例えば化合物ＡなどのＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療によって優れた利益を受ける可能性がより高い患者または患者群の同定を補助すると予想される。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
ＧＡＢＡ受容体は、哺乳動物の中枢神経系のＧＡＢＡ系神経伝達（ＧＡＢＡｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）に関与するタンパク質のファミリーである。ＧＡＢＲ−Ａ２は、ヘテロ五量体のリガンド依存性イオンチャンネルのＧＡＢＡ−Ａ受容体遺伝子ファミリーのメンバーであり、これを介して哺乳動物の脳における主要な抑制性神経伝達物質であるＧＡＢＡが作用する。ＧＡＢＡ−Ａ受容体は、バルビツール酸誘導体、ベンゾジアゼピン、およびエタノールなどの多数の重要な薬理学的物質の作用部位である。その遺伝子であるＧＡＢＲ−Ａ２は第４染色体にあり、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）受容体のサブユニット（アルファ２）をコードする。
【００１１】
化合物Ａに対する応答の強化との関連を示すＳＮＰのｒｓ３７５６００７のマイナーアレルは、Ｃ（シトシン）である。配列番号１は、ｒｓ３７５６００７のＳＮＰを含むＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の一部を表す。配列番号１として示された配列に関して、ｒｓ３７５６００７のＳＮＰは、そのなかの４０１位にある。
【００１２】
配列番号２は、ｒｓ１１５０３０１６のＳＮＰを含むＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の一部を表す。配列番号２として示された配列に関して、ｒｓ１１５０３０１６のＳＮＰは、そのなかの４０１位にある。
【００１３】
配列番号３は、ｒｓ１７５３７３５９のＳＮＰを含むＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の一部を表す。配列番号３として示された配列に関して、ｒｓ１７５３７３５９のＳＮＰは、そのなかの４０１位にある。
【００１４】
配列番号４は、ｒｓ１３７２４７２のＳＮＰを含むＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の一部を表す。配列番号４として示された配列に関して、ｒｓ１３７２４７２のＳＮＰは、そのなかの４０１位にある。
【００１５】
配列番号１〜４の配列には、ＳＮＰ位置におけるマイナーアレル塩基が記載されている。
【００１６】
本発明の様々な態様は、以下のＮＭＤＡアンタゴニスト化合物：（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミン（ＷＯ９３／２００５２で開示されている）との併用において特に有用である。
【００１７】
本発明によれば、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬に対する応答可能性の増加または減少を予測するために、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療の候補である患者を選択することが可能になる。特に、前記患者が、うつ病の影響を受けている／うつ病に罹っている場合、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬は、前記うつ病の治療のためのものである。
【００１８】
本発明の一態様によれば、ＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に関する個体の適性を評価する方法であって、ａ）個体から採取した核酸含有試料中で、それぞれＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子配列の一部であるｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９、およびｒｓ１３７２４７２から選択される１つまたはそれ以上の単一ポリヌクレオチド多型の部位におけるヌクレオチドを決定する工程、およびＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に関する個体の適性を、該ヌクレオチドの存在に基づいて評価する工程を含む、上記方法が提供される。一実施形態において、（配列番号１に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ３７５６００７におけるシトシンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。一実施形態において、（配列番号２に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ１１５０３０１６におけるチミンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。一実施形態において、（配列番号３に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ１７５３７３５９におけるシトシンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。一実施形態において、（配列番号４に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ１３７２４７２におけるチミンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。
【００１９】
本発明の一態様によれば、ＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に関する個体の適性を評価する方法であって、ａ）個体から採取した核酸含有試料中で、それぞれＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子配列の一部である配列番号１〜４のいずれか１つにおける位置に従って４０１位におけるヌクレオチドを決定する工程、およびＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に関する個体の適性を、該ヌクレオチドの存在に基づいて評価する工程を含む、上記方法が提供される。一実施形態において、（配列番号１に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ３７５６００７におけるシトシンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。一実施形態において、（配列番号２に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ１１５０３０１６におけるチミンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。一実施形態において、（配列番号３に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ１７５３７３５９におけるシトシンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。一実施形態において、（配列番号４に従って）４０１位またはＳＮＰのｒｓ１３７２４７２におけるチミンの存在は、ＮＭＤＡアンタゴニスト化合物での治療に対する個体の適性の指標である。
【００２０】
本発明の他の態様によれば、ＮＭＤＡアンタゴニストでの治療のために患者を選択する方法であって、患者から得られた核酸含有試料中で、それぞれＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子配列の一部である配列番号１〜４のいずれか１つにおける位置に従って４０１位におけるヌクレオチドを決定する工程、および該核酸が前記位置にマイナーアレルを持つ場合、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療のために患者を選択する工程を含む、上記方法が提供される。
【００２１】
本発明の他の態様によれば、ＮＭＤＡアンタゴニストでの治療のために患者を選択する方法であって、（ｉ）患者からの核酸含有試料を用意する工程；（ｉｉ）患者の核酸において、それぞれＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子配列の一部である配列番号１〜４のいずれか１つにおける位置に従って４０１位におけるヌクレオチドを決定する工程；およびその決定に基づきＮＭＤＡアンタゴニスト治療のために患者を選択する工程を含む、上記方法が提供される。特に、患者の核酸が、（配列番号１に従って）４０１位にシトシンおよび／または（配列番号２に従って）４０１位にチミンおよび／または（配列番号３に従って）４０１位にシトシンおよび／または（配列番号４に従って）４０１位にチミンを有する場合、その患者が、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療のために選択される。すなわち、患者が、両方の対立遺伝子の４０１位にシトシンまたはチミンを有するホモ接合型であるか、または一方の対立遺伝子の４０１位にのみシトシンまたはチミンを有するヘテロ接合型である場合である。
【００２２】
上記の本発明の態様の特定の実施形態において、患者が、ＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に好適であると決定されるか、またはこのような治療のために選択された場合、その患者は、ＮＭＤＡアンタゴニストで治療される。
【００２３】
本発明の他の態様によれば、（ａ）うつ病治療が必要な患者を選択する工程であって、該患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１１５０３０１６にチミン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１７５３７３５９にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１３７２４７２にチミンを保持すると同定されている、上記工程；および（ｂ）該患者をＮＭＤＡアンタゴニストで治療することを推奨する工程を含む、治療を推奨する方法が提供される。一実施形態において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の特定の遺伝子型（上述のＳＮＰのうち１つまたはそれ以上に特定の塩基が存在する）を有する患者が、新規に診断される。他の実施形態において、患者または患者の医師は、患者のＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子型について認識しており、例えば、患者が、既往の決定からＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシンを持つことを認識している。
【００２４】
本発明の他の態様によれば、うつ病に罹った患者に治療を指示する方法であって、（ａ）患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１１５０３０１６にチミン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１７５３７３５９にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１３７２４７２にチミンを保持すると同定されるかどうかを決定する工程；および（ｂ）患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１１５０３０１６にチミン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１７５３７３５９にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ１３７２４７２にチミンを保持すると同定された場合、患者にＮＭＤＡアンタゴニストで治療することを指示する工程を含む、上記方法が提供される。
【００２５】
本発明の他の態様によれば、うつ病に罹った患者がＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療によって利益を得るのか、または利益を得ないのかを予測する方法であって、前記患者からの核酸含有試料中で、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰ位置のｒｓ３７５６００７、および／またはｒｓ１１５０３０１６、および／またはｒｓ１７５３７３５９、および／またはｒｓ１３７２４７２におけるヌクレオチドを決定する工程を含み、これらのＳＮＰ位置のいずれかにマイナーアレルが存在するということは、その個体において、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療が、前記ＳＮＰ位置（複数可）においてメジャーアレルのホモ接合体を有する個体と比較して有効である可能性がより高いと予想されることの指標である、上記方法が提供される。一実施形態において、ＳＮＰ位置ｒｓ３７５６００７におけるシトシンの存在は、前記患者において、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬での治療が、前記位置にチミンを持つ患者と比較して有効である可能性がより高いと予想されることの指標である。
【００２６】
本発明の他の態様によれば、うつ病の影響を受けている患者のうつ病治療において、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬の有効可能性を決定する方法であって、前記患者のＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子が、一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２のいずれか１つにマイナーアレルを含むかどうかを決定する工程を含み、ここで、前記ＳＮＰ位置のいずれかにマイナーアレルが存在することは、うつ病治療において、ＮＭＤＡアンタゴニスト薬が、患者のＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子が前記位置にメジャーアレルのホモ接合体を有する場合よりも有効である可能性がより高いことの指標である、上記方法が提供される。
【００２７】
上記の本発明の態様の特定の実施形態において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子が、ｒｓ３７５６００７にシトシンを持つ場合、その患者は、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療のために選択されるか、またはＮＭＤＡアンタゴニストで治療される。本発明の上記態様の他の特定の実施形態において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子が、ｒｓ３７５６００７にチミンを持つ場合、その患者は、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療のために選択されないか、またはＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に関して除外される。
【００２８】
一実施形態において、本発明の方法は、患者から得られた試料において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の配列番号１で定義された場合に４０１位に相当する位置の配列を決定する工程を含む。一実施形態において、該方法は、患者から得られた試料において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の配列番号１で定義された場合に４０１位に相当する位置の配列がシトシンであるかどうかを決定することを含み、それによってＮＭＤＡアンタゴニストに対する応答可能性の増加を予測することができる。一実施形態において、該方法は、患者から得られた試料において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の配列番号１で定義された場合に４０１位に相当する位置の配列がチミンであるかどうかを決定する工程を含む。
【００２９】
本発明の方法は、うつ病および／または不安を有する患者、特に大うつ病性障害（ＭＤＤ）に罹った患者、単一または再発性のうつ病エピソードを有する患者、治療抵抗性うつ病を有する患者（すなわち他のうつ病治療に応答しないことが見出されている患者；ＴＲＤ）、双極性うつ病を有する患者、全般性不安障害（ＧＡＤ）を有する患者、強迫性障害（ＯＣＤ）を有する患者、パニック障害を有する患者、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を有する患者、ならびに社会不安障害を有する患者に使用することが好適である。したがって、本発明の方法は、ＭＤＤ、ＴＲＤ、ＧＡＤ、ＯＣＤ、ＰＴＳＤ、双極性うつ病、パニック障害または社会不安障害に罹った患者に使用することが好適である。
【００３０】
多数の科学論文および特許出願で、新規のＮＭＤＡアンタゴニスト化合物が説明されている。当業者は、本発明で使用するのに適したＮＭＤＡアンタゴニストを確認することが可能である。
【００３１】
特に好適な具体的なＮＭＤＡアンタゴニスト化合物は、ケタミン、および（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミン（ＷＯ９３／２００５２で開示されている）から選択される。
【００３２】
患者から得られた試料は、細胞核酸を含むあらゆる組織またはあらゆる生体試料、例えば循環細胞またはＤＮＡを含む血液試料であってもよい。一実施形態において、血液試料は、全血、血漿、血清またはペレット化した血液であってもよい。一実施形態において、試料は、組織試料である。組織試料は、新鮮な組織試料、凍結試料、固定試料または固定していない試料であってもよい。他の実施形態において、生体試料は、例えば痰、全血などの生物学的流体、または例えば血清もしくは血漿などの血液画分である。他の実施形態において、生体試料は、細胞試料を得るための侵襲を最小限にした技術を使用して得られたものと予想され、このような細胞試料から、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子配列中の１つまたはそれ以上の列挙されたＳＮＰ（複数可）が決定される。一実施形態において、生体試料は、患者のゲノムに典型的な核酸を、検出しようとするＳＮＰを同定するのに十分な量で含んでいなければならない。
【００３３】
試料からの分析用核酸の生成は、一般的に、核酸の増幅を必要とする。多くの増幅方法は、酵素による鎖延長によるものである（例えばポリメラーゼ連鎖反応、リガーゼ連鎖反応、または自家持続配列複製法）。好ましくは、本発明に係る増幅は、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの指数関数的増幅であるか、またはそれを含むものである。
【００３４】
ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の（配列番号１〜４のいずれか１つに従って）４０１位における特定のヌクレオチド（これは、それぞれｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９、およびｒｓ１３７２４７２のＳＮＰに相当する）は、当業界における様々な方法によって決定することができる。特定の方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、対立遺伝子特異的プローブもしくはプライマーを用いたハイブリダイゼーション、対立遺伝子特異的増幅（例えば、増幅抵抗突然変異系（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ）−ＡＲＭＳ）、酵素による突然変異検出、質量分析、一本鎖高次構造多型、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）、ＷＡＶＥ分析、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動、高解像度融解もしくは温度勾配ゲル電気泳動または核酸の配列決定が挙げられる。
【００３５】
一実施形態において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰ位置のヌクレオチドは、配列決定によって決定される。他の実施形態において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰ位置のヌクレオチドは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を含む技術を使用して決定される。さらなる実施形態において、ポリメラーゼ連鎖反応は、配列番号１、２、３または４で定義された場合に４０１位における塩基を検出する対立遺伝子特異的プライマーを使用する。上述したように、（配列番号１に従って）４０１位は、ｒｓ３７５６００７として知られているＳＮＰである。
【００３６】
本発明の一実施形態において、特定のＧＡＢＲ−Ａ２のＳＮＰ（ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２）／ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の配列番号１〜４の４０１位を決定する方法は、配列決定、ＷＡＶＥ分析、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）、および増幅反応、例えば増幅抵抗突然変異系（ＡＲＭＳ）から選択される、上記方法が提供される。ＡＲＭＳは、その内容が参照により組み入れられる欧州特許公報第０３３２４３５号で説明されており、そこでは、少なくとも１つの塩基が異なるテンプレート配列を選択的に増幅する方法が開示され、特許請求されており、この方法は、現在一般的にＡＲＭＳと称されている。ＲＦＬＰは、Ｚｈｏｎｇ（Ｚｈｏｎｇら、２００６、Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ：３６４、２０５〜２０８）によって説明されている。本発明の一実施形態において、患者から得られた試料において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２における特定の塩基を決定する方法は、増幅抵抗突然変異系である、上記方法が提供される。一実施形態において、ＡＲＭＳは、アガロースゲル、配列決定用ゲルまたはリアルタイムＰＣＲの使用を含んでいてもよい。一実施形態において、ＡＲＭＳは、リアルタイムＰＣＲの使用を含む。ＡＲＭＳアッセイは、反応液中のＤＮＡの存在を検出することでＰＣＲの成功を提示する第二のＰＣＲ反応と組み合わせてもよい。ＴａｑＭａｎ（商標）技術を使用して、異なる蛍光タグで標識したＴａｑＭａｎ（商標）プローブを使用して両方の反応のＰＣＲ産物を検出することができる。突然変異を検出するために、配列決定またはＲＦＬＰではなくＡＲＭＳを使用する利点は、ＡＲＭＳは、プロセシングおよびデータ分析を要しないより迅速な一工程のアッセイであり、ＡＲＭＳは、野生型ポリヌクレオチドのバックグラウンドと比較して試料における突然変異を検出することができる点である。増幅反応とは、非標的核酸に対して、標的核酸の特異的な増幅が起こる核酸反応のことである。
【００３７】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、周知の増幅反応である。
【００３８】
プローブという用語は、検出しようとする対立遺伝子の標的配列にハイブリダイズ可能な配列を有する、一本鎖配列に特異的なオリゴヌクレオチドを指す。
【００３９】
プライマーという用語は、コピーしようとする核酸の鎖に相補的なプライマー伸長産物の合成開始地点として作用することができる、一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド配列または特異的なプライマーを指す。プライマーの長さおよび配列は、プライマーが伸長産物の合成を開始させることができるような長さおよび配列でなければならない。
【００４０】
核酸という用語は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、上記で同定された天然に存在する核酸、またはそれらの相補物にハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドを包含する。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン、および２０ｐｇ／ｍｌの変性断片化サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で４２℃で一晩インキュベートすること、それに続いてフィルターを、０．１×ＳＳＣ中で、約６５℃で、少なくとも３０分洗浄すること、例えばそれぞれ３０分で２回洗浄することを指す。
【００４１】
多くの標的およびシグナル増幅方法が文献で説明されており、例えば、これらの方法の一般論は、Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ，Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：２２９〜２３７（１９８８）およびＬｅｗｉｓ，Ｒ．、Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ  １０：１、５４〜５５（１９９０）で説明されている。これらの増幅方法は、本発明者らの発明の方法で使用することができ、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ｉｎ  ｓｉｔｕのＰＣＲ、リガーゼ増幅反応（ＬＡＲ）、リガーゼハイブリダイゼーション、Ｑβバクテリオファージレプリカーゼ、転写に基づく増幅システム（ＴＡＳ）、転写産物配列決定を伴うゲノム増幅（ＧＡＷＴＳ）、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、およびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが挙げられる。様々な増幅技術での使用に好適なプライマーは、当業界公知の方法に従って製造することができる。
【００４２】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、特に米国特許第４，６８３，１９５号および４，６８３，２０２号で説明されている核酸の増幅方法である。ＰＣＲは、ＤＮＡポリメラーゼが引き起こすプライマー伸長反応の繰り返しサイクルからなる。標的ＤＮＡを熱変性させ、増幅しようとするＤＮＡの逆鎖の標的配列を挟む２つのオリゴヌクレオチドをハイブリダイズさせる。これらのオリゴヌクレオチドが、ＤＮＡポリメラーゼと共に使用するためのプライマーになる。プライマー伸長によりＤＮＡがコピーされて、両方の鎖の第二のコピーが作られる。熱変性、プライマーのハイブリダイゼーション、および伸長のサイクルを繰り返すことにより、標的ＤＮＡを、約２〜４時間で１００万倍またはそれよりも多く増幅することができる。ＰＣＲは、増幅結果を確認する検出技術と共に使用しなければならない分子生物学的ツールである。ＰＣＲの利点は、ＰＣＲは、およそ４時間で標的ＤＮＡの量を１００万から１０億倍に増幅することにより感度を向上させる点である。ＰＣＲは、診断の状況であらゆる公知の核酸を増幅するのに使用することができる（Ｍｏｋら、（１９９４）、Ｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、５２：２４７〜２５２）。
【００４３】
自家持続配列複製法（３ＳＲ）は、酵素カクテルおよび適切なオリゴヌクレオチドプライマーが介在する逆転写酵素（ＲＴ）活性、ポリメラーゼ活性、およびヌクレアーゼ活性の逐次的な繰り返しによる核酸テンプレートの等温増幅を含むＴＡＳの改変法である（Ｇｕａｔｅｌｌｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１８７４）。熱変性の代わりに、ＲＮＡ／ＤＮＡヘテロ二本鎖のＲＮＡの酵素分解が使用される。この反応液にＲＮアーゼＨ（ＲＮａｓｅ  Ｈ）およびその他の全ての酵素を添加し、全ての工程を、さらなる試薬の添加はせずに同じ温度で行う。このプロセスの後、４２℃で１時間で１０６〜１０９の増幅を達成することができる。
【００４４】
ライゲーション増幅反応またはライゲーション増幅系（ＬＡＲ／ＬＡＳ）は、ＤＮＡリガーゼおよび４つのオリゴヌクレオチド（標的の鎖あたり２つ）を使用する。この技術は、Ｗｕ，Ｄ．Ｙ．およびＷａｌｌａｃｅ，Ｒ．Ｂ．（１９８９）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ４：５６０によって説明されている。オリゴヌクレオチドは、標的ＤＮＡ上の隣接する配列にハイブリダイズし、リガーゼによって連結される。この反応液を熱変性させて、サイクルを繰り返す。
【００４５】
Ｑβレプリカーゼ。この技術では、Ｌｉｚａｒｄｉら（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７で説明されているように、一本鎖ＲＮＡを複製するバクテリオファージＱβ用のＲＮＡレプリカーゼを使用して、標的ＤＮＡを増幅する。まず、標的ＤＮＡを、Ｔ７プロモーターおよびＱβ５’配列領域を包含するプライマーにハイブリダイズさせる。このプライマーを使用して、このプロセスでその５’末端にプライマーが連結されたｃＤＮＡが逆転写酵素により生成する。これらの２工程は、ＴＡＳプロトコールに類似している。得られたヘテロ二本鎖を熱変性させる。次いで、Ｑβ３’配列領域を含む第二のプライマーを使用して、２周目のｃＤＮＡ合成を開始させる。それにより、Ｑβバクテリオファージの５’および３’末端の両方、加えて活性Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ結合部位を含む二本鎖ＤＮＡが生じる。次いでＴ７ＲＮＡポリメラーゼは、二本鎖ＤＮＡを転写してＱβを模擬する新しいＲＮＡを形成する。十分に洗浄してハイブリダイズしなかった全てのプローブを除去した後、新しいＲＮＡを標的から溶出させ、Ｑβレプリカーゼで複製する。後者の反応により、およそ２０分で１０７倍の増幅を起こすことができる。
【００４６】
核酸が増幅されれば、単一塩基対突然変異または多型を検出するための多数の技術を利用することができる。このような技術の１つは、一本鎖高次構造多型（ＳＳＣＰ）である。ＳＣＣＰ検出は、電気泳動中の、参照ＤＮＡと比較した一本鎖突然変異ＤＮＡの異常な移動に基づく。突然変異は、一本鎖ＤＮＡのコンフォメーション変化をもたらし、その結果として移動度のシフトが生じる。蛍光ＳＣＣＰは、検出を補助するために蛍光標識プライマーを使用する。したがって、参照および突然変異体ＤＮＡは、蛍光標識プライマーを使用して増幅される。増幅したＤＮＡを変性させて、素早く冷却して、一本鎖ＤＮＡ分子を生産し、これを非変性ゲル電気泳動によって試験する。
【００４７】
化学的ミスマッチ切断（ＣＭＣ）は、ヒドロキシルアミン、四酸化オスミウム、およびピペリジンの組み合わせによるＤＮＡミスマッチ塩基対の認識および切断に基づく。したがって、参照ＤＮＡおよび突然変異体ＤＮＡの両方が蛍光標識プライマーで増幅される。アンプリコンをハイブリダイズさせ、次いでミスマッチしたＴ塩基に結合する四酸化オスミウム、またはミスマッチしたＣ塩基に結合するヒドロキシルアミンを使用して切断し、続いてピペリジンにより修飾塩基の部位で切断する。次いで電気泳動により切断したフラグメントを検出する。
【００４８】
また制限断片長多型（ＲＦＬＰ）に基づく技術も使用することができる。
【００４９】
さらに、ＷＡＶＥ分析に基づく技術を使用することができる（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２００４；１０８：１７３〜８８）。このＤＮＡ断片分析システムを使用して、一塩基多型を検出することができ、このシステムは、温度変調型液体クロマトグラフィーおよび高分解能マトリックスに基づく（Ｇｅｎｅｔ  Ｔｅｓｔ．１９９７〜９８；１（３）：２０１〜６）。
【００５０】
リアルタイムＰＣＲ（定量ＰＣＲ、リアルタイム定量ＰＣＲ、またはＲＴＱ−ＰＣＲとして知られている）は、同時にＤＮＡを定量および増幅する方法である（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｄｉａｇｎ．２００５（２）：２０９〜１９）。ＤＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応により特異的に増幅される。各周の増幅の後、ＤＮＡを定量する。一般的な定量方法は、二本鎖ＤＮＡに挿入される蛍光色素、および相補的ＤＮＡとハイブリダイズすると蛍光を発する修飾ＤＮＡオリゴヌクレオチド（プローブと呼ばれる）の使用を包含する。
【００５１】
高感度で迅速なＤＮＡ増幅系に、Ｓｃｏｒｐｉｏｎ（商標）プライマーとして知られている特異的プライマーを使用することができる。このようなプライマーと、単一分子中の特異的な標的配列を有するプローブとを併用することにより、結果として単分子反応速度論による蛍光検出系が得られる（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０００、２８：３７５２〜３７６１）。これは、増幅した標的に結合する別々のプローブを必要としない、より速く且つより効率的な検出をもたらすという点で、例えば分子ビーコンおよびＴａｑＭａｎ（登録商標）などの他の蛍光プローブ系よりも優れた利点がある。これら３つの検出方法の直接比較（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２０００、２８：３７５２〜３７６１）から、Ｓｃｏｒｐｉｏｎｓ（登録商標）が、特に迅速なサイクル条件下で、分子間プロービング系よりも優れた性能を発揮することが示されている。Ｓｃｏｒｐｉｏｎ（商標）プライマーのある改変型の構造は、対象の標的に特異的なプローブ配列を端部に有する約６塩基の相補的なステム配列によりヘアピンループコンフォメーションに保持されている構造である（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９、１７：８０４〜８０７）。またこのステムは、（５’末端に取り付けられた）蛍光レポーター色素をクエンチャー分子と近接させて一緒に配置させるのにも役立つ。このコンフォメーションでは、シグナルは生産されない。ＰＣＲ−ブロッカーは、プライマー配列からヘアピンループを分離して、Ｓｃｏｒｐｉｏｎ（登録商標）の３’末端を形成する。このブロッカーは、特異的な標的の非存在下でのヘアピンループのアンフォールディングを引き起こすと予想されるリードスルーを防ぐ。ＰＣＲ中、通常通りにプライマーから伸長が起こる。それに続く変性およびアニーリング工程の後、ヘアピンループがほどけ、正しい産物が増幅された場合、プローブ配列は、新たに合成された鎖のプライマー下流にある特異的な標的配列に結合する。この新しい構造は、元のヘアピンループよりも熱力学的に安定である。蛍光色素はもはやクエンチャーにごく近接したところにないため、この時点で蛍光シグナルが生成する。蛍光シグナルは、標的ＤＮＡの量に正比例する。
【００５２】
代替のＳｃｏｒｐｉｏｎ（商標）プライマーは、２つの相補的な標識オリゴヌクレオチドの二重鎖を含む。二重鎖のうち１つのオリゴヌクレオチドは、５’末端レポーター色素で標識され、ブロッカー非コードヌクレオチドとＰＣＲプライマー要素の両方を有し、他方のオリゴヌクレオチドは、３’末端クエンチャー色素で標識される。この場合、作用機序は、実質的に上述のＳｃｏｒｐｉｏｎ（商標）ヘアピンプライマーと同じであり：リアルタイム定量ＰＣＲ中、５’末端レポーターと３’末端クエンチャー色素とが互いに分離して、蛍光発光の有意な増加をもたらす。
【００５３】
Ｓｃｏｒｐｉｏｎｓ（商標）と増幅抵抗突然変異系（ＡＲＭＳ）とを併用することができ（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９８９、１７：２５０３〜２５１６、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９、１７：８０４〜８０７）、それにより単一塩基突然変異の検出が可能になる。適切なＰＣＲ条件下で、プライマーの３’末端に位置する単一塩基ミスマッチは、完全にマッチする対立遺伝子を優先的に増幅させるのに十分であることにより（Ｎｅｗｔｏｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７：２５０３〜２５１６、１９８９）、密接に関連した種の識別が可能になる。上述のプライマーを使用する増幅系の基礎は、ミスマッチ３’−残基を有するオリゴヌクレオチドは、適切な条件下のＰＣＲにおいてプライマーとして機能しないということである。この増幅系は、アガロースゲル電気泳動後に反応混合物を検査するだけで遺伝子型解析を可能にする。この増幅系は簡単で信頼でき、いずれの対立遺伝子についても、遺伝子座でヘテロ接合体とホモ接合体とを明確に区別すると予想される。ＡＲＭＳは、制限酵素消化、従来通りに適用されるような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド、またはＰＣＲ産物の配列分析を必要としない。
【００５４】
一実施形態において、ヌクレオチドの決定方法は、単一塩基突然変異または多型を検出する対立遺伝子特異的（ＡＲＭＳ）プライマーを用いたリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイム−ＰＣＲ）の使用を含む。
【００５５】
ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子のｒｓ３７５６００７／（配列番号１の位置に従って）４０１位における塩基／ヌクレオチドに関して、シトシンは、本明細書では、マイナーアレルと称され、チミンは、メジャーアレルと称される。驚くべきことに、マイナーアレルを持つうつ病に罹った患者は、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のｒｓ３７５６００７にメジャーアレルを持つ患者（ホモ接合体）よりも、ＮＭＤＡアンタゴニストでのうつ病治療に対して有利に応答する可能性が高いことが見出された。
【００５６】
本発明の一実施形態において、上述したようなＡＲＭＳ法であって、第一のプライマー対は、マイナーアレルを検出するのに使用され、第二のプライマー対は、メジャーアレルを検出するのに使用され；ここで、各対の１つのプライマーは：−
（ａ）特定の対立遺伝子に特異的な３’末端のヌクレオチドを有するプライマー；および
（ｂ）プライマーの３’末端における、可能性のある追加のミスマッチ
を含む、上記方法が提供される。
【００５７】
１つの筋書きにおいて、各対の１つのプライマーは：−
（ａ）プライマー配列と標的配列に特異的なさらなる配列との両方を含む、単一の分子または核酸二重鎖プローブ；
（ｂ）前記単一分子または核酸二重鎖内に、クエンチャー分子と近接してプローブの５’末端に取り付けられた蛍光レポーター色素；
（ｃ）前記プローブの一方の末端における１つまたはそれ以上の非コードヌクレオチド残基；
を含み、
（ｄ）前記レポーター色素およびクエンチャー分子は、標的配列の増幅中に別々になる。
【００５８】
一実施形態において、プローブは、Ｓｃｏｒｐｉｏｎ（商標）プローブである。
【００５９】
本発明の一実施形態において、患者から得られた核酸含有試料中で、ＳＮＰのｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２におけるＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列を決定する方法であって、それぞれ配列番号１〜４に従って４０１位に相当するＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列を認識することができるＡＲＭＳプライマーの使用を含む、上記方法が提供される。本発明の一実施形態において、患者から得られた試料において、ＳＮＰのｒｓ３７５６００７におけるＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列を決定する方法であって、配列番号１に従って４０１位に相当する塩基を含むＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子配列の領域が増幅されるように最適化された、ＡＲＭＳプライマーおよびコンパニオンプライマー（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｐｒｉｍｅｒ）の使用を含む、上記方法が提供される。当業者であれば、「増幅されるように最適化された」は、フォワードプライマーおよびリバースプライマーの最適な長さおよび位置を決定することを含むことを理解しているであろう。一実施形態において、特定のＳＮＰ塩基の認識が可能なＡＲＭＳプライマーは、フォワードまたはリバースプライマーのどちらであってもよい。ＡＲＭＳアッセイで使用するためのフォワードまたはリバースプライマーは、５００塩基未満の領域が増幅されるように最適化される。一実施形態において、プライマーは、２５０塩基未満の領域が増幅されるように最適化される。一実施形態において、プライマーは、２００塩基未満の領域が増幅されるように最適化される。一実施形態において、プライマーは、１００塩基より大きい領域が増幅されるように最適化される。
【００６０】
一実施形態において、ＡＲＭＳフォワードプライマーは、配列番号１、２、３または４のいずれかで定義されたような４０１位に相当する位置におけるＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列を認識することができる。一実施形態において、ＡＲＭＳリバースプライマーは、配列番号１、２、３または４のいずれかで定義されたような４０１位に相当する位置におけるＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列を認識することができる。「認識する」とは、本内容において、プライマーに特異的にハイブリダイズして、および／またはそこからプライマーを容易に伸長させることを意味する。ＡＲＭＳアッセイで使用されたプライマーはいずれも、基質核酸へのハイブリダイゼーションを強化または容易にするためにロックト核酸を包含していてもよい。ロックト核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチドは、リボースの２’−酸素と４’−炭素とを連結するメチレン架橋を含む。この架橋により、ロックされた３’末端コンフォメーションが生じ、リボースの立体配座のフレキシビリティーを低下させ、リン酸主鎖の局所的な組織化を高める。ＢｒａａｓｃｈおよびＣｏｒｅｙは、ＬＮＡ／ＤＮＡハイブリッドの特性を再調査している（ＢｒａａｓｃｈおよびＣｏｒｅｙ、２００１、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ  ８：１〜７）。
【００６１】
数々の研究から、ＬＮＡを含むプライマーは、相補的ＤＮＡ配列に対する親和性を改善することが示されている。単一のＬＮＡ塩基を取り込むことにより、同じ長さおよび配列のＤＮＡ：ＤＮＡ複合体と比較した場合、融解温度（Ｔｍ）を４１℃まで高めることができ、さらにＴｍ値を９．６℃も高めることもできる。ＢｒａａｓｃｈおよびＣｏｒｅｙは、ＬＮＡ塩基の包含は、１０塩基よりも短いオリゴヌクレオチドに最大の作用を与えると提唱している。
【００６２】
ＰＣＲプライマー設計にＬＮＡを使用する意味が概説されている（Ｌａｔｏｒｒａ、ＡｒａｒおよびＨｕｒｌｅｙ、２００３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  １７、２５３〜２５９）。確実なプライマー設計のルールは確立されていないが、ＰＣＲプライマーにおけるＬＮＡ置換の最適化は複雑であり、数、位置、および配列の内容に依存すると述べられている。Ｕｇｏｚｏｌｌｉら（Ｕｇｏｚｏｌｌｉ、Ｌａｔｏｒｒａ、Ｐｕｃｋｅｔ、Ａｒａｒ、およびＨａｍｂｙ、２００４、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２４、１４３〜１５２）は、５’ヌクレアーゼアッセイを使用してリアルタイムＰＣＲでＳＮＰを検出するためのＬＮＡプローブの使用を説明している。Ｌａｔｏｒｒａら（Ｌａｔｏｒｒａ、Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｗｏｌｔｅｒ、およびＨｕｒｌｅｙ、２００３、Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ２２、７９〜８５）は、対立遺伝子特異的プライマーとして使用するための、３’末端および３’末端に隣接する位置にＬＮＡ塩基を含む一連のプライマーを合成した。ミスマッチＬＮＡ配列からのプライミングはＤＮＡプライマーと比べて減少したが、個々の反応の最適化を要した。
【００６３】
一実施形態において、ＡＲＭＳフォワードおよび／またはリバースプライマーは、標準のＤＮＡ塩基のうち１つまたは複数がＬＮＡ塩基で置換された配列を含む。
【００６４】
一実施形態において、ＡＲＭＳアッセイについて上述したようなＡＲＭＳプライマー対の使用の結果生じる増幅産物に結合することができるＡＲＭＳプローブが提供される。一実施形態において、ＡＲＭＳプローブは、標準のＤＮＡ塩基のうち１つまたは複数がＬＮＡ塩基で置換された配列を含む。一実施形態において、ＡＲＭＳプローブは、５’末端にＹａｋｉｍａ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）蛍光タグを含む。一実施形態において、ＡＲＭＳプローブは、３’末端にＢＨＱ（商標）クエンチャーを含む。当業者であれば、増幅産物においてプローブが結合する（したがってプローブの配列が相補的な）位置は、増幅産物を決定するフォワードおよびリバースプライマーで定められた境界によってのみ制限されることを認識しているであろう。
【００６５】
対照プローブを使用して、ＡＲＭＳアッセイが目的通りに稼働していることを確認して、ＡＲＭＳアッセイに使用された試料にＤＮＡが存在することを確認することができる。当業者であれば、対照プローブは、どのような選ばれた遺伝子でも標的にすることができることを理解しているであろう。
【００６６】
本発明の他の態様において、ＳＮＰのｒｓ３７５６００７におけるＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列を決定する方法であって、患者の生体試料から抽出されたＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子のｍＲＮＡの逆転写によって生成したｃＤＮＡの配列を決定する工程を含む、上記方法が提供される。このような試料は、新鮮な試料、保存試料または他の臨床材料であってもよい。ホルマリン固定した組織からのＲＮＡの抽出は、Ｂｏｃｋら、２００１  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：２９５  １１６〜１１７で説明されており、固定されていない組織からのＲＮＡの抽出手順、ならびに逆転写によるｃＤＮＡの生成プロトコール、ＰＣＲ増幅、および配列決定は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．Ｗ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００１で説明されている。
【００６７】
本発明のさらなる態様は、ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９、およびｒｓ１３７２４７２からなる群より選択されるＧＡＢＲ−Ａ２のＳＮＰのうち１つの、マイナーアレルを同定することができるハイブリダイゼーションまたは増幅プライマー、ならびにメジャーアレルを同定することができるハイブリダイゼーションまたは増幅プライマー、ならびに場合により使用説明書を含む診断キットを提供する。
【００６８】
本発明のさらなる態様は、ＧＡＢＲ−Ａ２における（配列番号１で定義された場合に４０１位に相当する）ｒｓ３７５６００７ＳＮＰを検出することができるＡＲＭＳフォワードまたはリバースプライマー、および場合によりＡＲＭＳコンパニオンプライマー、ならびに場合により使用説明書を含む診断キットを提供する。検出しようとする対立遺伝子の位置にどちらのプライマー（フォワードまたはリバース）が結合するかによって、他方のプライマーが「コンパニオン」プライマーと称される。本発明の一実施形態において、１つまたはそれ以上のＬＮＡ塩基を含み、ＧＡＢＲ−Ａ２における配列番号１で定義された場合に４０１位に相当する位置の配列の認識が可能なＡＲＭＳ突然変異体プライマー、および場合によりＡＲＭＳコンパニオンプライマー、ならびに場合により使用説明書を含む診断キットが提供される。一実施形態において、診断キットは、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療の候補である患者が前記治療に応答する可能性を予測する方法で使用することができる。代替の実施形態において、診断キットは、ＮＭＤＡアンタゴニストを用いたうつ病治療の候補である患者を、前記治療のために選択することにおいて使用することができる。
【００６９】
本発明のさらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニストを用いたうつ病治療に対する患者の応答を予測するための、配列番号１に従って４０１位に相当する位置におけるチミンまたはシトシンの認識が可能なプライマーまたはプローブの使用が提供される。
【００７０】
本発明のさらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニストを用いたうつ病治療に対する患者の応答を予測するための、配列番号２に従って４０１位に相当する位置におけるチミンまたはアデニンの認識が可能なプライマーまたはプローブの使用が提供される。
【００７１】
本発明のさらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニストを用いたうつ病治療に対する患者の応答を予測するための、配列番号３に従って４０１位に相当する位置におけるチミンまたはシトシンの認識が可能なプライマーまたはプローブの使用が提供される。
【００７２】
本発明のさらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニストを用いたうつ病治療に対する患者の応答を予測するための、配列番号４に従って４０１位に相当する位置におけるチミンまたはアデニンの認識が可能なプライマーまたはプローブの使用が提供される。
【００７３】
さらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニストに対するうつ病に罹った患者の応答を予測するための組成物またはキットの製造における、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列番号１に従って４０１位、またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列番号２に従って４０１位、またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列番号３に従って４０１位、またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列番号４に従って４０１位に特異的なプライマーまたはプローブの使用が提供される。
【００７４】
本発明のさらなる態様において、配列番号１〜４のいずれかに従って４０１位に相当する位置における塩基を包含する配列と同一な、または部分的に相補的な、少なくとも１２の核酸塩基、例えば少なくとも１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００個またはそれより多い核酸塩基の長さを有するオリゴヌクレオチドが提供される。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、５０未満の核酸塩基である。該配列が標的配列に部分的に相補的である場合、該配列は、検出および／またはそれからの鎖の伸長が可能になるように前記配列にハイブリダイズできるはずである。
【００７５】
具体的な実施形態において、上述したような方法を使用して、ＮＭＤＡアンタゴニストの遺伝薬理学を評価することができる。遺伝薬理学とは、薬物に対して異なる応答を引き起こす遺伝学的変異の研究である。患者から得られた試料において、ＳＮＰのｒｓ３７５６００７におけるＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の配列、またはそれ以外のいずれか３種の列挙されたＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子のＳＮＰを決定して、ＮＭＤＡアンタゴニストに対する患者の応答を分析することにより、ＮＭＤＡアンタゴニストの遺伝薬理学を解明することができる。
【００７６】
一実施形態において、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療の候補である患者が、前記治療に対して応答する可能性を予測する方法を使用して、うつ病を有する患者または患者群を、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療のために選択することができる。
【００７７】
一実施形態において、ＮＭＤＡアンタゴニストで治療するための候補であるうつ病または不安に罹った患者が、前記治療に対して応答する可能性を予測する方法を使用して、うつ病を有する患者または患者群のＮＭＤＡアンタゴニストでの治療に対する反応性を予測することができる。
【００７８】
ＮＭＤＡアンタゴニストは、例えば、１種またはそれ以上の薬学的に許容される担体、添加剤、緩衝剤、アジュバント、安定剤、または本明細書において説明されているような他の材料とその化合物を混合することによって、それを必要とする対象に医薬投与するのに好適な組成物または製剤に取り入れられると予想される。
【００７９】
「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、適度なベネフィット・リスク比に見合った、過剰な毒性、炎症、アレルギー性応答、または他の問題もしくは合併症のない、対象（例えばヒト）の組織と接触して使用するのに好適な、確かな医学的判断の範囲内の化合物、材料、組成物、および／または投与形態に関する。また各担体、添加剤なども、製剤の他の成分に適合するという観点で「許容できる」ものでなければならない。
【００８０】
好適な担体、希釈剤、添加剤などは、標準的な医薬の教本で見出すことができる。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ、第２版（Ｍ．ＡｓｈおよびＩ．Ａｓｈ編）、２００１（Ｓｙｎａｐｓｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｎｄｉｃｏｔｔ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ出版、２０００、またはＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第２版、１９９４を参照されたい。
【００８１】
製剤は、単位投与形態で提供することが都合がよい場合があり、薬学分野において周知のあらゆる方法によって製造することができる。このような方法は、活性化合物と、１種またはそれ以上のアクセサリー成分を構成する担体とを接触させる工程を包含する。一般的に、製剤は、活性化合物と、液体担体もしくは微粉化した固形担体またはその両方とを均一かつ緊密に接触させ、次いで必要に応じて生成物を成形することによって製造される。
【００８２】
製剤は、液体、溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル、シロップ、錠剤、ロゼンジ、顆粒、粉末、カプセル、カシェ剤、丸剤、アンプル、坐剤、ペッサリー、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、スプレー、ミスト、発泡体、ローション、オイル、ボーラス、舐剤、またはエアロゾルの形態であってもよい。
【００８３】
経口投与（例えば、摂取による）に好適な製剤は、それぞれ予め決められた量の活性化合物を含む、例えばカプセル、カシェ剤もしくは錠剤などの別々の単位として；粉末もしくは顆粒として；水性もしくは非水性液体中の溶液または懸濁液として；または水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして；ボーラスとして；舐剤として；またはペーストとして提供されてもよい。
【００８４】
錠剤は、従来の手段により、例えば場合により１種またはそれ以上のアクセサリー成分と共に圧縮または成形することにより作製することができる。圧縮錠剤は、好適な装置で活性化合物を、例えば粉末または顆粒などの流動しやすい状態で、場合により、結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、アカシア、ソルビトール、トラガカント、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤または希釈剤（例えばラクトース、微結晶性セルロース、リン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）；崩壊剤（例えばデンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）；表面活性剤または分散剤または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）；および保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）のうち１種または複数と混合して圧縮することにより製造することができる。成形錠剤は、好適な装置で、不活性な液体希釈剤で湿潤させた粉末化合物の混合物を成形することにより作製することができる。錠剤は、場合によりコーティングしたり、または刻み目を付けたりしてもよく、さらに、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを、望ましい放出プロファイルになるように様々な比率で使用して、中に含まれる活性化合物の持続放出または制御放出が達成されるように製剤化してもよい。錠剤は、場合により、胃ではなく消化管の部位での放出が達成されるように、腸溶コーティングと共に提供されてもよい。
【００８５】
担体が固体の経鼻投与に好適な製剤としては、鼻で吸い込む方式で、すなわち鼻に近づけて固定した粉末の容器から鼻腔を介して急速に吸入することにより投与される、例えば約２０〜約５００ミクロンの範囲の粒度を有する粗粉末が挙げられる。例えば鼻内噴霧、点鼻剤として投与するための、またはネブライザーでのエアロゾル投与による、担体が液体の好適な製剤としては、活性化合物の水性または油性溶液が挙げられる。
【００８６】
吸入による投与に好適な製剤としては、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の好適なガスなどの好適な噴射剤の使用により、加圧されたパックからエアロゾルスプレーとして提供されるものが挙げられる。
【００８７】
直腸内投与に好適な製剤は、例えば、カカオバターまたはサリチレートを含む好適なベースと共に坐剤として提供されてもよい。
【００８８】
非経口投与（例えば、皮膚注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、および皮内注射などの注射による）に好適な製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、静菌薬、および製剤を対象の受容者の血液と等張にする溶質を含み得る、水性および非水性の、等張の、パイロジェンフリーの滅菌注射液；ならびに懸濁化剤および増粘剤、ならびに化合物が血液成分または１つまたはそれ以上の臓器を標的とするように設計されたリポソームまたは他のマイクロ微粒子系を包含し得る、水性および非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。このような製剤で使用するのに好適な等張のビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、または乳酸加リンゲル注射液が挙げられる。典型的には、溶液中の活性化合物の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、例えば約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌである。製剤は、単回投与または複数回投与用の密封容器、例えばアンプルおよびバイアル中に提供されてもよく、さらに使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水を加えるだけのフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。即時調整用の注射液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から製造してもよい。製剤は、活性化合物が血液成分または１つまたはそれ以上の臓器を標的とするように設計されたリポソームまたは他のマイクロ微粒子系の形態であってもよい。
【００８９】
特定の病状の療法的または予防的治療に必要な各療法における用量の規模は、必然的に、治療される宿主、投与経路、および治療されている疾患の重症度に応じて様々であると予想される。
【００９０】
したがって、最適な投与量は、いずれか特定の患者を治療する医師によって、例えば疾患の重症度およびタイプ、体重、性別、食事、投与の時間および経路、他の薬物療法、ならびに他の関連する臨床的な要因などの、薬物の作用を改変することが公知の様々な要因を考慮することにより決定してもよい。また、毒性を軽減するために、併用治療の要素の上述した用量を減少させることも必要であるかまたは望ましい場合がある。治療的に有効な投与量は、インビトロまたはインビボのどちらの方法で決定してもよい。
【００９１】
本明細書に記載の組成物は、例えば錠剤またはカプセルのような経口投与に好適な形態、例えば粉末または溶液などの経鼻投与または吸入による投与に好適な形態、例えば滅菌溶液、懸濁液またはエマルジョンなどの非経口の注射（静脈内、皮下、筋肉内、血管内または点滴などを含む）に好適な形態、例えば軟膏またはクリームなどの局所投与に好適な形態、例えば坐剤などの直腸内投与に好適な形態であってもよく、または投与経路は、腫瘍への直接注射、もしくは領域への送達、もしくは局所送達によってなされてもよい。
【００９２】
治療的に有効な投与量は、インビトロまたはインビボのどちらの方法で決定してもよい。治療薬物の用量の計算は、医学、薬物動態学、および遺伝薬理学の考察を必要とする複雑な作業である。所定の患者の治療薬物の用量は、例えば疾患の重症度およびタイプ、体重、性別、食物、投与の時間および経路、他の薬物療法、ならびに他の関連する臨床的な要因などの、薬物の作用を改変することが公知の様々な要因を考慮して、主治医によって決定されると予想される。しかしながら、ＮＭＤＡアンタゴニストは通常、温血動物に、必要であれば分割用量と仮定して、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜７５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の１日用量が与えられるように投与されると予想される。ＮＭＤＡアンタゴニストは、例えば錠剤、カシェ剤またはカプセルなどで経口投与してもよい。またＮＭＤＡアンタゴニストは、非経口投与してもよい。このようなケースでは、より低い用量が使用されると予想される。したがって、例えば、静脈内投与の場合、一般的には０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量が使用されると予想される。
【００９３】
一実施形態において、ＮＭＤＡアンタゴニストは、（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミンおよびケタミンからなる群より選択される。
【００９４】
ＮＭＤＡアンタゴニストの有効量は、例えば、治療目的、投与経路、および患者の状態によって決まると予想される。したがって、治療専門家により、最適な治療効果を得るために必要に応じて投与量を決めて投与経路を改変する可能性がある。典型的な１日投与量または例えば毎週、２週間ごともしくは毎月などの間欠的な投与量は、上述の要因に応じて、約０．５ｍｇから、３００ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇもしくは１２００ｍｇまでの範囲、またはそれより多くであってもよい。
【００９５】
本発明者らは、ＮＭＤＡアンタゴニストは、単剤療法として、または他の薬物と組み合わせて使用され得ることを考慮する。また本発明は、アジュバント中でも、または第一選択の療法としても有用である。
【００９６】
一実施形態において、本発明の方法はさらに、上記で説明した方法に係るＮＭＤＡアンタゴニストでの治療のために選択された、またはそのような治療に対する応答に関して予測された患者への、ＮＭＤＡアンタゴニストの投与を含む。
【００９７】
一実施形態において、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の（配列番号１〜４のうちいずれか１つに従って）４０１位に相当する位置における対立遺伝子を決定するために患者の生体試料になされる方法は、この薬物での治療に好適であると同定された患者に、所定量のＮＭＤＡアンタゴニストを投与することをさらに含む。特定の実施形態において、決定工程の後、ＮＭＤＡアンタゴニストが患者に投与される。
【００９８】
本発明のさらなる態様において、上記で説明した方法に係るＮＭＤＡアンタゴニストでの治療のために選択された、またはそのような治療に対する応答が予測される、またはより好適な、患者または患者群を治療するための医薬品の製造における、ＮＭＤＡアンタゴニストの使用が提供される。
【００９９】
本発明のさらなる態様において、本明細書において説明されているような方法に従ってＮＭＤＡアンタゴニストに対する応答可能性の増加に関して選択された、または該可能性が増加していると予測された患者または患者群の治療方法であって、前記患者（複数可）にＮＭＤＡアンタゴニストを投与する工程を含む、上記方法が提供される。
【０１００】
本発明のさらなる態様において、うつ病または不安に罹った患者の治療方法であって、患者が、上述した本発明の方法に従ってＮＭＤＡアンタゴニストに有利に応答するかどうかを決定する工程、および患者がＮＭＤＡアンタゴニスト治療に応答する可能性が高いと同定された場合、前記患者にＮＭＤＡアンタゴニストの有効量を投与する工程を含む、上記方法が提供される。
【０１０１】
本発明のさらなる態様において、うつ病または不安に罹った患者の治療方法であって、
（ｉ）患者からの核酸含有試料を用意する工程、
（ｉｉ）ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰのｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２のうちいずれか１つにおける対立遺伝子を決定する工程；および
（ｉｉｉ）患者の細胞性ＤＮＡが前記位置にマイナーアレルを持つ場合、患者に、有効量のＮＭＤＡアンタゴニストを投与する工程
を含む、上記方法が提供される。
【０１０２】
本発明のさらなる態様において、うつ病または不安に罹った患者の治療方法であって、
（ｉｖ）患者からの核酸含有試料を用意する工程
（ｖ）ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のＳＮＰ位置ｒｓ３７５６００７における対立遺伝子を決定する工程；および
（ｖｉ）患者の細胞性ＤＮＡが前記位置にシトシンを持つ場合、患者に、有効量のＮＭＤＡアンタゴニストを投与する工程
を含む、上記方法が提供される。
【０１０３】
本発明のさらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療の候補である患者の治療方法であって、
（ｉ）患者から得られた試料において、以下に示す配列番号１で定義された位置４０１位におけるＧＡＢＲ−Ａ２の塩基がシトシンであるかどうかを決定する工程；および
（ｉｉ）工程（ｉ）で決定された塩基がシトシンである場合、前記患者にＮＭＤＡアンタゴニストの有効量を投与する工程
を含む、上記方法が提供される。
【０１０４】
本発明のさらなる態様において、ＮＭＤＡアンタゴニスト治療の候補である患者の治療方法であって、
（ｉ）患者から得られた試料において、配列番号１〜４のいずれかに従って４０１位におけるＧＡＢＲ−Ａ２の配列がマイナーアレルであるかどうかを決定する工程；および
（ｉｉ）工程（ｉ）の答えがイエスである場合、前記患者に、ＮＭＤＡアンタゴニストの有効量を投与する工程
を含む、上記方法が提供される。
【０１０５】
本発明のさらなる態様において、
（ａ）うつ病または不安の治療が必要な患者を選択する工程であって、該患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシンを保持すると同定されている、上記工程；および
（ｂ）患者をＮＭＤＡアンタゴニストで治療する工程
を含む、治療方法が提供される。
【０１０６】
本発明のさらなる態様において、
（ａ）ＮＭＤＡアンタゴニストを含有するパッケージを製造する工程；および
患者のうつ病または不安を治療するためにＮＭＤＡアンタゴニストの使用を推奨するラベルまたは挿入印刷物（ｐｒｉｎｔｅｄ  ｉｎｓｅｔ）をパッケージに入れる工程であって、該患者のゲノムが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ１１５０３０１６にチミン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ１７５３７３５９にシトシン、および／またはＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の一塩基多型の位置ｒｓ１３７２４７２にチミンを含む、上記工程
を含む、市販薬の製造方法が提供される。
【０１０７】
本発明のさらなる態様において、上述の方法に従ってＮＭＤＡアンタゴニスト治療に応答する可能性が高いと同定された患者を治療するための医薬品の製造における、ＮＭＤＡアンタゴニストの使用が提供される。
【０１０８】
本発明のさらなる態様において、うつ病または不安を有する患者を治療するための医薬品の製造におけるＮＭＤＡアンタゴニストの使用であって、該患者の細胞性ＤＮＡが、本明細書において説明された方法のいずれかに従って、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の配列番号１に従って４０１位に相当する位置にシトシンを持つことが決定されている、上記使用が提供される。
【０１０９】
本発明のさらなる態様において、うつ病または不安に罹った患者の治療で使用するためのＮＭＤＡアンタゴニストであって、該患者の細胞性ＤＮＡが、（配列番号１に従って）４０１位に相当するＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中にシトシンを持つことが決定されている、上記ＮＭＤＡアンタゴニストが提供される。
【０１１０】
本発明のさらなる態様において、うつ病または不安に罹った患者の治療で使用するためのＮＭＤＡアンタゴニストであって、該患者の細胞性ＤＮＡが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中のｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９またはｒｓ１３７２４７２のＳＮＰのうちいずれか１つにおいてマイナーアレルを持つと同定されている、上記ＮＭＤＡアンタゴニストが提供される。
【０１１１】
本発明のさらなる態様において、患者の細胞性ＤＮＡが、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子中の、一塩基多型の位置ｒｓ３７５６００７にシトシン、および／または一塩基多型の位置ｒｓ１１５０３０１６にチミン、および／または一塩基多型の位置ｒｓ１７５３７３５９にシトシン、および／または一塩基多型の位置ｒｓ１３７２４７２にチミンを持つと予め同定されている１人またはそれ以上の患者におけるうつ病または不安の治療で使用するためのＮＭＤＡアンタゴニスト薬が提供される。
【０１１２】
上述したように、本発明の様々な態様は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）に罹った患者、単一または再発性のうつ病エピソードを有する患者、治療抵抗性うつ病を有する患者（すなわち他のうつ病治療に応答しないことが見出されている患者；ＴＲＤ）、双極性うつ病を有する患者、全般性不安障害（ＧＡＤ）を有する患者、強迫性障害（ＯＣＤ）を有する患者、パニック障害を有する患者、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を有する患者、ならびに社会不安障害を有する患者に使用することが好適である。
【０１１３】
上述したように、以下のＮＭＤＡアンタゴニスト化合物：（Ｓ）−１−フェニル−２−（ピリジン−２−イル）エタンアミン（ＷＯ９３／２００５２で開示されている）およびケタミンが、本発明の様々な態様で使用するのに特に好適である。
【実施例】
【０１１４】
以下の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【０１１５】
実施例１−ゲノムＤＮＡ試料を、化合物Ａの第ＩＩ相試験に登録した個体から収集した（この試験における患者総数は１５２であった）。第ＩＩ相試験を、うつ病治療における化合物Ａの効能が測定されるように設計した。うつ病治療で使用された薬物療法に対して低い応答を示すものと定義された患者の治療歴に基づき、上述の第ＩＩ相試験に登録するための患者を選択した。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＧＡＢＡＡ受容体（ＧＡＢＲ−Ａ２）のアルファ−２サブユニットをコードする遺伝子における共通の遺伝学的変異（一塩基多型、ＳＮＰ）をＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイを使用して試験し、化合物Ａ（Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト）でのうつ病治療に対する応答へのそれらの影響を測定した。治療への応答の測定法として、モンゴメリー−アスバーグ（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ−Åｓｂｅｒｇ）うつ病評価尺度（ＭＡＤＲＳ；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ  ＳＡ、Ａｓｂｅｒｇ  Ｍ（１９７９年４月）．「Ａ  ｎｅｗ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｃａｌｅ  ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｔｏ  ｂｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｔｏ  ｃｈａｎｇｅ」．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １３４（４）：３８２〜８９）を使用した。ＧＡＢＲ−Ａ２およびＢＤＮＦにおける６つのＳＮＰの遺伝子型解析のために、３２種のＳＮＰを選択した。
【０１１６】
ＢＤＮＦの遺伝学的分析の結果からは、治療への応答における変化への寄与は実証されなかった。しかしながら、ＧＡＢＲ−Ａ２遺伝子の結果からは、多数のＳＮＰに関してＭＡＤＲＳにおける基準からの変化への影響が示され、なかでもｒｓ３７５６００７ＳＮＰは最も強い関連を示した。表１に、化合物Ａでの治療後にマイナーアレルがＭＡＤＲＳの変化に平均して正の影響を与えた、テストされた遺伝学的変異を列挙する。薬物で治療された患者（治療群）からのＰ値も示す（治療的ｐ値）。
【０１１７】
【表１】
2015501652.tif 000002
【０１１８】
したがって、テストされたＧＡＢＲ−Ａ２のＳＮＰのなかでも、化合物Ａで治療され、ｒｓ３７５６００７、ｒｓ１１５０３０１６、ｒｓ１７５３７３５９、およびｒｓ１３７２４７２にマイナーアレルを有する患者は、メジャーアレルのホモ接合体の保因者よりも平均して大きい改善を達成した。
【０１１９】
ＳＮＰ検出
ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイを使用して、標的遺伝子内の特定のＳＮＰを検出した。各ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイは、所定の突然変異または対立遺伝子に特異的であり、すなわち所定の位置において他の塩基に対して代替の塩基が検出されるように設計された。各ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイは、標的塩基（ＳＮＰ）を同定するために様々な蛍光タグで標識したＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブと共に標的遺伝子中の対象の多型配列を増幅する配列特異的なフォワードおよびリバースプライマーを含んでいた。ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイをＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）に注文し、可能な場合、プレ−デザインドＳＮＰジェノタイピング・アッセイ（Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙｓ）を使用した。市販のプレ−デザインドＳＮＰジェノタイピング・アッセイを使用して、化合物Ａでのうつ病治療に対する応答への影響との関連を示すＧＡＢＲ−Ａ２のＳＮＰそれぞれを検出した。表１にＳＮＰそれぞれのカタログ番号を列挙した。
【０１２０】
プレ−デザインドアッセイが利用できないＳＮＰには、カスタムＴａｑＭａｎ（登録商標）ＳＮＰジェノタイピング・アッセイを使用した。表２に、ｒｓ４９０４３４に対して特注設計された代表的なＳＮＰアッセイで使用されたプライマーおよびプローブ配列ならびに標識を示す。
【０１２１】
各ＳＮＰアッセイについて、ゲノムＤＮＡを臨床試料から抽出し、ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイを表２に記載のプライマーを使用して行った。ＴａｑＭａｎ（登録商標）反応には、総反応体積２μｌでゲノムＤＮＡをおよそ１０ｎｇ使用した。この反応には、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ジェノタイピング・マスター・ミックス（Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）、品番４３８１６５７）を使用した。ＴａｑＭａｎ（登録商標）ジェノタイピング・マスター・ミックスを脱イオン水で１：１に希釈し、ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイを８０倍濃度で使用した。次いでこの反応液を、熱サイクルの前にしっかりと密封した。サイクル条件は：サーマルサイクラー装置（ＫＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＴ−１０８サーマルサイクラー）中で、９５℃で１０分、続いて９２℃で１５秒、６０℃で６０秒を４０サイクルであった。次いで、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）７９００ＨＴシークエンス・デテクション・システム（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）で、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）ＳＤＳ  ｖ２．４ソフトウェア中の予めプログラム化された「アレリック・ディスクリミネーション（Ａｌｌｅｌｉｃ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ）」分析を使用してプレートを解析した。
【０１２２】
【表２】
2015501652.tif 000003
【配列表】
2015501652000001.app
【国際調査報告】
2015501652.tif 000004
2015501652.tif 000005
2015501652.tif 000006
2015501652.tif 000007