(57)【要約】  本明細書において、植物の成長、植物の生産性および／または土壌の質の向上に使用するための、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）から選択される１種または複数種の細菌種の株を含む微生物接種剤が提供される。任意選択により、微生物接種剤はまた、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株および／またはカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株を含み得る。前記微生物接種剤を含む肥料組成物もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）から選択される１種または複数種の細菌種の株を含む、植物の成長、植物の生産性および／または土壌の質の向上に使用するための微生物接種剤。
【請求項２】
前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種中の２種を含む請求項１に記載の微生物接種剤。
【請求項３】
前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種中の３種を含む請求項１に記載の微生物接種剤。
【請求項４】
前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種の全てを含む請求項１に記載の微生物接種剤。
【請求項５】
前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種の中の２種以上または３種以上の共生的組み合わせである請求項１〜４のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項６】
前記ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）株が、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８である請求項１〜５のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項７】
前記ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）株が、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４５で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８である請求項６に記載の微生物接種剤。
【請求項８】
前記ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）株が、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３である請求項１〜７のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項９】
前記ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）株が、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４６で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３である請求項８に記載の微生物接種剤。
【請求項１０】
前記ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）株が、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４である請求項１〜９のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項１１】
前記ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）株が、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４７で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４である請求項１０に記載の微生物接種剤。
【請求項１２】
前記ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）株が、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６である請求項１〜１１のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項１３】
前記ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）株が、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４８で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６である請求項１２に記載の微生物接種剤。
【請求項１４】
アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株をさらに含む請求項１〜１３のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項１５】
前記アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株が、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５である請求項１４に記載の微生物接種剤。
【請求項１６】
前記アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株が、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４３で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５である請求項１５に記載の微生物接種剤。
【請求項１７】
酵母をさらに含む請求項１〜１６のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項１８】
前記酵母がカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株である請求項１７に記載の微生物接種剤。
【請求項１９】
前記カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株が、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１である請求項１８に記載の微生物接種剤。
【請求項２０】
前記カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株が、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４４で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１である請求項１９に記載の微生物接種剤。
【請求項２１】
前記接種剤中の１種または複数種の菌株がカプセル化されている請求項１〜２０のいずれか一項に記載の微生物接種剤。
【請求項２２】
ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６から選択される少なくとも１種の微生物株を含む微生物接種剤。
【請求項２３】
アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５および／またはカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１をさらに含む請求項２２に記載の接種剤。
【請求項２４】
肥料として使用するための請求項１〜２３のいずれか一項に記載の接種剤。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項に記載の微生物接種剤を含む肥料組成物。
【請求項２６】
有機材料、腐植物質、浸透剤、多量栄養素、微量栄養素、ならびに他の土壌添加剤および／または植物添加剤などの１種または複数種の追加の成分をさらに含む請求項２５に記載の肥料組成物。
【請求項２７】
牧草植物、作物植物または観賞用植物の施肥に使用するための請求項２５または２６に記載の肥料組成物。
【請求項２８】
前記作物が、ヒトもしくは動物の食用作物、または燃料用もしくは薬品製造用の作物である請求項２７に記載の肥料組成物。
【請求項２９】
前記食用作物が、例えば、果実、野菜、ナッツ、種子または穀類である請求項２８に記載の肥料組成物。
【請求項３０】
植物の成長および／または生産性を向上させるための方法であって、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の微生物接種剤、または請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の肥料組成物を有効量、前記植物、植物の種子、または前記植物もしくは植物の種子が成長する土壌に施用することを含む方法。
【請求項３１】
土壌の質を改善するための方法であって、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の微生物接種剤、または請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の肥料組成物を有効量、土壌、または前記土壌中の植物もしくは植物の種子に施用することを含む方法。
【請求項３２】
前記植物が、牧草植物、作物植物または観賞用植物である請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記作物が、ヒトもしくは動物の食用作物、または燃料用もしくは薬品製造用の作物である請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
劣化した土壌または牧草地を回復する方法であって、前記土壌または牧草地に、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の微生物接種剤、または請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の肥料組成物を有効量、施用することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、一般に、本明細書に記載する１種または複数種の微生物種または微生物菌株を含む微生物接種剤、特に肥料として使用するための微生物接種剤、およびそのような有機体を含む肥料組成物に関する。本開示はまた、本開示の微生物接種剤および肥料組成物を使用して、植物の成長を促進し、土壌中の栄養素利用率を増大させ、劣化した土壌および牧草地を回復させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物および作物の生産を促進するために、また痩せた土壌の質を改善するために肥料を使用することは広く行われている。最も一般的に使用され、商業的に入手可能な肥料は、無機化学肥料である。そのような化学肥料は、製造コストが高い可能性、使用が危険である可能性があり、流出水および地下水の硝酸塩による汚染など、環境に悪影響を及ぼす結果を招くことがしばしばある。化学肥料の使用制限により、環境持続性を促進することができる。
【０００３】
微生物を含む肥料組成物（所謂、「生物肥料」）を、従来の化学肥料の代替と考えることが増えてきている。植物の成長を促進する特定の細菌種の能力は、以前から認識されている。例えば、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）種などの窒素固定細菌は、植物に必須の窒素化合物を提供する。アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）種およびアゾスピリルム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）種もまた、植物中への栄養素の蓄積を促進し、植物の成長を促し、かつ作物の収穫を増加させることが示されている。しかしながら、これらの属の細菌は、自然土壌および植物相と有効に競り合えないことが多く、したがって、非実際的なほどの大量の接種菌を施用する必要がある。各種のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種およびプセウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種もまた、微生物ベースの肥料に使用されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
今日まで、生物肥料の成功は限定的なものであり、現実の農業条件では有効性を示せないことが多かった。植物の成長のための栄養素を有効に提供し、環境に安全で危険のない、改良された微生物ベースの肥料が依然必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示の第１の態様は、植物の成長、植物の生産性および／または土壌の質を向上させる際に使用する、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）から選択される１種または複数種の細菌種の株を含む、微生物接種剤を提供するものである。
【０００６】
ある特定の実施形態では、接種剤は前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種中の２種、前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種中の３種、または前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種の全てを含む。接種剤は、前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種の中の２種以上または３種以上の共生的組み合わせであり得る。
【０００７】
ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）株は、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４５で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８である。
【０００８】
ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）株は、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４６で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３である。
【０００９】
ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）株は、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４７で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４である。
【００１０】
ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）株は、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４８で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６である。
【００１１】
第１の態様の接種剤は、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株をさらに含み得る。アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株は、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５であり得る。特定の実施形態では、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４３で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５である。
【００１２】
第１の態様の接種剤は、酵母をさらに含み得る。酵母はカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株であり得る。カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株はカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１であり得る。特定の実施形態では、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４４で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１である。
【００１３】
接種剤中の１種または複数種の菌株は、カプセル化してもよい。複数の菌株をカプセル化する場合、菌株は個々にカプセル化してもよく、あるいは単一のカプセルにまとめてもよい。
【００１４】
本開示の第２の態様は、少なくとも１種のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種、少なくとも１種のアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種、および少なくとも１種のカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種を含む微生物接種剤を提供するものである。
【００１５】
特定の実施形態では、少なくとも１種のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種は、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）から選択される。他の特定の実施形態では、微生物接種剤は、前記ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種のそれぞれについて少なくとも１種の菌株を含む。他の特定の実施形態では、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）はＬｐ１８株（受託番号Ｖ１１／０２２９４５で寄託）であり、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）はＬｂ２３株（受託番号Ｖ１１／０２２９４６で寄託）であり、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）はＬｒ２４株（受託番号Ｖ１１／０２２９４７で寄託）であり、かつラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）はＬｚ２６株（受託番号Ｖ１１／０２２９４８で寄託）である。
【００１６】
特定の実施形態では、少なくとも１種のアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種は、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）である。他の特定の実施形態では、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）はＡｆ１５（受託番号Ｖ１１／０２２９４３で寄託）である。
【００１７】
特定の実施形態では、少なくとも１種のカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種は、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）である。他の特定の実施形態では、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）はＣｅ３１（受託番号Ｖ１１／０２２９４４で寄託）である。
【００１８】
本開示の第３の態様は、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６から選択される少なくとも１種の微生物株を含む、微生物接種剤を提供するものである。
【００１９】
第３の態様の接種剤は、任意選択によりアセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５および／またはカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１をさらに含む。
【００２０】
第１、第２または第３の態様の接種剤は、肥料として使用し得る。
【００２１】
本開示の第４の態様は、第１、第２または第３の態様の微生物接種剤を含む肥料組成物を提供するものである。肥料は、任意選択により、有機材料、腐植物質、浸透剤、多量栄養素、微量栄養素、ならびに他の土壌添加剤および／または植物添加剤などの１種または複数種の追加の成分を含んでもよい。
【００２２】
本開示の第５の態様は、植物の成長および／または生産性を増加させる方法であって、植物もしくは植物の種子に、または植物もしくは植物の種子が成長する土壌に、有効量の第１、第２もしくは第３の態様の微生物接種剤、または第４の態様の肥料組成物を施用することを含む方法を提供するものである。
【００２３】
本開示の第６の態様は、土壌の質を改良する方法であって、土壌、または前記土壌中の植物もしくは植物の種子に、有効量の第１、第２もしくは第３の態様の微生物接種剤、または第４の態様の肥料組成物を施用することを含む方法を提供するものである。
【００２４】
上記態様では、植物は、例えば牧草植物、作物植物（果実および野菜植物を含む）または観賞用植物であり得る。作物は、例えば、ヒトもしくは動物の食用作物、または燃料用もしくは薬品製造用の作物であり得る。食用作物は、例えば、果実、野菜、ナッツ、種子または穀類であり得る。
【００２５】
本開示の第７の態様は、劣化した土壌または牧草地を回復する方法であって、土壌または牧草地に、有効量の第１、第２もしくは第３の態様の微生物接種剤、または第４の態様の肥料組成物を施用することを含む方法を提供するものである。
【００２６】
本開示の態様および実施形態を、以下の図面を参照しながら、非限定的な実施例によってのみ、本明細書で説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】実施例５に記載のように処理したソラマメの根の成長。Ａ、対照群；Ｂ、Ｔ４０処理群；Ｃ、ＳＧＬ４０処理群；Ｄ、Ｔ２５％ＧＬ４０処理群；Ｅ、ＧＬ４０処理群。
【図２】３種の土壌（Ａ〜Ｃ）中で、２０日の処理期間に亘って、実施例６に記載のように処理したトマトの成長（高さ）の平均変化速度。四角印はＩＭＰ  Ｂｉｏ処理の苗を示し、ダイアモンド印はＦｌｏｗＰｈｏｓ処理の苗を示し、三角印はＩＭＰ  ＢｉｏおよびＦｌｏｗＰｈｏｓ処理の苗を示し、十字印（「×」）は未処理（水のみ）の苗を示す。
【図３】実施例６に記載のように処理したトマト苗の、植物の高さ、群葉の大きさ、および根の成長の比較。ＧｒｅａｔＬａｎｄ＝ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理苗。
【図４】実施例８に記載のように処理したイチゴの栄養成長（および成長密度）の比較。Ａ、３か月後の従来肥料により処理した植物。Ｂ、３か月後のＩＭＰ  Ｂｉｏにより処理した植物。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
他の定義がなされていなければ、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野で通常の技能を有する者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本開示を実施または試験するにあたり、本明細書に記載のものと類似または均等の方法および材料であればいかなるものも使用することができるが、代表的な方法と材料を記載する。
【００２９】
本明細書では、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、その冠詞の文法上の対象の、１つまたは２つ以上の（すなわち、少なくとも１つの）ものを指すために使用される。例を挙げれば、「要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」は１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
【００３０】
本明細書の文脈では、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、同じ機能または結果を得るという文脈において、示された値と均等であると当業者が考えるであろう数の範囲を指すものと理解される。
【００３１】
本明細書およびそれに続く特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解する場合を除き、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、示された整数もしくは工程または整数群もしくは工程群を包含するが、他の任意の整数もしくは工程または整数群もしくは工程群を排除するものではないことを意味すると理解されよう。
【００３２】
本明細書では、用語「植物生産性」は、植物が栽培される理由である、植物の成長または発達の任意の態様をいう。したがって、本開示の目的では、植物生産性の改善または増大とは、広く、バイオマス、あるいは葉、茎、穀粒、果実、野菜、花、または種々の目的のために収穫もしくは使用される植物の他の部分の収量の改善をいい、また茎、葉および根などの植物構成部分における成長の改善をいう。例えば、穀粒、果実または野菜などの食用作物に言及するとき、植物生産性は、特定の作物から収穫された穀粒、果実、野菜または種子の収量であり得る。牧草などの作物では、生産性は、成長速度、植物密度またはグランドカバーの範囲であり得る。「植物の成長」は、茎、葉および根などの植物の任意の構成部分の成長をいう。成長は、これらの植物構成部分の任意の１つの成長速度であり得る。
【００３３】
用語「収量」は、生産された生物学的物質の量をいい、「バイオマス」と同義に使用し得る。作物植物では、「収量」はまた、生産単位当たり、または単位面積（例えば、ヘクタール）当たりの収穫物の量を意味し得る。収量は、量または質に関して定義し得る。収穫物は作物ごとに異なり得るものであり、例えば、種子、地上バイオマス、地下バイオマス（例えば、ジャガイモ）、根、果実、または経済的価値を有する他の植物構成部分であり得る。「収量」はまた、植物の収量安定性を包含する。「収量」はまた、最適成長条件下で得られる最大収量である収量可能性を包含する。収量は、特定のパラメータで監視し得る、多くの収量成分に依存し得る。これらのパラメータは当業者にはよく知られており、また作物により異なる。例えば、栽培者らは、彼らが改善しようとしている作物の特定の収量成分とそれに対応するパラメータを知っている。例えば、ジャガイモのキーとなる収量パラメータには、塊茎重量、塊茎数、および１株当たりの茎の数が含まれる。
【００３４】
「土壌の質の改善」とは、成長のために植物が必要とする、または植物に有益な栄養素の量および／またはその利用率を増大させることを意味する。例を挙げれば、そのような栄養素には、窒素、リン、カリウム、銅、亜鉛、ホウ素およびモリブデンが含まれる。用語「土壌の質の改善」にはまた、例えば鉄およびマンガンなどの植物の成長または発達に有害であり得る元素の量を低減または最小化させることが包含される。したがって、本開示の微生物接種剤および肥料組成物の使用による土壌の質の改善とは、それによって土壌中の植物の成長を助け、かつ促進することである。
【００３５】
本明細書で、劣化した牧草地または土壌について使用されるとき、用語「回復」は、植物の成長および／または収量の改善を促進するために、土壌中の植物栄養素の含有率を高めることをいう。劣化した牧草地には、過度に放牧した牧草地が含まれる。
【００３６】
本明細書では、用語「有効量」とは、例えば植物の成長速度、作物の収量、または土壌中における栄養素の利用率について、１つまたは複数の有益な、または所望する結果をもたらすのに十分な、所与の面積の土壌または植物に施用する微生物接種剤または肥料組成物の量をいう。「有効量」は１回または複数回の施用により与えることができる。正確な必要量は、用いる個々の株の特性および数、処理する植物種、処理する土壌の性質および状態、施用する微生物接種剤または肥料組成物の正確な性質、接種剤または肥料の施用形態、およびその施用手段、ならびに施用が行われる植物成長季節の時期などの因子によって異なるであろう。したがって、正確な「有効量」を特定することはできない。しかしながら、当業者であれば、与えられたいかなる場合にも、ルーチンの実験のみにより、適切な「有効量」を決定し得る。
【００３７】
本明細書では、用語「作物」は、収穫するため、または任意の経済的目的で使用するために栽培される任意の植物をいい、例えば、ヒトの食物、家畜用飼料、燃料または薬品製造（例えば、ケシ）などが挙げられる。
【００３８】
本明細書では、用語「任意選択により」は、その後に記述される特徴を有していても有していなくてもよい、またはその後に記述される事象もしくは状態が生じても生じなくてもよいことを意味する。したがって、そのような記載は、その特徴を有する実施形態、およびその特徴を有しない実施形態、ならびにその事象または状態が生じる実施形態およびそれが生じない実施形態を含み、かつ包含するものと理解されよう。
【００３９】
本開示によれば、植物の生産性の増大および土壌の質の改良に使用される新規の微生物接種剤および微生物肥料組成物が提供される。特定の実施形態では、微生物接種剤または肥料組成物中に存在する微生物種は、共生的有機体として組み合わされる。
【００４０】
最も広い実施形態では、本開示の微生物接種剤は、１種または複数種のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）菌種の菌株を含む。ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種は、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）およびラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）から選択し得る。接種剤はさらに、少なくとも１種のアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種および少なくとも１種のカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種を含み得る。
【００４１】
ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）株は、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４５で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託したラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８である。ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）株は、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４６で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託したラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３である。ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）株は、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４７で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託したラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４である。ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）株は、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６であり得る。特定の実施形態では、ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４８で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託したラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６である。
【００４２】
接種剤は、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株をさらに含み得る。アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株は、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５であり得る。特定の実施形態では、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４３で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託したアセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５である。
【００４３】
接種剤は、酵母菌をさらに含み得る。酵母菌はカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株であり得る。カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株は、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１であり得る。特定の実施形態では、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株は、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４４で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託したカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１である。
【００４４】
本明細書に開示の微生物接種剤および肥料組成物に加えられる各微生物株の濃度は、使用する個々の株の特性と数、処理する植物種、処理する土壌の性質および状態、施用する微生物接種剤または肥料組成物の正確な性質、接種剤または肥料の施用形態、およびその施用手段、ならびに施用が行われる植物成長季節の時期を含む多様な因子に依存するであろう。当業者であれば、与えられたいかなる場合にも、ルーチンの実験のみにより、適切な濃度を決定し得る。例を挙げれば、接種剤または肥料組成物に含まれる各菌株の濃度は、約１×１０2ｃｆｕ／ｍｌ〜約１×１０10ｃｆｕ／ｍｌであり得、また約１×１０3ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０3ｃｆｕ／ｍｌ、約５×１０3ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０4ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０4ｃｆｕ／ｍｌ、約５×１０4ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０5ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０5ｃｆｕ／ｍｌ、約５×１０5ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０6ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０6ｃｆｕ／ｍｌ、約５×１０6ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０7ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０7ｃｆｕ／ｍｌ、約５×１０7ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０8ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０8ｃｆｕ／ｍｌ、約５×１０8ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０9ｃｆｕ／ｍｌ、約２．５×１０9ｃｆｕ／ｍｌまたは約５×１０9ｃｆｕ／ｍｌであり得る。特定の実施形態の例を示せば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株の最終濃度は約２．５×１０5ｃｆｕ／ｍｌであり、アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）の最終濃度は約１×１０6ｃｆｕ／ｍｌであり得、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）の最終濃度は約１×１０5ｃｆｕ／ｍｌであり得る。
【００４５】
本開示ではまた、本明細書に記載の微生物株の変異体も考慮されている。本明細書では、用語「変異体」は、本明細書に開示され、例示されている微生物株の変異体または突然変異体であって、自然発生したもの、および特別に開発されたものの両方をいう。植物の成長の促進、および植物成長のための栄養素の土壌への供給に関し、類似の有利な特性を共有している場合、変異体は、それを特定できる生物学上の特徴として、本明細書で例示した特定の菌株と同じ特徴を有していても有していなくてもよい。本明細書に例示された微生物株の変異体を調製する適切な方法について、説明のための例を挙げれば、挿入要素もしくはトランスポゾン、または相同的組換により仲介されるものなどの遺伝子組み込み技術、遺伝子を修飾、挿入、削除、活性化または発現停止させる他の組換えＤＮＡ技術、種内原形質融合、紫外線またはＸ線照射による、またはニトロソグアニジン、メチルメタンスルホン酸、ナイトロジェンマスタードなどの化学的突然変異誘発物質を用いた処理による突然変異の誘発、ならびにバクテリオファージを介在させた形質導入があるが、これらに限定されない。適切で適用可能な方法は当該技術分野ではよく知られており、例えば、Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９７２）；Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ  Ｓｈｏｒｔ  Ｃｏｕｒｓｅ  ｉｎ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）；および、とりわけＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｄ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）に記載されている。
【００４６】
本明細書では、用語「変異体」にはまた、本明細書で開示された株に系統的に近い微生物株、および本明細書で開示された株と、ｒＲＮＡ遺伝子、伸長因子遺伝子および開始因子遺伝子、ＲＮＡポリメラーゼサブユニット遺伝子、ＤＮＡジャイレース遺伝子、熱ショックタンパク質遺伝子およびｒｅｃＡ遺伝子などの系統情報提供マーカーの１種または複数種で、実質的な配列相同性を有する株も包含される。例えば、本明細書で考慮されている「変異体」株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子は、本明細書に開示した株と、約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列相同性を共有し得る。
【００４７】
本開示の微生物接種剤および肥料組成物は、任意選択により１種または複数種の追加の微生物、例えば、作物学的に有益な微生物をさらに含み得る。そうした作物学的に有益な微生物は、接種剤または肥料中で本開示の有機体と相乗的もしくは協調的に作用し、あるいは協働し得る。作物学的に有益な微生物の例としては、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、プセウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）種、アゾスピリルム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）種、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）種、光合成菌およびセルロース分解菌、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）種などが挙げられる。この列挙が単に例示だけのものであり、言及したことによって、ここに示した特定の例に限定されるものでないことは、当業者であれば理解するであろう。
【００４８】
土壌環境において、接種菌が自然発生の競合相手および捕食性有機体に伍して生存していくことは困難であり得る。環境への施用後に、本開示の微生物接種剤および肥料組成物中に存在する微生物の生存を助けるために、１種または複数種の菌株を、例えば適切なポリマーマトリクス中に封入しカプセル化することができる。１例を挙げれば、カプセルは、Ｙｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｎｔ  ｇｒｏｗｔｈ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｉｎ  ａｌｇｉｎａｔｅ  ｂｅａｄｓ  ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍｉｃ  ａｃｉｄ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９５：７６−８３（この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているようなアルギネートビーズを含み得る。当業者であれば、任意の適切なカプセル化材料またはマトリクスを使用し得ることを理解するであろう。カプセル化は当業者に知られた方法および技術を使用して行い得る。カプセル化微生物には、微生物に加えて、栄養素、または接種剤もしくは肥料組成物の他の成分が含まれ得る。
【００４９】
本開示の微生物接種剤および肥料組成物を土壌、種子および／または植物に施用することによって、いかなる植物にも利益をもたらし得ることを、当業者であれば理解するであろう。特定の実施形態は、作物および牧草の、または観賞用植物およびオイルまたはバイオ燃料用に栽培される植物などの経済的価値を有する他の植物の、成長、発達、収量または生産性を促進するために使用される。作物植物は、果実、野菜、ナッツ、種子または穀粒生産植物などの食用作物（ヒトまたは他の動物用）であり得る。作物植物の例としては、塊茎および他の地下野菜（ジャガイモ、ビート根、ハツカダイコン、ニンジン、タマネギなど）、地上成長野菜または蔓性野菜（カボチャおよびカボチャ科の他の構成種、マメ、エンドウマメ、アスパラガスなど）、葉物野菜（レタス、フダンソウ、ホウレンソウ、アルファルファなど）、その他の野菜（トマト、ブロッコリなどのアブラナ属、アボカドなど）、果実（ベリー類、オリーブ、ネクタリンおよびモモなどの核果、マンゴーおよびバナナなどの熱帯果実、リンゴ、ナシ、マンダリン、オレンジ、マンダリン、キウイ、ココナッツなど）、穀物（コメ、トウモロコシ、コムギ、オオムギ、キビ、カラスムギ、ライムギなど）、ナッツ類（マカダミアナッツ、ピーナッツ、ブラジルナッツ、ヘーゼルナッツ、クルミ、アーモンドなど）、および経済的価値を有する作物および植物（サトウキビ、大豆、ヒマワリ、キャノーラ、モロコシ、牧草、芝草など）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
本開示の微生物接種剤および肥料組成物は、植物、植物の一部分（群葉など）、または種子に直接施用してよく、あるいは植物が成長する、もしくは栽培される、または種子が蒔かれている、もしくは蒔かれる土壌に施用してもよい。施用は、適切であればいかなる手段で行ってもよく、また適切であればいかなる規模で行ってもよい。例えば、施用は、注入、広範囲もしくは大量の散布もしくは噴霧などの散布もしくは噴霧、播種前の種子の浸漬、および／または播種後の種子もしくは苗への大量灌注を含み得る。当業者であれば、複数の施用手段を組み合わせて使用し得ることを理解するであろう（例えば、播種前に種子を浸漬し、その後、蒔いた種子へ大量灌注する、および／または苗もしくは成熟植物に施用するなど）。種子、苗または成熟植物は、適切な限り何回でも処理し得る。当業者であれば、施用必要回数を、例えば、対象としている植物、処理開始時の植物の発達段階、植物の健康状態、植物が栽培される成長条件、環境条件および／または気候条件、ならびに植物が栽培される目的に応じて、容易に決定することができる。例えば、トマトなどの花をつける作物の場合、開花期に１回または複数回、微生物接種剤および肥料組成物を施用することが望ましい。
【００５１】
したがって、本開示によれば、本明細書で開示した微生物接種剤および肥料製品は、接種剤または肥料組成物を土壌または植物の種子もしくは植物に施用する手段に応じて、任意の適切な形態に調製することができる。適切な形態としては、例えば、スラリー、液体および固体の形態を挙げることができる。固体形態には、粉末、顆粒、比較的大きい粒子形態、およびペレットが含まれる。固体形態の肥料粒子は、水溶性コーティング（例えば、着色または無着色のゼラチン球またはカプセル）または徐放性コーティングでカプセル化することができ、あるいは、例えばゼラチン、ポリビニルアルコール、エチルセルロース、セルロースアセテートフタレートまたはスチレンマレイン酸無水物の１種または複数種を使用するマイクロカプセル化により自由流動する粉末にカプセル化することができる。液体には、水溶液および水性懸濁液、ならびに乳化性濃縮物が含まれ得る。
【００５２】
本明細書で開示の接種剤および肥料組成物環境内で、有効な分散性、付着性および／または保存性もしくは安定性を実現するために、分散性、付着性、および保存性／安定性を高める適切な担体成分を用いて接種剤および組成物を剤形化することが有利であり得る。適切な担体は、当業者に知られており、例えばキトサン、バーミキュライト、堆肥、タルク、粉乳、ゲルなどが含まれる。
【００５３】
本開示の接種剤および肥料組成物には、腐植物質、微量要素、有機材料、浸透剤、多量栄養素、微量栄養素、ならびに他の土壌および／または植物添加剤などの追加成分を加えてもよい。
【００５４】
加え得る腐植質または腐植物質としては、例えば、酸化亜炭またはレオナルダイトから誘導されるフミン酸、フルボ酸、およびフミン酸カリウムなどのフミン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
添加する有機材料としては、生物固体、厩肥、堆肥または堆肥の有機副産物、活性化汚泥、または動物もしくは野菜の加工副産物（血粉、羽毛粉、綿実かす、ケルプ粉、海藻抽出物、フィッシュエマルションおよび魚粉など）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
浸透剤としては、非イオン性湿潤剤、洗浄剤ベースの界面活性剤、シリコーンおよび／または有機シリコーンが挙げられるが、これらに限定されない。適切な浸透剤は当業者に知られており、その例としては、ポリマーのポリオキシアルキレン、アリノール（ａｌｌｉｎｏｌ）、ノノキシノール、オクトキシノール、オキシカストロール（ｏｘｙｃａｓｔｒｏｌ）、ＴＲＩＴＯＮ、ＴＷＥＥＮ、Ｓｙｌｇａｒｄ  ３０９、Ｓｉｌｗｅｔ  Ｌ−７７およびＨｅｒｂｅｘ（シリコーン／界面活性剤ブレンド物）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
微生物接種剤および肥料組成物に含まれる微量要素の例は、実施例１に示す。しかしながら、当業者であれば、適切な微量要素はそれらに限定されず、任意の微量要素（天然または合成）を使用し得ることを理解するであろう。
【００５８】
本開示の接種剤および肥料組成物に添加し得る任意選択の他の土壌および／または植物添加剤としては、例えば、ゼオライトなどの水捕捉剤、酵素、ジベレリンなどの植物成長ホルモン、ならびに殺ダニ剤、殺虫剤、殺菌剤および殺線虫剤などの防除剤などが挙げられる。
【００５９】
本明細書における先行刊行物（もしくはそれから得られる情報）または知られた事柄への言及は、その先行刊行物（もしくはそれから得られる情報）または既知の事柄が、本明細書が関連する努力分野に共通の一般的知識の一部を形成することを容認もしくは承認するものであるとして、あるいは示唆する形態であるとして理解されるものではなく、また理解されるべきものでもない。
【００６０】
ここで、以下の特定の実施例を参照しながら本開示を説明するが、いかなる形であれ、それらを本発明の範囲を限定するものと解すべきでない。
【実施例】
【００６１】
以下の実施例は本発明を説明するためのものであって、この明細書を通して記載された開示の一般的性質をいかなる形であれ限定するものと解すべきでない。
【００６２】
実施例１−微生物株
生物肥料の製造に、以下の微生物株を使用した。
【００６３】
環境資源からラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８を単離した。１６Ｓ  ｒＲＮＡの部分配列決定は、リスクグループ１（ＴＲＢＡ）のラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）ＡＢ２６２７３５に対して１００％の相同性を示した。ＭＲＳ培地による３４℃で３日間の嫌気的培養により、Ｌｐ１８は、クリーム状の、円形をした、やや光沢を有する、凸状の、直径１〜２ｍｍのコロニー（通性嫌気菌）を形成する。その顕微鏡での外観は、グラム陽性で、非運動性の短桿菌であり、長方形で、多くは複相である。ラクトバチルス・パラファラギニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｆａｒｒａｇｉｎｉｓ）Ｌｐ１８を、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４５で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した。
【００６４】
環境資源からラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３を単離した。１６Ｓ  ｒＲＮＡの部分配列決定は、リスクグループ１（ＴＲＢＡ）のラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）ＡＢ４２９３６８に対して９９％の相同性を示した。ＭＲＳ培地による３４℃で４日間の嫌気的培養により、Ｌｂ２３は、クリーム状の、輝く、凸状の、直径１〜２ｍｍのコロニー（通性嫌気菌）を形成する。その顕微鏡での外観は、グラム陽性で、非運動性のチェーン状桿菌である。ラクトバチルス・ブフネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）Ｌｂ２３を、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４６で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した。
【００６５】
環境資源からラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４を単離した。１６Ｓ  ｒＲＮＡの部分配列決定は、リスクグループ１（ＤＳＭＺ）のラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）ＡＢ３６６３８９に対して９９％の相同性を示した。ＭＲＳ培地による３４℃で４日間の嫌気的培養により、Ｌｒ２４は、クリーム状の、円形をした、輝く、直径０．５ｍｍのコロニー（通性嫌気菌）を形成する。その顕微鏡での外観は、グラム陽性で、非運動性の短桿菌であり、単相または複相である。ラクトバチルス・ラピ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒａｐｉ）Ｌｒ２４を、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４７で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した。
【００６６】
環境資源からラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６を単離した。１６Ｓ  ｒＲＮＡの部分配列決定は、リスクグループ１（ＴＲＢＡ）のラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）ＡＢ００８２１３．１に対して９９％の相同性を示した。ＭＲＳ培地による３４℃で４８時間の嫌気的培養により、Ｌｚ２６は、白色の、円形をした、輝く、凸状の、直径１ｍｍのコロニー（通性嫌気菌）を形成する。その顕微鏡での外観は、グラム陽性で、非運動性の短桿菌であり、殆どが球菌様、複相であって、いくらかはチェーン状である。ラクトバチルス・ゼアエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ）Ｌｚ２６を、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４８で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した。
【００６７】
環境資源からアセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５を単離した。１６Ｓ  ｒＲＮＡの部分配列決定は、リスクグループ１（ＤＳＭＺ）のアセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）ＡＭ９０５８４９に対して１００％の相同性を示した。麦芽エキス培地による３４℃で３日間の培養により、ＡＦ１５は、不透明で、円形をした、輝く、凸状の、直径１ｍｍのコロニー（好気性）を形成する。その顕微鏡での外観は、グラム陰性の桿菌であり、単相または複相である。アセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）Ａｆ１５を、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４３で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した。
【００６８】
環境資源からカンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１を単離した。１６Ｓ  ｒＲＮＡの部分配列決定は、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）ＡＢ５３４６１８に対して８９％の相同性を示した。麦芽エキス培地による３４℃で２日間に培養により、Ｃｅ３１は、クリーム状の、平坦な、鈍い色をした、やや丸い、直径２〜３ｍｍのコロニー（好気性）を形成する。その顕微鏡での外観は、発芽しかけの卵形の酵母菌である。カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）Ｃｅ３１を、２０１１年１０月２７日に受託番号Ｖ１１／０２２９４４で、オーストラリアのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに寄託した。
【００６９】
培養菌の維持
各単離物について３０％グリセロールストックを作り、長期保存用として−８０℃に維持した。短期保存の培養菌は、寒天傾斜培地（３ケ月貯蔵）および寒天プレート培地（継代培養を毎月行う）で、４℃に維持する。単離物の初期特性を維持するために、３回のプレート継代培養後に、−８０℃のストックから新たなプレートを作る。
【００７０】
接種剤および増殖培地
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株を、用途に応じてＭＲＳ培養液（Ｄｉｆｃｏ）またはＭＲＳ寒天プレートで、空気のある状態、または空気のない状態（ラクトバチルス・ラピ（Ｌ．ｒａｐｉ）は嫌気性を好む）で増殖させた。培養菌を、３０〜３４℃の中温で２日間、ルーチン的に増殖させた。アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）およびエタノリカ（Ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）株は、用途に応じて麦芽エキス培養液（Ｏｘｏｉｄ）、または麦芽エキス寒天プレート上で、好気的に増殖させる。培養菌を、３０〜３４℃の中温で２日間、ルーチン的に増殖させる。
【００７１】
醗酵槽用「種菌」の調製
個々の株について、無菌ニクロム線を使用して新鮮な培養プレートから単一のコロニーを取出し、１５ｍＬの無菌培地を収容した汎用瓶に移す。３０℃、１４０ｒｐｍ、４８時間に設定した振盪インキュベータにこの瓶を確実に固定する（ラクトバチルス・ラピ（（Ｌ．ｒａｐｉ）は振盪しない）。インキュベーション後には、濁った細菌の増殖を目視できるはずである。「種菌」接種瓶は必要になるまで４℃で保管する（最大１週間）。
【００７２】
発酵槽の運転には、通常、５％の細菌接種を必要とする。発酵槽全実効容積の５％に当たる体積の無菌培地を含有するショット瓶に、保管した１５ｍｌの培養種菌を加える。１５ｍｌの種菌と同様にして、培養菌をインキュベートし、振盪する。各単離菌の純粋培養菌を増殖させるために、大規模な自動発酵槽を使用する。アルカリ、消泡剤およびブドウ糖の自動供給機を使用する。通常、温度は３０〜３４℃に、ｐＨは５．５に維持するが、酸素と撹拌は微生物に応じて変える。
【００７３】
試料の分析
単離菌をそれぞれ大規模に培養した後、試料を無菌的に抜き取り、層流フードの中で、１０倍段階希釈により生菌数の測定を行う。存在し得るが、その培地では増殖できない汚染菌のダブルチェックを行うために、湿式のスライドも作製し、位相差顕微鏡を使用して純度を測定する。４８時間後、生菌数測定用プレートの純粋培養菌（同一のコロニーモルフォロジー）の有無を確認し、コロニーを計数して１ｍｌ当たりのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍｌ）の値を算出する。グラム染色も実施する。
【００７４】
実施例２−牧草での試験
本明細書で開示した生物肥料を使用し、未処理の牧草および従来の無機肥料で処理した牧草と比較した圃場試験を行った。
【００７５】
生物肥料（以下、「ＩＭＰ  Ｂｉｏ」という）は、実施例１に挙げた６種の微生物株を、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）各株で２．５×１０5ｃｆｕ／ｍｌ、カンジダ・エタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）で１．０×１０5ｃｆｕ／ｍｌ、およびアセトバクター・ファバルム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｆａｂａｒｕｍ）で１．０×１０6ｃｆｕ／ｍｌの最終濃度で含んだ。実施例１に記載のようにして種を増殖させ、２％の微量要素、０．３％のフミン酸塩（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｈｕｍａｔｅ、ＬａｗｒｉｅＣｏ）、３％の糖蜜、および０．１〜０．２％のリン酸と混合した。リン酸はｐＨが３．８〜４．０の範囲になるまで加えた。微量要素成分は、通常次のものを含んだ（１，０００Ｌ当たり）。
【００７６】
【表１】
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【００７７】
比較用として使用した従来の無機肥料は、Ｓｐｒａｙ  Ｇｒｏ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｕｒｅａ、ＤＡＰ（リン酸二アンモニウム）、および市販の１４：１６：１１のＮＰＫ混合物であった。
【００７８】
牧草試験の場所は、降雨量、土壌の種類、牧草組成、および過去の施肥実績に基づいて選択した。タスマニアの次の場所を使用した。Ｎａｂａｇｅｅｎａ（多雨；ライグラス、カモガヤ、ヨークシャーフォッグ（Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ  ｆｏｇ）および他の草類）、Ｃｕｐｒｏｎａ（多雨；ライグラス）、Ｗｅｓｔ  Ｍｏｏｒｖｉｌｌｅ／Ｕｐｐｅｒ  Ｂｕｒｎｉｅ（多雨；ライグラス）、Ｃｏｎｎｏｒｖｉｌｌｅ（乾燥牧草地；劣化）およびＣｏｎｎｏｒｖｉｌｌｅ（灌漑牧草地；ライグラス）。
【００７９】
それぞれの場所で、牧草を４５ｍｍの高さに刈り取る（そして、刈り取った植物材料を施肥の前に除去する）ことにより、４×１０ｍの細長い牧草地を複数準備した。Ｗｅｓｔ  Ｍｏｏｒｖｉｌｌｅ／Ｕｐｐｅｒ  ＢｕｒｎｉｅおよびＮａｂａｇｅｅｎａでは、ＩＭＰ  Ｂｉｏを２０Ｌ／ｈａ、３０Ｌ／ｈａまたは５０Ｌ／ｈａで複製区画に施用し、１４：１６：１１のＮＰＫ混合物を２５０ｋｇ／ｈａで複製区画に施用した。Ｗｅｓｔ  Ｍｏｏｒｖｉｌｌｅでは、ＤＡＰも１２５ｋｇ／ｈａで複製区画に施用した。Ｃｕｐｒｏｎａでは、ＩＭＰ  Ｂｉｏを２０Ｌ／ｈａ、３０Ｌ／ｈａまたは５０Ｌ／ｈａで複製区画に施用し、Ｓｐｒａｙ  Ｇｒｏ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｕｒｅａを５０Ｌ／ｈａで施用した。Ｃｏｎｎｏｒｖｉｌｌｅでは、ＩＭＰ  Ｂｉｏを２０Ｌ／ｈａ、３０Ｌ／ｈａまたは５０Ｌ／ｈａで複製区画に施用し、ＤＡＰを１２５ｋｇ／ｈａで複製区画に施用した。ＩＭＰ  ＢｉｏとＳｐｒａｙＧｒｏ  Ｕｒｅａは、１回の通過により、２ｍの背負式ブームスプレーから大径の液滴で施用した。１４：１６：１１のＮＰＫ混合物とＤＡＰは手撒きにより施用した。それぞれの場所で、複製対照（肥料なし）区画を確保した。
【００８０】
処理後６〜８週してから、植物収量と葉の栄養素含有率を分析した。
【００８１】
植物収量の結果を下記表２に示す。これらの結果は、ＩＭＰ  Ｂｉｏ肥料が従来の無機肥料と少なくとも類似の収量、場合によってはそれに勝る収量を産出したことを示している。
【００８２】
【表２】
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【００８３】
下記表３に示すように、植物材料の栄養素分析を行った。牧草の成長に必要な、または有益な基本要素（窒素、リン、カリウム、カルシウム、銅、亜鉛、ホウ素、モリブデンなど）は、ＩＭＰ  Ｂｉｏにこれらの栄養素が加えられていないにも拘わらず、ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理区画からの植物材料中に、比較物の従来の無機肥料で処理した区画と同等、または、より高い濃度で含まれた。
【００８４】
【表３】
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2015504405.tif 000006
【００８５】
実施例３−土壌の質
本明細書に開示した生物肥料の土壌の質に対する効果を調べるために、タスマニアの農場の土壌１５０ｇ×２を、それぞれ１５０ｍｌの清浄なショット瓶×２に秤り取った。１瓶の土壌上面に、ＩＭＰ  Ｂｉｏ肥料（実施例１および２を参照）の１：１０希釈液１０ｍｌを滴下させ、蓋を閉め、３４℃で１週間インキュベートした。第２の瓶には生物肥料は加えず、３４℃でインキュベートした。両方の瓶の土壌が、標準の土壌試験法により、Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＥＡＬ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｃｒｏｓｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｌｉｓｍｏｒｅ、ＮＳＷ）で分析された。
【００８６】
ＩＭＰ  Ｂｉｏで土壌を１週間処理したときの結果を表４に要約する。未処理のインキュベート試料に対する土壌試験は、最初の未処理の土壌試験と実質的に同一であるので示していない。２つの処理試料の土壌試験から、インキュベート後のＩＭＰ  Ｂｉｏを含む土壌には顕著な違いがあることは明らかである。分析した第２の試料は、利用可能カチオン（カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、ならびに全微量元素−亜鉛、マンガンおよび銅）と、アンモニア性窒素の濃度が増加する一般的傾向を示すが、酸抽出した全濃度は全ての栄養素で僅かに低かった。有機物は、試料日間で１％（１４．６％から１５．５％へ）増加した。全栄養素の全体の減少は、重大ではなさそうである。
【００８７】
硝酸塩の増加は見られないが、アンモニア性窒素は３倍超に増加した。これは、有機窒素として貯蔵された窒素の無機化が増加していることを示しており、有機材料の変質と関係があり得、その程度はこの土壌中で特に大きい。このことはまた、窒素の固定を示すものであろう。
【００８８】
【表４】
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【００８９】
実施例４−ジャガイモでの試験
植え付け時に、Ｂｏｎｄｉ種ジャガイモをＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料（実施例２参照）で処理する圃場試験を実施した。試験はタスマニアのＷａｔｅｒｈｏｕｓｅで行った。長さ３０ｍの畝溝にＩＭＰ  Ｂｉｏを単独、または６５０ｋｇ／ｈａ（窒素３２ｋｇ／ｈａ、リン６３ｋｇ／ｈａおよびカリウム１００ｋｇ／ｈａを散布）もしくは１２５０ｋｇ／ｈａ（窒素６３ｋｇ／ｈａ、リン１２５ｋｇ／ｈａおよびカリウム２００ｋｇ／ｈａを散布）の従来の化学肥料５−１０−１６と共に、５０Ｌ／ｈａの割合で施用した。第４の複製地には、５−１０−１６を１２５０ｋｇ／ｈａで殺菌剤Ａｍｉｓｔａｒと共に施用した。それぞれの処理を施した、４つの長さ４ｍの区画を掘り起し、塊茎の大きさと収量について評価した。結果を表５に示す。
【００９０】
【表５】
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【００９１】
ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理では、１株当たりの茎の数が増加したが、これは望ましいことである（通常、茎の数の多さと塊茎数の多さは相関する）。大きい塊茎は種イモサイズの塊茎（４５〜３５０ｇ）より商品価値が低いことから、ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理で観察された大きい（＞３５０ｇ）塊茎の減少もまた有意義である。さらに、５−１０−１６＋Ａｍｉｓｔａｒで処理した場合と比べて、ＩＭＰ  Ｂｉｏでは種イモ重量が１４％増加（５トン／ｈａ）していることも、経済的価値が大きい。ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理のジャガイモ株では、また、５−１０−１６で処理したものより、約３週間長く生育する（成熟度の観点から）ことも観察された。
【００９２】
実施例５−ソラマメでの試験
ソラマメ株の成長に対するＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料の効果を明確にするために、市販肥料Ｂａｉｌｅｙｓ  ＴｒｉＳｔａｒ（８．３％Ｎ、０％Ｐ、１６％Ｋ、１４％Ｓ、１％Ｆｅ、２％Ｍｇ）と比較した温室実験を行った。
【００９３】
発芽後の苗に対する処理群および施用計画は次のようであった。
【００９４】
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【００９５】
Ｔ４０、ＳＧＬ４０およびＴ２５％ＧＬ４０の群の種を、播種前にＩＭＰ  Ｂｉｏの１：１０希釈液１００ｍｌに１時間浸漬した。対照とＧＬ４０の種は、播種前、乾燥状態のままとした。各処理群について３つの複製物（および対照群について２つの複製物）を使用した。各ポットの中央、５ｍｍの深さに種を植え付け、１６〜１８℃に温度制御した温室内、水耕用ライトの下にポットを置いた。発芽後、２週間毎（全体で４週間）に上記の処理方法により全ての苗を処理した。苗には１日に１回灌水した。
【００９６】
実験完了時、最も伸びた株で、かつ最も強い主茎を持った株は、Ｔ２５％ＧＬ４０のものであることが観察された。全体に、Ｔ２５％ＧＬ４０とＳＧＬ４０の群で最良の成長が観察された（データは示さず）。しかしながら、観察された最も注目すべき違いは、根の発達にあった（図１を参照）。対照株の根は最も密度が低く、最も短かった（図１Ａ）。Ｔ４０株の根は、良好な根密度と長さを有したが（図１Ｂ）、ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理の株ほど大きくは発達していなかった。ＳＧＬ４０の株では、根張りは良好な密度と長さを示した（図１Ｃ）。根粒は、黒色の小結節様のコブとして存在した。Ｔ２５％ＧＬ４０の株では、根張りは他の処理群より密で長かった（図１Ｄ）。根粒は存在したが、黒色の小結節様のコブは見られなかった。ＧＬ４０の株では、根張りは同様に密で、長く、よく発達していた（図１Ｅ）。根粒は、黒色の小結節様のコブとして存在した。
【００９７】
実施例６−トマトでの試験
トマトの株の成長速度に対するＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料（実施例２を参照）の効果を調べるために、２０日間の温室実験を行った。トマトの苗はＣｅｄｅｎｃｏから提供された。対照には水のみを使用し、市販肥料ＦｌｏｗＰｈｏｓ（Ｙａｒａ  Ｎｉｐｒｏ）を比較用として使用した。苗を、異なる場所から得た３種の異なる土壌（Ｃｅｄｅｎｃｏ）の１つを入れた５０ｍｍポットに植え付け、（ｉ）１０ｍｌの水、（ｉｉ）１０ｍｌのＩＭＰ  Ｂｉｏ（９００ｍｌの水に１００ｍｌ）、（ｉｉｉ）１０ｍｌのＦｌｏｗＰｈｏｓ（９００ｍｌの水に７．５ｍｌ）、または（ｉｖ）１０ｍｌのＦｌｏｗＰｈｏｓとＩＭＰ  Ｂｉｏの混合物（７．５ｍｌのＦｌｏｗＰｈｏｓと１００ｍｌのＩＭＰ  Ｂｉｏを水で全体積１０００ｍｌにした）のいずれかで１度だけ大量灌注を行った。対照（水）群の３つの複製物と処理群それぞれの８つの複製物。株には、１日に２回、３０ｍｌの水を与えた。２０日間の実験期間中、３日毎に株の高さを測定した。
【００９８】
３種の土壌それぞれで栽培した全ての処理群の、２０日間にわたるトマト苗の成長（高さ）の平均変化率を、図２に示す。図からわかるように、ＩＭＰ  Ｂｉｏ処理株は、実験の期間中、常に成長し、より背の高い株になった唯一の株であった。図３は、対照株、ＦｌｏｗＰｈｏｓ処理株およびＩＭＰ  Ｂｉｏ（ＧｒｅａｔＬａｎｄ）処理株における、株の高さ、群葉および根張りの発達の違いを比較した例であるが、これからもＩＭＰ  Ｂｉｏ処理の優位性が極めて明白である。
【００９９】
その後、ＶｉｃｔｏｒｉａのＴｉｍｍｅｒｉｎｇで圃場試験を実施し、開花期初期に８０Ｌ／ｈａまたは４０Ｌ／ｈａのいずれかの割合で、その後、開花期中期に４０Ｌ／ｈａで葉に施用することにより、ＩＭＰ  Ｂｉｏでトマト株を処理した。トマトの果実収量を測定し、未処理の同数の株からの収量と比較した。未処理株での１２８．８７ｔ／ｈａに対して、８０Ｌ／ｈａのＩＭＰ  Ｂｉｏ施用株の全果実収量は１４９．８７ｔ／ｈａであった。未処理株での１０３．０５ｔ／ｈａに対して、４０Ｌ／ｈａのＩＭＰ  Ｂｉｏを２回施用した株の全果実収量は１３０．１５ｔ／ｈａであった。
【０１００】
実施例７−マカダミアでの試験
ＮＳＷのＬｉｓｍｏｒｅの１００ｈａの農場で、１２か月の期間中、２〜３ケ月毎に４０Ｌ／ｈａの割合で噴霧することにより、マカダミアの木をＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料（実施例２を参照）で処理する圃場試験を実施した。過去少なくとも４年間使用したものと同じ肥料である化学肥料（Ｅａｓｙ  Ｎ  Ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ）と共にＩＭＰ  Ｂｉｏを施用した。過去４年の年間平均収量３５トンに対して、１２ヶ月処理後のマカダミアナッツの収量は約７０トンであった。ＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料が提供する恩恵によって、化学肥料の施用を大きく減少させることができた。
【０１０１】
ＩＭＰ  Ｂｉｏを使用してから４５日後、農場を横切る４カ所で葉と土壌の分析も実施した。マカダミアの葉では、亜鉛、マンガン、鉄およびホウ素濃度の、土壌ではアンモニア性窒素、硝酸性窒素、リン、カリウム、カルシウム、銅およびホウ素の顕著な増加が観察された。
【０１０２】
実施例８−イチゴでの試験
ＱｌｄのＢｅｅｒｗａｈで、８ｈａの区画におけるイチゴ株の成長および果実収量に対するＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料（実施例２を参照）の効果を確認するために圃場試験を実施した。植え付け前に、土壌へＩＭＰ  Ｂｉｏを４０Ｌ／ｈａの割合で施用し、植え付け時に再度同じ割合で施用し、栄養成長および開花期（２〜４週）、結実期（５〜８週）ならびに収穫期（９〜１６週）に毎週施用した。従来の肥料（植え付け前に、ＮｉｔｒｏＰｈｏｓｋａ（ｂｌｕｅ）を１０００ｋｇ／ｈａで施用）と比較すると、株の成長速度は顕著に増加し、株の栄養成長および葉の面積は増大した（図４）。果実収量もまた顕著に増加した（２０，０００ｋｇに対して３８，０００ｋｇ）。
【０１０３】
実施例９−他の試験
サトウキビ、レタス、ラズベリー、バラ、コムギ、バジルおよびターフグラス（ゴルフコースのグリーン用）についても予備試験を実施した。それぞれの場合で、ＩＭＰ  Ｂｉｏ生物肥料（実施例２を参照）は、未処理の株と比べて株の成長速度の増加をもたらすことが認められた（データは示さず）。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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