(57)【要約】  本開示の対象は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のための、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。好ましい実施形態において、本開示の対象は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、腎機能障害若しくは腎不全又は肝機能障害若しくは肝不全の予防又は軽減のための、抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、前述の患者の臓器機能障害の予防若しくは軽減又は臓器不全の予防のための、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項２】
前記抗ＡＤＭ抗体、前記抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は前記抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場が、非中和性ＡＤＭ抗体、非中和性アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非中和性ＡＤＭ非Ｉｇ足場である、請求項１に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項３】
前記臓器が、腎臓又は肝臓である、請求項１又は２に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項４】
前記臓器が心臓である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項５】
前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端部分（ａａ１−２１）に結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項６】
前記抗体、抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場が、単一特異性である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項７】
前記抗体、フラグメント又は足場が、ＡＤＭに対して少なくとも１０-7Ｍの結合親和性を示す、請求項１〜６のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項８】
前記抗体、フラグメント、又は足場が、ＡＤＭ結合タンパク質１（補体因子Ｈ）ではない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項９】
前記抗体、フラグメント、又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識し、そしてそこに結合する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１０】
前記抗体、前記フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長する、ＡＤＭ安定化抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１１】
前記抗体、フラグメント、又は足場が、ＡＤＭ生理活性を８０％以下、好ましくは５０％以下しか阻害しない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１２】
前記疾患が、敗血症、糖尿病、癌、心不全、及びショックを含んで成る群から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１３】
前記疾患が、ＳＩＲＳでも、敗血症でも、敗血症ショックでもない、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１４】
前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメントであって、前記重鎖が配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成り、そして、前記軽鎖が配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成る、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント。
【請求項１５】
前記抗体又はフラグメントが、以下の配列を：
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC、
含んで成る、請求項１４に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント。
【請求項１６】
前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭ生理活性を８０％以下、好ましくは５０％以下しか阻害しない調節抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１７】
昇圧薬、例えば、カテコールアミン及び／又は静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用されるべきである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【請求項１８】
ＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせて使用されるべきである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場、或いは、請求項１７に記載の組み合わせ。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場を含んで成る医薬製剤。
【請求項２０】
前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１９に記載の患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた医薬製剤。
【請求項２１】
前記医薬製剤が、凍結乾燥状況にある、請求項２０に記載の患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた医薬製剤。
【請求項２２】
前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項２３】
前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項２５】
前記医薬製剤が、急性疾患又は急性病態に罹患している患者において臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のために、患者に全身投与されるべきである、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
前記医薬製剤が、急性疾患又は急性病態に罹患している患者において臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のために、患者に輸液を介して全身投与されるべきである、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の対象は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の患者の治療法における使用に向けた、臓器機能不全又は臓器不全の予防又は低減のための、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。
【０００２】
好ましい実施形態において、本発明の対象は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、肝機能障害又は肝不全の予防又は軽減、或いは、腎機能障害又は腎不全の予防又は低減のための、抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。
【背景技術】
【０００３】
アドレノメデュリン（ＡＤＭ）というペプチドは、１９９３年に（itamura, K., et al., "Adrenomedullin: A Novel Hypotensive Peptide Isolated From Human Pheochromocytoma", Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol. 192 (2), pp. 553-560 (1993)）に、５２個のアミノ酸を含んで成る新規降圧ペプチドとして最初に記載されたが、それは、ヒト褐色細胞腫から単離されていた；配列番号：２１。同年に、１８５個のアミノ酸を含んで成る前駆体ペプチドをコードするｃＤＮＡ、及び前駆体ペプチドの完全アミノ酸配列もまた記載された。とりわけ、Ｎ末端で２１個のアミノ酸から成るシグナル配列を含んで成る前駆体ペプチドは、「プレプロアドレノメデュリン」（プレプロＡＤＭ）と呼ばれる。当該記載において、指定されるすべてのアミノ酸位置は、通常、１８５個のアミノ酸を含んで成るプレプロＡＤＭに関連している。ペプチドアドレノメデュリン（ＡＤＭ）は、プレプロＡＤＭの５２個のアミノ酸を含んで成るペプチド（配列番号２１）であり、且つ、９５〜１４６アミノ酸を含んで成るペプチドであって、そしてそれは、タンパク質分解的開裂によってプレプロＡＤＭから形成される。これまで、プレプロＡＤＭの開裂で形成されるペプチド断片の実質的にほんのいくつかの断片、特に生理学的に活性なペプチドアドレノメデュリン（ＡＤＭ）「ＰＡＭＰ」、つまり、プレプロＡＤＭ内のシグナルペプチドの第２１アミノ酸の次にくる２０個のアミノ酸（第２２〜４１）を含んで成るペプチドが、詳細に調査されてきた。１９９３年のＡＤＭの発見と特徴づけは、活性の徹底した研究、そして、公表の殺到を引き起こし、最近、その結果が様々な総説にまとめられていて、当該記載との関連において、特にＡＤＭに充てられている「Peptides」誌のある号に存在する論文、特に（Editorial, Takahashi, K., "Adrenomedullin: from a pheochromocytoma to the eyes", Peptides, Vol. 22, p. 1691 (2001)）及び（Eto, T., "A review of the biological properties and clinical implications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP), hypotensive and vasodilating peptides", Peptides, Vol. 22, pp. 1693-1711 (2001)）で言及されている。対象は、（Hinson, et al., "Adrenomedullin, a Multifunctional Regulatory Peptide", Endocrine Reviews, Vol. 21(2), pp. 138-167 (2000)）の中で更に総説されている。これまでの科学的研究では、とりわけ、ＡＤＭが多機能性調節ペプチドと見なすこともできる。それは、グリシンによって伸長された不活性型で血液循環中に放出される（Kitamura, K., et al., "The intermediate form of glycine-extended adrenomedullin is the major circulating molecular form in human plasma", Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 244(2), pp. 551-555 (1998)、要約のみ）。ＡＤＭに特異的であり、且つ、ＡＤＭの効果をおそらく同様に調節する結合タンパク質（Pio, R., et al., "Complement Factor H is a Serum-binding Protein for adrenomedullin, and the Resulting Complex Modulates the Bioactivities of Both Partners", The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276(15), pp. 12292-12300 (2001)）も存在する。これまでの調査で最も重要なことであるＡＤＭ並びにＰＡＭＰのそれらの生理作用は、血圧に影響を及ぼす効果であった。
【０００４】
したがって、ＡＤＭは有効な血管拡張薬であり、これにより、降圧効果をＡＤＭのＣ末端部分の特定のペプチドセグメントと関連づけることが可能である。さらに、プレプロＡＤＭから形成される先に触れた更に生理学的に活性なペプチドＰＡＭＰが、たとえそれがＡＤＭのものと異なる作用機序を有するようでも、降圧効果を同様に示すことがわかった（上記の総説に加えて、（Eto, T., "A review of the biological properties and clinical implications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP), hypotensive and vasodilating peptides", Peptides, Vol. 22, pp. 1693-1711 (2001)）及び（Hinson, et al., "Adrenomedullin, a Multifunctional Regulatory Peptide", Endocrine Reviews, Vol. 21(2), pp. 138-167 (2000)）同様に（Kuwasako, K., et al., "Purification and characterization of PAMP-12 (PAMP-20) in porcine adrenal medulla as a major endogenous biologically active peptide", FEBS Lett, Vol. 414(1), pp. 105-110 (1997) 、要約のみ）、（Kuwasaki, K., et al., "Increased plasma proadrenomedullin N-terminal 20 peptide in patients with essential hypertension", Ann. Clin. Biochem., Vol. 36 (Pt. 5), pp. 622-628 (1999)）又は（Tsuruda, T., et al., "Secretion of proadrenomedullin N-terminal 20 peptide from cultured neonatal rat cardiac cells", Life Sci., Vol. 69(2), pp. 239-245 (2001) 、要約のみ）、並びにＥＰ−Ａ２ ０ ６２２ ４５８）を参照のこと）。さらに、血液循環及び他の生体液体中で計測できるＡＤＭの濃度が、多くの病理学的な状態で、健康対照者に見られる濃度を有意に上回ることがわかった。これにより、鬱血性心不全、心筋梗塞、腎臓病、高血圧疾患、糖尿病に罹患している患者、ショックの急性期、並びに敗血症及び敗血症性ショックにおけるＡＤＭレベルは、様々な程度ではあるが、有意に高い。ＰＡＭＰ濃度はまた、前述の病理学的な状態のいくつかで増強されるが、血漿レベルはＡＤＭに対して低い（(Eto, T., "A review of the biological properties and clinical implications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP), hypotensive and vasodilating peptides", Peptides, Vol. 22, pp. 1693-1711 (2001)); page 1702)）。異常に高い濃度のＡＤＭが敗血症において観察されることがあり、そして、最も高い濃度が敗血症性ショックで観察されることがさらに知られている（Eto, T., "A review of the biological properties and clinical implications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP), hypotensive and vasodilating peptides", Peptides, Vol. 22, pp. 1693-1711 (2001)）及び（Hirata, et al., "Increased Circulating Adrenomedullin, a Novel Vasodilatory Peptide, in Sepsis", Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, Vol. 81(4), pp. 1449-1453 (1996)）、（Ehlenz, K., et al., "High levels of circulating adrenomedullin in severe illness: Correlation with C-reactive protein and evidence against the adrenal medulla as site of origin", Exp Clin Endocrinol Diabetes, Vol. 105, pp. 156-162 (1997)）、（Tomoda, Y., et al., "Regulation of adrenomedullin secretion from cultured cells", Peptides, Vol. 22, pp. 1783-1794 (2001)）、（Ueda, S., et al., "Increased Plasma Levels of Adrenomedullin in Patients with Systemic Inflammatory Response Syndrome", Am. J. Respir. Crit. Care Med., Vol. 160, pp. 132-136 (1999)）並びに（Wang, P., "Adrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis", Peptides, Vol. 22, pp. 1835-1840 (2001)）を参照のこと）。
【０００５】
更に、診断目的、特に敗血症診断、心臓診断、及び癌診断の範囲内で生体液体中のアドレノメデュリンの免疫反応性を同定する方法が、当該技術分野で知られている。本発明によれば、完全なプレプロアドレノメデュリンのアミノ酸（第４５〜９２）を含むプロアドレノメデュリンの中間領域部分ペプチドが、特に、ｍｉｄ−ｐｒｏＡＤＭ（ＷＯ２００４／０９０５４６）の配列を特異的に認識する少なくとも１つの標識抗体を扱う免疫学的アッセイを用いて計測される。
【０００６】
ＷＯ−Ａ１ ２００４／０９７４２３は、心臓血管疾患の診断、予後診断、及び治療のためのアドレノメデュリンに対する抗体の使用を記載している。ＡＤＭ受容体のブロッキングによる疾患の治療もまた、当該技術分野で記載されており（例えば、ＷＯ−Ａ１ ２００６／０２７１４７、ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１２８４４）、前述の疾患は、敗血症、敗血症性ショック、心血管疾患、感染症、皮膚病学的疾患、内分泌学的疾患、代謝性疾患、胃腸病学的疾患、癌、炎症、血液学的病、呼吸器疾患、筋骨格疾患（muscle skeleton diseases）、神経学的疾患、泌尿器科学的疾患であり得る。
敗血症の早期に関して、ＡＤＭが心臓機能、並びに肝臓、脾臓、腎臓、及び小腸における血液供給を改善することが報告されている。ＡＤＭ中和抗体は、敗血症早期の間の先に言及した効果を中和する（Wang, P., "Adrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis", Peptides, Vol. 22, pp. 1835-1840 (2001)）。
【０００７】
敗血症後期、つまり、敗血症の低心拍出量相では、ＡＤＭは、敗血症性ショックの患者の死亡に大きく関連するリスク因子を構成する（Schutz et al., “Circulating Precursor levels of endothelin-1 and adrenomedullin, two endothelium-derived, counteracting substances, in sepsis”, Endothelium, 14:345-351, (2007)）。例えば、非常に後期の敗血症における、重症患者の診療及び治療のための方法、及び重症患者の治療用薬剤の調製のための血管収縮活性を有するエンドセリン及びエンドセリン作動物質の使用は、ＷＯ−Ａ１ ２００７／０６２６７６に記載された。エンドセリン及び／又はエンドセリン作動物質に代わる、又はそれと組み合わせた、アドレノメデュリン拮抗物質、すなわち、例えば、その関連受容体をブロッキングすることによって、アドレノメデュリンの血管拡張作用を妨げる若しくは減弱する分子、又はアドレノメデュリンのその受容体への結合を妨げる物質（例えば、アドレノメデュリンに結合して、その受容体結合部位を妨げる抗体などの特異的な結合物質；「免疫学的中和」）の使用について、ＷＯ−Ａ１ ２００７／０６２６７６に更に記載された。そのような使用、又は後に続ける若しくは先行する別々の使用を含めた併用が、特定の症例において、例えば、治療学的な達成を改善するか又は望ましくない生理的ストレス若しくは副作用を回避するのに望ましいことであると記載された。これにより、中和ＡＤＭ抗体が敗血症の後期における敗血症の治療に使用され得ることが報告されている。
【０００８】
当該技術分野において、敗血症及び敗血症性ショックの治療のためのＡＤＭ結合タンパク質１と組み合わせたＡＤＭの投与が記載されている。ＡＤＭ及びＡＤＭ結合タンパク質１を用いた敗血症動物の治療が、敗血症後期への移行を予防すると考えられている。生きている生物体において、ＡＤＭ結合タンパク質（補体因子Ｈ）が前述の生物体の血液循環中に高濃度で存在していることに留意しなければならない（Pio et al.: Identification, characterization, and physiological actions of factor H as an Adrenomedullin binding Protein present in Human Plasma; Microscopy Res. and Technique, 55:23-27 (2002) and Martinez et al.; Mapping of the Adrenomedullin-Binding domains in Human Complement factor H; Hypertens Res Vol. 26, Suppl (2003), S56-59）。
本発明によれば、前記ＡＤＭ結合タンパク質１はまた、ＡＤＭ結合タンパク質１（補体因子Ｈ）とも呼ばれる。
【０００９】
慢性若しくは急性疾患又は急性病態、特に生命を脅かす疾患又は病態に罹患している患者を治療するとき、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減が非常に重要である。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の説明
本発明の対象は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のための、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。好ましい実施形態において、本発明の対象は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、腎機能障害若しくは腎不全、又は肝機能障害若しくは肝不全の予防又は軽減のための、抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。前記臓器は、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵臓、小腸、及び脾臓を含んで成る群から選択され得る。抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、機能障害若しくは不全の発生前、又は機能障害若しくは不全の発生後の任意の時点にて投与され得る。
【００１１】
「臓器機能障害」とは、臓器が求められるその機能を果たさない病態又は健康状態を意味する。「臓器不全」とは、外部の臨床的介入なしに通常の恒常性を維持できない位の臓器機能障害を意味する。
【００１２】
対照的に、臓器機能とは、生理学的範囲内のそれぞれの臓器の求められる機能を表す。当業者は、健康診断中の臓器のそれぞれの機能を知っている。そのため、以下には、本発明の範囲内の特定の臓器に関する基本情報のみが提供される：
【００１３】
心臓とは、静脈から受け入れた血液を動脈に拍出する、空洞のある筋肉性臓器である。それにより、心臓は、全身に酸素を供給するために循環系全体を通じて血流を維持している。
【００１４】
腎臓とは、適当な水分と電解質のバランスを維持するために機能する１対の臓器であり、それらは、酸−塩基濃度を調整し、さらに血液の代謝老廃物を濾過し、その後それは尿として排泄される。
【００１５】
肝臓とは、胆汁を分泌し、且つ、特定の血液タンパク質の形成、及び炭水化物、脂肪、及びタンパク質の代謝に関わる大きな臓器である。
【００１６】
肺は、血液から二酸化炭素を取り除き、且つ、血液に酸素を供給するように機能している。
【００１７】
膵臓は、十二指腸に膵液を、そして、血流にインスリン、グルカゴン、及びソマトスタチンを分泌する。
【００１８】
小腸とは、消化管の部分であり、そこでは、消化プロセスが実質的に完了している。それは狭く、ねじ曲がっており、そして、３つの部品である十二指腸、空腸、及び回腸から成っている。
【００１９】
脾臓は、赤血球−赤血球細胞−及び免疫系に関して重要な役割を果たしている。特に、脾臓は、老化赤血球細胞を取り除き、出血ショックの場合に備えて、血液の予備を保有する一方で、鉄の再生もおこなっている。さらに、それは、老化赤血球から取り除かれたヘモグロビンを代謝する。ヘモグロビンのグロビン部分は、その構成アミノ酸に分解され、そして、ヘム部分はビリルビンに代謝されるが、ビリルビンは、それに続いて、その除去のために肝臓を行ったり来たりする。加えて、脾臓は、その白脾髄内で抗体を合成し、且つ、血液とリンパ節循環を通して抗体で覆われた血球細胞と共に抗体で覆われた細菌を除去する。
【００２０】
提供した抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場が、臓器機能障害及び臓器不全の予防又は軽減するために適用されることを本発明が意図すること、そしてそのため、慢性若しくは急性疾患又は急性病態自体に対する一次治療又は第一線治療のいずれかの方法を必ずしも意図しない（そのため、慢性若しくは急性疾患又は急性病態を（単数若しくは複数の）基礎疾患と呼ぶこともできる）と強調されなければならない。これは、本発明が、例えば、それぞれの臓器にある感染、癌若しくは腫瘍を治癒又は治療するために提供されるのではなく、生理的機能に向かってそれぞれの臓器を復活させるために提供されることを意味する。従って、本発明の範囲内の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態のための治療法は、あらゆる種類の臓器機能障害、又は急性事象のような弱った臓器機能に関する。
【００２１】
具体的には、本発明によれば、例えば、糖尿病に起因する膵臓のあらゆる臓器機能障害又は臓器不全の場合に、本明細書中に提供された抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント、又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、糖尿病の第一線治療を意図するのではなく、膵臓の生理的機能を復活させることを意図していることは理解されるべきである。
【００２２】
具体的には、本発明によれば、癌性腫瘍又は癌に起因する、例えば、膵臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、小腸、心臓のあらゆる臓器機能障害又は臓器不全の場合に、本明細書中に提供された抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント、又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、それぞれの臓器の癌性腫瘍又は癌の第一線治療を意図するのではなく、それぞれの膵臓の生理的機能を復活させることを意図していることは理解されるべきである。
【００２３】
本発明で取り上げた患者群は、以下に説明するように規定できる：
次のように、臨床基準は、機能障害又は不全に陥る傾向があるそれぞれの臓器に関して言及され、よって、本発明による慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の（単数若しくは複数の）患者群を意味する。
【００２４】
基準は、臨床ＳＯＦＡスコアに準拠する。
【００２５】
ＳＯＦＡシステムは、１９９４年にEuropean Society of Intensive Care Medicineの合意のための会議で作成され、そして、１９９６年にさらに改訂された。
【００２６】
ＳＯＦＡは、多臓器不全を日々評価する６つの臓器機能障害／不全スコアである。各臓器は、０（正常）〜４（最も異常）に等級付けされ、そしてそれが、０〜２４ポイントの日々のスコアを提供する。ＳＯＦＡの目的は、臨床スタッフのために簡単で、信頼でき、そして、連続したスコアを作成することである。
【００２７】
集中治療室（ＩＣＵ）又は入院の最初の数日間の臓器機能障害に関する連続した評価は、予後の優れた指標である。平均及び最高ＳＯＦＡスコアの両方が、転特に帰の有用な予測の判断材料である。
【００２８】
【表１】
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【００２９】
ＭＡＰ、平均動脈圧；ＣＮＳ、中枢神経系；ＳａＯ2、末梢動脈酸素飽和度。
aＰａＯ2／ＦＩＯ2比が優先的に使用された。利用できなければ、ＳａＯ2／ＦＩＯ2比が使用された。
ｂ少なくとも１時間投与された血管作動性薬剤（ドーパミンやノルエピネフリン、μｇ／ｋｇ／分）。
【００３０】
ＳＯＦＡスコアに関する引用文献
１．  Jones AE, Trzeciak S, Kline JA. The Sequential Organ Failure Assessment score for predicting outcome in patients with severe sepsis and evidence of hypoperfusion at the time of emergency department presentation. Crit Care Med. 2009 May;37(5):1649-54.
２．  Ferreira FL, Bota DP, Bross A, Melot C, Vincent JL. Serial evaluation of the SOFA score to predict outcome in critically ill patients. JAMA. 2001 Oct 10;286(14):1754-8.
３．  Vincent JL, Moreno R, Takala J, Willatts S, De Mendonea A, Bruining H, Reinhart CK, Suter PM, Thijs LG. The SOFA (Sepsis-related Organ Failure Assessment) score to describe organ dysfunction/failure. On behalf of the Working Group on Sepsis-Related Problems of the European Society of Intensive Care Medicine. Intensive Care Med. 1996 Jul;22(7):707-10.
【００３１】
特定の実施形態において、本発明による患者群は、入院又は集中治療室（ＩＣＵ）に入った日の呼吸、肝臓、凝血、心血管系、ＣＮＳ、又は腎臓の臨床基準の一つに関してそれが１であるような、少なくとも１つのＳＯＦＡスコアに低い閾値を有している。これにより、前述の患者群は、本発明による治療的介入を必要としていて、よって、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減を必要としている。
【００３２】
別の特定の実施形態において、本発明による患者群は、入院又は集中治療室（ＩＣＵ）に入った日の呼吸、肝臓、凝血、心血管系、ＣＮＳ、及び／又は腎臓の臨床基準のいずれかに関してそれが１であるような、少なくとも２つのＳＯＦＡスコアに低い閾値を有している。これにより、前述の患者群は、本発明による治療的介入を必要としていて、よって、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減を必要としている。
【００３３】
別の特定の実施形態において、本発明による患者群は、入院又は集中治療室（ＩＣＵ）に入った日の呼吸、肝臓、凝血、心血管系、ＣＮＳ、及び／又は腎臓の臨床基準のいずれかに関してそれが１であるような、少なくとも３つのＳＯＦＡスコアに低い閾値を有している。これにより、前述の患者群は、本発明による治療的介入を必要としていて、よって、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減を必要としている。
【００３４】
別の特定の実施形態において、本発明による患者群は、入院又は集中治療室（ＩＣＵ）に入った日の呼吸、肝臓、凝血、心血管系、ＣＮＳ、及び／又は腎臓の臨床基準のいずれかに関してそれが１であるような、少なくとも４つのＳＯＦＡスコアに低い閾値を有している。これにより、前述の患者群は、本発明による治療的介入を必要としていて、よって、臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減を必要としている。
【００３５】
別の特定の実施形態において、本発明による腎臓の臓器機能障害又は腎臓の臓器不全の予防又は軽減を必要としている患者群は、少なくとも１、２、３、又は４の腎臓ＳＯＦＡスコアを有している。
【００３６】
別の特定の実施形態において、本発明による肝臓の臓器機能障害又は肝臓の臓器不全の予防又は軽減を必要としている患者群は、少なくとも１、２、３、又は４の肝臓ＳＯＦＡスコアを有している。
【００３７】
別の特定の実施形態において、本発明による心臓の臓器機能障害又は心臓の臓器不全の予防又は軽減を必要としている患者群は、少なくとも１、２、３、又は４の心血管系ＳＯＦＡスコアを有している。
【００３８】
別の特定の実施形態において、本発明による肺の臓器機能障害又は肺の臓器不全の予防又は軽減を必要としている患者群は、少なくとも１、２、３、又は４の呼吸器ＳＯＦＡスコアを有している。
【００３９】
最初のスコアにかかわらず、一般にＩＣＵ又は病院の最初の４８時間の間のＳＯＦＡスコアの上昇は、少なくとも５０％の死亡率を予測する。
【００４０】
よって、別の特定の実施形態において、本発明による臓器機能障害／不全向けの治療的介入を必要としている患者群は、入院又はＩＣＵに入った後の最初の４８時間以内に上昇した少なくとも１つのＳＯＦＡスコアを特徴とする。
【００４１】
患者群−腎機能障害／不全
次のように、前述の臨床基準は、腎機能障害／不全の（単数若しくは複数の）患者群を意味する：
・腎機能障害／不全のリスクがある患者：ＧＦＲ低下＞２５％、１．５倍に上昇した血清クレアチニン又は６時間で＜０．５ｍｌ／ｋｇ／時間の尿産生
・腎傷害のある患者：ＧＦＲ減少＞５０％、クレアチニンの倍増又は１２時間で＜０．５ｍｌ／ｋｇ／時間の尿産生
・腎不全に伴う患者：ＧＦＲ減少＞７５％、クレアチニンの三倍増若しくはクレアチニン＞３５５μｍｏｌ／ｌ（＞４４の上昇がある）（＞４ｍｇ／ｄｌ）又は２４時間で０．３ｍｌ／ｋｇ／時間の尿産生
・腎臓機能の損失を伴う患者：持続性の急性腎傷害（ＡＫＩ）又は４週間を超える腎臓機能の完全な喪失
・末期腎不全：３カ月を超える腎臓機能の完全な喪失。
患者群−肝機能障害／不全
肝機能障害／不全に関する患者群は、＞１．２ｍｇ／ｄＬ、好ましくは＞１．９ｍｇ／ｄＬ、より好ましくは＞５．９ｍｇ／ｄＬのビリルビンの低い閾値を特徴とする。
酸素欠乏
【００４２】
敗血症がミトコンドリアの機能障害に関連しており、そしてそれが、必然的に、正常に機能しない酸素消費につながり、そして、究極的には敗血症誘発性多臓器不全をもたらすことを、当業者は意識している。
【００４３】
これは、敗血症患者における上昇した組織酸素分圧に特に当てはまり、臓器が酸素を使用する能力が低下していることを示唆している。ミトコンドリアの酸化的リン酸化によるＡＴＰ産生が全酸素消費の９０％超を占めるので、試験管内においてミトコンドリア呼吸を阻害することが知られ、且つ、敗血症において過剰に産生される一酸化窒素に起因するかもしれない、ミトコンドリアの機能障害が、臓器不全を直接引き起こし得る。
【００４４】
そのため、本発明の非常に特殊な実施形態において、抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＳＩＲＳ、敗血症、重症敗血症、ショック、及び敗血症ショックの患者における臓器機能障害及び不全の予防方法において使用されることが特に意図される。
【００４５】
酸素欠乏はまた、例えば、バイパス手術のような虚血性事象によっても引き起こされ得る。
【００４６】
抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場はまた、患者が臓器の機能障害又は不全のいずれかの兆候を示す前に予防的に投与されてもよい。
【００４７】
これは、患者が、機能障害又は不全の問題が予想され得る、例えば髄膜炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症のような重症感染症；糖尿病、癌、例えば心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性若しくは慢性血管疾患のような他の疾患；敗血症ショックのようなショック及び例えば腎機能障害、肝機能障害のような臓器機能障害、熱傷、外科手術、外傷、中毒を例えば含めた、慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している場合であろう。抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場はまた、化学療法の前、その最中、又はその後に予防的又は治療的に投与されてもよい。同じことが、臓器の機能障害又は不全をもたらし得る、虚血性損傷が特定の臓器に起こり得る外科手術にも適用される。予防的とは、臓器損傷が起こる前を意味し、治療的とは、既に起こった臓器損傷を意味する。敗血症及び敗血症ショック、すなわち、敗血症の後期の間の臓器機能障害又は不全のリスクを低減するための本発明による抗体、フラグメント又は足場が、特に有効である。
【００４８】
急性疾患又は急性病態は、これだけに限定されるものではないが、例えば髄膜炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、又は敗血症のような重症感染症；糖尿病、癌、例えば心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性若しくは慢性血管疾患のような他の疾患；例えば敗血症ショックのようなショック、及び、例えば腎機能障害、肝機能障害のような臓器機能障害、熱傷、外科手術、外傷、中毒、化学療法によって引き起こされた損傷を含んで成る群から選択される。敗血症及び敗血症ショック、すなわち、敗血症の後期の間の死亡リスクを低減するための本発明による抗体、フラグメント又は足場が、特に有効である。
【００４９】
ＳＩＲＳ、敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックに関する以下の臨床基準が、規定される。
１）以下の症状の少なくとも２つを特徴とする宿主全身性炎症反応（ＳＩＲＳ）
・患者は低血圧を呈する（平均動脈圧が＜６５ｍｍＨｇ）
・＞４ｍｍｏｌ／Ｌになる高い血清乳酸レベル
・血糖＞７．７ｍｍｏｌ／Ｌ（糖尿病の不存在において）
・中心静脈圧が８〜１２ｍｍＨｇの範囲内にない
・尿排出量が＜０．５ｍＬｘｋｇ-1ｘ時間-1である
・中心静脈（上大静脈）酸素飽和が＜７０％又は混合静脈で＜６５％である
・心拍数が＞９０拍動／分である。
・体温＜３６℃又は＞３８℃
・呼吸数＞２０／分
・白血球数＜４又は＞１２ｘ１０9／Ｌ（白血球）；＞１０％の未熟好中球
【００５０】
２）敗血症
１）で触れた症状の少なくとも２つに続いて、更に新たな感染の臨床的な疑いが見られる：
・咳／痰／胸痛
・腹痛／膨満／下痢
・血流感染（line infection）
・心内膜炎
・排尿障害
・頚部硬直に伴う頭痛
・蜂巣炎／損傷／関節感染
・いずれかの感染に関して陽性の微生物学
【００５１】
３）重症敗血症
敗血症が患者に現れていることを条件に、更にいずれかの臓器機能障害の臨床的な疑いが見られる：
・最高血圧＜９０／平均；＜６５ｍｍＨＧ
・ラクタート＞２ｍｍｏｌ／Ｌ
・ビリルビン＞３４μｍｏｌ／Ｌ
・尿排出量２時間で＜０．５ｍＬ／ｋｇ／ｈ
・クレアチニン＞１７７μｍｏｌ／Ｌ
・血小板＜１００ｘ１０9／Ｌ
・Ｏ2が与えられた場合を除いてＳｐＯ2＞９０％
【００５２】
４）敗血症性ショック
３）で触れたような末端臓器機能障害のうちの少なくとも１つの兆候が現れている。治療に応答しない、全身性静脈内輸液投与だけでは低血圧から患者の血圧を維持するのに不十分である難治性の低血圧が存在するのであれば、敗血症性ショックが示され、本発明による抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場の投与もまた提供する。
【００５３】
よって、急性疾患又は急性病態は、これだけに限定されるものではないが、例えば、髄膜炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、又は敗血症のような重症感染症；糖尿病、癌、例えば、心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性及び慢性血管疾患のような他の疾患；例えば、敗血症性ショックのようなショック、並びに、例えば、腎機能障害、肝機能障害のような臓器機能障害、熱傷、外科手術、外傷、中毒、化学療法で引き起こされた損傷を含んで成る群から選択され得る。
敗血症及び敗血症性ショック、すなわち、敗血症後期の間の死亡リスクを低減するために本発明の抗体、フラグメント又は足場が、特に有効である。
【００５４】
本発明の一実施形態において、患者は、ＳＩＲＳ、重症感染症、敗血症、例えば敗血症ショックのようなショックに罹患していない。前述の重症感染症とは、例えば、髄膜炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重症敗血症、及び、例えば敗血症ショックのようなショックを意味する。これに関して、
重症敗血症は、前述の患者に敗血症が現れており、さらに、以下のいずれかの臓器機能障害に関する臨床的な疑いが存在していることを特徴とする：
・最高血圧＜９０／平均；＜６５ｍｍＨＧ
・乳酸＞２ｍｍｏｌ／Ｌ
・ビリルビン＞３４μｍｏｌ／Ｌ
・尿排出量２時間で＜０．５ｍＬ／ｋｇ／ｈ
・クレアチニン＞１７７μｍｏｌ／Ｌ
・血小板＜１００ｘ１０9／Ｌ
・Ｏ2が与えられた場合を除いてＳｐＯ2＞９０％
【００５５】
別の特定の実施形態において、前述の急性疾患又は急性病態は、敗血症、重症敗血症でもなく、ＳＩＲＳでもなく、ショックでもなく、敗血症ショックでもない。
【００５６】
別の実施形態において、前述の急性疾患又は急性病態は、敗血症ではない。
【００５７】
別の実施形態において、前述の急性疾患又は急性病態は、髄膜炎、糖尿病、癌、例えば、心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性及び慢性血管疾患；例えば、敗血症性ショックのようなショック、並びに、例えば、腎機能障害、肝機能障害のような臓器機能障害、熱傷、外科手術、外傷、中毒、化学療法で引き起こされた損傷を含んで成る群から選択される。
【００５８】
本明細書中に提供された抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場が、例えば腎結石、腎臓癌、腎臓炎、肝硬変、脂肪肝、肝臓癌、又は例えば肝炎などのいずれかの臓器関連疾患の第一線治療を意図しないと強調されなければならない。本発明による抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、それぞれの臓器の生理的機能における機能障害を予防するか又はそれに対処することを意図する。
【００５９】
よって、抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場の臓器保護効果は、前述の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の一次療法を支援する。重症感染症、ＳＩＲＳ、敗血症又は同様のもののような慢性若しくは急性疾患又は急性病態の場合には、一次療法は、例えば、抗生物質の投与であるだろう。抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、臓器を保護し、且つ、例えば、抗生物質の投与が効果を発揮するまで前述の患者の危機的状態の悪化を予防する助けとなるだろう。先に触れた抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場が予防的方法又は治療学的方法で投与され得る場合、これは、前述の患者に機能障害の問題が存在しているとき、機能障害若しくは不全の問題を予防するため、又は臓器機能障害を軽減するためであることを意味する。
【００６０】
本発明の別の特定の実施形態において、「抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、予防的方法又は治療的方法で投与され得る」という発現は、患者への全身投与を意味する。
【００６１】
さらに、本発明の一実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、昇圧薬、例えば、カテコールアミン、と組み合わせて使用され、前述の組み合わせが、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けに、前述の患者の臓器を保護するためのものであることを特徴とする。
【００６２】
これにより、本発明の対象は、特定の一実施形態において、昇圧薬の投与、例えばカテコールアミンの投与を必要としている患者の治療法における使用に向けた抗ＡＤＭ（ＡＤＭ）抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。
【００６３】
さらに、本発明の一実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、静脈内に投与された輸液（fluid）と組み合わせて使用されるべきであって、前述の組み合わせが、慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の治療法における使用に向けた、前述の患者の臓器を保護するためのものである。静脈内に投与されるべき前述の輸液が、全身投与されると強調されなければならない。
【００６４】
本発明の一実施形態において、その臓器を保護することを必要としている慢性若しくは急性疾患又は病態に罹患している前述の患者は、前述の患者が静脈内輸液を得る必要があることを特徴とする。
【００６５】
本発明によれば、輸液の投与とは、輸液の全身投与を意味していることに留意しなければならない。
【００６６】
これにより、ある特定の実施形態における本発明の対象は、静脈内輸液（intravenous fluids）を必要としている患者の治療法に使用するための抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。適当な血圧と正常又は平均以上の心拍出量の回復があっても、組織の血流低下の兆候は存続し得る。これは、「血液分布異常性ショック」と呼ばれることが多く、局所若しくは、微小血管レベルにおける血流の不均等分布、及び／又は適当な酸素運搬にもかかわらず、酸素を利用できない細胞の能力に関連し得る。それが「正常な」血圧であるように見えるにもかかわらず、組織の血流低下が認識されることは、臨床的に重要であり、そして、適時介入の引き金となるべきである。本発明によれば、そのような介入は、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、臓器機能障害の予防又は軽減のための、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場の投与である。
【００６７】
本発明による抗体は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされた１若しくは複数のポリペプチドを含んで成るタンパク質である。認識される免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α（ＩｇＡ）、γ（ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、及びμ（ＩｇＭ）定常領域遺伝子が含まれると共に多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。完全長の免疫グロブリン軽鎖は、一般的に約２５Ｋｄ又は長さが２１４個のアミノ酸である。完全長の免疫グロブリン重鎖は、一般的に約５０Ｋｄ又は長さが４４６個のアミノ酸である。軽鎖は、ＮＨ２末端で可変領域遺伝子（長さが約１１０個のアミノ酸）及びＣＯＯＨ末端でκ又はλ定常域遺伝子によってコード化される。重鎖は同様に、可変領域遺伝子（長さが約１１６個のアミノ酸）及び他の定常域遺伝子の１つによってコードされる。
【００６８】
抗体の基本構造単位は、一般に、それぞれの対が１つの軽鎖と１の重鎖とを有する免疫グロブリン鎖の２つの同一の対から成る四量体である。それぞれの対において、軽鎖及び重鎖可変領域は、抗体に結合して、定常領域がエフェクター機能を媒介する。免疫グロブリンはまた、例えばＦｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）2のみならず、二機能性ハイブリッド抗体、及び一本鎖、（例えば、Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17:105,1987; Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85:5879-5883, 1988; Bird et al., Science 242:423-426, 1988; Hood et al., Immunology, Benjamin, N.Y., 2nd ed., 1984; Hunkapiller and Hood, Nature 323:15-16,1986）を含む他のさまざまな形態で存在する。免疫グロブリン軽鎖又は重鎖可変領域には、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの超可変領域が介在するフレームワーク領域が含まれる（Sequences of Proteins of Immunological Interest, E. Kabat et al., U.S. Department of Health and Human Services, 1983を参照のこと）。先に述べたように、ＣＤＲは、抗原のエピトープに対する結合に主に関与する。免疫複合体とは、抗体、例えばモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体若しくはヒト抗体、又は抗原に特異的に結合する機能的な抗体フラグメントである。
【００６９】
キメラ抗体は、典型的に遺伝子操作によって、異なる種に属する免疫グロブリン可変領域及び定常領域からその軽鎖及び重鎖遺伝子が構築されている抗体である。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変領域セグメントを、κ及びγ1又はγ3のようなヒト定常領域セグメントに結合させることができる。一つの例において、このように治療的キメラ抗体は、マウス抗体からの可変又は抗原結合ドメイン及びヒト抗体からの定常又はエフェクタードメインとで構成されるが、他の哺乳類種も用いることができ、又は可変領域は分子技術によって産生することができる。キメラ抗体を作製する方法は、当技術分野において周知である、例えば米国特許第５，８０７，７１５号を参照のこと。「ヒト化」免疫グロブリンは、ヒトフレームワーク領域とヒト以外の（マウス、ラット、又は合成）免疫グロブリンからの一つ又はそれ以上のCDRとを含む免疫グロブリンである。CDRを提供するヒト以外の免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワーク領域を提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。一つの態様において、ヒト化免疫グロブリンにおける全てのCDRは、ドナー免疫グロブリンに由来する。定常領域が存在する必要はないが、存在すれば、それらは、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一でなければならない、すなわち約95％又はそれ以上のような、少なくとも約85〜90％同一でなければならない。したがって、ヒト化免疫グロブリンの全ての部分は、おそらくCDRを除いて、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。「ヒト化抗体」は、ヒト化軽鎖とヒト化重鎖免疫グロブリンとを含む抗体である。ヒト化抗体は、CDRを提供するドナー抗体と同じ抗原に結合する。ヒト化免疫グロブリン又は抗体のアクセプターフレームワークは、ドナーフレームワークから得られるアミノ酸による限定数の置換を有してもよい。ヒト化又は他のモノクローナル抗体は、抗原結合又は他の免疫グロブリン機能に実質的に影響を及ぼさないさらなる保存的アミノ酸置換を有することができる。例としての保存的置換は、ｇｌｙ、ａｌａ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ、ａｒｇ；及びｐｈｅ、ｔｙｒのような置換である。ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子操作によって構築することができる（例えば米国特許第５，５８５，０８９号を参照のこと）。ヒト化抗体は、軽鎖及び重鎖遺伝子がヒト起源である抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で既知の方法によって作成することができる。ヒト抗体は、対象となる抗体を分泌するヒトB細胞を不死化することによって作製することができる。不死化は、例えばEBV感染によって、又はヒトB細胞を骨髄腫もしくはハイブリドーマ細胞に融合させて、トリオーマ細胞を産生することによって行うことができる。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイ法によっても産生することができる（例えば、Dowerら、ＰＣＴ公開公報第９１／１７２７１号；McCaffertyら、ＰＣＴ公開公報第９２／００１０４７号；及びWinter、ＰＣＴ公開公報第９２／２０７９１号を参照のこと）、又はヒトの組み合わせモノクローナル抗体ライブラリから選択することができる（Morphosysのウェブサイトを参照のこ��）。ヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニック動物を用いても調製することができる（Lonbergら、ＰＣＴ公開公報第９３／１２２２７号；及びKucherlapati、ＰＣＴ公開公報第９１／１０７４１号を参照のこと）。
【００７０】
よって、抗ＡＤＭ抗体又は抗アドレノメデュリン抗体フラグメントは、当該技術分野で知られている形式を有し得る。例は、ヒト抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体である。好ましい実施形態において、本発明による抗体は、例えばＩｇＧのような、遺伝子組み換えにより作製された抗体、典型的な完全長の免疫グロブリン、或いは、例えば、化学的に結合した抗体（フラグメント抗原結合）のような少なくとも重鎖及び／又は軽鎖のＦ可変ドメインを含んで成る抗体フラグメントであって、これだけに限定されるものではないが、Ｆａｂ低分子化抗体を含んで成るＦａｂフラグメント、一本鎖Ｆａｂ抗体、エピトープタグを有する一価のＦａｂ抗体、例えばＦａｂ−Ｖ５Ｓｘ２；ＣＨ３ドメインで二量化された二価のＦａｂ（ミニ抗体）；例えば、異種のドメインの補助による、例えば、ｄＨＬＸドメインの二量体化による、多量体化によって形成された、二価のＦａｂ又は多価性Ｆａｂ、例えば、Ｆａｂ−ｄＨＬＸ−ＦＳｘ２；Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、多量体化した多価／多特異的ｓｃＦｖフラグメント、二価及び／又は二重特異性ダイアボディ、ＢＩＴＥ（登録商標）（二重特異性Ｔ細胞結合体（engager））、三機能性抗体、多価抗体、例えば、Ｇとは別のクラスからのもの；単一ドメイン抗体、例えば、ラクダ科の動物又は魚類の免疫グロブリン由来のナノボディ、並びに多数のその他のものを含めた抗体フラグメントである。
【００７１】
さらに、本発明の一実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、単一特異性である。単一特異性抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、単一特異性抗アドレノメデュリン抗体フラグメント、又は単一特異性抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場とは、前述の抗体、抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場が標的ＡＤＭ内に少なくとも５つのアミノ酸を包含する１つの特定の領域に結合することを意味する。
【００７２】
単一特異性抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、単一特異性抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は単一特異性抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、すべてが同じ抗原に親和性を有する抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。
【００７３】
本発明の別の好ましい実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、単一特異性である。単一特異性抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、単一特異性抗アドレノメデュリン抗体フラグメント、又は単一特異性抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場とは、前述の抗体、抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場が標的ＡＤＭ内に少なくとも４つのアミノ酸を包含する１つの特定の領域に結合することを意味する。
【００７４】
別の特別な実施形態において、抗ＡＤＭ抗体又はＡＤＭに結合する抗体フラグメントは、単一特異性抗体である。単一特異性とは、前述の抗体、抗体フラグメントが標的ＡＤＭ内に少なくとも５つのアミノ酸を包含する１つの特定の領域に結合することを意味する。
【００７５】
別の特別で好ましい実施形態において、抗ＡＤＭ抗体又はＡＤＭに結合する抗体フラグメントは、単一特異性抗体である。単一特異性とは、前述の抗体、抗体フラグメントが標的ＡＤＭ内に少なくとも４つのアミノ酸を包含する１つの特定の領域に結合することを意味する。
【００７６】
単一特異性抗体又はフラグメントは、すべて同じ抗原に親和性を有する抗体又はフラグメントである。モノクローナル抗体は単一特異性であるが、単一特異性抗体はまた、一般的な生殖細胞からそれらを製造する以外の手段によっても製造され得る。
【００７７】
抗ＡＤＭ抗体に加えて、他の生体高分子足場は、標的分子を複合体化することが当該技術分野で周知であり、高度に標的特異的な生体高分子の作製に使用された。例は、アプタマー、シュピーゲルマー、アンチカリン及びコノトキシンである。抗体の形式の例示に関しては、図１ａ、１ｂ、及び１ｃを参照のこと。
【００７８】
好ましい実施形態において、抗ＡＤＭ抗体の形式は、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）2フラグメント、及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される。別の好ましい実施形態において、抗体の形式は、ｓｃＦａｂフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、及び生物学的利用能を最適化されたそのコンジュゲート、例えばペグ化フラグメントなどを含んで成る群から選択される。最も好ましい形式の１つは、ｓｃＦａｂ形式である。
【００７９】
非Ｉｇ足場は、タンパク質足場であってもよく、それらはリガンド又は抗原に結合できるので抗体模倣体として使用できる。非Ｉｇ足場は、テトラネクチンベースの非Ｉｇ足場（例えば、ＵＳ２０１０／００２８９９５に記載）、フィブロネクチン足場（例えば、ＥＰ１２６６ ０２５に記載）；リポカリンベースの足場（例えば、ＷＯ２０１１／１５４４２０に記載）；ユビキチン足場（例えば、ＷＯ２０１１／０７３２１４に記載）、トランスフェリン足場（例えば、ＵＳ２００４／００２３３３４に記載）、プロテインＡ足場（例えば、ＥＰ２２３１８６０に記載）、アンキリン反復ベースの足場（例えば、ＷＯ２０１０／０６０７４８に記載）、マイクロタンパク質、好ましくはシステインノットを形成するマイクロタンパク質）足場（例えば、ＥＰ２３１４３０８に記載）、Ｆｙｎ ＳＨ３ドメインベースの足場（例えば、ＷＯ２０１１／０２３６８５に記載）、ＥＧＦＲ−Ａドメインベースの足場（例えば、ＷＯ２００５／０４０２２９に記載）及びＫｕｎｉｔｚドメインベースの足場（例えば、ＥＰ１９４１８６７に記載）を含んで成る群から選択され得る。
【００８０】
本発明の一実施形態において、本発明による抗ＡＤＭ抗体は、以下のように作製され得る。
【００８１】
Ｂａｌｂ／ｃマウスは、０及び１４日目に１００μｇのＡＤＭペプチド（抗原）−ＢＳＡコンジュゲート（１００μｌの完全フロイントアジュバント中に乳化させた）で、そして、２１及び２８日目ににと５０μｇ（１００μｌの不完全フロイントアジュバンド中）で免疫された。融合実験が行われる３日前に、動物には、１回の腹腔内及び１回の静脈内注射として与えられる、１００μｌの生理食塩液中に溶解させた５０μｇの前記コンジュゲートを与えた。
【００８２】
免疫されたマウスからの脾細胞及び骨髄腫細胞株ＳＰ２／０の細胞が、５０％のポリエチレングリコール１ｍｌを用いて３７℃にて３０秒間、融合された。洗浄後に、その細胞を９６ウェル細胞培養プレート内に播種した。ハイブリッドクローンは、ＨＡＴ培地［２０％のウシ胎仔血清及びＨＡＴサプリメントを補ったＲＰＭＩ１６４０培地］中で培養することによって選択された。２週間後に、ＨＡＴ培地が、３回の継代の間、ＨＴ培地に置き換えられ、それに続いて、正常細胞培地に戻される。
【００８３】
細胞培養上清は、融合３週間後に、まず抗原特異的なＩｇＧ抗体についてスクリーニングされた。陽性の試験された微量の培養物を、繁殖のために２４ウェルプレートに移した。再テストした後に、選択された培養物は、クローン化され、限界希釈を使用することで再度クローン化され、そして、アイソタイプが決定された（Lane, R.D. (1985). A short-duration polyethylene glycol fusion technique for increasing production of monoclonal antibody-secreting hybridomas. J. Immunol. Meth. 81: 223-228; Ziegler, B. et al.(1996) Glutamate decarboxylase (GAD) is not detectable on the surface of rat islet cells examined by cytofluorometry and complement-dependent antibody-mediated cytotoxicity of monoclonal GAD antibodies, Horm. Metab. Res. 28: 11-15もまた参照のこと）。
【００８４】
抗体は、以下の手順に従ってファージディスプレイを用いて作製され得る：投薬を受けていないヒト抗体遺伝子ライブラリＨＡＬ７／８が、アドレノメデュリンペプチドに対する、遺伝子組み換え一本鎖Ｆ可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の分離に使用される。抗体遺伝子ライブラリーは、２個の異なったスペーサーを介してアドレノメデュリンペプチド配列に連結されたビオチンタグを含むペプチドの使用を含むパンニングストラテジーを用いてスクリーニングされた。非特異性結合抗原とストレプトアビジン結合抗原とを使用したパンニング段階の混合が、非特異的バインダーのバックグラウンドを最小にするのに使用された。パニングの第三段階からの溶解ファージが、モノクローナルｓｃＦｖ発現性Ｅ．コリ（E. coli）株の作製に使用された。これらのクローン株の培養からの上清が、抗原ＥＬＩＳＡ試験にそのまま使用された（Hust, M., Meyer, T., Voedisch, B., Rulker, T., Thie, H., El-Ghezal, A., Kirsch, M.I., Schutte, M., Helmsing, S., Meier, D., Schirrmann, T., Dubel, S., 2011. A human scFv antibody generation pipeline for proteome research. Journal of Biotechnology 152, 159-170; Schutte, M., Thullier, P., Pelat, T., Wezler, X., Rosenstock, P., Hinz, D., Kirsch, M.I.,Hasenberg, M., Frank, R., Schirrmann, T., Gunzer, M., Hust, M., Dubel, S., 2009. Identification of a putative Crf splice variant and generation of recombinant antibodies for the specific detection of Aspergillus fumigatus. PLoS One 4, e6625もまた参照のこと）。
【００８５】
マウス抗体のヒト化は、以下の手順に従って行われ得る：マウス起源の抗体のヒト化のために、抗体の配列が、相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するフレームワーク領域（ＦＲ）と抗原との構造的相互作用に関して分析される。構造モデリングに基づいて、ヒト起源の適当なＦＲを選択し、そして、マウスＣＤＲ配列がヒトＦＲに移植される。構造的相互作用を取り戻すためにＣＤＲ又はＦＲのアミノ酸配列のバリエーションが導入でき、そしてそれは、ＦＲ配列に関する種の切り替えによって無効になった。この構造的相互作用の回復は、ファージディスプレイライブラリーを使用したランダムアプローチによって、又は分子モデリングによって導かれる方向性を持ったアプローチにより達成され得る（Almagro JC, Fransson J., 2008. Humanization of antibodies. Front Biosci. 2008 Jan 1;13:1619-33）。
【００８６】
好ましい実施形態において、ＡＤＭ抗体の形式は、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）2フラグメント、及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される。別の好ましい実施形態において、抗体の形式は、ｓｃＦａｂフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、及び生物学的利用能を最適化されたそのコンジュゲート、例えばペグ化フラグメントなどを含んで成る群から選択される。最も好ましい形式の１つは、ｓｃＦａｂ形式である。
【００８７】
別の好ましい実施形態において、抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント、又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、完全長の抗体、抗体フラグメント、又は非Ｉｇ足場である。
【００８８】
好ましい実施形態において、抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＡＤＭに含まれ、長さが少なくとも５個のアミノ酸から成るエピトープを対象にし、且つ、結合できる。
【００８９】
より好ましい実施形態において、抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＡＤＭに含まれ、長さが少なくとも４個のアミノ酸から成るエピトープを対象にし、且つ、結合できる。
【００９０】
本発明の好ましい実施形態において、前述の抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に位置しているＡＤＭの領域に結合する（図２を参照のこと）。
【００９１】
別の好ましい実施形態において、前述の抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識し、結合する。Ｎ末端端部とは、アミノ酸１、すなわち、配列番号２１又は２３の「Ｙ」；が結合に必須であることを意味する。抗体、フラグメント又は足場は、Ｎ末端伸長及びＮ末端改変アドレノメデュリンにも、Ｎ末端分解アドレノメデュリンにも結合しないであろう。
【００９２】
本発明の１つの特定の実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けに提供され、前述の抗体、抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場が、成熟ヒトＡＤＭのａａ１−４２の配列中の好ましくは少なくとも４個又は少なくとも５個のアミノ酸から成る領域に結合する： 
【００９３】
配列番号：２４
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA
【００９４】
本発明の１つの特定の実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、患者の急性疾患又は急性病態の治療又は予防に使用するために提供され、前述の抗体、フラグメント又は足場が、成熟ヒトＡＤＭのａａ１−２１の配列中の好ましくは少なくとも４個又は少なくとも５個のアミノ酸の領域に結合することを特徴とする：
配列番号：２３
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC
【００９５】
本発明による別の特定の実施形態において、本明細書中に提供された抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＡＤＭのＣ末端部分、すなわち、ＡＤＭのａａ４３−５２（配列番号２５）に結合しない。
ＰＲＳＫＩＳＰＱＧＹ−ＮＨ２
（配列番号：２５）
【００９６】
１つの特定の実施形態において、本発明による抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場を使用することが好ましく、前述の抗アドレノメデュリン抗体、前述の抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場が、血清、血液、血漿中でのアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2；半減滞留時間（half retention time））を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体、アドレノメデュリン安定化抗体フラグメント又はアドレノメデュリン安定化非Ｉｇ足場である。
【００９７】
ＡＤＭの半減期（半減滞留時間）は、ＡＤＭの定量化のための免疫学的アッセイを使用して、それぞれＡＤＭ安定化抗体、アドレノメデュリン安定化抗体フラグメント又はアドレノメデュリン安定化非Ｉｇ足場の不存在及び存在下、ヒト血漿中で決定され得る。
【００９８】
以下のステップが行われ得る：
−ＡＤＭは、ＡＤＭ安定化抗体、それぞれアドレノメデュリン安定化抗体フラグメント又はアドレノメデュリン安定化非Ｉｇ足場の不存在及び存在下、ヒトクエン酸血漿中に希釈され、そして、２４℃にてインキュベートされ、
−選択された時点（例えば、２４時間以内）でアリコートが採取され、そして、ＡＤＭの分解は、−２０℃にて冷凍することによって、前述のアリコート中で止められ、
−選択されたアッセイが安定化抗体によって影響を受けないのであれば、ＡＤＭの量が、ｈＡＤＭ免疫学的アッセイによってそのまま測定されるか、あるいは、アリコートは、（ＨＣｌのような）変性剤で処理されてもよくて、（例えば、遠心分離による）サンプルのクリーニング後に、ｐＨが中和されることができ、そして、ＡＤＭ免疫学的アッセイによってＡＤＭが定量化されるか、あるいは、非免疫学的アッセイ技術（例えば、ｒｐＨＰＬＣ）がＡＤＭ定量化のために使用でき、
−ＡＤＭの半減期が、それぞれＡＤＭ安定化抗体、アドレノメデュリン安定化抗体フラグメント又はアドレノメデュリン安定化非Ｉｇ足場の不存在及び存在下でインキュベートされたＡＤＭに関して計算され、
−ＡＤＭ安定化抗体、アドレノメデュリン安定化抗体フラグメント又はアドレノメデュリン安定化非Ｉｇ足場の不存在でインキュベートされたＡＤＭと比較して、安定化ＡＤＭに関して向上した半減期が計算される。
【００９９】
ＡＤＭの半減期の二倍の延長は、１００％の半減期の向上である。
【０１００】
半減期（半減滞留時間）は、特定の液体又は血液中で特定の化学物質又は薬物の濃度がそのベースライン濃度の半分まで落ちるのに必要な期間と規定される。
【０１０１】
血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（半減滞留時間）の測定に使用され得るアッセイは、実施例３に記載されている。
【０１０２】
いくつかの疾患に関して、ＡＤＭを妨げることが、ある程度有益である可能性がある。しかしながら、特定の量のＡＤＭがいくつかの生理機能に必要である場合に、ＡＤＭが完全に中和されるのであれば、それはまた有害でもあるだろう。多くの報告では、ＡＤＭの投与が特定の疾患において有益であり得ると強調された。それとは対照的に、他の報告において、ＡＤＭは、ある病態で投与された場合に、生命を脅かすものであると報告された。
【０１０３】
好ましい実施形態において、前述の抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、非中和抗体、フラグメント又は足場である。中和抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＡＤＭの生理活性をほぼ１００％まで、少なくとも９０％超まで、好ましくは少なくとも９５％超まで妨げる。
【０１０４】
対照的に、非中和抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＡＤＭの生理活性を１００％未満、好ましくは９５％未満まで、好ましくは９０％未満まで、より好ましくは８０％未満まで、そして、より一層好ましくは５０％未満まで妨げる。これは、中和抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場が結合したＡＤＭの残存する生理活性が、０％超、好ましくは５％超、好ましくは１０％超、より好ましくは２０％超、より好ましくは５０％超であることを意味している。
【０１０５】
これに関連して、「非中和抗ＡＤＭ活性」を有する抗体、抗体フラグメント、非Ｉｇ足場である（単数若しくは複数の）分子は、分かりやすくするために、本明細書中では「非中和」抗ＡＤＭ抗体、抗体フラグメント、又は非Ｉｇ足場と総称され、例えば、ＡＤＭの生理活性を８０％未満までしか妨げない前記分子は、以下のとおり規定される：
【０１０６】
−ＡＤＭに結合する単数若しくは複数の分子であって、そしてそれは、ＣＲＬＲ（カルシトニン受容体様受容体）及びＲＡＭＰ３（受容体活性修飾タンパク質３）から構成された機能性ヒト遺伝子組み換えＡＤＭ受容体を発現する真核細胞株の培養物に添加したとき、並行して添加したヒト合成ＡＤＭペプチドの作用を通じて細胞株によって産生されるｃＡＭＰの量を低減する分子であって、前述の添加したヒト合成ＡＤＭが、分析すべき中和抗体の不存在下におけるｃＡＭＰ合成の半値最大刺激をもたらす量で添加されることを特徴とし、分析すべきＡＤＭに結合する（単数若しくは複数の）非中和分子が、分析すべき中和抗体を用いて得られるｃＡＭＰ合成の最大低減を得るのに必要である量より１０倍多い量で加えられたときであっても、ＡＤＭに結合する（単数若しくは複数の）前述の分子によるｃＡＭＰの低減が、８０％以下の程度までしか起こらないことを特徴とする。
【０１０７】
同じ定義は、他の範囲；９５％、９０％、５０％など、に適用される。
【０１０８】
本発明による特定の実施形態において、抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場が使用され、前述の抗体又は抗アドレノメデュリン抗体フラグメントが、ＡＤＭの生理活性を（基礎値の）８０％未満、好ましくは５０％未満までしか妨げない。これは、本発明による抗体、抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場が、ＡＤＭの生理活性をそれぞれ８０％以下、又は５０％以下しか阻害しないことを意味する。暗に、これは、本発明に従って抗体、抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場を使用したとき、少なくとも２０％の残存ＡＤＭ生理活性又は少なくとも５０％の残存ＡＤＭ生理活性が存在することを意味する。ＡＤＭの生理活性の前述の限定された阻害が、抗体、フラグメント又は足場の過剰な濃度（ＡＤＭとの関連で抗体、フラグメント又は足場の過剰を意味する）でさえ起こることは理解される。前述の限定された阻害は、ＡＤＭバインダー自体の固有特性である。これは、前述の抗体、フラグメント又は足場が、それぞれ８０％又は５０％の最大阻害を有することを意味する。好ましい実施形態において、前述の抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、少なくとも５％までＡＤＭの生理活性を妨げる。暗に、これは、約９５％の残存ＡＤＭ生理活性が存在していることを意味する。
【０１０９】
生理活性は、物質が、その相互作用後に、生体内又は試験管内で（例えば、アッセイで）生物、組織若しくは臓器又は機能単位に呈する効果と規定される。ＡＤＭ生理活性の場合には、これは、ヒト組換型アドレノメデュリン受容体ｃＡＭＰ機能アッセイにおけるＡＤＭの効果であり得る。これにより、本発明によれば、生理活性は、アドレノメデュリン受容体ｃＡＭＰ機能アッセイによって規定される。以下のステップが、そうしたアッセイにおけるＡＤＭの生理活性を測定するために行われ得る：
−用量反応曲線が、ＡＤＭを用いて前述のヒト組換型アドレノメデュリン受容体ｃＡＭＰ機能アッセイで作成される。
−半最大（half-maximal）ｃＡＭＰ刺激のＡＤＭ濃度が計算され得る。
−一定の半最大ｃＡＭＰを刺激ＡＤＭ濃度にて、用量反応曲線（最大１００μｇ／ｍｌの終濃度）が、それぞれＡＤＭ安定化抗体、アドレノメデュリン安定化抗体フラグメント又はアドレノメデュリン安定化非Ｉｇ足場によって作成される。
【０１１０】
前述のＡＤＭバイオアッセイにおける５０％の最大阻害は、前述の抗ＡＤＭ抗体、それぞれ前述の抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は前述の抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場が、生理活性の基礎値を５０％まで妨げることを意味する。前述のＡＤＭバイオアッセイにおける８０％の最大阻害は、それぞれ前述の抗ＡＤＭ抗体、前述の抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は前述の抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場が、ＡＤＭの生理活性を８０％まで妨げることを意味する。これは、８０％以下しかＡＤＭ生理活性を妨げないという意味である。これは、約２０％の残存ＡＤＭ生理活性が依然として存在しているという意味である。
【０１１１】
しかしながら、本明細書によると及び先の文脈において、本明細書中に開示している抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント、及び抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場に関連する「ＡＤＭの生理活性を妨げる」という表現は、最大でＡＤＭ生理活性が１００％〜２０％残存するちょっとしたＡＤＭ生理活性の低減、好ましくはＡＤＭ生理活性が１００％〜５０％残存するＡＤＭ生理活性の低減と理解されるべきであるが；どんな場合でも、先に詳しく述べたように測定できるＡＤＭ生理活性が存在する。
【０１１２】
ＡＤＭの生理活性は、実施例２に従ってヒト組換型アドレノメデュリン受容体ｃＡＭＰ機能アッセイ（アドレノメデュリン・バイオアッセイ）で測定され得る。
【０１１３】
好ましい実施形態において、調節抗ＡＤＭ抗体又は調節抗ＡＤＭ抗体フラグメントは、敗血症の治療に使用される。調節抗ＡＤＭ抗体又は調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメントは、敗血症の早期におけるＡＤＭの生理活性を亢進し、敗血症の後期におけるＡＤＭの損傷効果を低減する。「調節」抗ＡＤＭ抗体又は調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメントは、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性８０％まで、好ましくは５０％未満までしか阻害しない抗体である。
【０１１４】
好ましい実施形態において、調節抗ＡＤＭ抗体、調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は調節抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、血液循環を安定させるため、特に体循環を安定させるために、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法において使用される。
【０１１５】
そのような調節抗体、調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は調節抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、敗血症の治療で特に有用であり得る。調節抗体、調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は調節抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、敗血症早期においてＡＤＭの生理活性を亢進するので、そして、敗血症後期におけるＡＤＭの損傷効果を軽減する。
【０１１６】
好ましい実施形態において、抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、ＡＤＭ内、好ましくはヒトＡＤＭ内に含まれた長さが少なくとも５アミノ酸から成るエピトープに対し、そして、そこに結合できる。
【０１１７】
より好ましい実施形態において、抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、ＡＤＭ内、好ましくはヒトＡＤＭ内に含まれた長さが少なくとも４アミノ酸から成るエピトープに対し、そして、そこに結合できる。
【０１１８】
「調節」抗ＡＤＭ抗体、調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は調節抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満しか妨げず、且つ、前述の抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、ＡＤＭの生理活性を少なくとも５％までしか妨げない抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場である。半減期及び生理活性の阻害に関連するこれらの値は、これらの値を測定するための前述のアッセイとの関連で理解されなければならない。これは、それぞれ８０％以下又は５０％以下のＡＤＭの阻害を意味している。
【０１１９】
こうした調節抗アドレノメデュリン抗体、調節抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は調節抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、投与の投薬を容易にする利点を提供する。アドレノメデュリン生理活性の部分的阻害又は部分的低減と生体内の半減期の延長（アドレノメデュリン生理活性の増強）との組み合わせは、抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場の投薬の有益な簡便さにつながる。内因性アドレノメデュリン過剰（最大刺激、敗血症後期、ショック、低心拍出量相）の状況で、活性低下効果は、抗体、フラグメント又は足場の強い影響であり、アドレノメデュリンの（マイナス）効果を限定する。低い又は正常な内因性アドレノメデュリン濃度の場合には、抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場の生物学的効果は、（部分的に阻害による）低減又はアドレノメデュリン半減期を延長することによる増強の組み合わせである。半減期の効果が正味の阻害効果より強ければ、内因性アドレノメデュリンの生物学的活性は、敗血症早期（低アドレノメデュリン、高心拍出量相）において有益に増強される。これにより、非中和、且つ、調節抗抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗アドレノメデュリン非Ｉｇ足場は、特定の生理学的範囲内にＡＤＭの生理活性を保つためのＡＤＭ生理活性緩衝物質のように作用する。
【０１２０】
これにより、両敗血症期（早期及び後期）は、調節効果が生じた場合に、過剰な抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場治療から利益を得るので、例えば、敗血症における抗体／フラグメント／足場の投薬は、過剰濃度から選択され得る。過剰量とは：抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場の濃度が、例えば、敗血症、の後期（ショック）中の内因性アドレノメデュリンより高いことを意味している。これは、敗血症における調節抗体、調節フラグメント又は調節足場の場合に、投薬が以下のとおりであり得ることを意味する：
【０１２１】
敗血症性ショックにおける、アドレノメデュリンの濃度は、２２６＋／−６６ｆｍｏｌ／ｍｌであり（Nishio et al., "Increased plasma concentrations of adrenomedullin correlate with relaxation of vascular tone in patients with septic shock.", Crit Care Med. 1997, 25(6):953-7）、抗体、フラグメント又は足場の等モル濃度は、４２．５μｇ／ｌ血液、つまり（６ｌの血液量／８０ｋｇ体重に基づいて）３．２μｇ／ｋｇ体重である。過剰量とは、少なくとも（平均）敗血症性ショックアドレノメデュリン濃度の二倍、つまり、少なくとも＞３μｇの抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント、抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場／ｋｇ体重、好ましくは、少なくとも６．４μｇの抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場／ｋｇ体重を意味する。好まれるのは＞１０μｇ／ｋｇ、より好まれるのは＞２０μｇ／ｋｇ、最も好まれるのは＞１００μｇの抗アドレノメデュリン抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場／ｋｇ体重である。これはまた、敗血症性ショック以外の重篤な急性病態に適用され得る。
【０１２２】
本発明の特定の実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体であるか、又はそのフラグメントである。本発明の一実施形態において、抗ＡＤＭ抗体又は抗ＡＤＭ抗体フラグメントは、ヒト抗体若しくはヒト化抗体であるか、又はそれらから誘導される。具体的な一実施形態において、１若しくは複数の（マウス）ＣＤＲが、ヒト抗体若しくは抗体フラグメント内にグラフトされる。
【０１２３】
一態様において、本発明の対象は、ＡＤＭに結合するヒトＣＤＲグラフト抗体又はその抗体フラグメントであって、前記ヒトＣＤＲグラフト抗体又はその抗体フラグメントが、以下の：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
及び／又は
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含む抗体重鎖（Ｈ鎖）を含んで成り、及び／又は以下の抗体軽鎖（Ｌ鎖）：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
及び／又は
配列番号：６
FQGSHIPYT
をさらに含んで成ることを特徴とする。
【０１２４】
本発明の具体的な一実施形態において、本発明の対象は、ＡＤＭに結合するヒトモノクローナル抗体又はＡＤＭに結合するその抗体フラグメントであって、その重鎖が、以下の：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成る群から選択された少なくとも１つのＣＤＲを含むことを特徴とし、且つ、その軽鎖が、以下の：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成る群から選択された少なくとも１つのＣＤＲを含むことを特徴とする。
【０１２５】
本発明のより具体的な実施形態、本発明の対象は、ＡＤＭに結合するヒトモノクローナル抗体又はＡＤＭに結合するその抗体フラグメントであって、その重鎖が、以下の配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成ることを特徴とし、且つ、その軽鎖が、以下の配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成ることを特徴とする。
【０１２６】
非常に具体的な実施形態において、抗ＡＤＭ抗体は：配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４を含んで成る群から選択された配列を有する。
【０１２７】
本発明による抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、親和定数が１０-7Ｍ超であり、好まれるのは１０-8Ｍであり、好まれる親和性は１０-9Ｍ超であり、最も好まれるのは１０-10Ｍ超であるような、ヒトＡＤＭに対する親和性を呈する。当業者は、高い用量の化合物を適用することよって低い親和性を補うと判断されることは知っているので、この測定が、本発明の範囲外につながることはないであろう。親和定数は、実施例１に記載の方法に従って測定され得る。
【０１２８】
好ましい実施形態において、抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、前述の慢性若しくは急性疾患又は患者の急性病態の間の死亡リスクを低減するために使用される。
【０１２９】
本発明による慢性若しくは急性疾患又は急性病態は、例えば、髄膜炎、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症のような重症感染症；糖尿病、癌のような他の疾患、例えば、心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性若しくは慢性の血管疾患；例えば、敗血症性ショックのようなショック、並びに、例えば、腎機能障害、肝機能障害、急性心筋梗塞、急性脳卒中のような臓器機能障害、多発外傷事象、熱傷、外科手術、中毒、化学療法による損傷を含んで成る群から選択される疾患又は病態であり得る。本発明の抗体、フラグメント又は足場は、敗血症及び敗血症性ショック、すなわち、敗血症後期の間の死亡リスクを低減するために特に有効である。
【０１３０】
好ましい実施形態において、抗体又は抗体フラグメントは、前述の患者の慢性又は急性疾患の間の死亡リスクを低減するために使用され、前述の疾患は、敗血症、糖尿病、癌、例えば心不全のような急性及び慢性血管疾患、例えば敗血症ショックのようなショック、並びに例えば腎機能障害のような臓器機能障害を含んで成る群から選択される。敗血症及び敗血症ショック、すなわち、敗血症の後期の間の死亡リスクを低減するために本発明による抗体又はフラグメントは、特に有効である。
【０１３１】
好ましい実施形態において、調節抗体又は調節アドレノメデュリン抗体フラグメントは、敗血症の治療に使用される。調節抗体は、敗血症の早期におけるＡＤＭの生理活性を亢進し、敗血症の後期におけるＡＤＭの損傷効果を低減する。「調節」抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメントは、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性８０％まで、好ましくは５０％未満までしか阻害しない抗体である。
【０１３２】
一実施形態において、抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、本発明による患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法で使用されるが、前述の患者がＩＣＵの患者であることを特徴とする。別の実施形態において、抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、本発明による患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用されるが、前述の患者が重症であることを特徴とする。重症とは、患者に死亡の可能性がある又はそれが差し迫っている疾患又は健康状態にあることを意味する。
【０１３３】
本発明の対象は、本発明による患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた更なる抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前述の抗体、フラグメント又は足場が、ＡＤＭ結合タンパク質との組み合わせで使用されることを特徴とする。ＡＤＭ結合タンパク質もまた、前述の患者の血液循環中に普通に存在している。
【０１３４】
ＡＤＭ結合タンパク質という用語はまた、ＡＤＭ結合タンパク質１（補体因子Ｈ）も意味することを強調しなければならないが、しかしながら、前記ＡＤＭ結合タンパク質１は、本発明によるような非中和の調節抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント、又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場でない。
【０１３５】
本発明の対象は、本発明による患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた更なる抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前述の抗体、フラグメント、足場が、更なる有効成分と組み合わせて使用されることを特徴とする。
【０１３６】
本発明の対象はまた、一次薬剤と組み合わせて使用されるべき抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場でもあって、前述の組み合わせは、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、前述の患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のためのものである。
【０１３７】
一次薬剤は、前述の疾患又は病態の主原因に対して作用する薬剤を意味する。前述の一次薬剤は、感染症の場合には抗生物質であり得る。
【０１３８】
以前に触れた組み合わせの特定の実施形態において、前述の組み合わせは、昇圧薬、例えばカテコールアミンと組み合わせて使用されるべきであって、前述の組み合わせは、患者の慢性若しくは急性の疾患又は病態の治療法における使用に向けた、前述の患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のためのものである。
【０１３９】
本発明の一実施形態において、前述の患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減を必要としている慢性若しくは急性疾患又は慢性病態に罹患している前述の患者は、患者が昇圧薬の投与、例えばカテコールアミン投与を受ける必要性を特徴とする。
【０１４０】
これにより、具体的な一実施形態における本発明の対象は、昇圧薬治療、例えば、カテコールアミン治療を必要としている患者の治療法における使用に向けたＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせて使用される抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。
【０１４１】
先に触れた組み合わせの特定の実施形態において、前述の組み合わせは、静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用されるべきであって、前述の組み合わせは、患者の慢性若しくは急性の疾患又は病態の治療法における使用に向けた、前述の患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のためのものである。
【０１４２】
本発明の一実施形態において、前述の患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減を必要としている慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している前述の患者は、患者が静脈内輸液を受ける必要性を特徴とする。
【０１４３】
これにより、具体的な一実施形態における本発明の対象は、静脈内輸液を必要としている患者の治療法における使用に向けたＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせた、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。
【０１４４】
本発明によれば、ＡＤＭ結合タンパク質１はまた、ＡＤＭ結合タンパク質１（補体因子Ｈ）とも呼ばれ得る。
【０１４５】
本発明の特定の一実施形態において、抗アドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ抗体フラグメント又はアドレノメデュリンに結合する抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場は、患者の急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けて提供され、前述の抗体、フラグメント又は足場は、ＡＤＭの結合タンパク質１（補体因子Ｈ）ではない。
【０１４６】
ＡＤＭ結合タンパク質という用語はまた、ＡＤＭ結合タンパク質１（補体因子Ｈ）も意味すると強調されなければならないが、しかしながら、それは、本発明によるとおり非中和性の調節抗ＡＤＭ抗体、抗ＡＤＭ抗体フラグメント、又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場ではない。
【０１４７】
前述の抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場、或いは、ＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分とそれらの組み合わせは、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、前述の患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のための、昇圧薬、例えば、カテコールアミン及び／又は静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用され得る。
【０１４８】
本発明の対象はまた、ＴＮＦ−α抗体と組み合わせて使用される、本発明による抗ＡＤＭ抗体、抗アドレノメデュリン抗体フラグメント又は抗ＡＤＭ非Ｉｇ足場である。ＴＮＦ−α抗体は、患者の治療向けに市販されている。
【０１４９】
本発明の対象は、本発明による抗体、フラグメント、又は足場を含んで成る更なる医薬製剤である。
【０１５０】
本発明の対象は、本発明による更なる医薬製剤であって、前述の医薬製剤が、溶液である、好ましくはすぐに使用できる溶液であることを特徴とする。
【０１５１】
前述の医薬製剤は、筋肉内に投与されてもよい。前述の医薬製剤は、血管内に投与されてもよい。前述の医薬製剤は、輸液を介して投与されてもよい。
【０１５２】
別の実施形態において、本発明の対象は、本発明による更なる医薬製剤であって、前述の医薬製剤は、筋肉内に投与される。
【０１５３】
別の実施形態において、本発明の対象は、本発明による更なる医薬製剤であって、前述の医薬製剤は、血管内に投与される。
【０１５４】
別の実施形態において、本発明の対象は、本発明による更なる医薬製剤であって、前述の医薬製剤は、輸液を介して投与される。
【０１５５】
本発明による医薬製剤が、筋肉内に、血管内に、又は輸液を介して投与され得る場合、慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のために、患者に全身投与されることが好ましい。
【０１５６】
そのため、本発明の別の実施形態において、本発明による医薬製剤は、慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のために、患者に全身投与されるべきである。
【０１５７】
本発明の別の特定の好ましい実施形態において、本発明による医薬製剤は、慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の臓器機能障害又は臓器不全の予防又は軽減のために、患者に輸液を介して全身投与されるべきである。
【０１５８】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０１５９】
１．  体液平衡の調整のための、患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６０】
２．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６１】
３．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に結合する、請求項１又は２に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６２】
４．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６３】
５．  前記抗体又はフラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体又はＡＤＭ安定化抗体フラグメントである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６４】
６．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６５】
７．  前記疾患が、敗血症、糖尿病、癌、心不全、ショック、及び腎機能障害を含んで成る群から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６６】
８．  前記患者がＩＣＵの患者である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６７】
９．  前記抗体又はフラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げる調節抗体又はフラグメントである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１６８】
１０．  請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体又はフラグメントを含んで成る医薬製剤。
【０１６９】
１１．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１０に記載の医薬製剤。
【０１７０】
１２．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１０に記載の医薬製剤。
【０１７１】
１３．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０１７２】
１４．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０１７３】
１５．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１４に記載の医薬製剤。
【０１７４】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０１７５】
１．  体液平衡の調整のための、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１７６】
２．  前記ＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場が、非中和ＡＤＭ抗体、非中和アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非中和ＡＤＭ非Ｉｇ足場である、請求項１に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１７７】
３．  前記患者の水腫を予防するか又は低減するための、請求項１又は２に記載の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１７８】
４．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１７９】
５．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１８０】
６．  前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１８１】
７．  前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体、ＡＤＭ安定化抗体フラグメント又はＡＤＭ安定化非Ｉｇ足場である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１８２】
８．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１８３】
９．  前記疾患が、ＳＩＲＳ、敗血症、糖尿病、癌、心不全、ショック、及び腎機能障害を含んで成る群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１８４】
１０．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメントであり、前記重鎖が以下の配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成り、且つ、前記軽鎖が以下の配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０１８５】
１１．  前記抗体又はフラグメントが、以下の配列を含んで成る群から選択される配列を含んで成る、請求項１０に記載のＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメント：
【０１８６】
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０１８７】
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０１８８】
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０１８９】
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０１９０】
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０１９１】
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE
【０１９２】
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０１９３】
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０１９４】
１２．  前記患者がＩＣＵの患者である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１９５】
１３．  前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げる調節抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１９６】
１４．  カテコールアミン及び／又は静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０１９７】
１５．  ＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせて使用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用に向けたＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場、或いは請求項１２に記載の組み合わせ。
【０１９８】
１６．  請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、フラグメント又は足場を含んで成る医薬製剤。
【０１９９】
１７．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１６に記載の医薬製剤。
【０２００】
１８．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１６に記載の医薬製剤。
【０２０１】
１９．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１６〜１７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０２０２】
２０．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１６〜１７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０２０３】
２１．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項２０に記載の医薬製剤。
【０２０４】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０２０５】
１．  血液循環の安定化のための、患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２０６】
２．  前記抗体又はフラグメントが、前記患者のカテコールアミン要求量を低減する、請求項１に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２０７】
３．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１又は２に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２０８】
４．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末部分（ａａ１−２１）に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２０９】
５．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２１０】
６．  前記抗体又はフラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２１１】
７．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２１２】
８．  前記抗体又はフラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げる調節ＡＤＭ抗体又は調節アドレノメデュリン抗体フラグメントである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２１３】
９．  前記疾患が、敗血症、糖尿病、癌、例えば心不全のような急性若しくは慢性血管疾患、例えば敗血症性ショックのようなショック、及び、例えば腎機能障害のような臓器機能障害を含んで成る群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２１４】
１０．  請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を含んで成る医薬製剤。
【０２１５】
１１．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１０に記載の医薬製剤。
【０２１６】
１２．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１０に記載の医薬製剤。
【０２１７】
１３．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０２１８】
１４．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０２１９】
１５．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１４に記載の医薬製剤。
【０２２０】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０２２１】
１．  血液循環の安定化のための、患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２２】
２．  前記抗体、フラグメント又は足場が、前記患者の昇圧薬の要求量、例えばカテコールアミン要求量を低減する、請求項１に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２３】
３．  前記ＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場が、非中和ＡＤＭ抗体、非中和アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非中和ＡＤＭ非Ｉｇ足場である、請求項１又は２に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２４】
４．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２２５】
５．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２６】
６．  前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２７】
７．  前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２８】
８．  前記抗体、フラグメント又は足場が、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２２９】
９．  前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げる調節ＡＤＭ抗体、調節アドレノメデュリン抗体フラグメント又は足場である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２３０】
１０．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメントであり、前記重鎖が以下の配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成り、且つ、前記軽鎖が以下の配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２３１】
１１．  前記抗体又はフラグメントが、以下の配列を含んで成る群から選択される配列を含んで成る、請求項１０に記載のＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメント：
【０２３２】
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２３３】
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２３４】
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２３５】
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２３６】
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２３７】
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE
【０２３８】
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２３９】
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２４０】
１２．  前記疾患が、ＳＩＲＳ、敗血症、糖尿病、癌、例えば心不全のような急性若しくは慢性血管疾患、例えば敗血症性ショックのようなショック、及び、例えば腎機能障害のような臓器機能障害を含んで成る群から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２４１】
１３．  カテコールアミン及び／又は静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２４２】
１４．  ＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせて使用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用に向けたＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場、或いは請求項１０に記載の組み合わせ。
【０２４３】
１５．  請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗体、フラグメント又は非Ｉｇ足場を含んで成る医薬製剤。
【０２４４】
１６．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１５に記載の医薬製剤。
【０２４５】
１７．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１５に記載の医薬製剤。
【０２４６】
１８．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１５〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０２４７】
１９．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０２４８】
２０．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１６に記載の医薬製剤。
【０２４９】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０２５０】
１．  慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメントであって、前記抗体又は前記フラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体又はフラグメントであることを特徴とし、及び／又は前記抗体が、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げることを特徴とする、アドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５１】
２．  慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメントであって、前記抗体又は前記フラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長する調節ＡＤＭ抗体又はフラグメントであり、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げることを特徴とする、アドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５２】
３．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末部分（ａａ１−２１）に結合する、請求項１又は２に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５３】
４．  請求項３に記載の前記抗体又は前記フラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端端部に結合する、慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５４】
５．  前記抗体又は前記フラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体又はフラグメントである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５５】
６．  前記抗体又は前記フラグメントが、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５６】
７．  前記疾患が、ＳＩＲＳ、敗血症、敗血症性ショック、糖尿病、癌、心不全、ショック、臓器不全、腎機能障害、急性体液恒常性障害、及び低血圧を含んで成る群から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５７】
８．  前記疾患が、敗血症性ショック又は敗血症である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５８】
９．  前記抗体又はフラグメントが、前記患者の体液平衡を調整する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２５９】
１０．  前記抗体又はフラグメントが臓器機能障害又は臓器不全の予防に使用される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６０】
１１．  前記抗体又はフラグメントが、腎機能障害又は腎不全の予防に使用される、請求項１０に記載の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６１】
１２．  前記抗体又はフラグメントが、血液循環の安定化に使用される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６２】
１３．  前記抗体又はフラグメントが、前記患者のカテコールアミン要求量を低減する、請求項１２に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６３】
１４．  前記患者の死亡リスクの低減のための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６４】
１５．  前記抗体又はフラグメントが、少なくとも３μｇ／ｋｇ体重の用量で投与され得る、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６５】
１６．  請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体又はフラグメントを含んで成る医薬組成物。
【０２６６】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０２６７】
１．  アドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前記抗体、前記フラグメント又は足場が、非中和抗体であることを特徴とするもの。
【０２６８】
２．  アドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前記抗体、前記フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体、フラグメント又は足場であることを特徴とし、及び／又は前記抗体、フラグメント又は足場が、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げることを特徴とする、アドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２６９】
３．  アドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前記抗体又は前記フラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長する調節ＡＤＭ抗体、フラグメント又は足場であり、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げることを特徴とする、アドレノメデュリン抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２７０】
４．  前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末部分（ａａ１−２１）に結合する、請求項１又は２に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２７１】
５．  請求項３に記載の前記抗体、前記フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部に結合する、アドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２７２】
６．  前記抗体、前記フラグメント又は前記足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体又はフラグメントである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２７３】
７．  活性な医薬物質としての使用に向けた、請求項１〜６のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２７４】
８．  前記疾患又は病態が、例えば、髄膜炎、全身的炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症のような重症感染症；糖尿病、癌のような他の疾患、例えば、心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性若しくは慢性血管疾患；例えば、敗血症性ショックのようなショック、並びに、例えば、腎機能障害、肝機能障害のような臓器機能障害、熱傷、外科手術、外傷を含んで成る群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２７５】
９．  前記疾患が、敗血症性ショック又は敗血症である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２７６】
１０．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメントであり、前記重鎖が以下の配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
の少なくとも１つを含んで成り、及び／又は前記軽鎖が以下の配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
の少なくとも１つを含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０２７７】
１１．  前記抗体又はフラグメントが、以下の配列を含んで成る群から選択される配列を含んで成る、請求項１０に記載のＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメント：
【０２７８】
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２７９】
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２８０】
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２８１】
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２８２】
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０２８３】
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE
【０２８４】
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２８５】
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２８６】
１２．  慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の体液平衡を調整するための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２８７】
１３．  慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の臓器機能障害又は臓器不全を予防又は軽減するための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２８８】
１４．  前記臓器が、腎臓又は肝臓である、請求項１３に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２８９】
１５．  慢性若しくは急性疾患又は急性病態に罹患している患者の血液循環の安定化のための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２９０】
１６．  前記抗体又はフラグメントが、前記患者のカテコールアミン要求量を低減する、請求項１５に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２９１】
１７．  昇圧薬、例えば、カテコールアミンと組み合わせて使用される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２９２】
１８．  静脈内輸液投与と組み合わせて使用される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２９３】
１９．  ＴＮＦ−α抗体と組み合わせて使用される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０２９４】
２０．  前記抗体又はフラグメントが、少なくとも３μｇ／ｋｇ体重の用量で投与され得る、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のそれを必要としている患者の治療における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場。
【０２９５】
２１．  請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体、フラグメント又は足場を含んで成る医薬組成物。
【０２９６】
２２．  慢性若しくは急性疾患又は慢性の病態の治療における使用に向けた、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場。
【０２９７】
２３．  前記疾患が敗血症である、請求項２２に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非Ｉｇ足場。
【０２９８】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０２９９】
１．  患者の重篤な慢性又は急性疾患の治療法における使用に向けた、前記患者の死亡リスクの低減のためのアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３００】
２．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０１】
３．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に結合する、請求項１又は２に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０２】
４．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０３】
５．  前記抗体又はフラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体又はフラグメントである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０４】
６．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０５】
７．  前記疾患が、敗血症、糖尿病、癌、心不全、ショック、及び腎機能障害を含んで成る群から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０６】
８．  前記患者がＩＣＵの患者である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０７】
９．  前記死亡リスクが、有害事象を予防することによって低減される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメントであって、後者が、ＳＩＲＳ、敗血症、敗血症性ショック、臓器不全、腎不全、体液恒常性障害、及び低血圧を含んで成る群から選択されるＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０８】
１０．  請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患の治療における使用のためのＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメントであって、斯かる抗体又はフラグメントが、ADM結合タンパク質との組み合わせで使用される、ＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３０９】
１１．  請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体又はフラグメントを含んで成る医薬製剤。
【０３１０】
１２．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１１に記載の医薬製剤。
【０３１１】
１３．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１１に記載の医薬製剤。
【０３１２】
１４．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３１３】
１５．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３１４】
１６．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１５に記載の医薬製剤。
【０３１５】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０３１６】
１．  患者の重篤な慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、前記患者の死亡リスクの低減のためのアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前記抗体、フラグメント又は足場が、非中和ＡＤＭ抗体、非中和アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非中和ＡＤＭ非Ｉｇ足場であることを特徴とするもの。
【０３１７】
２．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３１８】
３．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に結合する、請求項１又は２に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３１９】
４．  前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２０】
５．  前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２１】
６．  前記抗体、フラグメント又は足場が、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２２】
７．  前記疾患が、例えば、髄膜炎、全身的炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症のような重症感染症；糖尿病、癌のような他の疾患、例えば、心不全、心筋梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症のような急性若しくは慢性血管疾患；例えば、敗血症性ショックのようなショック、並びに、例えば、腎機能障害、肝機能障害のような臓器機能障害、熱傷、外科手術、外傷を含んで成る群から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療における使用向けアドレノメデュリン抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２３】
８．  請求項１〜７のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前記疾患が、ＳＩＲＳ、重症感染症、敗血症、例えば、敗血症性ショックのようなショックを含んで成る群から選択されることを特徴とするＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２４】
９．  前記患者が、ＩＣＵの患者である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けたＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２５】
１０．  前記死亡リスクが、有害事象を予防することによって低減される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、後者が、ＳＩＲＳ、敗血症、例えば敗血症性ショックのようなショック、例えば急性心不全、心筋梗塞、脳卒中のような急性若しくは慢性血管疾患、例えば腎不全、肝不全のような臓器不全、体液恒常性障害、並びに低血圧を含んで成る群から選択されるＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３２６】
１１．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメントであり、前記重鎖が以下の配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成り、且つ、前記軽鎖が以下の配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３２７】
１２．  前記抗体又はフラグメントが、以下の配列を含んで成る群から選択される配列を含んで成る、請求項１０に記載のＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメント：
【０３２８】
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３２９】
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３３０】
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３３１】
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３３２】
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３３３】
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE
【０３３４】
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０３３５】
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０３３６】
１３．  昇圧薬、例えば、カテコールアミン及び／又は静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３３７】
１４．  ＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせて使用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用に向けたＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場、或いは請求項１０に記載の組み合わせ。
【０３３８】
１５．  請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗体、フラグメント又は足場を含んで成る医薬製剤。
【０３３９】
１６．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１５に記載の医薬製剤。
【０３４０】
１７．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１５に記載の医薬製剤。
【０３４１】
１８．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１５〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３４２】
１９．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１５〜１６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３４３】
２０．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１９に記載の医薬製剤。
【０３４４】
２１．  ＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場であって、前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリン、好ましくはヒトＡＤＭ、のＮ末端部（ａａ１−２１）に結合することを特徴とするもの。
【０３４５】
２２．  前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１２に記載の抗体、フラグメント又は足場。
【０３４６】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０３４７】
１．  臓器機能障害又は臓器不全の予防のための、患者の慢性若しくは急性疾患の治療法における使用向けアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３４８】
２．  前記臓器は腎臓である、請求項１に記載の慢性若しくは急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３４９】
３．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５０】
４．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末部分（ａａ１−２１）に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５１】
５．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５２】
６．  前記抗体又は前記フラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体又はフラグメントである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５３】
７．  前記抗体が、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５４】
８．  前記疾患が、敗血症、糖尿病、癌、心不全、及びショックを含んで成る群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５５】
９．  前記患者がＩＣＵの患者である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５６】
１０．  前記抗体又はフラグメントが、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げる調節抗体又はフラグメントである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３５７】
１１．  請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体又はフラグメントを含んで成る医薬製剤。
【０３５８】
１２．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１１に記載の医薬製剤。
【０３５９】
１３．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１１に記載の医薬製剤。
【０３６０】
１４．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３６１】
１５．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３６２】
１６．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１５に記載の医薬製剤。
【０３６３】
本発明の範囲内の更なる実施形態は、以下に示される：
【０３６４】
１．  患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けた、前記患者臓器機能障害の予防若しくは軽減、又は臓器不全の予防のためのアドレノメデュリン（ＡＤＭ）抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３６５】
２．  前記臓器が、腎臓又は肝臓である、請求項１に記載の慢性若しくは急性疾患又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３６６】
３．  前記ＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場が、非中和ＡＤＭ抗体、非中和アドレノメデュリン抗体フラグメント又は非中和ＡＤＭ非Ｉｇ足場である、請求項１又は２に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３６７】
４．  前記抗体の形式が、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、（Ｆａｂ）2フラグメント及びｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含んで成る群から選択される、請求項１又は３に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３６８】
５．  前記抗体又はフラグメントが、アドレノメデュリンのＮ末端部（ａａ１−２１）に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３６９】
６．  前記抗体、フラグメント又は足場が、アドレノメデュリンのＮ末端端部（ａａ１）を認識又は結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３７０】
７．  前記抗体、前記フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンのｔ1/2半減滞留時間を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長するＡＤＭ安定化抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３７１】
８．  前記抗体、フラグメント又は足場が、ＡＤＭの生理活性を８０％未満まで、好ましくは５０％未満まで妨げる、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３７２】
９．  前記疾患が、敗血症、糖尿病、癌、心不全、及びショックを含んで成る群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３７３】
１０．  前記抗体又はフラグメントが、ＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメントであり、前記重鎖が以下の配列：
配列番号：１
GYTFSRYW
配列番号：２
ILPGSGST
配列番号：３
TEGYEYDGFDY
を含んで成り、且つ、前記軽鎖が以下の配列：
配列番号：４
QSIVYSNGNTY
配列番号：５
RVS
配列番号：６
FQGSHIPYT
を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＡＤＭ抗体又はアドレノメデュリン抗体フラグメント。
【０３７４】
１１．  前記抗体又はフラグメントが、以下の配列を含んで成る群から選択される配列を含んで成る、請求項１０に記載のＡＤＭ又はその抗体フラグメントに結合するヒトモノクローナル抗体又はフラグメント：
【０３７５】
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３７６】
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３７７】
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３７８】
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３７９】
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０３８０】
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE
【０３８１】
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０３８２】
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０３８３】
１２．  前記抗体、フラグメント又は足場が、血清、血液、血漿中のアドレノメデュリンの半減期（ｔ1/2半減滞留時間）を少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは＞５０％、最も好ましくは＞１００％延長し、且つ、ＡＤＭの生理活性を８０％未満、好ましくは５０％未満まで妨げる調節抗体、フラグメント又は足場である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の患者の慢性又は急性疾患の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３８４】
１３．  昇圧薬、例えばカテコールアミン及び／又は静脈内に投与される輸液と組み合わせて使用される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用向けＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場。
【０３８５】
１４．  ＡＤＭ結合タンパク質及び／又は更なる有効成分と組み合わせて使用される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の患者の慢性若しくは急性疾患又は急性病態の治療法における使用に向けたＡＤＭ抗体、アドレノメデュリン抗体フラグメント又はＡＤＭ非Ｉｇ足場、或いは請求項１３に記載の組み合わせ。
【０３８６】
１５．  請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体又はフラグメントを含んで成る医薬製剤。
【０３８７】
１６．  前記医薬製剤が、溶液であり、好ましくはすぐに使用できる溶液である、請求項１４に記載の医薬製剤。
【０３８８】
１７．  前記医薬製剤が、凍結乾燥状態にある、請求項１４に記載の医薬製剤。
【０３８９】
１８．  前記医薬製剤が、筋肉内に投与される、請求項１４〜１５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３９０】
１９．  前記医薬製剤が、血管内に投与される、請求項１４〜１５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【０３９１】
２０．  前記医薬製剤が、輸液を介して投与される、請求項１８に記載の医薬製剤。
【図面の簡単な説明】
【０３９２】
【図１ａ】抗体形式の例示−Ｆｖ及びｓｃＦｖ−バリアント
【図１ｂ】抗体様式の例示−ヘテロロガス融合抗体及び二機能性抗体
【図１ｃ】抗体様式の例示−二価抗体及び二重特異性抗体
【図２】ｈＡＤＭ１−５２（配列番号２１）、ｍＡＤＭ１−５０（配列番号２２）、ヒトＡＤＭ（配列番号２３）のａａ１−２１、ヒトＡＤＭ（配列番号２４）のａａ１−４２、ヒトＡＤＭ（配列番号２５）のａａ４３−５２、ヒトＡＤＭ（配列番号２６）のａａ１−１４、ヒトＡＤＭ（配列番号２７）のａａ１−１０、ヒトＡＤＭ（配列番号２８）のａａ１−６、ヒト成熟ヒトＡＤＭ（配列番号２９）のａａ１−３２、成熟マウスＡＤＭ（配列番号３０）のａａ１−４０、成熟マウスＡＤＭ（配列番号３１）のａａ１−３１
【図３ａ】ヒトＡＤＭの用量反応曲線。最大ｃＡＭＰ刺激を１００％活性化に調整した。
【図３ｂ】５．６３ｎＭのｈＡＤＭの存在下でのヒトＡＤＭ２２−５２（ＡＤＭ受容体拮抗物質）の用量／阻害曲線。
【図３ｃ】５．６３ｎＭのｈＡＤＭの存在下でのＣＴ−Ｈの用量／阻害曲線。
【図３ｄ】５．６３ｎＭのｈＡＤＭの存在下でのＭＲ−Ｈの用量／阻害曲線。
【図３ｅ】５．６３ｎＭのｈＡＤＭの存在下でのＮＴ−Ｈの用量／阻害曲線。
【図３ｆ】マウスＡＤＭの用量反応曲線。最大ｃＡＭＰ刺激を１００％活性化に調整した。
【図３ｇ】０．６７ｎＭのｍＡＤＭの存在下でのヒトＡＤＭ２２−５２（ＡＤＭ受容体拮抗物質）の用量／阻害曲線。
【図３ｈ】０．６７ｎＭのｍＡＤＭの存在下でのＣＴ−Ｍの用量／阻害曲線。
【図３ｉ】０．６７ｎＭのｍＡＤＭの存在下でのＭＲ−Ｍの用量／阻害曲線。
【図３ｊ】０．６７ｎＭのｍＡＤＭの存在下でのＮＴ−Ｍの用量／阻害曲線。
【図３ｋ】Ｆ（ａｂ）2ＮＴ−Ｍ及びＦａｂ ＮＴ−ＭによるＡＤＭの阻害を示す。
【図３ｌ】Ｆ（ａｂ）2ＮＴ−Ｍ及びＦａｂ ＮＴ−ＭによるＡＤＭの阻害を示す。
【図４】この図面は、典型的なｈＡＤＭ用量／シグナル曲線、及び１００μｇ／ｍＬの抗体ＮＴ−Ｈの存在下でのｈＡＤＭ用量シグナル曲線を示す。
【図５】この図面は、ＮＴ−Ｈ抗体の不存在及び存在下でのヒト血漿（クエン酸）中のｈＡＤＭの安定性を示す。
【図６】相同ヒトフレームワーク配列を用いたＦａｂのアラインメント
【図７】この図面は、ＮＴ−Ｍを用いた早期及び後期治療のためのノルアドレナリン要求量を示す。
【図８】この図面は、ＮＴ−Ｍを用いた早期及び後期治療後の尿産生量を示す。
【図９】この図面は、ＮＴ−Ｍを用いた早期及び後期治療後の体液平衡を示す。
【図１０】電気泳動の移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）によって分析したＢ細胞内の核内因子κ軽鎖遺伝子エンハンサ（ＮＦκＢ）の肝臓組織活性化。＃は、ビヒクルに対してｐ＜０．００１であることを示す。
【図１１】経時的な血清クレアチニンの推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図１２】経時的な血中尿素窒素（ＢＵＮ）の推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図１３】経時的な内因性クレアチニンクリアランスの推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図１４】経時的なＮａ+の微量な分泌の推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図１５】抽出総腎臓タンパク質に対する実測角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）レベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図１６】抽出総肝臓タンパク質に対する実測角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）レベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図１７】血漿ＩＬ−６レベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図１８】血漿ＩＬ−１０レベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図１９】血漿角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）レベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図２０】血漿単球走化性因子（ＭＣＰ−１）レベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図２１】血漿ＴＮＦ−αレベル。白色のボックスプロットは、ビヒクルで得た結果を示し、灰色のボックスプロットは、ＮＴ−Ｍでの治療後に得た結果を示す。
【図２２】経時的な血中尿素窒素（ＢＵＮ）の推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図２３】経時的な血清クレアチニンの推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図２４】経時的な内因性クレアチニンクリアランスの推移。平均＋／−ＳＥＭを示す。
【実施例】
【０３９３】
本発明による実施例部分の抗体、抗体フラグメント、及び非Ｉｇ足場が、ＡＤＭに結合しており、これにより、抗ＡＤＭ非抗体／抗体フラグメント／Ｉｇ足場とみなされるはずであることを強調すべきである。
【０３９４】
実施例１
抗体の作製とそれらの親和定数の測定
いくつかのヒト及びマウスの抗体を作り出し、そして、それらの親和定数を測定した（表１及び２を参照のこと）。
【０３９５】
免疫化のためのペプチド／コンジュゲート：
そのペプチドのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）へのコンジュゲーションのための（選択されたＡＤＭ配列内にシステインが存在していなければ）追加のＮ末端システイン残基を伴う、免疫化のためのペプチドを合成した、表１を参照のこと、（JPT Technologies, Berlin, Germany）。そのペプチドを、Ｓｕｌｆｏｌｉｎｋカップリングゲル（Perbio-science, Bonn, Germany）を使用することによってＢＳＡに共有結合により連結した。カップリング手順を、Perbioのマニュアルに従って実施した。
【０３９６】
以下の方法に従って、マウス抗体は作り出した：
Ｂａｌｂ／ｃマウスを、０日目と１４日目に１００μｇのペプチド−ＢＳＡ−コンジュゲート（１００μｌの完全フロイントアジュバント中に乳化させた）を用いて、そして、２１日目と２８日目に（１００μｌの不完全フロイントアジュバンド中の）５０μｇを用いて免疫した。融合実験を実施する３日前に、動物に、１回の腹腔内注射及び１回の静脈内注射として投与される、１００μｌの生理食塩水中に溶解した５０μｇの前記コンジュゲートを与えた。
【０３９７】
免疫されたマウスからの脾細胞及び骨髄腫細胞株ＳＰ２／０の細胞を、５０％のポリエチレングリコール１ｍｌを用いて３７℃にて３０秒間、融合させた。洗浄後に、その細胞を９６ウェル細胞培養プレート内に播種した。ハイブリッドクローンを、ＨＡＴ培地［２０％のウシ胎仔血清及びＨＡＴサプリメントを補ったＲＰＭＩ１６４０培地］中で培養することによって選択した。２週間後に、３回の継代の間に、ＨＡＴ培地をＨＴ培地に置き換え、それに続いて、正常細胞培地に戻した。
【０３９８】
細胞培養上清を、融合３週間後に、まず抗原特異的なＩｇＧ抗体についてスクリーニングした。陽性の試験された微量の培養物を、繁殖のために２４ウェルプレートに移した。再テストした後に、選択された培養物を、クローン化し、限界希釈を使用することで再度クローン化し、そして、アイソタイプを決定した（Lane, R.D. (1985). A short-duration polyethylene glycol fusion technique for increasing production of monoclonal antibody-secreting hybridomas. J. Immunol. Meth. 81: 223-228; Ziegler, B. et al.(1996) Glutamate decarboxylase (GAD) is not detectable on the surface of rat islet cells examined by cytofluorometry and complement-dependent antibody-mediated cytotoxicity of monoclonal GAD antibodies, Horm. Metab. Res. 28: 11-15もまた参照のこと）。
【０３９９】
マウスモノクローナル抗体の製造：
抗体を、標準的な抗体製造法（Marx et al, Monoclonal Antibody Production, ATLA 25, 121, 1997）によって作製し、そして、プロテインＡを介して精製した。抗体純度は、ＳＤＳゲル電気泳動分析に基づき、＞９５％であった。
【０４００】
ヒト抗体
ヒト抗体を、以下の手順に従ってファージディスプレイによって作製した：
投薬を受けていないヒト抗体遺伝子ライブラリＨＡＬ７／８を、アドレノメデュリンペプチドに対する、遺伝子組み換え一本鎖Ｆ可変ドメイン（ｓｃＦｖ）の分離に使用する。抗体遺伝子ライブラリーを、２個の異なったスペーサーを介してアドレノメデュリンペプチド配列に連結されたビオチンタグを含むペプチドの使用を含むパンニングストラテジーを用いてスクリーニングした。非特異性結合抗原とストレプトアビジン結合抗原とを使用したパンニング段階の混合を、非特異的バインダーのバックグラウンドを最小にするのに使用した。パンニングの第三段階からの溶解ファージを、モノクローナルｓｃＦｖ発現性Ｅ．コリ（E. coli）株の作製に使用した。これらのクローン株の培養からの上清を、抗原ＥＬＩＳＡ試験にそのまま使用した（Hust, M., Meyer, T., Voedisch, B., Rulker, T., Thie, H., El-Ghezal, A., Kirsch, M.I., Schutte, M., Helmsing, S., Meier, D., Schirrmann, T., Dubel, S., 2011. A human scFv antibody generation pipeline for proteome research. Journal of Biotechnology 152, 159-170; Schutte, M., Thullier, P., Pelat, T., Wezler, X., Rosenstock, P., Hinz, D., Kirsch, M.I.,Hasenberg, M., Frank, R., Schirrmann, T., Gunzer, M., Hust, M., Dubel, S., 2009. Identification of a putative Crf splice variant and generation of recombinant antibodies for the specific detection of Aspergillus fumigatus. PLoS One 4, e6625もまた参照のこと）。
【０４０１】
陽性クローンを、抗原に対する陽性ＥＬＩＳＡシグナル及びストレプトアビジンコートしたマイクロタイタープレートに対する陰性シグナルに基づいて選択した。更なる特徴づけのために、ｓｃＦｖオープンリーディングフレームを、発現プラスミドｐＯＰＥ１０７（Hust et al., J. Biotechn. 2011）内にクローン化し、固定した金属イオン親和性クロマトグラフィーによって培養上清から捕獲し、そして、サイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。
【０４０２】
親和定数
アドレノメデュリンに対する抗体の親和性を測定するために、固定化抗体へのアドレノメデュリンの結合に関する動態を、Biacore2000システム（GE Healthcare Europe GmbH, Freiburg, Germany）を使用した無標識表面プラズモン共鳴法によって測定した。抗体の可逆的固定化を、製造業者の取扱説明書に従って高密度でＣＭ５センサー表面に共有結合させた抗マウスＦｃ抗体を使用して実施した（マウス抗体捕獲キット；GE Healthcare）（Lorenz et al.,“ Functional Antibodies Targeting IsaA of Staphylococcus aureus Augment Host Immune Response and Open New Perspectives for Antibacterial Therapy“; Antimicrob Agents Chemother. 2011 January; 55(1): 165-173）。
【０４０３】
モノクローナル抗体を、それぞれ、以下に示したヒト及びマウスのＡＤＭのＡＤＭ領域に対して産生させた。以下の表は、更なる実験において使用される、得られた抗体の一群を表している。選択は、標的領域に基づいた：
【０４０４】
表１：
【０４０５】
【表２】
2015501797.tif 000003
【０４０６】
表２：
【０４０７】
【表３】
2015501797.tif 000004
【０４０８】
酵素分解による抗体フラグメントの作製：
Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）2フラグメントの作製を、マウス完全長抗体ＮＴ−Ｍの酵素分解によっておこなった。抗体ＮＴ−Ｍを、ａ）ペプシンベースのＦ（ａｂ）2調製キット（Pierce44988）及びｂ）パパインベースのＦａｂ調製キット（Pierce44985）を使用して消化した。フラグメント化手順を、供給業者によって提供された取扱説明書に従って実施した。消化は、Ｆ（ａｂ）2フラグメント化の場合、３７℃にて８時間実施した。Ｆａｂフラグメント化消化を、それぞれ１６時間実施した。
【０４０９】
Ｆａｂ作製及び精製の手順：
固定化パパインを、０．５ｍｌの消化バッファーで樹脂を洗浄し、そして、５０００ｘｇにて１分間、カラムを遠心分離することによって平衡化した。そのバッファーをその後、捨てた。脱塩カラムを、保管溶液を除去し、消化バッファーでそれを洗浄し、その都度その後に１０００ｘｇにて２分間それを遠心分離することによって調製した。０．５ｍｌの調製ＩｇＧサンプルを、平衡化した固定化パパインの入ったスピンカラムチューブに加えた。消化反応のインキュベーション時間は、３７℃の卓上ロッカーにより１６時間おこなった。カラムを、５０００×ｇにて１分間遠心分離して、固定化パパインと消化産物を分離した。その後、樹脂を、０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、そして、５０００×ｇにて１分間遠心分離した。洗浄画分を、総サンプル体積が１．０ｍｌである消化抗体に加えた。NAb Protein A Columnを、室温にてＰＢＳ及びＩｇＧ溶出バッファーで平衡化した。カラムを、１分間遠心分離して、保管溶液（０．０２％のアジ化ナトリウム含有）を除去し、２ｍｌのＰＢＳを加えることによって平衡化し、１分間再び遠心分離し、そして流し出して捨てた。サンプルは、カラムに適用し、転倒によって再懸濁させた。インキュベーションを、転倒混合しながら室温にて１０分間おこなった。カラムを１分間遠心分離して、Ｆａｂフラグメントが流れ出るのを防いだ。（引用文献：Coulter, A. and Harris, R. (1983). J. Immunol. Meth. 59, 199-203.; Lindner I. et al. (2010) ｛alpha｝2-Macroglobulin inhibits the malignant properties of astrocytoma cells by impeding ｛beta｝-catenin signaling. Cancer Res. 70, 277-87.; Kaufmann B. et al. (2010) Neutralization of West Nile virus by cross-linking of its surface proteins with Fab fragments of the human monoclonal antibody CR4354. PNAS. 107, 18950-5.; Chen X. et al. (2010) Requirement of open headpiece conformation for activation of leukocyte integrin αxβ2. PNAS. 107, 14727-32.; Uysal H. et al. (2009) Structure and pathogenicity of antibodies specific for citrullinated collagen type II in experimental arthitis. J. Exp. Med. 206, 449-62.; Thomas G. M. et al. (2009) Cancer cell-derived microparticles bearing P-selectin glycoprotein ligand 1 accelerate thrombus formation in vivo. J. Exp. Med. 206, 1913-27.; Kong F. et al. (2009) Demonstration of catch bonds between an integrin and its ligand. J. Cell Biol. 185, 1275-84）。
【０４１０】
Ｆ（ａｂ’）2作製及び精製の手順：
固定化ペプシンを、０．５ｍｌの消化バッファーで樹脂を洗浄し、そして、５０００ｘｇにて１分間、カラムを遠心分離することによって平衡化した。そのバッファーをその後、捨てた。脱塩カラムを、保管溶液を除去し、消化バッファーでそれを洗浄し、その都度その後に１０００ｘｇにて２分間それを遠心分離することによって調製した。０．５ｍｌの調製ＩｇＧサンプルを、平衡化した固定化ペプシンの入ったスピンカラムチューブに加えた。消化反応のインキュベーション時間は、３７℃の卓上ロッカーにより１６時間おこなった。カラムを、５０００×ｇにて１分間遠心分離して、固定化パパインと消化産物を分離した。その後、樹脂を、０．５ｍＬのＰＢＳで洗浄し、そして、５０００×ｇにて１分間遠心分離した。洗浄画分を、総サンプル体積が１．０ｍｌである消化抗体に加えた。NAb Protein A Columnを、室温にてＰＢＳ及びＩｇＧ溶出バッファーで平衡化した。カラムを、１分間遠心分離して、保管溶液（０．０２％のアジ化ナトリウム含有）を除去し、２ｍＬのＰＢＳを加えることによって平衡化し、１分間再び遠心分離し、そして流し出して捨てた。サンプルは、カラムに適用し、転倒によって再懸濁させた。インキュベーションを、転倒混合しながら室温にて１０分間おこなった。カラムを１分間遠心分離して、Ｆａｂフラグメントが流れ出るのを防いだ。（引用文献：Mariani, M., et al. (1991). A new enzymatic method to obtain high-yield F(ab´)2 suitable for clinical use from mouse IgG1. Mol.Immunol. 28: 69-77.;Beale, D. (1987). Molecular fragmentation: Some applications in immunology. Exp Comp Immunol 11:287-96.; Ellerson, J.R., et al. (1972). A fragment corresponding to the CH2 region of immunoglobulin G (IgG) with complement fixing activity. FEBS Letters 24(3):318-22.; Kerbel, R.S. and Elliot, B.E. (1983). Detection of Fc receptors. Meth Enzymol 93:113-147.; Kulkarni, P.N., et al. (1985). Conjugation of methotrexate to IgG antibodies and their F(ab´)2 fragments and the effect of conjugated methotrexate on tumor growth in vivo. Cancer Immunol Immunotherapy 19:211-4.; Lamoyi, E. (1986). Preparation of F(ab´)2 Fragments from mouse IgG of various subclasses. Meth Enzymol 121:652-663.; Parham, P., et al. (1982). Monoclonal antibodies: purification, fragmentation and application to structural and functional studies of class I MHC antigens. J Immunol Meth 53:133-73.; Raychaudhuri, G., et al. (1985). Human IgG1 and its Fc fragment bind with different affinities to the Fc receptors on the human U937, HL-60 and ML-1 cell lines. Mol Immunol 22(9):1009-19.; Rousseaux, J., et al. (1980). The differential enzyme sensitivity of rat immunoglobulin G subclasses to papain an pepsin. Mol Immunol 17:469-82.; Rousseaux, J., et al. (1983). Optimal condition for the preparation of Fab and F(ab´)2 fragments from monoclonal IgG of different rat IgG subclasses. J Immunol Meth 64:141-6.; Wilson, K.M., et al. (1991). Rapid whole blood assay for HIV-1 seropositivity using an Fab-peptide conjugate. J Immunol Meth 138:111-9）。
【０４１１】
ＮＴ−Ｈ抗体フラグメントのヒト化
抗体フラグメントを、ＣＤＲグラフト法（Jones, P. T., Dear, P. H., Foote, J., Neuberger, M. S., and Winter, G. (1986) Replacing the complementarity-determining regions in a human antibody with those from a mouse. Nature 321, 522-525）によってヒト化した。
【０４１２】
以下のステップをおこない、ヒト化配列を得た：
全ＲＮＡ抽出：全ＲＮＡを、Qiagenキットを使用してＮＴ−Ｈハイブリドーマから抽出した。
【０４１３】
第一段階のＲＴ−ＰＣＲ：QIAGEN（登録商標）OneStep RT-PCR Kit（Cat No.210210）を使用した。ＲＴ−ＰＣＲを、重鎖及び軽鎖に特異的なプライマーセットを用いて実施した。それぞれのＲＮＡのサンプルに関して、可変領域のリーダー配列を網羅した縮重順方向プライマー混合物を使用して、１２種類の個別の重鎖及び１１種類の軽鎖のＲＴ−ＰＣＲ反応を設定した。逆方向プライマーは、重鎖及び軽鎖の定常領域に位置している。プライマー内には制限部位を設計しなかった。
【０４１４】
反応物の準備：５ｘQIAGEN（登録商標）OneStep RT-PCRバッファー５．０μｌ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘ（それぞれのｄＮＴＰ１０ｍＭを含んでいる）０．８μｌ、プライマーセット０．５μｌ、QIAGEN（登録商標）OneStep RT-PCR Enzyme Mix０．８μｌ、鋳型ＲＮＡ２．０μｌ、無ＲＮａｓｅ不含水２０．０μｌまで、全容積２０．０μｌ。
ＰＣＲ条件：逆転写：５０℃、３０分；最初のＰＣＲ活性化：９５℃、１５分間。
サイクル：９４℃、２５秒間；５４℃、３０秒間；７２℃、３０秒間を２０サイクル；最終伸長：７２℃、１０分間。
【０４１５】
第二段階の準ネスト化ＰＣＲ：第一段階反応からのＲＴ−ＰＣＲ産物を第二段階のＰＣＲで更に増幅した。１２種類の個別の重鎖及び１１種類の軽鎖のＲＴ−ＰＣＲ反応を、抗体可変領域に対して特異的な準ネスト化プライマーセットを使用して準備した。
半応物の準備：２ｘＰＣＲミックス１０μｌ；プライマーセット２μｌ；第一段階のＰＣＲ産物８μｌ；全容積２０μｌ；Hybridoma Antibody Cloning Report。
【０４１６】
ＰＣＲ条件：９５℃にて５分間の最初の変性；９５℃にて２５秒間、５７℃にて３０秒間、６８℃にて３０秒間を２５サイクル；最終伸長を６８℃にて１０分間。
ＰＣＲが終わった後に、ＰＣＲ反応サンプルをアガロースゲルで泳動して、増幅したＤＮＡフラグメントを可視化する。ネスト化ＲＴ−ＰＣＲによって増幅した１５個超のクローンＤＮＡフラグメントの配列決定後に、数個のマウス抗体重鎖及び軽鎖を、クローン化したが、正しいように思われる。タンパク質配列アラインメント及びＣＤＲ分析で、１本の重鎖と１本の軽鎖を同定する。相同ヒトフレームワーク配列とのアラインメント後に、得られた可変重鎖のヒト化配列は、次のものであった：図６を参照のこと（可変重鎖内の２６、４０、及び５５位のアミノ酸及び可変軽鎖内の４０位のアミノ酸が結合特性に重要なので、それらはマウス起源に先祖返りし得る。得られた候補を以下に示す）（Padlan, E. A. (1991) A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties. Mol. Immunol. 28, 489-498.; Harris, L. and Bajorath, J. (1995) Profiles for the analysis of immunoglobulin sequences: Comparison of V gene subgroups. Protein Sci. 4, 306-310）
【０４１７】
抗体フラグメント配列に対する注釈（配列番号７〜１４）：ボールド体及び下線は、年代順に配置されたＣＤＲ１、２、３であり；斜体は、定常領域であり；ヒンジ部は、ボールド体文字で、そして、ヒスチジンタグは、ボールド体とイタリック体で強調表示され；フレームワーク点突然変異は、灰色の文字背景である。
【０４１８】
配列番号：７（ＡＭ−ＶＨ−Ｃ）
QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNEKFKGKATITADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０４１９】
配列番号：８（ＡＭ−ＶＨ１）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０４２０】
配列番号：９（ＡＭ−ＶＨ２−Ｅ４０）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGRILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０４２１】
配列番号：１０（ＡＭ−ＶＨ３−Ｔ２６−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWISWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０４２２】
配列番号：１１（ＡＭ−ＶＨ４−Ｔ２６−Ｅ４０−Ｅ５５）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKATGYTFSRYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTEGYEYDGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKHHHHHH
【０４２３】
配列番号：１２（ＡＭ−ＶＬ−Ｃ）
DVLLSQTPLSLPVSLGDQATISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHIPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０４２４】
配列番号：１３（ＡＭ−ＶＬ１）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０４２５】
配列番号：１４（ＡＭ−ＶＬ２−Ｅ４０）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYRVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHIPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０４２６】
実施例２
抗ＡＤＭ生理活性に対する選択抗ＡＤＭ抗体の効果
ＡＤＭ生理活性に対する選択ＡＤＭ抗体の効果を、ヒト組換型アドレノメデュリン受容体ｃＡＭＰ機能アッセイ（Adrenomedullin Bioassay）で試験した。
ヒト組換型アドレノメデュリン受容体ｃＡＭＰ機能性アッセイ（Adrenomedullin Bioassay）におけるヒト又はマウスアドレノメデュリン標的抗体の試験
【０４２７】
材料：
細胞株：ＣＨＯ−Ｋ１
受容体：アドレノメデュリン（ＣＲＬＲ＋ＲＡＭＰ３）
受容体の細胞株受入番号：ＣＲＬＲ：Ｕ１７４７３；ＲＡＭＰ３：ＡＪ００１０１６
試験に先立ち、抗生物質不含培地で培養した、ヒト組換型アドレノメズリン受容体を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＦＡＳＴ−０２７Ｃ）を、ＰＢＳ−ＥＤＴＡ（５ｍＭのＥＤＴＡ）でのゆるやかなフラッシングによって剥がし、遠心分離によって回収し、そして、アッセイバッファー（ＫＲＨ：５ｍＭのＫＣｌ、１．２５ｍＭのＭｇＳＯ4、１２４ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１３．３ｍＭのグルコース、１．２５ｍＭのＫＨ2ＰＯ4、１．４５ｍＭのＣａＣｌ2、０．５ｇ／ｌのＢＳＡ）中に再懸濁した。
【０４２８】
用量反応曲線を、標準作動物質（ｈＡＤＭ又はｍＡＤＭ）と平行して実施した。
拮抗物質試験（９６ウェル）：
拮抗物質試験のために、６μｌの標準作動物質（ヒト（５．６３ｎＭ）又はマウス（０．６７ｎＭ）アドレノメデュリン）を、異なった拮抗物質希釈率にて６μｌの試験サンプル；又は６μｌのバッファーと混合した。室温にて６０分間のインキュベーション後に、１２μｌの細胞（２，５００細胞／ウェル）を加えた。そのプレートを室温にて３０分間インキュベートした。溶解バッファー添加後に、製造業者の明細書に従って、Cis-Bio International製のＨＴＲＦキット（cat n°62AM2 PEB）を用いて、ＤｅｌｔａＦのパーセンテージを推測する。ｈＡＤＭ２２−５２を、標準拮抗物質として使用した。
【０４２９】
抗体を試験するｃＡＭＰ−ＨＴＲＦアッセイ
抗ｈ−ＡＤＭ抗体（ＮＴ−Ｈ、ＭＲ−Ｈ、ＣＴ−Ｈ）を、以下の最終抗体濃度：１００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌにて、５．６３ｎＭのヒトＡＤＭ１−５２の存在下、ヒト組換型アドレノメズリン受容体（ＦＡＳＴ−０２７Ｃ）ｃＡＭＰ機能性アッセイにいて拮抗物質活性についてした。
抗ｍ−ＡＤＭ抗体（ＮＴ−Ｍ、ＭＲ−Ｍ、ＣＴ−Ｍ）を、以下の最終抗体濃度：１００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、０．１６μｇ／ｍｌにて、０．６７ｎＭのマウスＡＤＭ１−５０の存在下、ヒト組換型アドレノメズリン受容体（ＦＡＳＴ−０２７Ｃ）ｃＡＭＰ機能性アッセイにいて拮抗物質活性についてした。データを、相対的阻害対拮抗物質濃度でプロットした（図３ａ〜３ｌを参照のこと）。個々の抗体による最大阻害を、表３中に示す。
【０４３０】
表３：
【０４３１】
【表４】
2015501797.tif 000005
【０４３２】
実施例３
抗ＡＤＭ抗体によるｈＡＤＭの安定化に関するデータ
ヒトＡＤＭ抗体によるヒトＡＤＭの安定化効果を、ｈＡＤＭ免疫学的アッセイを使用して試験した。
【０４３３】
ヒトアドレノメデュリンの定量化のための免疫学的アッセイ
使用される技術は、アクリジニウムエステル標識化に基づいたサンドイッチコートチューブ発光イムノアッセイであった。
【０４３４】
標識化合物（トレーサー）：１００μｇ（１００μｌ）のＣＴ−Ｈ（ＰＢＳ、ｐＨ７．４中に１ｍｇ／ｍｌ、AdrenoMed AG Germany）を、１０μｌのアクリジニウムＮＨＳ−エステル（アセトニトリル中に１ｍｇ／ｍｌ、InVent GmbH, Germany）（ＥＰ０３５３９７１）と混合し、そして、室温にて２０分間インキュベートした。標識したＣＴ−Ｈを、Bio-Sil（登録商標）SEC 400-5（Bio-Rad Laboratories, Inc., USA）によるゲル濾過ＨＰＬＣによって精製した。精製したＣＴ−Ｈを、（３００ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸カリウム、１００ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＮａ−ＥＤＴＡ、５ｇ／Ｌのウシ血清アルブミン、ｐＨ７．０）中に希釈した。終濃度は、２００μＬあたり約８００，０００相対光度単位（ＲＬＵ）の標識化合物（約２０ｎｇ標識抗体）であった。アクリジニウムエステル化学発光を、AutoLumat LB953（Berthold Technologies GmbH&Co. KG）を使用して計測した。
【０４３５】
固相：ポリスチレンチューブ（Greiner Bio-1International AG、Austria）を、ＭＲ−Ｈ（AdrenoMed AG、Germany）（１．５μｇのＭＲ−Ｈ／０．３ｍＬ、１００ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、５０ｍｍｏｌ／ＬのＴＲＩＳ／ＨＣｌ、ｐＨ７．８）でコートした（室温にて１８時間）。５％のウシ血清アルブミンでブロッキングした後に、そのチューブをＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄し、そして、真空乾燥した。
【０４３６】
較正：
２５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、２ｇ／ＬのＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、５０ｇ／Ｌのウシ血清アルブミン、２０タブ／Ｌのプロテアーゼインヒビターカクテル（Roche Diagnostics AG、Switzerland）中のｈＡＤＭ（BACHEM AG、Switzerland）の希釈物を使用して、アッセイを較正した。
【０４３７】
ｈＡＤＭイムノアッセイ：
標識ＣＴ−Ｈ（２００μｌ）を加えた後に、５０μｌのサンプル（又は較正物質）をコートチューブ内にピペットで計り入れ、そのチューブを４℃にて４時間インキュベートした。非結合トレーサーを、洗浄液（２０ｍＭのＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）で５回（各１ｍｌ）洗浄することによって除去した。
【０４３８】
チューブに結合した化学発光を、LB953を使用して計測した。
【０４３９】
図４は、典型的なｈＡＤＭ用量／シグナル曲線、及び１００μｇ／ｍＬの抗体ＮＴ−Ｈの存在下でのｈＡＤＭ用量シグナル曲線を示す。ＮＴ−Ｈは、記載したｈＡＤＭ免疫学的アッセイに影響しなかった。
【０４４０】
ヒトアドレノメデュリンの安定性：
ヒトＡＤＭを、ヒトクエン酸血漿中に希釈し（終濃度１０ｎＭ）、２４℃にてインキュベートした。選択した時点にて、−２０℃にて冷凍することによって、ｈＡＤＭの分解を止めた。インキュベーションを、ＮＴ−Ｈ（１００μｇ／ｍｌ）の不存在及び存在下で実施した。残存しているｈＡＤＭを、先に記載したｈＡＤＭ免疫学的アッセイを使用して定量化した。
【０４４１】
図５は、ＮＴ−Ｈ抗体の不存在と存在下、ヒト血漿（クエン酸）中でのｈＡＤＭの安定性を示している。ｈＡＤＭだけの半減期は、７．８ｈであり、そして、ＮＴ−Ｈの存在下で、半減期は１８．３ｈであった（２．３倍高い安定性）。
【０４４２】
実施例４
敗血症の死亡率（早期処置）
動物モデル
１２〜１５週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（Charles River Laboratories, Germany）を試験に使用した。腹膜炎を、軽いイソフルラン麻酔下で外科的に引き起こした。切開を、腹腔の左上象限（盲腸の正常な位置）に作った。盲腸を露出させ、そして、きつい結紮を小腸の付着点の遠位に縫合して盲腸の周りに配置した。２４ゲージの針で１カ所の刺創を盲腸に作り、そして、少量の盲腸内容物をその損傷から絞り出した。盲腸を腹腔内に戻し、そして、腹壁切除部位を閉じた。最後に、動物を、食物と水が自由摂取できるケージに戻した。５００μｌの生理的食塩水を、水分補給として皮下に与えた。
化合物（ＮＴ−Ｍ、ＭＲ−Ｍ、ＣＴ−Ｍ）の適用と投薬量
マウスを、ＣＬＰ直後に処置した（早期治療）。ＣＬＰとは、盲腸結紮及び穿刺（ＣＬＰ）の略語である。
【０４４３】
調査群
３つの化合物を、ビヒクルに対して、及び対照化合物処置に対して試験した。各群には、ＢＵＮ（血清血中尿素窒素試験）測定のために１日後の採血のための５匹のマウスを含む。各群あたり更なに１０匹のマウスを、４日間の期間にわたって経過観察した。
群  処置（１０μｌ／ｇ体重）  投与量／経過観察：
１  ＮＴ−Ｍ、０．２ｍｇ／ｍｌ  ４日間にわたり生存
２  ＭＲ−Ｍ、０．２ｍｇ／ｍｌ  ４日間にわたり生存
３  ＣＴ−Ｍ、０．２ｍｇ／ｍｌ  ４日間にわたり生存
４  非特異的マウスＩｇＧ、０．２ｍｇ／ｍｌ  ４日間にわたり生存
５  対照−ＰＢＳ、１０μｌ／ｇ体重  ４日間にわたり生存
【０４４４】
臨床化学
腎機能に関する血中尿素窒素（ＢＵＮ）濃度を、ベースラインとＣＬＰ後１日目に計測した。血液サンプルを、軽いエーテル麻酔下で毛細管を用いて海綿静脈洞から採取した。測定を、AU 400 Olympus Multianalyserを使用して実施した。４日死亡率を、表４中に示した。平均ＢＵＮ濃度を、表５中に示した。
【０４４５】
表４：
【０４４６】
【表５】
2015501797.tif 000006
【０４４７】
表５：
【０４４８】
【表６】
2015501797.tif 000007
【０４４９】
ＮＴ−Ｍ抗体が死亡率を大きく低減したことが、表４からわかる。４日後に、ＮＴ−Ｍ抗体で処置したマウスの７０％が生き残った。４日後、ＭＲ−Ｍ抗体で処置した場合には、３０％の動物が生き残り、そして、ＣＴ−Ｍ抗体で処置した場合には、１０％の動物が生き残った。それとは対照的に、非特異的マウスＩｇＧで処置した場合には、すべてのマウスが４日後に死亡した。同じ結果を、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）をマウスに投与した対照群で得た。
【０４５０】
血中尿素窒素又はＢＵＮ試験は、腎臓機能を計測するため、腎臓病を診断する助けにするため、及び急性若しくは慢性の腎機能障害若しくは不全症の患者を観察するために使用される。Ｓ−ＢＵＮ Ｔｅｓｔの結果は、ＮＴ−Ｍ抗体が腎臓を保護するのに最も効果的であることを明らかにした。
【０４５１】
敗血症の死亡率（後期処置）
動物モデル
１２〜１５週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（Charles River Laboratories, Germany）を試験に使用した。腹膜炎を、軽いイソフルラン麻酔下で外科的に引き起こした。切開を、腹腔の左上象限（盲腸の正常な位置）に作った。盲腸を露出させ、そして、きつい結紮を小腸の付着点の遠位に縫合して盲腸の周りに配置した。２４ゲージの針で１カ所の刺創を盲腸に作り、そして、少量の盲腸内容物をその損傷から絞り出した。盲腸を腹腔内に戻し、そして、腹壁切除部位を閉じた。最後に、動物を、食物と水が自由摂取できるケージに戻した。５００μｌの生理的食塩水を、水分補給として皮下に与えた。
【０４５２】
化合物（ＮＴ−Ｍ、ＭＲ−Ｍ、ＣＴ−Ｍ）の適用と投薬量
マウスを、ＣＬＰ直後に処置した（早期治療）。ＣＬＰとは、盲腸結紮及び穿刺（ＣＬＰ）の略語である。
化合物（ＮＴ−Ｍ ＦＡＢ２）の適用と投薬量
ＮＴ−Ｍ ＦＡＢ２を、ビヒクルに対して、及び対照化合物処置に対して試験した。処置を、敗血症の完全な発生後、すなわち、ＣＬＰの６時間後に実施した（後期処置）。各群には、４匹のマウスが含まれ、４日間の期間にわたって経過観察した。
群  処置（１０μｌ／ｇ体重）  投与量／経過観察：
【０４５３】
調査群
１  ＮＴ−Ｍ、ＦＡＢ２  ０．２ｍｇ／ｍｌ  ４日間にわたり生存
２  対照：非特異的マウスＩｇＧ、０．２ｍｇ／ｍｌ  ４日間にわたり生存
３  ビヒクル：−ＰＢＳ  １０μｌ／ｇ体重  ４日間にわたり生存
【０４５４】
表６：
【０４５５】
【表７】
2015501797.tif 000008
【０４５６】
ＮＴ−Ｍ ＦＡＢ２抗体が死亡率を大きく低減したことが、表６からわかる。４日後に、ＮＴ−Ｍ ＦＡＢ２抗体で処置したマウスの７５％が生き残った。それとは対照的に、非特異的マウスＩｇＧで処置した場合には、すべてのマウスが４日後に死亡した。同じ結果を、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）をマウスに投与した対照群で得た。
【０４５７】
実施例５
抗生物質処置及びカテコールアミンによる血液循環安定化、並びに体液平衡の調整に対するＣＬＰ動物における抗ＡＤＭ抗体の増分による効果。
動物モデル
この試験では、雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（８〜１２週、２２〜３０ｇ）を利用した。盲腸結紮及び穿刺（ＣＬＰ）によって引き起こした複数菌による敗血症を、敗血症性ショックを試験するためにモデルとして使用した（(Albuszies G, et al: Effect of increased cardiac output on hepatic and intestinal microcirculatory blood flow, oxygenation, and metabolism in hyperdynamic murine septic shock. Crit Care Med 2005;33:2332-8), (Albuszies G, et al: The effect of iNOS deletion on hepatic gluconeogenesis in hyperdynamic murine septic shock. Intensive Care Med 2007;33:1094-101), (Barth E, et al: Role of iNOS in the reduced responsiveness of the myocardium to catecholamines in a hyperdynamic, murine model of septic shock. Crit Care Med 2006;34:307-13), (Baumgart K, et al: Effect of SOD-1 over-expression on myocardial function during resuscitated murine septic shock. Intensive Care Med 2009;35:344-9), 
(Baumgart K, et al: Cardiac and metabolic effects of hypothermia and inhaled H2S in anesthetized and ventilated mice. Crit Care Med 2010;38:588-95), (Simkova V, et al: The effect of SOD-1 over-expression on hepatic gluconeogenesis and whole-body glucose oxidation during resuscitated, normotensive murine septic shock. Shock 2008;30:578-84), (Wagner F, et al.: Inflammatory effects of hypothermia and inhaled H2S during resuscitated, hyperdynamic murine septic shock. Shock, im Druck), (Wagner F, et al: Effects of intravenous H2S after murine blunt chest trauma: a prospective, randomized controlled trial. Crit Care 2011, submittes for publication)）。
【０４５８】
計量後に、マウスを、１２０μｇ／ｇのケタミン、１．２５μｇ／ｇのミダゾラム、及び０．２５μｇ／ｇのフェナタニルの腹腔内注射によって麻酔した。外科手順の間、体温を３７〜３８℃に保った。１ｃｍの正中線開腹をおこない、盲腸に近づいた。次に、盲腸を、基部近くで３−０の絹糸により結紮し、そして、１８ゲージ針で一カ所だけ穿刺した。盲腸を戻し、そして、切開を再び閉じた（４−０糸）。体液の手術中の損失を補うために、鎮痛剤として１μｇ／ｇのブプレノルフィンを含む０．５ｍｌの乳酸リンゲル液を、背部の真皮に皮下注射した。抗生作用のために、マウスには、下肢から皮下に３０μｇ／ｇのセフトリアキソン及び３０μｇ／ｇのクリンダマイシンを与えた。ＣＬＰの外科手術後に、動物を、水と食物が自由摂取できる適度に加温した環境内で飼育した。液体要求量の埋め合わせを、イソフルランによる短期間麻酔後に、８時間サイクルで適用される４μｇ／ｇのグルコース及び１μｇ／ｇのブプレノルフィンを含む０．５ｍｌの乳酸リンゲル液の背部皮下注射によって確保した。加えて、抗生作用を、下肢からの３０μｇ／ｇのセフトリアキソン及び３０μｇ／ｇのクリンダマイシンの皮下注射で維持した。
【０４５９】
試験物質の投薬
早期処置
ＣＬＰの外科手術及び切開の縫合直後、試験物質抗体ＮＴ−Ｍを、体重１ｋｇあたり２ｍｇの用量の陰茎静脈への注射により、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に５００μｇ／ｍｌの濃度で適用した（投与体積８８〜１２０μｌ）（５匹の動物）。
【０４６０】
後期処置
完全な敗血症発生後に、すなわち、ＣＬＰの外科手術の１５．５時間後に、動物を先に記載のとおり麻酔し、そして、ＮＴ−Ｍを、体重１ｋｇあたり２ｍｇの用量の陰茎静脈への注射により、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に５００μｇ／ｍｌの濃度で適用した（投与体積８８〜１２０μｌ）（３匹の動物）。
【０４６１】
対照群（６匹の動物）には、ＣＬＰの外科手術直後の抗体（４μｌ／ｇ、８８〜１２０μｌ）なしに、対応する量のビヒクルＰＢＳ溶液を与えた。
【０４６２】
調査群と実験設定
集中治療観察下におけるマウス敗血症性ショックモデル：
３、５、及び６匹の動物がいる３つの群を観察した。群１（５匹の動物）には、抗体ＮＴ−Ｍを、ＣＬＰの１５．５時間後に与え、群２には、ＣＬＰの外科手術直後に、抗体ＮＴ−Ｍを与え、そして、群３には、対応する量のＰＢＳを与えた（４μｌ／ｇ）。（複数菌による敗血症を発現させるように）ＣＬＰ後の１６時間のインキュベーション後、実験を、集中医療治療レジメンに匹敵する観察及び介入をしながら続けた。そのため、動物の計量後に、ＣＬＰ外科手術の部分に記載したように麻酔した（後期処置動物を除いて、処置前に麻酔した）。体温を、実験の残りの期間、３７〜３８℃に維持した。気管開口及び挿管後に、呼吸を実験動物用肺人工呼吸器Flexivent（登録商標）（Emka Technologies, FiO2 0,5, PEEP 10 H2O, VT 8μl/g, I:E 1:1,5, AF 70-140 温度による）によって観察し、そして補助した。
【０４６３】
麻酔を、０．３μｇ／ｇｘｈのケタミン及び３０μｇ／ｇｘｈのフェンタニルの連続点滴を用いてカニューレを挿入した右外頚静脈を介して実験の間、維持した。さらに、右総頸大動脈に、心拍数と平均動脈圧（ＭＡＰ）の連続監視のためにカニューレを挿入した。平均動脈圧を、コロイド（８０μＬ／ｇｘｈ、Ｈｅｘｔｅｎｄ（登録商標））の、そして、必要であるなら、昇圧薬としてコロイド中に溶解したノルアドレナリンの静脈内（頸静脈）注射によってＭＡＰ＞６５ｍｍＨｇに維持した。血液サンプル（１２０μｌ）を、クレアチニンの測定のために、カニューレを挿入した頸動脈を介して０時間と４時間に採取した。膀胱に穴をあけ、そして、尿を膀胱カテーテルを介して採取した。実験は、６時間後に終わらせるか、又はＭＡＰ＞６５ｍｍＨｇ（頸静脈）が昇圧剤の投薬で維持できない場合には、それで終わらせた。
【０４６４】
計測したパラメーター
以下のパラメーターを計測し、そして、分析した：ノルアドレナリンの総消費（μｇ ＮＡ／ｇ）、ノルアドレナリンの消費速度（μｇ ＮＡ／ｇ／ｈ）、実験中に採取した尿の全容積、実験終了時のクレアチニン濃度（μｇ／ｍＬ）及び平均クレアチニンクリアランス（μＬ／分）。
【０４６５】
表７：
【０４６６】
【表８】
2015501797.tif 000009
【０４６７】
カテコールアミン要求量を、対照群として合計６匹のマウスへの非特異的マウスＩｇＧ、ＣＬＰ（早期処置）直後の５匹のマウスから成る群へのＮＴマウス抗体又はＣＬＰ（後期処置）の１５．５時間後の３匹のマウスから成る群へのＮＴマウス抗体のいずれかの投与後に計測した。カテコールアミン要求量の低減は、血液循環の安定化の尺度である。これにより、データは、ＡＤＭ抗体、特にＮＴ−Ｍ抗体は、血液循環のかなりの安定化、そして、カテコールアミン要求量のかなりの低減につながることを示している。血液循環の安定化効果を、早期処置（ＣＬＰ直後）と完全な敗血症発生後の処置（後期処置）で示した（図７を参照のこと）。
【０４６８】
体液平衡の調整
蘇生法の早期でも４日間にわたる累積的なものでも、より有益な体液平衡は、敗血症性ショックの高い死亡リスクに関係している。体液平衡の制御は、敗血症に罹患している患者の疾患の経過に最も重要な点である（s. Boyd et al, 2011）。重大な疾患の患者の体液平衡の制御は、集中治療薬の大きな課題として残っている。表８から分かるように、ＮＴ−Ｍ抗体でのＣＬＰ（実験手順は「動物モデル」を参照のこと）後のマウスの処置は、排出される尿の全容積の増加につながる。分泌された尿は、無処置マウスと比較してＮＴ−Ｍ−処置動物では約３倍高かった。有益な処置効果は、早期処置及び後期処置で与えられた。体液平衡も同様に、早期処置でも後期処置でも、約２０〜３０％改善した。これにより、データは、ＡＤＭ抗体の使用、特にＮＴ ＡＤＭ抗体の使用は、患者の体液平衡を調整するのに好ましいのことを示している（表８並びに図８及び９を参照のこと）。
【０４６９】
表８
【０４７０】
【表９】
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【０４７１】
腎臓機能の改善
急性腎不全症だけに罹患している患者の間の４５パーセントの死亡率と比較して、急性腎不全と敗血症の組み合わせは、７０パーセントの死亡率に関連している（Schrier and Wang, “Mechanisms of Disease Acute Renal Failure and Sepsis”; The New England Journal of Medicine; 351:159-69; 2004）。クレアチニン濃度とクレアチニンクリアランスは、腎臓の機能（機能障害）を観察するための標準的な検査室パラメーターである（Jacob, “Acute Renal Failure”, Indian J. Anaesth.; 47 (5): 367-372; 2003）。先に記載した動物実験（早期処置）からのクレアチニン及びクレアチニンクリアランスデータを表９に示す。
【０４７２】
表９
腎臓機能：
【０４７３】
【表１０】
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【０４７４】
対照敗血症動物との比較において、クレアチニン濃度は４２％下がり、そして、クレアチニンクリアランスは、ＮＴ−Ｍ処置の結果として１００％超改善した（表９）。データは、ＡＤＭ抗体、特にＮＴ−Ｍの投与が腎臓機能の改善につながることを示している。
【０４７５】
肝臓の炎症状態の改善
対照及び早期処置動物の肝臓組織を、ホモジナイズし、そして、溶解バッファー中で溶解した。細胞抽出物の調製のために、細胞を、再懸濁し、氷上で溶解し、そして、遠心分離した。上清（タンパク質抽出物）を−８０℃にて保存した。Ｂ細胞の核内因子κ軽鎖遺伝子エンハンサ（ＮＦ−κＢ）の活性化を、電気泳動の移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）１，２を使用して先に記載のとおり測定した。細胞抽出物（１０μｇ）を、ポリ−デオキシ−イノシン−デオキシ−シチジル酸（ポリ−ｄＩ−ｄＣ）及びＮＦκＢ（ＨＩＶκＢ部位）（５’ＧＧＡＴＣＣＴＣＡＡＣＡＧＡＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＧＡＧＧＣＣＡ−３’）を含む32Ｐ標識した二本鎖オリゴヌクレオチド（Biomers, Ulm, Germany）と一緒に氷上でインキュベートした。複合体を、未変性ポリアクリルアミドゲルにより分離し、乾燥させ、そして、Ｘ線フィルムに感光させた。蛍光物質画像装置とイメージアナライザソフトウェア（AIDA Image Analyzer; Raytest）を使用して、デンシトメトリーによって放射能標識したＮＦ−κＢを定量化した。個々のゲルの比較のために、それぞれのバンドの強度を、外科機器の使用及びＣＬＰを受けなかった同時に泳動した対照動物のものに関連させる。そのため、ＥＭＳＡデータを、対照値に対する倍数増加として表す。統計：すべてのデータは、２つの群の相違を、対応のないサンプルのマン−ホイットニー順位和検定で分析したとの別段の明記がない限り、中央値（範囲）として示される。結果：ＮＴ−Ｍで処置した動物は、ビヒクル動物（２．９２（２．５０〜３．８１））（ｐ＜０．００１）と比較して、有意に減弱した肝臓組織ＮＦ−κＢ活性化（２．２７（１．９７〜２．５３））を示した（図１０を参照のこと）。
【０４７６】
引用文献：
１．  Wagner F, Wagner K, Weber S, Stahl B, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Asfar P, Calzia E, Senftleben U, Gebhard F, Georgieff M, Radermacher P, Hysa V: Inflammatory effects of hypothermia and inhaled H2S during resuscitated, hyperdynamic murine septic shock. Shock 2011;35(4):396-402
２．  Wagner F, Scheuerle A, Weber S, Stahl B, McCook O, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Thomas J, Asfar P, Szabo C, Moller P, Gebhard F, Georgieff M, Calzia E, Radermacher P, Wagner K: Cardiopulmonary, histologic, and inflammatory effects of intravenous Na2S after blunt chest trauma-induced lung contusion in mice. J Trauma 2011;71(6):1659-67
【０４７７】
実施例６
抗体ＮＴ−Ｍの生体内における副作用測定
１２〜１５週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（Charles River Laboratories, Germany）を試験に使用した。６匹のマウスを、ＮＴ−Ｍの用量（１０μｌ／ｇ体重）、０．２ｍｇ／ｍｌで処置した。対照として、６匹のマウスを、ＰＢＳ（１０μｌ／ｇの体重）で処置した。生存と身体的状態を１４日間観察した。死亡率は、両群において０であり、ＮＴ−Ｍと対照群の間に身体的状態の相違点はなかった。
【０４７８】
実施例７
ゲンタマイシン誘発性腎毒性
非敗血症性急性腎臓傷害モデルを確立し、そしてそれは、ゲンタマイシンによって誘発される腎毒性を利用する（Chiu PJS. Models used to assess renal functions. Drug Develop Res 32:247-255, 1994.）。このモデルを、抗アドレノメデュリン抗体を用いた処置が腎臓機能を改善するかどうかをアッセイするのに使用した。
実験を、以下のとおり実施した：
【０４７９】
【表１１】
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【０４８０】
体重２５０±２０ｇの８匹の雄Sprague-Dawleyラットから成る群を用いた。動物を、連続した７日間、１２０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｍ．にてゲンタマイシンで刺激した（群１及び２）。試験化合物（抗アドレノメデュリン抗体ＮＴ−Ｍ）及びビヒクル（リン酸緩衝生理食塩水）を、０日目、続いて、２、４及び６日目のゲンタマイシンの５分前に静脈内注射した。体重及び臨床徴候を毎日観察した。氷上への２４時間の尿採取を、０、２及び６日目に実施した。尿標本を、Ｎａ＋、Ｋ＋、及びクレアチニンの濃度についてアッセイした。臨床化学のための血液サンプルを、１日目（ゲンタマイシンの前）、３日目（ゲンタマイシンの前）、及び７日目に採取した。血清電解質（Ｎａ＋及びＫ＋）、クレアチニン、及びＢＵＮは、腎臓機能を観察する主要な分析物である。血漿サンプルを、ＥＤＴＡチューブ内に採取した（１及び３：１００μｌ、７日目：１２０μｌ）。クレアチニンクリアランスを計算した。尿量、尿の電解質、及びクレアチニンを、動物体重１００ｇあたりの排出された量として表した。すべての動物を７日目に屠殺した。腎臓を計量した。
【０４８１】
採尿：動物を、０日目、２日目、及び６日目に尿を２４時間採取する個別のケージに入れた。尿量、尿のＮａ＋、Ｋ＋、及びクレアチニンを計測した。
【０４８２】
内因性クレアチニンクリアランスを、以下のとおり計算した：
CCr (ml/24 h) = [UCr (mg/ml) x V (ml/24 h)] / SCr (mg/ml)
【０４８３】
２４時間のナトリウム（Ｎａ＋）の尿排泄を、以下のとおり計算した：
UNaV (μEq/24 h) = UNa (μEq/ml) x V (ml/24 h)
２４時間のＮＡＧ及びＮＧＡＬの尿排泄を、同様に計算した。
【０４８４】
Ｎａ+（ＦＥNa）の分画排泄率又は最終的な尿中に排出された濾過ナトリウムのパーセンテージは、尿細管Ｎａ+再吸収作用の尺度である。それを以下のとおり計算した：
FENa (%) =100 x [UNa (μEq/ml) x V (ml/24 h)] / PNa (μEq/ml) X CCr (ml/24 h)
【０４８５】
抗アドレノメデュリン抗体を用いた処置は、ビヒクルと比較した場合、７日目の腎臓機能のいくつかの尺度を改善した：血清クレアチニン１．０１ｍｇ／ｄＬ（ＮＴ−Ｍ）対１．５５ｍｇ／ｄＬ（ビヒクル）（図１１）、ＢＵＮ３２．０８ｍｇ／ｄＬ（ＮＴ−Ｍ）対５２．４１ｍｇ／ｄＬ（ビヒクル）（図１２）、内因性クレアチニンクリアランス９３４．４３ｍＬ／２４ｈ（ＮＴ−Ｍ）対６１３．３４ｍＬ／２４ｈ（ビヒクル）（図１３）、Ｎａ+の分画分泌０．９８％（ＮＴ−Ｍ）対１．７５％（ビヒクル）（図１４）。
【０４８６】
実施例８
先に記載したマウスＣＬＰモデルにおいて、腎臓機能に関するいくつかのパラメーターに対する抗アドレノメデュリン抗体ＮＴ−Ｍでの処置の効果を調査した。
【０４８７】
ＮＴ−Ｍは、それぞれ３倍及び２倍高い利尿及びクレアチニンクリアランスを引き起こし、実験終了時に低いクレアチニン、尿素、及びＮＧＡＬ血中濃度をもたらした（表１を参照のこと）。そのうえ、腎臓内の角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）濃度が、ＮＴ−Ｍでの処置によって有意に低減された（図１５）。
【０４８８】
表１０：ビヒクル（ｎ＝１１）及びＮＴ−Ｍ処置（ｎ＝９）動物の腎臓機能に関するパラメーター。血中濃度を、実験の終わりに採取したサンプルで計測した。ＮＧＡＬ＝好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン。すべてのデータが中央値（四分位数）である。
【０４８９】
【表１２】
2015501797.tif 000013
【０４９０】
実験を以下のとおり実施した：
クレアチニン、尿素、及び好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）
血中ＮＧＡＬ濃度を、市販のＥＬＩＳＡ（マウスＮＧＡＬ、RUO 042, BioPorto Diagnostics A/S, Denmark, Gentofte）を使用して計測した。尿素とクレアチニン濃度を、内部標準として2Ｈ3−クレアチニン（CDN isotopes, Pointe-Claire, QU, Canada）及びメチル尿素（FlukaChemikalien, Buchs, Switzerland）を使用した、キャピラリーカラム（Optima-5MS, Macherey-Nagel, Duren, Germany）ガスクロマトグラフィー／質量分析システム（Agilent 5890/5970, Boblingen, Germany）で計測した。アセトニトリルでの除タンパク、遠心分離、及び乾燥するまで蒸発乾固させた後に、上清を、ギ酸中で再構成し、そして、弱陰イオン交換カラム（ＷＣＸ、Phenomenex, Aschaffenburg, Germany）で抽出した。アセトニトリルに加えて、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロ酢酸アミド及びＮ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−Ｎ−メチルトリフルオロアセトアミドは、それぞれ尿素ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル−及びクレアチニントリメチルシリル−誘導体の形成を可能にする。イオンｍ／ｚ２３１と２４５、及びｍ／ｚ３２９と３３２を、それぞれ尿素とクレアチニン分析物、及び内部標準に関して観察した。尿排出量、並びに血漿及び尿クレアチニン濃度から、クレアチニンクリアランスを、標準式を使用して計算した。
【０４９１】
サンプル調製
−８０℃にて保存した腎臓を、ＰＢＳ中、ホモジナイザにより粉砕し、そして、全細胞溶解液（１００ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７、６；５００ｍＭのＮａＣｌ；６ｍＭのＥＤＴＡ；６ｍＭのＥＧＴＡ；１％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００；０、５％のＮＰ ４０；１０％のグリセロール；プロテアーゼ阻害剤（β−グリセロールリン酸 ２ｍＭ；ＤＴＴ ４ｍＭ；ロイペプチン（Leupeptine） ２０μＭ；オルトバナジウム酸ナトリウム ０．２ｍＭ））の２倍濃縮バッファーで溶解し、それに続いて遠心分離した。全細胞溶解液を、上清から得；細胞レムナントから成るペレットを捨てた。タンパク質量を、市販のタンパク質分析（Bio-Rad, Hercules, CA）を用いて決定し、そして、最終的なタンパク質濃度が４μｇ／ｌになるように光度測定を調整した。多重分析やＥＭＳＡ分析のサンプルを、ＥＭＳＡバッファー（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ；５０ｍＭのＫＣｌ、１０％のグリセロール；０、１ｍＭのＥＤＴＡ；１ｍＭのＤＴＴ）で１：１に希釈し、イムノブロットのためのサンプルを、２倍のサンプルバッファー（２％のＳＤＳ；１２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（２５℃にてｐＨ６、８）；１０％のグリセロール；５０ｍＭのＤＴＴ；０．０１％のブロモフェノールブルー）で１：１に希釈した。
【０４９２】
角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）濃度のレベルを、マウスマルチプレックスサイトカインキット（Bio-Plex Pro Cytokine Assay, Bio-Rad, Hercules, CA）を使用して測定し、そのアッセイを、製造業者の取扱説明書を用いてBio-plex懸濁液アレイシステムを使用して実施した（Wagner F, Wagner K, Weber S, Stahl B, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Asfar P, Calzia E, Senftleben U, Gebhard F, Georgieff M, Radermacher P, Hysa V. Inflammatory effects of hypothermia and inhaled H2S during resuscitated, hyperdynamic murine septic shock. Shock 2011;35:396-402; and Wagner F, Scheuerle A, Weber S, Stahl B, McCook O, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Thomas J, Asfar P, Szabo C, Moller P, Gebhard F, Georgieff M, Calzia E, Radermacher P, Wagner K. Cardiopulmonary, histologic, and inflammatory effects of intravenous Na2S after blunt chest trauma-induced lung contusion in mice. J Trauma 2011;71:1659-1667もまた参照のこと）。要するに、適当なサイトカイン標準とサンプルを、フィルタープレートに加えた。サンプルを、蛍光標識マイクロビーズに化学的に取り付けた抗体と一緒にインキュベートした。その後、あらかじめ混合しておいた検出抗体を、各ウェルに加え、それに続いて、ストレプトアビジン−フィコエリトリンを加えた。次に、ビーズを再懸濁し、そして、サイトカイン反応混合物を、Bio-Plexタンパク質配列リーダーを使用して定量化した。データを、自動処理させ、組換サイトカイン標準から作成される検量線を使用してBio-Plex Manager Software 4.1によって分析した。アッセイの検出限界を下回るレベルを、統計的な目的のためにゼロに設定した。
【０４９３】
実施例９
先に記載したマウスＣＬＰモデルにおいて、肝臓に対する抗アドレノメデュリン抗体ＮＴ−Ｍを用いた処置の効果を調査した。
【０４９４】
ＮＴ−Ｍは、肝臓における角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）濃度の有意な低下を引き起こした（図１６）。
【０４９５】
角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）の計測を、実施例８（腎臓）と同様におこなった。
【０４９６】
実施例１０
先に記載したマウスＣＬＰモデルにおいて、血液循環（血漿）中の数種類のサイトカイン及びケモキネシンに対する、抗アドレノメデュリン抗体ＮＴ−Ｍを用いた処置の効果を調査した。
【０４９７】
サイトカイン及びケモカイン濃度
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−６、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−１、及び角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）濃度の血漿レベルを、マウスマルチプレックスサイトカインキット（Bio-Plex Pro Cytokine Assay, Bio-Rad, Hercules, CA）を使用して測定し、そのアッセイを、製造業者の取扱説明書を用いてBio-plex懸濁液アレイシステムを使用して実施した（Wagner F, Wagner K, Weber S, Stahl B, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Asfar P, Calzia E, Senftleben U, Gebhard F, Georgieff M, Radermacher P, Hysa V. Inflammatory effects of hypothermia and inhaled H2S during resuscitated, hyperdynamic murine septic shock. Shock 2011;35:396-402; and Wagner F, Scheuerle A, Weber S, Stahl B, McCook O, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Thomas J, Asfar P, Szabo C, Moller P, Gebhard F, Georgieff M, Calzia E, Radermacher P, Wagner K. Cardiopulmonary, histologic, and inflammatory effects of intravenous Na2S after blunt chest trauma-induced lung contusion in mice. J Trauma 2011;71:1659-1667もまた参照のこと）。要するに、適当なサイトカイン標準とサンプルを、フィルタープレートに加えた。サンプルを、蛍光標識マイクロビーズに化学的に取り付けた抗体と一緒にインキュベートした。その後、あらかじめ混合しておいた検出抗体を、各ウェルに加え、それに続いて、ストレプトアビジン−フィコエリトリンを加えた。次に、ビーズを再懸濁し、そして、サイトカイン反応混合物を、Bio-Plexタンパク質配列リーダーを使用して定量化した。データを、自動処理させ、組換サイトカイン標準から作成される検量線を使用してBio-Plex Manager Software 4.1によって分析した。アッセイの検出限界を下回るレベルを、統計的な目的のためにゼロに設定した。
【０４９８】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−６及びＩＬ−１０、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−１、及び角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）の血漿レベル及び腎臓組織中濃度を、１つの単一サンプルからいくつかのパラメーターを得ることができる、市販の「マルチプレックスサイトカインキット」（Bio-Plex Pro Precision Pro Cytokine Assay, Bio-Rad, Hercules, CA）を使用して測定した。そのアッセイの個々の操作ステップを、製造業者の取扱説明書を用いてBio-plex懸濁液アレイシステムを使用して実施した（Wagner F, Wagner K, Weber S, Stahl B, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Asfar P, Calzia E, Senftleben U, Gebhard F, Georgieff M, Radermacher P, Hysa V. Inflammatory effects of hypothermia and inhaled H2S during resuscitated, hyperdynamic murine septic shock. Shock 2011;35:396-402; and Wagner F, Scheuerle A, Weber S, Stahl B, McCook O, Knoferl MW, Huber-Lang M, Seitz DH, Thomas J, Asfar P, Szabo C, Moller P, Gebhard F, Georgieff M, Calzia E, Radermacher P, Wagner K. Cardiopulmonary, histologic, and inflammatory effects of intravenous Na2S after blunt chest trauma-induced lung contusion in mice. J Trauma 2011;71:1659-1667もまた参照のこと）。
【０４９９】
要するに、蛍光標識したマイクロスフェア（「ビーズ」）を、９６ウェルプレートに加え、続いて、２回の洗浄ステップをおこない、内部標準を加え、そして、血漿及び腎臓ホモジネートサンプルを加えた。その後のインキュベーションの間、単一のサイトカインが、リスチレンビーズに取り付けられた抗体に結合している。単一のサイトカインの検出のためのサイトカイン特異的ビオチン標識抗体の添加、そして、追加のインキュベーション時間後に、それに続いて、フィコエリトリン標識ストレプトアビジンを加えた。追加のインキュベーション時間の後に、次に、ビーズを再懸濁し、そして、プレートは特殊なフローサイトメータ（Bio-Plex suspension array system, Bio-Rad, Hercules, CA）で計測することもできた。データを、自動処理させ、組換サイトカイン標準から作成される検量線を使用してBio-Plex Manager Software 4.1によって分析した。血漿レベルに関して、濃度を、ｐｇ*ｍＬ-1として示し、腎臓ホモジネートの濃度は、適切なタンパク質濃度に変換し、ｐｇ*ｍｇ-1タンパク質として示した。
【０５００】
ＮＴ−Ｍは、ＩＬ−６（図１７）、ＩＬ−１０（図１８）、角化細胞由来ケモカイン（ＫＣ）（図１９）、単球走化性因子（ＭＣＰ−１）（図２０）、ＴＮＦ−α（図２１）の血漿中濃度の有意な低下を引き起こした。
【０５０１】
実施例１１
虚血／再潅流誘発性急性腎傷害
急性腎傷害が虚血／再潅流によって引き起こされる他の非敗血症性急性腎臓傷害モデルを確立した（Nakamoto M, Shapiro JI, Shanley PF, Chan L, and Schrier RW. In vitro and in vivo protective effect of atriopeptin III on ischemic acute renal failure. J ClinInvest 80:698-705, 1987., Chintala MS, Bernardino V, and Chiu PJS. Cyclic GMP but not cyclic AMP prevents renal platelet accumulation following ischemia-reperfusion in anesthetized rats. J PharmacolExpTher 271:1203-1208, 1994）。このモデルを使用して、抗アドレノメデュリン抗体を用いた処置が腎臓機能を改善できるかどうか評価した。
【０５０２】
実験を以下のとおり実施した：
【０５０３】
【表１３】
2015501797.tif 000014
【０５０４】
体重２５０〜２８０ｇの８匹の雄Sprague-Dawleyラットから成る群を使用した。動物は、１２時間の光／暗サイクルの中、蒸留水の自由摂取させながら標準的な食餌を与えて飼育した。動物には、外科手術（０日目）の３０分前に水分補給した（０．９％のＮａＣｌ及び５％のデキストロース／１：１、１０ｍｌ／ｋｇをｐ．ｏ．）。ラットを、ペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔した。腹腔を正中切開部から露出し、続いて、ヘパリン（１００Ｕ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）を静脈内投与し、そして、両方の腎動脈を、血管鉗子を使用して４５分咬合した。腎クリップの除去直後に、腎臓を更に１分間観察して、血液再潅流を示す色の変化を確実にする。試験化合物（ＮＴ−Ｍ）及びビヒクル（リン酸緩衝生理食塩水）を、再潅流の５分前に静脈内に注射し、続いて、１及び２日目に連日注射した。
【０５０５】
採尿：氷上への２４時間の採尿を、−１日目の虚血／再潅流前（−２４ｈ〜０ｈ）、及び再潅流後０日目（０〜２４ｈ）、１日目（２４〜４８ｈ）及び２日目（４８〜７２ｈ）に開始した。
【０５０６】
採血：０．４ｍｌの血液を、血漿クレアチニン／Ｎａ＋／Ｋ＋、及びＢＵＮの測定のために、０ｈ（Ｉ ＲＩ外科手術前）、２４ｈ（ビヒクル又はＴＡの前）、４８ｈ（ビヒクル又はＴＡの前）、及び７２ｈに尾静脈を通してＥＤＴＡチューブ内に採取した；２ｍｌの血液を、大静脈の末梢を通して採取した。
【０５０７】
動物を、−１日目（−２４ｈ〜０ｈ）、０日目の再潅流後の０日目（０〜２４ｈ）、１日目（２４〜４８ｈ）、及び２日目（４８〜７２ｈ）に尿を２４時間採取する個別のケージに入れた。尿量、尿のＮａ＋、Ｋ＋、及びクレアチニンを計測した。
【０５０８】
クレアチニンクリアランス（ＣＣｒ）を、以下のとおり計算した：
CCr (ml/24 h) = [UCr (mg/ml) x V (ml/24 h)] / PCr (mg/ml)
２４時間のナトリウム（Ｎａ＋）の尿排泄を、以下のとおり計算した：
UNaV (μEq/24 h) = UNa (μEq/ml) x V (ml/24 h)
Ｎａ+（ＦＥNa）の分画排泄率、又は最終的な尿中に排出された濾過ナトリウムのパーセンテージは、尿細管Ｎａ＋再吸収作用の尺度である。それを以下のとおり計算した：
FENa (%) =100 x [UNa (μEq/ml) x V (ml/24 h)] / PNa (μEq/ml) X CCr (ml/24 h)
【０５０９】
抗アドレノメデュリン抗体を用いた処置は、腎臓機能のいくつかの尺度を改善した：
血中尿素窒素（ＢＵＮ）は、ビヒクル群において強い増大を示し（０ｈ：１７．４９ｍｇ／ｄＬ、２４ｈ：９８．８５ｍｇ／ｄＬ、４８ｈ：１０９．８４ｍｇ／ｄＬ、７２ｈ：、９１．８８ｍｇ／ｄＬ）、そして、ＮＴ−Ｍ処置ではあまりはっきりしなかった（０ｈ：１６．３３ｍｇ／ｄＬ、２４ｈ：８４．２ｍｇ／ｄＬ、４８ｈ：８２．６１ｍｇ／ｄＬ、７２ｈ：６４．５４ｍｇ／ｄＬ）（図２２）。
【０５１０】
血清クレアチニンも同様に発症した：ビヒクル群（０ｈ：０．６１ｍｇ／ｄＬ、２４ｈ：３．３ｍｇ／ｄＬ、４８ｈ：３．１６ｍｇ／ｄＬ、７２ｈ：、２．３１ｍｇ／ｄＬ）、ＮＴ−Ｍ群（０ｈ：０．５９ｍｇ／ｄＬ、２４ｈ：２．９６ｍｇ／ｄＬ、４８ｈ：２．３１ｍｇ／ｄＬ、７２ｈ：、１．８ｍｇ／ｄＬ）（図２３）。
【０５１１】
内因性クレアチニンクリアランスは、１日目に大幅に低下し、その後改善したが、ＮＴ−Ｍ群ではビヒクル群の低下よりも優れていた。ビヒクル群：（０ｈ：６５．１７ｍＬ／ｈ、２４ｈ：３．５ｍＬ／ｈ、４８ｈ：１２．６１ｍＬ／ｈ、７２ｈ：２０．８８ｍＬ／ｈ）、ＮＴ−Ｍ群：（０ｈ：７０．１１ｍＬ／ｈ、２４ｈ：５．８４ｍＬ／ｈ、４８ｈ：２１．２３ｍＬ／ｈ、７２ｈ：２６．６１ｍＬ／ｈ）（図２４）。
【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図３ｄ】
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【図３ｅ】
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【図３ｆ】
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【図３ｇ】
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【図３ｈ】
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【図３ｉ】
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【図３ｊ】
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【図３ｋ】
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【図３ｌ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【国際調査報告】
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