(57)【要約】  ここで述べる実施形態は、ポリグリセリンを含む透析物を提供する。ポリグリセリンは、分子量が約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでである。また、拡散剤および浸透圧剤として透析物を使用することもここで提供する。【選択図】図１A
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリグリセリンを含む透析物において、前記ポリグリセリンの分子量が約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでであることを特徴とする、透析物。
【請求項２】
前記ポリグリセリンの分子量が約０．４８ｋＤａから約３．０ｋＤａまでであることを特徴とする、請求項１に記載の透析物。
【請求項３】
前記透析物のｐＨが約２．０から約９．０までであることを特徴とする、請求項１または２に記載の透析物。
【請求項４】
前記透析物のｐＨが約６．５から約７．５までであることを特徴とする、請求項１、２または３に記載の透析物。
【請求項５】
前記透析物が水溶液中にあることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれかに記載の透析物。
【請求項６】
前記ポリグリセリンが、透析液の約０．０１重量％から約５０重量％までであることを特徴とする、請求項５に記載の透析物。
【請求項７】
前記ポリグリセリンが、透析液の約１．２５重量％から約２０重量％までであることを特徴とする、請求項５または６に記載の透析物。
【請求項８】
前記透析物が、１リットル当たり約１５０ミリオスモルから１リットル当たり約１５００ミリオスモルまでであることを特徴とする、請求項１ないし７のいずれかに記載の透析物。
【請求項９】
前記ポリグリセリンが、約１．０から約１５までの多分散度を有することを特徴とする、請求項１ないし８のいずれかに記載の透析物。
【請求項１０】
前記ポリグリセリンが樹枝状であることを特徴とする、請求項１ないし９のいずれかに記載の透析物。
【請求項１１】
前記ポリグリセリンの分岐度が、約０から約０．４までであることを特徴とする、請求項１ないし９のいずれかに記載の透析物。
【請求項１２】
前記ポリグリセリンの分岐度が、約０.４から約０．７までであることを特徴とする、請求項１ないし９のいずれかに記載の透析物。
【請求項１３】
前記ポリグリセリンの分岐度が、約０.７から約１．０までであることを特徴とする、請求項１ないし９のいずれかに記載の透析物。
【請求項１４】
前記ポリグリセリンの分岐度がゼロであることを特徴とする、請求項１ないし９のいずれかに記載の透析物。
【請求項１５】
第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンを含み、前記第１、第２およびそれ以上のポリグリセリンの各々の分子量が、他の第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンの分子量とは異なることを特徴とする、請求項１ないし１４のいずれかに記載の透析物。
【請求項１６】
前記ポリグリセリンが、１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方をさらに含むことを特徴とする、請求項１ないし１５のいずれかに記載の透析物。
【請求項１７】
前記１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方が、前記ポリグリセリン上のヒドロキシル基の約１％から約１００％までに結合されることを特徴とする、請求項１６に記載の透析物。
【請求項１８】
前記１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方が、前記ポリグリセリン上のヒドロキシル基の約１％から約４０％までに結合されることを特徴とする、請求項１６または１７に記載の透析物。
【請求項１９】
前記１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方が、１つまたはそれ以上のカルボキシル酸、アミン、置換アミン、第４級アミン、アミノ酸、リン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、アルキル、アルケン、アルキン、アルキルエーテル、芳香族化合物、芳香族エーテル、双性イオン基、炭水化物、ジスルフィド、ケタール、置換ケタール、アセタール、置換アセタール、エステル基、チオエステル、ウレタン、エステルアミド、アミド基、ペプチド、フェノール、ハロゲンまたはチオールを含むことを特徴とする、請求項１６、１７または１８に記載の透析物。
【請求項２０】
前記１つまたはそれ以上の電解質をさらに含むことを特徴とする、請求項１ないし１９のいずれかに記載の透析物。
【請求項２１】
前記１つまたはそれ以上のアミノ酸をさらに含むことを特徴とする、請求項１ないし２０のいずれかに記載の透析物。
【請求項２２】
前記１つまたはそれ以上の拡散剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１ないし２１のいずれかに記載の透析物。
【請求項２３】
前記１つまたはそれ以上の浸透圧剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１ないし２２のいずれかに記載の透析物。
【請求項２４】
前記浸透圧剤または拡散剤が、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸塩生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントース、キシリトール、合成または天然ポリマーを含むことを特徴とする、請求項２２または２３に記載の透析物。
【請求項２５】
分子、溶質またはイオンを膜、半透膜、生体膜、合成半透膜またはその組み合わせを横切って輸送するための請求項１ないし２４のいずれかに記載の前記透析物の使用。
【請求項２６】
透析における請求項１ないし２４のいずれかに記載の前記透析物の使用。
【請求項２７】
前記透析が間欠的透析を含むことを特徴とする、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記透析が持続的透析を含むことを特徴とする、請求項２６に記載の使用。
【請求項２９】
前記透析物が、半透膜によって体液から分離され、水分、毒素、代謝産物、分子、イオンまたは老廃物が前記体液から前記半透膜を介して前記透析物内に流れ込むことを特徴とする、請求項２６に記載の使用。
【請求項３０】
前記透析物が、フィルタと共に用いられ、透析液を滅菌するか、または毒素、分子、イオンまたは老廃物をそこから除去すること特徴とする、請求項２６に記載の使用。
【請求項３１】
腹膜透析における請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物の使用。
【請求項３２】
前記腹膜透析は、持続的外来腹膜透析を含むこと特徴とする、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記腹膜透析が周期腹膜透析を含むことを特徴とする、請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物が、少なくとも１つの他の腹膜透析液と組み合わせて使用することを特徴とする、請求項３１、３２または３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記透析物が、腹腔内投薬と共に使用することを特徴とする、請求項３１ないし３４のいずれかに記載の使用。
【請求項３６】
前記透析物が、電解質投与と共に使用することを特徴とする、請求項３１ないし３５のいずれかに記載の使用。
【請求項３７】
血液透析において請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物の使用。
【請求項３８】
前記透析物が、少なくとも１つの他の血液透析液と組み合わせて使用することを特徴とする、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
腎代替療法において、請求項１ないし２４のいずれかに記載の前記透析物の使用。
【請求項４０】
請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物を含む透析液。
【請求項４１】
請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物を含む腹膜透析液。
【請求項４２】
末期の腎臓病患者を治療する方法において、前記方法は、腹膜透析中の患者に対して請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物を投与するステップを含むことを特徴とする、方法。
【請求項４３】
前記透析物を１日に２回以上投与することを特徴とする、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物の、血管内容積増量剤または静脈利尿剤としての使用。
【請求項４５】
浮腫、頭蓋内圧の上昇、中毒または電解質平衡異常を有する患者を治療するための、請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物の使用。
【請求項４６】
前記浮腫が嚢浮腫を含むことを特徴とする、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
透析液を製剤化するためのキットにおいて、前記キットは、
（ａ）凍結乾燥ポリグリセリンを含み、前記ポリグリセリンは分子量が約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでであり；さらに
（ｂ）前記透析乾燥ポリグリセリンを使用して前記透析液を製剤化するためのインストラクションを含むことを特徴とする、キット。
【請求項４８】
前記ポリグリセリンの分子量が約０．４８ｋＤａから約３．０ｋＤａまでであることを特徴とする、請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
１つまたはそれ以上の電解質をさらに含むことを特徴とする、請求項４７または４８に記載のキット。
【請求項５０】
１つまたはそれ以上のアミノ酸をさらに含むことを特徴とする、請求項４７、４８または４９に記載のキット。
【請求項５１】
１つまたはそれ以上の拡散剤をさらに含むことを特徴とする、請求項４７ないし５０のいずれかに記載のキット。
【請求項５２】
１つまたはそれ以上の浸透圧剤をさらに含むことを特徴とする、請求項４７ないし５１のいずれかに記載のキット。
【請求項５３】
前記浸透圧剤または拡散剤が、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸塩生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントース、キシリトール、合成ポリマーまたは天然ポリマーを含むことを特徴とする、請求項５１または５２に記載のキット。
【請求項５４】
透析液を製剤化するためのキットにおいて、前記キットは、
（ａ）請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物と；
（ｂ）前記透析物を使用して前記透析液を製剤化するためのインストラクションとを含むことを特徴とする、キット。
【請求項５５】
請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物と、透析液として使用するための、少なくとも１つの生理学的に許容される塩、緩衝剤、希釈剤、または賦形剤を含むことを特徴とする、組成物。
【請求項５６】
前記組成物が水溶液中にあることを特徴とする、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記組成物が凍結乾燥製剤であることを特徴とする、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５８】
超分岐ポリグリセリンを含む腹膜透析液において、前記超分岐ポリグリセリンの分子量が、約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでであり、直鎖ポリグリセリンの分子量が、約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでであるか、またはその組み合わせであることを特徴とする、腹膜透析液。
【請求項５９】
前記ポリグリセリンの分子量が、約０．４８ｋＤａから約３．０ｋＤａまでであることを特徴とする、請求項５８に記載の腹膜透析液。
【請求項６０】
１つまたはそれ以上の電解質をさらに含むことを特徴とする、請求項５８または５９に記載の腹膜透析液。
【請求項６１】
１つまたはそれ以上のアミノ酸をさらに含むことを特徴とする、請求項５８、５９または６０に記載の腹膜透析液。
【請求項６２】
１つまたはそれ以上の拡散剤をさらに含むことを特徴とする、請求項５８ないし６１のいずれかに記載の腹膜透析液。
【請求項６３】
１つまたはそれ以上の浸透圧剤をさらに含むことを特徴とする、請求項５８ないし６２のいずれかに記載の腹膜透析液。
【請求項６４】
前記浸透圧剤または拡散剤が、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸塩生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントース、キシリトール、合成ポリマーまたは天然ポリマーを含むことを特徴とする、請求項６２または６３９に記載の腹膜透析液。
【請求項６５】
腎不全、  腎臓病、中毒、浮腫または電解質平衡異常を治療する際に使用するための、請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物。
【請求項６６】
患者の腎不全、腎臓病、中毒、浮腫または電解質平衡異常を治療する方法において、前記方法が、請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物を患者に投与するステップを含むことを特徴とする、方法。
【請求項６７】
毒素、分子、イオンまたは老廃物を体液から除去するための生体外方法において、前記方法は、請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物を半透膜によって体液から分離するステップと；毒素、分子、イオンまたは老廃物を前記体液から前記半透膜を介して前記透析物内に流れ込むようにするステップとを含むことを特徴とする、生体外方法。
【請求項６８】
哺乳類の透析における、請求項１ないし２４のいずれかに記載の透析物の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１２年４月２４日に出願された米国特許仮出願番号第６１/６３７，７１６号）に対する優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、ポリグリセリン分野に関する。特に、本発明は、ポリグリセリンに基づく浸透圧剤および拡散剤、ならびにその用途に関する。
【０００３】
多くの生理的機能は、半透膜を横切って水分または溶質を輸送することを必要とする。このような輸送のための駆動力は、膜全体に亘って存在する濃度勾配である。膜の孔が溶質を収容するのに十分な大きさであると仮定した場合、動的平衡を達成するために、溶質がより集中した膜の側面から、あまり集中していない膜の側面へと拡散することになる。拡散は、プロセス発生にエネルギーを費やさないため、一種の受動輸送である。浸透作用は、水分が低張溶液から高張溶液まで選択的透過膜を横切って移動する受動輸送の特例である。これらのプロセスは両方共、溶質の濃度に依存するので、拡散および浸透作用は、系統の拡散剤または浸透圧剤を添加することにより調節可能である。例えば、電解質平衡異常、酸塩基平衡異常、血圧、老廃物除去、および液体の貯留に関連する症状に対する多くの治療は、生体内または生体外のいずれかで、拡散剤および浸透圧剤またはそのいずれかを使用して、体液から溶質または水分を除去する必要があるか、または  浸透圧剤を使用して脱水症状を誘発することが必要である。
【０００４】
腎機能が低下した結果、このような平衡異常が生じる場合、患者は、腎代替療法に２つのオプション、すなわち透析および腎移植を有する。臨床診療では、２つの透析形態、すなわち血液透析（“ＨＤ”）および腹膜透析（“ＰＤ”）を用いる。ＰＤは、ＰＤ率がカナダ国家透析プログラムの０ないし７０％を含む状態でＨＤと共に使用することも可能である（グラスマン・エー（Grassmann, A）他、（2005）Nephrol. Dial. Transplant 20(12) : 2587 - 2593）。病院ベースのＨＤ患者と比較してＰＤ患者に対する非劣性転帰を疫学データが実証している（ボネッシュ・イー・エフ（Vonesh, E.F.）他、（2006）Kidney Int. Suppl. 103 : S3 ― S11）.
【０００５】
ＨＤは、外部装置を用いて血管回路を介して患者の血液を浄化し、ＰＤは、老廃物排泄のためのフィルタとして患者自身の腹腔膜、すなわち腹膜を使用する。ＨＤは通常、週に３回、３時間ないし４時間かけて透析施設内で行われ、そこでは、正看護師および技師が内科医の指導の下で透析機械を用いて所定の治療を行う。透析施設職員による訓練を受けた後、患者はＰＤを自宅で１日に複数回行い、それによって、より独立して生活を営むことが出来る。しかし、ＰＤは、留置ＰＤカテーテルおよび備品を定期的に維持管理し、保守する必要がある。このように自律性が増すことによって、ＰＤ患者の生活の質および治療満足度が、ＨＤ患者と比較して向上する（テオフィロウ・ピー（Theofilou, P. (2011) J. Clin. Med. Res. 3(3):132-138 ; ルービン・エイチ・アール（Rubin,H.R.）他、(2004) / Am. Med. Assoc. 291(6):697-703)。ＰＤはまた、患者あたり年間、数万ドルのオーダで、ＨＤよりも廉価であることが示されており（シャリフ・エー、バブーラル・ケー (Sharif, A., Baboolal, K.) (2011) Perit. Dial. Int. Suppl. 2 : S58-S62)、従って、医療予算、医療基盤および公共医療サービスへのアクセスが制限されている開発途上国では益々好まれつつある（ナヤック・ケー・エス(Nayak, K. S.)他、(2009) Contrib. Nephrol. 163 : 270-277）。
【０００６】
さらに、多くの研究が、ＰＤ患者におけるより優れた保存後遺腎機能を実証している（マロン・ビー（Marron, B.）他、(2008) Kidney Int. Suppl. 108 : S42-S51 ; ラング・エス・エム (Lang, S.M.) 他、(2001) Perit. Dial. Int. 21(1) : 52-57)。これによって、直接に、リン酸塩、塩、および液体をより良く扱うことになり、その結果、ＰＤ患者の食事制限が減じられ、生活の質が向上することになる（マロン・ビー （Marron, B.）他、(2008) Kidney Int. Suppl. 108 : S42-S51）。患者はまた、貧血症や左心室肥大の発生が低減したことを実証している（マロン・ビー（Marron, B.）他、(2008) Kidney Int. Suppl. 108 : S42-S51）。これによって、適合するＨＤ患者と比較してＰＤ患者の心不全入院が低減している理由を説明できる（トレスパラシオス・エフ・シー (Trespalacios, F.C.) 他、(2003) Am. J. Kidney Dis. 41(6) : 1267-1277)。
【０００７】
また、ＰＤに関して、末期の腎臓病の患者に対して、ＨＤよりも腎移植への好適な橋渡しとなるという証拠が増えつつある。ＰＤ患者にとって、肝炎感染があまり発生せず、それによって後の免疫抑制療法での合併症があまり発生しない可能性がある（ヤング・キュー(Yang, Q.)他、(2009) Clin. Nephrol. 72(1) : 62-68）。移植片転帰は、腎移植を受ける適合ＨＤ調節と比較して、ＰＤ患者に関して改良されているように思える（セザー・エス（Sezer, S.）他、(2011) Transplant Proc. 43(2) : 485-487 ; ドメニチ・エー (Domenici, A.) 他、(2011) Int. J. Nephrol. 2011 : 204216 ; ブレヤー・エー・ジェイ (Bleyer, A. J.) 他、(1999) J. Am. Soc. Nephrol. 10(1) : 154-159 ; ゴールドファーブ・ラムヤンツェブ・エー・エス (Goldfarb-Rumyantzev, A.S.) 他、(2005) Am. J. Kidney Dis. 46(3) : 537-549）。ＰＤ患者もまた、生着不全の場合には、将来の透析のための血管アクセスを保存する。従って、適時の腎移植を待ち望んでいる成人および小児患者に対する排他的移植前透析モダリティとして、まずＰＤを開始し、ＰＤを提供する試みをするよう誘発する。
【０００８】
現在のＰＤ液は、主要浸透圧剤として高濃度のグルコースを用いて生成することも可能である。このグルコースは、ＰＤ患者のための全身および局所の合併症を発生する可能性もある。毎日グルコースに曝すことにより、高血糖症、高インスリン血症、肥満および糖尿病の憎悪を生じる可能性がある。さらに、グルコースやグルコース分解生成物に曝すことによって、異常中皮形質変換、不適応性血管新生および限外濾過不全（ＵＦＦ）をもたらす腹膜を直接損傷することが示されている。この現象は、小溶質に対する膜透過性と、腹膜内グルコースの迅速吸収と、ＰＤ間の液体除去不良との増大によって臨床的に特徴づけられる。ＵＦＦおよびこのようなＰＤに対する液体除去不良は、患者がＰＤを中止しＨＤへの移行を必要とする主たる理由の１つとなる。さらに、グルコースを使用することによって、腹膜炎の発症に対するＰＤ患者の感受性が増大し、残留腎機能が低減し、腹膜機能を失うことに関連する可能性もある。腹膜炎が軽減することによって、ＵＦＦを遅延させ、患者がＰＤに費やす時間を延長する可能性もある。グルコース暴露を最小限にするにより、ＰＤに関連する代謝性合併症のうちのいくつかを防ぐことも可能である。局所宿主防御を向上し、腹膜内のグルコース濃度を低減することにより、無菌性および細菌性腹膜炎の割合を低減することも可能である。
【０００９】
長期間のグルコース暴露で生じる問題の多くを軽減するために、巨大グルコース系ポリマーであるイコデキストリンが設計されている。実際、イコデキストリン療法で見られる高レベルの血中マルトースにも拘わらず、イコデキストリンを含有する患者の所定ＰＤレジメン内の代謝パラメータが改良されていることを、臨床試験は示している。特に、ＰＤ患者の腹膜溶出物の細胞数は、グルコースよりもイコデキストリンの方がかなり高く、これは、腹膜炎におけるイコデキストリンの潜在的進行中の役割を示す。グルコースがもはや体内から水分を除去しない場合には、イコデキストリンの主たる臨床的役割は、ＵＦＦが確立した患者内部にある。イコデキストリンは大型であるため、より長い期間、腹腔内に残存し、それによって、グルコースと比較して、より信頼のおける限外濾過を達成することになる。さらに、イコデキストリンは、変動分子量の多分散分子として透析液内に存在し、同じ濃度の単分散ポリマーと比較して、浸透圧効率を低減することになる。また、イコデキストリンは、その流体反応速度が相対的に遅いため、延長ドエルに対して１日当たり一回使用出来るのみである。１日当たり複数のドエルに対して使用可能な代替の生体適合性ＰＤ液の必要性がいまだにあると思われる。
【００１０】
ＰＤ液のｐＨは、ＰＤ液の生体適合性における役割を果たすことも可能である。生理的ｐＨのＰＤ液は、最終的に腹膜不全をもたらす腹膜炎を防ぐことも可能である。従来のＰＤ液は、一般に酸性である。従って、生理的ｐＨのＰＤ液を開発することによって、腹膜の生存能を延長することも可能である。
【発明の概要】
【００１１】
本出願は、ここで述べるポリグリセリンが、驚異的な限外濾過能力、老廃物除去特性または溶液クリアランス特性を有し、さらに、一般に使用する腹膜透析（ＰＤ）液と比較した場合に腹膜損傷（すなわち、線維化、血管新生、被嚢性腹膜硬化症およびその結果生じる限外濾過不全（ＵＦＦ））を、同程度まで、もしくは全く示さないか、またはそのいずれかであるという発見に一部基づくものである。さらに、本出願は、ここで述べるポリグリセリンが、一般に使用するＰＤ液と比較して、驚異的に優れた細胞生存性を示すという発見に一部基づくものである。
【００１２】
ここで述べる実施形態は、驚異的な限外濾過能力を有する非グルコース系透析物を提供する。ここで述べる実施形態は、驚異的な老廃物除去特性を有する非グルコース系透析物を提供する。ココで述べる実施形態は、驚異的な溶質クリアランス特性を有する非グルコース系透析物を提供する。ここで述べる実施形態は、驚異的に腹膜損傷（すなわち、線維化、血管新生、被嚢性腹膜硬化症およびその結果生じる限外濾過不全（ＵＦＦ））を示さない非グルコース系透析物を提供する。ここで述べる実施形態は、驚異的に最小の腹膜傷害（すなわち、線維化、血管新生、被嚢性腹膜硬化症およびその結果生じる限外濾過不全（ＵＦＦ））を示す非グルコース系透析物を提供する。ここで述べる実施形態は、驚異的に優れた細胞生存特性を有する非グルコース系透析物を提供する。
【００１３】
一局面では、本発明は、ポリグリセリンを含有する透析物を提供し、ここではポリグリセリンは、約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでの分子量である。さらに他の実施形態では、ポリグリセリンの分子量は、約０．１６ｋＤａから約５９ｋＤａまで、約０．１７ｋＤａから約５８ｋＤａまで、約０．１８Ｄａから約５７ｋＤａまで、約０．１９ｋＤａから約５６ｋＤａまで、約０．２０ｋＤａから約５５ｋＤａまで、約０．２１ｋＤａから約５４ｋＤａまで、約０．２２ｋＤａから約５３ｋＤａまで、約０．２３ｋＤａから約５２ｋＤａまで、約０．２４ｋＤａから約５１ｋＤａまで、約０．２５ｋＤａから約５０ｋＤａまで、約０．２６ｋＤａから約４９ｋＤａまで、約０．２７ｋＤａから約４８ｋＤａまで、約０．２８ｋＤａから約４７ｋＤａまで、約０．２９ｋＤａから約４６ｋＤａまで、約０．３０ｋＤａから約４５ｋＤａまで、約０．３１ｋＤａから約４４ｋＤａまで、約０．３２ｋＤａから約４３ｋＤａまで、約０．３３ｋＤａから約４２ｋＤａまで、約０．３４ｋＤａから約４１ｋＤａまで、約０．３５ｋＤａから約４０ｋＤａまで、約０．３６ｋＤａから約３９ｋＤａまで、約０．３７ｋＤａから約３８ｋＤａまで、約０．３８ｋＤａから約３７ｋＤａまで、約０．３９ｋＤａから約３６ｋＤａまで、約０．４０ｋＤａから約３５ｋＤａまで、約０．４１ｋＤａから約３４ｋＤａまで、約０．４２ｋＤａから約３３ｋＤａまで、約０．４３ｋＤａから約３２ｋＤａまで、約０．４４ｋＤａから約３１ｋＤａまで、約０．４５ｋＤａから約３０ｋＤａまで、約０．４６ｋＤａから約２９ｋＤａまで、約０．４７ｋＤａから約２８ｋＤａまで、約０．４８ｋＤａから約２７ｋＤａまで、約０．４９ｋＤａから約２６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２４ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２３ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２２ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２１ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２０ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１９ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１８ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１７ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１４ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１３ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１２ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１１ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１０ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約９ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約８ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約７ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約４ｋＤａまで、または約０．５０ｋＤａから約３ｋＤａまでである。
【００１４】
別の実施形態では、透析物のｐＨは、約２．０から約９．０まで、約２．１から約８．９まで、約２．２から約８．８まで、約２．３から約８．７まで、約２．４から約８．６まで、約２．５から約８．５まで、約２．６から約８．４まで、約２．７から約８．３まで、約２．８から約８．２まで、約２．９から約８．１まで、約３．０から約８．０まで、約３．１から約８．０まで、約３．２から約８．０まで、約３．３から約８．０まで、約３．４から約８．０まで、約３．５から約８．０まで、約３．６から約８．０まで、約３．７から約８．０まで、約３．８から約８．０まで、約３．９から約８．０まで、約４．０から約８．０まで、約４．１から約８．０まで、約４．２から約８．０まで、約４．３から約８．０まで、約４．４から約８．０まで、約４．５から約７．９まで、約４．６から約７．９まで、約４．７から約７．９まで、約４．８から約７．９まで、約４．９から約７．９まで、約５．０から約７．９まで、約５．１から約７．９まで、約５．２から約７．８まで、約５．３から約７．８まで、約５．４から約７．８まで、約５．５から約７．８まで、約５．６から約７．７まで、約５．７から約７．７まで、約５．８から約７．７まで、約５．９から約７．７まで、約６．０から約７．６まで、約６．１から約７．６まで、約６．２から約７．６まで、約６．３から約７．６まで、約６．４から約７．６まで、または約６．５から約７．５までである。
【００１５】
他の実施形態では、透析物は水溶液内にある。一実施形態では、ポリグリセリンは約０．０１重量％から約５０重量％までの透析液、約０．０２重量％から約４９重量％までの透析液、約０．０４重量％から約４８重量％までの透析液、約０．０６重量％から約４７重量％までの透析液、約０．０８重量％から約４６重量％までの透析液、約０．１０重量％から約４５重量％までの透析液、約０．１２重量％から約４４重量％までの透析液、約０．１４重量％から約４３重量％までの透析液、約０．１６重量％から約４２重量％までの透析液、約０．１８重量％から約４１重量％までの透析液、約０．２０重量％から約４０重量％までの透析液、約０．２２重量％から約３９重量％までの透析液、約０．２４重量％から約３８重量％までの透析液、約０．２６重量％から約３７重量％までの透析液、約０．２８重量％から約３６重量％までの透析液、約０．３０重量％から約３５重量％までの透析液、約０．３２重量％から約３４重量％までの透析液、約０．３４重量％から約３３重量％までの透析液、約０．３６重量％から約３２重量％までの透析液、約０．３８重量％から約３１重量％までの透析液、約０．４０重量％から約３０重量％までの透析液、約０．４０重量％から約２９重量％までの透析液、約０．４２重量％から約２８重量％までの透析液、約０．４４重量％から約２７重量％までの透析液、約０．４６重量％から約２６重量％までの透析液、約０．４８重量％から約２５重量％までの透析液、約０．５０重量％から約２５重量％までの透析液、約０．５２重量％から約２５重量％までの透析液、約０．５４重量％から約２５重量％までの透析液、約０．５６重量％から約２５重量％までの透析液、約０．５８重量％から約２５重量％までの透析液、約０．６０重量％から約２５重量％までの透析液、約０．６２重量％から約２５重量％までの透析液、約０．６４重量％から約２５重量％までの透析液、約０．６６重量％から約２５重量％までの透析液、約０．６８重量％から約２５重量％までの透析液、約０．７０重量％から約２４重量％までの透析液、約０．７２重量％から約２４重量％までの透析液、約０．７４重量％から約２４重量％までの透析液、約０．７６重量％から約２４重量％までの透析液、約０．７８重量％から約２４重量％までの透析液、約０．８０重量％から約２４重量％までの透析液、約０．８２重量％から約２４重量％までの透析液、約０．８４重量％から約２４重量％までの透析液、約０．８６重量％から約２４重量％までの透析液、約０．８８重量％から約２４重量％までの透析液、約０．９０重量％から約２４重量％までの透析液、約０．９２重量％から約２３重量％までの透析液、約０．９４重量％から約２３重量％までの透析液、約０．９６重量％から約２３重量％までの透析液、約０．９８重量％から約２３重量％までの透析液、約１．００重量％から約２３重量％までの透析液、約１．０２重量％から約２２重量％までの透析液、約１．０４重量％から約２２重量％までの透析液、約１．０６重量％から約２２重量％までの透析液、約１．０８重量％から約２２重量％までの透析液、約１．１０重量％から約２２重量％までの透析液、約１．１２重量％から約２１重量％までの透析液、約１．１４重量％から約２１重量％までの透析液、約１．１６重量％から約２１重量％までの透析液、約１．１８重量％から約２１重量％までの透析液、約１．２０重量％から約２１重量％までの透析液、約１．２１重量％から約２０重量％までの透析液、約１．２２重量％から約２０重量％までの透析液、約１．２３重量％から約２０重量％までの透析液、約１．２４重量％から約２０重量％までの透析液、または約１．２５重量％から約２０重量％までの透析液を含む。
【００１６】
さらに他の実施形態では、透析物は容量オスモル濃度が、１リットル当たり約１５０ミリオスモルから１リットル当たり約１５００ミリオスモルまで、１リットル当たり約１５０ミリオスモルから１リットル当たり約１４８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１５０ミリオスモルから１リットル当たり約１４６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１５０ミリオスモルから１リットル当たり約１４４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１６０ミリオスモルから１リットル当たり約１４２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１６０ミリオスモルから１リットル当たり約１４００ミリオスモルまで、１リットル当たり約１６０ミリオスモルから１リットル当たり約１３８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１６０ミリオスモルから１リットル当たり約１３６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１７０ミリオスモルから１リットル当たり約１３４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１７０ミリオスモルから１リットル当たり約１３２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１７０ミリオスモルから１リットル当たり約１３００ミリオスモルまで、１リットル当たり約１７０ミリオスモルから１リットル当たり約１２８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１８０ミリオスモルから１リットル当たり約１２６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１８０ミリオスモルから１リットル当たり約１２４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１８０ミリオスモルから１リットル当たり約１２２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約１８０ミリオスモルから１リットル当たり約１２００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２００ミリオスモルから１リットル当たり約１１８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２００ミリオスモルから、１リットル当たり約１１６００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２００ミリオスモルから１リットル当たり約１１４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２００ミリオスモルから１リットル当たり約１１２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２１０ミリオスモルから１リットル当たり約１１００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２１０ミリオスモルから１リットル当たり約１０８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２１０ミリオスモルから１リットル当たり約１０６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２１０ミリオスモルから１リットル当たり約１０４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２２０ミリオスモルから１リットル当たり約１０２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２２０ミリオスモルから１リットル当たり約１０００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２２０ミリオスモルから１リットル当たり約９８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２２０ミリオスモルから１リットル当たり約９６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２３０ミリオスモルから１リットル当たり約９４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２３０ミリオスモルから１リットル当たり約９２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２３０ミリオスモルから１リットル当たり約９００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２３０ミリオスモルから１リットル当たり約８８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２４０ミリオスモルから１リットル当たり約８６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２４０ミリオスモルから１リットル当たり約８４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２４０ミリオスモルから１リットル当たり約８２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２４０ミリオスモルから１リットル当たり約８００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２６０ミリオスモルから１リットル当たり約７８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２６０ミリオスモルから１リットル当たり約７６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２６０ミリオスモルから１リットル当たり約７４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２６０ミリオスモルから１リットル当たり約７２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２８０ミリオスモルから１リットル当たり約７００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２８０ミリオスモルから１リットル当たり約６８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２８０ミリオスモルから１リットル当たり約６６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２８０ミリオスモルから１リットル当たり約６４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約６２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約６００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約５８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約５６０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約５４０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約５２０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約５００ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約４８０ミリオスモルまで、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約４６０ミリオスモルまで、または１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約４５０ミリオスモルまでである。
【００１７】
別の実施形態では、ポリグリセリンは、約１．０ないし１５、約１．０ないし約１４、約１．０ないし約１３、約１．０ないし約１２、約１．０ないし約１１、約１．０ないし約１０、約１．０ないし約９、約１．０ないし約８、約１．０ないし約７、約１．０ないし約６、または約１．０ないし約５の多分散度を有する。
【００１８】
一実施形態では、ポリグリセリンの分岐度は、約０．５から約０．７まで、約０．６から約０．７まで、約０．５から約０．６まで、約０．５５から約０．７まで、または約０．５５から約０．６５までである。
【００１９】
別の実施形態では、透析物は、第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンを含んでおり、第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンの各々の分子量は、他の第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンの分子量とは異なる。
【００２０】
他の実施形態では、ポリグリセリンは、１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方をさらに含むことも可能である。一実施形態では、１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方を結合して、ポリグリセリン上のヒドロキシル基の約１％から約１００％を形成する。別の実施形態では、１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方を結合して、ポリグリセリン上のヒドロキシル基の約１％から約４０％を形成する。さらに他の実施形態では、１つまたはそれ以上の疎水基、親水基またはその両方は、１つまたはそれ以上のカルボキシル酸、アミン、置換アミン、アミノ酸、リン酸塩、硫酸塩、アルキル、アルキルエーテル、芳香族基、双性イオン基、炭水化物、ジスルフィドまたはチオールを含む。
【００２１】
一実施形態では、透析物は、１つまたはそれ以上の電解質をさらに含む。別の実施形態では、透析物は、１つまたはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。他の実施形態では、透析物は、１つまたはそれ以上の拡散剤をさらに含む。さらに他の実施形態では、透析物は、１つまたはそれ以上の浸透圧剤をさらに含む。一実施形態では、浸透圧剤または拡散剤が、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸塩生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントースまたはキシリトールを含む。
【００２２】
別の局面では、ここで述べるように、分子、溶質またはイオンを膜、半透膜、生体膜、合成半透膜またはその組み合わせを横切って輸送するための透析物の使用を開示する。
【００２３】
他の局面では、透析において、ここで述べる透析物を使用することを開示する。一実施形態では、透析は、間欠的透析を含む。別の実施形態では、透析は持続的透析を含む。他の実施形態では、透析物は、半透膜によって体液から分離され、水分、毒素、分子、イオンまたは老廃物が体液から半透膜を介して透析物内へと流れ込む。さらに他の実施形態では、透析物はフィルタと共に用いられ、透析液を滅菌するか、または毒素、分子、イオンもしくは老廃物をそこから除去する。
【００２４】
別の局面では、腹膜透析において、ここで述べる透析物を使用することを開示する。一実施形態では、腹膜透析は、持続的外来腹膜透析を含む。別の実施形態では、腹膜透析は、周期腹膜透析を含む。他の実施形態では、ここで述べる透析物は、少なくとも１つの他の腹膜透析液と組み合わせて使用する。さらに他の実施形態では、透析物は電解質投与と共に使用する。
【００２５】
さらに他の局面では、血液透析において、ここで述べる透析物を使用することを開示する。一実施形態では、透析物は、少なくとも１つの他の血液透析液と組み合わせて使用する。
一局面では、腎代替療法において、ここで述べる透析物を使用することを開示する。
別の局面では、本発明は、ここで述べる透析物を含む透析液を提供する。
他の局面では、本発明は、ここで述べる透析物を含む腹膜透析液を提供する。
【００２６】
本発明のさらに他の局面に従って、末期の腎臓病患者を治療する方法を提供する。本方法は、ここで述べる透析物を腹膜透析中の患者へ投与するステップを含む。一実施形態では、透析物を１日に２回以上投与してもよい。
別の局面では、ここで述べる透析物を血管内容積増量剤または静脈利尿剤として使用することを開示する。
【００２７】
他の局面では、ここで述べる透析物を使用して、浮腫、頭蓋内圧の上昇、中毒または電解質平衡異常を有する患者を治療することを開示する。一実施形態では、浮腫は、嚢浮腫を含む。
【００２８】
一局面では、本発明は、透析液を製剤化するためのキットを提供し、該キットは、分子量が約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまでである凍結乾燥ポリグリセリンと、透析液を製剤化するための凍結乾燥ポリグリセリンを使用するためのインストラクションとを含む。一実施形態では、ポリグリセリンの分子量は、約０．１６ｋＤａから約５９ｋＤａまで、約０．１７ｋＤａから約５８ｋＤａまで、約０．１８ｋＤａから約５７ｋＤａまで、約０．１９ｋＤａから約５６ｋＤａまで、約０．２０ｋＤａから約５５ｋＤａまで、約０．２１ｋＤａから約５４ｋＤａまで、約０．２２ｋＤａから約５３ｋＤａまで、約０．２３ｋＤａから約５２ｋＤａまで、約０．２４ｋＤａから約５１ｋＤａまで、約０．２５ｋＤａから約５０ｋＤａまで、約０．２６ｋＤａから約４９ｋＤａまで、約０．２７ｋＤａから約４８ｋＤａまで、約０．２８ｋＤａから約４７ｋＤａまで、約０．２９ｋＤａから約４６ｋＤａまで、約０．３０ｋＤａから約４５ｋＤａまで、約０．３１ｋＤａから約４４ｋＤａまで、約０．３２ｋＤａから約４３ｋＤａまで、約０．３３ｋＤａから約４２ｋＤａまで、約０．３４ｋＤａから約４１ｋＤａまで、約０．３５ｋＤａから約４０ｋＤａまで、約０．３６ｋＤａから約３９ｋＤａまで、約０．３７ｋＤａから約３８ｋＤａまで、約０．３８ｋＤａから約３７ｋＤａまで、約０．３９ｋＤａから約３６ｋＤａまで、約０．４０ｋＤａから約３５ｋＤａまで、約０．４１ｋＤａから約３４ｋＤａまで、約０．４２ｋＤａから約３３ｋＤａまで、約０．４３ｋＤａから約３２ｋＤａまで、約０．４４ｋＤａから約３１ｋＤａまで、約０．４５ｋＤａから約３０ｋＤａまで、約０．４６ｋＤａから約２９ｋＤａまで、約０．４７ｋＤａから約２８ｋＤａまで、約０．４８ｋＤａから約２７ｋＤａまで、約０．４９ｋＤａから約２６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２４ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２３ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２２ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２１ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２０ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１９ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１８ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１７ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１４ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１３ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１２ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１１ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１０ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約９ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約８ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約７ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約４ｋＤａまで、または約０．５０ｋＤａから約３ｋＤａまでである。別の実施形態では、キットは１つまたはそれ以上の電解質をさらに含む。他の実施形態では、キットは１つまたはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。さらに他の実施形態では、キットは、１つまたはそれ以上の拡散剤をさらに含む。他の実施形態では、キットは１つまたはそれ以上の浸透圧剤をさらに含む。一実施形態では、浸透圧剤または拡散剤は、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸塩生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントースまたはキシリトールを含む。
【００２９】
別の局面では、本発明は、透析液を製剤化するためのキットを提供し、該キットは、ここで述べる透析物と、透析液を製剤化するためのインストラクションとを含む。
【００３０】
他の局面では、本発明は、ここで述べる透析物と、透析液として使用するための少なくとも１つの生理学的に許容される塩、緩衝剤、希釈剤、または賦形剤を含む組成物を提供する。一実施形態では、組成物は水溶液中にある。他の実施形態では、組成物は凍結乾燥製剤である。
【００３１】
別の局面では、本発明は、超分岐ポリグリセリンを含む腹膜透析液を提供し、超分岐ポリグリセリンは分子量が、約０．１５ｋＤaから約６０ｋＤａである。一実施形態では、ポリグリセリンの分子量は、約０．１６ｋＤａから約５９ｋＤａまで、約０．１７ｋＤａから約５８ｋＤａまで、約０．１８ｋＤａから約５７ｋＤａまで、約０．１９ｋＤａから約５６ｋＤａまで、約０．２０ｋＤａから約５５ｋＤａまで、約０．２１ｋＤａから約５４ｋＤａまで、約０．２２ｋＤａから約５３ｋＤａまで、約０．２３ｋＤａから約５２ｋＤａまで、約０．２４ｋＤａから約５１ｋＤａまで、約０．２５ｋＤａから約５０ｋＤａまで、約０．２６ｋＤａから約４９ｋＤａまで、約０．２７ｋＤａから約４８ｋＤａまで、約０．２８ｋＤａから約４７ｋＤａまで、約０．２９ｋＤａから約４６ｋＤａまで、約０．３０ｋＤａから約４５ｋＤａまで、約０．３１ｋＤａから約４４ｋＤａまで、約０．３２ｋＤａから約４３ｋＤａまで、約０．３３ｋＤａから約４２ｋＤａまで、約０．３４ｋＤａから約４１ｋＤａまで、約０．３５ｋＤａから約４０ｋＤａまで、約０．３６ｋＤａから約３９ｋＤａまで、約０．３７ｋＤａから約３８ｋＤａまで、約０．３８ｋＤａから約３７ｋＤａまで、約０．３９ｋＤａから約３６ｋＤａまで、約０．４０ｋＤａから約３５ｋＤａまで、約０．４１ｋＤａから約３４ｋＤａまで、約０．４２ｋＤａから約３３ｋＤａまで、約０．４３ｋＤａから約３２ｋＤａまで、約０．４４ｋＤａから約３１ｋＤａまで、約０．４５ｋＤａから約３０ｋＤａまで、約０．４６ｋＤａから約２９ｋＤａまで、約０．４７ｋＤａから約２８ｋＤａまで、約０．４８ｋＤａから約２７ｋＤａまで、約０．４９ｋＤａから約２６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２４ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２３ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２２ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２１ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約２０ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１９ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１８ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１７ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１４ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１３ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１２ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１１ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約１０ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約９ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約８ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約７ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約６ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約５ｋＤａまで、約０．５０ｋＤａから約４ｋＤａまで、または約０．５０ｋＤａから約３ｋＤａまでである。他の実施形態では、腹膜透析液は、１つまたはそれ以上の電解質をさらに含む。別の実施形態では、腹膜透析液は、１つまたはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。他の実施形態では、腹膜透析液は、１つまたはそれ以上の拡散剤をさらに含む。さらに他の実施形態では、腹膜透析液は、１つまたはそれ以上の浸透圧剤をさらに含む。一実施形態では、浸透圧剤または拡散剤が、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸��生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントースまたはキシリトールを含む。
別の局面では、ここで述べる透析物は、腎不全、腎臓病、中毒、浮腫または電解質平衡異常を治療する際に使用することも可能である。
【００３２】
本発明の別の局面に従って、患者の腎不全、腎臓病、中毒、浮腫または電解質平衡異常を治療するための方法を提供する。該方法は、ここで述べる透析物を患者に投与するステップを含む。
【００３３】
本発明のさらに他の局面に従って、毒素、分子、イオンまたは老廃物を体液から除去するための生体外方法を提供する。該方法は、ここで述べる透析物を半透膜によって体液から分離するステップと、毒素、分子、イオンまたは老廃物が体液から半透膜を介して透析物内に流れ込むようにするステップとを含む。
他の局面では、ここで述べる透析物を哺乳類の透析に使用することを開示する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１Ａ】および
【図１Ｂ】は、超分岐ポリグリセリン（ＨＰＧ）および直鎖ポリグリセリン（ＬＰＧ）の化学構造をそれぞれ示し、図１Ｂの“ｎ”は約１から約８１０までの範囲でもよい。
【図２】は、様々なＨＰＧ腹膜透析（ＰＤ）液に対する従来のＰＤ液（ＰＤＳ）によって生じた液体除去（限外濾過）を示す。
【図３】は、様々なＨＰＧＰＤ液対ＰＤＳによって生じた腹膜損傷および白血球浸潤を示す。
【図４】は、様々なＨＰＧＰＤ液対ＰＤＳを用いて回収した液体における好血球の割合のＳＣＣ／ＦＳＣプロットを示す。
【図５】は、様々なＨＰＧＰＤ液対ＰＤＳの蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）ヒストグラムにおけるフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）細胞の典型的割合を示す。
【図６】は、ＰＤＳ対貯留ＨＰＧＰＤ液内のＦＩＴＣ染色細胞を示す。
【図７】は、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳへの暴露に続く回収済み液内の細胞のメイ・グリュンワルド・ギムザ（ＭＧＧ）染色塗抹の典型的な顕微鏡画像を示す。
【図８】は、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳへの暴露に続く培養ヒト腹膜中皮細胞（ＨＰＭＣ）における細胞の生存率対培養時間を示す。
【図９】は、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳへの暴露に続く不死化ＨＰＭＣにおける細胞の生存率対培養時間を示す。
【図１０】は、培地、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳを用いた培養の３時間後の不死化ＨＰＭＣの典型的な顕微鏡画像を示す。
【００３５】
【図１１】は、培地、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳを用いた培養の３０分後の細胞粒度を示す。
【図１２】は、培地、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳを用いた培養の６時間後の細胞死の代表的ＦＡＣＳプロットを示す。
【図１３】は、培地、ＨＰＧＰＤ液またはＰＤＳを用いた培養の６時間後に続く代表的ウェスタンブロット法を示す。
【図１４】は、ＨＰＧ溶液の容量オスモル濃度への分子量および濃度の影響に関連する代表データを示す。
【図１５】は、ＬＰＧＰＤ液による限外濾過（液体除去）に関連する代表データを示す。
【図１６】は、同様の容量オスモル濃度でのグルコースと比較して、異なるサイズのＨＰＧの限外濾過に関連する代表データを示す。
【図１７Ａ】は、異なるサイズのＨＰＧを含むＰＤ液に対する同様の容量オスモル濃度でのグルコース（フィジオニール（Physioneal）ＰＤ液による尿素除去に関連する代表データを示す。
【図１７Ｂ】は、異なるサイズのＨＰＧを含むＰＤ液に対する同様の容量オスモル濃度でのグルコース（フィジオニール（Physioneal）ＰＤ液による尿素除去に関連する代表データを示す。
【図１７Ｃ】は、異なるサイズのＨＰＧを含むＰＤ液に対する同様の容量オスモル濃度でのグルコース（フィジオニール（Physioneal）ＰＤ液による尿素除去に関連する代表データを示す。
【図１８】は、異なるサイズのＨＰＧを含むＰＤ液に対する同様の容量オスモル濃度でのグルコース（フィジオニール）ＰＤ液によるナトリウム除去に関連する代表データを示す。
【図１９】図１９Ａは、ヘマトキシリンおよびエオシン（ＦＩ＆Ｅ）で染色された組織切片の代表画像を示す。  図１９Ｂは、ＨＰＧ溶液のいずれかに対するフィジオニール液への暴露後に腹膜があまり損傷を受けていないことを示す対応する表形式グラフデータを例示する。
【図２０】は、回収済みＨＰＧＰＤ液の全てにおける好中球の割合が、ドエル時間の４時間後のフィジオニール液の割合よりも低かったことを示す代表データを例示する。
【図２１】は、有意なＦＩＴＣ染色が、回収済みフィジオニール液において見出され、一方で、低い検出可能レベルのＦＩＴＣ染色がＨＰＧＰＤ液のいずれかで見られたことを示す代表データを例示する。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
ここで間接的に定められたいずれかの用語は、本発明の技術内で理解されるように、一般にその用語に関連する意味を有するものとして理解されるべきである。
【００３７】
用語“ポリグリセリン”は、当業者に通常理解されるのでここで使用し、例えば０から１．０までの分岐度を有するポリマーを言及する場合が多く、ヒドロキシル基の数は反復単位の数に等しく、反復単位は、以下のように構成される（ここでは“ｒ”が反復単位である）。
【００３８】
【化１】
2015515481.tif 000003
【００３９】
ここでは、Ｒ１はＨ−、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ｔ−Ｂｕ−、Ｎ３−ＣＨ２−ＣＨ２、アルキル鎖（１ないし１８個の炭素）、−ＣＨ２−ＮＨ２、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＮＨ（ＣＨ３）、ｒ−、ｒ−ＣＨ２−、または（ｒ−）２ＣＨ−；Ｒ２は−ｒ、−Ｏ−ｒ，−０−ＣＨ２−ＣＨ−ｒ、または−ＯＨ；およびＲ３は−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ３、ｒ−、−ＣＨｏ−ｒ、または−ＣＨ（−ｒ）２である。上記反復単位は、示した立体化学には限定されない。“ポリグリセリン”の例としては、超分岐ポリグリセリン（ＨＰＧ）、直鎖ポリグリセリン（ＬＰＧ）、樹枝状ポリグリセリン／ポリグリセリンデンドリマー、化学修飾ポリグリセリン、生分解性ポリグリセリン、櫛状ポリグリセリン、樹枝状移植ポリグリセリン、環状ポリグリセリン、またはその組み合わせが挙げられる。ここで述べるポリグリセリンの実施形態は、すべての可能な立体化学的選択肢を含み、これらはここで例示または記述したものを含む。
【００４０】
用語“超分岐ポリグリセリン”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、分岐度が約０．４から約０．７までであるポリグリセリンについて言及する場合が多い。
【００４１】
用語“直鎖ポリグリセリン”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、分岐度が“ゼロ”であるポリグリセリンについて言及する場合が多い。
【００４２】
用語“樹脂状ポリグリセリンまたはポリグリセリンデンドリマー”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、分岐度が１．０であるポリグリセリンについて言及する場合が多い。
【００４３】
用語“透析物”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、拡散剤および浸透圧剤のいずれかまたは両方として作用出来る物質について言及する場合が多い。
【００４４】
用語“浸透圧剤”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、半透膜に亘って浸透勾配を生成し、膜を横切る水分の移動を発生させる物質について言及する場合が多い。
【００４５】
用語“拡散剤”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、膜に亘って濃度勾配を生成し、より高い溶質濃度の領域からより低い溶質濃度の領域までの溶質の移動を発生させる物質について言及する場合が多い。
用語“電解質”は、当業者によって通常理解されるため、ここで使用しており、イオン化溶質について言及する場合が多い。
【００４６】
ここで述べる透析物は、ポリグリセリンを含む。様々な実施形態においては、ポリグリセリンは、分子量が約０．１５ｋＤａから約６０ｋＤａまで、または約０．４５ｋＤａから約３．０ｋＤａまでであってもよい。ポリグリセリンは、直鎖超分岐樹脂形態で、分子量を精密に調節して合成され得る軟性の親水性脂肪族ポリエーテルポリマーである。ポリグリセリンおよびその誘導体は、生体適合性および多機能性に優れている。例えば、血液適合性が高く、非免疫原性であり、動物毒性の証拠がない無毒性である（カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、(2006) Biomaterials 27(31) : 5377-5390; カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、(2008) Biomaterials 29(11) : 1693-1704）。マウスの循環半減期は、ポリマーの分子量に依存するが、５４０ｋＤａの分子量に対して約６０時間に到達する可能性があり、細かく調整可能である。他のポリマーとは異なり、ポリグリセリンは、静脈注射の後、臓器蓄積が非常に限定されるものとして示されている（カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、(2007) Biomaterials 28(31) : 4581-4590; カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、(2008) Biomaterials 29(11) : 1693-1704）。さらに、この不活性ポリマーは、グルコースまたは炭水化物を含有せず、安定しており、生理的ｐＦＩで容易に搬送される。
【００４７】
超分岐ポリグリセリン（ＨＰＧ）として、例えば、分岐度が約０．４から約０．７までのポリグリセリンは、例えば、ゆっくりと単量体を添加してグリシドールの開環重合を多分岐することにより生成することも可能である。ポリグリセリンデンドリマーは、多重有機反応によって生成される。ＨＰＧの実施形態の代表的構造は、図１Ａに示す。この構造は、ＨＰＧを高度な機能材料にするヒドロキシル官能価を有する大型および小型分岐部を含む。例えば、ＨＣｌにおける脱保護がその後に続く１，４ジオキサンの存在下でr-BuO’K+ を開始剤として用いるエトキシエチルグリシジルエーテルの開環重合によって直鎖ポリグリセリン（ＬＰＧ）を生成することも可能である（ジャーバイス・エム（Gervais, M.）他、(2010) Macromolecules 43 : 1778-1784; スティリバ・エス (Stiriba, S.) 他、(2002) J. Am. Chem. Soc. 124 : 9698-9700 ; カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、Biomacromolecules 7 : 703-709）。ＬＰＧの実施形態の代表的構造は、図１Ｂに示す。
【００４８】
ポリグリセリンは、多くの生物医学的応用におけるその潜在性に対して調査されてきた。さらに、ポリグリセリンは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）よりも細胞毒性が低く、熱的しかも酸化的に安定している。
【００４９】
ポリグリセリンは、透明な粘稠液である。室温では、かなり粘性が高く、本質的には不揮発性である。直鎖であり且つ超分岐されたポリグリセリンは、溶液内では緻密性であり、水中での可溶性が高い（例えば、ＨＰＧは、２００ｍｇ/ｍＬよりも高い水溶性を有する）。０．１Ｎ  ＮａＮＯ３水溶液ではＭｎ＝１０４，０００であるＬＰＧの流体力学半径（Ｒｈ）は、ＱＥＬＳ測定値によって決定されるように４．５５ｎｍであってもよい。比較として、Ｍｎ＝１０４，０００であるＨＰＧのＲｈ値は、４．８５ｎｍであってもよく、同様の分子量のＰＥＧは１２．２３ｎｍであってもよい。ＬＰＧのかなり小さいＲｈ値は、他の直鎖水溶性ポリマーと比較して全く異なる溶液構造を有し、ＨＰＧの溶液構造および特性に、より近似することを示す。固有粘度の観点から、ＬＰＧはＰＥＧ（１．３０８ ｄＬ/ｇ）よりもＨＰＧ（０．０５２ ｄＬ/ｇ）により近い固有粘度（０．０４７ ｄＬ/ｇ）を有し、ＬＰＧが溶液内でかなり小型の構造を有することを再度示唆している。ポリグリセリンの固有粘度は、（タンパク質と同様の）分子量の増加と共に増加し、他の直鎖ポリマーよりはかなり低くなる。これは、ポリグリセリンが他の巨大分子と同様に浸透圧剤として使用出来るだけでなく、血行路からの老廃物を活発に溶解することも可能であり、従って、拡散剤として作用することを示唆している。
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、ｐＨが約２．０から約９．０まで、または約６．５から約７．５までであってもよい。
【００５０】
様々な実施形態では、ここで述べる透析物が水溶液中であってもよく、ポリグリセリンは、透析液の約０．０１重量％から約５０重量％まで、または透析液の約１．２５％から約２０％までを含有する。
【００５１】
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、容量オスモル濃度が、１リットル当たり約１５０ミリオスモルから１リットル当たり約１５００ミリオスモルであってもよい。腹膜透析の応用では、容量オスモル濃度は、１リットル当たり約２９０ミリオスモルから１リットル当たり約４５０ミリオスモルまでであってもよい。生体外の応用では、高容量オスモル濃度を使用可能であり、例えば、約４０重量％から約５０重量％までの０．５ｋＤａＨＰＧ溶液を使用して、１リットル当たり約１５００ミリオスモルを達成することが可能である。分子量ＨＰＧがさらに低い場合、この容量オスモル濃度は、約３０重量％から約４０重量％までのＨＰＧ溶液を用いて達成することも可能である。
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、ポリグリセリンに対して約１．０ないし１５の多分散度を有することも可能である。
【００５２】
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンを含有することも可能であり、第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンの各々の分子量は、他の第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンの分子量とは異なる。第１、第２またはそれ以上のポリグリセリンの各々の分子量は、１反復単位の近似重量に対応して、７４Ｄａだけ変化可能である。分子量はまた、約０．５ｋＤａ、約１ｋＤａ、約２ｋＤａ、または約２．５ｋＤａ等の量だけ変化可能である。
【００５３】
腹膜透析中に、血液からの水分および溶質を除去するのに必要なドエル時間が、ポリグリセリンの容量オスモル濃度に順に影響を及ぼすポリグリセリンの分子量に依存するものと思われる。様々な実施形態では、異なる分子量を特定的に組み合わせて透析物を生成することにより、有効な透析に必要なドエル時間を特定の状況に合わせることも可能である。望ましいドエル時間に再度依存して、各々のポリグリセリンの様々な比率を使用することも可能である。ポリグリセリンの組み合わせは、例えば、ポリグリセリンがより大きい多分散度を有するように合成後の純化を最小にすることにより、または小さい多分散度を有する異なるポリグリセリンを組み合わせることにより、様々な方法で取得することも可能である。
【００５４】
様々な実施形態において、ここで述べるポリグリセリンは、誘導体化することも可能である。ポリグリセリンの誘導体は、ポリマーに添加されている疎水基、親水基またはその両方を含有するポリマーを含むことも可能である。このような領域は、ポリマーのヒドロキシル基を誘導体化することにより設けることも可能である。官能性誘導体は、ポリグリセリン上のヒドロキシル基の約１％から約１００％まで、またはポリグリセリン上のヒドロキシル基の約１％から約４０％までに結合可能である。このような基をポリグリセリンに添加することにより、ヒドロキシル基の数は、もはやポリグリセリン内の反復単位の数に等しくない可能性もある。このような基をポリグリセリンに添加するための方法論は、当業者には周知である（カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、(2008) Biomaterials 29: 1693-1704; キザッケダス・ジェイ・エヌ （Kizhakkedathu, J.N.）他、(2010) Biomacromolecules 11: 2567; カインサン・アール・ケイ（Kainthan, R.K.）他、(2006) Biomaterials 27: 5377-5390;  ターク・エイチ（Turk, H.）他、(2004) Bioconjugate Chem. 15: 162; デメッデ・ジェイ（Demedde, J.）他、(2010) Proc. Nat. Acad. Sci. 107: 19679; カルデロン・エム（Calderon, M.）他、(2010) Adv. Mater. 22: 190; ウィルムズ・ディー（Wilms, D）他、(2010) Acc. Chem.  Res. 43: 129; バウデッテ・ピー（Baudette, P.）他、（20W）Anal. Chem. 83: 6500）。疎水基および親水基の例として、カルボキシル酸、アミン、置換アミン、第４級アミン、アミノ酸、リン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、ホスホン酸塩、アルキル、アルケン、アルキン、アルキルエーテル、芳香族化合物、芳香族エーテル、双性イオン基、炭水化物、ジスルフィド、ケタール、置換ケタール、アセタール、置換アセタール、エステル基、チオエステル、ウレタン、エステルアミド、アミド基、ペプチド、フェノール、ハロゲンまたはチオールが挙げられる。
【００５５】
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、１つまたはそれ以上の電解質、１つまたはそれ以上のアミノ酸、１つまたはそれ以上の拡散剤、および１つまたはそれ以上の浸透圧剤、またはそのいずれかをさらに含むことも可能である。拡散剤または浸透圧剤は、ナトリウム、塩化物、乳酸塩、重炭酸塩、重炭酸塩生成剤、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ブドウ糖、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マニトール、Ｌカミチン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、マルトース、マルトトリオース、マルトペントース、キシリトール、合成または天然ポリマーをさらに含むことも可能である。
【００５６】
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、浸透圧剤および拡散剤、またはそのいずれかとして作用することも可能であり、結果として、分子、溶質、またはイオンを、膜、半透膜、生体膜、合成半透膜またはその組み合わせを横切って輸送する際に使用することも可能である。従って、ここで述べる透析物は、体液、空洞または他のいずれかの生物系から水分または溶質を除去する必要がある状態を処置する際に使用することも可能である。このような治療の例として、ここで述べる透析物を血管内容積増量剤または静脈利尿剤として使用することが挙げられる。ここで述べる透析物は、腎臓病、浮腫（脳浮腫を含む）、頭蓋内圧の上昇、中毒または電解質平衡異常を有する患者の治療に使用することも可能であり、また、腎代替療法で使用することも可能である。
【００５７】
ここで述べる透析物は、透析において使用することも可能である。透析は、間欠的透析かまたは持続的透析のいずれであってもよい。透析は、哺乳類に対して実施可能である。透析物は、半透膜によって体液から分離可能であり、水分、毒素、分子、イオンまたは老廃物が、体液から半透膜を介して透析物内に流れ込む。ここで述べる透析物は、フィルタと共に使用して、透析液を滅菌するか、または毒素、分子、イオンまたは老廃物をそこから除去することも可能である。
【００５８】
ここで述べる透析物は、持続的外来腹膜透析（ＣＡＰＤ）または周期腹膜透析を含む腹膜透析において使用することも可能である。あるいは、ここで述べる透析物は、血液透析において使用することも可能である。透析物は、腹腔内投薬および電解質投与、またはそのいずれかと共に使用することも可能である。ここで述べる透析物は、場合に応じて、少なくとも１つの他の腹膜透析液または少なくとも１つの他の血液透析液と組み合わせて使用することも可能である。透析液または腹膜透析液は、ここで述べるように透析物を含有することも可能である。
透析液または腹膜透析液は、ここで述べるように、ＨＰＧを含有することも可能である。
【００５９】
以下で示すように、急性ＰＤのラットモデルにおいては、ＨＰＧＰＤ液は、濃度/容量オスモル濃度依存液体除去を引き起こすことも可能であり、尿素クリアランスの観点からグルコース系ＰＤ液と比較して改良された特性を示す。さらに、ＨＰＧＰＤ液への暴露に続いて生体外でのヒト腹膜中皮細胞（ＨＰＭＣ）の生存率が上昇することによって示すように、グルコース系ＰＤ液と比較して、ＨＰＧによって引き起こされる腹膜傷害および炎症が減少する。
【００６０】
ＰＤの最中、血漿からＰＤ液までの容量オスモル濃度が増加したことにより発生する浸透圧のため、腹膜を介してＰＤ液まで液体が流れる。液体または水分の除去に加えて、ＰＤは身体からの老廃物（例えば、尿素、グルコース、クレアチニン、リン酸塩、および他の代謝副産物であり、そのすべては、透析中に除去されるべき毒素、分子、イオンおよび老廃物のいずれかとして考えられ得る）を除去することも必要である。この除去は、血漿、ＰＤ液間の濃度勾配を介する拡散によって行われる。ここで述べるポリグリセリンを含有するＰＤ液は、これらの機能の両方を実施することも可能である。
【００６１】
以下で述べるＰＤの急性モデルにおける従来のグルコース系ＰＤ液と比較して、ここで述べるポリグリセリンを含有するＰＤ液の生体適合性が向上することは、腹膜によって耐性が向上したという証拠になる。高浸透圧グルコース系ＰＤ液は、多形核細胞、食細胞（すなわちマクロファージ）および中皮細胞（ＭＣ）を含むすべての型式の腹膜細胞に対して細胞傷害を引き起こす。この傷害は、一般に使用するグルコースの酸性や高濃度に関連する可能性がある。生体内モデルおよび培養されたＨＰＭＣの両方において、ＨＰＧＰＤ液は、腹膜傷害や白血球浸潤が減少し、細胞寿命が延びることで示されるように、同じかまたはそれより高い容量オスモル濃度での従来のＰＤ液よりも腹膜および細胞培養への傷害が減少していること示す。さらに、培養したＨＰＭＣにおいて、ＨＰＧＰＤ液が引き起こすアポトーシスとは異なるＰＤＳへの暴露後の壊死によって細胞の大半は死ぬ。これらの異なる細胞死のメカニズムは、異なる免疫応答のトリガとなる。アポトーシス細胞が免疫寛容を引き起こし、一方で、壊死細胞が、血管内皮成長因子および形質転換増殖因子ベータを放出することによって細胞成長および創傷治癒を促進するマクロファージによって細胞毒性免疫およびアポトーシス細胞の取り込みを刺激する。特定の理論によって拘束されることなく、ＰＤの最中に高浸透圧ＨＰＧＰＤ液が発生するアポトーシス細胞が免疫寛容を誘発するために二次的腹膜傷害を発生させず、ＰＤ後の損傷修復にも有益となり得ることが期待される。様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、透析液を製剤化するためのキットに含むことも可能である。キットは、ここで述べるように凍結乾燥したポリグリセリンと、透析液を製剤化するための凍結乾燥したポリグリセリンを使用するためのインストラクションとを含むことも可能である。キットは、電解質、アミノ酸、１つもしくはそれ以上の他の拡散剤および１つもしくはそれ以上の他の浸透圧剤、またはそのいずれかを含む透析液の他の成分を含むことも可能である。透析液を製剤化するためのキットは、ここで述べる透析物と、透析液を製剤化するための透析物を使用するためのインストラクションとを含むことも可能である。
【００６２】
様々な実施形態では、ここで述べる透析物は、組成物に含むことも可能である。組成物は、ここで述べる透析物と、透析液または腹膜透析液として使用するための少なくとも１つの生理学的に許容される塩、緩衝剤、希釈剤、または賦形剤とを含むことも可能である。組成物は、水溶液中にあるか、または凍結乾燥製剤であってもよい。
ここで述べる透析物は、末期の腎臓病患者に対して腹膜透析中に投与することも可能である。透析物は、１日当たり２回以上投与することも可能である。
ここで述べる透析物は、腎不全、腎臓病、中毒、浮腫または電解質平衡異常を有する患者に投与することも可能である。
【００６３】
ここで述べる透析物は、生体外で、毒素、分子、イオンまたは老廃物を体液から除去するために使用することも可能である。ここで述べる透析物が半塗膜によって体液から分離され、毒素、分子、イオンまたは老廃物が、体液から半透膜を介して、透析物内に流れ込む。
【００６４】
様々な別の実施形態および実施例をここで述べる。これらの実施形態および実施例は、例示のものであり、発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００６５】
実施例
全ての実施例に対して、オスの同系繁殖ＳＤラット（体重３００グラム、週齢１０ないし１２週）をチャールズ・リバー・ラボラトリーズ・インターナショナル・インク（Charles River Laboratories International, Inc.）（米国マサチューセッツ州ウィルミントン）から購入し、ブリティッシュ・コロンビア大学のジャック・ベル・リサーチ・センター（カナダ国ブリティッシュ・コロンビア州バンクーバー）の飼養施設において保管した。ブリティッシュ・コロンビア大学の動物使用小委員会（Animal Use Subcommittee）によって承認された実験計画書に基づいて飼養ガイドライン（Animal Care guidelines）によるカナダ評議会に従って動物実験を行った。
【００６６】
全てのデータは、各群の平均 ± 標準偏差（ＳＤ）として提示される。データ分析に適当なものとして、両側分布または分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いるステューデント検定を使用した。０．０５未満のｐ値が有意であると考えられた。
【００６７】
ヒト腹膜中皮細胞（ＨＰＭＣ）はブリティッシュ・コロンビア大学の臨床研究倫理委員会（Clinical Research Ethics Board）によって承認された実験計画書に続いて、診療所内の匿名のＰＤ患者から提供された腹膜透析（ＰＤ）流出液から分離された。ＨＰＭＣは、最初の不完全ＳＶ４０ＤＮＡを用いて不死化された。初代の、またＳＶ４０不死化ＨＰＭＣの両方は、当業者に周知であるものとして、完全Ｋ１培地内で培養された。
【００６８】
実施例１：  前臨床モデルにおける透析有効性に関するＨＰＧ濃度の効果
患者を治療する際のＰＤの機能の１つは、限外濾過としても周知であるように、体液除去である。様々な濃度または容量オスモル濃度でのＨＰＧＰＤ液の液体除去は、０時間の基本調節と比較して急性ＰＤの４時間後のラットで決定された。
【００６９】
異なるサイズのＨＰＧの初期スクリーニングの後、動物モデルにおいてさらに試験を行うために３ｋＤａＨＰＧを選択した。２．５ないし１５重量％の様々な濃度のＨＰＧ（ＭＷ３ｋＤａ、約１．１と推定された多分散度）を使用するＰＤ液を生成した。ＨＰＧは、当業者に周知の方法に従って合成した。合成後、ポリマーが水中で２日間透析され、凍結乾燥によって回収された。ＨＰＧの合成は、ゲル浸透クロマトグラフィーおよび陽子磁気共鳴分光法によって検証された。ＨＰＧＰＤ液（２．５％ないし１５％）は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ、５３．８ｍｇ/Ｌ）、乳酸ナトリウム（ＮａＣ３Ｈ５Ｏ３、４４．８ｍｇ/Ｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２-２Ｈ２Ｏ、１．８３ｍｇ/Ｌ）および塩化カリウム（ＭｇＣｌ２-６Ｈ２Ｏ、０．５０８ｍｇ/Ｌ）を含有する無菌電解質溶液１００ｍＬにＨＰＧ（２．５ｇないし１５ｇ）を溶解することによって生成された。溶液の化学的プロファイルは、グルコースやブドウ糖を含有しない従来のＰＤ液と比較可能であり、以下のイオン濃度：１３１ｍｅｑ/Ｌ Ｎａ、９７ｍｅｑ/Ｌ Ｃｌ、３９．９ｍｅｑ/Ｌ 乳酸、２．３ｍｅｑ/Ｌ Ｃａおよび０．５ｍｅｑ/Ｌ Ｍｇを含有した。各溶液の容量オスモル濃度は、バンクーバー・コースタル・ヘルス・リージョナル・ラボラトリー・メディスン（Vancouver Coastal Health Regional Laboratory Medicine）（カナダ国ブリティッシュ・コロンビア州バンクーバー）での化学研究所におけるAdvanced（登録商標） モデル３３２０マイクロオスモメータ（アドバンスト・インスツルメンツ・インク（Advanced Instruments Inc.）米国マサチューセッツ州ノーウッド）を用いて測定され、各ＨＰＧ溶液のｐＨは、研究所のｐＨメーター（Accumet（登録商標） B15ベーシック、フィッシャー・サイエンティフィック（Fisher Scientific）、カナダ国オンタリオ州トロント)を１０分間用いて記録した。各溶液の容量オスモル濃度、密度およびｐＨは表１に示す。ＨＰＧ溶液は、従来のＰＤ液と比較した（DianealTM PD4CA PD液、２．５％ブドウ糖、バクスター・カンパニー（Baxter Co.）、カナダ国）（PDS）。
【００７０】
【表１】
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【００７１】
ラットは、イソフルランで麻酔をかけられ、３０ｍＬの予熱したＨＰＧ溶液またはＰＤＳを、ゆっくりと腹膜腔に注入した。処置後、１ないし２分で動物は目を覚まし、エサおよび水道水へと近づいて行った。腹腔内注射後すぐに、またはその４時間後に、動物を二酸化炭素で安楽死させた。血清および腹膜流出物の両方を、各ラットから採取し、各群からランダムに選択した３匹のラットから距骨周囲の腹膜を取集した。０時間で、各種のＨＰＧ溶液またはＰＤＳが２匹のラット内で試験され、いずれかの群からの回収量にはあまり差が認められないため、全ての溶液群（２８．１７±１．０３ｍＬ）から蓄積したデータは基本調節として使用した。腹膜流出物の体積は、限外濾過容量のマーカーとして各ラットから測定した。
【００７２】
図２に示すように、回収した腹膜流出物の体積の濃度依存増加、すなわち、４０±１．２４ｍＬの７．５％ＨＰＧ（ｐ＜０．０００１対基本調節）および４３．３３±５．２４ｍＬの１５％ＨＰＧ（ｐ＜０．０００１対基本調節）で示すように、ＨＰＧＰＤ液によって、かなりの液体が除去される。透析後４時間の腹膜流出物体積の５％ＨＰＧ溶液（２７．８８±１．６５ｍＬ）は、基本調節（ｐ＝０．７３７１）とは統計的には異なってはいなかった。ＨＰＧ（２．５％）は、限外濾過を全く達成しなかった（２３．０±２．７２ｍＬ）。透析の４時間後のＰＤＳによる腹膜流出物３７．２３±４．７２ｍＬと比較すると（図２）、ＨＰＧＰＤ液の液体除去は、濃度７．５％（ｐ＝０．１８７９）と同じであったが、１５％（ｐ＝０．０２６８）ではかなり向上した。これらのデータは、ＨＰＧがＰＤ液に有効な浸透圧剤および他の応用として使用可能であったことを示唆する。
【００７３】
ＰＤの他の機能は、老廃物除去または溶質クリアランスである。このモデルの腹膜流出物におけるクレアチニンは、研究室での測定値の最低レベル未満であったので（データは示さず）、流出物または血流内の老廃物のマーカーとして、尿素窒素を使用した。腹膜流出物および血清の両方における尿素レベルは、BUN Flex（登録商標） 試薬カートリッジ（シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インク（Siemens Healthcare Diagnostics Inc.）、米国デラウェア州ニューアーク）を有するディメンション・ビスタ*・システム（Dimension Vista* System）を使用するバンクーバー・コースタル・ヘルス・リージョナル・ラボラトリー・メディスン（Vancouver Coastal Health Regional Laboratory Medicine）での化学研究所で測定された。ＨＰＧＰＤ液対ＰＤＳが引き起こす尿素除去は、正味除去およびクリアランス率によって計算した。絶対尿素除去は、回収した透析物（Ｄ）または流出物における尿素濃度にその体積（Ｖ）を掛けて計算し、透析物対血漿（Ｐ）尿素比（Ｄ/Ｐ）を計算して、腹膜全体に亘る尿素の平衡にアクセスした。尿素クリアランスは、Ｄ/Ｐ比に透析物の体積を掛けて計算した（Ｄ/Ｐ*Ｖ）。
【００７４】
【表２】
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【００７５】
表２で示すように、濃度が７．５％および１５％のＨＰＧでは、ＨＰＧＰＤ液が発生する正味尿素除去または尿素クリアランス率のいずれかがブルコース系ＰＤＳよりもかなり高かった。より興味深いことには、７．５％ＨＰＧＰＤ液が引き起こす限外濾過はＰＤＳ（図２）とは異ならないが、０．１９８±０．０４３ミリモルのＰＤＳ（＞５１％増加、ｐ＝０．００２７）と比較して、７．５％ＨＰＧ溶液の腹膜流出物における０．３００±０．０４７ミリモルの全尿素で示すように、ＰＤＳよりも効果的であった。このデータは、ＨＰＧが尿素除去におけるグルコースよりも、また恐らくは他の老廃物よりも優れていることを示唆する。
【００７６】
上記ＨＰＧＰＤ液が引き起こす液体および老廃物除去に関連する同じ実験を、１ｋＤａＨＰＧＰＤ液および０．５ｋＤａＨＰＧＰＤ液に対して実施し、その結果を表３および表４に示す。
【００７７】
【表３】
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【００７８】
【表４】
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【００７９】
これらの結果は、より小さいＨＰＧポリマーが、より大きいポリマーと比較して改良された限外濾過および老廃物除去特性を提供することが可能であることを示している。従来の２．５％グルコースＰＤ液と比較すると、同じ限外濾過が、７．５％ＨＰＧ（３ｋＤａ）ＰＤ液、５％ＨＰＧ（１ｋＤａ）ＰＤ液または２．５ないし５％ＨＰＧ（０．５ｋＤａ）ＰＤ液を用いて達成可能であり、より小さいＨＰＧをそれほど使用しなくても、従来のＰＤ液で達成されるのと同等の結果を達成することが可能であることを示唆する。
【００８０】
実施例２：腹膜傷害および好中球浸潤に関するＨＰＧＰＤ液の効果
不十分な限外濾過または溶質クリアランスは、ＰＤを長期療法としてかなり制限する。その理由は、現在のＰＤ液への慢性的暴露によって、腹膜の炎症および傷害が引き起こされ、それによって被嚢性腹膜硬化症と呼ばれる線維症および血管新生が徐々に発生し、最終的にＵＦＦが生じる結果となるからである。ＰＤＳに対するＨＰＧＰＤ液を受け取るラットにおける腹膜傷害および炎症の差異を実証するために、腹膜の構造および白血球浸潤が組織学的分析で試験され、腹膜流出物における細胞個体群がフローサイトメトリー分析によって分析された。
【００８１】
ラットの各群からランダムに選択された壁側腹膜の３つの条片（ラット一匹当たり１つの条片）は、１０％の中性緩衝ホルマリンに固定され、パラフィンワックスに包埋された。切片を４ｐｍの厚さにし、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。腹膜傷害の病理的指標（すなわち、下中皮組織の厚さの増大および中皮が無傷であったかどうか）および多形核白血球浸潤は、盲検式に腹膜の各条片の２つの分離した部分における顕微鏡画像（４００倍）に基づいて検査した。回収した液体中の好中球の存在は、腹膜炎症のためのバイオマーカーとして使用した。腹膜の厚さは、図３に示す各サンプルにおける２つの矢印の間の距離で示される。データは、各群の典型的な顕微鏡画像として提示されている。図３にダークスポットとして現れている浸潤物は、好中球を含む多形核白血球である。組織学で検査されたように、腹膜に類似の傷害が、高浸透圧７．５％または１５％のＨＰＧＰＤ液で４時間透析を行った後のラットに認められ、これは、０時間調節と比較して膜の厚さが同様に増大することで示されるが、ＰＤＳを受けたラットと比べて傷害はそれほど深刻ではなかった。ＨＰＧＰＤ液を受けた群の膜の厚さは、ＰＤＳ群の僅か半分であった（図３）。多形核白血球（すなわち好中球）の浸潤をこれらの染色した組織部分で検査すると、ＨＰＧＰＤ液で治療する場合と比較して、ＰＤＳを受けるラットの腹膜には、より多くの多形核浸潤物が見られ、より深刻な膜の傷害と確実に相関性があった（図３）。
【００８２】
組織学的観察を確認するために、腹膜流出物における好中球および腹膜中皮細胞（ＭＣ）の数が、フローサイトメトリー分析によって検査された。フローサイトメトリー分析は、ＢＤ ＦＡＣＳCantoTMII（ビー・ディー・バイオサイエンシズ（BD Biosciences、カナダ国オンタリオ州ミシサガ）上で行われた。各サンプルに対して、少なくとも１０，０００の現象が数えられ、フロージョー・ソフトウェア（FlowJo software）を用いて分析した（ツリー・スター（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）、米国オレゴン州アシュランド）。各流出物における細胞個体群を分析するために、約１００万個の細胞を８,０００ｒｐｍで５分間、遠心分離によって遠心沈殿させ、その後、１％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）内の細胞を懸濁させた。好中球/顆粒球および単球が、前方散乱（ＦＳＣ）対側方散乱（ＳＳＣ）のドットプロットにおけるその大きさおよび粒度に基づいて同定され、腹膜流出物における細胞総数の百分率としてゲートされた領域でカウントされた。ＨＰＧ濃度に関係なく、ＨＰＧＰＤ液群の間の所定位置に相違はなかった。図４に示すように、ＰＤＳ群（ｎ＝５）（ｐ＜０．０００１、ＨＰＧ対ＰＤＳ）における９．３１±２．８９％と比較して、蓄積したＨＰＧ群における好中球３．６３±０．８７％で示すように（２．５％ＨＰＧでは３．４３±０．６５％；５％ＨＰＧでは４．４０±１．１４％；７．５％ＨＰＧでは３．４３±０．６５％；および１５％ＨＰＧでは３．２５±０．７４％、各群ではｎ＝４）、ＰＤＳ流出物内よりもＨＰＧ流出物内の方が好中球が少なかった。これらのデータは、ＰＤＳで透析されたラットの腹膜組織部分におけるより多くの多形核浸潤物の存在と一致した。ＨＰＧ流出物におけるＦＳＣの測定値によって決定されるマクロファージ個体群の細胞体積は、ＰＤＳ流出物におけるものよりも小さかった（図４）。
【００８３】
腹膜中皮細胞（ＭＣ）は、独特の細胞表面たんぱく質ＨＢＭＥ−１を発現し、これは、腹膜流出物における腹膜ＭＣのマーカーとして使用された。細胞懸濁液中のＭＣは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（抗ＨＢＭＥ−１−ＦＩＴＣ、ビオバイト・リミテッド（Ｂｉｏｒｂｙｔ  Ｌｔｄ．）、英国リバーサイド）に抱合されたウサギポリクロナール抗ＦＩＢＭＥ−１抗体に対するウサギポリクロナール抗マウスＩｇＡ−ＦＩＴＣ（ケイマン・ケミカル（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、米国ミシガン州アナーバー）を染色調節として、蛍光活性化細胞分離（ＦＡＣＳ）、すなわち特殊フローサイコメーター分析によって同定した。抗体染色していない細胞は、ＦＩＴＣポジティブに対してネガティブ背景として使用された。図５および図６に示すように、ＰＤＳ群における調節染色（０．４１±０．３１％）（ｐ＝０．００３１、ｎ＝４）と比較して、かなりの数のＨＢＭＥ−１染色細胞（１．６２±０．６８％）が存在し、また一方で蓄積したＨＰＧ溶液群におけるＨＢＭＥ−１染色が０．７０±０．５４％（範囲：０．２４±０．０４％ないし０．９９±０．４６％、各群においてｎ＝３）であり、この値は、調節染色（０．３６±０．３５％、ｎ＝４）（ｐ＝０．１８３２）と比較してそれほど大きいものではなかった。図５のデータは、各群のＦＡＣＳヒストグラムにおける典型的な割合のＦＩＴＣ染色細胞として提示される。図６のデータは、ＰＤＳ対蓄積ＨＰＧ系溶液内のＦＩＴＣ染色細胞の平均±ＳＤおよびその差（調節Ｉｇ対抗ＨＢＭＥ−１Ｉｇ）として提示される。
【００８４】
ＰＤＳ群の腹膜流出物におけるＭＣの存在は、ＰＤＳ群からの腹膜流出物のＭＧＧ染色細胞塗抹におけるＭＣの存在およびＨＰＧＰＤ液群からの非存在から明らかなように、メイ・グリュンワルド・ギムザ（ＭＧＧ）染色（図７）によってさらに確認された。腹膜流出物における細胞は、６，０００ｒｐｍで１０分間、遠心分離によって遠心沈殿され、顕微鏡ガラススライド上で擦り付けられた。空気乾燥を十分に行った後、細胞塗抹はメタノール内で固定された。ＲＢＳを用いた再水和に続いて、細胞塗抹はメイ・グリュンワルド溶液（シグマ・アルドリッチ・カナダ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ）、カナダ国オンタリオ州オークビル）（ＰＢＳで１：５希釈）で１０ないし１５分間染色し、ＰＢＳで洗浄し、その後ギムザ染色溶液（シグマ・アルドリッチ・カナダ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ）、カナダ国オンタリオ州オークビル）（ＰＢＳで１：５希釈）で３０分間、再度染色した。異なる型式の細胞の色は、ＰＢＳで再度洗浄することにより区別された。図７は、ＰＤＳ対ＨＰＧにおける細胞のＭＧＧ染色された塗抹の典型的な顕微鏡画像を示す（黒斑は白血球であり、灰色領域は腹膜ＭＣである）。これらのデータは全て、調節ＰＤＳと比較して、ＨＰＧＰＤ液を用いる透析に続いて、腹膜流出物における脱離ＭＣがほとんど検出不可能な状態での、組織構造における、少ない腹膜傷害の正相関を示す。中皮脱離がほとんど存在しない状態は、ＨＰＧ系溶液が腹腔における中皮に対して有毒ではないことを示しており、これはポリグリセリンの生体適合性をかなり強化する。これらの結果は、長期に亘る腹膜の完全性がＰＤ液の成分としてポリグリセリンを使用して維持出来ることを理解するのを支持するものと思われる。
【００８５】
実施例３：ＨＰＧＰＤ液に対する細胞生存率または耐性
高浸透圧ＨＰＧＰＤ液（７．５％および１５％）対ＰＤＳに対する細胞生存率または耐性は、培養されたＨＰＭＣで試験した。２４-ウェルプレート内に最初の、または不死化されたＨＰＭＣ（１ウェル当たり０．２Ｘ１０６個の細胞）をＫ１培地で一晩中成長させ続けた。ＨＰＭＣの融合性単層をＰＢＳで洗い流し、その後、５％二酸化炭素雰囲気で３７°ＣのＨＰＧＰＤ液（７．５％または１５％ＨＰＧ）またはＰＤＳに暴露した。トリピンＥＤＴＡ溶液（シグマ・アルドリッチ・カナダ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ）、カナダ国オンタリオ州オークビル）によって細胞を離脱し、トリパンブルーで死細胞をポジティブに染色した。生存しているか、または生存可能な細胞の数は、ＴＣ１０ＴＭ自動細胞カウンタ（バイオ・ラッド・ラボラトリーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、カナダ国オンタリオ州ミシサガ）を用いてカウントした。生存している細胞の割合は、以下のように計算した：％  ＝  （Ｔｘ／Ｔ０）ｘ１００。ここでは、Ｔｘは指示された時点での生存可能な細胞の総数を表し、Ｔ０は未処置の細胞単層（０時間時点）において生存可能な細胞の総数を表す。各サンプルにおける生存可能な細胞の数は、少なくとも３つの決定基の平均によって提示された。図８に示すように、３時間の培養中にＰＤＳよりもＨＰＧＰＤ液への暴露に続いて、最初のＨＰＭＣで、より多くの無傷の細胞がトリパンブルーでネガティブに染色された（ｐ＜０．０００１、７．５％ＨＰＧ対ＰＤＳ；ｐ＝０．００４４、１５％ＨＰＧ対ＰＤＳ、２方向ＡＮＯＶＡ）。同様の結果が、ＳＶ４０不死化ＨＰＭＣで見られた（ｐ＜０．０００１、７．５％ＨＰＧ対ＰＤＳ；２方向ＡＮＯＶＡ；ｐ＝０．００６７、１５％ＨＰＧ対ＰＤＳ、２方向ＡＮＯＶＡ）（図９）。
【００８６】
培地ＨＰＭＣの細胞構造でのＰＤＳに対する高浸透圧ＨＰＧ溶液の影響を、フローサイトメトリー分析を用いて顕微鏡下で調査した。２４ウェルプレートにおける不死化されたＨＰＭＣ（１ウェル当たり０．２*１０６個の細胞）を一晩中Ｋ１培地で成長させ、その後、５％の二酸化炭素雰囲気で３７°ＣのＫ１培地（ＣＭ）、ＨＰＧＰＤ液（７．５％および１５％ＨＰＧ）またはＰＤＳでの培養が行われた。図１０は、培養から３時間後の不死化ＨＰＭＣの典型的顕微鏡画像を示す。図１０において（細胞質における液胞を指示する矢印で）示すように、細胞質空洞化は、ＰＤＳで培養されたＦＩＰＭＣの顕微鏡画像で提示されたが、ＨＰＧ溶液または培地（ＣＭ）で培養された細胞には存在しなかった。この空洞化は、カスパーゼー３ー独立細胞死に関連し、水が細胞質から細胞外培地に拡散する場合には、グルコース細胞取り込みに関連する可能性がある。
【００８７】
これらの結果は、フローサイトメトリー分析でさらに確認され、ＳＳＣの測定値は、培養の３０分後の細胞質粒度のレベルを示した。図１１に示すように、ＨＰＭＣの細胞質粒度は、ＰＤＳによって顕著に誘起されており、これは、ＳＳＣの平均強度が培地を用いた細胞の２７．４±０．８（ｘ１０００）からＰＤＳ（ｐ＜０．０００１、ｔ−テスト）を用いて処理された細胞の７７．０±１．２（ｘ１０００）まで増加することで示されている。ＰＤＳとは対照的に、ＨＰＧＰＤ液での培養は粒度を増大させないが、ＳＳＣ測定値の濃度依存減少を引き起こした。これは、ＳＳＣの平均強度が、７．５％ＨＰＧＰＤ液では細胞内の１１．１±０．２（ｘ１０００）であり、１５％ＨＰＧＰＤ液では６．１±０．１（ｘ１０００）である（ｐ＜０．０００１、ＨＰＧ対培地、単一方向ＡＮＯＶＡ）という事実によって示された。
【００８８】
細胞生存に関するＰＤＳ上でのＨＰＧＰＤ液の有益な効果をさらに検証するために、細胞死または生存は、フローサイトメトリー分析およびウェスタンブロット法を用いてＰＤＳ対ＨＰＧＰＤ液が引き起こす高浸透圧ストレス後の回収中に調べた。ＨＰＭＣの細胞アポトーシスまたは壊死は、製造業者の実験計画書に続いてＦＡＣＳ分析によって測定され（ビー・ディー・バイオサイエンシズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、カナダ国オンタリオ州ミシサガ）、フィコエリスリン（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）（アネキシン（Ａｎｎｅｘｉｎ）ーＶ−ＰＥ）染色で抱合されたアネキシンーＶが早期アポトーシスを示し、７ーアミノーアクチノマイシンＤ（７−ＡＤＤ）染色は、晩期アポトーシスを示した。Ｋ１培地での培養の後、ＨＰＧＰＤ液（７．５％もしくは１５％）またはＰＤＳ、１時間、不死化ＨＰＭＣ（１ウェル当たり０．２Ｘ１０６個の細胞）をＫ１培地で回収した。５％の二酸化炭素雰囲気で３７°Ｃでの培養から６時間後、フローサイトメトリー分析およびウェスタンブロット分析によって細胞死を調べた。図１２では、非アポトーシス（生存可能）細胞は、左下腹部にあり、壊死細胞は、左上腹部にあり（７−ＡＡＤポジティブのみ）、晩期アポトーシス細胞は、右上腹部にあり（アネキシンーＶおよび７−ＡＡＤポジティブの両方、早期アポトーシス細胞は、右下腹部にあった（アネキシンーＶポジティブのみ）。ＨＰＭＣの１つの細胞懸濁液は、１ｘ結合バッファ内で１５分間、アネキシンーＶーＰＥで培養され、その後７−ＡＡＤで染色した。アポトーシスまたは壊死細胞の蛍光強度が、背景調節と比較して測定された。図１２（細胞死のＦＡＣＳプロットを代表し、細胞表面の７−ＡＡＤ染色した核ＤＮＡおよびアネキシンーＶ染色リン脂質を示す）および表５に示すように、ＰＤＳ処理（ｐ＜０．０００１）後の細胞（６１．７±２．７３％）と比較してＨＰＧＰＤ液で前処理した細胞（７．５％ＨＰＧでは７５．７７±１．３５％または１５％ＨＰＧでは７５．２７±０．６１％）においてより生存可能な、またはネガティブに染色した細胞が存在した。ＰＤＳ前処理したＨＰＭＣでは、培地での細胞と比較して、細胞の大半は壊死または晩期アポトーシスによって死んでおり、７−ＡＡＤのみで、またはアネキシンーＶと組み合わせてポジティブに染色され、一方で、７．５％または１５％のＨＰＧＰＤ液で培養した細胞は大半がアポトーシスで死んでおり、アネキシンーＶのみ、または７―ＡＡＤと組み合わせてポジティブに染色されている。
【００８９】
【表５】
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【００９０】
アポトーシスは、ウェスタンブロット法におけるＨＰＧＰＤ液前処理ＨＰＭＣの細胞タンパク質抽出物におけるカスパーゼ３の活性型の存在およびＰＤＳ前処理細胞での不存在によりさらなる確認が行われた（図１３）。タンパク質抽出物（１サンプル当たり５０ないし１００ｐｇ）は、１２％のＳＤＳーＰＡＧＥによって分画され、その後ニトロセルロース膜上に転送された。活性カスパーゼ３タンパク質（１７ｋＤａおよび１９ｋＤａ）が、ウサギのポリクロナール抗活性化カスパーゼ３（Ａｓｐｌ７５）抗体（セル・シグナリング・テック（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈ）、米国マサチューセッツ州ダンサーズ）で同定され、改良された化学発光検定法（イー・シー・エル（ＥＣＬ）アマーシャム・ファーマシア・バイオテック（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、英国バッキンガムシャー州）によって可視化された。ブロットは、各サンプルにおいて添加されたタンパク質を確認するために抗アクチンＩｇＧ（シグマ・アルドリッチ・カナダ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ）、カナダ国オンタリオ州オークビル）を使用して再検出された。まとめると、これらのデータは、高浸透圧ＨＰＧＰＤ液がアポトーシスでの細胞死を減少させ、ＰＤＳが壊死および細胞質空洞化に関連する細胞死を増加させたことを示唆するかもしれない。これらの結果もまた、ＨＰＧＰＤ液がグルコース系ＰＤ液のための有望な代用品であると理解することを支持している。これらのデータはまた、拡散剤および浸透圧剤またはそのいずれかを必要とする応用または方法において使用するためのポリグリセリンの生体適合性を支持している。
【００９１】
実施例４：腹膜透析のラットモデルにおける直鎖ポリグリセリン（ＬＰＧ）による液体除去
本実施例で使用したポリグリセリンは、アニオン開環重合によって合成された。超分岐ポリグリセリンの場合、メチル化カリウムを使用する開始剤として、トリスヒドロキシメチルプロパン（ＴＭＰ）からグリシドールのアニオン開環多分岐重合によってポリマーが得られた。直鎖ポリグリセリンの場合、エトキシエチルグリシジルエーテル（ＥＥＧＥ）が/−ＢｕＯＫ＋から開環重合を介して重合化され、その後、３５％のＨＣｌにおけるヒドロキシル保護基を除去した。合成に続いて、蒸留水に抗してポリグリセリンを透析し、透析物を凍結乾燥してポリマーを回収した。ポリマーは全て、特徴付けられた陽子ＮＭＲであり、ポリマーの分子量は、マルチアングルレーザ光散乱（ワイアット・テクノロジー・インク（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．米国）によって決定された。
【００９２】
表６で示すように、４つの異なる型のポリグリセリンを使用した。ポリマーの構造は、図１Ａおよび図１Ｂに示す。表６は、この研究で使用した超分岐ポリグリセリン（ＨＰＧ）および直鎖ポリグリセリン（ＬＰＧ）の特性に関するデータを示す。
【００９３】
【表６】
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【００９４】
Ｄｉａｎｅａｌ（登録商標）ＰＤ液と同じ塩濃度でポリグリセリン溶液を生成した。グルコースは、異なるポリグリセリンと取り換えた。ポリマーを緩衝液内で一晩中攪拌し、測定する前に濾過した。表７は、ポリマーの分子量および濃度のｏｓｍｏｌａｒｉｔｙ（登録商標）への依存度を示し、図１４は、表７の緩衝液の条件で、ＨＰＧ溶液の容量オスモル濃度に対する分子量および濃度の影響を示す。
【００９５】
【表７】
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【００９６】
塩化ナトリウム（５３８ｍｇ/１００ｍＬ）、乳酸ナトリウム（１６８ｍｇ/１００ｍＬ）、塩化カルシウム無水物（１８．４ｍｇ/１００ｍＬ）、塩化マグネシウム六水和物（５．１ｍｇ/１００ｍＬ）および重炭酸ナトリウム（２１０ｍｇ/１００ｍＬ）の濃度での塩を含有する溶液内に約７．５重量％のＬＰＧポリマー（Ｍｎ−２８８０Ｄａ）を溶解することによってＬＰＧＰＤ液を生成した。溶液のｐＨは、約７．４であった。ＬＰＧ溶液の液体除去は、腹膜透析のラットモデルにおいて試験した。ラットは、腹腔内注射により３０ｍＬのＬＰＧ溶液または従来の腹膜透析（ＰＤ）液を受けた。液体は、０時間から４時間のドエル時間に回収された。データは、各群で２匹のラットを使用する実験から収集された。
【００９７】
ドエル時間の４時間後、ＬＧＰ溶液は、グルコース系の従来の腹膜透析（ＰＤ）液（Ｐｈｙｓｉｏｎｅａｌ ４０）によるものと類似の顕著な液体除去（限外濾過）（図１５はＬＰＧＰＤ液による限外濾過（液体除去）を示す）を誘起した。
【００９８】
実施例５：異なるサイズのＨＰＧ（Ｄｉａｎｅａｌ（登録商標）ＰＤ４ＣＡＰＤ液に類似であるがブドウ糖は含有しない緩衝液組成物）による液体および尿素の除去
異なるサイズ（０．５ｋＤａおよび１ｋＤａ）のＨＰＧ（特徴については表６を参照）を、異なる濃度で無菌電解質溶液（塩化ナトリウム５．３８ｇ/Ｌ、乳酸ナトリウム４．４８ｇ/Ｌ，塩化カルシウム無水物０．１８３ｇ/Ｌおよび塩化マグネシウム六水和物０．０５０８ｇ/Ｌ、Ｄｉａｎｅａｌ（登録商標）ＰＤ４ＣＡＰＤ液と同じ組成であるがブドウ糖は含有しない）に溶解した。これらのＨＰＧ溶液の液体および尿素の両方を除去することの有効性を、腹膜透析のラットモデルにおいて試験した。ラットは、腹腔内注射により３０ｍＬのＨＰＧ溶液または（Ｄｉａｎｅａｌ（登録商標）ＰＤ４における）従来の腹膜透析（ＰＤＳ）液を受けた。液体は、０時間から４時間のドエル時間に回収された。データは、各群で４匹のラットを使用する実験から収集された。
【００９９】
０．５ｋＤａのサイズおよび２．５％の濃度のＨＰＧは、液体を除去する際の従来の腹膜透析液（ＰＤＳ）（ＤｉａｎｅａｌＴＭ２．５％）に等しく、ＰＤＳ（表３）よりも高い濃度（５ないし７．５％）でかなり多くの液体を除去した。これらのＨＰＧ溶液（２．５ないし７．５％）の尿素除去全体は、ＰＤＳと同じであるが、溶液内のＨＰＧ濃度が増加することによって、尿素除去が増大する傾向があった（表８は、ドエル時間の４時間後のラットにおける０．５ｋＤａＨＰＧの液体除去/限外濾過および尿素除去を示す）。
【０１００】
【表８】
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【０１０１】
１ｋＤａＨＰＧ溶液では、同様の結果が見られた（表９）（ポリマーの特徴に対しては表６を参照）。５％ＨＰＧ溶液の液体除去は、ＰＤＳと類似であり、ＨＰＧ溶液ではＰＤＳよりも７.５％だけ多かった。これらのＨＰＧ溶液の尿素除去は、ＰＤＳ以上であった。
【０１０２】
【表９】
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【０１０３】
実施例６：異なるサイズのＨＰＧ（Ｐｈｙｓｉｏｎｅａｌ４０溶液に類似であるがブドウ糖は含有しない緩衝液組成物）による液体、尿素およびナトリウムの除去ならびに限外濾過の動態
異なるサイズのＨＰＧを、無菌電解質溶液（塩化ナトリウム５．３８ｇ/Ｌ、乳酸ナトリウム１．６８ｇ/Ｌ，塩化カルシウム無水物０．１８４ｇ/Ｌ、塩化マグネシウム六水和物０．０５１ｇ/Ｌおよび重炭酸ナトリウム２．１０ｇ/Ｌ、Ｐｈｙｓｉｏｎｅａｌ４０溶液と同じ組成であるがグルコースは含有しない）内で、異なる濃度：４．８％の０．５ｋＤａＨＰＧ、６％の１ｋＤａＨＰＧおよび１４％の３ｋＤａＨＰＧで溶解した。これらの溶液の容量オスモル濃度は、０．５ｋＤａＨＰＧ溶液では４０２ｍＯｓｍ/ｋｇ、１ｋＤａＨＰＧ溶液では４０２ｍＯｓｍ/ｋｇおよび３ｋＤａＨＰＧ溶液では３９４ｍＯｓｍ/ｋｇであり、これは２．２７％のグルコース（４０１ｍＯｓｍ/ｋｇ）を含有するＰｈｙｓｉｏｎｅａｌ４０溶液とほぼ同じであった（表６におけるＨＰＧの特徴を参照）。溶液は全て、ｐＨ−７．４であった。表１０は、この実験に対して使用したＨＰＧおよびＰｈｙｓｉｏｎｅａｌ４０ＰＤ液の容量オスモル濃度に関連するデータを示す。
【０１０４】
【表１０】
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【０１０５】
これらのＨＰＧ溶液による液体、尿素およびナトリウムの除去効果に対する調節フィジオニール（Ｐｈｙｓｉｏｎｅａｌ）（２．２７％グルコース）は、腹膜透析のラットモデルにおいて検査した。ラットは、３０ｍＬのＨＰＧまたはフィジオニール溶液の腹腔内注射を受けた。液体/透析物および血清サンプルを、０．５時間、２時間、４時間および８時間のドエル時間に収集した。
【０１０６】
全てのＨＰＧ溶液は、同じ容量オスモル濃度で全ての時点のフィジオニールと比較して、より多くの液体を除去し、より重要なこととして、ＨＰＧ溶液の除去効果は延長ドエル時間の８時間では存続したが、従来のフィジオニールにはその効果はなかった。図１６は、同じ容量オスモル濃度でのグルコースと比較して、異なるサイズのＨＰＧの限外濾過に関連するデータを示す。ラットは、３０ｍＬの様々なＨＰＧ溶液または従来のフィジオニール４０（２．２７％グルコース）溶液を腹腔内注射により受けた。液体は、ドエル時間の異なる時点で回収された。データは、各時点における各群内の４匹から５匹のラットを用いた実験から収集され、２方向ＡＮＯＶＡによって統計学的に分析された。
【０１０７】
ＨＰＧＰＤ液およびフィジオニールＰＤ液による尿素除去の比較は、４．８％の０．５ｋＤａＨＰＧＰＤ液の効果はフィジオニールと同様であることを示唆した。６％の１ｋＤａＨＰＧ溶液は、フィジオニールよりも高い尿素クリアランスを有し、１４％の３ｋＤａＨＰＧＰＤ液は、フィジオニールよりも多くの尿素を除去した。図１７Ａないし図１７Ｃは、同様の容量オスモル濃度での異なるサイズのＨＰＧＰＤ液に対するグルコース（フィジオニール）ＰＤ液による尿素除去を示す。ラットは、３０ｍＬの様々なＨＰＧ溶液または従来のフィジオニール４０（２．２７％グルコース）溶液を腹腔内注射により受けた。液体は、ドエル時間の異なる時点で回収された。データは、各時点における各群内の４匹から５匹のラットを用いた実験から収集され、２方向ＡＮＯＶＡによって統計学的に分析された。
【０１０８】
ＨＰＧＰＤ液のナトリウム除去は、フィジオニール（図６）と比較した。結果は、フィジオニールは最初に体内へのナトリウムを減少させ、１時間後にナトリウム除去を開始し、その一方で、６％の１ｋＤａＨＰＧおよび４．８％の０．５ｋＤａによりナトリウムが減少または除去されなかったことを示した。ＨＰＧ１４％ＰＤ液（３ｋＤａ）は、フィジオニールと比較して、全ての時点でナトリウム除去が増加することを示した。図１８は、同じ容量オスモル濃度での異なるサイズのＨＰＧに対するグルコース（フィジオニール）ＰＤ液によるナトリウム除去を示す。ラットは、３０ｍＬの様々なＨＰＧ溶液または従来のフィジオニール４０（２．２７％グルコース）溶液を腹腔内注射により受けた。液体は、ドエル時間の異なる時点で回収された。データは、各時点における各群内の４匹から５匹のラットの平均値として提示され、２方向ＡＮＯＶＡによって統計学的に分析された。
【０１０９】
実施例７：同じ容量オスモル濃度でのグルコース（フィジオニール）と比較した異なるサイズのＨＰＧの生体適合性
ＨＰＧ溶液の生体適合性は、腹膜透析のラットモデルにおいてドエル時間の４時間後にフィジオニール溶液と比較した。最初に、生体適合性は、組織学的分析により調査した。
【０１１０】
図１９は、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した組織部分の画像と、ＨＰＧ溶液のいずれかに暴露した後は、フィジオニール溶液ほどは腹膜が損傷を受けなかったことを示す対応する表形式のグラフデータとを例示する。ラットは、３０ｍＬの様々なＨＰＧ溶液または従来のフィジオニール４０（２．２７％グルコース）溶液を腹腔内注射により受けた。腹膜組織は、ドエル時間の４時間後に採取された。組織部分は、Ｈ＆Ｅで染色され、腫れた腹膜の厚さは、Ｓｌｉｄｅｐａｔｈ  ＳｏｆｔｗａｒｅＴＭを用いて測定した。画像は、各群の代表であった。長い矢印（左から右を指す）は腹膜上皮を示し、短い矢印（右から左を指す）は好中球を示す。グラフは、各群（ｎ＝３ないし４）における腫れた腹膜の平均±ＳＥＭ（画像内の棒で示す）を提示する。
【０１１１】
第２に、腹膜透析におけるＨＰＧ溶液に対するフィジオニール溶液の生体適合性は透析物における好中球およびＨＢＭＥ−１染色細胞（腹膜中皮細胞）の存在により調査された。図２０に示すように、回収したＨＰＧＰＤ液の全てにおける好中球の割合は、ドエル時間の４時間後のフィジオニール溶液よりも小さかった。ラットは、３０ｍＬの様々なＨＰＧ溶液または従来のフィジオニール４０（２．２７％グルコース）溶液を腹腔内注射により受けた。透析物は、ドエル時間の４時間後に採取された。好中球の割合は、フローサイトメトリーを用いてカウントされた。データは、各群における４匹の動物の平均±ＳＤを提示した。
【０１１２】
腹膜透析におけるＨＰＧＰＤ液に対するフィジオニール溶液の優れた生体適合性もまた、ＦＩＴＣで抱合された抗ＨＢＭＥ−１抗体でポジティブに染色された、あまり脱離されていない腹膜中皮細胞によっても示された。図２１は、回収したフィジオニール溶液内で顕著なＦＩＴＣ染色が見い出されたが、ＨＰＧＰＤ液のいずれかでは、検出可能なレベルのＦＩＴＣ染色がほとんど見られず、これはフィジオニール溶液と比較して、ＨＰＧ溶液で透析した後、透析物内のあまり脱離されていない腹膜中皮細胞を示すことを例示している。ラットは、３０ｍＬの様々なＨＰＧＰＤ液または従来のフィジオニール４０（２．２７％グルコース）溶液を腹腔内注射により受けた。透析物は、ドエル時間の４時間後に採取された。好中球細胞は、ＦＩＴＣで抱合された抗ＨＢＭＥ−１抗体で染色され、フローサイトメトリーを用いてカウントされた。データは、各群における４匹の動物の平均±ＳＤを提示した。調節サンプルは、ＦＩＴＣで抱合された調節抗体で染色された。
【０１１３】
本発明の様々な実施形態をここで開示したが、当業者の共通する一般的知識に従って、本発明の範囲内で多くの変更および修正を行うことも可能である。このような修正は、同じ結果を実質上同じ方法で達成するために、本発明のいずれかの局面に対する周知の均等物の代替を含む。数字の範囲は、範囲を定める数字を含んでいる。用語“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”は、“含むが限定されない”という表現と実質的に同等である変更可能な用語としてここで使用し、単語“ｃｏｍｐｒｉｓｅ”と“ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ”は対応する意味を有する。ここで使用するように、単数形“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”は、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。このように、例えば、“物体”への言及は、このような物体を２つ以上含む。
【０１１４】
ここでの参考文献の引用は、このような参考文献が本発明の先行技術であることを認めているわけではなく、またこれらの文献の内容または日付に関しても同様である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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