(57)【要約】  ここに、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法を、そのためのキットおよびそれに関する使用および方法と共に記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．哺乳動物の口腔から口全体の唾液試料を入手し；
ｂ．以下のバイオマーカー：
ｉ）ムチン５Ｂ；
ｉｉ）炭酸脱水酵素６；および
ｉｉｉ）スタセリン；
のうちの１以上の濃度を測定し；次いで、
ｃ．ムチンＢ濃度；炭酸脱水酵素６濃度；および／またはスタセリン濃度を該バイオマーカーの各々についての対照値と比較することを含み、
ここで、該対照値は酸蝕症に罹っていない哺乳動物の口腔から採取された口全体の唾液試料中の該バイオマーカーの濃度であり；ムチン５Ｂについての該対照値に対するより低いムチン５Ｂ濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；
ここで、炭酸脱水酵素６についての該対照値に対するより低い炭酸脱水酵素６濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；および
ここで、スタセリンについての対照値に対するより高いスタセリン濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すことを特徴とする、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法。
【請求項２】
該エナメル質酸蝕症が、食事が病因のものである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該口全体の唾液が刺激されていない口全体の唾液である請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
該哺乳動物が、以下の基準：
【表１】
2015507183.tif 000007
のうち１以上を示す場合に、該哺乳動物はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有するものとして同定される前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
該哺乳動物が以下の基準：
【表２】
2015507183.tif 000008
のうちの少なくとも２つを示すことに基づいて、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
さらに、該哺乳動物は、試料が口腔から採取される前に、少なくとも１時間の間食べたり飲んだりすることを控えるように要求される前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
さらに、象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる剤または製品の有効量を該動物の口腔に投与することを含むエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された哺乳動物を治療する工程を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる該剤または製品が、フッ化物マウスリンス；高フッ化物濃度練り歯磨き；ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物または炭酸カルシウムのようなリン酸カルシウムまたはカルシウム研磨剤を含む練り歯磨き；遊離または塩形態であるＬ−アルギニンを含むオーラルケア組成物；象牙質結合剤またはワニス；第一スズイオン源を含むオーラルケア組成物；およびそれらの２以上の組合せから選択される請求項７に記載の方法。
【請求項９】
該哺乳動物がヒトである前記請求項いずれかに記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物の口腔から採取された口全体の唾液試料中のムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上の濃度を測定するための手段を含む、哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキット。
【請求項１１】
該エナメル質酸蝕症が、食事が病因のものである請求項１０に記載のキット。
【請求項１２】
ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上の濃度を測定するための該手段がそれらに対する抗体を含む請求項１０または請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットの製造における、ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上に対する抗体の使用。
【請求項１４】
ａ．哺乳動物の口腔から獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料を入手し；
ｂ．以下のバイオマーカー：
ｉ）全蛋白質；
ｉｉ）スタセリン；および
ｉｉｉ）カルシウム
のうちの１以上の濃度を測定し；次いで、
ｃ．全蛋白質濃度；スタセリン濃度；および／またはカルシウム濃度を該バイオマーカーの各々についての対照値と比較することを含み、
ここで、該対照値は酸蝕症に罹っていない哺乳動物の口腔から採取されたＡＥＰ試料中の該バイオマーカーの濃度であり；および
ここで、全蛋白質についての該対照値に対する全蛋白質のより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；
ここで、スタセリンについての該対照値に対するスタセリンのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；および
カルシウムについての該対照値に対するカルシウムのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すことを特徴とする、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法。
【請求項１５】
該エナメル質酸蝕症が、食事が病因のものである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
該哺乳動物が以下の基準：
【表３】
2015507183.tif 000009
のうちの一方または双方を示す場合、該哺乳動物はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される請求項１４または請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
さらに、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された哺乳動物を治療する工程を含み、ここで、該工程は、象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる剤または製品の有効量を該哺乳動物の口腔に投与することを含む請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる該剤または製品が、フッ化物マウスリンス；高フッ化物濃度練り歯磨き；ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物または炭酸カルシウムのようなリン酸カルシウムまたはカルシウム研磨剤を含む練り歯磨き；遊離または塩形態のＬ−アルギニンを含むオーラルケア組成物；象牙質結合剤またはワニス；第一スズイオン源を含むオーラルケア組成物；およびそれらの２以上の組合せから選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
該哺乳動物がヒトである請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
１時間以上にわたって形成されたＡＥＰの試料中のカルシウム、スタセリンおよび／または全蛋白質を測定するための手段を含む、哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
酸蝕症およびそのインパクトの認識が歯科開業医および患者の間で増加するにつれて、酸蝕症の源を正しく診断し、酸蝕症に対して増大した感受性を持つ個体を同定するためのアプローチに対して要望が存在する。細菌酸への長期の暴露による深い局所化された表面下傷害を生じるカリエスとは異なり、酸蝕症は、低いｐＨの食事由来の酸への短いかつ頻繁な暴露からの全エナメル質表面の溶解および軟化に由来し、特に、続いて研磨性練り歯磨きでブラッシングを行う場合に、軟化およびミクロン規模のミネラルの喪失に至る。クエン酸のような食事由来の酸は、それらの酸性ｐＨのみならず、それらのカルシウム−キレート能により特に損傷性であり、これはさらなるエナメル質の溶解に導く。
【０００２】
獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）は、当然に、エナメル質への酸の攻撃に対していくらか保護を提供する。ＡＥＰはカルシウムおよびリン酸イオンならびに蛋白質および酵素を含有する。ペリクルの形成は、スタセリンおよびプロリン−リッチな蛋白質のような前駆体蛋白質が最初に結合し、さらなる蛋白質（ムチン等）のための結合部位を供する複雑な多段階プロセスである。成熟は、ペリクル蛋白質の架橋および脱リン酸化および２時間後の後の段階における歯石細菌の結合を含む。ペリクルの組成は、流量、刺激、日中の時間、食事等に伴って変化する唾液の含有量にかなり依存する。唾液の流量は、唾液のｐＨ、イオン性成分および緩衝能に大きなインパクトを与える。
【０００３】
酸蝕症は、いくつかの状態−食事由来の酸、胃酸への頻繁な暴露、または十分な唾液の欠如（口内乾燥症）から由来し得る。胃粘膜糜爛に罹っている患者は、通常、糜爛性損傷の重症度および位置（上部口蓋表面）の評価を通じて同定され、他方、口内乾燥症を持つ患者は、唾液の目視検査および唾液流量の測定によって同定される。酸蝕症と酸性飲料の増加した摂取との間、より低い唾液流量とより低い唾液流量に由来するより低い唾液ｐＨ／緩衝能との間には関連性がある。しかしながら、正常な唾液流量を持ち、かつ胃酸暴露の徴候を持たない患者は、たとえ食事由来の酸への暴露が最小化されても、依然として食事由来酸蝕症損傷に罹る者がおり、これは、潜在的には、それらのＡＥＰに関連する酸蝕症に対する増大した感受性を示唆する。適切な処置のためにかなり感受性の患者のこのサブセットを同定し、ならびに食事由来の酸からの歯の酸蝕症を低下させ、軽減し、および制御するオーラルケア活性の効果を評価する臨床試験のために患者を同定する単純かつ信頼性がある方法に対する要望が存在する。
【発明の概要】
【０００４】
驚くべきことに、食事由来のエナメル質酸蝕症に対して高い感受性を持つ患者は、１）口全体の唾液中での、有意により低いムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、および／またはより高いスタセリン蛋白質レベル、および２）同様な唾液流量および食事を持つ健康な対照群と比較して、ＡＥＰにおける、有意により低い全蛋白質、スタセリンおよび／またはカルシウム濃度を示すことが判明した。これらの因子は、全蛋白質濃度に基づく唾液およびペリクル診断方法、カルシウム分析および蛋白質同定を用いて、酸蝕症に対する感受性を持つ患者を同定するのに用いることができる。試験試料は唾液および唾液ペリクルであるので、試料の収集は容易であって、蛋白質およびミネラル含有量に関する豊富な情報がある。
【０００５】
従って、本発明のいくつかの実施形態は、以下の工程：
（ｉ）患者から口全体の試料を入手し、唾液中のムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリン蛋白質のレベルのうちの１以上を測定することであって、対照値に対するより低いムチン５Ｂ、より低い炭酸脱水酵素、および／またはより高いスタセリン蛋白質レベルは、各々、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；および、
（ｉｉ）、患者から獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料を入手し、ＡＥＰ中の全蛋白質、スタセリンおよびカルシウムの濃度のうちの１以上を測定することであって、対照値に対するこれらの剤の各々のより低いレベルは、各々、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；
のうちの一方または双方を含む、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する患者を同定する方法を提供する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、酸蝕症は食事が病因のものである。
【０００７】
本発明の利用性のさらなる領域は、以下に提供される詳細な記載から明らかとなるであろう。詳細な記載および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しつつ、説明のみを目的とすることが意図されており、本発明の範囲を限定する意図ではないと理解されるべきである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
好ましい実施形態の以下の記載は、性質上、単に実例であって、断じて、当該発明、その適用、または使用の範囲を限定する意図ではない。
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態は、かくして、以下の：
（ｉ）患者からの、口全体の唾液、例えば、刺激されていない口全体の唾液（ＵＷＭＳ：ｕｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｍｏｕｔｈ  ｓａｌｉｖａ）の試料中のムチン５Ｂ濃度を測定することであって、対照値に対するより低いムチン５Ｂ濃度は、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；
（ｉｉ）患者からの、口全体の唾液、例えば、刺激されていない口全体の唾液（ＵＷＭＳ）の試料中の炭酸脱水酵素６濃度を測定することであって、対照値に対するより低い炭酸脱水酵素６濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；
（ｉｉｉ）患者からの、口全体の唾液、例えば、刺激されていない口全体の唾液（ＵＷＭＳ）の試料中のスタセリン濃度を測定することであって、対照値に対するより高いスタセリン濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；
（ｉｖ）患者からの獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料中の全蛋白質濃度を測定することであって、対照値に対する全蛋白質のより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；
（ｖ）患者からの獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料中のスタセリン濃度を測定することであって、対照値に対するスタセリンのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；および
（ｖｉ）患者からの獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料中のカルシウム濃度を測定することであって、対照値に対するカルシウムのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すこと；
のうちの１以上、例えば、いずれかの２、３、４、または５、例えば、全ての６を測定することを含む、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する患者を同定する方法（方法１）を提供する。
例えば、本発明は、
１．１  該患者が試料の収集に先立って少なくとも１時間、例えば、少なくとも２時間食べたり飲んだりしない方法１、
１．２  患者が以下の基準：
【表１】
2015507183.tif 000002
のうちの１以上を示す場合、該患者はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される方法１または１．１、
１．３  エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された該患者が方法１．２において同定された基準の少なくとも２つを満足する方法１．２、
１．４  口全体の唾液中のムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素およびスタセリンを測定することを含む前記方法のいずれか、
１．５  ０．５〜２時間、例えば、１時間の間装着された硬口蓋マウストレイ／スプリントにはめ込まれたヒドロキシアパタイトまたはエナメル質ブロックを患者の口に入れ、患者の口からの取り出しの後に該ブロックからＡＥＰを収集することによって、患者のＡＥＰがサンプリングされる前記方法のいずれか、
１．６  以下の：
（ａ）フッ化物マウスリンスおよび高フッ化物濃度練り歯磨きから選択されるフッ化物治療剤；
（ｂ）ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物または炭酸カルシウムのようなリン酸カルシウムまたはカルシウム研磨剤を含む練り歯磨き；
（ｃ）遊離または塩形態のＬ−アルギニンを含むオーラルケア製品、例えば、マウスウォッシュまたは歯磨剤；
（ｄ）露出された象牙質の領域に対する象牙質結合剤またはワニス；
（ｅ）第一スズイオンを含有するオーラルケア製品；
（ｆ）カルシウムイオンを含有するオーラルケア製品；
の１以上を含めた、治療剤または製品の有効量を、エナメル質または象牙質酸蝕症の制御のために歯に投与し、または患者が投与するように仕向けることを含む、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された患者を治療することをさらに含む前記方法のいずれかを提供する。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態は、使用説明書と共に、以下の蛋白質ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上の濃度を測定するための手段を含む、例えば、該蛋白質に対する抗体を含む、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットを提供する。
【００１１】
本発明は、さらに、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットの製造における、ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上に対する抗体の使用を提供する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は：ａ．哺乳動物の口腔から口全体の唾液試料を入手し；ｂ．以下のバイオマーカー：ｉ）ムチン５Ｂ；ｉｉ）炭酸脱水酵素６；およびｉｉｉ）スタセリンのうちの１以上の濃度を測定し；ムチンＢの濃度；炭酸脱水酵素６の濃度；および／またはスタセリン濃度をバイオマーカーの各々についての対照値と比較することを含み；ここで、該対照値は、エナメル質の酸蝕症に罹っていない哺乳動物の口腔から採取された口全体の唾液試料中のバイオマーカーの濃度であり；ムチン５Ｂについての対照値に対するより低いムチン５Ｂ濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；ここで、炭酸脱水酵素６についての対照値に対するより低い炭酸脱水酵素６の濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；および、スタセリンについての対照値に対するより高いスタセリン濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すことを特徴とする、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法を提供する。いくつかの実施形態では、エナメル質酸蝕症は食事が病因のものである。
【００１３】
いくつかの実施形態において、口全体の唾液は刺激されていない口全体の唾液である。いくつかの実施形態において、口全体の唾液は刺激されている。
【００１４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物が以下の基準：
【表２】
2015507183.tif 000003
のうちの１以上を示す場合、該哺乳動物はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、以下の基準：
【表３】
2015507183.tif 000004
のうちの少なくとも２つを示すことに基づいて、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態は、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された哺乳動物を治療する工程をさらに含む方法を提供し、ここで、該工程は、象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる剤または製品の有効量を該哺乳動物の口腔に投与することを含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、象牙質またはエナメル質の酸蝕症を予防し、または低下させる該剤または製品は：フッ化物マウスリンス；高フッ化物濃度練り歯磨き；ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物または炭酸カルシウムのようなリン酸カルシウムまたはカルシウム研磨剤を含む練り歯磨き；遊離または塩形態のＬ−アルギニンを含むオーラルケア製品；象牙質結合剤またはワニス；第一スズイオン源を含むオーラルケア組成物；およびそれらの２以上の組合せから選択される。
【００１８】
いくつかの実施形態は、使用説明書と共に、哺乳動物の口腔から採取された口全体の唾液試料中のムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上の濃度を測定するための手段を含む、哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットを提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒト；ネコ科動物；およびイヌ科動物から選択される。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態は、哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットの製造における、ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上に対する抗体の使用を提供する。
【００２１】
本発明の他の実施形態は：ａ．哺乳動物の口腔から獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料を入手し；ｂ．以下のバイオマーカー：ｉ）全蛋白質；ｉｉ）スタセリン；およびｉｉｉ）カルシウムのうちの１以上の濃度を測定し；全蛋白質濃度；スタセリン濃度；および／またはカルシウム濃度を、バイオマーカーの各々についての対照値と比較することを含み、ここで、該対照値は酸蝕症に罹っていない哺乳動物の口腔から採取されたＡＥＰ試料中のバイオマーカーの濃度であり；全蛋白質についての対照値に対する全蛋白質のより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；ここで、スタセリンについての対照値に対するスタセリンのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；および、カルシウムについての対照値に対するカルシウムのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すことを特徴とする、増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法を提供する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物が以下の基準：
【表４】
2015507183.tif 000005
のうちの一方または双方を示す場合、該哺乳動物はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される。
【００２３】
いくつかの実施形態は、１時間以上にわたって形成されたＡＥＰの試料中のカルシウム、スタセリンおよび／または全蛋白質を測定するための手段を含む、哺乳動物において酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットを提供する。
【００２４】
全体を通じて用いられるように、範囲は該範囲内にある各々のおよびあらゆる値を記載するための簡易表記法として用いられる。該範囲内のいずれの値も該範囲の目標として選択することができる。加えて、本明細書中に引用された全ての文献はここに引用してその全体を援用する。
【００２５】
本開示における定義および引用された文献の定義がコンフリクトする場合、本開示が優先する。
【００２６】
特記しない限り、本明細書中におけるここでおよび他の箇所で表された全てのパーセンテージおよび量は重量によるパーセンテージを指すと理解されるべきである。与えられた量は物質の有効重量に基づく。
【実施例】
【００２７】
実施例１
臨床試験を行って、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性についてのマーカーを同定する。登録基準は、（ｉ）刺激されていない唾液流量＞０．２ｍｌ／分、および（ｉｉ）胃酸酸蝕症損傷または異常な唾液機能の徴候無し、を含む。
【００２８】
２つの患者の群（各々ｎ＝３０）を調べ、一方は食事由来の酸蝕症の徴候無しのものであり（「対照」）、他方は食事由来の酸蝕症の徴候有りのものであり（「酸蝕症」）、双方の群は同様な食事および正常な唾液流量を有する。１時間の間装着された硬口蓋マウストレイ／スプリントにはめ込まれたヒドロキシアパタイトまたはエナメル質ブロックを患者の口に入れ、患者の口から取り出された後にブロックからＡＥＰを収集することによってＡＥＰをサンプリングし、ＡＥＰは患者の切歯からもサンプリングされる。
【００２９】
唾液中のムチン５ｂ、炭酸脱水酵素６およびスタセリン：刺激されていない口全体の唾液（ＵＷＭＳ）は、ＭＵＣ５ｂ、炭酸脱水酵素６およびスタセリンについての免疫ブロッティングによって分析する。半定量的分析は、精製されたＭＵＣ５ｂ、炭酸脱水酵素６およびスタセリン標準に対して抗体染色強度を比較することによって行われる。対照と比較して、酸蝕症患者からの全唾液中には、ほぼ２５％未満のＭＵＣ５ｂ（ｐ＜０．０５）および炭酸脱水酵素６（ｐ＜０．０５）がある。逆に、同一試料中には有意により多い（ほぼ２倍）スタセリンがある（ｐ＜０．００１）。
【００３０】
現場で１時間にわたって形成されたＡＥＰ中の全蛋白質含有量：ＢＣＡアッセイを用い、Ｓｉａｌｏｓｔｒｉｐペーパーによって収集されたＡＥＰ内の全蛋白質量を比較する。＞２時間にわたって形成された天然上顎切歯上のＡＥＰ内の全蛋白質において対照および酸蝕症患者との間に差は無い。対照的に、スプリント内に１時間保持されたヒドロキシアパタイトまたはエナメル質ブロックいずれかを被覆するＡＥＰは、有意な差を示した（各々、Ｐ＜０．０１およびｐ＜０．０５、各群においてｎ＝１８）。これは、酸蝕症群におけるＡＥＰ形成のより遅い速度を示唆する。
【００３１】
１時間の現場暴露後におけるＡＥＰ中のスタセリン：ＡＥＰ内の特異的蛋白質の分析は、ムチンまたは炭酸脱水酵素６のレベルにほとんど差がないことを明らかにする（が、多くの被験者では、蛋白質は検出することができず）、しかしながら、スタセリンについての明らかな低下がある。
【００３２】
１時間の現場暴露の後におけるＡＥＰ中のカルシウム：１時間でヒドロキシアパタイトディスク上で生じるＡＥＰのイオン分析（ＩＣＰ／ＭＳ）は、有意な量のカルシウムおよびリンを明らかとした。さらに、カルシウムレベルは、対照ｖｓ．酸蝕症群について有意により高い。同一の溶出技術を用い、非−唾液処理ヒドロキシアパタイトディスクからほとんどカルシウムまたはリンは溶出されず、これは、カルシウムおよびリンが吸収された唾液蛋白質と会合したことを示す。
【００３３】
まとめると、唾液およびエナメルペリクル試料は健康なおよび酸蝕症被験者の大きな群から収集する。ヒトエナメル質またはヒドロキシアパタイトの使用は、いずれの矛盾も生じさせず、用いた全てのアッセイにおいて同様な結果を与える。ＩＣＰ／ＭＳの使用は２つの群の間で差を示したが、それはさらなる解明を必要とする。プロフィロメトリーは、ペリクルの保護効果および群の間の差を示唆する。酸蝕症に対する増大した感受性は、ペリクル形成の低下した速度によって説明することができよう。ペリクル蛋白質の量の差は被験者自身の歯から検出されないが（切歯）、それは、スプリントに保持されたエナメル質およびヒドロキシアパタイトブロックの双方で明らかである。ペリクル形成の速度は、唾液中のペリクル構成成分の濃度に依存するが、微生物の分解または他のイオン性因子によっても影響されるであろう。
【００３４】
前記実施例から、以下のパラメータのいずれかまたは全てを用いて診断方法を開発して、歯牙酸蝕症に対する増大した感受性を持つ個体を同定する。
【表５】
2015507183.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成26年10月8日(2014.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．哺乳動物の口腔から口全体の唾液試料を入手し；
ｂ．以下のバイオマーカー：
ｉ）ムチン５Ｂ；
ｉｉ）炭酸脱水酵素６；および
ｉｉｉ）スタセリン；
のうちの１以上の濃度を測定し；次いで、
ｃ．ムチンＢ濃度；炭酸脱水酵素６濃度；および／またはスタセリン濃度を該バイオマーカーの各々についての対照値と比較することを含み、
ここで、該対照値は酸蝕症に罹っていない哺乳動物の口腔から採取された口全体の唾液試料中の該バイオマーカーの濃度であり；ムチン５Ｂについての該対照値に対するより低いムチン５Ｂ濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；
ここで、炭酸脱水酵素６についての該対照値に対するより低い炭酸脱水酵素６濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；および
ここで、スタセリンについての対照値に対するより高いスタセリン濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すことを特徴とする、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法。
【請求項２】
該エナメル質酸蝕症が、食事が病因のものである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該口全体の唾液が刺激されていない口全体の唾液である請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
該哺乳動物が、以下の基準：
【表１】
2015507183.tif 000010
のうち１以上を示す場合に、該哺乳動物はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有するものとして同定される前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
該哺乳動物が以下の基準：
【表２】
2015507183.tif 000011
のうちの少なくとも２つを示すことに基づいて、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
さらに、該哺乳動物は、試料が口腔から採取される前に、少なくとも１時間の間食べたり飲んだりすることを控えるように要求される前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
さらに、象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる剤または製品の有効量を該動物の口腔に投与することを含むエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された哺乳動物を治療する工程を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる該剤または製品が、フッ化物マウスリンス；高フッ化物濃度練り歯磨き；ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物または炭酸カルシウムのようなリン酸カルシウムまたはカルシウム研磨剤を含む練り歯磨き；遊離または塩形態であるＬ−アルギニンを含むオーラルケア組成物；象牙質結合剤またはワニス；第一スズイオン源を含むオーラルケア組成物；およびそれらの２以上の組合せから選択される請求項７に記載の方法。
【請求項９】
該哺乳動物がヒトである前記請求項いずれかに記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物の口腔から採取された口全体の唾液試料中のムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上の濃度を測定するための手段を含む、哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットの使用。
【請求項１１】
該エナメル質酸蝕症が、食事が病因のものである請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上の濃度を測定するための該手段がそれらに対する抗体を含む請求項１０または請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するための、ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上に対する抗体の使用。
【請求項１４】
哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性の診断に使用するための、ムチン５Ｂ、炭酸脱水酵素６、およびスタセリンのうちの１以上に対する抗体。
【請求項１５】
ａ．哺乳動物の口腔から獲得エナメルペリクル（ＡＥＰ）の試料を入手し；
ｂ．以下のバイオマーカー：
ｉ）全蛋白質；
ｉｉ）スタセリン；および
ｉｉｉ）カルシウム
のうちの１以上の濃度を測定し；次いで、
ｃ．全蛋白質濃度；スタセリン濃度；および／またはカルシウム濃度を該バイオマーカーの各々についての対照値と比較することを含み、
ここで、該対照値は酸蝕症に罹っていない哺乳動物の口腔から採取されたＡＥＰ試料中の該バイオマーカーの濃度であり；および
ここで、全蛋白質についての該対照値に対する全蛋白質のより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；
ここで、スタセリンについての該対照値に対するスタセリンのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示し；および
カルシウムについての該対照値に対するカルシウムのより低い濃度はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を示すことを特徴とする、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有する哺乳動物を同定する方法。
【請求項１６】
該エナメル質酸蝕症が、食事が病因のものである請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
該哺乳動物が以下の基準：
【表３】
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のうちの一方または双方を示す場合、該哺乳動物はエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定される請求項１５または請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
さらに、エナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を有すると同定された哺乳動物を治療する工程を含み、ここで、該工程は、象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる剤または製品の有効量を該哺乳動物の口腔に投与することを含む請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
象牙質またはエナメル質酸蝕症を予防し、または低下させる該剤または製品が、フッ化物マウスリンス；高フッ化物濃度練り歯磨き；ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物または炭酸カルシウムのようなリン酸カルシウムまたはカルシウム研磨剤を含む練り歯磨き；遊離または塩形態のＬ−アルギニンを含むオーラルケア組成物；象牙質結合剤またはワニス；第一スズイオン源を含むオーラルケア組成物；およびそれらの２以上の組合せから選択される請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
該哺乳動物がヒトである請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
１時間以上にわたって形成されたＡＥＰの試料中のカルシウム、スタセリンおよび／または全蛋白質を測定するための手段を含む、哺乳動物においてエナメル質酸蝕症に対する増大した感受性を診断するためのキットの使用。
【国際調査報告】
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