(57)【要約】  本発明は、ニワトリの成長能力を改善する、および／またはニワトリから得られる食肉を増加させる、および／またはニワトリもしくはニワトリ飼育作業からの気体放出を減少させる方法であって、有効量の2015533081.tif 000027またはその生理学的に許容可能な塩をニワトリに投与することを含む、方法を提供する。また、有効量の上記化合物、および上記化合物の結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩを含む経口ニワトリ飼料組成物も本発明に含まれる。
2015533081.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニワトリの成長能力を改良する方法であって、有効量の以下の式の化合物：
【化１】
2015533081.tif 000022
またはその生理学的に許容可能な塩を前記ニワトリに経口投与することを含む、方法。
【請求項２】
ニワトリの食肉の量を増加させる方法であって、有効量の以下の式の化合物：
【化２】
2015533081.tif 000023
またはその生理学的に許容可能な塩を前記ニワトリに経口投与することを含む、方法。
【請求項３】
ニワトリまたはニワトリ飼育作業からの気体の放出を減少させる方法であって、有効量の以下の式の化合物：
【化３】
2015533081.tif 000024
またはその生理学的に許容可能な塩を前記ニワトリに経口投与することを含む、方法。
【請求項４】
前記化合物の生理学的に許容可能な塩が、塩酸塩またはヘミフマル酸塩である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記投与が、動物飼料中に前記化合物を含むことによって行われる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記化合物が、約０ｐｐｍ超〜約５０ｐｐｍの量で前記飼料中に存在する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物が、少なくとも約７ｐｐｍの量で前記飼料中に存在する、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記投与が、短期間にわたる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ニワトリが、ガッルス・ガッルス・ドメスティクス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記減少がＮＨ３の量である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
追加の有効成分が前記ニワトリに投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
有効量の以下の式の化合物：
【化４】
2015533081.tif 000025
またはその生理学的に許容可能な塩を、それらのための適切な担体、および任意に１種以上の有効成分と共に含む、経口ニワトリ飼料組成物。
【請求項１３】
前記化合物の生理学的に許容可能な塩が、塩酸塩またはヘミフマル酸塩である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化合物が、０ｐｐｍ超〜約５０ｐｐｍの量で前記飼料中に存在する、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記化合物が、少なくとも約７ｐｐｍの量で前記飼料中に存在する、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
以下の式の化合物
【化５】
2015533081.tif 000026
の結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
家畜動物の飼育は、動物の健康の分野にとって大きな意義があるだけでなく、人の食肉の消費の分野にとっても不可欠である。畜産における重要な目標は、動物の成長能力を改良でき、ならびに動物から得られる食肉の質（例えば、食肉対脂肪の比）を維持／改良でき、および／またはその量を増加できる生物学的に活性な作用物質を利用する方法を開発することである。理想的には、このような生物学的に活性な作用物質は、食肉の質を維持／改良し、食肉の量を増加させるのに効果的である。
【背景技術】
【０００２】
ニワトリ飼育作業において、気体が動物によって、および動物の排泄物を分解するときに生成される。特に、生成されるアンモニアガスは、ニワトリの健康および成長速度に有害であり得、大気へのアンモニア排出は環境への懸念がある。これらの問題に対処するために、ニワトリ飼育作業からアンモニア排出を抑制するための異なる方法が使用されている。アンモニア排出を抑制する１つの方法は動物排泄物に化学物質を適用することである。例えば、ブロイラーニワトリの生産において、ニワトリ小屋の床の上のわらに重硫酸ナトリウム、硫酸アルミニウム、硫酸鉄または硫酸などの化学物質を適用することが知られている。ニワトリ排泄物に由来するアンモニアが化学物質と接触する場合、それは反応し、固体硫酸アンモニウムに変化し、結果として、気体アンモニアとして空気中に排出されない。典型的なブロイラーニワトリの作業において、化学物質は、ニワトリを小屋に導く前にニワトリ小屋の床に適用される。ニワトリはニワトリ小屋の床全体を覆い、それらが成長すると、それらは大きくなり、よりぎゅうぎゅう詰めになる。ニワトリが小屋に入った後、現在、アンモニアを抑制するために化学物質を床に適用する実用的な手段は存在しない。したがって、生育から最初の２週間の後、ニワトリ排泄物に由来するアンモニア排出が再開し、生育の残りの全体を通して継続する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
したがって、本発明は、ニワトリの成長能力を改良するための方法および組成物を提供する。さらに、本発明は、ニワトリから得られる食肉の量を増加させるための方法および組成物を提供する。本発明はまた、ニワトリおよびニワトリ飼育作業からの気体発生を減少させるための方法を提供する。本発明の全ての実施形態に使用される化合物は、有益な変異原性および／または催奇形性の特性を示す。
【０００４】
本発明の方法および組成物は以下の化合物：
【化１】
2015533081.tif 000003
またはその生理学的に許容可能な塩を利用する。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本発明の化合物は当該分野において公知のプロセスによって作製され得る。例えば、米国特許第６，５３４，５０４号、国際公開第２００２／３８５４４号、国際公開第２００２３８５４３号、米国特許第６，８２５，２２０号、米国特許第７，１２２，６８０号、米国特許第６，８４１，５６３号、米国特許第６，０９３，７３５号、米国特許第７，０４１，６８４号および国際公開第２００１／３６４１２に記載されているプロセスは、本発明の化合物を作製するために使用され得るプロセスを例示している。
【０００６】
本開示の化合物は、本発明の方法に有用でもある生理学的に許容可能な誘導体または塩を形成するように反応できる。塩は塩調製のための標準手段を使用して調製され得る。「生理学的に許容可能な塩」という用語は、化合物の酸性または塩基性部分と共に存在する付加塩を指す。このような塩は、当業者に公知であるＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ，Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌおよびＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００２に記載されている生理学的に許容可能な塩を含む。
【０００７】
例えば、化合物は酸付加塩を形成するように適切な酸で中和されてもよい。酸付加塩としては、例えば、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、コール酸、パモン酸、粘液酸、グルタミン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ギ酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸などの有機酸または無機酸のいずれかとの反応によって形成される塩が挙げられる。本発明の一実施形態において、化合物の生理学的に許容可能な塩は塩酸塩である。本発明の一実施形態において、化合物の生理学的に許容可能な塩はヘミフマル酸塩、特に以下に記載されている、結晶性ヘミフマル酸無水塩形態ＩＩである。
【０００８】
「ニワトリ」という用語は、ガッルス・ガッルス・ドメスティクス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）を含む、ガッルス・ガッルス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ）種を指す。ニワトリは任意の年齢であってもよい。好ましくは、ニワトリは、７０日齢未満、６５日齢未満、または６０日齢未満である。好ましくは、ニワトリはブロイラーである。
【０００９】
本明細書に使用される場合、「成長能力を改良する」とは、場合によって、ニワトリの成長の１つ以上の態様の減少または増加を含む、向上を指す。このような態様は以下の１つ以上を含む：増加した平均１日増加（ＡＤＧ）、増加した増加効率、増加した飼料摂取、増加した加熱枝肉重量、増加した平均１日増体量、増加した脚重量、増加した胸部重量、および減少した脂肪体重量。ニワトリから得られる「食肉の量を増加させる」とは、ニワトリの食肉全体を増加させること、脚における食肉を増加させること、および／または胸部における食肉を増加させることを含む。ニワトリまたはニワトリ飼育作業からの「気体排出を減少させる」とは、ニワトリまたはニワトリ飼育作業からのＮＨ３またはＨ２Ｓの１つまたは両方を減少させることを指す。
【００１０】
本明細書に使用される場合、「有効量」という用語は、ニワトリに投与される場合、成長能力を改良する、および／またはニワトリから得られる食肉の量を増加させる、および／またはニワトリもしくはニワトリ飼育作業からの気体排出を減少させる量を指す。好ましくは、本発明の化合物は、ニワトリが自由に取ることができる動物飼料または水中でニワトリに提供される。さらに、本発明は他の有効成分と共に本発明の化合物を投与することを含む。したがって、「有効量」は、１種以上の他の活性成分の投与と組み合わされる場合、ニワトリの成長能力を改良する、および／またはニワトリから得られる食肉の量を増加させる、および／またはニワトリもしくはニワトリ飼育作業からの気体排出を減少させる本発明の化合物の量を含む。
【００１１】
本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、本発明の化合物の有効量をニワトリに経口投与することを指す。経口投与のために、本発明の化合物は、一般に畜産に利用されている適切な担体または希釈剤と混合されてもよい。本発明の化合物を含む動物飼料および飼料が本発明のさらなる実施形態として提供される。このような動物飼料に一般に利用される典型的な担体および希釈剤としては、コーンミール、コーンコブグリット、ダイズミール、アルファルファミール、もみ殻、ダイズミルラン、綿実油かす、骨粉、粉砕トウモロコシ、コーンコブミール、ホイートミドリングス、石灰岩、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウム、尿素、蒸留乾燥穀物、ビタミンおよび／またはミネラル混合物、甘蔗廃糖蜜、水または他の液体担体などが挙げられる。このような担体は有効成分の均一分布を促進できる。本発明の化合物は任意の年齢のニワトリに投与されてもよい。好ましくは、本発明の化合物は、７０、６５または６０日齢までのニワトリに投与される。経口動物飼料組成物において、本発明の化合物の量は、０ｐｐｍ超〜２ｐｐｍ、２〜５０ｐｐｍ、３〜４０ｐｐｍ、３．５〜１０ｐｐｍ、５〜１０ｐｐｍ、または約７ｐｐｍであってもよい。
【００１２】
本発明の一部の実施形態において、ニワトリへの化合物の投与は様々な期間にわたる。一実施形態において、投与は短期間にわたる。本明細書で使用される場合、「短期間」とは、約３０日未満、例えば１４日、２１日または２８日にわたる化合物の１日投与を意味する。別の実施形態において、投与は中期間にわたる。本明細書で使用される場合、「中期間」とは、約３１日から約６０日の間、例えば４２日、４８日または５４日にわたる化合物の１日投与を意味する。さらに別の実施形態において、投与は長時間にわたる。本明細書で使用される場合、「長期間」とは、約６０日超、例えば７５日、９０日、１００日、１１１日、１２０日またはそれより長い期間にわたる化合物の１日投与を意味する。
【００１３】
以下の項目は本発明を例示する。
項目１．ニワトリの成長能力を改良する方法であって、有効量の以下の式の化合物：
【化２】
2015533081.tif 000004
またはその生理学的に許容可能な塩を前記ニワトリに経口投与することを含む、方法。
項目２．投与が動物飼料中に化合物を含むことによって行われる、項目１に記載の方法。
項目３．動物飼料が前記ニワトリに自由に提供される、項目１または項目２に記載の方法。
項目４．化合物の生理学的に許容可能な塩が塩酸塩またはヘミフマル酸塩である、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
項目５．化合物が、約２〜約５０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目２〜４のいずれか一項に記載の方法。
項目６．前記化合物が、約３．５〜約１０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目２〜５のいずれか一項に記載の方法。
項目７．前記化合物が、少なくとも約７ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目２〜６のいずれか一項に記載の方法。
項目８．投与が短期間にわたる、項目１〜７のいずれか一項に記載の方法。
項目９．投与が中期間にわたる、項目１〜７のいずれか一項に記載の方法。
項目１０．投与が長期間にわたる、項目１〜７のいずれか一項に記載の方法。
項目１１．ニワトリがガッルス・ガッルス・ドメスティクス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
項目１２．ニワトリが７０日齢未満である、項目１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
項目１３．前記ニワトリが雄である、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
項目１４．前記ニワトリがブロイラーである、項目１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
項目１５．前記改良された成長能力が、平均１日増加（ＡＤＧ）、増加効率、飼料摂取、加熱枝肉重量、平均１日増体量、脚の重量、胸部重量および脂肪体重量のうちの少なくとも１つである、項目１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
項目１６．ニワトリの食肉の量を増加させる方法であって、有効量の以下の式の化合物：
【化３】
2015533081.tif 000005
またはその生理学的に許容可能な塩を前記ニワトリに経口投与することを含む、方法。
項目１７．投与が動物飼料中に化合物を含むことによって行われる、項目１６に記載の方法。
項目１８．動物飼料が前記ニワトリに自由に提供される、項目１６または項目１７に記載の方法。
項目１９．化合物の生理学的に許容可能な塩が塩酸塩またはヘミフマル酸塩である、項目１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
項目２０．化合物が、約２〜約５０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
項目２１．前記化合物が、約３．５〜約１０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
項目２２．前記化合物が、少なくとも約７ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
項目２３．投与が短期間にわたる、項目１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
項目２４．投与が中期間にわたる、項目１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
項目２５．投与が長期間にわたる、項目１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
項目２６．ニワトリがガッルス・ガッルス・ドメスティクス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）である、項目１６〜２５のいずれか一項に記載の方法。
項目２７．ニワトリが７０日齢未満である、項目１６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
項目２８．前記ニワトリが雄である、項目１６〜２７のいずれか一項に記載の方法。
項目２９．前記ニワトリがブロイラーである、項目１６〜２８のいずれか一項に記載の方法。
項目３０．前記増加が、食肉全体、脚における食肉、および／または胸部における食肉のうちの１つ以上の増加である、項目１６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
項目３１．ニワトリまたはニワトリ飼育作業からの気体排出を減少させる方法であって、有効量の以下の式の化合物：
【化４】
2015533081.tif 000006
またはその生理学的に許容可能な塩を前記ニワトリに経口投与することを含む、方法。
項目３２．投与が動物飼料中に化合物を含むことによって行われる、項目３１に記載の方法。
項目３３．動物飼料が前記ニワトリに自由に提供される、項目３１または項目３２に記載の方法。
項目３４．化合物の生理学的に許容可能な塩が塩酸塩またはヘミフマル酸塩である、項目３１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
項目３５．化合物が約２〜約５０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
項目３６．前記化合物が約３．５〜約１０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目３１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
項目３７．前記化合物が少なくとも約７ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目３１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
項目３８．投与が短期間にわたる、項目３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
項目３９．投与が中期間にわたる、項目３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
項目４０．投与が長期間にわたる、項目３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
項目４１．ニワトリがガッルス・ガッルス・ドメスティクス（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）である、項目３１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
項目４２．ニワトリが７０日齢未満である、項目３１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
項目４３．前記ニワトリが雄である、項目３１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
項目４４．前記ニワトリがブロイラーである、項目３１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
項目４５．前記減少がＮＨ３の量である、項目３１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
項目４６．追加の有効成分が前記ニワトリに投与される、項目１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
項目４７．有効量の以下の式の化合物：
【化５】
2015533081.tif 000007
またはその生理学的に許容可能な塩を、それらのための適切な担体、および任意に１種以上の有効成分と共に含む、経口ニワトリ飼料組成物。
項目４８．化合物の生理学的に許容可能な塩が、塩酸塩またはヘミフマル酸塩である、項目４７に記載の組成物。
項目４９．化合物が、約２〜約５０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目４７または項目４８に記載の組成物。
項目５０．前記化合物が、約３．５〜約１０ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目４７〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
項目５１．前記化合物が、少なくとも約７ｐｐｍの量で飼料中に存在する、項目４７〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
項目５２．前記化合物が、
【化６】
2015533081.tif 000008
またはその生理学的に許容可能な塩である、項目１〜５１のいずれか一項に記載の方法または組成物。
【００１４】
研究１
以下の化合物が研究に使用される。
【００１５】
化合物１：陽性対照
２−［４−（２−｛［（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（２−チオフェン−２−イルフェノキシ）プロピル］アミノ｝−２−メチルプロピル）フェノキシ］ピリジン−３−カルボニトリル
【化７】
2015533081.tif 000009
【００１６】
化合物２
（２Ｓ）−１−｛［１，１−ジメチル−２−（４−｛［５−（モルホリン−４−イルカルボニル）ピリジン−２−イル］オキシ｝フェニル）エチル］アミノ｝−３−（１Ｈ−インダゾール−４−イルオキシ）プロパン−２−オール
【化８】
2015533081.tif 000010
【００１７】
化合物３
４−（｛（２Ｓ）−３−［（１，１−ジメチル−２−｛４−［４−（メチルスルホニル）フェノキシ］フェニル｝エチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−チオン
【化９】
2015533081.tif 000011
【００１８】
化合物４
２−｛４−［２−（｛（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−［２−（１Ｈ−インドール−２−イル）フェノキシ］プロピル｝アミノ）−２−メチルプロピル］フェノキシ｝ピリジン−３−カルボキサミド
【化１０】
2015533081.tif 000012
【００１９】
化合物５
４−｛［（２Ｓ）−３−（｛１，１−ジメチル−２−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）フェニル］エチル｝アミノ）−２−ヒドロキシプロピル］オキシ｝−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン塩酸塩
【化１１】
2015533081.tif 000013
【００２０】
化合物６
（２Ｓ）−１−｛［１，１−ジメチル−２−（４−｛［５−（モルホリン−４−イルカルボニル）ピリジン−２−イル］オキシ｝フェニル）エチル］アミノ｝−３−（１Ｈ−インドール−４−イルオキシ）プロパン−２−オール
【化１２】
2015533081.tif 000014
【００２１】
化合物７
４−（｛（２Ｓ）−３−［（２−｛４−［２，４−ビス（メチルスルホニル）フェノキシ］フェニル｝−１，１−ジメチルエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド
【化１３】
2015533081.tif 000015
【００２２】
化合物８
４−［４−（２−｛［２−ヒドロキシ−３−（３−ヒドロキシフェノキシ）プロピル］アミノ｝−２−メチルプロピル）フェノキシ］安息香酸二塩酸塩
【化１４】
2015533081.tif 000016
【００２３】
化合物９
２−［４−（２−｛［（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−インダゾール−４−イルオキシ）プロピル］アミノ｝−２−メチルプロピル）フェノキシ］ピリジン−３−カルボキサミド
【化１５】
2015533081.tif 000017
【００２４】
本研究の目的は、上記の化合物の非ゼロ用量と、陽性対照（化合物１）および陰性対照とを比較することによって雄のブロイラーの成長能力および枝肉反応を評価することである。表１は特定の処置群を示す：
【００２５】
【表１】
2015533081.tif 000018
【００２６】
投与経路は経口であり、化合物は飼料中で混合され、自由に取れるように提供される。研究の１日目のニワトリ年齢は３５日齢である。重量は以下の日に計られる：
１）研究１日目（囲いの重量）
２）研究１４日目（個々の動物の体重）
３）研究１５日目（選択された動物の個々の体重）
４）研究１６日目（ブロック１〜５）
５）研究１７日目（ブロック６〜１０）。
【００２７】
最後の体重の計測の後、以下の処理データを個々の動物において集める（加熱重量）。
１）生体重
２）加熱枝肉重量
３）脂肪体重量
４）加熱胸筋重量
５）脚における加熱骨重量。
【００２８】
陽性対照である化合物１は、改良されたＡＤＧ、飼料摂取、平均１日増体量のみを生じる。化合物の全ては加熱枝肉重量において数値的改善を生じる。３つの化合物、化合物２、５および９は、陰性対照および陽性対照の両方より有意に良好な改善を示す。増加は、３つ全ての化合物について飼料摂取の有意な増加に関連し、化合物２、５および９について未処置の対照より有意に増加する。化合物２、５および９はまた、脂肪体重量を減少させるが、相違は化合物５および９についてのみ有意である。対照からのパーセントの変化を、未処置の対照より良好に機能する化合物について以下の表２にまとめる。
【００２９】
表２
対照からのパーセントの変化に基づいた陽性対照（化合物１）対陰性対照より機能の改良において有意に良好な化合物
【表２】
2015533081.tif 000019
【００３０】
研究２
化合物２、５および９をこの研究において使用する。この研究は、屠殺前の最後の１４日に投与される、化合物の非ゼロ用量と、陰性対照とを比較することによって雄のブロイラーの成長能力および枝肉反応を評価するために行う。表３は特定の処置群を示す。
【００３１】
【表３】
2015533081.tif 000020
【００３２】
投与経路は経口であり、化合物は飼料中で混合され、自由に取れるように提供される。研究の１日目のニワトリの年齢は３５日齢である。重量は以下の日に計られる：
１）研究１日目（囲いの重量）
２）研究１５日目（個々の動物の体重）
３）研究１６日目（ブロック１〜４の動物において選択された動物の個々の体重）
４）研究１７日目（ブロック５〜８の動物において選択された動物の個々の体重）。
【００３３】
最後の体重の計測の後、以下の処理データを個々の動物において集める（加熱重量）。
１）生体重
２）加熱枝肉重量
３）脂肪体重量
４）加熱胸筋重量
５）脚における加熱骨重量。
【００３４】
ＡＤＧ、Ｇ／ＦおよびＦ／Ｇ（それぞれ、増加：飼料効率および飼料：増加効率）、加熱枝肉重量、加熱胸部重量、および脚における加熱骨重量について、陰性対照群（ＧＰ１）と全ての処置群とを比較した場合、処置効果は有意である。さらに、ＧＰ３、ＧＰ６およびＧＰ７群における動物は陰性対照群におけるものよりも有意に高いＡＤＧを有する。ＧＰ３群における動物は陰性対照群におけるものよりも有意に高いＡＤＦＩを有する。ＧＰ４群における動物は陰性対照群におけるものよりも有意に低いＡＤＦＩを有する。ＧＰ２、ＧＰ３、ＧＰ５、ＧＰ６およびＧＰ７群における動物は、陰性対照群におけるものよりも有意に高いＧ／Ｆ比、加熱枝肉重量、加熱胸筋重量、および脚における加熱骨重量を有する。ＧＰ２、ＧＰ３、ＧＰ５、ＧＰ６およびＧＰ７群における動物は、陰性対照群におけるものよりも有意に低いＦ／Ｇ比を有する。
【００３５】
研究３
この研究は、「典型的な」飼料を与えた場合の小規模の市場で飼育された市販のブロイラーの生体機能および枝肉収量で測定した化合物５の用量反応を決定するために行う。２４００  Ｈｕｂｂａｒｄ  Ｍ９９  Ｘ  Ｃｏｂｂニワトリ（１２００匹の雄／１２００匹の雌）をこの研究において使用する。化合物５は以下の用量で投与する：０、２、４、８および１６ｐｐｍ、飼料中で経口、ニワトリが２４日齢であるときに開始し、ニワトリが３８日齢になると終了する。５つの異なる化合物５の用量を、市販の成分のみを使用して全ての栄養素の推奨を満たすように調合したすりつぶした食餌中で投与する。
【００３６】
この研究で測定されたパラメータは、ＡＤＧ（平均１日増加）、ＡＤＦＩ（平均１日飼料摂取）、ＧＥ（増加効率）、およびＦＥ（飼料効率）を含む。トリは、枝肉（臓物を有さない）、胸筋（骨なし皮なし）、および骨付きモモ肉（ｌｅｇ−ｑｕａｒｔｅｒ）の重量について測定される。処理の日の生体重を、トリについての枝肉、胸肉および骨付きモモ肉についての収量を計算するために使用する。
【００３７】
改善が、ＧＥ、ＦＥ、および骨付きモモ肉の重量および収量について観察されるが、２ｐｐｍより多い用量はさらなる効果を示さない。ＧＥおよびＦＥは雌のブロイラーにおいてのみ効果的な影響を与える。化合物５の反応は脂肪沈着状態に起因して年齢と関連し得、２４〜３８日齢のブロイラーは、動物の若年齢およびそれによる脂質組織沈着の欠如に起因して他の測定されたパラメータに対する影響を示さない場合がある。さらに、この研究において、ＦＥおよびＧＥの両方を改善する、雄ではなく、雌の能力により、これらの反応が脂肪体組成と関連し得ることがさらに示唆され、雌が脂質組織を雄のブロイラーより迅速かつ多くの割合で獲得していると考えられる。
【００３８】
研究４
この研究は、化合物５を有するまたは有さない試料を提供されたブロイラーの生体機能および枝肉形質に対する化合物５の効果を調べるため、およびブロイラーからの種々の気体の放出を評価するために行う。Ｒｏｓｓ  Ｘ  Ｒｏｓｓ  ７０８の雄のニワトリがこの研究に使用される。化合物５は以下の用量にて投与される：０および１６ｐｐｍ、飼料中で経口、ニワトリが３４日齢で開始して、ニワトリが４８日齢で終了する。化合物５の用量は、市販の成分のみを使用して全ての栄養素の推奨を満たすように調合されたすりつぶされた食餌中に投与される。
【００３９】
この研究において測定されたパラメータはＡＤＧ、ＡＤＦＩおよびＦＣＲを含む。トリは、枝肉（臓物を有さない）、胸筋（骨なし皮なし）、骨付きモモ肉（ｌｅｇ−ｑｕａｒｔｅｒ）および腹部脂肪の重量について測定される。処理の日の生体重を、トリについての枝肉、胸肉および骨付きモモ肉についての収量を計算するために使用する。種々の気体の放出も測定する。累積気体放出が、以下の気体：ＮＨ３、ＮＯ、ＮＯ２、Ｈ２Ｓ、ＳＯ２、メタン／非メタン全炭化水素、Ｏ２、およびＣＯ２についてモニタされ、計算される。化合物５の効果は、これらの気体の累積放出によって、およびこれらの累積値をそれらの身体、枝肉、胸肉および骨付きモモ肉の重量に標準化することによって決定される。
【００４０】
化合物５による補給の結果、ＡＤＦＩおよび死亡率を除いて、モニタされた全ての生体機能、枝肉形質の改善が生じる。未処置のトリと比較して、化合物５を投与したトリからのＮＨ３およびＨ２Ｓの累積放出は、それぞれ、２９．２および１９．０％減少する。トリまたはその売り物になる切断肉の生体重の増加を考慮して、結果として得られる標準化された相違は、ＮＨ３放出の３０％より多い減少まで増加する。
【００４１】
毒性スクリーニング
化合物５は有益な変異原性および／または催奇形性の特性を示す。例えば、化合物５は、処置される他の化合物よりＡｍｅｓアッセイ（変異原性）およびＺｅｂｒａｆｉｓｈアッセイ（催奇形性／染色体の影響）において良好な結果を示す。
【００４２】
化合物５の結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩの調製
化合物５のＨＣｌ塩の許容可能な結晶形態の再現性の問題はより適した塩形態の探索につながる。化合物５の結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩは、有益な結晶化度、収量、および再現性を示す。化合物５の結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態は、化合物５のヘミフマル酸塩の２つの形態のうちの一方であり、他方は好ましくない特性を有する溶媒和形態である。化合物５の他の塩形態もまた、好ましくない特性を有するので、化合物のヘミフマル酸無水物塩形態２が必要な標準を満たすように決定される唯一の結晶性塩形態である。
【００４３】
結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩは化合物５の２ｇの遊離塩基をバイアルに入れることによって調製される。固体を６０℃、１０００ｒｐｍにて撹拌しながら１０ｍＬのＥｔＯＨに溶解して、透明な黄色の溶液を得る。次いでこの溶液を、１ｍＬのアリコート中の２５１ｍｇのフマル酸（５ｍＬのＥｔＯＨに溶解した）とゆっくり混合する。試料を１５分間撹拌し、非常に厚い白色のスラリーが得られる。さらに１５ｍＬのＥｔＯＨを加えて全溶媒体積を３０ｍＬにする。試料を６０℃にてさらに３０分間撹拌する。白色固体の厚いスラリーが得られる。白色固体を真空濾過によって分離し、１０分間、真空および空気流下で所定の位置において乾燥させる。供給源のバイアルおよびケーキをエタノールの１０ｍＬのアリコートで２回洗浄して回収を最大化する。厚いケーキの白色固体が得られ、この固体を６５℃の真空オーブン中に一晩置く。１．８７８ｇが回収される（７５．４８％の収率）。
【００４４】
示差走査熱量計分析を、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣユニットＱ２０００において実施する。試料を、５０ｍＬ／分の窒素パージにより１０℃／分にて２５℃から３００℃までひだ付きのアルミニウム皿において加熱する。ＤＳＣ温度をインジウム標準物で校正し、１５６．３〜１５６．９℃で開始する。化合物５の結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩはＤＳＣにより２０３．７３℃で開始する融点を示す。
【００４５】
結晶性固体のＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動するＣｕＫａ源λ＝１．５４０６０ÅおよびＶａｎｔｅｃ検出計を備えた、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計で得られる。試料は、２θにおいて０．００９°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度により、ならびに０．６ｍｍ発散、５．２８固定散乱防止、および９．５ｍｍ検出器スリットにより、２θにおいて４から４０°で走査する。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、スライドガラスを使用して滑らかな面を得る。結晶形態回折パターンを周囲温度および相対湿度にて収集する。任意の所与の結晶形態について、回折ピークの相対強度は、結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して変化し得ることは、結晶学の分野において周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特性ピーク位置は変化しない。さらに、また、任意の所与の結晶形態について、角度ピーク位置はわずかに変化し得ることは結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度または湿度、試料の変位、または内部表準の存在もしくは不在の変化に起因して変化し得る。この場合、２θにおける０．２のピーク位置変動性は、示した結晶形態の明確な識別を妨げずにこれらの潜在的変化を考慮に入れる。結晶形態の確認は、識別ピーク（°２θの単位）、典型的により突出したピークの任意の独自の組み合わせに基づいてなされ得る（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ＃３５、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ＃３０、Ｃｈａｐｔｅｒ＜９４１＞、４２７−４３２ページ、２０１２）。周囲温度および相対湿度にて収集した結晶形態回折パターンは、８．８５３および２６．７７４°２−θにおけるピークを用いてＮＢＳ標準参照物質６７５（雲母）に基づいて調整する。
【００４６】
結晶性ヘミフマル酸無水物塩形態ＩＩの好ましい試料は、０．２°の回折角に対する許容度で、以下の表４に記載される回折ピーク（２θ値）を有するとして、特に１２．３２、１４．６９および２１．０９からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて１９．３２におけるピークを有するとしてＣｕＫａ放射線を使用してＸ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００４７】
【表４】
2015533081.tif 000021
【国際調査報告】
2015533081.tif 000028
2015533081.tif 000029
2015533081.tif 000030
2015533081.tif 000031