(57)【要約】  本発明はタカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物又は保健用食品製造への応用を開示する。タカサゴサンシチソウエタノール抽出物と水抽出物の高用量群は、四塩化炭素によるマウス急性肝損傷を顕著に抑制することができ、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼを低下させると共に、肝細胞の変性、壊死程度をも軽減させることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
前記薬物又は保健用食品が、タカサゴサンシチソウ抽出物を、通常用量の医約的に許容される賦形剤と混合することにより製造される臨床的に認められる製剤であるタカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物又は保健用食品製造への応用。
【請求項２】
前記タカサゴサンシチソウ抽出物が、水抽出物又はエタノール抽出物である請求項１に記載のタカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物又は保健用食品製造への応用。
【請求項３】
前記水抽出物の製造方法が、タカサゴサンシチソウに８〜１２倍量の水を加え、１．５〜２時間煎じ、得られる残留物にさらに５〜８倍量の水を加えて、１〜１．５時間煎じ、得られた抽出液を合わせて、ろ過し、濃縮することを含む請求項２に記載のタカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物又は保健用食品製造への応用。
【請求項４】
前記エタノール抽出物の製造方法が、タカサゴサンシチソウに８〜１２倍量の７５〜９０％のエタノールを加え、１．５〜２時間還流抽出を行い、得られた残留物にさらに７５〜９０％倍量の水を加え、１〜１．５時間煎じ、得られた抽出液を合わせて、ろ過し、エタノールを回収し、濃縮することを含む請求項２に記載のタカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物又は保健用食品製造への応用。
【請求項５】
前記製剤が、臨床的に認められる顆粒剤、カプセル剤、錠剤又は経口液剤である請求項1に記載のタカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物又は保健用食品製造への応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、漢方薬分野に関し、特に漢方の簡単な処方としてのタカサゴサンシチソウの製薬及び保健用食品における用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
タカサゴサンシチソウは、白背三七とも呼ばれており、キク科植物タカサゴサンシチソウGynura divaricata(L)DC.[G.oualis DC.;G.pseudo-china(L) DC.]の植物全体である。タカサゴサンシチソウの異名として、大肥牛（「広州植物誌」）、土生地、白仔菜薬、散血姜（「広西薬植図誌」）、土田七（「広西漢方誌」）、槍刀薬、清心菜、白血皮菜、胡豆七、大暈病薬、台湾仙草、益寿神草、生命樹、龍仙草、神草などがある。タカサゴサンシチソウは多年草で、高さ３０〜６０ｃｍ、茎は直立しているか、多くは基部から傾斜して立ち上がり、木質であり、乾燥後には条状の稜を有し、分枝しないか、上部に花序の枝を有することがあり、無毛であるか、短い柔毛に覆われ、淡紫色を少し帯びている。葉質は厚く、通常は下部に集中しており、柄を有しているか、ほぼ無柄である。
【０００３】
葉は卵状、楕円状であるか、倒被針状であり、長さ２〜１５ｃｍ、幅１．５〜５ｃｍで、頂端は鈍端であったり、鋭端であったりしており、基部は楔状で細くになるか、下に延伸して葉柄になっており、ほぼ切形又はハート状であり、辺縁は粗い鋸歯があり、バイオリン状に裂けるものも見られる。全縁は稀であり、上面は緑色で、下面は紫色を帯びる。側脈は３〜５対で、細脈は一般的に互いにつながり合ってほぼ平行の長円形の細網を形成し、乾燥後には黒線が明確に呈し、両面は短い柔毛に覆われ、葉柄の長さは０．５〜４ｃｍで、短い柔毛があり、基部は卵状であるか、半月状の鋸歯を有する耳状である。上部の葉は次第に少なくなり、苞葉状、狭い被針状であるか、線状で、羽状に浅裂し、無柄で、茎を少し包む。
【０００４】
頭状花序は、直径が１．５〜２ｃｍで、通常（２）３〜５個が茎又は枝端で傘形の散房状に配列される円錐花序であり、叉状に分枝されるものが多い。花柄の長さは１〜１５ｃｍであり、密生した短い柔毛に覆われ、１〜３個の線形の苞片を有する。総苞は鐘状で、長さが８〜１０ｍｍ、幅が６〜８ｍｍであり、基部には数個の線状或いは糸状小苞片がある。総苞片は１層で、１１〜１４個あり、狭い被針状で長さは８〜１０ｍｍ、幅は１〜２ｍｍであり、頂端は次第に尖るようになって長い三角形となり、辺縁は乾燥質であり、背面は３脈を有し、短い毛にまばらに覆われるか、ほぼ無毛である。小花は橙黄色で香りがあり、総苞から少し伸びており、花冠は長さ１１〜１５ｍｍであり、管部は細く、長さ９〜１１ｍｍで、上部が拡大しており、裂片は長円の卵状で、頂端は赤色で尖っている。
【０００５】
薬室の基部は鈍い、矢尻状であり、花柱は分枝が細く、錐形の付属器があり、乳頭状の毛に覆われている。痩果は円筒状で、長さが約５ｍｍ、褐色で、１０本の肋を有し、微毛に覆われている。冠毛は白色、絹毛状で、長さが１０〜１２ｍｍである。
【０００６】
花・果期は８〜１０月である。薬材及び煎じるための断片の性状は塊状の根茎で、細長いひげ根を有する。茎は円柱状、褐紫色で、短い毛に覆われており、葉は互生し、皺がやや多く、完全な葉片は長い卵状から長円状の倒卵形になっており、長さ５〜１５ｃｍ、幅２．５〜８ｃｍで、先端は鈍又は短くて尖っている。基部に二つの耳形ものがあることもあるし、葉縁には不規則な切れ込み及び鋸歯がある。上の表面も下の表面も柔毛がある。頭状の花序又は総苞を有することがある。痩果は深い褐色で、冠毛が白いである。微かに薫り、味が薄い。
【０００７】
タカサゴサンシチソウは広東（広州、南海）、海南（澄邁、崖県、万寧、保亭、瓊中、瓊山等）、香港、雲南（景東、赤河、緑春）に分布している。ベトナムの北部にも分布している。タカサゴサンシチソウは清熱涼血、活血止痛、止血の効能があり、咳嗽、気管支炎、肺結核、瘡瘍、痛腫、熱傷（やけど）、打撲傷、関節痛、崩漏、外傷による出血などに用い、百日咳、骨折、創傷による出血、癰腫瘡せつ（ようしゅそうせつ）を治療する。タカサゴサンシチソウにはｎ-エイコサン（ｎ-Eicosane）、テトラコサノール（Tetracosanol）、オクタコサン酸（Octacosanoic acid）、オクタデカノール（Octacosyl alcohol）、パルミチン酸（Palmitic  acid）、スチグマステロール-3-O-β-D-グルコピラノシド（Stigmasterol-3-O-β-D- glucopyranoside）、スチグマステロール（Stigmasterol）、s―シトステロール（β-Sitosterol）、ダウコステロール（Daucosterol）、フリーデリン（Friedelin）などの成分が含有されている。現代の研究は、タカサゴサンシチソウが血糖値を下げる効果があることを示した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、タカサゴサンシチソウにおける、肝臓を有効に保護することができる新しい用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の技術的課題を解決するために、本発明による技術的方案は以下の通りである。
タカサゴサンシチソウの肝炎を治療する薬物または保健用食品の製造への応用であり、上記薬物又は保健用食品はタカサゴサンシチソウ抽出物を通常用量の医学的に認められる賦形剤（副原料）と混合することにより製造され、臨床的に認められる製剤である。
【００１０】
上記タカサゴサンシチソウ抽出物は水抽出物又はエタノール抽出物である。
上記水抽出物の製造方法は、タカサゴサンシチソウに８〜１２倍量の水を加え、１．５〜２時間煎じ、得られた残留物にさらに５〜８倍量の水を加えて、１〜１．５時間煎じ、得られた抽出液を合わせて、ろ過し、濃縮する工程を含むものである。
【００１１】
前記エタノール抽出物の製造方法は、タカサゴサンシチソウに８〜１２倍量の７５〜９０％のエタノールを加え、１．５〜２時間還流抽出を行い、得られた残留物にさらに７５〜９０％倍量の水を加え、１〜１．５時間煎じ、得られた抽出液を合わせて、ろ過し、エタノールを回収し、濃縮する工程を含むものである。
【００１２】
上記製剤は臨床で認められる顆粒剤、カプセル剤、錠剤又は経口液剤である。
【発明の効果】
【００１３】
研究の結果として、下記のことが分かった。本発明によれば、四塩化炭素（CCl4）の投与によるマウス急性肝損傷に対して、タカサゴサンシチソウのエタノール抽出物及び水抽出物の高用量群は顕著な抑制作用を示した。その抑制作用は、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及び血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼを低下させると共に、肝細胞の変性、壊死程度をも軽減させた。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下に記載した内容は、本発明の一部の実施例であって、本発明を更に説明するために用いられるが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００１５】
実施例１（水抽出）
タカサゴサンシチソウに８倍量の水を加え、２時間第一回目の抽出を行い、残留物についてさらに８倍量の水を加え、１．５時間第二回目の抽出を行った。得られた抽出液を合わせて、ろ過し、濃縮した後、暗褐色粉末状になるまで乾燥させた。エキスの収率（最後の粉末収率/投与した薬材の重量）は６〜１０％であった。
【００１６】
実施例２（水抽出）
タカサゴサンシチソウに１０倍量の水を加え、１．５時間第１回目の抽出を行い、残留物についてさらに６倍量の水を加えて１．２時間第２回目の抽出を行った。得られた抽出液を合わせて、ろ過、濃縮した後、暗褐色粉末状になるまで乾燥させた。エキスの収率は６〜１０％であった。
【００１７】
実施例３（水抽出）
タカサゴサンシチソウに１２倍量の水を加えて１．５時間第１回目の抽出を行い、残留物についてさらに５倍量の水を加えて１時間第２回目の抽出を行った。得られた抽出液を合わせて、ろ過し、濃縮した後、暗褐色粉末状になるまで乾燥させた。エキスの収率は６〜１０％であった。
【００１８】
実施例４（エタノール抽出）
タカサゴサンシチソウに１０倍量の８０%のエタノールを加え、２時間還流抽出を行い、残留物についてさらに８０％倍量の水を加え、１．５時間煎じた。得られた抽出液を合わせ、ろ過し、エタノールを回収し、濃縮を行い、暗褐色粉末状になるまで乾燥させた。エキスの収率は６〜８％であった。
【００１９】
実施例５（エタノール抽出）
タカサゴサンシチソウに８倍量の９０%のエタノールを加え、１．５時間還流抽出を行い、残留物についてさらに９０％倍量の水を加え、１時間煎じた。得られた抽出液を合わせ、ろ過し、エタノールを回収し、濃縮を行い、暗褐色粉末状になるまで乾燥させた。エキスの収率は６〜８％であった。
【００２０】
実施例６（エタノール抽出）
タカサゴサンシチソウに１２倍量の７５%のエタノールを加え、２時間還流抽出を行い、残留物についてさらに７５％倍量の水を加えて１．５時間煎じた。得られた抽出液を合わせ、ろ過し、エタノールを回収し、濃縮を行い、暗褐色粉末状になるまで乾燥させた。エキスの収率は６〜８％であった。
【００２１】
実施例７（顆粒剤）
処方：重量部で計算して、実施例１により得られた水抽出物１重量部、スクロース２．５重量部、デキストリン１．５重量部である。
製造方法：抽出物粉末にスクロース、デキストリンを加え、均一に混合して顆粒に作製した後、乾燥し、個別包装した。
性状：本品は黄褐色の顆粒で味は少し甘くて苦い。
用法・用量：１回に７．５ｇ、１日２〜３回、お湯で服用する。
【００２２】
実施例８（顆粒剤）
処方：重量部で計算して、実施例３より得られた水抽出物１重量部、スクロース２．５重量部、デキストリン１．５重量部である。
製造方法：抽出物粉末にスクロース、デキストリンを加え、均一に混合して顆粒に作製した後、乾燥し、個別包装した。
性状：本品は黄褐色の顆粒で味は少し甘くて苦い。
用法・用量：１回に２．５ｇ、１日２〜３回、お湯で服用する。
【００２３】
実施例９（カプセル剤）
処方：重量部で計算して、実施例４より得られたエタノール抽出物１重量部、澱粉２重量部である。
製造方法：抽出物粉末に澱粉を加え、均一に混合して顆粒に作製した後、乾燥し、カプセルに入れた。
性状：本品はカプセル剤で、内容物は暗褐色の顆粒或いは粉末であり、味は少し苦い。
用法・用量：１回に３粒、１日２〜３回、経口投与する。
【００２４】
実施例１０（錠剤）
処方：重量部で計算して、実施例５より得られたエタノール抽出物１重量部、澱粉２重量部、ステアリン酸マグネシウム適量である。
製造方法：抽出物粉末に澱粉を加え、均一に混合して顆粒に作製し、乾燥した後、ステアリン酸マグネシウムを添加し、打錠した。
性状：本品は暗褐色の錠剤で、味は少し苦い。
用法・用量：１回に３粒、１日２〜３回、経口投与する。
【００２５】
以下に記載する内容では、実験に基づいて、本発明における薬物の作用メカニズムと有利な効果についてさらに説明を行う。
【００２６】
一．実験材料及び方法
１．実験薬物：タカサゴサンシチソウ水抽出物（１．３ｇ生薬/ｍｌ）、エタノール抽出物（２．６ｇ生薬/ｍｌ）、ビフェンダート丸剤（Bifendate Pills、広州星群（薬業）株式有限会社、ロット番号JF４００２１）。
【００２７】
２．動物：動物はNIHマウスで、SPF級、雄性、体重１８〜２２ｇである。実験動物品質合格証番号は２００６Ａ０５１であり、SPF級実験動物環境条件合格証番号は２００６Ｂ０２３であり、SPF級実験動物生産合格証番号はSCXK粤２０１１−００１５である。動物は南方医科大学動物実験センターから提供された。
【００２８】
３．主な化学試薬及び検出機器：アラニン・アミノトランスフェラーゼ（ALT）測定試薬キット（中生北控生物科技株式会社、ロット番号：１２１８８１）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）測定試薬キット（中生北控生物科技株式会社、ロット番号：１２０９２１）、四塩化炭素溶液（分析純、天津市豊寧精密化工株式会社、ロット番号：１１１０１０）、ホルムアルデヒド溶液（分析純、ロット番号：２０１１１００７、広東光華科技株式会社）、無水エタノール（分析純、ロット番号：２０１１０４１６、天津市進豊化工株式会社）、キシレン（分析純、ロット番号：２０１０１２２４、広東光華化学株式会社）、ヘマトキシリン（生物学的染料、ロット番号：０６０４０８、北京鼎国生物技術株式会社FLUKAが輸入し個別包装したもの）、エオシンY（生物学的染料、ロット番号２００５０９１２、中国華東師範大学化工場）、ECHO LCD 生化学分析装置（イタリア、愛康社製造）。OLYMPUS  AU５４２１型全自動生化学分析装置（日本、OLYMPUS社製造）、日本OLYMPUS BH-2蛍光顕微鏡（日本、OLYMPUS社製造）、BECKMANTM 30型低温遠心機（アメリカ、BACKMAN社製造）、LEICA RM2135型切片機（ドイツ、LEICA社製造）、SARTORIUS電子天秤（ドイツ、SARTORIUS社製造）。
【００２９】
４．実験方法及び用量：動物は正常対照群、モデル群、ビフェンダート群（０．２ｇ/ｋｇ）、水抽出物高用量群（１．１２ｇ/ｋｇ）、水抽出物中用量群（０．５６ｇ/ｋｇ）、水抽出物低用量群（０．２８ｇ/ｋｇ）、エタノール抽出物高用量群（１．１２ｇ/ｋｇ）、エタノール抽出物中用量群（０．５６ｇ/ｋｇ）、エタノール抽出物低用量群（０．２８ｇ/ｋｇ）に分け、各群は１２匹の動物とした。１日１回、７日間連続胃内投与を行った。正常対照群及びモデル群は同じ体積の水道水を胃内投与した。胃内投与の容積は０．２５ｍｌ/１０ｇマウスであり、マウスには食べ物を自由に摂取させた。最終回の胃内投与を行って１時間後、０．１２％（体積比率）四塩化炭素(純落花生油で調制する)を０．２ｍｌ/匹の量で腹腔内注射した。絶食させてから１６時間後に、眼球を摘出し、採血し、遠心して血清を採取し、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼを測定した。
【００３０】
５．病理学的検査：肝左葉を採取して中性ホルマリンにて固定した後、通常脱水を行い、４μｍの切片をパラフィン包埋し、HE染色を行って、光学顕微鏡下で肝組織の病理学的変化を観察した。肝組織損傷の程度を０級から３級の４級に分けた。そのうち、０級（−）は、肝組織構造が正常であり、明らかな変性、壊死及び炎症細胞の浸潤がない。１級（＋）は、肝小葉の構造がなお正常であり、一部の肝細胞の混濁腫脹、気球状変性又は脂肪変性、散在性の点状壊死が見られている。２級（＋＋）は、肝小葉の構造が不明瞭であり、明らかな巣状壊死が見られ、炎症細胞の浸潤が伴っている。３級（＋＋＋）：肝小葉の構造が不明瞭であり、明らかな片状壊死がみられ、炎症細胞の浸潤が伴っている。
【００３１】
６．実験データは
2015524813.tif 000002
及び等級/頻度グラフの資料で示し、spss8.0統計ソフトウエアOne-Way ANOVA LSD又はDunnett T3法及びNonparametric Test ２ Independent Samples Test法を利用して、データ処理を行った。
【００３２】
二．検出結果
１．肝機能検出結果
マウス血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼの検出結果を表１に示した。
【表１】
2015524813.tif 000003
【００３３】
表１の結果から、モデル群は正常群に比べて、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼが、いずれも顕著に増加（P<０．０１）していた。ビフェンダート群の血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼは顕著に低下（P<０．０１）しており、タカサゴサンシチソウ水抽出物及びエタノール抽出物の高用量群の血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼは共に顕著に低下（P<０．０５）していた。タカサゴサンシチソウエタノール抽出物の中用量群のグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼが顕著に低下（P<０．０５）していることが認められた。
【００３４】
２．急性肝損傷マウスの肝組織病理学的障害に対する影響
病理切片の結果から、正常対照群のマウスにおいて、肝組織構造は正常であり、肝細胞は中心静脈を中心に放射状配列を現しており、肝細胞索、肝類洞の配列は規則的であった。肝小葉の構造は完全であり、一部の動物で肝細胞の軽度腫脹、点状壊死などの病理変化が認められた。
四塩化炭素モデル群のマウスにおいては、大部分肝細胞は、中心静脈を中心に囲んで分布し、混濁腫脹、細胞質のルースネス化を示しており、気球状変性を呈する細胞もあるということが認められた。肝小葉の中心静脈と肝臓被膜下に分布する肝細胞では点状、巣状及び片状壊死が認められており、炎症細胞の浸潤が伴うなどの病理的改変を表した。
ビフェンダート群及びタカサゴサンシチソウエタノール抽出物、水抽出物の高用量群では、肝細胞の壊死が明らかに減少（P<０．０５）することが認められた。
この結果からタカサゴサンシチソウエタノール抽出物、水抽出物の高用量群はCC1４腹腔内注射による肝損傷に対して保護作用があるということが分かる。病理検査結果を表２に示す。
【００３５】
【表２】
2015524813.tif 000004
【００３６】
三．実験のまとめ
本実験の結果から、CC14によるマウス急性肝損傷に対して、タカサゴサンシチソウエタノール抽出物、水抽出物の高用量群は顕著な抑制作用を示した。その抑制作用の効果として、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼを低下させると共に、肝細胞の変性、壊死程度をも軽減することが認められた。
【手続補正書】
【提出日】平成27年1月29日(2015.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タカサゴサンシチソウ抽出物と、医薬的に許容される賦形剤と含む肝炎治療用組成物。
【請求項２】
顆粒剤、カプセル剤、錠剤又は経口液剤の形態である請求項1に記載のタカサゴサンシチソウの肝炎治療用組成物。
【請求項３】
タカサゴサンシチソウを、水抽出又はエタノール抽出することにより製造するタカサゴサンシチソウ含有肝炎治療用組成物の製造方法。
【請求項４】
前記水抽出を、タカサゴサンシチソウに８〜１２倍量の水を加え、１．５〜２時間煎じ、得られた残留物にさらに５〜８倍量の水を加えて、１〜１．５時間煎じ、得られた抽出液を合わせて、ろ過し、濃縮することにより行う請求項３に記載のタカサゴサンシチソウ含有肝炎治療用組成物の製造方法。
【請求項５】
前記エタノール抽出を、タカサゴサンシチソウに８〜１２倍量の７５〜９０％のエタノールを加え、１．５〜２時間還流抽出し、得られた残留物にさらに７５〜９０％倍量の水を加え、１〜１．５時間煎じ、得られた抽出液を合わせて、ろ過し、エタノールを回収し、濃縮することにより行う請求項３に記載のタカサゴサンシチソウ含有肝炎治療用組成物の製造方法。
【国際調査報告】
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