(57)【要約】  本発明は、硫黄を含む植物に硫黄細菌を移植させ、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と、塩成分を含む溶液とを接触させ、塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法、上記の方法により製造された塩成分を含む溶液、及び窒酸塩が塩１００ｇ当たり１．７ｍｇ以下に含まれた塩を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫黄を含む植物に硫黄細菌を移植させ、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物を、塩成分を含む溶液と接触させ、塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法。
【請求項２】
前記硫黄を含む植物が竹科植物、じゃが芋、ニンニク、ニンニクの茎、生姜、銀杏の葉、粟、黍、黒豆、白豆、小豆、豌豆豆、隠元豆、緑豆、蜀黍、ザボンの皮、レモンの皮、蜜柑の皮、漢拏峰の皮、ライムの皮、オレンジの皮、キンカンの皮、高麗人参、にんじん、大根、かいわれ大根、桔梗、緑豆萌やし、大豆萌やし、落花生、蓬、カボチャ、ローズマリー、ローズハーブ、松の枝、松葉、五加皮、不断草、三菜、長ねぎ、野蒜、ブロッコリー、キャンドルプラント、パイナップルセージ、レモンバーム、スピアミント、アップルミント、パイナップルミント、緑茶葉、キャベツ及びレッドキャベツからなる群から選択される１種以上であることを特徴とする、請求項１に記載の塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法。
【請求項３】
前記硫黄細菌は、硫酸化細菌または硫黄還元細菌であることを特徴とする、請求項１に記載の塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法。
【請求項４】
前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と、塩成分を含む溶液と、を接触させる段階で、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と共に、硫黄を含まない植物も塩成分を含む溶液と接触させることを特徴とする、請求項１に記載の塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法。
【請求項５】
請求項１の方法により窒酸塩が除去されたことを特徴とする塩成分を含む溶液。
【請求項６】
前記塩成分を含む溶液が食用塩水または海水であることを特徴とする、請求項５に記載の塩成分を含む溶液。
【請求項７】
請求項５の塩成分を含む溶液を加熱して水を蒸発または凍結乾燥させることで製造された、窒酸塩が塩１００ｇ当たり１．７ｍｇ以下に含まれた塩。
【請求項８】
窒酸塩が塩１００ｇ当たり１ｍｇ以下に含まれた、請求項７に記載の塩。
【請求項９】
請求項５の塩成分を含む溶液を加熱して水を蒸発または凍結乾燥させることで製造された、植物性の食餌硫黄が含まれた塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法、窒酸塩の含量が最小化された塩成分を含む溶液、及び窒酸塩の含量が最小化された塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
塩に含まれている窒酸塩は、胃癌及び各種疾病の危険要因であると知られている。すなわち、窒酸塩を摂取する場合、摂取された窒酸塩が口腔の細菌によって亜硝酸塩（ｎｉｔｒｉｔｅ）となり、この亜硝酸塩は、魚、豚肉、穀類、ビールなどに入っている２次アミン（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｍｉｎｅ）やアルキルアミン（ａｌｃｈｙｌａｍｉｎｅ）などの物質と反応して、強力な発癌物質であるＮ−ｎｉｔｒｏｓｏ化合物を作る。よって、過量の窒酸塩を摂取する場合、癌の危ない誘発要因として作用する可能性がある。よって、健康を維持するためには、少量の窒酸塩を摂取する必要があり、このような目的を達成するためには、窒酸塩が少なく含まれた塩を使うことが要求される。
【０００３】
しかし、塩の製造過程において不可欠に窒酸塩が発生されるため、窒酸塩が少なく含まれた塩を製造することは容易ではない。すなわち、塩を製造するために海水を蒸発させる場合、その溶液に存在していた好気性の細菌が死滅したり、排泄物が腐るようになり、その過程でアンモニアが発生し、そのアンモニアは亜窒酸を形成し、その亜窒酸は微生物によって窒酸塩になる。よって、塩成分が溶けている溶液から窒酸塩を完全に除去しても、それから製造される塩には不可欠に窒酸塩が含まれているのである。同じ理由で、砂漠の塩、岩塩などの何れの塩の場合にも同様である。
【０００４】
よって、窒酸塩を少なく摂取するためには、食用塩水を使うことが望ましい方法である。なぜなら、塩水の状態では窒酸塩を完全に除去するのができるためである。
【０００５】
一方、海魚、珊瑚などの海生物を飼う場合にも、窒酸塩は海生物の生存に有害な影響を及ぼす。よって、海水から窒酸塩を除去する方法は、観賞用及び養殖用の海生物の生存及び成長に非常に重要な役目をする。
【０００６】
現在まで知られている塩水または海水から窒酸塩を除去する方法は、鉱物性硫黄を使って硫黄細菌を増殖させ、その硫黄細菌によって窒酸塩を窒素や硫化水素に分解して排出する方式により行われる（例：日本特許公開公報第２００２−２７３４７５号）。
【０００７】
しかし、このような方法は、鉱物性硫黄が危険要因として作用する。すなわち、鉱物性硫黄は、人体または他の生命体にとって非常に有害である。また、上記の方法は、窒酸塩の除去まで約２ヶ月ほどが所要されるので、窒酸塩の除去速度が非常に遅いという短所を有する。よって、従来の技術をそのまま食用塩水の製造に使うこと、かつ海生物の生育のための海水に使うことには限界がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記のような従来技術の問題点を解決するためのものであって、人体にとって全然無害な方法によって、塩成分を含む溶液から窒酸塩を非常に速い速度で除去する方法を提供することを目的とする。
【０００９】
また、本発明は、上記の方法によって製造された窒酸塩が除去された塩成分を含む溶液を提供することを目的とする。
【００１０】
また、本発明は、窒酸塩の含量が最小化された（１．７ｍｇ／１００ｇ以下）塩を提供することを目的とする。
【００１１】
また、本発明は、ナトリウム含量が最小化された塩を提供することを目的とする。
【００１２】
さらに、本発明は、植物性の食餌硫黄が含有され、塩味が画期的に強化された塩を提供することを目的とする。
【００１３】
尚、本発明は、植物固有の風味を含む塩成分を含む溶液及び塩を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、硫黄を含む植物に硫黄細菌を移植させ、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と、塩成分を含む溶液とを接触させ、塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法を提供する。
【００１５】
また、本発明は、上記の方法により窒酸塩が除去されたことを特徴とする塩成分を含む溶液を提供する。
【００１６】
また、本発明は、前記窒酸塩が除去された塩成分を含む溶液を加熱して水を蒸発させることで製造された、窒酸塩が塩１００ｇ当たり１．７ｍｇ以下に含まれた塩を提供する。
【００１７】
さらに、本発明は、植物性の食餌硫黄が含まれた塩を提供する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の窒酸塩の除去方法は、人体にとって全然無害な食餌硫黄を含む植物を硫黄細菌の栄養源として使うので、非常に安全であり、塩成分を含む溶液から窒酸塩を非常に速い速度（販売中の製品に比べて、約２〜５倍の速度）で除去する。
【００１９】
よって、本発明の窒酸塩の除去方法によって製造された塩成分を含む溶液は、食用または海生物の生育において非常に有用に使われることができる。
【００２０】
また、本発明の塩は、窒酸塩の含量が最小化され、食用または海生物の生育において非常に有用に使われることができる。
【００２１】
尚、本発明は、製造過程で硫黄細菌によってナトリウムが消費するので、ナトリウム含量が最小化された塩を提供することができる。
【００２２】
さらに、本発明は、植物性の食餌硫黄が含有され、塩味が画期的に強化された塩を提供することで、ナトリウムの攝取を画期的に低減できる塩を提供することができる。
【００２３】
また、本発明は、植物固有の風味を含む塩成分を含む溶液及び塩を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】韓国の新安地域の塩田（西海）から持って来た塩度３〜９％の塩水に含まれている細菌を、温度勾配電気泳動（ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＴＧＧＥ））方法で同定した結果を示す写真である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本発明は、硫黄を含む植物に硫黄細菌を移植させ、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と、塩成分を含む溶液とを接触させ、塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法に関する。
【００２６】
本発明において、前記硫黄細菌の移植は、硫黄細菌が移植された後、増殖された状態も含む概念として使われる。
【００２７】
硫黄（元素記号Ｓ．原子番号１６．原子量３２．０６６．元素周期律表の１６（６Ｂ）族に属する元素）は、全ての植物における必須栄養元素である。硫黄は、植物や微生物に硫酸塩の形態に移入され、植物の体内では硫化水素に還元され、硫黄含有アミノ酸の合成に利用されることもある。さらに、硫黄は、グルタチオンのような生物学的抗酸化剤や様々な酵素の重要な構成元素でもある。よって、植物には硫黄が様々な酵素の形態で存在することができる。
【００２８】
本発明は、植物に移入された食餌硫黄を使うため、使う植物が含んでいる硫黄の量によって窒酸塩の除去効果が異なるようになる。植物は、毒性のある土壌の鉱物性硫黄を食餌硫黄に切り替えて吸収するため、このように吸収された食餌硫黄は人体にも無害である。よって、食餌硫黄は栄養剤としても販売されている。（例えば、現在、ＭＳＭという松食餌硫黄が、関節炎補助栄養剤として販売されている。）
【００２９】
食餌硫黄の含量は、植物の種に応じて異なるが、禾本科植物、マメ科植物、アブラナ科（花びらが４枚）の植物の順に食餌硫黄の含量が増加する（禾本科植物＜マメ科植物＜アブラナ科植物）。硫黄は、蛋白質を成す植物のシステインとメチオニンに多く含有されており、フェレドキシン、ビオチン、グルタチオン、ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａの構成成分でもある。
【００３０】
前記硫黄を含み、窒酸塩の除去に効果的に使われ得る植物の具体的な例は、竹科植物、じゃが芋、ニンニク、ニンニクの茎、生姜、銀杏、銀杏の葉、粟、黍、黒豆、白豆、小豆、豌豆豆、隠元豆、緑豆、蜀黍、ザボンの皮、レモンの皮、蜜柑の皮、漢拏峰の皮、ライムの皮、オレンジの皮、キンカンの皮、高麗人参、にんじん、大根、かいわれ大根、桔梗、緑豆萌やし、大豆萌やし、落花生、蓬、カボチャ、ローズマリー、ローズハーブ、松の枝、松葉、五加皮、不断草、三菜、長ねぎ、野蒜、ブロッコリー、キャンドルプラント、パイナップルセージ、レモンバーム、スピアミント、アップルミント、パイナップルミント、緑茶葉、キャベツ、レッドキャベツなどが挙げられる。上記の植物は、１種単独、または２種以上を組み合わせて使うことができる。
【００３１】
上記の植物は、根、幹、及び葉の何れも効果を現わす。
【００３２】
上記の植物は、実験によってその効果が確認できた種であるが、上記の植物の外にも、本発明には多様な種類の硫黄を含む植物が使われることができる。特に、窒酸塩の除去に効果がないか不足している場合にも、植物固有の風味を有している場合には、窒酸塩の除去に効果がある他の植物と組み合わせて使うことができる。
【００３３】
すなわち、窒酸塩の除去のための機能は、窒酸塩の除去に効果がある硫黄を含む植物によって行われるようにし、製造される塩水または塩に風味を付与するのは、窒酸塩の除去に効果がないか不足している植物によって行われるようにすることができる。よって、本発明には、植物固有の風味を提供する目的で、硫黄を含まない植物も使われることができる。
【００３４】
上記のような方法により窒酸塩が除去された塩水及び塩を製造する場合、植物固有の風味が塩水及び塩に滲まれるため、植物固有の風味（味と香り）を有する塩水及び塩を製造することができる。
【００３５】
例えば、窒酸塩の除去能の優れた竹の竹の子と、窒酸塩の除去能の優れていない松葉と、を塩成分を含む溶液に共に入れて窒酸塩を除去すれば、窒酸塩が殆ど入っていない、松の香りがする塩水及び塩を作ることができる。
【００３６】
また、竹の子とオレンジ皮、またはレモン皮を利用して、レモンやオレンジの香りがする、窒酸塩が殆ど入っていない塩水及び塩も作ることができる。これは、単純にレモンを溶かして作ったレモン香の窒酸塩含有塩とは異なる。
【００３７】
また、豆（白豆）と竹の子とを結合してカリウムを強化し、ナトリウムを体内から多量に排出させる、カリウムが強化されたナトリウム排出無窒酸塩の塩も作ることができる。
【００３８】
硫黄を含む植物の中、窒酸塩を最も効果的に除去する植物の一つは、竹の竹の子である。前記竹は、タケ亜科（Ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅａｅ）に属する多年生植物を総称する。特に、前記竹の中でも、篠が望ましく使われることができる。
【００３９】
前記竹は、食餌硫黄を含んでおり、葉、幹、竹の子、及び根の何れも使うことができる。特に、竹の根には多くの気孔が存在し、多量の硫黄成分が含有されており、硫黄細菌の移植及び増殖に望ましく使われることができる。
【００４０】
前記篠は、生産された地域と栽培、及び収獲された季節と乾燥程度によって、含有した硫黄成分の量に差がある。すなわち、夏に生産された韓国の論山篠は、硫黄成分の含量が低く、火山地帯で生産された韓国の済州篠は、比較的に硫黄成分が高い。よって、硫黄成分が多く含有された竹を選択して使うことが望ましい。
【００４１】
硫黄を含む植物の窒酸塩の除去能力を示すと、次のようである。：
竹の子＞マメ科植物＞黍、粟＞ニンニク、ニンニクの茎＞じゃが芋、生姜＞蜜柑等、上記の皮類・・・＞銀杏、銀杏の葉
【００４２】
しかし、このような結果は、塩度と栽培環境、収穫時期、実験温度等の多くの条件によって多少異なることもある。例えば、栽培過程で窒素肥料を多く使った植物の場合、植物自体に窒酸塩が多く含有されることができるため、窒酸塩の除去のための用途に望ましい効果を出し難い可能性がある。よって、栽培過程で窒素肥料を殆ど使っていない植物が本発明において望ましく使われることができる。
【００４３】
本発明において、硫黄細菌である硫黄細菌［ｓｕｌｆｕｒ  ｂａｃｔｅｒｉａ］は、硫黄還元細菌及び硫酸化細菌に分類される。
【００４４】
前記硫黄細菌は、硫黄または無機化合物を酸化することによって、発育に必要なエネルギーを得る細菌であって、硫黄泉、汚水、土壌、塩田の塩水中に生育し、無色硫黄細菌（Ｌｅｕｃｏｔｈｉｏｂａｃｔｅｒｉａ）と有色硫黄細菌（ｃｈｒｏｍｏｔｈｉｏｂａｃｔｅｒｉａ）がある。
【００４５】
硫黄細菌は、硫黄、硫化水素、他の硫化物、亜硫酸塩類、及びチオ硫酸塩などを酸化したり、炭酸無水物を同化して増殖し、その栄養に有機炭素化合物を必要としない細菌である。
【００４６】
無色硫黄細菌には、ベギアトア属（Ｂｅｇｇｉａｔｏａ）、チオトリクス属（Ｔｈｉｏｔｈｒｉｘ）等があり、硫黄化合物や硫黄を酸化して炭素同化作用をすることで体内に硫黄を抱くこと、アルカリ性を好むことと酸性を好むこと等がある。
【００４７】
有色硫黄細菌には、チオバシルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）があり、体内にバクテリオプルプリンという紅色または緑色の色素を抱き、太陽光線を利用して光合性を行って硫黄粒を生成する。
【００４８】
前記硫黄還元菌には、無酸素の条件で硫酸塩や硫黄を電子受容体として使う絶対嫌気性菌として、硫酸塩還元細菌（ｓｕｌｆａｔｅ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ）及び硫黄還元細菌（ｓｕｌｆｕｒ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ）が使われることができる。
【００４９】
前記硫酸塩還元細菌としては、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ等が挙げられ、硫黄還元細菌としては、Ｄｅｓｕｌｆｕｒｏｍｏｎａｓ等が挙げられる。
【００５０】
また、本発明には、下記のような硫酸化細菌などが使われることができる。
（１）マリノバクター（Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＪＱ６１８２８０）
マリノバクター中の細菌は、グラム陰性に属する従属栄養型の好塩または耐塩性の細菌である。塩度３〜６％の濃度で最も高い脱窒効果を発揮する。最適の脱窒効果を現わす塩の濃度は３％である。ｐＨは中性が好適である。コハク酸をエネルギー源として利用し、窒酸塩を気体相の分子型窒素（Ｎ２）に還元して除去する機能を有する。酸素のない嫌気的な条件で脱窒効果を現わすので、酸素のない海底の堆積物または沈殿物での生息が可能である。（関連論文：Ｍｉｙｏ  Ｎａｋａｎｏ、Ｔａｄａｓｈｉ  Ｉｎａｇａｋｉ、Ｓｕｇｕｒｕ  Ｏｋｕｎｉｓｈｉ、Ｒｅｉｊｉ  Ｔａｎａｋａ  ａｎｄ  Ｈｉｒｏｔｏ  Ｍａｅｄａ、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓａｌｉｎｉｔｙ  ｏｎ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｕｎｄｅｒ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｉｎｇｌｅ  ｃａｒｂｏｎ  ｓｏｕｒｃｅ  ｂｙ  Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｍａｒｉｎｅ  ｓｅｄｉｍｅｎｔ」。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２０１０、５０、ｐｐ．２８５〜２８９；Ｂｏ−Ｒａｍ  Ｃｈｏｉ、ＶｉｎｈＨｏａ  Ｐｈａｍ、Ｓｏｏ−Ｊｅ  Ｐａｒｋ、Ｓｏ−Ｊｅｏｎｇ  Ｋｉｍ、Ｄｏｎｇ−Ｈｙｕｎ  Ｒｏｈ、Ｓｕｎｇ−Ｋｅｕｎ  Ｒｈｅｅ、「Ｃｈｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆａｃｕｌｔａｔｉｖｅ  ｓｕｌｆｕｒ−ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ  Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  ＢＲ１３  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｍａｒｉｎｅ  ｓｅｄｉｍｅｎｔ  ｏｆ  ｙｅｌｌｏｗ  ｓｅａ、Ｋｏｒｅａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｋｏｒｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００９、５２、ｐｐ．３０９〜３１４）
【００５１】
上記の２番目の論文の中、黄海の海洋沈殿物から分離したマリノバクター属に属する細菌種は、塩０．５〜９％、温度７〜３７℃の範囲で生長が可能であり、糖、有機酸などを炭素源として利用する。濃化培養する過程で、有機物質のない条件でチオ硫酸をエネルギー源として生長したため、選択的硫酸化細菌と称する。
【００５２】
（２）マリスピリルームインディキュム（Ｍａｒｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍｉｎｄｉｃｕｍ、ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＮＲ０４４５４５）
マリスピリルームインジキュムは、０．５〜１２％の塩濃度、１０〜４１℃で生長し、脱窒機能を有している。（関連論文：Ｌａｉ  Ｑ、Ｙｕａｎ  Ｊ、Ｇｕ  Ｌ  ａｎｄ  Ｓｈａｏ  Ｚ．、「Ｍａｒｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍｉｎｄｉｃｕｍｇｅｎ．ｎｏｖ．、ｓｐ．  ｎｏｖ．、ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  ｄｅｅｐ−ｓｅａ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００９、５９、ｐｐ．１２７８〜１２８１）
【００５３】
（３）タラソスピラ（Ｔｈａｌａｓｓｏｓｐｉｒａ  ｓｐ．  ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＡＢ３７３１１３）
芳香族炭化水素化合物を利用するＴｈａｌａｓｓｏｓｐｉｒａ属に属する細菌は、２〜１４％の塩濃度で生長するが、生長のための最適の塩濃度は、海水のような３％である。８〜４５℃の範囲で生長するが、生長のための最適の温度は４３℃である。葡萄糖を基質として利用することができ、窒酸塩を還元する機能を有する。（関連論文：Ｙｕｍｉｋｏ  Ｋｏｄａｍａ、Ｌｉｅｓ  Ｉｎｄａｈ  Ｓｔｉｋｎｏｗａｔｉ、Ａｔｓｕｋｏ  Ｕｅｋｉ、Ｋａｔｓｕｊｉ  Ｕｅｋｉ  ａｎｄ  Ｋａｚｕｙａ  Ｗａｔａｎａｂｅ、「Ｔｈａｌａｓｓｏｓｐｉｒａｔｅｐｉｄｉｐｈｉｌａｓｐ．  ｎｏｖ．、ａ  ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃａｒｏｍａｔｉｃ  ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｓｅａｗａｔｅｒ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００８、５８、ｐｐ．７１１〜７１５）
【００５４】
（４）カミニバシラス（Ｃａｍｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．  ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＡＢ７５２３１２）  
４５〜６５℃で生長し、最適の温度は５５〜６０℃である。深海の熱水噴出口の周辺で生長する。熱水噴出口からは硫黄が噴出されるので、硫黄を酸化してエネルギー源として利用することができる。２〜６％の塩濃度で生長が可能である。嫌気性の条件で窒酸塩を還元する機能を有する。（関連論文：Ａｌａｉｎ  Ｋ、Ｐｉｇｎｅｔ  Ｐ、Ｚｂｉｎｄｅｎ  Ｍ、Ｑｕｉｌｌｅｖｅｒｅ  Ｍ、Ｄｕｃｈｉｒｏｎ  Ｆ、Ｄｏｎｖａｌ  ＪＰ、Ｌｅｓｏｎｇｅｕｒ  Ｆ、Ｒａｇｕｅｎｅｓ  Ｇ、Ｃｒａｓｓｏｕｓ  Ｐ、Ｑｕｅｒｅｌｌｏｕ  Ｊ、ａｎｄ  Ｃａｍｂｏｎ−Ｂｏｎａｖｉｔａ  ＭＡ．「Ｃａｍｉｎｉｃｅｌｌａ（Ｃａｍｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓｇｅｎ．  ｎｏｖ．、ｓｐ．  ｎｏｖ．、ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃ  ｓｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  Ｅａｓｔ−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｒｉｓｅ  ｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌ  ｖｅｎｔ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００２、５２、ｐｐ．１６２１〜１６２８）
【００５５】
（５）テピディバクターフォルミキジェネス（Ｔｅｐｉｄｉｂａｃｔｅｒｆｏｒｍｉｃｉｇｅｎｅｓ、ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＪＱ６７０７４３）
胞子形成化学従属栄養細菌である。塩濃度２〜６％で生長が可能であるが、最適の濃度は３％である。生長のためのｐＨ範囲は５〜８であり、有機物（糖、有機酸）を栄養物質として利用して生長する。（関連論文：Ｕｒｉｏｓ  Ｌ、Ｃｕｅｆｆ  Ｖ、Ｐｉｇｎｅｔ  Ｐ、ａｎｄ  Ｂａｒｂｉｅｒ  Ｇ．「Ｔｅｐｉｄｉｂａｃｔｅｒｆｏｒｍｉｃｉｇｅｎｅｓ  ｓｐ．  ｎｏｖ．、ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｍｉｄ−Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｒｉｄｇｅ  ｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌ  ｖｅｎｔ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００４、５４、ｐｐ．４３９〜４４３）
【００５６】
また、本発明の方法では、前記硫黄細菌と共に、下記のような脱窒化細菌を使うことができる。
（６）ジェオスポロバクターサブターレニウス（Ｇｅｏｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒｓｕｂｔｅｒｒａｎｅｕｓ、ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＤＱ６４３９７８）
深海で生息するため、絶対嫌気性の条件で有機物質を基質として利用する。生長温度は３０〜５５℃、最適の温度は４２℃、塩の濃度は４％が生長のための最適であり、ｐＨは５．６〜８．４の範囲であり、最適は７．３である。（関連論文：Ｋｌｏｕｃｈｅ  Ｎ、Ｆａｒｄｅａｕ  ＭＬ、Ｌａｓｃｏｕｒｒｅｇｅｓ  ＪＦ、Ｃａｙｏｌ  ＪＬ、Ｈａｃｅｎｅ  Ｈ、Ｔｈｏｍａｓ  Ｐ、ａｎｄ  Ｍａｇｏｔ  Ｍ．、「Ｇｅｏｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒｓｕｂｔｅｒｒａｎｅｕｓ  ｇｅｎ．  ｎｏｖ．、ｓｐ．  ｎｏｖ．、ａ  ｓｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  ｄｅｅｐ  ｓｕｂｓｕｒｆａｃｅ  ａｑｕｉｆｅｒ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００７、５７、ｐｐ．１７５７〜１７６１）
【００５７】
（７）ファーミクテスバクテリア（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＪＸ２４０９６０）
ファーミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）は、好塩性ではないが、塩度３％以下の低塩度で脱窒化を担当することができる。（関連論文：Ｙｏｕｎｇ−Ｗｏｏｎ  Ｌｉｍ、Ｓｏｏｎ−Ａｅ  Ｌｅｅ、Ｓｅｕｎｇ  Ｂｕｍ  Ｋｉｍ３、Ｈａｅ−Ｙｏｕｎｇ  Ｙｏｎｇ２、Ｓｅｏｎ−ＨｅｅＹｅｏｎ、Ｙｏｎｇ−Ｋｅｕｎ  Ｐａｒｋ、Ｄｏｎｇ−Ｗｏｏ  Ｊｅｏｎｇ、ａｎｄ  Ｊｉｎ−Ｓｏｏｋ  Ｐａｒｋ、「Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｄｅｎｉｔｒｉｆｙｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｄａｅｊｅｏｎ  ｓｅｗａｇｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｌａｎｔ」、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００５、４３、ｐｐ．３８３〜３９０）
【００５８】
前記細菌の中、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ属、Ｍａｒｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ属、Ｔｈａｌａｓｓｏｓｐｉｒａ属、Ｃａｍｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌種は、塩分の高い環境で脱窒を担当する細菌である。前記細菌の中、硫酸化細菌である（１）〜（５）は、主に硫黄を酸化して生化学的エネルギーを生産し、脱窒細菌（（５）〜（７））は、他の細菌によって生産されたエネルギー源を利用して窒酸塩を還元するので、前記硫酸化細菌と脱窒細菌とを共に使う場合、共栄養構造による硫酸化と窒酸塩の還元反応が行われることができる。
【００５９】
前記細菌の中、（５）の場合は、硫黄の含量の多い所で生息する細菌であり、かつ有機物も栄養素として使う。
【００６０】
前記細菌は、完全に有機物が排除された条件で硫黄の生化学的酸化過程のみで生産されるエネルギー源で窒酸塩を還元するのではなく、水中に存在する多様な有機物と硫黄をエネルギー源として利用し、嫌気性の条件で酸素の代わりに窒酸塩を電子受容体として利用して生化学的エネルギーを生産することで、脱窒反応によって窒酸塩を除去する。
【００６１】
上記の（１）〜（５）の硫酸化細菌と、（６）、（７）の脱窒化細菌は、高塩度（３％以上）でも共栄養構造を成し、食餌硫黄と有機物をエネルギー源として、窒酸塩を適切に除去する。
【００６２】
上記の（１）〜（７）の細菌は、塩度が３〜２７％（ｗ／ｖ）である塩田の塩水から抽出することができ、抽出方法は、例えば、３〜２７％（ｗ／ｖ）である深海の海水や、塩田の塩水に硫黄を含む植物を入れ、細菌を移植させることで行われる。
【００６３】
よって、塩度が３〜２７％（ｗ／ｖ）である塩田の塩水から抽出した細菌を使う場合、硫黄を含む植物から硫黄、有機物など、細菌の生長に必要な全ての栄養物質が供給されるので、効率的に窒酸塩を除去することができる。
【００６４】
前記細菌は、５℃〜７０℃（深海の熱水口にも存在）の温度でも良く繁殖し、窒酸塩も容易に吸収する。
【００６５】
本発明において、塩成分を含む溶液は、塩成分、すなわち、ＮａＣｌが溶解されている溶液を意味し、より具体的には、塩を水に溶解させた塩水または海水などを意味する。
【００６６】
本発明の方法は、前記細菌が移植された硫黄を含む植物と、窒酸塩を除去しようとする塩成分を含む溶液と、を接触させる段階で、細菌が移植されていない硫黄を含む植物をさらに漬ける方式で行われることもできる。
【００６７】
また、本発明の方法は、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と、塩成分を含む溶液と、を接触させる段階で、前記硫黄細菌が移植された硫黄を含む植物と共に、硫黄を含んでいない植物も、塩成分を含む溶液と接触させる方法で行われることもできる。この場合、さらに入れる植物が硫黄を含んでいないため、窒酸塩の除去には役立たないが、植物固有の風味を塩水に提供することができる。
【００６８】
さらに、本発明の方法は、前記細菌が移植された硫黄を含む植物と、窒酸塩を除去しようとする塩成分を含む溶液と、を接触させる段階で、細菌が移植されていない硫黄を含む植物と共に、硫黄を含んでいない植物をさらに漬ける方式で行われることもできる。
【００６９】
また、本発明の方法は、前記細菌が移植された硫黄を含む植物と、窒酸塩を除去しようとする塩成分を含む溶液と、を接触させる段階で、硫黄を含む植物から抽出した食餌硫黄抽出物をさらに入れる方式で行われることができる。
【００７０】
尚、本発明の全ての過程は、硫黄を含む植物から食餌硫黄を抽出して行うこともできる。この場合、食餌硫黄の抽出は、該分野で通常使われる方法によって行われることができる。例えば、硫黄を含む植物を５０〜１２０℃の水に入れて沸かし、食餌硫黄を抽出することができる。
【００７１】
しかし、一部の細菌は、有機物を分解して窒酸塩を除去するため、食餌硫黄のみを抽出して使うことよりは、植物が有している纎維質の中に含まれた固有の有機物を共に使うことができるように、硫黄を含む植物を直接に使う方がさらに望ましい。
【００７２】
本発明の方法において、前記細菌を移植させる段階は、全体的に使う硫黄を含む植物の中、少量の植物で行い、残りの硫黄を含む植物は、後で窒酸塩を除去しようとする塩成分を含む溶液にさらに漬けることが望ましい。なぜなら、硫黄を含む植物の中には、硫黄細菌を移植しやすい植物と、直接に移植しにくい植物があるためである。そのため、竹と篠のように組職の堅い植物は、初期の硫黄細菌を移植することが有利である条件になるため、先ずは篠に移植した後、移植した篠の切れを他の食餌硫黄の多い植物に入れて窒酸塩を除去すれば一層効果的である。
【００７３】
前記細菌が移植された硫黄を含む植物と、細菌が移植されていない硫黄を含む植物は、同じ植物であることもできれば、異なる植物であることもできる。
【００７４】
本発明の窒酸塩を除去する方法は、嫌気的な条件で行われることが望ましい。なぜなら、硫黄細菌は嫌気的な条件で、酸素の代わりに窒酸塩を電子受容体として利用して生化学的エネルギーを生産することで、脱窒反応によって窒酸塩を除去するためである。すなわち、好気的な条件で、硫黄細菌は酸素を電子受容体として利用するため、窒酸塩の除去効果は期待され難い。
【００７５】
また、本発明は、前記本発明の方法、すなわち、塩成分を含む溶液から窒酸塩を除去する方法で窒酸塩が除去されたことを特徴とする塩成分を含む溶液に関する。
【００７６】
前記塩成分を含む溶液には、食用塩水、海水などが挙げられる。
【００７７】
前記食用塩水は、食べ物を製造する過程で使う塩水を含む。前記食用塩水は、塩の代用品として非常に有用に使われることができる。例えば、各種の食べ物の味を調節する用途、豆腐の製造時に凝固剤としての用途、キムチの製造時に漬けた水としての用途など、非常に有用に使われることができる。
【００７８】
また、本発明は、本発明において製造された塩成分を含む溶液から水を蒸発させて製造される、窒酸塩が塩１００ｇ当たり１．７ｍｇ以下に含まれた塩に関するものである。
【００７９】
上記で、窒酸塩は、塩１００ｇ当たり１ｍｇ以下に含まれることがさらに望ましい。
【００８０】
窒酸塩が完全に除去された高塩度（２５％以上の）の塩水は、その内部に硫黄細菌が共に存在する。しかし、これらの活動は、高塩度の状態で鈍くなり、水が蒸発して塩になる過程でまた死滅し、窒酸塩を発生させる。よって窒酸塩の含量が極少量である塩を製造することは、通常的な方法では不可能である。
【００８１】
しかし、発明の方法で窒酸塩を除去して製造した塩水を９０〜１２０℃で急速加熱するか、電子レンジで急速加熱するか、強い光を照射して水を急速蒸発または凍結乾燥させる場合、窒酸塩が１．７ｍｇ／１００ｇ以下の塩を得ることができる。特に、凍結乾燥の場合、凍結乾燥された塩に存在する細菌が腐敗せずに乾燥されるので、窒酸塩の含量が殆ど増加しないという利点がある。
【００８２】
上記で、急速加熱は１〜３０分、さらに望ましくは１〜１０分間に乾燥を完了することを意味する。
【００８３】
現在、市中に流通中の天日塩の場合は約４．３〜６．７ｍｇ／１００ｇ、化学塩の場合は約３．７ｍｇ／１００ｇ程の窒酸塩を含み、窒酸塩の含量をその以下に低めた塩は知られていない。そして、そのような塩の製造は、非常に難しいものと認識されている。
【００８４】
よって、このような事情を考慮すれば、窒酸塩が５ｍｇ／ｇ以下に含まれる本発明の塩は、非常に画期的なものであると言える。
【００８５】
本発明は、超高塩度に作られた塩水から急速に水を蒸発させることで、細菌を塩内の核酸のような形態に残るようにして、窒酸塩が最小化された塩を生産する。
【００８６】
さらに、本発明は、ナトリウムの含量が最小化された塩を提供する。
【００８７】
幾つかの細菌の代謝には微量のナトリウムが要求される。ナトリウムは、真核細胞における電荷を帯びた物質の移動に重要な役割をする。好塩性の細菌は、物質の移動のためにナトリウム（Ｎａ＋）を必要とする（生物工程工学２版、ＭＩＣＨＡＥＬ  Ｌ．ＳＨＵＬＥＲ、５９ページ）。本発明では、好塩性の硫黄細菌を使い、このような好塩性の細菌はナトリウムを微量消耗する。よって、本発明は、ナトリウムの含量が最小化された塩を提供することができる。
【００８８】
さらに、本発明は、植物性の食餌硫黄が含まれた塩を提供する。前記植物性の食餌硫黄は、塩の塩味を大きく強化する機能を行う。
【００８９】
硫黄細菌によって窒酸塩が除去された塩は、既存の再製塩に比べて２倍以上の塩味を出す。その理由は、竹の子やマメ科植物などに含まれた食餌硫黄とカリウムが苦い味を出すためである。普通は、植物に含有されたカリウムと食餌硫黄は苦い味を出すところ、これらは塩をさらに塩辛く感じらせるような効果を提供する。すなわち、本発明によって、食餌硫黄と硫黄細菌を使って製造された塩は、硫黄細菌が塩に食餌硫黄を残らせるため、塩味が大きく強化される。現在、カリウムの苦い味を利用して塩味を強化することで、ナトリウムの攝取を低減させた塩が販売されているが、本発明では、身により安全な食餌硫黄の苦い味を利用して塩の塩味を強化させることで、ナトリウムの攝取を減らすことができる。
【００９０】
塩に含まれた食餌硫黄は、塩５０ｇを基準にして５００ｍｇ以上含まれる場合，塩味が強化されたことが感じられ、１５００ｍｇ程含まれる場合、２倍以上の塩味が感じられると確認された。前記塩に含まれた食餌硫黄の含量は、植物の種類及び使われた硫黄細菌の個体数に応じて異なることができる。
【００９１】
本発明において、硫黄細菌によって得られた高塩度の塩水と塩は、野菜や食品の自然的窒酸塩の増加速度を遅らせることにも効果があるので、非常に有用である。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
以下で、実施例を通じて本発明についてより詳しく説明する。しかし、下記の実施例は、本発明を更に具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲が下記の実施例によって限定されるわけではない。下記の実施例は、本発明の範囲内で当業者によって適切に修正及び変更されることができる。
【００９３】
比較例１：窒酸塩のない塩水の製造
市販されている窒酸塩の除去剤（鉱物性硫黄を使用）（商品名：ＬＳＭ、製造社名：カリブシー（ｃａｒｉｂ−ｓｅａ））を購入し、塩水に含まれた窒酸塩を除去した。先ず、円筒状の容器に塩度９％の塩水１Ｌを入れ、窒酸塩の除去剤を、製品に表示された使用量に応じて添加した。窒酸塩がある程度除去される時まで待って、窒酸塩測定キットにより窒酸塩の濃度をチェックした。その結果、６０日が経過した時点で窒酸塩の濃度が０ｍｇ／Ｌとなることが確認できた。
【００９４】
実施例１：窒酸塩のない塩水の製造（硫黄還元細菌を使用）
窒酸塩を含む、塩度９％の塩水１０Ｌを円筒状の容器に入れた。篠の根を１ｃｍ〜２ｃｍ程のサイズに切って、硫黄還元細菌（ｃａｒｉｂ−ｓｅａ社のＬＳＭを購入して抽出した。細菌名称はｓｕｌｆｕｒ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ、「Ｄｅｓｕｌｆｕｒｏｍｏｎａｓ」である。）を移植し、硫黄還元細菌が移植された篠の根を、前記円筒状の容器の底から水面まで満たすようにした。温度は常温に維持し、円筒状の容器の蓋を覆って外気を遮断した。窒酸塩の除去を始めた日から６日目になる日、窒酸塩測定キットにより窒酸塩の濃度を測定した結果、窒酸塩の濃度が０ｍｇ／Ｌであることが確認でき、篠の切れを円筒状の容器から取り出した。円筒状の容器に残っている塩水を濾過フィルターに通過させ、別途の容器に移して窒酸塩のない塩水を製造した。
【００９５】
上記の実験から確認できるように、本発明の窒酸塩の除去方法は、市販中の製品に比べて顕著に速く（約２〜３倍）塩水中の窒酸塩を除去した。
【００９６】
実施例２：窒酸塩のない塩水の製造
（１）塩田の塩水からの細菌の抽出
１）使う植物に直接に細菌を移植する方法
韓国の西海岸にある新安地域の塩田から持って来た塩度９％の塩水に、長さ１〜２ｃｍに切断した硫黄を含む植物（篠の根の切れ）を入れ、２０〜３５℃の温度で３日間熟成させ、篠に細菌を移植させた。
【００９７】
２）別途の植物を利用して細菌の移植片を製造する方法
韓国の西海岸にある新安地域の塩田から持って来た塩度９％の塩水に、長さ１〜２ｃｍに切断した移植切れ（篠の根の切れ）を３００ｇ入れ、２０〜３５℃の温度で１５日熟成させ、篠に硫酸化細菌を移植及び増殖させた。
【００９８】
（２）塩水からの窒酸塩の除去（硫酸化細菌などを使用）
他の細菌が入らないように、実験で使う１８０ｍｌ容量のガラス容器と、天日塩を溶かした塩度９％（塩度は３〜２８％まで可能）の塩水を、華氏（゜Ｆ）９０度で消毒し、使う植物も、土からの細菌の流入を阻むために、お湯に５秒程度浸して殺菌処理した。
【００９９】
前記ガラス容器に塩水を入れ、窒酸塩の濃度を分光光度計の吸光法と、テトラ社（Ｔｅｔｒａ）またはサリファート社（Ｓａｌｉｆｅｒｔ）のＮＯ３  ｐｒｏｆｉ  ｔｅｓｔキット色測定法により測定した。次に、下記の表１に示すようなそれぞれの植物３０ｇを、塩水が溢れないようにガラス容器に入れ、上記の２）において硫酸化細菌などを増殖させた篠の根の切れ（１〜２ｃｍ）の一つを植物の中に入れ、泡が発生しないように若干振った。
【０１００】
前記実験容器を２０〜３５℃の温度で熟成させながら、分光光度計の吸光法と、テトラ社（Ｔｅｔｒａ）またはサリファート社（Ｓａｌｉｆｅｒｔ）のＮＯ３  ｐｒｏｆｉ  ｔｅｓｔキット色測定法により窒酸塩の除去程度を評価した。
【０１０１】
以上で植物を洗浄した後、１〜２ｃｍ程に切って使った。豆類や緑豆、黍、粟、銀杏のような実は、皮だけ剥いたままでそのまま使った。その他の枝や嵩の大きなものなどは、１〜２ｃｍ程に切って使った。植物を細く切る理由は、植物の内部の食餌硫黄と硫黄細菌との接触と繁殖を容易にするためである。
【０１０２】
【表１】
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【０１０３】
上記の表２に示すように、前記実験植物群は何れも窒酸塩の除去機能を現している。よって、このような植物群を利用して窒酸塩を除去する場合、窒酸塩が最小化された塩水及び塩を製造することができる。また、植物固有の風味（味と香り）を有する塩水及び塩を製造することができる。
【０１０４】
実施例３：窒酸塩が最小化された塩の製造
上記の実施例２の１（食餌硫黄を含む植物として竹の子を使用）で製造された塩水を９０〜１００℃で加熱し、２分内に水を蒸発させ、細かい塩を製造した。上記の製造された塩に含まれた窒酸塩の量を測定するために、製造された塩１ｇをまた蒸溜水３００ｍｌに溶かし、Ｔｅｔｒａ社（ドイツ、ｗｗｗ．ｔｅｔｒａ．ｎｅｔ）のＴｅｓｔ  Ｎｏ３測定キットを使って窒酸塩の含量を測定した。その測定した結果、窒酸塩の含量は１．３ｍｇ／１００ｇであった。
【０１０５】
実施例４：製造された塩のナトリウムの含量及び食餌硫黄の含量の測定
（１）ナトリウム含量の測定
上記の実施例３で製造された塩に含まれたナトリウムの含量をナトリウム電極イオン測定法によって測定した。すなわち、市販中の天日塩１００ｍｇと、実施例３で製造された塩１００ｍｇと、をそれぞれ蒸溜水１００ｍｌで溶かして塩溶液を製造し、ナトリウム電極イオン測定法によって、室温でそれぞれの塩溶液に含まれたナトリウムの含量を測定した。
【０１０６】
上記の実験の結果、実施例３で製造された塩により製造された塩溶液には、市販中の天日塩により製造された塩溶液に比べて、ナトリウムが平均１３ｍｇ〜１５ｍｇ／Ｌだけ少なく含まれたことが確認できた。これは、本発明の塩の製造過程で、ナトリウムが好塩性の細菌によって消費されたことを示す。
【０１０７】
（２）食餌硫黄含量の測定
上記の実施例３で製造された塩に含まれた食餌硫黄の含量を、硫黄イオン電極測量法によって測定した。その結果、塩５０ｇ基準、食餌硫黄１０００ｍｇが含まれたことが確認できた。
【０１０８】
（３）食餌硫黄含量と塩味との関係の確認
塩に含まれた食餌硫黄の含量と塩味との相関関係を、２０人の被験者を対象として確認した。上記の被験者は、３０代の女性１３人、及び４０代の男性７人からなる。上記の被験者を対象として、多様な食餌硫黄の含量を有する塩の味を味わわせて、塩味の程度を評価して記録するようにした。
【０１０９】
上記の実験の結果、塩５０ｇ基準、食餌硫黄５００ｍｇ以上で塩味が強化されたことを被験者１２人が感じたことが確認でき、１５００ｍｇでは被験者１６人が食餌硫黄が含まれていない塩に比べて２倍以上の塩味を感じたことが確認できた。
【０１１０】
実施例５：硫酸化細菌の同定
実施例２の（１）の２）において、細菌が移植された篠の根の切れに含まれている細菌を温度勾配電気泳動（ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＴＧＧＥ））方法により同定し、ＴＧＧＥの結果写真を図１に示した。また、各ＤＮＡ  ｂａｎｄを切り出して抽出及び精製した後、ＰＣＲを利用して増幅し、専門の会社に依頼して塩基序列を分析し、その結果を利用してＧｅｎＢａｎｋのＤａｔａｂａｓｅに基づいて同定した。
【０１１１】
上記の同定の結果、前記塩水にはＭａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＪＱ６１８２８０）、Ｍａｒｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍｉｎｄｉｃｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＮＲ０４４５４５）、Ｔｈａｌａｓｓｏｓｐｉｒａ  ｓｐ．（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＡＢ３７３１１３）、Ｃａｍｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＡＢ７５２３１２）、Ｔｅｐｉｄｉｂａｃｔｅｒｆｏｒｍｉｃｉｇｅｎｅｓ（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＪＱ６７０７４３）、Ｇｅｏｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒｓｕｂｔｅｒｒａｎｅｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＤＱ６４３９７８）、及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＪＸ２４０９６０）が含まれていることが確認できた。
【図１】
2015512771.tif 000009
【国際調査報告】
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2015512771.tif 000011
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