(57)【要約】  本発明は、哺乳動物の被験者において固形腫瘍を治療するための組成物及び方法を提供する。好塩菌抽出物を含む組成物は、（ａ）少なくとも１つの水溶性画分；及び（ｂ）少なくとも１つの油溶性画分を含む抗酸化物質を含有し、ここで、好塩菌抽出物は、固形腫瘍縮小の治療的処置に適応される。さらに、好塩菌抽出物を含む組成物は、放射線治療における固形腫瘍縮小をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで促進するように適応される。
2015533808.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の被験者において固形腫瘍を治療するための、抗酸化物質を含有する好塩菌抽出物を含む組成物であって、抗酸化物質は：
ａ．少なくとも１つの水溶性画分；及び
ｂ．少なくとも１つの油溶性画分、
を含み、
ここで、前記好塩菌抽出物は、固形腫瘍縮小の治療的処置に適応され；さらに、前記好塩菌抽出物は、放射線治療において固形腫瘍縮小を促進する、前記組成物。
【請求項２】
ドナリエラ抽出物をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
放射線照射及び他の関連障害の治療に有用な経口投与可能な錠剤であって、好塩菌抽出物画分、ドナリエラ抽出物画分、少なくとも１種の非発泡性賦形剤又は希釈剤、及び少なくとも１種の発泡性賦形剤を含む、前記錠剤。
【請求項４】
好塩菌抽出物を含む固形腫瘍縮小組成物であって、少なくとも１つのバイオアッセイで定量されるような少なくとも１つの測定可能な生物活性を特徴とし、さらに表１によって規定される抗腫瘍活性フィンガープリントを有する、前記組成物。
【請求項５】
好塩菌抽出物を含む固形腫瘍縮小組成物であって、抗血管新生因子として作用する、前記組成物。
【請求項６】
好塩菌抽出物を含む固形腫瘍縮小組成物であって、プロテアーゼを阻害すること、インテグリンシグナル伝達を阻害すること、ＶＥＧＦの結合及び活性を阻害すること、内皮細胞の細胞増殖に影響を及ぼすこと、ｂＦＧＦを阻害すること、細胞遊走を阻害すること、内皮細胞のアポトーシス、細胞接着、並びに内皮細胞、アンジオポエチン１のアンタゴニスト、又はＶＥＧＦ−Ｂ及びＰＩＧＦのデコイ受容体の存続を誘導することから成る群より選択されるプロセスを促進することによって固形腫瘍の血管新生プロセスを妨害することを特徴とする、前記組成物。
【請求項７】
好塩菌抽出物の量が約２．５重量％〜１０重量％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
好塩菌抽出物が、治療用量の好塩菌ホモジェネートＤＮ−１（好塩性古細菌ホモジェネート）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
固形腫瘍縮小に関して、被験者に相乗的な療法的放射線感受性効果を付与する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
相乗効果が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の放射線傷害増加に関して、癌細胞の放射線治療より少なくとも５０％高い放射線感受性として定義される、請求項６に記載の組成物。
【請求項１１】
相乗効果が、より顕著な腫瘍退縮に関して、被験者に対する放射線治療より高い放射線感受性として定義される、請求項５に記載の組成物。
【請求項１２】
相乗効果が、対照群と比較した生存期間の漸増として定義される、請求項５に記載の組成物。
【請求項１３】
経口投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
経口投与される組成物形態が、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、又は経口に適した任意の形態から成る群より選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、５Ｇｙ及び１０Ｇｙのγ線照射による放射線感受性に対して修飾効果を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、１６Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、顕著な腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、哺乳動物の生存期間の漸増をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞の放射線傷害をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで増加させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞増殖を低下させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、悪性細胞成長の抑制効果をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
効果がＤＮ−１濃度及び処理期間に比例して増加する、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を抽出するための方法であって：
ａ．細菌の破裂を防ぐ培地で培養されている好塩菌を提供する工程；
ｂ．胆汁酸塩を含み、細菌を溶解させて好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を培地中へ放出させるのに十分低いＮａＣｌ濃度を有する培地で、細菌を取り囲む工程；及び
ｃ．放出された好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を単離する工程；
を含み、
ここで、前記好塩菌ホモジェネートＤＮ−１は、固形腫瘍縮小の治療的処置に適応され；さらに、前記好塩菌ホモジェネートＤＮ−１は、放射線治療において固形腫瘍縮小を促進する、前記方法。
【請求項２９】
工程（ｂ）における培地が界面活性剤をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
工程（ｂ）における培地が陽イオン錯化剤をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
界面活性剤が、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、及び両性界面活性剤から成る群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
好塩菌抽出物の量が約２．５重量％〜１０重量％である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
好塩菌抽出物が、治療用量の好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
抗酸化物質組成物が、固形腫瘍縮小に関して、被験者に相乗的な療法的放射線感受性効果を付与する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
相乗効果が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の放射線傷害増加に関して、癌細胞の放射線治療より少なくとも５０％高い放射線感受性である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
相乗効果が、より顕著な腫瘍退縮に関して、被験者に対する放射線治療より高い放射線感受性として定義される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
相乗効果が、対照群と比較した生存期間の増加として定義される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
組成物が経口投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
経口投与される組成物が、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、又は経口に適した任意の形態から成る群より選択される形態である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、５Ｇｙ及び１０Ｇｙのγ線照射による放射線感受性に対して修飾効果を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項４１】
７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１（Ｉ）が、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４２】
７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、１６Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４３】
７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４４】
７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４５】
３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４６】
３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４７】
好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、顕著な腫瘍細胞退縮をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４８】
好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、哺乳動物の生存期間の増加をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項４９】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞の放射線傷害をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで増加させる、請求項２８に記載の方法。
【請求項５０】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞増殖を低下させる、請求項２８に記載の方法。
【請求項５１】
好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、悪性細胞成長の抑制効果をもたらす、請求項２８に記載の方法。
【請求項５２】
効果がＤＮ−１濃度及び処理期間に比例して増加する、請求項５１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、好塩菌抽出物を使用して腫瘍細胞を治療するための組成物に係るものである。より具体的には、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで放射線治療の影響を高め、同時に腫瘍細胞を減少させるための好塩菌組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
好塩菌は、好塩性の微生物として知られている。この種の古細菌は、ＤＮＡ複製、転写、及び翻訳のような、真核生物の生物学のいくつかの側面に関し、良好なモデルとしての役割を果たすことができる。好塩菌のゲノムを他の原核生物のそれと比較すると、極端な条件に対する微生物の適応への洞察が得られるはずである。
【０００３】
好塩菌は、極端な偏性菌である。それらは、その増殖のために、きわめて高い塩濃度（１０〜３０％）のＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、そして特にＮａＣｌを必要とする。これらの微生物は、天然の培地より単離される。培地中のＮａＣｌ濃度と平衡状態にあるべき内部浸透圧を維持するために、好塩菌は、その細胞質中に３〜４Ｍの塩をＫＣｌの形態で蓄積する。２ＭのＮａＣｌ濃度を含有する培地中の好塩菌懸濁液は、細菌エンベロープの剛性を完全に消失させ、このときこの細菌は丸い形状をとる。塩濃度を１Ｍ未満に下げると、溶菌をもたらす。
【０００４】
好塩菌のコロニーは赤い色であり、それらのエンベロープは、それらが曝露される強力な紫外線照射に対してそれらを防護する、着色した色素（バクテリオ−ルベリン）をまさに含有する。好塩菌は、色素のハロロドプシンを保有し、これが光子に応答して細胞中の塩化物イオンを汲み出し、電位勾配を創出して、光からのエネルギー産生を支援する。しかしながら、このプロセスは、電子転移が関与する他の光合成の形態とは無関係であって、好塩菌は、二酸化炭素から炭素を固定することができない。
【０００５】
塩に富んだ培地中での好塩菌の慣用の形状は、長さ４〜１０μｍ、直径０．７μｍの長円の桿菌である。この細菌は、５〜８本の周鞭毛を保有する。ハロバクテリウム・ハロビウム（Halobacterium halobium）は、炭水化物を炭素源及びエネルギー源として使用することができない。
【０００６】
各種好塩菌抽出物は、特に、ミルク、クリーム、ローション、血清、マスク剤、又はゲルのような局所組成物として、瘢痕、熱傷、又は様々な種類の潰瘍を治療するのに有利な化粧品特性を有することが知られている。
【０００７】
このように、増殖性疾患の治療を促進させるための手段及び方法を提供するという、満たされていない長く切望された必要性が依然として残っている。
【発明の概要】
【０００８】
発明の概要
本発明の１つの目的は、哺乳動物の被験者において固形腫瘍を治療するための組成物を提供することであり、前記組成物は、（ａ）少なくとも１つの水溶性画分；及び（ｂ）少なくとも１つの油溶性画分を含む抗酸化物質を含有する好塩菌抽出物を含む。この好塩菌抽出物は、固形腫瘍縮小の治療的処置に適応され；さらに、この好塩菌抽出物は、放射線治療において固形腫瘍縮小を促進する。
【０００９】
本発明の別の目的は、ドナリエラ抽出物をさらに含む、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の１つの目的は、好塩菌抽出物画分、ドナリエラ抽出物画分、少なくとも１種の非発泡性賦形剤又は希釈剤、及び少なくとも１種の発泡性賦形剤を含む、放射線照射及び他の関連障害の治療に有用な経口投与可能な錠剤を提供することである。
【００１１】
本発明の１つの目的は、好塩菌抽出物を含む固形腫瘍縮小組成物を提供することであり、該組成物は、少なくとも１つのバイオアッセイで定量されるような少なくとも１つの測定可能な生物活性を特徴とし、さらに該組成物は、表１によって規定される抗腫瘍活性フィンガープリントを有する。
【００１２】
本発明の１つの目的は、抗血管新生因子として作用する、好塩菌抽出物を含む固形腫瘍縮小組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の１つの目的は、プロテアーゼを阻害すること、インテグリンシグナル伝達を阻害すること、ＶＥＧＦの結合及び活性を阻害すること、内皮細胞の細胞増殖に影響を及ぼすこと、ｂＦＧＦを阻害すること、細胞遊走を阻害すること、内皮細胞のアポトーシス、細胞接着、並びに内皮細胞、アンジオポエチン１のアンタゴニスト、又はＶＥＧＦ−Ｂ及びＰＩＧＦのデコイ受容体の存続を誘導することから成る群より選択されるプロセスを促進することによって固形腫瘍の血管新生プロセスを妨害することを特徴とする、好塩菌抽出物を含む固形腫瘍縮小組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物の量が約２．５重量％〜１０重量％である、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物が、治療用量の好塩菌ホモジェネートＤＮ−１（好塩性古細菌ホモジェネート）を含む、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、固形腫瘍縮小に関して、被験者に相乗的な療法的放射線感受性効果を付与する、上に定義されるような抗酸化物質組成物を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、相乗効果が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の放射線傷害増加に関して、癌細胞の放射線治療より少なくとも５０％高い放射線感受性として定義される、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、相乗効果が、より顕著な腫瘍退縮に関して、被験者に対する放射線治療より高い放射線感受性として定義される、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、相乗効果が、対照群と比較した生存期間の漸増として定義される、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、経口投与される、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、経口投与される組成物形態が、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、又は経口に適した任意の形態から成る群より選択される、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが５Ｇｙ及び１０Ｇｙのγ線照射による放射線感受性に対する修飾効果を有する、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２３】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２４】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、１６Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２５】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２７】
本発明の別の目的は、３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２８】
本発明の別の目的は、３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００２９】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、顕著な腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００３０】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、哺乳動物の生存期間の漸増をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００３１】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞の放射線傷害をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで増加させる、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００３２】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞増殖を低下させる、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００３３】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、悪性細胞成長の抑制効果をもたらす、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００３４】
本発明の別の目的は、効果がＤＮ−１濃度及び処理期間に比例して増加する、上に定義されるような組成物を提供することである。
【００３５】
本発明の１つの目的は、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を抽出するための方法を提供することであり、該方法は、（ａ）細菌の破裂を防ぐ培地で培養されている好塩菌を提供する工程、（ｂ）胆汁酸塩を含み、細菌を溶解させて好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を培地中へ放出させるのに十分低いＮａＣｌ濃度を有する培地で、細菌を取り囲む工程、及び（ｃ）放出された好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を単離する工程、を含む。好塩菌ホモジェネートＤＮ−１は、固形腫瘍縮小の治療的処置のために適応され；さらに、この好塩菌ホモジェネートＤＮ−１は、放射線治療において固形腫瘍縮小を促進する。
【００３６】
本発明の別の目的は、工程（ｂ）における培地が界面活性剤をさらに含む、上に定義されるような方法を提供することである。
【００３７】
本発明の別の目的は、工程（ｂ）における培地が陽イオン錯化剤をさらに含む、上に定義されるような方法を提供することである。
【００３８】
本発明の別の目的は、界面活性剤が、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、及び両性界面活性剤から成る群より選択される、上に定義されるような方法を提供することである。
【００３９】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物の量が約２．５重量％〜１０重量％である、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４０】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物が、治療用量の好塩菌ホモジェネートＤＮ−１を含む、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４１】
本発明の別の目的は、抗酸化物質組成物が、固形腫瘍縮小に関して、被験者に相乗的な療法的放射線感受性効果を付与する、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４２】
本発明の別の目的は、相乗効果が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の放射線傷害増加に関して、癌細胞の放射線治療より少なくとも５０％高い放射線感受性である、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４３】
本発明の別の目的は、相乗効果が、より顕著な腫瘍退縮に関して、被験者に対する放射線治療より高い放射線感受性として定義される、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４４】
本発明の別の目的は、相乗効果が、対照群と比較した生存期間の増加として定義される、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４５】
本発明の別の目的は、組成物が経口投与される、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４６】
本発明の別の目的は、経口投与される組成物が、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、又は経口に適した任意の形態から成る群より選択される形態である、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４７】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、５Ｇｙ及び１０Ｇｙのγ線照射による放射線感受性に対して修飾効果を有する、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４８】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００４９】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される好塩菌抽出物、ＤＮ−１（Ｉ）ホモジェネートが、１６Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５０】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５１】
本発明の別の目的は、７％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５２】
本発明の別の目的は、３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、約１０％の腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５３】
本発明の別の目的は、３．５％ＮａＣｌで調製される２倍濃度の好塩菌を有する好塩菌抽出物、ＤＮ−１（ＩＩＩ）ホモジェネートが、１０Ｇｙより高い放射線照射後に、１０％未満の腫瘍細胞の生存をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５４】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、顕著な腫瘍細胞退縮をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５５】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートが、浮遊状態で放射線照射される腫瘍細胞の放射線感受性に有効であり、哺乳動物の生存期間の増加をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５６】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞の放射線傷害をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで増加させる、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５７】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、腫瘍細胞増殖を低下させる、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５８】
本発明の別の目的は、好塩菌抽出物、好塩菌ホモジェネートＤＮ−１が、悪性細胞成長の抑制効果をもたらす、上に定義されるような方法を提供することである。
【００５９】
本発明の別の目的は、効果がＤＮ−１濃度及び処理期間に比例して増加する、上に定義されるような方法を提供することである。
簡単な説明
本発明を理解し、それが実際にいかに実施され得るかを知るために、添付の図面を参照して、非限定的な例のみにより、複数の態様を記載する。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】図１は、本発明の好ましい態様に従った、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで浮遊状態で放射線照射されたＢ−１６メラノーマ細胞の生存のグラフを表す。
【図２】図２は、本発明の好ましい態様に従った、２５Ｇｙ局所γ線照射後のＢ−１６マウスメラノーマの成長の動態のグラフを表す。
【図３】図３は、本発明の好ましい態様に従った、２５Ｇｙ局所γ線照射後の固形ＥＬＤ癌の成長の動態のグラフを表す。
【図４】図４は、本発明の好ましい態様に従った、２５Ｇｙ局所γ線照射後の固形ＥＬＤ癌の成長の動態のグラフを表す。
【図５】図５は、本発明の好ましい態様に従った、局所γ線照射後の、Ｂ−１６メラノーマを有するマウスの生存のグラフを表す。
【図６】図６は、本発明の好ましい態様に従った、局所γ線照射後の、ＥＬＤ腫瘍を有するマウスの生存のグラフを表す。
【図７】図７は、本発明の好ましい態様に従った、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで浮遊状態で放射線照射されたＶ−７９細胞の生存のグラフを表す。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
詳細な説明
以下の記載は、当業者による本発明の使用を可能にするために提供するものであり、本発明者が考える本発明の実施の最良の様式について説明するものである。しかしながら、放射線治療の影響を高め、同時に腫瘍細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで減少させるのに有用な古細菌ＤＮ−１と抽出物を提供するために、本発明の一般的な原理について具体的に規定しているため、当業者には、様々な改変が依然として明らかであろう。
【００６２】
本発明は、油及び水に溶けた強力な抗酸化物質を含む古細菌抽出物、ＤＮ−１が含まれる産物である。さらにこの産物は、皮膚の回復（rehabilitation）に対して広範囲の影響を及ぼす。古細菌抽出物ＤＮ−１は、経口で送達される。
【００６３】
本明細書において、「好塩菌」、「古細菌」、「好塩性の古好塩菌」という用語は、古細菌、ハロバクテリウム・ハロビウム（Halobacterium halobium）としてもさらに理解されたい。
【００６４】
好塩菌は、細菌というより古細菌として認識されている。「好塩菌」という名称は、古細菌ドメインの存在が理解される前に、この群の微生物に対して割り当てられたのであって、命名法の規則に従えば、依然として正当である。非命名法の文脈では、好塩性の古細菌は、それらを好塩性の細菌から区別するために、高度好塩菌と呼ばれる場合がある。
【００６５】
好塩菌は、葉緑素なしに光合成を実施するという点で独特である。代わりに、それらの光合成色素は、バクテリオロドプシンとハロロドプシンである。これらの色素は、ヒトや他の動物によって視覚のために使用される色素である、センサリーロドプシンに似ている。バクテリオロドプシンとハロロドプシンは、好塩菌の細胞膜に埋め込まれており、それぞれの色素は、ビタミンＡ誘導体であるレチナールから成り、タンパク質に結合している。これら色素への放射線照射は、レチナール中の構造変化を引き起こす。これは、光異性化と呼ばれる。
【００６６】
レチナールの光異性化がＡＴＰの合成をもたらす。好塩菌には、センサリーロドプシン−Ｉとセンサリーロドプシン−ＩＩという２種類の追加のロドプシンがある。これらの化合物は、光へ応答する指向性運動である光走性を調節する。
【００６７】
好塩菌は、極端な偏性菌である。それらは、増殖のために、ごく高い塩濃度（１０〜３０％）のＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、及び特にＮａＣｌをまさに必要とする。これらの微生物は、天然培地又は人工培地（塩田）より単離されてきた。培地中のＮａＣｌ濃度と平衡状態にあるべき内部浸透圧を維持するために、好塩菌は、３〜４Ｍの塩をその細胞質にＫＣｌの形態で蓄積する。２ＭのＮａＣｌ濃度を含有する培地中の好塩菌懸濁液は、細菌エンベロープの剛性を完全に消失させ、このときこの細菌は丸い形状をとる。塩濃度を１Ｍ未満に下げると溶菌をもたらす。
【００６８】
好塩菌のコロニーは赤い色であって、それらのエンベロープは、それらが曝露される強力な紫外線照射に対してそれらを防護する、着色した色素（バクテリオ−ルベリン）をまさに含有する。
【００６９】
抗酸化物質を含有する産物は、放射線療法を受けている患者に対してポジティブな効果があり、また、放射線療法の合併症（粘膜炎）の症例において患者の助けになる。
【００７０】
ＤＮ−１は、水溶性及び油溶性の２つの群の抗酸化物質を含有するため、それは、放射線照射、創傷、熱傷、褥瘡、及び術後の瘢痕形成の後の身体回復に対して広範囲の効果がある、抗酸化物質含有抽出物である。
【００７１】
さらに本発明は、固形腫瘍細胞の放射線傷害をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで増加させる、好塩菌ホモジェネート、ＤＮ−１の能力を提示する。
【００７２】
固形腫瘍は、良性でも悪性でもよい。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫、及びリンパ腫である。白血病は、一般的に、固形腫瘍を形成しない。
【００７３】
肉腫は、骨又は筋肉のような身体中の結合組織より形成される癌である。この種の固形腫瘍は、その癌の細胞特性に依拠して、低グレード、中間グレード、又は高グレードへ割り当てられる。低グレード肉腫は、通常、外科手術で治療される。中間グレードと高グレードの肉腫は、通常、外科手術、化学療法、及び放射線の組合せで治療される。
【００７４】
癌腫は、身体の腺細胞と上皮細胞において生ずる。これらの細胞は、身体中の気道や胃腸管の裏打ちになる。副腎皮質癌は、身体が適切に機能することを助けるホルモンを作製する副腎皮質において生じる。甲状腺癌は、心拍数、体温、エネルギーレベル、及びカルシウムレベルに影響を及ぼすホルモンを産生する甲状腺より生じる。他の癌腫には、喉上部に影響を及ぼす鼻咽頭癌及び皮膚癌が含まれる。
【００７５】
リンパ腫は、リンパ節、脾臓、及び胸腺を含めたリンパ系器官において発生する。これらの器官には、身体が感染と闘うことを助ける細胞を産生して保存する役割がある。リンパ腫は、先進国世界における血液癌で最もよくある形態であって、米国では全癌の５．３％を占める。
【００７６】
固形腫瘍の明確な症状がないのは、それが多種多様な臓器において発症し得るからである。患者が感じる症状は、どの臓器が固形腫瘍が局在する癌の標的となったか、癌細胞の増殖速度、及び癌が他の臓器へすでに拡散（転移）したかどうかに依存する。
【００７７】
固形腫瘍への治療は、癌の局在、ステージ、及び患者の健康を含めたいくつかの要因に左右される。腫瘍を除去するための外科療法以外の他の選択肢には、化学療法及び放射線療法が含まれる。
【００７８】
本発明の好塩菌組成物の剤形には、丸剤、錠剤、カプセル剤、天然形態、又は好適な任意の経口固体剤形が含まれる。注目すべきことに、薬物送達の投与経路（ＲＯＡ）は、その物質の剤形に依存する。
【００７９】
本発明の組成物は、ドナリエラ抽出物をさらに含むことができる。
【００８０】
ドナリエラ・サリナ（Dunaliella salina）は、特に海の塩田において見出される好塩性の微細な緑藻の一種である。ドナリエラは、多量のカロテノイドを創出するその能力の故にその抗酸化活性で知られている。
【００８１】
耐塩性の緑藻であるドナリエラは、一定の条件下で増殖させると、高濃度のβ−カロテンを蓄積する。ドナリエラは、一定の条件下でごく多量のβ−カロテン（藻乾燥重量の１０％以上）を蓄積する能力を保有する。β−カロテン蓄積の程度は、光の積算量と分裂周期の間に藻が曝露される高いＮａＣｌ濃度に正比例していることが示された。
【００８２】
β−カロテンは、強力な抗癌特性を保有する。これは身体中の有害なフリーラジカルの量を減らすことによるものであり、減らさなければＤＮＡを損傷し得、さらに小皺のような化粧品関連の問題をもたらし、より深刻な話では、癌の罹患リスクを高め得る。ドナリエラは、免疫細胞に対して直接的な影響を有することが知られている。
【００８３】
別の態様において、ドナリエラ属の藻類の細胞膜は、塩化ナトリウムが約３Ｍ以上の濃度を有する溶液と接触したときに疎水性になって、この挙動により藻類を疎水性の表面を有する物質に吸着させることができ、それにより藻類が増殖した塩培地より迅速かつ経済的に分離され、回収され得る手段を提供する。海水に見出されるようなより低い塩化ナトリウム濃度では、細胞膜の表面が極性基によって占有され、疎水性ではないので、藻類は、疎水性の表面に吸着することも吸着状態を保つこともないことが見出された。
【００８４】
ドナリエラは、進行性の視力喪失を引き起こす消耗性疾患の予防に役立つとともに、それを治療する能力がある貴重な抗酸化物質である、ゼアキサンチンと呼ばれるカロテノイドをさらに含有する。
【００８５】
さらに、ドナリエラと好塩菌の組合せは、放射線治療の影響を高めて、同時に腫瘍細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで減少させる。
【００８６】
上に定義した本発明の組成物において、この抗酸化物質組成物は、固形腫瘍縮小に関して、被験者に相乗的な療法的放射線感受性効果を付与する。
【００８７】
上に定義した本発明の組成物において、相乗効果は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の放射線傷害増加に関して、癌細胞の放射線治療より少なくとも５０％高い放射線感受性として定義される。
【００８８】
上に定義した本発明の組成物において、相乗効果は、より顕著な腫瘍退縮に関連して、被験者に対する放射線治療より高い放射線感受性として定義される。
【００８９】
上に定義した本発明の組成物において、相乗効果は、対照群と比較した生存期間の漸増として定義される。
【００９０】
上に定義した本発明の組成物において、該組成物は経口投与される。
【００９１】
上に定義した本発明の組成物において、経口投与される組成物は、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、又は経口に適した任意の形態から成る群より選択される形態である。
【００９２】
上に定義した本発明の組成物において、好塩菌抽出物、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートは、５Ｇｙ及び１０Ｇｙのγ線照射による放射線感受性に対して修飾効果を有する。
【実施例】
【００９３】
実施例
図１〜７は、浮遊状態で放射線照射された腫瘍細胞の放射線感受性に対する、ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートの効果を提示する。
【００９４】
Ｂ−１６マウスメラノーマ細胞とＶ−７９チャイニーズハムスターにｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの浮遊状態でγ線照射した。
【００９５】
マウスを異なる群へ分け、１つの群は、ＤＮ−１の添加無しで試験するか、又は異なる濃度の好塩菌細胞で、又は異なる濃度のＮａＣｌ溶液（３．５％ＮａＣｌ濃度と７％ＮａＣｌ濃度）で調製した、１０％のＤＮ−１の懸濁液への添加後１５分で試験した。可視のコロニーを形成する細胞の能力、コロニー形成能をエンドポイントとして、細胞の生存とみなした。
【００９６】
本手順は、好塩菌の抽出に適用可能である。それは、低い塩濃度へ、例えば真水に曝露されるときのこれら微生物の細胞エンベロープの弱性に基づいている；これらの条件下では、好塩性の菌の細胞が溶解（破裂）して、すべての細胞成分を培地中へ放出する。
【００９７】
以下の実施例は、本発明について例解することを企図しているものであり、本発明を限定するものではない。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ
本発明は、インタクト及び放射線照射された悪性細胞と正常細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの増殖に対するＤＮ−１調製物の効果を開示する。ＤＮ−１は、７．５％ＮａＣｌで調製したホモジェネート好塩菌である。
【００９８】
細胞分裂の速度に対する増殖培地中０．１３％ＤＮ−１の効果について、マウス腫瘍細胞：Ｂ−１６メラノーマ、ルイス肺癌、及びＥＭＴ−６乳癌、並びに、ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞及びヒト胎児結腸の上皮細胞で試験した。放射線感受性に対するＤＮ−１の修飾効果について、５Ｇｙ及び１０Ｇｙでのγ線照射を用いた実験においていくつかの細胞株で評価した。
【００９９】
ＤＮ−１による悪性細胞増殖の抑制を示す数名の著者の先行データは、２つの細胞株において確認されている。この効果は、ＤＮ−１濃度及び処理期間に比例して増加している。しかしながら、ＥＭＴ−６細胞は例外であって、それらの分裂速度は、前述の濃度では、ＤＮ−１によって影響されなかった。
【０１００】
γ線照射１時間前及びγ線照射の間に３％ＤＮ−１を培地へ加えると、ルイス肺癌細胞、Ｂ−１６メラノーマ、及びＨＴ−２９ヒト結腸癌の放射線死を増加させたが、正常なヒト腸上皮細胞の損傷は変わらなかった。ＤＮ−１は、２種のマウス腫瘍細胞：Ｂ−１６及びルイス肺癌のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの増殖を実質的に阻害するが、ＥＭＴ−６細胞の増殖には影響を及ぼさなかった。放射線照射１時間前及び放射線照射の間に増殖培地へＤＮ−１を投与すると、ヒト由来の悪性細胞（ＨＴ−２９）の放射線傷害を実質的に高めるが、類似由来の正常細胞の感受性に変化はない。
【０１０１】
ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートの効果について、浮遊状態で放射線照射された腫瘍細胞の放射線感受性に基づいてさらに提示した。Ｂ−１６マウスメラノーマ細胞とＶ−７９チャイニーズハムスターを、ＤＮ−１の添加無しで、又は異なる濃度の好塩菌細胞で、又は減少させた濃度（７％ＮａＣｌ濃度に代わって、３．５％ＮａＣｌ濃度）のＮａＣｌ溶液において調製した、１０％のＤＮ−１の懸濁液への添加後１５分で、浮遊状態でγ線照射した。可視のコロニーを形成する細胞の能力（コロニー形成能）をエンドポイントとして、細胞「生存」とみなす。
【０１０２】
放射線感受性とは、イオン化放射線の有害効果に対する、細胞、組織、臓器、又は生物体の相対的な感受性である。細胞は、細胞周期のＳ期において最も感受性が低く、次いでＧ１期、次いでＧ２期で高く、Ｍ期で最も感受性が高い。ベルゴニー・トリボンドーの法則（law of Bergonie and Tribondeau）によれば、迅速に分裂する腫瘍細胞は、一般的に、大多数の身体細胞より敏感である。このことは、いつでも真ではない。腫瘍細胞は、低酸素状態になり得るので、イオン化酸素によって生成されるフリーラジカルを介してほとんどの効果が媒介されるＸ線に対して低感受性になり得る。最も感受性が高い細胞とは、未分化で、栄養状態が良好で、迅速に分裂して、きわめて活発に代謝している細胞であることが後に示された。身体細胞の中で、最も感受性が高いのは、精原細胞、赤芽球、表皮幹細胞、及び胃腸幹細胞である。最も感受性が低いのは、神経細胞と筋線維である。卵母細胞とリンパ球も感受性がきわめて高い細胞であるが、それらは休止細胞であって、上記に記載の判定基準に合致しない。
ｉｎ  ｖｉｖｏ
ＤＮ−１好塩菌ホモジェネートの効果について、マウスの脛筋に移植した２種の腫瘍（ＥＬＤ癌腫とＢ−１６メラノーマ）の腫瘍へのγ線照射後の退縮の動態と、処理後のマウスの生存期間について試験した。
【０１０３】
放射線照射は、マウスの身体への遮蔽スクリーンとともに提供される、臨床用コバルト（Ｃｏ）照射装置で行った。放射線照射は、腫瘍移植後６〜７日目に、脛の直径が約４ｍｍから８〜９ｍｍへ増加したときに実施した。
【０１０４】
「実験」マウスへは、常量の４６ｍｇ（バリアントＩ）又は２倍量の９６ｍｇ（バリアントＩＩ）の好塩菌細胞塊で調製したＤＮ−１を、１ｍｌの７％ＮａＣｌで希釈した（１：１０）溶液、並びに３．５％ＮａＣｌで調製してから凍結乾燥させたもの（バリアントＩＩＩ）より復元した溶液の０．２ｍｌを経口で毎日投与した。
【０１０５】
処理後週３回、腫瘍体積を測定した。この結果を、腫瘍の退縮及び再発について図２〜４に、そしてマウスの生存について図１及び図５〜７に提示する。
【０１０６】
動物にＤＮ−１を「給餌」すると、いずれの腫瘍型でもより顕著な退縮と、被験動物の生存期間の増加をもたらす。
【０１０７】
下記の表１は、本発明の組成物を調製した異なる手順を明示する。この組成物は、細胞懸濁液へのＤＮ−１の添加による、Ｖ−７９チャイニーズハムスター及びマウス細胞のメラノーマＢ−１６のγ線照射に対する感作について試験するために使用した。
【０１０８】
【表１】
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【０１０９】
ＤＮ−１：７％ＮａＣｌで調製した好塩菌のホモジェネート；
ＤＮ−１（ＩＩ）：７％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むホモジェネート；
ＤＮ−１（ＩＩＩ）：３．５％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むホモジェネート。
【０１１０】
ＤＭＦ：対照（ＤＮ−１無し）における放射線照射後と同じ細胞生存の減少をもたらす異なる調製物において、ＤＮ−１の存在により、放射線量を何倍減らすことができるかを示す、線量変更因子。
【０１１１】
図１は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの浮遊状態で放射線照射されたＢ−１６メラノーマ細胞の生存を、ＤＮ−１無しの場合と、異なるやり方で調製したＤＮ−１の１０％の添加の場合で明示する：
ＤＮ−１：７％ＮａＣｌで調製した好塩菌のホモジェネート；
ＤＮ−１（ＩＩ）：７％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むホモジェネート；
ＤＮ−１（ＩＩＩ）：３．５％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むホモジェネート。
【０１１２】
図２は、２５Ｇｙの局所γ線照射後のＢ−１６マウスメラノーマ増殖の動態のグラフを図解する。
【０１１３】
２５Ｇｙ局所γ線照射後のＢ−１６マウスメラノーマ増殖の動態
Ｂ−１６メラノーマをマウスの腓腹（calf muscle）に移植した。
【０１１４】
腓腹が９ｍｍの平均直径に達した移植後９日目に、腫瘍に放射線照射した。
【０１１５】
マウスは、通常食で維持するか又は、３種の異なる手順の１つで調製したＤＮ−１ホモジェネートの０．２ｍｌを毎日経口より摂取した：
Ｉ：７％ＮａＣｌで調製したＤＮ−１；
ＩＩ：７％ＮａＣｌで調製した、２倍濃度のＤＮ−１；
ＩＩＩ：３．５％ＮａＣｌで、２倍濃度で調製した、凍結乾燥ＤＮ−１より作製した復元溶液。
【０１１６】
ＤＮ−１ホモジェネートを投与しなかったマウスと上記の手順を比較した。
【０１１７】
Ｖｔ／Ｖｏは、処理後の測定日での平均腫瘍体積であるＶｔと、放射線照射日での平均腫瘍体積であるＶｏの間の比を示す。
【０１１８】
図３〜４は、マウス腓腹へ移植された固形ＥＬＤ癌増殖の、２５Ｇｙ局所照射へ曝露後の動態のグラフを示す。
【０１１９】
エールリッヒＥＬＤ癌を腓腹に移植した。
【０１２０】
腓腹が８ｍｍの平均直径に達した移植後８日目に、腫瘍に放射線照射した。
【０１２１】
動物は、通常食で維持するか又は、３種の異なる手順の１つにおいて３．５％ＮａＣｌで調製した、好塩菌の１０％ＤＮホモジェネートの０．２ｍｌを毎日経口より摂取した。
【０１２２】
グラフは、以下を表す：
■  ＤＮを摂取しなかった動物群；
□  ３．５％ＮａＣｌで調製したＤＮ−１で給餌した動物群；
△  ３．５％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むＤＮで給餌した動物群；
◇  ３．５％ＮａＣｌで調製した４倍濃度の好塩菌を含むＤＮで給餌した動物群。
【０１２３】
Ｖｔ／Ｖｏは、Ｖｔ（処理後の測定日での平均腫瘍体積）とＶｏ（放射線照射日での平均腫瘍体積）の間の比を示す。
【０１２４】
図５は、Ｂ−１６メラノーマを担うマウスの、局所γ線照射（２５Ｇｙ）後の生存百分率を示す。この間動物には、１０％ＤＮ−１又はＤＮ−１（ＩＩ）（ＩＩＩ）［２倍濃度の好塩菌で調製］の０．２ｍｌを毎日経口投与した。
【０１２５】
図６は、ＥＬＤ腫瘍を担うマウスの、局所γ線照射（２５Ｇｙ）後の生存を示す。この間動物には、１０％ＤＮ−１又はＤＮ−１（ＩＩ）（ＩＩＩ）［２倍濃度の好塩菌塊で調製］の０．２ｍｌを毎日経口投与した。
【０１２６】
図７：ＤＮ−１無しと、異なるやり方で調製した１０％のＤＮ−１の添加で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの浮遊状態で放射線照射されたＶ−７９細胞の生存。
【０１２７】
ＤＮ−１：７％ＮａＣｌで調製した好塩菌のホモジェネート；
ＤＮ−１（ＩＩ）：７％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むホモジェネート；
ＤＮ−１（ＩＩＩ）：３．５％ＮａＣｌで調製した２倍濃度の好塩菌を含むホモジェネート。
好塩菌ホモジェネートＤＮ−１の抽出
単離した赤色好塩菌（古細菌）及び微細藻類ドナリエラの７．５％ＮａＣｌ（ｐＨ＝７）中のホモジェネート
ハロバクテリウム・ハロビウム（Halobacterium halobium）より入手した好塩菌ホモジェネートＤＮ−１の抽出、塩ストック溶液の調製：
フラスコへ２４０ＬのＮａＣｌ、３０ＬのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、３５ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、７ＬのＫＣｌを加える。同じフラスコの最終要求量近くまで純水を加える。次いで、磁気撹拌子を使用してこの塩類を溶かす。
【０１２８】
ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏを加える。
【０１２９】
１Ｍ  ＴｒｉｓＣｌ緩衝液を使用することによって、フラスコ溶液のｐＨを７まで調整する。
【０１３０】
上記の溶液をメスシリンダーへ移して、正確な最終量になるまで水を一杯に満たす。
【０１３１】
一定量の菌塊を事前に分散させて、下記に示す溶液へ加えた：
上記の塩ストック溶液からの７６７ｍｌに、２００ｍｌの純水、５ｇのペプトン、１ｇの酵母エキス、３ｇの微細藻類（ドナリエラ）粉末、及び１ｇのカゼインを加える。
【０１３２】
この容量を１０００ｍｌの純水で調整する。
【０１３３】
オートクレーブを使用することによる培地の無菌化：
先の培地を十分な時間と温度（−３７℃）でインキュベートする。
【０１３４】
この培地を２週間懸濁させる。
【０１３５】
１０日目の好塩菌培養液へ微小藻類ドナリエラの溶液を加えて、得られる混合物を２５℃の温度と永久照明でインキュベートする。
【０１３６】
緑藻は、以下を含む増殖培地において培養する：
【０１３７】
【表２】
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【０１３８】
培地は、ｐＨ＝７へ調整する。
【０１３９】
２週間経過した培地の７５００ＲＰＭ、４℃での遠心分離により、沈殿物を生じる。
【０１４０】
この沈殿物を単離して、２Ｍ  ＮａＣｌ＋０．１５Ｍ  ＭｇＣｌ２の溶液内でそれを再懸濁させる。
【０１４１】
この溶液の遠心分離を７５００ＲＰＭ、４℃で実施して、沈殿物を得る。
【０１４２】
この沈殿層を単離し、７．５％ＮａＣｌの溶液内でそれを再懸濁させる。
【０１４３】
上記の溶液を各回１５秒間で３回音波処理する。各回の間には、この溶液を、その色と濁度又は透明度に変化が示されるまで、氷浴で冷やす。
【０１４４】
この溶液の遠心分離を実施して、分離した画分を得る（遠心分離操作は、７５００ＲＰＭ、４℃で１０分間実施する）。生じる沈殿物を単離して、−４℃で保存する。
【０１４５】
経口錠剤の製造方法
下記に収載する基本成分を乾燥粉末混合機又はポニー（Pony）ミキサーにおいて約２０分間混合した。この基剤混合物へ先の抽出物を加えて、滑沢剤を加えて、この混合物を再び約３０分間混合した。最終的に、この完全な混合物は、室温で２４時間以上、結合用に調質することが可能であった。錠剤は、割線入りでカプセル形状の経口錠剤へ打錠した。
【０１４６】
調合：混合物中の各成分の重量は、所定量に従って決定する。用量均一性を高めるために微粒子サイズをサイジングする（微粉化、製粉、粉砕、研削、粉状化）。
【０１４７】
造粒：粒径微細化と混和に続いて製剤を造粒してよく、これにより混和物中の薬物分布の均質性が得られる。
【０１４８】
乾燥：残留水分を、製品劣化を防いで自由懸濁性を確保するのに十分低く維持することによる（乾燥法は、流動層乾燥機、真空トレイ乾燥機、マイクロ波乾燥機、スプレー乾燥機、凍結乾燥機、ターボトレイ乾燥機、又はパン乾燥機を使用して実施してよい）。
【０１４９】
打錠は、顆粒（湿式造粒の場合）又はサイジング処理スラグ（乾式造粒の場合）の調製、又は成分の混合（直接打錠の場合）の後で実施し、それらを打錠して、最終製品を得る。
【０１５０】
上述の記載では、好ましい態様を含めて、本発明の態様を例解と説明の目的のために提示した。それらは、網羅的であることも、本発明を正確な開示形態へ限定することも企図していない。上記の教示に照らして、明白な修飾又は変更が可能である。先の態様は、本発明の主題とその実地応用の最良の例示を提供して、当業者が本発明を様々な態様において利用することを可能にするために選択されて記載されたのであって、様々な修飾を施せば、熟慮される特別な使用へ適応される。すべてのそのような修飾態様及び変更態様は、付帯の特許請求項に対して公正に、合法的に、そして公平に付与される権利の幅に従って解釈される場合、それによって決定されるような本発明の範囲内にある。
【図１】
2015533808.tif 000005
【図２】
2015533808.tif 000006
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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