(57)【要約】  直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて含む（任意で追加的な繊維分解酵素を含む）、飼料添加用組成物を提供する。ここにおいて、ＤＦＭは酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせから選択される。ＤＦＭはバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８またはバチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＫＸ１１−１、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７、プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＣＮＣＭ−ｌ−３６９８、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）ＣＮＣＭ−ｌ−３６９９、これらの特徴のすべてを有する株、それらの任意の誘導体または変異体からなる群より選択され、追加的な繊維分解酵素は、セロオビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される。  【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて含み、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせから選択される、飼料添加用組成物。
【請求項２】
対象とする動物の性能の向上、又は飼料中の原材料の消化性（例えば、アミノ酸の可消化性などの栄養素消化性）の向上、又は窒素保持の向上、又は飼料要求率（ＦＣＲ）の向上、又は対象とする動物の体重増加の向上、又は対象とする動物の飼料効率の向上、又は対象とする動物の胃腸管における酪酸および／またはプロピオン酸を生産する発酵プロセスの促進、を改善するための方法であって、直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて、対象とする動物に投与する工程を含み、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維溶解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせから選択される、方法。
【請求項３】
前記ＤＦＭが酵素生成株である、請求項１の飼料添加用組成物または請求項２の方法。
【請求項４】
前記ＤＦＭがＣ５糖類発酵株である、請求項１、２および３のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項５】
前記ＤＦＭが短鎖脂肪酸生産株である、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項６】
前記ＤＦＭが繊維分解性内性微生物菌叢促進株である、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項７】
前記ＤＦＭがバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、プロピオバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項８】
前記ＤＦＭがバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属から選択され、特に、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケアシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）またはバチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）である、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項９】
前記ＤＦＭがバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４、バチルス・プミラス（Ｂ．  ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８またはバチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＫＸ１１−１、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７、プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＣＮＣＭ−ｌ−３６９８、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）ＣＮＣＭ−ｌ−３６９９、これらの特徴のすべてを有する株、それらの任意の誘導体または変異体からなる群より選択される、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項１０】
前記ＤＦＭが生菌である、請求項１乃至９のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項１１】
前記直接給与微生物（ＤＦＭ）が内生胞子である、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項１２】
前記キシラナーゼがエンド−，１，４−β−ｄ−キシラナーゼである、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項１３】
前記飼料添加用組成物が追加的な繊維分解酵素を含む、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物。
【請求項１４】
直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼ、β−グルカナーゼ、および追加的な繊維分解酵素と組み合わせて、対象とする動物に投与する工程を含む、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記追加的な繊維分解酵素がセロオビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３の飼料添加用組成物または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記追加的な繊維分解酵素がセロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ  （Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３、１４、および１５に記載の飼料添加用組成物または方法。
【請求項１７】
前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１、３−１３、１５、１６の飼料添加用組成物または直接給与微生物（ＤＦＭ）、キシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）に少なくとも１種のミネラル及び／又は少なくとも１種のビタミンをと組み合わせて含む飼料添加用組成物を含むプレミックス。
【請求項１８】
前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維溶解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１、３−１３、１５、１６の飼料添加用組成物、請求項１７のプレミックス、またはキシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）と組み合わせてなる直接給与微生物（ＤＦＭ）、を含む飼料。
【請求項１９】
請求項１、３−１３、１５、１６の飼料添加用組成物、または請求項１７のプレミックス、を飼料成分に添加する工程を含む、飼料原料を調製する方法。
【請求項２０】
キシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）と組み合わせて、直接給与微生物（ＤＦＭ）を飼料成分に添加する工程を含み、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１、３−１３、１５、１６の飼料添加用組成物、請求項１７のプレミックス、または家畜飼料を調製する方法。
【請求項２１】
前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択され、キシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）と組み合わせる直接給与微生物（ＤＦＭ）の、対象とする動物の性能の向上、又は飼料中の原材料の消化性（例えば、アミノ酸の可消化性などの栄養素消化性）の向上、又は窒素保持の向上、又は飼料要求率（ＦＣＲ）の向上、又は対象とする動物の体重増加の向上、又は対象とする動物の飼料効率の向上、又は対象とする動物の胃腸管における酪酸および／またはプロピオン酸の生産に向けての発酵プロセスの促進を改善するための使用。
【請求項２２】
請求項１、３−１３、１５、１６のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物が用いられる、または請求項１７のプレミックスが用いられる、請求項１８の飼料が用いられる、または請求項１９または２０のいずれか一項に記載のように製造された飼料原料を用いる、請求項２１の使用。
【請求項２３】
酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される直接給与微生物（ＤＦＭ）、キシラナーゼ、β−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）（任意で少なくとも１つのビタミンおよび／または任意で少なくとも１つのミネラル）、および投与についての指示書を含むキット。
【請求項２４】
前記キットが請求項１、３乃至１３、１５、または１６のいずれか一項に記載の飼料添加用組成物、あるいは請求項１７のプレミックスを含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
図面及び実施例を参照して本明細書において全体を定義される通りの飼料添加用組成物又は飼料又はキット又は方法又は使用法又はプレミックス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、所定の直接給与微生物をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて用い飼料組成物を改良するための方法、並びに直接給与微生物をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて含む飼料添加用組成物に関する。本発明は、更に、使用法及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
酵素添加物は、栄養効率及び生産効率を向上させるという方法として、動物用飼料、特に家禽及び豚用飼料に添加剤として使用されている。酵素ブレンドを利用することで、大豆ミール、動物性タンパク質ミール、又は高繊維飼料および工業的副産物を含有している試料の栄養価を改良することができる。直接給与微生物（ＤＦＭ）という概念は、鶏または豚などの動物に好適な量を投与したときに宿主に健康上の利益を与えるように、生きた有益な微生物を給与することに関与する。この分類に当てはまる飼料添加物にはプロバイオティクスという別称がある。プロバイオティクス又はＤＦＭは、管理下試験において、動物の生産性能を向上させることが示されている。ＤＦＭは、直接給与微生物及び／又は酵母系の産物を含有する。
【０００３】
いくつかの酵素とともにＤＦＭを組み合わせることが試みられているが、ＤＦＭと酵素との相互作用は完全には理解されていない。本発明は動物の生産性能を驚くほど有意に改善する新規な特定の組み合わせに関する。
【０００４】
国際的な穀物市場における継続的圧力はバイオ燃料および製粉工業からの連産品（副生成物）のような代替的な費用効果のある原料を家禽及び養豚工業のための選択肢として求める傾向となっている。しかしながら、代替的成分の特徴の１つが非デンプン多糖類（ＮＳＰを；繊維）を多く含み、反芻動物以外の動物には、それらが非消化性であることにより、栄養価が低くなり、動物への取り込みに限度があり、エネルギーおよび栄養利用に不利な影響を与える。単胃動物の給餌における代替的な繊維質成分を成功裏に利用することは、飼料として正しく処方されたときにそれらの抗栄養性質と経済的利益の可能性に関するリスクを軽減し、食物繊維に含まれているエネルギーを効率的に利用する技術の利用可能性に依るものである。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の将来性のある発見は、シラナーゼによる非デンプン多糖類（ＮＳＰ）が多い植物細胞壁粒子由来の飼料材料の分解が、植物細胞壁構造炭水化物を消化する能力および／または嫌気性条件下で成分のＮＳＰ分画に含まれるペントース（例えば、アラビノキシラン）から短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）を生産する能力について選択された１つ以上の所定の直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせたときに、動物の能力を改善するために最適化することができることである。
【０００６】
なぜこの組み合わせが動物の性能を改善することができるのかというと、餌由来の繊維、特にヘミセルロースの可溶化が動物の消化管（ＧＩＴ）において最大化されるからである。関連するＣ５糖類が動物に吸収されたときには有効なエネルギー源とはならない（Ｓａｖｏｒｙ  Ｃ．、Ｊ．Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔ．１９９２、６７：１０３−１１４）ので、ヘミセルロースの可溶化は動物の能力を向上することについては十分ではないが、ＧＩＴ内またはＤＦＭのいずれかの微生物により短鎖脂肪酸に転換されたときにより有効なエネルギー源となる。
【０００７】
それゆえ、植物生成物（例えば、小麦、コーン、オーツ、バーレイ、および穀物関連生成物（副生成物）、あるいは微生物が利用しやすい混合穀物飼料）由来のエネルギー値は、嫌気性条件下でＮＳＰ分画のペントースからＳＣＦＡを生産することができるか、または遊離された糖類からＳＣＦＡの生産を高めるためにＧＩＴにある微生物集団を調整することができる所定のＤＭＦと、キシラナーゼとβ−グルカナーゼとを組み合わせることにより、最適化することができる。ＤＦＭはそれらの代謝をキシラナーゼとβ−グルカナーゼと組み合わせて繊維質の加水分解を相乗的に高めるために適合させることができる。繊維分解酵素とＤＦＭとを使用することは、追加的な利点を提供し炭水化物の利点を最大化する。
【０００８】
それらの酵素活性について選択された所定のＤＦＭはグリカンによる微生物食物連鎖として考えることができる。本明細書における所定の選択されたＤＦＭは食物繊維を優先的に利用し、他の微生物、例えば他の内生ＧＩＴ微生物のために、初期グリカン消化工程を行い、より短くより可溶性の多糖類を放出することができることが特徴である。この所定のＤＦＭは酵素（例えば、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ）により遊離されたグリカンにより、ＤＦＭの代謝を調節して、本願明細書に記載の酵素の効果を改善する。このＤＦＭの組み合わせは酵素のみの組み合わせまたはＤＦＭのみの使用の場合と比較される。
【０００９】
理論により拘束されることを意図するものではないが、本発明において、セルロース、ヘミセルロース、およびペクチン等の特定のグリカンの源（植物物質）またはグリコサミノグリカンが豊富である植物細胞壁粒子由来の飼料材料は、これらの不溶性粒子に直接結合し、それらのグリカン成分を直接消化することができる所定のＤＦＭグリカン分解物質により攻撃された形で消化管の末端に入って行く。このグリカン含有粒子の内部消化の後、盲腸に存在する第二のグリカン分解物質により消化され、より可溶性のグリカン分画で、両タイプの分解物由来の短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）発酵生成物の遊離プールができる。Ａｓ  ＳＣＦＡはＧＩＴ固有の嫌気性微生物による炭水化物の発酵および／またはタンパク質の発酵およ脱アミノ反応により生じるので、ＳＣＦ濃度は嫌気性微生物集団の指標となる。ＳＣＦＡは実際に宿主動物に数多くの利益を提供し、腸、筋肉、腎臓、心臓、肝臓、および脳組織のための代謝燃料として作用し、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）にたいしての静菌および殺菌作用も提供する。
【００１０】
非反芻動物における繊維の栄養価は主に、有効な繊維分解酵素（例えば、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ、好ましくは追加的な繊維分解酵素との組み合わせ）により、可溶化されたまたは分解された繊維の発酵を介する短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生成を通じて、提供することができる。キシラナーゼの単独投与は動物の（特に非反芻動物）の飼料において、繊維成分を利用するには不十分である。植物ベース飼料成分中に化学的特徴の大きな群列が存在する。酵素の利用は、植物（飼料）材料の特性に依存する。例のみとして挙げるならば、小麦穀粒にはアラビノキシランが豊富に含まれるが、小麦粉砕物（小麦粉砕物の生成物または副生成物）には、β−グルカンの含量が８ｇ−１ＤＭ（穀粒）から２６ｋｇ−１ＤＭまで増加する。
【００１１】
ＳＣＦＡは異なるエネルギー値を有し、幾つかはグルコースの前駆体として提供され、幾つかは腸の保全および健康の維持に寄与することができる。発明者らは本願明細書に記載の特定の組み合わせが動物のＧＩＴにおいて、発酵プロセスを酪酸および／またはプロピオン酸等の価値のある／有用なＳＣＦＡの生産に優先的に向かわせることを発見した。
【００１２】
１つの側面において、本発明は、直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて含み、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせから選択される、飼料添加用組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、
ｉ）対象とする動物の性能の向上、又は
ｉｉ）飼料中の原材料の消化性（例えば、アミノ酸の可消化性などの栄養素消化性）の向上、又は
ｉｉｉ）窒素保持の向上、又は
ｉｖ）飼料要求率（ＦＣＲ）の向上、又は
ｖ）対象とする動物の体重増加の向上、又は
ｖｉ）対象とする動物の飼料効率の向上、又は
ｖｉｉ）対象とする動物の胃腸管における酪酸および／またはプロピオン酸を生産する発酵プロセスの促進、のための方法を提供する。この方法は、直接給与微生物（ＤＦＭ）をキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて、対象とする動物に投与する工程を含み、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせから選択される。
【００１４】
本願発明は更に、直接給与微生物（ＤＦＭ）が酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、本願発明の飼料添加用組成物あるいは直接給与微生物（ＤＦＭ）、キシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）を、少なくとも１種のミネラル及び／又は少なくとも１種のビタミンをと組み合わせて含む飼料添加用組成物を含むプレミックスを提供する。
【００１５】
更なる側面において、本願発明は本願発明の飼料添加用組成物または本願発明のプレミックスを含む飼料を提供する。
【００１６】
本願発明は更に、ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、本願発明の飼料添加用組成物を含む飼料を提供する。
【００１７】
他の側面において、本願発明の飼料添加用組成物、または本願発明のプレミックス、を飼料成分に添加する工程を含む、家畜飼料を調製する方法が提供される。
【００１８】
本発明の更なる側面は、キシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）と組み合わせてなる直接給与微生物（ＤＦＭ）を飼料成分に添加する工程を含み、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、家畜飼料を調製する方法である。
【００１９】
本発明は更に、前記ＤＦＭが酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択され、キシラナーゼ、およびβ−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）と組み合わせてなる直接給与微生物（ＤＦＭ）の、
ｉ）対象とする動物の性能の向上、又は
ｉｉ）飼料中の原材料の消化性（例えば、アミノ酸の可消化性などの栄養素消化性）の向上、又は
ｉｉｉ）窒素保持の向上、又は
ｉｖ）飼料要求率（ＦＣＲ）の向上、又は
ｖ）対象とする動物の体重増加の向上、又は
ｖｉ）対象とする動物の飼料効率の向上、又は
ｖｉｉ）対象とする動物の胃腸管における酪酸および／またはプロピオン酸の生産に向けての発酵プロセスの促進を改善するための使用に関する。
【００２０】
本発明の更なる側面は、酵素生産株；Ｃ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内性微生物菌叢促進株；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される直接給与微生物（ＤＦＭ）、キシラナーゼ、β−グルカナーゼ（および任意で追加的な繊維分解酵素）（任意で少なくとも１つのビタミンおよび／または任意で少なくとも１つのミネラル）、および投与についての指示書を含むキットに関する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
図１はバチルス（バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ））直接給与微生物（ＤＦＭ）の有無における、キシラナーゼとβ−グルカナーゼとの排泄物中のラクトバチルスとＥ．ｃｏｌｉ総数の対する影響を示す（ｌｏｇ形質転換コロニー形成単位／排泄物１グラム、ｌｏｇ１０  ｃｆｕ／ｇ）。
【発明の詳細な説明】
【００２２】
好ましくは、本発明で使用する酵素は、ＤＦＭにとって外来性のものである。換言すれば、好ましくは、酵素はＤＦＭに加えられ、又はＤＦＭと混合される。
【００２３】
別途記載のない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本開示の属する技術分野の業者により一般に理解される意味と同様の意味を持つ。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ、ｅｔ  ａｌ．、ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ  および  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、２０  ＥＤ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  および  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９４）、並びに、Ｈａｌｅ  ＆  Ｍａｒｈａｍ、ＴＨＥ  ＨＡＲＰＥＲ  ＣＯＬＬＩＮＳ  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｈａｒｐｅｒ  Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ、ＮＹ（１９９１）は、本開示で使用される用語の多くについての一般的辞書を当業者に提供する。
【００２４】
本開示は、本明細書において開示される代表的な方法及び材料に限定されるものではなく、本開示の実施形態を実施又は試験するにあたって、本明細書に開示されるものと類似する又は同等である意味する方法及び材料を使用することができる。数範囲は、範囲を定義する数を包括する。別途記載のない限り、意味する核酸配列は、それぞれ、左から右に５’から３’の向きで記載され、アミノ酸配列は左から右にアミノ末端からカルボキシ末端の向きで記載される。
【００２５】
本明細書で提供される見出しは、本開示の様々な態様又は実施形態を制限するものではなく、総じて本明細書において参照として用いられ得るものである。したがって、以降で定義される用語は、総じて本明細書を参照することでより詳しく定義される。
【００２６】
本明細書において、アミノ酸は、アミノ酸名、３文字略記、又は１文字略記により参照される。
【００２７】
本明細書で使用するとき、用語「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを包含する。
【００２８】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸配列」は、用語「ポリペプチド」及び／又は用語「タンパク質」と同義である。一部の例では、用語「アミノ酸配列」は、用語「ペプチド」と同義である。一部の例では、用語「アミノ酸配列」は、用語「酵素」と同義である。
【００２９】
用語「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、本明細書において互換的に使用される。本開示及び特許請求の範囲において、アミノ酸残基に対し一般的な１文字表記及び２文字表記が用いられる場合がある。アミノ酸の３文字表記は、ＩＵＰＡＣＩＵＢ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＪＣＢＮ）に準拠して定義される通りのものである。遺伝子暗号の縮重に起因し、ポリペプチドは１種以上のヌクレオチド配列によりコードされる場合があることも理解されたい。
【００３０】
本明細書で参照される全てのＥ．Ｃ．酵素分類は国際分子生物学・生物学連合の命名委員会の答申（１９９２）の酵素命名法において提供されている分類を参照する（ＩＳＢＮ  ０−１２−２２６１６４−３）。
【００３１】
用語についての他の定義は本明細書中で明らかになる場合がある。実施例をより詳細に説明する前に、本開示は記載される具体的な実施形態に制限されるものではなく、言うまでもなく、多岐にわたることは理解される。本明細書で使用される専門用語は、具体的な実施形態を記載するという目的でのみ使用されるものであり、制限を意図するものではなく、したがって、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ制限されることも理解されるであろう。
【００３２】
値について範囲が提供される場合、文脈上明記されていない限り、下限とする単位の少数第一位までが開示されているものとし、それ以外には、範囲の上限値及び下限値の間の各数値も明確に開示されているものとする。規定の意味する値又は規定の範囲に含まれる値、及びその他の意味する規定の値又は規定の範囲に含まれる値、に挟まれる、より小さな各々の範囲も本開示に包含される。これらのより小さな範囲の上限及び下限は、独立して範囲に包含させることができ、あるいは除外させることができ、かつ各範囲が、記載の範囲内の意味する特定の制限を包含するよう、上限及び下限のいずれかを包含し、又はいずれも包含せず、又はいずれをも包含する、より小さな範囲も本開示に包含させる。規定の範囲が上限又は下限のいずれか又は両方を含有する場合、これらの含有される上限又は下限のいずれか又は両方を除外する範囲も本開示に含まれる。
【００３３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用するとき、単数冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈上明記されない限り複数形も含む。したがって、例えば、「酵素（ａｎ  酵素）」には、複数の候補となる剤が包含され、「飼料（ｔｈｅ  飼料）」を参照する場合には、当業者に知られる１種以上の飼料及びその同等物等が包含される。
【００３４】
本明細書で述べる開示は、本開示の出願日よりも先に開示されているという意味合いでのみ提供される。本明細書において、このような刊行物が、本明細書に添付の特許請求の範囲に対する先行技術に相当するものと解釈すると判断される記載は存在しない。
【００３５】
本発明において使用される酵素は、バッチ培養法、フェドバッチ培養法、及び連続培養法などの、固体培養又は液内培養のいずれかにより製造することができる。培養は、水溶性無機塩類培地、有機増殖因子、炭素供給源及びエネルギー供給源、酸素分子、及び言うまでもなく、採用した１種以上の特定の微生物の初回接種材料、を含む、増殖培地で実施する。
【００３６】
本明細書で使用するＤＦＭは酵素生産株である。
【００３７】
本明細書で使用するＤＦＭはＣ５糖類発酵株である。
【００３８】
本明細書で使用するＤＦＭは短鎖脂肪酸生産株である。
【００３９】
本明細書で使用するＤＦＭは繊維質分解性の内性微生物促進株である。
【００４０】
本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維質分解性の内性微生物促進株は以下の種からなる群より選択される：バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス（ＬａｃｔｏＢａｃｉｌｌｕｓ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）およびこれらの組み合わせ。
【００４１】
本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維質分解性の内性微生物促進株は以下から選択される少なくとも１つの株である：バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｅｎｕｓ）、特にバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、またはバチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）。
【００４２】
本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維質分解性の内性微生物促進株はエンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属から選択される少なくとも１つの株であり、特にエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）である。
【００４３】
本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維質分解性の内性微生物促進株はバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ９４４、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＳ  ２０８４（ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１３）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＬＳＳＡＯ１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０４）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）３Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０６）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）２２Ｃ−Ｐ１（ＰＴＡ−６５０８）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ２１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３４）バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＳ−２７（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０５）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＳ１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６３３）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１５Ａ−Ｐ４  （ＰＴＡ−６５０７）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＳ２７８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６３４）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ  ＢＬ８４２）（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１６）、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＫＸ１１−１、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７、プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＣＮＣＭ−ｌ−３６９８、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）ＣＮＣＭ−ｌ−３６９９、これらの特徴のすべてを有する株、それらの意味する誘導体または変異体からなる群より選択される。
【００４４】
本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維質分解性の内性微生物促進株は好ましくは有用な微生物である。
【００４５】
本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維質分解性の内性微生物促進株は内生胞子の形態でよい。
本発明に用いるキシラナーゼは好ましくはエンド−、１、４−β−ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８）である。
【００４６】
いくつかの態様において、好ましくは、キシラナーゼとβ−グルカナーゼは少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素と組み合わせて用いられる。この追加的な繊維分解酵素は、セロオビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００４７】
好ましくは、追加的な繊維分解酵素は、１つより多い、好ましくは２つより多い、好ましくは３つより多い、好ましくは４つより多い、好ましくは５つより多い。
【００４８】
好ましくは、本発明の飼料添加用組成物またはキシラナーゼとβ−グルカナーゼと組み合わせて用いる直接給与微生物（ＤＦＭ）は対象とする動物の胃腸管における酪酸および／またはプロピオン酸の生産に向けての発酵プロセスを促進する。
【００４９】
直接給与微生物（ＤＦＭ）
本明細書において、用語「微生物（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ）」は、「微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）」と互換的に使用される。
【００５０】
本明細書で使用するとき、ＤＦＭは酵素生産バシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株のような「酵素生産株」である意味する好適なＤＦＭでよい。ＤＦＭが酵素生産株かどうかを決定するために、「酵素生産ＤＦＭアッセイ」として定義されるＤＦＭアッセイを用いる。ＤＦＭは、本明細書に記載の「酵素生産ＤＦＭアッセイ」を用いて、酵素生産ＤＦＭとして分類された場合は酵素生産ＤＦＭであるとされる。
【００５１】
本明細書で使用するとき、ＤＦＭは「Ｃ５糖類発酵株」である好適なＤＦＭでよい。ＤＦＭがＣ５糖類発酵株かどうかを決定するために、「Ｃ５糖類発酵ＤＦＭアッセイ」として定義されるＤＦＭアッセイを用いる。ＤＦＭは、本明細書に記載の「Ｃ５糖類発酵ＤＦＭアッセイ」を用いて、Ｃ５糖類発酵ＤＦＭとして分類された場合はＣ５糖類発酵ＤＦＭであるとされる。
【００５２】
本明細書で使用するとき、ＤＦＭは「短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産株」である好適なＤＦＭでよい。ＤＦＭがＳＣＦＡ生産株かどうかを決定するために、「ＳＣＦＡ生産ＤＦＭアッセイ」として定義されるＤＦＭアッセイを用いる。ＤＦＭは、本明細書に記載の「ＳＣＦＡ生産ＤＦＭアッセイ」を用いて、ＳＣＦＡ生産ＤＦＭとして分類された場合はＳＣＦＡ生産ＤＦＭであるとされる。
【００５３】
本明細書で使用するとき、ＤＦＭは「繊維分解性内性微生物菌叢促進株」である意味する好適なＤＦＭでよい。ＤＦＭが繊維分解性内性微生物菌叢促進株かどうかを決定するために、「繊維分解性内性微生物菌叢促進ＤＦＭアッセイ」として定義されるＤＦＭアッセイを用いる。ＤＦＭは、本明細書に記載の「繊維分解性内性微生物菌叢促進ＤＦＭアッセイ」を用いて、繊維分解性内性微生物菌叢促進ＤＦＭとして分類された場合は繊維分解性内性微生物菌叢促進ＤＦＭであるとされる。
【００５４】
本明細書で使用するとき、ＤＦＭは「酵素生産株」、「Ｃ５糖類発酵株」、「短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産株」、または「繊維分解性内性微生物菌叢促進株」のいずれか、あるいはこれらの組み合わせでよい。
【００５５】
好ましくは、本明細書で使用するとき、ＤＦＭは「酵素生産株」及び／又は「Ｃ５糖類発酵株」及び／又は「短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産株」及び／又は「繊維分解性内性微生物菌叢促進株」に分類される株である。好ましくは、ＤＦＭは、例えば酵素生産活性、Ｃ５糖類発酵活性、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産活性、または繊維分解性内性微生物菌叢促進活性のような活性を、１つ以上、例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または４つ全ての活性を有する。
【００５６】
本発明のＤＦＭは溶解性の蒸留乾燥穀物（ＤＤＧＳ）等の高いレベルの繊維性植物副生成物の動物飼料に利益を与える。
酵素生成ＤＦＭアッセイ
これらの試験株のハイスループットスクリーニングを、１００ｘ１００ｘ１５０ｍｍグリッドプレートにおいて所望の各種基質培地１５．０ｍｌの上に２マイクロリットルの液体培地の液滴平板培養して行った。セルラーゼ、α―アミラーゼ、ゼイナーゼ（ｚｅｉｎａｓｅ）、大豆プロテアーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、およびキシラナーゼ活性を、個々の株により利用された特定の基質に基づいて決定した。環境由来株の酵素活性からの基質利用性質のアッセイに用いた培地成分を表１に示す。アッセイプレートを３０分間乾燥させて、次に培地を適用し、３２℃で２４時間インキュベートした。各株の酵素活性をミリメートル単位で測定する基質の分解領域の測定により決定した。この分解領域はきれいなコロニー成長の周辺縁により示される。複製プレートの平均値が記録された。
表１．環境的に提供されたバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の基質利用性質により示される酵素活性のアッセイに用いた培地成分
2015528705.tif 000002
【００５７】
１つの態様において、酵素生産株は１つ以上の以下の酵素活性を示す：セルラーゼ活性、α―アミラーゼ活性、キシラナーゼ活性、エステラーゼ活性、リパーゼ活性、β−マンナーゼ活性、プロテアーゼ活性（例えば、ゼイナーゼまたは大豆プロテアーゼ活性）およびこれらの組み合わせ。
【００５８】
１つの態様において、酵素生産株は以下の酵素活性の１つ以上を示す：セルラーゼ活性、キシラナーゼ活性、β−マンナーゼ活性、またはこれらの組み合わせ。
【００５９】
１つの態様において、酵素生産ＤＦＭはバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・プミラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）またはこれらの混合物から選択される群から選択される。
【００６０】
１つの態様において、酵素生産ＤＦＭ株は以下の群より選択される：
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５４２）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５４５）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９）、
バチルス・プミラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５４３）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５４４）、  
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５４８）、
バチルス・プミラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＫＸＩＩ−１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５４６）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１５Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０７）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＳ  ２０８４（ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１３）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＬＳＳＡＯ１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０４）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ３Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０６）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）２２Ｃ−Ｐ１（ＰＴＡ−６５０８）、
バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ２１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３４）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＢＳ−２７）（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０５）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＢＳ１８）（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６３３）、
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＢＳ２７８）（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０６３４）、
バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ８４２（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１６）、
またはこれらの誘導体あるいは変異体、およびこれらの組み合わせ。
【００６１】
ＤＦＭの酵素生産株はＵＳ６１／５２７、３７１およびＵＳ６１／５２６、８８１に記載の１つ以上の株でもよい。参照によりこれらを本明細書で引用する。
Ｃ５糖類発酵ＤＦＭアッセイ
バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株をトリプシン大豆アガー（Ｄｉｆｃｏ）のプレート上で３２℃で一晩培養し、乳酸菌を嫌気性条件で３７℃でＭＲＳアガー（Ｄｉｆｃｏ）にて一晩培養した。精製培地ＤＦＭをＡＰＩ  ５０  ＣＨＢおよびＡＰＩ  ５０  ＣＨＬ培地（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、Ｍａｒｃｙ  ｌ’Ｅｔｏｉｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）に（それぞれ、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株または乳酸菌で）接種して、ＡＰＩ  ５０ＣＨ(R)ストリプスを説明書に従って適用した。ストリプスをバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株については３２℃で、乳酸菌については嫌気性条件下の３７℃でインキュベートして、２４時間と４８時間後の色変化を観察した。
【００６２】
本明細書で用いる用語「Ｃ５糖類」は、５つの炭素を有する糖である。Ｃ５糖類は本明細書においてペントースとも言われる。
【００６３】
Ｃ５糖類は、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−リボース、Ｄ−キシロース、およびＬ−キシロースを含む。
１つの態様において、ＤＭＦのＣ５糖類発酵株は以下の群より選択される：
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１５Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０７）
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＳ  ２０８４（ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１３）
バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＬＳＳＡＯ１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０４）
エンテロコッカス・ファセシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７
ラクトバチルス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＤＪ６（ＰＴＡ  ６１０２）ラクトバチルス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＩＤ７（ＰＴＡ  ６１０３）、
またはこれらの組み合わせ。
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産ＤＦＭアッセイ：
ＤＭＦの４８時間培養物の１％容量／容量接種源を１０ｍｌチューブ内の改変乳酸ナトリウムブロス（ＮＬＢ）（１％乳酸ナトリウム；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；１％トリプトン；Ｏｘｏｉｄ  Ｌｔｄ．、Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ、Ｅｎｇｌおよび、０．５％酵母抽出物；Ｏｘｏｉｄ  Ｌｔｄ．および０．５％ＫＨ２ＰＯ４）に接種した。乳酸ナトリウムなしで同じ量（１％ｗｔ／ｖｏｌ）の９種類の炭水化物（乳酸、グルコース、ガラクトース、アラビノース、スクロース、スターチ、キシロース、セロビオース、フルクトース；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）の１つを補ったものも調製した。培養物を嫌気条件下３２℃で培養し、０、２４、４８、および７２時間のインキュベーション時間で、２回試験したチューブを５０００ｘｇ、１０分間遠心分離して、それぞれの培地から培養後ブロスを収集した。培養後ブロスにおける短鎖脂肪酸の生成を高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。培養後ブロスの２回試験において１ｍｌのサンプルを各管から除去して１０ｍｌの０．００５Ｍ  Ｈ２ＳＯ４と混合した。各希釈サンプルの３ｍｌを０．２ミクロンのフィルターでろ過してＨＰＬＣバイアルに入れて密封した。サンプルは酢酸、乳酸、プロピオン酸、および酪酸について、３００Ｘ７．８ｍｍ  Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）Ａｍｉｎｅｘ  ＨＰＸ−８７Ｈ  カラムを用いてＷａｔｅｒｓ２６９５分離モジュール（Ｍｉｌｆｏｒｄ、Ｍａ）にて解析した。全ての分析物はＷａｔｅｒｓ  ２４１０  ＲＩ検出器で検出した。
【００６４】
１つの態様において、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産株はプロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９でよい。
【００６５】
他の態様において、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産株はエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７でよい。
【００６６】
本明細書で用いるように、用語「短鎖脂肪酸」は乳酸のほかに揮発性の脂肪酸も含む。
【００６７】
１つの態様において、ＳＣＦＡは酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、２−メチル酪酸、および乳酸からなる群より選択される。
【００６８】
１つの態様において、ＳＣＦＡは酪酸である。
繊維分解性内性微生物菌叢促進ＤＦＭアッセイ：
ブロイラーにおけるＤＦＭの効果をＤＦＭなしと比較して評価するための飼育試験を行った。サンプルは試験の１１日と４２日に収集する。各サンプリング日にて、各飼育から１羽の鳥がサンプリングされ合計８羽がそれぞれの柵から集められた。鶏を安楽死させて、砂嚢から回腸と盲腸の接合部分までの全部の消化管（ＧＩＴ）を各鶏から収集した。
各鶏からの盲腸サンプルをスライスして開いて、盲腸組織の消化物をワイヤーパックバッグ（ｗｈｉｒｌ−ｐａｋ  ｂａｇ）に収集して、０．１％ペントース溶液９９ｍｌ中で７．０ストローク／秒で６０秒間砕いて、盲腸組織から粘膜関連微生物細胞を取り除いた。盲腸粘膜からのバクテリアと消化物とを含む粉砕された溶液のアリコートを液体窒素中で急速凍結して、更なる解析まで−２０℃で保存する。ゲノムＤＮＡをフェノールクロロホルム抽出により各サンプル２５０μｌから単離して、Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  ＰＣＲ  Ｔｅｍｐｌａｔｅ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を用いて精製した。１処置当たり２羽からのＤＮＡを等量プールして、１サンプルとして、ピロシーケンスにかけて、各月齢から１処置あたり４つのサンプルを得た。Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔａｇ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ＦＬＸ  ａｍｐｌｉｃｏｎ  ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇを前述のように行った（Ｄｏｗｄ、ｅｔ  ａｌ  ＢＭＣ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００８  Ｊｕｌ  ２４；８：１２５）。１６ＳｒＲＮＡ遺伝子のＶ１−Ｖ３領域はプライマー、２８Ｆ（５’−ＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＮＴＧＧＣＴＣＡＧ）および５１９Ｒ（５’−ＧＴＮＴＴＡＣＮＧＣＧＧＣＫＧＣＴＧ）を用いて各プールされたサンプルについて増幅された。ピロシーケンスデータはＱｉｉｍｅ  ｖ．１．４．０．ソフトウェアパイプラインを用いて処理され解析される。簡単に説明すると、生シークエンスデータを質にもとづいてスクリーニングしてトリム（切断）する。全ての配列が３５０ｂｐに切断される。配列をバーコードシークエンスに基づいて個々のサンプルにより結合する。バーコードタグおよびプライマーを配列から除去して、非バクテリアリボゾーム配列を除去する。配列は、ｕｃｌｕｓｔを使用して９７％の類似性での操作的分類単位（ＯＴＵｓ）にクラスタ化される。その後ＰｙＮＡＳＴを使用して整列し分類された各ＯＴＵからの代表的なシーケンスは、ＲＤＰの分類器を使用して、ＳＩＬＶＡデータベース内の既知の細菌の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列と配列比較によって割り当てられる。配列のランダムなサンプリングは配列の同じ数が分析されるように、各サンプルを正規化するために行われる。分散（ＡＮＯＶＡ）の分析の分析は、意味する線溶叢（分類群）が処理によって著しく影響を受けるかどうかを決定するために使用される。
【００６９】
本明細書で用いる用語「繊維分解性菌叢」はそれらのセルロース分解性およびヘミセルロース分解性酵素を合成できるそれらの能力に応じて複雑な植物性多糖を処理することができる微生物のグループを意味する。
【００７０】
本明細書で用いる用語「内性」の語は、個体（例えば、動物）のＧＩＴに存在する（またはもともといる）という意味である。言いかえれば、繊維分解性内性菌叢はＤＦＭではない。この繊維分解性内性菌叢は動物飼料に添加されない。
【００７１】
好ましくは、本発明で用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、生菌を含む。好ましくは、本発明で用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、生菌または生きた酵母または生きた糸状菌（真菌）を含む。
【００７２】
１つの好適な態様において、本発明で用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、生菌を含む。
【００７３】
用語「生菌」は代謝活性があり分化できる微生物を意味する。
【００７４】
１つの態様において、酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、胞子形成微生物であり、従って用語ＤＦＭは例えば微生物胞子等の胞子からなるか、このような胞子を含む。それゆえ、１つの態様において、本明細書で用いる「生菌」の語は内性胞子または分生胞子等の微生物胞子を含む。
【００７５】
他の態様において、本発明の飼料添加用組成物における酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、内性胞子または分生胞子等の微生物胞子を含まない。
【００７６】
微生物は天然の微生物または形質転換された微生物でよい。この微生物は好適な微生物の組み合わせでよい。いくつかの側面において、本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、酵母または糸状菌の１つ以上でもよい。
【００７７】
好ましくは、本発明の酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、プロバイオテック微生物である。
【００７８】
本発明では、用語「直接給与微生物（ＤＦＭ）」は、直接給与細菌、直接給与酵母、直接給与真菌、及びこれらの組み合わせを包含する。
【００７９】
好ましくは、酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、直接給与微生物である。
【００８０】
好ましくは、酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、以下の種の１つ以上由来の微生物である：バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）およびこれらの組み合わせ。  
１つの態様において、酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属由来である株から選択される。
【００８１】
１つの態様において、酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、以下のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属由来である株から選択される：バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ステアロデルモフィリス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂ．ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・アルカロフィリス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・クラウシ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・ハロヂュランス（Ｂ．ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・サーキュランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・ランタス（Ｂ．ｌａｕｔｕｓ）、バチルス・ツリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、およびバチルス・レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）。
【００８２】
少なくとも幾つかの態様において、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）株はバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４である。
【００８３】
少なくとも幾つかの態様において、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）株はバチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１５Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０７）、ＬＳＳＡＯ１（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０４）である。
【００８４】
少なくとも幾つかの態様において、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）株はバチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８またはバチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＫＸ１１−１である。
【００８５】
株３Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０６）、１５Ａ−Ｐ４（ＰＴＡ−６５０７）および２２Ｃ−Ｐ１（ＰＴＡ−６５０８）はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）より公に利用可能である。
【００８６】
株２０８４（ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１３０）；ＬＳＳＡ０１（ＮＲＲＬ−Ｂ−５０１０４）；ＢＳ２７（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１０５）はＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＮＲＲＬ）より公に利用可能である。株バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＬＳＳＡ０１はときにバチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）８といわれる。これらの株はＵＳ７、７５４、４６９Ｂ２に記載がある。
【００８７】
Ｗａｕｋｅｓｈａ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡにあるＤａｎｉｓｃｏ  ＵＳＡ、Ｉｎｃ．はブタペスト条約の下、以下の生物学的寄託物をＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＮＲＲＬ）  に寄託した。寄託日と登録番号を以下に示す。
2015528705.tif 000003
【００８８】
Ｗａｕｋｅｓｈａ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡのＤａｎｉｓｃｏ  ＵＳＡ、Ｉｎｃ．はＬａｎｇｅｂｒｏｇａｄｅ１、ＰＯ  Ｂｏｘ  １７、ＤＫ−１００１、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ  Ｋ、ＤｅｎｍａｒｋのＤｕＰｏｎｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡｐＳにこの出願において上記の寄託株を参照することについて権限を与え、一般に公開された寄託株に限定がないが取消すことのない同意与をえた。
【００８９】
Ｗ２２７  Ｎ７５２  Ｗｅｓｔｍｏｕｎｄ  Ｄｒｉｖｅ、Ｗａｕｋｅｓｈａ、ＷＩ  ５３１８６、ＵＳのＡｇＴｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．はブタペスト条約の下、以下の生物学的寄託物をＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＮＲＲＬ）に寄託した。寄託日と登録番号を以下に示す。
2015528705.tif 000004
【００９０】
ＡｇＴｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．はＬａｎｇｅｂｒｏｇａｄｅ１、ＰＯ  Ｂｏｘ  １７、ＤＫ−１００１、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ  Ｋ、ＤｅｎｍａｒｋのＤｕＰｏｎｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡｐＳにこの出願において上記の寄託株を参照することについて権限を与え、一般に公開された寄託株に限定がないが取消すことのない同意与をえた。
【００９１】
以下の表は上記の「酵素生産ＤＦＭアッセイ」を用いて選択された株の酵素生産能力をまとめたものである。
【００９２】
直接給餌微生物候補株の酵素活性の概要
表２．バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）株のセルラーゼ、キシラナーゼ、およびβ−マンナーゼ活性
2015528705.tif 000005
【００９３】
１マンナーゼ（例えば、β−マンナーゼ）はβ−マンナン、ガラクトマンナン、およびグルコマンナンの１、４−β−Ｄ−グルコシド結合を加水分解して酵素のクラスに与えられた名前である。従って、マンナーゼは植物細胞壁の主要成分の１つであるヘミセルロースを含むマンナンを分解する。β−マンナーゼはエンド−１、４−β−Ｄ−マンナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．７８）である。
【００９４】
好ましくは、本発明に用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、プロピニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属由来株でよい。１つの態様において、本発明で用いるＤＦＭはプロピニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）から選択される。
【００９５】
１つの態様において、本発明で用いるＤＦＭはプロピニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９である。
【００９６】
Ｗ２２７  Ｎ７５２  Ｗｅｓｔｍｏｕｎｄ  Ｄｒ．Ｗａｕｋｅｓｈａ、ＷＩ  ５３１８６、ＵＳＡのＡｇｔｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．はプロピニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９をＭａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９、ＵＳＡのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に登録番号ＰＴＡ−５２７１として寄託した。プロピニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９はＵＳ６、９５１、６４３Ｂ２において参照されており、ＡＴＣＣから公に利用可能である。
【００９７】
１つの態様において、本発明に用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ）属由来株である。
【００９８】
１つの態様において、本発明で用いるＤＦＭはエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ    ｆａｅｃｉｕｍ）株から選択される。
【００９９】
１つの態様において、本発明で用いるＤＦＭはエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ    ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７である。
【０１００】
ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＩＤ７（のちにエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ    ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７として再分類された）は２００４年６月２２日にブタペスト条約の下、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＩＤ７としてＭａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９、ＵＳＡのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に登録番号ＰＴＡ−６１０３として寄託された。ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＩＤ７（のちにエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７として再分類された）はＵＳ７、３８４、６２８で参照されＡＴＣＣより公に利用可能である。エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７を本明細書で用いる場合、登録番号ＰＴＡ−６１０３のエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７と互換的であることは理解される。エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７はデンマークのＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎより公に利用可能である。
【０１０１】
１つの態様において、本発明に用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ））属由来株である。
【０１０２】
１つの態様において、酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、以下のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ））種から選択される：
ラクトバチルス・ブンキネリ（ＬａｃｔｏｂＢａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ケフィリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒｉ）、ラクトバシルス・ビフィダム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチル・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、バチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カーバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂｂａｃｉｌｌｕｓｂ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチルス・ラクティス（ＬａｃｔｏｂＢａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・デルブレウキ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｅｕｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・パラプランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）、ラクトバチル・スラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、およびラクトバチルス・ジェンセニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｅｎｓｅｎｉｉ）、およびこれらの組み合わせ。
【０１０３】
１つの態様において、ＤＦＭは以下の株から選択される：
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＣＮＣＭ−Ｉ−３６９８およびラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）ＣＮＣＭ−Ｉ−３６９９。
【０１０４】
これらの株は２００６年１２月８日にＳｏｒｂｉａｌ、Ｒｏｕｔｅ  ｄｅ  Ｓｐａｙ  ７２７００  Ａｌｌｏｎｎｅｓ、ＦｒａｎｃｅによりＲｕｅ  ｄｕｅ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ、  Ｆ７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５、  ＦｒａｎｃｅのＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｍｓ（ＣＮＣＭ）２５に寄託され、この寄託に関する全権利、称号、権益はそのあと２０、Ｒｕｅ  ｄｅ  Ｂｒｕｎｅｌ、７５０１７  Ｐａｒｉｓ、ＦｒａｎｃのＤａｎｉｓｃｏ  Ｆｒａｎｃｅ  ＳＡＳに移された。
【０１０５】
Ｄａｎｉｓｃｏ  Ｆｒａｎｃｅ  ＳＡＳはＬａｎｇｅｂｒｏｇａｄｅ  １、ＰＯ  Ｂｏｘ１７、ＤＫ−１００１、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ  Ｋ、ＤｅｎｍａｒｋのＤｕＰｏｎｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡｐＳにこの出願において上記の寄託株を参照することについて権限を与え、一般に公開された寄託株に限定がないが取消すことのない同意与をえた。
【０１０６】
少なくとも幾つかの態様において、ＤＭＦはラクトバチルス・ラクティス（ＬａｃｔｏｂＢａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＤＪ６（ＰＴＡ  ６１０２）および／またはラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＩＤ７（ＰＴＡ  ６１０３）から選択される。
【０１０７】
Ｗ２２７  Ｎ７５２  Ｗｅｓｔｍｏｕｎｄ  Ｄｒｉｖｅ、Ｗａｕｋｅｓｈａ、ＷＩ  ５３１８６、ＵＳＡのＡｇＴｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．はブタペスト条約のもと、以下の生物寄託物をＭａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９、ＵＳＡのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託した。寄託日と登録番号を以下に記載する。
2015528705.tif 000006
【０１０８】
ＡｇＴｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ  はＬａｎｇｅｂｒｏｇａｄｅ  １、ＰＯ  Ｂｏｘ  １７、ＤＫ−１００１、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ  Ｋ  ＤｅｎｍａｒｋのＤｕＰｏｎｔ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡｐＳにこの出願において上記の寄託株を参照することについて権限を与え、一般に公開された寄託株に限定がないが取消すことのない同意与をえた。
【０１０９】
少なくとも１つの態様において、本明細書に記載の株の１つ以上は組み合わせて用いられる。
【０１１０】
それゆえ、本発明に用いる酵素生産株及び／又はＣ５糖類発酵株及び／又は短鎖脂肪酸生産株及び／又は繊維分解性内性微生物菌叢促進株は、本明細書で記載されているＤＦＭ株を少なくとも２つ、好ましくは、少なくとも３つ、好ましくは少なくとも４つの組み合わせであり、例えば、このＤＦＭはバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、  バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）  ＫＸ１１−１、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）Ｐ１６９、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＣＮＣＭ−Ｉ−３６９８またはラクトバチルス・ファルシミニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ）ＣＮＣＭ−Ｉ−３６９９からなる群より選択される。
【０１１１】
１つの態様において、このＤＦＭはバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）  ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、  バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８、バチルス・プミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＫＸ１１−１およびこれらの組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１１２】
任意のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、またはプロピオニバクテリウムの誘導体または変異体が本明細書および特許請求の範囲に記載の方法に含められ、用いることができる。  
いくつかの態様において、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ４４２、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ５２１、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ１０６９、バチルス・スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡＧＴＰ  ９４４、バチルス・スブチリス（Ｂ．  ｐｕｍｉｌｕｓ）ＡＧＴＰ  ＢＳ  １０６８、またはバチルス・スブチリス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）ＫＸ１１−１は本明細書または特許請求の範囲に記載の方法に含まれ、該方法に有用である。
【０１１３】
本明細書において、「変異体」はランダム増幅多型ＤＮＡポリメラーゼ連鎖反応（ＲＡＰＤ−ＰＣＲ）解析を用いて記載された株に対して少なくとも８０％の遺伝子配列を有する。遺伝子配列の同一性の程度は変化することができる。いくつかの態様において、変異体はＲＡＰＤ−ＰＣＲ解析を用いて開示された株に対して、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の遺伝子配列の同一性を有する。
【０１１４】
ＲＡＰＤ−ＰＣＲ解析に用いることができる６つのプライマーを以下に示す：プライマー１（５’−ＧＧＴＧＣＧＧＧＡＡ−３’）、プライマー２（５’−ＧＴＴＴＣＧＣＴＣＣ−３’）、プライマー３（５’−ＧＴＡＧＡＣＣＣＧＴ−３’）、プライマー４（５’−ＡＡＧＡＧＣＣＣＧＴ−３’）、プライマー５（５’−ＡＡＣＧＣＧＣＡＡＣ−３’）、プライマー６（５’−ＣＣＣＧＴＣＡＧＣＡ−３’）。ＲＡＰＤ解析はＲＡＰＤ解析のために予め混合され分注された反応物として設計されている。本発明において用いる直接給餌バクテリウムは同じ（属、種、または株）でよく、あるいは属、種、または株の混合物でもよい。
【０１１５】
好ましくは、本発明に従って使用されるＤＦＭは、一般に安全であると認識されている微生物であり、好ましくはＧＲＡＳにより認可されている微生物である。
【０１１６】
当業者であれば、食品産業及び／又は農産業において使用され、動物による消費に好適であると一般的に考えられ、本明細書に記載の属の範囲に含まれる微生物の、具体的な種及び又は株は容易に見当がつくであろう。
【０１１７】
好ましくは、本発明に従って使用されるＤＦＭは、動物による消費に好適なものである。
【０１１８】
有利なことに、製品は飼料又は飼料添加用組成物であり、生活性を有するＤＦＭは、製品の一般的な「販売期限」又は「消費期限」の間、すなわち飼料又は飼料添加用組成物が販売業者によって販売される期間中は効果を保持すべきである。所望の期間及び一般的な貯蔵寿命は、家畜用飼料によって異なる場合があり、当業者であれば、貯蔵寿命は、家畜用飼料の種類、家畜用飼料の容量、保管温度、加工条件、梱包材料及び梱包装置に応じ変化することを認識するであろう。
【０１１９】
一部の実施例では、ＤＦＭが熱に耐性を有すること、すなわち熱耐性であることが重要である。これは特に、飼料がペレット形態である場合に当てはまる。したがって、一実施形態では、ＤＦＭは熱耐性微生物であり、例えば、バチルス菌種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ）などの熱耐性細菌であってよい。
【０１２０】
一部の実施例では、ＤＦＭが芽胞形成細菌、例えば、バチルス菌種などのバチルス（Ｂａｃｉｌｌｉ）であることが好ましい場合がある。バチルス（Ｂａｃｉｌｌｉ）は、増殖に望ましくない条件下で安定な芽胞を形成することができる微生物であり、熱、ｐＨ、湿度、及び殺菌剤に対し非常に抵抗性である。
【０１２１】
好ましくは、ＤＦＭは、不活性化した微生物ではない。
【０１２２】
１つの態様において、ＤＦＭは単離されたまたは準単離された形態で用いられる生菌または死菌でよい。ＤＦＭはは培養された培地とともにまたは単離されて用いられる。
【０１２３】
１つの態様において、ＤＦＭは好適な培地で培養したときにコロニー形成する能力がある。好適な培地は飼料または飼料成分を含む（またはこれらからなる）。
【０１２４】
１つの態様において、ＤＦＭは好適な培地で培養したときにコロニー形成する能力がない。好適な培地は飼料または飼料成分を含む（またはこれらからなる）。
【０１２５】
ＤＦＭが好適な培地上で培養したときにコロニーを形成できるかできないかに関係なくこの細胞は代謝的には活性がある（例えば、それらが分割不可能であっても）。
【０１２６】
１つの態様において、ＤＦＭは死菌として投与される。
【０１２７】
１つの態様において、ＤＦＭは生菌として投与される。
【０１２８】
ＤＦＭは好適に投与される。
【０１２９】
好ましくは、飼料中のＤＦＭの投与量は約１ｘ１０３ＣＦＵ／ｇ飼料乃至約１ｘ１０９ＣＦＵ／ｇ飼料、好ましくは約１ｘ１０４ＣＦＵ／ｇ飼料乃至約１ｘ１０８ＣＦＵ／ｇ飼料、好ましくは約７．５ｘ１０４ＣＦＵ／ｇ飼料乃至約１ｘ１０７ＣＦＵ／ｇ飼料である。
【０１３０】
１つの態様において、ＤＦＭは飼料原料中に約１ｘ１０３ＣＦＵ／ｇ飼料より多く、好ましくは、約１ｘ１０４ＣＦＵ／ｇ飼料より多く、好ましくは約７．５ｘ１０４ＣＦＵ／ｇ飼料より多く、投与される。
【０１３１】
好ましくは、飼料添加用組成物中のＤＦＭの投与量は約１ｘ１０５ＣＦＵ／ｇ飼料乃至約１ｘ１０１３ＣＦＵ／ｇ飼料、好ましくは約１ｘ１０６ＣＦＵ／ｇ飼料乃至約１ｘ１０１２ＣＦＵ／ｇ飼料、好ましくは約３．７５ｘ１０７ＣＦＵ／ｇ飼料乃至約１ｘ１０１１ＣＦＵ／ｇ飼料である。
【０１３２】
１つの態様において、ＤＦＭは飼料添加組成物中に約１ｘ１０５ＣＦＵ／ｇ飼料より多く、好ましくは、約１ｘ１０６ＣＦＵ／ｇ飼料より多く、好ましくは約３．７５ｘ１０７ＣＦＵ／ｇ飼料より多く、投与される。
【０１３３】
好適な態様において、ＤＦＭは約５ｘ１０７乃至約１ｘ１０９ＣＦＵ／ｇ、好ましくは約１ｘ１０８乃至約５ｘ１０８ＣＦＵ／ｇ、で飼料添加用組成物に添加される。
【０１３４】
好適な態様において、ＤＦＭは約５ｘ１０３乃至約５ｘ１０５ＣＦＵ／ｇ、好ましくは約１ｘ１０４乃至約５ｘ１０５ＣＦＵ／ｇ、で飼料添加用組成物に添加される。
繊維分解酵素
本明細書に記載のようにＤＦＭは少なくとも１つのキシラナーゼおよび少なくとも１つのβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素と組み合わせて用いられる。
β−グルカナーゼまたはエンド−グルカナーゼは（１、４）−β−グルカン、（１、３；１、４）−β−グルカンおよびセルロースの（１、３）−β−Ｄ−グルコシドおよび／または（１、４）−β−Ｄ−グルコシド結合をグルコースオリゴ糖およびグルコースに加水分解して、それゆえ植物細胞壁の主成分であるセルロースおよびヘミセルロースを分解する酵素のクラスに与えれれる酵素名である。
【０１３５】
本発明においてβ−グルカナーゼは内生であり、例えばエンド−１、４−β−Ｄ−グルカナーゼ（Ｅ．Ｄ．３．２．１．４に分類される）。
【０１３６】
好ましくは、本発明で用いるβ−グルカナーゼはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、セルモマイセス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）、フサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）およびペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）由来β−グルカナーゼである。
【０１３７】
１つの態様において、繊維分解酵素はバチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、トリコデルマ・レーシ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、ペニシリウム・フニキュロサム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、フミコーラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、アスペルギルス・アキュレアタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、アスペルギルス・アキュレアタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）からなる群から選択される１つ以上の発現宿主から生産されるβ−グルカナーゼである。
【０１３８】
１つの態様において、繊維分解酵素は少なくともβ−グルカナーゼ繊維分解酵素を含む１つ以上の以下の市販製品でよい：
Ｅｃｏｎａｓｅ(R)ＧＴまたはＥｃｏｎａｓｅ(R)ＢＧ（ＡＢ  Ｖｉｓｔａより販売）、Ｒｏｖａｂｉｏ  Ｅｘｃｅｌ(R)（Ａｄｉｓｓｅｏより販売）、  Ｅｎｄｏｆｅｅｄ(R)ＤＣおよびＡｍｙｌｏｆｅｅｄ(R)（Ａｎｄｒｅｓ  Ｐｉｎｔａｌｕｂａ  Ｓ．Ａ．より販売）、  ＡｖｅＭｉｘ(R)ＸＧ１０（Ａｖｅｖｅより販売）、Ｎａｔｕｇｒａｉｎ(R)、Ｎａｔｕｇｒａｉｎ(R)ＴＳ、またはＮａｔｕｇｒａｉｎ(R)ＴＳ／Ｌ（ＢＡＳＦより販売）、Ａｖｉｚｙｍｅ(R)１２１０、Ａｖｉｚｙｍｅ(R)ＳＸ、Ｇｒｉｎｄａｚｙｍ(R)ＧＰ、Ｇｒｉｎｄａｚｙｍ(R)ＧＶ、Ｐｏｒｚｙｍｅ(R)８１００、Ｐｏｒｚｙｍｅ(R)９１０２、Ｐｏｒｚｙｍｅ(R)ｔｐ１００、ＡＸＴＲＡ(R)ＸＢ、Ａｖｉｚｙｍｅ(R)１１００、Ａｖｉｚｙｍｅ(R)１１１０、Ａｖｉｚｙｍｅ(R)１２０２、Ｐｏｒｚｙｍｅ(R)ｓｆまたはＰｏｒｚｙｍｅ(R)ＳＰ（Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎより販売）、Ｂｉｏ−ｆｅｅｄ  Ｐｌｕｓ(R)、ＲｏｎｏｚｙｍｅＡ(R)、ＲｏｎｏｚｙｍｅＶＰ(R)またはＲｏｘａｚｙｍｅｇ、２(R)（ＤＳＭより販売）、Ｈｏｓｔａｚｙｍ  Ｃ(R)（Ｈｕｖｅｐｈａｒｍａより販売）、ＫｅｍｚｙｍｅＷ  ｄｒｙまたはＫｅｍｚｙｍｅ  Ｗ  ｌｉｑｕｉｄ（Ｋｅｍｉｎより販売）、Ｂｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  ＢＬ（Ｋｅｒｒｙ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓより販売）、Ｓａｆｉｚｙｍｅｇ、（Ｌｅ  Ｓａｆｆｒｅより販売）、または飼料ｌｙｖｅ  ＡＧＬ（Ｌｙｖｅｎより販売）。
【０１３９】
１つの態様において、β−グルカナーゼはＡｘｔｒａ(R)ＸＢより入手される。
【０１４０】
β−グルカナーゼは意味する好適な量で投与される。
【０１４１】
１つの態様において、本発明で用いるβ−グルカナーゼは飼料原料中に約５０ＢＧＵ／ｋｇ飼料乃至約５００００ＢＧＵ／ｋｇ飼料、好ましくは、約１００ＢＧＵ／ｋｇ飼料乃至約１０００ＢＧＵ／ｋｇ飼料の範囲で存在する。
【０１４２】
本発明で用いるβ−グルカナーゼ飼料原料中に約７５ＢＧＵ／ｋｇ飼料乃至約４００ＢＧＵ／ｋｇ飼料、好ましくは、約１５０ＢＧＵ／ｋｇ飼料乃至約２００ＢＧＵ／ｋｇ飼料範囲で存在する。
【０１４３】
１つの態様において、β−グルカナーゼは飼料原料中に１０００ＢＧＵ／ｋｇ飼料未満、好ましくは、約５００ＢＧＵ／ｋｇ飼料未満、好ましくは、２５０ＢＧＵ／ｋｇ飼料未満存在する。
１つの態様において、β−グルカナーゼ飼料原料中に７５ＢＧＵ／ｋｇ飼料より多く、好ましくは、１００ＢＧＵ／ｋｇ飼料より多く存在する。
好ましくは、β−グルカナーゼは飼料添加用組成物中に約１５０ＢＧＵ／ｇ組成物乃至約３０００ＢＧＵ／ｇ組成物の範囲で、好ましくは、約３００ＢＧＵ／ｇ組成物乃至約１５００ＢＧＵ／ｇ組成物の範囲で存在する。
１つの態様において、β−グルカナーゼは飼料添加用組成物中に５０００ＢＧＵ／ｇ組成物以下、好ましくは、４０００ＢＧＵ／ｇ組成物以下、好ましくは、３０００ＢＧＵ／ｇ組成物以下、好ましくは、２０００ＢＧＵ／ｇ組成物以下の範囲で存在する。
１つの態様において、β−グルカナーゼは飼料添加用組成物中に、５０ＢＧＵ／ｇ組成物より多く、好ましくは、１００ＢＧＵ／ｇ組成物より多く、好ましくは、１２５ＢＧＵ／ｇ組成物より多く存在する。
【０１４４】
いくつかの態様において、β−グルカナーゼの活性は本明細書で記載するよう「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＢＧＵ）」を用いて計算できる。
【０１４５】
１つの態様において、本発明で用いるβ−グルカナーゼは本明細書に記載の「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）」を用いて決定されたβ−グルカナーゼ活性を有する。
【０１４６】
本明細書で用いる用語「繊維分解酵素」は１つ以上の以下の繊維分解酵素を含む：キシラナーゼ（例えば、エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８）または１、４β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７））、β−グルカナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．４）、セロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エクスポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、あるいはこれらの組み合わせ。
【０１４７】
本明細書で用いる用語「更なる（追加的な）繊維分解酵素」は１つ以上の以下の繊維分解酵素を含む：セロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エクスポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、あるいはこれらの組み合わせ。
【０１４８】
当業者は「追加的な繊維分解酵素」には複数の追加的な繊維分解酵素が含まれることを理解するだろう。
【０１４９】
１つの態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは少なくとも１つのキシラナーゼ、少なくとも１つのβ−グルカナーゼ、および少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素と組み合わせて用いられる。
【０１５０】
他の態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは少なくとも１つのキシラナーゼ、少なくとも１つのβ−グルカナーゼおよび２つ（または少なくとも２つの）追加的な繊維分解酵素とともに用いられる。
【０１５１】
他の態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは少なくとも１つのキシラナーゼ、少なくとも１つのβ−グルカナーゼおよび３つ（または少なくとも３つの）追加的な繊維分解酵素とともに用いられる。
【０１５２】
他の態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは少なくとも１つのキシラナーゼ、少なくとも１つのβ−グルカナーゼおよび４つ（または少なくとも４つの）追加的な繊維分解酵素とともに用いられる。
【０１５３】
１つの態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは本願発明の測定可能な酵素活性を含むブロスまたは固形状態の発酵生成物とともに用いられる。
【０１５４】
１つの態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは単離されたまたは精製された本願発明の酵素とともに用いられる。  
１つの態様において、本明細書で記載するようなＤＦＭは（例えば、ＤＦＭが酵素生産株である場合）組成物中のＤＦＭとは別の由来の本願発明の酵素とともに用いられる。
【０１５５】
好ましくは、繊維分解酵素は飼料のタンパク質１メートルトン（ＭＴ）あたり約０．０５乃至５ｇの酵素（またはｍｇ／ｋｇ）の範囲で飼料原料中に存在する。
【０１５６】
好ましくは、各繊維分解酵素は飼料原料中に飼料のタンパク質１メートルトン（ＭＴ）あたり（またはｍｇ／ｋｇ）約０．０５乃至５ｇの酵素の範囲で存在する。
【０１５７】
好ましくは、繊維分解酵素は飼料原料中総量で飼料のタンパク質１メートルトン（ＭＴ）あたり（またはｍｇ／ｋｇ）約０．０５乃至５ｇの酵素の範囲で存在する。
【０１５８】
好ましくは、飼料添加用組成物（またはプレミックス）中に約０．０５乃至１００ｍｇタンパク／ｇ組成物の範囲で（例えば、５０乃至１０００ｇ／ＭＴの食事の総含量において繊維分解酵素は存在する。
【０１５９】
好ましくは、（例えば、５０乃至１０００ｇ／ＭＴの食事の総含量において）約０．０５乃至１００ｍｇタンパク質／ｇ組成物の範囲で各繊維分解酵素は飼料添加用組成物（またはプレミックス）中に存在する。
【０１６０】
好ましくは、繊維分解酵素の総量は飼料添加用組成物（またはプレミックス）中に約０．０５乃至１００ｍｇタンパク質／ｇ組成物（例えば、５０乃至１０００ｇ／ＭＴの食事の総含量において）の範囲で存在する。
【０１６１】
好適な態様において、繊維分解酵素（例えば、各繊維分解酵素または繊維分解酵素の総量で）は飼料添加用組成物（またはプレミックス）の中に約５０乃至約７００ｇ／ＭＴ飼料の範囲で含まれる。好ましくは、繊維分解酵素（例えば、各繊維分解酵素または繊維分解酵素の総量で）は飼料添加用組成物（またはプレミックス）の中に約１００乃至約５００ｇ／ＭＴ飼料含まれる。
１つの態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はを含む（または必ず含む、またはからなる）セロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６２】
他の態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はβ−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６３】
好ましくは、追加的な繊維分解酵素はセロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）またはこれらの組み合わせを含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６４】
他の１つの態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はβ−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６５】
１つの態様において、本発明で用いる繊維分解酵素はフェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６６】
他の態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はα−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６７】
更なる追加的な態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エクスポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６８】
好適な態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はエンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エクスポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）およびペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２）からなる群から選択される１つ以上の（好ましくは、２つまたは２つ以上の、好ましくは、３つの）ペクチナーゼを含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１６９】
１つの態様において、本発明で用いる追加的な繊維分解酵素はセロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、および／またはペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エクスポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０１７０】
発明本は少なくとも１つキシラナーゼと、少なくとも１つのβ−グルカナーゼおよび少なくとも１つの本明細書で記載するような所定のＤＦＭとの組み合わせに関する。
好適な態様において、この少なくとも１つのキシラナーゼ、少なくとも１つのβ−グルカナーゼおよび本明細書で記載するような少なくとも１つの所定のＤＦＭは本明細書で記載するような追加的な繊維分解酵素と組み合わせられる。
発明本は更に少なくとも１つのキシラナーゼおよび少なくとも１つのβ−グルカナーゼと、少なくとも２つ、少なくとも３つまたは少なくとも４つ、少なくとも５つの、追加的な繊維分解酵素および本明細書で記載するような少なくとも１つの所定のＤＦＭとの組み合わせに関する。
【０１７１】
キシラナーゼは直鎖のポリサッカライドであるベータ−１、４−キシランをキシロースに加水分解し、従って植物細胞壁の主要な成分の１つであるヘミセルロースを分解する酵素のクラスの名前である。
【０１７２】
本発明で用いるキシラナーゼは意味する市販のキシラナーゼでよい。
【０１７３】
好ましくは、キシラナーゼはエンド−１、４−β−ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８として分類される）でよい。
【０１７４】
１つの態様において、好ましくは、キシラナーゼはエンドキシラナーゼ、例えば、エンド−１、４−β−ｄ−キシラナーゼでよい。エンド−１、４−β−ｄ−キシラナーゼの分類はＥ．Ｃ．３．２．１．８である。
【０１７５】
１つの態様において、発明本はエンドキシラナーゼ、例えば、エンド−１、４−β−ｄ−キシラナーゼ、および他の酵素と組み合わせられるＤＦＭに関する。
【０１７６】
本明細書で参照される全てのＥ．Ｃ．酵素分類は国際分子生物学・生物学連合の命名委員会の答申（１９９２）酵素命名法において提供されている分類を参照する（ＩＳＢＮ０−１２−２２６１６４−３）。
【０１７７】
好ましくは、本発明で用いるキシラナーゼはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ由来キシラナーゼである。
【０１７８】
１つの態様において、キシラナーゼはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１で示されるキシラナーゼを含む（またはからなる）、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２で示されるキシラナーゼを含む（またはからなる）またはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３（ＦｖｅＸｙｎ４）で示されるキシラナーゼを含む（またはからなる）、トリコデルマ・レーシ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）由来キシラナーゼ、Ｅｃｏｎａｓｅ  ＸＴTMまたは  Ｒｏｖａｂｉｏ  ＥｘｃｅｌTMを含む（またはからなる）。
１つの態様において、キシラナーゼ  はキシラナーゼ、Ａｘｔｒａ  ＸＡＰ(R)またはＡｖｉｚｙｍｅ  １５０２(R)またはＡｘｔｒａＸＢTM、であり、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａ／Ｓより入手可能である。
【０１７９】
１つの好適な態様において、本発明で用いるキシラナーゼは以下の１つ以上の市販製品における１つ以上キシラナーゼである：
2015528705.tif 000007
2015528705.tif 000008
2015528705.tif 000009
2015528705.tif 000010
2015528705.tif 000011
【０１８０】
１つの態様において、キシラナーゼはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２のポリペプチド配列；あるいはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１、またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２と少なくとも７５％同一性（少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％  または９９％当の同一性）を有する変異体、ホモログ、フラグメントまたは  それらの誘導体；あるいは少なくとも１つのアミノ酸の保存置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１、またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２を含むポリペプチド配列、としてここで示されるキシラナーゼを含む（またはからなる）。
【０１８１】
１つの態様において、キシラナーゼはポリペプチド配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３としてここで示される、あるいはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２またはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３に少なくとも９８．５％（例えば、少なくとも９８．８または９９または９９．１または９９．５％）同一性を有する変異体、ホモログ、フラグメント、またはそれらの誘導体を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１：
ｍｋｌｓｓｆｌｙｔａｓｌｖａａＩＰＴＡＩＥＰＲＱＡＡＤＳＩＮＫＬＩＫＮＫＧＫＬＹＹＧＴＩＴＤＰＮＬＬＧＶＡＫＤＴＡＩＩＫＡＤＦＧＡＶＴＰＥＮＳＧＫＷＤＡＴＥＰＳＱＧＫＦＮＦＧＳＦＤＱＶＶＮＦＡＱＱＮＧＬＫＶＲＧＨＴＬＶＷＨＳＱＬＰＱＷＶＫＮＩＮＤＫＡＴＬＴＫＶＩＥＮＨＶＴＱＶＶＧＲＹＫＧＫＩＹＡＷＤＶＶＮＥＩＦＥＷＤＧＴＬＲＫＤＳＨＦＮＮＶＦＧＮＤＤＹＶＧＩＡＦＲＡＡＲＫＡＤＰＮＡＫＬＹＩＮＤＹＳＬＤＳＧＳＡＳＫＶＴＫＧＭＶＰＳＶＫＫＷＬＳＱＧＶＰＶＤＧＩＧＳＱＴＨＬＤＰＧＡＡＧＱＩＱＧＡＬＴＡＬＡＮＳＧＶＫＥＶＡＩＴＥＬＤＩＲＴＡＰおよびＹＡＴＶＴＫＡＣＬＮＶＰＫＣＩＧＩＴＶＷＧＶＳＤＫＮＳＷＲＫＥＨＤＳＬＬＦＤＡＮＹＮＰＫＰＡＹＴＡＶＶＮＡＬＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２：
ＩＰＴＡＩＥＰＲＱＡＡＤＳＩＮＫＬＩＫＮＫＧＫＬＹＹＧＴＩＴＤＰＮＬＬＧＶＡＫＤＴＡＩＩＫＡＤＦＧＡＶＴＰＥＮＳＧＫＷＤＡＴＥＰＳＱＧＫＦＮＦＧＳＦＤＱＶＶＮＦＡＱＱＮＧＬＫＶＲＧＨＴＬＶＷＨＳＱＬＰＱＷＶＫＮＩＮＤＫＡＴＬＴＫＶＩＥＮＨＶＴＱＶＶＧＲＹＫＧＫＩＹＡＷＤＶＶＮＥＩＦＥＷＤＧＴＬＲＫＤＳＨＦＮＮＶＦＧＮＤＤＹＶＧＩＡＦＲＡＡＲＫＡＤＰＮＡＫＬＹＩＮＤＹＳＬＤＳＧＳＡＳＫＶＴＫＧＭＶＰＳＶＫＫＷＬＳＱＧＶＰＶＤＧＩＧＳＱＴＨＬＤＰＧＡＡＧＱＩＱＧＡＬＴＡＬＡＮＳＧＶＫＥＶＡＩＴＥＬＤＩＲＴＡＰおよびＹＡＴＶＴＫＡＣＬＮＶＰＫＣＩＧＩＴＶＷＧＶＳＤＫＮＳＷＲＫＥＨＤＳＬＬＦＤＡＮＹＮＰＫＰＡＹＴＡＶＶＮＡＬＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３：
ＱＡＡＤＳＩＮＫＬＩＫＮＫＧＫＬＹＹＧＴＩＴＤＰＮＬＬＧＶＡＫＤＴＡＩＩＫＡＤＦＧＡＶＴＰＥＮＳＧＫＷＤＡＴＥＰＳＱＧＫＦＮＦＧＳＦＤＱＶＶＮＦＡＱＱＮＧＬＫＶＲＧＨＴＬＶＷＨＳＱＬＰＱＷＶＫＮＩＮＤＫＡＴＬＴＫＶＩＥＮＨＶＴＱＶＶＧＲＹＫＧＫＩＹＡＷＤＶＶＮＥＩＦＥＷＤＧＴＬＲＫＤＳＨＦＮＮＶＦＧＮＤＤＹＶＧＩＡＦＲＡＡＲＫＡＤＰＮＡＫＬＹＩＮＤＹＳＬＤＳＧＳＡＳＫＶＴＫＧＭＶＰＳＶＫＫＷＬＳＱＧＶＰＶＤＧＩＧＳＱＴＨＬＤＰＧＡＡＧＱＩＱＧＡＬＴＡＬＡＮＳＧＶＫＥＶＡＩＴＥＬＤＩＲＴＡＰおよびＹＡＴＶＴＫＡＣＬＮＶＰＫＣＩＧＩＴＶＷＧＶＳＤＫＮＳＷＲＫＥＨＤＳＬＬＦＤＡＮＹＮＰＫＰＡＹＴＡＶＶＮＡＬＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４：
ｍｋｌｓｓｆｌｙｔａｓｌｖａａＩＰＴＡＩＥＰＲＱＡＳＤＳＩＮＫＬＩＫＮＫＧＫＬＹＹＧＴＩＴＤＰＮＬＬＧＶＡＫＤＴＡＩＩＫＡＤＦＧＡＶＴＰＥＮＳＧＫＷＤＡＴＥＰＳＱＧＫＦＮＦＧＳＦＤＱＶＶＮＦＡＱＱＮＧＬＫＶＲＧＨＴＬＶＷＨＳＱＬＰＱＷＶＫＮＩＮＤＫＡＴＬＴＫＶＩＥＮＨＶＴＮＶＶＧＲＹＫＧＫＩＹＡＷＤＶＶＮＥＩＦＤＷＤＧＴＬＲＫＤＳＨＦＮＮＶＦＧＮＤＤＹＶＧＩＡＦＲＡＡＲＫＡＤＰＮＡＫＬＹＩＮＤＹＳＬＤＳＧＳＡＳＫＶＴＫＧＭＶＰＳＶＫＫＷＬＳＱＧＶＰＶＤＧＩＧＳＱＴＨＬＤＰＧＡＡＧＱＩＱＧＡＬＴＡＬＡＮＳＧＶＫＥＶＡＩＴＥＬＤＩＲＴＡＰおよびＹＡＴＶＴＫＡＣＬＮＶＰＫＣＩＧＩＴＶＷＧＶＳＤＫＮＳＷＲＫＥＨＤＳＬＬＦＤＡＮＹＮＰＫＡＡＹＴＡＶＶＮＡＬＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５：
ＩＰＴＡＩＥＰＲＱＡＳＤＳＩＮＫＬＩＫＮＫＧＫＬＹＹＧＴＩＴＤＰＮＬＬＧＶＡＫＤＴＡＩＩＫＡＤＦＧＡＶＴＰＥＮＳＧＫＷＤＡＴＥＰＳＱＧＫＦＮＦＧＳＦＤＱＶＶＮＦＡＱＱＮＧＬＫＶＲＧＨＴＬＶＷＨＳＱＬＰＱＷＶＫＮＩＮＤＫＡＴＬＴＫＶＩＥＮＨＶＴＮＶＶＧＲＹＫＧＫＩＹＡＷＤＶＶＮＥＩＦＤＷＤＧＴＬＲＫＤＳＨＦＮＮＶＦＧＮＤＤＹＶＧＩＡＦＲＡＡＲＫＡＤＰＮＡＫＬＹＩＮＤＹＳＬＤＳＧＳＡＳＫＶＴＫＧＭＶＰＳＶＫＫＷＬＳＱＧＶＰＶＤＧＩＧＳＱＴＨＬＤＰＧＡＡＧＱＩＱＧＡＬＴＡＬＡＮＳＧＶＫＥＶＡＩＴＥＬＤＩＲＴＡＰおよびＹＡＴＶＴＫＡＣＬＮＶＰＫＣＩＧＩＴＶＷＧＶＳＤＫＮＳＷＲＫＥＨＤＳＬＬＦＤＡＮＹＮＰＫＡＡＹＴＡＶＶＮＡＬＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６：
ＱＡＳＤＳＩＮＫＬＩＫＮＫＧＫＬＹＹＧＴＩＴＤＰＮＬＬＧＶＡＫＤＴＡＩＩＫＡＤＦＧＡＶＴＰＥＮＳＧＫＷＤＡＴＥＰＳＱＧＫＦＮＦＧＳＦＤＱＶＶＮＦＡＱＱＮＧＬＫＶＲＧＨＴＬＶＷＨＳＱＬＰＱＷＶＫＮＩＮＤＫＡＴＬＴＫＶＩＥＮＨＶＴＮＶＶＧＲＹＫＧＫＩＹＡＷＤＶＶＮＥＩＦＤＷＤＧＴＬＲＫＤＳＨＦＮＮＶＦＧＮＤＤＹＶＧＩＡＦＲＡＡＲＫＡＤＰＮＡＫＬＹＩＮＤＹＳＬＤＳＧＳＡＳＫＶＴＫＧＭＶＰＳＶＫＫＷＬＳＱＧＶＰＶＤＧＩＧＳＱＴＨＬＤＰＧＡＡＧＱＩＱＧＡＬＴＡＬＡＮＳＧＶＫＥＶＡＩＴＥＬＤＩＲＴＡＰおよびＹＡＴＶＴＫＡＣＬＮＶＰＫＣＩＧＩＴＶＷＧＶＳＤＫＮＳＷＲＫＥＨＤＳＬＬＦＤＡＮＹＮＰＫＡＡＹＴＡＶＶＮＡＬＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７：
ｍｖｓｆｋｙｌｆｌａａｓａｌｇａｌａＡＰＶＥＶＥＥＳＳＷＦＮＥＴＡＬＨＥＦＡＥＲＡＧＴＰＳＳＴＧＷＮＮＧＹＹＹＳＦＷＴＤＮＧＧＴＶＮＹＱＮＧＮＧＧＳＹＳＶＱＷＫＤＴＧＮＦＶＧＧＫＧＷＮＰＧＳＡＲＴＩＮＹＳＧＳＦＮＰＳＧＮＡＹＬＴＶＹＧＷＴＴＮＰＬＶＥＹＹＩＶＥＮＹＧＴＹＮＰＧＮＧＧＴＹＲＧＳＶＹＳＤＧＡＮＹＮＩＹＴＡＴＲＹＮＡＰＳＩＥＧＤＫＴＦＴＱＹＷＳＶＲＱＳＫＲＴＧＧＴＶＴＴＡＮＨＦＮＡＷＡＱＬＧＭＳＬＧＴＨＮＹＱＩＶＡＴＥＧＹＱＳＳＧＳＳＳＩＴＶＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８：
ＡＰＶＥＶＥＥＳＳＷＦＮＥＴＡＬＨＥＦＡＥＲＡＧＴＰＳＳＴＧＷＮＮＧＹＹＹＳＦＷＴＤＮＧＧＴＶＮＹＱＮＧＮＧＧＳＹＳＶＱＷＫＤＴＧＮＦＶＧＧＫＧＷＮＰＧＳＡＲＴＩＮＹＳＧＳＦＮＰＳＧＮＡＹＬＴＶＹＧＷＴＴＮＰＬＶＥＹＹＩＶＥＮＹＧＴＹＮＰＧＮＧＧＴＹＲＧＳＶＹＳＤＧＡＮＹＮＩＹＴＡＴＲＹＮＡＰＳＩEGＤＫＴＦＴＱＹＷＳＶＲＱＳＫＲＴＧＧＴＶＴＴＡＮＨＦＮＡＷＡＱＬＧＭＳＬＧＴＨＮＹＱＩＶＡＴＥＧＹＱＳＳＧＳＳＳＩＴＶＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９：
ＡＧＴＰＳＳＴＧＷＮＮＧＹＹＹＳＦＷＴＤＮＧＧＴＶＮＹＱＮＧＮＧＧＳＹＳＶＱＷＫＤＴＧＮＦＶＧＧＫＧＷＮＰＧＳＡＲＴＩＮＹＳＧＳＦＮＰＳＧＮＡＹＬＴＶＹＧＷＴＴＮＰＬＶＥＹＹＩＶＥＮＹＧＴＹＮＰＧＮＧＧＴＹＲＧＳＶＹＳＤＧＡＮＹＮＩＹＴＡＴＲＹＮＡＰＳＩＥＧＤＫＴＦＴＱＹＷＳＶＲＱＳＫＲＴＧＧＴＶＴＴＡＮＨＦＮＡＷＡＱＬＧＭＳＬＧＴＨＮＹＱＩＶＡＴEGＹＱＳＳＧＳＳＳＩＴＶＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０：
ＭＶＳＦＴＳＬＬＡＡＶＳＡＶＴＧＶＭＡＬＰＳＡＱＰＶＤＧＭＳＶＶＥＲＤＰＰＴＮＶＬＤＫＲＴＱＰＴＴＧＴＳＧＧＹＹＦＳＦＷＴＤＴＰＮＳＶＴＹＴＮＧＮＧＧＱＦＳＭＱＷＳＧＮＧＮＨＶＧＧＫＧＷＭＰＧＴＳＲＴＩＫＹＳＧＳＹＮＰＮＧＮＳＹＬＡＶＹＧＷＴＲＮＰＬＩＥＹＹＩＶＥＮＦＧＴＹＮＰＳＳＧＧＱＫＫＧＥＶＮＶＤＧＳＶＹＤＩＹＶＳＴＲＶＮＡＰＳＩＤＧＮＫＴＦＱＱＹＷＳＶＲＲＮＫＲＳＳＧＳＶＮＴＧＡＨＦＱＡＷＫＮＶＧＬＮＬＧＴＨＤＹＱＩＬＡＶEGＹＹＳＳＧＳＡＳＭＴＶＳＱ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１：
ＬＰＳＡＱＰＶＤＧＭＳＶＶＥＲＤＰＰＴＮＶＬＤＫＲＴＱＰＴＴＧＴＳＧＧＹＹＦＳＦＷＴＤＴＰＮＳＶＴＹＴＮＧＮＧＧＱＦＳＭＱＷＳＧＮＧＮＨＶＧＧＫＧＷＭＰＧＴＳＲＴＩＫＹＳＧＳＹＮＰＮＧＮＳＹＬＡＶＹＧＷＴＲＮＰＬＩＥＹＹＩＶＥＮＦＧＴＹＮＰＳＳＧＧＱＫＫＧＥＶＮＶＤＧＳＶＹＤＩＹＶＳＴＲＶＮＡＰＳＩＤＧＮＫＴＦＱＱＹＷＳＶＲＲＮＫＲＳＳＧＳＶＮＴＧＡＨＦＱＡＷＫＮＶＧＬＮＬＧＴＨＤＹＱＩＬＡＶＥＧＹＹＳＳＧＳＡＳＭＴＶＳＱ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２：
ＴＱＰＴＴＧＴＳＧＧＹＹＦＳＦＷＴＤＴＰＮＳＶＴＹＴＮＧＮＧＧＱＦＳＭＱＷＳＧＮＧＮＨＶＧＧＫＧＷＭＰＧＴＳＲＴＩＫＹＳＧＳＹＮＰＮＧＮＳＹＬＡＶＹＧＷＴＲＮＰＬＩＥＹＹＩＶＥＮＦＧＴＹＮＰＳＳＧＧＱＫＫＧＥＶＮＶＤＧＳＶＹＤＩＹＶＳＴＲＶＮＡＰＳＩＤＧＮＫＴＦＱＱＹＷＳＶＲＲＮＫＲＳＳＧＳＶＮＴＧＡＨＦＱＡＷＫＮＶＧＬＮＬＧＴＨＤＹＱＩＬＡＶＥＧＹＹＳＳＧＳＡＳＭＴＶＳＱ
好ましくは、キシラナーゼは飼料原料中に約５００ＸＵ／ｋｇ乃至約１６、０００ＸＵ／ｋｇ飼料、より好ましくは、約７５０ＸＵ／ｋｇ飼料乃至約８０００ＸＵ／ｋｇ飼料、および更に好ましくは、約１０００ＸＵ／ｋｇ飼料乃至約４０００ＸＵ／ｋｇ飼料の範囲で存在する。
【０１８２】
１つの態様において、キシラナーゼは飼料原料中に約５００ＸＵ／ｋｇ飼料より多く、  好ましくは約６００ＸＵ／ｋｇ飼料より多く、好ましくは約７００ＸＵ／ｋｇ飼料より多く、好ましくは約８００ＸＵ／ｋｇ飼料より多く、好ましくは約９００ＸＵ／ｋｇ飼料より多く、好ましくは約１０００ＸＵ／ｋｇ飼料より多く存在する。
【０１８３】
１つの態様において、キシラナーゼ飼料原料中に約１６、０００ＸＵ／ｋｇ飼料より少なく、好ましくは約８０００ＸＵ／ｋｇ飼料より少なく、好ましくは約７０００ＸＵ／ｋｇ飼料より少なく、好ましくは約６０００ＸＵ／ｋｇ飼料より少なく、好ましくは約５０００ＸＵ／ｋｇ飼料より少なく、好ましくは約４０００ＸＵ／ｋｇ飼料より少なくは存在する。
【０１８４】
好ましくは、キシラナーゼは飼料添加用組成物中に約１００ＸＵ／ｇ乃至約３２０、０００ＸＵ／ｇ組成物、より好ましくは、約３００ＸＵ／ｇ組成物乃至約１６０、０００ＸＵ／ｇ組成物、およびより好ましくは、約５００ＸＵ／ｇ組成物乃至約５０、０００ＸＵ／ｇ組成物、およびより好ましくは、約５００ＸＵ／ｇ組成物乃至約４０、０００ＸＵ／ｇ組成物の範囲で存在する。
【０１８５】
１つの態様において、キシラナーゼは飼料添加用組成物中に約１００ＸＵ／ｇ組成物より多く、好ましくは約２００ＸＵ／ｇ組成物より多く、好ましくは約３００ＸＵ／ｇ組成物より多く、好ましくは約４００ＸＵ／ｇ組成物より多く、好ましくは約５００ＸＵ／ｇ組成物より多く存在する。
【０１８６】
１つの態様において、キシラナーゼは飼料添加用組成物中に約３２０、０００ＸＵ／ｇ組成物より少なく、好ましくは約１６０、０００ＸＵ／ｇ組成物より少なく、好ましくは約５０、０００ＸＵ／ｇ組成物より少なく、好ましくは約４０、０００ＸＵ／ｇ組成物より少なく、好ましくは約３００００ＸＵ／ｇ組成物より少なく存在する。
【０１８７】
キシラナーゼ活性は本明細書に記載の「キシラナーゼ活性アッセイ（ＸＵ）」の記載により測定してキシラナーゼ単位（ＸＵ）として表すことができる。Ｂａｉｌｅｙ、Ｍ．Ｊ．Ｂｉｅｌｙ、Ｐ．および  Ｐｏｕｔａｎｅｎ、Ｋ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ  ２３、  （３）、Ｍａｙ１９９２、２５７−２７０も参照。この記載を参照により本明細書に援用する。
【０１８８】
１つの態様において、好ましくは酵素上記のＥ．Ｃ．分類を用いて分類され、およびＥ．Ｃ．分類は１ＸＵを決定するための。本明細書に記載の「キシラナーゼ活性アッセイ（ＸＵ）」にて試験された活性を有する酵素を意図する。
【０１８９】
１つの態様において、本発明のためのキシラナーゼは本明細書に記載の「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸＵ／ｇ）」を用いて決定されるキシラナーゼ活性を有する。
酵素活性およびアッセイ          
１つの態様において、飼料添加用組成物はＤＦＭをキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて含む。
１つの態様において、キシラナーゼ活性は本明細書に記載の「キシラナーゼ活性アッセイ（ＸＵ）」を用いて計算される。
他の態様において、β−グルカナーゼ活性は本明細書に記載の「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＢＧＵ）」を用いて計算される。
好ましくは、ＤＦＭは以下の表に規定されるようにキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて投与される：
2015528705.tif 000012
【０１９０】
記載の酵素活性の単位は、各酵素について前述に記載のように計算される。
いくつかの態様において、飼料添加用組成物は本明細書に記載のキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよび追加的な繊維分解酵素と組み合わせたＤＦＭを含む。
好ましくは、ＤＦＭ、キシラナーゼ、β−グルカナーゼおよび追加的な繊維分解酵素以下の表に規定されるように投与される：
2015528705.tif 000013
【０１９１】
１つの態様において、好ましくは、飼料原料は以下を含む：
飼料中少なくとも１０００ＸＵ／ｋｇ乃至５０００ＸＵ／ｋｇ  好ましくは少なくとも２０００ＸＵ／ｋｇ乃至４５００ＸＵ／ｋｇ）のキシラナーゼ； 
飼料中少なくとも１００ＢＧＵ／ｋｇ乃至４０００ＢＧＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも１５０ＢＧＵ／ｋｇ乃至３０００ＢＧＵ／ｋｇ）のβ−グルカナーゼ；および
飼料中少なくとも５０、０００ＣＦＵ／ｇ乃至２００、０００ＣＦＵ／ｇ（好ましくは少なくとも７０、０００ＣＦＵ／ｇ乃至１７５、０００ＣＦＵ／ｇ）の本明細書に記載のＤＦＭ  。
他の態様において、好ましくは、飼料原料は以下を含む：
飼料中少なくとも１０００ＸＵ／ｋｇ乃至５０００ＸＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも２０００ＸＵ／ｋｇ乃至４５００ＸＵ／ｋｇ）のキシラナーゼ；
飼料中少なくとも１００ＢＧＵ／ｋｇ乃至４０００ＢＧＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも１５０ＢＧＵ／ｋｇ乃至３０００ＢＧＵ／ｋｇ）のβ−グルカナーゼ；および
飼料中少なくとも３７、５００ＣＦＵ／ｇ乃至１００、０００ＣＦＵ／ｇ（好ましくは少なくとも３７、５００ＣＦＵ／ｇ乃至７５、０００ＣＦＵ／ｇ）の本明細書に記載のＤＦＭ。
【０１９２】
他の態様において、好ましくは、飼料原料は以下を含む：
飼料中少なくとも１０００ＸＵ／ｋｇ乃至５０００ＸＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも２０００ＸＵ／ｋｇ乃至４５００ＸＵ／ｋｇ）のキシラナーゼ；
飼料中少なくとも２００−２０００ＣＭＣＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも５００−１５００ＣＭＣＵ／ｋｇ）のβ−グルカナーゼ；
飼料中少なくとも５０、０００ＣＦＵ／ｇ乃至２００、０００ＣＦＵ／ｇ（好ましくは少なくとも７０、０００ＣＦＵ／ｇ乃至１７５、０００ＣＦＵ／ｇ）の本明細書に記載のＤＦＭ；および
飼料中少なくとも８００−３５００ＡＢＸＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも１０００−２７５０ＡＢＸＵ／ｇ）および５００−３０００ｐＮＰＧＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも６００−２０００ｐＮＰＧＵ／ｋｇ）の追加的な繊維分解酵素混合物を含む。
【０１９３】
他の態様において、好ましくは、飼料原料は以下を含む：
飼料中少なくとも１０００ＸＵ／ｋｇ乃至５０００ＸＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも２０００ＸＵ／ｋｇ乃至４５００ＸＵ／ｋｇ）のキシラナーゼ；
飼料中少なくとも２００−２０００ＣＭＣＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも５００−１５００ＣＭＣＵ／ｋｇ）のβ−グルカナーゼ；
飼料中少なくとも３７、５００ＣＦＵ／ｇ乃至１００、０００ＣＦＵ／ｇ（好ましくは少なくとも３７、５００ＣＦＵ／ｇ乃至７５、０００ＣＦＵ／ｇ）の本明細書に記載のＤＦＭ；および
飼料中少なくとも８００−３５００ＡＢＸＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも１０００−２７５０ＡＢＸＵ／ｇ）および５００−３０００ｐＮＰＧＵ／ｋｇ（好ましくは少なくとも６００−２０００ｐＮＰＧＵ／ｋｇ）の追加的な繊維分解酵素混合物を含む。
１つの態様において、ＤＦＭは組成物に存在するキシラナーゼの単位に応じて投与される。１つの態様において、ＤＦＭはの範囲で６．２５ｘ１０１ＣＦＵＤＦＭ：１ＸＵ酵素乃至２ｘ１０９ＣＦＵ  ＤＦＭ：１ＸＵ酵素；好ましくは、１．８８ｘ１０４ＣＦＵ  ＤＦＭ：１ＸＵ酵素乃至０ｘ１０７ＣＦＵ  ＤＦＭ：１ＸＵ酵素の範囲で投与される。本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて用いられる。
【０１９４】
他の態様において、本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよび追加的な繊維分解酵素と組み合わせて用いられる。好適な態様において、追加的な繊維分解酵素はβ−グルコシダーゼでよい。
【０１９５】
１つの態様において、本発明で用いるキシラナーゼは本明細書に記載の「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸＵ／ｇ）」を用いて決定されるキシラナーゼ活性を有する。
【０１９６】
更なる態様において、本発明に用いるβ−グルカナーゼは本明細書に記載の「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）」を用いて決定されるβ−グルカナーゼ活性を有する。
【０１９７】
更なる態様において、本発明に用いるβ−グルコシダーゼは本明細書に記載の「β−グルコシダーゼ活性アッセイ（ｐＮＰＧＵ／ｇ）」を用いて決定されるβ−グルコシダーゼ活性を有する。
【０１９８】
１つの態様において、本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせてもちいられ、ここにおいてキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼは以下の表にで規定される活性を有する：
2015528705.tif 000014
【０１９９】
2015528705.tif 000015
【０２００】
１  １ＡＢＸ単位は５０℃およびｐＨ５．３で１分間に１μｍｏｌのキシロースを還元糖にする酵素の量であると定義される。
２  １ＣＭＣ単位は５０℃およびｐＨ４．８で１分間に１μｍｏｌの還元糖を放出する（グルコース当量であらわされる）活性の単位である。
【０２０１】
好適な態様において、本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびβ−グルコシダーゼと組み合わせて用いられる。ここにおいて、キシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびβ−グルコシダーゼは以下の表にで規定される活性を有する：
2015528705.tif 000016
【０２０２】
2015528705.tif 000017
【０２０３】
１  １ＡＢＸ単位は５０℃およびｐＨ５．３で１分間に１μｍｏｌのキシロースを還元糖にする酵素の量であると定義される。
２  １ＣＭＣ単位は５０℃およびｐＨ４．８で１分間に１μｍｏｌの還元糖を放出する（グルコース当量であらわされる）活性の単位である。
３  １ｐＮＰＧ単位は５０℃およびｐＨ４．８で１分間に１μｍｏｌのニトロ−フェノールが  から放出される単位を意味する。
【０２０４】
１つの態様において、本発明で用いるためのキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼは約３０００ＡＢＸｕ／ｇより多くのキシラナーゼ活性および約２０００−２６００ＣＭＣｕ／ｇのβ−グルカナーゼ活性をそれぞれ含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２０５】
好ましくは本発明で用いるためのキシラナーゼ、β−グルカナーゼ、およびβ−グルコシダーゼ約３０００ＡＢＸｕ／ｇより多くのキシラナーゼ活性、約２０００−２６００ＣＭＣｕ／ｇのβ−グルカナーゼ活性、および約２０００ｐＮＰＧｕ／ｇより多くのβ−グルコシダーゼ活性をそれぞれ含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２０６】
１つの態様において、本発明で用いるためのキシラナーゼは「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも２０００ＡＢＸｕ／ｇ（好ましくは少なくとも２５００ＡＢＸｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも３０００ＡＢＸｕ／ｇ活性）のキシラナーゼ活性を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２０７】
好ましくは、本発明で用いるためのキシラナーゼは「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定されるは約２０００乃至約５０００ＡＢＸｕ／ｇ（好ましくは少なくとも約２５００乃至約４０００ＡＢＸｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約３０００乃至約４０００ＡＢＸｕ／ｇ活性）のキシラナーゼ活性を含む（または必ず含む、またはからなる。
【０２０８】
他の態様において、本発明で用いるためのβ−グルカナーゼは 「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも１０００ＣＭＣｕ／ｇ  β−グルカナーゼ活性（好ましくは少なくとも１５００ＣＭＣｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも２０００ＣＭＣｕ／ｇ活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
好ましくは、本発明で用いるためのβ−グルカナーゼは「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）」を用いて決定される約６００乃至約４０００ＣＭＣｕ／ｇのβ−グルカナーゼ活性（好ましくは少なくとも約１０００乃至約３０００ＣＭＣｕ／ｇの活性、好ましくは少なくとも約１５００乃至約２６００ＣＭＣｕ／ｇの活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２０９】
更なる態様において、本発明で用いるためのβ−グルコシダーゼは「β−グルコシダーゼ活性アッセイ（ｐＮＰＧ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される、少なくとも３００ｐＮＰＧｕ／ｇのβ−グルコシダーゼ活性（好ましくは少なくとも５００ｐＮＰＧｕ／ｇの活性、好ましくは少なくとも１０００ｐＮＰＧｕ／ｇの活性または好ましくは少なくとも２０００ｐＮＰＧｕ／ｇの活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２１０】
好ましくは、本発明で用いるためのβ−グルコシダーゼは「β−グルコシダーゼ活性アッセイ（ｐＮＰＧ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される約２００乃至約４０００ｐＮＰＧ  ｕ／ｇβ−グルコシダーゼ活性（好ましくは少なくとも約３００乃至約３０００ｐＮＰＧ  ｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約１０００乃至約３０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性または好ましくは少なくとも約２０００乃至約３０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性）含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２１１】
好ましくは、本明細書に記載のＤＦＭキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて用いられ、「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも２０００ＡＢＸｕ／ｇキシラナーゼ活性（好ましくは少なくとも２５００ＡＢＸｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも３０００ＡＢＸｕ／ｇ活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）；および「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも１０００ＣＭＣｕ／ｇβ−グルカナーゼ活性（好ましくは少なくとも１５００ＣＭＣｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも２０００ＣＭＣｕ／ｇ活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
好ましくは、本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびβ−グルコシダーゼと組み合わせて用いられ、「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも２０００ＡＢＸｕ／ｇキシラナーゼ活性（好ましくは少なくとも２５００ＡＢＸｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも３０００ＡＢＸｕ／ｇ活性）；並びに「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも１０００ＣＭＣｕ／ｇβ−グルカナーゼ活性（好ましくは少なくとも１５００ＣＭＣ  ｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも２０００ＣＭＣｕ／ｇ活性）；並びに「β−グルコシダーゼ活性アッセイ（ｐＮＰＧ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される少なくとも３００ｐＮＰＧｕ／ｇβ−グルコシダーゼ活性（好ましくは少なくとも５００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも１０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性または好ましくは少なくとも２０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２１２】
１つの態様において、本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼと組み合わせて用いられ、「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸＵ／ｇ）」を用いて決定される約２０００乃至約５０００ＡＢＸｕ／ｇキシラナーゼ活性（好ましくは少なくとも約２５００乃至約４０００ＡＢＸｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約３０００乃至約４０００ＡＢＸｕ／ｇ活性）並びに；「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される約６００乃至約４０００ＣＭＣｕ／ｇβ−グルカナーゼ活性（好ましくは少なくとも約１０００乃至約３０００ＣＭＣｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約１５００乃至約２６００ＣＭＣｕ／ｇ活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０２１３】
好ましくは、本明細書に記載のＤＦＭはキシラナーゼ、β−グルカナーゼ、およびβ−グルコシダーゼと組み合わせて用いられ、「キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸＵ／ｇ）」を用いて決定される約２０００乃至約５０００ＡＢＸｕ／ｇキシラナーゼ活性（好ましくは少なくとも約２５００乃至約４０００ＡＢＸｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約３０００乃至約４０００ＡＢＸｕ／ｇ活性）；並びに「β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）」を用いて決定される約６００乃至約４０００ＣＭＣｕ／ｇβ−グルカナーゼ活性（好ましくは少なくとも約１０００乃至約３０００ＣＭＣｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約１５００乃至約２６００ＣＭＣｕ／ｇ活性）；並びに「β−グルコシダーゼ活性アッセイ（ｐＮＰＧ  Ｕ／ｇ）」を用いて決定される約２００乃至約４０００ｐＮＰＧｕ／ｇβ−グルコシダーゼ活性（好ましくは少なくとも約３００乃至約３０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性、好ましくは少なくとも約１０００乃至約３０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性または好ましくは少なくとも約２０００乃至約３０００ｐＮＰＧｕ／ｇ活性）を含む（または必ず含む、またはからなる）。
キシラナーゼ活性アッセイ（ＸＵ）
キシラナーゼ活性は、ＡＺＣＬ−アラビノキシラン（アズリン架橋小麦アラビノキシラン、Ｘｙｌａｚｙｍｅ  １００ｍｇタブレット、  Ｍｅｇｚｙｍｅ）を基質としてｐＨ５．０測定されたキシラナーゼ単位（ＸＵ）で表される。エンド−（１−４）−β−Ｄ−キシラナーゼ（キシラナーゼ）が生成する加水分解染色された水溶性フラグメントおよびそれらの放出速度（５９０ｎｍにおける吸光度の増加）が直接酵素活性に関与する。キシラナーゼ単位（ＸＵ）は酵素標準物質（Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎより入手可能なＤａｎｉｓｃｏキシラナーゼ）に対して、ＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液、ｐＨ５．０中４０℃、１０分の標準的な条件で決定される。
【０２１４】
標準酵素のキシラナーゼ活性はｐＨ５．３および５０℃で１分当たりオーツスペルトキシラン基質から放出される還元糖末端基の量として決定される。還元糖末端基はジニトロサリチル酸と反応して、反応生成物の形成が５４０ｎｍにおける吸光度の増加として測定することができる。酵素活性はキシロース標準曲線（還元糖当量）に対して定量化される。１キシラナーゼ単位は（ＸＵ）はｐＨ５．３および５０℃で１分間に０．５μｍｏｌの還元糖当量を放出する標準酵素の量である。
キシラナーゼ活性アッセイ（ＡＢＸ  Ｕ／ｇ）
キシラナーゼ活性は、バーチウッド４−Ｏメチルグルカノキシランを基質としてｐＨ５．３で測定される酸性バーチウッドキシラナーゼ単位（ＡＢＸ  Ｕ）で表される。ピペットで計り取る１．８ｍｌの１％バーチウッド４−Ｏメチルグルカノキシラン基質溶液をピペットで試験管に計りいれた。１０−１５分間インキュベートして、５０℃で平衡化した。０．２ｍｌの酵素希釈用液を容積式ピペットまたは均等物を用いて、計り取る。ボルテックスで混合する。各サンプルを５０℃で正確に５分インキュベートする。３ｍｌの１％３、５ニトロサリチル酸ナトリウム塩（ＤＮＳ）溶液を加えて混合する。試験管の上部をキャップで多い蒸発を防ぐ。試験管を沸騰しているウォーターバスにいれ正確に５  分計る。試験管を氷／ウォーターバスで１０分間冷却する。試験管を室温で１０分インキュベートする。試験管の内容物をキュベットへ移し、脱イオン水に対して５４０ｎｍの吸光度を測定する。対応する酵素ブランクを差し引くことによりバックグラウンドカラーの吸光度を補正する。キシロース標準曲線（還元糖当量）に対して酵素活性を定量化する。
１ＡＢＸ単位は５０℃およびｐＨ５．３で１分間に１μｍｏｌのキシロース還元糖当量を生成するのに必要な酵素の量と定義される。
β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＣＭＣＵ／ｇ）
β−グルカナーゼ活性は、カルボキシメチルセルロースナトリウム塩（ＣＭＣ）を基質としてｐＨ４．８で測定されるＣＭＣ単位で表される。１ｍｌの（０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液で調製された）１％カルボキシメチルセルロースナトリウム塩（ＣＭＣ）溶液をサンプルとブランクチューブにピペットで計り入れる。チューブを５０℃のウォーターバスで１０分間インキュベートする。１ｍｌの酵素希釈溶液を１５秒の間をあけてサンプルチューブへピペットで計り入れる。各添加ののちにチューブを混合する。１０分後、酵素をサンプルチューブに添加したのと同じ順序とタイミングで３ｍｌの１％３、５ジニトロサリチル酸ナトリウム塩（ＤＮＳ）をサンプルチューブに添加する。３ｍｌのＤＮＳをサンプルブランクチューブに添加する。ＤＮＳの添加ののち、試験管を５０℃のウォーターバスから取り出し他のラックに移す。対応するサンプルブランクに１ｍｌの希釈した酵素を添加する。チューブにキャップをして正確に５分間煮沸する。１００℃のウォーターバスから取り出し１０分間冷却バスに置く。室温で１０−１５分放置する。３ｍｌのキュベットに移す。試薬ブランクを用いて、吸光度計をゼロ補正して、各サンプルを脱イオン水に対して５４０ｎｍの吸光度を測定する。酵素活性はグルコース標準曲線（還元糖当量）に対して定量化される。
【０２１５】
１ＣＭＣ単位は５０℃およびｐＨ４．８で１分間に１μｍｏｌの還元糖（グルコース当量として表す）を放出する活性である。
β−グルカナーゼ活性アッセイ（ＢＧＵ）
ベータ−グルカナーゼ活性は、ＡＺＣＬ−グルカン（アズリン架橋オオムギβ−グルカン、Ｇｌｕｃａｚｙｍｅ１００ｍｇタブレット、Ｍｅｇａｚｙｍｅ）を基質としてｐＨ５．０でで測定されるベータ−グルカナーゼ単位（ＢＧＵ）で表される。ベータ−グルカナーゼによる加水分解は可溶性染色フラグメントを生成し、それらの放出速度（５９０ｎｍでの吸光度における増加）が直接酵素活性に関与する。ベータ−グルカナーゼ単位（ＢＧＵ）は酵素標準（Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎから入手可能なＭｕｌｔｉｆｅｃｔ  ＢＧＬ）に対して、ｐＨ５．０の０．１Ｍ酢酸緩衝液中での５０℃、１０分間の反応時間の標準的反応条件で決定される。
【０２１６】
標準酵素のベータ−グルカナーゼ活性はｐＨ５．０および５０℃で１分間にオオムギグルカン基質から放出された還元糖末端基の量として決定される。還元糖末端基は３、５−ジニトロサリチル酸と反応して、反応生成物の形成が５４０ｎｍでの吸光度における増加として測定することができる。酵素活性はグルコース標準曲線（還元糖当量）に対して定量化される。１ベータ−グルカナーゼ単位（ＢＧＵ）はｐＨ５．０および５０°Ｃで１分間に２．４μｍｏｌの還元糖当量を放出する標準酵素の量である。
β−グルコシダーゼ活性アッセイ（ｐＮＰＧ  Ｕ／ｇ）
β−グルコシダーゼ活性は、パラ−ニトロフェニルｌ−Ｂ−Ｄ−グルコピラノシド（ｐＮＰＧ）を基質として、ｐＨ４．８で測定されるｐＮＰＧ単位で表される。（０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液で調製された）１ｍｌの３％ニトロフェニルｌ−ベータ−Ｄ−グルコピラノシド（ｐＮＰＧ）溶液を２回分試験管へ、各サンプルおよび対照についてピペットで計り入れる。５分間の５０℃ウォーターバスに置く。２００μｌの対照またはサンプルを１５−３０秒の間隔でそれぞれの２回分のチューブに添加する。試薬ブランクチューブに、２００μｌの酢酸ナトリウム緩衝液を添加する。サンプルを添加した後に各チューブを混合する。チューブを正確に１０分間インキュベートし、５００μｌの１Ｍ炭酸ナトリウム溶液を添加して反応を停止する。添加の後各チューブを混合し、チューブをウォーターバスの外のラックにいれる。各チューブに１０ｍｌのｍｉｌｌｉ−Ｑｗａｔｅｒを添加して、ボルテックス混合する。試薬ブランクを用いて分光光度計をゼロ補正し、ニトロ−フェノールの濃度を４００ｎｍで各サンプルについて読み取ることにより測定した。１ｐＮＰＧ単位は５０℃およびｐＨ４．８で１分間にパラ−ニトロフェニルｌ−Ｂ−Ｄ−グルコピラノシドから１μｍｏｌのニトロ−フェノールを放出することを意味する。
有利な効果
ＤＦＭｓとキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）との相互作用は複雑であり、および理論により拘束されることを意図しないけれども、動物のＧＩＴで短鎖脂肪酸の生成が増加したことを見ることができることは驚くべきことである。
【０２１７】
本明細書に記載の所定のＤＦＭと少なくとも１つのキシラナーゼおよび少なくとも１つのβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）との組み合わせは、繊維性副生成物（例えばバイオ燃料および製粉工業からの）の多い飼料原料および／または該飼料原料を給餌された動物において特に有益であることが見いだされた。
【０２１８】
相当量（時には３０−６０％）の繊維性副生成物（高含有量の非デンプン多糖類、例えば繊維を含む）を含む飼料原料の栄養価および消化性を、そのような飼料原料を給餌した動物の性能および体重増加に見られるように、有意に改善したことが見いだされた。
【０２１９】
本発明の１つの利点は本発明の組み合わせを用い観察される飼料要求率（ＦＣＲ）を改善することである。
理論に拘束されることを意図しないけれども、非デンプン多糖類（ＮＳＰ）の多い植物細胞壁粒子由来の飼料材料のキシラナーゼによる分解は、キシラナーゼ（例えば、エンド−１、４−β−ｄ−キシラナーゼ）を１つ以上のβ-グルカナーゼ（および任意で１つ以上の追加的な繊維分解酵素と組み合わせて（例えばセロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エキソポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、またはこれらの組み合わせ））、並びに酵素を生産するそれらの能力、および／または短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）をＮＳＰ分画ペントースから嫌気性条件で生産するそれらの能力、および／または動物のＧＩＴ繊維分解性腸内菌叢における内性集団を促進する能力および／またはＣ５糖類を分解するそれらの能力について選択された１つ以上の所定の直接給餌微生物（ＤＦＭｓ）と組み合わせたときに、動物の性能の改善について最適化される。
【０２２０】
なぜこの組み合わせが性能を改善するのかという理由は飼料からの繊維、特にヘミセルロースの可溶化が動物の消化管（ＧＩＴ）において最大化されるからである。このヘミセルロースの可溶化は常に性能を高めるわけではない。なぜなら、放出されたＣ５糖類がそれらが吸収されたときには動物にとって有効なエネルギー源ではないが（Ｓａｖｏｒｙ  Ｃ．Ｊ．Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔ．１９９２、６７：１０３−１１４）、ＧＴＩの微生物またはＤＦＭのいずれかにより短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）に転換されたときにより有効なエネルギー源となるからである。
【０２２１】
それゆえ、植物生産物からのエネルギー値（例えば、小麦、コーン、オーツ、オオムギ、および穀物共生成物（副生成物）または単胃動物が利用しやすい混合穀物飼料）はキシラナーゼ（例えば、エンド−１、４−β−ｄ−キシラナーゼ）およびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの他の繊維分解酵素（セロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１７６およびＥ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、β−キシロシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７）、フェルロイルエステラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、α−アラビノフラノシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．５５）、ペクチナーゼ（例えば、エンドポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１５）、エキソポリガラクチュロナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６７）またはペクチン酸リアーゼ（Ｅ．Ｃ．４．２．２．２））、またはこれらの組み合わせ）を含むがこれらの限定されない）ならびに嫌気性条件でＮＳＰ分画ペントースからＣＦＡ生成することができる、および／またはＧＩＴの微生物集団を調節して放出された糖類から生成を高めることができる、および／またはＣ５糖類を利用することができる所定のＤＦＭと組み合わせることにより最適化することができる。このＤＦＭはキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）と組み合わせてそれらの代謝を調節して繊維の加水分解を相乗的に高める。（繊維分解性）酵素を生産することができるＤＦＭを用いると添加された酵素の追加的な利益を提供しこれらの酵素の利益を最大化することができる。
【０２２２】
それらの酵素活性について選択された所定のＤＦＭはグリカンによる細菌食物連鎖として考えることができる。特に本明細書に記載の選択されたＤＦＭは優先的に食物繊維を利用し初期グリカン消化工程を行ってより短い、より可溶性のポリサッカライドを他の微生物、例えば他の内性ＧＩＴ腸内菌叢のために放出する性質を有する。所定のＤＦＭは、生産性について選択された酵素（例えば、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で、少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）により放出されたグリカンに従ってそれらの代謝を調節して、酵素のみの組み合わせまたはＤＦＭのみの使用の場合と比較したときに、本明細書に記載の酵素およびＤＦＭ（ｓ）組み合わせの効果を改善する。
【０２２３】
理論により拘束されることを意図しないけれども、セルロース、ヘミセルロースおよびペクチン（植物材料）またはグリコサミノグリカン等の所定のグリカン源が豊富な本発明における飼料材料由来の植物細胞壁粒子はこれらの粒子に用意に結合することができそれらのグリカン成分を分解する所定のＤＦＭに攻撃されたグリカン分解物形態で消化管に入って行く。この初期のグリカン含有粒子の分解ののち、より可溶性のグリカンフラグメントが、盲腸に存在する第二のグリカンディグレーダーにより消化され、両タイプの分解物由来の短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）発酵生成物の遊離されたプールができる。
【０２２４】
ＳＣＦＡは炭水化物の発酵および／またはタンパク質の発酵およびＧＩＴにおける固有の嫌気性腸内菌叢による脱アミノ反応により生じるので、ＳＣＦＡ濃度は嫌気性微生物集の指標となりえる。ＳＣＦＡは腸、筋肉、腎臓、心臓、肝臓、および脳組織の代謝燃料として作用し、並びにＳａｌｍｏｎｅｌｌａおよびＥ．ｃｏｌｉ等の微生物に対する静菌および殺菌作用も提供する。
【０２２５】
非反芻動物における繊維の栄養価は主に、有効な繊維分解酵素（例えば、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ、好ましくは本明細書に記載の追加的な繊維分解酵素との組み合わせ）により、可溶化されたまたは分解された繊維の発酵を介する短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生成を通じて、提供されることができる。キシラナーゼの単独投与は動物の（特に非反芻動物）の飼料において、繊維成分を利用するには不十分である。植物ベース飼料成分中に化学的特徴の大きな群列が存在する。酵素の利用は、植物（飼料）材料の特性に依存する。例のみとして挙げるならば、小麦穀粒にはアラビノキシランが豊富に含まれるが、小麦ｍｉｄｄｌｉｎｇ（小麦粉砕物の生成物または副生成物）には、β−グルカンの含量が８ｇ−１ＤＭ（穀粒）から２６ｋｇ−１ＤＭまで増加する。
【０２２６】
キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）の複合体を含む酵素基質は共生成物（副生成物）ベースの飼料の栄養価を改善することができる。
【０２２７】
ＳＣＦＡは異なるエネルギー値を有し、幾つかはグルコースの前駆体として提供され、幾つかは腸の保全および健康の維持に寄与することができる。発明者らは本願明細書に記載の特定の組み合わせが動物のＧＩＴにおいて、価値のある／有用なＳＣＦＡの生産に優先的に向かわせることを発見した。
【０２２８】
理論により拘束されることを意図しないけれども、本願発明者らはＮＳＰが本発明のＤＦＭをキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）と組み合わせることにより、効果的に分解されることを発見した。更に、この所定の組み合わせが動物に対して大した栄養価を有さないＣ５糖類を放出させることが発見された。しかしながら、本願発明の組み合わせを用いると、ＧＩＴ中の微生物（または本発明のＤＦＭ）あるいは（本発明の（ＤＦＭの）組み合わせにより刺激される）内性繊維分解性腸内菌叢がこれらのＣ５糖類を有用なそして栄養学的に価値のある成分、即ち短鎖脂肪酸に変換させることができることが分かった。これらの短鎖脂肪酸は動物により利用される。従って、このシステムは動物の飼料原料の栄養価を改善する。
【０２２９】
有利なことには、本明細書に記載の直接給餌微生物、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つ追加的な繊維分解酵素）の組み合わせは、驚くべきことに、飼料添加用組成物、プレミックス、飼料、または飼料原料における繊維の分解を向上させ、動物の性能を改善する。特に、本発明の組み合わせは飼料の原材料の消化を改善して、栄養の生物利用価値（例えば栄養消化性）およびそれらの代謝エネルギーを改善する。
【０２３０】
ＤＦＭと酵素の処方
本発明のＤＦＭと酵素は、利用可能なＤＦＭと活性酵素とを処方に確実に含有させるのに好適な方法で処方できる。
【０２３１】
一実施形態では、ＤＦＭと酵素は乾燥粉末又は顆粒として処方され得る。
【０２３２】
乾燥粉末又は顆粒は、マイクロ成分ミキサーなど、当業者に既知の手法により製造できる。
【０２３３】
一部の実施形態ではＤＦＭ及び／又は酵素は被覆してよく、例えば、カプセル封入してよい。好適には、ＤＦＭと酵素は同一の被覆内に配合してよく又は同一のカプセル内にカプセル封入してよい。あるいは、いずれか又は両方の酵素を同一の被覆内に配合してもよく、あるいは同一のカプセル内にカプセル封入してもよい。または、１つまたは２つまたは３つまたは４つの酵素が同じ層ないにまたはカプセル内に製剤化されていてもよい。ＤＦＭは、１つ以上またはすべての酵素とは別にして被覆中に配合することもできる。ＤＦＭが芽胞を産生し得る一部の実施形態では、ＤＦＭには何ら被覆を行わなくてもよい場合もある。このような状況では、ＤＦＭの芽胞は、１つまたは２つまたは３つまたは４つの酵素と単純に混合してもよい。後者の場合、酵素を被覆してもよく、例えば、カプセル封入してもよく、例としては、１つ以上またはすべての酵素を被覆してもよく、例えばカプセル封入してもよい。酵素は酵素の混合物（すなわち、１つ以上、２つ以上、３つ以上または全部の酵素の混合物）としてカプセル封入することができ、あるいは酵素は別個に、例えば、単一の酵素としてカプセル封入することもできる。一部の好ましい実施形態では、両方の酵素を一緒に被覆してよく、例えば、一緒にカプセル封入してよい。
【０２３４】
一実施形態では、被覆は熱から酵素を保護し、熱保護材としてみなすことができる。
【０２３５】
一実施形態では、飼料添加用組成物は、参照により本願に援用される国際公開第２００７／０４４９６８号（ＴＰＴ顆粒剤と呼ばれる）に記載の通り、乾燥粉末又は顆粒剤中に配合される。
【０２３６】
一部の実施例では、粉末澱粉、又は石灰石などの希釈剤を用いて、ＤＦＭ（例えば、ＤＦＭの芽胞）を希釈してもよい。
【０２３７】
他の実施形態では、飼料添加用組成物は、塗布により、例えば、酵素の担体基材、例えば粉末小麦などへの噴霧により配合することができる。
【０２３８】
一実施形態では、本発明の飼料添加用組成物は、プレミックスとして配合され得る。例えば、プレミックスは１種以上の飼料成分、例えば、１種以上のミネラル及び／又は１種以上のビタミンを含み得る。
【０２３９】
一実施形態では、本発明での使用を目的としたＤＦＭ及び／又は酵素は、マルトデキストリン、石灰岩（炭酸カルシウム）、シクロデキストリン、小麦又は小麦成分、スクロース、デンプン、Ｎａ２ＳＯ４、タルク、ＰＶＡ、ソルビトール、安息香酸塩、ソルビン酸塩（ｓｏｒｂｉａｔｅ）、グリセロール、スクロース、プロピレングリコール、１、３−プロパンジオール、グルコース、パラベン、塩化ナトリウム、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、カルシウム、メタ重亜硫酸塩、ギ酸塩、及びこれらの混合物から選択される少なくとも１種の生理学的に許容できる担体とともに配合される。
【０２４０】
パッケージング
一実施形態では、本発明の飼料添加用組成物及び／又はプレミックス及び／又は飼料又は動物用飼料はパッケージ化される。
【０２４１】
好ましい一実施形態では、飼料添加用組成物及び／又はプレミックス及び／又は飼料又は動物用飼料は、袋、例えば紙袋によりパッケージ化される。
【０２４２】
代替的な実施形態では、飼料添加用組成物及び／又はプレミックス及び／又は飼料又は動物用飼料は、容器に密閉され得る。意味する好適な容器を使用できる。
副生成物
動物飼料工業では例えばバイオ燃料加工工程からの副生成物を動物に与えることが増えている（この形態での動物飼料は０乃至１０％が３０乃至６０％と極端に増えている）。これらの飼料提供コストは飼料投与コストを削減するためには好機であったが、同時に問題もあった。この副生成物はしばしば高繊維生成物（例えば、少なくとも４０％の繊維）である。その結果として、高繊維副生成物を含むもの（例えば、ＤＤＧＳ）は動物の成長や枝肉性質において負の影響を有する。動物の成長や枝肉性質に関するこの不の影響に加えて、栄養的な消化における変化について、肥育（例えば、豚の肥育）、貯蔵、および分解性について懸念が生じている。
【０２４３】
本明細書で用いる「副生成物」の語は例えば少なくとも約２０％または３０％の繊維を含む任意の繊維性植物性素材を意味する。
【０２４４】
１つの態様において、用語「副生成物」は高繊維含有飼料材料の任意の副生成物を意味する。
【０２４５】
１つの態様において、本明細書におけるこの副生成物は１つ以上の以下の生成物から選択される：トウモロコシ胚芽ミール、トウモロコシふすま、粉砕飼料、コーングルテンフィード、を蒸留乾燥穀物可溶物（ＤＤＧＳ）、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、グルテンミール、小麦ショート、小麦ミドリングまたはそれらの組み合わせ。
【０２４６】
１つの態様において、本発明の飼料原料はトウモロコシ胚芽ミール、トウモロコシふすま、粉砕飼料、コーングルテンフィード、を蒸留乾燥穀物可溶物（ＤＤＧＳ）、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、グルテンミール、小麦ショート、小麦ミドリングまたはそれらの組み合わせ等の繊維性副生成物を含む。
【０２４７】
１つの態様において、本発明のＤＦＭ、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）の組み合わせまたは本発明の飼料添加用組成物が投与される動物はトウモロコシ胚芽ミール、トウモロコシふすま、粉砕飼料、コーングルテンフィード、を蒸留乾燥穀物可溶物（ＤＤＧＳ）、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、グルテンミール、小麦ショート、小麦ミドリングまたはそれらの組み合わせ等の繊維性副生成物を含む飼料原料も給餌される。
分解および解重合
本発明のまたは本明細書に記載の酵素（または酵素を含む組成物）は不溶性アラビノキシラン（ＡＸｉｎｓｏｌ）または可溶性アラビノキシラン（ＡＸｓｏｌ）またはこれらの組み合わせ、またはＡＸｉｎｓｏｌの分解生成物を分解（解重合）するために用いられる。
【０２４８】
用語「解重合」または「分解」は加水分解と同義に用いる。
非デンプンポリサッカライド（ＮＳＰ）
通常の植物飼料成分の主要成分は炭水化物からなり、炭水化物は動物生産において重要な因子である。デンプンおよび糖などは分解しやすい栄養素であるが、野菜由来の炭水化物分画はセルロース、ヘミセルロース、ペクチン、ベータ−グルカンおよびリグニン等の非消化性（繊維性）成分を含む。
【０２４９】
リグニン以外のこれらの消化し難い成分は本明細書において非デンプンポリサッカライドといわれるグループとして分類される。
【０２５０】
１つの態様において、用語「繊維」は用語「ＮＳＰ」と互換的に使用される。
【０２５１】
ＮＳＰのグループ内には、ヘミセルロース自体は、キシラン、アラビナン、ガラクタン（ｇａｌａｔａｎｓ）、グルカンおよびマンナンからなる別のサブグループである。アラビノキシランは小麦およびコーンを含む、最も重要な飼料原料のいくつかにおける主要なＮＳＰ分画である。
アラビノキシラン（ＡＸ）
本明細書で用いる用語「アラビノキシラン」（ＡＸ）は鎖を介してキシロース単位に１α→２および／または１α→３結合によりランダムに結合されたＬ−アラビノフラノース（５員環形態でのＬ−アラビノース）を有するキシラン骨格（１、４−結合されたキシロース単位）からなるポリサッカライドを意味する。アラビノキシランは植物の一次細胞壁および二次細胞壁の両方に見られるヘミセルロースである。アラビノキシランは小麦、メイズ（コーン）、ライムギ、およびオオムギ等の穀物の外皮に見られる。
【０２５２】
アラビノキシラン（ＡＸ）は、植物細胞壁および組織の各種構造の接着結合ブロックとして作用し構造的強度と剛性を付与し、植物細胞壁とととても関係が深い。
【０２５３】
キシロースおよびアラビノース（アラビノキシランからなる）は両方ともペントースであるので、アラビノキシランは通常ペントサンとして分類される。
【０２５４】
ＡＸは小麦およびコーンを含む最も重要な飼料原材料のいくつかのおける主要な非デンプンポリサッカライド分画である。
【０２５５】
ＡＸの存在量、植物性材料内の位置、および分子構造が、存在する原料の栄養価を減少させ、飼料消化率に深刻な負の影響を及ぼすことになる。このことにより、ＡＸは動物生産効率を減少させる点において重要な抗栄養因子となった。
【０２５６】
ＡＸは相当量の水を保有することができ（水分保持能力として参照される）、このことが多くの製品において有利となる、高粘度となる可溶性アラビノキシランを生成させた。  水不溶性アラビノキシラン（ＡＸｉｎｓｏｌ）
水不溶性アラビノキシラン（ＡＸｉｎｓｏｌ）は植物性素材の乾燥分の大部分を占める水不抽出性アラビノキシラン（ＷＵ−ＡＸ）としても知られている。
【０２５７】
小麦において、ＡＸｉｎｓｏｌは乾燥分の６．３％を占める。小麦外皮および小麦ＤＤＧＳではＡＸｉｎｓｏｌは乾燥分（ｗ／ｗ）の約２０．８％または１３．４％を占める。
【０２５８】
ライムギでは、ＡＸｉｎｓｏｌは乾燥分の５．５％を占める。  
コーンでは、ＡＸｉｎｓｏｌは乾燥分の５．１％を占める。コーンＤＤＧＳでは、ＡＸｉｎｓｏｌは乾燥分の１２．６％を占める。
【０２５９】
ＡＸｉｎｓｏｌは飼料において栄養学的エントラップメントを起こす。デンプンおよびタンパク質等の消化性の良い栄養素の大部分が細胞壁材料のクラスター内に包埋されたままであるか、ＡＸの側鎖に結合しているかのいずれかである。これらの捕捉された栄養素は消化ができなくなり、のちの小腸での吸収もできなくなる。  
水溶性アラビノキシラン（ＡＸｓｏｌ）
水抽出性アラビノキシラン（ＷＥ−ＡＸ）としても知られている水可溶性アラビノキシラン（ＡＸｓｏｌ）はＡＸｓｏｌの水結合能力により粘度が高くなることから、バイオ燃料生成物中および／または麦芽製造および／または醸造でおよび／または飼料中で問題となっている。
【０２６０】
飼料中、ＡＸｓｏｌは過剰な水結合能力により、小腸内容物の粘度を相当高めることから、とくに微生物にとって抗栄養的効果を有する。粘度が高くなると、胆汁塩と消化酵素と飼料との適切な混合が阻害され、および／または栄養利用率と吸収が減少し、および／または後腸における発酵を刺激するので、飼料の消化および栄養利用に影響を与える。  
小麦において、ＡＸｓｏｌは乾燥分の１．８％を占める。小麦外皮および小麦ＤＤＧＳにおいて、ＡＸｓｏｌは乾燥分の約１．１％または４．９％（ｗ／ｗ）を占める。  
ライムギにおいて、ＡＸｓｏｌは乾燥分の３．４％を占める。
【０２６１】
オオムギにおいて、ＡＸｓｏｌは乾燥分の０．４−０．８％を占める。
【０２６２】
コーンにおいて、ＡＸｓｏｌは乾燥分の０．１％を占める。コーンＤＤＧＳにおいて、ＡＸｉｎｓｏｌは乾燥分の０．４％を占める。
【０２６３】
更に、しかしながら、植物性素材中に存在するＡＸｓｏｌの量に加えて、キシラナーゼが植物性素材中のＡＸｉｎｓｏｌを可溶化したとき、ペントサンおよび／または植物性素材のＡＸｓｏｌに寄与するオリゴマーが放出される。
【０２６４】
本明細書で開示されるキシラナーゼの１つの有意な利点は、キシラナーゼがＡＸｉｎｓｏｌを素早く効果的に可溶化されたオリゴマーおよび／またはペントサンに可溶化する能力を有しており、この酵素が粘度を高めずに、および／または粘度を低めてＡＸｉｎｓｏｌを可溶化することである。
【０２６５】
ＡＸｓｏｌの分解は粘度を低めることができる。
【０２６６】
ＡＸｓｏｌの分解は栄養素を放出することができる。
粘度
本発明はＡＸｓｏｌの水結合能力が望まれない粘度の上昇を引き起こす任意のプロセスにおいて粘度を減らすために用いることができる。
【０２６７】
本発明はＡＸｓｏｌの分解（解重合）によりまたはこのポリマーの分解（解重合）による粘度に低減および／または  ＡＸｉｎｓｏｌの可溶化により生成されたオリゴマーに関する。
【０２６８】
本発明では、粘度の低減は本発明の（または本明細書で記載の）キシラナーゼを含む１つのサンプルを本発明の（または本明細書で記載の）キシラナーゼを含まない比較可能な他のサンプルと比較することにより計算することができる。
【０２６９】
本発明のキシラナーゼの粘度低減プロファイルを市販の標準キシラナーゼのものと比較することで酵素の性能が証明される。目的は市販の指標酵素と比較される酵素性能の改善である。それぞれの製品のベンチマーク酵素は以下の実施例で提供される。
【０２７０】
本発明の１つの態様において、本明細書に記載のキシラナーゼは粘度低減剤である。
【０２７１】
飼料
本発明の酵素または飼料添加用組成物は、飼料として、又は飼料の調製に使用できる。
【０２７２】
本明細書において、用語「飼料」は、「動物用飼料」と同義に使用される。
【０２７３】
飼料は、使用及び／又は適用態様及び／又は投与態様に応じ、液体又は固体形態であり得る。
【０２７４】
１つの態様において、本発明の動物用飼料は、高繊維飼料原材料、および／またはトウモロコシ胚芽ミール、トウモロコシふすま、粉砕飼料、コーングルテンフィード、蒸留乾燥穀物可溶物（ＤＤＧＳ）、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、グルテンミール、小麦ショート、小麦ミドリングまたはそれらの組み合わせ等の、少なくとも１つの高繊維飼料原材料の少なくとも１つの副生成物を含む。
【０２７５】
１つの態様において、本発明のＤＦＭ、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）の組み合わせまたは本発明の飼料添加用組成物が投与される動物はトウモロコシ胚芽ミール、トウモロコシふすま、粉砕飼料、コーングルテンフィード、を蒸留乾燥穀物可溶物（ＤＤＧＳ）、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、グルテンミール、小麦ショート、小麦ミドリングまたはそれらの組み合わせ等の繊維性  副生成物を含む飼料原料も給餌される。
好ましくは、１つの態様において、家禽飼料の穀物成分は小麦、大麦とライムギ、小麦粉砕物、小麦ふすま、オーツ麦、オーツ麦外皮のいずれかであり、一方で、野菜成分は飼料が小麦−オオムギを主成分として含み、トリの給餌について栄養が満たされるように処方された、キャノーラ、菜種粕等の他のタンパク質成分を含むまたは含まない大豆油粕でよい。
本発明の飼料は溶液の形態で、または固形であってよく、使用および／または適用モードおよび／または投与モードに依存する。
【０２７６】
飼料として使用する際、又は試料の調製に使用する際、本発明の組成物は、次の：栄養学的に許容できる担体、栄養学的に許容できる希釈剤、栄養学的に許容できる賦形剤、栄養学的に許容できる補助剤、栄養学的有効成分のうちの１つ以上と組み合わせて使用できる。
【０２７７】
好ましい実施形態では、本発明の飼料添加用組成物を飼料成分と混合して動物用飼料を製造する。
【０２７８】
本明細書で使用するとき、用語「飼料成分」は、動物用飼料の全て又は一部を意味する。「動物用飼料の一部」は、動物用飼料に含まれる成分のうちの１つ、あるいは動物用飼料に含まれる成分のうちの１つ以上、例えば、２、又は３、又は４を意味し得る。一実施形態では、用語「飼料成分」は、プレミックス又はプレミックス成分を包含する。
【０２７９】
好ましくは、飼料は、飼い葉又はそれらの混合物、配合飼料又はそれらのプレミックスであり得る。一実施形態では、本発明の飼料添加用組成物は、配合飼料又は配合飼料成分と混合してよく、あるいは配合飼料のプレミックス、又は飼い葉、飼い葉成分、若しくは飼い葉プレミックスと混合してよい。
【０２８０】
本明細書で使用するとき、用語「飼い葉」は、動物に提供される（動物がそれを求めて探しまわるというものではない）意味する食物を意味する。飼い葉には、切断済みの植物を包含する。
【０２８１】
用語「飼い葉」には、干し草、わら、貯蔵牧草、圧縮及びペレット化飼料、油及び混合飼料、並びに同様に発芽穀類及びマメ科植物が包含される。
【０２８２】
飼い葉は次の植物：コーン（メイズ）、アルファルファ（ルーサン）、大麦、シャジクソウ（ｂｉｒｄｓｆｏｏｔ  ｔｒｅｆｏｉｌ）、アブラナ属、シャウ・モエラー（Ｃｈａｕ  ｍｏｅｌｌｉｅｒ）、ケール、菜種（キャノーラ）、ルタバガ（スウェーデンカブ）、カブ、ツメクサ、タチオランダゲンゲ、ムラサキツメクサ、サブタレニアンクローバー、シロツメクサ、イネ科草本、偽エンバク（ｆａｌｓｅ  ｏａｔ  ｇｒａｓｓ）、ウシノケグサ、ギョウギシバ、スズメノチャヒキ、ヒース・グラス（ｈｅａｔｈ  ｇｒａｓｓ）、牧草（牧草地及び草原の草が自然と混ぜ合わされたもの）、カモガヤ、ホソムギ、オオアワガエリ、コーン（メイズ）、アワ、エンバク、サトウモロコシ、大豆、樹木（まぐさ用に刈り込まれた枝葉）、小麦、及びマメ科植物のうちの１種以上から得られる。
【０２８３】
用語「配合飼料」は、粉末、ペレット、ナッツ、ケーキ、又はクランブルの形態の市販の飼料を意味する。配合飼料は、各種原材料及び添加剤を配合したものであってよい。これらの配合物は、対象とする動物の求める具体的な必要量に従って配合される。
【０２８４】
配合飼料は、１日に必要とされる栄養分をすべて提供する完全飼料、飼料の一部（タンパク質、エネルギー）を提供する濃厚飼料、又はミネラル及びビタミンなどのその他の微量栄養素のみを提供する栄養補助剤であってよい。
【０２８５】
配合飼料には、コーン、大豆、サトウモロコシ、オーツ麦、小麦、及び大麦などの飼料用穀類が主成分として使用される。
【０２８６】
本明細書で記載される通りに好適なプレミックスは、ビタミン、ミネラル、化学保存料、抗生物質、発酵産物、及びその他の必須成分などの微量成分からなる組成物であり得る。一般的に、プレミックスは、市販の飼料に配合するのに好適な組成物である。
【０２８７】
本発明の意味する動物用飼料は、ａ）シリアル類、例えば、小粒穀物（例えば、小麦、大麦、ライ麦、エンバク、及びこれらの組み合わせ）、及び／又は大粒穀物（例えば、コーン又はサトウモロコシなど）など、ｂ）シリアル類を原料とする製品、例えば、コーングルテンミール、コーンふすま、粉砕飼料、コーングルテンフィード、蒸留乾燥穀物粕（ＤＤＧＳ）、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、グルテンミール、小麦ふすま、小麦ショート（小麦  ｓｈｏｒｔｓ）、粗びき小麦粉、またはこれらの組み合わせ、ｃ）タンパク質類、例えば、大豆、ヒマワリ、落花生、ルピナス、エンドウ豆、ソラマメ、綿、セイヨウアブラナ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉骨粉飼料、ポテトタンパク質、乳清、コプラ、ゴマなどの供給源から得られるタンパク質など、ｄ）植物資源及び動物資源から得られる油類及び脂肪類、ｅ）ミネラル類及びビタミン類、からなる群から選択される１種以上の飼料材料を含み得る。
【０２８８】
１つの態様において、動物飼料はコーン、ＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ等の）、小麦、小麦ブラン、またはこれらの組み合わせを含む。
１つの態様において、飼料成分は、コーン、ＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ等の）、小麦、小麦ブラン、またはこれらの組み合わせを含む。
【０２８９】
１つの態様において、動物飼料はコーン、ＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ等の）、またはこれらの組み合わせを含むか、これらからなる。
１つの態様において、飼料成分は、コーン、ＤＤＧＳ（コーンＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ）等の）またはこれらの組み合わせである。
【０２９０】
本発明の動物用飼料は、コーン及び大豆ミール、又はコーン及び高脂肪分大豆又は小麦ミール又はヒマワリミールを、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、又は少なくとも６０重量％含有し得る。
【０２９１】
本発明の動物飼料は、約５乃至約４０％のコーンＤＤＧＳを含む。家禽について、平均的な動物飼料は約７乃至２％のコーンＤＤＧＳを含む。豚について、動物飼料は平均で５乃至４０％コーンＤＤＧＳを含む。
本発明の動物飼料は、単一穀物としてコーンを含んでいてもよく、この場合、動物飼料は約３５％乃至約８５％のコーンを含む。
【０２９２】
例えば、コーンと小麦のような混合穀物を含む動物飼料において、動物飼料は少なくとも１０％のコーンを含む。
【０２９３】
これに加え、又はこれに代替して、本発明の動物用飼料には、少なくとも１種の高繊維飼料材料及び／又は少なくとも１種の高繊維飼料材料の少なくとも１種の副産物を含有させて、動物用高繊維飼料を提供することもできる。高繊維飼料材料の例としては、小麦、大麦、ライ麦、オーツ麦、穀類由来の副産物、例えば、コーングルテンミール、湿質固形物、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）、小蒸留乾燥穀物可溶物（ＤＤＧＳ）、麦ふすま、粗びき小麦粉、小麦ショート、コメヌカ、もみ殻、オーツ麦のもみ殻、パーム核、及び柑橘パルプが挙げられる。一部のタンパク質資源：ヒマワリ、ルピナス、ソラマメ、及び綿などの資源から得られたタンパク質も、高繊維であるとみなすことができる。
【０２９４】
１つの態様において、本発明の動物飼料は、例として、可溶性の蒸留乾燥穀物（ＤＤＧＳ）とくにコーンＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ）、ウエットケーキ、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）特にコーンＤＤＧ（ｃＤＤＧ）、小麦ふすま、および小麦からなる群より選択される、少なくとも１つの繊維高含有物質および／または繊維高含有物質の少なくとも１つの副生成物を含む。
【０２９５】
１つの態様において、本発明の動物飼料は、例として、可溶性の蒸留乾燥穀物（ＤＤＧＳ）とくにコーンＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ）、小麦ふすま、および小麦からなる群より選択される、少なくとも１つの繊維高含有物質および／または繊維高含有物質の少なくとも１つの副生成物を含む。
【０２９６】
本発明では、飼料は、次の：ペレット、ナッツ又は（ウシ用）ケーキなどの配合飼料及びプレミックス、農作物又は農作物廃棄物：コーン、大豆、サトウモロコシ、オーツ麦、大麦、コーン茎葉、コプラ、麦わら、まぐさ、サトウダイコン廃棄物；魚粉；刈りたての牧草類及びその他の飼料用植物；肉骨粉飼料；糖蜜；油かす及び圧搾ケーキ；オリゴ糖；保存加工した飼料植物：まぐさ及び貯蔵牧草；海草；全粒の又は圧砕、製粉などを施した種子及び穀類；発芽粒及び豆類；酵母エキス、のうちの１つ以上であり得る。
【０２９７】
本発明では、一部の実施形態において用語、「飼料」には、ペットフードも包含する。ペットフードは、ドッグフード又はキャットフードなど、ペットによる消費が意図された植物性又は動物性物質である。ドッグフード及びキャットフードなどのペットフードは、犬用キブルなどの乾燥形態、又はウェットタイプの缶詰のいずれかであってもよい。キャットフードには、アミノ酸のタウリンを含有させてもよい。
【０２９８】
本発明では、一部の実施形態において用語、「飼料」には、魚用飼料も包含する。一般的に、魚用飼料は、飼育している魚の健康を良好に保つのに必要とされる多量栄養素、微量栄養素、及びビタミンを含有している。魚用飼料は、フレーク、顆粒、又は錠剤形態で有り得る。顆粒形態の飼料のうち、一部の迅速に沈降する飼料は、多くの場合、大型の魚又は水槽底部で生活する種に使用される。一部の魚用飼料は、観賞魚の発色を人工的に改良する目的で、βカロテン又は性ホルモンなどの添加剤も含有する。
【０２９９】
本発明では、一部の実施形態において用語、「飼料」には、鳥用飼料も包含する。鳥用飼料には、バードフィーダーに用いられるもの及びペットの鳥に給餌するためのものの両方の飼料が包含される。典型的な鳥用サンプルは多様な種子から構成されるが、獣脂（牛脂又は羊脂）を含有させてもよい。
【０３００】
本明細書で使用するとき、用語「接触」は、本発明の酵素（または酵素を含む組成物）が間接的に又は直接的に製品（例えば、飼料）に適用されていることを意味する。使用することのできる本開示の適用例としては、限定するものではないが、飼料添加用組成物を材料として含む製品を処理する工程、飼料添加用組成物を製品と混合して直接適用する工程、飼料添加用組成物を製品表面に噴霧する工程、又は製品を飼料添加用組成物の調合液に浸漬する工程、が挙げられる。
【０３０１】
一実施形態では、本発明の飼料添加用組成物は、好ましくは製品（例えば、動物用飼料）と混合させる。別の方法としては、飼料添加用組成物は、動物用飼料の乳濁液又は原材料に含有させてもよい。
【０３０２】
一部の用途に関しては、組成物を作用させる／組成物で処理する製品表面上に又は表面に対して利用可能であるように、組成物を製造することが重要である。これにより、組成物に次の望ましい特性：性能利益のうちの１つ以上を付与する。
【０３０３】
本発明の酵素（または酵素を含む組成物）は、ＤＦＭ及び酵素の量を調整して、製品（例えば、動物用飼料、又は動物用飼料の原材料）に点在、被覆、及び／又は含浸させることができる。
【０３０４】
好ましくは、飼料添加用組成物は単に動物飼料の給餌と同時に動物に投与される。
【０３０５】
好ましくは、本発明の酵素（または酵素を含む組成物）は、約７０℃、約８５℃、又は約９５℃までの熱処理に対して熱安定性である。熱処理は、最大で約１分、約５分、約１０分、約３０分、約６０分まで実施することができる。用語「熱安定性」は、特定温度への加熱前に添加剤中に存在した／添加剤中で活性であった酵素成分及び／又はＤＦＭのうちの少なくとも約７５％が、室温への冷却後も存在する／活性であることを意味する。好ましくは、特定温度への加熱前に添加剤中に存在しかつ活性であった酵素成分及び／又はＤＦＭのうちの少なくとも約８０％が、室温への冷却後も存在しかつ活性である。
【０３０６】
特に好ましい実施形態では、本発明の酵素（または酵素を含む組成物）を均質化させて、粉末を製造する。
【０３０７】
代替的な好ましい実施形態では、本発明の酵素（または酵素を含む組成物）は、参照により本案件に組み込まれる国際公開第２００７／０４４９６８号（ＴＰＴ顆粒剤と呼ばれる）に記載の通りに顆粒に配合する。
【０３０８】
他の好ましい実施形態では、飼料添加用組成物を顆粒に配合する場合、顆粒は、タンパク質コアを被覆する防水塩を含む。このような塩コーティングには、熱耐性の向上、貯蔵安定性の向上、及びそのままでは酵素に対し悪影響を及ぼすその他の飼料添加物からの保護、という利点がある。
【０３０９】
好ましくは、塩コーティングに使用される塩は、２０℃下で、６０％超の一定湿度と、０．２５超の水分活性を有する。
【０３１０】
好ましくは、塩コーティングは、Ｎａ２ＳＯ４を含む。
【０３１１】
本発明の酵素（または酵素を含む組成物）の製造法は、更に、粉末をペレット化する工程も含み得る。粉末は、当該技術分野において知られているその他の成分と混合させることもできる。粉末、又は粉末を含む混合物に、ダイを通過させ、得られたストランドを望ましい長さで好適なペレットに切断する。
【０３１２】
任意に、ペレット化工程は、ペレットの製造前の蒸気処理、又は調整工程を包含し得る。粉末を含む混合物は、調整槽に、例えば、蒸気噴射装置を備えるミキサーに入れることができる。混合物を調整槽内で、規定の温度まで、例えば６０〜１００℃に加熱する。典型的な加熱温度は、７０℃、８０℃、８５℃、９０℃、又は９５℃である。滞留時間は、例えば、５秒、１０秒、１５秒、３０秒、１分、２分、５分、１０分、１５分、３０分、及び１時間などのように、秒単位から分単位、及び更には時間単位で変化させることができる。
【０３１３】
本発明の酵素（または酵素を含む組成物）は、意味する適切な飼料材料に添加するのに好適であることは理解されるであろう。
【０３１４】
異なる動物種は異なる動物用飼料を必要とすること、並びに同種の動物であってさえも、動物の飼育目的に応じ、異なる動物用飼料を必要とする場合があることは、当業者により理解されるであろう。
【０３１５】
場合により、動物用飼料には、カルシウムなどの追加のミネラル、及び／又は追加のビタミン類を含有させることもできる。
【０３１６】
好ましくは、動物用飼料は、コーン大豆ミール混合物である。
【０３１７】
他の態様では、動物用飼料の製造方法を提供する。動物用飼料では、典型的には、最初に原材料を安定な粒経に挽き、次に適切な添加剤と混合する。次に、動物用飼料を水で溶くか、又はペレット化することができる。後者の場合、典型的には、目的とする高さまで温度を上昇させ、次に飼料をダイに通過させて、特定の大きさのペレットを製造する手法を包含する。ペレットを冷却させる。続いて、脂肪、及び酵素などの液性添加物を添加してもよい。動物用飼料の製造には、特に、少なくとも蒸気の使用を包含し得る適切な技術により、ペレット化の前に押し出す又は膨張させることを含む、追加工程を包含させてもよい。
【０３１８】
動物用飼料は、家禽（例えば、ブロイラー、産卵鶏、ブロイラ種鶏、七面鳥、鴨、ガチョウ、水鳥）、ブタ（全年齢種）、ペット（例えば、イヌ類、ネコ類）、又は魚などの単胃動物用の動物用飼料であってよく、好ましくは、動物用飼料は家禽用である。
【０３１９】
一実施形態では、動物用飼料は産卵鶏用のものではない。
【０３２０】
ほんの一例として、鶏、例えば、ブロイラー用の鶏用動物飼料は、下表に掲載される１種以上の成分を、下表に掲載される日齢％（％ａｇｅｓ）で含み得る。
2015528705.tif 000018
【０３２１】
ほんの一例として、ブロイラーなどの鶏用の飼料の仕様は、下表に記載の通りのものであってよい。
2015528705.tif 000019
【０３２２】
ほんの一例として、産卵鶏用飼料は、下表に掲載される１種以上の成分を、下表に掲載される日齢％で含み得る。
2015528705.tif 000020
【０３２３】
ほんの一例として、産卵鶏用の飼料の仕様は、下表に記載の通りのものであってよい。
2015528705.tif 000021
【０３２４】
ほんの一例として、七面鳥用飼料は、下表に掲載される１種以上の成分を、下表に掲載される日齢％で含み得る。
2015528705.tif 000022
【０３２５】
ほんの一例として、七面鳥用の飼料の仕様は、下表に記載の通りのものであってよい。
2015528705.tif 000023
【０３２６】
ほんの一例として、子豚用の飼料は、下表に掲載される１種以上の成分を、下表に掲載される日齢％で含み得る。
2015528705.tif 000024
【０３２７】
ほんの一例として、子豚用の飼料の仕様は、下表に記載の通りのものであってよい。
2015528705.tif 000025
【０３２８】
ほんの一例として、育成期／出荷期の豚用の飼料は、下表に掲載される１種以上の成分を、下表に掲載される日齢％で含み得る。
2015528705.tif 000026
【０３２９】
ほんの一例として、育成期／仕上げ期の豚用の飼料の仕様は、下表に記載の通りのものであってよい。
2015528705.tif 000027
【０３３０】
ウエットケーキ、蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）および蒸留乾燥穀物可溶化物（ＤＤＧＳ）
ウエットケーキ、蒸留乾燥穀物および蒸留乾燥穀物可溶化物は、穀物蒸留工業において用いられる方法により穀物または穀物混合物酵母発酵から得られたエチルアルコールを除去した後に得られた生成物である。
【０３３１】
蒸留からの蒸留廃液（例えば、水、穀物、酵母細胞等の残留物を含む）を分離して「固形」の部分と液体部分とに分ける。
この固形部分が「ウエットケーキ」と呼ばれ、動物飼料等に用いることができる。
液体部分は（部分的に）蒸発させてシロップ（可溶化物）にする。
ウエットケーキを乾燥させたものが蒸留乾燥穀物（ＤＤＧ）である。
ウエットケーキをシロップと一緒に乾燥させたものが（可溶化物）、蒸留乾燥穀物可溶化物である（ＤＤＧＳ）。
ウエットケーキは搾乳場や肉牛飼育場で用いられる。
乾燥されたＤＤＧＳは家畜の（例えば、乳牛、肉牛および豚）飼料および家禽飼料に用いられる。
コーンＤＤＧＳは乳牛にとってとても好適なタンパク質源である。
コーングルテンミール
１つの側面において、コーンの副生成物  がコーングルテンミール（ＣＧＭ）である。
ＣＧＭはトウモロコシ製粉工業の粉末状副生成物である。ＣＧＭは例えば、動物飼料において実用性がある。ＣＧＭはペットフード、家畜飼料、および家禽飼料等の飼料の安価なタンパク質源として用いられている。ＣＧＭはアミノ酸システインの好適な供給源であるが、リジンについては他のタンパク質とバランスを取らなければならない。
飼料添加用組成物
本発明の飼料添加用組成物、及び他の成分及び／又は他の成分を含む家畜飼料は、任意の好適な形態で使用できる。
【０３３２】
本発明の飼料添加用組成物は、固体又は液体製剤の形態で、又はこれらの代替形態で使用できる。固体製剤例としては、粉末、ペースト、巨丸剤、カプセル、ペレット、タブレット、細粉、及び可溶性のもの、噴霧乾燥させたもの、又は凍結乾燥させものであり得る顆粒が挙げられる。液体製剤例としては、限定するものではないが、水溶液、有機溶液、又は有機溶媒水溶液、懸濁液、及び乳濁液が挙げられる。
【０３３３】
一部の用途では、本発明のＤＦＭ又は飼料添加用組成物は、飼料と混合してもよく、又は飲用水に投与してもよい。一実施形態では、水に含有させる際の投与範囲は、約１×１１つの側面において、本発明は、飼料添加用組成物を製造する方法に関し、該方法はキシラナーゼ、β−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）および本明細書に記載のＤＦＭを飼料に利用可能な単体、希釈剤、または賦形剤と混合する工程、および（任意で）パッケージングする工程を含む。
プレミックス
動物飼料および／または飼料添加用組成物は少なくとも１つのミネラルおよび／または少なくとも１つのビタミンとブレンドしてもよい。このようなブレンドされた組成物は本明細書においてプレミックスとも呼ばれる。
形態
本発明の飼料添加用組成物、及び他の成分及び／又は他の成分を含む家畜飼料は、意味する好適な形態で使用できる。
【０３３４】
本発明の飼料添加用組成物は、固体又は液体製剤の形態で、又はこれらの代替形態で使用できる。固体製剤例としては、粉末、ペースト、巨丸剤、カプセル、ペレット、タブレット、細粉、及び可溶性のもの、噴霧乾燥させたもの、又は凍結乾燥させものであり得る顆粒が挙げられる。液体製剤例としては、限定するものではないが、水溶液、有機溶液、又は有機溶媒水溶液、懸濁液、及び乳濁液が挙げられる。
【０３３５】
一部の用途では、本発明のＤＦＭ又は飼料添加用組成物は、飼料と混合してもよく、又は飲用水に投与してもよい。一実施形態では、水に含有させる際の投与範囲は、約１×１０３ＣＦＵ／動物／日〜約１×１０１０ＣＦＵ／動物／日、及びより好ましくは約１×１０７ＣＦＵ／動物／日である。
【０３３６】
好適な形態例としては、粉末、ペースト、巨丸剤、ペレット、タブレット、丸剤、カプセル、腔坐剤、溶液又は懸濁液のうちの１つ以上が挙げられ、これらには、即効性、徐放性、修飾性（ｍｏｄｉｆｉｅｄ−）、持続性、周期性、拍動性、又は放出制御性投与用の着香剤又は着色剤を含有させることもできる。
【０３３７】
例えば、本発明の組成物を固体形態、例えば、ペレット形態で使用する場合、組成物には、賦形剤（例えば、微結晶セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性のリン酸カルシウム及びグリジンなど）、崩壊剤（例えば、デンプン（好ましくは、コーン、ポテト、又はタピオカ澱粉）、澱粉グリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及び特定の珪酸塩複合体など）、造粒結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン及びアカシアなど）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルク）のうちの一種以上を含有させることもできる。
【０３３８】
成形の際に使用するにあたって栄養学的に許容できる担体例としては、例えば、水、塩溶液、アルコール、シリコーン、ワックス、ワセリン、植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、リポソーム、糖類、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、界面活性剤、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリド及びジグリセリド、ペトロエトラル脂肪酸エステル（ｐｅｔｒｏｅｔｈｒａｌ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｅｓｔｅｒｓ）、ヒドロキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【０３３９】
成形に好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。
【０３４０】
水懸濁液及び／又はエリキシル剤の場合には、本発明の組成物は、各種甘味料又は着香料、着色剤又は染料、乳化剤及び／又は懸濁剤、並びに希釈剤（例えば、水、プロピレングリコール及びグリセリン、及びこれらの組み合わせ）と組み合わせることができる。
【０３４１】
多くの場合、非吸湿性乳清は、ＤＦＭ用（特に、微生物系ＤＦＭ）の担体として使用され、ＤＦＭの増殖開始に良好な培地である。
【０３４２】
ペーストを含有している微生物性ＤＦＭは、植物油及び不活性なゲル化材料と配合することもできる。
【０３４３】
穀類副産物を担体とし、これに真菌製品を配合することもできる。
【０３４４】
一実施形態では、好ましくは、本発明の飼料添加用組成物は、国際公開第２００５／１２３０３４号に教示される微小粒子などの微小粒子系の形態ではない。
【０３４５】
投与
本発明のＤＦＭ及び／又は飼料添加用組成物は、単回投与用に設計することができ、又は日単位での供給を目的として設計することもできる。
【０３４６】
本発明と組み合わせて使用する組成物（及び組成物に含まれる各成分）の最適量は、処理する製品、及び／又は組成物を製品に接触させる方法、及び／又は製品の使用目的に応じて異なる。
【０３４７】
組成物に使用するＤＦＭ及び酵素の量は、有効性を得るために、及びかかる組成物を含有している飼料を給与された動物の性能を向上させるのに十分な有効性を保持させるために、十分な量でなくてはならない。このような有効時間の長さは、少なくとも製品（例えば、飼料添加用組成物、又は飼料添加用組成物を含有している飼料）が利用される時間だけ延長させるべきである。
【０３４８】
他の成分との組み合わせ
本発明での使用を目的としたＤＦＭ及び酵素は、他の成分と組み合わせて使用できる。したがって、本発明は、組み合わせにも関係する。本明細書において、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ（および任意で少なくとも１つの追加的な繊維分解酵素）と組み合わせたＤＦＭを、「本発明の試料添加用組成物」として呼ぶことができる。
【０３４９】
好適な態様において、「本発明の飼料添加用組成物」はキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼおよび本明細書に記載の追加的な繊維分解酵素（例えば、好ましくは少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つの繊維分解酵素）と組み合わせたＤＦＭを含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０３５０】
更なる好適な態様において、「本発明の飼料添加用組成物」はキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼおよび本明細書に記載の追加的な繊維分解酵素（例えば、好ましくは少なくとも４つ、好ましくは少なくとも５つの繊維分解酵素）と組み合わせたＤＦＭを含む（または必ず含む、またはからなる）。
【０３５１】
本発明の組み合わせは、本発明の飼料添加用組成物（又はこれらの構成成分の１種以上）と、動物による消費に好適でありかつ消費者に薬用効果又は生理学的効果を提供し得る他の成分と、を含む。
【０３５２】
一実施形態では、好ましくは「他の成分」は、更なる酵素又は更なるＤＦＭではない。
【０３５３】
成分はプレバイオティクスであってもよい。典型的には、プレバイオティクスは、難消化性糖質（オリゴ糖類又は多糖類）、又は糖アルコールであり、上部消化管内では分解されず、すなわち吸収されない。市販品として用いられており、本発明に有用である既知のプレバイオティクスとしては、イヌリン（フラクトオリゴ糖、又はＦＯＳ）、及びトランス型ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ又はＴＯＳ）が挙げられる。好適なプレバイオティクスとしては、パラチノースオリゴ糖、大豆オリゴ糖、アルギン酸塩、キサンタン、ペクチン、ローカストビーンガム（ＬＢＧ）、イヌリン、グアーガム、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、難消化性デンプン、ラクトスクロース（ｌａｃｔｏｓａｃｃｈａｒｏｓｅ）、ラクツロース、ラクチトール、マルチトール、マルトデキストリン、ポリデキストロース（すなわち、Ｌｉｔｅｓｓｅ（登録商標））、ラクチトール、ラクトスクロース（ｌａｃｔｏｓｕｃｒｏｓｅ）、大豆オリゴ糖、パラチノース、イソマルトオリゴ糖、グルコオリゴ糖及びキシロオリゴ糖が挙げられる。
【０３５４】
一実施形態では、本発明は、本発明の飼料添加用組成物（又は飼料添加用組成物の１種以上の成分）と、プレバイオティクスとの組み合わせに関する。他の実施形態では、本発明は、ＤＦＭと、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼおよびアミラーゼおよびフィターゼおよびプロテアーゼ及びプレバイオティクスとを組み合わせて含む（又はこれらから本質的になる、又はこれらからなる）飼料添加用組成物に関する。
【０３５５】
プレバイオティクスは、本発明の飼料添加用組成物（又はこれらの成分）と同時に（例えば、一緒に混合することにより、又は同一の若しくは異なる経路により送達することにより同時に）、又は連続的に（例えば、同一の若しくは異なる経路により送達することにより連続的に）投与することができる。
【０３５６】
本発明の組み合わせの他の成分としては、ポリデキストロース、例えば、Ｌｉｔｅｓｓｅ（登録商標）、及び／又はマルトデキストリン、及び／又はラクチトールが挙げられる。場合によりこれらのその他の成分を飼料添加用組成物に添加することで、乾燥加工を補助し、かつＤＦＭの生存を助けることもできる。
【０３５７】
他の好適な成分の更なる例としては、次の：増粘剤、ゲル化剤、乳化剤、結合剤、結晶調整剤、甘味剤（人口甘味剤を包含する）、レオロジー改質剤、安定化剤、抗酸化剤、染料、酵素、担体、賦形剤、添加剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、懸濁剤、崩壊剤、造粒結合剤などが挙げられる。これらのその他の成分は天然素材であってもよい。これらのその他の成分は化学的手法及び／又は酵素的手法を用い調製してもよい。
【０３５８】
一実施形態では、ＤＦＭ及び／又は酵素はカプセル封入することができる。一実施形態では、飼料添加用組成物、及び／又はＤＦＭ、及び／又は酵素は、参照により本案件に組み込まれる国際公開第２００７／０４４９６８号（ＴＰＴ顆粒剤と呼ばれる）に記載される通りの乾燥粉末又は顆粒として配合される。
【０３５９】
一実施形態では、本発明での使用を目的としたＤＦＭ及び／又は酵素は、１種以上の脂質と組み合わせて使用することもできる。
【０３６０】
例えば、本発明での使用を目的としたＤＦＭ及び／又は酵素は、１種以上の脂質ミセルと組み合わせて使用することもできる。脂質ミセルは、単純脂質ミセル又は脂質ミセル複合体であってよい。
【０３６１】
脂質ミセルは、脂質及び／又は油などの配向性両親媒性分子の集合体であってよい。
【０３６２】
本明細書で使用するとき、用語「増粘剤又はゲル化剤」は、不混和性の液体の液滴、空気、又は不溶性固体のうちのいずれかの粒子の移動を緩慢にさせるか又は予防することにより、分離を防ぐ製品を指す。個々の水和分子の粘性が上昇し、分離が緩慢になった場合に、増粘がもたらされる。水和分子が結合して３次元ネットワークを形成し、粒子を捕捉し不動化させた場合に、ゲル化がもたらされる。
【０３６３】
本明細書で使用するとき、用語、「安定化剤」は、経時変化から製品（例えば、食品）を保護する成分又は成分の組み合わせとして定義される。
【０３６４】
本明細書で使用するとき、用語「乳化剤」は、エマルションの分離を予防する成分（例えば、食品成分）を指す。エマルションは、２種の不混和性の物質のうちの他方が液滴形態で存在し、他方に含有されている状態を指す。エマルションは、水中油型（油が液滴又は分散相となり、水が連続相となる）、又は油中水型（水が分散相となり、油が連続相となる）で構成される場合がある。液中気体の状態である発泡体、及び液中固体の状態である懸濁液も、乳化剤を使用して安定化させることができる。
【０３６５】
本明細書で使用するとき、用語「結合剤」は、物理的又は化学的反応により製品を互いに結合させる成分（例えば、飼料成分）を指す。例えば、「ゲル化」中に水が吸収されることで、結合効果が得られる。しかしながら、結合剤は、油などの他の液体を吸収し、製品中に保持する場合もある。典型的には、本発明の文脈において、結合剤は、例えば、焼成製品、ペストリー、ドーナッツ、及びパンなどの、固体又は低湿分製品に使用されることになる。
【０３６６】
「担体」又は「賦形剤」は、ＤＦＭ及び／又は酵素の投与に好適な材料を意味し、このような材料としては、例えば、当該技術分野で知られている意味する液体、ゲル、溶媒、液体希釈剤、又は可溶化剤などの意味する材料が挙げられる。これらの材料は、非毒性であり、かつ組成物に関係する意味する成分と有害な様式で相互作用しない。
【０３６７】
１つの態様において、本発明の飼料添加用組成物、プレミックス、飼料、または動物飼料は、少なくとも１種のマルトデキストリン、石灰岩（炭酸カルシウム）、シクロデキストリン、コムギ又はコムギ成分、スクロース、デンプン、Ｎａ２ＳＯ４、タルク、ＰＶＡ、ソルビトール、安息香酸塩、ソルビン酸塩（ｓｏｒｂｉａｔｅ）、グリセロール、スクロース、プロピレングリコール、１、３−プロパンジオール、ブドウ糖、パラベン、塩化ナトリウム、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、カルシウム、メタ重亜硫酸塩、ギ酸塩、及びこれらの混合物から選択される少なくとも１種の生理学的に許容できる担体と予備混合される。
【０３６８】
賦形剤の例としては：微結晶セルロース及びその他のセルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性のリン酸カルシウム、グリジン、デンプン、乳糖、及び高分子量ポリエチレングリコールのうちの１種以上が挙げられる。
【０３６９】
崩壊剤の例としては：デンプン（好ましくはコーン、ポテト、又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及び特定の珪酸塩複合体のうちの１種以上が挙げられる。
【０３７０】
造粒結合剤の例としては：ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、マルトース、ゼラチン、及びアカシアのうちの１種以上が挙げられる。
【０３７１】
滑沢剤の例としては：ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルクのうちの１種以上が挙げられる。
【０３７２】
希釈剤の例としては：水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン、並びにこれらの組み合わせのうちの１種以上が挙げられる。
【０３７３】
他の成分は、同時に（例えば、これらを一緒に混合した場合、又は更には別の経路により送達した場合でも）、又は連続的に（例えば、これらを別の経路により送達した場合）使用できる。
【０３７４】
好ましくは、本発明の飼料添加用組成物を他の成分と混合した場合にもＤＦＭは生存活性を保持する。
【０３７５】
一実施形態では、好ましくは、本発明の飼料添加用組成物はクロム又は有機クロムを含まない。
【０３７６】
一実施形態では、好ましくは、本発明の飼料添加物はソルビン酸を含有しない。
【０３７７】
濃縮物
本発明での使用を目的としたＤＦＭは、濃縮物の形態であってもよい。典型的には、これらの濃縮物は、実質的に高濃度のＤＦＭを含む。
【０３７８】
本発明の飼料添加用組成物には、生細菌成分（コロニー形成単位、ＣＦＵ）を含ませることができ、含有量は、少なくとも１０４ＣＦＵ／ｇ（好適には、少なくとも１０５ＣＦＵ／ｇ、例えば、少なくとも１０６ＣＦＵ／ｇ、少なくとも１０７ＣＦＵ／ｇ、少なくとも１０８ＣＦＵ／ｇ）〜約１０１０ＣＦＵ／ｇ（又は更には約１０１１ＣＦＵ／ｇ若しくは約１０１２ＣＦＵ／ｇ）の範囲である。
【０３７９】
ＤＦＭが濃縮物の形態である場合、本発明の飼料添加用組成物には生細菌を少なくとも１０９ＣＦＵ／ｇ〜約１０１２ＣＦＵ／ｇ、好ましくは少なくとも１０１０ＣＦＵ／ｇ〜約１０１２ＣＦＵ／ｇの範囲で含ませることができる。
【０３８０】
濃縮形態の粉末、顆粒及び液体組成物を水で希釈するか、あるいは水又はその他の好適な希釈剤（例えば、ミルク又は鉱物油若しくは植物油などの好適な増殖培地）に再懸濁するかして、使用に際して組成物を用意することもできる。
【０３８１】
本発明のＤＦＭ又は飼料添加用組成物、あるいは濃縮形態の本発明の組み合わせは、当該技術分野で知られている手法により製造することができる。
【０３８２】
本発明の一態様では、酵素又は飼料は、濃縮形態の組成物と接触している。
【０３８３】
本発明の組成物は、当該技術分野で知られている手法により噴霧乾燥又は凍結乾燥させてもよい。
【０３８４】
噴霧乾燥工程を用い粒子を製造するための典型的な加工法は、固体材料を適切な溶媒に溶解させること（例えば、発酵培地でのＤＦＭの培養）を伴う。別の方法としては、材料を非溶媒に懸濁又は乳化させて懸濁液又はエマルションを生成することもできる。場合により、この段階で、他の成分（上述のもの）、又は例えば、抗菌剤、安定化剤、染料、及び乾燥工程の助剤などの要素を添加してもよい。
【０３８５】
次に溶液を霧化して、液滴の微細な霧を生成する。この液滴を直ちに乾燥チャンバに入れ、ガスと接触させる。液滴から乾燥ガス中に溶媒を蒸発させ、液体を固化させることで、粒子を生成する。次に粒子を乾燥ガスから分離し、回収する。
【０３８６】
対象とする動物
本明細書で使用するとき、用語「対象とする動物（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、本発明の飼料添加用組成物、又は本発明の飼料添加用組成物を含む動物用飼料を、投与される又は投与されている動物（ａｎｉｍａｌ）を意味する。
【０３８７】
本明細書で使用するとき、用語「対象とする動物（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、動物（ａｎｉｍａｌ）を意味する。好ましくは、対象は、例えば、家畜類（ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ）、又は家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｅｄ  ａｎｉｍａｌ）（例えば、ペット）などの哺乳類、鳥類、魚類、又は甲殻類である。
【０３８８】
一実施形態では、「対象とする動物」は家畜類である。
【０３８９】
本明細書で使用するとき、用語「家畜類」は、意味する飼育動物を指す。好ましくは、家畜類は、雌牛又は雄牛（仔牛を含む）、家禽、豚（子豚を含む）、家禽（ブロイラー、鶏及び七面鳥を含む）、鳥類、魚類（サーモン、タラ、トラウト及びコイ科の魚（例えば、鯉）などの淡水魚、並びに海産魚（例えば、シーバス）を含む）、甲殻類（エビ、イガイ、及びホタテ貝など）、馬（競走馬を含む）、羊（子羊を含む）のうちの１種以上である。
【０３９０】
一実施形態では、用語「家畜類及び／又は家禽及び／又は鶏」には産卵鶏は包含されない。
【０３９１】
他の実施形態では、「対象とする動物」は家畜又はペット又は動物園などの環境で飼育されている動物である。
【０３９２】
本明細書で使用するとき、用語「家畜」又は「ペット」、又は「動物園などの環境で飼育されている動物」は、イヌ科の動物（例えば、犬）、ネコ科の動物（例えば、猫）、げっ歯目（例えば、モルモット、ラット、マウス）、鳥類、魚類（淡水魚及び海産魚を含む）、並びに馬などの意味する関係性のある動物を指す。
【０３９３】
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）生産
本明細書で用いる用語「短鎖脂肪酸」は揮発性脂肪酸だけでなく揮発性乳酸を含む。１つの態様において、ＳＣＦＡは酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、２−メチル酪酸および乳酸、好ましくはプロピオン酸および／または酪酸からなる群より選択される。
【０３９４】
１つの態様において、ＳＣＦＡ酪酸および／またはプロピオン酸である。
短鎖脂肪酸（特に揮発性脂肪酸、例えば、プロピオン酸および酪酸、および乳酸）は以下の方法を用いて解析される。
【０３９５】
揮発性脂肪酸および乳酸、例えば、ＳＣＦＡのクロマトグラフ解析は前述のようにビバル酸を内部標準として用いる評価用模擬サンプルを使用して行われる（Ｏｕｗｅｈａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、２００９  Ｆｅｂ；１０１（３）：３６７−７５）。酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、２−メチル酪酸、および乳酸の濃度が決定される。
【０３９６】
性能
本明細書で使用するとき、「動物性能」は、飼料要求率及び／又は動物の体重増加により、並びに／あるいは飼料要求率により、並びに／あるいは飼料に含まれる栄養分の消化性（例えば、アミノ酸の消化性）及び／又は飼料に含まれるエネルギー又は代謝エネルギーの消化性により、並びに／あるいは窒素保持により、決定することができる。
【０３９７】
好ましくは「動物性能」は、飼料要求率及び／又は動物の体重増加により、並びに／あるいは飼料要求率により決定される。
【０３９８】
「動物性能の向上」により、本発明の飼料添加用組成物を飼料に使用した場合に、かかる飼料添加用組成物を含有していない飼料と比較して、飼料要求率の向上、及び／又は体重増加の向上、及び／又は飼料要求率の減少、及び／又は飼料に含まれる栄養分若しくはエネルギーの可消化性の向上、及び／又は窒素保持の向上が得られることを意味する。
【０３９９】
好ましくは、「動物性能の向上」により、飼料要求率の向上及び／又は体重増加の上昇及び／又は飼料要求率の減少が意味される。
【０４００】
本明細書で使用するとき、用語「飼料要求率」は、一定期間の間、動物に飼料を適宜又は規定量で給与した場合に生じる、体重増加の程度を指す。
【０４０１】
「飼料要求率の向上」は、本発明の飼料添加用組成物を飼料に使用することで、飼料取り込み単位あたりの体重増加率が、既存の飼料添加用組成物を使用した場合と比較して向上していることを意味する。
【０４０２】
飼料要求率（ＦＣＲ）
本明細書で使用するとき、用語「飼料要求率」は、体重を特定量だけ増加させるために動物に給与する飼料量を指す。
【０４０３】
飼料要求率の向上とは、飼料要求率が低くなることを意味する。
【０４０４】
「飼料要求率の減少」又は「飼料要求率の向上」は、飼料に飼料添加用組成物を使用した場合に、動物の体重を特定量だけ増加させるために動物に給餌する必要のある飼料量が、かかる飼料添加用組成物を含有していない飼料を同量使用した場合と比較して少なくなることを意味する。
【０４０５】
栄養素消化性
本明細書で使用するとき、栄養素消化性は、胃腸管又は胃腸管の特定の分節（例えば、小腸）から消失する栄養素の割合を意味する。栄養素消化性は、対象とする動物に投与した量と、対象とする動物の糞便に分泌された量、又は胃腸管の特定の分節、例えば回腸において消化物中に残存している量との差として測定することができる。
【０４０６】
本明細書で使用するとき、栄養素消化性は、期間中の排泄物の総回収量を用いて、栄養素の摂取量と排出量の差から測定することができ、あるいは動物により吸収されず、かつ胃腸管又は胃腸管分節において消失した栄養素の量が研究者により算出可能な不活性マーカーを用い、測定することができる。このような不活性マーカーとしては、二酸化チタン、酸化クロム、又は酸不溶性灰分が挙げられる。消化能は、飼料に含まれる栄養素のパーセンテージとして、又は飼料に含まれる栄養素の質量単位あたりの可消化栄養素の質量単位として、表すことができる。
【０４０７】
本明細書で使用するとき、栄養素消化性能は、デンプン消化性、脂肪消化性、タンパク質消化性、ミネラル消化性、及びアミノ酸の可消化性能を包含する。
【０４０８】
本明細書で使用するとき、「エネルギー消化率」は、飼料に含まれる総エネルギーから糞便に含まれる総エネルギーを減じるか、あるいは消費された飼料に含まれる総エネルギーから動物の胃腸管の特定の分節、例えば回腸に残存している総エネルギーを減じるかして算出された値を意味する。本明細書で使用するとき、「代謝エネルギー」は、見かけの代謝エネルギーを指し、消費された飼料に含まれる総エネルギーから、糞便、尿、及び消化に由来するガスに含まれる総エネルギーを減じた値を意味する。エネルギー消化率及び代謝エネルギーは、栄養素消化率の測定法と同様の方法を用い、飼料の代謝エネルギーを算出するために窒素排出について適切な補正を行って、摂取総エネルギーと、糞便に分泌された又は胃腸管の特定の分節に存在する消化物に残存する総エネルギーとの差として測定することができる。
【０４０９】
窒素保持
本明細書で使用するとき、「窒素保持」は、対象とする動物が、食物由来の窒素を体重として保持する能力を意味する。窒素の排出が日常摂取量を超過した場合に負の窒素バランスが生じ、多くの場合、筋肉量の減少が見られる。正の窒素バランスは、多くの場合に筋肉の成長と関連付けられ、これは成長期の動物において顕著である。
【０４１０】
窒素保持は、期間中の糞尿の総回収量を用いて、窒素摂取量と窒素排出量の差から測定することができる。窒素排出量には、飼料由来の未消化タンパク質、内因性のタンパク質性分泌物、微生物タンパク質、及び尿窒素が包含されることは理解されるであろう。
【０４１１】
生存率
本明細書で使用するとき、用語「生存率」は、対象とする動物が生存し続ける率を意味する。用語「生存率の向上」は、「斃死率の低下」と言い換えることができる。
【０４１２】
枝肉歩留まり及び精肉歩留まり
本明細書で使用するとき、用語「枝肉歩留まり」は、食肉処理に関係する商業工程又は試験工程後に得られる枝肉が生体重に占める割合を意味する。用語「枝肉」は、頭部、尾部、肢部、及び羽又は皮を取り除き食用に食肉処理された動物の肉体を意味する。本明細書で使用するとき、用語「精肉歩留まり」は、食肉が生体重に占める割合、あるいは特定の切り出し肉が生体重に占める割合を意味する。
【０４１３】
体重増加
本発明は、更に、対象とする動物、例えば、家禽又はブタにおいて、体重増加率を向上させる方法を提供し、この方法は、本発明の飼料添加用組成物を含む動物用飼料を、対象とする動物に給与する工程を含む。
【０４１４】
「体重増加の向上」は、飼料添加用組成物を含む飼料の給与を受けた動物の体重増加が、この飼料添加用組成物を含まない飼料の給与を受けた動物の体重増加と比較して向上していることを指す。
【０４１５】
他の性質
１つの態様において、本発明の飼料添加用組成物、飼料、動物飼料、または本願発明の方法は動物の免疫反応を調節（例えば改善）しない。
【０４１６】
更なる態様において、本発明の飼料添加用組成物、飼料、動物飼料、または本願発明の方法は動物の生存率（例えば、死亡率の減少）を改善しない。
【０４１７】
好適な態様において、本発明の飼料添加用組成物、飼料、動物飼料、または本願発明の方法は動物の免疫反応を調節（例えば改善）しないし、生存率（例えば、死亡率の減少）を改善しない。
【０４１８】
プロバイオティクス
一部の態様では、本発明の組成物に含まれるＤＦＭは、プロバイオティクス培養効果を発揮し得ると考えられている。本発明の組成物に更にプロバイオティクス及び／又はプレバイオティクスを添加することも同様に本発明の範囲内に含まれる。
【０４１９】
本明細書において、プレバイオティクスは、
「有益な細菌のうち１種又は限定種の増殖及び／又は活性を選択的に刺激することで宿主に有効に作用する難消化性食品成分」である。
【０４２０】
本明細書で使用するとき、用語「プロバイオティクス培養物」は、例えば、必要数だけ経口摂取又は局所適用された場合に、宿主生物に有利に作用する、すなわち、１種以上の実証可能な健康効果を宿主生物に付与する、生細菌（例えば、細菌又は酵母など）であると定義する。プロバイオティクスは、１箇所以上の粘膜表面において、微生物のバランスを改善し得る。例えば、粘膜表面は腸、尿路、気道又は皮膚であり得る。プロバイオティクス摂取の下限又は上限は存在しないものの、日用量として、少なくとも１０６〜１０１２、好ましくは少なくとも１０６〜１０１０、好ましくは１０８〜１０９ｃｆｕを用いることが、対象とする動物において有利な健康効果を得るのに有効であることが示唆されている。
【０４２１】
単離
一態様では、本発明で使用される好適な酵素は、単離形態であってよい。用語「単離」は、酵素が、少なくとも１種のその他の成分を少なくとも実質的に不含であることを意味し、少なくとも１種のその他の成分は、酵素と、自然界において天然に関係するものであり、天然に見られる通りのものである。本発明の酵素は、本来であればこの物質が関連付けられていたであろう１種以上の汚染物質を実質的に不含の形態で提供され得る。したがって、例えば、混入する可能性のある１種以上のポリペプチド及び／又は核酸分子を実質的に含まない。
【０４２２】
精製
一態様では、好ましくは本発明に従う酵素及び／又はＤＦＭは精製された形態である。用語「精製」は、酵素及び／又はＤＦＭが高濃度で存在していることを意味する。酵素及び／又はＤＦＭは、組成物中に存在する主成分として望ましいものである。好ましくは、酵素及び／又はＤＦＭは、考慮中の総組成物に対し少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％、又は少なくとも約９８％の濃度で存在し、この濃度は、乾燥重量／乾燥重量基準で決定される。
【０４２３】
本明細書に記載の意味する特徴を組み合わせて本発明の範囲内に包含させるよう本発明の実施例を組み合わせ得ることも本発明の範囲内であると見なされる。特に、細菌に関係する何らかの治療上の効果が付随して発揮され得ることも本発明の範囲内のものであると見なされる。
【０４２４】
アミノ酸配列
本発明の範囲には、本明細書に定義される通りの特性を有する酵素のアミノ酸配列も包含される。
【０４２５】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸配列」は、用語「ポリペプチド」及び／又は用語「タンパク質」と同義である。一部の例では、用語「アミノ酸配列」は、用語「ペプチド」と同義である。一部の例では、用語「アミノ酸配列」は、用語「酵素」と同義である。
【０４２６】
アミノ酸配列は、好適な供給源から調製／単離することができ、あるいは合成することができ、あるいは組み換えＤＮＡ法により調製することができる。
【０４２７】
本発明に包含されるタンパク質は、他のタンパク質、特に酵素と組み合わせて使用することもできる。したがって、本発明は、タンパク質の組み合わせも範囲とし、この組み合わせには、本発明のタンパク質／酵素、及びその他のタンパク質／酵素が含まれ、その他のタンパク質／酵素は、本発明のその他のタンパク質／酵素であってよい。
【０４２８】
好ましくは、アミノ酸配列は、本発明の範囲に関係する場合、及び本発明の範囲に包含される場合、ネイティブな酵素ではない。この点において、用語「ネイティブな酵素」は、そのネイティブな環境に存在し、かつネイティブなヌクレオチド配列により発現されたものである場合、完全な酵素を意味する。
【０４２９】
配列同一性又は配列相同性
本発明は、本明細書に定義される特性を有するポリペプチドのアミノ酸配列と、又はこのようなポリペプチドをコードしている意味するヌクレオチド配列と、ある程度の配列同一性又は配列相同性を有する、配列の使用も包含する（本明細書において、以降「相同性配列」として参照する）。本明細書において、用語「相同性」は、参照している配列が、対象とするアミノ酸配列及び対象とするヌクレオチド配列と一定の相同性を有することを意味する。本明細書において、用語「相同性」は、「同一性」と等しい。
【０４３０】
相同性アミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列は、機能活性を保持し及び／又は酵素活性を増大させるポリペプチドを提供及び／又はコードしなくてはならない。
【０４３１】
本発明に関して用いる用語「ヌクレオチド配列」はゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、およびＲＮＡを含む。好ましくは、ＤＮＡを意味し、より好ましくは本発明をコードするｃＤＮＡ配列を意味する。
本文脈では、相同性配列は、幾つかの態様において、対象とする配列と少なくとも９７、％同一性である、好ましくは少なくとも９８又は９９％同一性であるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を含有する。
【０４３２】
幾つかの態様において、相同性配列は、本発明のポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列またはアミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、好ましくは少なくとも９０又は９５％同一であるヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を包含する。
【０４３３】
一般的には、相同性配列は、対象とする配列の活性部位などをコードする配列と同様の配列を含む。相同性は、類似度（すなわち、アミノ酸残基が類似する化学特性／機能を有する程度）の観点から考慮することもできるものの、本発明の文脈では、配列同一性の観点で相同性を表現するのが好ましい。
【０４３４】
１つの態様において、相同配列は少なくとも１つまたはいくつかの付加、欠失、および／または置換を対象配列に対して有するアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を含む。１つの態様において、本発明はアミノ酸配列が本明細書に記載されているタンパク質または親タンパク質のアミノ酸において１つまたは２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのアミノ酸あるいは１０または１０以上のアミノ酸のような多数のアミノ酸の置換、欠失、または付加による親由来のタンパク質であり親タンパク質の活性を有するタンパク質に関する。
【０４３５】
一般的には、相同性配列は、対象とする配列の活性部位などをコードする配列と同様の配列を含む。相同性は、類似度（すなわち、アミノ酸残基が類似する化学特性／機能を有する程度）の観点から考慮することもできるものの、本発明の文脈では、配列同一性の観点で相同性を表現するのが好ましい。
相同性比較は、目視検査により実施することができ、あるいはより一般的には、すぐに利用できる配列比較プログラムの補助により実施することができる。これらの市販のコンピュータプログラムでは、２つ以上の配列の相同性（％）を算出することができる。
【０４３６】
相同性（％）は、連続する配列間で算出することができ、すなわち１つの配列を他の配列と整列させ、一方の配列に含まれる各アミノ酸を、他方の配列に含まれる対応するアミノ酸と一度に一残基ずつ直接比較することで算出することができる。この手法は「ギャップなし」アラインメントと呼ばれる。通常、このようなギャップなしアライメントは、残基数が比較的少ない場合にのみ実施される。
【０４３７】
この手法は非常に単純でかつ着実な手法であるものの、例えば、本来であれば同一である配列対において、１箇所に挿入又は欠失が入っている場合を考慮に入れることができず、以降のアミノ酸残基はアラインメントから除外されることになり、したがって、グローバルアラインメントを実施した場合に、相同性（％）が大幅に低下する可能性がある。これらを踏まえ、ほとんどの配列比較法は、全体的な相同性スコアに対して重すぎるペナルティーを設けずに、可能性のある挿入及び欠失を考慮に入れ、最適なアラインメントを生成するよう設計されている。この手法は、配列アラインメント時に「ギャップ」を挿入して、局所的な相同性を最大化させることで実施される。
【０４３８】
しかしながら、これらのより複雑な手法は各ギャップに対して「ギャップペナルティ」を割り当てるものであり、同数の同一のアミノ酸に関し可能な限りギャップが少なくなる−比較する２つの配列間の関連性がより大きく反映される−ような配列アラインメントは、ギャップを多く含むアラインメントと比較してより高いスコアが付けられるようになる。「アフィンギャップコスト」は、一般的に用いられる手法であり、この手法では、ペナルティは、ギャップの伸長に対して比較的重く設定され、ギャップ中で続く各残基に対しては軽く設定される。この手法は、最も一般的に使用されているギャップスコアリング系である。当然のことながら、ギャップペナルティが高い場合には、ギャップ数がより少なくなるよう最適化されたアラインメントが得られることになる。ほとんどのアラインメントプログラムは、ギャップペナルティを変更することができる。しかしながら、配列比較の際にこのようなソフトウェアを用いる場合、デフォルト値を使用することが好ましい。
【０４３９】
したがって、配列の最大相同性％を計算するには、まず第一にギャップペナルティを考慮に入れて最適アラインメントを行うことが必要とされる。このようなアラインメントを実施するのに好適なコンピュータプログラムはＶｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）である。配列比較を実行するソフトウェアの例としては、限定するものではないが、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４ｔｈ  Ｅｄ−Ｃｈａｐｔｅｒ  １８を参照されたい）、ＢＬＡＳＴ  ２（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９  １７４（２）：２４７〜５０；ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９  １７７（１）：１８７〜８及びｔａｔｉａｎａ＠ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい）、ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９０  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０３〜４１０）、及びＡｌｉｇｎＸが挙げられる。オフライン及びオンライン検索には、少なくともＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ  ２及びＦＡＳＴＡを利用することができる（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ  １９９９、ｐａｇｅｓ  ７〜５８〜７〜６０を参照されたい）。
【０４４０】
最終的な相同性（％）は、同一性の観点から評価され得るものの、アラインメント方法は、典型的には、全か無かの対比較に基づくものではない。その代わりに、一般的にはスケールを用いた類似性スコアマトリックスが用いられ、各一対比較に対し、科学的類似性又は進化距離に基づきスコアが割り当てられる。一般的に用いられるこのようなマトリックス例としては、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスが挙げられ、この場合、プログラムにはＢＬＡＳＴ向けのデフォルトのマトリックスが適する。ベクターＮＴＩプログラムには、概して、一般的なデフォルト値、又は提供された場合にはカスタムされたシンボル比較表のいずれかが用いられる（更なる詳細については使用者マニュアルを参照されたい）。一部の用途に関しては、ベクターＮＴＩパッケージにはデフォルト値を用いることが好ましい。
【０４４１】
別の方法としては、相同性（％）は、ＣＬＵＳＴＡＬ．（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＤＧ  ＆  Ｓｈａｒｐ  ＰＭ（１９８８）、Ｇｅｎｅ  ７３（１）、２３７〜２４４）に類似するアルゴリズムに基づき、ベクターＮＴＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）における多重配列アラインメントによる特性を用い、算出することができる。
【０４４２】
ソフトウェアにより最適アラインメントを生成すれば、相同性（％）、好ましくは配列同一性（％）を算出することができる。ソフトウェアは、典型的には、配列比較の一部としてこの算出を行い、計算結果を生成する。
【０４４３】
配列同一性を決定する場合にはギャップペナルティを用いるべきであり、好ましくは、ペアワイズアラインメントに関し以降のパラメータを用いる：
2015528705.tif 000028
【０４４４】
2015528705.tif 000029
【０４４５】
一実施形態では、ギャップペナルティ及びギャップ伸長については上記の通りの設定を用い、ＣＬＵＳＴＡＬを使用することができる。
【０４４６】
好適には、アミノ酸配列に対する同一度は、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基、好ましくは少なくとも３０個の連続するアミノ酸残基、好ましくは少なくとも４０個の連続するアミノ酸残基、好ましくは少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基、好ましくは少なくとも６０個の連続するアミノ酸残基、好ましくは少なくとも１００個の連続するアミノ酸残基にわたって決定される。
【０４４７】
好適には、ヌクレオチド配列に対する同一度は、配列全長にわたって決定することができる。
【０４４８】
配列はわずかな変化を生じるが機能的に等しくなるアミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有する。意図的なアミノ酸置換は基質への二次的な結合活性が維持されている限り、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒性において類似する残基においてなされる。例えば、負電荷ミノ酸はアスパラギン酸およびグルタミン酸を含み、正電荷アミノ酸はリジンおよびアルギニンを含み、および類似の親水性値を有する非荷電極性頭部基を有するアミノ酸はロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、及びチロシンを含む。
【０４４９】
保存的置換  は例えば以下の表に従って行われる。第２列および好ましくは第３列の同じ行の同じブロック内のアミノ酸で互いに置換することができる：
2015528705.tif 000030
【０４５０】
本発明は塩基性残基を塩基性残基で、酸性残基を酸性残基で、極性残基を極性残基で置換するような、相同置換（置換と置き換えが両方とも本明細書で用いられ、既存のアミノ酸残基が代替的な残基で交換されることを意味する）も包含する。
１つのクラスの残基から他のまたは代替的にオルニチン（以下Ｚという）、ジアミノ酪酸オルニチン（以下、Ｂと称する）、ノルロイシンオルニチン（以下、Ｏと称する）、フェニルアラニン、チエニルアラニン、ナフチルアラニンとグリシン等の非天然のアミノ酸への置換である、非相同置換も生じる。
【０４５１】
非天然アミノ酸：アルファ＊およびアルファ−二置換＊アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸＊、乳酸＊、トリフルオロチロシン＊、ｐ−Ｃｌ−フェニルアラニン＊、ｐ型のＢｒ−フェニルアラニン＊、ｐ型Ｉ−フェニルアラニン＊、Ｌアリル−グリシン＊、ＳＳ−アラニン＊、Ｌ−アミノ酪酸＊、Ｌ−アミノ酪酸＊、Ｌ−アミノ酸イソ酪酸＊、Ｌ−アミノカプロン酸＃、７−アミノヘプタン酸＊、Ｌ−メチオニンスルホン＊、Ｌ−ノルロイシン＊、Ｌノルバリン＊、ｐ−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン＊、Ｌ−ヒドロキシプロリン、Ｌ−チオプロリン＊ような天然アミノ酸のハロゲン化物誘導体、４−メチルＰｈｅ＊、ペンタメチル−Ｐｈｅ＊、Ｌ−Ｐｈｅ（４−アミノ）＃、Ｌ−のＴｙｒ（メチル）＊、Ｌ−Ｐｈｅ（４−イソプロピル）＊、Ｌ−チック（１、２、３、４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシル酸）＊、などのフェニルアラニン（Ｐｈｅ）のメチル誘導体、ＬジアミノプロピオンおよびＬ−Ｐｈｅ（４−ベンジル）＊によっても置換は生じる。記号＊は誘導体の曾疎水性を示すために、前述の議論（相同または非相同置換に関する）の目的のために用いた。ここで、＃は誘導体の親水性質を示すために用い、＃＊は両親媒性の特徴を示すために用いる。
【０４５２】
変異体のアミノ酸配列はグリシンまたはβ−アラニン残基等のアミノ酸スペーサーのほかに、メチル、エチル、またはプロピル基等のアルキル基を含み、任意の２つのアミノ酸残基の間に挿入される好適なスペーサー基を含む。ペプトイド形態の１つ以上のアミノ酸残基を含む、更なるバリエーション形態は当業者によく理解されるであろう。疑義の生じるのを避けるために、「ペプトイド形態」はα−炭素置換基がα−炭素よりも残基の窒素原子上にある変異アミノ酸残基を意味する。ペプトイド形態のペプチドを調製する方法は当業者に知られており、例えば、Ｓｉｍｏｎ  ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ（１９９２）８９（２０）、９３６７−９３７１およびＨｏｒｗｅｌｌ  ＤＣ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９５）１３（４）、１３２−１３４に記載がある。
【０４５３】
１つの態様において、本発明に用いるキシラナーゼは少なくとも１つのアミノ酸の保存置換を有する本明細書に記載のポリペプチドを含む。
【０４５４】
好ましくは、それらは少なくとも２つの、少なくとも３つの、または少なくとも４つの、または少なくとも５つの保存置換である。
【０４５５】
好ましくは、それらは１２個未満、１０個未満、または８個未満、または５個未満のような１５個未満の保存置換である。
【実施例】
【０４５６】
実施例１：キシラナーゼ、β−グルカナーゼおよび直接給与微生物を含む小麦ベース飼料を給餌されたブロイラー鶏の反応
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。給餌はヤングブロイラー鶏（０乃至２１日齢）のエネルギーと栄養についてバランスのとれるように調製した（表１、給餌１）。この飼料の穀物成分は、小麦、オオムギ、ライムギ、小麦粉砕物、小麦ふすま、またはこれらの組み合わせのいずれかであり、タンパク質成分は大豆粕であり、脂肪源は菜種油であった。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を含み、この飼料はマッシュとして提供した。基礎飼料を分割して、各酵素とＤＦＭとを添加して表２に記載のような実験飼料を調製した。
【０４５７】
各サプリメントはプレミックス中に配合されており、このミックスを飼料調製物に添加した。ＤＦＭを含む飼料ははじめに混合され、各飼料間の相互汚染を防止するためにミキサーを洗浄する。各バッチのはじめ、中央、および終わりから各処置飼料のサンプルを収集して、混合し、動物試験を始める前に飼料中に酵素活性とＤＦＭがあることを確認した。各処置飼料からの追加のサンプルは解析に必要になるまで−２０℃±２℃で維持し保管した。
【０４５８】
オスのブロイラー鶏（Ｒｏｓｓ３０８）を民間の孵化場から１日齢で購入した。この鶏の重量を個々に測定し、ケージ当たりの鶏の平均体重が同じになるように、３２個の保育ケージに分け（１つのケージに８羽）。４つの処置飼料（表２）をランダムに８つのケージそれぞれに割り当てた。１２日目に、鶏を育成ケージに移した。保育ケージおよび育成ケージにおける鶏当たりの割り当てスペースはそれぞれ５３０および６４０ｃｍ２であった。保育ケージおよび育成ケージはコントロールされた環境下に収容されていた。第一週は温度を３１℃に維持し、そのあと次第に温度を下げて第三週の終わりまでに２１℃にした。鶏に２０時間蛍光照明を浴びせ、餌場と水場に自由に行けるようにした。飼料を０乃至２１日まで与えた。２１日齢で試験が終わるまで体重を週毎に記録した。死亡率は毎日記録した。ＳＡＳのＧＬＭ試験法を用いてデータを解析した。
表１：ブロイラーの小麦−基礎飼料の飼料成分（％として記載）
2015528705.tif 000031
【０４５９】
表２：試験計画
2015528705.tif 000032
【０４６０】
１酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼＡｘｔｒａ(R)ＸＢ）はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎから入手可能なものである。
２酵素を分泌する能力について選択された３つのバチルス株に基づく直接給餌微生物はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｓにより提供され、株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）およびを同じ割合で含む。
結果
表３：ヤングブロイラー鶏の成長能力におけるキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ベース直接給与微生物の影響
2015528705.tif 000033
【０４６１】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０４６２】
キシラナーゼ、繊維分解酵素（β−グルカナーゼ）およびバチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づくＤＦＭの組み合わせを給餌された鶏は対照よりも早く成長し、数字の上では酵素のみを給餌した鶏よりも成績がよかった。２１日齢における体重および体重増加量は数字の上ではキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびＤＦＭを３つのやり方で組み合わせて給餌された鶏において、対照よりも成績がよかった。
ＩＩ．栄養およびエネルギー保持／消化率
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。小麦−オオムギに基づく飼料はヤングブロイラー鶏（０乃至２１日齢）のエネルギーと栄養についてバランスのとれるように処方した（表１、給餌ＩＩ）。二酸化チタンを０．３０％処方して飼料成分の保持を決定するために用いた。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を含み、この飼料はマッシュとして提供した。基礎飼料を分割して、各酵素とＤＦＭとを添加して表４に記載のような実験飼料を調製した。各サプリメントは予め配合されており、この混合物を流して各飼料間の相互汚染を防止した。各バッチのはじめ、中央、および終わりから各処置飼料のサンプルを収集して、混合し、動物試験を始める前に飼料中に酵素活性とＤＦＭがあることを確実にした。各処置飼料からの追加のサンプルは解析に必要になるまで−２０℃±２℃で維持し保管した。
表４：試験計画
2015528705.tif 000034
【０４６３】
１酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼＡｘｔｒａ(R)ＸＢ）はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎから入手可能なものである。
【０４６４】
２酵素を分泌する能力について選択された３つのバチルス株に基づく直接給餌微生物はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｓにより提供され、株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８  （ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、  ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５  （ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）およびを同じ割合で含む。
【０４６５】
オスのブロイラー鶏（Ｒｏｓｓ３０８）を民間の孵化場から１日齢で購入した。この鶏の重量を個々に測定し、ケージ当たりの鶏の平均体重が同じになるように、３２個の保育ケージに分け（１つのケージに８羽）。４つの処置飼料（表２）をランダムに８つのケージそれぞれに割り当てた。１２日目に、鶏を育成ケージに移した。保育ケージおよび育成ケージにおける鶏当たりの割り当てスペースはそれぞれ５３０および６４０ｃｍ２であった。保育ケージおよび育成ケージはコントロールされた環境下に収容されていた。第一週は温度を３１℃に維持し、そのあと次第に温度を下げて第三週の終わりまでに２１℃にした。鶏に２０時間蛍光灯の光を浴びせ、餌場と水場に自由に行けるようにした。飼料を０乃至２１日まで与えた。２１日齢で試験が終わるまで体重を週毎記録した。死亡率は毎日記録した。ＳＡＳのＧＬＭ法を用いてデータを解析した。
この実験はエネルギーおよび栄養消化率測定のための排泄物サンプルを得るためのケージトライアルを含む。
【０４６６】
一日齢のオスのブロイラー鶏を（Ｒｏｓｓ３０８）民間の孵化場から購入した。鶏の体重を到着時に測定し、体重で階層化し、ケージ当たりの鶏の平均体重が同じになるように、３０ケージに分けた（１ケージ当たり５羽）。４つの処置飼料をランダムに６回の反復ケージに割り当てた。このトライアルは０日目乃至２１日目まで続け、鶏は実験飼料と水に自由にアクセルできた。保育ケージ温度と室温は第一週目はそれぞれ３２℃と２９℃にセットされた。
【０４６７】
そのあと、保育ケージの熱供給を停止して実験終了まで室温を２９℃に維持した。実験期間中光を２４時間照射した。１７、１８、１９および２０日目に、排泄物のサンプルを収集しエネルギーおよび栄養保持／消化率を決定するまで−２０℃で凍結保存した。羽および他の外来物質が混入しないように排泄物サンプルの収集の間注意を払った。各排泄物サンプルをプールしてケージごとにブレンダーを用いて混合し、１ケージ２つのサンプルを用意した。このサンプルを凍結乾燥した。乾燥したサンプルを粉砕して０．５ｍｍメッシュでふるいにかけ、密閉したプラスチックコンテナ内で化学的分析を行うまでに−４℃で貯蔵した。飼料サンプルと排泄物サンプルとを、乾燥重量、粗タンパク質（窒素分として）、総エネルギー、脂質（ヘキサン抽出物として）およびＡＯＡＣオフィシャル解析法による中性デタージェント繊維について分析した。チタニウム（消化マーカー）はＬｏｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００、Ａｎａｌｙｓｔ  １２５：２３３９-２３４３）に記載の方法に従って分析した。保持率／消化率を標準方法を用いて計算した（Ａｄｅｏｌａ、Ｏ．２００１．Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｐｉｇｓ．Ｐａｇｅｓ  ９０３-９１６  ｉｎ  Ｓｗｉｎｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、２ｎｄ  ｅｄ．Ａ．Ｊ．Ｌｅｗｉｓ、ａｎｄ  Ｌ．Ｌ．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、  ｅｄ．ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＤＣ）。データはＳＡＳ（２００４）のＧｅｎｅｒａｌ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅを用いて分析した。
結果
表５：ヤングブロイラー鶏の栄養保持率／消化率およびエネルギー代謝率におけるキシラナーゼ、繊維分解酵素およびバチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給与微生物の影響
2015528705.tif 000035
【０４６８】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０４６９】
キシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給餌微生物の組み合わせはヤングブロイラーの飼料の利用率を、対照またはキシラナーゼ単独、またはキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼの組み合わせのいずれかと比較して、改善した（表５）。このことは、脂質、繊維、および窒素等のエネルギー生産栄養素の保持率が増加していることと一致する（表５）。３種類の組み合わせにより高められた脂質保持率は注目すべきであり、飼料中の脂質の消化率と吸収率が上がり、発酵由来の短鎖脂肪酸の生産と吸収もが上がったことと一致する。エネルギーおよび栄養利用率においてよりよく観察されたキシラナーゼ、β−グルカナーゼ、バチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）／プロピオニック（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ）ＤＦＭの３種類の組み合わせの利点から腸の健康および好適な腸内菌叢の調節および腸の消化／吸収機能が改善されたことが推測できる。
ＩＩＩ．盲腸における乳酸生産
材料と方法
鶏の盲腸のＩｎ  ｖｉｔｒｏシミュレーション
鶏の盲腸のモデルを初期のヒトの大腸のｉｎ  ｖｉｔｒｏシステムから開発した（Ｍａｋｉｖｕｏｋｋｏ  ｅｔ  ａｌ．２００６；Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  ５２：９４−１０４、Ｍａｋｅｌａｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００９；  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄａｉｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １９：６７５−６８３）。この盲腸のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  モデルは新鮮な盲腸の微生物が接種された４つの連結された管からなる。小麦−小麦ふすまに基づく基礎飼料をヤングブロイラー鶏のエネルギーおよび栄養バランスを満たすように調製した（表１、飼料ＩＩＩ）。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を基礎飼料に配合した。基礎飼料を分割して、各酵素とＤＦＭとを添加して表６に記載のような実験飼料を調製した。各サプリメントは予め配合されており、この混合物を流して各飼料間の相互汚染を防止した。各バッチのはじめ、中央、および終わりから各処置飼料のサンプルを収集して、混合し、動物試験を始める前に飼料中に酵素活性とＤＦＭがあることを確実にした。各処置飼料からの追加のサンプルは解析に必要になるまで−２０℃±２℃で維持し保管した。別の飼料は、５時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏ盲腸システムに供給する前に上部消化管の模擬消化を受けた。これらの管は鶏の盲腸要素のモデルであり、それぞれが同じｐＨである（６．２５）。盲腸シュミレーションサンプルからの乳際のクロマトグラフ分析を前述の方法と同様にピバル酸を内部標準として用いて行った（Ｏｕｗｅｈａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．２００９；Ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  １０１：３６７−３７５）。
表６：試験計画
2015528705.tif 000036
【０４７０】
１Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
２ＡＣＣＥＬＬＥＲＡＳＥ(R)  ＴＲＩＯTM酵素複合剤はＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓより提供された、β−グルカナーゼ（２００  ＣＭＣ  Ｕ／ｋｇ）、キシラナーゼ（例えば、エンドキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））（＞１２００  ＡＢＸ  Ｕ／ｋｇ）およびβ−グルコシダーゼ（＞８００  ｐＮＰＧ  Ｕ／ｋｇ）を含む複数の酵素活性の強力な組み合わせを有する。
３酵素を分泌する能力により選択された３つのバチルス株に基づく直接給餌微生物はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎから提供されたものであり、株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８  （ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）、およびＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９）を同じ割合で含む。
結果
表７：鶏の盲腸の乳酸生産におけるキシラナーゼ、繊維分解酵素および直接給餌微生物の混合物の影響
2015528705.tif 000037
【０４７１】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０４７２】
キシラナーゼ＋他の繊維分解酵素の混合物＋バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の組み合わせに基づく直接給与微生物の組み合わせは盲腸の乳酸生産を、単一の酵素または酵素だけの組み合わせと比較して改善した。乳酸は乳酸杆菌および連鎖状球菌が優勢である乳酸バクテリアにより生産される。これらのバクテリアは腸において健康を促進する効果があると知られている（Ｗａｌｔｅｒ、２００８；Ａｐｐｌｉｅｄ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ７４：４９８５−４９９６）。乳酸は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属等の病原菌に対して抗菌効果を有している（Ｎｏｕｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９８９；  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ８、３５１-３６１）。そして乳酸杆菌は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）が腸内に付着するのを阻害することができる（Ｈｉｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９４；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ７６：２９４-３００）。Ｈｉｇｈ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆキシラナーゼ、繊維分解酵素および直接給餌微生物の組み合わせによる高い乳酸の濃度は腸の健康に関与している微生物の増加と活性に関与する。
ＩＶ．盲腸の微生物集団
材料と方法
ブロイラー鶏を初期体重に基づいて檻に割り当て、実験飼料を所定の実験計画を用いてランダムに与えた。鶏は０乃至２１日目の試験期間に実験飼料に自由にアクセルさせた。
【０４７３】
排泄物サンプルを１８日目乃至２１日目に毎日収集し、−２０℃で貯蔵した。２１日目に頸椎脱臼により鶏を安楽死させ、盲腸の内容物を取り出し、盲腸のＶＦＡについて調べるために−２０℃で貯蔵した。
【０４７４】
ＤＮＡ抽出：０．２ｇの盲腸の内容物をＰＢＳ中に懸濁し、更にビーズで打つ工程により精製し、そのあと市販のＭａｇＭＡＸTM  Ｔｏｔａｌ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  （Ａｐｐｌｉｅｄ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＭａｇＭａｘで自動的にＤＮＡを抽出した。単離されたＤＮＡの総量をＮａｎｏｄｒｏｐ  ＮＤ−１０００  フルスペクトラムＵＶ／Ｖｉｓスペクトロフォトメーター（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、  ＤＥ、  ＵＳＡ）で決定した。前述のようにフローサイトメトリーを用いて（Ａｐａｊａｌａｈｔｉ  ｅｔ  ａｌ．２００２、Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ６８（１０）：４９８６−４９９５）、全部または所定のサンプル由来のバクテリアを列挙した。
【０４７５】
ＰＣＲ方法：単離されたＤＮＡはアプライドバイオシステムを用いるｑＰＣＲ（定量性ポリメラーゼ連鎖反応）で分析する。特定のプライマーを３に記載のように所望の微生物を特定するために用いる。
表８：消化管内容物の微生物集団のｑＰＣＲによる定量化のための特定の種のプライマーが記載されている参考文献
2015528705.tif 000038
【０４７６】
キシラナーゼ＋（マンナナーゼまたはβ−グルカナーゼ）＋ＤＦＭｓの組み合わせは、盲腸の微生物集団をラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）および／または繊維分解性バクテリアとして知られている他の特定のグループルであるミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、バクテリオダス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ボゼブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）へとシフトさせる。
実施例２：コーンに基づく飼料を給餌されたヤングブロイラー鶏の成長能力と盲腸の揮発性脂肪酸における２つのキシラナーゼと他の繊維分解酵素（ＦＤＥ−混合物）およびＤＦＭ（バチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給餌微生物；ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給与微生物を組み合わせて与えたときの影響
実験１
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。基礎飼料、エネルギーとタンパク質のバランスがとれるように、かつこの日齢と遺伝子型の鶏の成長に適合させて調製する（表９）。飼料の穀物成分はコーンであり、タンパク質成分は大豆粕であり、カノーラ、菜種油粕等の他のタンパク質成分を含むものと含まないものとを調製した。ＤＤＧＳ等のコーン共生成物またはコーングルテンミールまたはコーングルテン飼料は、給餌される鶏の栄養要求に見合うように処方するために、単独または組み合わせのいずれかで、飼料に含めてよい。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を含み、この飼料はマッシュとして提供した。一般的な消化率マーカー（二酸化チタン、酸化クロムまたは石灰石）を３ｇ／ｋｇで含ませ、飼料成分の消化率を決定する。この基礎飼料を分割して、それぞれの酵素とＤＦＭを添加して表１０に記載の実験飼料を調製した。各サプリメントは予め混合されており、この混合物を処理された飼料に相互汚染が生じないように流した。バッチのはじめ、真ん中、終わりからそれぞれの処置飼料から集めて、混合して動物実験が始まる前に飼料中に酵素活性とＤＦＭがあることを確認した。各処理飼料からの追加のサンプルは−２０℃±２℃で維持し解析に必要になるまで貯蔵する。
表９：０乃至２１日目のブロイラーのコーン基礎飼料の組成（％で記載）
2015528705.tif 000039
【０４７７】
表１０：実験飼料の説明
2015528705.tif 000040
【０４７８】
１キシラナーゼ、例えばエンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８）は２つの異なる微生物由来である。
２バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＤＦＭは酵素生産株として選択された。
３ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）ＤＦＭはＣ５糖類発酵株；短鎖脂肪酸生産株；繊維分解性内生微生物菌叢促進株またはこれらの組み合わせとして知られている。
４ＦＤＥミックス：ベータ−グルカナーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−キシロシダーゼおよび／またはアルファ−アラビノフラノシダーゼを含む繊維分解酵素活性の組み合わせ
ブロイラー鶏は初期体重に基づいて檻に割り当てられ、実験飼料を認証された実験計画に従ってランダムに与えた。鶏は０乃至２１日目の期間は実験飼料に自由にアクセスできるようにした。体重（ＢＷ）、飼料摂取（ＦＩ）および死亡率を記録して、体重増加量（ＢＷＧ）、飼料要求率（ＦＣＲ）および飼料転換効率（ＦＣＥ）を計算した。
【０４７９】
１８日目乃至２０日目の排出物サンプルを毎日収集して、栄養と繊維質保持率およびＡＭＥおよびＡＭＥｎを決定するために−２０℃で貯蔵する。２１日目に鶏を頸椎脱臼により安楽死させ、回腸（メッケル憩室から回腸−盲腸接合部の約１cm上まで）および盲腸の内容物入手して内容物の回腸での消化率と盲腸のＶＦＡを決定するために−２０℃で貯蔵した。
【０４８０】
毎日の排出物サンプルを各ケージごとに収集して、６０℃でオーブン乾燥した。一方回腸消化物サンプルをケージ／檻ごとにプールして凍結乾燥した。飼料、排泄物、および回腸消化物のサンプルを細かく粉砕して解析のためによく混合した、すべてのサンプルは、乾燥重量、窒素、脂質、および２００５年のＡ．Ｏ．Ａ．Ｃ．法による総エネルギーについ解析した。可溶性および不溶性非デンプンポリサッカライドは飼料および排泄物について、Ｅｎｇｌｙｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）に従って分析する。一方、中性デタージェント繊維、中性デタージェント不溶性窒素はＴｉｌｌｅｙおよびＴｅｒｒｙ（１９６２）の方法に従って分析する。
【０４８１】
消化率マーカーは選択されたマーカーについての標準的方法で分析する。
【０４８２】
揮発性脂肪酸および乳酸、例えばＳＣＦＡｓのクロマトグラフ解析は前述のように（Ｏｕｗｅｈａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、２００９  Ｆｅｂ；１０１（３）：３６７−７５）ピバル酸を内部標準としてシュミレーションサンプルについて実施した。酢酸、プロピオン酸、酪酸、ブチル酸、イソブチル酸、吉草酸、イソ吉草酸、２−メチルブチル酸および乳酸が検出された。
【０４８３】
回腸の見かけの消化率の係数および成分の見かけの保持率の係数Ａｄｅｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．、  ２０１０（Ｐｏｕｌｔ  Ｓｃｉ．  ２０１０  Ｓｅｐ；８９（９）：１９４７−５４）に従って計算する。
１つのケージ（檻）が実験単位である。ＡＮＯＶＡはＧｅｎｅｒａｌ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ＳＡＳ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔ．Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて行われた。Ｆ率が有意性を示すとき、処置手段は分離される。
結果
全組み合わせを給餌された実験グループ：キシラナーゼ＋二次的繊維分解酵素およびＤＦＭ（バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはＬＢ）は、対照、または添加材単独または２種の組み合わせのいずれかよりも、より高いＢＷＧ（ｇ／ｂｉｒｄ／ｄａｙ）および／またはより低いＦＣＲ（ｇ  ＢＷ  ｇａｉｎ  ／  ｇ  ｆｅｅｄ  ｉｎｔａｋｅ）および／またはよりよい栄養、エネルギー、および繊維消化率／保持率を示した。
【０４８４】
キシラナーゼ（キシラナーゼ１および／または２）＋ＦＤＥ混合物＋ＤＦＭの組み合わせは回腸および／または盲腸の総ＶＦＡおよびブロイラーの回腸および／または盲腸消化物における酪酸またはプロピオン酸の濃度を有意に増加させた。
ＩＩ．成長能力
実験１
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。コーン／大豆ベース飼料をヤングブロイラー鶏（０−２１日齢）のエネルギーと栄養のバランスがとれるように調製した（表９、飼料Ｉ）。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を配合し、この飼料をマッシュとして給餌した。基礎飼料を分割して個々の酵素をＤＦＭを添加して表１１に示すような実験飼料を調製した。
表１１：実験Ｉに用いた処置の説明
2015528705.tif 000041
【０４８５】
ａ酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼ（Ａｘｔｒａ(R)ＸＢ））はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎにより供給される市販品である。
【０４８６】
ｂ３つの株のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づくＤＦＭ（株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）およびＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９））は酵素を分泌する能力により選択された。
【０４８７】
ｃＦｖｅＸｙｎ４キシラナーゼ（エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））は本明細書においてＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３で示され（参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１２／０７９６５０にも記載されている）、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎにより入手可能である。
全てのサプリメントはプレミックス中に配合されており、飼料調製時にミキサーに供給される。ＤＦＭを含む飼料がはじめに混合され、相互汚染を防ぐためにミキサーを洗浄した。サンプルを各バッチのはじめ、真ん中、終わりに集めて、混合して動物試験が始まる前に酵素活性とＤＦＭが存在することを確認した。各実験飼料からの追加のサンプルは−２０℃±２℃で維持し、解析に必要となるまで貯蔵した。オスのブロイラー（Ｈｕｂｂａｒｄ−Ｃｏｂｂ）鶏は１日齢で民間の孵化場から入手した。０日目に鶏を個別に体重測定し、ケージごとの鶏の平均体重が同様になるように、７２のケージに割り当てた（１ケージ当たり８羽）。９つの飼料処置（表１１）を８つのケージにランダムに割り当てた。これらのケージは環境がコントロールされた部屋に収容された。温度ははじめの１週間は３１℃に維持され、その後徐々に低めていき３週間目の終わりには２２℃にした。鶏は２０時間蛍光照明を照射され、試験の間餌と水に自由にアクセスできるようにした。体重と飼料摂取量を２１日間のはじめと終わりに記録した。死亡率は毎日記録した。飼料要求率は総飼料摂取量を生きている鶏と死んだ鶏の体重増加量で割って計算した。データはＧｅｎｅｒａｌ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ＳＡＳ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔ．Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて分析した。Ｆ率が有意性を示すとき、処置手段が分離される。
結果、実験１
表１２：ヤングブロイラー鶏の成長性能におけるキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給与微生物の影響
2015528705.tif 000042
【０４８８】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０４８９】
全組み合わせを給餌された処置クループ：キシラナーゼ＋β−グルカナーゼ＋バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＤＦＭの組み合わせは対照、または給餌された単独の添加剤または２つの組み合わせのいずれかよりもより高いＢＷＧ（ｇ／羽／日）、およびより低いＦＣＲ（ｇ  ＢＷ増量／ｇ飼料摂取量）を示した（表１２）。これはキシラナーゼ１とキシラナーゼ２が投与されたケースであった。
実験ＩＩ
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。コーン／大豆ベース飼料をヤングブロイラー鶏（０−２１日齢）のエネルギーと栄養のバランスがとれるように調製した（表９、飼料Ｉ）。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を配合し、この飼料をマッシュとして給餌した。基礎飼料を分割して個々の酵素をＤＦＭを添加して表１３に示すような実験飼料を調製した。
表１３：実験ＩＩの処置の説明
2015528705.tif 000043
【０４９０】
ａ酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼ（Ａｘｔｒａ(R)ＸＢ））はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎによる供給されている市販品である。
【０４９１】
ｂエンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）ベースＤＦＭ（エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７（ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ７、３８４、６２８においてラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）ＩＤ７  として参照され、ＡＴＣＣ寄託機関にＰＴＡ−６１０３として登録され、のちにエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）ＩＤ７として再分類された）
ｃＦｖｅＸｙｎ４  キシラナーゼ（エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））は本明細書でＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３で示され（参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１２／０７９６５０にも記載があり）Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎにより提供されている。
【０４９２】
全てのサプリメントはプレミックス中に配合されていて、飼料を調製するときにミキサーにこのプレミックスが添加される。ＤＦＭを含む飼料ははじめに混合され、相互汚染を防止するためにこのミキサーを洗浄する。サンプルを各バッチのはじめ、真ん中、および終わりから各処置飼料ごとに収集して、混合して、動物実験が始まる前に酵素活性とＤＦＭが飼料中に存在することを確認した。各処置飼料からの追加的なサンプルは−２０℃±２℃で維持し、分析に必要となるまで貯蔵した。オスのブロイラー（Ｈｕｂｂａｒｄ−Ｃｏｂｂ）鶏は１日齢で民間の孵化場から入手した。０日目に鶏を個別に体重測定し、ケージごとの鶏の平均体重が同様になるように、７２のケージに割り当てた（１ケージ当たり８羽）。９つの飼料処置（表１３）を８つのケージにランダムに割り当てた。これらのケージは環境がコントロールされた部屋に収容された。温度ははじめの１週間は３１℃に維持され、その後徐々に低めていき３週間目の終わりには２２℃にした。鶏は２０時間蛍光照明を照射され、試験の間餌と水に自由にアクセスできるようにした。体重と飼料摂取量を２１日間のはじめと終わりに記録した。死亡率は毎日記録した。データはＳＡＳのＧＬＭ法により分析した。
結果、実験ＩＩ
表１４：ヤングブロイラー鶏の成長能力におけるキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびエンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）に基づく直接給与微生物の影響
2015528705.tif 000044
【０４９３】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０４９４】
キシラナーゼ＋β−グルカナーゼ＋エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）ＤＦＭの組み合わせをキシラナーゼ＋β−グルカナーゼまたはキシラナーゼ＋エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）ＤＦＭに加えて補ったときに、ブロイラーの体重増加において数字上の改善が見られた（表１４）。
ＩＩＩ．盲腸における揮発性脂肪酸の生産
材料と方法
コーン−大豆粕−菜種粕に基づく基礎飼料をヤングブロイラー鶏のエネルギーおよび栄養のバランスが取れるように調製した（表９、飼料ＩＩ）。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を基礎飼料に配合した。この基礎飼料を分割して個々の酵素とＤＦＭを添加して表１５に記載のような実験飼料を調製した。以下の手順は実施例１、パートＩＩＩに記載のものに準拠する。シュミレーションサンプルの揮発性脂肪酸のクロマトグラフ解析はピバル酸を内部標準として、前述と同様に行った（Ｏｕｗｅｈａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．  ２００９；  Ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  １０１：３６７−３７５記載の示唆を参照により本明細書に援用する）。酢酸、プロピオン酸、ブチル酸、イソブチル酸、イソブチル酸、吉草酸、イソ吉草酸、および２−メチルブチル酸の濃度を決定した。
表１５：処置の説明
2015528705.tif 000045
【０４９５】
１３つのバチルス株に基づく直接給餌微生物（株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）およびＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９）を同じ割合で含む）は酵素を分泌する能力により選択され、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎから入手可能である。
酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼ（Ａｘｔｒａ(R)ＸＢ））はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎが提供する市販品である。
結果
表１６：鶏の盲腸の酢酸、ブチル酸、および総揮発性脂肪酸（ＶＦＡ）生産におけるキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよび直接給餌微生物の影響
2015528705.tif 000046
【０４９６】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０４９７】
キシラナーゼ＋β−グルカナーゼ＋直接給与微生物の組み合わせは、ＤＦＭ単独、酵素または酵素の組み合わせのみと比較して、盲腸の酢酸、酪酸、および揮発性脂肪酸（ＶＦＡ）生産を増加させた（表１６）。揮発性脂肪酸は相当量のエネルギーを鶏に提供することができる。酪酸はヒトにおいて胃腸管の健康を改善し大腸癌の発生を抑制することが知られている（Ｂｒｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、２００２、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：２５１−２６１参照により本明細書に援用される）。
実施例３：混合穀物ベース飼料を給餌した豚（２５乃至６０ｋｇ）の成長能力および栄養消化率における単独でまたは組み合わせて給餌したときのキシラナーゼおよび他の繊維分解酵素（β−グルカナーゼまたは繊維分解酵素混合物（ＦＤＥ−ミックス））およびＤＦＭ（バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給餌微生物）の影響
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。給餌
される基礎飼料はエネルギーとタンパク質のバランスが取れ、この日齢と遺伝子型の豚の成長に見合うように調製した（表１７）。この基礎飼料における主要な成分組成物（タイプおよび含量レベル）は表１７に示すように給餌される豚の栄養要求率に見合うように処方されている。一般的な消化率のマーカー（二酸化チタン、酸化クロム、または石灰石）は３ｇ／ｋｇで餌に配合され、飼料成分の消化率の決定に用いた。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を配合し、飼料をマッシュとして与えた。基礎飼料を分割して、表１８に示すように酵素とＤＦＭで処理した。飼料を混合している間、ミキサーは飼料の相互汚染を防ぐために洗浄する。サンプルを、各バッチのはじめ、真ん中、および終わりから各処置飼料について収集して、混合して飼料中に酵素活性とＤＦＭが存在することを確認した。各実験飼料からのサンプルは混合の間保持され、必要になるまで−２０℃で貯蔵した。
表１７：２０乃至６０ｋｇの豚の基礎飼料組成物の例（％で記載）
2015528705.tif 000047
【０４９８】
表１８：実験飼料の説明
2015528705.tif 000048
【０４９９】
１ＦＤＥミックス：ベータ−グルカナーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−キシロシダーゼおよび／またはアルファ−アラビノフラノシダーゼを含む繊維分解酵素活性の組み合わせ
２バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＤＦＭは酵素生産株として選択された
実験は成長フェーズに対応するように計画され実施された（２５から６０ｋｇ体重）。この実験飼料は４２日齢までで６週間給餌した。目的とする初期体重に近い雌と雄の豚のグループを同じ家畜群（遺伝子型）から作る。豚の入手時に体重を測定し、各処理が試験数８の檻の最小値となるように設計された試験計画を用いた飼料処理を割り当てた。体重と飼料の取り込みを週ごとに観察して、死亡率で補正した飼料転換効率の増加効果を計算する。新しく採取した排泄物サンプルを３週目と６週目に収集して、飼料成分の消化率を計算する。
【０５００】
本実験の目的のために、生育豚（初期体重３０ｋｇ）の回腸の末端にＴカニューレを装着させた。室温の調節された部屋で個別の檻（１．２ｘ１．５ｍ）に豚を収容する。各檻に給餌器とニップル式の給水器を備え、コンクリートの上に薄い板を敷いた床で飼育する。この実験は１処置あたり６回繰り返しの最小値を与えるように設計され実施された。全ての豚はそれらの維持エネルギー要求量の３倍のレベルの餌を与えられ（１０６ｋｃａｌ  ＭＥ  ｐｅｒ  ｋｇ０．７５；ＮＲＣ、１９９８）、８時と７時に同量の餌が与えられる。動物がボウルタイプの給水器に自由にアクセスできるようにしてある。豚の重量を各期間の始めと終わりで記録し、毎日供給された飼料の量を記録する。実験は１５日間続ける。各期間の始めの１０日間は飼料への適応期間とされる。新しく採取した排泄物サンプルを１１日目乃至１３日目に収集して、回腸の消化物を１４日目と１５日目の８時に収集する。回腸消化物の回収のために、プラスチックバックをカニューレのバレルに装着して、消化物をバックに流して収集した。消化物でバックがいっぱいになったら、または少なくとも１回に３０分バックを装着したままにしてその後、バッグを取り出し、直ちに−２０℃で冷凍した。
【０５０１】
排泄物および回腸サンプルを解糖して、動物飼料と混合して、サブサンプルを化学的分析のために収集した。基礎飼料のサンプルも収集して解析した。消化物サンプルを凍結乾燥して、細かく粉砕して化学的分析に用いた。排泄物サンプルはオーブンで乾燥して細かく粉砕して分析する。全てのサンプルは、標準的な方法に従って（ＡＯＡＣ、２００５）、乾燥重量、消化率マーカー、総エネルギー、粗タンパク質、脂質および中性デタージェント繊維について分析された。
エネルギーと栄養素の回腸での見かけの回腸での消化率を総消化率の値を前述のように計算する（Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７．Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．８５：１７２−１８０）。檻が実験単位であり、データはＳＡＳのＭＩＸＥＤ法で処理する。
結果
全組み合わせの給餌グループ：キシラナーゼ＋二次繊維分解酵素（β−グルカナーゼまたはＦＤＥ−ミックス）およびＤＦＭ（バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給餌微生物）は、より高いＢＷＧ、および／またはより低いＦＣＲ（ｇ  ＢＷ増量／ｇ飼料摂取量）および／または高い栄養素の消化率および／または高いエネルギー消化率および／または高い乾燥重量消化率および／または高い繊維消化率を示した。
実施例４：ヤングブロイラー鶏の栄養保持率／消化率およびエネルギー代謝率におけるキシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびプロピオン酸およびプロピオン酸生産株のバクテリアベースの直接給与微生物の影響
実施例４で用いる小麦ベース実験飼料の組成
表１９：ブロイラーの小麦−基礎飼料の飼料成分（％で記載）
2015528705.tif 000049
【０５０２】
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。小麦−オオムギに基づく飼料はヤングブロイラー鶏（０乃至２１日齢）のエネルギーと栄養についてバランスのとれるように処方した（表１９）。二酸化チタンを０．３０％処方して飼料成分の保持を決定するために用いた。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を含み、この飼料はマッシュとして提供した。基礎飼料を分割して、各酵素とＤＦＭとを添加して表２０に記載のような実験飼料を調製した。各サプリメントは予め配合されており、各飼料間の相互汚染を防止するためにミキサーを洗浄した。各バッチのはじめ、中央、および終わりから各処置飼料のサンプルを収集して、混合し、動物試験を始める前に飼料中に酵素活性とＤＦＭがあることを確実にした。各処置飼料からの追加のサンプルは解析に必要になるまで−２０℃±２℃で維持し保管した。
表２０：試験計画
2015528705.tif 000050
【０５０３】
１プロピオン酸生産株に基づく直接給与微生物（プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９  ＰＴＡ−５２７１、Ｏｍｎｉ−Ｂｏｓ（R）Ｐ１６９）
酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏ  キシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼ（Ａｘｔｒａ(R)  ＸＢ））はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎが販売する市販品である。
【０５０４】
この実験はエネルギーおよび栄養消化率測定のための排泄物サンプルを得るためのケージトライアルを含む。一日齢のオスのブロイラー鶏を（Ｒｏｓｓ３０８）民間の孵化場から購入した。鶏の体重を到着時に測定し、体重で階層化し、ケージ当たりの鶏の平均体重が同じになるように、３０ケージに分けた（１ケージ当たり５羽）。４つの処置飼料をランダムに６回の反復ケージに割り当てた。このトライアルは０日目乃至２１日目まで続け、鶏は実験飼料と水に自由にアクセスできた。保育ケージ温度と室温は第一週目はそれぞれ３２℃と２９℃にセットされた。そのあと、保育ケージの熱供給を停止して実験終了まで室温を２９℃に維持した。実験期間中光を２４時間照射した。１７、１８、１９および２０日目に、排泄物のサンプルを収集しエネルギーおよび栄養保持／消化率を決定するまで−２０℃で凍結保存した。羽および他の外来物質が混入しないように排泄物サンプルの収集の間注意を払った。排泄物サンプルをプールしてケージごとにブレンダーを用いて混合し、１ケージ２つのサンプルを用意した。このサンプルを凍結乾燥した。乾燥したサンプルを粉砕して０．５ｍｍメッシュでふるいにかけ、密閉したプラスチックコンテナ内で化学的分析を行うまでに−４℃で貯蔵した。飼料サンプルと排泄物サンプルとを、乾燥重量、粗タンパク質（窒素分として）、総エネルギー、脂質（ヘキサン抽出物として）およびＡＯＡＣオフィシャル解析法による中性デタージェント繊維について分析した。チタニウム（消化マーカー）は、参照により本明細書に援用されるＬｏｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００、Ａｎａｌｙｓｔ  １２５：２３３９-２３４３）に記載の方法に従って分析した。保持率／消化率を標準方法を用いて計算した（Ａｄｅｏｌａ、Ｏ．２００１．Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｐｉｇｓ．  Ｐａｇｅｓ  ９０３-９１６  ｉｎ  Ｓｗｉｎｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、  ２ｎｄ  ｅｄ．Ａ．Ｊ．Ｌｅｗｉｓ、ａｎｄ  Ｌ．Ｌ．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、ｅｄ．ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、  ＤＣ）。データはＳＡＳ（２００４）の一般線形モデル法（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）を用いて分析した。
結果
表２１：ヤングブロイラー鶏の栄養保持率／消化率およびエネルギー代謝率におけるキシラナーゼ、繊維分解酵素およびプロピオン酸生産株のバクテリアに基づく直接給与微生物の影響
2015528705.tif 000051
【０５０５】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０５０６】
キシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に基づく直接給餌微生物の組み合わせは対照またはキシラナーゼ単独、またはキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼの組み合わせのいずれかと比較して、飼料エネルギーの利用率を、改善した（表２０）。このことは、脂質等の乾燥エネルギー中のエネルギー生産栄養素の保持率が増加していることと一致する（表２０）。３種類の組み合わせにより高められた脂質保持率は注目すべきであり、飼料中の脂質の消化率と吸収率が上がり、発酵由来の短鎖脂肪酸の生産と吸収もが上がったことと一致する。エネルギーおよび栄養利用率においてよりよく観察されたキシラナーゼ、β−グルカナーゼ、バチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）／プロピオニック（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ）ＤＦＭの３種類の組み合わせの利点から腸の健康および好適な腸内菌叢の調節および腸の消化／吸収機能が改善されたことが推測できる。
実施例５：キシラナーゼ、他の繊維分解酵素およびプロピオン酸生産直接給与微生物を含むコーンベース飼料を給餌したブロイラー鶏の反応
実施例５で用いる実験飼料の成分
表２２：ブロイラーのコーン−基礎飼料の組成（％で記載）
2015528705.tif 000052
【０５０７】
材料と方法
動物および実験プロトコルの使用は実験動物組織委員会に承認されたものであった。小麦−オオムギに基づく飼料はヤングブロイラー鶏（０乃至２１日齢）のエネルギーと栄養についてバランスのとれるように処方した（表２２）。非合成抗生物質または抗コクシジウム薬を含み、この飼料はマッシュとして提供した。基礎飼料を分割して、各酵素とＤＦＭとを添加して表２３に記載のような実験飼料を調製した。各サプリメントは予め配合されており、各飼料間の相互汚染を防止するためにミキサーを洗浄した。各バッチのはじめ、中央、および終わりから各処置飼料のサンプルを収集して、混合し、動物試験を始める前に飼料中に酵素活性とＤＦＭがあることを確実にした。各処置飼料からの追加のサンプルは解析に必要になるまで−２０℃±２℃で維持し保管した。
表２３：実験計画
2015528705.tif 000053
【０５０８】
１Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
２ＡＣＣＥＬＬＥＲＡＳＥ(R)  ＴＲＩＯTM  β−グルカナーゼ（２００  ＣＭＣ  Ｕ／ｋｇ）、キシラナーゼ（例えば、エンドキシラナーゼ、エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ  （Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））（＞１２００  ＡＢＸ  Ｕ／ｋｇ）、およびβ−グルコシダーゼ（＞８００  ｐＮＰＧ  Ｕ／ｋｇ）（ＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓ）を含む複数の酵素活性の強力な組み合わせの酵素複合剤
３プロピオン酸生産株ベース直接給与微生物（プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニ）Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ  Ｐ１６９  ＰＴＡ−５２７１、Ｏｍｎｉ−Ｂｏｓ(R)Ｐ１６９）
１日齢の鶏を民間の孵化場から購入し、入手時に体重を測定し、同定のためにタグ付けして、体重で６つのブロックに分け、完全にランダムにブロック設計された、１つの檻当たり１０羽である１ブロック内で４つの処理（表２３）がランダムに割り当てられるようにした。
【０５０９】
１日目から飼料を自由接種にして清浄な水に自由にアクセスできるようにした。鶏を０日目から２１日目まで体重測定をして、体重を記録した。飼料の消費量も監視され、鶏の体重と日齢に加えて記録した。鶏を常時監視して、外見や行動についての変化を記録した。各給餌期間の終わりに、体重増加、飼料取り込み、飼料要求率、飼料効率、および脂肪率を決定した。データはＳＡＳのＧＬＭ法（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｉｎｃ．２００６）を用いて完全にランダム化されたブロック設計として解析した。
結果
表２４：ヤングブロイラー鶏の成長能力におけるキシラナーゼと他の繊維分解酵素の混合物とプロピオン酸ベース直接給与微生物との組み合わせの影響
2015528705.tif 000054
【０５１０】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０５１１】
キシラナーゼと他の繊維分解酵素の混合物とプロピオン酸ベース直接給与微生物との組み合わせを給餌された鶏は対照よりもＦＲＣが良好で、数字の上では酵素のみを給餌された鶏よりも良好であった（表２４）。
実施例６：キシラナーゼとβ−グルカナーゼとバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株ベース直接給餌微生物の有無においての、肉豚の成長能力、微生物数、および栄養消化率への影響
実施例６に用いた実験飼料の組成
表２５：生育豚飼料の組成（２０−６０ｋｇ体重）（％で記載）
2015528705.tif 000055
【０５１２】
材料と方法
肉豚における、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株ベース直接給餌微生物の有無におけるキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ酵素ブレンド飼料が成長能力、排泄物の微生物数および消化率に与える影響を評価するために２つの実験を行った。施設内動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が承認した豚の使用および関連する倫理ガイドラインを用いた。２つのグループに収容された合計４２匹の豚（［雌：ヨークシャーｘランドレース］ｘ雄：デュロック）を実験１にもちいて、３つのグループに分けられた上記の種の７２匹の豚を実験２に用いた。各檻は滑らかな透明プラスチック板で仕切られて、温度がコントロールされた部屋でプラスチックで覆った金属板の床を使用した。
【０５１３】
個々の基礎飼料を豚についてのＮＲＣ推奨量に見合うように調製した（ＮＲＣ、１９９８  Ｔａｂｌｅ  ２５  ｄｉｅｔ  Ｉ  ｆｏｒ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ  １  ａｎｄ  ｄｉｅｔ  ＩＩ  ｆｏｒ  ｅｘｐａｒｉｍｅｎｔａｌ２）。各実験において、基礎飼料の１バッチが調製され２つに分割され、各部分に表２６に記載のような添加剤を配合した。
表２６：試験計画
2015528705.tif 000056
【０５１４】
１３つのバチルス株に基づく直接給餌微生物（株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８）、ＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０）およびＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９）を同じ割合で含む）は酵素を分泌する能力により選択され、Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎより入手可能である。
【０５１５】
酵素（キシラナーゼ（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））およびβ−グルカナーゼ（Ａｘｔｒａ(R)ＸＢ））はＤａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎから入手可能な市販品である。
【０５１６】
表２６記載の処理は実施例１および２において、それぞれ檻単位で７回繰り返しおよび８回繰り返すように割り当てられた。試験区（処置）の檻の割り当ては豚の実験開始時の体重に基づいてランダム化された。体重と飼料摂取量を週ごとに記録して飼料要求率の計算に用いた。
【０５１７】
両方の実験において４２日間実験飼料を豚に与えた。実験の間、飼料と水はいつでも自由に摂取できるようにした。実験２において、新鮮な排泄物サンプルを３８日目、３９日目、および４０日目に集めて、栄養消化率、エネルギー消化率、および繊維消化率の他に微生物数を決定した。
【０５１８】
各檻からの混合排泄物サンプルの１グラムを９ｍｌの１％ペプトンブロス（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）で希釈してその後ホモジナイズした。排泄物サンプル中の微生物の生菌数を、連続希釈で１０倍希釈したサンプルをＭａｃＣｏｎｋｅｙアガープレート（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）および乳酸杆菌培地IIIアガープレート（Ｍｅｄｉｕｍ  ６３８、ＤＳＭＺ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にて平板培養して、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）をそれぞれ単離してカウントした。乳酸杆菌培地IIIアガープレートは嫌気性条件下で３９℃で４８時間インキュベートした。ＭａｃＣｏｎｋｅｙアガープレートは３７℃で２４時間インキュベートした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）のコロニーをインキュベーターから取り出してすぐにカウントした。化学的分析の前に、排泄物サンプルを解糖して６０℃で７２時間乾燥させ、１−ｍｍスクリーンを通過することができるサイズに細かく粉砕した。全ての飼料および排泄サンプルをその後、ＡＯＡＣ（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）により規定されている方法に従い、乾燥重量、総エネルギーおよび酸性デタージェント繊維について分析した。クロミウム（消化マーカー）を参照により本明細書に援用される、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．１９６２、Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．５９：３８１-３８９に記載の方法に従って解析した。消化率は標準的な方法を用いて計算した（Ａｄｅｏｌａ、Ｏ．２００１．Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂａｌａｎｃｅ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｐｉｇｓ．  Ｐａｇｅｓ  ９０３-９１６  ｉｎ  Ｓｗｉｎｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、  ２ｎｄ  ｅｄ．Ａ．Ｊ．Ｌｅｗｉｓ、ａｎｄ  Ｌ．Ｌ．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、  ｅｄ．  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、  ＤＣ  -ｔｈｅ  ｔｅａｃｈｉｎｇ  ｏｆ  ｗｈｉｃｈ  ｉｓ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ  ｈｅｒｅｉｎ  ｂｙ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）。成長能力のデータ（ＢＷ、ＡＤＦＩ、ＡＤＧおよびＦＣＲ）は、処置、実験計画および相互作用を試験系影響を与えるものとして、ＳＡＳのＧＬＭ法で処理した。相互作用を明らかにした初期解析は有意差はなかった。従って、追加的な解析において、引き続き処置の主な効果が提示される。微生物データは対数変換され、ＳＡＳのＧＬＭ法を用いて、消化率と同様に一元配列分散分析で処理される。
結果
表２７：バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株ベース直接給餌微生物の有無における、キシラナーゼとβ−グルカナーゼの肉豚の成長能力における影響
2015528705.tif 000057
【０５１９】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
表２８：バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株ベース直接給餌微生物の有無における、キシラナーゼとβ−グルカナーゼの肉豚の窒素、繊維及びエネルギー消化率（％）における影響
2015528705.tif 000058
【０５２０】
Ｎ．Ｂ．数値の後に記載の異なる文字はカラムに記載の値の間において統計的有意差があることを示す（Ｐ≦０．１０）。
【０５２１】
キシラナーゼ、β−グルカナーゼおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）を含む直接給餌微生物の組み合わせは、対照、または酵素のみを転換したものと比較して豚の成長能力、飼料の栄養およびエネルギーの利用率を改善した（表２７および２８）。
【０５２２】
３つの方法の組み合わせ腸内で繊維質の分解をよくし、ラクトバチルス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）バクテリウムの増殖を促進させた（図１）。
実施例７：豚の後腸の短鎖脂肪酸生産におけるキシラナーゼ、他の繊維分解酵素および直接給与微生物の影響
実施例７で用いる実験飼料の組成
表２９：生育豚飼料の組成（２０−６０ｋｇ体重）（％で記載）
2015528705.tif 000059
【０５２３】
材料と方法
豚の後腸モデルを確立するために、Ｂｏｉｓｅｎ  ａｎｄ  Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  １９９７、  Ａｎｉｍａｌ  Ｆｅｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６８：  ２７７−２８６  ｔｈｅ  ｔｅａｃｈｉｎｇ  ｏｆ  ｗｈｉｃｈ  ｉｓ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ  ｈｅｒｅｉｎ  ｂｙ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅに記載の方法を改造してインビトロでの豚の回腸を作った。簡単に説明すると、１．５３ｋｇの完全マッシュ飼料（コーンおよび小麦ベース、詳細は表２９を参照）を３ガロンの再密閉可能なバケツ内で、３．００Ｌのリン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６）と１．２０Ｌの０．２ＭＨＣｌと組み合わせた。ｐＨを１０ＭＨＣｌまたはＮａＯＨを用いて２に調整した。その後、１２０ｍＬの予め調製されたペプシン溶液を添加した（水１ｍｌあたり２５０ｍｇペプシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））。バケツを密閉して、胃での消化を模して振とうしなかがら３９℃で２時間インキュベートした。小腸での消化をまねするために、１．２０Ｌのリン酸緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ６．８）と６００ｍｌの０．６ＭＮａＯＨを溶液に添加して１０ＭＮａＯＨまたはＨＣｌを用いて前述のようにｐＨを調整した。中和の後、１２０ｍｌの予め調製されたパンクレアチン溶液（水１ｍｌあたり１００ｍｇパンクレアチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ））を添加して、バケツを密閉して、振とうさせながら３９℃で４時間インキュベーションした。インキュベーションの後、液体をろ過して二層で２つ重ねの半醸造バッグ（Ｊｕｍｂｏ  Ｎｙｌｏｎ  Ｃｏａｒｓｅ、  ＬＤ  Ｃａｒｌｓｏｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｋｅｎｔ、ＯＨ）を用いてろ過した。残ったスラリーをホモジナイズして１２８ｇずつ量りとり、別個の２５０ｍｌパイレックスボトルに入れた。このボトルを−２０℃で保存した。大腸微生物菌叢の摂取体として、盲腸の内容物を１２の生育豚から収集した。内容物をホモジナイズして、１０％のグリセロールと混合し、１４ｇのアリコートを１５ｍｌのコニカルビーカーの中に量りいれた。これを密閉して−８０℃で貯蔵した。
【０５２４】
豚の後腸のシミュレーション実験を２回繰り返しでおこなった。それぞれ、１つの対照と３つの処置群からなる（表３０）。各処置は３回試験を行った。それぞれのインビトロでの豚の後腸の発酵試験のために、盲腸内容物の模擬物を有する全部で２４個のパイレックスボトルを１つと大腸内容物を入れた１５ｍｌのコニカルビーカーを１つ用いた。
参照により本明細書に援用する、（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９９、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  ７９、７５５−７６２）  ａｎｄ  Ａｒｉｓｔｏｔｅｌｉ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｃｏｘ、２００３、  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７１：５５６５−５５７５）に記載の方法と同様にボトルを一晩解凍して、２４０ｍＬの無菌の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）と４ｇ／Ｌムチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）をそれぞれのボトルに添加した。摂取菌体を３０分間室温で解凍し、その間パイレックスボトルを３９℃で３０分間振とうウォーターバス中で予備加温し、１ｍｌの１％ペプトン溶液と４５０μＬの０．１Ｍリン酸緩衝液（表３０参照）中の試験サンプルを添加した。
表３０：豚のインビトロでの後腸発酵の処置試験
2015528705.tif 000060
【０５２５】
＊酵素および直接給餌微生物製品は飼料１メートルトン当たり５００ｇで等量含まれる。各実験は２回繰り返しで行われた。処置は各試験で３回測定された。；＃基礎飼料は表２９に記載のようにコーン対照飼料（ＣＣ）または小麦対照飼料（ＣＷ）のいずれかである。；†  キシラナーゼはＹ５（Ｄａｎｉｓｃｏ  キシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））または本明細書でＳＥＱ  ＤＩ  Ｎｏ．３で示され、参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１２／０７９６５０に記載の、４０００  ＸＵ／ｋｇ飼料の酵素活性が補償されている、ＮＧＸ（ＦｖｅＸｙｎ４（エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）のいずれかである；‡繊維分解酵素はＡｃｃｅｌ（Ａｃｃｅｌｅｒａｓｅ  Ｔｒｉｏ、ＡＣＣＥＬＬＥＲＡＳＥ(R)  ＴＲＩＯTM  ｅｎｚｙｍｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  β−グルカナーゼ（２００  ＣＭＣＵ／ｋｇ）、キシラナーゼ（例えば、エンドキシラナーゼ、エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））（＞１２００  ＡＢＸ  Ｕ／ｋｇ）およびβ−グルコシダーゼ（＞８００  ｐＮＰＧ  Ｕ／ｋｇ）（ＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓ）を含む複数の酵素活性の組み合わせを含む酵素複合体である酵素ミックスあるいは、３６０  ＢＧＵのβ−グルカナーゼ／ｋｇ飼料の活性が補償されているＡｘｔｒａ(R)  ＸＢβ−グルカナーゼのいずれかである。＋直接給餌微生物は製品１グラム当たり３．０ｘ１０８ｃｆｕの活性が補償されている、バチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）ベース（株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８  ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８、ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３  ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９およびＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５  ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０を同じ割合で含む）あるいは製品１グラム当たり２．１ｘ１０９ｃｆｕの活性が補償されているプロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）のいずれかである。
【０５２６】
ボトルをＣＯ２ガスで３０秒間洗浄し、その間２５０μＬの盲腸の摂取菌体を加える（Ｃｏｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５、  Ａｎｉｍａｌ  Ｆｅｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１２３：４２１−４４４に基づく。該文献を参照により本明細書に援用する）。１０ｍＬのベースラインサンプルを収集して、ベースラインｐＨを決定して、サンプルを−２０℃で貯槽した。ボトルを密閉して、緩やかに近層して、３９℃、１６０ｒｐｍの振とうウォーターバス中に静置した。１２時間後、他の１０ｍＬサンプルを収集して、ｐＨを決定して、サンプルを−２０℃で貯蔵した。高圧液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）による揮発性脂肪酸（ＶＦＡ）の定量化ために、サンプルを解凍して１６．１ｒａｄで２０分間遠心分離した。上清を０．２２ｍｍの混合セルロースエステル膜を通してろ過した（Ｍｉｌｅｘ−ＧＳ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）。ろ過物の２０μＬをＳｈｏｄｅｘ  ＳＨ−Ｇガードカラム（Ｗａｔｅｒｓ）および３００  Ｘ  ７．８  ｍｍ  Ａｍｉｎｅｘ  ＨＰＸ−８７Ｈカラム（Ｂｉｏｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を備えるＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｍｏｄｕｌｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）に注入した。
【０５２７】
水／アセトニトリル（９８：２、ｖ／ｖ）中６．８ｍＭリン酸の移動相を、０．５２５ｍＬ／分の流速で、３５℃のカラム温度で平衡化を行う。揮発性脂肪酸は２１１ｎｍの吸光度でＷａｔｅｒｓ  ２９９６フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて検出する。装置の制御、データの捕捉、およびデータ処理はＷａｔｅｒｓ  Ｅｍｐｏｗｅｒ  ３  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｗａｔｅｒｓ）で行った。揮発性脂肪酸の定量化は高グレード（≧９９．９％）試薬（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を用いて標準曲線を作製して行った。水／アセトニトリル（９８：２、ｖ／ｖ）中６．８ｍＭリン酸中に標準物質を直線希釈して０．０５％乃至２．０％の範囲の２つの濃度のサンプルを調整した。酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸（これらの合計を総ＶＦＡとする）および乳酸の濃度を決定した。
各試験の統計解析はＳＰＳＳのＧＬＭ法の使用をブロックする一元配置ＡＮＯＶＡとして行われた。有意性はＰ≦０．１０として記載し、処置の平均はダンカンの多重範囲検定を用いて分離された。
結果
ＮＧＸキシラナーゼ、Ａｃｃｅｌｅｒａｓｅトリオ繊維分解酵素ミックスおよびＤＦＭを添加して、添加剤のない対照と比較したときに、小麦ベース飼料において、１２時間後の豚の後腸のシミュレーションにおいて総ＶＦＡおよび乳酸生産における有意な増加が観察された（表３１、実験１および２）。プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９ベースＤＦＭの使用は更に有意にプロピオン酸レベルをあげ、対照と比較して、組み合わせ処理において模擬大腸内容物を大きく酸性化させた（表３１、実験１）。コーンベース飼料において、Ｙ５キシラナーゼ、Ａｃｃｅｌｅｒａｓｅトリオ繊維分解酵素ミックス、およびＤＦＭの組み合わせ処理は、１２時間の模擬豚後腸発酵の後に、有意に酪酸レベルを上げた。プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）Ｐ１６９ベースＤＦＭの使用は更に有意に総ＶＦＡレベルをあげた（表３１、実験３および５）。Ａｃｃｅｌｅｒａｓｅトリオ繊維分解酵素ミックスをＡｘｔｒａ(R)  ＸＢ  β−グルカナーゼで置き換えて、バチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）ベースＤＦＭをＹ５とコーン飼料中に用いると、対照処置と比較して、総ＶＦＡと乳酸が有意に増加する結果となった。（表３１、実験４）
2015528705.tif 000061
2015528705.tif 000062
【０５２８】
実施例８：豚の後腸の繊維分解におけるキシラナーゼ、他の繊維分解酵素および直接給与微生物の影響
実施例８に用いる実験飼料の組成
表３２：生育豚の飼料組成（２０−６０ｋｇ体重）（％で記載）
2015528705.tif 000063
【０５２９】
乾燥重量（ＤＭ）の消失を繊維の分解を証明するために、実施例７に記載のように盲腸の排出物を生成して、後腸の発酵を設定した。簡単に説明すると、小麦ベース飼料（ＣＷ、表３２）を添加物のない対照として用いて、ＣＷにＹ５キシラナーゼを加えたもの（処置１）、ＣＷにＹ５とＡｃｃｅｌｅｒａｓｅトリオ繊維分解酵素ミックスを加えたもの（処置２）、およびＣＷにＹ５とＡｃｃｅｌｅｒａｓｅと３つの株のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の直接給餌微生物（処置３）も用いた。酵素とＤＦＭの詳細は表３３を参照。
表３３：試験計画＊
2015528705.tif 000064
【０５３０】
＊酵素および直接給餌微生物製品は飼料１メートルトン当たり５００ｇで等量含まれる。各実験は２回繰り返しで行われた。処置は各試験で３回測定された。；＃基礎飼料は表２９に記載のようにコーン対照飼料（ＣＣ）または小麦対照飼料（ＣＷ）のいずれかである。；†  キシラナーゼはＹ５（Ｄａｎｉｓｃｏキシラナーゼ：エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））または本明細書でＳＥＱ  ＤＩ  Ｎｏ．３で示され、参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１２／０７９６５０に記載の、４０００ＸＵ／ｋｇ飼料の酵素活性が補償されている、ＮＧＸ（ＦｖｅＸｙｎ４（エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））Ｄａｎｉｓｃｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）のいずれかである；‡繊維分解酵素はＡｃｃｅｌ（Ａｃｃｅｌｅｒａｓｅ  Ｔｒｉｏ、ＡＣＣＥＬＬＥＲＡＳＥ(R)ＴＲＩＯTMｅｎｚｙｍｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  β−グルカナーゼ（２００ＣＭＣＵ／ｋｇ）、キシラナーゼ（例えば、エンドキシラナーゼ、エンド−１、４−β−Ｄ−キシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８））（＞１２００  ＡＢＸ  Ｕ／ｋｇ）およびβ−グルコシダーゼ（＞８００  ｐＮＰＧ  Ｕ／ｋｇ）（ＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｂｉｏｓｃｅｎｃｅｓ）を含む複数の酵素活性の組み合わせを含む酵素複合体である酵素ミックスあるいは、３６０  ＢＧＵのβ−グルカナーゼ／ｋｇ飼料の活性が補償されている  Ａｘｔｒａ(R)  ＸＢ  β−グルカナーゼのいずれかである。＋直接給餌微生物は製品１グラム当たり３．０  ｘ  １０８ｃｆｕの活性が補償されている、バチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）ベース（株ＡＧＴＰ  ＢＳ９１８  ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０８、ＡＧＴＰ  ＢＳ１０１３  ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５０９およびＡＧＴＰ  ＢＳ３ＢＰ５  ＮＲＲＬ  Ｂ−５０５１０を同じ割合で含む）あるいは製品１グラム当たり２．１ｘ１０９ｃｆｕの活性が補償されているプロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）のいずれかである。
【０５３１】
処置はＤＭおよび繊維質の消失に影響を与えた。実験の０時間と４８時間に、液体をろ過して残りの固形物を収集して、乾燥重量（ＤＭ）、酸性および中性デタージェント繊維（それぞれＡＤＦおよびＮＤＦ）の正確な栄養分析を行うために送付した。後者はＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ（ＡＯＡＣ）２００７、１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ．ＡＯＡＣ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃに記載の方法に従って生成されたＤＭベースのものを作製した。データを消失分をパーセンテージとして計算した。統計解析はＳＰＳＳのＧＬＭ法の使用をブロックする一元配置ＡＮＯＶＡとして行われた。有意性はＰ≦０．１０として記載し、処置の平均はダンカンの多重範囲検定を用いて分離された。
【０５３２】
結果
試験された小麦ベース飼料において、Ｙ５キシラナーゼ、Ａｃｃｅｌｅｒａｓｅトリオ繊維分解酵素ミックスおよび３つのバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ベースＤＦＭの組み合わせは任意の酵素およびＤＦＭを添加していないＣＷを比較して、ＤＭ、ＡＤＦ、およびＮＤＦの消失が最も多かった。
2015528705.tif 000065
【０５３３】
本明細書においてこれまでに言及したすべての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明に関し記載される手法及び系に対し、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく加えられる各種修正及び変更は当業者には明白であろう。本発明は特定の好ましい実施形態に関連付けて記載したが、本発明は、特定の実施形態に不当に制限されるよう請求されるものではないことは明白である。加えて、生化学及びバイオテクノロジー又は関連する分野に属する当業者には本発明を実施する際に記載のモデルに関し加えられる各種修正は明白なものであり、このような修正も以降の特許請求の範囲内で意図されるものとする。
【図１】
2015528705.tif 000066
【配列表】
2015528705000001.app
【国際調査報告】
2015528705.tif 000067
2015528705.tif 000068