(57)【要約】  【課題】本発明は、細胞増殖に関連する疾患（例えば、白血病、腫瘍、炎症および他の増殖性疾患）を治療するための３，４，５−トリメトキシフェニルヒドラジドから誘導されるアシル−ヒドラゾンを提供することを目的とする。  【解決手段】本発明は、アシル−ヒドラゾン化合物に関し、特に、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジド誘導体、およびそのオキサジアゾール類似体および他の同様の化合物、および白血病などの細胞増殖に関連する種々の疾患、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および炎症を治療するためのこれらの医薬的使用を提供する。【選択図】図１
2015504432.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉを特徴とし、
【化１】
2015504432.tif 000028
式中、環Ｂは、フェニル、４−Ｂｒ−フェニル、４−ＮＯ２−フェニル；３−ＯＣＨ３−４−ＯＨ−５−Ｂｒ−フェニル；３−ＯＣＨ３−４−ＯＨ−５−Ｉ−フェニル；３−ＯＣＨ３−４−ＯＨ−フェニル；１−ナフチル；２−ナフチル；４−Ｃｌ−フェニル；３，４−ＯＣＨ２Ｏ−フェニル；２−Ｃｌ−フェニル；２，５−ジＯＣＨ３−フェニル；３，４，５−トリＯＣＨ３−フェニル；２，４，５−トリＯＣＨ３−フェニル；４−Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３−フェニル；４−ＣＨ３−フェニル；
【化２】
2015504432.tif 000029
；
３−ＮＯ２−フェニル；４−Ｎ（ＣＨ３）２−フェニル；３−Ｃｌ−フェニル；２，６−ジＯＣＨ３−フェニル；
【化３】
2015504432.tif 000030
；
２−ＣＯＯＨ−フェニル；３−ＯＣＨ２ＣＨ３−４−ＯＨ−フェニル；３−ＯＣＨ３−フェニル；２−ＯＨ−４−Ｂｒ−フェニル；（３−ＯＣＨ３−４−ＯＣＨ２フェニル）−フェニル；４−ＣＦ３−フェニル；および３−ＣＦ３−４−Ｃｌ−フェニルを含む群から選択される置換基である、化合物。
【請求項２】
前記環Ｂが、３−ＯＣＨ３−４−ＯＨ−５−Ｉ−フェニル；
【化４】
2015504432.tif 000031
；
２，６−ジＯＣＨ３−フェニル；２−ＯＨ−４−Ｂｒ−フェニル；および３−ＣＦ３−４−ＣＩ−フェニルを含む群から選択される置換基をあらわす、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
構造ＩＩを特徴とし、
【化５】
2015504432.tif 000032
式中、環Ｂは、３−ＯＣＨ３−４−ＯＨ−５−Ｂｒ−フェニル、３−ＯＣＨ３−４−ＯＨ−フェニルおよび１−ナフチルを含む群から選択される置換基をあらわす、化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の１種類以上の化合物と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項５】
細胞増殖と関連する疾患を治療するための医薬を調製するための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６】
細胞増殖と関連する疾患を治療するための医薬を調製するための請求項２に記載の化合物の使用。
【請求項７】
細胞増殖と関連する疾患を治療するための医薬を調製するための式Ｉａの化合物の使用。
【化６】
2015504432.tif 000033
【請求項８】
細胞増殖と関連する疾患を治療するための医薬を調製するための式ＩＩａの化合物の使用。
【化７】
2015504432.tif 000034
【請求項９】
細胞増殖に関連するこれらの疾患が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および炎症である、請求項５〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または請求項４に記載の組成物を投与することを含む、細胞増殖に関連する疾患を治療するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞増殖に関連する疾患（例えば、白血病、腫瘍、炎症および他の増殖性疾患）を治療するための３，４，５−トリメトキシフェニルヒドラジドから誘導されるアシル−ヒドラゾンに関する。さらに具体的には、本発明は、サイクリン依存性タンパク質キナーゼ（ＣＤＫ）およびトポイソメラーゼＩに対する阻害活性を有し、従って、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を治療するのに有用であり得る化合物に関する。本発明は、さらに、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドから新規なアシル−ヒドラゾンおよびオキサジアゾールを得ることに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、異常な形態のヒト細胞が体中で増殖し、制御できずに広がることを特徴とする疾患である。新生細胞は、新生細胞が有する浸潤能が高い、機能の喪失、分化しない、転移する能力、細胞自体間で接着性が低いという点で正常細胞とは異なる（Ｒａｎｇ，Ｈ．Ｐ．；Ｄａｌｅ，Ｍ．Ｍ．；Ｒｉｔｔｅｒ，Ｊ．Ｍ；Ｍｏｏｒｅ，Ｐ．Ｋ．Ｆａｒｍａｃｏｌｏｇｉａ．、第５版、Ｒｉｏ  ｄｅ  Ｊａｎｅｉｒｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２００４．７０３ｐ）。２００９年には、２００９年にブラジルで乳癌４９，０００例、前立腺癌４７，０００例、肺癌２７，０００例、結腸および直腸の癌２５，０００例、胃癌２３，０００例、子宮頸癌１９，０００例の新患が発生すると概算され（ＩＮＣＡ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ  Ｎａｃｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｃａｎｃｅｒ［Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ］。＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｃａ．ｇｏｖ．ｂｒ／ｅｓｔｉｍａｔｉｖａ／２００６／ｉｎｄｅｘ．ａｓｐ？ｌｉｎｋ＝ｍａｐａ．ａｓｐ＆ＩＤ＝８＞から入手可能。２０１１年２月２３日にアクセスした）、ブラジルでは第２位の死因である。
【０００３】
白血病は、数種類ある癌の一種であり、リンパ球または骨髄の造血細胞の新生物性増殖によって起こり、この増殖は１個の幹細胞の変異から生じ、その後代が、白血病細胞のクローンを生成する。通常は、発癌遺伝子の不適切な発現および腫瘍抑制遺伝子の機能喪失といった悪性転換が生じる複数の遺伝子変異が発生し（Ｂａｉｎ，Ｂ．Ｊ．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｏ  ｅｍ  ｌｅｕｃｅｍｉａｓ．Ｒｉｏ  ｄｅ  Ｊａｎｅｉｒｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２００３、Ｃａｐ．１、０１−５６）、このことは、遺伝的因子またはリスク（例えば、喫煙、放射線または化学物質、例えば、ベンゼンの曝露）と関係があるだろう（ＩＮＣＡ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ  Ｎａｃｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｃａｎｃｅｒ［Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ］−Ｌｅｕｃｅｍｉａ−ｐｒｅｖｅｎｃａｏ，ｇｅｎｅｔｉｃａ，ｏｕｔｒｏｓ  ｆａｔｏｒｅｓ  ｄｅ  ｒｉｓｃｏ［Ｌｅｕｃｅｍｉａ−ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｏｔｈｅｒ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ］＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ２．ｉｎｃａ．ｇｏｖ．ｂｒ／ｗｐｓ／ｗｃｍ／ｃｏｎｎｅｃｔ／ｔｉｐｏｓｄｅｃａｎｃｅｒ／ｓｉｔｅ／ｈｏｍｅ／ｌｅｕｃｅｍｉａ／ｐｒｅｖｅｎｃａｏ＿ｇｅｎｅｔｉｃａ＿ｏｕｔｒｏｓ＿ｆａｔｏｒｅｓ＿ｄｅ＿ｒｉｓｃｏ＞から入手可能。２０１１年２月２３日にアクセスした；およびＩＡＲＣ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）。Ｗｏｒｌｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２００８。＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉａｒｃ．ｆｒ／ｅｎ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｐｄｆｓ−ｏｎｌｉｎｅ／ｗｃｒ／２００８／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ＞および＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉａｒｃ．ｆｒ／ｅｎ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｐｄｆｓ−ｏｎｌｉｎｅ／ｗｃｒ／２００８／ｗｃｒ＿２００８．ｐｄｆ＞から入手可能。２０１１年２月２３日にアクセスした）。白血病は、疾患がどれほどすばやく進行するか、また重篤になるかに基づいてさらに分けられ、急性または慢性であり得る。急性白血病は、細胞の白血病性クローンが、成熟段階および死に達することなく増殖し続け、白血病性クローンが増え続け、未熟な細胞が優性となるため、細胞成熟における欠陥を特徴とし、増殖と成熟の均衡が壊れることを特徴とする（ＩＮＣＡ  ２００９ｂ、Ｂａｉｎ，Ｂ．Ｊ．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｏ  ｅｍ  ｌｅｕｃｅｍｉａｓ．Ｒｉｏ  ｄｅ  Ｊａｎｅｉｒｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２００３、Ｃａｐ．１、０１−５６）。
【０００４】
急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は、骨髄での未熟リンパ球前駆細胞の制御できない増殖に起因し、新生細胞が非常にすばやく蓄積する（Ｐｌａｓｓｃｈａｅｒｔ，Ｓ．；Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｋｏｌｋ，Ｄ．；Ｄｅ  Ｂｏｎｔ，Ｅ．；Ｖｅｌｌｅｎｇａ，Ｅ．；Ｋａｍｐｓ，Ｗ．；Ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ，Ｅ．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＣＲＰ）  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ＆  Ｌｙｍｐｈｏｍａ、２００４、４５、６４９−６５４）。ＡＬＬは、小児急性白血病の症例の８０％を占め（Ｌａｋｓ，Ｄ．；Ｌｏｎｇｈｉ，Ｆ．、Ｂｅｒｎａｒｄｅｓ，Ｗ．Ｍ．；Ｒａｍｏｓ，Ｇ．Ｐ．Ｃ．Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ、２００３、７９、１４９−１５８）、すべての造血器悪性腫瘍の５０％を占める（Ｄｏｗｎｉｎｇ，Ｊａｍｅｓ  Ｒ．；Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｍ．Ａｃｕｔｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ａ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２００２、２、４３７−４４５）。成人では、ＡＬＬは比較的まれであり、造血器悪性腫瘍の２〜３％を占める（Ｄｏｗｎｉｎｇ，Ｊａｍｅｓ  Ｒ．；Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｍ．Ａｃｕｔｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ａ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２００２、２、４３７−４４５）。しかし、多分化能幹細胞に影響を及ぼし、さらに攻撃性の高い白血病を生じるため、小児の場合よりも予後はかなり悪い（Ｇｒｅａｖｅｓ，Ｍ．Ｆ．Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ｏｒｉｇｉｎｓ  ｏｆ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ  ａｎｄ  ｃｕｒａｂｉｌｉｔｙ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、１９９３、６７、４１３−４２３）。
【０００５】
天然源に由来する化合物を化学療法として使用することに関する研究は、数多い。一例は、抗悪性腫瘍薬パクリタキセル（ＴａｘｏｌＴＭ）であり、これまでに開発された中で最も重要な抗腫瘍性天然産物の１つであり、１９７１年に最初に報告され（Ｗａｎｉ，Ｍ．Ｃ．；Ｔａｙｌｏｒ，Ｈ．Ｌ．；Ｗａｌｌ，Ｍ．Ｅ．；Ｃｏｇｇｏｎ，Ｐ．；ＭｃＰｈａｉｌ，Ａ．Ｔ．Ｐｌａｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔｓ．ＶＩ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔａｘｏｌ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔ  ｆｒｏｍ  Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９７１、９３、２３２５−２３２７）、臨床用途としてＦＤＡで長期間承認されてきた唯一のものである（１９９２年）。別の例は、急性白血病および他の種類の腫瘍の治療に用いられるアルカロイドであるビンクリスチンであり、チューブリンに結合することによってパクリタキセルと同じ様式で機能し、微小管の生成（重合）または再組織化（解重合）を妨害する（Ｇｏｏｄｍａｎ  ｅ  Ｇｉｌｍａｎ．Ａｓ  ｂａｓｅｓ  ｆａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｓ  ｄａ  ｔｅｒａｐｅｕｔｉｃａ、１０a  Ｅｄ．、ｅｄｉｔｏｒａ  Ｍｃ  Ｇｒａｗ  Ｈｉｌｌ．２００６）。
【０００６】
現在の白血病治療で最も一般的に用いられる化学療法薬としては、ダウノルビシン、ドキソルビシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、メトトレキサートおよびメルカプトプリンが挙げられる（Ｐｌａｓｓｃｈａｅｒｔ，Ｓ．；Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｋｏｌｋ，Ｄ．；Ｄｅ  Ｂｏｎｔ，Ｅ．；Ｖｅｌｌｅｎｇａ，Ｅ．；Ｋａｍｐｓ，Ｗ．；Ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ，Ｅ．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＣＲＰ）  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ＆  Ｌｙｍｐｈｏｍａ、２００４、４５、６４９−６５４）。これらの薬物は、治療効果を与えるだけではなく、アポトーシスの誘発および細胞増殖の阻害といった役割に起因して、身体および正常細胞に顕著な毒性も提供する（Ｈｅｒｒ，Ｉ．；Ｄｅｂａｔｉｎ，Ｋ．Ｍ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｌｏｏｄ  ２００１、９８、２６０３−２６１４；およびＬｅｓｚｃｚｙｎｉｅｃｋａ，Ｍ．；Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｔ．；Ｄｅｎｔ，Ｐ．；Ｇｒａｎｔ，Ｓ．；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐ．Ｂ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ：ｂａｓｉｃ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２００１、９０、１０５−１５６）。抗悪性腫瘍薬剤は、迅速に分割する細胞を有する正常な組織にも干渉し、例えば、体内の防御細胞の生成を低下させる、傷の治癒が悪くなる、脱毛、胃腸上皮の損傷、不妊および催奇形といった多くの望ましくない影響を引き起こすことがある（Ｒａｎｇ，Ｈ．Ｐ．；Ｄａｌｅ，Ｍ．Ｍ．；Ｒｉｔｔｅｒ，Ｊ．Ｍ；Ｍｏｏｒｅ，Ｐ．Ｋ．Ｆａｒｍａｃｏｌｏｇｉａ．第５版．Ｒｉｏ  ｄｅ  Ｊａｎｅｉｒｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２００４．７０３ｐ）。
【０００７】
近年の癌研究の進歩にもかかわらず、２００８年には、ブラジルで白血病による５，６８６例の死亡が登録されており、２０１０年には、この疾患の新患は９，５８０例であると概算され（ＩＮＣＡ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ  Ｎａｃｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｃａｎｃｅｒ［Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ］。＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｃａ．ｇｏｖ．ｂｒ／ｅｓｔｉｍａｔｉｖａ／２００６／ｉｎｄｅｘ．ａｓｐ？ｌｉｎｋ＝ｍａｐａ．ａｓｐ＆ＩＤ＝８＞から入手可能。２０１１年２月２３日にアクセスした）、白血病および他の腫瘍を治療するための新薬の研究は依然として関心が高い。
【０００８】
近年の研究では、Ｗａｎｇら（Ｗａｎｇ，Ｚ．；Ｌｕ，Ｙ．；Ｓｅｉｂｅｌ，Ｗ．；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｄ．Ｄ．；Ｌｉ，Ｗ．Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｂｙ  Ｌｉｇａｎｄ−Ｂａｓｅｄ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ、２００９、４９、１４２０−１４２７）は、化合物ＬＹ−１−１００の構造に由来する抗腫瘍性化合物を評価し、微小管（コルヒチン結合部位）への作用機序および親和性を証明しているが、選択性は低い。
【化１】
2015504432.tif 000003
【０００９】
リガンド法によるバーチャルスクリーニングによって構造を選択し、出発化合物（ＬＹ−１−１００）と高い構造類似性を有する１４種の新規分子を得た。研究者が得たこの理論的な結果から、抗腫瘍活性を付与するには、ＬＹ−１−１００化合物のトリメトキシル化された環が維持されていなければならないが、トリアゾール環は重要ではないと思われること、また、アシル−ヒドラゾンの構造を生成するＮ−メチレン−ヒドラジンの構造に置き換えることができることがわかった。これらの化合物のマウスＢ１６Ｆ１細胞およびＡ３７５細胞での結果は、出発物質の効能および選択性の向上は示さなかったが、これらの結果は非常に有望であり、抗メラノーマ活性のための主ないくつかの構造要素が特定された（Ｗａｎｇ，Ｚ．；Ｌｕ，Ｙ．；Ｓｅｉｂｅｌ，Ｗ．；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｄ．Ｄ．；Ｌｉ，Ｗ．Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｂｙ  Ｌｉｇａｎｄ−Ｂａｓｅｄ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ、２００９、４９、１４２０−１４２７）。
【化２】
2015504432.tif 000004
【００１０】
この観点で、アシル−ヒドラゾンは、抗腫瘍活性を有する興味深い化合物種であると思われる。従って、本発明は、アシル−ヒドラゾン、特に、細胞増殖に関連する疾患（例えば、白血病、腫瘍、炎症および他の増殖性疾患）を治療するための３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドから誘導されるアシル−ヒドラゾンを得ることに関する。
【００１１】
特許出願第ＰＩ  ０１１２６７４−１号（サイクリン依存性キナーゼの阻害剤であるｎ−［５−［［［５−アルキル−２−オキサゾリル］メチル］チオ］−２−トリアゾリル］カルボキサミド）は、増殖性疾患、例えば、癌、炎症および関節炎の治療に有用なタンパク質キナーゼの阻害剤としての化合物およびその鏡像体、ジアステレオマー、溶媒和物および医薬的に許容される塩を記載している。この合成された化合物は、アルツハイマー病、化学療法によって誘発される脱毛および心血管疾患の治療にも有用であろう。この出願第ＰＩ  ０１１２６７４−１号に記載される化合物は、一連の本発明で提示するものよりも複雑な構造をあらわしている。
【００１２】
引用する特許公開Ｕ．Ｓ．２００４０１３８２７２号の化合物（１，４−置換シクロヘキサン誘導体）は、Ｒｈｏキナーゼを阻害することによって悪性疾患の細胞増殖を予防するのに有用であり、成長誘発および軸索の再生によって中枢神経系および末梢神経系の修復に有用であろう。公開Ｕ．Ｓ．２００４０１３８２７２号の化合物の作用機序は、本発明の構造で提案されるものとは異なる。
【００１３】
細胞周期進行の調整に有用なサイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋｓ）阻害剤は、特許出願第ＰＩ  ０４１８０９５−０号（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、これに関連する組成物および使用）に提案されている。このような化合物は、過剰な細胞増殖に関連する障害を有する患者の治療に有用であろう。ＰＩ  ０４１８０９５−０号に記載される化合物は、もっと複雑な合成過程を用いる一連の本発明で提案されるものとは異なるアシル−ヒドラゾンである。
【００１４】
特許出願第ＰＩ  ０５０８３６４−８号（４−ベンズイミダゾール−２−イル−ピリダジン−３−オン誘導体）には、キナーゼ、特に、ＣＤＫ２キナーゼ（サイクリン依存性キナーゼ２）の阻害剤として活性を有する化合物およびその生理学的に許容される塩が記載されている。ＰＩ  ０５０８３６４−８号の化合物は、もっと複雑な合成を用いる一連の本発明で提案されるものとは異なる。
【００１５】
米国特許出願第Ｕ．Ｓ．２００７００６６６１０号の公開広報（キナーゼ調整剤としてのアシル−ヒドラゾン）は、細胞増殖、形態発生および運動性を制御するチロシンキナーゼ受容体であるｃ−Ｍｅｔを含むチロシンキナーゼの阻害剤としてのアシル−ヒドラゾンを開示する。Ｕ．Ｓ．２００７００６６６１０号に記載されるアシル−ヒドラゾンは、もっと複雑な合成を用いる一連の本発明で提案されるものとは異なる。それに加え、記載されている化合物の作用標的は、本明細書に提案するものとは異なる。
【００１６】
公開された米国特許出願第２００８０１９４５６２号（ＣｄｋおよびＧｓｋの阻害のためのピラゾール誘導体）は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）およびキナーゼグリコーゲンシンターゼ（ＧＳＫ）の活性を阻害または調整するピラゾール化合物の合成、およびキナーゼが介在する疾患または状態の治療または予防におけるこれらの使用を指す。この化合物および化学中間体を含有する医薬組成物も記載されている。Ｕ．Ｓ．２００８０１９４５６２号書類の化合物は、一連の本発明で提案されているものとは異なる。
【００１７】
顕著な殺虫性および植物成長刺激活性についての文献（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｂ．Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｉｎｄｏｌｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、１９６３、４、３７３−４０１）、結核の治療についての文献（Ｖｉｇｏｒｉｔａ，Ｍ．Ｇ．；Ｏｔｔａｎａ，Ｒ．；Ｚａｐｐａｌａ，Ｃ．；Ｍａｃｃａｒｉ，Ｒ．；Ｐｉｚｚｉｍｅｎｔｉ，Ｆ．Ｃ．；Ｇａｂｂｒｉｅｌｌｉ，Ｇ．Ｈａｌｏｇｅｎａｔｅｄ  ｉｓｏｎｉａｚｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ａｎｔｉｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ａｇｅｎｔｓ−ＩＩＩ．Ｆａｒｍａｃｏ、１９９４、４９、７７５−７８１）；および細菌剤および静菌剤としての文献（Ｓａｍｕｓ，Ｎ．Ｍ．；Ｔｓａｐｋｏｖ，Ｖ．Ｉ．；Ｋｕｒａｃｈｅｖａ，Ｓ．Ａ．；Ｂｕｒｄｅｎｋｏ，Ｔ．Ａ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｏｆ  ３ｄ−ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｏｍｅ  ｈｙｄｒａｚｏｎｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｂｙ  ｕｓｉｎｇ  ５−ｎｉｔｒｏ−２−ｆｕｒａｌｄｅｈｙｄｅ．Ｋｈｉｍｉｋｏ−Ｆａｒｍａｔｓｅｖｔｉｃｈｅｓｋｉｉ  Ｚｈｕｒｎａｌ、１９９４、２８、４１−４４）にも、アシル−ヒドラゾンが記載されている。
【００１８】
上述のことを考慮し、目標は新しい化学療法薬を開発することとし、アシル−ヒドラゾンおよび閉環の従来にはない生物学的等価性戦略によって得られるそのオキサジアゾール誘導体を用いて研究が行われた。オキサジアゾールは、例えば、抗ウイルス性、抗菌性、抗悪性腫瘍性、殺真菌性およびチロシナーゼおよびカテプシンＫの阻害といった広範囲にわたる生体活性を有する重要なヘテロ環化合物種である（Ｋｕｍａｒ，Ｄ．；Ｓｕｎｄａｒｅｅ，Ｓ．；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅ．Ｏ．；Ｓｈａｈ，Ｋ．Ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｄｏｌｙｌ−１，３，４−ｏｘａｄｉａｚｏｌｅｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００９、１９、４４９２−４４９４）。また、これらは、アミドおよびエステルの優れた生物学的等価体であり、薬理学的活性の増加を実質的にもたらすことができ、受容体として水素結合に参加する（Ｇｕｉｍａｒａｅｓ，Ｃ．Ｒ．Ｗ．；Ｂｏｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．；Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｗ．Ｌ．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄ  Ａｍｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｐｏｔｅｎｔ  α−Ｋｅｔｏｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｍｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００５、１２７、１７３７７−１７３８４）。
【００１９】
従って、以下に詳細に記載する本発明からの過程から得られる具体的なアシル−ヒドラゾンおよびその類似体、および白血病、腫瘍および他の増殖性疾患、例えば、炎症の治療でのこれらの使用は、経済的および社会的な関心が高い。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
（本発明の目標）
本発明の目的は、単純な合成経路を用いることによって、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジド（ヒドラゾンおよびオキサジアゾール）から誘導される合成化合物およびすべての類似体などを得ること、および細胞増殖に関連する疾患（例えば、白血病、特に、急性リンパ芽球性白血病−ＡＬＬ−腫瘍、炎症および他の増殖性疾患）を治療するためのこれらの化合物の使用を得ることである。本発明は、さらに、これらの化合物の生体活性を決定するために用いられる手順も記載する。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、一種のアシル−ヒドラゾン、特に、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドから誘導されるアシル−ヒドラゾン、および類似体化合物であるオキサジアゾールおよび他の同様の化合物および関連する化合物、および例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を含む白血病、腫瘍および炎症を含む異なる細胞増殖に関連する疾患の治療におけるこれらすべての医薬用途に関する。本発明は、さらに、これらすべての化合物の生体活性を決定するために用いられる手順も記載する。
【００２２】
実験で標準として用いられる化合物（コルヒチン）と同様の活性を有するアシル−ヒドラゾンを得た。本明細書に開示する化合物の活性が高いことは、臨床現場で現在用いられている薬物よりも副作用が少ないことに関連する重要な特徴である。合成されたアシル−ヒドラゾン、さらに具体的には、化合物０２および０７は、顕著な抗白血病活性を示し、このことは、０２および０７が、白血病、特に、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および他の増殖性疾患、例えば、炎症を治療するための薬物プロトタイプまたは薬物の候補物質であることを示している。
【００２３】
最も活性な化合物の作用機序の決定は、健康なヒトリンパ球の選択性試験に加え、ＤＮＡマイクロアレイおよびチップによって示されるその後の試験を用いることによって行われた。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、（Ａ）コントロールサンプルＨＬ−６０  対  化合物０７で処理されたサンプル（ｐ＝０．００２、ＦＤＲ  ｑ値＝０．１６８）のエンリッチメントを示す、「ＲＥＡＣＴＯＭＥ  ＰＯＳＴ  ＣＨＡＰＥＲＯＮＩＮ  ＴＵＢＵＬＩＮ  ＦＯＬＤＩＮＧ  ＰＡＴＨＷＡＹ」として定義される遺伝子セットのエンリッチメントの概要、および（Ｂ）青色の四角（低い発現）および赤色の四角（高い発現）であらわされる、（Ａ）の遺伝子セットの一部である１６遺伝子の発現値を示す。
【図２】図２は、化合物０７が、Ｇ２／Ｍでの細胞周期停止を誘発することを示す。１２５ｎＭの化合物０７またはＤＭＳＯで１８時間処理したＪｕｒｋａｔ細胞について、ヨウ化プロピジウムで染色した後に細胞周期分析、フローサイトメトリー分析を行った。
【図３】図３は、１２５ｎＭの化合物０７（Ｆ８）またはビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理されたＪｕｒｋａｔ細胞から抽出された種々の細胞周期調整剤であるタンパク質抽出物のウェスタンブロット分析の結果を示す。
【図４】図４は、化合物０７が、Ｊｕｒｋａｔ細胞でのアポトーシスの強力な誘発因子であることを示す。全体として、この結果は、化合物０７が、主にＣｈｋ２およびＲｂによって細胞周期停止およびアポトーシスを促進することを示唆する。１２５ｎＭの化合物０７またはＤＭＳＯで１８時間処理されたＪｕｒｋａｔ細胞をアネキシンＶ／ヨウ化プロピジウムで二重染色し、フローサイトメトリーによって分析した。
【図５】図５は、化合物０７が、４８時間後にヒトリンパ球（ＷＢＣ）および白血病性Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＨＥＫ細胞に及ぼす影響を示す。正常なリンパ球の増殖は、フィトヘマグルチニンを用いて刺激された。化合物０７で処理された細胞の生存率  対  ビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理された細胞の生存率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
（本発明の詳細な説明）
本発明は、合成アシル−ヒドラゾンおよびその類似体および関連する化合物を得ることおよびその作用機序を含み、白血病、特に、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および他の増殖性障害、例えば、炎症を治療するのに有用であろう。
【００２６】
本発明の一態様によれば、（Ｉ）の構造の化合物を記載し、
【化３】
2015504432.tif 000005
【００２７】
本発明の化合物のさらなる群は、構造ＩＩを有する化合物を含み、
【化４】
2015504432.tif 000006
【００２８】
さらに、構造ＩＩＩの合成類似体であるオキサジアゾールも記載され、
【化５】
2015504432.tif 000007
【００２９】
本発明の新規アシル−ヒドラゾンは、エタノールを溶媒として用い、以下の反応に従って還流状態で３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドと異なるアルデヒドの縮合反応から得られた。
【化６】
2015504432.tif 000008
【００３０】
表１は、新規３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾンの合成で得られる収率および実験的な融点を示す。
【表１】
2015504432.tif 000009
【００３１】
化合物０２の構造は、オキサジアゾールを得るための反応中間体としてすでに公開されており（Ｍａｚｚｏｎｅ，Ｇ．；Ｂｏｎｉｎａ，Ｆ．；Ｆｏｒｍｉｃａ，Ｆ．Ｓｏｍｅ  ａｒｏｙｌｈｙｄｒａｚｏｎｅｓ  ｏｆ  ｈａｌｏｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅｓ  ａｎｄ  ｈａｌｏ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ２，５−ｄｉａｒｙｌ−１，３，４−ｏｘａｄｉａｚｏｌｅｓ．Ｆａｒｍａｃｏ、Ｅｄｉｚｉｏｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａ、１９７８、３３（１２）、９６３−７１）、化合物０７は、すでにＭＡＯ（モノアミンオキシダーゼ）阻害剤として評価されていた（Ｍａｚｚｏｎｅ，Ｇ．；Ａｒｒｉｇｏ  Ｒｅｉｎａ，Ｒ．３，４，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ  ｈｙｄｒａｚｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｎｔｉ−ＭＡＯ［ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ］ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｂｏｌｌｅｔｔｉｎｏ  ｄｅｌｌｅ  Ｓｅｄｕｔｅ  ｄｅｌｌａ  Ａｃｃａｄｅｍｉａ  Ｇｉｏｅｎｉａ  ｄｉ  Ｓｃｉｅｎｚｅ  Ｎａｔｕｒａｌｉ  ｉｎ  Ｃａｔａｎｉａ、１９７１、１０（８）、６８９−７０２）。化合物（０２および０７）両方の化学特徴も、我々の研究グループによってこれらの化合物および他の化合物のＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ  ｃｒｕｚａｉｎ阻害剤としての活性を評価した研究ですでに公開されているが、化合物０２および０７は、このタンパク質の阻害活性を示さなかった（Ｂｏｒｃｈｈａｒｄｔ，Ｄｅｉｓｅ  Ｍ．；Ｍａｓｃａｒｅｌｌｏ，Ａｌｅｓｓａｎｄｒａ；Ｃｈｉａｒａｄｉａ，Ｌｏｕｉｓｅ  Ｄｏｍｅｎｅｇｈｉｎｉ；Ｎｕｎｅｓ，Ｒｉｃａｒｄｏ  Ｊ．；Ｏｌｉｖａ，Ｇｌａｕｃｉｕｓ；Ｙｕｎｅｓ，Ｒｏｓｅｎｄｏ  Ａ．；Ａｎｄｒｉｃｏｐｕｌｏ，Ａｄｒｉａｎｏ  Ｄ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃｈａｌｃｏｎｅ  ａｎｄ  ｈｙｄｒａｚｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｒｕｚａｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１０、２１（１）、１４２−１５０）。しかし、白血病を治療するための化合物０２および０７の使用は、従来技術には記載されておらず、本発明の範囲内である。
【００３２】
以下の反応に従って、上述のヒドラジドを調製するのと同じ手順によって、ヒドラジドと異なるフェニルアルデヒドとの反応によって、さらなるアシル−ヒドラゾン（生物学的試験の議論を補助するために調製された）を合成した。
【化７】
2015504432.tif 000010
【００３３】
以下の反応に従って、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾンと無水酢酸の反応から、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾンの新規合成類似体であるオキサジアゾールも調製した。
【化８】
2015504432.tif 000011
【００３４】
表２は、オキサジアゾールの合成で得られる収率および実験的な融点を示す。
【表２】
2015504432.tif 000012
【００３５】
本発明は、合成されたアシル−ヒドラゾン、およびオキサジアゾールを含むその類似体および同様の化合物の作用機序の決定も記載する。本発明は、白血病、特に、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および他の細胞増殖に関連する疾患、例えば炎症を治療するためのプロトタイプ薬または薬物としてのこのような化合物すべての使用も指す。
【００３６】
本明細書に記載するアシル−ヒドラゾンは、一例の形態で以下に記載されるように、健康なヒトリンパ球でのその活性と比較したときに、ナノモル程度で活性を有し、白血病細胞に対して選択的に作用する。ここには、試験する化合物について新規な生物学的結果の関連性が示される。
【００３７】
別の実施形態では、本発明は、賦形剤、担体および医薬的に許容されるアジュバントと組み合わせて上述の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００３８】
本明細書で使用する場合、「医薬的に許容される」という用語の使用は、非毒性の不活性な固体、液体、半固体の任意の種類の賦形剤、希釈剤、補助配合物、または単に、滅菌水性媒体、例えば、食塩水を意味する。医薬的に許容される担体として役立ち得る物質のいくつかの例は、糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース、デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン、セルロースおよびその誘導体、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロース、シクロデキストリン；油、例えば、ピーナツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油；グリコール、例えば、プロピレングリコール、ポリオール、例えば、グリセリングリコール、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレン；エステル、例えば、ラウリン酸エチル、オレイン酸エチル、寒天；緩衝化剤、例えば、水酸化アルミニウムおよび水酸化マグネシウム；アルギン酸；発熱性物質を含まない水；等張食塩水液、Ｒｉｎｇｅｒ溶液；エチルアルコールおよびリン酸バッファー溶液、および医薬製剤に用いられる他の非毒性の適合性物質が挙げられる。
【００３９】
特に、本発明の化合物を含む医薬組成物および獣医薬組成物は、任意の種類の投与、例えば、非経口投与によって投与することを意図していてもよい。
【００４０】
具体的には、本発明の組成物は、上のいずれかの医薬形態で薬物を製造するときに用いられる任意の種類の賦形剤、例えば、吸収剤、希釈剤、バインダー、崩壊剤、滑沢剤、滑剤、可塑剤、コーティング剤、制御放出のためのマトリックス作成剤、溶媒および共溶媒、湿潤剤、乳化剤、界面活性剤、増粘剤、等張化剤、保水剤、研和剤、空気を追い出す薬剤、アルカリ化剤または酸性化剤、防腐剤、酸化防止剤、殺菌剤、静菌剤、キレート化剤、着色剤および甘味剤を含んでいてもよい。
【００４１】
本発明の組成物に適した吸収剤は、特定の揮発性化合物、例えば、エキスを固定するために、抽出物中に存在する水を吸収するために加えられる任意の物質であってもよい。このような賦形剤の非限定例は、リン酸カルシウム、カオリン、炭酸マグネシウムベントナイトおよびタルクである。
【００４２】
本発明の組成物は、溶媒として、錠剤を得ることができるように配合物に加えられるか、または適切な体積でカプセルを充填し、製造に必要な流動特性および圧縮特性を与える任意の不活性物質、例えば、限定されないが、ラクトース三塩基性リン酸カルシウム、デンプン、マンニトール、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース（Ｍｉｃｒｏｃｅｌ、Ａｖｉｃｅｌ）、二塩基性リン酸カルシウム（Ｅｎｃｏｍｐｒｅｓｓ、Ｄｉｔａｂ）、酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、タルク、カオリン、炭酸カルシウム、デキストロースフルクトース、ラクトース、アスパルテーム、セルロース、マルトース、マンニトール、グアーゴム、ソルビトール、デンプンおよびスクロースを含んでいてもよい。
【００４３】
本発明の組成物に適したバインダー物質は、顆粒化および固体医薬形態の圧縮の間に粒子の付着を促進するために用いられる薬剤であってもよく、本発明の組成物を、例えば、カルボポール、ポビドン、キサンタンゴム、アラビアゴム、アルギン酸、圧縮糖、ＣＭＣ−Ｎａ、エチルセルロース、ゼラチン、メチルセルロース、ポビドン（ＰＶＰ）、デンプン、アルファデンプンおよび液体グルコースの溶液、分散物または粉末の状態で使用することもできる。
【００４４】
本発明の組成物に適した脱凝集剤または崩壊剤は、生物学的流体の中で医薬形態の崩壊および／または溶解を促進するために用いられる任意の要素、例えば、アルギン酸、デンプン、アルギン酸ナトリウム、ＣＭＣ−Ｎａ、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム（Ａｃ−Ｄｉ−ｓｏｌ）、ナトリウムデンプングリコレート（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）およびクロスポビドン（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬ）であってもよい。
【００４５】
本発明の組成物に適した滑沢剤は、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、タルクおよび水素化植物油（例えば、Ｌｕｂｒｉｔａｂ）であってもよい。
【００４６】
本発明の組成物に適した滑剤は、例えば、コロイド状シリカ（Ａｅｒｏｓｉｌ  ２００）およびタルクであってもよい。
【００４７】
本発明の組成物に適した可塑剤をポリマーと共に用い、その相転移温度を変え、顆粒、錠剤またはペレットの上に形成させた膜の融着を促進することができる。このような薬剤の非限定例は、グリセリン、クエン酸トリエチル、フタル酸ジブチル、シリコーンおよびＰＰＧである。
【００４８】
錠剤、顆粒、カプセルまたはペレットの形態で本発明のコーティング組成物に用いられるコーティング剤は、例えば、セルロースアセテートフタレート、エチルセルロース、ゲランガム、マルトデキストリン、メタクリレート、メチルセルロース、微結晶性セルロース、シェラック、カラゲナンガム、ワックス、シェラック、ゼラチン、セルロース誘導体（メチルセルロースまたはエチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸セルロース）、アクリル酸エステルとメタクリル酸エステルのコポリマー（特に、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ｌ１００、ＲＳ  ３０Ｄ、ＲＳ  ＰＭ、Ｓ１００）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）およびポリ酢酸ビニルであってもよい。
【００４９】
活性原理の遅延性放出および／または制御放出を得るために、何らかの形で本発明の組成物に使用される制御放出のためのマトリックス作成剤は、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ−Ｎａ、キサンタンゴム、カルボポール、種々の種類のＥｕｄｒａｇｉｔ、寒天、ポリオキシエチレン誘導体（ＰＥＯの誘導体）、シクロデキストリンナノ球および任意の性質のナノ粒子であってもよい。
【００５０】
特に、溶媒および共溶媒、例えば、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、グリセリン、イソプロピルアルコール、鉱物油、オレイン酸、ピーナツ油、精製水、注射用の水を本発明の組成物に使用することもできる。
【００５１】
本発明の組成物に適した湿潤剤は、液体／固体界面の表面張力を下げる目的で加えられる任意の物質、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ナトリウムドクサートおよびポリソルベート２０、６０、８０（Ｔｗｅｅｎ  ２０、６０、８０）であってもよい。
【００５２】
本発明の組成物に適した乳化剤は、例えば、グリセリルモノステアレート、セチルアルコールおよびゼラチンおよび補助物質、例えば、ＣＭＣ−Ｎａ、ＭＣ、アルギネートおよびペクチンであってもよい。
【００５３】
界面活性剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、ノノキシノール１０、オクトキシノール９、ポリソルベート８０およびラウリル硫酸ナトリウムも、本発明の組成物にとって十分である。
【００５４】
本発明の組成物に適した増粘剤は、軟膏の稠度を高めるために用いられる任意の物質、例えば、セチルアルコール、ホワイトワックス、イエローワックス、ステアリルアルコール、パラフィン、微結晶性ワックスおよびセチルエステルワックスであってもよい。
【００５５】
本発明の組成物に適した等張化剤は、目、鼻によって、非経口経路によって投与される生体液の浸透特徴と類似した浸透特徴を有する溶液を得るために用いられる任意の物質、例えば、ＮａＣｌ（０．９％）、マンニトール（５．０７％）およびデキストロース（５．５１％）であってもよい。
【００５６】
本発明の組成物に適した保水剤は、グリセリン、プロピレングリコールおよびソルビトールであってもよい。
【００５７】
本発明の組成物に適した研和剤は、エマルション、油系基剤を調製する間に薬物粒子を小さくする過程で促進薬剤として用いられる任意の液体、特に、例えば、鉱物油（液体ペトロラタム）、グリセリン、プロピレングリコール過程、ＰＥＧ  ４００、綿実油、ヒマシ油およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）であってもよい。
【００５８】
本発明の組成物に適した空気を追い出す薬剤を使用し、気密状態に密閉された封入部から、または安定性を高めるために、流体配合物から空気、例えば、窒素（Ｎ２）および二酸化炭素（ＣＯ２）を追い出してもよい。
【００５９】
アルカリ化剤または酸性化剤、例えば、クエン酸、アンモニア、酢酸、アンモニウムカーボネート、フマル酸、ジエタノールアミン、塩酸（ＨＣｌ）、モノエタノールアミン、酒石酸、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、ホウ酸、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、炭酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリウムおよびトリエタノールアミンも、本発明の組成物に適している。
【００６０】
本発明の組成物で使用可能な防腐剤は、例えば、抗真菌剤、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ナトリウムブチルパラベン、メチルパラベン（Ｎｉｐａｇｉｎ）、プロピルパラベン（Ｎｉｐａｓｏｌ）、エチルパラベン、ナトリウムプロピオネートおよび抗菌剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、セチルピリジニウム、クロロブタノールおよび塩化フェノールである。
【００６１】
本発明の組成物に適した酸化防止剤は、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、β−トコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、メタ重亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、システイン、グルタチオンビタミンＣ、メタ重亜硫酸ナトリウム、システインおよびチオ硫酸ナトリウムを含む群から選択されてもよい。
【００６２】
本発明の組成物は、さらに、緩衝化剤として、クエン酸バッファー、リン酸バッファーおよびホウ酸バッファーを含んでいてもよい。着色剤として、例えば、フレーバーおよび香料、バニラ、メントール、シナモン油、アニス油およびココアを使用することができる。甘味剤としては、例えば、アスパルテーム、デキストロース（グルコース）、マンニトール、ソルビトール、サッカリン、シクラミン酸ナトリウム、糖、アセスルファームカリウム、ステビオシドおよびスクラロースを挙げることができる。
【００６３】
本発明の組成物は、さらに、賦形剤、例えば、殺菌剤、静菌剤、酸化防止剤、防腐剤、バッファー、安定化剤、ｐＨ調整剤、モル浸透圧濃度調整剤、発泡防止剤および界面活性剤、および不活性化剤の残り、または医薬製造に一般的に用いられる分画抗原の残り、成長媒体の要素および溶媒を含んでいてもよい。これらの種類の要素の例は、「Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（ＲＡＹＭＯＮＤ  Ｃ．Ｒｏｗｅ、Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ）の中に見出すことができる。
【００６４】
本明細書に記載する組成物の種々の投与経路が利用可能である。選択される特定の態様は、選択される特定の活性成分、治療効能に必要な投薬量、組成物が投与される患者によって変わるだろう。
【００６５】
別の実施形態では、本発明は、細胞増殖に関連する疾患、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および炎症を治療するための本明細書に記載する化合物および組成物の使用を記載する。
【００６６】
別の実施形態では、本発明は、細胞増殖に関連する疾患、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および炎症を治療するために本明細書に記載する化合物および組成物を用い、細胞増殖に関連する疾患、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、腫瘍および炎症を治療する方法を提供する。
【実施例】
【００６７】
具体例によって、本発明を記載する。
（実施例１  ３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾン０１−２９を調製するための一般的な手順）
３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾン０１−２９を合成するために、本願発明者らは、Ｔｒｏｅｂｅｒｇら（Ｔｒｏｅｂｅｒｇ，Ｌ．；Ｃｈｅｎ，Ｘ．；Ｆｌａｈｅｒｔｙ，Ｔ．Ｍ．；Ｍｏｒｔｙ，Ｒ．Ｅ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｍ．；Ｈｕａ，Ｈ．；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．；ＭｃＫｅｒｒｏｗ，Ｊ．Ｈ．；Ｋｅｎｙｏｎ，Ｇ．Ｌ．；Ｌｏｎｓｄａｌｅ−Ｅｃｃｌｅｓ，Ｊ．Ｄ．；Ｃｏｅｔｚｅｒ，Ｔ．Ｈ．Ｔ．；Ｃｏｈｅｎ，Ｆ．Ｅ．Ｃｈａｌｃｏｎｅ、ａｃｙｌ  ｈｙｄｒａｚｉｄｅ，ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ａｍｉｄｅｓ  ｋｉｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ  ｂｒｕｃｅｉ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０００、６、６６０−６６９）に記載される方法論を使用した。１００ｍＬ／１ッ口反応フラスコに、有機溶媒：アセトン、酢酸エチル、エチルエーテル、エタノール、メタノール（２０ｍＬ）中で実施例２に記載するように調製した３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジド（２ｍｍｏｌ）と、適切なアルデヒド（２ｍｍｏｌ）を入れた。この混合物を１〜１０時間還流させた。次いで、この溶液を濾過し、有機溶媒中、固体を再結晶させた。
【００６８】
（実施例２  ３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾン０１−２９を得るために用いられる３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドを得るための一般的な手順）
アシル−ヒドラゾン０１−２９の調製に用いられる３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドを合成するために、本願発明者らは、すでに記載されている方法論を使用し（Ｃｈｉｄａ，Ａ．Ｓ．；Ｖａｎｉ，Ｐ．Ｖ．Ｓ．Ｎ．；Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒａｍ，Ｍ．；Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ，Ｒ．；Ｓｉｎｇｈ，Ａ．Ｋ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ２，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ−１，４−ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ：ａ  ｋｅｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｅｎｚｙｍｅ−Ｑ  ｓｅｒｉｅｓ．Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、３１、６５７−６６０、２００１）、２工程で行った。
【００６９】
エステルを得ること：１０００ｍＬ／１ッ口反応フラスコに、エタノール、エチルエーテル、酢酸エチル、アセトン、石油エーテルであってもよい有機溶媒（３７５ｍｌ）中、没食子酸（５０ｇ、０．２９４ｍｏｌ）を、硫酸ジメチル（１７８．１ｇ、１．４１３ｍｏｌ）、無水炭酸カリウム（１７５．５ｇ、１．２９３ｍｏｌ）およびＴＢＡＩ（ヨウ化テトラブチルアンモニウム）（１ｇ）を入れ、１〜１２時間還流させてもよい。得られた固体を濾過し、同じ有機溶媒で洗浄した（５０ｍＬ×３回）。エステルをクリーム色に着色したアモルファス固体の状態で、収率７８％で得た。ｍｐ：８４℃（ｌｉｔ．ｍｐ８２−８３℃）。ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）：１．６０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．９２（ｓ，９Ｈ，ＯＣＨ３）、７．３３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）。
【００７０】
ヒドラジドを得ること：１０００ｍＬ／１ッ口反応フラスコに、第１の工程で得られたエステル（４８ｇ、０．２１２ｍｏｌ）を、９９％ヒドラジン水和物（Ｎ２Ｈ４・Ｈ２Ｏ）（７７．６ｇ、１．５４ｍｏｌ）、およびエタノール、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセトン、メタノールであってもよい有機溶媒（２００ｍＬ）の溶液と共に入れた。混合物を１〜５時間還流させ、０〜５０℃の温度で磁気攪拌のみを行い、一晩維持した。得られた固体を濾過し、メタノール中で再結晶化させ、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラジドを白色結晶として収率８５％で得た。ｍｐ：１６２−１６３℃（ｌｉｔ．ｍｐ  １６８℃）。ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）：３．８０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９０（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）、７．１８（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）、９．５５（ＮＨ）。
【００７１】
（実施例３  フェニル−ヒドラゾン３０−３５を調製するための一般的な手順）
フェニル−ヒドラゾン３０−３５を合成するために、本願発明者らは、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾンを得るために記載されているのと同じ様式で、Ｔｒｏｅｂｅｒｇら（Ｔｒｏｅｂｅｒｇ，Ｌ．；Ｃｈｅｎ，Ｘ．；Ｆｌａｈｅｒｔｙ，Ｔ．Ｍ．；Ｍｏｒｔｙ，Ｒ．Ｅ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｍ．；Ｈｕａ，Ｈ．；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．；ＭｃＫｅｒｒｏｗ，Ｊ．Ｈ．；Ｋｅｎｙｏｎ，Ｇ．Ｌ．；Ｌｏｎｓｄａｌｅ−Ｅｃｃｌｅｓ，Ｊ．Ｄ．；Ｃｏｅｔｚｅｒ，Ｔ．Ｈ．Ｔ．；Ｃｏｈｅｎ，Ｆ．Ｅ．Ｃｈａｌｃｏｎｅ，ａｃｙｌ  ｈｙｄｒａｚｉｄｅ，ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ａｍｉｄｅｓ  ｋｉｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ  ｂｒｕｃｅｉ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０００、６、６６０−６６９）に記載される方法論を使用した。
【００７２】
（実施例４  オキサジアゾール３６−３８を調製するための一般的な手順）
オキサジアゾール３６−３８を合成するために、本願発明者らは、Ｊｉｎら（Ｊｉｎ，Ｌ．；Ｃｈｅｎ，Ｊ．；Ｓｏｎｇ，Ｂ．；Ｃｈｅｎ，Ｚ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．；Ｌｉ，Ｑ．；Ｈｕ，Ｄ．；Ｘｕ，Ｒ．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、２００６、１６、５０３６−５０４０）に記載される方法論を使用した。１００ｍＬ／１ッ口反応フラスコに、対応する３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾン（１ｍｍｏｌ）および無水酢酸（１０ｍＬ）を混合した。この混合物を１〜１０時間還流させ、砕いた氷を加えて後で冷却し、０〜６０℃の温度で一晩放置し、生成物を沈殿させた。得られた固体を濾過し、水で洗浄し、有機溶媒／水を用いて再結晶化させた。
【００７３】
（新規化合物の赤外線（ＩＲ）スペクトルデータおよび１Ｈおよび１３Ｃの核磁気共鳴（ＮＭＲ））
＊ＴＭＳに対するdｐｐｍ、多重度（ＨｚでのＪ）。溶媒ＣＤＣＩ３。
０５−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ３．７３（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．８６（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、３．８９（ｓ，３Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、７．２２（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．３４（ｓ，１Ｈ，Ｈ６’）、７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’）、８．３１（ｓ，１Ｈ，ＨＣ＝Ｎ）、１０．０８（１Ｈ，ＯＨ）、１１．６６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ５６．７８（ｍ−ＯＣＨ３）、６０．８１（ｐ−ＯＣＨ３）、８５．１７（Ｃ３’）、１０５．８４（Ｃ２、Ｃ６）、１０９．７２（Ｃ６’）、１２８．２８（Ｃ１）、１２９．３１（Ｃ１’）、１３０．７５（Ｃ２’）、１４１．０３（Ｃ４）、１４７．３５（Ｃ＝Ｎ）、１４７．９７（Ｃ５’）、１４９．００（Ｃ４’）、１５３．３６（Ｃ３、Ｃ５）、１６３．１６（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  ３３８２（Ｎ−Ｈ）、１６３６、１２２８（Ｃ＝Ｏ）、１５６５（Ｃ＝Ｎ）、１２９０、１０４５（Ｃ−Ｏ）、２９９９、２８３９、１５８５、１４９０、１３３４、１１３７、９９７（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化９】
2015504432.tif 000013
【００７４】
１７−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ３．７４（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．８８（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、７．２３（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．５３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’）、７．６６（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’）、８．０２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ５’）、８．４３（ｓ，１Ｈ，ＨＣ＝Ｎ）、１１．３７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ５６．７６（ｍ−ＯＣＨ３）、６０．８１（ｐ−ＯＣＨ３）、１０５．７１（Ｃ２、Ｃ６）、１２９．５１（Ｃ１）、１３１．９４（Ｃ１’）、１３２．１６（Ｃ２’）、１３５．３７（Ｃ４’）、１４５．４５（Ｃ＝Ｎ）、１５３．３５（Ｃ３、Ｃ５）、１６２．２９（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  ３２１２（Ｎ−Ｈ）、１６２３、１２３４（Ｃ＝Ｏ）、１５８０（Ｃ＝Ｎ）、１２８０、１０５４（Ｃ−Ｏ）、２９９４、２９４１、２８３８、１５０３、１４５６、１４１１、１３４４、１１２５、１００６、８４４（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１０】
2015504432.tif 000014
【００７５】
２１−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ３．７１（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．７９（ｓ，６Ｈ，ｏ−ＯＣＨ３）、３．８５（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、６．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ３’，Ｈ５’）、７．２３（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４’）、８．６０（ｓ，１Ｈ，ＨＣ＝Ｎ）、１１．５２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ５６．７２（ｍ−ＯＣＨ３）、５６．７８（ｏ−ＯＣＨ３）、６０．７６（ｐ−ＯＣＨ３）、１０５．０８（Ｃ３’、Ｃ５’）、１０５．７６（Ｃ２、Ｃ６）、１１１．７５（Ｃ１’）、１２９．３７（Ｃ１）、１３１．８７（Ｃ４’）、１４０．８８（Ｃ４）、１４３．９２（Ｃ＝Ｎ）、１５３．３１（Ｃ３、Ｃ５）、１５９．３８（Ｃ２’、Ｃ６’）、１６２．８１（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  ３１８６（Ｎ−Ｈ）、１６４４、１２４０（Ｃ＝Ｏ）、１５８６（Ｃ＝Ｎ）、１２５８、１０６８（Ｃ−Ｏ）、３００２、２９２８、２８３８、１５０２、１４７３、１４１７、１３７８、１３４２、１１２１、１００７、７８３（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１１】
2015504432.tif 000015
【００７６】
２６−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ３．４２（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．８５（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、６．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ５’）、７．２５（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６’）、７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ３’）、８．６１（ｓ，１Ｈ，ＨＣ＝Ｎ）、１１．２６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、１２．０１（１Ｈ，ＯＨ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  ３２２０（Ｎ−Ｈ）、１６５３、１２２８（Ｃ＝Ｏ）、１５８８（Ｃ＝Ｎ）、１２７５、１０９９（Ｃ−Ｏ）、３００４、２９４１、２８３４、１５５０、１５０３、１４７９、１４６３、１４１６、１３５２、１３３５、１１８９、１０１１、９９２、９５１、８３９、７６０（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１２】
2015504432.tif 000016
【００７７】
２９−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ３．７２（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．８５（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、７．２２（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ５’）、８．０２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６’）、８．１５（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’）、８．５１（ｓ，１Ｈ，ＨＣ＝Ｎ）、１１．９６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ５６．６５（ｍ−ＯＣＨ３）、６０．７３（ｐ−ＯＣＨ３）、１０５．９６（Ｃ２、Ｃ６）、１２６．２９（Ｃ２’）、１２７．９８（Ｃ１’）、１２８．８８（Ｃ１）、１３２．３１（ＣＦ３）、１３２．９１（Ｃ４’）、１３３．０１（Ｃ５’）、１３４．８２（Ｃ６’）、１４１．２７（Ｃ４）、１４５．６１（Ｃ＝Ｎ）、１５３．４０（Ｃ３、Ｃ５）、１６３．５０（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  ３１８２（Ｎ−Ｈ）、１６５５、１２４２（Ｃ＝Ｏ）、１５８７（Ｃ＝Ｎ）、１２６９、１０３９（Ｃ−Ｏ）、３００８、２９３８、２８３８、１５０６、１４８０、１４１７、１３３６、１３１６、１１７３、１１２１、１００６、９５８、６６６（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１３】
2015504432.tif 000017
【００７８】
３６−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ２．３６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．８５（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．９１（ｓ，３Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、３．９２（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、６．００（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、６．９９（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’）、７．０６（ｓ，１Ｈ，Ｈ６’）、７．１１（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．２６（ｓ，１Ｈ，ＨＣ−Ｎ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ２１．７５（ＣＨ３）、５６．５６（ｍ−ＯＣＨ３）、６１．２５（ｐ−ＯＣＨ３）、９１．５２（Ｃ−Ｎ）、１０４．４４（Ｃ２、Ｃ６）、１１７．９３（Ｃ５’）、１１９．３７（Ｃ２’）、１２２．５２（Ｃ６’）、１３６．０２（Ｃ１’、Ｃ１）、１３９．２４（Ｃ４’）、１４１．４９（Ｃ４）、１５２．９０（Ｃ３’）、１５３．６４（Ｃ３、Ｃ５）、１５５．８４（Ｃ＝Ｎ）、１６８．３２（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  １７６６、１２３８（Ｃ＝Ｏ）、１６６７、１５８２（Ｃ＝Ｎ）、１２５４、１０４７（Ｃ−Ｏ）、１１７７（Ｃ−Ｎ）、３４４５（ＯＨ）、１１３０、６２１（Ｃ−Ｂｒ）、３００４、２９４１、２８３８、１４６６、１４１６、１３６６、１３０６、１１９０、９９８、８５８（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１４】
2015504432.tif 000018
【００７９】
３７−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．８２（ｓ，３Ｈ，ｐ−ＯＣＨ３）、３．９０（ｓ，３Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、３．９２（ｓ，６Ｈ，ｍ−ＯＣＨ３）、６．９７（ｓ，１Ｈ，Ｈ２’）、７．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’）、７．１０（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．２５（ｓ，１Ｈ，ＨＣ−Ｎ）、７．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ６’）；ＯＨ基に対応するシグナルは観察されない。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ２１．５４（ＣＨ３）、５６．２７（ｍ−ＯＣＨ３）、５６．３３（ｍ−ＯＣＨ３）、６１．０２（ｐ−ＯＣＨ３）、９１．１４（Ｃ−Ｎ）、１０４．２２（Ｃ２、Ｃ６）、１０９．７７（Ｃ２’）、１１９．１６（Ｃ５’）、１２８．０９（Ｃ６’）、１３６．４０２（Ｃ１’、Ｃ１）、１４１．２４（Ｃ４’）、１４１．９６（Ｃ４）、１５１．７８（Ｃ３’）、１５３．４２（Ｃ３、Ｃ５）、１５５．６０（Ｃ＝Ｎ）、１６８．１０（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  １７６７、１２４３（Ｃ＝Ｏ）、１６６５、１５８１（Ｃ＝Ｎ）、１２５０、１０４３（Ｃ−Ｏ）、１１７７（Ｃ−Ｎ）、３４４５（ＯＨ）、１１２９、６４４（Ｃ−Ｂｒ）、２９６７、２９４５、２８３８、１５０７、１４６６、１４１７、１３６５、１０３６、１２８７、１１９７、１０８３、９９７、９５８、８６１、６９９（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１５】
2015504432.tif 000019
【００８０】
３８−１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ２．４７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．８７（ｓ，９Ｈ，ＯＣＨ３）、７．０８（ｓ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ６）、７．２６（ｓ，１Ｈ，ＨＣ−Ｎ）、７．２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ２’）、７．４８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ３’）、７．５５（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ７’，Ｈ８’）、７．６２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ７’）、７．７６（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’）、７．９２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６’）、８．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ９’）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）d  ２１．５７（ＣＨ３）、５６．２８（ｍ−ＯＣＨ３）、６０．９８（ｐ−ＯＣＨ３）、９１．１７（Ｃ−Ｎ）、１０４．２７（Ｃ２、Ｃ６）、１１９．６１（Ｃ１）、１２３．０４（Ｃ２’）、１２５．０７（Ｃ９’）、１２５．２０（Ｃ３’）、１２６．０５（Ｃ７’）、１２６．９５（Ｃ８’）、１２８．９５（Ｃ４’）、１３０．５１（Ｃ６’）、１３０．６１（Ｃ１０’）、１３０．７９（Ｃ５’）、１３４．０４（Ｃ１’）、１４１．１１（Ｃ４）、１５３．２９（Ｃ３、Ｃ５）、１５５．８３（Ｃ＝Ｎ）、１６８．２６（Ｃ＝Ｏ）。ＩＲ  nｍａｘ／ｃｍ−１  １７３１、１２４３（Ｃ＝Ｏ）、１６６９、１５８７（Ｃ＝Ｎ）、１２５４、１０３９（Ｃ−Ｏ）、１１２４（Ｃ−Ｎ）、２９９７、２９４１、２８２７、１５０９、１４６５、１４１６、１３６９、１３３２、１１９１、１００６、９８０、８４７、７８４、６９９（Ａｒ）（ＫＢｒ）。
【化１６】
2015504432.tif 000020
【００８１】
（実施例５  急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞系譜に対する化合物の効果）
（ａ）化合物の希釈および貯蔵：すべての化合物をストック濃度が２０ｍＭになるようにＤＭＳＯに懸濁させ、−２０℃で保存した。細胞毒性試験のために、ストック溶液の希釈は、細胞を取り出す直前に、培地（ＲＰＭＩ−１６４０と、１０％のウシ胎児血清、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび１００ｐｇ／ｍＬのストレプトマイシン）で行った。
【００８２】
（ｂ）ＭＴＴ方法による化合物に対する細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの感度／耐性のアッセイ。ＲＥＨ細胞株およびＪｕｒｋａｔ細胞株を、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００ｐｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持し、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベーションした。文献に記載される方法に従って、細胞毒性アッセイを行った（Ｐｉｅｔｅｒｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｒｕｇ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ＭＴＴ  ａｓｓａｙ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｂｌｏｏｄ、１９９０、７６、２３２７−２３３６；Ｐｉｅｔｅｒｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．Ｌａｎｃｅｔ、１９９１、３３８、３９９−４０３  ｅ  Ｋａｓｐｅｒｓ，Ｇ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０、２７２３）。上述の培地に、細胞を濃度が３．７５×１０５細胞／ｍＬになるように再懸濁させた。この懸濁物８０マイクロリットルを、異なる濃度の化合物またはビヒクルのみが２０マイクロリットル入った９６丸底ウェルのプレートに播種した。それぞれの処理を３ッ組で行った。３７℃および５％ＣＯ２で４８時間インキュベーションした後、２０μＬのＭＴＴ溶液を加え（１×ＰＢＳを５ｍｇ／ｍＬ）、その後、３７℃および５％ＣＯ２で４時間３０分さらにインキュベーションした。この４時間３０分の間に、生きた細胞によってＭＴＴ（黄色がかった）がホルマザン塩（青色がかった色）に代謝された。この後に、１００μＬのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）１０％＋０．１ＭのＨＣｌを加え、ホルマザン結晶を溶解させた。一晩インキュベーションした後、５７０ｎｍでの吸光度の読み取りを行った。本化合物を加えていない培地（「ネガティブコントロール」）中の生存細胞の数を比較して、この処置で生き残った細胞の割合を計算した。
【００８３】
（ｃ）ＩＣの決定：ＩＣ５０は、最大阻害の５０％が得られる化合物の濃度であると定義される。吸光度を読み取った後、生存曲線を構築し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いてＩＣ５０の値を得た。
【００８４】
結果：Ｂ系統およびＴ系統の白血病細胞（それぞれＨＥＫおよびＪＵＲＫＡＴ）に対するアシルヒドラゾンおよびオキサジアゾールの作用
Ｐｉｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ（Ｐｉｅｔｅｒｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｒｕｇ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ＭＴＴ  ａｓｓａｙ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｂｌｏｏｄ、１９９０、７６、２３２７−２３３６；およびＰｉｅｔｅｒｓ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．Ｌａｎｃｅｔ、１９９１、３３８、３９９−４０３）およびＫａｓｐｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ（Ｋａｓｐｅｒｓ，Ｇ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ、１９９７  ９０、２７２３）に記載される方法に従って、細胞生存アッセイ（ＭＴＴ）によって、ヒト白血病Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＨＥＫ細胞に対する合成された化合物の細胞毒性の効果を試験した。結果を表３に示す。
【表３】
2015504432.tif 000021
2015504432.tif 000022
【００８５】
アシル−ヒドラゾン０１−２９のＡ環にあるメトキシ基の影響を分析するために、本願発明者らは、一連の相補的なアシル−ヒドラゾン（３０−３５）を試験した。この一連の化合物は、どれもスクリーニングを行った細胞に対する活性を示さず、従って、抗白血病活性のためにはトリメトキシル化された環が必要であることがわかった。
【００８６】
活性な化合物と相関関係にある化合物を探求する第３の企てでは、３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾンの環状誘導体１，３，４−オキサジアゾール（３６−３８）を試験した。相補的なアシル−ヒドラゾン（３０−３５）と同様に、１，３，４−オキサジアゾール（３６−３８）は、どれも活性を示さなかった。これらの結果の説明は、環化によって促進される環の剛性に起因するものであると考えられ、これにより分子と標的との相互作用が抑えられる。
【００８７】
従って、化合物０２、０７、０９、１０、１１および１６を選択し、これらのＩＣ５０を決定し、値を表４に提示する。
【表４】
2015504432.tif 000023
【００８８】
アシル−ヒドラゾン０２および０７は、優れた結果を示し、白血病性株ＲＥＨについて、ＩＣ５０は３３．７ｎＭおよび２５．４ｎＭであり、Ｊｕｒｋａｔについて３１．４ｎＭおよび１５．７ｎＭであった。
【００８９】
（実施例６  ＤＮＡマイクロアレイを用い、化合物の作用機序を決定するための実験）
実験前に、新鮮な培地中で１２時間、細胞をインキュベーションした。１０％ウシ胎児血清を追加したＤＭＥＭ中、白血病細胞株ＨＬ６０に由来する２百万の細胞を、３ッ組で、１２５ｎＭの投薬量の化合物０７またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ビヒクルで６時間処理した。この時間終了時に、簡単に遠心分離処理をして細胞を回収し、ＲＮＡｓｐｉｎｍｉｎｉ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（ＧＥ）のグアニジン溶液に溶解させた。
【００９０】
（ａ）ＲＮＡの精製およびビオチン化したプローブの調製：製造業者の指示に従って、ＲＮＡｓｐｉｎｍｉｎｉ  ＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（ＧＥ）を用い、細胞から全ＲＮＡを抽出した。合計で１００ｎｇのＲＮＡを使用し、製造業者の推奨に従ってＧｅｎｅＣｈｉｐ  ＷＴ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用い、ｃＤＮＡ合成の後、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写による増幅によって、ビオチン化した相補的なＲＮＡプローブ（Ｂｉｏ−ｃＲＮＡ）を調製した。
【００９１】
（ｂ）オリゴヌクレオチドマイクロアレイおよびハイブリダイゼーションアレイ：各複製物のｃＲＮＡプローブを、ヒトゲノムＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  １．０  ＳＴ  Ａｒｒａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）のオリゴヌクレオチドマイクロアレイでハイブリダイズした。ハイブリダイゼーションおよびその後の洗浄およびマイクロアレイの現像は、製造業者の推奨に従って行った。
【００９２】
（ｃ）データ分析：マイクロアレイハイブリダイゼーションの結果は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｇｅｎｅ  Ｃｈｉｐ  Ｓｃａｎｎｅｒ  ３０００−７Ｇで読み取った。Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒプラットフォームでデータを分析した。遺伝子発現の値を得るために、本願発明者らは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃｏｎｓｏｌｅを用い、遺伝子レベルで、ｉｔｅｒＰＬＩＥＲ＋１６アルゴリズムを使用した。ＬＩＭＭＡパッケージおよびＦｏｌｄ  Ｃｈａｎｇｅ（ＦＣ）基準＞１．５およびｐ＜０．０５を用いた回帰分析によって、化合物０７に応答して異なった状態で発現した遺伝子が得られた。既知の化合物の作用に関連する可能な作用機序を特定するために、異なった状態で発現した遺伝子のリストをＣＭａｐ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｍａｐ／）を用いて分析した（Ｌａｍｂ，Ｊ．、Ｃｒａｗｆｏｒｄ  Ｅ．Ｄ．Ｔｈｅ  Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ  Ｍａｐ：Ｕｓｉｎｇ  Ｇｅｎｅ−Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｎｅｃｔ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００６、３１３、１９２９−１９３５）。
【００９３】
所与の遺伝子セットの要素（遺伝子セット）が、マイクロアレイ実験データ内で一緒に制御されているか否かを確立するために、Ｇｅｎｅ  Ｓｅｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＧＳＥＡ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／）を使用した。ＧＳＥＡアルゴリズムは、２つの実験群（化合物０７で処理されたものと、コントロールで処理されたもの）の差がある発現を並べ、マイクロアレイによってあらわされた遺伝子のリストを作る。この場合には、化合物０７によって抑制された遺伝子は、リストの上部にあり、一方、誘発された遺伝子は、底部にある。次いで、このアルゴリズムは、このリストから、特定の遺伝子プールを構成する遺伝子を見つけ出す。これらの遺伝子が、このリストの上部で顕著に大きな範囲を占めている場合、化合物０７によって全遺伝子があらわされていると言うことができる。その逆の状況では、薬物処置によって全遺伝子が誘発される。ＧＳＥＡによって分析された遺伝子セットをいくつかの公共データベースから得た（ＢｉｏＣａｒｔａ、Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｄａｔａｂａｓｅ、Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｇａｔｅｗａｙ、Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ、ＧｅｎＭＡＰＰ、ＫＥＧＧ、Ｇｅｎｅ  Ｏｎｔｏｌｏｇｙ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｐａｔｈｗａｙｓ、Ｇｅｎｅ  Ａｒｒａｙｓ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｒｐ．、Ｈｕｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｔｏｍｙ  ＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍおよびＮｅｔＡｆｆｘ）。Ｆａｌｓｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｒａｔｅ（ＦＤＲ）のｑ値の設定として１０００順列を用い、同じ遺伝子に関連するプローブセットの平均発現値を考慮した。５未満の要素を有する遺伝子セットと、５００より大きい要素を有する遺伝子セットは考慮しなかった。
【００９４】
（結果：ＤＮＡマイクロアレイを用いた試験によって提案される作用機序）
これらの化合物の作用機序を決定するために、本願発明者らは、ＤＮＡバイオチップを用いた遺伝子発現の分析のために、化合物０７を選択した。これらの試行から、データセット（アルゴリズム）を作成し、その後、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ  Ｍａｐｓ（ＣＭａｐ）（ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｃｍａｐ）およびＧＳＥＡ分析によって解釈した。
【００９５】
化合物０７を用いたＨＬ−６０細胞の処理によって、１０２遺伝子が転写によってあらわれ、３５３遺伝子が転写によって活性化した（ＦＣ＞１．５、ｐ＜０．０５）。
【００９６】
試験化合物０７で処理した細胞のマイクロアレイ遺伝子発現の分析によって得られた結果をＣＭａｐで分析した。化合物０７の作用によって細胞内に異なる状態で発現した遺伝子を、異なる薬物に応答した一連の遺伝子リストとクロスリンクした。これらのリストは、ＣＭａｐデータベースの一部である。ＡＴＣ系（Ａｎａｔｏｍｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏｃｃ．ｎｏ／ａｔｃｄｄｄ／）によって分けられた薬物データと合わせると、化合物０７の効果は、駆虫薬として用いられるベンズイミダゾール誘導体（例えば、アルベンダゾール、メベンダゾール、フェンベンダゾール、チアベンダゾール）であるＰ０２ＣＡ群の薬物の効果とほぼ同じであった。ＣＭａｐでの化合物０７の分析結果を以下の表５ａに示す。
【００９７】
これらの薬物の作用機序は、チューブリンの阻害によるものであり、近年、白血病（Ｓｐａｇｎｕｏｌｏ  ＰＡ  ｅｔ  ａｌ、Ｔｈｅ  ａｎｔｉｈｅｌｍｉｎｔｉｃ  ｆｌｕｂｅｎｄａｚｏｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｆｒｏｍ  Ｖｉｎｃａ  ａｌｋａｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｐｌａｙｓ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１０；１１５（２３）：４８２４−３３）および固体腫瘍（Ｄｏｕｄｉｃａｎ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ、Ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｖｉａ  Ｂｃｌ−２  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００８；６（８）：１３０８−３１５；Ｇｕｐｔａ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ；  ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｂｅｎｏｍｙｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｂｒａｉｎ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｔ  ｍｉｔｏｓｉｓ，ｂｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｉｔｅ  ｉｎ  ｔｕｂｕｌｉｎ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００４；４３（２１）：６６４５−６６５５）を治療する有望な候補物質として記述されてきた。
【表５】
2015504432.tif 000024
【００９８】
ＣＭａｐプラットフォームの一部である他の摂動データと比較して、ＨＬ−６０細胞株のデータのみを考慮し、化合物０７の効果は、Ｈｓｐ９０を阻害する薬剤であるタネスピマイシンの効果と最もよく似ていた（エンリッチメント＝０．６９９、ｐ＜０．００１）。Ｈｓｐ９０は、チューブリンと相互作用し、整列するシャペロンであり（Ｃ  Ｇａｒｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ、Ｈｅａｔ−ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０（ｈｓｐ９０）ｂｉｎｄｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｔｏ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｄｉｍｅｒ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９８、２５０（２）：４１４−９；Ｒｅｄｍｏｎｄ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ；Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｃｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ９０−ｋＤａ  ｈｅａｔ−ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｐｈａｓｅ  ａｎｄ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｅｌｉ  Ｂｉｏｌ  １９８９；５０（１）：６６−７５；Ｓａｎｃｈｅｚ  ＥＲ  ｅｔ  ａｌ；Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｔｈｅ  ９０−ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｕｂｕｌｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  Ｌ  ｃｅｌｌ  ｃｙｔｏｓｏｌ  ａｎｄ  ｉｎ  ｉｎｔａｃｔ  ＰｔＫ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １９８８；２（８）：７５６−６０；Ｃｚａｒ  ＭＪ  ｅｔ  ａｌ；Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ９０−ｋＤａ  ｈｅａｔ−ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｏ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９９６；．７０（４）：３２２−３０）、チューブリンが変性しないように保護し、重合のためにチューブリンと相溶性のままである（Ｆ  Ｗｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ  ｓｔａｔｅ、Ｔｈｅ  ９０−ｋＤａ  ｈｅａｔ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈｓｐ９０  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅｒｍａｌ  ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０１０；２８５（１３）：９５２５−３４）。この結果は、化合物０７が、タネスピマイシンと同様に、チューブリンを整列させ、すでに生成している微小管を不安定化する過程に影響を及ぼすことができることを示す。
【表６】
2015504432.tif 000025
【００９９】
従って、細胞過程の力学は、継続する細胞骨格再構成、チューブリンの重合および解重合を要求する。チューブリン阻害剤は、以下の２つの様式で作用することができる。（１）チューブリン重合の阻害、または（２）解重合を阻害するような様式でチューブリンを安定化。ＧＳＥＡ分析は、化合物０７が、チューブリンと、チューブリン重合を阻害する化合物として典型的なチューブリンに特異的なシャペロンの遺伝子セットの発現を顕著に下げることを示した（図１）。チューブリン重合の阻害によって、細胞質の中に（重合していない）遊離チューブリンが蓄積する。この遊離細胞質チューブリンは、新しいチューブリンｍＲＮＡの生成を抑制し、存在するｍＲＮＡの分解を促進することによって、チューブリンｍＲＮＡ発現を負の方向に自動制御する（Ｃａｒｏｎ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ；ａｕｔｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｂｕｌｉｎ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｃｅｌｉ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  １９８５；１０１：１７６３−７２））。対照的に、チューブリンフィラメントを安定化する化合物は、チューブリンの発現を増加させる。
【０１００】
（実施例７  細胞周期中の細胞の進化、細胞周期制御因子の活性化およびアポトーシスの誘発に対する化合物０７の効果）
実験前に、新鮮な培地中で１２時間、細胞をインキュベーションした。１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および０．２％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＳ）を追加したＲＰＭＩ−６４０培地中、Ｊｕｒｋａｔに由来する２百万の細胞を、１２５ｎＭの投薬量の化合物０７またはＤＭＳＯ（ビヒクル）で１２時間、１８時間、２４時間および３０時間処理した。
【０１０１】
（ａ）細胞周期のスクリーニングアッセイ：化合物０７で処理した細胞、または化合物０７で処理しなかった細胞を、７０％エタノール中、２時間で固定させ、ＰＢＳで洗浄し、１ｍＬのＸ−１００、０．１％の０．２ｍｇ／ｍＬのＲＮＡｓｅおよび２０μｇ／ｍＬヨウ化プロピジウムを含むＰＢＳ中、３７℃で１５分間インキュベーションした。赤い蛍光を定量してＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで２０，０００事象を集め、標準的な幅  対  赤色蛍光ピーク領域によって任意の細胞凝集物を除外した。細胞周期の各段階にある細胞の割合を得るためのデータデコンボリューションを、ＭｏｄＦｉｔソフトウエアｖ２．０を用いて行った。
【０１０２】
（ｂ）アネキシンＶ／ＰＩラベリングを用いたアポトーシスを定量するためのアッセイ：化合物０７で処理した細胞、または化合物０７で処理しなかった細胞をＰＢＳですすぎ、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてラベリングした。簡単にいうと、細胞を、カルシウムを含有する適切なバッファーに再懸濁させ、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣおよびヨウ化プロピジウム５μｇ／ｍＬとともに１５分間インキュベーションした。緑色および赤色の蛍光定量を用い、速報散乱によってＦＡＣＳ順方向  対  標準によって任意の破片を除外し、Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで１０，０００事象を集めた。
【０１０３】
（ｃ）細胞周期を制御するタンパク質の発現およびリン酸化を分析するためのウェスタンブロット試験。化合物０７で処理した細胞、または化合物０７で処理しなかった細胞を、５０ｍＭのｐＨ７．７のＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＳｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテルＩ、１％のＳｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテルＩＩ、１％のＳｉｇｍａプロテアーゼ阻害剤カクテルＩＩ、１％のＩｇｅｐａｌ、０．１％のＳＤＳ、０．５％のデオキシコール酸ナトリウムおよび１ｍＭのＰＭＳＦが入ったバッファーに溶解した。氷上で３０分インキュベートし、凍結と解凍を３サイクル繰り返した後、抽出物を１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離処理し、膜片を沈殿させた。本願発明者らは、上澄みについて、Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬（Ｂｉｏｒａｄ）によってタンパク質定量を進めた。β−メルカプトエタノールおよび１００μｇのタンパク質を加える前にサンプルを５分間沸騰させ、アクリルアミド：ビスアクリルアミドゲル電気泳動（３９：１）を、ＳＤＳを用いて１０％で行い、０．４５μｍニトロセルロース膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｅｌｌ）に電気によって転写した。製造業者の指示に従って、Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ／Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓａｍｐｌｅｒキット番号９９１７抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）およびＣｙｃｌｉｎ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓａｍｐｌｅｒキット番号９８６７（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）でこの膜をインキュベーションすることによって、免疫検出を行った。Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｉｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて結果の現像を行い、次いで、Ｘ線フィルムに露光した。
【０１０４】
（結果：化合物０７は、Ｇ２で細胞周期停止を誘発し、アポトーシスによって細胞死を誘発する）
化合物０７で処理したＪｕｒｋａｔ細胞の細胞周期分析では、チューブリンの阻害と一致する結果が得られた。化合物０７で処理したＪｕｒｋａｔ細胞は、Ｇ２／Ｍで細胞周期停止を示した（図２）。
【０１０５】
細胞周期を制御する種々のタンパク質の発現およびリン酸化の変化を観察した。図３に示されるように、化合物０７で１２時間処理した後、Ｔｈｒ６８においてＣｈｋ２のリン酸化を検出することができる。Ｔｈｒ６８残基のリン酸化は、Ａｔａｘｉａ  Ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ  Ｍｕｔａｔｅｄ因子（ＡＴＭ）によって行われ、Ｃｈｋ２の活性化、その後のｃｄｃ２５、ＢＲＣＡ１、ｐ５３およびＥ２Ｆを含む多くの下流の標的のリン酸化を生じ、このことは、ＤＮＡ損傷に応答して、細胞周期、ＤＮＡ損傷の修復およびアポトーシスの誘発の重要な制御因子（チェックポイント）である（Ｆａｌｃｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ、Ｔｈｅ  ＡＴＭ−Ｃｈｋ２−Ｃｄｃ２５Ａ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｇｕａｒｄｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ＤＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００１、４１０（６８３０）：８４２−７；Ｍａｔｓｕｏｋａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ；Ｌｉｎｋａｇｅ  ｏｆ  ＡＴＭ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｃｈｋ２  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９８、２８２（５３９５）：１８９３−７；Ｌｅｅ  ＪＳ  ｅｔ  ａｌ；ｈＣｄｓｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＲＣＡ１  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０００：４０４（６７７４）２０１−４；Ｈｉｒａｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ、ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ５３  ｂｙ  ｔｈｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃｈｋ２．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０００、２８７（５４５９）：１８２４−７；Ｃ  Ｓｔｅｖｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ、Ｃｈｋ２  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  Ｅ２Ｆ−１  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ．Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００３：５（５）：４０１−９）。検出可能なｐ５３が存在しないことは、ウェスタンブロット（図３）において、Ｊｕｒｋａｔ細胞のｐ５３発現が低いことによって説明することができる（Ｖｉｇｏｒｉｔｏ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ；．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐ５３  ａｎｄ  ＰＭＡ  ｔｏ  ｇａｍｍａ−ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒ  １９９９、４１（４）：１５３−６１）。
【０１０６】
化合物０７で処理すると、ＣＤＫ４の発現が抑えられ、ＣＤＫ６の程度も低くなり、ＣＤＫ２のアイソフォームが短くなり、ＣＤＫ９のアイソフォームが大きくなった（図３）。Ｄ／ＣＤＫ４／ＣＤＫ６サイクリン複合体およびサイクリンＥ／ｃｄｋ２複合体は、Ｒｂをリン酸化し、不活性化し、細胞周期を進行させる。化合物０７で処理された細胞でＣＤＫ２、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６が低下すると、Ｒｂの不活性化が低下し、次いで、細胞周期の進行を阻害する役割を発揮し、アポトーシスを誘発することができる。
【０１０７】
（実施例８．健康なヒトリンパ球に対する化合物０７の効果、およびその選択性を評価することによるコロニー生成）
（ａ）ＭＴＴ方法による化合物０７に対する細胞の選択性／耐性のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ：正常なリンパ球に対して化合物０７を試験する場合、ヒトドナーからの血液をフィコール勾配で分離し、Ｔリンパ球を刺激するための各ウェルについて、８０マイクロリットルのＲＰＭＩ−１６４０（１０％  ＦＢＳ、１００  ＩＵ／ｍＬ  ペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシンを含む）および２０マイクロリットルのフィトヘマグルチニン溶液（Ｃｕｌｔｉｌａｂ）中、単核細胞を２００，０００細胞／ウェルで収穫した。化合物０７を、３００〜１ｎｍまでの順次希釈（５０％）で加えた。コントロールとして、白血病性Ｊｕｒｋａｔ細胞株およびＲＥＨ細胞株に由来する細胞を用いて並行試験を行い、化合物０７として同じ濃度のコルヒチンを用いた実験を行った。上述のように、ＭＴＴ方法によって４８時間後に細胞毒性を評価した。（ｂ）コロニー生成実験：造血細胞のコロニー生成アッセイを用い、化合物０７の細胞毒性も評価した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製の「ＥｐｏとのＨＳＣ−ＣＦＵ複合体」キット（カタログ番号１３０−０９１−２８０）を製造業者の推奨に従って使用した。健康なドナーからの骨髄細胞を、胎児ウシ血清、胎児ウシアルブミン、異なる成長因子（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−６、Ｅｐｏ）および化合物０７を加えた半固体メチルセルロース培地で培養し、造血に対する作用を評価した。３７℃および５％ＣＯ２で２週間培養した後、顆粒球（ＣＦＵ−Ｇ）、マクロファージ（ＣＦＵ−Ｍ）、顆粒球／マクロファージ（ＣＦＵ−ＧＭ）、赤血球系（ＢＦＵ−ＥおよびＣＦＵ−Ｅ）および混合系（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）のコロニー評価を行った。
【０１０８】
（結果：化合物０７の選択性）
フィトヘマグルチニンで刺激した健康で成熟したＴリンパ球を用い、化合物０７を試験し、正常細胞に対する作用を評価した。コルヒチンをポジティブコントロールとして使用した。結果を表６に示す。
【表７】
2015504432.tif 000026
【０１０９】
３００ｎＭの濃度の化合物０７では、コントロールに対して毒性が５％であり、一方、同じ濃度のコルヒチンは、Ｔリンパ球の生存能力を３７％阻害した。
【０１１０】
フィトヘマグルチニンで刺激した正常なリンパ球と比較した、白血球細胞に対する化合物０７の用量応答分析（図５）は、白血球細胞の細胞毒性用量よりも１０倍高い濃度まで、正常なリンパ球はフィトヘマグルチニンによって誘発されないようである。このことは、化合物０７が、患者の正常な免疫機能に影響を与えることなく、白血病細胞に作用することができることを示す。
【０１１１】
造血における化合物０７の効果を決定するために、成長因子を含む半固体メチルセルロース培地で培養した骨髄細胞のコロニー生成について、同じアッセイを試験した。表７に示すように、化合物０７は、ＩＣ５０に非常に近い濃度で（２０ｎＭ）、ポジティブコントロールとしてアッセイで使用したＰＩ３Ｋ阻害剤に適合する赤血球生成に対し、阻害活性を示す。化合物０７は、顆粒球およびマクロファージに対しても阻害活性も有するが、ＰＩ３Ｋ阻害剤と比較して強度は低い。平均ＬＬＡ系統のＩＣ５０の１０倍に対応する２００ｎＭの濃度では、化合物０７は、造血を完全に阻害した。
【表８】
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【０１１２】
上に報告したように、５種類の新規３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾンおよび３種類の新規３，４−オキサジアゾールが得られた。合成し、本発明の範囲内に含まれるすべてのアシル−ヒドラゾンおよびオキサジアゾールについて、Ｊｕｒｋａｔ株およびＨＥＫ株の白血病細胞で評価し、化合物０２および０７は、標準化合物（コルヒチン）と同様の優れた抗白血病活性を示した。化合物０７の作用機序は、ＤＮＡマイクロアレイを用いて決定され、チューブリンの阻害活性を示し、Ｃｈｋ２およびＲｂを活性化し、Ｇ２／Ｍで細胞周期停止し、アポトーシスによる細胞死を誘発した。その後の試験は、化合物０７の白血病細胞に対する選択性が、健康なヒトリンパ球での作用と比較すると、１０倍程度であることを示した。
【０１１３】
従って、本発明で存在する３，４，５−トリメトキシフェニル−ヒドラゾン、およびオキサジアゾールを含む関連する化合物およびその類似体は、異なる細胞増殖に関連する疾患、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を含む白血病、腫瘍および炎症を治療するための薬物プロトタイプ、プレドラッグまたは薬物としてきわめて有望である。
【０１１４】
例示およびさらなる用途の詳細のために本発明の記載が提示された。しかし、本発明の記載は、本明細書に開示するように記載し、例示する本発明に関する特徴を制限するものではない。上述のものおよび関連する技術分野の技術または知識と適合する変化および改変は、本発明の範囲内である。この報告の記載および特許請求の範囲に従って、本発明が、あらゆる改変および変更を発明の範囲に含むことが合理的新居とされる。
【図３】
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【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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