(57)【要約】  サンプル担持体およびサンプル担持体上の乾燥サンプルから液体サンプルを抽出する方法について説明する。サンプル担持体は、液体サンプルを受け取る第１の担持部を有し、液体サンプルを吸着し、かつ溶媒を添加すると溶解する物質を含む。第２の担持部は第１の担持部に付着され、溶媒中に溶解不可能な物質を含む。乾燥サンプルを有する第１の担持部は、溶媒を添加すると溶液中に溶解する。溶液は、抽出サンプル中の成分を決定するために分析される。サンプル担持体は、通常、カードもしくはディップスティックの形態とすることができる。代替実施形態では、乾燥サンプルを含む担持部は、溶液中に溶解不可能であるが、溶解可能な介在担持部に溶媒を添加することによって別の担持部から切り離される。
2015507211.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体であって、
液体サンプルを受け取る構造であり、液体サンプルを吸着し、かつ溶媒を添加すると溶解する物質を含む第１の担持部と、
第１の担持部に付着され、溶媒中で溶解しない物質を含む第２の担持部と
を含み、
第１の担持部と第１の担持部に含まれる乾燥サンプルとは、第１の担持部に溶媒を添加すると溶液中に溶解する、サンプル担持体。
【請求項２】
液体サンプルが生体液体サンプルである、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項３】
第１の担持部が、所定量の液体サンプルを保持するように構成される、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項４】
第１の担持部と第２の担持部が、サンプルカード内に、第２の担持部が第１の担持部を囲んで配置される、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項５】
第１の担持部と第２の担持部が線形部分の形状として構成され、第１の担持部は線形部分の一端に配置され、第２の担持部は線形部分の反対端に配置される、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項６】
第２の担持部が、液体サンプルに不透過性である、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項７】
溶媒が、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、およびジクロロメタンから成る溶媒群から選択される、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項８】
第１の担持部が、水溶液中に溶解不可能である、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項９】
第１の担持部が、セルロースアセテートを含む物質で形成される、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項１０】
第１の担持部が、ポリスルホンを含む物質で形成される、請求項１に記載のサンプル担持体。
【請求項１１】
乾燥サンプルから液体サンプルを抽出する方法であって、
第１の担持部と第１の担持部に付着される第２の担持部とを含むサンプル担持体のうち、乾燥サンプルを含む第１の担持部を溶液中に溶解させるステップと、
容器内に溶液を収集するステップと、
溶液中に、第１の担持部の成分を含む沈殿物を形成するステップと、
溶液から沈殿物を除去するステップと
を含む方法。
【請求項１２】
液体サンプルが、生体液体サンプルである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第１の担持部を溶解させるステップが、第１の担持部に溶媒を添加することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
溶媒を添加するステップが、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、およびジクロロメタンから成る溶媒群から溶媒を添加することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
溶液中に沈殿物を形成するステップが、容器内の溶液に追加溶液を添加することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
追加溶液が水である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
乾燥サンプルが、乾燥血液サンプルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
沈殿物がさらに、血液タンパク質を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
沈殿物を除去するステップが、溶液を遠心分離することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
沈殿物を除去するステップが、溶液を濾過することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体であって、
液体サンプルを受け取り、液体サンプルを吸着し、溶媒中に溶解不可能な物質を含む第１の担持部と、
第１の担持部に付着され、溶媒を添加すると溶解する物質を含む第２の担持部と、
第２の担持部に付着され、第２の担持部によって第１の担持部と分離される第３の担持部であって、溶媒中に溶解不可能な物質を含む第３の担持部と
を含み、
第１の担持部と第１の担持部に含まれる乾燥サンプルとは、溶媒を第２の担持部に添加すると第３の担持部から分離される、サンプル担持体。
【請求項２２】
液体サンプルが、生体液体サンプルである、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項２３】
第１の担持部が、所定量の液体サンプルを保持するように構成される、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項２４】
第１の担持部、第２の担持部、および第３の担持部が、サンプルカード内に、第２の担持部が第１の担持部を囲み、かつ第３の担持部から第１の担持部を分離する形で配置される、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項２５】
第１の担持部、第２の担持部、および第３の担持部が、線形部分の形状として構成され、第１の担持部は線形部分の一端に配置され、第３の担持部は線形部分の反対端に配置され、第２の担持部は第１の担持部と第３の担持部との間に配置される、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項２６】
溶媒が、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、およびジクロロメタンから成る溶媒群から選択される、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項２７】
第１の担持部および第３の担持部が、水溶液中に溶解不可能である、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項２８】
第２の担持部が、環帯形状である、請求項２４に記載のサンプル担持体。
【請求項２９】
第２の担持部が、セルロースアセテートを含む物質で形成される、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項３０】
第２の担持部が、ポリスルホンを含む物質で形成される、請求項２１に記載のサンプル担持体。
【請求項３１】
乾燥サンプルから液体サンプルを抽出する方法であって、
第１の担持部、第３の担持部、およびと第１の担持部と第３の担持部との間に配置される第２の担持部を含み、第１の担持部が乾燥サンプルを含むサンプル担持体のうち、第２の担持部を溶液中に溶解させるステップと、
容器内に第１の担持部と溶液とを収集するステップと、
溶液中に、第２の担持部の成分を含む沈殿物を形成するステップと、
溶液から沈殿物を除去するステップと
を含む方法。
【請求項３２】
液体サンプルが、生体液体サンプルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
第２の担持部を溶解させるステップが、第２の担持部に溶媒を添加することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
溶媒を添加するステップが、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、およびジクロロメタンから成る溶媒群から溶媒を添加することを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
溶液中に沈殿物を形成するステップが、容器内の溶液に追加溶液を添加することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
追加溶液が水である、請求項３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１２年２月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／５９８，５０２号（発明の名称「Ｄｒｉｅｄ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｄｉｓｓｏｌｖａｂｌｅ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅｇｉｏｎｓ）の優先権を主張するものであり、この特許の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【０００２】
本発明は、全般的には、乾燥血液スポットのような乾燥生体液の分析に関する。特に、本発明は、生体液の収集媒体および収集媒体からの既乾燥サンプルの抽出に関する。
【背景技術】
【０００３】
投与された薬の濃度や生体液内の代謝物、例えば、全血、血漿および血清の濃度の測定は、薬の有効性および毒性学的影響を把握するのに重要である。一般的な臨床試験は、大量の生体液体サンプルを注意深く低温で扱い処理する必要がある。乾燥スポットサンプリングは、現行の方式の代替実施形態であり、乾燥スポットのような少量（例えば、数マイクロリットルあるいはそれ以下）の生体液の収集に基づくものである。例えば、乾燥血液スポット（ＤＢＳ）サンプリングは、担持媒体上に少量の血液を収集することを含む。サンプルサイズの低減および小さい担持媒体による利便性により、サンプルの取り扱いがより容易になり、配送費を削減することができる。サンプルは、抽出プロセスで適切な溶媒を使用して乾燥スポットから再構成される。再構成されたサンプルは、例えば、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）法で分析することができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
多くの場合、上述の技術では、望ましい検出感度や使いやすさを実現できない。乾燥スポットは、例えば、被験者のヘマトクリット値によって、アナライト濃度が変化する可能性がある。再現性を向上させるためには、一般に、乾燥スポット全体のサンプリングが必要になる。従来の技術は、サンプルカードから乾燥スポットを打ち抜くことを含む。一般的な打ち抜き工程は、鋭いパンチ工具を使用する。パンチ工具を繰り返し使用することで、キャリーオーバーにつながる恐れがある。さらに、スポットの打ち抜きプロセスは、臨床医にとっては面倒であり、ワークフロー全体において律速段階となる可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様では、本発明は、受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体を特徴とする。サンプル担持体は、第１の担持部と第２の担持部とを含む。第１の担持部は、液体サンプルを受け取る構造であり、液体サンプルを吸着し、かつ溶媒を添加すると溶解する物質を含む。第２の担持部は、第１の担持部に付着され、溶媒中に溶解不可能な物質を含む。第１の担持部と第１の担持部に含まれる乾燥サンプルとは、第１の担持部に溶媒を添加すると溶液中に溶解する。
【０００６】
別の態様では、本発明は、乾燥サンプルから液体サンプルを抽出する方法を特徴とする。サンプル担持体の第１の担持部は、溶液中に溶解する。サンプル担持体は、乾燥サンプルを含む第１の担持部と、第１の担持部に付着される第２の担持部とを含む。溶液は容器内に収集される。第１の担持部の成分を含む沈殿物が溶液中に形成され、溶液から除去される。
【０００７】
さらに別の態様では、本発明は、受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体を特徴とする。サンプル担持体は、第１の担持部、第２の担持部、および第３の担持部を含む。第１の担持部は、液体サンプルを受け取る構造であり、液体サンプルを吸着し、かつ溶媒中に溶解不可能な物質を含む。第２の担持部は、第１の担持部に付着され、溶媒を添加すると溶解する物質を含む。第３の担持部は、第２の担持部に付着され、第２の担持部によって第１の担持部から分離される。第３の担持部は、溶媒中に溶解不可能な物質を含む。第１の担持部は、乾燥サンプルを含み、第２の担持部に溶媒を添加すると第３の担持部から分離される。
【０００８】
さらに別の態様では、本発明は、乾燥サンプルから液体サンプルを抽出する方法を特徴とする。サンプル担持体の第２の担持部は、溶液中に溶解する。サンプル担持体は、乾燥サンプルを含む第１の担持部、第３の担持部、および第１の担持部と第３の担持部との間に位置する第２の担持部を含む。第１の担持部と溶液は、容器内に収集される。沈殿物が溶液中に形成され、その沈殿物は第２の担持部の成分を含む。沈殿物は、溶液から除去される。
【０００９】
本発明の上述の利点およびさらに別の利点は、添付図面と併せて以下の説明を参照することで、よりよく理解できるであろう。種々の図面において、同じ符号は同じ要素および特徴を示すものとする。明確にするために、図面ごとに全ての要素に符号が付与されているわけではない。図面は必ずしも正確な縮尺であるとは限らず、本発明の原理を説明することに重点を置くものとする。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】血液サンプルを採取するための従来の乾燥血液スポットカードの図である。
【図２】本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体の一実施形態を示した図である。
【図３Ａ】図２のサンプル担持体がサンプル収集プレートに固定された時の１つの収集領域の断面側面図である。
【図３Ｂ】溶媒を添加して、収集領域を、抽出サンプルを含んだ溶液中に溶解させた後の図３Ａの断面側面図である。
【図４】サンプル担持体上の乾燥血液スポットから血液サンプルを抽出するための一実施形態の方法のフローチャートである。
【図５Ａ】生体液サンプリング用の別の実施形態のサンプル担持体がサンプル収集プレートに固定された時の１つの収集領域の上面図である。
【図５Ｂ】生体液サンプリング用の別の実施形態のサンプル担持体がサンプル収集プレートに固定された時の１つの収集領域の断面側面図である。
【図５Ｃ】図５Ａの上面図において、溶媒を添加して、収集領域を、抽出サンプルを含んだ溶液中に溶解させた後の図である。
【図５Ｄ】図５Ｂの断側面面図において、溶媒を添加して、収集領域を、抽出サンプルを含んだ溶液中に溶解させた後の図である。
【図６】本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存する別の実施形態のサンプル担持体を示した図である。
【図７Ａ】生体液サンプリング用の別の実施形態のサンプル担持体がサンプル収集プレートに固定された時の１つの収集領域の断面側面図である。
【図７Ｂ】図７Ａの断面側面図において、溶媒を添加して境界領域を溶解させて、収集領域を容器内に切り離した後の図である。
【図８】サンプル担持体上の乾燥血液スポットから血液サンプルを抽出するための別の実施形態の方法のフローチャートである。
【図９Ａ】図６のサンプル担持体の境界領域に溶媒を添加するためのツールの底面図である。
【図９Ｂ】図６のサンプル担持体の境界領域に溶媒を添加するためのツールの側面図である。
【図１０】本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体の別の実施形態を示した図である。
【図１１】識別ラベルが取り付けられた図１０のサンプル担持体の図である。
【図１２Ａ】図１０のサンプル担持体を使用してサンプリングされる液体を保持するための容器の図である。
【図１２Ｂ】図１０のサンプル担持体を受け取るために図１２Ａの容器のキャップをひっくり返した図である。
【図１２Ｃ】図１２Ｂのひっくり返したキャップを上から見た図である。
【図１３】本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体の別の実施形態を示した図である。
【図１４】８つの異なる溶解液による８つの試験アナライトそれぞれの平均回収率の評価結果を示したグラフである。
【図１５】図１４に対応する評価データの平均マトリックス効果率を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書内の「一実施形態」は、実施形態に関して説明する特定の機能、構造、または特徴が、教示の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味するものである。本明細書内の特定の実施形態についての記述は、必ずしも全て同じ実施形態を指すとは限らない。
【００１２】
添付図面に示されている実施形態例を参照しながら、本発明の教示をより詳細に説明する。本発明の教示を種々の実施形態および実施例に関して説明するが、本発明の教示はそれらの実施形態に限定されるものではない。むしろ、本発明の教示は、当業者が理解できるように、種々の代替実施形態、変更、および等価物を含む。本明細書内の教示を入手できる当業者は、本明細書に記載されている本発明の範囲内にあるさらに別の実施形態、変更、および実施形態、さらに他の使用分野を認識できるであろう。
【００１３】
概して、種々の実施形態は、受け取った液体サンプルの乾燥サンプルを保存するサンプル担持体に関する。例として、液体サンプルは生体液体サンプルまたは非生物的水性サンプルとすることができる。他の実施形態は、乾燥サンプルから液体サンプルを抽出する方法に関する。該方法は、乾燥サンプルを含む担持体の一部を溶液中に溶解させるステップを含む。その溶液は容器内に収集され、別の溶液（例えば、水）を容器に加えることにより、不要なサンプル成分（例えば、血液タンパク）および収集物質が溶液から沈殿する。沈殿物は、様々な技術のうちの１つ、例えば、遠心分離または濾過によって除去され、上清は、例えば、タンパク質沈殿法（ＰＰＴ）の典型的なワークフローに見られるように、別の容器に移すことによって分析に使用される。代替実施形態では、サンプル担持体の一部が溶解して、サンプル担持体の残りの部分から乾燥サンプルを含むサンプル担持体の別の部分を切り離す。例えば、溶解部分はサンプル担持体の大部分から乾燥サンプルを含む部分を分離する境界（例えば、環帯）とすることができる。本発明の方法の種々の実施形態は、サンプル担持体から乾燥サンプルスポットを打ち抜く必要がないので、打ち抜きプロセスに関する多数の問題を回避することができる。
【００１４】
以下の種々の実施形態の説明では、ＤＢＳサンプリング用のサンプル担持体について言及する。本発明の装置および方法は、他の生体液、例えば、他の生体液の乾燥サンプルスポット用のサンプル担持体と共に使用することも可能であることは理解できるだろう。例えば、他の生体液として、尿、唾液、血漿、血清、および脳脊髄液が挙げられる。
【００１５】
図１は、乾燥させて研究室または試験場に送る血液サンプル１２を採取するための従来のＤＢＳカード１０を示した図である。ＤＢＳカード１０は、典型的には、濾紙、ポリマー、または当分野で乾燥サンプルスポットを採取するのに周知である他の材料で作成される。カード１０は、血液サンプル１２を受け取る領域を囲む円形マーク１４を含む。マーク１４は、血液サンプル１２をサンプル担持体１０上のどこに付着させればよいかの基準となる。円形マーク１４の外側の担持体材料は、マーク１４に囲まれた担持体材料と同じである。サンプル位置および濃度は、それぞれの円形マーク１４内で異なる場合がある。識別（ＩＤ）フィールド１６は、それぞれのマーク１４に隣接して配置され、例えば、ラベルを取り付けることによって、それぞれのサンプル１２の情報を表示することができる。
【００１６】
分析結果の再現性を向上させるためには、完全な乾燥血液スポット１２のサンプリングが必要である。従来の技術は、血液スポット１２をサンプルカード１０から打ち抜くステップを含む。完全な血液スポット１２をカード１０から打ち抜くのに注意を払う必要があり、そうでなければ分析測定の再現性および精度が変化してしまう可能性がある。さらに、パンチ工具が血液スポット１２と接触する場合、パンチ工具を連続して使用することで、キャリーオーバーをもたらす可能性があり、次の測定に悪影響を及ぼす恐れがある。スポット１２を打ち抜くプロセスは、十分注意を払う必要があり、測定の速度を制限してしまう可能性がある。
【００１７】
図２では、本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存するサンプル担持体２０の一実施形態が示されている。サンプル担持体２０は、カードの形であり、第２の担持部２３内に配置される複数の第１の担持部（収集領域２２）を含む。各収集領域２２は、周知の量の血液サンプルを受け取るのに十分な領域を有する。例えば、それぞれの収集領域２２は、図１のＤＢＳカード１０用の円形マーク１４の外周と同様の外周を有する円形領域としてもよい。それぞれの収集領域２２の外周は、臨床医が血液サンプルを的確に塗布することができるように可視マークで示されてもよい。あるいは、それぞれの収集領域２２は、サンプル担持体２０の周囲部２３と区別する色もしくは質感を有してもよい。
【００１８】
収集領域２２は、１つまたは複数の溶媒中で溶解する物質（例えば、アセトニトリル）を含むが、サンプル担持体２０の周囲領域は溶媒中に溶解不可能である。収集領域２２は、種々の物質構造、例えば、膜、スポンジ、繊維、または２つ以上の物質構造の組み合わせで形成されてもよい。好適な実施形態では、収集領域２２は、例えば、セルロースアセテートから作成された膜状フィルタである。任意で、セルロースアセテートは、特定のサンプリング用途に応じて、１つまたは複数の他の物質と組み合わされてもよい、または混合されてもよい。代替実施形態では、収集領域２２は、ポリスルホンフィルタとして形成される。これらの収集領域の物質は、親水性であり、水溶液やアルコール溶液との相溶性を有する。さらに、収集領域物質は、特に、アナライト、タンパク質、および免疫グロブリンを吸着することはできないので、血液サンプルや他の生物的水性サンプルを吸着するのに適した物質である。また、溶媒（例えば、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ））を単独に使用して、または水と併用することで、アナライトのほとんどを溶解しやすくして、残存繊維、沈殿したタンパク質、および細胞残屑からアナライトを抽出しやすくする。
【００１９】
塗布した血液サンプルが乾燥した後、サンプル担持体２０は試験場に運ばれて、そこでサンプル収集プレートに固定される。研究室および試験場は、一般に、液体サンプルの移動、塗布、または蒸発を基本にしたワークフローを採用している。以下の説明において、タンパク質沈殿法（ＰＰＴ）は、サンプル調製において使用される技術である。ＰＰＴ法によれば、血漿：アセトニトリル＝１：３の割合で血漿がアセトニトリルに添加されて、７５％のアセトニトリル溶液が調製される。
【００２０】
図３Ａは、サンプル収集プレート２６に固定された時のサンプル担持体２０内の１つの収集領域２２の断面側面図である。さらに、サンプル担持体上の乾燥血液スポットから血液サンプルを抽出するための一実施形態の方法１００のフローチャートを示した図４を参照する。アセトニトリル３０（または他の溶媒）を含むリザーバ２８は、サンプル担持体２０の周囲部２３の上面に押し付けられて、溶媒を収集領域２２に添加されることができる（ステップ１０５）。溶媒は、確実に収集領域２２全体が溶媒中に溶解するように、周囲部２３の隣接領域にも添加されることが好ましい。図面内の黒丸印３２は、周囲部２３の上面とリザーバ２８の下面との接触界面、および周囲部２３の下面とサンプル収集プレート２６の上面との接触界面を示している。好ましくは、部品を互いに対してしっかりと保持するのに十分な力が加えられるので、溶媒はサンプル担持体２０の所望の領域に限定される。他の実施形態では、確実に流体封止できるように、接触界面３２の一方または両方に１つまたは複数のガスケットが配設されてもよい。
【００２１】
アセトニトリルは、収集領域２２を溶解し、その結果、図３Ｂに示されるように容器３６（例えば、サンプルウェル）内に抽出サンプルを含む溶液３４が収集される（ステップ１１０）。アセトニトリルの比率を小さくするために、容器内で溶液３４に水が加えられる（ステップ１１５）。水と溶液３４とを混合するために、サンプル収集プレート・容器構造体が撹拌される（ステップ１２０）。例として、アセトニトリル組成物は、測定されるアナライトの極性および溶解度に応じて、５０％から７５％未満の範囲の値まで低減されてもよい。任意で、薬物タンパク質相互作用を軽減するために、溶液に酸もしくは塩基が水と一緒に加えられてもよい。このアセトニトリル濃度で、混合溶液から血液タンパク質とセルロースアセテートが沈殿する。様々な技術によって、沈殿物が溶液３４から除去される（ステップ１２５）。例えば、標準的なＰＰＴワークフローによる遠心分離が行われてペレットを作製することにより、上清を容器３６から取り出しやすくする。代替的に、濾過プロセスを使用可能である。溶解プロセスの結果、収集領域２２からのいくつかの粒子状物質が容器３４中に存在する場合があるが、この場合も、遠心分離もしくは濾過プロセスにより粒子状物質を除去することができる。他の例では、代替の分離技術を使用して、分析機器（例えば、液体クロマトグラフィーシステムの分析カラム）に別な形で悪影響を及ぼす可能性のある溶解した収集領域の物質を除去することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、使用できる分子量サイズ分離技術の一例である。ＳＥＣ技術では、ポリマーのような大きな分子は固定相の小さい穴の中に拡散することができない（すなわち、大きな分子は物理的に穴から排除される）。したがって、大きな分子は、穴に入り込む小さい分子から分離される。固定相の穴サイズは、対象アナライトと大きな干渉分子（例えば、溶解収集領域物質とサンプルマトリックスによる干渉分子（例えば、血液中のタンパク質））とを効率良く分離できるように選択される。分離を行うのに、磁気捕捉技術も有用である。磁気捕捉技術によれば、マイクロビーズもしくはマイクロロッドのような磁性物質を収集領域物質に付着させる。したがって、収集領域物質は、磁場を印加することで捕捉され、分離される。分離プロセスによって沈殿物が除去された後、例えば、別のプレートおよびウェルに移動させることによって、分析ワークフローに上清が提供される（ステップ１３０）。
【００２２】
本発明の方法１００の１つまたは複数のステップは、ロボットシステムを使用して行うことができる。さらに、方法１００は、サンプル担持体２０のそれぞれの収集領域に対して同時に行うことができる。好ましくは、分析効率を高めるために、多数の乾燥血液スポット１２（サンプル担持体２０の収集領域２２それぞれに対して１つずつ塗布される）を同時に自動的に処理することができる。
【００２３】
上述の実施形態では、それぞれの収集領域２２は溶解し、サンプル担持体２０の周囲領域２３に開口部が残る。他の実施形態では、収集領域は別の構造体で支持される。例えば、図５Ａの上面図および図５Ｂの側面図の１つの収集領域２２´に関して示されているように、収集領域２２´はスクリーンもしくはメッシュ４２上に配置されてもよい。溶媒が添加されて収集領域２２´が溶解した後、図５Ｃの上面図および図５Ｄの側面図に示されているように、スクリーン４２はサンプル担持体の周囲部２３に固定された状態もしくは周囲部２３まで伸びた状態のまま変わらない。あるいは、構造体は、例えば、繊維、膜、またはサンプル担持体の周囲部２３内で収集領域を支持するもしくは固定する１つまたは複数の他の機構とすることもできる。いくつかの実施形態では、溶媒を添加すると構造体も溶解し、その結果、収集領域２２´と構造体の両方からの物質が容器内に収集された溶液中に存在することになる。
【００２４】
図６には、本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存する別の実施形態のサンプル担持体５０が示されている。サンプル担持体５０は、溶解可能な境界領域５２の形の第２の担持部を含む。それぞれの境界領域５２は、環状であり、収集領域５４（すなわち、第１の担持部）をサンプル担持体５０の周囲部２３（すなわち、第３の担持部）から分離する。収集領域５４を示すために、それぞれの境界領域５２の内周または外周に沿って可視マークが付与されてもよい。あるいは、境界領域５２または収集領域５４の少なくとも一方は、サンプル担持体５０の残りの部分と区別する色もしくは質感を有してもよい。
【００２５】
この実施形態では、境界領域５２は、溶媒中に溶解する物質を含むが、サンプル担持体５０の収集領域５４と残りの部分は溶媒中に溶解不可能である。好適な実施形態では、境界領域５２は、セルロースアセテート膜もしくはポリスルホン膜を含む。
【００２６】
図７Ａは、サンプル収集プレート２６に固定された時のサンプル担持体５０の１つの収集領域５４および境界領域５２の断面側面図であり、図８は、サンプル担持体上の乾燥血液スポットから血液サンプルを抽出するための一実施形態の方法２００のフローチャートである。溶媒３０を含むリザーバ２８がサンプル担持体５０の周囲部２３の上面に押し付けられて、溶媒３０が境界領域５２に添加される（ステップ２０５）。図示されているように、溶媒３０は収集領域５４にも添加されるが、他の実施形態では、リザーバ２８の底部の開口部は、溶媒３０を境界領域５２にほぼ限定して添加するような形状である。例えば、リザーバの底部は、境界領域５２の寸法と一致する大きさの環状開口部を有してもよい。別の代替実施形態では、フレーム６４に固定された多数の溶媒アプリケータ６２を有するツール６０を使用して溶媒を添加する。ツール６０は、図９Ａの底面図および図９Ｂの側面図それぞれに示されている。それぞれのアプリケータ６２は、フレーム６４内の対応する環状チャネル内に固定されたリング状スポンジまたは同様の吸収材料である。溶媒を境界領域５２に添加するためには、サンプル担持体５０はツール６０を受け取るように構成されたサンプル収集プレートに固定される。最初に、ツール６０は、それぞれのスポンジアプリケータ６２が溶媒を吸収するように溶媒を入れた長いリザーバ（図示せず）まで下ろされる。その後、ツール６０は、リザーバから外され、溶媒アプリケータ６２が境界領域と接触するようにサンプル収集プレートに対して位置決めされて溶解プロセスが開始され、図７Ｂに示されるように、サンプル収集領域５４を容器３６内に切り離す。
【００２７】
図７Ｂおよび再び図８を参照すると、溶媒が境界領域５２を溶解した後、サンプル１２を含む収集領域５４がサンプル担持体５０から切り離されて、溶解した境界領域を含む溶液５６と一緒に容器３６内に収集される（ステップ２１０）。溶液量は所望の抽出量を得るためには不十分である場合があるので、所望量を得るために溶液５６に抽出溶媒が添加される（ステップ２１５）。溶液５６中のアセトニトリルの比率を減らすために容器３６に水が加えられる（ステップ２２０）。水と溶液とを混合して収集領域５４からサンプル１２を抽出するのを助けるために、サンプル収集プレート２６および容器３６が撹拌される（ステップ２２５）。様々な周知の技術のいずれかを使用して溶液５６中に形成された沈殿物が除去され（ステップ２３０）、その後、上清が分析ワークフローで使用される（ステップ２３５）。
【００２８】
図１０を参照すると、本発明の受け取った液体の乾燥サンプルを保存する別の実施形態のサンプル担持体７０が示されている。サンプル担持体７０は、液体サンプルを受け取るための第１の担持部（すなわち、収集領域）７２を含む線形部分（例えば、ディップスティック）の形式である。第１の担持部は、液体サンプルを吸着し、かつ溶媒を添加すると溶解する物質で形成される。第２の担持部７４は、第１の担持部７２に付着され、溶媒中に溶解不可能な物質で作製される。第２の担持部７４により、臨床医は、サンプル収集および処理の様々な局面で、収集領域７２に触れずにサンプル担持体７０を持つことができる。さらに、第２の担持部７４は、サンプルの採取または処理の時の識別名を取り付ける手段を備える。図１１は、サンプル担持体７０に取り付けられる識別ラベル７６の一例を示している。
【００２９】
図１２Ａ〜図１２Ｃは、サンプル収集手順の局面で図１０のサンプル担持体７０を使用する方法を示している。図１２Ａを参照すると、容器８０にはサンプリングされて分析される液体８２が入っている。特別な例として、液体８２は、医院で採取された尿としてよい。容器キャップ８４は、液体量８２を分析のために研究室に送る前に、容器８０の上部にねじ込まれる。研究室では、臨床医が容器８０を振って、次の処理の前に液体内の成分が適切に混ざるようにする。容器８０の側面の小さい開口部を覆うタブ８６は、空気が容器内に入るように取り外され、それと同時に、液体８２が容器キャップ８４の上部の（注ぎ口キャップ９０を外した後の）注ぎ口８８から続けて注がれる。注がれた液体は、他の検査もしくは分析に使用されてもよいし、または余分の液体として処理され廃棄されてもよい。キャップ８４から伸びた浸漬容積部９２を満たすのに十分な液体量を保つのに細心の注意が払われる。
【００３０】
図１２Ｂは、キャップ８４が浸漬容積部に液体が含まれた状態で平面に配置するためにひっくり返された状態を示した図である。その後、図１２Ｃのひっくり返されたキャップを上から見た図に示されるように、ディップスティック式サンプル担持体７０が容器キャップのスロット９４に差し込まれて、収集領域７２が浸漬容積部９２に含まれる液体８２に完全に含浸される。サンプル担持体７０は、サンプル担持体７０がスロット９４から取り出されて乾燥可能とされる前に収集領域７２に液体８２を十分に吸着させるのに十分な時間（例えば、５秒間）差し込まれた状態のまま保たれる。サンプル担持体７０が引き戻される時に収集領域７２の表面にメニスカスを形成する過剰な液体が除去されるように、スロット９４の寸法は収集領域７２の断面寸法と厳密に一致する。取り外されたサンプル担持体７０は、収集領域７２をさらに処理する前に乾燥させることができるホルダもしくは装置内に入れられる。
【００３１】
ディップスティック式サンプル担持体７０上に液体サンプルを採取するのは研究室で行われるとして上述したが、液体が最初に採取された場所、例えば、医院で代わりに行われてもよい。この場合、ディップスティック式サンプル担持体７０は、十分に乾燥した後に適切な輸送用容器に入れられて、分析のために研究室または検査施設に送られる。
【００３２】
収集領域に乾燥サンプルを含むディップスティック式サンプル担持体７０は、他の形態のサンプル担持体について上述した方法に合致する様々な方法で液体サンプルを抽出するために処理される。例えば、収集領域７２を溶解させるために溶媒が添加され、その結果得られた溶液は、溶液を分析ワークフローに提供する前に沈殿物を除去するために処理される。
【００３３】
図１３に示されている代替実施形態のディップスティック式サンプル担持体９６では、第１の担持部（すなわち、収集領域９７）と第３の担持部９８は、溶媒中に溶解不可能であるが、線形部分に沿って他の２つの部分９７、９８間に配置される第２の担持部９９は溶解可能である。この実施形態では、ディップスティック式サンプル担持体９６は、図１０のディップスティック式サンプル担持体７０と同様の用法で使用されるが、抽出プロセスで溶媒を添加することにより、収集領域９７が溶液中に切り離される。したがって、次の処理は、図７Ａおよび図７Ｂに関して上述した溶解可能な境界領域５２を有するサンプル担持体５０に対する処理と同様である。
【００３４】
上述したサンプル担持体のさらに別の実施形態では、小さな粒子が各収集領域、境界領域、または収集領域および境界領域の両方の表面に埋め込まれる、もしくは付着される。粒子は、ナノスケールの粒子からミクロンサイズの粒子とすることができ、シリカ粒子、ジルコニア粒子、アルミナ粒子、炭素粒子、ポリマー粒子、多孔質粒子、無孔粒子、塩もしくは磁性粒子、または２つ以上の種類の粒子の組み合わせが挙げられる。いくつかの別の実施形態では、粒子が被覆される、または誘導体化される。粒子は、クロマトグラフィー分析に関して有益な機能を提供することができ、選択吸着剤を含んでもよい。収集領域の溶解時に、粒子は、容器内の溶液中に放出され、さらに処理されてもよい。このような目的で有用な１つの特定のタイプの粒子物質は、イオン交換物質である。具体的な例として、収集領域は、サンプルから妨害物質を除去する粒子を含むことができる。ＰＰＴの場合、粒子は、抽出サンプルからリン脂質を除去するのに使用されるＷａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（マサチューセッツ州ミルフォード）から市販されているＯｓｔｒｏ（Ｒ）とすることができる。Ｏｓｔｒｏ粒子に捕捉されたリン脂質は、その後、標準的なＰＰＴワークフローの一部として上述した遠心分離によって得られたペレットと共に除去される。
【００３５】
ＤＢＳサンプルの評価
ＤＢＳサンプルは、８つのアナライトを含んだラット全血３μＬをスポットすることによって、５ｍｍの直径のセルロースアセテート収集ディスク上で調製された。血液スポットは、次の処理の前に少なくとも２時間（典型的には、１６時間）空気乾燥された。その後、それぞれのＤＢＳサンプルは、微小遠心管内に入れられ、その後、溶解液１００μＬがそれぞれの管に添加された。溶解液は、０．１％のギ酸（ＦＡ）の存在下および非存在下の水／アセトニトリル（ＡＣＮ）混合物を含むものとした。セルロースアセテートディスクは、溶液中にすぐに溶解して、乳状液体混合物が形成された。表１には、評価に使用される８つの溶解液（＃１〜＃８）の量および組成が記載されている。
【００３６】
【表１】
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【００３７】
それぞれの混合物に水が加えられて、再びセルロースアセテートを沈殿させる。表１には、加えられる水（または、溶解液がＦＡを含む場合、加えられる水＋０．１％のＦＡ）の量と、その結果得られる溶液の組成が記載されている。それぞれの微小遠心管は遠心分離（典型的には、１０分間に１５０００ｒｐｍ）にかけられて、液体から固体セルロースアセテートを分離し、次の分析用に澄明な溶液のアリコートが取り出された。アリコートは、ＬＣ−ＭＳ分析のために直接注入されてもよいし、まず希釈されて溶液組成が変化した後に分析されてもよい。この評価では、ＬＣ−ＭＳへの注入の前に、全てのアリコートがアセトニトリル中で希釈されて、７０％アセトニトリル溶液が得られた。図１４および図１５は、３回反復して検査した結果の８つのアナライトの平均回収率および平均マトリックス効果率をそれぞれ示した図である。マトリックス効果値は、抽出マトリックスブランクにスパイクされたアナライトの反応を、マトリックスを含まない溶液にスパイクしたアナライトの反応と比較することによって決定された。この値は、サンプルマトリックスがアナライト反応にどの程度影響を及ぼすかを示している。
【００３８】
【数１】
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【００３９】
本発明は、特定の実施形態に関して図示され説明されているが、添付の請求項に記載されている本発明の精神および範囲から逸脱せずに、本発明の形式や細部に種々の変更を加えてもよいことを当業者は理解すべきである。例えば、本発明の種々の実施形態のサンプル担持体は、収集領域を囲む担持エリアが生体液不透過性の物質で作製されるように構成され得る。このようにして、塗布される生体液体サンプルを受け取るのに利用できる量を正確に規定することができる。その結果、収集領域全体に生体液体サンプルを染み込ませることによって、サンプルの既知量が採取される。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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