(57)【要約】  本発明は、卵巣癌の検出、診断、ならびに卵巣癌進行のモニタリング、および卵巣癌をなど種々の癌治療の進捗をモニタリングするためのバイオマーカー、方法、デバイス、試薬、システムおよびキットに関する。本発明はまた、ポイントオブケア検査（ＰＯＣＴ）および被験体におけるバイオマーカーの濃度を測定するための方法にも関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における癌の存在を診断するための方法であって、前記被験体中の１つまたは複数のバイオマーカー（複数可）のレベルを決定することと、前記被験体中の前記バイオマーカー（複数可）のレベル（複数可）をバイオマーカー（複数可）の正常なレベルのバイオマーカー（複数化）と比較することとを包含する、方法。
【請求項２】
前記癌が卵巣癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記バイオマーカーが、ｈＣＧ、ＬＨ、ＦＳＨ、ＢＮＰおよびＣＡ−１２５ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験体中のバイオマーカーの前記レベルが、前記正常なレベルよりも少なくとも１０％高い、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記被験体中のバイオマーカーの前記レベルが、前記正常なレベルよりも少なくとも５０％高い、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記バイオマーカーがゴナドトロピンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記バイオマーカーがＦＳＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記バイオマーカーがｈＣＧである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記バイオマーカーがＬＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記バイオマーカーがＢＮＰである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
卵巣癌を有すると診断された患者において卵巣癌の進行をモニタリングするための方法であって、時間内の最初のポイントで前記患者における１つまたは複数のバイオマーカー（複数可）のレベルを測定することと、時間内の第二のポイントで前記被験体における前記バイオマーカー（複数可）の前記レベル（複数可）を比較して、前記卵巣癌の進行を決定することとを包含する、方法。
【請求項１２】
前記バイオマーカーが、ｈＣＧ、ＬＨ、ＦＳＨ、ＢＮＰおよびＣＡ−１２５ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体中のバイオマーカーの前記レベルが、前記正常なレベルよりも少なくとも１０％高い、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体中のバイオマーカーの前記レベルが、前記正常なレベルよりも少なくとも５０％高い、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記バイオマーカーがＦＳＨである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記バイオマーカーがＢＮＰである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
卵巣癌を有すると診断された患者において卵巣癌の治療の有効性をモニタリングするための方法であって、時間内の最初のポイントで前記患者における１つまたは複数のバイオマーカー（複数可）のレベルを判定することと；卵巣癌治療法により前記患者を治療することと；時間内の第二のポイントで前記患者における１つまたは複数のバイオマーカー（複数可）の前記レベルを決定することと；時間内の最初のポイントで前記被験体におけるバイオマーカー（複数可）の前記レベル（複数可）を、時間内の第二のポイントでの前記レベルと比較して、前記卵巣癌の治療の有効性を決定することとを包含する、方法。
【請求項１８】
前記バイオマーカーが、ｈＣＧ、ＬＨ、ＦＳＨ、ＢＮＰおよびＣＡ−１２５ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体中のバイオマーカーの前記レベルが、正常なレベルよりも少なくとも１０％高い、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記被験体中のバイオマーカーの前記レベルが、正常なレベルよりも少なくとも５０％高い、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記バイオマーカーがゴナドトロピンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記ゴナドトロピンがＦＳＨである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ゴナドトロピンがＬＨである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ゴナドトロピンがｈＣＧである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記バイオマーカーがＢＮＰである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者におけるバイオマーカーの前記レベルの測定が、定量的ポイントオブケアデバイスによって行われる、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ポイントオブケアデバイスが、ラテラルフローデバイスである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
卵巣癌治療法により治療された個体のバイオマーカーモニタリング用キットであって：
１つまたは複数の血液サンプル中で前記バイオマーカー（複数可）を定量可能な複数のポイントオブケアデバイスまたはポイントオブユースデバイス
を備える、キット。
【請求項２９】
少なくとも２つのサンプルを収集するための説明書をさらに備える、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記ＰＯＣデバイスが、拡張範囲のラテラルフローデバイスである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
女性の妊娠を判定するための方法であって、時間内の最初のポイントで前記患者におけるｈＣＧのレベルを測定することと、時間内の第二のポイントで前記被験体における前記バイオマーカー（複数可）のレベル（複数化）を比較して、妊娠を判定することとを包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本ＰＣＴ出願は、その全体が参照によって援用される、２０１２年６月１５日出願の米国特許仮出願第６１／６５９，９８１号；２０１２年７月２日出願の同第６１／６６７，０８１号および２０１２年７月１４日出願の同第６１／６７１７１７号に対する優先権の利益を主張する。
【０００２】
連邦政府支援の研究開発に関する声明
該当せず
【０００３】
発明の分野
本発明は、卵巣癌の検出、診断のほか、卵巣癌進行のモニタリングおよび卵巣癌など種々の癌治療の進捗をモニタリングするためのバイオマーカー、方法、デバイス、試薬、システムおよびキットに関する。本発明はまた、ポイントオブケア検査（ＰＯＣＴ）および被験体におけるバイオマーカーの濃度を測定するための方法にも関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
癌は、世界の主要死因の１つであり、２００８年には死亡者数が７６０万名であった（全死亡例のほぼ１３％）。男性では前立腺癌が癌の主要原因の１つである。女性では、卵巣癌は９番目に多い癌であり、米国では女性の癌関連死亡では、５番目に多い原因となっている。７２名中１名の女性が卵巣癌を発症し、１００名中１名がこの形態の癌で死亡する。米国癌協会は、２０１３年には、２２，２４０名の女性が卵巣癌と診断され、約１４，２３０名が卵巣癌により死亡すると推定されている。卵巣癌のうち約８５％〜９０％が上皮性卵巣癌である。
【０００５】
治療の選択肢としては、手術、化学療法および時には放射線療法が挙げられる。手術には通常は、片側または両側の卵巣、卵管および子宮の除去を伴う。進行した疾患では、全ての腹部転移を外科的に除去することで、化学療法の効果が増強され、生存率の改善を助長する。癌組織の除去が行われたステージＩＩＩの卵巣癌の女性患者を対象に行った研究によって、静脈内投与および腹腔内直接投与による化学療法により生存率が改善されることが示される。
【０００６】
癌、および具体的には卵巣癌の早期検出および診断のために適切な腫瘍マーカーを特定することによって、患者の、特に症状があいまいであるかまたは症状が認められない患者の臨床的転帰が改善される。現在、費用対効果の高いスクリーニング試験は開発されていない。
【０００７】
卵巣上皮癌は、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、例としては、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）が上昇している個体、例えば、閉経後女性または排卵を誘発するための治療を受けた女性ではさらに一般的である。逆に、卵巣癌のリスクの低下は、複数回の妊娠、授乳、経口避妊薬使用、およびエストロゲン補充療法（その全てがＦＳＨおよびＬＨ濃度が低いこと、およびそれらに対する暴露の低減に関連する）の既往に関連する。卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は、卵巣腫瘍において遺伝子発現を調節し（Ｃｈｕ  Ｓ，Ｒｕｓｈｄｉ  Ｓ，Ｚｕｍｐｅ  ＥＴ，Ｍａｍｅｒｓ  Ｐ，Ｈｅａｌｙ  ＤＬ，Ｊｏｂｌｉｎｇ  Ｔ，Ｂｕｒｇｅｒ  ＨＧ，Ｆｕｌｌｅｒ  ＰＪ．（２００２），ＦＳＨ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｔｕｍｏｕｒｓ  ａｎｄ  ｎｏｒｍａｌ  ｏｖａｒｉｅｓ，Ｍｏｌ  Ｈｕｍ  Ｒｅｐｒｏｄ．８：４２６−３３）、スルビビンの上方制御を介して血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を増大させることによって卵巣癌の新生血管が発生する（Ｈｕａｎｇ  Ｙ，Ｈｕａ  Ｋ，Ｚｈｏｕ  Ｘ，Ｊｉｎ  Ｈ，Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｌｕ  Ｘ，Ｙｕ  Ｙ，Ｚｈａ  Ｘ，Ｆｅｎｇ  Ｙ（２００８），Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＩ３Ｋ  ／ＡＫＴ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ＦＳＨ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ＶＥＧＦ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｓｅｒｏｕｓ  ｃｙｓｔａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．１８：７８０−９１）。
【０００８】
現在、癌抗原１２５（ＣＡ−１２５）が、卵巣癌のための血清バイオマーカーとして用いられている。ＣＡ−１２５の血清濃度は、進行ステージの疾患およびこのマーカーを有する患者の７５〜８０％で上昇する。ＣＡ１２５は、化学療法に対する応答をモニタリングし、疾患再発を検出し、良性骨盤内腫瘤から悪性腫を識別するための血清腫瘍マーカーとして用いられる。しかし、これは現在、適切な診断バイオマーカーではない。なぜなら高レベルのＣＡ−１２５を有する健康な女性のほとんどに癌が認められないためである。
【０００９】
卵巣癌などの癌の早期検出のためのバイオマーカーが無いことに加えて、このようなバイオマーカーを得る方法にも困難を伴う。繰り返し行う静脈穿刺によって得た血漿または血清サンプルは、公開生殖試験における卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、エストラジオール（Ｅ２）およびプロゲステロン（Ｐ）の循環レベルをモニタリングするための究極の許容判断基準である。研究対象にとっては高頻度にわたる静脈穿刺の負荷は高く；研究者らにとっては、静脈穿刺サンプルは、即時処理および冷凍庫を備えた貯蔵施設を必要とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、卵巣癌を含む癌の検出および診断の改良法、ならびに効果予測バイオマーカー（複数可）を定量化できるポイントオブケアまたはポイントオブユースデバイスを含む、疾患の進行をモニタリングし、卵巣癌の種々の治療の進捗をモニタリングするための方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の要旨
本発明は、種々のバイオマーカーの検出、具体的には、ゴナドトロピンを含むバイオマーカーの濃度を測定するための方法、デバイス、試薬、システムおよびキットに関する。
【００１２】
本発明は、卵巣癌、前立腺癌および精巣癌などの癌の検出および診断のためのバイオマーカー、方法、デバイス、試薬、システムおよびキットに関する。
【００１３】
本発明は、卵巣癌の進行をモニタリングする、および種々の癌治療の進捗をモニタリングするためのバイオマーカー、方法、デバイス、試薬、システムおよびキットに関する。
【００１４】
また本発明は、卵巣癌、前立腺癌および精巣癌を含むがこれらに限定されない種々の癌のための診断としてのバイオマーカーの検出のための定量的ポイントオブケアデバイスおよび方法にも関する。
【００１５】
特定の実施形態では、本発明は、任意の薬物を用いて治療された個体のバイオマーカーをモニタリグするための方法を提供する。この方法は、適切な時点で個体からサンプルを得ることを包含する。このサンプルは、各々がバイオマーカーを定量化できる、ポイントオブケアデバイスもしくはポイントオブユースデバイス上で、または少なくとも２つのサンプルの貯蔵に適切なマトリックス上で中央検査室による薬物の定量化前に、採取または自己採取によって、ポイントオブケアまたはポイントオブユース時に収集してもよい。得られた情報は、個体について薬物の投与の指導に適切であり得る。
【００１６】
本発明はまた、ゴナドトロピン（ｈＣＧ、ＬＨおよびＦＳＨ）の定量化のためのポイントオブケアデバイスおよび／またはポイントオブユースデバイス、ならびに卵巣癌などの種々の癌のさらに有効な治療に向けて、個別の投与およびモニタリングが可能となるＢＮＰに関する。さらに、膀胱癌および精巣癌は、ｈＣＧポイントオブケア／ポイントオブユース（ＰＯＣ／ＰＯＵ）によってモニターされ得る。
【００１７】
サンプルは、ポイントオブケアまたはポイントオブサービス、例えば、自己採取によって収集してもよい。サンプルは、薬物の定量化のためにラテラルフローデバイスに適用されてもよく、その結果が、薬物動態解析のために医師または医師の代理人に伝達されてもよい。他の実施形態では、このサンプルは、定量化および解析のために中央検査室へサンプルを移送する前に、適切な貯蔵マトリックス、例えばニトロセルロース上で、例えば、自己採取によって、ポイントオブケア時またはポイントオブサービス時に収集される。
【００１８】
特定の実施形態では、自己採取によってポイントオブケアまたはポイントオブユースを通じて個体から種々の時点で収集したサンプルを、中央検査室によって得てもよい。次いで、検査室で、目的のバイオマーカーを定量するためのサンプルを検査して、その結果に基づいて、卵巣癌の検出または診断を得てもよい。得られた結果はまた、疾患の進行度を決定するため、および治療レジメンの有効性をモニターするために用いてもよい。
【００１９】
別の態様では、これによって、ある薬物で治療された個体のバイオマーカーをモニタリングするためのキットが提供される。このキットは、１つまたは複数のサンプル中で薬物を定量できる、複数のポイントオブケアデバイスもしくはポイントオブユースデバイス、または中央検査室による定量前にサンプルの貯蔵に適切なマトリックスを備える。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１Ａ−Ｃ】図１Ａ〜Ｃは、それぞれ、ＢＮＰ濃度対ＣＡ１２５濃度、ＦＳＨ濃度対ＣＡ１２５濃度、およびＢＮＰ濃度対ＦＳＨ濃度のプロットである。
【図２Ａ−Ｂ】図２Ａおよび図Ｂは、それぞれ、卵巣癌患者においてＰＯＣ／ＰＯＵデバイスで決定したＦＳＨ濃度およびＬＨ濃度のプロットである。
【図３】図３Ａは、ＰＯＣスキャナーデバイスから作成したＦＳＨ濃度のトレースであり、図３Ｂは、スキャナーデバイスから測定した濃度データから作成したＦＳＨ濃度のプロットである。
【図４】図４Ａは、ＰＯＣスマートフォンデバイスから作成したＦＳＨ濃度のトレースであり、図４Ｂは、スマートフォンデバイスから測定した濃度データから作成したＦＳＨ濃度のプロットである。
【図５】図５は、ＦＳＨの従来のアッセイおよび拡張範囲アッセイの比較である。
【図６】図６Ａ）従来のラテラルフローのスキャン、図６Ｂ）本発明の一実施形態のラテラルフローのスキャン、図６Ｃ）従来のラテラルフローのＦＳＨの濃度のプロット、および図６Ｄ）本発明の一実施形態のラテラルフローのＦＳＨ濃度のプロットであって、従来のラテラルフローに比較したＦＳＨの拡張された定量範囲を示す。
【図７】図７Ａ）従来のラテラルフローによるｈＣＧ濃度のプロットであり、図７Ｂ）本発明の一実施形態のラテラルフローによるｈＣＧ濃度のプロットであって、従来のラテラルフローに比較したＦＳＨの拡張された定量範囲を示し、図７Ｃ）本発明の一実施形態のラテラルフローによるｈＣＧ濃度のプロットであって、従来のラテラルフローに比較したＦＳＨの拡張された定量範囲を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、種々の癌の検出、診断および進行についてのバイオマーカー、方法、デバイス、試薬、システムおよびキットに、ならびに種々の癌治療の有効性を判定するためにバイオマーカーが測定され得る方法に関する。バイオマーカーのデータは、例えば、ラテラルフローのポイントオブケア検査を用いて、ポイントオブケアまたはポイントオブユースで収集されたサンプルから得てもよい。有利なことには、このサンプルは、自己採取によって得てもよい。特定の実施形態では、このサンプルを、ポイントオブケアデバイスに送達して、バイオマーカーを定量してもよく、そのようにして得た結果を医師または医師の代理人に報告する。一実施形態では、ゴナドトロピン（ｈＣＧ、ＬＨ、およびＦＳＨ）およびＢＮＰの定量は、ポイントオブケアおよびポイントオブユースの検出を用いてモニタリングしてもよく、これによって、卵巣癌などの種々の癌のより有効な治療に関して、個別の投薬およびモニタリングが可能になる。ゴナドトロピンは、これに限定するものではないが、血漿、血清または尿など種々の体液から定量的に検出され得る。ポイントオブケアには、濃度検出の拡張された定量範囲を要する。好ましくは、このアッセイまたは検査には、単回での判定を要し、反復および希釈はポイントオブケアではない。ほとんどのイムノアッセイは、対数２の測定範囲を有する。例えば、従来のラテラルフローＦＳＨ定量法では、測定範囲を１〜１００ＩＵ／Ｌのみに限定している。本発明の方法は、バイオマーカーの検出範囲を拡張するために、少なくとも対数１、または少なくとも対数２、または少なくとも対数３、または少なくとも対数４、または少なくとも対数５、または少なくとも対数６、または少なくとも対数７、または少なくとも対数８とする。例えば、本発明のアッセイおよび検査および方法によって、検出可能なＦＳＨ濃度の定量範囲を約１〜１０，０００ＩＵ／Ｌの間に拡張することができる。この拡張された定量範囲は、臨床用量のＦＳＨ投与後、またはバイオマーカー検査中に血液中で見られる全ての可能性のあるＦＳＨ濃度を包含する。本発明のアッセイ、デバイス、キットおよびバイオマーカーの他の使用例としては、ｈＣＧ定量化の用途が挙げられ、これには限定するものではないが、以下を包含する：１）妊娠を検出およびモニタリングすること、２）子宮外妊娠を検出および管理すること、３）ダウン症の胎児に関してリスクを決定すること、４）子癇前症を予測すること、５）妊娠性絨毛疾患を検出および管理すること、６）精巣生殖細胞悪性腫瘍を管理すること、および７）他のヒト悪性腫瘍をモニタリングすること。ｈＣＧポイントオブケア検査での課題としては、家庭での使用またはかかりつけ医の診療所もしくは救急治療室での使用が挙げられ、これによってサンプルの希釈も操作も重要でなくなるようになる。またこのサンプルは、血液または尿のいずれかでなくてはならず、本アッセイは、ｈＣＧ濃度範囲において対数６に適合する（０〜５００，０００超ＩＵ／Ｌ）十分な定量範囲を有していなければならない。本発明は、サンプルとして尿、血漿および血液を用いるｈＣＧの定量的ポイントオブケアアッセイを提供し、かつ定量範囲が２〜３００ＩＵ／Ｌである従来の方法に代わって、少なくとも２〜２１，０００ＩＵ／Ｌにおよぶ拡張定量範囲を有する。
【００２２】
拡張範囲を要する用途としては、これに限定するものではないが以下が挙げられる：１）子宮外妊娠：ｈＣＧが、特定のレベル１５００〜２０００ｍＩＵ／ｍＬを上回るが、超音波では妊娠が認められない場合、子宮外妊娠が疑われる。ｈＣＧが１５００〜２０００ｍＩＵ／ｍＬ未満であり、超音波が陰性である場合、子宮外妊娠、または初期の子宮内妊娠のいずれかを示し得る。２）妊娠モニタリング：ｈＣＧの倍加時間では、最終月経期以降約６週または７週までの間妊娠が正常に進行しているか否かを判断するための方法が得られる。その時点以降、ｈＣＧ倍加時間は遅くなり始め、超音波技術は、妊娠の進行状況に関する情報を得るための最高のツールとなる。３）救急部門：妊娠検査が、最も多くの頻度で指示される検査の１つである。４）精巣癌および他の生殖系列癌の検出および診断。
【００２３】
また、本発明のアッセイおよび検査および方法は、２Ｄバーコード性能を備えた光学リーダーを用いて読取ることができるカセットを提供し、これに限定するものではないが、クリニック、診療所または病院のデータベースなどのデータベースにアップロードするために、プリントアウトされるか、またはリーダー上に記憶され得るデータを提供する。このリーダーは、測定距離対標的サイズの比が低い共焦点光学装置を利用する。反射率測定値は、２Ｄバーコード中に組み込まれた従来の較正曲線を用いて、活動単位に変換される。このカセットは、中のサンプルが、少なくとも１２時間または少なくとも２４時間または少なくとも４８時間または少なくとも７２時間の間安定であり、それによって、患者がリーダーにアクセスしない場合、定量化のために中央検査室または診療室に搬送できるように作製される。
【００２４】
本発明で利用されるリーダーとしては、これに限定するものではないが、共焦点光学リーダーまたは携帯電話／スマートフォンリーダーが挙げられる。測定距離対標的サイズの比が低い共焦点光学装置を利用する反射率測定光学リーダーは、本発明の方法、キットおよびアッセイで訴えられ得る。計算は、各々のロットのカセット特有の２Ｄバーコードに組み込まれた情報を用いてバックグラウンドで行われてもよい。あるいは、十分な情報源なくポイントオブケア時に定量を行う携帯電話リーダーを用いてカセットの画像を取り込み、その画像は、インターネットを介してＦＳＨまたは他のバイオマーカー値をリアルタイムで受信され得る中央処理施設などの施設に転送できる。
【００２５】
本発明は、ＦＳＨなどのゴナドトロピンの迅速かつ定量的なポイントオブケア検査を直接自宅で現場利用するために提供し、患者が直接読み取ることができるか、または中央検査室／診療所へ移送して読込みを行うことができるカセットを提供する。ＴＤＭとして、この検査により、患者のより有効な量の投与が可能になり、ホルモン操作療法または癌治療の有効性を改善しなければならない。また、この検査によって、患者中心的で、より良好なコンプライアンス、およびその患者の個別の治療への参加がもたらされる。このアッセイは単純であることから、専門的かつ高価な装置を備えた中央検査室にアクセスできない後進地域においてこれらのアッセイを利用することができる。こうした範囲の拡張により、従来のアッセイの測定範囲内とするためにサンプルを希釈する必要がなくなる。
【００２６】
あるいは、サンプルを中央検査室が受取り、分析するまで、サンプルの収集および保管に適切なマトリックスまたは容器を用いて収集する。サンプルの収集および貯蔵のために適切なマトリックスまたは容器の例としては、これに限定するものではないが、市販の生物学的サンプリング濾紙システム、例えば、Ｗｈａｔｍａｎ  ３ＭＭ、ＧＦ／ＣＭ３０、ＧＦ／ＱＡ３０、Ｓ＆Ｓ９０３、ＧＢ００２、ＧＢ００３、またはＧＢ００４が挙げられる。血液標本収集のためのブロッティング材料のいくつかのカテゴリー、例えば、Ｓ＆Ｓ  ９０３セルロース（木材または綿由来）濾紙およびＷｈａｔｍａｎグラスファイバー濾紙が利用可能である。血液スポットを、濾紙の１つまたは複数の指定領域に置いて乾燥させ、次いで、検査申請書とともに中央検査室に郵送する。この収集方法では、診療室またはクリニックでサンプルを収集する必要がなくなるという利点を有する。従って、複数のサンプルが、費用と時間とをかなり削減して、０〜７２時間かけて患者によって好都合に収集され得る。これは、有効性の増大のほか、分析結果を治療医に伝達する場合の遅延の低減という利点を有し、治療医は、この情報を用いて、必要に応じて治療を調整し、患者に連絡して新しい治療計画を伝え得る。一態様では、卵巣癌と診断する、骨盤内腫瘤の良性か悪性かの鑑別診断を可能にする、卵巣癌の進行をモニターする、または卵巣癌の再発をモニターするために、単独でまたは種々の組み合わせのいずれかで用いる１つまたは複数のバイオマーカーが提供される。
【００２７】
本明細書に記載される任意のバイオマーカーは、以下のいずれかを含む卵巣癌のための種々の臨床的指標に用いてもよい：卵巣癌の検出、卵巣癌の特徴付け（例えば、卵巣癌の種類、亜型またはステージを決定すること）、例えば、骨盤内腫瘤の良性または悪性の鑑別診断をすること；卵巣癌予後を決定すること；卵巣癌の進行または寛解をモニタリングすること；卵巣癌の再発をモニタリングすること；転移をモニタリングすること；治療を選択すること（例えば、術前または術後の化学療法の選択）；治療剤または他の治療に対する応答をモニタリングすること、バイオマーカー検査と追加の生物医学情報とを組み合わせることによる。
【００２８】
本明細書に記載されるバイオマーカーを卵巣癌の診断に用い得る方式の例としては、卵巣癌を有することが明らかになっていない個体における、本明細書に記載の１つまたは複数のバイオマーカーの差次的発現は、その個体が卵巣癌を有することを示す場合があり、それによって、治療が最も有効である場合、初期段階の疾患での卵巣癌の検出が可能になる。卵巣癌の経過において「正常」値からのバイオマーカーの発現の増大は、卵巣癌進行の指標となり得るが、正常な発現と比較した場合の発現の低下は、その個体の寛解状態、または治療の奏功を示し得る。「正常」値と比較した場合のバイオマーカー発現度の増大は、癌の進行または卵巣癌治療の無効性を示し得る。さらに、卵巣癌が見かけ上治癒した後の１つまたは複数のバイオマーカーの差次的発現の増大または低下は、卵巣癌の再発の指標となり得る。この場合、癌の治療を再開してもよく、現在の治療を必要に応じて増強するまたは補強してもよい。さらにまた、バイオマーカー量の差次的変化も、特定の治療剤に対する個体応答の指標となり得る。差次的発現とは、特定の疾患に罹患している被験体において、その健常被験体もしくは対照被験体、または特定の疾患を有さない被験体におけるバイオマーカーの発現よりもさらに高いレベルまたはさらに低いレベルに活性化されるバイオマーカーの発現を指す。差次的発現としては、正常細胞および疾患細胞、または種々の疾患事象もしくは種々の治療を受けた細胞間での発現の定性的相違および定量的相違の両方が挙げられる。
【００２９】
本発明のバイオマーカーとしては、ＣＡ−１２５、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）が挙げられ、これは個々に用いられてもよいし、または組み合わせて用いられてもよい。ＦＳＨは、脳下垂体前葉によって放出され、女性の月経周期の最初の半分の間に卵およびエストラジオールの産生を刺激する。脳利尿ペプチドは、ヒトＮＰＰＢ遺伝子によってコードされる約３ｋＤａまでの３２ａａペプチドであり、利尿の調整、血管弛緩ならびにレニンおよびアンジオテンシンの分泌に関与する。
【００３０】
サンプル中の複数のバイオマーカーにより、特定の検査の感度および／または特異性が増大し得る。
【００３１】
バイオマーカーは、任意のレベルで差次的に発現され得るが、バイオマーカー（複数可）は一般に、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも５００％、または少なくとも１０００％増大されるレベルで存在する。本発明のバイオマーカー（複数可）の発現のレベルは、健常または対照の発現レベルよりも約１０％高い〜約２５０％高いか、または約１０％高い〜約１５０％高いか、または約１０％高い〜約１２５％高いか、または約１０％高い〜約１００％高いか、または約１０％高い〜約９０％高いか、または約１０％高い〜約８０％高いか、または約１０％高い〜約７０％高いか、または約１０％高い〜約６０％高いか、または約１０％高い〜約５０％高いか、または約１０％高い〜約４０％高いか、または約１０％高い〜約３０％高いか、または約１０％高い〜約２０％高いか、または約２０％高い〜約１２５％高いか、または約２０％高い〜約１００％高いか、または約２０％高い〜約９０％高いか、または約２０％高い〜約８０％高いか、または約２０％高い〜約７０％高いか、または約２０％高い〜約６０％高いか、または約２０％高い〜約５０％高いか、または約２０％高い〜約４０％高いか、または約５０％高い〜約２５０％か、または約５０％高い〜約１２５％高いか、または約５０％高い〜約１００％高い場合がある。
【００３２】
バイオマーカーは好ましくは、統計学的に有意なレベルで差次的に存在する（例えば、ウェルチのＴ検定またはウィルコクスン順位和検定のいずれかによって決定した場合、ｐ値が０．０５未満および／またはｑ値が０．１０未満である）。あるいは、このバイオマーカーは、卵巣癌の存在または卵巣癌の特定のステージとの相関を示す。相関の範囲は、負１（−１）と、完全負相関と、正１（＋１）と、完全正相関との間である。ゼロ（０）は、相関なしを意味する。実質的な正の相関とは、疾患または臨床測定にともなって、＋０．２５〜＋１．０の間の相関を有するバイオマーカーを指すが、実質的に負の相関とは、疾患または臨床測定に伴い−０．２５〜−１．０の間の相関を有するバイオマーカーを指す。有意な正の相関とは、疾患または臨床測定にともなって、＋０．２５〜＋１．０の間の相関を有するバイオマーカーを指すが、有意な負の相関とは、疾患または臨床測定に伴い−０．２５〜−１．０の間の相関を有するバイオマーカーを指す。
【００３３】
ある場合には、バイオマーカー発現レベルに関して正常値またはベースライン値（または範囲）を確立することが望ましい。正常なレベルは、当業者に公知の標準的な方法によって、任意の特定の集団、小集団または群について決定され得る。一般的にベースライン（正常）レベルのバイオマーカーは、正常な（健常な）個体から得られた生物学的サンプル（例えば、体液、細胞または組織）におけるバイオマーカーの量を定量することによって決定される。標準的な統計学的方法の適用によって、ベースライン発現レベル、およびこのようなベースラインレベルからの逸脱の判定が可能になる。
【００３４】
本発明のバイオマーカーのバイオマーカー値は、あらゆる種々の公知の解析方法を用いることによって測定され得る。バイオマーカー検出は、バイオマーカーに特異的に結合し得る１つまたは複数の分子である捕捉剤の使用によって容易になる場合がある。溶液中、または固体支持体上に固定された捕捉剤は、バイオマーカーに曝されてもよく、結合は、これに限定するものではないが、蛍光、化学発光、色素、および他の光学検出手段を含む種々の方法で検出され得る。イムノアッセイ法は、その対応する分析物に対する抗体の結合に基づき、特定のアッセイフォーマットによってサンプル中の分析物を検出し得る。
【００３５】
米国癌学会によれば、卵巣癌は、ＡＪＣＣ／ＴＮＭシステムによってステージ分類され得る。これは、原発性腫瘍（Ｔ）の範囲、隣接リンパ節（Ｎ）への転移の有無、および遠位転移（Ｍ）の有無を記述している。卵巣癌のカテゴリーＴとしては以下が挙げられる：Ｔ１：癌は、片側または両側の卵巣に限局される；Ｔ２：癌は、片側または両側の卵巣にあり、かつ骨盤組織に拡張している、およびＴ３：癌は、片側または両側の卵巣にあり、腹膜に伝播している。カテゴリーＮは、その癌が局所（隣接）リンパ節に伝播したか否かを示す。Ｎｘ：情報が不十分であるため、リンパ節の巻き込みを示すことができない。ＮＯ：リンパ節の巻き込みはない。Ｎ１：癌細胞が腫瘍に近いリンパ節で見出される。一旦、患者のＴ、ＮおよびＭのカテゴリーが決定されれば、この情報を、ステージグループ分けと呼ばれる過程で組み合わせて、ローマ数字で、ステージＩ（少なくとも進行ステージ）〜ステージＩＶ（最も進行したステージ）として表されるステージを決定する。ステージＩ：癌は、まだ卵巣（複数可）内にとどまっている。癌は卵巣の外側には伝播していない。ステージ２：この癌は、片側または両側の卵巣にあり、骨盤内で他の臓器に伝播している（例えば、子宮、卵管、膀胱、Ｓ字結腸、または直腸）。癌は、リンパ節、腹腔または遠位部位には伝播していない。ステージ３：この癌は、片側または両側の卵巣にあり、かつ以下のうちの一方または両方が存在する：（１）癌は、骨盤を越えて腹部の裏側に伝播している；（２）癌はリンパ節に伝播している。ステージ４：これは、卵巣癌の最も進行したステージである。このステージでは、癌は、肝臓、肺または腹腔の外側に位置する他の臓器の内側に伝播している。また、肺の周囲の体液中で卵巣癌細胞が発見されることは、ステージＩＶの疾患であることを示す証拠でもある。
【００３６】
薬物を試験する適切なデバイスまたは方法の非限定的な例としては、サンプル中の分析物の濃度を決定するためのラテラルフローデバイスが挙げられ、分析物測定時に使用するラテラルフローストリップを提供することを含む。試験され得る分析物の例としては、治療薬、薬物代謝物、およびホルモンが挙げられる。ラテラルフローストリップにサンプルを添加することで、サンプル中の分析物画分がラテラルフローストリップの構成要素に結合して、サンプル中の分析物濃度に比例する検出可能なシグナルが生じるようにする。
【００３７】
あるいは、定量は、ＥＬＩＳＡ、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、および質量分析（ＭＳ）または中央検査室での薬物モニタリングのための他の従来のアッセイのような、当該分野で現在公知のアッセイを含むがそれらに限定されない、任意の適切なアッセイによって、個体から検査室に提出されるサンプルで行われ得ることが十分説明されている。このサンプルは、適切なマトリックス上で指への穿刺後に収集された全血であってもよく、これは運搬されるか、そうでなければ検査のために検査室に送られる乾燥血液スポットとして保管される。採取は、乾燥血液スポットカードに正確かつ少量の血液を送出するように設計されたキャピラリおよび／またはデバイスで行われてもよい（カードパンチのばらつきは、ピペットのばらつきに代わる）。
【００３８】
実施例
実施例１
個別化投与についてのＣＡ１２５モニタリング
卵巣癌と診断された時点で収集した血清サンプル（Ｎ＝１３６）中のＣＡ−１２５を検査し、そのデータを、ＪＭＰ９統計解析ソフトウェアを用いて評価した。血清サンプル（Ｎ＝１３６）は、患者が卵巣癌との診断が下された時点で収集した。ＥＬＩＳＡ法を実施して、患者血清におけるＣＡ１２５レベルを測定した。
【００３９】
【表１】
2015528895.tif 000003
ＣＡ１２５レベルは他のステージよりもステージＩＶにおいて高く［Ｉ（Ｎ＝２０；２１０±３０８Ｕ／ｍＬ）、ＩＩ（Ｎ＝２２；３５０±４１８Ｕ／ｍＬ）、ＩＩＩ（Ｎ＝７９；８２１±１２２６Ｕ／ｍＬ）、ＩＶ（Ｎ＝１４；１８９８±１５９９Ｕ／ｍＬ）］、Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩはそれぞれ、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＝０．０００９であった。
【００４０】
【表２】
2015528895.tif 000004
ＣＡ１２５レベルは、Ｔ２およびＴ１よりもＴ３において高く［Ｔ１（Ｎ＝２０；２１０±３０８Ｕ／ｍＬ）、Ｔ２（Ｎ＝２２；３５０±４１８Ｕ／ｍＬ）、Ｔ３（Ｎ＝９４；９８５±１３２９Ｕ／ｍＬ）］、Ｔ１およびＴ２はそれぞれ、ｐ＝０．００６１およびｐ＝０．０１９０であった。
【００４１】
【表３】
2015528895.tif 000005
ＣＡ１２５レベルはＮＯよりもＮ１において高く［ＮＯ（Ｎ＝１２５；６９４±１０７７Ｕ／ｍＬ）およびＮ１（Ｎ＝１０；１７５７±１８１２Ｕ／ｍＬ）］、ｐ＝０．００５であった。
【００４２】
【表４】
2015528895.tif 000006
ＣＡ１２５レベルは、Ｍ０よりもＭ１において高く［ＭＯ（Ｎ＝１２１；６３４±１０４４Ｕ／ｍＬ）およびＭ１（Ｎ＝１５；１８５３±１５５０Ｕ／ｍＬ）］、ｐ＜０．０００１であった。ＣＡ１２５濃度は、他の亜型よりも明細胞組織学的亜型において高く［明細胞（Ｎ＝１３；１４７１±１３０７Ｕ／ｍＬ）、類子宮内膜（Ｎ＝２３；５７４±４４２Ｕ／ｍＬ）、粘液（Ｎ＝１６；２５５±２７２Ｕ／ｍＬ）、および漿液（Ｎ＝８３；８０８±１３３７Ｕ／ｍＬ）］、粘液、子宮内膜および漿液の亜型はそれぞれｐ＝０．００５、ｐ＝０．０２５９、ｐ＝０．０５５であった。
【００４３】
【表５】
2015528895.tif 000007
ＣＡ−１２５レベルは、他の亜型よりも明細胞の組織学的亜型において高く［明細胞（Ｎ＝１３；１４７１±１３０７Ｕ／ｍＬ）、類子宮内膜（Ｎ＝２３；５７４±４４２Ｕ／ｍＬ）、粘液（Ｎ＝１６；２５５±２７２Ｕ／ｍＬ）、および漿液（Ｎ＝８３；８０８±１３３７Ｕ／ｍＬ）］、粘液、類子宮内膜、および漿液亜型はそれぞれ、ｐ＝０．００５、ｐ＝０．０２５９、ｐ＝０．０５５であった。ＣＡ１２５濃度は、他のステージよりもステージＩＶにおいて高く［Ｉ（Ｎ＝２０；２１０±３０８Ｕ／ｍＬ）、ＩＩ（Ｎ＝２２；３５０±４１８Ｕ／ｍＬ）、ＩＩＩ（Ｎ＝７９；８２１±１２２６Ｕ／ｍＬ）、ＩＶ（Ｎ＝１４；１８９８±１５９９Ｕ／ｍＬ）］、Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩはそれぞれ、ｐ＜０．０００１、ｐ＜０．０００１、ｐ＝０．０００９であった。ＣＡ１２５レベルは、Ｔ２およびＴ１よりもＴ３において高く［Ｔ１（Ｎ＝２０；２１０±３０８Ｕ／ｍＬ）、Ｔ２（Ｎ＝２２；３５０±４１８Ｕ／ｍＬ）、Ｔ３（Ｎ＝９４；９８５±１３２９Ｕ／ｍＬ）］、Ｔ１およびＴ２はそれぞれ、ｐ＝０．００６１およびｐ＝０．０１９０であった。ＣＡ１２５レベルは、ＮＯよりもＮ１において高く［ＮＯ（Ｎ＝１２５；６９４±１０７７Ｕ／ｍＬ）およびＮ１（Ｎ＝１０；１７５７±１８１２Ｕ／ｍＬ）］、ｐ＝０．００５であった。ＣＡ１２５レベルは、Ｍ０よりもＭ１において高く［Ｍ０（Ｎ＝１２１；６３４±１０４４Ｕ／ｍＬ）およびＭ１（Ｎ＝１５；１８５３±１５５０Ｕ／ｍＬ）］、ｐ＜０．０００１であった。このデータによって、卵巣癌患者における疾患状態をモニタリングするためのＣＡ−１２５レベルの使用が支持される。
【００４４】
実施例２
ＬＨ．ＦＳＨおよびＢＮＰレベルの測定
卵巣癌と診断された時点で収集された血清サンプルの血液バイオマーカー（ＬＨ、ＦＳＨ、およびＢＮＰ）に関して、迅速かつ定量的なポイントオブケア（ＰＯＣ）デバイスを用いて検査して、そのデータをＪＭＰ９統計解析ソフトウェアを用いて評価した。ＦＳＨおよびＬＨに関する定量的ラテラルフローアッセイは、Ｌａｒｎ  Ｈｗａｎｇ，Ｃｈａｏ  Ｈｓｉａｏ，Ｋｏｕｒｏｓ  Ｍｏｔａｍｅｄ，Ｖｕｏｎｇ  Ｔｒｉｅｕ（２０１２）による、Ｒａｐｉｄ  ａｎｄ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｐｏｉｎｔ−ｏｆ−Ｃａｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ（ＴＤＭ）  Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  ＬＨ  ａｎｄ  ＦＳＨ（米国癌学会（ＡＡＣＲ）Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，２０１２年３月３１〜４月４日）によって行った。定量的ＢＮＰアッセイは、Ｈｕｍａｓｉｓ（韓国）によって行った。ＦＳＨ範囲＝５〜１０，０００ＩＵ／Ｌ；ＬＨ範囲＝１〜１，７００ＩＵ／Ｌ；ＢＮＰ範囲＝２５〜８００ｐｇ／ｍＬ。
【００４５】
【表６】
2015528895.tif 000008
ｐ＝０．０２，カイ二乗
【００４６】
【表７】
2015528895.tif 000009
ｐ＝０．９８１７  ウィルコクソン統計学
【００４７】
【表８】
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ｐ＝０．０１０２  ウィルコクソン統計学
【００４８】
漿液性腺癌群では、ＦＳＨ濃度が、正常対照（平均値＝１３．４ｍＵ／ｍｌ、ｐ＝０．０１，ウィルコクソン）に対して高かった（平均値＝１５１．６ｍＵ／ｍｌ）。さらに、２５ｐｇ／ｍｌを超えるＢＮＰの発現は、正常対照（１０例中３例、３０％、ｐ＝０．０２，カイ二乗）に対して患者において高かった（１９例中１４例、７４％）。ＦＳＨは、正常対照から正常血圧患者、高血圧患者で徐々に増大しており、ＦＳＨ平均値は、それぞれ、１３．４、７９．３、および２３２．２であった。同じことは、ＢＮＰでは観察されなかった。高血圧患者におけるＦＳＨの増大には、ＢＮＰの増大は伴わなかった。しかし、２５ｐｇ／ｍｌを超えるＢＮＰの発現は、正常な対照（１０例中３例、３０％、ｐ＝０．０２，カイ二乗）に対して患者では高かった（１９例中１４例、７４％）。ＬＨでは相違は観察されなかった。これらのデータによって、ＢＮＰおよびＦＳＨホルモンは、卵巣癌において役割（複数可）を果たすことが示唆される。
【００４９】
ＣＡ１２５とＦＳＨまたはＢＮＰとの間に相関がなかったことから、それらは独立したバイオマーカーであることが示唆される（図１）。ＦＳＨおよびＢＮＰは、年齢のマッチした正常群に対して癌患者間では発現／レベルの増大を呈した。ＦＳＨはおそらく、癌細胞発現の調節因子として、同様に血管形成の誘導の調節因子として機能する。ＦＳＨレベルの増大は図２に示す。ＢＮＰの役割は、現在のところ未知である。本実施例で示されるデータによって、関連の血液バイオマーカー（ＦＳＨ、ＬＨ、ｈＣＧ、およびＢＮＰ）をモニタリングするためのＰＯＣ／ＰＯＵデバイスの使用が実証された。ＢＮＰが卵巣癌に関連することは驚くべきことである。
【００５０】
実施例３
ＬＨ、ＦＳＨおよびＢＮＰレベルの測定
ＦＳＨについての迅速かつ定量的なラテラルフローポイントオブケア検査（ＰＯＣＴ）を、独自の方法を用いて開発して、ＴＤＭに適した定量範囲の増大を達成した。卵巣癌と診断された時点で、正常な個体から収集した血清サンプルを、ＰＯＣＴアッセイを用いてＦＳＨについて検査した。臨床データを、ＪＭＰ９統計解析ソフトウェアを用いて解析した。図３および図４に示されるデータによって、共焦点光学リーダーまたは携帯電話カメラ、例えば、ブラックベリー（ｂｌａｃｋｂｅｒｒｙ）を用い、ボードイメージアナライザーまたはイメージアナライザープログラムのいずれかを中央検査室で用いて、定量のための定量可能画像を作製し得ることが示される。
【００５１】
本明細書に示した範囲にはエンドポイントを含む。さらに、特に指示がない限り、そうでなければ文脈および当業者の理解から明らかであるように、範囲として表される値は、本発明の種々の実施形態において言及された範囲内の任意の特定の値またはサブ範囲を、文脈上明らかに他を示すのでない限り、その範囲の下限の単位の十分の一まで想定し得ることが理解されるべきである。
【００５２】
本明細書中に引用される全ての刊行物および特許は、本明細書において、あたかも各々の個々の刊行物または特許が詳細にかつ個々に参照によって援用されると示されるかのように、参照によって本明細書に援用される。任意の刊行物の引用は、出願日の前のその開示のためであって、本発明が先行発明という理由でこのような刊行物に先行する資格がないと認めると解釈されるべきではない。
【００５３】
本発明は、その例示的な実施形態を参照して詳細に示されかつ記載されてきたが、本明細書において添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲から逸脱することなく形態および詳細における種々の変更がなされてもよいことが当業者には理解される。
【００５４】
本発明の免疫学的組成物および本発明のアジュバントのさらなる利点は、本明細書に記載される実施形態に基づいて当業者によって達成され得、従って、明確に本発明の範囲内である。
【図１Ａ−Ｃ】
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【図２Ａ−Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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