(57)【要約】  本発明は、ピリミジンヒドロキシアミド化合物に関し、ＨＤＡＣ６の阻害における、およびうつ病および／または不安の処置における、かかる化合物の使用に関する。
2015533173.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
うつ病および／または不安に罹患するまたは感受性がある被検体の処置するための方法であって、治療有効量の式Ｉ
【化１】
2015533173.tif 000026
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを、それを必要とする被検体に投与することを備え、それによりうつ病および／または不安に罹患するまたは感受性がある前記被検体を処置するための方法。
【請求項２】
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ｍは０である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
式Ｉの前記化合物が以下；
【化２】
2015533173.tif 000027
から選択されるか、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
式Ｉの前記化合物が以下；
【化３】
2015533173.tif 000028
から選択されるか、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
式Ｉの前記化合物が
【化４】
2015533173.tif 000029
である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
式Ｉの前記化合物が
【化５】
2015533173.tif 000030
である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記うつ病が、うつ病、大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、および産後うつ病からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記不安が、不安、全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患がＨＤＡＣ６により媒介される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
式Ｉの前記化合物が血液脳関門を透過する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記被検体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
治療有効量の以下の化合物：
【化６】
2015533173.tif 000031
をそれを必要とする被験体に投与することを備える、うつ病および／または不安を処置するための方法。
【請求項１６】
治療有効量の以下の化合物：
【化７】
2015533173.tif 000032
をそれを必要とする被験体に投与することを備える、うつ病および／または不安を処置するための方法。
【請求項１７】
式Ｉ
【化８】
2015533173.tif 000033
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグ、
およびうつ病の処置において使用するための取扱い説明書を備える、キット。
【請求項１８】
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ｍは０である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
式Ｉの前記化合物が：
【化９】
2015533173.tif 000034
である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
式Ｉの前記化合物が：
【化１０】
2015533173.tif 000035
である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記うつ病が、大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、および産後うつ病からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記不安が、全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
【０００２】
本出願は、２０１２年１０月１２日に出願された、米国特許仮出願第６１／７１３，０１４号に対する優先権を主張し、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
連邦政府支援の研究に関する陳述
【０００３】
本発明のために行ったいくつかの研究は、米国連邦政府（アメリカ国立精神衛生研究所、ＮＩＨからの助成金ＭＨ０８７５８１）および国際精神保健研究組織（ＩＭＨＲＯ）およびＮＡＲＳＡＤからの受賞により出資を受けた。
【背景技術】
【０００４】
近年注目されている生物学的標的は、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）である。リジン残基のアセチル化および脱アセチル化を通したタンパク質の翻訳後修飾は、それらの細胞機能の制御において重要な役割を果たしている。ＨＤＡＣは、ヒストンタンパク質Ｎ−アセチル−リジン残基の脱アセチル化および他の転写制御因子を通して、遺伝子発現を調節する亜鉛加水分解酵素である（ＨａｓｓｉｇらＣｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１９９７，１，３００−３０８）。ＨＤＡＣは、細胞形状および分化を制御する細胞経路に関与する。現時点で、亜鉛を補因子として使用する、１１種のヒトＨＤＡＣ（Ｔａｕｎｔｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９６，２７２，４０８−４１１；Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２，２８００１−２８００７．Ｇｒｏｚｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９９，９６，４８６８−４８７３；Ｋａｏら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２０００，１４，５５−６６．Ｈｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００，２７５，１５２５４−１５２６４；Ｚｈｏｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００１，９８，１０５７２−１０５７７；Ｖｅｎｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００１，２９１，１３０４−１３５１）、はこれらのメンバーが３つのクラス（クラスＩ、ＩＩ、およびＩＶ）に分類されることが同定されている。ＮＡＤを補因子として使用する追加の７種のＨＤＡＣが同定されている。現在まで、このファミリーの任意の特定のクラスまたは個別のメンバーを選択的に標的とする低分子は知られていない（例えばオルソログ−選択的ＨＤＡＣ阻害剤が報告されている：（ａ）Ｍｅｉｎｋｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００，１４，４９１９−４９２２；（ｂ）Ｍｅｉｎｋｅら、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，８，２１１−２３５）。構造的に多様なＨＤＡＣおよびチューブリン脱アセチル化酵素（ＴＤＡＣ）阻害剤、特に、ＨＤＡＣまたはＴＤＡＣの特定のクラスおよび各個のＨＤＡＣおよびＴＤＡＣの、強力および／または選択的な阻害剤であるものを調製する必要性が残っている。
【０００５】
ヒストン脱アセチル化酵素は、ヒストンタンパク質のリジン残基の脱アセチル化を触媒する、少なくとも１１種の亜鉛結合加水分解酵素のファミリーである。ＨＤＡＣ阻害はクロマチンの高アセチル化、転写の変化、および成長停止をもたらす。近年に至るまで、選択的ＨＤＡＣ阻害剤は実現されていない。
【０００６】
ＨＤＡＣ６は、ジンクフィンガードメインを通してユビキチン化タンパク質を結合し、別の離散性の結合モチーフを通してダイニン・モーター複合体と相互作用すると考えられる。ＨＤＡＣ６は二つの触媒性脱アセチル化酵素ドメインを所有する。
【０００７】
ＨＤＡＣ６の低分子阻害薬、その医薬組成物、およびうつ病、不安、またはうつ病および不安の両方を処置するための、これらの化合物の使用方法を本明細書に提供する。ある特定の実施形態では、これらの化合物はＨＤＡＣ６の強力かつ選択的な阻害剤である。ある特定の実施形態では、これらの化合物は血液脳関門を透過する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】ＨａｓｓｉｇらＣｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１９９７，１，３００−３０８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、式Ｉの化合物を被検体に投与することを備える、被検体のうつ病および／または不安を処置するための方法を提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、それによりうつ病および／または不安に罹患するまたは感受性がある被検体を処置するための、治療有効量の式Ｉの化合物を、それを必要とする被検体に投与することを備える、うつ病および／または不安に罹患するまたは感受性がある被検体の処置方法を提供する。
【００１１】
ある実施形態では、処置されるうつ病は以下の一つ以上である。大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、および産後うつ病。
【００１２】
ある実施形態では、処置される不安は、以下の一つ以上である。全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）。
【００１３】
これらの方法に従い、式Ｉ：
【化１】
2015533173.tif 000003
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン（ｏｘｏｚｏｌｉｄｉｎｅ）、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは独立して（ｉｎｄｐｅｎｄｅｎｔｌｙ）、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に、任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを本明細書に提供する。
【００１４】
一実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する。
【００１５】
別の実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【００１６】
別の実施形態では、ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である。
【００１７】
他の実施形態では、ｍは０である。
【００１８】
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物を備える医薬組成物を提供する。
【００１９】
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物の被検体への投与を備える、被検体の他のＨＤＡＣではなくＨＤＡＣ６を選択的に阻害する方法を提供する。非限定的な実施形態では、この選択的阻害はうつ病の処置をもたらす。別の実施形態では、この選択的阻害は不安の処置をもたらす。さらなる実施形態では、この選択的阻害はうつ病および不安の両方の処置をもたらす。
【００２０】
別の態様では、本発明は、式Ｉの一つ以上の化合物から選択されたＨＤＡＣ活性を阻害することが可能な化合物；およびうつ病、不安、またはうつ病および不安の両方の処置に使用するための取扱い説明書を備えるキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ、化合物７３、または化合物１０１を用いた急性腹腔内（ｉ．ｐ．）注射後のチューブリンのアセチル化の変化を、注射後３０分、１時間、および４時間で示す。
【図２】ＴＳＡ、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ、化合物７３、または化合物１０１を用いた処置後のセロトニンラット神経芽細胞腫（ＲＮ４６Ａ）細胞におけるチューブリンのアセチル化を、注射後１時間、４時間および２４時間で示す。
【図３】様々な脳組織において化合物７３または化合物１０１のいずれかを使用した慢性対亜慢性の薬物処置におけるチューブリンアセチル化の比較を示す。
【図４】化合物７３を用いた処置後のヒストン３のアセチル化を、処置後３０分および４時間で示す。
【図５】ＨＤＡＣ６ノックアウトおよび野生型動物における、化合物７３または化合物１０１を用いた亜慢性の薬物処置後のチューブリンのアセチル化におけるパーセント変化を示す。
【図６】は化合物７３の急性投与後のオープンフィールド移所運動活性を、処置後３０分、１時間、１．５時間、および２時間で示す。
【図７】は化合物１０１の急性投与後のオープンフィールド移所運動活性を、処置後３０分、１時間、１．５時間、および２時間で示す。
【図８】化合物７３または化合物１０１を用いて処置した後の、２時間にわたる総移所運動活性を示す。
【図９】フルオキセチン、化合物７３、または化合物１０１を用いた２０日間の慢性阻害剤処置、および１０日間の社会的敗北後の社会的相互作用を示す。
【図１０】選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）およびヒストン脱アセチル化酵素６（ＨＤＡＣ６）阻害の組み合わせを使用した、尾懸垂試験の結果を示す。
【図１１】ヒストン脱アセチル化酵素（ｄｅａｃｙｔｅｌａｓｅ）（ＨＤＡＣ６）阻害剤を用いた急性処置での、尾懸垂試験の結果を示す。
【図１２】マウスの５ｍｇ／ｋｇの腹腔内（ｉｐ）投与の一時間後の化合物１０１の血漿レベルおよび脳レベルを示す。
【図１３Ａ】本研究で使用されたＨＤＡＣ６阻害剤の選択性、効力および薬物動態特性を示す。
【図１３Ｂ】本研究で使用されたＨＤＡＣ６阻害剤の選択性、効力および薬物動態特性を示す。
【図１３Ｃ】本研究で使用されたＨＤＡＣ６阻害剤の選択性、効力および薬物動態特性を示す。
【図１４Ａ】神経細胞培養物（１４ａ）および急性および亜慢性投与後のインビボでのＣＮＳ（１４ｂ−ｃ）における、リジン４０（Ｋ４０）でのα−チューブリンアセチル化およびリジン９（Ｈ３Ｋ９）でのヒストンＨ３アセチル化に及ぼすＨＤＡＣ６阻害剤の効果を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクル（１条件につきＮ＝２−３）。
【図１４Ｂ】神経細胞培養物（１４ａ）および急性および亜慢性投与後のインビボでのＣＮＳ（１４ｂ−ｃ）における、リジン４０（Ｋ４０）でのα−チューブリンアセチル化およびリジン９（Ｈ３Ｋ９）でのヒストンＨ３アセチル化に及ぼすＨＤＡＣ６阻害剤の効果を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクル（１条件につきＮ＝２−３）。
【図１５】不安試験におけるＨＤＡＣ６選択的阻害の効果を示す。データは平均値±ＳＥＭとして表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクル。
【図１６】ＨＤＡＣ６阻害剤化合物７３および化合物１０１が、抗うつ剤様特性を有することを示す。データは、平均値±ＳＥＭとして表される。＋ｐ＜０．０５対ビヒクル、＃ｐ＜０．０１対ビヒクル、＊ｐ＜０．０１対非敗北対照群。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
本発明を説明するために使用される様々な用語の定義を以下に挙げる。これらの定義は、具体例において限定されない限り、個々にまたは大きな群の一部としてのいずれかとして、本明細書全体および特許請求の範囲において使用されている用語に対して適用される。
【００２３】
ヒドロカルビル置換基内の炭素原子の数は、置換基内の炭素原子のｘが最小およびｙが最大数である、接頭辞「Ｃｘ−Ｃｙ」により示すことができる。同様に、Ｃｘ鎖は、ｘ個の炭素原子を含有するヒドロカルビル鎖を意味する。
【００２４】
示された構造における連結要素が「不在」または「結合」である場合には、示された構造における左要素が、示された構造における右要素に直接連結する。例えば、化学構造が、式中Ｌが不在またはＮが０であるＸ−（Ｌ）ｎ−Ｙとして示された場合、化学構造はＸ−Ｙである。
【００２５】
用語「アルキル」は、本明細書で使用されるとき、ある特定の実施形態では、１〜６個、または１〜８個の炭素原子をそれぞれ含有する、飽和、直鎖または分岐鎖炭化水素部分を意味する。Ｃ１−Ｃ６アルキル部分の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、Ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、Ｎ−ヘキシル部分が含まれるが、これらに限定されず、Ｃ１−Ｃ８アルキル部分の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、Ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、Ｎ−ヘキシル、ヘプチル、およびオクチル部分が含まれるが、これらに限定されない。
【００２６】
用語「アルケニル」は、本明細書で使用されるとき、ある特定の実施形態では、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有する、２〜６個、または２〜８個の炭素原子を含有する炭化水素部分から誘導される一価の基を表す。二重結合は別の基への結合点であってもなくてもよい。アルケニル基は、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン（ｂｕｔｅｎ）−１−イル、ヘプテニル、オクテニル等を含むが、これらに限定されない。
【００２７】
用語「アルキニル」は、本明細書で使用されるとき、ある特定の実施形態では、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する、２〜６個、または２〜８個の炭素原子を含有する炭化水素部分から誘導される一価の基を表す。アルキニル基は他の基への結合点であってもなくてもよい。代表的なアルキニル基は、例えば、エチニル、１−プロピニル、１−ブチニル、へプチニル、オクチニル等を含むが、これらに限定されない。
【００２８】
用語「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル部分を意味する。
【００２９】
用語「アリール」は、本明細書で使用されるとき、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル等を含むがこれらに限定されない、縮合または非縮合の、一つ以上の芳香環を有する単環式または多環式炭素環系を意味する。
【００３０】
用語「アラルキル」または「アリールアルキル」は、本明細書で使用されるとき、アリール環に結合されるアルキル残基を意味する。例としては、ベンジル、フェネチル等が含まれるが、これらに限定されない。
【００３１】
用語「炭素環」は本明細書で使用されるとき、単環式または多環式の、飽和、一部不飽和、または完全に不飽和の炭素環化合物から誘導される一価の基を表す。炭素環基の例としては、シクロアルキルの定義およびアリールの定義において見られる基を含む。
【００３２】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、単環式または多環式の、飽和または一部不飽和の炭素環化合物から誘導される一価の基を表す。Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチルおよびシクロオクチルが含まれるが、これらに限定されず、Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、およびビシクロ［２．２．２］オクチルが含まれるが、これらに限定されない。単一の水素原子の除去により少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有する、単環式または多環式炭素環化合物から誘導される一価の基もまた企図される。かかる基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル、等が含まれるが、これらに限定されない。
【００３３】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書で使用されるとき、１個の環原子がＳ、ＯおよびＮから選択される５〜１０個の環原子を有する；Ｓ、ＯおよびＮから独立して選択される０、１または２個の環原子は追加のヘテロ原子である；および残った環原子は炭素である、を有する単環式または多環式（例えば、二環式、または三環式またはそれ以上）の縮合または非縮合の、少なくとも一つの芳香環を有する部分または環形を意味する。ヘテロアリールは、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル、等を含むがこれらに限定されない。
【００３４】
用語「ヘテロアラルキル」は、本明細書で使用されるとき、ヘテロアリール環に結合したアルキル残基を意味する。例としては、ピリジニルメチル、ピリジニルエチル等が含まれるが、これらに限定されない。
【００３５】
用語「ヘテロシクロアルキル」は本明細書で使用されるとき、非芳香族３、４、５、６または７員環または非縮合系の縮合二環式または三環式基を意味し、ここで、（ｉ）各環が、酸素、硫黄、および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する（ｉｉ）各５員環が、０〜１個の二重結合を有し、各６員環が、０〜２個の二重結合を有し、（ｉｉｉ）窒素および硫黄ヘテロ原子は、任意選択的に酸化されてよく、（ｉｖ）窒素ヘテロ原子は任意選択的に四級化されてよく、（ｉｖ）任意の上記環がベンゼン環に縮合されてよい。代表的なヘテロシクロアルキル基は、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、およびテトラヒドロフリルを含むが、これらに限定されない。
【００３６】
用語「アルキルアミノ」は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルは先に定義された通りである、構造−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ１２アルキル）を有する基を意味する。
【００３７】
用語「アシル」は、カルボン酸、カルバミン酸、炭酸、スルホン酸、および亜リン酸を含むが、これらに限定されない酸から誘導される残基を含む。例としては、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族リン酸および脂肪族リン酸を含む。脂肪族カルボニルの例としては、アセチル、プロピオニル、２−フルオロアセチル、ブチリル、２−ヒドロキシアセチル、等が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
本発明に従って、本明細書に記載の任意のアリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールは、任意の芳香族基であり得る。芳香族基は、置換または非置換であり得る。
【００３９】
用語「ハル」、「ハロ」および「ハロゲン」は、本明細書で使用されるとき、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択された原子を意味する。
【００４０】
用語「オキソ」は、本明細書で使用されるとき、好ましくは二重結合により炭素に結合する酸素（例えば、カルボニル）を意味する。
【００４１】
本明細書に記載のように、本発明の化合物は、上記に概して記載されるように、または本発明の特定のクラス、サブクラス、および種に例示されるように、一つ以上の置換基で任意選択的に置換されてよい。語句「任意選択的に置換された」が語句「置換または非置換」と互換的に使用されることが理解されるだろう。一般に、用語「置換」は、用語「任意選択的」に先行されようがされまいが、特定の置換基の遊離基との、所与の構造内の水素遊離基の置き換えを意味する。別段の指示がない限り、任意選択的に置換された基は、基の各置換可能な位置に置換基を有してよく、任意の所与の構造内の一つより多い位置が、特定の基から選択された一つより多い置換基で置換され得る時、置換基は全ての位置で同一または異なってもいずれでもよい。用語「任意選択的に置換された」、「任意選択的に置換されたアルキル」、「任意選択的に置換された「任意選択的に置換されたアルケニル」、「任意選択的に置換されたアルキニル」、「任意選択的に置換されたシクロアルキル」、「任意選択的に置換されたシクロアルケニル」、「任意選択的に置換されたアリール」、「任意選択的に置換されたヘテロアリール」、「任意選択的に置換されたアラルキル」、「任意選択的に置換されたヘテロアラルキル」、「任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル」、および任意の他の任意選択的に置換された基は、本明細書で使用されるとき、
アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ３）、ハロアルコキシ（例えば、−ＯＣＦ３）、
−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、
−ＯＨ、保護ヒドロキシ、酸素、オキソ、
−ＮＯ２、−ＣＮ、
−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−アリール、−ジアルキルアミノ、−
−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−アリール、
−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、
−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ３−Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロシクロアルキル、
−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−−ＣＯＮＨ−アリール、
−ＯＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、
−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、
−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、
−ＮＨＳＯ２−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、または
−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１−Ｃ１２−アルキル、または−Ｓ−アリール
を含むがこれらに限定されない置換基で、１個、２個、または３個またはそれ以上のその上の水素原子を独立して置き換えることにより、置換されるまたは非置換の基を意味する。
【００４２】
ある特定の実施形態では、任意選択的に置換された基は以下を含む。Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ３−Ｃ１２シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ１２アリール、Ｃ３−Ｃ１２ヘテロシクロアルキル、Ｃ３−Ｃ１２ヘテロアリール、Ｃ４−Ｃ１２アリールアルキル、またはＣ２−Ｃ１２ヘテロアリールアルキル。
【００４３】
アリール、ヘテロアリール、アルキル、等はさらに置換され得ることが理解される。
【００４４】
本明細書で使用されるとき、用語「金属キレート剤」は、金属イオンとの複合体（つまり、「キレート」）形成が可能な任意の分子または部分を意味する。ある特定の例示的な実施形態では、金属キレート剤は、溶液中の、金属イオンに「結合」し、化学／酵素反応での使用に利用できないようにする任意の分子または部分を意味する。ある特定の実施形態では、溶液は生理的条件下で水性環境を備える。金属イオンの例としては、Ｃａ２＋、Ｆｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｎａ＋、等が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、金属キレート剤はＺｎ２＋に結合する。ある特定の実施形態では、金属イオンを沈殿させる部分の分子を金属キレート剤であるとは考えない。
【００４５】
用語「被検体」は本明細書で使用されるとき、哺乳類を意味する。被検体はそれゆえ、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、モルモット、等を意味する。好ましくは、被検体はヒトである。被検体がヒトである場合、被検体は本明細書において患者と称されてよい。
【００４６】
「処置する」、「処置すること」および「処置」は、疾患および／またはその付随する症状を緩和または軽減する方法を意味する。
【００４７】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得る塩」は、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび下等動物の組織との接触における使用に好適で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等を伴わず、妥当な利益／リスク比に見合う、本発明の工程により形成される化合物の塩を意味する。薬学的に許容され得る塩は当該技術分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、薬学的に許容され得る塩をＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９（１９７７）にて詳細に記載している。該塩は、本発明の化合物の最終の単離および精製中にインサイチュで調製され得るか、または別途、遊離塩基の官能基と好適な有機酸を反応させることにより調製され得る。薬学的に許容され得るの例としては、非毒性の酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸または、酢酸、マイレン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸とともに形成される、またはイオン交換など当該技術分野で使用される他の方法を使用することにより形成されるアミノ基の塩を含むが、これらに限定されない。他の薬学的に許容され得る塩は、アジピン酸、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、櫛状、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸、リン酸、ピクリン酸塩、ピバレート、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸、吉草酸塩、等を含むが、これらに限定されない。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、等を含む。さらに薬学的に許容され得る塩は、適切な場合は、ハロゲン化物、水酸化物、カルボキシレート、硫酸塩、リン酸、硝酸塩、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、スルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成される非毒性アンモニウム、第四級アンモニウムおよびアミンカチオンを含む。
【００４８】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得るエステル」は、インビボで加水分解されてヒトの体内で容易に分解されて親化合物またはその塩になるものを含む、本発明の工程により形成される化合物のエステルを意味する。好適なエステル基は例えば、薬学的に許容され得る脂肪族カルボン酸、特にアルカン、アルケン、シクロアルカンおよびアルカン二酸から誘導されるものを含み、ここで各アルキルまたはアルケニル部分は有利には６個以下の炭素原子を有する。具体的なエステルの例は、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酢酸塩、アクリル硫酸およびエチルコハク酸塩を含むが、これらに限定されない。
【００４９】
用語「薬学的に許容され得るプロドラッグ」は本明細書で使用されるとき、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび下等動物の組織との接触における使用に好適で、過度の毒性、刺激、アレルギー性反応等を伴い、妥当な利益／リスク比に見合い、その意図される用途に有効である、本発明の工程により形成される化合物のプロドラッグを意味し、ならびに可能な場合は、本発明の化合物の両性イオン形態を意味する。「プロドラッグ」は本明細書で使用されるとき、代謝的手段（例えば、加水分解）によりインビボで転換可能であり、本発明の式で示される任意の化合物が得られる化合物を意味する。様々な形態のプロドラッグが当該技術分野で公知であり、例えば、Ｂｕｎｄｇａａｒｄ（編），Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）；Ｗｉｄｄｅｒら（編），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，第４巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８５）；Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎら（編）．「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，第５章，１１３−１９１（１９９１）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，８：１−３８（１９９２）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７：２８５以降．（１９８８）；Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｓｔｅｌｌａ（編）Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９７５）；およびＢｅｒｎａｒｄ  Ｔｅｓｔａ＆Ｊｏａｃｈｉｍ  Ｍａｙｅｒ，「Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  Ｉｎ  Ｄｒｕｇ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｌｔｄ．（２００２）に記載されている。
【００５０】
本発明は、本発明の化合物の薬学的に許容され得るプロドラッグを含有する医薬組成物、および投与を通して障害を処置する方法も包含する。例えば、遊離アミノ、アミド、ヒドロキシまたはカルボキシル基を有する本発明の化合物は、プロドラッグへと変換され得る。プロドラッグは、本発明の化合物の遊離アミノ、ヒドロキシまたはカルボン酸基にのアミドまたはエステル結合を通して、アミノ酸残基、または２個以上の（例えば、２、３または４個の）アミノ酸残基のポリペプチド鎖が共有結合される、化合物を含む。アミノ酸残基は、一般に３文字記号で示される２０種類の天然に存在するアミノ酸を含むが、これらに限定されず、また４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン（ｈｙｄｒｏｘｙｙｓｉｎｅ）、デモシン（ｄｅｍｏｓｉｎｅ）、イソデモシン（ｉｓｏｄｅｍｏｓｉｎｅ）、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、ベータ−アラニン、ガンマ−アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチンおよびメチオニンスルホンも含む。さらなるタイプのプロドラッグも包含される。例えば、遊離カルボキシル基は、アミドまたはアルキルエステルとして誘導体化されることができる。遊離ヒドロキシ基は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９６，１９，１ １５に概要を述べられるように、ヘミコハク酸、リン酸エステル、ジメチルアミノアセテート、およびホスホリルオキシメチルオキシカルボニルを含むがこれらに限定されない基を使用して、誘導体化されてよい。ヒドロキシ基およびアミノ基のカルバメートプロドラッグもまた、ヒドロキシ基の炭酸塩プロドラッグ、スルホン酸塩エステルおよび硫酸塩エステルであるとして含まれる。（アシルオキシ）メチルおよび（アシルオキシ）エチルエーテル、ここでアシル基はアルキルエステルであってよく、エーテル、アミンおよびカルボキシル酸官能基を含むがこれらに限定されない基で任意選択的に置換されてよく、または上述のようにアシル基はアミノ酸エステルである、としてのヒドロキシ基の誘導体化もまた包含される。このタイプのプロドラッグは、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９６、３９、１０に記載されている。遊離アミンもまたアミド、スルホンアミドまたはホスホンアミドとして誘導体化され得る。全てのこれらのプロドラッグ部分は、エーテル、アミン、およびカルボン酸官能基を含むがこれらに限定されない基を組み込んでよい。
【００５１】
本発明によって構想される置換基と可変部の組み合わせは、安定な化合物の形成をもたらすもののみである。用語「安定な」は、本明細書で使用されるとき、製造を可能にするのに充分な安定性を有し、本明細書に詳述する目的（例えば、被検体への治療的または予防的投与）に有用であるのに充分な期間、化合物の完全性を維持している化合物をいう。
【００５２】
用語「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋」は、その天然の状態で発見される通常付随する成分を実質的または本質的に含まない物質を意味する。純度および均一性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を用いて決定される。特に、実施形態では、化合物は少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、および最も好ましくは少なくとも９９％純粋である。
【００５３】
本明細書で使用されるとき、用語「疾患」は、うつ病、大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、産後うつ病、不安、全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）を含む。
本発明の化合物
【００５４】
式Ｉ：
【化２】
2015533173.tif 000004
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン（ｏｘｏｚｏｌｉｄｉｎｅ）、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは独立して（ｉｎｄｐｅｎｄｅｎｔｌｙ）、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを本明細書に提供する。
【００５５】
一実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する。
【００５６】
別の実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【００５７】
別の実施形態では、ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である。
【００５８】
他の実施形態では、ｍは０である。
【００５９】
代表的な式Ｉの化合物は、下記の表１の以下の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを含むがこれらに限定されない。
【表１】
2015533173.tif 000005
【００６０】
ある特定の実施形態では、本発明の化合物は、表２から選択されるか、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグである。
【表２】
2015533173.tif 000006
【００６１】
特定の実施形態では、式Ｉの化合物は化合物７３であるか、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグである：
【化３】
2015533173.tif 000007
【００６２】
別の特定の実施形態では、式Ｉの化合物は化合物１０１であるか、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグである：
【化４】
2015533173.tif 000008
【００６３】
別の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化５】
2015533173.tif 000009
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを提供する。
【００６４】
一実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する。
【００６５】
別の実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【００６６】
別の実施形態では、ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である。
【００６７】
他の実施形態では、ｍは０である。
【００６８】
ある特定の実施形態では、式Ｉの化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを被検体に投与することを備える、それを必要とする被験体のＨＤＡＣ６により媒介される疾患または症状を処置するための方法を、本明細書に提供する。
【００６９】
他の実施形態では、式Ｉの化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを被検体に投与することを備える、それを必要とする被検体におけるＨＤＡＣ６により媒介されるＣＮＳ疾患または症状を処置するための方法を、本明細書に提供する。
【００７０】
他の実施形態では、式Ｉの化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを被検体に投与することを備える、それを必要とする被検体の脳内のα−チューブリンアセチル化を増大させるための方法を、本明細書に提供する。
【００７１】
ある特定の具体的な実施形態では、式Ｉの化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを被検体に投与することを備える、それを必要とする被検体のうつ病を処置するための方法を本明細書に提供する。
【００７２】
他の具体的な実施形態では、式Ｉの化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを被検体に投与することを備える、それを必要とする被検体の不安を増大させるための方法を、本明細書に提供する。
【００７３】
好ましい実施形態では、本発明において有用な化合物は、一つ以上の以下の特性を有する：化合物は少なくとも一つのヒストン脱アセチル化酵素を阻害することが可能である；化合物はＨＤＡＣ６を阻害することが可能である；化合物は選択的ＨＤＡＣ６阻害剤である；化合物は血液脳関門を透過できる；および／または化合物はＨＤＡＣ６のポリユビキチン結合ドメインに結合する。
【００７４】
ある特定の好ましい実施形態では、本発明の化合物は金属結合部分、好ましくはヒドロキサメートなどの亜鉛結合部分を備える。上述のように、ある特定のヒドロキサメートはＨＤＡＣ６活性の強力な阻害剤である；理論に縛られることを望まないが、これらのヒドロキサメートの効力は、亜鉛に結合する化合物の能力に、少なくとも部分的に、起因すると考えられる。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、生物学的経路に関与する生物学的標的、例えば、チューブリン脱アセチル化酵素（ＴＤＡＣ）またはＨＤＡＣ活性、例えば、ＨＤＡＣ６を有する生物学的標的、に選択性を付与することができる、少なくとも一つの部分または領域を含む。ゆえに、ある特定の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、生物学的標的への結合を左右する分子の他の部分から離間する亜鉛結合部分を含む。
【００７５】
本発明は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容され得るエステル、塩、またはそのプロドラッグを薬学的に許容され得る担体と共に、備える医薬組成物についても提供する。
【００７６】
本発明の別の目的は、本明細書の障害または疾患の処置に使用するための医薬品の製造における、本明細書に記載のような化合物の使用である。本発明の別の目的は、本明細書の障害または疾患の処置において使用するための、本明細書に記載の化合物の使用である。
【００７７】
本発明の化合物の合成は下記の実施例に見出すことができる。
【００７８】
別の実施形態は、本明細書に示した反応の、いずれか一つ、または組み合わせを使用する式Ｉの化合物の作成方法である。該方法は、本明細書に示した一つ以上の中間体または化学試薬の使用を含み得る。
【００７９】
別の態様は、本明細書に示した式Ｉの同位体標識化合物である。かかる化合物は、化合物内に導入される、放射性であってもなくてもよい（例えば、３Ｈ、２Ｈ、１４Ｃ、１３Ｃ、３５Ｓ、３２Ｐ、１２５Ｉ、および１３１Ｉ）一つ以上の同位体原子を有する。かかる化合物は、薬物代謝研究および診断、ならびに治療用途について有用である。
【００８０】
本発明の化合物は、遊離塩基形態の本化合物と薬学的に許容され得る無機または有機酸を反応させることにより、薬学的に許容され得る酸付加塩として製造され得る。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容され得る塩基付加塩は、遊離酸形態の化合物と薬学的に許容され得る無機または有機塩基を反応させることにより調製され得る。
【００８１】
あるいは、本発明の化合物の塩形態は、出発物質または中間体の塩を使用して調製され得る。
【００８２】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基形態は、それぞれ、対応する塩基付加塩または酸付加塩から調製され得る。例えば、酸付加塩形態内の本発明の化合物は、好適な塩基（例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウム、等）で処理することにより対応する遊離塩基へと変換され得る。塩基付加塩形態内の本発明の化合物は、好適な酸（例えば、塩酸等）で処理することにより対応する遊離酸へと変換され得る。
【００８３】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法（例えば、より詳細にはＳａｕｌｎｉｅｒら、（１９９４）、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，第４巻，ｐ．１９８５を参照）により調製され得る。例えば、適切なプロドラッグが、誘導体化されていない本発明の化合物と好適なカルバミル化剤（例えば、１，１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−二トロフェニルカルボネート、など）とを反応させることにより調製され得る。
【００８４】
本発明の化合物の保護誘導体は、当業者に既知の手段により作成され得る。保護基の創出およびそれらの除去に適用可能な技術の詳細な説明は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，第三版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９、およびその続編に見出されることができる。
【００８５】
本発明の化合物は、溶媒和化合物（例えば、水和物）として、本発明の工程の間に好都合に調製または形成され得る。本発明の化合物の水和物は、ジオキサン、テトラヒドロフランまたはメタノールなどの有機溶媒を使用して、水性／有機溶媒混合物からの再結晶により好都合に調製され得る。
【００８６】
本明細書の方法において有用な酸および塩基は当該技術分野で公知である。酸触媒は、本質的に無機（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、三塩化アルミニウム）または有機（例えば、カンファースルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、イッテルビウムトリフラート）であり得る、任意の酸性化学物質である。酸は、触媒的また化学量論的量のいずれにおいても、化学反応を促進するため有用である。塩基は、本質的に無機（重炭酸ナトリウム、水酸化カリウム）または有機（例えば、トリエチルアミン、ピリジン）であり得る、任意の塩基化学物質である。塩基は、触媒的また化学量論的量のいずれにおいても、化学反応を促進するために有用である。
【００８７】
加えて、本発明の化合物のいくつかは、一つ以上の二重結合、または一つ以上の不斉中心を有する。かかる化合物は、ラセミ体、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、およびシス−またはトランス−またはＥ−またはＺ−二重異性体型、および、絶対立体化学に関して、（Ｒ）−または（Ｓ）−、アミノ酸については（Ｄ）−または（Ｌ）−として規定され得る他の立体異性体型として生じ得る。これらの化合物の全てのかかる異性体型は、明確に本発明に含まれる。光学異性体は、上記の手順により、またはラセミ混合物を分割することにより、そのそれぞれの光学的に活性な前駆体から調製されてよい。分割は、クロマトグラフィーにより、または反復結晶化により、または当業者に公知のこれらの技術のいくつかの組み合わせにより、分割剤の存在下で行われ得る。分割に関するさらなる詳細は、Ｊａｃｑｕｅｓら、Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９８１）に見出され得る。本発明の化合物はまた、多数の互変異性体型で表されてもよく、かかる場合では、本発明は本明細書に記載の化合物の全ての互変異性体型を明確に含む。本明細書に記載の化合物がオレフィン性二重結合または他の幾何学的不斉中心を含有し、別段の指定がない場合、化合物はＥ幾何異性体およびＺ幾何異性体の両方を含むと意図される。同様に、全ての互変異性体型も含むことが意図される。本明細書で見られる任意の炭素−炭素二重結合の配置は、便宜上のためだけに選択されたもので、文章でそのように明言しない限り特定の配置を指示することを意図しない。ゆえに、トランスとして本明細書に随意に示された炭素−炭素二重結合は、シス、トランス、または任意の割合での二つの混合物であってもよい。かかる化合物の、全てのかかる異性体型は、本発明に明確に含まれる。本明細書に記載の化合物の全ての結晶形は、明確に本発明に含まれる。
【００８８】
合成された化合物は、反応混合物から分離され、カラムクロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー、または再結晶などの方法により、さらに精製され得る。当業者により理解され得るように、本明細書の式の化合物を合成するさらなる方法は、当業者にとって明白だろう。さらに、様々な合成のステップが、所望の化合物を得るために交互の順または順序通りに行われてよい。加えて、本明細書に示した溶媒、温度、反応持続期間等は、単に例示を目的とするものであり、当業者は多様な反応条件が所望の本発明の化合物を生成し得ると認識するだろう。本明細書に記載の化合物の合成において有用な合成化学転換および保護基の方法論（保護および脱保護）は、当該技術分野で知られており、例えば、
Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，編，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）、およびその続編に記載されるものなどを含む。
【００８９】
実施形態では、本発明は、本明細書に示した式の中間体化合物、およびかかる化合物を本明細書の（例えば、本明細書のスキームの）式の化合物に変換する方法について提供し、該方法は、本明細書の化合物と、一つ以上の化学転換（本明細書に提供されるものを含む）における一つ以上の試薬を反応させることを備え、それにより本明細書の任意の式の化合物またはその中間体化合物を提供する。
【００９０】
本明細書に記載の合成方法は、任意のスキームに記載される任意のステップの前後いずれかで、本明細書に記載の式の化合物の合成を最終的に可能にするために、好適な保護基を加えるまたは除去するステップも加えて含んでよい。本明細書に示した方法は、一式の化合物を別の式の化合物に変換する（例えば、スキームＡにおいて、Ａ１からＡ２；Ａ２からＡ３；Ａ１からＡ３）ことを企図する。変換の工程は、一つ以上の化学転換を意味し、それはインサイチュで、または中間体化合物の単離することで行われ得る。転換は、本明細書に引用した参考文献内のものを含む、当該技術分野で公知の技術およびプロトコルを使用して、出発化合物または中間体を追加の試薬と反応させること含み得る。中間体は精製（例えば、ろ過、蒸留、昇華、結晶化、研和、固相抽出、およびクロマトグラフィー）されてもされなくても、使用され得る。
【化６】
2015533173.tif 000010
【００９１】
本発明の化合物は、選択的生物学的特性を亢進させるために、本明細書に示した任意の合成手段を介して様々な官能基を付加することにより修飾され得る。かかる修飾は、当該技術分野に公知で、所与の生物学的システム（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）内への生物学的透過を増大させるもの、経口アベイラビリティを増大させるもの、注射による投与を可能にするために可溶性を増大させるもの、代謝を改変するもの、および排出速度を改変するものを含む。
【００９２】
本発明の化合物は、その化学構造および／または化学名により本明細書に定義される。化合物が化学構造と化学名の両方により言及され、化学構造と化学名が矛盾する場合には、化学構造が化合物のアイデンティティーを決定づける。
【００９３】
本明細書の変数の任意の定義における化学基のリストの列挙は、リストされた基の任意の単一基または組み合わせとしてのその変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態または任意の他の実施形態またはその一部の組み合わせとしてその実施形態を含む。本明細書の変数についての実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態としてまたは任意の他の実施形態またはその一部との組み合わせとしてその実施形態を含む。
本発明の方法
【００９４】
別の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化７】
2015533173.tif 000011
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に、任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを、被検体に投与することを備える、被検体において他のＨＤＡＣ（例えばＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３）ではなく、ＨＤＡＣ６を選択的に阻害する方法を提供する。
【００９５】
一実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する。
【００９６】
別の実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【００９７】
別の実施形態では、ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である。
【００９８】
他の実施形態では、ｍは０である。
【００９９】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、他のＨＤＡＣに対し、５から１０００倍のＨＤＡＣ６についての選択性を有する。
【０１００】
別の実施形態では、式Ｉの化合物は、ＨＤＡＣ酵素アッセイで試験されたとき、他のＨＤＡＣに対し、約５から１０００倍のＨＤＡＣ６についての選択性を有する。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、化合物は、他のＨＤＡＣに対して、１５から４０倍のＨＤＡＣ６についての選択性を有する。
【０１０２】
別の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化８】
2015533173.tif 000012
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを、被検体に投与することを備える、被検体のうつ病および／または不安の処置方法を提供する。
【０１０３】
一実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する。
【０１０４】
別の実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【０１０５】
別の実施形態では、ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である。
【０１０６】
他の実施形態では、ｍは０である。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、うつ病は以下の一つ以上である。大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、および産後うつ病。
【０１０８】
他の実施形態では、不安は以下の一つ以上である。全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）。
【０１０９】
別の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化９】
2015533173.tif 000013
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは、独立して、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグを、被検体に投与することを備える、被検体のＨＤＡＣ６により媒介される疾患の処置方法を提供する。
【０１１０】
一実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはテトラヒドロピランを形成する。
【０１１１】
別の実施形態では、ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピルまたはシクロヘキシルを形成する。
【０１１２】
別の実施形態では、ｍは１または２であり、各ＲＡは独立して、メチル、フェニル、Ｆ、Ｃｌ、メトキシル、またはＣＦ３である。
【０１１３】
他の実施形態では、ｍは０である。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、ＨＤＡＣ６により媒介される疾患は、うつ病、大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、産後うつ病、不安、全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）である。
【０１１５】
一実施形態では、本発明のＨＤＡＣ６阻害剤は、以下のいずれか一つ以上の処置に有用である。うつ病、大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、産後うつ病、不安、全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）。
【０１１６】
本明細書に示した方法は、特定の所定の処置を必要とすると被検体が同定されるものを含む。かかる処置を必要とする被検体を同定することは、被検体または医療専門家の判断であり得、主観的（例えば、意見）または客観的（例えば、試験または診断方法によって測定可能）であり得る。
【０１１７】
好ましくは、ＨＤＡＣ６阻害剤はＨＤＡＣ６の選択的阻害剤であり、それ自体、ヒストン脱アセチル化酵素により調節される障害の処置に有用である。一実施形態では、本発明のＨＤＡＣ６阻害剤は、チューブリン脱アセチル化酵素の選択的阻害剤であり、それ自体、チューブリン脱アセチル化酵素によって調節される障害の処置に有用である。
【０１１８】
好ましくは、ＨＤＡＣ６阻害剤は、血液脳関門を透過する。
【０１１９】
ゆえに、本発明の別の態様では、うつ病および／または不安を処置するための方法は、本明細書に記載のように、それを必要とする被検体に治療有効量のＨＡＤＣ６阻害剤を投与することを備えて提供される。ある特定の実施形態では、被検体はかかる処置を必要とすると同定される。ある特定の実施形態では、疾患を処置するための方法は、所望の結果を達成するために必要とされる量および時間をかけて、それを必要とする被検体に、治療有効量のＨＤＡＣ６阻害剤またはＨＤＡＣ６阻害剤を備える医薬組成物を投与することを備えて提供される。本発明のある特定の実施形態では、「治療有効量」のＨＤＡＣ６阻害剤または医薬組成物は、本発明にかかる、サイトカインのグループのサブセットを調節するのに有効な量である。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、本方法は、それを必要とする（必要としていると同定された被検体を含む）被検体（ヒトまたは動物を含むがこれらに限定されない）への、治療有効量のＨＤＡＣ６阻害剤またはその薬学的に許容され得る誘導体の投与を必然的に含む。ある特定の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤は、大うつ病、臨床的うつ病、慢性うつ病、気分変調、非定型うつ病、双極性うつ病、躁うつ病、季節性うつ病、精神病性うつ病、産後うつ病、不安、全般性不安障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、パニック障害、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および社会恐怖症（または社会不安障害）を含むうつ病の処置に有用である。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、本発明は、被検体がヒトである、本明細書に記載の任意の障害の処置方法を提供する。
【０１２２】
前述に従って、本発明は、かかる処置が必要な被検体の上記の任意の疾患または障害を予防するまたは処置するための方法をさらに提供し、該方法は本発明の治療有効量のＨＤＡＣ６阻害剤またはその薬学的に許容され得る塩を、前記被検体に投与することを備える。上記の使用のいずれについても、必要とされる投与量は、投与様式、処置すべき特定の症状および所望の効果に依存して変動するだろう。
【０１２３】
別の実施形態では、本明細書の方法は、他のＨＤＡＣ（例えば、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３）に対し、Ｚ倍の選択性（Ｚは２〜１０００の整数である）をＨＤＡＣ６について有するとして化合物を同定するステップを備える。
【０１２４】
一実施形態では、本発明は、化学療法剤、放射線剤、ホルモン剤、生物学的製剤、または抗炎症剤の一つ以上を被検体に同時投与することをさらに備える方法を提供する。
【０１２５】
別の態様では、本発明は、式Ｉ、
【化１０】
2015533173.tif 000014
（式中、
ＲｘおよびＲｙはそれぞれが結合する炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピロリジン、オキソゾリジン、またはイミダゾリジンを形成し、その各々は任意選択的に置換され；
各ＲＡは、独立してアルキル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり；または二つのＲＡ基は共に任意選択的に置換されたシクロアルキルまたは複素環を形成することができ；
ｍは０、１、または２である）の一つ以上の化合物、または薬学的に許容され得る塩、エステルまたはそのプロドラッグから選択される、被検体のうつ病および／または不安の処置が可能な化合物を備えるキット、およびうつ病および／または不安の処置に使用するための取扱い説明書を提供する。
【０１２６】
上記のように、本発明は、うつ病および／または不安の処置に有用な化合物を提供する。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ヒストン脱アセチル化酵素またはチューブリン脱アセチル化酵素の阻害剤として有用である。ある特定の実施形態例では、本発明の化合物は、チューブリン脱アセチル化活性に関連する障害に有用である。
【０１２７】
本明細書に示した方法は、特定の所定の処置を必要とすると被験者が同定されるものを含む。かかる処置を必要とする被検体を同定することは、被検体または医療専門家の判断であり得、主観的（例えば、意見）または客観的（例えば、試験または診断方法によって測定可能）であり得る。
【０１２８】
上記のように、本発明の化合物はＨＤＡＣ６の選択的阻害剤であり、それ自体、ヒストン脱アセチル化酵素により調節される障害の処置に有用である。上記のように、本発明の化合物は、チューブリン脱アセチル化酵素の選択的阻害剤であり、それ自体、チューブリン脱アセチル化酵素によって調節される障害の処置に有用である。例えば、本発明の化合物はうつ病および／または不安の処置に有用であってよい。
【０１２９】
ゆえに、本発明の別の態様では、うつ病および／または不安を処置するための方法は、本明細書に記載のように、それを必要とする被検体に治療有効量の化合物を投与することを備えて提供される。ある特定の実施形態では、被検体はかかる処置を必要とすると同定される。ある特定の実施形態では、うつ病および／または不安を処置するための方法は、所望の結果を達成するために必要とされる量および時間をかけて、それを必要とする被検体に治療有効量の化合物、または化合物を備える医薬組成物を投与することを備えて提供される。本発明のある特定の実施形態では、「治療有効量」の化合物または医薬組成物は、うつ病および／または不安を処置するのに有効な量である。本発明の方法にかかる、化合物および組成物は、うつ病および／または不安の処置に有効な、任意の量および任意の投与ルートを使用して投与されてよい。ゆえに、表現「うつ病の処置に有効な量」は、本明細書で使用されるとき、うつ病の兆候または症状を処置するために充分な量の薬剤を意味する。同様に、表現「不安の処置に有効な量」は、本明細書で使用されるとき、不安の兆候または症状を処置するために充分な量の薬剤を意味する。必要とされる正確な量は、被検体の種、年齢、および全身状態、感染の重症度、特定の抗癌剤、投与の様式等により、被検体によって変動するだろう。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、本方法は、それを必要とする被検体（ヒトまたは動物を含むがこれらに限定されない）への、治療有効量の化合物またはその薬学的に許容され得る誘導体の投与を必然的に含む。
【０１３１】
前述に従って、本発明は、かかる処置が必要な被検体の上記の任意の疾患または障害を予防するまたは処置するための方法をさらに提供し、該方法は治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を、前記被検体に投与することを備える。上記の使用のいずれについても、必要とされる用量は、投与様式、処置すべき特定の症状および所望の効果によって変動するだろう。
医薬組成物
【０１３２】
別の態様では、本発明は式Ｉの化合物を備える医薬組成物、または薬学的に許容され得るエステル、塩、またはそのプロドラッグを、薬学的に許容され得る担体と共に提供する。この医薬組成物は、うつ病および／または不安の処置において使用され得る。
【０１３３】
本発明の化合物は、任意の従来のルートによって、具体的には経腸的に、例えば、経口的に、例えば、タブレットまたはカプセルの形で、または非経口的に、例えば注射可能な溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻または坐薬の形で、医薬組成物として投与され得る。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を、少なくとも一つの薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、混合、造粒またはコーティング方法による従来の方法で製造され得る。例えば、経口組成物は、活性成分をａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）平滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコールと共に；錠剤についてはまたｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびまたはポリビニルピロリドン；および必要に応じて、ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または発泡性混合物；および／またはｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤も共に備える錠剤またはゼラチンカプセル剤であり得る。注射可能な組成物は、水性等張液または懸濁液であり得、坐剤は脂肪酸乳剤または懸濁液から調製され得る。組成物は、滅菌されてよく、および／または、保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤などのアジュバント、溶解促進剤、浸透圧および／または緩衝液を調節するための塩を含有してよい。加えて、それらはまた他の治療的に価値ある物質も含んでよい。経皮適用に好適な製剤は、有効量の本発明の化合物を担体と含む。担体は、宿主の皮膚の通過を助けるために吸収性の薬理学的に許容し得る溶媒を含み得る。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、任意選択的に担体を伴って化合物を含有する貯蔵部、任意選択的に、制御されたおよび所定の速度で長時間にわたり、宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御バリア、および該デバイスを皮膚に固定するための手段を備える、包帯の形である。マトリックス経皮製剤も使用されてよい。例えば皮膚および眼への、局所適用に好適な製剤は、好ましくは、当分野で既知の水性溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。これらは、可溶化剤、安定剤、張性増加剤、緩衝剤および防腐剤を含有してよい。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、組成物は、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤またはパッチの形であってよい。ある特定の実施形態例では、本発明にかかる、組成物の製剤はクリームであり、それはステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、パルミトオレイン酸、セチルまたはオレイルアルコールなどの飽和または不飽和脂肪酸をさらに含有してよく、特にステアリン酸が好ましい。本発明のクリームは、非イオン界面活性剤、例えば、ポリオキシ−４０−ステアリン酸塩も含有してよい。ある特定の実施形態では、活性成分は、薬学的に許容される担体および必要に応じて任意の必要な防腐剤または緩衝剤と、無菌条件下で混合される。眼科用製剤、点耳剤、および点眼剤も本発明の範囲内であると企図される。加えて、本発明は、身体への化合物の制御された送達を提供するというさらなる利点を有する、経皮パッチの使用を企図する。かかる剤形は、化合物を適当な媒体に溶解または分散させることにより作成される。上述のように、浸透促進剤も、皮膚を通る化合物のフラックスを増大させるために使用され得る。速度は、速度制御膜の提供または化合物を高分子マトリックスまたはゲル内に分散させることによって制御され得る。
【０１３５】
本発明の化合物および医薬組成物が、製剤化され得、併用療法において採用され得ることも理解されるだろう。つまり、化合物および医薬組成物は、一つ以上の他の所望の治療手順または医療手順で製剤化され得、またそれらの手順と同時または前後で、投与され得る。治療（治療法または手順）の特定の組み合わせを併用で採用するには、レジメンは、所望の治療法および／または手順の適合性、および達成すべき所望の治療的効果を考慮にいれるだろう。採用される治療は、同一の障害について所望の効果を達成してよく（例えば、本発明の化合物は、別の免疫調節剤、抗癌剤または乾癬の処置に有用な薬剤と同時に投与されてよい）、または異なる効果（例えば、任意の有害作用の制御）を達成してよいことも理解されるだろう。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、一つ以上の追加の治療的に活性な成分をさらに備える。本発明の目的のため、用語「緩和剤」は、疾患の症状および／または治療レジメンの副作用の緩和に焦点を当てるが、治癒的ではない処置を意味する。例えば、緩和処置は、鎮痛剤、抗悪心薬剤、解熱剤、および抗病薬を包含する。加えて、化学療法、放射線療法および外科手術は、全てに緩和的（つまり、治癒に向かうことなく症状を減らす；例えば、腫瘍の縮小および圧力、出血、疼痛および癌の他の症状の減少）に用いられ得る。
【０１３７】
本発明の医薬組成物は、一種類以上の薬学的に許容され得る担体と一緒に製剤化された治療有効量の本発明の化合物を備える。本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得る担体」は、任意の型の無毒性の、不活性な固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル封入物質または製剤化助剤を意味する。本発明の医薬組成物は、経口的、直腸内、非経口的、大槽内、膣内、腹腔内、局所的（散剤、軟膏剤または滴剤として）、頬側に、または口腔または鼻腔スプレーとして、ヒトおよび他の動物に投与され得る。
【０１３８】
注射用製剤、例えば、無菌の注射用の水性または油性懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて公知の技術に従って製剤化されてよい。無菌の注射用製剤は、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒中の無菌の注射用溶液、懸濁液または乳剤であってもよい。採用されてよい許容され得るビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐおよび等張性塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の、不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として従来使用されている。この目的のために、任意の無刺激性不揮発性油は、合成のモノジグリセリドまたはジグリセリドを含んで採用され得る。加えて、オレイン酸などの脂肪酸は注射剤の調製に使用される。
【０１３９】
薬物の効果を長引かせるため、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることがしばしば望ましい。これは、水溶性がに乏しい結晶性または非晶質の物質の液体懸濁液の使用によって達成され得る。そのため、薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、さらに、溶解速度は結晶サイズおよび結晶性形態に依存し得る。あるいはまた、非経口投与される薬物形態の吸収遅延は、薬物を油性ビヒクルに溶解または懸濁させることにより達成される。
【０１４０】
類似した型の固形組成物も、例えば、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として採用してよい。
【０１４１】
本発明の処置方法に従い、ヒトまたは他の動物などの被験者において、所望の結果を達成するために必要な量および時間をかけて、治療有効量の本発明の化合物を被検体に投与することにより、障害は処置されるまたは予防される。用語「治療有効量」の本発明の化合物は、本明細書で使用されるとき、被検体の障害の症状を低減させるために充分な量を意味する。医学分野でよく理解されるように、治療有効量の本発明の化合物は、いずれの医学的処置にも適応できる妥当な利益／リスク比であるだろう。
【０１４２】
一般に、本発明の化合物は、単一でまたは一つ以上の治療薬と組み合わせのいずれかで、当該技術分野で公知の任意の通常および許容され得る様式を介して治療有効量で投与されるだろう。治療有効量は、疾患の重症度、被検体の年齢、相対な健康状態、使用される化合物の効力、および他の因子に依存して広く変動してよい。一般に、満足のいく結果は、体重あたり約０．０３〜２．５ｍｇ／ｋｇ（０．０５〜４．５ｍｇ／ｍ２）の１日投与量で全身的に得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示される１日投与量は、約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲であり、好都合には、例えば１日４回までの分割量で、または制御された放出形態で投与される。経口投与に好適な単位投与形態は、約１〜５０ｍｇの活性成分を備える。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、本発明の化合物の治療的量または投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ（約０．１８ｍｇ／ｍ２〜約９００ｍｇ／ｍ２）、あるいは約１〜約５０ｍｇ／ｋｇ（約１．８〜約９０ｍｇ／ｍ２）まで変動してよい。一般に、本発明にかかる処置レジメンは、１日単回または複数回投与で約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇの本発明の化合物を、かかる処置を必要とする患者へ投与することを備える。投与ルート、ならびに他の薬剤との併用の可能性に依存して、治療量または投与量も変動するだろう。
【０１４４】
被検体の状態の改善に際し、維持用量の本発明の化合物、組成物、または組み合わせが、必要に応じて、投与されてよい。その後、処置を止めるべき、所望のレベルまで症状が軽減されたときに改善された状態が保持されるレベルまで、症状の関数として、投与の用量または頻度、または両方を減らしてもよい。しかしながら、被検体は、任意の疾患症状の再発に際して、長期にわたる断続的な処置を必要とするかもしれない。
【０１４５】
しかしながら、本発明の化合物および組成物の総１日使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医により決定されることが理解されるだろう。任意の特定の患者についての具体的な阻害用量は、処置されている障害および障害の重症度；採用される具体的な化合物の活性；採用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、全体の健康状態、性別、食事；投与の時間、投与ルート、採用される具体的な化合物の排出速度；処置期間；採用される具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；および医学的分野で周知の同様の因子を含む、様々な因子に依存するだろう。
実施例
【０１４６】
本発明の化合物および工程は、単なる例示を意図し本発明の範囲の限定を意図しない、以下の実施例と関連させると、よりよく理解されるだろう。開示された実施形態に対する種々の変更および修正は当業者に自明であり、限定されないが、本発明の化学構造、置換基、誘導体、製剤および／または方法に関するものなどを含むかかる変更および修正は、本発明の精神および添付の特許請求の範囲の範囲から逸脱せずに行われてよい。本明細書のスキームにおける構造内の変数の定義は、本明細書に示した式中の対応する位置のそれと同一基準である。
【０１４７】
本発明の化合物の合成は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１に提供され、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施例１：化合物の合成１
化合物１：
【化１１】
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合成のスキーム：
【化１２】
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エチル２−（フェニルアミノ）ピリミジン−５−カルボキシレート（化合物Ｂ）の合成
【０１４８】
ＮＭＰ（２０ｍｌ）中の化合物Ａの溶液に、アニリン（１．０ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）を添加し、１２０℃で一晩加熱した。反応が完了した後、混合物を氷水（２０ｍｌ）に注ぎ込み、沈殿物を分取してメタノール（５ｍｌ＊２）で洗浄し、沈殿物をろ過により単離して、化合物Ｂを淡色固体として得た（９８０ｍｇ、７５％）。
Ｎ−ヒドロキシ−２−（フェニルアミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物１）の合成
【０１４９】
メタノール／ジクロロメタン（５／２ｍｌ）中の化合物Ｂの溶液（１００ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）に、９８％ＮＨ２ＯＨ（１．７ｍｌ、水中５０％）を０℃で添加し、１０分間撹拌した。メタノール（１．５ｍｌ）中の飽和水酸化ナトリウムの溶液を添加し、混合物をさらに１０分間撹拌し続けた。反応混合物を真空で濃縮し、粗残基を２ＮＨＣｌでｐＨ＝６〜７まで酸性化した。沈殿物を分取し、水で洗浄して１を灰白色固体として得た（９０ｍｇ、９４．７％）。
実施例２：化合物９９の合成
【化１３】
2015533173.tif 000017
実施例３：化合物１１０の合成
【化１４】
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実施例４：化合物１１１の合成
【化１５】
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実施例５：２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物１０１／ＡＣＹ−７７５）の合成
【化１６】
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【０１５０】
中間体２の合成：乾燥ＤＭＦ（１０００ｍｌ）中の化合物１の溶液（１００ｇ、０．７４ｍｏｌ）に、１，５−ジブロモペンタン（１７０ｇ、０．７４ｍｏｌ）を添加した。反応物を氷浴で冷却しながらＮａＨ（６５ｇ、２．２当量）を滴加した。得られた混合物を５０℃で一晩激しく撹拌した。懸濁液を氷水で注意深くクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍｌ）で抽出した。合一された有機層を濃縮して粗生成物を得、それをフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して化合物２を淡色固体として得た（１００ｇ、６７％）。
【０１５１】
中間体３の合成：ＰＰＡ（５００ｍｌ）中の化合物２の溶液（１００ｇ、０．４９ｍｏｌ）を１１０℃で約５〜６時間にわたって加熱した。完了後、得られた混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を用いて約８〜９のｐＨに注意深く調整した。得られた沈殿物を分取し、水（１０００ｍｌ）で洗浄して、化合物３を白色固体として得た（９５ｇ、８７％）。
【０１５２】
中間体４の合成：Ｎ−ＢｕＯＨ（８００ｍｌ）中の化合物３の溶液（９５ｇ、０．４３ｍｏｌ）にＮａＣｌＯ（２６０ｍｌ、１．４当量）を添加した。３Ｎ  ＮａＯＨ（４００ｍｌ、２．８当量）を次いで０℃で添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物をＥＡ（２×５００ｍｌ）で抽出し、合一された有機層を塩水で洗浄した。溶媒を真空で除去して粗生成物を得、それをＨＣＬ塩で処理することによってさらに精製して、化合物４を白色粉末として得た（７２ｇ、７３％）。
【０１５３】
中間体６の合成：ジオキサン（５０ｍｌ）中の化合物４の溶液（２．２９ｇ  １０ｍｍｏｌ）に、化合物５（１．８７ｇ、１．０当量）およびＤＩＰＥＡ（２．５８ｇ、２．０当量）を添加した。混合物を１１０〜１２０℃で一晩加熱した。得られた混合物をシリカゲルカラム上で直接精製して、結合した生成物、化合物６、を白色固体として得た（１．３７ｇ、４０％）。
２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物１０１／ＡＣＹ−７７５）の合成：
【０１５４】
ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍｌ、１：１）中の化合物６の溶液（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）に水（２ｍｌ、過剰）中の５０％ＮＨ２ＯＨを添加した。ＭｅＯＨ（２ｍｌ、過剰）中の飽和ＮａＯＨを次いで０℃で添加し、反応物を３〜４時間撹拌した。完了後、得られた混合物を濃縮し、２Ｎ  ＨＣＬで４〜５のｐＨに達するまで酸性化した。沈殿物を分取りし、水（１０ｍｌ）で洗浄して過剰ＮＨ２ＯＨを除去した。沈殿物を乾燥させて２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミドを白色粉末として得た（７０ｍｇ、７３％）。
実施例６：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物７３／ＡＣＹ−７３８）の合成
【化１７】
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反応スキーム
【化１８】
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【０１５５】
中間体２の合成：ＭＢＴＥ（３７５０ｍｌ）中の化合物１の溶液、ベンゾニトリル、（２５０ｇ、１．０当量）、およびＴｉ（ＯｉＰｒ）４（１３３０ｍｌ、１．５当量）を窒素雰囲気下で約−１０〜−５℃まで冷却した。ＥｔＭｇＢｒ（１６１０ｍｌ、３．０Ｍ、２．３当量）を６０分間かけて滴加し、その間反応物の内部温度を５℃未満に維持した。反応混合物を１５〜２０℃まで１時間自然に温めた。内部温度を１５℃未満に維持しつつ、ＢＦ３−エーテル（１３００ｍｌ、２．０当量）を６０分間かけて滴加した。反応混合物を、１５〜２０℃で１〜２時間撹拌し、低水準のベンゾニトリルが残ったときに停止した。内部温度を３０℃未満に維持しつつ、１Ｎ  ＨＣｌ（２５００ｍｌ）を滴加した。依然として温度を３０℃未満に維持しつつ、ＮａＯＨ（２０％、３０００ｍｌ）を滴加し、ｐＨを約９．０にまでした。反応混合物をＭＴＢＥ（３Ｌ×２）およびＥｔＯＡｃ（３Ｌ×２）で抽出し、合一された有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下（４５℃未満）で濃縮して赤色油を得た。ＭＴＢＥ（２５００ｍｌ）を、油に添加して透明な溶液を得、乾燥ＨＣｌガスでバブリングした際に、固体沈殿物を得た。この固体をろ過して真空で乾燥させ、１４３ｇの化合物２を得た。
【０１５６】
中間体４の合成：化合物２（６２０ｇ、１．０当量）およびＤＩＰＥＡ（１０８０ｇ、２．２当量）をＮＭＰ（３１００ｍｌ）中に溶解し、２０分間撹拌した。化合物３（６８０ｇ、１．０２当量）を添加し、反応混合物を約８５〜９５℃まで４時間加熱した。溶液をゆっくりと自然に室温まで冷却した。この溶液をＨ２Ｏ（２０Ｌ）上に注ぎ、固体の多くを、強い撹拌で、溶液から凝結させた。混合物をろ過し、ケーキを減圧下５０℃で２４時間乾燥させ、８９６ｇの化合物４を得た（固体、８６．８％）。
【０１５７】
Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物７３／ＡＣＹ−７３８）の合成：ＭｅＯＨの溶液（１０００ｍｌ）を撹拌しながら約０〜５℃まで冷却した。ＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌ（１１０７ｇ、１０当量）を添加し、その後ＮａＯＣＨ３（１０００ｇ、１２．０当量）を注意深く添加した。得られた混合物を０〜５℃で１時間撹拌し、ろ過して固体を除去した。化合物４（４５０ｇ、１．０当量）を一度に反応混合物に添加し、化合物４が消費されるまで１０℃で２時間撹拌した。反応混合物を、ＨＣＬ（６Ｎ）の添加を通して約８．５〜９のｐＨまで調整し、沈殿物をもたらした。混合物を減圧下で濃縮した。水（３０００ｍｌ）を激しく撹拌しながら残基に添加し、沈殿物をろ過によって分取りした。生成物を４５℃のオーブンで一晩乾燥させた。（３４０ｇ、７９％収率）。
実施例７：ＨＤＡＣ酵素アッセイ
【０１５８】
試験するための化合物を、ＤＭＳＯで最終濃度の５０倍まで希釈し、１０．３倍希釈の連続がなされた。化合物をアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＫＣｌ、０．００１％のＴｗｅｅｎ−２０、０．０５％のＢＳＡ、２０μＭのＴＣＥＰ）で希釈して、それらの最終濃度の６倍まで希釈した。ＨＤＡＣ酵素（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）をその最終濃度の１．５倍までアッセイ緩衝液で希釈した。０．０５μＭの最終濃度のトリペプチド基質およびトリプシンをアッセイ緩衝液でその最終濃度の６倍で希釈した。これらのアッセイで使用される最終酵素濃度は、３．３ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ１）、０．２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ２）、０．０８ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ３）および２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ６）であった。使用される最終基質濃度は１６μＭ（ＨＤＡＣ１）、１０μＭ（ＨＤＡＣ２）、１７μＭ（ＨＤＡＣ３）および１４μＭ（ＨＤＡＣ６）であった。５μｌの化合物および２０μｌの酵素を黒色、不透明な３８４ウェルプレートのウェルに重複して添加した。酵素および化合物を室温で１０分間一緒にインキュベートした。５μｌの基質を各ウェルに添加し、プレートを６０秒間振とうし、Ｖｉｃｔｏｒ２マイクロタイタープレートリーダー内に配置した。蛍光の発生を６０分間モニターし、反応の線形速度（ｌｉｎｅａｒ  ｒａｔｅ）を算出した。４パラメータカーブフィット法（ｆｏｕｒ−ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｃｕｒｖｅ  ｆｉｔ）によりグラフパッドプリズムを使用してＩＣ５０を測定した。
【表３】
2015533173.tif 000023
【０１５９】
図１３ａ〜１３ｄのデータも、選択されたＨＤＡＣ６阻害剤の選択性、効力および薬物動態特性を示す。図１３ａは、ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａでインキュベートされた組換えＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３およびＨＤＡＣ６の用量依存性の酵素阻害を示す。図１３ｂは、化合物７３でインキュベートされた組換えＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３およびＨＤＡＣ６の用量依存性の酵素阻害を示す。図１３ｃは、化合物１０１でインキュベートされた組換えＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３およびＨＤＡＣ６の用量依存性の酵素阻害を示す。図１３ｄは、阻害剤化合物７３および化合物１０１および参照化合物ＳＡＨＡ、ＭＳ−２７５およびＡＣＹ−１２１５についてのＩＣ５０値のヒートマップの概要を示す（１条件につきＮ＝２）。明るい赤は、対応するＨＤＡＣアイソフォームへの化合物のより高い阻害効力を示し、黒色背景は活性の欠如を示す。図１３ｅは、急性の５ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射後の継時的な血漿濃度に対する脳内濃度の比率を示している。
結論：阻害は、ＨＤＡＣ６について選択的であり、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａより優れる。
【０１６０】
Ｐａｎ−ＨＤＡＣ阻害剤は、遺伝子の転写に大きな変化をもたらし、それは多数の望ましくない作用を有し得、それゆえにそれらは抗うつ薬の候補になる可能性が低くなる。ＨＤＡＣ３がこれらの作用の主な要因だと仮定すると、この阻害をＨＤＡＣ６のそれから分離させることは興味深い。この研究で試験された化合物は、そうするように設計されており、少なくともＨＤＡＣ３に対し、ＨＤＡＣ６について少なくとも１００倍の選択性を有する。トリペプチド基質３を各酵素のＫｍに等しい量で使用して蛍光アッセイによって、化合物をＨＤＡＣ阻害について試験した。ＨＤＡＣ酵素を各化合物の希釈物で、１０分間、プレインキュベートした。酵素／化合物混合物に基質を添加した後、蛍光発光を３０分間モニターし、４パラメータカーブフィット法によりＩＣ５０値を測定した。
【０１６１】
下記の表３に示すように、化合物７３および１０１は、それぞれ１．７ｎＭおよび７．５ｎＭのＩＣ５０値、クラスＩのＨＤＡＣに対するそれぞれの平均選択性が１００〜７００倍で、組み換体ＨＤＡＣ６に対する阻害活性を実証した（表１、図１３ｂ、１３ｃ、および１３ｄ）。比較のために、参照ＨＤＡＣ６阻害剤ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａは、ＨＤＡＣ６について１８ｎＭのＩＣ５０値を示し、クラスＩのＨＤＡＣに対し、平均約２００倍の選択性を示した。（図１３ａ）。化合物１０１は、全ての他のクラスＩＩのＨＤＡＣアイソフォームに対し最小の活性を有した（ＩＣ５０＞１μＭ）。不活性Ｎ末端ドメイン（Ｈ２１６Ａ）で点突然変異体だが無傷Ｃ末端ドメインである脱アセチル化酵素活性が、ＨＤＡＣ６ＷＴに匹敵し、化合物７３により完全に阻害されたため、インビトロでのアッセイにおける化合物７３および１０１の活性は、ＨＤＡＣ６のＣ末端触媒ドメインの阻害により完全に説明された。対照的に、ＨＤＡＣ６Ｃ末端触媒突然変異体は、ほぼ完全に脱アセチル化活性を欠いた。
【表４】
2015533173.tif 000024
実施例８：うつ病のマウスモデルにおけるα−チューブリンの可逆的アセチル化および抗うつ剤作用
【０１６２】
様々な抗うつ剤および気分安定剤は、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の阻害を介して脳内のタンパク質の高アセチル化を促進し、経過観察により、ＨＤＡＣはこれらの薬物の治療的活性に寄与する可能性があることが示唆される。この仮説は、うつ病のモデルにおいてＨＤＡＣ阻害剤が抗うつ様反応を促進するという、よく再現された知見と一致する。脳内のほとんどの研究が、クロマチン制御におけるこの酵素ファミリーの役割に焦点を当ててきたが、最近の報告は、ＨＤＡＣ基質の別の重要なクラスだとして細胞骨格タンパク質に向いている。ｐａｎ−ＨＤＡＣ阻害剤を用いた処置後に重度に高アセチル化されるタンパク質である、α−チューブリンは、活性依存シナプスリモデリングおよび細胞内輸送の役割を果たす微小管の重要な構成要素である。細胞質クラスＩＩＢのＨＤＡＣである、ＨＤＡＣ６は、主要なα−チューブリン脱アセチル化酵素として同定されており、ある特定の三環系およびＳＳＲＩ抗うつ剤により阻害される。加えて、ＨＤＡＣ６ノックアウトマウスは、抗うつ剤様表現型を有することが示されている。ここでの目的は、ＨＤＡＣ阻害剤の抗うつ活性におけるチューブリンアセチル化およびＨＤＡＣ６ノックアウトのプロレジリエント（ｐｒｏ−ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ）効果の因果関与を試験することである。抑うつ操作（すなわち、慢性社会的敗北）および抗うつ処置に曝露され、慢性的ストレス後にα−チューブリンのアセチル化の長期継続的な増加を示した後で、脳内のα−チューブリンアセチル化の包括的なレベル、局所性分布および細胞内局在の変化を調べた。野生型およびＨＤＡＣ６ノックアウトマウスにおいて、α−チューブリンのアセチル化における領域選択的変化を生成し、抗うつ様反応を生成するための、亢進されたＨＤＡＣ６選択性および脳バイオアベイラビリティを伴う新規薬理学的阻害剤の能力を試験した。最後に、ＨＤＡＣ６ノックアウトマウスにおけるチューブリンアセチル化の救助がストレス脆弱性を回復できるかどうかを試験するために、ウイルス媒介アプローチを使用した。これらの研究は、うつ病様行動における、α−チューブリンアセチル化の役割についての重要な新しい情報を提供する。
背景
【０１６３】
ＨＤＡＣ６は、抗うつ剤の重要な標的である、セロトニン細胞のマーカーである、Ｔｐｈと高度に共存する。ＨＤＡＣ６は、脳内の上行性セロトニンニューロン（ａｓｃｅｎｄｉｎｇ  ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ）の大部分を占める領域である、背側および正中縫線に高度に局在化されている。ＨＤＡＣ６は、トラポキシンまたは酢酸塩ではなく、ＴＳＡで処置された繊維芽細胞におけるチューブリンアセチル化の増大によって証明されるように、α−チューブリンの脱アセチル化を左右する。加えて、繊維芽細胞におけるＨＤＡＣ６のｓｉＲＮＡノックダウンも、アセチル化の増大をもたらす。インビボのニューロンにおけるＨＤＡＣ６のＣｒｅ駆動性ノックダウンも、マウスの脳溶解物中でチューブリンアセチル化の増大をもたらす。ＨＤＡＣ６は、慢性社会的敗北後の抑うつ用行動の発生に自発的に耐性がある、ならびに一般的な三環系抗うつ薬であるイミプラミンを用いた処置後のレジリエントなマウスの、縫線核内のセロトニン作動性ニューロンにおけるｍＲＮＡ発現が３０％低減したことを示す。ＨＤＡＣ６のセロトニン細胞特異的ノックアウトは、慢性社会的敗北後の尾懸垂試験、強制水泳試験および社会的相互作用試験において抗うつ剤様表現型をもたらす。
チューブリンアセチル化に及ぼす影響
【０１６４】
化合物７３および１０１は、ヒストンアセチル化を増大させることなく（図４参照）、神経細胞培養物内での（図２参照）、ならびに急性腹腔内注射後のマウス全脳での（図１参照）、および反復腹腔内注射後の特定の脳領域での（図５および図３参照）チューブリンアセチル化の増大をもたらした。図５は、ニューロンＨＤＡＣ６ノックアウトされたマウスは、ＨＤＡＣ６阻害剤で処置されたときにチューブリンアセチル化においてさらなる増大を示さなかったが、しかしながら、野生型マウスはビヒクルと比べて大きな増大を示したことを示し、これらの増大がＨＤＡＣ６特異的阻害に起因すると確証させた。図３では、屠殺の４８、２８、２４、４および半時間前の５つの処置からなる、亜慢性処置が１回注射／日を２１日間行う慢性処置よりもチューブリンアセチル化において大きな増大をもたらすことが観察された。細胞培養のために、指示通り、ＲＮ４６Ｂ細胞を、１、４または２４時間ＤＭＳＯ内で０．２５、２．５または２５μΜの薬物で処理した。テューキー事後分析：ビヒクル処置と比較した時、＊Ｐ＝０．０１〜０．０５、＊＊Ｐ＝０．００１〜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１である。
【０１６５】
図１３ｆおよび１４ａ〜１４ｅのデータは、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ６およびＴＰＨ２  ｍＲＮＡの分布および選択されたＨＤＡＣ６阻害剤が、リジン４０（Ｋ４０）でα−チューブリンのアセチル化およびリジン９（Ｈ３Ｋ９）でヒストンＨ３アセチル化に及ぼす効果を実証する。図１３ｆは、マウスの脳の矢状面上でインサイチュハイブリダイゼーション後に見られるように、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ６およびＴＰＨ２  ｍＲＮＡの分布を示す：平均発現強度は低（青）から高（赤）まで変動する：写真はアレン脳科学研究所からのものである。図１４ａは、ＲＮ４６Ａ−Ｂ１４セロトニン作動性細胞株において、非選択的ＨＤＡＣ阻害剤トリコスタチンＡ（ＴＳＡ、０．６μＭ）または選択的ＨＤＡＣ６阻害剤ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ（Ｔｕｂ  Ａ、２．５μＭ）、化合物７３（２．５μＭ）および化合物１０１（２．５μＭ）を用いた４時間の処置が全て、Ｋ４０でα−チューブリンアセチル化を増大させたことを示す。対照的に、ＴＳＡのみがＲＮ４６Ａ−Ｂ１４細胞においてＨ３Ｋ９アセチル化を有意に増大させた。結果は、ビヒクル処置条件に対して基準を合わせたパーセント変化として示される。水平の実線は、ビヒクル処置されたウェルの平均を示し、点線はそのＳＥＭを示す。代表的なウエスタンブロット画像を提示する。総α−チューブリンレベル（１条件につきＮ＝３、中段）またはヒストンＨ３タンパク質の総レベルを有意に改変した処置はなかった。図１４ｂは、インビボでの実験において、化合物７３（５ｍｇ／ｋｇ）および化合物１０１（５０ｍｇ／ｋｇ）の単回腹腔内投与が、マウス全能溶解物中の、３０分、１時間および４時間の時点で測定されたＫ４０アセチル化α−チューブリンレベルを増大させたことを示す。対照的に、この化合物の限られたＣＮＳバイオアベイラビリティに基づいて予測されるように、ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）の投与後のいずれの時点でも有意な変化は検出されなかった。代表的なウエスタンブロット画像を提示する。図１４ｃは、化合物７３（５ｍｇ／ｋｇ）および化合物１０１（５０ｍｇ／ｋｇ）の投与によって誘発されたα−チューブリンＫ４０アセチル化における増大は、ベースラインでは高アセチル化α−チューブリンを有したニューロン特異的ＨＤＡＣ６ノックアウトマウスでは妨げられたことを示す。薬物（５ｍｇ／ｋｇ）を亜慢性的（屠殺の２４時間、４時間および３０分前）にＨＤＡＣ６ノックアウトおよび野生型同腹仔に投与した。チューブリンアセチル化における変化は、皮質（ｃｔｘ）、海馬（Ｈｐｃ）、背側縫線核（ＤＲＮ）および小脳（ｃｂ）からの組織溶解物において測定された。薬物処置マウスのチューブリンアセチル化レベルを、対応する遺伝子型のビヒクル処置マウスのパーセント変化として表した。水平の線は、ビヒクル処置マウスにおける平均チューブリンアセチル化±ＳＥＭを示す。代表的なウエスタンブロット画像は、野生型およびＨＤＡＣ６ノックアウトマウスの海馬（左列）および背側縫線（右列）における各薬物処置により誘発された変化を示す。ビヒクルで処置された野生型のマウスに比べ、ＨＤＡＣ６ノックアウトマウスにおいてα−チューブリンＫ４０アセチル化のベー��ラインレベルの劇的な増強が観察された。野生型とは対照的に、化合物７３および化合物１０１で処置したノックアウトマウスにおける増大は観察されなかった。図１４ｄは、ＣｈＩＰにより測定されたヒストンＨ３リジン９（Ｈ３Ｋ９）アセチル化が、高用量の酪酸ナトリウム（１．２ｇ／ｋｇ）を用いた亜慢性処置の後、ＢＤＮＦプロモーター４およびｃＦＯＳプロモーターで増大したことを示す。図１４ｅは、ＢＤＮＦプロモーター４およびｃＦＯＳプロモーターで、ヒストンＨ３リジン９（Ｈ３Ｋ９）アセチル化に及ぼす、行動的活性用量（ｂｅｈａｖｉｏｒａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）の化合物７３（５ｍｇ／ｋｇ）を用いた亜慢性処置の効果の欠如を示す。
【０１６６】
マウス脳内で高度におよび広範に出現するクラスＩアイソフォームＨＤＡＣ２および３とは対照的に、ＨＤＡＣ６のｍＲＮＡ発現は、少数の脳領域に限られて現れ、ＤＲＮで最も高い信号が観察される（図１３ｆ）。ＴＳＡ（０．６μＭ）、ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ（２．５μＭ）、化合物７３（２．５μＭ）または化合物１０１（２．５μＭ）で処置されたＲＮ４６Ａ−Ｂ１４細胞では、処置の４時間後でのウエスタンブロット分析によりα−チューブリンのアセチル化（リジン４０）画分の増大が明らかになった（Ｆ４，９＝４８．６９、Ｐ＜０．０００１）。総α−チューブリン発現における変化は検出されなかった。（図１４ａ）。ＴＳＡがリジン９でのヒストンＨ３のアセチル化を９４％増大させる（Ｆ４，５＝２２．２１、Ｐ＝０．００２２）一方で、化合物７３または１０１、またはｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａを用いた処置の後では、ヒストンＨ３Ｋ９アセチル化において有意な変化は観察されなかった（図１４ａ）。
【０１６７】
ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａは、組織培養物において約４００％のα−チューブリンアセチル化における増大をもたらし（図１４ａ）、インビボでの単回全身投与（１０ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍＭ）に際して、心臓内でのα−チューブリンアセチル化の２６８％増大を生じた（ｐ＜０．０５）が、全脳溶解物におけるα−チューブリンアセチル化のレベルを有意に変化させなかった（図１４ｂ）。対照的に、化合物７３（５ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍＭ）および化合物１０１（５０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍＭ）は両方とも、全脳溶解物におけるα−チューブリンアセチル化を有意に増大させた。これらの変化は、投与後３０分（Ｆ３，１３＝１６３．４、Ｐ＜０．０００１）、１時間（Ｆ３，１３＝１６３．９、Ｐ＜０．０００１）および４時間（Ｆ３，１４＝４．７０３、Ｐ＝０．０１７９）で有意であった。
【０１６８】
化合物７３（５ｍｇ／ｋｇ）または化合物１０１（５０ｍｇ／ｋｇ）を野生型マウスに、屠殺の２４時間、４時間および３０分前に反復して投与した時、α−チューブリンアセチル化における有意な増大が、全ての試験された脳領域において観察された（図１４ｃ）：皮質、Ｆ２，７＝５８２．５、Ｐ＜０．０００１；海馬、Ｆ２，７＝２６０．４、Ｐ＜０．０００１；背側縫線核、Ｆ２，７＝５４．００、Ｐ＜０．０００１；および小脳、Ｆ２，７＝１３６．２、Ｐ＜０．０００１。対照的に、ノックアウトマウスにおける同一の処置レジメンは、ベースラインレベルを超えるα−チューブリンアセチル化の増大を生じなかった（図１４ｃ）。注目すべきは、以前に報告されるように（Ｅｓｐａｌｌｅｒｇｕｅｓら、２０１２）、これらの突然変異体マウスは、その野生型同腹仔と比較した時（０．５±０．０６；ｐ＜０．０００１）、ベースラインのアセチル化α−チューブリンを劇的に亢進する（１．９８±０．２アセチル／総）。
【０１６９】
細胞培養物において上記のように、化合物７３および１０１を用いたインビボでの処置は、ウエスタンブロットにおいてリジン９のヒストン３のアセチル化を有意に改変しなかった。加えて、クロマチン免疫沈降法は、５ｍｇ／ｋｇの化合物７３を用いた反復腹腔処置の後の海馬内のプロモーターＤＮＡでのヒストンＨ３Ｋ９アセチル化濃縮（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）における同時の変化はなかったことを明らかにした。これは、活性誘導神経遺伝子（ａｃｔｉｖｉｔｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｇｅｎｅｓ）のプロモーター、いわゆるｃＦＯＳおよびＢＤＮＦプロモーター４でのアセチル化Ｈ３Ｋ９の濃縮の増大をもたらした、行動的活性用量の、クラスＩヒストン脱アセチル化酵素阻害剤である、酪酸ナトリウム（１．２ｇ／ｋｇ）を用いた処置とは対照的である（図１４ｄおよび１４ｅ）。
ＨＤＡＣ６阻害の抗うつ効果
【０１７０】
ＨＤＡＣ６特異的阻害剤化合物７３および１０１は、抗うつ様活性を有する。化合物７３および１０１の両方が、急性投与の直後にオープンフィールドにおいて移所運動活性の亢進（ｈｙｐｅｒ  ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）をもたらした（図６、７、および８を参照）。両化合物は、急性投与３０分後の、尾懸垂試験においてＳＳＲＩシタロプラムに匹敵する抗うつ活性を示した（図１１参照）。加えて、低活性を伴うシタロプラムの用量と組み合わせた場合、これらの化合物は相加効果を有するように見られた（図１０参照）。この実験のために選ばれたシタロプラムの用量は、２ｍｇ／ｋｇが準活性であるべきだと記載する文献に基づいたが、この用量は依然として効果を示すと見出された。それからマウスは、１０日間毎日５分間、攻撃的な居住マウスに曝露されるという慢性社会的敗北ストレスを受け、それから社会的相互作用試験において１１日目に試験された。最初の１０日間は敗北前で、合計２０日間ビヒクルで処置されたマウスは、対照マウスと比較したとき、標的マウスが存在する場合には、相互作用ゾーンで過ごした時間が減少したことを示した。ＨＤＡＣ６阻害剤化合物で処置されたマウスは、ＳＳＲＩフルオキセチンを用いて処置されたマウスにおいて観察されたものと等しく、この表現型の発生に対してレジリエンスを示した（図９参照）。最も低い対象（すなわち、約５２秒）より多くの時間を相互作用ゾーンで過ごしていると定義される、レジリエントであると見出されたマウスのパーセントは、ＨＤＡＣ６阻害剤群においてより高い。全ての行動試験は、６〜１０週齢のＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウスを使用して行った。テューキー事後分析：ビヒクル処置されたマウスと比較して、＊Ｐ＝０．０１〜０．０５、＊＊Ｐ＝０．００１〜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【０１７１】
図１５ａ〜１５ｆのデータは、不安試験におけるＨＤＡＣ６選択的阻害の効果を示す。図１５ａ、１５ｂおよび１５ｃに示すように、化合物７３、化合物１０１またはｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａの急性全身投与の１時間前および２時間後にオープンフィールド試験において活性を評価した。図１５ａおよび１５ｂは、化合物７３および化合物１０１が、それぞれ、５０ｍｇ／ｋｇで投与されたときには探索を増大させたが、より低い用量ではそうでなかったことを示す（矢印は薬物投与を示す）。図１５ｃは、処置後２時間にわたって蓄積されたビームブレーク数を示す。ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）の効果の欠如および神経細胞特異的条件付きＨＤＡＣ６ノックアウトを伴うマウスにおける化合物７３と化合物１０１の効果の遮断に留意されたい（１条件につきＮ＝５〜８）。図１５ｄ、１５ｅ、および１５ｆは、ビー玉埋め法（図１５ｄ、１条件につきＮ＝１０〜１８）およびＮＩＨ試験（図１５ｅ、１条件につきＮ＝８〜１１）において化合物７３または化合物１０１の急性投与が抗不安薬様効果を生じたが、高架式十字迷路（図１５ｅ、１条件につきＮ＝５）では効果がなかったことを示す。
【０１７２】
図１６ａ〜１５ｇのデータは、ＨＤＡＣ６阻害剤化合物７３および化合物１０１が抗うつ剤様特性を有することを実証する。図１６ａは、尾懸垂試験において、化合物７３および化合物１０１の急性投与が、ＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウスに、基準抗うつ剤シタロプラムのそれに類似した抗不動効果を生じたことを示す。該効果は、急性５０ｍｇ／ｋｇ腹腔注射の３０分後に観察されたが、より低い用量（５ｍｇ／ｋｇ）についてはそうでなかった。準活性用量のＨＤＡＣ６選択的阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ）およびシタロプラム（０．５ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせは、抗不動活性（１条件につきＮ＝８〜２９）の頑強な増強作用を生じた。図１６ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、シタロプラム効果はＨＤＡＣ６ノックアウトにより増強された一方で、化合物７３の抗不動効果は、ＨＤＡＣ６の神経細胞選択的ノックアウトにより遮断されたことを示す。ビヒクルを用いて処置（１条件につきＮ＝６〜１５）されたとき、ＨＤＡＣ６野生型およびノックアウト間で差異は見られなかった。図１６ｃは、処置期間、社会的敗北および社会的相互作用（ＳＩ）試験を示すタイムラインである。ＨＤＡＣ６選択的阻害剤を用いた慢性処置は、社会的敗北を受けたビヒクル処置されたマウスと比較して、平均相互作用時間の増大（図１６ｄ）および試験場の隅で過ごした時間の低減（図１６ｅ）が観察されたように、社会的敗北後の回避の発生を防いだ。図１６ｆは、ＳＳＲＩまたはＨＤＡＣ６阻害剤を用いた処置が、ビヒクルを用いた処置と比較して、より大きな割合のレジリエントなマウスをもたらすことを示す。図１６ｇは、試験期間中に移動した総距離において変化が観察されなかったを示す（１条件につきＮ＝１１〜１５）。
【０１７３】
一般的な抗うつ剤は、新規の環境において歩行運動を増大させると示されてきた（Ｂｒｏｃｃｏら、２００２）。化合物７３、化合物１０１およびｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａの急性投与が、新規のオープンフィールド場での探索に及ぼす効果が試験された。順応した一時間後にｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａを１０ｍｇ／ｋｇで注射したとき、マウスは、探索活性の変化を呈さなかった。しかしながら、急速な、用量依存性移所運動の亢進効果が、５０ｍｇ／ｋｇの化合物７３（Ｆ４，１３２＝８４．６３、Ｐ＜０．０００１）（図１５ａおよび１５ｃ）または化合物１０１（Ｆ４，１７４＝７．２６５、Ｐ＜０．０００１）（図１５ｂおよび３ｃ）を用いた処置後に観察された。移所運動の亢進効果は継時的に変化し、（化合物７３：Ｆ５，１３２＝８４．６３、Ｐ＜０．０００１；化合物１０１：Ｆ５，１７４＝２８．７１、Ｐ＜０．００１）、脳生体内分布プロファイルと一致して、注射後の最初の１時間でピークに達し、２時間までにベースラインに戻った。同一用量の化合物１０１または化合物７３は、神経細胞選択的ノックアウトＨＤＡＣ６のマウスのオープンフィールド探索を有意に改変しなかった（図１５ａ、１５ｂ、および１５ｃ）。化合物７３（６０２±９６ビームブレーク数）および化合物１０１（４１９±７３ビームブレーク数）を用いて処置されたマウスが、ビヒクル（１７７±７１ビームブレーク数）を用いて処置されたそれらより中心内で大きな距離を移動するため、オープンフィールドの中心内の距離は増大する傾向にあった。さらには、５０ｍｇ／ｋｇ用量の化合物７３は、ホームケージ環境で試験された野生型マウスにおいて移所運動活性の亢進を生じ損ね、（ビヒクル＝４２７３±４２５ビームブレーク数；化合物７３＝３４６８±７１１ビームブレーク数；Ｆ１，２３２＝０．９４４７、Ｐ＝０．３６）、これは、効果が、非特異的な運動機能の上昇ではなく、ネオフォビックな条件下の探索行動の脱抑制を反映することを示唆する。
【０１７４】
抗不安薬（Ｂｒｏｅｋｋａｍｐら、１９８６）および抗うつ剤（Ａｌｂｅｌｄａ  ａｎｄ  Ｊｏｅｌ、２０１２）の両方に感受性の試験である、ビー玉埋め課題においては、化合物７３および化合物１０１を用いた処置は、非鎮静（１０ｍｇ／ｋｇ）用量の一般的な抗不安薬ＣＤＰ（図１５ｄ；Ｆ３，５０＝３．６９９、Ｐ＝０．０１７６）と同様の程度まで、埋められるビー玉の数を有意に減少させた。加えて、急性的に５０ｍｇ／ｋｇの用量で与えられる化合物７３は、ＮＩＨ試験において食事に対する待機時間を有意に低減させた（ｐ＜０．０５）が、この効果はＣＤＰのそれ（ｐ＜０．０１）（図１５ｅ）ほど強力ではなかった。抗不安薬に感受性だが、うつ病には感受性ではない試験である、ＥＰＭにおいては、化合物７３または化合物１０１のどちらも、行動的変化を生じなかったが、一方でＣＤＰは迷路の壁のない走行路にいる時間を劇的に増大させた（図１５ｆ；Ｆ３，１６＝７．４９８、Ｐ＝０．００２４）。
【０１７５】
ＴＳＴ（図１６ａ）においては、薬物／用量の有意な効果が観察された（Ｆ１２，１４０＝９．３６８、Ｐ＜０．０００１）。不動性における有意な減少が、化合物７３（ｐ＜０．００１）または化合物１０１（ｐ＜０．０１）のいずれを用いても５０ｍｇ／ｋｇで検出された。いずれの薬物でも５ｍｇ／ｋｇ用量後、有意な効果は観察されなかった。ＳＳＲＩシタロプラムの投与は、２ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．００１）および２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．００１）で不動時間における有意な低減をもたらしたが、０．５ｍｇ／ｋｇではそうでなかった。注射の２時間後で、２０ｍｇ／ｋｇのシタロプラム（ｐ＜０．００１）または５０ｍｇ／ｋｇの化合物７３（ｐ＜０．０１）を用いた処置は依然として有意な活性を有した。
【０１７６】
シタロプラムおよび化合物７３の抗不動効果が、無傷ＨＤＡＣ６タンパク質レベルに依存するのかどうかを試験するために、シタロプラムをＨＤＡＣ６の神経ノックアウトまたはＣ５７ＢＬ／６Ｊ背景で飼育されたその野生型同腹仔のマウスに投与した（図１６ｂ）。Ｃ５７ＢＬ／６ＪとＮＩＨ  ＳｗｉｓｓマウスをＴＳＴにおいて比較する以前の報告（Ｌｕｃｋｉら、２００１）と一致して、抗不動効果が依然として有意である一方で、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ野生型は、ＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウスより高いベースライン不動性を有し（ｐ＜０．０００１）、シタロプラム（ｐ＜０．０００１）および化合物７３（ｐ＜０．０１）の両方に対して反応が少ないことが見出された。対照的に、別のＳＳＲＩ、フルオキセチンの活性がＨＤＡＣ６ノックアウトにおいて増幅されることを示す以前の報告（Ｆｕｋａｄａら、２０１２）と一致して、シタロプラムの抗不動効果は、野生型同腹仔よりＨＤＡＣ６ノックアウトマウスにおいて有意に大きかった（Ｆ４，４７＝７．９０２、Ｐ＜０．０００１）。しかしながら、化合物７３の抗不動活性がＨＤＡＣ６ノックアウトマウスで試験されたとき、有意な効果は観察されず、ＴＳＴにおける化合物７３作用のためには無傷ＨＤＡＣ６タンパク質が必要とされることを示した。
【０１７７】
ＳＳＲＩおよびＨＤＡＣ６間の相互作用をさらに調べるために、シタロプラムおよびＨＤＡＣ６阻害剤を、ＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウスに同時投与した（図１６ａ）。化合物７３または化合物１０１（シタロプラム＋化合物７３対ビヒクル：ｐ＜０．００１；シタロプラム＋化合物１０１対ビヒクル：ｐ＜０．０１）と同時投与される準活性用量のシタロプラム（０．５ｍｇ／ｋｇ）について有意な抗不動効果が観察された（図１６ａ）。シタロプラムと化合物７３の組み合わせの効力は、４０倍高い用量のシタロプラムのそれと匹敵した。
【０１７８】
ＨＤＡＣ６のセロトニン選択的ノックアウト後のＣＳＤパラダイムのマウスにおけるプロ−レジリエント表現型は以前に報告されている（Ｅｓｐａｌｌｅｒｇｕｅｓら２０１２）。ＨＤＡＣ６の慢性薬理学的阻害がその表現型を複製し得るかどうかを研究する。マウスをビヒクル、フルオキセチン（２０ｍｇ／ｋｇ）、化合物７３（５ｍｇ／ｋｇ）または化合物１０１（５０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを用いて１０日間前処置し、処置を継続しながら１０日間のＣＳＤに曝露した（図１６ｃ）。２１日目、最後の注射の２４時間後に、マウスを社会的相互作用試験にて試験した。非敗北対照群と比べて、ＣＳＤに曝露されたビヒクル処置されたマウスは、社会的標的の存在下で相互作用ゾーンにいる時間において有意な低減を示し（図１６ｄ；ｐ＜０．０１）、これは社会的回避を示す。フルオキセチン、化合物７３または化合物１０１を用いた処置は、社会的相互作用時間におけるＣＳＤ−誘発低減を防止した。化合物７３を用いて処置された敗北マウスは、ビヒクル（ｐ＜０．０５）で処置されたそれらより、有意に高い相互作用ゾーン内時間を示した。たとえ、これらの効果が事後有意性に届かないとしても、類似の傾向が、化合物１０１（ｐ＝０．１８）およびフルオキセチン（ｐ＝０．０８）で観察された。同様に、化合物７３を用いた処置は、隅ゾーンで過ごした時間の量を低減させた（図１６ｅ；ｐ＜０．０５対ビヒクル）。レジリエンスの基準に到達したマウスの割合に関してデータが上昇したときにも、有意な効果は観察された。ビヒクルを用いて処置されたマウスにおいて、２７％のマウスが自発的にレジリエントであることが観察され；フルオキセチンを用いた処置ではパーセンテージは６０％まで増大し（ｐ＜０．０５）；化合物７３を用いた処置では、パーセンテージは８１％まで増大し（ｐ＜０．０１）；および化合物１０１を用いた処置では、パーセンテージは５８％まで増大した（ｐ＝０．１２）（図１６Ｆ）。薬物処置は、非敗北対照マウスにおける総移動距離（図１６ｇ）または相互作用時間を変化させなかった。化合物７３または化合物１０１が、４週間の処置の間、体重増加に及ぼす有意な影響はなかった。
結論
【０１７９】
化合物７３および１０１、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は、ＨＤＡＣ６についての選択性および脳バイオアベイラビリティにおいて、市販のＨＤＡＣ６阻害剤である、Ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａより優れる。
【０１８０】
これらの化合物は、ヒストンのアセチル化を変化させることなく、細胞培養物および脳内のα−チューブリンのアセチル化において有意な増大を生じる。加えて、ＨＤＡＣ６ノックアウトマウスにおいて遮断されたように、この効果はＨＤＡＣ６阻害に特異的である。
【０１８１】
高用量のこれらの化合物は、オープンフィールドで移所運動の亢進／抗不安薬効果を生じる。
【０１８２】
ＨＤＡＣ６阻害剤は、尾懸垂試験ならびに慢性社会的敗北ストレスのモデルにおいて抗うつ剤様効果を示す。
【０１８３】
この研究は、脳透過的、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤のインビボでの使用が、新規抗うつ剤様薬剤としての有望性（ｐｒｏｍｉｓｅ）を示すことを示す。
実施例９：薬物動態および血液脳関門研究
【０１８４】
雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、１０％ＤＭＡＣ／１０％ソルトール（ｓｏｌｕｔｏｌ）／８０％生理食塩水のビヒクル中の５ｍｇ／ｋｇの化合物１０１を腹腔内注射した。時点毎に３匹のマウスを、投与前、５、１５、および３０分、１、２、４、８および２４時間後に屠殺した。屠殺の際に血漿検体を全てのマウスから採取した。脳検体を、５および１５分、１および４時間後に屠殺したマウスから採取した。脳検体をＰＢＳ内で均質化し、１４０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。脳ホモジネートおよび血漿検体からの上清液を、分析のためにＬＣ／ＭＳ／ＭＳへと注入した。検体中の化合物レベルを適切なマトリックス中の標準曲線によって測定した。薬物動態パラメータをＷｉｎＮｏｎＬｉｎにより生データから測定した。図１２参照。これらの新しい化合物は、血漿で見られるレベルより高いまたは同等の脳レベルで、優れた脳透過性を呈した。
【０１８５】
さらに、化合物７３および１０１、およびｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａのインビボでの生体内分布プロファイルを、５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇでの急性投与後に２時間にわたり検査した（データを表４に示す）。急性５０ｍｇ／ｋｇ注射ｔ＝３０分後で、化合物７３および１０１のそれぞれの血漿レベルは５１５ｎｇ／ｍｌ（１．９μＭ）および１３５９ｎｇ／ｍｌ（４．１μＭ）であった。血漿からの排出は急速で、１２分の血漿半減期および２時間後には濃度が１０ｎｇ／ｍｌを下回った。それにもかかわらず、化合物７３および１０１の両方について２時間にわたって算出された、脳および血漿についての濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ脳／ＡＵＣ血漿）は１を超える比率をもたらした（表４）。比較して、ｔｕｂａｓｔａｔｉｎ  Ａは、０．１８のＡＵＣ脳／ＡＵＣ血漿比で、より長い２時間の血漿半減期、しかしより限られた脳透過性を呈する。まとめると、これらの結果は、それらの半減期が短いにもかかわらず、化合物７３および１０１は急速に脳に分布し、ＣＮＳにおける総薬物曝露を抹消組織のそれに匹敵させることを示す。
【表５】
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参照による組み込み
【０１８６】
本出願を通して引用される、全ての参考文献（参考文献、発行済み特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願を含む）の内容は、出典明示により参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者に一般的に知られている意味に一致する。
【０１８７】
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識する、または日常的な実験のみを使用して確認することができるだろう。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲により包含されることを意図する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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