(57)【要約】【課題】長期間の使用において安全性が高く、長期間薬を服用する必要があるうつ病患者の治療に適し、細胞内のｃＡＭＰのレベルの低下及びＤＡとＮＥの神経伝達物質の欠乏に関連する疾患の予防と治癒に適している医薬品組成物を提出すること。【解決手段】本発明は、体内の環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の含有量と利用度を急速に高めるための医薬品組成物を開示している。前記医薬品組成物は、ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分と、グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分と、ナツメの環状アデノシン一リン酸（ｊｕｊｕｂａ  ｃＡＭＰ）を含む第三主成分とを含んでなる。【選択図】図３
2015524827.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体内の環状アデノシン一リン酸の含有量と利用度を高めるための医薬品組成物であって、
ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含んでなる第一主成分；
グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含んでなる第二主成分；および
ナツメの環状アデノシン一リン酸を含んでなる第三主成分；
を含むことを特徴とする医薬品組成物。
【請求項２】
前記医薬品組成物は、
２〜２６重量部の前記ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１；
３〜４８重量部の前記甘草に関連する酸；および
０．００２〜０．５重量部の前記ナツメの環状アデノシン一リン酸；
を含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項３】
前記医薬品組成物は、
４〜１３重量部の前記ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１；
５〜１６重量部の前記甘草に関連する酸；および
０．０１〜０．１重量部の前記ナツメの環状アデノシン一リン酸；
を含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項４】
前記医薬品組成物は、薬理学的に許容される担体、添加剤又はそれらの組合せを含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項５】
前記医薬品組成物は、剤形を有し、前記剤形は、錠剤、カプセル、粉末、ピル、ダスト、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、パーティクル、滴下ピル、ロール及び薬理学的経口用量からなる群から選択される一つであることを特徴とする、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項６】
前記医薬品組成物は、体内や細胞における利用度とｃＡＭＰの含有量の低下を予防及び処理し、細胞内のｃＡＭＰ/ＰＫＡ/ＣＲＥＢ信号伝達経路を向上させ、ＢＤＮＦの発現を向上させ、ＤＡ、ＮＥ及び５ＨＴ神経伝達物質の含有量を増加させ、記憶力を増強させるために使用される薬物、健康食品及び栄養素として製造されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項７】
前記医薬品組成物は、ショウガ、ショウガ抽出物、またはそれらの組み合わせから選択される一つである第四主成分を更に含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項８】
体内の環状アデノシン一リン酸の利用度を高めるための医薬品組成物であって、
ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分；
グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分；および
ナツメの環状アデノシン一リン酸を含む第三主成分；
を含むことを特徴とする医薬品組成物。
【請求項９】
体内の環状アデノシン一リン酸の含有量を増加させるための医薬品組成物を調製する方法であって、
ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分を提供するステップ；
グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分を提供するステップ；および
前記医薬品組成物を製造するために、ナツメの環状アデノシン一リン酸を含む第三主成分を提供するステップ；
を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品組成物に関し、特に、経口薬及び健康食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９７１年にノーベル生理学・医学賞を受賞した科学者エール・ウィルバー・サザランド・ジュニア（Earl Wilbur Sutherland Jr.）は、細胞内の環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）のメカニズムを発見した。１９９２年にノーベル生理学・医学賞を受賞した科学者エドモンド・H・フィッシャー（Edmond H. Fischer）及びエドヴィン・ガーハード・クレープス（Edwin Gerhard Krebs）は、細胞内のｃＡＭＰ→ＰＫＡ（プロテインキナーゼＡ、ｃＡＭＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＰＫＡ）のメカニズムを更に発見した。２０００年にノーベル生理学・医学賞を受賞した科学者エリック・リチャード・カンデル（Eric Richard Kandel）は、さらに、細胞内のｃＡＭＰ→ＰＫＡ→ＣＲＥＢ（cAMP応答要素結合タンパク（cAMP response element-binding protein））のメカニズムを発見した。これにより、ｃＡＭＰに関する機能とヒトにおける生理学及び医学との間にある絶対的な、非常に重要な関係があることが明らかである。例えば、エリック・カンデルは、細胞内のｃＡＭＰ→ＰＫＡ→ＣＲＥＢ信号伝達経路（第二メッセンジャー信号伝達経路）に依存する、短期記憶及び長期記憶の形成のためのメカニズムを発見し、ノーベル賞を授与されて以来、科学者たちにとって、これらの結果は記憶増強薬を発明するためのキーであると考えられる。科学者は、努力を持続的に続け、急速に記憶力を強化し、学習能力を改善し、健忘症、痴呆、アルツハイマー病、パーキンソン病などの神経変性疾患を予防及び治癒し、さらに生物における低いｃＡＭＰの含有量と低いｃＡＭＰの利用度に関連する他の病気（例えばうつ病）を予防するために、脳細胞におけるｃＡＭＰ→ＰＫＡ→ＣＲＥＢ信号伝達経路を活性化する薬剤を開発することが試みられている。エール・ウィルバー・サザランド・ジュニアは、ノーベル生理学・医学賞を受賞して以来、30年以上をその研究に費やした。しかし、ヒトに対する長期間の使用、低い副作用及び高い有効性に適する医薬は、市販されていない。
【０００３】
現在の技術において、市販の抗うつ薬は、例えば選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩｓ）、セロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩｓ）、ノルアドレナリン−ドーパミン再取り込み阻害剤（ＮＤＲＩｓ）など、第一メッセンジャー神経伝達物質（例えば、５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ）、ノルエピネフリン（ＮＥ）、ドーパミン（ＤＡ）など）の再取り込みを阻害する。うつ病患者は、うつ病のない人より低い濃度の第一メッセンジャー神経伝達物質を有する。第一メッセンジャー神経伝達物質の濃度及びそれと受容体の組合せが正常レベルに接近した後、うつ病患者の細胞内のｃＡＭＰ第二メッセンジャー神経伝達物質を通常のレベルに到達することができる。しかしながら、高い副作用及び低い寛解率により、抗うつ薬は望ましくないものである。そのため、健常者は、記憶増強を目的に、長い期間に渡って抗うつ薬を服用していることを告知する報告はない。
【０００４】
アメリカ国立衛生研究所（ＮＩＨ）の国立精神衛生研究所（ＮＩＭＨ）は、６年間に３５万ドルを費やし、２８００人以上のうつ病患者に対し、５つの代表種類のＳＳＲＩ抗うつ薬（Celexa(R)、Zoloft(R)、Wellbutrin(R)、Effexor(R) 及び Buspar(R)）に関する寛解率研究を行った。調査報告書によると、各薬物についての寛解率は約３０％であり、うつ病の症状を軽減するために平均で６〜７週間を要することが示された。さらに、市販の抗うつ薬は、自殺率の増加、頭痛、めまい、不眠、過眠、耳鳴り、のどの渇き、嫌食、食欲の増加、体重増加、血圧上昇、胃の不調、逆流吐き気、嘔吐、消化不良、下痢、便秘、脚の痛み、皮膚の発疹、ディザ、痙攣、多汗、浮腫、性欲喪失及び性交不能などの異なる程度の副作用を呈する。近年、Prozac(R)などの抗うつ薬は、深刻な社会問題となっている。アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）は、２００４年に、３２種類の主要な抗うつ薬の副作用と警告が明らかになるために製薬企業が製品のラベルを改訂する必要があることを更に命令し、これらの抗うつ薬は子供や青年の自殺率が増加する可能性があることを医師や看護師に強調した。
【０００５】
長年にわたり、世界的な製薬業界の科学者は、低い副作用で、より安全で有効な薬剤を開発することに継続的に努めていた。前記薬剤は、細胞内のｃＡＭＰのレベル低下に関連する疾患を予防と治療するために、第一メッセンジャー神経伝達物質の受容体に直接機能でき、細胞内のｃＡＭＰ第二メッセンジャー神経伝達物質の生産と利用度をより迅速に増加させることができる。ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）の阻害剤であるRolipram(R)は、受容体後機序の媒介薬物に属する。実験結果によると、細胞内に生成されたｃＡＭＰがＰＤＥ４によって分解されるため、Rolipram(R)は、有意な抗うつ効果を有することを示す。即ち、ｃＡＭＰの利用度は、ＰＤＥ４を阻害することによって増加される。しかし、Rolipram(R)は、激しい嘔吐などの副作用を引き起こす可能性があるため、広く投与されていない。
【０００６】
本発明の発明者らは、従来技術の欠陥を解決するために、三つの天然植物（すなわち人参、甘草及びナツメ）を原料として用いて調製された医薬品組成物を開発した。本発明の医薬品組成物は、細胞内のｃＡＭＰのレベルを増加させるだけでなく、ｃＡＭＰの分解を減少させ、ｃＡＭＰの利用度を増加させ、脳内のＤＡとＮＥの神経伝達物質の濃度を増加させるために、ＰＤＥ４を阻害する。本発明の医薬品組成物は、長い期間の使用に安全性が高く、長い期間に薬を服用する必要があるうつ病患者の治療に適し、細胞内のｃＡＭＰのレベルの低下及びＤＡとＮＥの神経伝達物質の欠乏に関連する疾患の予防と治癒に適している。しかし、ｃＡＭＰの生成と利用度を向上できる成分の有効量は、各バッチの天然植物で異なり、例えば、成長期、原産地、収穫時期、保存方法、気候変動、温度、降雨、日光暴露などの要因によって異なる。したがって、より明確な及びより多くの量の活性成分を制御及び処方することができるため、医薬品組成物の有効性および安全性は、医薬品組成物の各バッチに一つずつで一貫性を維持し、医薬品組成物の品質管理（化学、製造と制御（ＣＭＣ））を改善する。更に、活性成分のうちのジンセノサイドの種類がより明確にすることができる場合には、原料が取得された範囲を広げることができ、原料の供給を低下させることはない。即ち、人参の根茎と葉に加えて、他の植物の部分（例えば、田七人参（Panax notoginseng）と西洋人参（panax quinquefolius））は、ジンセノサイドの様々なタイプを含む。したがって、本発明の発明者らは、医薬品組成物の品質管理（ＣＭＣ）を促進し、原料が取得された出処を広げるために、継続的に独自の研究結果に基づいて、より明確に定義された主な有効成分とそのメカニズムを検索することに努めて来た。発明者らは、より明確に定義された主要な有効成分を有する医薬品組成物を開発した。その医薬品組成物は、ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１、グリシルリジン酸（グリシルレチン酸）及びナツメｃＡＭＰを含む受容体後機序の媒介薬物である。ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の発現を増強させるための主要な活性成分である。
【０００７】
しかし、ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１に加えて、植物の根茎及び葉（例えば、人参、田七人参、西洋人参など）に含まれる他のタイプのジンセノサイドが、ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１の供給／不足を解決するために使用されている場合には、上記医薬品組成物の有効性を達成するために、天然植物における主要な活性成分の利用度をさらに高め、コストを低減することができる。また、上記医薬品組成物は、甘草に関連する酸を含むため、嘔吐を起こしやすい人は、甘草を服用すると、嘔吐の症状を誘発する。この問題は、古代から伝統的な中医師によって確認された。
【０００８】
したがって、本発明者らの発明は、従来技術における上記の制限に対処する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従来技術の欠点を克服するために、本発明は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための医薬品組成物を開示している。前記医薬品組成物は、ジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）、グリシルリジン酸及びナツメｃＡＭＰを主要な活性成分として含む。特に、本発明は、経口医薬または健康食品を開示し、製品の安定品質を提供し、ＢＤＮＦの発現向上させることにより、ｃＡＭＰ/ＰＫＡ/ＣＲＥＢ信号伝達経路を強化し、天然の植物における主要な活性成分の利用可能性を増加させ、コストを低減することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の医薬品組成物の仕組みは、本発明の発明者らの努力の結果である。従来技術において、ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１は、生命体におけるＢＤＮＦの発現を増加させることができることを証明しているので、関連する医薬品の主な活性成分として開発することができる。しかし、ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１は、現在の技術を用いて、人工的に合成することができないため、発明者らは、人参、田七人参、西洋人参などの天然植物の根、茎及び葉から取得する必要がある。ジンセノサイドは、３０種類以上があるため、天然植物における主要な活性成分の利用度をさらに高め、コストを低減するために、発明者らは、ジンセノサイドＲｅをジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１に組み込み、更にグリシルリジン酸（あるいはグリシルレチン酸）及びナツメｃＡＭＰと組み合わせて、主要な活性成分として医薬品組成物を調製する。相当な数の実験完了した後、本発明の医薬品組成物は、正常ラットに投与されてから８時間後に、ラットにおける海馬体におけるｃＡＭＰの濃度を増加させ、ＰＫＡの活性を高め、ＣＲＥＢリン酸化のレベルを促進し、ＰＤＥの活性を阻害することができることが証明された。長期反復性ストレス実験において、医薬品組成物を投与したマウスにおけるｃＡＭＰ濃度、ＰＫＡ活性、ＣＲＥＢリン酸化の発現及びＢＤＮＦの発現は、投与しない対照群のマウスよりも有意に高かった。投与したマウスの海馬体におけるｃＡＭＰおよびＰＫＡの発現、血清中のＢＤＮＦ及び視床下部におけるモノアミン神経伝達物質（例えば、５−ＨＴ、ＮＥ、ＤＡなど）は、投与しない対照群のマウスよりも有意に高い。したがって、本発明における医薬品組成物は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めることができることが証明された。なお、本発明における医薬品組成物は、従来技術と比べて、優れた有効性を示し、天然植物における主要な活性成分の利用度を増加させ、コストを削減し、品質管理（即ちＣＭＣ）を効果的に行うことができることは明らかである。更に、本発明における医薬品組成物は、長い期間の使用に安全性が高く、長い期間に薬を服用する必要があるうつ病患者の治療に適し、細胞内のｃＡＭＰのレベルの低下及び脳内のＤＡとＮＥの神経伝達物質の欠乏に関連する疾患（例えば、健忘症、認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病などの神経変性疾患、乾癬、癌などの患者自分の体や細胞における低いｃＡＭＰの発現がある病気）の予防と治癒に適している。医薬品組成物は、甘草に関連する酸を含むため、嘔吐を起こしやすい人は甘草を服用する場合、（古代から伝統的な中国人医師によって確認された問題である）嘔吐の症状を誘発することができる。それにもかかわらず、中国人医師は、古代からショウガが優れた制吐薬食品であることも確認した。したがって、従来技術の欠点を改善するために、ショウガ粉末又はその抽出物は、本発明の医薬品組成物に更に添加され得る。
【００１１】
本発明は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための医薬品組成物を開示している。前記医薬品組成物は、ジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）、グリシルリジン酸、ナツメｃＡＭＰ及びその他を含む。
【００１２】
本明細書及び特許請求の範囲に記載の医薬品組成物が生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めることができることは本発明の中核的な内容である。本発明は、公開された後、当業者は、一般的な技術を用いて、上記薬物を変性することができる。これは、当業者の通常の技術的活動である。したがって、任意の置換も本発明の保護範囲に含まれる。
【００１３】
本発明の上記目的及び利点は、当業者にとって、以下の詳細な説明を検討し、添付の図面を参照した後、より容易に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の好ましい第一実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。
【図２】本発明の好ましい第二実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。
【図３】本発明の好ましい第三実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。
【図４】本発明の好ましい第四実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。
【図５】医薬品組成物をラットに投与し、８時間後にラットの海馬体におけるｃＡＭＰレベルを示す図である。
【図６】ｃＡＭＰ−依存 ＰＫＡの活性を示すゲル電気泳動写真である（左から右まで、レーン１−４：生理食塩水、レーン５−８：パロキセチン、レーン９−１１：実施例１、レーン１２：陽性対照、レーン１３：陰性対照）。
【図７】医薬品組成物をラットに投与し、８時間後にラットの海馬体におけるｃＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性を示す図である。
【図８】医薬品組成物をラットに投与し、８時間後にラットの海馬体におけるｐ−ＣＲＥＢレベルを示す図である。
【図９】実施例１の繰り返しストレスを受けたマウスの海馬体におけるｃＡＭＰ濃度に対する効果を示す。
【図１０】実施例１の慢性的にストレスを受けたマウスの海馬体におけるＰＫＡの活性に対する効果を示す。
【図１１】実施例１の慢性的にストレスを受けたマウスの海馬体におけるＣＲＥＰリン酸化に対する効果を示す。
【図１２】実施例１の慢性的にストレスを受けたマウスの海馬体におけるＢＤＮＦレベルに対する効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下に、本発明を実施例に基づいて詳述するが、あくまでも例示であって、本発明の範囲はこれらの実施形態に限定されない。本発明の範囲は、特許請求の範囲に記載されており、さらに特許請求の範囲の記載と均等な意味及び範囲内での全ての変更を含んでいる。
【００１６】
以下、本発明の目的を達成するために、本発明の技術的なスキームを、具体的に説明する。
【００１７】
本発明は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための医薬品組成物を開示している。前記医薬品組成物は、ジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）、グリシルリジン酸及びナツメｃＡＭＰを含む主要な活性成分を用いて調製される。
【００１８】
実施例１
本発明に係る医薬品組成物は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるために、ジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）、グリシルリジン酸又はグリシルレチン酸及びナツメｃＡＭＰを含む原料を用いて調製される。
【００１９】
実施例２
本発明に係る医薬品組成物は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるために、２〜２６重量部の前記ジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）と、３〜４８重量部の前記グリシルリジン酸又はグリシルレチン酸と、０．００２〜０．５重量部の前記ナツメの環状アデノシン一リン酸と、を含む原料を用いて調製される。
【００２０】
実施例３
本発明に係る医薬品組成物は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるために、４〜１３重量部の前記ジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）と、５〜１６重量部の前記甘草に関連する酸と、０．０１〜０．１重量部の前記ナツメの環状アデノシン一リン酸と、を含む原料を用いて調製される。
【００２１】
実施例４
本発明に係る医薬品組成物は、ショウガ水抽出物を更に含んでいてもよい。
【００２２】
実施例５
本発明に係る医薬品組成物は、薬理学的に許容される担体又は添加剤を含んでもよく、例えば、錠剤、カプセル、粉末等として、薬学的に知られている経口医薬剤形で製造することができる。
【００２３】
実施例６
本発明に係る医薬品組成物は、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高める医薬品、健康食品または栄養補助食品として製造することができる。
【００２４】
以下、本発明の目的を達成するために、医薬品組成物の調製方法を記載する。
【００２５】
方法１
本発明において、ジンセノシド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）、グリシルリジン酸（あるいはグリシルレチン酸）及びナツメｃＡＭＰを含む抽出物は、それぞれ人参、甘草及びナツメから原料として抽出され、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるように、医薬品組成物として製造される。あるいは、準備されたジンセノシド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）、グリシルリジン酸（あるいはグリシルレチン酸）及びナツメｃＡＭＰを含む原料は、本発明の医薬品組成物として製造される。
【００２６】
方法２
本発明に係る医薬品組成物は、２〜２６重量部のジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）と、３〜４８重量部のグリシルリジン酸（あるいはグリシルレチン酸）と、０．００２〜０．５重量部のナツメｃＡＭＰと、を含む原料として製造される。
【００２７】
方法３
本発明に係る医薬品組成物は、４〜１３重量部のジンセノサイド（Ｒｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ）と、５〜１６重量部のグリシルリジン酸（あるいはグリシルレチン酸）と、０．０１〜０．１重量部のナツメｃＡＭＰとを含む原料として製造される。
【００２８】
方法４
本発明に係る医薬品組成物は、ショウガ水抽出物を更に含んでいてもよい。
【００２９】
方法５
本発明に係る医薬品組成物は、薬理学的に許容される担体又は添加剤を含んでもよく、例えば、錠剤、カプセル、粉末等として、薬学的に知られている経口医薬剤形で製造することができる。
【００３０】
方法６
本発明に係る医薬品組成物は、食品管理基準や生産健康食品のメソッド/製造基準に従って、原料を用いて、生命体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高める健康食品や栄養補助食品として製造することができる。
【００３１】
［好ましい実施形態］
本発明は、好ましい実施形態と図面を組み合わせることにより、次のように説明される。
【００３２】
実施形態１
図１を参照されたい。図１は、本発明の好ましい第一実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。図１において、７０％エタノール溶液を用いて、４０ｋｇの人参を破砕し、熱で抽出する。エタノール抽出物を分離し、カラムクロマトグラフィーを用いて、精製及び乾燥させ、２７０ｇのジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ（４８．４ｇのＲｇ１、１７６．９ｇのＲｂ１及び４４．７ｇのＲｅ）を含む人参抽出物（１．４２ｋｇ）を得る（ステップ１０１）。さらに、１５ｋｇの甘草を破砕して、室温で１２時間浸漬する。浸漬された甘草を、煎出及びエタノール沈殿を用いて抽出し、濃縮及び乾燥し、３０７ｇのグリシルリジン酸を含む甘草抽出物（３．１ｋｇ）を得る（ステップ１０２）。また、１０Ｋｇのナツメを破砕した後、室温で水に浸し、その後、浸漬されたナツメを、煎出及びエタノール沈殿法を用いて抽出し、ナツメ抽出物を得る。更に、分離マクロ多孔性樹脂ＯＵ−２とＭＥ−２を使用して、ナツメ抽出物を順次に吸収及び分離し、そして乾燥させ、０．７５２ｇのナツメｃＡＭＰを含むナツメ抽出物（４０ｇ）を得て（ステップ１０３）、本発明の医薬品組成物を調製するための原料として作用する。その後、１４４ｇの人参抽出物、３００ｇの甘草抽出物及び３．６ｇのナツメ抽出物を上記粉砕して混合し、４４７．６ｇの医薬品組成物を取得する（ステップ１０４）。本発明における実施形態１の前記医薬品組成物は、２７．４ｇのジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅと、２９．７ｇのグリシルリジン酸と、０．０６７ｇのナツメｃＡＭＰを含む。
【００３３】
実施形態２
図２を参照されたい。図２は、本発明の好ましい第二実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。図２において、実施形態１から得られた１２０ｇの人参抽出物（ステップ２０１）、２００ｇの甘草抽出物（ステップ２０２）と、０．５ｇのナツメ抽出物（ステップ２０３）を粉砕及び混合し、３２０．５ｇの医薬品組成物を取得する（ステップ２０４）。本発明における実施形態２の前記医薬品組成物は、２２．８ｇのジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅと、１９．８ｇのグリシルリジン酸と、０．００９ｇのナツメｃＡＭＰを含む。
【００３４】
実施形態３
図３を参照されたい。図３は、本発明の好ましい第三実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。図３において、調製された３．６ｇのジンセノサイドＲｇ１（純度９０％）（ステップ３０１）、３．２ｇのジンセノサイドＲｅ（純度９０％）（ステップ３０２）及び１５．６ｇのジンセノサイドＲｂ１（純度９０％）（ステップ３０３）と、２６ｇのグリシルレチン酸（純度９６％）（ステップ３０４）と、実施形態１から得られた１０ｇのナツメ抽出物（ステップ３０５）と、を粉砕及び混合し、５８．４ｇの医薬品組成物を取得する（ステップ３０６）。本発明における実施形態３の前記医薬品組成物は、２２．４ｇのジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅと、２６ｇのグリシルリジン酸と、０．１８８ｇのナツメｃＡＭＰを含む。
【００３５】
実施形態４
図４を参照されたい。図４は、本発明の好ましい第四実施形態に関する医薬品組成物の調製方法を示すフローチャートである。図４において、本発明に係る実施形態１から得られた１００ｇの医薬品組成物（ステップ４０１）を、３５ｇの市販のショウガ抽出物（ステップ４０２）と混合し、１３５ｇの本発明における実施形態４の医薬品組成物を取得する（ステップ４０３）。
【００３６】
実験例１：実施形態１の医薬品組成物を正常ラットに投与してから８時間後のｃＡＭＰ/ＰＫＡ/ＣＲＥＢ信号伝達経路に影響を与える動物実験。
【００３７】
常ラットは胃内に実施形態１の薬剤を投与してから８時間後に、それらの海馬体を取り出す。ｃＡＭＰ及び海馬におけるホスホ−ＣＲＥＢ（ｐ−ＣＲＥＢ）のレベルの変化は、酵素結合免疫吸着試験（enzyme-linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）を用いて測定される。ｃＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性変化は、生物発光法（Bioluminescent Assay）を用いて測定される。ＰＤＥ（ホスホジエステラーゼ）の活性変化は、蛍光法を用いて測定される。実施形態１の医薬品組成物を投与してから８時間後、分子薬理学的メカニズムを示す。そのメカニズムについては、ｃＡＭＰ濃度が短い時間の間に上昇して、ＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性を高め、ＣＲＥＢリン酸化のレベルを促進し、海馬体におけるＰＤＥ活性を阻害する。実験データを統計的に分析して、オリジンＰｒｏ７．５ソフトウェアを用いてプロットする。
【００３８】
１、実験材料：
１．１実験動物：体重１８０〜２００ｇの健康な雄性のＳＤラット（７０匹）は、北京維通利華実験室（Vital River Laboratories；ＶＲＬ）から購入した。
【００３９】
１．２試薬：
陽性対照薬：抗うつ薬パロキセチン塩酸塩（ロット番号：08030078、中美天津史克製藥有限公司製）；ParameterTM  Cyclic AMP アッセイキット  KGE002（米国R＆D Systems社製）； DUOSET  IC  ヒト/マウス/ラット Phospho-CREB (S133) ELISA Kit  DYC2510-2（米国R＆D Systems社製）；cAMP-Dependent プロテインキナーゼキット  V5340（米国Promega社製）；PDE-GloTM ホスホジエステラーゼアッセイキット  V1361（米国Promega社製）； PierceTM BCA プロテインアッセイキット23227（米国ピアスバイオテクノロジー製）。ｃＡＭＰ及びアデノシンなどの標準試薬は、中国薬品生物製品検定所から購入した。NaH2PO4、Na2HPO4、KH2PO4、KCl、NaCl、MgCl2、Tris Base、Tris-HClなどの試薬は、細胞培養グレードのための生化学試薬であり、米国Sigma社から購入した。E-64、アプロチニン、ロイペプチン、ペプスタチンA、フェニルメチルスルホニルフルオライド（PMSF）、NaF、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、エチレングリコール四酢酸（EGTA）、ジチオスレイトール（DTT）、NaVO4、ピロリン酸ナトリウム、アガロース、グリセロールなどの試薬は、高純度グレードであり、カナダBioBasic社から購入した。アセトニトリルとメタノール（HPLCグレード）は、ドイツメルク社から購入する。超純水は、Milli-Q(R)の純水である。医薬品組成物は、実施形態１の医薬品組成物である。
【００４０】
１．３実験装置：FlexStation（登録商標）3  マルチモードマイクロプレートリーダー（米国Molecular Devices社製）；Waters（登録商標）600E  高速液体クロマトグラフィー（クォータナリポンプ、オンライン脱ガス器、オートサンプラー、カラムオーブン、及びＵＶ検出器を含み、米国ウォーターズ社製）；冷蔵遠心分離機（米国Backmen Coulter社製）；電子超音波ホモジナイザー（米国超音波テクノロジー社製）；電気泳動装置（中国北京六一儀器廠製）；ゲルイメージャー（SYN GENE社製）；超低温フリーザー（日本三洋電機株式会社製）；mLineシングルチャンネルピペットと８チャンネルピペット（フィンランドBiohit社製）。
【００４１】
２．投薬
３日間の適応給餌の後、ラットを無作為に３群に分け、「グループＡ  生理食塩水」、「グループＢ  パロキセチン」及び「グループＣ・実施形態１」に標識する。パロキセチン塩酸塩の錠剤を粉砕し、超純水を使用して、特定の濃度の懸濁液に製剤化する。ラットの胃内に投与される量は、一匹のラット当たり５ｍｇ／ｋｇである。実施形態１の医薬品組成物は、超純水を使用して、特定の濃度で溶液に製剤化する。そしてラットの胃内に投与される量は、一匹のラット当たり５０ｍｇ／ｋｇである。グループＡのラットは、等容積の０．９％の生理食塩水を投薬する。投薬の前に、全てのラットを秤量し、ピクリン酸でマークし、すべての薬剤は、予め３０分間に３７℃で加熱した後に投薬した。
【００４２】
３．組織採集
グループＡ、Ｂ及びＣにおける実験動物が投与されてから８時間後、ラットをエチルエーテルで麻酔し、それらの大腿動脈からの出血により犠牲にされた。ラットの頭を除去して、氷上で脳を回収し、海馬体を採取し、三つの部分に分ける。各部分は、着色されたスクリューキャップを付し、予め標識を施し、１．５ｍｌのクライオチューブに入れ、正確に秤量し、１５分間迅速に液体窒素中で凍結させ、その後の使用のために、−８０℃の冷蔵庫に保存した。
【００４３】
４．サンプル測定
４．１ラットの海馬体におけるｃＡＭＰのレベルの測定
海馬体組織のサンプルが解凍され、少量の生理食塩水で洗浄された後、キットにより提供される（濃縮液を使用するため、５倍に希釈した）細胞溶解液が１：２０の比（ｇ：ｍｌ）でサンプルに添加された。前記サンプルは、３０秒間に電子超音波ホモジナイザーで均質化され、４℃で５分間に１００００ｒｐｍで遠心分離された。得られた上澄液は、着色されたスクリューキャップを付し予め標識を施し、１．５ｍｌのクライオチューブに入れ、テストのために、アイスボックス中に保存した。前記サンプルは、 ParameterTM Cyclic AMP Assay ELISA kit（米国R＆D Systems社製）を用いて測定した。前記サンプルは、室温に解凍し、サンプル中のｃＡＭＰレベルは、競合ELISAを用いて測定する。サンプルの光学密度（ＯＤ）の値は、マルチモードマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定し、サンプル中のｃＡＭＰレベルを標準曲線に従って計算した。
【００４４】
４．２ラットの海馬体におけるｃＡＭＰ−依存 ＰＫＡの活性の測定
海馬体組織のサンプルが解凍され、少量の生理食塩水で洗浄された後、（製造業者のマニュアルの処方に従って調製した）ＰＫＡ抽出緩衝液が１：１０の比（ｇ：ｍｌ）でサンプルに添加される。前記サンプルは、３０秒間に電子超音波ホモジナイザーで均質化され、４℃で５分間に１００００ｒｐｍで遠心分離される。得られた上澄液は、予め標識を施す１．５ｍｌの有色エッペンドルフチューブに入れ、テストのために、アイスボックス中に保存した。サンプルは、ｃＡＭＰ−依存プロテインキナーゼキット（米国Promega社製）で非放射性検出のためのPepTag（登録商標）分析を用いて測定した。そのキットの取扱説明書に従って、予混合試薬を２００μＬの８連ＰＣＲチューブに添加し、９μＬの各サンプルを、対応する予め標識のチューブに添加した。それらのチューブは、ボルテックス及び遠心分離し、室温で３０分間に反応させた後、ＰＣＲ装置に入れ、5分間に９８℃で酵素を失活させた。陽性対照及び陰性対照は、試験したサンプルと一緒に、取扱説明書に従って決定した。０．８％アガロースゲルを調製し、酵素変性後の各サンプルを１０μＬを取って、アガロースゲルの孔に注入し、電気泳動を３０分間に１００Ｖ、１３０ｍＡで行った。電気泳動緩衝液は、５０ｍＭ Tris-HCl（ｐＨ８．０）緩衝液である。電気泳動の後、アガロースゲルを装置から取って、ゲルイメージャーで撮影した。前記アガロースゲルは、ＵＶ分析器上に配置する。リン酸化PepTag（登録商標） Ａ１ペプチドスポットを切断し、着色されたスクリューキャップを付く及び予め標識を施す、１．５ｍｌのクライオチューブに入れる。前記アガロースゲルを加熱溶融した後、超純水を２５０μＬの容量まで添加した。１２５μｌのホットアガロースを速やかに予め標識した別の１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移し、７５μＬのゲルの可溶化溶液と50μＬの氷酢酸を加えてボルテックスし、得られた混合物を２００μＬを取って、96穴型マイクロプレートに加えた。陰性対照の正極に向かうアガロースは、空白対照とし、マルチモードマイクロプレートリーダーで蛍光分析を行い、５８６ｎｍの励起波長及び５９２ｎｍの発光波長を設定し、サンプルの蛍光強度をＰＫＡ活性を指す。
【００４５】
４．３ラットの海馬体におけるｐ−ＣＲＥＢレベルの測定
サンプルは、DuoSet IC  ヒト/マウス/ラット  Phospho-CREB（S133）ELISAキット（米国R＆D  Systems社製）を用いて測定した。海馬体組織のサンプルが解凍され、少量の生理食塩水で洗浄された後、（製造業者のマニュアルにIC DELUENT 6#に従って調製した）組織均質化溶液が１：２０の比（ｇ：ｍｌ）でサンプルに添加された。前記サンプルは、３０秒間に電子超音波ホモジナイザーで均質化され、４℃で５分間に１００００ｒｐｍで遠心分離された。得られた上澄液は、予め標識を施す１．５ｍｌの有色エッペンドルフチューブに入れ、テストのために、アイスボックス中に保存した。前記サンプルは、室温に解凍し、サンプル中のｐ−ＣＲＥＢレベルは、サンドイッチELISAを用いて測定する。サンプルの光学密度（ＯＤ）の値は、マルチモードマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定し、サンプル中のｐ−ＣＲＥＢレベルを標準曲線に従って計算した。
【００４６】
４．４ラットの海馬体における総タンパク量の測定
より正確にサンプルに含まれるタンパクのミリグラムあたりのｐ−ＣＲＥＢタンパク質の量を計算するためには、サンプル中の総タンパク量を測定することが必要である。ｐ−ＣＲＥＢ測定実験における均質化と遠心分離の後に得られた上澄液を取って、ＰＢＳで２５倍に希釈し、試験サンプルとして調製した。PierceTM BCA プロテインアッセイキットの取扱説明書に従って、サンプルのＯＤ値は、マルチモードマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定し、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準とし、サンプル中の総タンパク量を標準曲線に従って測定した。
【００４７】
４．５ＰＤＥ活性の測定
PDE-GloTM  ホスホジエステラーゼアッセイキット（米国Promega社製）で生物発光法を用いて、ラットの海馬体におけるＰＤＥ活性に対する実施形態１の医薬品組成物の影響を測定する。
【００４８】
４．５．１薬液の調製
実施形態１の医薬品組成物は、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ及び１．０ｍｇ／ｍｌの濃度に調製する。
【００４９】
４．５．２サンプルの調製
特定量の海馬体組織は、少量の生理食塩水で洗浄された後、PDE-GloTM反応緩衝液（４０ｍＭのTris-HCl、１０ｍＭのMgCl2、０．１μＭ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭのＰＭＳＦ、２μＭ／ｍｌのロイペプチン、２μＭ／ｍｌのアプロチニン、２μＭ／ｍｌのＥ−６４）が１：１０の比（ｇ：ｍｌ）で海馬体組織に添加された。得られた混合物は、電子超音波ホモジナイザーを用いて均質化され、４℃で３０分間に１４０００ｒｐｍで遠心分離される。得られた上澄液は、酵素溶液として使用した。
【００５０】
４．５．３生物発光法のプロトコル
プロトコルは、取扱説明書に提供される方法に従って行った。酵素反応液としては、１μＬ薬液は、１．５μＬの酵素溶液に添加し、総容量２．５μＬの混合溶液になった。２μモルのｃＡＭＰを含む２．５μLの基質溶液は、２．５μＬの混合溶液に加えて混合し、３０分間に３７°Cで反応させた。次に、（強力なＰＤＥ阻害剤である）３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含む２．５μＬの停止溶液は、混合溶液に添加して混合した。２．５μＬの試験溶液は、混合溶液に添加して混合し、反応混合溶液は、２０分間に室温で反応させた。最後に、１０μＬの発光試薬を反応混合物に添加し、１０分間に室温で反応させる。生物発光は、マルチモードマイクロプレートリーダーを用いて測定した。
【００５１】
５．実験結果
５．１ラットの海馬体におけるｃＡＭＰレベル
ラットの海馬体のホモジネート中のｃＡＭＰ濃度は、ＥＬＩＳＡ分析法を用いて測定し、組織サンプルの重量で割ることにより、海馬体組織に含まれるｃＡＭＰレベルを得られた。ｃＡＭＰレベルは、pmol / g 組織で表す（図５を参照）。
【００５２】
図５を参照されたい。実施形態１群は、生理食塩水群とパロキセチン群と比べて、ラットの海馬体組織におけるｃＡＭＰレベルが有意に増加する（* Ｐ＜０．０５、ｎ＝１０）。
【００５３】
５．２ラットの海馬体におけるｃＡＭＰ−依存 ＰＫＡの活性
酵素反応の後、サンプルは、アガロースゲル電気泳動を使用して解決し、ゲルイメージャーを使用して発展し、そして概略分析を行う。
【００５４】
図６を参照されたい。リン酸化Ａ１ペプチドは、負電荷を有し、正電極に向かって移行する。非リン酸化Ａ１ペプチドは、正電荷を有し、負電極に向かって移行する。これら二つのペプチドは、互いから分離している。リン酸化Ａ１ペプチドスポットの明るさが強い（正電極に向かって移行する）場合、リン酸化レベル及びｃＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性は、試料中に高いことを示している。図６に示すように、実施形態１群内のスポットの明るさは、生理食塩水群とパロキセチン群より強い。
【００５５】
アガロースゲル上のスポットを切断及び溶融し、溶融したゲルの体積を測定する。ラットの海馬体におけるｃＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性は、蛍光アッセイを用いて測定し、蛍光強度（図７参照）として表す。
【００５６】
図７を参照されたい。投与から８時間後、実施形態１群は、空白対照群とパロキセチン群と比べて、ラットの海馬体組織におけるｃＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性が有意に増加する（* Ｐ＜０．０５、ｎ＝１０）。
【００５７】
５．３ラットの海馬体におけるｐ−ＣＲＥＢレベル
ラットの海馬体サンプルのホモジネート中の総タンパク質の濃度は、総タンパクのμｇ当たりのｐ−ＣＲＥＢの量を算定するために、ＢＣＡ法を用いて測定する。次に、ラットの海馬体サンプルのホモジネート中のｐ−ＣＲＥＢ濃度は、サンドイッチＥＬＩＳＡ分析法を用いて測定した。ｐ−ＣＲＥＢ濃度（ｐｇ）／総タンパク質濃度（μｇ）は、ラットの海馬体におけるｐ−ＣＲＥＢレベルを表す（図８のデータを参照する）。
【００５８】
図８を参照されたい。投与から８時間後、実施形態１群は、生理食塩水群とパロキセチン群と比べて、ラットの海馬体組織におけるｐ−ＣＲＥＢレベルが有意に増加する（ｎ＝１０）。
【００５９】
５．４ラットの海馬体におけるＰＤＥ活性に対する医薬品組成物の影響
ラットの海馬体におけるＰＤＥ活性及び生体外での投与後のＰＤＥ活性に対する阻害は、生物発光分析法を用いて測定する。光度は、ＰＤＥ活性として表し、対照群と比較して、高い光度が高いＰＤＥ活性を示し、低い光度がＰＤＥ活性をすることを示す。測定結果は、実施形態１群の医薬品組成物（０．５ｍｇ／ｍｌ）は、空白対照群とパロキセチン群と比べて、ラットの海馬体組織におけるＰＤＥ活性が有意に阻害される（* Ｐ＜０．０５、ｎ＝４）。
【００６０】
６．結論
（１）ラットを投与してから８時間後、実施形態１群は、生理食塩水群とパロキセチン群と比べて、ラットの海馬体組織におけるｃＡＭＰレベルが有意に増加し、ｃＡＭＰ−依存ＰＫＡの活性が有意に増加し。ｐ−ＣＲＥＢレベルも有意に増加していた。
【００６１】
（２）実験では、実施形態１の医薬品組成物は、第二メッセンジャーｃＡＭＰ信号伝達経路を介して、その薬理学的機能を実行することができ、かつ投与から８時間後のｃＡＭＰ−ＰＫＡ−ＣＲＥＢ（ｐ−ＣＲＥＢ）経路を迅速に起動させることができる（生理食塩水群とパロキセチン群と比べて有意差（* Ｐ＜０．０５）を呈した）。
【００６２】
（３）投与から８時間後、陽性対照薬であるパロキセチンは、ｃＡＭＰ−ＰＫＡ−ＣＲＥＢ（ｐ−ＣＲＥＢ）伝達経路を起動させることができない。
【００６３】
（４）実験結果では、ＰＤＥの活性は、実施形態１の中用量の医薬品組成物によって有意に阻害されることを示す。ＰＤＥは、ｃＡＭＰに対する不活性化酵素であるため、ＰＤＥの阻害はラットの海馬体におけるｃＡＭＰレベルの増加を引き起こすことができる。
【００６４】
実験例２：慢性的にストレスを受けたマウスが１０日間に実施形態１の医薬品組成物を投与した後、ｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ信号伝達経路及びＢＤＮＦの発現に影響を与えるための動物実験である。
【００６５】
１．ストレスを繰り返し受けたマウスの海馬体におけるｃＡＭＰ濃度に対する実施形態１の医薬品組成物の効果（図９参照）
【００６６】
図９における結果は、実施形態１の医薬品組成物を投与したマウスの海馬体におけるｃＡＭＰ濃度は、投与しない対照群に比べて、有意に高いことを示す（* Ｐ＜０．０５）。
【００６７】
２．ストレスを繰り返し受けたマウスの海馬体おけるＰＫＡ活性に対する実施形態１の医薬品組成物の効果（図１０参照）
【００６８】
図１０における結果は、実施形態１の医薬品組成物を投与したマウスの海馬体におけるＰＫＡ活性は、投与しない対照群に比べて、有意に高いことを示す（*Ｐ＜０．０５）。
【００６９】
３．ストレスを繰り返し受けたマウスの海馬体おけるＣＲＥＢリン酸化に対する実施形態１の医薬品組成物の効果（図１１参照）
【００７０】
図１１における結果は、実施形態１の医薬品組成物を投与したマウスの海馬体におけるＣＲＥＢリン酸化は、投与しない対照群に比べて、有意に高いことを示す。
【００７１】
４．ストレスを繰り返し受けたマウスの海馬体おけるＢＤＮＦの発現に対する実施形態１の医薬品組成物の効果（図１２参照）
【００７２】
図１２における結果は、実施形態１の医薬品組成物を投与したマウスの海馬体におけるＢＤＮＦの発現は、投与しない対照群に比べて、有意に高いことを示す。
【００７３】
実験例３：慢性的にストレスを受けたラットが２１日間、実施形態１の医薬品組成物を投与した後、海馬体のｃＡＭＰ、ＰＫＡ、血清ＢＤＮＦ、及び視床下部のＮＥ、ＤＡおよび５−ＨＴの発現に影響を与えるための動物実験である。
【００７４】
１．ストレスを慢性的に受けたラットの海馬体におけるｃＡＭＰ濃度に対する実施形態１の医薬品組成物の効果（表１参照）
【表１】
2015524827.tif 000003
【００７５】
２．ストレスを慢性的に受けたラットの海馬体におけるＰＫＡレベルに対する実施形態１の医薬品組成物の効果（表２参照）
【表２】
2015524827.tif 000004
【００７６】
３．ストレスを慢性的に受けたラットの血清ＢＤＮＦレベルに対する実施形態１の医薬品組成物の効果（表３参照）
【表３】
2015524827.tif 000005
【００７７】
４．ストレスを慢性的に受けたラットの視床下部のモノアミン神経伝達物質の発現に対する実施形態１の医薬品組成物の効果（表４参照）
【表４】
2015524827.tif 000006
【００７８】
５．結論
実施形態１の医薬品組成物を投与したマウスの海馬体のｃＡＭＰとＰＫＡ、血清ＢＤＮＦ、及び視床下部におけるモノアミン神経伝達物質（ＮＥ、ＤＡと５−ＨＴ）の発現は、投与しない対照群に比べて、有意に高いことを示す（*Ｐ＜０．０５）。
【００７９】
実験例４：実施形態１の抗うつ薬理学の動物実験
１、動物行動学実験：
本発明者は、うつ病の発症機序と臨床症状に基づいて、マウスの尾の吊り下げ実験、ラットに対する強制水泳実験、マウスに対する強制水泳実験、ラットに対する予測できない長期的な刺激実験、ラットと他の動物に対する嗅球損傷実験を含む動物行動学実験を実施する。
【００８０】
１．１実施形態１の医薬品組成物は、一週間に、マウスの胃内に２０ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日及び８０ｍｇ／ｋｇ／日の用量（ラットの場合、１５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日及び６０ｍｇ／ｋｇ／日の用量）で投与し、実験的なうつ病に対する効果を決定する。中用量群（マウスの４０ｍｇ／ｋｇ／日とラットの３０ｍｇ／ｋｇ／日）及び陽性対照群（パロキセチン）は、マウスの尾の吊り下げ実験、ラットに対する強制水泳実験及びマウスに対する強制水泳実験における無運動時間が有意に短くなることを実証した。このデータは、対照群と比較して統計的に有意な差を示す（*Ｐ＜０．０５）。
【００８１】
１．２実施形態１の医薬品組成物は、胃の慢性予測不可能な軽度ストレス（chronic unpredictable mild stress 、ＣＵＭＳ）モデルにより、１５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日及び６０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で２１日間、連続してラットに投与する。結果は、正常群に比べて、ＣＵＭＳモデルラット群の体重が徐々に増加し、ショ糖消費量が有意に減少し（Ｐ＜０．０１）、ラットジャンプ試験におけるエラーの数が有意に増加する（Ｐ＜０．０１）ことを示す。対照群と比較して、実施形態１の低用量群及び陽性群（パロキセチン）の体重が有意に増加し、両群のショ糖消費量が有意に増加した（Ｐ＜０．０１）、両群の水平移動と垂直移動が有意に増加し（Ｐ＜０．０１）、両群のラットジャンプ試験におけるエラーの数が有意に減少する（実施形態１の低用量群Ｐ＜０．０５、陽性群（パロキセチン）Ｐ＜０．０１）
【００８２】
１．３実施形態１の医薬品組成物は、嗅球損傷モデルにより、２４日間、１５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日及び６０ｍｇ／ｋｇ／日の用量でラットに投与する。オープンフィールドボックス試験では、対照群と比較して、実施形態１の高用量は、嗅球損傷によって引き起こされる水平移動と垂直移動の低下を有意に改善する。陽性対照（３ｍｇ／ｋｇ／日のパロキセチン）も嗅球損傷によって引き起こされる水平移動と垂直移動の低下を有意に改善する。受動的回避実験では、対照群と比較して、実施形態１の高用量及び中用量が嗅球損傷によって引き起こされるラット学習力と記憶力の減少を有意に改善する。
【００８３】
２．相互作用モデルでの動物実験：
本発明者は、うつ病の発症機序と臨床症状によって、マウスに対するレセルピン誘発モデル実験（体温低下、運動不能と眼瞼下垂）及びマウスと他の動物に対するセロトニン（５−ＨＴ）誘発の頭部加振実験を含む動物行動学実験を実施する。
【００８４】
２．１実施形態１の医薬品組成物は、一週間、マウスの胃内に２０ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日及び８０ｍｇ／ｋｇ／日の用量（ラットの場合、１５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日及び６０ｍｇ／ｋｇ／日の用量）で投与する。実施形態１の医薬品組成物により、マウスにおけるレセルピンの誘発による体温低下、運動不能と眼瞼下垂を有意に阻害することができる。実施形態１が実験鬱病に対する効果は、モノアミン神経伝達物質の作用に関連する可能性があることを示す。セロトニンを注射したマウスの頭部の振とう量を有意に増加させることは、実施形態１の抗うつ効果はモノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）の阻害に関連する可能性があることを示す。また、実施形態１の医薬品組成物は、マウスの自己規制活性に有意な効果がないことを示しているので、中枢神経系に刺激効果を示していない。
【００８５】
３．主要な抗うつ薬理学の実験結果は、以下のように要約される（表５を参照）。
【表５】
2015524827.tif 000007
2015524827.tif 000008
2015524827.tif 000009
【００８６】
４．結論
実施形態１の医薬品組成物は、うつ病に対する有意な実験効果を有している。
【００８７】
以種々の実験結果を以下示す。
【００８８】
（１）ラットの胃内に実施形態１の医薬品組成物を投与してから８時間後、生理食塩水群及びパロキセチン群と比較して、海馬体のｃＡＭＰが有意に増加し、ＰＫＡの活性が有意に増強し（*Ｐ＜０．０５）、ｐ−ＣＲＥＢのレベルも増加し、ＰＤＥ４の活性が有意に阻害された（*Ｐ＜０．０５）。
【００８９】
（２）慢性的にストレスを受けたマウスの胃内に実施形態１の医薬品組成物を投与してから１０日後、反復的なストレスによる海馬体のｃＡＭＰとＰＫＡの低下が改善し、マウスの海馬体におけるリン酸化ＣＲＥＢ及びＢＤＮＦの発現を有意に促進する（*Ｐ＜０．０５）。
【００９０】
（３）慢性的にストレスを受けたラットの胃内に実施形態１の医薬品組成物を投与してから２１日後、血清ＧＳＣを減少させるが、反復的なストレスによる海馬体のｃＡＭＰとＰＫＡの低下が改善し、血清ＢＤＮＦ、視床下部のＮＥ及び５−ＨＴなどを含むモノアミン神経伝達物質の発現を有意に促進する（*Ｐ＜０．０５）。
【００９１】
（４）実施形態１の医薬品組成物は、うつ病に対する有意な実験効果を有している。
【００９２】
生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物の適用範囲は、次のように記載されている。
【００９３】
１、生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物は、薬理学的に許容される添加剤を含むことができる。
【００９４】
２、生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物は、粉末、カプセル、錠剤などの公知の剤形として製造することができる。
【００９５】
３、生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物は、医薬品、健康食品または栄養剤として製造することができ、細胞内のｃＡＭＰのレベル低下によって引き起こされる病気を予防と治療し、ＢＤＮＦのレベルを強化させ、細胞内のｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ信号伝達経路を強化させ、脳内のＤＡ、ＮＥ及び５−ＨＴを含む神経伝達物質のレベルを増強し、記憶力を増強する。
【００９６】
さらなる実施例は、以下のように開示されている。
【００９７】
実施例１
体内の環状アデノシン一リン酸の含有量と利用度を高めるための医薬品組成物においては、ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分、グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分、およびナツメの環状アデノシン一リン酸を含む第三主成分を含む。
【００９８】
実施例２
実施例１に記載の医薬品組成物においては、２〜２６重量部の前記ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１、３〜４８重量部の前記甘草に関連する酸、および０．００２〜０．５重量部の前記ナツメの環状アデノシン一リン酸、を含む。
【００９９】
実施例３
実施例１又は２に記載の医薬品組成物においては、４〜１３重量部の前記ジンセノサイドＲｇ１及びＲｂ１、５〜１６重量部の前記甘草に関連する酸、および０．０１〜０．１重量部の前記ナツメの環状アデノシン一リン酸、
を含む。
【０１００】
実施例４
実施例１−３に記載の医薬品組成物においては、薬理学的に許容される担体、添加剤又はそれらの組合せを含む。
【０１０１】
実施例５
実施例１−４に記載の医薬品組成物においては、剤形を有し、前記剤形は、錠剤、カプセル、粉末、ピル、ダスト、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、パーティクル、滴下ピル、ロール及び薬理学的経口用量からなる群から選択される一つである。
【０１０２】
実施例６
実施例１−５に記載の医薬品組成物においては、前記医薬品組成物は、体内や細胞における利用度とｃＡＭＰの含有量の低下を予防及び処理し、細胞内のｃＡＭＰ/ＰＫＡ/ＣＲＥＢ信号伝達経路を向上させ、ＢＤＮＦの発現を向上させ、ＤＡ、ＮＥ及び５ＨＴ神経伝達物質の含有量を増加させ、記憶力を増強させるために使用される薬物、健康食品及び栄養素として製造される。
【０１０３】
実施例７
実施例１−６に記載の医薬品組成物においては、前記医薬品組成物は、ショウガ、ショウガ抽出物、またはそれらの組み合わせから選択される一つである第四主成分を更に含む。
【０１０４】
実施例８
体内の環状アデノシン一リン酸の利用度を高めるための医薬品組成物においては、ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分、グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分、およびナツメの環状アデノシン一リン酸を含む第三主成分を含む。
【０１０５】
実施例９
体内の環状アデノシン一リン酸の含有量を増加させるための医薬品組成物を調製する方法においては、ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分を提供するステップ、グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分を提供するステップ、および前記医薬品組成物を製造するために、ナツメの環状アデノシン一リン酸を含む第三主成分を提供するステップを含む。
【０１０６】
現在何が最も実用的かつ好ましい実施形態かという観点から、本発明について説明したが、当該開示される実施形態に限定される必要はないと解されるべきである。反対に、添付の特許請求の範囲の精神および範囲に含まれる種々の変性および同様の配置を含むものとし、これらは最も広範な範囲の解釈と一致し、前記変性および同様の構成のすべてを包含するものとする。
【産業上の利用可能性】
【０１０７】
１．生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物は、薬理学的に許容される添加剤を含むことができる。
２．生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物は、粉末、カプセル、錠剤などの公知の剤形として製造することができる。
３．生体内のｃＡＭＰの含有量と利用度を急速に高めるための本発明の医薬品組成物は、医薬品、健康食品または栄養剤として製造することができ、細胞内のｃＡＭＰのレベル低下によって引き起こされる病気を予防と治療し、ＢＤＮＦのレベルを強化させ、細胞内のｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ信号伝達経路を強化させ、脳内のＤＡ、ＮＥ及び５−ＨＴを含む神経伝達物質のレベルを増強し、記憶力を増強する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年7月3日(2015.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体内の環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の含有量と利用度を高めるための医薬品組
成物であって、
ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含んでなる第一主成分、
グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択され
る一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分、および
ナツメの環状アデノシン一リン酸（ナツメｃＡＭＰ）を含む第三主成分を含むことを特
徴とする医薬品組成物。
【請求項２】
前記医薬品組成物は、
２〜２６重量部の前記ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ、
３〜４８重量部の前記甘草に関連する酸、および
０．００２〜０．５重量部の前記ナツメｃＡＭＰを含むことを特徴とする、請求項１に
記載の医薬品組成物。
【請求項３】
前記医薬品組成物は、
４〜１３重量部の前記ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅ、
５〜１６重量部の前記甘草に関連する酸、および
０．０１〜０．１重量部の前記ナツメｃＡＭＰを含むことを特徴とする、請求項１に記
載の医薬品組成物。
【請求項４】
前記ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅは、人参から抽出され、
前記甘草に関連する酸は、甘草から抽出され、
前記ナツメｃＡＭＰは、ナツメから抽出されることを特徴とする請求項１に記載の医薬
品組成物。
【請求項５】
前記医薬品組成物は、薬理学的に許容される担体、添加剤又はそれらの組合せを含み、
前記医薬品組成物は、剤形を有し、前記剤形は、錠剤、カプセル、粉末、ピル、ダスト
、溶液、マイクロカプセル、懸濁液、エマルション、パーティクル、滴下ピル、ロール及
び薬理学的経口投薬からなる群から選択される一つであることを特徴とする、請求項１に
記載の医薬品組成物。
【請求項６】
前記医薬品組成物は、体内や細胞における利用度とｃＡＭＰの含有量の低下を予防及び
処理し、細胞内のｃＡＭＰ/ＰＫＡ/ＣＲＥＢ信号伝達経路を向上させ、ＢＤＮＦの発現を
向上させ、ＤＡ、ＮＥ及び５ＨＴ神経伝達物質の含有量を増加させ、記憶力を増強させる
ために使用される薬物、健康食品及び栄養素として製造されることを特徴とする、請求項
１に記載の医薬品組成物。
【請求項７】
前記医薬品組成物は、ショウガ、ショウガ抽出物、またはそれらの組み合わせから選択
される一つである第四主成分を更に含み、
前記ショウガ抽出物は、ショウガ水抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の
医薬品組成物。
【請求項８】
体内の環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の利用度を高めるための医薬品組成物であ
って、
ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分、
グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択され
る一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分、および
ナツメの環状アデノシン一リン酸（ナツメｃＡＭＰ）を含む第三主成分を含むことを特
徴とする医薬品組成物。
【請求項９】
体内の環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の含有量を増加させるための医薬品組成物
を調製する方法であって、
ジンセノサイドＲｇ１、Ｒｂ１及びＲｅを含む第一主成分を提供するステップ、
グリシルリジン酸、グリシルレチン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択され
る一つである甘草に関連する酸を含む第二主成分を提供するステップ、および
前記医薬品組成物を製造するために、ナツメの環状アデノシン一リン酸（ナツメｃＡＭＰ
）を含む第三主成分を提供するステップを含む。
【国際調査報告】
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