(57)【要約】本発明は、抗がん抗体を使用するがん療法の分野に関する。効力の増強を示す、グリコシル化特性が改善された、特にフコシル化が低減された抗ＨＥＲ２抗体の医療上の使用が提供される。一局面において、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％以下のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）が提供され、このがんは転移性がんである。別の局面において、上記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が、ＣＨ２ドメイン内の以下のグリコシル化特性：（ｉ）２０％以下の相対量のフコースを担持する炭水化物鎖、（ｉｉ）少なくとも８％の相対量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃを担持する炭水化物鎖、（ｉｉｉ）少なくとも６５％の相対量の少なくとも１つのガラクトース単位を担持する炭水化物鎖、および（ｉｖ）少なくとも１５％の相対量の少なくとも２つのガラクトース単位を担持する炭水化物鎖を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％以下のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、前記がんが転移性がんである、抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２】
前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が、ＣＨ２ドメイン内の以下のグリコシル化特性：
（ｉ）２０％以下の相対量のフコースを担持する炭水化物鎖、
（ｉｉ）少なくとも８％の相対量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃを担持する炭水化物鎖、
（ｉｉｉ）少なくとも６５％の相対量の少なくとも１つのガラクトース単位を担持する炭水化物鎖、および
（ｉｖ）少なくとも１５％の相対量の少なくとも２つのガラクトース単位を担持する炭水化物鎖
を有する、請求項１に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項３】
前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者が、６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）で処置されている、請求項２に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項４】
皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、内臓転移、特に、肺および／または肝転移、ならびにリンパ節転移の１種または複数を含む転移を処置するための、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項５】
前記患者が、１つまたは複数の内臓転移、特に、肺および／または肝転移を有する、請求項４に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項６】
好ましくはリンパ節関与を伴った、転移性乳がん、特に浸潤性乳房乳管癌であるＨＥＲ２陽性がんを処置するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項７】
大腸がん、耳下腺癌などの唾液腺がん、非小細胞肺癌などの肺がん、および気管支がんからなる群から選択されるＨＥＲ２陽性転移性がんを処置するための、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項８】
免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有するＨＥＲ２陽性転移を処置するための、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項９】
転移によって引き起こされる皮膚病変またはリンパ節病変、特に皮膚潰瘍を処置するための、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１０】
前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者が、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、および／または
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、もしくはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、前記先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）が、任意の順序で逐次、または同時に行われた、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１１】
前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者が、単独療法または組合せ療法のいずれかで、少なくとも５種の抗がん剤、特に化学療法剤で処置されている、請求項１０に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１２】
前記ＨＥＲ２陽性がんが、少なくとも１種の化学療法剤を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行しており、かつ／または高フコーストラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および／もしくは高フコースペルツズマブ（オムニターグ）を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行している、請求項１０または１１に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１３】
前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が前記患者に繰り返して投与され、治療効果が、前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも第２の投与後に、好ましくは前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第１の投与後に既に得られる、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１４】
前記治療効果が、皮膚病変、特に、潰瘍性皮膚病変の低減、縦隔アデノパシーの低減、ならびに／または内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移の低減を含む、請求項１３に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１５】
２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または０％の、好ましくは、２％〜２０％、３％〜１５％、または５％〜１０％の範囲内のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１６】
前記ＣＨ２ドメイン内の以下のグリコシル化特性：
（ｉ）少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、
（ｉｉ）少なくとも６５％の量のガラクトース、
（ｉｉｉ）検出可能なＮｅｕＧｃ無し、
（ｉｖ）検出可能なＧａｌα１，３−Ｇａｌ無し、および
（ｖ）検出可能なα２，６−カップリングＮｅｕＡｃ
を有する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１７】
以下の特性：
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含むこと、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むこと、
（ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むこと、
（ｉｖ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むこと、
（ｖ）抗体トラスツズマブとの交差特異性を示すこと、
（ｖｉ）ＩｇＧ抗体であること
を有する、請求項１から１６のいずれか一項、特に請求項１４に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１８】
前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた前記処置が単独療法であり、または前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた前記処置が、特に、
（ｉ）少なくとも１種の化学療法剤、ならびに／または
（ｉｉ）前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる少なくとも１種のさらなる治療抗体、ならびに／または
（ｉｖ）がん手術および／または放射線治療
と組み合わせた組合せ療法である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項１９】
１、２、３、もしくは４週間毎、またはより低い頻度で、前記患者の体重１ｋｇ当たり１〜１５ｍｇの量で、好ましくは３週間毎またはより低い頻度で、前記患者の体重１ｋｇ当たり２〜８ｍｇの量で前記フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【請求項２０】
そのＦｃγＲＩＩＩａアロタイプに関係なく患者を処置するためのものである、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリコシル化特性が改善された抗ＨＥＲ２抗体の新規の医療上の使用に関する。前記抗ＨＥＲ２抗体は、一般的な治療抗体および化学療法剤を用いた療法が失敗し、または効果が少ない場合の治療有効性を示し、それによって新規の患者群、特に、従来の抗ＨＥＲ２抗体療法で成功裏に処置することができない患者を成功裏に処置することを可能にする。特に、本発明は、新規の抗転移処置、およびがんまたは転移が先の処置にもかかわらず再び起こった転移性がん（ｍｅｔａｓｔａｚｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）に罹患した、重度に事前処置された患者を含めて、事前処置された患者のための新規処置を提供する。さらに、本発明は、ＨＥＲ２の低い過剰発現を示すにすぎないＨＥＲ２陽性疾患、特に、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合に１＋または２＋のＨＥＲ２発現を有するＨＥＲ２陽性がんの処置におけるグリコシル化特性が改善された抗ＨＥＲ２抗体の新規の医療上の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体は、医療および研究の分野で広く使用されている作用物質である。医療では、これらは、多くの異なる分野において、特に、様々な疾患、特に、がんなどの新生物疾患の処置および予防における治療剤として用途を見出す。しかし、がん患者の抗体療法によって得られる治療結果は、高度に多様である。抗がん抗体を使用する療法のかなりのパーセンテージが、疾患の軽減をまったく示さないか、またはほんのわずかの軽減を示し、特定の患者群に限定されることもある。
【０００３】
例示的な確立された抗がん抗体は、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）に対する抗体である。ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）タンパク質は、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ遺伝子を過剰発現するがんに対する抗体療法の独特で有用な標的であると考えられている。ＨＥＲ２は、それだけに限らないが、乳がん、大腸がん、進行性食道腺癌、胃腺癌、または胃食道接合部腺癌を含めたいくつかのがんにおいて過剰発現される。例えば、ＨＥＲ２は、ヒト乳がんの２０〜３０％で過剰発現され、リンパ節陽性およびリンパ節陰性疾患を有する女性の芳しくない臨床予後と相関する。ＨＥＲ２の過剰発現は、より攻撃的な腫瘍とも関連付けられている。特に、乳がんなどのＨＥＲ２陽性腫瘍を処置するために、抗ＨＥＲ２抗体の使用は、確立した形態の療法である。組換えヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））は、１９９８年に米国で臨床用途のために認可されたものであり、転移乳がんを含めた乳がん、および転移胃がんを処置するのに認可されている。トラスツズマブは、単独療法および組合せ療法として使用される。トラスツズマブは、ＣＨＯ細胞（ハムスター細胞）内で発現され、したがって高度にフコシル化されている。単剤（単独療法）として与えられる抗体に対する応答率は、１５〜２６％に及んでいる。
【０００４】
別の抗ＨＥＲ２抗体は、抗体ペルツズマブ（組換えヒトモノクローナル抗体２Ｃ４；ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）としても公知）であり、これは、ＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）として公知である抗体の新規クラスの最初のものを表し、他のＨＥＲ受容体（ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４など）と活性ヘテロ二量体を形成するＨＥＲ２の能力を阻害するように機能し、ＨＥＲ２発現レベルに関係なく活性である。腫瘍細胞内でのＨＥＲ２／ＨＥＲ３ヘテロ二量体の形成のペルツズマブによる遮断は、極めて重要な細胞シグナル伝達を阻害することが実証されており、それは、腫瘍増殖および生存を低減する。ペルツズマブは、診療所において単剤として試験を受けている。第１相試験では、標準的な療法の間または後に進行した不治の、局所的に進行した、再発性の、または転移の固形腫瘍を有する患者が、３週間毎にペルツズマブを静脈内に与えて処置された。腫瘍退縮は、応答について評価可能な２０人の患者のうち３人で達成された。２人の患者では、部分応答が確認された。２．５カ月超続く安定病態は、２１人の患者のうち６人で観察された。これらの結果は、疾患の部分応答または安定化でさえ達成するのが困難であることを強調する。非常に多くの場合、腫瘍退縮または疾患の安定化などの有益な効果は、疾患が最終的に進行する数カ月前にしか観察されない。
【０００５】
アフコシル化抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強したことが示されており、したがって、生体により良好な抗体を開発する機会をもたらす。証拠は、主要なｎ−アセチルグルコサミンからフコースが欠如していると、ＩｇＧ１抗体（ａｎｉｔｂｏｄｉｅｓ）のＦｃγＲＩＩＩａ受容体への結合の親和性が増大し、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって媒介されるＡＤＣＣ効力の増大が結果として起こることを示唆する。これは、フコース残基の付加が欠損した変異体ＣＨＯ細胞、特に、α（１−６）フコシルトランスフェラーゼ酵素がノックアウトされたＣＨＯ細胞内で産生される非フコシル化糖型を使用する試験において確認される。ＦｃγＲＩまたは補体のＣ１成分に対する非フコシル化ＩｇＧ１糖型の親和性は、無影響であることが報告され、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂに対する親和性の小さな増大が報告されたが、活性化／阻害比は維持されたので、これは、機能的に有意でないはずであると結論付けられた。アフコシル化ＩｇＧ−Ｆｃで観察されるＡＤＣＣの増強は、ＦｃγＲＩＩＩａについての正常血清ＩｇＧの競合を克服する親和性の増大から部分的に生じる。ＡＤＣＣの改善は、アフコシル化トラスツズマブについても提示された。ＦｃγＲＩＩＩａ受容体は多型であり、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ（バリン）型は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ（フェニルアラニン）型よりＩｇＧ１に対してより高い親和性を有することが示されている。フコシル化ＩｇＧ１抗体は、ホモ接合性ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆまたはヘテロ接合性ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ細胞よりも、ホモ接合性ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ保有細胞によって、ＡＤＣＣを媒介することにおいてより効率的であることがｉｎ  ｖｉｔｒｏで実証された。したがって、ＡＤＣＣ効力における同様の差異が、発現されるＦｃγＲＩＩＩａの多形体に応じて、ｉｎ  ｖｉｖｏで関連し得ることが予測される。Ｆ／Ｆホモ接合性またはＶ／Ｆヘテロ接合性（ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｉｓ）である弱応答性（ｗｅａｋ−ｒｅｓｐｏｎｄｓ）患者のそれぞれの亜集団を処置するためのアフコシル化抗体の使用は、先行技術、例えば、ＵＳ２００６／０１８２７４１において示唆されている。アフコシル化抗体およびフコース含量が低減された抗体は、ＥＰ１５００４００およびＷＯ２００８／０２８６８６にも記載されている。非フコシル化（ｎｏｎ−ｆｏｃｕｓｙｌａｔｅｄ）抗ＨＥＲ２抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ結果は、Ｓｕｚｕｋｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００７年；１３巻：１８７５〜１８８２頁、Ｊｕｎｔｉｌｌａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１０年；７０巻：４４８１〜４４８９頁、およびＺｈａｎｇら、ｍＡｂｓ、３巻：３号、２８９〜２９８頁、２０１１年に記載されている。これらの論文では、フコシル化が低減された抗ＨＥＲ２抗体が、ＣＨＯ細胞内でのその産生に起因してＦｃ領域でフコシル化が高い抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と比較された。これらの結果は、フコース含量が低減された抗ＨＥＲ２抗体は、優れたＡＤＣＣ活性を示すことを実証する。しかし、これらの抗体の臨床用途における��れらの結果の治療妥当性は、まだ実証されていない。
【０００６】
トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体の一般的な問題は、これらがＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍でのみ活性であることである。したがって、患者の小さい集団のみが、それぞれの処置に適格である。臨床的なトラスツズマブ治験により、レベル０〜１＋のＨＥＲ２発現を有する患者（ＩＨＣによって決定）は、薬物から一様に恩恵を受けず、レベル２＋の発現を有する少数の患者のみが薬物から恩恵を受けることが示された。レベル３＋の発現を有するより多くの患者が恩恵を受ける。しかし、レベル３＋を有する患者群においてさえ、相当量の無応答者または低応答者がある。トラスツズマブは、ＨＥＲ２受容体に対して大きな親和性を示し、高用量を投与することができるが（その低毒性に起因して）、ＨＥＲ２＋患者の少なくとも７０％は、処置に応答しないことが判明した。抗腫瘍活性無し、または低減された抗腫瘍活性のみが、患者（特に、Ｆ／ＦおよびＦ／Ｖ受容体アロタイプの患者）の少なくとも８０％でも報告されている。実際に、耐性が一様に発生し、疾患は進行する。多くの場合では、疾患の無増悪期間は、仮にあったとしても数カ月遅延されるだけである。
【０００７】
トラスツズマブなどの従来の抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が失敗し、それぞれ、抗ＨＥＲ２抗体処置にもかかわらず疾患が進行するＨＥＲ２陽性がんに罹患した患者は、限られた治療選択肢を有することが多い。これは、患者が、やはり疾患の進行を防止することができない先の、または同時の化学療法処置を受けた場合、特に当てはまる。トラスツズマブは、少なくとも２つの化学療法レジームを既に受けた（したがって事前処置されている）患者を処置するために単独療法として転移乳がんにおいて、およびパクリタキセルまたはドセタキセルなどの化学療法剤との組合せ療法として他の適応症において与えられるので、このような先の、または同時の化学療法処置は、トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体が失敗する患者群において遭遇することが多い。化学療法剤および／または抗ＨＥＲ２抗体を用いた複数の処置にもかかわらず疾患が進行する場合、患者の生存予後は低い。ここで、処置の数が増加し、疾患が進行するにつれて患者の全体的な健康状態は低下することも念頭に置かなければならない。重度に事前処置された患者は、芳しくないパフォーマンスステータス（ＥＣＯＧ）を有することが多く、したがって、さらなる化学療法などのさらなる積極的処置から除外される。原発性がんが転移し、処置にもかかわらず転移し続ける場合、生存予後は特に低い。
【０００８】
転移または転移疾患は、１つの臓器または部分から別の非隣接臓器または部分への疾患の拡散である。がんは、組織内の単細胞が徐々に遺伝的に損傷されて悪性表現型を有するがん幹細胞を産生した後起こる。これらのがん幹細胞は、制御されない異常な有糸分裂を起こすことができ、それは、その位置のがん細胞の総数を増加させる機能を果たす。由来元側のがん細胞の範囲が臨床的に検出可能になると、それは、原発性腫瘍と呼ばれる。一部のがん細胞はまた、周囲の正常組織および局所的な範囲に侵入および浸潤する能力を取得し、新しい腫瘍を形成する。組織内の隣接する側で新しく形成された「娘」腫瘍は、局所転移と呼ばれる。一部のがん細胞は、リンパ管および／または血管の壁を貫通する能力を取得し、その後これらは、血流を通じて（循環腫瘍細胞）、体内の他方の側および組織に循環することができる。このプロセスは、リンパ節または血行性の拡散として公知である。腫瘍細胞が別の側に静止した後、これらは、血管または壁を再貫通し、増倍し続け、別の臨床的に検出可能な腫瘍を最終的に形成する。この新しい腫瘍は、転移（または二次性）腫瘍として公知である。転移は、悪性疾患の１つの顕著な特徴である。他の新生物におけるほとんどの腫瘍は、様々な程度においてであるが転移し得る。腫瘍細胞が転移するとき、新しい腫瘍は、二次性または転移腫瘍と呼ばれ、その細胞は、元の腫瘍のものと同様である。これは、例えば、乳がんが肺に転移する場合、二次性腫瘍は、異常な肺細胞ではなく、異常な乳腺細胞で構成されていることを意味する。
【０００９】
転移腫瘍は、がんの後期において非常に一般的である。転移の拡散は、血液もしくはリンパ管を介して、または両方の経路を通じて起こり得る。転移がリンパ液の拡散によって起こる場合、リンパ系内への浸潤の後に、腫瘍細胞の局部リンパ節（ｌｍｙｐｈｎｏｄｅｓ）への、および最終的に体の他の部分への輸送が続く。これは、癌の転移の最も一般的な経路である。がん細胞は、原発性腫瘍付近のリンパ節（局部リンパ節）に拡散し得る。これは、リンパ節関与、陽性リンパ節、または局部疾患と呼ばれる。腫瘍を検査または除去するための手術を行う際に腫瘍部位付近の少なくともリンパ節への生検によって試験することは、一般的な医療行為である。原発性腫瘍付近の局部リンパ節への局在的な拡散は、通常、転移としてカウントされないが、これは、より悪い予後の徴候である。リンパ管を通じた輸送は、癌の初期の蔓延の最も共通の経路である。
【００１０】
転移が起こる最も一般的な場所は、肺、肝臓、脳、および骨である。しかし、皮膚も、転移が見つかっており、乳がんなどの特定のがんのタイプにおいて起こることが多い。皮膚転移（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）（または皮膚転移（ｓｋｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）−これらの用語は、本明細書で同義語として使用される）は、内部がんに由来する皮膚におけるがん細胞の増殖を指す。ほとんどの場合、皮膚転移は、原発性内部悪性疾患（例えば、乳がんまたは肺がん）の初期の診断後、および疾患の過程の後期で発生する。皮膚転移は、がん性細胞が原発性腫瘍から離脱し、血液循環またはリンパ系を通じた皮膚への自己の道を作るときに起こる。ほとんどの悪性腫瘍が皮膚転移を生じ得るが、いくつかは、他よりそれを生じる可能性がより高い。女性における皮膚転移の最も一般的な源は、乳房（６９％）、大腸（９％）、黒色腫（５％）、卵巣（４％）、および肺（４％）である。ほとんどの皮膚転移は、原発性腫瘍付近の体の領域内で起こる。これらは、分解し、潰瘍を生じ、したがって、皮膚を突破する場合がある。潰瘍性腫瘍は一般に、２つの様式で発生し得る。これは、原発性腫瘍の一部として、または二次性腫瘍として、すなわち、転移として発生し得る。上述したように、腫瘍が血液およびリンパ系に拡散する場合、これは、皮膚に移動し、潰瘍性腫瘍に発達し得る。これは希有であり、一般にがんの進行期においてのみ起こる。一部の人については、潰瘍性腫瘍は、彼らのがんのうちで最もひどい態様であり、これは、潰瘍性腫瘍が、例えば、顔または腹部で他人の目に見える場合、患者が自分自身についてどのように感じるかに大いに影響し得る。さらに、潰瘍性腫瘍は、不快に臭うこともある。乳がんでは、皮膚転移の最も一般的な面は、胸部および腹部である。皮膚転移を処置するために、根底にある原発性腫瘍が処置される必要がある。しかし、皮膚転移が起こっているほとんどの場合では、原発性がんは、広範であり、治療不能であり得る。この場合、緩和ケアのみを与えることができる。
【００１１】
転移に罹患している患者の処置および生存は、がんが局所的であるか否か、または他の位置に拡散しているか否かによって一般に判定される。がんが他の組織および臓器に拡散する場合、それは、患者の生存の可能性を減少させ得る。処置の選択は一般に、原発性がんのタイプ、転移のサイズおよび位置、患者の年齢および全体的な健康、ならびに以前に使用された処置のタイプに依存する。上述したように、死亡率は、皮膚転移、特に、進行した潰瘍性皮膚転移を有する患者において特に高い。皮膚転移の出現は、広範な転移性疾患を知らせ、患者の予後不良をもたらす。
【００１２】
がん処置の失敗は、手術を使用して一般に対処される原発性腫瘍の増殖によって必ずしも引き起こされるのではなく、むしろ異なる臓器への転移拡散によって引き起こされることに、臨床腫瘍医は同意している。したがって、転移の防止、転移増殖の阻害、および転移のさらなる拡散の防止を含めた転移の有効な処置が重要である。異なる抗がん薬による原発性腫瘍の退縮は、それ自体抗転移活性を常に示すわけでないことが公知である。反対に、転移の増強が、いくつかの抗がん薬に応じて観察されている。さらに、化学療法剤および治療抗体は、転移の位置にも依存する異なる程度の抗転移活性を示す。
【００１３】
抗ＨＥＲ２抗体を用いた療法は、原発性および転移（ｍｅａｓｔａｓｅｓ）を処置するのに有用であり得ることが公知である。しかし、トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体は、異なるタイプの転移に対して幾分違った有効性を示すことが先行技術において公知である。例えば、Ｓａｗａｋｉら（Ｔｕｍｏｒｉ、２０巻：４０〜４３頁、２００４年：Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ａｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ａｎｄ  ｈｅａｖｉｌｙ  ｐｒｅ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ−２／ＮＥＵ−ｏｖｅｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）は、異なるタイプの転移がどのようにトラスツズマブ療法に応答したかを分析した。患者は、ＨＥＲ２遺伝子産物を過剰発現することが確認された。Ｓａｗａｋｉは、患者の１１．５％がトラスツズマブ処置に対して完全応答を有し、１１．５％が部分応答を有し、１１．５％が変化がまったくなく、患者の６５％が進行性疾患を示したことを臨床試験の結果として記載している。疾患進行までの時間は、３．１カ月（中央値）であり、応答の中央値持続時間は、６．４カ月であった。分析された患者は、従来の化学療法によって事前処置されており、前記療法に対して難治性であった。患者のほとんどは、複数の化学療法レジメン（ｒｅｇｉｍｅｎｔ）を受けており、したがって、分析された試験集団は一般に、非常に芳しくない予後を有していた。上記に論じたように、患者が受ける処置がより不首尾であるほど、患者の予後は芳しくない。Ｓａｗａｋｉは、トラスツズマブは、化学療法後に進行したＨＥＲ２過剰発現転移乳がんを有する女性において単剤として活性であると結論付けているが、その効果は十分な効力を欠いていると考えられると結論付けている。さらに、Ｓａｗａｋｉは、観察された応答率は、転移部によっても激しく異なったことを報告している。Ｓａｗａｋｉは、試験で得た結果は、トラスツズマブが、内臓転移、特に、肝転移、および肺転移、ならびに脳転移に対する単剤として有効でないことを示唆すると結論付けている。５０％の応答率が皮膚転移で、４３％がリンパ節で、１０％が骨転移で見られたが、肺および肝転移に関してまったく応答が見られなかった。しかし、全体的に低い応答率を考慮すると、これは、トラスツズマブが、多数の患者、特に、肺または肝臓の転移などの特定の転移に罹患している患者において有効でないことを強調する。
【００１４】
Ｒｏｓｓｉら（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ、２４巻：３１７〜３２０頁（２００４年））は、転移乳がんに罹患している重度に事前処置された患者に起こっている骨髄転移が、トラスツズマブで有効に処置され得る場合を報告している。患者は、血球数の完全な回復を実現したが、肺転移の進行に起因して最後に死亡した。Ｒｏｓｓｉは、転移乳がんの診断後の中央値生存時間は、１８〜２４カ月であることを報告しているが、この値は、疾患の転移部によって広く変動することを報告している。中央値生存時間は、骨疾患のみを有する患者（１８〜３０カ月）に対して、内臓疾患を有する患者（６〜１３カ月）で伝統的により低い。
【００１５】
Ｇｏｒｉら（Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、２００７年；１２巻：７６６〜７７３頁：Ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｉｎ  ＨＥＲ−２−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ：  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，  ｓｕｒｖｉｖａｌ，  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ）は、ＨＥＲ−２陽性転移乳がん患者におけるＣＮＳ転移の発生率を評価して、ＣＮＳ転移を有する患者の転帰を明確化し、再発のリスクファクターを同定するための観察試験を記載している。Ｇｏｒｉは、内臓転移が再発時の支配的な部位であり、これがＣＮＳ転移の著しくより高いリスクと関連していることを報告している。このことは、内臓転移の効率的な処置の重要性を強調する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００６／０１８２７４１号明細書
【特許文献２】国際公開第２００８／０２８６８６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
上記を考慮すると、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、転移ＨＥＲ２陽性がんの処置の改善に対する大きな需要があることが明白である。さらに、抗ＨＥＲ２抗体および／または化学療法剤を用いた以前の処置にもかかわらず疾患が進行する患者のために有効な処置スケジュールを提供するための高い需要があり、特に、重度に事前処置された患者に対して処置選択肢を提供するための需要がある。特に、ＨＥＲ２陽性転移、特に、皮膚転移、リンパ節転移、ならびに内臓転移、例えば、肺および肝転移を処置するための効率的な選択肢を提供するための高い需要がある。さらに、ＨＥＲ２の低度または中程度の発現、特に、ＩＨＣによって決定される場合にＨＥＲ２  １＋またはＨＥＲ２  ２＋を示すにすぎないＨＥＲ２陽性がんの処置を改善するための需要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
自己のＦｃ領域でフコシル化が低減された（非存在を含む）本発明による抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、がんを有する患者の処置に関して顕著な、予期しない治療有効性を、本明細書で報告される臨床試験において実証する。本明細書に記載の抗ＨＥＲ２抗体は、原発性がんおよび転移に対して治療的に活性である。これらは、従来のがん処置に対して耐性または難治性である原発性がんおよび転移に対して治療上有効であることも示された。さらに、自己のＦｃ領域でフコシル化が低減された（非存在を含む）本発明による抗ＨＥＲ２抗体は、低度または中程度のＨＥＲ２発現（例えば、ＩＨＣによって決定される場合に１＋または２＋）を示すにすぎないＨＥＲ２陽性がんに対する良好な治療有効性を実証する。特に、前記抗ＨＥＲ２抗体は、従来のがん処置に対して耐性または難治性である転移および原発性腫瘍に対して有効である。特に、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコシル化を有する従来の抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置に対して耐性であった、もしくは耐性になった、かつ／または１つもしくは複数の化学療法剤を用いた処置に対して耐性であった、もしくは耐性になった原発性がんおよび転移に対して高い治療有効性を示した。本明細書に報告される知見に基づいて、本発明は、従来の療法、特に、従来の抗ＨＥＲ２抗体を含んだ組合せ療法を含めた従来の抗ＨＥＲ２抗体療法で処置することができなかった、またはもはや処置することができない特定の患者群を処置することを可能にする新規医療処置スケジュールを提供する。特に、本発明は、重度に事前処置された患者、すなわち、複数ラインの以前の抗がん処置を受けた患者であって、しかしこのような以前の処置が失敗し、広く拡散した転移を有する患者にとって順調な処置スケジュールを提供する。本願に提示されるデータは、このような患者が、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が単独療法として投与されても、本発明の教示に従って成功裏に処置され得ることを実証する。処置の成功は、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、ならびに内臓転移、特に、肺および肝転移を含めた多数の異なる転移で見られた。転移を有する重度に事前処置された患者のこの特定の患者亜群の処置は、特に困難であり、したがってこの患者群は、非常に芳しくない生存予後を有するので、実証された強い抗転移効力は、重要な臨床的成功である。本発明は、単独療法（ｍｏｎｔｈｅｒａｐｙ）設定においても、前記患者にとって順調な新規処置を提供する。さらに、本明細書に提示のデータによって実証されるように、治療の成功は、低投与量の本発明による抗ＨＥＲ２抗体を投与する場合でも実現される。さらに、治療効果は、非常に急速に見られ、それによって、この患者群における本発明による抗ＨＥＲ２抗体の顕著な治療有効性を実証する。例えば、化学療法剤および従来の抗ＨＥＲ２抗体を用いた以前の複数の処置が失敗し、疾患が進行した、転移乳がんおよび大きな潰瘍性皮膚転移に罹患した重度に事前処置された患者において、潰瘍性皮膚転移は、本発明による抗ＨＥＲ２抗体（単独療法）を最初に投与して８日後に既に治癒し始め、最終的に完全に修復することができた。さらに、化学療法剤および従来の抗がん抗体を用いた以前の処置が失敗し、疾患が進行した、転移大腸がんに罹患し、肺および肝転移を有する重度に事前処置された患者においても、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を単独療法設定で投与したとき、標的病変部の著しい低減（４４％）が観察された。
【００１９】
さらに、本明細書に提示のデータは、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を、有利には、やはり多数の他の抗がん剤を用いた処置が失敗した、事前処置された患者においても、ＨＥＲ２陽性がん、特に、１＋または２＋（免疫組織化学検査（ｉｍｍｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）によって決定した場合）の低ＨＥＲ２過剰発現を呈する転移がんを処置するのに使用することができることも実証する。さらに、実施した臨床試験において、本発明による抗ＨＥＲ２抗体は、耐容性良好であり、観察される副作用は、従来の抗体療法と比較して低減されたことが示された。さらなる化学療法などの積極的な療法を除外することが多い重度に事前処置された患者の健康状態を考慮すると、このことは、重要な利点である。
【００２０】
さらに、本願に提示のデータは、例えば、トラスツズマブなどの高フコース抗ＨＥＲ２抗体でこれまで成功裏に処置することができなかった患者、例えば、肝臓および肺転移などの内臓転移に罹患した患者における治療効果を示す。
【００２１】
上記知見に基づいて、本発明は、第１の態様では、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％、好ましくは４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、最も好適には１０％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、がんが転移性がんである、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００２２】
第２の態様では、本発明は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、がんを有する患者を処置するための、５０％以下、好ましくは４０％以下、好ましくは３０％以下、２０％以下、より好適には１５％以下、最も好適には１０％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、
ｂ）６０％以上、特に、７０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、またはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。前記がんは、転移性がん、および／または免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル１＋などのレベル２＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有するがんであり得る。
【００２３】
第３の態様では、本発明は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、ＨＥＲ２陽性がんを有する患者を処置するための、５０％以下、好ましくは４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、最も好適には１０％〜０％または１０％〜３％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有する、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、転移性がんの処置に特に有用である。さらに、上記知見に基づいて、本発明は、ＨＥＲ２陽性転移性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％、好ましくは４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、最も好適には１０％〜０％または１０％〜３％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有する、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００２４】
上記に論じたように、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、転移に対して特に有効である。さらに、これらは、事前処置された、およびまた重度に事前処置された患者の、特に、転移、特に、内臓転移、リンパ節転移、および潰瘍性皮膚転移に罹患している患者における処置に特に有効である。治療効果は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を単独療法として投与したときでさえ見られた。したがって、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高度に有効であることが証明され、新規の有効な処置スケジュールが本発明によって提供される。本発明による低フコシル化抗ＨＥＲ２抗体の治療有効性の改善の程度、およびそれから生じる処置選択肢は、脱フコシル化した際のＡＤＣＣ活性の増大を実証する既存のｉｎ  ｖｉｔｒｏデータを考慮しても予期されなかった。特に、従来の高度フコシル化抗ＨＥＲ２抗体で一様に処置することができない転移に罹患している患者を有効に処置する可能性は、これが、既に存在する治療効果の単なる改善ではなく、効果的でない治療剤（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）の高度に活性な治療剤（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）への変換を表すので、意外であった。本明細書に記載するように、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、低投与量でも高度に有効であり、潰瘍性皮膚転移、内臓転移、例えば、肺転移および／または肝転移など、ならびにリンパ節転移などの転移を処置することができる。さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、レベル２＋以下、およびさらにはレベル１＋のＨＥＲ２の低過剰発現（免疫組織化学検査によって決定した場合）を有するに過ぎなかったＨＥＲ２陽性がんに対しても有効であった。実現される治療効果は、フコース低減化抗体が単独療法として投与される場合でも非常に急速に観察される。したがって、本発明は、既存のがん療法に対して重要な寄与をする。
【００２５】
上記および後続の開示から明らかであるように、本発明の異なる態様を組み合わせることができる。例えば、実施例に示したように、本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、従来のがん処置に対して耐性または難治性である転移および原発性腫瘍を処置するのに使用することができる。転移性がん、特に、既存の複数の転移に罹患しているこのような事前処置された、およびまた重度に事前処置された患者を成功裏に処置する可能性は、本発明によって行われる重要な寄与である。さらに、本発明の抗ＨＥＲ２抗体がレベル２＋以下のＨＥＲ２の低過剰発現を有するＨＥＲ２陽性がんに対して有効であることは一利点である。したがって、処置選択肢が、上述の患者に対して、彼らがこのような低ＨＥＲ２発現がんを有する場合でさえ提供される。
【００２６】
第４の態様では、本発明は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患を患っている患者を処置する方法であって、５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１５％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を前記患者に新生物疾患を処置するのに十分な量で投与するステップを含む、方法に関する。本発明の他の態様のフィーチャおよび実施形態も、本発明の処置の方法に同様に当てはまる。特に、ＨＥＲ２陽性新生物疾患は、本明細書に記載の転移性がんであり得、かつ／または患者は、本明細書に記載の１つもしくは複数の以前のがん処置を受けていた場合があり、かつ／またはＨＥＲ２陽性新生物疾患は、本明細書に記載するように、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２発現を有するＨＥＲ２陽性がんであり得る。
【００２７】
本発明の他の目的、フィーチャ、利点、および態様は、以下の記載および添付の特許請求の範囲から当業者に明らかとなる。しかし、本願の好適な実施形態を示す以下の記載、添付の特許請求の範囲、および具体例は、実例としてのみ示されていることが理解されるべきである。開示した発明の趣旨および範囲内の様々な変更および改変は、以下を読むことから当業者に容易に明らかとなる。
【００２８】
定義
本明細書において、以下の表現は一般に、これらが使用されている脈絡が別段に示す程度を除き、以下に示す意味を好ましくは有するように意図されている。
【００２９】
表現「含む」は、本明細書において、その文字通りの意味に加えて、表現「から本質的になる」および「からなる」も含み、具体的に指す。したがって、表現「含む」は、具体的に列挙されたエレメントを「含む」主題がさらなるエレメントを含まない実施形態、および具体的に列挙されたエレメントを「含む」主題がさらなるエレメントを包含する場合があり、かつ／または実際に包含する実施形態を指す。同様に、表現「有する」は、表現「含む」として理解されるべきであり、表現「から本質的になる」および「からなる」も含み、具体的に指す。
【００３０】
用語「抗体」は、特に、ジスルフィド結合によって接続された少なくとも２本の重鎖および２本の軽鎖を含むタンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。重鎖定常領域は、３つ、またはＩｇＭもしくはＩｇＥタイプの抗体の場合では、４つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を含み、第１の定常ドメインＣＨ１は、可変領域に隣接しており、ヒンジ領域によって第２の定常ドメインＣＨ２に接続されている場合がある。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメインのみからなる。可変領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域とともに散在した相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、各可変領域は、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合性ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、効果細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含めた宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。抗体は、例えば、ヒト化、ヒト、またはキメラ抗体であり得る。抗体は、ＡＤＣＣを誘導することができる。
【００３１】
特に、抗体は、任意のサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２を含めた任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭのものであり得る。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ抗体、より好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ２抗体、特に、ＩｇＧ１抗体である。重鎖定常領域は、任意のタイプ、例えば、γ、δ、α、μ、またはεタイプ重鎖のものであり得る。さらに、軽鎖定常領域も、任意のタイプ、例えば、κまたはλタイプ軽鎖などのものであり得る。好ましくは、抗体の軽鎖はκ鎖である。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ抗体の場合では２本の全長重鎖および２本の全長軽鎖を含む全長抗体である。
【００３２】
抗体の抗原結合性部分は、通常、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の全長または１つもしくは複数の断片を指す。抗体の抗原結合性機能は、全長抗体の断片によって果たされ得ることが示されている。抗体の結合性断片の例としては、Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片；Ｆ（ａｂ）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された、それぞれが同じ抗原に結合する２つのＦａｂ断片を含む二価の断片；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ、３４１巻：５４４〜５４６頁）；および単離相補性決定領域（ＣＤＲ）がある。抗体の「Ｆａｂ部分」は特に、重鎖および軽鎖可変領域（ＶＨおよびＶＬ）、ならびに第１の重鎖および軽鎖定常領域（ＣＨ１およびＣＬ）を含む抗体の部分を指す。抗体がこれらの領域のすべてを含まない場合では、用語「Ｆａｂ部分」は、抗体中に存在する領域ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、およびＣＬのもののみを指す。好ましくは、「Ｆａｂ部分」は、抗体の抗原結合性活性を含有する、パパインで天然抗体を消化することによって得られる断片に対応する抗体の部分を指す。特に、抗体のＦａｂ部分は、抗原結合部位またはその抗原結合能を包含する。好ましくは、Ｆａｂ部分は、抗体の少なくともＶＨ領域を含む。
【００３３】
抗体の「Ｆｃ部分」は特に、重鎖定常領域２、３、および適用可能な場合、４（ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を含む抗体の部分を指す。抗体がこれらの領域のすべてを含まない場合では、用語「Ｆｃ部分」は、抗体中に存在する領域ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４のもののみを指す。好ましくは、Ｆｃ部分は、抗体の少なくともＣＨ２領域を含む。好ましくは、「Ｆｃ部分」は、抗体の抗原結合性活性を含有しない、パパインで天然抗体を消化することによって得られる断片に対応する抗体の部分を指す。特に、抗体のＦｃ部分は、Ｆｃ受容体に結合することができ、したがって例えば、Ｆｃ受容体結合部位またはＦｃ受容体結合能を含む。「Ｆｃ部分」は、ＡＤＣＣを誘導することができる。
【００３４】
重鎖および軽鎖、特に、これらの可変領域のアミノ酸位置を示すために、Ｋａｂａｔ番号付けシステムを本明細書で使用する（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２）。前記システムによれば、重鎖可変領域は、３５Ａ位、３５Ｂ位、５２Ａ位〜５２Ｃ位、８２Ａ位〜８２Ｃ位、および１００Ａ位〜１００Ｋ位を含む０位〜１１３位のアミノ酸位置を含む。重鎖可変領域のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けによれば、３１位〜３５Ｂ位（ＣＤＲ１）、５０位〜６５位（ＣＤＲ２）、および９５位〜１０２位（ＣＤＲ３）に位置している。残りのアミノ酸位置は、フレームワーク領域ＦＲ１〜ＦＲ４を形成する。軽鎖可変領域は、２７Ａ位〜２７Ｆ位、９５Ａ位〜９５Ｆ位、および１０６Ａ位を含めた０位〜１０９位を含む。ＣＤＲは、２４位〜３４位（ＣＤＲ１）、５０位〜５６位（ＣＤＲ２）、および８９位〜９７位（ＣＤＲ３）に位置している。抗体の特定の遺伝子の初期形成に応じて、これらの位置のすべてが所与の重鎖可変領域または軽鎖可変領域中に存在しなければならないわけではない。重鎖または軽鎖可変領域中のアミノ酸位置が本明細書で述べられている場合では、別段の指定のない限り、これは、Ｋａｂａｔ番号付けによる位置に言及される。
【００３５】
本発明によれば、用語「キメラ抗体」は特に、定常領域がヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来し、少なくとも一方、好ましくは両方の可変領域が非ヒト抗体、例えば、マウス抗体などのげっ歯類抗体に由来する抗体を指す。
【００３６】
本発明によれば、用語「ヒト化抗体」は特に、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト抗体に由来し、定常領域、および可変領域の少なくとも１つのフレームワーク領域がヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来する抗体を指す。好ましくは、重鎖可変領域のすべてのＣＤＲ、またはより好ましくは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のすべてのＣＤＲが非ヒト抗体に由来する。さらに、好ましくは、重鎖可変領域のすべてのフレームワーク領域、またはより好ましくは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のすべてのフレームワーク領域がヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来する。ＣＤＲは、好ましくは、同じ非ヒト抗体に由来する。１つの可変領域のフレームワーク領域の最初の３つまたはすべては、同じヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来することが好ましいが、重鎖可変領域のフレームワーク領域は、軽鎖可変領域のフレームワーク領域と同じヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来する必要はない。特定の好適な実施形態では、ヒト化抗体は、１つまたは複数のＣＤＲが由来する非ヒト抗体と同じ抗原、特に同じエピトープに結合することができる。好ましくは、非ヒト抗体に由来するヒト化抗体のＣＤＲは、非ヒト抗体のＣＤＲと同一である。さらに、ヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来するヒト化抗体のフレームワーク領域は、ヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列のフレームワーク領域と同一であり得る。別の実施形態では、ヒト化抗体のフレームワーク領域は、これらが由来するヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列のフレームワーク領域と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を有し得る。置換されたアミノ酸残基は、ＣＤＲの１つまたは複数が由来する非ヒト抗体の対応するアミノ酸残基（特に、Ｋａｂａｔ番号付けによる同じ位置にあるアミノ酸残基に対応するもの）によって好ましくは置き換えられている。特に、ヒト化抗体の可変領域（重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域）のフレームワーク領域は、好ましくは３０以下のアミノ酸置換、好ましくは２５以下、２０以下、１５以下、１２以下、１０以下、または８以下のアミノ酸置換を含む。好適な実施形態では、ヒト化抗体の重鎖可変領域のすべてのフレームワーク領域は、一緒になって、これらが由来するヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列の重鎖可変領域のフレームワーク領域と、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％の相同性または同一性を共有する。さらに、ヒト化抗体の軽鎖可変領域のすべてのフレームワーク領域は、一緒になって、これらが由来するヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列の軽鎖可変領域のフレームワーク領域と、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％の相同性または同一性を好ましくは共有する。ヒト化抗体の定常領域は、任意のヒト抗体またはヒト抗体コンセンサス配列に由来し得る。特に、重鎖定常領域は、任意のタイプ、例えば、γ、δ、α、μ、またはεタイプの重鎖のものであり得る。したがってヒト化抗体は、任意のサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、Ｉ��Ｇ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２を含めた任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭのものであり得る。好ましくは、ヒト化抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２抗体、より好ましくはＩｇＧ１抗体である。さらに、軽鎖定常領域も、任意のタイプ、例えば、κまたはλタイプの軽鎖のものであり得る。好ましくは、ヒト化抗体の軽鎖は、κ鎖である。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体としてのヒト化抗ＨＥＲ２抗体の使用が好適である。
【００３７】
用語「ヒト抗体」は、本明細書において、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むように意図されている。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋら（２０００年、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２９６巻、５７〜８６頁）に記載されているように、定常領域も、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖系列配列、もしくはヒト生殖系列配列の突然変異バージョン、またはヒトフレームワーク配列分析に由来するコンセンサスフレームワーク配列を含有する抗体に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的な突然変異誘発によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含み得る。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書において、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むように意図されていない。特に、ヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示すヒトモノクローナル抗体であり得る。好ましくは、これは、組換え型であり、組換え手段によって調製、発現、創製、または単離されている。このような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発にかけることができ、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連する一方、ｉｎ  ｖｉｖｏでのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない場合のある配列である。
【００３８】
さらに、本発明による抗体は、フレームワークまたはＦｃ操作にかけられている場合がある。このような操作された抗体には、例えば、抗体の性質を改善するために、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に修飾が行われたものが含まれる。一般に、このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を減少させるために行われる。例えば、一手法は、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に「復帰突然変異させる」ことである。より具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖系列配列と異なるフレームワーク残基を含有し得る。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖系列配列と比較することによって同定することができる。フレームワーク領域配列をこれらの生殖系列配置に戻すために、体細胞突然変異を、例えば、部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発によって生殖系列配列に「復帰突然変異させる」ことができる。このような「復帰突然変異された」抗体も、本発明によって使用することができる。フレームワークまたはＣＤＲ領域内に行われる修飾に加えて、または代わりに、本発明の抗体は、一般に、抗体の１つまたは複数の機能的性質、例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合性、および／または抗原依存性細胞傷害性を変更するために、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作することができる。例えば、抗体のエフェクター機能を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基と置き換えることによってＦｃ領域を変更することができる。例えば、抗体がエフェクターリガンドに対する変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、１つまたは複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基と置き換えることができる。親和性が変更されているエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体、または補体のＣ１成分であり得る。一実施形態では、記載した抗体のＦｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸を修飾することによって、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増大させるように、かつ／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増大させるように修飾されている。この手法は、例えば、ＷＯ００／４２０７２にさらに記載されている。さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎについてのヒトＩｇＧ１の結合部位がマッピングされており、改善された結合性を有するバリアントが記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，  Ｒ．Ｌ．ら、２００１年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｎ．、２７６巻：６５９１〜６６０４頁を参照）。
【００３９】
標的アミノ酸配列が、その全長にわたって、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の参照アミノ酸配列の対応する部分と相同性または同一性を共有する場合、標的アミノ酸配列は、参照アミノ酸配列に「由来する」または「対応する」。例えば、ヒト化抗体のフレームワーク領域が特定のヒト抗体の可変領域に由来または対応する場合、ヒト化抗体のフレームワーク領域のアミノ酸は、その全長にわたって、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％のヒト抗体の対応するフレームワーク領域と相同性または同一性を共有する。「対応する部分」または「対応するフレームワーク領域」は、例えば、標的抗体の重鎖可変領域のフレームワーク領域１（ＦＲＨ１）が参照抗体の重鎖可変領域のフレームワーク領域１に対応することを意味する。同じことが、例えば、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、ＦＲＨ４、ＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４に当てはまる。特定の実施形態では、参照アミノ酸配列に「由来する」または「対応する」標的アミノ酸配列は、その全長にわたって、参照アミノ酸配列の対応する部分と１００％相同、または特に、１００％同一である。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列の「相同性」または「同一性」は、参照配列の全長にわたって、または相同性もしくは同一性が定義される配列に対応する参照配列の対応する部分の全長にわたって、本発明によって好ましくは決定される。
【００４０】
「特異的結合」は、好ましくは、抗体などの作用物質が、別の標的への結合性と比較して特異的であるエピトープなどの標的により強く結合することを意味する。作用物質は、これが第２の標的の解離定数（Ｋｄ）より低い解離定数で第１の標的に結合する場合、第２の標的と比較して第１の標的により強く結合する。好ましくは、作用物質が特異的に結合する標的の解離定数は、作用物質が特異的に結合しない標的の解離定数より１００分の１未満、２００分の１、５００分の１、または１０００分の１未満低い。
【００４１】
用語「トラスツズマブ」は、本明細書において特に、医薬Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ）中に使用されるトラスツズマブ抗体のアミノ酸配列を有する抗体トラスツズマブを指す。状況により別段に示されていない限り、抗体トラスツズマブはまた、そのＦｃ部分において、医薬Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｒｏｃｈｅ）中に使用されるトラスツズマブ抗体と同じまたは同様の（ｔｈｅ  ｏｒ  ａ  ｓｉｍｉｌａｒ）高いフコースグリコシル化パターンを有し、この場合、フコシル化は、少なくとも６０％、特に、少なくとも７０％である。異なるグリコシル化パターンを示す状況は、例えば、「Ｆｕｃ−トラスツズマブ」への言及である。用語Ｆｕｃ−トラスツズマブは特に、トラスツズマブと同じエピトープに結合し、医薬Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ）中に使用されるトラスツズマブ抗体のアミノ酸配列と少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好適には少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する抗体を指すが、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、そのＦｃ部分において、医薬Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）中に使用されるトラスツズマブ抗体より低い量のフコースを有し、特に、５０％以下、３０％以下、好ましくは２０％以下、より好適には１５％以下、最も好適には１０％〜０％のフコシル化をＦｃ部分中に有する。
【００４２】
本発明による用語「ＨＥＲ２」または「ＨＥＲ２／ｎｅｕ」は、特に、ヒト上皮増殖因子受容体２を指し、ＥｒｂＢ−２またはＣＤ３４０としても公知である。ＨＥＲ２は、細胞外リガンド結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内キナーゼドメインを含む受容体チロシンキナーゼである。そのリガンドに結合すると、ＨＥＲ２は、他のＥｒｂＢ受容体とホモ二量体またはヘテロ二量体を形成し、そのキナーゼ機能が活性化され、細胞内ドメインのいくつかのチロシンの自己リン酸化をもたらす。抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合することができる抗体である。さらに、抗ＨＥＲ２抗体は一般に、ＨＥＲ２陽性ヒトがん細胞の増殖を阻害することができる。
【００４３】
用語「抗体」、特に、「抗ＨＥＲ２抗体」は、本明細書において特に、抗体の集団または抗体を含む組成物、特に、薬剤投与に適した抗ＨＥＲ２抗体の集団または抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物を指す。抗体の集団または抗体を含む組成物中の抗体のすべて、または実質的にすべては、特に、同じアミノ酸配列を有する。抗ＨＥＲ２抗体などの抗体のグリコシル化フィーチャは特に、集団または組成物中の抗体の平均のグリコシル化を指す。例えば、本発明によれば、抗体のＦｃ部分、およびしたがってＣＨ２ドメイン内のフコースの（パーセンテージ）量は特に、フコース残基を含む抗体集団または抗体組成物中の抗体のＣＨ２ドメイン内の対応するグリコシル化部位に付着したすべての炭水化物鎖のパーセンテージを指す。前記炭水化物鎖は、ＩｇＧタイプ抗体の重鎖のＫａｂａｔ番号付けによるアミノ酸２９７位に対応するグリコシル化部位（例えば、配列番号９中のアミノ酸３０１位）に付着した炭水化物鎖を含む。Ａｓｎ２９７におけるＮ連結型グリコシル化は、哺乳動物ＩｇＧ内、および他の抗体アイソタイプの相同領域内で保存されている。好ましくは、炭水化物鎖の還元末端でＧｌｃＮＡｃ残基にα１，６連結を介して結合しているフコース残基のみが考慮される。特異的抗体種（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）のＣＨ２ドメイン内のフコースの量が述べられる場合、抗体集団または組成物中の前記特異的抗体種の抗体分子のＣＨ２ドメイン、およびしたがってＦｃ部分に付着した炭水化物鎖のみが、フコースのパーセンテージ量を判定するのに考慮される。抗体のＦａｂ部分中の炭水化物鎖は、存在する場合、考慮されない。同様に、抗体のバイセクティングＮ−アセチルグルコサミン（ビスＧｌｃＮＡｃ）の（パーセンテージ）量は、特に、ビスＧｌｃＮＡｃ残基を含む抗体集団中の抗体のＦｃ部分に付着したすべての炭水化物鎖のパーセンテージを指す。ビスＧｌｃＮＡｃは、複合型Ｎ−グリカン中の中央のマンノース残基に付着したＧｌｃＮＡｃ残基を指す。さらに、組成物中の抗体のガラクトースの（パーセンテージ）量は特に、少なくとも１つのガラクトース残基を含む抗体集団中の抗体のＦｃ部分に付着したすべての炭水化物鎖のパーセンテージを指す。
【００４４】
本発明によれば、用語「グリコシル化部位」は特に、天然グリコシル化酵素、特に、グリコシルトランスフェラーゼ、好ましくは天然に存在する哺乳動物またはヒトグリコシルトランスフェラーゼによって特異的に認識およびグリコシル化され得るアミノ酸配列を指す。特に、用語「グリコシル化部位」は、炭水化物が結合されている、または結合されることになるアスパラギン残基を含む、Ｎ−グリコシル化部位を指す。特に、グリコシル化部位は、アミノ酸配列Ａｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ／Ｃｙｓを有するＮ−グリコシル化部位であり、Ｘａａは、任意のアミノ酸残基である。好ましくは、ＸａａはＰｒｏでない。
【００４５】
用語「コンジュゲート」は特に、各化合物由来の性質の少なくともいくつかがコンジュゲート内で保持されるように一緒に連結された２種以上の化合物を意味する。連結は、共有結合性または非共有結合性結合によって実現され得る。好ましくは、コンジュゲートの化合物は、共有結合によって連結されている。コンジュゲートの異なる化合物は、化合物の原子同士間の１つまたは複数の共有結合を介して互いに直接結合され得る。代わりに、化合物は、リンカー分子を介して互いに結合されている場合があり、リンカーは、化合物の原子に共有結合性に付着している。コンジュゲートが２つを超える化合物から構成される場合、これらの化合物は、例えば、１つの化合物が次の化合物に付着した鎖コンホメーションで連結されてもよく、またはいくつかの化合物はそれぞれ、１つの中心の化合物に付着されてもよい。
【００４６】
用語「患者」は特に、ヒトを指す。
【００４７】
本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置され得る本発明による用語「ＨＥＲ２陽性がん」は特に、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する原発性がんまたは腫瘍を指す。ＨＥＲ２陽性がんとしては、それだけに限らないが、乳がん、胃がん、癌腫、大腸がん、移行上皮癌、膀胱がん、尿路上皮腫瘍、子宮がん、進行性食道腺癌、胃腺癌または胃食道接合部腺癌、卵巣がん、肺がん、肺腺癌、気管支がん、子宮内膜がん、腎がん、膵がん、甲状腺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、脳のがん、子宮頸がん、腸がん、肝がん、唾液腺がん（ｓａｌｉｖｉａｒｙ  ｇｌａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ）、および悪性ラブドイド腫瘍、ならびに特に、前述の転移形態がある。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置されるＨＥＲ２陽性がんは、乳がん、大腸がん、および膀胱がん、特に、転移乳がんおよび転移大腸がんから選択される。最も好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんは、乳がん、特に、転移乳がんである。好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんは、ＨＥＲ２を過剰発現し、かつ／またはＨＥＲ２遺伝子増幅を示す。したがって、ＨＥＲ２陽性がんは特に、ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍細胞および／または転移細胞を含むがんである。好ましくは、がん細胞の少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、少なくとも２５％、または少なくとも５０％が、ＨＥＲ２を過剰発現し、かつ／またはＨＥＲ２遺伝子増幅を示す。ＨＥＲ２陽性がんは特に、免疫組織化学検査によって決定される場合に少なくともレベル１＋（ＨＥＲ２  １＋）、好ましくは少なくともレベル２＋（ＨＥＲ２  ２＋）、より好ましくはレベル３＋（ＨＥＲ２  ３＋）のＨＥＲ２過剰発現を有するがんを指す。ある特定の実施形態では、ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋以下のＨＥＲ２発現レベルを有するがんである。実施例によって示されるように、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、中程度〜低度のＨＥＲ２過剰発現を示すにすぎないそれぞれのがんに対して治療上有効である。免疫組織化学検査は、この点において、固定された腫瘍試料の免疫組織化学的染色、および染色の分析を指す。０のＨＥＲ２発現レベル（ＨＥＲ２  ０）は、染色無し、または腫瘍細胞の１０％未満における膜染色、特に、細胞１個当たり２０，０００個未満のＨＥＲ２を指す。ＨＥＲ２  １＋は、細胞膜がほんの部分的に染色されている、特に、細胞１個当たり約１００，０００個のＨＥＲ２である、腫瘍細胞の１０％超における弱い膜染色を指す。ＨＥＲ２  ２＋は、腫瘍細胞の１０％超における膜全体の弱性〜中程度の染色、特に、細胞１個当たり約５００，０００個のＨＥＲ２を指す。ＨＥＲ２  ３＋は、腫瘍細胞の１０％超における強い完全な膜染色、特に、細胞１個当たり約２，０００，０００個のＨＥＲ２を指す。ＨＥＲ２発現は、好ましくは、がん細胞を含む組織学的試料、特に、ホルマリン固定、パラフィン包埋がん組織試料を使用して判定される。ＨＥＲ２過剰発現を判定するのに使用される免疫組織化学的アッセイは、好ましくは（ｉ）がん細胞を含む試料を、ＨＥＲ２に対する一次抗体と接触させるステップ、その後の（ｉｉ）試料を、一次抗体に対して作られ、目に見える最終生成物を有する反応を触媒する酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの視覚化剤にカップリングされた二次抗体と接触させるステップを含む。適当なＨＥＲ２免疫組織化学検査キットは、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（Ｄａｋｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  Ａ／Ｓ）およびＰａｔｈｗａｙ  ＨＥＲ２（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）である。ＨＥＲ２陽性新生物疾患は、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）または色原体ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）（ＣＩＳＨ）によって決定される場合、ＨＥＲ２遺伝子増幅に陽性であるがんも含む。がんは、腫瘍細胞内のＨＥＲ２遺伝子のコピー数が第１７染色体のコピー数の少なくとも２倍である場合、または腫瘍細胞が少なくとも４コピーのＨＥＲ２遺伝子を含む場合、ＦＩＳＨアッセイによるＨＥＲ２遺伝子増倍に陽性である。がんは、細胞核１個当たり少なくとも５コピーのＨＥＲ２遺伝子が腫瘍細胞の少なくとも５０％において存在する場合、ＣＩＳＨアッセイによるＨＥＲ２遺伝子増倍に陽性である。
【００４８】
「転移（ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）」または「転移（ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）」とは、がん細胞のその元の部位から体の別の部分への拡散を意味する。本発明の背景技術で上述したように、転移の形成は、非常に複雑なプロセスであり、通常、原発性腫瘍からのがん細胞の脱離、体の血液循環への侵入、および体内の他の正常組織内で増殖するための定着を伴う。詳細については、それは、本明細書にも適用されるそれぞれの開示に付託される。本明細書に記載するように、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置されるＨＥＲ２陽性がんは、好適な実施形態によれば、転移性がんとも本明細書で呼ばれる転移がんである。転移は遠位転移であり得る。転移は特に、ＨＥＲ２陽性がんについて上述したようにＨＥＲ２陽性であり、それは、本明細書でも適用される上記開示に付託される。本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で成功裏に処置され得る特定のタイプの転移は、皮膚転移、リンパ節転移、および内臓転移である。「皮膚転移（ｓｋｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）」または「皮膚転移（ｓｋｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）」は、同義語として使用される用語であり、内部がんに由来する皮膚内のがん細胞の増殖を指す。皮膚転移の発生および特徴は、本発明の背景技術で詳細に記載した。それは、本明細書でも適用されるそれぞれの開示に付託される。特に、皮膚転移は、潰瘍性皮膚転移であり得る。「内臓転移（ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）」または「内臓転移（ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）」は特に、内臓、体の内部器官、具体的には、心臓もしくは肺などの胸部、または肝臓、膵臓、もしくは腸などの腹部内のものにおける転移を指す。特に、用語「内臓転移」は、肺および／または肝臓における転移を指す。
【００４９】
本発明による用語「失敗した処置」もしくは「処置失敗」、または関連用語は特に、疾患の進行をもたらすがんの処置を指す。疾患の進行は特に、（ｉ）既存の腫瘍の、特に、少なくとも２５％のさらなる増殖、（ｉｉ）既存のタイプの１つもしくは複数の新しい転移の増殖もしくは形成（ｉｉｉ）異なるタイプの１つもしくは複数のさらなる転移の形成、（ｉｉｉ）さらなる病変部の形成、および／または（ｉｖ）１つもしくは複数の病変部のサイズの増大を指す。腫瘍のさらなる増殖は特に、少なくとも２５％の腫瘍体積の増大を指す。病変部のサイズの増大は特に、少なくとも２５％の病変サイズの増大を指す。
【００５０】
本発明による用語「順調な処置」または「処置成功」、または関連用語は特に、疾患の安定化、疾患の部分的な緩解および／または完全な緩解をもたらすＨＥＲ２陽性がんまたは転移の処置を指す。順調な処置は、好ましくは以下（ｉ）腫瘍増殖の阻害；（ｉｉ）腫瘍サイズの低減；（ｉｉｉ）同じタイプおよび／もしくは異なるタイプのさらなる転移の防止；（ｉｖ）転移の数の低減；（ｖ）さらなる病変部の防止；（ｖｉ）病変部の数の低減；（ｖｉｉ）１つもしくは複数の病変部のサイズの低減；ならびに／または（ｖｉｉｉ）痛みの低減のうちの１つまたは複数を含む。腫瘍サイズの低減は特に、腫瘍体積が２５〜５０％低減される緩解、腫瘍体積が５０％超低減される部分的な緩解、および腫瘍体積が１００％低減される完全な緩解を含めた、腫瘍体積の少なくとも２５％の減少を指す。病変部のサイズの低減は特に、病変サイズが２５〜５０％低減される低減、病変サイズが５０％超低減される部分的な低減、および病変サイズが１００％低減される完全な低減を含めた、病変サイズの少なくとも２５％の減少を指す。病変部は特に、原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移によって引き起こされる病変部を指す。病変部の特定の例は、特に皮膚転移によって引き起こされる皮膚潰瘍である。順調な処置は特に、無増悪生存期間の増大および／または寿命の増大、特に、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、好ましくは少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも６カ月、少なくとも９カ月、または少なくとも１年、さらにより好ましくは少なくとも１．５年、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年の無増悪生存期間または余命の増大をもたらす処置も含む。「安定病態」ならびにしたがって疾患の安定化は特に、（ｉ）２５％未満の腫瘍および／または転移体積の変動、ならびに（ｉｉ）転移の数の変化無しを含む。順調な処置は、好ましくは、少なくとも１カ月、より好ましくは少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも６カ月、少なくとも９カ月、または少なくとも１年、さらにより好ましくは少なくとも１．５年、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年の観察期間にわたって判定される。
【００５１】
処置失敗および順調な処置は、患者の処置を評価するのに当技術分野で一般に公知である臨床データおよび検査値からの結果によって確認される専門家の医学的判断に基づいて確立される。このようなデータは、例として、臨床検査、細胞学的および組織学的技法、内視鏡検査ならびに腹腔鏡検査、超音波、ＣＴ、ＰＥＴおよびＭＲＩスキャン、胸部Ｘ線、ならびにマンモグラフィーから得ることができる。さらに、腫瘍応答を判定するのに、ＲＥＣＩＳＴ基準を使用してもよい。
【００５２】
本発明による用語「手術」は特に、腫瘍、特に、乳房の腫瘍などの原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移のすべて、または一部を含む組織の外科的除去（切除またはエクトミー）を指す。
【００５３】
「アジュバント療法」は特に、手術後のがんの処置を指す。
【００５４】
「ネオアジュバント療法」は特に、手術前のがんの処置を指す。
【００５５】
「緩和医療」は特に、がんを著しく低減することを予期することなく症状管理に対処するために特に与えられるがん療法を指す。緩和ケアは、不治のがんに付随する症状を改善することを対象とする。緩和ケアの主目的は、患者の生活の残りの質を改善することである。痛みは、がんに付随する一般的な症状の１つである。末期がん患者のおよそ７５％が痛みを有する。痛みは主観的な症状であり、したがってこれは、技術的な手法を使用して測定することができない。がん患者の大部分は、隣接する神経、骨、もしくは軟組織を圧迫する腫瘍塊の結果として、または直接的な神経傷害（神経因性疼痛）から痛みを経験する。痛みは、肋骨、筋肉、および腹部などの内部構造（閉塞に付随するけいれんタイプの痛み）における影響を受けた神経から起こり得る。多くの患者は、追跡検査、処置（手術、放射線、および化学療法）、ならびに診断手順（すなわち、生検）の直接的な結果として様々なタイプの痛みも経験する。治療的に有用な緩和医療は、痛みを低減することができる。
【００５６】
用語「放射線治療（ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）」は、放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）としても知られ、特に、悪性細胞を制御し、または殺傷するためのイオン化放射線の医療上の使用を意味する。放射線治療は、例えば、手術後の腫瘍再発を防止するため、または原発性腫瘍もしくは転移を除去するために、アジュバントおよび／もしくはネオアジュバント療法として手術と組み合わせて、または手術を伴わないで使用することができる。
【００５７】
用語「医薬組成物」および同様の用語は特に、ヒトに投与するのに適した組成物、すなわち、薬学的に許容される成分を含有する組成物を指す。好ましくは、医薬組成物は、担体、希釈剤、または薬学的賦形剤、例えば、緩衝液、防腐剤、および張性モディファイヤーなどと一緒に、活性化合物、またはその塩もしくはプロドラッグを含む。
【００５８】
用語「抗体組成物」および「抗体を含む組成物」は、本明細書で互換的に使用される。抗体組成物は、流体または固体組成物であり得、凍結乾燥した、または再構成された抗体組成物も含む。好ましくは流体組成物が使用され、より好ましくは水性組成物が使用される。これは、好ましくは、水などの溶媒、ｐＨ値を調整および維持するための緩衝液、ならびに任意選択で、抗体を安定化させ、または抗体の分解を防止するためのさらなる作用物質をさらに含む。抗体組成物は、好ましくは、妥当な量の抗体、特に、少なくとも１ｆｍｏｌ、好ましくは少なくとも１ｐｍｏｌ、少なくとも１ｎｍｏｌ、または少なくとも１μｍｏｌの抗体を含む。特異的抗体を含む組成物は、さらなる抗体をさらに含み得る。しかし、好ましくは、特異的抗体を含む組成物は、特異的抗体は別として他の抗体を含まない。特に、抗体組成物中の抗体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、最も好ましくは約１００％が、同じ抗原またはエピトープに対して作られ、または結合する。したがって、本明細書で使用する抗体は、好ましくは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。抗体組成物は、好ましくは、医薬組成物である。
【００５９】
本発明の教示で実現される注目すべき治療結果、およびもたらされる新規処置選択肢を、参照される本発明の要約に簡単に記載した。実施例に示したデータに基づいて、本発明は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、ＨＥＲ２陽性がんを処置するための異なる新規処置選択肢を提供し、これらは、組み合わせることもできる。
【００６０】
発明の詳細な説明
第１の態様では、本発明は、転移性ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に転移性がんを有する患者を処置するための、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、または１０％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を提供する。したがって本発明は、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％、好ましくは４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、最も好適には１０％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、がんは、転移性がんである、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００６１】
さらに、実施例に示したデータに基づいて、本発明は、第２の態様において、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、がんを有する患者を処置するための、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、または１０％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、
ｂ）６０％、特に、７０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、またはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。前記新規治療的教示の利点は、上述されており、また、引き続いて記載される。
【００６２】
第３の態様では、実施例に示したデータに基づいて、本発明は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、転移性がんを有する患者を処置するための、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、１０％〜０％または１０％〜３％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、ＨＥＲ２陽性新生物疾患は、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有する、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。特に、本発明は、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％、好ましくは４０％以下、３０％以下、２０％以下、好ましくは１５％以下、最も好適には１０％〜０％または１０％〜３％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有する転移性がんである、抗ＨＥＲ２抗体を提供する。
【００６３】
さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者が、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、および／または
ｂ）６０％以上、好ましくは７０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、もしくはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、前記先行処置は、任意の順序で逐次、または同時に行われた、処置が開示されている。個々の処置の好適な実施形態は、引き続いて、かつ参照される特許請求の範囲において記載されている。実施例に示したように、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、特に、多数の転移に対する高い治療有効性を実証し、さらに、受けた以前の抗がん処置にもかかわらずがんが進行した事前処置された患者およびまた重度に事前処置された患者の順調な処置を可能にする。さらに、本発明の異なる態様を組み合わせることができる。例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、抗転移活性の改善を示し、先の抗体および／または化学療法処置に失敗した転移を処置するために有利に使用することができる。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、潰瘍性皮膚転移などの皮膚転移、ならびに肺および／または肝転移などの内蔵転移、ならびにリンパ節の転移を処置するのに使用することができる。さらに、治療効果は、ＩＨＣによって決定される場合に低ＨＥＲ２過剰発現（１＋および２＋）を示したＨＥＲ２陽性がんで見られた。したがってフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、１＋または２＋のＨＥＲ２過剰発現を示すにすぎないＨＥＲ２陽性がんに罹患している患者を処置するのに使用することができる。さらに、治療有効性は、単独療法設定で、かつまた低投与量で見られた。したがって、本発明は、やはり上記でさらに詳細に記載されているように、重要な新規処置選択肢を提供する。
【００６４】
本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体
本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、予想外に高い治療有効性を有し、従来の療法で処置することができない、または処置することができなかった患者および患者の亜群を処置することを可能にする。確立された抗がん剤、例えば、高フコース抗ＨＥＲ２抗体および／または化学療法剤を用いた処置に耐性である転移および腫瘍でさえ、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で成功裏に処置され得る。さらに、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、低度または中程度のＨＥＲ２発現（例えば、またはＩＨＣによって決定される場合にレベル１＋もしくは２＋）を示すにすぎないＨＥＲ２陽性がんに対して治療上有効である。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が単独療法で投与され、さらには低投与量で投与される場合でさえ、治療効果が見られる。
【００６５】
本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の重要なフィーチャは、抗体のＦｃ部分における改善されたグリコシル化パターンである。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、重鎖の第２の定常ドメイン（ＣＨ２）内でグリコシル化部位を有するＩｇＧ抗体、より好ましくはＩｇＧ１抗体である。このグリコシル化部位は特に、Ｋａｂａｔ番号付けによる重鎖のアミノ酸２９７位に対応するアミノ酸位置にあり、アミノ酸配列モチーフＡｓｎ  Ｘａａ  Ｓｅｒ／Ｔｈｒを有し、Ｘａａは、プロリンを除く任意のアミノ酸であり得る。Ａｓｎ２９７のＮ連結型グリコシル化は、哺乳動物ＩｇＧにおいて、および他の抗体アイソタイプの相同領域において保存されている。可変領域内に存在し得る任意選択の追加のアミノ酸に起因して、この保存されたグリコシル化部位は、配列番号９のアミノ酸３０１位にある。特に、組成物中に含まれるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、より好ましくは少なくとも９８％において、少なくとも１つのＣＨ２ドメイン、好ましくは両方のＣＨ２ドメインのグリコシル化部位は、炭水化物構造を担持する。本明細書に記載のフコシル化の量は、Ｆｃ領域内のこのグリコシル化部位で判定される。ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、可変ドメイン、ＣＨ１ドメイン、およびＣＬドメインのいずれにおいてもさらなるグリコシル化部位を含まず、かつ／または炭水化物構造を担持しない。
【００６６】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、５０％以下、４０％以下、３０％以下、またはさらには２０％以下、より好ましくは１５％以下、最も好ましくは１０％以下であるＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位におけるフコースの量を有し、またはアフコシル化されており、したがっていずれのフコースも含まない。特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、少なくとも２％、少なくとも３％、好ましくは少なくとも５％の残量のフコースを少なくとも含む。用語「フコースの量」は特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物中のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体に付着したすべての炭水化物鎖のフコース単位を担持する炭水化物鎖の相対量を指す。
【００６７】
本明細書で使用される、いずれのフコースも担持しない抗体を含めた、フコシル化の量が低減された抗ＨＥＲ２抗体は、様々な手段によって得ることができる。例えば、抗ＨＥＲ２抗体は、改変グリコシル化機構で宿主細胞内で発現させることができる。改変グリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野で記載されており、本明細書に記載するように、宿主細胞として使用して、自己のＦｃ領域内でフコシル化が低減された組換え抗ＨＥＲ２抗体を生成することができる。例えば、ＨａｎｇらによるＥＰ１，１７６，１９５は、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記載しており、この遺伝子は、フコシルトランスフェラーゼをコードし、その結果、このような細胞株内で発現される抗体は、低フコシル化を呈する。したがって、一実施形態では、本発明の組成物中に含まれる抗体は、低フコシル化パターンを呈する細胞株、例えば、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子の発現欠損（ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）を有する哺乳動物細胞株内で組換え発現によって生成される。ＷＯ０３／０３５８３５は、バリアントＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞であって、フコースをＡｓｎ（２９７）連結炭水化物に付着させる能力が低減されており、やはりその宿主細胞内で発現される抗体の低フコシル化をもたらす細胞を記載している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，  Ｒ．Ｌ．ら、２００２年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２７７巻：２６７３３〜２６７４０頁も参照）。本発明の組成物中に含まれる抗体は、哺乳動物様グリコシル化パターンに関して操作され、グリコシル化パターンとしてのフコースを欠く抗体を産生することができる酵母またはｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ  ｆｕｎｇｉ内で生成することができる（例えば、ＥＰ１２９７１７２Ｂ１を参照）。
【００６８】
好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、フコシル化能力が低減された、またはさらにはまったく無いヒト細胞株内で組換え発現によって得られる。それぞれの低減された、または非存在のフコシル化能力は、例えば、フコシル化に必要な酵素（例えば、ＦＵＴ８もしくはＧＭＤ）の発現を低減することによって、またはそれぞれの遺伝子機能を排除することによって、例えば、遺伝子ノックアウトによって実現することができる。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、ヒト細胞株、好ましくはヒト血液細胞株内で、特に、ヒト骨髄性白血病細胞株内で組換えで生成される。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を生成するのに使用される細胞株は、好ましくは、フコシル化活性が低減されており、もしくは存在せず、かつ／またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、抗体のフコシル化を低減し、またはさらには非存在にする条件下で生成される。本明細書に記載するように、低減された、または非存在のフコシル化活性は、フコシル化に必要な酵素（例えば、ＦＵＴ８またはＧＭＤ）の発現または活性をマニピュレートすることによって実現することができる。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体、特に、Ｆｕｃ−トラスツズマブの生成に使用され得る好適なヒト細胞株、および適当な生成手順は、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００８／０２８６８６Ａ２に記載されている。
【００６９】
さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のフコシル化のレベルは、細胞株によってこれらを生成した後、例えば、フコシダーゼを用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理によって低減することができる。
【００７０】
上記に論じたように、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、一グリコシル化プロファイルを有し、ヒト細胞株、好ましくはヒト骨髄性白血病細胞株内での発現によって得られる。ヒトグリコシル化プロファイルは、好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のＦｃ部分に付着した炭水化物鎖の少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、少なくとも８５％、またはより好適には少なくとも９０％が、複合型グリカン構造、好ましくは二分岐複合型グリカン構造であることで特徴付けられる。ヒトグリコシル化プロファイルを有するフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は特に、検出可能な量のＮ−グリコリルノイラミン酸（ＮｅｕＧｃ）および／またはＧａｌα１，３−Ｇａｌ構造を含まない。それぞれのグリコシル化構造は、げっ歯類細胞株などの非ヒト細胞株内で産生される抗体中に見つかる。さらに、これは、好ましくは、検出可能な量のα１，６カップリングＮ−アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＡｃ）を含む。
【００７１】
好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のビスＧｌｃＮＡｃの量より高い量のバイセクティングＮ−アセチルグルコサミン（ビスＧｌｃＮＡｃ）を含む。これは、少なくとも２％、好ましくは少なくとも５％、少なくとも８％、またはより好適には少なくとも１０％の量のＣＨ２ドメインに付着した炭水化物鎖内のビスＧｌｃＮＡｃを含み得る。ビスＧｌｃＮＡｃの量は、好ましくは、５％〜５０％、好ましくは７％〜４０％、より好ましくは８％〜２５％、より好適には１０％〜２５％の範囲内である。用語「ビスＧｌｃＮＡｃの量」は特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物中のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体に付着したすべての炭水化物鎖のバイセクティングＮ−アセチルグルコサミン単位を担持する炭水化物鎖の相対量を指す。コアフコースの量を低減し、同時にＦｃグリコシル化内のビスＧｌｃＮＡｃの量を増加させると、腫瘍溶解の強い増大、強い抗転移効力を示し、さらに、より広い患者スペクトルを効率的に処置することを可能にするフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体がもたらされることが判明した。
【００７２】
さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％の量のガラクトースを含む。ガラクトースの量は、好ましくは、５０％〜９５％、より好ましくは５５％〜９０％、最も好ましくは６０％〜８０％の範囲内である。用語「ガラクトースの量」は特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物中のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体に付着したすべての炭水化物鎖のうちの、少なくとも１つのガラクトース単位を含む炭水化物鎖であるガラクトシル化炭水化物鎖の相対量を指す。ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも１８％、または少なくとも２０％の２つのガラクトース単位を担持する炭水化物の相対量を含む。２つのガラクトース単位を担持する炭水化物鎖の相対量は特に、１０％〜５０％、好ましくは１５％〜４０％、より好ましくは１８％〜３０％の範囲内である。
【００７３】
ビスＧｌｃＮＡｃの量および／またはガラクトースの量は、好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のＣＨ２ドメインに付着した炭水化物鎖内の、したがって抗体のＦｃ部分内のビスＧｌｃＮＡｃの量およびガラクトースの量のみをそれぞれ指す。上述したビスＧｌｃＮＡｃおよびガラクトースを含むグリコシル化はまた、ヒトグリコシル化パターンに特徴的であり、上述したように、ヒト細胞株内で抗ＨＥＲ２抗体を発現させることによって得ることができる。
【００７４】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、ＩｇＧ抗体、より好ましくはＩｇＧ１抗体である。これは、その標的エピトープに特異的に結合する能力、およびＦｃγ受容体、特に、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａに結合する能力を有する。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）反応を誘導することができる。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体より強いＡＤＣＣを誘導することができる。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイ、特に、以下の実施例１５に記載のＡＤＣＣアッセイにおいて判定される場合、高フコース抗ＨＥＲ２抗体より少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、ＡＤＣＣを誘導することにおいて強力である。実施例１５に示したように、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（発明）をＦｕｃ＋抗体（先行技術）と比較するとき、ＡＤＣＣ抗腫瘍活性の最大１０〜１４０倍の改善が観察された。ＡＤＣＣの誘導におけるより高い効力は、好ましくは、高フコース抗ＨＥＲ２抗体と比較して、ＡＤＣＣの同じレベル（溶解された標的細胞の比など）、好ましくは高フコース抗ＨＥＲ２抗体の最大溶解の９５％における同じ比溶解を誘導するのに必要なフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のＸ分の１低い濃度を指す。例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体より５分の１低い濃度で同じレベルのＡＤＣＣを誘導する場合、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体よりＡＤＣＣを誘導することにおいて５倍強力である。実施例によって示したように、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体と比較して、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を使用するとき、１０〜１４０分の１低い抗体濃度が、同じＡＤＣＣ応答に必要であった。代わりに、ＡＤＣＣの誘導におけるより高い効力は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ濃度、好ましくは１０ｎｇ／ｍｌで、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体によって誘導されるＸ倍高いＡＤＣＣレベル（溶解された標的細胞の比など）を指すことができる。例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が同じ抗体濃度で高フコース抗ＨＥＲ２抗体より５倍高いレベルのＡＤＣＣを誘導する場合、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体よりＡＤＣＣを誘導することにおいて５倍強力である。ＡＤＣＣの誘導におけるＸ倍高い効力は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆアロタイプを有するドナーの効果細胞、またはＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖアロタイプを有するドナーの効果細胞、またはＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖアロタイプを有するドナーの効果細胞で誘導されるＡＤＣＣを特に指すことができる。好ましくは、ＡＤＣＣの誘導におけるＸ倍高い効力は、異なるＦｃγＲＩＩＩａアロタイプのそれぞれについて誘導されたＡＤＣＣの平均として決定される。実施例によって示したように、本発明によるフコース低減化抗体は、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体と比較して一般に、より高いＡＤＣＣ、低ＨＥＲ２過剰発現によって特徴付けられるがん細胞に対してさらにより顕著である効果を示す。したがって、��ＨＥＲ２抗体は、すべてのＡＤＣＣ受容体アロタイプでＡＤＣＣを有効に媒介することができ、さらに、この効果は、より低くＨＥＲ２を発現する腫瘍（ＩＨＣによって決定される場合に１＋）で見られた。
【００７５】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）およびＣＨ２ドメイン、より好ましくはドメインＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、軽鎖可変領域（ＶＬ）、好ましくはドメインＶＬおよびＶＨを含む。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含み得る。これは、好ましくは、組換えモノクローナル抗体、例えば、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体であり、好ましくはヒト化抗体である。
【００７６】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ＡＤＣＣを媒介し、好適な実施形態によれば、ＨＥＲ２／ｎｅｕの細胞外部分、特に、ＨＥＲ２／ｎｅｕのドメインＩＶに特異的に結合することができ、以下の活性：（ｉ）ＨＥＲ２へのリガンド結合を遮断することができること、（ｉｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ、特に、ＨＥＲ２／ｎｅｕのキナーゼ活性の活性化を遮断することができること、および／または（ｉｉｉ）特に、細胞内へのＨＥＲ２／ｎｅｕの内在化を誘導することによって、細胞表面におけるＨＥＲ２／ｎｅｕの量を低減することができることのうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくはすべてを有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、上述の特徴のすべてを有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、抗体トラスツズマブとの交差特異性を示し、特に、抗体トラスツズマブと同じエピトープに結合する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍性においてトラスツズマブと等価であるが、改善されたグリコシル化に起因してＡＤＣＣ媒介抗腫瘍性の増大を示す。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブと同じ重鎖、および好ましくはまた軽鎖ＣＤＲ配列を含む。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の重鎖、および好ましくはまた軽鎖のアミノ酸配列全体は、トラスツズマブの対応するアミノ酸配列と少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または少なくとも９７％同一である。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のアミノ酸配列は、トラスツズマブの対応するアミノ酸配列に由来する。
【００７７】
ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、かつ／またはＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、かつ／またはＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の重鎖可変領域は、これらのＣＤＲ配列の３つすべてを含み、特に、配列番号７のアミノ酸配列を含む。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、かつ／またはＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、かつ／またはＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖可変領域は、これらのＣＤＲ配列の３つすべてを含み、特に、配列番号８のアミノ酸配列を含む。さらに、ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の重鎖は、配列番号９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖は、好ましくは、配列番号１０のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、もしくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。上述したように、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍性においてトラスツズマブと等価である。
【００７８】
ある特定の好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含み、ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有する。
【００７９】
一実施形態によれば、低減された抗ＨＥＲ２抗体は、ＡＤＣＣを媒介し、ＨＥＲ２への特異的結合、およびＨＥＲ２／ｎｅｕの二量体化、特に、上皮増殖因子受容体ファミリーの他のメンバー、例えば、ＨＥＲ１、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４とのＨＥＲ２／ｎｅｕのヘテロ二量体化の遮断をすることができる。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、抗体ペルツズマブと交差特異性を示し、特に、抗体ペルツズマブと同じエピトープに結合する。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブと同じ重鎖、および好ましくはまた軽鎖ＣＤＲ配列を含む。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の重鎖および好ましくはまた軽鎖のアミノ酸配列全体は、ペルツズマブの対応するアミノ酸配列と少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または少なくとも９７％同一である。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のアミノ酸配列は、ペルツズマブの対応するアミノ酸配列に由来し、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍性においてペルツズマブと等価であるが、本明細書に記載の改善されたグリコシル化に起因してＡＤＣＣ媒介抗腫瘍性の増大を示す。
【００８０】
一実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、治療的活性物質などのさらなる作用物質とコンジュゲートした抗体を含むコンジュゲートである。さらなる作用物質は、好ましくは、がんの療法および／または監視において有用である。例えば、さらなる作用物質は、放射性核種、化学療法剤（ｃｈｅｍｔｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）、抗体、特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる種および／または異なる特異性のもの、酵素、相互作用ドメイン、検出可能標識、毒素、細胞溶解性成分、免疫調節剤、免疫エフェクター、ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ抗原、放射性同位体、ならびにリポソームからなる群から選択することができる。さらなる作用物質は、含まれる場合、特に、融合もしくは化学的カップリングによって共有結合的に、または非共有結合的に抗体に付着され得る。特定の好適なさらなる作用物質は、放射性核種、またはがん細胞を殺傷することができる細胞傷害性剤、例えば、化学療法剤、特に、他で本明細書に記載したものなどである。さらなる作用物質としてコンジュゲートされ得る化学療法剤の具体例としては、シスプラチンなどのアルキル化剤、抗代謝産物、植物性アルカロイドおよびテルペノイド、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキソールなどのタキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカンおよびトポテカン、ドキソルビシンなどの抗新生物薬がある。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、本明細書に記載の化学療法剤および／または抗体のいずれともコンジュゲートされ得る。一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、治療的活性物質であるさらなる作用物質とコンジュゲートされていない。実施例においても使用された一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、さらなる作用物質とコンジュゲートされていない。
【００８１】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置
実施例で示される臨床データで実証されるように、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、とりわけ高抗転移活性を示し、したがって、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体で処置することができない、または処置することができなかった転移の処置を可能にする。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、本明細書で特に定義される患者群において、単一治療剤として使用される場合でさえ、予想外に高い治療有効性を示す。転移性がんを含めたがんの順調な処置加えて、本発明の抗ＨＥＲ２抗体は、レベル１＋または２＋（ＩＨＣによって決定した場合）のＨＥＲ２発現を有するＨＥＲ２陽性がんの処置、および／または重度に事前処置された患者を含めた、本明細書に記載の事前処置された患者の処置を可能にする。特に、顕著な効果が、転移の処置、例えば特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、ならびに肺および肝転移などの内蔵転移の処置などにおいて見られた。これらの効果は、抗がん剤、例えば、化学療法剤および／または抗体療法、特に、抗ＨＥＲ２抗体を用いた先行処置が失敗した、重度に事前処置された患者においても見られた。したがって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、重度に事前処置された患者においてさえ、単独療法としての処置に使用することができる。単独療法としてフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を使用することは、治療効果を実現することができる一方、軽微な副作用のみが予期され得るという利点を有する。このことは、化学療法および／または抗体療法の複数のラインを用いた先行処置に加えて疾患が進行した進行性転移がんを有する患者を処置するときに利点があり、その理由は、この患者群は、芳しくない健康状態にあることが多く、したがって、さらなる積極的処置から除外されるためである。
【００８２】
しかし、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、患者の治療上の恩恵をさらに改善するために、化学療法剤またはさらなる抗がん抗体などの１種または複数の抗がん治療剤でがんがさらに処置される組合せ療法で使用することもできる。本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、低い投与量で、特に、従来の高フコース抗ＨＥＲ２抗体より低い投与量で有効であるので、このような組合せ療法は、特に、重度に事前処置された患者にやはり新規の有用な治療選択肢をもたらす。ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、１種または複数の抗がん剤、例えば、化学療法剤および／またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる１種もしくは複数のさらなる抗体と組み合わせて使用される。ここで、高フコース抗ＨＥＲ２抗体、特に、トラスツズマブについて確立された組合せ療法が使用され得る。処置は、放射線治療と組み合わせることもできる。
【００８３】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と組み合わせて使用され得る抗がん剤は、任意の化学療法剤、特に、ＨＥＲ２陽性がんの処置に有効であることが公知である化学療法剤から選択することができる。特に、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））に使用される抗がん剤（ａｎｔ−ｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ）との組合せが好適である。組合せパートナーは、タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテル）、およびＳＢ−Ｔ−１２１４；シクロホスファミド；ラパチニブ；カペシタビン；シタラビン；ビノレルビン；ベバシズマブ；ゲムシタビン；マイタンシン；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロン；アロマターゼ阻害剤、例えば、アミノグルテチミド、テストラクトン（テスラク）、アナストロゾール（アリミデクス）、レトロゾール（フェマラ）、エキセメスタン（アロマシン）、ボロゾール（リビゾール）、フォルメスタン（レンタロン）、ファドロゾール（アフェマ）、４−ヒドロキシアンドロステンジオン、１，４，６−アンドロスタトリエン−３，１７−ジオン（ＡＴＤ）、および４−アンドロステン−３，６，１７−トリオン（６−ＯＸＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エリプチシン、アウリントリカルボン酸、およびＨＵ−３３１；白金系化学療法剤、例えば、ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（シスプラチン）、ｃｉｓ−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）、および［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ’）白金（ＩＩ）（オキサリプラチン）、ならびに代謝拮抗剤、特に、葉酸代謝拮抗剤、例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、およびプララトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｕｒａｃｉｌ）、ゲムシタビン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル、およびテガフール−ウラシル、ならびにプリン類似体、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ならびにエストロゲン受容体ダウンレギュレーターからなる群から選択することができる。組合せ療法として使用される場合、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテル）と組み合わせて使用される。これは特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブに対応する場合、例えば、トラスツズマブと同じＣＤＲ配列、特に同じ全体的な配列を有する。ここで、組合せ療法において高フコース抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブを使用する場合、先行技術で使用されるのと基本的に同じ組合せスケジュールおよび投与スキームを使用することができる。確立されたトラスツズマブ療法に基づくフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の適当な組合せとしては、それだけに限らないが、
（ｉ）ドキソルビシンを含む処置レジメンの一部として、シクロホスファミド、およびパクリタキセルまたはドセタキセル
（ｉｉ）ドセタキセルおよびカルボプラチン、
（ｉｉｉ）パクリタキセル、
（ｉｖ）シスプラチン、カペシタビン（ｃａｐｅｃｅｔａｂｉｎｅ）、または５−フルオロウラシル
との組合せ療法がある。
【００８４】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、アントラサイクリン療法の後で使用することができる。
【００８５】
さらに、治療抗体を、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の組合せパートナーとして使用することができる。これは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なるがん療法で有用な任意の抗体であり得る。特に、さらなる抗体は、行政機関、例えば、米国食品医薬品局（ｔｈｅ  Ｕ．Ｓ．  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、ＦＤＡ）、欧州医薬品庁（ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ、ＥＭＡ、以前にＥＭＥＡ）、および医薬品医療機器連邦研究所（ｔｈｅ  Ｂｕｎｄｅｓｉｎｓｔｉｔｕｔ  ｆｕｒ  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ  ｕｎｄ  Ｍｅｄｉｚｉｎｐｒｏｄｕｋｔｅ、ＢｆＡｒＭ）によってがん処置のために認可されている。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体との組合せ処置に使用され得るさらなる抗体の例は、ペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体（これは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブと交差特異性を示し、好ましくはフコース低減化トラスツズマブ抗体である場合に特に実現可能である）、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブ（アービタックス）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｏｍａｂ）（ベクティビックス）、およびニモツズマブ（テラロック（Ｔｈｅｒａｌｏｃ））；ベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体；アレムツズマブ（キャンパス）などの抗ＣＤ５２抗体；ブレンツキシマブ（アドセトリス）などの抗ＣＤ３０抗体；ゲムツズマブ（マイロターグ）などの抗ＣＤ３３抗体；ならびに抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）、トシツモマブ（ベキサール）、およびイブリツモマブ（ゼヴァリン）である。
【００８６】
本明細書に提示のデータは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が順調であり、かつ／または、同等の投薬レジメンを使用して、高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置より効率的であることを実証する。本明細書に提示のデータによって示されるように、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、別の抗体、特に、トラスツズマブなどの高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が失敗する一方で、成功する。この処置の成功は、原発性がんで、ならびにレベル２＋または１＋のＨＥＲ２発現（ＩＨＣによって決定した場合）を有する転移およびがんの処置において見られる。この効果は、同等の投薬レジメンを使用するとき、またはさらにはより低い投与量を使用するとき見られる。
【００８７】
本願に提示のデータは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位におけるバリンに関してホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖ）である患者にとって順調であり、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置より前記患者にとって効率的でもあり得ることを示す。さらに、提示したデータは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位におけるフェニルアラニンに関してホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）である患者、ならびにＦｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位におけるバリンおよびフェニルアラニンに関してヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）である患者にとって順調であり、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置より前記患者にとって効率的であることを示す。さらに、データは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、あらゆるＦｃγ受容体ＩＩＩａアロタイプ、特に、すべてのＦアロタイプ（Ｆ／ＦおよびＦ／Ｖ）の患者を処置するのに成功裏に使用され得、かつ／または対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置より前記患者にとって効率的であることを示す。それによって、本発明は、転移がんに罹患している患者、特に重度に事前処置された患者に改善された療法を提供することにおいて著しく寄与し、その理由は、本発明による処置が、一般に低い生存のチャンス、および限られた処置選択肢を有する患者の前記群のすべてのメンバーに利用可能であるためである。
【００８８】
さらに、本明細書に教示のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、強いＨＥＲ２過剰発現（例えば、ＩＨＣによって決定される場合に３＋、例えば、細胞１個当たりおよそ１＊１０６分子を有するＳＫ−ＢＲ−３で行った実施例を参照）を示すがん細胞に対してだけでなく、より低いＨＥＲ２発現（例えば、ＩＨＣによって決定される場合に１＋または２＋、例えば、およそ３．５＊１０４分子／細胞を有するＭＣＦ−７細胞で行った実施例を参照）を示すがん細胞に対してもＡＤＣＣ応答の増強を示す。したがって、より多くの患者、特に、１＋または２＋である、特に、Ｆ／ＦまたはＦ／Ｖアロタイプを有する転移性がんを含めたＨＥＲ２陽性がんに罹患している患者が、本明細書に記載の新規処置から恩恵を受けることになる。
【００８９】
本明細書に提供されるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、ＨＥＲ２陽性原発性腫瘍、ＨＥＲ２陽性再発性腫瘍、および／またはこのような腫瘍のＨＥＲ２陽性転移の処置用であり、特に、手術の前、間、または後の処置、および転移の防止または処置に有用である。本発明によって実証されるように、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、ならびに内臓転移、例えば、肺転移および肝転移の転移の防止を含めた処置に特に有用である。本明細書に提供されるデータによって示されるように、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、ＨＥＲ２陽性腫瘍または転移によって引き起こされる病変を処置するのに、特に、皮膚潰瘍形成などの皮膚病変、またはリンパ節病変を処置するのに成功裏に使用され得る。さらに、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、痛みの処置に使用することができ、したがって不治のがんを有する患者の緩和医療として使用することができることが観察された。
【００９０】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は特に、アジュバント療法としての患者の処置用である。ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ネオアジュバント療法としての、または組み合わせたネオアジュバント−アジュバント療法における患者の処置用である。さらに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、緩和療法としての患者の処置用である。
【００９１】
実施例によって示したように、本明細書に教示のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、治療的に順調であり、特に、腫瘍もしくは転移の緩解または疾患の安定化をもたらすことができる。特に、分析した重度に事前処置された患者において、疾患の少なくとも安定化、および部分応答が観察され、それは、基本的に治療選択肢をまったく有さないか、またはほんの限られた治療選択肢を有する重度に事前処置された患者の患者群における重要な成功である。特に、実施例は、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、腫瘍増殖の阻害、腫瘍サイズの低減、さらなる転移（同じもしくは異なるタイプの）の防止、および／または転移の数もしくはサイズの低減をもたらし得ることを示す。特に、原発性腫瘍および／または転移によって引き起こされる病変部の印象的な低減が、特に、潰瘍性皮膚転移を含めた皮膚転移、リンパ節転移、ならびに肺および肝転移を含めた内蔵転移に関して観察された。縦隔アデノパシーの低減も観察された。本発明の処置で得られる治療効果に起因して、患者の無増悪生存期間、および／または寿命の増大を実現することができる。
【００９２】
実施例によって示したように、本明細書に教示のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高度に有効であり、したがって、治療応答が迅速に見られる。これは、転移性がんに罹患している患者群、および複数の先の処置が失敗した重度に事前処置された患者の患者群において重要な利点である。実施例によって示したように、本明細書に教示のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、複数の先の処置が失敗した転移性がんに罹患している患者群を処置するのにも使用することができる。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置の治療効果、特に、少なくとも部分応答は、好ましくは少なくともフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第２の投与後に、好ましくはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第１の投与後に既に得られる。実施例によって示したように、潰瘍性皮膚転移の相当な低減が、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた第１の処置後に観察された。ある特定の実施形態では、治療効果は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第１の投与をした後、８週間以下、好ましくは７週間以下、６週間以下、５週間以下、４週間以下、３週間以下、または２週間以下、より好ましくは１週間以下後に観察される。
【００９３】
先行処置
本発明者らは、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が、複数の先の抗がん処置、特に、化学療法剤および／または他の抗がん抗体、特に、高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた前処置に失敗した患者においてさえ高い治療有効性および臨床的成功を示すことを見出した。がん療法は、疾患がさらに進行しているほど、特に転移が進行している場合、より失敗しやすいので、観察された効果は注目すべきである。複数の処置後、がん細胞は、高度に突然変異されており、それによって処置をより容易に逃れる。さらに、腫瘍負荷、すなわち、患者中の腫瘍細胞の数は、疾患の進行とともに増大する。より高い腫瘍細胞数において、一部の腫瘍細胞の殺傷より、残っている腫瘍細胞の増殖が上回っている場合がある。同じことが転移の発生に当てはまる。したがって、重度に事前処置された患者、特に、広く拡散した転移を有する患者におけるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の示された治療効果は、印象的で予想外であり、新規の患者群に対して新規処置選択肢も提供する。
【００９４】
これらの知見を考慮すると、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患の１つまたは複数の以前の処置を受けたことがある患者において、前記ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特にＨＥＲ２陽性がんを処置するのに適している。一実施形態によれば、前記ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、前記ＨＥＲ２陽性がんは、転移性である。新生物疾患の先行処置としては、１種または複数の化学療法剤を用いた処置、放射線処置（放射線治療）、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる１種または複数の治療抗体を用いた処置、特に、自己の効力に関してフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体に好ましくは対応する（例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍性においてトラスツズマブと等価である）１種または複数の高フコース抗体を用いた処置、ならびにこれらの処置の２つ以上の組合せがある。特に、トラスツズマブなどの高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた少なくとも１つの前処置は、単独療法または組合せ療法として行われた。
【００９５】
さらに、ＨＥＲ２陽性新生物疾患は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置の前に手術によって処置されている場合がある。特に、患者の先行処置は、がん手術、好ましくは、原発性腫瘍および／または転移の少なくとも一部の外科的切除を伴ったものである。
【００９６】
好適な実施形態では、患者は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置の前に、２つ以上、好ましくは３つ以上、より好ましくは４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、または８つ以上の先行する抗がん処置に付された。先行処置は、好ましくは、単独療法として、あるいはさらなる療法、例えば、１種もしくは複数の化学療法剤、および／または放射線治療、および／またはＨＥＲ２と異なる抗原に対する１種もしくは複数のさらなる抗体などと組み合わせた、特にトラスツズマブなどの高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた少なくとも１つの処置を含む。高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた先行処置は、特に、マイタンシンなどの化学療法剤などのさらなる作用物質にコンジュゲートした、トラスツズマブなどの高フコース抗ＨＥＲ２抗体も使用した場合がある。一実施形態では、前処置で使用した高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、さらなる作用物質にコンジュゲートしていなかった。一実施形態によれば、非グリコシル化抗ＨＥＲ２抗体が先行処置で使用された。
【００９７】
特定の実施形態では、患者は、本明細書に記載のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置される前に、少なくとも２、好ましくは少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０の異なる抗がん剤、例えば、化学療法剤および／または治療抗体で処置されたことがある。
【００９８】
先行処置の１つまたは複数、特にすべてが失敗し、ＨＥＲ２陽性がんが先行処置の後に再発し、または進行した。
【００９９】
先行処置で使用される高フコース抗ＨＥＲ２抗体
本発明の好適な態様および実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体で患者を処置して失敗した後に使用される。高フコース抗ＨＥＲ２抗体およびその特定の実施形態に関する詳細は既に上述した。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体および高フコース抗ＨＥＲ２は、同じ抗体に基づき、したがって特に、同じ抗原に結合し、同じＣＤＲ領域を含むが、Ｆｃ領域内のこれらのグリコシル化、特に、これらのフコースの量において互いに異なる。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体より低い量のフコースを有し、より強いＡＤＣＣ応答を媒介することができる。さらに、これは好ましくは、上述したように、より高い量のビスＧｌｃＮＡｃを有する。
【０１００】
高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、そのＣＨ２ドメイン内に、６５％以上、７０％以上、または７５％以上であるフコースの量を有する。それぞれの高フコース抗体は、ＣＨＯ細胞またはＳＰ２／０細胞などの標準的な細胞株内で抗体を産生させる際に得られる。例えば、ＣＨＯ細胞内で産生される抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））は、ＣＨ２ドメインに付着した炭水化物鎖中に７０％超のフコースを含む高フコース抗ＨＥＲ２抗体である。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のＣＨ２ドメイン内のフコースの量は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のＣＨ２ドメイン内のフコースの量より、少なくとも２０パーセンテージポイント、好ましくは少なくとも３０パーセントポイント、より好ましくは少なくとも４０パーセンテージポイント、少なくとも５０パーセンテージポイント、または少なくとも６０パーセンテージポイント、またはさらには少なくとも７０パーセンテージポイント低い。例えば、高フコース抗ＨＥＲ２抗体が７０％のフコース含量を有する場合、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、６０パーセンテージポイントより低いフコース含量を有し、これは、１０％のフコース含量を有する。一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、アフコシル化されており、フコースを含まない。
【０１０１】
さらなる実施形態では、患者の以前の処置で使用された高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、１０％以下、７％以下、もしくは５％以下、より好ましくは３％以下のＣＨ２ドメイン内のビスＧｌｃＮＡｃの量を有し、またはビスＧｌｃＮＡｃを含まない。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のビスＧｌｃＮＡｃの量は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のビスＧｌｃＮＡｃの量より、好ましくは少なくとも５パーセンテージポイント、より好ましくは少なくとも７パーセンテージポイント、最も好ましくは少なくとも１０パーセンテージポイント高い。さらに、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、７０％以下、６０％以下、または５５％以下、特に、５０％以下の量のガラクトースをＣＨ２ドメイン内に含み得る。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のガラクトースの量は、好ましくは、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のガラクトースの量より、少なくとも１０パーセンテージポイント高く、より好ましくは少なくとも１５パーセンテージポイント高く、または少なくとも２０パーセンテージポイント高く、最も好ましくは少なくとも２５パーセンテージポイント高い。
【０１０２】
高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と同じ抗体タイプのものであり、特に、ＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ１抗体である。好ましくは、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに特異的に結合することができ、かつ／またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と交差特異性を示す。ある特定の実施形態では、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の対応するアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、より好ましくは１００％同一である重鎖および／または軽鎖アミノ酸配列を有する。特に、重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のＣＤＲの対応するアミノ酸配列と同一である。好適な実施形態では、前処置で使用された高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）であり、または抗体トラスツズマブとの交差特異性を示す。
【０１０３】
一実施形態によれば、前処置で使用された高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、リガンド結合、ならびに／またはＨＥＲ２／ｎｅｕの二量体化、特に、上皮増殖因子受容体ファミリーの他のメンバー、例えば、ＨＥＲ１、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４とのＨＥＲ２／ｎｅｕのヘテロ二量体化を遮断することができる。ある特定の実施形態では、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、抗体ペルツズマブ（オムニターグ）であり、または抗体ペルツズマブと交差特異性を示す。
【０１０４】
一実施形態によれば、前処置で使用された高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のエピトープと異なるＨＥＲ２のエピトープに特異的に結合する。この実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体および高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、異なるＣＤＲ配列を有する。一実施形態によれば、これらは、これらの作用機序において少なくとも１つの差異を有する。
【０１０５】
高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、完全抗体、または抗体の断片もしくは誘導体であり得る。上記一実施形態で記載したように、前処置で使用される高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、さらなる治療剤とコンジュゲートされ得る。適当な治療剤の例は、放射性核種および化学療法剤、特に、本明細書に記載の化学療法剤、例えば、マイタンシンである。一実施形態によれば、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、コンジュゲート無しである。高フコース抗ＨＥＲ２抗体を用いた先行処置は、単独療法、あるいは１種もしくは複数の化学療法剤、および／または１種もしくは複数のさらなる抗体、および／または放射線治療と一緒の組合せ療法であり得る。適当な化学療法剤およびさらなる抗体は、他で本明細書に記載されたものである。
【０１０６】
実施例に示したように、本発明によって使用されるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、先行処置において、さらに、有効な治療設定において使用された高フコース抗ＨＥＲ２抗体であって、いずれの効果も示さなかった高フコース抗ＨＥＲ２抗体より高い治療有効性を有する。治療効果および処置可能な患者群の詳細は、本明細書に他で記載されている。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の治療有効性は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ用量であるが、それより低い頻度で投与される場合、および／またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ頻度であるが、それより低い用量で投与される場合でさえ、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体の治療有効性より依然として高いことも観察された。したがって、有利には、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を使用するとき、投与量を下げることができ、処置サイクルを延長することができる。
【０１０７】
さらなる実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、グリコシル化されていない抗ＨＥＲ２抗体で患者を処置して失敗した後に使用される。Ｆｃ部分でまったくグリコシル化されていない抗体は、Ｆｃ受容体への結合性の低減を示し、したがって、強いＡＤＣＣ活性を媒介することができない。高フコース抗ＨＥＲ２抗体に関して本明細書に記載したフィーチャおよび実施形態は、非グリコシル化抗ＨＥＲ２抗体にも同様に当てはまる。特に、非グリコシル化抗ＨＥＲ２抗体は、ＣＨ２ドメインを含まない抗体断片、特にＦｃ領域を含まない抗体断片を包含する。
【０１０８】
先行処置で使用される他の抗原に対する抗体
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なるさらなる治療抗体には、他の抗原に対して作られ、かつ／またはＨＥＲ２に特異的に結合しない抗体も含まれる。前処置で使用され得るこれらのさらなる抗体は、好ましくは、腫瘍細胞に存在し、非腫瘍細胞に好ましくは存在しない、またはより低い量で非腫瘍細胞に、もしくは抗体にアクセス可能でない部位で存在する抗原に特異的に結合する。好ましくは、さらなる抗体は、行政機関、例えば、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）、欧州医薬品庁（ＥＭＡ、以前にＥＭＥＡ）、および医薬品医療機器連邦研究所（ＢｆＡｒＭ）などによってがん処置のために認可されている。さらなる抗体の好適な例は、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブ（アービタックス）、パニツムマブ（ベクティビックス）、およびニモツズマブ（テラロック））；ベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体；アレムツズマブ（キャンパス）などの抗ＣＤ５２抗体；ブレンツキシマブ（アドセトリス）などの抗ＣＤ３０抗体；ゲムツズマブ（マイロターグ）などの抗ＣＤ３３抗体；ならびに抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）、トシツモマブ（ベキサール）、およびイブリツモマブ（ゼヴァリン）である。
【０１０９】
さらなる抗体は、完全抗体、または抗体の断片もしくは誘導体であり得る。一実施形態では、さらなる抗体は、さらなる治療剤にコンジュゲートされている。このような治療剤の例は、放射性核種、および化学療法剤、特に、本明細書に記載の化学療法剤である。一実施形態によれば、先行処置で使用されたさらなる抗体は、コンジュゲート無しである。
【０１１０】
先行処置で使用される化学療法剤
ある特定の実施形態では、先行処置は、一化学療法剤を用いた、またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる１種もしくは複数の治療抗体と任意選択で組み合わせた２種以上の化学療法剤の組合せを用いた１つまたは複数の処置を含む。化学療法剤は、任意の化学療法剤であり得、シクロホスファミド；ラパチニブ；カペシタビン；シタラビン；ビノレルビン；ベバシズマブ；ゲムシタビン；マイタンシン；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロン；タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテル）、およびＳＢ−Ｔ−１２１４；アロマターゼ阻害剤、例えば、アミノグルテチミド、テストラクトン（テスラク）、アナストロゾール（アリミデクス）、レトロゾール（フェマラ）、エキセメスタン（アロマシン）、ボロゾール（リビゾール）、フォルメスタン（レンタロン）、ファドロゾール（アフェマ）、４−ヒドロキシアンドロステンジオン、１，４，６−アンドロスタトリエン−３，１７−ジオン（ＡＴＤ）、および４−アンドロステン−３，６，１７−トリオン（６−ＯＸＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エリプチシン、アウリントリカルボン酸、およびＨＵ−３３１；白金系化学療法剤、例えば、ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（シスプラチン）、ｃｉｓ−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）、および［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ’）白金（ＩＩ）（オキサリプラチン）；ならびに代謝拮抗剤、特に、葉酸代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、およびプララトレキサートなど、ピリミジン類似体、例えば、フルオロウラシル、ゲムシタビン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル、およびテガフール−ウラシル、ならびにプリン類似体からなる群から選択され得る。特に、先行処置は、タキサンを用いた１つまたは複数の処置を含んでいた。
【０１１１】
先行処置のスケジュール
ＨＥＲ２陽性がんを処置するのに後にフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が使用される、患者が受けた例示的な先行処置は、以下に示されており、前処置は、以下の処置の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、あるいは少なくとも３つを伴う：
−  単独療法としてトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））ならびに／または化学療法剤と組み合わせた、特にタキサン、例えば、ドセタキセルおよびビノレルビンと組み合わせたトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）を用いた少なくとも１つの処置ならびに／あるいは
−  少なくとも１つのトラスツズマブ単独療法、およびトラスツズマブを伴う少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの組合せ療法、ならびに／あるいは
−  少なくとも１種のタキサンを用いた少なくとも１つの処置、好ましくは、単独療法または組合せ療法として１種、２種、またはそれ以上の異なるタキサン、特にパクリタキセルおよびドセタキセルを用いた少なくとも２つの別個の処置、ならびに／あるいは
−  好ましくは、ゲムシタビンなどの化学療法剤と組み合わせたシスプラチンなどの白金系化学療法剤を用いた少なくとも１つの処置、ならびに／あるいは
−  好ましくは、アジュバント療法としての少なくとも１つの放射線治療、ならびに／あるいは
−  一化学療法剤または異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ドキソルビシンとシクロホスファミドの組合せ、ラパチニブとカペシタビンの組合せ、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎｅ）とエトポシドとシタラビンの組合せ、およびベバシズマブとビノレルビンとカペシタビンの組合せなどを用いた少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの処置、ならびに／あるいは
−  異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ホリン酸とフルオロウラシルとオキサリプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）の組合せ、ホリン酸とフルオロウラシルとイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）の組合せ、およびテガフール−ウラシルとホリン酸カルシウムの組合せを用いた少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、または少なくとも３つの処置、ならびに／あるいは
−  任意選択で１種または複数の化学療法剤と組み合わせた、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる治療抗体、特に、パニツムマブもしくはセツキシマブなどの抗ＥＧＦＲ抗体、および／またはベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体を用いた少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、または少なくとも３つの処置。
【０１１２】
上記先行処置は、アジュバントおよび／またはネオアジュバント療法として使用されていた場合があり、がんの先行処置は、ここでは、かつ好ましくは手術を含み得る。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、任意の順序での上記処置の１つもしくは複数、好ましくは２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、または８つ以上の後の、患者におけるがんを処置するためのものである。特に、先行処置は、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））などの高フコース抗ＨＥＲ２抗体を使用していた。
【０１１３】
ＨＥＲ２陽性新生物疾患および処置される患者
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体によって処置されるＨＥＲ２陽性新生物疾患は、好ましくは、上記で詳述したＨＥＲ２陽性がんである。その中で、ＨＥＲ２陽性がんの好適なタイプも記載した。それは、繰り返しを回避するために上記開示に付託される。そこに記載されているように、ＨＥＲ２陽性がんは、特に、乳がん、結腸直腸がん、大腸がん、膀胱がん、卵巣がん、胃がん、食道がん、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの肺がん、気管支がん、および耳下腺癌などの唾液腺がん（ｓａｌｖｉａｒｙ  ｇｌａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ）からなる群から選択され得る。好適であるある特定の実施形態では、がんは、転移性がんである。ＨＥＲ２陽性がんは、任意のタイプの転移、例えば、皮膚転移、リンパ節転移、内臓転移、例えば、肺転移および肝転移など、ならびに／または脳転移などを含み得る。ある特定の実施形態では、がんは、ＩＨＣによって決定される場合にレベル２＋または１＋のＨＥＲ２発現を有するがんであり、任意選択で、これらの特徴を有する転移性がんであり得る。本発明によって可能になる利点および特定の処置スケジュールは上述し、それは、上記開示に付託される。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、原発性がんまたは腫瘍が１つまたは複数の転移を既に発生させた転移性がんを処置するためのものである。１つまたは複数の転移は特に、原発性がんまたは腫瘍が発生した組織と異なる組織内に存在する。
【０１１５】
好適な実施形態では、処置される患者は、ＨＥＲ２陽性乳がん、特に、転移性乳がんに罹患している。乳がんとしては、非浸潤性乳管がん（ｄｕｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｍｏｎａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）、浸潤性乳管癌、非浸潤性小葉癌、浸潤性小葉癌、髄様癌、乳首のパジェット病、および転移乳がんがある。このようなＨＥＲ２陽性乳がんの具体例は、特に、リンパ節関与を伴った浸潤性乳房乳管癌である。一実施形態では、処置される患者は、転移性乳がんを有し、皮膚転移および／またはリンパ節転移に罹患している。特に、処置される患者は、原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移の部位で病変部を有し得る。特に、患者は、皮膚潰瘍形成、特に、少なくとも２ｃｍ、好ましくは少なくとも３ｃｍ、少なくとも４ｃｍ、少なくとも５ｃｍ、または少なくとも６ｃｍの直径を有する皮膚潰瘍形成などの皮膚病変を有し得る。患者は、リンパ節転移によって引き起こされる縦隔アデノパシーも有し得る。特に、処置される患者において、原発性腫瘍および／または転移の少なくとも一部が、例えば、手術および／または放射線治療によって除去されたが、例えば、転移および／または再発性腫瘍が存在する。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、処置される患者は、エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）および／またはプロゲステロン受容体陰性（ＰｇＲ−）であるＨＥＲ２陽性腫瘍および／またはＨＥＲ２陽性転移を有する。エストロゲン受容体陰性は、がん細胞にエストロゲン受容体をまったく検出することができないがんを指す。プロゲステロン受容体陰性は、がん細胞にプロゲステロン受容体をまったく検出することができないがんを指す。
【０１１７】
ＨＥＲ２陽性がんは、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、化学療法剤および／または治療抗体などの１種または複数の抗がん剤、特に、本明細書に記載の化学療法剤の１種もしくは複数、および／または本明細書に記載の抗体の１種もしくは複数、好ましくは、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）および／またはペルツズマブ（オムニターグ）などの本明細書に記載の高フコース抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも１種または複数に対して耐性であり得るか、またはこれらで処置した後に進行した場合がある。さらに、ＨＥＲ２陽性新生物疾患は、放射線治療に対して耐性であるか、またはその後に進行している。
【０１１８】
処置される患者は、ＨＥＲ２陽性がんを患っている任意のヒト患者であり得る。好ましくは、患者は、重度に事前処置されたがん患者、特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置される前に、１つまたは複数の、好ましくは２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、または６つ以上のがん療法に付された患者である。処置される患者を特徴付けるそれぞれの先行処置は上述し、それは、上記開示に付託される。
【０１１９】
本発明者らはとりわけ、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアロタイプにかかわらず１つまたは複数のがん療法に対して耐性であるか、またはこれらの後に進行したＨＥＲ２陽性がんを有する患者の処置を改善することを見出した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで実証され、臨床現場で確認されたように、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、特に、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／ＦまたはＦ／Ｖアロタイプを有するドナーから得られる効果細胞に対して、増大したＡＤＣＣ活性を有する。これらの効果細胞で、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、ＡＤＣＣアッセイにおいてあまり有効でない。しかし、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖアロタイプを有する患者に一般的な高フコース抗ＨＥＲ２抗体に対して耐性であるがんを有する患者の処置の改善も示す。したがって患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａの任意のアロタイプを有し得、本明細書に記載の新規処置から恩恵を受けることになる。特に、患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンについてホモ接合性であり得（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖ）、または患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性であり得（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）、または患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性であり得る（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）。したがって、Ｆ／ＦおよびＦ／Ｖアロタイプを含めたすべてのＦｃγＩＩＩａアロタイプを処置することができ、ＨＥＲ２  １＋およびＨＥＲ２  ２＋などの低ＨＥＲ２過剰発現を有する患者も処置することができる。
【０１２０】
本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を使用する臨床試験は、前記抗体を用いた処置は、ほとんど有害反応を引き起こさないことも示した。特に、本試験で、臨床的な心毒性作用は、まったく観察されなかった。それと対照的に、市販の高フコース抗ＨＥＲ２抗体Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）は、心毒性副作用を有することが公知である。したがって、特定の実施形態では、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、医薬Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）中に使用されるトラスツズマブより少ない有害反応を引き起こし、好ましくは低い心毒性を有する。
【０１２１】
好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、うっ血性心不全、症候性心不全、冠動脈性心疾患、制御されていない不整脈、狭心症、心臓弁不全、高血圧症、心筋梗塞、安静時呼吸困難、またはこれらの疾患の１つもしくは複数のリスクを有する患者のがん処置用である。好ましくは、５５％以下、特に、５０％以下、または４５％以下の左心室駆出分画率を有する患者を、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置することができる。特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、１種または複数のアントラサイクリン（ａｎｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロンと組み合わせてこれらの患者を処置するのに適している。
【０１２２】
さらに、臨床試験は、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、患者によって耐容性良好であり、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎより少ない有害反応を引き起こし、特に、有害な胃腸の反応、例えば、下痢、吐き気、および嘔吐などをまったく引き起こさないことも示した。したがって、好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、有害な胃腸の反応が重大である患者の処置用である。
【０１２３】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物および投与量
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は特に、治療用組成物中に含まれる。これは、好ましくは、静脈内注射に適した組成物、例えば、抗体を含む水溶液、または静脈内注射に適した組成物を調製するのに使用され得る組成物、例えば、凍結乾燥抗体組成物である。フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物は、溶媒、希釈剤、および賦形剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる成分をさらに含み得る。組成物の成分は、好ましくはすべて薬学的に許容される。組成物は、固体または流体組成物、特に、好ましくは水性の溶液、エマルジョン、もしくは懸濁液、または凍結乾燥粉末であり得る。
【０１２４】
組成物は、１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ、または１５ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、特に、約２０ｍｇ／ｍｌの範囲内の濃度でフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む。
【０１２５】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、任意の適当な投与経路によって、好ましくは静脈内注射によって患者に投与することができる。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、患者の体重１ｋｇ当たり０．５〜１５ｍｇ、１〜１０ｍｇ、好ましくは２〜８ｍｇ、より好ましくは３〜６ｍｇもしくは３〜５ｍｇ、最も好ましくは約４ｍｇもしくは約６ｍｇ、またはそれ未満の範囲内の用量で投与される。ここで、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体より低い投与量で投与することができ、単独療法として与えられる場合でさえ治療効果を誘発することが判明した。したがって、有利には、より低い投与量が使用され得る。代わりに、低減された有害な副作用プロファイルに起因して、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、より高い用量で、例えば、患者の体重１ｋｇ当たり０．２〜３０ｍｇ、好ましくは２〜２５ｍｇ、より好ましくは４〜２０ｍｇ、または６〜１８ｍｇ、最も好ましくは８〜１５ｍｇ、特に、約１２ｍｇの範囲内の用量で投与することもできる。ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、１０ｍｇ〜１２５０ｍｇ、好ましくは５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜７５０ｍｇ、または２４０〜６００ｍｇの範囲内の１投与当たりの用量で投与される。４００〜２０００ｍｇ、好ましくは５００〜１５００ｍｇ、より好ましくは６００〜１０００ｍｇというより高い用量も可能である。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、１週間〜２カ月、好ましくは２週間〜６週間、より好ましくは３週間〜４週間、特に、３週間毎または４週間毎の範囲の間隔で投与される。上述した用量は、特に、３週間毎の投与のために最適化されている。抗ＨＥＲ２抗体の高い効力に起因して、投与間隔を、例えば、投与量を増大させる必要なく、３週間から４週間に延長することが可能である。一実施形態によれば、処置は、１〜１０ｍｇ、好ましくは２〜８ｍｇ、より好適には３〜６ｍｇの初期用量でフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を患者に投与するステップと、初期用量と同じ、またはそれより低い量でフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の複数の後続の用量を患者に投与するステップとを含み、初期用量と後続の用量は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、好ましくは少なくとも４週間互いに時間が離れている。
【０１２６】
注入を含めた注射によって抗体を投与すると、患者の体内で有害反応、特に、注入関連反応（ＩＲＲ）を引き起こす場合がある。それぞれの効果は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する際にも起こり得る。それぞれの注入関連反応を低減するために、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の処置は、このような注入関連反応を処置または防止するための手段と組み合わせることができる。
【０１２７】
本発明の一実施形態によれば、ＩＲＲの防止または低減は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の処置を鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質の前投薬と組み合わせることによって実現される。前記作用物質は、以下の特徴：非オピオイド鎮痛剤であること、非サリチレート鎮痛剤であること、アニリン鎮痛剤／アニリン誘導体であること、アセトアニリド誘導体であること、アミノフェノール誘導体であること、アセチルアミノフェノールであること、シクロオキシゲナーゼ阻害剤であること、および／またはプロスタグランジン阻害剤であることの１つまたは複数を有し得る。好ましくはＮ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド（パラセタモールまたはアセトアミノフェン）が鎮痛剤および／または解熱剤として使用される。作用物質は、好ましくは、静脈内に、または経口的に投与される。
【０１２８】
このような前投薬は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の投与に関連したＩＲＲを予想外に著しく低減することを、本発明者らは見出した。したがって、本発明の一態様では、この前投薬は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の投与によって引き起こされるＩＲＲを防止または処置するのに使用される。例示的な注入関連反応は、発熱、血管性浮腫などの浮腫、関節痛、および震えである。
【０１２９】
鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質は、好ましくは、２５０ｍｇ〜１５００ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、好ましくは少なくとも７００ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも９００ｍｇの、より好ましくは１０００ｍｇの用量で投与される。これは、好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する前に、好ましくは１回の単一用量で、または２回以上で、好ましくは２つの別個の用量で投与される。
【０１３０】
好適な実施形態では、作用物質は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する５分〜６時間、好ましくは１０分〜４時間、１５分〜３時間、または２０分から２時間、より好ましくは３０分〜９０分、特に１時間前に、特に、単回投与として投与される。
【０１３１】
ある特定の好適な実施形態では、作用物質は、２回の用量で投与され、第１の用量は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する前の８時間〜４８時間、好ましくは１２時間〜３６時間、または１６時間〜２４時間、特に夜に（すなわち、約１２時間前）に投与される。第２の用量は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する５分〜６時間、好ましくは１０分〜４時間、１５分〜３時間、または２０分〜２時間、より好ましくは３０分〜９０分、特に１時間前に投与される。特定の好適な実施形態では、作用物質の第１の用量は、抗体を投与する前の夜に投与され、第２の用量は、抗体を投与する１時間前に与えられる。好ましくは、両用量は、１０００ｍｇの作用物質である。この投与スキームの特定の好適な作用物質は、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミドである。
【０１３２】
さらなる実施形態では、作用物質は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の投与に対する注入関連反応が存在する際に投与される。
【０１３３】
鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質は、１種もしくは複数のステロイド、好ましくは、グルココルチコイド、例えば、コルチゾール、コルチゾン酢酸エステル（ｃｏｒｔｉｓｏｎ  ａｃｅｔａｔｅ）、クロプレノール（ｃｌｏｐｒｅｎｏｌ）、プレドニゾン、プレドニゾロン、デフラザコート、フルオコルトロン（ｆｌｕｏｃｏｒｔｏｌｏｎ）、トリアムシノロン、ベタメタゾン、またはデキサメタゾン、特に、メチルプレドニゾロンと組み合わせて投与することができる。ステロイドは、好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する５分〜４時間、より好ましくは１５分〜１時間、最も好ましくは約３０分前に投与される。ステロイドは、好ましくは、２５〜５００ｍｇ、より好ましくは５０〜２５０ｍｇ、または１００〜１５０ｍｇの用量で、特に、約１２５ｍｇの用量で投与される。
【０１３４】
本発明の特定の好適な実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体を用いた患者の処置は、ＩＲＲを有効に低減または防止するために以下の通り、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミドおよびメチルプレドニゾロンを用いた前投薬と組み合わされる：
ａ）抗体を投与する前の夜に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第１の用量、
ｂ）抗体を投与する１時間前のＮ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド（Ｎ−（４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ））１０００ｍｇの第２の用量、および
ｃ）抗体を投与する３０分前のメチルプレドニゾロン１２５ｍｇの一用量。
【０１３５】
このスキームでは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、上述した用量で投与され、それは、上記開示に付託される。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、ステロイドは、まったく投与されず、好ましくは、ステロイドおよび抗ヒスタミン剤は、まったく投与されない。特に、注入関連反応は、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質でのみ処置または防止される。
【０１３７】
別の態様では、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体の投与によって引き起こされる注入関連反応を処置または防止するための鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質を提供する。抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、本明細書に定義されたフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体である。したがって、本発明の他の態様のフィーチャおよび実施形態は、本発明のこの態様に当てはまる。
【０１３８】
処置の方法
さらなる態様では、本発明は、ＨＥＲ２陽性新生物疾患を患っている患者を処置する方法であって、５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１５％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を前記患者に新生物疾患を処置するのに十分な量で投与するステップを含む、方法を対象とする。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、本発明は、転移性がんであるＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置する方法であって、５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１５％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を投与するステップを含む、方法を提供する。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、本発明は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体、またはグリコシル化されていない抗ＨＥＲ２抗体で処置した後に、ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特にＨＥＲ２陽性がんを患っている患者を処置する方法であって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を前記患者に新生物疾患を処置するのに十分な量で投与するステップを含む、方法を提供する。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、５０％以下の量のフコースをＣＨ２ドメイン内に有し、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１つの化学療法剤、
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、またはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、本発明は、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置する方法であって、５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１５％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を投与するステップを含み、ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有する、方法を対象とする。
【０１４２】
上記および以下に記載のすべての実施形態およびフィーチャも、本発明による処置の方法に同様に当てはまる。
本発明の具体的な実施形態
本発明の特定のおよび特に好適な実施形態を以下に記載する。
転移性がんの処置の具体的な実施形態
前記第１の態様の第１の具体的な実施形態では、本発明は、転移性ＨＥＲ２陽性がん、好ましくは乳がんまたは大腸がんを有する患者を処置するためのフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体であって、
（ｉ）２０％以下の量のフコース、少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、および少なくとも６５％の量のガラクトースをＣＨ２ドメイン内に有し、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有し、
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有し、
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種、少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種の異なる化学療法剤、および／または
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％同一である、少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、好ましくはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を対象とする。好ましくは、この第１の実施形態における先行処置は、以下：
（ｉ）単独療法としての高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、ならびに／または化学療法剤、好ましくはタキサン、例えば、ドセタキセルおよびビノレルビンとの少なくとも１つの組合せ処置、特に、高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの単独療法、ならびにさらに高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）とのさらに少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの組合せ処置、
（ｉｉ）少なくとも１種のタキサンを用いた少なくとも１つの処置、好ましくは、１種、２種、またはそれ以上の異なるタキサン、好ましくはパクリタキセルおよびドセタキセルを用いた少なくとも２つの別個の処置、
（ｉｉｉ）好ましくは、ゲムシタビンなどの化学療法剤と組み合わせた、シスプラチンなどの白金系化学療法剤を用いた少なくとも１つの処置、
（ｉｖ）好ましくはアジュバント療法としての放射線治療、
（ｖ）一化学療法剤もしくは異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ドキソルビシンとシクロホスファミドの組合せ、ラパチニブとカペシタビンの組合せ、イダルビシンとエトポシドとシタラビンの組合せ、およびベバシズマブとビノレルビンとカペシタビンの組合せを用いた少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの処置、
ならびに／あるいは
（ｖｉ）原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移の少なくとも一部の外科的切除
のうちの１つあるいは複数を含んだ。
【０１４３】
特に、患者の先行処置は、この第１の実施形態では、処置（ｉ）〜（ｖｉ）のうちの少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または６つすべてを含む。好ましくは、先行処置は、少なくとも処置（ｉ）、（ｖ）、および（ｖｉ）を含む。
【０１４４】
第２の具体的な実施形態では、本発明は、転移性ＨＥＲ２陽性がんを有する患者を処置するためのフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体であって、
（ｉ）２０％以下の量のフコース、少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、および少なくとも６５％の量のガラクトースをＣＨ２ドメイン内に有し、検出可能なＮｅｕＧｃをまったく有さず、検出可能なＧａｌα２，６−カップリングＮｅｕＡｃをまったく有さず、好ましくはヒト細胞株内で組換えで産生されたものであり、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有し、
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有し、
（ｉｖ）トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））より強いＡＤＣＣを誘導することができ、
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種の異なる化学療法剤、ならびに
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％同一である、少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、好ましくはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））
ｃ）任意選択で放射線治療、ならびに
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた上、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、ならびに内臓転移、特に、肺または肝転移から選択される転移の処置用である、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を対象とする。好適な先行処置は、第１の具体的な実施形態とともに上述し、それは、それぞれの開示に付託される。
【０１４５】
第１および第２の具体的な実施形態で処置される患者は、以下の特徴：
（ｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖ）であること、または
（ｉｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であること
を有し得る。
【０１４６】
特に、第１および第２の特定の実施形態のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、そのＦｃγＲＩＩＩａアロタイプに関係なく、患者を処置するのに使用することができる。第１および第２の具体的な実施形態では、ＨＥＲ２陽性がんおよび／または転移は、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有し得る。好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんおよび／または転移は、ＦＩＳＨまたはＣＩＳＨによって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性である。一態様によれば、第１および第２の具体的な実施形態における処置される患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、または患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、任意選択でさらに、ＨＥＲ２陽性がんおよび／または転移は、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有する。
【０１４７】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の適当で好適な投与量、および適当で好適な前投薬スケジュールは上述した。それは、第１および第２の具体的な実施形態にも当てはまる上記開示に付託される。第１および第２の具体的な実施形態によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、単独療法として、または組合せ療法として使用するためのものであり得る。実施形態は上述し、それは、それぞれの開示に付託される。
【０１４８】
上述したように、本発明は、転移性がんであるＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置する方法であって、５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１５％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を投与するステップを含む、方法を対象とする。
【０１４９】
上記および以下に記載のすべての実施形態およびフィーチャも、本発明による処置の方法に同様に当てはまる。
【０１５０】
上述したように、ある特定の態様では、本発明は、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置するための、５０％以下のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、がんは、転移性がんである、抗ＨＥＲ２抗体を対象とする。
【０１５１】
好ましくは、抗ＨＥＲ２抗体は、転移の処置用であり、転移としては、皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、内臓転移、特に、肺および／または肝転移、ならびにリンパ節転移の１つまたは複数がある。一実施形態によれば、患者は、１つまたは複数の内臓転移、特に、肺および／または肝転移を有する。好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんは、以下の特徴：（ｉ）乳がん、好ましくは転移性乳がんであること、（ｉｉ）好ましくはリンパ節関与を伴った浸潤性乳房乳管癌であること、（ｉｉｉ）リンパ節転移および／または皮膚転移と関連し、特に、リンパ節転移によって引き起こされる縦隔アデノパシーおよび／または皮膚転移によって引き起こされる皮膚潰瘍形成と関連すること、（ｉｖ）内臓転移、特に、肺および／または肝転移と関連すること、（ｖ）大腸がん、耳下腺癌などの唾液腺がん、非小細胞肺癌などの肺がん、および気管支がんからなる群から選択されることのうちの１つまたは複数を有する。一実施形態によれば、ＨＥＲ２陽性転移は、以下の特徴：（ｉ）エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）および／またはプロゲステロン受容体陰性（ＰｇＲ−）、（ｉｉ）免疫組織化学検査によって決定される場合に少なくともレベル１＋、好ましくはレベル２＋、またはレベル３＋のＨＥＲ２過剰発現、（ｉｉｉ）免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋以下のＨＥＲ２過剰発現、（ｖ）蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）または色素原ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）によって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性のうちの１つまたは複数を有する。
【０１５２】
一実施形態によれば、抗ＨＥＲ２抗体は、（ｉ）原発性腫瘍の処置、（ｉｉ）再発性腫瘍の処置、（ｉｉｉ）腫瘍増殖の阻害、（ｉｖ）皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移を含めた転移の処置、ならびに／または（ｖ）転移によって引き起こされる病変、特に、皮膚病変もしくはリンパ節病変、より具体的には、皮膚潰瘍の処置のためのものである。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置すると、以下：（ｉ）さらなる転移の防止、（ｉｉ）１つまたは複数の転移によって引き起こされる病変、特に、皮膚潰瘍の低減、（ｉｉｉ）転移の数の低減のうちの１つまたは複数がもたらされる。一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、ａ）少なくとも１種の化学療法剤、および／またはｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、もしくはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、ｃ）任意選択で放射線治療、およびｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた。一実施形態によれば、新生物疾患は、以下の先行処置の後に再発し、または進行した。実施例に示したように、本発明による抗ＨＥＲ２抗体は、以前の処置が失敗した、またはがんが再発した、もしくはさらなる転移が発生した、重度に事前処置された患者を含めた事前処置された患者を成功裏に処置することにおいて特に有効である。
【０１５３】
一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、患者は、単独療法または組合せ療法のいずれかで、少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種、少なくとも４種、または少なくとも５種の異なる抗がん剤、特に化学療法剤で処置されている。好ましくは、先行処置は、以下の処置：（ｉ）単独療法としてのトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、（ｉｉ）化学療法剤と組み合わせた、好ましくはタキサン、例えば、ドセタキセルおよびビノレルビンと組み合わせたトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、（ｉｉｉ）タキサンを用いた少なくとも１つの処置、好ましくは異なるタキサン、好ましくはパクリタキセルおよびドセタキセルを用いた少なくとも２つの別個の処置、（ｉｖ）ゲムシタビンなどの化学療法剤と好ましくは組み合わせた、シスプラチンなどの白金系化学療法剤を用いた少なくとも１つの処置、（ｖ）好ましくはアジュバント療法としての放射線治療、（ｖｉ）異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ドキソルビシンとシクロホスファミドの組合せ、ラパチニブとカペシタビンの組合せ、イダルビシンとエトポシドとシタラビンの組合せ、およびベバシズマブとビノレルビンとカペシタビンの組合せを用いた少なくとも１つの処置のうちの１つもしくは複数、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つ、最も好ましくはすべてを含む。一実施形態によれば、患者の先行処置は、がん手術、好ましくは原発性腫瘍および／または転移の外科的除去を伴った。好適な実施形態によれば、ＨＥＲ２陽性がんは、少なくとも１種の化学療法剤を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行しており、かつ／または高フコーストラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および／もしくは高フコースペルツズマブ（オムニターグ）を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行している。一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、アジュバント処置用、ネオアジュバント処置用、ネオアジュバント−アジュバント処置用、または緩和処置用である。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、患者に繰り返して投与され、治療効果は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも第２の投与後に、好ましくはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第１の投与後に既に得られる。好ましくは、治療効果は、皮膚病変、特に、潰瘍性皮膚病変の低減、縦隔アデノパシーの低減、ならびに／または内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移の低減を含む。
【０１５４】
好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または０％の、特に、２％〜２０％、３％〜１５％、または５％〜１０％の範囲内のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ＣＨ２ドメイン内の以下のグリコシル化特性：（ｉ）少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、（ｉｉ）少なくとも６５％の量のガラクトース、（ｉｉｉ）任意選択で検出可能なＮｅｕＧｃ無し、（ｉｖ）任意選択で検出可能なＧａｌα１，３−Ｇａｌ無し、（ｖ）任意選択で検出可能なα２，６−カップリングＮｅｕＡｃのうちの１つまたは複数、好ましくはすべてを有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、以下の特徴：（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含むこと、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むこと、（ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むこと、（ｉｖ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むこと、（ｖ）抗体トラスツズマブとの交差特異性を示すこと、（ｖｉ）抗体トラスツズマブのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むこと、（ｖｉｉ）結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍応答において抗体トラスツズマブと等価であること、（ｖｉｉｉ）ヒト細胞株内で組換え産生されたことのうちの１つまたは複数、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくはすべてを有する。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））である対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体より強いＡＤＣＣを誘導することができる。
【０１５５】
一実施形態によれば、好ましくはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））である高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、７０％以上、特に、８０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する。好ましくは、前処置で使用される高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、以下の特徴：（ｉ）ＩｇＧ抗体であること、（ｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と交差特異性を示すこと、（ｉｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに特異的に結合することができること、（ｉｖ）その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％、より好ましくは１００％同一であること、（ｖ）抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））であること、（ｖｉ）ＨＥＲ２に特異的に結合することができ、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のエピトープは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のエピトープと異なること、および／または（ｖｉｉ）抗体ペルツズマブ（オムニターグ）であることのうちの１つまたは複数、好ましくは少なくとも３つを有する。
【０１５６】
一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、単独療法である。代わりに、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、特に、（ｉ）少なくとも１種の化学療法剤、ならびに／または（ｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる少なくとも１種のさらなる治療抗体、ならびに／または（ｉｖ）がん手術および／もしくは放射線治療と組み合わせた組合せ療法である。
【０１５７】
上述したように、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置される患者は、先のがん処置を受けたことがある。一実施形態によれば、先の処置は、少なくとも１種の化学療法剤を伴った。ここで、患者の前処置で使用される少なくとも１種の化学療法剤は、シクロホスファミド；ラパチニブ；カペシタビン；シタラビン；ビノレルビン；ベバシズマブ；ゲムシタビン；マイタンシン；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロン；タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテル）、およびＳＢ−Ｔ−１２１４；アロマターゼ阻害剤、例えば、アミノグルテチミド、テストラクトン（テスラク）、アナストロゾール（アリミデクス）、レトロゾール（フェマラ）、エキセメスタン（アロマシン）、ボロゾール（リビゾール）、フォルメスタン（レンタロン）、ファドロゾール（アフェマ）、４−ヒドロキシアンドロステンジオン、１，４，６−アンドロスタトリエン−３，１７−ジオン（ＡＴＤ）、および４−アンドロステン−３，６，１７−トリオン（６−ＯＸＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エリプチシン、アウリントリカルボン酸、およびＨＵ−３３１；白金系化学療法剤、例えば、ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（シスプラチン）、ｃｉｓ−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）、および［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ’）白金（ＩＩ）（オキサリプラチン）、ならびに代謝拮抗剤、特に、葉酸代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、およびプララトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、フルオロウラシル、ゲムシタビン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル、およびテガフール−ウラシル、ならびにプリン類似体からなる群から選択され得る。
【０１５８】
好ましくは患者の先行処置は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なり、特に、自己の作用機序がフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる抗ＨＥＲ２抗体、特に、ペルツズマブ、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブ（アービタックス）、パニツムマブ（ベクティビックス）、およびニモツズマブ（テラロック）など、ベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体、アレムツズマブ（キャンパス）などの抗ＣＤ５２抗体、ブレンツキシマブ（アドセトリス）などの抗ＣＤ３０抗体、ゲムツズマブ（マイロターグ）などの抗ＣＤ３３抗体、ならびに抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）、トシツモマブ（ベキサール）、およびイブリツモマブ（ゼヴァリン）などからなる群から選択される少なくとも１種の治療抗体を使用した。
【０１５９】
一実施形態によれば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、少なくとも１種の異なる抗がん剤との組合せ療法であり、抗がん剤は、（ｉ）好ましくはタキサンである化学療法剤、ならびに（ｉｉ）抗がん治療抗体であって、自己の作用機序がフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる抗ＨＥＲ２抗体、例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブに対応する場合、ペルツズマブなど、セツキシマブ（アービタックス）などの抗ＥＧＦＲ抗体、および／またはベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体である、抗がん治療抗体からなる群から選択される。
【０１６０】
好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、１、２、３、もしくは４週間毎、またはより低い頻度で、患者の体重１ｋｇ当たり１〜１０ｍｇの量で、好ましくは３週間毎またはより低い頻度で、患者の体重１ｋｇ当たり２〜８ｍｇの量で投与される。好ましくは、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ用量であるが、それより低い頻度で投与される場合、またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ頻度であるが、それより低い用量で投与される場合、高フコース抗ＨＥＲ２抗体より高い治療有効性を有する。
【０１６１】
上記に論じたように、改善された治療有効性により、先行技術の抗ＨＥＲ２抗体で処置することができなかった、またはそれほど有効に処置することができなかった異なる患者を処置することが可能になる。ここで、異なる選択肢が存在する：（ｉ）患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖ）であり、（ｉｉ）患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、（ｉｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、そのＦｃγＲＩＩＩａアロタイプに関係なく、患者を処置するためのものであり、または（ｉｖ）患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、ＨＥＲ２陽性がんおよび／もしくは転移は、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有し、好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんおよび／もしくは転移は、ＦＩＳＨもしくはＣＩＳＨによって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性である。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置は、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質、特に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミドを用いた患者の前投薬と組み合わされる。
【０１６３】
好ましくは、前投薬は、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質の少なくとも２つの別個の用量を含み、第１の用量は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する８時間〜４８時間前に与えられ、第２の用量は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する５分〜６時間前に与えられる。好ましくは、用量のそれぞれは、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質２５０ｍｇおよび１５００ｍｇ、特に１０００ｍｇを含有する。好ましくは、前投薬は、ステロイド、好ましくはグルココルチコイド、特に、メチルプレドニゾロンの投与をさらに含む。好ましくは、ステロイドは、抗体を投与する５分〜４時間、特に３０分前に投与される。好ましくは、前投薬は、以下のステップ：ａ）抗体を投与する前の夜に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第１の用量、ｂ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する１時間前のＮ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第２の用量、およびｃ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する３０分前のメチルメチルプレドニゾロン１２５ｍｇの一用量を含み、またはこれらからなる。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、本発明は、上述した前投薬によって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の投与により引き起こされる注入関連反応を処置または防止するための鎮痛剤および／または解熱剤を提供する。
【０１６５】
事前処置された患者の処置の具体的な実施形態
以下では、先のがん処置を受けたことがある患者の処置に関する第２の態様による本発明の具体的な実施形態を列挙する。本明細書に上述したフィーチャおよび実施形態は、以下の実施形態にも当てはまり、これらと組み合わせることができる。
【０１６６】
１．ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、ＨＥＲ２陽性がんを有する患者を処置するための、５０％以下のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化ＨＥＲ２抗体）であって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、および
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、またはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた、ＨＥＲ２抗体。
【０１６７】
２．新生物疾患が、先行処置の後に再発し、または進行した、実施形態１に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１６８】
３．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、患者が、単独療法または組合せ療法のいずれかで、少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種、少なくとも４種、または少なくとも５種の異なる化学療法剤で処置されている、実施形態１または２に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１６９】
４．先行処置が、以下の処置：
（ｉ）単独療法としてのトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、
（ｉｉ）化学療法剤と組み合わせた、好ましくはタキサン、例えば、ドセタキセルおよびビノレルビンと組み合わせたトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、
（ｉｉｉ）タキサンを用いた少なくとも１つの処置、好ましくは異なるタキサン、好ましくはパクリタキセルおよびドセタキセルを用いた少なくとも２つの別個の処置、
（ｉｖ）ゲムシタビンなどの化学療法剤と好ましくは組み合わせた、シスプラチンなどの白金系化学療法剤を用いた少なくとも１つの処置、
（ｖ）好ましくはアジュバント療法としての放射線治療、
（ｖｉ）異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ドキソルビシンとシクロホスファミドの組合せ、ラパチニブとカペシタビンの組合せ、イダルビシンとエトポシドとシタラビンの組合せ、およびベバシズマブとビノレルビンとカペシタビンの組合せを用いた少なくとも１つの処置
のうちの１つもしくは複数、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つ、またはすべてを含む、実施形態１から３のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７０】
５．患者の先行処置が、がん手術、好ましくは、原発性腫瘍および／または転移の外科的除去を伴った、実施形態１から４のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７１】
６．ＨＥＲ２陽性がんが転移性がんである、実施形態１から５のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７２】
７．転移が、皮膚転移、内臓転移、特に、肺および／または肝転移、ならびにリンパ節転移のうちの１つまたは複数を含む、実施形態６に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７３】
８．患者が１つまたは複数の潰瘍性皮膚転移を有する、実施形態７に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７４】
９．以下の特徴：
（ｉ）乳がん、好ましくは転移性乳がんであること、
（ｉｉ）リンパ節関与を伴った、浸潤性乳房乳管癌であること、
（ｉｉｉ）リンパ節転移および／または皮膚転移と関連し、特に、リンパ節転移によって引き起こされる縦隔アデノパシーおよび／または皮膚転移によって引き起こされる皮膚潰瘍形成と関連すること、
（ｉｖ）内臓転移、特に、肺および／または肝転移と関連すること
のうちの１つまたは複数を有するＨＥＲ２陽性がんを処置するための、実施形態１から８のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７５】
１０．以下の特徴：
（ｉ）エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）および／またはプロゲステロン受容体陰性（ＰｇＲ−）、
（ｉｉ）免疫組織化学検査によって決定される場合に少なくともレベル１＋、好ましくはレベル２＋、またはレベル３＋のＨＥＲ２過剰発現、
（ｉｉｉ）免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋以下のＨＥＲ２過剰発現、
（ｖ）蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）または色素原ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）によって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性
のうちの１つまたは複数を有するＨＥＲ２陽性腫瘍および／または転移を処置するための、実施形態１から９のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７６】
１１．ＨＥＲ２陽性がんが、少なくとも１種の化学療法剤を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行しており、かつ／または高フコーストラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および／もしくは高フコースペルツズマブ（オムニターグ）を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行している、実施形態１から１０のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
１２．
（ｉ）原発性腫瘍の処置、
（ｉｉ）再発性腫瘍の処置、
（ｉｉｉ）腫瘍増殖の阻害、
（ｉｖ）皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移を含めた転移の処置、ならびに／または
（ｖ）腫瘍もしくは転移によって引き起こされる病変、特に、皮膚病変もしくはリンパ節病変、より具体的には、皮膚潰瘍の処置
のための、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７７】
１３．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置すると、以下：
（ｉ）腫瘍増殖の阻害、
（ｉｉ）腫瘍サイズの低減、
（ｉｉｉ）さらなる転移の防止、
（ｉｖ）原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移によって引き起こされる病変、特に、皮膚潰瘍の低減、
（ｖ）転移の数の低減、
（ｖｉｉ）無増悪生存期間の増大、ならびに／あるいは
（ｖｉｉｉ）寿命の増大
のうちの１つあるいは複数がもたらされる、実施形態１から１２のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７８】
１４．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、アジュバント処置用、ネオアジュバント処置用、ネオアジュバント−アジュバント処置用、または緩和処置用である、実施形態１から１３のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１７９】
１５．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が患者に繰り返して投与され、治療効果が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも第２の投与後に、好ましくはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第１の投与後に既に得られる、実施形態１から１４のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８０】
１６．治療効果が、皮膚病変、特に、潰瘍性皮膚病変の低減、縦隔アデノパシーの低減、ならびに／または内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移の低減を含む、実施形態１５に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８１】
１７．２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または０％の、好ましくは、２％〜２０％、３％〜１５％、または５％〜１０％の範囲内のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する、実施形態１から１６のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８２】
１８．ＣＨ２ドメイン内の以下のグリコシル化特性：
（ｉ）少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、
（ｉｉ）少なくとも６５％の量のガラクトース、
（ｉｉｉ）任意選択で検出可能なＮｅｕＧｃ無し、
（ｉｖ）任意選択で検出可能なＧａｌα１，３−Ｇａｌ無し、
（ｖ）任意選択で検出可能なα２，６−カップリングＮｅｕＡｃ
のうちの１つまたは複数、好ましくはすべてを有する、実施形態１から１７のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８３】
１９．以下の特徴：
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含むこと、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むこと、
（ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むこと、
（ｉｖ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むこと、
（ｖ）抗体トラスツズマブとの交差特異性を示すこと、
（ｖｉ）抗体トラスツズマブのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むこと、
（ｖｉｉ）結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍応答において抗体トラスツズマブと等価であること、
（ｉｘ）ヒト細胞株内で組換え産生されたこと
のうちの１つまたは複数、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくはすべてを有する、実施形態１から１８のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８４】
２０．対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体より強いＡＤＣＣを誘導することができる、実施形態１から１９のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８５】
２１．高フコース抗ＨＥＲ２抗体が、７０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する、実施形態１から２０のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８６】
２２．前処置で使用される高フコース抗ＨＥＲ２抗体が、以下の特徴：
（ｉ）ＩｇＧ抗体であること、
（ｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と交差特異性を示すこと、
（ｉｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに特異的に結合することができること、
（ｉｖ）その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％、より好ましくは１００％同一であること、
（ｖ）抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））であること、
（ｖｉ）ＨＥＲ２に特異的に結合することができ、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のエピトープが、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のエピトープと異なること、および／または
（ｖｉｉ）抗体ペルツズマブ（オムニターグ）であること
のうちの１つまたは複数、好ましくは少なくとも３つを有する、実施形態１および２１のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８７】
２３．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が単独療法である、実施形態１から２２のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８８】
２４．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、特に、
（ｉ）少なくとも１種の化学療法剤、ならびに／または
（ｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる少なくとも１種のさらなる治療抗体、ならびに／または
（ｉｖ）がん手術および／もしくは放射線治療
と組み合わせた組合せ療法である、実施形態１から２３のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１８９】
２５．
ａ）患者の前処置で使用される少なくとも１種の化学療法剤が、シクロホスファミド；ラパチニブ；カペシタビン；シタラビン；ビノレルビン；ベバシズマブ；ゲムシタビン；マイタンシン；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロン；タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテル）、およびＳＢ−Ｔ−１２１４など；アロマターゼ阻害剤、例えば、アミノグルテチミド、テストラクトン（テスラク）、アナストロゾール（アリミデクス）、レトロゾール（フェマラ）、エキセメスタン（アロマシン）、ボロゾール（リビゾール）、フォルメスタン（レンタロン）、ファドロゾール（アフェマ）、４−ヒドロキシアンドロステンジオン、１，４，６−アンドロスタトリエン−３，１７−ジオン（ＡＴＤ）、および４−アンドロステン−３，６，１７−トリオン（６−ＯＸＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エリプチシン、アウリントリカルボン酸、およびＨＵ−３３１；白金系化学療法剤、例えば、ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（シスプラチン）、ｃｉｓ−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）、および［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ’）白金（ＩＩ）（オキサリプラチン）、ならびに代謝拮抗剤、特に、葉酸代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、およびプララトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、フルオロウラシル、ゲムシタビン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル、およびテガフール−ウラシル、ならびにプリン類似体からなる群から選択され；かつ／または
ｂ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、少なくとも１種の異なる抗がん剤との組合せ療法であり、抗がん剤が、（ｉ）好ましくはタキサンである化学療法剤、ならびに（ｉｉ）抗がん治療抗体であって、自己の作用機序がフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる抗ＨＥＲ２抗体、例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブに対応する場合、ペルツズマブなど、セツキシマブ（アービタックス）などの抗ＥＧＦＲ抗体、および／もしくはベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体である、抗がん治療抗体からなる群から選択される
実施形態１から２４のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９０】
２６．患者の先行処置が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なり、特に、自己の作用機序がフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる抗ＨＥＲ２抗体、特に、ペルツズマブ、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブ（アービタックス）、パニツムマブ（ベクティビックス）、およびニモツズマブ（テラロック）など、ベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体、アレムツズマブ（キャンパス）などの抗ＣＤ５２抗体、ブレンツキシマブ（アドセトリス）などの抗ＣＤ３０抗体、ゲムツズマブ（マイロターグ）などの抗ＣＤ３３抗体、ならびに抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）、トシツモマブ（ベキサール）、およびイブリツモマブ（ゼヴァリン）からなる群から選択される少なくとも１種の治療抗体を使用した、実施形態１から２５のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９１】
２７．１、２、３、もしくは４週間毎、またはより低い頻度で、患者の体重１ｋｇ当たり１〜１０ｍｇの量で、好ましくは３週間毎またはより低い頻度で、患者の体重１ｋｇ当たり２〜５ｍｇの量でフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与するための、実施形態１から２６のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９２】
２８．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ用量であるが、それより低い頻度で投与される場合、またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ頻度であるが、それより低い用量で投与される場合、高フコース抗ＨＥＲ２抗体より高い治療有効性を有する、実施形態１から２７のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９３】
２９．
（ｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖ）であり、
（ｉｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、
（ｉｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が、そのＦｃγＲＩＩＩａアロタイプに関係なく、患者を処置するためのものであり、または
（ｉｖ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、ＨＥＲ２陽性がんおよび／もしくは転移が、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有し、好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんおよび／もしくは転移が、ＦＩＳＨもしくはＣＩＳＨによって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性である、
実施形態１から２８のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９４】
３０．抗ＨＥＲ２抗体の処置が、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質、特に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミドを用いた患者の前投薬と組み合わされる、実施形態１から２９のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９５】
３１．前投薬が、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質の少なくとも２つの別個の用量を含み、第１の用量が、抗体を投与する８時間〜４８時間前に与えられ、第２の用量が、抗体を投与する５分〜６時間前に与えられる、実施形態３０に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９６】
３２．用量のそれぞれが、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質２５０ｍｇおよび１５００ｍｇ、特に１０００ｍｇを含有する、実施形態３０に記載のＨＥＲ２抗体。
【０１９７】
３３．前投薬が、ステロイド、好ましくはグルココルチコイド、特に、メチルプレドニゾロンの投与をさらに含む、実施形態３０から３２の１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９８】
３４．ステロイドが、抗体を投与する５分〜４時間、特に３０分前に投与される、実施形態３３に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０１９９】
３５．前投薬が、以下のステップ：
ａ）抗体を投与する前の夜に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第１の用量、
ｂ）抗体を投与する１時間前のＮ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第２の用量、および
ｃ）抗体を投与する３０分前のメチルメチルプレドニゾロン１２５ｍｇの一用量
を含み、またはこれらからなる、実施形態３０から３４の１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２００】
３６．大腸がん、耳下腺癌などの唾液腺がん、非小細胞肺癌などの肺がん、および気管支がんからなる群から選択されるＨＥＲ２陽性がんを処置するための、実施形態１から３５のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２０１】
３７．実施形態３０から３５のいずれかに記載の前投薬による、抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物の投与によって引き起こされる注入関連反応を処置または防止するための鎮痛剤および／または解熱剤。
【０２０２】
さらなる態様では、本発明は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体で処置した後にＨＥＲ２陽性新生物疾患、特にＨＥＲ２陽性がんを患っている患者を処置する方法であって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を前記患者に新生物疾患を処置するのに十分な量で投与するステップを含む、方法を対象とする。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、５０％以下の量のフコースをＣＨ２ドメイン内に有し、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、またはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた。
【０２０３】
上述したすべての実施形態およびフィーチャも、本発明による処置の方法に同様に当てはまる。
【０２０４】
低ＨＥＲ２発現を有するがんの処置の特定の実施形態
以下では、低ＨＥＲ２発現を有するがんの処置に関する第３の態様による本発明の具体的な実施形態を列挙する。本明細書に上述したすべてのフィーチャおよび実施形態は、以下の実施形態にも当てはまり、これらと組み合わせることができる。
【０２０５】
１．ＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、ＨＥＲ２陽性がんを処置するための５０％以下のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）であって、ＨＥＲ２陽性腫瘍は、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有する、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体。
【０２０６】
２．ＨＥＲ２陽性新生物疾患が転移性がんである、実施形態１に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２０７】
３．
（ｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、または
（ｉｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、ＨＥＲ２陽性がんおよび／もしくは転移が、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有し、ＨＥＲ２陽性がんおよび／もしくは転移が、ＦＩＳＨもしくはＣＩＳＨによって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性である、
実施形態１または２に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２０８】
４．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者が、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、および／または
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、またはグリコシル化されていない少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体、
ｃ）任意選択で放射線治療、ならびに
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）が、任意の順序で逐次、または同時に行われた、実施形態１から３のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２０９】
５．ＨＥＲ２陽性がんが、先行処置の後に再発し、または進行した、実施形態４に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１０】
６．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、患者が、単独療法または組合せ療法のいずれかで、少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種、少なくとも４種、または少なくとも５種の異なる抗がん剤、特に化学療法剤および／または治療抗体で処置されている、実施形態４または５に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１１】
７．先行処置が、以下の処置：
（ｉ）単独療法としてのトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、
（ｉｉ）化学療法剤と組み合わせた、好ましくはタキサン、例えば、ドセタキセルおよびビノレルビンと組み合わせたトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、
（ｉｉｉ）タキサンを用いた少なくとも１つの処置、好ましくは異なるタキサン、好ましくはパクリタキセルおよびドセタキセルを用いた少なくとも２つの別個の処置、
（ｉｖ）ゲムシタビンなどの化学療法剤と好ましくは組み合わせた、シスプラチンなどの白金系化学療法剤を用いた少なくとも１つの処置、
（ｖ）好ましくはアジュバント療法としての放射線治療、
（ｖｉ）異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ドキソルビシンとシクロホスファミドの組合せ、ラパチニブとカペシタビンの組合せ、イダルビシンとエトポシドとシタラビンの組合せ、およびベバシズマブとビノレルビンとカペシタビンの組合せを用いた少なくとも１つの処置
のうちの１つもしくは複数、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つ、またはすべてを含む、実施形態４から６のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１２】
８．患者の先行処置が、がん手術、好ましくは、原発性腫瘍および／または転移の外科的除去を伴った、実施形態４から７のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１３】
９．がんが、乳がん、胃がん、癌腫、大腸がん、移行上皮癌、膀胱がん、尿路上皮腫瘍、子宮がん、進行性食道腺癌、胃腺癌または胃食道接合部腺癌、卵巣がん、肺がん、肺腺癌、子宮内膜がん、腎がん、膵がん、甲状腺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、脳のがん、子宮頸がん、腸がん、および肝がん、好ましくは、大腸がん、耳下腺癌などの唾液腺がん、非小細胞肺癌などの肺がん、および気管支がん、ならびに特に、前述の転移形態から選択される、実施形態１から８のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１４】
１０．転移が、皮膚転移、内臓転移、特に、肺および／または肝転移、ならびにリンパ節転移のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２から９の１つまたは複数に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１５】
１１．患者が１つまたは複数の潰瘍性皮膚転移を有する、実施形態１０に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１６】
１２．以下の特徴：
（ｉ）乳がん、好ましくは転移性乳がんであること、
（ｉｉ）リンパ節関与を伴った、浸潤性乳房乳管癌であること、
（ｉｉｉ）大腸がんであること、
（ｉｖ）膀胱がんであること、
（ｖ）リンパ節転移および／または皮膚転移と関連し、特に、リンパ節転移によって引き起こされる縦隔アデノパシーおよび／または皮膚転移によって引き起こされる皮膚潰瘍形成と関連すること
（ｖｉ）内臓転移、特に、肺および／または肝転移と関連すること
のうちの１つまたは複数を有するＨＥＲ２陽性がんを処置するための、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１７】
１３．以下の特徴：
（ｉ）エストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）および／またはプロゲステロン受容体陰性（ＰｇＲ−）
（ｉｉ）蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）または色素原ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）で判定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性
のうちの１つまたは複数を有するＨＥＲ２陽性腫瘍および／または転移を処置するための、実施形態１から１２のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１８】
１４．ＨＥＲ２陽性がんが、少なくとも１種の化学療法剤を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行しており、かつ／または高フコーストラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および／もしくは高フコースペルツズマブ（オムニターグ）を用いた処置に耐性であるか、もしくはその処置後に進行している、実施形態４から１３のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２１９】
１５．
（ｉ）原発性腫瘍の処置、
（ｉｉ）再発性腫瘍の処置、
（ｉｉｉ）腫瘍増殖の阻害、
（ｉｖ）皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移を含めた転移の処置、ならびに／または
（ｖ）腫瘍もしくは転移によって引き起こされる病変、特に、皮膚病変もしくはリンパ節病変、より具体的には、皮膚潰瘍の処置
のための、実施形態１から１４のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２０】
１６．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置すると、以下：
（ｉ）腫瘍増殖の阻害、
（ｉｉ）腫瘍サイズの低減、
（ｉｉｉ）さらなる転移の防止、
（ｉｖ）原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移によって引き起こされる病変、特に、皮膚潰瘍の低減、
（ｖ）転移の数の低減、
（ｖｉｉ）無増悪生存期間の増大、ならびに／あるいは
（ｖｉｉｉ）寿命の増大
のうちの１つあるいは複数がもたらされる、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２１】
１７．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、アジュバント処置用、ネオアジュバント処置用、ネオアジュバント−アジュバント処置用、または緩和処置用である、実施形態１から１６のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２２】
１８．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が患者に繰り返して投与され、治療効果が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の少なくとも第２の投与後に、好ましくはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の第１の投与後に既に得られる、実施形態１から１７のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２３】
１９．治療効果が、皮膚病変、特に、潰瘍性皮膚病変の低減、縦隔アデノパシーの低減ならびに／または内臓転移、特に、肺および／もしくは肝転移の低減を含み、かつ／あるいは痛みを低減する、実施形態１８に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２４】
２０．２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、１０％〜３％、または０％の、好ましくは、２％〜２０％、３％〜１５％、または５％〜１０％の範囲内のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する、実施形態１から１９のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２５】
２１．２０％以下、好ましくは１５％以下、より好適には１０％以下の量のフコースをＣＨ２ドメイン内に有し、以下のグリコシル化特性：
（ｉ）少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、
（ｉｉ）少なくとも６５％の量のガラクトース、
（ｉｉｉ）任意選択で検出可能なＮｅｕＧｃ無し、
（ｉｖ）任意選択で検出可能なＧａｌα１，３−Ｇａｌ無し、
（ｖ）任意選択で検出可能なα２，６−カップリングＮｅｕＡｃ
のうちの１つまたは複数、好ましくはすべてを有する、実施形態１から２０のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２６】
２２．以下の特徴：
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含むこと、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むこと、
（ｉｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むこと、
（ｉｖ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むこと、
（ｖ）抗体トラスツズマブとの交差特異性を示すこと、
（ｖｉ）抗体トラスツズマブのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むこと、
（ｖｉｉ）結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍応答において抗体トラスツズマブと等価であること、
（ｖｉｉｉ）ヒト細胞株内で組換え産生されたこと
のうちの１つまたは複数、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくはすべてを有する、実施形態１から２１のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２７】
２３．対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体より強いＡＤＣＣを誘導することができる、実施形態１から２２のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２８】
２４．先行処置で使用される高フコース抗ＨＥＲ２抗体が、７０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する、実施形態４から２３のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２２９】
２５．先行処置で使用される高フコース抗ＨＥＲ２抗体が、以下の特徴：
（ｉ）ＩｇＧ抗体であること、
（ｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と交差特異性を示すこと、
（ｉｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに特異的に結合することができること、
（ｉｖ）その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％、より好ましくは１００％同一であること、
（ｖ）抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））であること、
（ｖｉ）ＨＥＲ２に特異的に結合することができ、高フコース抗ＨＥＲ２抗体のエピトープが、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のエピトープと異なること、および／または
（ｖｉｉ）抗体ペルツズマブ（オムニターグ）であること
のうちの１つまたは複数、好ましくは少なくとも３つを有する、実施形態４および２４のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３０】
２６．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が単独療法である、実施形態１から２５のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３１】
２７．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、特に、
（ｉ）少なくとも１種の化学療法剤、ならびに／または
（ｉｉ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる少なくとも１種のさらなる治療抗体、ならびに／または
（ｉｉｉ）がん手術および／もしくは放射線治療
と組み合わせた組合せ療法である、実施形態１から２６のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３２】
２８．
ａ）実施形態４に記載の患者の先行処置で使用される少なくとも１種の化学療法剤が、シクロホスファミド；ラパチニブ；カペシタビン；シタラビン；ビノレルビン；ベバシズマブ；ゲムシタビン；マイタンシン；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロン；タキサン、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテル）、およびＳＢ−Ｔ−１２１４；アロマターゼ阻害剤、例えば、アミノグルテチミド、テストラクトン（テスラク）、アナストロゾール（アリミデクス）、レトロゾール（フェマラ）、エキセメスタン（アロマシン）、ボロゾール（リビゾール）、フォルメスタン（レンタロン）、ファドロゾール（アフェマ）、４−ヒドロキシアンドロステンジオン、１，４，６−アンドロスタトリエン−３，１７−ジオン（ＡＴＤ）、および４−アンドロステン−３，６，１７−トリオン（６−ＯＸＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、ラメラリンＤ、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エリプチシン、アウリントリカルボン酸、およびＨＵ−３３１；白金系化学療法剤、例えば、ｃｉｓ−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（シスプラチン）、ｃｉｓ−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）（カルボプラチン）、および［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ’）白金（ＩＩ）（オキサリプラチン）、ならびに代謝拮抗剤、特に、葉酸代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、およびプララトレキサート、ピリミジン類似体、例えば、フルオロウラシル、ゲムシタビン、フロクスウリジン、５−フルオロウラシル、およびテガフール−ウラシル、ならびにプリン類似体からなる群から選択され；かつ／または
ｂ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、少なくとも１種の異なる抗がん剤との組合せ療法であり、抗がん剤が、（ｉ）好ましくはタキサンである化学療法剤、ならびに（ｉｉ）抗がん治療抗体であって、自己の作用機序がフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる抗ＨＥＲ２抗体、例えば、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブに対応する場合、ペルツズマブなど、セツキシマブ（アービタックス）などの抗ＥＧＦＲ抗体、および／もしくはベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体である、抗がん治療抗体からなる群から選択される
実施形態１から２７のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３３】
２９．患者の先行処置が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なり、特に、自己の作用機序がフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体と異なる抗ＨＥＲ２抗体、特に、ペルツズマブ、抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、セツキシマブ（アービタックス）、パニツムマブ（ベクティビックス）、およびニモツズマブ（テラロック）、ベバシズマブ（アバスチン）などの抗ＶＥＧＦ抗体、アレムツズマブ（キャンパス）などの抗ＣＤ５２抗体、ブレンツキシマブ（アドセトリス）などの抗ＣＤ３０抗体、ゲムツズマブ（マイロターグ）などの抗ＣＤ３３抗体、ならびに抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）、トシツモマブ（ベキサール）、およびイブリツモマブ（ゼヴァリン）からなる群から選択される少なくとも１種の治療抗体を使用した、実施形態１から２８のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３４】
３０．１、２、３、もしくは４週間毎、またはより低い頻度で、患者の体重１ｋｇ当たり１〜１０ｍｇの量で、好ましくは３週間毎またはより低い頻度で、患者の体重１ｋｇ当たり２〜５ｍｇの量でフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与するための、実施形態１から２９のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３５】
３１．フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ用量であるが、それより低い頻度で投与される場合、またはフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同じ頻度であるが、それより低い用量で投与される場合、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体より高い治療有効性を有する、実施形態４から３０のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３６】
３２．抗ＨＥＲ２抗体の処置が、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質、特に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミドを用いた患者の前投薬と組み合わされる、実施形態１から３１のいずれか１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３７】
３３．前投薬が、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質の少なくとも２つの別個の用量を含み、第１の用量が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する８時間〜４８時間前に与えられ、第２の用量が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する５分〜６時間前に与えられる、実施形態３２に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２３８】
３４．用量のそれぞれが、鎮痛性および／または解熱性を有する作用物質２５０ｍｇおよび１５００ｍｇ、特に１０００ｍｇを含有する、実施形態３３に記載のＨＥＲ２抗体。
【０２３９】
３５．前投薬が、ステロイド、好ましくはグルココルチコイド、特に、メチルプレドニゾロンの投与をさらに含む、実施形態３２から３４の１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２４０】
３６．ステロイドが、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する５分〜４時間、特に３０分前に投与される、実施形態３５に記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２４１】
３７．前投薬が、以下のステップ：
ａ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する前の夜に、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第１の用量、
ｂ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する１時間前のＮ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド１０００ｍｇの第２の用量、および
ｃ）フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を投与する３０分前のメチルメチルプレドニゾロン１２５ｍｇの一用量
を含み、またはこれらからなる、実施形態３２から３４の１つに記載の抗ＨＥＲ２抗体。
【０２４２】
３８．実施形態３２から３７のいずれかに記載の前投薬による、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を含む組成物の投与によって引き起こされる注入関連反応を処置または防止するための鎮痛剤および／または解熱剤。
【０２４３】
この態様の特定のおよび特に好適な実施形態を以下に再び記載する。
【０２４４】
本発明の特定のおよび特に好適な実施形態を以下に記載する。
【０２４５】
第１の具体的な実施形態では、本発明は、ＨＥＲ２陽性がんを有する患者を処置するためのフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体であって、ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有し、好ましくは、がんは、転移性がんであり、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、
（ｉ）２０％以下、好ましくは１５％以下、より好適には１０％〜０％または１０％〜３％の量のフコース、少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、および少なくとも６５％の量のガラクトースをＣＨ２ドメイン内に有し、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有し、
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有し、
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種、少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種の異なる化学療法剤、および／または
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％同一である、少なくとも１種の高フコース抗ＨＥＲ２抗体、好ましくはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を対象とする。好ましくは、この第１の実施形態における先行処置は、以下：
（ｉ）単独療法としての高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの処置、ならびに／または化学療法剤、好ましくはタキサン、例えば、ドセタキセルおよびビノレルビンなどとの少なくとも１つの組合せ処置、特に、高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いた少なくとも１つの単独療法、ならびにさらに高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）とのさらに少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの組合せ処置、
（ｉｉ）少なくとも１種のタキサンを用いた少なくとも１つの処置、好ましくは、１種、２種、またはそれ以上の異なるタキサン、好ましくはパクリタキセルおよびドセタキセルを用いた少なくとも２つの別個の処置、
（ｉｉｉ）好ましくは、ゲムシタビンなどの化学療法剤と組み合わせた、シスプラチンなどの白金系化学療法剤を用いた少なくとも１つの処置、
（ｉｖ）好ましくはアジュバント療法としての放射線治療、
（ｖ）一化学療法剤もしくは異なる化学療法剤の組合せ、例えば、ドキソルビシンとシクロホスファミドの組合せ、ラパチニブとカペシタビンの組合せ、イダルビシンとエトポシドとシタラビンの組合せ、およびベバシズマブとビノレルビンとカペシタビンの組合せを用いた少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つの処置、
ならびに／あるいは
（ｖｉ）原発性腫瘍および／または１つもしくは複数の転移の少なくとも一部の外科的切除
のうちの１つあるいは複数を含んだ。
【０２４６】
特に、患者の先行処置は、この第１の実施形態では、処置（ｉ）〜（ｖｉ）のうちの少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または６つすべてを含む。好ましくは、先行処置は、少なくとも処置（ｉ）、（ｖ）、および（ｖｉ）を含む。
【０２４７】
第２の具体的な実施形態では、本発明は、ＨＥＲ２陽性がんを有する患者を処置するためのフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体であって、ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定した場合に、レベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有し、好ましくは、がんは、転移性がんであり、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、
（ｉ）１５％以下、好ましくは１０％〜０％または１０％〜２％の量のフコース、少なくとも８％の量のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ、および少なくとも６５％の量のガラクトースをＣＨ２ドメイン内に有し、検出可能なＮｅｕＧｃをまったく有さず、検出可能なＧａｌα２，６カップリングＮｅｕＡｃをまったく有さず、好ましくは、ヒト細胞株内で組換え産生されたものであり、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有し、
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有し、
（ｉｖ）トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））より強いＡＤＣＣを誘導することができ、
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも２種、好ましくは少なくとも３種の異なる化学療法剤、ならびに
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）であり、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のものと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％同一である、少なくとも１種の高フコース抗ＨＥＲ２抗体、好ましくはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））
ｃ）任意選択で放射線治療、ならびに
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、任意選択でｃ）、および任意選択でｄ）は、任意の順序で逐次に、または同時に行われ、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、リンパ節転移、および内臓転移、特に、肺または肝転移から選択される転移を処置するためのものである、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を対象とする。好適な先行処置は、第１の具体的な実施形態とともに上述し、それは、それぞれの開示に付託される。
【０２４８】
第１および第２の具体的な実施形態で処置される患者は、以下の特徴：
（ｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖ）であること、または
（ｉｉ）患者が、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、もしくは患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であること
を有し得る。
【０２４９】
特に、第１および第２の特定の実施形態のフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、そのＦｃγＲＩＩＩａアロタイプに関係なく、患者を処置するのに使用することができる。第１および第２の具体的な実施形態では、ＨＥＲ２陽性がんおよび／または転移は、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有し得る。好ましくは、ＨＥＲ２陽性がんおよび／または転移は、ＦＩＳＨまたはＣＩＳＨによって決定される場合にＨＥＲ２遺伝子増幅に関して陽性である。一態様によれば、第１および第２の具体的な実施形態における処置される患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のフェニルアラニンについてホモ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ）であり、または患者は、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａのアミノ酸１５８位のバリンおよびフェニルアラニンについてヘテロ接合性（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｆ）であり、任意選択でさらに、ＨＥＲ２陽性がんおよび／または転移は、免疫組織化学検査によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくは１＋以下のＨＥＲ２過剰発現を有する。
【０２５０】
フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の適当で好適な投与量、および適当で好適な前投薬スケジュールは上述した。それは、第１および第２の具体的な実施形態にも当てはまる上記開示に付託される。第１および第２の具体的な実施形態によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、単独療法として、または組合せ療法として使用するためのものであり得る。実施形態は上述し、それは、それぞれの開示に付託される。
【０２５１】
上述したように、本発明は、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有し、好ましくは転移性がんである、ＨＥＲ２陽性がんを有するヒト患者を処置する方法であって、５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１５％〜０％のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する抗ＨＥＲ２抗体（フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体）を投与するステップを含む、方法を対象とする。
【０２５２】
上述したように、本発明は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体で処置した後にＨＥＲ２陽性新生物疾患、特に、ＨＥＲ２陽性がんを患っている患者を処置する方法であって、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を前記患者に新生物疾患を処置するのに十分な量で投与するステップを含む、方法を対象とする。特に、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、５０％以下の量のフコースをＣＨ２ドメイン内に有し、高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する。好適な実施形態では、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置する前に、前記患者は、
ａ）少なくとも１種の化学療法剤、
ｂ）６０％以上のＣＨ２ドメイン内フコース量を有する少なくとも１種の抗ＨＥＲ２抗体（高フコース抗ＨＥＲ２抗体）、
ｃ）任意選択で放射線治療、および
ｄ）任意選択で少なくとも１種のさらなる治療抗体
で処置されており、先行処置ａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）は、任意の順序で逐次、または同時に行われた。がんは、免疫組織化学検査（ＩＨＣ）によって決定される場合にレベル２＋以下、好ましくはレベル１＋のＨＥＲ２過剰発現を有するＨＥＲ２陽性がんであり得る。
【０２５３】
上述したすべての実施形態およびフィーチャも、本発明による処置の方法に同様に当てはまる。
【０２５４】
本願は、先の出願である２０１２年７月１８日に出願されたＵＳ６１／６７３，２０１、２０１２年７月１８日に出願されたＵＳ６１／６７３，２１６、２０１２年７月１８日に出願された、ＵＳ６１／６７３，２２９、および２０１２年１２月１８日出願されたＥＰ１２１９７７６８．０の利益を主張し、これらの出願はすべて参照により本明細書に組み込まれている。
【０２５５】
本明細書に記載の数値範囲は、範囲を定義する数値を含む。本明細書に提供される表題は、全体として本明細書を参照することによって読むことができる本発明の様々な態様または実施形態の限定ではない。一実施形態によれば、方法の場合に、ある特定のステップを含むとして、または組成物の場合に、ある特定の成分を含むとして本明細書に記載される主題は、それぞれのステップまたは成分からなる主題を指す。本明細書に記載の好適な態様および実施形態を選択し、組み合わせることは好適であり、好適な実施形態のそれぞれの組合せから生じる特定の主題も本開示に属する。
【図面の簡単な説明】
【０２５６】
【図１】図１は、第１の注入後の注入用量／体重の関数としての血清半減期ｔ１／２を示す図である。Ｆｕｃ−トラスツズマブ：黒色円；Ｆｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））：灰色円。
【図２】図２は、第１の用量から８日以内に開始し、６週間後に完了した（第２の用量）潰瘍性皮膚転移の劇的な治癒を示す図である。投与量：３週間毎にＦｕｃ−トラスツズマブ２４０ｍｇ。Ａ：処置前（ベースライン）；Ｂ：１週間後（サイクル１、８日目）、Ｆｕｃ−トラスツズマブ２４０ｍｇの１用量；Ｃ：３週間後（サイクル２、１日目）、Ｆｕｃ−トラスツズマブ２４０ｍｇの１用量；Ｄ：５週間後（サイクル２、１５日目）、Ｆｕｃ−トラスツズマブ２４０ｍｇの２用量；Ｅ：６週間後（サイクル３、１日目）、Ｆｕｃ−トラスツズマブ２４０ｍｇの２用量。
【図３】図３は、フローサイトメトリーによって分析した異なる細胞株に対するＦｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））の結合性を示す図である。二つ組の平均値±標準偏差が示されている。Ａ：Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）Ｂ：Ｆｕｃ−トラスツズマブ。
【図４】図４Ａは、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））とともに４日インキュベートした後のＺＲ−７５−１細胞でのＨＥＲ２／ｎｅｕ発現を示す図である。それぞれ二通りに実施した２つの独立したフローサイトメトリーから得た、培地対照に対するＨＥＲ２陽性細胞のパーセンテージの平均値±標準偏差が示されている。図４Ｂは、Ｆｕｃ−トラスツズマブ、Ｆｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、またはｈＩｇＧ１、および陰性対照としての培地とともにインキュベートしたＺＲ−７５−１細胞からの溶解産物のウエスタンブロットを示す図である。
【図５】図５は、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））によるＳＫ−ＢＲ−３細胞の増殖阻害を示す図である。抗体とのインキュベーション時間は、４日であった。培地対照と比較した増殖のパーセンテージが示されている。６回の反復測定で実施した３つの独立した実験の平均値＋標準誤差が示されている。
【図６】図６は、Ｆｕｃ−トラスツズマブ、およびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、およびプロテインＧとともに６時間インキュベートした後のＢＴ４７４細胞を使用する活性カスパーゼ−３アポトーシスアッセイを示す図である。二通りでの測定の切断されたカスパーゼ−３陽性細胞（アポトーシス細胞）のパーセンテージの平均値±標準偏差が示されている。
【図７】図７は、異なるＦｃγＲＩＩＩａアロタイプを有するドナーの初代ヒトＰＢＭＣを使用して、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いたＳＫ−ＢＲ−３細胞に対するＡＤＣＣアッセイを示す図である。三つ組の比溶解の平均値±標準誤差が示されている。Ａ：ＶＶドナー；Ｂ：ＦＶドナー；Ｃ：ＦＦドナー。
【図８】図８は、異なるＦｃγＲＩＩＩａアロタイプを有するドナーの初代ヒトＰＢＭＣを用いたＭＣＦ−７細胞に対するＡＤＣＣアッセイを示す図である。インキュベーション時間  ５時間、Ｅ：Ｔ比  ５０：１。三つ組の比溶解の平均値±標準誤差が示されている。Ａ：ＶＶドナー；Ｂ：ＦＶドナー；Ｃ：ＦＦドナー。
【図９】図９（ＡならびにＢ）は、ＭＣＦ−７細胞に対する、同じ比溶解を実現するために要求されるＦｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の濃度の比較（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎの最大溶解の９５％の比溶解における）、ならびにその最大溶解の９５％でＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と同じ比溶解を実現するためにＦｕｃ−トラスツズマブの濃度が低減された係数（改善係数（ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ））を示す図である。黒色記号は、個々のドナーを表し、赤色記号は、すべてのドナーの平均値を表す（Ａを参照）。すべてのドナーの平均値は、Ｂでは線として示されている。より低くＨＥＲ２発現する腫瘍（ＭＣＦ−７）についての最大Ｆｕｃ−トラスツズマブ媒介ＡＤＣＣ増大は、最大１４０倍であり、平均で４２である。したがって、大きく改善された抗腫瘍ＡＤＣＣがすべての患者アロタイプで実現された。
【図１０】図１０は、図６〜８に示したものと同様の実験の結果を示す図である。さらなる説明は、対応する実施例１５の記載に提供されている。
【図１１】図１１は、図６〜８に示したものと同様の実験の結果を示す図である。さらなる説明は、対応する実施例１５の記載に提供されている。
【図１２】図１２は、図６〜８に示したものと同様の実験の結果を示す図である。さらなる説明は、対応する実施例１５の記載に提供されている。
【図１３】図１３Ａは、ＢＴ４７４ヒト乳癌異種移植片を保有するヌードマウスにおけるＦｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す図である。腫瘍が触知可能サイズに到達したとき、マウスを指定された投与量レベルで処置した。抗体は、４週間にわたって週２回ｉ．ｖ．投与した。各記号は、８匹の動物の群の平均値および標準誤差を表す。図１３Ｂは、ＢＴ４７４ヒト乳癌異種移植片を保有するヌードマウスにおける異なる濃度のＦｕｃ−トラスツズマブのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す。腫瘍が触知可能サイズに到達したとき、マウスを指定された投与量レベルで処置した。抗体は、４週間にわたって週２回ｉ．ｖ．投与した。各記号は、８匹の動物の群の平均値および標準誤差を表す。
【図１４】図１４は、患者由来＃７２６８胃癌異種移植片（ＭＶ９１３８）を保有するヌードマウスにおけるＦｕｃ−トラスツズマブのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す図である。腫瘍が触知可能サイズに到達したとき、マウスを指定された投与量レベルで処置した。抗体は、４週間にわたって週２回ｉ．ｖ．投与した。各記号は、８匹の動物の群の平均値および標準誤差を表す。
【図１５】図１５Ａは、３０ｍｇ／体重１ｋｇの単一用量ｉ．ｖ．投与後のＦｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の薬物動態を示す図である。動物の抗体血清濃度は、投薬後の１０時点で測定した。各記号は、３匹の動物の群の平均値および標準誤差を表す。データ点は、１／Ｙ２で重み付けした２相指数関数的減衰でフィッティングした。図１５Ｂは、単回ｉ．ｖ．注入後のＦｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の血清濃度を示す。各記号は、３ｍの動物の群の平均値および標準偏差を表す。
【発明を実施するための形態】
【０２５７】
実施例
（実施例１）
トラスツズマブバリアントのグリコシル化分析
本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体、ここではトラスツズマブの低フコシル化バリアント（Ｆｕｃ−トラスツズマブ、引き続いてＴｒａｓＧＥＸ（商標）とも呼ばれる）は、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２００８／０２８６８６Ａ２に記載のフコシル化活性が低減されたヒト骨髄性白血病細胞株内の発現によって得た。高フコース抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（Ｆｕｃ＋トラスツズマブ）は、ハムスターＣＨＯ細胞内で産生させ、したがってトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））に実質的に対応する。
【０２５８】
より詳細にＦｕｃ−トラスツズマブのグリコシル化パターンを特徴付けるために、糖プロファイリング試験を実施した。ヒト化ＩｇＧ１抗体トラスツズマブは、重鎖定常領域２内に１つのＮ−グリコシル化部位を含む。糖プロファイリングのために、インタクトなＮ−グリカンをタンパク質コアから解放し、Ｎ−グリカンの還元末端を蛍光マーカーで標識した。標識Ｎ−グリカンの精製試料をＵＰＬＣによって分離した。Ｎ−グリカン構造の相対モル存在量を計算するために、蛍光検出に基づくピーク面積を使用した。抗体について推定されたデータを表１に要約する。値は、対象のモノサッカライドのタイプ（例えば、フコース）を含有するＮ−グリカンの相対モル含量を表す。
【０２５９】
【表１】
2015528802.tif 000002
【０２６０】
糖プロファイリングは、Ｆｕｃ−トラスツズマブが、ハムスターＣＨＯ細胞（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の生成に使用される）内で発現されるＦｕｃ＋トラスツズマブと比較してはるかにより低いフコース含量およびより高いビスＧｌｃＮＡｃ含量を有することを示す。さらに、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、ヒト細胞株内での産生に起因して、ヒトグリコシル化プロファイルを有し、したがって検出可能なＮｅｕＧｃおよび検出可能なＧａｌα１，３−Ｇａｌをまったく有していなかった。
【０２６１】
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））の標的結合、特異性、親和性、およびＦｖ媒介抗腫瘍活性を、異なる比較可能性試験（以下の実施例も参照）、特に、ＨＥＲ２抗原ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー分析、ＨＥＲ２下方調節、ＶＥＧＦ生成の低減、腫瘍増殖の阻害、および腫瘍アポトーシスの誘導で分析した。結果により、本発明によるＦｕｃ−トラスツズマブが腫瘍細胞増殖阻害、および腫瘍細胞アポトーシスの誘導の完全な維持を示すことが確認された。したがって、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブは、結合性およびＦｖ媒介抗腫瘍性において基本的に等価である。したがって、治療有効性、特に、抗転移活性に関する改善は、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体のグリコシル化特性の改善に起因する。
【０２６２】
実施例１に記載のＦｕｃ−トラスツズマブを後続の分析および実施例で使用した。
【０２６３】
（実施例２）
臨床試験
局所的に進行した、または転移のＨＥＲ２陽性がんを有する患者におけるＦｕｃ−トラスツズマブ（実施例１を参照）の第Ｉ相−用量漸増および薬物動態学的試験を実施した。３週投与スキームを使用した。患者に、１２ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ、２４０ｍｇ、４８０ｍｇ、または７２０ｍｇのＦｕｃ−トラスツズマブを投与した。処置は、安全で非常に耐容性良好であり、主に第１の注入時にほんの時折の注入関連反応（ＩＲＲ）を伴ったが、それは、ステロイドによって、特に、本明細書に記載のパラセタモールとステロイドの組合せで制御することができる。
【０２６４】
観察された薬物動態に関して、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、血清半減期、Ｃｍａｘ、Ｃｍｉｎ、ＡＵＣ、およびクリアランスを含めて、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と完全に同等の薬物動態学的性質を示した。例えば、第１の注入後のＦｕｃ−トラスツズマブの循環半減期ｔ１／２は、用量依存性であり、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と完全に同等であり、４８０ｍｇを注入した後の血清ｔ１／２は２１３±５９時間であり、７２０ｍｇを注入した後の血清ｔ１／２は３０６±１３１時間であった（図１を参照）。
【０２６５】
印象的な治療有効性が、化学療法および／または抗体療法の複数の先の処置を受けたこれらの後期患者において見られた。治療効果は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）に対して以前に応答しなかった患者において見られた。さらに、応答は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）に使用した用量より低い用量で見られた。さらに、治療有効性は、１＋および２＋などの低ＨＥＲ２発現（ＩＨＣによって決定して）を有する患者においても見られ、数カ月にわたる疾患の安定化を実現することができた。
【０２６６】
【表２】
2015528802.tif 000003
【０２６７】
Ｆｕｃ−トラスツズマブは、異なるＦｃγＲＩＩＩａ状態を有する患者において同等の治療有効性を示し、Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置がＦｃγＲＩＩＩａアロタイプと無関係であることを実証する：
【０２６８】
【表３】
2015528802.tif 000004
【０２６９】
さらに、治療有効性は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）が有意な治療効果を示さない徴候において見られた。特に、高い効力が転移、特に、皮膚転移、特に、潰瘍性皮膚転移、肺および肝転移、リンパ節病変で見られ、さらに、患者、特に、不治の患者にとって生活の質を著しく改善する痛みの低減も観察された。さらに、大腸がん、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、気管支がん、または耳下腺癌を有する患者の有効な処置がそれぞれ観察された。したがって、得られた臨床データにより、本明細書に記載の新規処置スケジュールおよび患者群において、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の高い治療有効性が確認される。
【０２７０】
本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体、ここでは、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（実施例１を参照）を投与した際に主要な応答を有した患者の選択された記録を、以下の実施例で記載する。欧州癌研究治療機関（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、ＥＯＲＴＣ）、米国の国立がん研究所、およびカナダ臨床試験グループの国立がん研究所を含む国際共同研究によって公開された固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）の指針に従って、腫瘍評価を臨床試験中に実施した。
【０２７１】
（実施例３）
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた、転移乳がんに罹患している重度に事前処置された患者の処置
患者の特徴：女性、Ｆ／Ｆ  ＦｃγＩＩＩａ状態
前処置の年表：
２００６年９月：
右局所進行性乳がんの診断（組織診断：浸潤性乳管癌；ＥＲ−  ＰｇＲ−；ハーセプテスト  ３＋）。
２００６年９月から２００７年１月まで：
ドキソルビシンおよびシクロホスファミドを用いた療法の４サイクル、その後のパクリタキセルを用いた療法の２サイクル、疾患の部分応答有り。
２００７年２月：
右乳房切除（組織診断：浸潤性乳管癌ＧＩＩＩ；ＥＲ−ＰｇＲ−；ハーセプテスト  ３＋）。
２００７年３月から６月まで：
パクリタキセルを用いた療法の３サイクル、その後の右胸壁、右腋窩部および鎖骨上部、ならびに右内胸鎖（ｒｉｇｈｔ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍａｍｍａｒｙ  ｃｈａｉｎ）に対する放射線治療
２００７年４月から２００８年６月まで：
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）Ｆｕｃ＋）を用いた処置。
２００９年３月：
疾患の再発（胸壁における皮膚転移、縦隔アデノパシー）。皮膚転移の生検を実施し、それにより乳がんの局在化が確認された（ＥＲ−；ＰｇＲ−；ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ３＋）。
２００９年４月から５月まで：
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））およびドセタキセルを用いた療法の３サイクル、疾患の進行有り。
２００９年６月から２０１０年１月まで：
ラパチニブおよびカペシタビンを用いた処置、疾患の初期の部分応答、その後の疾患の進行有り。
２０１０年２月から９月まで：
イダルビシン、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄ）、およびシタラビンを用いた処置、疾患の初期の部分応答、その後の疾患の進行有り。
２０１０年１０月：
皮膚転移の生検を繰り返した（組織診断：乳がんの局在化；ＥＲ−；ＰｇＲ−；ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ３＋）。
２０１０年１２月から２０１１年２月まで：
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））およびビノレルビンを用いた処置、疾患の進行有り。
２０１１年３月から８月まで：
ベバシズマブ、ビノレルビン、およびカペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎ）を用いた療法の８サイクル、疾患の初期の部分応答、その後の疾患の進行有り。
２０１１年１０月から２０１２年２月まで：
シスプラチンおよびゲムシタビンを用いた療法の４サイクル、疾患の進行有り。
【０２７２】
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置
上述した前処置に失敗した後、２０１２年３月にＦｕｃ−トラスツズマブを用いた試験に患者を登録した。ベースラインにおいて、患者は、皮膚病変および縦隔リンパ節侵襲（ｍｅｄｉｓｔｉｎａｌ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ）が急速に進行していた。特に、皮膚潰瘍形成の複数の出血範囲を伴って、胸壁においてびまん性皮膚新生物関与があった。皮膚潰瘍形成の範囲は、右傍胸骨部でより大きかった（最大直径６ｃｍ）。ＣＴスキャンにより、縦隔アデノパシーの存在が確認された。上述した前処置から導出することができるように、１つの単独療法および２つの組合せ療法においてＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を用いて、効果はまったく見られなかった。
【０２７３】
患者に、耐容性良好であるＦｕｃ−トラスツズマブ（３週間毎に２４０ｍｇ、これは、およそ３．３ｍｇ／ｋｇの投与量になる）を用いた療法を６サイクル投与した。皮膚潰瘍形成範囲の修復プロセスは、サイクル１の８日目で、すなわち、初期用量後に既に顕著であり、徐々により大きくなった。サイクル３後に、疾患の部分応答が記録された。皮膚新生物浸潤は、包括的に改善された。特に、右傍胸骨部の皮膚潰瘍形成の範囲は、完全に修復された（図２を参照）。さらに、リンパ節侵襲（縦隔アデノパシー）の強い低減が報告された。第１のＣＴスキャンおよびＦｕｃ−トラスツズマブの３サイクルにおける標的合計の７２％の低減が報告された（最長直径の合計：１３５ｍｍから３７ｍｍへの低減）。
【０２７４】
実施例３は、高フコース抗ＨＥＲ２抗体（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および多数の化学療法処置を用いた処置に失敗した重度に事前処置された患者において、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の高い効力を実証するものであり、特に、潰瘍性皮膚転移およびリンパ節転移に対して注目すべき効果を示した。したがって、実施例３は、本発明が先行技術に対してする重要な寄与を支持する。
【０２７５】
（実施例４）
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた、大腸がんに罹患した重度に事前処置された患者の処置
患者の特徴：女性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｖ
初期のがんの特徴：
−  転移大腸がん  病期ＩＶ
−  肝臓および肺転移（ｍｅｔａｔｓｔａｓｅｓ）を伴った浸潤性シグマレクタム（ｓｉｇｍａｒｅｃｔｕｍ）癌腫
−  ＨＥＲ２  ３＋（ハーセプテスト；細胞の９５％において完全な膜染色）
前処置：
８ラインの先の処置：
−  化学療法剤フォルフォックス、フォルフィリ、テガフールウラシル、およびホリン酸カルシウムＩを含む様々な化学療法
−  抗がん抗体：パニツムマブ（抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体）、４＊アバスチン＝ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体）との組合せを含む
肺および肝臓転移を伴って進行するベースラインにおいて。
【０２７６】
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置：
患者に、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（３週間毎に４８０ｍｇ、これは、およそ７．５ｍｇ／ｋｇの投与量になる）を用いた療法を５サイクル投与した。処置は、耐容性良好であり、重要な治療効果が記録された。特に、標的病変部の４４％の低減（最長直径の合計：１９７ｍｍから１１１ｍｍへの低減）が実現された（８週間後の最初のＣＴスキャンで記録された）。実施例４は、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を用いた処置が、特に、肺および肝転移などの内臓転移を処置するのに意外にも有効であることを実証する。トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））などの高フコース抗ＨＥＲ２抗体は、肺および肝転移に対して有効でないことが先行技術には記載されているので、これは重要な知見である。背景技術で記載したように、肺および肝転移などの内蔵転移は、特に、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））などの高フコース抗ＨＥＲ２抗体で処置された患者において、再発の支配的な側面である。本願に記載のこれらの重要な知見は、内臓転移、特に、肺および肝転移に罹患している患者にとって新規の処置選択肢を提供し、その理由は、このような転移は、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で処置され得るためである。
【０２７７】
（実施例５）
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた、肺がんに罹患している患者の処置
患者の特徴：男性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｆ
初期のがん特徴：
−  非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）  病期ＩＶ
−  ＨＥＲ２  ３＋
−  ＴＮＭがん病期分類：ＣＴ１ＢＮ０Ｍ１Ａ（直径２〜３ｃｍの腫瘍；リンパ節への拡散無し；肺または胸膜液もしくは心膜液における転移が迫っている）  。
【０２７８】
年表：
−  甲状腺癌に起因する１９９７年の甲状腺切除。
−２０１３年１月に自己免疫性溶血性貧血。非小細胞肺癌の診断。
【０２７９】
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置：
２０１３年２月にＦｕｃ−トラスツズマブを用いた試験に患者を登録した。ベースラインにおいて、２つの病変部が標的病変部として同定された。これまで、患者に、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（３週間毎に７２０ｍｇ、これは、およそ９．５ｍｇ／ｋｇの投与量になる）を用いた療法を６サイクル投与した。標的病変部の直径の合計は、ベースラインとＲＥＣＩＳＴ１．１．に従って評価した腫瘍応答が安定病態であった２カ月後の評価との間で未変化のままであった。処置は現在、継続中である。
【０２８０】
（実施例６）
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた、耳下腺がんに罹患した患者の処置
患者の特徴：男性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｆ
初期のがんの特徴：
−  右耳下腺癌  病期ＩＩＢ
−  ＨＥＲ２  ３＋
−  ＴＮＭがん病期分類：ＣＴ３ＣＮ０ＣＭ０（直径７ｃｍ超の腫瘍；リンパ節への拡散無し；転移無し）
年表：
−  ２０１１年１２月に最初の診断、エノラル（ｅｎｏｒａｌ）腫瘍摘出
−  ２０１３年１月に局所的な再発
−  ２０１３年１月から３月にリンパ節レベルＩ〜ＩＩＩの下顎後陥凹のアジュバント放射線治療  。
【０２８１】
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置：
２０１３年２月にＦｕｃ−トラスツズマブを用いた試験に患者を登録した。ベースラインにおいて、１つ病変部が標的病変部として同定された。これまで、患者に、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（３週間毎に７２０ｍｇ、これは、およそ８．９ｍｇ／ｋｇの投与量になる）を用いた療法を６サイクル投与した。標的病変部の直径の合計は、ベースラインと２カ月後の評価との間で２６％減少した。ＲＥＣＩＳＴ１．１．に従って評価した腫瘍応答は、安定病態であった。処置は現在、継続中である。
【０２８２】
（実施例７）
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた、気管支がんに罹患した患者の処置
患者の特徴：女性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｆ
初期のがんの特徴：
−  気管支がん  病期ＩＩＩＢ
−  ＨＥＲ２  ２＋
−  ＴＮＭがん病期分類：Ｔ２Ｎ３Ｍ０（直径３〜７ｃｍの腫瘍；遠位リンパ節への拡散；転移無し）  。
【０２８３】
年表：
−  ２０１２年６月に最初の診断、頚部リンパ節生検
−  ２０１２年７月から２０１３年１月にビノレルビンを用いた療法の１３サイクル  。
【０２８４】
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置：
２０１３年２月にＦｕｃ−トラスツズマブを用いた試験に患者を登録した。ベースラインにおいて、１つ病変部が標的病変部として同定された。これまで、患者に、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（３週間毎に７２０ｍｇ、これは、およそ１２．２ｍｇ／ｋｇの投与量になる）を用いた療法を６サイクル投与した。２カ月後、ＲＥＣＩＳＴ１．１．に従って評価した腫瘍応答は、安定病態であった。処置は現在、継続中である。
【０２８５】
（実施例８）
Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた、ＨＥＲ２を中程度に発現するＨＥＲ２陽性がんに罹患した重度に事前処置された患者の処置
さらに、実施した臨床試験において、強い治療効果が、１＋または２＋のＨＥＲ２過剰発現（ＩＨＣによって決定した場合）を示すにすぎない異なるＨＥＲ２陽性がんに罹患した患者において見られた。
【０２８６】
尿路上皮癌（病期ＩＶ）に罹患した１人の患者（女性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｖ、ＩＨＣによって決定される場合にＨＥＲ２発現１＋）も、がんの低ＨＥＲ２発現状態にもかかわらず、試験登録の際、主要な臨床応答（ｃｌｉｎｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を示した。尿路上皮癌は、腹膜癌症（ｐｅｒｉｔｈｏｎｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｏｓｉｓ）および後腹膜リンパ節症（ｒｅｔｒｏｐｅｒｉｔｈｏｎｅａｌ  ｌｙｍｐｈｏａｄｅｎｏｐａｔｉｅｓ）を伴った膀胱であった。患者は、カルボプラチンおよびゲムシタビンを含めたいくつかの化学療法剤で以前に処置された。さらに、患者は、いくつかのがん外科手術を受けた。腫瘍は、３回再び起こった。したがって、実施した手術にもかかわらず、かつ化学療法処置にもかかわらず、患者は、試験登録の際に標的病変に罹患しており、転移を示した。この患者では、疾患の安定化は、およそ３．５ｍｇ／ｋｇの投与量になる注入１回当たりわずか２４０ｍｇの投与量でＦｕｃ−トラスツズマブを投与するとき、実現された。さらに、患者は、やはり重要な臨床効果である痛みの強い低減を報告した。これらの結果により、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２の中程度の過剰発現、さらにはＩＨＣによって決定される場合にわずか１＋を示すにすぎないＨＥＲ２陽性新生物疾患の処置を可能にすることが確認される。
【０２８７】
同様の結果が、進行している乳房癌に罹患している患者（女性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｆ、ＩＨＣによって決定される場合にＨＥＲ２発現１＋）においても観察された。やはりここで、疾患の安定化が、およそ１ｍｇ／ｋｇの投与量になる６０ｍｇのＦｕｃ−トラスツズマブという非常に低い投与量を投与するときでさえ観察された（この患者をより低い抗体投与量を受けたコホートに登録した）。
【０２８８】
浸潤性乳管乳房癌に罹患しているさらなる患者（女性、ＦｃγＩＩＩａ状態：Ｆ／Ｆ、ＩＨＣによって決定される場合にＨＥＲ２発現２＋）も、抗体が各サイクルで６０ｍｇという非常に低い投与量で投与されたけれども（これもおよそ１ｍｇ／ｋｇの濃度になる）、Ｆｕｃ−トラスツズマブを受けた後、継続中の安定化を示した。より高い投与量で見られた応答を考慮すると、より強い応答が、低ＨＥＲ２発現によって特徴付けられるそれぞれのＨＥＲ２陽性がんにおいても、より高い投与量で投与すると目に見えることになることが明白である。
【０２８９】
（実施例９）
有害反応
実施した臨床試験では、Ｆｕｃ−トラスツズマブを用いた処置によって引き起こされる有害反応も観察された。試験中、心臓の症状は、まったく検出されなかった。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎは、心臓の反応を引き起こすことが公知であるので、このことは重要である。さらに、登録した患者の重い前処置、およびはるかに進行した疾患状態に起因して、前記患者は、芳しくない健康であり、したがって心疾患により感受性である。
【０２９０】
さらに、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、一般に耐容性良好でもあり、軽度または中程度の有害イベントを示すにすぎなかった。特に、有害な胃腸の反応、例えば、下痢、吐き気、および嘔吐などはまったく観察されず、患者の血球数の有害な変化はまったくなかった。
【０２９１】
（実施例１０）
注入関連反応の防止
Ｆｕｃ−トラスツズマブの治療活性を評価するための臨床試験では、Ｆｕｃ−トラスツズマブの注入によって引き起こされる軽度から中程度の有害反応（注入関連反応、ＩＲＲ）も、第１および第２のコホートの患者で観察された。Ｆｕｃ−トラスツズマブの後続の投与におけるＩＲＲを防止するために、残っている患者を、Ｆｕｃ−トラスツズマブ注入の前に、単独で、またはステロイドメチルプレドニゾロンと組み合わせて、パラセタモールで前処置した。パラセタモール前処置は、Ｆｕｃ−トラスツズマブ注入の前の夜の１０００ｍｇの一用量、およびその注入の１時間前の１０００ｍｇの一用量を伴った。メチルプレドニゾロンを１２５ｍｇの用量で、Ｆｕｃ−トラスツズマブ注入の３０分前に、一部の患者にさらに投与した。患者に前処置すると、ＩＲＲが減少した。特に、パラセタモールおよび任意選択でメチルプレドニゾロンを用いた前処置を受けた患者のほぼ５０％は、Ｆｕｃ−トラスツズマブ注入後にいずれのＩＲＲも示さなかった。前処置されず、ＩＲＲを示した第１の患者は、最低用量のＦｕｃ−トラスツズマブを受けたので、このことはさらにより注目すべきであった。したがって、ＩＲＲがパラセタモールおよび任意選択でメチルプレドニゾロンを用いた前処置によって完全に防止され得る患者は、最大４０倍高いＦｕｃ−トラスツズマブ用量を受けた。
【０２９２】
ステロイド（ｓｔｅｒｅｏｉｄｓ）およびパラセタモールの前投薬を導入した後、７人の患者のうちの１人のみがＩＲＲを示した。前記患者は、ＩＲＲグレード２を示し、それは、第１および第２の注入に制限された。ステロイドを使用しないと、１人を除くすべての患者において、ＩＲＲが少なくとも１回起こった（グレード１〜３）。したがって、ステロイドおよびパラセタモールを含み、好ましくはこれらからなる前投薬を使用し、それぞれの前投薬を第１の注入およびＩＲＲ後の単一の次の注入に制限することが推奨される。好ましくは、パラセタモールは、グルコース低減化抗ＨＥＲ２抗体を注入する前の夜およびこれを注入する１時間前に与えられる。ステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン１２５ｍｇ）は、好ましくは患者に注入する３０分前に投与される。第１の注入時にいずれのＩＲＲ（ＩＲＲ≧グレード１）も存在しない場合、その後の注入のために前投薬を与える必要はまったく無い。
【０２９３】
任意のＩＲＲ（ＩＲＲ≧グレード１）が第１の注入またはその後の注入の１つの間に起こる場合では、前投薬（例えば、上述したパラセタモールおよびステロイド）が、次の注入のために、かつＩＲＲ（ＩＲＲ≧グレード１）が最後の注入の間に観察される限り、患者に投与されることになる。患者が任意のＩＲＲ（ＩＲＲ≧グレード１）の第２の再発を経験している場合では、この患者は、すべての後続の注入のために前投薬（パラセタモールおよびステロイド）を受けることが推奨される。
【０２９４】
これらの知見は、Ｆｕｃ−トラスツズマブ注入によって引き起こされるＩＲＲは、メチルプレドニゾロンなどのステロイドと任意選択で組み合わせた、パラセタモールなどの鎮痛剤を用いた前処置によって防止され得ることを実証する。
【０２９５】
（実施例１１）
ＨＥＲ２を発現する異なる細胞へのフコシル化が異なる抗体バリアントの結合
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））の結合特性を比較するために、いくつかのＨＥＲ２陽性細胞株をフローサイトメトリーによって分析した。
【０２９６】
簡単に言えば、標的細胞を回収し、異なる濃度のトラスツズマブバリアントとともにインキュベートした。細胞を洗浄し、二次Ｃｙ３コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体とともに４℃で、暗所でインキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で分析した。生細胞にこれらの散乱性に基づいてゲートをかけ、陽性細胞のパーセンテージをＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して計算した。結果として、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））は、図３に示したように、試験したすべての腫瘍細胞株に対して同等の結合特性を示す。０．０１〜１０μｇ／ｍｌの分析濃度範囲全体にわたって、陽性細胞のパーセンテージの差異はまったく無かった。
【０２９７】
（実施例１２）
フコース低減化および高フコース抗体バリアントによるＨＥＲ２受容体の下方調節
同一の結合特異性および親和性、ならびに可変領域のそのタンパク質配列に起因して、さらなるＦｃ部分媒介相互作用を伴わないＨＥＲ２受容体への抗体の結合によって媒介される機構は、Ｆｕｃ−およびＦｕｃ＋トラスツズマブについて同一であるはずであると予期された。ＨＥＲ２受容体にＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）が結合すると、細胞表面の受容体の発現が下方調節されることが報告されている（Ｍｕｒｐｈｙら、２００９年；Ｃｕｅｌｌｏら、２００１年；Ｆｒａｎｋｅｌ、２００２年；Ｄｅ  Ｌｏｒｅｎｚｏら、２００７年）。細胞表面のＨＥＲ２受容体発現が低減されると、より少ないＨＥＲ２ヘテロ二量体形成が可能になり、増殖因子誘導シグナル伝達、細胞周期進行、および増殖の阻害がもたらされる。
【０２９８】
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と同様の様式でＨＥＲ２受容体発現を下方調節するＦｕｃ−トラスツズマブの能力を分析するために、受容体下方調節試験を両抗体のこの作用機序を比較して実施した。ＨＥＲ２受容体下方調節を、フローサイトメトリーおよびウエスタンブロットによって分析した。
【０２９９】
フローサイトメトリー分析のために、ＺＲ−７５−１細胞を９６ウェル平底プレート内に播種し、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で１日間インキュベートした。様々な濃度のＦｕｃ−トラスツズマブ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、または陰性対照としてのｈＩｇＧ１を添加した。プレートをＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で３〜４日間インキュベートした。ＺＲ−７５−１細胞を回収し、トラスツズマブよって結合されるものと異なるエピトープを認識するＦＩＴＣコンジュゲート抗ヒトＨＥＲ２抗体（ＢＭＳ１２０ＦＩ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｂｅｎｄｅｒ  Ｍｅｄｓｙｓｔｅｍｓ）で染色した。この抗体を使用して、ＨＥＲ２受容体の染色が、トラスツズマブの存在にもかかわらず可能である。ＢＭＳ１２０ＦＩ陽性細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）ソフトウェアを使用してＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターでフローサイトメトリーによって分析した。
【０３００】
図４Ａは、Ｆｕｃ−トラスツズマブ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、またはｈＩｇＧ１とともに４日インキュベートした後の、ＺＲ−７５−１細胞を使用する２つの独立したアッセイの平均結果を示す。データは、培地対照のパーセンテージとしてのＨＥＲ２受容体発現を表す。Ｆｕｃ−トラスツズマブまたはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の存在下のＨＥＲ２発現は、培地対照と比較して約３０％低減されることを示すことができた。ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照は、ＨＥＲ２受容体発現を低減させなかった。
【０３０１】
したがって、ＺＲ−７５−１細胞にＦｕｃ−トラスツズマブが結合すると、細胞表面のＨＥＲ２受容体の下方制御が誘導される。ＨＥＲ２下方制御のレベルは、Ｆｕｃ−トラスツズマブとＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））との間で同等であった。
【０３０２】
フローサイトメトリーによる分析の結果を、ウエスタンブロットによって確認した。簡単に言えば、ＺＲ−７５−１細胞を１０ｃｍの細胞培養皿内に播種し、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で１日間インキュベートした。０．１μｇ／ｍｌの濃度のＦｕｃ−トラスツズマブ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、または陰性対照としてのｈＩｇＧ１を添加した。プレートを、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で３〜４日間インキュベートした。ＺＲ−７５−１細胞を回収し、ペレットを、さらに使用するために−８０℃で凍結させて貯蔵した。ペレットは、プロテアーゼ阻害剤カクテル（ＰＩＣ：プロテアーゼ阻害剤カクテルコンプリートＭｉｎｉ、Ｒｏｃｈｅ）を含有する溶解緩衝液（Ｒｉｐａ−Ｂｕｆｆｅｒ：５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５；１５０ｍＭのＮａＣｌ；１％のＮｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０；０．５％のデソキシコール酸ナトリウム；０．１％のＳＤＳ；１ｍＭのＥＤＴＡ）中に溶解させた。細胞を氷上で１０分間溶解させ、溶解産物を遠心分離によって清澄化した。ＰＩＣを添加し、タンパク質含量を、製造者のプロトコールに従ってＤＣタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｋｉｔ  ＩＩ）によって決定した。ウエスタンブロットをＳＯＰ−０７−１０に従って実施した。簡単に言えば、細胞溶解産物を還元性試料緩衝液中に希釈し、７０℃で１０分間変性させた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥについては、１レーン当たりタンパク質３０μｇを、７．５％のＴｒｉｓ−ＨＣｌレディーゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）に装填した。ニトロセルロース膜にブロットした後、膜をブロックし、ヒツジ抗ヒトＥｒｂＢ２抗体（Ａｂｃａｍ）を使用してＨＥＲ２受容体を検出した。二次抗体として、西洋ワサビ（ｈｏｒｓｅ  ｒｅｄｄｉｓｈ）ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）カップリングウサギ抗ヒツジ抗体（Ａｂｃａｍ）を使用した。等量のタンパク質の装填のための対照として、第２のブロットを並行して行い、β−アクチン（細胞シグナル伝達）に対するウサギ抗体とともにインキュベートし、ＨＲＰカップリングヤギ抗ウサギＩｇＧ  Ｈ＋Ｌ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いて検出した。ウエスタンブロットを、製造者のプロトコールに従って、ＤＡＢ金属増強基質キット（ＤＡＢ  Ｍｅｔａｌ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｋｉｔ）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して発色させた。
【０３０３】
図４Ｂは、ウエスタンブロット分析の例を示す。β−アクチン対照は、同量の細胞溶解産物がゲルに装填されることを示す。ＨＥＲ２受容体の分子量は、１８５ｋＤａである。対応するバンドは、培地対照またはアイソタイプ対照抗体（ｈＩｇＧ１）と比較して、Ｆｕｃ−トラスツズマブまたはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）とともにインキュベートされたＺＲ−７５−１細胞の溶解産物中で劇的に低減される。
【０３０４】
したがって、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、Ｆｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と同等の様式でＺＲ−７５−１細胞のＨＥＲ２受容体の発現を下方調節することが、ウエスタンブロットおよびフローサイトメトリーによって示された。
【０３０５】
（実施例１３）
ＨＥＲ２発現腫瘍細胞の増殖の阻害
ＨＥＲ２の細胞外ドメインにトラスツズマブが結合すると、腫瘍細胞の増殖が阻害される（Ｂｒｏｃｋｈｏｆｆら、２００７年；Ｓｐｉｒｉｄｏｎら、２００２年）。Ｆｕｃ−トラスツズマブのこの作用機序を分析するために、ＳＫ−ＢＲ−３細胞（ヒト乳癌細胞株）の増殖を、様々な濃度（０．１〜１μｇ／ｍｌ）のＦｕｃ−トラスツズマブまたはＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）を用いてＭＴＴアッセイで測定した。ＭＴＴアッセイは、生存細胞のミトコンドリア脱水素酵素による可溶性黄色テトラゾリウム塩ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド；チアゾリルブルー）の切断に基づく非放射性アッセイである。これは、５７０ｎｍでＥＬＩＳＡリーダーによって測定され得る紫色ホルマザンを形成する。吸収シグナルは、培養液中の生存細胞の直接的な尺度である。
【０３０６】
陽性対照として、タキソールを付加することによって増殖を完全に阻害し、ｈＩｇＧ１または培地単独は、陰性対照として機能を果たした。簡単に言えば、ＳＫ−ＢＲ−３細胞を９６ウェル平底プレート内で２日間増殖させた。Ｆｕｃ−トラスツズマブ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ならびに対照物質（ｈＩｇＧ１およびタキソール（２０ｎＭ））を添加し、プレートを、加湿したＣＯ２インキュベーター内で、３７℃でさらに４〜６日間インキュベートした。上清を完全に除去し、ＭＴＴを添加した。細胞を、加湿したＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で２時間、ＭＴＴとともにインキュベートした。上清を除去し、細胞を、溶解緩衝液を含有するＨＣｌおよび２−プロパノールを使用して、暗所で、室温で１時間溶解させた。５７０ｎｍ  ／６３０ｎｍの吸収を、プレートリーダーＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００（Ｔｅｃａｎ  Ａｕｓｔｒｉａ  ＧｍｂＨ）で測定した。
【０３０７】
図５は、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を用いて実施した３つの独立した実験の結果を示す。抗体とともに４日インキュベートした後の増殖を、培地対照中の増殖に対して計算した。陽性対照タキソール（２０ｎＭ）は、最大の増殖阻害をもたらした（培地対照と比較してわずか６％の増殖；データを示さず）。Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞の増殖の濃度依存阻害を誘導した。１００μｇ／ｍｌの抗体濃度で、増殖は、５０％超低減した。ボンフェローニ事後検定を使用して、観察されるＦｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）によって誘導される増殖阻害の有意な差異は、まったくなかった。ヒトアイソタイプ対照と比較して、ＳＫ−ＢＲ−３細胞の増殖の高度に有意な低減が０．１μｇ／ｍｌ以上の濃度で観察された。
【０３０８】
（実施例１４）
ＨＥＲ２発現腫瘍細胞のアポトーシスの誘導
アポトーシスの誘導は、抗体が抗腫瘍活性を媒介し得るさらなる機構である。単量体抗体によるアポトーシスの直接誘導は、効果的でないことが多いが（リツキシマブについて見られるように、Ｚｈａｎｇら、２００５年）、抗ヒト免疫グロブリンまたはプロテインＧによる抗体の架橋は、この作用機序を誘起する。ｉｎ  ｖｉｖｏで、抗体の架橋は、Ｆｃ受容体保有細胞によって誘導され得る。
【０３０９】
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）のアポトーシス活性について矛盾する結果が公開されている（Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙら、２００８年；Ｂｒｏｃｋｈｏｆｆら、２００７年；Ｓｐｉｒｉｄｏｎら、２００２年；Ｄｅ  Ｌｏｒｅｎｚｏ、２００７年）。
【０３１０】
この潜在的な作用機序を試験するために、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））によるアポトーシスの誘導を、腫瘍細胞株ＢＴ４７４においてプロテインＧと架橋した後分析した。アポトーシスの誘導のマーカーとして、本発明者らは、ＢＤ  ＰＥ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｃａｓｐａｓｅ−３  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ｋｉｔを使用して、カスパーゼ３の活性化を分析した。カスパーゼ−３、システインプロテアーゼ（ｃｙｓｔｅｉｎ  ｐｒｏｔｅａｓｅ）は、アポトーシスの早期に活性化される重要なプロテアーゼである。これは、アポトーシスを受けている細胞内でプロセシングされる３２ｋＤａの不活性なプロ酵素として合成される。プロセシングされた形態は、２つのサブユニット（１７ｋＤａおよび１２ｋＤａ）からなり、これらは、会合して活性カスパーゼを形成する。活性カスパーゼ−３は、細胞質内および核内の他のカスパーゼおよび標的をタンパク質分解的に切断および活性化し、それによってアポトーシスを促進する。カスパーゼの活性化は一般に、アポトーシス経路における「復帰不能点」と一般に考えられている。ＢＤ  ＰＥ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｃａｓｐａｓｅ−３  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ｋｉｔを使用して、アポトーシス細胞は、カスパーゼ−３の不活性なプロ酵素形態を認識しないカスパーゼ−３の活性体に特異的な抗体で染色される。
【０３１１】
簡単に言えば、腫瘍細胞株を、アッセイの前に１日間１％のＦＣＳを含有する培地中で培養した。ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で一晩インキュベートした４８ウェルプレート内に細胞を播種した。様々な濃度のＦｕｃ−トラスツズマブ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、または陰性対照としてのｈＩｇＧ１、および２μｇ／ｍｌの最終濃度のプロテインＧを添加した。プレートを、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で４〜４８時間インキュベートした。
【０３１２】
製造者のプロトコールに従って、細胞（接着細胞および非接着細胞の両方）を回収し、透過処理し、固定し、活性カスパーゼ−３について染色した。活性カスパーゼ−３陽性（アポトーシス）細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）ソフトウェアを使用してＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターでフローサイトメトリーによって分析した。図６は、ＢＴ４７４細胞を使用する活性カスパーゼ−３アポトーシスアッセイの結果を示す。プロテインＧによる架橋後に、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、ＢＴ４７４細胞内で強い濃度依存性アポトーシスを誘導した。アポトーシス誘導は、Ｆｕｃ−トラスツズマブとＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）との間で同等であり、それによって、Ｆａｂ媒介腫瘍活性が保持されていることが確認された。
【０３１３】
（実施例１５）
フコシル化が異なる抗体バリアントのＡＤＣＣ活性
抗体Ｆｃドメイン内のグリコシル化部位内のフコース含量が低減すると、ＡＤＣＣ活性、抗原陽性腫瘍細胞の比溶解をもたらす抗体依存性細胞傷害が増大することが報告されている。この効果は、ナチュラルキラー細胞のＦｃγＲＩＩＩａ受容体へのフコース低減化抗体のより高い親和性結合によって引き起こされる。ヒトＩｇＧ１抗体に対する異なる親和性を有する、アミノ酸１５８位におけるこの受容体の２つのアロタイプ（Ｖ１５８Ｆ）が公知である。一般に、Ｖ対立遺伝子は、Ｆ対立遺伝子受容体より、ヒトＩｇＧ１に対する高い親和性を有する。したがって、異なるＦｃγＲＩＩＩａ受容体を有するドナーに対するＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と比較したＦｕｃ−トラスツズマブのＡＤＣＣ活性を分析した。ホモ接合性Ｖ／Ｖ、ホモ接合性Ｆ／Ｆ、およびヘテロ接合性Ｆ／Ｖドナーを、これらの試験に使用した。ＡＤＣＣ活性の規模は、細胞表面の抗原の発現レベルに依存することが報告されているので、低または高ＨＥＲ２レベルを発現する腫瘍細胞株を、ＡＤＣＣアッセイで分析した。
【０３１４】
アッセイは、ユウロピウム放出アッセイとして実施した。簡単に言えば、ＨＥＲ２陽性標的細胞株（ＳＫ−ＢＲ−３；ＭＣＦ−７）を、電気穿孔によってユウロピウム（Ｅｕ３＋）を装填し、様々な濃度のＦｕｃ−トラスツズマブ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、またはヒト対照抗体の存在下で、５０：１の効果細胞と標的細胞の比（Ｅ：Ｔ比）で、解凍した初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、効果細胞、液体窒素中に貯蔵）とともに５時間インキュベートした。上清中へのユウロピウム放出（抗体媒介性細胞死を示す）を、蛍光プレートリーダーＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００（Ｔｅｃａｎ  Ａｕｓｔｒｉａ  ＧｍｂＨ）を使用して定量化した。最大放出は、トリトン−Ｘ−１００とともに標的細胞をインキュベートすることによって実現され、自然放出は、標的細胞単独のみを含有する試料中で測定された。特異的な細胞傷害性を、
％比溶解＝（実験的放出−自然放出）／（最大放出−自然放出）×１００
として計算した。
【０３１５】
３つすべてのアロタイプの異なるドナーに由来する効果細胞を使用して、高レベルのＨＥＲ２を発現する標的細胞株ＳＫ−ＢＲ−３（細胞１個当たり約１×１０６個の結合部位）、および低ＨＥＲ２レベルを発現する標的細胞株ＭＣＦ−７（細胞１個当たり約３×１０４個の結合部位）に対して、両方の抗体を用いて実施したいくつかの実験の結果を分析した。
【０３１６】
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較してＦｕｃ−トラスツズマブのＡＤＣＣ増強の規模を近似するために、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の濃度曲線を、各ドナーについて同じプレートで並行して測定した。曲線フィッティングは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアバージョン５．０１によって計算した４パラメータ（４ＰＬ）ロジスティックプロットを使用して、両方の抗体について別個に実施した。得られた曲線から、トップおよびボトム溶解値、ならびにＥＣ５０値を計算した。さらに、ある特定の抗体濃度における比溶解値またはある特定の比溶解値に対応する抗体濃度を内挿した。最大比溶解は、トップおよびボトム曲線値の差異として計算した。
【０３１７】
ＳＫ−ＢＲ−３細胞に対するＡＤＣＣ活性の増強
１３人の異なるドナー（３人のＶ／Ｖドナー、５人のＦ／Ｖドナー、５人のＦ／Ｆドナー）を、Ｆｕｃ−トラスツズマブまたはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）によって媒介されるＳＫ−ＢＲ−３細胞に対するこれらのドナーのＡＤＣＣ活性について分析した。
【０３１８】
Ｆｕｃ−トラスツズマブは、ＨＥＲ２高レベル発現細胞株ＳＫ−ＢＲ−３に対して、すべてのドナーアロタイプについてＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較して強く増強されたＡＤＣＣ活性を媒介する。図７において、異なるアロタイプからのドナーで得られた濃度曲線の代表例を示す。
【０３１９】
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で実現された最大溶解は、すべてのドナーについて同等であり、曲線は、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）について同等の比溶解のトップ値およびボトム値を示した。したがって、Ｆｕｃ−トラスツズマブのＡＤＣＣ活性の増大の規模を、他のパラメータ：（ｉ）一定の抗体濃度での比溶解の増大、および（ｉｉ）両抗体の最大半量比溶解（ＥＣ５０値）に必要とされる有効抗体濃度における曲線の比較に基づいて、すべてのドナーについて推定した。
【０３２０】
０．５ｎｇ／ｍｌの一定の抗体濃度で、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、すべてのドナータイプについて比溶解の注目すべき増大を示す（図７を参照）。１３人すべてのドナーからの平均Ｆｕｃ−トラスツズマブ媒介比溶解は、１２％のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）媒介比溶解と比較して、３９％であった。抗体媒介比溶解の平均差異は、Ｖ／ＶまたはＦ／Ｖアロタイプ（それぞれ２８および２６％）のドナーと比較した場合の、Ｆ／Ｆアロタイプ（６０％）のドナーで最高であった。Ｆｕｃ−トラスツズマブについて、平均増大係数は６であり、殺傷される％腫瘍細胞のＡＤＣＣ活性の６倍の増大を示した。
【０３２１】
さらに、本発明者らは、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）について、最大半量（５０％）比溶解が実現される抗体濃度（ＥＣ５０値）を比較した。抗体のより高い効力は、より低いＥＣ５０値と相関する。ＥＣ５０値は、両抗体で著しく異なった（ｐ値  ０．０００９；両側の対応のあるスチューデントｔ−検定）。Ｆｕｃ−トラスツズマブは、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較して、９分の１低いＥＣ５０濃度値で最大半量比溶解に到達する。改善係数は、Ｆ／ＦおよびＦ／Ｖドナーでより高かった。
【０３２２】
要約すると、異なるアロタイプの１３人のヒトドナーを用いたＡＤＣＣアッセイにおいてＦｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）によって得られた濃度曲線を比較した。曲線は、両抗体によって同等の最大溶解が媒介されることを示したが、ＥＣ５０値の、および同じ比溶解に対する所要濃度の９分の１の低減によって示されるように、ＡＤＣＣ活性の約９倍の改善を示した（詳細については、表４を参照）。
【０３２３】
【表４】
2015528802.tif 000005
【０３２４】
ＭＣＦ−７細胞に対するＡＤＣＣ活性の増強
１２人の異なるドナー（３人のＶ／Ｖドナー、５人のＦ／Ｖドナー、４人のＦ／Ｆドナー）を、Ｆｕｃ−トラスツズマブまたはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）によって媒介されるＭＣＦ−７細胞に対するこれらのドナーのＡＤＣＣ活性について分析した。
【０３２５】
ＭＣＦ−７細胞に対して、Ｆｕｃ−トラスツズマブは、すべてのドナーアロタイプについてＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較して強く増強されたＡＤＣＣ活性を媒介する。図８では、異なるアロタイプからのドナーで得られた濃度曲線の代表例を示す。
【０３２６】
ＭＣＦ−７細胞は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞より約３０分の１少ないＨＥＲ２抗原を細胞表面で発現する。ＡＤＣＣ活性は、細胞表面の抗原密度と相関するので、ＳＫ−ＢＲ−３細胞と比較してより低い最大溶解がＭＣＦ−７細胞について予期される。実際に、Ｆｕｃ−トラスツズマブの平均最大比溶解は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞の７４％と比較してわずか４０％であった。これは、ＭＣＦ−７細胞と比較してＳＫ−ＢＲ−３細胞に対するＦｕｃ＋トラスツズマブのより高いＡＤＣＣ活性を示すＳｕｚｕｋｉおよび共同研究者ら（２００７年）による報告と一致する。驚くべきことに、Ｆｕｃ−トラスツズマブで得られたＭＣＦ−７細胞の最大溶解は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較して劇的に増強された（ｐ値＜０．０００１）。Ｆｕｃ−トラスツズマブによって媒介される最大溶解は、１７％から７２％の間であったが、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）媒介最大溶解は、６〜２９％の範囲ではるかにより低かった。Ｆｕｃ−トラスツズマブによって媒介される平均最大溶解は、３倍（２倍〜５倍）増大した。
【０３２７】
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブによって得られる最大比溶解の差異に起因して、抗体のＥＣ５０値の比較は有益ではなく、その理由は、ＥＣ５０値が、Ｆｕｃ−トラスツズマブのはるかにより高い比溶解にもかかわらず同じであり得るためである。したがって、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブの結合曲線の差異を、（ｉ）１０ｎｇ／ｍｌで実現される比溶解、および（ｉｉ）同じ比溶解に対して必要とされる濃度を比較することによって分析した。
【０３２８】
１０ｎｇ／ｍｌの抗体濃度でＦｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブによって媒介された比溶解は、両抗体間で有意な差異を示す（ｐ値＜０．０００１）。１８％という比溶解の平均増大が観察され、Ｆｕｃ＋トラスツズマブと比較して、１０ｎｇ／ｍｌの抗体濃度において３倍高い比溶解がＦｕｃ−トラスツズマブで得られることに対応した。
【０３２９】
最大比溶解の９５％に必要とされるＦｕｃ−トラスツズマブとＦｕｃ＋トラスツズマブの所要抗体濃度間に有意な差異があった（ｐ値  ０．０３）。この点で同じ比溶解を実現するための所要抗体濃度は、異なるドナーの中で係数５〜係数１３８（改善係数）によって低減された（図９を参照）。所要抗体濃度の低減は、ＦＦドナーで最高である（改善係数：ＦＦドナー  ５５、ＶＶドナー  ２８、ＦＶドナー  ４０）。
【０３３０】
ＨＥＲ２低レベル発現ＭＣＦ−７細胞で、濃度曲線の３つの異なる点におけるＦｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブのＡＤＣＣ活性を比較すると、フコース低減化トラスツズマブ抗体について、ＡＤＣＣ活性の劇的な増大が示された。最大で実現される比溶解（抗体が殺傷することができる標的細胞のパーセンテージに対応する）、および１０ｎｇ／ｍｌにおける比溶解は、最大５倍増大した。同じ比溶解に関しては、Ｆｕｃ−トラスツズマブの最大１３８分の１低い抗体濃度が、Ｆｕｃ＋トラスツズマブと比較して必要とされた（表５を参照）。
【０３３１】
【表５】
2015528802.tif 000006
【０３３２】
さらなる結果
自己のＨＥＲ２状態による細胞株の特徴付けを後続の表６に示す。
【０３３３】
【表６】
2015528802.tif 000007
【０３３４】
上述したものと同様の実験のさらなる結果も、図１０〜１２に示す。図１０は、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（低フコース、増加したビスＧｌｃＮＡｃ）を糖最適化（ｇｌｙｃｏｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）すると、すべての患者亜群、特に、より低いＨＥＲ２発現腫瘍を有するものを処置するためのＡＤＣＣ活性が高度に改善されることを示す。図１１に示した結果により、ＡＤＣＣ応答の増大がすべてのＰＢＭＣドナーで観察されることが確認される。１０〜１４０より低い抗体濃度が同じＡＤＣＣ応答に必要とされる。Ｆｕｃ−トラスツズマブは、高ＨＥＲ２細胞（ＳＫ−ＢＲ−３）および低ＨＥＲ２細胞（ＭＣＦ−７）においてＡＤＣＣ応答の増強を示した。図１２は、高ＨＥＲ２  ＳＫ−ＢＲ−３細胞を使用して、実施例１に記載のＦｕｃ−トラスツズマブ（ＴｒａｓＧＥＸ（商標）とも呼ばれる）について、異なるアロタイプの１４人のドナーでＡＤＣＣアッセイから得たＥＣ５０値を示す。図１２Ａは、１４人の個々のドナーのＥＣ５０値を示す。各記号は、個々のドナーを表す。中央値レベルは、線で示されている。図１２Ｂは、ドナーの改善係数（ＥＣ５０  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）／ＥＣ５０  Ｆｕｃ−トラスツズマブ）を示す。各記号は、個々のドナーを表す。平均値は、線で示されている。
【０３３５】
Ｆｕｃ＋トラスツズマブと比較したＦｕｃ−トラスツズマブのＡＤＣＣアッセイの分析の要約
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））のＡＤＣＣ活性を比較すると、高および低ＨＥＲ２レベルを発現する腫瘍細胞に対するフコース低減化トラスツズマブ抗体のＡＤＣＣ活性の劇的な増大が示される。Ｆｕｃ−トラスツズマブによって媒介されるＡＤＣＣ増大は、低ＨＥＲ２レベルを発現する腫瘍細胞で特に顕著である。
【０３３６】
結果によって実証されるように、低ＨＥＲ２発現腫瘍（ＭＣＦ−７）についての最大Ｆｕｃ−トラスツズマブ媒介ＡＤＣＣ増大は、最大約１４０倍であり、平均で４３倍であり、高ＨＥＲ２発現腫瘍（ＳＫ−ＢＲ−３）については、最大増大で最大約３０倍であり、平均で９倍である。Ｆｕｃ−トラスツズマブを使用するとき、最大％腫瘍細胞溶解でさえ、低ＨＥＲ２発現腫瘍について最大５倍（平均３倍）で強く増大される。低ＨＥＲ２発現腫瘍に対する高い有効性は、低度または中程度の量のＨＥＲ２過剰発現を示すにすぎないＨＥＲ２陽性がんの処置が可能となるので、フコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の重要な治療選択肢をもたらす。上述したように、治療効果は、ＩＨＣによって決定される場合に１＋（ＨＥＲ２  １＋）のＨＥＲ２過剰発現を示すにすぎない患者においてさえ見られた。
【０３３７】
したがって、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、腫瘍作用の重要なモードであるＡＤＣＣ活性の高い増大を示す。さらに、グリコシル化の最適化に起因して実現される効果により、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体からこれまで恩恵を受けていない患者まで、適当な患者スペクトルを広げることが可能になる。本明細書に示すように、治療効果は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）などの高フコース抗ＨＥＲ２抗体についての２０％未満の代わりに、すべてのＦｃγＲＩＩＩａアロタイプに対して見られる。さらに、より低いＨＥＲ２発現を有する患者も、記載した処置から恩恵を受けることができる。特に、転移、特に潰瘍性皮膚転移ならびに内臓転移、例えば、肺および肝転移などで見られる新規の治療効果を考慮すると、これは、重要な効果である。
【０３３８】
これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験によって実証されたＦｕｃ−トラスツズマブのＡＤＣＣ活性の増大は、特に、低フコース含量（１０％未満）に基づき、さらに、Ｆｃ断片のグリコシル化のバイセクティングＧｌｃＮＡｃ量の増強（１０％超）によって支持される。
【０３３９】
（実施例１６）
フコシル化が異なる抗体バリアントのｉｎ  ｖｉｖｏ薬理
Ｆｕｃ−トラスツズマブの薬理効果を調査するために、マウスおよびカニクイザルでいくつかのｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施し、これらのうちのいくつかは、Ｆｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と比較して実施した。
【０３４０】
Ｆｕｃ＋トラスツズマブを用いた組織交差反応性試験は、抗体は、ヒトおよびカニクイザル組織のみと反応するが、げっ歯類組織または任意の他の動物種の組織と反応しないことを示した。Ｆｕｃ−トラスツズマブは、Ｆｕｃ＋トラスツズマブと同じ抗原結合特異性、親和性、および作用機序を示すので、その組織反応性は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と同一であることが予期される。したがって、ヒト腫瘍細胞の異種移植片モデルを使用するげっ歯類試験は、重要な効力試験と考えられる。
【０３４１】
げっ歯類と異なり、カニクイザルは、Ｆｕｃ＋トラスツズマブの安全性および毒性試験にとって適切な種と考えられていたので、Ｆｕｃ−トラスツズマブの毒性試験にも妥当である。
【０３４２】
動物モデルにおける抗腫瘍活性
異なる腫瘍モデルにおけるＦｕｃ−トラスツズマブの効力を分析するヌードマウスでの薬力学的試験を実施し、Ｆｕｃ＋トラスツズマブとも比較した。ヒト細胞株ＢＴ４７４または患者由来癌腫に由来するＨＥＲ２陽性腫瘍細胞を異種移植された胸腺欠損ヌードマウスを使用した。
【０３４３】
試験では、１×１０７個の腫瘍細胞を、ヌードマウス（１群当たりＮ＝８）の皮下（ｓ．ｃ．）植え込み、腫瘍が触知可能サイズに到達するまで増殖させ、それは、植え込みをしておよそ７〜１３日後に到達した。標的腫瘍サイズは、約０．１ｃｍ３であった。この時点で、抗体処置を開始した。腫瘍サイズは、ノギス様計測器で週２回測定した。個々の腫瘍体積を計算し（Ｖ＝（長さ＋幅２）／２）、処置の初日の値と関連付けた（相対腫瘍体積）。治療効果は、原発性腫瘍増殖阻害の観点から判定した。
【０３４４】
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｎ＝８ｆ／群）を、３ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで４週間にわたって週２回静脈内に投与した。適用体積は、両抗体製剤について１０μｌ／体重１ｇであった。注射液中の濃度の調整は、ＰＢＳを用いた希釈によって行った。実験のセットに関しては、処置期間中の投与精度および比較可能性を増強するために、体重ベース投与を選択した（Ｆｉｃｈｔｎｅｒら、２００８年、Ｓｔｅｉｎｅｒら、２００７年）。マブセラ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ）は、無関係の抗体対照として機能を果たし、３０ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのみ投与した。異種移植されたマウスは、腫瘍が触知可能サイズに到達したとき、指定投与量レベルで処置した。各記号は、８匹の動物の群の平均値および標準誤差を表す。処置した動物の平均相対腫瘍体積を、図１３Ａに示す。
【０３４５】
両抗体、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブは、ＰＢＳ処置動物と比較してＢＴ４７４腫瘍増殖を強く阻害する（ｐ＜０．００１）。用量レベル間で有意な差異は、まったく観察されなかった。Ｆｕｃ−トラスツズマブは、８つの腫瘍のうち８つで腫瘍緩解を引き起こし、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）は、８つの腫瘍のうち７つで腫瘍緩解を引き起こした。Ｆｕｃ−トラスツズマブ処置群およびＦｕｃ＋トラスツズマブ処置群における相対腫瘍体積と腫瘍緩解の数との有意な差異は、用量群内でまったく見出されなかった。したがって、この実験は、Ｆｕｃ−トラスツズマブが強い用量依存性抗腫瘍活性を示すことを検証する。マウスは、実施した糖最適化（ｇｌｙｃｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）、すなわち、フコースの低減およびビスＧｌｃＮＡｃの増加に感受性でないので、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＦｕｃ＋トラスツズマブの同等の効力がこのモデルにおいて予期された。本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体の改善および新しい治療選択肢は特に、本明細書に示した臨床データによって実証される。動物の体重の有意な変化はまったく観察されず、毒性がまったく起こらなかったことを示した。
【０３４６】
Ｆｕｃ−トラスツズマブの抗腫瘍効果の用量依存性を調査するために、第２の試験を実施した。０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇのＦｕｃ−トラスツズマブの範囲の５つの異なる用量レベルを調査した。Ｆｕｃ−トラスツズマブ（Ｎ＝８）を、４週間にわたって週２回静脈内投与した。動物の平均相対腫瘍体積を、図１３Ｂに示す。Ｆｕｃ−トラスツズマブは、ビヒクル処置動物と比較して、強く、かつ用量依存的にＢＴ４７４腫瘍増殖を阻害した（ｐ＜０．００１）。
【０３４７】
動物の体重の有意な変化はまったく観察されず、毒性がまったく起こらなかったことを示した。
【０３４８】
（実施例１７）
患者由来腫瘍モデル
Ｆｕｃ−トラスツズマブの抗腫瘍活性を、胃起源のヒト患者癌腫異種移植片を保有する免疫欠損ヌードマウスで試験した。患者由来腫瘍細胞の異種移植片は、腫瘍細胞株より元の組織と同様であると想定され、したがって、より高い臨床的妥当性のものであると考えられる。腫瘍モデルは、免疫組織化学的に評価されたその陽性のＨＥＲ２発現状態に従って選択した。胃癌起源の腫瘍は、免疫組織化学検査によって中程度のレベルのＨＥＲ２を発現することが示された。
【０３４９】
胃のモデルでは、Ｆｕｃ−トラスツズマブ（Ｎ＝８ｍ／群）を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、４週間にわたって週２回ｉ．ｖ．投与した。注射液中の濃度の調整は、製剤緩衝液を用いた希釈によって行った。適用体積は、１０μｌ／体重１ｇで一定に保った。動物の平均相対腫瘍体積を、図１４に示す。
【０３５０】
Ｆｕｃ−トラスツズマブは、腫瘍増殖を著しく阻害し（ｐ＜０．００１）、それによって、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が、中程度のレベルのＨＥＲ２も発現するＨＥＲ２陽性腫瘍の処置に適していることが確認された。効力の主要な差異は、２つの試験した用量レベル間でまったく観察されず、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体が少投与量で既に高度に有効であることが確認された。どの動物も尚早に死亡しなかった。動物の体重の有意な変化はまったく観察されず、毒性がまったく起こらなかったことを示した。
【０３５１】
（実施例１８）
薬物動態
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較して、ヌードマウスにおけるＦｕｃ−トラスツズマブの血清半減期を評価するために、Ｆｕｃ−トラスツズマブのＰＫ／ＴＫプロファイルを、単一用量ＰＫ試験で調査した。
【０３５２】
さらに、Ｆｕｃ−トラスツズマブのＰＫ／ＴＫプロファイルを、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）のＰＫプロファイルを比較して、単一用量カニクイザル試験で特徴付けた。この試験で収集した血漿試料は、ＥＬＩＳＡ法によって分析した。
【０３５３】
ヌードマウスの血清半減期
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の薬物動態学的挙動を、１０ｍｌ／体重１ｋｇの適用体積で３０ｍｇ／体重１ｋｇの単回静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラス投与の後、ヌードマウスにおいて試験した（Ｎ＝３ｆ／群）。１ｍｇ／ｋｇ〜最大１００ｍｇ／ｋｇの用量レベルが効果的な範囲内であると考えられており（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ−Ｏｕｃｈｉら、２００７年；Ｂａｓｅｌｇａら、１９９８年；Ｐｉｅｔｒａｓら、１９９８年）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を用いた単一用量薬物動態学的試験（ＥＭＥＡ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）についてのＥＰＡＲ）でも使用した。血液試料を、投与前（−１日）、投与して５分、１、６、２４時間、および３、５、７、１０、１５、２１日後に採取した。抗体血清レベルは、市販の力価ＥＬＩＳＡアッセイによって決定した。アッセイの較正範囲は、血清１ｍｌ当たり１〜最大１０００ｎｇの抗体であった。結果を図１５Ａに示す。
【０３５４】
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の注射液の濃度は、ＰＢＳを用いた希釈によって調整した。
【０３５５】
Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）は、それぞれ３．５時間および３．０時間の初期半減期を伴う２相指数関数的減衰を呈した。Ｆｕｃ−トラスツズマブの終末相半減期は、５．４日（１３０時間に等しい）であり、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）については５．５日（１３２時間に等しい）である。最大血漿濃度は、Ｆｕｃ−トラスツズマブについて、８０１±１５１μｇ／ｍｌ、およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）について８６８±８４μｇ／ｍｌであった。血漿濃度および半減期のこれらの差異は、統計的に有意でなく、両抗体の薬物動態学的挙動は、同様であると考えられる。これらの結果は、公開されたデータ（Ｐａｌｍら、２００３年；ｔ１／２＝１１０時間）と良好に一致している。
【０３５６】
カニクイザルに単回静脈内１時間注入した後のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較したＦｕｃ−トラスツズマブの薬物動態学的試験
この試験の目的は、カニクイザルへの単回１時間ｉ．ｖ．注入、その後の２０日の観察期間後の、参照製品Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較したＦｕｃ−トラスツズマブの薬物動態を評価することであった。
【０３５７】
それぞれ３匹の雄カニクイザルを含む２つの群を、４０ｍｇ／体重（ｂｗ）１ｋｇの用量でＦｕｃ−トラスツズマブまたはＦｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を用いて単回１時間ｉ．ｖ．注入によって処置した。用量は、１〜４７ｍｇ／ｋｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の用量を使用したアカゲザルおよびカニクイザルにおける薬物動態学的試験および毒性試験（ＥＭＥＡ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）についてのＥＰＡＲ）を参照して選択した。
【０３５８】
行動変化の任意の徴候、処置に対する反応、または疾病に関して、投与の各回で、投与前後に個々に動物を観察した。ケージサイド観察は、皮膚／毛、眼、粘膜、呼吸器系および循環系、体性運動活動および挙動パターンを含んでいた。試験の局所的な寛容性または注入部位での参照項目に対して特別な注意を払った。各サルの体重は、投与前、試験開始時に、その後、毎週間隔で、常に週の同じ日に、その日の同じ時間に記録した。
【０３５９】
血液サンプリングは、注入の前、１時間注入が終わった直後（２分以内）、注入が終わって２、４、６、８、１２、および２４時間後に実施した。さらに、注入が終わった後の試験４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、および２０日目で、血液試料を収集した。標準的なトキシコキネティクスパラメータを評価した。
【０３６０】
動物のいずれも、試験の過程中に尚早に死亡せず、または全身毒性の臨床徴候を示さなかった。試験項目に関連した影響または局所的な不耐性は、まったく認めらなかった。Ｃｍａｘレベルは、Ｆｕｃ−トラスツズマブおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の両方について、１時間注入が終わった直後（２分以内）に観察し、同じ範囲内であることが判明した。それぞれ試験１日目で、Ｆｕｃ−トラスツズマブの平均終末相血清消失半減期は、１７０時間であった一方、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の平均終末相血清消失半減期は、１９５時間であった。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と比較したＦｕｃ−トラスツズマブのトキシコキネティクスパラメータ間で統計的に有意な差異はまったく無かった（ｐ≦０．０１）（図１５Ｂ）。したがって、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体は、対応する高フコース抗ＨＥＲ２抗体と同様の薬物動態学的挙動を示す。このことにより、本発明によるフコース低減化抗ＨＥＲ２抗体で見られる改善された、かつ新規の治療効果は、グリコシル化の変化に起因して変更される腫瘍活性に実際に起因し、薬物動態学的挙動の変化に起因しないことが確認される。
【０３６１】
サル血清中の平均トキシコキネティクスパラメータを表７に示す。
【０３６２】
【表７】
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【０３６３】
反復投与毒性試験をカニクイザルで実施した。用量範囲発見試験では、以下の用量レベルを試験した：５、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ／日のＦｕｃ−トラスツズマブ。投与スケジュールは、２週間にわたって週２回、および合計で５回の投与であった。投与道程は、１時間−ｉｖ注入であった。標準的な毒物学的パラメータを試験し、処置関連効果は、まったく観察されなかった。
【０３６４】
中心的な４週間反復投与試験では、以下の用量レベルを試験した：４０、２０、および５ｍｇ／ｋｇのＦｕｃ−トラスツズマブ。投与スケジュールは、４週間にわたって毎週、および合計で５回の投与であった。投与道程は、１時間−ｉｖ注入であった。免疫原性および安全性薬理学的パラメータを含めた標準的な毒物学的パラメータを試験した。有害作用、および４０ｍｇ超／ｋｇ  ｂ．ｗ．／用量のレベルで観察される有害作用は、まったく見出されなかった。さらに、ヒトおよびカニクイザル組織における組織交差反応性を実施し、組織交差反応性は、Ｆｕｃ＋トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と同等であることが判明した。
【図２Ａ】
2015528802.tif 000009
【図２Ｂ】
2015528802.tif 000010
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2015528802.tif 000021
【図１０】
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【図１１】
2015528802.tif 000023
【図１２】
2015528802.tif 000024
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2015528802.tif 000027
【配列表】
2015528802000001.app
【国際調査報告】
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2015528802.tif 000029
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