(57)【要約】  本発明は、式Ｉ−１１の化合物を複数工程反応により調製するプロセスに関するものである。【化１】2015501319.tif 000082
2015501319.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物Ｉ−１１を製造するプロセスであって：
【化１】
2015501319.tif 000058
（ａ）化合物Ｉ−４を：
【化２】
2015501319.tif 000059
２，２−ジメトキシプロパン、２，２−ジエトキシルプロパン、２−メトキシプロペンおよびアセトンからなる群から選択されるアセトニド保護試薬と反応させて、化合物Ｉ−５を産生する工程と：
【化３】
2015501319.tif 000060
（ｂ）化合物Ｉ−５を０℃から４０℃の温度にて還元剤により還元して、化合物Ｉ−６を産生する工程と：
【化４】
2015501319.tif 000061
（ｃ）化合物Ｉ−６を溶媒および触媒の存在下で酸化剤により酸化して、化合物Ｉ−７を産生する工程と：
【化５】
2015501319.tif 000062
（ｄ）化合物Ｉ−７をリン酸化合物Ａ−４と反応させて：
【化６】
2015501319.tif 000063
化合物Ｉ−８を産生する工程と：
【化７】
2015501319.tif 000064
（ｅ）化合物Ｉ−８を触媒の存在下で還元して、化合物Ｉ−９を産生する工程と：
【化８】
2015501319.tif 000065
（ｆ）化合物Ｉ−９を酸と反応させて、化合物Ｉ−１０を産生する工程と：
【化９】
2015501319.tif 000066
および
（ｇ）化合物Ｉ−１０を触媒の存在下で還元して、化合物Ｉ−１１を産生する工程と；
を含み、
式中、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ独立して、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択され；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選択される、プロセス。
【請求項２】
工程（ｃ）において：
溶媒は、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエン、およびこれらを２つ含む混合溶媒からなる群から選択され；
酸化剤は、ＮａＯＣｌ、ＮａＣｌＯ２、過酸化水素、ピリジン三酸化硫黄、ＰＣＣおよびＤＣＣからなる群から選択され；
触媒はＴＥＭＰＯまたはＴＥＭＰＯ類似体である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
工程（ｄ）におけるＩ−７とＡ−４との反応は、約２０から４０℃の温度で、かつＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエン、およびこれらを２つ含む混合溶媒からなる群から選択される溶媒の存在下で実行される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項４】
還元工程（ｅ）において使用される触媒は、Ｐｄ、ラネーＮｉ、Ｐｔ、ＰｄＣｌ２およびＰｄ（ＯＨ）２からなる群から選択され；還元は、水素ガスの存在下で実行される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項５】
工程（ｆ）における酸は、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＴＦＡ、ＭｅＳＯ３Ｈ、ＴｆＯＨ、Ｈ２ＳＯ４、パラトルエンスルホン酸、およびＲがアルキル、アリールまたは置換アリールであるＲＳＯ３Ｈからなる群から選択される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項６】
工程（ｇ）の還元は、ＨＭＤＳの存在下で実行され、用いられる触媒は、アルミナ上Ｐｔ、アルミナ上Ｐｄ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＨ）２−Ｃ、ラネーＮｉ、Ｒｈ／Ｃ、Ｒｈ／Ａｌ、Ｐｔ／Ｃ、Ｒｕ／ＣおよびＰｔＯ２からなる群から選択される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項７】
化合物Ｉ−３を：
【化１０】
2015501319.tif 000067
ＫＲＥＤ酵素の存在下で還元して、化合物Ｉ−４を産生する工程をさらに含む、
【化１１】
2015501319.tif 000068
請求項１に記載のプロセス。
【請求項８】
ＫＲＥＤ酵素は、配列番号１のポリペプチドおよび配列番号２のポリペプチドからなる群から選択される、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
配列番号３のポリペプチドおよび配列番号４のポリペプチドからなる群から選択される補因子リサイクル系をさらに含む、請求項８に記載のプロセス。
【請求項１０】
ＮＡＤＨおよびＮＡＤＰＨからなる群から選択される補因子をさらに含む、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
化合物Ｉ−１を：
【化１２】
2015501319.tif 000069
塩化ベンゾイルおよび保護試薬と反応させて、化合物Ｉ−３を産生する工程をさらに含む、
【化１３】
2015501319.tif 000070
請求項７に記載のプロセス。
【請求項１２】
化合物Ｉ−１１を産生するプロセスであって：
【化１４】
2015501319.tif 000071
（ａ）化合物Ｉ−１を：
【化１５】
2015501319.tif 000072
塩化ベンゾイルおよび保護試薬と反応させて、化合物Ｉ−３を産生する工程と：
【化１６】
2015501319.tif 000073
（ｂ）化合物Ｉ−３をＫＲＥＤ酵素の存在下で還元して、化合物Ｉ−４を産生する工程と：
【化１７】
2015501319.tif 000074
（ｃ）化合物Ｉ−４を、２，２−ジメトキシプロパン、２，２−ジエトキシルプロパン、２−メトキシプロペンおよびアセトンからなる群から選択されるアセトニド保護試薬と反応させて、化合物Ｉ−５を産生する工程と：
【化１８】
2015501319.tif 000075
（ｄ）化合物Ｉ−５を０℃から４０℃の温度にて還元剤により還元して、化合物Ｉ−６を産生する工程と：
【化１９】
2015501319.tif 000076
（ｅ）化合物Ｉ−６を溶媒および触媒の存在下で酸化剤により酸化して、化合物Ｉ−７を産生する工程と：
【化２０】
2015501319.tif 000077
（ｆ）化合物Ｉ−７をリン酸化合物Ａ−４と反応させて：
【化２１】
2015501319.tif 000078
化合物Ｉ−８を産生する工程と：
【化２２】
2015501319.tif 000079
（ｇ）化合物Ｉ−８を触媒の存在下で還元して、化合物Ｉ−９を産生する工程と：
【化２３】
2015501319.tif 000080
（ｈ）化合物Ｉ−９を酸と反応させて、化合物Ｉ−１０を産生する工程と：
【化２４】
2015501319.tif 000081
（ｉ）化合物Ｉ−１０を触媒の存在下で還元して、化合物Ｉ−１１を産生する工程と；
を含み、
式中、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ独立して、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択され；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選択される、プロセス。
【請求項１３】
工程（ｂ）におけるＫＲＥＤ酵素は、配列番号１のポリペプチドおよび配列番号２のポリペプチドからなる群から選択される、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
工程（ｂ）はさらに、配列番号３のポリペプチドおよび配列番号４のポリペプチドからなる群から選択される補因子リサイクル系を含む、請求項１３に記載のプロセス。
【請求項１５】
ＮＡＤＨおよびＮＡＤＰＨからなる群から選択される補因子をさらに含む、請求項１４に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ベータ３アゴニストおよび中間体を製造するプロセス、ケトレダクターゼ（ＫＲＥＤ）生体触媒、ならびに生体触媒を使用する方法に関するものである。
【０００２】
［シーケンスリスト、表またはコンピュータプログラムへの参照］
シーケンスリストの公式コピーを、ＡＳＣＩＩフォーマットのテキストファイルとしてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して明細書と同時に提出し、ファイル名がＭＲＬ−ＢＲＥ−０００２６−ＫＲＥＤ．ｔｘｔ、作成日が２０１１年１０月２４日、サイズが９，６１７バイトである。ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出したこのシーケンスリストは、本明細書の一部であり、その全体が参照によって本明細書中に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
本出願は、ベータ３アゴニストを製造する中間体化合物として用いられ得る式Ｉ−１１の化合物を製造するための効率的かつ経済的な合成プロセスに関するものである。
【発明の概要】
【０００４】
本出願は、式Ｉ−１１の化合物を製造する複数工程合成プロセスに関するものである。一実施形態において、ＫＲＥＤ酵素が複数工程プロセスにおいて用いられる。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本明細書中で記載されるのは、化合物Ｉ−１から複数工程反応を通して化合物Ｉ−１１を製造するプロセスであり：
【化１】
2015501319.tif 000003
【０００６】
式中、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選択される。
【０００７】
一実施形態において、化合物Ｉ−１から化合物Ｉ−１１までの複数工程反応は、以下の工程：
（ａ）化合物Ｉ−４を：
【化２】
2015501319.tif 000004
【０００８】
２，２−ジメトキシプロパン、２，２−ジエトキシルプロパン（２，２−ｄｉｅｔｈｏｘｙｌｐｒｏｐａｎｅ）、２−メトキシプロペンおよびアセトンからなる群から選択されるアセトニド保護試薬と反応させて、化合物Ｉ−５を産生する工程と：
【化３】
2015501319.tif 000005
【０００９】
（ｂ）化合物Ｉ−５を０℃から４０℃の温度にて還元剤により還元して、化合物Ｉ−６を産生する工程と：
【化４】
2015501319.tif 000006
【００１０】
（ｃ）化合物Ｉ−６を溶媒および触媒の存在下で酸化剤により酸化して、化合物Ｉ−７を産生する工程と：
【化５】
2015501319.tif 000007
【００１１】
（ｄ）化合物Ｉ−７をリン酸化合物Ａ−４と反応させて：
【化６】
2015501319.tif 000008
【００１２】
化合物Ｉ−８を産生する工程と：
【化７】
2015501319.tif 000009
【００１３】
（ｅ）化合物Ｉ−８を触媒の存在下で還元して、化合物Ｉ−９を産生する工程と：
【化８】
2015501319.tif 000010
【００１４】
（ｆ）化合物Ｉ−９を酸と反応させて、化合物Ｉ−１０を産生する工程と：
【化９】
2015501319.tif 000011
【００１５】
（ｇ）化合物Ｉ−１０を触媒の存在下で還元して、化合物Ｉ−１１を産生する工程と；
を含み、
式中、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ独立して、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択され；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選択される。
【００１６】
一実施形態において、前述の工程（ｃ）における溶媒は、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエン、およびこれらを２つ含む混合溶媒からなる群から選択される。別の実施形態において、酸化剤は、ＮａＯＣｌ、ＮａＣｌＯ２、過酸化水素、ピリジン三酸化硫黄、ＰＣＣおよびＤＣＣからなる群から選択される。別の実施形態において、触媒はＴＥＭＰＯまたはＴＥＭＰＯ類似体である。
【００１７】
一実施形態において、工程（ｄ）におけるＩ−７とＡ−４との反応は、約２０から４０℃の温度で実行される。別の実施形態において、反応は、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエン、およびこれらを２つ含む混合溶媒からなる群から選択される溶媒の存在下で実行される。
【００１８】
一実施形態において、還元工程（ｅ）において使用される触媒は、Ｐｄ、ラネーＮｉ、Ｐｔ、ＰｄＣｌ２およびＰｄ（ＯＨ）２からなる群から選択される。別の実施形態において、還元は、水素ガスの存在下で実行される。
【００１９】
一実施形態において、工程（ｆ）における酸は、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＴＦＡ、ＭｅＳＯ３Ｈ、ＴｆＯＨ、Ｈ２ＳＯ４、パラトルエンスルホン酸、およびＲがアルキル、アリールまたは置換アリールであるＲＳＯ３Ｈからなる群から選択される。
【００２０】
一実施形態において、工程（ｇ）の還元は、ＨＭＤＳの存在下で実行される。別の実施形態において、用いられる触媒は、アルミナ上Ｐｔ、アルミナ上Ｐｄ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＨ）２−Ｃ、ラネーＮｉ、Ｒｈ／Ｃ、Ｒｈ／Ａｌ、Ｐｔ／Ｃ、Ｒｕ／ＣおよびＰｔＯ２からなる群から選択される。
【００２１】
一実施形態において、化合物Ｉ−１から化合物Ｉ−１１への複数工程反応はさらに、化合物Ｉ−３を：
【化１０】
2015501319.tif 000012
【００２２】
ＫＲＥＤ酵素の存在下で還元して、化合物Ｉ−４を産生する工程を含む。
【化１１】
2015501319.tif 000013
【００２３】
一実施形態において、ＫＲＥＤ酵素は、配列番号１のポリペプチドおよび配列番号２のポリペプチドからなる群から選択される。
【００２４】
別の実施形態において、補因子リサイクル系が、ＫＲＥＤ酵素の他にも存在する。適切な補因子リサイクル系として、配列番号３のポリペプチドおよび配列番号４のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
一実施形態において、配列番号１のＫＲＥＤ酵素および配列番号３の補因子リサイクル系が、Ｉ−３からＩ−４への還元において存在する。
【００２６】
別の実施形態において、配列番号２のＫＲＥＤ酵素および配列番号４の補因子リサイクル系が、Ｉ−３からＩ−４への還元において存在する。
【００２７】
一実施形態において、電子を供与することができる補因子分子が、ＫＲＥＤ酵素の他にも存在する。一実施形態において、補因子はＮＡＤＨおよびＮＡＤＰＨからなる群から選択される。
【００２８】
一実施形態において、化合物Ｉ−１から化合物Ｉ−１１への複数工程反応はさらに、化合物Ｉ−１を：
【化１２】
2015501319.tif 000014
【００２９】
塩化ベンゾイルおよび保護試薬と反応させて、化合物Ｉ−３を産生する工程を含み：
【化１３】
2015501319.tif 000015
【００３０】
式中、Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される保護基であり；Ｒ１は、Ｃ１−６アルキルまたはアリールである。
【００３１】
一実施形態において、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピルまたはブチルである。別の実施形態において、Ｒ１は、メチル、エチルまたはフェニルである。一実施形態において、Ｐ１はＢｏｃである。
【００３２】
一実施形態において、化合物Ｉ−１から化合物Ｉ−３への変換は、化合物Ｉ−２を介して実行され：
【化１４】
2015501319.tif 000016
【００３３】
式中、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキルまたはアリールであり；Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。
【００３４】
一実施形態において、Ｉ−１からＩ−３への変換は：
【化１５】
2015501319.tif 000017
【００３５】
を含み、
式中、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキルまたはアリールであり；Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。一実施形態において、Ｒ１はメチルまたはエチルであり、Ｐ１はＢｏｃである。
【００３６】
一実施形態において、前述の工程（ａ）または（ｂ）は、塩基の存在下で実行される。適切な塩基として、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｋ３ＰＯ４、Ｅｔ３Ｎ、ｉ−Ｐｒ２Ｎｅｔおよびピリジンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、塩基はＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３またはＥｔ３Ｎである。
【００３７】
一実施形態において、工程（ｂ）における保護試薬は、Ｂｏｃ２Ｏである。
【００３８】
一実施形態において、Ｉ−１からＩ−３への変換は、適切な触媒の存在下で実行される。一実施形態において、触媒はＤＭＡＰである。
【００３９】
一実施形態において、Ｉ−１からＩ−３への変換は、０℃から６０℃、またはより具体的には０℃から４０℃、またはさらにより具体的には２０℃から３０℃の温度で実行されてよい。一実施形態において、温度は２０℃から３０℃である。
【００４０】
一実施形態において、前述のＩ−１からＩ−３への変換は、Ｎｏｖｅｌ  Ｎ→Ｃ  Ａｃｙｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｃｙｃｌｉｃ  Ｉｍｉｄｅｓ：Ａ  Ｆａｃｉｌｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  α−Ａｍｉｎｏｋｅｔｏｎｅｓ  ａｎｄ  β−Ａｍｉｎｏａｌｃｏｈｏｌｓ，Ｈａｒａ，ｅｔ．ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒ，Ｖｏｌ．３９，ｐａｇｅ  ５５３７（１９９８）に記載されるのと類似した合成プロセスを用いて実行されてよい。
【００４１】
一実施形態において、化合物Ｉ−３の化合物Ｉ−４への変換は、ＫＲＥＤ酵素の存在下での動的速度論的分割（ＤＫＲ）還元を介しており：
【化１６】
2015501319.tif 000018
【００４２】
式中、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキルまたはアリールであり；Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される保護基である。一実施形態において、Ｒ１はメチルまたはエチルである。一実施形態において、Ｐ１はＢｏｃである。
【００４３】
一実施形態において、Ｉ−３のＩ−４への酵素学的還元は、溶媒中で実行される。適切な溶媒として、ＩＰＡ、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡｃおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、溶媒はＤＭＳＯである。
【００４４】
一実施形態において、Ｉ−３からＩ−４へのＤＫＲ還元に適した温度は、０℃から６０℃、またはより具体的には１０℃から４０℃、またはさらにより具体的には２０℃から３５℃である。一実施形態において、温度は約３０℃である。
【００４５】
一実施形態において、補因子リサイクル系およびＮＡＤＰＨ補因子とカップリングするＫＲＥＤ酵素が用いられて、化合物Ｉ−３を還元し、化合物Ｉ−４を得る。Ｉ−３のＩ−４へのＫＲＥＤ触媒還元に適した反応条件が、以下、実施例において示される。
【００４６】
クラスＥＣ１．１．１．１８４に属するＫＲＥＤ酵素は、対応するプロ立体異性ケトン基質からの、対応するラセミアルデヒドおよびケトン基質の立体特異的還元による、光学活性アルコールの合成に有用である。
【００４７】
ＫＲＥＤ酵素は、一般的に、ケトンまたはアルデヒド基質を、対応するアルコール産物に変換するが、逆反応（アルコール基質の、対応するケトン／アルデヒド産物への酸化）を触媒することもできる。ＫＲＥＤ等の酵素による、ケトンおよびアルデヒドの還元、ならびにアルコールの酸化は、一般的に、補因子を必要とし、最も一般的なのは、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）または還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）であり、そして酸化反応については、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）またはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ＋）である。ＮＡＤＨおよびＮＡＤＰＨは電子供与体として機能するが、ＮＡＤおよびＮＡＤＰは電子受容体として機能する。ＫＲＥＤ酵素は、リン酸化補因子または非リン酸化補因子の何れかを用いていることが多い。
【００４８】
ＫＲＥＤ酵素は、様々なケトおよびアルデヒド化合物のキラルアルコール産物への変換のための化学手順に代えて、用いられてよい。これらの生体触媒変換は、生体触媒ケトン還元に関わるケトレダクターゼを発現する細胞全体、または精製酵素（特に細胞全体における複数のケトレダクターゼの存在が、所望される産物のエナンチオマー純度および収率に悪影響を及ぼす場合）に従事してよい。インビトロ用途のために、補因子（ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ）再生酵素（グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）およびホルメートデヒドロゲナーゼ等）が一般的に、ケトレダクターゼと共に用いられる。
【００４９】
有用な化学化合物を生じさせるための生体触媒プロセスにおける、天然に存在する、または設計されたＫＲＥＤ酵素の使用を説明する例として、４−クロロアセト酢酸エステルの不斉還元（Ｚｈｏｕ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９８３  １０５：５９２５−５９２６；Ｓａｎｔａｎｉｅｌｌｏ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（Ｓ）１９８４：１３２−１３３；米国特許第５，５５９，０３０号明細書；米国特許第５，７００，６７０号明細書および米国特許第５，８９１，６８５号明細書）、ジオキソカルボン酸の還元（例えば、米国特許第６，３９９，３３９号明細書）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−クロロ−５−ヒドロキシ−３−オキソヘキサノエートの還元（例えば、米国特許第６，６４５，７４６号明細書および国際公開第０１／４０４５０号パンフレット）、ピロロトリアジンベースの化合物の還元（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２８６６４６号明細書）、置換アセトフェノンの還元（例えば、米国特許第６，８００，４７７号明細書）、およびケトチオランの還元（国際公開第２００５／０５４４９１号パンフレット）が挙げられる。
【００５０】
天然に存在するＫＲＥＤ酵素は、広範な細菌および酵母において見つけることができる（総説：Ｋｒａｕｓ  ａｎｄ  Ｗａｌｄｍａｎ，Ｅｎｚｙｍｅ  ｃａｔａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｖｏｌｓ．１＆２．ＶＣＨ  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ  １９９５；Ｆａｂｅｒ，Ｋ．，Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．２０００；Ｈｕｍｍｅｌ  ａｎｄ  Ｋｕｌａ  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９  １８４：１−１３）。いくつかのＫＲＥＤ遺伝子および酵素配列が報告されており：Ｃａｎｄｉｄａ  ｍａｇｎｏｌｉａｅ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＪＣ７３３８；ＧＩ：１１３６０５３８）、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＢＡＡ２４５２８．１；ＧＩ：２８１５４０９）、Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ  ｓａｌｍｏｎｉｃｏｌｏｒ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＡＦ１６０７９９；ＧＩ：６５３９７３４）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＡＡＰ９４０２９．１；ＧＩ：３３１１２０５６）、ラクトバチルス・ブレビス菌（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．１ＮＸＱ＿Ａ；ＧＩ：３０７４９７８２）、Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｅｔｙｌｉｃｕｍ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＢＡＤ３２７０３．１）およびＴｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ  ｂｒｏｃｋｉｉ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ１４９４１；ＧＩ：１７７１７９０）が挙げられる。
【００５１】
Ｉ−３のＩ−４へのＫＲＥＤ触媒還元は、電子供与体が溶液中に存在することを必要とする。通常、補因子が、ＫＲＥＤ還元反応における電子供与体として用いられる。補因子は、プロセスにおいて、ＫＲＥＤおよび／またはＧＤＨと共同して機能する。適切な補因子として、ＮＡＤＰ＋（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）、ＮＡＤＰＨ（ＮＡＤＰ＋の還元型）、ＮＡＤ＋（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）、およびＮＡＤＨ（ＮＡＤ＋の還元型）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。通常、補因子の還元型が反応混合物に加えられる。従って、本開示の方法は、ＮＡＤＰＨ補因子またはＮＡＤＨ補因子から選択される電子供与体が存在する中で、実行される。ある実施形態において、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨ補因子濃度が、約０．０３から０．５ｇ／Ｌ、約０．０５から０．３ｇ／Ｌ、約０．１から０．２ｇ／Ｌ、約０．５ｇ／Ｌ、約０．１ｇ／Ｌ、または約０．２ｇ／Ｌである反応条件の方法が、実行されてよい。
【００５２】
プロセスの一部の実施形態において、補因子リサイクル系が、反応において産生される補因子ＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＨ型ＮＡＤＰ＋／ＮＡＤ＋を再生するために用いられる。補因子リサイクル系は、補因子の酸化型を還元する（例えば、ＮＡＤＰ＋からＮＡＤＰＨへ）ことによって、ＫＲＥＤ触媒作用を続けさせる一連の反応物を指す。補因子リサイクル系はさらに、二次基質、ならびに、還元剤によって補因子の酸化型の還元を触媒する触媒、例えば、基質グルコースおよび酵素ＧＤＨ、を含んでよい。ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋からＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨをそれぞれ再生する補因子リサイクル系が、当該技術において知られており、本明細書中で記載される方法において用いられてよい。用いられてよい適切な補因子リサイクル系の例として、グルコースおよびグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）、ホルメートおよびホルメートデヒドロゲナーゼ（ＦＤＨ）、グルコース−６−リン酸およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、第二級（例えば、イソプロパノール）アルコールおよび第二級アルコールデヒドロゲナーゼ、ホスファイトおよびホスファイトデヒドロゲナーゼ、分子水素およびヒドロゲナーゼ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらの系は、補因子としてＮＡＤＰ＋／ＮＡＤＰＨまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨの何れと共同して用いられてもよい。ヒドロゲナーゼを用いる電気化学的再生が、補因子再生系として用いられてもよい。例えば、米国特許第５，５３８，８６７号明細書および米国特許第６，４９５，０２３号明細書を参照（これらは双方とも、参照によって本明細書中に組み込まれる）。金属触媒および還元剤（例えば、分子水素またはホルメート）を含む化学補因子再生系もまた適している。例えば、ＰＣＴ公報である国際公開第２０００／０５３７３１号パンフレットを参照（これは、参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【００５３】
本開示の一部の実施形態において、補因子リサイクル系はグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）を含んでよく、これは、Ｄ−グルコース（デキストロース）およびＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の、それぞれグルコン酸およびＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨへの変換を触媒するＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋依存性酵素である。本明細書中で記載されるプロセスの実施における使用に適したＧＤＨ酵素として、天然に存在するＧＤＨだけでなく天然に存在しないＧＤＨの双方が挙げられる。天然に存在するグルコースデヒドロゲナーゼコード遺伝子が、文献において報告されている（例えば、枯草菌６１２９７  ＧＤＨ遺伝子、セレウス菌ＡＴＣＣ  １４５７９、および巨大菌）。天然に存在しないＧＤＨが、例えば、突然変異生成、指向性進化等を用いて生成されており、ＰＣＴ公報である国際公開第２００５／０１８５７９号パンフレット、ならびに米国特許出願公開第２００５／００９５６１９号明細書および米国特許出願公開第２００５／０１５３４１７号明細書において示されている。
【００５４】
一部の実施形態において、補因子リサイクル系はホルメートデヒドロゲナーゼ（ＦＤＨ）を含んでよく、これは、ホルメートおよびＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の、それぞれ二酸化炭素およびＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨへの変換を触媒するＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋依存性酵素である。本明細書中で記載されるＫＲＥＤ触媒反応における補因子再生系としての使用に適したＦＤＨとして、天然に存在するホルメートデヒドロゲナーゼおよび天然に存在しないホルメートデヒドロゲナーゼが挙げられる。適切なホルメートデヒドロゲナーゼが、ＰＣＴ公報である国際公開第２００５／０１８５７９号パンフレットに記載されている。ホルメートは、塩（一般的にアルカリまたはアンモニウム塩）（例えば、ＨＣＯ２Ｎａ、ＫＨＣＯ２ＮＨ４等）の形態で、ギ酸（一般的に水性ギ酸）の形態で、またはこれらの混合物の形態で与えられてよい。塩基またはバッファが、所望のｐＨを与えるために用いられてよい。
【００５５】
一部の実施形態において、補因子再生系は、Ｉ−３のＩ−４への還元を触媒する同ＫＲＥＤ酵素を含んでよい。このような実施形態において、Ｉ−３のＩ−４への還元を触媒する同ＫＲＥＤはまた、第二級アルコールの酸化（例えば、イソプロパノールからアセトンへの酸化）を触媒し、これによって同時にＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋をＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨに還元する。従って、一部の実施形態において、Ｉ−３のＩ−４へのＫＲＥＤ触媒変換は、第二級アルコール（例えば、ＩＰＡ）の存在下で実行されてよく、ＮＡＤＰＨまたはＮＡＤＨ補因子をリサイクルするために補酵素（例えば、ＧＤＨ）が溶液中に存在せずともよい。このような実施形態において、適切な反応条件は、ＩＰＡ濃度が約５５から７５％（ｖ／ｖ）、ＮＡＤＰＨまたはＮＡＤＨ補因子ローディングが約０．０３から０．５ｇ／Ｌであってよく、補因子リサイクル酵素はＫＲＥＤそれ自体以外に存在しない。
【００５６】
化合物Ｉ−３のＩ−４へのＫＲＥＤ触媒変換における使用に適した補因子リサイクル系として、基質グルコース（Ｌ−またはＤ−グルコース）とカップリングする補酵素グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）が挙げられる。適切なＧＤＨ補因子として、配列番号３のポリペプチドのＧＤＨおよび配列番号４のポリペプチドのＧＤＨ（双方ともＣｏｄｅｘｉｓ  Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｗｏｏｄ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから市販されている）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００５７】
一実施形態において、化合物Ｉ−５は、化合物Ｉ−４をアセトニド保護剤と反応させることによって調製され：
【化１７】
2015501319.tif 000019
【００５８】
式中、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選択され；Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。一実施形態において、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ブチルおよびベンジルからなる群から選択される。別の実施形態において、Ｐ１はＢｏｃである。
【００５９】
適切なアセトニド保護試薬として、２，２−ジメトキシプロパン、２，２−ジエトキシルプロパン、２−メトキシプロペンおよびアセトンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、アセトニド保護試薬は、２，２−ジメトキシプロパンである。
【００６０】
Ｉ−４からＩ−５への反応は、溶媒の存在下で実行されてよい。適切な溶媒として、トルエン、アセトン、ＴＨＦ、ＩＰＡｃ、ジクロロメタン、ＥｔＯＡｃ、ＭｅＣＮおよびこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、溶媒は、トルエンおよびアセトンの混合物である。
【００６１】
Ｉ−４からＩ−５への反応は、酸の存在下で実行されてよい。適切な酸として、三ハロゲン化ホウ素、有機ボラン、ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４、ＴＦＡ、Ｈ３ＰＯ４およびＴｉＣｌ４が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、酸はＢＦ３である。別の実施形態において、ＢＦ３は三フッ化ホウ素エーテレート（ＢＦ３・Ｏ（Ｅｔ）２）の形態である。
【００６２】
Ｉ−４からＩ−５への反応は、１０℃から５０℃、またはより具体的には２０℃から４０℃の温度で実行されてよい。２０℃から４０℃へ反応温度を上げることで、産物プロフィールに影響を及ぼすことなく、反応速度を２から３倍上げることができることがわかった。
【００６３】
一実施形態において、化合物Ｉ−６は、化合物Ｉ−５から還元剤により調製され：
【化１８】
2015501319.tif 000020
【００６４】
式中、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選択され；Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。一実施形態において、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ブチルおよびベンジルからなる群から選択される。別の実施形態において、Ｐ１はＢｏｃである。
【００６５】
適切な還元剤として、ＬｉＡｌＨ４、ＬｉＢＨ４、ＮａＢＨ４−ＬｉＢｒ、およびＤＩＢＡＬが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、還元剤はＬｉＡｌＨ４である。別の実施形態において、還元剤はＬｉＢＨ４である。さらに別の実施形態において、還元剤ＬｉＢＨ４は、例えばＮａＢＨ４およびＬｉＢｒの共同使用によって、インサイチュで生じてよい。
【００６６】
還元剤の量は概して、０．８から１．６等量、またはより具体的には１．０から１．４等量である。
【００６７】
一実施形態において、Ｉ−５からＩ−６への還元は、０℃から６０℃、またはより具体的には０℃から３５℃、またはさらにより具体的には２０℃から３０℃の温度で実行される。一実施形態において、温度は２０℃から３０℃である。
【００６８】
一実施形態において、化合物Ｉ−６の化合物Ｉ−７への酸化は、触媒の存在下で、酸化剤により実行され：
【化１９】
2015501319.tif 000021
【００６９】
式中、Ｐ１は、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。一実施形態において、Ｐ１はＢｏｃである。
【００７０】
適切な酸化剤として、ＮａＯＣｌ、ＮａＣｌＯ２、過酸化水素、Ｓｗｅｒｎ酸化および変異形（ピリジン三酸化硫黄、ＰＣＣおよびＤＣＣ等）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、酸化剤はＮａＯＣｌである。
【００７１】
酸化剤の量は、通常は１．１等量から１．３等量、またはより具体的には１．２等量から１．２５等量である。一実施形態において、酸化剤の量は１．２５等量である。
【００７２】
前述の酸化反応に適した触媒として、ＴＥＭＰＯおよびＴＥＭＰＯ類似体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、触媒はＴＥＭＰＯである。
【００７３】
本明細書中で記載されるプロセスの１つの利点は、酸化工程由来の化合物Ｉ−７を、次のホーナー・ワズワース・エモンズ（以下、「ＨＷＥ」）工程において直接用いて、化合物Ｉ−８を製造することができることである。このワンポットプロセスにより、溶媒を切り換える必要が除外されて、収率を上げることができ、かつコストを引き下げることができる。
【００７４】
一実施形態において、Ｉ−６からＩ−７への酸化工程は、溶媒の存在下で実行されてよい。適切な溶媒として、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエンおよびこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、溶媒はトルエンおよびＭｅＣＮの混合物である。別の実施形態において、溶媒はＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＣＮの混合物である。
【００７５】
一実施形態において、Ｉ−７とＡ−４とのＨＷＥ反応は、溶媒の存在下で実行され：
【化２０】
2015501319.tif 000022
【００７６】
式中、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ独立して、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。一実施形態において、Ｐ１およびＰ２は双方ともＢｏｃである。
【００７７】
適切な溶媒として、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエン、およびこれらを２つ含む混合溶媒が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、溶媒はトルエンおよびＭｅＣＮの混合物である。
【００７８】
ＨＷＥ反応は、通常、−１０から５０℃、またはより具体的には、０から４０℃の温度で実行される。一実施形態において、温度は０から２５℃である。別の実施形態において、温度は４０℃である。
【００７９】
ＨＷＥ反応は、通常、塩基または塩の存在下で実行される。一実施形態において、塩基は第三級アミンである。別の実施形態において、塩基はＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）である。
【００８０】
一実施形態において、塩はハロゲン化リチウム、またはより具体的には、ＬｉＣｌまたはＬｉＢｒである。
【００８１】
ＨＷＥ反応において、不純物化合物Ｉ−２１（アルドールディマー（ａｌｄｏｌ  ｄｉｍｍｅｒ）副産物）が、化合物Ｉ−８に加えて形成され得る。
【化２１】
2015501319.tif 000023
【００８２】
反応後にｐＨを６．５から７．０の間に調整することによって、純度のより高い化合物Ｉ−８を高い収率で得ることができることがわかった。その上、より多くの反応化合物Ａ−４の添加が、不純物Ｉ−２１を産物Ｉ−８へ至らせることが示された。一実施形態において、さらなる０．２等量のＡ−４の添加が、Ｉ−２１のレベルを８ＬＣＡＰから２ＬＣＡＰにまで下げることができる。
【００８３】
反応温度を上げることで、所望の産物化合物Ｉ−８への変換速度を上げることができ、かつ副産物化合物Ｉ−２１のレベルを下げることができる。
【００８４】
反応をバッチプロセスから添加制御プロセスへ変えることによって、化合物Ｉ−８の収率を上げることができ、かつ副産物化合物Ｉ−２１のレベルを下げることができる。例えば、反応化合物Ｉ−７を、反応化合物Ａ−４を含有する溶液に加えることによって、Ｉ−２１のレベルを下げることができ、かつ化合物Ｉ−８の収率を向上させることができる。
【００８５】
一実施形態において、１．２等量のＡ−４、３等量のＤＩＰＥＡ、および３等量のＬｉＣｌを含有する５容量のＭｅＣＮ溶液を調製し、４０℃に温めた。その後、化合物Ｉ−７のトルエンストリームを３時間にわたってこの混合物に加えて、追加の３０分のエージング後、産物への変換が完了した。不純物Ｉ−２１のレベルは、約〜１ＬＣＡＰであった。１時間間隔での反応サンプリングによれば、反応混合物中に化合物Ｉ−７のビルドアップはないことが示された。仕上り後、産物は９０％の単離収率で単離された。
【００８６】
より僅かに少ない量の反応物Ａ−４を用いて、化合物Ｉ−８の収率に負の影響が及ばないこともわかった。一実施形態において、１．２等量の代わりに１．０等量の化合物Ａ−４を用いてもなお高い収率が得られた。
【００８７】
ＨＷＥ反応で用いられる化合物Ａ−４は、化合物Ａ−１から調製されてよく：
【化２２】
2015501319.tif 000024
【００８８】
Ａ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  β−Ｋｅｔｏｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ，Ｍａｌｏｎｅｙ  ｅｔ．ａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７４，ｐａｇｅ  ７５７４−７５７６（２００９）に記載されるのと類似した合成工程および条件を用いることによる。
【００８９】
一実施形態において、化合物Ｉ−８の還元による化合物Ｉ−９の産生が、触媒の存在下で実行され：
【化２３】
2015501319.tif 000025
【００９０】
式中、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ独立して、Ａｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、Ｂｚ、Ｃｂｚ、ＤＭＰＭ、ＦＭＯＣ、Ｎｓ、ＭｏｚおよびＴｓからなる群から選択される。一実施形態において、Ｐ１およびＰ２は双方ともＢｏｃである。
【００９１】
適切な触媒として、Ｐｄ、ラネーＮｉ、Ｐｔ、ＰｄＣｌ２およびＰｄ（ＯＨ）２が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、触媒は５％Ｐｄ／Ｃである。
【００９２】
別の実施形態において、Ｉ−８からＩ−９への還元は、溶媒の存在下で実行される。適切な溶媒として、ＴＨＦ、ＭＴＢＥ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＣＮ、トルエン、メタノール、エタノール、２−プロパノールおよびこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、溶媒はＴＨＦである。
【００９３】
別の実施形態において、還元反応は、２から３００ｐｓｉｇの、好ましくは約４０ｐｓｉｇの圧力の水素ガスを用いて、触媒の存在下で実行される。
【００９４】
一実施形態において、化合物Ｉ−９が酸と反応して、環化反応を介して化合物Ｉ−１０を産生する。
【化２４】
2015501319.tif 000026
【００９５】
適切な酸として、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＴＦＡ、ＭｅＳＯ３Ｈ、ＴｆＯＨ、Ｈ２ＳＯ４、パラトルエンスルホン酸および他のスルホン酸（ＲＳＯ３Ｈ（ＲがＣ１−６アルキル、アリールまたは置換アリールである）等）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、酸はＨＣｌである。
【００９６】
一実施形態において、ＨＣｌが酸として用いられ、化合物Ｉ−１０のＨＣｌ塩が得られる。一実施形態において、ＨＣｌ塩は、ビスＨＣｌ塩の形態である。別の実施形態において、ビスＨＣｌ塩は、一水和物の形態である。別の実施形態において、化合物Ｉ−１０のビスＨＣｌ塩の一水和物は、結晶質である。
【００９７】
Ｉ−９からＩ−１０への変換は、０から４０℃、またはより具体的には１５から２５℃、またはさらにより具体的には２０から２５℃の温度で実行されてよい。一実施形態において、温度は２０から２５℃である。
【００９８】
一実施形態において、化合物Ｉ−１０は、触媒の存在下で化合物Ｉ−１１に還元される。
【化２５】
2015501319.tif 000027
【００９９】
Ｉ−１０からＩ−１１への変換のための反応条件が制御されて、シス選択性水素化プロセスが得られてよい。一実施形態において、シス選択性水素化が、触媒の存在下で実行される。適切な触媒として、アルミナ上Ｐｔ、アルミナ上Ｐｄ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＨ）２−Ｃ、ラネーＮｉ、Ｒｈ／Ｃ、Ｒｈ／Ａｌ、Ｐｔ／Ｃ、Ｒｕ／ＣおよびＰｔＯ２が挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、触媒はアルミナ上Ｐｔである。
【０１００】
別の実施形態において、Ｉ−１０からＩ−１１へのシス選択性水素化がＨＭＤＳの存在下で実行され、これによりヒドロキシ基をインサイチュで保護することができるので、ジアステレオ選択性を向上させることができる。他の適切な保護試薬として、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＳＣｌおよびＴＢＤＭＳＣｌが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１０１】
一実施形態において、化合物Ｉ−１１は、結晶性無水遊離塩基の形態で得られる。別の実施形態において、化合物Ｉ−１１は、結晶性遊離塩基半水和物の形で得られる。
【０１０２】
本明細書中で用いられる用語「アルキル」は、特定の炭素原子数を有する分枝鎖および直鎖の双方の飽和脂肪族炭化水素基を意味する。例えば、Ｃ１−６アルキルとして、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（Ｐｒ）、ｎ−ブチル（Ｂｕ）、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、およびこれらの異性体（イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）、イソブチル（ｉ−Ｂｕ）、ｓｅｃブチル（ｓ−Ｂｕ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）、イソペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチルおよびイソヘキシル等）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１０３】
本明細書中で用いられる用語「アリール」は、芳香族炭素環を指す。例えば、アリールとして、フェニルおよびナフタレ（ｎａｐｈｔｈａｌｅ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１０４】
本願の全体を通じて、以下の用語は、特に明記しない限り、示された意味を有する：
用語                            意味
Ａｃ                            アシル（ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−）
Ａｑ                            水性
Ｂｎ                            ベンジル
ＢＯＣ（Ｂｏｃ）                ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｏｃ２Ｏ                      ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート
Ｂｚ                            ベンゾイル
℃                              摂氏度
Ｃａｌｃ．またはｃａｌｃ’ｄ    算出された
Ｃｂｚ                          カルボベンジルオキシ
ＣＤＩ                          １，１’カルボニルジイミダゾール
ＤＣＣ                          Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシカルボジイミド
ＤＣＭ                          ジクロロメタン
ＤＫＲ                          動的速度論的分割
ＤＭＡｃ                        Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ                        ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ                          Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＰＭ                        ３，４−ジメトキシベンジル
ＤＭＳＯ                        ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ                          １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｑ．またはｅｑｕｉｖ．        等量
ＥＳ−ＭＳおよびＥＳＩ−ＭＳ    エレクトロンスプレーイオン質量分光法
Ｅｔ                            エチル
ＥｔＯＡｃ                      酢酸エチル
ＦＭＯＣ                        ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｇ                              グラム
ｈまたはｈｒ                    時
ＨＡＴＵ                        Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ                        Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ                          塩化水素
ＨＭＤＳ                        ヘキサメチルジシラザン
ＨＰＬＣ                        高性能液体クロマトグラフィ
ＨＯＡｃ                        酢酸
ＨＯＢＴ                        １−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール
ＨＯＰＯ                        ２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキサイド
ＩＰＡ                          イソプロピルアルコール
ｋｇ                            キログラム
ＬＣ／ＭＳまたはＬＣ−ＭＡＳＳ  液体クロマトグラフィ質量スペクトル
Ｌ                              リットル
ＬＡＨまたはＬｉＡｌＨ４        水素化アルミニウムリチウム
ＬＣＡＰ                        液体クロマトグラフィ領域パーセント
ＬｉＢＨ４                      水素化ホウ素リチウム
Ｍ                              モラー
Ｍｅ                            メチル
ＭｅＣＮ                        アセトニトリル
ＭｅＯＨ                        メタノール
ｍｉｎ                          分
ｍｇ                            ミリグラム
ｍＬ                            ミリリットル
ｍｍｏｌ                        ミリモル
ｍｏｚまたはＭｅＯＺ            ｐ−メトキシベンジルカルボニル
ＭＴＢＥ                        メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＡＤＰ                        ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートナトリウム塩
ｎＭ                            ナノモラー
Ｎｓ                            ４−ニトロベンゼンスルホニル
ＰＣＣ                          ピリジニウムクロロクロメート
５％Ｐｄ／Ｃ                    ５重量パーセント活性炭上パラジウム
Ｐｈ                            フェニル
ｒ．ｔ．またはｒｔまたはＲＴ    ＲＴ
Ｓａｔ．                        飽和
ＴＢＤＭＳＣｌ                  ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＥＡまたはＥｔ３Ｎ            トリエチルアミン
ＴＥＭＰＯ                      １−オキシル−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン
ＴＥＳＣｌ                      トリエチルクロロシラン
ＴＦＡ                          トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ                          テトラヒドロフラン
ＴＭＳＣｌ                      トリメチルクロロシラン
Ｔｓ                            ｐ−トルエンスルホニル
以下の反応スキームは、本明細書中で記載される化合物の合成において用いられる合成工程、試薬および条件を説明する。本発明の主題である化合物Ｉ−１１の合成は、１つまたは複数の類似の経路によって達成されてよい。
【実施例１】
【０１０５】
［出発化合物Ｉ−５ｂからの化合物ｉ−１１の調製］
スキーム１
【化２６】
2015501319.tif 000028
【０１０６】
スキーム１において、ワンポットスループロセス（ｏｎｅ−ｐｏｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｐｒｏｃｅｓｓ）により、出発材料ｉ−１からケトアミドｉ−３を産生した。酵素学的ＤＫＲ還元により、ｉ−３からｉ−４を産生した。保護後、エステルｉ−５をＬＡＨまたはＬｉＢＨ４によりアルコールｉ−６に還元した。
【０１０７】
化合物ｉ−６を得て、ＴＥＭＰＯ酸化によってｉ−７に変換した。ＴＥＭＰＯ酸化およびその後のＨＷＥカップリング工程のために、ワンポットスループロセス（ｏｎｅ−ｐｏｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｐｒｏｃｅｓｓ）を用いて、相を切り離した後のアルデヒドｉ−７の粗蒸気をＨＷＥ反応に直接用いて、溶媒切換えを回避した。不飽和ケトンｉ−８を、５つの工程にわたって単離した。最後に、化合物ｉ−８を、ｉ−９およびｉ−１０を介して化合物ｉ−１１に変換した。詳細な実験条件を以下に記載する。
【０１０８】
［工程１．化合物ｉ−１からの化合物ｉ−３の調製］
【化２７】
2015501319.tif 000029
【０１０９】
Ｎａ２ＣＯ３（１１０ｇ、１．０３４ｍｏｌ）の水（６０６ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（６０６ｍＬ）中混合物（０から５℃）に、グリシンメチルエステル（ｉ−１、１１９ｇ、９４８ｍｍｏｌ）を３０分にわたって分けて加えた。生じたスラリーをさらに１５から３０分間エージングしてから、ＰｈＣＯＣｌ（１００ｍｌ、０．８６２ｍｏｌ）を０から５℃にて１．５時間にわたって滴加した。０から５℃でさらに１時間エージングした後、反応混合物を２５℃に温めて、均質な二相溶液が形成された。分離した有機相を共沸的に濃縮し、溶媒をＭｅＣＮに切り換えた。約６００ｍＬの最終容量が得られた。
【０１１０】
ＤＭＡＰ（４３．１ｍｍｏｌ、５．２６ｇ）を加えてから、Ｂｏｃ２Ｏ（０．９４８ｍｏｌ、２０７ｇ）のＭｅＣＮ溶液（２００ｍＬ）をＲＴにて２から３時間にわたって滴加した。反応溶液をＲＴで約６時間エージングした。バッチをＮ２により３回真空脱気して、アミド化工程で発生したＣＯ２を除去した。ＴＨＦ（５４０ｍＬ、ＫＦ＜５００）を反応溶液に加えた。続いて、ｔ−ＢｕＯＫ（１．１２ｍｏｌ、１２８ｇ、９７％）のＴＨＦ溶液（６７０ｍｌ）を、０から１０℃にて１から２時間にわたって滴加した。反応溶液を０から５℃で１時間エージングした。
【０１１１】
続いて、反応を、１５ｗｔ％クエン酸水（５１５ｍＬ  Ｈ２Ｏ中０．４３１ｍｏｌ、９１ｇ  クエン酸）（＜１０℃）で急冷した。有機相を４８０ｍＬの半飽和ＮａＣｌ水で洗浄し、溶媒をＩＰＡに切り換え、最終容量を約１．２５Ｌにした（＜４５℃にてＩＰＡ中約１０％水であった）。バッチを４０から５０℃に温めた。水（１２５０ｍＬ）を４０から５０℃にて２時間にわたって滴加して、スラリーが生じた。
【０１１２】
スラリーを周辺温度（２０℃）に冷却し、１から２時間エージングして濾過した。ｉ−３のウェットケーキを、３０％ＩＰＡ水（６４０ｍＬ×２）で置換洗浄した。ＲＴでの吸引乾燥、または乾燥Ｎ２スイープによる＜５０℃での真空オーブン乾燥により、２２７ｇの白色の結晶性固体ｉ−３が与えられ、以下に記載するＨＰＬＣによって決定して、９０％の収率であった。
【０１１３】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｓｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，４．６×１５０ｍｍ，２．７μｍ粒子サイズ；
カラム温度：３０℃；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；
移動相：Ａ：０．１％Ｈ３ＰＯ４  Ｂ：アセトニトリル
移動相プログラム：
【表１】
2015501319.tif 000030
【０１１４】
［工程２．ＤＫＲ還元による化合物ｉ−３からの化合物ｉ−４の調製］
【化２８】
2015501319.tif 000031
【０１１５】
Ｋ２ＨＰＯ４（１４．１ｇ）のＲＴの８０ｍＬ水溶液に、デキストロース（９．８ｇ）に続いて、ＮＡＤＰ（３６０ｍｇ）、配列番号２のＫＲＥＤ酵素（２９０ｍｇ）および配列番号４の補因子リサイクル系（１１５ｍｇ）を加えた。生じた均質な溶液を、使用前に２Ｍ  ＮａＯＨでｐＨ調整して最低でも７．５にした。
【０１１６】
ｉ−３（１２．０ｇ）のＤＭＳＯ溶液（３６ｍｌ）（３０℃）を、前述の水性酵素溶液に３０℃にて４時間にわたって激しい撹拌下で滴加した。２Ｍ  ＮａＯＨ（約２１ｍＬ）を滴加して、反応混合物のｐＨを７．３から７．７に維持した。２Ｍ  ＮａＯＨ溶液を９０％（約１９ｍＬ）加えると、反応温度は、＞９５％の変換が達成されるまで３５℃に上昇した。
【０１１７】
ＩＰＡ（９１ｍＬ）およびＭＴＢＥ（４９ｍＬ）をＲＴで加えた。有機層を分離した。水性相をＩＰＡ／ＭＴＢＥ（１４０ｍｌ、ＩＰＡ：ＭＴＢＥ＝２０：８０）で抽出した。併合有機相をブライン（５０ｍＬ、１０％ｗ／ｖブライン）で洗浄し、化合物ｉ−４を含有する粗産物を、次の工程に直接用いた。
【０１１８】
以下のＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−３およびｉ−４の保持時間はそれぞれ約８．８および７．８分であった。
【０１１９】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｃｅ  ３  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｃ１８，３×１５０ｍｍ，３μｍ粒子サイズ
カラム温度：３０℃；流量：０．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１５ｎｍ；
移動相：Ａ：ホルメートバッファ，ｐＨ４（１．２６ｇ  ＨＣＯ２Ｎａおよび０．７９ｍＬ  ＨＣＯ２Ｈ（１Ｌ  Ｈ２Ｏ中））
Ｂ：アセトニトリル
移動相プログラム：時間（分）％Ｂ
０              ５
１０            ９５
［キラルＳＦＣ法］
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ，２５０×４．６ｍｍ，５μｍ粒子サイズ
カラム温度：３５℃；流量：２ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；
移動相プログラム：
【表２】
2015501319.tif 000032
【０１２０】
［工程３．アセトニド保護による化合物ｉ−４からの化合物ｉ−５の調製］
【化２９】
2015501319.tif 000033
【０１２１】
ｉ−４エステルのトルエン溶液（１０．６ｇ、約２５から３０ｍＬのトルエン中、先のＤＫＲ工程由来の粗溶液）に、５０ｍＬのアセトンおよび２０ｍｌの２，２−ジメトキシプロパンを加えた。続いて、ＢＦ３エーテラート（０．４３ｍＬ）のトルエン溶液（２ｍＬ）を、シリンジポンプを介してＲＴにて２時間にわたって加えた。反応溶液をＲＴで１５時間エージングした。変換は、ＨＰＬＣによって＞９７％であるとわかった。ｉ−４およびｉ−５の保持時間はそれぞれ約４．５分および６．５分であった。
【０１２２】
Ｅｔ３Ｎ（０．５ｍＬ）を滴加した。周辺温度でのさらに１５分間のエージング後、溶液の溶媒をトルエン（約３０ｍＬ）に切り換えながら、大部分のアセトンを真空除去した。ＭＴＢＥ（６０ｍＬ）を加え、有機相を５％ＮａＨＣＯ３／ブライン（４０ｍＬ）で洗浄した。有機相を共沸的に乾燥し、溶媒をトルエンに切り換え、最終容量を約３５から４０ｍＬにした。
【０１２３】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｓｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，４．６×１５０ｍｍ，２．７μｍ粒子サイズ；
カラム温度：４０℃；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；
移動相：Ａ：０．１％Ｈ３ＰＯ４  Ｂ：アセトニトリル
移動相プログラム：
【表３】
2015501319.tif 000034
【０１２４】
［工程４．化合物ｉ−５の還元による化合物ｉ−６の調製］
化合物ｉ−６を、２つの代替条件下で、化合物ｉ−５の還元から調製してよい。
【０１２５】
オプション１：ＬＡＨ還元：
【化３０】
2015501319.tif 000035
【０１２６】
ｉ−５エステルのトルエン粗溶液（８．２８ｇアッセイ、先の保護工程由来、トルエンの約２．５から３ｖｏｌ中）に、４０ｍＬのＴＨＦを加えた。続いて、溶液を０℃に冷却した。ＬｉＡｌＨ４（ＴＨＦ中２Ｍ溶液、６．９ｍＬ）を１時間にわたって滴加し、この間、内部温度を０から５℃に保った。反応溶液をさらに０．５から１時間エージングした。変換は、ＨＰＬＣによれば＞９９％であった。０から５℃にて、２．０ｍＬのＴＨＦ中０．５２ｍＬのＨ２Ｏを、続いて０．５２ｍＬの１５％ＮａＯＨを、続いて１．５６ｍＬのＨ２Ｏをゆっくり加えた。スラリー混合物をＲＴにまで温めて、Ｓｏｌｋａ  Ｆｌｏｃを通して濾過した。ウェットケーキをＴＨＦ（２５ｍＬ）およびトルエン（１６ｍＬ）で洗浄した。
【０１２７】
以下のＨＰＬＣ法を用いて、９１％のアッセイ収率を得た。ｉ−５およびｉ−６の保持時間はそれぞれ約６．５分および５．７分であった。
【０１２８】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｓｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，４．６×１５０ｍｍ，２．７μｍ粒子サイズ；
カラム温度：４０℃；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；
移動相：Ａ：０．１％Ｈ３ＰＯ４  Ｂ：アセトニトリル
移動相プログラム：
【表４】
2015501319.tif 000036
【０１２９】
オプション２：ＬｉＢＨ４還元：
【化３１】
2015501319.tif 000037
【０１３０】
ｉ−５エステルのトルエン粗溶液（１１．１ｇアッセイ、先の保護工程由来、トルエンの約２．５から３ｖｏｌ中）を、ＬｉＢＨ４（０．９３７ｇ）のＴＨＦ中混合物（６０ｍＬ）に１５から３０分にわたって加えた。続いて、反応溶液を３５℃で１５時間エージングした。変換は、ＨＰＬＣによれば＞９７％であった。
【０１３１】
反応溶液をＲＴに冷却し、逆に急冷して内部温度を外部冷却により５℃未満に維持しながら、１０％ＮＨ４Ｃｌ（４０ｍＬ）の溶液に入れた。急冷した溶液を周辺温度にて２から３時間、またはＨ２ガスの発生が止まるまで、エージングした。ＭＴＢＥ（１００ｍＬ）を加えた。水性層を廃棄し、有機層は溶媒をトルエンに切り換えて、最終容量を約４０ｍＬにし、これを以降の酸化工程に直接用いた。アッセイ収率は９２％であり、水性ロスは１．２％であった。
【０１３２】
［工程５．化合物ｉ−６のＴＥＭＰＯ酸化による化合物ｉ−７の調製］
【化３２】
2015501319.tif 000038
【０１３３】
ｉ−６アルコールのトルエン溶液（２０ｇアッセイ、約６０ｍＬ）に、アセトニトリル（１２０ｍＬ）をＲＴにて加えた。続いて、ＫＢｒ（１．１６ｇ）、ＮａＨＣＯ３（１．８ｇ）および水（４０ｍＬ）をチャージして、二相混合物が生じた。二相混合物を５℃に冷却し、ＴＥＭＰＯ（３０５ｍｇ）を加えた。続いて、ＮａＣｌＯ溶液（Ｃｌｏｒｏｘ；６ｗｔ％；１０１ｇ）を０から５℃にて２時間にわたって滴加した。滴加後、反応を５℃にて約３０分撹拌した。＞９６％の変換が得られた。
【０１３４】
反応を、５℃の１０％亜硫酸ナトリウム（５０ｍＬ）の滴加によって急冷した。有機層を分離して、次のＨＷＥカップリング工程に、さらに精製することなく、直接用いた。アッセイ収率は、内部標準としてＤＭＡｃを用いた１Ｈ  ＮＭＲによれば、１７．５ｇ（８８％）であった。
【０１３５】
以下のＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−６およびｉ−７の保持時間はそれぞれ約３．３分および３．９分であった。
【０１３６】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ｚｏｒｂａｘ，Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８，４．６ｍｍ×５０ｍｍ，１．８μｍ粒子サイズ；
カラム温度：２２℃；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；
移動相：Ａ：９５／５／０．１，Ｈ２Ｏ／メタノール／Ｈ３ＰＯ４  Ｂ：９５／５，ＭｅＣＮ／メタノール
移動相プログラム：
【表５】
2015501319.tif 000039
【０１３７】
［工程６．ホーナー・ワズワース・エモンズ（ＨＷＥ）カップリング反応によるｉ−８の調製］
【化３３】
2015501319.tif 000040
【０１３８】
先に得たｉ−７アルデヒドの−１０℃のウェットトルエン／アセトニトリル溶液（１６２ｇ溶液；１７．５ｇアッセイ；１０．８１ｗｔ％）に、アセトニトリル（１４０ｍＬ）、ホスホネートａ−４（２４．６ｇ）およびＬｉＢｒ（１４．９ｇ）を加え、内部温度を０℃未満に維持した。
【０１３９】
反応を０℃にまで温め、ヒューニッヒ塩基（２２．２ｇ）を滴下により０から５℃にて２時間にわたってチャージした。生じた反応混合物を０から５℃にて２から４時間撹拌し、ＲＴに温めてから、ＲＴで１２時間エージングした。ＨＰＬＣによって、＞９９％の変換（産物／（産物＋アルデヒド））が示された。
【０１４０】
スラリーを５℃に冷却して、クエン酸の１０％水溶液（約７５ｇ）を滴加してｐＨを６．５から７．０に調整し、この間、バッチ温度を０から５℃に維持した。水性相を０から５℃にて分離し、廃棄した。
【０１４１】
有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（５７ｍＬ）で、そしてＨ２Ｏ（５７ｍＬ）で逐次洗浄した。有機相の溶媒をＩＰＡに切り換え、最終容量を約１９２ｍＬにした。産物は、蒸留中に徐々に結晶化した。
【０１４２】
水（１６．４ｍＬ、０．６容量）を加え、生じたスラリーを４９℃に加熱して均質な溶液を与えた。生じた溶液を４０℃に冷却してシードさせた（０．２７ｇ）。生じた混合物を４０℃で２時間エージングしてシードベッドを形成させ、Ｈ２Ｏ（９３ｍＬ）を滴下により４０℃にて３時間にわたってチャージしてから、４０℃で１時間エージングした。スラリーを２時間にわたって５から１０℃に冷却してから、５から１０℃で２時間エージングした。
【０１４３】
ウェットケーキを、５０％Ｈ２Ｏ／ＩＰＡで洗浄した（１６４ｍＬのコールド置換洗浄に続いて、１１０ｍＬのスラリー洗浄）。窒素下で吸引乾燥して、産物がオフ−ホワイト色の固体として与えられた（２４．９ｇ、１００ｗｔ％、＞９９のＬＣＡＰ、アルデヒドからの単離収率が８０％）。
【０１４４】
以下のＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−７、ａ−４およびｉ−８の保持時間はそれぞれ約３．０分、１．２分および３．８分であった。
【０１４５】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ｚｏｒｂａｘ，Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８，４．６ｍｍ×５０ｍｍ，１．８μｍ粒子サイズ；
カラム温度：４０℃；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ；
移動相：Ａ：０．１％Ｈ３ＰＯ４；Ｂ：ＭｅＣＮ
移動相プログラム：
【表６】
2015501319.tif 000041
【０１４６】
［工程７．化合物ｉ−８からの化合物ｉ−９の調製］
【化３４】
2015501319.tif 000042
【０１４７】
ＴＨＦ（８４ｇ）に続きエノンｉ−８（１９．０７ｇ）および１０％炭素上パラジウム（０．９５ｇ）を水素化処理ベッセルにチャージした。水素の取込みが止まるまで、バッチを２５℃で９０分水素化した。触媒を、ｓｏｌｋａ  ｆｌｏｃのベッドの濾過によって除去した。濾過残留物をＴＨＦ（８４ｇ）で洗浄した。併合有機相の溶媒をＩＰＡに切り換え、最終容量を１４２ｍＬにし、これを次の工程において直接用いた。９３％のアッセイ収率が得られた（１７．８ｇのｉ−９）。
【０１４８】
以下のＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−８およびｉ−９の保持時間はそれぞれ約１１．２分および１１．４分であった。
【０１４９】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：ＨｉＣｈｒｏｍ  ＡＣＥ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ），３μｍ粒子サイズ；
カラム温度：３０℃；流量：１．０ｍＬ／分；検出：２１０ｎｍ，２５４ｎｍ；
移動相：Ａ：１ｍＬのリン酸（８５％）（１ＬのＨ２Ｏ中に溶解）Ｂ：ＭｅＣＮ
移動相プログラム：
【表７】
2015501319.tif 000043
【０１５０】
［工程８．化合物ｉ−９からの化合物ｉ−１０の調製］
【化３５】
2015501319.tif 000044
【０１５１】
Ｎ−Ｂｏｃ−ケトンアニリンｉ−９（２６．１アッセイｋｇ）のＩＰＡ溶液（約１２５ｇ／Ｌ）に、ＩＰＡ中４Ｎ  ＨＣｌ（２２０．８Ｌ）をＲＴにて加えた。反応混合物を２０から２５℃にて２４時間激しく撹拌した。ＩＰＡを１バッチ容量までチャージすることによって一定の容量にてバッチを減圧化で蒸留し、ＨＣｌを除去した。続いて、バッチを約２１５Ｌの最終容量に濃縮した。
【０１５２】
生じたスラリーを４５℃に加熱し、ＩＰＡｃ（約４３０Ｌ）をバッチに２から３時間にわたってゆっくり加えた。続いて、スラリーを１から２時間にわたって約２０℃に冷却し、一晩エージングした。バッチを濾過し、そしてケーキを、ＩＰＡ：ＩＰＡｃが１：２の混合物（５２Ｌ）で、続いてＩＰＡｃ（５２Ｌ）で洗浄した。ウェットケーキを窒素雰囲気下で４５℃にて乾燥して、環式イミンビス−ＨＣｌ一水和物塩ｉ−１０（１６．１ｋｇ）が与えられた。９４％の単離収率が得られた。
【０１５３】
工程７（ｉ−８からｉ−９）と同じＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−９およびｉ−１０（ビス−ＨＣｌ塩）の保持時間はそれぞれ約１１．３分および８．３分であった。
【０１５４】
［工程９．化合物ｉ−１０からの化合物ｉ−１１の調製］
【化３６】
2015501319.tif 000045
【０１５５】
Ｎ２下のイミン二塩化水素化一水和物ｉ−１０（１２．０ｇ、９８．５ｗｔ％）のＴＨＦ中混合物（８６ｍＬ）に、ヘキサメチルジシラザン（１０．９５ｇ）を加え、この間、バッチ温度を２５℃未満に維持した。生じたスラリーを、周辺温度にて２時間激しく撹拌した。
【０１５６】
３００ｍＬのオートクレーブに、５％アルミナ上白金（０．６０５ｇ）のＴＨＦ懸濁液（３２ｍＬ）を、続いて先に調製した基質スラリーをチャージした。水素の取込みが止まるまで、生じた混合物を水素下（４０ｐｓｉｇ）でＲＴにて撹拌した。水素化の完了をＨＰＬＣによって確かめ、ベッセルを窒素によって不活性にした。
【０１５７】
反応混合物をディスチャージし、ベッセルを９６ｍＬのＴＨＦでリンスした。バッチをＳｏｌｋａ  Ｆｌｏｃのパッドにより濾過し、パッドをＴＨＦベッセルリンス（約９６ｍＬ）でリンスした。併合濾液を、０．５Ｍ塩酸（１２９ｍＬ）と共に周辺温度で１時間撹拌した。水性層を分離した。ＩＰＡｃ（３９ｍＬ）に続いて５Ｎ水酸化ナトリウム（約１５ｍＬ）を激しく撹拌しながら加え、ｐＨを１０．０に調整した。
【０１５８】
有機層（約１２０ｍＬ）を分離し、ＲＴにて２時間、ＡｑｕａＧｕａｒｄ  Ｐｏｗｄｅｒ（Ｍｅａｄｗｅｓｔｖａｃｏ）（２．４ｇ）で処理した。溶液をＳｏｌｋａ  Ｆｌｏｃのパッドにより濾過し、パッドを２−プロパノール（１８ｍＬ）でリンスした。併合濾液を７０ｍＬに濃縮した。溶液を、合計１４０ｍＬの２−プロパノールを供給することによって一定の容量にて蒸留し、バッチ温度を３３から３５℃に維持した。生じた溶液を約３４ｍＬに濃縮して５０℃に加熱してから、Ｈ２Ｏ（６．３ｍＬ）を加えた。生じた溶液を４１から４３℃に冷却して、ピロリジンアニリン半水和物（４２ｍｇ）をシードさせた。生じた混合物を４１から４３℃にて１時間エージングして、シードベッドを形成させた。
【０１５９】
水（６０．９ｍＬ）を４１から４３℃にて６時間にわたってチャージし、生じた混合物を３時間にわたって１０℃に冷却してから、１０℃で２時間エージングした。固体を濾過によって集め、２５％２−プロパノール／Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。ウェットケーキを窒素下で周辺温度にて吸引乾燥し、７．６８ｇのピロリジンアニリンｉ−１１が半水和物として与えられた。
【０１６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ７．２７（ｍ，４Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），５．０７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），４．７５（ｓ，２Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０５（ｍ，２Ｈ），２．４７（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，６．６Ｈｚ，１Ｈ），１．５３（ｍ，１Ｈ），１．３４（ｍ，１Ｈ０，１．２２（ｍ，２Ｈ）。
【０１６１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１４６．５，１４４．３，１２９．２，１２７．８，１２７．４，１２６．８，１２６．７，１１４．０，７６．８，６４．４，６０．１，４２．１，３０．２，２７．２。
【０１６２】
以下のＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−１０（ビス−ＨＣｌ塩）およびｉ−１１の保持時間はそれぞれ約８．３分および８．５分であった。
【０１６３】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ；
カラム温度：２５℃；流量：１ｍＬ／分；検出：２１０ｎｍ，２５４ｎｍ；
移動相：Ａ：アセトニトリル；Ｂ：０．１％水性ＮＨ４ＯＨ（ＨによりｐＨ９．５に調整）
移動相プログラム：
【表８】
2015501319.tif 000046
【実施例２】
【０１６４】
化合物ｉ−１からの化合物ｉ−８の調製−代替条件
［工程１．化合物ｉ−１からの化合物ｉ−３の調製］
【化３７】
2015501319.tif 000047
【０１６５】
不活性の１０００Ｌベッセルに、水（１７８ｋｇ）に続いてグリシンメチルエステルヒドロクロリド（ｉ−１のＨＣｌ塩、３５．０ｋｇ）をチャージして、溶液を形成した。ＥｔＯＡｃ（１７８Ｌ；１６０．６ｋｇ）をチャージし、混合物を０℃に冷却した。トリエチルアミン（５６．４ｋｇ；７８Ｌ）を約３０分にわたって加え、内部温度を＜１０℃に維持した。混合物を０℃に冷却し、塩化ベンゾイル（３５．６ｋｇ；２９．４Ｌ）を＞３０分にわたって加え、内部温度を＜１０℃に維持した。塩化ベンゾイル添加終了時のＨＰＬＣ分析によれば、ベンゾイル化中間体への１００％の変換が示された。
【０１６６】
続いて、１０％リン酸（９ｋｇの８５ｗｔ％リン酸および８１ｋｇ  Ｈ２Ｏから調製した）を１５分にわたってチャージし、混合物を撹拌した。より下部の水性層を取り出してから、ＥｔＯＡｃで２回逆抽出した（１７８Ｌ；１６０．６ｋｇに続いて８９Ｌ；８０．３ｋｇ）。水性層へのロスは約２．１％であった。
【０１６７】
有機層を併合し、約５０Ｌに濃縮してから、アセトニトリル（１７８Ｌ；１４０．０ｋｇ）をチャージし、約５０Ｌに濃縮した。続いて、アセトニトリル（１７８Ｌ；１４０．０ｋｇ）をチャージし、溶液を０℃に冷却し、ＤＭＡＰ（３．０９ｋｇ）をチャージした。マンウェイを介した固体のチャージ前に、ＭｅＣＮのフラッシポイント未満に留めるために、０℃へ冷却する必要があった。
【０１６８】
混合物を２０℃に温め、Ｂｏｃ無水物（６０．８ｋｇ；６４．７Ｌ）のＭｅＣＮ溶液（６４．７Ｌ；６０．８ｋｇ＋１０Ｌリンス）を混合物に３０分にわたってチャージした。反応混合物を一晩エージングした。ＨＰＬＣ分析によれば、Ｂｏｃ−中間体への１００％の変換が示された。
【０１６９】
混合物を３×真空／Ｎ２サイクルを介して脱気し、０℃に冷却し、ｔ−ＢｕＯＫ（３６．９ｋｇ）のＴＨＦ溶液（１４２Ｌ；１２６．６ｋｇ）を１時間にわたって加え、内部温度を＜５℃に維持した。反応混合物を５から１０℃で１時間エージングした。ＨＰＬＣ分析によって、ケト−エステルへの完全変換が示された。
【０１７０】
続いて、１０％クエン酸（ａｑ．）（３６．５ｋｇクエン酸および３２８．６ｋｇ  Ｈ２Ｏから調製した）を混合物に加え、撹拌し、より下部の水性層を除去した。
【０１７１】
５％ＮａＣｌ（ａｑ．）（１４．２５ｋｇ  ＮａＣｌおよび２７０．８ｋｇ  Ｈ２Ｏから調製した）を有機物に加え、撹拌し、より下部の水性層を取り出した。より下部のブライン層をＭＴＢＥ（８０ｋｇ）で逆抽出し、全ての有機物を併合した。
【０１７２】
併合し、洗浄した有機物を約３００Ｌに濃縮してから、ＩＰＡ（１７８Ｌ；１３９．７ｋｇ）を加えて約２８５Ｌにまで濃縮し（１Ｈ−ＮＭＲによれば、残存ＭｅＣＮは示されなかった）、その後ＩＰＡ（１１７ｋｇ）を加えた。スラリーを５０℃に加熱して溶液を得、Ｈ２Ｏ（３２７．５ｋｇ）を１時間にわたって加え、内部温度を４０から５０℃に維持し、続いて４５分にわたって２０℃に冷却し、一晩エージングした。リカーロスは、冷却の終わりには＜２％であった。
【０１７３】
スラリーを濾過し、ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ（３８．３ｋｇ：１４６．３ｋｇ）で洗浄し、固体を真空内で５０℃にて一晩乾燥して、ケトエステル化合物ｉ−３がオフ−ホワイト色の固体として与えられた（６５．２５ｋｇ；９９．４ＬＣＡＰ；１００ＬＣＷＰ）。収率は８９％であった。
【０１７４】
以下に記載するＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−３の保持時間は約４．０分であった。
【０１７５】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，１００×４．６ｍｍ，２．７μｍ粒子サイズ；
カラム温度：４０℃；流量：１．８ｍＬ／分；検出：２１０ｎｍ，２２０ｎｍ，２５４ｎｍ；
移動相：Ａ：１ＬのＨ２Ｏ中１．０ｍｌの９９．９％リン酸（８５ｗ／ｗ％）Ｂ：ＭｅＣＮ
勾配：
【表９】
2015501319.tif 000048
【０１７６】
［工程２．ＤＫＲ還元による化合物ｉ−３からの化合物ｉ−４の調製］
【化３８】
2015501319.tif 000049
【０１７７】
二塩基性リン酸ナトリウム二水和物（８．５４ｋｇ）を水（４８０ｋｇ）中に溶解することによって、０．１Ｍリン酸バッファ溶液を調製した。ｐＨを、ＨＣｌ（およそ１．５Ｌ）を用いて７．０に調整した。
【０１７８】
０．１Ｍリン酸バッファ（４００ｋｇ）に続いてＤＭＳＯ（６６ｋｇ）を１０００Ｌベッセルにチャージした。Ｄ−（＋）−グルコース（３９．２ｋｇ）およびＮＡＤＰジナトリウム塩（０．９０ｋｇ）をマンウェイを介してチャージし、全ての固体が溶解するまで、混合物を３０℃で撹拌した。
【０１７９】
残りの０．１Ｍリン酸バッファ（８８．５ｋｇ）に続いて配列番号１のＫＲＥＤ酵素（３．０ｋｇ）および配列番号３の補因子リサイクル系（０．３０ｋｇ）を、４００Ｌベッセルにチャージした。全ての酵素が溶解するまで、この混合物を２０℃でゆっくり撹拌した。混合物中で形成されるのを防ぐために、激しい撹拌は避けるべきである。一旦溶解されると、曇った黄色の溶液が得られた。
【０１８０】
１６０Ｌベッセルに、ケトエステル基質ｉ−３（３２．６ｋｇ）に続いてＤＭＳＯ（６６ｋｇ）をチャージした。全ての固体が溶解するまで、混合物を３０℃で撹拌した。
【０１８１】
グルコース／ＮＡＤＰ溶液のｐＨを、２Ｍ水酸化ナトリウム溶液（２．４ｋｇ）を用いて７．１９から７．５０に調整した。
【０１８２】
その後、酵素溶液に続いて水ライン洗浄液（５ｋｇ）を１０００Ｌベッセルへ移した。続いて、併合溶液のｐＨを、２Ｍ水酸化ナトリウム溶液（１．９ｋｇ）を加えることによって７．３０から７．５０に再調整した。
【０１８３】
続いて、ケトエステルのＤＭＳＯ溶液を、およそ４時間にわたって１０００Ｌベッセルにチャージし、反応ベッセル内の温度を３０℃に維持し、ｐＨを７．３から７．７の間で維持した。
【０１８４】
出発材料が添加中に結晶化した。その後、反応混合物は一貫してスラリーであった。反応が進行するにつれ、ｐＨはより酸性になった。２Ｍ  ＮａＯＨを加えることによって、７．３から７．７の範囲を維持した。
【０１８５】
反応は続いて、反応が完了するまで、３０℃でエージングし、ｐＨを７．３から７．７に維持した。反応は、およそ５日後に９０％完了した。２Ｍ  ＮａＯＨの総取込み量は５５ｋｇであった。総予測取込み量は６０ｋｇであった。
【０１８６】
ベッセル容量限界のために、抽出仕上げを２分割にして実行した。以下に詳述する量は、全バッチサイズについてである。
【０１８７】
ＭＴＢＥ（９００Ｌ）およびメタノール（４００Ｌ）をチャージし、混合物を撹拌し、沈降させた。二相混合物が得られた−上部の澄明な有機層が産物を含有し、下部の曇った水性層が全ての酵素残留物を含有した。分離は良好であったが、３０から６０分の沈降時間を必要とした。
【０１８８】
相を分離して、水性をＭＴＢＥ（３００Ｌ）で抽出した。有機相を併合し、１０％ブライン（１５０Ｌ）で洗浄した。水性層への総ロスは、理論収率の１から２％であった。
【０１８９】
続いて、有機層を、減圧蒸留によって１１００Ｌから９５Ｌに濃縮した。トルエン（１８５ｋｇ）をチャージし、バッチを濃縮して最終容量を１００Ｌとした。蒸留中、バッチ温度を４０℃未満に維持した。
【０１９０】
処理した全材料は６４．２ｋｇであった。アッセイ収率は５３．９ｋｇ（８６％）であった。約１４％のケトエステルｉ−３を含有した。ｅｅ＞９９．９％。ＫＦ＜２５０ｐｐｍ。ＭＴＢＥは１Ｈ  ＮＭＲによって検出されなかった。
【０１９１】
以下に記載するＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−３およびｉ−４の保持時間はそれぞれ約４．５分および３．８分であった。
【０１９２】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，１００×４．６ｍｍ，２．７μｍ粒子サイズ；
カラム温度：４０℃；流量：１．８ｍＬ／分；検出：２１０ｎｍ；
移動相：Ａ：１ＬのＨ２Ｏ中１．０ｍｌの９９．９％リン酸（８５ｗ／ｗ％）Ｂ：ＭｅＣＮ
勾配：
【表１０】
2015501319.tif 000050
【０１９３】
［工程３．アセトニド保護による化合物ｉ−４からの化合物ｉ−５の調製］
【化３９】
2015501319.tif 000051
【０１９４】
不活性の１０００Ｌベッセルに、トルエン中ヒドロキシエステルｉ−４（５３．９ｋｇヒドロキシエステル；全溶液１１４．１ｋｇ）を、続いてアセトン（２５７Ｌ；２０３ｋｇ）および２，２−ジメトキシプロパン（９７Ｌ；８２ｋｇ）をチャージし、混合物を５分間撹拌した。三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（２．２０Ｌ；２．４７ｋｇ）を３０分にわたって混合物にチャージし、２０℃で１５時間一晩エージングした（発熱量は認められなかった）。反応時間は完了まで約４時間であった；一晩後のＨＰＬＣ分析によって、＞９９％の変換が示された。
【０１９５】
続いて、トリエチルアミン（２．４Ｌ；１．７６ｋｇ）をチャージし、混合物を低容量（約１００Ｌ）に濃縮した。ＭＴＢＥ（３０８Ｌ；２２９ｋｇ）に続いて、５％ＮａＨＣＯ３（ａｑ．）（６．４５ｋｇ  ＮａＨＣＯ３および１２２．５５ｋｇ  Ｈ２Ｏから調製した１２９Ｌ）および１０％ＮａＣｌ（ａｑ．）（１２．９ｋｇ  ＮａＣｌ、１１６．１ｋｇ  Ｈ２Ｏから調製した１２９Ｌ）をチャージした。混合物を５分間撹拌し、層を沈降させ、より下部の水性層を除去した。洗浄した有機物を約７５Ｌに濃縮してから、トルエンをチャージし（９１Ｌ；１０５ｋｇ）、約７５Ｌに濃縮した。続いてトルエン（１３８Ｌ；１１９ｋｇ）を加えた。反応時間は完了まで約４時間であった；一晩後のＨＰＬＣ分析によって、＞９９％の変換が示された。
【０１９６】
続いて、トリエチルアミン［２．４Ｌ；１．７６ｋｇ］をチャージし、混合物を低容量（約１００Ｌ）に濃縮した。ＭｔＢＥ［３０８Ｌ；２２９ｋｇ］に続いて、５％ＮａＨＣＯ３（ａｑ．）［６．４５ｋｇ  ＮａＨＣＯ３および１２２．５５ｋｇ  ＤＩ  Ｈ２Ｏから調製した１２９Ｌ］および１０％ＮａＣｌ（ａｑ．）［１２．９ｋｇ  ＮａＣｌ、１１６．１ｋｇ  ＤＩ  Ｈ２Ｏから調製した１２９Ｌ］をチャージした。混合物を５分間撹拌し、層を沈降させ、より下部の水性層を除去した。洗浄した有機物を約７５Ｌに濃縮してから、トルエンをチャージし［９１Ｌ；１０５ｋｇ］、約７５Ｌに濃縮した。続いてトルエン［１３８Ｌ；１１９ｋｇ］を加えた。
【０１９７】
最終溶液は１７６．８ｋｇであり、産物アセトニドｉ−５アッセイは６１．２ｋｇ（１００％）であった。ケトエステル化合物ｉ−３が１４．２ＬＣＡＰでなお存在した。
【０１９８】
本実施例の工程１と同じＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−４およびｉ−５の保持時間はそれぞれ約３．２分および５．２分であった。
【０１９９】
［工程４．化合物ｉ−５のホウ素還元による化合物ｉ−６の調製］
【化４０】
2015501319.tif 000052
【０２００】
１０００Ｌベッセルに、テトラヒドロフラン（２１８ｋｇ）および１０％水素化ホウ素リチウムＴＨＦ溶液（５０．８ｋｇ）をチャージした。混合物を撹拌し、温度を２０℃に調整した。
【０２０１】
アセトニドエステルｉ−５（酵素学的ＤＫＲ工程を完遂した約１４ＬＣＡＰケトエステルｉ−３を含有する）のトルエン溶液（合計１７６．８ｋｇのトルエン溶液中５５．９ｋｇの基質）を４５分にわたってチャージし、２０から２５℃のバッチ温度を維持した。バッチを３５℃に温めて、１８時間エージングした。基質のチャージング中、僅かな発熱量が認められた。最小限のオフガスが観察された。ＨＰＬＣによって、＜１％の残留出発材料が示された。
【０２０２】
バッチに続いてＴＨＦライン洗浄液（１０ｋｇ）を４００Ｌベッセルに移した。１０００Ｌベッセルに、塩化アンモニウム（２４．５ｋｇ）の水溶液（２４５ｋｇ）をチャージした。塩化アンモニウム溶液を０から５℃に冷却してから、バッチを９０分にわたってチャージし、温度を０から５℃に維持した。水素ガスが発生した。バッチの塩化アンモニウム急冷溶液への添加速度を、ベッセルを加圧しないように制御した。
【０２０３】
急冷した反応混合物を２０℃に温めて、２時間（オフガスが止まるまで）撹拌した。撹拌を止め、層を沈降させた。より下部の水性相を涸渇させ、有機物を約１０％ブライン（５０ｋｇ水中５ｋｇ塩化ナトリウム）で洗浄した。一部のエマルジョンが界面にあったので、大部分の有機物を取り出し、エマルジョンおよび水性層をトルエン（１００ｋｇ）で再抽出した。有機相を併合し、１００Ｌに減圧濃縮した（バッチ温度を４０℃未満に維持した）。
【０２０４】
ヘプタン（４１０ｋｇ）をチャージし、混合物を３０℃に温めた。バッチを、水（３００ｋｇ）中アセトニトリル（２０ｋｇ）の混合物で２０分間洗浄した。水性層を除去し、洗浄をもう２回繰り返した。洗浄は、可溶性を維持するために３０から３５℃で実行した。以下の構造を有するジオール化合物ｉ−１６が、１４から２ＬＣＡＰに低下した。
【化４１】
2015501319.tif 000053
【０２０５】
続いて、有機相を減圧下で１００Ｌに濃縮した。アセトニトリル（１２０ｋｇ）をチャージし、バッチを１４０Ｌ（１４２ｋｇ）に濃縮した。アッセイ収率は５５．６ｋｇ（９９％）であり、＜２ＬＣＡＰのｉ−１６が存在した。
【０２０６】
本実施例の工程２と同じＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−５、ｉ−６およびｉ−１６ジアステレオマーの保持時間はそれぞれ、約５．６分、４．９分、３．０分および３．１分であった。
【０２０７】
［工程５．化合物ｉ−６のＴＥＭＰＯ酸化によるアルデヒド化合物ｉ−７の調製］
【化４２】
2015501319.tif 000054
【０２０８】
不活性の１０００Ｌガラス内張ベッセルに、ＫＢｒ（２．６５ｋｇ）、ＮａＨＣＯ３（４．１１ｋｇ）および水（１５２ｋｇ）をチャージした。アルコールｉ−６のトルエン／ＣＨ３ＣＮ／ヘプタン溶液（３９．２ｗｔ％の１４２ｋｇ）に続いて、アセトニトリル（８３ｋｇ）およびトルエン（１５３ｋｇ）を水溶液に加えた。生じた撹拌溶液を０から２℃に冷却した。ダイヤフラムポンプを用いて、ＴＥＭＰＯ（０．６９５ｋｇ）のトルエン溶液（２．８Ｌ）を反応混合物に加え、ラインおよびポンプをトルエン（約１Ｌ）でリンスした。
【０２０９】
空気駆動式テフロン（登録商標）内張ポンプを用いて、次亜塩素酸ナトリウム（１２０ｋｇ、９９Ｌ、１３．９ｗｔ％活性塩素）を、表面上方の添加ラインを介してベッセルにチャージした。続いて、次亜塩素酸ナトリウム溶液を７０分の期間にわたって反応混合物に加え、この間、バッチ温度を１０℃未満に維持した。添加ラインを水（１ｋｇ）でリンスしてバッチ内に流し入れた。バッチを＜５℃で２０分間エージングした。次亜塩素酸ナトリウムを１５℃に予め冷却する必要はないが、周囲温度（すなわち２３℃）を越えてはならない。添加速度を６０から７０分の範囲内に維持しなければならない。添加速度をより長くするとより多い量の出発材料および過剰酸化酸副産物が生じることとなるが、ラン時間をより短くすることは発熱活性によりおそらく可能ではないであろう。発熱は、漂白剤の添加を止めると直ぐに止むこととなる。この場合、４．０ＬＣＡＰ出発材料、１．３ＬＣＡＰ酸、および８７．４ＬＣＡＰアルデヒドが得られた。さらに０．０５ｅｑ．ＮａＯＣｌ（４ｋｇ）をチャージしてから急冷を始めたが、バッチを再びアッセイしなかった。
【０２１０】
バッチの温度を５℃でチェックし、続いて１Ｍ亜硫酸ナトリウム（全体を５．０４ｋｇのＮａ２ＳＯ３および３５ｋｇの水から調製し；実際に加えた量はこの溶液の僅か１８Ｌであった）を１０分の期間にわたって加え、バッチ温度を１０℃未満に維持した。バッチ温度を２０℃にセットし、５分間エージングした。バッチを、ヨウ素デンプン紙で試験し、オキシダントが存在しないことを確認した。
【０２１１】
二相混合物を１０分間混合してから、沈降させた。より下部の水性層を除去し、廃棄した。上部の有機カットを水（６８ｋｇ）で洗浄した。より下部の水性カットを再び除去し、廃棄した。有機層を再び、オキシダントについてヨウ素デンプン紙で試験した（５℃で良好な保持点−保持溶液）。
【０２１２】
双方のカットは非常に良好であり、かなり急速に沈降した。最終の有機カットは、１．３ＬＣＡＰ出発材料および９１．１ＬＣＡＰアルデヒドを示した。双方の水層に残存するＫＢｒおよび酸の副産物を除去した。
【０２１３】
続いて、有機溶液を真空下で蒸留して、最終容量を約１３５Ｌにし、この間、温度を＜４０℃に維持した（アルデヒドの収率に基づいて約３容量）。ＫＦは、以降のＨＷＥ工程について＜２％水であるべきである。この場合、ＫＦは８０μｇ／ｍＬであった。
【０２１４】
これにより、アルデヒドの３６．８ｗｔ％溶液が与えられ（全量１３１．７ｋｇ；３６．８ｗｔ％、ｉ−７について４８．５ｋｇアッセイ；８７％の収率（アニソールを内部標準とした１Ｈ−ＮＭＲアッセイ））、さらなる処理を待つ間、プラスチック内張スチールドラム内にて５℃の窒素下で保存した。以下に記載するＨＰＬＣ法を用いて、ｉ−６およびｉ−７の保持時間はそれぞれ約４．９分および５．５分であった。
【０２１５】
［ＨＰＬＣ法］
カラム：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，１００×４．６ｍｍ，２．７μｍ粒子サイズ；
カラム温度：４０℃；流量：１．５ｍＬ／分；検出：２１０ｎｍ，２５４ｎｍ；
移動相：Ａ：１ＬのＨ２Ｏ中１．０ｍｌの９９．９％リン酸（８５ｗ／ｗ％）Ｂ：ＭｅＣＮ
移動相勾配：
【表１１】
2015501319.tif 000055
【０２１６】
［工程６．ｉ−７アルデヒドの化合物ａ−４とのＨＷＥカップリングによるｉ−８の調製］
【化４３】
2015501319.tif 000056
【０２１７】
ホスホネートａ−４（６７．４ｋｇ、１．２ｅｑｕｉｖ．）および塩化リチウム（１９．９８ｋｇ、３ｅｑｕｉｖ．）に続いてアセトニトリル（１８８．６４ｋｇ）を１０００Ｌベッセルにチャージした。混合物を約５℃に冷却し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６０．９５ｋｇ、３ｅｑｕｉｖ．）を加え、この間、内部温度を２０℃未満に維持した。添加を完了すると、バッチを４０℃に温め、先の工程からのアルデヒドｉ−７のトルエン溶液を３時間にわたって加えてから、さらに３０分間エージングした。
【０２１８】
アルデヒド溶液を調製イリドに加えると、反応終了時に非常に低いレベル（約１ＬＣＡＰ）のアルドールディマー（ａｌｄｏｌ  ｄｉｍｍｅｒ）副産物Ｉ−２１が生じた。
【化４４】
2015501319.tif 000057
【０２１９】
バッチを０℃に冷却し、ＭＴＢＥ（１７７．６ｋｇ）に続いてクエン酸（１０％ａｑ．）を加えて、ｐＨを６．５から７に調整した（プラントにおいて６．８７を達成した）。ｐＨが行き過ぎた場合、２Ｎ  ＮａＯＨを首尾良く加えてｐＨを範囲内に戻すよう調整した。
【０２２０】
より下部の水性層を排出し、有機物を、１０％重炭酸ナトリウム溶液（２４０Ｌ）に続いて水（２×１２０Ｌ）で洗浄した。第１水性洗浄中に、水性層中の一部の固体が、過飽和のために沈殿するクエン酸塩であると識別された。これは、水性層と共に首尾良く排出された。
【０２２１】
最終溶液のアッセイ収率によれば、有機ストリーム中に７５．６７ｋｇ、９０．１％存在することが示された（なお、これはベッセル内のおよその容量に基づく推定値であった）。水性カットへのロスは＜０．１％であった。
【０２２２】
溶液を蒸留して最小容量とし（約１００Ｌ）、イソプロピルアルコール（６０４．５ｋｇ）を加えた。続いて溶液を蒸留して最終容量を６１６Ｌ（約７容量＋産物）とし、バッチを４９℃に加熱した。水（４６．２ｋｇ、０．６容量）を加え、バッチを３０分にわたって４０℃に冷却した。バッチをシードさせ、４０℃で１時間エージングし、シードベッドを形成させた。続いて水（４９２．８ｋｇ）をバッチに１時間にわたって加え、この間、バッチ温度を４０℃にてマリネした。バッチを４０℃で２時間エージングしてから、２時間にわたって１０℃に冷却し、この温度で一晩エージングした。エージング期間後、リカーのアッセイによってリカー濃度が２．９ｍｇ／ｍｌであることが示された。バッチを濾過し、ケーキを、１０℃に冷却した１：１のＩＰＡ：水（３８０Ｌ）で洗浄した。固体を真空内で４０℃にて乾燥した。続いて共ミリングして、７５．９３ｋｇの所望産物（１００ＬＣＡＰ、９９ｗｔ％、８９％収率）が与えられた。リカーおよび洗浄液へのロスは３％であった。
【０２２３】
このプロトコルが成功することにより、１．０１ｅｑｕｉｖのホスホネートａ−４のみを用いる反応を試みて、反応の終了時に９９％アッセイ収率となった。
【０２２４】
本実施例の工程２と同じＨＰＬＣ法を用いて、ａ−４およびｉ−８の保持時間はそれぞれ約３．８分および６．２分であった。
【０２２５】
実施例１の工程７から工程９に類似の手順を用いて、化合物ｉ−１１を化合物ｉ−８から調製することができる。
【配列表】
2015501319000001.app
【国際調査報告】
2015501319.tif 000083