(57)【要約】  本発明は、ＥＧＦＲ阻害剤およびメチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートを含む、がん治療における使用のための医薬組成物に関する。メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートは、ＥＧＦＲ阻害剤の抗がん効力を増強する。治療され得るがんには、乳がん、胃がん、胃腸がん、胆嚢がん、胆管がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、膵臓がん、頭頸部がん、食道がん、中皮腫がん、非小細胞肺がんを含めた肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、黒色腫、脳腫瘍、腺癌、食道がんおよび骨肉腫が含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
成分として、
ａ．メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートと、
ｂ．ＥＧＦＲ阻害剤と
を含む、がん治療における使用のための医薬組成物。
【請求項２】
前記組成物が５−フルオロウラシルと分離して投与するためのものである、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３】
前記組成物が５−フルオロウラシルの類似体、プロドラッグおよび／または代謝物と分離して投与するためのものである、請求項１または２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項４】
前記５−フルオロウラシルおよび／または前記５−フルオロウラシルの類似体、プロドラッグおよび／または代謝物がＦｄＵＭＰに代謝される、請求項２または３に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項５】
前記がん治療が腫瘍成長の阻害である、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項６】
前記がん治療が腫瘍体積の減少である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項７】
成分ｂ）が、表１に列挙されるＥＧＦＲ阻害剤、ならびにゲフィチニブ、エルロチニブおよびラパチニブ、ならびにポリクローナルもしくはモノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブおよびマツズマブまたはそれらの組み合わせから選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項８】
成分ｂ）がモノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤である、請求項７に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項９】
成分ｂ）がセツキシマブおよび／またはパニツムマブである、請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１０】
成分ａ）がメチレン−テトラヒドロフォレートである、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１１】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも２４時間前までに投与するためのものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１２】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも３６時間前までに投与するためのものである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１３】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも４８時間前までに投与するためのものである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１４】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも６時間で投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１５】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも２４時間で投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１６】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも４８時間で投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１７】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも１週間で投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１８】
成分ａ）が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも１２日で投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも１週間前までに投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも１週間で投与するためのものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、少なくとも３カ月の期間中、５−ＦＵおよび／またはその類似体、プロドラッグおよび／または代謝物から分離して投与するためのものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２２】
成分ａ）および成分ｂ）が異なる医薬組成物に製剤化される、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２３】
成分ａ）および成分ｂ）が共通の医薬組成物に製剤化される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２４】
成分ｂ）がセツキシマブであり、少なくとも５０ｍｇ／ｍ2、好ましくは少なくとも１００ｍｇ／ｍ2、より好ましくは少なくとも２５０ｍｇ／ｍ2、４００ｍｇ／ｍ2または５００ｍｇ／ｍ2、および最大で１０００ｍｇ／ｍ2の量で投与するためのものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２５】
成分ａ）が、少なくとも１０ｍｇ／ｍ2、好ましくは少なくとも２０ｍｇ／ｍ2、より好ましくは少なくとも５０ｍｇ／ｍ2、最も好ましくは少なくとも１００ｍｇ／ｍ2、２００ｍｇ／ｍ2または５００ｍｇ／ｍ2、および最大で５ｇ／ｍ2の量で投与するためのものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２６】
前記がんが、乳がん、胃がん、胃腸がん、胆嚢がん、胆管がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、膵臓がん、頭頸部がん、食道がん、中皮腫がん、非小細胞肺がんを含めた肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、黒色腫、脳腫瘍、腺癌、食道がんおよび骨肉腫から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、がんを治療するための、ＥＧＦＲ阻害剤および還元型フォレート（folate）の使用に関する。
【発明の背景】
【０００２】
がんは、世界最大の健康問題の１つである。がんは、世界的な主な死因のうちの１つであり、心血管疾患、糖尿病、慢性呼吸器疾患とともに、がんは世界的に、全死亡の６０％超の原因となる。２００８年においては、世界的に、約１，２７０万の新規のがん症例および７６０万のがんによる死亡が生じた。
【０００３】
大腸がん（ＣＲＣ）は、世界的に見て、男性で３番目、女性で２番目に多いがんである。症例のほぼ６０％は、先進地域で生じる。発生率は世界的に見て変動するが、全体的に、女性よりも男性で実質的に高い。６００，０００を超える人々がこの疾患が原因で毎年死亡し、これはすべてのがん関連死の８％を占める。米国だけで、１５０，０００を超える新規の症例が毎年診断される。結腸がんは、結腸（大腸の最長部分）組織中に生じるがんと定義される。大抵の結腸がんは、腺癌（粘液および他の液体を産生および放出する細胞から始まるがん）である。
【０００４】
結腸がんは十分治療可能であり、腸に限局する場合は、治癒可能な疾患であることが多い。手術は治療の主な形態であり、約５０％の患者を治癒させる。手術後の再発は重要な問題であり、最終的な死因となることが多い。大腸がんの症例の約半分は転移を有するか、転移を有する疾患に進展する。こうした場合、化学療法が唯一の治療選択であり、患者の予後がかなり悪いことが多い。同様に、他の形態のがんに対する治療レジメンは、すべての患者を完全に回復させるとは限らず、多くのがんは再発する、および／または転移を有する形態に進展する。
【０００５】
したがって、大腸がんだけでなく、多くの他のがん適応、例としては、たとえば乳がん、胃がん、胃腸がん、胆嚢がん、胆管がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、膵臓がん、頭頸部がん、食道がん、中皮腫がん、非小細胞肺がんを含めた肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、黒色腫、脳腫瘍、腺癌、食道がんおよび骨肉腫との闘病のために、新規かつ改善された薬物ベースの療法が大いに必要である。
【０００６】
上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）は、刺激を受けた時に、ＭＡＰＫ、ＡｋｔおよびＪＮＫ経路を含めたいくつかのシグナル伝達経路を活性化するチロシンキナーゼである。こうした経路に関与するタンパク質の活性化は、最終的にＤＮＡ合成および細胞増殖につながり、ＥＧＦＲ経路は、ＣＲＣを含めた多種多様のがんで活性化されることが示されている。このように、ＥＧＦＲは抗がん療法の魅力的な標的である。したがって、がん治療で使用するために、いくつかのＥＧＦＲ阻害剤が開発されている。これらには、モノクローナル抗体、たとえばセツキシマブおよびパニツムマブならびに最近開発されたザルツムマブ、ニモツズマブおよびマツズマブ、ならびに小分子薬物、たとえばゲフィチニブ、エルロチニブおよびラパチニブが含まれる。一般に、モノクローナル抗体はＥＧＦＲの細胞外リガンド結合部位に結合するが、一方で小分子は、ＥＧＦＲの細胞内チロシンキナーゼ部分に結合し、その部分を阻害する。
【０００７】
セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））およびパニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））は、モノクローナル抗体かつＥＧＦＲ阻害剤である。これらは、ＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合して、天然リガンドの結合および受容体の活性化を妨げることによって、阻害を及ぼす。セツキシマブは、ＩｇＧ１アイソタイプのキメラのマウス／ヒトモノクローナル抗体であるが、一方でパニツムマブは、ＩｇＧ２アイソタイプの完全ヒト抗体である。
【０００８】
セツキシマブは、転移を有する大腸がん（ｍＣＲＣ）の二次および三次治療用に現在使用されており、この場合は、腫瘍がＥＧＦＲおよび野生型ＫＲＡＳ（カーステンラス肉腫ウイルスがん遺伝子（Kirsten ras sarcoma viral oncogene））を発現している。ＫＲＡＳは、ＥＧＦＲの下流のグアノシン三リン酸−（ＧＴＰ−）結合タンパク質であって、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路の中心的構成要素あり、ＭＡＰＫ経路はＥＧＦＲのシグナルカスケードの構成要素である。ＫＲＡＳの変異は、このシグナル伝達経路のＥＧＦＲ非依存的な恒常的活性化につながり、ＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブおよびパニツムマブからの応答および利益の欠如を伴う。大腸がんのおおよそ４０％は、ＫＲＡＳ遺伝子の変異を特徴とする。こうした変異の約９０％は、ＫＲＡＳ遺伝子のエクソン２のコドン１２および１３に生じ、残りの変異は、コドン６１および１４６に生じる（おおよそ５％ずつ）。
【０００９】
セツキシマブはイリノテカン化学療法に対する後天性抵抗性を克服するのに有用であることが示されているため、イリノテカンに不応性（抵抗性）のｍＣＲＣの患者において、イリノテカンと組み合わせて使用される。セツキシマブは、不成功に終わったイリノテカンおよびオキサリプラチンベースのレジメンの後にｍＣＲＣの患者において、またはイリノテカンベースのレジメンに不耐性の患者において、単一薬剤としても使用される。
【００１０】
さらに、セツキシマブは、放射線療法と組み合わせてまたは白金ベースの療法とともにもしくはその療法の後のいずれかで、様々なステージの頭および頚の扁平上皮がんの患者を治療するために使用される。
【００１１】
パニツムマブは、非変異性ＫＲＡＳの患者において、すなわち他の以前の治療が不成功に終わった場合に、ＥＧＦＲを発現する難治性の転移を有する大腸がんを治療するために使用される。
【００１２】
ＥＧＦＲ阻害剤は、抗がん薬として最初はかなり有望であったし、実際に依然として有益な用途があるが、ＥＧＦＲ阻害剤はいくつかの欠点も伴う。ナイーブ状況（すなわち前治療がない患者）の治療で単一薬剤として使用される場合、セツキシマブの効力は乏しく、患者の生存についていかなる実質的な改善ももたらさなかった。また、たとえば、ＦＯＬＦＩＲＩ（５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリンおよびイリノテカン）、ＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ、ロイコボリンおよびオキサリプラチン）またはＣＡＰＯＸ（カペシタビンおよびオキサリプラチン）との様々な併用療法で使用される場合、セツキシマブは、ＦＯＬＦＩＲＩと組み合わせた場合に生存時間を改善したが、他の組み合わせについては、奏効率または生存時間の改善は不明であった（総説として、Ｇａｒｒｅｔｈ  ａｎｄ  Ｅｎｇ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１１）、１１巻、９３７〜９４９頁を参照されたい）。
【００１３】
セツキシマブ治療の利益は、化学療法不応性の状況、すなわち他の治療が失敗した場合でより明らかであり、この場合は、セツキシマブは、単一薬剤として使用される場合とイリノテカンと組み合わせて使用される場合の両方で奏効率を改善することが示されている（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２００４）、３５１巻、３３７〜３４５頁；Ｊｏｎｋｅｒら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（２００７）、３５７巻、２０４０〜２０４８頁）。この状況での生存の改善は中程度のもの、すなわち数カ月であることが示された。
【００１４】
セツキシマブ治療は、いくつかの重大なおよびいくつかの有害な副作用を伴い、副作用には重篤なアレルギー性急性輸液反応、心肺停止、皮膚毒性および低マグネシウム血症が含まれる（ＧａｒｒｅｔｈおよびＥｎｇ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１１）、１１巻、９３７〜９４９頁；Ｌｅｎｚ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（２００７）、１巻、７７〜９１頁）。セツキシマブから最も頻繁に観察される毒性形態は発疹であり、大部分の患者は座瘡形態の発疹を生じ、これは著しい心理的影響を患者に与え得る。他のよくある副作用には、そう痒、爪の変化、頭痛、下痢、感染症および嘔吐が含まれる。同様の副作用は、パニツムマブ治療に関して観察される。
【００１５】
したがって、がんに対する新規の治療レジメンを見出す必要、および効力を改善し、ＥＧＦＲ阻害剤、たとえば、セツキシマブおよびパニツムマブの副作用を低減させる必要が依然として存在する。
【００１６】
フォレートは、細胞分裂および細胞成長に必須の内在性物質である。細胞内の還元型フォレートは、少なくとも６つの相互変換可能な形態のプールとして存在する。フォレートは、たとえばヌクレオチド代謝に関与し、様々な酵素、たとえばチミジル酸シンターゼ（ＴＳ）およびジヒドロフォレートレダクターゼ（ＤＨＦＲ）の基質および／または補酵素としての機能を果たす。フォレートメチレン−テトラヒドロフォレート（メチレン−ＴＨＦ）は、たとえば、ＴＳによって行われるｄＵＭＰとｄＵＴＰの間の転換において、一炭素供与体として働く。それによって、メチレン−ＴＨＦはチミジン合成に寄与し、ひいては、ＤＮＡ合成および細胞成長に寄与する。
【００１７】
発がんにおけるフォレートの役割は複雑である。実験データによって、発がん中のフォレート補給のタイミングが重要であることが示唆されている（Ｕｌｒｉｃｈ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ（２００６）、１５巻、１８９〜９３頁；Ｋｉｍ、Ｇｕｔ（２００６）、５５巻、１３８７〜１３８９頁）。前腫瘍性病変（たとえば結腸の異常腺窩巣またはポリープ）が存在する前のフォレートレベルの増大は、腫瘍の発生を予防することができるが、フォレート補給は、一旦前腫瘍性病変が存在すれば、がんの進行を増進すると考えられている。したがってフォレートは、予防的に使用する場合はがんの発生を阻害すると考えられているが、一旦がんが発生し始めると、がんの進行を増進すると考えられている。フォレートは、ヌクレオチド合成および細胞成長に関与すると知られているので、フォレートがそうしたがん促進効果を有することが予想されている。さらに、がん細胞は頻繁にフォレート受容体をアップレギュレートして、がん細胞のヌクレオチド要求の高まりに応え、ＤＮＡ合成および成長を支え、それ故、フォレート投与に伴い腫瘍成長促進リスクの増大が予想される（Ｕｌｒｉｃｈ、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．（２００７）、８６巻、２７１〜２７３頁）。
【００１８】
したがって、フォレート代謝拮抗薬、たとえばメトトレキサートおよびペメトレキセドは、フォレートおよびヌクレオチド代謝に関与する１種以上の酵素、たとえばＴＳおよび／またはＤＨＦＲを阻害できることにより、がんを治療するための化学療法剤として使用されている。フルオロピリミジン、たとえば５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、ＴＳを阻害できることにより、化学療法剤として同様に使用されている。しかし、フォレート代謝拮抗薬およびフルオロピリミジンは細胞傷害性であり、多くの患者にとって、重篤な副作用を伴う可能性がある。
【００１９】
葉酸およびフォレートは、たとえばロイコボリン（フォリン酸としても知られる）、レボロイコボリンおよびメチレン−ＴＨＦの形で、がん患者に化学療法剤と同時投与されている。フォレートは、たとえばメトトレキサートに対するレスキュー剤として使用されており、これは、メトトレキサートおよびマルチターゲティング抗フォレート治療の有毒な副作用を低減させるためである（Ｂｏｒｓｉら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １９９０、７巻、３４７〜３６３頁；ＥＰ１６９９４６２Ｂ１）。
【００２０】
葉酸、ロイコボリンおよびメチレン−ＴＨＦはまた、５−ＦＵと組み合わせて使用されており、これは５−ＦＵの抗腫瘍効果を増強するためである。
【００２１】
ＵＳ５３７６６５８、ＵＳ２００７／００９９８６６Ａ１およびＷＯ２００７／０６４９６８は、５−ＦＵの細胞傷害性を増強し、それにより５−ＦＵの化学療法的効果を増強するための、テトラヒドロフォレート（ＴＨＦ）および／またはメチレン−ＴＨＦの使用を開示している。
【００２２】
ＵＳ２００７／０２８０９４４Ａ１は、メチレン−ＴＨＦが５−ＦＵの効力を増大させるだけでなく、患者に対する５−ＦＵの毒性を低減させるという発見に基づいて、がんを治療するための、５−ＦＵと組み合わせたメチレン−ＴＨＦの使用を開示している。さらに、少なくとも１つの追加的な制がん剤が患者に投与される。たとえば、１つの追加的な制がん剤は抗ＥＧＦＲ抗体、たとえばセツキシマブでもよい。
【００２３】
ＷＯ２００８／１０９３４９Ａ１は、がんを治療するための治療レジメンを開示しており、この治療レジメンは、５−ＦＵおよびメチレン−ＴＨＦを一定日数患者に投与すること、およびカペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）として市販されている）を、その間の日に患者に投与することを含む。カペシタビンは５−ＦＵに類似しているが、経口的に患者に投与される。特定の態様では、治療は、化学療法剤、たとえばセツキシマブの同時投与をさらに含む。
【００２４】
ＵＳ２０１１／００５２５８１Ａ１は、セツキシマブおよび任意に５−ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたピコプラチンを投与することによって転移を有する大腸がんを治療するための方法を開示している。
【００２５】
したがって、セツキシマブは、５−ＦＵおよびフォレート、たとえばロイコボリンおよびメチレン−ＴＨＦと併せて使用されている。これらの治療レジメンでは、フォレートは５−ＦＵの効果を増強するために使用されている。
【発明の概要】
【００２６】
本発明者らは、驚いたことに、フォレート、たとえばメチレン−ＴＨＦが、５−ＦＵがなくても、ＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブの抗がん効果を増強することを発見した。すなわち、こうしたフォレートは、セツキシマブ治療の効力を増大させる固有の能力を有するように思われる。この特性の背景にある機序は解明されていないが、フォレート自体の固有の予期しない抗がん特性、またはフォレートとＥＧＦＲ受容体および／もしくはＥＧＦＲ阻害剤の間の相乗的な機序によることのいずれかに起因する可能性がある。本発明は、したがって、がんを治療するための、５−ＦＵが存在しないかまたは５−ＦＵから分離した、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との新規な組み合わせを実証する。
【００２７】
５−ＦＵなしの、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との新規な組み合わせは、単一薬剤としてＥＧＦＲ阻害剤を使用するより有効であり、かつ５−ＦＵを含む治療レジメンと比較して副作用が少ないがん治療レジメンを提供する。そうした治療レジメンは、たとえば、がんの再発を予防するのに有用であってもよい。さらに、そうした治療は、たとえば患者が５−ＦＵに耐容性を示さないために５−ＦＵを使用することができない場合に有用である。
【００２８】
一側面では、本発明は、メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートおよびＥＧＦＲ阻害剤を成分として含む、がん治療における使用のための医薬組成物を提供する。
【００２９】
一態様では、医薬組成物は、５−フルオロウラシルと分離して投与するためのものである。さらなる態様では、医薬組成物は、５−フルオロウラシルの類似体、プロドラッグおよび／またはその代謝物と分離して投与するためのものである。さらに別の態様では、前記５−フルオロウラシルならびに／または５−フルオロウラシルの前記類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物は、ＦｄＵＭＰに代謝される。
【００３０】
医薬組成物は、腫瘍成長を阻害するために、または腫瘍体積を減少させるために使用してもよい。腫瘍は、固形または非固形腫瘍でもよく、好ましくは固形腫瘍でもよい。
【００３１】
一態様では、ＥＧＦＲ阻害剤は、ゲフィチニブ、エルロチニブおよびラパチニブならびにポリクローナルもしくはモノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブおよびマツズマブまたはそれらの組み合わせから選択される。本発明で使用してもよい他のＥＧＦＲ阻害剤は、表１に列挙される。好ましい態様では、ＥＧＦＲ阻害剤は、モノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブおよび／またはパニツムマブである。
【００３２】
一態様では、メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートは、メチレン−テトラヒドロフォレート、たとえば［６Ｒ］−メチル−テトラヒドロフォレートである。
【００３３】
一態様では、医薬組成物のメチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートは、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも２４時間前までに投与するためのものである。他の態様では、これらは、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも３６時間または４８時間前までに投与するためのものである。
【００３４】
他の態様では、医薬組成物のメチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートは、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから、早くとも６時間、２４時間、４８時間、１週間または１２日で投与するためのものである。
【００３５】
さらに他の態様では、医薬組成物は、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の投与前、遅くとも１週間前までに投与するためのもの、ならびに／または５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を投与してから早くとも１週間で投与するためのである。
【００３６】
一態様では、本発明による医薬組成物は、少なくとも３カ月の期間中、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物から分離して投与するためのものである。
【００３７】
医薬組成物のメチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートおよびＥＧＦＲ阻害剤は、異なる医薬組成物または共通の医薬組成物に製剤化されてもよい。
【００３８】
一態様では、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブであり、少なくとも５０ｍｇ／ｍ２、好ましくは少なくとも１００ｍｇ／ｍ2、より好ましくは少なくとも２５０ｍｇ／ｍ2、４００ｍｇ／ｍ2または５００ｍｇ／ｍ2、および最大で１０００ｍｇ／ｍ2の量で投与される。
【００３９】
メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートは、少なくとも１０ｍｇ／ｍ2、好ましくは少なくとも２０ｍｇ／ｍ2、より好ましくは少なくとも５０ｍｇ／ｍ2、最も好ましくは少なくとも１００ｍｇ／ｍ2、２００ｍｇ／ｍ2または５００ｍｇ／ｍ2、および最大で５ｇ／ｍ2の量で投与するためのものであってもよい。
【００４０】
異なる態様では、メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレートは、１日１回もしくは２回、２日もしくは３日毎、１週１回から２回、または２週もしくは３週毎に１回投与するためのものである。ＥＧＦＲ阻害剤は、１日１回、２日もしくは３日毎、１週１回から２回、または２週もしくは３週毎に１回投与するためのものであってもよい。
【００４１】
本発明の医薬組成物は、乳がん、胃がん、胃腸がん、胆嚢がん、胆管がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、膵臓がん、頭頸部がん、食道がん、中皮腫がん、非小細胞肺がんを含めた肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、黒色腫、脳腫瘍、腺癌、食道がんおよび骨肉腫から選択されるがんを治療するためのものであってもよい。
【００４２】
一側面では、本発明は、医薬として活性な成分として、ａ）メチレン−テトラヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートまたはメチル−テトラヒドロフォレート、およびｂ）ＥＧＦＲ阻害剤を含むキットを提供する。ＥＧＦＲ阻害剤は、ゲフィチニブ、エルロチニブおよび抗体のＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブおよびマツズマブ、または表１に列挙されるＥＧＦＲ阻害剤から選択されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、フォレートがＤＮＡ合成、修復およびメチル化に影響を与える主な代謝経路を示す。
【図２】図２は、例１の動物群における経時的な腫瘍体積の中央値の進展を示し、動物群には、それぞれ、ビヒクル、セツキシマブ、セツキシマブとメチレン−ＴＨＦ、セツキシマブと５−ＦＵ、およびセツキシマブと５−ＦＵとメチレン−ＴＨＦを与えた。
【図３】図３は、例１のそれぞれの群の動物について、例１で定義されたエンドポイントまでの時間を表示する、カプランマイヤープロットを示す。
【図４】図４は、例１のそれぞれの動物群における経時的な体重の中央値の進展を示す。
【詳細な説明】
【００４４】
本発明につながる研究活動において、本発明者らは、驚いたことに、メチレンテトラヒドロフォレート（メチレン−ＴＨＦ）は、５−ＦＵから分離して使用する場合、抗がん薬としてのセツキシマブの効力を増強する能力を有することを発見した（例１、図２および３を参照されたい）。さらに、メチレン−ＴＨＦおよびセツキシマブを投与した時の有毒な副作用が、メチレン−ＴＨＦおよびセツキシマブを５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と組み合わせて投与した時と比較して低減することを発見した（例１、図４を参照されたい）。
【００４５】
こうした発見から、本発明者らは、がんを治療するための、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物と分離したまたはそれらから区別した、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との新規な組み合わせを提供するに至った。５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物なしの、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との新規な組み合わせは、単一薬剤としてＥＧＦＲ阻害剤を使用するより有効であり、かつ５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を含む治療レジメンと比較して副作用が少ないがん治療レジメンを提供する。さらにそうした治療は、たとえば患者が５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物に耐容性を示さないためにこれらを使用することができない場合に有用である。
【００４６】
上で記載したように、たとえばロイコボリン（フォリン酸）、テトラヒドロフォレート（ＴＨＦ）およびメチレン−ＴＨＦの形のフォレートは、細胞分裂および細胞成長に必須の内在性物質である。がん療法については、これらは、メトトレキサートおよびマルチターゲティングフォレート代謝拮抗薬治療の重篤な副作用を緩和するために（（Ｂｏｒｓｉら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １９９０、７巻、３４７〜３６３頁；ＥＰ１６９９４６２Ｂ１）、ならびに／または５−ＦＵおよび類似物質、たとえばカペシタビンの抗腫瘍効果を増強するために使用されている。
【００４７】
食餌性フォレートは、２種の補給形態、葉酸およびロイコボリンで一般に利用可能である。葉酸の経口投与は、小腸での脱抱合ステップおよび肝臓での還元型フォレートへの還元ステップを必要とし、これは、体の細胞への取り込みを可能にするためである。一方で、ロイコボリン（フォリン酸または５−ホルミルテトラヒドロフォレートとも示される）の経口投与は、こうした脱抱合および還元ステップをバイパスする。ロイコボリンは、葉酸より代謝的に活性なフォレートの形態であるように思われ、還元型フォレートとして、血液脳関門を直接的に通過する可能性がある。葉酸と同様に、ロイコボリンは、代謝的に活性になるにはメチル化されなければならない。葉酸のメチル化ステップは、十分なレベルのセリンおよび機能的なセリンヒドロキシル−メチルトランスフェラーゼ（ＳＨＭＴ）酵素を必要とする。還元型フォレートメチレン−ＴＨＦおよびメチル−テトラヒドロフォレート（メチル−ＴＨＦ）の補給には、このメチル化ステップをバイパスするという利点がある。
【００４８】
図１は、フォレートおよびホモシステインがＤＮＡ合成、修復およびメチル化に影響を与える主な代謝経路を概説する。酵素ＭＴＨＦＲは、ＤＮＡメチル化およびＤＮＡ合成経路の平衡を保って、正常な恒常性を維持する。（ＲＦＣ＝還元型フォレートキャリアー；ＦＰＧＳ＝ホリルポリグルタメートシンターゼ；ＧＧＨ＝γ−グルタミルヒドロラーゼ；ＴＳ＝チミジル酸シンターゼ；ＴＨＦ＝テトラヒドロフォレート；ＭＴＨＦＲ＝メチレン−テトラヒドロフォレートレダクターゼ）；ＭＳ＝メチオニンシンターゼ；ＳＡＭ＝Ｓ−アデノシルメチオニン；ＤＰＤ＝ジヒドロ−ピリミジンデヒドロゲナーゼ；Ｂ２＝リボフラビン；Ｂ６＝ピリドキシン；Ｂ１２＝コバラミン）。
【００４９】
還元型フォレートキャリアー、ＲＦＣ−１は、還元型フォレートを細胞へ入れる主要なトランスポーターである（Ｓｉｒｏｔｎａｋ  ＦＭ、Ｔｏｌｎｅｒ  Ｂ、「Ｃａｒｒｉｅｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｆｏｌａｔｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ」；Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｎｕｔｒ  １９９９；１９：９１〜１２２）。細胞内で、還元型フォレートモノグルタメートは、酵素ホリルポリグルタメートシンターゼ（ＦＰＧＳ）によってポリグルタメートに転換される（Ｓｈａｎｅ  Ｂ、「Ｆｏｌｙｌｐｏｌｙｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｎｅ−ｃａｒｂｏｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」；Ｖｉｔａｍ  Ｈｏｒｍ  １９８９；４５：２６３〜３３５）。テトラヒドロフォレートのポリグルタメート型形態は、次いで、さらに５，１０−メチレンテトラヒドロフォレート（メチレン−ＴＨＦ）に転換され、メチレン−ＴＨＦは、ｄＵＭＰからｄＴＭＰへの転換においてメチル供与体として必要とされる（Ｓｐｅａｒｓ  ＣＰら、「Ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ−５−ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ−ｆｏｌａｔｅ  ｔｅｒｎａｒｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ」；Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９８９；３８：２９８５〜９３；Ｓｐｅａｒｓ  ＣＰら「Ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｕｍｏｒｓ  ａｎｄ  ｎｏｒｍａｌ  ｌｉｖｅｒ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｇｉｖｅｎ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９８４；４４：４１４４〜５０）。この転換は、チミジル酸シンターゼ（ＴＳ）によって触媒される。メチレン−ＴＨＦは、代謝的に活性な５−メチルテトラヒドロフォレート（メチル−ＴＨＦ）の前駆物質でもあり、メチル−ＴＨＦは、ホモシステインの再メチル化に利用される。メチレン−ＴＨＦからメチル−ＴＨＦへの転換は、酵素メチレンテトラヒドロフォレートレダクターゼ（ＭＴＨＦＲ）に依存している。
【００５０】
酵素γ−グルタミルヒドロラーゼ（ＧＧＨ）は、細胞間および細胞内のポリグルタメートの分解を触媒する（Ｇａｌｉｖａｎ  Ｊら、「Ｇｌｕｔａｍｙｌ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ａｎｄ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ」、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０００；８５：２０７〜１５）。
【００５１】
示したように、ＤＮＡ合成およびメチル化経路が正しく機能するには、フォレートに加えて、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）およびコバラミン（ビタミンＢ１２）が必要とされる。これらの代謝物のいずれかのレベルが不十分であると、その結果として、ホモシステインレベルが高まる。ピリドキシン欠乏はまた、フリーラジカルおよびアルキル化剤損傷の解毒に必要とされる優れた抗酸化物質のグルタチオンを産生する細胞の能力を害する。
【００５２】
図１に示すように、メチレン−ＴＨＦは、チミジル酸シンターゼ（ＴＳ）がチミジル酸合成で使用するための、正常な細胞内葉酸代謝物である。メチレン−ＴＨＦのポリグルタメートに関しても同じことが当てはまる。メチレン−ＴＨＦはまた、メチレン−テトラヒドロフォレートレダクターゼ、セリンヒドロキシメチラーゼおよびＣｌ−テトラヒドロフォレートシンターゼおよびメチレン−テトラヒドロフォレートデヒドロゲナーゼを含めたいくつかの他の酵素によって使用される。メチレン−ＴＨＦを使用するこうした相互転換は、プリン合成、アミノ酸合成および脂質代謝に必須である。したがって、メチレン−ＴＨＦは、少なくとも４種の異なる酵素の基質として、代謝の分枝点に位置する（Ｓｐｅａｒｓら；米国特許第５，３７６，６５８号）。
【００５３】
したがって、メチレン−ＴＨＦは、酵素チミジル酸シンターゼ（ＴＳ）によって行われるｄＵＭＰとｄＵＴＰの間の転換において一炭素供与体として働くことによって細胞成長を拡大することが従前から知られているので、がん促進効果を有すると予想されている。
【００５４】
上で述べたように、以前の研究によって、フォレート状態は、がん化学療法の毒性および効力を調節する可能性があることが示された。このように、葉酸およびロイコボリンは、抗がん剤、たとえばメトトレキサートと組み合わせてその細胞傷害性効果を軽減するために、および５−ＦＵと組み合わせてその抗がん効果を増大させるために、使用されている。
【００５５】
葉酸、ロイコボリンおよびそれらの代謝物のメチレン−ＴＨＦは、このように、５−ＦＵの化学療法的効果を増強することが知られている。抗がん効力の増強はメチレン−ＴＨＦによって達成され、メチレン−ＴＨＦは、チミジル酸シンターゼ（ＴＳ）に対する５−ＦＵの阻害効果を強化する。メチレン−ＴＨＦは、ＴＳおよび５−ＦＵの代謝物であるＦｄＵＭＰと三元複合体を形成し、この複合体形成によりＦｄＵＭＰのＴＳへの結合が強化されることによって、この阻害の増大を惹起する。したがって、メチレン−ＴＨＦがない場合は、ＦｄＵＭＰは、非常に弱くＴＳに結合する。しかし、大過剰のメチレン−ＴＨＦの存在下では、低レベルのＦｄＵＭＰでさえＴＳに結合する。過剰なメチル−ＴＨＦの存在下では、ＴＳとメチル−ＴＨＦとＦｄＵＭＰとの間の三元複合体は安定であり、有意なＴＳ活性は生じない。この有効なＴＳ阻害は、チミジンが少ない細胞状態、ＤＮＡへのウラシルの誤取り込みの増大およびＤＮＡへのウラシルの誤取り込みの増大、ならびに腫瘍細胞成長および細胞死の阻害につながる。メチレン−ＴＨＦは葉酸またはロイコボリン代謝の活性物質であるので、この内因性フォレートの使用は、葉酸またはロイコボリンの使用よりもはるかに好都合である。
【００５６】
本発明に関しては、５−ＦＵに類似の物質はＦｄＵＭＰに代謝される物質である。例としては、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、フロクスウリジン（５−フルオロデオキシウリジン、ＦＵＤＲ）、テガフール（Ｔｅｙｓｕｎｏ（商標）、Ｆｔｏｒａｆｕｒ（登録商標）、ＵＦＴ）および５’−デオキシフルオロウリジン（Ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ（商標））が挙げられる。
【００５７】
このように、メチレン−ＴＨＦは、５−ＦＵとの組み合わせで、ＦｄＵＭＰのＴＳへの結合を強化することにより抗がん効果を有することが以前に示された。５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物の同時投与なしでメチレン−ＴＨＦを投与する場合は、この機序は生じないと思われ、そのため、メチレン−ＴＨＦがいかなる抗がん効果にも寄与しないであろうことが予想されるはずである。メチレン−ＴＨＦは、ＥＧＦＲ阻害剤のセツキシマブとのみ一緒に使用し、５−ＦＵと一緒に使用しない場合に、腫瘍阻害活性の増大に寄与するという本発明者らの発見は、したがって、非常に驚くべきことである（例１を参照されたい）。
【００５８】
したがって、本発明に関しては、メチレン−ＴＨＦまたはメチレン−ＴＨＦのプロドラッグもしくはその代謝物が、ＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブと組み合わせて、がん治療のために提供される。一態様では、ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦまたはメチレン−ＴＨＦのプロドラッグまたはその代謝物との組み合わせが、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物と分離してがんを治療するために提供される。
【００５９】
本発明に関しては、ＥＧＦＲ阻害剤は、小分子ＥＧＦＲ阻害剤またはモノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤であってもよい。小分子ＥＧＦＲ阻害剤の例としては、ゲフィチニブ、エルロチニブおよびラパチニブが挙げられる。モノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤の例としては、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブおよびマツズマブが挙げられる。現在開発中のＥＧＦＲ阻害剤は、表１に列挙される。好ましくは、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブまたはパニツムマブである。
【００６０】
本発明に関しては、メチレン−ＴＨＦ、テトラヒドロフォレート（ＴＨＦ）またはメチル−テトラヒドロフォレート（メチル−ＴＨＦ）は、がん治療のために、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせて使用してもよい。メチレン−ＴＨＦは、ＴＨＦと平衡状態で存在することが一般に知られているフォレート代謝物である（たとえば図１を参照されたい）。メチレン−ＴＨＦは、酵素メチレンテトラヒドロフォレートレダクターゼ（ＭＴＨＦＲ）によってメチル−ＴＨＦに転換される。さらにメチル−ＴＨＦは、ＴＨＦおよびメチレン−ＴＨＦの前駆物質である。
【表１】
2015504080.tif 000002
2015504080.tif 000003
2015504080.tif 000004
2015504080.tif 000005
【００６１】
メチレン−ＴＨＦの別の表現は、たとえば５，１０−メチレンテトラヒドロフォレート、５，１０−メチレン−ＴＨＦ、ＣＨ2ＦＨ4および５，１０−ＣＨ2−ＦＨ4である。メチレン−ＴＨＦは、たとえば、そのＣａまたはＮａ2塩の形で、または様々な硫酸塩の形で使用してもよい。さらに本発明によれば、遊離酸、すなわち５，１０−メチレン−テトラヒドロ葉酸または５，１０−メチレンテトラヒドロプテロイルグルタミン酸（５，１０−ＣＨｚ−Ｈ4−ＰｔｅＧｌｕ）を使用してもよい。
【００６２】
メチル−ＴＨＦの別の表現は、たとえば５−メチル−ＴＨＦ、ＣＨ3Ｈ4Ｆおよび５−ＣＨ3−Ｈ4Ｆである。メチル−ＴＨＦは、たとえば、そのＣａまたはＮａ2塩の形で、または様々な硫酸塩の形で使用してもよい。さらに本発明によれば、遊離酸、すなわち５−メチル−テトラヒドロ葉酸またはメチルテトラヒドロプテロイル−グルタミン酸（５−ＣＨ3−Ｈ4ＰｔｅＧｌｕ）を使用してもよい。
【００６３】
ＴＨＦの別の表現は、たとえばＨ4Ｆ、ＦＨ4および５，６，７，８−テトラヒドロフォレートである。ＴＨＦは、たとえば、そのＣａまたはＮａ2塩の形で、または様々な硫酸塩の形で使用してもよい。さらに本発明によれば、遊離酸、すなわちテトラヒドロ葉酸またはテトラヒドロプテロイル−グルタミン酸（Ｈ4ＰｔｅＧｌｕ）を使用してもよい。
【００６４】
ＴＨＦ、メチレン−ＴＨＦおよびメチル−ＴＨＦは、いくつかの異性体形態で存在してもよいが、それぞれ生物学的に活性なＴＨＦ、メチレン−ＴＨＦおよびメチル−ＴＨＦの異性体が、本発明によれば好ましい。ここで使用する場合、「生物学的に活性な異性体」は、ＴＨＦ、メチレン−ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦの内因性異性体、すなわち体内の酵素系に適合する天然の形態に関する。ＴＨＦの天然の生物学的に活性な異性体の１つは、［６Ｓ］−テトラヒドロ葉酸とも示される［６Ｓ］−ＴＨＦである。メチレン−ＴＨＦの天然の生物学的に活性な異性体の１つは、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（Ｍｏｄｕｆｏｌｉｎ（登録商標））とも示される［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦである。およびメチル−ＴＨＦの天然の生物学的に活性な異性体の１つは、［６Ｓ］−５−メチルテトラヒドロ葉酸とも示される［６Ｓ］−メチル−ＴＨＦである。
【００６５】
メチレン−ＴＨＦは、異なる立体異性体形態で存在する。ラセミ混合物は、［６Ｒ，６Ｓ］−メチレン−ＴＨＦ（約５０％の６Ｒ−配置および５０％の６Ｓ−配置）を含む。しかし、［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦアイソフォーム（約１００％の６Ｒ−配置）が、生物学的に活性な異性体である。本発明に関しては、［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦまたは［６Ｒ，６Ｓ］−メチレン−ＴＨＦを使用してもよい。生物学的に活性なアイソフォーム、［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦが、より有効な抗腫瘍効果を有するので、好ましい。天然および合成のメチレン−ＴＨＦまたは［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦを使用してもよい。生物学的に活性な異性体の重量部が高ければ高いほど、より良い結果が達成される。
【００６６】
本発明によって使用するための［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦは、９０％以上の純度を適切には有する。９７％以上の純度が好ましい。生物学的に活性な異性体の重量部が高ければ高いほど、より良い安定性が達成される。低純度では、ＴＨＦ、メチレン−ＴＨＦおよびメチル−ＴＨＦは非常に酸化を受けやすいので、不安定である。
【００６７】
一態様では、ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとの組み合わせまたは組成物は、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を含まない。換言すれば、前記ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとの組み合わせまたは組成物は、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物と分離して、またはそれらから区別して投与するために提供される。一態様では、ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとの組み合わせまたは組成物は、他の化学療法剤と分離して、またはそれから区別してがんを治療するために提供される。換言すれば、ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとの組み合わせまたは組成物は、その態様では、他の抗がん剤と同時にまたは共に投与されない。
【００６８】
一態様では、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物、または、そうした態様では、任意の他の抗がん剤の投与前、遅くとも３週間または２週間または７日または５日または３日または４８時間または３６時間または２４時間前までに患者に投与される。一態様では、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物は、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦの体内レベルが生理的に活性なレベルより下に下がるより前には患者に投与されない。メチレン−ＴＨＦの半減期は約２０分であり、ＴＨＦの半減期は約３０分であり、メチル−ＴＨＦの半減期は約５時間である。
【００６９】
一態様では、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤をそれぞれ投与してから、早くとも６時間または１２時間または２４時間または４８時間、３日または４日または５日または７日または２週間または３週間で患者に投与される。一態様では、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物、または、そうした態様では、任意の他の抗がん剤の体内レベルが生理的に活性なレベルより下になってから患者に投与される。
【００７０】
「と分離して、または区別して投与するために提供される」とは、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との組み合わせが、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物、または、そうした態様では、任意の他の抗がん剤それぞれの投与前、遅くとも１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月前までに投与されてもよいことを意味する。すなわち、成分のメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦもしくはメチル−ＴＨＦまたはＥＧＦＲ阻害剤のいずれかは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤それぞれの投与前、遅くとも１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月前までに投与されてもよい。あるいは、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との組み合わせは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤をそれぞれ投与してから、早くとも１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月で投与されてもよい。すなわち、成分のメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦもしくはメチル−ＴＨＦまたはＥＧＦＲ阻害剤のいずれかは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤を投与してから、１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月より後に投与されてもよい。
【００７１】
メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦおよびＥＧＦＲ阻害剤は、同時にまたは連続的に投与されてもよい。連続投与の場合は、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦのいずれかが最初に投与されてからＥＧＦＲ阻害剤が投与されるか、またはＥＧＦＲ阻害剤が最初に投与されてからメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦが投与される。
【００７２】
投与間隔は、薬物の特徴によって決まり、数時間から数日変動してもよい。メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、１日１回もしくは２回、２日もしくは３日毎、１週１回から２回、または２週もしくは３週毎に１回、患者に投与されてもよい。ＥＧＦＲ阻害剤は、たとえば２日もしくは３日毎、１週１回から２回、または２週もしくは３週毎に１回、投与されてもよい。
【００７３】
メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との組み合わせは、５−ＦＵおよび／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または他の抗がん剤から分離して、少なくとも１日または少なくとも１週間もしくは２週間もしくは３週間もしくは１カ月もしくは２カ月もしくは３カ月もしくは６カ月もしくは１年もしくは２年の期間中、患者に投与されてもよい。一態様では、この組み合わせは、少なくとも３カ月の期間中投与される。
【００７４】
セツキシマブは、好ましくは、１０ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜８００ｍｇの用量で投与される。静脈内注入の用量は、少なくとも５０ｍｇ／ｍ2（体表面積）、好ましくは少なくとも１００ｍｇ／ｍ2、より好ましくは少なくとも２５０ｍｇ／ｍ2または約４００ｍｇ／ｍ2である。最大用量は約５００ｍｇ／ｍ2である。用量は個々に調整されることになるので、たとえば患者の状態および生理機能に応じて変動してもよい。セツキシマブは、たとえば、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、鼻腔内または経口的に投与されてもよい。
【００７５】
メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、好ましくは、１００ｐｇ〜１０００ｍｇの用量で、好ましくは１００〜２００ｍｇの用量で投与される。１日当たりの用量は、１ｍｇ〜１０００ｍｇの間、特に１００ｍｇ〜５００ｍｇの間の範囲にわたる。用量は、少なくとも１０ｍｇ／ｍ2、好ましくは少なくとも２０ｍｇ／ｍ2、より好ましくは少なくとも５０ｍｇ／ｍ2、最も好ましくは少なくとも１００または２００ｍｇ／ｍ2である。最大用量は、約５ｇ／ｍ2、または好ましくは１ｍｇ／ｍ2もしくは５００ｍｇ／ｍ2である。用量は個々に調整されることになるので、たとえば患者の状態および生理機能に応じて変動してもよい。メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、たとえば、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、鼻腔内または経口的に投与されてもよい。
【００７６】
本発明による医薬組成物は、非活性成分、たとえば不活性なビヒクル、または医薬的に許容可能な補助剤、担体、防腐剤、アスコルビン酸、還元剤、アスコルベート、抗酸化物質なども含んでいてもよく、これらは、当業者に周知である。
【００７７】
本発明による医薬組成物は、従来の製造法によって製剤化されてもよい。組み合わせのメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦ部分は、たとえば、ロイコボリンの生産に使用されるものと類似の製造法によって製造されてもよい。本発明のメチレン−ＴＨＦはまた、ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００６９４４およびそれに関連する特許文献に記載されているように製造されてもよい。
【００７８】
本発明によって治療されるがんの例は、乳がん、胃がん、胃腸がん、胆嚢がん、胆管がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、膵臓がん、頭頸部がん、食道がん、中皮腫がん、非小細胞肺がんを含めた肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、黒色腫、脳腫瘍、腺癌、食道がんおよび骨肉腫である。しかし、いかなるがんも、本発明による医薬組成物を用いて治療されてよい。
【００７９】
一態様では、本発明による医薬組成物はがんを治療するためのものであり、ここでは、原発腫瘍、リンパ節転移および／または遠隔転移は野生型ＫＲＡＳ状態を有するか、またはＫＲＡＳコドン１２および１３に関して野生型である。
【００８０】
一側面では、本発明は、医薬として活性な量のＥＧＦＲ阻害剤および医薬として活性な量のメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦを患者に投与することを含む、がんを治療するための方法を提供する。
【００８１】
本発明の物としての側面に関して開示される態様は、適用可能な場合、本発明の方法としての側面にも関連し、逆もまた同じであることを理解されたい。本発明の物としての側面に関して上に記載されたこうした化合物のすべての特徴は、したがって、本発明の方法としての側面にも適用され、逆もまた同じである。
【００８２】
がんを治療するための方法の一態様では、前記ＥＧＦＲ阻害剤は、ゲフィチニブ、エルロチニブおよびラパチニブ；ポリクローナルまたはモノクローナル抗体のＥＧＦＲ阻害剤、たとえばセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブおよびマツズマブ；ならびに表１に列挙されるＥＧＦＲ阻害剤から選択される。好ましくは、ＥＧＦＲ阻害剤はモノクローナル抗体である。より好ましくは、モノクローナル抗体はセツキシマブまたはパニツムマブである。
【００８３】
方法の好ましい態様では、前記メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、それぞれの物質の生物学的に活性な異性体である。好ましくはメチレン−ＴＨＦが患者に投与され、最も好ましくは［６Ｒ］−メチレン−ＴＨＦが投与される。
【００８４】
一態様では、方法は、ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとの組み合わせまたは組成物を、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物と分離して、またはそれらから区別して投与することを含む。別の態様では、ＥＧＦＲ阻害剤とメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとの組み合わせまたは組成物は、他の抗がん剤と分離して、または他の抗がん剤と区別して投与される。
【００８５】
「と分離して、または区別して投与するために提供される」は、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との組み合わせが、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物を、または、そうした態様では、任意の他の抗がん剤それぞれの投与前、遅くとも１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月前までに投与されてもよいことを意味する。すなわち、成分のメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦもしくはメチル−ＴＨＦまたはＥＧＦＲ阻害剤のいずれかは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤それぞれの投与前、遅くとも１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月前までに投与されてもよい。あるいは、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦとＥＧＦＲ阻害剤との組み合わせは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤をそれぞれ投与してから、早くとも１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月で投与されてもよい。すなわち、成分のメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦもしくはメチル−ＴＨＦまたはＥＧＦＲ阻害剤のいずれかは、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤を投与してから、１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月または３カ月より後に投与されてもよい。
【００８６】
一態様では、方法は、組み合わせのメチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦを、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤の投与前、遅くとも３週間または２週間または７日または５日または３日または４８時間または３６時間または２４時間前までに患者に投与することを含む。一態様では、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物または任意の他の抗がん剤は、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦの体内レベルが生理的に活性なレベルより下に下がるより前には患者に投与されない。方法は、５−ＦＵならびに／もしくはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物、または任意の他の抗がん剤、または任意の他の医薬として活性な薬剤をそれぞれ投与してから、早くとも６時間または１２時間または２４時間または４８時間、３日または４日または５日または７日または２週間または３週間で、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦを患者に投与することをさらに、または代わりに含んでもよい。一態様では、メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦは、５−ＦＵならびに／またはその類似体、プロドラッグおよび／もしくはその代謝物、または、そうした態様では、任意の他の抗がん剤の体内レベルが生理的に活性なレベルより下になってから、患者に投与される。
【００８７】
メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦおよびＥＧＦＲ阻害剤は、本発明の製品側面について上で明記した通りの用量、時間間隔および順序で投与されてもよい。メチレン−ＴＨＦ、ＴＨＦまたはメチル−ＴＨＦおよびＥＧＦＲ阻害剤は、たとえば、連続的にまたは同時に投与されてもよい。
【００８８】
治療されるがんは、乳がん、胃がん、胃腸がん、胆嚢がん、胆管がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、膵臓がん、頭頸部がん、食道がん、中皮腫がん、非小細胞肺がんを含めた肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、黒色腫、脳腫瘍、腺癌、食道がんおよび骨肉腫から選択されてもよい。しかし、いかなるがんも、本発明による医薬組成物を用いて治療されてよい。
【００８９】
ここで使用する場合、用語「化学療法剤」または「抗がん薬」または「抗がん剤」は、がんを治療するための医薬に関し、すなわちこれらは、抗がんまたは抗腫瘍効果を有する薬剤／活性成分に関する。そうした効果は、腫瘍成長の阻害、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞死の誘導、転移形成の阻害、腫瘍再発の阻害を含んでいてもよい。
【００９０】
ここで使用する場合、用語「患者」は、本発明による方法、キットまたは医薬組成物を用いる治療を受けることを必要としている、任意のヒトまたはヒト以外の哺乳動物に関する。
【００９１】
ここで使用する場合、用語「治療」は、様々な種類のがんの症状を治癒または緩和するための治療とがんの進行を防ぐまたはがんの再発を予防するための治療の両方に関する。特に、固形腫瘍は、本発明によって治療するのに適当である。しかし、固形と非固形の腫瘍の両方が治療されてもよい。
【００９２】
ここで使用する場合、用語「医薬として活性な量」は、所望の薬理学的および／または治療効果につながる物質用量に関する。所望の薬理学的および／または治療効果は、上で述べたように、様々な種類のがんの症状を治癒または緩和すること、およびがんの進行を防ぐことである。
【００９３】
ここで使用する場合、用語「生理的に活性なレベル」は、患者体内の物質のレベル、たとえば、血中循環レベルであって、所望の生理的効果が達成されるレベルに関する。このレベルより下では、生理的効果は達成されないかまたは検出できない。抗がん剤の生理的効果は、たとえば、腫瘍成長の阻害、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞死の誘導、転移形成の阻害、腫瘍再発の阻害であってもよい。
【００９４】
化学療法的または抗がん的治療の「効力」という用語は、腫瘍およびがん細胞に影響を及ぼすその能力および治療の臨床結果を改善するその能力に関する。そうした効力は、たとえば寛解、無増悪期間、奏効率および生存を測定することによって決定することができる。そうしたパラメーターを測定するための方法は、本分野で十分に確立されている。たとえば、抗腫瘍効果は、腫瘍サイズおよび経時的な腫瘍サイズを測定することによって決定することができる。
【００９５】
［実施例］
目的：大腸腺癌の異種移植モデルであるＬｏＶｏにおいて、セツキシマブと組み合わせたメチレン−ＴＨＦの抗腫瘍性効力を決定すること。ＬｏＶｏは、セツキシマブおよび５−ＦＵに感受性の細胞系である。
【００９６】
研究計画：合計で５０匹の８〜１２週齢の雌ＮＣｒ  ｎｕ／ｎｕマウス（群当たり１０匹）に、５０％マトリゲル中の１ｘ１０7のＬｏＶｏ腫瘍細胞を側腹部に皮下注射した。７日後、これらのマウスに、表１のスケジュールに従って腹腔内注射投与した。動物を個々に監視した。実験のエンドポイントを１０００ｍｍ3の腫瘍量または７５日の早く達するほうのいずれかとした。応答動物はより長く追跡することができた。エンドポイントに達した時は、動物を安楽死させた。体重（ｇ）および腫瘍体積（ｍｍ3）を、１、２、３、４、５、７、１１、１４、１８、２１、２５、２８、３２、３５、３９、４２、４６、４９、５３、５６、６０、６３、６７、７０および７４日目に測定した。
【表２】
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【００９７】
結果
得られたデータの概要を表２に示す。
【表３】
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【００９８】
腫瘍体積
腫瘍体積の中央値の経時的経過を図１に示す。ビヒクル群、すなわち群１の動物は、より速くエンドポイントに到達した。この図は、メチレン−ＴＨＦは腫瘍成長に対して有益な効果を有し、セツキシマブの抗腫瘍効果を増強することを示す。驚いたことに、メチレン−ＴＨＦの有益な効果は５−ＦＵがなくても見られる。
【００９９】
生存時間
それぞれの群において、エンドポイントまでの時間、すなわち１０００ｍｍ3の腫瘍量または７５日に達した時を示すカプラン−マイヤープロットを図２に示す。このカプラン−マイヤー曲線（エンドポイントまでの時間）は、メチレン−ＴＨＦの有益な効果、メチレン−ＴＨＦがセツキシマブの有益な効果を増強することを示す。ログランク検定は、ビヒクル群を除外する場合も、治療群の間に統計的に有意な差があることを示す。
【０１００】
体重
体重は治療の副作用の重篤度の指標となり、体重の不十分な発達は、より有害な副作用を示す。図３に見られるように、メチレン−ＴＨＦを用いた両治療群、すなわち群３および５は、よく似た体重の発達を示す。２８日目以降体重の発達が最も不十分な群は、セツキシマブおよび５−ＦＵを与えた群４であった。
【０１０１】
結論
腫瘍体積、すなわち腫瘍成長阻害と、体重、すなわち重篤な副作用がより少ない、の両方を考慮すると、５−ＦＵおよびメチレン−ＴＨＦと組み合わせてセツキシマブを与えた群が最も良好な成果があったように思われる。腫瘍体積を考慮すると、セツキシマブのみを与えた群は良好な成果が最も少なかったが、ビヒクルを含めた他の群よりも重量が増加した。驚いたことに、メチレン−ＴＨＦは、５−ＦＵがなくても、セツキシマブの抗腫瘍成長効果を増強する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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