(57)【要約】本発明は、膜活性物質である過酸化水素及び一酸化窒素並びにそれらの供給源と共に、生物学的及び治療的に活性な物質からなる医薬組成物を経鼻導入することにより脳内に生物学的活性物質を導入するための方法に関し、ここで前記膜活性物質が鼻腔内に分解形態で残留し、薬理学的活性物質のみが輸送される。本方法は、前記医薬組成物が、１回又は複数回で全用量又は部分用量で経鼻導入され、導入の時間間隔が、３〜１８０秒、好ましくは６０秒であり、薬物用量が、薬学的に規定された用量の２分の１〜１００分の１であることを特徴とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
膜活性物質である過酸化水素及び一酸化窒素並びにそれらの供給源と共に、生物学的及び治療的に活性な物質からなる医薬組成物を経鼻投与することにより脳内に生物学的活性物質を導入するための方法であって、前記膜活性物質が鼻腔内に分解形態で残留し、薬理学的活性物質のみが運ばれる方法において、
前記医薬組成物が、１回又は複数回で全用量及び部分用量で経鼻投与され、投与の時間間隔が、３〜１８０秒、好ましくは６０秒であり、薬物投与量が、薬学的に規定された投与量の２分の１〜１００分の１であることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記医薬活性物質が、１つの鼻腔及び／又は両方の鼻腔に、同時に及び／又は交互に投与され、経鼻投与の回数が、１〜５回、好ましくは３回であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記医薬活性物質が、中枢神経系の機能に調節的及び治療的な効果をもたらすものであり、合成物及び天然物の形態か、及び／又はこれらの材料の組成物の形態で、膜活性物質である過酸化水素及び一酸化窒素並びにそれらの供給源と共に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記医薬活性物質が、脳の神経伝達物質系のレギュレーターを含む群、例として、ドパミン、セロトニン、ヒスタミン又はアセチルコリンのレセプターのアゴニスト及び／又はアンタゴニストを含む群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記医薬活性物質が、脳の神経伝達物質系のモジュレーターを含む群、例として、γ−アミノ酪酸若しくはアカチノールメマンチン、又はこれらの誘導体を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記医薬活性物質が、中枢神経系の機能に調節効果を有する内在性代謝物の群、例として、内在性物質であるホルモン、アミノ酸、オピオイド及びタンパク質の誘導物質の群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項７】
中枢神経系に作用する前記医薬活性物質が、１ｋＤａ未満の分子量を有するように選択され、例えば、ドパミン、ベンラファキシン、アマンタジン又はトリメペリジンであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
中枢神経系に作用する前記医薬活性物質が、１ｋＤａより大きい分子量を有するように選択され、例えば、インスリン、ガラニン様ペプチド、レプチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン又はベバシズマブであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記医薬活性物質が、細胞又は細胞構造の組成物、例えば幹細胞、免疫複合体又はモノクローナル抗体の組成物の形態で経鼻導入されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記医薬活性物質が、ジェネリック物質から選択されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記医薬活性物質が、一般的に許容される投与量の１％〜１００％の用量で経鼻的に使用されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
膜活性物質である過酸化水素が、１０−９Ｍ〜１０−３Ｍの濃度、好ましくは５×１０−４Ｍ〜１０−６Ｍの濃度で経鼻的に使用されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
膜活性物質である一酸化窒素−ＮＯが、１０−７Ｍ〜１０−１Ｍの濃度、好ましくは１０−４Ｍ〜１０−１Ｍの濃度で経鼻的に使用されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
１種以上の医薬活性物質が、ゲル、軟膏、油、懸濁液、リポソーム又はナノソームの形態で、経鼻投与用医薬組成物に使用されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
薬学的に許容される安定剤、抗酸化剤、ゲル形成材料、ｐＨ調節剤、浸透圧調節剤、乳化剤、可溶化剤又は抗微生物剤が、経鼻投与用医薬組成物のための組成物に使用されることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
スプレーが、前記医薬組成物の経鼻投与のために使用されることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、合成及び天然の生物学的に活性な医薬物質並びにフリーラジカルの性質を有する膜活性産物及び／又はこれらの産物の供給源と、鼻腔の神経構造及び血管構造との相互作用に基づいてこれらの物質を鼻腔から脳内に直接送達するための、医学的生物学的方法の開発に関する。
【０００２】
自然環境は、多面的な生物学的活性分子の供給源を構築し、このような分子は食物と共に又は周囲空気から生物に侵入する。これらの生物学的活性分子の他の重要な供給源は、生物の内部供給源、例えば血液及び間質液である。器官構造若しくは組織に到達するために、生物学的活性分子は、外部環境及び内部環境、例えば脳の膜構造から生体膜を通過しなければならない。
【０００３】
生物の外部環境及び内部環境の多くの生物学的活性分子は、脳を含めた器官及び組織の正常な機能のために有用であり、必須である。生物学的活性分子としては、特に、大部分の医薬品、加えて膨大な生化学化合物、すなわち生物における代謝プロセス中に形成される代謝産物が挙げられる。
【０００４】
同時に、多くの一般に公知の医薬品及び新規な医薬品の脳内への送達、バイオテクノロジー産物の送達、並びに中枢神経系（ＣＮＳ）、特の脳の処置における様々な代謝産物の治療的使用は、深刻な問題となっている。ＣＮＳにおいて活性な幾つかの医薬品の鼻腔から脳への送達のための方法は、過去１０年の科学文献及び特許文献に記載されている（Ｍｉｎｇ  Ｍｉｎｇ  Ｗｅｎ（２０１１）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｉｓｃｏｖｅｒｍｅｄｉｃｉｎｅ．ｃｏｍ／Ｍｉｎｇ−ｍｉｎｇ−Ｗｅｎ／２０１１／０６／１３／ｏｌｆａｃｔｏｒｙ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ−ｔｈｒｏｕｇｈ−ｉｎｔｒａｎａｓａｌ−ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｏｆ−ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ−ｄｒｕｇｓ−ｔｏ−ｔｈｅ−ｂｒａｉｎ−ｃｕｒｒｅｎｔ−ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／；Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ  Ｈ．Ｒ．ら（２００７）．Ｉｎｔｒａｎａｓａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｓｐｅｃｔｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ３３７：１〜２４）。
【０００５】
Ｍｉｎｇ  Ｍｉｎｇ  Ｗｅｎ及びＣｏｓｔａｎｔｉｎｏらの研究では、医薬物質の鼻腔から脳内への送達について公知の方法を報告している。これらの方法は、例えばリポソーム、ナノ粒子等の膜の通過を促進する粘膜付着性賦形剤の使用を含み、さらには適切な科学的根拠はないが血管収縮剤の使用も含む。
【０００６】
何らかの低分子の脳内への通過を可能にする幾つかの方法が報告されているが、それでもなお広範な医薬物質のための普遍的方法にはなっていない。
【０００７】
処置及び免疫化の目的での末梢血及び脳内への医薬物質の経鼻輸送方法（欧州特許第１０３１３４７号）は、明らか且つ公知の解決法となっている。著者らは、経鼻輸送のためにこれまでに使用されてきた方法は、鼻腔の膜を介して心地よく快適に医薬活性物質を輸送するための納得のいく原理を確立できていないと判断している。
【０００８】
著者らは、医薬製剤中のサイトカイン又はそれらの供給源の存在が、問題解決の重要な要素であると考える。しかし、著者らによって使用される方法は、末梢血循環への及び／又は脳内への医薬品の経鼻送達、並びに免疫化の手段のための可能な経路のみとなっており、脳疾患処置のための医薬品の経鼻送達をさらに改善するための薬理学的及び技術的なプラットフォームとしてしか役立たない。
【０００９】
説明された方法の重要な欠陥は、医薬品の製造及び使用の複雑さ、並びに水溶性化合物に関する特有な制限である。この方法のさらなる欠陥は、医薬品組成物の製造の複雑さである。
【００１０】
より早い時点で、本発明者らは、フリーラジカル物質若しくはその二次産物、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）又は−ＮＯ活性産物、例えばＬ−アルギニンは、特定の条件下で、鼻腔の神経及び血管の膜構造の透過性の増大を提供し得ること、並びに脳内への生物学的活性物質の通過に役立つ可能性があることを決定した（独国特許第１０２４８６０１号；ユーラシア特許第０１０６９２号）。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ドパミン及びＤＯＰＡＣを含む視床下部の抽出溶液及び線条体抽出物の代表的なクロマトグラムを図示する図である。
【図２】ハロペリドール強硬症モデルにおけるラットの自発運動活性に対する、Ｈ２Ｏ２と一緒のドパミンの経鼻投与の効果を示す図である。
【００１２】
現在までに、この技術的問題を解決するための製剤が、文献Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  Ｎ．ら２０１２、Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ  Ｕｎｌｏｃｋｅｄ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）、７７巻、５号、４１９〜４２４ページ等の多くの考察で議論されている。この文献において、トリチウムで標識したドパミン（ＤＡ）によって実験を行ったところ、マイクロモル濃度の過酸化水素の同時経鼻導入によって生物学的活性物質であるドパミンの脳内への導入の有効性が決定された。ドパミンは、通常の条件下では脳内へ通過してそこで著しい効果を引き起こすことができないことが一般に公知である。
【００１３】
脳構造におけるドパミンの特定の生物学的活性を確認するために、同位体産物［３Ｈ］ドパミンを用いて、そして神経遮断ハロペリドールを用いて動物実験が行われた。ドパミンは、通常の条件下では脳内へ通過してそこで著しい生理学的効果及び治療効果を引き起こすことができないことは、一般に公知である。脳構造におけるドパミンの特定の生理学的活性を確認するために、同位体［３Ｈ］ドパミンを用いて、そして神経遮断ハロペリドールを用いて動物実験が行われた。
【００１４】
トリチウムで標識した［３Ｈ］ドパミンは、塩酸ドパミン製造中に高温固相触媒で水素をトリチウムに同位体交換する反応を使用して産生された。得られた［３Ｈ］ＤＡ調製物を、Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８カラム（８×１５０ｍｍ）中で、０．１％ヘプタフルオロ酪酸の存在下のアセトニトリルの水溶液の濃度勾配において精製した。この調製物の定量的分析は、ＨＰＬＣ及びＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＤＡ標準（「Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ」）を用いて行った。均一に標識されたＤＡの特異的放射活性は、２０Ｃｉ／ｍｏｌであった。この調製物のストック溶液には、１０−２Ｍの［３Ｈ］ドパミンが０．７５ｍＣｉ／ｍｌの容量活性で含まれていた。
【００１５】
ドパミン溶液の経鼻導入のための調製物において、この混合物は、［３Ｈ］ＤＡ溶液（濃度：４×１０−２；容量活性：０．７５ｍＣｉ／ｍｌ）及び安定化過酸化水素の等張溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）から即時調製された。経鼻導入される溶液中のドパミン及びＨ２Ｏ２の最終濃度は、適宜、１０−２Ｍ及び１０−５Ｍであった。［３Ｈ］ＤＡ及びＨ２Ｏ２溶液の混合物は実験動物群に導入された。対照群の動物には、［３Ｈ］ＤＡ及び０．９％  ＮａＣｌの混合物が与えられた。
【００１６】
［３Ｈ］ＤＡを含む溶液の経鼻導入の３分間後に断頭されたラットからの生物学的材料の製造において、脳を取り出し、視床下部及び両方の線条体部分を摘出し、冷却表面（＋４℃）に置いた。取り出された脳構造を３５〜４０秒以内に計量し、液体窒素中で凍結し、エッペンドルフ試験管内に入れた。この凍結サンプルを４８時間にわたり凍結乾燥させ、次いで２００μＬの０．１Ｍ  ＨＣｌＯ４溶液によって抽出した。次にこのサンプルを１５分以内に１０，０００ｇで遠心分離し、上清を［３Ｈ］ＤＡ及び［３Ｈ］ＤＯＰＡＣの決定のために使用した。
【００１７】
サンプル中のＤＡ及びＤＯＰＡＣの最終濃度は、これらの物質の放射性誘導体の血漿のピークに関連したＵＶ検出を用いた決定のために適切ではなかったので、この理由で、クロマトグラフィー分離の前に、１０μｇのドパミンの非標識標準及びその代謝物である３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸（ＤＯＰＡＣ）を組織の抽出物のそれぞれに添加した。０．１Ｍ  ＨＣｌＯ４中の抽出物のクロマトグラフィー分析を、０．１％ヘプタフルオロ酪酸を含むアセトニトリルの水溶液の勾配溶出（４〜２４％）を用いたＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８カラム、５μｍ（４×１５０ｍｍ）において２０℃で実施した。波長２５４ｎｍ及び２２０ｎｍの同時検出を、Ｂｅｃｋｍａｎ分光光度計（モデル１６５、Ａｌｔｅｘ）を用いて実施した。サンプル容積は、１００μＬであった。別個に［３Ｈ］ＤＡ及び［３Ｈ］ＤＯＰＡＣを与えられた実験群及び対照群の各動物の脳抽出物の画分を、液体シンチレーション計数を用いて定量的に分析した。
【００１８】
図１に、ドパミン及びＤＯＰＡＣを含む視床下部の抽出溶液及び線条体抽出物の代表的なクロマトグラムを図示する。
【００１９】
図１は、ラット脳の視床下部及び線条体のクロマトグラフィー抽出画分における［３Ｈ］ＤＡ及び［３Ｈ］ＤＯＰＡＣの放射活性である。
【００２０】
注記：ドパミン及びＤＯＰＡＣの標準に対する、視床下部及び線条体のクロマトグラフィー抽出画分における［３Ｈ］ＤＡ及び［３Ｈ］ＤＯＰＡＣの放射活性を、Ｔｒｉ−Ｃａｒｂ  ２９００ＴＲ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）液体シンチレーションカウンターを用いて測定した。対照群及び実験群のそれぞれ８匹のラットの抽出物の放射活性を、１分間あたりの放射性崩壊の数、ＤＰＭとして測定した；これらの値のマイクロキューリー（μＣｉ）への換算のために、２．２２×１０６の換算係数を用いた。カウンターの平均効率は、４９％であった。ドパミンの量への換算は、１０−２Ｍ［３Ｈ］ＤＡのストック溶液の濃度及び０．７５μＣｉ／ｍｌの容量活性に基づいた。
【００２１】
ラットにおける強硬症の状態を、ハロペリドール（「Ｒａｔｉｏｐｈａｒｍ」）の０．２５ｍｇ／ｋｇの用量での単回の腹腔内（ｉ．ｐ．）投与によって作り出した。強硬症応答及び外部刺激に対する反応のなさを、自発運動活性の８５％低下として確認した。次に、３つの別個のラット群の動物に、１０−２Ｍドパミン、１０−５Ｍ  Ｈ２Ｏ２又はＤａ＋Ｈ２Ｏ２混合物の溶液を経鼻投与した。投与した溶液の用量は、各鼻孔に５０μＬであった。与えたドパミンの単回用量は、０．８ｍｇ／ｋｇであった；この場合におけるＨ２Ｏ２の用量は、動物１匹につき３４ｎｇであった。ラットの自発活性を見積もるため、「オープンフィールド試験」を用いた。試験部位は、木製の床を有し、独立した１６のセクター及び２つの同心円に分割された、直径８０ｃｍの円形活動領域であった。障壁の高さは、４０ｃｍであった。自発運動活性を測定するために、動物を活動領域の中央に置き、セクターの間の水平運動の数を、２分間にわたって記録した。観察を、調製物の経鼻投与の９０秒後に開始した。
【００２２】
実験動物で行った研究を、学会の倫理学委員会の要件を遵守して行った。２２０〜２５０ｇの範囲にわたる体重を有する５１匹の雄「Ｗｉｓｔａｒ」ラットを実験に用いた。この動物を、食物及び水への接触が無制限な標準的動物施設条件下で取り扱った。実験開始前の３日間にわたり、ラットを、研究者との接触（「操作」）に慣れさせた。
【００２３】
１分間あたりの放射性同位体崩壊の数の分析における統計的有意性（Ｐ）を、非パラメータ化片側マン−ホイットニー試験を用いて計算した。結果を、Ｐ＜０．０５において有意であると考えた。ラットの強硬症モデルの調査において、動物の運動活性を、視覚記録の条件単位として表した。これから得られた結果の非ガウシアン分布の仮定を導いた。
【００２４】
脳の視床下部及び線条体における［３Ｈ］ＤＡ及び［３Ｈ］ＤＯＰＡＣの放射活性は、ドパミン及びＨ２Ｏ２をこの２つの成分の水溶液のスプレーの形態で同時に経鼻投与された実験群のラットにおいて有意に高かった。実験ラット及び対照ラットの視床下部及び線条体におけるドパミン及びＤＯＰＡＣの計算された濃度を、表１に表す。対照群動物には、ドパミン及びＨ２Ｏ２ではなくＮａＣｌ溶液をスプレーで与えた（表１）。
【００２５】
【表１】
2015527344.tif 000002
【００２６】
生理学的実験におけるハロペリドールの注射は、ラットにおいて自発的活動を有意に抑制した。ハロペリドールのｉ．ｐ．投与後の強硬症の発症の潜伏期間は、９．４［８．９；９．８］分間であった；強硬症の間隔は、５７．１［５４．８；５９．４］であった。ＤＡ＋Ｈ２Ｏ２混合物の経鼻導入は、９０秒以内に自発運動活性の有意な復活をもたらした。対照動物におけるドパミン又はＨ２Ｏ２の等張水溶液の別個の投与は、強硬症の全期間中、動物の運動活性を復活させなかった（図２）。
【００２７】
図２：ハロペリドール強硬症モデルにおけるラットの自発運動活性に対する、Ｈ２Ｏ２と一緒のドパミンの経鼻投与の効果である。
【００２８】
注記：ＨＰ：ハロペリドール；ＤＡ：ドパミン：Ｈ２Ｏ２：過酸化水素１０−５Ｍ。相対単位は、「オープンフィールド」試験において１つのセクターを横切ることに相当する。ラットの自発運動活性：群（Ｉ）：無処置対照；（ＩＩ）：ＨＰのｉ．ｐ．投与後；（ＩＩＩ〜ＩＶ）ＤＡ若しくはＨ２Ｏ２の等張溶液の経鼻投与の後；（Ｖ）：ＤＡ＋Ｈ２Ｏ２の混合物の投与の後。群（ＩＩＩ〜Ｖ）における値を、ＨＰ効果に基づいて測定した。各群におけるラットの数は、ｎ＝７である。各群（Ｉ〜Ｖ）における動物を、別個に試験した。値及び誤りを、中央値として表した［第１四分位数；第３四分位数］。Ｐ値を、片側マンホイットニー試験を用いて計算した。
【００２９】
試験物質としてのドパミンの例について、結果は、ドパミンと同時に経鼻的に投与されたマイクロモル濃度のＨ２Ｏ２が脳の構造内へのドパミンの迅速な送達をもたらすことを示した。このように、経鼻投与の僅か３分間後には、視床下部及び線条体において、ドパミン含量及びその代謝の産物であるＤＯＰＡＣの有意な増大が観察された。抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムにおけるドパミンのピークは、ドパミン標準のピークにちょうど適合した。ハロペリドール強硬症モデルにおいて、ドパミンをＨ２Ｏ２の混合物で経鼻投与した後、実験動物で特徴的運動障害が有効に軽減したのと同様に、標的器官である線条体においてもドパミン含量が増大することが証明された。
【００３０】
対照的に、対照動物における生理学的溶液と共に［３Ｈ］ＤＡを経鼻投与したところ、脳の構造におけるドパミン含量における増大も、強硬症効果における軽減も伴わなかった。
【００３１】
鼻腔の粘膜の表面上での低分子量の過酸化水素Ｈ２Ｏ２の短い存続時間、加えて比較的長い時間にわたる効果の持続は、生化学的増幅因子の関与を示唆する。本発明者らは、早い時期に（独国特許第１０２４８６０１号）、この役割の候補が、一酸化窒素ラジカル（−ＮＯ）であり得ること、加えてドパミンと共に経鼻投与されたＬ−アルギニン（−ＮＯ形成酵素であるＮＯシンターゼ（ｅＮＯＳ）の基質）が、ラットにおいて自発運動活性を復活させることができることを実証した。この時点で、Ｌ−アルギニンは、短い存続時間のＨ２Ｏ２よりも鼻腔において有意にゆっくりと代謝されることに留意することが重要である。ドパミンの脳内への送達におけるＬ−アルギニンの関与の正確なメカニズムは、不透明なままである。
【００３２】
本発明で扱われる問題は、先行技術の不利益をなくした方法の創造であり、ここで、医薬品の形態での生物学的及び医薬活性を有する物質は、時間的、量的、そして意図的に連続させた経鼻投与の後に、効果的且つ有益に脳内へ直接導入される。
【００３３】
上述した一連の調査を説明する以下の実験において、過酸化水素及びＬ−アルギニンの有効濃度の領域、並びにこの方法の時間及び量的なパラメータを提示する。
【００３４】
以下の実験を用いて本発明を解説し説明する。
【００３５】
実験１。「ドパミン＋Ｈ２Ｏ２」混合物の経鼻投与は、体重１ｋｇあたり１００ｍｇの容量でのハロペリドールの腹腔内投与後のラットにおいて、自発運動活性を復活する。
【００３６】
物質（経鼻）：両鼻孔における、種々の濃度での過酸化水素の経鼻投与と同時併用の、１０−３Ｍの濃度のドパミン。
【００３７】
評価基準：「オープンフィールド」試験における、動物の異なる群のラットの運動の合計としての、自発運動活性の変化。
【００３８】
動物群：対照群：「無処置対照」（群Ｉ）、「ハロペリドールｉ．ｐ．」（群ＩＩ）、「ハロペリドールｉ．ｐ．＋ドパミン」（群ＩＩＩ）、及び種々の濃度での「ハロペリドールｉ．ｐ．＋Ｈ２Ｏ２」（群ＩＶ及びＶ）。実験群：種々の濃度での「ハロペリドールｉ．ｐ．＋ドパミン＋Ｈ２Ｏ２」（群ＶＩＩ〜ＩＸ）（表２）。
【００３９】
【表２】
2015527344.tif 000003
【００４０】
これらの結果は、鼻内過酸化水素Ｈ２Ｏ２の最小の有効濃度は、１０−８〜１０−１０Ｍの範囲内にあることを実証した。高濃度においては鼻粘膜構造の損傷が起こり得るため、鼻過酸化水素Ｈ２Ｏ２についての最大有効濃度は、５×１０−４Ｍであるという仮説を立てた。
【００４１】
実験２：「ドパミン＋Ｌ−アルギニン混合物」の経鼻投与は、体重１ｋｇあたり１００ｍｇのハロペリドールの腹腔内投与後のラットにおける、自発運動活性を復活させる。
【００４２】
物質（鼻）：１鼻孔における、種々の濃度のＬ−アルギニンと同時且つ併用の１０−３Ｍの濃度のドパミン。評価基準：「オープンフィールド」試験における、動物の異なる群のラットの運動の合計としての、自発運動活性の変化。動物群：対照群：「無処置対照」（群Ｉ）、「ハロペリドールｉ．ｐ．」（群ＩＩ）、「ハロペリドールｉ．ｐ．＋鼻ドパミン」（群ＩＩＩ）、及び種々の濃度での「ハロペリドールｉ．ｐ．＋鼻Ｌ−アルギニン」（群ＩＶ及びＶ）。実験群：種々の濃度での「ハロペリドールｉ．ｐ．＋鼻ドパミン＋Ｌ−アルギニン」（群ＶＩ〜ＶＩＩＩ）（表３）。
【００４３】
【表３】
2015527344.tif 000004
【００４４】
これらの結果は、鼻内Ｌ−アルギニンの最小有効濃度が、１０−７Ｍの範囲内にあることを示した。
【００４５】
高濃度においてはＬ−アルギニンの副作用が起こり得るため、経鼻投与についてのＬ−アルギニンの最大有効濃度は、１０−１Ｍである。
【００４６】
レセプターの生理学的反応におけるさらに重要なパラメータは、時間である。鼻腔のレセプターの生理学的反応は、刺激の間隔に大きく依存する。連続的刺激の過程にわたり、反応の低下が生理的適応に伴って起こる。このことは、例えばＨ２Ｏ２又は−ＮＯによって起こる刺激等の作用をもたらす刺激に対するレセプターの適応が、レセプターの感度に加えてそれに付随する生理学的反応を急激に低下させるので、重要な問題となる（Ｆ．Ｒ．Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｇ．Ｔｈｅｗｓ、１９８３．Ｈｕｍａｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ．Ｂｅｒｌｉｎ−Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ−Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００４７】
この適応は、医薬物質の治療有効性を低下させる可能性がある。現在、Ｈ２Ｏ２及び−ＮＯが活性の間に鼻のレセプターの感度を維持するための方法は公知ではない。本発明者らが開発した方法は、生物学的及び治療的に活性な物質を含む医薬組成物中の例えばＨ２Ｏ２又は−ＮＯ等の神経活性物質が、鼻腔の粘膜において短期間で間欠的（断続的）に作用することに基づく。
【００４８】
本発明者らの実験において、この方法の使用は、Ｈ２Ｏ２と同時の経鼻投与の後に、物質フェノバルビタールの効果を有意に増大する。フェノバルビタールの経口投与は、癲癇及び／又は睡眠障害の処置に関して長い間公知である（Ｐ．Ｋｗａｎ、Ｍ．Ｊ．Ｂｒｏｄｉｅ：Ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｅｐｉｌｅｐｓｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ２１ｓｔＣｅｎｔｕｒｙ：Ａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２００４；４５：１１４１〜１１４９ページ）。この処置の不利益は、吐き気、目眩、肝臓におけるＰ−４５０活性の増大、及び多くの医薬品の代謝への干渉等の望ましくない副作用である。
【００４９】
実験３：性成熟したダイコクネズミにおいて、経鼻投与を用いてフェノバルビタールの効果を実験的に調査した。フェノバルビタールの経鼻投与後、フェノバルビタールに起因する睡眠間隔を、血管作用性物質及び神経活性物質の存在及び非存在に関して比較した。表４に、実験の代表的な結果を列挙する。
【００５０】
【表４】
2015527344.tif 000005
【００５１】
部分用量の回数及び部分用量の連続投与間の間隔は、物質及び／又は投与ごとに異なるようにすることができ、この場合、それぞれ１〜５回の部分用量及び／又は１０〜６０秒の間隔の範囲であってもよい。
【００５２】
本発明は、以下の利点を有する：
医薬物質の脳への直接送達、
ＣＮＳ疾患を処置するための広範な医薬品を作製する可能性、
ジェネリック物質の包括的且つ有効な使用（ジェネリック薬の「第三世代（ｔｈｉｒｄ  ｌｉｆｅ）」）の可能性、
現在までに公知の方法と比較した医薬品の治療有効性の向上、
医薬品の有効用量及び望まれない副作用の危険性の有意な低下、
生物学的活性物質及びその分解産物の環境負荷の低下。
【図１】
2015527344.tif 000006
【図２】
2015527344.tif 000007
【国際調査報告】
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