(57)【要約】  プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗剤組成物が開示される。本組成物は、洗濯または自動食器洗いなどの硬質面クリーニングに用いることができ、市販のプロテアーゼと比較して向上した性能を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数の洗剤成分と、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドとを含む洗剤組成物であって、前記プロテアーゼ活性を有するポリペプチドが、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｄ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリペプチドの断片
から選択される、洗剤組成物。
【請求項２】
プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、例えば、ラッカーゼ、及び／又はペロキシダーゼから選択される１種または複数種の追加の酵素をさらに含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項３】
プロテアーゼ阻害剤、好ましくは４−ホルミルフェニルボロン酸（４−ＦＰＢＡ）またはペプチドアルデヒドをさらに含む、請求項１または２に記載の洗剤組成物。
【請求項４】
固形セッケン、均質な錠剤、２つ以上の層を有する錠剤、１つまたは複数のコンパートメントを有するポーチ、通常のもしくは圧縮された粉末、顆粒、ペースト、ゲル、または通常の圧縮もしくは濃縮液体の形態である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の洗剤組成物。
【請求項５】
前記洗剤組成物が、粉末、顆粒または液体の形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の洗剤組成物。
【請求項６】
洗濯、硬質面クリーニング、食器洗いまたは自動食器洗いなどの洗浄プロセスにおける、請求項１〜５のいずれか１項に記載の洗剤組成物の使用。
【請求項７】
生地または硬質面からタンパク質性物質を分解または除去する方法であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載の洗剤組成物を用いて、前記生地または前記硬質面を処理するステップを含む方法。
【請求項８】
以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリペプチドの断片
からなる群から選択される、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドの洗剤組成物における使用。
【請求項９】
以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；および／または
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリペプチドの断片
から選択される、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチドの洗濯または食器洗いなどの洗浄プロセスにおける使用。
【請求項１０】
前記食器洗いが、手洗いまたは自動である、請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
本出願は、コンピュータ読み取り可能な形態の配列表を含んでおり、これは本明細書において参照により援用される。
【背景技術】
【０００２】
洗剤産業においては、長年にわたって異なる酵素が洗剤配合物に利用されてきており、最も一般的に用いられている酵素としては、それぞれ種々のタイプの汚れの除去に適合しているプロテアーゼ、アミラーゼおよびリパーゼが挙げられる。酵素に追加して、洗剤組成物には、典型的には、処方成分の複雑な組み合わせが含まれる。例えば、大部分のクリーニング製品には、界面活性剤系、漂白薬剤またはビルダーが含まれる。現在の洗剤の複雑さに関わらず、新規の酵素および／または酵素ブレンドを含む新規の洗剤組成物を開発する必要性が未だ存在している。
【０００３】
従来、洗濯は高い温度およびｐＨで行われており、周知の洗剤酵素は、典型的には４０℃〜６０℃の範囲内のより高い温度およびｐＨで実施されるように選択されている。
【０００４】
環境への負荷をさらに抑えるために洗浄プロセスの改善がますます重視されていることで、世界的に、環境に負荷を与え得る、洗浄時間、ｐＨ、温度を低減し、洗剤成分の量を減らす傾向が見られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、より低い温度、より低いｐＨおよび／またはより少量の洗剤成分で洗濯を実施する要望、従って、従来の条件、例えば、高い温度、ｐＨおよび多量の洗剤成分で、十分に機能するのに加えて、例えば、低温および／または低ｐＨでも高い性能を有する洗剤プロテアーゼに対する要請もまた存在している。さらに、少量の界面活性剤およびビルダーを含む洗剤などの様々な洗剤で機能する酵素も求められている。
【０００６】
本発明は、上記およびその他の重要な目的を対象としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗浄および／または洗剤組成物に関する。本発明はさらに、食器洗いおよび洗濯などの洗浄プロセスにおいてプロテアーゼ活性を有するこのようなポリペプチドの使用に関する。本発明はまた、このポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、核酸構築物、ベクター、およびポリヌクレオチドを含む宿主細胞、ならびにポリペプチドを生成および使用する方法にも関する。
【０００８】
一態様において、本発明は、洗浄プロセスにおいてプロテアーゼ活性を有するポリペプチドの使用に関し、ここで、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、好ましくは少なくとも９７％の同一性、好ましくは少なくとも９８％の同一性、および最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、好ましくは少なくとも９７％の同一性、好ましくは少なくとも９８％の同一性、および最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体；ならびに
（ｄ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリペプチドの断片
から選択される。
【０００９】
別の態様において、本発明は、洗浄プロセスにおいてプロテアーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗剤組成物に関する。洗浄プロセスは、布地もしくは生地の洗濯であってもよいし、または自動食器洗いなどの食器洗いであってもよい。
【００１０】
さらに別の態様において、本発明は、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、このようなポリヌクレオチドを含む核酸構築物（例えば、発現構築物）、このような構築物を含む宿主細胞、ならびにこうしたポリヌクレオチドおよび／または核酸構築物の使用により、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを生成する方法に関する。
【００１１】
別の態様は、１つまたは複数の洗剤成分と、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドとを含む洗剤組成物に関し、ここで、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｄ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリペプチドの断片
から選択される。
【００１２】
別の態様は、生地または硬質面からタンパク質性物質を分解または除去する方法に関し、この方法は、本発明の組成物を用いて、生地または硬質面を処理することを含む。
【００１３】
本発明のさらに別の態様は、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリペプチドの断片
からなる群から選択される、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドの洗剤組成物における使用に関する。
【００１４】
本発明の第３の態様は、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリペプチドの断片
から選択される、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチドの洗濯または食器洗いなどの洗浄プロセスにおける使用に関する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、このようなポリヌクレオチドを含む核酸構築物（例えば、発現構築物）、このような構築物を含む宿主細胞、ならびにこうしたポリヌクレオチドおよび／または核酸構築物の使用により、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを生成する方法に関する。
【００１６】
図１〜４は、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼの特徴付けの結果を示す。実験の詳細については、実施例４を参照されたい。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ基質に対するｐＨ−活性を示す。
【図２】ｐＨ−安定性（３７℃で２時間後の残留活性）を示す。
【図３】Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫ基質に対する温度−活性を示す。
【図４】ｐＨ９．０でのＳｕｃ−ＡＡＰＸ−ｐＮＡ基質に対する特異性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
配列表の概要
配列番号１は、バチルスレンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）Ｓａｖｉｎａｓｅプロテアーゼのもので置換した天然シグナルペプチドを含むストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥのコードポリヌクレオチドのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）コドン使用頻度最適化融合遺伝子のＤＮＡ配列である。
【００１９】
配列番号２は、配列番号１から推定されるアミノ酸配列である。
【００２０】
配列番号３は、Ｓａｖｉｎａｓｅ（バチルスレンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）由来のプロテアーゼ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ，Ｄｅｎｍａｒｋ）のアミノ酸配列である。
【００２１】
定義
プロテアーゼ活性を有するポリペプチド：プロテアーゼ活性を有するポリペプチドまたはプロテアーゼは、場合によっては、ペプチダーゼ、プロテイナーゼ、ペプチドヒドラーゼ、またはタンパク質分解酵素と呼ばれることもある。プロテアーゼは、いずれかの末端から開始してペプチドを加水分解するエキソ型か、ポリペプチド鎖の内部で作用するエンド型（エンドペプチダーゼ）のいずれであってもよい。エンドペプチダーゼは、対象のプロテアーゼの特異性に関連するＮ−およびＣ−末端遮断ペプチド基質に対して活性を示す。
【００２２】
「プロテアーゼ」という用語は、本明細書において、ペプチド結合を加水分解する酵素として定義される。このプロテアーゼの定義は、本明細書で用いる用語「親プロテアーゼ」および「プロテアーゼ変異体」のプロテアーゼ部分にも適用される。用語「プロテアーゼ」は、ＥＣ３．４酵素グループ（その１３のサブクラスの各々を含む）に属するあらゆる酵素を含む。ＥＣ番号は、ＮＣ−ＩＵＢＭＢ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏ−ｃｈｅｍ．１９９４，２２３，１−５；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９５，２３２，１−６；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９６，２３７，１−５；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９７，２５０，１−６；およびＥｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９，２６４，６１０−６５０にそれぞれ公開された補足１〜５を含む）からの酵素命名法（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）１９９２を参照にする。命名法は、定期的に補足され、更新される；例えば、ワールドワイドウェブ（ＷＷＷ）：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｅｍ．ｑｍｗ．ａｃ．ｕｋ／ｉｕｂｍｂ／ｅｎｚｙｍｅ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌを参照。
【００２３】
本発明は、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドの洗剤組成物における使用を提供する。本発明はまた、プロテアーゼ活性を有するポリペプチド、およびポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも提供する。本発明のプロテアーゼは、ペプチダーゼファミリーＳ８のセリンプロテアーゼである。本発明のプロテアーゼは、ｐＨ４〜１１の広範囲でＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに活性であり、特にｐＨ６〜１１の範囲で高い活性を発揮する。
【００２４】
本発明のプロテアーゼ、および本発明の使用のためのプロテアーゼは、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９０：２０５−２１８（１９９３）およびＭＥＲＯＰＳ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｄａｔａｂａｓｅ，ｒｅｌｅａｓｅ，９．４（２０１１年１月３１日）（ｗｗｗ．ｍｅｒｏｐｓ．ａｃ．ｕｋ）に記載されているように、以下：
（ａ）ＥＣ３．４．２１酵素グループに属するプロテアーゼ；および／または
（ｂ）ペプチダーゼファミリーＳ８のセリンプロテアーゼ
からなる群から選択される。データベースは、Ｒａｗｌｉｎｇｓ，Ｎ．Ｄ．，Ｂａｒｒｅｔｔ，Ａ．Ｊ．＆  Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．（２０１０）‘ＭＥＲＯＰＳ：ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｄａｔａｂａｓｅ’，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３８，Ｄ２２７−Ｄ２３３に記載されている。
【００２５】
本発明のプロテアーゼは、エンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２１）である。数種のプロテアーゼ活性タイプがある。３つの主要な活性タイプは次の通りである：Ｐ１のＡｒｇまたはＬｙｓの後にアミド基質の切断があるトリプシン様、Ｐ１の疎水性アミノ酸の１つの後に切断が存在するキモトリプシン様、ならびにＰ１のＡｌａの後に切断があるエラスターゼ様。
【００２６】
所与のプロテアーゼがセリンプロテアーゼ、およびファミリーＳ８プロテアーゼであるかどうかを決定するためには、前述のＨａｎｄｂｏｏｋおよび本明細書に記載する原則を参照にする。こうした決定は、天然もしくは野生型プロテアーゼ；または遺伝子改変型もしくは合成プロテアーゼにかかわらず、あらゆるタイプのプロテアーゼについて実施することができる。
【００２７】
ファミリーＳ８のペプチダーゼは、触媒三残基Ａｓｐ、ＨｉｓおよびＳｅｒをこの順序で含む。触媒三残基のアミノ酸のいずれの突然変異によっても、酵素活性の変化または損失が起こる。ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ（配列番号２）から単離されるＳ８プロテアーゼの触媒三残基のアミノ酸は、恐らく位置Ａｓｐ４０、Ｈｉｓ７３およびＳｅｒ２２５である。
【００２８】
プロテアーゼ活性は、対象プロテアーゼの特異性に関連するペプチド結合を含む基質を使用するあらゆるアッセイを用いて、測定することができる。一般的プロテアーゼ基質の例として、カゼイン、ウシ血清アルブミンおよびヘモグロビンがある。古典的なＡｎｓｏｎおよびＭｉｒｓｋｙ法では、変性ヘモグロビンを基質として使用し、対象プロテアーゼとのアッセイインキュベーションの後、トリクロロ酢酸可溶性ヘモグロビンの量をプロテアーゼ活性の測定値として定量する（Ａｎｓｏｎ，Ｍ．Ｌ．およびＭｉｒｓｋｙ，Ａ．Ｅ．，１９３２，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１６：５９ならびにＡｎｓｏｎ，Ｍ．Ｌ．，１９３８，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２２：７９）。
【００２９】
本発明の目的のために、プロテアーゼ活性は、Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡアッセイ、Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫアッセイおよびＫｉｎｅｔｉｃ  Ｓｕｃ−ＡＡＰＸ−ｐＮＡアッセイなどの「Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」に記載されているアッセイを用いて実施した。Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫアッセイの場合、不溶性Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫ（アズリン架橋カゼイン）基質は、プロテアーゼとインキュベートすると、青色を発するが、この色をプロテアーゼ活性の測定値として定量する。Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡアッセイの場合、無色のＳｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ物質が、プロテアーゼとインキュベートすると、黄色のパラニトロアニリンを放出するが、この黄色をプロテアーゼ活性の測定値として定量する。本発明のポリペプチドは、配列番号２の成熟型ポリペプチドプロテアーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９５％、および少なくとも１００％を有する。
【００３０】
単離されたポリペプチド：「単離されたポリペプチド」という用語は、自然界において見出されるポリペプチドと相対的に人工的に修飾されたポリペプチドを意味し、これにより、これは、ポリペプチドが自然界において一緒に見出される少なくとも１種の他の化合物から完全にまたは部分的に分離されている。一態様において、ポリペプチドは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、少なくとも１％の純度、例えば、少なくとも５％の純度、少なくとも１０％の純度、少なくとも２０％の純度、少なくとも４０％の純度、少なくとも６０％の純度、少なくとも８０％の純度および少なくとも９０％の純度である。
【００３１】
実質的に純粋なポリペプチド：「実質的に純粋なポリペプチド」という用語は、最大で１０重量％、最大で８重量％、最大で６重量％、最大で５重量％、最大で４重量％、最大で３重量％、最大で２重量％、最大で１重量％および最大で０．５重量％の元々関連しているかまたは組換えにより関連している他のポリペプチド材料を含有する調製物を意味する。好ましくは、このポリペプチドは、調製物中に存在するポリペプチド材料の総重量を基準として、少なくとも９２％の純度、例えば、少なくとも９４％の純度、少なくとも９５％の純度、少なくとも９６％の純度、少なくとも９７％の純度、少なくとも９８％の純度、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％の純度および１００％の純度である。本発明の変異体は、実質的に純粋な形態であることが好ましい。これは、例えば、周知の組換え方法によって、または、古典的な精製方法によって変異体を調製することにより達成されることが可能である。
【００３２】
成熟型ポリペプチド：「成熟型ポリペプチド」という用語は、Ｎ末端プロセシング、Ｃ末端切断、グリコシル化、リン酸化等などの翻訳および任意の翻訳後修飾後における、その最終形態にあるポリペプチドを意味する。一態様において、成熟型ポリペプチドは、Ｅｄｍａｎ分解およびインタクトな分子量分析を用いた配列決定に基づき、配列番号２のアミノ酸１〜２７９である。宿主細胞が、同じポリヌクレオチドによって発現されるさらに異なる成熟型ポリペプチド（すなわち、異なるＣ末端および／またはＮ末端アミノ酸を有する）の２つの混合物を産生し得ることは当分野において公知である。さらに、異なる宿主細胞は、ポリペプチドのプロセシングも異なるため、ポリペプチドを発現する１つの宿主細胞は、同じポリヌクレオチドを発現する別の細胞と比較して、異なる成熟型ポリペプチド（例えば、異なるＣ末端および／またはＮ末端アミノ酸を有する）を生成し得ることも公知である。
【００３３】
プロペプチド：「プロペプチド」という用語は、成熟型ポリペプチドと一緒に翻訳され、および、成熟型ポリペプチドが遊離される前に切断されてプロテアーゼ活性が得られるポリペプチドを意味する。一態様において、プロペプチドは、配列番号２のアミノ酸−８９〜−１である。
【００３４】
シグナルペプチド：「シグナルペプチド」という用語は、成熟型ポリペプチドおよび存在する場合はプロペプチドと一緒に翻訳されて、短鎖ポリペプチドを意味する。シグナルペプチドは、翻訳されたポリペプチドのＮ−末端に位置し、ポリペプチドの分泌に関与する。通常は、シグナルペプチドは、プラズマメンブランまたは小胞体のメンブランなどのメンブラン中のポリペプチドの転位の最中に除去される。
【００３５】
シグナルペプチドは、当分野において公知であり、シグナルペプチドを予測するための複数の方法が開発されており、例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １０：１−６）がある。一態様において、シグナル配列は、配列番号２のアミノ酸−１１６〜−９０である。
【００３６】
成熟型ポリペプチドコード配列：「成熟型ポリペプチドコード配列」という用語は、プロテアーゼ活性を有する成熟型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １０：１−６）予測プログラムによれば、配列番号１のヌクレオチド３４９〜１０８５であり、このプログラムは、配列番号１のヌクレオチド１〜８１がシグナルペプチドをコードすることも予測している。別の態様では、成熟型ポリペプチドコード配列は、成熟型ポリペプチドの、Ｅｄｍａｎ分解およびインタクトな分子量分析を用いた配列決定によれば、配列番号１のヌクレオチド３４９〜１１８５である。
【００３７】
配列同一性：２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の関連性が、「配列同一性」というパラメータによって記載される。
【００３８】
本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度は、好ましくはバージョン３．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実装されている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて判定される。用いられる任意のパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳボージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等の残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
【００３９】
本発明の目的のために、２つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列同一性の程度は、好ましくはバージョン３．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージ（前述のＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実装されている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（前述のＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０）を用いて判定される。用いられる任意のパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ  ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等のデオキシリボヌクレオチド×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
【００４０】
断片：「断片」という用語は、成熟型ポリペプチドのアミノおよび／またはカルボキシル末端から欠失された１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸を有するポリペプチドを意味し；ここで、断片はプロテアーゼ活性を有する。一態様において、断片は、少なくとも２００アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸５０〜２５０）、少なくとも２３０アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸２０〜２５０）、少なくとも２６０アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１５〜２７５）、および少なくとも２７５アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１〜２７５）を含有する。
【００４１】
サブ配列：「サブ配列」という用語は、成熟型ポリペプチドコード配列の５’および／または３’末端から欠失された１つまたは複数（いくつか）のヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを意味し；ここで、サブ配列は、プロテアーゼ活性を有する断片をコードする。一態様において、サブ配列は、少なくとも６００ヌクレオチド（例えば、配列番号１のヌクレオチド４９６〜１０９８）、例えば、少なくとも６９０ヌクレオチド（例えば、配列番号１のヌクレオチド４０６〜１０９８）、少なくとも７８０ヌクレオチド（例えば、配列番号１のヌクレオチド３９１〜１１７３）、および少なくとも８２５ヌクレオチド（例えば、配列番号１のヌクレオチド３９１〜１１７３）を含有する。
【００４２】
対立遺伝子変異体：「対立遺伝子変異体」という用語は、同一の染色体座を占有する遺伝子の２つ以上の代替的な形態のいずれかを意味する。対立遺伝子変異は、突然変異を介して自然に生じ、また、個体群中の多型性によりもたらされ得る。遺伝子突然変異は、サイレント（コードされるポリペプチドにおける変化無し）であることが可能であり、または、改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドがコードされ得る。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によってコードされたポリペプチドである。
【００４３】
単離されたポリヌクレオチド：「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、自然界において見出されるポリヌクレオチドと相対的に人工的に修飾されたポリヌクレオチドを意味し、これにより、これは、ポリペプチドが自然界において一緒に見出される少なくとも１種の他の化合物から完全にまたは部分的に分離されている。一態様において、単離されたポリヌクレオチドは、アガロース電気泳動による測定で、少なくとも１％の純度、例えば、少なくとも５％の純度、少なくとも１０％の純度、少なくとも２０％の純度、少なくとも４０％の純度、少なくとも６０％の純度、少なくとも８０％の純度、少なくとも９０％の純度および少なくとも９５％の純度である。ポリヌクレオチドは、ゲノム、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、半合成、合成由来、または、これらのいずれかの組み合わせであり得る。
【００４４】
実質的に純粋なポリヌクレオチド：「実質的に純粋なポリヌクレオチド」という用語は、他の外来性または不要なヌクレオチドを含まず、および、遺伝的に操作されたポリペプチド産生系における使用に好適な形態のポリヌクレオチド調製物を意味する。それ故、実質的に純粋なポリヌクレオチドは、元々または組換え的に関連している他のポリヌクレオチド材料を最大で１０重量％、最大で８重量％、最大で６重量％、最大で５重量％、最大で４重量％、最大で３重量％、最大で２重量％、最大で１重量％および最大で０．５重量％含有する。しかしながら、実質的に純粋なポリヌクレオチドは、プロモータおよびターミネータなどの天然の５’−および３’−非翻訳領域を含み得る。好ましくは、ポリヌクレオチドは、重量基準で、少なくとも９０％の純度、例えば、少なくとも９２％の純度、少なくとも９４％の純度、少なくとも９５％の純度、少なくとも９６％の純度、少なくとも９７％の純度、少なくとも９８％の純度、少なくとも９９％の純度および少なくとも９９．５％の純度である。本発明のポリヌクレオチドは、実質的に純粋な形態であることが好ましい。
【００４５】
コード配列：「コード配列」という用語は、ポリペプチドのアミノ酸配列を直接的に特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、一般にオープンリーディングフレームにより判定され、これは、通常は、ＡＴＧ開始コドン、または、ＧＴＧおよびＴＴＧなどの代わりの開始コドンで開始され、ＴＡＡ、ＴＡＧおよびＴＧＡなどの終止コドンで終わる。コード配列は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成または組換えポリヌクレオチドであり得る。
【００４６】
ｃＤＮＡ：「ｃＤＮＡ」という用語は、真核細胞から得られる成熟したスプライシングされたｍＲＮＡ分子からの逆転写により調製されることが可能であるＤＮＡ分子を意味する。ｃＤＮＡは、対応するゲノムＤＮＡ中に存在し得るイントロン配列を欠いている。初期の一次ＲＮＡ転写物は、成熟型のスプライシングされたｍＲＮＡとして出現する前にスプライシングを含む一連のステップを介して処理されるｍＲＮＡの前駆体である。
【００４７】
核酸構築物：「核酸構築物」という用語は、一重螺旋または二重螺旋を有する核酸分子を意味し、これは、天然の遺伝子から単離されるか、もしくは、そうでなければ自然に存在しないであろう様式で核酸のセグメントを含有するよう修飾されるか、または、合成される。核酸構築物という用語は、核酸構築物が本発明のコード配列の発現に要求される制御配列を含有する場合、用語「発現カセット」と同義である。
【００４８】
制御配列：「制御配列」という用語は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現に必要なすべての成分を意味する。各制御配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して在来もしくは外来のものであっても、または、相互に在来もしくは外来のものであってもよい。このような制御配列としては、これらに限定されないが、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、および転写ターミネータが挙げられる。少なくとも、制御配列、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む。制御配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコード領域に対する制御配列の連結を促進させる特定の制限部位を導入する目的のためにリンカーを備えていてもよい。
【００４９】
作動可能にリンク：「作動可能にリンクされた」という用語は、制御配列がコード配列を発現させるよう、ポリヌクレオチドのコード配列と相対的に適切な位置に制御配列が位置する構造を意味する。
【００５０】
発現：「発現」という用語は、特にこれらに限定されないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾および分泌物を含むポリペプチドの生成に関与するいずれかのステップを含む。
【００５１】
発現ベクター：「発現ベクター」という用語は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、また、その発現をもたらす追加のヌクレオチドに作動可能にリンクされている直鎖または環状ＤＮＡ分子を含む。
【００５２】
宿主細胞：「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物または発現ベクターによる形質転換、形質移入、形質導入等に対する感受性を有するいずれかの細胞タイプを意味する。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異による親細胞とは等しくない親細胞の子孫のいずれかを包含する。
【００５３】
変異体：「変異体」という用語は、１種または複数種（いくつか）のアミノ酸残基の改変（すなわち、置換、挿入および／または欠失）を１つまたは複数（いくつか）の位置で含むプロテアーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換とは、ある位置のアミノ酸の異なるアミノ酸による置き換えを意味し；欠失とは、ある位置のアミノ酸の除去を意味し；および、挿入とは、ある位置のアミノ酸に隣接して例えば１〜３個のアミノ酸を付加することを意味する。
【００５４】
クリーニング組成物：「クリーニング組成物」および「クリーニング配合物」という用語は、布地、カーペット、ガラス食器を含む食器類、コンタクトレンズ、タイル、亜鉛板、床およびテーブル面などの硬質面、髪（シャンプー）、皮膚（セッケンおよびクリーム）、歯（うがい薬、歯磨き粉）等などのクリーニングされるアイテムから望ましくない化合物を取り除くために用いられる組成物を指す。この用語は、組成物が、この組成物において用いられるプロテアーゼおよび他の酵素と適合可能な限りにおいて、所望される特定のタイプのクリーニング組成物および生成物の形態（例えば、液体、ゲル、顆粒または噴霧組成物）のために選択されるいずれかの材料／化合物を包含する。クリーニング組成物材料の特定の選択はクリーニングされる表面、アイテムまたは布地、および、使用中のクリーニング条件について所望される組成物の形態を考慮することにより容易になされる。これらの用語は、いずれかの対象物および／または表面のクリーニング、漂白、消毒および／または殺菌に好適ないずれかの組成物をさらに指す。これらの用語は、これらに限定されないが、洗剤組成物（例えば、液体および／または固体ランドリー洗剤および目の細かい布地用の洗剤；ガラス、木材、セラミックおよび金属製カウンター面ならびに窓などのための硬質面クリーニング配合物；カーペットクリーナ；オーブンクリーナ；布地フレッシュナー；布地柔軟剤；ならびに、生地およびランドリーの予備染み抜き、ならびに、食器用洗剤）を含むことが意図されている。
【００５５】
洗剤組成物：「洗剤組成物」という用語は、別段の定めがある場合を除き、特にクリーニング洗剤といった粒状または粉末形態の汎用または重質洗浄剤；特にいわゆる重質液体（ＨＤＬ）タイプの液体、ゲルまたはペースト形態の汎用洗浄剤；目の細かい布地用の液体洗剤；特に高発泡性タイプのものといった手洗い用食器洗い剤または軽質食器洗い薬剤；家庭用途および工業用途の種々の錠剤、粒状、液体およびすすぎ補助タイプを含む機械用食器洗い薬剤；抗菌性手洗いタイプ、クリーニングバー、うがい薬、義歯クリーナ、車またはカーペットシャンプー、浴室クリーナを含む液体クリーニングおよび消毒剤；髪用シャンプーおよび髪リンス；シャワーゲル、泡風呂；金属クリーナ；ならびに、漂白剤添加剤および「汚れ落としスティック（ｓｔａｉｎ−ｓｔｉｃｋ）」または前処理タイプなどのクリーニング助剤を含む。
【００５６】
「洗剤組成物」および「洗剤配合物」という用語は、汚染された対象物のクリーニング用の洗浄用媒体における使用が意図される混合物の言及において用いられる。いくつかの実施形態において、この用語は、布地および／または衣服の洗濯（例えば、「ランドリー洗剤」）に言及するために用いられる。代替的な実施形態において、この用語は、食器、カトラリー等をきれいにするために用いられるもの（例えば、「食器洗い洗剤」）などの他の洗剤を指す。本発明がいずれかの特定の洗剤配合物または組成物に限定されることは意図されていない。この用語は、本発明に係るプロテアーゼに追加して、例えば、界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系もしくは漂白剤成分、ポリマー、布地コンディショナ、起泡増進剤、セッケン泡抑制剤、染料、芳香剤、色あせ防止剤、光学増白剤、殺菌剤、殺菌・殺カビ剤、汚染物懸濁剤、腐食防止剤、酵素抑制剤もしくは安定化剤、酵素活性化剤、トランスフェラーゼ、加水分解酵素、酸化還元酵素、青み付け剤および蛍光性染料、酸化防止剤、ならびに、溶解剤を含有する洗剤を包含することが意図されている。
【００５７】
酵素洗浄力有益性：「酵素洗浄力有益性」という用語は、本明細書において、ある酵素が、その酵素を含まない同じ洗剤と比較して、洗剤に追加し得る有利な効果として定義される。酵素によりもたらされ得る重要な洗浄力有益性は、洗浄および／またはクリーニング後に、視認可能な汚染物がないか、ほとんどない汚れ除去、洗浄プロセスで遊離した汚染物の再付着の防止または低減（この効果は、再付着防止とも呼ばれる）、もともと白色であったが、使用および洗浄を繰り返すうちに灰色もしくは黄色っぽい外観になった生地の白色度の完全なまたは部分的な回復（増白とも呼ばれる効果）である。触媒による汚れ除去もしくは汚染物の再付着防止に直接関係はしない、生地の取り扱いによる有益性（ｔｅｘｔｉｌｅ  ｃａｒｅ  ｂｅｎｅｆｉｔ）もまた酵素洗浄力有益性に重要である。このような生地の取り扱いによる有益性の例は、１つの布地から別の布地へ、もしくは、同一の布地の別の部分への移染の防止もしくは低減（移染防止または逆汚染防止とも呼ばれる効果）；毛玉ができる傾向を低減するための布地表面からの突出繊維もしくは破断繊維の除去、または、既に存在している毛玉もしくは毛羽立ちの除去（抗毛玉とも呼ばれる効果）；布地柔軟性の向上；布地の色の清澄化；ならびに、布地もしくは衣服の繊維中に詰まった粒状汚染物の除去である。酵素漂白はさらなる酵素洗浄力有益性であり、ここで、触媒活性は、一般に、過酸化水素もしくは他の過酸化物などの漂白成分の形成を触媒するために用いられる。
【００５８】
生地の取り扱いによる有益性：触媒による汚れ除去もしくは汚染物の再付着防止に直接関係はしない、生地の取り扱いによる有益性もまた酵素洗浄力有益性に重要である。このような生地の取り扱いによる有益性の例は、１つの布地から別の布地へ、もしくは、同一の布地の別の部分への移染の防止もしくは低減（移染防止または逆汚染防止とも呼ばれる効果）；毛玉ができる傾向を低減するための布地表面からの突出繊維もしくは破断繊維の除去、または、既に存在している毛玉もしくは毛羽立ちの除去（抗毛玉とも呼ばれる効果）；布地柔軟性の向上；布地の色の清澄化；ならびに、布地の繊維中に詰まった粒状汚染物の除去である。酵素漂白はさらなる酵素洗浄力有益性であり、ここで、触媒活性は、一般に、過酸化水素もしくは他の過酸化物などの漂白成分の形成を触媒するために用いられる。
【００５９】
デルタレミッション値（ΔＲｅｍ）：「デルタレミッション」または「デルタレミッション値」という用語は、本明細書において、４６０ｎｍでの反射率またはレミッション測定の結果として定義される。類似した色の１枚の布きれ（好ましくは、洗浄を繰り返して得られるもの）をバックグラウンドとして用いて、布きれを測定する。各布きれのタイプを代表する布きれを洗浄前に測定する。デルタレミッションは、洗浄済の布きれのレミッション値から未洗浄の布きれのレミッション値を差し引いたものである。
【００６０】
デルタ酵素性能値（ΔＲｅｍ酵素値）：「デルタ酵素性能レミッション値」という用語は、本明細書において、４６０ｎｍでの反射率またはレミッション測定の結果として定義される。類似した色の１枚の布きれ（好ましくは、洗浄を繰り返して得られるもの）をバックグラウンドとして用いて、布きれを測定する。各布きれのタイプを代表する布きれを洗浄前に測定する。デルタレミッションは、酵素を含有する洗剤で洗浄した布きれのレミッション値から、酵素を含まない洗剤で洗浄した同様の布きれのレミッション値を差し引いたものである。
【００６１】
洗剤成分：「洗剤成分」という用語は、本明細書において、洗剤組成物に用いることができる化学物質の種類を意味すると定義される。洗剤成分の例としては、界面活性剤、ヒドロトロープ、ビルダー、補助ビルダー、キレータもしくはキレート剤、漂白系もしくは漂白成分、ポリマー、布地色調剤、布地コンディショナ、起泡増進剤、セッケン泡抑制剤、分散剤、移染防止剤、蛍光性白色化剤、香料、光学増白剤、殺菌剤、殺真菌剤、汚染物懸濁剤、汚染物遊離ポリマー、再付着防止剤、酵素抑制剤または安定化剤、酵素活性化剤、酸化防止剤、および可溶化剤が挙げられる。洗剤組成物は、任意のタイプの洗剤成分を１種または複数種含み得る。
【００６２】
食器洗い：「食器洗い」という用語は、例えば、手洗いまたは自動食器洗いによる食器洗いのあらゆる形態を指す。食器洗いは、限定するものではないが、あらゆる形態の陶器類、例えば、皿、カップ、コップ、ボウル、あらゆる形態のカトラリー、例えば、スプーン、ナイフ、フォークおよび給仕用品、ならびにセラミック、プラスチック、金属、磁気、ガラスおよびアクリル製品などの洗浄を含む。
【００６３】
食器洗い組成物：「食器洗い組成物」という用語は、硬質面を洗浄するためのあらゆる形態の組成物を指す。本発明は、いずれか特定のタイプの食器洗い組成物またはいずれか特定の洗剤に限定されるものではない。
【００６４】
生地：「生地」という用語は、ヤーン、ヤーン中間物、繊維、不織材料、天然材料、合成材料、および、いずれかの他の生地材料、これらの材料から形成される布地および布地から形成される製品（例えば、衣服および他の物品）を含む任意の生地材料を意味する。生地または布地は、ニット、織布、デニム、不織布、フェルト、ヤーン、およびタオル地の形態であってもよい。生地は、綿、亜麻／リネン、ジュート、ラミー、サイザルもしくはコイアなどの天然のセルロース系材料、またはビスコース／レーヨン、ラミー、酢酸セルロース繊維（トライセル）、リヨセルまたはこれらのブレンドなどの人工セルロース系材料（例えば、木材パルプを原料とするもの）といったセルロースベースのものであってよい。生地または布地はまた、羊毛、キャメル、カシミヤ、モヘア、ウサギおよび絹などの天然ポリアミド、またはナイロン、アラミド、ポリエステル、アクリル、ポリプロピレンおよびスパンデックス／エラスタンなどの合成ポリマー、またはこれらのブレンドのような非セルロースベースであってもよいし、さらには、セルロースベースおよび非セルロースベース繊維のブレンドであってもよい。ブレンドの例として、綿および／またはレーヨン／ビスコースと、羊毛、合成繊維（例えば、ポリアミド繊維、アクリル繊維、ポリエステル繊維、ポリビニルアルコール繊維、ポリ塩化ビニル繊維、ポリウレタン繊維、ポリ尿素繊維、アラミド繊維）、およびセルロース含有繊維（例えば、レーヨン／ビスコース、ラミー、亜麻／リネン、ジュート、酢酸セルロース、リオセル）などの１つまたは複数のコンパニオン材料とのブレンドがある。布地は、通常の洗浄可能なランドリー、例えば、汚れた家庭ランドリーであってよい。布地または衣服という用語を用いる場合、より広義の用語「生地」も包含することが意図される。
【００６５】
硬質面クリーニング：「硬質面クリーニング」という用語は、本明細書において、硬質面の洗浄として定義され、ここで、硬質面には、床、テーブル、壁、屋根等、ならびに自動車（車洗い）および食器（食器洗い）などの硬質物体の表面を含み得る。食器洗いとしては、限定するものではないが、皿、カップ、コップ、ボウル、ならびにスプーン、ナイフ、およびフォークなどのカトラリー、給仕用品、セラミック、プラスチック、金属、磁気、ガラスおよびアクリル製品の洗浄が挙げられる。
【００６６】
向上した洗浄性能：「向上した洗浄性能」という用語は、本明細書において、標準プロテアーゼの洗浄性能と比して、例えば、汚れの除去の増加による、洗浄プロテアーゼの変化として定義される。「洗浄性能」という用語は、ランドリーだけではなく、例えば、食器洗いでの洗浄性能も含む。
【００６７】
洗浄性能：「洗浄性能」という用語は、例えば、洗浄または硬質面洗浄の際に洗浄しようとする対象物に存在する汚れを酵素が除去する能力として用いられる。
【００６８】
本発明は、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、好ましくは少なくとも９７％の同一性、好ましくは少なくとも９８％の同一性、および最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、好ましくは少なくとも９７％の同一性、好ましくは少なくとも９８％の同一性、および最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体；ならびに
（ｄ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリペプチドの断片
から選択される、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドに関する。
【００６９】
このようなポリペプチドは、好ましくは、配列番号２のアミノ酸配列もしくはその対立遺伝子変異体を含むか、またはそれから構成され；あるいは、プロテアーゼ活性を有するその断片である。別の態様では、ポリペプチドは、配列番号２の成熟型ポリペプチドを含むか、またはそれから構成される。別の好ましい態様では、ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸１〜２７９を含むか、またはそれから構成される。
【００７０】
本発明は、１つまたは複数の洗浄もしくは洗剤成分と、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドとを含む洗剤組成物などの洗浄組成物に関し、ここで、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリペプチドの断片
から選択される。
【００７１】
本発明は、１つまたは複数の洗浄もしくは洗剤成分を含むと共に、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する単離されたポリペプチドであって、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗剤組成物に関する。一態様では、ポリペプチドは、配列番号２の成熟型ポリペプチドと、３６以下のアミノ酸、例えば、３０アミノ酸、２５アミノ酸、２０アミノ酸、１５アミノ酸、１０アミノ酸、９アミノ酸、８アミノ酸、７アミノ酸、６アミノ酸、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸、および１アミノ酸が異なる。
【００７２】
本発明は、洗剤組成物におけるプロテアーゼ活性を有するポリペプチドの使用に関し、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、以下：
ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリペプチドの断片
からなる群から選択される。
【００７３】
本発明は、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも６０％の配列同一性、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する単離されたポリペプチドであって、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドの洗剤組成物における使用に関する。一態様では、ポリペプチドは、配列番号２の成熟型ポリペプチドと、３６以下のアミノ酸、例えば、３０アミノ酸、２５アミノ酸、２０アミノ酸、１５アミノ酸、１０アミノ酸、９アミノ酸、８アミノ酸、７アミノ酸、６アミノ酸、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸、および１アミノ酸が異なる。
【００７４】
本発明はまた、配列番号２の成熟型ポリペプチドのアミノ酸、または、その相同性配列の１つまたは複数（または数々）の置換、欠失および／または挿入を含む変異体に関する。好ましくは、アミノ酸変異は、副次的な性質のものであり、すなわち、タンパク質の折り畳みおよび／もしくは活性に顕著に影響しない保存的アミノ酸置換もしくは挿入；典型的には１〜約３０アミノ酸の小さな欠失；アミノ−端子メチオニン残基などの小さなアミノ−もしくはカルボキシル−末端伸長；約２０〜２５個以下の残基の小さなリンカーペプチド；または、ポリヒスチジン配列、抗原性エピトープもしくは結合性ドメインなどの変異もしくは他の機能を変化させることによって精製を促進させる小さな伸長である。好ましくは、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して少なくとも６０％の配列同一性を有し；例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％であるが、１００％未満の同一性を配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して有する。
【００７５】
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リシンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、および、小さいアミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、スレオニンおよびメチオニン）の群の範囲内である。特異活性を一般に改変しないアミノ酸置換は技術分野において公知であり、例えば、Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，１９７９，Ｉｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。最も頻繁に生じる置換はＡｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／ＧｌｕおよびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
【００７６】
あるいは、アミノ酸変異は、ポリペプチドの物理化学的特性が改変されるような性質のものである。例えば、アミノ酸変異は、ポリペプチドの熱安定性を向上させ、基質特異性を改変し、至適ｐＨを変化させることであり得る。
【００７７】
親ポリペプチドにおける必須アミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５）などの技術分野において公知である手法に従って同定することが可能である。後者の技術においては、単一のアラニン突然変異が分子中のすべての残基に導入され、得られたミュータント分子が、分子の活性に重要であるアミノ酸残基を同定するためにプロテアーゼ活性についてテストされる。また、Ｈｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８を参照のこと。酵素の活性部位または他の生物学的相互作用は、推定上の接触部位アミノ酸の突然変異が併用される、核磁気共嗚、結晶構造解析、電子回折または光親和性標識などの技術によって判定される、構造の物理的分析によって判定されることも可能である。例えば、ｄｅ  Ｖｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；Ｗｌｏｄａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３０９：５９−６４を参照のこと。必須アミノ酸のアイデンティティは、親ポリペプチドに関連するポリペプチドによるアイデンティティの分析から推測されることも可能である。
【００７８】
故に、配列番号２を有するプロテアーゼの触媒三残基のアミノ酸Ａｓｐ４０、Ｈｉｓ７３およびＳｅｒ２２５は、分子の活性に極めて重要であるため、修飾すべきではない。従って、配列番号２におけるＡｓｐ４０、Ｈｉｓ７３およびＳｅｒ２２５に対応するアミノ酸残基は、好ましくは修飾すべきではない。触媒残基は公知のＳ８セリンプロテアーゼとのアラインメントにより判定されており、ここで、触媒残基は、このようなプロテアーゼのすべてにおいて保存されていることが見出された。
【００７９】
単一もしくは複数のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入は、Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：５３−５７；Ｂｏｗｉｅ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：２１５２−２１５６；国際公開第９５／１７４１３号パンフレット；または、国際公開第９５／２２６２５号パンフレットにより開示されているものなどの公知の突然変異誘発方法、組換え法、および／または、シャッフリング法、これに続く関連するスクリーニング法を用いて行い、テストすることが可能である。用いられることが可能である他の方法としては、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ（例えば、Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：１０８３２−１０８３７；米国特許第５，２２３，４０９号明細書；国際公開第９２／０６２０４号パンフレット）、および、領域特異的突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ  ４６：１４５；Ｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，ＤＮＡ  ７：１２７）が挙げられる。
【００８０】
突然変異誘発／シャッフリング法は、宿主細胞によって発現されたクローン化突然変異誘発ポリペプチドの活性を検出するために、高スループット自動スクリーニング法と組み合わせることが可能である（Ｎｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １７：８９３−８９６）。活性ポリペプチドをコードする突然変異誘発ＤＮＡ分子は、宿主細胞から回収可能であり、技術分野における標準的な方法を用いて直ぐに配列決定されることが可能である。これらの方法では、ポリペプチドにおける個別のアミノ酸残基の重要性を直ぐに判定することが可能である。
【００８１】
配列番号２の成熟型ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失および／または挿入の総数は、一実施形態において、１０以下、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８または９である。
【００８２】
ポリペプチドは、一のポリペプチドの一部分が、他のポリペプチドの一部分のＮ−末端またはＣ−末端で融合したハイブリッドポリペプチドであり得る。
【００８３】
ポリペプチドは、他のポリペプチドが本発明のポリペプチドのＮ−末端またはＣ−末端で融合した融合ポリペプチドまたは切断可能な融合ポリペプチドであり得る。融合ポリペプチドは、他のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを本発明のポリヌクレオチドに融合させることにより生成される。融合ポリペプチドを生成する技術は、技術分野において公知であると共に、フレーム中に収まり、融合ポリペプチドの発現が同一のプロモータおよびターミネータによる制御下にあるよう、ポリペプチドをコードするコード配列を連結するステップを含む。融合タンパク質はまた、翻訳後に融合が形成されるインテインテクノロジーを用いて構築されてもよい（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：２５７５−２５８３；Ｄａｗｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：７７６−７７９）。
【００８４】
融合ポリペプチドは、２つのポリペプチドの間に切断部位をさらに含んでいることが可能である。融合タンパク質が分泌される際に、この部位が切断されて２つのポリペプチドが遊離される。切断部位の例としては、これらに限定されないが、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：５６８−５７６；Ｓｖｅｔｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７６：２４５−２５１；Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６３：３４８８−３４９３；Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：４９８−５０３；および、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：３７８−３８１；Ｅａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５：５０５−５１２；Ｃｏｌｌｉｎｓ−Ｒａｃｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：９８２−９８７；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６：２４０−２４８；および、Ｓｔｅｖｅｎｓ，２００３，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｌｄ  ４：３５−４８に開示されている部位が挙げられる。
【００８５】
本発明はまた、極めて低度の緊縮条件、低度の緊縮条件、中度の緊縮条件、中高度の緊縮条件、高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列、またはその完全長相補ストランドとハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチドにも関する（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，およびＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００８６】
プロテアーゼ活性を有するポリペプチドのソース
プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、いずれかの属の微生物、植物、ウイルスまたはいずれかの種の動物から得られ得る。本発明の目的のために、「〜から得られる」という用語は、本明細書において用いられるところ、所与のソースに関連して、ポリヌクレオチドによってコードされたポリペプチドがソースによって、または、ソースからのポリヌクレオチドが挿入された系統によって生成されることを意味することとする。一態様において、所与のソースから入手されるポリペプチドは細胞外に分泌される。
【００８７】
ポリペプチドは細菌性ポリペプチドであり得る。例えば、ポリペプチドは、プロテアーゼ活性を有する、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）もしくはストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）ポリペプチドなどのグラム陽性細菌性ポリペプチド、または、カムピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ネイッセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）もしくはウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）ポリペプチドなどのグラム陰性細菌性ポリペプチドであり得る。
【００８８】
一態様において、ポリペプチドは、バチルスアルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルスブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルスシルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスクラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルスコアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バシラスフィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチルスラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｕｔｕｓ）、バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルスプミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）またはバチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ポリペプチドである。
【００８９】
他の態様において、ポリペプチドは、ストレプトコッカスエクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカスウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）またはストレプトコッカスズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）ポリペプチドである。
【００９０】
他の態様において、ポリペプチドは、ストレプトマイセスアウロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトマイセスアベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセスコエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトマイセスグリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）またはストレプトマイセスリビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ）ポリペプチドである。
【００９１】
ポリペプチドはまた、真菌性ポリペプチドであり得る。例えば、ポリペプチドは、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）もしくはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）ポリペプチドなどのイースト菌ポリペプチド；または、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アガリクス属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、アウレオバシジウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ボトリオスペリア属（Ｂｏｔｒｙｏｓｐａｅｒｉａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、ケトミジウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｄｉｕｍ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、クラビセプス属（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ）、コクリオボルス属（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ）、コプリノプシス属（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ）、コプトテルメス属（Ｃｏｐｔｏｔｅｒｍｅｓ）、コリナスクス属（Ｃｏｒｙｎａｓｃｕｓ）、クリホネクトリア属（Ｃｒｙｐｈｏｎｅｃｔｒｉａ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジプロディア属（Ｄｉｐｌｏｄｉａ）、エクシディア属（Ｅｘｉｄｉａ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、ギベレラ属（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）、ホロマスチゴトイデス属（Ｈｏｌｏｍａｓｔｉｇｏｔｏｉｄｅｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、イルペクス属（Ｉｒｐｅｘ）、レンチヌラ属（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ）、レプトスパエリア属（Ｌｅｐｔｏｓｐａｅｒｉａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、メラノカルプス属（Ｍｅｌａｎｏｃａｒｐｕｓ）、メリピルス属（Ｍｅｒｉｐｉｌｕｓ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスチクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロケーテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、ピロマイセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、ポイトラシア属（Ｐｏｉｔｒａｓｉａ）、シュードプレクタニア属（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｃｔａｎｉａ）、シュードトリコニムファ属（Ｐｓｅｕｄｏｔｒｉｃｈｏｎｙｍｐｈａ）、リゾムコール属（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）、シゾフィルム属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、シタリジウム属（Ｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、テルモアスクス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、トリコファエア属（Ｔｒｉｃｈｏｐｈａｅａ）、ベルチシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ボルバリエラ属（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ）もしくはキシラリア属（Ｘｙｌａｒｉａ）ポリペプチドなどの糸状真菌性ポリペプチドであり得る。
【００９２】
他の態様において、ポリペプチドは、サッカロマイセスカルスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセスジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロマイセスドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロマイセスクルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロマイセスノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）またはサッカロマイセスオビホルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）ポリペプチドである。
【００９３】
他の態様において、ポリペプチドは、アクレモニウムセルロリチクス（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）、アスペルギルスアクレアツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、アスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルスフォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルスフミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルスジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クリソスポリウムイノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウムケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウムルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウムメルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウムパンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウムクイーンスランジクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウムトロピクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウムゾナツム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｚｏｎａｔｕｍ）、フザリウムバクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムセレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウムクロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウムクルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム  グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウムグラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウムヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムレチクランツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム  ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウムサムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウムサルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウムスポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムスルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウムトルロスム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウムトリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラグリセア（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｇｒｉｓｅａ）、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、イルペクスラクテウス（Ｉｒｐ��ｘ  ｌａｃｔｅｕｓ）、ムコールミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウムフニクロスム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）、ペニシリウムプルプロゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロケーテクリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ  ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、チエラビアアクロマチカ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｃｈｒｏｍａｔｉｃａ）、チエラビアアルボミセス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｌｂｏｍｙｃｅｓ）、チエラビアアルボピロサ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｌｂｏｐｉｌｏｓａ）、チエラビアアウストラレインシス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｕｓｔｒａｌｅｉｎｓｉｓ）、チエラビアフィメティ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｆｉｍｅｔｉ）、チエラビアミクロスポラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）、チエラビアオビスポラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｏｖｉｓｐｏｒａ）、チエラビアペルビアナ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｐｅｒｕｖｉａｎａ）、チエラビアセトサ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｅｔｏｓａ）、チエラビアスペデドニウム（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｐｅｄｅｄｏｎｉｕｍ）、チエラビアスブテルモフィラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｕｂｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、チエラビアテルレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トリコデルマハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）またはトリコデルマビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）ポリペプチドである。
【００９４】
別の態様において、ポリペプチドはストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属ポリペプチドである。
【００９５】
前述の種について、本発明は、知られている種の名称に関わらず、完全および不完全世代、ならびに、例えば無性世代といった他の分類学上の均等物の両方を含むことが理解されるであろう。当業者は、適切な均等物の同一性を容易に認識するであろう。
【００９６】
これらの種の系統は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭ：Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）、オランダ微生物株保存センター（ＣＢＳ：Ｃｅｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ  Ｖｏｏｒ  Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ）、および、農業研究局特許培養物コレクション（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、北方リサーチセンター（ＮＲＲＬ：Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）などの多数の微生物保存機関において公共に容易に利用可能である。
【００９７】
ポリペプチドは、上記のプローブを用いて自然（例えば、汚染物、コンポスト、水等）から単離された微生物を含む他のソースから同定され、また、得られ得る。微生物を自然環境から単離する技術は技術分野において周知である。次いで、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、他の微生物または混合ＤＮＡサンプルのゲノムもしくはｃＤＮＡライブラリを同じようにスクリーニングすることにより得られ得る。一旦、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドがプローブで検出されたら、ポリヌクレオチドは、当業者に周知である技術（例えば、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９を参照のこと）を利用することにより単離またはクローン化されることが可能である。
【００９８】
ポリヌクレオチド
本発明はまた、本発明のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。
【００９９】
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの単離またはクローン化に用いられる技術は技術分野において公知であり、ゲノムＤＮＡからの単離、ｃＤＮＡからの調製、または、これらの組み合わせが含まれる。このようなゲノムＤＮＡからのポリヌクレオチドのクローン化は、例えば、発現ライブラリの周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または抗体スクリーニングを用いて共有される構造機構を伴うクローン化されたＤＮＡ断片を検出することにより実施されることが可能である。例えば、Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，ＰＣＲ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、連結活性化転写（ＬＡＴ）およびポリヌクレオチドベース増幅（ＮＡＳＢＡ）などの他の核酸増幅法が用いられ得る。ポリヌクレオチドは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の系統、または、他のもしくは関連する生体からクローン化され得、それ故、例えば、ポリヌクレオチドの領域をコードするポリペプチドの対立形質もしくは種変異体であり得る。
【０１００】
本発明はまた、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードする、配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含むか、これから構成される単離されたポリヌクレオチドに関する。
【０１０１】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの修飾は、ポリペプチドに実質的に類似するポリペプチドの合成に必要であり得る。ポリペプチドに「実質的に同様」という用語は、ポリペプチドの非天然形態を指す。これらのポリペプチドは、天然のソースから単離されたポリペプチドとはいくらかの操作法で異なっていてもよく、例えば、特異活性、耐熱性、至適ｐＨ等が異なる変異体である。変異体は、配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列（例えば、そのサブ配列）として表されるポリヌクレオチドに基づいて構築され得、および／または、ポリペプチドのアミノ酸配列に変化をもたらさないが、酵素の生成のために意図される宿主生体のコドン利用に対応するヌクレオチド置換の導入により、または、異なるアミノ酸配列をもたらし得るヌクレオチド置換の導入により構築され得る。ヌクレオチド置換の概要については、例えば、Ｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ２：９５−１０７を参照のこと。
【０１０２】
本発明はまた、極めて低度の緊縮条件、低度の緊縮条件、中度の緊縮条件、中高度の緊縮条件、高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列、またはその完全長相補ストランドとハイブリダイズする本発明のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド；またはその対立遺伝子変異体およびサブ配列（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，前掲）にも関する。
【０１０３】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、遺伝コードに関する知識に基づき設計し、当分野では公知の方法を用いて人工的に合成してもよい。特に、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを設計することが可能であり、ここで、ポリヌクレオチドのコドン使用頻度は、選択した宿主生物に特に適している。このようなポリヌクレオチドの例として、バチルス属の一種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）での発現のためにコドン最適化された、配列番号１を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【０１０４】
一態様において、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列または、配列番号１のヌクレオチド３４９〜１１８５のポリヌクレオチドのように、プロテアーゼ活性を有する配列番号２の断片をコードする配列番号１のサブ配列を含むか、またはそれから構成される。
【０１０５】
核酸構築物
本発明はまた、制御配列に適合する条件下で好適な宿主細胞中にコード配列を発現させる１つまたは複数（いくつか）の制御配列に作動可能にリンクした本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
【０１０６】
ポリヌクレオチドは、多様な方法で処置されてポリペプチドの発現がもたらされ得る。ベクターへ挿入される前のポリヌクレオチドの処置が、発現ベクターに応じて、望ましいか、または、必要であり得る。組換えＤＮＡ法を利用するポリヌクレオチドを修飾するための技術は技術分野において周知である。
【０１０７】
制御配列は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現のための宿主細胞によって認識されるポリヌクレオチドであるプロモータ配列であり得る。プロモータ配列は、ポリペプチドの発現を媒介する転写制御配列を含有する。プロモータは、ミュータント、切断およびハイブリッドプロモータを含む選択される宿主細胞において転写活性を示すいずれかのポリヌクレオチドであり得、ならびに、宿主細胞に対して相同性または非相同性である細胞外または細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得られ得る。
【０１０８】
細菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写をもたらす好適なプロモータの例は、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＱ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＬ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ペニシリナーゼ遺伝子（ｐｅｎＰ）、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）マルトジェニックアミラーゼ遺伝子（ａｍｙＭ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）レバンスクラーゼ遺伝子（ｓａｃＢ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｘｙｌＡおよびｘｙｌＢ遺伝子、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃオペロン、ストレプトマイセスコエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）アガラーゼ遺伝子（ｄａｇＡ）および原核β−ラクタマーゼ遺伝子（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：３７２７−３７３１）、ならびに、ｔａｃプロモータ（ＤｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２１−２５）から得られるプロモータである。さらなるプロモータが、「Ｕｓｅｆｕｌ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂａｃｔｅｒｉａ」，Ｇｉｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ２４２：７４−９４；および、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９に記載されている。
【０１０９】
糸状真菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写をもたらす好適なプロモータの例は、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）アセトアミダーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）酸安定α−アミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）またはアスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）アルカリ性タンパク分解酵素、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ、フザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様タンパク分解酵素（国際公開第９６／００７８７号パンフレット）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）アミログルコシダーゼ（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ  Ｄａｒｉａ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ  Ｑｕｉｎｎ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、リゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）リパーゼ、リゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）β−グルコシダーゼ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＶ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＶ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩ、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）β−キシロシダーゼ、ならびに、ＮＡ２−ｔｐｉプロモータ（非翻訳リーダーがアスペルギリ属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉ）におけるトリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子由来の非翻訳リーダーにより置き換えられた、アスペルギリ属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉ）における中性α−アミラーゼをコードする遺伝子を含む修飾プロモータ；非限定的な例としては、非翻訳リーダーがアスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌ���ｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）におけるトリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子由来の非翻訳リーダーにより置き換えられた、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）における中性α−アミラーゼをコードする遺伝子を含む修飾プロモータが挙げられる）の遺伝子から得られたプロモータ；ならびに、そのミュータント、切断およびハイブリッドプロモータである。
【０１１０】
イースト菌宿主において、有用なプロモータは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ガラクトキナーゼ（ＧＡＬ１）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコール脱水素酵素／グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２／ＧＡＰ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）メタロチオネイン（ＣＵＰ１）およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼの遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞に対する他の有用なプロモータは、Ｒｏｍａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｙｅａｓｔ  ８：４２３−４８８により記載されている。
【０１１１】
制御配列はまた、宿主細胞によって認識されて転写を終結させる好適な転写ターミネータ配列であり得る。ターミネータ配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’−末端に作動可能にリンクする。本発明においては、選択した宿主細胞において機能するいずれかのターミネータが用いられ得る。
【０１１２】
糸状真菌宿主細胞の好ましいターミネータは、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびフザリウムオキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様タンパク分解酵素の遺伝子から得られる。
【０１１３】
イースト菌宿主細胞の好ましいターミネータは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）チトクロムＣ（ＣＹＣ１）およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素の遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞の他の有用なターミネータが、前述のＲｏｍａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２に記載されている。
【０１１４】
制御配列はまた、転写されるときの宿主細胞による翻訳に重要であるｍＲＮＡの非翻訳領域である好適なリーダー配列であり得る。リーダー配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’−末端に作動可能にリンクする。選択した宿主細胞において機能するいずれかのリーダー配列が用いられ得る。
【０１１５】
糸状真菌宿主細胞の好ましいリーダーは、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびアスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）トリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から得られる。
【０１１６】
イースト菌宿主細胞の好適なリーダーは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコール脱水素酵素／グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）の遺伝子から得られる。
【０１１７】
制御配列はまた、ポリヌクレオチドの３’−末端に作動可能にリンクし、転写された場合に、ポリアデノシン残基を転写ｍＲＮＡに負荷するシグナルとして宿主細胞により認識される配列であるポリアデニル化配列であり得る。選択される宿主細胞において機能するポリアデニル化配列のいずれかが用いられ得る。
【０１１８】
糸状真菌宿主細胞に好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、フザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様プロテアーゼおよびアスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼの遺伝子から得られる。
【０１１９】
イースト菌宿主細胞の有用なポリアデニル化配列が、Ｇｕｏ  ａｎｄ  Ｓｈｅｒｍａｎ，１９９５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌ．１５：５９８３−５９９０に記載されている。
【０１２０】
制御配列はまた、ポリペプチドのＮ−末端にリンクしたシグナルペプチドをコードし、および、ポリペプチドを細胞の分泌経路に送るシグナルペプチドコード領域であり得る。ポリヌクレオチドのコード配列の５’−末端は、ポリペプチドをコードするコード配列のセグメントと共に、翻訳読み枠に元々リンクしたシグナルペプチドコード配列を本質的に含有し得る。または、コード配列の５’−末端は、コード配列に対して外来性のシグナルペプチドコード配列を含有し得る。コード配列がシグナルペプチドコード配列を元々含有していない場合には、外来性のシグナルペプチドコード配列が必要とされる場合がある。または、外来性のシグナルペプチドコード配列は単に、ポリペプチドの分泌を増強するために天然シグナルペプチドコード配列を置き換えてもよい。しかしながら、発現ポリペプチドを選択した宿主細胞の分泌経路に送るいずれかのシグナルペプチドコード配列がもちいられてもよい。
【０１２１】
細菌宿主細胞の効果的なシグナルペプチドコード配列は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＮＣＩＢ１１８３７マルトジェニックアミラーゼ、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）サブチリシン、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）β−ラクタマーゼ、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）α−アミラーゼ、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中性プロテアーゼ（ｎｐｒＴ、ｎｐｒＳ、ｎｐｒＭ）および古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｐｒｓＡの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。さらなるシグナルペプチドが、Ｓｉｍｏｎｅｎ  ａｎｄ  Ｐａｌｖａ，１９９３，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５７：１０９−１３７に記載されている。
【０１２２】
糸状真菌宿主細胞の効果的なシグナルペプチドコード配列は、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）中性アミラーゼ、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）セルラーゼ、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）エンドグルカナーゼＶ、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼおよびリゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。
【０１２３】
イースト菌宿主細胞の有用なシグナルペプチドは、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子およびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）インベルターゼの遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード配列が、前述のＲｏｍａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２により記載されている。
【０１２４】
制御配列はまた、ポリペプチドのＮ−末端でプロペプチド位置をコードするプロペプチドコード配列であり得る。得られたポリペプチドは、酵素原またはプロポリペプチド（または、いくつかの場合においてチモーゲン）として公知である。プロポリペプチドは、一般に非活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒または自己触媒切断によって活性ポリペプチドに転換されることが可能である。プロペプチドコード配列は、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）アルカリ性タンパク分解酵素（ａｐｒＥ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中性タンパク分解酵素（ｎｐｒＴ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）ラッカーゼ（国際公開第９５／３３８３６号パンフレット）、リゾムコールミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼおよびサッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子の遺伝子から得られ得る。
【０１２５】
シグナルペプチドおよびプロペプチド配列の両方がポリペプチドのＮ−末端に存在する場合、プロペプチド配列はポリペプチドのＮ−末端に隣接して位置されており、また、シグナルペプチド配列は、プロペプチド配列のＮ−末端に隣接して位置されている。
【０１２６】
宿主細胞の増殖に対したポリペプチドの発現の調節を可能とする調節配列を付加することが望ましい場合もあり得る。調節系の例は、調節化合物の存在を含む化学的または物理的刺激に応じて、遺伝子の発現をオンオフさせるものである。原核系における調節系としては、ｌａｃ、ｔａｃ、およびｔｒｐオペレータ系が挙げられる。イースト菌においては、ＡＤＨ２系またはＧＡＬ１系が用いられ得る。糸状菌においては、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼプロモータ、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡα−アミラーゼプロモータおよびアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）グルコアミラーゼプロモータが用いられ得る。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能とするものである。真核系において、これらの調節配列は、メトトレキセートの存在下で増幅されるジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、および、重金属を伴って増幅されるメタロチオネイン遺伝子を含む。これらの事例において、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、調節配列と作動可能にリンクしているであろう。
【０１２７】
発現ベクター
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む組換え発現ベクターに関する。種々のヌクレオチドおよび制御配列が一緒になって、このような部位でポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの挿入または置換を可能とするために１つまたは複数（いくつか）の好都合な制限部位を含み得る組換え発現ベクターが生成される。または、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドまたは配列を含む核酸構築物を発現に適切なベクターに挿入することにより発現され得る。発現ベクターの形成において、コード配列は、コード配列が、発現に適切な制御配列と作動可能にリンクするようベクター中に位置されている。
【０１２８】
組換え発現ベクターは、組換えＤＮＡ法に簡便に供されることが可能であり、ポリヌクレオチドの発現をもたらすことが可能であるいずれかのベクター（例えば、プラスミドまたはウイルス）であり得る。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞に対するベクターの親和性に応じることとなる。ベクターは、直鎖または閉鎖された環状プラスミドであり得る。
【０１２９】
ベクターは、例えばプラスミド、染色体外要素、微小染色体または人工染色体といった、自己複製ベクター（すなわち、染色体外のエンティティとして存在し、その複製が染色体複製とは無関係なベクター）であり得る。ベクターは、自己複製を確実とするための何らかの手段を含有し得る。または、ベクターは、宿主細胞に導入された際に、ゲノム中に統合され、および、中に統合された染色体と一緒に複製されるものであり得る。しかも、単一のベクターもしくはプラスミド、または、一緒になって、宿主細胞のゲノムに導入される全ＤＮＡを含有する２つ以上のベクターもしくはプラスミド、または、トランスポゾンが用いられてもよい。
【０１３０】
ベクターは、形質転換、形質移入、形質導入等された細胞の選択を容易とする１つまたは複数（いくつか）の選択マーカーを含有することが好ましい。選択マーカーは、その生成物が、殺生剤またはウイルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求体に対する原栄養性等をもたらす遺伝子である。
【０１３１】
細菌性選択マーカーの例は、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）もしくはバチルスサブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）由来のｄａｌ遺伝子、または、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシンまたはテトラサイクリン耐性などの抗生物質耐性を与えるマーカーである。イースト菌宿主細胞の好適なマーカーは、ＡＤＥ２、ＨＩＳ３、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＭＥＴ３、ＴＲＰ１およびＵＲＡ３である。糸状真菌宿主細胞において使用される選択マーカーとしては、これらに限定されないが、ａｍｄＳ（アセトアミダーゼ）、ａｒｇＢ（オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ）、ｂａｒ（ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ）、ｈｐｈ（ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ）、ｎｉａＤ（硝酸レダクターゼ）、ｐｙｒＧ（オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼ）、ｓＣ（硫酸アデニルトランスフェラーゼ）およびｔｒｐＣ（アントラニル酸シンターゼ）、ならびに、これらの均等物が挙げられる。アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）のａｍｄＳおよびｐｙｒＧ遺伝子、ならびに、ストレプトマイセスハイグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）のｂａｒ遺伝子がアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）細胞における使用に好ましい。
【０１３２】
ベクターは、宿主細胞のゲノムへのベクターの統合、または、ゲノムとは無関係の細胞中のベクターの自律複製を許容する要素を含有することが好ましい。
【０１３３】
宿主細胞ゲノムへの統合に関して、ベクターは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列、または、相同的もしくは非相同的組換えによるゲノムへの統合に係るベクターのいずれかの他の要素に依存し得る。または、ベクターは、染色体における正確な位置での宿主細胞のゲノムへの相同的組換えによる統合をもたらす追加のポリヌクレオチドを含有していてもよい。正確な位置で統合される可能性を高めるために、統合要素は、相同的組換えの確率を高めるために対応する標的配列に対して高度の配列同一性を有する、１００〜１０，０００塩基対、４００〜１０，０００塩基対および８００〜１０，０００塩基対などの十分な数の核酸を含有しているべきである。統合要素は、宿主細胞のゲノム中の標的配列と相同的であるいずれかの配列であり得る。さらに、統合要素は、非コーディングまたはコーディングポリヌクレオチドであり得る。他方で、ベクターは、非相同的組換えにより宿主細胞のゲノムに統合され得る。
【０１３４】
自律複製に関して、ベクターは、対象の宿主細胞におけるベクターの自律的な複製を可能とする複製起点をさらに含んでいてもよい。複製起点は、細胞において機能する自律複製を媒介するいずれかのプラスミドレプリケータであり得る。「複製起点」または「プラスミドレプリケータ」という用語は、インビボでのプラスミドまたはベクターの複製を可能とするポリヌクレオチドを意味する。
【０１３５】
細菌性複製起点の例は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における複製を許容するプラスミドｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９、ｐＡＣＹＣ１７７およびｐＡＣＹＣ１８４の複製起点、ならびに、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）における複製を許容するｐＵＢ１１０、ｐＥ１９４、ｐＴＡ１０６０およびｐＡＭβ１の複製起点である。
【０１３６】
イースト菌宿主細胞において用いられる複製起点の例は、２ミクロン複製起点、ＡＲＳ１、ＡＲＳ４、ＡＲＳ１とＣＥＮ３との組み合わせ、および、ＡＲＳ４とＣＥＮ６との組み合わせである。
【０１３７】
糸状真菌細胞において有用な複製起点の例は、ＡＭＡ１およびＡＮＳ１（Ｇｅｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｇｅｎｅ  ９８：６１−６７；Ｃｕｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：９１６３−９１７５；国際公開第００／２４８８３号パンフレット）である。ＡＭＡ１遺伝子の単離およびＡＭＡ１遺伝子を含むプラスミドまたはベクターの構築は、国際公開第００／２４８８３号パンフレットに開示されている方法に従って達成可能である。
【０１３８】
本発明のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーが宿主細胞に挿入されて、ポリペプチドの生成が高められてもよい。ポリヌクレオチドのコピーの数は、配列の少なくとも１つの追加のコピーを宿主細胞ゲノムに統合することにより、または、増幅可能な選択マーカー遺伝子をポリヌクレオチドに含めることにより増加させることが可能であり、ここで、選択マーカー遺伝子の増幅されたコピー、従って、ポリヌクレオチドの追加のコピーを含有する細胞は、適切な選択可能な薬剤中で細胞を培養することにより選択可能である。
【０１３９】
上記の要素を連結して本発明の組換え発現ベクターを構築するために用いられる手法は、当業者に周知である（例えば、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９を参照のこと）。
【０１４０】
宿主細胞
本発明はまた、本発明のポリペプチドの生成をもたらす１つまたは複数（いくつか）の制御配列に作動可能にリンクした本発明のポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞に関する。ポリヌクレオチドを含む構築物もしくはベクターは、構築物もしくはベクターが染色体性組み込み体として、もしくは、既述の自己複製余剰−染色体性ベクターとして維持されるよう宿主細胞に導入される。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異により親細胞と同等ではない親細胞のいずれかの子孫を包含する。宿主細胞の選択は、ポリペプチドをコードする遺伝子およびそのソースに大きく依存することとなる。
【０１４１】
宿主細胞は、例えば、原核生物または真核生物といった、本発明のポリペプチドの組換え生成において有用ないずれかの細胞であり得る。
【０１４２】
原核宿主細胞は、グラム陽性またはグラム陰性バクテリアのいずれかであり得る。グラム陽性バクテリアとしては、これらに限定されないが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）およびストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられる。グラム陰性バクテリアとしては、これらに限定されないが、カムピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ネイッセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）およびウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）が挙げられる。
【０１４３】
細菌宿主細胞は、特にこれらに限定されないが、バチルスアルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルスブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルスシルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスクラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルスコアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バシラスフィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチルスラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｕｔｕｓ）、バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルスプミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、およびバチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）細胞を含むいずれかのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞であり得る。
【０１４４】
細菌宿主細胞はまた、特にこれらに限定されないが、ストレプトコッカスエクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカスウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）、およびストレプトコッカスズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）細胞を含むいずれかのストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞であり得る。
【０１４５】
細菌宿主細胞はまた、特にこれらに限定されないが、ストレプトマイセスアウロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトマイセスアベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセスコエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトマイセスグリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）、およびストレプトマイセスリビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ）細胞を含むいずれかのストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞であり得る。
【０１４６】
バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、例えば、プロトプラスト形質転換により（例えば、Ｃｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，１９７９，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１１−１１５を参照のこと）、コンピテント細胞を用いることにより（例えば、Ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  Ｓｐｉｚｉｚｅｎ，１９６１，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．８１：８２３−８２９、またはＤｕｂｎａｕ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｏｆｆ−Ａｂｅｌｓｏｎ，１９７１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５６：２０９−２２１を参照のこと）、電気穿孔法により（例えば、Ｓｈｉｇｅｋａｗａ  ａｎｄ  Ｄｏｗｅｒ，１９８８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：７４２−７５１を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｅ，１９８７，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：５２７１−５２７８を参照のこと）行われ得る。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞へのＤＮＡの導入は、例えば、プロトプラスト形質転換により（例えば、Ｈａｎａｈａｎ，１９８３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６６：５５７−５８０を参照のこと）または電気穿孔法により（例えば、Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：６１２７−６１４５を参照のこと）行われ得る。ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、例えば、プロトプラスト形質転換および電気穿孔法により（例えば、Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｆｏｌｉａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（Ｐｒａｈａ）４９：３９９−４０５を参照のこと）、接合により（例えば、Ｍａｚｏｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７１：３５８３−３５８５を参照のこと）、または、形質導入により（例えば、Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：６２８９−６２９４を参照のこと）行われ得る。シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、例えば、電気穿孔法により（例えば、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６４：３９１−３９７を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｐｉｎｅｄｏ  ａｎｄ  Ｓｍｅｔｓ，２００５，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７１：５１−５７を参照のこと）行われ得る。ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、例えば、天然コンピテンスにより（例えば、Ｐｅｒｒｙ  ａｎｄ  Ｋｕｒａｍｉｔｓｕ，１９８１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３２：１２９５−１２９７を参照のこと）、プロトプラスト形質転換により（例えば、Ｃａｔｔ  ａｎｄ  Ｊｏｌｌｉｃｋ，１９９１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｓ  ６８：１８９−２０７を参照のこと）、電気穿孔法により（例えば、Ｂｕｃｋｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５：３８００−３８０４を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｃｌｅｗｅｌｌ，１９８１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．４５：４０９−４３６を参照のこと）行われ得る。しかしながら、ＤＮＡを宿主細胞に導入するための技術分野において公知である方法のいずれかを用いるこ��が可能である。
【０１４７】
宿主細胞はまた、哺乳類、昆虫、植物または真菌細胞などの真核生物であり得る。
【０１４８】
宿主細胞は真菌細胞であり得る。本明細書において用いられるところ、「真菌」は、子嚢菌門（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）、担子菌門（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）、ツボカビ門（Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）および接合菌門（Ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａ）（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ，Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ  ａｎｄ  Ｂｉｓｂｙ’ｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｆｕｎｇｉ，８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，ＣＡＢ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫに定義されているとおり）、ならびに、卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）（前述のＨａｗｋｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ｐａｇｅ  １７１に引用されているとおり）およびすべての栄養胞子形成真菌（前述のＨａｗｋｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）を含む。
【０１４９】
真菌宿主細胞はイースト菌細胞であり得る。本明細書において用いられるところ、「イースト菌」は、子嚢菌酵母（エンドミセス目（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ））、担子菌イースト菌を含み、イースト菌は、不完全菌類（不完全酵母菌類（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｔｅｓ））に属する。イースト菌の分類は将来において変更される可能性があるため、本発明の目的について、イースト菌は、Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔ（Ｓｋｉｎｎｅｒ，Ｆ．Ａ．，Ｐａｓｓｍｏｒｅ，Ｓ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｄａｖｅｎｐｏｒｔ，Ｒ．Ｒ．，ｅｄｓ，Ｓｏｃ．Ａｐｐ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．９，１９８０）に記載されているとおりに定義されるものとする。
【０１５０】
イースト菌宿主細胞は、クルイベロマイセスラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、サッカロマイセスカルスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセスジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロマイセスドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロマイセスクルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロマイセスノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセスオビホルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）またはヤロウイアリポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）細胞などのカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）またはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）細胞であり得る。
【０１５１】
真菌宿主細胞は糸状真菌細胞であり得る。「糸状菌」は、真菌植物門（Ｅｕｍｙｃｏｔａ）および卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）亜門（前述のＨａｗｋｓｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５で定義されているとおり）のすべてのフィラメント形を含む。糸状菌は、一般に、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナンおよび他の複雑な多糖類から組成される菌糸体壁によって特徴付けられる。栄養成長は菌糸の伸展によるものであり、および、炭素異化は絶対好気性である。対照的に、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などのイースト菌による栄養成長は単細胞葉状体の出芽によるものであり、および、炭素異化は発酵性であり得る。
【０１５２】
糸状真菌宿主細胞は、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、アウレオバシジウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ブエルカンデラ属（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、コプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）、コリオルス属（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスチクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロケーテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、フレビア属（Ｐｈｌｅｂｉａ）、ピロマイセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、プレウロツス属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、シゾフィルム属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、テルモアスクス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トラメテス属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）細胞であり得る。
【０１５３】
例えば、糸状真菌宿主細胞は、アスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルスフォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルスフミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルスジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、ヤケイロタケ（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ  ａｄｕｓｔａ）、セリポリオプシスアネイリナ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ａｎｅｉｒｉｎａ）、セリポリオプシスカレギエア（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｃａｒｅｇｉｅａ）、セリポリオプシスギルベスセンス（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｇｉｌｖｅｓｃｅｎｓ）、セリポリオプシスパンノシンタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｐａｎｎｏｃｉｎｔａ）、セリポリオプシスリブロサ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｒｉｖｕｌｏｓａ）、セリポリオプシススブルファ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｕｂｒｕｆａ）、セリポリオプシススブベルミスポラ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｕｂｖｅｒｍｉｓｐｏｒａ）、クリソスポリウムイノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウムケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウムルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウムメルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウムパンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウムクイーンスランジクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウムトロピクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウムゾナツム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｚｏｎａｔｕｍ）、コプリヌスシネレウス（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｉｎｅｒｅｕｓ）、クリオルスヒルスツス（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｈｉｒｓｕｔｕｓ）、フザリウムバクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムセレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウムクロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウムクルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム  グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウムグラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウムヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムレチクランツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム  ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウムサムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウムサルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕ��）、フザリウムスポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムスルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウムトルロスム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウムトリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、ムコールミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウムプルプロゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロケーテクリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ  ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、フレビアラジアタ（Ｐｈｌｅｂｉａ  ｒａｄｉａｔａ）、プレウロツスエリンギイ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｙｎｇｉｉ）、チエラビアテルレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トラメテスビロサ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｉｌｌｏｓａ）、トラメテスベルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、トリコデルマハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）またはトリコデルマビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）細胞であり得る。
【０１５４】
真菌細胞は、それ自体公知の様式でのプロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、および、細胞壁の再生を含むプロセスにより形質転換され得る。アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）およびトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）宿主細胞の形質転換に好適な手法は、欧州特許第２３８０２３号明細書およびＹｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：１４７０−１４７４に記載されている。フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種の形質転換に好適な方法は、Ｍａｌａｒｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ  ７８：１４７−１５６および国際公開第９６／００７８７号パンフレットに記載されている。イースト菌は、Ｂｅｃｋｅｒ  ａｎｄ  Ｇｕａｒｅｎｔｅ，Ｉｎ  Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．ａｎｄ  Ｓｉｍｏｎ，Ｍ．Ｉ．，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  １９４，ｐｐ  １８２−１８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３；および、Ｈｉｎｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：１９２０に記載の手法を用いて形質転換され得る。
【０１５５】
生成方法
本発明はまた：（ａ）ポリペプチドの生成を実施可能な条件下で、野生型形態でポリペプチドを生成する細胞を培養するステップ；および、（ｂ）ポリペプチドを回収するステップを含む本発明のポリペプチドを生成する方法に関する。好ましい態様において、細胞はバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）のものである。
【０１５６】
本発明はまた：（ａ）ポリペプチドの生成を実施可能な条件下で本発明の組換え宿主細胞を培養するステップ；および、（ｂ）ポリペプチドを回収するステップを含む本発明のポリペプチドを生成する方法に関する。
【０１５７】
宿主細胞は、技術分野において周知である方法を用いてポリペプチドの生成に好適な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、好適な培地中ならびにポリペプチドの発現および／または単離が許容される条件下で行われる、振盪フラスコ培養により、および、実験用もしくは産業用発酵槽における小規模もしくは大規模発酵（連続式、バッチ式、フェドバッチ式または固体状発酵を含む）により培養され得る。培養は、炭素および窒素源および無機塩を含む好適な栄養培地において、技術分野において公知である手法を用いて行われる。好適な媒体は、商業的な供給者から入手可能であるか、または、公開された組成に従って調製され得る（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ）。ポリペプチドが栄養培地に分泌される場合、ポリペプチドは培地から直接回収可能である。ポリペプチドが分泌されない場合、細胞ライセートから回収可能である。
【０１５８】
ポリペプチドは、ポリペプチドに特異的な技術分野において公知である方法を用いて検出され得る。これらの検出方法は、特定の抗体の使用、酵素産生物の形成、または、酵素基質の消失を含み得る。例えば、酵素アッセイを用いてポリペプチドの活性を判定してもよい。
【０１５９】
ポリペプチドは技術分野において公知である方法を用いて回収され得る。例えば、ポリペプチドは、特にこれらに限定されないが、遠心分離、ろ過、抽出、噴霧乾燥、蒸発または沈殿を含む従来の手法により栄養培地から回収され得る。
【０１６０】
ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドを得るために、特にこれらに限定されないが、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、親和性、疎水性、クロマトフォーカシングおよびサイズ排除）、電気泳動的手法（例えば、分取等電点電気泳動）、較差溶解度（例えば、硫酸アンモニウム沈殿）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、または、抽出（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｊ．−Ｃ．Ｊａｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｒｓ  Ｒｙｄｅｎ，ｅｄｉｔｏｒｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと）を含む技術分野において公知である多様な手法によって精製され得る。
【０１６１】
代替的な態様においては、ポリペプチドは回収されず、ポリペプチドを発現する本発明の宿主細胞がポリペプチドのソースとして用いられ得る。
【０１６２】
本発明はまた、本発明のポリペプチドを含む組成物に関する。好ましくは、組成物は、このようなポリペプチドが富化されている。「富化」という用語は、組成物のプロテアーゼ活性が、例えば少なくとも１．１の富化因子で高められることを示す。
【０１６３】
洗剤組成物
一実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドを１種または複数種の追加のクリーニングおよび／または洗剤組成物成分と共に含む洗剤組成物に関する。追加の成分の選択は、当業者の技能の範囲内であり、以下に記載される例示的な非限定的な成分を含む従来の成分が含まれる。
【０１６４】
成分の選択には、生地の取り扱いの場合、洗浄しようとする生地の種類、汚れの種類および／または程度、洗浄を行う温度、ならびに、洗剤生成物の配合物の検討が含まれ得る。以下に記載の成分は特定の官能基に従う一般的なヘッダによって分類されるが、これは限定として解釈されるべきではなく、当業者に認識されるであろう１つまたは複数の追加の官能基が成分中に含まれていてもよい。洗剤組成物は、例えば、布地、布もしくはリネンなどの生地の洗濯、または床、テーブル、もしくは食器洗いなどの硬質面のクリーニングに好適となり得る。
【０１６５】
洗剤組成物中の酵素量
本発明の一実施形態において、本発明のポリペプチドは、洗浄液１リットル当たり、０．０００１〜２００ｍｇの酵素タンパク質、例えば０．０００５〜１００ｍｇの酵素タンパク質、好ましくは０．００１〜３０ｍｇの酵素タンパク質、より好ましくは０．００５〜８ｍｇの酵素タンパク質、さらにより好ましくは０．０１〜２ｍｇの酵素タンパク質に対応する量で洗剤組成物に添加してよい。
【０１６６】
例えば、自動食器洗い（ＡＤＷ）に使用するための組成物は、組成物の重量に対し、０．０００１％〜５０％、例えば０．００１％〜２０％、例えば、０．０１％〜１０％、例えば、０．０５％〜５％の酵素タンパク質を含有してよい。
【０１６７】
例えば、顆粒洗濯洗剤に使用するための組成物は、組成物の重量に対し、０．０００１％〜５０％、例えば０．００１％〜２０％、例えば０．０１％〜１０％、例えば０．０５％〜５％の酵素タンパク質を含有してよい。
【０１６８】
例えば、液体洗濯洗剤に使用するための組成物は、組成物の重量に対し、０．０００１％〜１０％、例えば０．００１％〜７％、例えば０．１％〜５％の酵素タンパク質を含有してよい。
【０１６９】
本発明の洗剤組成物のプロテアーゼは、例えば、プロピレングリコールもしくはグリセロールなどのポリオール、糖質もしくは糖質アルコール、乳酸、ホウ酸、もしくは例えば芳香族ホウ酸エステルといったホウ酸誘導体、または、４−ホルミルフェニルボロン酸（４−ＦＰＢＡ）などのフェニルボロン酸誘導体といった従来の安定化剤を用いて安定化することができ、また、組成物は、例えば、国際公開第９２／１９７０９号パンフレットおよび国際公開第９２／１９７０８号パンフレットに記載されているように配合してもよい。
【０１７０】
本発明の他の安定化剤は、国際公開第２００９／１１８３７５号パンフレットまたは国際公開第２０１０／０５５０５２号パンフレットに開示されているペプチドアルデヒドなどのペプチドアルデヒドプロテアーゼ阻害剤である。
【０１７１】
本発明のポリペプチドはまた、参照により本明細書に援用される国際公開第９７／０７２０２号パンフレットに開示の洗剤配合物に組み込んでもよい。
【０１７２】
組成物は、主な酵素成分として本発明のポリペプチドを含み得る例えば単成分組成物である。または、組成物は、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解性酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解性酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼまたはキシラナーゼなどの複数の酵素活性を含み得る。追加の酵素が、例えば、アスペルギルスアクレアツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、アスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルスフォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルスフミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルスジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）またはアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）といったアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）；例えば、フザリウムバクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムセレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウムクロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウムクルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム  グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウムグラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウムヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムレチクランツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム  ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウムサムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウムサルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウムスルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウムトルロセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｓｅｕｍ）、フザリウムトリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）もしくはフザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）といったフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）；フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、例えば、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）もしくはフミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）；または、例えば、トリコデルマハルジ���ヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）またはトリコデルマビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）といったトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）に属する微生物によって例えば生成され得る。
【０１７３】
組成物は、技術分野において公知である方法に従って調製され得、また、液体または乾燥組成物の形態であり得る。例えば、組成物は、粒質物または微粒剤の形態であり得る。ポリペプチドは、技術分野において公知である方法に従って安定化され得る。
【０１７４】
従って、本発明の一態様は、１つまたは複数の洗剤成分と、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドとを含む洗剤組成物に関し、ここで、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７５％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｄ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリペプチドの断片
から選択される。
【０１７５】
一実施形態において、本発明は、本発明の酵素を１種または複数種の追加のクリーニング組成物成分、例えば、洗剤成分と共に含む洗剤組成物に関する。
【０１７６】
追加の成分の選択は、当業者の技能の範囲内であり、以下に記載される例示的な非限定的な成分を含む従来の処方成分が含まれる。成分の選択には、布地の取り扱いに関して、クリーニングされる布地の種類、汚染物の種類および／または程度、クリーニングを行う温度、ならびに、洗剤生成物の配合物の検討が含まれ得る。以下に記載の成分は特定の官能基に従う一般的なヘッダによって分類されるが、これは限定として解釈されるべきではなく、当業者に認識されるであろうとおり追加の官能基が成分中に含まれていてもよい。
【０１７７】
界面活性剤
洗剤組成物は、アニオン性および／またはカチオン性および／またはノニオン性および／または半極性および／または両イオン性またはこれらの混合物であり得る１種または複数種の界面活性剤を含んでいてもよい。特定の実施形態において、洗剤組成物は、１種または複数種のノニオン性界面活性剤および１種または複数種のアニオン性界面活性剤の混合物を含む。界面活性剤は、典型的には、約１％〜約４０％または約３％〜約２０％または約３％〜約１０％などの約０．１％〜６０重量％のレベルで存在する。界面活性剤は所望のクリーニング用途に基づいて選択され、技術分野において公知であるいずれかの従来の界面活性剤を含む。ランドリー洗剤に用いられ得る技術分野において公知であるいずれかのランドリー界面活性剤が利用され得る。
【０１７８】
含まれる場合、洗剤は、通常は、約５％〜約１５％または約２０％〜約２５％を含む約５％〜約３０％などの約１％〜約４０重量％のアニオン性界面活性剤を含有するであろう。アニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、硫酸塩およびスルホン酸塩、特に、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分岐アルキルベンゼンスルホネート（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホネート、α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン−２，３−ジイルビス（硫酸塩）、ヒドロキシアルカンスルホネートおよびジスルホネート、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアルキルスルフェート（ＡＳ）、脂肪族アルコールスルフェート（ＦＡＳ）、第１級アルコールスルフェート（ＰＡＳ）、アルコールエーテルスルフェート（アルコールエトキシスルフェートまたは脂肪族アルコールエーテルスルフェートとしても公知であるＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ）、第２級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、パラフィンスルホネート（ＰＳ）、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）を含むα−スルホ脂肪酸メチルエステル（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキル−またはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸またはセッケンのジエステルおよびモノエステル、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１７９】
含まれる場合、洗剤は、通常、約１％〜約４０重量％のカチオン性界面活性剤を含むであろう。カチオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルキルジメチルエタノール第４級アミン（ＡＤＭＥＡＱ）、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、ジメチルジステアリル塩化アンモニウム（ＤＳＤＭＡＣ）およびアルキルベンジルジメチルアンモニウム、ならびに、これらの組み合わせ、アルキル第４級アンモニウム化合物、アルコキシル化第４級アンモニウム（ＡＱＡ）が挙げられる。
【０１８０】
含まれる場合、洗剤は、通常、約３％〜約５％または約８％〜約１２％などの、例えば約０．５％〜約３０％、特に約１％〜約２０％、約３％〜約１０％といった約０．２％〜約４０重量％のノニオン性界面活性剤を含有するであろう。ノニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルコールエトキシレート（ＡＥまたはＡＥＯ）、アルコールプロポキシレート、プロポキシル化脂肪族アルコール（ＰＦＡ）、エトキシル化および／またはプロポキシル化脂肪酸アルキルエステルなどのアルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド（ＡＰＧ）、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド（ＦＡＤＡ）、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＥＦＡＭ）、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、または、グルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルコサミドＧＡまたは脂肪酸グルカミドＦＡＧＡ）、ならびに、商品名ＳＰＡＮおよびＴＷＥＥＮで入手可能な生成物、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１８１】
含まれる場合、洗剤は、通常、約１％〜約４０重量％の半極性界面活性剤を含有するであろう。半極性界面活性剤の非限定的な例としては、アルキルジメチルアミンオキシド、Ｎ−（ココアルキル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミンオキシドおよびＮ−（獣脂−アルキル）−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミンオキシドなどのアミンオキシド（ＡＯ）、脂肪酸アルカノールアミドおよびエトキシル化脂肪酸アルカノールアミド、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１８２】
含まれる場合、洗剤は、通常、約１％〜約４０重量％の両性イオン性界面活性剤を含有するであろう。両性イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、ベタイン、アルキルジメチルベタインおよびスルホベタイン、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１８３】
ヒドロトロープ
ヒドロトロープは、疎水性化合物を水溶液（または、反対に、極性物質を非極性環境）中に可溶化させる化合物である。典型的には、ヒドロトロープは、親水特性および疎水特性の両方を有する（いわゆる、界面活性剤から公知である両親媒性特性）が；しかしながら、ヒドロトロープの分子構造は、一般に、自発的な自己凝集を好まず、例えば、Ｈｏｄｇｄｏｎ  ａｎｄ  Ｋａｌｅｒ（２００７），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｏｌｌｏｉｄ  ＆  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １２：１２１−１２８による概説を参照のこと。ヒドロトロープは、ミセル相、層状相または他の良好に画定されたメソ相を形成する界面活性剤および脂質について見出されるような、超えると自己凝集を生じる限界濃度を示さない。代わりに、多くのヒドロトロープは、凝集物の大きさが濃度の増加に伴って大型化する連続タイプの凝集プロセスを示す。しかしながら、多くのヒドロトロープは、水、脂、界面活性剤およびポリマーの混合物を含む、極性および非極性特性の物質を含有する系の相挙動、安定性およびコロイド特性を改変させる。ヒドロトロープは、従来、製薬、パーソナルケア、食品から技術的用途にわたり産業で用いられている。洗剤組成物中においてヒドロトロープを使用することにより、相分離または高粘度などの望ましくない現象を誘起することなく、例えば、界面活性剤のより濃縮された配合物（水を排除することにより液体洗剤をコンパクトにするプロセスのとおり）が可能となる。
【０１８４】
洗剤は、約０．５〜約５％または約３％〜約５％などの０〜５重量％のヒドロトロープを含有し得る。洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかのヒドロトロープが利用され得る。ヒドロトロープの非限定的な例としては、ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐ−トルエンスルホン酸ナトリウム（ＳＴＳ）、キシレンスルホン酸ナトリウム（ＳＸＳ）、クメンスルホン酸ナトリウム（ＳＣＳ）、シメンスルホン酸ナトリウム、アミンオキシド、アルコールおよびポリグリコールエーテル、ヒドロキシナフタレンナトリウム、ヒドロキシナフタレンスルホン酸ナトリウム、エチルヘキシル硫酸ナトリウム、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１８５】
ビルダーおよびコビルダー
洗剤組成物は、約５％〜約２０％などの約０〜６５重量％の洗剤ビルダーもしくはコビルダー、または、これらの混合物を含有し得る。皿洗浄洗剤において、ビルダーのレベルは、典型的には４０〜６５％、特に５０〜６５％である。ビルダーおよび／またはコビルダーは特に、ＣａおよびＭｇと共に水溶性錯体を形成するキレート化剤であり得る。ランドリー洗剤に用いられる技術分野において公知であるいずれかのビルダーおよび／またはコビルダーが利用され得る。ビルダーの非限定的な例としては、ゼオライト、二リン酸塩（ピロリン酸塩）、三リン酸ナトリウム（ＳＴＰまたはＳＴＰＰ）などの三リン酸塩、炭酸ナトリウムなどの炭酸塩、メタケイ酸ナトリウムなどの可溶性ケイ酸塩、層状ケイ酸塩（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製ＳＫＳ−６）、２−アミノエタン−１−オール（ＭＥＡ）、イミノジエタノール（ＤＥＡ）および２，２’、２”−ニトリロトリエタノール（ＴＥＡ）などのエタノールアミン、および、カルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１８６】
洗剤組成物はまた、約１％〜約２０％などの０〜４０重量％の洗剤コビルダーまたはこれらの混合物を含有し得る。洗剤組成物は、コビルダーを単独で含んでいても、または、例えばゼオライトビルダーといったビルダーと組み合わせて含んでいてもよい。コビルダーの非限定的な例としては、ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）またはコポリ（アクリル酸／マレイン酸）（ＰＡＡ／ＰＭＡ）などのポリアクリレートのホモポリマーまたはそのコポリマーが挙げられる。さらに非限定的な例としては、クエン酸塩、アミノカルボン酸塩、アミノポリカルボン酸塩およびホスホン酸塩などのキレート剤、ならびに、アルキル−またはアルケニルコハク酸が挙げられる。追加の特定の例としては、２，２’，２”−ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸（ＥＤＤＳ）、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジイルビス（ホスホン酸）（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンテトラキス（メチレン）テトラキス（ホスホン酸）（ＥＤＴＭＰＡ）、ジエチレントリアミンエペンタキス（メチレン）ペンタキス（ホスホン酸）（ＤＴＰＭＰＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（ＥＤＧ）、アスパラギン酸−Ｎ−一酢酸（ＡＳＭＡ）、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＳＤＡ）、アスパラギン酸−Ｎ−モノプロピオン酸（ＡＳＭＰ）、イミノジコハク酸（ＩＤＡ）、Ｎ−（２−スルホメチル）アスパラギン酸（ＳＭＡＳ）、Ｎ−（２−スルホエチル）アスパラギン酸（ＳＥＡＳ）、Ｎ−（２−スルホメチル）グルタミン酸（ＳＭＧＬ）、Ｎ−（２−スルホエチル）グルタミン酸（ＳＥＧＬ）、Ｎ−メチルイミノ二酢酸（ＭＩＤＡ）、α−アラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（α−ＡＬＤＡ）、セリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＥＤＡ）、イソセリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＩＳＤＡ）、フェニルアラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＰＨＤＡ）、アントラニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＮＤＡ）、スルファニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＬＤＡ）、タウリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＴＵＤＡ）およびスルホメチル−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＭＤＡ）、Ｎ−（ヒドロキシエチル）−エチリデンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエタノールグリシン（ＤＥＧ）、ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）（ＤＴＰＭＰ）、アミノトリス（メチレンホスホン酸）（ＡＴＭＰ）、ならびに、これらの組み合わせおよび塩が挙げられる。さらなる例示的なビルダーおよび／またはコビルダーは、例えば、国際公開第０９／１０２８５４号パンフレット、米国特許第５９７７０５３号明細書に開示されている。
ホスホン酸塩などの湯垢抑制剤。
【０１８７】
漂白系
洗剤は、約０．５％〜約５％などの０〜１０重量の漂白系を含有し得る。ランドリー洗剤において用いられるいずれかの技術分野において公知である漂白系が利用され得る。好適な漂白系成分としては、漂白触媒、光漂白、漂白活性化剤、過炭酸ナトリウムおよび過ホウ酸ナトリウムなどの過酸化水素の供給源、事前に形成した過酸、ならびに、これらの混合物が挙げられる。好適な事前に形成した過酸としては、これらに限定されないが、ペルオキシカルボン酸および塩、過炭酸および塩、過イミド酸および塩、ペルオキシ一硫酸および塩、例えば、オキソン（Ｒ）、ならびに、これらの混合物が挙げられる。漂白系の非限定的な例としては、例えば、過ホウ酸（通常は一水和物または四水和物）、過炭酸、過硫酸、過リン酸、過ケイ酸のナトリウム塩などのアルカリ金属塩を含む無機塩を、過酸−形成性漂白活性化剤と組み合わせて含み得るペルオキシド系漂白系が挙げられる。本明細書において漂白活性化剤とは、ペルオキシド漂白剤様過酸化水素と反応して、過酸を形成する化合物を意味する。このようにして形成された過酸は、活性化された漂白剤を構成する。本明細書において用いられる好適な漂白活性化剤は、エステルアミド、イミドまたは無水物の分類に属するものを含み、好適な例は、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、ナトリウム３，５，５トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、ジペルオキシドデカン酸、４−（ドデカノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＬＯＢＳ）、４−（デカノイルオキシ）ベンゼンスルホネート、４−（デカノイルオキシ）安息香酸塩（ＤＯＢＳ）、４−（３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＩＳＯＮＯＢＳ）、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）および４−（ノナノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）、および／または、国際公開第９８／１７７６７号パンフレットに開示されているものである。対象の漂白活性化剤の特定のファミリーは欧州特許第６２４１５４号明細書に開示されており、アセチルトリエチルシトレート（ＡＴＣ）が特に好ましいファミリーである。ＡＴＣまたは短鎖トリグリセリド様トリアシンは、最終的にはクエン酸およびアルコールに分解されるために、環境にやさしいという利点を有する。さらに、アセチルトリエチルシトレートおよびトリアセチンは、保管に際して生成物中における良好な加水分解安定性を有しており、これは効果的な漂白活性化剤である。最後に、ＡＴＣは、ランドリー添加剤に対して良好な補助能を提供する。または、漂白系は、例えば、アミド、イミドまたはスルホンタイプのペルオキシドを含み得る。漂白系はまた、６−（フタロイルアミノ）過カプロン酸（ＰＡＰ）などの過酸を含み得る。漂白系はまた、漂白触媒を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、漂白剤成分は、以下の式を有する有機触媒：
【化１】
2015524002.tif 000002
（ｉｉｉ）およびこれらの混合物（式中、各Ｒ1は、独立して、９〜２４個の炭素を含有する分岐アルキル基または１１〜２４個の炭素を含有する直鎖アルキル基であり、好ましくは、各Ｒ1は、独立して、９〜１８個の炭素を含有する分岐アルキル基または１１〜１８個の炭素を含有する直鎖アルキル基であり、より好ましくは各Ｒ1は、独立して、２−プロピルヘプチル、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−オクタデシル、イソ−ノニル、イソ−デシル、イソ−トリデシルおよびイソ−ペンタデシルからなる群から選択される）からなる群から選択される有機触媒であり得る。他の例示的な漂白系は、例えば、国際公開第２００７／０８７２５８号パンフレット、国際公開第２００７／０８７２４４号パンフレット、国際公開第２００７／０８７２５９号パンフレット、国際公開第２００７／０８７２４２号パンフレットに記載されている。好適な光漂白は、例えばスルホン化アエンフタロシアニンであり得る。
【０１８８】
ポリマー
洗剤は、０．５〜５％、２〜５％、０．５〜２％または０．２〜１％などの０〜１０重量％のポリマーを含有する。洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかのポリマーが利用され得る。ポリマーは、上記のとおりコビルダーとして機能し得、または、再汚染防止、繊維保護、汚染物遊離、移染防止、油脂クリーニングおよび／または消泡特性をもたらし得る。いくつかのポリマーは、上記の特性を２つ以上および／または下記のモチーフを２つ以上有している場合がある。例示的なポリマーとしては、（カルボキシメチル）セルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（エチレングリコール）またはポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＧ）、エトキシル化ポリ（エチレンイミン）、カルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、および、ＰＡＡなどのポリカルボキシレート、ＰＡＡ／ＰＭＡ、ポリ−アスパラギン酸、および、ラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー、疎水性修飾ＣＭＣ（ＨＭ−ＣＭＣ）およびシリコーン、テレフタル酸とオリゴマー系グリコールとのコポリマー、ポリエチレンテレフタレートとポリオキシエテンテレフタレートとのコポリマー（ＰＥＴ−ＰＯＥＴ）、ＰＶＰ、ポリ（ビニルイミダゾール）（ＰＶＩ）、ポリ（ビニルピリジン−Ｎ−オキシド）（ＰＶＰＯまたはＰＶＰＮＯ）、ならびに、ポリビニルピロリドン−ビニルイミダゾール（ＰＶＰＶＩ）が挙げられる。さらに例示的なポリマーとしては、スルホン化ポリカルボキシレート、ポリエチレンオキシドおよびポリプロピレンオキシド（ＰＥＯ−ＰＰＯ）およびジクアタニウムエトキシスルフェートが挙げられる。他の例示的なポリマーは、例えば、国際公開第２００６／１３０５７５号パンフレットに開示されている。上記のポリマーの塩もまた予期される。
【０１８９】
布地色調剤
本発明の洗剤組成物はまた、染料または顔料などの布地色調剤を含んでいてもよく、これは、洗剤組成物に配合された場合に、前記布地が前記洗剤組成物を含む洗浄液と接触させられる際に布地に付着し、これにより、可視光の吸収／反射を介して前記布地の色合いを変えることが可能である。蛍光性白色化剤は少なくともいくらかの可視光を放つ。対照的に、布地色調剤は、可視光スペクトルの少なくとも一部分を吸収することで表面の色合いを変える。好適な布地色調剤としては、染料および染料−クレイ複合体が挙げられ、また、顔料もまた挙げられ得る。好適な染料としては、微小分子染料および高分子染料が挙げられる。好適な微小分子染料としては、例えば国際公開第２００５／０３２７４号パンフレット、国際公開第２００５／０３２７５号パンフレット、国際公開第２００５／０３２７６号パンフレットおよび欧州特許第１８７６２２６号明細書（本明細書において参照により援用される）に記載されている、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｂｌｕｅ、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｒｅｄ、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｖｉｏｌｅｔ、Ａｃｉｄ  Ｂｌｕｅ、Ａｃｉｄ  Ｒｅｄ、Ａｃｉｄ  Ｖｉｏｌｅｔ、Ｂａｓｉｃ  Ｂｌｕｅ、Ｂａｓｉｃ  ＶｉｏｌｅｔおよびＢａｓｉｃ  Ｒｅｄ、または、これらの混合物の染料索引（Ｃ．Ｉ．）分類に属する染料からなる群から選択される微小分子染料が挙げられる。洗剤組成物は、約０．００００３重量％〜約０．２重量％、約０．００００８重量％〜約０．０５重量％またはさらには約０．０００１重量％〜約０．０４重量％の布地色調剤を含むことが好ましい。組成物は、０．０００１重量％〜０．２重量％の布地色調剤を含み得、これは、組成物が単位用量ポーチの形態である場合に特に好ましい場合がある。好適な色調剤はまた、例えば、国際公開第２００７／０８７２５７号パンフレット、国際公開第２００７／０８７２４３号パンフレットに開示されている。
【０１９０】
追加の酵素
本発明による洗剤添加剤、ならびに、洗剤組成物は、例えばラッカーゼおよび／またはペルオキシダーゼといった、タンパク分解酵素、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼなどの１種または複数種［追加］の酵素を含み得る。
【０１９１】
普通、選択された酵素の特性は選択された洗剤と適合性であるべきであり（すなわち、至適ｐＨ、他の酵素的および非酵素的処方成分等との親和性）、酵素は有効量で存在しているべきである。
【０１９２】
セルラーゼ：好適なセルラーゼは、例えば植物または微生物由来などの、細菌性、真菌性、植物性、ウイルス性、または動物由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。好適なセルラーゼとしては、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号明細書、米国特許第５，６４８，２６３号明細書、米国特許第５，６９１，１７８号明細書、米国特許第５，７７６，７５７号明細書および国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）およびフザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）から生成された真菌セルラーゼといった、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）由来のセルラーゼが挙げられる。
【０１９３】
特に好適なセルラーゼは、色の取り扱いに関する有益性を有するアルカリ性または中性セルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許第０  ４９５  ２５７、欧州特許第０  ５３１  ３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載されているセルラーゼである。他の例は、国際公開第９４／０７９９８号パンフレット、欧州特許第０  ５３１  ３１５号明細書、米国特許第５，４５７，０４６号明細書、米国特許第５，６８６，５９３号明細書、米国特許第５，７６３，２５４号明細書、国際公開第９５／２４４７１号パンフレット、国際公開第９８／１２３０７号パンフレットおよび国際特許出願第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号パンフレットに記載されているものなどのセルラーゼ変異体である。
【０１９４】
市販されているセルラーゼとしては、Ｃｅｌｌｕｚｙｍｅ（商標）およびＣａｒｅｚｙｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｃｌａｚｉｎａｓｅ（商標）およびＰｕｒａｄａｘ  ＨＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）およびＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）が挙げられる。
【０１９５】
プロテアーゼ：好適なプロテアーゼは、細菌、真菌、ウイルスまたは動物由来のもの、例えば野菜または微生物性由来のものを含む。微生物性由来のものが好ましい。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。これは、セリンプロテアーゼまたはメタロプロテアーゼなどのアルカリ性プロテアーゼであってよい。セリンプロテアーゼは、例えば、トリプシンなどのＳ１ファミリー、サブチリシンなどのＳ８ファミリーであってよい。メタロプロテアーゼ類プロテアーゼは、例えば、ファミリーＭ４由来のサーモリシンまたはＭ５、Ｍ７もしくはＭ８ファミリー由来のものなどの他のメタロプロテアーゼであってよい。
【０１９６】
「サブチラーゼ」という用語は、Ｓｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｎｇ．４（１９９１）７１９−７３７およびＳｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６（１９９７）５０１−５２３に従うセリンプロテアーゼのサブグループである。セリンプロテアーゼは、活性部位にセリンを有することにより特性決定されるプロテアーゼのサブグループであり、基質との共有結合付加物を形成する。サブチラーゼは、６つの部類、すなわちサブチリシンファミリー、サーミターゼファミリー、プロテイナーゼＫファミリー、ランチビオテックペプチダーゼファミリー、ケキシン（Ｋｅｘｉｎ）ファミリー、およびピロリシンファミリーにさらに細分することができる。本発明の一実施形態において、追加のプロテアーゼは、サブチリシンまたはその変異体などのサブチラーゼであってよい。
【０１９７】
サブチリシンの例としては、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のもの、例えば、サブチリシンレンツス（ｌｅｎｔｕｓ）、バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、サブチリシンノボ（Ｎｏｖｏ）、サブチリシンカールスベルグ（Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、サブチリシンＢＰＮ’、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７およびサブチリシン１６８（国際公開第８９／０６２７９号パンフレットに記載）、ならびにプロテアーゼＰＤ１３８（国際公開第９３／１８１４０号パンフレット）がある。別のセリンプロテアーゼの例は、国際公開第９８／０２０１１５号パンフレット、国際公開第０１／４４４５２号パンフレット、国際公開第０１／５８２７５号パンフレット、国際公開第０１／５８２７６号パンフレット、国際公開第０３／００６６０２号パンフレット及び国際公開第０４／０９９４０１号パンフレットに記載されている。サブチラーゼ変異体の別の例は、ＢＰＮ’番号付けを用いて、以下の位置：３、４、９、１５、２７、３６、６８、７６、８７、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０６、１１８、１２０、１２３、１２８、１２９、１３０、１６０、１６７、１７０、１９４、１９５、１９９、２０５、２１７、２１８、２２２、２３２、２３５、２３６、２４５、２４８、２５２および２７４のいずれかに突然変異を有するものであってよい。より好ましいサブチラーゼ変異体は、突然変異：Ｓ３Ｔ、Ｖ４Ｉ、Ｓ９Ｒ、Ａ１５Ｔ、Ｋ２７Ｒ、*３６Ｄ、Ｖ６８Ａ、Ｎ７６Ｄ、Ｎ８７Ｓ，Ｒ、*９７Ｅ、Ａ９８Ｓ、Ｓ９９Ｇ，Ｄ，Ａ、Ｓ９９ＡＤ、Ｓ１０１Ｇ，Ｍ，Ｒ  Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ，Ｙ，Ｎ、Ｓ１０６Ａ、Ｇ１１８Ｖ，Ｒ、Ｈ１２０Ｄ，Ｎ、Ｎ１２３Ｓ、Ｓ１２８Ｌ、Ｐ１２９Ｑ、Ｓ１３０Ａ、Ｇ１６０Ｄ、Ｙ１６７Ａ、Ｒ１７０Ｓ、Ａ１９４Ｐ、Ｇ１９５Ｅ、Ｖ１９９Ｍ、Ｖ２０５Ｉ、Ｌ２１７Ｄ、Ｎ２１８Ｄ、Ｍ２２２Ｓ、Ａ２３２Ｖ、Ｋ２３５Ｌ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２５２Ｋ、Ｔ２７４Ａ（ＢＰＮ’番号付けを用いて）を含んでよい。
【０１９８】
トリプシン様プロテアーゼの例は、国際公開第８９／０６２７０号パンフレットおよび国際公開第９４／２５５８３号パンフレットに記載のトリプシン（例えば、ブタまたはウシ由来）およびフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼである。有用なプロテアーゼの例は、国際公開第９２／１９７２９号パンフレット、国際公開第９８／２０１１５号パンフレット、国際公開第９８／２０１１６号パンフレット、および国際公開第９８／３４９４６号パンフレットに記載の変異体であり、特に、以下の１つまたは複数の位置に置換を伴う変異体である：２７、３６、５７、７６、８７、９７、１０１、１０４、１２０、１２３、１６７、１７０、１９４、２０６、２１８、２２２、２２４、２３５および２７４。
【０１９９】
メタロプロテアーゼの例は、国際公開第０７／０４４９９３号パンフレット（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔ．）に記載の中性メタロプロテアーゼである。
【０２００】
好ましい市販されているタンパク分解酵素としては、Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（商標）、Ｅｓｐｅｒａｓｅ（商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｐｒｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｒｅｌａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）およびＳａｖｉｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ａｘａｐｅｍ（商標）（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｓｅｓ  Ｎ．Ｖ．）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）、ＦＮ２（商標）、ＦＮ３（商標）、ＦＮ４（商標）、Ｍａｘａｃａ（商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（商標）、Ｍａｘａｔａｓｅ（商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（商標）、Ｐｕｒａｆａｓｔ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＯｘＰ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅ（商標）およびＰｕｒａｍａｘ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ／Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  ｉｎｔ．）が挙げられる。
【０２０１】
別の好ましいプロテアーゼは、国際公開第９５／２３２２１号パンフレットに記載のバチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）由来のアルカリ性プロテアーゼＤＳＭ  ５４８３、国際公開第９２／２１７６０号パンフレット、ならびに国際公開第９５／２３２２１号パンフレット、欧州特許第１９２１１４７号明細書および欧州特許第１９２１１４８号明細書に記載されているその変異体である。
【０２０２】
リパーゼおよびクチナーゼ：好適なリパーゼおよびクチナーゼは、細菌、真菌、ウイルスまたは動物由来、例えば、野菜もしくは微生物由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。例としては、欧州特許第２５８  ０６８号明細書および欧州特許第３０５  ２１６号明細書に記載されている、テルモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）由来、例えば、Ｔ．ラヌギノスス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）（旧名：フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ））由来のリパーゼ；国際公開第９６／１３５８０号パンフレットに記載されている、例えばＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）といったフミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）由来のクチナーゼ；例えば、Ｐ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）遺伝子またはＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）遺伝子（欧州特許第２１８  ２７２号明細書）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（欧州特許第３３１  ３７６号明細書）、Ｐ．スツツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（英国特許第１，３７２，０３４号明細書）、Ｐ．フルオレッセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属の一種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＳＤ７０５株（国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび国際公開第９６／２７００２号パンフレット）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）といったシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパーゼ；例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（Ｄａｒｔｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１１３１：２５３−３６０）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（特開昭６４／７４４９９２号公報）またはＢ．プミルス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）（国際公開第９１／１６４２２号パンフレット）といったバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）リパーゼが挙げられる。
【０２０３】
他の例は、国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、欧州特許第４０７  ２２５号明細書、欧州特許第２６０  １０５号明細書、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、国際公開第００／０６００６３号パンフレット、国際公開第２００７／０８７５０８号パンフレットおよび国際公開第２００９／１０９５００号パンフレットに記載のものなどのリパーゼ変異体である。
【０２０４】
好ましい市販されているリパーゼ酵素としては、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｏｌａｓｅ  Ｕｌｔｒａ（商標）およびＬｉｐｅｘ（商標）、Ｌｅｃｉｔａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｏｌｅｘ（商標）；Ｌｉｐｏｃｌｅａｎ（商標）、Ｌｉｐｏｐｒｉｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。他の市販されているリパーゼとしては、Ｌｕｍａｆａｓｔ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔ  Ｉｎｃ）；Ｌｉｐｏｍａｘ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ／Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔ  Ｉｎｃ）およびＳｏｌｖａｙ製のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ）リパーゼが挙げられる。
【０２０５】
アミラーゼ：本発明のプロテアーゼと一緒に用いることができる好適なアミラーゼは、αアミラーゼまたはグルコアミラーゼであってよく、細菌性または真菌性由来のいずれであってもよい。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。アミラーゼとしては、例えば、英国特許第１，２９６，８３９号明細書により詳細に記載されているバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の特殊な系統などの、例えばバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から得られるα−アミラーゼが挙げられる。
【０２０６】
好適なアミラーゼの例としては、国際公開第９５／１０６０３号パンフレットに記載の配列番号３を有するアミラーゼまたは配列番号３と９０％の配列同一性を有する変異体が挙げられる。好ましい変異体は、国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、および国際公開第９７／４３４２４号パンフレットに記載のもの、ならびに国際公開第９９／０１９４６７号パンフレットに記載の配列番号４、例えば、以下の１つまたは複数の位置に置換を伴う変異体である：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１７８、１７９、１８１、１８８、１９０、１９７、２０１、２０２、２０７、２０８、２０９、２１１、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、および４４４。
【０２０７】
異なる好適なアミラーゼには、国際公開第０２／０１０３５５号パンフレットに記載の配列番号６を有するアミラーゼ、または配列番号６と９０％の配列同一性を有する変異体が挙げられる。配列番号６の好ましい変異体は、位置１８１および１８２に欠失、および位置１９３に置換を有するものである。
【０２０８】
好適な他のアミラーゼは、国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットに記載の配列番号６に記載のＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）由来のαアミラーゼの残基１〜３３と、国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットに記載の配列番号４に示すＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の残基３６〜４８３を含むハイブリッドαアミラーゼまたはその９０％配列同一性を有する変異体である。このハイブリッドαアミラーゼの好ましい変異体は、以下の１つまたは複数の位置に置換、欠失もしくは挿入を伴うものである：Ｇ４８、Ｔ４９、Ｇ１０７、Ｈ１５６、Ａ１８１、Ｎ１９０、Ｍ１９７、Ｉ２０１、Ａ２０９およびＱ２６４。国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットに記載の配列番号６に記載のＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）由来のαアミラーゼの残基１〜３３と、配列番号４の残基３６〜４８３を含むハイブリッドαアミラーゼの最も好ましい変異体は、以下の置換を有するものである：
Ｍ１９７Ｔ；
Ｈ１５６Ｙ＋Ａ１８１Ｔ＋Ｎ１９０Ｆ＋Ａ２０９Ｖ＋Ｑ２６４Ｓ；または
Ｇ４８Ａ＋Ｔ４９Ｉ＋Ｇ１０７Ａ＋Ｈ１５６Ｙ＋Ａ１８１Ｔ＋Ｎ１９０Ｆ＋Ｉ２０１Ｆ＋Ａ２０９Ｖ＋Ｑ２６４Ｓ。
【０２０９】
好適な別のアミラーゼは、国際公開第９９／０１９４６７号パンフレットに記載の配列番号６を有するアミラーゼ、配列番号６と９０％の配列同一性を有するその変異体である。配列番号６の好ましい変異体は、以下の１つまたは複数の位置に置換、欠失もしくは挿入を有するものである：Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｈ１８３、Ｇ１８４、Ｎ１９５、Ｉ２０６、Ｅ２１２、Ｅ２１６およびＫ２６９。特に好ましいアミラーゼは、位置Ｒ１８１およびＧ１８２、または位置Ｈ１８３およびＧ１８４に欠失を有するものである。
【０２１０】
好適な他のアミラーゼは、国際公開第９６／０２３８７３号パンフレットに記載の配列番号１、配列番号３、配列番号２または配列番号７を有するもの、または配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号７と９０％の配列同一性を有するその変異体である。配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号７の好ましい変異体は、以下の１つまたは複数の位置に置換、欠失もしくは挿入を有するものである：１４０、１８１、１８２、１８４、１９５、２０６、２１２、２４３、２６０、２６９、３０４および４７６。より好適な変異体は、位置１８１および１８２に欠失を有するものである。配列番号１、配列番号２または配列番号７の最も好ましい変異体は、位置１８３および１８４に欠失を、また位置１４０、１９５、２０６、２４３、２６０、３０４および４７６の１つまたは複数の位置に置換を有するものである。
【０２１１】
用いることができる他のアミラーゼは、国際公開第０８／１５３８１５号パンフレットに記載の配列番号２、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに記載の配列番号１０を有するアミラーゼ、または国際公開第０８／１５３８１５号パンフレットに記載の配列番号２と９０％の配列同一性または国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに記載の配列番号１０と９０％の配列同一性を有するその変異体である。国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに記載の配列番号１０の好ましい変異体は、以下の１つまたは複数の位置に置換、欠失もしくは挿入を有するものである：１７６、１７７、１７８、１７９、１９０、２０１、２０７、２１１および２６４。
【０２１２】
別の好適なアミラーゼは、国際公開第０９／０６１３８０号パンフレットに記載の配列番号２を有するアミラーゼまたは配列番号２と９０％の配列同一性を有するその変異体である。配列番号２の好ましい変異体は、以下の１つまたは複数の位置にＣ末端の切断および／または置換、欠失もしくは挿入を有するものである：Ｑ８７、Ｑ９８、Ｓ１２５、Ｎ１２８、Ｔ１３１、Ｔ１６５、Ｋ１７８、Ｒ１８０、Ｓ１８１、Ｔ１８２、Ｇ１８３、Ｍ２０１、Ｆ２０２、Ｎ２２５、Ｓ２４３、Ｎ２７２、Ｎ２８２、Ｙ３０５、Ｒ３０９、Ｄ３１９、Ｑ３２０、Ｑ３５９、Ｋ４４４およびＧ４７５。配列番号２のより好ましい変異体は、以下の１つまたは複数の位置：Ｑ８７Ｅ、Ｒ、Ｑ９８Ｒ、Ｓ１２５Ａ、Ｎ１２８Ｃ、Ｔ１３１Ｉ、Ｔ１６５Ｉ、Ｋ１７８Ｌ、Ｔ１８２Ｇ、Ｍ２０１Ｌ、Ｆ２０２Ｙ、Ｎ２２５Ｅ，Ｒ、Ｎ２７２Ｅ，Ｒ、Ｓ２４３Ｑ，Ａ，Ｅ，Ｄ、Ｙ３０５Ｒ、Ｒ３０９Ａ、Ｑ３２０Ｒ、Ｑ３５９Ｅ、Ｋ４４４ＥおよびＧ４７５Ｋに置換を、ならびに／または以下の位置：Ｒ１８０および／もしくはＳ１８１またはＴ１８２および／もしくはＧ１８３に欠失を有するものである。配列番号２の最も好ましいアミラーゼ変異体は、以下の置換を有するものである：
Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ；
Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ；
Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ；または
Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ（ここで、変異体は、Ｃ末端切断されており、任意選択で、位置２４３に置換および／または位置１８０および／または１８１に欠失をさらに含む。
【０２１３】
他の好適なアミラーゼは、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに記載の配列番号１２を有するαアミラーゼまたは配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体である。好ましいアミラーゼ変異体は、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに記載の配列番号１２の以下の１つまたは複数の位置に置換、欠失もしくは挿入を有するものである：Ｒ２８、Ｒ１１８、Ｎ１７４；Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｄ１８３、Ｇ１８４、Ｇ１８６、Ｗ１８９、Ｎ１９５、Ｍ２０２、Ｙ２９８、Ｎ２９９、Ｋ３０２、Ｓ３０３、Ｎ３０６、Ｒ３１０、Ｎ３１４；Ｒ３２０、Ｈ３２４、Ｅ３４５、Ｙ３９６、Ｒ４００、Ｗ４３９、Ｒ４４４、Ｎ４４５、Ｋ４４６、Ｑ４４９、Ｒ４５８、Ｎ４７１、Ｎ４８４。特に好ましいアミラーゼには、Ｄ１８３およびＧ１８４の欠失を有し、置換Ｒ１１８Ｋ、Ｎ１９５Ｆ、Ｒ３２０ＫおよびＲ４５８Ｋを有する変異体、ならびに以下の群：Ｍ９、Ｇ１４９、Ｇ１８２、Ｇ１８６、Ｍ２０２、Ｔ２５７、Ｙ２９５、Ｎ２９９、Ｍ３２３、Ｅ３４５およびＡ３３９から選択される１つまたは複数の位置に置換をさらに有する変異体が含まれ、これらの位置全てに置換を有する変異体が最も好ましい。
【０２１４】
他の例は、国際公開第２０１１／０９８５３１号パンフレット、国際公開第２０１３／００１０７８号パンフレットおよび国際公開第２０１３／００１０８７号パンフレットに記載されているものなどのアミラーゼ変異体である。
【０２１５】
市販されているアミラーゼは、Ｄｕｒａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ（商標）、Ｆｕｎｇａｍｙｌ（商標）、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（商標）、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ  Ｐｌｕｓ（商標）、Ｎａｔａｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｑｕｏｚｙｍｅ  ＸおよびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ製）、およびＲａｐｉｄａｓｅ（商標）、Ｐｕｒａｓｔａｒ（商標）、ならびにＰｏｗｅｒａｓｅ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．製）である。
【０２１６】
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼは、細菌、真菌、植物、ウイルスもしくは動物由来、例えば、野菜または微生物由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、例えば、Ｃ．シネレウス（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ）といったコプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）由来のペルオキシダーゼ、および、国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレットおよび国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されているものなどのその変異体が挙げられる。
【０２１７】
市販されているペルオキシダーゼとしては、Ｇｕａｒｄｚｙｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【０２１８】
洗剤酵素は、１種または複数種の酵素を含有する個別の添加剤を加えることにより、または、これらの酵素のすべてを含む複合添加剤を加えることにより、洗剤組成物に含まれていてもよい。本発明の洗剤添加剤（すなわち、個別の添加剤または複合添加剤）は、例えば、粒質物、液体、スラリー等として配合されることが可能である。好ましい洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に非発塵性粒質物、液体、特に安定化された液体またはスラリーである。
【０２１９】
非発塵性粒質物は、例えば、米国特許第４，１０６，９９１号明細書および米国特許第４，６６１，４５２号明細書に開示のとおり生成され得、任意により、技術分野において公知である方法によりコーティングされてもよい。ワックス状コーティング材の例は、１０００〜２００００の平均モル重量を有するポリ（エチレンオキシド）生成物（ポリエチレングリコール、ＰＥＧ）；１６〜５０個のエチレンオキシドユニットを有するエトキシル化ノニルフェノール；アルコールが１２〜２０個の炭素原子を含有し、および、１５〜８０個のエチレンオキシドユニットが存在するエトキシル化脂肪族アルコール；脂肪族アルコール；脂肪酸；ならびに、脂肪酸のモノ−およびジ−およびトリグリセリドである。流動床技術による用途に対して好適なフィルム形成性コーティング材の例は英国特許第１４８３５９１号明細書に記載されている。液体酵素調製物は、例えば、確立された方法に従って、プロピレングリコールなどのポリオール、糖質または糖質アルコール、乳酸またはホウ酸を添加することにより安定化され得る。保護された酵素は、欧州特許第２３８，２１６号明細書に開示されている方法に従って調製され得る。
【０２２０】
補助材
ランドリー洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかの洗剤成分もまた利用され得る。他の任意の洗剤成分としては、単独もしくは組み合わせで、耐食剤、収縮防止剤、再汚染防止剤、しわ防止剤、殺菌剤、バインダ、腐食抑制剤、崩壊剤／分解剤、染料、酵素安定化剤（ホウ酸、ホウ酸塩、ＣＭＣ、および／または、プロピレングリコールなどのポリオールを含む）、クレイを含む布地コンディショナ、充填材／加工助剤、蛍光性白色化剤／光学増白剤、起泡増進剤、起泡（セッケンの泡）調節剤、香料、汚染物−懸濁剤、軟化剤、セッケン泡抑制剤、色あせ防止剤、および、ウィッキング剤が挙げられる。ランドリー洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかの処方成分が利用され得る。このような処方成分の選択は十分に当業者の技能の範囲内である。
【０２２１】
分散剤−本発明の洗剤組成物はまた、分散剤を含有することが可能である。特に粉末洗剤が分散剤を含んでいてもよい。好適な水溶性有機材料としては、ホモ−またはコポリマー酸またはその塩が挙げられ、ここで、ポリカルボン酸は、２個以下の炭素原子によって相互に分離された少なくとも２つのカルボキシルラジカルを含む。好適な分散剤は、例えば、Ｐｏｗｄｅｒｅｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｓｅｒｉｅｓ  ｖｏｌｕｍｅ  ７１，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．に記載されている。
【０２２２】
移染防止剤−本発明の洗剤組成物はまた、１種または複数種の移染防止剤を含み得る。好適な高分子移染防止剤としては、これらに限定されないが、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ−オキシドポリマー、Ｎ−ビニルピロリドンおよびＮ−ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドンおよびポリビニルイミダゾールまたはこれらの混合物が挙げられる。主題の組成物中に存在する場合、移染防止剤は、組成物の約０．０００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、または、さらには約０．１％〜約３重量％のレベルで存在し得る。
【０２２３】
蛍光性白色化剤−本発明の洗剤組成物はまた、好ましくは、蛍光性白色化剤または光学増白剤などのクリーニングされる物品の色合いを変え得る追加の成分を含有するであろう。存在する場合、増白剤は、約０，０１％〜約０，５％のレベルであることが好ましい。ランドリー洗剤組成物における使用に好適ないずれかの蛍光性白色化剤が、本発明の組成物中に用いられ得る。最も一般的に用いられる蛍光性白色化剤は、ジアミノスチルベン−スルホン酸誘導体、ジアリールピラゾリン誘導体およびビスフェニル−ジスチリル誘導体の分類に属するものである。ジアミノスチルベン−スルホン酸誘導体タイプの蛍光性白色化剤の例としては：４，４’−ビス−（２−ジエタノールアミノ−４−アニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネート；４，４’−ビス−（２，４−ジアニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２．２’−ジスルホネート；４，４’−ビス−（２−アニリノ−４（Ｎ−メチル−Ｎ−２−ヒドロキシ−エチルアミノ）−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネート、４，４’−ビス−（４−フェニル−２，１，３−トリアゾール−２−イル）スチルベン−２，２’−ジスルホネート；４，４’−ビス−（２−アニリノ−４（１−メチル−２−ヒドロキシ−エチルアミノ）−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネートおよび２−（スチビル−４”−ナフト−１．，２’：４，５）−１，２，３−トリアゾール−２”スルホネートのナトリウム塩が挙げられる。好ましい蛍光性白色化剤は、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＡＧ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能であるＴｉｎｏｐａｌ  ＤＭＳおよびＴｉｎｏｐａｌ  ＣＢＳである。Ｔｉｎｏｐａｌ  ＤＭＳは、４，４’−ビス−（２−モルホリノ−４アニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベンジスルホネートのジナトリウム塩である。Ｔｉｎｏｐａｌ  ＣＢＳは、２，２’−ビス−（フェニル−スチリル）ジスルホネートのジナトリウム塩である。また、好ましい蛍光性白色化剤は、Ｐａｒａｍｏｕｎｔ  Ｍｉｎｅｒａｌｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｍｕｍｂａｉ，Ｉｎｄｉａ製の市販のＰａｒａｗｈｉｔｅ  ＫＸである。本発明における使用に好適な他の蛍光剤としては、１−３−ジアリールピラゾリンおよび７−アルキルアミノクマリンが挙げられる。好適な蛍光性増白剤レベルは、約０．０１、０．０５、約０．１、または、さらには約０．２重量％の下限レベルから、０．５またはさらには０．７５重量％の上限レベルを含む。
【０２２４】
汚染物遊離ポリマー−本発明の洗剤組成物はまた、綿およびポリエステル系布地などの布地からの汚染物の除去、特にポリエステル系布地からの疎水性汚染物の除去を補助する１種または複数種の汚染物遊離ポリマーを含み得る。汚染物遊離ポリマーは、例えば、ノニオン性またはアニオン性テレフタレート系ポリマー、ポリビニルカプロラクタムおよび関連するコポリマー、ビニルグラフトコポリマー、ポリエステルポリアミドであり得る（例えばＣｈａｐｔｅｒ  ７，Ｐｏｗｄｅｒｅｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｓｅｒｉｅｓ  ｖｏｌｕｍｅ  ７１，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．を参照のこと）。他のタイプの汚染物遊離ポリマーは、コア構造と、このコア構造に結合した複数のアルコキシレート基とを含む両親媒性アルコキシル化油脂クリーニングポリマーである。コア構造は、国際公開第２００９／０８７５２３号パンフレット（本明細書において参照により援用されている）に詳述されているとおり、ポリアルキレンイミン構造またはポリアルカノールアミン構造を含み得る。さらに、ランダムグラフトコポリマーは、好適な汚染物遊離ポリマーである。好適なグラフトコポリマーは、国際公開第２００７／１３８０５４号パンフレット、国際公開第２００６／１０８８５６号パンフレットおよび国際公開第２００６／１１３３１４号パンフレット（本明細書において参照により援用されている）により詳細に記載されている。他の汚染物遊離ポリマーは、欧州特許第１８６７８０８号明細書または国際公開第２００３／０４０２７９号パンフレット（共に本明細書において参照により援用されている）に記載されているものなどの変性セルロース誘導体などの特に置換セルロース系構造といった置換多糖類構造である。好適なセルロース系ポリマーとしては、セルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、セルロースアミドおよびこれらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、アニオン性変性セルロース、ノニオン性変性セルロース、カチオン性変性セルロース、両性イオン性変性セルロース、および、これらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、エステルカルボキシメチルセルロースおよびこれらの混合物が挙げられる。
【０２２５】
再汚染防止剤−本発明の洗剤組成物としてはまた、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリオキシエチレンおよび／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アクリル酸のホモポリマー、アクリル酸とマレイン酸とのコポリマー、ならびに、エトキシル化ポリエチレンイミンなどの１種または複数種の再汚染防止剤が挙げられ得る。上記の汚染物遊離ポリマーに記載のセルロース系ポリマーは、再汚染防止剤としても機能し得る。
【０２２６】
他の好適な補助材としては、これらに限定されないが、収縮防止剤、しわ防止剤、殺菌剤、バインダ、キャリア、染料、酵素安定化剤、布地軟化剤、充填材、起泡調節剤、ヒドロトロープ、香料、顔料、セッケン泡抑制剤、溶剤、ならびに液体洗剤用構造化剤、および／または、構造弾性化剤が挙げられる。
【０２２７】
洗剤生成物の配合物
本発明の洗剤組成物は、例えば、バー、均質な錠剤、２つ以上の層を有する錠剤、１つまたは複数のコンパートメントを有するポーチ、通常のもしくは圧縮された粉末、顆粒、ペースト、ゲル、または、通常の圧縮もしくは濃縮液体といったいずれかの簡便な形態であり得る。
【０２２８】
洗剤配合物形態：層（同一のまたは異なる相）、ポーチ、機械用量単位に対応した形態。
【０２２９】
ポーチは、単一または複数のコンパートメントとして構成されることが可能である。例えば水との接触に先だってポーチから組成物が漏れ出ることが防止される、組成物の保持に好適であれば如何なる形態、形状および材料のものであることも可能である。ポーチは、内部容積を有する水溶性フィルム製のものである。前記内部容積は、ポーチのコンパートメントに分離されていることが可能である。好ましいフィルムは、フィルムまたはシートに形成される好ましくはポリマーである高分子材料である。好ましいポリマー、コポリマーまたはその誘導体は、ポリアクリレート、および、水溶性アクリレートコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート、最も好ましくはポリビニルアルコールコポリマーおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）から選択される。好ましくは、フィルム中のポリマーのレベルは、例えばＰＶＡで少なくとも約６０％である。好ましい平均分子量は、典型的には約２０，０００〜約１５０，０００であろう。フィルムはまた、ポリアクチドおよびポリビニルアルコール（Ｃｈｒｉｓ  Ｃｒａｆｔ  Ｉｎ．Ｐｒｏｄ．Ｏｆ  Ｇａｒｙ，Ｉｎｄ．，ＵＳから市販されている商品名Ｍ８６３０で知られている）などの加水分解的に分解性および水溶性のポリマーブレンドと、グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールおよびこれらの混合物のような可塑剤とを含むブレンド組成物であることが可能である。ポーチは、水溶性フィルムにより分離された固体ランドリークリーニング組成物または部分成分および／または液体クリーニング組成物または部分成分を含んでいることが可能である。液体成分用のコンパートメントは、固形分を含有するコンパートメントとは組成が異なっていることが可能である。参照：（米国特許出願公開第２００９／００１１９７０  Ａ１号明細書）
【０２３０】
洗剤処方成分は、水溶性ポーチ中のコンパートメントにより、または、錠剤の異なる層中において相互に物理的に分離されていることが可能である。これにより、成分間の負の保管相互作用を防止することが可能である。コンパートメントの各々の異なる溶解プロファイルはまた、洗浄溶液中における選択された成分の溶解を遅延させることが可能である。
【０２３１】
単位用量にない液体またはゲル洗剤は、水性であり得、典型的には、最大で約７０％の水、最大で約６５％の水、最大で約５５％の水、最大で約４５％の水、最大で約３５％の水などの少なくとも２０重量％および最大で９５％の水を含有し得る。特に限定されないが、アルカノール、アミン、ジオール、エーテルおよびポリオールを含む他のタイプの液体が、水性液体またはゲル中に含まれていてもよい。水性液体またはゲル洗剤は０〜３０％の有機溶剤を含有していてもよい。
【０２３２】
液体またはゲル洗剤は非水性であってもよい。
【０２３３】
固形洗濯セッケン
本発明のプロテアーゼを固形洗濯セッケンに添加して、ランドリー、布地および／または生地の手洗いに用いることができる。固形洗濯セッケンという用語は、洗濯セッケン、固形セッケン、複合化粧セッケン（ｃｏｍｂｏ  ｂａｒ）、合成化粧セッケン（ｓｙｎｄｅｔ  ｂａｒ）および固形洗剤を含む。固形セッケンの種類は、これらが含有する界面活性剤の種類が通常異なり、固形洗濯セッケンという用語は、脂肪酸からのセッケンおよび／または合成セッケンを含有するものを含む。固形洗濯セッケンは、室温で固体であり、液体、ゲルまたは粉末ではない。固体という用語は、時間経過で有意に変化しない物理的形状として定義され、すなわち、固体対象物（例えば、固形洗濯セッケン）を容器中に収容する場合、固体対象物が変化して、それが収容された容器を充填することはない。固形セッケンは、典型的には、棒状であるが、丸形または楕円などの固体形状をしていてもよい。
【０２３４】
固形セッケンは、１種または複数の追加の酵素、ペプチドアルデヒド（またはハイドロサルファイト付加物もしくはヘミアセタール付加物）などのプロテアーゼ阻害剤、ホウ酸、ホウ酸塩、ホウ砂および／または４−ホルミルフェニルホウ酸などのフェニルホウ酸誘導体、１種以上のセッケンまたは合成界面活性剤、グリセリンなどのポリオール、脂肪酸などのｐＨ調節化合物、クエン酸、酢酸および／またはギ酸、および／または一価カチオンと有機アニオンの塩（ここで、一価カチオンは、例えば、Ｎａ+、Ｋ+もしくはＮＨ4+であってよく、有機アニオンは、例えば、ギ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩もしくは乳酸塩であってよく、従って、一価カチオンと有機アニオンの塩が、例えば、ギ酸ナトリウムであってよい）を含んでもよい。
【０２３５】
固形セッケンはまた、ＥＤＴＡおよびＨＥＤＰのような複合体形成剤、香料および／または様々な種類の充填材、界面活性剤、例えば、アニオン系合成界面活性剤、ビルダー、ポリマー性汚れ放出剤、洗剤キレート剤、安定剤、充填材、染料、着色剤、移染防止剤、アルコキシル化ポリカーボネート、セッケン泡抑制剤、構造剤、結合剤、浸出剤、漂白活性化剤、粘土汚れ除去剤、再付着防止剤、ポリマー性分散剤、増白剤、繊維柔軟剤、香料および／または当分野では公知の他の化合物を含んでもよい。
【０２３６】
固形セッケンは、限定するものではないが、ミキサー、押出機、例えば、二段真空押出機、押出機、カッター、ロゴスタンパー、冷却トンネルおよびラッパーといった従来の洗濯固形セッケン製造装置で処理することができる。本発明は、いずれか単一の方法による洗濯固形セッケンの製造に限定されない。本発明のプレミックスを製造工程の様々な段階でセッケンに添加してもよい。例えば、セッケン、酵素、任意選択で１種または複数の追加の酵素、プロテアーゼ阻害剤、ならびに一価カチオンと有機アニオンの塩を含有するプレミックスを調製した後、混合物を押出す。酵素および任意の追加の酵素は、例えば、液体形態のプロテアーゼ阻害剤と同時に添加することができる。混合ステップおよび押出ステップ以外に、製造工程は、粉砕、押出、切断、スタンピング、冷却および／またはラッピングのステップをさらに含んでもよい。
【０２３７】
粒状洗剤配合物
粒状洗剤は、国際公開第０９／０９２６９９号パンフレット、欧州特許第１７０５２４１号明細書、欧州特許第１３８２６６８号明細書、国際公開第０７／００１２６２号パンフレット、米国特許第６４７２３６４号明細書、国際公開第０４／０７４４１９号パンフレットまたは国際公開第０９／１０２８５４号パンフレットに記載されているとおり配合され得る。他の有用な洗剤配合物が、国際公開第０９／１２４１６２号パンフレット、国際公開第０９／１２４１６３号パンフレット、国際公開第０９／１１７３４０号パンフレット、国際公開第０９／１１７３４１号パンフレット、国際公開第０９／１１７３４２号パンフレット、国際公開第０９／０７２０６９号パンフレット、国際公開第０９／０６３３５５号パンフレット、国際公開第０９／１３２８７０号パンフレット、国際公開第０９／１２１７５７号パンフレット、国際公開第０９／１１２２９６号パンフレット、国際公開第０９／１１２２９８号パンフレット、国際公開第０９／１０３８２２号パンフレット、国際公開第０９／０８７０３３号パンフレット、国際公開第０９／０５００２６号パンフレット、国際公開第０９／０４７１２５号パンフレット、国際公開第０９／０４７１２６号パンフレット、国際公開第０９／０４７１２７号パンフレット、国際公開第０９／０４７１２８号パンフレット、国際公開第０９／０２１７８４号パンフレット、国際公開第０９／０１０３７５号パンフレット、国際公開第０９／０００６０５号パンフレット、国際公開第０９／１２２１２５号パンフレット、国際公開第０９／０９５６４５号パンフレット、国際公開第０９／０４０５４４号パンフレット、国際公開第０９／０４０５４５号パンフレット、国際公開第０９／０２４７８０号パンフレット、国際公開第０９／００４２９５号パンフレット、国際公開第０９／００４２９４号パンフレット、国際公開第０９／１２１７２５号パンフレット、国際公開第０９／１１５３９１号パンフレット、国際公開第０９／１１５３９２号パンフレット、国際公開第０９／０７４３９８号パンフレット、国際公開第０９／０７４４０３号パンフレット、国際公開第０９／０６８５０１号パンフレット、国際公開第０９／０６５７７０号パンフレット、国際公開第０９／０２１８１３号パンフレット、国際公開第０９／０３０６３２号パンフレット、および、国際公開第０９／０１５９５１号パンフレット、
【０２３８】
国際公開第２０１１０２５６１５号パンフレット、国際公開第２０１１０１６９５８号パンフレット、国際公開第２０１１００５８０３号パンフレット、国際公開第２０１１００５６２３号パンフレット、国際公開第２０１１００５７３０号パンフレット、国際公開第２０１１００５８４４号パンフレット、国際公開第２０１１００５９０４号パンフレット、国際公開第２０１１００５６３０号パンフレット、国際公開第２０１１００５８３０号パンフレット、国際公開第２０１１００５９１２号パンフレット、国際公開第２０１１００５９０５号パンフレット、国際公開第２０１１００５９１０号パンフレット、国際公開第２０１１００５８１３号パンフレット、国際公開第２０１０１３５２３８号パンフレット、国際公開第２０１０１２０８６３号パンフレット、国際公開第２０１０１０８００２号パンフレット、国際公開第２０１０１１１３６５号パンフレット、国際公開第２０１０１０８０００号パンフレット、国際公開第２０１０１０７６３５号パンフレット、国際公開第２０１００９０９１５号パンフレット、国際公開第２０１００３３９７６号パンフレット、国際公開第２０１００３３７４６号パンフレット、国際公開第２０１００３３７４７号パンフレット、国際公開第２０１００３３８９７号パンフレット、国際公開第２０１００３３９７９号パンフレット、国際公開第２０１００３０５４０号パンフレット、国際公開第２０１００３０５４１号パンフレット、国際公開第２０１００３０５３９号パンフレット、国際公開第２０１００２４４６７号パンフレット、国際公開第２０１００２４４６９号パンフレット、国際公開第２０１００２４４７０号パンフレット、国際公開第２０１００２５１６１号パンフレット、国際公開第２０１００１４３９５号パンフレット、国際公開第２０１００４４９０５号パンフレット、
【０２３９】
国際公開第２０１０１４５８８７号パンフレット、国際公開第２０１０１４２５０３号パンフレット、国際公開第２０１０１２２０５１号パンフレット、国際公開第２０１０１０２８６１号パンフレット、国際公開第２０１００９９９９７号パンフレット、国際公開第２０１００８４０３９号パンフレット、国際公開第２０１００７６２９２号パンフレット、国際公開第２０１００６９７４２号パンフレット、国際公開第２０１００６９７１８号パンフレット、国際公開第２０１００６９９５７号パンフレット、国際公開第２０１００５７７８４号パンフレット、国際公開第２０１００５４９８６号パンフレット、国際公開第２０１００１８０４３号パンフレット、国際公開第２０１０００３７８３号パンフレット、国際公開第２０１０００３７９２号パンフレット、
【０２４０】
国際公開第２０１１０２３７１６号パンフレット、国際公開第２０１０１４２５３９号パンフレット、国際公開第２０１０１１８９５９号パンフレット、国際公開第２０１０１１５８１３号パンフレット、国際公開第２０１０１０５９４２号パンフレット、国際公開第２０１０１０５９６１号パンフレット、国際公開第２０１０１０５９６２号パンフレット、国際公開第２０１００９４３５６号パンフレット、国際公開第２０１００８４２０３号パンフレット、国際公開第２０１００７８９７９号パンフレット、国際公開第２０１００７２４５６号パンフレット、国際公開第２０１００６９９０５号パンフレット、国際公開第２０１００７６１６５号パンフレット、国際公開第２０１００７２６０３号パンフレット、国際公開第２０１００６６４８６号パンフレット、国際公開第２０１００６６６３１号パンフレット、国際公開第２０１００６６６３２号パンフレット、国際公開第２０１００６３６８９号パンフレット、国際公開第２０１００６０８２１号パンフレット、国際公開第２０１００４９１８７号パンフレット、国際公開第２０１００３１６０７号パンフレット、国際公開第２０１００００６３６号パンフレットに記載されている。
【０２４１】
使用
本発明は、また、家庭用ランドリーの洗濯および産業用ランドリーの洗濯といった生地および布地のランドリーなどの洗浄プロセスにおいて本発明のプロテアーゼまたはその組成物を使用する方法にも関する。
【０２４２】
本発明はまた、自動食器洗い（ＡＤＷ）、洗車および産業用表面のクリーニングなどの硬質面クリーニングにおいてその組成物を用いる方法に関する。従って、一実施形態において、本発明は、本発明のプロテアーゼ、または配列番号２の成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有する本発明のプロテアーゼを含む洗剤の、ランドリーまたは食器洗いといった洗浄における使用に関する。故に、一実施形態において、本発明は、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドの洗剤、洗浄プロセスおよび／または洗濯プロセスにおける使用に関する。
【０２４３】
本発明のポリペプチドは、添加されて、これにより、洗剤組成物の成分となり得る。
【０２４４】
本発明の洗剤組成物は、例えば、汚れた布地の前処理に好適なランドリー添加剤組成物を含む手洗い式もしくは機械式ランドリー洗剤組成物として、および、リンス添加布地柔軟剤組成物として配合され得、または、一般的な家庭における硬質面クリーニング作業において用いられる洗剤組成物として配合され得、または、手洗いもしくは機械による食器洗い作業用に配合され得る。
【０２４５】
特定の態様において、本発明は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドを含む洗剤添加剤を提供する。
【０２４６】
洗剤配合剤に対して重要な汚染物および汚れは多くの異なる物質から組成されており、そのすべてが異なる基質特異性を有する一連の異なる酵素が、ランドリー、および、食器洗いなどの硬質面クリーニングの両方に関連する洗剤において用いられるよう開発されてきている。酵素を伴わない同一のプロセスと比して、適用されたクリーニングプロセスにおける汚れ除去性を特異的に改善するために、これらの酵素は酵素洗浄力有益性をもたらすと考えられる。技術分野において公知である汚れ除去酵素としては、カルボヒドラーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、キシラナーゼ、クチナーゼおよびペクチナーゼなどの酵素が挙げられる。
【０２４７】
一態様において、本発明は、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して有するポリペプチドの、洗剤組成物ならびに洗濯および硬質面クリーニングといった洗浄プロセスにおける使用に関する。従って、一態様では、本発明は、各種汚れについて、様々な条件下での本発明のプロテアーゼの洗浄効果を明らかにする。本発明の具体的態様では、洗剤組成物および洗浄プロセスにおける使用は、前述した汚れ除去酵素の少なくとも１種と組み合わせた本発明のプロテアーゼの使用に関する。
【０２４８】
本発明の好ましい態様において、本発明のプロテアーゼは、少なくとも２種の酵素と組み合わされてもよい。これらの追加の酵素は、「追加の酵素」の項において詳述されており、少なくとも３、４または５種の酵素がより好ましい。好ましくは、酵素は、例えば、カーボリティック（ｃａｒｂｏｌｙｔｉｃ）活性、タンパク質分解活性、デンプン分解活性、脂肪分解活性、ヘミセルロース分解活性またはペクチン分解活性といった異なる基質特異性を有する。酵素の組み合わせは、例えば、本発明のプロテアーゼおよびアミラーゼ、本発明のプロテアーゼおよびセルラーゼ、本発明のプロテアーゼおよびヘミセルラーゼ、本発明のプロテアーゼおよびリパーゼ、本発明のプロテアーゼおよびクチナーゼ、本発明のプロテアーゼおよびペクチナーゼ、または、本発明のプロテアーゼおよび再付着防止酵素といった、例えば本発明のプロテアーゼと他の汚れ除去酵素であり得る。より好ましくは、本発明のプロテアーゼは、少なくとも２種の他の汚れ除去酵素と組み合わされ、例えば、本発明のプロテアーゼ、リパーゼおよびアミラーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼおよびペクチナーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼおよびクチナーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼおよびセルラーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼおよびヘミセルラーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、リパーゼおよびペクチナーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、リパーゼおよびクチナーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、リパーゼおよびセルラーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、リパーゼおよびヘミセルラーゼである。さらにより好ましくは、本発明のプロテアーゼは、少なくとも３種の他の汚れ除去酵素と組み合わされ得、例えば、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼおよびペクチナーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼおよびクチナーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼおよびセルラーゼ；または、本発明のプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼおよびヘミセルラーゼである。本発明のプロテアーゼは：アミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ、セルラーゼ、キサンタナーゼまたはプルラナーゼなどのカルボヒドラーゼ、ペプチダーゼ、他のプロテアーゼまたはリパーゼを含む完全ではない列挙から選択される酵素のいずれかと組み合わされてもよい。
【０２４９】
本発明の他の実施形態において、本発明のプロテアーゼは、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（商標）またはサーモリシンを含むＭ４メタロプロテアーゼなどの１種または複数種のメタロプロテアーゼと組み合わされてもよい。このような組み合わせは、上記に概説した他の洗剤酵素の組み合わせをさらに含んでいてもよい。
【０２５０】
クリーニングプロセスもしくは生地の取り扱いプロセスは、例えば、ランドリープロセス、食器洗いプロセス、または、浴室タイル、床、テーブル表面、排水管、シンクおよび洗面器などの硬質面のクリーニングであり得る。ランドリープロセスは、例えば、家庭用洗濯であることが可能であるが、産業用洗濯であってもよい。しかも、本発明は、布地および／または衣服の洗濯プロセスに関し、ここで、このプロセスは、洗剤組成物および本発明の少なくとも１種のプロテアーゼを含有する洗浄溶液で布地を処理するステップを含む。クリーニングプロセスまたは生地取り扱いプロセスは、例えば、機械式洗浄プロセスまたは手動洗浄プロセスにおいて実施可能である。洗浄溶液は、例えば、洗剤組成物を含有する水性洗浄溶液であることが可能である。
【０２５１】
本発明の洗浄、クリーニングまたは生地取り扱いプロセスに供される布地および／または衣服は、例えば家庭ランドリーといった従来の可洗ランドリーであり得る。好ましくは、ランドリーの主な製品は、ニット、織布、デニム、不織布、フェルト、ヤーンおよびタオルを含む衣服および布地である。布地は、綿、亜麻、亜麻、ジュート、カラムシ、サイザルもしくはコイアを含む天然セルロース系材料、または、ビスコース／レーヨン、カラムシ、酢酸セルロース繊維（三細胞性）、リオセルもしくはこれらのブレンドを含む人工セルロース系材料（例えば、木材パルプ由来のもの）などのセルロース系材料であり得る。布地はまた、ウール、ラクダ、カシミヤ、モヘア、ウサギおよび絹を含む天然ポリアミドなどの非セルロース系材料、または、ナイロン、アラミド、ポリエステル、アクリル、ポリプロピレンおよびスパンデックス／エラスタンなどの合成ポリマー、または、これらのブレンド、ならびに、セルロース系および非セルロース系繊維のブレンドであり得る。ブレンドの例は、綿および／またはレーヨン／ビスコースと、ウール、合成繊維（例えば、ポリアミド繊維、アクリル繊維、ポリエステル繊維、ポリビニルアルコール繊維、ポリ塩化ビニル繊維、ポリウレタン繊維、ポリウレア繊維、アラミド繊維）およびセルロース含有繊維（例えば、レーヨン／ビスコース、カラムシ、亜麻、亜麻、ジュート、酢酸セルロース繊維、リオセル）などの１種または複数種の随伴材料とのブレンドである。
【０２５２】
近年において、洗浄性能を犠牲にすることなく、酵素およびポリペプチドなどの再生可能な生物学的成分により石油化学製品に由来する洗剤中の成分を置き換えることに関心がますます集まっている。洗剤組成物の成分が変更されると、プロテアーゼ、リパーゼおよびアミラーゼなどの一般的に用いられる洗剤酵素と比して改変されたおよび／もしくは向上した特性を有する新たな酵素活性、または、新たな酵素が、従来の洗剤組成物と比して同様のまたは向上した洗浄性能を達成するために必要とされる。
【０２５３】
本発明は、タンパク質性の汚れ除去プロセスにおける、本発明のプロテアーゼの使用にさらに関する。タンパク質性の汚れは、例えば、ベビーフード、皮脂、カカオ、卵、血液、乳、インク、草またはこれらの組み合わせといった、食品汚れなどの汚れであり得る。
【０２５４】
典型的な洗剤組成物は酵素に追加して種々の成分を含み、これらの成分は異なる効果を有し、いくつかの成分は、界面活性剤のように、洗剤における表面張力を低下させ、これにより、クリーニングされる汚れを浮き上がらせ、分散させ、次いで、洗い流すことが可能であり、漂白剤系のような他の成分は、度々酸化により除去、退色させ、また、多くの漂白剤は強い殺菌特性をも有し、消毒および殺菌に用いられる。ビルダーおよびキレート剤のようなさらに他の成分は、液体から金属イオンを取り除くことにより例えば洗浄水を軟化させる。
【０２５５】
特定の実施形態において、本発明は本発明のプロテアーゼを含む組成物の使用に関し、ここで、前記酵素組成物は、少なくとも１種または複数種の以下の界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、ランドリーもしくは食器洗浄における漂白剤系もしくは漂白剤成分をさらに含む。
【０２５６】
本発明の好ましい実施形態において、界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系および／もしくは漂白剤成分の量は、本発明のプロテアーゼが添加されずに用いられる界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系および／もしくは漂白剤成分の量と比して低減される。好ましくは、界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系および／もしくは漂白剤成分である少なくとも１種の成分は、このような成分の従来の量などの本発明のプロテアーゼが添加されない系中の成分の量よりも、１％少ない、２％少ないなど、３％少ないなど、４％少ないなど、５％少ないなど、６％少ないなど、７％少ないなど、８％少ないなど、９％少ないなど、１０％少ないなど、１５％少ないなど、２０％少ないなど、２５％少ないなど、３０％少ないなど、３５％少ないなど、４０％少ないなど、４５％少ないなど、５０％少ないなどの量で存在する。一態様において、本発明のプロテアーゼは洗剤組成物中において用いられ、ここで、前記組成物は、界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系もしくは漂白剤成分、および／または、ポリマーである少なくとも１種の成分を含まない。
【０２５７】
従って、本発明の一態様は、１つまたは複数の洗剤成分と、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドとを含む洗剤組成物の、洗濯および食器洗いなどの硬質面クリーニングといった洗浄プロセスにおける使用に関し、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドは、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；および／または
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／もしくは挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）もしくは（ｄ）のポリペプチドの断片
から選択される。
【０２５８】
洗浄方法
本発明の洗剤組成物は、理想的には、ランドリー用途における使用に好適である。従って、本発明は布地を洗濯する方法を含む。この方法は、選択される布地に本発明による洗剤組成物を含むクリーニングランドリー溶液を接触させるステップを含む。布地は、通常の消費者が用いる条件において洗濯されることが可能であるいずれかの布地を含み得る。この溶液は、約５．５〜約１１のｐＨを有することが好ましい。組成物は、溶液中で約１００ｐｐｍ、好ましくは５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で利用され得る。水温は、典型的には、約１０℃、約１５℃、約２０℃、約２５℃、約３０℃、約３５℃、約４０℃、約４５℃、約５０℃、約５５℃、約６０℃、約６５℃、約７０℃、約７５℃、約８０℃、約８５℃および約９０℃を含む約５℃〜約９０℃の範囲である。水対布地の比は、典型的には約１：１〜約３０：１である。
【０２５９】
特定の実施形態において、洗浄方法は、約５．０〜約１１．５のｐＨ、または、代替的実施形態においては、約５〜約１１、約５〜約１０、約５〜約９、約５〜約８、約５〜約７、約５．５〜約１１、約５．５〜約１０、約５．５〜約９、約５．５〜約８、約５．５〜約７、約６〜約１１、約６〜約１０、約６〜約９、約６〜約８、約６〜約７、約６．５〜約１１、約６．５〜約１０、約６．５〜約９、約６．５〜約８、約６．５〜約７、約７〜約１１、約７〜約１０、約７〜約９もしくは約７〜約８などのさらに約６〜約１０．５、好ましくは約５．５〜約９、および、より好ましくは約６〜約８で実施される。
【０２６０】
特定の実施形態において、洗浄方法は、約１°ｄＨ、約２°ｄＨ、約３°ｄＨ、約４°ｄＨ、約５°ｄＨ、約６°ｄＨ、約７°ｄＨ、約８°ｄＨ、約９°ｄＨ、約１０°ｄＨ、約１１°ｄＨ、約１２°ｄＨ、約１３°ｄＨ、約１４°ｄＨ、約１５°ｄＨ、約１６°ｄＨ、約１７°ｄＨ、約１８°ｄＨ、約１９°ｄＨ、約２０°ｄＨ、約２１°ｄＨ、約２２°ｄＨ、約２３°ｄＨ、約２４°ｄＨ、約２５°ｄＨ、約２６°ｄＨ、約２７°ｄＨ、約２８°ｄＨ、約２９°ｄＨ、約３０°ｄＨなどの約０°ｄＨ〜約３０°ｄＨの硬度で実施される。典型的な欧州洗浄条件下では、硬度は約１５°ｄＨであり、典型的なＵＳ洗浄条件下では約６°ｄＨであり、および、典型的なアジア洗浄条件下では、約３°ｄＨである。
【０２６１】
本発明は、本発明のプロテアーゼを含む洗剤組成物で布地、食器類または硬質面を洗浄する方法に関する。
【０２６２】
好ましい実施形態はクリーニング方法に関し、前記方法は：対象物に本発明のプロテアーゼを含むクリーニング組成物を前記対象物のクリーニングに好適な条件下で接触させるステップを含む。好ましい実施形態において、クリーニング組成物は洗剤組成物であり、プロセスはランドリーまたは食器洗浄プロセスである。
【０２６３】
さらに他の実施形態は布地から汚れを除去する方法に関し、これは、前記布地に本発明のプロテアーゼを含む組成物を前記対象物のクリーニングに好適な条件下で接触させるステップを含む。
【０２６４】
好ましい実施形態において、上記の方法において用いられる組成物は、カルボヒドラーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼもしくはクチナーゼ、または、これらの組み合わせからなる群から選択される酵素などの、上記の「追加の酵素」の項において記載されている少なくとも１種の追加の酵素をさらに含む。さらに他の好ましい実施形態において、組成物は、以下の、界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系もしくは漂白剤成分、または、ポリマーの成分の少なくとも１種または複数種を低減された量で含む。
【０２６５】
また、本発明の１種または複数種のプロテアーゼを用いる、布地を処理する組成物および方法が予期される（例えば、生地からのり抜きするため）。プロテアーゼは、技術分野において周知であるいずれかの布地処理方法において用いられることが可能である（例えば、米国特許第６，０７７，３１６号明細書を参照のこと）。例えば、一態様においては、布地に溶液中のプロテアーゼを接触させるステップを含む方法によって、布地の触感および外観が向上する。一態様において、布地は加圧下で溶液で処理される。
【０２６６】
一実施形態において、プロテアーゼは、生地を織り上げる最中もしくはその後、または、糊抜きステージの最中、または、１つまたは複数の追加の布地加工ステップの最中に適用される。生地を編み上げる最中、糸はかなりの機械的応力にさらされる。機械式織機で編み上げる前に、縦糸ヤーンは、度々、これらの引張強度を高めて破断を防止するためにサイジング用のデンプンもしくはデンプン誘導体でコーティングされる。プロテアーゼは、これらのサイジング用のタンパク質もしくはタンパク質誘導体を除去するために適用可能である。生地が織り上げられた後、布地を糊抜きステージに進めることが可能である。これに続いて、１つまたは複数の追加の布地加工ステップが可能である。糊抜きは、生地からサイジングを除去する作業である。編み上げた後、サイジングコーティングは、均質で耐洗浄性の結果が確実に得られるよう、布地のさらなる加工の前に除去されるべきである。酵素の作用によるサイジングの酵素性加水分解を含む糊抜き方法もまた提供されている。
【０２６７】
従って、一態様において、本発明は、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／もしくは挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに／または
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）もしくは（ｄ）のポリペプチドの断片
から選択されるプロテアーゼ活性を有するポリペプチドの、洗濯または食器洗い（例えば、手洗いまたは自動の）などの洗浄プロセスにおける使用に関する。
【０２６８】
本発明は、さらに、生地または硬質面からタンパク質性物質を分解または除去する方法に関し、この方法は、以下：
（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）高度の緊縮条件、または極めて高度の緊縮条件下で、
（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列；
（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補ストランド
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２の成熟型ポリペプチドの１つまたは複数（いくつか）のアミノ酸の置換、欠失、および／もしくは挿入を含む変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも７０％の配列同一性、例えば、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％を有するが、１００％未満の配列同一性を有する変異体；ならびに／または
（ｅ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）もしくは（ｄ）のポリペプチドの断片
から選択される１つまたは複数の洗剤成分プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗剤組成物で、生地または硬質面を処理することを含む。
【０２６９】
低温での使用
本発明の一実施形態は、洗浄しようとする表面に本発明のプロテアーゼを接触させるステップを含むランドリー、食器洗いまたは産業用クリーニングを行う方法に関し、ここで、前記ランドリー、食器洗い、産業用または組織的クリーニングは、約４０℃以下の温度で実施される。本発明の一実施形態は、ランドリー、食器洗いまたはクリーニングプロセスにおける本発明のプロテアーゼの使用に関し、ここで、ランドリー、食器洗い、産業用クリーニングにおける温度は約４０℃以下である。
【０２７０】
他の実施形態において、本発明は、タンパク質除去プロセスにおける本発明のプロテアーゼの使用に関し、ここで、タンパク質除去プロセスにおける温度は約４０℃以下である。
【０２７１】
本発明はまた、ランドリー、食器洗浄または産業用クリーニングプロセスにおける、参照プロテアーゼと比して少なくとも１つの向上した特性を有する本発明のプロテアーゼの使用に関し、ここで、ランドリー、食器洗浄またはクリーニングプロセスにおける温度は、約４０℃以下の温度で実施される。
【０２７２】
上記で認識された方法および使用の各々において、洗浄温度は、約４０℃以下、約３９℃以下など、約３８℃以下など、約３７℃以下など、約３６℃以下など、約３５℃以下など、約３４℃以下など、約３３℃以下など、約３２℃以下など、約３１℃以下など、約３０℃以下など、約２９℃以下など、約２８℃以下など、約２７℃以下など、約２６℃以下など、約２５℃以下など、約２４℃以下など、約２３℃以下など、約２２℃以下など、約２１℃以下など、約２０℃以下など、約１９℃以下など、約１８℃以下など、約１７℃以下など、約１６℃以下など、約１５℃以下など、約１４℃以下など、約１３℃以下など、約１２℃以下など、約１１℃以下など、約１０℃以下など、約９℃以下など、約８℃以下など、約７℃以下など、約６℃以下など、約５℃以下など、約４℃以下など、約３℃以下など、約２℃以下など、約１℃以下などである。
【０２７３】
他の好ましい実施形態において、洗浄温度は、約５〜３０℃、約５〜２０℃、約５〜１０℃、約１０〜４０℃、約１０〜３０℃、約１０〜２０℃、約１５〜４０℃、約１５〜３０℃、約１５〜２０℃、約２０〜４０℃、約２０〜３０℃、約２５〜４０℃、約２５〜３０℃または約３０〜４０℃などの約５〜４０℃の範囲である。特定の好ましい実施形態において、洗浄温度は約３０℃である。
【０２７４】
特定の実施形態において、低温洗浄方法は、約５．０〜約１１．５のｐＨで、または、代替的な実施形態においては、さらには、約５〜約１１、約５〜約１０、約５〜約９、約５〜約８、約５〜約７、約５．５〜約１１、約５．５〜約１０、約を含む５．５〜約９、約５．５〜約８、約５．５〜約７、約６〜約１１、約６〜約１０、約６〜約９、約６〜約８、約６〜約７、約６．５〜約１１、約６．５〜約１０、約６．５〜約９、約６．５〜約８、約６．５〜約７、約７〜約１１、約７〜約１０、約７〜約９または約７〜約８などの約６〜約１０．５、好ましくは約５．５〜約９、および、より好ましくは約６〜約９で実施される。
【０２７５】
特定の実施形態において、低温洗浄方法は、約１°ｄＨ、約２°ｄＨ、約３°ｄＨ、約４°ｄＨ、約５°ｄＨ、約６°ｄＨ、約７°ｄＨ、約８°ｄＨ、約９°ｄＨ、約１０°ｄＨ、約１１°ｄＨ、約１２°ｄＨ、約１３°ｄＨ、約１４°ｄＨ、約１５°ｄＨ、約１６°ｄＨ、約１７°ｄＨ、約１８°ｄＨ、約１９°ｄＨ、約２０°ｄＨ、約２１°ｄＨ、約２２°ｄＨ、約２３°ｄＨ、約２４°ｄＨ、約２５°ｄＨ、約２６°ｄＨ、約２７°ｄＨ、約２８°ｄＨ、約２９°ｄＨ、約３０°ｄＨなどの約０°ｄＨ〜約３０°ｄＨの硬度で実施される。典型的な欧州洗浄条件下では、硬度は約１５°ｄＨであり、典型的なＵＳ洗浄条件下では約６°ｄＨであり、および、典型的なアジア洗浄条件下では約３°ｄＨである。
【実施例】
【０２７６】
材料および方法
ＬＢ脱脂乳寒天
３７ｇの脱水ＬＢ寒天培地（Ｓｉｇｍａ  Ｌ３０２７）を２０ｍｌのスキムミルク（Ａｒｌａ，Ｄｅｎｍａｒｋ）と混合し、総量を１０００ｍｌに調整することにより、ＬＢ脱脂乳寒天を調製した。続いて、混合物を１２１℃で１６分オートクレーブすることにより滅菌した。
【０２７７】
洗浄アッセイ
ランドリー用自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）
ランドリーにおける洗浄性能を評価するために、自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）を用いて洗濯実験を実施する。ＡＭＳＡでは、大量の小容量酵素−洗剤溶液の洗浄性能を試験可能である。ＡＭＳＡプレートは、テスト溶液用の多数のスロットと、洗浄されるランドリーサンプルである生地をすべてのスロット開口部に対してしっかりと押し込む蓋とを有する。洗浄時間の間、プレート、テスト溶液、生地および蓋を激しく振盪してテスト溶液と生地とを接触させ、規則正しい周期的な振動で機械的応力を加える。さらなる説明については、国際公開第０２／４２７４０号パンフレット、特に第２３〜２４頁の段落「Ｓｐｅｃｉａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ」を参照のこと。
【０２７８】
洗浄性能は、洗浄した生地の色の輝度として計測される。輝度はまた、白色の光を照射した際のサンプルからの反射光の強度として表されることが可能である。サンプルが汚れている場合、きれいなサンプルのものよりも反射光の強度は低い。従って、反射光の強度を用いて洗浄性能を計測することが可能である。
【０２７９】
色の計測は、洗浄した生地のイメージを撮像するために用いられるプロ用の平面スキャナ（Ｋｏｄａｋ  ｉＱｓｍａｒｔ，Ｋｏｄａｋ、Ｍｉｄｔａｇｅｒ２９、ＤＫ−２６０５  Ｂｒｏｎｄｂｙ、Ｄｅｎｍａｒｋ）で行われる。
【０２８０】
スキャンしたイメージからの光強度の値を抽出するために、イメージからの２４ビットピクセル値をレッド、グリーンおよびブルー（ＲＧＢ）の値に変換する。強度値（Ｉｎｔ）は、ＲＧＢ値をベクターとして一緒に加算し、次いで、得られるベクターの長さから算出される。
【数１】
2015524002.tif 000003
【０２８１】
【表１】
2015524002.tif 000004
【０２８２】
試験材料は、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＢＶ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １２０，３１３３  ＫＴ  Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  ＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓおよびＥＭＰＡ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＡＧ，Ｍｏｅｖｅｎｓｔｒａｓｓｅ  １２，ＣＨ−９０１５  Ｓｔ．Ｇａｌｌｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから取得した。
【０２８３】
プロテアーゼアッセイ
１）Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡアッセイ：
ｐＮＡ基質：Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ（Ｂａｃｈｅｍ  Ｌ−１４００）。
温度：室温（２５℃）
アッセイ緩衝剤：１００ｍＭコハク酸、１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＣＨＥＳ、１００ｍＭ  ＣＡＢＳ、１ｍＭ  ＣａＣｌ2、１５０ｍＭ  ＫＣｌ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ値２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０および１１．０に調節）。
【０２８４】
２０μｌプロテアーゼ（０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で希釈）を１００μｌアッセイ緩衝剤と混合した。１００μｌのｐＮＡ基質（５０ｍｇを１．０ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解し、さらに０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で４５倍に希釈した）を添加することによりアッセイを開始した。プロテアーゼ活性の尺度として、ＯＤ405の増加を監視した。
【０２８５】
２）Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫアッセイ：
基質：Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫ錠剤（架橋され、染色されたカゼイン；Ｍｅｇａｚｙｍｅ製）
温度：制御した（アッセイ温度）。
アッセイ緩衝剤：１００ｍＭコハク酸、１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＣＨＥＳ、１００ｍＭ  ＣＡＢＳ、１ｍＭ  ＣａＣｌ2、１５０ｍＭ  ＫＣｌ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｐＨ６．５またはｐＨ７．０。
【０２８６】
Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫ錠剤を、２．０ｍｌの０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中で穏やかに攪拌することにより懸濁させた。５００μｌのこの懸濁液および５００μｌアッセイ緩衝剤をエッペンドルフチューブに分取し、氷上に置いた。２０μｌプロテアーゼサンプル（０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で希釈）を添加した。アッセイを、エッペンドルフチューブを、アッセイ温度に設定したＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒに移すことにより開始した。チューブを、最大の振盪率（１４００ｒｐｍ）でＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒで１５分間インキュベートした。チューブを氷浴に戻すことによりインキュベーションを停止した。次いで、チューブを氷冷遠心分離で数分間遠心分離し、２００μｌの上澄みをマイクロタイタープレートに移した。ＯＤ650をプロテアーゼ活性の尺度として読み取った。アッセイには緩衝剤ブラインドを含めた（酵素の代わり）。
【０２８７】
３）Ｓｕｃ−ＡＡＰＸ−ｐＮＡアッセイ：
ｐＮＡ基質：Ｓｕｃ−ＡＡＰＡ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１７７５）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＲ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１７２０）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＤ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１８３５）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＩ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１７９０）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＭ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１３９５）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＶ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１７７０）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＬ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１３９０）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＥ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１７１０）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＫ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１７２５）
Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ（ＢａｃｈｅｍＬ−１４００）
温度：室温（２５℃）
アッセイ緩衝剤：１００ｍＭコハク酸、１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＣＨＥＳ、１００ｍＭ  ＣＡＢＳ、１ｍＭ  ＣａＣｌ2、１５０ｍＭ  ＫＣｌ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｐＨ値９．０。
【０２８８】
２０μｌプロテアーゼ（０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で希釈）を１００μｌアッセイ緩衝剤と混合した。１００μｌのｐＮＡ基質（５０ｍｇを１．０ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解し、さらに０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で４５倍に希釈した）を添加することによりアッセイを開始した。プロテアーゼ活性の尺度として、ＯＤ405の増加を監視した。
【０２８９】
実施例１．最適化ＤＮＡ配列の設計
ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する系統に由来するファミリーＳ８プロテアーゼの配列を受入番号ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ：Ｄ１ＸＳＤ４を有する公開データベースで同定した。このプロテアーゼを発現させるために、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株での発現のために最適化したコドン使用頻度でプロテアーゼをコードする遺伝子を設計したが、これは配列番号１に示す配列を有する。コドン最適化方法は、当分野では公知の方法であり、国際公開第２０１２０２５５７７号パンフレットにも記載されている。
【０２９０】
実施例２．プロテアーゼの発現
配列番号１の配列を有するＤＮＡ断片を合成し（Ｇｅｎｅａｒｔ（登録商標），Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｎａｅｒｕｍ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、国際公開第２０１２０２５５７７号パンフレットに記載されている方法に従って枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）にクローン化した。合成プロテアーゼの遺伝子を、安定化配列を含む、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＬ）、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＱ）、およびバチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡプロモータ由来のプロモータから構成される三重プロモータ系の制御により発現させた。発現カセットは、国際公開第９９／４３８３５号パンフレットにも記載されている。得られたプラスミド（Ｃ３６２Ｔと称する）をプロテアーゼ欠失枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）に形質転換させ、ＬＢ＋６ｍｇ／ｌ  ＣＡＭ上に平板培養した。
【０２９１】
形質転換体をＬＢ＋ＣＡＭ＋脱脂乳プレート上に線状に塗り、３７℃で一晩インキュベートした。プロテアーゼ活性を有するポリペプチドを発現する形質転換体は、タンパク質分解活性の存在を示すコロニーの周りにクリアゾーンを示した。
【０２９２】
脱脂乳プレート上のクリアゾーンにより示される、プロテアーゼを発現する形質転換体を３７℃の濃縮液体培地において、２２５ｒｐｍで振盪しながら、５日間増殖させた。１００００ｒｐｍで３０分間の遠心分離、続いて０．４５μｍフィルターを通した濾過により細胞から上澄みを分離した。上澄みを−２０℃で使用まで保存した。
【０２９３】
４０μｌの解凍したサンプルを１０μｌの５０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）に添加し、氷上で５分インキュベートした後、４００００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄みを除去し、２０μｌのＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝剤（Ｎｕｐａｇｅ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をペレットに添加した後、ペレットが完全に溶解するまでピペッティングを実施した。
【０２９４】
サンプルを９９℃で３分間加熱し、８〜１６％Ｃｒｉｔｉｏｎ  Ｓｔａｉｎｆｒｅｅ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（Ｂｉｏｒａｄ）にロードした後、製造業者の指示に従いトリス−グリシン緩衝剤中で泳動させた。ゲルは、製造業者の指示に従い、Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ  Ｓｔａｉｎ  Ｆｒｅｅ  Ｉｍａｇｅｒ（Ｂｉｏｒａｄ）中で作製した。
【０２９５】
発現したプロテアーゼを呈示する形質転換体サンプルにおいて、約４０ｋＤａに明瞭なバンドを認めた。
【０２９６】
実施例３：ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼの精製
実施例２からの培養上澄みを解凍し、遠心分離（２００００×ｇ、２０分間）してから、上澄みを沈殿物から注意深く傾瀉した。上澄みを、Ｎａｌｇｅｎｅ０．２μｍろ過ユニットを通してろ過して、残りのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）宿主細胞を除去した。固体硫酸アンモニウムを０．２μｍ濾液に添加して最終濃度１．６Ｍ（ＮＨ4）2ＳＯ4とし、平衡を確実にするために、溶液を室温で２０分間撹拌した。プロテアーゼ溶液を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、２ｍＭのＣａＣｌ2、１．６Ｍ（ＮＨ4）2ＳＯ4、ｐＨ８．０で平衡化したＰｈｅｎｙｌ−ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（ｈｉｇｈ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｓｉｏｎ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）カラムに加えた。カラムを平衡緩衝剤で完全に洗浄した後、プロテアーゼを、平衡緩衝剤および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、２ｍＭのＣａＣｌ2、ｐＨ８．０、２５％（ｖ／ｖ）イソプロパノールのカラム体積の３倍量のリニア勾配で溶出した。カラムからの画分をプロテアーゼ活性について分析した（ｐＨ９でのＳｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡアッセイを用いて）後、プロテアーゼピークをプールした。プールを、Ｇ２５  ｓｅｐｈａｄｅｘカラムの２０ｍＭのＣＨ3ＣＯＯＨ／ＮａＯＨ、２ｍＭのＣａＣｌ2、ｐＨ５．０に移し、Ｇ２５  ｓｅｐｈａｄｅｘに移した酵素を脱イオン水で希釈して、１．２ｍＳ／ｃｍの導電率を得た。調整したプロテアーゼ溶液を、２０ｍＭのＣＨ3ＣＯＯＨ／ＮａＯＨ、２ｍＭのＣａＣｌ2、ｐＨ５．０で平衡化したＳＯＵＲＣＥ  ３０Ｓカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製）に加えた。カラムを平衡緩衝剤で完全に洗浄した後、プロテアーゼを、同一の緩衝剤中のリニアＮａＣｌ勾配（０→０．５Ｍ）で、カラム体積の８倍量で溶出した。カラムからの画分をプロテアーゼ活性について分析し（ｐＨ９でのＳｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡアッセイを用いて）、ピーク画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによりさらに分析した。クーマシーで染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に３１ｋＤａ付近で主要バンドを有する画分をプールし、これをさらなる特徴付けに用いた。
【０２９７】
実施例４：ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼの特徴付け
Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡアッセイを用いて、ｐＨ−活性プロファイルおよびｐＨ−安定性プロファイル（明示したｐＨ値での２時間後の残存活性）を得た。ｐＨ−安定性プロファイルに関して、プロテアーゼを異なるアッセイ緩衝剤で１０倍に希釈してこれらの緩衝剤のｐＨ値とし、次いで、３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、ｐＨ９．０アッセイ緩衝剤での希釈により、残存活性に係るアッセイの前にプロテアーゼインキュベーションのｐＨを同一のｐＨ値に移行させた。Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫアッセイを用いて、ｐＨ７．０での温度−活性プロファイルを得た（Ｐｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫアッセイを用いて、ｐＨ９．０でのＳａｖｉｎａｓｅ（配列番号３）の温度−活性プロファイルを得た）。Ｓｕｃ−ＡＡＰＸ−ｐＮＡアッセイと、１０の異なるＳｕｃ−ＡＡＰＸ−ｐＮＡ基質を用いて、ｐＨ９．０での酵素のＰ１特異性を取得した。
【０２９８】
結果を以下の表２〜５に示す。表２に関して、活性は、酵素に係る至適ｐＨに対するものである。表３に関して、活性はサンプルに対する残存活性であり、これを安定な条件下（５℃、ｐＨ９．０）で維持した。表４に関して、活性は、酵素に係るｐＨ７．０での至適温度に対するものである。表５について、活性は、酵素についての最良の基質（Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）に関するものである。
【０２９９】
【表２】
2015524002.tif 000005
【０３００】
【表３】
2015524002.tif 000006
【０３０１】
【表４】
2015524002.tif 000007
【０３０２】
【表５】
2015524002.tif 000008
【０３０３】
Ｓａｖｉｎａｓｅ（バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）由来のプロテアーゼ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ；Ｄｅｎｍａｒｋから市販のもの）（配列番号３）のデータと比較した、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）由来のＳ８プロテアーゼについてのＳｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ基質に対するｐＨ活性、ｐＨ安定性プロファイル（３７℃で２時間後の残留活性）、ｐＨ７．０でのＰｒｏｔａｚｙｍｅ  ＡＫに対する温度活性プロファイル、およびｐＨ９．０での１０Ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ基質に対するＰ１特異性も図１〜４に示す。
【０３０４】
ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来の精製Ｓ８プロテアーゼの他の特徴付け
プロテアーゼを次の公知のプロテアーゼ阻害剤で阻害した：ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル）、ＣＩ−２Ａ（オオムギ由来のキモトリプシン阻害剤２Ａ）およびＳＳＩ（ストレプトマイセスアルボグリセオルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｏｇｒｉｓｅｏｌｕｓ）由来のストレプトマイセススブチリシン阻害剤）。
【０３０５】
精製したタンパク質のＮ末端配列をＥＤＭＡＮ分解により決定した：ＡＴＱＴＮＡＰ。
【０３０６】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定された分子量は、近似Ｍr＝３１ｋＤａであった。
【０３０７】
質量分析法により決定された分子量は、２７７０２．４Ｄａであった。
【０３０８】
配列番号２のアミノ酸１〜２７９に一致する成熟型タンパク質の計算分子量は、２７７０２．１Ｄａであり、実験で決定された質量と見事に一致した。
【０３０９】
実施例５：ランドリー用自動機械応力アッセイ（ＡＭＳＡ）
ランドリーにおける洗浄性能を評価するために、自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）を用いて洗濯実験を実施する。洗濯実験は、以下に指定する実験条件下で実施する。
【０３１０】
【表６】
2015524002.tif 000009
【０３１１】
試験材料は以下の通りである。
【０３１２】
【表７】
2015524002.tif 000010
【０３１３】
実施例３で調製したプロテアーゼを、記載に従いＡＭＳＡ洗浄で試験した。試験は、２０℃および４０℃の両方で実施し、洗剤用の公知のプロテアーゼであるＳａｖｉｎａｓｅ（配列番号３）、バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）由来のプロテアーゼと比較した。結果を表６、７に示す。
【０３１４】
【表８】
2015524002.tif 000011
【０３１５】
【表９】
2015524002.tif 000012
【０３１６】
結果から、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ  Ｓ８プロテアーゼが、２０℃および４０℃の両方で、４種の汚れ全てについて優れた性能を示すことがわかる。
【０３１７】
実施例６：ランドリー用自動機械応力アッセイ（ＡＭＳＡ）
自動機械式応力アッセイを用い、４つの異なる工業的汚れについて、２つの異なる洗浄温度で、２つの異なる液体洗剤および粉末洗剤を用いて、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）由来のＡＣＴＥ  Ｓ８プロテアーゼの洗浄性能を試験した。
【０３１８】
実験は、表１に記載する洗剤組成物および布きれを用い、以下の表８に指定する実験条件下で、単一サイクルの洗浄手順を使用し、ランドリー用ＡＭＳＡに記載されているように実施した。結果を以下の表９および１０に示す。
【０３１９】
【表１０】
2015524002.tif 000013
【０３２０】
ＣａＣｌ2、ＭｇＣｌ2、およびＮａＨＣＯ3（Ｃａ2+：Ｍｇ2+：ＣＯ3-＝４：１：７．５）をテスト系に添加することにより、水硬度を１５°ｄＨに調節した。洗浄後、生地を水道水で洗い流し、乾燥させた。
【０３２１】
【表１１】
2015524002.tif 000014
【０３２２】
結果から、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼを含む洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤と比較して、汚れを除去する上でより有効であることがわかる。ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼは、２０℃で、４種の汚れ全ての除去に有効であり、特に血液、乳およびインク汚れの除去に有効である。
【０３２３】
【表１２】
2015524002.tif 000015
【０３２４】
結果から、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼを含む洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤と比較して、汚れを除去する上でより有効であることがわかる。ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼは、４０℃で、４種の汚れ全ての除去に有効であり、特に血液、乳およびインク汚れの除去に有効である。
【０３２５】
実施例７．液体洗剤での小型洗浄
実験条件
【０３２６】
【表１３】
2015524002.tif 000016
【０３２７】
実験は、ＰＣ−０５布きれについて２０℃で１５°ｄＨに設定された小型洗浄ロボットを用いて、２回繰り返し測定として実施した。
【０３２８】
ＣａＣｌ2、ＭｇＣｌ2、およびＮａＨＣＯ3（Ｃａ2+：Ｍｇ2+：ＣＯ3-＝４：１：７．５）を試験系に添加することにより、水の高度を１５°ｄＨに調節した。洗浄後、生地を水道水で洗い流し、乾燥させた。
【０３２９】
テスト材料は、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＢＶ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １２０，３１３３  ＫＴ  Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから得られる。
【０３３０】
続いて、生地を空気乾燥させ、洗浄性能をこれらの生地の色の輝度として計測する。輝度は、レミッション（Ｒ）としても表すことが可能であり、これは、白色光を照射した際に、テスト材料から反射されて放射された光に係る尺度である。生地のレミッション（Ｒ）は、Ｚｅｉｓｓ  ＭＣＳ  ５２１  ＶＩＳ分光測光計を用いて４６０ｎｍで計測される。計測は、製造業者のプロトコルに従って行われる。
【０３３１】
ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥの性能を、１０ｎＭ、３０ｎＭおよび６０ｎＭプロテアーゼ濃度で、Ｓａｖｉｎａｓｅ（対照標準）（配列番号３）と、次のように相対性能を計算することにより、比較する。
ＲＰ＝（Ｒ変異体−Ｒブランク）／（Ｒ対照標準−Ｒブランク）
【０３３２】
酵素が、ＲＰ＝１の対照標準より優れた性能を発揮すれば、その酵素は、向上した洗浄性能を呈示するとみなされる。従って、ＲＰ＞１が、向上した洗浄性能を示す。
【０３３３】
結果および検討：
以下の表１２は、対照標準としてのＳａｖｉｎａｓｅ（配列番号３）（バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）由来のプロテアーゼ；Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ，Ｄｅｎｍａｒｋから市販されている）に対する実施例３の酵素の「向上係数／相対性能」を示す。
【０３３４】
【表１４】
2015524002.tif 000017
【０３３５】
結果から、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ  Ｓ８プロテアーゼが、特に低濃度で、Ｓａｖｉｎａｓｅより優れた性能を発揮することがわかる。
【０３３６】
実施例８：液体洗剤を用いた様々な水硬度およびプロテアーゼ濃度でのＳ８プロテアーゼストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥの洗浄性能
Ｓ８プロテアーゼストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥのＡＭＳＡ洗浄性能を、３つの異なる水硬度および２つの異なる酵素濃度の液体洗剤を用いて、自動機械応力アッセイにより３つの異なる工業的汚れについて試験した。
【０３３７】
実験は、表１に記載する洗剤組成物および布きれを用い、以下の表１３に指定する実験条件下で、単一サイクルの洗浄手順を使用し、ランドリー用ＡＭＳＡ方法に記載されているように実施した。
【０３３８】
【表１５】
2015524002.tif 000018
【０３３９】
ＣａＣｌ2およびＭｇＣｌ2（Ｃａ2+：Ｍｇ2+＝５：１）をテスト系に添加することにより、水硬度を６、１６もしくは２４°ｄＨに調節した。洗浄後、生地を水道水で洗い流し、乾燥させた。
【０３４０】
【表１６】
2015524002.tif 000019
【０３４１】
結果から、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼを含有する洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤およびＳａｖｉｎａｓｅ含有洗剤の両者と比較して、低〜中程度の水硬度における綿／ポリエステル上の血液／乳／インク汚れの除去に特に有効であることがわかる。
【０３４２】
【表１７】
2015524002.tif 000020
【０３４３】
結果から、Ｓ８プロテアーゼストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥを含有する洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤およびＳａｖｉｎａｓｅ含有洗剤の両方と比較して、低〜中程度の水硬度における綿／ポリエステル上のチョコレート−牛乳／インク汚れの除去に有効であることがわかる。
【０３４４】
【表１８】
2015524002.tif 000021
【０３４５】
結果から、Ｓ８プロテアーゼストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥを含有する洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤およびＳａｖｉｎａｓｅ含有洗剤の両方と比較して、低〜中程度の水硬度における油／乳／インク汚れの除去に有効であることがわかる。
【０３４６】
【表１９】
2015524002.tif 000022
【０３４７】
結果から、ストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥ由来のＳ８プロテアーゼを含有する洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤およびＳａｖｉｎａｓｅ含有洗剤の両方と比較して、低〜中程度の水硬度における綿／ポリエステル上の血液／乳／インク汚れの除去に特に有効であることがわかる。
【０３４８】
【表２０】
2015524002.tif 000023
【０３４９】
結果から、Ｓ８プロテアーゼストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥを含有する洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤およびＳａｖｉｎａｓｅ含有洗剤の両方と比較して、４０℃で、低〜中程度の水硬度における綿／ポリエステル上のチョコレート−乳／インク汚れの除去に特に有効であることがわかる。
【０３５０】
【表２１】
2015524002.tif 000024
【０３５１】
結果から、Ｓ８プロテアーゼストレプトマイセス属の一種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＡＣＴＥを含有する洗剤が、プロテアーゼを含まない洗剤およびＳａｖｉｎａｓｅ含有洗剤の両方と比較して、４０℃で、低〜中程度の水硬度における油／乳／インク汚れの除去に有効であることがわかる。
【図１】
2015524002.tif 000025
【図２】
2015524002.tif 000026
【図３】
2015524002.tif 000027
【図４】
2015524002.tif 000028
【配列表】
2015524002000001.app
【国際調査報告】
2015524002.tif 000029
2015524002.tif 000030
2015524002.tif 000031
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