(57)【要約】ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物、ならびにそのようなリポソーム組成物を作製および使用する方法が記載される。これらのリポソーム組成物は、薬物の生体内分布に大きく影響することなく、（ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて）長期的な薬物暴露を提供する。ペプチドエポキシケトン化合物の耐容性もまた、このリポソーム組成物中で製剤化されたときに向上した。【選択図】図７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的リポソーム組成物であって、
リポソーム封入ペプチドエポキシケトン化合物であって、（ｉ）前記リポソーム組成物のリポソームは、１つ以上の脂質を含み、前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含み、（ｉｉ）前記リポソームは、約０．０１：１〜約１：１のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比を含み、（ｉｉｉ）前記リポソームは、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有する、リポソーム封入ペプチドエポキシケトン化合物と、
前記リポソームを含む水溶液を含む、薬学的リポソーム組成物。
【請求項２】
ペプチドエポキシケトン化合物：脂質の前記重量比は、約０．０５：１〜約０．５：１である、請求項１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項３】
前記リポソームは、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有する、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項４】
前記リポソームの前記脂質は、約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項５】
前記リポソームの前記脂質は、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項６】
前記リポソームの前記脂質は、約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項７】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項６に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項８】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項６または請求項７に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項８に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１０】
前記リポソームの前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリンを含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１１】
前記リポソームの前記脂質は、スフィンゴミエリンを含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１２】
前記リポソームの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１３】
前記リポソームの前記脂質は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１４】
前記リポソームの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１５】
前記リポソームの前記脂質は、約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１６】
前記水溶液は、緩衝剤をさらに含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１７】
前記水溶液は、等張性を維持するための薬剤をさらに含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１８】
前記リポソーム組成物は、前記ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームと、前記リポソームの内部水性コア内の可溶化剤とを含む、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項１９】
前記可溶化剤は、化合物である、請求項１８に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２０】
前記可溶化剤は、化合物であり、前記化合物は、シクロデキストリンであり、前記リポソーム組成物の前記リポソームは、前記リポソームの前記内部水性コア内に、前記シクロデキストリンと複合化した前記ペプチドエポキシケトン化合物を含む、請求項１９に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２１】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項２０に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２２】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンである、請求項２１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２３】
前記シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項２１に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２４】
リポソーム組成物の前記水溶液は、約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０に調整される、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２５】
リポソーム組成物の前記水溶液は、ヒトの生理的ｐＨに調整される、請求項２４に記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２６】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２７】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物。
【請求項２８】
前述の請求項のいずれかに記載の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される、乾燥薬学的組成物。
【請求項２９】
乾燥薬学的組成物であって、
１つ以上の脂質を含み、前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含み、約０．０１：１〜約１：１のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比である、乾燥薬学的組成物。
【請求項３０】
追加の賦形剤をさらに含む、請求項２９に記載の前記乾燥薬学的組成物。
【請求項３１】
前記追加の賦形剤は、抗凍結剤、糖、ガラス転移調節剤、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上の賦形剤を含む、請求項３０に記載の前記乾燥薬学的製剤。
【請求項３２】
薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、
（ｉ）ペプチドエポキシケトン化合物、および１つ以上の脂質であって、前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含む、脂質、ならびに（ｉｉ）約０．０１：１〜約１：１のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比を含む、乾燥フィルムを調製することと、
前記乾燥フィルムを水溶液で再水和して、リポソームおよび前記水溶液を含むリポソーム組成物を形成することと、を含む、方法。
【請求項３３】
ペプチドエポキシケトン化合物：脂質の前記重量比は、約０．０５：１〜約０．５：１である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含む、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、請求項３２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、請求項３２〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項３２〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項３８または請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリンを含む、請求項３２〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、スフィンゴミエリンを含む、請求項３２〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項３２〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項３２〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを含む、請求項３２〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む、請求項３２〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
緩衝剤を前記水溶液に添加することをさらに含む、請求項３２〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
等張性を維持するための薬剤を前記水溶液に添加することをさらに含む、請求項３２〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記水溶液の前記ｐＨを約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０に調整することをさらに含む、請求項３２〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
前記水溶液の前記ｐＨをヒトの生理的ｐＨに調整することをさらに含む、請求項３２〜４９のいずれかに記載の方法。
【請求項５２】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、請求項３２〜５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、請求項３２〜５０のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
請求項３２〜５３のいずれかに記載の方法によって作製される、薬学的リポソーム組成物。
【請求項５５】
薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、
１つ以上の脂質を含み、前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含む、乾燥フィルムを調製することと、
前記乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物および１つ以上の可溶化剤を含む水溶液で再水和して、前記水溶液中に分散したリポソームを含むリポソーム組成物を形成することと、を含む、方法。
【請求項５６】
前記１つ以上の可溶化剤は、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記１つ以上の可溶化剤は、化合物を含み、前記化合物は、シクロデキストリンである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記１つ以上の可溶化剤は、ｐＨ調整剤を含み、前記水溶液は、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３．０のｐＨを有する、請求項５６〜５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記水溶液の前記ｐＨは、約ｐＨ１．０である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記１つ以上の可溶化剤は、共溶媒を含む、請求項５６〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
透析、脱塩、緩衝液交換、またはゲル濾過をさらに含む、請求項５５〜６１のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
前記リポソーム組成物の前記リポソームは、約０．０１：１〜約１：１のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比を含む、請求項５５〜６２のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含む、請求項５５〜６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６５】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、請求項５５〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、請求項５５〜６６のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項５５〜６７のいずれかに記載の方法。
【請求項６９】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項６８または請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリンを含む、請求項５５〜７１のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、スフィンゴミエリンを含む、請求項５５〜７２のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項５５〜７３のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項５５〜７４のいずれかに記載の方法。
【請求項７６】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを含む、請求項５５〜７５のいずれかに記載の方法。
【請求項７７】
前記乾燥フィルムの前記脂質は、約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む、請求項５５〜７６のいずれかに記載の方法。
【請求項７８】
前記リポソーム組成物を形成した後に、ペプチドエポキシケトン化合物を非封入水溶液から除去することをさらに含む、請求項５５〜７７のいずれかに記載の方法。
【請求項７９】
前記ペプチドエポキシケトン化合物を前記非封入水溶液から除去するために、透析、超遠心分離、またはゲル濾過が使用される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記リポソーム組成物を形成した後に、前記水溶液を約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０のｐＨに調整することをさらに含む、請求項５５〜７９のいずれかに記載の方法。
【請求項８１】
前記リポソーム組成物を形成した後に、前記水溶液をヒトの生理的ｐＨに調整することをさらに含む、請求項５５〜７９のいずれかに記載の方法。
【請求項８２】
前記リポソーム組成物を形成した後に、等張性を維持するために薬剤を前記水溶液に添加することをさらに含む、請求項５５〜８１のいずれかに記載の方法。
【請求項８３】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、請求項５５〜８２のいずれかに記載の方法。
【請求項８４】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、請求項５５〜８３のいずれかに記載の方法。
【請求項８５】
請求項５５〜８４のいずれかに記載の方法によって作製される、薬学的リポソーム組成物。
【請求項８６】
薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、
溶媒および１つ以上の脂質を含み、前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含む、脂質溶液を調製することと、
前記脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物および１つ以上の可溶化剤を含む水溶液に注入して、前記水溶液中に分散したリポソームを含むリポソーム組成物を形成することと、を含む、方法。
【請求項８７】
前記溶媒は、有機溶媒である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記溶媒は、エタノールである、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記１つ以上の可溶化剤は、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、またはそれらの組み合わせである、請求項８６〜８８のいずれかに記載の方法。
【請求項９０】
前記１つ以上の可溶化剤は、化合物を含み、前記化合物は、シクロデキストリンである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記シクロデキストリンは、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記１つ以上の可溶化剤は、ｐＨ調整剤を含み、前記水溶液は、約ｐＨ０．５〜約ｐＨ３．０のｐＨを有する、請求項８９〜９１のいずれかに記載の方法。
【請求項９３】
前記水溶液の前記ｐＨは、約ｐＨ１．０である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記可溶化剤は、共溶媒を含む、請求項８９〜９３のいずれかに記載の方法。
【請求項９５】
透析、脱塩、緩衝液交換、またはゲル濾過をさらに含む、請求項８６〜９４のいずれかに記載の方法。
【請求項９６】
前記リポソーム組成物の前記リポソームは、約０．０１：１〜約１：１のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比を含む、請求項８６〜９５のいずれかに記載の方法。
【請求項９７】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含む、請求項８６〜９６のいずれかに記載の方法。
【請求項９８】
前記リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することを含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、請求項８６〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、請求項８６〜９９のいずれかに記載の方法。
【請求項１０１】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、請求項８６〜１００のいずれかに記載の方法。
【請求項１０２】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質の前記脂質は、コレステロールまたはリン脂質である、請求項１０１または請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリンを含む、請求項８６〜１０４のいずれかに記載の方法。
【請求項１０６】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、スフィンゴミエリンを含む、請求項８６〜１０５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０７】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項８６〜１０６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０８】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む、請求項８６〜１０７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０９】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを含む、請求項８６〜１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１０】
前記リポソーム組成物の前記リポソームの前記脂質は、約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む、請求項８６〜１０９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１１】
前記リポソーム組成物を形成した後に、ペプチドエポキシケトン化合物を非封入水溶液から除去することをさらに含む、請求項８６〜１１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１１２】
前記ペプチドエポキシケトン化合物を前記非封入水溶液から除去するために、透析、超遠心分離、またはゲル濾過が使用される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記リポソーム組成物を形成した後に、前記水溶液を約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０のｐＨに調整することをさらに含む、請求項８６〜１１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１１４】
前記リポソーム組成物を形成した後に、前記水溶液をヒトの生理的ｐＨに調整することをさらに含む、請求項８６〜１１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１１５】
前記リポソーム組成物を形成した後に、等張性を維持するために薬剤を前記水溶液に添加することをさらに含む、請求項８６〜１１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１１６】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および化合物Ｖからなる群から選択される、請求項８６〜１１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１１７】
前記ペプチドエポキシケトン化合物は、カーフィルゾミブ（化合物Ｖ）である、請求項８６〜１１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１８】
請求項８６〜１１７のいずれかに記載の方法によって作製される、薬学的リポソーム組成物。
【請求項１１９】
処置を必要とする対象において多発性骨髄腫を処置する方法であって、
治療上効果的な量の、請求項１〜２７、５４、８５、または１１８のいずれか１項に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１２０】
治療上効果的な量の化学療法剤の同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
処置を必要とする対象において固形腫瘍を処置する方法であって、
治療上効果的な量の、請求項１〜２７、５４、８５、または１１８のいずれか１項に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１２２】
治療上効果的な量の化学療法剤の同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
処置を必要とする対象において疾患または状態を処置する方法であって、
治療上効果的な量の、請求項１〜２７、５４、８５、または１１８のいずれか１項に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１２４】
治療上効果的な量の化学療法剤、サイトカイン、ステロイド、または免疫療法剤の同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む、請求項１２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、現在係属中である２０１２年７月１８出願の米国仮特許出願第６１／６７３，０１７号、および現在係属中である２０１３年３月１５日出願の米国仮特許出願第６１／７９４，６０３号の利益を主張し、これらは共に、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。  
【０００２】
本発明は、癌の処置のための組成物、ならびにそのような組成物を調製する方法に関する。本発明の態様は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む安定なリポソーム組成物を製剤化する方法、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物、およびそのようなリポソーム組成物を使用する方法を含むが、それらに限定されない。
【背景技術】
【０００３】
真核生物において、タンパク質分解は、破壊の標的となるタンパク質が７６アミノ酸のポリペプチドユビキチンに結合するユビキチン経路によって主に媒介される。標的とされると、ユビキチン化タンパク質は、次いで、３つの主要なタンパク質分解活性の作用によりタンパク質を短鎖ペプチドに切断する多触媒性プロテアーゼである２６Ｓプロテアソームの基質として機能する。細胞内タンパク質代謝回転における一般的機能を有する一方で、プロテアソーム媒介分解はまた、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩの提示、アポトーシス、細胞増殖調節、ＮＦ−κＢ活性化、抗原処理、および炎症性シグナルの伝達等の多くのプロセスにおいて重要な役割を果たす。
【０００４】
２０Ｓプロテアソームは、４つのリングに組織化した２８のサブユニットを含む７００ｋＤａの円筒形状多触媒性プロテアーゼ複合体である。酵母および他の真核生物において、７つの異なるαサブユニットが外側リングを形成し、７つの異なるβサブユニットが内側リングを構成する。αサブユニットは、１９Ｓ（ＰＡ７００）および１１Ｓ（ＰＡ２８）調節複合体の結合部位、ならびに２つのβサブユニットリングにより形成された内部タンパク質分解チャンバの物理的バリアとして機能する。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、プロテアソームは、２６Ｓ粒子（「２６Ｓプロテアソーム」）として存在すると考えられる。Ｉｎ  ｖｉｖｏ実験では、プロテアソームの２０Ｓ形態の阻害を、２６Ｓプロテアソームの阻害と容易に関連付けることができることが示されている。粒子形成中のβサブユニットのアミノ末端プロ配列の切断は、触媒求核剤として機能するアミノ末端トレオニン残基を露出させる。
【０００５】
したがって、プロテアソームにおける触媒活性を担うサブユニットは、アミノ末端求核性残基を有し、これらのサブユニットは、Ｎ末端求核剤（Ｎｔｎ）ヒドロラーゼのファミリーに属する（求核性Ｎ末端残基は、例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、または他の求核性部分である）。このファミリーは、例えば、ペニシリンＧアシラーゼ（ＰＧＡ）、ペニシリンＶアシラーゼ（ＰＶＡ）、グルタミンＰＲＰＰアミドトランスフェラーゼ（ＧＡＴ）、および細菌性グルコシルアスパラギナーゼを含む。遍在的に発現したβサブユニットに加えて、高等脊椎動物はまた、３つのインターフェロンγ誘導性βサブユニット（ＬＭＰ７、ＬＭＰ２およびＭＥＣＬ１）を有し、これらは、その通常の相当物である、それぞれβ５、β１およびβ２を置き換え、したがってプロテアソームの触媒活性を改変する。
【０００６】
異なるペプチド基質の使用により、大型疎水性残基の後を切断するキモトリプシン様活性（ＣＴ−Ｌ）、塩基性残基の後を切断するトリプシン様活性（Ｔ−Ｌ）、および酸性残基の後を切断するカスパーゼ様（Ｃ−Ｌ）という３つの主要なタンパク質分解活性が、真核生物２０Ｓプロテアソームに対して定義されている。主要なプロテアソームタンパク質分解活性には、異なる触媒部位が寄与すると思われるが、これは、阻害剤、βサブユニットにおける点突然変異、およびインターフェロンγ誘導性βサブユニットの交換が、様々な程度でこれらの活性を改変するためである。
【０００７】
プロテアソーム活性を阻害するために使用され、癌、特に多発性骨髄腫に対して効果的であることが示されている小分子のいくつかの例がある。しかしながら、それらの化合物は一般に、細胞および分子レベルでのプロテアソームの役割を探求および利用するために、したがってそれらの抗癌活性を最大化するために必要な、特異性、安定性、または有効性を欠いている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は全体として、プロテアソーム阻害剤の治療活性を、特にそれらの薬物動態学的特性を向上させることによって増加させるための、リポソーム組成物に関する。本発明の態様は、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物、そのような組成物を作製する方法、およびそのような組成物を使用する方法を含む。
【０００９】
一態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物に関する。いくつかの実施形態において、薬学的リポソーム組成物は、リポソーム封入ペプチドエポキシケトン化合物を含み、（ｉ）このリポソーム組成物のリポソームは、１つ以上の脂質（例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および／またはスフィンゴミエリン）を含み、このリポソーム内で、ペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、約０．０１：１〜約１：１である。好ましい実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、約０．０５：１〜約０．５：１である。典型的には、リポソームは、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ、好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有する。
【００１０】
本発明薬学的リポソーム組成物の実施形態は、リン脂質、コレステロール、親水性ポリマー誘導体化脂質、および／またはそれらの組み合わせを含む、リポソームの脂質を含むが、それらに限定されない。
【００１１】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、リポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤（例えば、化合物）を含む、リポソームを含む。
【００１２】
本発明の薬学的リポソーム組成物はまた、１つ以上の賦形剤を含むことができる。
【００１３】
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物を作製する方法に関する。薬学的リポソーム組成物を作製する１つの方法は、ペプチドエポキシケトン化合物および少なくとも１つの脂質を含む、乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを水溶液で再水和して、リポソームおよび水溶液を含むリポソーム組成物を形成することとを含む。薬学的リポソーム組成物を作製する別の方法は、１つ以上の脂質を含む、乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液で再水和して、水溶液中に分散したリポソームを含むリポソーム組成物を形成することとを含む。典型的には、水溶液は、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む。薬学的リポソーム組成物を作製するなおも別の方法は、１つ以上の脂質および溶媒を含む脂質溶液を調製することと、脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液に注入することとを含む。典型的には、水溶液は、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む。
【００１４】
好ましい実施形態において、薬学的リポソーム組成物を作製する方法は、リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ（好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズ）を有するようにサイズ調整することをさらに含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、過剰のペプチドエポキシケトン化合物が、非封入水溶液から除去される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本方法は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝液）および／または等張性を維持するための薬剤を含むが、それらに限定されない１つ以上の賦形剤を、リポソームが分散した水溶液に添加することをさらに含む。
【００１７】
別の態様において、本発明は、本発明の方法によって作製される薬学的リポソーム組成物に関する。
【００１８】
さらなる態様において、本発明は、処置を必要とする対象において疾患または状態を処置する方法であって、治療上効果的な量の、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームを含む薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態において、処置する方法は、治療上効果的な量の別の治療薬剤、例えば、化学療法剤、サイトカイン、ステロイド、免疫療法剤、またはそれらの組み合わせの同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む。
【００１９】
別の態様において、本発明は、１つ以上の両親媒性脂質（例えば、リン脂質）、およびペプチドエポキシケトン化合物を含む、乾燥薬学的組成物に関する。
【００２０】
当業者は、本明細書における開示を考慮して、本発明のこれらの、または他の実施形態を容易に思い付くだろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本明細書における実施例および表に示されるデータを生成するために使用された、例示的リポソームカーフィルゾミブ組成物（Ａ〜Ｇ）の特性決定を示す。
【図２Ａ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示す。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、全血（主に赤血球）中のプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして表される第１の群は、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ、本明細書においてＳＢＥ−ＣＤとも称される）、および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないプラセボビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示し、第３のバーは、８時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示し、第４のバーは、２４時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示す。図において斜線模様のバーとして表される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。
【図２Ｂ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示す。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、副腎組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、注射用ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ（非リポソーム）のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示し、第３のバーは、８時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示し、第４のバーは、２４時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示す。図において斜線模様のバーとして表される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。
【図２Ｃ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、肝組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、注射用ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ（非リポソーム）のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブ組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブ組成物のデータを示す。図において斜線模様のバーとして表される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。
【図２Ｄ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、心臓組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。データの３つの群が、以下のように横軸に示されている。図において斜交平行模様のバーとして示される第１の群は、注射用ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ（非リポソーム）のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示し、第３のバーは、８時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示し、第４のバーは、２４時間でのＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータを示す。図において斜線模様のバーとして表される第２の群は、カーフィルゾミブのリポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないリポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブリポソーム組成物のデータを示す。図において白抜き輪郭線のバーとして示される第３の群は、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第１のバーは、カーフィルゾミブを含まないペグ化リポソームビヒクルの対照データを示し、第２のバーは、１時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第３のバーは、８時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示し、第４のバーは、２４時間でのカーフィルゾミブペグ化リポソーム組成物のデータを示す。
【図３Ａ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、全血（主に赤血球）中のプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。
【図３Ｂ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、心臓組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。
【図３Ｃ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、肝組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。
【図３Ｄ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、副腎組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの４つの群が示されている。第１の群（×を含む白い正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、４、６、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（×を含む白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第３の群（黒の正方形）は、５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。第４の群（黒丸）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤ（ａｐ−Ｌ１１）を含む。
【図４】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物の循環半減期に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、μｍｏｌ／Ｌ単位のカーフィルゾミブの濃度（濃度（μｍｏｌ／Ｌ））であり、横軸は、分単位の時間（時間（分））である。×を含む白い正方形を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の投与に対応する。黒い正方形を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤを含む。黒丸を伴う線は、１５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１、カーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応し、ペグ化リポソームの水性コアは、カーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤを含む。
【図５Ａ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、全血（主に赤血球）中のプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。
【図５Ｂ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、心臓組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。
【図５Ｃ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、肝組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。
【図５Ｄ】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物に対する薬力学応答に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸（ＣＴ−Ｌ活性）は、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を含まない対応するビヒクルに対する酵素活性パーセント（％）であり、酵素活性は、副腎組織におけるプロテアソームＣＴ−Ｌ活性に対応する。横軸は、時間単位の時間（時間）である。データの２つの群が示されている。第１の群（白丸）は、１０ｍｇ／ｋｇで投与された、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）および１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５（非リポソーム）中で製剤化された、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）の注射用組成物の、０、１、８、および２４時間のデータ点でのデータを示す。第２の群（黒の正方形）は、１５ｍｇ／ｋｇで投与された、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むカーフィルゾミブのリポソーム組成物の、０、１、４、６、および２４時間のデータ点でのデータを示す。
【図６】ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、カーフィルゾミブの異なる組成物の循環半減期に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、μｍｏｌ／Ｌ単位のカーフィルゾミブの濃度（濃度（μｍｏｌ／Ｌ））であり、横軸は、分単位の投薬後の時間（投与後の時間（分））である。白丸を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の投与に対応する。黒い正方形を伴う線は、１５ｍｇ／ｋｇの、捕捉されたカーフィルゾミブ（ｐＬ−６）を含むリポソームを含む、カーフィルゾミブのリポソーム組成物の投与に対応する。
【図７】カーフィルゾミブの異なる組成物の投薬頻度に関連するデータを示すグラフである。図において、縦軸は、ｍｍ３単位の腫瘍体積（腫瘍体積（ｍｍ３））であり、横軸は、腫瘍負荷後の日数（日）である。白丸を伴う線（図中、３０日目で一番上の線）は、ビヒクル（１２．５ｍｇ／ｍＬのＥＰＣ、３．１ｍｇ／ｍＬのコレステロール、１．２ｍｇ／ｍＬのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥを含み、カーフィルゾミブを含まないリポソーム）の週１回の投与に対応し、白い正方形を伴う線は、各週の１日目および２日目に投与された、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物（非リポソーム）に対応し、黒丸を伴う線は、各週の１日目および２日目に投与された、１０ｍｇ／ｋｇのカーフィルゾミブの用量を提供する、ｐＬ６＝２ｍｇ／ｍＬのＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍＬのスフィンゴミエリン、３．２ｍｇ／ｍＬのコレステロール、１．３ｍｇ／ｍＬのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥの投与に対応する。白い三角形を伴う線は、週１回投与された、１５ｍｇ／ｋｇのカーフィルゾミブの用量を提供する、ｐＬ６＝２ｍｇ／ｍＬのＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍＬのスフィンゴミエリン、３．２ｍｇ／ｍＬのコレステロール、１．３ｍｇ／ｍＬのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥの投与に対応する。実線の矢印は、投薬期間の開始を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本明細書において引用される全ての特許、刊行物および特許出願は、各個別の特許、刊行物、または特許出願が、全ての目的において、明確かつ個別に参照により全体的に組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２３】
１．０．０  定義
本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものであり、制限することを意図しないことを理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別様に明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「１種の脂質」への言及は、１種以上の脂質または脂質の混合物を含み、「親水性ポリマー」への言及は、１種以上の親水性ポリマー、または親水性ポリマーの混合物を含み、「１種の薬剤」への言及は、１種以上の薬剤を含む、等である。
【００２４】
別段に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載の方法および材料と同様または同等の他の方法および材料を、本発明の実践において使用することができるが、本明細書において好ましい材料および方法が説明される。
【００２５】
本発明を説明および請求する上で、以下の用語が、以下に記載される定義に従って使用される。
【００２６】
「酵素」という用語は、本明細書において使用される場合、触媒様式で化学反応を行う、任意の部分的または完全にタンパク質性の分子を指す。そのような酵素は、天然酵素、融合酵素、プロ酵素、アポ酵素、変性酵素、ファルネシル化酵素、ユビキチン化酵素、脂肪酸アシル化酵素、ゲランゲラニル化酵素、ＧＰＩ結合酵素、脂質結合酵素、プレニル化酵素、自然発生的または人工的に生成された突然変異酵素、側鎖または骨格が改変された酵素、リーダー配列を有する酵素、ならびに、プロテオグリカンおよびプロテオリポソーム等の非タンパク質性の材料と複合化した酵素であってもよい。酵素は、自然発現、促進された発現、クローニング、様々な液体ベースおよび固体ベースのペプチド合成、ならびに当業者に知られた同様の方法を含む任意の手段により作製され得る。
【００２７】
「Ｃｘ−ｙアルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、例えばトリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチル等のハロアルキル基を含む、鎖内にｘ個からｙ個の炭素を含有する直鎖アルキルおよび分岐鎖アルキル基を含む、置換または非置換の飽和炭化水素基を指す。Ｃ０アルキルは、基が末端位置にある場合は水素を、内部にある場合は結合を示す。「Ｃ２−ｙアルケニル」および「Ｃ２−ｙアルキニル」という用語は、長さおよび可能な置換においてアルキルに類似するが、それぞれ少なくとも１つの二重または三重結合を含有する、置換または非置換の不飽和脂肪族基を指す。
【００２８】
「アルコキシ」という用語は、本明細書において使用される場合、結合した酸素を有するアルキル基を指す。代表的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等を含む。
【００２９】
「エーテル」という用語は、本明細書において使用される場合、酸素により共有結合した２つの炭化水素を指す。したがって、アルキルをエーテル化するアルキルの置換基は、アルコキシであるか、またはそれに類似する。
【００３０】
「Ｃ１−６アルコキシアルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、アルコキシ基で置換され、それによりエーテルを形成するＣ１−６アルキル基を指す。
【００３１】
「Ｃ１−６アラルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、アリール基で置換されたＣ１−６アルキル基を指す。
【００３２】
「アミン」および「アミノ」という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認識されており、非置換および置換両方のアミン、ならびにその塩、例えば、一般式：
【化１】
2015524410.tif 000003
で表すことができる部分を指し、
式中、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１０’は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８を表し、または、Ｒ９およびＲ１０は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、環構造内に４個から８個の原子を有するヘテロ環を完成させ、Ｒ８は、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリルまたはポリシクリルを表し、ｍは、ゼロまたは１から８の整数である。好ましい実施形態において、Ｒ９またはＲ１０の１つだけがカルボニルであってもよく、例えば、Ｒ９、Ｒ１０、および窒素は、一緒になってイミドを形成しない。さらにより好ましい実施形態において、Ｒ９およびＲ１０（および任意選択でＲ１０’）は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、または−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８を表す。ある特定の実施形態において、アミノ基は塩基性であり、すなわち、プロトン化形態は、ｐＫａ≧７．００を有する。
【００３３】
「アミド（ａｍｉｄｅ）」および「アミド（ａｍｉｄｏ）」という用語は、アミノ置換カルボニルを指し、一般式：
【化２】
2015524410.tif 000004
で表すことができる部分を含むものとして、当該技術分野において認識されており、式中、Ｒ９、Ｒ１０は、上で定義された通りである。アミドの好ましい実施形態は、不安定となり得るイミドを含まない。
【００３４】
「アリール」という用語は、本明細書において使用される場合、環の各原子が炭素である、５員、６員、および７員置換または非置換単環式芳香族基を指す。「アリール」という用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つが芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。アリール基は、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリン等を含む。
【００３５】
「炭素環」および「カルボシクリル」という用語は、本明細書において使用される場合、環の各原子が炭素である非芳香族置換または非置換環を指す。「炭素環」および「カルボシクリル」という用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つが炭素環であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。
【００３６】
「カルボニル」という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認識されており、一般式：
【化３】
2015524410.tif 000005
で表すことができる部分を指し、
式中、Ｘは、結合であるか、または酸素もしくは硫黄を表し、Ｒ１１は、水素、アルキル、アルケニル、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８、または薬学的に許容される塩を表し、Ｒ１１’は、水素、アルキル、アルケニル、または−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｒ８を表し、ｍおよびＲ８は、上で定義された通りである。Ｘが酸素であり、Ｒ１１またはＲ１１’が水素でない場合、式は、「エステル」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ１１が水素である場合、式は、「カルボン酸」を表す。
【００３７】
「Ｃ１−６ヘテロアラルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、ヘテロアリール基で置換されたＣ１−６アルキル基を指す。
【００３８】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書において使用される場合、環構造が１個から４個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の芳香族の５員から７員環構造、より好ましくは、５員から６員環を指す。「ヘテロアリール」という用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つがヘテロ芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。ヘテロアリール基は、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン等を含む。
【００３９】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書において使用される場合、炭素または水素以外の任意の元素の原子を指す。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、リン、および硫黄である。
【００４０】
「ヘテロシクリル」および「ヘテロ環式基」という用語は、本明細書において使用される場合、環構造が１個から４個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の非芳香族の３員から１０員環構造、より好ましくは３員から７員環を指す。「ヘテロシクリル」および「ヘテロ環式環」という用語用語はまた、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つがヘテロ環であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであってもよい。ヘテロシクリル基は、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタム等を含む。
【００４１】
「Ｃ１−６ヒドロキシアルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒドロキシ基で置換されたＣ１−６アルキル基を指す。
【００４２】
「チオエーテル」という用語は、本明細書において使用される場合、結合した硫黄部分を有するアルキル基を指す。好ましい実施形態において、「チオエーテル」は、−−Ｓ−アルキルで表現される。代表的なチオエーテル基は、メチルチオ、エチルチオ等を含む。
【００４３】
「置換された」という用語は、本明細書において使用される場合、骨格の１個以上の炭素上の水素を置き換える置換基を有する部分を指す。「置換」または「〜で置換された」という用語は、そのような置換が、置換された原子および置換基の許容される価数に従い、置換が安定な化合物、例えば、例として再配列、環化、削除等による転換を自発的に生じない安定な化合物をもたらすという暗黙の条件を含む。本明細書において使用される場合、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことが企図される。幅広い態様において、許容される置換基は、非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式およびヘテロ環式、芳香族および非芳香族の、有機化合物の置換基を含む。許容される置換基は、適切な有機化合物に対して１つ以上であってもよく、また同じまたは異なってもよい。本発明の目的において、窒素等のヘテロ原子は、ヘテロ原子の価数を満足する、水素置換基、および／または本明細書に記載の任意の許容される有機化合物の置換基を有してもよい。置換基は、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、もしくはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、もしくはチオホルメート）、アルコキシ、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含み得る。当業者には、炭化水素鎖上で置換された部分が、適切な場合はそれ自体置換されてもよいことが理解される。
【００４４】
「阻害剤」という用語は、本明細書において使用される場合、酵素の活性をブロックまたは低減する化合物を指す（例えば、ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ、Ｂｏｘ−ＬＬＲ−ＡＭＣ、およびＺ−ＬＬＥ−ＡＭＣ等の標準的蛍光性ペプチド基質のタンパク質分解切断の阻害、２０Ｓプロテアソームの様々な触媒活性の阻害）。阻害剤は、競合的、不競合的、または非競合的阻害により作用し得る。阻害剤は、可逆的または不可逆的に結合することができ、したがって、この用語は、酵素の自殺基質である化合物を含む。阻害剤は、酵素の活性部位上またはその近くの１つ以上の部位を修飾することができ、または、阻害剤は、酵素上の他の箇所において構造変化をもたらすことができる。
【００４５】
「ペプチド」という用語は、本明細書において使用される場合、標準的α−置換基を有する標準的アミド結合だけでなく、一般に使用されるペプチド模倣薬、他の修飾された結合、非自然発生的側鎖、および側鎖修飾、例えば米国特許第７，４１７，０４２号に記載のようなものも指す。
【００４６】
「ポリシクリル」および「多環式」という用語は、本明細書において使用される場合、２個以上の炭素が２つの隣接する環に共通である２つ以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリル）を指し、例えば、環は「融合環」である。多環の環のそれぞれは、置換または非置換であってもよい。
【００４７】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書において使用される場合、生理学的条件下で治療活性薬剤に変換される化合物を指す。プロドラッグを作製するための一般的方法は、生理学的条件下で加水分解して所望の分子を顕現させる選択された部分を含めることである。他の実施形態において、プロドラッグは、宿主動物の酵素活性により変換される。
【００４８】
「予防」という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認識されており、局所再発（例えば、疼痛）、癌等の疾患、心不全等の複合症候群、または他の任意の医学的状態等の状態に関連して使用される場合、当該技術分野において十分理解されており、組成物を施されない対象と比較した、対象における医学的状態の症状の頻度を低減、またはその発症を遅延させる組成物の投与を含む。したがって、癌の予防は、例として、例えば統計的および／または臨床的に有意な量だけ、処置されていない対照集団と比べて予防処置を受けている患者の集団における検出可能な癌性増殖の数を低減すること、および／または、処置されていない対照集団に対して処置された集団における検出可能な癌性増殖の出現を遅延させることを含む。感染症の予防は、例えば、処置されていない対照集団と比較して、処置された集団における感染症の診断の数を低減すること、および／または、処置されていない対照集団と比較して、処置された集団における感染症の症状の発症を遅延させることを含む。疼痛の予防は、例えば、処置されていない対照集団と比較して、処置された集団における対象が経験する痛みの感覚の強さを低減する、または代替としてその感覚を遅延させることを含む。
【００４９】
「予防的または治療的」処置という用語は、本明細書において使用される場合、当該技術分野において認められており、対象に対する主題の組成物の１種以上の投与を指す。望ましくない状態（例えば、対象の疾患または他の望ましくない状態）の臨床症状の前に投与される場合、処置は予防的であり（すなわち、望ましくない状態の発現から対象を保護する）、一方、望ましくない状態の症状の後に投与される場合、処置は治療的である（すなわち、既存の望ましくない状態またはその副作用を消失、改善、または安定化させることが意図される）。
【００５０】
「プロテアソーム」という用語は、本明細書において使用される場合、免疫および構成プロテアソームを指す。
【００５１】
「治療上効果的な量」という用語は、本明細書において使用される場合、（哺乳動物、好ましくはヒトに対する）所望の投薬計画の一部として投与される場合、例えば任意の医療処置に適用される妥当な利益／リスク比で、疾患または状態が処置されるために、または化粧品目的において臨床的に許容される標準に従う、症状を軽減する、状態を改善する、または疾患状態の発症を抑える調製物中の化合物（複数を含む）の量を指す。
【００５２】
「処置する」および「処置」という用語は、本明細書において使用される場合、対象の状態を改善または安定化する様式で、状態の症状、臨床兆候、および基礎病理を逆転、低減、または停止させることを指す。
【００５３】
「両親媒性脂質」という用語は、本明細書において使用される場合、構造的には主に脂質様（疎水性）であるが、一方の端部において、極性領域、荷電領域、または極性および荷電領域の組み合わせ（親水性）を有する分子を指す。親水性領域は、頭部基と呼ばれ、脂質部分は、尾部基（複数を含む）として知られる。両親媒性脂質の例は、リン脂質、糖脂質、およびスフィンゴ脂質を含む。
【００５４】
「親水性ポリマー」および「水溶性ポリマー」という用語は、本明細書において使用される場合、リポソームを遮蔽し、それによりリポソーム循環半減期を向上させるために使用されるポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または他のポリエトキシル化ポリマーを指す。「親水性ポリマー」は、リポソームで非共有結合的に会合した遊離親水性ポリマー、およびリポソームの成分に複合体化または共有結合した親水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ修飾脂質）を包含する。追加の例示的親水性ポリマーは、ポリビニルアルコール、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリアクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリグリセロール、ポリアキソズリン等を含むが、それらに限定されない。
【００５５】
「遊離ステロール」という用語は、本明細書において使用される場合、別の化合物に共有結合していないステロールを指す。「遊離コレステロール」は、ステロール修飾両親媒性脂質化合物中の部分として共有結合していないコレステロールを指す。
【００５６】
「ステロール」および「ステロイドアルコール」は、本明細書において使用される場合、遊離ヒドロキシルを有するステロイドまたはその誘導体のサブグループを指す。例示的なステロールは、コレステロールおよびその誘導体のクラス、植物ステロールおよびその誘導体のクラス、ならびに真菌ステロールおよびその誘導体のクラスを含むが、それらに限定されない。ステロールは、天然または合成であってもよい。
【００５７】
「ステロール修飾両親媒性脂質」という用語は、本明細書において使用される場合、親水性頭部基、および少なくとも１つがステロールである２つ以上の疎水性尾部を有する、両親媒性脂質化合物を指す。「ステロール修飾両親媒性リン脂質」は、ホスフェート含有部分を含むステロール修飾両親媒性脂質、例えばホスホコリンまたはホスホグリセロールを指す。
【００５８】
「治療薬剤」という用語は、本明細書において使用される場合、薬物および医薬品を含む治療薬として試験、開発または応用において使用される薬剤を指す。
【００５９】
「薬物」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または他の異常な状態の診断、処置、または予防において使用される任意の化学化合物（例えば、ペプチドエポキシケトン化合物）を指す。
【００６０】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書において使用される場合、生理学的条件下で治療活性薬剤に変換される化合物を指す。プロドラッグを作製するための一般的方法は、生理学的条件下で加水分解して所望の分子を顕現させる選択された部分を含めることである。他の実施形態において、プロドラッグは、対象の酵素活性により変換される。
【００６１】
「治療上許容される」および「薬学的に許容される」という用語は、本明細書において使用される場合、生物学的に、または別様に望ましくない物質を指し、すなわち、その物質は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、または、組成物に任意の他の成分と悪い相互作用を生じることなく、活性成分と共に対象に投与され得る。
【００６２】
「エマルション」という用語は、本明細書において使用される場合、２種の非混和性（ブレンド不可能な）物質の混合物を指す。
【００６３】
「二重層」という用語は、本明細書において使用される場合、２つの分子層として配置された両親媒性脂質分子（多くはリン脂質）で構成される構造を指し、疎水性尾部は内側に、極性頭部基は外表面にある。
【００６４】
「単層」という用語は、本明細書において使用される場合、両親媒性分子の単一分子層を指し、頭部基は一方の側に配列し、疎水性基は反対側にある。
【００６５】
「リポソーム」という用語は、本明細書において使用される場合、脂質二重層を含む小胞、例えば、両親媒性脂質（例えば、リン脂質またはその誘導体）が水中に分散された場合に形成される閉じた小胞を指す。本発明のリポソームは、典型的には、１種以上のリン脂質を含み、また界面活性剤特性を有する混合脂質鎖を含んでもよい（例えば、卵ホスファチジルエタノールアミン）。リポソームは、不健康組織（例えば、腫瘍または新生細胞）への結合を標的化するために表面リガンドを使用し得る。リポソームは、典型的には水性コアを有する。
【００６６】
「捕捉された」という用語は、本明細書において使用される場合、ペプチドエポキシケトン化合物のリポソーム二重層および／またはリポソームの内部水性体積（リポソームの水性コアとも呼ばれる）との非共有結合的会合を指す。
【００６７】
「リポソーム組成物」および「リポソーム含有組成物」は、本明細書において同義的に使用され、脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム製剤または混合物を指し、そのようなリポソーム混合物または製剤は、追加の賦形剤をさらに含んでもよい。リポソーム組成物は、典型的には、リポソームを含む水溶液を含む。封入水溶液は、リポソームの水性コア内の水溶液である。非封入水溶液は、リポソームが分散した水溶液である。
【００６８】
「賦形剤」という用語は、本明細書において使用される場合、典型的には、本発明のリポソーム組成物の製剤化または投与において使用される任意の薬理学的に不活性な物質、例えば、リン脂質、緩衝剤、担体、またはビヒクル（例えば希釈剤）等を指す。本発明の実践において有用な賦形剤の例は、本明細書に記載されている。
【００６９】
「ｐＨ調整剤」という用語は、本明細書において使用される場合、水溶液のｐＨを修正するために使用される任意の薬剤を指す。ｐＨは、酸性化剤（例えば酸）およびアルカリ化剤（例えば酸の塩または塩基）を使用することにより調整される。酸性化剤は、ｐＨを低下させるために製剤中で使用され、アルカリ化剤は、ｐＨを増加させるために使用される。ｐＨ調整剤は、緩衝系（例えば、酸および塩基の組み合わせ）を含む。本発明の薬学的組成物は、組成物の調製（すなわち、バルク溶液）のために、または治療薬投与のための再構成後に所望のｐＨを達成するために、これらの薬剤の１種以上を含有してもよい。
【００７０】
「可溶化剤」という用語は、本明細書において使用される場合、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度を増加させる薬剤、典型的には化合物、ｐＨ調整剤、または共溶媒を指す。
【００７１】
「生理学的条件」という用語は、本明細書において使用される場合、生細胞に適合する条件、例えば、温度、ｐＨ、塩分等の主に水性の条件を指す。
【００７２】
「治療組成物」、「薬学的組成物」、「治療調製物」、および「薬学的調製物」という用語は、本明細書において同義的に使用され、対象、典型的にはヒトへの適用または投与に好適な本発明のリポソーム組成物を包含する。一般に、そのような組成物は、安全で、滅菌または無菌であり、好ましくは、対象において望ましくない反応を惹起し得る汚染物質を含まない（すなわち、組成物を構成する化合物（複数を含む）は、薬学的に許容される）。組成物は、経口（すなわち、口もしくは消化管により投与される）または非経口（例えば、口腔内、直腸内、経皮、経粘膜、皮下、静脈内、腹腔内、皮内、気管内、くも膜下、経肺等）を含む複数の異なる投与経路による、それを必要とする対象への適用または投与のために製剤化され得る。
【００７３】
「無菌条件」という用語は、本明細書において使用される場合、典型的には、製造品が病原体により汚染されない製造または処理条件を指す。
【００７４】
「対象」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒト、ならびにアカゲザル、チンパンジーおよび他の類人猿やサル種等の非ヒト霊長類を含む他の霊長類；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ等の家畜；イヌおよびネコ等の家庭用哺乳類；マウス、ラットおよびモルモット等のげっ歯類を含む実験動物；ニワトリ、シチメンチョウおよびその他の家禽、カモ、ガン等の、家畜、野生および狩猟鳥を含む鳥等を制限なく含む、脊索動物亜門の任意のメンバーを指す。この用語は、特定の年齢を示さない。したがって、成体、若年、および新生個体が含まれることが意図される。
【００７５】
２．０．０  発明の概要
本発明を詳細に説明する前に、本発明は、特定の種類のリポソーム、特定の薬物源、特定の脂質、特定のポリマー等に限定されないことを理解されたいが、これは、そのような詳細が、本明細書の教示を鑑みて選択され得るためである。また、本明細書において使用される用語は、単に本発明の特定の実施形態を説明するためのものであり、制限することを意図しないことを理解されたい。
【００７６】
ペプチドエポキシケトン化合物は、広範な疾患および状態の処置に有用なプロテアソーム阻害剤である。多くのペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）は、水中溶解度が良好でない（例えば、カーフィルゾミブは、水中で本質的に不溶性である）。現在、注射用のカーフィルゾミブは、スラリー法を使用して、カーフィルゾミブ原薬を、クエン酸を含むスルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ）中に溶解させてバルク溶液を形成し、次いでこれが凍結乾燥されて再構成および注射に好適な凍結乾燥カーフィルゾミブを生成することにより調製されている。
【００７７】
しかしながら、カーフィルゾミブＳＢＥ−β−ＣＤ組成物を静脈内投与すると、急速な代謝により半減期が短くなる。カーフィルゾミブの排出は、主に肝外であり、カーフィルゾミブは、主としてペプチダーゼ切断およびエポキシド加水分解により排除される。したがって、治療計画において週に複数回の注射が使用される。さらに、ＳＢＥ−β−ＣＤ組成物の使用は、その最善のプロファイルの活性に影響し得るカーフィルゾミブの用量増加を制限し得る。
【００７８】
リポソームは、典型的にはリン脂質を含む球状小胞であり、極性頭部基が内部および外部水相に向かって配向した１つ以上の同心円脂質二重層により封入された内部水性体積を有する。リン脂質は、体内で自然に発生し、細胞膜の主要な構成成分であるため、生体適合性および生分解性である。リポソームは、水性コア内および／または脂質二重層内に薬物を捕捉することにより、薬物担体として機能し得る。リポソームは、サイズに幅があり、単層または多層小胞として存在し得る。
【００７９】
本出願は、難溶性の疎水性エポキシケトン系プロテアソーム阻害剤を組み込んだ様々なリポソーム組成物の開発を記載する。いくつかの態様において、ペプチドエポキシケトン化合物の捕捉が説明される。他の態様において、リポソームの内部水性コアへのペプチドエポキシケトン化合物の組み込みが説明される。本明細書に記載のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、耐容性、有効性、およびｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を改善することによって、ペプチドエポキシケトン化合物の治療域を最大化する。
【００８０】
本発明の薬学的リポソーム組成物は、滅菌または無菌のいずれかであり、この薬学的リポソーム組成物を作製する方法は、典型的には、滅菌または無菌条件下で行われる。本発明の薬学的リポソーム組成物の最終滅菌もまた使用され得る。
【００８１】
第１の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物に関する。いくつかの実施形態において、薬学的リポソーム組成物は、リポソーム封入ペプチドエポキシケトン化合物を含み、（ｉ）このリポソーム組成物のリポソームは、１つ以上の脂質（例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および／またはスフィンゴミエリン）を含み、このリポソーム内で、ペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、約０．０１：１〜約１：１である。好ましい実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、約０．０５：１〜約０．５：１である。典型的には、リポソームは、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ、好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有する。本発明の薬学的リポソーム組成物は、典型的には、リポソームが分散した水溶液を含む。
【００８２】
本発明薬学的リポソーム組成物の実施形態は、リポソームの脂質が約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、リポソームの脂質が約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、リポソームの脂質が約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質を含む、およびそれらの組み合わせである実施形態を含むが、それらに限定されない。
【００８３】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、コレステロールまたはリン脂質である。
【００８４】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。
【００８５】
好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ）である。
【００８６】
リポソームの脂質は、いくつかの実施形態において、例えば約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む。
【００８７】
また、リポソームが分散した水溶液は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝剤）および／または等張性を維持するための薬剤を含むがそれらに限定されない、１種以上の賦形剤を含んでもよい。
【００８８】
本発明のこの第１の態様の他の実施形態において、リポソーム組成物は、リポソームの内部水性コア内に、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤（例えば、化合物）を含むリポソームを含む。いくつかの実施形態において、可溶化剤は、化合物（例えば、シクロデキストリン）であり、リポソーム組成物のリポソームは、リポソームの内部水性コア内に、化合物（例えば、シクロデキストリン）と複合化したペプチドエポキシケトン化合物を含む。化合物である好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、例えば、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリンである。
【００８９】
本発明の薬学的リポソーム組成物はまた、水溶液が約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０に調整されたリポソーム組成物を含み得る。好ましくは、水溶液は、ヒトの生理的ｐＨに調整される。
【００９０】
本発明のリポソーム組成物における使用のためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【００９１】
ペプチドエポキシケトン化合物を含む薬学的リポソーム組成物の好ましい実施形態は、ペプチドエポキシケトン化合物−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、およびペプチドエポキシケトン化合物−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【００９２】
第２の態様において、本発明は、本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物を乾燥させることにより形成される乾燥薬学的組成物に関する。本発明のこの第２の態様の一実施形態は、１つ以上の脂質を含む乾燥薬学的組成物であり、この脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンからなる群から選択される少なくとも１つのリン脂質を含み、このペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、約０．０１：１〜約１：１である。いくつかの実施形態において、乾燥薬学的組成物は、追加の賦形剤、例えば抗凍結剤（例えば、グリセロール、ジメチルアミン、ジメチルスルホキシド）、ガラス転移調節剤（例えば、糖、ポリオール、ポリマー、アミノ酸）、それらの組み合わせ、および／または他の安定化賦形剤をさらに含む。
【００９３】
第３の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物を作製する方法に関し、この方法は、ペプチドエポキシケトン化合物および少なくとも１つの脂質（例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および／またはスフィンゴミエリン等のリン脂質）を含み、このペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比が約０．０１：１〜約１：１である（好ましくはペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、約０．０５：１〜約０．５：１である）、乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを水溶液で再水和して、リポソームおよび水溶液を含むリポソーム組成物を形成することとを含む。
【００９４】
好ましい実施形態において、本方法は、リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ（好ましくは約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズ）を有するようにサイズ調整することをさらに含む。
【００９５】
薬学的リポソーム組成物を作製するための本発明のこの態様の方法の実施形態は、乾燥フィルムの脂質が約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、乾燥フィルムの脂質が約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、乾燥フィルムの脂質が約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、およびそれらの組み合わせである実施形態を含むが、それらに限定されない。
【００９６】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、コレステロールまたはリン脂質である。
【００９７】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。
【００９８】
好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である。
【００９９】
乾燥フィルムの脂質は、いくつかの実施形態において、例えば約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本方法は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝液）および／または等張性を維持するための薬剤を含むが、それらに限定されない１つ以上の賦形剤を、リポソームが分散した水溶液に添加することをさらに含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本方法は、水溶液のｐＨを約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０に調整すること、好ましくは水溶液のｐＨをヒトの生理的ｐＨに調整することをさらに含む。
【０１０２】
本発明のリポソーム組成物を作製する方法において使用するためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【０１０３】
第４の態様において、本発明は、本発明の第３の態様の方法によって作製される薬学的リポソーム組成物に関する。
【０１０４】
第５の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、１つ以上の脂質を含む乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液で再水和することとを含む方法に関する。典型的には、本方法は、少なくとも１つのリン脂質（例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および／またはスフィンゴミエリンを含む、乾燥フィルムを調製することと、乾燥フィルムを、ペプチドエポキシケトン化合物および１つ以上の可溶化剤を含む水溶液で再水和して、水溶液中に分散したリポソームを含むリポソーム組成物を形成することとを含む。
【０１０５】
本発明のこの第５の態様のいくつかの実施形態において、１つ以上の可溶化剤は、例えば、化合物、ｐＨ調整剤（例えば、有機または非有機酸）、共溶媒（例えば、エタノールまたはジメチルスルホキシド）、またはそれらの組み合わせである。シクロデキストリン（好ましくはスルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリン）は、可溶化剤として使用される化合物の一例である。いくつかの実施形態において、ｐＨ調整剤は、水溶液のｐＨを約ｐＨ０．５〜ｐＨ３．０に、好ましくは約ｐＨ１．０のｐＨにするために使用される。いくつかの実施形態において、リポソームの形成後に、リポソーム組成物のｐＨは、おおよそ約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０の間に、好ましくはおおよそヒトの生理的ｐＨに調整される。いくつかの実施形態において、例えばｐＨ調整および／または共溶媒の除去のために、本方法は、透析、脱塩、緩衝液交換、および／またはゲル濾過を使用してリポソーム組成物を処理することをさらに含む。
【０１０６】
リポソーム組成物のリポソーム中のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、例えば、約０．０１：１〜約１：１であり得る。
【０１０７】
本方法は、リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含むことができる。
【０１０８】
薬学的リポソーム組成物を作製するための本発明のこの態様の方法の実施形態は、乾燥フィルムの脂質が約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、乾燥フィルムの脂質が約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、乾燥フィルムの脂質が約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、およびそれらの組み合わせである実施形態を含むが、それらに限定されない。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、コレステロールまたはリン脂質である。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。
【０１１１】
好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である。
【０１１２】
乾燥フィルムの脂質は、いくつかの実施形態において、例えば約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、本方法は、リポソーム組成物を形成した後に、ペプチドエポキシケトン化合物を、リポソームが分散した水溶液（つまり、非封入水溶液）から、例えば、透析、超遠心分離、ゲル濾過、またはそれらの組み合わせを使用して除去することをさらに含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、本方法は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝液）および／または等張性を維持するための薬剤を含むが、それらに限定されない１つ以上の賦形剤を、リポソームが分散した水溶液に添加することをさらに含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、本方法は、水溶液のｐＨを約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０に調整すること、好ましくは水溶液のｐＨをヒトの生理的ｐＨに調整することをさらに含む。
【０１１６】
本発明のリポソーム組成物を作製する方法において使用するためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【０１１７】
第６の態様において、本発明は、本発明の第５の態様の方法によって作製される薬学的リポソーム組成物に関する。
【０１１８】
第７の態様において、本発明は、薬学的リポソーム組成物を作製する方法であって、１つ以上の脂質および溶媒を含む脂質溶液を調製することと、脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液に注入することとを含む方法に関する。典型的には、本方法は、溶媒および少なくとも１つのリン脂質（例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および／またはスフィンゴミエリン）を含む脂質溶液を調製することと、脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物および１つ以上の可溶化剤を含む水溶液に注入して、水溶液中に分散したリポソームを含むリポソーム組成物を形成することとを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、溶媒は、有機溶媒、例えば、アルコール（例えば、エタノール）である。
【０１２０】
本発明のこの第７の態様のいくつかの実施形態において、この１つ以上の可溶化剤は、例えば、化合物、ｐＨ調整剤（例えば、有機または非有機酸）、共溶媒（例えば、エタノールまたはジメチルスルホキシド）、またはそれらの組み合わせである。シクロデキストリン（好ましくはスルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリン）が、可溶化剤として使用される化合物の一例である。いくつかの実施形態において、ｐＨ調整剤は、水溶液のｐＨを約ｐＨ０．５〜ｐＨ３．０に、好ましくは約ｐＨ１．０のｐＨにするために使用される。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、例えばｐＨ調整ならびに／または溶媒および／もしくは共溶媒の除去のために、本方法は、透析、脱塩、緩衝液交換、および／またはゲル濾過を使用してリポソーム組成物を処理することをさらに含む。
【０１２２】
リポソーム組成物のリポソーム中のペプチドエポキシケトン化合物：脂質の重量比は、例えば、約０．０１：１〜約１：１であり得る。
【０１２３】
本方法は、リポソームを、約０．０５ミクロン〜約０．５ミクロンの平均サイズ、約０．０５ミクロン〜約０．２ミクロンの平均サイズを有するようにサイズ調整することをさらに含むことができる。
【０１２４】
薬学的リポソーム組成物を作製するための本発明のこの態様の方法の実施形態は、リポソーム組成物のリポソームの脂質が約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質を含む、リポソーム組成物のリポソームの脂質が約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロールをさらに含む、リポソーム組成物のリポソームの脂質が約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質をさらに含む、およびそれらの組み合わせである実施形態を含むが、それらに限定されない。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の脂質は、コレステロールまたはリン脂質である。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコールである。
【０１２７】
好ましい実施形態において、親水性ポリマー誘導体化脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］である。
【０１２８】
リポソーム組成物のリポソームの脂質は、いくつかの実施形態において、例えば約０．００１重量パーセント〜約５重量パーセントのα−トコフェロールをさらに含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、本方法は、リポソーム組成物を形成した後に、ペプチドエポキシケトン化合物を、リポソームが分散した水溶液（つまり、非封入水溶液）から、例えば、透析、超遠心分離、ゲル濾過、またはそれらの組み合わせを使用して除去することをさらに含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、本方法は、ｐＨ調整剤（例えば、緩衝液）および／または等張性を維持するための薬剤を含むが、それらに限定されない１つ以上の賦形剤を、リポソームが分散した水溶液に添加することをさらに含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、本方法は、水溶液のｐＨを約ｐＨ３．５〜約ｐＨ７．０に調整すること、好ましくは水溶液のｐＨをヒトの生理的ｐＨに調整することをさらに含む。
【０１３２】
本発明のリポソーム組成物を作製する方法において使用するためのペプチドエポキシケトン化合物の例は、化合物Ｉを含むが、これに限定されない。リポソーム組成物における使用に好ましいペプチドエポキシケトン化合物は、化合物ＩＩ、化合物ＩＩＩ、化合物ＩＶ、および、最も好ましくはカーフィルゾミブ（化合物Ｖ）を含む。
【０１３３】
第８の態様において、本発明は、本発明の第７の態様の方法によって作製される薬学的リポソーム組成物に関する。
【０１３４】
第９の態様において、本発明は、処置を必要とする対象において疾患または状態を処置する方法であって、治療上効果的な量の、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームを含む、本明細書に記載の薬学的リポソーム組成物を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態において、処置する方法は、治療上効果的な量の別の治療薬剤、例えば、化学療法剤、サイトカイン、ステロイド、免疫療法剤、またはそれらの組み合わせの同時、逐次的、または別個の投与をさらに含む。ペプチドエポキシケトン化合物を含む本発明のリポソーム組成物を使用して処置される疾患または状態の例は、多発性骨髄腫、固形腫瘍、感染症、および自己免疫疾患を含むが、それらに限定されない。
【０１３５】
別の態様において、本発明は、１つ以上の脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を含む、乾燥薬学的組成物を含む。そのような乾燥薬学的組成物は、本発明の方法における使用のために再水和され得る。一実施形態において、乾燥薬学的組成物は、１つ以上の両親媒性脂質（例えば、少なくとも１つのリン脂質を含む脂質）、および（ｉｉ）ペプチドエポキシケトン化合物を含む。乾燥薬学的組成物は、本明細書に記載の本発明のリポソーム組成物（例えば、可溶化剤をさらに含む組成物）のいずれか、ならびに本明細書に記載の方法のいずれかによって作製されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を使用して、作製することができる。いくつかの実施形態において、乾燥薬学的組成物は、追加的賦形剤、例えば抗凍結剤（例えば、グリセロール、ジメチルアミン、ジメチルスルホキシド）、ガラス転移調節剤（例えば、糖、ポリオール、ポリマー、アミノ酸）、および／または他の安定化賦形剤をさらに含む。
【０１３６】
３．０．０  薬学的組成物
本発明は、ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、カーフィルゾミブ）のリポソーム組成物およびそのプロドラッグ、ならびにそのような組成物を作製および使用する方法に関する。
【０１３７】
３．１．０  ペプチドエポキシケトン化合物
本発明の実践において有用なペプチドエポキシケトン化合物の例は、米国特許第７，４１７，０４２号に記載されており、式Ｉ：
【化４】
2015524410.tif 000006
の構造を有するペプチドエポキシケトン化合物を含むが、それらに限定されず、
式中、Ｘは、Ｏ、ＮＨ、またはＮ−アルキルであり、Ｙは、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｏ、またはＣ（Ｒ９）２であり、Ｚは、ＯまたはＣ（Ｒ９）２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、全て水素であり、各Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシアルキル、アリール、およびＣ１−６アラルキルから選択され、そのそれぞれは、アルキル、アミド、アミン、カルボン酸またはその薬学的に許容される塩、カルボキシルエステル、チオール、およびチオエーテルから選択される基で、任意選択で置換され、ｍは、０から２の整数であり、ｎは、０から２の整数である。これらの化合物を説明するために使用される用語は、「定義」の項でさらに説明されている。
【０１３８】
本発明の実践において有用な特定のペプチドエポキシケトン化合物の例は、式ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶを有する以下の化合物を含む（以下の化合物における「Ｐｈ」は、フェニル基を表す）。
【０１３９】
【化５】
2015524410.tif 000007
【０１４０】
【化６】
2015524410.tif 000008
【０１４１】
【化７】
2015524410.tif 000009
【０１４２】
本発明の好ましい実施形態において、ペプチドエポキシケトン化合物は、次の式Ｖを有するカーフィルゾミブである：
【０１４３】
【化８】
2015524410.tif 000010
【０１４４】
本発明のリポソーム組成物において、リポソーム中のペプチドエポキシケトン化合物：総脂質の重量比は、約０．０１：１〜約１：１、好ましくは約０．０２５：１〜約０．５：１、およびより好ましくは約０．０５：１〜約０．２５：１である。
【０１４５】
３．２．０  リポソーム成分
本発明の実践において使用される脂質の種類は、リン脂質、ステロール、ならびにそれらの修飾物および誘導体を含むが、それらに限定されない。また、追加の両親媒性脂質が、本発明の実践において使用されてもよい。
【０１４６】
本発明の実践における使用に好ましい小胞形成両親媒性脂質は、リン脂質およびその誘導体を含む。リン脂質は、一般に、中性、カチオン性、およびアニオン性の３つのクラスに分類される。本発明の実践において有用なリン脂質の例は、ホスファチジルコリン、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、または水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ））、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ジオレイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジオレイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、１，２−ジレオイル（ｄｉｌｅｏｙｌ）−ｓｎ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リシルホスファチジルグリセロール、スフィンゴ脂質（例えば、スフィンゴミエリン）、およびそれらの混合物を含むが、それらに限定されない。
【０１４７】
本発明の実践において有用なさらなる脂質は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ−Ｎ−トリエチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ−２−（スペルミンカルボキサミド）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）、Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、ステアリルアミン、ジセチルホスフェート、β−オレイル−γ−パルミトイル、およびそれらの混合物を含む。
【０１４８】
本発明の実践における使用に好ましい脂質は、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（例えば、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、または水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ））、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）を含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、リポソームの脂質は、約２０重量パーセント〜約１００重量パーセントのリン脂質、好ましくは約３０重量パーセント〜約９０重量パーセントのリン脂質を含む。
【０１４９】
リポソームを安定化させるために、様々なステロールおよびその誘導体（例えば、コレステロール）を使用することができる。ステロール修飾両親媒性脂質は、当該技術分野において知られている（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０１７７１５６号を参照されたい）。本発明の実践における使用のためのステロール、例えばコレステロールはまた、様々な親水性ポリマーで誘導体化されていてもよい（ＰＥＧ−コレステロール誘導体；例えば、米国特許第６，２７０，８０６号を参照されたい）。本発明の一実施形態において、ステロールまたはその誘導体は、脂質二重層を安定化させるためにリポソーム組成物に添加することができる。本発明の実践における使用に好ましいステロールは、コレステロールおよびその誘導体（例えば、コレステロールヘミスクシネート）であり、例えば、本発明のリポソーム組成物のリポソームの脂質は、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセントのコレステロール、好ましくは約１５重量パーセント〜約４０重量パーセントのコレステロールを含むことができる。
【０１５０】
他の実施形態において、コレステロールは、特定の器官または細胞型により認識されるように設計されたリガンド、例えば長鎖脂肪酸、アミノ酸、オリゴ糖、ホルモン、アミノ酸誘導体、タンパク質、糖タンパク質、修飾タンパク質等で化学修飾される。得られるリポソームは、特定の器官または細胞型への標的化に好適である（例えば、米国特許第４，５４４，５４５号を参照されたい）。
【０１５１】
使用され得る標的化因子を含むリポソーム組成物の追加の例は、本明細書の教示を鑑みて、米国特許第５，０４９，３９０号、米国特許第５，７８０，０５２号、米国特許第５，７８６，２１４号、米国特許第５，８３０，６８６号、米国特許第６，０５６，９７３号、米国特許第６，１１０，６６６号、米国特許第６，１７７，０５９号、米国特許第６，２４５，４２７号、米国特許第６，３１６，０２４号、米国特許第６，５２４，６１３号、米国特許第６，５３０，９４４号、米国特許第６，７４９，８６３号、米国特許第６，８０３，３６０号、米国特許第６，９６０，５６０号、米国特許第７，０６０，２９１号、米国特許第７，１０１，９８５号、および米国特許出願第２００２／０１９８１６４号、米国特許出願第２００３／００２７７７９号、米国特許出願第２００３／０２２０２８４号、米国特許出願第２００３／０２２４０３７号、米国特許出願第２００３／０２２８２８５号、米国特許出願第２００３／１４３７４２号、および米国特許出願第２００４／００２２８４２号を含む。
【０１５２】
滅菌安定化は、様々な親水性ポリマーまたは親水性糖脂質、例えばポリエチレングリコールおよびガングリオシドＧＭ１によりリポソームに付与されるコロイド安定性を指す。リポソームは、ＰＥＧ−ＰＥ、ＧＭ１、または全身循環において比較的長い半減期を示すような別の糖脂質もしくはポリマーを含有してもよい。ＰＥＧおよび他のポリエトキシル化ポリマー等の親水性ポリマーが、リポソームの循環半減期を向上させるためにリポソームを遮蔽するために使用され得る。そのような親水性ポリマーは、リポソームと非共有結合的に会合させてもよく、または、リポソームの特定の成分に複合体化もしくは共有結合してもよい（例えば、ＰＥＧ修飾脂質、すなわち１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩）（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ））。追加の例示的親水性ポリマーは、ポリビニルアルコール、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリグリセロール、ポリアキソズリン、およびそれらの混合物を含むが、それらに限定されない。
【０１５３】
本明細書に記載のリポソーム組成物のいくつかの実施形態において、リポソームの脂質は、約０．１重量パーセント〜約３０重量パーセント、好ましくは約１重量パーセント〜約２０重量パーセントの親水性ポリマー誘導体化脂質を含むことができる。本発明の実践における使用に好適な親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（例えば、モノメトキシポリエチレングリコールに複合体化したリン脂質、例えば、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ））である。
【０１５４】
使用され得るリポソーム組成物の追加の例は、本明細書の教示を鑑みて、米国特許第４，７８９，６３３号、米国特許第４，９２５，６６１号、米国特許第４，９８３，３９７号、米国特許第５，０１３，５５６号、米国特許第５，５３４，２４１号、米国特許第５，５９３，６２２号、米国特許第５，６４８，４７８号、米国特許第５，６７６，９７１号、米国特許第５，７５６，０６９号、米国特許第５，８３４，０１２号、米国特許第５，８４６，４５８号、米国特許第５，８９１，４６８号、米国特許第５，９４５，１２２号、米国特許第６，０５６，９７３号、米国特許第６，０５７，２９９号、米国特許第６，０７７，８３４号、米国特許第６，１２６，９６６号、米国特許第６，１５３，５９６号、米国特許第６，２８７，５９３号、米国特許第６，３１６，０２４号、米国特許第６，３８７，３９７号、米国特許第６，４７６，０６８号、米国特許第６，５８６，５５９号、米国特許第６，６２７，２１８号、米国特許第６，７２３，３３８号、米国特許第６，８９７，１９６号、米国特許第６，９３６，２７２号、米国特許第６，９６０，５６０号、米国特許第７，１２２，２０２号、米国特許第７，３１１，９２４号、米国特許第７，３６１，６４０号、および米国特許第７，９０１，７０８号、ならびに米国特許出願公開第２００３／００７２７９４号、米国特許出願公開第２００３／００８２２２８号、米国特許出願公開第２００３／０１６６６０１号、米国特許出願公開第２００３／０２０３８６５号、米国特許出願公開第２００３／０２１５４９０号、米国特許出願公開第２００３／０２２４０３７号、米国特許出願公開第２００４／００２２８４２号、米国特許出願公開第２００４／０２３４５８８号、および米国特許出願公開第２００５／０１３６０６４号を含む。
【０１５５】
リポソーム組成物は、典型的には、リポソーム捕捉ペプチドエポキシケトン化合物および水性担体を含む。
【０１５６】
本発明の実践において有用な典型的な賦形剤は、担体またはビヒクル（例えば、水または緩衝水溶液）、ｐＨ調整剤、酸化防止剤（例えば、α−トコフェロール、メチオニン、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルドロキシルトルエン、および没食子酸プロピル、ならびにそれらの混合物）、等張性を維持するための薬剤（例えば、塩化ナトリウム、糖、ポリオール（糖アルコール）、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、およびそれらの混合物）、１種以上の糖（例えば、トレハロース、マルトース、スクロース、ラクトース、マンノース、デキストロース、フルクトース等）または糖アルコール（例えば、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、マンニトール、グリセロール等）、アルコール（例えば、エタノール、ｔ−ブタノール等）、および保存剤（アルコール、安息香酸、サリチル酸、フェノールおよびその誘導体（例えば、クレゾール、ｐ−クレゾール、ｍ−クレゾールおよびｏ−クレゾール）、セトリミド、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシトルエン）、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）、ならびにそれらの混合物）を含むが、それらに限定されない。
【０１５７】
本発明の実践において有用なｐＨ調整剤は、塩酸、水酸化ナトリウム、クエン酸、フタル酸、酢酸、アスコルビン酸、ホスフェート、グルタメート、コハク酸ナトリウムまたはカリウム、タルトレート、ヒスチジン、リン酸ナトリウムまたはカリウム、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびジエタノールアミンを含むが、それらに限定されない。酸および塩基／塩の両方を含む緩衝剤もまた使用され得る。
【０１５８】
本発明の好ましい実施形態において、リポソームは、緩衝水溶液（例えば、再水和媒体としての、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））、０．９％生理食塩水、５％デキストロース、１０％スクロース、または注射用蒸留水（ＷＦＩ））を使用して再水和され得る。いくつかの実施形態において、リポソーム組成物の水相のｐＨは、例えば、おおよそヒトの生理的ｐＨ（すなわち、約ｐＨ６．５〜約ｐＨ７．５）まで調整される。水相中に典型的に存在する賦形剤は、緩衝系、等張性を維持するための薬剤、糖、糖アルコール、および／または保存剤を含むが、それらに限定されない。
【０１５９】
ペプチドエポキシケトンのリポソーム組成物の例示的実施形態は、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−コレステロール、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ−コレステロール、カーフィルゾミブ−ＤＰＰＣ、カーフィルゾミブ−ＤＰＰＣ−コレステロール、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【０１６０】
さらなる例は、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ、カーフィルゾミブ−ＤＳＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、カーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ、およびカーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むがそれらに限定されない、ペプチドエポキシケトンのペグ化リポソーム組成物を含む。
【０１６１】
ペプチドエポキシケトンのリポソーム組成物の好ましい実施形態は、カーフィルゾミブ−ＥＰＣ−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロール、およびカーフィルゾミブ−スフィンゴミエリン−ｍＰＥＧ２０００ＤＳＰＥ−コレステロールを含むが、それらに限定されない。
【０１６２】
リポソーム組成物の具体的な実施形態の例は、実施例１、７、１０、および１１に記載されている。
【０１６３】
４．０．０  リポソーム組成物の調製
リポソームは、逆相蒸発法を含む、様々な技術（例えば、Ｓｚｏｋａ，Ｆ．，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｖｅｓｉｃｌｅｓ（Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ），”Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｕｎｅ  １９８０，９：４６７−５０８、米国特許第４，２３５，８７１号）により調製され得る。逆相蒸発小胞は、最初に、約２〜４ミクロンの典型的平均サイズを有する。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、リポソームは、単純な脂質フィルム水和技術により形成される（例えば、実施例１および２を参照されたい）。この手順において、本明細書に記載の種類のリポソーム形成脂質およびペプチドエポキシケトン化合物の混合物は、好適な有機溶媒に溶解され、容器内で蒸発されて薄いフィルムを形成し、次いで水性媒体により被覆される。脂質フィルムは水和して、典型的には約０．１ミクロンから１０ミクロンのサイズを有する小胞を形成する。
【０１６５】
本発明の他の実施形態は、疎水性で非水溶性のペプチドエポキシケトン化合物を、リポソームの内部水性コア内に受動的に封入する方法を含む。そのような水性コアへの封入は、１種以上の可溶化剤を使用して促進され得る。可溶化剤は、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度を増加させる。可溶化剤は、例えば、可溶化を促進するための化合物（例えば、シクロデキストリン）、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせを含む。リポソームの内部水性コアにペプチドエポキシケトン化合物を封入する利点は、化学的および生物学的分解からのより高い保護、より遅い拡散、より高い組織内分布、ならびに薬物放出プロファイルの延長を含む。
【０１６６】
シクロデキストリンは、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度を促進するための化合物の一例である。シクロデキストリンは、荷電もしくは中性であっても、天然（シクロデキストリンα、β、γ、δ、ε）であっても、分岐していても、または重合していてもよい。ある特定の態様において、シクロデキストリンは、例えば、アルキル、アリール、アリールアルキル、グリコシド等の基による１つ以上のヒドロキシプロピルの置換によって、または、アルコールもしくは脂肪酸でのエーテル化、エステル化によって、化学修飾されてもよい。これらの基のうち、特に好ましいのは、ヒドロキシプロピル、メチルｍ、スルホブチルエーテル基からのものである（例えば、Ｓｔｅｌｌａ  Ｖ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．３６（１）：３０−４２（２００８）を参照されたい）。ある特定の態様において、シクロデキストリンは、６つ、７つまたは８つのグルコピラノース単位を含む。
【０１６７】
シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、およびγ−シクロデキストリンを含む。好適なα−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリンおよびヒドロキシエチル−α−シクロデキストリンを含むが、それらに限定されない。好適なβ−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（例えば、２−ヒドロキシプロピルシクロデキストリン等）、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、ジヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、２，６−ジ−Ｏ−メチル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ランダムメチル化シクロデキストリン、および硫酸化β−シクロデキストリンを含むが、それらに限定されない。好適なγ−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン、ジヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ヒドロキシエチルγ−シクロデキストリン、および硫酸化γ−シクロデキストリンを含む。
【０１６８】
本発明の実践における使用に好ましいシクロデキストリンは、β−シクロデキストリン（スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン等（ＳＢＥ−β−ＣＤまたはＳＢＥ−ＣＤと略される；ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）（Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ））、またはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ；Ｊａｎｓｓｅｎ、Ｔｉｔｕｓｖｉｌｌｅ  ＮＪ；Ｇｏｕｌｄ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４３（１０）：１４５１−９（２００５）もまた参照されたい）米国特許第４，９２０，２１４号、米国特許第５，３８５，８９１号、米国特許第５，７１８，９０５号、および米国特許第６，０４６，１７７号もまた参照されたい）を含む。
【０１６９】
ペプチドエポキシケトン化合物は、典型的には、疎水性であり、水に対する低い溶解度を有する。ペプチドエポキシケトン化合物は、酸性溶液に対し増加した水溶解度を有する。したがって、ペプチドエポキシケトン化合物が溶解されている水溶液のｐＨを低下させると、水可溶化を向上させることができる。例えば、水溶液のｐＨは、ｐＨ調整剤を使用して、酸、例えば塩酸を使用して約ｐＨ２未満のｐＨに低下され得る。ｐＨ調整剤の例は、上に列挙されている。ペプチドエポキシケトン化合物の可溶化に好適なｐＨ調整剤は、塩酸、クエン酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、酢酸、および／またはマレイン酸を含むが、それらに限定されない。可溶化に好適なｐＨは、典型的には、約ｐＨ１である。
【０１７０】
さらに、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度は、共溶媒可溶化の使用により増加され得る。可溶化剤としての共溶媒の例は、ジメチルスルホキシド、メチルピロリドン、ジメチルイミダゾリジノン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、エタノール、およびそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されない。
【０１７１】
上述のように、水溶液中のペプチドエポキシケトン化合物の溶解度は、化合物、ｐＨ調整剤、共溶媒、およびそれらの組み合わせを含むがそれらに限定されない可溶化剤の使用により増加され得る。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、リポソームは、薄型フィルム水和法に続く、ペプチドエポキシケトン化合物および可溶化剤を含む水溶液を使用した水和によって形成される。そのような方法において、脂質フィルムが形成され、脂質フィルムは、例えば、Ｌ−α−ホスファチジルコリン（卵ホスファチジルコリン、ＥＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、およびスフィンゴミエリン（ＳＰＨ）、モノメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に複合体化したリン脂質、およびコレステロールを含むがそれらに限定されないリン脂質のいずれか１種または組み合わせを含む。脂質は、典型的には、有機溶媒（例えば、メタノール：クロロホルム）中に溶解され、続いて溶媒が除去されて脂質フィルムが形成される。
【０１７３】
ペプチドエポキシケトン化合物は、例えば、約１％〜約６０％（ｗ／ｗ）、好ましくは約５％〜約４０％の可溶化剤（例えば、スルホブチルエーテル−ベータシクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータシクロデキストリン）を含む水溶液中に可溶化される。水溶液はまた、例えば、ｐＨ調整剤（例えば、クエン酸緩衝液、約ｐＨ３、もしくはグリシン−ＨＣｌ；約ｐＨ２）および／またはペプチドエポキシケトン化合物の可溶化のための共溶媒を含んでもよい。薬物水溶液は、脂質フィルムを再水和させるために使用される。再水和の際、自己集合性小胞が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液の内部水性体積（すなわち、水性コア）を封入する同心円状の脂質二重層を形成する。非封入遊離薬物は、例えば遠心分離により除去することができ、リポソーム組成物は、例えばリン酸緩衝生理食塩水で洗浄され得る。実施例７は、この方法に従うリポソーム組成物の作製を説明している。
【０１７４】
他の実施形態において、リポソームは、脂質溶液注入法により形成され、ここで脂質溶液は、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液中に注入される。この方法は、典型的には、水溶液中の共溶媒可溶化を伴う、または伴わないｐＨ制御を使用して、ペプチドエポキシケトン化合物（例えば、異なる固体状態、例えば結晶性または非晶質の）を可溶化することを含む。脂質は、溶媒、例えばエタノール中に溶解され、続いて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む水溶液中に、撹拌しながら注入される。リポソーム小胞は、水溶液への注入後、少量の水溶液を小胞の内部水性区画（複数を含む）内に捕捉しながら形成される。実施例１０は、この方法に従うリポソーム組成物の作製を説明している。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、例えばｐＨ調整ならびに／または溶媒および／もしくは共溶媒の除去のために、本発明の方法は、透析、脱塩、緩衝液交換、および／またはゲル濾過を使用してリポソーム組成物を処理することをさらに含む。
【０１７６】
本発明のリポソーム組成物は、一般に、脂質、ペプチドエポキシケトン化合物、および水溶液の不均質混合物を含有し、リポソームは、実質的に均一なサイズであり、約１ミクロン未満、好ましくは約０．０１〜約１．０ミクロン、およびより好ましくは約０．０５〜約０．５ミクロンの平均サイズを有する。いくつかの実施形態において、本発明のリポソーム組成物のリポソームは、約０．２ミクロン未満の平均直径を有する。サイズ調整は、より大きなリポソームを排除し、最適な薬物動態学的特性を有する決められたサイズ範囲をもたらすのに役立つ。
【０１７７】
１つの効果的な小胞のサイズ調整法は、０．０３〜０．２ミクロンの範囲内、典型的には０．０５、０．０８、０．１、または０．２ミクロンの選択された均一細孔サイズを有する一連のポリカーボネート膜を通して、リポソームの水性懸濁液を押し出すことを含む。膜の細孔サイズは、大まかに、その膜を通した押し出しにより生成されるリポソームの最大サイズに対応し、特に、調製物は、同じ膜を通して２回以上押し出される。リポソームは、リポソームサイズの段階的低減を達成するために、連続的により小さい細孔を有する膜を通して押し出されてもよい。このリポソームサイズ調整の方法は、均一サイズの小胞組成物の調製において使用される。より最近の方法は、非対称セラミックフィルタを通した押し出しを含む（例えば、米国特許第４，７３７，３２３号を参照されたい）。均質化法もまた、０．１ミクロン以下のサイズまでリポソームを微細化するのに有用である。
【０１７８】
浴またはプローブ超音波照射によるリポソーム懸濁液の超音波処理は、約０．０５ミクロン未満のサイズの微小単層小胞（ＳＵＶ）までの段階的サイズ低減をもたらすために使用され得る。均質化は、粗大リポソームをより微小なリポソームに断片化するためにせん断エネルギーに依存する別の方法である。典型的な均質化手順において、小胞は、標準的なエマルションホモジナイザを通して、選択されたリポソームサイズ、典型的には約０．１ミクロン〜０．５ミクロンが観察されるまで再循環される。両方の方法において、粒子サイズ分布は、従来のレーザビーム粒子サイズ識別により監視され得る。さらなるサイズ調整法は、マイクロフルイダイザの使用を含む。
【０１７９】
遠心分離および分子篩クロマトグラフィーは、１ミクロン未満の選択された閾値を下回る粒子サイズを有するリポソーム懸濁液を生成するために利用可能な他の方法である。これらの２つの方法は、粗大粒子の微小粒子への変換ではなく、より粗大なリポソームの選択的除去を含む。
【０１８０】
本発明のリポソーム組成物の調製、再水和、および特性決定の例は、本明細書における実施例１、実施例２、実施例３、実施例７、実施例１０、および実施例１１に示されている。
【０１８１】
一態様において、本発明は、本明細書に記載のリポソーム組成物の調製のための方法を含む。一実施形態において、リポソーム組成物を作製する方法は、脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を好適な溶媒中で混合（典型的には溶解）することと、溶媒を蒸発させて乾燥フィルムを生成することと、乾燥フィルム（この実施形態においては脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を含む）を再水和してリポソームを形成することと、リポソームをサイズ調整することとを含む。別の実施形態において、リポソーム組成物を作製する方法は、リポソーム化合物を含む乾燥フィルムを生成し、続いてペプチドエポキシケトン化合物ならびに可溶化剤、ｐＨ調整剤、および／または共溶媒を含む水溶液を使用して再水和する、薄型フィルム水和法を含む。さらに別の実施形態において、リポソーム組成物を作製する方法は、脂質（複数を含む）を溶媒（複数を含む）に溶解することと、得られた脂質溶液を、ペプチドエポキシケトン化合物ならびに可溶化剤、ｐＨ調整剤、および／または共溶媒を含む水溶液に注入することとを含む。
【０１８２】
本発明はまた、本明細書に記載の方法により作製されるペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物を含む。
【０１８３】
１種以上の脂質およびペプチドエポキシケトン化合物を含む乾燥薬学的組成物は、例えば凍結乾燥、デシケーション、フリーズドライ、噴霧乾燥、または同様の方法によって本明細書に記載のリポソーム組成物から形成され得る。いくつかの実施形態において、乾燥薬学的組成物は、追加的賦形剤、例えば抗凍結剤（例えば、グリセロール、ジメチルアミン、ジメチルスルホキシド）、ガラス転移調節剤（例えば、糖、ポリオール、ポリマー、アミノ酸）、および／または他の安定化賦形剤をさらに含む。そのような乾燥薬学的組成物は、本発明の方法における使用のために再水和され得る。そのような乾燥薬学的組成物の再構成のために使用される再水和媒体は、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、等張性を維持するための薬剤、糖、糖アルコール、アルコール、および／または保存剤を含み得るが、それらに限定されない。
【０１８４】
５．０．０  本発明のリポソーム組成物の使用
本発明の一態様において、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、癌の処置に有用である。本発明の化合物はまた、ＮＦ−κＢ活性化を阻害し、細胞培養物中のｐ５３レベルを安定化するために使用され得る。
【０１８５】
本発明の一実施形態において、リポソーム組成物は、ＣＯＰＤ、乾癬、気管支炎、気腫、および嚢胞性線維症を含むがそれらに限定されない、慢性炎症に関連した状態の処置における抗炎症治療的介入に使用され得る。
【０１８６】
本発明の別の実施形態において、リポソーム組成物は、卒中；神経系への虚血性損傷；神経外傷（例えば衝撃による脳の損傷、脊髄損傷、および神経系への外傷性損傷）；多発性硬化症およびお他の免疫媒介型ニューロパチー（例えばギラン−バレー症候群及びその異型、急性運動軸策性ニューロパチー、急性炎症性脱髄性多発性神経炎、およびフィッシャー症候群）；ＨＩＶ／ＡＩＤＳの痴呆症候群；アキソノミー；尿病性ニューロパチー；パーキンソン病；ハンチントン病；多発性硬化症；細菌性、寄生虫性、真菌性、およびウイルス性髄膜炎；脳炎；血管性痴呆；多発性梗塞性痴呆；レヴィー小体性痴呆；ピックス病などの前葉体性痴呆；皮質下痴呆（例えばハンチントンまたは進行性核上麻痺）；局所性皮質性萎縮症候群（例えば原発性感情鈍麻）；代謝毒性痴呆（例えば慢性甲状腺機能低下症またはＢ１２欠損症）；ならびに感染によって引き起こされる痴呆（例えば梅毒または慢性髄膜炎）を含むがそれらに限定されない、神経変性疾患および状態を処置するために使用され得る。
【０１８７】
本発明のさらに別の実施形態において、リポソーム組成物は、対象に、効果的な量の本明細書において開示されるペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物を投与することを含む、アルツハイマー病の処置として使用され得る。そのような場合、リポソーム組成物は、β−ＡＰ処理速度を低減し、β−ＡＰプラーク形成速度を低減し、β−ＡＰ生成速度を低減し、アルツハイマー病の臨床兆候を低減する。
【０１８８】
本発明の他の実施形態は、悪液質および筋肉消耗疾患、癌、慢性感染性疾患、熱、筋肉の不使用（萎縮症）および脱神経、神経損傷、絶食、アシドーシスに関連する腎不全、糖尿病、ならびに肝不全を処置するための方法に関する。本発明の実施形態は、細胞における筋肉タンパク質分解の速度を低減するため、細胞内タンパク質分解の速度を低減するため、細胞内のｐ５３タンパク質の分解の速度を低減するため、およびｐ５３関連癌の成長を阻害するための方法を包含する。
【０１８９】
本発明のある特定の実施形態は、過剰増殖状態、例えば糖尿病性網膜症、黄斑変性、糖尿病性ネフロパシー、糸球体硬化症、ＩｇＡネフロパシー、肝硬変、胆管閉鎖症、鬱血性心不全、強皮症、放射線誘導線維症、ならびに肺線維症（特発性肺線維症、膠原血管病、サルコイドーシス、間質性肺疾患、および外因性肺障害）を処置するための方法に関する。火傷患者の処置は、多くの場合線維症により妨げられ、したがって、本発明の追加の実施形態は、火傷の処置のための、ペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物の局所的または全身投与である。手術後の創縫合は、多くの場合、外観を損なう瘢痕を伴うが、これは線維症の阻害により予防され得る。したがって、ある特定の実施形態において、本発明は、瘢痕化の予防または低減のための方法に関する。
【０１９０】
本発明の特定の実施形態は、体の組織に到達する酸素の欠乏である低酸素症に関連した虚血および再かん流傷害を処置する方法に関する。そのような傷害または状態の例は、急性冠症候群（不安定プラーク）、動脈閉塞性疾患（心臓、脳、末梢動脈および血管閉塞）、アテローム性動脈硬化（冠動脈硬化、冠動脈疾患）、梗塞、心不全、膵臓炎、心筋肥大、狭窄、および再狭窄を含むが、それらに限定されない。
【０１９１】
本発明の２つのさらなる実施形態は、対象においてＨＩＶ感染を阻害または低減するための方法、およびウイルス遺伝子発現のレベルを低下させるための方法である。
【０１９２】
ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、敗血ショックを予防および／または処置するためのＴＮＦαの阻害に使用され得る。
【０１９３】
本発明の追加の実施形態は、細胞における抗原提示を阻害するための方法である。そのような方法において、リポソーム組成物は、アレルギー、喘息、器官／組織拒絶反応（移植片対宿主病）、ならびに、紅斑性狼瘡、関節リウマチ、乾癬、多発性硬化症、および炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎およびクローン病）を含むがそれらに限定されない自己免疫疾患等の免疫関連状態を処置するために使用される。したがって、さらなる実施形態は、対象の免疫系を抑制する（例えば、移植拒絶反応、アレルギー、自己免疫疾患、および喘息を阻害する）ための方法であって、対象に、効果的な量の本明細書に記載の化合物を投与することを含む方法である。
【０１９４】
本発明の一実施形態は、ＩκＢ−α分解を阻害するための方法であって、細胞をリポソーム組成物と接触させることを含む方法である。さらなる実施形態は、細胞、筋肉、器官、または対象におけるＮＦ−κＢの細胞内含有量を低減するための方法であって、細胞、筋肉、器官、または対象をリポソーム組成物に接触させることを含む方法である。
【０１９５】
本発明のさらなる実施形態は、対象において増殖性疾患（例えば、癌、乾癬、または再狭窄）を処置するための方法であって、対象に、効果的な量のリポソーム組成物を投与することを含む方法である。本発明はまた、対象におけるサイクリン関連炎症を処置するための方法を包含する。
【０１９６】
本発明の別の実施形態は、ｐ５３関連アポトーシスを処置するための方法である。
【０１９７】
ある特定の実施形態において、本発明のリポソーム組成物は、マラリヤ属（マラリアを引き起こす熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、および卵形マラリア原虫を含む）、トリパノソーマ属（シャーガス病を引き起こすクルーズトリパノソーマ、およびアフリカ睡眠病を引き起こすブルーストリパノソーマを含む）、リーシュマニア属（アマゾンリーシュマニア、ドノバンリーシュマニア、幼児リーシュマニア、メキシコリーシュマニア等を含む）、ニューモシスチスカリニ（ＡＩＤＳおよび他の免疫抑制患者において肺炎を引き起こすことが知られている原生動物）、トキソプラズマ原虫、赤痢アメーバ、エントアメーバインバデンス、およびランブル鞭毛虫から選択される寄生原生動物により引き起こされる、ヒトにおける感染症等の寄生虫感染の処置に有用である。ある特定の実施形態において、開示される化合物は、プラスモディウムヘルマニ、クリプトスポリジウム属、単包条虫、アイメリアテネラ、ザルコシスティスニューローナ、およびアカパンカビから選択される寄生原生動物により引き起こされる、動物および家畜における寄生虫感染の処置に有用である。
【０１９８】
本発明の一実施形態において、リポソーム組成物は、骨粗しょう症等の骨損失に関連した疾患の処置および／または予防において有用となり得る。
【０１９９】
本発明の薬学的組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の実際の投薬レベルは、対象に毒性となることなく、特定の対象、組成、および投与形態に対する所望の治療反応を達成するのに効果的なペプチドエポキシケトン化合物の量を得るように変動され得る。
【０２００】
薬学的に許容される混合物中のペプチドエポキシケトン化合物の濃度は、投与される化合物の用量、使用される化合物（複数を含む）の薬物動態学的特性、および投与経路を含むいくつかの因子に依存して変動する。一般に、本発明のリポソーム組成物は、非経口投与用の水溶液として提供され得る。典型的な用量範囲は、１日当たり、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重のペプチドエポキシケトン化合物であり、単回用量または分割用量で投与され得る。各分割用量は、同じまたは異なる本発明の化合物を含有し得る。用量は、患者の健康全般、ならびに選択されたペプチドエポキシケトン化合物（複数を含む）の組成および投与経路を含む、いくつかの要因に依存する効果的な量である。
【０２０１】
本発明の別の態様は、１種以上の他の治療薬剤がペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物と共に投与される併用処置を提供する。そのような併用処置は、処置の個々の成分の同時、逐次的、または別個の投薬により達成され得る。
【０２０２】
本発明のある特定の実施形態において、本明細書に記載のペプチドエポキシケトン含有リポソーム組成物は、１種以上の他のプロテアソーム阻害剤（複数を含む）を含む併用処置の一部として使用される。
【０２０３】
他の実施形態において、本発明のリポソーム組成物は、化学療法薬を含む併用処置の一部である。好適な化学療法薬は、天然生成物、例えばビンカアルカロイド（すなわち、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンオレルビン）、パクリタキセル、エピジポドフィロトキシン（すなわち、エトポシド、テニポシド）、抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびイダルビシン）、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）およびマイトマイシン、酵素（全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、自身のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を枯渇させる、Ｌ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤、例えば窒素マスタード（メクロレタミン、シクロホスファミドおよびそのアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、スルホン酸アルキル（ブスルファン）、ニトロソ尿素（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びそのアナログ、ストレプトゾシン）、トラゼン−デカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖／抗有糸分裂抗代謝剤、例えば葉酸アナログ（メトトレキサート）、ピリミジンアナログ（フルオロウラシル、フロクスウリジン、およびシタラビン）、プリンアナログ及び関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２−クロロデオキシアデノシン）；アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール、エキセメスタンおよびレトロゾール）；ならびに白金配位複合体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトーテン、アミノグルテチミド；ヒストン脱アセチチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤（トリコスタチン、酪酸ナトリウム、アピシダン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリド）；ホルモン（すなわち、エストロゲン）およびホルモン作動薬、例えば黄体化ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作動薬（ゴセレリン、ロイプロリド、およびトリプトレリン）を含み得る。他の化学療法剤は、レナリドミド、メクロレタミン、カンプトテシン、イホスファミド、タモキシフェン、ラロキシフェン、ゲムシタビン、ナベルビン、または前述のものの任意のアナログまたは誘導改変体を含み得る。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、本発明は、処置を必要とする対象において癌（例えば、多発性骨髄腫または固形腫瘍）を処置する方法に関する。方法は、典型的には、治療上効果的な量の本発明の薬学的リポソーム組成物（例えば、カーフィルゾミブを含む）を投与することを含み、さらに、治療上効果的な量の化学療法剤の同時、逐次的、または別個の投与を含んでもよい。
【０２０５】
本発明のある特定の実施形態において、本明細書に記載のリポソーム組成物は、サイトカインを含む併用処置において使用される。サイトカインは、インターフェロン−γ、インターフェロン−α、およびインターフェロン−β；インターロイキン１〜８、１０、および１２；顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β；ならびにＴＧＦ−βを含むが、それらに限定されない。
【０２０６】
本発明の実施形態は、本明細書に記載のリポソーム組成物およびステロイドを組み込んだ併用処置を含む。好適なステロイドは、２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメタゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフプレドネート、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチル、フルコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン、ホルモコルタール、ハルシノニド、プロピオン酸ハロベタゾール、ハロメタゾン、ヒドロコルチゾン、エタボン酸ロテプレドノール、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２５−ジエチルアミノアセテート、プレドニゾロンリン酸ナトリウム、プレドニゾン、プレドニバル、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、並びにそれらの塩及び／又は誘導体を含み得るが、それらに限定されない。
【０２０７】
本発明のある特定の実施形態において、本明細書に記載のリポソーム組成物は、免疫療法剤を含む併用処置の一部である。好適な免疫療法薬は、ＭＤＲ調整剤（ベラパミル、バルスポーダル、ビリコダル、タリクイダル、ラニクイダル）、シクロスポリン、サリドマイド、およびモノクローナル抗体を含み得るが、それらに限定されない。モノクローナル抗体は、裸であっても、または複合体化されてもよく、例えば、リツキシマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ゲムツヅマブオゾガマイシン、ベバシズマブ、セツキシマブ、エルロチニブおよびトラスツズマブであってもよい。
【０２０８】
本発明を支持するように行われた実験は、本発明のリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比べて増加した最大耐量（ＭＴＤ）を提供することを示した。例えば、マウスにおいて、第１のリポソーム組成物は、ＭＴＤにおける２．５倍の増加をもたらし、第２のリポソーム組成物は、５０％の増加をもたらした。ラットにおいては、リポソーム組成物は、耐容性の増加をもたらした（実施例４）。血液および組織内のプロテアソーム阻害により測定される生体内分布は、様々な組成物にわたって同様であった（実施例５、実施例１１）。さらに、本発明のリポソームペプチドエポキシケトン化合物組成物は、マウスおよびラットにおいて、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム組成物と比較して、それぞれ約３から５倍、および７倍増加した暴露（ＡＵＣ）を提供した。この増加した暴露は、血漿クリアランスの増加の結果であった（実施例６、実施例１１）。
【０２０９】
さらに、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、注射用非リポソームＳＢＥ−ＣＤ製剤と比較して、カーフィルゾミブの最大耐量（ＭＴＤ）を、マウスにおいて１０ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇに５０％増加させることにより、向上した耐容性を示した。これらの結果は、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、注射用非リポソームＳＢＥ−ＣＤ製剤と比べて、より低い最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）でより長期間にわたりカーフィルゾミブを放出することを示している。
【０２１０】
また、水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を有するリポソームを含むリポソーム組成物は、いくつかのマウス組織において、２４時間で遅延したプロテアソーム回復をもたらし、一方、現在の薬物製品（すなわち、注射用非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ）は、投薬後２４時間までにプロテアソーム阻害からの回復をもたらした（実施例８、図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃ、図３Ｄ）。これらの結果は、リポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物の長期暴露を提供することを支持している。
【０２１１】
さらに、非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ製剤中で送達された場合、カーフィルゾミブの血漿濃度は急速に降下し、投薬から１時間後には検出不可能であった（実施例９、図４）。カーフィルゾミブが、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物として送達された場合、全身暴露は、投薬から２４時間後までの間、検出可能な全薬物（封入および放出の両方）を伴って延長された（実施例９、図４）。これらのデータは、リポソームの水性コア内に捕捉されたペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、注射用の非リポソームペプチドエポキシケトン化合物製剤と比べて、大幅により大きな暴露およびより長期の循環をもたらしたことを示している。
【０２１２】
また、本発明のリポソーム組成物は、非リポソーム製剤と比べて、低減された投薬頻度で有効性を維持する（実施例１１）。
【０２１３】
したがって、実施例におけるデータは、本発明のリポソーム組成物が、生体内分布に影響することなく、長期暴露をもたらしたことを示している。また、ペプチドエポキシケトン化合物の耐容性は、恐らくは高濃度の遊離薬物への暴露の低減に起因して、動物において向上した。本発明のペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、現在の注射用非リポソームＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ製剤と比べて、以下の改善を提供する：プロテアソーム回復を遅延させることによって、ペプチドエポキシケトン化合物の薬力学的プロファイルを改善する；クリアランスを減少させ、血漿半減期を延長することによって、薬物動態プロファイルを改善する；ペプチドエポキシケトン化合物の安全性プロファイル（すなわち、耐容性）を改善する；および低減された投薬頻度を可能にする。
【０２１４】
実験
以下の例は、当業者に、本発明を実践する方法の完全な開示および説明を提供するために記載されるものであり、本発明者が発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。使用される数値（例えば、量、濃度、パーセント変化等）に対する正確さを確保する努力がなされているが、いくつかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段に指定されない限り、温度は摂氏温度であり、気圧は、大気圧また大気圧に近い気圧である。
【０２１５】
本発明の方法を実践するために使用される組成物は、医薬製品に必要とされる含量および純度の仕様を満たす。
【０２１６】
１．０  材料および方法
リポソーム懸濁液の粒子サイズ低減
再水和されたリポソーム懸濁液の粒子サイズ低減または解砕は、超音波照射（２０分から６０分）により、または高圧均質化／マイクロフルイダイザ（３０，０００ｐｓｉまで）により行うことができる。
【０２１７】
ＨＰＬＣアッセイによる含量決定
リポソーム懸濁液は、有機溶媒、例えばメタノールと混合して、脂質を溶解し、カーフィルゾミブを遊離させることができる。溶液は、０．２μｍＰＴＦＥフィルタで濾過してから、ＨＰＬＣ分析することができる。
【０２１８】
カーフィルゾミブ含量は、表１中の方法に従い、過塩素酸ナトリウム緩衝液、０．１Ｍ、ｐＨ３．１およびアセトニトリル（５０：５０ｖ／ｖ）を使用して、勾配ＨＰＬＣアッセイにより決定することができる。
【０２１９】
【表１】
2015524410.tif 000011
2015524410.tif 000012
【０２２０】
リポソーム形態
リポソーム組成物の小胞サイズ、形状および表面形態は、走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）および透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）により決定することができる。
【０２２１】
リポソーム／カーフィルゾミブ固体状態
偏光顕微鏡法、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）、および凍結割断電子顕微鏡法を使用して、小胞の相挙動を解明することができる。
【０２２２】
リポソームのサイズおよび分布
偏光顕微鏡法、動的光散乱、およびＴＥＭを使用して、リポソーム組成物のリポソームのサイズおよびサイズ分布範囲を決定することができる。
【０２２３】
遊離薬物の決定
カーフィルゾミブは、極めて低い水溶解度を有するため、遊離薬物に対する捕捉薬物の量は、偏光顕微鏡に基づいて定性的に決定することができる。遊離薬物は、その極めて低い水溶解度に起因して水性媒体中で沈殿し、その沈殿した物質は、偏光顕微鏡を使用して観察することができる。
【０２２４】
スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン
スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）、例えば、ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）は、合成的に生成することができ、および／または、例えばＬｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡから市販されている。
【０２２５】
２．０  実施例
実施例１
薄型脂質フィルム内に分子レベルで分散したカーフィルゾミブの調製
リポソームカーフィルゾミブを作製するために、示された比率の以下の材料を、好適なサイズの丸底フラスコに加えた：１：１９〜１：２．３３の薬物対総脂質重量比。総脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、および／またはスフィンゴミエリン（ＳＰＨ）を単独で、またはコレステロールと共に含む。コレステロールが添加される場合、脂質対コレステロール重量比（脂質：コレステロール）は、０．９：０．１〜０．５：０．５である。適切な体積のリン酸緩衝生理食塩水を使用して脂質フィルムを再水和し、それぞれ１ｍｇ／ｍＬおよび２ｍｇ／ｍＬの標的カーフィルゾミブ濃度をもたらした。
【０２２６】
ペグ化リポソームカーフィルゾミブを作製するために、示された比率の以下の材料を、好適なサイズの丸底フラスコに加えた：１：１９〜１：２．３３の薬物対総脂質重量比。総脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、および／またはスフィンゴミエリンを含み、ＰＥＧ修飾脂質（例えば、ＰＥＧ修飾リン脂質）は、０．９：０．１〜０．７５：０．２５の重量比（脂質：ＰＥＧ修飾脂質）であり、またはコレステロールが添加される場合、脂質対ＰＥＧ修飾脂質対コレステロール重量比（脂質：ＰＥＧ修飾脂質：コレステロール）は、０．８３：０．０８３：０．０８３〜０．５７：０．１４：０．２９である。適切な体積のリン酸緩衝生理食塩水を使用して脂質フィルムを再水和し、２ｍｇ／ｍＬの標的カーフィルゾミブ濃度をもたらした。
【０２２７】
脂質およびカーフィルゾミブを溶解するために、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの溶解脂質を達成するために十分である適切な体積の有機溶媒（例えば、クロロホルム：ＭｅＯＨ（６０：４０または５０：５０ｖ／ｖ））を、フラスコに加えた。フラスコを５０〜１００ｒｐｍで回転するロータリーエバポレーターに取り付け、使用した脂質の最高ゲル−液晶相転移（Ｔｃ）温度より高く設定された水浴内に浸した。卵ホスファチジルコリンのＴｃは、室温を下回る（−１５℃〜−７℃）が、ＥＰＣに使用された浴の温度は、約４５℃から５０℃であった。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥに対しては、水浴温度は、それぞれ５５℃超、４１℃超、および５０℃超に設定されるべきである。
【０２２８】
フラスコを、水浴内で約１分間回転させ、平衡化した。１０トル未満の低圧まで徐々に真空引きし、沈殿物を伴わずに、フラスコの壁上に薄型乾燥フィルムを得た。いかなる残留溶媒も除去するために、フラスコを室温で数時間から一晩、高真空下に供した。
表２は、例示的なリポソームカーフィルゾミブ組成物（リポソームカーフィルゾミブ組成物、Ｌ−ＣＦＺ；ペグ化リポソームカーフィルゾミブ組成物、ｐＬ−ＣＦＺ）および対照組成物（すなわち、「空の」リポソーム）の成分の公称濃度を示す。
【０２２９】
【表２】
2015524410.tif 000013
【０２３０】
表３は、本発明のリポソームカーフィルゾミブ組成物および対照組成物（すなわち、「空の」リポソーム）において使用される成分の例示的範囲を示す。表において、ＥＰＣが列挙される場合、追加の脂質、例えば、ＨＳＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、および／またはスフィンゴミエリンもまた添加され得る。
【０２３１】
【表３】
2015524410.tif 000014
2015524410.tif 000015
【０２３２】
実施例２
脂質水和
薄型フィルムが形成された丸底フラスコを、最高ゲル−液晶相転移より高く設定された水浴内に浸した。ＥＰＣが使用された場合、再水和は、室温で生じた。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥにおいては、水浴温度は、それぞれ５５℃超、４１℃超、および５０℃超に設定されるべきである。適切な体積のリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２、または注射用蒸留水を、脂質フィルムに添加し、所望の標的カーフィルゾミブ濃度または用量を達成した。必要に応じて、断続的にボルテックスしながらフラスコを穏やかに撹拌または振とうし、フラスコ壁からの水和の完了を促進するために、適切なＴｃ温度で１分から２分間、水浴内で超音波照射した。
【０２３３】
フィルムが分散した後、混合物をバイアルに移し、さらに２０分から４０分間、Ｔｃを超える水浴中で超音波照射し、リポソームをサイズ調整した。ＥＰＣが使用された場合、超音波照射器内の水浴の温度は、室温付近に維持された。水和後、脂質懸濁液は、僅かに濁った、または乳状の溶液として観察された。
【０２３４】
図１は、後述の試験において使用された本発明の例示的なリポソームカーフィルゾミブ組成物および対照組成物（すなわち、「空の」リポソーム）の組成を記載している。
【０２３５】
実施例３
リポソームの特性決定
再水和されたリポソーム懸濁液の粒子サイズ低減および／または解砕は、超音波照射（２０分から６０分）により行われた。
【０２３６】
例示的なリポソームカーフィルゾミブ組成物のＣＦＺ含量は、上述のようにＨＰＬＣにより決定された。リポソーム組成物は、脂質およびカーフィルゾミブを溶解するために、それぞれメタノール中に希釈した。溶液は、０．２μｍＰＴＦＥフィルタで濾過してから、ＨＰＬＣ分析した。調製されたロット（図１）の理論的および実験的リポソーム薬物濃度の間のパーセント差異は、典型的には２％以下であった（１２％の差異を有していた第１のロットの１つを除く）。ＨＰＬＣ分析の結果を、図１に示す。
【０２３７】
いかなる遊離薬物も、１μｇ／ｍＬ未満のその極めて低い水溶解度に起因して水性媒体中で沈殿し、いかなる沈殿した物質も、偏光顕微鏡下で容易に観察することができるので、偏光顕微鏡に基づき、ほぼ全ての薬物がリポソーム内に捕捉されたことが、定量的に決定された。
【０２３８】
実施例４
リポソームカーフィルゾミブの耐容性
リポソーム（Ｌ−ＣＦＺ）またはペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ）カーフィルゾミブ組成物中に組み込まれたカーフィルゾミブの耐容性を、マウスおよびラットの両方において、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ、ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤとも呼ばれる）、１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５中で製剤化されたカーフィルゾミブの注射用組成物を使用して達成された、最大耐量（ＭＴＤ）より上で評価した（例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）。
【０２３９】
実施例２において調製され、実施例３において特性決定されたリポソーム組成物を、適切な体積の水性媒体で再水和し、約１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌの範囲内の標的カーフィルゾミブ濃度を達成した（図１における組成データを参照されたい）。Ｌ−ＣＦＺおよびｐＬ−ＣＦＺ組成物の両方の毒性を、マウスにおいて試験した（表４）。Ｌ−ＣＦＺの毒性を、ラットにおいて試験した（表５）。
【０２４０】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（７〜８週齢；５／コホート）に、以下のように静脈内投薬した：１５ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ（７．５ｍＬ／ｋｇ）；１０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（５ｍＬ／ｋｇ）；１０ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（５ｍＬ／ｋｇ）；１５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（７．５ｍＬ／ｋｇ）；１５ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（７．５ｍＬ／ｋｇ）；２０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１０ｍＬ／ｋｇ）；２０ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（１０ｍＬ／ｋｇ）；２５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１２．５ｍＬ／ｋｇ）；２５ｍｇ／ｋｇ  ｐＬ−ＣＦＺ（１２．５ｍＬ／ｋｇ）；３０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１５ｍＬ／ｋｇ）；３５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（１７．５ｍＬ／ｋｇ）；または空のリポソーム（１５ｍＬ／ｋｇ）。）。次いで、生存を７日間の期間にわたり監視した。マウスの生存率、リポソーム組成物、および処置に使用された投薬は、表４に示される通りであった。
【０２４１】
【表４】
2015524410.tif 000016
【０２４２】
体重約２５０〜３００グラムの雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（５／コホート）に、以下を静脈内投薬した：８ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ（ＳＢＥ−ＣＤ組成物）（５ｍＬ／ｋｇ）；８ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（４ｍＬ／ｋｇ）；１０ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（５ｍＬ／ｋｇ）；１２．５ｍｇ／ｋｇ  Ｌ−ＣＦＺ（６ｍＬ／ｋｇ）；または空のリポソーム（５ｍＬ／ｋｇ）。次いで、生存を７日間の期間にわたり監視した。投薬されたラットの生存率は、表５に示される通りであった。
【０２４３】
【表５】
2015524410.tif 000017
【０２４４】
リポソームカーフィルゾミブは、ＳＢＥ−ＣＤ系カーフィルゾミブ組成物と比較して、マウスにおけるカーフィルゾミブの最大耐量（ＭＴＤ）を、リポソームカーフィルゾミブ組成物の場合約２．５倍、ペグ化リポソームカーフィルゾミブ組成物の場合５０％増加させることにより、耐容性を大幅に向上させた。ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化されたカーフィルゾミブ（７ｍｇ／ｋｇ）と比較して、リポソームカーフィルゾミブＬ−ＣＦＺ（１０ｍｇ／ｋｇ）において、ＭＴＤの若干の増加のみが観察された。
【０２４５】
これらのデータは、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、ペプチドエポキシケトン化合物の最大耐量（ＭＴＤ）を増加させることにより、耐容性を大幅に向上させたことを示している。
【０２４６】
実施例５
ＣＦＺリポソーム組成物の薬力学応答
ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化されたカーフィルゾミブ（ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ）（  １０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）、１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５中で製剤化されたカーフィルゾミブの注射用組成物（例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）を使用）、空のｐＬ（組成物Ｄ、図１）、ＣＦＺを含むリポソーム（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ、図１）、およびペグ化リポソーム（ｐＬ−ＣＦＺ、組成物Ｅ、図１）の薬力学応答を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて評価した。
【０２４７】
マウス（時点当たり３匹のマウス）に、１０ｍｇ／ｋｇの用量を、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で投与した。薬力学的試験のための血液試料および組織を、各組成物の投与から１時間後、８時間後、および２４時間後に採取した。プロテアソームのキモトリプシン様活性を定量するために、蛍光発生基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ；Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、全血（主に赤血球）（図２Ａを参照されたい）、副腎（図２Ｂを参照されたい）、肝臓（図２Ｃを参照されたい）、および心臓（図２Ｄを参照されたい）におけるプロテアソーム活性の測定により、薬力学応答を決定した。全ての試料は、ＣＦＺビヒクルに対して正規化され、ビヒクル時点は、投薬から１時間後であった。各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つの組織試料を評価した。
【０２４８】
１０ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投薬は、全血および全ての組織において、１時間以内に８０％超の急速なプロテアソーム阻害をもたらした。プロテアソーム阻害からの同様の完全な回復は、血液および心臓を除く試験した全ての組織において、投薬から２４時間後に観察され、全ての組成物に対して、８〜２４時間のｔ１／２で生じた。リポソームおよびペグ化リポソームの両方で心臓において観察されたより遅い回復は、心臓組織がデポとして機能し得ることを示唆している。予測されるように、カーフィルゾミブの不可逆的結合、および赤血球が新たなプロテアソームを合成しないことに起因して、血液においてはプロテアソーム活性の回復が見られなかった。
【０２４９】
これらの観察は、全血および組織におけるプロテアソーム活性の阻害が急速であり、組成物にわたって同様であり、急速な吸収と相関することを示している。リポソーム組成物は、ＣＦＺの生体内分布に悪影響を及ぼさなかった。
【０２５０】
実施例６
リポソームＣＦＺの循環半減期
リポソームＣＦＺの循環半減期を、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン、１０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．５中で製剤化された５ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺまたは１５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブ組成物の単回静脈内注射後の、７〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３／時点）において評価した。
【０２５１】
ＣＦＺが、ＳＢＥ−ＣＤを含有する組成物中で５ｍｇ／ｋｇで送達された場合、血漿濃度は経時的に急速に降下し、６０分後には、定量限界未満（ＢＬＯＱ；定量限界−ＬＯＱ）まで低下する（表６）。血漿半減期（ｔ１／２）は、約２０分であった。
【０２５２】
【表６】
2015524410.tif 000018
【０２５３】
リポソーム組成物中で１５ｍｇ／ｋｇで送達された場合（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ、またはｐＬ−ＣＦＺ−Ｃｈｏｌ、組成物Ｇを使用（図１）、投薬体積１５０μＬ）、投薬から６時間後に検出可能なＣＦＺが観察された（表７）。
【０２５４】
【表７】
2015524410.tif 000019
2015524410.tif 000020
【０２５５】
ｔ１／２は、リポソームＣＦＺおよびペグ化リポソームＣＦＺ組成物のそれぞれにおいて、それぞれ１４０分および２０１分であった。リポソームＣＦＺ組成物対ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤのデータは、ペプチドエポキシケトン化合物の循環半減期を大幅に向上させるリポソームの能力を明確に示している。
【０２５６】
リポソームＣＦＺの循環半減期はまた、１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化された８ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ、または８ｍｇ／ｋｇリポソームＣＦＺの単回静脈内注射後の、体重約２５０〜３００グラムの雄Ｓｐｒａｇ−Ｄａｗｌｅｙラット（３／時点）においても評価した。マウスと同様に、ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤが送達された場合、ラットにおいて血漿濃度の急速な降下が観察され（表８）、血漿ｔ１／２は１７分であった。ＣＦＺがリポソーム組成物（Ｌ−ＣＦＺ、組成物Ｃ、図１、４ｍＬ／ｋｇの投薬体積）中で同じ投薬レベルで送達された場合、投薬から４時間後に検出可能なＣＦＺが観察され（表８）、ｔ１／２は約５０分であった。
【０２５７】
【表８】
2015524410.tif 000021
2015524410.tif 000022
【０２５８】
表９および表１０に示されるデータは、ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤと比較して、リポソームＣＦＺ組成物（Ｌ−ＣＦＺ組成物Ｃ、図１）およびペグ化リポソームＣＦＺ組成物（ｐＬ−ＣＦＺ組成物Ｅ、図１）に対する暴露（ＡＵＣ）が、マウスおよびラットにおいて、それぞれ約５から７倍および２０倍増加したことを示している。
【０２５９】
【表９】
2015524410.tif 000023
【０２６０】
【表１０】
2015524410.tif 000024
【０２６１】
これらのデータは、非リポソームＳＢＥ−ＣＤ組成物に対する、リポソーム組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の暴露期間の延長を示している。
【０２６２】
実施例７
薄型脂質フィルムの調製、および、ＳＢＥ−ＣＤと複合化したペプチドエポキシケトン化合物が投入された水性コアを含むリポソームの調製における使用
ペグ化リポソームフィルムを作製するために、示された比率の以下の材料を、好適なサイズの丸底フラスコに加えた。総脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、および／またはＳＰＨを含み、ＰＥＧ修飾脂質（例えば、ＰＥＧ修飾リン脂質）は、０．９：０．１〜０．７５：０．２５の重量比（脂質：ＰＥＧ修飾脂質）であり、またはコレステロールが添加される場合、脂質対ＰＥＧ修飾脂質対コレステロール重量比（脂質：ＰＥＧ修飾脂質：コレステロール）は、０．８３：０．０８３：０．０８３〜０．５７：０．１４：０．２９である。
【０２６３】
脂質を溶解するために、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの溶解脂質を達成するために十分である適切な体積の有機溶媒（例えば、クロロホルム：ＭｅＯＨ（６０：４０ｖ／ｖ））を、フラスコに加えた。フラスコを１００ｒｐｍで回転するロータリーエバポレーターに取り付け、使用した脂質の最高ゲル−液晶相転移（Ｔｃ）温度より高く設定された水浴内に浸した。卵ホスファチジルコリンのＴｃは、室温を下回る（−１５℃〜−７℃）が、ＥＰＣに使用された浴の温度は、約４５℃から５０℃であった。ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびｍＰＥＧ−ＤＳＰＥに対しては、水浴温度は、それぞれ５５℃超、４１℃超、および５０℃超に設定されるべきである。相転移温度がない場合、水浴温度は３５〜４５℃に設定される。
【０２６４】
フラスコを、水浴内で約１分間回転させ、平衡化した。１０トル未満の低圧まで徐々に真空引きし、沈殿物を伴わずに、フラスコの壁上に薄型乾燥フィルムを得た（典型的には約３０分間）。いかなる残留溶媒も除去するために、フラスコを室温で数時間から一晩、高真空下に供した。
【０２６５】
スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＳＢＥ−ＣＤ）との複合体形成により、カーフィルゾミブ（ＣＦＺ）を水溶液中に可溶化した。過剰のカーフィルゾミブを、２０％ＳＢＥ−ＣＤおよび２０ｍＭクエン酸の水溶液に添加した。ＣＦＺの可溶化に必要な場合は、溶液のｐＨを１Ｎ  ＨＣｌで約ｐＨ２．５に調整した。混合物を約１０分間超音波照射し、磁気撹拌棒を使用して１時間以上撹拌してから、０．２μｍフィルタを通して濾過し、過剰の溶解していない薬物を除去した。濾過後、溶液のｐＨを、ｐＨ３．５から５に調整した。このＳＢＥ−ＣＤと複合化したＣＦＺの水溶液を使用して、薄型脂質フィルムを再水和した。
【０２６６】
小胞が再水和されたら、３１０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離およびＰＢＳでの洗浄により、または、８〜１０ｋＤのＭＷＣＯを有する膜を使用して４８時間まで透析することにより、非封入遊離薬物を除去した。
【０２６７】
表１１は、ＳＢＥ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含む、例示的なリポソーム組成物の成分の公称濃度を示す。
【０２６８】
【表１１】
2015524410.tif 000025
【０２６９】
実施例８
ＳＢＥ−ＣＤと複合化したペプチドエポキシケトン化合物が投入された水性コアを含むリポソームを含むＣＦＺリポソーム組成物の薬力学応答
ＳＢＥ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物の薬力学応答を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて評価した。
【０２７０】
ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）、または、ＳＢＥ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物の薬力学応答を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウス（ａｐＬ−１１（１５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合）、実施例７；およびａｐＬ−１１（５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合）、実施例７）において評価した。マウス（時点当たり３匹のマウス）に、５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇの用量の非リポソームカーフィルゾミブ、または５ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブを、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で溶液として投与した。薬力学的試験のための血液試料および組織を、１０ｍｇ／ｋｇでの非リポソーム組成物の投与から０、１、８、および１４時間後；５ｍｇ／ｋｇでの非リポソーム組成物の投与から０、１、４、６、８および２４時間後；ならびに、５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇでのリポソーム組成物の投与から０、１、４、６、および２４時間後に採取した。各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つの組織試料を評価した。プロテアソームのキモトリプシン様活性を定量するために、蛍光発生基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ；Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、全血（主に赤血球）、副腎、肝臓、および心臓におけるプロテアソーム活性の測定により、薬力学応答を決定した。全ての試料は、ＣＦＺを含まない対応するビヒクルに対して正規化され、ビヒクル試料時点測定は、投薬から１時間後であった。
【０２７１】
ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）の、５ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇでの単回投薬、または、ＳＢＥ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物（ａｐＬ−１１）の、５ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇでの単回投薬は、全血および全ての他の組織において、１時間以内にプロテアソーム活性の急速な阻害をもたらした。１５ｍｇ／ｋｇでの投薬ではプロテアソーム活性のより大きな阻害が観察され、これは、全ての組織、すなわち全血（主に赤血球）（図３Ａを参照されたい）、心臓（図３Ｂを参照されたい）、肝臓（図３Ｃを参照されたい）、および副腎（図３Ｄを参照されたい）において、１時間でプロテアソーム活性の８０％超の阻害をもたらした。プロテアソーム阻害からの同様のほぼ完全な回復は、血液および心臓を除く試験した全ての組織において、投薬から２４時間後に観察され、ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）の５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの両方の投薬レベルに対して、６〜２４時間のｔ１／２で生じた。副腎においては、ＳＢＥ−ＣＤと複合化したＣＦＺが投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物に対し、５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇの両方でプロテアソーム活性の回復の遅延が観察されたが、この結果は、ＣＦＺの長期暴露を示唆している。予測されるように、カーフィルゾミブの不可逆的結合、および赤血球が新たなプロテアソームを合成しないことに起因して、血液においてはプロテアソーム活性の回復が見られなかった。
【０２７２】
これらの観察は、全血および組織におけるプロテアソーム活性の阻害が急速であり、ペプチドエポキシケトン化合物を含む非リポソーム製剤とリポソーム組成物との間で同様であったことを示している。さらに、ＳＢＥ−ＣＤと複合化したペプチドエポキシケトン化合物が投入された水性コアを含むリポソームを含むリポソーム組成物による、副腎におけるプロテアソーム活性の回復の遅延は、非リポソーム組成物に対する、リポソーム組成物での延長された暴露を示唆している。さらに、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物は、ペプチドエポキシケトン化合物の生体内分布に悪影響を及ぼさなかった。
【０２７３】
実施例９
リポソームＣＦＺの循環半減期  
リポソームＣＦＺの循環半減期を、以下の単回静脈内注射後の、７〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３／時点）において評価した：１０％スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン（ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標））、１０ｍＭシトレート、ｐＨ３．５中で製剤化された５ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ（ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ；非リポソーム）；５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブ組成物ａｐＬ−１１（実施例７；ａｐＬ−１１（５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合））および１５ｍｇ／ｋｇのリポソームカーフィルゾミブ組成物ａｐＬ−１１（実施例７；ａｐＬ−１１（１５ｍｇ／ｋｇ投薬の場合））。
【０２７４】
図４に示されるように、注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の血漿濃度は、静脈内ボーラス投与後、急速で広範囲の代謝により急速に降下した（図４：×を含む白い正方形を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇの注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の投与に対応する）。５ｍｇ／ｋｇで投薬されたカーフィルゾミブの半減期は約２０分であり、カーフィルゾミブは投薬から１時間後には検出不可能であった。
【０２７５】
リポソーム組成物中で送達された場合、カーフィルゾミブへの暴露期間は大幅に延長された（図４、黒い正方形を伴う線は、５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１（実施例７）、ペグ化リポソームの水性コアがカーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤを含むカーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応し；黒丸を伴う線は、１５ｍｇ／ｋｇのａｐＬ１１（実施例７）、ペグ化リポソームの水性コアがカーフィルゾミブおよびＳＢＥ−ＣＤを含むカーフィルゾミブのペグ化リポソーム組成物の投与に対応する）。全薬物（封止および放出）は、投薬から２４時間後まで検出可能であった。これは、組織におけるプロテアソーム回復の観察された遅延と一致する。
【０２７６】
リポソームＣＦＺ組成物対ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ（非リポソーム）のデータは、ペプチドエポキシケトン化合物の循環半減期を大幅に向上させるリポソーム組成物の能力を示す。さらに、データは、非リポソームＳＢＥ−ＣＤ組成物に対する、リポソーム組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の暴露期間の延長を示している。
【０２７７】
実施例１０
ｐＨ制御およびエタノール注入法を使用した、ペプチドエポキシケトンが投入された水性コアを含むリポソームの調製
エタノール注入法を使用してリポソーム組成物を作製するために、示された比率の以下の材料を使用した。総脂質は、典型的には、脂質ＥＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、および／またはＳＰＨを含み、ＰＥＧ修飾脂質（例えば、ＰＥＧ修飾リン脂質）および／またはコレステロールを、０．９：０．１〜０．７５：０．２５の重量比（脂質：ＰＥＧ修飾脂質または脂質：コレステロール）でさらに含み得るか、またはコレステロールが添加される場合、脂質対ＰＥＧ修飾脂質対コレステロール重量比（脂質：ＰＥＧ修飾脂質：コレステロール）は、０．８３：０．０８３：０．０８３〜０．５７：０．１４：０．２９であり得る。
【０２７８】
エタノール注入法において使用される他の材料は、以下を含む：無水エタノール；１Ｎ  ＨＣｌ；カーフィルゾミブ（結晶質または非晶質）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｓｙｒｉｎｇｅ  Ｇａｓｔｉｇｈｔ、２２ゲージ；透析キット、Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）Ｇ２（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｒａｎｃｈｏ  Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ、ＣＡ）分画分子量（ＭＷＣＯ）８〜１０ｋＤ；注射用蒸留水（ＷＦＩ）；およびリン酸緩衝生理食塩水１Ｘ（ＰＢＳ）。
【０２７９】
脂質／エタノール溶液は、以下のように調製した：１２５ｍｇ／ｍＬ卵スフィンゴミエリン、３１．２５ｍｇ／ｍＬコレステロール、１２．５ｍｇ／ｍＬ  ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥを含有する２ｍＬのエタノール。必要に応じて、脂質／エタノール溶液を数回超音波照射し、溶解を促進させた。
【０２８０】
ＣＦＺの水溶液は、以下のように調製した：１０ｍＬの０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液を調製し（約ｐＨ１）、溶解度を超えるＣＦＺを添加した。水溶液を、加熱水浴（約３０℃）内で２０〜３０分間超音波照射した。ｐＨ１での近似的なカーフィルゾミブ溶解度は、１．８ｍｇ／ｍＬである。溶解していない過剰の薬物を、０．２μｍフィルタを通して濾過することにより除去し、外見上透明な溶液を生成した。
【０２８１】
代替として、非晶質カーフィルゾミブを、共溶媒として６％（ｖ／ｖ）エタノールを含む０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液中に溶解し、次いで温めた水浴内で溶液が透明となるまで超音波照射することにより、カーフィルゾミブの過飽和溶液を調製する。
【０２８２】
１ｍＬの脂質−エタノール溶液を、９ｍＬのＣＦＺの水溶液中に、磁気撹拌棒を使用して撹拌しながら急速に注入することにより、リポソームを形成した。撹拌は、５〜１０分間継続した。溶液のｐＨは、約ｐＨ１であった。透析キット（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）Ｇ２）ＭＷＣＯ  ８〜１０ｋＤを使用して、得られた溶液を、１２時間から１６時間、リン酸緩衝生理食塩水（またはＷＦＩ）に対して透析した。約６〜８時間後、バルク透析溶液を、新鮮なＰＢＳまたはＷＦＩで置き換えた。透析されたリポソーム含有製剤の溶液のｐＨは、約ｐＨ３から３．５であった。リポソームを含む水溶液のｐＨを、水酸化ナトリウムで、ｐＨ３．５から生理的ｐＨの、約ｐＨ６．８に調整した。
【０２８３】
表１２は、例示的なリポソーム組成物の成分の公称濃度を示す。
【０２８４】
【表１２】
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【０２８５】
実施例１１
捕捉されたペプチドエポキシケトンを含むリポソームは、抗腫瘍反応を誘引する
ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソームを含むリポソーム組成物の抗癌作用を評価するために、マウス異種移植片腫瘍モデルにおいて、例示的なリポソーム組成物を試験した。
【０２８６】
リポソーム組成物は、実施例１および実施例２に記載の方法により作製した。リポソーム組成は、以下の通りであった：ｐＬ６＝２ｍｇ／ｍＬ  ＣＦＺ、１２．５ｍｇ／ｍＬスフィンゴミエリン、３．２ｍｇ／ｍＬコレステロール、１．３ｍｇ／ｍＬ  ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ。
【０２８７】
第１に、ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；例えば、米国特許公開第２０１１／０２３６４２８号を参照されたい）およびｐＬ−６、ＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物の薬力学応答を、単回静脈内ボーラス投与後のＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて評価した。
【０２８８】
マウス（時点当たり３匹のマウス）に、１０ｍｇ／ｋｇのＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化されたカーフィルゾミブ（非リポソーム）または１５ｍｇ／ｋｇのｐＬ−６、ＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物の用量を、５ｍＬ／ｋｇの投薬体積で溶液として投与した。薬力学的試験のための血液試料および組織を、リポソーム製剤の投与から０時間、１時間、４時間、６時間および２４時間後に、非リポソーム製剤に対しては０時間、１時間、８時間、および２４時間後に採取した。各マウスからの各組織に対して、時点当たり３つの組織試料を評価した。プロテアソームのキモトリプシン様活性を定量するために、蛍光発生基質（ＬＬＶＹ−ＡＭＣ；Ｌｉｇｈｔｃａｐ  ＥＳ，ＭｃＣｏｒｍａｃｋ  ＴＡ，Ｐｉｅｎ  ＣＳ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４６：６７３−６８３（２０００）により説明されるように）を使用して、全血（主に赤血球）、副腎、肝臓、および心臓におけるプロテアソーム活性の測定により、薬力学応答を決定した。全ての試料は、ＣＦＺを含まない対応するビヒクルに対して正規化され、ビヒクル試料時点測定は、投薬から１時間後であった。
【０２８９】
ＳＢＥ−Ｂ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）の１０ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤ）での単回投薬、または、捕捉されたＣＦＺを含むリポソームを含むリポソーム組成物（ｐＬ−６）の１５ｍｇ／ｋｇでの単回投薬は、全血および全ての他の組織、すなわち全血（主に赤血球）（図５Ａを参照されたい）、心臓（図５Ｂを参照されたい）、肝臓（図５Ｃを参照されたい）、および副腎（図５Ｄを参照されたい）において、１時間以内にプロテアソーム活性の８０％超の急速阻害をもたらした。プロテアソーム阻害からの同様の完全な回復は、血液および心臓を除く試験した全ての組織において、投薬から２４時間後に観察され、非リポソーム注射用ＣＦＺに対して、６〜２４時間のｔ１／２で生じた。副腎においては、リポソーム組成物ｐＬ−６に対し、プロテアソーム活性の回復の遅延が観察されたが、これは、ＣＦＺの長期暴露を示唆している。予測されるように、カーフィルゾミブの不可逆的結合、および赤血球が新たなプロテアソームを合成しないことに起因して、血液においてはプロテアソーム活性の回復が見られなかった。
【０２９０】
これらの観察は、全血および組織におけるプロテアソーム活性の阻害が急速であり、組成物にわたって同様であることを示している。副腎におけるプロテアソーム活性の回復の遅延は、リポソーム組成物での延長された暴露を示唆している。リポソーム組成物は、ＣＦＺの生体内分布に悪影響を及ぼさなかった。
【０２９１】
第２に、リポソームＣＦＺの循環半減期を、以下の単回静脈内注射後の、７〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（３／時点）において評価した：５ｍｇ／ｋｇで投与された、ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）；および、１５ｍｇ／ｋｇで投与されたｐＬ−６、ＣＦＺが投入されたリポソームを含むリポソーム組成物。
【０２９２】
図６に示されるように、注射用カーフィルゾミブＳＢＥ−ＣＤ組成物（非リポソーム）の血漿濃度は、静脈内ボーラス投与後に急速に降下し、１時間後には定量限界未満であった。半減期は、約２０分であった。これは、急速で広範囲の代謝に起因する（図６、白丸を伴う線）。
【０２９３】
ｐＬ−６リポソーム組成物中で送達された場合、カーフィルゾミブへの暴露期間は、大幅に延長された（図６、黒い正方形を伴う線）。全薬物（封入および放出）の血漿濃度は徐々に降下し、投薬から２４時間後まで検出可能であった。これは、組織におけるプロテアソーム回復の観察された遅延と一致する。
【０２９４】
リポソームＣＦＺ組成物対ＣＦＺ  ＳＢＥ−ＣＤ（非リポソーム）のデータは、ペプチドエポキシケトン化合物の循環半減期を大幅に向上させるリポソーム組成物の能力を示す。さらに、データは、非リポソームＳＢＥ−ＣＤ組成物に対する、リポソーム組成物中のペプチドエポキシケトン化合物の暴露期間の延長を示している。
【０２９５】
第３に、ＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム）、およびＣＦＺが投入されたリポソームを含むｐＬ−６リポソーム組成物の抗腫瘍反応を、マウスにおいて評価した。腫瘍は、ＢＮＸマウス（群当たりｎ＝８〜１０）の右脇腹へのＲＬ細胞（ヒト非ホジキンＢ細胞リンパ腫細胞；継代数＜９および移植時の生存率＞９５％）の皮下注射により確立した。ＲＬ試験において、０．１ｍＬの体積中に１×１０７細胞を含有する細胞懸濁液を注射した。マウスを処置群に無作為割り当てし、腫瘍が約１００ｍｍ３（ＲＬ）に達したら投薬を開始した。最長垂直直径を記録することにより、腫瘍を週３回測定し、Ｖ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２の式を使用して腫瘍体積を計算した。
【０２９６】
ＲＬ細胞から得られた確立されたヒト腫瘍異種移植片を保有するＢＮＸマウスを、非リポソームカーフィルゾミブまたはリポソームカーフィルゾミブで処置した。週１回（ＱＷ）スケジュールまたは各週に２日連続して１日１回投与される投薬（ＱＤ×２）スケジュールで、薬物を投与した。群サイズは、Ｎ＝８〜１０マウス／群であった。
【０２９７】
結果を図７に示す。図中に示されたデータは、カーフィルゾミブを含むリポソーム組成物の週１回の静脈内投与（図７、リポソーム組成物１５ｍｇ／ｋｇ、ＱＷ、白い三角）およびリポソーム組成物のＱＤ×２投与（図７、リポソーム組成物、１０ｍｇ／ｋｇ  ＣＦＺ、ＱＤ×２、黒丸）が、１日目／２日目のスケジュール（すなわち、ＱＤ×２）で投与されたＳＢＥ−ＣＤ中で製剤化された注射用カーフィルゾミブ（非リポソーム；図７、ＱＤ×２、５ｍｇ／ｋｇ）と同様の抗腫瘍反応を誘引したことを示している。一元配置ＡＮＯＶＡおよびボンフェローニ事後分析により、処置群とビヒクル対照との間の統計比較を行った（有意性はｐ＜０．００１であった）。データは、週１回１５ｍｇ／ｋｇで投与されたリポソーム組成物が、ＱＤ×２で投与されたリポソームまたは非リポソーム組成物と同程度に有効であったことを示している。
【０２９８】
これらのデータは、ペプチドエポキシケトン化合物を含むリポソーム組成物が、非リポソーム製剤と比べて低減された投薬頻度でも、有効性を維持することを示している。
【０２９９】
当業者には明らかなように、本発明の趣旨および範囲から逸脱せずに、上記実施形態の様々な修正および変形を行うことができる。そのような修正および変形は、本発明の範囲内である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2015524410.tif 000031
【図３Ａ】
2015524410.tif 000032
【図３Ｂ】
2015524410.tif 000033
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
2015524410.tif 000035
【図４】
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【図５Ａ】
2015524410.tif 000037
【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
2015524410.tif 000040
【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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