(57)【要約】本発明は、抗腫瘍剤、ならびにグッドパスチャー抗原結合タンパク質、ｐ２１阻害剤およびＡＢＣＣ７阻害剤を含む医薬組成物、ならびに癌の治療におけるそれらの使用を提供する。【選択図】図【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）抗腫瘍剤またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｂ）式：
【化１】
2015524385.tif 000037
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１が、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３が、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｃ）薬学的に許容可能な担体と、
を含む医薬組成物。
【請求項２】
Ｒ１が、水素またはメトキシであり、
Ｒ２が、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、
Ｒ３が、存在する場合、クロロ、メチルまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ４が、Ｈまたはメチルである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｒ１が水素である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｒ４がメチルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記化合物が、
【化２】
2015524385.tif 000038
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化合物が、
【化３】
2015524385.tif 000039
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記抗腫瘍剤が、パクリタキセル、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびシスプラチンからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗腫瘍剤が、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記トポイソメラーゼＩＩ阻害剤がアントラサイクリン薬を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗腫瘍剤が、ドキソルビシンおよびエトポシドからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
さらに、ｐ２１の阻害剤を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ｐ２１の阻害剤が、ｐ２１抗体、ｐ２１のｓｉＲＮＡ、ｐ２１のｓｈＲＮＡ、ｐ２１アンチセンス化合物および２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン−４−イル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（フラボピリドール）、（１Ｒ、２Ｒ、４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ、９Ｓ、１２Ｓ、１５Ｒ、１６Ｅ、１８Ｒ、１９Ｒ、２１Ｒ、２３Ｓ、２４Ｅ、２６Ｅ、２８Ｅ、３０Ｓ、３２Ｓ、３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０＾｛４，９｝］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート（テムシロリムス）、（３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ、７Ｒ、９Ｒ、１１Ｓ、１２Ｒ、１３Ｓ、１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ、３Ｒ、４Ｓ、６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ、４Ｒ、５Ｓ、６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１０−（２，４，７−トリオキサ−１−アザオクタン−１−イリデン）−１−オキサシクロテトラデカン−２−オン（ロキシスロマイシン）、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メタノン塩酸塩（塩酸ラロキシフェン）、（７Ｓ，９Ｅ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ，１６Ｒ，１７Ｓ，１８Ｓ，１９Ｅ，２１Ｚ）−２，１５，１７，２７，２９−ペンタヒドロキシ−１１−メトキシ−３，７，１２，１４，１６，１８，２２−ヘプタメチル−２６−｛（Ｅ）−［（４−メチルピペラジン−１−イル）イミノ］メチル｝−６，２３−ジオキソ−８，３０−ジオキサ−２４−アザテトラシクロ［２３．３．１．１４’７．０５’２８］トリアコンタ−１（２８），２，４，９，１９，２１，２５（２９）、２６−オクタエン−１３−イルアセテート（リファンピシン）、［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−アセチル−６，１０，１３−トリメチル−３−オキソ−２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］アセテート（酢酸メゲストロール）、８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）−６−メトキシキノリンニリン酸塩（プリマキン二リン酸）、カリウム；［２−ブチル−５−クロロ−３−［［４−［２−（１，２，３−トリアザ−４−アザニダシクロペンタ−２，５−ジエン−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］イミダゾール−４−イル］メタノール（ロサルタンカリウム）、（２Ｓ）−３−メチル−２−［ペンタノイル−［［４−［２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］アミノ］ブタン酸（バルサルタン）、（Ｚ）−ブト−２−エン−二酸；２−（２，２−ジシクロヘキシルエチル）ピペリジン（ペルヘキシリンマレイン酸塩）、３−Ｏ−メチル−５−Ｏ−（２−メチルプロピル）−２，６−ジメチル−４−（２−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニソルジピン）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるｐ２１発現阻害剤からなる群から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
さらに、ＡＴＰ結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）の阻害剤を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記ＡＢＣＣ７阻害剤が、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド−［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロ−ヘキシルウレア（グリベンクラミド）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０）またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の
（ａ）抗腫瘍剤、および
（ｂ）式：
【化４】
2015524385.tif 000040
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１が、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３が、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、
を投与することを含む方法。
【請求項１６】
さらに腫瘍におけるｐ２１の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のｐ２１阻害剤を、前記対象に投与することを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｐ２１阻害剤が、ｐ２１抗体、ｐ２１のｓｉＲＮＡ、ｐ２１のｓｈＲＮＡ、ｐ２１アンチセンス化合物および２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン−４−イル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（フラボピリドール）、（１Ｒ、２Ｒ、４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ、９Ｓ、１２Ｓ、１５Ｒ、１６Ｅ、１８Ｒ、１９Ｒ、２１Ｒ、２３Ｓ、２４Ｅ、２６Ｅ、２８Ｅ、３０Ｓ、３２Ｓ、３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０＾｛４，９｝］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート（テムシロリムス）、（３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ、７Ｒ、９Ｒ、１１Ｓ、１２Ｒ、１３Ｓ、１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ、３Ｒ、４Ｓ、６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ、４Ｒ、５Ｓ、６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１０−（２，４，７−トリオキサ−１−アザオクタン−１−イリデン）−１−オキサシクロテトラデカン−２−オン（ロキシスロマイシン）、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メタノン塩酸塩（塩酸ラロキシフェン）、（７Ｓ，９Ｅ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ，１６Ｒ，１７Ｓ，１８Ｓ，１９Ｅ，２１Ｚ）−２，１５，１７，２７，２９−ペンタヒドロキシ−１１−メトキシ−３，７，１２，１４，１６，１８，２２−ヘプタメチル−２６−｛（Ｅ）−［（４−メチルピペラジン−１−イル）イミノ］メチル｝−６，２３−ジオキソ−８，３０−ジオキサ−２４−アザテトラシクロ［２３．３．１．１４’７．０５’２８］トリアコンタ−１（２８），２，４，９，１９，２１，２５（２９）、２６−オクタエン−１３−イルアセテート（リファンピシン）、［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−アセチル−６，１０，１３−トリメチル−３−オキソ−２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］アセテート（酢酸メゲストロール）、８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）−６−メトキシキノリンニリン酸塩（プリマキン二リン酸）、カリウム；［２−ブチル−５−クロロ−３−［［４−［２−（１，２，３−トリアザ−４−アザニダシクロペンタ−２，５−ジエン−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］イミダゾール−４−イル］メタノール（ロサルタンカリウム）、（２Ｓ）−３−メチル−２−［ペンタノイル−［［４−［２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］アミノ］ブタン酸（バルサルタン）、（Ｚ）−ブト−２−エン−二酸；２−（２，２−ジシクロヘキシルエチル）ピペリジン（ペルヘキシリンマレイン酸塩）、３−Ｏ−メチル−５−Ｏ−（２−メチルプロピル）−２，６−ジメチル−４−（２−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニソルジピン）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるｐ２１発現阻害剤からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
さらに、腫瘍におけるＡＢＣＣ７の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＡＴＰ結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）阻害剤を、前記対象に投与することを含む、請求項１５〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＡＢＣＣ７阻害剤が、ＡＢＣＣ７抗体、ＡＢＣＣ７のｓｉＲＮＡ、ＡＢＣＣ７のｓｈＲＮＡ、ＡＢＣＣ７アンチセンス化合物および３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド−［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロ−ヘキシルウレア（グリベンクラミド）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０）またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるＡＢＣＣ７発現阻害剤からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む方法。
【請求項２１】
前記腫瘍の治療が腫瘍の転移の減少を含む、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍の治療が、腫瘍中の癌幹細胞の枯渇を含む、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の
（ａ）抗腫瘍剤、および
（ｂ）ＧＰＢＰ−１阻害剤、
を投与することを含む方法。
【請求項２４】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化５】
2015524385.tif 000041
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４が、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化６】
2015524385.tif 000042
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、もしくは−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化７】
2015524385.tif 000043
の化合物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１が、水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、もしくは−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨである、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、もしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）からなる群から選択され、
Ｒ１が、水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、もしくは−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨである、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化８】
2015524385.tif 000044
を有する化合物である、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化９】
2015524385.tif 000045
を有する化合物である、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
Ｒ２がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ２がメチルである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ２がハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ２が、フルオロメチルまたはジフルオロメチルである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
Ｒ２が、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
Ｒ２が、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒ２がヒドロキシメチルである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｒ４がＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項２５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ４がＨである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
Ｒ４が、メチルまたはプロピルである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
Ｒ４がメチルである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
Ｒ４がＨまたはメチルである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
Ｒ４が、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）または−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨである、請求項２５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
Ｒ１が水素である、請求項２５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
Ｒ１がメトキシである、請求項２５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である、請求項２５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
Ｒ３が、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
Ｒ３がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
Ｒ３がメチルである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
Ｒ３がハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
Ｒ３がトリフルオロメチルである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５４】
Ｒ３が、クロロ、メチル、またはトリフルオロメチルである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
Ｒ１が、水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２が、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３が、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
Ｒ１が、水素またはメトキシであり、
Ｒ２が、ヒドロキシメチルであり、
Ｒ３が、存在する場合、クロロ、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ４が、Ｈまたはメチルである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、
（ａ）ＧＰＢＰ−１に対して選択的な抗体またはアプタマー、
（ｃ）ＧＰＢＰのｍＲＮＡに対して選択的な阻害性核酸、
（ｄ）一般式Ｘ１−ＳＨＣＩＸ２−Ｘ３（配列番号１）
（式中、
Ｘ１は配列ＡＴＴＡＧＩＬＡＴＬ（配列番号２）の０〜１０個のアミノ酸であり、
Ｘ２はＥまたはＱであり、
Ｘ２は、配列ＬＭＶＫＲＥＤＳＷＱ（配列番号３）の０〜１０個のアミノ酸である）
のアミノ酸配列を含むペプチド、
（ｇ）ＳＨＣＩＥ（配列番号４）、ＳＨＣＩＱ（配列番号５）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号６）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＱＬＭＶＫＲ（配列番号７）、およびＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、
（ｈ）Ｉ−２０：ＲＤＥＶＩＧＩＬＫＡＥＫＭＤＬＡＬＬＥＡＱＹＧＦＶＴＰＫＫＶＬＥＡＬＱＲＤＡＦＱＡＫＳＴＰＷＱＥＤＩＹＥＫＰＭＮＥＬＤＫＶＶＥＫＨＫＥＳＹＲＲＩＬＧＱＬＬＶＡＥＫＳＨＲＱＴＩＬＥＬＥＥＥＫＲＫＨＫＥＹＭＥＫＳＤＥＦＩＣＬＬＥＱＥＣＥＲＬＫＫＬＩＤＱＥＩＫＳＱＥＥＫＥＱＥＫＥＫＲＶＴＴＬＫＥＥＬＴＫＬＫＳＦＡＬＭＶＶＤＥＱＱＲＬＴＡＱＬＴＬＱＲＱＫＩＱＥＬＴＴＮＡＫＥＴＨＴＫＬＡＬＡＥＡＲＶＱＥＥＥＱＫＡＴＲＬＥＫＥＬＱＴＱＴＴＫＦＨＱＤＱＤＴＩＭＡＫＬＴＮＥＤＳＱＮＲＱＬＱＱＫＬＡＡＬＳＲＱＩＤＥＬＥＥＴＮＲＳＬＲＫＡＥＥＥ（配列番号９）
からなる群から選択される１以上の阻害剤を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗腫瘍剤が、パクリタキセル、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびシスプラチンからなる群から選択される、請求項２３〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗腫瘍剤がトポイソメラーゼＩＩ阻害剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記トポイソメラーゼＩＩ阻害剤がアントラサイクリン薬を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗腫瘍剤が、ドキソルビシンおよびエトポシドからなる群から選択される、請求項２３〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
さらに、腫瘍においてｐ２１の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のｐ２１阻害剤を、前記対象に投与することを含む、請求項２３〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ｐ２１阻害剤が、ｐ２１抗体、ｐ２１のｓｉＲＮＡ、ｐ２１のｓｈＲＮＡ、ｐ２１アンチセンス化合物および２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン−４−イル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（フラボピリドール）、（１Ｒ、２Ｒ、４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ、９Ｓ、１２Ｓ、１５Ｒ、１６Ｅ、１８Ｒ、１９Ｒ、２１Ｒ、２３Ｓ、２４Ｅ、２６Ｅ、２８Ｅ、３０Ｓ、３２Ｓ、３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０＾｛４，９｝］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート（テムシロリムス）、（３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ、７Ｒ、９Ｒ、１１Ｓ、１２Ｒ、１３Ｓ、１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ、３Ｒ、４Ｓ、６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ、４Ｒ、５Ｓ、６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１０−（２，４，７−トリオキサ−１−アザオクタン−１−イリデン）−１−オキサシクロテトラデカン−２−オン（ロキシスロマイシン）、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メタノン塩酸塩（塩酸ラロキシフェン）、（７Ｓ，９Ｅ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ，１６Ｒ，１７Ｓ，１８Ｓ，１９Ｅ，２１Ｚ）−２，１５，１７，２７，２９−ペンタヒドロキシ−１１−メトキシ−３，７，１２，１４，１６，１８，２２−ヘプタメチル−２６−｛（Ｅ）−［（４−メチルピペラジン−１−イル）イミノ］メチル｝−６，２３−ジオキソ−８，３０−ジオキサ−２４−アザテトラシクロ［２３．３．１．１４’７．０５’２８］トリアコンタ−１（２８），２，４，９，１９，２１，２５（２９）、２６−オクタエン−１３−イルアセテート（リファンピシン）、［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−アセチル−６，１０，１３−トリメチル−３−オキソ−２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］アセテート（酢酸メゲストロール）、８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）−６−メトキシキノリンニリン酸塩（プリマキン二リン酸）、カリウム；［２−ブチル−５−クロロ−３−［［４−［２−（１，２，３−トリアザ−４−アザニダシクロペンタ−２，５−ジエン−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］イミダゾール−４−イル］メタノール（ロサルタンカリウム）、（２Ｓ）−３−メチル−２−［ペンタノイル−［［４−［２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］アミノ］ブタン酸（バルサルタン）、（Ｚ）−ブト−２−エン−二酸；２−（２，２−ジシクロヘキシルエチル）ピペリジン（ペルヘキシリンマレイン酸塩）、３−Ｏ−メチル−５−Ｏ−（２−メチルプロピル）−２，６−ジメチル−４−（２−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニソルジピン）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるｐ２１発現阻害剤からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
さらに、腫瘍におけるＡＢＣＣ７の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＡＴＰ結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）阻害剤を前記対象に投与することを含む、請求項２３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＡＢＣＣ７阻害剤が、ＡＢＣＣ７抗体、ＡＢＣＣ７のｓｉＲＮＡ、ＡＢＣＣ７のｓｈＲＮＡ、ＡＢＣＣ７アンチセンス化合物および３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド−［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロ−ヘキシルウレア（グリベンクラミド）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０）またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるＡＢＣＣ７発現阻害剤からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記腫瘍の治療が、腫瘍の転移の減少および／または腫瘍中の癌幹細胞の枯渇を含む、請求項２３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記腫瘍の治療がＧＰＢＰ−１発現腫瘍である、請求項１５〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるための方法であって、化学療法剤で治療される腫瘍を有する対象に、腫瘍においてＡＢＣＣ７の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＡＴＰ結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法。
【請求項６９】
前記ＡＢＣＣ７阻害剤が、ＡＢＣＣ７抗体、ＡＢＣＣ７のｓｉＲＮＡ、ＡＢＣＣ７のｓｈＲＮＡ、ＡＢＣＣ７アンチセンス化合物および３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド−［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロ−ヘキシルウレア（グリベンクラミド）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０）またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるＡＢＣＣ７発現阻害剤からなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化１０】
2015524385.tif 000046
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４が、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２３に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化１１】
2015524385.tif 000047
の化合物である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
Ｒ１が水素である、請求項７０または７１に記載の方法。
【請求項７３】
ＲがＣＲ３であり、式中、Ｒ３がホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項７０〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
Ｒ３が−ＣＯＨである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
Ｒ２が、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である、請求項７０〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
Ｒ２が、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（ＯＥｔ）である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
Ｒ４が（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである、請求項７０〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
Ｒ４が−ＣＨ２−Ｐｈである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ＧＰＢＰ−１阻害剤が、式：
【化１２】
2015524385.tif 000048
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項７０に記載の方法。
【請求項８０】
式：
【化１３】
2015524385.tif 000049
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４が、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８１】
前記化合物が、式：
【化１４】
2015524385.tif 000050
の化合物である、請求項９０に記載の化合物。
【請求項８２】
Ｒ１が水素である、請求項８０または８１に記載の化合物。
【請求項８３】
ＲがＣＲ３であり、Ｒ３がホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である、請求項８０〜８２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８４】
Ｒ３が−ＣＯＨである、請求項８３に記載の化合物。
【請求項８５】
Ｒ２が、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である、請求項８０〜８４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８６】
Ｒ２が、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（ＯＥｔ）である、請求項８５に記載の化合物。
【請求項８７】
Ｒ４が（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである、請求項８０〜８６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８８】
Ｒ４が−ＣＨ２−Ｐｈである、請求項８７に記載の化合物。
【請求項８９】
前記化合物が、式：
【化１５】
2015524385.tif 000051
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項８０に記載の化合物。
【請求項９０】
腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の式：
【化１６】
2015524385.tif 000052
（式中、
Ｒが、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１が、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３が、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４が、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法。
【請求項９１】
Ｒ１が水素またはメトキシであり、Ｒ２が、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、Ｒ３が、存在する場合、クロロ、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４がＨまたはメチルである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
Ｒ１が水素である、請求項９０または９１に記載の方法。
【請求項９３】
Ｒ４がメチルである、請求項９０〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記化合物が、
【化１７】
2015524385.tif 000053
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９５】
前記化合物が、
【化１８】
2015524385.tif 000054
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９６】
腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるための方法であって、化学療法剤で治療される腫瘍を有する対象に、腫瘍におけるｐ２１の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のｐ２１阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法。
【請求項９７】
前記ｐ２１阻害剤が、ｐ２１抗体、ｐ２１のｓｉＲＮＡ、ｐ２１のｓｈＲＮＡ、ｐ２１アンチセンス化合物および２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン−４−イル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（フラボピリドール）、（１Ｒ、２Ｒ、４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ、９Ｓ、１２Ｓ、１５Ｒ、１６Ｅ、１８Ｒ、１９Ｒ、２１Ｒ、２３Ｓ、２４Ｅ、２６Ｅ、２８Ｅ、３０Ｓ、３２Ｓ、３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０＾｛４，９｝］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート（テムシロリムス）、（３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ、７Ｒ、９Ｒ、１１Ｓ、１２Ｒ、１３Ｓ、１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ、３Ｒ、４Ｓ、６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ、４Ｒ、５Ｓ、６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１０−（２，４，７−トリオキサ−１−アザオクタン−１−イリデン）−１−オキサシクロテトラデカン−２−オン（ロキシスロマイシン）、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メタノン塩酸塩（塩酸ラロキシフェン）、（７Ｓ，９Ｅ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ，１６Ｒ，１７Ｓ，１８Ｓ，１９Ｅ，２１Ｚ）−２，１５，１７，２７，２９−ペンタヒドロキシ−１１−メトキシ−３，７，１２，１４，１６，１８，２２−ヘプタメチル−２６−｛（Ｅ）−［（４−メチルピペラジン−１−イル）イミノ］メチル｝−６，２３−ジオキソ−８，３０−ジオキサ−２４−アザテトラシクロ［２３．３．１．１４’７．０５’２８］トリアコンタ−１（２８），２，４，９，１９，２１，２５（２９）、２６−オクタエン−１３−イルアセテート（リファンピシン）、［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−アセチル−６，１０，１３−トリメチル−３−オキソ−２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］アセテート（酢酸メゲストロール）、８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）−６−メトキシキノリンニリン酸塩（プリマキン二リン酸）、カリウム；［２−ブチル−５−クロロ−３−［［４−［２−（１，２，３−トリアザ−４−アザニダシクロペンタ−２，５−ジエン−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］イミダゾール−４−イル］メタノール（ロサルタンカリウム）、（２Ｓ）−３−メチル−２−［ペンタノイル−［［４−［２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］アミノ］ブタン酸（バルサルタン）、（Ｚ）−ブト−２−エン−二酸；２−（２，２−ジシクロヘキシルエチル）ピペリジン（ペルヘキシリンマレイン酸塩）、３−Ｏ−メチル−５−Ｏ−（２−メチルプロピル）−２，６−ジメチル−４−（２−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニソルジピン）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択されるｐ２１発現阻害剤からなる群から選択される、請求項９６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
相互参照
本願は、２０１２年７月２日に出願の米国仮特許出願第６１／６６７０５７号の優先権を主張し、同出願は、参照によりその全体を本明細書に援用する。
【０００２】
基底膜コラーゲンＩＶ型のα３鎖の非コラーゲン（ＮＣ１）ドメイン［α３（ＩＶ）ＮＣ１］の構造は、部分的にリン酸化に依存する。グッドパスチャー抗原結合タンパク質（ＧＰＢＰ）（国際公開第００／５０６０７号；国際公開第０２／０６１４３０号）は、その超分子集合内に、α３（ＩＶ）ＮＣ１ドメインの構造異性化を触媒する非従来型のタンパク質キナーゼである。（７７ｋＤのＧＰＢＰまたはＧＰＢＰとしても知られる）ＧＰＢＰ−１の発現レベルの増加は、グッドパスチャー（「ＧＰ」）症候群を媒介する自己免疫応答を行う異常な非寛容化（ｎｏｎ−ｔｏｌｅｒｉｚｅｄ）α３（ＩＶ）ＮＣ１配座異性体の生成に関連している。ＧＰ患者では、α３（ＩＶ）ＮＣ１ドメイン（「グッドパスチャー抗原」または「ＧＰ抗原」）に対する自己抗体は、ＧＰ症候群の２つの主要な臨床症状である進行の急速な糸球体腎炎、および多くの場合は肺出血を引き起こす。さらに、ＧＰＢＰは、炎症、アポトーシス、およびタンパク質フォールディングを調節し、ＧＰＢＰ発現の増加は、抗体媒介性糸球体腎炎（ＩｇＡ腎症、全身性エリテマトーデスおよびグッドパスチャー自己免疫症候群）、ならびにタンパク質のミスフォールディングによる小胞体（ＥＲ）ストレス誘発物質を含むいくつかの化学療法剤（すなわち、パクリタキセル）に対する癌細胞の耐性を誘発すると考えられている。したがって、ＧＰＢＰの阻害剤は、抗体媒介性障害、薬剤耐性癌、炎症、タンパク質ミスフォールディングおよびＥＲストレス障害、ならびに異常なアポトーシスの治療に有用である。
【発明の概要】
【０００３】
第１の態様において、本発明は、
（ａ）抗腫瘍剤またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｂ）式：
【０００４】
【化１】
2015524385.tif 000002
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１は、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｃ）薬学的に許容可能な担体と、
を含む医薬組成物を提供する。
【０００５】
第２の態様において、本発明は、腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の
（ａ）抗腫瘍剤、および
（ｂ）式：
【０００６】
【化２】
2015524385.tif 000003
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１は、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、
を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
さらなる実施形態において、本発明は、腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の
（ａ）抗腫瘍剤、および
（ｂ）ＧＰＢＰ−１阻害剤、
を投与することを含む方法を提供する。
【０００８】
さらなる態様において、本発明は、式：
【０００９】
【化３】
2015524385.tif 000004
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１０】
別の態様において、本発明は、腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の式：
【００１１】
【化４】
2015524385.tif 000005
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１は、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ドキソルビシンがＧＰＢＰ−１を阻害することを示す写真である。Ａでは、ＧＰＢＰ−１キナーゼ活性およびそれらの相乗作用に対するＴ１２ならびにドキソルビシンの阻害活性を評価するために、低いおよび高い特異的活性を有する２つの異なる調製物からの酵母ＦＬＡＧ−ＧＰＢＰ−１約２００ｎｇを、示された化合物および濃度の非存在下（−）または存在下（＋）で［γ−３２Ρ］ΑΤΡとインキュベートした。混合物をウェスタンブロットおよびオートラジオグラフ（３２Ρ）に供した。ＧＰＢＰのレベルを、抗ＦＬＡＧ（ＷＢ）を用いてさらに分析した。Ｂのパネルには、昆虫細胞で産生された組換えヒトＧＰＢＰ−１に対する示された化合物の、Ｂｅｎｅｓｉ−Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ法により計算された親和定数が示されている。
【図２】Ｔ１２が、ドキソルビシンと共同して、Ａ５４９細胞の生存率を低下させることを示すグラフである。細胞を９６ウェルプレートに播種し、示された化合物の組み合わせで処理した。細胞生存率（細胞数）を、処理の３６時間後に、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）および任意の蛍光単位で測定した（縦軸）。Ｔ１２は、細胞生存率を変化させず、用量依存的にドキソルビシンと相乗作用した。各組み合わせを四重に分析し、対数プロットおよびベストフィット曲線上に各組み合わせの平均値ならびに標準偏差を示す。化合物の各組み合わせの致死濃度５０（ＬＣ５０）を表に示す。双方向ＡＮＯＶＡ試験は、化合物の組み合わせ間の違いが統計的に有意（Ｐ＜０．０００１）であることを示す。
【図３】Ｔ１２が、Ａ５４９細胞におけるＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）およびＤＤＩＴ３（ＣＨＯＰ）遺伝子のドキソルビシン誘発性発現を増強することを示すグラフである。細胞を２４時間ドキソルビシン（１μΜ）および／またはＴ１２（５０μΜ）で処理した。全ＲＮＡを単離し、逆転写し、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）およびＤＤＩＴ３（ＣＨＯＰ）のｍＲＮＡレベルを、ＴａｑＭａｎ（商標）商業プローブおよびプライマーを用いてｑＰＣＲによって評価した。結果を、未処理細胞に対する相対量（ＲＱ）として表す。代表的なアッセイを示す。
【図４】p２１が、Ｔ１２とドキソルビシンの相乗的生物活性を相殺することを示すグラフである。Ａ５４９細胞を、２４時間、ｐ２１標的ｓｉＲＮＡまたは対照ｓｉＲＮＡとマグネトフェクションした。Ａでは、トランスフェクトした細胞を２４時間、ドキソルビシン（１μΜ）および／またはＴ１２（５０μΜ）で処理した。続いて、全ＲＮＡを単離し、逆転写し、ＤＤＩＴ３（ＣＨＯＰ）遺伝子のｍＲＮＡレベルを、図３と同様にｑＰＣＲにより評価した。結果を、対照ｓｉＲＮＡでトランスフェクトした未処理細胞に対する相対値（ＲＱ）として表す。代表的なアッセイを示す。Ｂでは、図２のようにトランスフェクトした細胞を９６ウェルプレートに播種し、処理し、分析した。各組み合わせの致死濃度５０（ＬＣ５０）を表に示す。双方向ＡＮＯＶＡ試験は、組み合わせ間の差異が統計的に有意（ｐ＜０．０００１）であることを示す。
【図５】Ｔ１２が、ドキソルビシン誘発性カスパーゼ３媒介性アポトーシスを増強することを示すグラフである。Ａ５４９細胞を、３６時間、ドキソルビシン（１μΜ）および／またはＴ１２（５０μΜ）とインキュベートした。その後、細胞を、ヒトＰＡＲＰ切断断片に特異的なＰＥ結合抗体で染色し、さらにフローサイトメトリーにより分析した。データを未処理の対照細胞に対する倍数で表す。代表的な実験を示す。
【図６】Ｔ１２およびドキソルビシンが、同様の方法で細胞周期関連遺伝子を活性化することを示すグラフである。Ａ５４９細胞を、２４時間、ドキソルビシン（１μΜ）またはＴ１２（５０μΜ）で処理した。全ＲＮＡを精製し、逆転写し、細胞周期ＲＴ２プロファイラーＰＣＲアレイを行った。Ａは、処理細胞対未処理細胞の相対的なｍＲＮＡレベルの対数散布図を示す。中央ラインの上下のドットは、それぞれ、処理に応答して上方制御または下方制御された遺伝子を示す。Ｂは、Ａで示された過剰発現遺伝子の相対発現（ＲＱ）の棒グラフを示す。結果は、未処理細胞に対して何倍の発現かを示す。
【図７】ＣＦＴＲ阻害が、Ｔ１２で処理したＡ５４９培養物の細胞生存率を低下させることを示すグラフである。Ａ５４９細胞を９６ウェル培養プレートに播種し、４時間後に、Ｔ１２（５０μΜ）および／またはＣＦＴＲ阻害剤−１７２（２５μΜ）の非存在下または存在下で、示される濃度のドキソルビシンにより処理した。細胞をさらに３６時間培養し、細胞生存率を図２のように評価した。化合物の各組み合わせの致死濃度５０（ＬＣ５０）を表に示す。双方向ＡＮＯＶＡ試験は、化合物の組み合わせ間の差異が統計的に有意（Ｐ＜０．０００１）であることを示す。
【図８】Ｔ１２が癌細胞の遊走を阻害することを示すグラフである。方法および実験計画に記載したように改良型ボイデンチャンバーを用いて、遊走を測定した。ドキソルビシンは１μΜ、Ｔ１２は５０μΜで使用した。
【図９】Ｔ１２が、Ａ５４９細胞培養物のＣＳＣ／ＳＰコンパートメントを枯渇させることを示すグラフである。Ａでは、Ａ５４９細胞培養物を、ベラパミル（５０μΜ）およびフミトレモルギンＣ（ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎ）（１０μΜ）の非存在下（−）または存在下（＋）でヘキスト３３３４２とインキュベートした。丸で囲んだ領域（Ｒ２）は、ＣＳＣ／ＳＰ細胞を表すフローサイトメトリーイベントを含む領域を示す。Ｂでは、示した化合物で処理しない（対照）か、または処理した細胞培養物中のＣＳＣ／ＳＰ細胞の相対的存在量（％）を示す。
【図１０】Ｔ１２が、優先的にＣＳＣ／ＳＰ細胞においてドキソルビシン蓄積を増強することを示すグラフである。Ａ５４９培養物を処理しない（対照）か、またはドキソルビシン（１μΜ）および／もしくはＴ１２（５０μΜ）で処理した。Ａでは、ドキソルビシン含有量を、ＰＥチャネルを用いるフローサイトメトリーにより測定した。蛍光強度値を示す。ドキソルビシンの増加量は、蛍光ピークの右方向への移動によって証明される。Ｂでは、ＣＳＣ／ＳＰおよびＣＴＡＣ／ＭＰのコンパートメントを図９のように同定し、細胞のドキソルビシン含有量をＡのように決定した。
【図１１】Ｔ１２およびドキソルビシンが、Ａ５４９ベース腫瘍の成長を相乗的に停止することを示すグラフである。Ａ５４９異種移植片を有するヌードマウスを、方法および実験計画に記載したように示した化合物で処置した。示した時間の腫瘍サイズを示す。組み合わせ処置のみが平均腫瘍体積を有意に減少させることを明らかにした統計的解析を表に示す（１群あたりｎ＝１０）。
【図１２】Ｔ１２およびドキソルビシンが、Ａ５４９ベース腫瘍を相乗的に壊死させることを示す写真である。図１１で使用したマウスの腫瘍試料をホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、マッソントリクローム染色し、光学顕微鏡で観察した。壊死領域をアスタリスクで示す。代表的な画像を示す。
【図１３】Ｔ１２およびドキソルビシンが、Ａ５４９ベース腫瘍内でＭＭＰ１０発現を相乗的に減少させることを示すグラフである。図１１で使用したマウスの腫瘍サンプルから抽出したｍＲＮＡを、ＭＭＰ１０およびＣＯＬ４Α３ＢＰ（ＧＰＢＰ）の発現評価のためにｑＰＣＲによって分析した（ｎ＝５）。
【図１４】Ｔ１２が、ＪＬＳＭ細胞生存率を著しく低下させることを示すグラフである。ＡおよびＢでは、ＪＬＳＭ細胞を、Ｉ型コラーゲンでコーティングされた９６ウェル培養プレートに（１ｃｍ２あたり１０，０００細胞で）播種した。細胞を４時間定着させ、示した処理を行い、３６時間後に細胞生存率をアッセイした。対照の棒グラフは、Ｔ１２またはＴ４９を含まない細胞を表す。
【図１５】ＧＰＢＰが、ドキソルビシンに耐性を示すＡ５４９細胞中で過剰発現することを示す写真である。Ａ５４９細胞を、１μΜのドキソルビシン（Ａ５４９−ＤＲ）で４週間処理した。Ａ５４９およびＡ５４９−ＤＲ細胞の細胞溶解物５０μｇを、ＧＰＢＰ特異的ｍＡｂ Ｎ２７を用いて、ＧＰＢＰレベルを評価するためにウェスタンブロットによって分析した。チューブリンを特異的抗体で染色し、ローディング対照として使用した。
【図１６】ＧＰＢＰが、ＣＳＣ／ＳＰ増殖を可能にするＢ−ＡＬＩ培地中で増殖させたＡ５４９細胞中で過剰発現することを示すグラフである。棒グラフは、示された培養液中で示された時間増殖させたＡ５４９細胞における示された遺伝子の相対発現を表す。ＤＭＥＭ：２ｍＭのＬ−グルタミンおよび１０％ウシ胎児血清を補充した（０日目）ハムＦ１２培地中で増殖させたＡ５４９細胞を参考に使用した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
引用される全ての引用文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。特段の断りのない限り、本願において利用する技術は、分子クローニング：実験室マニュアル（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス）、遺伝子発現技術（酵素学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、１８５巻、Ｄ．Ｇｏｅｄｄｅｌ（編）、１９９１、アカデミックプレス社、カリフォルニア州サンディエゴ）、酵素学の方法の中の「タンパク質精製へのガイド（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」（Ｍ．Ｐ．Ｄｅｕｔｓｈｃｅｒ（編）、（１９９０）アカデミックプレス社）；ＰＣＲプロトコル：方法および応用へのガイド（Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）（Ｉｎｎｉｓら、１９９０．アカデミックプレス社、カリフォルニア州サンディエゴ）、動物細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ）：基本技術のマニュアル、第２版（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ．１９８７．Ｌｉｓｓ社、ニューヨーク州ニューヨーク）、遺伝子の導入および発現プロトコル（Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）、１０９〜１２８ページ、Ｅ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ（編）、Ｈｕｍａｎａプレス社、ニュージャージー州クリフトン）、およびＡｍｂｉｏｎ社の１９９８年のカタログ（Ａｍｂｉｏｎ、テキサス州オースティン）などのいくつかの周知の引用文献のいずれかに記載されている。
【００１４】
文脈が特に明確に指示しない限り、本明細書で使用する単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、複数の指示対象を含む。本明細書で使用する「および」は、特段の断りのない限り、「または」と互換的に使用される。
【００１５】
文脈が特に明確に指示しない限り、本発明の異なる態様および実施形態の間の全ての一般的な用語は、同じ意味を有する。
【００１６】
文脈が特に明確に指示しない限り、本発明の一態様について開示された実施形態は、同様に本発明の他の態様で使用することができ、本発明の他の態様で開示された実施形態と組み合わせて使用することもできる。
【００１７】
第１の態様において、本発明は、
（ａ）抗腫瘍剤、またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｂ）グッドパスチャー抗原結合タンパク質−１（ＧＰＢＰ−１）阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩と、
（ｃ）薬学的に許容可能な担体と、
を含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
本明細書で使用する用語「ＧＰＢＰ」は、ＣＯＬ４Ａ３ＢＰ遺伝子から発現した（ＧＰＢＰ−１、ＧＰＢＰ−２およびＧＰＢＰ−３由来のポリペプチドなどの）任意のポリペプチドアイソフォームを指す。本明細書で使用する用語「ＧＰＢＰ−１阻害剤」は、ＧＰＢＰ−１の発現もしくは（キナーゼ活性などの）活性を低下させる任意の化合物を意味し、他のＧＰＢＰアイソフォームの発現もしくは（キナーゼ活性などの）活性を低下させても、または低下させなくてもよい。ＧＰＢＰ−１は、ヒトＩＶ型コラーゲンα３鎖の非コラーゲン（ＮＣ１）ドメイン［α３（ＩＶ）ＮＣ１］に結合し、リン酸化する自己リン酸化活性を示す従来にないセリン／スレオニンキナーゼである（Ｒａｙａら、１９９９および２０００）。ＧＰＢＰ−１は巨大多量体集合体を形成し、その特定のキナーゼ活性は低分子量の凝集体のキナーゼ活性よりもはるかに高い（Ｒａｙａら、２０００）。
【００１９】
任意の適切なＧＰＢＰ阻害剤は、本発明の医薬組成物に使用され得る。好ましい一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ａ）：
【００２０】
【化５】
2015524385.tif 000006
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１は、水素もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルもしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、ＨもしくはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００２１】
式（Ａ）の化合物の好ましい一実施形態において、Ｒ１は水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、存在する場合、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００２２】
式（Ａ）の化合物の別の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２は、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、クロロ、メチル、またはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。
【００２３】
式（Ａ）の化合物の別の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２は、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。
【００２４】
様々なさらに好ましい実施形態において、Ｒ１は水素であり、かつ／またはＲ４はメチルである。さらに好ましい実施形態において、式（Ａ）の化合物は、
【００２５】
【化６】
2015524385.tif 000007
またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。最も好ましい実施形態において、本化合物は、
【００２６】
【化７】
2015524385.tif 000008
またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００２７】
発明者らは、本発明のＧＰＢＰ−１阻害剤が、腫瘍を治療するためのより有効な治療選択肢を提供するために、抗腫瘍剤と相乗的に作用することができ、式Ａの阻害剤が特に良好な活性を与えることを発見した。特定の作用機構に制約されるものではないが、両化合物が異なる方法でＧＰＢＰキナーゼを阻害するように作用し、ＧＰＢＰ−１阻害剤が、腫瘍中の癌幹細胞（ＣＳＣ）の生存率を低下させるので、発明者らは、一般式（Ａ）およびその実施形態のものなどのＧＰＢＰ−１阻害剤が、腫瘍の治療において（ドキソルビシンによって示される）抗腫瘍剤と相乗作用すると考えている。他の特性の中でも、ＣＳＣは、分裂が遅く、豊富な生体異物のトランスポーターを有するので、有糸分裂阻害剤によって死滅させられる可能性はないため、薬剤耐性に関与することが予想される。
【００２８】
別の好ましい実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｂ）：
【００２９】
【化８】
2015524385.tif 000009
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、もしくは−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００３０】
別の実施形態において、式ＢのＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｃ）
【００３１】
【化９】
2015524385.tif 000010
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００３２】
式（Ｂ）または（Ｃ）のＧＰＢＰ−１阻害剤の一実施形態において、ＲはＮおよびＣＲ３から選択され、Ｒ３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）からなる群から選択され、Ｒ１は水素、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、または−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。
【００３３】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式：
【００３４】
【化１０】
2015524385.tif 000011
を有する化合物である。
【００３５】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々な実施形態において、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。例えば、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、メチル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、フルオロメチル、ジフルオロメチル、ヒドロキシメチル、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であってよい。
【００３６】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、メチル、プロピル、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、または−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨであってよい。
【００３７】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ１は、水素またはメトキシであってよい。
【００３８】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ３は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、クロロ、メチル、またはトリフルオロメチルであってよい。式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の任意の実施形態の様々なさらなる実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、メチル、またはトリフルオロメチルであってよい。
【００３９】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物のさらなる実施形態において、Ｒ１は水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物のさらなる実施形態において、Ｒ１は水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、存在する場合、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００４０】
式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の別の実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２はヒドロキシメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、クロロ、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の別の実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２はヒドロキシメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。
【００４１】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｄ）：
【００４２】
【化１１】
2015524385.tif 000012
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００４３】
一実施形態において、式（Ｄ）の化合物は、式：
【００４４】
【化１２】
2015524385.tif 000013
の化合物である。
【００４５】
式（Ｄ）の化合物の任意の実施形態の一実施形態において、Ｒ１は水素である。式（Ｄ）の化合物の任意の実施形態の別の実施形態において、ＲはＣＲ３であり、Ｒ３はホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。別の実施形態において、Ｒ３は−ＣＯＨである。様々な実施形態において、Ｒ２は、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（ＯＥｔ）であってよい。様々なさらなる実施形態において、Ｒ４は、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、または−ＣＨ２−Ｐｈであってよい。好ましい実施形態において、式Ｄの化合物は、式：
【００４６】
【化１３】
2015524385.tif 000014
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００４７】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）：
【００４８】
【化１４】
2015524385.tif 000015
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【００４９】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（ＩＩ）：
【００５０】
【化１５】
2015524385.tif 000016
の化合物である。
【００５１】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）：
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、および−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、もしくは−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である）
の化合物である。
【００５２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）：
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、もしくはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−Ｏ（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である）
の化合物である。
【００５３】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物であり、式中、ＲはＮである。これらの化合物は、式（ＩＩＩ）：
【００５４】
【化１６】
2015524385.tif 000017
で表すことができる。
【００５５】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物であり、式中、ＲはＣＨ５である。これらの化合物は、式（ＩＶ）：
【００５６】
【化１７】
2015524385.tif 000018
で表すことができる。
【００５７】
一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ１は、水素、ヒドロキシ、またはＣ１−Ｃ６アルコキシである。一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ１は水素である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはスルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）である。
【００５８】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であってよい。例えば、特定の実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、またはイソプロピルなどのＣ１−Ｃ６アルキルであってよい。他の実施形態において、Ｒ２は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、またはトリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であってよい。特定の実施形態において、Ｒ２は、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であってよい。例えば、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）は、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、または２−ヒドロキシエチルであってよい。
【００５９】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ２はメチルである。別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。
【００６０】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。例えば、特定の実施形態において、Ｒ３は、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣＨ３）、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）、または（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣ（ＣＨ３）３）であってよい。他の実施形態において、Ｒ３は、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）であってよい。
【００６１】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ３は−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。一実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ４は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、またはベンジルオキシである。別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ４は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシ（例えば、メトキシ）である。好ましくは、Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルコキシである。より好ましい実施形態において、Ｒ４はメトキシである。
【００６２】
一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）に関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）に関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ５は、メチルなどのＣ１−Ｃ６アルキルである。さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）に関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ５は、トリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。
【００６３】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、式中、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）チオ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、またはベンジルオキシである。
【００６４】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（ＩＩＩ）のいずれかの化合物であり、式中、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）チオ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、またはベンジルオキシである。
【００６５】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、式中、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｒ４は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００６６】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（ＩＩＩ）のいずれかの化合物であり、式中、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、またはホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｒ４は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００６７】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、式中、
Ｒは、存在する場合、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は−（ＣＨ２）１−２−Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルコキシである。
【００６８】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかの化合物であり、式中、
Ｒは、存在する場合、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２はメチルであり、
Ｒ３は−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
Ｒ４はメトキシである。
【００６９】
一実施形態において、式（Ｖ）の化合物は式（ＶＩ）：
【００７０】
【化１８】
2015524385.tif 000019
の化合物である。
【００７１】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）または式（ＶＩ）の化合物であり、式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、および−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００７２】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）または式（ＶＩ）の化合物であり、式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ５から選択され、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００７３】
一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ１は水素である。
【００７４】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００７５】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００７６】
さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であってよい。例えば、特定の実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、またはイソプロピルなどのＣ１−Ｃ６アルキルであってよい。他の実施形態において、Ｒ２は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、またはトリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であってよい。特定の実施形態において、Ｒ２は、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であってよい。例えば、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）は、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、または２−ヒドロキシエチルであってよい。
【００７７】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ２はメチルである。
【００７８】
一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００７９】
別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ６は、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシ（例えば、メトキシ）である。一実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ５は、メチルなどのＣ１−Ｃ６アルキルである。さらに別の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかに関連する上記の化合物であり、式中、Ｒ５は、トリフルオロメチルなどのハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。
【００８０】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかの化合物であり、式中、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびアミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）からなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）チオ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３である。
【００８１】
特定の実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、式（Ｖ）〜（ＶＩ）のいずれかの化合物であり、式中、
Ｒ１は水素であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ホルミル（Ｃ０−Ｃ６アルキル）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ６は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、または−ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３であり、
Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、またはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）である。
【００８２】
様々なさらなる実施形態において、ＧＰＢＰ−１阻害剤は、
（ａ）ＧＰＢＰ−１に対して選択的な抗体またはアプタマー、
（ｃ）ＧＰＢＰのｍＲＮＡに対して選択的な阻害性核酸、
（ｄ）一般式Ｘ１−ＳＨＣＩＸ２−Ｘ３（配列番号１）
（式中、
Ｘ１は配列ＡＴＴＡＧＩＬＡＴＬ（配列番号２）の０〜１０個のアミノ酸であり、
Ｘ２はＥまたはＱであり、
Ｘ２は、配列ＬＭＶＫＲＥＤＳＷＱ（配列番号３）の０〜１０個のアミノ酸である）
のアミノ酸配列を含むペプチド、
（ｇ）ＳＨＣＩＥ（配列番号４）、ＳＨＣＩＱ（配列番号５）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号６）、ＩＬＡＴＬＳＨＣＩＱＬＭＶＫＲ（配列番号７）、およびＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、
（ｈ）Ｉ−２０：ＲＤＥＶＩＧＩＬＫＡＥＫＭＤＬＡＬＬＥＡＱＹＧＦＶＴＰＫＫＶＬＥＡＬＱＲＤＡＦＱＡＫＳＴＰＷＱＥＤＩＹＥＫＰＭＮＥＬＤＫＶＶＥＫＨＫＥＳＹＲＲＩＬＧＱＬＬＶＡＥＫＳＨＲＱＴＩＬＥＬＥＥＥＫＲＫＨＫＥＹＭＥＫＳＤＥＦＩＣＬＬＥＱＥＣＥＲＬＫＫＬＩＤＱＥＩＫＳＱＥＥＫＥＱＥＫＥＫＲＶＴＴＬＫＥＥＬＴＫＬＫＳＦＡＬＭＶＶＤＥＱＱＲＬＴＡＱＬＴＬＱＲＱＫＩＱＥＬＴＴＮＡＫＥＴＨＴＫＬＡＬＡＥＡＲＶＱＥＥＥＱＫＡＴＲＬＥＫＥＬＱＴＱＴＴＫＦＨＱＤＱＤＴＩＭＡＫＬＴＮＥＤＳＱＮＲＱＬＱＱＫＬＡＡＬＳＲＱＩＤＥＬＥＥＴＮＲＳＬＲＫＡＥＥＥ（配列番号９）
からなる群から選択される１以上の阻害剤を含む。
【００８３】
上記のポリペプチド配列は当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第７３２６７６８号、同第７９３５４９２号、同第６５７９９６９号、および同第７１４７８５５号を参照されたい。
【００８４】
本明細書に開示される他のＧＰＢＰ−１阻害剤の合成は、国際公開第２０１１／０５４５３０号の教示に基づいて当業者が行うことができる。
【００８５】
以下の実施例は、ＧＰＢＰ−１キナーゼ活性を阻害する例示的な抗腫瘍剤としてのドキソルビシンに焦点を当てているが、全ての腫瘍がＣＳＣのポピュレーションを有し、本発明のＧＰＢＰ−１阻害剤はＣＳＣの生存率を低下させるので、任意の適切な抗腫瘍剤を使用することができる。したがって、任意の抗腫瘍剤と本発明のＧＰＢＰ−１阻害剤の組み合わせは、改善された治療用生成物を提供する可能性がある。
【００８６】
したがって、アントラサイクリン、アルキル化剤（例えば、マイトマイシンＣ）、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗剤、葉酸類似体（例えば、メトトレキサートなどのジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤）、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有剤、インターフェロンおよびインターロイキンが挙げられるが、これらに限定されない任意の適切な抗腫瘍剤を、本発明の医薬組成物に使用することができる。癌が耐性を発達させ得る既知の化学療法剤の特定の例としては、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾデパ、カルボコン、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、トリメチロールメラミン、クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｉｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール（ｍｎｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｉ）、ミトラクトール、ピポブロマン、アクラシノマイシン、アクチノマイシンＦ（１）、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、６−ジアゾ−５−オキソ−１−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、フルオロウラシル、テガフール、Ｌ−アスパラギナーゼ、パルモザイム、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、カルボプラチン、シスプラチン、デホファミド、デメコルチン、ジアジクオン、エルホルニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、エトポシド、フルタミド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、レンチナン、ロニダミン、プレドニゾン、デキサメタゾン、ロイコボリン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、パクリタキセル、タモキシフェン、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
好ましい実施形態において、抗腫瘍剤は、パクリタキセル、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびシスプラチンからなる群から選択される。好ましい実施形態において、抗腫瘍剤は、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤である。別の好ましい実施形態において、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤は、アントラサイクリンまたはポドフィロトキシン誘導体を含む。最も好ましい実施形態において、アントラサイクリン薬はドキソルビシンであり、ポドフィロトキシン誘導体はエトポシドである。
【００８８】
発明者らは、さらに、抗腫瘍剤とのＧＰＢＰ−１阻害剤の相乗効果が、場合によっては、ＤＮＡ損傷に応答して細胞周期の停止を促進するサイクリン依存性キナーゼ阻害剤のｐ２１によって低減され得ることを発見した。したがって、本発明の組成物のいずれかの別の実施形態において、本組成物はさらにｐ２１阻害剤を含んでもよい。ｐ２１抗体、ｐ２１のｓｉＲＮＡ、ｐ２１のｓｈＲＮＡ、およびｐ２１アンチセンス化合物が挙げられるが、これらに限定されない任意の適切なｐ２１阻害剤を使用することができる。
【００８９】
本明細書に開示するように、発明者らは、ＡＴＰ−結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）がＴ１２との相乗作用により腫瘍細胞の生存率を低下させ、このＡＢＣメンバーが、ＣＳＣコンパートメントで本発明のＧＰＢＰ阻害剤の排除を媒介する生体異物のトランスポーターとして作用する可能性を高めることを発見した。したがって、ＡＢＣＣ７発現および／または活性の阻害剤は、腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるために使用することができる。したがって、本発明の組成物のいずれかの別の実施形態において、本組成物はさらに、ＡＴＰ−結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）の阻害剤を含んでもよい。ＡＢＣＣ７抗体、ＡＢＣＣ７のｓｉＲＮＡ、ＡＢＣＣ７のｓｈＲＮＡ、ＡＢＣＣ７アンチセンス化合物および３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２、カルビオケム、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド−［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロ−ヘキシルウレア（グリベンクラミド、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０１、カルビオケム、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）もしくはそれらの薬学的に許容可能な塩を含むがこれらに限定されないＡＢＣＣ７発現阻害剤を含むがこれらに限定されない任意の適切なＡＢＣＣ７阻害剤を使用することができる。
【００９０】
本医薬組成物中の化合物は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、およびアレルギー反応などを伴わずに患者の組織と接触して使用するのに適し、妥当な利益／リスク比に相応し、かつそれらの意図される使用に有効であり、可能であれば、本発明の化合物の双性イオン形態である本発明の化合物のカルボキシレート塩、アミノ酸付加塩、エステル、アミド、およびプロドラッグが挙げられるが、これらに限定されない、その薬学的に許容可能な塩、エステル、アミド、およびプロドラッグを含む。「塩」という用語は、本発明の化合物の比較的非毒性の無機および有機酸付加塩を指す。これらの塩は、化合物の最終単離および精製の間にその場で調製することができるか、またはその遊離塩基形態の精製化合物と適切な有機酸もしくは無機酸とを別々に反応させ、形成された塩を単離することによって調製することができる。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。これらには、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ金属およびアルカリ土類金属、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、およびエチルアミンなどを含むがこれらに限定されない非毒性アンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオン、およびアミンカチオンに基づくカチオンが含まれ得る（例えば、参照により本明細書に援用されるＢｅｒｇｅ Ｓ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７；６６：１−１９を参照されたい）。
【００９１】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な非毒性エステルの例としては、アルキル基が、直鎖状または分枝状の、置換または非置換のＣ５−Ｃ７シクロアルキルエステル、ならびにベンジルおよびトリフェニルメチルなどのアリールアルキルエステルであるＣ１−Ｃ６アルキルエステルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ４アルキルエステルは、メチル、エチル、２，２，２−トリクロロエチル、およびｔｅｒｔ−ブチルなどが好ましい。本発明の化合物のエステルは、従来の方法にしたがって調製することができる。
【００９２】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な非毒性アミドの例としては、アンモニア、アルキル基が直鎖状または分岐状である１級Ｃ１−Ｃ６アルキルアミンおよび２級Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミンから誘導されたアミドが挙げられる。２級アミンの場合には、アミンは、１個の窒素原子を含む５員または６員の複素環の形態であってもよい。アンモニア、１級Ｃ１−Ｃ３アルキルアミンおよび２級Ｃ１−Ｃ２ジアルキルアミンから誘導されたアミドが好ましい。本発明の化合物のアミドは従来の方法にしたがって調製することができる。
【００９３】
「プロドラッグ」という用語は、例えば、血液中での加水分解によって、上記の式の親化合物を生成するために、急速にインビボで変換される化合物を指す。プロドラッグの完全な議論は、両方とも参照により本明細書に援用されるＡＣＳシンポジウムシリーズの１４巻、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「新規デリバリーシステムとしてのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、ならびに米国薬剤師会およびペルガモンプレス、１９８７、Ｅｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ（編）、ドラッグデザインにおける生体可逆性担体（Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ）に提供されている。一実施形態において、本開示は、式（Ｉ）〜（ＶＩ）のいずれか１つに関連する上記の化合物および少なくとも１種類の薬学的に許容可能な担体、溶媒、アジュバントまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００９４】
投与の場合には、本組成物は通常、指示された投与経路に適する１種以上のアジュバントと組み合わされる。本組成物は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩、リン酸および硫酸のカルシウム塩、アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／もしくはポリビニルアルコール、ならびに従来の投与のために錠剤化またはカプセル化されたものと混合することができる。あるいは、本発明の組成物は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、トラガカントゴムおよび／または様々な緩衝液中に提供されてもよい。他のアジュバントおよび投与様式は、製薬技術分野で周知である。担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を、単独でまたは当技術分野で周知のワックス、もしくは他の材料と共に含んでもよい。
【００９５】
本組成物は、（顆粒、粉末または坐剤を含む）固体形態または液体形態（例えば、溶液、懸濁液、またはエマルジョン）で構成されてもよい。本発明の化合物は、様々な溶液に適用されてもよいし、滅菌などの従来の製薬操作が行われてもよく、かつ／または防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤などの従来のアジュバントを含んでいてもよい。
【００９６】
本発明の組成物は、従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体、アジュバントおよびビヒクルを含む投与単位製剤で経口投与、局所投与、非経口投与、吸入もしくはスプレーによる投与、または直腸投与することができる。本明細書で使用する非経口という用語は、経皮、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内、もしくは髄腔内への注射または注入技術などを含む。さらに、本発明の化合物および薬学的に許容可能な担体を含む医薬製剤が提供される。本組成物は、１以上の非毒性の薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／またはアジュバント、ならびに必要であれば他の活性成分を含む。本発明の化合物を含む医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、水性もしくは油性の懸濁剤、分散性粉末もしくは顆粒、エマルジョン、硬もしくは軟カプセル、シロップまたはエリキシル剤などの経口使用に適する形態であってもよい。
【００９７】
経口使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造のための当技術分野で公知の任意の方法にしたがって調製することができ、そのような組成物は、口当たりの良い製剤を提供するために甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１種以上の薬剤を含んでもよい。錠剤は、錠剤の製造に適する非毒性の薬学的に許容可能な賦形剤と混合された活性成分を含む。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア、ならびに潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってよい。錠剤は、コーティングされなくてもよいし、公知の技術によってコーティングされてもよい。場合によって、そのようなコーティングは、胃腸管内での崩壊および吸収を遅らせ、長時間にわたる持続作用を提供するために、既知の技術によって調製することができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を用いることができる。
【００９８】
経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセル、または活性成分が水もしくは油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセルとして提供されてもよい。水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適する賦形剤と混合された活性物質を含む。このような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアであり；分散剤または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、脂肪酸およびポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなどのヘキシトールから誘導された部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、または脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってよい。水性懸濁液は、１種以上の保存剤、例えば、エチル、またはｎ−プロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１種以上の着色剤、１種以上の香味剤、およびスクロースまたはサッカリンなどの１種以上の甘味剤を含んでもよい。
【００９９】
油性懸濁液は、植物油、例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油、または流動パラフィンなどの鉱油中に活性成分を懸濁することによって製剤化することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えば、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含んでもよい。甘味剤および香味剤は、口当たりの良い経口製剤を提供するために添加することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって保存することができる。
【０１００】
水の添加による水性懸濁液の調製に適する分散性粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１種以上の保存剤と混合された活性成分を提供する。適切な分散剤もしくは湿潤剤または懸濁剤は、既に上述したものによって例示される。追加の賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤および着色剤も存在してもよい。
【０１０１】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、植物油もしくは鉱油またはこれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤は、天然に存在するゴム、例えば、アラビアゴムまたはトラガカントゴム、天然に存在するホスファチド、例えば、大豆、レシチン、ならびに脂肪酸およびヘキシトールから誘導されたエステル類または部分エステル類、無水物、例えば、ソルビタンモノオレエート、エチレンオキシド、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートと前記部分エステルの縮合生成物であってよい。エマルジョンは、甘味剤および香味剤を含んでもよい。
【０１０２】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、グルコースまたはショ糖を用いて製剤化することができる。このような製剤は、粘滑剤、保存剤、香味剤および着色剤を含んでもよい。医薬組成物は、滅菌注射用の水性または油性懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、上記の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、公知の技術にしたがって製剤化することができる。無菌の注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液であってもよい。使用可能な許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の固定油は、溶媒または懸濁媒体として従来法で使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意のブランドの不揮発性油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製に使用される。
【０１０３】
本発明の医薬組成物は、例えば、薬物の直腸投与のために、坐剤の形態で調製することもできる。これらの組成物は、常温で固体であるが、直腸温度で液体である適切な非刺激性の賦形剤と薬物を混合することによって調製することができ、したがって、薬物を放出するために直腸内で融解する。このような材料には、ココアバターおよびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１０４】
本発明の医薬組成物は、滅菌媒体中で非経口的に投与することができる。使用されるビヒクルおよび濃度に依存して、薬物をビヒクル中に懸濁または溶解することができる。都合のよいことに、局所麻酔薬、保存剤および緩衝剤などのアジュバントをビヒクル中に溶解することができる。
【０１０５】
第２の態様において、本発明は、腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の
（ｉ）抗腫瘍剤、および（ｉｉ）式（Ａ）：
【０１０６】
【化１９】
2015524385.tif 000020
（式中、
ＲはＮまたはＣＲ３から選択され、Ｒ１は水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、Ｒ４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。
【０１０７】
上述したように、発明者らは、本発明のＧＰＢＰ−１阻害剤が、腫瘍を治療するためのより有効な治療選択肢を提供するために、抗腫瘍剤と相乗的に作用することができることを発見した。特定の作用機構に制約されるものではないが、両化合物が、異なる方法でＧＰＢＰキナーゼを阻害するように作用し、ＧＰＢＰ−１阻害剤が腫瘍中のＣＳＣの生存率を低下させるので、発明者らは、一般式（Ａ）およびその実施形態のものなどのＧＰＢＰ−１阻害剤が、腫瘍を治療する際に（ドキソルビシンによって例示される）抗腫瘍剤と相乗作用すると考えている。他の特性の中でも、ＣＳＣは、分裂が遅く、豊富な生体異物のトランスポーターを有するので、抗有糸分裂薬によって死滅させられる可能性が低いので、薬剤耐性に関与すると考えられている。
【０１０８】
式（Ａ）の化合物の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２は、メチル、フルオロメチルまたはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、クロロ、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。式（Ａ）の化合物の別の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２は、メチル、フルオロメチルまたはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４はＨまたはメチルである。
【０１０９】
様々なさらなる好ましい実施形態において、Ｒ１は水素であり、かつ／またはＲ４はメチルである。さらに好ましい実施形態において、式（Ａ）の化合物は、
【０１１０】
【化２０】
2015524385.tif 000021
またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。最も好ましい実施形態において、本化合物は、
【０１１１】
【化２１】
2015524385.tif 000022
またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１１２】
この第２の態様の別の実施形態において、本方法は、一般式（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｉ〜ＶＩ）の化合物の任意の実施形態または実施形態の組み合わせを含む本明細書に開示される任意の実施形態または実施形態の組み合わせに従って、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の（ｉ）抗腫瘍剤、および（ｉｉ）ＧＰＢＰ−１阻害剤を投与することを含む。
【０１１３】
アントラサイクリン、アルキル化剤（例えば、マイトマイシンＣ）、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗剤、葉酸類似体（例えば、メトトレキサートなどのジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤）、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有剤、インターフェロンおよびインターロイキンが挙げられるが、これらに限定されない任意の適切な抗腫瘍剤を、本発明の方法に使用することができる。癌が耐性を発達させ得る既知の化学療法剤の特定の例としては、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾデパ、カルボコン、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、トリメチロールメラミン、クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｉｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール（ｍｎｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｉ）、ミトラクトール、ピポブロマン、アクラシノマイシン、アクチノマイシンＦ（１）、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、６−ジアゾ−５−オキソ−１−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、フルオロウラシル、テガフール、Ｌ−アスパラギナーゼ、パルモザイム、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、カルボプラチン、シスプラチン、デホファミド、デメコルチン、ジアジクオン、エルホルニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、エトポシド、フルタミド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、レンチナン、ロニダミン、プレドニゾン、デキサメタゾン、ロイコボリン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、パクリタキセル、タモキシフェン、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１４】
好ましい実施形態において、抗腫瘍剤は、パクリタキセル、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびシスプラチンからなる群から選択される。好ましい実施形態において、抗腫瘍剤はトポイソメラーゼＩＩ阻害剤である。別の好ましい実施形態において、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤は、アントラサイクリンまたはポドフィロトキシン誘導体を含む。最も好ましい実施形態において、アントラサイクリン薬はドキソルビシンであり、ポドフィロトキシン誘導体はエトポシドである。
【０１１５】
特定の作用機構に制約されるものではないが、発明者らは、全ての腫瘍が、本発明のＧＰＢＰ−１阻害剤の治療効果および方法の恩恵を受けると考えている。好ましい実施形態において、腫瘍は、化学療法剤に応答して、ＧＰＢＰの著しい発現を示し、かつ／またはＧＰＢＰ発現を増加させる。したがって、好ましい実施形態において、腫瘍はＧＰＢＰを発現する（すなわち、「ＧＰＢＰを発現する腫瘍」）。このような「発現」は、（ＧＰＢＰを発現しないことが知られている腫瘍の参照細胞などの）対照細胞と比較して増加した任意の発現量であってよい。さらに好ましい実施形態において、腫瘍は、化学療法剤に応答してＧＰＢＰを過剰発現する。このような「過剰発現」は、（化学療法剤に応答して、ＧＰＢＰを過剰発現しないことが知られている腫瘍の参照細胞などの）対照細胞と比較した任意の量、例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％、７５％、１００％、またはそれ以上の過剰発現であってよい。ＧＰＢＰタンパク質発現は、任意の適切な技術によって決定することができる。循環しているＧＰＢＰレベルを決定するための方法は当技術分野で公知である（米国特許第７９３５４９２号参照）。
【０１１６】
本発明の方法のこれらの実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、本方法は、さらに、腫瘍におけるｐ２１の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のｐ２１阻害剤を対象に投与することを含み得る。ｐ２１の発現を下方制御する化合物、ｐ２１抗体、ｐ２１のｓｉＲＮＡ、ｐ２１のｓｈＲＮＡ、およびｐ２１アンチセンス化合物を含むがこれらに限定されないｐ２１の任意の適切な阻害剤を使用することができる。２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン−４−イル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（フラボピリドール）、（１Ｒ、２Ｒ、４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ、９Ｓ、１２Ｓ、１５Ｒ、１６Ｅ、１８Ｒ、１９Ｒ、２１Ｒ、２３Ｓ、２４Ｅ、２６Ｅ、２８Ｅ、３０Ｓ、３２Ｓ、３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０＾｛４，９｝］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート（テムシロリムス）、（３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ、７Ｒ、９Ｒ、１１Ｓ、１２Ｒ、１３Ｓ、１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ、３Ｒ、４Ｓ、６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ、４Ｒ、５Ｓ、６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１０−（２，４，７−トリオキサ−１−アザオクタン−１−イリデン）−１−オキサシクロテトラデカン−２−オン（ロキシスロマイシン）、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メタノン塩酸塩（塩酸ラロキシフェン）、（７Ｓ，９Ｅ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ，１６Ｒ，１７Ｓ，１８Ｓ，１９Ｅ，２１Ｚ）−２，１５，１７，２７，２９−ペンタヒドロキシ−１１−メトキシ−３，７，１２，１４，１６，１８，２２−ヘプタメチル−２６−｛（Ｅ）−［（４−メチルピペラジン−１−イル）イミノ］メチル｝−６，２３−ジオキソ−８，３０−ジオキサ−２４−アザテトラシクロ［２３．３．１．１４，７．０５，２８］トリアコンタ−１（２８），２，４，９，１９，２１，２５（２９），２６−オクタエン−１３−イルアセテート（リファンピシン）、［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−アセチル−６，１０，１３−トリメチル−３−オキソ−２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］アセテート（酢酸メゲストロール）、８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）−６−メトキシキノリンニリン酸塩（プリマキン二リン酸）、カリウム；［２−ブチル−５−クロロ−３−［［４−［２−（１，２，３−トリアザ−４−アザニダシクロペンタ（ａｚａｎｉｄａｃｙｃｌｏｐｅｎｔａ）−２，５−ジエン−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］イミダゾール−４−イル］メタノール（ロサルタンカリウム）、（２Ｓ）−３−メチル−２−［ペンタノイル−［［４−［２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］アミノ］ブタン酸（バルサルタン）、（Ｚ）−ブト−２−エン−二酸；２−（２，２−ジシクロヘキシルエチル）ピペリジン（ペルヘキシリンマレイン酸塩）、３−Ｏ−メチル−５−Ｏ−（２−メチルプロピル）−２，６−ジメチル−４−（２−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニソルジピン）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩を含むがこれらに限定されないｐ２１発現の任意の適切な阻害剤を使用することができる。このような化合物は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、およびＭｅｒｃｋ社などのいくつかの商業的供給源から利用可能である。
【０１１７】
本発明の方法のこれらの実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、本方法は、さらに、腫瘍内のＡＢＣＣ７の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＡＴＰ−結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）阻害剤を対象に投与することを含み得る。ＡＢＣＣ７抗体、ＡＢＣＣ７のＳｉＲＮＡ、ＡＢＣＣ７のｓｈＲＮＡ、ＡＢＣＣ７アンチセンス化合物および３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロヘキシルウレア（グリベンクラミド）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０）、またはその薬学的に許容可能な塩を含むがこれらに限定されないＡＢＣＣ７発現阻害剤を含むがこれらに限定されないＡＢＣＣ７の発現ならびに／または活性の任意の適切な阻害剤を用いることができる。
【０１１８】
本発明の方法のさらなる実施形態において、本方法は、本発明の任意の実施形態または実施形態の組み合わせに記載の医薬組成物で対象を治療することを含んでもよい。
【０１１９】
本明細書で使用する「治療する」または「治療すること」とは、以下の（ａ）腫瘍サイズの減少、（ｂ）腫瘍増殖の減少、（ｃ）転移の進行および／もしくは伝播の抑制または制限；（ｄ）治療を受ける対象の治療目標を維持するのに必要な抗腫瘍剤の量の減少、ならびに（ｅ）腫瘍内のＣＳＣの枯渇のうちの１以上を達成することを意味する。
【０１２０】
したがって、一実施形態において、腫瘍の治療は、腫瘍内のＣＳＣの枯渇を含む。発明者らは、ＧＰＢＰ−１阻害剤が、腫瘍内のＣＳＣの生存率を低下させることができることを発見した。他の特性の中でも、ＣＳＣは、分裂が遅く、豊富な生体異物のトランスポーターを有するので、抗有糸分裂薬によって死滅させられる可能性が低いため、薬剤耐性に関与すると考えられている。
【０１２１】
別の実施形態において、腫瘍を治療することは、腫瘍の転移を減少させることを含む。腫瘍細胞転移の「阻害」は、治療をしない場合と比較した任意の量の阻害を含み得る。非限定的な様々な実施形態において、本方法は、腫瘍細胞転移を（未治療などの）対照と比較して５％、１０％、２５％、５０％、１００％、またはそれ以上阻害することを含み得る。
【０１２２】
異なる活性化合物は、同じ時間または異なる時間に与えられる別々の組成物として製剤化することができるか、または治療剤は、本発明の医薬組成物などの中の単一組成物として与えることができる。
【０１２３】
抗腫瘍剤および化合物の適切な投与量レベルは、本明細書の教示だけでなく他の臨床的要因に照らして当業者が決定することができる。１日当たり体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ、より好ましくは、１日当たり体重１キログラム当たり０．１ｍｇ〜約５０ｍｇのオーダーの例示的な投与量レベルが、一般的に上記の病状の治療に有用である。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される対象および特定の投与様式に依存して変化する。投与単位形態は、一般的に、有効成分を約１ｍｇ〜約５００ｍｇ含む。
【０１２４】
本明細書に記載の化合物または本化合物を含む医薬組成物は、それを必要とする個体に投与される。好ましい実施形態において、対象は哺乳動物である。より好ましい実施形態において、対象はヒトである。治療用途においては、組成物は、本発明の方法を実施するのに十分な量で投与される。これらの用途に有効な量は、化合物の性質（比活性など）、投与経路、障害の段階および重症度、対象の体重および一般的な健康状態が挙げられるが、これらに限定されない要因、ならびに処方医師の判断に依存する。活性化合物は、広い用量範囲にわたって有効である。しかし、実際に投与される化合物の量は、上記の関連する状況に照らして医師によって決定されることが理解されるであろう。したがって、上記の投与量範囲は、決して本発明の範囲を限定するものではない。
【０１２５】
本方法を用いて、肺腺癌、肺扁平上皮癌、子宮頸癌、結腸癌および乳腺癌を含むがこれらに限定されない任意の適切な腫瘍を有する対象を治療することができる。好ましい実施形態において、腫瘍は、化学療法抵抗性の腫瘍ではない。さらに好ましい実施形態において、腫瘍は、化学療法剤に応答して、著しい量のＧＰＢＰを発現し、かつ／またはＧＰＢＰ発現を増加させる。したがって、好ましい実施形態において、腫瘍はＧＰＢＰを発現する（すなわち、「ＧＰＢＰを発現する腫瘍」）。このような「発現」は、（ＧＰＢＰを発現しないことが知られている腫瘍の参照細胞などの）対照細胞と比較して増加した任意の量の発現であってよい。さらに好ましい実施形態において、腫瘍は、化学療法剤に応答してＧＰＢＰを過剰発現する。このような「過剰発現」は、（化学療法剤に応答して、ＧＰＢＰを過剰発現しないことが知られている腫瘍細胞などの）対照細胞と比較した任意の量、例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％、７５％、１００％、またはそれ以上の過剰発現であってよい。
【０１２６】
第３の態様において、本発明は、式（Ｄ）：
【０１２７】
【化２２】
2015524385.tif 000023
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、（アリール）Ｃ２−Ｃ６アルキル、および（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、もしくは（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）Ｃ１−Ｃ６アルキル、ホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、アミノ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スルファニル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−（ＣＨ２）１−５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、もしくは−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、もしくは（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０１２８】
本発明のこの態様による化合物は、腫瘍を治療するのにより有効な治療選択肢を提供するために、抗腫瘍剤と相乗的に作用することができ、したがって、本明細書に開示されるように、本発明の医薬組成物および方法に使用することができる。
【０１２９】
一実施形態において、式（Ｄ）の化合物は、式：
【０１３０】
【化２３】
2015524385.tif 000024
の化合物である。
【０１３１】
式（Ｄ）の化合物の任意の実施形態の一実施形態において、Ｒ１は水素である。式（Ｄ）の化合物の任意の実施形態の別の実施形態において、ＲはＣＲ３であり、Ｒ３はホルミル（Ｃ１−Ｃ６アルキル）である。別の実施形態において、Ｒ３は−ＣＯＨである。様々な実施形態において、Ｒ２は、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルコキシ）、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）（ＯＥｔ）であってよい。様々なさらなる実施形態において、Ｒ４は、（アリール）Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは−ＣＨ２−Ｐｈであってよい。好ましい実施形態において、式Ｄの化合物は、式：
【０１３２】
【化２４】
2015524385.tif 000025
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１３３】
第４の態様において、本発明は、腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるための方法であって、化学療法剤で治療される腫瘍を有する対象に、腫瘍におけるｐ２１の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のｐ２１阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。本明細書に開示するように、発明者らは、ｐ２１発現の下方制御がＴ１２およびドキソルビシンとの相乗作用により、腫瘍細胞の生存率を低下させることを発見した。したがって、ｐ２１の発現および／または活性の阻害剤は、腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるために使用することができる。２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチルピペリジン−４−イル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（フラボピリドール）、（１Ｒ、２Ｒ、４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ、９Ｓ、１２Ｓ、１５Ｒ、１６Ｅ、１８Ｒ、１９Ｒ、２１Ｒ、２３Ｓ、２４Ｅ、２６Ｅ、２８Ｅ、３０Ｓ、３２Ｓ、３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０＾｛４，９｝］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシル−３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート（テムシロリムス）、（３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ、７Ｒ、９Ｒ、１１Ｓ、１２Ｒ、１３Ｓ、１４Ｒ）−６−｛［（２Ｓ、３Ｒ、４Ｓ、６Ｒ）−４−（ジメチルアミノ）−３−ヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１４−エチル−７，１２，１３−トリヒドロキシ−４−｛［（２Ｒ、４Ｒ、５Ｓ、６Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチルオキサン−２−イル］オキシ｝−３，５，７，９，１１，１３−ヘキサメチル−１０−（２，４，７−トリオキサ−１−アザオクタン−１−イリデン）−１−オキサシクロテトラデカン−２−オン（ロキシスロマイシン）、６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル］［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メタノン塩酸塩（塩酸ラロキシフェン）、（７Ｓ，９Ｅ，１１Ｓ，１２Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ，１６Ｒ，１７Ｓ，１８Ｓ，１９Ｅ，２１Ｚ）−２，１５，１７，２７，２９−ペンタヒドロキシ−１１−メトキシ−３，７，１２，１４，１６，１８，２２−ヘプタメチル−２６−｛（Ｅ）−［（４−メチルピペラジン−１−イル）イミノ］メチル｝−６，２３−ジオキソ−８，３０−ジオキサ−２４−アザテトラシクロ［２３．３．１．１４，７．０５，２８］トリアコンタ−１（２８），２，４，９，１９，２１，２５（２９），２６−オクタエン−１３−イルアセテート（リファンピシン）、［（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−アセチル−６，１０，１３−トリメチル−３−オキソ−２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］アセテート（酢酸メゲストロール）、８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）−６−メトキシキノリンニリン酸塩（プリマキン二リン酸）、カリウム；［２−ブチル−５−クロロ−３−［［４−［２−（１，２，３−トリアザ−４−アザニダシクロペンタ−２，５−ジエン−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］イミダゾール−４−イル］メタノール（ロサルタンカリウム）、（２Ｓ）−３−メチル−２−［ペンタノイル−［［４−［２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］フェニル］メチル］アミノ］ブタン酸（バルサルタン）、（Ｚ）−ブト−２−エン−二酸；２−（２，２−ジシクロヘキシルエチル）ピペリジン（ペルヘキシリンマレイン酸塩）、３−Ｏ−メチル−５−Ｏ−（２−メチルプロピル）−２，６−ジメチル−４−（２−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニソルジピン）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩を含むがこれらに限定されない任意の適切なｐ２１阻害剤を本発明の方法に使用することができる。
【０１３４】
第５の態様において、本発明は、腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるための方法であって、化学療法剤で治療される腫瘍を有する対象に、腫瘍内のＡＢＣＣ７の発現および／または活性を阻害するのに有効な量のＡＴＰ−結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。本明細書に開示するように、発明者らは、ＡＴＰ−結合カセットトランスポーター７（ＡＢＣＣ７）が、Ｔ１２との相乗作用により、腫瘍細胞の生存率を低下させ、このＡＢＣメンバーが、ＣＳＣコンパートメントで本発明のＧＰＢＰ阻害剤の排除を媒介する生体異物のトランスポーターとして作用する可能性を高めることを発見した。したがって、ＡＢＣＣ７の発現および／または活性の阻害剤は、腫瘍の化学療法抵抗性を減少させるために使用することができる。ＡＢＣＣ７抗体、ＡＢＣＣ７のｓｉＲＮＡ、ＡＢＣＣ７のｓｈＲＮＡ、ＡＢＣＣ７アンチセンス化合物および３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（４−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン（１７２）、７，９−ジメチル−１１−フェニル−６−（５−メチルフラン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−ピリミド−［４’，５’−３，４］ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−８，１０−（７Ｈ，９Ｈ）−ジオン（ＰＰＱ−１０２）、１−［（２，４−ジクロロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（ロニダミン）、トランス−Ｎ−［６−シアノ−３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−イル］−Ｎ−メチル−エタンスルホンアミド（クロマノール２９３Ｂ）、１−［［ｐ−［２−（５−クロロ−ｏ−アニサミド）エチル］フェニル］スルホニル］−３−シクロ−ヘキシルウレア（グリベンクラミド）、およびＮ−（２−ナフタレニル）−（（３，５−ジブロモ−２，４−ジヒドロキシフェニル）メチレン）グリシンヒドラジド（ＧｌｙＨ−１０）またはそれらの薬学的に許容可能な塩を含むがこれらに限定されないＡＢＣＣ７発現阻害剤を含むがこれらに限定されない任意の適切なＡＢＣＣ７阻害剤を本発明の方法に使用することができる。
【０１３５】
さらなる態様において、本発明は、腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍を有する対象に、腫瘍を治療するのに有効な量の式：
【０１３６】
【化２５】
2015524385.tif 000026
（式中、
Ｒは、ＮおよびＣＲ３から選択され、
Ｒ１は、水素またはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ３は、存在する場合、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはハロ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ４は、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。
【０１３７】
以下の実施例に示すように、本明細書に開示される特定の化合物は、単独であろうと、他の抗腫瘍療法と組み合わせようと、ＣＳＣを標的とし、したがって、一般的に腫瘍を治療するのに有効である。
【０１３８】
一実施形態において、Ｒ１は水素またはメトキシであり、Ｒ２は、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、クロロ、メチルまたはトリフルオロメチルであり；Ｒ４は、Ｈまたはメチルである。別の実施形態において、Ｒ１は水素である。別の実施形態において、Ｒ１は、水素またはメトキシであり、Ｒ２は、メチル、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、Ｒ３は、存在する場合、メチルまたはトリフルオロメチルであり、Ｒ４は、Ｈまたはメチルである。さらなる実施形態において、Ｒ４はメチルである。さらなる実施形態において、本化合物は、
【０１３９】
【化２６】
2015524385.tif 000027
またはその薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。最も好ましくは、本化合物は、
【０１４０】
【化２７】
2015524385.tif 000028
またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１４１】
定義
本明細書で使用する「アルケニル」という用語は、２〜１０個の炭素を含み、特に断りのない限り、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素を意味する。アルケニルの代表例としては、エテニル、２−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−メチル−１−ヘプテニル、３−デセニル、および３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用する「アルコキシ」という用語は、酸素原子を介して親分子部分に付加された、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。アルコキシの代表例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、およびヘキシルオキシが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
本明細書で使用する「アルキル」という用語は、特に断りのない限り、１〜１０個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素を意味する。アルキルの代表例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシルが挙げられるが、これらに限定されない。「アルキル」基は、２個の他の部分との間の連結基である場合には、直鎖または分枝鎖であってもよい。例としては、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＣ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
「アルキレン」という用語は、２価のアルキル基を指す。「アルキレン鎖」は、ポリメチレン基、すなわち、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは正の整数、好ましくは、１〜６、１〜４、１〜３、１〜２、または２〜３である。置換アルキレン鎖は、１個以上のメチレン水素原子が置換基で置換されたポリメチレン基である。適切な置換基には、置換脂肪族基についての以下のものが含まれる。アルキレン鎖は、１以上の位置にて脂肪族基または置換脂肪族基で置換されていてもよい。
【０１４４】
本明細書で使用する「アルキニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子を含み、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味する。アルキニルの代表例としては、アセチレニル、１−プロピニル、２−プロピニル、３−ブチニル、２−ペンチニル、および１−ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
本明細書で使用する「アリール」という用語は、フェニル（すなわち、単環式アリール）、もしくは少なくとも１つのフェニル環を含む二環式環系、または二環式芳香環系に炭素原子のみを含む二環式芳香環を意味する。二環式アリールは、アズレニル、ナフチル、または単環式シクロアルキルに縮合したフェニル、単環式シクロアルケニル、または単環式ヘテロシクリルであってよい。二環式アリールは、２環系のフェニル部分内に含まれる任意の炭素原子、またはナフチル環もしくはアズレニル環を有する任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。二環式アリールの縮合した単環式シクロアルキルまたは単環式ヘテロシクリル部分は、必要に応じて、１個もしくは２個のオキソおよび／またはチア基で置換されている。二環式アリールの代表例としては、アズレニル、ナフチル、ジヒドロインデン−１−イル、ジヒドロインデン−２−イル、ジヒドロインデン−３−イル、ジヒドロインデン−４−イル、２，３−ジヒドロインドール−４−イル、２，３−ジヒドロインドール−５−イル、２，３−ジヒドロインドール−６−イル、２，３−ジヒドロインドール−７−イル、インデン−１−イル、インデン−２−イル、インデン−３−イル、インデン−４−イル、ジヒドロナフタレン−２−イル、ジヒドロナフタレン−３−イル、ジヒドロナフタレン−４−イル、ジヒドロナフタレン−１−イル、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル、５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−５−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−６−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−７−イル、２Ｈ−クロメン−２−オン−８−イル、イソインドリン−１，３−ジオン−４−イル、イソインドリン−１，３−ジオン−５−イル、インデン−１−オン−４−イル、インデン−１−オン−５−イル、インデン−１−オン−６−イル、インデン−１−オン−７−イル、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキサン−５−イル、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキサン−６−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−３（４Ｈ）−オン−５−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−３（４Ｈ）−オン−６−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イル、２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−３（４Ｈ）−オン−８−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−５−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−６−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−７−イル、ベンゾ［ｄ］オキサジン−２（３Ｈ）−オン−８−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−５−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−６−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−７−イル、キナゾリン−４（３Ｈ）−オン−８−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−５−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−６−イル、キノキサリン−２−（１Ｈ）−オン−７−イル、キノキサリン−２（１Ｈ）−オン−８−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−４−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−５−イル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−６−イル、およびベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−オン−７−イルが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、二環式アリールは、５もしくは６員の単環式シクロアルキル、５もしくは６員の単環式シクロアルケニル、または５もしくは６員の単環式ヘテロシクリルのいずれかに縮合した（ｉ）ナフチル環または（ｉｉ）フェニル環であり、この縮合したシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクリル基は、必要に応じて、独立してオキソもしくはチアである１または２個の基で置換されている。
【０１４６】
本明細書で使用する「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉまたは−Ｆを意味する。
【０１４７】
「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」および「ハロアルコキシ」という用語は、場合によって、１個以上のハロゲン原子で置換されているアルキル、アルケニルまたはアルコキシ基を指す。
【０１４８】
本明細書で使用する「ヘテロアリール」という用語は、単環式ヘテロアリール、または少なくとも１つの芳香族複素環を含む二環式環系を意味する。単環式ヘテロアリールは、５または６員環であってよい。５員環は、２つの二重結合および１、２、３または４個の窒素原子、必要に応じて、１個の酸素または硫黄原子からなる。６員環は、３個の二重結合および１、２、３または４個の窒素原子からなる。５または６員のヘテロアリールは、ヘテロアリール内に含まれる任意の炭素原子または任意の窒素原子を介して親分子部分に結合している。単環式ヘテロアリールの代表例としては、フリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピロリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリルおよびトリアジニルが挙げられるが、これらに限定されない。二環式ヘテロアリールは、フェニル、単環式シクロアルキル、単環式シクロアルケニル、単環式ヘテロシクリル、または単環式ヘテロアリールに縮合した単環式ヘテロアリールからなる。二環式ヘテロアリール基の縮合シクロアルキルまたはヘテロシクリル部分は、場合により、独立して、オキソもしくはチアである１または２個の基で置換されている。二環式ヘテロアリールが、縮合シクロアルキル、シクロアルケニル、またはヘテロシクリル環を含む場合には、二環式ヘテロアリール基は、二環式環系の単環式ヘテロアリール部分内に含まれる任意の炭素または窒素原子を介して親分子部分に結合している。二環式ヘテロアリールが、ベンゾ環に縮合した単環式ヘテロアリールである場合には、二環式ヘテロアリール基は、二環式環系内の任意の炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に結合している。二環式ヘテロアリールの代表例としては、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサチアジアゾリル（ｂｅｎｚｏｘａｔｈｉａｄｉａｚｏｌｙｌ）、ベンゾチアゾリル、シンノリニル、５，６−ジヒドロキノリン−２−イル、５，６−ジヒドロイソキノリン−１−イル、フロピリジニル、インダゾリル、インドリル、イソキノリニル、ナフチリジニル、キノリニル、プリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−３−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−４−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−１−イル、チエノピリジニル、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾリル、および６，７−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾール−４（５Ｈ）−オニルが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、縮合二環式ヘテロアリールは、フェニル環、５もしくは６員の単環式シクロアルキル、５もしくは６員の単環式シクロアルケニル、５もしくは６員の単環式ヘテロシクリル、または５もしくは６員の単環式ヘテロアリールのいずれかに縮合している５もしくは６員の単環式ヘテロアリール環であり、縮合したシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクリル基は、必要に応じて、独立してオキソもしくはチアである１または２個の基で置換されている。
【０１４９】
「薬学的に許容可能な」とは、健全な医学的判断の範囲内にあり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または妥当な利益／リスク比に相応の他の問題もしくは合併症を伴わずヒトおよび動物の組織との接触に適するか、またはそうでなければヒトまたは家畜に使用するために許容されるものとして米国食品医薬品局によって承認されている化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【０１５０】
本発明は、例示のみを目的とし、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない添付の実施例を参照するとより良く理解することができる。
【０１５１】
実施例
５ｑ１３のＣＯＬ４Ａ３ＢＰ遺伝子は、少なくとも３つのポリペプチド：１）ＧＰＢＰ−１（ＧＰＢＰまたは７７ｋＤのＧＰＢＰ）、ＩＶ型コラーゲンと結合している細胞外空間に分泌され、見出される６２４残基長のポリペプチド（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．１９９９；Ｒｅｖｅｒｔ ｅｔ ａｌ．２００７；Ｒｅｖｅｒｔ ｅｔ ａｌ．２００８）；２）（ＧＰＢＰΔ２６またはＣＥＲＴとしても知られる）ＧＰＢＰ−２、ｍＲＮＡの選択的エキソンスプライシングによって主に細胞内で生成される５９８残基長の細胞質アイソフォーム（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．２０００；Ｒｅｖｅｒｔ ｅｔ ａｌ．２００８）；ならびに３）（９１ｋＤのＧＰＢＰとしても知られる）ＧＰＢＰ−３、代替の非標準的なｍＲＮＡ翻訳開始点から生じる膜結合９１ｋＤ変異体を発現する。
【０１５２】
ＧＰＢＰ−１は、ヒトＩＶ型コラーゲンα３鎖の非コラーゲン（ＮＣ１）ドメイン［α３（ＩＶ）ＮＣ１］に結合し、リン酸化する自己リン酸化活性を示す特殊なセリン／スレオニンキナーゼである（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．１９９９および２０００）。
【０１５３】
ＧＰＢＰ−１は、特異的なキナーゼ活性が、低分子量の凝集体のキナーゼ活性よりもはるかに高い巨大多量体集合体を形成する（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．２０００）。
【０１５４】
５残基長のモチーフ２６０ＳＨＣＩＥ２６４（配列番号４）は、天然のＧＰＢＰ−１多量体アセンブリに重要であるモチーフのコアである。２６０ＳＨＣＩＥ２６４（配列番号４）を表す単離されたペプチド（Ｑ２）および隣接する領域（ＬＡＴＬＳＨＣＩＥＬＭＶＫＲ（配列番号８）は、効率的にＧＰＢＰ−１キナーゼ活性を阻害する（Ｓａｕｓ ｅｔ ａｌ．２００８）。最後に、Ｑ２を模倣する有機化合物（Ｑ２ペプチドミメティック）も、ＧＰＢＰ−１キナーゼ活性を阻害する（Ｓａｕｓ ｅｔ ａｌ．２０１０）。
【０１５５】
サイドポピュレーションとしても知られる癌の前駆幹細胞（ＣＳＣ／ＳＰ）およびメジャーポピュレーションとしても知られる癌の一過性増殖細胞（ｃａｎｃｅｒ ｔｒａｎｓｉｔ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ｃｅｌｌ）（ＣＴＡＣ／ＭＰ）の２つの主な細胞コンパートメントが任意の種類の腫瘍に存在することが広く認められている。ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントは、複製老化を示さないので、時間を通して生物内に残り、永続化させる珍しいユニークな能力を有する自己複製系統を含む。一般的に、ＣＳＣ／ＳＰは、増殖およびアポトーシスについては低い能力を示し、生体異物の流出については高い能力を示す。ＣＴＡＣ／ＭＰは、ＣＳＣ／ＳＰから派生するが、その前駆細胞とは異なり、これらの細胞は、複製老化を受けるので、自己複製し、生物内に残り、永続化させる限られた能力を示す。さらに、ＣＳＣ／ＳＰとは対照的に、ＣＴＡＣ／ＭＰは、高増殖性であり、生体異物を汲み出す能力はより低い。このコンパートメントのより高い増殖率および生体異物の低いクリアランスを利用するので、従来の化学療法は、主にＣＴＡＣ／ＭＰをターゲットにしていることを複数の証拠が裏付けている。しかし、ＣＳＣ／ＳＰは、従来の治療法を嫌うため、癌の再発は、通常、薬剤耐性を示し、かつ致死的である新規なＣＴＡＣ／ＭＰ系統から生じる。したがって、ＣＴＡＣ／ＭＰコンパートメントよりもＣＳＣ／ＳＰを標的とする薬剤が、癌および薬剤耐性をより効率的に治療するのに必要とされることを裏付ける証拠が増えつつある（総説については、Ａｌｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．２００７を参照されたい）。
【０１５６】
発明者らは、本明細書ではＴ１２と呼ばれるＱ２ペプチド模倣薬の３−［４”−メトキシ−３，２’−ジメチル−（１，１’；４’，１”）テルフェニル−２”−イル］プロピオン酸であるＧＰＢＰキナーゼ阻害剤が、癌の治療において従来の薬剤と相乗作用することを示す。Ｔ１２の治療効果は、恒常性がＧＰＢＰ発現に特に依存しているＣＳＣ／ＳＰコンパートメントの選択的標的から生じる。
【０１５７】
方法および実験計画
化学物質
細胞培養アッセイのために、ドキソルビシン塩酸塩およびＣＦＴＲ阻害剤−１７２をＳｉｇｍａ社から、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から、およびＢＤ（商標）カルセインＡＭ蛍光色素をＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社から購入した。インビボアッセイのために、ドキソルビシンを、２ｍｇ／ｍＬの注射用溶液としてファイザー社から購入した。
【０１５８】
テルフェニル−１２（Ｔ１２）を、以前（国際公開第２０１１／０５４５３０号の化合物２２ｂ）に記載されたように合成した。Ｔ１２を水に懸濁し、１ＭのＮａＯＨで中和した。得られた溶液を室温で１時間撹拌した後、凍結乾燥して、白色粉末としてＴ１２のナトリウム塩を得た。
【０１５９】
テルフェニル−１６（Ｔ１６）を以下の手順にしたがって合成した：
【０１６０】
【化２８】
2015524385.tif 000029
【０１６１】
具体的には、無水アセトン中の２−ブロモ−５−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０当量）の溶液に、炭酸カリウム（２当量）および臭化ベンジル（１．１当量）を添加した。
【０１６２】
反応混合物を室温（ｒ．ｔ．）で一晩撹拌し、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた粗反応生成物を水に懸濁し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、揮発物を真空除去して、５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモベンズアルデヒドを得た。
【０１６３】
０℃に冷却した乾燥ＴＨＦ中メトキシメチルトリフェニル塩化ホスホニウム（１．０当量）の懸濁液に、ＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、１．０当量）を添加し、得られたオレンジ色の溶液を０℃で３０分間攪拌した。反応物を−７８℃まで冷却し、ＴＨＦ中５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモベンズアルデヒド（１．０当量）の溶液を滴下し、得られた混合物を室温まで温め、１．３０時間撹拌した。その後、反応物を水でクエンチし、水相をジクロロメタンで抽出し、集めた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ５０：１）によって精製し、茶色がかった油状物として対応するエノールエーテルを得た。６Ｎ塩酸をアセトン中の上記化合物の溶液に滴下し、得られた混合物を、出発物質が消費されるまで室温で攪拌した。その後、水を加え、水相をジクロロメタンで抽出し、集めた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させて、黄色がかった油状物として粗製２−［５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモベンジル］−１，３−ジオキソランを得、これをすぐに次の反応に用いた。
【０１６４】
２−［５−（ベンジルオキシ）−２−ブロモベンジル］−１，３−ジオキソラン（１．０当量）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．１当量）、酢酸カリウム（３．０当量）、およびジクロロメタンとの［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）錯体（０．０３当量）を無水ジメチルスルホキシドに溶解し、得られた混合物を不活性雰囲気下、１１０℃で一晩加熱した。その後、溶媒を減圧下で除去し、残留物を水に懸濁し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗反応生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ ２０：１）により精製し、２−［（１，３−ジオキソラン−２−イル］−４−ベンジルオキシフェニル−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランを得た。
【０１６５】
エチル（Ｅ）−３−［３’−ホルミル−４−（トリフルオロメタンスルホニルオキシ）ビフェニル−２−イル］アクリレート（１当量）、２−［（１，３−ジオキソラン−２−イル］−４−ベンジルオキシフェニル−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１．２当量）およびパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（０．０３当量）をＤＭＥ／ＥｔＯＨ（９：１）に溶解した。その後、２Ｍの水性Ｎａ２ＣＯ３溶液（２当量）を、この黄色の溶液に添加し、得られた混合物を一晩還流した。混合物を真空濃縮した後、残留物を水に溶解し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗反応生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ ５：１）により精製し、化合物Ｔ１６を得た。
【０１６６】
テルフェニル−５５（Ｔ５５）を、以下の手順にしたがって合成した：
【０１６７】
【化２９】
2015524385.tif 000030
【０１６８】
２−ブロモ−５−ヒドロキシベンズアルデヒド（１ミリモル）、３−クロロ−４−メトキシフェニルボロン酸（１ミリモル）およびＮａ２ＣＯ３（２ミリモル）を、ＡｃＮ／Ｈ２Ｏ（７：３）に溶解した。その後、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（０．０３ミリモル）を加え、得られた混合物を完了するまで還流した。混合物を真空濃縮した後、残留物を水に溶解し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗反応生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ ５：１）により精製して、白色固体（９３％）として３’−クロロ−４−ヒドロキシ−４’−メトキシビフェニル−２−カルバルデヒドを得た；融点：１６８〜１７０℃。
【０１６９】
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中の３’−クロロ−４−ヒドロキシ−４’−メトキシビフェニル−２−カルバルデヒド（０．９３ミリモル）およびピリジン（２．７８ミリモル）の溶液を０℃で冷却した。その後、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中のトリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．０２ミリモル）の溶液を、窒素雰囲気下で滴加した。混合物を、出発物質が消費されるまで室温（ｒ．ｔ．）で攪拌した。次いで、これをＮａＨＣＯ３飽和溶液でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ １０：１）により精製し、黄色がかった油状物として３’−クロロ−２−ホルミル−４’−メトキシビフェニル−４−イルトリフルオロメタンスルホネートを得た（９３％）。
【０１７０】
３’−クロロ−２−ホルミル−４’−メトキシビフェニル−４−イルトリフルオロメタンスルホネート（２．２４ミリモル）、（Ｅ）−エチル−３−［５−メトキシ−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］アクリレート（２．４６ミリモル）およびパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（０．０６ミリモル）を、ＤＭＥ／ＥｔＯＨ（９：１）に溶解した。その後、この黄色の溶液に２ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（４．４８ミリモル）を加え、得られた混合物を、完了するまで還流した。溶媒を真空濃縮し、残留物を水に溶解し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗反応生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ  ５：１）により精製し、エチル（Ｅ）−３−［３−クロロ−２’−ホルミル−４，４”−ジメトキシ−（１，１’；４’，１”）テルフェニル−２”−イル］アクリレートを白色固体として得た（５４％）；融点：１５０〜１５２℃。
【０１７１】
ＡｃＯＥｔ中エチル（Ｅ）−３−［３−クロロ−２’−ホルミル−４，４”−ジメトキシ−（１，１’；４’，１”）テルフェニル−２”−イル］アクリレート（１．２２ミリモル）の溶液に、触媒として１０％パラジウム炭素（２５％ｗ／ｗ）を添加し、これを圧力２５ａｔｍおよび室温で一晩水素化した。その後、混合物をセライトで濾過し、濾液を真空濃縮した。粗反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ ２０：１）により精製し、透明な油状物としてエチル−３−［３−クロロ−２’−メチル−４，４”−ジメトキシ−（１，１’；４’，１”）テルフェニル−２”−イル］プロピオネートを得た（６３％）。
【０１７２】
４：１のテトラヒドロフラン／水の混合物中のエチル−３−［３−クロロ−２’−メチル−４，４”−ジメトキシ−（１，１’；４’，１”）テルフェニル−２”−イル］プロピオネート（０．７０ミリモル）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（２．１ミリモル）を加え、反応物を、出発物質が消費されるまで室温で撹拌した。その後、ＴＨＦを減圧下で除去し、水層を１ＭのＨＣｌ溶液で酸性化し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で真空除去し、白色固体としてＴ５５化合物を得た（９８％）；融点：１３５〜１３７℃。１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ：７．５１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．２０（ｍ，５Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ：１７８．９，１５８．９，１５３．９，１４０．２，１３８．９，１３８．７，１３５．２，１３５．０，１３４．２，１３１．３，１３１．０，１２９．６，１２８．５，１２６．８，１２２．０，１１４．５，１１１．７，１１１．６，５６．２，５５．３，３５．１，２８．２，２０．５；ＨＲＭＳ（ＥＩ） ｍ／ｚ：Ｃ２４Ｈ２３ＣｌＯ４の計算値：４２８．１６２３（Ｍ＋ＮＨ４）；実験値：４２８．１６３２。
【０１７３】
組換えＧＰＢＰおよびインビトロアッセイ
組換え酵母ＧＰＢＰ−１を、以前に記載された（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．１９９９，ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．２０００）ようにＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓで発現させ、アフィニティー精製した。組換えＦＬＡＧ−ＧＰＢＰ−１をＳＦ９昆虫細胞で発現および精製するために、ＦＬＡＧ−ＧＰＢＰ−１のｃＤＮＡをバキュロウイルス発現ベクターｐＦａｓｔＢａｃ１にクローニングした。このプラスミドをＤＨ１０Ｂａｃコンピテント細胞に形質転換し、組換えバキュロウイルスを製造業者の取扱説明書に従って生成した（Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ（商標） Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）。製造業者の取扱説明書に従って、バキュロウイルスを用いて、ＳＦ９細胞に感染させ、培地の上清中のＧＰＢＰ−１を、抗ＦＬＡＧアガロース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いてアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。ＧＰＢＰ−１リン酸化アッセイを、以前に記載された（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．１９９９）ように行った。
【０１７４】
ＧＰＢＰ−１に対するＴ１２およびドキソルビシンの親和定数を、Ｂｅｎｅｓｉ−Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ法により計算した（Ｆａｉｚｕｌ ｅｔ ａｌ．２００８）。
【０１７５】
細胞培養
Ａ５４９ヒト肺腺癌細胞（ＣＬＳ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ）を、特定の化合物の抗腫瘍活性の評価のためにエクスビボモデルとして使用した。特に示さない限り、Ａ５４９細胞をＤＭＥＭ：２ｍＭのＬ−グルタミンおよび１０％ウシ胎児血清を補充したハムＦ１２培地で培養した。ドキソルビシンに耐性を示すＡ５４９細胞（Ａ５４９−ＤＲ）を、４週間、１μΜで細胞を処理することにより得た。Ａ５４９細胞を、ＧＰＢＰ−１を発現するプラスミドでトランスフェクトし、さらにＧ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で選択し、恒常的にＧＰＢＰ−１を発現する細胞株（Ａ５４９−ＧＰＢＰ）を得た。
【０１７６】
標準的な手順に従って、ＪＬＳＭ細胞をヒト肺扁平上皮癌生検から得た。具体的には、生検を縦に切断し、２ｍｍの外植片を、コラーゲンでコーティングした６ウェルプレート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）に堆積させ、５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２、３７℃の加湿インキュベーター中に１５分間置き、Ｉ型コラーゲン基質への細胞の結合を促進させた。続いて、外植片を、さらに１ウェルあたり１ｍＬのＣｌｏｎｅｔｉｃｓ（商標）の無血清Ｂ−ＡＬＩＴＭ気液界面培地（Ｂ−ＡＬＩ培地）とインキュベートした。細胞が成長し始めた時、外植片を除去し、新鮮な培地を有するＩ型コラーゲンコーティングフラスコに細胞を移した。培養物を、５％（ｖ／ｖ）のＣＯ２および９５％（ｖ／ｖ）の空気を有する３７℃の加湿インキュベーター中に置いた。
【０１７７】
細胞毒性アッセイ
細胞傷害性アッセイを、製造業者の説明書に従って、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて行った。Ａ５４９細胞を、９６ウェル培養プレートに播種し（７５００細胞／ウェル）、４時間静置した。その後、細胞を、３６時間、０〜１０μΜ範囲の濃度のドキソルビシンの存在下で、０〜５０μΜ範囲の濃度の個々のペプチド模倣体と共に培養した。ＪＬＳＭ細胞を０．２５％トリプシン（Ｌｏｎｚａ社）で処理することによって回収し、コラーゲンＩ型コーティング９６ウェルブラック培養プレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に１ｃｍ２あたり１０，０００細胞の密度で播種した。４時間の静置後、３６時間、（ドキソルビシンの有無にかかわらず）異なるペプチド模倣体で細胞を処理した。続いて、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）試薬を添加し、インキュベーションを３時間継続した。蛍光を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ＧｅｍｉｎｉＸＰＳ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、５６０ＥＸ ｎｍ／５９０ＥＭ ｎｍフィルター設定で測定した。培地を含むブランクウェルを用いて、バックグラウンド蛍光を測定した。
【０１７８】
ＲＮＡ抽出およびＴａｑｍａｎ（商標）遺伝子発現解析
製造業者の説明書に従って、Ｉｌｕｓｔｒａ ＲＮＡｓｐｉｎ（商標）Ｍｉｎｉ（Ｇｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて、細胞試料から全ＲＮＡを抽出した。各試料からの全ＲＮＡ１μｇを、高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてｃＤＮＡ（ＲＴ）に変換した。リアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）のために、１．５μｌのｃＤＮＡを、ＴａｑＭａｎ（商標）遺伝子発現マスターミックス、ならびにＣＯＬ４Ａ３ＢＰ／ＧＰＢＰ、ＤＤＩＴ３／ＣＨＯＰ、ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１、ＰＲＯＭ１／ＣＤ１３３、ＮＡＮＯＧ、ＭＭＰ１０およびＨＰＲＴ１の特異的ＴａｑＭａｎ（商標）プローブならびにそれらのプライマーと混合した。これらは全て、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社から入手した。ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ１）プライマーを、内因性対照として使用した。製造業者の取扱説明書に従って、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）でｑＰＣＲを行った。ｍＲＮＡの相対レベルを、未処理サンプルを基準として使用して、ΔΔＣｔ法（比較Ｃｔ法）を用いて計算した。
【０１７９】
ｓｉＲＮＡトランスフェクション
化学的に合成したｐ２１のｓｉＲＮＡ（５’−ＣＡＡＧＧＡＧＵＣＡＧＡＣＡＵＵＵＵＡｔｔ３’）（配列番号１２）およびｓｉＲＮＡの陰性対照を設計し、Ａｍｂｉｏｎ社から購入した。製造業者の手順に従って、ＭａｇｎｅｔｏＦｅｃｔｉｏｎ（商標）（Ｏｚｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて、インビトロでの一過的トランスフェクションを行った。
【０１８０】
ＰＣＲアレイ試験
ＲＮＡを、Ｉｌｕｓｔｒａ ＲＮＡｓｐｉｎ Ｍｉｎｉ （ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて細胞から精製し、ｃＤＮＡを、ＲＴ２ファーストストランド（商標）ｃＤＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ社）を用いて調製した。製造業者（Ｑｉａｇｅｎ社）の手順に従って、処理した細胞または未処理細胞からのｃＤＮＡを用いて、ヒト用の細胞周期ＲＴ２プロファイラー（商標）ＰＣＲアレイ（ＰＡＨＳ−０２０Ｚ、Ｑｉａｇｅｎ社）でスクリーニングした。ＲＴ２ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ ＲＯＸ（商標）ｑＰＣＲマスターミックス（Ｑｉａｇｅｎ社）およびＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（商標）リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてｑＰＣＲを行った。製造業者のソフトウェアを用いて、ｑＰＣＲデータを解析した。
【０１８１】
マイクロアレイ解析
ｍＲＮＡ発現解析のために、Ａ５４９、Ａ５４９−ＤＲおよびＡ５４９−ＧＰＢＰ細胞を溶解し、製造業者の取扱説明書に従って、全ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ（商標）プロテクトミニキット（Ｑｉａｇｅｎ社）を用いて抽出した。ＮａｎｏＤｒｏｐ ＮＤ１０００（ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて分析法によりＲＮＡを定量化し、ＲＮＡ ６０００ナノバイオアナライザー（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）アッセイによって品質を確認した。簡単に説明すると、製造業者の取扱説明書に従って、全ＲＮＡ１５０ｎｇから、Ｌｏｗ Ｉｎｐｕｔ Ｑｕｉｃｋ Ａｍｐ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ Ｋｉｔ Ｏｎｅ−Ｃｏｌｏｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いて、シアニン３−ＣＴＰ標識ｃＲＮＡを作製した。「１色マイクロアレイベース遺伝子発現解析（Ｏｎｅ−Ｃｏｌｏｒ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ−Ｂａｓｅｄ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）」プロトコルバージョン６．０（Ａｇｉｌｅｎｔ社）に従って、標識ｃＲＮＡ１．６μｇを、４１，０００＋ユニークなヒト遺伝子および転写産物を含む全ヒトゲノムオリゴマイクロアレイキット（Ｗｈｏｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｏｌｉｇｏ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｋｉｔ）（Ａｇｉｌｅｎｔ社）とハイブリダイズさせた。製造業者の取扱説明書に従って、アレイをアジレントマイクロアレイスキャナーでスキャンし、Ａｇｉｌｅｎｔ社のプロトコルＧＥ１＿１０７＿Ｓｅｐ０９、グリッドテンプレート０１４８５０＿Ｄ＿Ｆ＿２０１００４３０およびＱＣ Ｍｅｔｒｉｃ Ｓｅｔ ＧＥ１＿ＱＣＭＴ＿Ｓｅｐ０９に従って、アジレント社の特徴抽出ソフトウェア１０．７．１を使用してデータを抽出した。
【０１８２】
生データファイルを、供給者の方法論を用いてバックグラウンド補正し、シグナル強度を分位正規化アルゴリズム（ｑｕａｎｔｉｌｅ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）によりアレイ間で標準化した。ｌｉｍｍａ調整ｔ統計量（ｌｉｍｍａ ｍｏｄｅｒａｔｅｄ ｔ−ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）を用いて、全比較の差次的遺伝子発現評価を行った。Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ Ｈｏｃｈｂｅｒｇ（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ ｅｔ ａｌ．１９９５）によって提案された複数の試験のための従来の調整を用いて、調整されたＰ値を導き出した。
【０１８３】
切断されたＰＡＲＰのフローサイトメトリー分析
Ａ５４９細胞におけるカスパーゼ−３活性化を、ＰＥにコンジュゲートしたヒト抗切断ＰＡＲＰ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いたフローサイトメトリーによって評価した。簡単に説明すると、治療後、細胞を遠心分離により回収し、Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ（商標）緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）に２０分間懸濁し、洗浄し、次いで、抗体と３０分間インキュベートした。その後、細胞を洗浄し、さらにフローサイトメトリー（ＢＤ ＦａｃｓＶｅｒｓｅ（商標）サイトメータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）により解析した。
【０１８４】
遊走アッセイ
遊走アッセイを、改変ボイデンチャンバー（コーニング社のトランスウェルインサート、直径６．５ｍｍ）を用いて行った。８μｍの細孔を有するポリカーボネート膜を含むインサートを、４００μｌの培地（ＤＭＥＭ：１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン−ストレプトマイシンおよび２ｍＭグルタミンを補充したＦ−１２）を含む下部チャンバーに入れた。血清飢餓Ａ５４９細胞を、０．５％トリプシンおよび０．２％ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ社）を含むハンクス平衡塩溶液を用いて培養皿から取り除き、洗浄して、血清を含まない培地（ＤＭＥＭ：Ｆ−１２、１％ペニシリン−ストレプトマイシンおよび２ｍＭグルタミン）に１０６細胞／ｍＬで懸濁した。血清を含まない２５０μＬの培地中の２５万（２５０，０００）細胞を、各移動チャンバーの上部に加え、１６時間、多孔質膜の下側に移動させた。Ｔ１２およびドキソルビシンは、アッセイを通して上下両方のコンパートメントの培地中に存在していた。上部膜表面上の非遊走細胞を除去し、膜の下面に付着した遊走細胞を、０．５％トリプシンおよび０．２％ＥＤＴＡを含むハンクス平衡塩溶液で剥離した。剥離した細胞を３７℃で９０分間、カルセインＡＭ蛍光色素（４μｇ／ｍｌ）を用いて標識し、蛍光を４９４／５１７ｎｍ（Ａｂｓ／Ｅｍ）で測定した。
【０１８５】
サイドポピュレーションの染色
Ａ５４９細胞を、１０ｍＭのＨｅｐｅｓを含む（予め３７℃に加温した）培地に１０６細胞／ｍＬで懸濁した。５μｇ／ｍＬのヘキスト３３３４２を加え、暗所で９０分間、振盪しながら３７℃の水浴中で細胞をインキュベートした。インキュベーション前（かつ染色後）に、１ｍＬのアリコートを採取し、ベラパミル（５０μΜ）およびフミトレモルギンＣ（１０μΜ）を加えた。細胞を４℃で５分間、３００×ｇで遠心分離し、１０ｍＭのＨｅｐｅｓを含む冷培地に懸濁した。細胞を、分析するまで４℃で保存した。ヘキスト３３３４２流出物の分析を、入射３５０ｎｍの紫外光でフローサイトメーターを用いて評価した。得られた蛍光を、ヘキスト青および赤の検出をそれぞれ可能にする４２４／４４ＢＰおよび６７５ＬＰフィルターを使用して２つの波長で測定した。サイドポピュレーションの蛍光は、青および赤の両方のチャネルで低い発光を示したが、メジャーポピュレーション（ＭＰ）は、より高い発光を示す。両方のポピュレーションのドキソルビシン含有量を、入射４８８ｎｍの青色光および５８５／４０フィルターを用いて推定した。ベラパミルおよびフミトレモルギンＣを用いて、ＳＰ領域を特定した。
【０１８６】
マウス異種移植片研究
１０週齢のヌードマウス（ＮＭＲｉ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｆｏｘｎ１ｎｕ）（Ｊａｎｖｉｅｒ社）を、異種移植研究のために使用した。３００個のＡ５４９細胞を、１００μＬの培地に懸濁し、２００μＬのマトリゲル（ＢＤ）と混合し、個々のマウスの腹部に皮下注射した（ｎ＝４０）。腫瘍の大きさをデジタルノギスで定期的に測定し、体積を、式体積＝（長さ×幅２）／２を用いて計算した。腫瘍が約４００ｍｍ３に達した時に、マウスを無作為に４群に分け（各群ｎ＝１０）、１）１週間ごとに２．５ｍｇ／ｋｇのドキソルビシン（ｉ．ｐ．）；２）マウス１匹当たり６ｍＬの毎日の水摂取量を考慮して、飲料水と共に投与される１日あたり２０ｍｇ／ｋｇのＴ１２；３）２．５ｍｇ／ｋｇ／週のドキソルビシンおよび２０ｍｇ／ｋｇ／日のＴ１２；ならびに４）ビヒクルで処置した。３週間後にマウスを屠殺し、腫瘍異種移植片を切除し、ホルマリンで固定し、パラフィン包埋するか、または凍結して、ＲＮＡを抽出した。
【０１８７】
パラフィン包埋腫瘍試料の切片を、ヘマトキシリンおよびエオシンならびにマッソントリクロームの標準染色を行った。凍結腫瘍サンプルを、乳鉢の中で液体窒素を用いて粉砕し、全ＲＮＡを上記のように抽出した。
【０１８８】
結果
ドキソルビシンは、Ｔ１２とは異なる様式でＧＰＢＰ−１キナーゼ活性を阻害し、両方の阻害剤は、相乗的な生物活性（癌細胞生存率の低下）を示す
ドキソルビシン、トポイソメラーゼＩＩを標的とする抗腫瘍剤（Ｐｏｍｍｉｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）が、ＧＰＢＰ−１を介して動作する可能性を探求するために、ヒト組換えＧＰＢＰ−１（Ｒａｙａ ｅｔ ａｌ．１９９９）を、ドキソルビシンおよびＴ１２の存在下ならびに非存在下でインビトロ自己リン酸化に供した（図１Ａ）。ドキソルビシンは効率的にＧＰＢＰ−１自己リン酸化を阻害し、阻害活性はＴ１２と相乗的であった。このことは、ドキソルビシンおよびＴ１２が異なる方法でＧＰＢＰ−１を標的にする考えを裏付ける。したがって、個々の阻害剤のＧＰＢＰ−１への結合分析は、個々の阻害剤の親和定数に大きな違いを明らかにした（図１Ｂ）。したがって、ドキソルビシンのＧＰＢＰ−１への結合は、Ｔ１２よりも約１０５倍強く、ドキソルビシンは、実質的に「不可逆的」な方法でＧＰＢＰ−１に結合することが明らかになったが、Ｔ１２は、かなり低い程度〜中程度の親和性を示し、したがって、より「可逆的」な結合を示すことが予想される。さらに、阻害剤は、異なる部位においてＧＰＢＰ−１に結合するという考えと一致して、Ｔ１２は、用量依存的にＡ５４９細胞に対するドキソルビシンＬＣ５０を減少させた（図２）。興味深いことに、Ａ５４９細胞は、ドキソルビシンに応答してＧＰＢＰの細胞発現を増加させ、このことは、ドキソルビシン耐性の発達に関連していた（下記参照）。対照的に、ドキソルビシンに応答して、ＧＰＢＰの発現を増加させなかった卵巣癌細胞（ＯＶＣＡＲ−３）は、Ｔ１２に応答しなかった。興味深いことに、ＯＶＣＡＲ−３細胞におけるＧＰＢＰ−１の組換え発現は、ドキソルビシンＬＣ５０を増加させ、これらの細胞をＴ１２処理に対して感作させ、化学療法抵抗性が、ＧＰＢＰ−１発現の増加により誘導され、Ｑ２ペプチド模倣体（データは示さず）によって相殺することができることを示す。
【０１８９】
エトポシドを用いて、ドキソルビシンと同様の作用機構による独立した抗腫瘍性（トポイソメラーゼＩＩ中毒）という同様の結果が観察された（Ｐｏｍｍｉｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）。同様の結果が、本発明の他の化合物、例えば、１５ｂ、２２ｆ、２２ｈ、２２ｊ、および３２（表１）を用いた場合に観察された。
【０１９０】
【表１】
2015524385.tif 000031
2015524385.tif 000032
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【０１９１】
表１
表１の各化合物について示した活性は、ドキソルビシンＬＣ５０がＡ５４９細胞培養物において５０μΜ濃度でその化合物によって減少する割合である。例えば、Ａ５４９培養物におけるドキソルビシンのＬＣ５０が０．９μΜである場合には、５０μΜの化合物２２b（Ｔ１２）の活性度は４．０であり、５０μΜの化合物２２ｂの存在下で、ドキソルビシンＬＣ５０は、０．９／４＝０．２２５μＭになる。いくつかの化合物（１３ｃ、２４ａ、２４ｃ）については、化合物それ自体が５０μΜでかなり有毒であるため、ドキソルビシン増強活性の評価のためにより低い濃度を用いた。３列目に記号−、−／＋、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋を用いて、簡略化した方法で化合物の相対活性を示す。
【０１９２】
Ｔ１２は化学療法剤に応答してＣＤＫＮ１ＡおよびＤＤＩＴ３遺伝子の誘導を増強する
ＧＰＢＰ−１組換え発現により誘導されるＣＤＫＮ１Ａ遺伝子発現（表２）
ＣＤＫＮ１Ａは、ｐ２１（配列番号１０（ｃＤＮＡ）および１１（タンパク質）、ＤＮＡ損傷に応答して細胞周期停止を促進するサイクリン依存性キナーゼ阻害剤）をコードする。
【０１９３】
さらに、ドキソルビシンは、ＤＤＩＴ３（Ｌａｉ ｅｔ ａｌ．２０１０）の発現を増強することが報告されている。ＤＤＩＴ３は、小胞体ストレス応答によって誘導される細胞死を媒介する転写因子のＣＨＯＰをコードする（Ｚｉｎｓｚｎｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９８）。したがって、発明者らは、ｑＰＣＲアプローチを用いて、Ａ５４９細胞のドキソルビシンおよび／またはＴ１２に対する応答にＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）およびＤＤＩＴ３（ＣＨＯＰ）が関与するかを評価した（図３）。発明者らのアッセイ条件では、Ｔ１２は、ドキソルビシンと相乗的にＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）およびＤＤＩＴ３（ＣＨＯＰ）の両方の発現を誘導した。
【０１９４】
ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１はＴ１２誘導性細胞死を相殺する
これまでの研究で、ＤＤＩＴ３／ＣＨＯＰはＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１発現を下方制御することが示されている（Ｍｉｈａｉｌｉｄｏｕ ｅｔ ａｌ ２０１０およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．２０１２）。これから、発明者らは、ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１の下方制御が、ドキソルビシンおよびＴ１２で処理したＡ５４９細胞において、ＤＤＩＴ３／ＣＨＯＰ発現（図４Ａ）ならびに細胞死（図４Ｂ）を増加させることを証明するが、これにより、Ｔ１２相乗作用がＣＨＯＰにより媒介され、ｐ２１によって相殺されることが示唆される。
【０１９５】
Ｔ１２は、ドキソルビシン誘発性カスパーゼ−３媒介性アポトーシスを増強する
ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）は、細胞アポトーシス中に切断されることが示されている（Ｓｉｔｈａｎａｎｄａｍ ｅｔ ａｌ．２００５）。ＰＡＲＰ切断は、一般的には、アポトーシスエフェクターカスパーゼ−３によって実行される（Ｌａｚｅｂｎｉｋ ｅｔ ａｌ．２００４）ので、ＰＡＲＰ切断を用いて、カスパーゼ−３媒介性アポトーシスを監視することができる。興味深いことに、Ｔ１２は、Ａ５４９培養細胞において、ドキソルビシン誘発性ＰＡＲＰ切断を増強し、このことは、カスパーゼ−３依存性アポトーシスが、Ｔ１２およびドキソルビシンの相乗作用により細胞生存率が低下するのを媒介することを示唆する（図５）。Ｔ１２が、ドキソルビシン処理したＡ５４９細胞におけるＣＨＯＰ発現（上記の図３参照）およびＰＡＲＰ切断の両方を増強したことは、Ｔ１２がＵＰＲ関連アポトーシスを上方制御することを示唆する。
【０１９６】
ドキソルビシンおよびＴ１２は、Ａ５４９細胞における細胞周期関連遺伝子の類似した転写プロファイルを誘導する
細胞周期ＲＴ２プロファイラーＰＣＲアレイ（Ｑｉａｇｅｎ社）を用いて、発明者らは、Ａ５４９細胞におけるドキソルビシンまたはＴ１２誘導性遺伝子発現を調べた（図６）。ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）、ＧＡＤＤ４５Ａ（増殖停止およびＤＮＡ損傷誘導性、α）、ｐ５３阻害剤ＭＤＭ２、およびＳＥＲＴＡＤ１は全て、ドキソルビシンまたはＴ１２処理細胞のいずれにおいても上方制御された。誘導は、Ｔ１２処理細胞よりもドキソルビシン処理細胞において顕著であったが、個々の処理についての個々の遺伝子間の相対的発現は類似していた。これらの結果は、ドキソルビシンおよびＴ１２が、Ａ５４９細胞における偶然の経路を介して動作することを示唆した。
【０１９７】
ＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７はＴ１２の細胞毒性効果を相殺する
ｑＰＣＲ研究において、発明者らは、ドキソルビシンおよびＴ１２で共処理されたＡ５４９細胞が、ＣＦＴＲ遺伝子の上方制御を行うことを発見した（データは示さず）。ＣＦＴＲは、ＡＴＰ結合カセットトランスポーター（ＡＢＣＣ７）をコードする。ＡＢＣトランスポーターは、細胞からの生体異物の排除を媒介し、癌細胞の薬物に対する耐性に関与する膜タンパク質である（Ｄｅａｎ ２００９）。ＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７は、生体異物のトランスポーターとしては未だ説明されていないが、塩素イオンチャネルとして説明されている（Ｖａｓｉｌｉｏｕ ｅｔ ａｌ．２００９）。しかし、ドキソルビシンおよびＴ１２で処理した細胞におけるＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７ ｍＲＮＡの上方制御により、発明者らは、Ａ５４９細胞の薬剤治療への応答に関与する可能性を調べた。したがって、発明者らは、細胞生存率アッセイにおけるＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７阻害剤１７２を使用した（図７）。ＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７阻害は、ドキソルビシンの有無に関わらず、Ｔ１２で処理した培養物における細胞生存率を著しく低下させたが、ドキソルビシン単独で処理した培養物においては低下させなかった。これらの結果から、ＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７が、細胞に対するＴ１２の効果を相殺し、ＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７の阻害はＴ１２の治療効果を高めるはずであることが示唆された。
【０１９８】
ドキソルビシンはＴ１２媒介性癌細胞遊走の阻害を増強する
発明者らは、トランスウェル遊走チャンバーを使用して、Ｔ１２がＡ５４９細胞の細胞遊走を著しく阻害し、ドキソルビシンによる追加の治療が実質的に細胞遊走を抑止したことを発見した（図８）。
【０１９９】
Ｔ１２はドキソルビシン媒介性ＣＳＣ／ＳＰ枯渇を増強する
癌細胞株の培養物は、典型的には、癌幹細胞（ＣＳＣ）の特徴を有する細胞のサイドポピュレーション（ＳＰ）を含む（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．２００７）。ヘキスト３３３４２で染色し、フローサイトメトリーにより分析したこのコンパートメントは、高い生体異物輸送活性に起因する低色素含有量を示す。細胞を輸送阻害剤（すなわち、ベラパミルおよびフミトレモルギンＣ）とインキュベーションすると、ＣＳＣ／ＳＰ細胞が色素含有量を増加させ、したがって、これらの細胞の特定のおよびその後の定量化が可能になる（図９Ａ）。ドキソルビシンまたはＴ１２のいずれかとＡ５４９細胞を処理すると、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントの細胞含有量が減少した。興味深いことに、共処理は、さらに、このコンパートメントを未処理の培養物の１／４まで縮小させた（図９Ｂ）。
【０２００】
Ｔ１２はＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおけるドキソルビシン蓄積を誘導する
ドキソルビシンおよびＴ１２で処理したＡ５４９細胞は、ドキソルビシンのみで処理した細胞よりも高いドキソルビシン含有量を示した（図１０Ａ）。しかし、Ｔ１２誘発性ドキソルビシンの蓄積は、培養物において均一に分布していなかったため、ＣＳＣ／ＳＰはＣＴＡＣ／ＭＰコンパートメントよりも多くのドキソルビシンを蓄積し（図１０Ｂ）、Ｔ１２が優先的にＣＳＣ／ＳＰコンパートメントに影響を及ぼすことが示唆された。
【０２０１】
Ｔ１２はインビボでのドキソルビシンの抗腫瘍活性を増強する
ヌードマウスを、ヒトＡ５４９癌細胞を用いた異種移植アッセイのために使用した。ドキソルビシンまたはＴ１２のいずれも腫瘍成長を損なわない用量では、これらの化合物の併用投与は、腫瘍停止を引き起こした（図１１）。３週間後、マウスを屠殺し、腫瘍を分析のために解剖した。組織学的研究のために試料を固定し、パラフィン包埋した。興味深いことに、腫瘍内の壊死領域は、併用治療を受けたマウスにおいてより広範であった（図１２）。さらに、併用治療は、ＣＳＣ／ＳＰの増殖および転移に関連するバイオマーカーであるマトリックスメタロプロテイナーゼ１０（ＭＭＰ−１０）をより低いレベルで発現する腫瘍を引き起こした（図１３）（Ｒｅｇａｌａ ｅｔ ａｌ．２０１１）。
【０２０２】
Ｔ１２は残存癌細胞における主要な生物活性を示す
まとめると、発明者らのデータは、両化合物が異なる方法でＧＰＢＰキナーゼ活性を阻害しているので、Ｔ１２が癌の治療においてドキソルビシンと相乗作用することを示している。さらに、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおいて細胞生存率を低下させる際に、Ｔ１２の「ユニーク」な能力により相乗作用が生じることを示唆する証拠もある。発明者らは、さらにこのことを詳しく調べるために、腫瘍体積を約５０％減少させる３ラウンドのシスプラチンベースの化学療法後に、主にＣＳＣ／ＳＰコンパートメントに存在するはずである肺扁平上皮癌の細胞株（ＪＬＳＭ）を患者から樹立した（Ａｌｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．２００７）。したがって、化学療法が、腫瘍においてＭＲＰ／ＡＢＣＣ１を発現する細胞の数を増加させ、ＪＬＳＭ由来の初代培養物は、ＡＢＣファミリーメンバーを豊富に発現し（データは示さず）、この発現はＣＳＣ／ＳＰコンパートメントに関連することが明らかになったので、原発腫瘍の免疫組織化学的分析はこの仮定を裏付けた（Ｄｅａｎ，２００９）。予想通り、ＪＬＳＭ初代培養物は、Ｔ１２に感受性が高く、実質的にドキソルビシンに耐性を示し（図１４）、さらに、肺癌ＣＳＣ／ＳＰがＴ１２に感受性を示すことが裏付けられた。対照的に、関連Ｔ４９（ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００６７５７および国際公開第２０１１／０５４５３０中の化合物２２ｊ）は、ドキソルビシンと組み合わせて投与されない限り、生物活性を示さなかった（図１４）。
【０２０３】
Ａ５４９培養物におけるドキソルビシンに対する耐性およびＣＳＣ／ＳＰコンパートメントの増大はＧＰＢＰ発現の増加と関連する
上記のデータは、Ａ５４９におけるドキソルビシン耐性がＧＰＢＰ発現の増加によって媒介されることを示唆している。このことは、ドキソルビシンでＡ５４９細胞を選択することによって評価され、ウェスタンブロットによりＧＰＢＰ発現を分析した（図１５）。ドキソルビシン処理およびＡ５４９細胞の選択により、高レベルのＧＰＢＰを発現する細胞系統が得られた。これらの提案と一致して、ドキソルビシン耐性Ａ５４９細胞および増加した組換えＧＰＢＰを発現するＡ５４９細胞の両方は、ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１（細胞周期下方制御因子）およびＡＢＣＣ１（生体異物トランスポーター）発現の増加を示した（表２）。
【０２０４】
【表２】
2015524385.tif 000036
【０２０５】
表２．ＣＤＫＮ１ＡおよびＡＢＣＣ１の発現は、組換えＧＰＢＰを発現しているＡ５４９細胞およびＡ５４９−ＤＲ細胞において上方制御される。この表は、示された遺伝子および細胞型の相対発現（統計量）ならびに統計的有意さ（ｐ、調整）が野生型Ａ５４９を順守していることを示す。
【０２０６】
化学療法抵抗性が、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントに生じるエピジェネティックな変化に依存することは広く受け入れられている（Ａｌｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．２００７）。したがって、ＧＰＢＰ媒介性ドキソルビシン耐性は、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントで発生すると予想される。これを試験するために、発明者らは、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントを拡張することが知られている培養条件を用いて、血清の非存在下でＡ５４９細胞を培養した。ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントの拡大は、ＧＰＢＰ発現の増加に関連し（図１６）、Ｔ１２の生物学的作用に対する感受性（１５μΜ対１２５μΜのＬＣ５０）が増大した（データは示さず）。
【０２０７】
考察
ドキソルビシンおよびＴ１２の両方は、ＧＰＢＰキナーゼ活性の阻害剤であるが、ドキソルビシンはＴ１２よりもＧＰＢＰに対してはるかに高い親和性を示し、おそらくＧＰＢＰ内の異なる領域に結合する（図１）。ドキソルビシンおよびＴ１２は、相乗的に腫瘍細胞の細胞生存率（生物活性）を低下させ（図２）、この共同作用は、少なくとも部分的にＧＰＢＰキナーゼ活性を下方制御するドキソルビシンに起因する。さらに、ドキソルビシンの生物活性は、ＣＳＣ／ＳＰ（図９）およびＣＴＡＣ／ＭＰ（図２）の両方のコンパートメントに作用するが、Ｔ１２のみ、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおいて生物活性を示した（図２、図９および図１４）。興味深いことに、Ｔ１２は、ＣＳＣ／ＳＰ（図９）およびＣＴＡＣ／ＭＰ（図２）の両方のコンパートメントにおいてドキソルビシンの生物活性を増強した。まとめると、このデータは、ＧＰＢＰが癌細胞ホメオスタシスに重要であり、Ｔ１２およびドキソルビシン間の生物活性の差異は、差次的ＧＰＢＰ結合部位／親和性によることを示唆している。ＧＰＢＰの高親和性阻害がＧＰＢＰ合成にリバウンド効果を与えることを示す証拠がいくつかある（図１５およびＰＣＴ／ＥＰ１２／０５２９２３、国際公開第２０１２／１１３７８５号）。対照的に、インビトロまたはインビボで培養した場合に、ＧＰＢＰ発現の増加がＡ５４９細胞のＴ１２処理と関連している証拠はない（図１３およびデータは示さず）。したがって、Ｔ１２の存在下でＡ５４９細胞を処理した場合に、ドキソルビシンＬＣ５０の低下（図２）は、反応性ＧＰＢＰ発現および化学療法抵抗性の発生を防止することが予想される。治療用量に満たないドキソルビシンを使用した動物モデルへのＴ１２の投与が、これらの結論を支持する（図１１〜１３）。
【０２０８】
低親和性ＧＰＢＰ阻害（Ｔ１２）は、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにて生物活性を発揮するのに十分であった（図９および図１４）。このことは、ＣＴＡＣ／ＭＰコンパートメントよりもＣＳＣ／ＳＰにおいて細胞の恒常性を維持するのにＧＰＢＰ発現がより重要であることを示唆している。ＧＰＢＰは、タンパク質分泌を促進し（Ｆｕｇｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２００７）、したがって、原形質膜へのタンパク質転移も促進する。生体異物を汲みだすＣＳＣ／ＳＰ細胞のユニークな能力が、このコンパートメントからの細胞を特に薬物耐性にさせると考えられている（Ｄｅａｎ ２００９）。Ｔ１２の存在下で、癌細胞がドキソルビシンを蓄積することを示す証拠がある。しかしながら、この効果は、ＣＴＡＣコンパートメントよりもＣＳＣ／ＳＰにおいて比較的より顕著であった（図１０）。ドキソルビシンは、ＡＢＣ生体異物トランスポーターファミリーに構造的に関連する塩素イオンチャネルであるＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７の発現を増加させる（データは示さず）。ＡＢＣトランスポーターファミリーは、典型的にはＣＳＣ／ＳＰコンパートメントでより多く発現しており、このことは、従来の抗腫瘍剤に対するＣＳＣ／ＳＰの耐性に関連している（Ｄｅａｎ ２００９，Ｖａｓｉｌｉｏｕ ｅｔ ａｌ．２００９）。興味深いことに、Ｔ１２は、ドキソルビシン依存的に増加するＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７発現を増強させ（データは示さず）、ドキソルビシンの非存在下で、ＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７の特異的阻害剤がＴ１２の生物活性を増強した（図７）ことは、Ｔ１２およびトランスポーター阻害剤が、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおける細胞生存率を低下させることに協力することを示唆している。
【０２０９】
発明者らのデータから、Ｔ１２はＧＰＢＰの「予期しない」低親和性阻害を示すが、ＧＰＢＰまたはＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７の発現を誘導しないことが示される。対照的に、「予想外」にＧＰＢＰの高親和性阻害も示すドキソルビシンは、ＧＰＢＰおよびＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７の両方の発現を誘導し、癌細胞を治療に対して耐性にさせる。Ｔ１２とドキソルビシンの組み合わせは、ＣＳＣ／ＳＰ（図９）およびＣＴＡＣ／ＭＰ（図２）の両方のコンパートメントにおいて化学療法抵抗性ならびに癌細胞生存率の両方を著しく低下させるので、動物モデルにおいて効率的に腫瘍増殖を損なう。さらに、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおける細胞生存率にひどく影響を与えることが予想されるＴ１２およびＣＦＴＲ／ＡＢＣＣ７−１７２阻害剤の組合せは、癌を治療するための新規な戦略を提供する。
【０２１０】
上述のデータは、主に、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９およびそれに由来する腫瘍を表す。臨床設定において発明者らの知見の範囲を探索するために、発明者らは、腫瘍サイズを５０％減少させる３ラウンドのシスプラチンベースの化学療法を受けた後の患者の肺扁平上皮癌に由来する初代培養物を分析した（データは示さず）。従来の化学療法は、主にＣＴＡＣ／ＭＰコンパートメントにおいて生物活性を発揮するので、培養物はＣＳＣ／ＳＰに富むことが予想された。興味深いことに、対応する一次培養物は、Ｔ１２に高度に感受性があり、実質的にドキソルビシンに耐性を示す（図１４）ので、肺癌ＣＳＣ／ＳＰがＴ１２に感受性を示すことをさらに支持する。
【０２１１】
Ｔ１２は、生物活性を示さないドキソルビシンおよび関連Ｔ４９（ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／００６７５７および国際公開第２０１１／０５４５３０号の化合物２２ｊ）と対照的に、患者の癌細胞に対して生物活性を示した（図１４）。しかし、Ｔ４９およびドキソルビシンは相乗的であり、組み合わせた場合にこれらの細胞に対して生物活性を示した（図１４）。後者は、個々のＱ２ペプチド模倣体のＧＰＢＰ結合親和性が、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおける生物活性の調節に重要であることを示唆している。
【０２１２】
ドキソルビシン耐性Ａ５４９細胞および組換えＧＰＢＰを発現するＡ５４９は、増加したレベルのＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１Ａ）およびＭＲＰ／ＡＢＣＣ１（多剤耐性関連タンパク質１）のｍＲＮＡを発現することが判明した（表２）。患者の腫瘍の病理学的分析は、シスプラチン処理時の原発腫瘍においてＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１およびＭＲＰ／ＡＢＣＣ１ポリペプチドの発現増加を示した（データは示さず）。ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１発現は、ＤＮＡ損傷に応答して増加し（Ｂｕｎｚ ｅｔ ａｌ．１９９８）、その下方制御は、細胞周期の進行を増強する（Ｓｅｏａｎｅ ｅｔ ａｌ．２００２）。したがって、化学療法に対する反応性ＧＰＢＰ発現は、ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１依存性細胞周期停止および有糸分裂阻害剤に対する化学療法抵抗性を媒介することが予想される。ＧＰＢＰの阻害は、原形質膜へのＡＢＣトランスポーターの移行を減少させ、癌細胞の化学療法剤を汲みだす能力を低下させることが予想される。したがって、データは、化学療法抵抗性の一般的機構が、ＣＤＫＮ１Ａ／ｐ２１を上方制御し、細胞分裂を停止させ、有糸分裂阻害剤に対して細胞を耐性にさせるＧＰＢＰの発現増加に起因することを示唆する。同様に、ＭＲＰ／ＡＢＣＣ１の上方制御を通じて、ＧＰＢＰは、抗癌治療に対して細胞をより耐性にさせる細胞外コンパートメントへの薬物流出も増強する。低い増殖速度およびＡＢＣトランスポーターの発現増加は、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントに特徴的であり、腫瘍において主要なＧＰＢＰ発現がＣＳＣ／ＳＰコンパートメントで生じることを示唆している。一貫して、Ａ５４９細胞がＣＳＣ／ＳＰコンパートメントを拡張する培養条件において、発明者らは、ＧＰＢＰ発現の漸進的増加を見出した（図１６）。
【０２１３】
まとめると、発明者らのデータは、ＣＳＣ／ＳＰコンパートメントにおいてＧＰＢＰ発現を増加させる任意の化学療法治療がＴ１２および関連化合物による治療の恩恵をうけることを示す。実施例は、抗腫瘍剤としてのドキソルビシンに焦点を当ててきたが、発明者らは、子宮癌由来のＣＳＣが、発明者らが試験した別のペプチド模倣体であるＴ１２に関連するＧＰＢＰ−１阻害剤（Ｔ５５）に高度に感受性を示すことを観察した（データは示さず）。さらに発明者らは、Ｔ１２が、ｔｏｐｏｌｌ阻害剤のドキソルビシンおよびエトポシドとは異なる作用機序を有するパクリタキセルとも相乗作用することを示すデータを生み出した。
【０２１４】
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【図１】
2015524385.tif 000055
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2015524385.tif 000062
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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