(57)【要約】  本発明は、ｃ−Ｍｅｔを対象とする療法による処置に適した癌患者の選別に有用な方法に関する。本方法は、生体内陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像に適した18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドを含む造影剤を使用する。また、治療方法、ｃ−Ｍｅｔを対象とする観察療法及び造影剤及びペプチドの本発明の方法における使用も開示される。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
前もって癌と診断された個々の患者が抗Ｍｅｔ療法による治療に対して感受性であるか否かの判定を補助する方法であって、
（ｉ）18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを含む造影剤を用意し、
（ｉｉ）患者に予め投与されているステップ（ｉ）の造影剤によって癌の１以上の部位を撮像し、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の造影から、部位における造影剤の取込の増大があるか否かを決定し、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の決定が取込の増大を示す場合、癌がｃ−Ｍｅｔを過剰発現していると判断され、抗Ｍｅｔ療法が患者に適していると決定され、
（ｖ）ステップ（ｉｉｉ）の決定が取込の増大を示さない場合、癌がｃ−Ｍｅｔを過剰発現していないと判断され、抗Ｍｅｔ療法が患者に適していないと決定される
ことを含み、
ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドが次式Ｉの１８〜３０量体環状ペプチドであ、方法。
Ｚ1−［ｃＭＢＰ］−Ｚ2            （Ｉ）
式中、
ｃＭＢＰは次式ＩＩのものであり、
−（Ａ）x−Ｑ−（Ａ’）y−        （ＩＩ）
Ｑは次のアミノ酸配列（ＳＥＱ−１）であり、
−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−
Ｘ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ2はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ3はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ4はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ5はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ6はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓa-dは各々がシステイン残基であって、残基ａとｂ及びｃとｄが環化して２つの別々のジスルフィド結合を形成し、
Ａ及びＡ’は独立にＣｙｓ以外の任意のアミノ酸であり、但しＡ及びＡ’の１以上が存在し、Ｌｙｓであり、
ｘ及びｙは独立に値０〜１３の整数であって、［ｘ＋ｙ］＝１〜１３となるように選択され、
Ｚ1はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｈ又はＭIGであり、
Ｚ2はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＯＢc、又はＭIGであり、
Ｂcは生体適合性カチオンであり、
各ＭIGは独立に、生体内でｃＭＢＰペプチドの代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、
ｃＭＢＰはＡ又はＡ’基のＬｙｓ残基において18Ｆ標識される。
【請求項２】
ｃＭＢＰが次式ＩＩＡのものであり、ｃＭＢＰがただ１つのＬｙｓ残基を含む、請求項１記載の方法。
−（Ａ）x−Ｑ−（Ａ’）z−Ｌｙｓ−            （ＩＩＡ）
式中、ｚは値０〜１２の整数であり、［ｘ＋ｚ］＝０〜１２である。
【請求項３】
ＱがＳＥＱ−２又はＳＥＱ−３のアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２記載の方法。
Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6          （ＳＥＱ−２）
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ        （ＳＥＱ−３）。
【請求項４】
Ｘ3がＡｒｇである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
−（Ａ）x−又は−（Ａ’）y−基が、
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−    （ＳＥＱ−４）、
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−    （ＳＥＱ−５）又は
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−    （ＳＥＱ−６）
から選択されるリンカーペプチドを含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
ｃＭＢＰがアミノ酸配列（ＳＥＱ−７）を有する、請求項５記載の方法。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｔｙｒ−Ｃｙｓc−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ    （ＳＥＱ−７）
【請求項７】
Ｚ1及びＺ2が独立にＭIGである、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
Ｚ1がアセチルであり、Ｚ2が第一アミドである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
癌が、非小細胞性肺癌、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、頭頚部癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、膠腫又は肉腫である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
癌が非小細胞性肺癌、結腸直腸癌又は胃癌である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前もって癌と診断された個々の患者の治療方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の決定方法を実施し、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）の決定により抗Ｍｅｔ療法が患者に適している場合、患者の抗Ｍｅｔ療法を開始又は継続する
ことを含む、方法。
【請求項１２】
抗Ｍｅｔ療法が、
（ａ）非タンパク性ｃ−Ｍｅｔ阻害剤、
（ｂ）抗Ｍｅｔ抗体又はその断片、
（ｃ）抗Ｍｅｔ抗体又はその断片、
（ｄ）ｃ−Ｍｅｔシグナリング経路に間接的に影響を及ぼす薬剤
又はこれらの組合せ
を含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
抗Ｍｅｔ療法が追加の処置と共に併用療法の一部として送達され、追加の処置が、
（ｉ）ＥＧＦＲ阻害剤、
（ｉｉ）チロシンキナーゼ阻害剤、
（ｉｉｉ）ＶＥＧＦ阻害剤、
（ｉｖ）標準的な癌化学療法、
（ｖ）β−カテニン阻害剤
から選択される、請求項１１又は請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前もって癌と診断され、請求項１１乃至請求項１３のいずれか１項記載の抗Ｍｅｔ療法で予め処置された個々の患者の療法のモニター方法であって、それぞれ請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載のステップ（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の撮像及び決定を療法の開始後１以上の時間間隔で実施することを含む、方法。
【請求項１５】
抗Ｍｅｔ療法が請求項１２又は請求項１３に定義されているものである、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドの、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の決定方法、請求項１１乃至請求項１３のいずれか１項記載の治療方法、又は請求項１４又は請求項１５記載のモニター方法における使用。
【請求項１７】
請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の式（Ｉ）のｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドの、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の決定方法、請求項１１乃至請求項１３のいずれか１項記載の治療方法、又は請求項１４又は請求項１５記載のモニター方法における使用。
【請求項１８】
請求項１１又は請求項１２に定義されている抗Ｍｅｔ療法の、請求項１１乃至請求項１３のいずれか１項記載の治療方法、又は請求項１４又は請求項１５記載のモニター方法における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−Ｍｅｔを対象とする療法による治療に適した癌患者の選別に有用な方法に関する。本方法では、生体内の陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに適切な18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドを含む造影剤を使用する。また、治療方法、ｃ−Ｍｅｔの観察療法、及び本発明の方法における造影剤及びペプチドの使用も開示される。
【背景技術】
【０００２】
分散因子（ＳＦ）ともいわれる肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、創傷治癒及び血管形成のような様々な生理学的過程に関与する増殖因子である。ＨＧＦとその受容体（ｃ−Ｍｅｔ）との相互作用の高い親和性の相互作用は腫瘍の増殖、浸潤及び転移に関係する。
【０００３】
Ｋｎｕｄｓｅｎらは前立腺癌におけるＨＧＦとｃ−Ｍｅｔの役割について、イメージングと療法に対する考えられる関連と共に検討している［Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，９１，３１−６７（２００４）］。診断と療法のための標識抗ｍｅｔ抗体は国際公開第０３／０５７１５５号、欧州特許出願公開第２１２７６８３号及び国際公開第２０１１／１１０６４２号に記載されている。
【０００４】
ｃ−Ｍｅｔは、上皮由来の多くのヒトの癌で腫瘍の増殖、浸潤及び転移に関与することが示されている。ｃ−Ｍｅｔは殆どの癌腫により発現され、正常組織と比べてその高まった発現は肺、乳、大腸、膵臓、頭頚部、胃、肝細胞、卵巣、腎臓、膠腫、黒色腫及び幾つかの肉腫の癌で検出されている。大腸癌腫（ＣＲＣ）において、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現は疾病の最先前新生物病変である形成異常腺窩巣で検出されている。頭頚部扁平上皮細胞癌において、ｃ−Ｍｅｔは原発性腫瘍の概略８０％で発現又は過剰発現が報告されている。前立腺癌の骨への転移において、ｃ−Ｍｅｔは８０％を超える骨転移で過剰発現が報告された。
【０００５】
正常な状態では、ｃ−Ｍｅｔは上皮細胞で発現され、間葉的に誘導されるＨＧＦによりパラクリン様に活性化される。正常細胞におけるｃ−Ｍｅｔの活性化は一過性の事象であり、厳密に調節される。しかし、腫瘍細胞において、ｃ−Ｍｅｔは構成的に活性であることができる。癌において、異常なｃ−Ｍｅｔ刺激はｃ−Ｍｅｔ増幅／過剰発現によって達成され得、オートクリンシグナルループの創成によってｃ−Ｍｅｔ突然変異（例えば構造変化）及び自律的増殖制御の獲得が活性化され得る。さらに、ｃ−Ｍｅｔ受容体の不完全な下方調節も細胞膜における異常なｃ−Ｍｅｔ発現に寄与する。ｃ−Ｍｅｔの過剰発現はＨＧＦ依存性であるが（オートクリン／パラクリン）、突然変異により起こる構造変化はＨＧＦに依存しない（例えば細胞外ドメインの損失）。
【０００６】
国際公開第２００４／０７８７７８号はｃ−Ｍｅｔ又はｃ−ＭｅｔとＨＧＦを含む複合体と結合するポリペプチド又は多量体ペプチド構築物を開示している。およそ１０種の異なるペプチド構造体が記載されている。国際公開第２００４／０７８７７８号は、これらのペプチドが、生体外及び生体内用の検出可能な標識、又は治療用の薬剤で標識可能であることを開示している。検出可能な標識は酵素、蛍光性化合物、光学染料、常磁性の金属イオン、超音波造影剤又は放射性核種であることができる。国際公開第２００４／０７８７７８号の好ましい標識は放射性又は常磁性であり、最も好ましくは金属キレート剤で錯化した金属からなるとされている。国際公開第２００４／０７８７７８号は、放射性核種は18Ｆ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、123Ｉ、77Ｂｒ、76Ｂｒ、99mＴｃ、51Ｃｒ、67Ｇａ、68Ｇａ、47Ｓｃ、167Ｔｍ、141Ｃｅ、111Ｉｎ、168Ｙｂ、175Ｙｂ、140Ｌａ、90Ｙ、88Ｙ、153Ｓｍ、166Ｈｏ、165Ｄｙ、166Ｄｙ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、97Ｒｕ、103Ｒｕ、186Ｒｅ、203Ｐｂ、211Ｂｉ、212Ｂｉ、2l3Ｂｉ、2l4Ｂｉ、105Ｒｈ、109Ｐｄ、117mＳｎ、149Ｐｍ、161Ｔｂ、177Ｌｕ、198Ａｕ及び199Ａｕから選択することができると述べている。国際公開第２００４／０７８７７８号は、診断目的に好ましい放射性核種は64Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、99mＴｃ及び111Ｉｎであり、99mＴｃが特に好ましいと述べている（６２頁）。
【０００７】
国際公開第２００８／１３９２０７号は、緑〜近赤外波長６００〜１２００ｎｍの光を用いて哺乳類の身体をインビボで撮像するのに適した光学レポーターイメージング部分で標識された１７〜３０個のアミノ酸のｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを開示している。これらのｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドは次のアミノ酸配列を含む。
Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6
Ｘ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ2はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ3はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ4はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ5はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ6はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓa-dは各々がシステイン残基であって、残基ａとｂ及びｃとｄが環化して２つの別々のジスルフィド結合を形成する。国際公開第２００８／１３９２０７号の光学レポーターは好ましくはシアニン染料である。
【０００８】
国際公開第２００９／０１６１８０号は、国際公開第２００８／１３９２０７号のものと類似であるが光学レポーターがベンゾピリリウム染料であるｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを開示している。国際公開第２００８／１３９２０７号及び国際公開第２００９／０１６１８０号の作用剤は生体外及び生体内用途向けに、殊にヒトの身体の生体内光学撮像に有用であると述べられている。大腸癌の光学撮像が好ましい用途である。
【０００９】
国際公開第２０１１／０２０９２５号は抗ｃ−Ｍｅｔ抗体及びその使用を開示している。国際公開第２０１１／０２０９２５号は、この抗体が抗ｃ−Ｍｅｔ抗体による治療に対する患者の感受性を決定するのを助けるのに使用できることを開示している。その方法は腫瘍のｃ−Ｍｅｔ状態を決定するためにインビトロ法（腫瘍試料の免疫組織化学的分析）を使用することを含んでいる。しかしながら、この方法はやはり上記不利益を伴う生検に依存している。
【００１０】
Ｍｅｒｃｈａｎｔら［２０１１  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，Ａｂｓｔｒａｃｔ  １０６３２、Ｓｕｐｐｌ．（２０１１）］はマウス異種移植片におけるｃ−Ｍｅｔの分子イメージングのために76Ｂｒ又は89Ｚｒ−標識抗ｃ−Ｍｅｔ抗体（ＭｅｔＭａｂ（商標））を開示している。これらの作用剤は迅速な腫瘍取込と遅いクリアランスを示したと報告されている。
【００１１】
ｃ−Ｍｅｔを対象とする薬剤の化学療法剤（「抗Ｍｅｔ療法」）が幾つかの機関により開発されている。かかる薬剤は転移性の病気で典型的に使用されると期待されている。しかしながら、現在までの臨床試験結果は、患者の予後が腫瘍のｃ−Ｍｅｔ状態に関する知識に依存することを示唆している。また、ｃ−Ｍｅｔ状態は抗ｃＭｅｔ療法に対する応答を予測できる可能性もある。現在のところ、ｃ−Ｍｅｔ状態は患者から採取した生検試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）分析によって決定することができるが、生検は侵襲的であり（患者に幾らかのリスクをもたらす）、代表的な試料とならないことがある。従って、主として健全な組織が収集されるサンプリングの誤りという固有のリスクがあるか、又は、腫瘍の不均質性ために、腫瘍の最も活性な部分の分子プロフィールを表さない腫瘍切片が採取される［Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３６６（１０）；８８３−８９２（２０１２）］。さらに、生検はサンプリングした腫瘍に関する情報が得られるのみであり、全体としての患者の腫瘍及び／又は腫瘍転移負担に関するものではない。抗Ｍｅｔ療法は第二又は第三選択療法として使用されることが期待されるので、処理してない腫瘍を代表する十分な質の生検材料が入手できない可能性があるか、又は潜在的にその腫瘍の分子プロフィールを表さない可能性がある。生検による再度のサンプリングは、病的状態に幾らかのリスクをもたらすため、また上記した問題のため、一般には行われない。
【００１２】
最近公表された研究［Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，１（１）；４４−５３（２０１１）］において、病気が進んだ前処置されたＮＳＣＬＣ患者（ｎ＝１３９）で新たな生検を取得し、治療の選別のためにリアルタイムのバイオマーカー分析を利用することの価値が調べられた。分子プロフィールに基づいて患者を治療に割り当てると、有効な治療成果の確率が上昇することが見出された。報告によるとこの生検手順はこの試験で十分に許容されたが患者の１１．５％に気胸が起こり、結果として、バイオマーカーに基づく治療の階層化のための患者からの再生検は有利であるがリスクがないわけではないと結論された。
【００１３】
ｃ−Ｍｅｔをブロックするモノクローナル抗体であるＭｅｔＭＡｂ（商標）（Ｒｏｃｈｅ）に対する第ＩＩ相試験で［２０１１  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ＆  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｏｃｈｅ．ｃｏｍ／ｍｅｄｉａ／ｍｅｄｉａ＿ｒｅｌｅａｓｅｓ／ｍｅｄ−ｃｏｒ−２０１１−０５−１９．ｈｔｍ］、ＮＳＣＬＣ患者は、
（ｉ）ＭｅｔＭＡｂ＋エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（ＥＧＦＲ阻害剤）、又は
（ｉｉ）プラセボ＋エルロチニブ
のいずれかにランダム化された。
ｃ−Ｍｅｔ状態は保管試料（およそ５０％がＩＨＣにより陽性であった）のＩＨＣ及びＦＩＳＨ分析によって決定された。患者群全体として（すなわちｃ−Ｍｅｔ発現の高い患者も低い患者も含む）２つの治療で差異がなかった。保管生検試料の遡及ＩＨＣ分析に基づいてデータを分析したところ、メジアン全生存期間はＭｅｔＭＡｂ群で１２．６月であったのに対して、エルロチニブ群では３．８月であった（ｐ＝０．００２）。さらに、エルロチニブと組み合わせてＭｅｔＭＡｂで処置された低いｃ−Ｍｅｔ発現の患者では、エルロチニブ単独と比べてより悪い成果であった。治療に先立った生検の予測収集はこの試験に含まれておらず、保管試料に基づくｃ−Ｍｅｔスコアリングが研究対象集団に対して十分に代表的であるか否かは不明である。
【００１４】
Ｏｌｉｎｅｒら［Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３０，Ｓｕｐｐｌ．，ａｂｓｔｒ  ４００５（２０１２）］は最近、局所的に進行した又は転移性の胃癌若しくは食道胃接合部癌の患者におけるエピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）及びカペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（ＥＣＸ）と組み合わせたＨＧＦ抗体リロツムマブ（ｒｉｌｏｔｕｍｕｍａｂ）（Ａｍｇｅｎ）の第２相研究のデータを公表した。ｃ−Ｍｅｔが高い腫瘍（＞５０％腫瘍細胞陽性）の患者は併用療法で処置された場合プラセボ及びＥＣＸで処置された患者と比べてメジアン全生存期間が改良された。逆に、ｃ−Ｍｅｔが低い腫瘍（£５０％陽性）の患者は併用療法で処置した場合プラセボ及びＥＣＸで処置した患者と比べて不利な全生存期間の傾向を示した。プラセボ及びＥＣＸ群の場合、ｃ−Ｍｅｔが高い腫瘍の患者の方が、ｃ−Ｍｅｔが低い腫瘍の患者より全体的に悪かった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１２／０３９８０２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
従って、個々の患者が抗Ｍｅｔ療法の利益を得るか否かを決定するために、腫瘍のｃ−Ｍｅｔ状態及び／又は患者の腫瘍転移負担を評価するためのより侵襲的でない方法に対するニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌（ＣＲＣ）及び胃癌のような癌においてｃ−Ｍｅｔ療法の開始前の決定過程を補助するために、患者の腫瘍（１以上）のｃ−Ｍｅｔ状態を決定する方法を提供する。抗Ｍｅｔ療法のために、処理する医師は、アジュバントｃ−Ｍｅｔ阻害剤療法を開始する前に患者のｃ−Ｍｅｔ状態（腫瘍及び転移）を知る必要があるであろう。新たに診断される患者の場合診断生検の分子分析から答えを得ることが可能であり得るが、標準的な療法で失敗した患者の場合保管試料が利用可能であってもその病気の現在の状態を十分に表していないことがある。
【００１８】
本発明の方法は、いつ個々の患者が抗Ｍｅｔ療法の利益を得るか否かを医師が決定する際の助けになる。重要なことに、本方法はまた、抗Ｍｅｔ療法が無効であるか又は否定的な効果を有するであろう患者をかかる治療から除外する際の助けにもなる。
【００１９】
本発明の方法は、生検よりずっと少ないリスクを患者にもたらし、例えば生検が困難な腫瘍部位又は前もっては知られていない転移の部位の発現を含めて全ての腫瘍及び転移に対する全ｃ−Ｍｅｔ負担を評価する方法を提供するという利点を有する。従って、生検試料（かかる試料が利用可能であるとしても）の分析よりも完全な患者の状況が得られる。加えて、本方法は、いろいろな時間間隔で撮像を繰り返すのに適しており、従って抗Ｍｅｔ療法をモニターするのに使用することができる。
【００２０】
ＭｅｔＭａｂ（商標）は８〜１２日の複合排出半減期を示し、従って、バックグランドからのクリアランスが極端に遅いので、生体イメージングにとって理想的な薬物動態を有していない。対照的に、本発明の作用剤では、患者への投与後１時間以内の撮像が可能になる。
【００２１】
本発明はまた、抗Ｍｅｔ療法を監視する手段も提供する。これは、所与の療法が、個々の患者に対して好結果を示すことを立証する（従って継続する価値がある）か、又は有効でなく、異なる処置又は薬物療法への早めの変更を可能にするかを決定するのに有意義であることが期待される。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
第１の態様では、本発明は、前もって癌と診断された個々の患者が、抗Ｍｅｔ療法による治療に対して感受性であるか否かの判定を助ける方法を提供し、この方法は、
（ｉ）18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを含む造影剤を用意し、
（ｉｉ）前もって患者に投与されたステップ（ｉ）の造影剤を用いて癌の１以上の部位を撮像し、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の撮像から、部位における造影剤の取込が高められたか否かを決定し、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の決定が高められた取込を示す場合、癌がｃ−Ｍｅｔを過剰発現していると判断され、抗Ｍｅｔ療法が患者に適切であると決定され、
（ｖ）ステップ（ｉｉｉ）の決定が高められた取込を示さない場合、癌がｃ−Ｍｅｔを過剰発現していないと判断され、抗Ｍｅｔ療法が患者に適切でないと決定される
ことを含んでおり、
ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドは式Ｉの１８〜３０量体環状ペプチドである。
Ｚ1−［ｃＭＢＰ］−Ｚ2          （Ｉ）
式中、
ｃＭＢＰは式ＩＩで表される。
−（Ａ）x−Ｑ−（Ａ’）y−        （ＩＩ）
式中、Ｑはアミノ酸配列（ＳＥＱ−１）である。
−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−
Ｘ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、
Ｘ2はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ3はＴｈｒ又はＡｒｇであり、
Ｘ4はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、
Ｘ5はＳｅｒ又はＴｈｒであり、
Ｘ6はＡｓｐ又はＧｌｕであり、
Ｃｙｓa-dは各々システイン残基であって、残基ａとｂ及びｃとｄは環化して２つの別々のジスルフィド結合を形成し、
Ａ及びＡ’は独立にＣｙｓ以外の任意のアミノ酸であるが、但しＡ及びＡ’の１以上が存在し、Ｌｙｓであり、
ｘ及びｙは独立に値０〜１３の整数であり、［ｘ＋ｙ］＝１〜１３となるように選択され、
Ｚ1はｃＭＢＰのＮ末端に結合しており、Ｈ又はＭIGであり、
Ｚ2はｃＭＢＰのＣ末端に結合しており、ＯＨ、ＯＢc、又はＭIGであり、
Ｂcは生体適合性カチオンであり、
各ＭIGは独立に、ｃＭＢＰペプチドの生体内代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、
ｃＭＢＰはＡ又はＡ’基のＬｙｓ残基で18Ｆ標識されている。
【００２３】
用語「ｃ−Ｍｅｔ」はその通常の意味を有しており、ＭＥＴともいわれる肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）受容体を指す。ＨＧＦはまた分散因子（ＳＦ）ともいわれる。
【００２４】
用語「患者」は哺乳動物、好ましくはインビボの完全な哺乳類の身体、さらに好ましくはヒトの被験体をいう。表現「前もって癌と診断された」は、患者が既に癌に陽性と診断されており、好ましくはその個々の患者の癌の少なくとも原発性部位（１以上）の位置が知られていることを意味する。この診断は当技術分野で公知の方法で行うことができる。この表現はまた、臨床診断によって病変部が癌に進行し、抗Ｍｅｔ療法による治療の利益を得る可能性があるとされる前癌状態の病変を包含する。
【００２５】
表現「治療に対して感受性」は、個々の患者がある形態の癌を患っており、治療が平均余命を延長するか、及び／又は癌の状態がその患者の健康状態に及ぼす影響を低減することを意味する。従って、個々の患者に対して薬物治療を行うことの全利益：リスク比は正（すなわち有益）である。
【００２６】
用語「抗Ｍｅｔ療法」は、受容体の直接阻害によって（例えば抗ｃ−Ｍｅｔ抗体）、そのリガンドＨＧＦの不活性化によって（例えばＡＭＧ１０２、Ｌ２Ｇ７）、ＨＧＦのｃ−Ｍｅｔへの結合に干渉することによって（例えばＮＫ４）、又はｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性を阻害することによって（例えばＰＨＡ−６６５７５２及びＳＵ１１２７４）、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達を阻害する作用剤を含む薬物が患者に送達される化学療法を意味する。薬物は任意の適切な投与経路によって送達され得る。本明細書で使用する場合、用語「抗Ｍｅｔ療法」は外部ビーム放射線療法を除外する。好ましいかかる療法については第２の態様に関して記載する（下記）。
【００２７】
用語「造影剤」は哺乳類の身体の生体イメージングに適した化合物を意味する。好ましくは、哺乳動物はインビボで完全な哺乳類の身体であり、さらに好ましくはヒトの被験体である。好ましくは、造影剤は、最小の侵襲的な方法で、すなわち医学の専門知識技術の下で行われたとき哺乳類の被験体に実質的な健康上のリスクをもたらさないで、哺乳類の身体に投与することができる。かかる最小の侵襲的な投与は好ましくは、局所又は全身麻酔の必要がない被験体の末梢静脈への静脈内投与である。用語「生体イメージング」は本明細書で使用する場合、哺乳類の被験体の内面の全部又は一部の像を非侵襲的に生成する技術をいう。
【００２８】
用語「予め投与されている」とは、そのステップに臨床医が関与し、撮像に先立って、造影剤が既に哺乳類の被験体に与えられていることを意味する。
【００２９】
用語「取込の増大」は、対象とした癌の領域で取られた造影剤からの信号に関する、隣接するバックグランド組織におけるかかる信号に対する標的：バックグランド比が正であることを意味する。最小のかかる比は腫瘍：筋肉又は腫瘍：血液比の場合１．１：１である。
【００３０】
用語「ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド」は、ｃ−Ｍｅｔ（又は単にＭＥＴ）ともいわれる肝細胞増殖因子受容体に結合するペプチドを意味する。本発明の適切なかかるペプチドは式Ｉの１８〜３０個のアミノ酸の環状ペプチドである。かかるペプチドは約２０ｎＭ未満のｃ−Ｍｅｔに対する見かけのＫDを有する。ペプチドのｃＭＢＰ配列はプロリン残基を含んでおり、かかる残基が骨格アミド結合のシス／トランス異性化を示し得ることは公知である。本発明のｃＭＢＰペプチドはかかる異性体を全て包含する。
【００３１】
Ｚ1基はｃＭＢＰの最後のアミノ酸残基、すなわちアミノ末端のアミン基と置き換わっている。従って、Ｚ1がＨである場合、ｃＭＢＰのアミノ末端は最後のアミノ酸残基の遊離のＮＨ２基で終結する。Ｚ2基はｃＭＢＰの最後のアミノ酸残基つまりカルボキシ末端のカルボニル基と置き換わっている。従って、Ｚ2がＯＨである場合ｃＭＢＰのカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離のＣＯ2Ｈ基で終結し、Ｚ2がＯＢcである場合末端のカルボキシ基はＣＯ2Ｂc基としてイオン化する。
【００３２】
用語「生体適合性カチオン」（Ｂc）は、イオン化し負に帯電した基と塩を形成する正に帯電した対イオンを意味し、この場合正に帯電した対イオンも非毒性であり、従って哺乳類の身体、殊にヒトの身体への投与に適している。適切な生体適合性カチオンの例には、アルカリ金属のナトリウム又はカリウム、アルカリ土類金属のカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性カチオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【００３３】
用語「代謝阻害基」（ＭIG）は、アミノ末端（Ｚ1）又はカルボキシ末端（Ｚ2）のいずれかでｃＭＢＰペプチドの生体内代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基は当業者に周知であり、以下のものから適宜選択される。すなわち、ペプチドアミン末端については、Ｎ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＲG、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）ＲGはＣ1-6アルキル、又はＣ3-10アリール基から選択されるＲGを有するか又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックを含む。ペプチドカルボキシ末端については、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロック。好ましいかかるＰＥＧ基は式ＩＡ又はＩＢの生体修飾基である。
【００３４】
【化１】
2015507620.tif 000002
式ＩＡの１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸
ｐは１〜１０の整数である。或いは、式ＩＢのプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造を使用することができる。
【００３５】
【化２】
2015507620.tif 000003
式中、ｐは式ＩＡに対して定義された通りであり、ｑは３〜１５の整数である。式ＩＢで、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは５〜１２である。
【００３６】
好ましいかかるアミノ末端ＭIG基はアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。
【００３７】
用語「18Ｆ放射性標識」は、ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドが放射性同位体18Ｆに共有結合されていることを意味する。18ＦはＣ−Ｆフルオロアルキル又はフルオロアリール結合によって適切に結合される。これは、かかる結合が生体内で比較的安定であるので、18Ｆ放射標識のｃＭＢＰペプチドからの代謝性開裂に対する耐性を授与するからである。18Ｆは好ましくはＣ−Ｆフルオロアリール結合を介して結合される。18ＦはｃＭＢＰのアミノ酸の１つに直接結合してもよいが、好ましくはｃＭＢＰ上の放射性フッ素化置換基の一部として結合される。置換基は好ましくは次式のものである。
−（Ｌ）n−18Ｆ
式中、
Ｌは式−（Ａ）m−の合成リンカー基であり、各Ａは独立に−ＣＲ2−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−ＣoＣ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、−ＣＲ2−Ｏ−Ｎ＝、−ＣＲ2−Ｏ−ＮＲ−、−ＣＲ2−Ｏ−ＮＨ（ＣＯ）−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、若しくはＣ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックであり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは値１〜２０の整数であり、
ｎは値０又は１の整数である。
【００３８】
用語「アミノ酸」は、Ｌ−若しくはＤ−アミノ酸、アミノ酸アナログ（例えばナフチルアラニン）又はアミノ酸ミメティックを意味し、これらは天然でも又は純粋に合成由来でもよく、光学的に純粋、すなわち単一のエナンチオマー、従ってキラルでも、又はエナンチオマーの混合物でもよい。本明細書では、アミノ酸に対して慣用の３文字又は１文字略号を使用する。好ましくは本発明のアミノ酸は光学的に純粋である。用語「アミノ酸ミメティック」は、天然のアミノ酸の合成類似体を意味し、これらはアイソスターであり、すなわち天然の化合物の立体及び電子構造を模倣して設計されている。かかるアイソスターは当業者に周知であり、限定されることはないがデプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールがある［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７，（１９８５）参照］。
【００３９】
用語「ペプチド」は、ペプチド結合（すなわち１つのアミノ酸のアミンをもう１つのアミノ酸のカルボキシルに結合するアミド結合）で結合した２以上のアミノ酸（上記に定義した）を含む化合物を意味する。
【００４０】
用語「糖」は単糖類、二糖累又は三糖類を意味する。適切な糖には、
【００４１】
【化３】
2015507620.tif 000004
グルコース、ガラクトース、マルトース、マンノース、及びラクトースがある。場合により、糖はアミノ酸との容易な結合が可能になるように官能化してもよい。すなわち、例えばアミノ酸のグルコサミン誘導体はペプチド結合を介して他のアミノ酸に結合することができる。アスパラギンのグルコサミン誘導体（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍから市販されている）はこの１つの例である。
【００４２】
Ａ及びＡ’が「Ｃｙｓ以外の任意のアミノ酸」である場合とは、Ａ及びＡ’基の追加のアミノ酸が遊離のチオール基、特にＣｙｓ残基を欠いていることを意味する。これは、追加のＣｙｓ残基が、Ｑ配列のＣｙｓa−Ｃｙｓb及びＣｙｓc−Ｃｙｓdジスルフィド架橋とのジスルフィド架橋スクランブリングを起こす危険性があり、結果としてｃ−Ｍｅｔ結合親和性が損失又は低下するからである。
【００４３】
好ましい特徴
第１の態様の方法において、癌は好ましくは非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、頭頚部癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、膠腫若しくは肉腫、又は上皮由来の他の癌である。癌の腫瘍は好ましくは固形腫瘍である。より好ましくは、癌はＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌又は胃癌である。最も好ましくは、癌はＮＳＣＬＣである。
【００４４】
本発明の好ましいｃＭＢＰペプチドは（蛍光偏光アッセイ測定に基づいて）約１０ｎＭ未満、最も好ましくは１〜５ｎＭの範囲のｃ−Ｍｅｔとｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦの結合に対するＫDを有し、３ｎＭ未満が理想的である。
【００４５】
式Ｉ及びＩＩのｃＭＢＰペプチドは好ましくは式ＩＩＡのものである。
−（Ａ）x−Ｑ−（Ａ’）z−Ｌｙｓ−
（ＩＩＡ）
式中、Ａは式ＩＩについて定義した通りであり、
ｚは値０〜１２の整数で、［ｘ＋ｚ］＝０〜１２であり、
ｃＭＢＰはただ１つのＬｙｓ残基を含む。
【００４６】
すなわち、式ＩＩＡにおいて、単一のＬｙｓ残基は特にｃＭＢＰのＣ末端に位置している。従ってこれは、18Ｆ放射標識が好ましくはＣ末端位置に配置されていることを意味する。
【００４７】
Ｑは好ましくはＳＥＱ−２又はＳＥＱ−３のいずれかのアミノ酸配列を含む。
Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6      （ＳＥＱ−２）、
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｘ1−Ｃｙｓc−Ｘ2−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ3−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ      （ＳＥＱ−３）。
【００４８】
ＳＥＱ−１、ＳＥＱ−２及びＳＥＱ−３において、Ｘ3は好ましくはＡｒｇである。式Ｉ及び式ＩＩにおいて、−（Ａ）x−又は−（Ａ’）y−基は好ましくは次のものから選択されるリンカーペプチドを含む。
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−    （ＳＥＱ−４）、
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−    （ＳＥＱ−５）、又は
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−    （ＳＥＱ−６）。
【００４９】
第１の態様のｃＭＢＰペプチドは好ましくは次のアミノ酸配列（ＳＥＱ−７）を有する。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓa−Ｔｙｒ−Ｃｙｓc−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓd−Ｔｒｐ−Ｃｙｓb−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。
【００５０】
本発明の好ましい造影剤は両方のｃＭＢＰペプチド末端がＭIG基で保護されており、すなわち好ましくはＺ1及びＺ2の両方がＭIGであり、これらは通常異なる。このように両方のペプチド末端が保護されていることは生体イメージング用途にとって重要である。すなわち、そうでないと、迅速なペプチド代謝が起こると予想され、その結果ｃ−Ｍｅｔに対する選択的な結合親和性が損失するであろうからである。両方のＺ1とＺ2がＭIGである場合、好ましくはＺ1がアセチルであり、Ｚ2が第一アミドである。最も好ましくは、Ｚ1がアセチルで、Ｚ2が第一アミドであり、18Ｆ部分がｃＭＢＰのリジン残基のεアミン側鎖に結合している。
【００５１】
放射性フッ素化置換基−（Ｌ）n−18Ｆは、ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドのＮ末端のαアミノ基、又は代わりにアミノ置換アミノ酸（例えばＬｙｓ残基）のアミン側鎖に結合され得る。好ましくは、ｃＭＢＰのＬｙｓ残基のεアミン基に結合される。
【００５２】
好ましい放射性フッ素化置換基−（Ｌ）n−18Ｆはｎ＝１であり、すなわち上で定義した合成リンカー基が存在する。より好ましいかかる置換基はフェニル基に結合した18Ｆ放射標識を含み、すなわち置換基は次式のものである。
【００５３】
−（Ａ）xＣ6Ｈ4−18Ｆ
式中、Ａは上で定義した通りであり、
ｘは値０〜５の整数である。
【００５４】
最も好ましいかかる置換基は、フッ素化活性エステルによるＬｙｓアミン残基のＮ−アシル化、又はＬｙｓアミン残基のアミノ−オキシ誘導体とフッ素化ベンズアルデヒドとの縮合によって生じ、次式のものである。
【００５５】
【化４】
2015507620.tif 000005
第１の態様の造影剤は好ましくは、
（ｉ）第１の態様で定義された18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド、
（ｉｉ）非標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド
を含む造影剤組成物として提供され、
ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドは（ｉ）と（ｉｉ）で同一のアミノ酸配列を有し、
非標識ｃＭＢＰペプチドは18Ｆ標識ｃＭＢＰペプチドのモル量の５０倍以下で組成物中に存在する。
【００５６】
組成物中の18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドの好ましい実施形態は上記記載の通りである。用語「組成物」はその通常の意味を有し、すなわち特定の成分の混合物である。組成物は固体又は液体／溶液形態であり得る。
【００５７】
用語「非標識」は、ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドが非放射性であり、18Ｆその他の放射性同位体で放射標識されていないことを意味する。１以上のかかるペプチドが組成物中に存在してもよく、かかる非標識ペプチドは本来第４の態様（後記）の非放射性の前駆体を包含する。用語「非標識」は、19Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを除外する。19Ｆは、ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを放射標識するのに用いた18Ｆ−フッ素中に存在し、従って同じ放射標識反応の生成物である。当技術分野で公知のように、２つのフッ素置換化合物がフッ素原子の同位体においてのみ異なる場合、それらは化学的には殆ど同じ挙動をし、従ってそれらの分離は極端に困難であろう。非標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド又は前駆体は好ましくは基Ｚ1及び／又はＺ2が既に結合している。
【００５８】
好ましくは、非標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドは対応する18Ｆ標識ペプチドのモル量の３０倍以下、より好ましくは２０倍以下、最も好ましくは１０倍未満で組成物中に存在する。組成物は好ましくは溶液形態であり、成分（ｉ）と（ｉｉ）は両方とも溶液中に存在する。より好ましくは、溶液は生体適合性溶媒、又は２以上のかかる溶媒の混合物である。好ましいかかる生体適合性溶媒は以下に記載するが、好ましくは水性溶媒からなる。
【００５９】
第１の態様の造影剤は好ましくは、造影剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した無菌の形態で含む薬剤組成物として提供される。「生体適合性担体」は、組成物が生理学的に容認できる、すなわち毒性又は過度の不快を伴わないで哺乳類の身体に投与できるように造影剤が懸濁又は好ましくは溶解することができる流体、殊に液体である。生体適合性担体は適宜無菌の発熱物質を含まない注射用水のような注射可能な担体液体、生理的食塩水（最終の注射用生成物が等張になるように都合よく平衡させ得る）のような水溶液、生体適合性緩衝剤（例えばリン酸塩緩衝剤）を含む水性緩衝剤溶液、１以上の張度調節物質（例えば血漿カチオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はショ糖）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）、又はその他の非イオン性ポリオール物質（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。好ましくは生体適合性担体は発熱物質を含まない注射用水、等張の生理的食塩水又はリン酸塩緩衝液である。緩衝剤の使用は、ｐＨを調節するために好ましい。好ましくは、組成物は、場合により５〜１０％ｖ／ｖのエタノールを可溶化剤として用いて、７．５以上のｐＨに維持される。薬剤組成物は抗菌性保存剤、ｐＨ調節剤、充填剤、放射線保護剤、可溶化剤又は浸透圧調節剤のような追加の任意添加物を含有し得る。
【００６０】
本発明の最も好ましい造影剤組成物は、Ｚ1＝Ｚ2＝ＭIGが結合したＳＥＱ−７のｃＭＢＰペプチド、及びパラ−アミノ安息香酸放射線保護剤とエタノール放射線保護剤／可溶化剤の組合せを水性緩衝剤中に含む。かかる好ましい組成物中のＳＥＱ−７の好ましいペプチドはペプチド１であり、好ましい18Ｆ標識ｃＭＢＰペプチドは化合物３である。放射能濃度は好ましくは３５０ＭＢｑ／ｍｌ未満であり、ｐＡＢＡ濃度は２ｍｇ／ｍｌ、エタノールは約５〜１０％ｖｏｌ／ｖｏｌ、好ましくは６．５〜７．５％ｖｏｌ／ｖｏｌである。
【００６１】
造影剤と生体適合性担体は各々適切なバイアル又は容器に入れて供給され、これは密封容器からなり、無菌完全性及び／又は放射能安全性、さらに場合により不活性なヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）の維持を可能にする一方で、シリンジ又はカニューレによる溶液の添加及び抜き出しを許容する。
【００６２】
薬剤組成物は、望ましい無菌の非発熱性生成物が得られるように無菌の製造（すなわちクリーンルーム）条件で製造することができる。重大な成分、殊に関連する試薬及び装置の造影剤と接触する部分（例えばバイアル）が無菌であるのが好ましい。成分と試薬は滅菌ろ過、例えばガンマ線照射を用いる最終滅菌、オートクレーブ処理、乾燥加熱又は化学的処理（例えばエチレンオキシドによる）を含めて当技術分野で公知の方法によって滅菌することができる。最小数の操作を行う必要があるように、予め幾つかの成分を滅菌するのが好ましい。しかしながら、用心のため、薬剤組成物の製造において１以上の滅菌ろ過ステップを最終のステップとして含ませるのが好ましい。
【００６３】
第１の態様の造影剤は適切な前駆体の放射性フッ素化によって製造することができる。かかる前駆体は、
（ｉ）Ｚ1＝Ｚ2＝ＭIGである式Ｉのｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド、又は
（ｉｉ）アミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド
を含む。
【００６４】
用語「アミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド」は、アミノ−オキシ官能基が共有結合されている式Ｉのｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを意味する。かかるアミノ−オキシ基は式−Ｏ−ＮＨ２、好ましくは−ＣＨ２Ｏ−ＮＨ２であり、アミノ−オキシ基のアミンがオキシムエーテルを形成するアルデヒドとの縮合反応においてＬｙｓアミン基より反応性が高いという利点を有する。かかるアミノ−オキシ基は以下に記載するようにｃＭＢＰのＬｙｓ残基に適切に結合される。
【００６５】
前駆体は非放射性であり、高い化学的純度で得ることができるように設計されている。また、適切な起源の18Ｆとの反応の際に、十分な放射化学純度（ＲＣＰ）で反応が効率よく起こるように設計されている。「適切な起源の18Ｆ」は前駆体の性質に依存する。前駆体が式Ｉの非標識ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドを含む場合、非標識ペプチドのリジン（Ｌｙｓ）残基のアミン基が放射標識の部位であるように設計されている。Ｚ1＝Ｚ2＝ＭIGであるので、ｃＭＢＰペプチドの末端は保護されている。好ましいかかるｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチド及び好ましいＺ1／Ｚ2基は第１の態様で記載した通りである。このように、適切な起源の18Ｆはリジンのアミン基、好ましくはＬｙｓのεアミンとできるだけ効率よく反応するように設計されている。
【００６６】
薬剤組成物の製造のために、前駆体は好ましくは無菌の形態、より好ましくは凍結乾燥固体である。前駆体は好ましくはアミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドである。
【００６７】
本発明の式Ｉ、すなわちＺ1−［ｃＭＢＰ］−Ｚ2のｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドは、
（ｉ）所望のｃＭＢＰペプチドと同じペプチド配列を有し、Ｃｙｓa及びＣｙｓbが保護されてなく、Ｃｙｓc及びＣｙｓd残基がチオール−保護基を有する線状ペプチドの固相ペプチド合成、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）のペプチドを溶液中で水性塩基によって処理して、ＣｙｓaとＣｙｓbを結合する第１のジスルフィド結合を有する単環式ペプチドを得、
（ｉｉｉ）Ｃｙｓc及びＣｙｓdチオール−保護基を除去し環化して、ＣｙｓcとＣｙｓdを結合する第２のジスルフィド結合を得、所望の二環式ペプチド生成物Ｚ1−［ｃＭＢＰ］−Ｚ2を得る
ことを含む製造方法により得ることができる。
【００６８】
用語「保護基」は、望ましくない化学反応を阻害又は抑制するが、分子の残りを変更させない十分に温和な条件下で当該官能基から開裂され得る程充分に反応性であるように設計されている基を意味する。脱保護の後所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者に周知であり、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から適宜選択される。適切なチオール保護基はＴｒｔ（トリチル）、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）、ｔ−Ｂｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、メトキシベンジル、メチルベンジル又はＮｐｙｓ（３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）である。さらなる保護基の使用は‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，［Ｗｉｌｅｙ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，（２００６）］に記載されている。好ましいアミン保護基はＢｏｃ及びＦｍｏｃ、最も好ましくはＢｏｃである。好ましいアミン保護基はＴｒｔ及びＡｃｍである。
【００６９】
実施例１及び２はさらなる特定の詳細を提供する。固相ペプチド合成のさらなる詳細はＰ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ  ａｎｄ  Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されている。ｃＭＢＰペプチドは不活性な雰囲気下で貯蔵され、冷凍庫に保管されるのが最良である。溶液中で使用する場合、ジスルフィド架橋のスクランブリングの危険があるので７より高いｐＨを回避するのが最良である。
【００７０】
アミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドはＰｏｅｔｈｋｏら［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５，８９２−９０２（２００４）］、Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒら［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，２０８５−２０８９（２００７）］、Ｓｏｌｂａｋｋｅｎら［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１６，６１９０−６１９３（２００６）］又はＧｌａｓｅｒら［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９，９５１−９５７（２００８）］の方法によって製造することができる。アミノ−オキシ基は場合により２つのステップで結合してもよい。先ず、Ｎ保護アミノ−オキシカルボン酸又はＮ保護アミノ−オキシ活性化エステルをｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドに結合する。次に、中間体のＮ保護アミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドを脱保護して所望の生成物を得る（上記引用のＳｏｌｂａｋｋｅｎ  ａｎｄ  Ｇｌａｓｅｒの論文参照）。Ｂｏｃ−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＨのようなＮ保護アミノ−オキシカルボン酸は、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから市販されている。
【００７１】
18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドは以下のようにして製造することができる。
（ｉ）上記のようにして前駆体を用意する。
（ｉｉ）前駆体がＺ1＝Ｚ2＝ＭIGである式Ｉの非標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドからなる場合、活性化剤の存在下で18Ｆ標識活性化エステル又は18Ｆ標識カルボン酸のいずれかと反応させて、環状ペプチドのｃＭＢＰのＬｙｓ残基でアミド結合を介して結合した18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを得る。
（ｉｉｉ）前駆体がアミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドからなる場合、
（ａ）活性化剤の存在下で18Ｆ標識活性化エステル又は18Ｆ標識カルボン酸と反応させて、官能化ペプチドのアミノ−オキシ位置でアミド結合を介して結合した18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを得るか、又は
（ｂ）18Ｆ標識アルデヒドと反応させて、官能化ペプチドのアミノ−オキシ位置でオキシムエーテル結合を介して結合した18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを得る。
【００７２】
用語「活性化エステル」又は「活性エステル」は、より良好な脱離基であり、従ってアミンのような求核試薬とのより容易な反応を可能にするように設計された関連するカルボン酸のエステル誘導体を意味する。適切な活性エステルの例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホ−スクシニミジルエステル、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、パラ−ニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（すなわちベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。好ましい活性エステルはＮ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステル、殊にＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
【００７３】
用語「活性化剤」は、アミドを生成させるためにアミンとカルボン酸との間のカップリングを容易にするのに使用される試薬を意味する。適切なかかる活性化剤は当技術分野で公知であり、カルボジイミド、例えばＥＤＣ［Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド及びジシクロヘキシルカルボジイミド又はジイソプロピルカルボジイミドのようなＮ，Ｎ’−ジアルキルカルボジイミド、並びにＨＢＴＵ［Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］、ＨＡＴＵ［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］、及びＰｙＢＯＰ［ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート］のようなトリアゾール類を包含する。さらなる詳細は「Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、ｐａｇｅｓ  ５０８−５１０，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）に与えられている。好ましいかかる活性化剤はＥＤＣである。
【００７４】
［18Ｆ］ＳＦＢのような18Ｆ標識活性化エステルは、Ｇｌａｓｅｒら及びその引用文献［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］の方法、又はＭａｒｉｋら［Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｓｏｔ．，６５（２），１９９−２０３（２００７）］の自動化方法によって調製・製造することができる。
【００７５】
【化５】
2015507620.tif 000006
18Ｆ標識カルボン酸は上で引用したＭａｒｉｋらの方法によって得ることができる。
【００７６】
ｑが３である式18Ｆ（ＣＨ２）2Ｏ［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］qＣＨ２ＣＨＯの18Ｆ標識脂肪族アルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒら［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（４），９５１−９５７（２００８）］の方法によって得ることができる。18Ｆ−フルオロベンズアルデヒドはＧｌａｓｅｒら［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］の方法によって得ることができる。前駆体Ｍｅ3Ｎ+−Ｃ6Ｈ4−ＣＨＯ．ＣＦ3ＳＯ3-はＨａｋａら［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］の方法によって得ることができる。
【００７７】
18Ｆ標識アルデヒドとアミノ−オキシ官能化ｃ−Ｍｅｔペプチドの結合は好ましくはＦｌａｖｅｌｌら［Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３０（２８），９１０６−９１１２（２００８）］により記載されているようにアニリン触媒の存在下で行われる。保護アミノ−オキシｃ−Ｍｅｔペプチド（例えば、化合物１）を前駆体として使用することが可能であるが、遊離のアミノ−オキシ誘導体（例えば、化合物２）が好ましい。これは、全合成がより自動化され易いのに対して、保護前駆体の場合は手動の脱保護ステップが通例必要とされるからである。
【００７８】
好ましい造影剤組成物は以下のようにして得ることができる。
（ｉ）18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドを準備する。
（ｉｉ）18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドから非標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドをクロマトグラフィーにより分離する。
【００７９】
ステップ（ｉｉ）のクロマトグラフィー分離はＨＰＬＣ又は１以上のＳＰＥカートリッジを用いるＳＰＥ（固相抽出）により行われ得る。自動合成機を使用する場合はＳＰＥが好ましく、他の状況ではＨＰＬＣが好ましい。実施例５は本発明の化合物３に対して適切なＨＰＬＣ法を提供する。
【００８０】
造影剤が薬剤組成物として提供される場合、本方法の調製は好ましくは自動化合成装置を用いて行われる。用語「自動化合成機」は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙら［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］により記載されているように単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。用語「単位操作」は、複雑なプロセスが、ある範囲の材料に適用することができる一連の単純な操作又は反応に減らされることを意味する。かかる自動化合成機は、殊に放射性薬剤組成物が望ましい場合本発明の方法にとって好ましい。これらはある範囲の供給業者から市販されており［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙら、上掲］、例えば、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；ＣＴＩ  Ｉｎｃ；Ｉｏｎ  Ｂｅａｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｓ．Ａ．（Ｃｈｅｍｉｎ  ｄｕ  Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ  ３、Ｂ−１３４８  Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）；Ｒａｙｔｅｓｔ（Ｇｅｒｍａｎｙ）及びＢｉｏｓｃａｎ（ＵＳＡ）がある。
【００８１】
第２の態様では、本発明は、前もって癌と診断された個々の患者の治療方法を提供し、方法は、
（ｉ）第１の態様の決定方法を実施し、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）の決定において、抗Ｍｅｔ療法が患者に適しているとされたとき、患者に対する抗Ｍｅｔ療法を開始又は継続する
ことを含む。
【００８２】
第２の態様における造影剤及び決定方法の好ましい態様は第１の態様で記載した通りである（上記）。
【００８３】
用語「抗Ｍｅｔ療法」は第１の態様で定義した通りである（上記）。抗Ｍｅｔ療法は好ましくは、
（ａ）非タンパク性のｃ−Ｍｅｔ阻害剤、
（ｂ）抗Ｍｅｔ抗体又はその断片、
（ｃ）抗ＨＧＦ抗体又はその断片、
（ｄ）ｃ−Ｍｅｔシグナリング経路に間接的に影響を及ぼす薬剤、
又はこれらの組合せ
を含む。
【００８４】
用語「非タンパク性」はその通常の意味を有する。好ましいかかるｃ−Ｍｅｔ阻害剤は合成である。用語「合成」はその通常の意味を有し、すなわち天然起源、例えば哺乳類の身体から単離されるのとは対照的に人工である。かかる化合物は、その製造及び不純物プロフィールを完全に制御することができるという利点を有する。ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は好ましくは「小分子」であり、すなわち２０００ダルトン未満、より好ましくは１５００ダルトン未満、最も好ましくは１０００ダルトン未満の分子量を有する。
【００８５】
表現「ｃ−Ｍｅｔシグナリング経路に間接的に影響を及ぼす薬剤」は、上流又は下流のいずれかで、ｃ−Ｍｅｔの調節、発現又は機能に対して阻害性／アンタゴニスト又はアゴニスト効果を有するようにｃ−Ｍｅｔシグナリング経路に干渉する薬理学的に活性な化合物を意味する。Ａｐｃ遺伝子の転写及びｃ−Ｍｅｔの下流発現に対して間接的に影響を及ぼす薬剤の例はβ−カテニン阻害剤又はＮＦκＢ／ＩＫＫ阻害剤である。抗Ｍｅｔ療法のさらなる詳細はＴｏｓｃｈｉら［Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１４（１９），５９４１−５９４６（２００８）］により提供されている。２つの抗Ｍｅｔ療法が承認されており（クリゾチニブ（ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）及びカボザンチニブ（ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ））、さらに目下臨床開発中であり（ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｅａｒｃｈ及び様々な研究会の概要に基づく）以下のものがある。
【００８６】
【表１】
2015507620.tif 000007
第２の態様では、抗Ｍｅｔ療法は場合により追加の処置と共に併用療法の一部として送達され得、追加の処置は、
（ｉ）ＥＧＦＲ阻害剤、
（ｉｉ）チロシンキナーゼ阻害剤、
（ｉｉｉ）ＶＥＧＦ阻害剤、
（ｉｖ）標準的な癌化学療法剤、
（ｖ）β−カテニン阻害剤
から選択される。
【００８７】
第３の態様では、本発明は、前もって癌と診断され、第２の態様で定義された抗Ｍｅｔ療法で予め処置された個々の患者の療法のモニター方法を提供し、方法は、療法の開始後、１以上の時間間隔で、それぞれ第１の態様のステップ（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の撮像及び決定を実施することを含む。
【００８８】
第３の態様における造影剤及び決定の好ましい実施形態は第１の態様で記載されている通りである（上記）。第３の態様における抗Ｍｅｔ療法の好ましい実施形態は第２の態様で記載した通りである（上記）。
【００８９】
第３の態様のモニター方法において、患者の癌の対象の領域（１以上）の複数の像を実施することが予期される。比較の撮像技術は当技術分野で公知であり、例えば、いろいろな時点における画像サブトラクション及び／又は腫瘍：バックグランド比の分析を用いて、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現の程度が、抗Ｍｅｔ療法、又はｃ−Ｍｅｔ発現に影響を及ぼし得る他の療法に応答して変化したか否かの決定を補助することができる（例えば、非小細胞性肺癌においてエルロチニブがきかない患者でのｃ−Ｍｅｔの上方制御［Ｃａｐｐｕｚｚら．Ａｎｎａｌ．Ｏｎｃｏｌ．，２０：２９８−３０４（２００９）；Ｅｎｇｅｌｍａｎ，ら．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１６，１０３９−１０４３（２００７）］、及び耐放射線性を生ずる電離放射線に応答したｃ−Ｍｅｔの上方制御［Ｄｅ  Ｂａｃｃｏら．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，１０３（８），６４５−６１（２０１１）］。その後、例えば療法の継続、用量の変更、異なる抗Ｍｅｔ療法への変更、併用療法の開始、待機手術又は療法の経過の終了の点で患者管理を変更することができる。
【００９０】
ｃ−Ｍｅｔの生体内発現をベースラインスキャン測定した後、療法開始から１か月以内に第２のスキャンを行うことは、その後の時点で腫瘍の大きさを測定することで評価される療法に対する最終的な応答を示す可能性がある。仮説は、療法の開始後ｃ−Ｍｅｔ発現の急激な低下が療法応答を予測するということである。このことの臨床上の有用性は、無駄な療法の管理に費やされる時間と金銭を低減する可能性がある。このように、連続的なスキャンは、抗ｃ−Ｍｅｔ療法が抗腫瘍効果を持続することができないという早期の信号を提供する可能性を有する。その場合、ｃ−Ｍｅｔ発現の変化（又はおそらくは上昇）の欠如が、療法の不成功を正確かつ確実に予測する可能性を有する。これは、より有効であることが確かめられ得る代わりの療法への早期の切換を容易にするので、臨床上大いに有用であろう。
【００９１】
第４の態様では、本発明は、第１の態様で定義された18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドの、第１の態様の決定方法、第２の態様の治療方法、又は第３の態様のモニター方法における使用を提供する。
【００９２】
第４の態様における18Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドの好ましい態様は第１の態様で記載した通りである（上記）。
【００９３】
第５の態様では、本発明は、第１の態様で定義された式（Ｉ）のｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチドの、第１の態様の決定方法、第２の態様の方法、又は第３の態様のモニター方法における使用を提供する。
【００９４】
第５の態様におけるｃ−Ｍｅｔ結合性環状ペプチド及び決定方法の好ましい態様は第１の態様で記載した通りである（上記）。第５の態様における治療方法の好ましい態様は第２の態様で記載した通りである（上記）。第５の態様におけるモニター方法の好ましい態様は第３の態様で記載した通りである（上記）。
【００９５】
第６の態様では、本発明は、第２の態様で定義された抗Ｍｅｔ療法の、第２の態様の治療方法、又は第３の態様のモニター方法における使用を提供する。
【００９６】
第６の態様における抗Ｍｅｔ療法の好ましい態様は第１の態様で記載した通りである（上記）。
【実施例】
【００９７】
以下に詳述する非限定的実施例によって本発明を例証する。実施例１は、両末端に代謝阻害基（Ｚ1＝Ｚ2＝ＭIG）を有する本発明のｃＭＢＰペプチド（ペプチド１）の合成を提供する。実施例２は、本発明の保護前駆体（化合物１）の合成を提供する。実施例３は、フッ素標識ｃ−Ｍｅｔペプチドの非放射性フッ素化（すなわち19Ｆ）対応物（化合物３Ａ）の合成を提供する。実施例４は、本発明の18Ｆ−放射性フッ素化ｃ−Ｍｅｔペプチド（化合物３Ｂ）の合成を提供する。実施例５は、標識及び非標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドの分離のためのＨＰＬＣ条件を提供する。
【００９８】
実施例６は、動物腫瘍モデルにおける本発明の18Ｆ標識ペプチド（化合物３Ｂ）の生体内分布を提供する。結果は、ＨＴ−２９腫瘍において発現されたヒトのｃ−Ｍｅｔ受容体への結合、従って腫瘍イメージングに対する有用性を示す。実施例７は、実施例６の腫瘍取込が特異的であることを実証する。すなわち、その取込は、非放射性の19Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチド（化合物３Ａ）の同時投与によって阻害することができるからである。
【００９９】
実施例８もまた、19Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合性ペプチドが同時投与されたときの霊長類において約４０％の低下した肝臓取込を実証している。そのペプチドの19Ｆ標識スクランブルバージョン（ｃ−Ｍｅｔ受容体に対して親和性をもたない）の同時投与は、肝臓取込を有意に低下させなかった。肝臓は高レベルのｃ−Ｍｅｔ発現を有し、従って19Ｆ標識ｃＭＢＰとの競合後取込の低下は生体内の特異的なｃ−Ｍｅｔ結合の証拠を表すと考えられる。
【０１００】
実施例９は、さらにＳＰＥカートリッジ精製の自動化使用を含む化合物３Ｂの自動化合成を提供する。結果は、このアプローチを用いて高純度及び十分な放射化学収率で化合物３Ｂを得ることができることを示す。実施例１０は本発明の造影剤を用いたヒトの撮像を記載する。
【０１０１】
略号
慣用の１文字又は３−文字アミノ酸表記を使用する。
％ｉｄ：      パーセント注射用量
Ａｃ：        アセチル
Ａｃｍ：      アセトアミドメチル
ＡＣＮ：      アセトニトリル
Ｂｏｃ：      ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ：      ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：      ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：    ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：      Ｎ−３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド
Ｆｍｏｃ：    ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：    Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：    高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＰｙＵ    Ｏ−（Ｎ−スクシニミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチレンウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＮＨＳ：      Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド
ＮＭＭ：      Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：      １−メチル−２−ピロリジノン
ｐＡＢＡ：    パラ−アミノ安息香酸
Ｐｂｆ：      ２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ＰＢＳ：      リン酸塩緩衝生理食塩水
ｐ．ｉ．：    注射後
ＰｙＢＯＰ：  ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＳＰＥ：      固相抽出
ＳＵＶ：      標準取込値
ｔＢｕ：      ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ：      トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ：      トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ：      トリチル。
【０１０２】
【表２】
2015507620.tif 000008
実施例１
ペプチド１の合成
ステップ（ａ）：保護前駆体線状ペプチドの合成
前駆体線状ペプチドは次の構造を有する。
Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ２。
ペプチジル樹脂Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｈｒ（ψMe,Meｐｒｏ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ポリマーを、Ｆｍｏｃ化学を用いるＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチド合成機で、０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から出発して組み立てた。過剰の１ｍｍｏｌの（ＨＢＴＵを用いて）予め活性化したアミノ酸をカップリングステップに供した。Ｇｌｕ−Ｔｈｒプソイドプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  ０５−２０−１１２２）を配列中に組み込んだ。樹脂を窒素バブラー装置に移し、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した無水酢酸（１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）の溶液で６０ｍｉｎ処理した。無水物溶液をろ過により除き、樹脂をＤＣＭで洗浄し、窒素流下で乾燥した。
【０１０３】
側鎖保護基の除去とペプチドの樹脂からの開裂を、２．５％のＴＩＳ、２．５％の４−チオクレゾール及び２．５％の水を含有するＴＦＡ（１０ｍＬ）中で２時間３０ｍｉｎ同時に行った。樹脂をろ過によって除き、ＴＦＡを真空下で除去し、ジエチルエーテルを残渣に加えた。生成した沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、風乾して２６４ｍｇの粗ペプチドを得た。
【０１０４】
粗ペプチドを調製用ＨＰＬＣ（グラジエント：２０〜３０％Ｂ、４０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０ｍｉｎ）により精製して１００ｍｇの純粋なペプチド１線状前駆体を得た。純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（グラジエント：１０〜４０％Ｂ、１０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４ｍｉｎ）で分析した。さらなる生成物特性決定をエレクトロスプレー質量分析で行った（ＭＨ２2+計算値：１４６４．６、ＭＨ２2+実測値：１４６５．１）。
【０１０５】
ステップ（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４−１６ジスルフィド架橋の形成
Ｃｙｓ４−１６；Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ２。
【０１０６】
ステップ（ａ）の線状前駆体（１００ｍｇ）を５％のＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、アンモニアを用いて溶液をｐＨ６に調節した。反応混合物を５日間撹拌した。次いで、ＴＦＡを用いて溶液をｐＨ２に調節し、真空中で蒸発させることにより殆どの溶媒を除去した。残渣（４０ｍＬ）を生成物の精製のために少しずつ調製用ＨＰＬＣカラムに注入した。
【０１０７】
残渣を調製用ＨＰＬＣ（グラジエント：０％Ｂで１０ｍｉｎ、次いで０〜４０％Ｂで４０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４４ｍｉｎ）により精製して７２ｍｇの純粋な化合物１単環式前駆体を得た。
【０１０８】
純粋な生成物（異性体Ｐ１〜Ｐ３の混合物）を分析用ＨＰＬＣ（グラジエント：１０〜４０％Ｂで１０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．３７ｍｉｎ（Ｐ１）；５．６１ｍｉｎ（Ｐ２）；６．０５ｍｉｎ（Ｐ３））で分析した。さらなる生成物特性決定をエレクトロスプレー質量分析で行った（ＭＨ２2+計算値：１４６３．６、ＭＨ２2+実測値：１４６４．１（Ｐ１）；１４６４．４（Ｐ２）；１４６４．３（Ｐ３））。
【０１０９】
ステップ（ｃ）：第２のＣｙｓ６−１４ジスルフィド架橋の形成（ペプチド１）
ステップ（ｂ）の単環式前駆体（７２ｍｇ）を窒素雰囲気下で７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１ＭのＨＣｌ（７．２ｍＬ）及びＡｃＯＨ（４．８ｍＬ）中の０．０５ＭのＩ2をこの順に加え、混合物を４５ｍｉｎ撹拌した。１Ｍアスコルビン酸（１ｍＬ）を加えて無色の混合物を得た。殆どの溶媒を真空中で蒸発させ、残渣（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、調製用ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。
【０１１０】
残渣を調製用ＨＰＬＣ（グラジエント：０％Ｂで１０ｍｉｎ、次に２０〜３０％Ｂで４０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：１０ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４３〜５３ｍｉｎ）によって精製して５２ｍｇの純粋なペプチド１を得た。純粋な生成物を分析用ＨＰＬＣ（グラジエント：１０〜４０％Ｂで１０ｍｉｎ、Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、流量：０．３ｍＬ／ｍｉｎ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ  ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４ｍｉｎ）で分析した。さらなる生成物の特性決定をエレクトロスプレー質量分析を用いて行った（ＭＨ２2+計算値：１３９１．５、ＭＨ２2+実測値：１３９２．５）。
【０１１１】
実施例２
化合物１の合成
（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；１３８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１３８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（８３ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解した。溶液を２５ｍｉｎ振盪した後、ＤＭＦ（５ｍｌ）中のペプチド１（１．０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を２ｍｉｎ撹拌した。次に、Ｓｙｍ．−コリジン（２３９ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間撹拌した。反応混合物を水（５ｍｌ）で希釈し、生成物を調製用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。
【０１１２】
ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ  ４０００系、溶媒Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ；グラジエント２０〜４０％Ｂで６０ｍｉｎ；流量＝５０ｍｌ／ｍｉｎ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μｍ  Ｃ１８（２）２５０×５０ｍｍ；検出：ｕｖ  ２１４ｎｍ。精製化合物１の収量６９０ｍｇ（６５％）。実測値ｍ／ｚ：１４７８．４、期待値ＭＨ２2+：１４７８．１。
【０１１３】
実施例３
化合物３Ａの合成
ステップ（ａ）：Ｎ−（４−フルオロベンジリデン）アミノオキシ酢酸の調製
（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸（９６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及び４−フルオロベンズアルデヒド（５３ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）をギ酸（０．５ｍｌ）に溶解し、反応混合物を１３５ｍｉｎ撹拌した。次に反応混合物を２０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（７ｍｌ）で希釈し、生成物を半調製用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。
【０１１４】
ＨＰＬＣ条件：Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄ；溶媒Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ；グラジエント２５〜３５％Ｂで４０ｍｉｎ；流量＝１０ｍｌ／ｍｉｎ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μｍ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２ｍｍ；検出：ｕｖ  ２１４ｎｍ。
収量９２ｍｇ（９３％）。
【０１１５】
ステップ（ｂ）：化合物３Ａの調製
Ｎ−（４−フルオロベンジリデン）アミノオキシ酢酸［ステップ（ａ）、４３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ］及びＰｙＢＯＰ（１１２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解した。ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＤＩＰＥＡ（１５７ｍＬ、０．９０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を１ｍｉｎ振盪した。次に溶液をＤＭＦ（１０ｍｌ）中のペプチド１（５００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に加え、反応混合物を３０ｍｉｎ振盪した。その後反応混合物を水（２０ｍｌ）で希釈し、生成物を調製用ＨＰＬＣで精製した。
【０１１６】
ＨＰＬＣ条件は実施例２と同じだが、溶媒Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％酢酸アンモニウム、溶媒Ｂ＝ＡＣＮである。純粋な物質の収量２９１ｍｇ（５５％）。実測値ｍ／ｚ：９８８．６、期待値ＭＨ33+：９８７．７。
【０１１７】
実施例４
化合物３Ｂの化合物１からの合成
ステップ（ａ）：化合物１の脱保護により化合物２を得る
５ｍｌの反応バイアル中の化合物１（７ｍｇ、２．３７μＭ）を水（１０μＬ）及びトリフルオロ酢酸（１９０μＬ）で処理した後、音波浴中の密封したバイアル内に１０分浸した。次に水性ＴＦＡを真空下で除き（およそ３０ｍｉｎ）、残渣をクエン酸塩緩衝剤（ｐＨ２．６、１．７ｍＬ）中に再構成し、位置１４で自動化合成機カセット（ＦａｓｔＬａｂ（商標）、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ）にロードした。
【０１１８】
ステップ（ｂ）  18Ｆ−ベンズアルデヒドの合成と精製
［18Ｆ］フッ化物を、銀標的を有するＧＥＭＳ  ＰＥＴｔｒａｃｅサイクロトロンを用いて［18Ｏ］（ｐ，ｎ）［18Ｆ］核反応により製造した。１．５〜３．５ｍＬの全標的容積を用いた。放射性フッ化物をＷａｔｅｒｓ  ＱＭＡカートリッジ（炭酸塩で予め状態調節した）にトラップし、フッ化物を水（８０μＬ）とアセトニトリル（３２０μＬ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ2.2.2（４ｍｇ、１０．７μＭ）と炭酸カリウム（０．５６ｍｇ、４．１μＭ）の溶液で溶出する。窒素を用いて溶液をＱＭＡカートリッジから反応容器に追い出した。［18Ｆ］フッ化物を一定の窒素流及び真空下１２０℃で９分乾燥した。ジメチルスルホキシド（１．１ｍＬ）中のトリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレート［Ｈａｋａら，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］（３．３ｍｇ、１０．５μＭ）を乾燥［18Ｆ］フッ化物に加え、混合物を１０５℃に７分加熱して４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドを生成した。標識効率は６９±３％であった（壊変補正）。
【０１１９】
次いで、粗標識混合物を水酸化アンモニウム溶液で希釈し、ＭＣＸ＋  ＳＰＥカートリッジ（ＦＡＳＴｌａｂ手順の一部として水で予め状態調節した）にロードした。カートリッジを水で洗浄し、窒素ガスで乾燥させた後、４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドを反応容器に戻してエタノール（１ｍＬ）中に溶出した。およそ１３％（壊変補正済）の［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドがカートリッジにトラップされたままだった。
【０１２０】
ステップ（ｃ）：アミノ−オキシ誘導体とのアルデヒド縮合（化合物２）
化合物２（５ｍｇ、１．８μｍｏｌ）をＦＡＳＴｌａｂ反応容器に移した後、４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒドの溶出によりＭＣＸ＋  カートリッジから戻す。次に混合物を７０℃に１７分加熱した）。分析用ＨＰＬＣで、化合物３Ｂ生成物のＲＣＰが６３±９％であることを確認した。
【０１２１】
粗反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、調製用ＨＰＬＣにロードした。１０ｍＭ酢酸アンモニウム対アセトニトリル系で、粗反応混合物の３つの可能な放射性成分、すなわち［18Ｆ］フッ化物（ＴR＝０．５ｍｉｎ）、［18Ｆ］化合物３Ｂ（ＴR＝６ｍｉｎ）及び４−［18Ｆ］フルオロベンズアルデヒド（ＴR＝９ｍｉｎ）が完全に分離した。ＨＰＬＣ系からの放射能の回収は良好で、回収効率は９７％であった。精製物を、ほぼ６ｍｉｎの保持時間のものを収集することにより得た。
【０１２２】
実施例５
nＦ標識ｃ−Ｍｅｔ環状ペプチドの非標識ペプチドからのＨＰＬＣ分離
化合物３Ａは実施例３に従って調製した。
（ｉ）分析用ＨＰＬＣ条件
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ  １８（４，６×５０）ｍｍ、２．５μｍ、
水性移動相Ａ：１０ｍＭ  ＮＨ4Ａｃ（緩衝剤）  ｐＨ  ｃａ．６．８、
有機移動相Ｂ：アセトニトリル
カラム温度：２５℃
流量：１．２ｍｌ／ｍｉｎ
グラジエント
【０１２３】
【表３】
2015507620.tif 000009
（ｉｉ）調製用ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｘ架橋  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ  １８（１０×１００）ｍｍ、５μｍ
水性移動相Ａ：１０ｍＭ  ＮＨ4Ａｃ（緩衝剤）  ｐＨ  ｃａ．６．８
有機移動相Ｂ：エタノール（９０％）  移動相Ａ（１０％）
カラム温度：２５℃
流量：４ｍｌ／ｍｉｎ
グラジエント
【０１２４】
【表４】
2015507620.tif 000010
（ｉｉｉ）  分析用及び調製用ＨＰＬＣ結果
【０１２５】
【表５】
2015507620.tif 000011
実施例６
腫瘍担持ヌードマウスにおける18Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔペプチド（化合物３Ｂ）の生体内分布
ＣＤ−１雄性ヌードマウス（約２０ｇ）を個々の換気ケージに入れ、食物と水を自由に摂取させた。ＨＴ−２９細胞（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ．ｎｏ．ＨＴＢ−３８）を、１０％ウシ胎児血清とペニシリン／ストレプトマイシンを追加したＭｃＣｏｙ’ｓ  ５ａ培地（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｍ８４０３）で増殖させた。細胞を週に二回０．２５％トリプシンを用いて７０〜８０％のコンフルエントで１：３に分割し、５％ＣＯ2中３７℃でインキュベートした。軽いガス麻酔下（イソフルラン）のマウスに、ＨＴ−２９細胞懸濁液を、細い穴の針（２５Ｇ）を用いて、１００ｍｌの容積の注射当たり１０6細胞の名目用量で１つの部位（首のうなじ）にｓ．ｃ注射した。その後腫瘍を、２０日間、又は（研究に供するために）少なくとも２００ｍｍ3の容積になるまで増殖させた。２０日の増殖時間後、動物に尾静脈から静脈内ボーラスとして化合物３Ｂ（０．１ｍｌ、１〜５ＭＢｑ／動物）を注射した。注射後の様々な時間に動物を安楽死させ、解剖し、以下の臓器及び組織を摘出した。
【０１２６】
腫瘍の取込は２分で２．３％ｉｄ／ｇ、３０分でピークに達した（３．８％ｉｄ／ｇ）後経時的に低下し、ｐｉ１２０ｍｉｎで１．９％ｉｄ／ｇになった。腫瘍内の全保持率は８３％であった。適度に迅速な血液クリアランスが経時的にあった（最初の２分の血液は９．２％ｉｄ／ｇであり、ｐｉ１２０ｍｉｎで０．８１％ｉｄ／ｇに低下した）。重大なバックグランド組織（例えば肺及び肝臓）は、ｐ．ｉ．１２０ｍｉｎで１．１％ｉｄ／ｇ（肝臓）及び１．５６％ｉｄ／ｇ（肺）という取込の経時的血液クリアランスプロフィールを示した。
【０１２７】
実施例７
腫瘍担持ヌードマウスにおける化合物３Ｂの受容体ブロック研究
実施例６の研究を繰り返した。但し、１００及び１０００倍過剰の非放射性類似体の化合物３Ａ（動物当たり〜１．５ｍｇ及び１５ｍｇ過剰）を同時注射し、動物を注射後１２０分で解剖した。この研究での動物は全て（２５〜３０ｇの範囲の）同程度の体重であった。データは、１０００倍過剰の非標識ペプチドで化合物３Ｂの腫瘍取込の統計学的に有意な低下（ｐ＜０．０１）が達成されたことを実証した（ＨＴ−２９腫瘍取込は１．９％ｉｄ／ｇから１．１％ｉｄ／ｇへ落ち、４０％低下した）。
【０１２８】
実施例８
化合物３Ｂの霊長類ＰＥＴイメージング
３匹の雌性カニクイザルで化合物３Ｂの生体内分布をＰＥＴにより測定した。各々の場合に２つのトレーサー注射を行った。
（ａ）トレーサー単独（化合物３Ｂ）３ＭＢｑ／ｋｇ（ベースライン研究）、
（ｂ）ベースライン注射の４時間後０．１５ｍｇ／ｋｇの化合物３Ａを同時注射するトレーサー９ＭＢｑ／ｋｇ（遮断研究）。
【０１２９】
トレーサーは１〜３ｍＬ、次に１ｍＬの生理的食塩水でボーラス投与として注射した。放射能決定のための血液試料（０．２ｍｌ）を投与後２１０分まで時々採取した。動態研究において、対象の領域を骨、心臓、腎臓、肺、肝臓、及び筋肉から選択した。全身体研究において、対象の領域は骨、脳、結腸、心臓、腎臓、肺、肝臓、筋肉、膵臓、小腸、脾臓、及び膀胱である。時間−活性データは生成され、標準取込値（ＳＵＶ）として表される。
【０１３０】
特異的な結合（〜４０％）は、凍結切片オートラジオグラフィーを用いてアカゲザル肝臓の生体外で観察された。アカゲザルの筋肉は特異的結合性をもたないことが観察された。カニクイザルにおける生体内研究は、０．１５ｍｇ／ｋｇの化合物３Ａの同時注射後＞４０％低下する肝臓の迅速な取込を示した。生体内で筋肉に対する特異的な結合は観察されなかった。
【０１３１】
実施例９
ＳＰＥ精製を用いた化合物３Ｂの自動化合成
ＦａｓｔＬａｂ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ）自動化合成装置を用いて実施例４の合成を実施した。カセットは試薬、シリンジ及びＳＰＥカートリッジを備えていた。
【０１３２】
ＱＭＡ（第四メチルアンモニウム水処理）、ＭＣＸ＋（混合カチオン交換）及びＣ２（低疎水性）ＳＰＥカートリッジは全てＷａｔｅｒｓから入手した。
【０１３３】
ＦＡＳＴｌａｂ手順中カートリッジは（相前後して）エタノールで状態調節した。使用直前に、カートリッジを希釈（０．２％リン酸）でプライムした。粗反応混合物を１％リン酸で希釈し、ＳＰＥ上にロードした。ＳＰＥを水で洗浄した後生成物を６ｍＬの水（８０％エタノール）で溶出し、放射化学純度（ＲＣＰ）を分析用ＨＰＬＣで分析した。
【０１３４】
使用した18Ｆ−フッ素の開始量に基づく結果は以下の通り。
【０１３５】
【表６】
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実施例１０
ヒトの研究
化合物３Ｂを用いた撮像を、既に頭頚部扁平上皮細胞癌腫と診断されている６人のヒト患者で行った。作用剤は十分寛容された（有害効果なし）。６人の患者の内５人はトレーサーの中／高度の取込を示し、１人の患者は低い取込を示した（反対側と同様）。これは、かかる患者の８０％がｃ−Ｍｅｔを過剰発現するという文献の報告と一致する。
【配列表】
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【国際調査報告】
2015507620.tif 000013
2015507620.tif 000014