(57)【要約】  非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象を処置する方法が開示される。この方法は、（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること、ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミドを前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること、ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法：
（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること、ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む；続いて、
（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミドを前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること、ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む。
【請求項２】
前記対象を、工程（ａ）に先立って、強度軽減移植前処置のもとで前処置することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象を、工程（ａ）に先立って、インビボＴ細胞減量により前処置することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量は前記対象の体重１キログラムあたり５〜４０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、Ｔ細胞枯渇骨髄細胞、Ｔ細胞枯渇Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞、Ｔ細胞枯渇臍帯血、骨髄細胞および／またはＧ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞からの正の選択によって獲得される精製されたＣＤ３４＋細胞、ならびに、エクスビボ拡大ＣＤ３４＋細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞はＴ細胞減量によって得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｔ細胞減量は抗体によって行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２抗体および抗ＴＣＲα／β抗体からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記未成熟造血細胞は、Ｂ細胞減量によって処理される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｂ細胞減量は、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ２０抗体によって行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が非同系のドナーから得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記非同系ドナーは前記対象に対して同種または異種である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記同種ドナーが、ＨＬＡ一致の兄弟姉妹、ＨＬＡ一致の非血縁ドナー、ＨＬＡハプロタイプ一致の血縁ドナー、および、１つまたは複数の異なるＨＬＡ決定基を呈示するドナーからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象はヒト対象である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記インビボＴ細胞減量が抗体によって行われる、請求項３に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体またはそれらの両方を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体または抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記強度軽減移植前処置は骨髄非破壊的前処置を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２１】
前記骨髄非破壊的前処置は、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ）、化学療法剤および／または抗体免疫療法の少なくとも１つを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＴＢＩは、１Ｇｙ〜７．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＴＢＩは、１Ｇｙ〜３．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学療法剤は、ブスルファン、フルダラビン、メルファランおよびチオテパの少なくとも１つを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体は、抗ＣＤ５２抗体、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体および抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体の少なくとも１つを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記シクロホスファミドの濃度が体重１キログラムあたり約１００ｍｇ〜２００ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記シクロホスファミドの濃度が体重１キログラムあたり約１００ｍｇである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記シクロホスファミドが単回服用で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記シクロホスファミドが２回服用で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記２回服用のそれぞれが体重１キログラムあたり約５０ｍｇの濃度を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記２回服用のそれぞれが工程（ａ）の後の３日目および４日目に投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象は悪性疾患を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記悪性疾患は造血系のガンである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記造血系のガンは白血病またはリンパ腫を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記造血系のガンは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大Ｔ細胞／ヌル細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、不特定Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）／慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫−粘膜関連リンパ組織リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、原発性中枢神経系リンパ腫、膵性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、縦隔原発性Ｂ細胞リンパ腫および多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象は非悪性疾患を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記非悪性疾患は、遺伝疾患もしくは障害、自己免疫疾患または代謝異常である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記非悪性疾患は、鎌状赤血球病、先天性好中球減少症、血小板減少症、再生不良性貧血、骨髄異形成症候群、モノソミー７、大理石骨病、ゴーシェ病、ハーラー病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質萎縮症、サラセミア、先天性または遺伝的決定の造血異常、狼瘡、自己免疫性肝炎、セリアック病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、関節リウマチ、強皮症および乾癬からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記細胞移植片または組織移植片は未成熟造血細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞移植片または組織移植片が、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸およびリンパ系／造血系の組織または臓器からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
前記細胞移植片または組織移植片が、前記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を前記対象に移植する前に、または、前記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を前記対象に移植するのと同時に、または、前記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を前記対象に移植した後で前記対象に移植される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞移植または組織移植はいくつかの臓器の同時移植を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記細胞移植片または組織移植片および前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、同じドナーから得られる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
未成熟造血細胞移植を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法：
（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を前処置された対象に移植すること、ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む；続いて、
（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミドを前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること、ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む。
【請求項４５】
前記前処置された対象は、強度軽減移植前処置のもとで前処置されている、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記強度軽減移植前処置が前記移植の１〜１０日前に行われる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記強度軽減移植前処置は骨髄非破壊的前処置プロトコルを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記骨髄非破壊的前処置プロトコルは、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ）、化学療法剤および／または抗体免疫療法の少なくとも１つを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＴＢＩは、１Ｇｙ〜７．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＴＢＩは、１Ｇｙ〜３．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記化学療法剤は、ブスルファン、フルダラビン、メルファランおよびチオテパの少なくとも１つを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体は、抗ＣＤ５２抗体、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体および抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体の少なくとも１つを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
前記前処置された対象は、インビボＴ細胞減量で前処置される、請求項４４に記載の方法。
【請求項５４】
前記インビボＴ細胞減量は、移植の４〜７日前に行われる、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記インビボＴ細胞減量が抗体によって行われる、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体またはそれらの両方を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗体は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体および抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５〜４０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、Ｔ細胞枯渇骨髄細胞、Ｔ細胞枯渇Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞、Ｔ細胞枯渇臍帯血、骨髄細胞および／またはＧ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞からの正の選択によって獲得される精製されたＣＤ３４＋細胞、ならびに、エクスビボ拡大ＣＤ３４＋細胞からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項６１】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項６２】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞はＴ細胞減量によって得られる、請求項４４に記載の方法。
【請求項６３】
前記Ｔ細胞減量は抗体によって行われる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２抗体および抗ＴＣＲα／β抗体からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記未成熟造血細胞は、Ｂ細胞減量によって処理される、請求項４４に記載の方法。
【請求項６６】
前記Ｂ細胞減量は、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ２０抗体によって行われる、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が非同系のドナーから得られる、請求項４４に記載の方法。
【請求項６８】
前記非同系ドナーは前記対象に対して同種または異種である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６９】
前記対象はヒト対象である、請求項４４に記載の方法。
【請求項７０】
前記シクロホスファミドの濃度が体重１キログラムあたり約１００ｍｇ〜２００ｍｇである、請求項４４に記載の方法。
【請求項７１】
前記シクロホスファミドの濃度が体重１キログラムあたり約１００ｍｇである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記シクロホスファミドが単回服用で投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項７３】
前記シクロホスファミドが２回服用で投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項７４】
前記２回服用のそれぞれが体重１キログラムあたり約５０ｍｇの濃度を含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記２回服用のそれぞれが工程（ａ）の後の３日目および４日目に投与される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
未成熟造血細胞移植を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む方法：
（ａ）全身照射（ＴＢＩ）および化学療法剤を含む強度軽減移植前処置のもとで対象を前処置すること；
（ｂ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を前記対象に移植すること、ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む；続いて、
（ｃ）治療効果的な量のシクロホスファミドを前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること、ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む。
【請求項７７】
前記ＴＢＩは、２Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＴＢＩは、工程（ｂ）の２日前に単回服用で行われる、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記化学療法剤は、フルダラビンを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記フルダラビンは、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で行われる、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記フルダラビンは、工程（ｂ）の前の３〜７日に毎日投与される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８３】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、Ｔ細胞枯渇Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞を含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８４】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞はＴ細胞減量によって得られる、請求項７６に記載の方法。
【請求項８５】
前記Ｔ細胞減量は抗体によって行われる、請求項７６に記載の方法。
【請求項８６】
前記抗体は、抗ＣＤ３抗体を含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記未成熟造血細胞は、Ｂ細胞減量によって処理される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８８】
前記Ｂ細胞減量は、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ２０抗体によって行われる、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が非同系のドナーから得られる、請求項７６に記載の方法。
【請求項９０】
前記非同系ドナーは前記対象に対して同種または異種である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記シクロホスファミドが２回服用で投与される、請求項７６に記載の方法。
【請求項９２】
前記２回服用のそれぞれが体重１キログラムあたり約５０ｍｇの濃度を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記２回服用のそれぞれが工程（ｂ）の後の３日目および４日目に投与される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象においてドナー特異的寛容性を誘導する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法：
（ａ）非同系のドナーから得られる、Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること、ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含む；続いて、
（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミドを前記対象に投与し、それにより、ドナー特異的寛容性を前記対象において誘導すること、ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む。
【請求項９５】
前記対象を、工程（ａ）に先立って、強度軽減移植前処置のもとで前処置することをさらに含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記対象を、工程（ａ）に先立って、インビボＴ細胞減量により前処置することをさらに含む、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記細胞移植片または組織移植片は未成熟造血細胞を含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記細胞移植片または組織移植片が、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸およびリンパ系／造血系の組織または臓器からなる群から選択される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
前記細胞移植片または組織移植片が、前記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を前記対象に移植した後で前記対象に移植される、請求項９４に記載の方法。
【請求項１００】
前記細胞移植または組織移植はいくつかの臓器の同時移植を含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項１０１】
前記細胞移植片または組織移植片および前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、同じドナーから得られる、請求項９４に記載の方法。
【請求項１０２】
前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む、請求項９４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１１年１２月２２日に出願した米国特許仮出願第６１／５７８９１７号（参照として本明細書中にそれらの全体を援用される）の利益を主張する。
【０００２】
本発明はそのいくつかの実施形態において、安定かつ長期の細胞移植または組織移植を達成するための併用療法に関連する。
【背景技術】
【０００３】
一方のハプロタイプが完全に一致しないハプロタイプ一致ドナーを造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）のための代替源として使用することは、事実上すべての患者が、ＨＳＣＴドナーとして役立ち得、また容易に入手可能なハプロタイプ一致の血縁者を有するので、非常に魅力的である。致命的な移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の危険性を回避するための、また、ハプロタイプ一致の厳密なＴ細胞枯渇骨髄移植（ＴＤＢＭＴ）を白血病患者において適用するための初期の試みでは、ドナーのＴ細胞が移植片内に存在しないことにより、高い割合の移植片拒絶が、放射線療法および化学療法に対して抵抗性のある残存する宿主由来のＴ細胞（ＨＴＣ）により媒介されて引き起こされることが明らかにされた。この障害を克服するために、完全に不一致のマウス系統の組合せを使用したときでさえ、このＨＴＣ媒介免疫バリアを克服することができ、かつ、問題なく移植することができる‘大用量’のＴＤＢＭ細胞が意図された［Ｂａｃｈａｒ−Ｌｕｓｔｉｇ  Ｅ他、Ｎａｔ  Ｍｅｄ（１９９５）、１：１２６８〜１２７３］。続いて、ヒトにおいて、齧歯類の場合と同様に、ＣＤ３４＋造血幹細胞の用量増大が、遺伝子的バリアを克服し、これにより、精製ハプロタイプ一致ＨＳＣＴの後における充分な生存率を可能にするために使用される場合があることが実証された［Ｒｅｉｓｎｅｒ  ＹおよびＭａｒｔｅｌｌｉ  ＭＦ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ（１９９５）、１６：４３７〜４４０、ならびに、米国特許第５８０６５２９号］。
【０００４】
精製された‘大用量’のＣＤ３４＋ＨＳＣＴの使用は白血病患者におけるハプロタイプ一致の移植を可能にしているが、１つの大きな欠点、すなわち、すべてのＴ細胞枯渇移植片に共通する欠点が、レシピエントの免疫系の遅い回復速度である。これは、移植前における広範囲の免疫除去前処置プロトコル、少ない数のドナーＴ細胞が移植片内に注入されること、および、成体レシピエントの低下した胸腺機能に起因すると考えられる。したがって、ハプロタイプ一致ＣＤ３４＋幹細胞移植片の成体レシピエントにおいて、著しい割合の移植関連死亡（ＴＲＭ）が日和見感染症によって引き起こされている。
【０００５】
いくつかの取り組みが、この難題に対処するために開発中である。これには、胸腺機能を改善するための新規な様式、移植後での抗ウイルス性特異的Ｔ細胞の養子移入、部分的にポリクローナルである宿主非反応性の同種枯渇Ｔ細胞の移入、または、誘導可能な自殺遺伝子によりトランスフェクションされた完全にポリクナールなＴ細胞の移入が含まれる。宿主の免疫を保存するための代替的かつさらなる取り組みが、強度軽減移植前処置（ＲＩＣ）の使用である。この骨髄非破壊的取り組みでは、相当なレベルの宿主免疫細胞が無傷で残っており、したがって、ＴＲＭが、移植後の免疫再構成を改善することによって、また、前処置作用因に伴う毒性を軽減することによってそれらの両方で減少する場合がある。ＲＩＣのもとでのハプロタイプ一致移植は、実質的な免疫学的バリアが生存している宿主Ｔ細胞によって提示されるために、一層さらに複雑である。このバリアを克服するための近年の試みはほとんどが、増大したＧＶＨＤ率の拡大においてであったが、高い生着率を可能にするＴ細胞非枯渇移植片を使用するものであった。ハプロタイプ一致移植をＲＩＣのもとで適用するための別の取り組みが、ＣＤ３４＋幹細胞を含有するだけでなく、ＣＤ３４陰性始原体、ＮＫ細胞、移植片生着促進細胞および樹状細胞をも含有するＣＤ３／ＣＤ１９枯渇移植片を使用するものである。しかしながら、これもまた、増大したＧＶＨＤ率およびＴＲＭ率の拡大においてである。
【０００６】
１９７０年代には、Ｇｅｏｒｇｅ  Ｓａｎｔｏｓが、骨髄移植（ＢＭＴ）直後における高用量シクロホスファミド（ＣＹ）の短い治療単位がドナーまたは宿主の活性化された同種反応性Ｔ細胞を標的としたことを齧歯類において明らかにした［Ｏｗｅｎｓ  ＡＨ  ＪｒおよびＧＷ．Ｓ．、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９７１）、１１：３７８〜３８２］。シクロホスファミドは、造血幹細胞における解毒酵素アルデヒドデヒドロゲナーゼの大きい発現のために造血幹細胞に対して非毒性であることが認められた。また、Ｓｌａｖｉｎ他は、高用量のシクロホスファミドの投与により、幹細胞の生着に対する有害な影響を伴うことなく、マウスにおけるＧＶＨＤおよび移植片拒絶を減らすことができることをさらに明らかにした［Ｂｒｏｄｓｋｙ  ＲＡおよびＲＪ．Ｊ．Ｌａｎｃｅｔ（２００５）、３６５：１６４７〜１６５６］。Ｊｏｈｎ  ＨｏｐｋｉｎｓおよびＦｒｅｄ  Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒの両グループによる臨床試験では、シクロホスファミド、フルダラビンおよび２ＧｙのＴＢＩからなる骨髄非破壊的プロトコル、ならびに、シクロホスファミド（５０ｍｇ／ｋｇ、＋３日目および＋４日目）、ＭＭＦ（＋５日目から＋３５日目まで）およびタクロリムス（＋５日目から＋１８０日目まで）による移植後のＧＶＨＤ予防が評価された［Ｌｕｚｎｉｋ  Ｌ他、Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００８）、１４：６４１］。それによれば、彼らの教示から明白であるが、このプロトコルは大きい再発率をもたらし、これはおそらくは、骨髄非破壊的前処置による不良な疾患減量、および、ＧＶＨＤに関連づけられる移植片対白血病（ＧＶＬ）効果の欠如に起因すると考えられた［Ｍｕｎｃｈｅｌ  Ａ他、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１１）、３：４３〜４７］。
【０００７】
同種の造血幹細胞の安定した生着を達成するための別の取り組みが試みられており、幾つかが米国特許出願第２０１１０１１０９０９号、米国特許出願第２００５０１１８１４２号、米国特許出願第２００７００９８６９３号、米国特許第５，８７６，６９２号、米国特許第５，５１４，３６４号、米国特許第６，２１７，８６７号、米国特許第５，６３５，１５６号、米国特許出願第２００６０１４０９１２号、米国特許出願第２００４０００５３００号、米国特許出願第２００７０１４１０２７号、米国特許出願第２００３００１７１５２号、米国特許出願第２００３０１６５４７５号、及び米国特許出願第２００１０００９６６３号に記載されている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明のいくつかの実施形態の１つの局面によれば、非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法が提供される：（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態の１つの局面によれば、未成熟造血細胞移植を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法が提供される：（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を前処置された対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態の１つの局面によれば、未成熟造血細胞移植を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む方法が提供される：（ａ）全身照射（ＴＢＩ）および化学療法剤を含む強度軽減移植前処置プロトコルのもとで対象を前処置すること；（ｂ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を前記対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｃ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態の１つの局面によれば、非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象においてドナー特異的寛容性を誘導する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法が提供される：（ａ）非同系のドナーから得られる、Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、ドナー特異的寛容性を前記対象において誘導すること。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記方法はさらに、上記対象を、工程（ａ）に先立って、強度軽減移植前処置のもとで前処置することを含む。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記方法はさらに、上記対象を、工程（ａ）に先立って、インビボＴ細胞減量により前処置することを含む。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の上記用量は上記対象の体重１キログラムあたり５〜４０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞の上記用量は上記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、Ｔ細胞枯渇骨髄細胞、Ｔ細胞枯渇Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞、Ｔ細胞枯渇臍帯血、骨髄細胞および／またはＧ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞からの正の選択によって獲得される精製されたＣＤ３４＋細胞、ならびに、エクスビボ拡大ＣＤ３４＋細胞からなる群から選択される。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は上記対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞はＴ細胞減量によって得られる。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞減量は抗体によって行われる。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２抗体および抗ＴＣＲα／β抗体からなる群から選択される。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記抗体は、抗ＣＤ３抗体を含む。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記未成熟造血細胞は、Ｂ細胞減量によって処理される。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｂ細胞減量は、抗ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ２０抗体によって行われる。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が非同系のドナーから得られる。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記非同系ドナーは上記対象に対して同種または異種である。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記同種ドナーが、ＨＬＡ一致の兄弟姉妹、ＨＬＡ一致の非血縁ドナー、ＨＬＡハプロタイプ一致の血縁ドナー、および、１つまたは複数の異なるＨＬＡ決定基を呈示するドナーからなる群から選択される。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記対象はヒト対象である。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記インビボＴ細胞減量が抗体によって行われる。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、またはそれらの両方を含む。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記抗体は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体または抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体を含む。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記強度軽減移植前処置は骨髄非破壊的前処置を含む。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記骨髄非破壊的前処置は、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ）、化学療法剤および／または抗体免疫療法の少なくとも１つを含む。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記ＴＢＩは、１Ｇｙ〜７．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記ＴＢＩは、１Ｇｙ〜３．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記ＴＢＩは、２Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記ＴＢＩは、工程（ｂ）の２日前に単回服用で行われる。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記化学療法剤は、ブスルファン、フルダラビン、メルファランおよびチオテパの少なくとも１つを含む。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記抗体は、抗ＣＤ５２抗体、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体または抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体の少なくとも１つを含む。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記シクロホスファミドの濃度が体重１キログラムあたり約１００ｍｇ〜２００ｍｇである。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記シクロホスファミドの濃度が体重１キログラムあたり約１００ｍｇである。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記シクロホスファミドが単回服用で投与される。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記シクロホスファミドが２回服用で投与される。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記２回服用のそれぞれが体重１キログラムあたり約５０ｍｇの濃度を含む。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記２回服用のそれぞれが工程（ａ）の後の３日目および４日目に投与される。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記対象は悪性疾患を有する。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記悪性疾患は造血系のガンである。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記造血系のガンは白血病またはリンパ腫を含む。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記造血系のガンは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大Ｔ細胞／ヌル細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、不特定Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）／慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫−粘膜関連リンパ組織リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、原発性中枢神経系リンパ腫、膵性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、縦隔原発性Ｂ細胞リンパ腫および多発性骨髄腫からなる群から選択される。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記対象は非悪性疾患を有する。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記非悪性疾患は、遺伝疾患もしくは障害、自己免疫疾患または代謝異常である。
【００５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記非悪性疾患は、鎌状赤血球病、先天性好中球減少症、血小板減少症、再生不良性貧血、骨髄異形成症候群、モノソミー７、大理石骨病、ゴーシェ病、ハーラー病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質萎縮症、サラセミア、先天性または遺伝的決定の造血異常、狼瘡、自己免疫性肝炎、セリアック病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、関節リウマチ、強皮症および乾癬からなる群から選択される。
【００５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記細胞移植片または組織移植片は未成熟造血細胞を含む。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記細胞移植片または組織移植片が、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸およびリンパ系／造血系の組織または臓器からなる群から選択される。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記細胞移植片または組織移植片が、上記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を上記対象に移植する前に、または、上記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を移植するのと同時に、または、上記用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞を移植した後で上記対象に移植される。
【００５５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記細胞移植または組織移植はいくつかの臓器の同時移植を含む。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記細胞移植片または組織移植片および上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が、同じドナーから得られる。
【００５７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記前処置された対象は、強度軽減移植前処置のもとで前処置されている。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記強度軽減移植前処置が、移植の１〜１０日前に行われる。
【００５９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記前処置された対象は、インビボＴ細胞減量で前処置される。
【００６０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記インビボＴ細胞減量は、移植の４〜７日前に行われる。
【００６１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記化学療法剤は、フルダラビンを含む。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記フルダラビンは、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で行われる。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記フルダラビンは、工程（ｂ）の前の３〜７日に毎日投与される。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、上記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、Ｔ細胞枯渇Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞を含む。
【００６５】
本発明の教示が、他の寛容性誘導プロトコルとともに、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００１／４９２４３、同ＷＯ２００７／０２３４９１および同ＷＯ２０１０／０４９９３５（これらはそれらの全体が参照によって本明細書中に組み込まれる）に記載される寛容性誘導プロトコルなどとともに使用され得ることが理解されるであろう。
【００６６】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的用語および／または科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、例示的な方法および／または材料が下記に記載される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
本明細書では本発明のいくつかの実施形態を単に例示し添付の図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の実施形態を例示考察することだけを目的としていることを強調するものである。この点について、図面について行う説明によって、本発明の実施形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
【００６８】
【図１Ａ−１Ｂ】図１Ａ−１Ｂは、‘大用量’の厳密なＴ細胞枯渇ＢＭの移植および移植後シクロホスファミドの後における不一致ドナー骨髄（ＢＭ）の永続的生着を例示するグラフである。マウスを、抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体を使用するＴ細胞減量（ＴＣＤ）による−６日目での前処置、および、２．０Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）への暴露による−１日目での前処置に供した。高用量のシクロホスファミド（ＣＹ、１００ｍｇ／ｋｇ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与した。ドナータイプのキメラ現象を移植後３５日（図１Ａ）および９５日（図１Ｂ）で評価した。
【００６９】
【図２Ａ−２Ｃ】図２Ａ−２Ｃは、典型的なＦＡＣＳキメラ現象分析を例示するドットプロットグラフである。図２Ｃは、混合キメラ現象が、‘大用量’（２５×１０６個）の厳密なＴ細胞枯渇ＢＭが移植され、かつ、高用量のＣＹにより処置されたレシピエントにおいて達成されたことを示す。対照的に、前処置プロトコルのみを受けたレシピエントマウス（図２Ａ）、または、ほんの５×１０６個のＢＭ細胞およびＣＹが接種されたレシピエントマウスは、ドナータイプのキメラ現象を示さなかった（図２Ｂ）。
【００７０】
【図３】図３は、移植後１８０日および２２５日での永続的な混合キメラ現象を、‘大用量’（２５×１０６個）のＴ細胞枯渇ＢＭが移植され、かつ、高用量のＣＹにより処置されたレシピエントマウスにおいて例示するグラフである。留意すべきことに、５×１０６個のＴ細胞枯渇ＢＭおよびＣＹが接種されたマウスは混合キメラ現象を示さなかった。
【００７１】
【図４Ａ−４Ｂ】図４Ａ−４Ｂは、キメラマウスにおけるドナータイプ皮膚移植片または第三者皮膚移植片の移植を例示する。図４Ａは、高用量のＣＹにより移植後の＋３日目および＋４日目に処置される、通常用量（５×１０６個）または‘大用量’（２５×１０６個）のＴ枯渇ＢＭのレシピエントにおけるドナータイプ（Ｂａｌｂ／ｃ）皮膚移植片または第三者（Ｃ５７ＢＬ／６）皮膚移植片の許容（「＋」によって表される）または拒絶（「−」によって表される）を例示する移植片である。図４Ｂは、高用量のＣＹにより移植後の＋３日目および＋４日目に処置される、‘大用量’（２５×１０６個）Ｔ枯渇ＢＭのレシピエントにおけるドナータイプ（Ｂａｌｂ／ｃ）皮膚移植片（白毛）または第三者（Ｃ５７ＢＬ／６）皮膚移植片（黒毛）の写真である。
【００７２】
【図５】図５は、高用量のＣＹにより移植後に処置される、‘大用量’（２５×１０６個）Ｔ枯渇ＢＭのレシピエントマウスにおけるドナータイプのキメラ現象に対する種々の照射線量の影響を例示するグラフである。
【００７３】
【図６】図６は、‘大用量’（２５×１０６個）Ｔ枯渇ＢＭおよび２ＧｙのＴＢＩのレシピエントにおけるドナータイプのキメラ現象に対する増大用量のシクロホスファミド（ＣＹ）の影響を例示するグラフである。
【００７４】
【図７】図７は、‘大用量’のＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇ＢＭと移植後のＣＹとを組み合わせることによって達成される不一致ドナーＢＭの生着を例示するグラフである。留意すべきことに、残留ＣＤ８＋Ｔ細胞のＢＭ調製物からの枯渇化は、‘大用量’のＴ細胞枯渇ＢＭ細胞を移植後のＣＹと組み合わせるときに達成されるキメラ現象のレベルに対する有害な影響を何ら有していなかった。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
本発明はそのいくつかの実施形態において、安定かつ長期の細胞移植または組織移植を達成するための併用療法に関連する。
【００７６】
本発明の原理および操作は、図面および付随する説明を参照してより良く理解されることができる。
【００７７】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示される細部、または、実施例によって例示される細部に必ずしも限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の実施形態が可能であり、あるいは、様々な方法で実施、または、実行される。また、本明細書中において用いられる表現法および用語法は説明のためであって、限定として見なされるべきでないことを理解しなければならない。
【００７８】
同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の適用が、得られるＨＬＡ一致ドナーが家族内において、または、非血縁の篤志家ドナーの国際登録において不足していることによって制限されている。逆に、移植について必要性のある事実上すべての患者が、ハプロタイプの一方が完全に不一致の家族ドナーを有する。
【００７９】
ハプロタイプの一方が完全に不一致の血縁ドナーからの骨髄移植に対する主な障害が、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）および移植片拒絶であった。非常に多数の造血幹細胞を最小限の残存Ｔ細胞混入および攻撃的な免疫抑制的かつ骨髄破壊的な療法とともに使用することにより、高い生着率が、重度のＧＶＨＤをほとんど伴うことなくもたらされている。しかしながら、免疫再構成がこの取り組みの後では遅れており、かつ、不完全となっており、また、著しい割合の移植関連死亡（ＴＲＭ）が日和見感染症によって引き起こされる。
【００８０】
本発明を実施に移している間に、本発明者らは、不一致骨髄の成功した生着が、厳密なＴ細胞枯渇‘大用量’骨髄を移植し、続いて、高用量のシクロホスファミドを移植後早期に対象に投与することによって達成され得ることを発見している。本発明者らは、そのような療法は、短い免疫骨髄破壊的な前処置療法のみを必要とすることを示している。本発明者らはさらに、そのような移植手順が長期かつ安定なキメラ現象を引き起こすこと、および、寛容性が達成されていることを示している。
【００８１】
本明細書中下記および下記の実施例の節において示されるように、本発明者らは、‘大用量’Ｔ細胞枯渇骨髄移植（ＴＤＢＭＴ）と移植後の高用量シクロホスファミド（ＣＹ）との組合せが不一致ドナー骨髄の永続的な生着を可能にすることを骨の折れる実験によって発見している（図１Ａ〜図１Ｂおよび図２Ａ〜図２Ｃを参照のこと）。永続的な混合キメラ現象が移植後の長期間にわたって示された（マウスにおいて移植後１８０日および２２５日、図３を参照のこと）。重要なことに、‘大用量’ＴＤＢＭＴと移植後の高用量ＣＹとの組合せは造血幹細胞の生着を強度軽減移植前処置のもとで可能にし（図５を参照のこと）、また、ドナー皮膚移植片の許容によって示されるように、寛容性の誘導をもたらした（図４Ｂを参照のこと）。
【００８２】
したがって、本発明の１つの局面によれば、非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法が提供される：（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する／処置する」には、状態の進行を取り消すこと、実質的に阻害すること、遅くすること、または、逆向きにすること、状態の臨床的症状または審美的症状を実質的に改善すること、あるいは、状態の臨床的症状または審美的症状の出現を実質的に防止することが含まれる。
【００８４】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」または用語「その必要性のある対象」は、細胞移植または組織移植を必要としている、任意の年齢の雄性または雌性の哺乳動物（好ましくは、ヒト）を示す。典型的には、対象は、細胞移植または組織移植による処置を受け入れることができる障害、あるいは、病理学的または望まれない健康状態または状態または症候群、あるいは、物理的、形態学的または生理学的な異常のために、細胞移植または組織移植を必要としている。
【００８５】
１つの実施形態によれば、対象は、例えば、器官の機能性の喪失をもたらす加齢、外傷、創傷または何らかの病理学的状態に起因して、組織再生（固形組織または軟部組織）を必要としている。
【００８６】
本発明の１つの実施形態によれば、対象は悪性疾患を有する。
【００８７】
本発明の１つの実施形態によれば、悪性疾患は造血系のガンである。
【００８８】
例示的な造血系のガンには、下記のものが含まれるが、それらに限定されない：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性非リンパ芽球性白血病（ＡＮＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｔ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大Ｔ細胞／ヌル細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、不特定Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）／慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫−粘膜関連リンパ組織リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、原発性中枢神経系リンパ腫、膵性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、縦隔原発性Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｔ細胞白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、菌状息肉腫および多発性骨髄腫。
【００８９】
１つの実施形態によれば、造血系のガンは白血病またはリンパ腫を含む。
【００９０】
１つの実施形態によれば、対象は非悪性疾患を有する。
【００９１】
１つの実施形態によれば、非悪性疾患は、遺伝性の疾患または障害、自己免疫疾患、あるいは、代謝障害である。
【００９２】
例示的な非悪性疾患には、下記のものが含まれるが、それらに限定されない：重症複合免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、鎌状赤血球病（鎌状赤血球貧血）、先天性好中球減少症、血小板減少症、再生不良性貧血（例えば、重症再生不良性貧血）、骨髄異形成症候群、モノソミー７、大理石骨病、ゴーシェ病、ハーラー病、異染性白質ジストロフィー、副腎白質萎縮症、サラセミア、先天性または遺伝的決定の造血異常、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、狼瘡、自己免疫性肝炎、セリアック病、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、関節リウマチ、強皮症および乾癬。
【００９３】
１つの実施形態によれば、本発明の対象は、細胞移植または組織移植によって処置可能である心臓血管疾患、リウマチ様疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝疾患、神経学的疾患、筋疾患、腎疾患、結合組織疾患、全身疾患および／または生殖関連疾患のいずれかに罹患している場合がある。
【００９４】
本明細書中で使用される場合、表現「細胞移植片または組織移植片」は身体の細胞（例えば、１個だけの細胞または細胞群）または組織（例えば、充実組織または軟部組織、これらは全体または一部を移植することができる）を示す。本発明の教示に従って移植され得る例示的な組織には、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸およびリンパ系／造血系組織（例えば、リンパ節、パイアー斑、胸腺または骨髄）が含まれるが、これらに限定されない。本発明の教示に従って移植され得る例示的な細胞には、幹細胞を含む未成熟な造血細胞が含まれるが、これらに限定されない。さらに、本発明ではまた、臓器全体の移植、例えば、腎臓、心臓、肺、肝臓、膵臓または脾臓などの移植が意図される。
【００９５】
本発明の１つの実施形態によれば、細胞移植片または組織移植片は未成熟な造血細胞を含む。
【００９６】
１つの実施形態によれば、上記方法は、対象と非同系である細胞または組織を使用して行うことができる。
【００９７】
適用に依存して、上記方法は、対象と同種または異種である細胞または組織を使用して行うことができる。
【００９８】
本明細書中で使用される場合、用語「同種（の）」は、当該対象と同じ種であるが、当該対象とは実質的に非クローンであるドナーに由来する細胞または組織を示す。典型的には、同じ種の非近交系の非接合体（ｎｏｎ−ｚｙｇｏｔｉｃ）双胎哺乳動物は互いに同種である。同種ドナーは対象に関してＨＬＡ同一またはＨＬＡ非同一（すなわち、１つまたは複数の異なるＨＬＡ決定基を呈示する）であってもよいことが理解される。
【００９９】
１つの実施形態によれば、同種ドナーは、ＨＬＡ一致の兄弟姉妹、ＨＬＡ一致の非血縁ドナー、ＨＬＡハプロタイプ一致の血縁ドナー、あるいは、１つまたは複数の異なるＨＬＡ決定基を呈示するドナーである。
【０１００】
本明細書中で使用される場合、用語「異種（の）」は、当該対象のリンパ球の実質的割合の種に対して異なる種の抗原を実質的に発現する細胞または組織を示す。典型的には、異なる種の非近交系哺乳動物は互いに異種である。
【０１０１】
本発明では、異種の細胞または組織が様々な種に由来すること、例えば、ウシ属の動物（例えば、ウシ）、ウマ科の動物（例えば、ウマ）、ブタ類（例えば、ブタ）、オビド類（ｏｖｉｄｓ）（例えば、ヤギ、ヒツジ）、ネコ属の動物（例えば、イエネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ））、イヌ科の動物（例えば、イヌ（Ｃａｎｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ））、齧歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、アレチネズミ、ハムスター）または霊長類（例えば、チンパンジー、アカゲザル、マカクザル、マーモセット）など（これらに限定されない）に由来することが想定される。
【０１０２】
異種起源（例えば、ブタ起源）の細胞または組織が好ましくは、人畜共通感染症（例えば、ブタの内因性レトロウイルスなど）を有さないことが知られている供給源から得られる。同様に、ヒト由来の細胞または組織が好ましくは、実質的に病原体非含有の供給源から得られる。
【０１０３】
本発明の１つの実施形態によれば、対象およびドナーの両方がヒトである。
【０１０４】
適用および利用可能な供給源に依存して、本発明の細胞移植片または組織移植片は、出生前の生物ドナー、出生後の生物ドナー、成体ドナーまたは死体ドナーから得ることができる。そのうえ、必要とされる適用に依存して、細胞移植片または組織移植片はナイーブであり得るか、または、遺伝子操作され得る。使用される細胞移植片または組織移植片の種類の決定は十分に当業者の能力の範囲内である。さらに、この技術分野で知られているどの方法も、（例えば、移植用の）細胞移植片または組織移植片を得るために用いることができる。
【０１０５】
述べられたように、未成熟な造血細胞を含むＴ細胞枯渇造血細胞またはＴ細胞枯渇造血組織（例えば、ＣＤ３４＋を含む）の所与の用量が対象に移植される。
【０１０６】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は対象に関して非同系（例えば、同種または異種）である。
【０１０７】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞および細胞移植片または組織移植片は同系である（例えば、同じドナーから得られる）。
【０１０８】
本明細書中で使用される場合、表現「未成熟（な）造血細胞」は、前駆体造血細胞を含む造血組織調製物または造血細胞調製物を示す。そのような組織／細胞調製物は、生物学的サンプル、例えば、骨髄、動員末梢血（例えば、ＣＤ３４細胞の濃度を高めるためのＣＤ３４細胞の動員）、臍帯血（例えば、臍帯）、胎児肝臓、卵黄嚢および／または胎盤を含むか、あるいは、それらに由来する。加えて、精製されたＣＤ３４＋細胞または他の造血幹細胞（例えば、ＣＤ１３１＋細胞など）を、エクスビボ拡大を伴って、または伴うことなく、そのどちらでも、本発明の教示に従って使用することができる。
【０１０９】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞を含む。
【０１１０】
本明細書中で使用される場合、表現「Ｔ細胞（を）枯渇（させた）未成熟（な）造血細胞」は、Ｔリンパ球が枯渇化されている造血細胞の集団を示す。Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、例えば、ＣＤ３４＋、ＣＤ３３＋および／またはＣＤ５６＋の細胞を含む場合がある。Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ２＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、α／βＴ細胞および／またはγ／δＴ細胞が枯渇化されている場合がある。
【０１１１】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ３４＋未成熟造血細胞について濃縮されるＴ細胞枯渇のＧ−ＣＳＦ動員血液細胞を含む。
【０１１２】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞が枯渇化されている。
【０１１３】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の体重１キログラムあたり５０×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、４０×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、３０×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、２０×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、１５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、１０×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、９×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、８×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、７×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、６×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、４×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、３×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、２×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞、または、１×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含む。
【０１１４】
１つの具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含む。
【０１１５】
１つの具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は２０×１０５個未満のＣＤ３＋Ｔ細胞を含むが、１０個を超えるＣＤ３＋Ｔ細胞を含む。
【０１１６】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、少なくとも１×１０３個〜１×１０５個のＣＤ３＋Ｔ細胞を含む。
【０１１７】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、ＣＤ８＋細胞が枯渇化されている。
【０１１８】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は対象の体重１キログラムあたり１×１０４個未満〜４×１０５個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。
【０１１９】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の体重１キログラムあたり５０×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、２５×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、１５×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、１０×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、９×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、８×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、７×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、６×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、５×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、４×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、３×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、２×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、１×１０５個未満のＣＤ８＋細胞、９×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、８×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、７×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、６×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、５×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、４×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、３×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、２×１０４個未満のＣＤ８＋細胞、または、１×１０４個未満のＣＤ８＋細胞を含む。
【０１２０】
１つの具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は対象の体重１キログラムあたり４×１０５個未満のＣＤ８＋細胞を含む。
【０１２１】
１つの具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は４×１０５個未満のＣＤ８＋細胞を含むが、１０個を超えるＣＤ８＋細胞を含む。
【０１２２】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む。
【０１２３】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は、対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、０．５×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、１×１０５個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、０．５×１０５個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、１×１０４個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、０．５×１０４個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、１×１０３個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞、または、０．５×１０３個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む。
【０１２４】
１つの具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は対象の体重１キログラムあたり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む。
【０１２５】
１つの具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含むが、１０個を超えるＣＤ８＋ＴＣＲα／β−細胞を含む。
【０１２６】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｂ細胞が枯渇化されている。
【０１２７】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋および／またはＣＤ２０＋のＢ細胞）が枯渇化されている。
【０１２８】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞は、対象の体重１キログラムあたり５０×１０５個未満のＢ細胞、４０×１０５個未満のＢ細胞、３０×１０５個未満のＢ細胞、２０×１０５個未満のＢ細胞、１０×１０５個未満のＢ細胞、９×１０５個未満のＢ細胞、８×１０５個未満のＢ細胞、７×１０５個未満のＢ細胞、６×１０５個未満のＢ細胞、５×１０５個未満のＢ細胞、４×１０５個未満のＢ細胞、３×１０５個未満のＢ細胞、２×１０５個未満のＢ細胞、または、１×１０５個未満のＢ細胞を含む。
【０１２９】
１つの具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は対象の体重１キログラムあたり４×１０５個未満のＢ細胞を含む。１つの具体的な実施形態によれば、未成熟造血細胞は５０×１０５個未満のＢ細胞を含むが、１０個を超えるＢ細胞を含む。
【０１３０】
Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２＋、ＴＣＲα／β＋、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋の細胞）またはＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋および／またはＣＤ２０＋の細胞）の枯渇化が、どのような方法であれ、この技術分野で知られている方法を使用して行われる場合があり、例えば、特異的な抗体による根絶（例えば、殺傷）によって、あるいは、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕獲ＥＬＩＳＡ標識化の使用などによる親和性に基づく精製によって行われる場合がある。
【０１３１】
そのような方法が、本明細書中に、また、ＴＨＥ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、第１巻〜第４巻（編者：Ｄ．Ｎ．Ｗｅｉ）、および、ＦＬＯＷ  ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ  ＡＮＤ  ＣＥＬＬ  ＳＯＲＴＩＮＧ（編者：Ａ．Ｒａｄｂｒｕｃｈ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、１９９２）に記載される。例えば、細胞を、例えば、フローサイトメトリーまたはＦＡＣＳによって選別することができる。したがって、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）が使用される場合があり、これは、様々な程度の色チャネル、小角および鈍角の光散乱検出チャネル、ならびに、インピーダンスチャネルを有する場合がある。この技術分野で知られているリガンド依存的分離技術はどれも、抗体親和性ではなく、むしろ、細胞の物理的性質に依拠する正の分離技術および負の分離技術の両方と併せて使用される場合がある：そのような分離技術には、水簸および密度勾配遠心分離が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３２】
細胞選別のための他の方法には、例えば、固体担体（例えば、プレート、ビーズおよびカラムなど）を使用するそのような技術を含めて、親和性技術を使用するパンニングおよび分離が含まれる。したがって、生物学的サンプルが、抗体が固体マトリックス（例えば、プレート）に結合させられる「パンニング」によって分離される場合がある。
【０１３３】
代替として、細胞が磁気分離技術によって選別／分離される場合があり、これらの方法のいくつかが磁性ビーズを利用する。種々の磁性ビーズが数多くの供給者から入手可能であり、そのような供給者には、例えば、Ｄｙｎａｌ（ノルウェー）、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、米国）、Ｉｍｍｕｎｃｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、米国）、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ（Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、フランス）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国）、およびＣｅｌｌｐｒｏ（米国）が含まれる。代替として、抗体をビオチン化し、または、ジゴキシゲニンとコンジュゲート化し、アビジン被覆または抗ジゴキシゲニン被覆の親和性カラムと併せて使用することができる。
【０１３４】
１つの実施形態によれば、分離品質を増大させるために、または、多数のパラメーターによる選別を可能にするために、種々の枯渇／分離方法を組み合わせることができ、例えば、磁気細胞選別をＦＡＣＳと組み合わせることができる。
【０１３５】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞がＴ細胞減量（ＴＣＤ）によって得られる。
【０１３６】
Ｔ細胞減量が、例えば、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＴＣＲα／β抗体および／または抗ＴＣＲγ／δ抗体を含めて、様々な抗体を使用して行われる場合がある。
【０１３７】
１つの実施形態によれば、Ｂ細胞の枯渇化がＢ細胞減量によって行われる。
【０１３８】
Ｂ細胞減量が、ＣＤ１９抗体または抗ＣＤ２０抗体を含めて、様々な抗体を使用して行われる場合がある。代替では、Ｂ細胞のインビボ減量を抗ＣＤ２０抗体の注入によって達成することができる。
【０１３９】
代替として、ＣＤ３４＋幹細胞またはＣＤ１３１＋幹細胞の正の選択が、例えば、上記でさらに詳しく記載されるような磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーターおよび／または捕獲ＥＬＩＳＡ標識化を使用して行われる場合がある。
【０１４０】
述べられたように、Ｔ細胞またはＢ細胞の減量が、インビトロにおいて、または、インビボにおいて（例えば、未成熟造血細胞をドナーから取得する前のドナーにおいて）行われる場合がある。
【０１４１】
１つの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞を含むＴ細胞枯渇未成熟造血細胞）は、（上記で述べられた供給源のすべてから採取され、例えば、骨髄および／またはＧ−ＣＳＦ動員末梢血始原体細胞から採取され、（例えば、抗ＣＤ３４抗体を使用する磁性ビーズを用いた）正の選択によって選択される）Ｔ細胞枯渇の骨髄細胞、Ｔ細胞枯渇の動員末梢血始原体細胞（例えば、Ｇ−ＣＳＦによって動員されたもの）、Ｔ細胞枯渇の臍帯血／胎児肝臓／卵黄嚢、および／または、精製されたＣＤ３４＋細胞を含む。加えて、細胞数を増大させるためにインビボ拡大された精製ＣＤ３４＋細胞もまた、本発明の方法によって意図される。
【０１４２】
本発明の１つの実施形態によれば、対象には、体重１キログラムあたり少なくとも約４×１０６個、少なくとも約４．５×１０６個、少なくとも約５×１０６個、少なくとも約５．５×１０６個、少なくとも約６×１０６個、少なくとも約６．５×１０６個、少なくとも約７×１０６個、少なくとも約７．５×１０６個、少なくとも約８×１０６個、少なくとも約８．５×１０６個、少なくとも約９×１０６個、少なくとも約９．５×１０６個、少なくとも約１０×１０６個、少なくとも約１２．５×１０６個、少なくとも約１５×１０６個、少なくとも約２０×１０６個、少なくとも約２５×１０６個、少なくとも約３０×１０６個、少なくとも約３５×１０６個、少なくとも約４０×１０６個、少なくとも約４５×１０６個、少なくとも約５０×１０６個、少なくとも約６０×１０６個、少なくとも約７０×１０６個、少なくとも約８０×１０６個、少なくとも約９０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む所与の用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞が投与される。
【０１４３】
１つの具体的な実施形態によれば、対象には、体重１キログラムあたり少なくとも約１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む所与の用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞が投与される。
【０１４４】
１つの具体的な実施形態によれば、対象には、体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む所与の用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞が投与される。
【０１４５】
１つの実施形態によれば、対象には、対象の体重１キログラムあたり約４〜３０×１０６個、４〜４０×１０６個、４〜５０×１０６個、４〜６０×１０６個、４〜７０×１０６個、４〜８０×１０６個、４〜９０×１０６個、４〜１００×１０６個、５〜１０×１０６個、５〜２０×１０６個、５〜３０×１０６個、５〜４０×１０６個、５〜５０×１０６個、５〜６０×１０６個、５〜７０×１０６個、５〜８０×１０６個、５〜９０×１０６個、５〜１００×１０６個、１０〜２０×１０６個、１０〜３０×１０６個、１０〜４０×１０６個、１０〜５０×１０６個、１０〜６０×１０６個、１０〜７０×１０６個、１０〜８０×１０６個、１０〜９０×１０６個、１０〜１００×１０６個、２０〜３０×１０６個、２０〜４０×１０６個、２０〜５０×１０６個、２０〜６０×１０６個、２０〜７０×１０６個、２０〜８０×１０６個、２０〜９０×１０６個、２０〜１００×１０６個、３０〜４０×１０６個、３０〜５０×１０６個、３０〜６０×１０６個、３０〜７０×１０６個、３０〜８０×１０６個、３０〜９０×１０６個、３０〜１００×１０６個、４０〜５０×１０６個、４０〜６０×１０６個、４０〜７０×１０６個、４０〜８０×１０６個、４０〜９０×１０６個、４０〜１００×１０６個、５０〜６０×１０６個、５０〜７０×１０６個、５０〜８０×１０６個、５０〜９０×１０６個、５０〜１００×１０６個、６０〜７０×１０６個、６０〜８０×１０６個、６０〜９０×１０６個、６０〜１００×１０６個、７０〜８０×１０６個、７０〜９０×１０６個、７０〜１００×１０６個、８０〜９０×１０６個、８０〜１００×１０６個の範囲のＣＤ３４＋細胞を含む所与の用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞が投与される。
【０１４６】
１つの具体的な実施形態によれば、対象には、体重１キログラムあたり約５〜４０×１０６個の範囲のＣＤ３４＋細胞を含む所与の用量のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞が投与される。
【０１４７】
本発明のＴ細胞枯渇未成熟造血細胞は、どのような方法であれ、細胞移植のためにこの技術分野で知られている方法を使用して、例えば、細胞注入（例えば、Ｉ．Ｖ．）を使用して、腹腔内経路を介して、または、骨内経路を介して（これらに限定されない）レシピエントに移植される場合がある。
【０１４８】
述べられたように、本発明の対象にはさらに、細胞移植片または組織移植片（例えば、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸および／またはリンパ系／造血系の組織）が移植される場合がある。
【０１４９】
細胞または組織を対象に移植することが、様々なパラメーターに依存して、例えば、細胞タイプまたは組織タイプ、レシピエントの疾患（例えば、臓器不全）のタイプ、病期または重篤度、対象に対して特異的な身体的または生理学的なパラメーター、および／あるいは、所望される治療結果などに依存して、数多くの方法で行われる場合がある。
【０１５０】
本発明の細胞移植片または組織移植片を移植することが、細胞移植片または組織移植片を、適用に依存して、様々な解剖学的位置のいずれか１つに移植することによって行われる場合がある。細胞移植片または組織移植片が、同位置の解剖学的位置（移植のための正常な解剖学的位置）に、または、異所性の解剖学的位置（移植のための異常な解剖学的位置）に移植される場合がある。適用に依存して、細胞移植片または組織移植片が、腎被膜の下に、あるいは、腎臓、精巣脂肪、皮下組織、網、門脈、肝臓、脾臓、心臓腔、心臓、胸腔、肺、皮膚、膵臓および／または腹腔内空間の中に都合よく埋め込まれる場合がある。
【０１５１】
例えば、本発明の教示による肝臓組織が、肝臓、門脈、腎被膜、皮下、網、脾臓および腹腔内空間に移植される場合がある。様々な解剖学的位置（例えば、これら）への肝臓の移植が、肝移植による処置を受け入れる疾患（例えば、肝不全）を処置するためにこの技術分野では一般に実施される。類似して、膵臓組織を本発明に従って移植することが、組織を、門脈、肝臓、膵臓、精巣脂肪、皮下、網、腸の係蹄（小腸のＵ係蹄の漿膜下組織）および／または腹腔内空間に移植することによって都合よく行われる場合がある。膵臓組織の移植が、膵臓移植による処置を受け入れる疾患（例えば、糖尿病）を処置するために使用される場合がある。同様に、腎臓組織、心臓組織、肺組織または皮膚組織などの組織の移植が、例えば、腎不全、心不全、肺不全または皮膚損傷（例えば、火傷）に苦しむレシピエントを処置するという目的のために上記のいずれかの解剖学的位置に行われる場合がある。
【０１５２】
場合により、本発明の細胞移植片または組織移植片を、不全臓器を有する対象に移植するときには、損なわれた臓器を最初に少なくとも部分的に対象から取り出し、その結果、移植組織の最適な発達および対象の解剖学／生理学とのその構造的／機能的な一体化を可能にするようにすることが好都合である場合がある。
【０１５３】
本発明の方法ではまた、いくつかの臓器（例えば、心臓および肺、肝臓および脾臓、膵臓および骨髄（例えば、造血幹細胞）、腎臓および骨髄（例えば、造血幹細胞）、など）の同時移植が、対象がそのような手法による有益な影響を受ける場合には想定される。
【０１５４】
１つの実施形態によれば、同時移植は、未成熟造血細胞および実質組織／臓器またはいくつかの実質臓器／組織を移植することを含む。
【０１５５】
１つの実施形態によれば、未成熟造血細胞および実質臓器は、同じドナーから得られる。
【０１５６】
１つの実施形態によれば、細胞移植片または組織移植片（例えば、実質臓器）が、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋細胞を含むＴ細胞枯渇未成熟造血細胞）を対象に移植する前に、または、移植するのと同時に、または、移植した後で対象に移植される。
【０１５７】
細胞移植片または組織移植片を対象に移植した後では、標準的な医療実務によれば、臓器の成長機能性および免疫適合性を当該技術分野での様々な標準的技術のいずれか１つに従ってモニターすることが望ましい。例えば、膵臓組織の移植組織の機能性が、標準的な膵臓機能検査（例えば、インスリンの血清中レベルの分析）によって移植後にモニターされる場合がある。同様に、肝臓組織の移植組織が、標準的な肝臓機能検査（例えば、アルブミン、総タンパク質、ＡＬＴ、ＡＳＴおよびビリルビンの血清中レベルの分析、ならびに、血液凝固時間の分析）によって移植後にモニターされる場合がある。細胞移植片または組織移植片の構造的発達がコンピューター断層撮影法または超音波画像診断によりモニターされる場合がある。
【０１５８】
移植組織タイプにかかわらず、移植片拒絶および／または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％軽減するために、あるいは、好ましくは、移植片拒絶および／または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を回避するために、本発明では、シクロホスファミドの移植後投与が意図される。
【０１５９】
１つの実施形態によれば、本発明ではさらに、本明細書中に記載されるような移植後での投与に加えて、移植前（例えば、移植の４日前、３日前または２日前、すなわち、Ｔ−４、Ｔ−３またはＴ−２）におけるシクロホスファミドの投与が意図される。
【０１６０】
留意すべきことに、（細胞移植片または組織移植片の）移植日はＴ＝ゼロであると見なされる。
【０１６１】
本明細書中で使用される場合、用語「シクロホスファミド」は、アルキル基（ＣｎＨ２ｎ＋１）をＤＮＡに特異的に付加するナイトロジェンマスタード系アルキル化剤（これはまた、シクロホスファンとして知られている）を示す。１つの具体的な実施形態において、シクロホスファミドは、分子式Ｃ７Ｈ１５Ｃ１２Ｎ２Ｏ２Ｐ・Ｈ２Ｏおよび化学名２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキサザホスホリン２−オキシド一水和物を示す。シクロホスファミドは、例えば、Ｚｙｄｕｓ（Ｇｅｒｍａｎ  Ｒｅｍｅｄｉｅｓ）、Ｒｏｘａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ−Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ−Ｍｅａｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ、および、Ｐｆｉｚｅｒ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎから、Ｅｎｄｏｘａｎ、Ｃｙｔｏｘａｎ、Ｎｅｏｓａｒ、ＰｒｏｃｙｔｏｘおよびＲｅｖｉｍｍｕｎｅの商品名で市販されている。
【０１６２】
治療効果的な量のシクロホスファミドが典型的には、細胞移植片または組織移植片が移植された後で対象に投与される。
【０１６３】
理論にとらわれることはないが、治療効果的な量は、対象に対して毒性であることなく、ドナーまたは宿主の活性化された同種反応性Ｔ細胞を殺傷するために効率的であるシクロホスファミドの量である。
【０１６４】
例えば、細胞移植片または組織移植片の場合、シクロホスファミドの治療効果的量は、対象の体重１キログラムあたり約１〜２５ｍｇ、１〜５０ｍｇ、１〜７５ｍｇ、１〜１００ｍｇ、１〜２５０ｍｇ、１〜５００ｍｇ、１〜７５０ｍｇ、１〜１０００ｍｇ、５〜５０ｍｇ、５〜７５ｍｇ、５〜１００ｍｇ、５〜２５０ｍｇ、５〜５００ｍｇ、５〜７５０ｍｇ、５〜１０００ｍｇ、１０〜５０ｍｇ、１０〜７５ｍｇ、１０〜１００ｍｇ、１０〜２５０ｍｇ、１０〜５００ｍｇ、１０〜７５０ｍｇ、１０〜１０００ｍｇ、２５〜５０ｍｇ、２５〜７５ｍｇ、２５〜１００ｍｇ、２５〜１２５ｍｇ、２５〜２００ｍｇ、２５〜３００ｍｇ、２５〜４００ｍｇ、２５〜５００ｍｇ、２５〜７５０ｍｇ、２５〜１０００ｍｇ、５０〜７５ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、５０〜１２５ｍｇ、５０〜１５０ｍｇ、５０〜１７５ｍｇ、５０〜２００ｍｇ、５０〜２５０ｍｇ、５０〜５００ｍｇ、５０〜１０００ｍｇ、７５〜１００ｍｇ、７５〜１２５ｍｇ、７５〜１５０ｍｇ、７５〜２５０ｍｇ、７５〜５００ｍｇ、７５〜１０００ｍｇ、１００〜１２５ｍｇ、１００〜１５０ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、１００〜１０００ｍｇ、１２５〜１５０ｍｇ、１２５〜２５０ｍｇ、１２５〜５００ｍｇ、１２５〜１０００ｍｇ、１５０〜２００ｍｇ、１５０〜３００ｍｇ、１５０〜５００ｍｇ、１５０〜１０００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、２００〜５００ｍｇ、２００〜７５０ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２５０〜５００ｍｇ、２５０〜７５０ｍｇ、２５０〜１０００ｍｇを含む。
【０１６５】
１つの具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドの治療効果的量は対象の体重１キログラムあたり約２５ｍｇ〜２００ｍｇである。
【０１６６】
下記の実施例の節において例示されるように、本発明者らは、（移植後３日目および４日目での）移植後におけるシクロホスファミドの２回の服用での投与が、Ｔ細胞を枯渇させた‘大用量’の不一致ドナー骨髄の永続的な生着および寛容性を可能にすることを示している。
【０１６７】
１つの実施形態によれば、シクロホスファミドが単回服用で投与される。
【０１６８】
１つの実施形態によれば、シクロホスファミドが、多数回の服用で、例えば、２回、３回、４回、５回またはそれ以上の服用で投与される。
【０１６９】
１つの具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドが２回の服用で投与される。
【０１７０】
１つの実施形態によれば、シクロホスファミドが、毎日、例えば、１日１回または１日２回などで投与される。
【０１７１】
それぞれのシクロホスファミド投与の用量が、対象の体重１キログラムあたり約５ｍｇ、７．５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇまたは５００ｍｇを含む場合がある。
【０１７２】
１つの具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドの用量が対象の体重１キログラムあたり５０ｍｇである。
【０１７３】
述べられたように、シクロホスファミドが移植後に投与される。したがって、例えば、シクロホスファミドが、移植後１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日またはそれ以降（すなわち、Ｔ＋１、Ｔ＋２、Ｔ＋３、Ｔ＋４、Ｔ＋５、Ｔ＋６、Ｔ＋７、Ｔ＋８、Ｔ＋９、Ｔ＋１０）で対象に投与される場合がある。１つの具体的な実施形態によれば、シクロホスファミドが移植後３日および４日において２回服用で投与される。
【０１７４】
１つの実施形態によれば、シクロホスファミドが移植前および移植後に投与される。したがって、例えば、シクロホスファミドが、移植の３日前（Ｔ−３）に、その後、移植後（例えば、Ｔ＋３日、Ｔ＋４日など）に対象に投与される場合がある。
【０１７５】
シクロホスファミドの投与回数および治療効果的な量は、移植のタイプおよび療法に対する対象の応答を考慮に入れて、必要に応じて調節される場合がある。投与回数および治療効果的な量の決定は、とりわけ本明細書中に提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１７６】
細胞移植片または組織移植片の生着を促進させるために、本発明の方法はさらに好適には、対象を、細胞移植片または組織移植片の移植の前に、あるいは、移植と同時に、あるいは、移植の後で、さらなる免疫抑制薬物および／または免疫抑制照射により前処置（コンデショニング）することを含む場合がある。
【０１７７】
細胞移植片または組織移植片（例えば、実質臓器）がＴ細胞枯渇未成熟造血細胞に先立って移植される状況では、全身的免疫抑制剤（下記でさらに詳しく記載されるような、例えば、シクロスポリンＡ）を、臓器拒絶を回避するために使用することが望ましいことが理解されるであろう。Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞が移植され、キメラ現象が達成されると、全身的免疫抑制剤は漸減され、その後で停止される場合がある。対照的に、細胞移植片または組織移植片（例えば、実質臓器）がＴ細胞枯渇未成熟造血細胞の後で移植される状況では、キメラ現象誘導後、全身的免疫抑制の使用が要求されない場合がある。
【０１７８】
好適な免疫抑制療法を移植のために選択し、施すための十分な指針が、この技術分野の文献に提供されている（例えば、下記の文献を参照のこと：Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ  ＣＨおよびＲｏｗｌａｎｄｓ  ＤＴ  Ｊｒ．、１９９２、ＪＡＭＡ、２６８、２９５２；Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＲＭ他、１９９６、Ｌａｎｃｅｔ、３４８、１２０８；Ｓｕｔｈａｎｔｈｉｒａｎ  ＭおよびＳｔｒｏｍ  ＴＢ、１９９６、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３１、３６５；Ｍｉｄｔｈｕｎ  ＤＥ他、１９９７、Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ、７２、１７５；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＶＡ他、１９９４、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、９７、１４；Ｈａｎｔｏ  ＤＷ、１９９５、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ、４６、３８１；Ｓｅｎｄｅｒｏｗｉｃｚ  ＡＭ他、１９９７、Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ、１２６、８８２；Ｖｉｎｃｅｎｔｉ  Ｆ他、１９９８、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３８、１６１；Ｄａｎｔａｌ  Ｊ他、１９９８、Ｌａｎｃｅｔ、３５１、６２３）。
【０１７９】
したがって、本発明の１つの実施形態によれば、対象は、細胞移植片または組織移植片が移植される前に強度軽減移植前処置のもとで前処置される。
【０１８０】
１つの実施形態によれば、強度軽減移植前処置が、細胞移植片または組織移植片が移植される前の２週間までの間（例えば、１日〜１０日、または、１日〜７日）にわたって行われる。
【０１８１】
したがって、例えば、対象が骨髄破壊的前処置または骨髄非破壊的前処置により処置される場合がある。そのような前処置は、例えば、また、下記の実施例の節において詳しく記載されるように、インビボＴ細胞減量、例えば、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体、抗ＣＤ５２抗体（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ）および／または抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体による（例えば、それぞれが約３００μｇの治療効果的な用量での移植前６日における）インビボＴ細胞減量を含む場合がある。
【０１８２】
前処置はさらには、または、代替として、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ、すなわち、全リンパ節、胸腺および脾臓の暴露）、化学療法剤および／または抗体免疫療法を含む場合がある。
【０１８３】
したがって、１つの実施形態によれば、ＴＢＩは、０．５〜１Ｇｙ、０．５〜１．５Ｇｙ、０．５〜２．５Ｇｙ、０．５〜５Ｇｙ、０．５〜７．５Ｇｙ、０．５〜１０Ｇｙ、０．５〜１５Ｇｙ、１〜１．５Ｇｙ、１〜２Ｇｙ、１〜２．５Ｇｙ、１〜３Ｇｙ、１〜３．５Ｇｙ、１〜４Ｇｙ、１〜４．５Ｇｙ、１〜１．５Ｇｙ、１〜７．５Ｇｙ、１〜１０Ｇｙ、２〜３Ｇｙ、２〜４Ｇｙ、２〜５Ｇｙ、２〜６Ｇｙ、２〜７Ｇｙ、２〜８Ｇｙ、２〜９Ｇｙ、２〜１０Ｇｙ、３〜４Ｇｙ、３〜５Ｇｙ、３〜６Ｇｙ、３〜７Ｇｙ、３〜８Ｇｙ、３〜９Ｇｙ、３〜１０Ｇｙ、４〜５Ｇｙ、４〜６Ｇｙ、４〜７Ｇｙ、４〜８Ｇｙ、４〜９Ｇｙ、４〜１０Ｇｙ、５〜６Ｇｙ、５〜７Ｇｙ、５〜８Ｇｙ、５〜９Ｇｙ、５〜１０Ｇｙ、６〜７Ｇｙ、６〜８Ｇｙ、６〜９Ｇｙ、６〜１０Ｇｙ、７〜８Ｇｙ、７〜９Ｇｙ、７〜１０Ｇｙ、８〜９Ｇｙ、８〜１０Ｇｙ、１０〜１２Ｇｙ、または、１０〜１５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む。
【０１８４】
１つの具体的な実施形態によれば、ＴＢＩは、１Ｇｙ〜３．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む。
【０１８５】
１つの実施形態によれば、ＴＢＩ処置が移植の１日前〜１０日前（例えば、１日前〜３日前）に対象に施される。１つの実施形態によれば、対象が、移植の１日前または２日前にＴＢＩにより１回、前処置される。
【０１８６】
１つの具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、０．５〜１Ｇｙ、０．５〜１．５Ｇｙ、０．５〜２．５Ｇｙ、０．５〜５Ｇｙ、０．５〜７．５Ｇｙ、０．５〜１０Ｇｙ、０．５〜１５Ｇｙ、１〜１．５Ｇｙ、１〜２Ｇｙ、１〜２．５Ｇｙ、１〜３Ｇｙ、１〜３．５Ｇｙ、１〜４Ｇｙ、１〜４．５Ｇｙ、１〜１．５Ｇｙ、１〜７．５Ｇｙ、１〜１０Ｇｙ、２〜３Ｇｙ、２〜４Ｇｙ、２〜５Ｇｙ、２〜６Ｇｙ、２〜７Ｇｙ、２〜８Ｇｙ、２〜９Ｇｙ、２〜１０Ｇｙ、３〜４Ｇｙ、３〜５Ｇｙ、３〜６Ｇｙ、３〜７Ｇｙ、３〜８Ｇｙ、３〜９Ｇｙ、３〜１０Ｇｙ、４〜５Ｇｙ、４〜６Ｇｙ、４〜７Ｇｙ、４〜８Ｇｙ、４〜９Ｇｙ、４〜１０Ｇｙ、５〜６Ｇｙ、５〜７Ｇｙ、５〜８Ｇｙ、５〜９Ｇｙ、５〜１０Ｇｙ、６〜７Ｇｙ、６〜８Ｇｙ、６〜９Ｇｙ、６〜１０Ｇｙ、７〜８Ｇｙ、７〜９Ｇｙ、７〜１０Ｇｙ、８〜９Ｇｙ、８〜１０Ｇｙ、１０〜１２Ｇｙ、１０〜１５Ｇｙ、１０〜２０Ｇｙ、１０〜３０Ｇｙ、１０〜４０Ｇｙ、１０〜５０Ｇｙ、０．５〜２０Ｇｙ、０．５〜３０Ｇｙ、０．５〜４０Ｇｙ、または、０．５〜５０Ｇｙの範囲に含まれる照射線量を含む。
【０１８７】
１つの具体的な実施形態によれば、ＴＬＩは、１Ｇｙ〜３．５Ｇｙの範囲に含まれる単回照射線量または分割照射線量を含む。
【０１８８】
１つの実施形態によれば、ＴＬＩ処置が移植の１日前〜１０日前（例えば、１日前〜３日前）に対象に施される。１つの実施形態によれば、対象が、移植の２日前〜７日前にＴＬＩにより１回、前処置される。
【０１８９】
１つの実施形態によれば、前処置は化学療法剤を含む。例示的な化学療法剤には、ブスルファン、ミレラン、ブスルフェクス、フルダラビン、メルファランおよびチオテパおよびシクロホスファミドが含まれるが、これらに限定されない。化学療法剤は、移植前に、単回服用で、あるいは、数回の服用で、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回またはそれ以上の服用（例えば、毎日の服用）で対象に投与される場合がある。１つの実施形態によれば、対象には、化学療法剤が（例えば、フルダラビンが、例えば、約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で）移植前の５日間連続して（例えば、−７日目から−３日目まで）投与される。
【０１９０】
１つの実施形態によれば、前処置は抗体免疫療法を含む。例示的な抗体には、抗ＣＤ５２抗体（例えば、アレムツズマブ、例えば、Ｃａｍｐａｔｈ、ＭａｂＣａｍｐａｔｈ、Ｃａｍｐａｔｈ−１ＨおよびＬｅｍｔｒａｄｅの商品名で販売されるもの）および抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）剤［例えば、Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ウサギＡＴＧ、ｒＡＴＧ、Ｇｅｎｚｙｍｅから入手可能）およびＡｔｇａｍ（ウマＡＴＧ、ｅＡＴＧ、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）］が含まれるが、これらに限定されない。さらなる抗体免疫療法は、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）剤、抗ＣＤ４剤または抗ＣＤ８剤を含む場合がある。１つの実施形態によれば、抗体は、移植前（例えば、移植の６日前）に、単回服用で、あるいは、数回の服用で、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回またはそれ以上の服用（例えば、毎日の服用）で対象に投与される。
【０１９１】
１つの実施形態によれば、対象は、移植後、ＧＶＨＤ予防により、慢性的に（例えば、長期間にわたって、例えば、１０日間を超えて）処置されない。
【０１９２】
１つの実施形態によれば、造血幹細胞移植後の再発に備えて、対象はさらに、ドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）によって処置される場合がある。例えば、対象には、Ｄａｚｚｉ他［Ｄａｚｚｉ，Ｓｚｙｄｌｏ他、Ｂｌｏｏｄ（２０００）、９６：２７１２〜６］（これは全体が参照によって本明細書中に組み込まれる）によって以前に記載されたような段階的用量のＴ細胞が投与される場合がある。
【０１９３】
１つの実施形態によれば、対象は、Ｔ細胞枯渇ハプロタイプ一致移植の後における再発を処置するために、レシピエントの体重１キログラムあたり約０．５〜５×１０４個のＣＤ３＋リンパ球（例えば、レシピエントの体重１キログラムあたり１×１０４個のＣＤ３＋リンパ球、例えば、操作されていないＣＤ３＋リンパ球）の注入によって処置される場合がある。
【０１９４】
１つの実施形態によれば、初期の分子的再発および／または造血系再発を有する患者がさらに、レシピエントの体重１キログラムあたり約１×１０４個のＣＤ３＋細胞の第１の用量により処置されるであろう。ＧＶＨＤがない場合、レシピエントの体重１キログラムあたり約１×１０５個のＣＤ３＋細胞の２回目の注入が典型的には、約４５日後に与えられ、続いて、２ヶ月後に、レシピエントの体重１キログラムあたり約１×１０６個のＣＤ３＋細胞の第３の用量が与えられるであろう。ドナーは典型的には、リンパ球を集めるための白血球アフェレーシスを（例えば、移植のために）造血細胞動員の前に受けることが理解されるであろう。凍結された産物が必要に応じて解凍され、５分〜１０分の期間にわたって直ちに注入される。急性ＧＶＨＤを示す患者、または、造血生着を明らかにすることができない患者は典型的には、ＤＬＩを何ら受けないであろう。
【０１９５】
１つの実施形態によれば、再発したＢ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者が典型的には、２回目のリツキシマブ服用と同時でのＤＬＩを伴って、リツキシマブ（例えば、約４週間にわたって毎週、３７５ｍｇ／ｍ２）によりさらに処置されるであろう。
【０１９６】
１つの実施形態によれば、再発した多発性骨髄腫を有する患者が、ＤＬＩを開始する前に、ボルテゾミブ（例えば、１日目、４日目、８日目および１１日目での１．３ｍｇ／ｓｑｍ）によりさらに処置されるであろう。
【０１９７】
１つの実施形態によれば、ＤＬＩ後の免疫抑制剤は何ら、本発明の方法と一緒には使用されないであろう。
【０１９８】
本発明の１つの局面によれば、Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞移植を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法が提供される：（ａ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を前処置された対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【０１９９】
本発明の１つの局面によれば、未成熟造血細胞移植を必要としている対象を処置する方法であって、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む方法が提供される：（ａ）全身照射（ＴＢＩ）および化学療法剤を含む強度軽減移植前処置プロトコルのもとで対象を前処置すること；（ｂ）Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を前記対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｃ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【０２００】
本発明の１つの局面によれば、非同系の細胞移植片または組織移植片を必要としている対象において、ドナー特異的寛容性を誘導する方法であって、下記の（ａ）および（ｂ）を含む方法が提供される：（ａ）非同系のドナーから得られる、Ｔ細胞を枯渇させた未成熟な造血細胞の所与の用量を対象に移植すること（ただし、前記Ｔ細胞枯渇未成熟造血細胞は前記対象の体重１キログラムあたり５×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含み、かつ、前記用量は前記対象の体重１キログラムあたり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）；続いて、（ｂ）治療効果的な量のシクロホスファミド（ただし、前記治療効果的な量は体重１キログラムあたり２５ｍｇ〜２００ｍｇを含む）を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置すること。
【０２０１】
本明細書中で使用される場合、用語「ドナー特異的寛容性」は、本明細書中で使用される場合、そのような処置方法の非存在下におけるレシピエントの細胞の応答性と比較して、ドナーの細胞（例えば、ドナー造血細胞）と接触したとき、レシピエントの細胞（例えば、レシピエントのＴ細胞）の低下した応答性が認められる状態を示す。
【０２０２】
寛容性の誘導は、移植片拒絶またはＧＶＨＤの危険性が低下している（本明細書中上記でさらに詳しく記載されるような）細胞移植片または組織移植片の移植を可能にする。
【０２０３】
本発明の１つの実施形態によれば、初期の分子的再発および／または造血系再発を有する患者がドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）を受ける場合がある。
【０２０４】
本発明の１つの実施形態によれば、ＤＬＩはレシピエントの体重１キログラムあたり１×１０３個〜１×１０６個のＣＤ３＋Ｔ細胞を含むであろう。
【０２０５】
１つの実施形態によれば、初期の分子的再発および／または造血系再発を有する患者が、単回用量または数回の用量（２回、３回、４回、５回またはそれ以上の用量）のＤＬＩを受ける場合がある。
【０２０６】
したがって、例えば、初期の分子的再発および／または造血系再発を有する患者が、レシピエントの体重１キログラムあたり１×１０４個のＣＤ３＋Ｔ細胞の第１の用量を受ける場合がある。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）がない場合、レシピエントの体重１キログラムあたり１×１０５個のＣＤ３＋Ｔ細胞の第２の注入が、例えば、４５日後に与えられ、続いて、例えば、２ヶ月後に、レシピエントの体重１キログラムあたり１×１０６個のＣＤ３＋Ｔ細胞の第３の用量が与えられる場合がある。
【０２０７】
１つの実施形態によれば、初期の分子的再発および／または造血系再発を有する患者が、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ）、化学療法剤および／または抗体免疫療法を受ける場合がある。
【０２０８】
したがって、例えば、再発したＢ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者が、２回目のリツキシマブ服用と同時でのＤＬＩを伴って、リツキシマブを（例えば、３７５ｍｇ／ｍ２の用量で毎週）約４週間にわたって受ける場合がある。
【０２０９】
したがって、例えば、再発した多発性骨髄腫を有する患者が、ＤＬＩを開始する前に、ボルテゾミブにより（例えば、１日目、４日目、８日目および１１日目に１．３ｍｇ／ｓｑｍの用量で）処置される場合がある。
【０２１０】
本明細書中で使用される用語「約」は、±１０％を示す。
【０２１１】
用語「含む／備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、およびそれらの同根語は、「含むが、それらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【０２１２】
用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、「含み、それらに限定される（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【０２１３】
表現「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、さらなる成分、工程および／または部分が、主張される組成物、方法または構造の基本的かつ新規な特徴を実質的に変化させない場合にだけ、組成物、方法または構造がさらなる成分、工程および／または部分を含み得ることを意味する。
【０２１４】
本明細書中で使用される場合、単数形態（「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」）は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数の参照物を包含する。例えば、用語「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または用語「少なくとも１つの化合物」は、その混合物を含めて、複数の化合物を包含し得る。
【０２１５】
本開示を通して、本発明の様々な態様が範囲形式で提示され得る。範囲形式での記載は単に便宜上および簡潔化のためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈すべきでないことを理解しなければならない。従って、範囲の記載は、具体的に開示された可能なすべての部分範囲、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値を有すると見なさなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、具体的に開示された部分範囲（例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など）、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値（例えば、１、２、３、４、５および６）を有すると見なさなければならない。このことは、範囲の広さにかかわらず、適用される。
【０２１６】
数値範囲が本明細書中で示される場合には常に、示された範囲に含まれる任意の言及された数字（分数または整数）を含むことが意味される。第１の示された数字および第２の示された数字「の範囲である／の間の範囲」という表現、および、第１の示された数字「から」第２の示された数「まで及ぶ／までの範囲」という表現は、交換可能に使用され、第１の示された数字と、第２の示された数字と、その間のすべての分数および整数とを含むことが意味される。
【０２１７】
本明細書中で使用される用語「方法（ｍｅｔｈｏｄ）」は、所与の課題を達成するための様式、手段、技術および手順を示し、これには、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者に知られているそのような様式、手段、技術および手順、または、知られている様式、手段、技術および手順から、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者によって容易に開発されるそのような様式、手段、技術および手順が含まれるが、それらに限定されない。
【０２１８】
明確にするため別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴が、単一の実施形態に組み合わせて提供されることもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施形態で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで、あるいは本発明の他の記載される実施形態において好適なように提供することもできる。種々の実施形態の文脈において記載される特定の特徴は、その実施形態がそれらの要素なしに動作不能である場合を除いては、それらの実施形態の不可欠な特徴であると見なされるべきではない。
【０２１９】
本明細書中上記に描かれるような、および、下記の請求項の節において特許請求されるような本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、実験的裏付けが下記の実施例において見出される。
【実施例】
【０２２０】
次に下記の実施例が参照されるが、下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定様式で例示する。
【０２２１】
一般に、本願で使用される用語と、本発明で利用される実験方法には、分子生化学、微生物学および組み換えＤＮＡの技法が広く含まれている。これらの技術は文献に詳細に説明されている。例えば以下の諸文献を参照されたい：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、米国メリーランド州バルチモア（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、米国ニューヨーク（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、米国ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎら編「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」１〜４巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、米国ニューヨーク（１９９８）；米国特許の第４６６６８２８号、同第４６８３２０２号、同第４８０１５３１号、同第５１９２６５９号および同第５２７２０５７号に記載される方法；「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」Ｉ〜ＩＩＩ巻、Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻、Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓら編「Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、米国コネティカット州ノーウォーク（１９９４）；ＭｉｓｈｅｌｌとＳｈｉｉｇｉ編「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、米国ニューヨーク（１９８０）；利用可能な免疫アッセイ法は、特許と科学文献に広範囲にわたって記載されており、例えば：米国特許の第３７９１９３２号、同第３８３９１５３号、同第３８５０７５２号、同第３８５０５７８号、同第３８５３９８７号、同第３８６７５１７号、同第３８７９２６２号、同第３９０１６５４号、同第３９３５０７４号、同第３９８４５３３号、同第３９９６３４５号、同第４０３４０７４号、同第４０９８８７６号、同第４８７９２１９号、同第５０１１７７１号および同第５２８１５２１号；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編（１９８４）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編（１９８５）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編（１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌ���ｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）；「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．（１９８４）および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、米国カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；これらの文献の全ては、あたかも本願に完全に記載されているように援用するものである。その他の一般的な文献は、本明細書を通じて提供される。それらの文献に記載の方法は当業技術界で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。それらの文献に含まれるすべての情報は本願に援用するものである。
【０２２２】
実施例１
‘大用量’骨髄の移植および移植後シクロホスファミドの後におけるＨＬＡ不一致骨髄の安定した生着
材料および実験手順
動物
これらの研究で使用されたマウスは６週齢〜１２週齢のメスのマウスであった。Ｂａｌｂ／ｃヌード（Ｈ−２ｄ）およびＣ３Ｈ／Ｈｅｎ（Ｈ−２ｋ）をＨａｒｌａｎ  Ｉｓｒａｅｌ（Ｒｅｈｏｖｏｔ、イスラエル）から購入した。すべてのマウスを小型ケージにおいて飼育し（各ケージにおいて５匹の動物）、無菌餌および酸性水を与えた。これらの研究はＷｅｉｚｍａｎ科学研究所の施設内動物管理使用委員会によって承認された。
【０２２３】
移植プロトコル
低用量（５×１０６個）および高用量（２５×１０６個）のＢａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞（これは、Ｔ細胞が枯渇されたＢＭの供給源を提供する）を、抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）および抗ＣＤ８抗体（クローン５３．６．７２）（それぞれ３００μｇ；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＮＨ、米国）が−６日目に送達されるインビボＴ細胞減量（ＴＣＤ）と、−１日目での２．０Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）への暴露との後、０日目に同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）に移植した。高用量シクロホスファミド（ＣＹ、１００ｍｇ／ｋｇ、Ｂａｘｔｅｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ドイツ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与し、ドナータイプのキメラ現象を、蛍光性の抗宿主Ｈ−２抗体および抗ドナーＨ−２抗体（例えば、ドナータイプ細胞について特異的なＦＩＴＣ標識された抗Ｈ−２Ｄｄ抗体、および、宿主タイプ細胞について特異的なＰＥ標識された抗Ｈ−２Ｋｋ抗体）を使用して移植後３５日および９５日で評価した。
【０２２４】
皮膚移植片プロトコル
ドナー（Ｂａｌｂ／ｃ）および第三者（Ｃ５７ＢＬ／６）の皮膚移植片を、上記で記載されるような混合型キメラレシピエント［すなわち、大用量（２５×１０６個）のＴ細胞枯渇ＢＭが以前に移植され、かつ、高用量のＣＹにより処置されたそのようなマウス］、および、通常用量（５×１０６個）のＴ細胞枯渇ＢＭ細胞が接種され、かつ、高用量のＣＹにより処置されたレシピエントマウスに移植した。
【０２２５】
結果
レシピエントマウスの強度軽減移植前処置（ＲＩＣ）の後における、‘大用量’Ｔ細胞枯渇骨髄移植（ＢＭＴ）と、移植後の高用量シクロホスファミド（ＣＹ）との間での潜在的な相乗作用を検証するために、下記の実験を行った。
【０２２６】
レシピエントマウス（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）を、Ｔ細胞枯渇骨髄の移植組織を移植する前に前処置プロトコルにより処置した。具体的には、マウスを、−６日目に送達される抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体を使用するＴ細胞減量（ＴＣＤ）を用いて、かつ、−１日目での２．０Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）への暴露によってインビボ処置した。次に、低用量（５×１０６個）または高用量（２５×１０６個）のＢａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞（これは、非常に少ない数の成熟Ｔ細胞を有するヌードマウスとして、Ｔ細胞が枯渇されたＢＭの供給源を提供する）を０日目に同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）に移植した。高用量のシクロホスファミド（ＣＹ、１００ｍｇ／ｋｇ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与した。骨髄細胞生着の評価を移植後３５日および９５日においてドナータイプのキメラ現象によって評価した。
【０２２７】
図１Ａ〜図１Ｂおよび図２Ａ〜図２Ｂに示されるように、３５日目および９５日目でのキメラ現象分析では、コントロールマウス（これらは、ＴＣＤ、２ＧｙのＴＢＩおよび必要な場合にはＣＹにより前処置されたが、ＢＭを受けなかった）はどれもがドナータイプのキメラ現象を発現しなかったことが明らかにされた。同様に、５×１０６個のＴ細胞枯渇ＢＭの通常用量が移植されたＢＭマウスレシピエントはどれもが、シクロホスファミド処置の存在下または非存在下において、ドナータイプのキメラ現象を発現しなかった。しかしながら、Ｔ細胞枯渇ＢＭの用量を２５×１０６個の細胞に増大したときには、永続的な混合キメラ現象が、移植後の＋３日目および＋４日目にシクロホスファミドによりまた処置された７匹のマウスのうちの４匹において達成された（図１Ａ〜図１Ｂおよび図２Ｃを参照のこと）。
【０２２８】
移植後１８０日および２２５日におけるこれらのレシピエントマウスのさらなる追跡調査では、誘導されたキメラ現象が安定的かつ永続的であったことが明らかにされた（図３）。図３に例示されるように、ドナータイプのキメラレシピエントの数およびドナーキメラ現象のレベルが移植後２２５日において変わらないままであった。このことは、寛容性が達成されていることを示唆する。
【０２２９】
寛容性の誘導を、ドナー（Ｂａｌｂ／ｃ）および第三者（Ｃ５７ＢＬ／６）の皮膚移植片を、（上記で記載されるように）通常的な（５×１０６個の）Ｔ細胞枯渇ＢＭ細胞用量が接種されたレシピエントとの比較で、（上記で記載されるように）大用量（２５×１０６個）のＴ細胞枯渇ＢＭが移植され、かつ、高用量のＣＹにより処置された混合型キメラレシピエントに移植することによって測定した。
【０２３０】
図４Ａ〜図４Ｂに示されるように、２５×１０６個のＴ細胞枯渇ＢＭが移植された４匹のキメラマウスのうちの３匹がドナー移植片を許容し、第三者皮膚移植片を拒絶した。対照的に、５×１０６個のＴ細胞枯渇ＢＭおよびＣＹが接種されたレシピエントマウスはドナー皮膚移植片および第三者皮膚移植片の両方を拒絶した（図４Ａ）。
【０２３１】
これらの結果は、大用量Ｔ細胞枯渇ＢＭおよび高用量シクロホスファミド処置の組合せにより、造血幹細胞の成功した生着が強度軽減移植前処置のもとでは、寛容性誘導とともに可能になることを例示している。
【０２３２】
これらの結果によって勇気づけられて、一組の校正実験を、キメラ現象の誘導をこの取り組みによって改善するための最適な照射およびシクロホスファミド用量を決定するために開始した。
【０２３３】
実施例２
キメラ現象に対する全身照射（ＴＢＩ）の種々の線量の影響
材料および実験手順
動物
実施例１（本明細書中上記）に記載される通り。
【０２３４】
移植プロトコル
高用量（２５×１０６個）のＢａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞（これは、Ｔ細胞が枯渇されたＢＭの供給源を提供する）を、抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）および抗ＣＤ８抗体（クローン５３．６．７２）（それぞれ３００μｇ；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＮＨ、米国）が−６日目に送達されるインビボＴ細胞減量（ＴＣＤ）と、１ＧｙのＴＢＩから３．５ＧｙのＴＢＩにまで及ぶ線量の種々の照射への−１日目での暴露との後、０日目に同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）に移植した。高用量シクロホスファミド（ＣＹ、１００ｍｇ／ｋｇ、Ｂａｘｔｅｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ドイツ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与し、ドナータイプのキメラ現象を、蛍光性の抗宿主Ｈ−２抗体および抗ドナーＨ−２抗体（例えば、ドナータイプ細胞について特異的なＦＩＴＣ標識された抗Ｈ−２Ｄｄ抗体、および、宿主タイプ細胞について特異的なＰＥ標識された抗Ｈ−２Ｋｋ抗体）を使用して移植後３０日で評価した。
【０２３５】
結果
この実験では、最小限の照射線量が明確にされた。‘大用量’（２５×１０６個）のＢａｌｂ／ｃヌードＴ細胞枯渇ＢＭを、−６日目での（抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体による）Ｔ細胞減量と、−１日目での（１ＧｙのＴＢＩから３．５ＧｙのＴＢＩにまで及ぶ）照射の種々の線量との後、０日目に５群の同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）に移植した。高用量シクロホスファミド（ＣＹ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与し、ドナータイプのキメラ現象を移植後３０日で評価した。
【０２３６】
図５において認められ得るように、２．５Ｇｙ、３Ｇｙまたは３．５ＧｙのＴＢＩにより照射されたレシピエントマウスのすべて（６／６）がキメラであり、５８％〜８３％の間に及ぶドナータイプのキメラ現象を示した。同様に、２ＧｙのＴＢＩにより処置されたマウスの８７％（１３／１５）が、５６％〜８５％の間に及ぶドナータイプのキメラ現象を示した。
【０２３７】
照射線量を１．０Ｇｙにまでさらに低下させると、キメラマウスの割合における小さい低下が引き起こされた（すなわち、８３％（５／６））。しかしながら、ドナータイプのキメラ現象の範囲が１４．５％〜５８％に有意に低下した。
【０２３８】
実施例３
キメラ現象に対する種々のシクロホスファミド（ＣＹ）用量の影響
材料および実験手順
動物
実施例１（本明細書中上記）に記載される通り。
【０２３９】
移植プロトコル
高用量（２５×１０６個）のＢａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞（これは、Ｔ細胞が枯渇されたＢＭの供給源を提供する）を、抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）および抗ＣＤ８抗体（クローン５３．６．７２）（それぞれ３００μｇ；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＮＨ、米国）が−６日目に送達されるインビボＴ細胞減量（ＴＣＤ）と、２．０Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）への−１日目での暴露との後、０日目に同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）に移植した。種々の用量のシクロホスファミド（ＣＹ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇ，Ｂａｘｔｅｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ドイツ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与し、ドナータイプのキメラ現象を、蛍光性の抗宿主Ｈ−２抗体および抗ドナーＨ−２抗体（例えば、ドナータイプ細胞について特異的なＦＩＴＣ標識された抗Ｈ−２Ｄｄ抗体、および、宿主タイプ細胞について特異的なＰＥ標識された抗Ｈ−２Ｋｋ抗体）を使用して移植後３０日で評価した。
【０２４０】
結果
この実験では、ＣＹ移植後の最適用量が明確にされた。‘大用量’（２５×１０６個）のＢａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞を、−６日目での（抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体による）Ｔ細胞減量（ＴＣＤ）と、−１日目での２ＧｙのＴＢＩとの後、０日目に３群の同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）に移植した。種々の用量のシクロホスファミド（ＣＹ）（１００ｍｇ／ｋｇ，１２５ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与し、ドナータイプのキメラ現象を移植後３０日で評価した。
【０２４１】
図６において認められ得るように、ＣＹの用量を１２５ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇにまで増大した場合、キメラ現象の有意な増強がもたらされなかった。したがって、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇのＣＹにより処置されるレシピエントマウスは、平均して５７．５±２５．８、６６．５±２０．６または６７．４±２７．４のドナータイプのキメラ現象をそれぞれ示した。統計学有意性が、１００ｍｇ／ｋｇにより処置されるレシピエントを１２５ｍｇ／ｋｇまたは１５０ｍｇ／ｋｇにより処置されるレシピエントと比較したとき、何ら見出されなかった（それぞれ、Ｐ＝０．５およびＰ＝０．４６９）。
【０２４２】
実施例４
ＣＤ８＋の非Ｔ細胞は、‘大用量’のＴ細胞枯渇ＢＭを移植後のＣＹと組み合わせることによってキメラ現象を達成するために重要でない
材料および実験手順
動物
実施例１（本明細書中上記）に記載される通り。
【０２４３】
移植プロトコル
高用量（２５×１０６個）のＣＤ８枯渇Ｂａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞およびＣＤ８非枯渇Ｂａｌｂ／ｃヌードＢＭ細胞を、抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）および抗ＣＤ８抗体（クローン５３．６．７２）（それぞれ３００μｇ；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、ＮＨ、米国）が−６日目に送達されるインビボＴ細胞減量（ＴＣＤ）と、−１日目での２．０Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）への暴露との後、０日目に同種レシピエント（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎ）の２つのコホートに移植した。高用量シクロホスファミド（ＣＹ、１００ｍｇ／ｋｇ、Ｂａｘｔｅｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ドイツ）を移植後の＋３日目および＋４日目に投与し、ドナータイプのキメラ現象を、蛍光性の抗宿主Ｈ−２抗体および抗ドナーＨ−２抗体（例えば、ドナータイプ細胞について特異的なＦＩＴＣ標識された抗Ｈ−２Ｄｄ抗体、および、宿主タイプ細胞について特異的なＰＥ標識された抗Ｈ−２Ｋｋ抗体）を使用して移植後３０日で評価した。
【０２４４】
これらの実験におけるＢＭ供給源がＢａｌｂ／ｃヌードマウスであった。そのうえ、これらの実験における移植マウスは胸腺欠損であり、そのようなものとして、移植マウスはＴ細胞を欠いていた。しかしながら、影響は、残存する非Ｔ  ＣＤ８細胞の寄与によるものであったという可能性に反論するために、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスからのＢＭ調製物を、細胞分取システム（例えば、抗ＣＤ８磁性ビーズまたはＦＡＣＳソーター）を使用するＣＤ８細胞についての負の選別に供した。
【０２４５】
結果
Ｉｌｄｓｔａｄ他は以前に、ＣＤ８＋ＴＣＲ−ＢＭ細胞のサブセットが、ドナータイプのキメラ現象を達成するために非常に重要であることを教示していたので［Ｆｕｇｉｅｒ−Ｖｉｖｉｅｒ  ＩＪ他、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ（２００５）、２０１：３７３〜３８３；Ｇｒｉｍｅｓ  ＨＬ他、Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ（２００４）、３２：９４６〜９５４；Ｈｕａｎｇ  Ｙ他、Ｂｌｏｏｄ（２０１１）、１１７：２４９４〜２５０５；Ｋａｕｆｍａｎ  ＣＬ他、Ｂｌｏｏｄ（１９９４）、８４：２４３６〜２４４６；Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ  Ｊ他、ＢＭＣ  Ｍｅｄ（２０１２）、１０：４８；Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ  Ｊ他、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ（２０１２）、４：１２４ｒａ１２８］、本発明者らは残存ＣＤ８＋細胞をＢａｌｂ／ｃヌード‘大用量’ＢＭ調製物から枯渇させ、キメラ現象の誘導をコントロールのＣＤ８＋非枯渇ヌードＢＭ細胞と比較して測定した。
【０２４６】
図７において認められ得るように、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＢＭ調製物からの枯渇化は、‘大用量’のＴ細胞枯渇ＢＭ細胞を移植後のＣＹと組み合わせるときに達成されるキメラ現象のレベルに対する有害な影響を何ら有していなかった。
【０２４７】
実施例５
臨床プロトコル
研究設計
これは、将来的かつ観察的な第Ｉ相／第ＩＩ相多施設研究である。血液学的障害を有する１０名の患者が１年の期間にわたって登録されるであろう。
【０２４８】
本研究の一次終点が生着であり、１０名の評価可能な患者（すなわち、２８日目以降も生存する患者）が参加するであろう。許容され得る一次移植不全率または移植片拒絶率はおよそ１０％である。
【０２４９】
研究期間
一次分析が、６ヶ月および１２ヶ月の追跡調査データを使用して行われるであろう。患者は追跡調査が移植後４８ヶ月まで行われるであろう。
【０２５０】
定義
安定している持続した生着が、輸血を伴うことなく、３日間連続して１０００／μｌを超える好中球、および、３日間連続して２００００／μｌを超える血小板として定義される。
【０２５１】
移植片拒絶が、リンパ球の増大の有無にかかわらず、確認された好中球生着の後での１００／μｌ未満の好中球の急激な低下として定義される。
【０２５２】
移植の失敗が、＋２８日目での輸血を伴うことなく、連続する３日間にわたる１０００／μｌを超える好中球、および、連続する３日間にわたる２００００／μｌを超える血小板に達する不全として定義される。
【０２５３】
本研究の二次終点がグレードＩＩ〜グレードＩＶの急性ＧＶＨＤの発生である。グレードＩＩ〜グレードＩＶの急性ＧＶＨＤの許容され得る発生率はおよそ１０％である。
【０２５４】
急性ＧＶＤＨについて、グレード分類基準が下記の表１Ａ〜表１Ｂに示される。
2015504047.tif 000002
【０２５５】
統計学的検討
生着、生存、無疾患生存、再発率および移植関連死亡危険性についての時間間隔が、幹細胞移植日から計算されるであろう。保険数理曲線がカプラン・マイヤー法に従って計算されるであろう。
【０２５６】
適格性基準
算入基準−患者
・年齢−１８歳以上、７０歳以下
・１７ｐ欠失および／またはＴＰ５３変異によるｐ５３喪失に起因するフルダラビンまたは他の化学療法に対する不応性を有するＣＬＬ患者
・どちらかの不都合な細胞遺伝学（例えば、複雑な核型、ｄｅｌ１７ｐ、ｄｅｌ６ｑ２３−２６、ＴＰ５３における変異、マイナス１ｐなど）を有する濾胞性リンパ腫
・抗ＣＤ３０による免疫療法に不適格である、自己移植後に再発したホジキンリンパ腫
・不都合な細胞遺伝学を部分的寛解または完全な寛解のどちらにおいても有する、自己移植後に再発した多発性骨髄腫
・免疫療法後に再発する重症再生不良性貧血
・ＨＬＡ完全一致の家族ドナーまたは１つの遺伝子座ＨＬＡが不一致の家族ドナーが存在しないこと
・一致した非血縁ドナーが存在しないこと、または、ドナー登録簿におけるドナー検索について不適格であること（ＩＢＭＤＲ）
・患者の自己幹細胞のハプロタイプ一致家族ドナーおよび予備が存在すること
・安定した臨床的状態および１２週を超える平均余命
・カルノフスキー−７０％超
・書面によるインフォームドコンセント
【０２５７】
・処置前の評価
・完全な臨床歴ならびにパフォーマンスステータスおよび身体表面積の検査および測定
・完全な血球数
・血液型、赤血球亜群、抗Ａおよび／または抗Ｂの凝集素力価決定
・クレアチニンクリアランス、尿酸、フェリチン、ＬＤＨ、ｂｅｔａ２ミクログロブリン、タンパク質電気泳動、ＳＧＯＴ、ＳＧＰＴ、尿検査、血中グルコース、血中窒素、免疫グロブリンレベル、クームズ試験
・妊娠試験
・ＨＩＶ−ａｂ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶ−ａｂ、ＨＣＶＲＮＡ、ＣＭＶ−ａｂ、トキソプラズマ−ａｂ、ＨＳＶａｂ
・ＥＣＧならびに超音波検査またはシンチグラフィー検査による躯出率の測定
・胸部Ｘ線
・肺ＣＴスキャン、脳ＣＴスキャン、上顎洞ＣＴスキャン
・歯のＸ線撮影および検査
・形態学分析および細胞遺伝学的分析のための生検および骨髄吸引、分子マーカーについての検索（不明な場合）、ならびに、ＦＡＣＳ分析（基礎疾患に応じて）
・危険性のある患者における神経学的検査および腰椎穿刺
・既知疾患所在の放射線学的スキャン（ＣＴ、ＮＭＲ）
・選択されたドナーに関する完全な血清学的タイプ決定および分子的ＨＬＡタイプ決定、ＭＬ培養ならびに細胞毒性試験
・細胞傷害性抗ＨＬＡ抗体
・腹部超音波検査
【０２５８】
除外基準−患者
・中枢神経系疾患所在の病歴
・ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＶＣＲＮＡ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶＤＮＡについて陽性であること
・任意の種類の活動型肺炎および記録された肺炎、真菌の組織感染、呼吸器分泌物または血液のウイルス陽性培養
・正常の２倍を超えるビリルビン
・５０ｍｌ／分未満の血中クレアチニンクリアランス
・予測値の５０％未満のＤＬＣＯ
・４５％未満の躯出率（または最近１年における心筋発作）
・妊娠中または授乳中
・精神医学的障害
【０２５９】
適格性基準−ドナー
・十分な数の正常な始原体細胞を集めることを妨げる造血機能関連疾患または骨髄機能関連疾患がないこと
・末梢血幹細胞採取を受けることによる重大な健康上の危険性を引き起こすと思われる医学的状態が何らないこと
・陰性のＨＩＶ試験、ＨＴＬＶ−１試験
・健康な家族の誰もが造血幹細胞供与のために考慮されるであろう。ドナーの選択は、レシピエント、兄弟姉妹、両親、および、可能であれば、他の家族メンバー（例えば、伯父／叔父、伯母／叔母およびいとこなど）に対して行われることになる、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲの遺伝子座のタイプ決定に基づくであろう。見込みのある血縁ドナーは、少なくとも遺伝子型で、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲが患者とハプロタイプ一致でなければならず、しかし、共有されないハプロタイプにおける２つ〜３つのＨＬＡ対立遺伝子については異なることができる。
・ドナーは、ドナー対レシピエントのＮＫ同種反応性に基づいて優先的に選択されるであろう。
【０２６０】
ドナーの評価
・完全な病歴、理学的検査、および、フェレーシスのための好適性を末梢静脈により決定するためのフェレーシス施設による身体静脈の検査
・血液検査：ＷＢＣ、ＰＬＴ、Ｈｂ、ＰＴ、ＰＴＴ、総タンパク質、アルブミン、電解質、グルコース、ＳＧＯＴ／ＳＧＰＴ、アルカリホスファターゼ、ビリルビン、ＬＤＨ、尿酸、クレアチニン
・ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＳＶ、ＶＺＶ、Ｂ型肝炎＋Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、トキソプラズマ血清学
・完全な赤血球タイプ決定
・梅毒、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＳＶ、ＶＺＶ、Ｂ型肝炎＋Ｃ型肝炎、ＨＴＬＶ−１、ＨＩＶ、トキソプラズマについての血清学
・輸血伝達性疾患試験が幹細胞採取の３０日前〜７日前の間で行われなければならない。
・胸部Ｘ線
・ＥＫＧ
・ＰＣＲによるＶＮＴＲ分析
・ドナーは、より若年であること、健康状態がより良好であること、および、ＣＭＶ陰性レシピエントについてはＣＭＶ陰性であることに基づいて優先順位が付けられるであろう。
【０２６１】
除外基準−ドナー
・陽性のＨＩＶ試験またはＨＴＬＶ−１試験、あるいは、活動性／持続性のウイルス性肝炎感染の証拠により、当該ドナーは本研究の参加から除外されるであろう。
・末梢血幹細胞採取を受けることによる重大な健康上の危険性を引き起こすと思われる何らかの医学的状態（すなわち、インスリン依存性糖尿病、心臓血管障害、慢性的炎症性疾患）が存在すること
【０２６２】
処置手順
ドナーＨＳＣの動員および移植片の処理
患者は、フィルグラスチム／レノグラスチムにより刺激される末梢血造血細胞を供与することに同意し、かつ、供与することができる家族ドナー（１８歳〜６０歳の年齢）を有することが要求される。ドナーは血液バンクの一般的規則に従ってスクリーニングされるであろう。５０歳を超えるドナーにおいては運動ＥＫＧ試験を行うことが望ましい。正常なドナーはフィルグラスチムまたはレノガストリム（５ｍｃｇ／ｋｇ）を１２時間毎に皮下に受けるであろう；５日目に白血球アフェレーシスが開始されるであろう。フィルグラスチム／レノガストリムの投薬量が、白血球を６０×１０９個／Ｌ未満で維持するように調節されるであろう。フィルグラスチム／レノグラスチム処置の４日目に、循環ＣＤ３４＋細胞数が４０／μＬを超えているならば、ドナーは白血球アフェレーシスを開始するであろう。毎日の白血球アフェレーシスが、１０×１０６個／ｋｇを超えるＣＤ３４＋細胞の目標細胞量を集めるために、最大で４日であるが、計画された３日間にわたって続けられるであろう。目標に早く達するならば、採取を、最大可能な量を得るために合計で３日間にわたって続けることができる。ドナーが、その構成要素部分のいずれかで手順に耐えられないならば、代わりのドナーが、得られる場合には使用される場合がある。部位において、１０×１０６個／ｋｇを超えるＣＤ３４＋細胞を適切なドナーから集めることができないならば、患者は研究が進められない場合がある。ＰＢＰＣは、ドナーのＴ細胞およびＢ細胞が、細胞選別システム（例えば、抗ＣＤ３／１９磁性ビーズまたはＦＡＣＳソーター）を使用するＣＤ３＋細胞および／またはＣＤ１９＋細胞の選択によって枯渇化されるであろう。ＣＤ３４陽性細胞の目標値がレシピエント体重（ｂ．ｗ．）１キログラムあたり少なくとも１０×１０６個であろう。
【０２６３】
アフェレーシスが肘正中静脈を介して行われるであろう。
【０２６４】
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表２（上記）に記載されるように、フルダラビンが、連続する５日（−７、−６、−５、−４および−３）で毎日、３０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内投与されるであろう。それぞれの用量が３０分かけて注入されるであろう。ＴＢＩ（２００ｃＧｙ）が、−１日目に単回で与えられるであろう。
【０２６５】
０日目に、ＣＤ３７−／ＣＤ１９−の免疫選択ＨＳＣが解凍され、洗浄され、中心アクセスにより注入されるであろう。
【０２６６】
ＣＹが、移植後の＋３日目および＋４日目に、５０ｍｇ／ｋｇ／日で１時間のうちに静脈内投与されるであろう。
【０２６７】
特別な管理指図
ａ．二重管中心静脈ラインが前処置療法の前に設置されるであろう；
ｂ．尿酸塩予防のために、アロプリノール（３００ｍｇ、経口）が与えられるであろう；
ｃ．制吐治療が単一施設の指針に従って与えられるであろう；
ｄ．選別および照射された血液産物の輸血。８ｇ／Ｌを超えるヘモグロビンレベルおよび１５０００／μＬを超える血小板を発熱および出血の兆候の非存在下で維持する；
【０２６８】
処置期間中の患者モニターリング
ａ．毎日の全血球数および白血球分画
ｂ．血清中のクレアチニン、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ＋＋、ビリルビンを化学療法および水分過剰の期間中は毎日
ｃ．肝機能検査、アルブミン、アンチトロンビンＩＩＩを用いた凝固試験、サイトメガロウイルス抗原血症およびＰＣＲを週に２回
ｄ．施設指針に従う調査培養
【０２６９】
毒性評価
毒性が、下記の表３に示されるように、ＷＨＯ基準に従って評価されるであろう。
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【０２７０】
支持療法
細菌感染症および真菌感染症のモニターリングおよび処置
患者を、層流または高効率空中粒子ろ過を備える隔離室において看護する。リポソーム性アムホテリシンを、抗真菌剤による予防として、−５日目から生着まで１ｍｇ／ｋｇ／日で与える。細菌感染症を綿棒および血液培養によって毎週モニターする。静脈内抗生物質治療を感染の臨床兆候（起源不明の発熱）または陽性の血液培養に基づいて開始する。患者が７２時間後も依然として発熱しているならば、経験的な抗真菌剤治療を、Ｌ−ＡＭＢ（３ｍｇ／ｋｇ／日）またはボリコナゾール（８ｍｇ／ｋｇ／日、ｉ．ｖ．）を使用して開始する。バンコマイシンを、さらに７２時間の発熱の後では、あるいは、グラム＋の敗血症または陽性の血液培養がある場合には加える。
【０２７１】
サイトメガロウイルス感染症の予防、モニターリングおよび処置
ＣＭＶ抗体について血清反応陽性であるレシピエントにおいて、ＣＭＶ予防が、幹細胞注入前の１０日目〜２日目の間におけるガンシクロビル（１０ｍｇ／ｋｇ／日）からなる。ガンシクロビルが、＋２１日目から＋３６０日目まで先制的治療として再導入される。ＣＭＶ抗原血症／ＰＣＲが毎週、血液サンプルにおいて求められる。ＣＭＶ抗原血症／ＰＣＲが発症するならば、患者はガンシクロビル（１０ｍｇ／ｋｇ／日）またはホスカルネット（１８０ｍｇ／ｋｇ／日）により処置されるであろう。
【０２７２】
血液産物は輸血前に放射線照射される（３０Ｇｙ）。
【０２７３】
移植後の研究室評価：
１．完全なヘモグラムを、顆粒球および血小板が自家持続性になるまで毎日、その後は退院まで週に３回；退院後から１００日目までは少なくとも１週間毎に、その後は１２ヶ月まで２週間毎に。
２．肝機能検査および腎機能検査に関するスクリーニングプロフィルを最初の３０日間については週に２回、その後は退院に至るまで毎週；臨床的に示されるならば、より高頻度に。
３．ＦＩＳＨ（性別不一致の移植片）または細胞遺伝学によるキメラ現象の形態学分析のための骨髄吸引が、およそ１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月で、その後はおよそ３年間にわたって４ヶ月毎に行われるであろう。さらなる分析が、臨床的に示されるように行われるであろう。ＣＭＬ患者はまた、再発のｂｃｒ／ａｂｌ証拠についてモニターされるであろう。
４．免疫学的再構成が、循環リンパ球の表現型分析、ナチュラルキラー細胞およびリンホカイン活性化キラー細胞の機能の評価、Ｔ細胞マイトジェンおよびＢ細胞マイトジェンに対するリンパ球形質転換応答、ならびに、免疫グロブリンレベルを含めて、様々なインビトロアッセイによってモニターされるであろう。
【０２７４】
追跡調査
＋９０日目までは、完全な血球数、ＣＭＶについての抗原血症およびＰＣＲ、反応性プロテインＣ、完全な肝機能および腎機能が週に２回、評価されるであろう。
＋９０日までは２週間毎に、末梢血表現型（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＨＬＡＤＲ）、胸部Ｘ線。
＋９０日から＋１８０日までは２週間毎に：完全な血球数、ＣＭＶについての抗原血症およびＰＣＲ、反応性プロテインＣ、完全な肝機能および腎機能。
毎月：免疫グロブリンレベル、タンパク質電気泳動、
＋９０日後に、末梢血表現型（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＨＬＡＤＲ）、胸部Ｘ線。
＋１８０日後に、完全な血球数、ＣＭＶについての抗原血症およびＰＣＲ、反応性プロテインＣ、完全な肝機能および腎機能。
【０２７５】
疾患の完全な再度の病期分類が、移植後の２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月および２４ヶ月で、その後は毎年行われるであろう。これには、末梢血細胞および骨髄細胞におけるＨＬＡのＰＣＲ分析によるドナーキメラ現象の評価が含まれるであろう。
【０２７６】
パフォーマンスステータス・グレード分類基準については、下記の表４を参照のこと。
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【０２７７】
ドナーリンパ球の計画的注入
ドナーリンパ球注入（ＤＬＩ）が、同種ＨＳＣＴの後における再発を処置するために効果的である。それにもかかわらず、ＤＬＩの成功は、ＧＶＨＤに伴う疾病および死亡によってある程度、限定されている。Ｔ細胞の段階的用量は、ＧＶＨＤを生じさせる可能性が１回だけの大量注入よりも低く、寛解を誘導するために同じように効果的であるようである［Ｄａｚｚｉ，Ｓｚｙｄｌｏ他、Ｂｌｏｏｄ（２０００）、９６：２７１２〜６］。用量を見出す近年の研究では、１×１０４個／ｋｇレシピエントｂ．ｗ．の操作されていないＣＤ３＋リンパ球が、Ｔ細胞枯渇ハプロタイプ一致移植を受けた患者において安全に注入され得ることが示されている［Ｌｅｗａｌｌｅ  Ｐ．他、Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２００２）、２９（増刊２）：Ｓ２６、０１６４ａ］。
【０２７８】
初期の分子的再発および／または血液学的再発を有する患者が１×１０４個／ｋｇレシピエントｂ．ｗ．のＣＤ３＋細胞の第１の用量を受けるであろう；ＧｖＨＤがない場合には、１×１０５個／ｋｇのＣＤ３＋細胞の第２の注入が４５日後に与えられ、続いて、２ヶ月後に、１×１０６個／ｋｇのＣＤ３＋細胞の第３の用量が与えられるであろう。ドナーは、造血細胞動員の前に、リンパ球を集めるために白血球アフェレーシスを受けるであろう。これは、Ｇ−ＣＳＦが一部のＴリンパ球サブセットに対する免疫調節効果を有しており、これにより、同種刺激に対するそれらの応答性を低下させることが示されているからである。凍結された産物が解凍され、５分〜１０分の期間にわたって直ちに注入されるであろう。急性ＧｖＨＤの患者、または、血液学的生着を明らかにすることができない患者はＤＬＩを何ら受けないであろう。
【０２７９】
再発したＢ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者が、２回目のリツキシマブ服用と同時でのＤＬＩを伴って、リツキシマブ（３７５ｍｇ／ｍ２）を４週間にわたって毎週受けるであろう。再発した多発性骨髄腫を有する患者が、ＤＬＩを開始する前に、ボルテゾミブ（１日目、４日目、８日目および１１日目での１．３ｍｇ／ｓｑｍ）により処置されるであろう。
【０２８０】
ＤＬＩ後の免疫抑制剤は何ら使用されないであろう。
【０２８１】
本発明はその特定の実施態様によって説明してきたが、多くの別法、変更および変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更および変形すべてを包含するものである。
【０２８２】
本明細書で挙げた刊行物、特許および特許出願はすべて、個々の刊行物、特許および特許出願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用または確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。節の見出しが使用されている程度まで、それらは必ずしも限定であると解釈されるべきではない。
【図１Ａ−１Ｂ】
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【図２Ａ−２Ｃ】
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【図３】
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【図４Ａ−４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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