(57)【要約】本発明は、ＤＮＡデンドリマーを使用するラテラルフローデバイスおよびラテラルフローキット、ならびにラテラルフローデバイスおよびラテラルフローキットを使用して分析物を検出するための方法に関する。より具体的には、ＤＮＡデンドリマーを、試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、試験試薬または結合性試薬は、分析物に特異的に結合する。
2015524557.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、前記デバイスは、多孔性マトリックスを含み、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックス上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、試験試薬を含み、前記試験試薬は、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合するか、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体であり、
液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含み、
ａ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではないか、または
ｂ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含むか、または
ｃ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる
デバイス。
【請求項２】
前記第１の成分および前記第２の成分のうちの一方が、ポリヌクレオチドであり、他方が、非ポリヌクレオチド部分である、請求項１に記載の試験デバイス。
【請求項３】
前記分析物が、ポリペプチドまたは低分子であり、前記分析物に結合する前記試験試薬および／または結合性試薬が、前記ポリペプチドまたは低分子に結合する抗体である、請求項１に記載の試験デバイス。
【請求項４】
前記分析物が、ポリヌクレオチドであり、前記分析物に結合する前記試験試薬および／または結合性試薬が、前記分析物であるポリヌクレオチドと実質的に相補的な別のポリヌクレオチドである、請求項１に記載の試験デバイス。
【請求項５】
物質を、前記試験ゾーンより上流にある前記マトリックスの一部において乾燥させ、前記乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、前記試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、前記乾燥させた物質が、
１）前記ＤＮＡデンドリマー、
２）前記分析物に結合する前記第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体、および
３）前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識
のうちの少なくとも１つである、請求項１に記載の試験デバイス。
【請求項６】
１）前記ＤＮＡデンドリマー、
２）前記分析物に結合する第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体、および
３）前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識
のうちの少なくとも２つが、互いに共有結合的に架橋されたものである、請求項１に記載の試験デバイス。
【請求項７】
前記ＤＮＡデンドリマーが、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む、請求項１に記載の試験デバイス。
【請求項８】
液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、請求項１に記載の試験デバイスと接触させるステップであり、前記液体試料を、前記試験デバイスの試験ゾーンの上流にある部位へと適用するステップと、
ｂ）前記液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、前記試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）前記試験ゾーンにおける前記検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
【請求項９】
前記液体試料と、
１）前記ＤＮＡデンドリマー、
２）前記分析物に結合する第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体、および
３）前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識
のうちの少なくとも１つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、前記混合物を、前記試験デバイスへと適用する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
約０．００１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．５％（ｖ／ｖ）、または約０．０１％（ｖ／ｖ）以下のＴｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
硫酸デキストランを含む液体中で実行される、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
物質を、前記試験ゾーンより上流にある前記試験デバイスの一部において乾燥させ、前記乾燥させた物質を可溶化または再懸濁させ、前記試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送して、検出可能なシグナルを発生させ、前記乾燥させた物質が、
１）前記ＤＮＡデンドリマー、
２）前記分析物に結合する第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、前記分析物、または分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体、および
３）前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識
のうちの少なくとも１つである、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、前記デバイスは、多孔性マトリックスを含み、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックス上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、試験試薬を含み、前記試験試薬は、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合するか、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体であり、
液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する成分を含み、
ａ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではないか、または
ｂ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含むか、または
ｃ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる
デバイス。
【請求項１４】
前記成分が、ポリヌクレオチドである、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項１５】
前記分析物が、ポリペプチドまたは低分子であり、前記分析物に結合する前記試験試薬および／または結合性試薬が、前記ポリペプチドまたは低分子に結合する抗体である、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項１６】
前記分析物が、ポリヌクレオチドであり、前記分析物に結合する前記試験試薬および／または結合性試薬が、前記分析物であるポリヌクレオチドと実質的に相補的な別のポリヌクレオチドである、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項１７】
物質を、前記試験ゾーンより上流にある前記マトリックスの一部において乾燥させ、前記乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、前記試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、前記乾燥させた物質が、
１）前記ＤＮＡデンドリマー、および
２）前記分析物に結合する前記第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体
のうちの少なくとも１つである、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項１８】
前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含む、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項１９】
前記ＤＮＡデンドリマーが、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、または約９００〜約１，１００の前記検出可能な標識を含む、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項２０】
前記ＤＮＡデンドリマーが、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、または約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項２１】
前記ＤＮＡデンドリマーが、一層構造、二層構造、三層構造、または四層構造を構成する、請求項１３に記載の試験デバイス。
【請求項２２】
液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、請求項１３に記載の試験デバイスと接触させるステップであり、前記液体試料を、前記試験デバイスの試験ゾーンの上流にある部位へと適用するステップと、
ｂ）前記液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、前記試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）前記試験ゾーンにおける前記検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
【請求項２３】
約０．００１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．５％（ｖ／ｖ）、または約０．０１％（ｖ／ｖ）以下のＴｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
硫酸デキストランを含む液体中で実行される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
物質を、前記試験ゾーンより上流にある前記試験デバイスの一部において乾燥させ、前記乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、前記試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、前記乾燥させた物質が、
１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結された前記ＤＮＡデンドリマー、および
２）前記分析物に結合する第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、前記分析物、または分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体
のうちの少なくとも１つである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験ゾーンより上流にある前記試験デバイス上の位置において乾燥させ、前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーのうちの少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、液体により、前記試験ゾーンへと移動させるがこと可能な、請求項１から７および１３から２１のいずれかに記載の試験デバイス。
【請求項２７】
前記ＤＮＡデンドリマーを、ａ）前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーを安定化させ、ｂ）前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーの、液体に可溶化または再懸濁することを促進し、そして／またはｃ）前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーの可動性を促進させる材料の存在下で前記試験デバイス上の位置において乾燥させる、請求項２６に記載の試験デバイス。
【請求項２８】
前記材料が、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤からなる群から選択される、請求項２７に記載の試験デバイス。
【請求項２９】
前記糖が、トレハロースおよび／またはスクロースである、請求項２８に記載の試験デバイス。
【請求項３０】
前記液体が、ａ）前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーを安定化させ、ｂ）前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーの、前記液体に可溶化または再懸濁することを促進し、そして／またはｃ）前記乾燥させたＤＮＡデンドリマーの可動性を促進させる材料を含む、請求項２６から２９のいずれかに記載の試験デバイス。
【請求項３１】
前記材料が、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤からなる群から選択される、請求項３０に記載の試験デバイス。
【請求項３２】
前記タンパク質が、ＢＳＡであり、前記洗浄剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０である、請求項３１に記載の試験デバイス。
【請求項３３】
前記液体の容量が、少なくとも約２０ｕｌ、２５ｕｌ、３０ｕｌ、３５ｕｌ、４０ｕｌ、４５ｕｌ、５０ｕｌ、５５ｕｌ、６０ｕｌ、６５ｕｌ、７０ｕｌ、７５ｕｌ、８０ｕｌ、８５ｕｌ、９０ｕｌ、９５ｕｌ、１００ｕｌ、１１０ｕｌ、１２０ｕｌ、１５０ｕｌ、２００ｕｌ、３００ｕｌ、４００ｕｌ、５００ｕｌであるか、または５００ｕｌを超える容量である、請求項２６から３２のいずれかに記載の試験デバイス。
【請求項３４】
前記ＤＮＡデンドリマーが、
ａ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約１〜２、２〜４、もしくは４〜８を含む１層ＤＮＡデンドリマー、
ｂ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約１〜４、４〜８、もしくは８〜１８を含む２層ＤＮＡデンドリマー、
ｃ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約２〜６、６〜１０、１０〜１８、１８〜２８、２８〜３８、３８〜５０、もしくは５０超を含む３層ＤＮＡデンドリマー、および／または
ｄ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約１５〜２５、２５〜４５、４５〜６０、６０〜８０、８５〜１０５、１０５〜１３０、もしくは１３０超を含む４層ＤＮＡデンドリマー
を含む、請求項１から７、１３から２１、および２６から３３のいずれかに記載の試験デバイス。
【請求項３５】
前記第１の成分および前記第２の成分のうちの少なくとも一方がポリヌクレオチドであり、他方が、非ポリヌクレオチド部分である、請求項３４に記載の試験デバイス。
【請求項３６】
前記ＤＮＡデンドリマーが、
ａ）前記第１の成分のうちの約１〜２、２〜４、もしくは４〜８を含む１層ＤＮＡデンドリマー、
ｂ）前記第１の成分のうちの約１〜４、４〜８、もしくは８〜１８を含む２層ＤＮＡデンドリマー、
ｃ）前記第１の成分のうちの約２〜６、６〜１０、１０〜１８、１８〜２８、２８〜３８、３８〜５０、もしくは５０超を含む３層ＤＮＡデンドリマー、および／または
ｄ）前記第１の成分のうちの約１５〜２５、２５〜４５、４５〜６０、６０〜８０、８５〜１０５、１０５〜１３０、もしくは１３０超を含む４層ＤＮＡデンドリマー
を含む、請求項３４に記載の試験デバイス。
【請求項３７】
前記第１の成分が、ポリヌクレオチドを含む、請求項３６に記載の試験デバイス。
【請求項３８】
前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ鎖である、請求項３７に記載の試験デバイス。
【請求項３９】
液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、請求項２６から３８のいずれかに記載の試験デバイスと接触させるステップであり、前記液体試料を、前記試験デバイスの試験ゾーンの上流にある部位へと適用するステップと、
ｂ）前記液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、前記試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）前記試験ゾーンにおける前記検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
【請求項４０】
前記検出可能な標識が前記試験ゾーンにおいて発生させる前記シグナルを、
ａ）より少数の第１および／もしくは第２の成分を含むＤＮＡデンドリマーを使用して、前記検出可能な標識が前記試験ゾーンにおいて発生させるシグナルと比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、もしくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍以上増強するか、または
ｂ）ＤＮＡデンドリマーを使用せずに、前記検出可能な標識が前記試験ゾーンにおいて発生させるシグナルと比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００倍以上増強する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、前記デバイスは、多孔性マトリックスを含み、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックス上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、試験試薬を含み、前記試験試薬は、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体であり、
液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示すことが可能であり、
ａ）前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むか、または
ｂ）前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、もしくは前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第３の成分を含み、
ｃ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではなく、そして／または
ｄ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、そして／または
ｅ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる
デバイス。
【請求項４２】
液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、請求項４１に記載の試験デバイスと接触させるステップであり、前記液体試料を、前記試験デバイスの試験ゾーンの上流にある部位へと適用するステップと、
ｂ）前記液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、前記試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）前記試験ゾーンにおける前記検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
【請求項４３】
液体試料中の分析物を検出するためのキットであって、
ａ）多孔性マトリックスであって、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックス上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスと、
ｂ）ＤＮＡデンドリマーと
を含み、
１）前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むか、または
２）前記ＤＮＡデンドリマーが、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結され、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、もしくは前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第３の成分を含む
キット。
【請求項４４】
前記ＤＮＡデンドリマーが、前記第１または第３の成分のうちの約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００を含む、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
前記第１の成分および前記第２の成分のうちの一方が、ポリヌクレオチドであり、他方が、非ポリヌクレオチド部分である、請求項４３または４４に記載のキット。
【請求項４６】
前記第３の成分が、ポリヌクレオチドである、請求項４３または４４に記載のキット。
【請求項４７】
１）前記ＤＮＡデンドリマー、
２）前記分析物に結合する前記第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体、および
３）前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識
のうちの少なくとも２つが、互いに共有結合的に結合または架橋されている、請求項４３から４５のいずれかに記載のキット。
【請求項４８】
前記ＤＮＡデンドリマーが、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、または約９００〜約１，１００の前記検出可能な標識を含む、請求項４３から４７のいずれかに記載のキット。
【請求項４９】
前記ＤＮＡデンドリマーが、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、または約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む、請求項４３から４８のいずれかに記載のキット。
【請求項５０】
前記ＤＮＡデンドリマーが、一層構造、二層構造、三層構造、もしくは四層構造、または米国特許第６，２７４，７２３Ｂ１号に記載されている、少なくとも１つの単量体ユニットを含むＤＮＡデンドリマー構造を構成する、請求項４３から４９のいずれかに記載のキット。
【請求項５１】
抗体−オリゴコンジュゲート、分析物捕捉抗体、ストレプトアビジン−標識、例えば、金粒子、コンジュゲート、または他の標識、緩衝液、試薬、指示書などのうちの１または複数をさらに含む、請求項４３から５０のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、「ＬＡＴＥＲＡＬ  ＦＬＯＷ  ＡＳＳＡＹＳ  ＵＳＩＮＧ  ＤＮＡ  ＤＥＮＤＲＩＭＥＲＳ」と題された、２０１２年７月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／６７１，６６２号、および「ＬＡＴＥＲＡＬ  ＦＬＯＷ  ＡＳＳＡＹＳ  ＵＳＩＮＧ  ＤＮＡ  ＤＥＮＤＲＩＭＥＲＳ」と題された、２０１３年３月１５日に出願された米国特許出願第１３／８４４，６０１号の優先権の利益を主張する。上述の出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
技術分野
本発明は、ＤＮＡデンドリマーを使用する新規のラテラルフローデバイスおよびラテラルフローキット、ならびにラテラルフローデバイスおよびラテラルフローキットを使用して分析物を検出するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
３ＤＮＡ（登録商標）ＤＮＡデンドリマーとは、もっぱらＤＮＡを含む、特許権のある樹枝状分子である。クラスとしてのデンドリマーは、相互接続された天然または合成の単量体サブユニットから構築される、複雑で高度に分枝状の分子である。ＤＮＡデンドリマーは、それらの各々が、各鎖の中央部分に位置する配列相補性の領域を共有する２本のＤＮＡ鎖から作られる、ＤＮＡ単量体から構築される（図１）。単量体は、作製工程において、サイズおよび形状の異なるＤＮＡデンドリマーを調製するように組み合わされる（図２）。時間が経過するにつれてＤＮＡデンドリマーが「ばらばらになる」ことを防止するために、場合によって、ＵＶ光を使用してソラーレン架橋剤のインターカレーションおよび活性化を介する工程において、化学的「スポット溶接」を、成長しつつあるアセンブリーへと加える。デンドリマーは歴史的に、勾配超遠心分離後に変性性のショ糖勾配において、それらのサイズおよび分子量に従い精製されてきた。
【０００４】
ＤＮＡデンドリマーはとりわけ、ニトロセルロースおよびナイロンを含む多様な膜基質へと非共有結合的に固定化された核酸およびタンパク質を検出するための、膜ベースのアッセイにおいて既に使用されている。これらのアッセイは典型的に、標的分析物に特異的なターゲティング部分または結合性部分を含有するように特異的に誘導体化されたデンドリマーの使用を必要とし、最適な結合のためには数時間〜一晩を要することが典型的であった。シグナル増幅に由来する感度の改善は、アッセイの非デンドリマー変化形の５〜５００倍の範囲であった。
【０００５】
ＤＮＡデンドリマーはまた、核酸（ＤＮＡ／ＲＮＡ）マイクロアレイ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＯＳＡ、ビーズベースのイムノアッセイ、タンパク質アレイ、および他の類似のアッセイを含む他のいくつかの適用において、シグナル増幅剤として有用であることも示されている。これらのアッセイは全て、分析物または標的材料の基質への固定化であって、非共有結合的結合工程もしくは共有結合的結合工程を介する直接的な固定化、またはアッセイ工程の前もしくはアッセイ工程中のいくつかのステップを一般に必要とする、既に固定化されたリガンドへの結合を介する間接的な固定化を特徴とする。次いで、最大で数百の標識部分を含有するＤＮＡデンドリマーは、分析物（または分析物に結合したリガンドに間接的に）およびデンドリマーの両方に同時に直接的に結合するターゲティングデバイスを介して分析物に直接的または間接的に結合し、これにより、多重標識されたデンドリマーと分析物との間の架橋を創出するであろう。これらのアッセイでは、デンドリマー上の標識部分（例えば、蛍光色素）から直接的に、またはシグナル発生部分の、デンドリマー上の結合部位への結合（例えば、ストレプトアビジン−ＨＲＰの、デンドリマーに結合させたビオチンへの結合）を介して間接的に、シグナルを発生させた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、とりわけ、より高感度なラテラルフローアッセイのために、現在の技術および方法の限界を克服するデバイスおよび方法が必要とされている。本発明は、これらの必要および他の関連の必要に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の簡単な要旨
一態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、その上に試験ゾーンを含む多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスを含み、液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し（または液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過することが可能であり）、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むデバイスを提示する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドではないか、またはＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の第１の成分を含むか、またはＤＮＡデンドリマーを、試験デバイスを使用する前に、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。いくつかの実施形態では、試験試薬または結合性試薬は、分析物に特異的に結合する。
【０００９】
別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための方法であって、ａ）液体試料を、上記の試験デバイスと接触させるステップであり、液体試料を、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位に適用するステップと、ｂ）液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、試験ゾーンへと移送するステップと、ｃ）試験ゾーンにおける検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、液体試料中の分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップとを含む方法を提示する。
【００１０】
さらに別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、その上に試験ゾーンを備える多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスを含み、液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し（または液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過することが可能であり）、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する成分を含むデバイスを提示する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドではないか、またはＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の第１の成分を含むか、またはＤＮＡデンドリマーを、試験デバイスを使用する前に、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。いくつかの実施形態では、試験試薬または結合性試薬は、分析物に特異的に結合する。
【００１２】
なおも別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための方法であって、ａ）液体試料を、上記の試験デバイスと接触させるステップであり、液体試料を、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位に適用するステップと、ｂ）液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、試験ゾーンへと移送するステップと、ｃ）試験ゾーンにおける検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、液体試料中の分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップとを含む方法を提示する。
【００１３】
なおも別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、その上に試験ゾーンを備える多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスを含み、液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示すことが可能であり、ａ）前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むか、またはｂ）前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、もしくは前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第３の成分を含み、ｃ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではなく、および／またはｄ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、および／またはｅ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させるデバイスを提示する。また、上記のデバイスを使用して液体試料中の分析物を検出するための方法も提供される。
【００１４】
なおも別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するためのキットであって、ａ）その上に試験ゾーンを備える多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスと、ｂ）ＤＮＡデンドリマーとを含み、１）前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むか、または２）前記ＤＮＡデンドリマーが、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結され、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、もしくは前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第３の成分を含むキットを提示する。
【００１５】
本試験デバイス、本試験キット、および本試験方法の原理は、当技術分野で公知のラテラルフロー試験デバイスおよびラテラルフロー試験アッセイへと適用するか、またはこれらへと適用するように適合させることができる。例えば、本試験デバイスおよび方法の原理は、米国特許第３，６４１，２３５号、同第３，９５９，０７８号、同第３，９６６，８９７号、同第４，０９４，６４７号、同第４，１６８，１４６号、同第４，２９９，９１６号、同第４，３４７，３１２号、同第４，３６６，２４１号、同第４，３９１，９０４号、同第４，４２５，４３８号、同第４，５１７，２８８号、同第４，９６０，６９１号、同第５，１４１，８７５号、同第４，８５７，４５３号、同第５，０７３，４８４号、同第４，６９５，５５４号、同第４，７０３，０１７号、同第４，７４３，５６０号、同第５，０７５，０７８号、同第５，５９１，６４５号、同第５，６５６，４４８号、同第ＲＥ３８，４３０Ｅ号、同第５，６０２，０４０号、同第６，０１７，７６７号、同第６，３１９，６７６号、同第６，３５２，８６２号、同第６，４８５，９８２号、同第５，１２０，６４３号、同第４，９５６，３０２号、同第ＲＥ３９，６６４Ｅ号、同第５，２５２，４９６号、同第５，５１４，６０２号、同第７，２３８，５３８Ｂ２号、同第７，１７５，９９２Ｂ２号、同第６，７７０，４８７Ｂ２号、同第５，７１２，１７０号、同第５，２７５，７８５号、同第５，５０４，０１３号、同第６，１５６，２７１号、同第６，１８７，２６９号、同第６，３９９，３９８号、同第７，３１７，５３２号、ＥＰ０，１４９，１６８Ａ１、ＥＰ０，３２３，６０５Ａ１、ＥＰ０，２５０，１３７Ａ２、ＧＢ１，５２６，７０８、およびＷＯ９９／４０４３８において開示および／または特許請求されているラテラルフロー試験デバイスおよびラテラルフロー試験アッセイへと適用するか、またはこれらへと適用するように適合させることができる。
【００１６】
本特許または本出願ファイルは、色刷りで作成された少なくとも１つの図面を含有する。色刷りの図面を伴う本特許または特許出願公開のコピーは、申請および必要な手数料の納付を行えば、特許庁により頒布されよう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、例示的な標準的なラテラルフロー「ポイントオブケア」アッセイフォーマットを例示する。
【００１８】
【図２】図２は、例示的なデンドリマー増強型ラテラルフロー「ポイントオブケア」アッセイフォーマットを例示する。デンドリマー−抗体試薬は、コンジュゲートパッド上でドライダウンさせて用意する。ラテラルフローアッセイの間、デンドリマーは、試験ラインにおいて、高濃度の金粒子を回収および濃縮し、これにより、捕捉されるタンパク質分子についてのシグナル強度を、標準的な非デンドリマーアッセイを超えて増大させる。
【００１９】
【図３】図３は、ＤＮＡデンドリマーの例示的な作製：デンドリマー構造のステップ式「アセンブリー」を例示する。デンドリマーは、制御されたステップバイステップの工程において添加される、５つの部分的に二本鎖の「単量体」からアセンブルされる。いくつかの実施形態では、最終的なデンドリマーマトリックス構造は、アセンブリー工程におけるソラーレン（psorlen）架橋形成インターカレーション試薬の添加を介して、完全に共有結合的である。
【００２０】
【図４】図４は、イムノアッセイのためのターゲティング抗体および標識を含有する例示的なデンドリマー分子を例示する。
【００２１】
【図５Ａ】図５（ａ）は、ｈＣＧラテラルフローＰＯＣアッセイモデル（直接的サンドイッチ法）における、３ＤＮＡデンドリマーによるタンパク質検出を例示する。
【００２２】
【図５Ｂ】図５（ｂ）は、ＤＮＡデンドリマーを例示し、抗ｈＣＧ抗体−オリゴコンジュゲートおよび金試薬を、例示的なデンドリマーラテラルフローアッセイを実施するときの液体成分として添加した。いくつかの実施形態では、３ＤＮＡデンドリマーアッセイの感度は、標準的な抗ｈＣＧ金アッセイの１６倍であり、標準的なビオチニル化抗ｈＣＧ  ＳＡ−金アッセイの約３２倍である。
【００２３】
【図５Ｃ】図５（ｃ）は、３ＤＮＡデンドリマー「ウェット」アッセイの、２つの標準的なアッセイとの比較を例示する。
【００２４】
【図６Ａ】図６（ａ）は、ｈＣＧラテラルフローＰＯＣアッセイモデル（間接的サンドイッチ法）における、３ＤＮＡデンドリマーによるタンパク質検出を例示する。
【００２５】
【図６Ｂ】図６（ｂ）は、ＤＮＡデンドリマーを例示し、抗ｈＣＧ抗体−オリゴコンジュゲート、天然抗体、および金試薬を、例示的なデンドリマーラテラルフローアッセイを実施するときの液体成分として添加した。いくつかの実施形態では、３ＤＮＡデンドリマーアッセイの感度は、標準的な抗ｈＣＧ金アッセイの１６倍であり、標準的なビオチニル化抗ｈＣＧ  ＳＡ−金アッセイの約３２倍である。
【００２６】
【図７】図７は、マルチステップデンドリマーＬＦアッセイの、例示的な１ステップ型完全ドライダウンアッセイへの転換を例示する。
【００２７】
【図８Ａ】図８（ａ）は、例示的な蛍光３ＤＮＡデンドリマーによるラテラルフロータンパク質検出：直接的に標識された蛍光抗体との比較を例示する。
【００２８】
【図８Ｂ】図８（ｂ）は、例示的な蛍光３ＤＮＡデンドリマーによるラテラルフロー（ＬＦ：ｌａｔｅｒａｌ  ｆｌｏｗ）タンパク質検出：直接的に標識された蛍光抗体との比較を例示する。
【００２９】
【図９】図９は、実施例１０において使用されるラテラルフローデバイスを例示する。
【００３０】
【図１０】図１０は、抗体−オリゴコンジュゲートを伴わずに乾燥させ、ｈＣＧラテラルフローアッセイを含有するＨＦ９０ニトロセルロース上で走らせたデンドリマーの結果を例示する。
【００３１】
【図１１】図１１は、抗体−オリゴコンジュゲートを伴わずに乾燥させ、ｈＣＧラテラルフローアッセイを含有するＨＦ１８０ニトロセルロース上で走らせたデンドリマーの結果を例示する。
【００３２】
【図１２】図１２は、抗体−オリゴコンジュゲートと共に乾燥させ、ｈＣＧラテラルフローアッセイを含有するＨＦ９０ニトロセルロース上で動かしたデンドリマーの結果を例示する。
【００３３】
【図１３】図１３は、ＤＣＮ評定システムを例示する。
【００３４】
【図１４】図１４は、実施例１１における試験結果を例示する。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
発明の詳細な説明
開示の明確さのためであり、限定を目的とするものではないが、本発明についての詳細な記載を、後続の小節に分ける。
【００３６】
Ａ．定義
別段に規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で言及される全ての特許、出願、出願公開、および他の刊行物は、参照によりそれらの全体において組み込まれる。本節において示される定義が、参照により本明細書に組み込まれる特許、出願、出願公開、および他の刊行物において示される定義に反するかまたはこれと他の形で齟齬を来す場合は、本節において示される定義が、参照により本明細書に組み込まれる定義に優先される。
【００３７】
本明細書で使用される「ａ」または「ａｎ」とは、「少なくとも１つの」または「１または複数の」を意味する。
【００３８】
本明細書で使用される「結合性試薬」とは、標的または分析物に所望のアフィニティーおよび／または特異性で結合する任意の物質を指す。結合性試薬の非限定的な例は、細胞、細胞小器官、ウイルス、粒子、微粒子、分子、または凝集物もしくはその複合体、または分子の凝集物もしくは複合体を含む。例示的な結合性試薬は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、例えば、抗体または受容体、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、アプタマー、およびこれらの複合体でありうる。
【００３９】
「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介する、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的への特異的結合が可能な免疫グロブリン分子であり、任意のクラスの免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥでありうる。また、ニワトリなどの鳥類において主要な抗体種類であるＩｇＹも定義内に含まれる。本明細書で用いられる「抗体」という用語は、無傷のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけでなく、また、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、これらの突然変異体、自然発生の変異体、必要とされる特異性を有する抗原認識部位を伴う抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性を有する抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変された立体配置も包摂する。
【００４０】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」とは、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体、すなわち、少量存在する自然に発生しうる突然変異を除いて同一な集団を含む抗体、を指す。本明細書で用いられる、「モノクローナル抗体」は、モノクローナル抗体の機能的断片もさらに指す。
【００４１】
本明細書で使用される「抗原」という用語は、抗体がその抗原認識部位を介して特異的に結合する標的分子を指す。抗原は、一価の場合もあり、多価の場合もある、すなわち、抗原は、１または複数の抗体により認識される１または複数のエピトープを有しうる。抗体により認識されうる抗原の種類の例は、ポリペプチド、オリゴ糖、糖タンパク質、ポリヌクレオチド、脂質などを含む。
【００４２】
本明細書で使用される「〜に特異的に結合する」という用語は、規定の分析物または標的に優先的に結合するような結合性試薬、例えば、抗体の特異性を指す。他の潜在的な干渉性物質の存在下における、結合性試薬または抗体による特定の分析物または標的の認識は、このような結合の１つの特徴である。いくつかの実施形態では、分析物に特異的に結合する結合性試薬は、被験試料中の１または複数の他の干渉性部分への結合を回避する。
【００４３】
本明細書で使用される「結合を回避する」という用語は、特定の結合性試薬、例えば、抗体または抗体断片の特異性を指す。特定の部分への結合を回避する結合性試薬、抗体、または抗体断片は一般に、特定の部分に高い割合で、このような結合性試薬、抗体、または抗体断片が結合しないような特異性を有する。この比率は一般に、特異的な標的の検出を指向する結合性試薬または抗体を活用するアッセイの干渉性部分との許容可能な交差反応性比率のうちにある。本開示の結合性試薬、抗体、または抗体断片は、干渉性部分のうちの約９０％超に対する結合を回避することがしばしばであるが、より大きな比率が想定され、好ましいことが明らかである。例えば、本開示の結合性試薬、抗体、または抗体断片は、干渉性部分のうちの約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、および約９９％以上に対する結合を回避する。それほどしばしばではないが、本開示の結合性試薬、抗体、または抗体断片は、干渉性部分のうちの約７０％超、または約７５％超、または約８０％超、または約８５％超に対する結合を回避する。
【００４４】
本明細書で使用される「哺乳動物」とは、哺乳動物クラスの種のうちのいずれかを指す。本明細書で使用される「哺乳動物」という用語は、ヒト、ヒト対象、またはヒト患者を指すことがしばしばである。
【００４５】
本明細書で使用される「対象」という用語は、特殊な種または試料種類に限定されない。例えば、「対象」という用語は、患者を指す場合があり、しばしば、ヒト患者を指す。しかし、この用語は、ヒトに限定されず、したがって、様々な哺乳動物種を包摂する。
【００４６】
本明細書で使用される「試料」という用語は、それについての分析物アッセイが所望される分析物を含有しうる任意のものを指す。試料は、生物学的流体または生物学的組織などの生物学的試料でありうる。生物学的流体の例は、尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、糞便、痰、脳脊髄液、涙液、粘液、羊水などを含む。生物学的組織とは、通常、それらの細胞間物質と併せた、特定の種類の細胞の凝集物であり、結合組織、上皮組織、筋肉組織、および神経組織を含む、ヒト構造、動物構造、植物構造、細菌構造、真菌構造、またはウイルス構造の構造的材料のうちの１つを形成する。生物学的組織の例はまた、臓器、腫瘍、リンパ節、動脈、および個々の細胞も含む。
【００４７】
本明細書で使用される「単離」という用語は、その元の環境から取り出され、その天然の状態から改変された材料を指す。例えば、単離ポリペプチドは、担体へとカップリングすることができるが、そのポリペプチドは、その元の環境にないため、やはり「単離」されている。
【００４８】
本明細書で使用されるハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ：ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）とは、多様な化学的構造の試料など、多数の試料を、疾患標的に照らして調べて、「ヒット」を同定する工程を指す（例えば、Broachら、High throughput screening for drugdiscovery、Nature、３８４巻：１４〜１６頁（１９９６年）；Janzenら、High throughput screening as adiscovery tool in the pharmaceutical industry、LabRobotics Automation：８２６１〜２６５頁（１９９６年）；Fernandes、P.B.、Letter from the society president、J. Biomol. Screening、２巻：１頁（１９９７年）；Burbaumら、New technologies for high-throughput screening、Curr. Opin. Chem. Biol.、１巻：７２〜７８頁（１９９７年）を参照されたい）。ＨＴＳ操作は、試料調製、アッセイ手順、およびその後の大容量のデータの処理に対処するように、高度に自動化およびコンピュータ化されている。
【００４９】
本明細書では、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸、例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、１，０００以上のアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状の場合もあり、分枝状の場合もあり、修飾アミノ酸を含むことが可能であり、非アミノ酸で遮断することができる。「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語はまた、天然で修飾されたアミノ酸ポリマーまたは介入により、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは標識成分とのコンジュゲーションなど、他の任意の操作もしくは修飾により修飾されたアミノ酸ポリマーも包摂する。定義内にはまた、例えば、アミノ酸の１または複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）のほか、当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。
【００５０】
本明細書では、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸分子」という用語は、互換的に使用され、任意の長さ、例えば、少なくとも８、９、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、１，０００ヌクレオチド以上のヌクレオチドのポリマー形態を指し、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、これらの類似体、またはこれらの混合物を含みうる。「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸分子」という用語は、分子の一次構造だけを指す。したがって、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸分子」という用語は、三本鎖デオキシリボ核酸、二本鎖デオキシリボ核酸、および一本鎖デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）のほか、三本鎖リボ核酸、二本鎖リボ核酸、および一本鎖リボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸分子」という用語はまた、例えば、アルキル化により、および／またはキャッピングにより修飾された形態、および非修飾形態のポリヌクレオチドも含む。より特定すると、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」、および「核酸分子」という用語は、スプライシングされている場合であれ、スプライシングされていない場合であれ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、およびｍＲＮＡを含む、ポリデオキシリボヌクレオチド（２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有する）、ポリリボヌクレオチド（Ｄ−リボースを含有する）、プリン塩基またはピリミジン塩基のＮ−グリコシドまたはＣ−グリコシドである、他の任意の種類のポリヌクレオチド、および非ヌクレオチド骨格を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸（「ＰＮＡ」））ポリマーおよびポリモルホリノ（Ａｎｔｉ−Ｖｉｒａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ、ＯＲ．からＮｅｕｇｅｎｅとして市販されている）ポリマー、ならびにポリマーがＤＮＡ内およびＲＮＡ内で見出される塩基対合および塩基スタッキングなどを可能とする立体配置内にヌクレオ塩基を含有することを条件として、他の合成の配列特異的な核酸ポリマーを含む。したがって、これらの用語は、例えば、３’−デオキシ−２’，５’−ＤＮＡ、オリゴデオキシリボヌクレオチドのＮ３’〜Ｐ５’におけるホスホルアミデート、２’−Ｏ−アルキル置換ＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡとの間のハイブリッド体、またはＰＮＡとＤＮＡもしくはＲＮＡとの間のハイブリッド体を含み、また、公知の種類の修飾、例えば、標識、アルキル化、「キャップ」、ヌクレオチドのうちの１または複数の類似体による置換、例えば、非帯電連結（例えば、ホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメートなど）によるヌクレオチド間修飾、負に帯電させた連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）によるヌクレオチド間修飾、および正に帯電させた連結（例えば、アミノアルキルホスホルアミデート、アミノアルキルホスホトリエステル）によるヌクレオチド間修飾、例えば、タンパク質（酵素（例えば、ヌクレアーゼ）、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシンなどを含む）などのペンダント部分を含有するヌクレオチド間修飾、インタカレート剤（例えば、アクリジン、ソラーレンなど）を伴うヌクレオチド間修飾、キレート剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属などによるキレート剤）を含有するヌクレオチド間修飾、アルキル化剤を含有するヌクレオチド間修飾、修飾された連結（例えば、アルファアノマー核酸など）によるヌクレオチド間修飾などのヌクレオチド間修飾のほか、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの非修飾形態も含む。
【００５１】
本明細書で使用される「ヌクレオシド」および「ヌクレオチド」という用語は、公知のプリン塩基およびピリミジン塩基だけでなく、また、修飾された他の複素環塩基も含有する部分を含むことが察知されるであろう。このような修飾は、メチル化プリンもしくはメチル化ピリミジン、アシル化プリンもしくはアシル化ピリミジン、または他の複素環を含む。修飾ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオチドはまた、糖部分上の修飾であって、例えば、ヒドロキシル基のうちの１または複数が、ハロゲン、脂肪族基で置きかえられているか、またはエーテル、アミンなどとして官能化された修飾も含みうる。「ヌクレオチド単位」という用語は、ヌクレオシドおよびヌクレオチドを包摂することを意図する。
【００５２】
「核酸プローブ」と「プローブ」とは、互換的に使用され、対応する標的に結合しうる核酸配列を含有する、上記で定義されたポリヌクレオチドを含む構造を指す。プローブのポリヌクレオチド領域は、ＤＮＡ、および／またはＲＮＡ、および／または合成のヌクレオチド類似体からなりうる。
【００５３】
本明細書で使用される「相補的またはマッチ」とは、２つの核酸配列が、少なくとも５０％の配列同一性を有することを意味する。好ましくは、２つの核酸配列は、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。「相補的またはマッチ」はまた、２つの核酸配列が、低度な厳密性の条件下、中程度の厳密性の条件下、および／または高度な厳密性の条件下でハイブリダイズしうることも意味する。
【００５４】
本明細書で使用される「実質的に相補的または実質的にマッチ」とは、２つの核酸配列が、少なくとも９０％の配列同一性を有することを意味する。好ましくは、２つの核酸配列は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。代替的に、「実質的に相補的または実質的にマッチ」とは、２つの核酸配列が、高度な厳密性の条件下でハイブリダイズしうることを意味する。
【００５５】
一般に、ハイブリッド体の安定性とは、イオン濃度および温度の関数である。典型的に、ハイブリダイゼーション反応は、より低度な厳密性の条件下で実施するのに続き、変化させるがより高度な厳密性で洗浄を行う。中程度に厳密なハイブリダイゼーションとは、プローブなどの核酸分子が、相補的核酸分子に結合することを許容する条件を指す。ハイブリダイズさせた核酸分子は一般に、例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性のうちのいずれかを含む、少なくとも６０％の同一性を有する。中程度に厳密な条件とは、４２℃で、５０％のホルムアミド、５倍濃度のデンハルト液、５倍濃度のＳＳＰＥ、０．２％のＳＤＳ中のハイブリダイゼーションに続く、４２℃で、０．２倍濃度のＳＳＰＥ、０．２％のＳＤＳ中の洗浄と同等な条件である。高度な厳密性の条件は、例えば、４２℃で、５０％のホルムアミド、５倍濃度のデンハルト液、５倍濃度のＳＳＰＥ、０．２％のＳＤＳ中のハイブリダイゼーションに続く、６５℃で、０．１倍濃度のＳＳＰＥおよび０．１％のＳＤＳ中の洗浄によりもたらすことができる。低度な厳密性のハイブリダイゼーションとは、２２℃で、１０％のホルムアミド、５倍濃度のデンハルト液、６倍濃度のＳＳＰＥ、０．２％のＳＤＳ中のハイブリダイゼーションに続く、３７℃で、１倍濃度のＳＳＰＥ、０．２％のＳＤＳ中の洗浄と同等な条件を指す。デンハルト液は、１％のＦｉｃｏｌｌ、１％のポリビニルピロリドン、および１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する。２０倍濃度のＳＳＰＥ（塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、エチレンジアミド四酢酸（ＥＤＴＡ））は、３Ｍの塩化ナトリウム、０．２Ｍのリン酸ナトリウム、および０．０２５ＭのＥＤＴＡを含有する。当業者には、他の適する中程度の厳密性および高度な厳密性のハイブリダイゼーション緩衝液および条件が周知であり、例えば、Sambrookら、Molecular Cloning: A LaboratoryManual、２版、Cold Spring Harbor Press、Plainview、N.Y.（１９８９年）；およびAusubelら、Short Protocols in MolecularBiology、４版、John Wiley & Sons（１９９９年）において記載されている。
【００５６】
代替的に、実質的な相補性は、ＲＮＡ鎖またはＤＮＡ鎖が、その相補体と、選択的なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする場合にも存在する。典型的に、選択的なハイブリダイゼーションは、少なくとも１４〜２５ヌクレオチドの連なりにわたり少なくとも約６５％の相補性、好ましくは少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約９０％の相補性が存在する場合に生じるであろう。Kanehisa（１９８４年）、Nucleic Acids Res.、１２巻：２０３〜２１５頁を参照されたい。
【００５７】
本明細書で使用される「生物学的試料」とは、高分子および生体分子の生物供給源もしくはウイルス供給源、または他の供給源から得られる任意の試料を指し、核酸もしくはタンパク質または他の高分子を得うる、対象の任意の細胞型または組織を含む。生物学的試料は、生物学的供給源から直接的に得られる試料の場合もあり、加工された試料の場合もある。例えば、増幅された単離核酸は、生物学的試料を構成する。生物学的試料は、血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑液、尿、および汗などの体液、動物および植物に由来する組織試料および臓器試料、ならびにこれらに由来する加工された試料を含むがこれらに限定されない。また、土壌試料および水試料ならびに他の環境試料、ウイルス、細菌、真菌、藻類、原虫、およびこれらの成分も含まれる。
【００５８】
本明細書で記載される本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「からなること」ならびに／または態様および実施形態「から本質的になること」を含むことが理解される。
【００５９】
本開示を通して、本発明の多様な態様は、範囲形式で提示される。範囲形式の記載は、簡便さおよび簡潔さだけのためであり、本発明の範囲に対する厳格な限定としてはみなさないものとすることを理解されたい。したがって、範囲についての記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲のほか、その範囲内の個々の数値も有すると考えるものとする。例えば、１〜６などの範囲についての記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など、具体的に開示される部分範囲のほか、その範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５、および６も有すると考えるものとする。これは、範囲の幅にかかわらず適用される。
【００６０】
本発明の他の目的、利点、および特色は、付属の図面と共に理解される、以下の明細書から明らかとなろう。
Ｂ．ＤＮＡデンドリマーを使用するラテラルアッセイデバイス
【００６１】
一態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、その上に試験ゾーンを備える多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスを含み、液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し（または液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過することが可能であり）、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むデバイスを提示する。
【００６２】
いくつかの実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドではないか、またはＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の第１の成分を含むか、またはＤＮＡデンドリマーを、試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。いくつかの実施形態では、試験試薬または結合性試薬は、分析物に特異的に結合する。
【００６３】
第１の成分および第２の成分は、任意の適切な物質でありうる。例えば、第１の成分および／または第２の成分は、無機分子または無機部分の場合もあり、有機分子または有機部分の場合もあり、これらの複合体の場合もある。例示的な有機分子または有機部分は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、およびこれらの複合体を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、第１の成分と第２の成分とは同じである。他の実施形態では、第１の成分と第２の成分とは異なる。さらに他の実施形態では、第１の成分および第２の成分のうちの一方は、ポリヌクレオチドであり、他方は、非ポリヌクレオチド部分である。なおも他の実施形態では、第１の成分は、ポリヌクレオチドであり、第２の成分は、非ポリヌクレオチド部分、例えば、ポリペプチドである。
【００６５】
ＤＮＡデンドリマーは、第１の成分を介して、任意の適切な結合性試薬へと連結されうる。例えば、第１の成分は、ＤＮＡデンドリマーを、分析物に結合する結合性試薬、好ましくは分析物に特異的に結合する結合性試薬へと連結しうる。別の例では、第１の成分は、ＤＮＡデンドリマーを、分析物に結合する別の結合性試薬、好ましくは分析物に特異的に結合する結合性試薬に結合する結合性試薬へと連結しうる。
【００６６】
ＤＮＡデンドリマーは、第２の成分を介して、任意の適切な試薬へと連結されうる。例えば、第２の成分は、ＤＮＡデンドリマーを、検出可能な標識へと連結しうる。別の例では、第２の成分は、ＤＮＡデンドリマーを、検出可能な標識へと連結される別の結合性試薬へと連結しうる。
【００６７】
本デバイスは、任意の適切なアッセイフォーマット、例えば、サンドイッチアッセイフォーマットまたは競合アッセイフォーマットにおいて使用することができる。いくつかの実施形態では、試験デバイスは、分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合し、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬は、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、試験デバイスは、分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合し、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む。
【００６８】
さらに他の実施形態では、試験デバイスは、分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物または分析物類似体であり、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬は、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体は、第２の結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する。なおも他の実施形態では、試験デバイスは、分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物または分析物類似体であり、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬は、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体は、第２の結合性試薬に結合する結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する。
【００６９】
本デバイスと共に使用される分析物および多様な試薬、例えば、分析物、分析物類似体、試験試薬、および／または結合性試薬は、任意の適切な物質でありうる。いくつかの実施形態では、分析物、分析物類似体、試験試薬、および／または結合性試薬は、無機分子、有機分子、またはこれらの複合体である。例示的な有機分子は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、およびこれらの複合体を含む。
【００７０】
他の実施形態では、分析物は、ポリペプチド、低分子、または抗原であり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬は、ポリペプチド、低分子、または抗原に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する抗体である。さらに他の実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドであり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬は、分析物であるポリヌクレオチドと実質的に相補的な別のポリヌクレオチドである。なおも他の実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドであり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬は、非ポリヌクレオチド部分、例えば、分析物であるポリヌクレオチドに結合するポリペプチド、抗体、または受容体である。
【００７１】
マトリックスは、任意の適切な材料を含むか、またはこれからなることが可能である。いくつかの実施形態では、マトリックスは、ニトロセルロース、グラスファイバー、ポリプロピレン、ポリエチレン（好ましくは極めて分子量の大きな）、フッ化ポリビニリデン、エチレン酢酸ビニル、アクリロニトリル、および／またはポリテトラフルオロエチレンを含む。例えば、米国特許第６，１８７，５９８号を参照されたい。膜内の任意の固有の疎水性を低減し、したがって、湿性試料を、迅速かつ効率的に取り込み、送達するその能力を増強しうるので、作製時に膜を表面活性剤で前処理することが有利でありうる。マトリックスはまた、紙または他のセルロース性材料から作製することもできる。いくつかの実施形態では、マトリックスは、ニトロセルロースまたはグラスファイバーを含むかまたはこれからなる。
【００７２】
マトリックスはまた、任意の適切な形態または形状でもありうる。いくつかの実施形態では、マトリックスは、ストリップまたはサークルの形態である。マトリックスはまた、任意の適切な数のエレメントを含むかまたは任意の適切な数のエレメントからなることも可能である。いくつかの実施形態では、マトリックスは、単一のエレメントであるか、または複数のエレメントを含む。
【００７３】
本試験デバイスは、任意の適切なさらなるエレメントを含みうる。いくつかの実施形態では、試験デバイスは、マトリックスより上流にあり、マトリックスと流体連絡させた試料適用エレメントをさらに含みうる。他の実施形態では、試験デバイスは、マトリックスから下流にあり、マトリックスと流体連絡させた液体吸収エレメントをさらに含みうる。さらに他の実施形態では、試験デバイスは、液体試料の適正な流動および／または妥当な試験結果を示すための手段を含む対照ゾーンをさらに含みうる。なおも他の実施形態では、マトリックスの少なくとも一部は、固体バッキングで支持されている。なおも他の実施形態では、マトリックスの全体は、固体バッキングで支持されている。
【００７４】
本デバイスと共に使用される多様な試薬、例えば、ＤＮＡデンドリマー、多様な結合性試薬、および／または検出可能な標識（detectable）は、使用前に試験デバイス上で乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識のうちの少なくとも１つである。
【００７５】
他の実施形態では、２つの物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な標識のうちの少なくとも２つであり、乾燥させた物質を、単独でまたは複合体で、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能である。
【００７６】
さらに他の実施形態では、３つの物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な標識の全てである。
【００７７】
上記の物質は、試験デバイスの任意の適切な位置において乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、物質は、試験ゾーンより上流にあるコンジュゲートエレメント上で乾燥させる。他の実施形態では、物質を、試験デバイス上の試料適用箇所から下流に配置する。さらに他の実施形態では、物質を、試験デバイス上の試料適用箇所より上流に配置する。
【００７８】
任意の適切な検出可能な標識を、本試験デバイスと共に使用することができる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、可溶性標識、例えば、可溶性酵素または蛍光標識である。他の実施形態では、検出可能な標識は、粒子標識である。粒子標識は、目視可能な粒子標識の場合もあり、目視不可能な粒子標識の場合もある。いくつかの実施形態では、目視可能な粒子標識は、金粒子、ラテックス粒子、Ｑ−Ｄｏｔ、カーボンナノチューブ、銀粒子、および銀でコーティングした粒子からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、目視不可能な粒子標識は、蛍光粒子である。検出可能な標識はまた、質量および／または電荷の変化をもたらす部分でもありうる。ＤＮＡデンドリマーは、質量および／または電荷の変化をもたらしうる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、あるＤＮＡデンドリマー、例えば、そのＤＮＡデンドリマー自体の場合もあり、さらなるＤＮＡデンドリマーの場合もある。
【００７９】
いくつかの実施形態では、物質を、ａ）乾燥させた物質を安定化させ、ｂ）乾燥させた物質の、液体に可溶化もしくは再懸濁することを促進し、および／またはｃ）乾燥させた物質の可動性を促進させる材料の存在下で乾燥させる。任意の適切な材料を使用することができる。例えば、材料は、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤でありうる。例えば、米国特許第５，１２０，６４３号および同第６，１８７，５９８号を参照されたい。
【００８０】
いくつかの実施形態では、試料液単独を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する。他の実施形態では、顕色液を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する。
【００８１】
試験デバイスは、試験デバイスの少なくとも一部を覆うハウジングをさらに含むことができ、ハウジングは、試験ゾーンより上流における試料の適用または試験ゾーンへの試料の適用を可能とする試料適用ポート、ならびに試験ゾーンおよび／または対照ゾーンにおけるシグナルの検出を可能とする、試験ゾーンの近傍の光学的開口部を含む。いくつかの実施形態では、ハウジングは、試験デバイスの全体を覆う。他の実施形態では、マトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの少なくとも一部は、ハウジングにより覆われておらず、試料を、ハウジングの外側にあるマトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの一部へと適用し、次いで、試験ゾーンへと移送する。
【００８２】
ＤＮＡデンドリマー、多様な結合性試薬および検出可能な標識は、任意の適切な様式で連結することができる、例えば、非共有結合的に連結することもでき、共有結合的に連結することもできる。いくつかの実施形態では、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識のうちのいずれもが、互いと共有結合的に結合または架橋されていない。
【００８３】
他の実施形態では、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識のうちの少なくとも２つが、互いに共有結合的に結合または架橋されている。
【００８４】
さらに他の実施形態では、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識の全てが、互いに共有結合的に結合または架橋されている。
【００８５】
任意の適切なＤＮＡデンドリマーを使用することができる。例えば、米国特許第５，１７５，２７０号、同第５，４８７，９７３号、同第６，０４６，０３８号、同第６，０７２，０４３号、同第６，１１０，６８７号、同第６，１１７，６３１号、および同第６，２７４，７２３号において開示および／または特許請求されているＤＮＡデンドリマーを使用することができる。ＤＮＡデンドリマーは、ＤＮＡデンドリマーを、検出可能な標識へと連結する、任意の適切な数の第２の成分を含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、ＤＮＡデンドリマーを、ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識へと連結する、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、約１００〜約１，４００、約５００〜約１，２００、または約９００〜約１，１００の第２の成分を含む。標識は、同じ場合もあり、異なる場合もある。
【００８６】
ＤＮＡデンドリマーは、任意の適切な数のＤＮＡヌクレオチドを含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、約１０，０００〜約８０，０００、約３０，０００〜約８０，０００、または約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む。
【００８７】
ＤＮＡデンドリマーは、任意の適切な数の層を含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、一層構造、二層構造、三層構造、または四層構造を含む。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、液体試料が、試験デバイスに沿って側方方向に移動して、試験ゾーンにおいて検出可能なシグナルを発生させる試験デバイスを提示する。
【００８９】
Ｃ．液体試料中の分析物を検出するための方法
別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための方法であって、ａ）液体試料を、上記のＢ節で記載された試験デバイスと接触させるステップであり、液体試料を、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位に適用するステップと、ｂ）液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、試験ゾーンへと移送するステップと、ｃ）試験ゾーンにおける検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、液体試料中の分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップとを含む方法を提示する。
【００９０】
本方法は、任意の適切なアッセイフォーマットで使用することができる。例えば、ＤＮＡデンドリマー、多様な結合性試薬、および／または検出可能な標識を、試料液および／または顕色液とあらかじめ混合することができ、次いで、混合物を試験デバイスへと適用して、アッセイを開始する。代替的に、ＤＮＡデンドリマー、多様な結合性試薬、および／または検出可能な標識のうちの１または複数を、試験デバイスの適切な位置において乾燥させることもでき、試料液および／または顕色液を試験デバイスへと適用して、アッセイを開始する。
【００９１】
いくつかの実施形態では、液体試料と、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識のうちの少なくとも１つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する。
【００９２】
他の実施形態では、液体試料と、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識のうちの少なくとも２つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する。
【００９３】
さらに他の実施形態では、液体試料と、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識の全てとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する。
【００９４】
本方法は、界面活性剤または洗浄剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行することができる。いくつかの実施形態では、方法は、約０．００１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．５％（ｖ／ｖ）、または約０．０１％（ｖ／ｖ）以下のＴｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行する。本方法はまた、ポリマー、例えば、硫酸デキストランを含む液体中で実行することもできる。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．５％（ｖ／ｖ）〜約１％（ｖ／ｖ）の硫酸デキストランを含む液体中で実行する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、物質を、試験ゾーンより上流にある試験デバイスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送して、検出可能なシグナルを発生させ、乾燥させた物質は、１）ＤＮＡデンドリマー、２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識のうちの少なくとも１つである。
【００９６】
物質は、試験デバイスの任意の適切な位置において乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、乾燥させた物質を、試料の適用部位から下流に配置し、乾燥させた物質を、液体試料により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。他の実施形態では、乾燥させた物質を、試料の適用部位より上流に配置し、乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。さらに他の実施形態では、乾燥させた物質を液体試料単独により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。なおも他の実施形態では、分析物および／または乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。
【００９７】
本方法は、任意の適切な試料中の分析物を評価するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、体液試料中、例えば、全血液試料中、血清試料中、血漿試料中、および尿試料中の分析物を評価するのに使用することができる。他の実施形態では、本方法は、生物学的供給源、法医学的供給源、食物供給源、生物戦争供給源、または環境供給源に由来する試料中の分析物を評価するのに使用することができる。
【００９８】
本方法は、任意の適切な目的で使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、液体試料中の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用することができる。他の実施形態では、本方法は、液体試料中の複数の分析物を検出するのに使用することができる。さらに他の実施形態では、本方法は、液体試料中の複数の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用することができる。
【００９９】
本方法は、任意の適切な分析物を評価するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞、ウイルス、および分子からなる群から選択される分析物を評価するのに使用することができる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本方法は、自動化されており、および／またはハイスループットフォーマットにおいて使用される。
Ｄ．検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーを使用するラテラルアッセイデバイス
【０１０１】
さらに別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、その上に試験ゾーンを備える多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスを含み、液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し（または液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過することが可能であり）、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する成分を含むデバイスを提示する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドではないか、またはＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の第１の成分を含むか、またはＤＮＡデンドリマーを、試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。いくつかの実施形態では、試験試薬または結合性試薬は、分析物に特異的に結合する。
【０１０３】
成分は、任意の適切な物質でありうる。例えば、成分は、無機分子または無機部分の場合もあり、有機分子または有機部分の場合もあり、これらの複合体の場合もある。例示的な有機分子または有機部分は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、およびこれらの複合体を含む。いくつかの実施形態では、成分は、ポリヌクレオチドである。
【０１０４】
本デバイスは、任意の適切なアッセイフォーマット、例えば、サンドイッチアッセイフォーマットまたは競合アッセイフォーマットにおいて使用することができる。いくつかの実施形態では、試験デバイスは、分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合し、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬は、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、試験デバイスは、分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合し、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む。
【０１０５】
さらに他の実施形態では、試験デバイスは、分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物または分析物類似体であり、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬は、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体は、第２の結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する。なおも他の実施形態では、試験デバイスは、分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬は、分析物または分析物類似体であり、分析物に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬は、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体は、第２の結合性試薬に結合する結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する。
【０１０６】
本デバイスと共に使用される分析物および多様な試薬、例えば、分析物、分析物類似体、試験試薬、および／または結合性試薬は、任意の適切な物質でありうる。いくつかの実施形態では、分析物、分析物類似体、試験試薬、および／または結合性試薬は、無機分子、有機分子、またはこれらの複合体である。例示的な有機分子は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、およびこれらの複合体でありうる。
【０１０７】
他の実施形態では、分析物は、ポリペプチド、低分子、または抗原であり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬は、ポリペプチド、低分子、または抗原に結合し、好ましくはこれに特異的に結合する抗体である。さらに他の実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドであり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬は、分析物であるポリヌクレオチドと実質的に相補的な別のポリヌクレオチドである。なおも他の実施形態では、分析物は、ポリヌクレオチドであり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬は、非ポリヌクレオチド部分、例えば、分析物であるポリヌクレオチドに結合するポリペプチド、抗体、または受容体である。
【０１０８】
マトリックスは、任意の適切な材料を含むか、またはこれからなることが可能である。いくつかの実施形態では、マトリックスは、ニトロセルロース、グラスファイバー、ポリプロピレン、ポリエチレン（好ましくは極めて分子量の大きな）、フッ化ポリビニリデン、エチレン酢酸ビニル、アクリロニトリル、および／またはポリテトラフルオロエチレンを含む。例えば、米国特許第６，１８７，５９８号を参照されたい。膜内の任意の固有の疎水性を低減し、したがって、湿性試料を、迅速かつ効率的に取り込み、送達するその能力を増強しうるので、作製時に膜を表面活性剤で前処理することが有利でありうる。マトリックスはまた、紙または他のセルロース性材料から作製することもできる。いくつかの実施形態では、マトリックスは、ニトロセルロースまたはグラスファイバーを含むかまたはこれからなる。
【０１０９】
マトリックスはまた、任意の適切な形態または形状でもありうる。いくつかの実施形態では、マトリックスは、ストリップまたはサークルの形態である。マトリックスはまた、任意の適切な数のエレメントを含むかまたは任意の適切な数のエレメントからなることも可能である。いくつかの実施形態では、マトリックスは、単一のエレメントであるか、または複数のエレメントを含む。
【０１１０】
本試験デバイスは、任意の適切なさらなるエレメントを含みうる。いくつかの実施形態では、試験デバイスは、マトリックスより上流にあり、かつ、マトリックスと流体連絡させた試料適用エレメントをさらに含みうる。他の実施形態では、試験デバイスは、マトリックスから下流にあり、かつ、マトリックスと流体連絡させた液体吸収エレメントをさらに含みうる。さらに他の実施形態では、試験デバイスは、液体試料の適正な流動および／または妥当な試験結果を示すための手段を含む対照ゾーンをさらに含みうる。なおも他の実施形態では、マトリックスの少なくとも一部は、固体バッキングで支持されている。なおも他の実施形態では、マトリックスの全体は、固体バッキングで支持されている。
【０１１１】
本デバイスと共に使用される多様な試薬、例えば、ＤＮＡデンドリマーおよび／または多様な結合性試薬は、使用前に試験デバイス上で乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、１）ＤＮＡデンドリマー、および２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体のうちの少なくとも１つである。他の実施形態では、ＤＮＡデンドリマー、および分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体の両方を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させる。
【０１１２】
物質は、試験デバイスの任意の適切な位置において乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、物質は、試験ゾーンより上流にあるコンジュゲートエレメント上で乾燥させる。他の実施形態では、物質を、試験デバイス上の試料適用箇所から下流に配置する。さらに他の実施形態では、物質を、試験デバイス上の試料適用箇所より上流に配置する。
【０１１３】
任意の適切な検出可能な標識を、本試験デバイスと共に使用することができる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、可溶性標識、例えば、可溶性酵素または蛍光標識である。他の実施形態では、検出可能な標識は、粒子標識である。粒子標識は、目視可能な粒子標識の場合もあり、目視不可能な粒子標識の場合もある。いくつかの実施形態では、目視可能な粒子標識は、金粒子、ラテックス粒子、Ｑ−Ｄｏｔ、カーボンナノチューブ、銀粒子、および銀でコーティングした粒子からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、目視不可能な粒子標識は、蛍光粒子である。検出可能な標識はまた、質量および／または電荷の変化をもたらす部分でもありうる。ＤＮＡデンドリマーは、質量および／または電荷の変化をもたらしうる。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、あるＤＮＡデンドリマー、例えば、そのＤＮＡデンドリマー自体の場合もあり、さらなるＤＮＡデンドリマーの場合もある。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、物質を、ａ）乾燥させた物質を安定化させ、ｂ）乾燥させた物質の、液体に可溶化もしくは再懸濁することを促進し、および／またはｃ）乾燥させた物質の可動性を促進させる材料の存在下で乾燥させる。任意の適切な材料を使用することができる。例えば、材料は、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤でありうる。例えば、米国特許第５，１２０，６４３号および同第６，１８７，５９８号を参照されたい。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、試料液単独を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する。他の実施形態では、顕色液を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する。
【０１１６】
試験デバイスはハウジングをさらに含みうる。いくつかの実施形態では、試験デバイスは、試験デバイスの少なくとも一部を覆うハウジングをさらに含み、ハウジングは、試験ゾーンより上流における試料の適用または試験ゾーンへの試料の適用を可能とする試料適用ポート、ならびに試験ゾーンおよび／または対照ゾーンにおけるシグナルの検出を可能とする、試験ゾーンの近傍の光学的開口部を含む。他の実施形態では、ハウジングは、試験デバイスの全体を覆う。さらに他の実施形態では、マトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの少なくとも一部は、ハウジングにより覆われておらず、試料を、ハウジングの外側にあるマトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの一部へと適用し、次いで、試験ゾーンへと移送する。
【０１１７】
任意の適切なＤＮＡデンドリマーを使用することができる。例えば、米国特許第５，１７５，２７０号、同第５，４８７，９７３号、同第６，０４６，０３８号、同第６，０７２，０４３号、同第６，１１０，６８７号、同第６，１１７，６３１号、および同第６，２７４，７２３号において開示および／または特許請求されているＤＮＡデンドリマーを使用することができる。ＤＮＡデンドリマーは、ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬へと連結する、任意の適切な数の成分を含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬へと連結する、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の成分を含む。
【０１１８】
ＤＮＡデンドリマーは、任意の適切な数の検出可能な標識を含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、または約１００〜約１，２００、または約９００〜約１，１００の検出可能な標識を含む。標識は、同じ場合もあり、異なる場合もある。
【０１１９】
ＤＮＡデンドリマーは、任意の適切な数のＤＮＡヌクレオチドを含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、約１０，０００〜約８０，０００、約３０，０００〜約８０，０００、または約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む。
【０１２０】
ＤＮＡデンドリマーは、任意の適切な数の層を含みうる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーは、一層構造、二層構造、三層構造、または四層構造を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本開示は、試験デバイスであって、液体試料が、試験デバイスに沿って側方方向に移動して、試験ゾーンにおいて検出可能なシグナルを発生させる試験デバイスを提示する。
【０１２２】
Ｅ．液体試料中の分析物を検出するための方法
なおも別の態様では、本開示は、液体試料中の分析物を検出するための方法であって、ａ）液体試料を、上記のＤ節で記載された試験デバイスと接触させるステップであり、液体試料を、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位に適用するステップと、ｂ）液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、試験ゾーンへと移送するステップと、ｃ）試験ゾーンにおける検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、液体試料中の分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップとを含む方法を提示する。
【０１２３】
本方法は、任意の適切なアッセイフォーマットで使用することができる。例えば、ＤＮＡデンドリマーおよび／または多様な結合性試薬を、試料液および／または顕色液とあらかじめ混合することができ、次いで、混合物を試験デバイスへと適用して、アッセイを開始する。代替的に、ＤＮＡデンドリマーおよび／または多様な結合性試薬を、試験デバイスの適切な位置において乾燥させることもでき、試料液および／または顕色液を試験デバイスへと適用して、アッセイを開始する。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、液体試料と、１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマー、および２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体のうちの少なくとも１つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する。
【０１２５】
他の実施形態では、液体試料と、１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマー、および２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体の両方とをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する。
【０１２６】
本方法は、界面活性剤または洗浄剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行することができる。いくつかの実施形態では、方法は、約０．００１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．５％（ｖ／ｖ）、または約０．０１％（ｖ／ｖ）以下のＴｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行する。本方法はまた、ポリマー、例えば、硫酸デキストランを含む液体中で実行することもできる。いくつかの実施形態では、方法は、約０．１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．５％（ｖ／ｖ）〜約１％（ｖ／ｖ）の硫酸デキストランを含む液体中で実行する。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、物質を、試験ゾーンより上流にある試験デバイスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマー、および２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体のうちの少なくとも１つである。
【０１２８】
物質は、試験デバイスの任意の適切な位置において乾燥させることができる。いくつかの実施形態では、乾燥させた物質を、試料の適用部位から下流に配置し、乾燥させた物質を、液体試料により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。他の実施形態では、乾燥させた物質を、試料の適用部位より上流に配置し、乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。さらに他の実施形態では、乾燥させた物質を液体試料単独により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。なおも他の実施形態では、分析物および／または乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する。
【０１２９】
本方法は、任意の適切な試料中の分析物を評価するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、体液試料中、例えば、全血液試料中、血清試料中、血漿試料中、および尿試料中の分析物を評価するのに使用することができる。他の実施形態では、本方法は、生物学的供給源、法医学的供給源、食物供給源、生物戦争供給源、または環境供給源に由来する試料中の分析物を評価するのに使用することができる。
【０１３０】
本方法は、任意の適切な目的で使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、液体試料中の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用することができる。他の実施形態では、本方法は、液体試料中の複数の分析物を検出するのに使用することができる。さらに他の実施形態では、本方法は、液体試料中の複数の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用することができる。
【０１３１】
本方法は、任意の適切な分析物を評価するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞、ウイルス、および分子からなる群から選択される分析物を評価するのに使用することができる。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本方法は、自動化されており、および／またはハイスループットフォーマットにおいて使用される。
【０１３３】
Ｆ．例示的な実施形態
例示的な実施形態では、本開示は、エンドユーザーによる熟練をほとんど必要とせず、簡単なリードアウトおよび結果の解釈を提示し、比較的短時間で、最小限の手順ステップにより実施されるイムノアッセイを典型とする、「ポイントオブケア」（ＰＯＣ：ｐｏｉｎｔ−ｏｆ−ｃａｒｅ）検出アッセイにおける、ＤＮＡデンドリマーのシグナル増幅デバイスとしての使用について記載する。典型的に、ＰＯＣ試験は、いくつかの種類のイムノクロマトグラフィーアッセイ（目視可能なリードアウトによるラテラルフロー、デュアルパスプラットフォームなど）、膜およびラテラルフロー型デバイスを使用する蛍光検出アッセイ、電気化学的検出アッセイ、および酵素的検出アッセイ、ならびにマイクロフルイディクスおよびバイオセンサー（膜基質または紙基質を伴うかまたは伴わない）の使用を組み込むアッセイを含む、目視可能なシグナル発生デバイスおよび目視不可能なシグナル発生デバイスを組み込む、様々な異なるシグナル発生戦略を活用する様々なアッセイフォーマットを含む。これらのアッセイは、異なる単一の分析物または複数の分析物を同時に検出することが可能でありうる。一般に、ＰＯＣ試験を代表する主なものは、対象の分析物への結合が可能であり、試験ラインが陽性の場合に試験試料中の分析物の存在を示す、膜上の「試験」ライン内に固定化されたリガンド（抗体または抗原）を含有する膜ストリップを通常含む、ラテラルフローイムノアッセイである。ラテラルフローアッセイはまた、アッセイが適切に行われていることを示す「対照」ラインを含有することも多い。ラテラルフローアッセイの他の成分は、試料を含有する分析物がストリップアッセイへと添加される試料パッド、ドライダウンさせたアッセイ試薬を含有するコンジュゲートパッド、毛細管現象が可能な膜（典型的にはニトロセルロース）、ならびに固定化されたリガンドと、分析物ならびにシグナル発生リガンドおよび関連するデバイスとの間の免疫反応部位、ならびに膜内の毛細管現象を介して、試料パッドから、膜を通して、ウィッキングパッドへと液体を吸い出すのに用いられる、膜の遠位端上のウィッキングパッドを含む。液体試料を試料パッドへと添加すると、液体は、試料パッドから、コンジュゲートパッドへと流動し、ここで、コンジュゲートパッド（例えば、抗分析物抗体とコンジュゲートさせた金粒子）内で既に乾燥させた任意のシグナル発生試薬は、再水和し、試料液により、前方の膜へと運ばれる。次いで、分析物およびシグナル発生試薬は、試験ライン（Ｔ）および対照ライン（Ｃ）と反応し、分析物の検出についての陽性結果は、試験ラインにおけるシグナルにより示される。膜の遠位端におけるウィックまたは吸収性パッドは、毛細管現象を介して、膜を通して液体を「吸引」するのに用いられる（図１を参照されたい）。
【０１３４】
これらの適用は、既にＤＮＡデンドリマーをシグナル増幅剤として組み込む他のイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）と概念が類似するが、ラテラルフローアッセイおよび他のＰＯＣアッセイにおけるＤＮＡデンドリマーの使用が探索されるようになったのは、近年のことに過ぎない（例えば、米国特許出願第ＵＳ２０１１／０１６００９０Ａ１号を参照されたい）。既に、本発明者らは、デンドリマーの性質およびサイズ、ならびにシグナル増幅が小さく、非特異的なバックグラウンドが極めて大きいことを含む、他の膜ベースのアッセイ（例えば、ウェスタンブロットイムノアッセイ）におけるデンドリマーの性能の低さについてのかつての経験を踏まえ、ＤＮＡデンドリマーは、ラテラルフローアッセイにおける使用に適さない可能性が高いことを仮定した。この仮定、および、数百の標識部分を単一の結合部位へと送達するＤＮＡデンドリマーの能力（非デンドリマーラテラルフロー試薬を使用する単一の標識または最大で５〜１０の標識と比較して）が示されているにもかかわらず、本発明者らは、ＤＮＡデンドリマーをシグナル増幅剤として活用するラテラルフローアッセイを実施することを決定した。具体的には、デンドリマー１つ当たり約１，０００のビオチン部分を含有するＤＮＡデンドリマーを合成し、ｈＣＧ分析物と、シグナル発生剤として用いられるストレプトアビジン−金コンジュゲート（デンドリマー上のビオチンに結合するストレプトアビジン−金）との間の「架橋」試薬として用いられる、抗ｈＣＧ抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートによる、モデルのラテラルフローｈＣＧアッセイにおいて調べた。抗ｈＣＧ抗体とコンジュゲートさせた金粒子を活用する標準的なｈＣＧアッセイもまた、実施した（図２）。驚くべきことに、ＤＮＡデンドリマーによるラテラルフローアッセイは極めて良好な性能を示し、標準的なｈＣＧアッセイを上回る、最大で１２８倍の感度の改善をもたらし、アッセイ膜にわたり、非特異的なバックグラウンドシグナルをほとんどまたはまったくもたらさなかった。デンドリマーのサイズおよび高度な分枝状構造に起因して、デンドリマーは、ラテラルフローアッセイを実施するときに、膜を効率的に潅流できないと予測されたので、ＤＮＡデンドリマーが、ラテラルフローアッセイにおいて良好な性能を示すとは予測されなかったことに注目されたい。さらに、ＤＮＡデンドリマーラテラルフローアッセイにおいても、シグナル発生部分の非特異的結合は生じるが、ブロッキングおよび緩衝液の選択活性を介して制御可能である。
【０１３５】
ラテラルフローＰＯＣアッセイにおけるＤＮＡデンドリマーの具体的な適用
ＤＮＡデンドリマーは、サンドイッチアッセイフォーマットおよび／または競合アッセイフォーマットのＰＯＣラテラルフロータンパク質検出アッセイにおいて使用することができる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、直接的サンドイッチアッセイにおいて使用する。このアッセイフォーマットは、分析物に特異的な第１の抗体の、典型的には、毛細管現象を介して、液体を、膜の一方の端部から別の端部へと吸引することが可能な膜ストリップ上に位置する、抗体のストライプラインとしての固定化を必要とする。分析物を含有する水性試料を、膜ストリップの端部へと添加し、分析物を、固定化された第１の抗体により捕捉する。分析物に特異的であり、オリゴヌクレオチドへとコンジュゲートさせた（「抗体−オリゴコンジュゲート」）、第２の抗体（しかし、固定化された第１の抗体以外のエピトープを指向する）を、分析物に結合させる。抗体−オリゴコンジュゲートは、シグナルを発生させるかまたはシグナル発生デバイスに結合することが可能な標識部分を含有するＤＮＡデンドリマーと別個であるかまたはこれに既に結合させている。ＤＮＡデンドリマーを、抗体−オリゴコンジュゲートに結合させ、膜ストリップ上に位置する試験ライン上でシグナルを発生させる。典型的には、金粒子をＤＮＡデンドリマー上の標識部分へと結合させること（例えば、ＤＮＡデンドリマーに結合させたビオチン部分に結合するストレプトアビジン−金粒子）により、またはシグナルを直接的に発生させることが可能な、ＤＮＡデンドリマーに結合させた標識部分（例えば、蛍光色素）により、目視可能なシグナルを発生させる。この方法の例は、ヒト絨毛ゴナドトロピン（ｈＣＧ：ｈｕｍａｎ  ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）などの分析物に直接的に結合し、これにより、抗体−オリゴコンジュゲートと、固定化された分析物との間の直接的連結を形成する抗体を含有する抗体−オリゴコンジュゲートを含むであろう。一般に、シグナルが大きいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、間接的サンドイッチアッセイにおいて使用する。このフォーマットは、抗体−オリゴコンジュゲートが、分析物に直接的に結合せず、分析物に結合する別の成分に結合する抗体を含有することを除き、「直接的サンドイッチアッセイ」と極めて類似する。この方法の例は、ヒト絨毛ゴナドトロピン（ｈＣＧ）などの分析物に直接的に結合する別の抗体に結合し、これにより、抗体−オリゴコンジュゲートと、固定化された分析物との間の間接的連結を形成する抗体を含有する抗体−オリゴコンジュゲートを含むであろう。一般に、シグナルが大きいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、直接的競合アッセイにおいて使用する。このアッセイフォーマットは一般に、固定化された分析物（第１の抗体ではない）の使用を組み込み、次いで、固定化された分析物が、抗体−オリゴコンジュゲート、ＤＮＡデンドリマー、および標識発生部分に結合する。分析物を含有する試料を添加すると、可溶性抗体−オリゴコンジュゲートは、可溶性分析物に結合し、これが、抗体−オリゴコンジュゲートの、固定化された分析物への結合について競合し、これにより、シグナルの小さな（またはシグナルがみられない）結果が引き起こされる。この方法の例は、ヒト絨毛ゴナドトロピン（ｈＣＧ）などの分析物に直接的に結合し、これにより、抗体−オリゴコンジュゲートと、可溶性分析物との間の直接的連結を形成し、抗体−オリゴコンジュゲート、ＤＮＡデンドリマー、およびシグナル発生部分の、固定化されたｈＣＧ分析物への結合について競合する抗体を含有する抗体−オリゴコンジュゲートを含むであろう。一般に、シグナルが小さいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、間接的競合アッセイにおいて使用する。このフォーマットは、抗体−オリゴコンジュゲートが、分析物に直接的に結合せず、分析物に結合する別の成分に結合する抗体を含有することを除き、「直接的競合アッセイ」と極めて類似する。この方法の例は、ヒト絨毛ゴナドトロピン（ｈＣＧ）などの分析物に直接的に結合する別の抗体に結合し、これにより、抗体−オリゴコンジュゲートと、可溶性ｈＣＧ分析物との間の間接的連結を形成する抗体を含有する抗体−オリゴコンジュゲートを含むであろう。一般に、シグナルが小さいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１３９】
さらに、ＤＮＡデンドリマーを、ＰＯＣ核酸検出アッセイにおいて使用する。いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、固定化された核酸標的の直接的検出において使用する。このアッセイは、核酸プローブの、ＰＯＣデバイスへの固定化を含み、核酸プローブは、試料中の対象の核酸分子内に位置する第１の核酸配列とハイブリダイズし、これに、前述の試料中の対象の核酸分子内に位置する第２の核酸配列とハイブリダイズすることが可能な核酸プローブターゲティングデバイスを含有する、ＤＮＡデンドリマーが直接的に結合するであろう。このアッセイでは、シグナルは、タンパク質検出アッセイについて既に記載した通りに発生させることができる。この方法の例は、嚢胞性線維症（ＣＦ）突然変異に特異的な、固定化されたＤＮＡプローブであって、ＣＦ遺伝子の部分的な遺伝子配列および対象の突然変異を含有する、特異的にＰＣＲ増幅されたＤＮＡ単位複製配列とハイブリダイズし、ＤＮＡデンドリマーに結合させたＤＮＡオリゴヌクレオチドであり、ＣＦ遺伝子に特異的なＤＮＡオリゴヌクレオチドとさらにハイブリダイズし（固定化されたプローブの結合に干渉しない配列の別の部分とはハイブリダイズしない）、これにより、ＤＮＡデンドリマーと、固定化された、ハイブリダイズさせたＣＦ単位複製配列との間の直接的連結を形成する、固定化されたＤＮＡプローブを含むであろう。一般に、シグナルが大きいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、固定化された標的の間接的検出において使用する。このアッセイは、ＤＮＡデンドリマーが、固定化された対象の核酸分子に間接的に結合することを除き、「固定化された核酸標的の直接的検出」と類似する。間接的結合は、核酸分子を介する場合もあり、固定化された対象の核酸分子に結合させたデバイス内に含有されたハプテンへの結合など、他の手段を介する場合もある。この方法の例は、嚢胞性線維症（ＣＦ）突然変異に特異的な、固定化されたＤＮＡプローブであって、ＣＦ遺伝子の部分的な遺伝子配列および対象の突然変異を含有する、特異的にＰＣＲ増幅されたＤＮＡ単位複製配列とハイブリダイズし、ＣＦ単位複製配列の別の部分に特異的であり、その５プライム（５’）端上にビオチンを含有する、第２の可溶性ＤＮＡプローブとさらにハイブリダイズする、固定化されたＤＮＡプローブ、ならびに抗ビオチン抗体−オリゴコンジュゲートを含有するＤＮＡデンドリマーを含み、これにより、ＤＮＡデンドリマーと、固定化された、ハイブリダイズさせたＣＦ単位複製配列との間の間接的連結を形成するであろう。一般に、シグナルが大きいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、競合核酸ＰＯＣアッセイにおいて使用する。タンパク質アッセイについて上記で論じた通り、標識された部分（ＤＮＡデンドリマーまたはＤＮＡデンドリマーに結合させた標識されたデバイス）が、可溶性分析物に結合し、固定化されたリガンドへの結合について競合するであろうという前提に基づくと、直接的競合ＰＯＣ核酸検出アッセイおよび間接的競合ＰＯＣ核酸検出アッセイのいずれもが可能である。一般に、シグナルが小さいほど、陽性結果も大きくなる。
【０１４２】
例示的な実施形態では、いくつかの新規の態様は、上記のＰＯＣアッセイにおけるＤＮＡデンドリマーの使用に関する。いくつかの実施形態では、ＰＯＣアッセイにおいてＤＮＡデンドリマーを使用する場合の感度の改善は、デンドリマーに結合させた標識部分の数に正比例せず、デンドリマー１つ当たりの標識部分の数を２４０の標識から４８０、９６０の標識へと増大させながら、ターゲティングデバイスの数を一定に保つ場合の感度の改善は、標識部分の数を増大させなかった場合に予測される改善より小さく、非直線的な様式であった。さらに、デンドリマー１つ当たり１，４４０の標識を伴うデンドリマーを使用する場合は、感度の改善がみられないか、または感度のわずかな低下がみられた。逆に、デンドリマー上のターゲティングデバイスの数を増大させることにより、感度は、著明に改善されたが、本発明者らは、これを、前記ＤＮＡデンドリマーと分析物との間の直接的結合または間接的結合を介する、ＤＮＡデンドリマーとターゲティングされる分析物との間の結合（または衝突）の可能性の改善であると考える。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ＰＯＣ試験成分の作製時に、ＤＮＡデンドリマー（関連のアッセイ試薬を伴い、および／または伴わない）を、ＰＯＣ試験へと「ドライダウン」させ、これにより、ＰＯＣアッセイを実施するのに必要とされるステップの数を低減する。典型的には、抗体−金粒子コンジュゲートを含むアッセイ試薬を、ＰＯＣラテラルフロー試験ストリップのためのコンジュゲートパッドへとドライダウンさせて、アッセイを実施するのに必要とされるステップの数を低減する。ドライダウン試薬は、水性試験試料の添加を介して、またはアッセイ手順において脱水試薬へと添加される水性緩衝液の添加を介して再水和させ、アッセイを実施するときにこれらの試薬を水性調製物として添加する必要性を排する。本発明者らが知る限りにおいて、いかなるアッセイフォーマットにおいても、ＤＮＡデンドリマーおよび抗体−オリゴコンジュゲートをドライダウンさせたことはなく、乾燥させたデンドリマーおよび抗体−オリゴコンジュゲートが、再水和後において適切な性能を示すのかどうかは知られていなかった。本発明者らは、他のラテラルフロー試薬のために使用される作製法と類似の作製法を使用して、ＤＮＡデンドリマーおよび抗体−オリゴコンジュゲートを、ＰＯＣラテラルフロー試験ストリップへとドライダウンさせることができ、デンドリマーおよび抗体−オリゴコンジュゲートは、ドライダウンさせなかった液体状態において使用される試薬と同等以上の性能を示すことを明確に裏付けた。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ドライダウンさせたＤＮＡデンドリマーを使用して、ＰＯＣアッセイにおけるステップの数を変化させる能力を、アッセイ成分の一部または全部と組み合わせる。ワンステップアッセイおよびマルチステップアッセイを含む既往のＰＯＣラテラルフロー法は、全てをラテラルフロー試験ストリップへとドライダウンさせた試薬、またはドライダウンさせた一部の試薬と、ドライダウンさせておらず、アッセイ時に液体試薬として使用される他の試薬とを含有する試薬を組み込む。これらの試薬は、ＤＮＡデンドリマー、抗体−オリゴコンジュゲート、ＤＮＡデンドリマーへの結合が可能な金粒子コンジュゲート、分析物に特異的な天然抗体（間接的ラテラルフローアッセイのための）、ならびにアッセイを実施するために必要とされる他の緩衝液およびブロッキング剤を含むがこれらに限定されない。本発明者らはまた、ＤＮＡデンドリマーを、試験に必要とされる他の全ての試薬成分と組み合わせて、ラテラルフロー試験ストリップへとドライダウンさせる結果として、ワンステップ工程をもたらしうることも見出した。さらに、本発明者らは、前述の試薬成分のうちの１または複数は、ＰＯＣラテラルフローアッセイにおける成分として、単独または組合せで使用しうる結果として、実施するのに２つ、３つ以上のステップを必要としうる方法をもたらすことも見出した。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、金粒子およびラテックス粒子を含む、標識された補助的粒子と共に使用し、シグナル発生粒子をデンドリマーへと結合させるための、多様な架橋戦略を活用する。ＤＮＡデンドリマーは、目視可能なシグナルまたは目視不可能なシグナルをＰＯＣアッセイへと付与する多様な種類の粒子を伴う使用のために適合させてある。目視可能なＰＯＣラテラルフローアッセイでは、ＤＮＡデンドリマーの構造へと組み込まれた部分への結合が可能な金粒子の使用が裏付けられている。例えば、表面に固定化されたストレプトアビジンまたは抗ビオチン抗体を含有する金粒子を使用して、組み込まれたビオチン部分を含有するＤＮＡデンドリマーに結合させる。さらに、固定化された核酸プローブを含有する金粒子または他の種類の粒子も、ＤＮＡデンドリマー上の相補的核酸配列に結合させるのに使用されている。加えて、ラテックス粒子、Ｑ−Ｄｏｔ、カーボンナノチューブ、銀粒子、または銀でコーティングした粒子などを含む他の種類の粒子も、ＤＮＡデンドリマーへの結合が可能な場合の目視可能なシグナル発生のために使用することができる。また、ＤＮＡデンドリマー結合性粒子、例えば、蛍光アッセイのための蛍光色素を含有するＱ−Ｄｏｔおよびラテックス粒子も、目視不可能なシグナルを発生させるために使用することができる。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡデンドリマーを、シグナル発生部分（および酵素などのシグナル発生部分）で直接的に標識し、これにより、このようなデンドリマー−標識複合体が、水溶液中および他の溶液中で完全に可溶性である場合における、シグナル発生粒子の使用を回避する。ＰＯＣアッセイにおける可溶性ＤＮＡデンドリマーを使用する明確な利点であって、不溶性のシグナル発生粒子の使用を回避することにより達成されるステップの低減、液体形態または脱水形態にある可溶性ＤＮＡデンドリマーの、粒子コンジュゲートと比較した固有の安定性、ＰＯＣアッセイ基質へと乾燥させた後における、ＤＮＡデンドリマーの再水和の容易さおよび効率などを含む利点が存在する。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ＰＯＣアッセイにおいて使用されるＤＮＡデンドリマーは、他の既に開示されているＤＮＡデンドリマーアッセイ適用のために必要とされる、標識部分およびターゲティングデバイスの、ＤＮＡデンドリマーへの共有結合的架橋形成の必要性を消失させる様式で作製する。典型的に、ＤＮＡマイクロアレイおよびタンパク質マイクロアレイ上のＤＮＡデンドリマーの使用を含む他のアッセイフォーマットでは、ＤＮＡデンドリマーが、共有結合的に架橋された標識部分およびターゲティングデバイスを有し、最終的には、既に開示されている、比較的非効率的なスクロース勾配遠心分離精製法を使用して精製されている（例えば、第５，１７５，２７０号および第５，４８７，９７３号を参照されたい）。本発明者らは、標識部分またはターゲティングデバイスを付加した後で架橋されなかったＤＮＡデンドリマーも慣例的な作製工程で調製されたＤＮＡデンドリマーと同様の性能を示すことを経験的に判定している。これは、様々なＰＯＣラテラルフローアッセイフォーマットにおける使用のための前記ＤＮＡデンドリマーを作製する費用を著明に低減する驚くべき知見であった。
【０１４８】
本発明は、以下の例示的な実施形態によりさらに例示される。
１．液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、前記デバイスは、多孔性マトリックスを含み、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックスの上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含み、
液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し（または液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過することが可能であり）、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含み、
ａ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではないか、または
ｂ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含むか、または
ｃ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる
デバイス。
いくつかの実施形態では、前記分析物は、ポリヌクレオチドではなく、前記ＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含む。他の実施形態では、前記分析物は、ポリヌクレオチドではなく、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。さらに他の実施形態では、前記ＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。なおも他の実施形態では、前記分析物は、ポリヌクレオチドではなく、前記ＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。
２．第１の成分と第２の成分とが同じである、実施形態１による試験デバイス。
３．第１の成分と第２の成分とが異なる、実施形態１による試験デバイス。
４．第１の成分および第２の成分のうちの一方が、ポリヌクレオチドであり、他方が、非ポリヌクレオチド部分である、実施形態３による試験デバイス。
５．第１の成分が、ポリヌクレオチドであり、第２の成分が、非ポリヌクレオチド部分である、実施形態４による試験デバイス。
６．非ポリヌクレオチド部分が、ポリペプチドである、実施形態１〜５のうちのいずれかによる試験デバイス。
７．第１の成分が、ＤＮＡデンドリマーを、分析物に結合する結合性試薬へと連結する、実施形態１〜６のうちのいずれかによる試験デバイス。
８．第１の成分が、ＤＮＡデンドリマーを、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する結合性試薬へと連結する、実施形態１〜６のうちのいずれかによる試験デバイス。
９．第２の成分が、ＤＮＡデンドリマーを、検出可能な標識へと連結する、実施形態１〜８のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０．第２の成分が、ＤＮＡデンドリマーを、検出可能な標識へと連結される別の結合性試薬へと連結する、実施形態１〜８のうちのいずれかによる試験デバイス。
１１．分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物に結合し、分析物に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む、実施形態１〜１０のうちのいずれかによる試験デバイス。
１２．分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物に結合し、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む、実施形態１〜１０のうちのいずれかによる試験デバイス。
１３．分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物または分析物類似体であり、分析物に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体が、第２の結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する、実施形態１〜１０のうちのいずれかによる試験デバイス。
１４．分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物または分析物類似体であり、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの第１の成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体が、第２の結合性試薬に結合する結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する、実施形態１〜１０のうちのいずれかによる試験デバイス。
１５．分析物、分析物類似体、試験試薬、および／または結合性試薬が、無機分子、有機分子、またはこれらの複合体である、実施形態１〜１４のうちのいずれかによる試験デバイス。
１６．有機分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、およびこれらの複合体からなる群から選択される、実施形態１５による試験デバイス。
１７．分析物が、ポリペプチドまたは低分子であり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬が、ポリペプチドまたは低分子に結合する抗体である、実施形態１〜１４のうちのいずれかによる試験デバイス。
１８．分析物が、ポリヌクレオチドであり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬が、分析物であるポリヌクレオチドと実質的に相補的な別のポリヌクレオチドである、実施形態１〜１４のうちのいずれかによる試験デバイス。
１９．マトリックスが、ニトロセルロース、グラスファイバー、ポリプロピレン、ポリエチレン（好ましくは極めて分子量の大きな）、フッ化ポリビニリデン、エチレン酢酸ビニル、アクリロニトリル、および／またはポリテトラフルオロエチレンを含む、実施形態１〜１８のうちのいずれかによる試験デバイス。
２０．マトリックスが、ストリップまたはサークルの形態である、実施形態１〜１９のうちのいずれかによる試験デバイス。
２１．マトリックスが、単一のエレメントであるか、または複数のエレメントを含む、実施形態１〜２０のうちのいずれかによる試験デバイス。
２２．マトリックスより上流にあり、かつ、マトリックスと流体連絡させた試料適用エレメントをさらに含む、実施形態１〜２１のうちのいずれかによる試験デバイス。
２３．マトリックスから下流にあり、かつ、マトリックスと流体連絡させた液体吸収エレメントをさらに含む、実施形態１〜２２のうちのいずれかによる試験デバイス。
２４．液体試料の適正な流動および／または妥当な試験結果を示すための手段を含む対照ゾーンをさらに含む、実施形態１〜２３のうちのいずれかによる試験デバイス。
２５．マトリックスの少なくとも一部が、固体バッキングで支持されている、実施形態１〜２４のうちのいずれかによる試験デバイス。
２６．物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
のうちの少なくとも１つである、実施形態１〜２５のうちのいずれかによる試験デバイス。
２７．２つの物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な標識
のうちの少なくとも２つであり、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、単独でまたは複合体で、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能である、実施形態２６による試験デバイス。
２８．３つの物質を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な標識
の全てである、実施形態２６による試験デバイス。
２９．物質を、試験ゾーンより上流にあるコンジュゲートエレメント上で乾燥させる、実施形態２６〜２８のうちのいずれかによる試験デバイス。
３０．物質を、試験デバイス上の試料適用箇所から下流に配置する、実施形態２６〜２９のうちのいずれかによる試験デバイス。
３１．物質を、試験デバイス上の試料適用箇所より上流に配置する、実施形態２６〜３０のうちのいずれかによる試験デバイス。
３２．検出可能な標識が、可溶性標識である、実施形態１〜３１のうちのいずれかによる試験デバイス。
３３．可溶性標識が、可溶性酵素または蛍光標識である、実施形態３２による試験デバイス。
３４．検出可能な標識が、粒子標識である、実施形態１〜３１のうちのいずれかによる試験デバイス。
３５．粒子標識が、目視可能な粒子標識または目視不可能な粒子標識である、実施形態３４による試験デバイス。
３６．目視可能な粒子標識が、金粒子、ラテックス粒子、Ｑ−Ｄｏｔ、カーボンナノチューブ、銀粒子、銀でコーティングした粒子、およびこれらの複合体からなる群から選択される、実施形態３５による試験デバイス。
３７．目視不可能な粒子標識が、蛍光粒子である、実施形態３５による試験デバイス。
３８．物質を、ａ）乾燥させた物質を安定化させ、ｂ）乾燥させた物質の、液体に可溶化または再懸濁することを促進し、および／またはｃ）乾燥させた物質の可動性を促進させる材料の存在下で乾燥させる、実施形態２６〜３７のうちのいずれかによる試験デバイス。
３９．材料が、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤からなる群から選択される、実施形態３８による試験デバイス。
４０．試料液単独を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する、実施形態１〜３９のうちのいずれかによる試験デバイス。
４１．顕色液を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する、実施形態１〜３９のうちのいずれかによる試験デバイス。
４２．試験デバイスの少なくとも一部を覆うハウジングをさらに含み、ハウジングが、試験ゾーンより上流における試料の適用または試験ゾーンへの試料の適用を可能とする試料適用ポート、および試験ゾーンにおけるシグナルの検出を可能とする、試験ゾーンの近傍の光学的開口部を含む、実施形態１〜４１のうちのいずれかによる試験デバイス。
４３．ハウジングが、試験デバイスの全体を覆う、実施形態４２による試験デバイス。
４４．マトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの少なくとも一部が、ハウジングにより覆われておらず、試料を、ハウジングの外側にあるマトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの一部へと適用し、次いで、試験ゾーンへと移送する、実施形態４２による試験デバイス。
４５．１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
のうちのいずれもが、互いに共有結合的に結合または架橋されていない、実施形態１〜４４のうちのいずれかによる試験デバイス。
４６．１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
のうちの少なくとも２つが、互いに共有結合的に結合または架橋されている、実施形態１〜４４のうちのいずれかによる試験デバイス。
４７．１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
の全てが、互いに共有結合的に結合または架橋されている、実施形態１〜４４のうちのいずれかによる試験デバイス。
４８．ＤＮＡデンドリマーが、ＤＮＡデンドリマーを、ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識へと連結する、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、約９００〜約１，１００の第２の成分を含む、実施形態１〜４７のうちのいずれかによる試験デバイス。
４９．ＤＮＡデンドリマーが、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む、実施形態１〜４８のうちのいずれかによる試験デバイス。
５０．ＤＮＡデンドリマーが、一層構造、二層構造、三層構造、もしくは四層構造、または米国特許第６，２７４，７２３Ｂ１号に記載されている、少なくとも１つの単量体ユニットを含むＤＮＡデンドリマー構造を含む、実施形態１〜４９のうちのいずれかによる試験デバイス。
５１．液体試料が、試験デバイスに沿って側方方向に移動して、試験ゾーンにおいて検出可能なシグナルを発生させる、実施形態１〜５０のうちのいずれかによる試験デバイス。
５２．液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、実施形態１〜５０のうちのいずれかによる試験デバイスと接触させるステップであり、液体試料を、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位に適用するステップと、
ｂ）液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）試験ゾーンにおける検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、液体試料中の分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
５３．液体試料と、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
のうちの少なくとも１つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する、実施形態５２による方法。
５４．液体試料と、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
のうちの少なくとも２つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する、実施形態５２による方法。
５５．液体試料と、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
の全てとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する、実施形態５２による方法。
５６．約０．００１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．５％（ｖ／ｖ）、または約０．０１％（ｖ／ｖ）以下のＴｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行される、実施形態５２〜５５のうちのいずれかによる方法。
５７．硫酸デキストランを含む液体中で実行される、実施形態５２〜５６のうちのいずれかによる方法。
５８．物質を、試験ゾーンより上流にある試験デバイスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送して、検出可能なシグナルを発生させ、乾燥させた物質が、
１）ＤＮＡデンドリマー、
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体、および
３）ＤＮＡデンドリマーに連結可能な検出可能な標識
のうちの少なくとも１つである、実施形態５２による方法。
５９．乾燥させた物質を、試料の適用部位から下流に配置し、乾燥させた物質を、液体試料により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態５８による方法。
６０．乾燥させた物質を、試料の適用部位より上流に配置し、乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態５８による方法。
６１．乾燥させた物質を液体試料単独により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態５８による方法。
６２．分析物および／または乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態５８による方法。
６３．液体試料が、体液試料である、実施形態５２〜６２のうちのいずれかによる方法。
６４．体液試料が、全血液試料、血清試料、血漿試料、および尿試料からなる群から選択される、実施形態６３による方法。
６５．液体試料が、生物学的供給源、法医学的供給源、食物供給源、生物戦争供給源、または環境供給源に由来する試料である、実施形態５２〜６４のうちのいずれかによる方法。
６６．液体試料中の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用される、実施形態５２〜６５のうちのいずれかによる方法。
６７．液体試料中の複数の分析物を検出するのに使用される、実施形態５２〜６６のうちのいずれかによる方法。
６８．液体試料中の複数の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用される、実施形態６７による方法。
６９．分析物が、細胞、ウイルス、および分子からなる群から選択される、実施形態５２〜６８のうちのいずれかによる方法。
７０．液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、その上に試験ゾーンを含む多孔性マトリックスであり、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスを含み、
液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し（または液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過することが可能であり）、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示し、前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する成分を含み、
ａ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではないか、または
ｂ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含むか、または
ｃ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる
デバイス。
いくつかの実施形態では、前記分析物は、ポリヌクレオチドではなく、前記ＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含む。他の実施形態では、前記分析物は、ポリヌクレオチドではなく、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。さらに他の実施形態では、前記ＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。なおも他の実施形態では、前記分析物は、ポリヌクレオチドではなく、前記ＤＮＡデンドリマーは、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる。
７１．成分が、ポリヌクレオチドである、実施形態７０による試験デバイス。
７２．分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物に結合し、分析物に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む、実施形態７０または７１による試験デバイス。
７３．分析物についてのサンドイッチアッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物に結合し、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含む、実施形態７０または７１による試験デバイス。
７４．分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物または分析物類似体であり、分析物に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体が、第２の結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する、実施形態７０または７１による試験デバイス。
７５．分析物についての競合アッセイにおいて使用されるデバイスであり、試験ゾーンにおける試験試薬が分析物または分析物類似体であり、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬を使用し、第２の結合性試薬が、ＤＮＡデンドリマーの成分であるポリヌクレオチドと実質的に相補的なポリヌクレオチドを含み、試験ゾーンにおける分析物または分析物類似体が、第２の結合性試薬に結合する結合性試薬への結合について試料中の分析物と競合する、実施形態７０または７１による試験デバイス。
７６．分析物、分析物類似体、試験試薬、および／または結合性試薬が、無機分子、有機分子、またはこれらの複合体である、実施形態７０〜７５のうちのいずれかによる試験デバイス。
７７．有機分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質、およびこれらの複合体からなる群から選択される、実施形態７６による試験デバイス。
７８．分析物が、ポリペプチドまたは低分子であり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬が、ポリペプチドまたは低分子に結合する抗体である、実施形態７０〜７７のうちのいずれかによる試験デバイス。
７９．分析物が、ポリヌクレオチドであり、分析物に結合する試験試薬および／または結合性試薬が、分析物であるポリヌクレオチドと実質的に相補的な別のポリヌクレオチドである、実施形態７０〜７７のうちのいずれかによる試験デバイス。
８０．マトリックスが、ニトロセルロース、グラスファイバー、ポリプロピレン、ポリエチレン（好ましくは極めて分子量の大きな）、フッ化ポリビニリデン、エチレン酢酸ビニル、アクリロニトリル、および／またはポリテトラフルオロエチレンを含む、実施形態７０〜７９のうちのいずれかによる試験デバイス。
８１．マトリックスが、ストリップまたはサークルの形態である、実施形態７０〜８０のうちのいずれかによる試験デバイス。
８２．マトリックスが、単一のエレメントであるか、または複数のエレメントを含む、実施形態７０〜８１のうちのいずれかによる試験デバイス。
８３．マトリックスより上流にあり、かつ、マトリックスと流体連絡させた試料適用エレメントをさらに含む、実施形態７０〜８２のうちのいずれかによる試験デバイス。
８４．マトリックスから下流にあり、かつ、マトリックスと流体連絡させた液体吸収エレメントをさらに含む、実施形態７０〜８３のうちのいずれかによる試験デバイス。
８５．液体試料の適正な流動および／または妥当な試験結果を示すための手段を含む対照ゾーンをさらに含む、実施形態７０〜８４のうちのいずれかによる試験デバイス。
８６．マトリックスの少なくとも一部が、固体バッキングで支持されている、実施形態７０〜８５のうちのいずれかによる試験デバイス。
８７．試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において物質を乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、
１）ＤＮＡデンドリマー、および
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体
のうちの少なくとも１つである、実施形態７０〜８６のうちのいずれかによる試験デバイス。
８８．ＤＮＡデンドリマー、および分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体の両方を、試験ゾーンより上流のマトリックスの一部において乾燥させる、実施形態８７による試験デバイス。
８９．物質を、試験ゾーンより上流にあるコンジュゲートエレメント上で乾燥させる、実施形態８７または８８による試験デバイス。
９０．物質を、試験デバイス上の試料適用箇所から下流に配置する、実施形態８７または８８による試験デバイス。
９１．物質を、試験デバイス上の試料適用箇所より上流に配置する、実施形態８７または８８による試験デバイス。
９２．検出可能な標識が、可溶性標識である、実施形態７０〜９１のうちのいずれかによる試験デバイス。
９３．可溶性標識が、可溶性酵素または蛍光標識である、実施形態９２による試験デバイス。
９４．検出可能な標識が、粒子標識である、実施形態７０〜９１のうちのいずれかによる試験デバイス。
９５．粒子標識が、目視可能な粒子標識または目視不可能な粒子標識である、実施形態９４による試験デバイス。
９６．目視可能な粒子標識が、金粒子、ラテックス粒子、Ｑ−Ｄｏｔ、カーボンナノチューブ、銀粒子、銀でコーティングした粒子、およびこれらの複合体からなる群から選択される、実施形態９５による試験デバイス。
９７．目視不可能な粒子標識が、蛍光粒子である、実施形態９５による試験デバイス。
９８．物質を、ａ）乾燥させた物質を安定化させ、ｂ）乾燥させた物質の、液体に可溶化または再懸濁することを促進し、および／またはｃ）乾燥させた物質の可動性を促進させる材料の存在下で乾燥させる、実施形態８７〜９７のうちのいずれかによる試験デバイス。
９９．材料が、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤からなる群から選択される、実施形態９８による試験デバイス。
１００．試料液単独を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する、実施形態７０〜９９のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０１．顕色液を使用して、分析物および／または物質を試験ゾーンへと移送する、実施形態７０〜９９のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０２．試験デバイスの少なくとも一部を覆うハウジングをさらに含み、ハウジングが、試験ゾーンより上流における試料の適用または試験ゾーンへの試料の適用を可能とする試料適用ポート、および試験ゾーンにおけるシグナルの検出を可能とする、試験ゾーンの近傍の光学的開口部を含む、実施形態７０〜１０１のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０３．ハウジングが、試験デバイスの全体を覆う、実施形態１０２による試験デバイス。
１０４．マトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの少なくとも一部が、ハウジングにより覆われておらず、試料を、ハウジングの外側にあるマトリックスの試料受容部分または試料適用エレメントの一部へと適用し、次いで、試験ゾーンへと移送する、実施形態１０２による試験デバイス。
１０５．ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００の前記第１の成分を含む、実施形態７０〜１０４のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０６．ＤＮＡデンドリマーが、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、または約９００〜約１，１００の検出可能な標識を含む、実施形態７０〜１０５のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０７．ＤＮＡデンドリマーが、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、または約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む、実施形態７０〜１０６のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０８．ＤＮＡデンドリマーが、一層構造、二層構造、三層構造、もしくは四層構造、または米国特許第６，２７４，７２３Ｂ１号に記載されている、少なくとも１つの単量体ユニットを含むＤＮＡデンドリマー構造を含む、実施形態７０〜１０７のうちのいずれかによる試験デバイス。
１０９．液体試料が、試験デバイスに沿って側方方向に移動して、試験ゾーンにおいて検出可能なシグナルを発生させる、実施形態７０〜１０８のうちのいずれかによる試験デバイス。
１１０．液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、実施形態７０〜１０８のうちのいずれかによる試験デバイスと接触させるステップであり、液体試料を、試験デバイス上の試験ゾーンより上流の部位に適用するステップと、
ｂ）液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）試験ゾーンにおける検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、液体試料中の分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
１１１．液体試料と、
１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマー、および
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体
のうちの少なくとも１つとをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する、実施形態１１０による方法。
１１２．液体試料と、
１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマー、および
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体
の両方とをあらかじめ混合して、混合物を形成し、混合物を、試験デバイスへと適用する、実施形態１１０による方法。
１１３．約０．００１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、好ましくは約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．５％（ｖ／ｖ）、または約０．０１％（ｖ／ｖ）以下のＴｗｅｅｎ−２０を含む液体中で実行される、実施形態１１０〜１１２のうちのいずれかによる方法。
１１４．硫酸デキストランを含む液体中で実行される、実施形態１１０〜１１３のうちのいずれかによる方法。
１１５．物質を、試験ゾーンより上流にある試験デバイスの一部において乾燥させ、乾燥させた物質を、液体試料および／またはさらなる液体により、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移動させて、検出可能なシグナルを発生させることが可能であり、乾燥させた物質が、
１）検出可能な標識へと非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマー、および
２）分析物に結合する第１の結合性試薬、分析物に結合する別の結合性試薬に結合する第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体であって、それらの各々がＤＮＡデンドリマーに連結可能な、第１の結合性試薬、第２の結合性試薬、分析物、または分析物類似体
のうちの少なくとも１つである、実施形態１１０による方法。
１１６．乾燥させた物質を、試料の適用部位から下流に配置し、乾燥させた物質を、液体試料により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態１１５による方法。
１１７．乾燥させた物質を、試料の適用部位より上流に配置し、乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態１１５による方法。
１１８．乾燥させた物質を液体試料単独により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態１１５による方法。
１１９．分析物および／または乾燥させた物質を、別の液体により可溶化または再懸濁させ、試験ゾーンおよび／または対照ゾーンへと移送する、実施形態１１５による方法。
１２０．液体試料が、体液試料である、実施形態１１０〜１１９のうちのいずれかによる方法。
１２１．体液試料が、全血液試料、血清試料、血漿試料、および尿試料からなる群から選択される、実施形態１２０による方法。
１２２．液体試料が、生物学的供給源、法医学的供給源、食物供給源、生物戦争供給源、または環境供給源に由来する試料である、実施形態１１０〜１２１のうちのいずれかによる方法。
１２３．液体試料中の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用される、実施形態１１０〜１２２のうちのいずれかによる方法。
１２４．液体試料中の複数の分析物を検出するのに使用される、実施形態１１０〜１２３のうちのいずれかによる方法。
１２５．液体試料中の複数の分析物の量を定量化または半定量化するのに使用される、実施形態１２４による方法。
１２６．分析物が、細胞、ウイルス、および分子からなる群から選択される、実施形態１１０〜１２５のうちのいずれかによる方法。
１２７．ＤＮＡデンドリマーを、試験デバイスを使用する前に、試験ゾーンより上流にある試験デバイス上の位置において乾燥させ、乾燥させたＤＮＡデンドリマーのうちの少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が、液体により、試験ゾーンへと移動させるがこと可能な、実施形態１〜５１および７０〜１０９のうちのいずれかによる試験デバイス。
１２８．ＤＮＡデンドリマーを、ａ）乾燥させたＤＮＡデンドリマーを安定化させ、ｂ）乾燥させたＤＮＡデンドリマーの、液体に可溶化または再懸濁することを促進し、および／またはｃ）乾燥させたＤＮＡデンドリマーの可動性を促進させる材料の存在下で試験デバイス上の位置において乾燥させる、実施形態１２７による試験デバイス。
１２９．材料が、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤からなる群から選択される、実施形態１２８による試験デバイス。
１３０．糖が、トレハロースおよび／またはスクロースである、実施形態１２９による試験デバイス。
１３１．液体が、ａ）乾燥させたＤＮＡデンドリマーを安定化させ、ｂ）乾燥させたＤＮＡデンドリマーの、液体に可溶化または再懸濁することを促進し、および／またはｃ）乾燥させたＤＮＡデンドリマーの可動性を促進させる材料を含む、実施形態１２７〜１３０のうちのいずれかによる試験デバイス。
１３２．材料が、タンパク質、ペプチド、多糖、糖、ポリマー、ゼラチン、および洗浄剤からなる群から選択される、実施形態１３１による試験デバイス。
１３３．タンパク質が、ＢＳＡであり、洗浄剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０である、実施形態１３２による試験デバイス。
１３４．前記液体の容量が、少なくとも約２０ｕｌ、２５ｕｌ、３０ｕｌ、３５ｕｌ、４０ｕｌ、４５ｕｌ、５０ｕｌ、５５ｕｌ、６０ｕｌ、６５ｕｌ、７０ｕｌ、７５ｕｌ、８０ｕｌ、８５ｕｌ、９０ｕｌ、９５ｕｌ、１００ｕｌ、１１０ｕｌ、１２０ｕｌ、１５０ｕｌ、２００ｕｌ、３００ｕｌ、４００ｕｌ、５００ｕｌであるか、または５００ｕｌを超える容量である、実施形態１２７から１３３のいずれかに記載の試験デバイス。
１３５．前記ＤＮＡデンドリマーが、
ａ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約１〜２、２〜４、もしくは４〜８を含む１層ＤＮＡデンドリマー、
ｂ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約１〜４、４〜８、もしくは８〜１８を含む２層ＤＮＡデンドリマー、
ｃ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約２〜６、６〜１０、１０〜１８、１８〜２８、２８〜３８、３８〜５０、もしくは５０超を含む３層ＤＮＡデンドリマー、および／または
ｄ）前記第１および／もしくは第２の成分のうちの約１５〜２５、２５〜４５、４５〜６０、６０〜８０、８５〜１０５、１０５〜１３０、もしくは１３０超を含む４層ＤＮＡデンドリマー
を含む、実施形態１から５１、７０から１０９、および１２７から１３４のいずれかに記載の試験デバイス。
１３６．前記第１の成分および前記第２の成分のうちの少なくとも一方がポリヌクレオチドであり、他方が、非ポリヌクレオチド部分である、実施形態１３５に記載の試験デバイス。
１３７．前記ＤＮＡデンドリマーが、
ａ）前記第１の成分のうちの約１〜２、２〜４、もしくは４〜８を含む１層ＤＮＡデンドリマー、
ｂ）前記第１の成分のうちの約１〜４、４〜８、もしくは８〜１８を含む２層ＤＮＡデンドリマー、
ｃ）前記第１の成分のうちの約２〜６、６〜１０、１０〜１８、１８〜２８、２８〜３８、３８〜５０、もしくは５０超を含む３層ＤＮＡデンドリマー、および／または
ｄ）前記第１の成分のうちの約１５〜２５、２５〜４５、４５〜６０、６０〜８０、８５〜１０５、１０５〜１３０、もしくは１３０超を含む４層ＤＮＡデンドリマー
を含む、実施形態１３５に記載の試験デバイス。
１３８．前記第１の成分が、ポリヌクレオチドを含む、実施形態１３７に記載の試験デバイス。
１３９．前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ鎖である、実施形態１３８に記載の試験デバイス。
１４０．液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、実施形態１２７から１３９のいずれかに記載の試験デバイスと接触させるステップであり、前記液体試料を、前記試験デバイスの試験ゾーンの上流にある部位へと適用するステップと、
ｂ）前記液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、前記試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）前記試験ゾーンにおける前記検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
１４１．前記検出可能な標識が前記試験ゾーンにおいて発生させる前記シグナルを、
ａ）より少数の第１および／もしくは第２の成分を含むＤＮＡデンドリマーを使用して、前記検出可能な標識が前記試験ゾーンにおいて発生させるシグナルと比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、もしくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍以上増強するか、または
ｂ）ＤＮＡデンドリマーを使用せずに、前記検出可能な標識が前記試験ゾーンにおいて発生させるシグナルと比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００倍以上増強する、実施形態１４０に記載の試験デバイス。
１４２．液体試料中の分析物を検出するための試験デバイスであって、前記デバイスは、多孔性マトリックスを含み、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックス上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、試験試薬を含み、前記試験試薬は、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体であり、
液体試料が、前記試験デバイスに沿って側方方向に流れ、前記試験ゾーンを通過し、検出可能なシグナルを形成して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を示すことが可能であり、
ａ）前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識およびＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むか、または
ｂ）前記検出可能なシグナルの形成が、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結されたＤＮＡデンドリマーの使用を必要とし、前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、もしくは前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第３の成分を含み、
ｃ）前記分析物が、ポリヌクレオチドではなく、そして／または
ｄ）前記ＤＮＡデンドリマーが、約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、もしくは約１００〜約２００の前記第１の成分を含み、そして／または
ｅ）前記ＤＮＡデンドリマーを、前記試験デバイスを使用する前に、前記試験デバイス上の前記試験ゾーンより上流の部位で乾燥させる
デバイス。
１４３．液体試料中の分析物を検出するための方法であって、
ａ）液体試料を、実施形態１４２に記載の試験デバイスと接触させるステップであり、前記液体試料を、前記試験デバイスの試験ゾーンの上流にある部位へと適用するステップと、
ｂ）前記液体試料中に存在する場合、分析物、検出可能な標識、およびＤＮＡデンドリマーを、前記試験ゾーンへと移送するステップと、
ｃ）前記試験ゾーンにおける前記検出可能な標識が発生させるシグナルの存在、非存在、および／または量を評価して、前記液体試料中の前記分析物の存在、非存在、および／または量を決定するステップと
を含む方法。
１４４．液体試料中の分析物を検出するためのキットであって、
ａ）多孔性マトリックスであって、前記多孔性マトリックスは、前記多孔性マトリックス上に試験ゾーンを備え、前記試験ゾーンが、分析物もしくは前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する、または結合性試薬への前記分析物の結合について前記試料中の分析物と競合する分析物もしくは分析物類似体である試験試薬を含む多孔性マトリックスと、
ｂ）ＤＮＡデンドリマーと
を含み、
１）前記ＤＮＡデンドリマーが、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、または前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第１の成分と、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識へと連結する第２の成分とを含むか、または
２）前記ＤＮＡデンドリマーが、検出可能な標識へと共有結合的もしくは非共有結合的に連結され、前記ＤＮＡデンドリマーを、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な結合性試薬、前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物、もしくは前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な分析物類似体へと連結する第３の成分を含む
キット。
１４５．前記ＤＮＡデンドリマーが、前記第１または第３の成分のうちの約１〜約３２４、好ましくは約６０〜約３２４、約８０〜約３００、または約１００〜約２００を含む、実施形態１４４に記載の試験デバイス。
１４６．前記第１の成分および前記第２の成分のうちの一方が、ポリヌクレオチドであり、他方が、非ポリヌクレオチド部分である、実施形態１４４または１４５に記載のキット。
１４７．前記第３の成分が、ポリヌクレオチドである、実施形態１４４または１４５に記載のキット。
１４８．  １）前記ＤＮＡデンドリマー、
２）前記分析物に結合する前記第１の結合性試薬、前記分析物に結合する別の結合性試薬に結合する前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体であって、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体の各々が前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能である、前記第１の結合性試薬、前記第２の結合性試薬、前記分析物、または前記分析物類似体、および
３）前記ＤＮＡデンドリマーに連結可能な前記検出可能な標識
のうちの少なくとも２つが、互いに共有結合的に結合または架橋されている、実施形態１４４から１４７のいずれかに記載のキット。
１４９．前記ＤＮＡデンドリマーが、約１０〜約１，５００、好ましくは約４０〜約１，５００、または約９００〜約１，１００の前記検出可能な標識を含む、実施形態１４４から１４８のいずれかに記載のキット。
１５０．前記ＤＮＡデンドリマーが、約４００〜約８０，０００、好ましくは約４，０００〜約８０，０００、または約６０，０００〜約８０，０００のＤＮＡヌクレオチドを含む、実施形態１４４から１４９のいずれかに記載のキット。
１５１．前記ＤＮＡデンドリマーが、一層構造、二層構造、三層構造、もしくは四層構造、または米国特許第６，２７４，７２３Ｂ１号に記載されている、少なくとも１つの単量体ユニットを含むＤＮＡデンドリマー構造を構成する、実施形態１４４から１５０のいずれかに記載のキット。
１５２．抗体−オリゴコンジュゲート、分析物捕捉抗体、ストレプトアビジン−標識、例えば、金粒子、コンジュゲート、または他の標識、緩衝液、試薬、指示書などのうちの１または複数をさらに含む、実施形態１４４から１５１のいずれかに記載のキット。
【実施例】
【０１４９】
Ｇ．実施例
以下の実施例は、ＰＯＣラテラルフローアッセイにおけるＤＮＡデンドリマーの使用についての上記の記載の適用を表す。以下の実施例は、例示的な目的だけで組み入れられるものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０１５０】
（実施例１）
全液体（「ウェット」）型直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイにおける感度を改善するための、ＤＮＡデンドリマーおよび抗ｈＣＧマウスモノクローナルターゲティング抗体−オリゴコンジュゲートの使用
ＤＮＡデンドリマーの作製
ＤＮＡデンドリマーは、既に開示されている（特許第５，１７５，２７０号、同第５，４８４，９０４号、同第５，４８７，９７３号、同第６，１１０，６８７号、および同第６，２７４，７２３号を参照されたい）通りに作製する。略述すると、ＤＮＡデンドリマーは、それらの各々が、各鎖の中央部分に位置する配列相補性の領域を共有する２本のＤＮＡ鎖から作製されるＤＮＡ単量体から構築される。２本の鎖がアニールして、単量体を形成する場合、結果として得られる構造は、４本の一本鎖「アーム」に隣接する、中央の二本鎖「ウェスト」を有する構造として記載することができる。このウェストプラスアーム構造は、基本的なＤＮＡ単量体を含む。５つの単量体種類の各々の末端における一本鎖アームは、正確かつ特異的な様式で互いに相互作用するようにデザインする。相補的単量体のアームの間の塩基対合は、単量体層の逐次的付加を介する、デンドリマーの方向付けられたアセンブリーを可能とする（図３）。デンドリマーの各層のアセンブリーは、ＤＮＡ鎖を互いに共有結合的に結合させ、これにより、そうしければデンドリマー構造の変形を引き起こす変性条件の影響を受けにくい、完全に共有結合的な分子を形成する架橋形成工程を含む（図２）。加えて、相補的捕捉オリゴとして用いられる３８塩基のオリゴヌクレオチドも、以下の簡単なＴ４  ＤＮＡリガーゼ依存型ライゲーション反応：
１２４マーのＤＮＡ鎖                        ５００ｎｇ
ｅ（＋）ＬＩＧ−ＢＲ７  Ｂｒｉｄｇｉｎｇオリゴ（１４マー）  ２４１．９ｎｇ
ｌｉｇＡ  Ｃａｐ０３オリゴ（３８マー）      ３０６．５ｎｇ
１０倍濃度のリガーゼ緩衝液                  １ｕＬ（１／１０容量）
ヌクレアーゼ非含有水                        １０ｕＬの全容量まで
Ｔ４  ＤＮＡリガーゼ（１Ｕ／ｕＬ）          １ｕＬ（１ユニット、１／１０容量）
を介して、別個の１２４マーの一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドの５’端へとあらかじめライゲーションする（「鎖ライゲート」）。
【０１５１】
最初の５つの反応物を併せて添加し、４２℃で１５分間にわたりインキュベートし、次いで、室温まで冷却させる。次いで、６番目の反応物を添加し、２時間にわたりインキュベートする。ライゲーション反応は、０．５ＭのＥＤＴＡ溶液０．２５ｕＬを添加する（１２．５ｍＭの最終濃度まで）ことにより停止させる。この鎖ライゲートを、下記の捕捉配列特異的なビオチニル化ＤＮＡデンドリマーの作製において使用する。
【０１５２】
ハイブリダイゼーションを介して、鎖ライゲート（上記）およびビオチン標識部分を含有するＤＮＡオリゴヌクレオチドを、デンドリマーの末端側の一本鎖ＤＮＡ配列に共有結合的に結合させるのに続き、ハイブリダイズさせた２本のＤＮＡ鎖の間で、ソラーレンのインターカレーションを施す。インターカレーションされたソラーレンは、３００ｎｍのＵＶ光に曝露されると、ハイブリダイズさせたＤＮＡ鎖の間で、共有結合的に結合する。
【０１５３】
典型的なハイブリダイゼーション−架橋形成作製工程は、以下のようになろう。
【０１５４】
マイクロ遠心管へと、以下の成分：
４層ＤＮＡデンドリマー              １０００ｎｇ（１ｕｇ）
鎖ライゲート（上記に由来する）      鎖として５００ｎｇ（総合成量：１０ｕＬ）
ｃ（＋）  ２×ビオチンオリゴ（３５マー）（デンドリマーの「ｃアーム」と相補的）
４５２．４ｎｇ
Ｎ３（−）＃１  ２×ビオチンオリゴ（１８マー）（「鎖３のライゲート」と相補的）
２９１．９ｎｇ
Ｎ３（−）＃２  ２×ビオチンオリゴ（１９マー）（「鎖３のライゲート」と相補的）
２４３．２ｎｇ
Ｎ３（−）＃３  ２×ビオチンオリゴ（２６マー）（「鎖３のライゲート」と相補的）
３１６．２ｎｇ
５ＭのＮａＣｌ                              １．１ｕＬ（０．２Ｍの最終濃度）
０．１ＭのＤＴＴ                            ０．７ｕＬ（２．５ｍＭの最終濃度）
ヌクレアーゼ非含有水                        ２８ｕＬの全容量まで
エタノール中の２，４，８トリメチルソラーレン飽和溶液    １．１ｕＬ
を添加する。
【０１５５】
上記の反応物を併せて添加し、十分に混合し、７５℃の水の容器に入れ、４２℃までゆっくりと冷却する。３００ｎｍのＵＶ光へと１０分間にわたり曝露することにより、ビオチニル化オリゴをＤＮＡデンドリマーのアームへと共有結合的に結合させる架橋形成イベントを誘発する。１．１ｕＬエタノール中のソラーレン飽和溶液をさらに添加し、反応物を、さらに２．５分間にわたり３００ｎｍのＵＶ光へと曝露する。架橋形成しなかったオリゴヌクレオチドは、サイズ除外スピンカラムまたは同等の方法を使用することにより除去する。
【０１５６】
より多くの捕捉配列またはより少ない捕捉配列を含有するデンドリマーのためには、これに応じて、「鎖ライゲート」（上記の反応物２）の量を変化させることができる。
【０１５７】
マウス抗ｈＣＧターゲティング抗体（ＤＣＮ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を、デンドリマーに結合させた「鎖ライゲート」へと既にライゲーションされたＣａｐ０３  ＤＮＡオリゴヌクレオチドと相補的なｃｐｌＣａｐ０３  ＤＮＡオリゴヌクレオチドへとコンジュゲートさせた。ｃｐｌＣａｐ０３  ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、標準的な架橋形成縮合コンジュゲーション化学反応を使用して、抗マウスＩｇＧ抗体へと共有結合的にコンジュゲートさせる。この抗体−オリゴコンジュゲートは、ラテラルフローアッセイにおける別個の試薬として使用することもでき、抗体に結合させたｃｐｌＣａｐ０３オリゴヌクレオチドの、デンドリマーの末端側の「アーム」上の相補的なＣａｐ０３配列とのハイブリダイゼーションを介して、ＤＮＡデンドリマーとあらかじめ組み合わせることもできる。このハイブリダイゼーション部位は、３１塩基対を含み、溶融温度が６５℃を超え、これにより、生理学的温度および生理学的条件で安定的な、抗体と結合させたデンドリマーの複合体をもたらす（図４）。
【０１５８】
ＤＮＡデンドリマーをシグナル増幅剤として活用するＰＯＣラテラルフローアッセイの性能：
以下の材料：
１．ａ）ニトロセルロース膜（ＨＦ１８０、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）およびｂ）ウィック材料からなるラテラルフローストリップ。ニトロセルロース膜に、試験ラインとして使用するための、ラテラルフローイムノアッセイ適用に適する濃度の抗ｈＣＧアルファ抗体ならびに対照ラインとして使用するための抗マウスＩｇＧ抗体のさらなるストライプで筋をつけた。標準的なラテラルフローイムノアッセイのために、全ての成分を適切にブロッキングし、調製した；
２．公知量のｈＣＧを含有する液体（水性）試料；
３．溶液中のデンドリマー結合のためのターゲティング分子として使用するための、マウス抗ｈＣＧ（ベータ）抗体−オリゴコンジュゲート；
４．ビオチニル化させ、水性緩衝液中にＣａｐ０３捕捉配列（上記で記載した）を含有する、ＤＮＡデンドリマー；
５．溶液中のストレプトアビジンコンジュゲート金コロイドナノ粒子（４０ｎｍの公称サイズ）（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＤＣＮ）、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）；
６．０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０（Ｔ）および０．５％のＢＳＡ（Ｂ）（ＰＢＳ−ＴＢ）を伴うリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）；
７．溶液中のマウス抗ｈＣＧ金コロイドコンジュゲート（４０ｎｍの公称サイズ）（ＤＣＮ）；
８．平底ウェルを伴う、９６ウェルポリスチレンマイクロ滴定プレート
が必要とされた。
【０１５９】
アッセイ手順（マルチステップ）：
１．ＰＢＳ−ＴＢを使用して、全ての試薬を希釈した。
２．９６ウェルマイクロ滴定プレートの第１行に、１５μｌの適量のｈＣＧ抗原（１００ｍＩＵで始め、２倍の系列希釈で、０．０２４ｍＩＵまでの範囲にわたる）を分注した。
３．第２行に、１５μｌのマウス抗ｈＣＧ抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを、適正な希釈率（経験的に決定される１：１００）で分注した。
４．第３行に、１３．３ｎｇ／μｌまで希釈した（デンドリマーのウェル１つ当たり／ラテラルフローストリップ１つ当たりの総最終常用量を２００ｎｇとする）、１５μｌのデンドリマーを分注した。
５．第４行に、１．０  ＯＤまで希釈した、２０μｌのストレプトアビジン−金コロイドコンジュゲートを分注した。
６．ストリップの基部が、ウェルの前部において溶液との接触を維持するように、ストリップを、行１のウェル（ｈＣＧ抗原を含有する）に入れ、ストリップをプレートの後部へと寄せかけた。
７．第１行のウェル内の全ての液体を、全てのストリップへとウィッキングさせたら、ストリップを、ウェルの次の行へと移した。各ストリップについて、後続のウェルへと、各ウェル内の全ての液体が、対応するストリップにより吸収されるまでこの工程を繰り返した。
８．全てのウェルを通して、全てのストリップを移動させるのに成功した後、各試験ラインの目視スコアを記録した（ＤＣＮによる標準的なラテラルフロー目視評定ガイドによる（図１３））。試験ラインおよび対照ラインの両方における目視可能な赤色調または赤褐色の線では、妥当な陽性結果（試料中のｈＣＧの検出の成功）が示された。目視可能な対照ラインだけでは、妥当な陰性結果（試料中のｈＣＧの検出は見られない）が示された。任意の目視可能な対照ラインが欠如すれば、試験の非妥当性が示され、結果は棄却された。
９．標準的なアッセイを構成するため、上記の手順に従い、マウス抗ｈＣＧ抗体−オリゴコンジュゲートおよび３ＤＮＡデンドリマーの両方を、１５μｌのＰＢＳ−Ｔで置きかえ、ストレプトアビジン金コロイドコンジュゲートをマウス抗ｈＣＧ金コロイドコンジュゲート（１．０  ＯＤの常用濃度まで希釈した）で置きかえる。
【０１６０】
直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローｈＣＧアッセイ（ウェットアッセイフォーマット）における３ＤＮＡデンドリマーの活用の結果：上記で記載したアッセイを、２倍の系列希釈における１００ｍＩＵ〜０．０２４ｍＩＵの範囲のｈＣＧ試料に対して実施した後で、デンドリマーアッセイについて、標準的な非デンドリマーｈＣＧアッセイについての３．１〜６．２ｍＩＵのＬＯＤと比較して、０．２０〜０．４０ｍＩＵ  ｈＣＧの検出限界（ＬＯＤ：ｌｉｍｉｔ  ｏｆ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）が達成されることから、ＤＮＡデンドリマーをシグナル増幅剤として使用する場合に、８〜３２倍の感度の改善が結果としてもたらされることが観察された（図５）。
【０１６１】
（実施例２）
全液体（「ウェット」）型間接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイにおける感度を改善するための、３ＤＮＡデンドリマーおよび抗マウスＩｇＧターゲティング抗体−オリゴコンジュゲートの使用
以下の材料：
１．実施例１で記載した、ラテラルフローストリップ；
２．実施例１で記載した、ｈＣＧ抗原を含有する液体（水性）試料；
３．一次抗体（経験的に決定される１：１０００の希釈率）として使用されるマウス抗ｈＣＧ（ベータ）抗体（ＤＣＮ）；
４．溶液中のデンドリマー結合のためのターゲティング分子として使用するための、抗マウス抗体−オリゴコンジュゲート；
５．溶液中の３ＤＮＡビオチニル化デンドリマー；
６．実施例１で記載した、ストレプトアビジンコンジュゲート金コロイドナノ粒子；
７．実施例１で記載した、ＰＢＳ−ＴＢ；
８．実施例１で記載した、マウス抗ｈＣＧ金コロイドコンジュゲート；
９．実施例１で記載した、９６ウェルポリスチレンマイクロ滴定プレート
が必要とされた。
【０１６２】
アッセイ手順（マルチステップ）：アッセイは、以下のステップを除き、実施例１の通りに実施した。
３．第２行に、１５μｌのマウス抗ｈＣＧ抗体を、適正な希釈率（経験的に決定される１：１０００）で分注する。
４．第３行に、１５μｌの抗マウス抗体−オリゴコンジュゲートを、適正な希釈率（経験的に決定される１：１８）で分注する。
５．第４行に、１３．３ｎｇ／μｌまで希釈した（デンドリマーのウェル１つ当たり／ラテラルフローストリップ１つ当たりの総最終常用量を２００ｎｇとする）、１５μｌのデンドリマーを分注する。
６．第５行に、１．０  ＯＤまで希釈した、２０μｌのストレプトアビジン−金コロイドコンジュゲートを分注する。
７．残りのステップは、実施例１のステップ７〜９と同一の様式で実施した。
【０１６３】
間接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローｈＣＧアッセイ（ウェットアッセイフォーマット）におけるＤＮＡデンドリマーの活用の結果：上記で記載したアッセイを、２倍の系列希釈における１００ｍＩＵ〜０．０２４ｍＩＵの範囲のｈＣＧ試料に対して実施した後で、デンドリマーアッセイについて、標準的な非デンドリマーｈＣＧアッセイについての３．１〜６．２ｍＩＵのＬＯＤと比較して、０．１０〜０．２０ｍＩＵ  ｈＣＧの検出限界（ＬＯＤ）が達成されることから、ＤＮＡデンドリマーをシグナル増幅剤として使用する場合に、１６〜６４倍の感度の改善が結果としてもたらされることが観察された（図６）。
【０１６４】
（実施例３）
ＤＮＡデンドリマーの多様な物理的特徴の、実施例１で実施した直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイの性能に対する影響
必要とされる材料：下記で記載される通り、異なるＤＮＡデンドリマーを活用したことを除き、実施例１の通りであった。
【０１６５】
アッセイ手順（マルチステップ）：アッセイは、下記で記載される通り、異なるＤＮＡデンドリマーを使用したことを除き、実施例１の通りに実施した。
【０１６６】
捕捉配列の数の影響
ＰＯＣアッセイにおいて、分析物に直接的または間接的に結合することが可能な抗体−オリゴコンジュゲートは、ＤＮＡデンドリマーシグナル増幅剤へとあらかじめ組み込まれたＤＮＡオリゴヌクレオチド「捕捉」配列を「架橋する」か、またはこれに結合する。ＤＮＡデンドリマー内に作製された（前記アームのハイブリダイゼーションおよび架橋形成を介して）オリゴヌクレオチド「捕捉」配列の数は、変化させることができる。約６０、約１２０、または約１６０の「捕捉」配列を含有するＤＮＡデンドリマーを、既に記載した通りに合成した。次いで、これらのＤＮＡデンドリマーを、実施例１で記載した直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイ（「ウェット」フォーマット）において活用した。
【０１６７】
ｈＣＧ検出アッセイでは、捕捉配列の数を増大させると、より低値のＬＯＤが達成されることが観察された。感度を最高レベルまで増大させたところ、多様な反応緩衝液、洗浄剤、および他の試薬を使用することにより部分的に制御される非特異的結合（ＮＳＢ：ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）がアッセイ中で観察された。これらの結果は、ＤＮＡデンドリマー上の抗体−オリゴコンジュゲート結合部位の数を増大させることにより、分析物、抗体−オリゴコンジュゲート、およびＤＮＡデンドリマーシグナル増幅剤の間の接触の可能性の増大を介する反応速度の改善を介して、アッセイの感度が改善される可能性が高いことを裏付けた。
標識の数の影響
【０１６８】
標識部分（例えば、ビオチン）の総数を、ＤＮＡデンドリマー上で変化させた。ＤＮＡデンドリマーを、約１，４４０、約９６０、約４８０、および約２４０のビオチンと共に合成した。約９６０のビオチンを含有するＤＮＡデンドリマーの性能が最良であるのに続き、それぞれ、約１，４４０、約４８０、および約２４０のビオチンの性能が良好であることが観察された。約１，４４０のビオチンを伴うＤＮＡデンドリマーの感度が低いことは予測外であり、この分子試薬のサイズが他のデンドリマーと比較して幾分大きく、イムノアッセイでは最適に標識されたデンドリマーに対して、反応速度的に好適でないことに起因した可能性がある。
【０１６９】
サイズの影響
ＤＮＡデンドリマーは、多様な物理的サイズとなるように合成することができ、これは、ＰＯＣラテラルフローシステムにおけるこれらの分子の性能に対して影響を及ぼしうる。分子のサイズおよび構造が、イムノアッセイの反応速度に寄与することを踏まえると、最多の標識部分を有する最も大型のＤＮＡデンドリマーが、ラテラルフローアッセイ中で反応速度的に好適でない可能性があるのに対し、少数の標識を含有する小型のデンドリマーは、小型分子の良好な反応速度に起因して、アッセイ中で同等以上の性能を示しうることが仮定される。上記で言及した通り、約１，４４０のビオチン標識部分を伴う最も大型のデンドリマーは、約９６０のビオチンを伴うデンドリマーより低い性能を示した。約１，４４０のビオチンデンドリマーは、約９６０のビオチンデンドリマーの場合の約６９，９００のＤＮＡヌクレオチドと比較して、約８１，５００のＤＮＡヌクレオチドを含有し、総質量の差違は１６．６％である。この質量差は、大型のデンドリマー上の多数のビオチン部分にもかかわらず、これらの分子の間の性能の差違の一因となりうると本発明者らは考える。さらに、他のサイズのさらなるＤＮＡデンドリマーについても調べたところ、より大きいシグナル増幅結果またはより小さなシグナル増幅結果であって、様々なデンドリマーの間のサイズの差違に正比例しないシグナル増幅結果をもたらすことが判明した。
【０１７０】
（実施例４）
直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイにおける非特異的結合（ＮＳＢ）の低減
必要とされる材料：下記で記載される通り、異なるＰＢＳ緩衝液を活用したことを除き、実施例１の通りであった。
【０１７１】
アッセイ手順（マルチステップ）：アッセイは、下記で記載される通り、異なるＰＢＳ緩衝液を使用したことを除き、実施例１の通りに実施した。
【０１７２】
ＤＮＡデンドリマーを使用するＰＯＣラテラルフローアッセイに由来する非特異的結合を低減するかまたは消失させるために、緩衝液マトリックスを考案し、調べた。様々な比率のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）またはＴｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ）からなる９つのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液を調べた。
【０１７３】
緩衝液は、
＃１：１倍濃度のＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０
＃２：１倍濃度のＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０
＃３：１倍濃度のＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．５％のＴｗｅｅｎ−２０
＃４：１倍濃度のＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０
＃５：１倍濃度のＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０
＃６：１倍濃度のＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．５％のＴｗｅｅｎ−２０
＃７：１倍濃度のＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０
＃８：１倍濃度のＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０
＃９：１倍濃度のＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、０．５％のＴｗｅｅｎ−２０
からなった。
【０１７４】
様々な緩衝液のＮＳＢに対する結果：
緩衝液７中で走らせたラテラルフローアッセイが、最高の特異的シグナルおよび最小のＮＳＢを結果としてもたらした。ＰＢＳ緩衝液中の比較的高比率のＴｗｅｅｎ−２０（＞０．０１％）の存在が、ＮＳＢの増大を結果としてもたらしたことは予測外であり、これらの緩衝液は、ラテラルフローアッセイにおける使用のためには選択しなかった。
【０１７５】
（実施例５）
特殊な化学的薬剤を添加することによる、ＤＮＡデンドリマー直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイにおける感度（特異的シグナル）の増強
先行研究は、多様な種類の化学物質の添加が、多様なアッセイシステム（例えば、ＤＮＡ／ＲＮＡマイクロアレイ）においてＤＮＡデンドリマーを使用する場合にもたらされる感度（シグナル）に対して、増強効果を及ぼすことを示している。使用される化学物質は典型的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの体積排除ポリマー、または他の高度に分枝状の多糖分子による。２つの異なるラテラルフローＰＢＳ緩衝液の調合：ａ）１倍濃度のＰＢＳ、０．５％のＴｗｅｅｎ−２０、およびｂ）１倍濃度のＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、および０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０（実施例４による緩衝液７）を、これらの実験に使用した。
【０１７６】
必要とされる材料：以下の化学物質：
ＰＥＧ３３５０
ＰＥＧ６０００
ＰＥＧ８０００
Ｆｉｃｏｌｌ（ＭＷ７０，０００）
硫酸デキストラン
スクロース
を、多様な濃度で、ＤＮＡデンドリマー希釈緩衝液へと添加したことを除き、実施例１の通りであった。
【０１７７】
アッセイ手順（マルチステップ）：アッセイは、実施例１の通りに実施した。
【０１７８】
増強化学物質の試験の結果：
全ての化学物質を多様な濃度で調べて、ｈＣＧ滴定アッセイ（実施例１を参照されたい）において感度が改善されるのかどうかを決定する一方でまた、ＮＳＢも測定した。被験化学物質のうち、０．７５％（容量：容量）の濃度の硫酸デキストランが、有意な感度の改善をもたらし、硫酸デキストラン非含有デンドリマーアッセイの平均２〜４倍の感度であり、ＮＳＢの感知可能な増大を伴わなかった。他のアッセイフォーマット（例えば、ＥＬＩＳＡ）において達成される結果とは対照的に、他の化学的試薬は、感度の改善をほとんどもしくはまったくもたらさないか、または許容不可能なレベルのＮＳＢを顕示するか、あるいはこれらの両方であった。
【０１７９】
（実施例６）
ＤＮＡデンドリマーＰＯＣラテラルフローアッセイにおける異なる種類の金コロイド粒子の使用
複数サイズのストレプトアビジンまたはニュートラビジンとコンジュゲートさせた金粒子を、ＤＮＡデンドリマーを伴う直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローシステムにおいて調べて、どの粒子が、ＮＳＢをほとんどまたはまったく伴わずに最高の感度をもたらすのかを確認した。
【０１８０】
必要とされる材料：以下の金粒子：
ストレプトアビジン−金コンジュゲート、２０ｎｍ
ストレプトアビジン−金コンジュゲート、３０ｎｍ
ストレプトアビジン−金コンジュゲート、４０ｎｍ
ストレプトアビジン−金コンジュゲート、８０ｎｍ
ニュートラビジン−金コンジュゲート、４０ｎｍ
抗ビオチン抗体−金コンジュゲート、４０ｎｍ
ＤＮＡデンドリマー配列と相補的なＤＮＡオリゴヌクレオチドとコンジュゲートさせた金粒子、２０ｎｍ
を１．０  ＯＤの最終濃度で調べたことを除き、実施例１の通りであった。
【０１８１】
多様な金粒子の試験の結果：
３０ｎｍおよび４０ｎｍのストレプトアビジン−金粒子のいずれによっても、最高の感度、シグナル、および低度のＮＳＢが達成された。８０ｎｍのストレプトアビジン−金粒子により、比較的弱いシグナルがもたらされたことは予測外であり、おそらく、ラテラルフロー膜内を効果的に移動する大型粒子の能力が小さいことを示す。ＤＮＡデンドリマーと相補的なＤＮＡオリゴヌクレオチドで誘導体化した金粒子は、良好に作動し、２０ｎｍのストレプトアビジン−金粒子と同等以上の感度を達成した（本発明者らは、大型の粒子が、２０ｎｍの被験粒子よりなお良好な性能を示すと考えるが、大型のオリゴヌクレオチドコンジュゲート粒子は入手可能でなかった）。
【０１８２】
（実施例７）
部分ドライダウン型または完全ドライダウン型の直接的または間接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローｈＣＧアッセイにおける、ＤＮＡデンドリマーおよび他のアッセイ成分の使用
必要とされる材料：以下：
１．３倍濃度のドライダウン溶液（ＤＤＨ２Ｏ中で調合された１５％のトレハロース（Ｆｉｓｈｅｒ）溶液、６０％のスクロース（Ｓｉｇｍａ）溶液）；
２．３７℃の強制換気オーブン；
３．ガラス試験管（１２×７５ｍｍ）
を除き、実施例１および実施例２の通りであった。
【０１８３】
ドライダウン試薬の調製：
【０１８４】
抗マウス抗体−オリゴコンジュゲート
抗マウス抗体−オリゴコンジュゲートは、最終濃度５％のトレハロースおよび２０％のスクロースと共に、１：１８の希釈率（０．５％のＢＳＡおよび０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を伴う１倍濃度のＰＢＳで希釈した３倍濃度のドライダウン溶液で開始する）で調製した。
【０１８５】
ＤＮＡデンドリマー
総質量６５〜２００ｎｇのＤＮＡデンドリマー（ストリップ１つ当たり５ｕＬ当たり）を、５％のトレハロースおよび２０％のスクロースを含有する最終溶液中で希釈した（０．５％のＢＳＡおよび０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を伴う１倍濃度のＰＢＳで希釈した３倍濃度のドライダウン溶液で開始する）。
【０１８６】
ストレプトアビジン金コロイド
ストレプトアビジン−金（ＳＡ−金）コンジュゲートを、５％のトレハロースおよび２０％のスクロース中１．５  ＯＤの濃度まで希釈した（０．５％のＢＳＡおよび０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を伴う１倍濃度のＰＢＳで希釈した３倍濃度のドライダウン溶液で開始する）。
【０１８７】
ドライダウン手順：
単一の試薬（抗体−オリゴコンジュゲート、ＤＮＡデンドリマー、またはＳＡ−金）のドライダウン：
１．５μｌの適正に調製された試薬を、ラテラルフローストリップ上のＰｏｒｅｘコンジュゲートパッドの中央部へとピペティングする。
２．ストリップを、３７℃の強制換気オーブン内に、３０分間にわたり入れる。
２つの試薬（抗体−オリゴコンジュゲートまたはＤＮＡデンドリマー）のドライダウン：
１．５μｌの第１の試薬を、ラテラルフローストリップ上のパッドの基部から約１ｃｍのＰｏｒｅｘコンジュゲートパッドへとピペティングする。
２．５μｌの第２の試薬を、Ｐｏｒｅｘコンジュゲートパッドの基部へとピペティングする。
３．ストリップを、３７℃の強制換気オーブン内に、３０分間にわたり入れる。
３つの試薬（抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲート、ＤＮＡデンドリマー、およびＳＡ−金）のドライダウン：
１．５μｌの第１の試薬を、パッドの基部から約１ｃｍのＰｏｒｅｘパッドへとピペティングする。
２．５μｌの第２の試薬を、Ｐｏｒｅｘパッドの中央部へとピペティングする。
３．５μｌの第３の試薬を、Ｐｏｒｅｘパッドの基部へとピペティングする。
４．ストリップを、３７℃の強制換気オーブン内に、３０分間にわたり入れる。
【０１８８】
アッセイ手順：
１つのドライダウン試薬だけを含有する直接的サンドイッチアッセイ：
１．ラテラルフローストリップを、ｈＣＧ抗原を含有する６５μｌの適量の試料を含有するガラス試験管に入れた。
２．試料液を、ストリップへと完全に吸収させた後で、ストリップを、１５ｕｌの抗体−オリゴコンジュゲートまたはＤＮＡデンドリマーを含有するガラス試験管へと移した。
３．全ての液体を、ストリップへと完全に吸収させた後で、ストリップを、２０μｌのＳＡ−金を含有するガラス試験管へと移した（金をストリップ上でドライダウンさせていないという条件で）。
４．ＳＡ−金コンジュゲートを、ラテラルフローストリップへと完全に吸収させた後で、ストリップを、３５μｌの１倍濃度のＰＢＳ−ＴＢ緩衝液を含有するガラス試験管へと移した。
５．アッセイの完了後、目視評定ガイドによるスコアを記録した。
６．標準的な比較アッセイでは、抗ｈＣＧ金コロイドでＳＡ−金コンジュゲートを置換し、ＤＮＡデンドリマーおよび抗体−オリゴコンジュゲート試薬の使用を必要としなかった。
【０１８９】
２つのドライダウン試薬を含有する直接的サンドイッチアッセイ：「ウェット」試薬ステップのうちの１つを排したことを除き、すぐの上記と同じ手順であり、結果として２ステップアッセイをもたらした。
【０１９０】
３つのドライダウン試薬を含有する直接的サンドイッチアッセイ：「ウェット」試薬ステップのうちの１つを排したことを除き、すぐの上記と同じ手順であり、結果として１ステップアッセイをもたらした。
【０１９１】
直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローｈＣＧアッセイにおいて、乾燥させた試薬（ＤＮＡデンドリマーを含む）を活用することの結果
上記で記載したアッセイを、２倍の系列希釈における１００ｍＩＵ〜０．０２４ｍＩＵの範囲のｈＣＧ試料に対して実施した後で、デンドリマーアッセイについて、標準的な非デンドリマーｈＣＧアッセイについての３．１〜６．２ｍＩＵのＬＯＤと比較して、０．０１〜０．４０ｍＩＵ  ｈＣＧの検出限界（ＬＯＤ）が達成されることから、ＤＮＡデンドリマーをシグナル増幅剤として使用する場合に、８〜６４倍の感度の改善が結果としてもたらされることが観察された（図７）。
【０１９２】
最大で４つのドライダウン試薬を含有する間接的サンドイッチラテラルフローアッセイもまた、上記と類似の様式で実施することができ、同様の結果をもたらしうる。
【０１９３】
（実施例８）
直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローｈＣＧアッセイにおける、蛍光ＤＮＡデンドリマーおよび他のアッセイ成分の使用
蛍光色素で直接標識されたＤＮＡデンドリマーを、ＰＯＣラテラルフローｈＣＧアッセイ（「ウェット」）において使用した。ＤＮＡデンドリマーを、約９６０の蛍光Ｏｙｓｔｅｒ  ６５０色素で直接標識し、これで、実施例１で使用したビオチニル化ＤＮＡデンドリマーおよびＳＡ−金コンジュゲートを置換した。他の点では、アッセイを、実施例１で記載した通りに実施した。結果により、感度は、ＳＡ−金の目視可能なシグナルによるアッセイフォーマットを使用して達成される感度と同等以上であることが示された（図８）。
【０１９４】
（実施例９）
全液体（「ウェット」）型直接的サンドイッチＰＯＣラテラルフローアッセイにおける感度を改善するための、ＤＮＡデンドリマーおよび抗ｈＣＧマウスモノクローナルターゲティング抗体−オリゴコンジュゲートの使用であって、ＤＮＡデンドリマーが非共有結合的に結合させた標識部分を含有する使用
本実施例は、標識されたオリゴヌクレオチドおよび鎖ライゲートのデンドリマー構造への結合について記載する以下のデンドリマー作製工程を除き、実施例１と同一である。
【０１９５】
マイクロ遠心管へと、以下の成分：
４層ＤＮＡデンドリマー              １０００ｎｇ（１ｕｇ）
鎖ライゲート（上記に由来する）      鎖として５００ｎｇ（総合成量：１０ｕＬ）
ｃ（＋）  ２×ビオチンオリゴ（３５マー）（デンドリマーの「ｃアーム」と相補的）
４５２．４ｎｇ
Ｎ３（−）＃１  ２×ビオチンオリゴ（１８マー）（「鎖３のライゲート」と相補的）
２９１．９ｎｇ
Ｎ３（−）＃２  ２×ビオチンオリゴ（１９マー）（「鎖３のライゲート」と相補的）
２４３．２ｎｇ
Ｎ３（−）＃３  ２×ビオチンオリゴ（２６マー）（「鎖３のライゲート」と相補的）
３１６．２ｎｇ
５ＭのＮａＣｌ                                １．１ｕＬ（０．２Ｍの最終濃度）
ヌクレアーゼ非含有水                          ２８ｕＬの全容量まで
を添加する。
【０１９６】
上記の反応物を併せて添加し、十分に混合し、７５℃の水の容器に入れ、室温までゆっくりと冷却して、鎖ライゲートおよび標識されたオリゴの、デンドリマー構造へのハイブリダイゼーションを可能とする。ハイブリダイズしなかったオリゴヌクレオチドは、サイズ除外スピンカラムまたは同等の方法を使用することにより除去する。
【０１９７】
本実施例の結果は、実施例１で報告した結果と符合した。
【０１９８】
（実施例１０）
ＤＮＡデンドリマーのラテラルフローデバイスからの放出についての研究
実験デザイン：材料
本研究で使用される材料を、以下に列挙する：
・ビオチンを含有する、放射性標識された（３２Ｐ）ＤＮＡデンドリマー
・抗ｈＣＧβ抗体−オリゴコンジュゲート
・ドライダウンバッファー（スクロースおよびトレハロースを含有する）（実施例７の［０１８２］における、３倍濃度のドライダウン溶液）
・コンジュゲートパッド（Ｐｏｒｅｘ、Ｐｏｒｅｘ商標）
・ＨＦ９０ニトロセルロースまたはＨＦ１８０ニトロセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ商標）を含有するラテラルフローストリップ
・ｈＣＧ抗原
・ランニングバッファー（実施例４の［０１７３］で列挙された緩衝液７）
・ストレプトアビジン−金コンジュゲート（４０ｎｍの粒子）。
【０１９９】
実験デザイン：方法
放射性標識されたＤＮＡデンドリマー（抗体−オリゴコンジュゲートを伴わない）を、ドライダウンバッファーと共に、ｈＣＧアッセイラテラルフローコンジュゲートパッドへと混合し、ＨＦ９０ニトロセルロース膜およびＨＦ１８０ニトロセルロース膜の両方へと固定した。放射性標識されたＤＮＡデンドリマー（抗体−オリゴコンジュゲートと組み合わせた）を、ドライダウンバッファーと共に、ｈＣＧアッセイラテラルフローコンジュゲートパッドへと混合し、ＨＦ９０ニトロセルロース膜へと固定した。以下の水溶液：
・緩衝液による制御なし；
・希釈されたｈＣＧ抗原を伴う６５ｕＬのランニングバッファー；
・希釈されたｈＣＧ抗原を伴う６５ｕＬのランニングバッファーに続く、２０ｕＬの金粒子；
・希釈されたｈＣＧ抗原を伴う６５ｕＬのランニングバッファーに続き、２０ｕＬの金粒子に続く、３５ｕＬのランニングバッファー（洗浄ステップ）
を、ｈＣＧラテラルフローストリップのコンジュゲートパッド（ドライダウンさせたデンドリマーを含有する）の近位端へと適用して、デンドリマーのコンジュゲートパッドからの放出の効率を評価し、デンドリマーが、ラテラルフローデバイス上のどこまで移動したのかを同定した。
【０２００】
ラテラルフローデバイスを分解し、シンチレーションカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ  ＬＳ６５００）でＣＰＭをカウントすることにより、各領域（図９に示される）を、３２Ｐの量について評定した。
【０２０１】
抗体−オリゴコンジュゲートを伴わずに乾燥させ、ｈＣＧラテラルフローアッセイを含有するＨＦ９０ニトロセルロース上で走らせたデンドリマーの結果を、表１および図１０に示す。表１および図１０に示す通り、全含水容量を６５ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約７３％が放出され、ウィックへと移動し、全含水容量を８５ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約９１％が放出され、ウィックへと移動し、全含水容量を１２０ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約９２％が放出され、ウィックへと移動した。
表１
【表１】
2015524557.tif 000003
【０２０２】
抗体−オリゴコンジュゲートを伴わずに乾燥させ、ｈＣＧラテラルフローアッセイを含有するＨＦ１８０ニトロセルロース上で走らせたデンドリマーの結果を、表２および図１１に示す。表２および図１１に示す通り、全含水容量を６５ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約６１％が放出され、ウィックへと移動し、全含水容量を８５ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約８１％が放出され、ウィックへと移動し、全含水容量を１２０ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの８３％が放出され、ウィックへと移動した。
表２
【表２】
2015524557.tif 000004
【０２０３】
抗体−オリゴコンジュゲートと共に乾燥させ、ｈＣＧラテラルフローアッセイを含有するＨＦ９０ニトロセルロース上で動かしたデンドリマーの結果を、表３および図１２に示す。表３および図１２に示す通り、全含水容量を６５ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約８７％が放出され、ウィックへと移動し、全含水容量を８５ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約７６％が放出され、ウィックへと移動し、全含水容量を１２０ｕＬとしたところ、デンドリマーのうちの約７９％が放出され、ウィックへと移動した。
表３
【表３】
2015524557.tif 000005
【０２０４】
上記の結果は、６５ｕＬの水溶液は、ニトロセルロース膜の全長を移動することにより、乾燥させたデンドリマーのうちの７３％（ＨＦ９０）〜６１％（ＨＦ１８０）を放出して、吸収性ウィック内の最終的沈着物をもたらし、８５ｕＬの水溶液は、ニトロセルロース膜の全長を移動することにより、乾燥させたデンドリマーのうちの９１％（ＨＦ９０）〜８１％（ＨＦ１８０）を放出して、吸収性ウィック内の最終的沈着物をもたらし、１２０ｕＬの水溶液は、ニトロセルロース膜の全長を移動することにより、乾燥させたデンドリマーのうちの９２％（ＨＦ９０）〜８３％（ＨＦ１８０）を放出して、吸収性ウィック内の最終的沈着物をもたらしたことを示す。
【０２０５】
ＨＦ９０ニトロセルロース膜は、ＨＦ１８０膜と比較して、乾燥させたデンドリマーをやや効率的に放出すると考えられる。抗体−オリゴコンジュゲートとあらかじめ組み合わされたデンドリマーのコンジュゲートパッドからの放出は、コンジュゲートパッド上の乾燥させたデンドリマー試薬単独と比較してやや効率的でない傾向があった。まとめると、コンジュゲートパッド（Ｐｏｒｅｘ）上で乾燥させたＤＮＡデンドリマーは、典型的なラテラルフローアッセイにおいて最小限の容量の水溶液を適用することにより、容易かつ効率的に放出される。
【０２０６】
（実施例１１）
デンドリマー捕捉配列の数の、デンドリマー増強ラテラルフローアッセイに対する影響についての研究
実験デザイン：材料
本研究で使用される材料を、以下に列挙する：
・約９００のビオチンおよび多様な数の捕捉配列を含有する４層ＤＮＡデンドリマー：
「１×」＝デンドリマー１つ当たり約１８の捕捉配列
「２×」＝デンドリマー１つ当たり約３５の捕捉配列
「４×」＝デンドリマー１つ当たり約７１の捕捉配列
「６×」＝デンドリマー１つ当たり約９５の捕捉配列
「８×」＝デンドリマー１つ当たり約１１５の捕捉配列
・抗ｈＣＧβ抗体−オリゴコンジュゲート
・ドライダウンバッファー（スクロースおよびトレハロースを含有する）（実施例７の［０１８２］における、３倍濃度のドライダウン溶液）
・コンジュゲートパッド（Ｐｏｒｅｘ、Ｐｏｒｅｘ商標）
・ＨＦ１８０ニトロセルロース（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ商標）および１ｍｇ／ｍＬの濃度で筋をつけられる抗ｈＣＧアルファ抗体を含有するラテラルフローストリップ
・ｈＣＧ抗原
・ランニングバッファー（実施例４の［０１７３］で列挙された緩衝液７）
・ストレプトアビジン−金コンジュゲート（４０ｎｍの粒子）。
【０２０７】
実験デザイン：方法
様々な数の捕捉配列を伴うＤＮＡデンドリマーを、標準化されたｈＣＧラテラルフローアッセイにおいて、以下の通りに走らせた。
１．ＤＮＡデンドリマー、抗ｈＣＧベータ抗体−オリゴコンジュゲート、およびストレプトアビジン−金コンジュゲートを、ｈＣＧラテラルフローアッセイのコンジュゲートパッド上でドライダウンさせた。
２．コンジュゲートパッドを伴う各ラテラルフローストリップをまず、１５、３、および０．６ｍＩＵのｈＣＧ抗原を含有する、１００ｕＬの、実施例４（［０１７３］）で列挙された緩衝液７に入れた。水性のランニングバッファーに、ラテラルフローストリップを、２０分間にわたり走らせ、次いで、抗ｈＣＧアルファ抗体を含有する試験ラインにおける反応を、ＤＣＮ評定システムにより、目視で読み取った（図１３）。
【０２０８】
本研究の結果を、図１４に示す。図１４に示す通り、９００ビオチン４層デンドリマー上の捕捉配列の数と、ｈＣＧラテラルフローアッセイにおけるシグナル増幅のレベルとの直接的な相関が存在すると考えられ、６×デンドリマーおよび８×デンドリマー（それぞれ、デンドリマー１つ当たり９５および１１５の捕捉配列）により、最高のシグナル増幅レベルがもたらされた。
【０２０９】
上記の実施例は、例示的な目的だけで組み入れられるものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。上記で記載した実施例に対する多くの変化形が可能である。当業者には、上記で記載した実施例に対する改変および変化形が明らかであるので、本発明は、付属の特許請求の範囲だけによって限定されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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