(57)【要約】  サンプル中の分析物を決定するための新規の改善された乾燥スティック構築物が提供される。乾燥スティックデバイスは、（ｉ）キャビティを含む固体担体と、（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティは少なくとも１つの乾燥試薬を含む。また本発明は、自動または半自動システムも提供する。さらに本発明は、泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための自動または半自動システムを提供する。【選択図】図１
2015528114.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスにおいて、前記デバイスが、
（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）前記分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、前記キャビティが前記少なくとも１つの乾燥試薬を含み、発生される前記検出可能なシグナルが前記サンプルから得られることを特徴とするデバイス。
【請求項２】
請求項１に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記乾燥スティックが多孔質材料を含まないことを特徴とするデバイス。
【請求項３】
請求項１または２に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記少なくとも１つの乾燥試薬が固定化されないことを特徴とするデバイス。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記乾燥スティックが抗体および／または免疫グロブリンを含まないことを特徴とするデバイス。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記乾燥スティックがイムノアッセイでないことを特徴とするデバイス。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記少なくとも１つの乾燥試薬が、乾燥、コーティングまたは接着によって前記キャビティの少なくとも一部に固定されることを特徴とするデバイス。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記サンプルが、乳、血液、血清、血漿、唾液、尿、汗、眼球レンズ流体、脳脊髄液、腹水、粘膜流体、滑液、腹水、羊水、毛髪などからなる群から選択されることを特徴とするデバイス。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記１つまたは複数の乾燥試薬が、前記キャビティの別々の部分に固定されることを特徴とするデバイス。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記キャビティが区画化されることを特徴とするデバイス。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスにおいて、前記少なくとも１つの乾燥試薬が、前記キャビティの少なくとも一部に固定された少なくとも２つの別々の層、例えば少なくとも３つの層、例えば少なくとも４つの層、例えば少なくとも５つの層、例えば少なくとも６つの層内に存在することを特徴とするデバイス。
【請求項１１】
水性サンプル中の分析物を決定するための方法において、
（ａ）前記サンプルを請求項１乃至１０の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスのキャビティに適用するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つの試薬と、前記分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とを反応させて、検出可能なシグナルを発生させるステップと、
（ｃ）前記検出可能なシグナルを前記サンプルから得るステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法において、洗浄ステップを含まないことを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１乃至１０の何れか一項に記載の乾燥スティックデバイスを調製するための方法において、
（ｉ）キャビティを含む担体を提供するステップと、
（ｉｉ）少なくとも１つの乾燥試薬を提供するステップと、
（ｉｉ）前記少なくとも１つの乾燥試薬を前記キャビティに施すステップと、
前記乾燥スティックデバイスを得るステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
（ａ）請求項１乃至１０の何れか一項に記載のサンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、
（ｂ）分析すべきサンプルを得るためのサンプリング手段であって、データ保存手段によって制御され、事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ活性化されるサンプリング手段と
を含むことを特徴とする自動または半自動システム。
【請求項１５】
システムによって識別可能な独自の識別コードがそれぞれ割り当てられた複数の個々の群メンバーを含む泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための自動または半自動システムにおいて、前記システムが、前記泌乳動物の個々のメンバーの乳サンプル中の少なくとも１つの分析物を分析するための分析手段を含み、前記分析手段が、
（ａ）請求項１乃至１０の何れか一項に記載のサンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、
（ｂ）前記乳サンプルの一部をそれぞれ別の分析手段へ方向付けるための手段であって、前記個々の群メンバーの生産または泌乳サイクルにおいて事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ前記方向付け手段が活性化されるように、前記個々の群メンバーのそれぞれの生理および栄養状態のデータ（前記群メンバーの繁殖および泌乳サイクルにおける時点を示すデータを含む）の保存手段によって制御される方向付け手段と
を含むことを特徴とする自動または半自動システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改善された乾燥スティック構築物、このような乾燥スティックの製造方法、およびサンプル中の分析物の分析におけるその使用に関する。また本発明は、改善された乾燥スティック構築物を含む自動または半自動システムにも関する。さらに、本発明は、泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための、改善された乾燥スティック構築物を含む自動または半自動システムに関する。
【背景技術】
【０００２】
迅速で信頼性のある診断テストに対する需要が高まっている。現在、使用される診断テストの大部分は、検出可能なシグナルを発生させることができる１つまたは複数の試薬を含侵させた単一の多孔質材料層（フィルタパッドなど）を含む。１つまたは複数の試薬が単一の多孔質材料層内に存在するので、このような診断テストは非分割型である。
【０００３】
このような非分割型乾燥スティックを使用する場合、多孔質材料は流体サンプルと接触され、それにより色の変化または色の強度の変化が引き起こされ、これを用いて、特定の効果が達成されたかどうかを検証する、あるいはサンプル中に存在する分析物の量を定量的に決定する。
【０００４】
最適貯蔵安定性および最適性能が同じ環境条件（例えば、ｐＨおよび／または塩含量）で達成されることはほとんどないので、分割されていない環境を含む乾燥スティックデバイスは、含侵された試薬の貯蔵安定性および性能の両方を妥協し得る。
【０００５】
従って、非分割型乾燥スティックデバイスを用いることにより、試験紙の環境は、乾燥スティックデバイスが容認可能な（しかし、最適でない）貯蔵安定性と、容認可能な（しかし、最適でない）性能とを示すように作られる。
【０００６】
これらの問題を乗り越えるために分割型乾燥スティックが開発された。従来技術の分割型乾燥スティックは、（ｉ）試薬の貯蔵安定性と、（ｉｉ）試薬の性能と、（ｉｉｉ）分析物と試薬の間の反応の速度とを支持するように作られている。従来技術の分割型乾燥スティックは、異なる試薬を含侵させた多孔質材料から作られた異なるパッド層を含む。
【０００７】
しかしながら、パッドの使用により、このような分割型乾燥スティックの製造プロセスは時間がかかると共に費用もかかる。
【０００８】
分割型乾燥スティックを調製する場合、パッドを構成する多孔質材料は、それぞれの試薬が含侵される。続いて多孔質材料は積層され、次にスライスされ、パッドに切断された後、固体担体に取り付けられる。あるいは、スライスされた多孔質材料が固体担体に取り付けられた後、スティックに切断される。これらのプロセスステップは全て時間がかかると共に費用もかかり、そして製造不良のリスクを高める。さらに、スリッティング（ｓｌｉｔｔｉｎｇ）および切断ステップの間に発生する粉塵は、作業環境に悪影響を及ぼし得る。多孔質材料は、含浸の非一貫性が頻繁に起こる材料の縁部の使用を回避するためにトリミングされなければならないので、収率損失も遭遇され得る。
【０００９】
積層ステップを除いて、単一の多孔質材料パッドを含む非分割型乾燥スティックの製造においても同じプロセスステップが使用されなければならない。
【００１０】
明らかに、当該技術分野において、再現可能で安価であり、そして製造が容易かつ迅速である、改善された非分割型および分割型乾燥スティックが必要とされている。さらに、作業環境に悪影響を与えない製造方法が必要とされている。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の目的は、サンプル中の分析物を決定するための改善された乾燥スティック構築物に関する。改善された乾燥スティック構築物は、非分割型または分割型乾燥スティック構築物である。
【００１２】
特に、本発明の目的は、多孔質材料の使用を回避することによって上記の従来技術の問題を解決する、改善された乾燥スティック構築物を提供することであると考えることができる。
【００１３】
従って、本発明は、一態様では、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックに関し、前記デバイスは、キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティは少なくとも１つの乾燥試薬を含む。
【００１４】
本発明の別の態様はサンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックに関し、前記デバイスは、キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、少なくとも１つの乾燥試薬は、キャビティの少なくとも一部に固定される。
【００１５】
本発明の態様はサンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックに関し、前記デバイスは、キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、少なくとも１つの乾燥試薬は、乾燥によってキャビティの少なくとも一部に固定される。
【００１６】
本発明のさらなる態様はサンプル中の分析物を決定するための方法に関し、前記方法は、（ａ）キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む乾燥スティックデバイスのキャビティに、サンプルを適用するステップと、（ｂ）少なくとも１つの乾燥試薬と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とを反応させて、検出可能なシグナルを提供するステップとを含む。
【００１７】
また本発明のさらなる態様はサンプル中の分析物を決定するための方法に関し、前記方法は、（ａ）キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、少なくとも１つの乾燥試薬がキャビティの少なくとも一部に固定される乾燥スティックデバイスのキャビティに、サンプルを適用するステップと、（ｂ）少なくとも１つの乾燥試薬と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とを反応させて、検出可能なシグナルを提供するステップとを含む。
【００１８】
本発明のさらに別の態様は乾燥スティックデバイスの調製方法に関し、前記方法は、キャビティを含む担体を提供するステップと、少なくとも１つの乾燥試薬または少なくとも１つの試薬を提供するステップと、少なくとも１つの乾燥試薬または少なくとも１つの試薬をキャビティに施すステップと、乾燥スティックデバイスを得るステップとを含む。
【００１９】
本発明のさらに別の態様は、（ａ）キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、（ｂ）分析すべきサンプルを得るためのサンプリング手段であって、データ保存手段によって制御され、事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ活性化されるサンプリング手段とを含む自動または半自動システムに関する。
【００２０】
本発明の態様は、（ａ）キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、少なくとも１つの乾燥試薬がキャビティの少なくとも一部に固定される、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、（ｂ）分析すべきサンプルを得るためのサンプリング手段であって、データ保存手段によって制御され、事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ活性化されるサンプリング手段とを含む自動または半自動システムに関する。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、システムによって識別可能な独自の識別コードがそれぞれ割り当てられた複数の個々の群メンバーを含む泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための自動または半自動システムに関し、本システムは、泌乳動物の個々のメンバーの乳サンプル中の少なくとも１つの分析物を分析するための分析手段を含み、前記分析手段は、（ａ）キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、（ｂ）乳サンプルの一部をそれぞれ別の分析手段へ方向付けるための手段であって、個々の群メンバーの生産または泌乳サイクルにおいて事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ方向付け手段が活性化されるように、個々の群メンバーのそれぞれの生理および栄養状態のデータ（前記群メンバーの繁殖および泌乳サイクルにおける時点を示すデータを含む）の保存手段によって制御される方向付け手段とを含む。
【００２２】
本発明のさらなる態様は、システムによって識別可能な独自の識別コードがそれぞれ割り当てられた複数の個々の群メンバーを含む泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための自動または半自動システムに関し、本システムは、泌乳動物の個々のメンバーの乳サンプル中の少なくとも１つの分析物を分析するための分析手段を含み、前記分析手段は、（ａ）キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、少なくとも１つの乾燥試薬がキャビティの少なくとも一部に固定される、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、（ｂ）乳サンプルの一部をそれぞれ別の分析手段へ方向付けるための手段であって、個々の群メンバーの生産または泌乳サイクルにおいて事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ方向付け手段が活性化されるように、個々の群メンバーのそれぞれの生理および栄養状態のデータ（前記群メンバーの繁殖および泌乳サイクルにおける時点を示すデータを含む）の保存手段によって制御される方向付け手段とを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１Ａ】図１Ａは、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、サンプル中の分析物を決定するための区画化乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、サンプル中の分析物を決定するための区画化乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、サンプル中の分析物を決定するための区画化乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図３】図３は、サンプル中の分析物を決定するための階層型乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図４】図４は、１つまたは複数の乾燥試薬のラインを含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックの例を示す。
【図５】図５は、１つまたは複数の乾燥試薬のドットを含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックの例を示す。
【図６】図６は、異なる乾燥試薬の別々の層を含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスの例を示す。
【図７】図７は、（ｉ）試薬が同一パッド内に存在する従来の非分割型乾燥スティックの製造方法と、（ｉｉ）本発明の方法との間の比較を示す。このような従来の非分割型乾燥スティックの一例として、ＢＨＢ乾燥スティックが使用される。
【図８】図８は、（ｉ）試薬が異なるパッドに分離される従来の分割型乾燥スティックの製造方法と、（ｉｉ）本発明の方法との間の比較を示す。このような従来の分割型乾燥スティックの一例として、ＬＤＨ乾燥スティックが使用される。
【図９】図９は、（ｉ）従来のＬＤＨスティック対（ｉｉ）新規のＬＤＨ乾燥スティックの性能曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、これから以下においてより詳細に説明されるであろう。
【００２５】
本発明の発明者らは、多孔質材料を含まない新規の改善された乾燥スティック構築物を開発した。本発明の乾燥スティック構築物は、包含される試薬に関して分割されていなくても分割されていてもよい。本発明との関連では、「分割（ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ）」という用語は、同一の乾燥スティック内に異なる環境（例えば、異なる試薬、ｐＨ値および／または塩濃度）を有する乾燥スティックデバイスに関する。一方、「非分割（ｎｏｎ−ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ）」という用語は、試薬が存在するただ１つの環境を含む乾燥スティックデバイスに関する。
【００２６】
実施形態において、本発明の乾燥スティック構築物は、産業および／または最終使用者により要求されるように、貯蔵中の良好な安定性および試験またはアッセイ中の良好な性能の要求に同時に応じる。
【００２７】
サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティック構築物および方法
本発明の改善された乾燥スティック構築物は、（ｉ）キャビティを含む固体担体と、（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティは、少なくとも１つの乾燥試薬を含む。
【００２８】
本発明との関連では、「キャビティ」という用語は、固体担体におけるウェルまたは任意の同様の圧痕（ｉｎｄｅｎｔａｔｉｏｎ）などの空洞であると理解されるべきである。本発明の実施形態において、キャビティの容積は０．１〜１０００μＬの範囲、例えば１〜１００μＬの範囲、例えば２５〜７５０μＬの範囲、例えば１００〜５００μＬの範囲、好ましくは２〜５０μＬの範囲である。
【００２９】
本発明の乾燥スティックを用いて発生される検出可能なシグナルは検出前に多孔質材料を通過する必要がないので、発生される検出可能なシグナルは多孔質材料の存在によって弱められず、変動の影響を受けにくい。従来の乾燥スティックでは、多孔質材料によってこのような変動が発生され得る。多孔質材料は品質および色の両方に関して変動することで有名であるため、このような変動は回避するのが困難である。品質が低下するか、あるいは色が異なるまたはむらのある多孔質材料を用いると、そうでない場合に発生される検出可能なシグナルの分化が起こり、従って乾燥スティックの性能が損なわれ得る。さらに、分析物および乾燥試薬の混合は多孔質材料内では困難であり得る。従って、本発明の乾燥スティックにおいて検出可能なシグナルがサンプルから一段階手順で直接得られることは大きな利点である。
【００３０】
従って、本発明の実施形態では、発生される検出可能なシグナルはサンプルから得られる。本発明のさらなる実施形態では、発生される検出可能なシグナルは、サンプルから直接得られる。
【００３１】
従って、実施形態では、本発明は水性サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスに関し、前記デバイスは、キャビティを含む固体担体と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、キャビティは少なくとも１つの乾燥試薬を含み、発生される検出可能なシグナルはサンプルから得られる。
【００３２】
本発明との関連では、「従来の乾燥スティック」という用語は、多孔質材料を含む乾燥スティックであると理解されるべきである。従来の乾燥スティックは、非分割型または分割型乾燥スティックであり得る。本発明との関連では、「多孔質材料」という用語は、サンプルを吸着し、それによりサンプルを多孔質材料の全体にわたってほぼ均一に展開させる材料に関する。
【００３３】
さらに、本発明の乾燥スティック構築物において使用される試薬および／または乾燥試薬の量は、従来の乾燥スティックにおいて使用される量と比較して低減され得る。それは、検出前に多孔質材料を通過しないと、はるかにより強力なシグナルが発生されるからである。同様に、本発明の乾燥スティックを用いて検出可能なシグナルを発生させるために必要とされるサンプルの量は、多孔質材料における吸着が回避されるので、（従来の乾燥スティックと比較して）低減される。
【００３４】
従って、本発明の実施形態では、乾燥スティックは多孔質材料を含まない。
【００３５】
少なくとも１つの乾燥試薬は、固体（例えば、粉末または圧縮粉末）として乾燥スティック中に存在し得る。２つ以上の乾燥試薬が乾燥スティック中に存在する場合、このような乾燥試薬は別々の粉末または別々の圧縮粉末として乾燥スティックのキャビティ内に存在し得る。
【００３６】
乾燥スティックの取り扱い中に固体をキャビティ内に保持するために、キャビティは膜で密封されてもよい。一実施形態では、膜に穴をあけ、それにより少なくとも１つの試薬を適用サンプルと接触させることによって、サンプルがキャビティに適用される。好ましい実施形態では、膜は、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン、バイオプラスチック、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。
【００３７】
透明膜を使用することも考えることができる。
【００３８】
あるいは、膜は、適用されるサンプルによって溶解可能であり、それにより少なくとも１つの乾燥試薬をサンプルと接触させる材料から作られてもよい。
【００３９】
あるいは、そして膜の使用を回避するために、少なくとも１つの乾燥試薬は、キャビティの少なくとも一部に固定されてもよい。従って、「キャビティの少なくとも一部に固定された乾燥試薬」は、サンプルと接触されるまで移動が実質的に妨げられる乾燥試薬であると理解されるべきである。
【００４０】
従って、一実施形態では、本発明は、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックに関し、前記デバイスは、（ｉ）キャビティを含む固体担体と、（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含み、少なくとも１つの乾燥試薬は、キャビティの少なくとも一部に固定される。
【００４１】
本発明の実施形態では、このような固定は、コーティング、接着および乾燥を含む。
【００４２】
少なくとも１つの乾燥試薬の固定化は、サンプルが適用される際に少なくとも１つの乾燥試薬の分子の可動性を妨害し得る。従って、このような固定化は、試験またはアッセイ中の性能に悪影響を与え得る。試験中のこの性能の不足を補うために、最適性能を達成するのに必要とされる固定化乾燥試薬の量は増大されることが必要とされ、従って、製造される乾燥スティック当たりのコストの増大が生じ得る。
【００４３】
従って、本発明の実施形態では、少なくとも１つの乾燥試薬は乾燥スティックのキャビティに固定化されない。
【００４４】
固定化は、特にイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡなど）から知られており、イムノアッセイでは、固定化された抗体および／または固定化された免疫グロブリンの使用により溶液中の巨大分子の存在または濃度が測定される。イムノアッセイの動作モードは、本発明の乾燥スティックの動作モードとは異なる。本発明の乾燥スティックでは、サンプルが適用され、適用サンプルから検出可能なシグナルが直接得られる。イムノアッセイでは、検出可能なシグナルが得られる前にいくつかの洗浄ステップが必要とされ、それによりこのようなアッセイは、本発明の乾燥スティックと比較してより高価であると共に時間がかかる。さらに、検出可能なシグナルを得るために、サンプルを適用した後、液体反応混合物をイムノアッセイに添加する必要があることがある。
【００４５】
本発明の別の実施形態では、乾燥スティックは、抗体および／または免疫グロブリンを含まない。本発明のさらに別の実施形態では、乾燥スティックはイムノアッセイではない。
【００４６】
少なくとも１つの試薬および／または少なくとも１つの乾燥試薬の形態に応じて、少なくとも１つの試薬および／または少なくとも１つの乾燥試薬は、適用されたら自動的にキャビティの少なくとも一部に接着され得る。これは、少なくとも１つの乾燥試薬および／または少なくとも１つの乾燥試薬が「粘着性」物質（実質的に水を含まない）の形態である場合であり得る。
【００４７】
特に好ましい実施形態では、少なくとも１つの試薬は、キャビティの少なくとも一部に乾燥される。従って、このような乾燥スティックデバイスは、（ｉ）キャビティを含む固体担体と、（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬とを含むことができ、少なくとも１つの乾燥試薬は、乾燥によってキャビティの少なくとも一部に固定される。
【００４８】
本発明との関連では、「乾燥」という用語は、水および／または有機溶媒が試薬から除去され（例えば、蒸発によって）、それにより乾燥試薬が得られるプロセスであると理解されるべきである。
【００４９】
また、本発明の発明者らは、サンプル中の分析物を決定するための新規の改善された方法を提供した。本方法は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む乾燥スティックデバイスのキャビティに、サンプルを適用するステップと、
（ｂ）少なくとも１つの乾燥試薬と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とを反応させて、検出可能なシグナルを提供するステップと
を含む。
【００５０】
任意の種類の視覚または機器による手段によって直接または間接的に観察することが可能である検出可能なシグナルは任意の物質によって発生され得る。機器による手段は、例えば、磁気探知器、分光光度計、ＥＬＩＳＡリーダーおよび／またはＣＣＤカメラであり得る。種々の適切な化合物がシグナル生成化合物として適切であり得る。本発明において、シグナル生成化合物は、色素原、触媒、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性標識、金属、磁性粒子、色素粒子、有機ポリマーラテックス粒子、シグナル生成物質を含有するリポソームまたは他の小胞などからなる群から選択され得る。
【００５１】
従って、本発明の実施形態において、本方法は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む乾燥スティックデバイスのキャビティに、サンプルを適用するステップと
（ｂ）少なくとも１つの乾燥試薬と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とを反応させて、検出可能なシグナルを発生させるステップと、
（ｃ）検出可能なシグナルをサンプルから得るステップと
を含む。
【００５２】
上記のように、本発明の乾燥スティックを用いて検出可能なシグナルを得るために洗浄ステップは必要とされない。従って、本発明の実施形態では、本方法は、洗浄ステップを含まない。
【００５３】
検出可能なシグナルが得られる前に、短時間のインキュベーションが必要とされることもある。従って、本発明の実施形態では、少なくとも１つの乾燥試薬と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とは、少なくとも１分間、例えば少なくとも２分間、例えば少なくとも３分間、例えば少なくとも４分間、例えば少なくとも５分間、例えば少なくとも６分間、例えば少なくとも７分間、例えば少なくとも８分間、例えば少なくとも９分間、例えば少なくとも１０分間、例えば１〜１０分間、例えば２〜９分間、例えば３〜８分間、例えば４〜７分間、例えば５〜６分間、好ましくは１〜５分間反応させられる。
【００５４】
本発明との関連では、「湿った状態」という用語は、少なくとも１つの乾燥試薬とサンプルとの間の接触に関し、それにより、少なくとも１つの乾燥試薬は湿潤またはわずかに湿潤する。湿った状態の効果は、少なくとも１つの乾燥試薬が遊離および溶解（移動）され、乾燥スティックデバイスにおける反応が始まり、サンプル中に存在する分析物の量に依存する検出可能なシグナルが生成されることである。
【００５５】
実施形態では、サンプルの適用の後、検出可能なシグナルは、キャビティの上部、底部、または側面から直接得られる。これは、検出可能なシグナルを得るために洗浄ステップが必要とされないことを意味する。従って、検出可能なシグナルは、一段階手順でキャビティから得ることができる。それに応じて、検出可能なシグナルを得るためにサンプルの添加の他に、液体をキャビティに連続して添加する必要もない。そのため、本発明の乾燥スティック構築物はＥＬＩＳＡではない。
【００５６】
さらなる実施形態では、本発明はサンプル中の分析物を決定するための方法に関し、前記方法は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、少なくとも１つの乾燥試薬がキャビティの少なくとも一部に固定される乾燥スティックデバイスのキャビティに、サンプルを適用するステップと、
（ｂ）  少なくとも１つの乾燥試薬と、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物とを反応させて、検出可能なシグナルを提供するステップと
を含む。
【００５７】
このような固定は乾燥であることが好ましいこともある。
【００５８】
固体担体
本発明の乾燥スティックは固体担体を含む。本発明との関連では、「固体担体」という用語は、移動に対して、またはサンプルの反応に対して、または試薬に対して影響を与えない材料を指す。言い換えると、固体担体は、試薬を適所に保持するための固定具である。固体担体は乾燥スティックの安定化基盤を提供し、所望の物理的形状を保持するために十分な強度を提供し、検出可能なシグナルの生成を実質的に妨害しない。
【００５９】
本発明の実施形態では、固体担体のための材料は、膜、プラスチック、ガラス（ｇｌａｓ）、金属、磁器、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。検出可能なシグナルがキャビティの側面および／または底部から得られる場合、固体担体（または、少なくともキャビティ）は透明な材料で作られるのが好ましいこともある。
【００６０】
プラスチックは、合成有機固体、半合成有機固体およびこれらの組み合わせであり得る。同様に、プラスチックは、熱可塑性ポリマー、熱硬化性ポリマー、およびこれらの組み合わせであり得る。実施形態では、プラスチックは、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン、バイオプラスチック、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。
【００６１】
試薬および／または乾燥試薬
「試薬（単数）」および／または「試薬（複数）」は、固体、半固体または液体の形態であり得る。固体担体に施される前に、「試薬（単数）」および／または「試薬（複数）」は、水および／または有機溶媒中に溶解されてもよい。あるいは、その元の形態（すなわち、固体、半固体または液体の形態）で固体担体に施されてもよい。
【００６２】
従って、本発明との関連では、「試薬（単数）」、「試薬（複数）」、「乾燥試薬（単数）」および／または「乾燥試薬（複数）」という用語は、検出可能なシグナルを提供するために、サンプル中に存在する分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応する、これらの決定に関与する、あるいはこれらの決定のために必要である化学および／または酵素物質に関する。試薬の組み合わせ、より具体的には、２つ以上の試薬、例えば３つ以上の試薬、例えば４つ以上の試薬、例えば５つ以上の試薬、例えば６つ以上の試薬に関する類似の定義が提供され得る。
【００６３】
本発明との関連では、「乾燥試薬」という用語は、水を実質的に含まない試薬であると理解されるべきである。従って、本発明の実施形態では、乾燥試薬は、５％ｗ／ｗ未満の水、例えば４％ｗ／ｗ未満の水、例えば３％ｗ／ｗ未満の水、例えば２％ｗ／ｗ未満の水、例えば１％ｗ／ｗ未満の水、例えば０．５％ｗ／ｗ未満の水、例えば０．０１％ｗ／ｗ未満の水、例えば０．０１％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの範囲の水、例えば１％ｗ／ｗ〜４％ｗ／ｗの範囲の水、例えば２％ｗ／ｗ〜３％ｗ／ｗの範囲の水、例えば０．５％ｗ／ｗ〜１％ｗ／ｗの範囲の水、例えば０．０１％ｗ／ｗ〜０．５％ｗ／ｗの範囲の水を含む。好ましい実施形態では、乾燥試薬は水を含まない。本発明の実施形態では、乾燥試薬は、得られた乾燥スティックにおいて、固体（例えば、粉末）、半固体、または液体の形態であり得る。
【００６４】
分析物
上記の原理に基づく乾燥スティックまたは方法は、当業者に知られている適切なシグナル生成化合物を選択することによって広範囲の分析物を決定するために使用することができる。従って、本発明は、本明細書中で言及される例に限定される必要はない。
【００６５】
本発明の実施形態では、アッセイすべき分析物は、タンパク質、酵素、脂質、炭水化物、抗生物質、ホルモン、ビタミンおよび化合物からなる群から選択され得る。
【００６６】
本発明の実施形態では、ホルモンはステロイドである。ステロイドは、プレグネノロン、プロゲステロン、テストステロン、ジヒドロテストステロン、エストロン、エストラジオール、コルチゾール、コルチゾン、アルドステロン、コルチコステロン、アンドロステンジオン、１７α−ＯＨ−プレグネノロン、１７α−ＯＨ−プロゲステロン、１１−デオキシ（ｄｅｓｏｘｙ）−コルチコステロン、１１−デオキシコルチゾール（ｄｅｓｏｘｙｃｏｒｔｉｓｏｌ）、デヒドロエピアンドロステロンおよび黄体形成ホルモンの群から選択され得る。
【００６７】
酵素は、カタラーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、アルカリホスファターゼ、酸ホスファターゼ、カルボキシルエステラーゼ、アリールエステラーゼ、β−グルクロニダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、リパーゼ、リゾチーム、キサンチンオキシダーゼ、プラスミンおよびベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ（ＮＡＧａｓｅ）およびプロスタグランジンＤシンターゼ（ＰＧＤＳ）からなる群から選択され得る。
【００６８】
好ましい実施形態では、酵素は、ＬＤＨおよびＮＡＧａｓｅからなる群から選択される。
【００６９】
化合物は、尿素、トリグリセリドおよびケトン体からなる群から選択され得る。ケトン体は、アセトアセタート、ベータ−ヒドロキシブチラート（ＢＨＢ）、クエン酸、乳酸、アセトン、アスコルビン酸、ニトラート、ウロビリノーゲンおよびコレステロールからなる群から選択され得る。
【００７０】
好ましい実施形態では、化合物は、尿素およびＢＨＢからなる群から選択される。
【００７１】
炭水化物は、単糖および／または二糖であり得る。単糖は、グルコースまたはガラクトースであり得る。二糖はラクトースであり得る。
【００７２】
さらにより好ましい実施形態では、分析物は、ＬＤＨ、尿素およびＢＨＢからなる群から選択される。
【００７３】
別の実施形態では、分析物は、乾燥スティック中に酵素が存在して分析物の決定に関与するかどうかに関係なく、酵素であり得る。
【００７４】
サンプル
本発明との関連では、「サンプル」という用語は、液体または溶液の形態で見られる任意のサンプルに関する。またこの用語は、アッセイの際に液体において、液化、溶解および／または懸濁され得る気体にも関する。またこの用語は、例えば、溶液、懸濁液またはエマルションの形態で液体サンプルを形成するように変化されれば、固体サンプルにも関する。
【００７５】
乾燥スティック試験に適用する前に必要な液体サンプルの取り扱いステップ数が最小であることが好ましい。本発明との関連では、「取り扱いステップ」という用語は、アッセイデバイスに適用する前の、液体サンプルの任意の種類の前処理に関する。この前処理には、分離、ろ過、希釈、蒸留、濃度、妨害化合物の不活性化、遠心分離、加熱、固定、試薬の添加、または化学処理が含まれる。
【００７６】
本発明の実施形態では、サンプルは哺乳類から採取することができ、好ましくは、哺乳類は、群れ動物、雌ウシ、ラクダ、水牛、ブタ、ウマ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ペットおよびヒトからなる群から選択される。またサンプルは、ヘビ、魚および鳥などの他のタイプの動物からも採取され得る。
【００７７】
本発明の好ましい実施形態では、サンプルは、任意の望ましい源に由来することができるが、サンプルは、乳、血液、血清、血漿、唾液、尿、汗、眼球レンズ流体、脳脊髄液、腹水、粘膜流体、滑液、腹水、羊水、毛髪などからなる群から選択されるのが好ましい。
【００７８】
またサンプルは、細菌または細菌由来の源、植物または植物由来の源、真菌または真菌由来の源、製造プロセス、水源、食物源、飼料源、油源および／またはミネラル源から得ることもできる。
【００７９】
製造プロセスは、発酵プロセス、生化学プロセスおよび化学合成プロセスなどであるがこれらに限定されない任意の種類の製造プロセスであり得る。
【００８０】
同様に、水源は、湖、小川、川、開放水域および精製プラントなどであるがこれらに限定されない任意の種類の水源であり得る。
【００８１】
ミネラル源は、採掘ストリーム（ｍｉｎｉｎｇ  ｓｔｒｅａｍ）であり得る。
【００８２】
乾燥スティック構築物のさらなる実施形態
本発明の実施形態では、分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応することができる少なくとも１つの乾燥試薬は、キャビティの別々の部分に存在し得る。
【００８３】
このような乾燥試薬の分離は、アッセイ中により速くかつより均一である検出可能なシグナルを提供する。２つ以上の乾燥試薬が乾燥スティック中に存在する場合、乾燥試薬間のあらゆる種類の反応が回避されるので、乾燥試薬のこのような分離は乾燥スティックの貯蔵安定性を改善し得る。湿った状態のときに、乾燥試薬は分析物と反応して、検出可能なシグナルを提供する。
【００８４】
従って、乾燥試薬の分離を含まない乾燥スティックは非分割型乾燥スティックとみなされ得るが、２つ以上の分離された乾燥試薬を含む乾燥スティックは、キャビティの各部分が原則として異なる環境であるので分割型乾燥スティックと見なされ得る。湿った状態のときに、新しい環境が生じる。
【００８５】
実施形態では、乾燥試薬は、キャビティの表面に存在する乾燥ラインまたは乾燥ドットにおいて分離され得る（例として、図４および５を参照されたい）。
【００８６】
乾燥試薬の容易な分離を提供し、乾燥スティックの貯蔵安定性を改善するために、キャビティは区画化され得る（例として、図２Ａ〜２Ｃを参照されたい）。
【００８７】
従って、本発明の実施形態では、キャビティは、少なくとも２区画、例えば少なくとも３区画、例えば少なくとも４区画、例えば少なくとも５区画、例えば少なくとも１０区画、例えば少なくとも２０区画、例えば少なくとも３０区画を含む。
【００８８】
従って、２つ以上の乾燥試薬、例えば３つ以上の乾燥試薬、例えば４つ以上の乾燥試薬、例えば５つ以上の乾燥試薬、例えば１０以上の乾燥試薬、例えば２０以上の乾燥試薬、例えば３０以上の乾燥試薬、例えば４０以上の乾燥試薬、例えば５０以上の乾燥試薬を別々の区画に固定できることになる。乾燥試薬は同じであっても異なっていてもよい。
【００８９】
好ましい実施形態では、２つ以上の乾燥試薬、例えば３つ以上の乾燥試薬、例えば４つ以上の乾燥試薬、例えば５つ以上の乾燥試薬、例えば１０以上の乾燥試薬、例えば２０以上の乾燥試薬、例えば３０以上の乾燥試薬、例えば４０以上の乾燥試薬、例えば５０以上の乾燥試薬が別々の区画に乾燥され得る。この場合も、乾燥試薬は同じであっても異なっていてもよい。
【００９０】
区画化されたキャビティは、乾燥試薬がキャビティの異なる部分に存在する実施形態の代替例であると見なすことができる。結果は同じであり、より速くかつより均一であるシグナルおよび／または改善された乾燥スティックの貯蔵安定性が提供されると考えられる。
【００９１】
別の実施形態では、キャビティは階層化される（例として、図３を参照されたい）。従って、特定の連鎖反応が所望される場合には、乾燥スティックは、階層型キャビティにおいて特定の一連の乾燥試薬を有するように設計され得る。乾燥試薬の分離を含むこのような乾燥スティックは、サンプルが適用される前に乾燥試薬間の任意の反応が回避されるので、従来の乾燥スティックと比較して改善された貯蔵安定性を示し得る。さらに、一連の乾燥試薬は、サンプル成分の沈殿を制限および／または回避するように配列され、従って、得られる検出可能なシグナルが改善される。この点について、階層型キャビティを含む乾燥スティックにも沈殿に関して同じ考察が適用可能であるので、別々の層を含む乾燥スティックに関する以下の部分を参照されたい。
【００９２】
本発明のさらなる実施形態では、乾燥試薬は、キャビティの少なくとも一部において少なくとも２つの別々の層、例えばキャビティの少なくとも一部において少なくとも３つの層、例えば少なくとも４つの層、例えば少なくとも５つの層、例えば少なくとも６つの層内に存在することができる（例として、図６を参照されたい）。
【００９３】
実施形態では、乾燥試薬の１つは、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供するために乾燥試薬または乾燥試薬の組み合わせに必要とされる条件を提供することができる制御化合物であり得る。さらに、制御化合物は、サンプル中に存在する分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と、乾燥試薬との間の反応の速度を増大することが可能であり得る。本発明の実施形態では、制御化合物は、酸、塩基または塩であり得る。
【００９４】
好ましくは、制御化合物は、湿った状態のときにｐＨ６未満、例えばｐＨ５未満、例えばｐＨ４未満、例えばｐＨ３未満、例えばｐＨ２未満、例えばｐＨ１未満、例えばｐＨ０未満、例えばｐＨ０〜６の範囲、例えばｐＨ０〜５の範囲、例えばｐＨ０〜４の範囲、例えばｐＨ０〜３の範囲、例えばｐＨ０〜２の範囲、例えばｐＨ０〜１の範囲、例えばｐＨ１〜６の範囲、例えばｐＨ２〜６の範囲、例えばｐＨ３〜６の範囲、例えばｐＨ４〜６の範囲、例えばｐＨ５〜６の範囲である、乾燥スティック試験デバイス中のサンプルのｐＨ値を提供することができる酸性化合物である。
【００９５】
本発明の別の実施形態では、制御化合物は、湿った状態のときにｐＨ８以上、例えばｐＨ８〜１４の範囲、例えばｐＨ８〜１３の範囲、例えばｐＨ８〜１２の範囲、例えばｐＨ８〜１１の範囲、例えばｐＨ８〜１０の範囲、例えばｐＨ８〜９の範囲、例えばｐＨ９〜１２の範囲、例えばｐＨ１０〜１３の範囲、例えばｐＨ１０〜１１の範囲である、乾燥スティック試験デバイス中のサンプルのｐＨ値を提供することができるアルカリ化合物であり得る。
【００９６】
本発明の一実施形態では、制御化合物は、少なくとも１つの乾燥試薬から分離され得る。このような分離は、例えば、キャビティの異なる部分であるか、あるいはキャビティの少なくとも一部の別々の層であり得る。
【００９７】
このような乾燥試薬（任意の制御化合物を含む）の分離は、非適合性の試薬を異なる層に含有させることができるので、乾燥スティックの安定性、貯蔵特性および適用性を改善し得る。それに応じて、サンプルの適用前に試薬間の反応が回避される。
【００９８】
さらに、沈殿を制限および／または回避するために一連の層が配列されてもよい。サンプル成分の沈殿とは、流体サンプルのサンプル成分または流体サンプルの一部が固体または半固体塊に変化することを意味し、これは、例えば、熱、または強酸、強塩基もしくは高塩濃度などの化学物質の作用によって起こることが多い（このような化学物質は制御化合物であり得る）。
【００９９】
凝固したサンプル成分は、検出可能なシグナルを妨害および低減し得る。従って、特定の分析物の決定において強酸、強塩基または高塩濃度が必要とされる場合、サンプル成分の沈殿を防止するためにこのような化合物を固体担体に隣接する層に配置するのが好ましいことがある。
【０１００】
サンプル成分は、サンプル中に存在するタンパク質、炭水化物、脂肪、細胞、または他の成分からなる群から選択され得る。
【０１０１】
好ましい実施形態では、サンプルは乳である。
【０１０２】
好ましい実施形態では、少なくとも２つの試薬が、キャビティの少なくとも一部に乾燥された少なくとも２つの別々の層、例えば少なくとも３つの層、例えば少なくとも４つの層、例えば少なくとも５つの層、例えば少なくとも６つの層内に存在する。
【０１０３】
明らかに、上記で概説された種々の乾燥スティック構築物は、サンプル中の分析物をアッセイするために使用することができる。
【０１０４】
乾燥スティックの調製
従来の乾燥スティックの調製方法と、本発明の乾燥スティック構築物の調製方法との間の比較は、図７および８において見ることができる。
【０１０５】
本発明に従う乾燥スティックデバイスは、乾燥スティックデバイスの調製のために提供される任意の従来の方法によって調製することができる。好ましい実施形態では、本発明に従う乾燥スティックデバイスを提供するための方法は、
（ｉ）キャビティを含む担体を提供するステップと、
（ｉｉ）少なくとも１つの乾燥試薬を提供するステップと、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの乾燥試薬をキャビティに施すステップと、
乾燥スティックデバイスを得るステップと
を含む。
【０１０６】
同一パッド（すなわち、同一の多孔質材料）内に試薬が存在する非分割型乾燥スティックの従来の調製方法を上記の本発明の方法と比較すると、以下のプロセスステップが不要とされる：
Ｉ．多孔質材料を調達するステップ、
ＩＩ．１つまたは複数の試薬を多孔質材料に含侵させるステップ、
ＩＩＩ．多孔質材料を細長片に切断するステップ、
ＩＶ．細長片をパッドに切断するステップ、
Ｖ．パッドをカートリッジに取り付けるステップ。
【０１０７】
イムノアッセイの調製方法に関して、このような製造は、抗体および／または免疫グロブリンを固定化するためにいくつかのインキュベーションステップおよび洗浄ステップを必要とする。このようなステップは、本発明の方法によって不要とされる。
【０１０８】
さらなる実施形態では、本発明の乾燥スティックは、
（ｉ）キャビティを含む担体を提供するステップと、
（ｉｉ）少なくとも１つの試薬を含む少なくとも１つの溶液を提供するステップと、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの溶液をキャビティの少なくとも一部に施すステップと
（ｉｖ）溶液を固定するステップと、
乾燥スティックデバイスを得るステップと
を含む方法によって調製され得る。
【０１０９】
一実施形態では、前記固定は乾燥であり得る。
【０１１０】
別々のパッド（すなわち、別々の多孔質材料）内に試薬が存在する分割型乾燥スティックの従来の調製方法を上記の本発明の方法と比較すると、以下のプロセスステップが不要とされる：
Ｉ．多孔質材料を調達するステップ、
ＩＩ．試薬を少なくとも２つの別々の多孔質材料に含侵させるステップ、
ＩＩＩ．積層ステップ、
ＩＶ．含侵された多孔質材料を細長片に切断するステップ、
Ｖ．細長片をパッドに切断するステップ、
ＶＩ．パッドをカートリッジに取り付けるステップ。
【０１１１】
明らかに、本発明の方法を用いると方法のステップ数は著しく減少され、従ってプロセスの経済が改善される。さらに、方法のステップ数が低減されると、プロセス障害のリスクが低下し、従って廃棄されるスティックの量が制限される。
【０１１２】
従来の方法では、いくつかの中間生成物が生じる（１つまたは複数の含侵された多孔質材料など）。本発明の方法を用いると、このような中間生成物が回避されるので、乾燥および冷却貯蔵の必要性が低減される。
【０１１３】
本発明の方法は、パッドの切断および／またはスリッティングステップを含まない。従って、本発明の方法ではパッドの切断および／またはスリッティング装置が必要とされず、従って改善された製造の経済が提供される。
【０１１４】
従って、このようなプロセスステップの間に発生される粉塵の量が回避される。乾燥スティックの従来の調製方法で発生される粉塵は次のプロセスステップに影響を与え、作業環境に悪影響を与え得る。従って、通常このような粉塵は積極的に除去され、製造プロセスにさらなるコストが加わる。
【０１１５】
本発明の乾燥スティック構築物にはパッドが必要とされないので、これらのスティックの調製方法は、乾燥スティックのサイズに応じて容易に調整することができる。従来の乾燥スティックの調製方法は、乾燥スティックのサイズが変化すると、新しい切断および／またはスリッティング装置を必要とするか、あるいは少なくとも切断および／またはスリッティング装置の調整を必要とし、従って、製造プロセスに時間およびコストが追加される。
【０１１６】
さらに、従来の乾燥スティックにおいて使用されるパッドは、糊、テープまたは同様の接着剤を用いて取り付けられる。糊の残留物は、乾燥スティックの性能に影響を与え得る。特にパッド側面の糊の残留物は、適用されたサンプルをその側面に向けて移動させ、傾斜したシグナルを発生し得る。このような傾斜したシグナルは読取りに影響を及ぼし、従って、間違った結果（偽陰性および偽陽性の両方）のリスクが増大される。
【０１１７】
実施形態では、少なくとも１つの溶液は少なくとも１つの試薬を含む。
【０１１８】
少なくとも１つの試薬を含む溶液は、水溶液および／または有機溶媒からなる群から選択され得る。
【０１１９】
溶液が水を含む場合、このような水は製造プロセスの最後に除去される（例えば、蒸発によって）ことが好ましい。
【０１２０】
本発明の方法を用いることにより、別々の乾燥試薬を含む分割型乾燥スティックを得ることが可能である。従って、このような乾燥スティックが所望される場合、本方法は、異なる試薬を含む少なくとも２つの異なる溶液、例えば３つ以上の異なる溶液、例えば４つ以上の異なる溶液、例えば５つ以上の異なる溶液、例えば６つ以上の異なる溶液、例えば７つ以上の異なる溶液、例えば８つ以上の異なる溶液、例えば９つ以上の異なる溶液、例えば１０以上の異なる溶液を適用することを含む。
【０１２１】
上記のように、試薬および／または乾燥試薬のこのような分離は、（ｉ）キャビティの別々の部分、（ｉｉ）キャビティの異なる区画、（ｉｉｉ）階層型キャビティの異なる部分、および／または（ｉｖ）キャビティの異なる層において、試薬および／または乾燥試薬を分離することによって得ることができる。
【０１２２】
キャビティの別々の部分における乾燥試薬（任意の制御化合物を含む）の分離は、非接触分配または接触分配によって達成することができ、少なくとも１つの試薬を含む溶液のラインおよび／またはドットがキャビティの別々の部分に分配される。試薬は、既に言及された方法のどれか１つによって固定され得る。好ましい実施形態では、ラインおよび／またはドットは、少なくとも１つの試薬を含む少なくとも１つの溶液を施した後に乾燥され得る。
【０１２３】
別々の乾燥試薬（任意の制御化合物を含む）を含む異なる層の提供は、少なくとも１つの試薬を含む少なくとも１つの溶液を提供するステップと、このような溶液をキャビティの少なくとも一部に施すステップとを連続的に繰り返すことによって達成され得る。このような繰り返しは、２つ以上の別々の層、例えば３つ以上の別々の層、例えば４つ以上の別々の層、例えば５つ以上の別々の層、例えば６つ以上の別々の層を得るために実行され得る。各層は、互いに異なる乾燥試薬または乾燥試薬の組み合わせを含む。
【０１２４】
使用される溶液に応じて、既に施された層の溶解を防止する層によって各層をコーティングすることが有利であり得る。このようなコーティングにはワックスが含まれ得る。サンプルが適用されたら少なくとも１つの乾燥試薬が分析物と反応することができように、適用サンプルによって溶解可能なコーティングを使用することも考えられ得る。
【０１２５】
上述の方法を使用して、上記で開示される種々の乾燥スティック構築物を提供することができる。従って、本発明は、上述の方法によって得ることができる乾燥スティックデバイスに関する。
【０１２６】
付加的な実施形態
実施形態では、本発明に従う乾燥スティック試験デバイスは、サンプル中の分析物を決定するために使用される。好ましくは、分析物は、タンパク質、脂肪、炭水化物、抗生物質、ステロイド、ビタミンおよび化合物からなる群から選択される。好ましくは、化合物は、尿素、トリグリセリド、ならびにアセトアセタート、ベータ−ヒドロキシブチラート（ＢＨＢ）、アスコルビン酸（クエン酸）およびアセトンなどのケトン体からなる群から選択される。分析物が炭水化物である場合、炭水化物は、グルコースおよびラクトースからなる群から選択され得る。
【０１２７】
ＬＤＨの決定
上述のように、本発明の発明者らは、サンプル中の分析物を決定するための新規の乾燥スティック構築物を開発しており、このような分析物は、体液中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）であり得る。本発明に従う乾燥スティックデバイスは、サンプル中のＬＤＨの定性的検出および定量的決定のために有用であることができ、試験手段は少なくとも１つの乾燥試薬組成物を含む。
【０１２８】
ＬＤＨの定量的決定は、乳腺構造の完全性に影響を与え、そして同時に、分泌上皮および血液乳関門を損傷する乳房の炎症を決定するために重要であり得る。その結果として、多くの乳成分が乳腺炎によって影響を受ける。脂肪、タンパク質およびラクトースなどの主要な成分が減少し、いくつかの酵素は変化する。ＬＤＨおよび／またはＮ−アセチルグルコサミニダーゼは、乳腺炎によって起こる炎症の適切な指標として使用され得る。Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＡＧａｓｅ）とも呼ばれるＮ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルコサミニダーゼは、乳房の炎症に対するより優れたマーカーの１つであると主張されている。さらに、ＬＤＨのような乳中の他の酵素も、ＮＡＧａｓｅと同様の価値を有し、乳腺炎の適切な指標としての役割を果たし得ることが示されている。
【０１２９】
あるいは、心発作の後、例えば血液中のＬＤＨの濃度がその正常濃度を超えて著しく上昇することにおいて、ＬＤＨの定量的決定は、心疾患、特に心発作の検出においてきわめて重要であり得る。従って、このようなＬＤＨ濃度の異常な上昇の早期発見は、明らかに、より正確かつ迅速な心臓疾患の診断をもたらすことができる。
【０１３０】
異常な心臓の状態の早期診断は非常に重要なので、血液中のＬＤＨの濃度の変数を検出するための試験は、臨床医が実行するために十分に迅速でかつ簡単でなければならないが、誤差または誤った読取りが極端に変化することなく診断が行われるように十分に正確でなければならない。このようなメカニズムは、本発明の新規の乾燥スティックデバイスによって表される。この新規の乾燥スティックデバイスを用いると、器具類は必要でなく、試薬の混合または再構成も必要でない。従って、試験は、患者の家または診療所において特別な装置を用いることなく行うことができる。
【０１３１】
本発明の実施形態では、サンプル中のＬＤＨのアッセイ方法は、
（ｉ）ＬＤＨを含有する疑いのあるサンプルを本発明の乾燥スティックデバイスに適用するステップと、
（ｉｉ）ＬＤＨ、ＬＤＨの誘導体、またはＬＤＨの指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる第１の乾燥試薬または乾燥試薬の組み合わせを、サンプルによって溶解させるステップであって、第１の乾燥試薬または乾燥試薬の組み合わせが前記試薬の第１の環境を提供し、湿っていない状態のときに、第１の環境が試薬および乾燥スティックデバイスの改善された貯蔵安定性を可能にするステップと、
（ｉｉｉ）サンプルをさらに、第２の乾燥試薬組成物または乾燥試薬の組み合わせである調節試薬組成物と反応させるステップであって、前記調節試薬組成物が前記試薬の第２の環境を作り、湿った状態のときに、前記第２の環境がＬＤＨと試薬の間の反応の速度の増大を可能にするステップと、
（ｉｖ）試薬およびＬＤＨ、ＬＤＨの誘導体、またはＬＤＨの指標化合物に、検出可能なシグナルを提供させるステップと
を含み得る。
【０１３２】
本発明のさらなる実施形態では、ＬＤＨの決定は、酵素ベースの決定に基づく。
【０１３３】
サンプル中のＬＤＨの濃度を決定するための新規の乾燥スティックデバイスは、少なくとも１つの乾燥試薬組成物を含み得る。乾燥試薬組成物は、乾燥試薬、乾燥試薬の組み合わせまたは一連の乾燥試薬を含み得る。
【０１３４】
このような乾燥試薬の一例はテトラゾリウム塩であり得る。この試薬は、サンプルと接触される乾燥スティックデバイスに、指標に添加されるサンプル中のＬＤＨの濃度を表すように変化する強度を有する色を付与することができる。これらの色素は当該技術分野においてよく知られており、通常、式：
2015528114.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は個々に、同じまたは異なるアリールまたは置換アリールラジカルであり、Ｘは、ハロゲンなどのアニオンである）を有する。
【０１３５】
この構造の有用な塩の例としては、塩化２，３，５−トリフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム、塩化２−（ｐ−ヨードフェニル）−３−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウム（ＩＮＴ）、ニトロブルーテトラゾリウム、ブルーテトラゾリウムなどが挙げられる。これらの塩は、使用される溶液１００部に基づいて約０．０５部〜約０．３５部、好ましくは、約０．１部〜約０．２部の範囲の濃度で、以下に記載されるような形で新規の乾燥スティックデバイス内に取り込まれ得る。
【０１３６】
乾燥スティックはさらに、テトラゾリウム塩の早期の着色を防止するために使用される抗酸化剤を含むことができる。適切な抗酸化剤の例としては、２，６−ジ第３級ブチル−ｐ−クレゾールなどのアルキル化フェノール；ブチル化ヒドロキシトルエン、４−ｔ−ブチルカテコール、オクタデシル−３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシヒドロシンナマート；２，２’−メチレンビス（６−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール）、４，４’−ブチリデンビス（６−ｔ−ブチル−３−メチルフェノール）などのアルキリデンビスフェノール；４，４’−チオビス（６−ｔ−ブチル−３−メチルフェノール）、２，２’−チオビス（６−ｔ−ブチル−４−メチルフェノール）などのチオビスフェノール；テトラキス［メチレン（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシヒドロシンナマート）］メタン、１，３，５−トリメチル−２，４，６−トリス（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジル）ベンゼンなどのポリフェノール；チオジプロピオン酸ジトリデシル、チオジプロピオン酸ジステアリル、チオジプロピオン酸ジラウリルなどのエステル；ジアリールまたはジアルキル置換ｐ−フェニレンジアミン、ジフェニルアミン、Ｎ−フェニル−アルファ−ナフチルアミンなどのアミン；亜リン酸ジブチル、亜リン酸ジデシル、亜リン酸ジオクチル、亜リン酸ジフェニルデシル、亜リン酸ジテトラデシル、亜リン酸フェニルジデシル、亜リン酸フェニルネオペンチル、亜リン酸トリデシル、トリチオ亜リン酸トリラウリル、亜リン酸トリフェニル、亜リン酸トリスノニルなどの有機亜リン酸塩、ならびに種々の他の周知の抗酸化剤（例えば、ヒドロキノン、ヒドロキノンモノメチルエーテル、モノ−ｔ−ブチルヒドロキノン、２，５−ジ−ｔ−ブチルヒドロキノン、トルヒドロキノン、２，５−ジ−ｔ−アミルヒドロキノンなどを含むキノンなど）が挙げられる。また、フェノチアジン、ヒドロキシベンゾフェノン、ｐ−ジメチルアミノニトロソベンゼン、チオジプロピオン酸なども使用され得る。
【０１３７】
これらの抗酸化材料は、溶液１００を基準として約０．０１部〜２．０部、好ましくは約０．０２部〜１．０部の範囲の量で使用することができ、テトラゾリウム塩と共に使用されてもよいし、あるいはその付着の前または後に使用されてもよい。
【０１３８】
乾燥試薬の別の例はジアホラーゼであってもよく、これは、ＮＡＤＨによるテトラゾリウム塩の還元を触媒するために使用される。この酵素は当該技術分野においてよく知られており、使用される溶液１００部を基準として重量により約０．０２部〜０．２部の範囲の濃度で使用されるべきであり、好ましくは、０．０３部〜０．１０部で使用される。
【０１３９】
ニコチンアミド−アデニン−ジヌクレオチド（以下、ＮＡＤと呼ばれることもある）は、乳酸リチウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウムなどのアルカリ乳酸塩との混合物において、さらなる成分を構成する。ＮＡＤの使用は当該技術分野においてよく知られており、溶液１００部を基準として重量により約０．０１部〜約０．２０部の範囲の濃度で使用されるべきであり、好ましくは、０．０１５部〜０．０８部で使用される。乳酸塩は、溶液１００部を基準として０．０３部〜約１．５部の範囲の量で使用され、好ましくは、０．０２部〜０．０９部で使用される。
【０１４０】
上記のメカニズムを用いるサンプル中のＬＤＨの決定において、存在する試薬の以下の反応が使用され得ると考えられる。
2015528114.tif 000004
【０１４１】
上記の反応スキームは、サンプルが乾燥スティックデバイスに添加されたら、その中のＬＤＨがテトラゾリウム塩の還元および着色された指標の形成をもたらす反応を起こし得ることを説明し、その強度はＬＤＨの濃度に正比例する。次に、臨床医は、得られた色を標準色票とただ比較して、試験中のサンプルのＬＤＨ濃度を確かめるだけである。
【０１４２】
本発明の新規の乾燥スティックデバイスを用いて最適な結果を達成するために、さらなる成分として、適用可能であることが当業者には周知であるものの何れかである適切な非イオン性湿潤剤を取り込むことも、必須ではないが有利である。例えば、脂肪アルカノールアミド、すなわちアルカノールアミンと、ラウリン酸または皮を剥いたココナッツ（ｓｔｒｉｐｐｅｄ  ｃｏｃｏｎｕｔ）脂肪酸などの脂肪酸との反応生成物（適切なアルカノールアミンは、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、アモンイソプロパノールアミン（ａｍｏｎｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌａｍｉｎｅ）などである）；エチレンオキシド由来の材料、すなわちエチレンオキシドとアルキルフェノール（ここで、アルキル基はオクチル、ノニル、またはより高次である）との反応から得られるもの、長鎖脂肪アルコール（例えば、トリデシルアルコール、ラノリン、レセチン（ｌｅｃｅｔｈｉｎ）アルコールなど）、長鎖脂肪酸（例えば、トール油、オレイン酸、アビエチン酸など）、長鎖脂肪メルカプタン、長鎖脂肪アミン、ポリオキシプロピレングリコール、脂肪ソルビタンエステル；糖エステル、すなわち脂肪酸のメチルエステルおよびスクロースまたはラフィノースのアルコーリシス反応生成物；ポリソルビトール；ポリビニルアルコール；メチルセルロース；エトキシ化フェノール／ホルムアルデヒド樹脂などが使用され得る。溶液１００部当たり約０．０１部〜約１．０部の湿潤剤の濃度が使用され、湿潤剤は、好ましくは、成分が１つずつ添加される場合には各成分と共に添加され、あるいは完全な混合系として添加される場合には、成分と混合されて添加される。
【０１４３】
本発明の実施形態では、テトラゾリウム塩の水溶液は、乾燥スティックデバイスの別々の部分において、別々の区画において、別々のストライプとして、または別々のドットとして調製および添加され得る。次に、ジアホラーゼおよび場合により炭水化物安定剤の緩衝溶液は、乾燥スティックデバイスの別々の部分において、別々の区画において、別々のストライプとして、または別々のドットとして調製および添加され得る。ＮＡＤおよびアルカリ乳酸塩の緩衝液溶液は、乾燥スティックデバイスの別々の部分において、別々の区画において、別々のストライプとして、または別々のドットとして調製および添加され得る。乾燥ステップは、試験指標の調製を完了させる。
【０１４４】
本発明の実施形態では、サンプル中のＬＤＨの決定方法は、
（ａ）着色化合物と、
（ｂ）ジアホラーゼと、
（ｃ）ニコチンアミド−ジヌクレオチドと、
（ｄ）乳酸塩と
を含む、少なくとも１つの乾燥試薬組成物を有する乾燥スティックデバイスを用いて実施され得る。
【０１４５】
試薬（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）はただ１つの乾燥試薬組成物、または個々の乾燥試薬組成物、例えば２つの異なる乾燥試薬組成物、例えば３つの異なる乾燥試薬組成物、または例えば４つの異なる乾燥試薬組成物中に存在し得る。
【０１４６】
本発明の別の実施形態では、乾燥スティックデバイスはさらに、
（ｅ）抗酸化剤
を含む少なくとも１つの乾燥試薬組成物を含むことができる。
【０１４７】
試薬（ｅ）は、ただ１つの乾燥試薬組成物中に試薬（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）と一緒に存在していてもよいし、あるいは個々の乾燥試薬組成物中に存在していてもよい。
【０１４８】
試薬は、少なくとも２つの乾燥試薬組成物、例えば少なくとも３つの乾燥試薬組成物、例えば少なくとも４つの乾燥試薬組成物、例えば少なくとも５つの乾燥試薬組成物、例えば少なくとも６つの乾燥試薬組成物に分離され得る。
【０１４９】
本発明の実施形態では、着色化合物は、テトラゾリウム塩またはその任意の誘導体からなる群から選択される。
【０１５０】
湿潤剤などが取り込まれる場合、これらは、均一な乾燥試薬付着物を得るように、乾燥試薬組成物の何れかまたは全てに添加される。炭水化物安定剤として適する材料には、使用される溶液１００部を基準として約１０．０部〜約２５．０部、好ましくは約１５．０部〜約２０．０部の範囲の濃度のマルトースおよびソルビトールならびに水溶性重合エチレンオキシド（高分子量および低分子量の両方）、ジエチレングリコールなどが含まれる。
【０１５１】
本発明の実施形態では、水溶性抗酸化剤が使用されてもよく、そして試薬は全て緩衝溶液中に一緒に混合され得る。各成分の濃度は、それぞれが同じ水１００部に基づくことを除いて上記の通りであり、１回の溶解−１回の乾燥（ｏｎｅ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｏｎｅ  ｄｒｙ）サイクルを用いて所望の試験指標を製造することができる。
【０１５２】
どちらの手順においても有用な緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、フタル酸緩衝液、トリス緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸−コハク酸緩衝液などが挙げられる。好ましい緩衝液はトリス緩衝液、すなわち０．０５〜０．２Ｍ濃度の２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオールである。
【０１５３】
ＬＤＨの決定のために異なるアッセイが提供されていれば、第１および第２の環境が変化され得ることは当業者には明らかである。さらに、本発明の概念によって提供される知識に基づいて、第１および第２の環境を最適化する方法も当業者には明らかである。すなわち、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供することができる試薬の貯蔵に有利であるように選択され得る第１の環境を有し、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供することができる試薬の性能に有利であるように、あるいは分析物と、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供することができる試薬との間の反応の速度に有利であるように形成され得る第２の環境を有する。
【０１５４】
本発明の好ましい実施形態では、乾燥スティックデバイスは、ＬＤＨを検出するための上述の反応スキームに従ってＬＤＨを測定するために開発される。この構築物では、少なくとも１つの乾燥試薬組成物には約ｐＨ６．８のｐＨ値が提供され、調節乾燥試薬組成物には、試薬または試薬の組み合わせの約ｐＨ８．３の第２の環境を提供することができるｐＨ調節剤が提供されるのが好ましいことがある。
【０１５５】
β−ヒドロキシブチラート（ＢＨＢ）の決定
ＢＨＢは、エネルギーを得るために脂肪が動員される際に形成さている。他のケトン体を有するＢＨＢのレベルは、例えば動物の空腹時、または減食によって増大する。グルコースに対する要求が高いとき、すなわち雌ウシなどの群れ動物の妊娠後期および泌乳の間、レベルはエネルギー状態に密接に関連する。
【０１５６】
本発明の実施形態では、ＢＨＢの決定は、上記のＬＤＨの決定のために提供されたものと同じ反応スキームを用いて実施され得る。
【０１５７】
本発明の好ましい実施形態では、乾燥スティックデバイスは、ＢＨＢを検出するための上述の反応スキームに従ってＢＨＢを測定するために開発される。この構築物では、少なくとも１つの乾燥試薬組成物には約ｐＨ６．８のｐＨ値が提供され、調節乾燥試薬組成物には、試薬または試薬の組み合わせの約ｐＨ８．３の第２の環境を提供することができるｐＨ調節剤が提供されるのが好ましいことがある。
【０１５８】
尿素の決定
タンパク質利用の決定は重要なパラメータであり得る。ウシの畜産において、タンパク質は最も高価な飼料成分の１つなので、動物（例えば、雌ウシ）が飼料内に含有されるタンパク質を最適に利用することは非常に重要である。利用は、とりわけ、動物内に同時に存在するエネルギーおよびタンパク質の量に依存する。
【０１５９】
本発明の実施形態では、尿素の決定は、以下の反応スキーム：
2015528114.tif 000005
を用いて実施され得る。
【０１６０】
本発明の好ましい実施形態では、乾燥スティックデバイスは、尿素を検出するための上述の反応スキームに従って尿素を測定するために開発される。この構築物において、そしてＪａｃｋ  Ｂｅａｎｓから得られるウレアーゼを使用する場合には、少なくとも１つの乾燥試薬組成物には約ｐＨ８．０のｐＨ値が提供され、調節試薬組成物には、試薬または試薬の組み合わせの約ｐＨ６．０の第２の環境を提供することができるｐＨ調節剤が提供されるのが好ましいことがある。
【０１６１】
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＡＧａｓｅ）の決定
ＮＡＧａｓｅの定量的決定は、ＬＤＨと同じ方法で、乳腺構造の完全性に影響を与えると同時に分泌上皮および血液乳関門を損傷する乳房の炎症を決定するために重要であり得る。
【０１６２】
本発明の実施形態では、ＮＡＧａｓｅの決定は、以下の反応スキーム：
2015528114.tif 000006
を用いて実施され得る。
【０１６３】
ここで、４−ＭＵ−ＮＡＧは４−メチルウンベリフェリルＮ−アセチル−ベータ−Ｄ−グルコサミニドに関し、４−ＭＵ−酸は４−メチルウンベリフェロンに関し、そして４−ＭＵ−フェノラート色素は４−メチルウンベリフェロン塩に関する。
【０１６４】
本発明の好ましい実施形態では、乾燥スティックデバイスは、ＮＡＧａｓｅを検出するための上述の反応スキームに従ってＮＡＧａｓｅを測定するために開発される。この構築物では、少なくとも１つの乾燥試薬組成物には約ｐＨ７．０のｐＨ値が提供され、調節試薬組成物には、試薬または試薬の組み合わせの約ｐＨ４．６の第２の環境を提供することができるｐＨ調節剤が提供されるのが好ましいことがある。
【０１６５】
ＬＤＨ、ＢＨＢ、尿素、ＮＡＧａｓｅまたは任意の他の分析物の決定のために異なるアッセイが提供されていれば、第１および第２の環境が変化され得ることは当業者には明らかである。さらに、本発明の概念によって提供される知識に基づいて、第１および第２の環境を最適化する方法も当業者には明らかである。すなわち、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供することができる試薬の貯蔵に有利であるように形成され得る第１の環境を有し、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供することができる試薬の性能に有利であるように、あるいは分析物と、分析物と反応して検出可能なシグナルを提供することができる試薬との間の反応の速度に有利であるように形成され得る第２の環境を有する。
【０１６６】
自動または半自動システム
本発明の実施形態において、例えば、所与の任意の時点で可能な分析物の中から、哺乳類（群メンバーなど）から得られるサンプル中のいくつかの分析物を同時に取扱いおよび分析することができるシステムが提供されることは顕著な特徴であり得る。好ましくは、この時点は、例えば、個々の動物の繁殖または泌乳サイクルの状態に依存する。
【０１６７】
サンプル中のいくつかの分析物のこの分析は、分析手段と、特定の分析物を特定の時点で分析すべきかどうか決定するために使用され得る、各群メンバーの繁殖および泌乳状態に関する情報および／または任意の他の情報を含有するデータベースとを動作的に連結させることによって可能になる。このようにして、システムは「動的」モードで動作する。
【０１６８】
従って、本発明は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、
（ｂ）分析すべきサンプルを得るためのサンプリング手段であって、データ保存手段によって制御され、事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ活性化されるサンプリング手段と
を含む自動または半自動システムに関する。
【０１６９】
従って、さらなる実施形態では、本発明は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含み、発生される検出可能なシグナルがサンプルから得られる、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、
（ｂ）分析すべきサンプルを得るためのサンプリング手段であって、データ保存手段によって制御され、事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ活性化されるサンプリング手段と
を含む自動または半自動システムに関する。
【０１７０】
少なくとも１つの乾燥試薬は、例えば、乾燥、コーティングまたは接着によって、キャビティの少なくとも一部に固定され得る。
【０１７１】
さらに、実施形態では、本発明は、システムによって識別可能な独自の識別コードがそれぞれ割り当てられた複数の個々の群メンバーを含む泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための自動または半自動システムに関し、本システムは、泌乳動物の個々のメンバーの乳サンプル中の少なくとも１つの分析物を分析するための分析手段を含み、前記分析手段は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、
（ｂ）乳サンプルの一部をそれぞれ別の分析手段へ方向付けるための手段であって、個々の群メンバーの生産または泌乳サイクルにおいて事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ方向付け手段が活性化されるように、個々の群メンバーのそれぞれの生理および栄養状態のデータ（前記群メンバーの繁殖および泌乳サイクルにおける時点を示すデータを含む）の保存手段によって制御される方向付け手段と、
を含む。
【０１７２】
さらなる実施形態では、本発明は、システムによって識別可能な独自の識別コードがそれぞれ割り当てられた複数の個々の群メンバーを含む泌乳動物の群れの生産能力を最適化するための自動または半自動システムに関し、本システムは、泌乳動物の個々のメンバーの乳サンプル中の少なくとも１つの分析物を分析するための分析手段を含み、前記分析手段は、
（ａ）（ｉ）キャビティを含む固体担体と、
（ｉｉ）分析物、前記分析物の誘導体、または前記分析物の指標化合物と反応して、湿った状態のときに検出可能なシグナルを提供することができる少なくとも１つの乾燥試薬と
を含み、キャビティが少なくとも１つの乾燥試薬を含み、発生される検出可能なシグナルがサンプルから得られる、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスと、
（ｂ）乳サンプルの一部をそれぞれ別の分析手段へ方向付けるための手段であって、個々の群メンバーの生産または泌乳サイクルにおいて事前に選択された時点または事前に選択された時間間隔においてのみ方向付け手段が活性化されるように、個々の群メンバーのそれぞれの生理および栄養状態のデータ（前記群メンバーの繁殖および泌乳サイクルにおける時点を示すデータを含む）の保存手段によって制御される方向付け手段と
を含む。
【０１７３】
この場合も、少なくとも１つの乾燥試薬は、例えば、乾燥、コーティングまたは接着によって、キャビティの少なくとも一部に固定され得る。
【０１７４】
明らかに、乾燥スティックデバイスは、３〜３５頁に明確に記載される特徴を含むことができる。
【０１７５】
本明細書で使用される場合、「自動」という用語は、実質的に手動操作なしにシステムが動作され得ることを暗示する。従って、この用語は、乳サンプルが搾乳場所において搾乳システムからオンラインで自動的に採取され、分析手段まで自動的に運ばれ、次に分析データが自動的に作成され、これが自動的に処理されてシステムを更新し、農場経営者に矯正措置の指示が提供されることを示す。搾乳場所は、自由に移動する搾乳動物のための自動搾乳システムの搾乳場所であってもよいし、あるいはヘリンボーン搾乳システムなどの従来の搾乳システムのいくつかの搾乳場所の１つであってもよい。また搾乳場所は、回転または並列搾乳パーラーであってもよい。
【０１７６】
「半自動」という用語は、本明細書で使用される場合、システムの操作の少なくとも一部がいくらか手動の操作（例えば、手動によるサンプルの分析手段までの輸送）を含むシステムを指す。
【０１７７】
「生産能力」という用語は、本明細書で使用される場合、その最も広い解釈における生産能力を意味することが意図される。従って、この用語には、乳の生産（乳の量および品質を含む）、群メンバーの繁殖能力（例えば、搾乳動物１頭あたりの子孫の数）、および飼料配給の最適利用が含まれる。
【０１７８】
サンプルを得るため、好ましくは次のサンプルを得るために事前に選択される時点または事前に選択される時間間隔は、動的モードで、あるいはサンプルを得るために予め決められたスケジュールに従って決定され得る。
【０１７９】
本発明の興味深い特徴は、個々の群メンバーのそれぞれの生理および栄養状態のデータの保存手段が新しいデータによって連続的に更新されるので、所与の時点で所与のサンプルにおいて分析される化合物／パラメータの範囲の選択が、特定の群メンバーまたは特定の群れのグループに対して絶えず更新されるデータセットに基づいていることであり得る。
【０１８０】
従って、サンプルを得るため、好ましくは次のサンプルを得るために事前に選択される時点または事前に選択される時間間隔は、好ましくは、動的モードで決定され得る。「動的モード」という用語は、既に分析されたサンプルから得られる結果に基づいて、次のサンプルを提供して、前記次のサンプルの次の分析を実施するための時点を決定することに関する。
【０１８１】
上記の自動または半自動システムの特徴および相互接続に関するさらなる詳細は、参照によって本明細書に援用される国際公開第０２／０６９６９７号パンフレットまたは国際公開第２００４／０１７０６６号パンフレットにおいて見出すことができる。
【０１８２】
本発明の態様の１つに関して記載された実施形態および特徴は、本発明の他の態様にも当てはまることに注意すべきである。
【０１８３】
本出願で引用される全ての特許および非特許参考文献は、参照によってその全体が本明細書に援用される。
【０１８４】
本発明はこれから以下の非限定的な実施例および図面においてさらに詳細に記載されるであろう。
【０１８５】
図面の詳細な説明
図１Ａは、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスを示す。図１Ａａ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびキャビティ（２）を含む。図１Ａｂ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）および乾燥試薬（３）を含む。図１Ａｃ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（４）を含み、ここで、乾燥試薬（３）は溶解されている。
【０１８６】
図１Ｂは、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスを示す。図１Ｂａ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびキャビティ（２）を含む。図１Ｂｂ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）および乾燥試薬（３）を含む。図１Ｂｃ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（４）を含み、ここで、乾燥試薬（３）は溶解されている。
【０１８７】
図２Ａは、サンプル中の分析物を決定するための区画化乾燥スティックデバイスを示す。図２Ａａ）に示される乾燥スティックの断面図は、固体担体（１）、キャビティ（２）および２つの別々の区画（３）を含む。図２Ａｂ）に示される乾燥スティックの断面図は、２つの異なる乾燥試薬（４）および（５）を含む２つの別々の区画（３）を含む。図２Ａｃ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（６）を含み、ここで、乾燥試薬（４）および（５）は溶解されている。
【０１８８】
図２Ｂは、サンプル中の分析物を決定するための区画化乾燥スティックデバイスを示す。図２Ｂａ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）、キャビティ（２）および４つの別々の区画（３）を含む。従って、乾燥スティックは、４つの異なる乾燥試薬を含むことができる。図２Ｂｂ）に示される乾燥スティックの断面図は、２つの異なる乾燥試薬（４）および（５）を含む２つの別々の区画（３）を含む。図２Ｂｃ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（６）を含み、ここで、乾燥試薬（４）〜（７）は溶解されている。
【０１８９】
図２Ｃは、サンプル中の分析物を決定するための区画化乾燥スティックデバイスを示す。図２Ｂａ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）および２つの別々の区画（５）を含む。図２Ｂｂ）に示される乾燥スティックの断面図は、固体担体（１）と、２つの異なる乾燥試薬（２）および（３）を含む２つの異なる区画とを含む。図２Ｂｃ）に示される乾燥スティックの断面図は、固体担体（１）およびサンプル（４）を含み、ここで、乾燥試薬（２）および（３）は溶解されている。
【０１９０】
図３は、サンプル中の分析物を決定するための階層型乾燥スティックデバイスを示す。図３ａ）に示される階層型乾燥スティックは、固体担体（１）ならびに２つの異なる乾燥試薬（２）および（３）を含む。図３ｂ）に示される階層型乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（４）を含み、ここで、乾燥試薬（２）および（３）は溶解されている。
【０１９１】
図４は、１つまたは複数の乾燥試薬のラインを含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックを示す。図４ａ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）、キャビティ（２）、ならびに異なる乾燥試薬のライン（３）、（４）および（５）を含む。図４ｂ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）、ならびに異なる乾燥試薬のライン（３）、（４）および（５）を含む。図４ｃ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（６）を含み、ここで、乾燥試薬は溶解されている。図４ｄ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）、キャビティ（２）およびより細い乾燥試薬のライン（３）を含む。
【０１９２】
図５は、１つまたは複数の乾燥試薬のドットを含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックを示す。図５ａ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）、キャビティ（２）、ならびに異なる乾燥試薬のドット（３）、（４）、（５）および（６）を含む。図５ｂ）に示される乾燥スティックは、異なる乾燥試薬のドット（３）および（４）を含む。図５ｃ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）、キャビティ（２）および同一の乾燥試薬のより小さいドット（３）を含む。図５ｄ）に示される乾燥スティックは、固体担体（１）およびサンプル（７）を含み、ここで、乾燥試薬は溶解されている。
【０１９３】
図６は、固体担体（１）、ならびに異なる乾燥試薬の層（２）および（３）を含む、サンプル中の分析物を決定するための乾燥スティックデバイスを示す。
【０１９４】
図７は、（ｉ）試薬が同一パッド内に存在する従来の非分割型乾燥スティックの製造方法と、（ｉｉ）本発明の方法との間の比較を示す。このような従来の非分割型乾燥スティックの一例として、ＢＨＢ乾燥スティックが使用される。
【０１９５】
図８は、（ｉ）試薬が異なるパッドに分離される従来の分割型乾燥スティックの製造方法と、（ｉｉ）本発明の方法との間の比較を示す。このような従来の分割型乾燥スティックの一例として、ＬＤＨ乾燥スティックが使用される。
【０１９６】
図９は、（ｉ）従来のＬＤＨ乾燥スティックおよび（ｉｉ）本発明の新規のＬＤＨ乾燥スティックの性能曲線を示す。
【実施例】
【０１９７】
実施例１．ＢＨＢ乾燥スティックの調製および試験
含浸溶液の調製：
３４００ｍＬの０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ８．０中に、以下の試薬を１つずつ溶解して、淡黄色の透明な溶液が得られる。
・  ２０．０ｇのβ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（β−ＮＡＤ＋）
・  ９．０ｇのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＴＢ）
・  ３２ｍＬのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の５％溶液
・  ２０．０ｇのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
・  ４００ＫＵのアスコルビン酸オキシダーゼ（ＡｍａｎｏからのＡＳＯ−３）
・  １００ＫＵのジアホラーゼ（Ｕｎｉｔｉｋａ）
・  ５０ＫＵのヒドロキシブチラートデヒドロゲナーゼ（ＡｍａｎｏからのＨＢＤＨ）
【０１９８】
乾燥スティックの調製：
別々のスティックのキャビティにおいて、新たに調製した上記の溶液１０μＬをそれぞれのキャビティに満たした。次に、換気したオーブンにおいてスティックを４０℃で１時間乾燥させて、キャビティの底部に固着した乾燥残留物（約２５０μｇ）が各キャビティ内に得られた。次に、得られたそれぞれ別々の乾燥スティックを乾燥剤と共にホイルバッグに入れ、ホイルバッグを密封した。次に、乾燥スティックと共に密封したバッグを、使用するまで冷蔵庫内において４℃で貯蔵した。
【０１９９】
標準シリーズのＵＨＴ乳中のＢＨＢの調製：
３４．７ｍｇのＢＨＢ−Ｎａ塩を２７５ｍＬのＵＨＴ乳中に溶解させることによって、ＵＨＴ乳中１．０５ｍＭのＢＨＢのストック溶液を調製した。ここで使用したＵＨＴ乳の品質は約０．０５ｍＭのＢＨＢを含有した。
【０２００】
標準シリーズのＵＨＴ乳中のＢＨＢは以下のように調製した。
2015528114.tif 000007
【０２０１】
標準シリーズによるＢＨＢ乾燥スティックの試験：
８個の別々の乾燥スティック（上記の通り）の８個のキャビティに、約２５℃において、ＵＨＴ乳中のＢＨＢ標準のそれぞれを１０μＬ添加した。各ウェル内の乾燥材料が溶解し、しばらくすると、８個の別々のキャビティ内の液体は青みがかった色に変わり始めた。５分のインキュベーション時間の後、青色の強度を視覚的に比較し、色の強度がＢＨＢ濃度に比例することに気付いた。
【０２０２】
実施例２．ＬＤＨ乾燥スティックの調製および試験
含浸溶液Ａの調製：
２６００ｍＬの０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ８．０中に、以下の試薬を１つずつ溶解して、淡黄色の透明な溶液が得られる。
・  ６０．０ｇのβ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（β−ＮＡＤ＋）
・  ３０．０ｇの酢酸Ｌｉ
・  ３．０ｇのＰＥＧ２０．０００
・  ３０．０ｇのスクロース
・  ３０ｍＬのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の５％溶液
・  ３０．０ｇのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
・  ３００ＫＵのアスコルビン酸オキシダーゼ（ＡｍａｎｏからのＡＳＯ−３）
・  ６００ＫＵのジアホラーゼ（Ｕｎｉｔｉｋａ）
・  ３．０ｇのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＴＢ）
【０２０３】
含浸溶液Ｂの調製：
１０８０ｍＬのＤＩ水中に４５０ｇのＴＲＩＳを溶解して、ｐＨ約１２の無色透明な溶液を得た。
【０２０４】
乾燥スティックの調製：
第１のスティックのキャビティに、新たに調製した上記の溶液Ａを８．４μＬ満たした。次に、換気したオーブンにおいてスティックを４０℃で１時間乾燥させて、キャビティの底部に固着した乾燥残留物（約７７０μｇ）がウェル内に得られた。次に、得られた乾燥スティックを乾燥剤と共にホイルバッグに入れ、ホイルバッグを密封した。次に、乾燥スティックと共に密封したバッグを、使用するまで冷蔵庫内において４℃で貯蔵した。
【０２０５】
第２のスティックのキャビティに、新たに調製した上記の溶液Ｂを３．４μＬ満たした。次に、換気したオーブンにおいてスティックを４０℃で１時間乾燥させて、キャビティの底部に小さいペレットとして固着した乾燥残留物（約１ｍｇ）が各ウェル内に得られた。次に、乾燥スティックを乾燥剤と共にホイルバッグに入れ、ホイルバッグを密封した。次に、乾燥スティックと共に密封したバッグを、使用するまで冷蔵庫内において４℃で貯蔵した。
【０２０６】
分割型のＬＤＨ乾燥スティックは、第２の乾燥スティックキャビティからのペレットを第１のスティックのキャビティに添加することによって調製した。
【０２０７】
標準シリーズのＵＨＴ乳中のＬＤＨの調製：
ＵＨＴ乳中１０００Ｕ／ＬのＬＤＨ（ｓｉｇｍａ  Ｌ１３７８）のストック液を調製した。標準シリーズのＵＨＴ乳中のＬＤＨは、以下のように調製した。
2015528114.tif 000008
【０２０８】
標準シリーズによるＬＤＨ乾燥スティックの試験：
上記の８個の別々のＬＤＨ乾燥スティックのキャビティに、約２５℃において、ＵＨＴ乳中のＬＤＨ標準のそれぞれを１０μＬ添加した。各ウェル内の乾燥材料が溶解し、しばらくすると、８個のキャビティ内の液体は青みがかった色に変わり始めた。５分のインキュベーション時間の後、青色の強度を視覚的に比較し、色の強度がＬＤＨ濃度に比例することに気付いた。
【０２０９】
実施例３．新規のＬＤＨ乾燥スティック対従来のＬＤＨ乾燥スティック
リン酸緩衝溶液：２５２０ｍＬのＤＩ水中の８５．９ｇのＮａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏおよび２．１ｇのＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ８．０。
【０２１０】
溶液Ａ：２．６ｍＬのリン酸緩衝溶液、６０．０ｍｇのβ−ＮＡＤ＋、３０．０ｍｇの乳酸Ｌｉ、３．０ｍｇのＰＥＧ  ２０．０００、３０．０ｍｇのスクロース、３０．０ｍｇのＢＳＡ、３００ＵのＡＳＯ−３、６００Ｕのジアホラーゼ、３．０ｍｇのＮＴＢ。
【０２１１】
溶液Ｂ：１．０８ｍＬのＤＩ水を有する４５０ｍｇのＴＲＩＳ（全部で１．４５ｍＬの溶液）。
【０２１２】
溶液Ｃ：３００μＬのＤＩ水中の１．５ｍｇのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００。
【０２１３】
標準シリーズの乳中のＬＤＨ：ＵＨＴ乳．ＬＤＨ  Ｓｉｇｍａ  Ｌ１３７８を添加して標準シリーズ０、５０、１００、２００、３００、４００Ｕ／Ｌを得た。
【０２１４】
スティックフレーム：１９μＬのボックス型ウェル（５．２ｍｍ×５．２ｍｍ×０．７ｍｍ高さ）を有する白色ポリスチレンフレーム。
【０２１５】
（ｉ）従来のＬＤＨ乾燥スティックの調製：
層１：８．５×１０ｃｍ片のＷｈａｔｍａｎ  ３ＭＭＣｈｒろ紙に２．８ｍＬの溶液Ａを含侵させ、乾燥空気換気したオーブンにおいて４０℃で２０分間乾燥させた。
【０２１６】
層２：８．５×１０ｃｍ片のＡｓａｈｉ  ＰＳ−２ワイパーに１．３６ｍＬの溶液Ｂを含侵させ、乾燥空気換気したオーブンにおいて４０℃で１０分間乾燥させた。
【０２１７】
積層：開放構造を有するホットメルトグルー転写テープを使用し、１式のローラーを通過させることにより、乾燥層１および２を互いに積層した。
【０２１８】
切断および取付け：積層材料を５×５ｍｍの正方形に切断し、スティックフレームに取り付けた。
【０２１９】
貯蔵：ＬＤＨ乾燥スティックをホイルバッグ内で乾燥剤と共に４℃において貯蔵した。
【０２２０】
（ｉｉ）新規のＬＤＨ乾燥スティックの調製：
乾燥スティックのウェルの底部に、２滴の２．０μＬの溶液Ａおよび１滴の２．０μＬの溶液Ｂを別々に置いた。乾燥空気換気したオーブン内に乾燥スティックを４０℃で１０分間入れ、３滴の乾燥スポットを有する乾燥スティックが残された。全部で２５本のスティックを同時に調製した。乾燥スティックをホイルバッグ内で乾燥剤と共に４℃で貯蔵した。
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【０２２１】
従って、新規の乾燥スティックは、標準的な乾燥スティックと比べて約１／２の化学しか含有しない。
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【０２２２】
表１１および図９の結果は、新規のＬＤＨ乾燥スティック構築物が、従来のＬＤＨ乾燥スティックとほぼ同じ形状の性能曲線を与えることを示しており、新規の乾燥スティック構築物では約１／２の化学しか使用しなかったので、これは驚くべきことである。
【０２２３】
１５μＬのサンプル添加による結果は、例えば１０μＬから１５μＬへサンプル体積を変化させることによって性能曲線の形状が望ましい方向に影響され得ることを示す。
【０２２４】
参考文献
国際公開第０２／０６９６９７号パンフレット
国際公開第２００４／０１７０６６号パンフレット
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
2015528114.tif 000015
【図３ａ）】
2015528114.tif 000016
【図３ｂ）】
2015528114.tif 000017
【図４ａ）】
2015528114.tif 000018
【図４ｂ）】
2015528114.tif 000019
【図４ｃ）】
2015528114.tif 000020
【図４ｄ）】
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【図５ａ）】
2015528114.tif 000022
【図５ｂ）】
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【図５ｃ）】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【国際調査報告】
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