(57)【要約】  本発明は、（ａ）親リパーゼのリパーゼ変異体であって、配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有し、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を有し、および、リパーゼ活性を有する変異体、ならびに、（ｂ）アニオン性界面活性剤を導入するステップを含む洗剤組成物を得る方法であって、前記組成物が、親リパーゼを含む対応する組成物と比して高い安定性を有する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）親リパーゼのリパーゼ変異体であって、配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有し、前記配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を有し、および、リパーゼ活性を有する変異体、ならびに、（ｂ）アニオン性界面活性剤を導入するステップを含む洗剤組成物を得る方法であって、前記組成物が、前記親リパーゼを含む対応する組成物と比して高い安定性を有する方法。
【請求項２】
前記配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する前記位置における前記アミノ酸置換がＳ、Ｔ、Ｎ、Ｙ、Ｈ、ＬまたはＱである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１種の前記アニオン性界面活性剤が、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分岐アルキルベンゼンスルホネート（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホネート、α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン−２，３−ジイルビス（スルフェート）、ヒドロキシアルカンスルホネートおよびジスルホネート、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアルキルスルフェート（ＡＳ）、脂肪族アルコールスルフェート（ＦＡＳ）、第１級アルコールスルフェート（ＰＡＳ）、アルコールエーテルスルフェート（アルコールエトキシスルフェートまたは脂肪族アルコールエーテルスルフェートとしても公知であるＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ）、第２級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、パラフィンスルホネート（ＰＳ）、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）を含むα−スルホ脂肪酸メチルエステル（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキルコハク酸またはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸のジエステルおよびモノエステル、セッケン、または、これらのいずれかの組み合わせである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記リパーゼ変異体が：
ａ．前記配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；
ｂ．低ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）前記配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列、（ｉｉ）前記（ｉ）の完全長補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；
ｃ．前記配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；および
ｄ．リパーゼ活性を有する前記配列番号２の成熟型ポリペプチドの断片
からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記リパーゼ変異体が、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％であるが、１００％未満の配列同一性を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記リパーゼ変異体が、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件または超高ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）前記配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列または（ｉｉ）前記（ｉ）の完全長補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記置換の数が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０置換などの、例えば１〜１０および１〜５などの１〜２０置換である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記配列番号２の成熟型ポリペプチドの位置Ｎ３３Ｑ、Ｔ２３１Ｒおよび／またはＮ２３３Ｒに対応する１つまたは複数の位置に置換をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記リパーゼ変異体が：
ａ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｂ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｃ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｄ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｓ
ｅ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｆ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｇ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｈ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｉ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｊ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｋ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｔ
ｌ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｍ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｎ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｏ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｐ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｑ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｒ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｎ
ｓ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｔ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｕ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｖ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｗ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｘ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｙ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｙ
ｚ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ａａ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｂｂ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｃｃ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｄｄ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｅｅ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｆｆ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｈ
ｇｇ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｈｈ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｉｉ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｊｊ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｋｋ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｌｌ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｍｍ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｌ
ｎｎ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｏｏ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｐｐ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｑｑ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｒｒ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｓｓ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｔｔ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｑ
ｕｕ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｖｖ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｗｗ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
から選択される置換を含むか、または、置換を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記親リパーゼが、前記配列番号２の成熟型ポリペプチドを含むか、または、前記配列番号２の成熟型ポリペプチドから構成される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物がＣａＣｌ2をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法により得られる洗剤組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の洗剤組成物をクリーニング対象物に散布するステップを含むクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、洗剤組成物およびその入手方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
洗剤組成物は、クリーニング効率を最適化および改善するために常に開発されている。洗剤組成物は、界面活性剤および酵素が含まれる種々の処方成分の複雑な混合物に基づいている。しかしながら、リパーゼは、通常、アニオン性界面活性剤の存在下では不安定であり、これにより、組成物の安定性に影響を及ぼしてしまう。それ故、アニオン性界面活性剤とリパーゼの両方を含む安定性が向上した洗剤組成物を得ることが望まれている。
【０００３】
国際公開第９２／０５２４９号パンフレットは、向上した特性を有するテルモマイセスラヌギノスス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）のリパーゼ変異体に関する。この文献には、変異体がアミノ酸位置Ｄ２５４における置換を含み得ると記載されているが、アニオン性界面活性剤を含む安定化された洗剤組成物を提供するために用いられ得る安定な変異体を入手するためにこの特定の位置が重要であることは示されておらず、明示もされていない。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、（ａ）親リパーゼのリパーゼ変異体であって、配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有し、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を有し、および、リパーゼ活性を有する変異体、ならびに、（ｂ）アニオン性界面活性剤を導入するステップを含む洗剤組成物を得る方法であって、前記組成物が、親リパーゼを含む対応する組成物と比して高い安定性を有する方法に関する。
【０００５】
定義
リパーゼ：「リパーゼ」または「脂肪分解酵素」または「脂質エステラーゼ」という用語は、酵素命名法により定義されるクラスＥＣ３．１，１中の酵素である。これは、リパーゼ活性（トリアシルグリセロールリパーゼ、ＥＣ３．１．１．３）、クチナーゼ活性（ＥＣ３．１．１．７４）、ステロールエステラーゼ活性（ＥＣ３．１．１．１３）および／またはワックス−エステルヒドロラーゼ活性（ＥＣ３．１．１．５０）を有していてもよい。本発明の目的に関して、リパーゼ活性は、実施例において記載されている手法に従って判定される。一態様において、本発明の変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの少なくとも２０％、例えば、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも１００％のリパーゼ活性を有する。
【０００６】
突然変異体：「突然変異体」という用語は、同一の染色体座を占める遺伝子の２つ以上の代替形態のいずれかを意味する。突然変異体は突然変異を介して自然に生じ、個体群において多型性をもたらし得る。遺伝子突然変異は、非表現性（コードされるポリペプチドに変化無し）であることが可能であり、または、異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドがコードされ得る。ポリペプチドの突然変異体は、遺伝子の突然変異体によってコードされたポリペプチドである。
【０００７】
ｃＤＮＡ：「ｃＤＮＡ」という用語は、真核細胞または原核細胞から得られたスプライスされた成熟ｍＲＮＡ分子から逆転写によって調製可能であるＤＮＡ分子を意味する。ｃＤＮＡは、対応するゲノムＤＮＡ中に存在し得るイントロン配列を欠いている。元の一次ＲＮＡ転写物は、スプライスされた成熟ｍＲＮＡとして出現する前にスプライシングを含む一連のステップを介して処理されるｍＲＮＡに対する前駆体である。
【０００８】
コード配列：「コード配列」という用語は、変異体のアミノ酸配列を直接特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、一般にオープンリーディングフレームによって判定され、ＡＴＧ、ＧＴＧまたはＴＴＧなどの開始コドンで始まり、ＴＡＡ、ＴＡＧまたはＴＧＡなどの終止コドンで終わる。コード配列は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡまたはこれらの組み合わせであり得る。
【０００９】
制御配列：「制御配列」という用語は、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドの発現に必要な核酸配列を意味する。各制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドに対して自生（すなわち同じ遺伝子由来）であっても外来性（すなわち異なる遺伝子由来）であってもよく、または、相互に自生であっても外来性であってもよい。このような制御配列としては、これらに限定されないが、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、および、転写ターミネータが挙げられる。制御配列としては、プロモータ、ならびに、転写および翻訳停止シグナルが最低限挙げられる。制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドのコード領域との制御配列の連結反応を促進させる特定の制限部位を導入するために、リンカーと共に提供され得る。
【００１０】
発現：「発現」という用語は、変異体の生成に関与するいずれかのステップを含み、特にこれらに限定されないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾および分泌が挙げられる。
【００１１】
発現ベクター：「発現ベクター」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを含み、また、発現をもたらす制御配列に作動可能に結合している直線状または環状のＤＮＡ分子を意味する。
【００１２】
断片：「断片」という用語は、成熟型ポリペプチドのアミノおよび／またはカルボキシル末端から欠失された１つまたは複数（例えばいくつか）のアミノ酸を有するポリペプチドを意味し；ここで、断片はリパーゼ活性を有する。一態様において、断片は、成熟型ポリペプチドのアミノ酸の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％および少なくとも９５％の数のアミノ酸を含有する。
【００１３】
高ストリンジェンシー条件：「高ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、５０％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて６５℃で３回洗浄される。
【００１４】
宿主細胞：「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物または発現ベクターを伴う形質転換、形質移入、形質導入または類似のものに対する感受性を有するいずれかの細胞タイプを意味する。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異によって親細胞とは異なっている親細胞のいずれかの子孫を包含する。
【００１５】
向上した特性：「向上した特性」という用語は、親と比して向上した変異体に関連する特徴を意味する。このような向上した特性としては、これらに限定されないが、化学安定性、酸化安定性、ｐＨ安定性、保管条件下での安定性、界面活性剤および界面活性剤ミセルに対する安定性、ならびに、熱安定性が挙げられる。
【００１６】
単離された：「単離された」という用語は、自然界においては生じない形態または環境にある物質を意味する。単離された物質の非限定的な例としては、（１）いずれかの非天然物質、（２）特にこれらに限定されないが、自然界において関連している天然構成成分の１種以上もしくはすべてが少なくとも部分的に除去されたいずれかの酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチドもしくは補助因子を含むいずれかの物質；（３）自然界において見出される物質と相対的に人工的に修飾されたいずれかの物質；または、（４）自然界において関連している他の成分に対する物質の量を増やすことにより修飾されたいずれかの物質（例えば、物質をコードする遺伝子の複数のコピー；物質をコードする遺伝子と自然界で関連しているプロモータより強力なプロモータの使用）が挙げられる。単離された物質は、発酵液体培地サンプル中に存在し得る。
【００１７】
低ストリンジェンシー条件：「低ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、２５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて５０℃で３回洗浄される。
【００１８】
成熟ポリペプチド：「成熟ポリペプチド」という用語は、Ｎ−末端処理、Ｃ−末端切断、グリコシル化、リン酸化等などの、翻訳および任意の翻訳後修飾の後におけるその最終形態でのポリペプチドを意味する。一態様において、成熟ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸１〜２６９である。
【００１９】
成熟型ポリペプチドコード配列：「成熟型ポリペプチドコード配列」という用語は、リパーゼ活性を有する成熟型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は、配列番号１のヌクレオチド６７〜８７３である。
【００２０】
中ストリンジェンシー条件：「中ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、３５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて５５℃で３回洗浄される。
【００２１】
中−高ストリンジェンシー条件：「中−高ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、３５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて６０℃で３回洗浄される。
【００２２】
ミュータント：「ミュータント」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００２３】
核酸構築物：「核酸構築物」という用語は、一本鎖もしくは二本鎖である核酸分子を意味し、これは、天然遺伝子から単離されるか、または、本来自然には存在し得ないような核酸のセグメント、もしくは、合成された、１つまたは複数の制御配列を含む核酸のセグメントを含有するよう修飾されている。
【００２４】
作動可能に結合：「作動可能に結合」という用語は、制御配列がコード配列の発現をもたらすよう、ポリヌクレオチドのコード配列と比して制御配列が適切な位置に位置されている構成を意味する。
【００２５】
親または親リパーゼ：「親」または「親リパーゼ」という用語は、本発明の酵素変異体をもたらすために置換が行われるリパーゼを意味する。親は、天然の（野生型）ポリペプチドまたはその変異体もしくは断片であり得る。
【００２６】
配列同一性：２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の関連性が、「配列同一性」というパラメータによって記載される。
【００２７】
本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、好ましくはバージョン５．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実装されている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳボージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等の残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
【００２８】
本発明の目的のために、２つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳ  ｐａｃｋａｇｅ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，ｓｕｐｒａ）、好ましくはバージョン５．０．０以降のＮｅｅｄｌｅ  ｐｒｏｇｒａｍに実装されているＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，ｓｕｐｒａ）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティ、および、ＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ  ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
（同等のデオキシリボヌクレオチド×１００）／（アライメントの長さ−アライメントにおけるギャップの総数）
【００２９】
サブ配列：「サブ配列」という用語は、成熟型ポリペプチドコード配列の５’および／または３’末端から欠失された１つまたは複数（例えばいくつか）のヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを意味し；ここで、サブ配列は、リパーゼ活性を有する断片をコードする。一態様において、サブ配列は、成熟型ポリペプチドをコードするヌクレオチドの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％および少なくとも９５％の数のヌクレオチドを含有する。
【００３０】
変異体：「変異体」という用語は、１つまたは複数（例えばいくつか）の位置で置換を含む、リパーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換とは、ある位置に存在するアミノ酸と異なるアミノ酸との置き換えを意味する。本発明の変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも１００％のリパーゼ活性を有する。
【００３１】
超高ストリンジェンシー条件：「超高ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、５０％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて７０℃で３回洗浄される。
【００３２】
超低ストリンジェンシー条件：「超低ストリンジェンシー条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブについて、５×ＳＳＰＥにおける４２℃、０．３％  ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片化および修飾サケ精子ＤＮＡ、ならびに、２５％ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーション、これに続く、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法を意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％  ＳＤＳを用いて、１５分間ずつかけて４５℃で３回洗浄される。
【００３３】
野生型リパーゼ：「野生型」リパーゼという用語は、自然界において見出されるバクテリア、イースト菌または糸状菌などの天然の微生物によって発現されるリパーゼを意味する。
【００３４】
従来の変異体の決定
本発明の目的のために、配列番号２において開示されている成熟型ポリペプチドが、他のリパーゼにおける対応するアミノ酸残渣の決定に用いられる。他のリパーゼのアミノ酸配列が配列番号２に開示される成熟ポリペプチドと共にアラインされ、アライメントに基づいて、配列番号２において開示されている成熟ポリペプチド中の任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号が、ＥＭＢＯＳＳ  ｐａｃｋａｇｅ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）、好ましくはバージョン５．０．０以降のＮｅｅｄｌｅ  ｐｒｏｇｒａｍに実装されているＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティ、および、ＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。
【００３５】
他のリパーゼにおける対応するアミノ酸残基の同定は、特にこれらに限定されないが、ＭＵＳＣＬＥ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｙ  ｌｏｇ‐ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ；バージョン３．５以降；Ｅｄｇａｒ，２００４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２：１７９２−１７９７）、ＭＡＦＦＴ（バージョン６．８５７以降；Ｋａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｋｕｍａ，２００２，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３０：３０５９−３０６６；Ｋａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３３：５１１−５１８；Ｋａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｔｏｈ，２００７，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２３：３７２−３７４；Ｋａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５３７：３９−６４；Ｋａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｔｏｈ，２０１０，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２６：１８９９−１９００）、および、ＣｌｕｓｔａｌＷを採用するＥＭＢＯＳＳ  ＥＭＭＡ（１．８３以降；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２：４６７３−４６８０）を含むいくつかのコンピュータプログラムを、それぞれのデフォルトパラメータで用いることによる複数のポリペプチド配列のアライメントにより判定可能である。
【００３６】
配列番号２の成熟型ポリペプチドから他の酵素が分化して、従来からの配列に基づく比較による関係の検出ができない場合（Ｌｉｎｄａｈｌ  ａｎｄ  Ｅｌｏｆｓｓｏｎ，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９５：６１３−６１５）、他の対配列比較アルゴリズムを用いることが可能である。配列に基づくサーチにおける感度は、データベースのサーチにポリペプチドファミリー（プロファイル）の確率表現を利用するサーチプログラムを用いることで高めることが可能である。例えば、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムは、反復データベースサーチプロセスを介してプロファイルを生成し、離れた相同体を検出することが可能である（Ａｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）。ポリペプチドに係るファミリーまたはスーパーファミリーがタンパク質構造データベースにおいて１つまたは複数の表現を有する場合には、感度をさらに高めることが可能である。ＧｅｎＴＨＲＥＡＤＥＲ（Ｊｏｎｅｓ，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：７９７−８１５；ＭｃＧｕｆｆｉｎ  ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ，２００３，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １９：８７４−８８１）などのプログラムは、問い合わせ配列に係るフォールド構造を予想するニューラルネットワークに対する入力として、多様なソース（ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ、二次構造予測、構造アラインメントプロファイルおよび溶媒和ポテンシャル）からの情報を利用する。同様に、Ｇｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１３：９０３−９１９による方法が、未知の構造の配列とＳＣＯＰデータベースに存在するスーパーファミリーモデルとのアラインに用いられることが可能である。次いで、これらのアラインメントを用いてポリペプチドに係る相同性モデルを生成することが可能であり、このようなモデルは、その目的のために開発された多様なツールを用いて正確に評価可能である。
【００３７】
公知の構造のタンパク質に関して、数々のツールおよびリソースが、構造アラインメントの検索および生成のために使用可能である。例えばタンパク質のＳＣＯＰスーパーファミリーが構造的にアラインされており、これらのアラインメントはアクセスおよびダウンロードが可能である。２つ以上のタンパク質構造は距離アラインメントマトリックス（Ｈｏｌｍ  ａｎｄ  Ｓａｎｄｅｒ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ３３：８８−９６）または組み合わせ拡張法（Ｓｈｉｎｄｙａｌｏｖ  ａｎｄ  Ｂｏｕｒｎｅ，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １１：７３９−７４７）などの多様なアルゴリズムを用いてアラインすることが可能であり、これらのアルゴリズムを、可能性のある構造相同体を発見するために、対象の構造と共に問い合わせ構造データベースに対して追加的に実行することが可能である（例えば、Ｈｏｌｍ  ａｎｄ  Ｐａｒｋ，２０００，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：５６６−５６７）。
【００３８】
本発明の変異体の記載において、以下の命名法が参照を容易とするために採用される。公認されているＩＵＰＡＣの１文字または３文字のアミノ酸略記が利用されている。
【００３９】
置換．アミノ酸置換に関しては以下の命名法が用いられている：元のアミノ酸、位置、置換されたアミノ酸。従って、位置２２６でのスレオニンのアラニンでの置換は、「Ｔｈｒ２２６Ａｌａ」または「Ｔ２２６Ａ」と示される。複数の突然変異は加算記号（「＋」）によって分けられており、例えば、「Ｇｌｙ２０５Ａｒｇ＋Ｓｅｒ４１１Ｐｈｅ」または「Ｇ２０５Ｒ＋Ｓ４１１Ｆ」とされ、それぞれ、グリシン（Ｇ）のアルギニン（Ｒ）による、および、セリン（Ｓ）のフェニルアラニン（Ｆ）による位置２０５および４１１での置換が表されている。
【００４０】
複数の置換。複数の置換を含む変異体は記号（「＋」）を加えることで区分されており、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ＋Ｇｌｙ１９５Ｇｌｕ」または「Ｒ１７０Ｙ＋Ｇ１９５Ｅ」は、それぞれ、位置１７０および１９５におけるチロシンおよびグルタミン酸によるアルギニンおよびグリシンの置換を表す。
【００４１】
異なる置換。１つの位置に異なる置換を導入することが可能である場合、異なる置換はコンマによって区分されており、例えば、「Ａｒｇ１７０Ｔｙｒ，Ｇｌｕ」は、位置１７０におけるチロシンまたはグルタミン酸によるアルギニンの置換を表す。それ故、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ，Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ，Ａｌａ」は、以下の変異体を示す：「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」、「Ｔｙｒ１６７Ｇｌｙ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」、「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ｇｌｙ」および「Ｔｙｒ１６７Ａｌａ＋Ａｒｇ１７０Ａｌａ」。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
発明の詳細な説明
本発明は、配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有する親リパーゼから誘導されたリパーゼ変異体に関し、この変異体は、リパーゼ活性を有すると共に、親リパーゼと比して、少なくとも１種のアニオン性界面活性剤を含む洗剤組成物を得るために配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を含み、この組成物は、親リパーゼを含む対応する組成物と比してより安定である。
【００４３】
さらに、本発明は、洗剤組成物、および、これを入手する方法を提供する。
【００４４】
変異体
一実施形態において、変異体は、配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有する親リパーゼから誘導されたリパーゼ変異体であり、この変異体は、リパーゼ活性を有すると共に、親リパーゼと比して、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を含むと共に、親リパーゼと比して、アニオン性界面活性剤の存在下でより安定である。
【００４５】
一実施形態において、変異体は、親リパーゼのアミノ酸配列に対して、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％であるが、１００％未満などの少なくとも６０％の配列同一性を有する。
【００４６】
他の実施形態において、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％であって、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％であるが、１００％未満などの配列同一性を有する。
【００４７】
一態様において、本発明の変異体中の置換の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個などの例えば、１〜１０および１〜５などの１〜２０個の置換である。
【００４８】
他の態様において、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの２５４に対応する位置に置換を含む。他の態様において、変異体は、位置２５４と、位置３３、２３１および２３３のいずれかとに対応する２つの位置において置換を含む。他の態様において、変異体は、２５４と、位置３３、２３１および２３３のいずれかとに対応する３つの位置において置換を含む。他の態様において、変異体は、位置２２、２３１、２３３および２５４に対応する位置の各々において置換を含む。
【００４９】
他の態様において、変異体は、位置２５４に対応する位置における置換を含むか、または、この置換から構成される。他の態様においては、位置２５４に対応する位置におけるアミノ酸が、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌで置換される。他の態様において、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの置換Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，Ｑを含むか、または、これから構成される。
【００５０】
他の態様において、変異体はさらに、位置３３に対応する位置における置換を含むか、または、この置換から構成される。他の態様においては、位置３３に対応する位置におけるアミノ酸が、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌで置換される。他の態様において、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの置換Ｎ３３Ｑを含む。
【００５１】
他の態様において、変異体はさらに、位置２３１に対応する位置における置換を含むか、または、この置換から構成される。他の態様においては、位置２３１に対応する位置におけるアミノ酸が、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌで置換される。他の態様において、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの置換Ｔ２３１Ｒを含む。
【００５２】
他の態様において、変異体はさらに、位置２３３に対応する位置における置換を含むか、または、この置換から構成される。他の態様においては、位置２３３に対応する位置におけるアミノ酸が、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌで置換される。他の態様において、変異体は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの置換Ｎ２３３Ｒを含む。
【００５３】
他の態様において、変異体は、上記のものなどの、位置Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，ＱおよびＮ３３Ｑに対応する位置において、置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００５４】
他の態様において、変異体は、上記のものなどの、位置Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，ＱおよびＴ２３１Ｒに対応する位置において、置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００５５】
他の態様において、変異体は、上記のものなどの、位置Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，ＱおよびＮ２３３Ｒに対応する位置において、置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００５６】
他の態様において、変異体は、上記のものなどの、位置Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，Ｑ、Ｎ３３ＱおよびＴ２３１Ｒに対応する位置において、置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００５７】
他の態様において、変異体は、上記のものなどの、位置Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，Ｑ、Ｎ３３ＱおよびＮ２３３Ｒに対応する位置において、置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００５８】
他の態様において、変異体は、上記のものなどの、位置Ｄ２５４Ｓ，Ｔ，Ｎ，Ｙ，Ｈ，Ｌ，Ｑ、Ｎ３３Ｑ、Ｔ２３１ＲおよびＮ２３３Ｒに対応する位置において、置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００５９】
変異体は、１つまたは複数（例えばいくつか）の他の位置において、１つまたは複数の追加の置換をさらに含んでいてもよい。
【００６０】
他の態様において、変異体は：Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ；Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ；Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ；Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｑ；Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ；Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ；または、Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑから選択される置換を含むか、または、この置換から構成される。
【００６１】
アミノ酸の変更は軽微なものであり得、すなわち、タンパク質の折り畳みおよび／または活性に顕著に影響しない保存的アミノ酸置換または挿入；典型的には１〜３０アミノ酸の微小な欠失；アミノ末端メチオニン残基などの微小なアミノ−またはカルボキシル−末端延伸；２０〜２５残基以下の小リンカーペプチド；または、正味の電荷または他の機能を変えることにより精製を容易とする、ポリヒスチジン配列、抗原エピトープもしくは結合ドメインなどの微小な延伸であり得る。
【００６２】
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リシンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、ならびに、低分子アミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、スレオニンおよびメチオニン）の群に含まれるものによる。一般に比活性を変化させないアミノ酸置換は技術分野において公知であり、例えば、Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，１９７９，Ｉｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。一般的な置換は、Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／ＧｌｕおよびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
【００６３】
あるいは、アミノ酸の変更は、ポリペプチドの物理化学的特性を変化させるようなものである。例えば、アミノ酸の変更は、ポリペプチドの熱安定性を向上させ、基質特異性を変化させ、最適なｐＨを変化させたりし得る。
【００６４】
ポリペプチド中の必須アミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニンスキャニング突然変異誘発などの技術分野において公知である手法に準拠して同定することが可能である（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５）。後者の技術においては、単一のアラニン突然変異が分子中のすべての残基に導入され、得られるミュータント分子は、分子の活性に重要であるアミノ酸残基を同定するためにリパーゼ活性についてテストされる。また、Ｈｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８を参照のこと。酵素の活性部位または他の生物学的相互作用はまた、推定される接触部位アミノ酸の突然変異との組み合わせにより、核磁気共嗚、結晶構造解析、電子回折、または、光親和性標識などの技術によって測定される構造の物理的分析によって判定可能である。例えば、ｄｅ  Ｖｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；Ｗｌｏｄａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３０９：５９−６４を参照のこと。必須アミノ酸の同一性はまた、関連するポリペプチドとのアライメントから推定可能である。
【００６５】
変異体は、例えば、２００〜４００、２５０〜３５０、および、約３００個のアミノ酸などの１５０〜４５０個のアミノ酸から構成され得る。
【００６６】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、向上した化学安定性を有する。
【００６７】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、向上した酸化安定性を有する。
【００６８】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、向上したｐＨ安定性を有する。
【００６９】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、保管条件下で向上した安定性を有する。
【００７０】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、界面活性剤に対して向上した安定性を有する。
【００７１】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、向上した基質安定性を有する。
【００７２】
一実施形態において、変異体は、親酵素と比して、向上した熱安定性を有する。
【００７３】
親リパーゼ
親リパーゼは、（ａ）配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；（ｂ）低ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列、もしくは、（ｉｉ）（ｉ）の完全長補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；または、（ｃ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドであり得る。
【００７４】
一態様において、親は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のリパーゼ活性を有する配列番号２の成熟型ポリペプチドに対する配列同一性を有する。一態様において、親のアミノ酸配列と、配列番号２の成熟型ポリペプチドとの差異は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８または９個などの１０個以下のアミノ酸である。
【００７５】
他の態様において、親は、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、または、これらから構成される。他の態様において、親は、配列番号２の成熟型ポリペプチドを含むか、または、これらから構成される。他の態様において、親は、配列番号２の１〜２６９のアミノ酸を含むか、または、これらから構成される。
【００７６】
他の態様において、親は、配列番号２の成熟型ポリペプチドのアミノ酸の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の数のアミノ酸を含有する断片である。
【００７７】
他の実施形態において、親は、配列番号２の成熟型ポリペプチドの対立変異体である。
【００７８】
他の態様において、親は、超低ストリンジェンシー条件、低ストリンジェンシー条件、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、または、超高ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列、または、（ｉｉ）（ｉ）もしくは（ｉｉ）の完全長補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【００７９】
配列番号１のポリヌクレオチドまたはそのサブ配列、ならびに、配列番号２のポリペプチドまたはその断片は、技術分野において周知である方法に従って異なる属もしくは種の菌株から親をコードするＤＮＡを同定およびクローン化するよう核酸プローブを設計するために用いられ得る。特に、このようなプローブは、その対応する遺伝子を同定および単離ために、標準的なサザンブロッティング法に続いて、対象細胞のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを伴うハイブリダイゼーションのために用いられることが可能である。このようなプローブは、配列全体よりもかなり短いことが可能であるが、少なくとも１５、例えば、少なくとも２５、少なくとも３５または少なくとも７０ヌクレオチドの長さであるべきである。好ましくは、核酸プローブは、例えば、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも３００ヌクレオチド、少なくとも４００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも６００ヌクレオチド、少なくとも７００ヌクレオチド、少なくとも８００ヌクレオチドまたは少なくとも９００ヌクレオチドの長さなどの、少なくとも１００ヌクレオチドの長さである。ＤＮＡおよびＲＮＡプローブの両方が用いられることが可能である。プローブは、典型的には、対応する遺伝子を検出するために標識化される（例えば、32Ｐ、3Ｈ、35Ｓ、ビオチンまたはアビジンで）。このようなプローブは本発明によって包含される。
【００８０】
このような他の株から調製したゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡライブラリは、上記のプローブとハイブリダイズし、親をコードするＤＮＡについてスクリーニングされ得る。このような他の株由来のゲノムまたは他のＤＮＡは、アガロースもしくはポリアクリルアミドゲル電気泳動、または、他の分離技術によって分離され得る。ライブラリからのＤＮＡまたは分離されたＤＮＡは、ニトロセルロースまたは他の好適なキャリア材料に移されて固定され得る。配列番号１またはそのサブ配列とハイブリダイズするクローンまたはＤＮＡを同定するために、キャリア材料がサザンブロッティングにおいて用いられる。
【００８１】
本発明の目的のために、ハイブリダイゼーションは、ポリヌクレオチドが、（ｉ）配列番号１；（ｉｉ）配列番号１の成熟ポリペプチドコード配列；（ｉｉｉ）これらの完全長補体；または、（ｉｖ）これらのサブ配列に対応する標識化核酸プローブと、超低〜超高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることを示す。これらの条件下で核酸プローブがハイブリダイズする分子は、例えば、Ｘ線フィルム、または、技術分野において公知であるいずれかの他の検出手段を用いて検出が可能である。
【００８２】
一態様において、核酸プローブは、配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列である。他の態様において、核酸プローブは、配列番号１の６７〜８７３のヌクレオチドである。他の態様において、核酸プローブは、配列番号２のポリペプチド；その成熟型ポリペプチド；または、その断片をコードするポリヌクレオチドである。他の態様において、核酸プローブは配列番号１である。
【００８３】
他の実施形態において、親は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対する配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。
【００８４】
ポリペプチドは、あるポリペプチドの領域が他のポリペプチドの領域のＮ末端またはＣ末端で融合したハイブリッドポリペプチドであり得る。
【００８５】
親は、他のポリペプチドが本発明のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合した融合ポリペプチドまたは切断可能な融合ポリペプチドであり得る。融合ポリペプチドは、他のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを本発明のポリヌクレオチドに融合させることにより生成される。融合ポリペプチドを生成する技術は技術分野において公知であり、フレーム中にあるよう、また、融合ポリペプチドの発現が同一のプロモータおよびターミネータの制御下にあるよう、ポリペプチドをコードするコード配列を結合するステップが含まれる。融合ポリペプチドはまた、融合ポリペプチドが翻訳後に形成されるインテインテクノロジーを用いて構築され得る（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：２５７５−２５８３；Ｄａｗｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：７７６−７７９）。
【００８６】
融合ポリペプチドは、２つのポリペプチド間に切断部位をさらに含んでいることが可能である。融合タンパク質を分泌すると、この部位が切断されて、２つのポリペプチドが放出される。切断部位の例としては、これらに限定されないが、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：５６８−５７６；Ｓｖｅｔｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７６：２４５−２５１；Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６３：３４８８−３４９３；Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：４９８−５０３；および、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：３７８−３８１；Ｅａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５：５０５−５１２；Ｃｏｌｌｉｎｓ−Ｒａｃｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：９８２−９８７；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６：２４０−２４８；および、Ｓｔｅｖｅｎｓ，２００３，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｌｄ  ４：３５−４８において開示されている部位が挙げられる。
【００８７】
親は、すべての種類の微生物から得られてもよい。本発明の目的のために、「〜から得られる」という用語は、本明細書において用いられるところ、所与のソースに関連して、ポリヌクレオチドによってコードされる親は、ソースによって生成されるか、または、ソースからのポリヌクレオチドが挿入された系統によって生成されることを意味すべきである。一態様において、親は、細胞外で分泌される。
【００８８】
親は、細菌性リパーゼであり得る。例えば、親は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）もしくはストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）リパーゼなどのグラム陽性細菌性ポリペプチド、または、カムピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ネイッセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）もしくはウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）リパーゼなどのグラム陰性細菌性ポリペプチドであり得る。
【００８９】
一態様において、親は、バチルスアルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルスブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチルスシルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスクラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルスコアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バシラスフィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチルスラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｕｔｕｓ）、バチルスレンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルスメガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルスプミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルスステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、またはバチルスチューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）リパーゼである。
【００９０】
他の態様において、親は、ストレプトコッカスエクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカスウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｕｂｅｒｉｓ）またはストレプトコッカスズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）リパーゼである。
【００９１】
他の態様において、親は、ストレプトマイセスアウロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトマイセスアベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセスコエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトマイセスグリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）またはストレプトマイセスリビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ）リパーゼである。
【００９２】
親は、真菌性リパーゼであり得る。例えば、親は、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）もしくはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）リパーゼなどのイースト菌リパーゼ；または、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アガリクス属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、アウレオバシジウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ボトリオスペリア属（Ｂｏｔｒｙｏｓｐａｅｒｉａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、ケトミジウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｄｉｕｍ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、クラビセプス属（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ）、コクリオボルス属（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ）、コプリノプシス属（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ）、コプトテルメス属（Ｃｏｐｔｏｔｅｒｍｅｓ）、コリナスクス属（Ｃｏｒｙｎａｓｃｕｓ）、クリホネクトリア属（Ｃｒｙｐｈｏｎｅｃｔｒｉａ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジプロディア属（Ｄｉｐｌｏｄｉａ）、エクシディア属（Ｅｘｉｄｉａ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、ギベレラ属（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）、ホロマスチゴトイデス属（Ｈｏｌｏｍａｓｔｉｇｏｔｏｉｄｅｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、イルペクス属（Ｉｒｐｅｘ）、レンチヌラ属（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ）、レプトスパエリア属（Ｌｅｐｔｏｓｐａｅｒｉａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、メラノカルプス属（Ｍｅｌａｎｏｃａｒｐｕｓ）、メリピルス属（Ｍｅｒｉｐｉｌｕｓ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスチクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロケーテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、ピロマイセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、ポイトラシア属（Ｐｏｉｔｒａｓｉａ）、シュードプレクタニア属（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｃｔａｎｉａ）、シュードトリコニムファ属（Ｐｓｅｕｄｏｔｒｉｃｈｏｎｙｍｐｈａ）、リゾムコール属（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）、シゾフィルム属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、シタリジウム属（Ｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、テルモアスクス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、トリコファエア属（Ｔｒｉｃｈｏｐｈａｅａ）、ベルチシリウム属（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ボルバリエラ属（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ）もしくはキシラリア属（Ｘｙｌａｒｉａ）リパーゼなどの糸状菌性リパーゼであり得る。
【００９３】
他の態様において、親は、サッカロマイセスカルスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセスジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロマイセスドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロマイセスクルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロマイセスノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）またはサッカロマイセスオビホルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）リパーゼである。
【００９４】
他の態様において、親は、アクレモニウムセルロリチクス（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）、アスペルギルスアクレアツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）、アスペルギルスアワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルスフォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルスフミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルスジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルスニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クリソスポリウムイノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウムケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウムルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウムメルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウムパンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウムクイーンスランジクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウムトロピクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウムゾナツム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｚｏｎａｔｕｍ）、フザリウムバクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムセレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウムクロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウムクルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム  グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウムグラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウムヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム  オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウムレチクランツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム  ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウムサムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウムサルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウムスポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムスルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウムトルロスム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウムトリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウムベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラグリセア（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｇｒｉｓｅａ）、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、イルペクスラクテウス（Ｉｒｐｅｘ  ｌａｃｔｅｕｓ）、ムコールミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウムフニクロスム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）、ペニシリウムプルプロゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロケーテクリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ  ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、チエラビアアクロマチカ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｃｈｒｏｍａｔｉｃａ）、チエラビアアルボミセス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｌｂｏｍｙｃｅｓ）、チエラビアアルボピロサ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｌｂｏｐｉｌｏｓａ）、チエラビアアウストラレインシス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ａｕｓｔｒａｌｅｉｎｓｉｓ）、チエラビアフィメティ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｆｉｍｅｔｉ）、チエラビアミクロスポラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）、チエラビアオビスポラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｏｖｉｓｐｏｒａ）、チエラビアペルビアナ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｐｅｒｕｖｉａｎａ）、チエラビアセトサ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｅｔｏｓａ）、チエラビアスペデドニウム（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｐｅｄｅｄｏｎｉｕｍ）、チエラビアスブテルモフィラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｓｕｂｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、チエラビアテルレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トリコデルマハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマコニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマレエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、またはトリコデルマビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｉｄｅ）リパーゼである。
【００９５】
他の態様において、親は、フミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼ、例えば、配列番号２のリパーゼまたはその成熟型ポリペプチドである。
【００９６】
前述の種について、本発明は、知られている種の名称に関わらず、完全および不完全世代、ならびに、例えば無性世代などの他の分類学上の均等物の両方を含むことが理解されるであろう。当業者は、適切な均等物の同一性を容易に認識するであろう。
【００９７】
これらの種の系統は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ：Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）、オランダ微生物株保存センター（ＣＢＳ：Ｃｅｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ  Ｖｏｏｒ  Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ）、および、農業研究局特許培養物コレクション（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、北方リサーチセンター（ＮＲＲＬ：Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）などの多数の微生物保存機関において公共に容易に利用可能である。
【００９８】
親は、上記のプローブを用いて、自然（例えば、汚染物、コンポスト、水等）から単離された微生物、または、天然材料（例えば、汚染物、コンポスト、水等）から直接的に得られたＤＮＡサンプルを含む他のソースから同定および得られ得る。微生物およびＤＮＡを自然環境から直接的に単離する技術は技術分野において周知である。次いで、親をコードするポリヌクレオチドは、他の微生物または混合ＤＮＡサンプルのゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡライブラリを同じようにスクリーニングすることにより得られ得る。一旦、親をコードするポリヌクレオチドがプローブで検出されたら、ポリヌクレオチドは、当業者に公知の技術（例えば、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９を参照のこと）を利用することにより単離またはクローン化され得る。
【００９９】
組成物
一実施形態において、本発明は、１種または複数種の追加のクリーニング組成物コンポーネントと組み合わされて、リパーゼ変異体を含む洗剤組成物に関する。追加の成分の選択は、当業者の技能の範囲内であり、以下に記載される例示的な非限定的な成分を含む従来の処方成分が含まれる。
【０１００】
成分の選択には、洗濯用途に関して、クリーニングされる繊維の種類、汚染物の種類および／または程度、クリーニングを行う温度、ならびに、洗剤生成物の配合物の検討が含まれ得る。以下に記載の成分は特定の官能基に従う一般的なヘッダによって分類されるが、これは限定として解釈されるべきではなく、当業者に認識されるであろうとおり追加の官能基が成分中に含まれていてもよい。
【０１０１】
酵素
本発明の一実施形態において、リパーゼ変異体は、０．０１〜１００；０．００５〜５０；０．０１〜２５；０．０５〜１０；０．０５〜５；または、０．０１〜１ｍｇのタンパク質／洗浄液１リットルなどの０．００１〜１００ｍｇのタンパク質／洗浄液１リットルに対応する量で洗剤組成物に添加され得る。同様に、リパーゼ変異体は、０．０１〜１０００；０．００５〜５００；０．０１〜２５０；０．０５〜１００；０．０５〜５０；０．０１〜１０；または０．０２〜２ｍｇのタンパク質／洗剤１ｇなどの０．００１〜１０００ｍｇのタンパク質／洗剤１ｇに対応する量で洗剤組成物に添加され得る。
【０１０２】
洗剤組成物は、タンパク分解酵素、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼなどの、例えばラッカーゼおよび／またはペルオキダーゼなどの１種または複数種の追加の酵素をさらに含んでいてもよい。
【０１０３】
普通、含まれるすべての酵素、すなわちリパーゼ変異体、ならびに、追加の酵素の両方の特性は、選択される洗剤と適合性であるべきであり（すなわち、ｐＨが最適であり、他の酵素成分および非酵素成分等と親和性である）、また、酵素は、有効量で存在しているべきである。本発明の一実施形態において、酵素は、０．０１〜１００；０．００５〜５０；０．０１〜２５；０．０５〜１０；０．０５〜５；または、０．０１〜１ｍｇのタンパク質／洗浄液１リットルなどの０．００１〜１００ｍｇのタンパク質／洗浄液１リットルに対応する量で洗剤組成物に添加され得る。同様に、酵素は、０．０１〜１０００；０．００５〜５００；０．０１〜２５０；０．０５〜１００；０．０５〜５０；０．０１〜１０；または０．０２〜２ｍｇのタンパク質／洗剤１ｇなどの０．００１〜１０００ｍｇのタンパク質／洗剤１ｇに対応する量で洗剤組成物に添加され得る。
【０１０４】
酵素は、従来の安定化剤、例えば、プロピレングリコール（１，２−プロパンジオール）、グリセロール、ソルビトール、ヘキシレングリコール、糖質もしくは糖アルコールなどのポリオール、乳酸、硼酸、または、硼酸誘導体、例えば、芳香族ホウ酸エステル、または、４−ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体、または、ペプチドアルデヒド；好ましくは、トリ−もしくはテトラペプチドアルデヒド、場合によりそのヒドロ亜硫酸塩付加物、および、例えば、国際公開第９２／１９７０９号パンフレットおよび国際公開第９２／１９７０８号パンフレットに記載のとおり配合され得る組成物を用いて安定化され得る。
【０１０５】
セルラーゼ：好適なセルラーゼとしては、細菌または真菌由来のものが挙げられる。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。好適なセルラーゼとしては、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）由来のセルラーゼ、例えば、フミコラインソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフトラテルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）およびフザリウムオキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）から産生される真菌性セルラーゼ（米国特許第４，４３５，３０７号明細書、米国特許第５，６４８，２６３号明細書、米国特許第５，６９１，１７８号明細書、米国特許第５，７７６，７５７号明細書および国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている）が挙げられる。
【０１０６】
特に好適なセルラーゼは、色の取り扱いに関して有益性を有するアルカリ性または中性セルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許第０４９５２５７号明細書、欧州特許第０５３１３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載のセルラーゼである。他の例は、国際公開第９４／０７９９８号パンフレット、欧州特許第０５３１３１５号明細書、米国特許第５，４５７，０４６号明細書、米国特許第５，６８６，５９３号明細書、米国特許第５，７６３，２５４号明細書、国際公開第９５／２４４７１号パンフレット、国際公開第９８／１２３０７号パンフレットおよび国際特許出願第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号パンフレットに記載のものなどのセルラーゼ変異体である。
【０１０７】
市販されているセルラーゼとしては、Ｃｅｌｌｕｚｙｍｅ（商標）およびＣａｒｅｚｙｍｅ（商標）Ｅｎｄｏｌａｓｅ；Ｃｅｌｌｕｃｌｅａｎ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｃｌａｚｉｎａｓｅ（商標）およびＰｕｒａｄａｘ  ＨＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）；ならびに、ＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）が挙げられる。
【０１０８】
プロテアーゼ：好適なプロテアーゼとしては、動物、植物または微生物由来のものが挙げられる。微生物由来のものが好ましい。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。タンパク分解酵素は、セリンタンパク分解酵素またはメタロプロテアーゼ、好ましくは、アルカリ性微生物性タンパク分解酵素またはトリプシン様タンパク分解酵素であり得る。アルカリ性プロテアーゼの例は、特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のもの、例えば、サブチリシンＮｏｖｏ、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７およびサブチリシン１６８（国際公開第８９／０６２７９号パンフレットに記載）などのサブチリシンである。トリプシン様プロテアーゼの例は、国際公開第８９／０６２７０号パンフレットおよび国際公開第９４／２５５８３号パンフレットに記載のトリプシン（例えば、ブタまたはウシ由来のもの）およびフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）タンパク分解酵素である。
【０１０９】
有用なプロテアーゼの例は、国際公開第９２／１９７２９号パンフレット、国際公開第９８／２０１１５号パンフレット、国際公開第９８／２０１１６号パンフレットおよび国際公開第９８／３４９４６号パンフレットに記載の変異体であって、特に、以下の位置：２７、３６、５７、７６、８７、９７、１０１、１０４、１２０、１２３、１６７、１７０、１９４、２０６、２１８、２２２、２２４、２３５および２７４の１つまたは複数に置換を有する変異体である。
【０１１０】
好ましい市販されているタンパク分解酵素としては、Ａｌｃａｌａｓｅ（商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（商標）、Ｐｒｉｍａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｌａｓｅ（商標）、Ｅｓｐｅｒａｓｅ（商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（商標）Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（商標）、Ｏｖｏｚｙｍｅ（商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（商標）、Ｒｅｌａｓｅ（商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（商標）、Ｂｌａｚｅ（商標）、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｍａｘａｔａｓｅ（商標）、Ｍａｘａｃａｌ（商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＯｘＰ（商標）、Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｏｘ（商標）、Ｐｕｒａｆａｃｔ  Ｐｒｉｍｅ（商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）、ＦＮ２（商標）、およびＦＮ３（商標）ＦＮ４（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）が挙げられる。他の例は、Ｐｒｉｍａｓｅ（商標）およびＤｕｒａｌａｓｅ（商標）である。Ｂｌａｐ  Ｒ、Ｂｌａｐ  ＳおよびＢｌａｐＸはＨｅｎｋｅｌから入手可能である。
【０１１１】
リパーゼおよびクチナーゼ：好適なリパーゼおよびクチナーゼとしては、細菌または真菌由来のものが挙げられる。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。例としては、例えば、欧州特許第２５８０６８号明細書および欧州特許第３０５２１６号明細書に記載のとおり、Ｔ．ラヌギノスス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）（過去にはフミコララヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）と呼ばれていた）などのテルモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）由来のリパーゼ、例えば、Ｈ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）（国際公開第９６／１３５８０号パンフレット）などのフミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）由来のクチナーゼ、例えばＰ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）またはＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（欧州特許第２１８２７２号明細書）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（欧州特許第３３１３７６号明細書）、Ｐ．ｓｐ．菌株ＳＤ７０５（国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび国際公開第９６／２７００２号パンフレット）、Ｐ．ウィスコンシネシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）などのシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の菌株（現在では、これらのいく種かはバークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）と再命名されている）由来のリパーゼ、ＧＤＳＬ−タイプストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）リパーゼ（国際公開第１０／０６５４５５号パンフレット）、マグナポルテ  グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ  ｇｒｉｓｅａ）（国際公開第１０／１０７５６０号パンフレット）由来のクチナーゼ、シュードモナスメンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）（米国特許第５３８９５３６号明細書）由来のクチナーゼ、テルモビフィダフスカ（Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ  ｆｕｓｃａ）（国際公開第１１／０８４４１２号パンフレット）由来のリパーゼ、ゲオバチルスステアロテルモイルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）リパーゼ（国際公開第１１／０８４４１７号パンフレット）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（国際公開第１１／０８４５９９号パンフレット）由来のリパーゼ、ならびに、ストレプトマイセスグリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）（国際公開第１１／１５０１５７号パンフレット）およびＳ．プリスティナエスピラリス（Ｓ．ｐｒｉｓｔｉｎａｅｓｐｉｒａｌｉｓ）（国際公開第１２／１３７１４７号パンフレット）由来のリパーゼが挙げられる。
【０１１２】
他の例は、欧州特許第４０７２２５号明細書、国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、国際公開第００／３４４５０号パンフレット、国際公開第００／６００６３号パンフレット、国際公開第０１／９２５０２号パンフレット、国際公開第０７／８７５０８号パンフレットおよび国際公開第０９／１０９５００号パンフレットに記載されているものなどのリパーゼ変異体である。
【０１１３】
好ましい市販されているリパーゼ製品としては、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｅｘ（商標）；Ｌｉｐｏｌｅｘ（商標）およびＬｉｐｏｃｌｅａｎ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｌｕｍａｆａｓｔ（元々はＧｅｎｅｎｃｏｒ製）およびＬｉｐｏｍａｘ（元々はＧｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ製）が挙げられる。
【０１１４】
さらに他の例は、時々、例えばカンジダアンタルクチカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）リパーゼＡに対してホモロジーを有するアシルトランスフェラーゼなどのアシルトランスフェラーゼまたはペルヒドロラーゼ（国際公開第１０／１１１１４３号パンフレット）；マイコバクテリウムスメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）由来のアシルトランスフェラーゼ（国際公開第０５／５６７８２号パンフレット）；ＣＥ７ファミリー由来のペルヒドロラーゼ（国際公開第０９／６７２７９号パンフレット）；および、Ｍ．スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ペルヒドロラーゼの変異体、特に、Ｈｕｎｔｓｍａｎ  Ｔｅｘｔｉｌｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  Ｐｔｅ  Ｌｔｄ製の市販されている製品Ｇｅｎｔｌｅ  Ｐｏｗｅｒ  Ｂｌｅａｃｈにおいて用いられているＳ５４Ｖ変異体（国際公開第１０／１０００２８号パンフレット）と称されるリパーゼである。
【０１１５】
アミラーゼ：好適なアミラーゼ（αおよび／またはβ）としては、細菌または真菌由来のものが挙げられる。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。アミラーゼとしては、例えばバチルスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の特殊な菌株（英国特許第１，２９６，８３９号明細書により詳細に記載されている）などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から得られるα−アミラーゼが例えば挙げられる。
【０１１６】
有用なアミラーゼの例は、国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、国際公開第９６／２３８７３号パンフレットおよび国際公開第９７／４３４２４号パンフレットに記載されている変異体、特に、以下の位置：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１８１、１８８、１９０、１９７、２０２、２０８、２０９、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８および４４４の１つまたは複数に置換を有する変異体である。
【０１１７】
市販されているアミラーゼは、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ；Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ  Ｐｌｕｓ；Ｄｕｒａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ  Ｕｌｔｒａ；Ｎａｔａｌａｓｅ、Ｆｕｎｇａｍｙｌ（商標）およびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｒａｐｉｄａｓｅ（商標）およびＰｕｒａｓｔａｒ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．製）である。
【０１１８】
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼとしては、植物、細菌または真菌由来のものが挙げられる。化学的に修飾されたミュータントまたはタンパク質改変ミュータントが含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、例えば、Ｃ．シネレウス（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ）などのヒトヨタケ属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）由来のペルオキシダーゼ、ならびに、国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレットおよび国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されているその変異体が挙げられる。
【０１１９】
市販されているペルオキシダーゼとしては、Ｇｕａｒｄｚｙｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【０１２０】
洗剤酵素は、１種もしくは複数種の酵素を含有する別の添加剤を添加することにより、または、これらの酵素のすべてを含む複合添加剤を添加することにより、洗剤組成物中に含まれ得る。本発明の洗剤添加剤（すなわち、別の添加剤または複合添加剤）は、例えば、粒質物、液体、スラリー等として配合されることが可能である。好ましい洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に非散粉性粒質物、液体、特に安定化液体、または、スラリーである。
【０１２１】
非散粉粒質物は、例えば、米国特許第４，１０６，９９１号明細書および米国特許第４，６６１，４５２号明細書に開示されているとおり製造され得、任意により、技術分野において公知である方法によってコーティングされ得る。ワックスコーティング剤の例は、１０００〜２００００の平均モル重量を有するポリ（エチレンオキシド）生成物（ポリエチレングリコール、ＰＥＧ）；１６〜５０エチレンオキシド単位を有するエトキシル化ノニルフェノールエトキシル化ノニルフェノール；アルコールが１２〜２０個の炭素原子を含有すると共に１５〜８０エチレンオキシド単位を有するエトキシル化脂肪族アルコール；脂肪族アルコール；脂肪酸；ならびに、脂肪酸のモノ−およびジ−およびトリグリセリドである。液体床技術による適用に好適なフィルム形成性コーティング剤の例が英国特許第１４８３５９１号明細書に記載されている。液体酵素調製物は、確立された方法に従って、例えば、プロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、糖質もしくは糖アルコールなどのポリオール、塩、乳酸、硼酸、芳香族ホウ酸エステル、または、４−ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体、または、ペプチドアルデヒド；好ましくはトリ−またはテトラペプチドアルデヒド、場合により場合によりそのヒドロ亜硫酸塩付加物を添加することにより安定化され得る。保護された酵素は、欧州特許第２３８２１６号明細書に開示の方法に従って調製され得る。
【０１２２】
界面活性剤
本発明の洗剤組成物は、少なくとも１種のアニオン性界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、１種または複数種の界面活性剤をさらに含んでいても良く、これらは、カチオン性、ノニオン性、半極性、両性イオン性、または、いずれかのこれらの混合物であり得る。特定の実施形態において、洗剤組成物は、１種または複数種のアニオン性界面活性剤と、１種または複数種のノニオン性界面活性剤との混合物を含む。界面活性剤は、典型的には、１〜約６０重量％；２〜約５０重量％；３〜約４０重量％；４〜約３０重量％；５〜約２５重量％；または、１０〜約２０重量％などの合計で０．１〜約７０重量％で存在する。界面活性剤は所望されるクリーニング用途に基づいて選択され、技術分野において公知であるいずれかの従来の界面活性剤を含む。洗剤における使用に関して技術分野において公知である界面活性剤のいずれかが利用され得る。
【０１２３】
好適なアニオン性界面活性剤としては：アルキル硫酸塩；アルキルスルホン酸塩；アルキルリン酸塩；アルキルホスホン酸塩；アルキルカルボン酸塩；および、これらの混合物が挙げられる。アニオン性界面活性剤は：Ｃ１０〜Ｃ１８アルキルベンゼンスルホン酸塩（ＬＡＳ）、好ましくは、Ｃ１０〜Ｃ１３アルキルベンゼンスルホン酸塩；典型的には以下の式：ＣＨ3（ＣＨ2）XＣＨ2−ＯＳＯ3-Ｍ+（式中、Ｍは、水素またはカチオンであって、カチオンは電荷的な中性をもたらし、好ましいカチオンはナトリウムおよびアンモニウムカチオンであり、ｘは少なくとも７、好ましくは少なくとも９の整数である）を有する、Ｃ１０〜Ｃ２０第１級分岐鎖、直鎖およびランダム鎖アルキル硫酸塩（ＡＳ）；典型的には、以下の式：
【０１２４】
【化１】
2015507675.tif 000002
【０１２５】
（式中、Ｍは水素またはカチオンであって、カチオンは電荷的な中性をもたらし、カチオンとしては、ナトリウムおよびアンモニウムカチオンが挙げられ、ｘは少なくとも７または少なくとも９の整数であり、ｙは少なくとも８または少なくとも９の整数である）を有するＣ１０〜Ｃ１８第２級（２，３）アルキル硫酸塩；Ｃ１０〜Ｃ１８アルキルアルコキシカルボン酸塩；米国特許第６，０２０，３０３号明細書および米国特許第６，０６０，４４３号明細書により詳細に記載されている中鎖分岐アルキル硫酸塩；国際公開第９９／０５２４３号パンフレット、国際公開第９９／０５２４２号パンフレット、国際公開第９９／０５２４４号パンフレット、国際公開第９９／０５０８２号パンフレット、国際公開第９９／０５０８４号パンフレット、国際公開第９９／０５２４１号パンフレット、国際公開第９９／０７６５６号パンフレット、国際公開第００／２３５４９号パンフレットおよび国際公開第００／２３５４８号パンフレットにより詳細に記載されている変性アルキルベンゼンスルホン酸塩（ＭＬＡＳ）；メチルエステルスルホン酸塩（ＭＥＳ）；α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、ならびに、これらの混合物からなる群から選択されることが可能である。
【０１２６】
アニオン性界面活性剤としては：直鎖または分岐鎖、置換または無置換アルキルベンゼンスルホン酸塩界面活性剤、好ましくは直鎖Ｃ８〜Ｃ１８アルキルベンゼンスルホン酸塩界面活性剤；直鎖または分岐鎖、置換または無置換アルキルベンゼン硫酸塩界面活性剤；直鎖Ｃ８〜Ｃ１８アルキル硫酸塩界面活性剤、Ｃ１〜Ｃ３アルキル分岐Ｃ８〜Ｃ１８アルキル硫酸塩界面活性剤、直鎖または分岐鎖アルコキシル化Ｃ８〜Ｃ１８アルキル硫酸塩界面活性剤、および、これらの混合物を含む直鎖または分岐鎖、置換または無置換アルキル硫酸塩界面活性剤；直鎖または分岐鎖、置換または無置換アルキルスルホン酸塩界面活性剤；ならびに、これらの混合物が挙げられる。
【０１２７】
アルコキシル化アルキル硫酸塩界面活性剤は、１〜３０、１〜１０または３〜７の平均アルコキシル化度を有する、直鎖または分岐鎖、置換または無置換Ｃ８〜１８アルキルアルコキシル化硫酸塩界面活性剤であればよい。
【０１２８】
アニオン性界面活性剤は：直鎖または分岐鎖、置換または無置換、Ｃ１２〜１８アルキル硫酸塩；直鎖または分岐鎖、置換または無置換、Ｃ１０〜１３アルキルベンゼンスルホン酸塩、好ましくは直鎖Ｃ１０〜１３アルキルベンゼンスルホン酸塩；および、これらの混合物からなる群から選択され得る。直鎖Ｃ１０〜１３アルキルベンゼンスルホン酸塩がきわめて好ましい。市販されている直鎖アルキルベンゼン（ＬＡＢ）のスルホン化により入手可能であるか、好ましくはこれにより入手される直鎖Ｃ１０〜１３アルキルベンゼンスルホン酸塩がきわめて好ましく；好適なＬＡＢとしては、商品名Ｉｓｏｃｈｅｍ（登録商標）でＳａｓｏｌにより供給されるもの、または、商品名Ｐｅｔｒｅｌａｂ（登録商標）でＰｅｔｒｅｓａにより供給されるものなどの低２−フェニルＬＡＢが挙げられ、他の好適なＬＡＢとしては、商品名Ｈｙｂｌｅｎｅ（登録商標）でＳａｓｏｌにより供給されるものなどの高２−フェニルＬＡＢが挙げられる。好適なアニオン性洗浄性界面活性剤は、ＥＴＡＬ触媒プロセスによって得られるが、ＨＦなどの他の合成経路も好適であり得るアルキルベンゼンスルホン酸塩である。他の好適なアニオン性界面活性剤はアルキルエトキシカルボキシレートである。
【０１２９】
アニオン性界面活性剤は、典型的には塩形態で存在し、典型的には好適なカチオンと複合化される。好適な対イオンとしては、Ｎａ+およびＫ+、Ｃｉ−Ｃ6アルカノールアンモニウム、好ましくはモノ−エタノールアミン（ＭＥＡ）トリ−エタノールアミン（ＴＥＡ）、ジ−エタノールアミン（ＤＥＡ）などの置換アンモニウム、および、これらのいずれかの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、アニオン性界面活性剤の少なくとも２０重量％または少なくとも３０重量％または少なくとも４０重量％または少なくとも５０重量％または少なくとも６０重量％または少なくとも７０重量％または少なくとも８０重量％、または、さらには、もしくは、少なくとも９０重量％が、ナトリウムカチオンによって中和されている。
【０１３０】
アニオン性界面活性剤は８．０〜９．１の親水性指数（ＨＩｃ）を有し得、または、アニオン性界面活性剤は、６．０〜８．０または７．０〜８．０未満の範囲内のものなどのより低い親水性指数（ＨＩｃ）を有していてもよい。親水性指数（ＨＩｃ）は、国際公開第００／２７９５８号パンフレットにおいてより詳細に記載されている。
【０１３１】
洗剤は、通常は、１〜約６０重量％；２〜約５０重量％；３〜約４０重量％；４〜約３０重量％；５〜約２５重量％；または、１０〜約２０重量％などの０．１〜７０重量％のアニオン性界面活性剤を含有するであろう。好ましいアニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、硫酸塩およびスルホン酸塩、特に、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分岐アルキルベンゼンスルホネート（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホネート、α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン−２，３−ジイルビス（硫酸塩）、ヒドロキシアルカンスルホネートおよびジスルホネート、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアルキルスルフェート（ＡＳ）、脂肪族アルコールスルフェート（ＦＡＳ）、第１級アルコールスルフェート（ＰＡＳ）、アルコールエーテルスルフェート（アルコールエトキシスルフェートまたは脂肪族アルコールエーテルスルフェートとしても公知であるＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ）、第２級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、パラフィンスルホネート（ＰＳ）、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）を含むα−スルホ脂肪酸メチルエステル（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキル−またはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸またはセッケンのジエステルおよびモノエステル、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１３２】
含まれる場合、洗剤は、通常、０，０１％〜約４０重量％、例えば０，０５〜約１０重量％、０，１〜５重量％などのカチオン性界面活性剤を含むであろう。カチオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルキルジメチルエタノール第４級アミン（ＡＤＭＥＡＱ）、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、ジメチルジステアリル塩化アンモニウム（ＤＳＤＭＡＣ）およびアルキルベンジルジメチルアンモニウム、ならびに、これらの組み合わせ、アルキル第４級アンモニウム化合物、アルコキシル化第４級アンモニウム（ＡＱＡ）が挙げられる。
【０１３３】
含まれている場合、洗剤は、通常は、０．２〜約６０重量％、または、さらには４０〜約７０重量％のノニオン性界面活性剤を含有し、例えば、０．５〜約４０重量％、１〜約３０重量％；１〜約２０重量％、３〜約１０重量％、２〜約５重量％または６〜約１５重量％のノニオン性界面活性剤を含有するであろう。ノニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルコールエトキシレート（ＡＥまたはＡＥＯ）、アルコールプロポキシレート、プロポキシル化脂肪族アルコール（ＰＦＡ）、エトキシル化および／またはプロポキシル化脂肪酸アルキルエステルなどのアルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド（ＡＰＧ）、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド（ＦＡＤＡ）、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＥＦＡＭ）、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、または、グルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルカミドＧＡ、または、脂肪酸グルカミドＦＡＧＡ）、ならびに、商品名ＳＰＡＮおよびＴＷＥＥＮで入手可能である製品、および、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１３４】
含まれている場合、洗剤は、通常は、例えば約０．５〜約３０重量％、約１〜約２０重量％、約３〜約１０重量％、約３〜約５重量％または約８〜約１２重量％などの、約０．１〜約４０重量％の半極性界面活性剤を含有するであろう。半極性界面活性剤の非限定的な例としては、アルキルジメチルアミンオキシド、Ｎ−（ココアルキル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミンオキシドおよびＮ−（獣脂−アルキル）−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミンオキシドなどのアミンオキシド（ＡＯ）、脂肪酸アルカノールアミド、および、エトキシル化脂肪酸アルカノールアミド、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１３５】
含まれている場合、洗剤は、通常は、例えば約０．５〜約３０重量％、約１〜約２０重量％、約３〜約１０重量％、約３〜約５重量％または約８〜約１２重量％などの、約０．２〜約４０重量％の両性イオン性界面活性剤を含有するであろう。両性イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、ベタイン、アルキルジメチルベタインおよびスルホベタイン、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１３６】
ヒドロトロープ
ヒドロトロープは、疎水性化合物を水溶液（または、反対に、極性物質を非極性環境）中に可溶化させる化合物である。洗剤組成物中においてヒドロトロープを使用することにより、相分離または高粘度などの望ましくない現象を誘起することなく、例えば、界面活性剤がより濃縮された配合物（水を排除することにより液体洗剤をコンパクトにするプロセスのとおり）が可能となる。
【０１３７】
洗剤は、０．５〜約５重量％または３〜約５重量％などの０〜約１０重量％のヒドロトロープを含有していてもよい。いくつかの場合において、洗剤は、０〜約２５重量％または２５〜約５０重量％などの０〜約５０重量％のヒドロトロープを含有していてもよい。洗剤における使用に関して技術分野において公知であるヒドロトロープのいずれかが利用され得る。ヒドロトロープの非限定的な例としては、ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐ−トルエンスルホン酸ナトリウム（ＳＴＳ）、キシレンスルホン酸ナトリウム（ＳＸＳ）、クメンスルホン酸ナトリウム（ＳＣＳ）、シメンスルホン酸ナトリウム、アミンオキシド、アルコールおよびポリグリコールエーテル、ヒドロキシナフテン酸ナトリウム、ヒドロキシナフタレンスルホン酸ナトリウム、エチルヘキシル硫酸ナトリウム、ポリオール、ならびに、これらの組み合わせが挙げられる。
【０１３８】
ビルダーおよびコビルダー
洗剤組成物は、０〜約６５重量％または０〜約２０重量％の洗剤ビルダー、コビルダー、または、これらの混合物を含有し得る。食器洗剤において、ビルダーの量は、典型的には、４０〜約６５重量％または５０〜約６５重量％である。ビルダーおよび／またはコビルダーは、特に、ＣａおよびＭｇと水溶性錯体を形成するキレート化剤であり得る。洗剤における使用に関して技術分野において公知であるビルダーおよび／またはコビルダーのいずれかが利用され得る。
【０１３９】
ビルダーの非限定的な例としては、ゼオライト、二リン酸塩（ピロリン酸塩）、三リン酸ナトリウム（ＳＴＰまたはＳＴＰＰ）などの三リン酸塩、炭酸ナトリウムなどの炭酸塩、メタケイ酸ナトリウムなどの可溶性ケイ酸塩、層状ケイ酸塩（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製ＳＫＳ−６）、２−アミノエタン−１−オール（ＭＥＡ）、イミノジエタノール（ＤＥＡ）および２，２’、２”−ニトリロトリエタノール（ＴＥＡ）などのエタノールアミン、および、カルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、ならびに、これらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０１４０】
コビルダーの非限定的な例としては、ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）またはコポリ（アクリル酸／マレイン酸）（ＰＡＡ／ＰＭＡ）などのポリアクリレートのホモポリマーまたはそのコポリマーが挙げられる。さらに非限定的な例としては、クエン酸塩、アミノカルボン酸塩、アミノポリカルボン酸塩およびホスホン酸塩などのキレート剤、ならびに、アルキル−またはアルケニルコハク酸が挙げられる。追加の特定の例としては、２，２’，２”−ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸（ＥＤＤＳ）、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジイルビス（ホスホン酸）（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンテトラキス（メチレン）テトラキス（ホスホン酸）（ＥＤＴＭＰＡ）、ジエチレントリアミンエペンタキス（メチレン）ペンタキス（ホスホン酸）（ＤＴＰＭＰＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（ＥＤＧ）、アスパラギン酸−Ｎ−一酢酸（ＡＳＭＡ）、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＳＤＡ）、アスパラギン酸−Ｎ−モノプロピオン酸（ＡＳＭＰ）、イミノジコハク酸（ＩＤＡ）、Ｎ−（２−スルホメチル）アスパラギン酸（ＳＭＡＳ）、Ｎ−（２−スルホエチル）アスパラギン酸（ＳＥＡＳ）、Ｎ−（２−スルホメチル）グルタミン酸（ＳＭＧＬ）、Ｎ−（２−スルホエチル）グルタミン酸（ＳＥＧＬ）、Ｎ−メチルイミノ二酢酸（ＭＩＤＡ）、α−アラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（α−ＡＬＤＡ）、セリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＥＤＡ）、イソセリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＩＳＤＡ）、フェニルアラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＰＨＤＡ）、アントラニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＮＤＡ）、スルファニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＬＤＡ）、タウリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＴＵＤＡ）およびスルホメチル−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＭＤＡ）、Ｎ−（ヒドロキシエチル）−エチリデンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエタノールグリシン（ＤＥＧ）、ジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）（ＤＴＰＭＰ）、アミノトリス（メチレンホスホン酸）（ＡＴＭＰ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ならびに、これらの任意の組み合わせおよび塩が挙げられる。さらなる例示的なビルダーおよび／またはコビルダーは、例えば、国際公開第０９／１０２８５４号パンフレット、米国特許第５９７７０５３号明細書に開示されている。
【０１４１】
漂白系
洗剤は、０〜約５０重量％、０．１〜約２５重量％、０．５〜約２０重量％、１〜約１５重量％または２〜約１０重量％の漂白系を含有していてもよい。洗剤において用いられるいずれかの技術分野において公知である漂白系が利用され得る。好適な漂白系成分としては、漂白触媒、光漂白、漂白活性化剤、過炭酸ナトリウムおよび過ホウ酸ナトリウムなどの過酸化水素の供給源、事前に形成した過酸、ならびに、これらの混合物が挙げられる。好適な事前に形成した過酸としては、これらに限定されないが、ペルオキシカルボン酸および塩、過炭酸および塩、過イミド酸および塩、ペルオキシ一硫酸および塩、例えば、オキソン（Ｒ）、ならびに、これらの混合物が挙げられる。漂白系の非限定的な例としては、例えば、過ホウ酸（通常は一水和物または四水和物）、過炭酸、過硫酸、過リン酸、過ケイ酸のナトリウム塩などのアルカリ金属塩を含む無機塩を、過酸−形成性漂白活性化剤と組み合わせて含み得るペルオキシド系漂白系が挙げられる。本明細書において漂白活性化剤とは、ペルオキシド漂白剤様過酸化水素と反応して、過酸を形成する化合物を意味する。このようにして形成された過酸は、活性化された漂白剤を構成する。本明細書において用いられる好適な漂白活性化剤は、エステルアミド、イミドまたは無水物の分類に属するものを含み、好適な例は、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、ナトリウム３，５，５トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、ジペルオキシドデカン酸、４−（ドデカノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＬＯＢＳ）、４−（デカノイルオキシ）ベンゼンスルホネート、４−（デカノイルオキシ）安息香酸塩（ＤＯＢＳ）、４−（３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＩＳＯＮＯＢＳ）、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）および４−（ノナノイルオキシ）ベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）、および／または、国際公開第９８／１７７６７号パンフレットに開示されているものである。対象の漂白活性化剤の特定のファミリーは欧州特許第６２４１５４号明細書に開示されており、アセチルトリエチルシトレート（ＡＴＣ）が特に好ましいファミリーである。ＡＴＣまたは短鎖トリグリセリド様トリアシンは、最終的にはクエン酸およびアルコールに分解されるために、環境にやさしいという利点を有する。さらに、アセチルトリエチルシトレートおよびトリアセチンは、保管に際して生成物中における良好な加水分解安定性を有しており、これは効果的な漂白活性化剤である。最後に、ＡＴＣは、ランドリー添加剤に対して良好な補助能を提供する。または、漂白系は、例えば、アミド、イミドまたはスルホンタイプのペルオキシドを含み得る。漂白系はまた、６−（フタロイルアミノ）過カプロン酸（ＰＡＰ）などの過酸を含み得る。漂白系はまた、漂白触媒を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、漂白剤成分は、以下の式を有する有機触媒：
【０１４２】
【化２】
2015507675.tif 000003
【０１４３】
（ｉｉｉ）およびこれらの混合物（式中、各Ｒ1は、独立して、９〜２４個の炭素を含有する分岐アルキル基または１１〜２４個の炭素を含有する直鎖アルキル基であり、好ましくは、各Ｒ1は、独立して、９〜１８個の炭素を含有する分岐アルキル基または１１〜１８個の炭素を含有する直鎖アルキル基であり、より好ましくは各Ｒ1は、独立して、２−プロピルヘプチル、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−オクタデシル、イソ−ノニル、イソ−デシル、イソ−トリデシルおよびイソ−ペンタデシルからなる群から選択される）からなる群から選択される有機触媒であり得る。他の例示的な漂白系は、例えば、国際公開第０７／０８７２５８号パンフレット、国際公開第０７／０８７２４４号パンフレット、国際公開第０７／０８７２５９号パンフレット、国際公開第０７／０８７２４２号パンフレットに記載されている。好適な光漂白は、例えばスルホン化アエンフタロシアニンであり得る。
【０１４４】
ポリマー
洗剤は、０．５〜約５重量％、２〜約５重量％、０．５〜約２重量％または０．２〜約１重量％などの０〜約１０重量％のポリマーを含有し得る。洗剤における使用に関して技術分野において公知であるポリマーのいずれかが利用され得る。ポリマーは、上記のとおりコビルダーとして機能し得、または、再付着防止、繊維保護、汚染放出、移染防止、グリースクリーニングおよび／または消泡特性を提供し得る。いくつかのポリマーは、上記の特性を２つ以上、および／または、以下に記載の主題を２つ以上有し得る。
【０１４５】
例示的なポリマーとしては、（カルボキシメチル）セルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（エチレングリコール）またはポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＧ）、エトキシル化ポリ（エチレンイミン）、カルボキシメチルイヌリン（ＣＭＩ）、および、ＰＡＡ、ＰＡＡ／ＰＭＡ、ポリアスパラギン酸などのポリカルボキシレート、および、ラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー、疎水性修飾ＣＭＣ（ＨＭ−ＣＭＣ）およびシリコーン、テレフタル酸とオリゴマー系グリコールとのコポリマー、ポリエチレンテレフタレートとポリオキシエテンテレフタレート（ＰＥＴ−ＰＯＥＴ）とのコポリマー、ＰＶＰ、ポリ（ビニルイミダゾール）（ＰＶＩ）、ポリ（ビニルピリジン−Ｎ−オキシド）（ＰＶＰＯまたはＰＶＰＮＯ）、ならびに、ポリビニルピロリドン−ビニルイミダゾール（ＰＶＰＶＩ）が挙げられる。さらなる例示的なポリマーとしては、スルホン化ポリカルボキシレート、ポリエチレンオキシドおよびポリプロピレンオキシド（ＰＥＯ−ＰＰＯ）および硫酸ジクオタニウムエトキシ（ｄｉｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ  ｅｔｈｏｘｙ  ｓｕｌｆａｔｅ）が挙げられる。他の例示的なポリマーが、例えば、国際公開第０６／１３０５７５号パンフレットに開示されている。上記のポリマーの塩もまた想定される。
【０１４６】
ポリマーはまた、界面活性増強ポリマーであり得る。好ましいポリマーは、両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーおよび／またはランダムグラフトコポリマーである。両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーとは、布地および表面からグリース粒子を除去するよう親水特性と疎水特性とが両立したいずれかのアルコキシル化ポリマーを指す。本発明の両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーの特定の実施形態は、核構造と、この核構造に結合する複数のアルコキシレート基とを含む。核構造は、国際公開第１１／１５６２９７号パンフレットに記載されているとおり、ポリアルキレンイミン構造またはポリアルカノールアミン構造を含み得る。
【０１４７】
布地色調剤
本発明の洗剤組成物は布地色調剤を含んでいてもよい。色調剤は、洗浄液から布地に付着して布地の白み知覚性が向上されるよう配合される。蛍光性白色化剤は少なくともいくらかの可視光を放つ。対照的に、布地色調剤は、可視光スペクトルの少なくとも一部分を吸収することで表面の色合いを変える。好適な色調剤としては、染料および染料−クレイ複合体が挙げられ、また、顔料もまた挙げられ得る。好適な染料としては、微小分子染料および高分子染料が挙げられる。好適な微小分子染料としては、例えば国際公開第０５／０３２７４号パンフレット、国際公開第０５／０３２７５号パンフレット、国際公開第０５／０３２７６号パンフレットおよび欧州特許第１８７６２２６号明細書（本明細書において参照により援用される）に記載されているとおり、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｂｌｕｅ、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｒｅｄ、Ｄｉｒｅｃｔ  Ｖｉｏｌｅｔ、Ａｃｉｄ  Ｂｌｕｅ、Ａｃｉｄ  Ｒｅｄ、Ａｃｉｄ  Ｖｉｏｌｅｔ、Ｂａｓｉｃ  Ｂｌｕｅ、Ｂａｓｉｃ  ＶｉｏｌｅｔおよびＢａｓｉｃ  Ｒｅｄ、または、これらの混合物の染料索引（Ｃ．Ｉ．）分類に属する染料からなる群から選択される微小分子染料が挙げられる。
【０１４８】
色調剤は青色または紫色であることが好ましい。遮光染料は、５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、好ましくは５７０ｎｍ〜６３０ｎｍのピーク吸収波長を有することが好ましい。単一の染料としてヒトの眼に対して視覚的効果を有する染料の組み合わせは、ポリエステルにおいて５５０ｎｍ〜６５０ｎｍ、好ましくは５７０ｎｍ〜６３０ｎｍのピーク吸収波長を有する。これは、青色または紫色の遮光を達成するために例えば赤色および緑色−青色の染料を混合することにより提供されてもよい。
【０１４９】
好適な染料の例は、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ７、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ９、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  １１、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ２６、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ３１、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ３５、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ４０、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ４１、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ５１、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ６６、ｄｉｒｅｃｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ９９、ａｃｉｄ  ｖｉｏｌｅｔ  ５０、ａｃｉｄ  ｂｌｕｅ  ９、ａｃｉｄ  ｖｉｏｌｅｔ  １７、ａｃｉｄ  ｂｌａｃｋ  １、ａｃｉｄ  ｒｅｄ  １７、ａｃｉｄ  ｂｌｕｅ  ２９、ｓｏｌｖｅｎｔ  ｖｉｏｌｅｔ  １３、ｄｉｓｐｅｒｓｅ  ｖｉｏｌｅｔ  ２７  ｄｉｓｐｅｒｓｅ  ｖｉｏｌｅｔ  ２６、ｄｉｓｐｅｒｓｅ  ｖｉｏｌｅｔ  ２８、ｄｉｓｐｅｒｓｅ  ｖｉｏｌｅｔ  ６３およびｄｉｓｐｅｒｓｅ  ｖｉｏｌｅｔ  ７７、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  １６、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ６５、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ６６、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ６７、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ７１、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  １５９、ｂａｓｉｃ  ｖｉｏｌｅｔ  １９、ｂａｓｉｃ  ｖｉｏｌｅｔ  ３５、ｂａｓｉｃ  ｖｉｏｌｅｔ  ３８、ｂａｓｉｃ  ｖｉｏｌｅｔ  ４８；ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ３、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ７５、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  ９５、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  １２２、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  １２４、ｂａｓｉｃ  ｂｌｕｅ  １４１、チアゾリウム染料、ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｂｌｕｅ  １９、ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｂｌｕｅ  １６３、ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｂｌｕｅ  １８２、ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｂｌｕｅ  ９６、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（登録商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ＣＴ（Ｍｉｌｌｉｋｅｎ，米国スパータンバーグ）およびＡｚｏ−ＣＭ−Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（Ｍｅｇａｚｙｍｅ，Ｂｒａｙ，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ  ｏｆ  Ｉｒｅｌａｎｄ）である。
【０１５０】
洗剤組成物は、０．００００３〜約０．２重量％、０．００００８〜約０．０５重量％、または、さらには０．０００１〜約０．０４重量％の布地色調剤を含むことが好ましい。組成物は０．０００１〜０．２重量％の布地色調剤を含み得、これは、組成物が単位用量ポーチの形態である場合には特に好ましい場合がある。好適な色調剤は、例えば、国際公開第０７／０８７２５７号パンフレット、国際公開第０７／０８７２４３号パンフレットにも開示されている。
【０１５１】
消泡剤
洗剤組成物は、シリコーン消泡剤化合物；シリコーンオイルおよび疎水性粒子の消泡剤化合物；ならびに、これらの混合物から選択される消泡剤を０．００１〜約４．０重量％含み得る。一実施形態において、組成物は、本明細書において、０．０１〜約２．０重量％または０．０５〜約１．０重量％のシリコーン消泡剤を含む（割合は、いずれかのキャリアを含まない有効量基準による）。一実施形態において、消泡剤は：シリコーン樹脂および変性シリカと組み合わされた、アリールまたはアルキルアリール置換基を含む有機変性シリコーンポリマー；Ｍ／Ｑ樹脂；ならびに、これらの混合物から選択される。
【０１５２】
カルシウムおよびマグネシウムカチオン
組成物は、０．０１〜５．０重量％のカルシウムおよび／またはマグネシウムカチオンなどの二価カチオンを含むことが好ましい。組成物は、０．０１〜０．２重量％、０．２〜１．０重量％、１．０〜２．０重量％、２．０〜３．０重量％、３．０〜４．０重量％または４．０〜５．０重量％を含み得る。
【０１５３】
補助材
洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかの洗剤成分もまた利用され得る。他の任意の洗剤成分としては、単独もしくは組み合わせで、耐食剤、収縮防止剤、再汚染防止剤、しわ防止剤、殺菌剤、バインダ、腐食抑制剤、崩壊剤／分解剤、染料、酵素安定化剤（ホウ酸、ホウ酸塩、ＣＭＣ、４−ＦＰＢＡなどのプロテアーゼ阻害剤およびペプチドアルデヒド、および／または、プロピレングリコール、グリセロール、ソルビトールなどのポリオールを含む）、クレイを含む布地コンディショナ、充填材／加工助剤、蛍光性白色化剤／光学増白剤、起泡増進剤、起泡（セッケンの泡）調節剤、香料、汚染物−懸濁剤、軟化剤、セッケン泡抑制剤、色あせ防止剤、および、ウィッキング剤が挙げられる。洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかの処方成分が利用され得る。このような処方成分の選択は十分に当業者の技能の範囲内である。
【０１５４】
本発明の洗剤組成物はまた、分散剤を含有することが可能である。特に粉末洗剤が分散剤を含んでいてもよい。好適な水溶性有機材料としては、ホモ−またはコポリマー酸またはその塩が挙げられ、ここで、ポリカルボン酸は、２個以下の炭素原子によって相互に分離された少なくとも２つのカルボキシルラジカルを含む。好適な分散剤は、例えば、Ｐｏｗｄｅｒｅｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｓｅｒｉｅｓ  ｖｏｌｕｍｅ  ７１，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．に記載されている。
【０１５５】
本発明の洗剤組成物はまた、１種または複数種の移染防止剤を含み得る。好適な高分子移染防止剤としては、これらに限定されないが、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ−オキシドポリマー、Ｎ−ビニルピロリドンおよびＮ−ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドンおよびポリビニルイミダゾールまたはこれらの混合物が挙げられる。主題の組成物中に存在する場合、移染防止剤は、組成物の０．０００１〜約１０重量％、約０．０１〜約５重量％、または、０．１％〜約３重量％のレベルで存在し得る。
【０１５６】
本発明の洗剤組成物はまた、好ましくは、蛍光性白色化剤または光学増白剤などのクリーニングされる物品の色合いを変え得る追加の成分を含有するであろう。存在する場合、増白剤は、０，０１％〜約０，５重量％のレベルであることが好ましい。ランドリー洗剤組成物における使用に好適ないずれかの蛍光性白色化剤が、本発明の組成物中に用いられ得る。最も一般的に用いられる蛍光性白色化剤は、ジアミノスチルベン−スルホン酸誘導体、ジアリールピラゾリン誘導体およびビスフェニル−ジスチリル誘導体の分類に属するものである。ジアミノスチルベン−スルホン酸誘導体タイプの蛍光性白色化剤の例としては：４，４’−ビス−（２−ジエタノールアミノ−４−アニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネート；４，４’−ビス−（２，４−ジアニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２．２’−ジスルホネート；４，４’−ビス−（２−アニリノ−４（Ｎ−メチル−Ｎ−２−ヒドロキシ−エチルアミノ）−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネート、４，４’−ビス−（４−フェニル−２，１，３−トリアゾール−２−イル）スチルベン−２，２’−ジスルホネート；４，４’−ビス−（２−アニリノ−４（１−メチル−２−ヒドロキシ−エチルアミノ）−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベン−２，２’−ジスルホネートおよび２−（スチビル−４”−ナフト−１．，２’：４，５）−１，２，３−トリアゾール−２”スルホネートのナトリウム塩が挙げられる。好ましい蛍光性白色化剤は、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＡＧ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能であるＴｉｎｏｐａｌ  ＤＭＳおよびＴｉｎｏｐａｌ  ＣＢＳである。Ｔｉｎｏｐａｌ  ＤＭＳは、４，４’−ビス−（２−モルホリノ−４アニリノ−ｓ−トリアジン−６−イルアミノ）スチルベンジスルホネートのジナトリウム塩である。Ｔｉｎｏｐａｌ  ＣＢＳは、２，２’−ビス−（フェニル−スチリル）ジスルホネートのジナトリウム塩である。また、好ましい蛍光性白色化剤は、Ｐａｒａｍｏｕｎｔ  Ｍｉｎｅｒａｌｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｍｕｍｂａｉ，Ｉｎｄｉａ製の市販のＰａｒａｗｈｉｔｅ  ＫＸである。本発明における使用に好適な他の蛍光剤としては、１−３−ジアリールピラゾリンおよび７−アルキルアミノクマリンが挙げられる。好適な蛍光増白剤レベルは、０．０１重量％、０．０５重量％、０．１重量％または０．２重量％の低レベルから、約０．５重量％または約０．７５重量％の高レベルを含む。
【０１５７】
本発明の洗剤組成物はまた、綿およびポリエステル系布地などの布地からの汚染物の除去、特にポリエステル系布地からの疎水性汚染物の除去を補助する１種または複数種の汚染物遊離ポリマーを含み得る。汚染物遊離ポリマーは、例えば、ノニオン性またはアニオン性テレフタレート系ポリマー、ポリビニルカプロラクタムおよび関連するコポリマー、ビニルグラフトコポリマー、ポリエステルポリアミドであり得る（例えばＣｈａｐｔｅｒ  ７，Ｐｏｗｄｅｒｅｄ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｓｅｒｉｅｓ  ｖｏｌｕｍｅ  ７１，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．を参照のこと）。他のタイプの汚染物遊離ポリマーは、コア構造と、このコア構造に結合した複数のアルコキシレート基とを含む両親媒性アルコキシル化油脂クリーニングポリマーである。コア構造は、国際公開第０９／０８７５２３号パンフレット（本明細書において参照により援用されている）に詳述されているとおり、ポリアルキレンイミン構造またはポリアルカノールアミン構造を含み得る。さらに、ランダムグラフトコポリマーは、好適な汚染物遊離ポリマーである。好適なグラフトコポリマーは、国際公開第０７／１３８０５４号パンフレット、国際公開第０６／１０８８５６号パンフレットおよび国際公開第０６／１１３３１４号パンフレット（本明細書において参照により援用されている）により詳細に記載されている。他の汚染物遊離ポリマーは、欧州特許第１８６７８０８号明細書または国際公開第０３／０４０２７９号パンフレット（共に本明細書において参照により援用されている）に記載されているものなどの変性セルロース誘導体などの特に置換セルロース系構造などの置換多糖類構造である。好適なセルロース系ポリマーとしては、セルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、セルロースアミドおよびこれらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、アニオン性変性セルロース、ノニオン性変性セルロース、カチオン性変性セルロース、両性イオン性変性セルロース、および、これらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、エステルカルボキシメチルセルロースおよびこれらの混合物が挙げられる。
【０１５８】
本発明の洗剤組成物としてはまた、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリオキシエチレンおよび／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アクリル酸のホモポリマー、アクリル酸とマレイン酸とのコポリマー、ならびに、エトキシル化ポリエチレンイミンなどの１種または複数種の再汚染防止剤が挙げられ得る。上記の汚染物遊離ポリマーに記載のセルロース系ポリマーは、再汚染防止剤としても機能し得る。
【０１５９】
他の好適な補助材としては、これらに限定されないが、収縮防止剤、しわ防止剤、殺菌剤、バインダ、キャリア、染料、酵素安定化剤、布地軟化剤、充填材、起泡調節剤、ヒドロトロープ、香料、顔料、セッケン泡抑制剤、溶剤、液体洗剤用構造化剤、および／または、構造弾性化剤が挙げられる。
【０１６０】
使用
洗剤における使用。本発明のリパーゼは、安定化された洗剤組成物の調製に用いられ得る。従って、本発明は、（ａ）親リパーゼのリパーゼ変異体であって、配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有し、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を有し、および、リパーゼ活性を有する変異体、ならびに、（ｂ）アニオン性界面活性剤を導入するステップを含む洗剤組成物を得る方法であって、前記組成物が、親リパーゼを含む対応する組成物と比して高い安定性を有する方法に関する。
【０１６１】
安定性は、特に限定されないが、本明細書に記載のとおりリアルタイムまたは加速保管安定性および／またはＤＳＣアッセイにより監視され得る。これらは洗剤組成物に加えられ得、それ故、洗剤組成物のコンポーネントとなる。洗剤組成物は、粒状、液体、ゲル、ペースト、セッケンバー、単位用量／カプセル等、または、いずれかのこれらの組み合わせを含むいずれかの好適な形体であり得る。
【０１６２】
本発明の洗剤組成物は、例えば、汚染された布地の前処理に好適なランドリー添加剤組成物、および、リンス添加布地軟化剤組成物を含む手洗いもしくは洗濯機用ランドリー洗剤組成物として配合され得、または、通常の家庭用硬質面クリーニング作業において用いられる洗剤組成物として配合され得、または、手洗いもしくは機械用食器洗浄作業用に配合され得る。
【０１６３】
特定の態様において、本発明は、本明細書に記載のとおり本発明のポリペプチドを含む洗剤添加剤を提供する。
【０１６４】
本発明はまた、その組成物を使用するための方法に関する。
【０１６５】
本発明はまた、以下の実施形態に関する。
１．配列番号２と少なくとも６０％の配列同一性を有する親リパーゼから誘導されたリパーゼ変異体であって、リパーゼ活性を有し、親リパーゼと比して、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を含む変異体の使用であり、少なくとも１種のアニオン性界面活性剤を含む洗剤組成物であって、親リパーゼを含む対応する組成物と比してより安定である組成物を得るための使用。
【０１６６】
２．実施形態１に係る使用であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置におけるアミノ酸置換がＳ、Ｔ、Ｎ、Ｙ、Ｈ、ＬまたはＱである使用。
【０１６７】
３．実施形態１または２に係る使用であって、少なくとも１種のアニオン性界面活性剤が、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分岐アルキルベンゼンスルホネート（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホネート、α−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン−２，３−ジイルビス（スルフェート）、ヒドロキシアルカンスルホネートおよびジスルホネート、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアルキルスルフェート（ＡＳ）、脂肪族アルコールスルフェート（ＦＡＳ）、第１級アルコールスルフェート（ＰＡＳ）、アルコールエーテルスルフェート（アルコールエトキシスルフェートまたは脂肪族アルコールエーテルスルフェートとしても公知であるＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ）、第２級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、パラフィンスルホネート（ＰＳ）、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）を含むα−スルホ脂肪酸メチルエステル（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキルコハク酸またはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸のジエステルおよびモノエステル、セッケン、または、これらのいずれかの組み合わせである使用。
【０１６８】
４．実施形態１〜３のいずれかに係る使用であって、リパーゼ変異体が：
ａ．配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチド；
ｂ．低ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列、（ｉｉ）（ｉ）の完全長補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；
ｃ．配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；および
ｄ．リパーゼ活性を有する配列番号２の成熟型ポリペプチドの断片
からなる群から選択される使用。
【０１６９】
５．実施形態１〜４のいずれかに係る使用であって、リパーゼ変異体が、配列番号２の成熟型ポリペプチドに対して、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％であるが、１００％未満の配列同一性を有する使用。
【０１７０】
６．実施形態１〜５のいずれかに係る使用であって、リパーゼ変異体が、中ストリンジェンシー条件、中−高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件または超高ストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列または（ｉｉ）（ｉ）の完全長補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる使用。
【０１７１】
７．実施形態１〜６のいずれかに係る使用であって、置換の数が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０置換などの、例えば、１〜１０および１〜５などの１〜２０置換である使用。
【０１７２】
８．実施形態１〜７のいずれかに係る使用、配列番号２の成熟型ポリペプチドの位置Ｎ３３Ｑ、Ｔ２３１Ｒおよび／またはＮ２３３Ｒに対応する１つまたは複数の位置に置換をさらに含む使用。
【０１７３】
９．実施形態１〜８のいずれかに係る使用であって、リパーゼ変異体が：
ａ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｂ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｃ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｄ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｓ
ｅ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｆ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｇ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｓ
ｈ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｉ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｊ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｋ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｔ
ｌ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｍ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｎ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｔ
ｏ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｐ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｑ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｒ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｎ
ｓ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｔ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｕ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｎ
ｖ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｗ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｘ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｙ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｙ
ｚ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ａａ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｂｂ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｙ
ｃｃ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｄｄ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｅｅ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｆｆ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｈ
ｇｇ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｈｈ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｉｉ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｈ
ｊｊ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｋｋ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｌｌ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｍｍ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｌ
ｎｎ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｏｏ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｐｐ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｌ
ｑｑ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｒｒ．Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｓｓ．Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｔｔ．Ｎ３３Ｑ＋Ｄ２５４Ｑ
ｕｕ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｖｖ．Ｎ３３Ｑ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
ｗｗ．Ｎ３３Ｑ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｄ２５４Ｑ
から選択される置換を含むか、または、置換から構成される使用。
【０１７４】
１０．前記実施形態のいずれかの使用であって、親リパーゼが、配列番号２の成熟型ポリペプチドを含むか、または、これから構成されている使用。
【０１７５】
１１．前記実施形態のいずれかの使用であって、組成物が、ＣａＣｌ2をさらに含む使用。
【０１７６】
１２．実施形態１〜１１に従うリパーゼ変異体の使用により得られる洗剤組成物。
【０１７７】
１３．（ａ）親リパーゼのリパーゼ変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を有し、および、リパーゼ活性を有する変異体、ならびに、（ｂ）アニオン性界面活性剤を含む洗剤組成物であって、親リパーゼを含む対応する組成物と比して高い安定性を有する組成物。
【０１７８】
１４．（ａ）親リパーゼのリパーゼ変異体であって、配列番号２の成熟型ポリペプチドのＤ２５４に対応する位置に置換を有し、および、リパーゼ活性を有する変異体、ならびに、（ｂ）アニオン性界面活性剤を導入するステップを含む洗剤組成物を得る方法であって、前記組成物が、親リパーゼを含む対応する組成物と比して高い安定性を有する方法。
【０１７９】
１５．クリーニングのための実施形態１２または１３の組成物の使用。
【０１８０】
本発明を、本発明の範囲を限定すると理解されるべきではない以下の実施例によりさらに記載する。
【実施例】
【０１８１】
実施例１：示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）
リパーゼの熱安定性を、ＶＰ−毛管示差走査熱量計（ＭｉｃｒｏＣａｌ  Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）を用いて示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）により測定した。酵素溶液を緩衝剤（１ｍＭ  ＣａＣｌ2を添加した、もしくは、添加しない５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝剤ｐＨ８．０）中で、２００Ｋ／ｈｒの一定のプログラムした加熱速度で加熱した後に得たサーモグラム（Ｃｐ対Ｔ）における変性ピーク（主吸熱ピーク）の再上部を熱変性温度Ｔｄ（℃）とした。
【０１８２】
サンプル溶液および基準溶液（およそ０．２ｍｌ）を保管条件から１０℃で熱量計（基準：酵素を含有しない緩衝剤）に仕込み、２０℃から１１０℃にＤＳＣ走査する前に、２０℃で２０分間熱的に事前に平衡化した。変性温度をおよそ＋／−１℃の精度で測定した。
【０１８３】
実施例２ａ：リアルタイム保管安定性アッセイ
精製したリパーゼを、ＨＳＢ緩衝剤（２．５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７；１０Ｍ  ＮａＣｌ；０．０２％  Ｂｒｉｊ−３５）で１００ｐｐｍの濃度に希釈した。２０マイクロリットルの１００ｐｐｍリパーゼ溶液を１８０マイクロリットルの洗剤組成物に添加し、５分間撹拌し、シールした。サンプルを４℃（非ストレス下）および３５℃（ストレス下）で保管した。保管時間は、リパーゼ基準の半減期に基づいて選択した。
【０１８４】
保管後、可能性のある縮合液体を遠心分離により回収した。１０マイクロリットルのサンプルアリコートを、０．０５Ｍ  ｐＨ９ホウ酸緩衝剤（９ｍＭ  ＣａＣｌ２；０．０２２５％  Ｂｒｉｊ−３５；０．８５％４−ＦＢＰＡ（３１，５ｇ／ｌ））中で２００倍に希釈した。１部の希釈したアリコートを、４部の１ｍＭ  ｐＮＰ−パルミテート、１ｍＭの塩化カルシウム、１００ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、６．５ｍＭのデオキシコレート、１．４ｇ／Ｌ  ＡＯＳと混合し、ｐＮＰ発色団の放出を分光測光法で２０分間かけて計測した。
【０１８５】
残存活性をストレス下での計測速度対非ストレス下でのサンプルの比として算出した。残存活性の平均値を２〜４回の反復に基づいて算出した。
【０１８６】
実験６、７および８に示されている半減期は、以下の式に基づいて算出した：半減期＝ストレス時間×ｌｎ（０，５）／ｌｎ（残存活性）。
【０１８７】
リパーゼ基準を基準とした半減期改善係数（ＨＩＦ）を、リパーゼの半減期をリパーゼ基準の半減期で除することにより算出した。リパーゼ基準は別段の定めがある場合を除き、突然変異Ｔ２３１ＲおよびＮ２３３Ｒを含むテルモマイセスラヌギノスス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼである。
【０１８８】
【表１】
2015507675.tif 000004
【０１８９】
Ｄ００２は、英国内において２０１０年に購入した、酵素を含まない市販の洗剤（Ｐｅｒｓｉｌ  Ｓｍａｌｌ  ＆  Ｍｉｇｈｔｙ  ｎｏｎｂｉｏ，２ｘ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ）である。これはＬＡＳ／ＳＬＥＳ／ＮＩ系であり、直接計測でｐＨ８．４を有する。
【０１９０】
実施例２ｂ：アニオン性界面活性剤の存在下におけるリアルタイム保管安定性アッセイ。
単純なアッセイシステムをセットアップして、ＬＡＳなどのアニオン性界面活性剤の存在下における安定性をテストした。
【０１９１】
【表２】
2015507675.tif 000005
【０１９２】
精製したリパーゼを、ＨＳＢ緩衝剤（２．５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７；１０ｍＭ  ＮａＣｌ；０．０２％  Ｂｒｉｊ−３５）で１００ｐｐｍの濃度に希釈した。２０マイクロリットルの１００ｐｐｍリパーゼ溶液を１８０マイクロリットルの緩衝剤溶液に添加し、５分間撹拌し、シールした。サンプルを、界面活性剤を含まない基準緩衝剤Ｘ０１３中（非ストレス下）、および、界面活性剤を含む緩衝剤Ｘ００１またはＸ００２中（ストレス下）で、室温で保管した。４回の反復のサンプルアリコートを、１、２、３、４、６、２４および４８時間後に採取した。
【０１９３】
保管後、可能性のある縮合液体を遠心分離により回収した。１０マイクロリットルのサンプルアリコートを、０．０５Ｍ  ｐＨ９ホウ酸緩衝剤（９ｍＭ  ＣａＣｌ２；０．０２２５％  Ｂｒｉｊ−３５；０．８５％４−ＦＢＰＡ（３１．５ｇ／ｌ））中で２００倍に希釈した。１部の希釈したアリコートを、４部の１ｍＭ  ｐＮＰ−パルミテート、１ｍＭの塩化カルシウム、１００ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、６．５ｍＭのデオキシコレート、１．４ｇ／Ｌ  ＡＯＳと混合し、ｐＮＰ発色団の放出を分光測光法で２０分間かけて計測した。
【０１９４】
残存活性をストレス下での計測速度対非ストレス下でのサンプルの比として算出した。残存活性の平均値を２〜４回の反復に基づいて算出した。
【０１９５】
半減期を、ｙ＝Ａ×２＾（−ｘ／Ｂ）（式中、ｙは残存活性であり、および、ｘはインキュベーション時間である）の曲線を当てはめることにより算出した。この場合、Ｂの最適値が半減期である。当てはめは、Ｒにおけるｎｌｓ−関数（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ）を用いて行う。
【０１９６】
実施例２ｃ：リアルタイム保管安定性アッセイ
２ｍｇ  ＥＰ／ｇストック溶液中の精製したリパーゼを、９６．３％洗剤に６８ｐｐｍの濃度で加えた。サンプルを少なくとも１時間撹拌し、その後、シールしたガラスバイアルに分配し、次いで、保管した。最終保管の後、すべてのサンプルを凍結させ、残存活性について分析し、実験の開始時から凍結させた基準サンプルと比較した。別段の定めがある場合を除き、リパーゼ基準は、突然変異Ｔ２３１ＲおよびＮ２３３Ｒを含むテルモマイセスラヌギノスス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼであった。
【０１９７】
リパーゼ活性を、リパーゼ酵素を０．０１４５〜０．０４９０Ｍ：ＬＣＬＵ／Ｌに希釈し、基質ＰＮＰ−パルミテートと共にインキュベート（ｐＨ８；３７℃）し；放出されたＰＮＰを４０５ｎｍで６５秒間にわたって分光測光法的に検出する方法により計測した。絶対活性は検量線を基準として読み取られる。絶対活性の平均値を２回の反復に基づいて算出した。
【０１９８】
半減期を、ｙ＝Ａ×２＾（−ｘ／Ｂ）（式中、ｙは残存活性であり、および、ｘはインキュベーション時間である）の曲線を当てはめることにより算出した。この場合、Ｂの最適値が半減期である。当てはめは、Ｒにおけるｎｌｓ−関数（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ）を用いて行う。
【０１９９】
実施例３：熱安定性
熱安定性をＣａＣｌ2の不在下に実施例１に記載されているとおり判定した。Ｄ２５４Ｓ置換リパーゼ変異体およびその基準リパーゼに係るＬＡＳの存在または不在下における熱変性温度Ｔｄが表３に示されている。
【０２００】
【表３】
2015507675.tif 000006
【０２０１】
実施例４：熱安定性
熱安定性をＣａＣｌ2の存在下に実施例１に記載されているとおり判定した。種々のＤ２５４置換リパーゼ変異体およびその基準リパーゼに係るＬＡＳの存在または不在下における熱変性温度Ｔｄが表４に示されている。
【０２０２】
【表４】
2015507675.tif 000007
【０２０３】
実施例５：熱安定性
熱安定性を実施例１に記載されているとおり判定した。Ｄ２５４Ｓリパーゼ変異体に係るＬＡＳの存在または不在下における熱変性温度ＴｄおよびＣａＣｌ2が表５に示されている。
【０２０４】
【表５】
2015507675.tif 000008
【０２０５】
実施例６：リアルタイム保管安定性データ
実施例２ａに記載されているとおり、洗剤Ｄ００１において保管安定性を判定した。リパーゼ変異体およびその基準リパーゼの残存活性および半減期改善係数（ＨＩＦ）が表６に示されている。
【０２０６】
【表６】
2015507675.tif 000009
【０２０７】
実施例７：リアルタイム保管安定性データ
実施例２ａに記載されているとおり、洗剤Ｄ００１において保管安定性を判定した。リパーゼ変異体およびその基準リパーゼの残存活性および半減期改善係数（ＨＩＦ）が表７に示されている。
【０２０８】
【表７】
2015507675.tif 000010
【０２０９】
実施例８：種々の洗剤における安定性
実施例２ａに記載されているとおり、洗剤Ｄ００１、Ｄ００２およびＤ００３において保管安定性を判定した。リパーゼ変異体およびその基準リパーゼの半減期（時間）が表８に示されている。
【０２１０】
【表８】
2015507675.tif 000011
【０２１１】
実施例９：ＬＡＳ系における安定性
１、２、３、４、６、２４および４８時間後の保管安定性を、組成物：Ｘ００１およびＸ００２を含む２種のＬＡＳの４回の反復において、実施例２ｂに記載されているとおり、それぞれ、ｐＨ７およびｐＨ９で、判定した。リパーゼは、基準緩衝剤Ｘ０１３中においては、観察時間を通して安定であった。リパーゼ変異体およびその基準リパーゼの半減期（時間）が表９に示されている。
【０２１２】
【表９】
2015507675.tif 000012
【０２１３】
実施例１０：リアルタイム保管安定性データ
保管安定性を実施例２ｃに記載のとおり判定した。種々の温度での洗剤Ｄ００１、Ｄ００２およびＤ００３中のリパーゼ変異体およびその基準リパーゼの半減期（週数）および半減期改善係数（ＨＩＦ）が、それぞれ、表１０ａ、１０ｂおよび１０ｃに示されている。
【０２１４】
【表１０】
2015507675.tif 000013
【０２１５】
【表１１】
2015507675.tif 000014
【０２１６】
【表１２】
2015507675.tif 000015
【０２１７】
実施例１１：混合界面活性剤系における安定性
１９．２５、１６１．７５および３２９．２５時間後の保管安定性を、表１１ａに列挙されているとおり異なる界面活性剤を異なるｐＨで含有する洗剤混合物において、４回の反復で判定した。テストを、実施例２ｂに記載されているとおりであるが、記載の保管温度で行った。リパーゼは、基準緩衝剤Ｘ０１３中においては、観察時間を通して安定であった。リパーゼ変異体およびその基準リパーゼの半減期（時間）が表１１ｂに示されている。改善係数は、Ｄ２５４Ｓ突然変異を伴う変異体の半減期対Ｄ２５４Ｓ突然変異を伴わない変異体の半減期の比として示されている。
【０２１８】
【表１３】
2015507675.tif 000016
【０２１９】
【表１４】
2015507675.tif 000017
【０２２０】
【表１５】
2015507675.tif 000018
【０２２１】
【表１６】
2015507675.tif 000019
【０２２２】
実施例１２：洗剤Ｄ００１中に保管した後のリパーゼの洗浄性能
精製したリパーゼを６．０ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した（５０ｍＭ  Ｈ3ＢＯ3／ＮａＯＨ、１Ｍ  ＮａＣｌ  ｐＨ９）。０．２５ｍｇのリパーゼを５ｇの洗剤Ｄ００１（表１）に添加し、３０分間撹拌し、シールした。サンプルを３７℃（ストレス下）で、０日間、７日間および１４日間保管し、その後、−１８℃（非ストレス下）に移した。
【０２２３】
保管後、洗浄性能を、上記の変更を伴うＡＳＴＭ  Ｄ３０５０（ＡＳＴＭ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗｅｓｔ  Ｃｏｎｓｈｏｈｏｃｋｅｎ，ＰＡ）と同様の方法を用いて実験スケールで計測した。汚染テスト見本（ＣＳ−１０：バターの脂肪および着色剤で汚染した綿、Ｃｅｎｔｅｒ  Ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ）を、５ｇの洗剤Ｄ００１および０ｍｇまたは０．２５ｍｇのリパーゼを含有する１Ｌの洗剤溶液を用いて、Ｔｅｒｇ−Ｏ−ｔｏｍｅｔｅｒ中で９０ｒｐｍで洗浄した。見本を３０℃で、１５°ｄＨ  Ｃａ++／Ｍｇ++／ＨＣＯ３-（比４：１：７．５）の擬似的な水硬度を用いて１５分間洗浄し、次いで、水道からの流水で１０分間すすいだ。洗浄およびすすぎの後、見本を室温で一晩乾燥させた。見本のクリーンさを、４６０ｎｍ（Ｍａｃｂｅｔｈ  Ｃｏｌｏｕｒ  Ｅｙｅ  ７０００反射率分光測光計）の色彩計計測を用いる光放射により判定し、結果は、酵素を含まない洗剤で洗浄したブランクの放射を差し引くことにより、ΔＲとして表記した。
【０２２４】
【表１７】
2015507675.tif 000020
【０２２５】
本明細書に記載され、特許請求されている本発明は、本明細書に開示されている特定の態様によって範囲が限定されるべきではなく、これは、これらの態様は本発明の数々の態様の例示であることが意図されているためである。いずれかの同等の態様は本発明の範囲内であることが意図されている。実際に、本明細書に示され、記載されているものに追加した本発明の種々の改変形態が、前述の記載から当業者には明らかとなるであろう。このような改変形態もまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に属することが意図されている。競合する場合には、定義を含む本開示が優先されることとなる。
【０２２６】
配列表の参照
本出願は、コンピュータ読み取り可能な形態の配列表を含んでおり、これは本明細書において参照により援用される。
【配列表】
2015507675000001.app
【国際調査報告】
2015507675.tif 000021
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