(57)【要約】本明細書において記述される技術は、がん、例えば異常に高いレベルのSREBP1を発現するがんの処置のためのボロン酸ピナコリル置換スチルベンに関する。2015527988.tif 000052
2015527988.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I、II、III、およびIVが以下である、式I、II、IIIまたはIVの化合物:
2015527988.tif 000045
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4およびR5は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -CN; ハロゲン; またはヒドロキシルであり;
R6は環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリールであり;
R7は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
nは0以上、4以下の整数であり; かつ
mは0以上、5以下の整数である;
2015527988.tif 000046
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3、R4、R5、R6、R7およびR8は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R9は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり; かつここでR9およびR5またはR6は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
nは0以上、5以下の整数である;
2015527988.tif 000047
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロである;
2015527988.tif 000048
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり; かつ
nは0以上、4以下の整数である。
【請求項２】
以下からなる群より選択される、請求項1に記載の化合物:
2015527988.tif 000049
2015527988.tif 000050
2015527988.tif 000051
。
【請求項３】
請求項1〜2のいずれか一項に記載のステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)阻害剤を対象に投与する段階を含む、対象におけるがんを処置する方法。
【請求項４】
異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含む、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞が、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを有する細胞である、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
異常な量のErb2を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含む、請求項3に記載の方法。
【請求項７】
FASN、SCD1、またはACLYからなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の異常な量を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含む、請求項3に記載の方法。
【請求項８】
対象が子宮内膜がんを有する、請求項3〜7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
がんが、前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんからなる群より選択される、請求項3〜8のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項1〜2のいずれか一項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項10に記載の組成物。
【請求項１２】
がんを処置するための、請求項1〜2のいずれか一項に記載のステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)阻害剤の使用。
【請求項１３】
がんが、異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞から構成される、請求項12に記載の使用。
【請求項１４】
異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞が、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを有する細胞である、請求項13に記載の使用。
【請求項１５】
がんが、異常な量のErb2を発現する細胞から構成される、請求項12に記載の使用。
【請求項１６】
がんが、FASN、SCD1、またはACLYからなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の異常な量を発現する細胞から構成される、請求項12に記載の使用。
【請求項１７】
がんが子宮内膜がんである、請求項12〜16のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
がんが、前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんからなる群より選択される、請求項17に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2012年6月25日付で出願された米国仮特許出願第61/663,875号の、米国特許法119条(e)の下での恩典を主張するものであり、この内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
配列表
本出願は、EFS-Webを介してASCII形式で提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。2013年6月7日付で作成された前記ASCIIのコピーは、名称が003252-071731-PCT_SL.txtであり、サイズが104,058バイトである。
【０００３】
技術分野
本明細書において記述される技術の態様は、がんの処置に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
急速に増殖している腫瘍細胞の顕著な特徴は、脂質生合成の増大、すなわち脂質の生成の増大である。大部分の正常細胞はその脂肪酸のほとんどを循環血中から獲得するが、腫瘍細胞はそれ自体の必要な脂質の90%超を合成する。がん細胞の脂質生合成調節のかく乱はしたがって、新しいがん治療法の開発のための目標を提案する。
【０００５】
がんに関連した脂質生合成の調節はまた、肥満とがんとの間の関連によって重要である。例えば、疫学研究から、肥満が子宮内膜がんの最も一般的なリスク因子と特定されている。肥満女性は、標準体重の女性と比べて子宮内膜がんを発症するリスクが2〜4培高い。肥満の影響を受けている人の数は、特に発展途上国において、予想通りに増えているので、子宮内膜がんは深刻な公衆衛生問題であり続けるであろう。
【発明の概要】
【０００６】
概要
腫瘍細胞および/または腫瘍細胞になる素因を持った細胞の異常な脂質生合成を標的としうる治療法は、例えば、懸念の高まっている子宮内膜がんの処置および予防において有用である。本明細書において記述される技術の態様は、ボロン酸ピナコリル置換スチルベンが、ステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を阻害し、異常に高いレベルのSREBP1を発現するがんを処置するために用いられうるという本発明者らの発見に基づいている。
【０００７】
したがって、1つの局面において、SREBP1を阻害する化合物が本明細書において提供される。いくつかの態様において、化合物は、
2015527988.tif 000003
2015527988.tif 000004
からなる群より選択することができる。
【０００８】
いくつかの態様において、化合物は、
2015527988.tif 000005
2015527988.tif 000006
2015527988.tif 000007
からなる群より選択することができる。
【０００９】
いくつかの態様において、化合物は、
2015527988.tif 000008
2015527988.tif 000009
からなる群より選択することができる。
【００１０】
いくつかの態様において、化合物は、
2015527988.tif 000010
2015527988.tif 000011
2015527988.tif 000012
からなる群より選択することができる。
【００１１】
1つの局面において、本明細書において記述される技術は、対象におけるがんを処置する方法であって、本明細書において記述されるステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)阻害剤を対象に投与する段階を含む該方法に関する。いくつかの態様において、本方法は、異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含みうる。いくつかの態様において、異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞は、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを有する細胞でありうる。
【００１２】
いくつかの態様において、本方法は、異常な量のErb2を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含みうる。いくつかの態様において、本方法は、FASN、SCD1、またはACLYからなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の異常な量を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含みうる。
【００１３】
いくつかの態様において、対象は子宮内膜がんを有しうる。いくつかの態様において、がんは、前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんからなる群より選択することができる。
【００１４】
1つの局面において、本明細書において記述される技術は、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤を含む薬学的組成物に関する。いくつかの態様において、組成物は薬学的に許容される担体をさらに含みうる。
【００１５】
1つの局面において、本明細書において記述される技術は、がんを処置するための、ステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)の阻害剤の使用に関する。いくつかの態様において、がんは、異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞から構成されうる。いくつかの態様において、異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞は、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを有する細胞でありうる。
【００１６】
いくつかの態様において、がんは、異常な量のErb2を発現する細胞から構成されうる。いくつかの態様において、がんは、FASN、SCD1、またはACLYからなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の異常な量を発現する細胞から構成されうる。
【００１７】
いくつかの態様において、がんは子宮内膜がんでありうる。いくつかの態様において、がんは、前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんからなる群より選択することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】IHCによって判定された子宮内膜がん(EC)におけるSREBP1発現を実証する。図1Aは、正常組織および子宮内膜がんでのSREBP1に対するIHC染色スコアのボックスプロットを示す。図1Bは、SREBP1a、SREBP1c、SREBP2、およびSCD1を含む脂質生合成遺伝子のmRNA存在量の定量的RT-PCR分析のグラフを示す。脂質生合成遺伝子の相対発現レベルを、mRNA存在量を1として設定した正常と比べ、倍率変化として計算した。
【図２Ａ】SREBP1が子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現、細胞増殖、および細胞移動に必要とされることを実証する。一般的に用いられる子宮内膜がん細胞株における、脂質生合成遺伝子の発現のウエスタンブロット(WB)分析。アクチンはタンパク質負荷対照として働く。
【図２Ｂ】SREBP1が子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現、細胞増殖、および細胞移動に必要とされることを実証する。子宮内膜がん細胞におけるSREBP1aおよびSREBP1cのmRNA存在量の定量的RT-PCR分析。RNA存在量は、ECC-1細胞でのそれと比べた倍率変化として示された。
【図２Ｃ】SREBP1が子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現、細胞増殖、および細胞移動に必要とされることを実証する。AN3-CA細胞に、ヒトSREBP1を標的とするshRNA (shSREBP1)を一過性にトランスフェクションした。shSREBP1を安定的に発現する細胞を抗生物質によって選択した。WBにより、SREBP1の低減したタンパク質発現が示された。
【図２Ｄ】SREBP1が子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現、細胞増殖、および細胞移動に必要とされることを実証する。SREBP1aならびにFASNおよびSCD1を含むその標的遺伝子のmRNA存在量の定量的RT-PCR分析。
【図２Ｅ】SREBP1が子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現、細胞増殖、および細胞移動に必要とされることを実証する。AN3-CA細胞での内在性SREBP1ノックダウンは、細胞成長にとって部分的に欠陥がある。異なる時点で細胞をカウントすることによって細胞成長を判定した。
【図２Ｆ】SREBP1が子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現、細胞増殖、および細胞移動に必要とされることを実証する。ボイデン(Boyden)チャンバアッセイを行って、細胞移動能を判定した。トランスウェル(Transwell)アッセイを行って、細胞移動を判定した。細胞1×105個を上部チャンバ中に播種した。6時間後、上部チャンバ中の培地を無血清培地と交換した。下部チャンバは、化学誘引物質として働く10% FBSを補充した培地を含有する。細胞播種から48時間後に、細孔を越えて移動する細胞をカウントし、プロットした。
【図３Ａ】BF175による薬理学的阻害が脂質形成および脂質生合成遺伝子の発現を抑制することを実証する。BF175を与えたショウジョウバエ幼虫。脂肪体を分離し、オイルレッドO (Oil-Red O)で染色した。シグナル伝達を定量化した。
【図３Ｂ】BF175による薬理学的阻害が脂質形成および脂質生合成遺伝子の発現を抑制することを実証する。AN3-CA細胞を漸増用量のBF175で処理した。細胞を24時間後に溶解し、その後、ウエスタンブロットに供して、SREBP1およびその標的遺伝子のタンパク質存在量を検出した。GDIはタンパク質負荷対照として働いた。
【図３Ｃ】BF175による薬理学的阻害が脂質形成および脂質生合成遺伝子の発現を抑制することを実証する。AN3-CA細胞を表示のように漸増用量のBF175で処理した。細胞を24時間後に溶解し、その後、qRT-PCRに供して、表示のようにSREBP1およびその標的遺伝子のmRNA発現を検出した。
【図３Ｄ】BF175による薬理学的阻害が脂質形成および脂質生合成遺伝子の発現を抑制することを実証する。FASNプロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーター活性をSREBP1転写活性の代替的尺度として含めた。nSREBP1をコードするベクターとともにレポータープラスミドでトランスフェクションされたHEK 293T細胞を、漸増用量のBF175で処理した。
【図３Ｅ】BF175による薬理学的阻害が脂質形成および脂質生合成遺伝子の発現を抑制することを実証する。Scdプロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーター活性をSREBP1転写活性の代替的尺度として含めた。nSREBP1をコードするベクターとともにレポータープラスミドでトランスフェクションされたHEK 293T細胞を、漸増用量のBF175で処理した。
【図４】SREBP1発現細胞においてBF175により細胞増殖が抑制されることを実証する。(図4A)漸増用量のBF175による処理の24時間前に子宮内膜がん細胞を播種した。処理から48時間後に、細胞をMTTアッセイに供して、細胞生存性を判定した。BF175は、SREBP1発現が比較的高いRL95-2およびAN3-CA細胞の増殖を顕著に抑制する。(図4B)細胞5×105個を6ウェルプレート中の1ウェルあたりに播種し、増大された用量のBF175で処理した。処理から48時間後に細胞数をカウントした。(図4C) AN3-CA細胞を無血清培地で飢餓にし、BrdUの存在下において培地に10%血清を添加することにより解放した。細胞をBF175または媒体対照で処理した。BrdUを6時間後に染色し、BrdU陽性細胞をカウントした。
【図５】BF175が細胞死を誘導することを実証する。(図5A) AC3-CA細胞を、増大された用量のBF175による48時間処理の24時間前に播種した。細胞をフローサイトメトリーアッセイに供して、アポトーシス細胞死(サブG1期の細胞)の割合を判定した(図5B)。
【図６Ａ】BF175がSREBP1を標的とし、かつSREBP1依存性の遺伝子転写を阻害することを実証する。SREBP1プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターの図式的マップ。
【図６Ｂ】BF175がSREBP1を標的とし、かつSREBP1依存性の遺伝子転写を阻害することを実証する。AN3-CA細胞にSREBP1プロモーターレポータープラスミドを一過性にトランスフェクションし、これをルシフェラーゼ活性の測定前に、漸増用量のBF175で24時間処理した。
【図６Ｃ】BF175がSREBP1を標的とし、かつSREBP1依存性の遺伝子転写を阻害することを実証する。SREBP1プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターの図式的マップ。
【図６Ｄ】BF175がSREBP1を標的とし、かつSREBP1依存性の遺伝子転写を阻害することを実証する。AN3-CA細胞にSREBP1プロモーターレポータープラスミドを一過性にトランスフェクションし、これをルシフェラーゼ活性の測定前に、漸増用量のBF175で24時間処理した。
【図７】脂質生合成におけるSREBP1関連経路の概略図を示す。
【図８】対照細胞と比較した場合の、BF175で処理された細胞の成長率の平均グラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
詳細な説明
本明細書において記述される技術の態様は、本明細書において記述される化合物が、特定のがん、例えば子宮内膜がんにおいて上方制御されかつそれにより、それらのがんが呈する脂質生合成レベルの増大に寄与する遺伝子であるステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を阻害しうるという発見に基づいている。したがって、SREBP1阻害剤を投与することによるがんの処置に関する組成物および方法が本明細書において提供される。いくつかの態様において、がんは子宮内膜がんである。いくつかの態様において、がんは、異常なレベルのSREBP1を発現する細胞から構成される。
【００２０】
便宜上、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲において用いられる特定の用語をここに集めている。特に明記しない限り、または文脈から暗に示されない限り、以下の用語および語句は以下に示す意味を含む。そうではないと明らかに述べられていない限り、または文脈から明らかでない限り、以下の用語および語句は、用語または語句が属する技術分野において獲得した意味を除外することはない。本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるため、定義は、特定の態様の記述を助けるために提供するものであって、主張する本発明を限定する意図はない。特に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。
【００２１】
用語「減少する」、「低減する」、「低減した」、「低減」、「減少する」、および「阻害する」は全て、一般には参照基準と比べて統計的に有意な量の減少を意味するように本明細書において用いられる。しかしながら、不確かさを避けるために、「低減する」、「低減」または「減少する」または「阻害する」は典型的には、参照基準と比べて少なくとも10%の減少を意味し、例えば、参照基準と比べて所与の実体もしくはパラメータの、少なくとも約20%、少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約35%、少なくとも約40%、少なくとも約45%、少なくとも約50%、少なくとも約55%、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約98%、少なくとも約99%の減少、または例えば、最大で完全な欠如（完全な欠如を含む）、または所与の処置がないのと比べて10〜99%の任意の減少を含みうる。
【００２２】
用語「増大する」、「増大した」または「増強する」または「活性化する」は全て、一般には統計的に有意な量の増加を意味するように本明細書において用いられ; 不確かさを避けるために、用語「増大した」、「増大する」または「増強する」または「活性化する」は典型的には、参照基準と比べて少なくとも10%の増加、例えば、参照基準と比べて少なくとも約20%、もしくは少なくとも約30%、もしくは少なくとも約40%、もしくは少なくとも約50%、もしくは少なくとも約60%、もしくは少なくとも約70%、もしくは少なくとも約80%、もしくは少なくとも約90%の増加、または最大で100%の増加（100%の増加を含む）、または10〜100%の間の任意の増加、あるいは参照基準と比べて少なくとも約2倍、もしくは少なくとも約3倍、もしくは少なくとも約4倍、もしくは少なくとも約5倍、もしくは少なくとも約10倍の増加、または2倍から10倍もしくはそれ以上の間の任意の増加を意味する。
【００２３】
本明細書において用いられる用語「生体サンプル」は、生物有機体(biological organism)から採取または単離されたサンプル、例えば、がん生検サンプル、血液サンプル、細胞溶解物、対象由来の組織サンプルのホモジネート、または対象由来の液状サンプルを意味する。例示的な生体サンプルとしては、がん組織生検材料または血液および/もしくは血清サンプルが挙げられるが、これらに限定されることはない。いくつかの態様において、サンプルは切除、生検、または針生検由来である。さらに、微細針吸引サンプルを用いることができる。いくつかの態様において、サンプルはパラフィン包埋組織または凍結組織のいずれかでありうる。用語「生体サンプル」はまた、未処理または前処理(もしくは前加工処理)された生体サンプルを含みうる。いくつかの態様において、生体サンプルは未処理生体サンプルでありうる。本明細書において用いられる場合、語句「未処理生体サンプル」は、溶液中での希釈および/または懸濁を除く事前のいずれのサンプル前処理も受けていない生体サンプルをいう。生体サンプルを処理するための例示的な方法としては、遠心分離、ろ過、超音波処理、ホモジナイゼーション、加熱、凍結融解、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されることはない。当業者は、本明細書において記述されるポリペプチドまたはヌクレオチドのレベルの判定に必要とされる生体サンプルの前加工処理に適した方法およびプロセスを承知している。
【００２４】
サンプルは、対象から細胞のサンプルを取り出すことによって得ることができるが、しかし以前に単離された(例えば前の時点で単離され、かつ同じまたは別の人によって単離された)細胞を用いることによって達成することもできる。加えて、生体サンプルは、新たに収集された、または以前に収集されたサンプルでありうる。いくつかの態様において、生体サンプルは生体液である。生体液の例としては、唾液、血液、痰、吸引物、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されることはない。いくつかの態様において、生体サンプルは凍結された生体サンプル、例えば、凍結された組織または液状サンプル、例えば血液である。凍結されたサンプルは、本発明の方法、アッセイ法およびシステムを用いる前に融解されうる。凍結されたサンプルは、融解後、本発明の方法、アッセイ法およびシステムに供される前に遠心分離されうる。いくつかの態様において、生体サンプルはプロテアーゼ阻害剤のような、少なくとも1種の化学試薬で処理することができる。化学試薬および/または生物試薬を用いて、加工処理の間に、サンプル中の生体分子(例えば、核酸およびタンパク質)を含めて、サンプルの安定性を保護および/または維持することができる。1つの例示的な試薬はプロテアーゼ阻害剤であり、これは一般に、加工処理中のタンパク質の安定性を保護または維持するために用いられる。加えて、またあるいは、化学試薬および/または生物試薬を用いて、サンプルから核酸またはタンパク質を放出させることができる。生体サンプルには細胞を含めることができるが、しかしこの用語は、遺伝子発現レベルを測定するために用いられうる非細胞画分のような、非細胞性の生物材料をいうこともできる。
【００２５】
本明細書において用いられる場合、「対象」はヒトまたは動物を意味する。通常、動物は霊長類、げっ歯類、家畜または狩猟動物のような脊椎動物である。霊長類には、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、およびマカク、例えば、アカゲザル(Rhesus)が含まれる。げっ歯類には、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギおよびハムスターが含まれる。家畜および狩猟動物には、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ科の種、例えば、家ネコ、イヌ科の種、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、鳥科の種、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、ならびに魚類、例えば、マス、ナマズおよびサケが含まれる。患者または対象は、上記の任意のサブセット、例えば、上記の全てを含むが、ただしヒト、霊長類またはげっ歯類のような1種または複数種の群または種を除く。特定の態様において、対象は哺乳類、例えば霊長類、例えばヒトである。用語「患者」、「個体」および「対象」は、本明細書において互換的に用いられる。
【００２６】
好ましくは、対象は哺乳類である。哺乳類はヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシでありうるが、しかしこれらの例に限定されない。例えば、ヒト以外の哺乳類を、例えばがんの、動物モデルに相当する対象として、有利に用いることができる。加えて、本明細書において記述される方法を用いて、家畜および/またはペットを処置することができる。対象は雄性または雌性でありうる。
【００２７】
対象は、以前に、処置を必要としている状態(例えばがん)またはそのような状態に関連した1つもしくは複数の合併症を患っているまたはそれらを有すると診断された、あるいは特定された、かつ任意で、がんの処置またはがんに関連した1つもしくは複数の合併症の処置を既に受けたものでありうる。あるいは、対象はまた、がんまたはがんに関連した1つもしくは複数の合併症を有すると以前に診断されていないものでありうる。例えば、対象は、がんまたはがんに関連した1つもしくは複数の合併症の1つもしくは複数のリスク因子を示す対象、あるいはリスク因子を示さない対象でありうる。特定の状態の処置を「必要としている対象」は、その状態を有する対象、その状態を有すると診断された対象、またはその状態を発症するリスクがある対象でありうる。
【００２８】
本明細書において用いられる場合、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、本明細書において互換的に用いられて、隣接した残基のα-アミノ基とカルボキシ基との間のペプチド結合によって互いに連結されている一連のアミノ酸残基を表す。用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、そのサイズまたは機能に関係なく、修飾アミノ酸(例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化アミノ酸など)およびアミノ酸類似体を含む、アミノ酸の重合体をいう。「タンパク質」および「ポリペプチド」は比較的大きいポリペプチドに関して用いられることが多く、用語「ペプチド」は小さいポリペプチドに関して用いられることが多いが、当技術分野におけるこれらの用語の用法は重なっている。用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、遺伝子産物およびその断片をいう場合、本明細書において互換的に用いられる。したがって、例示的なポリペプチドまたはタンパク質には、遺伝子産物、天然に存在するタンパク質、相同体、オルソログ、パラログ、断片ならびに前記の他の等価物、変種、断片、および類似体が含まれる。
【００２９】
本明細書において用いられる場合、用語「核酸」または「核酸配列」は、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはその類似体の単位を組み込んでいる、任意の分子、好ましくは重合体分子をいう。核酸は一本鎖または二本鎖のどちらかでありうる。一本鎖核酸は、変性した二本鎖DNAの1つの鎖の核酸でありうる。あるいは、いかなる二本鎖DNA由来でもない一本鎖核酸でありうる。1つの局面において、鋳型核酸はDNAである。別の局面において、鋳型はRNAである。適当な核酸分子は、ゲノムDNAまたはcDNAを含むDNAである。他の適当な核酸分子は、mRNAを含むRNAである。
【００３０】
本明細書において用いられる場合、用語「処置する」、「処置」、「処置すること」または「改善」は、目的が、疾患または障害、例えばがんと関連した状態の進行または重症度を、反転させる、軽減する、改善する、阻害する、遅らせるまたは阻止することである、治療的処置をいう。用語「処置すること」は、がんに関連した状態、疾患または障害の少なくとも1つの有害作用または症状を低減することまたは軽減することを含む。処置は一般に、1つまたは複数の症状または臨床マーカーが低減されるなら、「有効」である。あるいは、疾患の進行が低減または停止されるなら、処置は「有効」である。つまり、「処置」は、症状またはマーカーの改善だけでなく、処置がない場合に予想されるであろうものと比べて症状の進行または悪化の、休止、または少なくとも緩徐化も含む。有益なまたは所望の臨床結果には、1つもしくは複数の症状の軽減、疾患の程度の縮減、安定化した(すなわち、悪化していない)疾患状態、疾患の進行の遅延もしくは緩徐化、疾患状態の改善もしくは緩和、寛解(部分的であれ全体的であれ)、および/または検出可能であれ検出不能であれ、死亡率の減少が含まれるが、これらに限定されることはない。疾患の「処置」という用語はまた、疾患の症状または副作用からの解放の供与(待機的処置を含む)を含む。
【００３１】
本明細書において用いられる場合、用語「アルキル」、「アルケニル」および接頭語「アルク-(alk-)」は、直鎖および分枝鎖の両方の基を含み、環状の基、すなわちシクロアルキルおよびシクロアルケニルを含む。他に特に規定がなければ、これらの基は1〜20個の炭素原子を含み、アルケニル基は2〜20個の炭素原子を含む。好ましい基は、合計10個までの炭素原子を有する。環状の基は、単環式であっても多環式であってもよく、好ましくは3〜10個の環炭素原子を有する。例示的な環状の基としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピルメチル、アダマンチル、ノルボルナンおよびノルボルネンが挙げられる。これは、アルキルカルボン酸、アルキルアルコール、アルキルカルボキシレート、アルキルアリールなどのような、接頭語「アルキル-」を含む基についても当てはまる。適当なアルキルカルボン酸基の例は、メチルカルボン酸、エチルカルボン酸などである。適当なアルキルアルコールの例は、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、2-メチルプロパン-1-オールなどである。適当なアルキルカルボキシレートの例は、メチルカルボキシレート、エチルカルボキシレートなどである。適当なアルキルアリール基の例は、ベンジル、フェニルプロピルなどである。
【００３２】
これらは直鎖または分枝、飽和または不飽和脂肪族炭化水素であってよく、これはN、O、またはSが任意で挿入されていてもよい。代表的な飽和直鎖アルキルとしては、エチル、n-プロピル、n-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシルなどが挙げられる; 一方で、飽和分枝アルキルとしては、イソプロピル、sec-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、イソペンチルなどが挙げられる。
【００３３】
本明細書において用いられる場合、用語「アルケニル」は、隣接した炭素原子間の少なくとも1つの二重結合を含んだ、上記に定義される通りの、アルキルを意味する。アルケニルはシスおよびトランス異性体の両方を含む。代表的な直鎖および分枝アルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、1-ブテニル、2-ブテニル、イソブチレニル、1-ペンテニル、2-ペンテニル、3-メチル-1-ブテニル、2-メチル-2-ブテニル、2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられる。
【００３４】
本明細書において用いられる場合、用語「アルキニル」は、隣接した炭素間の少なくとも1つの三重結合をさらに含む、上記に定義される通りの、任意のアルキルまたはアルケニルを意味する。代表的な直鎖および分枝アルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、1-ペンチニル、2-ペンチニル、3-メチル-1ブチニルなどが挙げられる。
【００３５】
本明細書において用いられる用語「アリール」は、炭素環式芳香環または環系を含む。本明細書において用いられる場合、用語「アリール」は、芳香族5〜8員単環式、8〜12員二環式、または11〜14員三環式環系をいう。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フルオレニルおよびインデニルが挙げられる。
【００３６】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも1つの環ヘテロ原子(例えば、O、S、N)を含んだ芳香環または環系を含む。本明細書において用いられる場合、用語「ヘテロアリール」は、単環式なら1〜3個のヘテロ原子、二環式なら1〜6個のヘテロ原子、または三環式なら1〜9個のヘテロ原子であって、O、N、またはSから選択される該ヘテロ原子(例えば、炭素原子に加えて、単環式、二環式、または三環式なら、それぞれ、1〜3個、1〜6個、または1〜9個の、N、O、またはSのヘテロ原子)を有し、各環の0、1、2、3、または4個の原子が置換基によって置換されていてもよい、芳香族5〜8員単環式、8〜12員二環式、または11〜14員三環式環系をいう。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フリルまたはフラニル、イミダゾリル、チアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニルまたはチエニル、キノリニル、インドリル、オキサゾリル、イソキノリニル、イソインドリル、チアゾリル、ピロリル、テトラゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、カルバゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、キノキサリニル、ベンゾチアゾリル、ナフチリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、プリニル、キナゾリニルなどが挙げられる。
【００３７】
アリールおよびヘテロアリール基は、置換されていなくても、またはアルキル、アルコキシ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、アルキルチオ、ハロアルキル、ハロアルコキシ(haoalkoxy)、ハロアルキルチオ、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、カルボキシ、ホルミル、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、アリールアルコキシ、アリールアルキルチオ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルコキシ、ヘテロアリールアルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロアルキル、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルコキシカルボニル、ハロアルキルカルボニル、ハロアルコキシカルボニル、アルキルチオカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アリールチオカルボニル、ヘテロアリールチオカルボニル、アルカノイルオキシ、アルカノイルチオ、アルカノイルアミノ、アリールカルボニルオキシ、アリールカルボニルチオ(arylcarbonythio)、アルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アリールジアジニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アリールアルキルスルホニルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノアルキル、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールアルキルカルボニルアミノ(heteroarylalkycarbonylamino)、アルキルスルホニルアミノ、アルケニルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アリールアルキルスルホニルアミノ、ヘテロアリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールアルキルスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、アルケニルアミノカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニルアミノ、アリールアルキルアミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールアミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノカルボニルアミノおよび、ヘテロシクリルの場合、オキソからなる群より独立して選択される1つまたは複数の置換基によって置換されていてもよい。他の基が「置換されている」または「置換されていてもよい」と記述されているなら、それらの基は上に列挙された置換基の1つまたは複数によって置換されていてもよい。
【００３８】
本明細書において用いられる用語「アリールアルキル」は、アルキル基を通じて親分子部分に付着されたアリール基を含む基をいう。
【００３９】
本明細書において用いられる場合、用語「シクリル」は、非芳香族5〜8員単環式、8〜12員二環式、または11〜14員三環式環系をいい、これらは飽和であってもまたは部分的に不飽和であってもよい。代表的な飽和シクリル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどが挙げられるが、これらに限定されることはない; 一方で、不飽和シクリル基としては、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどが挙げられる。
【００４０】
用語「ヘテロ環」、「ヘテロシクリル」および「ヘテロ環式基」は、当技術分野において認識されており、1〜4個のヘテロ原子を含む、3員〜約7員の環のような、非芳香族3員〜約14員の環構造であり、単環式なら1〜3個のヘテロ原子、二環式なら1〜6個のヘテロ原子、または三環式なら1〜9個のヘテロ原子であって、O、N、またはSから選択される該ヘテロ原子(例えば、炭素原子に加えて、単環式、二環式、または三環式なら、それぞれ、1〜3個、1〜6個、または1〜9個の、N、O、またはSのヘテロ原子)を有し、各環の0、1、2または3個の原子が置換基によって置換されていてもよい、5〜8員単環式、8〜12員二環式、または11〜14員三環式環系をいう。ヘテロ環は、飽和または不飽和である部分を含んでよい。いくつかの態様において、ヘテロ環は、2個またはそれ以上の炭素が2個の隣接している環に共通である、例えば「縮合環」である、2個またはそれ以上の環(例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび/またはヘテロシクリル)を含んでよい。いくつかの態様において、ヘテロ環は「架橋」環であってよく、ここで環が非隣接原子を通じて連結され、例えば、3個またはそれ以上の原子が両環に共通である。ヘテロ環の各々が置換されていてもよい。ヘテロシクリル基の例としては、例えば、チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサチン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、ジオキサン、モルホリン、テトラヒドロフラン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ラクトン、ラクタム、例えばアゼチジノンおよびピロリジノン、スルタム、スルトンなどが挙げられる。ヘテロ環式環は、例えば、ハロゲン、アリール、ヘテロアリール、アルキル、ヘテロアルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフィドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、CF3、CNなどを含む置換基によって1つまたは複数の位置で置換されていてもよい。
【００４１】
本明細書において用いられる場合、用語「ハロゲン」は、ヨウ素、臭素、塩素、およびフッ素をいう。
【００４２】
本明細書において用いられる場合、用語「置換されていてもよいアルキル」、「置換されていてもよいシクリル」、「置換されていてもよいヘテロシクリル」、「置換されていてもよいアリール」、および「置換されていてもよいヘテロアリール」は、置換時に、該アルキル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールにおける少なくとも1個の水素原子が置換基と置き換えられていることを意味する。オキソ置換基(=O)の場合、2個の水素原子が置き換えられる。この関連で、置換基はオキソ、ハロゲン、アルキル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、-CN、-ORx、-NRxRy、-NRxC(=O)Ry、-NRxS02Ry、-C(=O)Rx、-C(=O)ORx、-C(=O)NRxRy、-SOnRxおよび-SOnNRxRyを含み、式中、nが0、1または2であり、RxとRyが同じまたは異なり、独立して水素、アルキル、シクリル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロ環であり、かつ該アルキル、シクリル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロ環置換基の各々がオキソ、ハロゲン、-OH、-CN、アルキル、-ORx、ヘテロ環、-NRxRy、-NRxC(=O)Ry、-NRxSO2Ry、-C(=O)Rx、-C(=O)ORx、-C(=O)NRxRy、-SOnRxおよび-SOnNRxRyの1つまたは複数でさらに置換されていてもよい。
【００４３】
本明細書において用いられる用語「カルボニル」は、「C(=O)」をいう。
【００４４】
用語「アシル」、「カルボキシル基」、または「カルボニル基」は、当技術分野において認識されており、下記一般式によって表すことができるような部分を含みうる:
2015527988.tif 000013
式中、Wは、Rwが水素、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ環、置換されたそれらの誘導体、またはそれらの塩である、ORw、N(RW)2、SRW、またはRwである。例えば、WがO-アルキルである場合、この式は「エステル」を表し、WがOHである場合、この式は「カルボン酸」を表す。Wがアルキルである場合、この式は「ケトン」基を表し、Wが水素である場合、この式は「アルデヒド」基を表す。当業者は、そのような用語の使用を理解するであろう。
【００４５】
本明細書において用いられる場合、用語「置換された」は、有機化合物の全ての認容される置換基を含むものと企図され、「許容可能な」は、当業者に公知の原子価の法則に関連している。場合によって、「置換された」は一般に、本明細書において記述される置換基による水素の置き換えをいいうる。しかしながら、本明細書において用いられる「置換された」は、分子を特定するような、例えば、「置換された」官能基が置換によって異なる官能基になるような重要な置換基の置き換えおよび/または改変を包含しない。例えば、「置換されたフェニル」は、依然としてフェニル部分を含んでいなければならず、この定義において、例えばピリジンのようなヘテロアリール基になるような置換によって修飾することはできない。幅広い局面において、許容可能な置換基には、有機化合物の非環式および環式の置換基、分枝および非分枝の置換基、炭素環式および複素環式の置換基、芳香族および非芳香族の置換基、縮合置換基、ならびに架橋置換基が含まれる。例示的な置換基としては、例えば、本明細書において記述されるものが挙げられる。許容可能な置換基は、適切な有機化合物に対して、1つまたは複数であってもよく、かつ同じであってもまたは異なっていてもよい。本発明の目的で、窒素のようなヘテロ原子は、水素置換基、および/またはヘテロ原子の原子価を満足するような、本明細書において記述される有機化合物の許容可能な任意の置換基を有してもよい。本発明は、有機化合物の許容可能な置換基によって、いかなる制限を受けることも意図されない。
【００４６】
本明細書において用いられる場合、用語「含む(comprising)」または「含む(comprises)」は、本方法または組成物に不可欠である、組成物、方法、およびその各成分に関連して用いられるが、不可欠であるかどうかにかかわらず、明記されていない要素の包含も受け入れる。
【００４７】
用語「からなる」は、態様のその記述において列挙されていない任意の要素を除く、本明細書において記述される組成物、方法、および各成分をいう。
【００４８】
本明細書において用いられる場合、用語「本質的に〜からなる」は、所与の態様に必要とされる要素をいう。この用語は、その態様の基本的かつ新規または機能的な特徴に著しく影響を及ぼさない、要素の存在を許容する。
【００４９】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる場合、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」および「その(the)」は、文脈によって明らかに別のことが示される場合を除き、複数形の言及物を含む。したがって、例えば、「その方法」への言及は、本明細書において記述されるタイプの、および/または本開示を読むことによって当業者には明らかになるなどの、1つまたは複数の方法、および/または段階を含む。同様に、「または」という語は、文脈によって明らかに別のことが示される場合を除き、「および」を含むものと意図される。本明細書において記述されるものと同様または同等な方法および材料を、本開示の実践または試験において用いることができるが、適当な方法および材料を以下に記述する。「例えば(e.g.)」という略号は、ラテン語のexempli gratiaに由来し、非限定的な例を示すために本明細書において用いられる。したがって「例えば(e.g.)」という略号は「例えば(for example)」という用語と同義である。
【００５０】
操作実施例(operating example)以外において、または別のように指示される場合を除き、本明細書において用いられる成分の数量または反応条件を表す全ての数は、いかなる場合にも「約」という用語で修飾されていると理解されるべきである。用語「約」は、割合に関連して用いられる場合、±1%を意味しうる。
【００５１】
用語「統計学的に有意な」または「有意に」は、統計的有意性をいい、一般には基準値を上回るまたは下回る2標準偏差(2SD)を意味する。さらなる定義は、以下の個々の節の文中において提供される。
【００５２】
細胞生物学および分子生物学における一般用語の定義は、「The Merck Manual of Diagnosis and Therapy」, 19th Edition, Merck Research Laboratories刊行, 2006 (ISBN 0-911910-19-0); Robert S. Porter et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd.刊行, 1994 (ISBN 0-632-02182-9); The ELISA guidebook (Methods in molecular biology 149) by Crowther J. R. (2000); Immunology by Werner Luttmann, Elsevier刊行, 2006のなかで見出すことができる。分子生物学における一般用語の定義は、Benjamin Lewin, Genes X, published by Jones & Bartlett Publishing, 2009 (ISBN-10: 0763766321); Kendrew et al. (eds.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc.刊行, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)およびCurrent Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan et al., edsのなかで見出すこともできる。
【００５３】
特に明記しない限り、本発明は、例えば、ともに、参照により全体が本明細書に組み入れられるSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3 ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2001)およびDavis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995)に記述されているように、標準的な手順を用いて行われた。
【００５４】
他の用語は、本発明のさまざまな局面の記述のなかで本明細書において定義される。
【００５５】
本明細書において記述される方法および組成物は、ステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)の活性を阻害することによるがんの処置に関する。本明細書において記述される場合、「ステロール調節結合タンパク質1」または「SREBP1」(例えばNCBI Gene ID: 6720)は、小胞体に結合した不活性前駆体として合成され、細胞ステロールレベルの減少により、逐次的な二段階の切断プロセスを起こして、核内にNH2-末端活性ドメイン(nSREBPと命名されている)を放出し、次いでSREBP標的遺伝子をトランス活性化して、コレステロールおよびFAの恒常性を維持する、脂質恒常性の調節に関わる転写因子をいう。SREBP1活性の標的には、コレステロールおよび脂肪酸(FA)合成に必要とされる酵素、例えばFASNおよびSCDが含まれる。2種のSREBP1ヒトアイソフォームが存在する; SREBP1a (タンパク質: SEQ ID NO: 1; mRNA: SEQ ID NO: 2)およびSREBP1c (タンパク質: SEQ ID NO: 3; mRNA: SEQ ID NO: 4)。いくつかの態様において、SREBP1はSREBP1aおよびSREBP1cをいうことができる。いくつかの態様において、SREBP1はSREBP1aでありうる。いくつかの態様において、SREBP1はSREBP1cでありうる。SREBP1は、特定のがんにおいて異常に高いレベルで発現されることがあり、例えばいくつかのがん型、特に乳がんおよび前立腺がんを含むホルモン応答性組織の場合には悪性転換、がんの進行、増殖および転移と相関関係を有するものと考えられている。
【００５６】
SREBP1の阻害剤に応答して成長阻害を呈する広範囲の腫瘍型(例えば実施例3に記述されるように、白血病、CNSがん、非小細胞肺がん、前立腺がん、黒色腫、結腸がん、卵巣がん、腎臓がん、および乳がん)を考慮すると、本明細書において記述される阻害剤および方法は、増大したまたは高いレベルのSREBP1の発現および/または活性を有する細胞を含む任意のがんを処置できることが本明細書において企図される。
【００５７】
いくつかの態様において、本明細書において記述される技術は、SREBP1の阻害によるがんに特有の脂質生合成の阻害によりがんを処置する方法に関する。いくつかの態様において、SREBP1は、SREBP1の阻害剤を対象に投与することによって阻害することができる。本明細書において用いられる場合、用語「SREBP1の阻害剤」または「SREBP1阻害剤」は、少なくとも10%、例えば10%もしくはそれ以上、20%もしくはそれ以上、30%もしくはそれ以上、50%もしくはそれ以上、75%もしくはそれ以上、90%もしくはそれ以上、95%もしくはそれ以上、98%もしくはそれ以上、または99%もしくはそれ以上、SREBP1の発現および/または活性を低減する薬剤をいう。用語「薬剤」は一般に、細胞、組織または対象に投与されるレベルでは通常には存在しない、または存在しない任意の実体をいう。薬剤は、ポリヌクレオチド; ポリペプチド; 小分子; 抗体; またはその機能的断片を含む群から選択することができる。いくつかの態様において、SREBP1阻害剤はボロン酸ピナコリル置換スチルベンでありうる。
【００５８】
いくつかの態様において、SREBP1の阻害剤は、I、II、IIIまたはIVの式を有する化合物であり得、ここで式I、II、III、およびIVは以下である:
2015527988.tif 000014
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4およびR5は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -CN; ハロゲン; またはヒドロキシルであり;
R6は環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリールであり;
R7は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
nは0以上、4以下の整数であり; かつ
mは0以上、5以下の整数である;
2015527988.tif 000015
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3、R4、R5、R6、R7およびR8は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R9は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり; かつここでR9およびR5またはR6は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
nは0以上、5以下の整数である;
2015527988.tif 000016
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロである;
2015527988.tif 000017
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり; かつ
nは0以上、4以下の整数である。
【００５９】
いくつかの態様において、本明細書において提供されるのは、式IのSREBP1阻害剤である:
2015527988.tif 000018
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4およびR5は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -CN; ハロゲン; またはヒドロキシルであり;
R6は環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリールであり;
R7は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
nは0以上、4以下の整数であり; かつ
mは0以上、5以下の整数である。
【００６０】
いくつかの態様において、R1とR2は異なる。いくつかの態様において、R1とR2は同じである。いくつかの態様において、少なくとも一方のR1またはR2がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R1およびR2の両方がメチル、エチル、プロピル、またはブチルである。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、
2015527988.tif 000019
を形成する。
【００６１】
いくつかの態様において、R3およびR6は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロである。
【００６２】
いくつかの態様において、nは0である。いくつかの態様において、nは1である。いくつかの態様において、nは2である。いくつかの態様において、nは3である。いくつかの態様において、nは4である。
【００６３】
いくつかの態様において、全てのR3が異なる。いくつかの態様において、全てのR3が同じである。いくつかの態様において、少なくとも2つのR3が同じである。いくつかの態様において、少なくとも3つのR3が同じである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC1〜4アルコキシである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がCNである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がハロゲンである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がF、Cl、Br、またはIである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がCF3である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されたアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されていないアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されたフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されていないフェニルである。
【００６４】
いくつかの態様において、R4およびR5は独立して水素、-CN、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオキシ、アリールチオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールチオキシ、またはアルキルハロである。いくつかの態様において、R4とR5は同じである。いくつかの態様において、R4とR5は異なる。いくつかの態様において、少なくともR4が水素である。いくつかの態様において、少なくともR5が水素である。いくつかの態様において、R4およびR5の両方が水素である。いくつかの態様において、R4はC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R4はC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、R4はC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、R4はCNである。いくつかの態様において、R4は置換されたアリールである。いくつかの態様において、R4は置換されていないアリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたフェニルである。いくつかの態様において、R4は置換されていないフェニルである。いくつかの態様において、R5はC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R5はC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、R5はC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、R5はCNである。いくつかの態様において、R5は置換されたアリールである。いくつかの態様において、R5は置換されていないアリールである。いくつかの態様において、R5は置換されたフェニルである。いくつかの態様において、R5は置換されていないフェニルである。いくつかの態様において、R4はCNであり、かつR5はフェニルである。
【００６５】
いくつかの態様において、R6はC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R6はメチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチルまたはt-ブチルである。いくつかの態様において、R6はC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、R6はC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、R6は置換されたまたは置換されていないアリールである。いくつかの態様において、R6は
2015527988.tif 000020
である。
【００６６】
いくつかの態様において、mは0である。いくつかの態様において、mは1である。いくつかの態様において、mは2である。いくつかの態様において、mは3である。いくつかの態様において、mは4である。いくつかの態様において、mは5である。
【００６７】
いくつかの態様において、全てのR7が異なる。いくつかの態様において、全てのR7が同じである。いくつかの態様において、少なくとも2つのR7が同じである。いくつかの態様において、少なくとも3つのR7が同じである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がC1〜4アルコキシである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がCNである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がハロゲンである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がF、Cl、Br、またはIである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がCF3である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも2つのR7がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも3つのR7がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7が、置換されたアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7が、置換されていないアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7が、置換されたフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR7が、置換されていないフェニルである。いくつかの態様において、R7がOH-フェニルである。
【００６８】
いくつかの態様において、式Iは
2015527988.tif 000021
でありうる。
【００６９】
いくつかの態様において、本明細書において提供されるのは、式IIのSREBP1阻害剤である:
2015527988.tif 000022
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3、R4、R5、R6、R7およびR8は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R9は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり; かつここでR9およびR5またはR6は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
nは0以上、5以下の整数である。
【００７０】
いくつかの態様において、R1とR2は異なる。いくつかの態様において、R1とR2は同じである。いくつかの態様において、少なくとも一方のR1またはR2がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R1およびR2の両方がメチル、エチル、プロピル、またはブチルである。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、
2015527988.tif 000023
を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、
2015527988.tif 000024
を形成する。
【００７１】
いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の1つ1つが異なる。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の全てが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の少なくとも2つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の少なくとも3つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも4つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の少なくとも5つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の少なくとも1つが水素である。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の1つ1つが水素である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がメチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、またはt-ブチルである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7およびR8の少なくとも1つがC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がC1〜4アルコキシである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がCNである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がハロゲンである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がF、Cl、Br、またはIである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がCF3である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8が、置換されたアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8が、置換されていないアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8が、置換されたフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8が、置換されていないフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7およびR8がB(0)R1R2である。
【００７２】
いくつかの態様において、nは0である。いくつかの態様において、nは1である。いくつかの態様において、nは2である。いくつかの態様において、nは3である。いくつかの態様において、nは4である。
【００７３】
いくつかの態様において、全てのR9が異なる。いくつかの態様において、全てのR9が同じである。いくつかの態様において、少なくとも2つのR9が同じである。いくつかの態様において、少なくとも3つのR9が同じである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がメチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、またはt-ブチルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がC1〜6アルコキシである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がC1〜6アルコールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がC1〜6ジオールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がO-C1〜6アルコールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がO-C1〜6ジオールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が置換または非置換環式脂肪族である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が単環式である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が二環式である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が三環式である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が6員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が7員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が8員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が9員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が10員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が11員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が12員環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がS-C1〜12アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がS-C1〜12アルキルであり、ここでC1〜12アルキルは単環式、二環式、または三環式環系である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がCNである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がハロゲンである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がF、Cl、Br、またはIである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がCF3である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が、置換されたアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が、置換されていないアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が、置換されたフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR9が、置換されていないフェニルである。
【００７４】
いくつかの態様において、R9はオルト位にある。いくつかの態様において、R9はメタ位にある。いくつかの態様において、R9はパラ位にある。いくつかの態様において、1つのR9はメタ位にあり、かつ1つのR9はパラ位にある。いくつかの態様において、1つのR9はオルト位にあり、かつ1つのR9はパラ位にある。いくつかの態様において、1つのR9はオルト位にあり、1つのR9はメタ位にあり、かつ1つのR9はパラ位にある。
【００７５】
いくつかの態様において、式IIは
2015527988.tif 000025
2015527988.tif 000026
でありうる。
【００７６】
いくつかの態様において、本明細書において提供されるのは、式IIIのSREBP1阻害剤である:
2015527988.tif 000027
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロである。
【００７７】
いくつかの態様において、R1とR2は異なる。いくつかの態様において、R1とR2は同じである。いくつかの態様において、少なくとも一方のR1またはR2がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R1およびR2の両方がメチル、エチル、プロピル、またはブチルである。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、
2015527988.tif 000028
を形成する。
【００７８】
いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の1つ1つが異なる。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の全てが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも2つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも3つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも4つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも5つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも6つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも7つが同じである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも1つが水素である。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の1つ1つが水素である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がメチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、またはt-ブチルである。いくつかの態様において、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11の少なくとも1つがC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がC1〜4アルコキシである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がCNである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がハロゲンである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がF、Cl、Br、またはIである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がCF3である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9およびR11が、置換されたアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11が、置換されていないアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11が、置換されたフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11が、置換されていないフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11がB(O)R1R2である。
【００７９】
いくつかの態様において、
式IIIは
2015527988.tif 000029
でありうる。
【００８０】
いくつかの態様において、本明細書において提供されるのは、式IVのSREBP1阻害剤である:
2015527988.tif 000030
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり; かつ
nは0以上、4以下の整数である。
【００８１】
いくつかの態様において、R1とR2は異なる。いくつかの態様において、R1とR2は同じである。いくつかの態様において、少なくとも一方のR1またはR2がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、R1およびR2の両方がメチル、エチル、プロピル、またはブチルである。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換5員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、非置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、置換6員環を形成する。いくつかの態様において、R1およびR2は一緒になって、
2015527988.tif 000031
を形成する。
【００８２】
いくつかの態様において、R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロである。
【００８３】
いくつかの態様において、nは0である。いくつかの態様において、nは1である。いくつかの態様において、nは2である。いくつかの態様において、nは3である。いくつかの態様において、nは4である。
【００８４】
いくつかの態様において、全てのR3が異なる。いくつかの態様において、全てのR3が同じである。いくつかの態様において、少なくとも2つのR3が同じである。いくつかの態様において、少なくとも3つのR3が同じである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC1〜4アルキルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC2〜4アルケニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC2〜4アルキニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がC1〜4アルコキシである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がCNである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がハロゲンである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がF、Cl、Br、またはIである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がCF3である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3がNO2である。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されたアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されていないアリールである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されたフェニルである。いくつかの態様において、少なくとも1つのR3が、置換されていないフェニルである。
【００８５】
いくつかの態様において、R4は置換されていないアリールである。いくつかの態様において、R2は置換されたアリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたまたは置換されていない単環式アリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたまたは置換されていない二環式アリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたまたは置換されていない三環式アリールである。いくつかの態様において、R4は置換されていないヘテロアリールである。いくつかの態様において、R2は置換されたヘテロアリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたまたは置換されていない単環式ヘテロアリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたまたは置換されていない二環式ヘテロアリールである。いくつかの態様において、R4は置換されたまたは置換されていない三環式ヘテロアリールである。いくつかの態様において、R4は
2015527988.tif 000032
である。
【００８６】
いくつかの態様において、R4は置換されている。いくつかの態様において、R4は2つ以上の位置で置換されている。いくつかの態様において、R4はC1〜4アルキルで置換されている。いくつかの態様において、R4はC2〜4アルケニルで置換されている。いくつかの態様において、R4はC2〜4アルキニルで置換されている。いくつかの態様において、R4はC1〜4アルコキシで置換されている。いくつかの態様において、R4はCNで置換されている。いくつかの態様において、R4はハロゲンで置換されている。いくつかの態様において、R4はF、Cl、Br、またはIで置換されている。いくつかの態様において、R4はCF3で置換されている。いくつかの態様において、R4はNO2で置換されている。いくつかの態様において、R4は置換されたアリールで置換されている。いくつかの態様において、R4は置換されていないアリールで置換されている。
【００８７】
いくつかの態様において、式IVは
2015527988.tif 000033
でありうる。
【００８８】
所与の化合物がSREBP1の発現および/または活性を低減させるかどうかは、インビトロでもしくはインビボで、例えばインビトロのアッセイ法で、または例えば乳がんの、動物モデルで判定することができる。SREBP1の発現を判定する方法は、本明細書において以下に記述されている。非限定的な例は、本明細書において実施例に記述されているように腫瘍組織の免疫組織化学的分析でありうる。手短に言えば、腫瘍組織の5μm厚の切片をキシレンで脱パラフィン化し、段階的な一連のアルコールによって再水和させる。内在性ペルオキシダーゼ活性は、3%過酸化水素水溶液中での15分間のインキュベーションによってブロックすることができる。抗原回復は、スライドを10 mMクエン酸ナトリウム緩衝液(pH 6.0)に浸し、それらを5分間、沸騰温度未満に維持することによって行うことができる。スライドをリン酸緩衝生理食塩水中でリンスし、10%正常血清とともにインキュベートして、非特異的な染色をブロックすることができる。スライドを次いで、加湿チャンバ中4℃で終夜、一次抗体(抗SREBP1, K-10, Santa Cruz)とともにインキュベートすることができる。例えば、本明細書において実施例に記述されているように、例えば、半定量的スコアリングシステムのような、半定量的方法を用いて、染色を評価することができる。SREBP1が転写因子である場合、その活性は、トランス活性化される1種または複数種の遺伝子、例えば、ACLYおよびSCD1またはFASNの活性をモニタリングすることによって判定することができる。SREPB1標的遺伝子の発現は、例えばRT-PCRを介して、または例えば他の免疫化学的手法のウエスタンブロットによって、タンパク質レベルでモニターすることができる。あるいは、これらのSREBP1標的遺伝子(または他の標的遺伝子)に対するプロモーターをレポーター遺伝子、例えばGFPに核酸連結させて、所与の条件の下でSREBP1活性に対する培養細胞の読み出しを与えることができる。いくつかの態様において、SREBP1活性が減少するなら、SREBP1の両アイソフォーム、SREBP2、ACLY、およびSCD1の発現は減少するが、FASNの発現はそれほどではないにせよ減少し、PKLRの発現は変化しないと考えられる。
【００８９】
いくつかの態様において、本明細書において記述される方法は、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤によるがんの処置を受ける対象を選択することに関する。本明細書において記述される方法による処置に向けて選択される対象は、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤に感受性であるか、または感受性である可能性が高い細胞から構成されるがん、例えば異常な(例えば高い)レベルのSREBP1を発現する細胞を有するがんを有するものであるべきである。がんがSREBP1阻害剤に感受性である可能性が高いかどうかは、例えば、がん細胞が、異常なレベルのSREBP1を典型的には発現するがん細胞のタイプのものであるかどうかを判定することによって、またはそれらが異常なレベルのSREBP1を発現するかどうかを判定することによって、判定することができる。
【００９０】
いくつかの態様において、対象は、異常なレベルのSREBP1を発現するがん細胞を有しうる。本明細書において用いられる場合、用語「異常なレベル」のSREBP1は、健常個体由来の同じタイプの細胞におけるSREBP1発現産物および/または活性のレベルを代表する対照基準サンプルでのSREBP1発現産物および/または活性の量よりも顕著に高いSREBP1発現産物および/または活性の量をいうことができる。
【００９１】
いくつかの態様において、異常なレベルのSREBP1を発現する対象は、1超のHスコアを有するがんを有している対象でありうる。Hスコアは、対象から得られ、SREBP1ポリペプチドの発現について本明細書において記述されるように染色されたがんのサンプルの免疫組織化学的染色に基づいて計算することができる。そのような臨床標本におけるSREBP1の発現レベルは、陽性細胞の全割合および染色の強度(1+、2+、または3+)に基づいてスコア化する(Hスコア)ことができ、ここでH = (%「1+」×1) + (%「2+」×2) + (%「3+」×3)である。0〜1のスコアは正常なレベルのSREBP1発現でありうるが、1超のスコア、例えば1.1もしくはそれ以上、1.5もしくはそれ以上、2.0もしくはそれ以上、または2.5もしくはそれ以上のスコアは異常なレベルのSREBP1発現でありうる。
【００９２】
いくつかの態様において、対照基準サンプルは、SREBP1レベルを判定したい細胞と同じタイプの健常細胞を含みうる。いくつかの態様において、対照基準サンプルの細胞は、SREBP1発現および/または活性のレベルを判定したい細胞と類似の年齢、発達状態、性別、および/または細胞型のものでありうる。いくつかの態様において、対照基準サンプルは、SREBP1発現および/または活性のレベルを判定したい対象生物と類似の年齢、発達状態、および/または性別の健常生物から得ることができる。いくつかの態様において、試験サンプルおよび対照基準サンプルは、同じタイプのものである、つまり、同じ生物学的供給源から得られ、かつ同じ組成、例えば同じ数および型の細胞を含むものである。いくつかの態様において、対照基準サンプルは、がん細胞が由来する細胞型のものである対象生物由来の非がん性細胞であり得、例えば、がん性細胞が乳がん細胞であるなら、対照基準サンプルは、同じ対象由来の健常乳房細胞でありうる。
【００９３】
いくつかの態様において、対象は、対象の細胞におけるSREBP1発現産物および/または活性のレベルが、対照基準サンプルに存在するSREBP1発現産物および/または活性のレベルよりも顕著に高いなら、本明細書において記述される方法による処置の候補である。いくつかの態様において、対象は、対象の細胞におけるSREBP1発現産物および/または活性のレベルが、対照基準サンプルに存在するSREBP1発現産物および/または活性のレベルよりも少なくとも2倍高い、例えば2倍もしくはそれより高い、3倍もしくはそれより高い、4倍もしくはそれより高い、5倍もしくはそれより高い、または6倍以上もしくはそれより高いなら、本明細書において記述される方法による処置の候補である。
【００９４】
所与の遺伝子の発現は、その遺伝子の発現産物のいずれか、例えばその遺伝子によってコードされるmRNAまたはポリペプチドのレベルを測定することによって判定することができる。いくつかの態様において、異常なレベルの遺伝子を発現する細胞は、その遺伝子によってコードされるmRNAの異常なレベルを発現する細胞でありうる。いくつかの態様において、異常なレベルの遺伝子を発現する細胞は、その遺伝子によってコードされるポリペプチドの異常なレベルを発現する細胞でありうる。
【００９５】
いくつかの態様において、異常なレベルのSREBP1を発現する細胞は、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを発現する細胞でありうる。
【００９６】
発現のレベル、例えばSREBP1の発現のレベルは、対象から得られた生体サンプル中の、SREBP1によってコードされるmRNAおよび/またはポリペプチドのレベルを測定することによって判定することができる。いくつかの態様において、生体サンプルはがん細胞を含む。いくつかの態様において、生体サンプルは生検サンプルを含む。
【００９７】
対象または対象から得られたサンプルにおけるmRNAおよび/またはポリペプチドのレベルを判定するための方法は、当技術分野において周知である。SREBP1ポリペプチドのレベルを判定する方法には、ウエスタンブロット法; 免疫沈降法; 酵素免疫測定(ELISA)法; 放射性免疫測定(RIA)法; サンドイッチアッセイ法; 蛍光インサイチューハイブリダイゼーション(FISH)法; 免疫組織学的染色; 放射免疫アッセイ法; 質量分析法および/または免疫電気泳動アッセイ法が含まれるが、これらに限定されることはない。特定の態様において、SREBP1ポリペプチドのレベルを判定することは、抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、および/またはモノクローナル抗体断片の使用を伴う。SREBP1に特異的な抗体は市販されている、例えばAbcam; Cambridge, MAのカタログ番号3259。SREBP1 mRNAのレベルを判定する方法には、RT-PCR法、定量的RT-PCR法、ハイブリダイゼーションアッセイ法、RNA-Seq法、ノザンブロット法、ハイスループット配列決定法、および/またはマイクロアレイに基づく発現解析が含まれるが、これらに限定されることはない。
【００９８】
ある細胞において特定の遺伝子が異常に高いレベルで発現される場合に同じ細胞においてSREBP1が異常なレベルで発現される可能性が高い、すなわち、その発現がSREBP1発現の直接測定の代わりとして働きうる遺伝子が存在する。そのような遺伝子の非限定的な例としては、Erb2 (NCBI Gene ID: 2100、例えばSEQ ID NO: 05 (mRNA)、SEQ ID NO: 06 (タンパク質); FASN (NCBI Gene ID: 2194、例えばSEQ ID NO: 07 (mRNA)、SEQ ID NO: 08 (タンパク質); SCD1 (NCBI Gene ID: 6319、例えばSEQ ID NO: 09 (mRNA)、SEQ ID NO: 10 (タンパク質); またはACLY (NCBI Gene ID: 47、例えばSEQ ID NO: 11 (mRNA)、SEQ ID NO: 12 (タンパク質)が挙げられる。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法による処置を必要としている対象は、異常なレベルのSREBP1の発現と相関がある遺伝子の異常なレベルを発現するがん細胞を有することができる。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法による処置を必要としている対象は、異常なレベルのSREBP1の発現と相関がある1種または複数種の遺伝子のmRNAの異常なレベルを発現するがん細胞を有することができる。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法による処置を必要としている対象は、異常なレベルのSREBP1の発現と相関がある1種または複数種の遺伝子のポリペプチドの異常なレベルを発現するがん細胞を有することができる。対象のがん細胞におけるこれらの遺伝子の発現は、SREBP1について本明細書に上述されているように判定することができる。Erb2、FASN、SCD1、およびACLYに特異的な抗体、例えば、それぞれ、Abcam; Cambridge, MAのカタログ番号ab3576、ab22759、ab19862、およびab40793は、市販されている。
【００９９】
いくつかの態様において、SREBP1および/または異常なレベルのSREBP1の発現と相関がある1種もしくは複数種の遺伝子の発現レベルを判定することは、20種以下の遺伝子、例えば20種もしくはそれ以下の遺伝子、15種もしくはそれ以下の遺伝子、10種もしくはそれ以下の遺伝子、または5種もしくはそれ以下の遺伝子の発現を判定することを伴う。
【０１００】
特定のがんは、SREBP1の異常な発現によって特徴付けられる、および/または特徴付けられる可能性が高いことが知られている。そのようながんの非限定的な例としては、子宮内膜がん; 前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんが挙げられうる。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法によって処置される対象は、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤に感受性である可能性が高いがんを有しうる。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法による処置に向けて選択される対象は、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤に感受性である可能性が高いがんを有しうる。本明細書において記述されるSREBP1阻害剤に感受性である可能性が高いがんは、SREBP1の異常な発現を有することが知られているがん型でありうる。
【０１０１】
いくつかの態様において、本明細書において記述される方法によって処置されるがんは、低分化腫瘍または中分化腫瘍を含む。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法によって処置されるがんは、高分化腫瘍を含まない。腫瘍の分化のレベルは、当業者に周知の方法、例えばグリーソンスコアによって判定することができ、グリーソンスコアでは、悪性度1の腫瘍が高分化型であり、悪性度2の腫瘍が中分化型であり、悪性度3またはそれ以上の腫瘍が低分化型である(例えばGleason, Donald F; Mellinger George T. J. Urol. 2002 167:953-8を参照のこと; これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる)。
【０１０２】
いくつかの態様において、本明細書において記述される方法は、がんを有する対象またはがんを有すると診断された対象を、SREBP1阻害剤で処置することに関する。がんを有する対象は、医師が、がんを診断する現行の方法を用いて特定することができる。その状態を特徴付けてかつ診断に役立つがんの症状および/または合併症は、当技術分野において周知であり、例えば、乳がんの場合、乳房組織中のしこりもしくは塊、乳房の全部もしくは一部の腫れ、皮膚炎、乳房のえくぼ症状、乳房もしくは乳頭の痛み、乳頭退縮、赤み、鱗状、または乳房もしくは乳頭の炎症、および乳頭分泌を含むが、これらに限定されることはない。例えば乳がんの、診断に役立ちうる検査には、乳房撮影、X線、MRI、超音波、ダクトグラム、生検、および乳管洗浄細胞診が含まれるが、これらに限定されることはない。がんの家族歴、またはがんのリスク因子(例えば喫煙、放射線、汚染物質、BRCA1変異など)への曝露も、対象が、がんを有する可能性が高いかどうかを判定するのに、またはがんの診断をするのに役立ちうる。本明細書において用いられる用語「悪性腫瘍」、「悪性疾患」、「がん」または「腫瘍」は、身体の器官および系の正常な機能を妨害する制御されない細胞増殖をいう。
【０１０３】
本明細書において記述される組成物および方法は、がんを有する対象またはがんを有すると診断された対象に投与することができる。いくつかの態様において、本明細書において記述される方法は、がんの症状を軽減するために対象に、本明細書において記述される組成物、例えばSREBP1阻害剤の有効量を投与する段階を含む。本明細書において用いられる場合、「がんの症状を軽減すること」は、がんに関連した任意の状態または症状を軽減することである。等価な未処置対照と比べて、そのような低減は、任意の標準的な技法によって測定された場合に少なくとも5%、10%、20%、40%、50%、60%、80%、90%、95%、99%またはそれ以上である。本明細書において記述される組成物を対象に投与するための種々の手段は、当業者に知られている。そのような方法は、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、気道(エアロゾル)、肺、または腫瘍内を含む、経口または非経口経路を含みうるが、これらに限定されることはない。投与は局所性または全身性でありうる。
【０１０４】
本明細書において用いられる用語「有効量」は、疾患または障害の少なくとも1つまたは複数の症状を軽減するために必要とされるSREBP1阻害剤の量をいい、所望の効果を与えるのに十分な薬理学的組成物の量に関する。用語「治療的有効量」はそれゆえ、典型的な対象への投与時に特定の抗がん効果を引き起こすのに十分であるSREBP1阻害剤の量をいう。本明細書において用いられる有効量はまた、さまざまな状況で、疾患の症状の発現を遅延させるのに、疾患の症状の経過を変化させるのに(例えば、限定されることはないが、疾患の症状の進行を遅らせるのに)、または疾患の症状を改善するのに十分な量を含む。したがって、正確な「有効量」を指定することは一般に実用的ではない。しかしながら、任意の所与の場合に、当業者は日常の実験のみを用いて適切な「有効量」を判定することができる。
【０１０５】
有効量、毒性、および治療効力は、例えば、LD50 (集団の50%に対して致死的な用量)およびED50 (集団の50%において治療的に有効な用量)を判定するための、細胞培養物または実験動物での標準の薬学的手順によって判定することができる。投与量は、採用される投薬形態および利用される投与経路に依って変化しうる。毒性と治療効果との間の用量比が治療指数であり、これはLD50/ED50比として表すことができる。大きい治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療的に有効な用量は、細胞培養アッセイ法から最初に推定することができる。また、一定用量を動物モデルにおいて処方して、細胞培養または適切な動物モデルにおいて判定された通りのIC50 (すなわち、症状の半最大阻害を達成するSREBP1阻害剤濃度)を含む循環血漿濃度範囲を達成することができる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定することができる。任意の特定の投与量の効果は、適当なバイオアッセイ法、例えば、数ある中でも、SREBP1活性の阻害のアッセイ法またはがん細胞増殖の阻害のアッセイ法によってモニターすることができる。投与量は、医師が判定し、必要に応じて調整し、認められる処置効果に合わせることができる。
【０１０６】
特定の態様において、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤を含む組成物の有効な用量は、患者に1回投与することができる。特定の態様において、SREBP1阻害剤を含む組成物の有効な用量は、患者に繰り返し投与することができる。患者に、例えば0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg、25 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg、またはそれ以上のような、SREBP1阻害剤を含む組成物の治療量を投与することができる。SREBP1阻害剤を含む組成物は、5分、10分、15分、20分、または25分間のような、時間をかけて投与することができる。正当なら、例えば、1時間に1回を3時間、6時間、12時間もしくはそれ以上にわたってなど、または2週間に1回(すなわち、2週間ごとに)を1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月もしくはそれ以上にわたってなど、投与を定期的に繰り返すことができる。場合によっては、最初の処置レジメンの後、処置をさらに低頻度に施すことができる。例えば、2週間に1回の投与を3ヶ月にわたって行った後、1ヶ月に1回の投与を6ヶ月もしくは1年またはそれ以上にわたって繰り返すことができる。SREBP1阻害剤を含む組成物の投与は、がんのマーカーまたは症状のレベル、例えば腫瘍のサイズまたは腫瘍の成長の速度を、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%もしくは少なくとも90%またはそれ以上低減させることができる。
【０１０７】
本明細書において記述される組成物の投与量は、医師が判定し、必要に応じて調整し、認められる処置効果に合わせることができる。処置の持続期間および頻度に関して、熟練医師には、処置が治療効果をもたらしている時点を判定するために、投与量を増やすかもしくは減らすか、投与頻度を増やすかもしくは減らすか、処置を中止するか、処置を再開するか、または処置レジメンに対して他の変更を行うかどうかを判定するために、対象をモニターすることは典型的である。投薬スケジュールは、対象のSREBP1阻害剤に対する感受性のような、いくつかの臨床因子に依って、1週間に1回から1日に1回まで変化しうる。
【０１０８】
いくつかの態様において、本明細書において記述される技術は、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤と、任意で、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物に関する。薬学的に許容される担体および希釈剤には、生理食塩水、水性緩衝溶液、溶媒および/または分散媒が含まれる。そのような担体および希釈剤の使用は、当技術分野において周知である。薬学的に許容される担体として働きうる材料のいくつかの非限定的な例としては、(1) ラクトース、グルコースおよびスクロースのような糖類; (2) トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンのようなデンプン; (3) セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロースおよび酢酸セルロース; (4) 粉末トラガカント; (5) 麦芽; (6) ゼラチン; (7) ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような滑沢剤; (8) カカオ脂および坐剤ワックスのような賦形剤; (9) 落花生油、綿実油、ヒマワリ油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびダイズ油のような油; (10) プロピレングリコールのようなグリコール; (11) グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール(PEG)のようなポリオール; (12) オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル; (13) 寒天; (14) 水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤; (15) アルギン酸; (16) 発熱物質を含まない水; (17) 等張食塩水; (18) リンゲル液; (19) エチルアルコール; (20) pH緩衝化溶液; (21) ポリエステル、ポリカーボネートおよび/またはポリ無水物; (22) ポリペプチドおよびアミノ酸のような増量剤(23) 血清アルブミン、HDLおよびLDLのような血清成分; (22) エタノールのようなC2〜C12アルコール; ならびに(23) 薬学的製剤中で採用される他の無毒性の適合物質が挙げられる。湿潤剤、着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、着香剤、芳香剤、保存料および抗酸化物質も、製剤中に存在しうる。「賦形剤」、「担体」、「薬学的に許容される担体」などのような用語は、本明細書において互換的に用いられる。いくつかの態様において、担体は活性薬剤、例えば本明細書において記述されるSREBP1阻害剤の分解を阻害する。
【０１０９】
本明細書において記述される方法は、例えば組み合わせ療法の一部として、対象に第2の薬剤および/または処置を投与する段階をさらに含みうる。第2の薬剤および/または処置の非限定的な例としては、放射線治療、外科手術、ゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン、ボルテゾミブ、AMG479、ボリノスタット、リツキシマブ、テモゾロミド、ラパマイシン、ABT-737、PI-103; チオテパおよびシトキサン(CYTOXAN) (登録商標)シクロフォスファミドのようなアルキル化剤; ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンのようなスルホン酸アルキル; ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパのようなアジリジン; アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド(trietylenephosphoramide)、トリエチレンチオホスホルアミド(triethiylenethiophosphoramide)およびトリメチロロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミンおよびメチラメラミン; アセトゲニン(特にブラタシンおよびブラタシノン); カンプトテシン(合成類似体トポテカンを含む); ブリオスタチン; カリスタチン; CC-1065 (そのアドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む); クリプトフィシン(特にクリプトフィシン1およびクリプトフィシン8); ドラスタチン; デュオカルマイシン(合成類似体KW-2189およびCB1-TM1を含む); エリュテロビン; パンクラチスタチン; サルコジクチイン; スポンジスタチン; クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードのようなナイトロジェンマスタード; カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン(ranimnustine)のようなニトロソ尿素(nitrosureas); 抗生物質、例えばエンジイン抗生物質(例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ1IおよびカリケアミシンωI1(例えば、Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)を参照のこと); ジネミシンAを含むジネミシン; クロドロネートのようなビスホスホネート; エスペラマイシン; ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連した色素タンパク質エネジン抗生物質クロモフォア)、アクラシノマイシン(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン(chromomycinis)、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、6-ジアゾ-5-オキソ-L-ノルロイシン、アドリアマイシン(ADRIAMYCIN) (登録商標)ドキソルビシン(モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、2-ピロリノ-ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンCのようなマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン; メトトレキサートおよび5-フルオロウラシル(5-FU)のような代謝拮抗物質; デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートのような葉酸類似体; フルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体; アンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンのようなピリミジン類似体; カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンのようなアンドロゲン; アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤; フロリン酸(frolinic acid)のような葉酸補給剤; アセグラトン; アルドホスファミドグリコシド; アミノレブリン酸; エニルウラシル; アムサクリン; ベストラブシル; ビサントレン; エダトラキサート(edatraxate); デフォファミン; デメコルシン; ジアジクオン; エルホルミチン; 酢酸エリプチニウム; エポチロン; エトグルシド; 硝酸ガリウム; ヒドロキシウレア; レンチナン; ロニダイニン; メイタンシンおよびアンサミトシンのようなメイタンシノイド; ミトグアゾン; ミトキサントロン; モピダンモール(mopidanmol); ニトラエリン; ペントスタチン; フェナメット; ピラルビシン; ロソキサントロン; ポドフィリン酸; 2-エチルヒドラジド; プロカルバジン; PSK(登録商標)多糖類複合体(JHS Natural Products、Eugene、Oreg.); ラゾキサン; リゾキシン; シゾフラン; スピロゲルマニウム; テヌアゾン酸; トリアジクオン; 2,2',2''-トリクロロトリエチルアミン; トリコテセン(特にT-2毒素、ベラクリンA、ロリジンAおよびアングイジン); ウレタン; ビンデシン; ダカルバジン; マンノムスチン; ミトブロニトール; ミトラクトール; ピポブロマン; ガシトシン; アラビノシド(「Ara-C」); シクロホスファミド; チオテパ; タキソイド、例えば、タキソール(TAXOL) (登録商標) パクリタキセル(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、アブラキサン(ABRAXANE) (登録商標) パクリタキセルのクレモフォール(Cremophor)無添加アルブミン操作ナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, I11.)、およびタキソテール(TAXOTERE) (登録商標) ドキセタキセル(Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); クロランブシル; GEMZAR(登録商標)ゲムシタビン; 6-チオグアニン; メルカプトプリン; メトトレキサート; シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンのような白金類似体; ビンブラスチン; 白金; エトポシド(VP-16); イホスファミド; マイトキサントロン; ビンクリスチン; ナベルビン(NAVELBINE) (登録商標)ビノレルビン; ノバントロン; テニポシド; エダトレキサート; ダウノマイシン; アミノプテリン; ゼローダ; イバンドロナート; イリノテカン(Camptosar、CPT-11) (イリノテカンと5-FUおよびロイコボリンとの処置レジメンを含む); トポイソメラーゼ阻害剤RFS 2000; ジフルオロメチルオルニチン(DMFO); レチノイン酸のようなレチノイド; カペシタビン; コンブレタスタチン; ロイコボリン(LV); オキサリプラチン処置レジメン(FOLFOX)を含む、オキサリプラチン; ラパチニブ(タイケルブ(Tykerb) (登録商標)); 細胞増殖を低減するPKC-α、Raf、H-Ras、EGFR (例えば、エルロチニブ(タルセバ(Tarceva) (登録商標)))およびVEGF-Aの阻害剤ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体を挙げることができる。
【０１１０】
加えて、処置の方法は、放射線または放射線療法の使用をさらに含みうる。さらに、処置の方法は、外科的処置の使用をさらに含みうる。
【０１１１】
いくつかの態様において、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤を含む薬学的組成物は、非経口投与形態でありうる。非経口投薬形態の投与は典型的には、汚染物質に対する患者の自然防御を回避するので、非経口投薬形態は好ましくは、無菌であるか、または患者への投与の前に滅菌されうる。非経口投薬形態の例としては、いつでも注射できる状態にある溶液、注射のために薬学的に許容される媒体にいつでも溶解または懸濁できる状態にある乾燥製品、いつでも注射できる状態にある懸濁液、および乳濁液が挙げられるが、これらに限定されることはない。加えて、投与DUROS (登録商標)型の投薬形態、および過量放出(dose-dumping)を含むが、これらに限定されない、制御放出性の非経口投薬形態を患者への投与のために調製することができる。
【０１１２】
開示されるSREBP1阻害剤の非経口投薬形態を提供するために用いられうる適当な媒体は、当業者には周知である。例としては、非限定的に、滅菌水; 注射用水USP; 生理食塩溶液; グルコース溶液; 限定されることはないが、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、ならびに乳酸加リンゲル注射液のような、水性媒体; 限定されることはないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールのような、水混和性媒体; ならびに限定されることはないが、トウモロコシ油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルのような、非水性媒体が挙げられる。本明細書において開示されるSREBP1阻害剤の薬学的に許容される塩の溶解性を変えるまたは改める化合物を、従来のかつ制御放出性の非経口投薬形態を含む、開示の非経口投薬形態へ組み入れることもできる。
【０１１３】
SREBP1阻害剤を含む薬学的組成物はまた、経口投与に適するように、例えば、限定されることはないが、錠剤(非限定的に分割錠もしくはコーティング錠を含む)、丸剤、カプレット、カプセル、咀嚼錠、粉末パケット、カシェ剤、トローチ、オブラート、エアロゾルスプレイのような、分離した投薬形態、あるいは限定されることはないが、シロップ、エリキシル剤、水性液体、非水性液体中の溶液もしくは懸濁液、水中油乳剤、または油中水乳剤のような液体として製剤化することができる。そのような組成物は、予め決められた量の、開示される化合物の薬学的に許容される塩を含有し、当業者には周知の薬学の方法によって調製されうる。一般には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams, and Wilkins, Philadelphia PA. (2005)を参照されたい。
【０１１４】
いくつかの態様において、本明細書において記述されるSREBP1阻害剤は、制御放出性または遅延放出性の手段によって投与することができる。制御放出性の医薬製品(pharmaceutical products)は、その非制御放出性の対応物によって達成されるものと比べて薬物療法を改善するという共通の目標を有する。理想的には、医療処置での最適にデザインされた制御放出調製物の使用は、最少量の薬物を利用し、最小限の時間で状態を治癒または制御することによって特徴付けられる。制御放出製剤の利点には、1) 薬物の活性延長; 2) 投薬頻度の低減; 3) 患者のコンプライアンス増大; 4) 合計薬物の使用減少; 5) 局所または全身副作用の低減; 6) 薬物蓄積の最小化; 7) 血中レベルの変動低減; 8) 処置の有効性の改善; 9) 薬物活性の増強または消失の低減; および10) 疾患または状態の制御速度の改善が挙げられる。Kim, Cherng-ju, Controlled Release Dosage Form Design, 2 (Technomic Publishing, Lancaster, Pa.: 2000)。
【０１１５】
従来の投薬形態は一般に、製剤からの迅速薬物放出または即時薬物放出をもたらす。薬物の薬効薬理および薬物動態に依り、従来の投薬形態の使用は、患者の血液および他の組織中の薬物の濃度の激しい変動をもたらしうる。これらの変動は、投薬頻度、作用の発現、効力の持続期間、治療域の血中レベルの維持、毒性、副作用などのような、いくつかのパラメータに影響を与えうる。有利には、制御放出製剤を用いて、薬物の作用の発現、作用の持続期間、治療ウィンドウ内の血漿中レベル、およびピーク血中レベルを制御することができる。特に、制御放出性または延長放出性の投薬形態または製剤を用いて、薬物の最大の有効性を達成する一方で、薬物の過少投与(すなわち、最低治療レベルを下回る)および薬物の毒性レベルの超過の両方から起こりうる、可能性のある有害作用および安全性の問題を最小限にすることを確実にできる。
【０１１６】
大部分の制御放出製剤は、所望の治療効果を即座に生じる量の薬物(活性成分)を初めに放出し、そして次第にかつ持続的に、この治療的または予防的効果のレベルを長期間にわたって維持する他の量の薬物を放出するようにデザインされる。体内でこの薬物の一定レベルを維持するために、代謝されて体内から排出される薬物の量を置き換える速度で、薬物が投薬形態から放出されなければならない。活性成分の制御放出は、pH、イオン強度、浸透圧、温度、酵素、水、および他の生理学的条件または化合物を含むが、これらに限定されない、さまざまな条件によって刺激されうる。
【０１１７】
種々の公知の制御放出性または持続放出性の投薬形態、製剤、および装置は、本開示の塩および組成物で用いるのに適合されうる。例としては、米国特許第3,845,770号; 同第3,916,899号; 同第3,536,809号; 同第3,598,123号; 同第4,008,719号; 同第5674,533号; 同第5,059,595号; 同第5,591,767号; 同第5,120,548号; 同第5,073,543号; 同第5,639,476号; 同第5,354,556号; 同第5,733,566号; および同第6,365,185 B1号に記述されるものを含むが、これらに限定されることはない; これらの各々が参照により本明細書に組み入れられる。これらの投薬形態は、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他の重合体マトリックス、ゲル、透過性膜、浸透性システム(OROS (登録商標) (Alza Corporation, Mountain View, Calif. USA)のような)、またはこれらの組み合わせを用い1種または複数種の活性成分の遅延放出または制御放出を提供して、さまざまな比率での所望の放出特性を提供することができる。
【０１１８】
本開示の態様の記述は、網羅的であるものと、または開示された正確な形態に本開示を限定するものと意図されない。本開示の特定の態様および例が例示を目的として本明細書に記述されるものの、当業者なら認識するように、本開示の範囲内で種々の等価な修正が可能である。例えば、方法の段階または機能は所与の順序で提示されるが、代替的な態様が異なる順序で機能を果たすこともあり、または機能は実質的に同時に果たされることもある。本明細書において提供される開示の教示は、必要に応じて他の手順または方法に適用されうる。本明細書において記述されるさまざまな態様を組み合わせて、さらなる態様を提供することができる。本開示の局面を、必要なら、上記の参考文献および出願書類の組成物、機能および概念を採用するように修正して、本開示のさらなる態様を提供することができる。これらのおよびその他の変更を、詳細な説明に照らして本開示に加えることができる。
【０１１９】
前述の態様のいずれかの特定の要素は組み合わされてもよく、または他の態様における要素に代用されてもよい。さらに、本開示の特定の態様に関連した利点がこれらの態様との関連で記述されているが、他の態様がそのような利点を示すこともあり、本開示の範囲内に入るように全ての態様がそのような利点を必ずしも示すことを要しない。
【０１２０】
特定されている全ての特許および他の刊行物は、例えば、本発明に関連して用いられうるそのような刊行物に記述されている方法論を、記述および開示する目的で参照により本明細書に明示的に組み入れられる。これらの刊行物は、本出願の出願日の前にこれらが単に開示されたことを示しているだけである。この点で、本発明者らが先行発明によってまたはその他任意の理由で、そのような開示に先行する資格がないと認めるものと解釈されるべきではない。日付に関する全ての記載またはこれらの書類の内容に関する表現は、本出願者らが入手できる情報に基づいており、これらの書類の日付または内容の正確さに関して何らの承認をなすものではない。
【０１２１】
本発明を、限定するものと解釈されるべきではない以下の例によってさらに例証する。
【０１２２】
本明細書において記述される技術のいくつかの態様は、番号付けされた以下の項目のいずれかによって定義することができる。
1.  式I、II、III、およびIVが以下である、式I、II、IIIまたはIVの化合物:
2015527988.tif 000034
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4およびR5は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -CN; ハロゲン; またはヒドロキシルであり;
R6は環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリールであり;
R7は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
nは0以上、4以下の整数であり; かつ
mは0以上、5以下の整数である;
2015527988.tif 000035
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3、R4、R5、R6、R7およびR8は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R9は独立してハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり; かつここでR9およびR5またはR6は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
nは0以上、5以下の整数である;
2015527988.tif 000036
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく; かつ
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は独立して水素; ハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; B(O)R1R2; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロである;
2015527988.tif 000037
式中、R1およびR2は非置換分枝もしくは直鎖アルキルであり、かつR1およびR2は一緒になって、置換もしくは非置換5員もしくは6員環を形成していてもよく;
R3はハロゲン; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝脂肪族; 環式もしくは非環式、置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロ脂肪族; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アシル; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝アリール; 置換もしくは非置換、分枝もしくは非分枝ヘテロアリール; -C(=O)RB; -CO2RB; -; -CN; -SCN; -SRB; -SORB; -SO2RB; -NO2; -N(RB)2; -NHC(O)RB; または-C(RB)3であり; ここでRBの各存在は独立して、水素; ハロゲン; 保護基; 脂肪族; ヘテロ脂肪族; アシル; アリール部分; ヘテロアリール; ヒドロキシル; アルコキシ; アリールオキシ; アルキルチオキシ; アリールチオキシ; アミノ; アルキルアミノ; ジアルキルアミノ; ヘテロアリールオキシ; ヘテロアリールチオキシ; またはアルキルハロであり;
R4は置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり; かつ
nは0以上、4以下の整数である。
2.  以下からなる群より選択される、項目1に記載の化合物:
2015527988.tif 000038
2015527988.tif 000039
。
3.  項目1〜2のいずれか一項目に記載のステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)阻害剤を対象に投与する段階を含む、対象におけるがんを処置する方法。
4.  異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含む、項目3に記載の方法。
5.  異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞が、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを有する細胞である、項目4に記載の方法。
6.  異常な量のErb2を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含む、項目3に記載の方法。
7.  FASN、SCD1、またはACLYからなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の異常な量を発現するがん細胞を有する対象を選択する第1の段階をさらに含む、項目3に記載の方法。
8.  対象が子宮内膜がんを有する、項目3〜7のいずれか一項目に記載の方法。
9.  がんが、前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんからなる群より選択される、項目3〜8のいずれか一項目に記載の方法。
10.  項目1〜2のいずれか一項目に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
11.  薬学的に許容される担体をさらに含む、項目10に記載の組成物。
12.  がんを処置するための、項目1〜2のいずれか一項目に記載のステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)阻害剤の使用。
13.  がんが、異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞から構成される、項目12に記載の使用。
14.  異常なレベルのステロール調節結合タンパク質1(SREBP1)を発現する細胞が、異常なレベルのSREBP1ポリペプチドを有する細胞である、項目13に記載の使用。
15.  がんが、異常な量のErb2を発現する細胞から構成される、項目12に記載の使用。
16.  がんが、FASN、SCD1、またはACLYからなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の異常な量を発現する細胞から構成される、項目12に記載の使用。
17.  がんが子宮内膜がんである、項目12〜16のいずれか一項目に記載の使用。
18.  がんが、前立腺がん; 乳がん; 結腸直腸がん; 結腸直腸がん腫; 肝細胞がん; 子宮内膜腺がん; 子宮がん; 白血病; 肺がん; 中枢神経系のがん; 黒色腫; 卵巣がん; 腎臓がん; および膵臓がんからなる群より選択される、項目17に記載の使用。
【実施例】
【０１２３】
実施例1: 子宮内膜がん細胞成長を抑制するための脂質生合成シグナル伝達の標的化
顕著に増強された脂質生合成は、急速に増殖している腫瘍細胞の代謝的特徴である。ほとんどの正常細胞はその脂肪酸の大部分を血液循環から獲得しているので、腫瘍細胞は、必要とされる脂質の90%超を新たに合成する。SREBP1遺伝子によりコードされる、ステロール調節エレメント結合タンパク質1(SREBP1)は、脂質生合成遺伝子の発現の主要な調節因子である。SREBP1およびその標的遺伝子は種々のがんにおいて過剰発現されることが知られているが、子宮内膜がん(EC)におけるSREBP1の役割は、ほとんど知られていない。本明細書において、子宮内膜がん標本のパネルを定量的PCRによりその脂質生合成遺伝子の発現についてスクリーニングし、SREBP1、SREBP2、およびFASN遺伝子のmRNA存在量の有意な増大が正常子宮内膜と比べてがんにおいて認められた。免疫組織化学染色により、SREBP1タンパク質の過剰発現が確認され、ECにおけるSREBP1の核分布の増大がさらに実証された。SREBP1は、細胞培養での細胞増殖を促進し、異種移植モデルでの腫瘍成長を増強する。内在性SREBP1遺伝子のノックダウンにより、脂質飢餓血清を補充した培地において培養された細胞の生存性が損なわれた。小分子BF175は、SREBP1依存性の遺伝子発現および細胞増殖を抑制し、ECの細胞死を誘導した。まとめると、本明細書において提示される結果から、ECの細胞成長におけるSREBP1の役割が確立され、ECの増殖をブロックするためのSREBP1および脂質生合成の標的化におけるBF175のその治療有効性が確証された。
【０１２４】
序文
子宮内膜がん(EC)と新たに診断された女性の数は1987年から20%増えた; しかし死者数は同じ期間中に168%の増加を記録した。2011年に米国でEC由来の新規症例および死亡と推定されたのは、それぞれ、46,470例および8,120例である(データはhttp://www.cancer.gov/cancertopics/types/endometrialのワールド・ワイド・ウェブにて入手できる)。疫学研究から、肥満がECの最も一般的なリスク因子と特定されている。肥満女性は、閉経状態(1〜5)にかかわらず、標準体重の女性と比べてECを発症するリスクが2〜4培高い。この疾患の影響を受けている集団のサイズは、特に発展途上国において、増えていると予想されるので、ECは深刻な公衆衛生問題であり続けるであろう。ステロール調節エレメント結合タンパク質(SREBP)は、コレステロールおよび脂肪酸(FA)合成に必要とされる複数の酵素の発現を制御することによって脂質恒常性を調節する転写因子のファミリーである。3種のSREBPアイソフォームSREBP1a、SREBP1cおよびSREBP2は、脂質合成において異なる役割を有する(6,7)。トランスジェニックおよびノックアウトマウスを用いたインビボでの研究から、SREBP1cはFA合成およびインスリン誘導性グルコース代謝(特に脂質生合成における)に関わるが、SREBP2はコレステロール合成の制御において比較的特異性があることが示唆される。SREBP1aアイソフォームは、コレステロールおよびFA経路の両方の調節に関与している。SREBP転写因子は、小胞体(ER)膜に結合した不活性前駆体として合成され、そのプロセッシングは細胞のステロール含量によって主に制御される。ステロールレベルが減少すると、前駆体は逐次的な二段階の切断プロセスを起こして、核内にNH2-末端活性ドメイン(nSREBPと命名されている)を放出し、これが次いで、SREBP標的遺伝子を活性化して、コレステロールおよびFAの恒常性を維持する(8〜15)。主要なSREBP標的には、FASN (16,17)およびステアロイルCoAデサチュラーゼ(SCD) (18〜21)が含まれる。このステロール感受性プロセスはSREBP1cでなく、SREBP1aおよびSREBP2アイソフォームの主要な調節点であるものと思われる。さらに、SREBP1cアイソフォームは主に、インスリンにより転写レベルで調節される。各SREBPアイソフォームならではの調節および活性化の特性は、脂質代謝の協調的な調節を容易にする。最低でも、SREBP1活性は、SRE含有遺伝子またはレポーター遺伝子構築体からの発現をトランス活性化するSREBP1aのアミノ末端活性ドメインの能力をいう。上述の通り、SREBP標的にはFASNおよびSCDが含まれる。したがって、SREPB1活性の阻害剤は、SREBP1aのアミノ末端活性ドメインによるSRE媒介性のトランス活性化を阻害するであろう。例えば、1つまたは複数のSREを含む調節エレメントを含むレポーター構築体を用いて、SREBP1媒介性のトランス活性化に及ぼすSREBP1阻害剤のその効果をモニターすることができる。適当なレポーター構築体の例としては、本明細書において実施例1に記述されているFASNおよびSCDプロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーター構築体ならびに、参照により全体が本明細書に組み入れられるAmemiya-Kudo et al. Journal of Lipid Research 2002 43: 1220-1235に記述されているレポーター構築体(例えばFAS、ACLY、LDLR、HMG、およびFPPレポーター)が挙げられる。
【０１２５】
脂質生合成は多くのヒトがんにおいて極めて活性なプロセスである。SREBP1の調節機能から、がんに関連した脂質生合成の検知および調節における役割が示唆される。SREBP1の発現の増大が結腸直腸がん腫、乳がんおよび前立腺がん、ならびに肝臓がんにおいて報告されている。さらに、SREBP1の発現の上昇は、いくつかのがん型、特に乳がんおよび前立腺がんを含むホルモン応答性組織に対しての悪性転換、がんの進行、および転移と関係していた(22〜25)。SREBP1の発現は結腸直腸がんにおけるFASNおよびKi-67の発現と相関しており、急速な細胞増殖の支持におけるSREBP1の役割が示唆される(25)。SREBP1は、良性前立腺肥大症と比べて臨床前立腺がんサンプルにおいて上昇している(26)。肝細胞がん(HCC)組織および非がん肝組織の遺伝子発現プロファイリングから、HCCにおける脂質生合成シグナル伝達の増大が示された。肝細胞がんにおけるSREBP1発現の増強から、死亡率の増大が予測される(22,23)。ヒト肝がんHuH7およびHep3B細胞におけるSREBP1の過剰発現から、細胞増殖および病巣形成が増強されたが、これらの細胞でのsiRNAによるSREBP1のノックダウンから、細胞複製および足場非依存性細胞成長が低減された(22)。SREBP1の劇的な増加は、アンドロゲン非依存性の方向への前立腺がんの進行と相関していた(26)。がん遺伝子による正常乳房上皮細胞の形質転換には、ヒト乳がんにおけるSREBP1存在量の増大という知見と一致して、SREBP1およびFASNの過剰発現が伴った(27〜29)。過去の研究から、SREBP1が、FASNの誘導とその後の脂肪酸生成を通じて、PPARγのトランス活性化を調節することが確立された(16,30)。
【０１２６】
脂質生合成シグナル伝達の増強に関する比較的明瞭な理解にもかかわらず、子宮内膜がんでのSREBP1の役割は依然として、ほとんど知られていない。SREBP1転写標的遺伝子の発現上昇の証拠を考慮すると、本研究の主要な焦点は、例えば、子宮内膜がんにおけるSREBP1の発現状態を判定することであった。本明細書において実証されるのは、より高悪性度の腫瘍におけるSREBP1の核染色の増大であり、SREBP1トランス活性化の増強が脂質生合成遺伝子発現および脂質生合成の誘導を通じて子宮内膜がんの進行に寄与しうることを示唆するものである。shRNA手法を用いた内在性SREBP1発現のノックダウンは、SREBP1標的遺伝子発現の低減ならびに細胞増殖および移動の障害をもたらす。さらに、脂質生合成シグナル伝達の小分子阻害剤BF175は、SREBP1媒介性シグナル伝達を標的とすることにより腫瘍細胞成長を抑制することが実証される。
【０１２７】
結果
子宮内膜がんにおけるSREBP1発現の増大
過去の研究から、FASNのような脂質生合成遺伝子は子宮内膜がんにおいて過剰発現されることが示唆された。EC細胞がFASNを過剰発現する基本的機構は、よく理解されていない。SREBP1は、FASN遺伝子プロモーターに結合し、かつFASN発現を正に調節する主要な転写因子である。SREBP1発現および/または活性の上昇は、ECにおけるFASN発現の上昇に寄与しうると仮定された。SREBP1発現のレベルを判定するために、抗SREBP1抗体を用い、ホルマリン固定され、パラフィン包埋された切片に対して免疫組織化学染色を行った。核および細胞質SREBP1の存在量を、それぞれ、成熟型および前駆体型の両方についてスコア化した。SREBP1は、正常組織およびがん組織の両方において検出された。SREBP1は、低分化ECにおいて過剰発現されることが分かった。SREBP1の核局在化が低分化腫瘍(悪性度2〜3)において頻繁に見られたが、しかし高分化腫瘍(悪性度1)においては見られなかった(図1Aおよびデータ不掲載)。SREBP1の大部分は正常子宮内膜および高分化腫瘍の上皮細胞の細胞質において見られたが、核SREBP1は中分化腫瘍から低分化腫瘍までの高悪性度において検出された(図2A〜2F)。これらの知見から、子宮内膜がんの進行における活性化SREBP1の役割が示唆される。
【０１２８】
SREBP1の存在量は、転写レベルまたは翻訳後レベルのどちらかで調節された(31,32)。タンパク質発現の増大は、遺伝子発現の増強によりうる。これを確認するため、定量的リアルタイムPCR (qRT-PCR)分析を、手術で摘出されたサンプルから調製されたcDNAサンプルのパネルに対して行い、SREBPおよびSCD1、つまりSREBPの転写標的の転写産物レベルを正常組織とがん組織との間で比較した。図1Aに示されるように、がん組織はSREBP1aおよびSREBP2の著しい低減を示した。SREBP1c発現の有意差は認められなかった。その一方で、SCD1のmRNAレベルは、がんにおいて有意に増大されており、これは、核転座から明らかなようにSREBP1タンパク質の発現および活性化の増大と歩調を合わせている。mRNA発現の低減およびタンパク質存在量の増大から、SREBP1タンパク質が、がんにおいて安定化される機構が示唆される。
【０１２９】
SREBP1は子宮内膜がん細胞における脂質生合成遺伝子の発現に関与する
SREBP1の発現と子宮内膜がんの進行との相関関係が確立されたので、SREBP1が腫瘍形成に寄与するかどうか判定した。それをするために、SREBP1発現の初期スクリーニングを、ECC、HEC-1-A、RL95-2、KLE、およびAN3-CAを含む5種の、一般的に用いられる子宮内膜細胞株において行った。SREBP1発現は高分化ECC-1細胞において検出不能であり、中および低分化RL95-2およびAN3-CA細胞において高度に発現された(データ不掲載)。SREBP1抗体はSREBP1aおよびSREBP1cを識別することができないので、qRT-PCRを行って、どのSREBP1アイソフォームが主に発現されるかを判定した。図2Bに示されるように、RL95-2細胞は比較的高いレベルで両アイソフォームを発現する。AN3-CAはSREBP1aを発現するが、SREBP1cを発現しない。FASN、SCD、およびACLYを含むSREBP標的遺伝子の発現レベルも判定した。比較的高いFASN、SCD1、およびACLYの発現がAN3-CA細胞において検出された(図2A)。AN3-CA細胞は、比較的高いレベルの脂質生合成遺伝子発現により、本研究にける大部分の実験のために選出された。内在性SREBP1が脂質生合成遺伝子発現に必要とされるかどうか試験するため、shRNA手法を用いてSREBP1遺伝子の発現をノックダウンした(33)。タンパク質レベルおよびmRNAレベルの両方で90%超のノックダウン効率が達成された(図2C)。SREBP1標的遺伝子の発現も顕著に低減され(図2D)、これらの遺伝子の部分的なSREBP1依存性を示唆していた。
【０１３０】
SREBP1は細胞の増殖および移動に必要とされる
細胞増殖は細胞分裂シグナル伝達により厳重に制御され、タンパク質および脂質を含む、巨大分子の生成のための生合成経路の活性化を要する。SREBP1が、細胞に脂質を供給する代謝プロセスである脂質生合成を調節するという証拠を考慮すると、内在性SREBP1のノックダウンが細胞増殖および細胞成長を低減させるものと予想された。細胞培養におけるSREBP1不活性の機能的結果について判定するため、ベクター対照またはshRNAによるSREBP1のノックダウンを伴う細胞を比較した。同数の各群の細胞を播種し、5日間カウントした。shSREBP1発現細胞において細胞数の低減が認められた(図2E)。脂質生合成シグナル伝達の抑止が細胞移動を低減することが以前に示されている。SREBP1が細胞移動に関与するかどうか試験するため、トランスウェル(transwell)アッセイを行ったが、ここでは、内在性SREBP1のノックダウンが細胞移動を顕著に阻害した(図2F)。
【０１３１】
小分子阻害剤BF175は脂質生合成をインビボで抑制する
BF175が脂質恒常性の調節にいずれかの効果を及ぼすかどうかさらに調べるため、ショウジョウバエ幼虫に、孵化から放浪第三齢幼虫まで、100μMのBF175を含有するハエ飼料を与えた。脂質をその後、オイルレッドOで染色および定量化した。図3Aに示されるように、飼料中で100μMのBF175を与えた野生型の幼虫は、DMSOを有する対照飼料と比べて脂質レベルの20〜25%の低減を有する。同様の結果は、50 uMまたは200 uMのBF175、またはBF102、つまりBF175に類似の化合物で認められた。これらの結果から、BF175 (およびBF102)が全生物での脂質生合成の阻害において保存された役割を有することが示唆される。200μMで、両方の化合物はショウジョウバエの発達および生存性に影響を与えず、これらの化合物と混合された飼料を与えた成体ハエも、寿命にいずれの明らかな影響も与えず(データ不掲載)、これらの化合物がショウジョウバエにとって有毒ではないことが示唆される。
【０１３２】
BF175はSREBP1活性および脂質生合成遺伝子発現を抑制する
脂質生合成シグナル伝達の阻害が子宮内膜がんの進行の治療的介入となりうるかどうかについて調べた。BF175による脂質生合成の抑制から、この薬剤によって腫瘍細胞成長が軽減されうることが示唆される。AC3-CA細胞を、増大された用量のBF175で処理した。BF175はACLYおよびSCD1のタンパク質発現を顕著に低減させ、それほどではないにせよ、FASNのタンパク質発現を低減させた(図3B)。これは、SREBP1のノックダウンだけがFASN mRNAレベルの30%の低減を引き起こしたという、本明細書において上記でなされた知見と一致する(図2D)。過去の報告からも、FASN遺伝子発現が複数のシグナル伝達経路によって制御されることが示された(16,25,27,35〜38)。qRT-PCRアッセイを行って、BF175で処理された細胞におけるこれらの遺伝子のmRNAレベルを判定した。SREBPの全3種の形態が顕著に抑制された。FASN、SCDおよびACLY遺伝子の発現も阻害された(図3C)。PKLR遺伝子によってコードされるピルビン酸キナーゼ(PK)は、脂質生合成に関与するが、しかしSREBP1によって調節されない。BF175に曝露された細胞においてPKLR遺伝子発現の変化は認められず、SREBP1特異的なシグナル伝達が標的とされることを示唆している。SREBP1はフィードフォワード(feed-forward)機構を通じてその遺伝子発現を正に調節するので、SREBPのmRNA発現も抑制されたことが分かったことに驚きはない(31)。
【０１３３】
SCDおよびFASNの両方がSREBP1の転写標的である。SREBP1活性の代替的尺度としてFASNまたはSCDプロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーターを用い(図3D、3E)、BF175がその転写を標的とすることによって遺伝子発現を調節するかどうか判定した。実験をAN3-CAおよびヒト胚腎臓HEK 293細胞において行ったところ、BF175がFASNおよびSCDレポーター活性を用量依存的に強力に抑制することが示された(図3D、3E)。
【０１３４】
BF175は子宮内膜がん細胞成長を阻害する
本明細書における上記の結果から、SREBP1が細胞増殖に必要とされ、BF175が抑制のためにSREBP1を標的としたことが実証されるので、次に、BF175によるSREBP1阻害が細胞成長を低減しうるかどうか試験した。5種の細胞株を24時間、異なる用量のBF175とともにインキュベートし、MTTアッセイを行って、細胞生存性を測定した。BF175処理は、AN3-CAおよびRL95-2細胞の成長を顕著に阻害した。ECC1、HEC1AおよびKLE細胞において効果がほとんどまたは全く認められなかったが、その場合にはいっそう低いSREBP1発現が検出された(図4A)。これらの結果から、BF175がSREBP1依存的に機能することがさらに確認された。細胞成長もBF175処理細胞における総細胞数により判定され、用量依存的での細胞の顕著な低減が示された(図4B)。
【０１３５】
BF175によるSREBP1阻害が細胞成長を損なう機構をよりよく理解するために、AN3-CA細胞を48時間、無血清培地で飢餓にし、その後、BF175の存在下および非存在下において10%血清およびBrdUを細胞に供給することにより解放した。6時間後、細胞を、新たに合成されたDNAに取り込まれたBrdUについて染色した。BrdU陽性細胞をカウントし、総細胞数の割合として計算した。BrdU陽性細胞の数の有意な変化は、BF175処理群と対照群との間で認められず(図4C)、BF175によるSREBP1阻害は細胞分裂シグナル伝達に応じてDNA合成をブロックしないことが示唆された。
【０１３６】
アポトーシス細胞死および自己貪食細胞死のBF175依存性誘導
SREBP1の阻害が細胞を死リガンドに対して感受性にさせ、細胞死の回避が正味の細胞成長に寄与することが以前に示されている(39)。BF175による細胞成長阻害がまた、細胞死の増強によりうるものと仮定された。この考えを試すため、いくつかの手法を用いた。最初に、BF175または対照で処理した細胞のサブG1集団を分析した。24時間BF175で処理された細胞をフローサイトメトリーアッセイに供したところ、BF175がサブG1細胞集団中の細胞を著しく増加させたことが示された(図5A)。BF175処理細胞をまた、アネキシンV染色により分析して、アポトーシス細胞死を判定した。初期アポトーシスにある細胞は、アネキシンV陽性および7-AAD陰性であり; 一方で後期アポトーシスにある細胞は、アネキシンVおよび7-AADの両方が陽性である。図5Bに実証されるように、初期アポトーシス細胞の割合は、1.81%から5.92%に増加し、BF175により細胞死が3倍誘導された。この知見は、BF175の存在下においてアポトーシス細胞死の劇的な増加を示すTUNEL染色によってさらに確認された(データ不掲載)。栄養枯渇に対する一次細胞応答は、自食作用の誘導である。SREBP1の遮断が、自食作用を起こすように細胞を誘導するかどうか調べた。AN3-CA細胞に、既述のように、GFP-LC3またはGFPをコードするレトロウイルスベクターを形質導入した(40)。FACs選別によって濃縮されたGFP陽性細胞をBF175で処理した。自食胞の蓄積を示す、増加した数の点状のドットがBF175処理細胞において見出された(データ不掲載)。
【０１３７】
BF175はSREBP1依存性の転写を抑制する
機構的に、BF175がSREBP1活性をいかにして調節するかを理解するため、既述(41)のようにSREBP1遺伝子プロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーターを用いたアッセイを行った。切断型プロモーターレポーターを最初に、BF175に対する応答性について試験した(図6A)。最小プロモーター(90bp)レポーター活性は、全長(2,600bp)として同じように良好に抑制され、応答性エレメントが90塩基対のSREBP1プロモーター領域に限定されることが示唆された。以前に特定されたように、Ebox、SREおよびSp1はこの領域内の主要な部位であった。図6Cに例証されるように各個々の部位の変異を有するプロモーターレポーターを使い、SRE変異体レポーターがBF175による抑制にあまり応答しないことが実証され、EboxまたはSp1結合タンパク質ではなく、SREBPがBF175によって標的とされることが示唆された(図6D)。
【０１３８】
考察
本明細書において記述される結果は、子宮内膜がん細胞増殖におけるSREBP1の役割を確立する。脂質生合成遺伝子の発現および脂質生合成の増強は、がん細胞増殖に必要とされる。脂質生合成シグナル伝達は細胞増殖を制御することが以前に確立されている。shRNAおよび薬理学的手法を用いてSREBP1の発現および/または活性を標的とすることにより、細胞成長をブロックすることが可能である。本明細書において記述されるSREBP1遺伝子ノックダウン実験により、細胞増殖および移動の支持におけるSREBP1の役割が確立された。
【０１３９】
腫瘍成長は細胞集団の正味の獲得であり、これは細胞増殖および細胞死の両方によって寄与される。BF175処理は、MTTアッセイによって測定された場合に、細胞生存性および総細胞数を低減させた。BF175は、新たに合成されたDNAへのBrdUの取り込みを阻害しなかったことから、BF175は、急速に増殖している細胞にとって極めて重要な段階であるG1/S移行をブロックしえないことを示唆していた。SREBP1発現のノックダウンは、細胞を脂質飢餓に感受性にさせ、無脂質培養条件の下で細胞死をもたらす(データ不掲載)。これは、BF175が細胞死を誘導するという知見と完全に一致している。
【０１４０】
今回の研究では、SREBP1が、がんの進行に寄与する、腫瘍での脂質生合成の増強に関与するかどうかという重要な問題に取り組んだ。SREBP1活性の標的化は、細胞成長を抑制するための手法となる。合成SREBP1阻害剤は、細胞増殖を阻害することによりおよび細胞死を誘導することにより、がん細胞成長のブロックにおいて有効であることが本明細書において実証される。BF175およびその類似体は、がんの進行における薬理学的介入のためのリード化合物として働きうる。
【０１４１】
材料および方法
子宮内膜がん標本および免疫組織化学(IHC)染色
本試験において用いられた、ホルマリン固定されパラフィン包埋された腫瘍標本は、商業的供給源(Creative Biolabs, Shirley, NY)から、および90th Hospital of Jinan, Chinaの組織バンクからのものであった。全ての腫瘍は原発性、かつ完全な臨床病理学的情報を伴って外科手術前には未処置であった。全ての患者が定型的乳房切断術または非定型的乳房切除術を受けた; 腋窩リンパ節を日常的に解剖し、リンパ節転移を、組織学的検査に基づいて判定した。腫瘍サイズは、手術時に腫瘍標本に対して測定された最大腫瘍直径と定義された。90th Hospital of Jinan由来の子宮内膜がん組織は、コアサイズの直径2 mmで60-コアアレイへ組み込まれた。一部のがん組織には、隣接する正常組織が含まれた。
【０１４２】
SREBP1に対するIHC染色は、Kimmel Cancer Center Pathology Core Facility at Thomas Jefferson Universityにおいてパラフィン包埋組織ブロックに対して行われた。ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色を再評価して、がん組織および正常上皮を確実にした。これらのマーカーに対するIHC染色は、5μm厚の切片に対して行われた。手短に言えば、組織スライドをキシレンで脱パラフィン化し、段階的な一連のアルコールによって再水和させた。内在性ペルオキシダーゼ活性は、3%過酸化水素水溶液中での15分間のインキュベーションによってブロックされた。抗原回復は、スライドを10 mMクエン酸ナトリウム緩衝液(pH 6.0)に浸し、5分間、沸騰温度未満に維持することによって行われた。スライドをリン酸緩衝生理食塩水中でリンスし、10%正常血清とともにインキュベートして、非特異的な染色をブロックした。スライドを次いで、加湿チャンバ中4℃で終夜、一次抗体(抗SREBP1, K-10, Santa Cruz)とともにインキュベートした。
【０１４３】
全ての染色は、半定量的方法を用いて、サンプルの起源に盲目とされた病理学者により評価された。染色の強度および領域の程度を考慮するうえで広く受け入れられているGerman半定量的スコアリングシステムを用いた。各標本に、核および細胞質の染色の強度(染色なし = 0; 弱染色 = 1、中染色 = 2、強染色 = 3)ならびに染色細胞の程度(0% = 0、1〜10% = 1、11〜50% = 2、51〜80% = 3、81〜100% = 4)にしたがってスコアを割り当てた。最終の免疫反応性のスコアは、染色細胞のスコアの程度と強度スコアを乗じ、0 (最小スコア)から12 (最大スコア)までの幅をとることによって判定された。SREBP1発現は低い(0〜4のスコア)、中間(スコア5〜8)、および高い(9〜12)と定義された。
【０１４４】
プラスミド、抗体、および試薬
ヒトSREBP1を標的とするshRNAが既述されている(33)。FASNの1000bpのプロモーターをAN3-CA細胞のゲノムDNAから増幅させて、pGL3-basicベクター(Promega)のKpn I/Bgl IIへサブクローニングした。マウスScd1プロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーターが既述されている(42)。pcDNA3-FLAG-SREBP1aはAddgeneから入手された(43)。SREBP1プロモーター駆動性ルシフェラーゼレポーターの全ての変異体構築体が既述されている(41)。GFP-LC3を発現するレトロウイルスベクター(MSCV-IRES-GFP)は、本発明者らによって既述されている(40)。抗SREBP1 (K-10およびH-160)、抗FASN (H300)、抗アクチン(C4)は、Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA)から購入した。抗SCD (MC38)はCell Signaling Technology (Danvers, MA)から購入した。抗ACLYはAbcam (カタログ番号ab40993, Cambridge, MA)から得た。
【０１４５】
細胞培養
ヒト胎児腎臓293T細胞(HEK293T)は、1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含んだ、かつ10%ウシ胎仔血清(FBS)を補充したDMEM中で維持された。ECC-1、HEC-1A、RL95-2、KLE、およびAN3-CAを含む子宮内膜がん細胞株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection (ATCC))から購入された。基礎の培地は以下である: RPMI-1640 (ECC-1)、McCoy's 5a (HEC-1A)、DMEM:F12 (RL95-2, KLE)、およびEagle's Minimum Essential Medium (AN3-CA)。細胞維持のため、基礎の培地に10%ウシ胎仔血清(FBS)を補充した。表示の通り脂質不含の培養条件の下で、基地の培地に、Cocalico Biologicals (Reamstown, PA) (カタログ番号55-0116)から購入した5%脂質飢餓FBSを補充した。
【０１４６】
トランスフェクション、形質導入およびルシフェラーゼレポーターアッセイ
一過性トランスフェクションの場合、SUPERFECT (商標)トランスフェクション試薬を製造元のプロトコル(Qiagen, Valencia, CA)にしたがって用いた。細胞形質導入の場合、リン酸カルシウム沈殿を用いてHEK 293T細胞へのヘルパーウイルスの一過性の同時トランスフェクションによってレトロウイルスを調製した。HEK 293T細胞にプラスミドDNAをトランスフェクションし、6時間37℃で培養し、培地を交換し、36時間後に上清を回収し、0.45μmフィルタを通してろ過した。8μg/mlのポリブレンを補充したDMEM中およそ70%の集密で細胞に感染させた。翌日、培地を、10% FBSを補充した基礎培地に交換し、さらなるアッセイのために培養した。
【０１４７】
ルシフェラーゼアッセイは、既述のように行った(44)。手短に言えば、トランスフェクションの前の日に24ウェルプレート中に50%の集密で細胞を播種した。細胞に、HEK 293Tの場合にはリン酸カルシウム沈殿または残りの細胞株の場合にはLIPOFECTAMINE 2000 (商標) (Invitrogen, Carlsbad, CA)を介し製造元の使用説明書にしたがって適切な組み合わせのレポーター(1ウェルあたり300 ng)、発現ベクター(対照ベクター300 ngに等しいモル濃度として計算された)、および対照ベクター(1ウェルあたり300 ng)を一過性にトランスフェクションした。トランスフェクションから24時間後に、AUTOLUMAT LB 953 (商標) (EG&G Berthold)を用いて室温でルシフェラーゼアッセイを行った。データは、各三つ組のサンプルでの少なくとも2回の別個の実験からの平均 ± SEMとして示されている。
【０１４８】
RNA単離、定量的リアルタイムPCR
TRIZOL (商標)試薬(Invitrogen, Carlsbad, CA)を製造元の使用説明書にしたがって用い全RNAを調製した。SUPERSCRIPT (商標) II Reverse Transcriptase Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA)を用いて全RNA 5μgを逆転写に供して、cDNAを合成した。体積反応液25μlは、逆転写産物1μlおよび100 nMの各プライマーからなった。qRT-PCRに用いられたプライマーは、以下の通りに記載される。
【０１４９】
【表１】
2015527988.tif 000040
【０１５０】
細胞増殖、移動およびアポトーシスアッセイ
細胞に、SREBP1を標的とするshRNAを安定的にトランスフェクションし、対照をTRANSWELL (商標)移動アッセイに供した。10% FBSを含有するDMEMの入った各ウェル中に細胞1×104個の密度で、ECM (Sigma, St. Louis, MO)をコーティングした細孔径8μmのTRANSWELL (商標)フィルタインサート(Costar)上に細胞を播種した。37℃および5% CO2での6時間のインキュベーション後、フィルタの上面に付着した細胞を、綿棒を用いて取り出した。細胞を、メタノールに溶解された0.4%クリスタルバイオレットで染色し、底面の細胞の数をカウントした。データは、三つ組で行われた少なくとも3回の実験からのもの(平均 ± SEM)である。
【０１５１】
TRANSWELL (商標)移動アッセイは、本発明者らの以前の刊行物に記述されている(45,46)。細胞2.5×104個を、ECM (1:7.5) (Sigma, St. Louis, MO)でコーティングされた細孔径8μmのTRANSWELL (商標)フィルタインサート(Corning Inc., Corning, NY)上に播種した。37℃および5% CO2での6時間のインキュベーション後、フィルタの上面に付着した細胞を、綿棒を用いて取り出した。細胞を、メタノールに溶解された0.4%クリスタルバイオレットで染色し、底面の細胞の数をカウントした。
【０１５２】
PE Annexin V Apoptosis Detection Kit (BD Biosciences)およびTACS 2 TdT-DAB In Situ Apoptosis Detection Kit (Trevigen, Gaithersburg, MD)により製造元の使用説明書にしたがって細胞死を判定した。
【０１５３】
ショウジョウバエ飼料中でのBF175の混合
BF175、またはBF102の1 Mストック溶液をDMSO中で作製し、50 uM、100 uMおよび200 uMの終濃度に向けて、溶かしたハエ飼料中でさらに希釈および混合し、対照飼料を等量のDMSOと混合した。野生型(w1118)のハエをこれらの飼料にて胚にさせ、放浪第三齢段階の雌性幼虫をオイルレッドO染色について分析した。
【０１５４】
オイルレッドO染色および定量化
ショウジョウバエ幼虫をPBS中で解剖し、その後、室温で15分間PBS中4%のホルマリン中で固定した。それらを25分間0.036%オイルレッドO 5mlで染色し、70%イソプロパノールおよび蒸留水で1回リンスした。終夜乾燥された後に、各幼虫由来のオイルレッドOをイソプロパノール0.3 ml中に抽出し、510 nmでのO.D.を測定した。統計解析のために片側t検定を用いた。
【０１５５】
参考文献:
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2015527988.tif 000042
2015527988.tif 000043
【０１５６】
実施例2
米国がん協会(American Cancer Society)によって刊行された統計資料によれば、約1,596,670例の新たながん症例が2011年に診断されていると予想された。国立がん研究所(National Cancer Institute)では、がん歴を有する米国人およそ11.7百万人が2007年には生存していたと推定している。疫学研究では、肥満(obese and obesity)を、がんの最も一般的なリスク因子と特定している。肥満患者は、標準体重の集団と比べて子宮内膜がん、乳がんおよび結腸がんおよび肝臓がんを発症するリスクが2〜4培高い。肥満(obese and obesity)の影響を受けている集団のサイズは、特に発展途上国において、大きくなっていると予想されるので、がんは深刻な公衆衛生問題であり続けよう。顕著に増強された脂質生合成は、急速に増殖している腫瘍細胞の代謝的特徴である。さらに、現在、肥満およびがんの両方を標的とする有効な治療法は存在していない。ほとんどの正常細胞はその脂肪酸の大部分を血液循環から獲得しているので、腫瘍細胞は、必要とされる脂質の90%超を新たに合成する。本明細書において記述される、SREBP1遺伝子によりコードされる、ステロール調節エレメント結合タンパク質1(SREBP1)は、脂質生合成遺伝子の発現の主要な調節因子である。本発明者らの研究は、がん遺伝子ErbB2を有するがんでの脂質生合成シグナル伝達の変化および乳がんでのエストロゲン受容体状態を強く関連付けた。
【０１５７】
BF175の、可能性のある標的を広く探索するため、対照と比べてBF175で処理された細胞のマイクロアレイ発現分析を行った。マイクロアレイ分析から、472種の遺伝子のmRNA発現は差次的に増大したが、542種のそれはBF175処理細胞において低下したことが検出された。これらのBF175調節遺伝子のINGENUITY (商標)分析から、最も顕著な機能として「脂質代謝(Lipid Metabolism)」が明らかにされた(表2)。それらのBF175下方制御遺伝子のうち、48種の遺伝子がグルコースを触媒および変換して、脂質またはコレステロールのどちらかを産生するのに直接関与していた(図6A〜6D、および表2)。これらのBF175遺伝子のうちのかなりの数のものが、SREBP1およびSREBP2を含めて、SREBP1の標的と報告されており、BF175がSREBP1活性を直接調節することが示唆された。さらに、このデータセットと、以前に公表されたSREBP1遺伝子シグネチャからのものとの間の顕著な重複からもかさねて、BF175の特異性が確認された。
【０１５８】
実施例3
NCI60試験を10^-5モルの単回用量にてBF175で59種の細胞株において行った。1回用量データは、処理細胞の成長率の平均グラフとして報告された。1回用量のアッセイについて報告された数は、薬物なしの対照と比べての、およびゼロ時の細胞数と比べての成長である。これによって、成長阻害(0〜100の間の値)と死亡率(0未満の値)の両方の検出が可能になる。例えば、100の値は成長阻害なしを意味する。40の値は60%成長阻害を意味するであろう。0の値は実験の間を通して正味の成長なしを意味する。-40の値は40%の死亡率を意味するであろう。-100の値は、全ての細胞が死んだことを意味する。
【０１５９】
がんスクリーニングパネルのヒト腫瘍細胞株を、5%ウシ胎仔血清および2 mM L-グルタミンを含有するRPMI 1640培地中で成長させた。個々の細胞株の倍加時間に依って、細胞を100μL中に、細胞5,000〜40,000個/ウェルに及ぶプレーティング密度で96ウェルマイクロタイタープレートへ植え付けた。細胞の植え付けの後、マイクロタイタープレートを、BF175の添加前に、37℃、5% CO2、95%空気および100%相対湿度で24時間インキュベートした。24時間後、各細胞株のプレート2枚をTCAによりインサイチューで固定し、薬物添加時(Tz)の各細胞株に対する細胞集団の測定とした。BF175を所望とされる最終の最大試験濃度の400倍でジメチルスルホキシドに溶解し、使用の前に凍結貯蔵した。薬物添加時に、凍結濃縮物のアリコットを融解し、50μg/mlのゲンタマイシンを含有する完全培地により所望とされる最終の最大試験濃度の2倍に希釈した。これらの薬物希釈物100μlのアリコットを、培地100μlを既に含んでいる適切なマイクロタイターウェルに添加し、必要とされる最終の薬物濃度をもたらした。
【０１６０】
薬物添加の後、プレートを37℃、5% CO2、95%空気および100%相対湿度でさらに48時間インキュベートした。接着細胞の場合、アッセイは冷TCAの添加によって終結される。細胞を50% (w/v)の冷TCA 50μl (終濃度、10% TCA)の穏やかな添加によりインサイチューで固定し、4℃で60分間インキュベートした。上清を捨て、プレートを水道水で5回洗浄し、風乾させる。1%酢酸中0.4% (w/v)のスルホロダミンB (SRB)溶液(100μl)を各ウェルに加え、プレートを室温で10分間インキュベートした。染色後、未結合の色素を1%酢酸で5回洗浄することによって除去し、プレートを風乾させた。結合した染色剤をその後、10 mMトリズマ塩基で可溶化し、自動プレート読取機にて515 nmの波長で吸光度を読み取った。
【０１６１】
浮遊細胞の場合、方法論は、80% TCA 50μl (終濃度、16% TCA)を穏やかに加えることによってウェルの底部に定着細胞を固定することによりアッセイを終結させたことを除いて、同じであった。吸光度の測定値[ゼロ時(Tz)、対照増殖(C)、および10^-5モル濃度のBF175にて薬物の存在下での被験成長(Ti)]を用いて、成長率は、Ti>/=Tzの場合の濃度では[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100およびTi<Tzの場合の濃度では[(Ti-Tz)/Tz]×100として計算される。
【０１６２】
【表２】
2015527988.tif 000044
【図１】
2015527988.tif 000053
【図２Ａ】
2015527988.tif 000054
【図２Ｂ】
2015527988.tif 000055
【図２Ｃ】
2015527988.tif 000056
【図２Ｄ】
2015527988.tif 000057
【図２Ｅ】
2015527988.tif 000058
【図２Ｆ】
2015527988.tif 000059
【図３Ａ】
2015527988.tif 000060
【図３Ｂ】
2015527988.tif 000061
【図３Ｃ】
2015527988.tif 000062
【図３Ｄ】
2015527988.tif 000063
【図３Ｅ】
2015527988.tif 000064
【図４】
2015527988.tif 000065
【図５】
2015527988.tif 000066
【図６Ａ】
2015527988.tif 000067
【図６Ｂ】
2015527988.tif 000068
【図６Ｃ】
2015527988.tif 000069
【図６Ｄ】
2015527988.tif 000070
【図７】
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【図８】
2015527988.tif 000072
【配列表】
2015527988000001.app
【国際調査報告】
2015527988.tif 000073
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