(57)【要約】  本発明は、１つ以上のオリゴペプチドで複合化したＲＮＡを少なくとも１つ包含した複合化ＲＮＡであって、上記オリゴペプチドが８〜１５アミノ酸の長さであり、かつ実験式（Ａｒｇ）ｌ；（；Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる、複合化ＲＮＡに関する。本発明は、細胞または生体をトランスフェクトすることによって、本発明の複合化ＲＮＡを利用する方法にさらに関する。また、本発明の複合化ＲＮＡを細胞、組織、または生体にトランスフェクトするための、および／または免疫反応を調節するため、好ましくは免疫反応を誘引または亢進するための、本発明の複合化ＲＮＡの使用と、本発明の複合化ＲＮＡを包含した薬学的組成物およびキットを、ここに開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上のオリゴペプチドと複合化された少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を包含する複合化ＲＮＡであって、
上記オリゴペプチドは８〜１５アミノ酸の長さであり、かつ以下の実験式
（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ    （式Ｉ）
によって表され、
上記実験式において、
ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５であり、かつｌ、ｍ、ｎ、およびｏは、それぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および１５から選択された任意の数値であり、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎの総含有量が、上記オリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも５０％に相当するように規定され；
Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎ以外の天然アミノ酸または非天然アミノ酸から選択された任意のアミノ酸であり；さらに
ｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、および８から選択された任意の数値であり、Ｘａａの総含有量が、上記オリゴペプチドの全アミノ酸の５０％を超えないように規定される、複合化ＲＮＡ。
【請求項２】
上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）はｍＲＮＡである、請求項１に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項３】
上記オリゴペプチドは、８〜１４、８〜１３、８〜１２、９〜１２、または９〜１１アミノ酸の長さである、請求項１または２に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項４】
上記Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎの総含有量が、上記複合化ＲＮＡの上記オリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％に相当している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項５】
実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ中のＸａａが、疎水性の中性側鎖を有するアミノ酸および中性極性側鎖を有するアミノ酸を含む、中性側鎖を有するアミノ酸から選択されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項６】
実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチドが、酸性側鎖を有するアミノ酸を一方または両方の末端部に包含していない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項７】
実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチドが、
一方もしくは両方の末端部に中性アミノ酸もしくは塩基性アミノ酸を包含している、
一方もしくは両方の末端部に塩基性アミノ酸を包含している、または
両方の末端部に少なくとも１つの、好ましくは少なくとも２つの、さらに好ましくは少なくとも３つの、塩基性アミノ酸を包含している、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項８】
実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチドが、その配列内部に、少なくとも３つの近接した塩基性アミノ酸の範囲を包含している、請求項１〜７のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項９】
実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチドが、一方または両方の末端部に少なくとも１個、２個、または３個の非カチオン性アミノ酸を包含し、上記非カチオン性アミノ酸は、好ましくはヒスチジンから選択されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１０】
上記複合化ＲＮＡの上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）がｍＲＮＡであり、上記ｍＲＮＡは、治療上有効なタンパク質もしくはペプチド、免疫活性化タンパク質もしくはペプチド、腫瘍抗原、または抗体をコードしている、請求項１〜９のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１１】
上記ＲＮＡが修飾されたＲＮＡであり、特に野生型ＲＮＡと比較して安定化したＲＮＡである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１２】
上記修飾されたＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量が、野性型ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量より多く、上記修飾されたＲＮＡにコードされたアミノ酸配列が、好ましくは上記野性型ＲＮＡにコードされたアミノ酸配列と比較して修飾されていない、請求項１１に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１３】
上記複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する質量比が、約１：１００〜約１：０．５の範囲内にあるか、または約１：５０〜約１：１、約１：１００、約１：９０、約１：８０、約１：７０、約１：６０、約１：５０、約１：４５、約１：４０、約１：３５、約１：３０、約１：２５、約１：２０、約１：１５、約１：１０、約１：５、約１：４、約１：３、約１：２、約１：１、もしくは約１：０．５の値である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１４】
上記複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の、上記１つ以上のオリゴペプチドに対するモル比が、約１：２００００〜約１：５００もしくは１：２５０の範囲内にあるか、約１：１００００〜約１：１０００の範囲内にあるか、または約１：９５００、約１：９０００、約１：８５００、約１：８０００、約１：７５００、約１：７０００、約１：６５００、約１：６０００、約１：５５００、約１：５０００、約１：４５００、約１：４０００、約１：３５００、約１：３０００、約１：２５００、約１：２０００、約１：１５００、約１：１０００、約１：５００、約１：４５０、約１：４００、約１：３５０、約１：３００、もしくは約１：２５０の値である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１５】
上記複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する窒素／リン酸塩比（Ｎ／Ｐ比）が、約０．２〜５０、約０．５〜５０、または約０．７５〜２５の範囲内にある、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１６】
上記オリゴペプチドが、
Ａｒｇ９Ｈｉｓ３、Ｈｉｓ３Ａｒｇ９Ｈｉｓ３、ＴｙｒＳｅｒＳｅｒＡｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ、Ｈｉｓ３Ａｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ、（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）４、Ｔｙｒ（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）２Ａｒｇからなる群、または
Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ１０、Ａｒｇ１１、Ａｒｇ１２、Ａｒｇ１３、Ａｒｇ１４、Ａｒｇ１５、（配列番号１〜８）；
Ｌｙｓ８、Ｌｙｓ９、Ｌｙｓ１０、Ｌｙｓ１１、Ｌｙｓ１２、Ｌｙｓ１３、Ｌｙｓ１４、Ｌｙｓ１５、（配列番号９〜１６）；
Ｈｉｓ８、Ｈｉｓ９、Ｈｉｓ１０、Ｈｉｓ１１、Ｈｉｓ１２、Ｈｉｓ１３、Ｈｉｓ１４、Ｈｉｓ１５、（配列番号１７〜２４）；および
Ｏｒｎ８、Ｏｒｎ９、Ｏｒｎ１０、Ｏｒｎ１１、Ｏｒｎ１２、Ｏｒｎ１３、Ｏｒｎ１４、Ｏｒｎ１５、（配列番号２５〜３２）
から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡ。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡを、必要に応じて、薬学的に適したキャリアと共に備えた薬学的組成物。
【請求項１８】
ａ．実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドと複合化したＲＮＡを少なくとも１つ包含する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡを、必要に応じて調製および／または準備するステップと、
ｂ．ステップａによって調製および／または準備した複合化ＲＮＡを用いて、細胞、組織、または生体をトランスフェクトするステップと
を包含する、細胞または生体をトランスフェクトするための方法。
【請求項１９】
上記生体が、ヒト、ヤギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ロバ、サル、類人猿、ならびにマウス、ハムスター、およびウサギを含めた齧歯類からなる群より選択される哺乳類である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
細胞または生体をトランスフェクトするための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡの使用。
【請求項２１】
腫瘍または癌疾患、循環器病、感染症、（感染性）ウイルス性疾患、自己免疫疾患、（単）遺伝子疾患、および／またはアレルギーから選択される疾病を治療するための薬剤を調製するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の複合化ＲＮＡの使用。
【請求項２２】
上記複合化ＲＮＡのトランスフェクションが、生体における免疫反応を誘引する、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
サイトカインもしくはサイトカインを含む組成物、および／または少なくとも１つの付加的なアジュバントもしくは少なくとも１つの付加的なアジュバントを含む組成物を備えた、請求項２２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、８〜１５アミノ酸の長さであり、かつ式（Ａｒｇ）ｌ（Ｌｙｓ）ｍ（Ｈｉｓ）ｎ（Ｏｒｎ）ｏ（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドと複合体を形成するＲＮＡ（分子）を少なくとも１つ含む複合化ＲＮＡに関する。さらに、本発明は、上記本発明の複合化ＲＮＡを利用することによって、細胞または生体をトランスフェクトする方法に関する。また、本発明の開示内容には、上記本発明の複合化ＲＮＡを包含する薬学的組成物およびキット、ならびに、細胞、組織または生体をトランスフェクトするための上記本発明の複合化ＲＮＡの使用、および／または免疫反応を調節、好ましくは免疫反応を誘引または亢進するための上記本発明の複合化ＲＮＡの使用を含む。
【０００２】
遺伝子を導入する方法によって患者の細胞または組織に核酸をトランスフェトすることは、分子医学の主要な方法であって、多数の疾病の治療および予防において重要な役割を果たす。核酸のトランスフェクト方法が、組織または生体の免疫刺激を起こすことがある。あるいは、もしくは、さらに、核酸のトランスフェクションに続いて、導入された核酸によりコードされる情報のプロセッシング、つまり所望のポリペプチドまたはタンパク質への翻訳が起こることがある。核酸としてのＤＮＡまたはＲＮＡは、遺伝子治療に代わるアプローチとなる。核酸のトランスフェクションにより、トランスフェクトされた核酸のタイプに依存して、調節、例えば遺伝子発現の抑制または促進が起こることもある。これらの核酸のトランスフェクションは、通常、遺伝子を導入する方法を使って実施される。
【０００３】
細胞または組織に遺伝子を導入する方法は、この数十年間集中的に研究されてきたが、成果は限られたものでしかない。周知の方法としては物理的または物理化学的方法、例えば、（裸の）核酸を（直接）注入する方法または微粒子銃を用いた遺伝子導入方法が挙げられる。微粒子銃による遺伝子導入法（微粒子銃照射としても知られている）は、コーネル大学で開発された方法であり、組織または培養細胞への遺伝物質の導入を可能にする。微粒子銃による遺伝子導入法は、通常、表面コーティング用金属粒子（例えば金粒子または銀粒子）によって達成され、吸着したＤＮＡを含むこれらの金属粒子を、遺伝子銃を用いて細胞内に打ち込む。ただし、微粒子銃による遺伝子導入法は、おそらくＲＮＡの速い分解に起因して、ＲＮＡに対して使用した場合にうまく機能するということがまだ示されていない。また、これらの方法はｉｎ  ｖｉｖｏでの応用に適しておらず、このことは実用上重大な制限があることを意味している。
【０００４】
他の物理的または物理化学的方法としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ電気穿孔法などが挙げられる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ電気穿孔法は、高圧電流の使用を基本としており、細胞膜に浸透性を持たせて、新しいＤＮＡまたはＲＮＡの細胞内への導入を可能にする。したがって、トランスフェクションに先立って、化学物質を使用する、あるいは慎重な凍結処理を行うことによって、細胞壁は通常弱められて、「電気的形質転換受容性」を有する状態にされる。電気的形質転換受容性を有する細菌または細胞（例えば、真核細胞）とＤＮＡ（またはＲＮＡ）とが混合されると、電気放電を使用することによってプラスミドが細胞内に導入され、反応室を横断するスパークの経路に存在する細胞内へＤＮＡ（またはＲＮＡ）が導入され得る。
【０００５】
さらに他の物理的または物理化学的方法としては、ナノプレックス（ナノ粒子システム）、リポプレックス（リポソームシステム）、ポリプレックス、またはカチオン性ポリマーの使用などがあげられる。このナノプレックス（ナノ粒子システム）は、ポリアクリレート、ポリアミド、ポリスチレン、シアノアクリレート、ポリ乳酸(polylactat)（ＰＬＡ）、ポリ−乳酸−コ−グルコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリエチルなどを、細胞または組織内への核酸輸送のためのキャリアシステムとして使用することを含んでいる。リポプレックスつまりリポソームシステムは、通常、細胞膜に似た働きを可能にするカチオン性脂質を使用することを含んでいる。これにより、脂質の正に帯電した部分が、核酸の負に帯電した部分と相互作用し、それゆえ、細胞膜との融合を可能になる。リポプレックス、つまりリポソームシステムとしては、例えばＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＴＡＰ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ＥＤＭＰＣなどが挙げられる。ポリプレックス（カチオン性ポリマー）は、通常、負に帯電した核酸と複合体を形成することで、核酸の凝縮を起こし、これらの核酸を分解から保護する。ポリプレックス（カチオン性ポリマー）を使った細胞内への輸送は、通常、受容体媒介性エンドサイトーシスを介して生じる。これにより、ＤＮＡは、例えばポリプレックスポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）を介して特定の分子（例えばトランスフェリン）と結合する。なお、このＰＬＬは表面受容体と結合して、エンドサイトーシスを誘発する。ポリプレックス（カチオン性ポリマー）としては、例えば、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、キトサン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリジメチルアミノエチルメタクリル酸塩（ＰＤ−ＭＡＥＭＡ）、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）が挙げられる。
【０００６】
細胞または生体内へ遺伝子を導入するその他の周知の物理的または物理化学的方法としては、例えば、ウイルスを基本とするトランスフェクションなどの方法が挙げられる。具体的な例としては、ＤＮＡウイルスがＤＮＡ媒介物として使用できる。この種のウイルスは、その感染特性によって非常に高いトランスフェクション率を有する。通常使用されるウイルスは、トランスフェクションされた細胞内で機能的な感染性粒子が形成されないように、なんらかの遺伝子改変が行われている。このような安全予防策がとられてはいるものの、例えば組み換え現象は起こり得るので、導入された治療上有効な遺伝子およびウイルス性遺伝子が制御されず伝播する危険性が全くないとは言い切れない。
【０００７】
この文脈においてさらに好適なのは、いわゆる転座性タンパク質またはタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）を使用して、マクロ分子を細胞または組織内へ輸送することである。転座性タンパク質は、細胞（転座性タンパク質）同士の間、例えばＨＩＶ  ｔａｔ（ＨＩＶ）、アンテナペディア（ショウジョウバエアンテナペディア）、ＨＳＶ  ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＦＧＦ、またはラクトフェリンなどの間でマクロ分子を輸送できるペプチド群であると考えられる。一方、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、これらの配列に共有結合しているタンパク質およびペプチドを細胞膜を介して細胞内へ導くことのできるペプチド群であると考えられる（Ｌｅｉｆｅｒｔ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｔｏｎ：Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎｓ：ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｖｏｌ．８  Ｎｏ．１  ２００３）。転座性タンパク質とＰＴＤとに共通しているのは塩基性領域であり、この塩基性領域は、ポリアニオン（例えば核酸）を結合することができるので、主に融合ペプチド輸送の役目を負っていると考えられる。ただしこれに限られるわけではなく、ＰＴＤは、受容体依存性不飽和吸着性エンドサイトーシスを使って、カチオン性トランスフェクション試薬と同様に作用することができる。ＰＴＤは、通常、タンパク質またはペプチドに結合して、ペプチドをベースとしたワクチンが投与される際にＣＴＬ応答を実現または亢進する（Ｍｅｌｉｋｏｖ  ａｎｄ  Ｃｈｅｒｎｏｍｏｒｄｉｋ，  Ａｒｇｉｎｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ｃｅｌｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｆｒｏｍ  ｅｎｄｏｓｏｍａｌ  ｕｐｔａｋｅ  ｔｏ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｃｅｌｌ、Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ２００５）。
【０００８】
タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）は、細胞膜を貫通する能力を有し、それゆえに（マクロ）分子の細胞内への輸送を実現するので、「細胞貫通ペプチド」（ｃｅｌｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ；ＣＰＰ）とも呼ばれることがある。ＣＰＰは低分子ペプチドであって、通常塩基性アミノ酸の含有量が多く、７〜３０個のアミノ酸の長さを有する。ＣＰＰを介して細胞内へ輸送される上述のマクロ分子としては、ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはＰＮＡ（ペプチド核酸）およびペプチドがあげられ、上記ＣＰＰは通常共有結合を介してこれらのマクロ分子に結合しており、細胞にトランスフェクトされる。細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）は、薬理学的な関心の高い多様な分子の細胞内輸送を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ双方で媒介するために使用され、成果をおさめている。ただし、細胞への取り込みが生じるメカニズムは依然不明である。ＣＰＰ類は多種多様であり、両親媒性螺旋状ペプチド類（例えば、トランスポータン、ペネトラチン）疎水性ペプチド類（例えば、ＭＴＳ、ＶＰ２２、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０）、プロリンリッチ・ペプチド類、ＭＰＧペプチド類、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー類、カルシトニン・ペプチド類、またはカチオン性かつ親水性のアルギニンリッチ・ペプチド類などからなる。上記カチオン性かつ親水性のアルギニンリッチ・ペプチド類には、細胞のプロテオグリカン（例えば、ＨＩＶ−１Ｔａｔタンパク質の形質導入ドメイン）との結合を介した（共有結合した）複合分子の細胞への取り込みを媒介するアルギニンリッチＣＰＰが含まれる（Ｄｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ２００５）。特に、アルギニンリッチＣＰＰ類は、タンパク質またはＤＮＡ（例えばプラスミドＤＮＡ）を細胞内へ媒介する媒介物であると記載されている。さらに、ポリアルギニン類は（マクロ）分子の細胞への輸送に使用されてもよく、ここで（マクロ）分子は、典型的にはなくとも６０〜８０個のアミノ酸（特にアルギニン類）の長さを有し、さらに典型的には１０００個から１５０００個のアミノ酸の長さを有していて、高分子化合物を表わしている。ＣＰＰ類が細胞内へ取り込まれる一般的なメカニズムは不明なままであるが、ポリアルギニンの場合の取り込みメカニズムとしてエンドサイトーシスが提案されている。エンドサイトーシスとは、マクロ分子が細胞膜を通過せずに細胞に入る細胞プロセスであり、クラスリン依存性エンドサイトーシス、カベオリン依存性エンドサイトーシス、および／またはＦアクチン依存性エンドサイトーシスの３つの異なるエンドサイトーシス・メカニズムが提案されている（例えば、Ｍｅｌｉｋｏｖ  ａｎｄ  Ｃｈｅｒｎｏｍｏｒｄｉｋ，  Ａｒｇｉｎｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ｃｅｌｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｆｒｏｍ  ｅｎｄｏｓｏｍａｌ  ｕｐｔａｋｅ  ｔｏ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｃｅｌｌ、Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ２００５）。いかなる理論に縛られるわけではないが、エンドサイトーシ���中、ＣＰＰによって複合化されたマクロ分子は、まず、ヘパラン（ＨＳ）を含めた、負に帯電した細胞表面のグリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ；ＧＡＧ）に結合する。そして、クラスリン依存性エンドサイトーシス、カベオリン依存性エンドサイトーシス、および／またはＦアクチン依存性エンドサイトーシスによって、例えば細胞外で細胞膜を上記ＣＰＰ結合マクロ分子を包むように折り畳むことによって、上記ＣＰＰ結合マクロ分子が細胞内に入る。この結果、ＣＰＰ結合マクロ分子が中に組み込れた袋状の小胞が形成される。後期エンドゾームおよび／またはゴルジ体および／または小胞体（ＥＲ）を介するＣＰＰ結合マクロ分子の輸送によって、ＣＰＰ結合マクロ分子が細胞質内へ運搬される。この段階で、ＣＰＰが誘引した一過的な孔が脂質二重層に開くことがある。あるいは、ＣＰＰによって複合化されたマクロ分子が細胞内の他の場所へ、例えば特定の目的に要求される作用様式によっては、エンドゾーム内へ輸送されることもある。一例としてＴＬＲ−７受容体およびＴＬＲ−８受容体はエンドゾーム中に位置している。したがって、免疫活性化ＲＮＡを細胞にトランスフェクトするとエンドゾームへ輸送され、例えば（具体的な相互作用およびその相互作用のパートナーによっては）下記のＲＮＡリガンドによって免疫活性化される。なお、上記免疫活性化ＲＮＡは、例えば、ＴＬＲ１からＴＬＲ１３（トール様受容体：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、またはＴＬＲ１３）のリガンドから選択されたＴｏｌｌ（トール）様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）のリガンドである。
【０００９】
上記において定義された細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）は当該技術分野において周知であり、広く議論されている。ただし、ペプチド、タンパク質、およびＤＮＡを積荷として輸送するために、これらのＣＰＰを（キャリアとして）使用することは確立されており、上記ＣＰＰは通常共有結合で積荷分子に連結されている。一方、ＣＰＰを使った細胞内部へのＲＮＡ輸送は、非常に限られた事例数しか報告されておらず、特に低分子ＲＮＡ配列、例えば二本鎖ｓｉＲＮＡ配列に限定されている。
【００１０】
一例をあげると、Ｆｕｔａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ．２７６，Ｎｏ．８，ｐｐ．５８３６〜５８４０，２００１）には、４〜１６個のアミノ酸の長さを有するキャリアオリゴペプチド（Ａｒｇ）ｎを、積荷ペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ導入のために使用することが開示されている。また、同文献によれば、このキャリアオリゴペプチドは積荷ペプチドに共有結合している。さらに、６個または８個のアルギニンの長さを有する（Ａｒｇ）ｎの場合に、最適な転座が得られることが実証されている。
【００１１】
ＣＰＰによるペプチドまたはペプチド模倣物の膜貫通型輸送は、さらにＤｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５、前掲）によって示された。Ｄｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５、前掲）には、オリゴペプチドＡｒｇ７およびＡｒｇ９を、積荷ペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ導入および積荷タンパク質（例えばシクロスポリンまたはカタラーゼ）のｉｎ  ｖｉｖｏ導入のために使用することが開示されている。
【００１２】
従来技術では、マクロ分子、例えばＤＮＡ、ペプチド、またはタンパク質を細胞にトランスフェクトする場合、高分子ポリペプチド、例えばポリ−Ｌ−アルギニン（例えば通常分子量が約５０００Ｄａから１５ｋＤａ）またはポリ−Ｌ−リジン（例えば通常分子量が約５４ｋＤａ）、および高分子ＰＥＩ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ；ポリエチレンイミン）（例えば通常分子量が約２５ｋＤａ）が使用された（Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２９、Ｎｏ．１８（２００１））。ただし、高分子ポリ−Ｌ−リジンとＰＥＩは、キャリア分子としては効果的ではないようである。さらに、高分子ポリ−Ｌ−アルギニンを高い濃度で使用する際、補体系の賦活を引き起こす有毒な作用が観察された。それゆえ、低分子量のトランスフェクション薬剤、例えば、低分子ポリアルギニンを開発するために努力がなされた。ただし、分子量の低いポリアルギニンは、キャリア／積荷の複合体（例えば、ポリアルギニンをキャリア、ＤＮＡ分子を積荷として形成された複合体）の安定性が通常低い。それゆえ、ＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（ＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｎｅｗ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｒｅｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｇｅｎｔｓ；Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．２７４、Ｎｏ．１４、２０００）は、これらのペプチドをグルタルアルデヒドを介してＤＮＡに架橋結合し、シッフ塩基を形成することによって、ペプチド／ＤＮＡの複合体の安定性を亢進させようとした。しかし、このような架橋結合の結果、細胞内での複合体の解離が極めて遅くなり、したがって、コードされているタンパク質の発現が経時的に極めて低い。この問題を回避するために、ＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００、前掲）は、ＣＰＰとＤＮＡとの間でジスルフィド結合を形成することによって複合体を安定させるシステイン残基を、ＣＰＰキャリア内に導入した。トランスフェクション時に、これらのジスルフィド結合は細胞内部の還元環境に起因して細胞内で切断され、その結果、コードされているペプチドの発現が増加する。ただし、この架橋結合は精巧であり、ＤＮＡの非所望の修飾をさらに引き起こす可能性がある。
【００１３】
さらに、上述のように、低分子ＰＥＩ（例えば通常分子量が約２０００Ｄａ）および低分子ポリ−Ｌ−リジン（例えば通常分子量が約３４００Ｄａ）を、上記マクロ分子のトランスフェクションに使用してもよい。ただし、これらの実験では、低分子ＰＥＩまたはポリ−Ｌ−リジンの場合、トランスフェクションの改善が観察されたものの、これらのキャリア分子がＤＮＡと極めて安定した複合体を形成したために、発現は検出できなかった。この安定した複合体の形成の結果、これらのキャリア分子の複合化ＤＮＡは、コードされているタンパク質への翻訳および発現には必要なステップである解離を示さないようである（Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、（２００１）、前掲）。
【００１４】
さらに、ＣＰＰによってＤＮＡが輸送されることが、Ｎｉｉｄｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２７２．、Ｎｏ．２４，ｐｐ．１５３０７〜１５３１２，  １９９７）によって示された。Ｎｉｉｄｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７、前掲）には、プラスミドＤＮＡを積荷の一部として輸送するためにＣＰＰを使用すること、特に、規定アルギニン含有量が２５％、長さがアミノ酸１２個または２４個であるカチオン性のα−ヘリックス状ペプチドを使用することが開示されている。その結果、高分子であるおよび／または疎水性を有するペプチドがＤＮＡに強力に結合し、細胞内へのＤＮＡの輸送を実現することができることが発見された。さらに、Ｎｉｉｄｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １９９９，  １０，  ７７３〜７８０）は、１６〜１７個のアミノ酸の長さを有するペプチドが、プラスミドＤＮＡの輸送には最も効率的であることを示した。ただし、低分子ペプチド（例えば約１２個のアミノ酸）をＣＰＰとして使用する際には、ＤＮＡの細胞へのトランスフェクション効率は大幅に減少することがわかった。
【００１５】
低分子であるアルギニン分子の細胞へのトランスフェクション効率を亢進するために、Ｆｕｔａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ２００１，  １２，  １００５〜１０１１）は、４〜１６アミノ酸の長さであるステアリル化されたオリゴペプチド（Ａｒｇ）ｎを使用した。これらのオリゴペプチドは、トランスフェクション実験において、ルシフェラーゼをコードしているプラスミドＤＮＡをｉｎ  ｖｉｔｒｏ導入するために、４〜１６アミノ酸の長さであるステアリル化されていないオリゴペプチド（Ａｒｇ）ｎ、およびポリアルギニン（分子量５０００〜１５０００）が比較対象として使用された。これに応じて、トランスフェクションに使用されるキャリアペプチドがプラスミドＤＮＡと混合されて、キャリア／積荷複合体を形成した。８個のアルギニンの長さを有するステアリル化された（Ａｒｇ）ｎの場合に、最適な転座が得られることが実証された。また一方で、６〜７および９〜１５のアルギニンの長さであるアルギニンは、細胞輸送活性の大幅な低下を示した。さらに、ステアリル化されていないアルギニンおよびポリアルギニンの輸送活性は、思わしくない結果しか示さず、これらのキャリアペプチドを使うと輸送活性に損失が生じることを示唆した。したがって、Ｆｕｔａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１、前掲）に示された、ステアリル化されたキャリアペプチドとステアリル化されていないキャリアペプチドとの間の、観察上のトランスフェクション効率の差は、これらの実験において使用されるＣＰＰの化学的性質を大幅に変化させる脂質類の存在に起因している。
【００１６】
Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｂａｓｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｆｏｒｅｉｇｎ  ｇｅｎｅｓ，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １６４０（２００３）  １２９〜１３６）によれば、低分子であるアルギニンキャリアペプチド、例えば（Ａｒｇ）９から（Ａｒｇ）１５を、緑色蛍光タンパク質ＰＥＧＦＰ−Ｎ３をコードするＤＮＡの複合化と細胞へのトランスフェクションのために使用してもよい。アルギニン（Ａｒｇ）９から（Ａｒｇ）１５を使用する際には、細胞へのトランスフェクション効率は（Ａｒｇ）９から（Ａｒｇ）１５に向けて増加し、（Ａｒｇ）１５の場合に最適な結果が得られた。これらの結果は、ＤＮＡを細胞へトランスフェクトする最適な輸送特性は、式（Ａｒｇ）ｎ（ｎは１５より十分に大きな値）によって表わされるキャリアペプチドの場合に実現されることを示唆している。ただし、低分子であるアルギニンペプチドのトランスフェクション目的の適用性については、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００３、前掲）にＤＮＡ分子の場合に積荷として記述されているだけであった。
【００１７】
さらに、細胞へのトランスフェクションは、ＣＰＰをＲＮＡと組み合わせて使用することによって実施してもよい。ただし、ＲＮＡの細胞への輸送については、実施例がほんのわずかな件数しか実施されていない。その原因は、ＲＮＡの劣化が速いことと、複合体の安定性が低いことにあると考えられる。したがって、ＣＰＰを使ったＲＮＡのトランスフェクションは、比較的安定している二本鎖ＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡに限定されるようである。一例をあげると、Ｔｏｅｎｇｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ＲＮＡ（２００６），  １２：１４３１〜１４３８）は、ｓｉＲＮＡと複合体を形成するステアリル化された８−アルギニン（Ａｒｇ）８を、低分子二本鎖ｓｉＲＮＡを海馬の神経細胞へｉｎ  ｖｉｔｒｏ導入するために使用した。Ｔｏｅｎｇｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００６、前掲）の結果によれば、ｓｉＲＮＡの輸送またはその他のＲＮＡ分子の輸送には、キャリアペプチドのステアリル成分が必須であるように思われる。
【００１８】
Ｖｅｌｄｈｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）は、さらに、低分子二本鎖ｓｉＲＮＡ配列を使った細胞へのトランスフェクションのために、非共有的複合体において特定ＣＰＰを使用することについて報告した（Ｖｅｌｄｈｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｂｙ  ａ  ｎｏｎ−ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ａｔｔａｃｈｅｄ  ｃｅｌｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ：ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００６）。Ｖｅｌｄｈｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）で使用されたペプチドは、ＭＰＧα（Ａｃ−ＧＡＬＦＬＡＦＬＡＡＡＬＳＬＭＧＬＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ−Ｃｙａ）およびＭＰＧα−ｍＮＬＳ（Ａｃ−ＧＡＬＦＬＡＦＬＡＡＡＬＳＬＭＧＬＷＳＱＰＫＳＫＲＫＶ−Ｃｙａ）である。これらの特定ペプチドは、Ｎ側末端においてはアセチル類（Ａｃ）で、また、Ｃ側末端においてはシステアミド類で付加的に修飾した。Ｖｅｌｄｈｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）は、前記キャリアペプチドを使用することによって、長さが約１８個〜４０個のヌクレオチドの二本鎖ｓｉＲＮＡを細胞に導入することが可能であることを示した。
【００１９】
以上を要約すれば、マクロ分子を細胞内へ輸送することを目的としたＣＰＰまたはその他のキャリアペプチドの使用に関する基本的な事項を、ペプチドおよびＤＮＡ分子の場合について示した。二本鎖ｓｉＲＮＡの細胞貫通特性を開示した具体的な報告はほとんどない。
【００２０】
ＲＮＡ導入は現代の分子医学では重要な道具である。また、ＤＮＡ分子は重大な問題を起こす可能性があるので、ＤＮＡ細胞トランスフェクションと比較して優れた性質を示す。例えば、ＤＮＡ分子を適用すると、そのＤＮＡが宿主ゲノムに組み込れる危険性がある。外来性ＤＮＡが宿主ゲノムに組み込まれると、宿主遺伝子の発現に対して影響を与える可能性がある。また、発癌遺伝子の発現または腫瘍抑制遺伝子の破壊が誘発されることもありうる。さらに、宿主にとっては欠かすことができない遺伝子が、外来性ＤＮＡがこの遺伝子のコード領域に組み込まれることによって不活性化される（遺伝子産物も同様に不活性化される）。ＤＮＡが細胞成長の調整に関わる遺伝子に組み込まれると、具体的な危険性がある。この場合、宿主細胞は変性状態になり、癌または腫瘍の形成を起こすこともある。このようなＤＮＡへの非所望の組み込みは、細胞にトランスフェクトされたＤＮＡが強力なプロモーター、例えばウイルス性ＣＭＶプロモーターを備えていれば、さらに大きな問題を引き起こすかもしれない。上記プロモーターが治療済み細胞のゲノムへ組み込まれると、細胞内での遺伝子発現の調整に所望しない変化を引き起こす可能性がある。もう一つの欠点は、ＤＮＡ分子がエピゾームとしてまたは上記で言及したように宿主ゲノム内へ組み込まれて、細胞核内に長時間残存することである。この現象は、時間的に限定されないまたはできない導入遺伝子タンパク質の生成と、この導入遺伝子タンパク質に対して関連する許容性が生じる危険との双方の原因になる。ＤＮＡの注入によって、抗ＤＮＡ抗体の発達（Ｇｉｌｋｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９５，  １３９８〜１４０２（１９９５））、および自己免疫疾患の誘引が誘発される可能性もある。列挙したこれら全ての危険性がＤＮＡの適用と関連性がある。逆に、これらの危険性は、ＤＮＡの替わりにＲＮＡ、特にｍＲＮＡを使用すれば発生しない。例えば、ｍＲＮＡは宿主ゲノムに組み込まれない。また、転写の実行にはプロモーターなどのウイルス性配列が一切不要である。ＲＮＡの使用によって生じる欠点があるとすれば、ＤＮＡに比較して不安定であることがその原因となるかもしれない（ＲＮＡ劣化酵素、特にいわゆるＲＮａｓｅ（ＲＮＡ分解酵素）、さらに、ＲＮＡを不安定にするその他多数のプロセスがＲＮＡ不安定性化の元凶となる）。しかし一方で、ＲＮＡを安定化する方法が、当該技術分野において、例えば、ＷＯ０３／０５１４０１、ＷＯ０２／０９８４４３、ＷＯ９９／１４３４６、ＥＰ−Ａ−１０８３２３２、ＵＳ５，５８０，８５９、およびＵＳ６，２１４，８０４において開示されている。さらに、リポゾームを使うか（Ｍａｒｔｉｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３，  １７１９〜１７２２（１９９３））、または弾道デバイス（遺伝子銃）で核酸を細胞基質内ｉｎ  ｖｉｖｏ投与することによって（Ｖａｓｓｉｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｖａｃｃｉｎｅ  １９，  ２０１２〜２０１９（２００１）、ＲＮＡをＲＮＡ分解酵素による劣化から保護する方法も開発された。
【００２１】
ＲＮＡ分子自身は、上述のようにＤＮＡに比べて有利な特性を有するので、本発明の目的は、細胞内へのＲＮＡ輸送に適しており、かつ効率的なキャリアを提供することである。したがって、本発明は、効率的な細胞内へのＲＮＡトランスフェクションを可能にする溶液を提供する。
【００２２】
この本発明の目的は、請求項によって特徴づけられる本発明の実施形態によって実現される。具体的には、上記目的は以下の複合化ＲＮＡ（分子）によって達成される。すなわち、１つ以上のオリゴペプチドで複合化されたＲＮＡ（分子）、好ましくはｍＲＮＡを少なくとも１つ備えた複合化ＲＮＡ（分子）であり、上記少なくとも１つのオリゴペプチドは８〜１５アミノ酸の長さであり、かつ、上記少なくとも１つのオリゴペプチドは、以下の実験式によって表わされる上記少なくとも１つのオリゴペプチド内において、任意の順序で配置されたｌ個のＡｒｇ残基、ｍ個のＬｙｓ残基、ｎ個のＨｉｓ残基、ｏ個のＯｒｎ残基、およびｘ個のＸａａ残基を含有している複合化ＲＮＡ（分子）である。
（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ      （式Ｉ）
なお、
・Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎ全体の含有量が上記オリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも５０％、例えば少なくとも６０％または７０％を占める場合、ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５であり、また、ｌ、ｍ、ｎ、およびｏは互いに独立した、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および１５から選択された任意の数値であり、
・Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎを除いた天然（つまり自然に生じる）アミノ酸および非天然アミノ酸から選択された任意のアミノ酸であり、
・Ｘａａ全体の含有量が上記オリゴペプチドの全てのアミノ酸の５０％を超えない、例えば４０％または３０％を越えない場合、ｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、および８から選択された任意の数値である。
【００２３】
本発明の文脈において、複合化ＲＮＡとは、本発明において定義するように、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドでもって、ＲＮＡとオリゴペプチドとの間で非共有的複合体を形成することによって複合化された、ＲＮＡ（分子）、好ましくはｍＲＮＡであると理解すべきである。ここで、“非共有的”とは、ＲＮＡとオリゴペプチドとが、これらの分子の非共有的な相互作用によって可逆的に連結しており、上記分子は共有結合以外の任意のタイプの電子相互作用によって、例えばファンデルワールス結合（つまり、上記複合化分子の不特定な引力から発生する弱い静電性の引きつけあい）によって、互いに連結していることを意味している。ＲＮＡと少なくとも１つのオリゴペプチドとの連結は、複合体の解離平衡状態にある。細胞内については、理論に縛られるわけではないが、ＲＮＡとオリゴペプチドとが解離した状態の方で平衡であるように思われる。
【００２４】
本発明に係わる上記複合化ＲＮＡの少なくとも１つのオリゴペプチドは、８〜１５アミノ酸の長さであり、好ましくは８〜１４、８〜１３、８〜１２、または９〜１２、または９〜１１アミノ酸の長さであり、さらに好ましくは８〜１０、９〜１１、１０〜１２、１１〜１３、１２〜１４、または１３〜１５アミノ酸の長さであり、一層好ましくは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸の長さである上記式によって表わされるペプチドから選択されてもよい。
【００２５】
本発明に係る上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上記において定義したように、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる。なお、（塩基性アミノ酸である）Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、および／またはＯｒｎ全体の含有量が、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも５０％（例えば少なくとも５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、または５９％）、少なくとも６０％（例えば少なくとも６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、または６９％）、少なくとも７０％（例えば少なくとも７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、または７９％）、少なくとも８０％（例えば少なくとも８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、または８９％）、少なくとも９０％（例えば少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）、もしくは１００％を占めるる場合、ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５であり、また、ｌ、ｍ、ｎ、およびｏは互いに独立した、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および１５から選択された任意の数値であるか、またはこれらの２つの数値によって形成される任意の範囲である。上記アミノ酸Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎ（三文字表記）は、それぞれアルギニン、リジン、ヒスチジン、およびオルニチン（すべてアミノ酸）を指す。この文脈において、オルニチンは、構造がＮＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨＮＨ２−ＣＯＯＨと表わされるアミノ酸である。オルニチンは２１番目のアミノ酸として人工的に合成されたものであって、ＤＮＡによってコードされたアミノ酸ではないという意味で、“自然に生じる”２０個のアミノ酸には属しない。したがって、オルニチンは主要なタンパク質合成とは無関係である。ただし、オルニチンはＬ−アルギニンから開始する酵素反応によって生成される。保護されていないオルニチンを含んだポリペプチドは自発的にラクタム化を起こすので、オルニチンは遺伝子コードの一部をなすとは考えられていない。オルニチンは、アルギナーゼ酵素がＬ−アルギニンに作用して尿素を発生させる反応の生成物の一つであるから、塩基性アミノ酸だとみなすべきである。
【００２６】
別の好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡのオリゴペプチドの（それぞれの）アミノ酸は、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式Ｉ）によって表わされ、実験式について上記において定義されたように任意の頻度で発生する。つまり、各塩基性アミノ酸（Ｘａａを含む）は、上記において定義した実験式において、上記において定義した数値または範囲で発生する。なお、上記において定義した数値のうち２つを使って、任意の範囲を形成すればよい。ただし、上記実験式中の塩基性アミノ酸Ａｒｇの含有量が、実験式全体に対して少なくとも１０％であれば特に好ましく、少なくとも２０％であればさらに好ましく、少なくとも３０％、４０％、または５０％に達すれば一層好ましく、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％に達すればなお一層好ましい。別の特に好適な実施形態によれば、上記実験式中の塩基性アミノ酸Ｌｙｓの含有量は、実験式全体に対して少なくとも１０％、さらに好ましくは少なくとも２０％、一層好ましくは少なくとも３０％、４０％、または５０％に達し、なお一層好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％に達する。さらに別の特に好適な実施形態によれば、上記実験式中の塩基性アミノ酸Ｈｉｓの含有量は、実験式全体に対して少なくとも１０％、さらに好ましくは少なくとも２０％、一層好ましくは少なくとも３０％、４０％、または５０％に達し、なお一層好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％に達する。さらに別の好適な実施形態によれば、上記実験式中の塩基性アミノ酸Ｏｒｎの含有量は、実験式全体に対して少なくとも１０％、さらに好ましくは少なくとも２０％、一層好ましくは少なくとも３０％、４０％、または５０％に達し、なお一層好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％に達する。上記において定義された塩基性アミノ酸Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、および／またはＯｒｎの上記において定義された含有量、数値、または範囲は、どれもさらに互いに組み合わてもよく、好ましくは本発明の複合化ＲＮＡのオリゴペプチドの全ての塩基性アミノ酸全体の含有量が、最初に定義されたように、少なくとも５０％（少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、または５９％）、少なくとも６０％（少なくとも６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、または６９％）、少なくとも７０％（少なくとも７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、または７９％）、少なくとも８０％（少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、または８９％）、少なくとも９０％（少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）、または１００％に達する。
【００２７】
さらに、上記式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ中のアミノ酸、つまりＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、および／またはＯｒｎは、天然（つまり自然に生じる）アミノ酸Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎから選択されてもよく、または、これらのアミノ酸に由来する非天然（つまり自然には生じない）アミノ酸から選択されてもよい。アミノ酸Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、およびＯｒｎに由来する非天然の（つまり自然には生じない）アミノ酸としては、上記オリゴペプチドを有する場合、これらのアミノ酸の、化学的に修飾された任意の公知の誘導体が細胞または生体にとって有毒でない限り、上記誘導体が使用されてもよい（このようなアミノ酸の誘導体は複数の会社が販売している；例えばＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍを参照）。
【００２８】
さらに、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上記実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ中にアミノ酸Ｘａａを含有していてもよく、このアミノ酸Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、またはＯｒｎ以外の、天然（つまり自然に生じる）アミノ酸または非天然（つまり自然には生じない）アミノ酸から選択された任意のアミノ酸であってもよい。Ｘａａは、好ましくは、自然に発生する中性（および疎水性）アミノ酸、および／または自然に発生する中性（および極性）アミノ酸、および／または自然に生じる酸性アミノ酸から選択されるが、これに限定されるものではない。なお、上記自然に生じる中性（および疎水性）アミノ酸とは、中性（および疎水性）側鎖を有するアミノ酸、例えば、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、またはメチオニン（Ｍｅｔ）である。また、上記自然に生じる中性（および極性）アミノ酸とは、中性（および極性）側鎖を有するアミノ酸、例えば、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、またはグルタミン（Ｇｌｕ）である。さらに、上記自然に生じる酸性アミノ酸とは、酸性側鎖を有するアミノ酸、例えば、アスパラギン酸（Ａｓｐ）またはグルタミン酸（Ｇｌｕ）である。好ましくは、本発明に係わる上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上記実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘにおいて、酸性側鎖を持たないアミノ酸から選択されたアミノ酸Ｘａａを含有していてもよい。一層好ましくは、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ中のＸａａは、中性側鎖を有するアミノ酸から、つまり、上記において定義された中性（および疎水性を有する）側鎖を有するアミノ酸および／または中性（および極性を有する）側鎖を有するアミノ酸から選択される。また、上記オリゴペプチドと共に提供する場合に、アミノ酸の任意の公知の誘導体、つまり、化学的に修飾されたアミノ酸が細胞または生体にとって有毒でない限り、上記誘導体が、上記実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘにおいて、Ｘａａの替わりに使用されてもよい（このようなアミノ酸の誘導体は複数の会社が販売している；例えばＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍを参照）。Ｘａａの含有量は、通常上記式中、全てのオリゴペプチド配列の全てのアミノ酸の０％〜３０％、０％〜４０％、または０％〜５０％である。つまり、Ｘａａの含有量は全体で、全てのオリゴペプチド配列の全てのアミノ酸の３０％、４０％、または５０％以下であり、好ましくは、全てのオリゴペプチド配列の全てのアミノ酸の２０％以下、一層好ましくは１０％以下、および最も好ましくは５％以下である。したがって、Ｘａａの含有量が、上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドの全てのアミノ酸の３０％（またはそれ未満）、４０％、または５０％という上記の数���以下であれば、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ中のｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、または８から選択された任意の数値であってもよい。
【００２９】
通常、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘで示される本発明に係わる上記複合化ＲＮＡオリゴペプチドのアミノ酸Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｏｒｎ、およびＸａａは、オリゴペプチド配列の任意の位置に配置されてもよい。したがって、実験式（Ｉ）はアミノ酸の順序についてなんら指定するものではなく、むしろアミノ酸の種類とペプチド中におけるその発生頻度とを反映させようというものである。つまり、ペプチド鎖がｌ個のＡｒｇ残基、ｍ個のＬｙｓ残基、ｎ個のＨｉｓ残基、ｏ個のＯｒｎ残基、およびｘ個のＸａａ残基を含有することを示唆しており、ペプチド鎖におけるこれらの残基の順序について指定するものではない。
【００３０】
ただし、上記オリゴペプチドは、一方の末端部または好ましくは両方の末端部において、酸性側鎖以外のアミノ酸を備えていることが好ましい。さらに好ましくは、上記オリゴペプチド配列が、一方の末端部または好ましくは両方の末端部において、中性アミノ酸または塩基性アミノ酸を備えており、一層好ましくは、一方または両方の末端部において、塩基性アミノ酸を備えている。さらに好適な実施形態では、上述の一般式によって表わされる上記オリゴペプチドは、少なくとも２つ、さらに好ましくは少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの末端塩基性残基、特にＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓをどちらかの末端において含有する。別の好適な実施形態によれば、上述の一般式によって表わされるオリゴペプチドは、好ましくは、一方の末端部または好ましくは両方の末端部においてカチオン性アミノ酸（つまりＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓ）を有しない。一層好ましくは、両方の末端部においてカチオン性アミノ酸（つまりＡｒｇ、Ｏｒｎ、またはＬｙｓ）を有しない。換言すれば、上述の一般式によって表わされるオリゴペプチドの１つの末端部、またはさらに好ましくは両方の末端部は、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、Ｌｙｓ、もしくはこれらのカチオン性アミノ酸の任意の変異体または誘導体を除いたアミノ酸から選択される、任意の非カチオン性アミノ酸を備えていてもよい。両末端部は、例えば１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、またはさらに多くの、上記において定義された塩基性非カチオン性残基を、特定配列のＮ末端部および／またはＣ末端部を先頭として備えている。
【００３１】
別の好適な実施形態によれば、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドの一方または両方の末端部は、その末端部の一方または両方において、少なくとも１つのヒスチジン残基を備えていてもよい。例えば、オリゴペプチド全体の長さが上記において定義されたように８〜１５アミノ酸に限定されている限り、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、１つ、２つ、３つ、またはより多くのヒスチジン残基を一方または両方の末端部において連続して備えていてもよい。
【００３２】
また、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのオリゴペプチドのＸａａ残基は、通常少なくとも１つのＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、またはＯｒｎを挟んで互いに離間している。このようにＸａａ残基が離間することによって、オリゴペプチド中の非塩基性アミノ酸がクラスタをつくることが避けられるので好ましい。これは、非塩基性クラスタが形成されると、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのキャリアペプチドとしてのオリゴペプチドの有利性が低減するからである。
【００３３】
ただし、上述の式によって表わされる複合化ＲＮＡのオリゴペプチドの塩基性アミノ酸残基は、上記において定義されたＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、またはＯｒｎから選択され、通常、少なくとも２個、好ましくは少なくとも３個、４個、５個、または６個、またはより多くの、本発明において定義される塩基性アミノ酸のクラスタの形態で生じる。特に好適な実施形態によれば、上記クラスタは、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、または１５個のアミノ酸を備えていてもよい。上記塩基性アミノ酸のクラスタは、好ましくは、少なくとも３個、４個、５個、または６個、またはより多くの塩基性アミノ酸のクラスタであって、好ましくは、塩基性面または結合領域を上記オリゴペプチド内に生成する。この塩基性面または結合領域によって、本発明に係る上記複合化ＲＮＡのキャリアペプチドとしてのオリゴペプチドは、有利な特徴を獲得する。
【００３４】
別の好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式Ｉ）によって表わされ、以下の式からなる小群より選択されてもよい（ただしこれに限定されるものではない）。すなわち、
Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ１０、Ａｒｇ１１、Ａｒｇ１２、Ａｒｇ１３、Ａｒｇ１４、Ａｒｇ１５（配列番号１〜８）；
Ｌｙｓ８、Ｌｙｓ９、Ｌｙｓ１０、Ｌｙｓ１１、Ｌｙｓ１２、Ｌｙｓ１３、Ｌｙｓ１４、Ｌｙｓ１５（配列番号９〜１６）；
Ｈｉｓ８、Ｈｉｓ９、Ｈｉｓ１０、Ｈｉｓ１１、Ｈｉｓ１２、Ｈｉｓ１３、Ｈｉｓ１４、Ｈｉｓ１５（配列番号１７〜２４）；
Ｏｒｎ８、Ｏｒｎ９、Ｏｒｎ１０、Ｏｒｎ１１、Ｏｒｎ１２、Ｏｒｎ１３、Ｏｒｎ１４、Ｏｒｎ１５（配列番号２５〜３２）。
【００３５】
別の好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式Ｉ）によって表わされ、下記の小群より選択されてもよい（ただしこれに限定されるものではない）。この小群は、上記において定義された実験式Ｉで表わされる、好適な例として本発明の特定のオリゴペプチドを定義する。なお、（実験式（Ｉ）と同様に）下記の式はアミノ酸の順序についてなんら指定するものではなく、もっぱら各ペプチドの成分としてのアミノ酸（の個数）を指定することによって実験式を反映させようというものである。したがって、実験式Ａｒｇ（７−１４）Ｌｙｓ１は、この式の範疇に入るペプチドが７個〜１４個のＡｒｇ残基と１個のＬｙｓ残基とを含有し、その順序はいかなる順序であってもよいことを意味している。ペプチドが７個のＡｒｇ残基と１個のＬｙｓ残基とを含有するのであれば、７個のＡｒｇ残基と１個のＬｙｓ残基とを有する全ての変異体が包含される。したがってＬｙｓ残基は、例えばＡｒｇが７個とＬｙｓ残基が１個からなるアミノ酸８個の長さの配列中で、どこに配置されてもよい。上記小群は、好ましくは、以下のオリゴペプチドからなる。すなわち、
Ａｒｇ（７−１４）Ｌｙｓ１、Ａｒｇ（７−１４）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（７−１４）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（７−１４）Ｈｉｓ１、Ｌｙｓ（７−１４）Ｏｒｎ１、Ｈｉｓ（７−１４）Ｏｒｎ１；
Ａｒｇ（６−１３）Ｌｙｓ２、Ａｒｇ（６−１３）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（６−１３）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（６−１３）Ｈｉｓ２、Ｌｙｓ（６−１３）Ｏｒｎ２、Ｈｉｓ（６−１３）Ｏｒｎ２；
Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ３、Ａｒｇ（５−１２）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（５−１２）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ３、Ｌｙｓ（５−１２）Ｏｒｎ３、Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ３；
Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ４、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（４−１１）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ４、Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ４、Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ４；
Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ５、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ５、Ａｒｇ（３−１０）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ５、Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ５、Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ５；
Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ６、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ６、Ａｒｇ（２−９）Ｏｒｎ６、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ６、Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ６、Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ６；
Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ７、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ７、Ａｒｇ（１−８）Ｏｒｎ７、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ７、Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ７、Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ７；
Ａｒｇ（６−１３）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（６−１３）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（６−１３）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（６−１３）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（６−１３）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（６−１３）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（６−１３）、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（６−１３）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（６−１３）Ｏｒｎ１；
Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（５−１２）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（５−１２）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（５−１２）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（５−１２）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（５−１２）、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ２；
Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（４−１１）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（４−１１）、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ３；
Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ４Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ４；
Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ５Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ５、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ５、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ５Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ５Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ４Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ５；
Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ６Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ５Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ５、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ６、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ６Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ５Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ６、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ６Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ６、Ａｒｇ６Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ５、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ６、Ａｒｇ６Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ６、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ６Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ６、Ａｒｇ６Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ５Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ６Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ６Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ５Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ６、Ｌｙｓ６Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ６；
Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（５−１２）；
Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（４−１１）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（４−１１）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（４−１１）；
Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（３−１０）；
Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ３Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（２−９）；
Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ５Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ５Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ａｒｇ４Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ５Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ５Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ５Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ４Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（１−８）。
【００３６】
１つの好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされ、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ１０、Ａｒｇ１１、Ａｒｇ１２、Ａｒｇ１３、Ａｒｇ１４、Ａｒｇ１５（配列番号１〜８）；Ｌｙｓ８、Ｌｙｓ９、Ｌｙｓ１０、Ｌｙｓ１１、Ｌｙｓ１２、Ｌｙｓ１３、Ｌｙｓ１４、Ｌｙｓ１５（配列番号９〜１６）；Ｈｉｓ８、Ｈｉｓ９、Ｈｉｓ１０、Ｈｉｓ１１、Ｈｉｓ１２、Ｈｉｓ１３、Ｈｉｓ１４、Ｈｉｓ１５（配列番号１７〜２４）；またはＯｒｎ８、Ｏｒｎ９、Ｏｒｎ１０、Ｏｒｎ１１、Ｏｒｎ１２、Ｏｒｎ１３、Ｏｒｎ１４、Ｏｒｎ１５（配列番号２５〜３２）からなる小群より選択される。
【００３７】
別の好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡのオリゴペプチドは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされ、一般式Ａｒｇ９（Ｒ９とも称される）、Ａｒｇ９Ｈｉｓ３（Ｒ９Ｈ３とも称される）、Ｈｉｓ３Ａｒｇ９Ｈｉｓ３（Ｈ３Ｒ９Ｈ３とも称される）、ＴｙｒＳｅｒＳｅｒＡｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ（ＹＳＳＲ９ＳＳＹとも称される）、Ｈｉｓ３Ａｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ（Ｈ３Ｒ９ＳＳＹとも称される）、（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）４（（ＲＫＨ）４とも称される）、Ｔｙｒ（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）２Ａｒｇ（Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒとも称される）からなる小群より選択される。一層好ましくは、これらの一般式は以下のように定義される。すなわち、
Ａｒｇ９：Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号２）
Ａｒｇ９Ｈｉｓ３：Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ（配列番号３９）
Ｈｉｓ３Ａｒｇ９Ｈｉｓ３：Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ（配列番号４０）
ＴｙｒＳｅｒＳｅｒＡｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ：Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ（配列番号４１）
Ｈｉｓ３Ａｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ：Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ（配列番号４２）
（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）４：Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ（配列番号４３）
Ｔｙｒ（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）２Ａｒｇ：Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ（配列番号４４）
本発明の複合化ＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのオリゴペプチドは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされ、付加的に修飾されてもよい。本発明の文脈において、修飾とは通常、その結果生じる複合化ＲＮＡのトランスフェクション能力に対して干渉しない、ペプチドに適した任意の修飾を含む。
【００３８】
それゆえ、典型的な修飾には、例えば上記において定義された修飾されたアミノ酸の使用を含む。さらに、上記オリゴペプチドの末端アミノ酸残基は、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされ、カルボキシ基（Ｃ側末端）およびアミノ基（Ｎ側末端）（ならびにカルボキシ側鎖基またはアミドアミノ酸側鎖基、上記参照）を有し、適切なアミノ保護基またはカルボキシル保護基を使うことによって、保護された形態（例えばＣ末端がアミド基によって保護されている）および／または保護されていない形態で存在してもよい。また、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチドの酸付加塩を使用してもよい。一般的な酸付加塩はハイドロハリック（ｈｙｄｒｏｈａｌｉｃ）酸塩、つまり、ＨＢ、ＨＩ、またはさらに好ましくはＨＣｌである。
【００３９】
上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチド中で、リジンの末端または側鎖カルボキシル基もしくはε−アミノ基をペグ化することによって、凝集および血清劣化に対する耐性が生じる。このペグ化は本発明の権利範囲内である。
【００４０】
本発明の複合化ＲＮＡの（分子）の少なくとも１つのオリゴペプチドは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされ、さらに、少なくとも１つの特定のリガンドに結合または連結するように修飾されてもよく、上記少なくとも１つの特定のリガンドは、上記少なくとも１つのオリゴペプチドの一方または両方の末端部に結合または連結されていてもよい。上記オリゴペプチドの一方または両方の末端部に結合または連結された上記少なくとも１つの特定のリガンドは、同一であっても、あるいは異なっていてもよい。さらにこの特定のリガンドは、受容体またはタンパク質またはタンパク質／受容体複合体、例えば細胞表面であれば例えばＲＧＤ−ペプチド、トランスフェリン、またはマンノースなど（ただしこれに限定されるものではない）と、結合または相互作用可能な任意の化合物から選択されてもよい。
【００４１】
上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる上記オリゴペプチドの誘導体を生成する、その他の好ましい修飾は上記オリゴペプチドに共有結合してもよい炭水化物および／または脂質に基づいている。炭水化物および／または脂質を、その反応性側鎖類を介して、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、またはチロシン、もしくはグルタミン酸塩またはアスパラギン酸塩に結合することが好ましい。あるいは、炭水化物および／または脂質が、本発明において定義されたオリゴペプチド末端類にさらに連結されてもよい。さらに、上記オリゴペプチドは、機能的に異なるペプチドまたはタンパク質類に結合されてもよく、この機能的に異なるペプチドまたはタンパク質類はオリゴペプチドをさらに安定化するおよび／または体液、特に血液中においてオリゴペプチドの輸送特性の改善に役立つようなものであってもよい。適したペプチドまたはタンパク質は、例えばアルブミン、トランスフェリンなどから選択されてもよく、このアルブミン、トランスフェリンなどは、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドに、直接もしくはペプチドまたは有機リンカー配列を介して結合されてもよい。好ましくは、これらのペプチドまたはタンパク質は、オリゴペプチドの有する一方の一つの末端に連結されている。
【００４２】
この文脈において、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドの、脂質を使った修飾では、通常（飽和または不飽和）脂肪酸、特に長鎖の（飽和または不飽和）脂肪酸（中でも、＞Ｃ１２、＞Ｃ１４、または＞Ｃ１６の長鎖）を使用しないことに注意されたい。したがって、本発明の文脈において、上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドを、脂肪酸を使って修飾することは、本発明の不可欠な要素ではない。ただし、キャリアペプチドの修飾に脂肪酸が使用されるのであれば、例えばブタン脂肪酸（ｂｕｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（酪酸脂肪酸（ｂｕｔｙｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ペンタン脂肪酸（ｐｅｎｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（吉草酸脂肪酸（ｖａｌｅｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ヘキサン脂肪酸（ｈｅｘａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（カプロン脂肪酸（ｃａｐｒｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、オクタン脂肪酸（ｏｃｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（カプリル脂肪酸（ｃａｐｒｙｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ノナン脂肪酸（ｎｏｎａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ペラルゴン脂肪酸（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、デカン脂肪酸（ｄｅｃａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（カプリン脂肪酸（ｃａｐｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ドデカン脂肪酸（ｄｏｄｅｃａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ラウリン脂肪酸（ｌａｕｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、テトラデカン脂肪酸（ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ミリスチン脂肪酸（ｍｙｒｉｓｔｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ヘキサデカン脂肪酸（ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（パルミチン脂肪酸（ｐａｌｍｉｔｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ヘプタデカン脂肪酸（ｈｅｐｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（マルガリン（ダツリン）脂肪酸（ｍａｒｇａｒｉｃ  （ｄａｔｕｒｉｃ）  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、オクタデカン脂肪酸（ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ステアリン脂肪酸（ｓｔｅａｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、エイコサン脂肪酸（ｅｉｃｏｓａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（アラキン脂肪酸（ａｒａｃｈｉｄｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ドコサン脂肪酸（ｄｏｃｏｓａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ベヘン脂肪酸（ｂｅｈｅｎｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、テトラコサン脂肪酸（ｔｅｔｒａｃｏｓａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（リグノセリン脂肪酸（ｌｉｇｎｏｃｅｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ヘキサコサン脂肪酸（ｈｅｘａｃｏｓａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（セロチン酸脂肪酸（ｃｅｒｏｔｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ヘプタコサン脂肪酸（ｈｅｐｔａｃｏｓａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（カルボセリン脂肪酸（ｃａｒｂｏｃｅｒｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、オクタコサン脂肪酸（ｏｃｔａｃｏｓａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（モンタン脂肪酸（ｍｏｎｔａｎｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、トリアコンタン脂肪酸（ｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（メリシン脂肪酸（ｍｅｌｉｓｓｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ドトリアコンタン脂肪酸（ｄｏｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ラッセル脂肪酸（ｌａｃｃｅｒｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、トリアコンタン脂肪酸（ｔｒｉｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（セロメリッシン（フィリン）脂肪酸（ｃｅｒｏｍｅｌｉｓｓｉｃ  （ｐｓｙｌｌｉｃ）  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、テトラトリアコンタン脂肪酸（ｔｅｔｒａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（ゲダ脂肪酸（ｇｅｄｄｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））、ペンタトリアコンタン脂肪酸（ｐｅｎｔａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）（蝋型脂肪酸（ｃｅｒｏｐｌａｓｔｉｃ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ））など、またはこれらの不飽和類似体からなる群より選択されてもよい（ただしこれに限定されるものではない）。特定の例をあげると、本発明では、通常、式Ｉのキャリアペプチドの修飾のために、オクタデカン脂肪酸（ステアリン脂肪酸）またはその不飽和類似体を使用しない。つまり、通常、式Ｉのステアリル化されたオリゴペプチドは、ここでは上記本発明の複合体のＲＮＡ成分の複合化のために使用されない。
【００４３】
上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドの劣化問題を回避するためには、本発明の別の一実施形態によれば、Ｄアミノ酸からなる、または少なくとも部分的にＤアミノ酸からなる、上記オリゴペプチドのレトロ−インバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）型異性体が使用されてもよい。「レトロ−インバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）型異性体」という用語は、配列方向が反対で、各アミノ酸残基のキラリティーが反転している直鎖ペプチドの異性体を指す（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６８，  ７４４〜７４６（１９９４）；Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６８，  ６９２〜６９３（１９９４）を参照）。親ペプチドに対して、レトロ−インバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）型ペプチドは、アミノ酸が逆の順序で、通常Ｆｍｏｃアミノ酸誘導体をともなって組み立てられる。通常、未精製のペプチドは逆位相ＨＰＬＣによって精製されてもよい。
【００４４】
上述の実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘで表わされるオリゴペプチドに導入可能な他の修飾は、ペプチドの主鎖の修飾に関連したものである。好ましくは、修飾されたオリゴペプチドは骨格模倣物であり、その主鎖は自然に生じる主鎖とは異なるが、その側鎖構造はオリゴペプチド、もしくはその断片、変異体、または誘導体と同一である。一般に、骨格模倣物は、一つ以上の主鎖の成分（ＮＨ、ＣＨ、ＣＯ）が、置換（好ましくは）または挿入によって修飾されている。置換基としては、例えば（Ｉ）−ＮＨ−を置換する−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＣＨ２−、（ＩＩ）−ＣＨＲ−を置換する−Ｎ−、Ｃ−アルキル−、または−ＢＨ−、および（ＩＩＩ）−ＣＯ−を置換する−ＣＳ−、−ＣＨ２−、−ＳＯｎ−、−Ｐ＝Ｏ（ＯＨ）−、または−Ｂ（ＯＨ）−があげられる。本発明において定義される実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドのペプチド模倣物は、これらの修飾それぞれの組み合わせであってもよい。特に、各グループＩ、ＩＩ、およびＩＩＩのそれぞれの修飾を組み合わてもよい。ペプチド模倣物において、主鎖の各成分は修飾されてもよく、または、ある限った個数の成分を自然に生じたものではない成分と交換してもよい。好ましくは、本発明において定義される実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドの全ての主鎖の成分（−ＮＨ−、−ＣＨＲ−、またはＣＯのいずれか）が、他の自然に生じたものではない基に変換される。オリゴペプチドの主鎖のアミド結合（−ＮＨ−ＣＯ−）が（分子全体において、または少なくとも１つの位置において）置換される場合、好適な置換成分は生物学的等価性を有するもの、例えばレトロ−インバース（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｅ）型アミド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）、ヒドロキシルエチレン（−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−）、アルケン（ＣＨ２＝ＣＨ−）、カルバ（ＣＨ２−ＣＨ２−）、および／または−Ｐ＝Ｏ（ＯＨ）−ＣＨ２−）である。あるいは、本発明において定義される実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘにおいて表わされるオリゴペプチドの骨格模倣物中において、例えばＣα原子に隣接する成分によって、挿入による主鎖の伸長が生じてもよい。例えば−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ−、−ＮＨ−が、上記Ｃα原子の何れの側に挿入されてもよい。
【００４５】
特に好ましいのは、本発明において定義される実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされるオリゴペプチドのオリゴカルバミン酸塩ペプチドの主鎖構造である。したがって、アミド結合をカルバミン酸塩類によって置換してもよい。単量体であるＮ−保護アミノアルキル炭酸塩は、対応するアミノ酸またはアミノアルコールから得ることができる。アミノ酸またはアミノアルコールは、活性を有するエステル、例えばＦｍｏｃ類を使用することによってｐ型ニトロフェニルエステル、または固相合成によって感光性ニトロアトリルオキシカルボニル（ｎｉｔｒｏａｔｒｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）基に変換される。
【００４６】
本発明の複合化ＲＮＡは、さらに、トランスフェクションの目的に適した少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を備え、この少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、上記で開示されたように実験式Ｉ（（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ）によって表わされる１つ以上のオリゴペプチドで複合化されている。
【００４７】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、（好ましくは、本発明に係る複合化ＲＮＡとして適用されるＲＮＡのタイプに依存して）任意の長さを有していてもよい。上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、トランスフェクトされるＲＮＡのタイプに応じて、５〜２００００ヌクレオチドの長さ、さらに好ましくは５〜１００００ヌクレオチドの長さ、または３００〜１００００ヌクレオチドの長さ、一層好ましくは５〜５０００ヌクレオチドの長さ、最も好ましくは２０〜５０００ヌクレオチドの長さ、５０〜５０００ヌクレオチドの長さ、１００〜５０００ヌクレオチドの長さ、または３００〜１００００ヌクレオチドの長さであってもよいが、これに限定されるものではない（下記の開示を参照）。
【００４８】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、任意のＲＮＡであってもよく、好ましくは、低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド（好適な長さは５〜８０、さらに好ましくは２０〜８０ヌクレオチド）、コーディングＲＮＡ、免疫活性化ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、またはリボスイッチ、リボザイム、またはアプタマーである。ただしこれに限定されるものではない。さらに、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、一本鎖ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡ（後者は２本の一本鎖ＲＮＡ（複数分子）が非共有的に連結しているのであるから、一種のＲＮＡ（単一分子）であるともみなすことができる）であってもよいし、あるいは、部分的な二本鎖ＲＮＡ（これは通常、長めの一本鎖ＲＮＡ分子と比較的低分子の一本鎖ＲＮＡ分子とによって形成されるか、あるいは、長さがほぼ等しく、一方の一本鎖ＲＮＡ分子がもう一方の一本鎖ＲＮＡ分子に対して部分的に相補的であり、それゆえ両者がこの領域において二本鎖ＲＮＡ分子を形成する２本の一本鎖ＲＮＡ分子によって形成される）であってもよい。好ましくは、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、一本鎖ＲＮＡである。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、さらに、環状ＲＮＡまたは直鎖ＲＮＡであってもよく、好ましくは直鎖ＲＮＡである。さらに好ましくは、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、（直鎖）一本鎖ＲＮＡである。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、リボゾームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）、好ましくはｍＲＮＡである。本発明では、これらのＲＮＡのどれが細胞にトランスフェクトされてもよい。本発明において、ｍＲＮＡは通常いくつかの構造的要素からなるＲＮＡであり、例えば、必要に応じて５’−ＵＴＲ領域が存在し、この上流にリボゾーム結合部位が配置され、さらにコード領域と、必要に応じて３’−ＵＴＲ領域とが続き、さらにポリＡ尾部（および／またはポリＣ尾部）が続く。ｍＲＮＡは、モノシストロン性ＲＮＡ、ジシストロン性ＲＮＡ、さらに多シストロン性ＲＮＡとして、つまり、１つ、２つ、またはそれ以上の個数のタンパク質のコード配列を担持するＲＮＡとして発生してもよい。ジシストロン性ｍＲＮＡまたは多シストロン性ｍＲＮＡ中のこのようなコード配列は、例えばここで定義されるように、少なくとも１つのＩＲＥＳ配列によって離間している。
【００４９】
低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド
第１の実施形態において、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドであってもよい。本発明において、低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、上記において定義された任意のＲＮＡを備えていてもよい。上記低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、好ましくは一本鎖または二本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドであり、さらに好ましくは一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。上記低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、一層好ましくは、直鎖一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。
【００５０】
好ましくは、ここで使用される上記低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、一般にＲＮＡ分子に対して上記において定義された長さを有し、さらに好ましくは、５〜１００、５〜５０、または５、３０ヌクレオチドの長さ、あるいは、２０〜１００、２０〜８０、一層好ましくは２０、６０ヌクレオチドの長さである。低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、各種目的のために、例えば、（非特異的）免疫活性化、遺伝子の転写／翻訳の低減／抑制のために使用されてもよい。
【００５１】
コーディングＲＮＡ
第２の実施形態において、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、コーディングＲＮＡであってもよい。本発明の複合化ＲＮＡのコーディングＲＮＡは、上記において定義された任意のＲＮＡであってもよい。上記コーディングＲＮＡは、好ましくは一本鎖ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡであり、さらに好ましくは一本鎖ＲＮＡ、および／または環状ＲＮＡまたは直鎖ＲＮＡ、さらに好ましくは直鎖ＲＮＡである。上記コーディングＲＮＡは、一層好ましくは（直鎖）一本鎖ＲＮＡである。上記コーディングＲＮＡは、最も好ましくは（（直鎖）一本鎖）メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。
【００５２】
上記コーディングＲＮＡは、さらに、タンパク質またはペプチドをコードしていてもよい。ただし、上記タンパク質またはペプチドは、例えば、治療上有効なタンパク質またはペプチド、腫瘍抗原、抗体、免疫活性化タンパク質またはペプチドなどから選択されたもの、もしくは特定の（治療目的の）用途に適した任意の他のタンパク質またはペプチドから選択されたものであって、タンパク質をコードする上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）が細胞、組織、または生体に輸送され、それに続いてこの細胞、組織、または生体中でタンパク質が発現するものである（ただしこれに限定されるものではない）。
【００５３】
この文脈において、治療上有効なタンパク質は、従来技術に基づいて当業者にとって公知である、任意の組み換えタンパク質または単離されたタンパク質から選択されてもよい。本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、ＡＩＦ、Ａｐａｆ（例えば、Ａｐａｆ−１、Ａｐａｆ−２、Ａｐａｆ−３）ｏｄｅｒ  ＡＰＯ−２（Ｌ）、ＡＰＯ−３（Ｌ）、アポパイン、Ｂａｄ、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ｘＳ、ｂｉｋ、ＣＡＤ、カルパイン、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ−１、カスパーゼ−２、カスパーゼ−３、カスパーゼ−４、カスパーゼ−５、カスパーゼ−６、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、カスパーゼ−１０、カスパーゼ−１１）、ｃｅｄ−３、ｃｅｄ−９、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ｃｒｍ  Ａ、ｃｙｔｏｃｈｒｏｍ  Ｃ、ＣｄＲ１、ＤｃＲ１、ＤＤ、ＤＥＤ、ＤＩＳＣ、ＤＮＡ−ＰＫＣＳ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＦＡＤＤ／ＭＯＲＴ−１、ＦＡＫ、Ｆａｓ（Ｆａｓ−リガンドＣＤ９５／ｆａｓ（受容体））、ＦＬＩＣＥ／ＭＡＣＨ、ＦＬＩＰ、ホドリン、ｆｏｓ、Ｇ−アクチン、Ｇａｓ−２、ゲルゾリン、グランザイムＡ／Ｂ、ＩＣＡＤ、ＩＣＥ、ＪＮＫ、ラミンＡ／Ｂ、ＭＡＰ、ＭＣＬ−１、Ｍｄｍ−２、ＭＥＫＫ−１、ＭＯＲＴ−１、ＮＥＤＤ、ＮＦ−ｋａｐｐａＢ、ＮｕＭａ、ｐ５３、ＰＡＫ−２、ＰＡＲＰ、パーフォリン、ＰＩＴＳＬＲＥ、ＰＫＣδ、ｐＲｂ、プレセニリン、ｐｒＩＣＥ、ＲＡＩＤＤ、Ｒａｓ、ＲＩＰ、スフィンゴミエリナーゼ、単純ヘルペスから得られるチミジンキナーゼ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、トランスグルタミナーゼなどを含む、アポトーシス因子またはアポトーシス関連タンパク質から選択されてもよい（ただしこれに限定されるものではない）。
【００５４】
本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、さらに、以下に列挙するタンパク質からなる群より選択されるタンパク質を含む、組み換えタンパク質から選択されてもよい。すなわち、０ＡＴＬ３、０ＦＣ３、０ＰＡ３、０ＰＤ２、４−１ＢＢＬ、５Ｔ４、６Ｃｋｉｎｅ、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、Ａ２Ｍ、ＡＡ、ＡＡＡＳ、ＡＡＣＴ、ＡＡＳＳ、ＡＢＡＴ、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＢ１、ＡＢＣＢ１１、ＡＢＣＢ２、ＡＢＣＢ４、ＡＢＣＢ７、ＡＢＣＣ２、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ８、ＡＢＣＤ１、ＡＢＣＤ３、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、ＡＢＬ１、ＡＢＯ、ＡＢＲＡＣＡＡ１、ＡＣＡＣＡ、ＡＣＡＤＬ、ＡＣＡＤＭ、ＡＣＡＤＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＡＣＡＴ１、ＡＣＣＰＮ、ＡＣＥ、ＡＣＨＥ、ＡＣＨＭ３、ＡＣＨＭ１、ＡＣＬＳ、ＡＣＰＩ、ＡＣＴＡ１、ＡＣＴＣ、ＡＣＴＮ４、ＡＣＶＲＬ１、ＡＤ２、ＡＤＡ、ＡＤＡＭＴＳ１３、ＡＤＡＭＴＳ２、ＡＤＦＮ、ＡＤＨ１Ｂ、ＡＤＨ１Ｃ、ＡＤＬＤＨ３Ａ２、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＤＳＬ、ＡＥＺ、ＡＦＡ、ＡＦＤ１、ＡＦＰ、ＡＧＡ、ＡＧＬ、ＡＧＭＸ２、ＡＧＰＳ、ＡＧＳ１、ＡＧＴ、ＡＧＴＲ１、ＡＧＸＴ、ＡＨ０２、ＡＨＣＹ、ＡＨＤＳ、ＡＨＨＲ、ＡＨＳＧ、ＡＩＣ、ＡＩＥＤ、ＡＩＨ２、ＡＩＨ３、ＡＩＭ−２、ＡＩＰＬ１、ＡＩＲＥ、ＡＫ１、ＡＬＡＤ、ＡＬＡＳ２、ＡＬＢ、ＨＰＧ１、ＡＬＤＨ２、ＡＬＤＨ３Ａ２、ＡＬＤＨ４Ａ１、ＡＬＤＨ５Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＤＯＡ、ＡＬＤＯＢ、ＡＬＭＳ１、ＡＬＰＬ、ＡＬＰＰ、ＡＬＳ２、ＡＬＸ４、ＡＭＡＣＲ、ＡＭＢＰ、ＡＭＣＤ、ＡＭＣＤ１、ＡＭＣＮ、ＡＭＥＬＸ、ＡＭＥＬＹ、ＡＭＧＬ、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＭＰＤ３、ＡＭＰＤ１、ＡＭＴ、ＡＮＣ、ＡＮＣＲ、ＡＮＫ１、ＡＮＯＰ１、ＡＯＭ、ＡＰ０Ａ４、ＡＰ０Ｃ２、ＡＰ０Ｃ３、ＡＰ３Ｂ１、ＡＰＣ、ａＰＫＣ、ＡＰＯＡ２、ＡＰＯＡ１、ＡＰＯＢ、ＡＰＯＣ３、ＡＰＯＣ２、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＨ、ＡＰＰ、ＡＰＲＴ、ＡＰＳ１、ＡＱＰ２、ＡＲ、ＡＲＡＦ１、ＡＲＧ１、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＡＲＭＥＴ、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＳＣ２、ＡＲＳＥ、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、ＡＲＴＳ、ＡＲＶＤ１、ＡＲＸ、ＡＳ、ＡＳＡＨ、ＡＳＡＴ、ＡＳＤ１、ＡＳＬ、ＡＳＭＤ、ＡＳＭＴ、ＡＳＮＳ、ＡＳＰＡ、ＡＳＳ、ＡＳＳＰ２、ＡＳＳＰ５、ＡＳＳＰ６、ＡＴ３、ＡＴＤ、ＡＴＨＳ、ＡＴＭ、ＡＴＰ２Ａ１、ＡＴＰ２Ａ２、ＡＴＰ２Ｃ１、ＡＴＰ６Ｂ１、ＡＴＰ７Ａ、ＡＴＰ７Ｂ、ＡＴＰ８Ｂ１、ＡＴＰＳＫ２、ＡＴＲＸ、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＡＵＴＳ１、ＡＶＭＤ、ＡＶＰ、ＡＶＰＲ２、ＡＶＳＤ１、ＡＸＩＮ１、ＡＸＩＮ２、ＡＺＦ２、Ｂ２Ｍ、Ｂ４ＧＡＬＴ７、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ−１、ＢＡＸ、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３、ＢＢＳ４、ＢＣＡ２２５、ＢＣＡＡ、ＢＣＨ、ＢＣＨＥ、ＢＣＫＤＨＡ、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＣＬ１０、ＢＣＬ２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ５、ＢＣＬ６、ＢＣＰＭ、ＢＣＲ、ＢＣＲ／ＡＢＬ、ＢＤＣ、ＢＤＥ、ＢＤＭＦ、ＢＤＭＲ、ＢＥＳＴ１、βカテニン／ｍ、ＢＦ、ＢＦＨＤ、ＢＦＩＣ、ＢＦＬＳ、ＢＦＳＰ２、ＢＧＬＡＰ、ＢＧＮ、ＢＨＤ、ＢＨＲ１、ＢＩＮＧ−４、ＢＩＲＣ５、ＢＪＳ���ＢＬＭ、ＢＬＭＨ、ＢＬＮＫ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＧＭ、ＢＲＡＦ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＢＲＣＤ２、ＢＲＣＤ１、ＢＲＤＴ、ＢＳＣＬ、ＢＳＣＬ２、ＢＴＡＡ、ＢＴＤ、ＢＴＫ、ＢＵＢ１、ＢＷＳ、ＢＺＸ、Ｃ０Ｌ２Ａ１、Ｃ０Ｌ６Ａ１、Ｃ１ＮＨ、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＧ、Ｃ１Ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ４Ｂ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ７ｏｒｆ２、Ｃ８Ａ、Ｃ８Ｂ、Ｃ９、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３／ＣＡ  ２７−２９、ＣＡ１９５、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ２、ＣＡ２４２、ＣＡ５０、ＣＡＢＹＲ、ＣＡＣＤ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｓ、ＣＡＣＮＢ２、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＧＥ、ＣＡ１、ＣＡＬＢ３、ＣＡＬＣＡ、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＭ、ＣＡＬＲ、ＣＡＭ４３、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＰＮ３、ＣＡＲＤ１５、ＣＡＳＰ−５／ｍ、ＣＡＳＰ−８、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＡＳＲ、ＣＡＴ、ＣＡＴＭ、ＣＡＶ３、ＣＢ１、ＣＢＢＭ、ＣＢＳ、ＣＣＡ１、ＣＣＡＬ２、ＣＣＡＬ１、ＣＣＡＴ、ＣＣＬ−１、ＣＣＬ−１１、ＣＣＬ−１２、ＣＣＬ−１３、ＣＣＬ−１４、ＣＣＬ−１５、ＣＣＬ−１６、ＣＣＬ−１７、ＣＣＬ−１８、ＣＣＬ−１９、ＣＣＬ−２、ＣＣＬ−２０、ＣＣＬ−２１、ＣＣＬ−２２、ＣＣＬ−２３、ＣＣＬ−２４、ＣＣＬ−２５、ＣＣＬ−２７、ＣＣＬ−３、ＣＣＬ−４、ＣＣＬ−５、ＣＣＬ−７、ＣＣＬ−８、ＣＣＭ１、ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＤ１、ＣＣＯ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＣＴ、ＣＣＶ、ＣＣＺＳ、ＣＤ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２７Ｌ、ｃＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤＡＮ１、ＣＤＡＮ２、ＣＤＡＮ３、ＣＤＣ２７、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＣ２Ｌ１、ＣＤＨ１、ＣＤＫ４、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＬ１、ＣＤＰＤ１、ＣＤＲ１、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＣＲ、ＣＥＣＲ９、ＣＥＰＡ、ＣＥＴＰ、ＣＦＮＳ、ＣＦＴＲ、ＣＧＦ１、ＣＨＡＣ、ＣＨＥＤ２、ＣＨＥＤ１、ＣＨＥＫ２、ＣＨＭ、ＣＨＭＬ、ＣＨＲ３９Ｃ、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＥ、ＣＨＳ、ＣＨＳ１、ＣＨＳＴ６、ＣＨＸ１０、ＣＩＡＳ１、ＣＩＤＸ、ＣＫＮ１、ＣＬＡ２、ＣＬＡ３、ＣＬＡ１、ＣＬＣＡ２、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮＫＢ、ＣＬＤＮ１６、ＣＬＰ、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＧ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＳ、ＣＭＣＷＴＤ、ＣＭＤＪ、ＣＭＤ１Ａ、ＣＭＤ１Ｂ、ＣＭＨ２、ＭＨ３、ＣＭＨ６、ＣＭＫＢＲ２、ＣＭＫＢＲ５、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＭＭ、ＣＭＴ２Ｂ、ＣＭＴ２Ｄ、ＣＭＴ４Ａ、ＣＭＴ１Ａ、ＣＭＴＸ２、ＣＭＴＸ３、Ｃ−ＭＹＣ、ＣＮＡ１、ＣＮＤ、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＳＮ、ＣＮＴＦ、ＣＯＡ−１／ｍ、ＣＯＣＨ、ＣＯＤ２、ＣＯＤ１、ＣＯＨ１、ＣＯＬ１０Ａ、ＣＯＬ２Ａ２、ＣＯＬ１１Ａ２、Ｃ��Ｌ１７Ａ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ４Ａ６、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、
ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＯＬ７Ａ１、ＣＯＬ８Ａ２、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＯＬ９Ａ３、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ２３Ａ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬＱ、ＣＯＭＰ、ＣＯＭＴ、ＣＯＲＤ５、ＣＯＲＤ１、ＣＯＸ１０、ＣＯＸ−２、ＣＰ、ＣＰＢ２、ＣＰＯ、ＣＰＰ、ＣＰＳ１、ＣＰＴ２、ＣＰＴ１Ａ、ＣＰＸ、ＣＲＡＴ、ＣＲＢ１、ＣＲＢＭ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＨ、ＣＲＨＢＰ、ＣＲＳ、ＣＲＶ、ＣＲＸ、ＣＲＹＡＢ、ＣＲＹＢＡ１、ＣＲＹＢＢ２、ＣＲＹＧＡ、ＣＲＹＧＣ、ＣＲＹＧＤ、ＣＳＡ、ＣＳＥ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＴ３、ＣＳＴＢ、ＣＴ、ＣＴ７、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、ＣＴＡＡ１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＥＮ、ＣＴＨ、ＣＴＨＭ、ＣＴＬＡ４、ＣＴＭ、ＣＴＮＮＢ１、ＣＴＮＳ、ＣＴＰＡ、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＣ、ＣＴＳＫ、ＣＴＳＬ、ＣＴＳ１、ＣＵＢＮ、ＣＶＤ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＹＢ５、ＣＹＢＡ、ＣＹＢＢ、ＣＹＢＢ５、ＣＹＦＲＡ  ２１−１、ＣＹＬＤ、ＣＹＬＤ１、ＣＹＭＤ、ＣＹＰ１１Ｂ１、ＣＹＰ１１Ｂ２、ＣＹＰ１７、ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１９、ＣＹＰ１９Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＰ２１Ａ２、ＣＹＰ２７Ａ１、ＣＹＰ２７Ｂ１、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｄ７Ｐ１、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ７Ｂ１、ＣＹＰＢ１、ＣＹＰ１１Ｂ１、ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＲＡＡ、Ｄ４０、ＤＡＤｌ、ＤＡＭ、ＤＡＭ−１０／ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＤＡＭ−６／ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＤＡＸ１、ＤＡＺ、ＤＢＡ、ＤＢＨ、ＤＢＩ、ＤＢＴ、ＤＣＣ、ＤＣ−ＣＫ１、ＤＣＫ、ＤＣＲ、ＤＣＸ、ＤＤＢ１、ＤＤＢ２、ＤＤＩＴ３、ＤＤＵ、ＤＥＣＲ１、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＤＥＭ、ＤＥＳ、ＤＦ、ＤＦＮ２、ＤＦＮ４、ＤＦＮ６、ＤＦＮＡ４、ＤＦＮＡ５、ＤＦＮＢ５、ＤＧＣＲ、ＤＨＣＲ７、ＤＨＦＲ、ＤＨＯＦ、ＤＨＳ、ＤＩＡ１、ＤＩＡＰＨ２、ＤＩＡＰＨ１、ＤＩＨ１、ＤＩＯ１、ＤＩＳＣＩ、ＤＫＣ１、ＤＬＡＴ、ＤＬＤ、ＤＬＬ３、ＤＬＸ３、ＤＭＢＴ１、ＤＭＤ、ＤＭ１、ＤＭＰＫ、ＤＭＷＤ、ＤＮＡＩ１、ＤＮＡＳＥ１、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＤＰＥＰ１、ＤＰＹＤ、ＤＰＹＳ、ＤＲＤ２、ＤＲＤ４、ＤＲＰＬＡ、ＤＳＣＲ１、ＤＳＧ１、ＤＳＰ、ＤＳＰＰ、ＤＳＳ、ＤＴＤＰ２、ＤＴＲ、ＤＵＲＳ１、ＤＷＳ、ＤＹＳ、ＤＹＳＦ、ＤＹＴ２、ＤＹＴ３、ＤＹＴ４、ＤＹＴ２、ＤＹＴ１、ＤＹＸ１、ＥＢＡＦ、ＥＢＭ、ＥＢＮＡ、ＥＢＰ、ＥＢＲ３、ＥＢＳ１、ＥＣＡ１、ＥＣＢ２、ＥＣＥ１、ＥＣＧＦ１、ＥＣＴ、ＥＤ２、ＥＤ４、ＥＤＡ、ＥＤＡＲ、ＥＣＡ１、ＥＤＮ３、ＥＤＮＲＢ、ＥＥＣ１、ＥＥＦ１Ａ１Ｌ１４、ＥＥＧＶ１、ＥＦＥＭＰ１、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ／Ｈｅｒ１、ＥＧＩ、ＥＧＲ２、ＥＩＦ２ＡＫ３、ｅＩＦ４Ｇ、ＥＫＶ、Ｅｌ  ＩＳ、ＥＬＡ２、ＥＬＦ２、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＬＫ１、ＥＬＮ、ＥＬＯＮＧ、ＥＭＤ、ＥＭＬ１、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＭＸ２、ＥＮＡ−７８、ＥＮＡＭ、ＥＮＤ��、ＥＮＧ、ＥＮＯ１、ＥＮＰＰ１、ＥＮＵＲ２、ＥＮＵＲ１、ＥＯＳ、ＥＰ３００、ＥＰＢ４１、ＥＰＢ４２、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＤ、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈｒｉｎＡ２、ＥｐｈｒｉｎＡ３、ＥＰＨＸ１、ＥＰＭ２Ａ、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＥＰＸ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＣＣ２、ＥＲＣＣ３、ＥＲＣＣ４、ＥＲＣＣ５、ＥＲＣＣ６、ＥＲＶＲ、ＥＳＲ１、ＥＴＦＡ、ＥＴＦＢ、ＥＴＦＤＨ、ＥＴＭ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＴＶ１、ＥＶＣ、ＥＶＲ２、ＥＶＲ１、ＥＷＳＲ１、ＥＸＴ２、ＥＸＴ３、ＥＸＴ１、ＥＹＡ１、ＥＹＣＬ２、ＥＹＣＬ３、ＥＹＣＬ１、ＥＺＨ２、Ｆ１０、Ｆ１１、Ｆ１２、Ｆ１３Ａ１、Ｆ１３Ｂ、Ｆ２、Ｆ５、Ｆ５Ｆ８Ｄ、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ８Ｃ、Ｆ９、ＦＡＢＰ２、ＦＡＣＬ６、ＦＡＨ、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＦ、ＦａｓＬ、ＦＢＮ２、ＦＢＮ１、ＦＢＰ１、ＦＣＧ３ＲＡ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＨＬ、ＦＣＭＤ、ＦＣＰ１、ＦＤＰＳＬ５、ＦＥＣＨ、ＦＥＯ、ＦＥＯＭ１、ＦＥＳ、ＦＧＡ、ＦＧＢ、ＦＧＤ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ５、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＧ、ＦＧＳ１、ＦＨ、ＦＩＣ１、ＦＩＨ、Ｆ２、ＦＫＢＰ６、ＦＬＮＡ、
ＦＬＴ４、ＦＭＯ３、ＦＭＯ４、ＦＭＲ２、ＦＭＲ１、ＦＮ、ＦＮ１／ｍ、ＦＯＸＣ１、ＦＯＸＥ１、ＦＯＸＬ２、ＦＯＸＯ１Ａ、ＦＰＤＭＭ、ＦＰＦ、Ｆｒａ−１、ＦＲＡＸＦ、ＦＲＤＡ、ＦＳＨＢ、ＦＳＨＭＤ１Ａ、ＦＳＨＲ、ＦＴＨ１、ＦＴＨＬ１７、ＦＴＬ、ＦＴＺＦ１、ＦＵＣＡ１、ＦＵＴ２、ＦＵＴ６、ＦＵＴ１、ＦＹ、Ｇ２５０、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、Ｇ６ＰＣ、Ｇ６ＰＤ、Ｇ６ＰＴ１、Ｇ６ＰＴ２、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＥ、ＧＡＬＫ１、ＧＡＬＮＳ、ＧＡＬＴ、ＧＡＭＴ、ＧＡＮ、ＧＡＳＴ、ＧＡＳＴＲＩＮ１７、ＧＡＴＡ３、ＧＡＴＡ、ＧＢＡ、ＧＢＥ、ＧＣ、ＧＣＤＨ、ＧＣＧＲ、ＧＣＨ１、ＧＣＫ、ＧＣＰ−２、ＧＣＳ１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＣＳＨ、ＧＣＳＬ、ＧＣＹ、ＧＤＥＰ、ＧＤＦ５、ＧＤＩ１、ＧＤＮＦ、ＧＤＸＹ、ＧＦＡＰ、ＧＦＮＤ、ＧＧＣＸ、ＧＧＴ１、ＧＨ２、ＧＨ１、ＧＨＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳ、ＧＩＦ、ＧＩＮＧＦ、ＧＩＰ、ＧＪＡ３、ＧＪＡ８、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ６、ＧＪＢ１、ＧＫ、ＧＬＡ、ＧＬＢ、ＧＬＢ１、ＧＬＣ３Ｂ、ＧＬＣ１Ｂ、ＧＬＣ１Ｃ、ＧＬＤＣ、ＧＬＩ３、ＧＬＰ１、ＧＬＲＡ１、ＧＬＵＤ１、ＧＭ１（ｆｕｃ−ＧＭ１）、ＧＭ２Ａ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭＰＲ、ＧＮＡＩ２、ＧＮＡＳ、ＧＮＡＴ１、ＧＮＢ３、ＧＮＥ、ＧＮＰＴＡ、ＧＮＲＨ、ＧＮＲＨ１、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＳ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰ１ＢＡ、ＧＰ１ＢＢ、ＧＰ９、ＧＰＣ３、ＧＰＤ２、ＧＰＤＳ１、ＧＰＩ、ＧＰ１ＢＡ、ＧＰＮ１ＬＷ、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＧＰＳＣ、ＧＰＸ１、ＧＲＨＰＲ、ＧＲＫ１、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＧＲＰＲ、ＧＳＥ、ＧＳＭ１、ＧＳＮ、ＧＳＲ、ＧＳＳ、ＧＴＤ、ＧＴＳ、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＧＵＬＯＰ、ＧＵＳＢ、ＧＵＳＭ、ＧＵＳＴ、ＧＹＰＡ、ＧＹＰＣ、ＧＹＳ１、ＧＹＳ２、Ｈ０ＫＰＰ２、Ｈ０ＭＧ２、ＨＡＤＨＡ、ＨＡＤＨＢ、ＨＡＧＥ、ＨＡＧＨ、ＨＡＬ、ＨＡＳＴ−２、ＨＢ１、ＨＢＡ２、ＨＢＡ１、ＨＢＢ、ＨＢＢＰ１、ＨＢＤ、ＨＢＥ１、ＨＢＧ２、ＨＢＧ１、ＨＢＨＲ、ＨＢＰ１、ＨＢＱ１、ＨＢＺ、ＨＢＺＰ、ＨＣＡ、ＨＣＣ−１、ＨＣＣ−４、ＨＣＦ２、ＨＣＧ、ＨＣＬ２、ＨＣＬ１、ＨＣＲ、ＨＣＶＳ、ＨＤ、ＨＰＮ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ２／ＮＥＵ、ＨＥＲ３、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＥＳＸ１、ＨＥＸＡ、ＨＥＸＢ、ＨＦ１、ＨＦＥ、ＨＦ１、ＨＧＤ、ＨＨＣ２、ＨＨＣ３、ＨＨＧ、ＨＫ１、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＣＳ、ＨＬＸＢ９、ＨＭＢＳ、ＨＭＧＡ２、ＨＭＧＣＬ、ＨＭＩ、ＨＭＮ２、ＨＭＯＸ１、ＨＭＳ１、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＮＤ、ＨＮＥ、ＨＮＦ４Ａ、ＨＯＡＣ、ホメオボックスＮＫＸ  ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＤ１３、ＨＰ、ＨＰＣ１、ＨＰＤ、ＨＰＥ２、ＨＰＥ１、ＨＰＦＨ、ＨＰＦＨ２、ＨＰＲＴ１、ＨＰＳ１、ＨＰＴ、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＲ、ＨＲＡＳ、ＨＲＤ、ＨＲＧ、ＨＲＰＴ２、ＨＲＰＴ１、ＨＲＸ、ＨＳＤ１１Ｂ２、ＨＳＤ���７Ｂ３、ＨＳＤ１７Ｂ４、ＨＳＤ３Ｂ２、ＨＳＤ３Ｂ３、ＨＳＮ１、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＰＧ２、ＨＳＴ−２、ＨＴＣ２、ＨＴＣ１、ｈＴＥＲＴ、ＨＴＮ３、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＶＢＳ６、ＨＶＢＳ１、ＨＶＥＣ、ＨＶ１Ｓ、ＨＹＡＬ１、ＨＹＲ、Ｉ−３０９、ＩＡＢ、ＩＢＧＣ１、ＩＢＭ２、ＩＣＡＭ１、ＩＣＡＭ３、ｉＣＥ、ＩＣＨＱ、ＩＣＲ５、ＩＣＲ１、ＩＣＳ１、ＩＤＤＭ２、ＩＤＤＭ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＦ、ＩＦＮａ／ｂ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＧＡＤ１、ＩＧＥＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ２Ｒ、ＩＧＦ１、ＩＧＨ、ＩＧＨＣ、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＭ、ＩＧＨＲ、ＩＧＫＣ、ＩＨＧ１、ＩＨＨ、ＩＫＢＫＧ、ＩＬ１、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ−１１、ＩＬ１２、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１３、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ１８、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ６、ＩＬ−７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ−８、ＩＬ−９、未成熟ラミニン受容体、ＩＭＭＰ２Ｌ、ＩＮＤＸ、ＩＮＦＧＲ１、ＩＮＦＧＲ２、ＩＮＦα、ＩＦＮβＩＮＦγ、ＩＮＳ、ＩＮＳＲ、
ＩＮＶＳ、ＩＰ−１０、ＩＰ２、ＩＰＦ１、ＩＰ１、ＩＲＦ６、ＩＲＳ１、ＩＳＣＷ、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡ７、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＩＨ１、ＩＴＭ２Ｂ、ＩＶ、ＩＶＤ、ＪＡＧ１、ＪＡＫ３、ＪＢＳ、ＪＢＴＳ１、ＪＭＳ、ＪＰＤ、ＫＡＬ１、ＫＡＬ２、ＫＡＬＩ、ＫＬＫ２、ＫＬＫ４、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＥ２、ＫＣＮＥ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ１、ＫＣＳ、ＫＥＲＡ、ＫＦＭ、ＫＦＳ、ＫＦＳＤ、ＫＨＫ、ｋｉ−６７、ＫＩＡＡ００２０、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＩＦ１Ｂ、ＫＩＴ、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＬＫ３、ＫＬＫＢ１、ＫＭ−ＨＮ−１、ＫＭＳ、ＫＮＧ、ＫＮＯ、Ｋ−ＲＡＳ／ｍ、ＫＲＡＳ２、ＫＲＥＶ１、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１０、ＫＲＴ１２、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ１４Ｌ１、ＫＲＴ１４Ｌ２、ＫＲＴ１４Ｌ３、ＫＲＴ１６、ＫＲＴ１６Ｌ１、ＫＲＴ１６Ｌ２、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴ３、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ６Ａ、ＫＲＴ６Ｂ、ＫＲＴ９、ＫＲＴＨＢ１、ＫＲＴＨＢ６、ＫＲＴ１、ＫＳＡ、ＫＳＳ、ＫＷＥ、ＫＹＮＵ、Ｌ０Ｈ１９ＣＲ１、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＬＡＬＬ、ＬＡＭＡ２、ＬＡＭＡ３、ＬＡＭＢ３、ＬＡＭＢ１、ＬＡＭＣ２、ＬＡＭＰ２、ＬＡＰ、ＬＣＡ５、ＬＣＡＴ、ＬＣＣＳ、ＬＣＣＳ１、ＬＣＦＳ２、ＬＣＳ１、ＬＣＴ、ＬＤＨＡ、ＬＤＨＢ、ＬＤＨＣ、ＬＤＬＲ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＥＰ、ＬＥＷＩＳＹ、ＬＧＣＲ、ＬＧＧＦ−ＰＢＰ、ＬＧＩ１、ＬＧＭＤ２Ｈ、ＬＧＭＤ１Ａ、ＬＧＭＤ１Ｂ、ＬＨＢ、ＬＨＣＧＲ、ＬＨＯＮ、ＬＨＲＨ、ＬＨＸ３、ＬＩＦ、ＬＩＧ１、ＬＩＭＭ、ＬＩＭＰ２、ＬＩＰＡ、ＬＩＰＡ、ＬＩＰＢ、ＬＩＰＣ、ＬＩＶＩＮ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＭＡＮ１、ＬＭＮＡ、ＬＭＸ１Ｂ、ＬＯＬＲ、ＬＯＲ、ＬＯＸ、ＬＰＡ、ＬＰＬ、ＬＰＰ、ＬＱＴ４、ＬＲＰ５、ＬＲＳ１、ＬＳＦＣ、ＬＴ−β、ＬＴＢＰ２、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＹＬ１、ＸＣＬ１、ＬＹＺ、Ｍ３４４、ＭＡ５０、ＭＡＡ、ＭＡＤＨ４、ＭＡＦＤ２、ＭＡＦＤ１、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥＢ１、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、ＭＧＢ１、ＭＧＢ２、ＭＡＮ２Ａ１、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＮＢＢ、ＭＡＯＡ、ＭＡＯＢ、ＭＡＰＫ８ＩＰ１、ＭＡＰＴ、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ２／ｍ、ＭＡＴ１Ａ、ＭＢＬ２、ＭＢＰ、ＭＢＳ１、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣＣ、ＭＣＣＣ２、ＭＣＣＣ１、ＭＣＤＲ１、ＭＣＦ２、ＭＣＫＤ、ＭＣＬ１、ＭＣ１Ｒ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＰ、ＭＣＯＲ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＭＣＰＨ２、ＭＣＰＨ１、ＭＣＳ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＤＢ、ＭＤＣＲ、Ｍ���Ｍ２、ＭＤＲＶ、ＭＤＳ１、ＭＥ１、ＭＥ１／ｍ、ＭＥ２、ＭＥ２０、ＭＥ３、ＭＥＡＸ、ＭＥＢ、ＭＥＣ  ＣＣＬ−２８、ＭＥＣＰ２、ＭＥＦＶ、ＭＥＬＡＮＡ、ＭＥＬＡＳ、ＭＥＮ１  ＭＳＬＮ、ＭＥＴ、ＭＦ４、ＭＧ５０、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＧＡＴ２、ＭＧＡＴ５、ＭＧＣ１  ＭＧＣＲ、ＭＧＣＴ、ＭＧＩ、ＭＧＰ、ＭＨＣ２ＴＡ、ＭＨＳ２、ＭＨＳ４、ＭＩＣ２、ＭＩＣ５、ＭＩＤＩ、ＭＩＦ、ＭＩＰ、ＭＩＰ−５／ＨＣＣ−２、ＭＩＴＦ、ＭＪＤ、ＭＫＩ６７、ＭＫＫＳ、ＭＫＳ１、ＭＬＨ１、ＭＬＬ、ＭＬＬＴ２、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ７、ＭＬＬＴ１、ＭＬＳ、ＭＬＹＣＤ、ＭＭＡ１ａ、ＭＭＰ  １１、ＭＭＶＰ１、ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ−抗原、ＭＮＧ１、ＭＮ１、ＭＯＣ３１、ＭＯＣＳ２、ＭＯＣＳ１、ＭＯＧ、ＭＯＲＣ、ＭＯＳ、ＭＯＶ１８、ＭＰＤ１、ＭＰＥ、ＭＰＦＤ、ＭＰＩ、ＭＰＩＦ−１、ＭＰＬ、ＭＰＯ、ＭＰＳ３Ｃ、ＭＰＺ、ＭＲＥ１１Ａ、ＭＲＯＳ、ＭＲＰ１、ＭＲＰ２、ＭＲＰ３、ＭＲＳＤ、ＭＲＸ１４、ＭＲＸ２、ＭＲＸ２０、ＭＲＸ３、ＭＲＸ４０、ＭＲＸＡ、ＭＲＸ１、ＭＳ、ＭＳ４Ａ２、ＭＳＤ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＳＳ、ＭＳＳＥ、ＭＳＸ２、ＭＳＸ１、ＭＴＡＴＰ６、ＭＴＣ０３、ＭＴＣＯ１、ＭＴＣＹＢ、
ＭＴＨＦＲ、ＭＴＭ１、ＭＴＭＲ２、ＭＴＮＤ２、ＭＴＮＤ４、ＭＴＮＤ５、ＭＴＮＤ６、ＭＴＮＤ１、ＭＴＰ、ＭＴＲ、ＭＴＲＮＲ２、ＭＴＲＮＲ１、ＭＴＲＲ、ＭＴＴＥ、ＭＴＴＧ、ＭＴＴＩ、ＭＴＴＫ、ＭＴＴＬ２、ＭＴＴＬ１、ＭＴＴＮ、ＭＴＴＰ、ＭＴＴＳ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３、ＭＵＭ−３／ｍ、ＭＵＴ、変異体ｐ２１  ｒａｓ、ＭＵＴＹＨ、ＭＶＫ、ＭＸ２、ＭＸＩ１、ＭＹ０５Ａ、ＭＹＢ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ２、ＭＹＨ６、ＭＹＨ７、ＭＹＬ２、ＭＹＬ３、ＭＹＭＹ、ＭＹＯ１５Ａ、ＭＹＯ１Ｇ、ＭＹＯ５Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯＣ、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ、ＭＹＰ２、ＭＹＰ１、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素−Ｖ、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＡＭＳＤ、ＮＡＰＢ、ＮＡＴ２、ＮＡＴ、ＮＢＩＡ１、ＮＢＳ１、ＮＣＡＭ、ＮＣＦ２、ＮＣＦ１、ＮＤＮ、ＮＤＰ、ＮＤＵＦＳ４、ＮＤＵＦＳ７、ＮＤＵＦＳ８、ＮＤＵＦＶ１、ＮＤＵＦＶ２、ＮＥＢ、ＮＥＦＨ、ＮＥＭ１、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＥＵ１、ＮＥＵＲＯＤ１、ＮＦ２、ＮＦ１、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＨＳ、ＮＫＳ１、ＮＫＸ２Ｅ、ＮＭ、ＮＭＥ１、ＮＭＰ２２、ＮＭＴＣ、ＮＯＤＡＬ、ＮＯＧ、ＮＯＳ３、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ１、ＮＰ、ＮＰＣ２、ＮＰＣ１、ＮＰＨＬ２、ＮＰＨＰ１、ＮＰＨＳ２、ＮＰＨＳ１、ＮＰＭ／ＡＬＫ、ＮＰＰＡ、ＮＱＯ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲＡＳ、ＮＲＡＳ／ｍ、ＮＲＬ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＴＮ、ＮＳＥ、ＮＳＸ、ＮＴＲＫ１、ＮＵＭＡ１、ＮＸＦ２、ＮＹ−ＣＯ１、ＮＹ−ＥＳＯ１、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＮＹ−ＬＵ−１２、ＡＬＤＯＡ、ＮＹＳ２、ＮＹＳ４、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＮＹＳ１、ＮＹＸ、ＯＡ３、ＯＡ１、ＯＡＰ、ＯＡＳＤ、ＯＡＴ、ＯＣＡ１、ＯＣＡ２、ＯＣＤ１、ＯＣＲＬ、ＯＣＲＬ１、ＯＣＴ、ＯＤＤＤ、ＯＤＴ１、ＯＦＣ１、ＯＦＤ１、ＯＧＤＨ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＰＡ２、ＯＰＡ１、ＯＰＤ１、ＯＰＥＭ、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＰＮ１ＬＷ、ＯＰＮ１ＭＷ、ＯＰＮ１ＳＷ、ＯＰＰＧ、ＯＰＴＢ１、ＴＴＤ、ＯＲＭ１、ＯＲＰ１、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、ＯＳＭ  ＬＩＦ、ＯＴＣ、ＯＴＯＦ、ＯＴＳＣ１、ＯＸＣＴ１、ＯＹＴＥＳ１、Ｐ１５、Ｐ１９０  ＭＩＮＯＲ  ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ３、Ｐ１６、Ｐ４０、Ｐ４ＨＢ、Ｐ−５０１、Ｐ５３、Ｐ５３／ｍ、Ｐ９７、ＰＡＢＰＮ１、ＰＡＦＡＨ１Ｂ１、ＰＡＦＡＨ１Ｐ１、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＧＥ−５、ＰＡＨ、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＫ３、ＰＡＰ、ＰＡＰＰＡ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＡＸ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ６、ＰＡＸ７、ＰＡＸ８、ＰＡＸ９、ＰＢＣＡ、ＰＢＣＲＡ１、ＰＢＴ、ＰＢＸ１、ＰＢＸＰ１、ＰＣ、ＰＣＢＤ、ＰＣＣＡ、ＰＣＣＢ、ＰＣＫ２、ＰＣＫ１、ＰＣＬＤ、ＰＣＯＳ１、ＰＣＳＫ１、ＰＤＢ１、ＰＤＣＮ、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥＦ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲＬ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＲ、ＰＤＸ１、ＰＥＣＡＭ１、ＰＥＥ１、ＰＥＯ１、ＰＥＰＤ、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ７、ＰＥＸ１、ＰＦ４、ＰＦＢＩ���ＰＦＣ、ＰＦＫＦＢ１、ＰＦＫＭ、ＰＧＡＭ２、ＰＧＤ、ＰＧＫ１、ＰＧＫ１Ｐ１、ＰＧＬ２、ＰＧＲ、ＰＧＳ、ＰＨＡ２Ａ、ＰＨＢ、ＰＨＥＸ、ＰＨＧＤＨ、ＰＨＫＡ２、ＰＨＫＡ１、ＰＨＫＢ、ＰＨＫＧ２、ＰＨＰ、ＰＨＹＨ、ＰＩ、ＰＩ３、ＰＩＧＡ、ＰＩＭ１−ＫＩＮＡＳＥ、ＰＩＮ１、ＰＩＰ５Ｋ１Ｂ、ＰＩＴＸ２、ＰＩＴＸ３、ＰＫＤ２、ＰＫＤ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤＴＳ、ＰＫＨＤ１、ＰＫＬＲ、ＰＫＰ１、ＰＫＵ１、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ、ＰＬＡ２Ｇ７、ＰＬＡＴ、ＰＬＥＣ１、ＰＬＧ、ＰＬＩ、ＰＬＯＤ、ＰＬＰ１、ＰＭＥＬ１７、ＰＭＬ、ＰＭＬ／ＲＡＲα、ＰＭＭ２、ＰＭＰ２２、ＰＭＳ２、ＰＭＳ１、ＰＮＫＤ、ＰＮＬＩＰ、ＰＯＦ１、ＰＯＬＡ、ＰＯＬＨ、ＰＯＭＣ、ＰＯＮ２、ＰＯＮ１、ＰＯＲＣ、ＰＯＴＥ、ＰＯＵ１Ｆ１、ＰＯＵ３Ｆ４、ＰＯＵ４Ｆ３、ＰＯＵ１Ｆ１、ＰＰＡＣ、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＣＤ、ＰＰＧＢ、ＰＰＨ１、ＰＰＫＢ、ＰＰＭＸ、ＰＰＯＸ、ＰＰＰ１Ｒ３Ａ、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＰＴ１、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＢ、ＰＲＢ３、ＰＲＣＡ１、ＰＲＣＣ、ＰＲＤ、ＰＲＤＸ５／ｍ、ＰＲＦ１、ＰＲＧ４、ＰＲＫＡＲ１Ａ、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＤＣ、ＰＲＫＷＮＫ４、ＰＲＮＰ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＤＨ、ＰＲＯＭ１、ＰＲＯＰ１、ＰＲＯＳ１、
ＰＲＳＴ、ＰＲＰ８、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＰＲＰＳ２、ＰＲＰＳ１、ＰＲＳ、ＰＲＳＳ７、ＰＲＳＳ１、ＰＲＴＮ３、ＰＲＸ、ＰＳＡ、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＳＥＮ２、ＰＳＥＮ１、ＰＳＧ１、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＳＯＲＳ１、ＰＴＣ、ＰＴＣＨ、ＰＴＣＨ１、ＰＴＣＨ２、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ１、ＰＴＨ、ＰＴＨＲ１、ＰＴＬＡＨ、ＰＴＯＳ１、ＰＴＰＮ１２、ＰＴＰＮＩ  ｌ、ＰＴＰＲＫ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＰＴＳ、ＰＵＪＯ、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ１、ＰＷＣＲ、ＰＸＥ、ＰＸＭＰ３、ＰＸＲ１、ＰＹＧＬ、ＰＹＧＭ、ＱＤＰＲ、ＲＡＢ２７Ａ、ＲＡＤ５４Ｂ、ＲＡＤ５４Ｌ、ＲＡＧ２、ＲＡＧＥ、ＲＡＧＥ−１、ＲＡＧ１、ＲＡＰ１、ＲＡＲＡ、ＲＡＳＡ１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＢ１、ＲＢＰ４、ＲＢＰ４、ＲＢＳ、ＲＣＡ１、ＲＣＡＳ１、ＲＣＣＰ２、ＲＣＤ１、ＲＣＶ１、ＲＤＨ５、ＲＤＰＡ、ＲＤＳ、ＲＥＣＱＬ２、ＲＥＣＱＬ３、ＲＥＣＱＬ４、ＲＥＧ１Ａ、ＲＥＨＯＢＥ、ＲＥＮ、ＲＥＮＢＰ、ＲＥＮＳ１、ＲＥＴ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＲＧＲ、ＲＨＡＧ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＨＤ、ＲＨＯ、Ｒｉｐ−１、ＲＬＢＰ１、ＲＬＮ２、ＲＬＮ１、ＲＬＳ、ＲＭＤ１、ＲＭＲＰ、ＲＯＭ１、ＲＯＲ２、ＲＰ、ＲＰ１、ＲＰ１４、ＲＰ１７、ＲＰ２、ＲＰ６、ＲＰ９、ＲＰＤ１、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰ１、ＲＰ１０、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２、ＲＰＳ４Ｘ、ＲＰＳ４Ｙ、ＲＰＳ６ＫＡ３、ＲＲＡＳ２、ＲＳ１、ＲＳＮ、ＲＳＳ、ＲＵ１、ＲＵ２、ＲＵＮＸ２、ＲＵＮＸｌ、ＲＷＳ、ＲＹＲ１、Ｓ−１００、ＳＡＡ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＡＧＥ、ＳＡＬＬ１、ＳＡＲＤＨ、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＳＡＳ、ＳＡＸ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ４、ＳＣＡ５、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１、ＳＣＣ、ＳＣＣＤ、ＳＣＦ、ＳＣＬＣ１、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｇ、ＳＣＯ２、ＳＣＰ１、ＳＣＺＤ２、ＳＣＺＤ３、ＳＣＺＤ４、ＳＣＺＤ６、ＳＣＺＤ１、ＳＤＦ−１α／βＳＤＨＡ、ＳＤＨＤ、ＳＤＹＳ、ＳＥＤＬ、ＳＥＲＰＥＮＡ７、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＡ６、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＥＲＰＩＮＧ１、ＳＥＲＰＩＮＩ１、ＳＦＴＰＡ１、ＳＦＴＰＢ、ＳＦＴＰＣ、ＳＦＴＰＤ、ＳＧＣＡ、ＳＧＣＢ、ＳＧＣＤ、ＳＧＣＥ、ＳＧＭ１、ＳＧＳＨ、ＳＧＹ−１、ＳＨ２Ｄ１Ａ、ＳＨＢＧ、ＳＨＦＭ２、ＳＨＦＭ３、ＳＨＦＭ１、ＳＨＨ、ＳＨＯＸ、ＳＩ、ＳＩＡＬ、ＳＩＡＬＹＬ  ＬＥＷＩＳＸ、ＳＩＡＳＤ、Ｓ１１、ＳＩＭ１、ＳＩＲＴ２／ｍ、ＳＩＸ３、ＳＪＳ１、ＳＫＰ２、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ１Ｌ、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ���Ａ９、ＳＬＣ１１Ａ１、ＳＬＯＳ、ＳＭＡ、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＬ、ＳＭＡＲＣＢ１、ＳＭＡＸ２、ＳＭＣＲ、ＳＭＣＹ、ＳＭ１、ＳＭＮ２、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ２、ＳＯＤ３、ＳＯＤ１、ＳＯＳ１、ＳＯＳＴ、ＳＯＸ９、ＳＯＸ１０、Ｓｐ１７、ＳＰＡＮＸＣ、ＳＰＧ２３、ＳＰＧ３Ａ、ＳＰＧ４、ＳＰＧ５Ａ、ＳＰＧ５Ｂ、ＳＰＧ６、ＳＰＧ７、ＳＰＩＮＫ１、ＳＰＩＮＫ５、ＳＰＰＫ、ＳＰＰＭ、ＳＰＳＭＡ、ＳＰＴＡ１、ＳＰＴＢ、ＳＰＴＬＣ１、ＳＲＣ、ＳＲＤ５Ａ２、ＳＲＰＸ、ＳＲＳ、ＳＲＹ、βｈＣＧ、ＳＳＴＲ２、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０／ＳＳＸ２）、ＳＳＸ４、ＳＴ８、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＡＲ、ＳＴＡＲＰ１、ＳＴＡＴＨ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＫ２、ＳＴＫ１１、ＳＴｎ／ＫＬＨ、ＳＴＯ、ＳＴＯＭ、ＳＴＳ、ＳＵＯＸ、ＳＵＲＦ１、ＳＵＲＶＩＶＩＮ−２Ｂ、ＳＹＣＰ１、ＳＹＭ１、ＳＹＮ１、ＳＹＮＳ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＣＳＴＤ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＧ７２、ＴＡＦ７Ｌ、ＴＡＦ１、ＴＡＧＥ、ＴＡＧ−７２、ＴＡＬＩ、ＴＡＭ、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＶＲ１、ＴＡＲＣ、ＴＡＲＰ、ＴＡＴ、
ＴＡＺ、ＴＢＰ、ＴＢＸ２２、ＴＢＸ３、ＴＢＸ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＢＸＡＳ１、ＴＣＡＰ、ＴＣＦ２、ＴＣＦ１、ＴＣＩＲＧ１、ＴＣＬ２、ＴＣＬ４、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＮ２、ＴＣＯＦ１、ＴＣＲ、ＴＣＲＡ、ＴＤＤ、ＴＤＦＡ、ＴＤＲＤ１、ＴＥＣＫ、ＴＥＣＴＡ、ＴＥＫ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＥＬＡＢ１、ＴＥＸ１５、ＴＦ、ＴＦＡＰ２Ｂ、ＴＦＥ３、ＴＦＲ２、ＴＧ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＩ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ２、ＴＧＦβＲＥ、ＴＧＦγ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＧＩＦ、ＴＧＭ−４、ＴＧＭ１、ＴＨ、ＴＨＡＳ、ＴＨＢＤ、ＴＨＣ、ＴＨＣ２、ＴＨＭ、ＴＨＰＯ、ＴＨＲＡ、ＴＨＲＢ、ＴＩＭＭ８Ａ、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３、ＴＩＭＰ１、ＴＩＴＦ１、ＴＫＣＲ、ＴＫＴ、ＴＬＰ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＸ１、ＴＭ４ＳＦ１、ＴＭ４ＳＦ２、ＴＭＣ１、ＴＭＤ、ＴＭＩＰ、ＴＮＤＭ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＴＮＮＩ３、ＴＮＮＴ２、ＴＯＣ、ＴＯＰ２Ａ、ＴＯＰ１、ＴＰ５３、ＴＰ６３、ＴＰＡ、ＴＰＢＧ、ＴＰＩ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＰＩ１、ＴＰＭ３、ＴＰＭ１、ＴＰＭＴ、ＴＰＯ、ＴＰＳ、ＴＰＴＡ、ＴＲＡ、ＴＲＡＧ３、ＴＲＡＰＰＣ２、ＴＲＣ８、ＴＲＥＨ、ＴＲＧ、ＴＲＨ、ＴＲＩＭ３２、ＴＲＩＭ３７、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、Ｔｒｐ−ｐ８、ＴＲＰＳ１、ＴＳ、ＴＳＣ２、ＴＳＣ３、ＴＳＣ１、ＴＳＧ１０１、ＴＳＨＢ、ＴＳＨＲ、ＴＳＰ−１８０、ＴＳＴ、ＴＴＧＡ２Ｂ、ＴＴＮ、ＴＴＰＡ、ＴＴＲ、ＴＵ  Ｍ２−ＰＫ、ＴＵＬＰ１、ＴＷＩＳＴ、ＴＹＨ、ＴＹＲ、ＴＹＲＯＢＰ、ＴＹＲＯＢＰ、ＴＹＲＰ１、ＴＹＳ、ＵＢＥ２Ａ、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＥ１、ＵＣＨＬ１、ＵＦＳ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＬＲ、ＵＭＰＫ、ＵＭＰＳ、ＵＯＸ、ＵＰＡ、ＵＱＣＲＣ１、ＵＲＯ５、ＵＲＯＤ、ＵＰＫ１Ｂ、ＵＲＯＳ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ３Ａ、ＵＳＨ１Ａ、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＰ９Ｙ、ＵＶ２４、ＶＢＣＨ、ＶＣＦ、ＶＤＩ、ＶＤＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、ＶＨＬ、ＶＩＭ、ＶＭＤ２、ＶＭＤ１、ＶＭＧＬＯＭ、ＶＮＥＺ、ＶＮＦ、ＶＰ、ＶＲＮＩ、ＶＷＦ、ＶＷＳ、ＷＡＳ、ＷＢＳ２、ＷＦＳ２、ＷＦＳ１、ＷＨＣＲ、ＷＨＮ、ＷＩＳＰ３、ＷＭＳ、ＷＲＮ、ＷＳ２Ａ、ＷＳ２Ｂ、ＷＳＮ、ＷＳＳ、ＷＴ２、ＷＴ３、ＷＴ１、ＷＴＳ、ＷＷＳ、ＸＡＧＥ、ＸＤＨ、ＸＩＣ、ＸＩＳＴ、ＸＫ、ＸＭ、ＸＰＡ、ＸＰＣ、ＸＲＣＣ９、ＸＳ、ＺＡＰ７０、ＺＦＨＸ１Ｂ、ＺＦＸ、ＺＦＹ、ＺＩＣ２、ＺＩＣ３、ＺＮＦ１４５、ＺＮＦ２６１、ＺＮＦ３５、ＺＮＦ４１、ＺＮＦ６、ＺＮＦ１９８、およびＺＷＳ１である。
【００５５】
また、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、さらに、例えば（遺伝子を導入された）生物において成長を促進するために、成長ホルモンまたは成長因子から選択されてもよく、該成長ホルモンまたは成長因子としては、例えばＴＧＦα、ＩＧＦ（インスリン様成長因子）、代謝および／または造血に影響を与えるタンパク質（例えば、αアンチトリプシン、ＬＤＬ受容体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インスリン、ＧＡＴＡ−１など）、もしくは、例えば血液凝固系の第ＶＩＩＩ因子および第ＸＩ因子などのタンパク質があげられる。このようなタンパク質は、さらに、酵素を備え、該酵素としては、例えば、βガラクトシダーゼ（ｌａｃＺ）、ＤＮＡ制限酵素（例えば、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩなど）、リゾチームなど、もしくはプロテアーゼ、例えば、パパイン、ブロメライン、ケラチナーゼ、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、レニン（キモシン）、スイザイム（ｓｕｉｚｙｍｅ）、ノルターゼ（ｎｏｒｔａｓｅ）などがあげられる。これらのタンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされてもよい。したがって、本発明は、治療される生体において欠陥が生じたタンパク質（例えば、変異、欠損、または発現欠陥のいずれかの原因による）を置換し、これにより、タンパク質を効果的に発現し、かつ発現量を増加させることが可能な技術を提供する。このような欠陥が生じたタンパク質は、例えば一元発生の障害において発生し、好ましくは本質的な免疫反応を引き起こすことがないので、治療される生体において機能的ではない。
【００５６】
あるいは、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、さらに、例えば障害または疾病の原因となる機能障害性または外因性のタンパク質の（過剰な）発現によって引き起こされる特定の疾患の治療を可能にするプロテアーゼなどから選択されてもよい。したがって、本発明を使用して、病原性生体（ウイルス、細菌など）を攻撃する複合化ＲＮＡを、治療として生体に導入してもよい。例えば、治療用プロテアーゼをコードするＲＮＡを使用して、ウイルスの構築に欠かすことのできないウイルス性タンパク質、またはウイルス生成に必要不可欠なその他のステップに欠かすことのできないウイルス性タンパク質を切断してもよい。
【００５７】
本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、さらに、中心的な役割を果たす細胞内プロセス（例えばアポトーシス、細胞成長など）に対して、特に生体の免疫系に関連して影響を与え得るシグナル伝達の調節（抑制または活性化）などを通じて各種細胞内経路を調節する、タンパク質から選択されてもよい。これにより、例えばサイトカイン、リンフォカイン、モノカイン、インターフェロンなどの免疫調節物質が、本発明において定義される複合化ＲＮＡによって効率よく発現する。好ましくは、これらのタンパク質は、このような理由で、例えば、４個の位置特異的に保存されたシステイン残基を含有するサイトカインファミリー（ＣＣＣＣ）のクラスＩのサイトカインと、保存された配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）とをさらに含む。なお、ここで、Ｘは保存されていないアミノ酸を表わしている。サイトカインファミリーのクラスＩのサイトカインとしては、ＧＭ−ＣＳＦサブファミリー（例えばＩＬ−３、ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦ）、ＩＬ−６サブファミリー（例えばＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２）、またはＩＬ−２サブファミリー（例えばＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５）、またはサイトカインＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０などがあげられる。上記タンパク質は、４個の位置特異的に保存されたシステイン残基を同様に含有するが、保存された配列モチーフＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）は含有しないサイトカインファミリー（インターフェロン受容体ファミリー）（ＣＣＣＣ）のクラスＩＩのサイトカインをさらに備えていてもよい。サイトカインファミリーのクラスＩＩのサイトカインとしては、例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、などがあげられる。本発明にしたがって使用される（上記本発明の免疫抑制組成物の）少なくとも１つの修飾された（ｍ）ＲＮＡによってコードされたタンパク質は、さらに、腫瘍壊死ファミリーのサイトカイン（例えばＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＣＤ４０、Ｆａｓなど）を含んでいてもよく、あるいは、７個の膜貫通ヘリックス型を含有し、Ｇタンパク質（例えばＩＬ−８、ＭＩＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＲ５、ＣＸＲ４など）と相互作用をするケモカインファミリーのサイトカインを含んでいてもよい。上記タンパク質は、さらに、ＡＩＦ、Ａｐａｆ（例えばＡｐａｆ−１、Ａｐａｆ−２、Ａｐａｆ−３）、またはＡＰＯ−２（Ｌ）、ＡＰＯ−３（Ｌ）、アポパイン、Ｂａｄ、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ｘＳ、ｂｉｋ、ＣＡＤ、カルパイン、カスパーゼ（例えばカスパーゼ−１、カスパーゼ−２、カスパーゼ−３、カスパーゼ−４、カスパーゼ−５、カスパーゼ−６、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、カスパーゼ−１０、カスパーゼ−１１）、ｃｅｄ−３、ｃｅｄ−９、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ｃｒｍ  Ａ、チトクロムＣ、ＣｄＲ１、ＤｃＲ１、ＤＤ、ＤＥＤ、ＤＩＳＣ、ＤＮＡ−ＰＫＣＳ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＦＡＤＤ／ＭＯＲＴ−１、ＦＡＫ、Ｆａｓ（ＦａｓリガンドＣＤ９５／ｆａｓ（受容体））��ＦＬＩＣＥ／ＭＡＣＨ、ＦＬＩＰ、ホドリン、ｆｏｓ、Ｇ−アクチン、Ｇａｓ−２、ゲルゾリン、グランザイムＡ／Ｂ、ＩＣＡＤ、ＩＣＥ、ＪＮＫ、ラミンＡ／Ｂ、ＭＡＰ、ＭＣＬ−１、Ｍｄｍ−２、ＭＥＫＫ−１、ＭＯＲＴ−１、ＮＥＤＤ、ＮＦ−κＢ、ＮｕＭａ、ｐ５３、ＰＡＫ−２、ＰＡＲＰ、パーフォリン、ＰＩＴＳＬＲＥ、ＰＫＣδ、ｐＲｂ、プレセニリン、ｐｒＩＣＥ、ＲＡＩＤＤ、Ｒａｓ、ＲＩＰ、スフィンゴミエリナーゼ、チミジンキナーゼを含む、アポトーシス因子またはアポトーシス関連タンパク質から選択されてもよく、あるいは単純ヘルペス、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、トランスグルタミナーゼなどから選択されてもよい。
【００５８】
また、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、さらに、抗原特異的Ｔ細胞受容体をコードしていてもよい。Ｔ細胞受容体、すなわちＴＣＲ（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）とは、一般に、主要組織適合性複合体（ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ；ＭＨＣ）分子に結合した抗原を認識する役目を担う、Ｔリンパ球（またはＴ細胞）の表面上で見られる分子である。Ｔ細胞受容体は、Ｔ細胞の９５％においてはα鎖およびβ鎖からなるヘテロ二量体であり、一方、Ｔ細胞の５％はγ鎖およびδ鎖からなるＴＣＲを有する。ＴＣＲが抗原およびＭＨＣと結合すると、関連する酵素、共受容体、および固有アクセサリー分子によって媒介される一連の生化学的現象を介して、該ＴＣＲのＴリンパ球が賦活化される。したがって、これらのタンパク質は、特定の抗原を特異的に標的とすることを可能にし、その標的指向性によって免疫系の機能性を支援する。したがって、これらの受容体をコードしている、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を投与することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞にトランスフェクトする手法、または、好ましくは、ｅｘ  ｖｉｖｏで細胞にトランスフェクトする（例えば、ある免疫細胞を特異的にトランスフェクトする）手法の採用を検討する。導入されたＴ細胞受容体分子はＭＨＣ分子上の特定の抗原を認識し、これにより攻撃すべき抗原に対する免疫系の認識を支援する。
【００５９】
本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた治療上有効なタンパク質は、さらに、アジュバントタンパク質を含んでいてもよい。この文脈において、アジュバントタンパク質は、好ましくは、本発明において定義される生来の免疫反応を誘発できる任意のタンパク質であると理解すべきである。好ましくは、この生来の免疫反応には、パターン認識受容体の賦活化が含まれ、パターン認識受容体としては、例えば、ヒトのトール様受容体ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０またはマウスのトール様受容体ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３から選択されたトール様受容体を含む、トール様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）ファミリーから選択された受容体があげられる。好ましくは、生来の免疫反応が哺乳類において、さらに好ましくはヒトにおいて誘発される。好ましくは、上記アジュバントタンパク質は、ヒトアジュバントタンパク質または病原性アジュバントタンパク質、特に細菌性アジュバントタンパク質から選択される。さらに、アジュバント効果に関与するヒトタンパク質をコードするｍＲＮＡが共に使用されてもよい。
【００６０】
ヒトアジュバントタンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、通常、生来の免疫反応、例えば、外因性ＴＬＲリガンドがＴＬＲに結合する反応を（哺乳類において）誘発できる任意のヒトタンパク質を含む。さらに好ましくは、本発明の複合化ＲＮＡによってコードされたヒトアジュバントタンパク質は、以下に列挙するものからなる群より選択される（ただしこれに限定されるものではない）。すなわち、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１ＣＣＬ２１、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＮＦαを含む、生来の免疫反応を誘引または亢進するサイトカイン；ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、およびＴＮＦαを含む、マクロファージから放出されるサイトカイン；Ｃ１ｑ、ＭＢＬ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２ｂ、Ｂｂ、Ｄ、ＭＡＳＰ−１、ＭＡＳＰ−２、Ｃ４ｂ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、ＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ１ｑＲ、Ｃ１ＩＮＨ、Ｃ４ｂｐ、ＭＣＰ、ＤＡＦ、Ｈ、Ｉ、Ｐ、およびＣＤ５９を含む補体系の成分；ＴＬＲおよびＩＬ−１Ｒ１を含む、上記パターン認識受容体のシグナル伝達ネットワークの成分であるタンパク質（ただし上記成分は、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、βデフェンシン、熱ショックタンパク質（例えば、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７５、およびＨＳＰ９０）、ｇｐ９６、フィブリノーゲン、およびフィブロネクチンのＴｙｐＩＩＩ反復エキストラ（ｅｘｔｒａ）ドメインＡを含む、パターン認識受容体のリガンドである）；ＩＬ−１ＲＩ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、およびＴＬＲ１１を含む受容体；低分子ＧＴＰａｓｅシグナル伝達の成分（ＲｈｏＡ、Ｒａｓ、Ｒａｃ１、Ｃｄｃ４２など）、ＰＩＰシグナル伝達成分（ＰＩ３Ｋ、Ｓｒｃキナーゼなど）、ＭｙＤ８８依存性シグナル伝達成分（ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２など）、およびＭｙＤ８８非依存性シグナル伝達成分（ＴＩＣＡＭ１、ＴＩＣＡＭ２など）を含むシグナル伝達因子；例えばＮＦ−κＢ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、およびｃ−Ｍｙｃを含む、活性化転写因子；例えばＩＬ−１α、ＩＬ−１β、βデフェンシン、ＩＬ−６、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、およびＩＦＮβを含む、誘起標的遺伝子；ＣＤ２８、ＣＤ４０−リガンド、またはＰＤ１を含む、共刺激分子；ＬＡＭＰを含むタンパク質ドメイン；細胞表面タンパク質；または、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ｔｒｉｆ、ｆｌｔ３リガンド、チモペンチン、Ｇｐ９６、またはフィブロネクチンなどを含む、ヒトアジュバントタンパク質、もしくは上記ヒトアジュバントタンパク質のうち任意のヒトアジュバントタンパク質の任意のホモログである。
【００６１】
病原性アジュバントタンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、通常、生来の免疫反応を（哺乳類において）誘発することが可能な任意の病原性（アジュバント）タンパク質を含む。さらに好ましくは、上記病原性アジュバントタンパク質は、細菌、原虫、ウイルス、または菌類、動物などに由来する病原性（アジュバント）タンパク質から選択され、一層好ましくは、細菌性タンパク質、原虫タンパク質（例えば、トキソプラズマ原虫のプロフィリン様タンパク質）、ウイルス性タンパク質、または真菌タンパク質、動物タンパク質などからなる群（ただしこれに限定されるものではない）より選択される病原性アジュバントタンパク質から選択される。
【００６２】
この文脈において、細菌性（アジュバント）タンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、生来の免疫反応を（好ましくは哺乳類において）誘発できる任意の細菌性タンパク質を含んでもよい。さらに好ましくは、細菌性（アジュバント）タンパク質は、上記複合化ＲＮＡによってコードされていてもよく、アグロバクテリウム、アキフェックス（Ａｑｕｉｆｅｘ）、アゾスピリルム、バチルス、バルトネラ、ボルデテラ、ボレリア、バークホルデリア、カンピロバクター、カウロバクター、クロストリジウム、エシェリキア、ヘリコバクター、ラクノスピラセ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、レジオネラ、リステリア、プロテウス、シュードモナス、リゾビウム、ロドバクター、ロゼブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、サルモネラ、セルプリナ、セラチア、シゲラ、トレポネーマ、ビブリオ、ウォリネラ、エルシニアを含む生体から得られるフラゲリンを含む細菌性フラゲリン（ただしこれに限定されるものではない）からなる群より選択される細菌性アジュバントタンパク質を含んでもよく、さらに好ましくは、アグロバクテリウム・ツメファシエンス、アキフェックス・ピロフィラス（Ａｑｕｉｆｅｘ  ｐｙｒｏｐｈｉｌｕｓ）、アゾスピリルム・ブラシレンセ、バチルス・スブチリス、バチルス・チューリンゲンシス、バルトネラ・バシリホルミス、ボルデテラ・ブロンキセプチカ、ボレリア・ブルグドルフェリ、バークホルデリア・セパシア、カンピロバクター・ジェジュニ、カウロバクター・クレセンタス、ベネット（Ｂｅｎｎｅｔｔ）クローン１型クロストリジウム・ボツリヌム、エシェリキア・コリ、ヘリコバクター・ピロリ、ラクノスピラセ・バクテリアム（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、レジオネラ・ニューモフィラ、リステリア・モノサイトゲネス、プロテウス・ミラビリス、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｏｇｕｉｎｏｓａ）、シュードモナス・シリンゲ、リゾビウム・メリロティ、ロドバクター・スフェロイデス、ロゼブリア・セシコラ（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ  ｃｅｃｉｃｏｌａ）、ロゼブリス・ホミニス（Ｒｏｓｅｂｕｒｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ）、サルモネラ・チフィリウム、サルモネラ・ボンゴリ（ｂｏｎｇｏｒｉ）、サルモネラ・チフィ、サルモネラ・エンテリティディス、セルプリナ・ハイオディセンテリア、セラチア・マルセセンス、シゲラ・ボイディ、トレポネーマ・ファゲデニス（ｐｈａｇｅｄｅｎｉｓ）、ビブリオ・アルギノリチカス、ビブリオ・コレラエ、ビブリオ・パラヘモリチカス、ウォリネラ・スクシオゲネス、およびエルシニア・エンテロコリチカなどの種から得られるフラゲリン（ただしこれに限定されるものではない）からなる群より選択される細菌性アジュバントタンパク質を含んでもよい。
【００６３】
細菌性フラゲリンは、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、さらに、アジュバントとしての特質を示す任意の細菌性フラゲリンから選択されることが特に好適であり、さらに好ましくは、以下に列挙するものからなる群より選択される細菌性フラゲリンから選択されてもよい。すなわち、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ１００を含む細菌性熱ショックタンパク質（すなわちシャペロン）；グラム陰性細菌から得られるＯｍｐＡ（外膜タンパク質）；ＯｍｐＦを含む細菌性ポリン；ボルデテラ・パータシスから得られる百日咳毒素（ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｏｘｉｎ；ＰＴ）、ボルデテラ・パータシスから得られる百日咳アデニル酸シクラーゼ毒素ＣｙａＡおよびＣｙａＣ、百日咳毒素から得られるＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ変異体、ボルデテラ・パータシスから得られる百日咳アデニル酸シクラーゼ毒素ＣｙａＡおよびＣｙａＣ、破傷風毒素、コレラ毒素（ＣＴ）、コレラ毒素Ｂサブユニット、コレラ毒素から得られるＣＴＫ６３変異体、ＣＴから得られるＣＴＥ１１２Ｋ変異体、エシェリキア・コリの熱不安定性エンテロトキシン（ｌａｂｉｌｅ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ；ＬＴ）、熱不安定エンテロトキシンから得られるＢサブユニット（Ｂ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｆｒｏｍ  ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ；ＬＴＢ）、毒性が低減されたエシェリキア・コリ熱不安定エンテロトキシン変異体（ＬＴＫ６３とＬＴＲ７２を含む）を含む細菌性毒素；フェノール溶解性モジュリン（ｍｏｄｕｌｉｎ）；ヘリコバクター・ピロリから得られる好中球活性化タンパク質（ＨＰ−ＮＡＰ）；界面活性剤タンパク質Ｄ；ボレリア・ブルグドルフェリから得られる表層タンパク質Ａリポタンパク；マイコバクテリウム・ツベルクローシスから得られるＡｇ３８（３８ｋＤａ抗原）；細菌性線毛から得られるタンパク質；ビブリオ・コレラエのエンテロトキシンＣＴ；グラム陰性細菌の線毛から得られるピリン；界面活性剤タンパク質Ａなど；もしくは上記細菌性（アジュバント）タンパク質のうち任意の細菌性（アジュバント）タンパク質の任意のホモログである。
【００６４】
細菌性フラゲリンは、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、一層好ましくは、受託番号を示した以下の配列中の任意の配列からなる群より選択される配列を含む。
【００６５】
【表１】
2010537651.tif 000002
2010537651.tif 000003
【００６６】
原生生物タンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、アジュバントとしての特質を示す任意の原生生物タンパク質から選択されてもよく、さらに好ましくは、トリパノソーマ・クルージから得られるＴｃ５２、トリパノソーマ・ゴンディから得られるＰＦＴＧ、原虫熱ショックタンパク質、リーシュマニア菌種から得られるＬｅＩＦ、トキソプラズマ原虫から得られるプロフィリン状タンパク質などからなる群より選択されてもよいが、これに限定されるものではない。
【００６７】
ウイルス性タンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、アジュバントとしての特質を示す任意のウイルス性タンパク質から選択されてもよく、さらに好ましくは、呼吸器合胞体ウイルス融合糖タンパク質（Ｆタンパク質）、ＭＭＴウイルスから得られる外被タンパク質、マウス白血病ウイルスタンパク質、野性型麻疹ウイルスの赤血球凝集素タンパク質などからなる群より選択されてもよいが、これに限定されるものではない。
【００６８】
真菌タンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、アジュバントとしての特質を示す任意の真菌タンパク質から選択されてもよく、さらに好ましくは、真菌性免疫調節タンパク質（ｆｕｎｇａｌ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ；ＦＩＰ、ＬＺ−８）などからなる群より選択されてもよいが、これに限定されるものではない。
【００６９】
最後に、病原性アジュバントタンパク質は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、アジュバントとしての特質を示すさらに別の任意の病原性タンパク質から最終的に選択されてもよく、さらに好ましくは、キーホールリンペットヘモシアニン（Ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ；ＫＬＨ）、ＯｓｐＡなどからなる群より選択されてもよいが、これに限定されるものではない。
【００７０】
他の構成としては、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、抗原をコードしていてもよい。本発明では「抗原」という用語は、免疫系によって認識され、例えば抗体を形成することによって抗原特異的な免疫応答を誘発できる物質を指す。抗原はその起源によって分類できる。この分類によれば、抗原には、外因性抗原と内因性抗原の２つの主なクラスがある。外因性抗原は、例えば、吸入、摂取、または注射などによって（細胞または身体の）外部から細胞または身体に入る抗原である。これらの抗原は、抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ；“ＡＰＣ”、例えば樹状細胞またはマクロファージ）によって内在化され、処理されて断片を形成する。そしてＡＰＣは、その表面上においてＭＨＣ  ＩＩ分子を使用することによって、ヘルパーＴ細胞（例えばＣＤ４＋）に断片を提示する。これらの抗原断片がＴ細胞によって認識されると、Ｔ細胞が活性化され、サイトカインが分泌される。サイトカインとは、免疫細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはマクロファージの増殖を賦活する物質である。一方、内因性抗原とは、例えば正常な細胞の代謝の結果として細胞内部で生成された抗原である。これらの抗原の断片がＡＰＣの表面上のＭＨＣ  Ｉ分子に提示される。これらの抗原は、賦活化された抗原特異的な細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識される。認識後、上記Ｔ細胞は、抗原提示細胞の溶解またはアポトーシスを引き起こす異なる毒素を分泌しながら反応する。内因性抗原としては、抗原、例えば、その細胞自身の遺伝子情報によってコードされたタンパク質またはペプチドだけではなく、細胞内部の外来性核酸によってコードされたタンパク質またはペプチドをも含み、さらに、細胞内で発生するウイルス起源の抗原をも含む。内因性抗原の分類の１つが、腫瘍抗原の分類である。これらの抗原は、腫瘍細胞の表面上のＭＨＣ  Ｉ分子によって提示される。この分類は、さらに、腫瘍特異的抗原（ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ；ＴＳＡｓ）と腫瘍関連抗原（ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ−ａｎｔｉｇｅｎ；ＴＡＡ）とに分類され得る。ＴＳＡは腫瘍細胞によってのみ提示され、正常で“健康な”細胞によって提示されることは決してない。ＴＳＡは通常、腫瘍特異的な変異の結果生じる。ＴＡＡは、ＴＳＡより一般的に見られ、通常、腫瘍細胞と健康な細胞の双方によって提示される。これらの抗原は認識され、抗原提示細胞は細胞傷害性Ｔ細胞によって破壊され得る。また、腫瘍抗原は、腫瘍の表面上においても、例えば変異型受容体の形態で発生可能である。この場合、腫瘍抗原は抗体によって認識され得る。
【００７１】
抗原は、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、例えばタンパク質、ペプチド、またはその断片を含んでいてもよい。好ましくは、抗原とは、タンパク質およびペプチド、またはその断片であり、例えばこれらのタンパク質またはペプチドのエピトープである。エピトープ（“抗原決定基”とも称される）は、通常、５〜１５、好ましくは９〜１５アミノ酸を有する上記抗原性タンパク質またはペプチド構造の外表面上に位置している断片である（Ｂ細胞エピトープおよびＴ細胞エピトープが通常ＭＨＣ分子上で提示され、例えばＭＨＣ−Ｉは通常、約９アミノ酸の長さのエピトープを提示し、ＭＨＣ−ＩＩは通常、約１２〜１５アミノ酸の長さのエピトープを提示する）。さらに、本発明に係る複合体の少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた抗原は、さらに、共有結合または非共有結合によって上記ＲＮＡ（分子）に連結されている任意の他の生体分子、例えば脂質、炭水化物などを含んでいてもよい。
【００７２】
本発明によれば、抗原は本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、また、外因性抗原であっても内因性抗原であってもよい。内因性抗原としては、細胞内、特に変性細胞、例えば腫瘍細胞において生成された抗原があげられる。これらの抗原は「腫瘍抗原」と称される。内因性抗原は細胞の表面上に位置していることが好ましいが、これに限定されるものではない。さらに、腫瘍抗原とは、自分自身が変性していない（あるいは、もともとは変性していなかった）が、腫瘍であると推定される細胞に関連する細胞中において発現した抗原をも意味する。腫瘍を供給する血管またはその（再）編成に関連する抗原、特に血管新生に関連する抗原、例えば成長因子（例えばＶＥＧＦ、ｂＦＧＦなど）も、上記腫瘍抗原に含まれる。腫瘍に関連する抗原としては、細胞または組織から得られ、通常腫瘍に包埋されている抗原も含まれる。さらに、癌疾患にかかっている（気づいていてもよく、気づいていなくてもよい）患者の体内で発現する物質（通常タンパク質またはペプチド）もあり、これらの物質は当該患者の体液中では高い濃度で発生する。一例としては、腫瘍細胞の侵入および遊離に関連したタンパク質があげられる。これらの物質も「腫瘍抗原」と称されるが、免疫応答誘引物質の厳密な意味においては、抗原ではない。上記物質の使用も本発明の権利範囲に含まれる。
【００７３】
抗原は、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、典型的には、例えば特定の目的に適した任意の抗原（例えば本発明において定義される例えば特定の感染性疾病に関連した（または該感染性疾病を引き起こす）抗原）、癌抗原（例えば腫瘍特異的な表面抗原）、癌疾患において発現する抗原、癌疾患において発現する変異抗原、または、その他の疾病（例えば自己免疫疾患、アレルギーなど）の原因に関わるタンパク質抗原から選択されてもよいが、これに限定されるものではない。例えば、患者にアレルギーまたは自己免疫性状態を引き起こす抗原を投与することによって患者を脱感作するために、これらの抗原を使用してもよい。
【００７４】
本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた、好ましい抗原性（ポリ）ペプチドの例としては、腫瘍抗原などの、公知の抗原ペプチド全てがあげられる。腫瘍抗原の特定の例としては、腫瘍特異的な表面抗原（ｔｕｍｏｕｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｔｉｇｅｎ；ＴＳＳＡ）、例えば５Ｔ４、α５β１インテグリン、７０７−ＡＰ、ＡＦＰ、ＡＲＴ−４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、ＭＮ／Ｃ  ＩＸ抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＳＰ−８、βカテニン／ｍ、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＥＡ、ＣＴ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ−２／ｎｅｗ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＡＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、ミオシン／ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＭ−１、−２、−３、ＮＡ８８−Ａ、ＰＡＰ、プロテイナーゼ−３、ｐ１９０  ｍｉｎｏｒ  ｂｃｒ−ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１またはＳＡＲＴ−３、サバイビン、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、ＶＥＧＦ、およびＷＴ１、もしくは例えばＮＹ−Ｅｓｏ−１またはＮＹ−Ｅｓｏ−Ｂなどの配列から選択したものがあげられる。任意のクラスの腫瘍抗原が本発明の目的に適しており、例えば、血管新生に関わることが知られ、細胞外マトリックス構造などに影響を与える腫瘍抗原があげられる。上記抗原の断片およびその類似物も本発明の権利範囲に含まれる。
【００７５】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされている腫瘍抗原の例を、下記の表１および表２に図示する。これらの表は、癌疾患に関連する特異的（タンパク質）抗原（つまり“腫瘍抗原”）をその癌疾患と対応させて示している。本発明では、“癌疾患”および“腫瘍疾患”という用語を同意語として使用する。
【００７６】
【表２】
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【００７７】
【表３】
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【００７８】
本発明に係る好適な実施形態では、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよい腫瘍抗原の例は、以下に列挙するものからなる群より選択される。すなわち、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰ  ＨＰＧ１、  ５  １インテグリン、  ５  ６インテグリン、  −アクチニン−４／ｍ、  メチルアシル−補酵素Ａラセミ化酵素、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬ−２、ｂｃｒ／ａｂｌ、  カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ−４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ  １５−３／ＣＡ  ２７−２９、ＣＡ  １９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＥ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ−１／ｍ、コアクトシン様タンパク質、ＸＸＩＩＩ型コラーゲン、ＣＯＸ−２、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ−Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｆｒａｕ−１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ−２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、未成熟ラミニン受容体、カリクレイン−２、カリクレイン−４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ−ＬＣ−１、Ｋ−Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ−Ａ１、ＬＤＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、乳グロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メランＡ、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−２／ｍ、基質タンパク質２２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ−抗原、ＭＲＰ−３、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３／ｍ、ミオシン  クラスＩ／ｍ、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサ���ン転移酵素−Ｖ、ネオＰＡＰ、ネオＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＯＡ１、ＯＦＡ−ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐ１５、ｐ１９０  ｍｉｎｏｒ  ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ−１−キナーゼ、ピン−１、Ｐｍｌ／ＰＡＲα、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、プロステイン、プロテイナーゼ−３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ−１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０、ＳＳＸ−４、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＥＡＰ、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＧ−７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＧＭ−４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、およびＷＴ１である。
【００７９】
本発明に係る好適な実施形態では、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよい腫瘍抗原の例は、以下に列挙するものからなる群より選択される。すなわち、ＭＡＧＥ−Ａ１［受託番号Ｍ７７４８１］、ＭＡＧＥ−Ａ６［受託番号ＮＭ＿００５３６３］、メランＡ［受託番号ＮＭ＿００５５１１］、ＧＰ１００［受託番号Ｍ７７３４８］、チロシナーゼ［受託番号ＮＭ＿０００３７２］、サバイビン［受託番号ＡＦ０７７３５０］、ＣＥＡ［受託番号ＮＭ＿００４３６３］、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ［受託番号Ｍ１１７３０］、ＷＴ１［受託番号ＮＭ＿０００３７８］、ＰＲＡＭＥ［受託番号ＮＭ＿００６１１５］、ＥＧＦＲＩ（上皮性成長因子受容体１）［受託番号ＡＦ２８８７３８］、ムチン−１［受託番号ＮＭ＿００２４５６］、およびＳＥＣ６１Ｇ［受託番号ＮＭ＿０１４３０２］である。
【００８０】
さらに他の構成としては、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）が抗体をコードしていてもよい。本発明によれば上記抗体は、任意の抗体、例えば、当該技術分野において公知である、任意の組み換えによって生成された抗体または天然に生じる抗体、特に治療用、診断用、または科学的目的に適した抗体、または特定の癌疾患に関連して特定される抗体から選択されてもよい。本発明において、「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（作動薬、拮抗薬、および遮断抗体または中和抗体を含む）ならびにポリエピトープ特異性を有する抗体種を含む。本発明によれば、「抗体」は通常、当該技術分野において公知の任意の抗体（例えばＩｇＭ抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、およびＩｇＥ抗体）、例えば天然に生じる抗体、ワクチン接種によって宿主生体において生成される抗体、天然に生じる抗体またはワクチン接種によって宿主生体において生成される抗体から単離特定された抗体、および当該技術分野において公知の生体分子的方法で組み換えによって生成される抗体、さらに、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、細胞内抗体（つまり細胞において発現して必要に応じて特定の細胞区画において局在化される抗体）、および前記抗体の断片や変異体を含む。一般に抗体は、軽鎖および重鎖からなり、軽鎖と重鎖は共に可変ドメインおよび定常ドメインを有する。軽鎖は、Ｎ末端可変ドメインＶＬおよびＣ末端定常ドメインＣＬからなる。一方、例えば、ＩｇＧ抗体の重鎖は、Ｎ末端可変ドメインＶＨおよび３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３を含む。単鎖抗体は、本発明において定義される複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよく、好ましくは一本鎖ＲＮＡによって、さらに好ましくはｍＲＮＡによってコードされていてもよい。
【００８１】
一つ目の別の構成によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、ポリクローナル抗体をコードしていてもよい。この場合、上記「ポリクローナル抗体」という用語は、通常、特定の抗原または免疫原、もしくはワクチン接種によって宿主生体（例えば、ヤギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ロバ、サル、類人猿、および齧歯類を含む哺乳類、なお齧歯類にはマウス、ハムスター、およびウサギが含まれる）において生成されたタンパク質のエピトープ、に対して向けられる抗体の混合物を意味する。ポリクローナル抗体は、一般に同一ではなく、それゆえ通常は、同じ抗原の異なるエピトープまたは領域を認識する。したがって、このような場合、通常、本発明によってクレームされているように複合化された異なるＲＮＡ分子の混合物（組成物）に適用され、上記異なるＲＮＡ分子はそれぞれが、特定の抗原または免疫原もしくはタンパク質のエピトープに対して向けられる特定の（モノクローナルな）抗体をコードしている。
【００８２】
さらに他の構成としては、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、モノクローナル抗体をコードしていてもよい。「モノクローナル抗体」という用語は、ここでは通常、ほぼ均質な抗体の集団、つまり、集団を構成する個々の抗体が、起こりうる自然発生的な変異を除けば（少量は存在してもかまわない）同一である集団から得られる抗体を指す。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原性部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる異なる抗体を通常含んでいる従来の（ポリクローナル）抗体の調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の一つの決定基に対して向けられる。例えば、上記において定義されたモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５（１９７５）によって最初に記述されたハイブリドーマ法によって作製してもよい。あるいは、組み換えＤＮＡ法、例えば米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載の方法によって作製してもよい。「モノクローナル抗体」は、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）に記載された手法を使って生成されたファージライブラリから単離されてもよい。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎによれば、対象としている免疫原（抗原）を宿主、例えばマウスに注射し、免疫原に反応して生成されたＢ細胞リンパ球を、ある時間が経過した後に回収する。このＢ細胞を、マウスから得られた骨髄腫細胞と組み合わせて、Ｂ細胞が骨髄腫細胞と融合できる培地に導入すると、Ｂ細胞は雑種細胞を生成する。そして、これらの融合した細胞（雑種細胞）をマイクロタイターのプレートの別のウェルに入れて成長させ、モノクローナル抗体を生成させる。モノクローナル抗体は試験を行なって、対象としている抗原を検出するためにはどれが適しているかを決定する。選択後、そのモノクローナル抗体を、細胞培養において、またはマウスに上記雑種細胞を注射することによって、成長させることができる。ただし、本発明の目的のためには、これらのモノクローナル抗体のペプチド配列を決定しなければならない。また、これらの抗体をコードするＲＮＡ配列は、当該技術分野において周知の手順によって調製してもよい。
【００８３】
ヒトにおける治療用目的の使用には、非ヒトモノクローナル抗体または非ヒトポリクローナル抗体、例えばマウス抗体は、さらに、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされていてもよい。ただし、このような抗体は、一般に上記非ヒト抗体に対するヒト抗体を人体において生成することによって免疫応答を誘引するので、通常は限られた用途にしか役に立たない。したがって、特定の非ヒト抗体はヒトに対して一度きりしか投与できない。この問題を解決するために、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によって、キメラ抗体、ヒト化非ヒト抗体、およびヒト抗体をコードすることもできる。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされる“キメラ“抗体とは、好ましくは、上述の抗体の定常ドメインが、他の生体、好ましくはヒト配列からの抗体の配列に置き替えられた抗体である。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によって同様にコードされた“ヒト化“（非ヒト）抗体とは、抗体の上述の定常ドメインおよび可変ドメイン（ただし高頻度可変ドメインは除く）がヒト配列に置き替えられた抗体である。さらに他の構成としては、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、ヒト抗体、すなわちヒト配列だけを有する抗体をコードしていてもよい。このようなヒト抗体は、ヒトＩｇＧ遺伝子座にとっての導入遺伝子である、ヒト組織または免疫された非ヒト宿主生体から単離し得る。配列が決定されたＲＮＡ配列を、当該技術分野において周知の手順によって調製してもよい。また、ヒト抗体は、ファージ表示法を使用することによって準備することができる。
【００８４】
さらに、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、二重特異性抗体をコードしていてもよい。本発明の文脈における“二重特異性”抗体とは、好ましくは、例えば、エフェクター細胞（例えばＣＴＬ、ＮＫ細胞、マクロファージ、顆粒球など）を標的にするエフェクター分子（例えば毒素、薬物、サイトカインなど）を補充する目的で、エフェクターと各標的との間でアダプターとして作用する抗体である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  Ｒ．Ｅ．、  Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｉｎ，  ２００５，  ２６（１）：１〜９のレビューを参照）。ここで記載される二重特異性抗体は、一般に、例えば上述の２つの異なる抗原、免疫原、エピトープ、薬物、細胞（または細胞上の受容体）、またはその他の分子（または構造）を認識するように構成されている。二重特異性とは、上記抗体の抗原結合領域が２つの異なるエピトープに対して特異的であることをここでは意味する。したがって、異なる抗原、免疫原、またはエピトープなどはお互いに近接させることができ、必要に応じて２つの成分を直接相互作用させることが可能である。例えば、異なる細胞、例えばエフェクター細胞および標的細胞を、二重特異性抗体を介して連結することができる。一方ではここに記載するように溶解性抗原に結合し、他方では腫瘍細胞の表面上の抗原または受容体に結合する抗体またはその断片も、本発明に含まれるが、これに限定されるものではない。
【００８５】
まとめると、本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、さらに、上記において定義された抗体をコードしてもよい。これらの抗体は細胞内において発現する抗体、つまり細胞の特定の部分に局在化されて、さらにそこで発現する核酸によってコードされた抗体であるから、上記抗体は細胞内抗体とも称されることがある。
【００８６】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされた抗体は、好ましくは完全長抗体、つまり、上述の完全長重鎖および完全長軽鎖からなる抗体を含んでいてもよい。ただし、抗体（例えば抗体断片、変異体、または付加物）の誘導体は、本発明に係る複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡによってコードされていてもよい。
【００８７】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、さらに、前記抗体のＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃ断片、Ｆａｃｂ断片、ｐＦｃ’断片、Ｆｄ断片、およびＦｖ断片から選択された抗体断片をコードしていてもよい。一般に、抗体断片は当該技術分野において公知である。例えば、Ｆａｂ（“ｆｒａｇｍｅｎｔ，  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ”：抗原結合断片）断片は、重鎖および軽鎖それぞれの１つの定常のドメインと１つの可変ドメインとからなる。この２つの可変ドメインは、特定の抗原上でエピトープを結合する。上記２つの鎖はジスルフィド連鎖を介して連結されている。ｓｃＦｖ（“ｓｉｎｇｌｅ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ”：単鎖可変断片）断片は、例えば、通常軽鎖および重鎖の可変ドメインからなる。上記ドメインは、一般には、例えば１５個〜２５個のグリシン、プロリン、および／またはセリン残基からなるペプチドのようなポリペプチド連鎖である、人工的連鎖によって連結されている。
【００８８】
本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、前記治療上有効なタンパク質、抗原、または抗体の断片および／またはその変異体をコードしていてもよく、さらに、上記断片および／または変異体は、前記治療上有効なタンパク質、抗原、または抗体のうちの一つと、これらの治療上有効なタンパク質、抗原、または抗体をコードしている核酸配列またはアミノ酸配列の全長の少なくとも７０％、８０％、または８５％、好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％の配列相同性を有してもよい。好ましくは、上記断片および／または変異体は、完全長の治療上有効な天然タンパク質、抗原、または抗体と比較すると、同じ生物学的機能または特異的活性、例えば特異的結合能（例えば特定の抗原の特異的結合能）、触媒活性（例えば治療上有効なタンパク質の触媒活性）などを有する。この文脈において、ここに記載する抗体の「生物学的機能」には、さらに、抗原の中和、補体活性化、またはオプソニン化が含まれる。したがって、抗体は通常、細胞表面上の天然エピトープまたは自由抗原のいずれかを認識する。上記において定義された抗体は、抗原提示細胞と相互作用し、異なる防御メカニズムが惹起される。上記抗体は、一方で、標的とする細胞において、その細胞の自己破壊（アポトーシス）につながるシグナル伝達メカニズムを惹起できる。また他方で、上記抗体は、身体の免疫系の他の成分またはエフェクター細胞が認識して攻撃できるような方法で、細胞に標識をつけることができる。この攻撃メカニズムは、抗体依存性補体性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ＣＭＣ）および抗体依存性細胞性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ＡＤＣＣ）と称される。ＡＤＣＣにおいては、抗体によって標識された細胞に関わる免疫細胞によって抗体が認識され、直接的行動を介してまたは他のタイプの細胞を補充することによって、タグ付き細胞の死を引き起こす。ＣＭＣとは、通常複数の抗体が互いの近辺に存在するときに、異なる補体タンパク質が段階的に活性化されるプロセスであり、その結果、細胞は溶解するか、あるいは、他の免疫細胞をこの場所に引きつけてエフェクター細胞機能が発揮される。抗原の中和において、抗体は、抗原と結合して中和することができる。このような中和反応は次に、抗体遮断を引き起こす。こうすることによって、抗体は１つの抗原とだけ、または、二重特異性抗体の場合には２つの抗原とだけしか結合できない。特に、ｓｃＦｖ抗体断片は、抗体の定常ドメインの機能を有しないので、中和反応において有用である。補体活性化において補体タンパク質の複合化システムは、抗体Ｆｃ部とは独立した抗体との結合を介して賦活され得る。補体タンパク質の段階的活性化の最終生成物が作用する結果、細胞は溶解し、炎症環境が生じる。上記オプソニン化において、病原体またはその他の非細胞性粒子は、抗体の定常ドメインとの結合を介して、貪食細胞がアクセスできるようになる。あるいは、異物であると認識された細胞は、抗���依存性細胞性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ＡＤＣＣ）を介して溶解され得る。特に、ＮＫ細胞は、Ｆｃ受容体を賦活化することによって溶解能を示す。
【００８９】
２つのＲＮＡ配列（核酸またはアミノ酸）が相同である割合を決定するためには、配列を並べ、続いて双方を比較すればよい。したがって、例えば、第１の配列の配列に隙間を挿入して、第２の配列の対応する位置における成分を比較してもよい。第１の配列中のある位置が、第２の配列中のある位置の場合と同じ成分によって占められていれば、２つの配列はこの位置において相同である。２つの配列の相同割合は、相同である位置の個数を位置の総数で除算して得られる数値の関数である。
【００９０】
２つの配列の相同割合は数学的アルゴリズムを使って決定され得る。使用可能な数学的アルゴリズムの好例（ただしこの例に限定されるものではない）は、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，  ９０：５８７３〜５８７７のアルゴリズム、またはＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，  ２５：３３８９〜３４０２のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムがＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。本発明の複合化ＲＮＡのＲＮＡ配列とある程度まで相同な配列は、このプログラムで特定できる。
【００９１】
生理的配列と比較すると保存的な置換を含むアミノ酸配列をコードする（本発明の複合化ＲＮＡの）少なくとも１つのＲＮＡ分子は、特に変異体という用語で称される種類のＲＮＡ分子に属している。同じクラスに由来するコードされたアミノ酸を入れ替える置換を、保存的置換と称する。特に、これらのアミノ酸は、コードされたアミノ酸、コードされた脂肪性側鎖、正または負に帯電した側鎖、側鎖中の芳香族基、または側鎖（例えばヒドロキシル機能を有する側鎖）が水素架橋に入ることのできるコードされたアミノ酸である。このことは、例えば、極性を有する側鎖を持つアミノ酸が、同様に極性を有する側鎖を持つ別のアミノ酸によって置き替えられることを意味している。あるいは、例えば、疎水性側鎖を特徴とするアミノ酸が、同様に疎水性側鎖を有する別のアミノ酸によって置換される（例えばセリン（スレオニン）がスレオニン（セリン）によって置換される、またはロイシン（イソロイシン）がイソロイシン（ロイシン）によって置換される）ことを意味している。三次元構造を改変する原因とならない配列上の位置、または結合領域に影響しない配列上の位置においては、特に挿入および置換が可能である。挿入または除去による三次元構造の改変は、例えば、ＣＤスペクトル（ｃｉｒｃｕｌａｒ  ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ  ｓｐｅｃｔｒａ；円二色性スペクトル）を使って容易に決定され得る（Ｕｒｒｙ，  １９８５，  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，  Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ  ａｎｄ  ＯＲＤ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ｉｎ：Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．），  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）。
【００９２】
免疫活性化ＲＮＡ
第３の実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、免疫活性化ＲＮＡであってもよい。こうすることによって、免疫活性化ＲＮＡは、上記において定義された式（Ｉ）によって表わされる本発明のオリゴペプチドでＲＮＡを複合化する以前に、すでに免疫活性効果を示す。または、さらに好ましくは、ここで使用される上記ＲＮＡの免疫活性効果は、上記において定義された式（Ｉ）によって表わされる本発明のオリゴペプチドでＲＮＡを複合化することによって、亢進またはさらに誘引される。本発明の複合化ＲＮＡの免疫活性化ＲＮＡは、任意のＲＮＡ、例えば上記において定義されたコーディングＲＮＡであってもよい。好ましくは、上記免疫活性化ＲＮＡは、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、または部分的二本鎖ＲＮＡであり、さらに好ましくは、一本鎖ＲＮＡ、および／または環状ＲＮＡまたは直鎖ＲＮＡ、さらに好ましくは直鎖ＲＮＡである。さらに好ましくは、上記免疫活性化ＲＮＡは、（直鎖）一本鎖ＲＮＡである。一層好ましくは、上記免疫活性化ＲＮＡは、（（直鎖）一本鎖）メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。免疫活性化ＲＮＡは、さらに、上記において定義された低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチドとしても生じる。
【００９３】
ここで使用される免疫活性化ＲＮＡは、さらに、天然にみられるか、または合成によって調整され、かつ免疫応答を誘引する任意のクラスのＲＮＡ分子から選択されてもよい。この文脈において、免疫応答は様々な仕組みで現れる。適切な免疫応答にとって大きな要素は、異なるＴ細胞小グループの活性化である。Ｔリンパ球は通常、ヘルパーＴ１（Ｔｈ１）細胞とヘルパーＴ２（Ｔｈ２）細胞の２つの小グループに分類され、免疫系はこの２つの小グループを使って、細胞内（Ｔｈ１）病原体（例えば抗原）および細胞外（Ｔｈ２）病原体（例えば抗原）を破壊できる。上記２つのＴｈ細胞グループは、それぞれが生成するエフェクタータンパク質（サイトカイン）のパターンにおいて異なる。したがって、Ｔｈ１細胞は、マクロファージと細胞傷害性Ｔ細胞の賦活によって細胞性免疫応答を補助する。一方、Ｔｈ２細胞は、Ｂ細胞を活性化して血漿細胞に転換すること、および（例えば抗原に対抗する）抗体を形成することによって、体液性免疫応答を促進する。したがって、免疫応答においてＴｈ１／Ｔｈ２比は非常に重要である。本発明の関連においては、免疫応答のＴｈ１／Ｔｈ２比は、好ましくは細胞性応答（Ｔｈ１応答）側に向かってシフトしていて、その結果、細胞性免疫応答が誘引される。一例としては、免疫系はトール様受容体（ＴＬＲ）のリガンドによって賦活される。ＴＬＲとは、病原体関連分子パターン（ｐａｔｈｏｇｅｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎ；ＰＡＭＰ）を認識する、高度に保存的なパターン認識受容体（ｐａｔｔｅｒｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＰＲＲ）ポリペプチドのファミリーである。ＴＬＲは、さらに、哺乳類の先天的免疫において重要な役割を果たす。現在少なくとも１３のファミリーメンバーが確認され、それぞれＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３（トール様受容体：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、およびＴＬＲ１３）と称されている。さらに、複数の特異的ＴＬＲリガンドが確認されている。例えば、非メチル化細菌性ＤＮＡおよびその合成類似体（ＣｐＧ  ＤＮＡ）はＴＬＲ９のリガンドであることが見出されている（Ｈｅｍｍｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０−５；Ｂａｕｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｐｒｏｃ  ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ  ＵＳＡ  ９８，  ９２３７−４２）。さらに、あるＴＬＲに対するリガンドが、ある核酸分子を含んでいること、およびあるタイプのＲＮＡが、配列から独立してまたは配列に対して依存的に免疫活性を有していて、これらの各種免疫活性化ＲＮＡが例えばＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、または細胞内受容体（例えばＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ−５など）を活性化することも報告されている（Ｌｉｐｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｃｅｒｔａｉｎ  Ｇ，  Ｕ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｌｉｇｏｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｂｙ  ａｃｔｉｎｇ  ｖｉａ  ＴＬＲ７  ａｎｄ  ＴＬＲ８（ＷＯ  ０３／０８６２８０を参照））。Ｌｉｐｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．に記載の免疫活性Ｇ、Ｕ含有オリゴリボヌクレオチドは、リボゾームＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、およびウイルスＲＮＡを含むＲＮＡ由来のものであると考えられる。
【００９４】
本発明によれば、例えば、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式Ｉ）によって表わされるキャリアペプチドで複合化された、上記において定義された任意のＲＮＡ（分子）は、（具体的な長さ、一本鎖もしくは二本鎖の状態、修飾、および／またはヌクレオチド配列には無関係に）免疫活性を有する、つまり免疫応答を亢進することが見出された。それゆえ、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式Ｉ）によって表わされるキャリアペプチドで複合化され、上記において定義されたＲＮＡは、特定の治療に対して適しており、かつ、そうすることが望ましいのであれば、（非特異的）免疫活性化を亢進するために使用できる。したがって、式（Ｉ）によって表わされるペプチドで任意のＲＮＡを複合化することで免疫活性化効果を奏することは、本発明の複合化ＲＮＡが内在する特性であると言える。
【００９５】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つの（免疫活性）ＲＮＡ（分子）は、それゆえ、ＴＬＲのリガンドを表わすおよび／またはＴＬＲのリガンドをコードするＲＮＡ配列（ただしこれに限定されるものではない）を含む、免疫活性を有することが知られている任意のＲＮＡ配列を含んでいる。なお、前記ＴＬＲのリガンドは、好ましくはＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３からなるファミリーから選択され、さらに好ましくはＴＬＲ７およびＴＬＲ８、つまりＲＮＡ（例えばＲＩＧ−ＩまたはＭＡＤ−５など）またはその他の任意の免疫活性化ＲＮＡ配列の細胞内受容体のリガンドから選択される（例えば、Ｍｅｙｌａｎ，  Ｅ．、  Ｔｓｃｈｏｐｐ，  Ｊ．（２００６）、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＲＮＡ  ｈｅｌｉｃａｓｅｓ：ｔｗｏ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ｗａｙｓ  ｔｏ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ２２，  ５６１〜５６９を参照）。さらに、免疫活性化ＲＮＡとして使用されるＲＮＡ分子（のクラス）は、免疫応答を誘発可能なその他の任意のＲＮＡを含んでいてもよい。このような免疫活性化ＲＮＡとしては、リボゾームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、およびウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）などがあげられるが、これに限定されるものではない。
【００９６】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つの（免疫活性）ＲＮＡ（分子）として使用されるさらに他のＲＮＡ分子（のクラス）は、例えば式（ＩＩａ）
ＧｌＸｍＧｎ
によって表わされるＲＮＡ分子を含んでいてもよいが、これに限定されるものではない。ただし、上記式中、Ｇはグアノシン、ウラシル、またはグアノシンの類似体もしくはウラシルの類似体であり、Ｘはグアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシン、またはこれらのヌクレオチドの類似体であり、ｌは１〜４０の整数であって、ｌ＝１の場合のＧはグアノシンまたはその類似体であって、ｌ＞１の場合のヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシンまたはその類似体であり、ｍは３以上の整数であって、ｍ＝３の場合のＸはウラシルまたはその類似体であって、ｍ＞３の場合のウラシルまたはその類似体が少なくとも３つ連続して起こり、ｎは１〜４０の整数であって、ｎ＝１の場合のＧはグアノシンまたはその類似体であって、ｎ＞１の場合のヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシンまたはその類似体である。
【００９７】
また、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つの（免疫活性）ＲＮＡ（分子）として使用されるさらに他のＲＮＡ分子（のクラス）は、例えば式（ＩＩｂ）
ＣｌＸｍＣｎ
によって表わされるＲＮＡ分子を含んでいてもよいが、これに限定されるものではない。ただし、上記式中、Ｃはシトシン、ウラシル、またはシトシンの類似体もしくはウラシルの類似体であり、Ｘはグアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシン、またはこれらのヌクレオチドの類似体であり、ｌは１〜４０の整数であって、ｌ＝１の場合のＣはシトシンまたはその類似体であって、ｌ＞１の場合のヌクレオチドの少なくとも５０％はシトシンまたはその類似体であり、ｍは３以上の整数であって、ｍ＝３の場合のＸはウラシルまたはその類似体であって、ｍ＞３の場合のウラシルまたはその類似体が少なくとも３つ連続して起こり、ｎは１〜４０の整数であって、ｎ＝１の場合のＣはシトシンまたはその類似体であって、ｎ＞１の場合のヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシンまたはその類似体である。
【００９８】
好ましくは、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用される免疫活性化ＲＮＡ分子は、一般的に本発明の複合化ＲＮＡのＲＮＡ分子について上記において定義された長さを有し、さらに好ましくは５〜５０００、５００〜５０００、さらに好ましくは１０００〜５０００、あるいは５〜１０００、５〜５００、５〜２５０、５〜１００、５〜５０、さらに好ましくは５〜３０ヌクレオチドの長さを有する。
【００９９】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用される少なくとも１つの免疫活性化ＲＮＡは、上記ＤＮＡの免疫活性特性を亢進するために、さらに、修飾されてもよく、好ましくは“化学的に修飾”されてもよい。「化学的に修飾」という用語は、本発明に係る免疫活性化ＲＮＡとして使用されるＲＮＡが、天然のＲＮＡ種と比較すると、個々のまたはいくつかの原子、または原子グループが置換、挿入、または除去によって修飾されることを意味する。
【０１００】
好ましくは、上記ＲＮＡの化学的修飾には、天然のヌクレオチドの少なくとも１つの類似体を含む。本発明において使用され得るヌクレオチド類似体は、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、およびシトシンの類似体であるが、ここに列挙したものが全てではない。上記修飾は、塩基、リボース類、および／またはリン酸塩主鎖類の修飾を指す。この文脈において、グアノシン、ウラシル、アデノシン、およびシトシンの類似体としては、天然に生じるまたは天然に生じない任意のグアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、またはシトシンを化学的に、例えばアセチル化、メチル化、ヒドロキシル化などによって修飾したものが例示できるが、この例示はいかなる限定を示唆するものではなく、また、具体的には以下に列挙するものを含む。すなわち、１−メチル−アデノシン、１−メチル−グアノシン、１−メチル−イノシン、２，２−ジメチル−グアノシン、２，６−ジアミノプリン、２’−アミノ−２’−デオキシアデノシン、２’−アミノ−２’−デオキシシチジン、２’−アミノ−２’−デオキシグアノシン、２’−アミノ−２’−デオキシウリジン、２−アミノ−６−クロロプリンリボシド、２−アミノプリン−リボシド、２’−アラアデノシン、２’−アラシチジン、２’−アラウリジン、２’−アジド−２’−デオキシアデノシン、２’−アジド−２’−デオキシシチジン、２’−アジド−２’−デオキシグアノシン、２’−アジド−２’−デオキシウリジン、２−クロロアデノシン、２’−フルオロ−２’−デオキシアデノシン、２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン、２’−フルオロ−２’−デオキシグアノシン、２’−フルオロ−２’−デオキシウリジン、２’−フルオロチミジン、２−メチル−アデノシン、２−メチル−グアノシン、２−メチル−チオ−Ｎ６−イソペネニル−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシアデノシン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシシチジン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシグアノシン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシウリジン、２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチルイノシン、２’−Ｏ−メチル偽ウリジン、２−チオシチジン、２−チオ−シトシン、３−メチル−シトシン、４−アセチル−シトシン、４−チオウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）−ウラシル、５，６−ジヒドロウリジン、５−アミノアリルシチジン、５−アミノアリル−デオキシ−ウリジン、５−ブロモウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−カルボキシメチルアモノメチル−ウラシル、５−クロロ−アラ−シトシン、５−フルオロ−ウリジン、５−ヨードウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン、５−メトキシ−ウリジン、５−メチル−２−チオ−ウリジン、６−アザシチジン、６−アザウリジン、６−クロロ−７−デアザ−グアノシン、６−クロロプリンリボシド、６−メルカプト−グアノシン、６−メチル−メルカプトプリン−リボシド、７−デアザ−２’−デオキシ−グアノシン、７−デアザアデノシン、７−メチル−グアノシン、８−アザアデノシン、８−ブロモ−アデノシン、８−ブロモ−グアノシン、８−メルカプト−グアノシン、８−オキソグアノシン、ベンズイミダゾール−リボシド、βＤ−マンノシル−ケオシン、ジヒドロ−ウラシル、イノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、Ｎ６−（［６−アミノヘキシル］カルバモイルメチル）−アデノシン、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン、Ｎ６−メチル−アデノシン、Ｎ７−メチル−キサントシン、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ピューロマイシン、ケオシン、ウラシル−５−オキシ酢酸、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウィブトキソシン、キサントシン、およびキシロ−アデノシンである。これらの類似体の調製法は当業者にとって公知であり、例えば、米国特許第４，３７３，０７１号明細書、米国特許第４，４０１，７９６号明細書、米国特許第４，４１５，７３２号明細書、米国特許第４，４５８，０６６号明細書、米国特許第４，５００，７０７号明細書、米国特許第４，６６８，７７７号明細書、米国特許第４，９７３，６７９号明細書、米国特許第５，０４７，５２４号明細書、米国特許第５，１３２，４１８号明細書、米国特許第５，１５３，３１９号明細書、米国特許第５，２６２，５３０号明細書、および米国特許第５，７００，６４２号明細書に記載されている。上述の類似体の場合、本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用される免疫活性化ＲＮＡ配列の免疫原性を亢進する類似体、および／または上記免疫活性化ＲＮＡにさらに導入された修飾と干渉しない類似体に対して、特定の優先度が与えられる。
【０１０１】
ｓｉＲＮＡ
第４の実施形態では、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、ｓｉＲＮＡの形態であってもよい。ｓｉＲＮＡは、特にＲＮＡ干渉現象との関連において興味が持たれる。ＲＮＡ干渉現象は免疫学的な研究の過程において注目された。最近、ＲＮＡに基づいた防御メカニズムが発見された。この防御メカニズムは、菌界ならびに植物界および動物界の双方において起こり、”ゲノムの免疫系”として作用する。このシステムは、もともと様々な種において互いに独立して記載され、線虫（Ｃ．  ｅｌｅｇａｎｓ）における記載が最初であった。その後、プロセスの根底にあるメカニズムが同一であると認識できたのである。つまり、植物におけるＲＮＡ媒介ウイルス抵抗性、植物における転写後遺伝子サイレンシング（ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ；ＰＴＧＳ）、および真核生物におけるＲＮＡ干渉は、共通の過程に基づいている。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ手法は、二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）に基づいており、遺伝子発現の配列特異的な抑制を誘発する（Ｚａｍｏｒｅ（２００１）、Ｎａｔ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．９：７４６〜７５０；Ｓｈａｒｐ（２００１）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  ５：４８５〜４９０：Ｈａｎｎｏｎ（２００２）  Ｎａｔｕｒｅ  ４１：２４４〜２５１）。哺乳類細胞への高分子ｄｓＲＮＡのトランスフェクションでは、タンパク質キナーゼＲおよびＬが賦活化されることによって、非特異的効果、例えば、インターフェロン応答が生じる（Ｓｔａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６７：２２７〜２６４；Ｈｅ  ａｎｄ  Ｋａｔｚｅ（２００２）  Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５：９５〜１１９）。例えば２１マーから２３マーのように、より低分子のいわゆるｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）が使用される場合には、３０ｂｐより低分子であるｓｉＲＮＡでは非特異的効果が誘発されないので、これらの非特異的効果は避けられる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４〜４９８）。最近では、ｄｓＲＮＡ分子がｉｎ  ｖｉｖｏでも使用されている（ＭｃＣａｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），  Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：３８〜３９；Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２０：１００６〜１０１０；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：２４３〜２４７）。したがって、本発明に係る複合化ＲＮＡのために使用されるｓｉＲＮＡは、通常、約８〜３０のヌクレオチド、好ましくは１７〜２５、一層好ましくは２０〜２５、最も好ましくは２１〜２３ヌクレオチドを有する（一本鎖または）二本鎖ＲＮＡ配列、好ましくは二本鎖ＲＮＡ配列を含んでいる。原則的に、上述のＲＮＡ配列、例えば（ｍ）ＲＮＡ配列のコード領域で発生し、かつ、１７〜２９、好ましくは１９〜２５、最も好ましくは２１〜２３塩基対の長さを有する、全てのセクションが、ｓｉＲＮＡにとっては標的配列となる。同様に、ｓｉＲＮＡは、コード領域には存在しない、特にＲＮＡの５’非コード領域に存在する、上記（治療関連）タンパク質または抗原のヌクレオチ��配列を対象とし、したがって、例えば調整機能を有するＲＮＡの非コード領域に対しても向けられる。ｓｉＲＮＡの標的配列は、したがって、ＲＮＡの翻訳領域および／もしくは非翻訳領域、ならびに／または制御因子の領域に存在する。ｓｉＲＮＡの標的配列はさらに、非翻訳配列および翻訳配列のオーバーラップ領域に存在する。特に、上記標的配列には、ＲＮＡのコード領域の開始トリプレットから少なくともヌクレオチド１つ上流のヌクレオチドが含まれる。
【０１０２】
アンチセンスＲＮＡ
第５の実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、アンチセンスＲＮＡであってもよい。本発明の文脈において、アンチセンスＲＮＡは、好ましくは、テンプレート、つまりＤＮＡの繋がりではなく、上記コーディングに基づいて転写される（一本鎖）ＲＮＡ分子であり、こうすることによってセンスＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）に対して相補的になる。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるアンチセンスＲＮＡは、通常、センスＲＮＡ分子とアンチセンスＲＮＡ分子との間で二本鎖を形成し、それゆえ、ｍＲＮＡの翻訳をブロックできる。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるアンチセンスＲＮＡは、（治療関連）タンパク質または抗原（例えば上記のもの）をコードするｍＲＮＡ配列の任意の部分を対象とすることによって（ｍＲＮＡ配列の任意の部分に対して相補的にすることによって）、コードされているタンパク質の翻訳が低減／抑制されるのであれば、上記任意の部分を対象とする（相補的にする）ことができる。したがって、標的とされるｍＲＮＡ上にある、アンチセンスＲＮＡの標的配列は、ｍＲＮＡの翻訳領域および／または非翻訳領域、例えばｍＲＮＡ制御因子の領域、特に調整機能を実現しているＲＮＡの５’非コード領域に位置している。標的とされるｍＲＮＡ上にある、アンチセンスＲＮＡの標的配列は、さらに、標的ｍＲＮＡの非翻訳（コード）配列および翻訳（コード）配列に対して部分的に相補的な領域をその配列で被覆することによって、アンチセンスＲＮＡがｍＲＮＡに結合するように生成される。特に、上記アンチセンスＲＮＡは、標的ｍＲＮＡのコード領域の開始トリプレットから少なくともヌクレオチド１つ上流のヌクレオチドによって、標的ｍＲＮＡ配列に対して相補的であってもよい。好ましくは、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるアンチセンスＲＮＡは、一般的に（本発明の複合化ＲＮＡの）ＲＮＡ分子について上記において定義された長さを有する。通常、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるアンチセンスＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの断片である。さらに詳細に記載すると、上記アンチセンスＲＮＡは、さらに好ましくは５〜５０００、５００〜５０００、さらに好ましくは１０００〜５０００、あるいは５〜１０００、５〜５００、５〜２５０、５〜１００、５〜５０、または５〜３０、あるいは一層好ましくは２０〜１００、２０〜８０、または２０〜６０ヌクレオチドの長さを有する。
【０１０３】
ＲＮＡの修飾
一実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡ、特に低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド、コーディングＲＮＡ、免疫活性化ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボスイッチ、リボザイム、またはアプタマーは、（上記ＲＮＡの、例えば特定の治療用途における可能性、長さ、および／または配列には無関係に）修飾ＲＮＡとして使用してもよく、任意の修飾（特に以下に開示する修飾）が、（任意に組み合わせて、またはそのままで）上記において定義されたＲＮＡ（分子）に導入されてもよい。ただし、特定のタイプのＲＮＡ（例えばコーディングＲＮＡ）には適した種類の修飾もあれば、任意のＲＮＡ分子に対して、例えば本発明において定義されるように特定のＲＮＡの種類に制限されることなく適用される修飾もある。したがって、本発明の目的において使用するために望ましい特定の効果または複合的効果を実現するために、ＲＮＡの修飾が導入されてもよい。したがって、例えば劣化に対してＲＮＡを安定させることによって、そのトランスフェクション効率を亢進し、翻訳効率を改善し、免疫原としての可能性を高めるように、および／または治療用途における可能性を高める（例えばサイレンシング特性またはアンチセンス特性を高める）ように修飾が設計されてもよい。本発明の複合化ＲＮＡの成分としての修飾されたＲＮＡによって、少なくとも１つの、さらに好ましくは少なくとも２つの機能的性質が同時に改善できて、例えばＲＮＡが安定化し、治療用途における可能性または免疫原としての可能性が改善すれば特に好ましい。
【０１０４】
一般に、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用するＲＮＡを安定化し、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるその半減期を延ばすことは主要な目的である。好ましくは、ｉｎ  ｖｉｖｏ条件下における修飾されたＲＮＡの半減期は（修飾されていないＲＮＡとの比較において）、少なくとも２０％、さらに好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、一層好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、または２００％長い。修飾によって実現する安定化によって、修飾されたｍＲＮＡの半減期が、修飾されていないＲＮＡとの比較において、少なくとも５分、１０分、１５分、３０分、さらに好ましくは少なくとも６０分延びることがある。
【０１０５】
一実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）、好ましくはコーディングＲＮＡ、例えばｍＲＮＡは、ＲＮＡの例えばコード領域のＧ／Ｃ含有量を調整（修飾）することによって安定化されてもよい。本発明の特に好適な実施形態では、（本発明の複合化ＲＮＡの）ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量が変更される。具体的には、対応する野性型ＲＮＡ、つまり修飾されていないＲＮＡのコード領域と比較して、Ｇ／Ｃ含有量が多くなるように変更される。修飾されたＲＮＡにコードされたアミノ酸配列は、好ましくは、対応する野性型ＲＮＡによってコードされたアミノ酸配列から変更されない。
【０１０６】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡのこの修飾は、翻訳される任意のＲＮＡのコード配列が、そのＲＮＡの効率的な翻訳にとって重要であるという事実に基づいている。特に、Ｇ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含有量が多い配列は、Ａ（アデノシン）／Ｕ（ウラシル）含有量が多い配列より安定している。したがって、本発明によれば、ＲＮＡのコドンを野性型ＲＮＡから変更し、一方で、翻訳されたアミノ酸配列は保持し、Ｇ／Ｃヌクレオチド含有量を増加させる。複数のコドンが全く同一のアミノ酸をコードする（いわゆる遺伝子コードの）ということに関連して、安定性のために最も好ましいコドン（いわゆる代替コドンの使用）が決定される。
【０１０７】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡによってコードされるアミノ酸における野性型配列との比較において、上記ＲＮＡ配列の修飾には様々な可能性がある。もっぱらＧまたはＣヌクレオチドを含有するコドンによってコードされたアミノ酸の場合、コドンの修飾の必要はない。したがって、Ｐｒｏ（ＣＣＣまたはＣＣＧ）、Ａｒｇ（ＣＧＣまたはＣＧＧ）、Ａｌａ（ＧＣＣまたはＧＣＧ）、およびＧｌｙ（ＧＧＣまたはＧＧＧ）のコドンは、ＡもＵも存在しないので修飾の必要がない。
【０１０８】
一方、Ａヌクレオチドおよび／またはＵヌクレオチドを含有するコドンは、同一アミノ酸をコードするが、Ａおよび／またはＵを含有しない他のコドンに置換することによって修飾される。具体例としては以下のコドンがあげられる。すなわち、
Ｐｒｏのコドンは、ＣＣＵまたはＣＣＡからＣＣＣまたはＣＣＧに変更すればよい。
Ａｒｇのコドンは、ＣＧＵ、ＣＧＡ、ＡＧＡ、またはＡＧＧからＣＧＣまたはＣＧＧに変更すればよい。
Ａｌａのコドンは、ＧＣＵまたはＧＣＡからＧＣＣまたはＧＣＧに変更すればよい。
Ｇｌｙのコドンは、ＧＧＵまたはＧＧＡからＧＧＣまたはＧＧＧに変更すればよい。
【０１０９】
また、コドンからＡヌクレオチドまたはＵヌクレオチドを取り除くことができない場合もあるが、Ａヌクレオチドおよび／またはＵヌクレオチドの含有量がより少ないコドンを使用することによってＡおよびＵの含有量を減らすことは可能である。具体例としては以下のコドンがあげられる。
Ｐｈｅのコドンは、ＵＵＵからＵＵＣに変更すればよい。
Ｌｅｕのコドンは、ＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵ、またはＣＵＡからＣＵＣまたはＣＵＧに変更すればよい。
Ｓｅｒのコドンは、ＵＣＵ、ＵＣＡ、またはＡＧＵからＵＣＣ、ＵＣＧ、またはＡＧＣに変更すればよい。
Ｔｙｒのコドンは、ＵＡＵからＵＡＣに変更すればよい。
Ｃｙｓのコドンは、ＵＧＵからＵＧＣに変更すればよい。
Ｈｉｓのコドンは、ＣＡＵからＣＡＣに変更すればよい。
Ｇｌｎのコドンは、ＣＡＡからＣＡＧに変更すればよい。
Ｉｌｅのコドンは、ＡＵＵまたはＡＵＡからＡＵＣに変更すればよい。
Ｔｈｒのコドンは、ＡＣＵまたはＡＣＡからＡＣＣまたはＡＣＧに変更すればよい。
Ａｓｎのコドンは、ＡＡＵからＡＡＣに変更すればよい。
Ｌｙｓのコドンは、ＡＡＡからＡＡＧに変更すればよい。
Ｖａｌのコドンは、ＧＵＵまたはＧＵＡからＧＵＣまたはＧＵＧに変更すればよい。
Ａｓｐのコドンは、ＧＡＵからＧＡＣに変更すればよい。
Ｇｌｕのコドンは、ＧＡＡからＧＡＧに変更すればよい。
停止コドンＵＡＡは、ＵＡＧまたはＵＧＡに変更すればよい。
【０１１０】
一方で、Ｍｅｔ（ＡＵＧ）およびＴｒｐ（ＵＧＧ）のコドンの場合は、配列は全く変更できない。
【０１１１】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡのＧ／Ｃ含有量を、その特定の野性型ＲＮＡ（つまりもとの配列）との比較において高めるために、上で列挙した置換は、個々に使用しても、または任意の可能な組み合わせで使用してもかまわない。こうすることによって、例えば、野性型配列において発生するＴｈｒのコドンが全てＡＣＣ（またはＡＣＧ）に変更され得る。ただし、例えば、上記の可能な置換を組み合わせて使用することが好ましい。具体例としては、
もとの配列（野性型ＲＮＡ）においてＴｈｒをコードしているコドンを全てＡＣＣ（またはＡＣＧ）に置換し、かつ、もともとＳｅｒをコードしているコドンを全てＵＣＣ（またはＵＣＧまたはＡＧＣ）に置換する。
もとの配列においてＩｌｅをコードしているコドンを全てＡＵＣに置換し、もともとＬｙｓをコードしているコドンを全てＡＡＧに置換し、かつ、もともとＴｙｒをコードしているコドンを全てＵＡＣに置換する。
もとの配列においてＶａｌをコードしているコドンを全てＧＵＣ（またはＧＵＧ）に置換し、もともとＧｌｕをコードしているコドンを全てＧＡＧに置換し、もともとＡｌａをコードしているコドンを全てＧＣＣ（またはＧＣＧ）に置換し、かつ、もともとＡｒｇをコードしているコドンを全てＣＧＣ（またはＣＧＧ）に置換する。
もとの配列においてＶａｌをコードしているコドンを全てＧＵＣ（またはＧＵＧ）に置換し、もともとＧｌｕをコードしているコドンを全てＧＡＧに置換し、もともとＡｌａをコードしているコドンを全てＧＣＣ（またはＧＣＧ）に置換し、もともとＧｌｙをコードしているコドンを全てＧＧＣ（またはＧＧＧ）に置換し、かつ、もともとＡｓｎをコードしているコドンを全てＡＡＣに置換する。
もとの配列においてＶａｌをコードしているコドンを全てＧＵＣ（またはＧＵＧ）に置換し、もともとＰｈｅをコードしているコドンを全てＵＵＣに置換し、もともとＣｙｓをコードしているコドンを全てＵＧＣに置換し、もともとＬｅｕをコードしているコドンを全てＣＵＧ（またはＣＵＣ）に置換し、もともとＧｌｎをコードしているコドンを全てＣＡＧに置換し、かつ、もともとＰｒｏをコードしているコドンを全てＣＣＣ（またはＣＣＧ）に置換する、などの例があげられる。
【０１１２】
好ましくは、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量は、野性型ＲＮＡの、タンパク質をコードするコード領域のＧ／Ｃ含有量との比較において、少なくとも７％、さらに好ましくは少なくとも１５％、特に好ましくは少なくとも２０％増加させる。特定の実施形態によれば、タンパク質をコードしている領域において、または野性型ＲＮＡ配列の全体において、置換可能コドンの少なくとも６０％、さらに好ましくは少なくとも７０％、一層好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９５％、または１００％に達する割合が置換され、こうすることによって上記配列のＧ／Ｃ含有量を増加させる、または最大化することができる。
【０１１３】
この文脈において、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡのＧ／Ｃ含有量を、野性型配列との比較において最大値（つまり置換可能コドンの１００％）まで、特にタンパク質をコードしている領域において増加させることは特に好適である。
【０１１４】
本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡの別の好ましい修飾は、上記翻訳効率が細胞中のｔＲＮＡの発生頻度の変化によっても決まるという知見に基づいている。したがって、いわゆる「希少コドン」がＲＮＡ配列において高い割合で存在していれば、対応する修飾されたＲＮＡ配列は、比較的“頻出”するｔＲＮＡをコードするコドンが存在する場合に比べて、大幅に低い割合で翻訳される。
【０１１５】
本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡにおいて、タンパク質をコードする領域は、細胞内において比較的希少なｔＲＮＡをコードする野性型配列の少なくとも１つのコドンを、細胞内において比較的頻出させ、上記比較的希少なｔＲＮＡと同じアミノ酸を搬送するｔＲＮＡをコードするコドンと交換するように、野性型ＲＮＡの対応する領域との比較において修飾される。この修飾によって、ＲＮＡ配列は、頻繁に生じるｔＲＮＡが利用可能なコドンが挿入されるように修飾される。換言すれば、本発明によれば、この修飾によって、細胞内において比較的希少なｔＲＮＡをコードする野性型配列の全てのコドンが、細胞内において比較的頻出し、上記比較的希少なｔＲＮＡと同じアミノ酸をそれぞれのコドンの場合において担うｔＲＮＡをコードするコドンとそれぞれのコドンの場合において交換される。
【０１１６】
どのｔＲＮＡが細胞内において比較的頻繁に生じるのか、また、その一方で、どのｔＲＮＡの発生が比較的希少なのかは、当業者にとって公知である。例えば、Ａｋａｓｈｉ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｄｅｖ．  ２００１，  １１（６）：６６０〜６６６．に記載されている。最も頻繁に発生するｔＲＮＡを特定のアミノ酸に対して使用するコドン、例えば、（ヒト）細胞内において最も頻繁に生じるｔＲＮＡを使用するＧｌｙコドンが、特に好ましい。
【０１１７】
本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡにおいて増加させた、特に最大化した配列上のＧ／Ｃ含有量を、ＲＮＡのコード領域によってコードされたタンパク質のアミノ酸配列を修飾せずに、“頻出”するコドンと関連付けることが特に好適である。この好適な実施形態によって、特に効率よく翻訳、安定化された（修飾された）、本発明に係る複合化ＲＮＡのＲＮＡを提供することが可能になる。
【０１１８】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）としてここで使用されるＲＮＡのＧ／Ｃ含有量（増加させたＧ／Ｃ含有量；ｔＲＮＡの交換）の決定は、ＷＯ０２／０９８４４３に開示されているコンピュータプログラムを使って実施され得る。なお、ＷＯ０２／０９８４４３の−開示内容は、その全体が本発明の開示内容に含まれるものとする。このコンピュータプログラムを使って、任意の所望のＲＮＡのヌクレオチド配列が、細胞内においてできるだけ頻繁に生じるｔＲＮＡをコードするコドンの使用と組み合わせて、最大Ｇ／Ｃ含有量が結果的に達成できるように、遺伝子コード、またはその縮重性を手かがりにして修飾され得る。
【０１１９】
ＲＮＡ（分子）によってコードされたアミノ酸配列は、好ましくは、配列との比較において修飾されない。あるいは、Ｇ／Ｃ含有量だけを変更することも可能であり、またはもとの配列との比較においてコドンの使用法だけを変更することも可能である。ＷＯ０２／０９８４４３には。Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ  ６．０のソースコード（開発環境としては、マイクロソフト社製Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｔｕｄｉｏ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ  ６．０を、サービスパック３とともに使用）も記載されている。
【０１２０】
本発明の別の好適な実施形態では、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）のリボゾーム結合部位の環境中におけるＡ／Ｕ含有量は、その特定の野性型ＲＮＡのリボゾーム結合部位の環境におけるＡ／Ｕ含有量との比較すると増加している。この修飾（リボゾーム結合部位周囲におけるＡ／Ｕ含有量の増加）によって、リボゾームが修飾されたＲＮＡに結合する効率が上昇する。リボゾームがリボゾーム結合部位（Ｋｏｚａｋ配列、つまりＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号３３）であり、該ＡＵＧが開始コドンを形成する）に効果的に結合すると、次に、修飾されたＲＮＡが効率的に翻訳されるという効果を奏する。
【０１２１】
本発明のさらに別の実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、潜在的に不安定化要素となる可能性のある配列因子が修飾されてもよい。特に、ＲＮＡのコード領域、および／または５’非翻訳領域および／または３’非翻訳領域は、不安定化配列因子を含有しないように、特定の野性型ＲＮＡとの比較において修飾されてもよく、上記ＲＮＡ（分子）にコードされたアミノ酸配列は、好ましくは特定の野性型ＲＮＡとの比較において修飾されない。例えば、真核生物のＲＮＡの配列において不安定化配列因子（ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ；ＤＳＥ）が発生し、上記不安定化配列因子にシグナルタンパク質が結合して、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＲＮＡの酵素分解を調整することは公知である。したがって、ＲＮＡ（分子）をさらに安定化するためには、タンパク質をコードする領域には不安定化配列因子が全く含まれない、またはほぼ含まれないように、野性型ＲＮＡの対応領域との比較における１つ以上の変更が、上記タンパク質をコードする領域において必要に応じて実施される。本発明によれば、非翻訳領域（３’−ＵＴＲおよび／または５’−ＵＴＲ）に存在するＤＳＥは、さらに、上記の修飾によって、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）から取り除かれてもよい。
【０１２２】
この不安定化配列としては、例えば、多数の不安定ＲＮＡの３’−ＵＴＲセクションにおいて生じるＡＵリッチ配列（ＡＵ−ｒｉｃｈ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ＡＵＲＥＳ）があげられる（Ｃａｐｕｔ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９８６，  ８３：１６７０〜１６７４）。本発明に係る複合化ＲＮＡのＲＮＡは、したがって、好ましくは、上記ＲＮＡがこのような不安定化配列を含有しないように、野性型ＲＮＡとの比較において修飾される。このことは、起こり得るエンドヌクレアーゼによって認識される配列モチーフ、例えば、トランスフェリン受容体をコードする遺伝子の３’−ＵＴＲ部分に含有されるＧＡＡＣＡＡＧという配列にも適用できる（Ｂｉｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １９９４，  １３：１９６９〜１９８０）。これらの配列モチーフは、本発明によれば、好ましくは本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）において除去されてもよい。
【０１２３】
本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、５’Ｃａｐ構造を有していてもよい。本発明において使用され得るＣａｐ構造の例としては、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ、（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、およびＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇなどがあげられる。
【０１２４】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の安定性を亢進する別の修飾は、５’端または３’端におけるＲＮＡの伸長、通常は、１０〜２００ヌクレオチドの長さ分のホモヌクレオチド伸長に基づいている。これらの伸長は、特にＲＮＡがｍＲＮＡとして提供されている場合、通常約１０〜２００アデノシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜１００アデノシンヌクレオチド、さらに好ましくは約２０〜７０アデノシンヌクレオチド、一層好ましくは約２０〜６０アデノシンヌクレオチドのポリＡ尾部を、３’末端に含んでいてもよい。この構成の替わりに、あるいは、この構成に加えて、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、特にＲＮＡがｍＲＮＡとして提供されている場合、通常約１０〜２００シトシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜１００シトシンヌクレオチド、さらに好ましくは約２０〜７０シトシンヌクレオチド、一層好ましくは約２０〜６０、または１０〜４０シトシンヌクレオチドに達するポリＣ尾部を、３’末端に含有してもよい。
【０１２５】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）において生じる可能性のある別の修飾は、特にＲＮＡがｍＲＮＡとして提供されている場合、好ましくは少なくとも１つのＩＲＥＳおよび／または少なくとも１つの５’および／または３’末端の安定化配列に関する。本発明によれば、１つ以上のいわゆるＩＲＥＳ（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅ；配列内リボソーム進入部位）がＲＮＡに挿入されてもよい。ＩＲＥＳは、それゆえ、唯一のリボゾーム結合部位として機能するが、リボゾームによって互いに独立して翻訳される複数のタンパク質をコードするＲＮＡ（多シストロン性ＲＮＡ）を提供するためにもさらに役立つ。本発明において使用され得るＩＲＥＳ配列の例としては、ピコルナウイルス（例えばＦＭＤＶ）、ペスチウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ブタコレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス角膜白斑ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、またはコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）などがあげられる。
【０１２６】
本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、当該分野において公知である、少なくとも１つの５’端および／または３’端安定化配列を有していてもよい。５’非翻訳領域および／または３’非翻訳領域におけるこれらの安定化配列は、細胞基質においてＲＮＡの半減期を延ばすという効果を有する。これらの安定化配列は、ウイルス、細菌、および真核生物において天然に生じる配列に対して１００％の配列相同性を有していることもあるが、部分的にまたは完全に合成されたものであってもよい。本発明においてＲＮＡを安定化させるために使用され得る安定化配列の一例として、例えばＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓまたはＸｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ由来のβグロビン遺伝子の非翻訳配列（ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ＵＴＲ）をあげることができる。安定化配列の別の例としては、αグロビン、α（Ｉ）コラーゲン、１５−リポキシゲナーゼ、またはチロシンヒドロキシラーゼをコードする非常に安定したＲＮＡの３’ＵＴＲに含有されている、一般式（Ｃ／Ｕ）ＣＣＡＮｘＣＣＣ（Ｕ／Ａ）ＰｙｘＵＣ（Ｃ／Ｕ）ＣＣ（配列番号３４）によって表わされるものがあげられる（Ｈｏｌｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９９７，  ９４：２４１０〜２４１４を参照）。このような安定化配列は、当然ながら、個々にまたは互いに組み合わせて、ならびに、当業者にとって公知のさらに他の安定化配列と組み合わせて使用できる。本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、したがって、好ましくは、グロビンＵＴＲ（非翻訳領域）によって安定化したＲＮＡとして、特にβグロビンＵＴＲによって安定化したＲＮＡとして存在する。
【０１２７】
所望であれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、主鎖修飾を有していてもよい。本発明との関連における主鎖修飾とは、ＲＮＡに含まれているヌクレオチドの主鎖のリン酸塩が化学的に修飾されている修飾である。このような主鎖修飾は、通常、メチルホスホン酸、ホスホロアミド酸、およびホスホロチオエート（例えばシチジン−５’−Ｏ−（１−チオリン酸塩））からなる群から選択される修飾を含んでいるが、このことがなんらの限定を示唆するものではない。
【０１２８】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、上記の構成に加えて、あるいは、上記の構成の替わりに、糖修飾をさらに含有していてもよい。本発明との関連における糖修飾とは、存在するヌクレオチドの糖の化学的修飾であって、通常、２’−デオキシ−２’−フルオロ−オリゴリボヌクレオチド（２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸塩、２’−フルオロ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸塩）、２’−デオキシ−２’−デアミンオリゴリボヌクレオチド（２’−アミノ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸塩、２’−アミノ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸塩）、２’−Ｏ−アルキルオリゴリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−Ｃ−アルキルオリゴリボヌクレオチド（２’−Ｏ−メチルシチジン−５’−三リン酸塩、２’−メチルウリジン−５’−三リン酸塩）、２’−Ｃ−アルキルオリゴリボヌクレオチド、およびその異性体（２’−アラシチジン−５’−三リン酸塩、２’−アラウリジン−５’−三リン酸塩）、またはアジド三リン酸塩（２’−アジド−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸塩、２’−アジド−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸塩）からなる群より選択される糖修飾を含むが、このことがなんらの限定を示唆するものではない。
【０１２９】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、上記の構成に加えて、あるいは、上記の構成の替わりに、好ましくは、少なくとも１つのＲＮＡ（分子）によってコードされたタンパク質の発現を、不変、つまり自然（＝天然）のＲＮＡ配列との比較において大幅に増加させることに適した、少なくとも１つの塩基修飾をさらに含有していてもよい。この場合において「大幅」とは、タンパク質の発現が、天然のＲＮＡ配列の発現との比較において、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、または６０％、さらに好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、または１００％に達する増加率で、最も好ましくは少なくとも１５０％、２００％、または３００％に達する増加率で増加することを意味する。本発明との関連において、塩基修飾を有するヌクレオチドは、好ましくは、２−アミノ−６−クロロプリンリボシド−５’−三リン酸塩、２−アミノアデノシン−５’−三リン酸塩、２−チオシチジン−５’−三リン酸塩、２−チオウリジン−５’−三リン酸塩、４−チオウリジン−５’−三リン酸塩、５−アミノアリルシチジン−５’−三リン酸塩、５−アミノアリルウリジン−５’−三リン酸塩、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸塩、５−ブロモウリジン−５’−三リン酸塩、５−ヨードシチジン−５’−三リン酸塩、５−ヨードウリジン−５’−三リン酸塩、５−メチルシチジン−５’−三リン酸塩、５−メチルウリジン−５’−三リン酸塩、６−アザシチジン−５’−三リン酸塩、６−アザウリジン−５’−三リン酸塩、６−クロロプリンリボシド−５’−三リン酸塩、７−デアザアデノシン−５’−三リン酸塩、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸塩、８−アザアデノシン−５’−三リン酸塩、８−アジドアデノシン−５’−三リン酸塩、ベンズイミダゾール−リボシド−５’−三リン酸塩、Ｎ１−メチルアデノシン−５’−三リン酸塩、Ｎ１−メチルグアノシン−５’−三リン酸塩、Ｎ６−メチルアデノシン−５’−三リン酸塩、Ｏ６−メチルグアノシン−５’−三リン酸塩、偽ウリジン−５’−三リン酸塩、またはピューロマイシン−５’−三リン酸塩、キサントシン−５’−三リン酸塩からなる塩基修飾されたヌクレオチドの群から選択される。５−メチルシチジン−５’−三リン酸塩、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸塩、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸塩、および偽ウリジン−５’−三リン酸塩からなる塩基修飾されたヌクレオチドの群から選択された塩基修飾ヌクレオチドに対しては、特段の優先度が与えられる。
【０１３０】
本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、上記の構成に加えて、あるいは、上記の構成の替わりに、必要とする患者に対して投与すれば免疫抑制的に作用する、つまり免疫応答を防止または低減させることに好ましくは適した少なくとも１つの修飾を、上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）が含有するように、ヌクレオチドのヌクレオシド内にさらに含有していてもよい。この少なくとも１つの修飾は、好ましくは以下のａ）、ｂ）、ｃ）から選択されたヌクレオシド修飾から選択される。すなわち、
ａ）シチジンおよび／またはウリジンのヌクレオシドのピリミジン塩基の４位、５位、または６位における化学的修飾、
ｂ）アデノシン、イノシン、および／またはグアノシンのヌクレオシドのプリン塩基の２位、６位、７位、または８位における化学的修飾、および／または
ｃ）アデノシン、イノシン、グアノシン、シチジン、および／またはウリジンのヌクレオシドの糖の２’位における化学的修飾である。
【０１３１】
この文脈において、（ｍ）ＲＮＡは、通常、アデノシン−５’−モノリン酸塩、グアノシン−５’−モノリン酸塩、イノシン−５’−モノリン酸塩、シチジン−５’−モノリン酸塩、および／またはウリジン−５’−モノリン酸塩から選択された複数のヌクレオチドによって形成される核酸鎖である。これらのヌクレオチドは、そのモノリン酸塩を介して互いに連結されている。ヌクレオチドは、ヌクレオシドと構造的要素として５’−モノリン酸塩とを備え、上記ヌクレオシドは、通常核酸塩基によって、つまりピリミジン（ウラシルまたはシトシン）またはプリン（アデニンまたはグアニン）塩基、および糖によって形成される。したがって、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）のヌクレオシドの修飾は、常に、上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の各ヌクレオチドのヌクレオシド構造における修飾を意味しているものとする。
【０１３２】
第１の修飾ａ）によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのヌクレオシドが、シチジンおよび／またはウリジンのヌクレオシドのピリミジン塩基の５位または６位において化学的修飾によって修飾されてもよい。シチジンおよび／またはウリジンのヌクレオシドのピリミジン塩基の４位、５位、または６位における上記化学的修飾は、以下に列挙するものからなる群より選択されるが、これに限定されるものではない。すなわち、４−チオ、５−ヨード−／（５−Ｉ−）、５−ブロモ−／（５−Ｂｒ−）、５−アミノアリル−、５−フルオロ−／（５−Ｆ−）、５−ヒドロキシ−、５−ヒドロ−／（５−Ｈ−）、５−ニトロ−、５−プロピニル−／（５−（Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）−）、５−メチル−、５−メチル−２−チオ−、５−ホルミル−、５−ヒドロキシメチル−、５−メトキシ−、５−オキシ酢酸メチルエステル−、５−オキシ酢酸−、５−カルボキシヒドロキシメチル−、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ピリミジンメチルエステル−、５−メトキシカルボニルメチル−、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ、５−アミノメチル−、５−アミノメチル−２−チオ−、５−アミノメチル−２−セレノ−、５−メチルアミノメチル−、５−カルバモイルメチル−、５−カルボキシメチルアミノメチル−、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−、５−カルボキシメチル−、５−メチルジヒドロ−、５−タウリノメチル−、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、５−イソペンテニルメチル−、５−イソペンテニルメチル−２−チオ−、５−アミノプロピル−／（５−（Ｃ３Ｈ６ＮＨ３）−）、５−メトキシ−エトキシ−メチル−／（５−（ＣＨ２−Ｏ−Ｃ２Ｈ４−Ｏ−ＣＨ３）−）、または６−アザ−である。
【０１３３】
第２の修飾ｂ）によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのヌクレオシドは、上記対応する少なくとも１つの修飾されていないＲＮＡ（分子）を投与すると通常現れる（先天的）免疫活性応答を、哺乳類において抑制および／または無効化するために適しており、上記の構成の替わりに、アデノシン、イノシン、および／またはグアノシンのヌクレオシドのプリン塩基の２位、６位、７位、または８位において化学的修飾によって修飾されてもよい。アデノシン、イノシン、および／またはグアノシンのヌクレオシドのプリン塩基の２位、６位、７位、または８位における上記化学的修飾は、２−アミノ−、７−デアザ−、８−アザ−、または８−アジド−からなる群より選択されてもよいが、これに限定されるものではない。
【０１３４】
第３の修飾ｃ）によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのヌクレオシドは、上記対応する少なくとも１つの修飾されていないＲＮＡ（分子）を投与すると通常現れる（先天的）免疫活性応答を哺乳類において抑制および／または無効化するために適しており、ＲＮＡ配列に組み込まれる場合、アデノシン、イノシン、グアノシン、シチジン、および／またはウリジンのヌクレオシドの糖の２’位において少なくとも１つの化学的修飾によって修飾されてもよい。アデノシン、イノシン、グアノシン、シチジン、および／またはウリジンのヌクレオシドの糖の２’位における上記化学的修飾は、２’−デオキシ−、２’−アミノ−２’−デオキシ−、２’−アミノ−、２’−フルオロ−２’−デオキシ−、２’−フルオロ−、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシ−、または２’−Ｏ−メチル−からなる群より選択されてもよいが、これに限定されるものではない。
【０１３５】
特に好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのヌクレオシドが、上記において定義された修飾ａ）およびｃ）にしたがって、シチジンおよび／またはウリジンのヌクレオシドのピリミジン塩基の４位、５位、または６位、およびリボース糖の２’位において修飾される。
【０１３６】
別の特に好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのヌクレオシドが、上記において定義された修飾ｂ）およびｃ）にしたがって、さらに好ましくは上記において定義されたように、アデノシン、イノシン、および／またはグアノシンのヌクレオシドのプリン塩基の２位、６位、７位、または８位、およびリボース糖の２’位において修飾される。
【０１３７】
さらに特に好適な実施形態によれば、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の少なくとも１つのヌクレオシドが修飾され、以下の群から選択される化学的修飾された（（ｍ）ＲＮＡの）ヌクレオチドを形成する。すなわち、４−チオ−ウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、２−アミノプリン−リボシド−５’−（モノ）リン酸塩、５−アミノアリルシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−アミノアリルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ブロモシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ブロモ−２’−デオキシシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ブロモウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ヨードシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ヨード−２’−デオキシシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ヨードウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ヨード−２’−デオキシウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−プロピニル−２’−デオキシシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−プロピニル−２’−デオキシウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ホルミルシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５、２’−Ｏ−ジメチルシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ヒドロキシメチルシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチルシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、５，２’−Ｏ−ジメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メチル−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−ヒドロキシウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メトキシウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、ウリジン５−オキシ酢酸−５’−（モノ）リン酸塩、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル−５’−（モノ）リン酸塩、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル−５’−（モノ）リン酸塩、５−メトキシカルボニルメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−アミノメチル−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メチルアミノメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メチルアミノメチル−２−セレノウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−カルバモイルメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−カルボキシメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−メチルジヒドロウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−タウリノメチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−タウリノメチル−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−（イソペンテニルメチル）ウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−（イソペンテニルメチル）−２−チオウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、５−（イソペンテニルメチル）−２’−Ｏ−メチルウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、６−アザシチジン−５’−（モノ）リン酸塩、７−デアザアデノシン−５’−（モノ）リン酸塩、７−デアザグアノシン−５’−（モノ）リン酸塩、８−アザアデノシン−５’−（モノ）リン酸塩、８−アジドアデノシン−５’−（モノ）リン酸塩、偽ウリジン−５’−（モノ）リン酸塩、２’−アミノ−２’−デオキシシチジン−（モノ）リン酸塩、２’−フルオロチミジン−５’−（モノ）リン酸塩、イノシン−５’−（モノ）リン酸塩、および２’−Ｏ−メチル−イノシン−５’−（モノ）リン酸塩である。
【０１３８】
要求に応じて、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）が、好ましくは機能的効果を実現するために導入される、ヌクレオチドによる置換、付加、または除去を含んでいてもよい。上記ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡがＷＴ配列に由来するものであれば、この各種のヌクレオチド修飾が導入されてもよい。これにより、複合化ＲＮＡのＲＮＡの調製のために、本発明において、公知の部位に対する変異誘発を利用する技術によってＤＮＡマトリックスが使用される（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ３ｒｄ  ｅｄ．、  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  ２００１を参照）。このようなプロセスでは、ＲＮＡの調製のために、対応するＤＮＡ分子がｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されてもよい。このＤＮＡマトリックスは、適したプロモーター、例えばＴ７プロモーターまたはＳＰ６プロモーターをｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のために有しており、このプロモーターに続いて、ＲＮＡの調製のために望ましいヌクレオチド配列とｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写に対する終了シグナルとが現れる。本発明によれば、対象としているＲＮＡのマトリックスを形成するＤＮＡ分子は、まず発酵的増殖を行ない、次に、細菌内で複製され得るプラスミドの一部として単離することによって調製されてもよい。本発明にとって適していると言うことのできるプラスミドは、例えば、ｐＴ７Ｔｓ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ２６４０４、Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９５，  １２１：２３４９〜２３６０）のプラスミド、およびｐＧＥＭ（登録商標）シリーズのプラスミドがある。ｐＧＥＭ（登録商標）シリーズの例としては、ｐＧＥＭ（登録商標）−１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ６５３００、Ｐｒｏｍｅｇａ）およびｐＳＰ６４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ６５３２７）があげられる。さらに、Ｍｅｚｅｉ  ａｎｄ  Ｓｔｏｒｔｓ，  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＣＲ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  ｉｎ：Ｇｒｉｆｆｉｎ  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ（ｅｄ．），  ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  ＦＬ，  ２００１を参照のこと。
【０１３９】
本発明に係わるＲＮＡ複合体の成分の質量比またはモル比とは、１つ以上のオリゴペプチドに対するＲＮＡ（一本鎖でも二本鎖でもよい）の質量比またはモル比の意味であり、通常、いかなる制限を受けるものではなく、特定の適用に対して適切なものが選ばれる。ただし、上記１つ以上のオリゴペプチドとＲＮＡとの質量比またはモル比は、１：１未満、１：２未満、１：３未満、１：４未満、１：５未満、１：６未満、１：７未満、１：８未満、１：９未満、１：１０未満、１：１１未満、１：１２未満、１：１３未満、１：１４未満、１：１５未満、１：１６未満、１：１７未満、１：１８未満、または１：２０未満であってもよい。あるいは、上記１つ以上のオリゴペプチドとＲＮＡとの質量比またはモル比は、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、または２０：１を超えてもよい。好ましくは、上記１つ以上のオリゴペプチドとＲＮＡとの質量比またはモル比は、上記１つ以上のオリゴペプチドの含有量に対して１：５以上でもよい。さらに好ましくは、上記１つ以上のオリゴペプチドとＲＮＡとの（モル比または）質量比は１：５〜２０：１、さらに好ましくは１：３〜１５：１である。
【０１４０】
特定の好適な実施形態によれば、本発明に係るＲＮＡ複合体の成分の質量比、特に、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の質量比は、好ましくは約１：１００〜約１：０．５の範囲であり、さらに好ましくは約１：５０〜約１：１の値を有し、一層好ましくは、複合体におけるＲＮＡ：ペプチドの比に関して約１：１００、約１：９０、約１：８０、約１：７０、約１：６０、約１：５０、約１：４５、約１：４０、約１：３５、約１：３０、約１：２５、約１：２０、約１：１５、約１：１０、約１：５、約１：４、約１：３、約１：２、または約１：１、さらに約１：０．５に達する値を有する。なお、上記の具体的に示した値を２つ組み合わせることによって、任意の範囲を形成してもよい。最も好ましくは、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の質量比は、約１：５０〜約１：１の範囲であってもよい。
【０１４１】
同様に、本発明に係るＲＮＡ複合体の成分のモル比、特に、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）のモル比は、好ましくは、特定の好適な実施形態によれば、約１：２００００〜約１：５００の範囲であり、さらに１：２５０に達する値でもよく、さらに好ましくは約１：１００００〜約１：１０００の範囲、一層好ましくは、複合体におけるＲＮＡ：ペプチドの比に関して約１：９５００、約１：９０００、約１：８５００、約１：８０００、約１：７５００、約１：７０００、約１：６５００、約１：６０００、約１：５５００、約１：５０００、約１：４５００、約１：４０００、約１：３５００、約１：３０００、約１：２５００、約１：２０００、約１：１５００、約１：１０００、約１：５００、約１：４５０、約１：４００、約１：３５０、約１：３００、または約１：２５０の値を有する。なお、上記の具体的に示した値を２つ組み合わせることによって、任意の範囲を形成してもよい。最も好ましくは、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）のモル比は、約１：１００００〜約１：１０００の範囲である。免疫活性化のためには、本発明に係わるＲＮＡ複合体の成分のモル比は、約１：１００００〜約１：１００の範囲であってもよく、さらに、約１：１００００〜約１：５００に達する範囲であってもよい。
【０１４２】
本発明の文脈において、上記モル比および質量比は、通常互いに関連しており、各比は、例えばＲＮＡの長さやペプチドの長さなどの要素によって影響を受けることがある。ただし、判定の際には質量比およびモル比を平均複合体サイズに対して算出してもよく、約１：５０〜１：１の質量比が約１：１００００〜１：１０００のモル比にほぼ対応する。モル比および質量比の代表的な例は、実施例において示す。この代表的な値はさらに計算の際に使用してもかまわない。
【０１４３】
さらに、本発明に係るＲＮＡ複合体の成分の比、特に、上記１つ以上のオリゴペプチドに対する複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の比は、さらに、全てのＲＮＡ複合体の窒素／リン酸塩比（Ｎ／Ｐ比）に基づいて算出されてもよい。例えば、１μｇのＲＮＡは、ＲＮＡが塩基の統計的分布を示すと仮定すれば、通常約３ｎｍｏｌのリン酸塩残基を含有している。また、１μｇのペプチドは、分子量および塩基性アミノ酸の個数に依存して、通常約ｘ  ｎｍｏｌの窒素残基を含有している。好適な一例として、（Ａｒｇ）９（分子量１４２４ｇ／ｍｏｌ、窒素原子９個）の場合について算出すると、１μｇの（Ａｒｇ）９が約７００ｐｍｏｌの（Ａｒｇ）９を含有し、それゆえ、７００ｘ９＝６３００ｐｍｏｌの塩基性アミノ酸、つまり６．３ｎｍｏｌの窒素原子を含有する。質量比ＲＮＡ／（Ａｒｇ）９が約１：１の場合、Ｎ／Ｐ比の計算結果は約２になる。好適な一例として、質量比が約２：１であり、２μｇのＲＮＡを含むプロタミン（分子量約４２５０ｇ／ｍｏｌ、サケのプロタミンを使用した場合、窒素原子は２１個）の場合について算出すると、このＲＮＡについては、リン酸塩が６ｎｍｏｌであることが計算の結果得られる。１μｇのプロタミンは約２３５ｐｍｏｌのプロタミン分子を含有し、それゆえ、２３５ｘ２１＝４９３５ｐｍｏｌの塩基性窒素原子、つまり４．９ｎｍｏｌの窒素原子を含有する。ＲＮＡ／プロタミンの質量比が約２：１の場合、Ｎ／Ｐ比の計算結果は約０．８１になる。ＲＮＡ／プロタミンの質量比が約８：１の場合、Ｎ／Ｐ比の計算結果は約０．２になる。本発明の文脈において、Ｎ／Ｐ比は、好ましくは約０．２〜５０、好ましくは約０．５〜５０、最も好ましくは約０．７５〜２５、または１〜２５の範囲である（複合体中のＲＮＡ：ペプチド比について、一層好ましくは、約１０〜５０の範囲、最も好ましくは約２５〜５０の範囲である）。
【０１４４】
本発明の別の一実施形態は、本発明に係る複合化ＲＮＡ、ならびに必要に応じて（薬学的に）適切なキャリアおよび／または別の補助的物質および添加剤を備えた組成物、好ましくは薬学的組成物に関する。本発明によって採用される（医薬品）組成物は、通常、安全かつ効果的な量の本発明に係る複合化ＲＮＡを備える。ここで使用する「安全かつ効果的な量」という文言は、例えば、細胞内、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組織内、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて効果を発揮することのできる、本発明に係る複合化ＲＮＡの量を意味している。上記の効果を発揮とは、例えば、上述したように、コードされているタンパク質（例えば、治療上有効なタンパク質、抗体、または抗原、または上述のその他の任意のタンパク質またはペプチド）の多量の発現を（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで）誘引すること、細胞、組織、または生体において（ｉｎ  ｖｉｖｏ）治療対象である病状（例えば、本発明において記載する、腫瘍疾患または癌疾患、循環器病、感染症、自己免疫疾患、（単）遺伝子疾患など）の好転を誘引すること、および／または免疫応答を誘引または亢進することを意味している。ただし、上記の定義と同時に、「安全かつ効果的な量」は、重大な副次的効果を避けられる程度に、特に本発明において言及される疾病の治療において、十分に低い量である。換言すれば、長所と危険性の妥当なバランスが実現可能な量である。この限界値を決定することは、一般に合理的な医学的判断の範囲内にある。したがって、上記（医薬品）組成物の本発明に係る複合化ＲＮＡの濃度は一定ではなく、例えば０．１ｎｇ／ｍｌから１，０００ｍｇ／ｍｌ以上の広い範囲にわたるが、これに限定されるものではない。本発明に係る複合化ＲＮＡのこのような「安全かつ効果的な量」は、治療にあたる医師の知識と経験内で、治療対象である特定の病状、年齢、治療を受ける患者の健康状態、病状の重さ、治療期間の長さ、同時に行う治療の特性、使用される（薬学的に）適切な特定キャリアなどの要素との関連において変化してもかまわない。ここに記載する（医薬品）組成物は、ヒトを対象とした医学および獣医学的な目的に採用され得る。
【０１４５】
ここに記載する本発明に係る（医薬品）組成物は、適切なキャリア、好ましくは薬学的に適切なキャリアを、必要に応じてを備えていてもよい。ここで使用する「適切なキャリア」という用語には、好ましくは、１つ以上の適合性を有する固体または液体充填剤、希釈剤、または人への投与に適した被包性化合物が含まれる。ここで使用する「適合性を有する」という用語は、組成物の構成物質が、本発明に係る複合化ＲＮＡおよび組成物中に必要に応じて含まれている上記補助的物質と、そのまま混合可能、また、通常の使用状態では組成物の（医薬的）効果を大きく低減させる相互作用が生じない方法で互いに混合可能であることを意味する。（医薬的）効果の低減とは、例えばコードされているタンパク質の（医薬的）活性を低減させること、コードされたタンパク質の発現を抑制またはその発現の障害となること、もしくは、例えば上記複合化ＲＮＡの免疫原としての可能性を抑制することを意味している。適切なキャリアは、治療を受ける人への投与に適したキャリアであるためには、当然充分に高い純度と充分に低い毒性とを有していなければならない。
【０１４６】
キャリアは、それが固体であっても、または液体であっても、投与法によって選択される。したがって、上述の（薬学的に）適切なキャリアの選択は、特に本発明に係る（医薬品）組成物が投与される形態によって決定される。本発明に係る（医薬品）組成物は、例えば全身投与され得る。投与経路の例としては、例えば皮内または経皮、経口、非経口などがあげられ、さらに皮下注射、筋肉注射、動脈注射、または静脈注射、外用および／または鼻腔内経路が含まれる。本発明に係る（医薬品）組成物の適切な使用量は、動物モデルを使った通例の実験によって決定され得る。上記モデルとしては、ウサギ、ヒツジ、マウス、ラット、イヌ、およびヒト以外の霊長類のモデルなどがあげられるが、これに限定されるものではない。
【０１４７】
液体の形態で、例えば注射によって投与する場合、上記キャリアは、発熱物質を含まない水、等張性生理食塩水溶液、および緩衝溶液（例えばリン酸緩衝溶液）から選択されてもよい。好ましい注射用単位投与量形態には、滅菌水溶液、生理食塩水溶液、またはその混合物（例えばリンガ・ラクタット溶液）が含まれる。上記溶液のｐＨ値は、約７．０〜約７．６、好ましくは約７．４に調節すべきである。
【０１４８】
好ましくは、上記（医薬品）組成物には、水中に存在する本発明の複合化ＲＮＡが含まれる。あるいは、本発明に係る（医薬品）組成物は、液体調製用キャリアとして注射用緩衝液を含有していてもよく、こうすることによって好ましくはトランスフェクションが改善され、また、本発明の複合化ＲＮＡのＲＮＡがタンパク質をコードしていれば、細胞、組織、または生体における、コードされているタンパク質の翻訳がさらに改善される。本発明に係る（医薬品）組成物は、液体の形態であれば、例えば（医薬品）組成物全体に対して、ナトリウム塩（好ましくは少なくとも５０ｍＭのナトリウム塩）、カルシウム塩（好ましくは少なくとも０．０１ｍＭのカルシウム塩および／またはマグネシウム塩）、ならびに必要に応じてカリウム塩（好ましくは少なくとも３ｍＭのカリウム塩）を含有する水性注射用緩衝液または水を備えていてもよい。好適な実施形態によれば、このような注射用緩衝液中に含有されるナトリウム塩、カルシウム塩および／またはマグネシウム塩、ならびに必要に応じて加えられるカリウム塩は、ハロゲン化物の形態（例えば塩化物、ヨウ化物、または臭化物）もしくはその水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、または硫酸塩の形態である。ここで述べる例としては、ナトリウム塩の場合であればＮａＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、および／またはＮａ２ＳＯ４、必要に応じて存在するカリウム塩の場合であればＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢ、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３、および／またはＫ２ＳＯ４、およびカルシウム塩および／またはマグネシウム塩の場合であればＣａＣｌ２、ＣａＩ２、ＣａＢｒ２、ＣａＣＯ３、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＯＨ）２、ＭｇＣｌ２、ＭｇＩ２、ＭｇＢｒ２、ＭｇＣＯ３、ＭｇＳＯ４、および／またはＭｇ（ＯＨ）２などがあげられる。上記注射用緩衝液は、上述のカチオンの有機アニオンをさらに含有していてもよい。特に好適な実施形態では、このような注射用緩衝液は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、および必要に応じて塩化カリウム（ＫＣｌ）を塩として含有し、これら塩化物に加えて、他のアニオンがさらに存在することも可能である。
【０１４９】
これらの塩は通常、本発明に係る（医薬品）組成物において必要に応じて使用される注射用緩衝液中に存在する。なお、この場合、（液体の形態であれば）上記（医薬品）組成物全体に対する塩の濃度は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が少なくとも５０ｍＭ、塩化カリウム（ＫＣｌ）が少なくとも３ｍＭ、および塩化カルシウムおよび／または塩化マグネシウム（ＣａＣｌ２）が少なくとも０．０１ｍＭである。上記注射用緩衝液は、高張性注射用緩衝液および等張性注射用緩衝液または低張性注射用緩衝液の何れの形態であってもよい。本発明との関連では、この文脈において、上記注射用緩衝液は特定の基準培地について各場合において高張性、等張性、または低張性である。つまり上記注射用緩衝液は、特定の基準培地と比較すると塩含有量が高い、同じである、または低い。好ましくは、浸透またはその他の濃度の効果によって細胞にダメージを与えない塩濃度が採用される。ここの基準培地は、例えば”ｉｎ  ｖｉｖｏ”法で発生する液体であり、例えば血液、リンパ流体、細胞質流体、またはその他の体内で発生する流体、もしくは従来から”ｉｎ  ｖｉｔｒｏ”法で採用されている液体または緩衝液である。上記液体および緩衝液は、当業者には公知である。
【０１５０】
本発明に係わる（医薬品）組成物中に必要に応じて含有される上記注射用緩衝液は、別の成分、例えば糖（単糖類、二糖類、三糖類、または多糖類）、特にブドウ糖またはマンニトールをさらに含有していてもよい。ただし好適な実施形態では、使用する注射用緩衝液中に糖類は一切存在しない。例えば糖類などの非帯電成分を、注射用緩衝液が厳密に含有しないことも好ましい。上記注射用緩衝液は通常、もっぱら金属カチオン、特にアルカリまたはアルカリ土類金属からなる群から選択された金属カチオン、およびアニオン（中でも上述のアニオン）を含有する。使用する注射用緩衝液の（医薬品）組成物全体に対するｐＨ値は、液体の形態であれば、好ましくは１と８．５との間、好ましくは３と５との間、さらに好ましくは５．５と７．５との間、特に５．５と６．５との間である。適切な場合には、上記注射用緩衝液は、注射用緩衝液を緩衝ｐＨ値に保持する緩衝系をさらに含有してもよい。この系は、例えば、リン酸緩衝系、ＨＥＰＥＳ、またはＮａ２ＨＰＯ４／ＮａＨ２ＰＯ４であってもよい。ただし、使用する注射用緩衝液が上述の緩衝系を一切含まない、または緩衝系を一切含まないことが、とりわけ好ましい。
【０１５１】
本発明に係わる（医薬品）組成物中に必要に応じて含有される上記注射用緩衝液は、上述の一価カチオンおよび二価カチオンに加えて、またはその代替として、二価カチオンおよび一価カチオンを含有していてもよい。この二価カチオンは、特にアルカリ土類金属（例えばマグネシウム（Ｍｇ２＋）または鉄（Ｆｅ２＋））からなる群から選択された二価カチオンであり、一価カチオンは、特にアルカリ金属（例えばリチウム（Ｌｉ＋））からなる群から選択された一価カチオンである。これらの一価カチオンは、好ましくはその塩の形態、例えばハロゲン化物の形態（例えば塩化物、ヨウ化物、または臭化物）もしくはその水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、または硫酸塩の形態である。ここで述べる例としては、リチウム塩の場合であればＬｉＣｌ、ＬｉＩ、ＬｉＢｒ、Ｌｉ２ＣＯ３、ＬｉＨＣＯ３、およびＬｉ２ＳＯ４、マグネシウム塩の場合であればＭｇＣｌ２、ＭｇＩ２、ＭｇＢｒ２、ＭｇＣＯ３、ＭｇＳＯ４、およびＭｇ（ＯＨ）２、ならびに鉄塩の場合であればＦｅＣｌ２、ＦｅＢｒ２、ＦｅＩ２、ＦｅＦ２、Ｆｅ２Ｏ３、ＦｅＣＯ３、ＦｅＳＯ４、およびＦｅ（ＯＨ）２などがあげられる。上述の二価カチオンおよび／または一価カチオンの全ての組み合わせも同様に例としてあげられる。したがって、二価カチオンだけを含有する注射用緩衝液、一価カチオンだけを含有する注射用緩衝液、または二価カチオンと一価カチオンとを含有する注射用緩衝液が、本発明に係る（医薬品）組成物において使用される。二価カチオンまたは一価カチオンのいずれか１つのタイプだけ、特に好ましくは、例えばＣａ２＋カチオンだけ、またはその塩（例えばＣａＣｌ２）だけを含有する注射用緩衝液は、同様に使用される。上記以外の二価カチオンまたは一価カチオン、特にアルカリ土類金属およびアルカリ金属からなる群から選択される上記以外のカチオンを、注射液の調製のために、本発明によって使用される注射用緩衝液中のそれぞれＣａ２＋またはＮａ１＋の一部または全体の替わりに採用するのであれば、注射用緩衝液における、Ｃａ２＋（二価カチオン）およびＮａ１＋（一価カチオン）の場合の上述の容積モル濃度（つまり、通常Ｎａ＋濃度が少なくとも５０ｍＭ、Ｃａ２＋濃度が少なくとも０．０１ｍＭ、および必要に応じてＫ＋濃度が少なくとも３ｍＭ）を、さらに考慮に入れてもよい。実際に、使用される注射用緩衝液において、上述のＣａ２＋またはＮａ１＋を全て、それぞれ別の二価カチオンまたは一価カチオンに置き換えることも可能で、さらに、例えば、別の複数の二価カチオン（Ｃａ２＋の替わり）の組み合わせに置き換えることも可能であるし、および／または別の複数の一価カチオン（Ｎａ１＋の替わり）の組み合わせに置き換えることも可能である（特に、それぞれ、アルカリ土類金属からなる群より選択される別の複数の二価カチオンの組み合わせ、またはアルカリ金属からなる群より選択される別の複数の一価カチオンの組み合わせに置き換えることも可能である）。しかし、Ｃａ２＋またはＮａ１＋の多くとも一部、つまり、Ｃａ２＋およびＮａ１＋によってそれぞれ占められる注射液における一価のカチオンおよび二価カチオンの特定の全容積モル濃度の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、一層好ましくは少なくとも６０％、さらに好ましくは少なくとも８０％を置き替えることが好ましい。ただし、本発明に係る薬学的組成物において必要に応じて含有される注射用緩衝液が、二価カチオンとしてはＣａ２＋だけ、および一価カチオンとしてはＮａ１＋だけを含有していれば、とりわけ好適である。言い換えれば、薬学的組成物全体に対して、Ｃａ２＋が二価カチオンの合計容積モル濃度の１００％を占め、Ｎａ１＋が一価カチオンの合計容積モル濃度の１００％を占めれば、とりわけ好適である。上記注射用緩衝液の水溶液は、全薬学的組成物に対して、溶液に含有される塩の３０ｍｏｌ％まで、好ましくは２５ｍｏｌ％まで、好ましくは２０ｍｏｌ％まで、さらに好ましくは１５ｍｏｌ％まで、さらに好ましくは１０ｍｏｌ％まで、一層好ましくは５ｍｏｌ％まで、同様にさらに好ましくは不溶解性またはほとんど不溶解性の塩の２ｍｏｌ％までを含有してもよい。本発明の文脈において、ほとんど不溶解性の塩とは、その溶解度積が１０−４未満である塩である。容易に溶解する塩とは、その溶解度積が１０−４を超える塩である。好ましくは、本発明に係る薬学的組成物において必要に応じて含有される注射用緩衝液は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が５０ｍＭから８００ｍＭ、好ましくは６０ｍＭから５００ｍＭ、さらに好ましくは７０ｍＭから２５０ｍＭ、特に好ましくは６０ｍＭから１１０ｍＭ、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）が０．０１ｍＭから１００ｍＭ、好ましくは０．５ｍＭから８０ｍＭ、さらに好ましくは１．５ｍＭから４０ｍＭ、および必要に応じて塩化カリウム（ＫＣｌ）が３ｍＭから５００ｍＭ、好ましくは４ｍＭから３００ｍＭ、さらに好ましくは５ｍＭから２００ｍＭである。さらに、有機アニオンがその他のアニオンとして、上述した無機アニオン（例えばハロゲン化物、硫酸塩、または炭酸塩）に加えて発生してもよい。該有機アニオンとしては、コハク酸塩、ラクトビオン酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸などがあげられ、これらの有機アニオンは複数種類が存在していてもかまわない。
【０１５２】
本発明に係る（医薬品）組成物において必要に応じて含有される注射用緩衝液は、好ましくは乳酸を含有する。該注射用緩衝液が有機アニオンを含有する場合、上記注射用緩衝液は、特に好ましくは乳酸だけを有機アニオンとして含有する。本発明の文脈において、乳酸は、所望の任意の乳酸、例えばＬ−乳酸やＤ−乳酸であってよい。本発明との関連において発生する乳酸塩は、特に上記注射用緩衝液が一価カチオンとしてはＮａ＋だけを含有し、二価カチオンとしてはＣａ２＋だけを含有する場合、通常乳酸ナトリウムおよび／または乳酸カルシウムである。本発明に係る（医薬品）組成物において必要に応じて使用される上述の注射用緩衝液は、全薬学的組成物に対して、好ましくは１５ｍＭから５００ｍＭ、さらに好ましくは１５ｍＭから２００ｍＭ、最も好ましくは１５ｍＭから１００ｍＭの乳酸を含有する。
【０１５３】
液体以外の形態（例えば固体の形態または半流動体の形態）で処方される場合、本発明の薬学的組成物は、適切なキャリアまたはその構成物質として役立つ化合物を含有してもよい。例としては、ラクトース、ブドウ糖、およびショ糖などの糖類；コーンスターチまたはジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；トラガント粉末；麦芽；ゼラチン；獣脂；ステアリン酸やステアリン酸マグネシウムなどの固体潤滑剤；硫酸カルシウム；ラッカセイ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびカカオ油などの植物油；ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール類；およびアルギン酸などがあげられる。ただし、上記化合物は、液体組成物の調製にも使用してよい。
【０１５４】
本発明の薬学的組成物に含まれていてもよいその他の成分としては、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）などの乳化剤；ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤；着色料；人工香味料；治療薬キャリア；錠剤形成剤；安定剤；抗酸化剤；防腐剤などがあげられる。
【０１５５】
その他の注入に適したキャリアとしては、ヒドロゲル、放出を制御するまたは遅延させるデバイス、ポリ乳酸、およびコラーゲンマトリックスなどがあげられる。ここで使用され得る適切なキャリアとしては、ローション、クリーム、ゲルなどにおける使用に適したキャリアなどがあげられる。上記化合物を経口投与するのであれば、錠剤やカプセル等は好ましい単位投与量の形態である。経口投与に使用され得る単位投与量の形態の調製に適したキャリアは、従来技術において周知であり、その選択は、本発明の目的にとっては重要でなく、当業者によって容易に実施可能な二次的な検討事項、例えば、風味、コスト、および保存安定性などによって決まる。
【０１５６】
本発明は、上述の本発明の複合化ＲＮＡを細胞または組織にトランスフェクトする（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏによる）トランスフェクション法をさらに提供する。本発明の（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏによる）トランスフェクション法は、好ましくは、
ａ）実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドで複合化されたＲＮＡを少なくとも１つ備えた、本発明に係る複合化ＲＮＡを必要に応じて調製および／または準備するステップと、
ｂ）ステップａによって調製および／または準備された複合化ＲＮＡを用いて、細胞、（生体）組織、または生体に（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏによって）トランスフェクトするステップとを備える。
【０１５７】
細胞または組織に、本発明の複合化ＲＮＡをトランスフェクトする本発明のｉｎ  ｖｉｔｒｏ・トランスフェクションまたはｉｎ  ｖｉｖｏ・トランスフェクションのステップａにしたがって、上記において定義された複合化ＲＮＡを調製および／または準備することは、当該技術分野において公知である任意の方法によって実施されればよい。ここで使用される複合化ＲＮＡは、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドで複合化されたＲＮＡを少なくとも１つ備える。それゆえ、上記において定義された複合化ＲＮＡをステップａによって調製および／または準備することは、上記少なくとも１つのＲＮＡと、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドとを調製および／または準備することを含む。
【０１５８】
低分子ペプチド配列、例えば（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘなどの調製法は、当該技術分野において広く知られており、例えば固相合成（例えばＦｍｏｃ固相合成、またはその他の適した方法）を採用すればよい（例えば、Ｒ．  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｅｄ．、  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．７７、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９８）を参照）。
【０１５９】
上記において定義された本発明の複合体の成分としての少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の調製および／または準備には、ステップａによれば、第１のサブステップａ１）が含まれる。第１のサブステップａ１）では、具体的には、通常所望のＲＮＡに対応する配列を備えた核酸テンプレートの準備および／または調製を行う。上記核酸テンプレートの配列は任意の核酸であってもよく、例としては一本鎖ＤＮＡまたは二本鎖ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはその断片などがあげられ、上述の治療上有効なタンパク質、抗体、または抗原、もしくは任意の他のタンパク質またはペプチドをコードしてもよい。通常、ＤＮＡ配列、例えばＤＮＡプラスミドは、好ましくは直鎖形態であり、この目的のために採用されてもよい。好ましくは、上記核酸テンプレートの配列は、（発現）ベクターであってもよく、さらに好ましくは、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位を有する（発現）ベクターである。従来技術において公知の任意の（発現）ベクター、例えば市販の（発現）ベクター（上記を参照）が、このために使用され得る。好ましい（発現）ベクターとしては、例えばＳＰ６、Ｔ７またはＴ３結合部位をクローン部位の上流および／または下流に有するベクターなどがあげられる。該ベクターは、上述の治療上有効なタンパク質、抗体、または抗原、もしくは任意の他のタンパク質またはペプチドをコードする核酸配列を備えていてもよく、この核酸配列は通常、例えば使用されるベクターの多発性クローン部位を介して上記（発現）ベクターにクローニングによって導入される。
【０１６０】
転写に先立って、上記（発現）ベクターは通常、ＲＮＡの将来の３’末端が位置する部位において適切な制限酵素を使って切断され、当該断片は精製される。こうすることによって、転写ＲＮＡがベクター配列を含むことが防止され、規定通りの長さのＲＮＡ転写物が得られる。この文脈において、好ましくは、突出末端を生成する制限酵素（例えばＡａｔＩＩ、ＡｐａＩ、ＢａｎＩＩ、ＢｇｌＩ、Ｂｓｐ１２８６、ＢｓｔＸＩ、ＣｆｏＩ、ＨａｅＩＩ、ＨｇｉＡＩ、ＨｈａＩ、ＫｐｎＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕＩ、ＳａｃＩ、ＳａｃＩＩ、ＳｆｉＩ、ＳｐｈＩなど）は使用しない。しかしながら、そのような制限酵素を使用するのであれば、突出３’末端は、好ましくは、例えばＫｌｅｎｏｗまたはＴ４ＤＮＡポリメラーゼで充填される。
【０１６１】
上記の構成の替わりに、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を調製および／または準備するために使用される核酸テンプレートを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を採用することによって調製してもよい。好ましくは、上記核酸テンプレート、つまり使用するプライマーの片方は、通常ＲＮＡポリメラーゼ結合部位の配列を含有している。さらに、使用するプライマーの５’末端は、好ましくは約１０〜５０、さらに好ましくは１５〜３０、最も好ましくは約２０ヌクレオチドの延長部を含有している。
【０１６２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写に先立って、転写テンプレートとして使用される上記核酸、例えばＤＮＡまたはｃＤＮＡテンプレートは、高い収率を保証するために通常精製され、ＲＮａｓｅを有していない。この文脈において、上記テンプレートの精製は、従来技術において公知の任意の方法、例えば塩化セシウム勾配またはイオン交換方法を用いて、もしくはアガロースゲル電気泳動を介した精製によって実施可能である。
【０１６３】
核酸テンプレートの調製および／または準備に続いて、本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つの所望のＲＮＡ（分子）を調製するために、上記において定義された第１のサブステップａ１）にしたがって調製された上記核酸テンプレートを使って、第２のサブステップａ２）にしたがってｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応が実施されてもよい。
【０１６４】
第２のサブステップａ２）による上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応は、通常ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応において実施される。適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地は、上述の核酸テンプレート、例えば約０．１μｇ〜１０μｇ、好ましくは約１μｇ〜５μｇ、さらに好ましくは２．５μｇ、最も好ましくは約１μｇの上記核酸を最初に備えている。適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地は、必要に応じて還元剤、例えばＤＴＴ、さらに好ましくは約１μｌ〜２０μｌの５０ｍＭのＤＴＴ、一層好ましくは約５μｌの５０ｍＭのＤＴＴをさらに備えている。上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地は、通常ヌクレオチド、例えばヌクレオチド混合物を含んでおり、本発明の場合には、Ａ、Ｇ、Ｃ、またはＵヌクレオチドの混合物を、一つのヌクレオチドあたり約０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、好ましくは一つのヌクレオチドあたり０．１ｍＭ〜１ｍＭ、好ましくは合計で約４ｍＭ含んでいる。同様に、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地は、ＲＮＡポリメラーゼ、例えばＴ７ＲＮＡポリメラーゼ（例えばＴ７−Ｏｐｔｉ  ｍＲＮＡキット、ＣｕｒｅＶａｃ社、ドイツ、テュービンゲン）、Ｔ３ＲＮＡポリメラーゼまたはＳＰ６を、通常ＲＮＡポリメラーゼの約１０Ｕ〜５００Ｕ、好ましくは約２５Ｕ〜２５０Ｕ、さらに好ましくは約５０Ｕ〜１５０Ｕ、最も好ましくは約１００Ｕ備えている。さらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地は、本発明の複合化ＲＮＡの転写された少なくとも１つのＲＮＡ（分子）の劣化を回避するために、好ましくはＲＮａｓｅを含まない。したがって、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地は、必要に応じてさらにＲＮａｓｅインヒビターを備えている。
【０１６５】
そして、上記核酸テンプレートはｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地において培養され、上述の治療上有効なタンパク質、抗体、または抗原、もしくは任意の他のタンパク質またはペプチドをコードしていてもよい本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）に転写される。培養時間は通常、約３０分間〜２４０分間、好ましくは約４０分間〜１２０分間、最も好ましくは約９０分間である。培養温度は通常、約３０℃〜４５℃、好ましくは３７℃〜４２℃である。培養温度は、使用するＲＮＡポリメラーゼに左右され、例えばＴ７ＲＮＡポリメラーゼの場合には約３７℃である。上記転写によって得られた本発明の複合化ＲＮＡの少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、好ましくはｍＲＮＡである。上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写において得られる収率は、上述の採用された初期量の場合、通常、使用されるテンプレートＤＮＡ１μｇあたりＲＮＡが約３０μｇ程度である。本発明の文脈において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写において得られる収率は、線型アップスケーリングによって増加させることが可能である。これを実現するためには、上述の採用された初期量を、好ましくは、要求される収率にしたがって、例えば、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、５０，０００倍、１００，０００倍などの倍率で増加させる。
【０１６６】
培養後、本発明の複合化ＲＮＡの転写された少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を必要に応じて精製してもよい。この精製には、従来技術において公知である任意の適切な方法、例えばクロマトグラフィー精製法（例えば親和性クロマトグラフィー）、ゲル濾過などを使用すればよい。上記精製によって、組み込まれていない、つまり過剰なヌクレオチドおよびテンプレートＤＮＡがｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写培地から除去され、きれいなＲＮＡが得られる。例えば、上記転写後、反応混合物に依然含有されているＤＮＡテンプレートを除去するために、転写ＲＮＡとの反応混合物は通常ＤＮａｓｅで消化される。上記の構成に続いてまたは上記の構成の替わりに、本発明の複合化ＲＮＡの転写された少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を、ＬｉＣｌを用いて沈殿させてもよい。そして、上記転写ＲＮＡの精製をＩＰ  ＲＰ−ＨＰＬＣによって行う。こうすることによって、特に、相対的に高分子である断片と低分子である断片を互いに効果的に分離することができるようになる。
【０１６７】
好ましくは、この文脈において、ＲＮＡの精製は、予備用の規模でＲＮＡの精製法を用いて実施される。この予備の規模は、ＨＰＬＣによって多孔質性逆位相を固定相（ＰＵＲＥメッセンジャー）として使用してＲＮＡが精製されるという点において異なる。例えば精製を実施するためには、ＨＰＬＣ精製の固定相として、逆位相が採用できる。逆位相を用いたクロマトグラフィーの場合、極性を持たない化合物が通常固定相として機能し、極性を有する溶媒、例えば通常緩衝液の形態で採用される水とアセトニトリルおよび／またはメタノールとの混合物は、溶出の移動相として機能する。好ましくは、上記多孔質性逆位相は、８．０μｍ±２μｍ、好ましくは±１μｍ、さらに好ましくは＋／−０．５μｍの粒子サイズを有する。上記逆位相物質はビーズの形態であってもよい。上記精製は、この粒子サイズを有する多孔質性逆位相を用いて、また、必要に応じてビーズの形態で、特に好適に実施され、特に良好な分離結果が得られる。使用する逆位相は、好ましくは多孔質である。これは、例えばＡｚａｒａｎｉ  Ａ．  ａｎｄ  Ｈｅｃｋｅｒ  Ｋ．Ｈ．に記載された、多孔質でない固定逆位相の場合、過度な高圧が発生して、ＲＮＡの予備的精製がたとえ可能であっても非常な困難がともなうようになるという理由による。逆位相は、好ましくは孔サイズが２００Åから５，０００Å、特に３００Åから４，０００Åである。逆位相に特に好適な孔サイズは、２００Å〜４００Å、８００Å〜１，２００Å、および３，５００Å〜４，５００Åである。上記の孔サイズを有する逆位相によれば、上記転写ＲＮＡの精製において特に良好な結果が得られる。逆位相に用いる物質は、好ましくはポリスチレンジビニルベンゼンであり、特に非アルキル化ポリスチレンジビニルベンゼンが使用される。ポリスチレンジビニルベンゼンを用いた固定相は、それ自体が公知である。上記精製の場合、それ自体が公知であってＨＰＬＣ法ですでに採用され、かつ市販されているポリスチレンジビニルベンゼンが使用可能である。特に粒子サイズが８．０μｍ±０．５μｍ、孔サイズが２５０μｍ〜３００μｍ、９００μｍ〜１，１００μｍ、または３，５００μｍ〜４，５００μｍである非アルキル化多孔質ポリスチレンジビニルベンゼンが、精製の使用にとって非常に好ましい。逆位相にこの物質を使用すれば、上述の長所は特に好適に実現され得る。
【０１６８】
ＨＰＬＣ精製は、正の電荷を有するイオンが、負に帯電したＲＮＡに対する逆イオンとして移動相に添加されるイオン対法によって実施可能である。親油性イオン対は、逆位相系の極性を持たない固定相によって速度が落とされ、これにより形成される。実施の際には、イオン対法の精密な条件を、具体的なそれぞれの分離課題に合わせて経験的に決定するしなければならない。逆イオンのサイズ、その濃度、および溶液のｐＨ値は、分離結果に対して大幅に寄与する。好適には、アルキルアンモニウム塩（例えば酢酸トリエチルアンモニウム）および／またはテトラアルキルアンモニウム化合物（例えばテトラブチルアンモニウム）が移動相に添加される。好ましくは、０．１Ｍの酢酸トリエチルアンモニウムが添加され、ｐＨ値が約７に調節される。移動相の選択は、所望の分離の特性に依存する。このことは、特定の分離に対して見つけた移動相、例えば従来技術から知りえる移動相を、十分な成功の見通しをもって別の分離課題に対して容易に転用ができないことを意味している。理想的な溶出条件、特に採用する移動相は、経験的に実験を通じて各分離課題ごとに決定しなければならない。ＨＰＬＣ法によってＲＮＡを溶出する場合、移動相としては、水性溶媒と有機溶媒の混合物が採用可能である。この文脈において、ｐＨ値が約７、例えば６．５〜７．５、例えば７．０である緩衝液を水性溶媒として使用することが好適であり、好ましくは緩衝用酢酸トリエチルアンモニウムが使用され、特に好ましくは、上述のようにイオン対法において、さらにＲＮＡに対する逆イオンとして作用する０．１Ｍの酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液が使用される。移動相において採用される有機溶媒は、アセトニトリル、メタノール、またはこれらの２つの混合物であってもよく、とりわけ好ましくはアセトニトリルである。上述のＨＰＬＣ法を用いたＲＮＡの精製は、これらの有機溶媒を用いて特に好適に実施される。上記移動相は、特に好ましくはｐＨ値が７の０．１Ｍの酢酸トリエチルアンモニウムとアセトニトリルとの混合物である。同様に、移動相を基準にして、上記移動相が５．０体積％から２０．０体積％の有機溶媒を含有し、１００体積％を満たす残りの部分が水性溶媒であれば、特に好ましいことが分かった。また、移動相を基準にして、移動相が９．５体積％から１４．５体積％の有機溶媒を含有し、１００体積％を満たす残りの部分が水性溶媒であれば、本発明に係わる方法にとってとりわけ好ましい。上記ＲＮＡの溶出は、続いて均一濃度でまたは勾配分離を用いて実施される。均一濃度分離の場合、ＲＮＡの溶出は、常に一定である、単一の溶出剤、または複数の溶出剤の混合物を用いて実施される。なお、上記において詳述した溶媒は、溶出剤として使用可能である。
【０１６９】
あるいは、本発明のトランスフェクション方法のステップａにおいて、上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）は、化学的合成によって調製されてもよい。こうすることによって、当該技術分野において公知の各種方法が使用できる。ホスホラミダイト法は、化学的にオリゴヌクレオチド、例えばＲＮＡ断片を合成する方法として最も広く使用されている（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：７０５９〜７０７１，１９８９）。一般に、このホスホラミダイト法は、テトラゾールを促進剤として用い、ヌクレオシドホスホラミダイトとヌクレオシドとの凝縮反応をキー反応として利用する。この反応は通常、糖類中のヒドロキシル基とヌクレオシド塩基類中のアミノ基との双方に対して競合しながら起こるので、所望のヌクレオチドを合成するためには、糖類中のヒドロキシル基だけに対して選択的に反応することが要求される。したがって、アミノ基に対する副反応は、通常、アミノ基を保護することによって防止される。上記保護基は、合成が終了すると除去される。ＲＮＡ分子の合成方法に関するさらに具体的な情報は、”７ｔｈ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｃｈｅｍ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，”、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ，  １８，１８１〜１８４（１９８７８月３０日）において報告されたＡｒｎｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｃｈｌｏｒｉｄｉｔｅ  ａｎｄ  Ａｍｉｄｉｔｅ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ａｍｉｄｉｎｅ  Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，”；Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，  １０８（１９），ｐ．６９２、Ａｂｓｔｒ．、Ｎｏ．１６７８７５ｚ（１９８８年５月９日）；Ｈａｙａｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ  Ｔｒｉｆｌａｔｅ  ａｓ  ａｎ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｖｉａ  ｔｈｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ  Ｍｅｔｈｏｄ”、Ｊ．  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ６１（２３）、７９９６〜７９９７（１９９６年１１月１５日）；Ｐｉｒｒｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｐｒｏｏｆｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｈｏｔｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｉｃ  ＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｗｉｔｈ  ３’，５’−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｉｎｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ，”  Ｊ．  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ６３（２），、２４１〜２４６（１９９８年１月２３日）；  Ｅｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  Ｉｍｉｄａｚｏｌｉｄｅ−−Ａ  Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｔｒｉｆｌａｔｅ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８０（４５）、３９４７〜３９４８（１９８０年９月）に記載がある。これらの文献はすべて参照によってここに引用される。
【０１７０】
本発明のステップａにおける複合化ＲＮＡの調製は、通常、サブステップａ３）にしたがって、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる特定量の上記１つ以上のオリゴペプチドに対して、上記少なくとも１つのＲＮＡ（分子）を特定量付加することによって行う。こうすることによって、少なくとも１つのＲＮＡ（分子）、およびここで規定された実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドについて上述した、モル比または質量比が通常予想される。複合体の形成は、通常両方の成分を混合した際に起こる。このようにすることによって、通常は、上記ペプチド性成分が上記ＲＮＡ成分に付加される。ただし逆になることもある。
【０１７１】
ただし、方法ステップａ）による上記調製ステップは必要に応じて実施するステップであり、本発明に係る複合化ＲＮＡがすでに利用可能であれば実施しなくてもよい。したがって、上記において定義されたサブステップａ１）、ａ２）、およびａ３）も必要に応じて実施するステップであり、複合化ＲＮＡを生成するために使用されるＲＮＡがすでに利用可能であれば、必ずしも実施する必要はない。同様に、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドは、直接使用されてもよく、すでに利用可能（例えば供給者から入手可能）であれば、必ずしも調製する必要はない。
【０１７２】
本発明の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで細胞または組織にトランスフェクトする方法のステップｂ）においては、ステップａにおいて準備および／または調製された複合化ＲＮＡが、細胞または組織にトランスフェクトされる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて細胞または組織にトランスフェクトすることは、一般にステップａにおいて準備および／または調製された複合化ＲＮＡを、細胞または組織に付加することによって実施される。そして、好ましくは、上記複合化ＲＮＡが、細胞性メカニズム、例えばエンドサイトーシスを使用することによって細胞に入る。複合化ＲＮＡそのものの細胞または組織への付加は、本発明によれば、本発明の複合化ＲＮＡ（分子）のトランスフェクション可能性のおかげで、その他の成分を一切付加させることなく実施される。あるいは、ステップａにおいて準備および／または調製された複合化ＲＮＡの細胞または組織への付加は、組成物の形態で、例えば水溶液の成分（好ましくは上記において定義された薬学的組成物）として実施されてもよい。さらに、上記組成物は、トランスフェクション活性をさらに亢進させるために、必要に応じて付加的成分を含有していてもよい。
【０１７３】
（ステップａにおいて準備および／または調製された）複合化ＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるトランスフェクションのための、この文脈における細胞（または宿主細胞）には、任意の細胞が含まれ、好ましくは、（上記において定義された）任意のＲＮＡ分子が、本発明の複合化ＲＮＡを使用することによってトランスフェクトされる細胞が含まれるが、これに限定されるものではない。特に、ＲＮＡトランスフェクションによって、本発明に係わる複合化ＲＮＡのＲＮＡによってコードされたタンパク質が、細胞内において発現することが可能になる。または、本発明の複合体のＲＮＡ（例えばｓｉＲＮＡ、反感知ＲＮＡ）が、細胞性遺伝子の発現を減弱させるまたは抑制することが可能になる。この文脈における細胞は、好ましくは、培養された真核細胞（例えばイースト菌細胞、植物細胞、動物細胞、およびヒト細胞）または原核生物細胞（例えば細菌細胞など）を含んでいるか、もしくは免疫応答を誘引する。翻訳後の修飾、例えばコードされているタンパク質のグリコシル化が必要であれば（Ｎ結合および／またはＯ結合）、好ましくは、多細胞性生体の細胞が選択される。原核生物細胞とは対照的に、上記（高等）真核細胞は、合成タンパク質の翻訳後の修飾を可能にする。当業者は、上記高等真核細胞または株化細胞を多数知っている。例としては、２９３Ｔ（胚性腎臓株化細胞）、ＨｅＬａ（ヒト子宮頸部癌腫細胞）、ＣＨＯ（チャイニーズハムスターの卵巣からの細胞）、さらに、実験用途で開発された細胞および株化細胞（例えばｈＴＥＲＴ−ＭＳＣ、ＨＥＫ２９３、Ｓｆ９、またはＣＯＳ細胞など）や、その他の株化細胞などがあげられる。適切な真核細胞としては、疾病または感染によって機能が損なわれた細胞または株化細胞（例えば癌細胞、特に本記載において言及される任意の種類の癌の癌細胞）、ＨＩＶによって機能が損なわれた細胞、および／または免疫系または中枢神経系（ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ；  ＣＮＳ）の細胞などがさらにあげられる。同様に、適切な細胞は真核微生物、例えばイースト菌に由来してもよく、このイースト菌としては、例えば出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ；  Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２８２：３９，  （１９９７））、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、カンジダ、ピキア、および糸状菌類、アスペルギルス属、ペニシリウム属などがあげられる。同様に、適切な細胞には原核生物細胞、例えば細菌細胞が含まれ、この細菌細胞としては、例えばエシェリキア・コリから得られる細菌細胞、または一般のバチルス、ラクトコッカス、ラクトバチルス、シュードモナス、ストレプトマイセス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、好ましくは大腸菌などの細菌から得られる細菌細胞などがあげられる。ヒト細胞または動物細胞（例えば本記述中で言及した動物の細胞）は真核細胞として特に好ましい。さらに、抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ；  ＡＰＣ）が、本発明に係る複合化ＲＮＡのｅｘ  ｖｉｖｏトランスフェクションに使用されてもよい。特に好ましいのは樹状細胞であり、樹状細胞は、本発明���係る複合化ＲＮＡのｅｘ  ｖｉｖｏトランスフェクションに使用されてもよい。
【０１７４】
特に好適な実施形態によれば、血液細胞および／または造血細胞、またはその部分的な集団、つまり、血液（全血）から単離される任意のタイプの細胞および／またはこれらの細胞に由来する培養株化細胞に由来する任意のタイプの細胞に、本発明において定義される複合化ＲＮＡが上記トランスフェクション法を使ってトランスフェクトされてもよい。これらの細胞の例としては、例えば赤血液細胞（赤血球）、顆粒球、単核細胞（末梢血単核球、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ；  ＰＢＭＣ）および／または血小板、ＡＰＳ、ＤＣなどがあげられる。好ましくは、血液細胞が使用され、その中でも、よく分化したプロフェッショナルなＡＰＣ（例えばＤＣ）をわずかな比率で含有していることを特徴とする血液細胞の部分的な集団が特に使用される。トランスフェクションの対象となる細胞は、トランスフェクションに対する使用時に、好ましくはそのＤＣ含有率が５％未満、特に好ましくは多くとも２％以下である。本発明の文脈において、「血液細胞」とは、好ましくは、全血、血清、またはその他の供給源（例えば脾臓またはリンパ節）からの赤血球、顆粒球、単核細胞（ＰＢＭＣ）、および／または血小板のほぼ純粋な集団の、プロフェッショナルなＡＰＣをわずかな比率で含む混合物または濃縮物であると理解すべきである。本発明によって使用される血液細胞は、好ましくは新鮮な血液細胞である。つまり、血液細胞の収集（特に採血）とトランスフェクションとの間の時間が非常に短い、例えば１２時間未満、好ましくは６時間未満、特に好ましくは２時間未満、とりわけ好ましくは１時間未満である。さらに、本発明に係る複合化ＲＮＡのトランスフェクション法を使ってトランスフェクションの対象となる血液細胞は、好ましくは、本発明の薬学的組成物を用いて治療する、実際の患者に由来する。上記において定義された血液細胞、造血細胞、またはその部分的な集団の使用は、以下に述べる驚くべき発見に基づいている。つまり、本発明において定義されるｍＲＮＡによってコードされたある抗原に対して治療を受ける患者に接種する場合には、個々人、特に治療を受ける実際の患者の例えば血液から得られる血液細胞（例えばＰＢＭＣ）を、手間と時間と費用のかかる細胞培養手法を使って、プロフェッショナルな抗原提示細胞（ＡＰＣ）（特に樹状細胞（ＤＣ））を高い比率で含んだ細胞の集団に分化させることが不要なのである。翻って、血液細胞、特に上述した血液細胞の部分的な集団を採取する例えば実際の患者において、適切な免疫活性化を実現する薬学的組成物を得るために、１つ以上の抗原をコードするｍＲＮＡを直接血液細胞にトランスフェクトすれば、免疫活性化を成功させるには充分なのである。なお、この免疫活性化は、好ましくは腫瘍からの１つ以上の抗原、もしくは病原菌または薬剤からの１つ以上の抗原に対して向けられる。本発明において定義される複合化ＲＮＡを血液細胞または血液細胞に由来する（血液細胞から単離、または各培養株化細胞から単離される）細胞にトランスフェクトすることは、抗原に限定されるものではなく、当然、複合化ＲＮＡを得るために使用される、本発明において定義される任意のＲＮＡ、例えば���発明において定義される任意の他の免疫活性化ＲＮＡや任意のコーディングＲＮＡなどに関連する。
【０１７５】
培養細胞（例えばヒトまたは動物細胞）をｉｎ  ｖｉｔｒｏでトランスフェクトする必要、または外植細胞（例えばヒトまたは動物細胞）をｉｎ  ｖｉｔｒｏで（再移植の前に宿主生体に）トランスフェクトする必要がある一方で、本発明の複合化ＲＮＡを患者に直接投与してｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクトすることも予想される。そこで、（ステップａにおいて準備および／または調製された）複合化ＲＮＡのトランスフェクションは、ステップｂにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで起こることもあり得る。つまり、生体組織および／または生体に投与されることもあり得る。したがって、本発明のトランスフェクション法のステップａにおいて準備された複合化ＲＮＡは、生体組織または生体に、そのまま、または例えば（液体）組成物（特に水性組成物、例えば上記において定義された薬学的組成物）の一成分として投与されてもよい。この文脈において、生体（または生物）とは、通常、ヒト、および例えばブタ、ヤギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ロバ、サル、類人猿、または齧歯類（例えばマウス、ハムスター、およびウサギ）などの動物を含む群から選択される哺乳類のことを意味している。ただしこれに限定されるものではない。さらに、上述の生体組織は、好ましくはこれらの生体に由来する。これらの生体組織および／または生体に対する複合化ＲＮＡは、任意の適した投与経路を介して、例えば全身に対して投与される。投与経路の例としては、上記において定義されたように、例えば皮内、経皮、経口、非経口などがあげられ、さらに、皮下注射、筋肉注射、静脈注射、外用および／または鼻腔内経路が含まれる。
【０１７６】
また、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで使用されてもよいトランスフェクション法は、例えば本発明において言及される各種疾病の治療法としてｉｎ  ｖｉｖｏで使用しても非常に適切である。本発明に係る治療法の好ましい一形態では、他の薬学的に効果的な物質、例えば抗体、または抗原（特に、本発明において開示される病原性抗原または腫瘍抗原）を投与すること、もしくは少なくとも１種類のサイトカインを投与することを含む別のステップを含んでいてもよい。両方を、例えば上記サイトカインまたは抗原をコードするＤＮＡまたはＲＮＡとして、上記複合化ＲＮＡとは別に投与してもよい。あるいは、上記サイトカインまたは抗原をそのまま投与してもよい。上記治療法は、免疫系をさらに賦活する（本発明において開示される）付加的な補助剤を投与することをさらに含んでいてもよい。本発明のさらに別の実施形態によれば、上記において定義された複合化ＲＮＡは、１つ以上のオリゴペプチドで複合化されたＲＮＡを少なくとも１つ含んでおり、上記オリゴペプチドは８〜１５アミノ酸の長さを有し、実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされ、上記複合化ＲＮＡが本発明において言及される特定の疾病の治療および／または予防のために使用されてもよい。特定の疾病の治療および／または予防は、通常、本発明の複合化ＲＮＡのＲＮＡによってコードされた適切なタンパク質の選択に左右される。この文脈における治療は、（このタンパク質をコードする）本発明に係る複合化ＲＮＡをそのまま投与すること、または上記において定義された本発明に係る（医薬品）組成物を投与することのいずれかによって行われてもよい。
【０１７７】
この文脈において、疾病または病状の例としては、例えば以下に列挙する疾病から選択される癌または腫瘍疾患があげられるが、これに限定されるものではない。すなわち、メラノーマ、悪性メラノーマ、結腸癌腫、リンパ腫、肉腫、芽腫、腎臓癌腫、胃腸腫瘍、神経膠腫、前立腺腫瘍、膀胱癌、直腸腫瘍、胃癌、食道癌、膵癌、肝臓癌、乳癌腫（すなわち乳癌）、子宮癌、子宮頸部癌、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ；  ＡＭＬ）、急性リンパ系白血病（ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ；  ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ；  ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ；  ＣＬＬ）、肝細胞腫、例えば乳頭腫ウイルス誘引性癌腫（例えば子宮頸部癌腫、すなわち子宮頸部癌）、多様なウイルス誘引性腫瘍、アデノ癌腫、ヘルペスウイルス誘引性腫瘍（例えばバーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘引性Ｂ細胞リンパ腫）、Ｂ型肝炎誘引性腫瘍（肝細胞癌）、ＨＴＬＶ−１誘引性リンパ腫およびＨＴＬＶ−２誘引性リンパ腫、聴神経腫瘍（ａｃｕｓｔｉｃｕｓ  ｎｅｕｒｉｎｏｍａ）、肺癌腫（すなわち肺癌、気管支癌腫）、小細胞肺癌腫、咽頭癌、肛門癌腫、グリア芽細胞腫、直腸癌腫、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、基底細胞腫、脳腫転移、髄芽細胞腫、膣癌、精巣癌、甲状腺癌腫、ホジキン症候群、髄膜腫、シュネーベルガー病（Ｓｃｈｎｅｅｂｅｒｇｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、下垂体腫瘍、菌状息肉腫、カルチノイド、神経鞘腫、棘細胞癌、バーキットリンパ腫、喉頭癌、腎臓癌、胸腺腫、コーパス（ｃｏｒｐｕｓ）癌腫、骨癌、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、ＣＵＰ症候群、頭部／頸部腫瘍、乏突起神経膠腫、外陰癌、腸癌、結腸癌腫、食道癌腫（すなわち食道癌）、疣贅症状、小腸腫瘍、頭蓋咽頭腫、卵巣癌、軟部組織腫瘍、卵巣癌（すなわち卵巣癌）、膵癌腫（すなわち膵癌）、子宮内膜癌腫、肝臓腫転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、白血病、形質細胞腫、蓋腫瘍（ｌｉｄ  ｔｕｍｏｕｒ）、前立腺癌（すなわち前立腺腫瘍）などである。
【０１７８】
この文脈において、疾病または病状のさらに別の例としては、例えば以下に列挙する疾病から選択されるウイルス性感染症から選択される感染症などがあげられるが、これに限定されるものではない。すなわち、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、黄熱病、ライム病、炭疽病、エイズ（ＡＩＤＳ）、尖圭コンジローマ（ｃｏｎｄｙｌｏｍａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）伝染性軟属腫、デング熱、三日熱、エボラウイルス、感冒、初夏髄膜脳炎（ｅａｒｌｙ  ｓｕｍｍｅｒ  ｍｅｎｉｎｇｏｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ；  ＥＳＭＥ）、インフルエンザ、帯状疱疹、肝炎、単純ヘルペスＩ型、単純ヘルペスＩＩ型、帯状疱疹、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、マールブルグウイルス、麻疹、口蹄疫、単核球症、流行性耳下腺炎、ノーウォークウイルス感染症、パイフェル腺熱、天然痘、ポリオ（灰白髄炎）、仮性クループ、感染性紅斑、狂犬病、疣贅、ウエストナイル熱、水疱、サイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ；  ＣＭＶ）、細菌性感染症などである。上記細菌性感染症の例としては、例えば、流産（前立腺炎症）、炭疽病、虫垂炎（盲腸の炎症）、ボレリア症、ボツリヌス中毒症、カンピロバクター、トラコーマ病原体（尿道、結膜の炎症）、コレラ、ジフテリア、ドナボノシス（ｄｏｎａｖｏｎｏｓｉｓ）、喉頭蓋炎、シラミ媒介性チフス、腸チフス、ガス壊疽、ノウサギ疫病（ｈａｒｅ  ｐｌａｇｕｅ）、ピロリ菌、百日咳、気候性横痃、骨髄炎、レジオネラ症病、ハンセン病、リステリア症、肺炎、髄膜炎、細菌性髄膜炎、炭疽病、中耳炎、マイコプラズマ・ホミニス、新生児敗血（絨毛羊膜炎）、水癌、パラチフス、疫病、ライター病、ロッキー山紅斑熱、サルモネラパラチフス、サルモネラ腸チフス、猩紅熱、梅毒、破傷風、淋病、ツツガムシ病、結核、発疹チフス、腟炎、軟性下疳、ならびに寄生虫、原虫、または菌類によって引き起こされる感染症があげられる。さらに、上記寄生虫、原虫、または菌類によって引き起こされる感染症の例としては、例えば、アメーバ性赤痢、ビルハルツ住血吸虫症、シャーガス病、包虫、魚類条虫類、魚肉中毒（シガテラ）、キツネ条虫類（ｆｏｘ  ｔａｐｅｗｏｒｍ）、真菌症白癬、イヌ条虫類、カンジダ症、粃糠疹、そう痒（疥癬）、リーシュマニア症、皮膚リーシュマニア症、ランブリアン赤痢（ｌａｍｂｌｉａｎ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｙ、ジアルジア症）、シラミ、マラリア、顕微鏡法、糸状虫症（河川盲目症）、真菌症、無鉤条虫、住血吸虫症、睡眠病、有鉤条虫、トキソプラズマ症、トリコモナス症、トリパノソーマ症（睡眠病）、内臓のリーシュマニア症、おむつによる皮膚炎、または矮小条虫などがあげられる。
【０１７９】
同様に本発明の文脈における疾病の例としては、以下に列挙するウイルスなどから選択されるウイルスによって引き起こされる（感染性）ウイルス性疾患なとがあげられるが、これに限定されるものではない。すなわち、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、オルソポックス痘瘡ウイルス、オルソポックス小痘瘡ウイルス、パラポックスオビス（ｏｖｉｓ）ウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、疱疹Ｂウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、ヒト巨大細胞ウイルス（ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｙ  ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、チクングニアウイルス、オニョンニョンウイルス、ルビウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＧＢウイルスＣ、ウエストナイルウイルス、デング熱ウイルス、黄熱病ウイルス、跳躍病ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、日本脳炎Ｂ型ウイルス、ポワッサンウイルス、ＦＳＭＥウイルス、ＳＡＲＳ付随コロナウイルス、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ、ヒトコロナウイルスＯｃ４３、トロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルスＩ型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルスＩＩ型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、タカリベウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、ボルナ疾病ウイルス、ブニヤムウェラウイルスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、スナバエ発熱ウイルス、トスカーナウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハザラウイルス、ハサン（Ｋｈａｓａｎ）ウイルス、ハンタンウイルス、ソウルウイルス、プロスペクト・ヒルウイルス、プーマラウイルス、ドブラバ・ベルグレードウイルス、トゥーラウイルス、シンノンブルウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ザイールエボラウイルス、スーダンエボラウイルス、象牙海岸エボラウイルス、インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、バラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、呼吸器多核体ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、水疱性口内炎インディアナウイルス、狂犬病ウイルス、モコラウイルス、ドゥベンハーゲ・ウイルス、ヨーロッパ・コウモリ・リッサウイルス１型＋２型、オーストラリア・コウモリ・リッサウイルス、アデノウイルスＡ〜Ｆ、ヒトパピローマウイルス、コンジロームウイルス６型、コンジロームウイルス１１型、ポリオーマウイルス、アデノ随伴ウイルス２型、ロタウイルス、またはオルビウイルスなどである。これらの疾病は、例えば本発明に係るワクチンによって治療することができる。
【０１８０】
さらに、疾病または病状の例としては、以下に列挙する循環器病から選択する循環器病などがあげられるが、これに限定されるものではない。すなわち、冠動脈心疾患、動脈硬化症、卒中、および高血圧、ならびにアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ジストニア、てんかん、多発性硬化症、およびパーキンソン病などから選択される神経細胞の疾病である。
【０１８１】
この文脈において疾病または病状の例としては、例えばアレルギー障害またはアレルギー疾病などがあげられる。アレルギーとは通常、ある腫の外来性抗原またはアレルゲンに対する異常な後天性免疫過敏症を含む状態である。アレルギーは通常、これらの抗原またはアレルゲンに対して局所的または全身的な炎症反応を引き起こし、体内においてこれらのアレルゲンに対する免疫を生じさせる。この文脈におけるアレルゲンの例としては、例えば、草、花粉、カビ、薬物、または様々な環境的なトリガーなどがあげられる。いかなる理論に縛られるわけではないが、アレルギー疾患の発生には、複数の異なる疾病メカニズムが関わっていると考えられる。Ｐ．  ＧｅｌｌとＲ．  Ｃｏｏｍｂｓによる分類方式によれば、「アレルギー」という言葉は、古典的ＩｇＥ機構によって引き起こされるＩ型過敏症に限られる。Ｉ型過敏症は、マスト細胞および好塩基球が過度にＩｇＥによって活性化され、その結果、鼻汁のような軽い症状から、生命を脅かすアナフィラキシ・ショック、および死亡にもいたる全身的な炎症反応が起きることを特徴とする。周知の種類のアレルギーの例としては、例えば、アレルギー性喘息（鼻の粘膜の肥大を引き起こす）、アレルギー性結膜炎（結膜の発赤および痒みを引きを起こす）、アレルギー性鼻炎（いわゆる枯草熱）、即時型過敏反応、血管浮腫、アトピー性皮膚炎（湿疹）、じん麻疹、好酸球増加症、昆虫刺傷に対する呼吸系アレルギー、皮膚アレルギー（各種発疹、例えば湿疹、じん麻疹、および（接触性）皮膚炎を引きを起こし、また、これらの症状を含む）、食品アレルギー、薬に対するアレルギーなどがあげられるが、これに限定されるものではない。本発明に関して、アレルゲン（例えばネコアレルゲン、埃アレルゲン、ダニ抗原、植物抗原（例えばカバノキ抗原）など）をコードする例えばＲＮＡを含有する例えば薬学的組成物が本発明の複合体として提供される。こうすることによって、コードされた上記アレルゲンは、患者の免疫応答を脱感作させる。あるいは、本発明の上記薬学的組成物が、上記の（過剰な）免疫応答をより強力なＴＨ１応答に変化させ、こうすることによって、患者の非所望のＩｇＥ応答を抑制するまたは減弱させる。
【０１８２】
さらに、ここで定義される疾病または病状の例としては、例えば自己免疫疾患などがあげられる。自己免疫疾患は、大きく分類すると、各疾病の主な臨床病理学的特徴によって、全身的な自己免疫性障害と器官特異的、つまり局在的な自己免疫性障害とに分けられる。自己免疫疾患は、ＳＬＥ、シェーグレン症候群、強皮症、関節リウマチ、および多発性筋炎を含む全身的症候群のカテゴリーと、内分泌学症候群（ＤＭ１型、橋本甲状腺炎、アジソン病など）、皮膚科学的症候群（尋常性天疱瘡）、血液学的症候群（自己免疫性溶血性貧血）、神経系症候群（多発性硬化症）、または実質的に体組織の任意の限局性腫瘤を含む局所的症候群のカテゴリーとに分類できる。治療対象となる自己免疫疾患は、Ｉ型自己免疫疾患、ＩＩ型自己免疫疾患、ＩＩＩ型自己免疫疾患、またはＩＶ型自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；  ＭＳ）、関節リウマチ、糖尿病、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ；  ＳＬＥ）、慢性多発性関節炎、バセドウ病、自己免疫性型慢性肝炎、大腸炎、アレルギーＩ型疾病、アレルギーＩＩ型疾病、アレルギーＩＩＩ型疾病、アレルギーＩＶ型疾病、線維筋痛症、脱毛、ベヒテレフ病、クローン病、重症筋無力症、慢性単純性苔癬、リウマチ性多発筋痛症、進行性全身性硬化症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；  ＰＳＳ）、乾癬、ライター病、リウマチ性関節炎、乾癬、血管炎など、またはＩＩ型糖尿病からなる群より選択されてもよい。
【０１８３】
上記免疫系が自己抗原に対して免疫反応を誘引する正確な形態は、現時点でははっきりしないが、病気の原因についてはいくつかの発見がある。これによると、自己反応はＴ細胞バイパスに起因している。正常な免疫系には、Ｂ細胞が抗体を大量に生成する前に、Ｔ細胞によってＢ細胞が活性化されること必要である。Ｔ細胞のこの要件は、まれなケースではあるがバイパスされることがある。このようなケースの一例としては、例えば、Ｔ細胞受容体のβ−サブユニットに非特異的に直接結合することによって、Ｂ細胞のポリクローナル賦活、またはＴ細胞のポリクローナル賦活さえも惹起できるスーパー抗原を生成する生体に感染させる場合があげられる。別の説明では、分子の模倣から自己免疫疾患が起こるとする。外因性抗原が、ある宿主抗原と構造的な類似点を有していてもよい。この場合、この抗原に対して生成される（自己抗原を模倣する）任意の抗体は、理論的にはさらに宿主抗原に結合し、免疫応答を増幅する。分子の模倣の最も驚くべき形態は、ヒト心筋と抗原を共有するグループＡのβ溶連菌において観察され、リウマチ熱における心臓の症状に関連する原因となっている。したがって、本発明は、本発明の複合化ＲＮＡの成分として自己抗原をコードするＲＮＡ（または本発明の複合化ＲＮＡを含んだ（液体）組成物）を提供することを可能にする。または、自己抗原（タンパク質、ｍＲＮＡ、または自己抗原タンパク質をコードとするＤＮＡ）と本発明の複合化ＲＮＡとを含む薬学的組成物を提供することを可能にする。いずれ場合にも、免疫系は通常、脱感作される。
【０１８４】
最後に、同様に、本発明の文脈において治療対象である疾病の例としては、例えば単遺伝子疾患、つまり遺伝性疾病、または一般的な遺伝子疾患などがあげられる。上記遺伝子疾患は、通常遺伝子の欠陥によって、例えばタンパク質の転写や翻訳を許さない調整変異、またはタンパク質活性が消失する遺伝子変異が原因となって引き起こされる。これらの疾病は、代謝障害またはその他の症状、例えば筋ジストロフィーを頻繁に引き起こす。したがって、本発明は、本発明において定義される複合化ＲＮＡを提供するによってこれらの疾病の治療を可能にする。したがって、以下の疾病が治療可能である。すなわち、３β−水酸化ステロイド脱水素酵素欠乏症（ＩＩ型）；３−ケトチオラーゼ欠乏症；６−メルカプトプリン敏感症；アースコグ・スコット症候群；無βリポタンパク血症；無カタラーゼ血症；軟骨無発生症；軟骨無発生症・低軟骨形成症；軟骨無形成症；色覚異常；遠位中間肢異形成症（ハンター・トンプソン型）；ＡＣＴＨ欠乏症；Ａｃｙｌ−ＣｏＡ脱水素酵素欠乏症（短鎖、中鎖、長鎖）；大腸腺腫症；アデノシン・脱アミノ酵素欠乏；アデニロスクシナーゼ欠乏症；アダリノパシー（Ａｄｈａｌｉｎｏｐａｔｈｙ）；副腎性過形成、先天性（１１β−ヒドロキシラーゼ欠乏、１７α−ヒドロキシラーゼ欠乏、および２１−ヒドロキシラーゼ欠乏に起因する）；副腎性形成不全、先天性低ゴナドトロピン性性腺機能低下症；副腎性器症候群；副腎白質ジストロフィー；副腎脊髄神経障害；無フィブリノーゲン血症；無ガンマグロブリン血症；アラジール症候群；白子症（褐色白子症、眼白子症、眼皮膚白皮症、赤褐色白子症）；アルコール不耐症、急性；アルドラーゼＡ欠乏症；アルドステロン症、糖質コルチコイド反応性；アレキサンダー病；アルカプトン尿症；汎発性脱毛症；α１−抗キモトリプシン欠乏；αメチルアシル−ＣｏＡラセミ化酵素欠乏；αサラセミア／精神遅滞症候群；アルポート（Ａｌｐｏｒｔ）症候群；アルツハイマー病−１（ＡＰＰに関連する）；アルツハイマー病−３；アルツハイマー病−４；エナメル質形成不全；アミロイド神経障害（家族性型、いくつかの対立形質型）；アミロイド症（オランダ型；フインランド型；遺伝性腎臓；腎臓；老年性全身性）；筋萎縮性側索硬化症；無アルブミン血症；男性ホルモン非感受性；貧血（ダイアモンド・ブラックファン）；貧血（溶血性、ＰＫ欠乏）；貧血（溶血性、Ｒｈ  ｎｕｌｌ、抑制因子型）；貧血（新生児溶血性、致命的および近致命的）；貧血（鉄芽球性、運動失調を伴う）；貧血（鉄芽球性／低色素）；Ｇ６ＰＤ欠乏に起因する貧血；動脈瘤（家族性動脈性）；アンジェルマン症候群；血管浮腫；無虹彩症；前眼部異常および白内障；前眼部間葉系発育異常；前眼部間葉系発育異常および白内障；抗トロンビンＩＩＩ欠乏；不安に関連した性格特性；アペール症候群；無呼吸（麻酔後）；ＡｐｏＡ−ＩおよびａｐｏＣ−ＩＩＩ欠乏（複合性）；アポリポタンパクＡ−ＩＩ欠乏；アポリポタンパクＢ−１００（リガンド欠損性）；見かけの鉱質コルチコイド過剰症候群（これに起因する高血圧）；アルギニン血症；アルギニノコハク酸尿症；関節症（進行性偽性リウマトイド、子供の関節症）；アスパルチルグルコサミン尿症；運動��調（偶発性）；単独ビタミンＥ欠乏をともなう運動失調；毛細血管拡張性運動失調症；骨形成不全ＩＩ；ＡＴＰ依存性ＤＮＡリガーゼＩ欠乏；房室伝導欠損をともなう心房中隔欠損症；丘疹破壊をともなう無毛症；自閉症（サクシニルプリンミック（ｓｕｃｃｉｎｙｌｐｕｒｉｎｅｍｉｃ））；自己免疫の多腺性病、Ｉ型；自律神経系機能障害；アクセンフェルト異常；無精子症；パンフォース・ラザルス（Ｂａｍｆｏｒｔｈ−Ｌａｚａｒｕｓ）症候群；バナヤン・ゾナナ（Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ）症候群；バルト症候群；バーター症候群（２型または３型）；基底細胞癌腫；基底細胞母斑症候群；ＢＣＧ感染症；ベアレ・スティーブンソン（Ｂｅａｒｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ）真皮症候群；ベッカー型筋ジストロフィー；ベックウィズ・ウィーデマン症候群；ベルナール・スーリエ症候群（Ｂ型；Ｃ型）；ベツレムミオパチー；胆汁酸吸収障害、一次；ビオチニダーゼ欠乏症；膀胱癌；トロンボキサン受容体欠損に起因する出血障害；ブルーム症候群；短指症（Ｂ１型またはＣ型）；鰓耳（Ｂｒａｎｃｈｉｏｏｔｉｃ）症候群；鰓弓耳腎（Ｂｒａｎｃｈｉｏｏｔｏｒｅｎａｌ）症候群；乳癌（浸潤性管内；小葉；雄性、ライフェンスタイン症候群をともなう；孤発性）；乳癌−１（早発性）；乳癌−２（早発性）；ブロディーミオパチー；ブルガダ症候群；ブルンネル症候群；バーキットリンパ腫；チョウジストロフィー（レチナール）；Ｃ１ｑ欠乏（Ａ型；Ｂ型；Ｃ型）；Ｃ１ｒ／Ｃ１ｓ欠乏；Ｃ１ｓ欠乏、単独型；Ｃ２欠乏症；Ｃ３欠乏症；Ｃ３ｂ失活剤欠乏症；Ｃ４欠乏症；Ｃ８欠乏症、ＩＩ型；Ｃ９欠乏症；常染色体性性転換をともなう屈曲肢異形成症；屈指症−関節症−内反又心膜炎（Ｃａｍｐｔｏｄａｃｔｙｌｙ−ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ−ｃｏｘａ  ｖａｒａｐｅｒｉｃａｒｄｉｔｉｓ）症候群；カナバン病；
カルバモイルリン酸塩合成酵素Ｉ欠乏；糖タンパク質糖鎖不全症候群（Ｉ型；Ｉｂ型；ＩＩ型）；肺のカルチノイド腫瘍；心脳ミオパチー（致命的小児性、チトクロムｃ酸化酵素欠乏症に起因）；心筋症（拡張性；Ｘ連鎖拡張性；家族性肥大性；肥大性）；カルニチン欠乏症（全身性原発性）；カルニチン−Ａアシルカルニチン転位酵素欠乏症；手根管症候群（家族性）；白内障（青色白内障；先天性；結晶性ａｃｕｌｅｉｆｏｒｍ；若年発症；多形性および層状；点状；先天層間（ｚｏｎｕｌａｒ  ｐｕｌｖｅｒｕｌｅｎｔ））；白内障、Ｃｏｐｐｏｃｋ状；ＣＤ５９欠乏症；セントラルコア疾病；小脳失調；脳アミロイド血管症；皮質下梗塞および白質脳症をともなう大脳動脈症；大脳空洞性形成異常−１；大脳眼顔面骨格症候群；脳腱黄色腫症；脳血管障害；セロイドリポフスチン沈着症（神経細胞性、変異体若年性型、顆粒状オスミウム酸親和性沈着物）；セロイドリポフスチン沈着症（神経細胞−１、小児性）；セロイド−リポフスチン沈着症（神経細胞−３、若年性）；チャー（Ｃｈａｒ）症候群；シャルコー・マリー・トゥース病；シャルコー・マリー・トゥース神経障害；シャルルボア・サゲネー（Ｃｈａｒｌｅｖｏｉｘ−Ｓａｇｕｅｎａｙ）型；チェディアック・東症候群；塩素イオン下痢（フインランド型）；胆汁うっ滞（良性反復性肝内）；胆汁うっ滞（家族性肝内）；胆汁うっ滞（進行性家族性肝内）；コレステロールエステル蓄積症；点状軟骨異形成症（末節骨短縮型；近位肢型；Ｘ連鎖性優性；Ｘ連鎖性劣性；グレーベ型）；軟骨肉腫；全脈絡膜萎縮；慢性肉芽腫症（常染色体性、ＣＹＢＡ欠乏に起因）；慢性肉芽腫症（Ｘ連鎖性）；ＮＣＦ−１欠乏に起因する慢性肉芽腫症；ＮＣＦ−２欠乏に起因する慢性肉芽腫症；カイロミクロン血症症候群、家族性；シトルリン血症；古典的コケイン症候群−１；口唇裂、唇顎裂、口蓋裂；口唇裂／口蓋外胚葉異形成症症候群；鎖骨頭蓋異骨症；ＣＭＯ  ＩＩ欠乏；コーツ病；コケイン症候群−２、Ｂ型；コフィン・ローリー症候群；コルヒチン抵抗性；結腸アデノ癌腫；結腸癌；色覚異常（２型色覚異常；１型色覚異常；３型色覚異常）；直腸結腸癌；複合第Ｖ因子およびＶＩＩＩ欠損；複合高脂血症（家族性）；複合免疫不全（Ｘ連鎖性、中等度）；複合化Ｉ欠乏；複合神経障害；錐体ジストロフィー３型；錐体杆体ジストロフィー３型；錐体杆体ジストロフィー６型；錐体杆体レチナールジストロフィー２型；先天性両側性輸精管欠損；結膜炎、木質性；拘縮性くも指；コプロポルフィリン症；先天性角膜扁平；角膜薄濁；角膜ジストロフィー（アベリノ型；ゼラチン質液滴状；グレーノーＩ型；格子Ｉ型；ライス・バックラーズ型（Ｒｅｉｓ−Ｂｕｃｋｌｅｒｓ））；コルチゾール抵抗性；クマリン抵抗性；カウデン病；ＣＰＴ欠乏、肝臓（Ｉ型；ＩＩ型）；筋痙攣（家族性、カリウム悪化）；頭蓋・聾・手症候群；頭蓋骨癒合症（２型）；クレチン症；クロイツフェルト・ヤコブ病；クリグラー・ナジャー症候群；クルーゾン症候群；クラリーノ（Ｃｕｒｒａｒｉｎｏ）症候群；皮膚弛緩症；環状血球新生；環状魚鱗癬；円柱腫症；嚢胞性線維症；シスチン症（腎症）；シスチン尿（ＩＩ型；ＩＩＩ型）；ダルトン症；ダリエー病；Ｄ−二機能性タンパ��質欠乏症；聴覚消失、常染色体優性１；聴覚消失、常染色体優性１１；聴覚消失、常染色体優性１２；聴覚消失、常染色体優性１５；聴覚消失、常染色体優性２；聴覚消失、常染色体優性３；聴覚消失、常染色体優性５；聴覚消失、常染色体優性８；聴覚消失、常染色体優性９；聴覚消失、常染色体性劣性１；聴覚消失、常染色体劣性２；聴覚消失、常染色体劣性２１；聴覚消失、常染色体劣性３；聴覚消失、常染色体劣性４；聴覚消失、常染色体劣性９；聴覚消失、非症候性感音性１３；聴覚消失、Ｘ連鎖性１；聴覚消失、Ｘ連鎖性３；デブリソキン感受性；デジュリーヌ・ソッタ病；認知症（家族性デンマーク型）；認知症（パーキンソニズムをともなう前頭側頭骨）；歯の疾病；歯科的異常；歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症；デニス・ドラッシュ症候群；隆起性皮膚線維肉腫；デスモイド疾病；尿崩症（腎発生）；尿崩症（神経下垂体）；糖尿病（インスリン抵抗性）；糖尿病（希少型）；糖尿病（ＩＩ型）；捻曲性骨異形成症；ジヒドロピリミジン尿症；薬用量感受性性転換；網膜のドイン蜂巣状変性；デュービン‐ジョンソン症候群；デュシェンヌ筋ジストロフィー；血小板減少症をともなう異常赤血球産生症貧血；異常フィブリノーゲン血症（α型；β型；γ型）；
先天性角化異常症−１；プロトロンビン不全血症；ジストニア（ドパ反応性）；ジストニア（筋クローヌス性）；ジストニア−１（ねじれ）；外胚葉異形成症；偏位水晶体；瞳孔水晶体；欠指症（外胚葉異形成症、および口唇裂／口蓋症候群３）；エーラス・ダンロス症候群（早老性型）；エーラス・ダンロス症候群（Ｉ型；ＩＩ型；ＩＩＩ型；ＩＶ型；ＶＩ型；ＶＩＩ型）；エラスチン大動脈弁上部狭窄症；楕円赤血球症−１；楕円赤血球症−２；楕円赤血球症−３；エリス・ファンクレフェルト症候群；エメリ・ドレフュシュ筋ジストロフィー；肺気腫；脳疾患；心内膜線維弾性症−２；子宮内膜癌腫；終板アセチルコリンエステラーゼ欠乏；亢進性Ｓ錐体症候群；拡大前庭水管；表皮水疱症；栄養障害型表皮水疱症（優性または劣性）；単純性表皮水疱症；表皮溶解性角化症；表皮剥離性掌蹠角化症；てんかん（全般；若年性；筋クローヌス性；夜間性前頭葉；進行性筋クローヌス性）；てんかん、良性、新生児（１型または２型）；骨端異形成症（多発性）；偶発性運動失調（２型）；偶発性運動失調／ミオキミア症候群；赤血病（α；異形成）；赤血球増多；紅斑角皮症；エストロゲン抵抗性；ＬＤＨ−Ａ欠乏に起因する労作性ミオグロビン尿症；外骨腫、多発性（１型；２型）；滲出性硝子体網膜症、Ｘ連鎖性；ファブリ病；補体因子欠乏；第ＶＩＩ因子欠乏症；第Ｘ因子欠乏症；第ＸＩ因子欠乏症；第ＸＩＩ因子欠乏症；第ＸＩＩＩＡ因子欠乏症；第ＸＩＩＩＢ因子欠乏症；家族性地中海熱；ファンコニ貧血；ファンコニ・ピッケル（Ｆａｎｃｏｎｉ−Ｂｉｃｋｅｌ）症候群；ファーバー脂肪性肉芽腫症；脂肪肝（急性）；ソラマメ症；魚眼症；中心窩形成不全；脆弱Ｘ染色体症候群；フレイジャー症候群；フリードライヒ失調症；果糖・ビスホスファターゼフルクトース不耐性；フコシドーシス；フマラーゼ欠乏症；白点状眼底；黄色斑眼底；Ｇ６ＰＤ欠乏；ＧＡＢＡトランスアミナーゼ欠乏症；白内障をともなうガラクトキナーゼ欠乏；ガラクトースエピメラーゼ欠乏症；ガラクトース血症；ガラクトシアリドーシス；ＧＡＭＴ欠乏；ガードナー症候群；胃癌；ゴーシェ病；熱性痙攣プラスの全般てんかん；生殖細胞腫瘍；ゲルストマン・シュトロイスラー病；巨細胞肝炎（新生児）；巨大血小板異常；巨細胞線維芽細胞腫；ギテルマン症候群；グランツマン血小板無力症（Ａ型；Ｂ型）；緑内障１Ａ；緑内障３Ａ；多形神経膠芽腫；糸球体硬化症（限局的分節状）；ブドウ糖輸送欠損（血液脳関門）；ブドウ糖／ガラクトース吸収障害；グルコシダーゼＩ欠乏；グルタル酸尿症（Ｉ型；ＩＩｂ型；ＩＩＣ型）；グルタチオン（Ｇｌｕｔｈａｔｉｏｎ）合成酵素欠乏症；グリセロールキナーゼ欠乏；グリシン受容体（α１ポリペプチド）；糖原病Ｉ；糖原病ＩＩ；糖原病ＩＩＩ；糖原病ＩＶ；糖原病ＶＩ；糖原病ＶＩＩ；糖原病（肝臓、常染色体性）；糖原病（Ｘ連鎖性、肝臓）；ＧＭ１ガングリオシドーシス；ＧＭ２ガングリオシドーシス；甲状腺腫（青年性多結節性）；甲状腺腫（先天性）；甲状腺腫（非風土性、単純）；性器発育不全（ＸＹ型）；肉芽腫症、敗血性；グレーブス病；Ｇｒｅｉｇ頭蓋骨癒合・合指症候群；グリセリ（Ｇｒｉｓｃｅｌｌｉ）症候群；成長ホルモン欠乏性低身長症；聴覚消失およ��精神遅滞をともなう発育遅延；女性化乳房（家族性、芳香化酵素活性の増加に起因）；オルニチン血症をともなう脈絡膜および網膜の脳回転状萎縮（Ｂ６応答性または無応答性）；ヘイリーヘイリー病；ハイム・ムンク症候群；手足子宮症候群；ハルデロポルフィリン尿症（Ｈａｒｄｅｒｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎｕｒｉａ）；ＨＤＬ欠乏（家族性）；心ブロック（非進行性または進行性）；ハインツ小体貧血；ヘルプ症候群；血尿（家族性良性）；ヘムオキシゲナーゼ−１欠乏；片麻痺性片頭痛；ヘモクロモトーシス（Ｈｅｍｏｃｈｒｏｍｏｔｏｓｉｓ）；ヘモグロビンＨ疾病；ＡＤＡ過剰に起因する溶血性貧血；アデニル酸キナーゼ欠乏に起因する溶血性貧血；バンド３欠損に起因する溶血性貧血；ブドウ糖リン酸塩異性化酵素欠乏に起因する溶血性貧血；グルタチオン合成酵素欠乏症に起因する溶血性貧血；ヘキソキナーゼ欠乏に起因する溶血性貧血；ＰＧＫ欠乏に起因する溶血性貧血；溶血性尿毒症症候群；血球貪食性リンパ組織球症；血友病Ａ；血友病Ｂ；第Ｖ因子欠乏に起因する出血性素因；ヘモシデローシス（全身性、無セルロプラスミン血症に起因）；肝性リパーゼ欠乏症；肝芽腫；肝細胞癌；遺伝性出血性末梢血管拡張症−１；遺伝性出血性末梢血管拡張症−２；
ヘルマンスキー・プドラック症候群；ヘテロタキシー（Ｘ連鎖性内臓性）；ヘテロトピア（室周囲）；ヒッペル・リンダウ病；ヒルシュスプルング病；ＨＲＧ欠乏に起因するヒスチジンに富んだ糖タンパク質血栓形成傾向；ＨＭＧ−ＣｏＡ脱離酵素欠乏；全前脳症−２；全前脳症−３；全前脳症−４；全前脳症−５；ホルト・オーラム症候群；ホモシスチン尿；Ｈｏｙｅｒａａｌ−Ｈｒｅｉｄａｒｓｓｏｎ症候群；ＨＰＦＨ（欠失型または非欠失型）；ＨＰＲＴ関連痛風；ハンチントン病；中脳水道狭窄に起因する水頭症；胎児水腫；高βリポタンパク血症；高コレステロール血症、家族性；高フェリチン血症・白内障症候群；高グリセロール血症；高グリシン血症；高グロブリン血症Ｄおよび周期熱症候群；高インスリン症；高インスリン症・高アンモニア血症症候群；高カリウム血性周期性四肢麻痺；高リポタンパク血症；高リジン血症；高メチオニン血症（持続性、常染色体性、優性、メチオニン、アデノシルトランスフェラーゼＩ／ＩＩＩ欠乏に起因する）；高オルニチン血症・高アンモニア血症ホモシトルリン血症症候群；高シュウ酸尿症；副甲状腺機能亢進；プテリン−４ａ  カルビノールアミン脱水酵素欠乏症に起因する高フェニルアラニン血症；高プロインスリン血症；高プロリン血症；高血圧；甲状腺機能亢進症（先天性）；高トリグリセリド血症；低αリポタンパク血症；低βリポタンパク血症；低カルシウム血症；軟骨低形成症；低色素小球性貧血；歯数不足；低フィブリノーゲン血症；低グロブリン血症およびＢ細胞欠損；性腺機能低下症（性腺刺激ホルモン過剰）；低ゴナドトロピン性（性腺機能低下症）；低カリウム血性周期性四肢麻痺；低マグネシウム血症；ミエリン形成不全（先天性）；副甲状腺機能低下症；低ホスファターゼ症（成人性；幼児期；小児性；遺伝性）；低プロトロンビン血症；甲状腺機能低下症（先天性；遺伝性先天性；非甲状腺腫性）；魚鱗癬様紅皮症；魚鱗癬；ジーメンス型水疱性魚鱗癬；ＩｇＧ２欠乏症；線毛運動不全症−１；免疫不全（Ｔ細胞受容体／ＣＤ３複合体）；免疫不全（Ｘ連鎖性、高ＩｇＭをともなう）；ＣＤ３γにおける欠損に起因する免疫不全；免疫不全・セントロメア不安定性・顔貌異常を伴うＩＣＦ症候群（Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ−ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙｆａｃｉａｌ  ａｎｏｍａｌｉｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；色素失調症；疼痛に対する非感受性（先天性、無汗症をともなう）；不眠（致命的家族性）；インターロイキン２受容体欠乏症（α鎖）；椎間板疾病；常染色体優性虹彩角発生奇形；単独成長ホルモン欠乏（ＧＨの欠乏をともなうＩｌｌｉｇ型、および生理不活性アクティブＧＨをともなうＫｏｗａｒｓｋｉ型）；イソ吉草酸血症；ジャックソン・ワイス（Ｊａｃｋｓｏｎ−Ｗｅｉｓｓ）症候群；ジェンセン（Ｊｅｎｓｅｎ）症候群；ジャーベル・ランゲニールセン症候群；ジュベール（Ｊｏｕｂｅｒｔ）症候群；ジュベルグ・マルシディ（Ｊｕｂｅｒｇ−Ｍａｒｓｉｄｉ）症候群；カルマン症候群；神崎病；角膜炎；角化症（手掌足底）；角化症手掌足底線条体Ｉ；角化症手掌足底線条体ＩＩ；ＳＣＯＴ欠乏に起因するケトアシドーシス；Ｋｅｕｔｅｌ症候群；クリッペル・トルノネー症候群；Ｋｎｉｅｓｔ異形成症；コストマン好中球減少；クラッベ病；クズリップ・ポリダクティリ（Ｋｕｒｚｒｉｐｐ−Ｐｏｌｙｄａｋｔｙｌｉｅ）症候群；ＰＤＸ１欠乏症に起因する乳酸酸血症；ランゲル中脚異形成症；ラロン低身長症；ローレンス・ムーン・ビードル・バルデ（Ｌａｕｒｅｎｃｅ−Ｍｏｏｎ−Ｂｉｅｄｌ−Ｂａｒｄｅｔ）症候群；ＬＣＨＡＤ欠乏；レーバー先天黒内障；左右軸形成異常；リー症候群；平滑筋腫症（拡散性、アルポート症候群をともなう）；妖精症；レリ・ワイル（Ｌｅｒｉ−Ｗｅｉｌｌ）軟骨形成異常；レッシュ・ナイハン症候群；白血病（急性骨髄性；急性前骨髄球性；急性Ｔ細胞リンパ芽球性；慢性骨髄性；若年性骨髄単球性；白血病−１（Ｔ細胞急性リンパ球性）；白血球接着欠乏症；ライディッヒ細胞腺腫；レルミット・デュクロ症候群；リドル症候群；リー・フラウメニ症候群；リポアミド脱水素酵素欠乏症；リポジストロフィー；類脂質副腎性過形成；リポタンパクリパーゼ欠乏症；脳回欠損（Ｘ連鎖性）；脳回欠損−１；肝臓糖原病（０型）；ＱＴ延長症候群−１；ＱＴ延長症候群−２；ＱＴ延長症候群−３；ＱＴ延長症候群−５；ＱＴ延長症候群−６；眼脳腎症候群；肺癌；肺癌（非小細胞）；肺癌（小細胞）；リンパ浮腫；
リンパ腫（Ｂ細胞非ホジキン）；リンパ腫（拡散性大細胞型）；リンパ腫（濾胞性）；リンパ腫（ＭＡＬＴ）；リンパ腫（マントル細胞）；リンパ球増殖性症候群（Ｘ連鎖性）；リジン尿性タンパク不耐症；マシャド・ジョセフ病；（５ｑ症候群の）大球性貧血抵抗性；黄斑変性症；悪性中皮腫；マロニル−ＣｏＡ脱炭酸酵素欠乏症；マンノース症（αまたはβ）；メープルシロップ尿症（Ｉａ型；Ｉｂ型；ＩＩ型）；マルファン症候群；マロトー・ラミー症候群；マーシャル（Ｍａｒｓｈａｌｌ）症候群；ＭＡＳＡ症候群；マスト細胞白血病；血液疾患をともなう肥満細胞症；マッカードル病；マッキューン・オールブライ異形成症；マキュージック・カウフマン（ＭｃＫｕｓｉｃｋ−Ｋａｕｆｍａｎ）症候群；マクラウド表現型；甲状腺髄様癌；髄芽細胞腫；メースマン角膜変性症；巨赤芽球性貧血−１；メラノーマ；メンブロ増殖性（Ｍｅｍｂｒｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）糸球体腎炎；メニエール病；髄膜腫（ＮＦ２関連；ＳＩＳ関連）；メンケス病；精神遅滞（Ｘ連鎖性）；メフェニトイン低代謝群；中皮腫；異染性白質ジストロフィー；骨幹端軟骨無形成症（ムルク・ジェンセン（Ｍｕｒｋ  Ｊａｎｓｅｎ）型；シュミット型）；メトヘモグロビン血症；メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ欠乏（常染色体劣性）；メチルコバラミン欠乏（ｃｂｌ  Ｇタイプ）；メチルマロン酸尿症（ムターゼ欠乏症タイプ）；メバロン酸尿症；ＭＨＣクラスＩＩ欠乏；小眼球症（白内障および虹彩異常）；三好ミオパチー；若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）；モーア・トラネプジャルグ（Ｍｏｈｒ−Ｔｒａｎｅｂｊａｅｒｇ）症候群；モリブデン補助因子欠乏症（Ａ型またはＢ型）；連珠毛；モルブス（Ｍｏｒｂｕｓ）ファブリ；モルブス（Ｍｏｒｂｕｓ）ゴーシェ；ムコ多糖症；膵線維症；ムエンケ（Ｍｕｅｎｃｋｅ）症候群；ミュア・トール症候群；マリブレー低身長症；マルチプルカルボキシラーゼ欠損症（ビオチン応答性）；多発性内分泌腫瘍症；筋糖原病；筋ジストロフィー（先天性メロシン欠損型）；筋ジストロフィー（福山型先天性）；筋ジストロフィー（肢・腰帯）；筋ジストロフィー）デュシェンヌ状）；単純性表皮水疱症をともなう筋ジストロフィー；筋無力症候群（スローチャネル型先天性）；マイコバクテリア感染症（非定型、家族性播種性）；骨髄異形成症候群；骨髄性白血病；骨髄性悪性腫瘍；ミエロペルオキシダーゼ欠乏症；ミオアデニル酸デアミナーゼ欠乏；ＰＧＫ欠乏に起因するミオグロビン尿／溶血；ミオ神経胃腸ミオパチー症候群（Ｍｙｏｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｐａｔｈｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；ミオパチー（アクチン；先天性；デスミン関連；心臓骨格性；遠位性；ネマリン）；ＣＰＴＩＩ欠乏に起因するミオパチー；ホスホグリセリン酸ムターゼ欠乏症に起因するミオパチー；先天性筋緊張症；ミオトニア・レビオール（Ｍｙｏｔｏｎｉａ  ｌｅｖｉｏｒ）；筋緊張性ジストロフィー；粘液性脂肪肉腫；ＮＡＧＡ欠乏；爪膝蓋骨症候群；ネマリンミオパチー１（常染色体優性）；ネマリンミオパチー２（常染色体劣性）；新生児副甲状腺機能亢進；腎結石症；ネフロン癆（若年性）；腎症（慢性低補体血症性）腎症−１；ネフロ���ゼ症候群；ネザートン症候群；神経芽細胞腫；神経線維腫症（１型または２型）；神経線維鞘腫症；神経細胞−５セロイド−リポフスチン沈着症；神経障害；好中球減少（同種免疫性新生児）；ニーマン・ピック病（Ａ型；Ｂ型；Ｃ１型；Ｄ型）；夜盲（先天性定常性）；ナイミーヘン症候群；左心室心筋非圧縮；非表皮溶解性掌蹠角化症；ノリエ病；ノラム病（Ｎｏｒｕｍ  ｄｉｓｅａｓｅ）；ヌクレオシドホスホリラーゼ欠乏；肥満；後角症候群；眼白子症（ネトゥルシップ・フォールス（Ｎｅｔｔｌｅｓｈｉｐ−Ｆａｌｌｓ）型）；眼咽頭筋ジストロフィー；小口病；多数歯欠損症；オメン症候群；オピッツＧ症候群；腎臓疾病をともなう視神経眼欠損症；オルニチントランスカルバミラーゼ欠乏；オロト酸尿症；起立性調節障害；ＯＳＭＥＤ症候群；脊椎後縦靱帯骨化症；骨関節症；骨形成不全症；骨溶解；大理石骨病（劣性または特発性）；骨肉腫；卵巣癌；卵巣発育異常；先天性爪肥厚症（ジャックソン・ローウラー（Ｊａｃｋｓｏｎ−Ｌａｗｌｅｒ）型またはヤダゾーン・レワンドウスキー（Ｊａｄａｓｓｏｈｎ−Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋｙ）型）；骨パジェット病；パリスター・ホール症候群；膵臓非形成；膵癌；膵炎；パピヨン・ルフェーブル症候群；
傍神経節腫；先天性パラミオトニー；頭頂孔；パーキンソン疾病（家族性または若年性）；発作性夜間血色素尿症；ペリツェウス・メルツバッハー病；ペンドレッド症候群；会陰尿道下裂；周期熱；ペルオキシソーム生物発生障害；乳児期の持続性高インシュリン性低血糖；持続性ミュラー管症候群（ＩＩ型）；ペーテルス奇形；ポイツ・ジェガース症候群；パイフェル症候群；フェニルケトン尿症；ホスホリボシルピロリン酸塩合成酵素関連痛風；肝臓および筋肉のホスホリラーゼキナーゼ欠乏；まだら症；毛母腫；両側性網膜芽細胞腫をともなった松果体腫；下垂体ＡＣＴＨ分泌腺腫；下垂体ホルモン欠乏；下垂体腫瘍；胎盤ステロイドスルファターゼ欠乏症；プラスミン・インヒビター欠乏；プラスミノーゲン欠乏（Ｉ型およびＩＩ型）；プラスミノーゲン栃木病；血小板異常；血小板糖タンパク質ＩＶ欠乏；血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ欠乏症；多発性嚢胞腎；硬化性リューケンインセロファロパチー（ｌｅｕｋｅｎｅｎｃｅｐｈａｌｏｐｈａｔｈｙ）をともなう多嚢胞性脂肪膜状骨異形成症；多指症、後部；ポリープ症；膝窩翼状片症候群；ポルフィリン症（急性肝性、急性間欠性、または先天性赤血球新生性）；晩発性皮膚ポルフィリン症；肝赤血球新生ポルフィリン症（Ｐｏｒｐｈｙｒｉａ  ｈｅｐａｔｏｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ）；異型ポルフィリン症；プラダー・ウィリ症候群；思春期早発症；早期卵巣機能不全；早老症Ｉ型；早老症ＩＩ型；進行性外眼筋麻痺；進行性肝内胆汁うっ滞−２；プロラクチン産生腺腫（副甲状腺機能亢進、カルチノイド症候群）；プロリダーゼ欠乏症；プロピオン酸血症；前立腺癌；タンパク質Ｓ欠乏；タンパク質尿症；プロトポルフィリン症（赤血球新生）；偽軟骨無形成症；偽雌雄同体；偽低アルドステロン症；偽副甲状腺機能低下症；偽膣会陰陰嚢尿道下裂；偽ビタミンＤ欠乏クル病；弾力線維性仮性黄色腫（常染色体優性；常染色体劣性）；肺胞タンパク症；肺高血圧症；電撃性紫斑病；濃化異骨症；ピロ変形赤血球症；ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏症；ピルビン酸脱水素酵素欠乏症；ラブソン・メンデンホール（Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ）症候群；レフスム疾病；腎細胞癌腫；腎尿細管性アシドーシス；聴覚消失をともなう腎尿細管性アシドーシス；腎尿細管性アシドーシス・大理石骨病症候群；細網症（家族性組織球性）；網膜変性症；網膜ジストロフィー；網膜色素変性症；白点状網膜炎；網膜芽細胞腫；レチノール結合タンパク質欠乏症；網膜分離症；レット症候群；Ｒｈ（ｍｏｄ）症候群；棒状体素因症候群；ラブドイド腫瘍；横紋筋肉腫；横紋筋肉腫（肺胞）；肢根型点状軟骨異形成症；リビング症候群；クル病（ビタミンＤ抵抗性）；リーガー奇形；ロビノウ（Ｒｏｂｉｎｏｗ）症候群；ロトムンド・トムソン症候群；ルビンシュタイン・テイビ症候群；サッカロピン尿症；セートレ・ヒョツェン症候群；サラ疾病；サンドホフ疾病（小児性、若年性、および成人型）；サンフィリポ症候群（Ａ型またはＢ型）；シントラー病；裂脳症；統合失調症（慢性）；シュワン腫（孤発性）；ＳＣＩＤ（常染色体劣性、Ｔ陰性／Ｂ陽性）；分泌経路ｗ／ＴＭＤ；先天性ＳＥＤ；瀬川症候群；選択的Ｔ細胞欠損；ＳＥＭＤ（パキスタン���）；ＳＥＭＤ（ストラドウィック型）；中隔視神経異形成症；重症複合免疫不全症（Ｂ細胞陰性）；重症複合免疫不全症（Ｔ細胞陰性、Ｂ細胞／ナチュラルキラー細胞陽性）；重症複合免疫不全症（Ｘ連鎖性）；ＡＤＡ欠乏に起因する重症複合免疫不全症；性転換（ＸＹ、副腎不全をともなう）；セザリー症候群；シャー・ワールデンブルグ症候群；低身長；シュプリンツェン・ゴールドベルグ症候群；シアル酸蓄積障害；シアリドーシス（Ｉ型またはＩＩ型）；シアル酸尿症；鎌状赤血球貧血；シンプソン・ゴラビ・ベメル（Ｓｉｍｐｓｏｎ−Ｇｏｌａｂｉ−Ｂｅｈｍｅｌ）症候群；内臓不定位；シェーグレン・ラルソン症候群；スミス・フィンマン・マイアズ（Ｓｍｉｔｈ−Ｆｉｎｅｍａｎ−Ｍｙｅｒｓ）症候群；スミス・レムリ・オピッツ症候群（Ｉ型またはＩＩ型）；ソマトトロフィノーマ（Ｓｏｍａｔｏｔｒｏｐｈｉｎｏｍａ）；ソースビー眼底変性症；痙性対麻痺；球状赤血球症；球状赤血球症−１；球状赤血球症−２；ケネディの球脊髄性筋萎縮症；脊髄性筋萎縮症；脊髄小脳失調症；スポンジロコスタル（Ｓｐｏｎｄｙｌｏｃｏｓｔａｌ）骨形成不全；晩発性脊椎骨端異形成症；脊椎骨幹端異形成症（日本型）；シュタルガルト病−１；多発性脂腺嚢腫；
スティックラー症候群；スタージ・ウェーバー症候群；皮質下ラミナル・ヘテロピア（ｌａｍｉｎａｌ  ｈｅｔｅｒｏｐｉａ）；皮質下層状異所形成；コハク酸半アルデヒド脱水素酵素欠乏症；ショ糖不耐症；サザーランド・ハーン（Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ−Ｈａａｎ）症候群；無ＣＦ・汗塩素イオン上昇（Ｓｗｅａｔ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ＣＦ）；指節癒合症；骨癒合症候群；合多指症；タンジール病；テイ・サックス疾病；Ｔ細胞性急性リンパ性白血病；Ｔ細胞免疫不全；Ｔ細胞性前リンパ球性白血病；サラセミア（αまたはδ）；Ｈｂ  Ｌｅｐｏｒｅ  に起因するサラセミア；致死性骨異形成症（Ｉ型またはＩＩ型）；チアミン応答性巨赤芽球性貧血症候群；血小板血症；血栓形成傾向（ジスプラスミノーゲネミック（ｄｙｓｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎｅｍｉｃ））；ヘパリン補因子ＩＩ欠乏に起因する血栓形成傾向；タンパク質Ｃ欠乏に起因する血栓形成傾向；トロンボモジュリン欠損に起因する血栓形成傾向；甲状腺腺腫；甲状腺ホルモン抵抗性；甲状腺ヨードペルオキシダーゼ欠乏症；ティーツェ症候群；トルブタミド低代謝群；タウンズ・ブロックス（Ｔｏｗｎｅｓ−Ｂｒｏｃｋｓ）症候群；トランスコバラミンＩＩ欠乏；トリーチャー・コリンズ下顎顔面形成異常；Ｔｒｉｃｈｏｄｏｎｔｏｏｓｓｅｏｕｓ症候群；Ｔｒｉｃｈｏｒｈｉｎｏｐｈａｌａｎｇｅａｌ症候群；裂毛症；三機能的タンパク質欠乏症（Ｉ型またはＩＩ型）；トリプシノーゲン欠乏症；結節性硬化症−１；結節性硬化症−２；ターコット症候群；チロシンホスファターゼ；チロシン血症；尺側・乳房症候群；尿路結石症（２，８−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｄｅｎｉｎｅ）；アッシャー症候群（１Ｂ型または２Ａ型）；静脈形成異常；心室頻拍；男性化；ビタミンＫ依存性凝固欠損；ＶＬＣＡＤ欠乏；Ｖｏｈｗｉｎｋｅｌ症候群；フォンヒッペル・リンダウ症候群；フォンウィルブランド疾病；ワールデンブルグ症候群；ワールデンブルグ症候群／眼白子症；ワールデンブルグ・シャー神経性変異体；ワールデンブルグ・シャー症候群；ワーグナー症候群；ワルファリン感受性；ワトソン症候群；ワイセンバッハ・ツバイミュラー（Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈｅｒ−Ｚｗｅｙｍｕｌｌｅｒ）症候群；ウェルナー症候群；Ｗｅｙｅｒｓ・ａｃｒｏｄｅｎｔａｌ骨形成不全；白色海綿状母斑；ウィリアムズ・ビューレン症候群；ウィルムス腫瘍（１型）；ウィルソン病；ウィスコット・オールドリッチ症候群；ウォルコット・ラリソン（Ｗｏｌｃｏｔｔ−Ｒａｌｌｉｓｏｎ）症候群；ウルフラム症候群；ウォルマン疾病；キサンチン尿症（Ｉ型）；色素性乾皮症；Ｘ−ＳＣＩＤ；イエメン型盲聾色素脱失症候群；低カルシウム尿性高カルシウム血症（Ｉ型）；ツェルウェガー症候群；ヅロトガラ・オグル（Ｚｌｏｔｏｇｏｒａ−Ｏｇｕｒ）症候群などである。
【０１８５】
遺伝子によって遺伝する性質があり、通常単一遺伝子の欠損によって引き起こされ、かつメンデルの法則にしたがって遺伝する、治療対象として好ましい疾病は、好ましくは以下に列挙する常染色体性劣性遺伝病からなる群より選択される。すなわち、例えば、アデノシンデアミナーゼ欠乏、家族性高コレステロール血症、カナバン症候群、ゴーシェ病、ファンコニ貧血、神経細胞セロイドリポフスチン沈着症、膵線維症（嚢胞性線維症）、鎌状赤血球貧血、フェニルケトン尿症、アルカプトン尿症、白子症、甲状腺機能不全、ガラクトース血症、α１−アンチトリプシン欠乏、色素性乾皮症、リビング症候群、ムコ多糖症、口唇裂、下顎、口蓋、ローレンス・ムーン・ビードル・バルデ症候群、短肋骨多指症候群、クレチン症、ジュベール症候群、早老症ＩＩ型、短指症、副腎性器症候群、およびＸ染色体遺伝病などである。Ｘ染色体遺伝病の例としては、例えば、色覚異常（例えば赤／緑色覚異常）、脆弱Ｘ染色体症候群、筋ジストロフィー（デュシェンヌ型およびベッカー・キネール（Ｂｅｃｋｅｒ−Ｋｉｅｎｅｒ）型）、血友病ＡおよびＢ、Ｇ６ＰＤ欠乏、ファブリ疾病、ムコ多糖症、ノリエ症候群、網膜色素変性症、敗血性肉芽腫症、Ｘ−ＳＣＩＤ、オルニチントランスカルバミラーゼ欠乏、レッシュ・ナイハン症候群などがあげられる。あるいは、上記治療対象として好ましい疾病は、好ましくは以下に列挙する常染色体性優性遺伝病からなる群より選択される。すなわち、例えば、遺伝性血管浮腫、マルファン症候群、神経線維腫症、早老症Ｉ型、骨形成不全症、クリッペル・トルノネー症候群、スタージ・ウェーバー症候群、ヒッペル・リンダウ（Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ）症候群、および結節症硬化症（ｔｕｂｅｒｏｓｉｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）などである。
【０１８６】
本発明はさらに遺伝性を有しない疾病、あるいは上記カテゴリーに属さない疾病の治療を可能にする。これらの疾病の例としては、例えば特定のタンパク質因子（例えば上述の特定の治療上有効なタンパク質）を必要としている患者の治療などがあげられる。こういった患者の例としては。例えば、透析患者（例えば（定期的）腎臓透析を受ける患者、および上記において定義された特定の治療上有効なタンパク質（例えばエリスロポエチン（ＥＰＯ）など）を必要とする患者）があげられる。
【０１８７】
別の一実施形態によれば、本発明は、本発明に係る少なくとも１つの複合化ＲＮＡを使用して細胞または生体をトランスフェクトすること含む。細胞または生体のトランスフェクションは、好ましくは本発明の複合化ＲＮＡを細胞または組織にトランスフェクトするために、上記（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）トランスフェクション法を使って実施されてもよい。
【０１８８】
さらに別の実施形態によれば、本発明は、上記疾病、障害、条件、または病理学的状態のうち任意のものを治療するために（薬剤を調製するために）本発明に係る少なくとも１つの複合化ＲＮＡを使用することを含む。この文脈において薬剤は、例えば上記において定義された薬学的組成物であっても、あるいは本発明において定義され、付加的に本発明の複合化ＲＮＡ、ワクチンなどを含んだ注射用緩衝液であってもよい。二種類以上の複合化ＲＮＡ分子を使用するのであれば、複合化ＲＮＡはそのＲＮＡ（分子）が異なり、こうすることによって少なくとも２種類の特定の複合化ＲＮＡ（分子）の混合物を形成してもよい。上記疾病のうち任意の疾病を治療するために（薬剤を調製するために）二種類以上の複合化ＲＮＡを使用するのであれば、これらの複合化ＲＮＡ混合物には同種のＲＮＡ（分子）が含有されていてもよく、または（少なくとも２種類の）異なるＲＮＡ（分子）が含有されていてもよい。この文脈において、上記ＲＮＡ（分子）のうちの任意のＲＮＡ（分子）が、以下に列挙する本発明の複合化ＲＮＡのために使用されてもよい。すなわち、例えば低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド、コーディングＲＮＡ、免疫活性化ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、もしくはリボスイッチ、リボザイム、またはアプタマーなどである。さらに好ましくはコーディングＲＮＡ（分子）、一層好ましくは直鎖コーディングＲＮＡ（分子）、最も好ましくはｍＲＮＡが使用されてもよい。好ましくは上記コーディングＲＮＡ（分子）、さらに好ましくは直鎖コーディングＲＮＡ（分子）、さらに好ましくはｍＲＮＡが上記複合化ＲＮＡのために使用される。上記ＲＮＡ（分子）は通常、（特定の）癌などを治療する際に特定の癌抗原または腫瘍抗原に結合可能な、特定の疾病の治療に適したタンパク質またはペプチド（例えば抗体）をコードする。好適なＲＮＡ（分子）の組み合わせは、従来技術においてまたは本発明の開示によって、当業者にとって公知である。
【０１８９】
本発明の別の一実施形態によれば、（付加的に）治療中に免疫反応を誘発する（例えば誘引または亢進する）ことが好ましい。この文脈において、免疫反応は様々な形態で発生する。好適な免疫反応にとって重要な要素は、異なるＴ細胞小グループを活性化することである。Ｔリンパ球は通常、ヘルパーＴ１（Ｔｈ１）細胞およびヘルパーＴ２（Ｔｈ２）細胞の２つの小グループに分類される。免疫系は、この２つの小グループを使って、細胞内（Ｔｈ１）および細胞外（Ｔｈ２）の病原体（例えば抗原）を破壊することができる。上記２つのＴｈ細胞グループは、それぞれのグループが生成するエフェクタータンパク質（サイトカイン）のパターンが異なる。したがって、Ｔｈ１細胞は、マクロファージおよび細胞傷害性Ｔ細胞を活性化することによって、細胞性免疫反応を補助する。一方、Ｔｈ２細胞は、Ｂ細胞を活性化して血漿細胞に転換させることによって、および（例えば抗原に対して）抗体を形成をすることによって、体液性免疫反応を促進する。Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、したがって、免疫反応にとって非常に重要である。本発明の治療対象となる各種疾病の場合、免疫反応のＴｈ１／Ｔｈ２比は、好ましくは細胞性応答（Ｔｈ１応答）に片寄っており、こうすることによって細胞性免疫反応を誘引する。これに応じて、本発明は、さらにこの免疫反応の片寄りを元に戻すために使用されてもよい。したがって、本発明には、上記疾病のうち任意の疾病を治療するために（薬剤を調製するために）、本発明に係る少なくとも１つの複合化ＲＮＡを使用することがさらに含まれ、ここで上記薬剤（および／または上記複合化ＲＮＡ）は、上記において定義された組織または生体において免疫反応を誘発させる（例えば誘引する、または亢進する）ことができてもよい。ここでも、この文脈における薬剤は、例えば上記において定義された薬学的組成物であっても、あるいは本発明において定義され、本発明の複合化ＲＮＡなどを含んだ注射用緩衝液であってもよい。上記疾病のうち任意の疾病を治療するために（薬剤を調製するために）、この文脈において二種類以上の複合化ＲＮＡを使用するのであれば、上記複合化ＲＮＡの種類は、そのＲＮＡ（分子）について異なっていてもよく、また、異なる種類のＲＮＡの混合物を形成してもよい。
【０１９０】
ただし、本実施形態の場合、好ましくは、これらの複合化ＲＮＡのうちの少なくとも一種類が、治療中に上記免疫反応を誘引または亢進し、その一方で、他の複合化ＲＮＡが免疫応答を誘引または亢進する必要がない、もしくは免疫応答を防止するために使用されてもよい。この文脈において、上記ＲＮＡ（分子）のうちの任意のＲＮＡ（分子）が、以下に列挙する本発明の複合化ＲＮＡのために使用されてもよい。すなわち、例えば、低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド、コーディングＲＮＡ、免疫活性化ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、もしくはリボスイッチ、リボザイム、またはアプタマーなどである。さらに好ましくはコーディングＲＮＡ（分子）、一層好ましくは直鎖コーディングＲＮＡ（分子）、最も好ましくはｍＲＮＡが上記複合化ＲＮＡのために使用されてもよい。上記ＲＮＡ（分子）がコーディングＲＮＡ（分子）であれば、さらに好ましくは直鎖コーディングＲＮＡ（分子）であれば、さらに好ましくはｍＲＮＡであれば、該ＲＮＡ（分子）は通常、（特定の）癌などを治療する際に特定の癌抗原に結合可能な、特定の疾病の治療に適したタンパク質またはペプチド（例えば抗体）をコードする。二種類以上の複合化ＲＮＡが薬剤に含有されるならば、異なる組み合わせのタンパク質またはペプチドが選択されてもよい。好適なＲＮＡ（分子）の組み合わせ（コーディングＲＮＡが使用されているのであれば、コードされているタンパク質またはペプチドの好適な組み合わせ）は、従来技術において当業者にとって公知である。あるいは、本発明の開示において定義された治療上効果的なタンパク質をコードするＲＮＡなどを組み合わせてもよい。上記のように特定の疾病の治療と同時に、１つの薬学的組成物または薬剤を使って免疫反応を誘引または亢進することは、上述の特定の疾病の治療を誘引または亢進した免疫反応が支援する場合には特に有利である。
【０１９１】
あるいは、疾病の治療、および免疫反応の誘引または亢進は、上記において定義された複数の異なる薬学的組成物または薬剤を、時差をつけて使用することによって実施されてもよい。例えば、本発明の複合体化（免疫活性化）ＲＮＡを含んだ、本発明において定義される薬学的組成物または薬剤を、本発明において定義される別の薬学的組成物または薬剤の投与に先立って（またはその投与と同時に）投与することによって、免疫反応を誘引してもよく、あるいは亢進してもよい。なお、上記別の薬学的組成物または薬剤には、以下に列挙する本発明の複合化ＲＮＡが含有されてていもよい。すなわち、例えば低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド、コーディングＲＮＡ、免疫活性化ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、もしくはリボスイッチ、リボザイム、またはアプタマーなどの特定の疾病の治療に適した複合化ＲＮＡである。
【０１９２】
一実施形態によれば、本発明は、上記において定義された組織または生体において免疫反応を調節する、好ましくは誘引または亢進するために（薬剤を調製するために）、さらに好ましくは本発明において言及される疾病または状態を支援するために、本発明に係わる少なくとも１つの複合化ＲＮＡを使用することをさらに含む。こうすることによって、本発明の複合化ＲＮＡは、免疫系を非特異的に賦活化するために、例えばあるサイトカインの生成を誘発するために使用されてもよい。したがって上記複合化ＲＮＡは、例えば病原体または腫瘍に由来する抗原によって誘発される特異的免疫反応を支援するために使用されてもよい。この文脈において薬剤は、例えば上記において定義された薬学的組成物であっても、または本発明において定義され、本発明の複合化ＲＮＡ、ワクチンなどを含んだ注射用緩衝液であってもよい。上記免疫反応は、８〜１５アミノ酸の長さを有し、かつ実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘによって表わされる１つ以上のオリゴペプチドに起因する少なくとも１つの複合化ＲＮＡによって調節されてもよく、および／または上記複合化ＲＮＡのＲＮＡによってコードされたタンパク質の免疫活性特性によって調節されてもよい。
【０１９３】
したがって、本発明は、必要に応じて、様々な目的を実現するのに非常に役立つ。複合化ＲＮＡは、そのままでまたは本発明の組成物の成分として、それ自体が、本発明の複合体の成分としてのＲＮＡのトランスフェクション性を改善する。本発明の複合化ＲＮＡのこの根底にある性質は、様々な応用にとって有益である。細胞にＲＮＡを導入したい時には、本発明によって、トランスフェクション効率の改善が必ず保証される。この特性そのものが、多種多様な疾病の治療、上記において定義された例えば単遺伝子疾患または遺伝子疾患を治療するための本発明の使用を可能にする。
【０１９４】
さらに、本発明は、免疫障害、例えばアレルギー性疾患または自己免疫疾患の治療が予想される場合はいつでも使用されてもよい。また、本発明は、患者の免疫系の非特異的または特異的免疫反応を亢進することによって、該免疫系を賦活化せてもよい。したがって、本発明は、適切な場合は、疾病を治療するために非特異的免疫反応を誘発してもよい。また、必要に応じて、（例えば本発明の複合体の成分としてのＲＮＡによって抗原をコードすることによって）特異的免疫反応をそのまま誘発してもよく、または本発明の複合化ＲＮＡと抗原とを例えば同一組成物として組み合わせることによって誘発してもよい。必要に応じて、本発明の複合化ＲＮＡは、好ましくは、免疫反応を調節できる（好ましくは、免疫反応を誘引または亢進することができる、もしくはアレルギー性疾患または自己免疫疾患の場合、特定のアレルギーまたは自己抗原に対して患者の免疫系を脱感作することによって免疫反応を調節できる）抗原または抗体、もしくは上記において定義された他の任意のタンパク質またはペプチドであってもよい。組織または生体において免疫反応を調節するために、例えば免疫反応を誘引または亢進するために、上記のように複合化ＲＮＡが、そのまままたは上記において定義された薬剤としてこの組織または生体に投与されてもよい。使用可能な投与形態は、薬学的組成物の場合、上述した形態と同じであってもよい。薬剤の投与は、本発明において言及される疾病または病状の治療より先に、それと同時に、および／またはそれに続いて、例えばこれらの疾病または病状に適した治療または治療薬の投与のより先に、それと同時に、および／またはそれに続いて薬剤を投与することによって行われてもよい。
【０１９５】
他の実施形態によれば、本発明は、例えばサイトカインの生成を上記において定義された組織または生体において誘発することによって、免疫反応を、好ましくは非特異的免疫反応を調節するために、好ましくは誘発するために、例えば誘引または亢進するために（薬剤を調製するために）、また、好ましくは、本発明において言及される疾病または病状を支援するために、ペプチド（Ａｒｇ）７を本発明において定義されるＲＮＡ（分子）とともに複合体において使用すること、またはペプチド（Ａｒｇ）７を単独で使用することをさらに含む。一方で、本発明の式（Ｉ）によって表わされるペプチドの範囲を決定する中で、本発明の発明者らは、たとえ核酸、特にＲＮＡのｈＰＢＭＣへのトランスフェクションが観察されなくても、ｈＰＢＭＣにおいて（Ａｒｇ）７が免疫反応を大幅に誘引または亢進することができるという驚くべき発見をした。ＲＮＡ（分子）は、本発明において定義される任意のＲＮＡ（分子）であってもよく、好ましくは低分子ＲＮＡオリゴヌクレオチド、コーディングＲＮＡ、免疫活性化ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、もしくはリボスイッチ、リボザイム、またはアプタマーであってもよいが、これに限定されるものではない。ここでも、この文脈における薬剤は、例えば上記において定義された薬学的組成物であっても、あるいは本発明の複合化ＲＮＡなどを付加的に含有する本発明において定義される注射用緩衝液であってもよく、本発明において定義される薬剤中の本発明の複合化ＲＮＡは、本発明において定義されるＲＮＡ（分子）との複合体中のペプチド（Ａｒｇ）７によって、または単独のペプチド（Ａｒｇ）７よって置き替えられている。
【０１９６】
別の実施形態によれば、本発明は、上記疾病のうち任意の疾病または病状を治療するために（薬剤を調製するために）、ペプチド（Ａｒｇ）７を本発明において定義されるＲＮＡ（分子）とともに複合体中で使用すること、または上記ペプチド（Ａｒｇ）７を単独で使用することをさらに含んでいる。
【０１９７】
最後の実施形態によれば、本発明はさらに、本発明に係る複合化ＲＮＡおよび／または本発明に係る薬学的組成物と、必要に応じて本発明に係る複合化ＲＮＡの投与および投与量および／または本発明に係る薬学的組成物に関する情報とともに技術的な指示とを含んだキットを提供する。上記キットは、少なくとも１つの抗原または少なくとも１つの抗体もしくは抗原または抗体を含んだ組成物、付加的な補助剤または少なくとも１つの補助剤を含んだ組成物、ならびに／もしくは少なくとも１つのサイトカインまたは少なくとも１つのサイトカインを含んだ組成物の群の成分のうち１つ以上を個別にさらに備えていてもよい。上記抗原、抗体、および／またはサイトカインは、そのまま（タンパク質）提供してもよく、あるいはその抗原、抗体、またはサイトカインをコードするＤＮＡまたはＲＮＡとして提供してもよい。
【０１９８】
本発明は、ペプチド（Ａｒｇ）７を本発明において定義されるＲＮＡ（分子）との複合化物中に含んだキット、またはペプチド（Ａｒｇ）７だけを含んだキットと、必要に応じて上記ペプチド（Ａｒｇ）７の投与および投与量に関する情報とともに技術的な指示とをさらに提供する。上記キットは、例えば上述した任意の適用または使用に適用されてもよく、好ましくは、上記疾病のうち任意の疾病を治療するために（薬剤を調製するために）本発明に係る少なくとも１つの複合化ＲＮＡの使用に適用されてもよい。上記キットは、さらに、上記疾病のうち任意の疾病を治療するために（薬剤を調製するために）本発明に係る少なくとも１つの複合化ＲＮＡの使用に適用されてもよく、ここで、上記薬剤（および／または上記複合化ＲＮＡ）は、上記において定義された組織または生体において免疫反応を誘引または亢進することができる。上記キットは、さらに、上記において定義された組織または生体において免疫反応を調節するために、好ましくは誘発する、例えば誘引または亢進するために（薬剤を調製するために）、また、好ましくは、本発明において言及される疾病または病状を支援するために、本発明に係る少なくとも１つの複合化ＲＮＡの使用に適用されてもよい。
【０１９９】
図面
以下の図は、本発明をさらに説明するためのものであり、図面に示した範囲に本発明の主題を限定するものではない。
【０２００】
図１は、安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ配列の配列を示し、ルシフェラーゼをコードする天然ｍＲＮＡがポリＡ／ポリＣ−ｔａｇ（Ａ７０−Ｃ３０）によって修飾されている。この第１の構造物（ＣＡＰ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０、配列番号３５）は、以下の配列因子を含んでいた。すなわち、αグロビン遺伝子からの安定化配列、３’末端部（ポリＡ−尾部）に位置する７０のアデノシン、および３’−末端部（ポリＣ尾部）に位置する３０のシトシンであり、シンボル
＝コードする配列
＝αグロビン遺伝子の３’−ＵＴＲ
＝ポリＡ−尾部
＝ポリＣ尾部
によって表わされている。
【０２０１】
図２は、安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ配列の配列を示し、配列番号３５（図１参照）によって表わされる上記構造物が、コドンをうまく使用するためにＧＣ最適化配列によってさらに修飾されている。最終構造物（構造物ＣＡＰ−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０、配列番号３６）は、以下の配列因子を含んでいた。すなわち、コドンをうまく使用するためのＧＣ最適化配列、αグロビン遺伝子からの安定化配列、３’末端部（ポリＡ−尾部）に位置する７０のアデノシン、および３’−末端部（ポリＣ尾部）に位置する３０のシトシンであり、シンボル
＝コードする配列
＝αグロビン遺伝子の修飾３’−ＵＴＲ
＝ポリＡ−尾部
＝ポリＣ尾部
によって表わされている。
【０２０２】
図３は、配列番号３５（配列番号３７）（図１参照）によって表わされる配列のコード配列を示す。
【０２０３】
図４は、配列番号３６（配列番号３８）（図２参照）によって表わされる配列のＧＣ最適化コード配列を示す。ＧＣ最適化コドンには下線を引いた。
【０２０４】
図５は、ｈＰＢＭＣ細胞においてノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＩＬ−６生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＩＬ−６生成量は非常に大きい。つまり、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【０２０５】
図６は、ｈＰＢＭＣ細胞においてノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＴＮＦα生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＴＮＦα生成量は非常に大きい。つまり、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【０２０６】
図７は、ｈＰＢＭＣにおいてノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはポリ−Ｌ−アルギニンで複合化されたＲＮＡのそれぞれの免疫活性効果を、比較例において比較した結果を示す。有利な効果として、１：５（ＲＮＡ：ノナアルギニン）未満の質量比の場合（１：１０、１：８、１：５、１：２、１：１、２：１）に、非常に高い免疫活性効果が観察される。ただし、ＲＮＡ：ノナアルギニン質量比が５：１の場合には、観察されるＴＮＦα生成量はあまり多くない。ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはｍＲＮＡを単独で使用した活性化実験についても、同じことが言える。また、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）と比較すると、ｍＲＮＡをポリ−Ｌ−アルギニンで複合化することによって、ＴＮＦα生成の誘引が大幅に減少することが観察された。ポリ−Ｌ−アルギニンの濃度が高いと、そのポリ−Ｌ−アルギニンがトランスフェクトされる細胞にとって有害であるようである。ポリ−Ｌ−アルギニン：ＲＮＡの質量比が１：２以上の場合、細胞が溶解するので特に有害なようである。
【０２０７】
図８は、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）を使ったＲＮＡの複合体を、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトすると発現するルシフェラーゼを示す。図８から読み取れるように、２：１（ＲＮＡ：ノナアルギニン）未満の質量比が有利なようである。対照的に、（高分子）ポリ−Ｌ−アルギニンで複合化しても、低いルシフェラーゼ活性しか生じない。したがって、（高分子）ポリ−Ｌ−アルギニンは、ｍＲＮＡのトランスフェクションには適していないようである。
【０２０８】
図９は、比較例において、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）を使ったＲＮＡの複合体を、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトすると発現するルシフェラーゼを示す。図９から読み取れるように、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）を使ったＲＮＡの複合体をトランスフェクトしても、低いルシフェラーゼ活性しか生じない。したがって、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）もｍＲＮＡのトランスフェクションには適していないようである。
【０２０９】
図１０は、ｈＰＢＭＣ細胞におけるヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＩＬ−６生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＩＬ−６生成量は非常に大きい。つまり、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【０２１０】
図１１は、ｈＰＢＭＣ細胞におけるヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＴＮＦα生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＴＮＦα生成量は非常に大きい。つまり、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【０２１１】
図１２は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｒ９ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１２】
図１３は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｒ９Ｈ３ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１３】
図１４は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｈ３Ｒ９Ｈ３ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１４】
図１５は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、ＹＹＹＲ９ＳＳＹペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１５】
図１６は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｈ３Ｒ９ＳＳＹペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１６】
図１７は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、（ＲＫＨ）４ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１７】
図１８は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【０２１８】
図１９は、トランスフェクション効率に対する、末端に位置するヒスチジンの効果を示す。
【０２１９】
図２０は、トランスフェクション効率に対する、末端に位置する中性アミノ酸の効果を示す。
【０２２０】
図２１は、ｈＰＢＭＣにおけるＴＮＦαの分泌に対する、Ｒ９Ｈ３で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を示す。
【０２２１】
図２２は、ｈＰＢＭＣにおけるＩＬ−６の分泌に対する、Ｒ９Ｈ３で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を示す。
【０２２２】
〔実施例〕
以下の実施例は、本発明をさらに説明するためのものであり、本発明の主題を実施例に示した範囲に限定するものではない。
【０２２３】
（実施例１：ルシフェラーゼのｍＲＮＡ構造物の調製）
以下の実験では、安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ配列を調製し、トランスフェクション実験に使用した。ここで、上記ルシフェラーゼをコードする天然ｍＲＮＡを、ポリＡ／ポリＣ−ｔａｇ（Ａ７０−Ｃ３０）で修飾し、コドンをうまく使用するためにＧＣを最適化し、さらに安定化させた。
【０２２４】
第１の構造物（ＣＡＰ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０構造物、配列番号３５）は、以下の配列因子を含んでいた。すなわち、αグロビン遺伝子からの安定化配列、３’末端部に位置する７０のアデノシン、および３’−末端部に位置する３０のシトシンである。
【０２２５】
以下の実験においてここで使用した最終構造物（ＣＡＰ−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０構造物、配列番号３６）は、以下の配列因子含有していた。すなわち、コドンをうまく使用するためにＧＣ最適化された配列、αグロビン遺伝子からの安定化配列、３’末端部に位置する７０のアデノシン、および３’−末端部に位置する３０のシトシンである。
【０２２６】
これらの配列は、図１および図２（配列番号３５および配列番号３６）にも図示する。個々のコード配列は図３および図４（配列番号３５および配列番号３６）に示す。
【０２２７】
（実施例２：安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写）
配列番号３５または配列番号３６によって表わされる、上記の安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）を、Ｔ７−ポリメラーゼ（Ｔ７−Ｏｐｔｉ  ｍＲＮＡキット、ＣｕｒｅＶａｃ社、ドイツ、テュービンゲン）を用いて、製造指示に従ってｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写した。
【０２２８】
全てのｍＲＮＡ転写物が、７０の塩基からなるポリＡ−尾部と５’−Ｃａｐ構造とを含有していた。上記５’−Ｃａｐ構造は、過剰な量のＮ７−メチル−グアノシン−５’−三リン酸エステル−５’−グアノシンを添加することによって得られた。
【０２２９】
（実施例３：ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）、ポリ−Ｌ−アルギニン、またはそれ以外の（Ａｒｇ）９ベースのペプチドによる、個々のＲＮＡ複合体の形成）
配列番号３６（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）によって表わされる１５μｇのＲＮＡ安定化されたルシフェラーゼｍＲＮＡを、ノナアルギニン（Ａｒｇ９）またはポリ−Ｌ−アルギニン（シグマ・オールドリッチ；Ｐ４６６３；５０００〜１５０００ｇ／ｍｏｌ）と異なる質量比で混合し、こうすることによって複合体を形成した。（（Ａｒｇ）９）については、図示するように、好適な例として以下の質量比を使用した。上記と同じ指示にしたがって、比較例にはポリ−Ｌ−アルギニンを使用した。
【０２３０】
【表４】
2010537651.tif 000014
【０２３１】
また、（Ａｒｇ）９ベースの別の複合化ＲＮＡを、以下のペプチドを複合化に用いて調製した。
【０２３２】
Ｒ９：Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ
Ｒ９Ｈ３：Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ
Ｈ３Ｒ９Ｈ３：Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ
ＹＳＳＲ９ＳＳＹ：Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
Ｈ３Ｒ９ＳＳＹ：Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
（ＲＫＨ）４：Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ
Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒ：Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ
複合化には、配列番号３６によって表わされる４μｇの安定化されたルシフェラーゼｍＲＮＡ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）を、それぞれ上記の（式Ｉによって表わされる）ペプチドとモル比で混合し、こうすることによって複合体を形成した。その後、得られた溶液を、水で５０μｌの最終的な体積に調節し、室温で３０分間培養した。使用した比率を下の表に示す。そして、トランスフェクションの１日前に、ＨｅＬａ細胞（１５０×１０３／穴）を２４穴のマイクロタイタープレートに播種し、トランスフェクション実施時に７０％コンフルエントの状態にした。
【０２３３】
【表５】
2010537651.tif 000015
【０２３４】
【表６】
2010537651.tif 000016
【０２３５】
【表７】
2010537651.tif 000017
【０２３６】
【表８】
2010537651.tif 000018
【０２３７】
【表９】
2010537651.tif 000019
【０２３８】
【表１０】
2010537651.tif 000020
【０２３９】
【表１１】
2010537651.tif 000021
【０２４０】
（実施例４：ＨｅＬａ細胞における、配列番号３５または配列番号３６によって表わされる安定化されたルシフェラーゼｍＲＮＡ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）の、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）によって媒介されるトランスフェクションおよび発現）
トランスフェクションの１日前に、ＨｅＬａ細胞（１５０×１０３／穴）を２４穴のマイクロタイターのプレートに播種し、トランスフェクション実施時に７０％コンフルエントの状態にした。トランスフェクションをするために、実施例３に開示した上記ＲＮＡ／（ペプチド）溶液（４０μｌ）５０μｌを、血清を含まない培地２５０μｌと混合し、上記細胞（最終ＲＮＡ濃度：１３μｇ／ｍｌ）に添加した。トランスフェクション溶液の添加に先立って、上記ＨｅＬａ細胞を、一穴について１ｍｌのオプティメン（Ｏｐｔｉｍｅｎ；  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で穏やかかつ慎重に２度洗浄した。そして、上記トランスフェクション溶液（３００μｌ／穴）を上記細胞に添加し、細胞を３７℃で４時間培養した。その後、１０％ＦＣＳを含んだ３００μｌのＲＰＭＩ培地（Ｃａｍｐｒｅｘ）を各穴に添加し、上記細胞を３７℃でさらに２０時間培養した。上記トランスフェクション溶液を、トランスフェクションの２４時間後に吸引によって排出し、上記細胞を３００μｌの溶解緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＰＯ４、２ｍＭのＥＤＴＡ、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、２ｍＭのＤＴＴ）に溶解させた。そして、その上清をルシフェリン緩衝液（２５ｍＭのグリシルグリシン、１５ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのＡＴＰ、６２．５μＭのルシフェリン）と混合し、ルミノメーター（Ｌｕｍａｔ  ＬＢ  ９５０７（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ドイツ、Ｂａｄ  Ｗｉｌｄｂａｄ））を使って蛍光を検出した。これらの実験の結果を図８および図１２〜図１８に示す。
【０２４１】
（実施例５：ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはポリ−Ｌ−アルギニン（比較例）を用いたＲＮＡ複合体の、トランスフェクション時の免疫活性化）
ａ）トランスフェクション実験
健康なドナーの末梢血から得られたＨＰＢＭＣ細胞を、フィコール勾配を使って単離し、その後１ｘＰＢＳ（リン酸塩を緩衝液とする生理食塩水）で洗浄した。そして上記細胞を９６穴のマイクロタイタープレート（２００×１０３／穴）に播種した。上記ｈＰＢＭＣ細胞を、実施例４に記載の手順で、１０μｌの上記ＲＮＡ／ペプチド複合体（ＲＮＡ最終濃度：６μｇ／ｍｌ、同量のＲＮＡを使用）とともに、Ｘ−ＶＩＶＯ  １５培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）（最終ＲＮＡ濃度：１０μｇ／ｍｌ）において２４時間培養した。ｈＰＢＭＣ細胞に対する免疫活性効果を、サイトカインの生成（インターロイキン６と腫瘍壊死因子α）を検出することによって測定した。したがって、ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｂ）を、特異的なサイトカイン抗体をさらに含んだ結合緩衝液（０．０２％のＮａＮ３、１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、１５ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．７）とともに一晩（ｏ／ｎ）培養した。そして１％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を含んだ１ｘＰＢＳで細胞を封止した。上記細胞の上清を添加し、３７℃で４時間培養した。その後、上記マイクロタイタープレートを１ｘＰＢＳおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０で洗浄し、ビオチンで標識した二次抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ドイツ、ハイデルブルグ）と共に培養した。ストレプトアビジン結合した西洋わさびペルオキシダーゼを上記プレートに添加した。そして、そのプレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含んだ１ｘＰＢＳで再度洗浄し、ＡＢＴＳ（２、２’−アジノ−ビス（３−エチル−ベンズチアゾリン−６−スルホン酸）を基質として添加した。サイトカインの量は、Ｓｕｎｒｉｓｅ  ＥＬＩＳＡリーダー（Ｔｅｃａｎ、ドイツ、クライルスハイム）を用いて組み換えサイトカイン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ドイツ、ハイデルブルグ）と共に標準曲線を使用し、４０５ｎｍ（ＯＤ４０５）における吸収度を測定することによって決定した。
【０２４２】
ｂ）結果
ｉ）ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化したＲＮＡの免疫活性効果
ｉ１）ＨＰＢＭＣ細胞を、上記において開示したように、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化したＲＮＡとともに２４時間培養した。ここで、ＲＮＡ：（Ａｒｇ）９の質量比は１：１であった。次に、上記細胞上清内におけるＩＬ−６の生成量をＥＬＩＳＡを使って測定した。その結果、ＨＰＢＭＣ細胞のＩＬ−６生成量は非常に大きかった。つまり、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）（図５を参照）で複合化したＲＮＡの免疫活性効果は非常に高かった。
【０２４３】
ｉ２）ＨＰＢＭＣ細胞を、上記において開示したように、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化したＲＮＡとともに２４時間培養した。ここで、ＲＮＡ：（Ａｒｇ）９の質量比は１：１であった。次に、上記上清細胞内におけるＴＨＦαの生成量をＥＬＩＳＡを使って測定した。その結果、ＨＰＢＭＣ細胞のＴＮＦα生成量は非常に大きかった。つまり、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）（図６を参照）で複合化したＲＮＡの免疫活性効果は非常に高かった。
【０２４４】
ｉｉ）ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはポリ−Ｌ−アルギニンで複合化したＲＮＡそれぞれの免疫活性効果の比較結果（比較例）
ｈＰＢＭＣを、ＲＮＡの複合体およびノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはポリ−Ｌ−アルギニンなどを用いて、異なるＲＮＡ：ノナアルギニンの質量比（１：１０、１：８、１：５、１：２、１：１、２：１、５：１、８：１および１０：１）の条件でそれぞれ２４時間培養した。その後、ＴＮＦαの生成量をＥＬＩＳＡを使って測定した。
【０２４５】
有利な効果として、５：１（ＲＮＡ：ノナアルギニン）未満の質量比の場合（１：１０、１：８、１：５、１：２、１：１、２：１）（図７を参照）に、非常に高い免疫活性効果が観察された。ＲＮＡ：ノナアルギニン質量比が５：１の場合には、観察されるＴＮＦα生成量はあまり多くない。ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはｍＲＮＡを（図７の左側を参照）単独で使用した活性化実験についても、同じことが言える。
【０２４６】
また、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）（図７の右側を参照）と比較すると、ポリ−Ｌ−アルギニンによってｍＲＮＡを複合化することによって、ＴＮＦαの生成の誘引が大幅に減少する。さらに、観察によると、ポリ−Ｌ−アルギニンの濃度が高いと、ポリ−Ｌ−アルギニンがトランスフェクトされる細胞にとって有害であるようである。ＲＮＡ：ポリ−Ｌ−アルギニンの質量比が１：２以下の場合、細胞が溶解するので特に有害なようである。
【０２４７】
（実施例６：ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはポリ−Ｌ−アルギニンを用いたＲＮＡ複合体をトランスフェクトする際における、ＨｅＬａ細胞におけるそれぞれのルシフェラーゼの発現（比較例））
ａ）ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）を用いたＲＮＡ複合体をＨｅＬａ細胞にトランスフェクトする際における、ルシフェラーゼの発現。異なる比率のノナアルギニンまたはポリ−Ｌ−アルギニンでそれぞれ複合化したルシフェラーゼをコードするＲＮＡｃｔｉｖｅを、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトした。２４時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。ＲＮＡ：ノナアルギニンの質量比は、２：１未満が有利なようである（図８を参照）。
【０２４８】
ｂ）比較すると、（高分子）ポリ−Ｌ−アルギニンで複合化しても、ルシフェラーゼ活性が高いレベルにまで増加することはないようである。したがって、（高分子）ポリ−Ｌ−アルギニンは、ｍＲＮＡ（図８参照）のトランスフェクションには適していないようである。
【０２４９】
（実施例７：ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）を用いたＲＮＡ複合体をトランスフェクトする際における、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現（比較例））
異なる比率のヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化したルシフェラーゼをコードするＲＮＡｃｔｉｖｅを、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトした。２４時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化しても、ルシフェラーゼ活性が高いレベルにまで増加することはないようである。したがって、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）は、ｍＲＮＡ（図９参照）のトランスフェクションには適していないようである。
【０２５０】
（実施例８：ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）を用いたＲＮＡ複合体をトランスフェクトする際における免疫活性化（比較例））
ａ）トランスフェクション実験
ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）について、上述の実施例５の実験と同様にトランスフェクション実験を実施した。
【０２５１】
ｂ）ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化したＲＮＡの免疫活性効果の結果
ｉ）ＨＰＢＭＣ細胞を、上記において開示したように、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化したＲＮＡとともに２４時間培養した。ここで、ＲＮＡ：（Ａｒｇ）７の質量比は１：１であった。次に、細胞上清内におけるＩＬ−６の生成量を、ＥＬＩＳＡを使って測定した。その結果、ＨＰＢＭＣ細胞のＩＬ−６生成量は非常に大きかった。つまり、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高かった（図１０参照）。
【０２５２】
ｉｉ）ＨＰＢＭＣ細胞を、上記において開示したように、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化したＲＮＡとともに２４時間培養した。ここで、ＲＮＡ：（Ａｒｇ）７の質量比は１：１であった。次に、細胞上清内におけるＴＨＦαの生成量をＥＬＩＳＡを使って測定した。その結果、ＨＰＢＭＣ細胞のＴＮＦα生成量は非常に大きかった。つまり、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化したＲＮＡの免疫活性効果は非常に高かった（図１１参照）。
【０２５３】
（実施例９：トランスフェクション効率に対するヒスチジンの効果の決定）
トランスフェクション効率に対するヒスチジンの効果を決定するために、ヒスチジン含有量の異なるペプチドを使って、上記トランスフェクション実験と同様にしてトランスフェクションを実施した。したがって、配列番号３６によって表わされる安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）４μｇを、（式Ｉによって表わされる）それぞれのペプチド、特にＲ９、Ｒ９Ｈ３、またはＨ３Ｒ９Ｈ３とモル比で混合し、これにより複合体を形成した。その後、得られた溶液を、水で５０μｌの最終的な体積に調節し、室温で３０分間培養した。各実験で使用した比率は１：１００００、１：５０００、および１：１０００であった。そして、トランスフェクションの１日前に、ＨｅＬａ細胞（１５０×１０３／穴）を２４穴のマイクロタイタープレートに播種し、トランスフェクション実施時に７０％コンフルエントの状態にした。トランスフェクトするために、５０μｌの上記ＲＮＡ／（ペプチド）溶液を、血清を含まない培地２５０μｌと混合し、上記細胞（最終ＲＮＡ濃度：１３μｇ／ｍｌ）に添加した。トランスフェクション溶液の添加に先立って、上記ＨｅＬａ細胞を、一穴について１ｍｌのオプティメン（Ｏｐｔｉｍｅｎ；  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で穏やかかつ慎重に２度洗浄した。そして、上記トランスフェクション溶液（３００μｌ／穴）を上記細胞に添加し、細胞を３７℃で４時間培養した。その後、１０％ＦＣＳを含んだ３００μｌのＲＰＭＩ培地（Ｃａｍｐｒｅｘ）を各穴に添加し、上記細胞を３７℃でさらに２０時間培養した。上記トランスフェクション溶液を、トランスフェクションの２４時間後に吸引によって排出し、上記細胞を３００μｌの溶解緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＰＯ４、２ｍＭのＥＤＴＡ、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、および２ｍＭのＤＴＴ）に溶解させた。そして、その上清をルシフェリン緩衝液（２５ｍＭのグリシルグリシン、１５ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのＡＴＰ、６２．５μＭのルシフェリン）と混合し、ルミノメーター（Ｌｕｍａｔ  ＬＢ  ９５０７（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ドイツ、Ｂａｄ  Ｗｉｌｄｂａｄ））を使って蛍光を検出した。
【０２５４】
結果を図１９に示す。図から読み取れるように、３個のヒスチジンを片方の末端に付加することによって、複合化ＲＮＡのトランスフェクション効率はすでに増加しており、３個のヒスチジンを両方の末端に付加すると、複合化ＲＮＡのトランスフェクション効率が大幅に増加する。
【０２５５】
（実施例１０：トランスフェクション効率に対する中性アミノ酸の効果の決定）
トランスフェクション効率に対する中性アミノ酸の効果を決定するために、ペプチドＨ３Ｒ９ＣＣＳを使って、上記実施例９のトランスフェクション実験と同様にして別のトランスフェクション実験を実施した。これらの追加実験の結果を図２０に示す。
【０２５６】
（実施例１１：ｈＰＢＭＣにおけるＲ９Ｈ３を用いた免疫活性化）
ｈＰＢＭＣにおける免疫活性化に対するＲ９Ｈ３の効果を試験した。したがって、上述の実施例３のＲ９Ｈ３とＲＮＡとの複合体を調製した。さらに、健康なドナーの末梢血から得られたＨＰＢＭＣ細胞を、フィコール勾配を使って単離し、その後１×ＰＢＳ（リン酸塩を緩衝液とする生理食塩水）で洗浄した。そして上記細胞を９６穴のマイクロタイタープレート（２００×１０３／穴）に播種した。上記ｈＰＢＭＣ細胞を、実施例４に記載の手順で、１０μｌの上記ＲＮＡ／ペプチド複合体（最終ＲＮＡ濃度：６μｇ／ｍｌ、同量のＲＮＡを使用）とともに、Ｘ−ＶＩＶＯ  １５培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）において２４時間培養した。ｈＰＢＭＣ細胞に対する免疫活性効果を、サイトカインの生成（インターロイキン６と腫瘍壊死因子α）を検出することによって測定した。したがって、ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｂ）を、特異的なサイトカイン抗体をさらに含んだ結合緩衝液（０．０２％のＮａＮ３、１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、１５ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．７）とともに一晩（ｏ／ｎ）培養した。そして１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を含んだ１×ＰＢＳで細胞を封止した。上記細胞の上清を添加し、３７℃で４時間培養した。その後、上記マイクロタイタープレートを１×ＰＢＳおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０で洗浄し、ビオチンで標識した二次抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ドイツ、ハイデルブルグ）と共に培養した。ストレプトアビジン結合した西洋わさびペルオキシダーゼを上記プレートに添加した。そして、そのプレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含んだ１×ＰＢＳで再度洗浄し、ＡＢＴＳ（２、２’−アジノ−ビス（３−エチル−ベンズチアゾリン−６−スルホン酸）を基質として添加した。サイトカインの量は、Ｓｕｎｒｉｓｅ  ＥＬＩＳＡリーダー（Ｔｅｃａｎ、クライルスハイム、ドイツ）を用いて組み換えサイトカイン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ドイツ、ハイデルブルグ）と共に標準曲線を使用し、４０５ｎｍ（ＯＤ４０５）における吸収度を測定することによって決定した。結果は図２１および図２２に示す。図から読み取れるように、ＲＮＡ：Ｒ９Ｈ３の比が１：５０００のときに、免疫活性化が非常に高かった。
【図面の簡単な説明】
【０２５７】
【図１】図１は、安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ配列の配列を示し、ルシフェラーゼをコードする天然ｍＲＮＡがポリＡ／ポリＣ−ｔａｇ（Ａ７０−Ｃ３０）によって修飾されている。この第１の構造物（ＣＡＰ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０、配列番号３５）は、以下の配列因子を含んでいた。すなわち、αグロビン遺伝子からの安定化配列、３’末端部（ポリＡ−尾部）に位置する７０のアデノシン、および３’−末端部（ポリＣ尾部）に位置する３０のシトシンであり、シンボル      ＝コードする配列      ＝αグロビン遺伝子の３’−ＵＴＲ      ＝ポリＡ−尾部      ＝ポリＣ尾部によって表わされている。
【図２】図２は、安定化されたルシフェラーゼのｍＲＮＡ配列の配列を示し、配列番号３５（図１参照）によって表わされる上記構造物が、コドンをうまく使用するためにＧＣ最適化配列によってさらに修飾されている。最終構造物（構造物ＣＡＰ−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０、配列番号３６）は、以下の配列因子を含んでいた。すなわち、コドンをうまく使用するためのＧＣ最適化配列、αグロビン遺伝子からの安定化配列、３’末端部（ポリＡ−尾部）に位置する７０のアデノシン、および３’−末端部（ポリＣ尾部）に位置する３０のシトシンであり、シンボル      ＝コードする配列      ＝αグロビン遺伝子の修飾３’−ＵＴＲ      ＝ポリＡ−尾部      ＝ポリＣ尾部によって表わされている。
【図３】図３は、配列番号３５（配列番号３７）（図１参照）によって表わされる配列のコード配列を示す。
【図４】図４は、配列番号３６（配列番号３８）（図２参照）によって表わされる配列のＧＣ最適化コード配列を示す。ＧＣ最適化コドンには下線を引いた。
【図５】図５は、ｈＰＢＭＣ細胞においてノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＩＬ−６生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＩＬ−６生成量は非常に大きい。つまり、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【図６】図６は、ｈＰＢＭＣ細胞においてノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＴＮＦα生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＴＮＦα生成量は非常に大きい。つまり、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【図７】図７は、ｈＰＢＭＣにおいてノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはポリ−Ｌ−アルギニンで複合化されたＲＮＡのそれぞれの免疫活性効果を、比較例において比較した結果を示す。有利な効果として、１：５（ＲＮＡ：ノナアルギニン）未満の質量比の場合（１：１０、１：８、１：５、１：２、１：１、２：１）に、非常に高い免疫活性効果が観察される。ただし、ＲＮＡ：ノナアルギニン質量比が５：１の場合には、観察されるＴＮＦα生成量はあまり多くない。ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）またはｍＲＮＡを単独で使用した活性化実験についても、同じことが言える。また、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）と比較すると、ｍＲＮＡをポリ−Ｌ−アルギニンで複合化することによって、ＴＮＦα生成の誘引が大幅に減少することが観察された。ポリ−Ｌ−アルギニンの濃度が高いと、そのポリ−Ｌ−アルギニンがトランスフェクトされる細胞にとって有害であるようである。ポリ−Ｌ−アルギニン：ＲＮＡの質量比が１：２以上の場合、細胞が溶解するので特に有害なようである。
【図８】図８は、ノナアルギニン（（Ａｒｇ）９）を使ったＲＮＡの複合体を、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトすると発現するルシフェラーゼを示す。図８から読み取れるように、２：１（ＲＮＡ：ノナアルギニン）未満の質量比が有利なようである。対照的に、（高分子）ポリ−Ｌ−アルギニンで複合化しても、低いルシフェラーゼ活性しか生じない。したがって、（高分子）ポリ−Ｌ−アルギニンは、ｍＲＮＡのトランスフェクションには適していないようである。
【図９】図９は、比較例において、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）を使ったＲＮＡの複合体を、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトすると発現するルシフェラーゼを示す。図９から読み取れるように、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）を使ったＲＮＡの複合体をトランスフェクトしても、低いルシフェラーゼ活性しか生じない。したがって、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）もｍＲＮＡのトランスフェクションには適していないようである。
【図１０】図１０は、ｈＰＢＭＣ細胞におけるヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＩＬ−６生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＩＬ−６生成量は非常に大きい。つまり、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【図１１】図１１は、ｈＰＢＭＣ細胞におけるヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を、ＴＮＦα生成量を測定することによって示している。図から読み取れるように、ｈＰＢＭＣ細胞のＴＮＦα生成量は非常に大きい。つまり、ヘプタアルギニン（（Ａｒｇ）７）で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果は非常に高い。
【図１２】図１２は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｒ９ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１３】図１３は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｒ９Ｈ３ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１４】図１４は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｈ３Ｒ９Ｈ３ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１５】図１５は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、ＹＹＹＲ９ＳＳＹペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１６】図１６は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｈ３Ｒ９ＳＳＹペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１７】図１７は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、（ＲＫＨ）４ペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１８】図１８は、ＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現に対する、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒペプチドで複合化されたＲＮＡの効果を示す。
【図１９】図１９は、トランスフェクション効率に対する、末端に位置するヒスチジンの効果を示す。
【図２０】図２０は、トランスフェクション効率に対する、末端に位置する中性アミノ酸の効果を示す。
【図２１】図２１は、ｈＰＢＭＣにおけるＴＮＦαの分泌に対する、Ｒ９Ｈ３で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を示す。
【図２２】図２２は、ｈＰＢＭＣにおけるＩＬ−６の分泌に対する、Ｒ９Ｈ３で複合化されたＲＮＡの免疫活性効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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