(57)【要約】本発明は概して、微生物を検出および同定するための方法、より具体的には、微生物の検出の増加を促進するために試料を2種類の温度でインキュベートすることによって試料中の微生物を検出するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、試料中の病原体を検出するための方法：
試料中の病原体を第1の温度で培養する段階であって、第1の温度が、少なくとも1種類の内在性タンパク質の生成を妨げ、かつ該病原体の最適な増殖を可能にする、段階；
試料中の病原体を第2の温度で培養する段階であって、第2の温度が、少なくとも1種類の内在性タンパク質の生成を可能にする、段階；および
少なくとも1種類のタンパク質に特異的に結合する検出試薬と試料とを接触させる段階；
それにより、試料中の病原体を検出する段階。
【請求項２】
病原体がリステリア菌（Listeria）を含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
第1の温度が約37℃である、請求項2記載の方法。
【請求項４】
第2の温度が約30℃である、請求項2記載の方法。
【請求項５】
少なくとも1種類の内在性タンパク質がフラジェリンタンパク質を含む、請求項2記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第119条(e)項に基づき、2006年8月14日に出願された米国特許仮出願第60/837,469号の恩典を主張し、該仮出願は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【０００２】
技術分野
本発明は概して、微生物を検出および同定するための方法、より具体的には、インキュベーター内で、関心対象の細菌タンパク質（または他の細菌産物）の生成を妨げるが該微生物を最適に増殖させるある温度で、試料中の微生物を増やす（enrich）ことによって、微生物を検出するための方法に関する。一定時間の後、試料全体または試料の一部分を移し、先に阻害されていたタンパク質の発現を可能にする異なる最適温度でインキュベートする。続いて、2種類の温度でインキュベートしたこの試料を、温度制御されるタンパク質（temperature regulated protein）（または他の細菌産物）を検出するのに適したアッセイ法で試料またはその一部分を分析することにより、試験する。
【背景技術】
【０００３】
関連技術の説明
微生物病は、長い間、世界的規模の主要な健康問題になっている。世界中で、大発生の頻度および深刻さが顕著に増加している。新規の病原菌、例えば大腸菌（E. coli）O157:H7が同定されている。さらに、以前から認識されていた病原性の属が突然変異して、ネズミチフス菌（Salmonella typhimirium）DT 104などの薬物耐性をもつ高感染性株を形成している。このような疾患の予防における重要な特徴は早期発見および早期診断である。疫学者は、効果的な疾患予防戦略を見つけ出すために、環境中および食品中の微生物汚染を探す必要がある。
【０００４】
一つの例は、汚染された牛挽肉を原因とする、米国の太平洋岸北西地区における1992年の腸管出血性大腸菌（EHEC）の大発生である。EHECは比較的「新規に発見された」病原体である。EHECは1975年に初めて単離され、1982年になってようやく、大腸菌O157:H7が米国における食物に関係した出血性大腸炎の2度の大発生と関連付けられた。大腸菌O157:H7症例の発生頻度報告は増加している。通常は大腸菌株は無害な共生生物であるが、いくつかの株は病原性である。EHECは特に毒性が高く、小児における重篤な腹部疝痛および急性腎不全、ならびに心血管系および中枢神経系の障害を含む致命的な合併症を引き起こしうる。
【０００５】
もう一つの例として、米国疾病管理センター（CDC；Centers for Disease Control）の食物媒介性疾患に関する調査によると、サルモネラ菌（Salmonella）は、食物媒介性の微生物病の大発生全体における原因の第1位（50%超）である。1988年から1992年の期間で、年間40,000例を超える症例がCDCに報告された。サルモネラ菌は、幅広い種類の温血動物および冷血動物に感染することができ、かつ宿主外で長期間生存することができる。
【０００６】
さらなる例では、ネズミチフス菌DT 104が、1990年代初頭に英国で初めて同定された。これは、その毒性で知られているサルモネラ菌の、適応性の高い薬剤耐性株である。結果として、重大な臨床的関心がこの血清型に集中した。ネズミチフス菌DT 104は、サルモネラ属の中で高度に保存されている必須の（core）細胞壁の抗原エピトープを含む。
【０００７】
グラム陽性細菌属であるリステリア菌（Listeria）は自然界に広く分布しており、土壌、水、植物、および多くの動物種から単離されている。農業環境におけるリステリア菌の検出頻度は増加しているようである。リステリア症の特定の大発生について、死亡率は罹患患者の30%から40%と推定されるが、最小感染量はほとんど分かっていない。食物におけるリステリア菌制御の特に困難な面の1つは、リステリア菌が-0.4℃の低温でも44℃の高温でも増殖できるということである。これらの要素はすべて、食物病原体としてのリステリア菌の重要性の増大に寄与している。
【０００８】
近年、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）およびカンピロバクター・コリ（Campylobacter coli）が、腸炎、特に家禽を発生源とする腸炎の原因の第1位と同定された。このことにより、これら2つの菌種を、ヒト病原体ではない他のいくつかのカンピロバクター（Campylobacter）種と識別する必要性が増大している。これには、より特異的な細胞壁膜の抗原エピトープを差別的に選択することが必要である。
【０００９】
微生物汚染の潜在的な環境源および食物源を、迅速かつ容易に、ただし非常に高い特異性でモニターすることができれば、ヒトへの感染のリスクが低減すると考えられる。したがって、特別な装置または専門の装置を必要とせず、現場で実行することができ、かつ特別な技能を必要としない、細菌、酵母、カビ、真菌、寄生虫、およびウイルスを含む微生物の検出のために高い特異性を提供する分析法が有用であろう。食物媒介性の細菌汚染の場合、サルモネラ菌、リステリア菌、EHEC、およびカンピロバクター菌が、4つの主要な疾患関連微生物である。
【００１０】
サルモネラ菌、リステリア菌、およびEHECの検出方法のいくつかが現在利用可能であるが、分析の標準的な培養法によって試験結果を得るためには、訓練された実験技術者と、最低2〜5日が必要である。新規のより迅速な方法は、酵素結合イムノアッセイ（EIA）、DNAハイブリダイゼーション、免疫拡散法、または増殖/代謝測定法などの技術に基づいている。培養法よりも所要時間は大幅に少ないが、これらの迅速試験はなお、熟練を要する技術訓練、機能的な実験室、および専門の設備を必要とする。これらの試験は一般的に、相当な操作時間（hands-on time）を含む合計2日またはそれ以上の日数を要する。今日までのカンピロバクター菌の検出方法論は技術集約的であり、十分な訓練を受けた分析者に加えて、綿密な培地および環境条件を必要とする。
【００１１】
診断分野における最近の別の技術には、ラテラルフローイムノアッセイが含まれる。このような試験はヒト絨毛性ゴナドトロピン（hCG）の検出のために開発され、妊娠試験に応用されている。典型的には、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を、検出ゾーンと称される、固体担体ストリップの遠位端付近の個別のバンドに固定化する。別の量の抗体を、無機ゾルまたは染色ポリスチレン粒子などの検出試薬で標識する。この標識抗体を、担体ストリップの近位端付近に可逆的に固定する。抗原を潜在的に含む試料液と近位端が水和すると、該抗原が標識抗体と反応して、複合体は固定化抗体のゾーンを通過し、これが、固定化抗体と反応してサンドイッチを形成する。発色試薬-抗原複合体の捕捉により、検出ゾーンにおいて可視シグナルの形成が起こる。
【００１２】
ホルモンまたは他の可溶性分子標的の識別とは対照的に、病原細菌を識別するには2つの主要な課題に対処する必要がある。これらの課題とは、抗原的に関連する多くの微生物の存在下で、偽陽性結果に対して低い寛容性で、および偽陰性に対して非常に低いか好ましくはゼロの寛容性で、病原微生物の株すべてを検出することが必要なことである。2つ目の課題は、微生物そのものの物理的サイズおよび不均一性である。典型的な臨床診断試験、例えば尿中のhCGに対する試験は、十分に特徴づけられたマトリックス（例えば、尿）中の単一で小さな固有の実体（すなわち、ホルモン）の検出に的を絞っている。さらに、分析物（hCG）の構造は定義されており、サイズおよび組成が均一である。
【００１３】
病原体の検出、例えばサルモネラ菌に対する試験は、シトロバクター（Citrobacter）種およびエンテロバクター（Enterobacter）種などの類似する微生物の非病原体株から、特定の病原体株を識別する必要がある。十分に定義された小さなサイズおよび構造をもつ大部分のホルモンまたはマーカータンパク質とは対照的に、微生物はきわめて大きく、それらの表面は不均一であり、サルモネラ菌の鞭毛相転換のような変化を受け得る多くの異なる抗原エピトープを含む。
【００１４】
微生物を増殖させながら、検出容易な抗原の同時曝露を可能にする方法論が、当技術分野において必要である。さらに、さまざまな母体中の不均一な微生物集団における、特定の種の高度に保存された標的抗原エピトープに対する選択性の向上を実現することが、当技術分野において必要である。本発明はこれらおよび他の関連する利点を提供する。
【発明の概要】
【００１５】
概要
本発明の1つの局面は、少なくとも1種類の内在性タンパク質の生成を妨げかつ病原体の最適な増殖を可能にする第1の温度で、試料中の病原体を培養する段階；少なくとも1種類の内在性タンパク質の生成を可能にする第2の温度で、試料中の病原体を培養する段階；および、少なくとも1種類のタンパク質に特異的に結合する検出試薬と試料とを接触させる段階；それにより、試料中の病原体を検出する段階を含む、試料中の病原体を検出するための方法を提供する。1つの態様において、病原体はリステリア菌を含む。さらなる態様において、第1の温度は約37℃である。別の態様において、第2の温度は約30℃である。1つの態様において、少なくとも1種類の内在性タンパク質は、フラジェリンタンパク質を含む。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
詳細な説明
本発明を説明する前に、以下で用いられる特定の用語の定義を示すことはその理解に有用であろう。
【００１７】
本明細書で用いる「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびに、F(ab’)2およびFab断片などのそれらの断片、ならびに組換えによって産生される他の結合パートナーを含む。さらに抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、α-ガラクトシダーゼなどの酵素と共有結合的に結合してもよく、または組換えにより融合してもよい。
【００１８】
「通常増菌培地（general enrichment medium）」という用語は、微生物の増殖の促進に有用であることが公知の任意の培地を意味する。簡単に説明すると、さまざまな通常増菌培地が市販されておりかつ/または容易に作製可能であり、これには、トリプトンベースの培地（例えば、Terrificブロス、SOB培地、SOC培地、およびLB培地）、NZCYM培地、最少培地、ラクトースブロス、緩衝ペプトン水、ブレインハートインフュージョン培地、ヘモフィルス（Haemophilus）ブロス、トリプシン大豆ブロス、および栄養ブロスなどが含まれるがそれらに限定されない（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Press, 1989; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing, 1995を参照のこと。Sigma Chemical Co, St. Louis, MOおよびDifco Laboratories lnc., Detroit, Michiganより市販されている）。
【００１９】
本発明は概して、特定のタンパク質または関心対象となる他の病原体産物（例えば、任意のさまざまな検出試薬/アッセイ法を用いて特異的に検出することができる、鞭毛または他の細胞タンパク質）の発現を阻害しながら病原体の最適な増殖を可能にする第1の温度で試料を培養することによって、試料中の病原体を検出するための方法を提供する。続いて該試料を、先に阻害されていたタンパク質を発現する第2の温度で増殖させる。続いて該試料を、関心対象のタンパク質または産物を検出するための任意のさまざまな検出アッセイ法に供する。この様式で、病原体が試料中で検出される。
【００２０】
Current Protocols in Microbiology (Eds. R Coico, T. Kowalik, J. Quarles, B. Stevenson, and R. Taylor; John Wiley & Sons, Inc., NY, NY 2000-2006)に説明されているもののような、病原体の増殖に関する当業者に公知の任意のさまざまな培養条件を、本発明の方法において用いることができる。本発明では、トリプシン大豆ブロス、栄養ブロス、緩衝ペプトン水、ラクトースブロス、ブレインハートインフュージョンブロス、または類似の培地などの、いくつかの広く認識されている通常増菌培地のうちの任意のものを使用する。
【００２１】
当業者により認識されているように、本方法の第1および第2の温度は、検出される微生物、および関心対象となる、温度制御されるタンパク質または産物に応じて変動する。例として、リステリア菌は37℃および30℃で増殖する。37℃においてリステリア菌は良好に増殖するが鞭毛を生じず、一方30℃においてリステリア菌は増殖し、かつ鞭毛も生じる。このことにより、37℃で一定時間増殖させると、試料中の細菌の増殖が可能になる。一旦30℃で一定時間増殖させると、増えた細菌には鞭毛が現れ、これをその後、試料中の該細菌の捕捉およびその存在の検出に使用することができる。このように、本方法は、同一容器中において病原体の増殖のための差別的な温度を使用することを可能にして最大可能増殖レベルを誘導し、続いて容器全体を、温度制御されるタンパク質の生成を可能にする第2の温度に移す。この様式で、病原体の検出のための総アッセイ時間が減少し、かつ感度が向上する。
【００２２】
したがって、本発明の第1および第2の温度は、関心対象のタンパク質の増殖/阻害および関心対象のタンパク質の増殖/生成に適した任意の温度であってよい。例えば、第1および第2の温度は20℃〜40℃の範囲であってよい。特定の態様において、第1の温度は20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、または40℃であってよく、第2の温度は20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、または40℃であってよい。
【００２３】
本発明の方法は、リステリア菌、腸管出血性大腸菌（EHEC）、サルモネラ菌、赤痢菌（Shigella）、カンピロバクター菌、アエロモナス・ヒドロフィラ（Aeromonas hydrophilia）、アエロモナス・キャビエ（Aeromonas caviae）、アエロモナス・ソブリア（Aeromonas sobria）、ストレプトコッカス・ウベリス（Streptococcus uberis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）、バチルス・スフェリカス（Bacillus sphaericus）、蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）、セラチア・リクファシエンス（Serratia liquefaciens）、ラクトコッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）、キサントモナス・マルトフィリア（Xanthomonas maltophilia）、スタフィロコッカス・シミュランス（Staphylococcus simulans）、スタフィロコッカス・ホミニス（Staphylococcus hominis）、ストレプトコッカス・コンステラタス（Streptococcus constellatus）、ストレプトコッカス・アンギノサス（Streptococcus anginosus）、大腸菌、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、マイコバクテリウム・フォーチュイタム（Mycobacterium fortuitum）、および肺炎杆菌（Klebsiella pneumonia）を含むがそれらに限定されない任意のさまざまな病原体の検出に用いることができる。
【００２４】
「細菌」という用語は、試験試料中に集合的に存在するまたは共存する1種類または複数の種類の生菌を意味する。この用語は、1種類の細菌（例えば、アエロモナス・ヒドロフィラ、アエロモナス・キャビエ、アエロモナス・ソブリア、ストレプトコッカス・ウベリス、エンテロコッカス・フェシウム、エンテロコッカス・フェカリス、バチルス・スフェリカス、蛍光菌、シュードモナス・プチダ、セラチア・リクファシエンス、ラクトコッカス・ラクチス、キサントモナス・マルトフィリア、スタフィロコッカス・シミュランス、スタフィロコッカス・ホミニス、ストレプトコッカス・コンステラタス、ストレプトコッカス・アンギノサス、大腸菌、黄色ブドウ球菌、マイコバクテリウム・フォーチュイタム、および肺炎杆菌）、細菌属（例えば、連鎖球菌（streptococci）、シュードモナス（pseudomonas）、および腸球菌（enterococci））、複数の関連する細菌種（例えば、大腸菌群）、共通の特徴を有するより大きな細菌の群（例えば、すべてのグラム陰性細菌）、食品、動物、もしくはヒト対象において、または環境源において一般的に見出される細菌の群、または上に列記した細菌の2つまたはそれ以上の組み合わせを意味しうる。細菌には、参照により本明細書に組み込まれるBergey's Manual of Systematic Bacteriology, 1989, Williams and Wilkins, U.S.A.において記述されたまたは言及されたものが含まれる。
【００２５】
「試料」または「試験試料」とは、牛挽肉または鳥挽肉などの食品、ヒトまたは動物の試験対象、土壌、水、空気、もしくは他の環境源、または細菌濃度を測定すべき任意の他の供給源から採取された一片、画分、アリコート、液滴、部分、断片、大量、または一かけら（tidbit）を意味する。試験試料は、参照により本明細書に組み込まれるCompendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, Third Edition, Edited by Carl Vanderzant and Don F. Splittstoesser, Compiled by the APHA Technical Committee on Microbiological Methods for Foodsにおいて記述されたまたは言及されたものを含むがそれらに限定されない当業者に公知の技術を用いて、供給源から採取されうる。
【００２６】
当業者によって認識されるように、温度依存的に発現する任意のタンパク質が、本発明の方法において有用でありうる。本明細書に記載される例示的なタンパク質は細菌性の鞭毛タンパク質であるが、温度制御される他のタンパク質もまた本明細書において意図される。
【００２７】
特定の態様において、検出法は、リステリア菌、腸管出血性大腸菌（EHEC）、サルモネラ菌、またはカンピロバクター菌に特異的である。1つの態様において本方法は、培養した試料を、標的タンパク質または他の微生物産物に特異的な抗体を含む、視覚的免疫沈降アッセイ（visual immunoprecipitate assay）、酵素結合イムノアッセイ、化学発光、免疫ブロット法、または類似の検出技術などの検出系に導入し、それにより高精度の結果をもたらす段階を含む。
【００２８】
本発明のさらなる局面は、試験試料中の微生物の存在を検出するための視覚的免疫沈降アッセイの使用である。視覚的免疫沈降アッセイにおいて、最初に試薬ゾーンに配置される「抗体検出試薬」を含む抗体は、典型的にはポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれかである。さらに、ポリクローナル抗体を用いる場合、該抗体は好ましくは、本発明で利用する前にアフィニティーカラムで精製される。このような抗体の産生は、当技術分野において周知である（例えば、Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988を参照のこと）。アフィニティー精製された適切な抗体は、市販の供給源からも入手することができる。例えば、サルモネラ菌に特異的なポリクローナル抗血清は、Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, Marylandから入手可能である。好ましい視覚的免疫沈降アッセイとは、米国特許第5,658,747号によって記述されたものである。簡単に説明すると、米国特許第5,658,747号では、抗体検出試薬を含む試薬ゾーンおよび、該試薬ゾーンの下流に位置しかつ標的微生物と抗体検出試薬との間の複合体と特異的に結合することができる固定された結合パートナーを含む検出ゾーンを備えた、ラテラルフロー診断装置を利用している。
【００２９】
ポリクローナル抗体は、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ニワトリ、シチメンチョウ、ウサギ、マウス、またはラットなどのさまざまな温血動物を免疫することによって、当業者により容易に産生することができる。簡単に説明すると、標的微生物または該標的微生物と特異的に結合する抗原を利用して、動物を免疫する。関心対象のタンパク質またはペプチドの免疫原性は、フロイント完全アジュバントもしくはフロイント不完全アジュバントなどのアジュバントの使用を通じて、または、オボアルブミンまたはキーホールリンペットヘモシアニン（KLH）などの他のタンパク質へのカップリングによって、増加しうる。
【００３０】
モノクローナル抗体はまた、周知の技術を用いて容易に産生することができる（例えば、Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKearn, and Bechtol (eds.), 1980および上記のAntibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.)を参照のこと）。簡単に説明すると、一例としては、ポリクローナル抗体の産生と同様に対象動物を免疫する。あるいは、モノクローナル抗体の産生に適したインビトロ免疫技術もまた当技術分野において公知である。続いて、抗体産生細胞を不死化骨髄腫細胞と融合させて、不死化ハイブリドーマ細胞株を提供する。融合の後、慣例的にはHAT培地であるが他の適切な培地も当技術分野において公知である適切な培地を含む培養プレートに、該細胞を入れる。約7日後、生じた融合細胞またはハイブリドーマを、所望の抗原を認識する抗体の存在を判定するためにスクリーニングしてもよい。数回のクローン希釈（clonal dilution）および再分析の後、関心対象のタンパク質に結合する抗体を産生するハイブリドーマを単離することができる。
【００３１】
モノクローナル抗体または結合パートナーを構築するために、他の技術を利用することもできる（例えば、Huse et al., "Generation of a Large Combinational Library of the Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda," Science 246:1275-1281, 1989; Sastry et al., "Cloning of the Immunological Repertoire in Escherichia coli for Generation of Monoclonal Catalytic Antibodies: Construction of a Heavy Chain Variable Region-Specific cDNA Library," Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5728-5732, 1989; Alting-Mees et al., "Monoclonal Antibody Expression Libraries: A Rapid Alternative to Hybridomas," Strategies in Molecular Biology 3:1-9, 1990; Larrick et al., "Polymerase Chain Reaction Using Mixed Primers: Cloning of Human Monoclonal Antibody Variable Region Genes From Single Hybridoma Cells," BioTechnology 7:934-938, 1989を参照のこと）。
【００３２】
適切な抗体が得られたら、当業者に周知の多くの技術により該抗体を単離または精製する（上記のAntibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Laneを参照のこと）。
【００３３】
本発明において有用な抗体は、抗原的に関連する多数の微生物の存在下で、標的微生物の株すべてを選択的に検出できることが好ましい。さらに、該抗体は、（偽陽性結果を導く）非特異的結合に対して低い寛容性で、および（偽陰性結果を導く）標的微生物との結合に関してきわめて低いか好ましくはゼロの失敗率で、そのような検出ができることが好ましい。
【００３４】
特定の態様において、試料は、増菌検出法（enrichment-detection method）で分析される、食物試料、水試料、排泄物試料、化粧品試料、排水試料、工業試料、薬学的試料、植物試料、環境試料、および他の種類の試料などの未精製の現地試料を含むかそれらから本質的になる溶液である。あるいは、試料は体液などの生物学的流体であってもよい。さらなる態様において、試料は、本発明の方法による試料の培養の前に、部分的または実質的に精製されてもよい。
【００３５】
第1の温度および第2の温度を含む適切な条件下で試料をインキュベートした後、好ましくは視覚的免疫沈降アッセイ、酵素結合イムノアッセイ、化学発光、免疫ブロット法、または類似の検出技術などであるがそれらに限定されない迅速検出法を用いて、結果を検出する。このような方法論は、米国特許第5,658,747号および国際公開公報第95/30903号に、より詳細に記載されている。
【００３６】
本発明の別の局面は試験試料中の微生物を検出するための方法を提供し、ここで、該試験試料を、適切な培地中および第1の温度で、微生物量を増やすのに十分な時間インキュベートし、その後、温度制御される検出可能なタンパク質を微生物が生成するのに適した適切な培地中および第2の温度でインキュベートする。続いて、免疫親和性、視覚的免疫沈降、酵素結合イムノアッセイ、化学発光、免疫ブロット法などを含むがそれらに限定されない免疫に基づく検出方法論を利用することにより、病原微生物の存在を検出する。あるいは、試料中の抗原の曝露を、検出前または検出と同時に界面活性剤で処理することによって増強してもよい。さらなる別の態様において、試料中の抗原の曝露を、検出前または検出と同時に、界面活性剤の存在下で試料を加熱することによって増強してもよい。
【００３７】
上記のさまざまな態様を組み合わせて、さらなる態様を提供することができる。本明細書で言及されかつ/または2006年8月14日に出願された米国特許仮出願第60/837,469号の出願データシートに列挙された、米国特許、米国特許公開公報、米国特許出願、各国特許、各国特許出願、および非特許刊行物はすべて、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。さまざまな特許、特許出願、および刊行物の概念を援用してなおさらなる態様を提供するために、必要ならば、上記態様の局面を改変することができる。
【００３８】
上記で詳述した説明を踏まえて、上記の態様に対してこれらおよび他の変更を加えることができる。概して、添付の特許請求の範囲において使用される用語は、特許請求の範囲を、明細書および特許請求の範囲に開示された特定の態様に限定すると解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに可能な態様をすべて含むと解釈されるべきである。従って、添付の特許請求の範囲は本開示によって限定されない。
【国際調査報告】
2010501075.tif 000002
2010501075.tif 000003
2010501075.tif 000004