(57)【要約】  本発明は、免疫応答または炎症応答の調節に使用される薬剤を製造するための、式（Ｉ）に示す化合物またはその製薬上許容される塩の使用に関する。式中、ＺはＯまたはＳであり；ｎは１〜３であり；Ｒ３は−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＳＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＮＨＲ８、−Ｃ（ＮＨ）ＳＲ８、または−Ｃ（ＮＨ）ＮＨＲ８（ここで、Ｒ８は水素原子もしくはアルキル基である）であり；Ｒ４は、水素原子、−ＣＨ２Ｒ５または−ＣＨ２ＣＨ２Ｒ５（ここで、Ｒ５は、それぞれ独立してＲ３の定義のいずれかである）であり；Ｂは−ＮＲ２−、−ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨＲ７−または−ＣＨ２Ｏ−（ここで、Ｒ２は、水素原子またはＣ１−３のアルキル基、アルケニル基もしくはアルキニル基であり、Ｒ７は、水素原子またはＣ１−３のアルキル基もしくはアルコキシ基である）であり；Ａは；式中、Ｒ１が、−ＮＨ２または−ＯＨであり、ＣおよびＤは、それぞれ独立して、１または２以上のヘテロ原子を含んでもよい、５員または６員の、置換されたまたは非置換の、芳香環または非芳香環であり、Ｃは任意の位置で基Ｂと結合している、である。2010518143.tif 000026
2010518143.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫または炎症反応の調節に使用される薬剤を製造するための、式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩の使用：
【化１】
2010518143.tif 000020
式中、
ＺはＯまたはＳであり；
ｎ＝１〜３であり；
Ｒ３は−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＳＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＮＨＲ８、−Ｃ（ＮＨ）ＳＲ８、または−Ｃ（ＮＨ）ＮＨＲ８（ここで、Ｒ８は水素原子もしくはアルキル基である）であり；
Ｒ４は、水素原子、−ＣＨ２Ｒ５または−ＣＨ２ＣＨ２Ｒ５（ここで、Ｒ５は、それぞれ独立してＲ３の定義のいずれかである）であり；
Ｂは、−ＮＲ２−、−ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨＲ７−または−ＣＨ２Ｏ−（ここで、Ｒ２は、水素原子またはＣ１−３のアルキル基、アルケニル基もしくはアルキニル基であり、Ｒ７は、水素原子またはＣ１−３のアルキル基もしくはアルコキシ基である）であり；
Ａは、；
【化２】
2010518143.tif 000021
式中、
Ｒ１は、−ＮＨ２または−ＯＨであり；
ＣおよびＤは、それぞれ独立して、１または２以上のヘテロ原子を含んでもよい、５員または６員の、置換されたまたは非置換の、芳香環または非芳香環であり、Ｃは任意の可能な位置で基Ｂと結合している、
である。
【請求項２】
免疫抑制治療に使用される薬剤を製造するための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
自己免疫疾患の治療または予防に使用される薬剤を製造するための、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
炎症の軽減もしくは予防に用いるための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
自己免疫炎症疾患の治療または予防のための薬剤の製造に用いるための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
サイトカイン生成を抑制するための薬剤の製造に用いるための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
リウマチ関節炎、乾癬性関節炎、若年性突発性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚節炎、多発節炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、尋常性天疱瘡、慢性特発性血小板減少性紫斑病、クローン病、潰瘍性大腸炎、結節性多発性動脈炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、もしくは神経単位組織の炎症の治療または予防のための薬剤の製造に用いるための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
リウマチ関節炎、乾癬性関節炎、もしくは強直性脊椎炎の治療または予防のための薬剤の製造に用いるための、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
リウマチ関節炎の治療または予防のための薬剤の製造に用いるための、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
ＺがＯである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
ｎが１である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
Ｒ８が、水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、またはｔ−ブチル基である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
Ｒ３が−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ４が−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｒ８である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
Ｒ８が、水素原子、メチル基、またはエチル基である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
Ｂが、−ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨＲ７−、または−ＣＨ２Ｏ−である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
Ｂが、−ＣＨ２ＮＲ２−である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ２が、水素原子、メチル基、エチル基または−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
Ｒ７が、水素原子、メチル基、エチル基またはメトキシ基である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
Ｄが、５員の芳香環である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
Ａが、
【化３】
2010518143.tif 000022
である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
Ｃが：
【化４】
2010518143.tif 000023
式中、ＸがＣＨもしくはＮであり、かつ、
ＹがＣであり、Ｒ６は水素原子、メチル基、エチル基、もしくはＨＣＯである；
または、ＹがＮであり、Ｒ６が不対電子対である、
である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
Ａが、式Ａ−ｉまたは式Ａ−ｉｉ：
【化５】
2010518143.tif 000024
である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
Ａが、式Ａ−ｉ−１または式Ａ−ｉｉ−１：
【化６】
2010518143.tif 000025
である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
Ｂが、−ＣＨ２ＮＲ２であり；この際、Ｒ２が、水素原子、メチル基、エチル基、または−ＣＨ２ＣＨ≡ＣＨであり；ＺがＯであり；ｎが１であり；Ｒ３が−ＣＯ２Ｒ８である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
ＡがＡ−ｉであり、ＹがＣであり、Ｒ６が水素原子である場合；または、ＡがＡ−ｉｉであり、Ｒ１が−ＯＨである場合、
Ｂは、−ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨＣＨ３−、または−ＣＨ２Ｏ−であり；この際、Ｒ２は、水素原子、メチル基、エチル基、または−ＣＨ２ＣＨ≡ＣＨであり；ＺはＯであり；ｎは１であり；Ｒ３は−ＣＯ２Ｒ８であり；Ｒ４は水素原子または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｒ８であり；この際、Ｒ８は、それぞれ独立して水素原子、メチル基、またはエチル基である、請求項２３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫抑制治療に関し、また、自己免疫疾患および炎症性疾患の新たな治療に関する。好ましい実施形態は、リウマチ関節炎の治療に使用する、新たな薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
リウマチ関節炎（ＲＡ）は、慢性の炎症/自己免疫性疾患である。それは、特に手や足、そして手首から始まる、累積的な消耗性の痛みと、関節の破壊に特徴がある。しかし、全身疾患であり、炎症は皮膚や心臓、肺、眼のような関節外組織にも発生する。世界保健機関は、ＲＡの有症率は０．３％〜１％であり、女性においてより一般的なものであると報告している。患者は、どの年代でも存在するが、特に４０歳以上ではよりしばしば発症しやすくなり、先進国においては少なくとも５０％の患者は疾患の発症後１０年間は常勤することができない。
【０００３】
ＲＡの詳しい原因は知られていない。遺伝と様々な環境因子が関係するとされ、分子経路の複雑な組合せが関連していると考えられている。対照的に、ＲＡにおいて炎症が関節の損傷を引き起こすメカニズムはよく理解されている。発作時の焦点は、隣接組織から滑液を隔離する、関節の柔らかい組織である、滑液膜に当てられている。健常な滑液膜は関節腔に滑液の主成分を分泌する線維芽細胞、および、この液体から不要な成分を取り除くマクロファージを含んでいる。滑液膜は、無血管性の軟骨の付近に栄養を供給する少数の血管をも含むが、白血球は含まない。
【０００４】
一度活性化されると、自己免疫応答は滑液膜の炎症を誘発し、新たな血管から流入する白血球で満たされる。滑液細胞によって栄養分の消費量は増加し、滑液の生成量は多くなる。全関節包は腫脹し、軟骨成分の栄養成分へのアクセスは阻害され、軟骨細胞は餓死する。加えて、線維芽細胞とマクロファージは活性化され、腫瘍壊死因子αのようなサイトカインを分泌する、または破骨細胞のような破壊細胞へと分化する。軟骨表面は消化され、下層の骨は磨耗し始める。
【０００５】
ＲＡの治療法はまだ存在せず、既存の治療法は、患者間で大きく異なりうる疾患の症状に対してのみ焦点を当てている。一般的な目的は、罹患関節における痛みや凝りを軽減させ、関節損傷を最小化するものであり、後者は回復しない。
【０００６】
イブプロフェンやメロキシカムのような非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、腫脹を軽減したり、小さな痛みや凝りを和らげたりすることに用いられる。しかし、病気の進行が遅くなるようなことはなく、長期にわたって服用すると、胃の出血を引き起こしうる。重度の局部的な炎症である場合に、痛みや腫脹を軽減させるため、副腎皮質ステロイドを関節に注入することがあるが、繰り返しになるが、これもＲＡの進行を遅らせるものではない。
【０００７】
長期にわたって、患者は、通常、病気の進行を遅らせるために、および関節損傷の予防のために、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を投与される。これらの薬は、効き始めるまでに数週間から数カ月間必要となるため、短期的な緩和を与える上記投薬治療を初期段階でしばしば受ける。ＤＭＡＲＤに分類される薬剤は、化学的および薬理学的に非常に多様であり、具体例は、以下に示される。
【０００８】
【化１】
2010518143.tif 000003
【０００９】
メトトレキサートは、一般的に処方されるＤＭＡＲＤの１つである。メトトレキサートの作用の詳細なメカニズムは、十分には解明されていない。しかし、滑膜細胞アポトーシスの直接的な促進、リンパ球の増殖の阻害ならびに免疫抑制につながるインターロイキン１の生成およびアデノシン遊離の誘導を低減することを含むと考えられている。その有効性に関らず、その毒性プロフィールは最適化されておらず、その薬理速度論的性質は寧ろ不十分である：即ち、取り込まれた後、８０％超は、未変化のまま速やかに除去されてしまう。さらに、約３５％の患者は、メトトレキサートのみの治療を行っても十分な効果を得られない。
【００１０】
レフルノミドは比較的新しいＤＭＡＲＤであり、デノボピリミジン合成に関わる酵素であるジヒドロオロテート  デヒドロゲナーゼを阻害する。レフルノミドは、メトトレキサートよりも短時間で働くが、副作用の原因となりやすい。例えば、かかる薬剤を服用した患者が、重度の肝臓損傷を受け、幾人かは、結果として死に至ったことが報告されている。
【００１１】
オーラノフィンおよびヒドロキシクロロキニーネなどのように副作用が殆どないような他の薬剤もあるが、活性は低い。アザチオプリン、シクロスポリンおよびシクロホスファミドを含む薬剤である、他のＤＭＡＲＤは、とても有効であり、重度のＲＡに対して効果が期待できるが、重度の副作用を引き起こす。
【００１２】
サイトカイン阻害剤は、ＲＡの治療において、いくらかの効果をもたらすため使用されてきた。例えば、エタネルセプトおよびインフリキシマブ等の腫瘍壊死因子αの阻害剤は注射または点滴により投与されてきたが、一方でアナキンラ等のインターロイキン−１の阻害剤は、メトトレキサート単独では効果がないときに、時々、メトトレキサート療法と組み合わせて使用されてきた。
【００１３】
これまでの研究によって、リウマチ関節炎に寄与しうる、かつ、いくつかの他の自己免疫／炎症性疾患に関与しうる遺伝子が特定されている（Ｋａｗａｈｉｔｏ  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｏｎｏｌｏｇｙ，  １９９８，  １６１  ：  ４４１１−４４１９．）。実際、上記薬剤には、それらの疾患の治療に効果的であることが追って見出されたものがある。例えば、ヒドロキシクロロキニーネは、全身性エリテマトーデスの治療に用いることができ、一方メトトレキサートおよびレフルノミドはともに、乾癬性関節炎のために処方されうる。シクロスポリンは、重度の乾癬またはアトピー性皮膚炎の治療に有用であることが見出され、アザチオプリンは自己免疫溶血性貧血および自己免疫慢性活動性肝炎を緩和し、インフリキシマブはクローン病、潰瘍性大腸炎および強直性脊椎炎を治療することができる。アザチオプリンおよびシクロスポリンはまた、臓器移植の生体の拒絶反応を防止するために用いられうる免疫抑制剤である。
【発明の概要】
【００１４】
上記の観点から、上記の問題の一以上を解決する代替の免疫抑制剤ならびにリウマチ関節炎および関連する疾患のための代替療法への必要性が残されている。
【００１５】
そこで、本発明の第一の態様によれば、免疫または炎症反応の調節に使用される薬剤を製造するための、式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩の使用が提供される。
【００１６】
【化２】
2010518143.tif 000004
【００１７】
式中、
Ｚは、ＯまたはＳであり；
ｎは、１〜３であり；
Ｒ３は、−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＳＲ８、−Ｃ（Ｓ）ＮＨＲ８、−Ｃ（ＮＨ）ＳＲ８、または−Ｃ（ＮＨ）ＮＨＲ８（ここで、Ｒ８は水素原子またはアルキル基である）であり；
Ｒ４は、水素原子、−ＣＨ２Ｒ５または−ＣＨ２ＣＨ２Ｒ５（ここで、Ｒ５は、それぞれ独立してＲ３の定義のいずれかである）であり；
Ｂは、−ＮＲ２−、−ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨＲ７−または−ＣＨ２Ｏ−（ここで、Ｒ２は、水素原子またはＣ１−３のアルキル基、アルケニル基もしくはアルキニル基であり、Ｒ７は、水素原子またはＣ１−３のアルキル基もしくはアルコキシ基である）であり；
Ａは；
【００１８】
【化３】
2010518143.tif 000005
【００１９】
式中、
Ｒ１は、−ＮＨ２または−ＯＨであり；
ＣおよびＤは、それぞれ独立して、１または２以上のヘテロ原子を含んでもよい、５員または６員の、置換されたまたは非置換の、芳香環または非芳香環であり、Ｃは任意の可能な位置で基Ｂと結合している、
である。
【００２０】
本発明の好ましい実施形態を以下に記載し、また、従属項に規定する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、本発明に使用する２つの化合物（化合物３および４）の全合成を示す概略図であり、これらは下記の実施例１および２において詳細に記載される。
【図２】図２は、コラーゲン誘導関節炎試験の際に化合物Ｉ−Ａ１を用いて治療したマウスの平均関節炎評点を示す。
【図３】試験終了時の平均赤血球数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
式Ｉにおいて、印付けされた炭素Ｃ＊は非対称であってよく（Ｒ４がＨでない場合）、この場合に式Ｉの化合物は、ラセミ体で存在しうるか、または、従来の方法によりこれらの（＋）もしくは（−）のエナンチオマーへと分離されうるということが理解されるであろう。また、他のキラル中心が一部の化合物に存在して、１以上のさらなるエナンチオマー対を生じうる。例えば、第２のキラル中心が、Ｂ＝−ＣＨ２ＣＨＲ７−であり、Ｒ７がＣ１−３のアルキル基またはアルコキシ基である、化合物に存在する。かようなラセミ体またはエナンチオマー体の全ての使用が本発明の範囲に属することを意図している。さらに、式Ｉの化合物は１以上の互変異性体で存在してもよく、これらの形態のいずれの使用も本発明の範囲に属している。
【００２３】
好ましくは、下記条件の１以上を満たす式Ｉの化合物を使用する。
・ＺがＯである。
・ｎが１である。
・Ｒ３が−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ４が−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｒ８である。
・Ｒ８が、水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、またはｔ−ブチル基であり、好ましくは水素原子、メチル基、またはエチル基であり、より好ましくは水素原子である。
・Ｂが、−ＣＨ２ＮＲ２−、−ＣＨ２ＣＨＲ７−、または−ＣＨ２Ｏ−であり、好ましくは−ＣＨ２ＮＲ２−である。
・Ｒ２が、水素原子、メチル基、エチル基、または−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨであり、好ましくは水素原子である。
・Ｒ７が、水素原子、メチル基、エチル基またはメトキシ基であり、好ましくは水素原子である。
【００２４】
さらに、式ＩＩＩ、Ｖ、またはＶＩＩの好ましい化合物は、上記するＺ、ｎ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、および／またはＲ７についての１以上の好ましい化合物である。
【００２５】
式Ｉ、ＩＩ，ＩＶ、またはＶＩの基Ａにおいて、Ｄは、好ましくは５員のヘテロ芳香環である。好ましくは、Ａが、
【００２６】
【化４】
2010518143.tif 000006
【００２７】
である。
【００２８】
基Ａにおいて、Ｃは下記の基のうちの一つでありうる（隣接する環および基Ｂへの結合場所が示されている）。
【００２９】
【化５】
2010518143.tif 000007
【００３０】
式中、ＸはＣＨまたはＮであり、ＹがＣであり、Ｒ６が水素原子、メチル基、エチル基、またはＨＣＯである；もしくは、ＹがＮであり、Ｒ６が不対電子対である。好ましい実施形態では、ＸおよびＹの両方がＮであり、Ｒ６は不対電子対である。
【００３１】
特に好ましいＡ基は下記の構造のものである。
【００３２】
【化６】
2010518143.tif 000008
【００３３】
特に興味深いのは、下記の２つのＡ基である。
【００３４】
【化７】
2010518143.tif 000009
【００３５】
特に好ましくは、上記の２つのＡ基を有する式Ｉの化合物であり、ここで、Ｂは−ＣＨ２ＮＲ２−であり；Ｒ２は、水素原子、メチル基、エチル基、または−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨであり；ＺはＯであり；ｎは１であり；Ｒ３は−ＣＯ２Ｒ８であり、好ましくは任意の加水分解性エステル基である。このグループの化合物の個々の例を以下に示す。
【００３６】
【化８】
2010518143.tif 000010
【００３７】
式Ｉの化合物は、簡単に入手でき安価な出発物質から、公知の様々な方法を用いて合成されうる。例えば、Ｂが−ＮＲ２−、−ＣＨ２ＮＲ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ２−である場合、式ＩＩの化合物
【００３８】
【化９】
2010518143.tif 000011
【００３９】
式中、Ａは上記で定義した通りであり、ｍは０、１または２であり、Ｘは脱離基である、
は、式ＩＩＩの化合物：
【００４０】
【化１０】
2010518143.tif 000012
【００４１】
式中、Ｚ、ｎ、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記で定義した通りである、
と反応しうる。脱離基Ｘは、一般に、塩素、臭素、またはヨウ素などのハロゲンであり、特には、臭素またはヨウ素である。この反応は、好ましくは、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）のような極性非プロトン性溶媒中で行われる。第三級アミンまたは重炭酸ナトリウムよりも高い収率を与える、フッ化カリウムなどの塩基性触媒が用いられうる。必要に応じて、反応性の高い基は、反応の前に公知の適当な保護基を用いて保護され、後に通常の方法で脱保護されうる。例えば、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである場合、これらの酸基は、例えばメチルエステル基として保護され、続いて、例えば、エタノールに溶解させた水酸化ナトリウムを用いたアルカリ加水分解、および氷酢酸などの酸の添加による沈殿などの既知の方法によって脱保護されうる。
【００４２】
Ｂが−ＣＨ２Ｏ−である場合、式Ｉの化合物は、例えば、式ＩＶの化合物：
【００４３】
【化１１】
2010518143.tif 000013
【００４４】
式中、Ａは上記で定義した通りであり、Ｘは脱離基である、
を、式Ｖの化合物：
【００４５】
【化１２】
2010518143.tif 000014
【００４６】
式中、Ｚ、ｎ、Ｒ３およびＲ４は上記で定義した通りである、
と、ウィリアムソンエーテル型反応によってカップリングさせることによって調製されうる。この反応において、一般に、式Ｖの化合物は、式ＩＶの化合物との反応の前に、例えばＮａＨのような塩基を用いて、そのアロキシドイオンの形態に変換される。Ｘは任意の適当な脱離基であってよく、特には、ハライドでありうる。
【００４７】
Ｂが−ＣＨ２ＣＨＲ７−である場合、式Ｉの化合物は、例えば、任意の既知の炭素−炭素結合形成反応によって、特に、グリニャール試薬およびリチウム化合物もしくは銅−リチウム化合物のような有機金属試薬の使用または生成を含む反応によって、式ＶＩの化合物を式ＶＩＩの化合物とカップリングさせることによって調製されうる；
【００４８】
【化１３】
2010518143.tif 000015
【００４９】
式中、Ａ、Ｚ、ｎ、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ７は上記で定義した通りであり、Ｙは、それぞれ独立してハライドである。
例えば、式ＶＩＩの化合物を、その対応するグリニャール試薬または銅酸リチウム試薬に変換し、その後、式ＶＩの化合物と反応させてもよい。または、式ＶＩの化合物を、その対応するグリニャール試薬または銅酸リチウム試薬に変換し、その後、式ＶＩＩの化合物と反応させてもよい。また、任意の反応性置換基の適当な保護基は当業者に公知である。
【００５０】
中間体ＩＩ〜ＶＩＩは、通常の方法で調製されうる。例えば、式ＩＩＩ、ＶまたはＶＩＩの化合物は、下記式の化合物：
【００５１】
【化１４】
2010518143.tif 000016
【００５２】
を、下記式の化合物：
【００５３】
【化１５】
2010518143.tif 000017
【００５４】
式中、Ｂ’は−ＮＨＲ２、−ＯＨまたは−ＣＨＹＲ７であり、Ｘは脱離基である、
と、塩基の存在下で反応させることによって調製されうる。続いて、加水分解によってシアノ基を除去し、必要に応じて適当な保護基を用いて脱炭酸してもよい。
【００５５】
理論によって制限されないが、式Ｉの化合物の変性されたケトメチレン性またはチオケトメチレン性の側鎖によって、メトトレキサートに比べて腎臓毒性がより低くなっていると考えられる。ケトメチレン性またはチオケトメチレン性の基の不安定性がより低いため、加水分解による不活性化が最小限になり、その結果、半減期がより長くなる。加えて、式Ｉの化合物は、従来の化合物に比べて改善された物理化学的特性を示す。
【００５６】
上記で議論したように、第一の関心事は、リウマチ関節炎等の炎症性疾患の治療における式Ｉの化合物の使用にある。しかしながら、これらの化合物の治療における有用性は、さらに免疫抑制療法におけるような一般的な免疫および／または炎症反応の調整にまで拡張される。免疫抑制は、エイズ等の特定の疾患には悪影響を与える可能性がある。しかしながら、免疫抑制療法は、自己免疫疾患の予防もしくは治療、または臓器移植の拒絶反応の予防等の治療目的のため、免疫抑制を慎重に誘導することを意味する。免疫抑制療法は、例えば、サイトカイン産生、特に腫瘍壊死因子α、インターロイキン−４もしくは−１３、またはインターフェロン−γの抑制を含みうる。
【００５７】
本発明で治療しうる他の自己免疫および炎症性疾患の例は：乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎および強直性脊椎炎等の関節炎疾患；皮膚筋炎および多発性筋炎等の炎症性筋疾患；神経組織および内耳等の他の組織の炎症を含む疾患；乾癬、アトピー性皮膚炎、尋常性天疱瘡および慢性難治性特発性血小板減少性紫斑病等の皮膚疾患；クローン病および潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患；血管炎、例えば結節性多発性動脈炎；全身性エリテマトーデス等の自己免疫溶血性貧血；自己免疫肝炎；多発性硬化症等の神経変性自己免疫疾患；心膜炎；気管支ぜんそくまたはアトピー；１型糖尿病；ブドウ膜炎；甲状腺炎；および強皮症、である。
【００５８】
好ましくは式Ｉの化合物は、以下の疾患のいずれかの治療に用いられる：乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、尋常性天疱瘡、慢性難治性特発性血小板減少性紫斑病、クローン病、潰瘍性大腸炎、結節性多発性動脈炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、または、神経組織もしくは内耳の炎症。
【００５９】
他の実施形態では、式Ｉの化合物が、臓器移植の拒絶反応を予防するために用いられる。
【００６０】
式Ｉの化合物の好ましい使用は、リウマチ性疾患、特に関節炎疾患、さらに好ましくは、リウマチ関節炎、乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎または強直性脊椎炎を治療することである。
【００６１】
前記化合物は、好ましくは経口（固形例えば錠剤で、または液状で）もしくは非経口、または局所適用により、任意の適当な投与方法で投与しうる。前記化合物は単独で、または、他の生物剤、抗リウマチ剤、他の免疫抑制剤もしくはモノクローナル抗体等の免疫刺激剤等の他の治療用薬剤と組み合わせて、哺乳類、好ましくはヒトに与えうる。前記化合物は、葉酸誘導体、葉酸またはフォリン酸等のアジュバントと共に投与してもよい。
【００６２】
以下の実施例は、本発明の説明を意図したものであり、本発明をいかなる方法によっても限定するものではない。
【実施例】
【００６３】
実施例１
化合物３の合成
出発物質源
３−クロロプロパノイルクロライドおよびシアノ酢酸エチルを、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社，  ジ  オールド  ブリックヤード,  ニュー  ロード,  ギリンガム，  ドーセット  ＳＰ８  ４ＸＴ，  英国から商業的に得た、または標準的な方法によって合成した。α−ブロモ−ｐ−ニトロアセトフェノン７を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中でｐ−ニトロアセトフェノンを臭素で臭素化することによって得た。２，４−ジアミノ−６−ブロモメチルプテリジン２を、標準的な方法によって得た（例えば、米国特許第４，０７７，９５７号および米国特許第４，２２４，４４６号を参照）。
【００６４】
段階Ａ：
化合物６の合成
３−クロロプロパノイルクロライドを、ピリジンまたはトリエチル酢酸の存在下、エタノールでエステル化して、３−クロロプロピオン酸エチル５を製造した。後者を、Ｌ．  Ｒｕｚｉｃｋａ  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  １７，  １８３−２００  （１９３４），  ＣＡ  ２８：２５８４、またはＫｏｅｌｓｃｈ，  ＣＦ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  ６５，  ２４５８−９  （１９４３）の方法に従ってシアノ酢酸エチルと縮合して、α−シアノグルタル酸ジエチル６を得た。予想される構造を１Ｈ−ＮＭＲで確認した。ＧＣ：９７％純度。
【００６５】
段階Ｂ：
化合物８の合成
１７５ｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のα−ブロモ−ｐ−ニトロアセトフェノン７を、５００ｍｌのＤＭＦにおける１７５ｇ（０．８２ｍｍｏｌ）のα−シアノグルタル酸ジエチル６および１７５ｇ（３ｍｍｏｌ）のＫＦの懸濁液に０〜５℃で一部ずつ添加した。反応を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。４時間後、反応混合物を、ｐＨ５の０．１％酢酸を含む２ｌの水に懸濁した。水をデカンテーションした後、ゴム状の沈殿物を水で洗浄した（２×７５０ｍｌ）後、３００ｍｌのメタノールと共に粉砕した。結晶化が終了したら、沈殿物を濾過し、過剰のメタノールおよびエーテルで順次洗浄して、２１０ｇの化合物８を融点が９２．１℃の黄色固体として得た（収率  ６８％）。シリカゲルでのクロマトグラフィー（５０：５０：５  ベンゼン−シクロヘキサン−エタノール）後の、生成物の融点は９９．７℃であった。シリカゲルプレート（５：１：３：１０：０．１  ベンゼン−エタノール−シクロヘキサン−石油エーテル−ＡｃＯＨ）でのＴＬＣでは、Ｒｆ（保持因子）が０．３８の単一のスポットを示した。ＨＰＬＣ：９７％純度。
【００６６】
段階Ｃ：
化合物９の合成
３０ｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の化合物８を４００ｍｌのメタノールに溶解し、６ｇの２０％  Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下、室温で、水素化フラスコ中、水素化した。水素の理論容積（約６２００ｍｌ；０．２８ｍｍｏｌ）を１時間で吸収させた（ＴＬＣコントロール）。白金触媒を濾過し、メタノールを蒸発させた。得られた未精製産物を真空中で乾燥して固化して、２７．６ｇの化合物９、黄色固体を得（収率  ９９％）、これをさらに精製せずに下記未精製化合物１０への変換に使用した。純度は、ＴＬＣ分析によって許容範囲であった。ＴＬＣ（４：１  クロロホルム−メタノール）では、Ｒｆが０．５（４−ジメチルアミノベンズアルデヒドに特徴的な反応）の単一のスポットを示した。ＨＣｌ塩を、ＨＣｌ中で還流後単離した。予想される構造をＬＣ−ＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲで確認した；ＨＰＬＣ：９９％純度。
【００６７】
段階Ｄ：
化合物１０の合成
１０００ｍｌのメタノールにおける５２．２ｇ（０．１５ｍｍｏｌ）の中間体９の溶液を調製した。１８８ｍｌの６Ｎ  ＮａＯＨを、室温で１時間、滴下し、溶液を１２時間、放置した。次に、この反応混合物を３００ｍｌの水で希釈し、高真空中下で濃縮した。７００ｍｌの３７％ＨＣｌを残渣に添加し、得られた混合物を４時間、加熱還流した。得られた混合物を、１．５ｌのメタノールで希釈し、ＮａＣｌ沈殿物を濾別した。濾液を段階Ｅで使用した。懸濁液を濾過して、過剰の水、アセトンおよびエーテルで沈殿物を順次洗浄することによって、少量の二塩基酸１０を、希釈前に単離した。ＴＬＣ（４：１  クロロホルム−メタノール）では、Ｒｆが０．２６の単一のスポットを示した。
【００６８】
段階Ｅ：
化合物１の合成
段階Ｄで得られたジカルボン酸１０のメタノール溶液を０〜５℃に冷却し、１００ｍｌの塩化チオニルを滴下した。この反応混合物を３時間還流しながら攪拌した後、室温まで冷却し、溶剤を留去した。得られた沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄して、２７ｇの化合物１を融点が１１５〜１１６℃の固体として得た（収率  ６３％）。テトラヒドロフランから結晶化した後、１７．５ｇの、融点が１１６〜１１７℃の、化合物１の白色結晶を得た。ＴＬＣ（４：１  クロロホルム−メタノール）では、Ｒｆが０．７３の単一のスポットを示した。ＵＶスペクトル：２３４，３１９ｎｍ（ＭｅＯＨ）。１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：２．０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＣＨ３），２．５（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＣＨ３），３．１（２Ｈ，ｍ，ＣＯＣＨ２），３．５（１Ｈ，ｍ，ＣＯＣＨ２ＣＨ），３．７５（６Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ３），７．６−８．０（４Ｈ，ｍ，ＣＨ  ａｒｏｍ．）。ＨＰＬＣ：９９％純度。
【００６９】
段階Ｆ：
Ｎ−［４−［［２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］シュードグルタミン酸エステル（化合物３）の合成
７０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中、７ｇ（２７．４ｍｍｏｌ）の２，４−ジアミノ−６−ブロモメチルプテリジン２および７ｇ（２３．４ｍｍｏｌ）のＮ−［４−メチル−アミノ）ベンゾイル］シュードグルタミン酸ジメチル１の混合物を、７０℃で３０分間攪拌した。その後、光から保護して、室温で一晩放置した。そこで、１０分間、１００℃に再加熱した。反応をＴＬＣによって確認した。冷却後、反応混合物を、ｐＨ４にＡｃＯＨで酸性にした水（１０００ｍｌ）に注いだ。生成した暗い黄色の沈殿物を濾過して、水で３回洗浄し、空気乾燥した。２．６ｇの、融点が２００〜２１０℃の、オレンジ−黄色の生成物３を得た。濾液を１０％  ＮａＨＣＯ３で処理して、生成した沈殿物を同様にして分離して、ジメチルエステル３の第２の画分（２ｇ）を得た。全収率：３６％。ＴＬＣ（４：１  クロロホルム−メタノール）では、Ｒｆが０．４８の単一のスポットを示した。ＵＶスペクトル：２１０，２４２，３３２（０．１Ｎ  ＨＣｌ）；２３８，３３５（ＭｅＯＨ）。
【００７０】
実施例２
Ｎ−［４−［［２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］シュードグルタミン酸（化合物４）の合成
１ｇ（２．１ｍｍｏｌ）のジメチルエステル３を、１０ｍｌの２Ｎ  ＮａＯＨおよび２５ｍｌのエタノールの溶液に一部ずつ添加し、室温で４時間攪拌した。生成した沈殿物を濾過し、蒸留水に溶解した。このアルカリ水溶液を、活性炭で処理し、濾過し、１０％酢酸を用いて、そのｐＨを４．５に調整した。その沈殿物を濾過し、ｐＨ４．５の状態で、水、アセトンで順次洗浄し、０．８ｇの化合物４を得た。その生成物は、褐色の固体であり、分取ＨＰＴＬＣ（高性能薄層クロマトグラフィー）で精製した。５０：５０：５の比のＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ−ＮＨ４ＯＨで溶出した後に、二塩基酸をｐＨ８の水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌを用いてシリカゲルから抽出した。水は凍結乾燥法で除去した。ＴＬＣ（７：２：１  ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ−ＮＨ４ＯＨ）により、Ｒｆが０．８０の単一のスポットを示した。質量分析スペクトル：ｍ／ｚ１２０（Ｍ＋，１００％）．ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：  １６５１（ＣＯＣＨ２），１５９４（Ｃ＝Ｃ），１５６３，１４０３（Ｃ＝Ｏ酸），１１７６（Ｃ−Ｏ），８２３（ＣＨ）．ＵＶスペクトル：２４２，３３２ｎｍ（０．１Ｎ  ＨＣｌ）；２３２，２５９，３２５ｎｍ（０．１Ｎ  ＮａＯＨ）；２２９，２６２，３１８（ＭｅＯＨ）．１Ｈ  ＮＭＲ：１．６（３Ｈ，ｍ，ＣＨ−ＣＨ２）、２．２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ），２．９（２Ｈ，ｍ，ＣＯＣＨ２），４．６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＮＨ），６．８−７．８（４Ｈ，ｍＣＨ  ａｒｏｍ．），９（１Ｈ，ｓ，７−ＣＨ）．ＨＰＬＣ：９７％純度。
【００７１】
式１の他の化合物は、適切である上記する方法を採用して製造されうる。例えば、中間体１と類似化合物は、ホルムアルデヒドとシアノ水素化ホウ素ナトリウムとの反応により対応するＮ−メチル誘導体に変換しうる。中間体６もまた、シアノ酢酸エチルとアルリル酸エチルとを標準手段により反応させて製造される。
【００７２】
実施例３
マウスに対するＲＡのインビボ治療：コラーゲン誘導ＲＡ（ＣＩＡ）モデル
コラーゲン誘導リウマチ関節炎の治療に対する式１の化合物の活性をマウスで試験した。ＣＩＡモデルは、細胞性および液性免疫の両方を含んでいると考えられるものの１つである。
【００７３】
ＲＡ誘導
雄マウスで、生後７週間であるＤＢＡ／１（Ｈａｒｌａｎ，英国）は、自由摂食と自由節水可能な１０のグループに分けて収容された。ウシＩＩ型コラーゲンの一容量（０．０５Ｍ酢酸中の２ｍｇ／ｍｌ溶液）を、等容量の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；ヒト結核菌４ｍｇ／ｍｌ）で乳化した。全マウスを、ハロタン麻酔下において、０．１ｍｌのその乳化液（１マウスにつき１００μｇのコラーゲン）を、プラスチックシリンジを用いて、尾に皮膚内注射することで、０日目に免疫化した。注射した部位は、尾の根元からおよそ１ｃｍの部分であった。２１日目にマウスは腹膣内注射によりコラーゲンチャレンジ（マウス１匹につき、リン酸塩緩衝剤食塩水中、２００μｇのウシＩＩ型コラーゲン）も注射された。
【００７４】
治療
賦形剤を、陰性対照基準として用い、一方、ＰＢＳ中のメトトレキサート（ＭＴＸ）を、陽性対照基準として用いた。式Ｉ−Ａ１の酸性化合物を、０．２Ｎ  ＮａＯＨ溶液に溶解し、５０ｍｇ／ｍｌ貯蔵液を得て、それから、ＰＢＳで希釈して、一連の濃度の溶液を調製した。式Ｉの他の化合物を同様に溶解した。１０匹のマウスの群のそれぞれに、０日目から６週間、１日１回、腹膣内注射により、試験溶液または対照基準溶液５ｍｌ／ｋｇを投与した。
【００７５】
観察と検査
マウスについて１７日目に末梢関節における関節炎の発症応答の兆候を診察し、その後、研究の終了まで１日１回診察した。関節炎反応は、以下に記載するように、重症度の昇順で０―４段階によって、それぞれの足について記録し、マウスごとに総合的な重症度の評点を計算した。両後足（左と右、肉球の直下、腫骨の上）について、足の厚さを、ｍｍ単位で測定した。測定は１７日目以後、研究の終了まで、１日１回、ダイヤルカリパス（ドイツ、ミュンヘンのクリップリン社製）を用いて行った。
【００７６】
【表１】
2010518143.tif 000018
【００７７】
０日目と１７日目以後は１日１回、臨床検査を行い、記録した。観察は、肌、毛、目、粘膜、分泌と排出（例えば、下痢）の発生と、自律神経系の活動（例えば、流涙、唾液分泌、立毛、瞳の大きさ、異常な呼吸パターン）の変化に関して行った。突飛な行動、震え、痙攣、睡眠と昏睡状態と同様に、歩行、姿勢、手で触れた時の対処の変化も、記録した。
【００７８】
個々の体重を、研究中ずっと記録した。研究は４２日目に終了した。
【００７９】
結果
式Ｉの化合物は、このモデルにおいて有意な抗関節炎効果を示した。陰性（賦形剤）対照基準を投与されたマウスは、有意に高い関節炎評点を有し、試験化合物を投与されたマウスのそれよりも後足が大きくなった（図２参照）。さらに、試験化合物の抗関節炎効果は、手足において、組織学的評点の有意な低下（滑膜の肥厚化、減少した骨／軟骨の侵食と細胞浸潤の低下）と相関があった。
【００８０】
メトトレキサートと比較して、化合物は高絶対用量投与において許容され、最大許容投与量のより低い割合で効果的であった。例えば、式Ｉ−Ａ１は最大許容投与量の１０％の治療投与量で効果的であった。一方、メトトレキサートは２番目に高い治療投与量を要した。
【００８１】
研究の最後に検査された他の臨床症状に関しては、式Ｉの化合物を投与された群では対応するメトトレキサートを投与された群よりも顕著な改善が見られた。例えば、メトトレキサートを投与されたマウスは、研究の最後には、重度な貧血の兆候を示したが、試験化合物を投与された群からは全く貧血の兆候は見られなかった。図３に示すように、赤血球数の測定がこれを裏づけた。治療中、副作用は見られず、試験化合物は、優れた認容性を示すことが示唆された。
【００８２】
実施例４
ラットに対するＲＡのインビボ治療；アジュバント誘導ＲＡ（ＡＩＡ）モデル
アジュバント誘導リウマチ関節炎を治療するため、式Ｉの化合物の活性を試験した。当該ＡＩＡモデルは、主に、Ｔ細胞媒介性のメカニズムに関すると考えられるものの一つである。
【００８３】
ＲＡ誘導
体重２００±１０ｇである雄のＬｅｗｉｓラットを、自由摂食と自由摂水を可能な６群に分けて収容した。０．１ｍｌのＣＦＡ（ヒト結核菌３ｍｇ／ｍｌ）を、研究の１日目に、各ラットの右後足の足底部位に注射した。
【００８４】
治療
被検物質を、初め、上述の方法で、（必要であれば）ＮａＯＨ溶液に溶解させ、２％のＴｗｅｅｎ８０に、一連の濃度に懸濁させた。（１日目に）ＣＦＡを注射する１時間前から、１０ｍｌ／ｋｇを２１日間連続で、経口強制投与した。２％のＴｗｅｅｎ８０を陰性対照標準として用い、２％Ｔｗｅｅｎ８０中のメトトレキサートを陽性対照標準として用いた。
【００８５】
観察と検査
０日目、１日目のＣＦＡ注射後４時間の時点、７日目、１４日目、２１日目に、水置換によって、右後足の体積を測定した。左後足の体積は、０日目、１日目、７日目、１４日目、２１日目に、水置換によって、測定した。累積的な足の体積の増加を計算し、賦形剤を投与した対照基準と比較した。陰性対照基準と比較して、足の体積が、３０％またはそれ以上の減少は、有意な抗炎症活性であると考えられた。体重を１日目、７日目、１４日目、２１日目に測定した。前足、尾、鼻、耳の腫脹の症状を２１日目に記録した。
【００８６】
結果
一般的な多発関節炎の症状：１００％の陰性対照基準のラットが多発関節炎を発症した。一方、治療されたラットは多発関節炎の症状を発症しなかった。陰性対照基準を投与された群に対して、試験化合物を少量投与されたラットで、体重に重大な変化は見られなかった。被検体の代表群の後足の平均体積を、以下に示す。
【００８７】
第1群−陰性対照標準（賦形剤のみ）；第２群−ＭＴＸ対照標準；第３群−式Ｉ−Ａ１の化合物（低投与量）
【００８８】
【表２】
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【００８９】
式Ｉの化合物は、ラットにおける、誘起された関節炎である、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）の急性期と慢性期の両期において高い活性を示す結果となった。
【００９０】
これらの２つの研究の結果から、多くの臨床的指標を用いて、動物モデルの関節炎における病症の進行と重症化が式Ｉの化合物の投与により阻害されることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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