(57)【要約】逆アゴニスト機構を経たＣＢ１受容体の抑制による、次式で表される化合物及び医薬組成物は、哺乳動物の体重の減少、統合失調症を伴う認知障害、抗精神病薬による治療の間に観察され治療において発現する体重増加の緩和に有用であり、またバイオアベイラビリティを増加させる。2010507589.tif 000029
2010507589.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式で表される化合物
【化１】
2010507589.tif 000026
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
次式を有する請求項１記載の化合物
【化２】
2010507589.tif 000027
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項３】
次式で表される中間体。
【化３】
2010507589.tif 000028
【請求項４】
請求項１及び２のいずれか１項に記載の化合物と、薬理学的に許容できる担体、希釈剤若しくは賦形剤とを含んでなる医薬組成物。
【請求項５】
請求項２記載の化合物が、９０％ｅｅ超の光学純度で存在する医薬組成物。
【請求項６】
請求項２記載の化合物が、９５％ｅｅ超の光学純度で存在する医薬組成物。
【請求項７】
請求項１及び２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
【請求項８】
過剰摂食を伴う摂食障害、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認知障害、薬物乱用又はアルコール依存、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される治療により発現する体重増加、から選択される疾患の治療に用いられる、請求項１及び２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
体重増加、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認知障害、薬物乱用又はアルコール依存症、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される治療により発現する体重増加、から選択される疾患の治療において、抗精神病薬と同時、個別又は連続的な組合せで用いられる、請求項１及び２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
過剰摂食を伴う摂食障害、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認知障害、薬物乱用又はアルコール依存、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される治療により発現する体重増加、から選択される疾患の治療薬の製造における、請求項１及び２のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
体重増加、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認知障害、薬物乱用又はアルコール依存症、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される治療により発現する体重増加、から選択される疾患の治療のための複合治療に用いられる薬剤の製造における、請求項１及び２のいずれか１つに記載の化合物の使用であって、前記薬剤は、抗精神病薬と同時、個別又は連続的組合せにより投与される。
【請求項１２】
哺乳動物に有効量の請求項１若しくは２記載の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩を、抗精神病薬との同時、個別又は連続的組合せにより投与するステップを有してなる哺乳動物の症状の治療方法。
【請求項１３】
前記症状が過剰摂食を伴う摂食障害である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記症状が肥満である、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
前記症状が統合失調症である、請求項１２記載の方法。
【請求項１６】
前記症状が統合失調症を伴う認知障害である、請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
前記症状が薬剤乱用又はアルコール依存症である、請求項１２記載の方法。
【請求項１８】
前記症状が禁煙である、請求項１２記載の方法。
【請求項１９】
前記症状が治療により発現する、禁煙の間に観察される体重増加である、請求項１２記載の方法。
【請求項２０】
哺乳動物に有効量の請求項１及び２のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容できる塩を投与するステップを有してなる哺乳動物の症状の治療方法。
【請求項２１】
前記症状が統合失調症である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記症状が体重増加である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
前記症状が肥満である、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
前記症状が統合失調症を伴う認知障害である、請求項２０記載の方法。
【請求項２５】
前記症状が薬剤乱用又はアルコール依存症である、請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
前記症状が禁煙である、請求項２０記載の方法。
【請求項２７】
前記症状が治療により生じる体重増加であり、非定型抗精神病薬による治療の間に観察される、請求項２０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本特許出願は、２００６年１０月２３日に出願の米国仮特許出願第６０／８６２５４０号の優先権を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、ＣＢ１化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
ＣＢ１受容体ファミリーは中枢神経系及び末梢神経系に主に存在し、幾つかの末梢器官においても若干存在する。ＣＢ２受容体は主に免疫系に存在する。カンナビノイド受容体リガンドについての薬理学的可能性及び治療可能性が、幾つかの文献において概説されている（非特許文献１乃至４：Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ  １９９８，８，３０１−３１３、Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ａ．Ｄｏｈｅｒｔｙ，Ｅｄ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  １９９９，Ｖｏｌ．３４，１９９−２０８、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．２０００，１０，１５２９−１５３８、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．２０００，２１，２１８−２２４）。ＣＢ１受容体アゴニストは、摂食刺激、鎮吐作用（ａｎｅｍｅｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）、無痛覚症、緑内障における眼圧低下、多発性硬化症における筋攣縮の軽減に関与しうることが知られている。逆に、ＣＢ１受容体アンタゴニストは、肥満症のモデル動物における、摂食及び体重の低下に有効であることが示されている。しかしながら、ＣＢ１受容体活性を調節するほとんどの化合物は、基礎ＣＢ１受容体シグナル伝達を低下させ、ＣＢ１アゴニスト依存性の受容体刺激を阻害する活性を低下させる逆作動の薬力学的特性を有している。
【０００４】
選択的で中枢作用活性を有する多くのＣＢ１受容体化合物が、現在肥満治療用に開発過程にある。それにもかかわらず、生体内効力が増強され、低分子量であり、かつ有害事象を最小限に抑えながら治療効果を提供する、薬物動態学的及び薬理特性を有するＣＢ１受容体化合物に対する要求が依然として存在する。例えば特許文献１：国際公開第２００７／０２０５０２号を参照のこと。
【０００５】
本能的な強い要求（ａｐｐｅｎｔｅｎｃｙ）の障害に加えて、ＣＢ１逆アゴニストは、試験において抗精神病薬の活性を更に高めることが示されている。現在の抗精神病療法は、陽性症状を抑えるすることには多少は有効であるが、かかる療法は、多くの患者が普通の生活を送ることが出来ないようにする陰性症状及び認知的症状の治療に対しては有効ではない。多くの証拠を総合すると、特定の脳の部位、特に海馬領域、線条体領域、皮質領域において神経細胞活性化を促進する薬物は、陰性症状及び認知的症状の治療に効果的であることを示唆している。更に、ＣＢ１受容体化合物による体重減少効果は、抗精神病薬投与に起因する体重増加モデル動物において実証されており、それゆえ治療により発現した体重増加および現在の抗精神病療法でみられるメタボリックシンドロームを制御する上でも有効であると考えられる。
【０００６】
更に、ＣＢ１受容体化合物は飲酒モデル動物においてアルコール消費を減少させることが示されており、それゆえ薬物乱用の治療においても有用と考えられる。
【０００７】
経口投与は好ましい薬物送達経路であるが、多くのＣＢ１受容体化合物は、水性溶媒への限られた溶解度および代謝不安定性の結果として、経口バイオアベイラビリティが低いという問題を有している。内在性カンナビノイドリガンド、及びＣＢ１受容体中のそれらが結合する相補的部位が高い親油性を有するため、公知のＣＢ１受容体化合物もまた親油性が高い。この高い親油性のために水性溶媒への溶解性は低く、ゆえに経口吸収性及びバイオアベイラビリティが制限される。例えば特許文献１：国際公開第２００７／０２０５０２号を参照のこと。
【０００８】
更に、肝臓で迅速に代謝される化合物は、小腸からの吸収後および全身を循環する前に代謝変換を受けることが考えられる。このプロセスの間、反応性の代謝中間体が生成されることが考えられるため、続いて体内の他の求核剤（タンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡなど）と反応することも考えられる。これにより、毒性の問題が生じ得る。このいわゆる「初回通過効果」もまた、薬物のバイオアベイラビリティを制限することとなる。例えば特許文献１：国際公開第２００７／０２０５０２号を参照のこと。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００７／０２０５０２号パンフレット
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ  １９９８，８，３０１−３１３
【非特許文献２】Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ａ．Ｄｏｈｅｒｔｙ編集；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  １９９９，第３４巻，１９９−２０８
【非特許文献３】Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．２０００，１０，１５２９−１５３８
【非特許文献４】Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．２０００，２１，２１８−２２４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
結論として、良好なバイオアベイラビリティを有し、高い生体内効力を有し、ＣＢ２よりも選択性が高く、これまでの分子よりも容易に溶解し、かつ後に毒性の問題となりうる反応性代謝産物を生成させないＣＢ１受容体化合物に対する要望がある。本発明はこの要望を充足するものであり、またそれに関連する利点をも提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）の化合物
【化１】
2010507589.tif 000003
又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関するものである。
【００１３】
本発明は更に、式（Ｉａ）の化合物
【化２】
2010507589.tif 000004
又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関するものである。
【００１４】
本発明は、式（ＩＩ）の化合物の中間物の提供に関するものである。
【化３】
2010507589.tif 000005
【００１５】
本発明は、式（Ｉ）又は（Ｉａ）のいずれかの化合物、並びにその薬理学的に許容できる担体、希釈剤若しくは賦形剤を含んでなる医薬組成物の提供に関するものである。
【００１６】
他の実施形態では、本発明は式（Ｉａ）の化合物が９０％ｅｅ超の光学純度において存在することを特徴とする医薬組成物の提供に関するものである。
【００１７】
更に他の実施態様（医薬組成物）では、詳細には、式（Ｉａ）の化合物が９５％ｅｅ超の光学純度において存在する。
【００１８】
本発明の実施態様は、式（Ｉ）又は（Ｉａ）のいずれか１つの治療用の化合物の提供に関するものである。
【００１９】
本発明は、過剰摂食と関連した摂食障害、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認識機能障害、薬物乱用又はアルコール依存、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される、治療により発現した体重増加から選択される障害の治療に用いられる、式（Ｉ）又は（Ｉａ）のいずれか１つの化合物を提供するものである。
【００２０】
本発明は、過剰摂食と関連した摂食障害、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認識機能障害、薬物乱用又はアルコール依存、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される、治療により発現した体重増加から選択される障害の治療用薬剤の製造における式（Ｉ）又は（Ｉａ）のいずれか１つの化合物の使用を提供するものである。
【００２１】
本発明の一実施形態は、逆作動機構を介したＣＢ１受容体の阻止によって治療可能である、哺乳動物の症状の治療方法の提供するもので、当該方法は、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）のいずれか１つの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の有効量を患者に投与するステップを有してなる。
【００２２】
本発明の一実施形態は、哺乳動物の症状の治療方法の提供に関し、当該方法は、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）のいずれかの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の有効量を抗精神病薬と同時、個別又は連続的組合せにより投与するステップを含んでなる。
【００２３】
本発明の一実施形態は、前記症状が過剰摂食と関連した摂食障害である前記方法の提供に関するものである。
【００２４】
本発明の一実施形態は、前記症状が肥満症である前記方法の提供に関するものである。
【００２５】
本発明の一実施形態は、前記症状が統合失調症である前記方法の提供に関するものである。
【００２６】
本発明の一実施形態は、前記症状が統合失調症を伴う認識機能障害である前記方法の提供に関するものである。
【００２７】
本発明の一実施形態は、前記症状が薬物乱用又はアルコール依存症である前記方法の提供に関するものである。
【００２８】
本発明の一実施形態は、前記症状が禁煙である前記方法の提供に関するものである。
【００２９】
本発明の一実施形態は、前記症状が禁煙中に観察される、治療により発現した体重増加である前記方法の提供に関するものである。
【００３０】
本発明の一実施形態は、体重増加、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認知障害、薬物乱用又はアルコール依存症、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される治療により発現する体重増加から選択される障害の治療における、抗精神病薬と同時、個別又は連続的組合せによる使用のための、式（Ｉ）又は（Ｉａ）のいずれかの１つの化合物の提供に関するものである。
【００３１】
更に別の実施形態では、本発明は、体重増加、肥満、統合失調症、統合失調症を伴う認知障害、薬物乱用又はアルコール依存症、禁煙、及び非定型抗精神病薬による治療の間に観察される治療により発現する体重増加から選択される障害の併用療法に用いられる薬剤の製造で使用される、式（Ｉ）又は（Ｉａ）のいずれか１つの化合物の提供に関するもので、前記薬剤は、抗精神病薬と同時、個別又は連続的組合せにおいて投与されるものである。
【００３２】
本発明は、逆作動機構を介したＣＢ１受容体の阻止によって治療可能な哺乳動物の症状の、抗精神病薬との同時、個別又は連続的組合せによる治療方法の提供に関するもので、当該方法は、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）のいずれか１つの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の有効量を患者に投与するステップを有してなる。
【００３３】
本発明のは、哺乳動物の症状の治療方法の提供に関し、当該方法は、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）のいずれか１つの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の有効量を投与するステップを含んでなる。
【００３４】
本発明の一実施形態は、前記症状が統合失調症である前記方法を提供するものである。
【００３５】
本発明の一実施形態は、前記症状が体重増加である前記方法を提供するものである。
【００３６】
本発明の一実施形態は、前記症状が肥満症である前記方法を提供するものである。
【００３７】
本発明の一実施形態は、前記症状が統合失調症を伴う認識機能障害である前記方法を提供するものである。
【００３８】
本発明の一実施形態は、前記症状が薬剤乱用又はアルコール依存症である前記方法を提供するものである。
【００３９】
本発明の一実施形態は、前記症状が禁煙である前記方法の提供に関するものである。
【００４０】
本発明の一実施形態は、前記症状が非定型抗精神病薬による治療の間に観察される、治療により発現する体重増加である前記方法を提供するものである。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物は不斉中心を含み、それによりジアステレオマー混合物、ラセミ混合物、単一の鏡像体及び式Ｉａの化合物といった個々のジアステレオマーとして得られる。式（Ｉ）の化合物のかかる異性体は全て本発明の態様として包含される。
【００４２】
ラセミ体における式（Ｉ）の化合物は有用な物質であるが、一方の胸像体が濃縮した式（Ｉ）の化合物を投与するのが一般には好ましい。本発明の好ましい態様は、実質的に純粋な鏡像体である式（Ｉａ）の化合物を提供するものである。そのようなものとして、以下の特定の種類の式（Ｉ）及び（Ｉａ）の各化合物が本発明の態様として包含される。
（ａ）鏡像体純度が８０％の鏡像体過剰率を超える化合物、
（ｂ）鏡像体純度が９０％の鏡像体過剰率を超える化合物、
（ｃ）鏡像体純度が９５％の鏡像体過剰率を超える化合物、及び
（ｄ）鏡像体純度が９９％の鏡像体過剰率を超える化合物。
【００４３】
これらの鏡像異性的に純粋な化合物は、この化合物の鏡像異性体混合物から、式（Ｉ）の化合物の所望の鏡像異性体を精製することにより調製できる。式（Ｉ）の化合物の所望の鏡像異性体はまた、実質的に鏡像異性的に純粋な前駆体を用いて、下記の一般的図式により合成することにより調製してもよい。当業者であれば、最終化合物又は中間体のいずれの分割によっても、実質的に鏡像異性的に純粋な形態の式（Ｉ）の化合物（例えば式（Ｉａ）の化合物）が得られ、最も便利な方法を適宜使用できることをがわかる。
【００４４】
実質的に純粋なジアスレテオマーは、当該分野で公知の方法を使用してジアステレオマーの混合物から単離できることもわかる。ジアステレオマーを精製する方法にはクロマトグラフィ及び結晶化法が挙げられる。胸像異性体の混合物は、分割として公知のプロセスによって、個々の実質的に純粋な胸像異性体に分離してもよい。胸像異性体は、キラル固定相を用いたクロマトグラフィによって分割してもよい。適当なキラル固体相としては、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ及びＣｈｉｒａｃｅｌ  ＯＪ（Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．社から市販）などの多糖ベースの固定相が挙げられる。更に、塩基性化合物の鏡像異性体は、キラル酸での処理でジアステレオマー塩の混合物に変換することによって分割してもよい。所望のジアステレオマー塩は、例えば結晶化法によって単離される。実質的に鏡像異性的に純粋な塩基性化合物は、塩基で処理することにより単離してもよい。キラル酸の例としては、（−）−酒石酸、（＋）−酒石酸、（−）−マンデル酸、（＋）−マンデル酸、（−）−ジトルオイル酒石酸及び（＋）−ジトルオイル酒石酸が挙げられる。酸性化合物の胸像異性体は、実質的に鏡像異性的に純粋な塩基を使用して類似したやり方で分割できる。かかる塩基の例としては、Ｒ−α−メチルベンジルアミン、Ｓ−α−メチルベンジルアミン、及びブルシンが挙げられる。ラセミ混合物の分割する別の方法としては、共有結合を形成する実質的に鏡像異性的に純粋なキラル試薬（本願明細書においてキラル補助基と称される）と反応させることが挙げられる。この反応により当該分野で公知の方法に従って精製されるジアステレオマー混合物が得られる。次いで、キラル補助基の全て又は一部は、実質的に鏡像異性的に純粋な化合物を生成するための分子から切断してもよい。場合によっては、キラル補助基によって導入された不斉中心が最終生成物中に保持されていてもよい。
【００４５】
当業者であれば、ある開示された中間体化合物及び式（ＩＩ）の化合物中の様々な位置に水素が付着してもよいことがわかるし、すなわちそれらが互変異性を有することがわかる。個々の互変異性体並びにそれらの混合物は、本発明の態様として包含される。特定の状況に応じて、各々の形の互変異性体として存在しても、相互に変換しても、互変異性化してもよい。
【００４６】
特に定めのない限り、本願明細書において、式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物と称するときは、その薬理学的に許容できる塩も包含されるものとする。
【００４７】
後述する本発明の化合物は、制御された条件下での結晶化により調製された、特異的な結晶形として存在してもよいとわかる。
【００４８】
式（Ｉ）及び（Ｉａ）の化合物は、ＣＢ２受容体よりもむしろＣＢ１受容体に対して選択的である。更に、これらのＣＢ１受容体リガンドが、ＣＢ１受容体機能のアゴニストとして機能し、更には逆アゴニスト特性を有することを示唆することが証明されている。このように、式（Ｉ）及び（Ｉａ）の化合物はＣＢ１受容体の調節物質であって、そのようなものとしてＣＢ１受容体に関連する症状の予防及び治療に有用であると明言できる。かかる症状としては、例えば記憶障害、認識障害、統合失調症の陰性症状、薬物乱用障害（特にアヘン、アルコール及びニコチン）、肥満、代謝異常及び過剰摂食に関連した摂食障害などが挙げられる。ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ．，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｒｅｖｉｓｅｄ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ（２０００）を参照のこと。また、ＤＳＭ−ＩＶ，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ４ｔｈ  Ｅｄ．，（１９９４）も参照のこと。ＤＳＭ−ＩＶ及びＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲは、Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎにより作成され、診断カテゴリに関して記載している。当業者であれば、病的な精神状態のための代替的な命名法、疾病分類及び分類体系があり、またこれらのシステムは医療技術の進歩に伴い進化することがわかる。
【００４９】
また式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物は体重増加を改善するために使用でき、その際、関連する体重増加を示す対象が、臨床的な意味で肥満であると分類されるか否かは問わない。
【００５０】
本発明の治療方法を実施するために、式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物の有効量をかかる治療又は予防を必要とする患者に投与してもよい。本発明の方法による予防的投与の必要性は、周知の危険因子を用いることにより決定される。個々の化合物の有効量は、最終分析で主治医により決定されるが、その決定は、実際に治療する疾患、疾患の重篤度及びその他に患者が罹患する疾患若しくは症状、選択される投与経路、患者が付随的に必要としうる他の薬剤及び治療などの因子、並びに医師が判断材料とする他の要因などにより決定される。式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物の予防用量若しくは治療用量は、当然ながら治療する症状の重篤度の性質、及び特定の式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物、及びその投与経路により異なる。
【００５１】
投与は１日１回であってもよく、又は１日の総量を１日２回、３回又は４回に分割して投与してもよい。更に、投与するものとして選択した個々の化合物の性質、及び／又は剤形の特性（すなわち放出調節製剤）に基づいて、例えば週１回、２週に１回、月１回など更に少ない頻度で投与してもよい。投与単位は、投与頻度が少なくなる程大きくなりうる。投与が経皮経路又は継続的な静脈への点滴によるものである場合、当該投与は当然ながら、用法・用量全体にわたり断続的であるよりはむしろ連続的であるのが好ましい。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
上記のように、また本願明細書の記載全体を通じて、以下の用語は、別段の記載がない限り以下のとおり定義する。
「アゴニスト」とは、受容体の機能的反応を刺激する化合物を指す。
【００５３】
「中性アンタゴニスト」とは、受容体の基礎活性を変化させないが、機能的反応を基礎状態の機能的活性に戻すことによって、アゴニスト及び逆アゴニストの機能的活性を抑制する化合物を指す。
【００５４】
「逆アゴニスト」とは、受容体の常時活動を逆転させることによって、負の固有活性を有する化合物を指す。逆アゴニストは、アゴニストの活性を逆転させるアンタゴニストとして機能する。
【００５５】
「アンタゴニスト」とは、中性アンタゴニストである化合物を指す。
【００５６】
「肥満」とは、多量の体脂肪を有する症状のことを指す。ある人が３０ｋｇ／ｍ２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）を有する場合、その人は肥満であると考えられる。ＢＭＩが２７〜３０の人は一般に過剰体重であると考えられる。従来、標準体重の人は１９．９〜２５．９のＢＭＩである。肥満は、遺伝又は環境などのあらゆる要因に起因すると考えられる。肥満を生じさせる障害又は肥満の原因の例としては、過食、肉体的活動の低下、代謝活性の低下を呈する病状などが挙げられる。
【００５７】
「薬理学的に許容できる塩」及び「塩」とは、本発明の化合物の比較的無毒性の、無機及び有機の酸付加塩及び塩基付加塩を指す。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらの“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）を参照のこと。
【００５８】
「医薬組成物」及び「組成物」とは、活性成分（薬理学的有効量で存在することが好ましい）と、担体を構成する不活性成分（薬理学的に許容できる賦形剤）とを含んでなる生成物、並びに、任意の２つ以上の上記成分の混合、錯体形成又は凝集により、又は１つ以上の上記成分の解離により、又は１つ以上の上記成分による他の種類の反応又は相互作用により、直接若しくは間接的に生じる任意の生成物が包含を指すものとする。それ故に、本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物と、薬理学的に許容できる賦形剤とを混合することにより生じるあらゆる組成物を包含する。
【００５９】
（肥満の）「予防」とは、肥満の症状の発症前に治療を施して、肥満の発症を防止することを指す。更に、既に肥満である対象に処置が開始された場合には、かかる治療により、肥満による医学的続発症（例えば動脈硬化症、２型糖尿病、多嚢胞卵巣、心臓血管疾患、変形性関節症、皮膚科的障害、高血圧、インスリン抵抗性、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、及び胆石症）の予防、又はこれらの進行の抑止がなされることが予想される。
【００６０】
本願明細書で使用する「治療する」とは、別段の記載がない限り、かかる用語が係る障害若しくは症状、又はかかる障害若しくは症状の１つ以上の徴候を回復に向かわせる、緩和する、又は進行を阻害することを指す。本願明細書で使用する「治療」の用語は、別段の記載がない限り、その「治療する」について上記に定義するように治療することの行為を指す。
本願明細書で使用する「ｐ．ｏ．」の用語は、特に明記しない限り経口を指す。
本願明細書で使用する「ｓ．ｃ．」の用語は、特に明記しない限り皮下を意味する。
本願明細書で用いられる「Ｒｅｔ．」の用語は、特に明記しない限り保持を意味する。
本願明細書で用いられる「ＤＭＳＯ」の用語は、特に明記しない限りジメチルスルホキシドを意味する。
【００６１】
本願明細書において教示される治療用途において、特許請求された化合物の塩は、薬理学的に許容できるものでなければならない。薬理学的に許容できる塩に関する詳細については、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、１（１９７７）ジャーナルを参照のこと。
【実施例】
【００６２】
調製例及び実施例：
調製例及び実施例の全体にわたる、ＨＰＬＣ法の条件は、以下のとおりである：
方法Ａ：
ＬＣカラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ８  ４．６×１５０ｍｍ  ５μＭ。
勾配：２０〜９０％アセトニトリル（ｗ）／０．０１％トリフルオロ酢酸、１３．０分。
カラム温度：４０℃。
オートサンプラ温度：周囲温度。
流量：２．０ｍＬ／分。
シグナルを２６０ｎＭ及び２１５ｎＭの波長で検出。
【００６３】
方法Ｂ：
ＬＣカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−フェニル４．６×１５０ｍｍ  ５μｍ。
アイソクラチック：３６％のＡ及び６４％のＢ（Ａ＝０．０５Ｍ  ＮＨ４ＯＡｃ／水（ｐＨ５．０）、及びＢ＝ＡＣＮ）、１０分間。
カラム温度：３５℃。
オートサンプラ温度：周囲温度。
流量：２．０ｍＬ／分。
シグナルを２０６ｎＭの波長で検出。
【００６４】
方法Ｃ：
ＬＣカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＲＸ−Ｃ１８  ４．６×２５０ｍｍ  ５μｍ。
勾配：５０〜９０％アセトニトリル（ｗ）／０．０３Ｍリン酸緩衝液（リン酸緩衝液＝５．５２ｇ  ＮａＨ２ＰＯ４及びＨ３ＰＯ４１．４ｍＬ／Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水２Ｌ）、１５分。
カラム温度：４０℃。
オートサンプラ温度：周囲温度。
流量：１．５ｍＬ／分。
シグナルを２６０ｎＭの波長で検出。
【００６５】
方法Ｄ：
ＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８  ２．０×５０ｍｍ  ３．０μｍ。
勾配：５〜１００％ＡＣＮ  ＡＣＮ（ｗ）／０．１％ギ酸、７．０分、更に１００％で１．０分間維持。
カラム温度：５０℃±１０℃。
ＡＳ温度：周囲温度。
流量：１．０ｍＬ／分。
シグナルを３００ｎｍの波長で検出。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０２（Ｍ−１）。
【００６６】
製剤Ａ：
６−トリフルオロメチル−ニコチン酸エチルエステル
【化４】
2010507589.tif 000006
「６−（ハロアルキル）−３−ピリジンカルボン酸の調製」という発明の名称のドイツ特許公報に記載の手順により、標題の化合物を調製した。Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｐｅｔｅｒ．（Ｂａｙｅｒ  Ａ．−Ｇ．，Ｇｅｒｍａｎｙ）．Ｅｕｒ．Ｐａｔ．Ａｐｐｌ．（２００３），１３ｐｐ．欧州特許出願公開第１３４０７４７Ａ１、２００３０９０３を参照のこと。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５，８．５），８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８），４．３８（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７），１．３４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）．
【００６７】
製剤Ｂ：
２−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−プロパン−２−オール
【化５】
2010507589.tif 000007
不活性化反応器中に含まれる、工業銘柄６−トリフルオロメチル−ニコチン酸エチルエステル（４５．６モル、１０．００ｋｇ）及びｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（７１．６Ｌ、５３．０ｋｇ）を１０〜１５℃に冷却し、３Ｍ塩化メチルマグネシウム（１３６．８モル、４５．６Ｌ、４６．２ｋｇ）及びテトラヒドロフラン（７６．５Ｌ、６８．０ｋｇ）を含む５〜１２℃に冷却された別の不活性化反応槽に、上記溶液を添加した。添加中、穏やかな発熱が観察され、１５〜２５℃の間で内部反応温度を維持した。ＨＰＬＣで開始エステルが完全に消費されたことを確認し、反応槽内容物を０〜３℃に冷却した。塩酸（２０３モル、１６．６７Ｌ、２０．０ｋｇ）及び水（８１．０Ｌ、８１．０ｋｇ）を含む０〜５℃に冷却された別の反応槽に、上記反応器から内容物を徐々に添加し、ガスの発生が観察された。層を分離させ、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５９．５Ｌ、４４．０ｋｇ）で水層を１回抽出した。有機層を組み合わせ、２０％塩化ナトリウム溶液（１８９．３モル、４６．５Ｌ、５５．３ｋｇ）で洗浄した。有機溶液を濾過し、約１倍容となるまで濃縮し、アセトニトリル（３１．８Ｌ、２５．０ｋｇ）で希釈した。アセトニトリル中の工業銘柄の油状物（７．９ｋｇ、８４．４％、ＨＰＬＣベース）として標題の化合物を供給するため、上記溶液を約１倍容となるまで濃縮した。アセトニトリル中の溶液として、上記粗生成物を更なる精製をせずに使用した。生成物の純粋なサンプルは、以下の手順により得ることができる。
【００６８】
精製（任意）：
標題の化合物（１．８１ｋｇ、８．８２モル）をメチルｔ−ブチルエーテル（３Ｌ、２．２Ｋｇ）、水（５００ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）の入った２２Ｌの分液漏斗に満たし、１０分間撹拌して明るい黄色の水層を分離し、有機層を２２Ｌのフラスコに移した。硫酸マグネシウム（２００ｇ、１．６６モル）をフラスコに添加し、１０分間撹拌し更に濾過した。濾液を濃縮して油状物とし、標題の化合物を１．６４ｋｇ（９０．６％）の重量の油状物として提供するためアセトニトリル（２×３Ｌ）で二回共蒸発させた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ８．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），８．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），５．４２（ｓ，１Ｈ），１．４７（ｓ，６Ｈ）。
【００６９】
製剤Ｃ：
Ｎ−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチル］−アセトアミド
【化６】
2010507589.tif 000008
アセトニトリル（６７．４Ｌ、５３．０ｋｇ）を、２−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−プロパン−２−オール（５２モル、１２．８ｋｇ）を含む反応槽に添加し、０〜５℃に冷却した。０〜１５℃に内部反応温度を維持しながら、徐々に濃硫酸（３７２モル、１９．８Ｌ、３６．５ｋｇ）を添加した。溶液を２５〜３０℃で２４時間加熱し、ＨＰＬＣで反応の完了を観察した。撹拌しながら混合物を０℃に冷却し、水（９５．０Ｌ、９５．０ｋｇ）を添加した。アンモニア水（５７．５ｋｇ）溶液を添加して溶液ｐＨを８．０〜９．０に調整し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（８１．１Ｌ、６０．０ｋｇ）を添加した。下部の水層を分離し、約３倍容となるまで有機層を濃縮し、−５〜０℃に反応容器の内容物を冷却した。得られた固体を濾取し、一定の重量となるまで真空乾燥し、標題の化合物を純度８１．８％の淡黄色の固体として回収した（１３．４ｋｇ、８７．３％、ＨＰＬＣベース）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ８．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２Ｈｚ），８．３０（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５，８．５Ｈｚ），７．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）。
【００７０】
製剤Ｄ：
１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン
【化７】
2010507589.tif 000009
窒素雰囲気下で撹拌しながらＮ−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチル］−アセトアミド（９３．５モル、１９．１ｋｇ）、濃塩酸（８０５．９モル、６６．２Ｌ、７９．４ｋｇ）及び水（７９．４Ｌ、７９．４ｋｇ）の混合物を９５〜１００℃まで２４時間加熱した。２０〜３５℃に反応混合物を冷却し、ＨＰＬＣで反応の完了を観察した。１０〜２０℃に反応槽を冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１０５．４Ｌ、７８．０ｋｇ）を添加した。相分離させ、有機層を除去した。１５％の水酸化ナトリウム（９１０．９モル、２０５Ｌ、２４２．９ｋｇ）を水相に添加し、ｐＨを９．５〜１０．５とした。酢酸エチル（３×８９ｍＬ、３×８０．０ｋｇ）で水層を抽出し、有機層を混合し、水相を除去した。約２倍容となるまで溶液を濃縮し、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１７４Ｌ、１２９．１ｋｇ）を添加し、約２倍容となるまで溶液を濃縮した。反応槽をｎ−ヘプタン（１６８Ｌ、１１５．０ｋｇ）で希釈して、約２倍容に溶液を濃縮し、更にｎ−ヘプタン（３０Ｌ、２０．７ｋｇ）で希釈した。反応槽内の混合物を０〜５℃に冷却し、０〜５℃で混合物を２時間撹拌した。得られた固体を濾取して３５〜４５℃の真空下で乾燥させ、純度９７．９％の純黄褐色の粉末として標題の化合物（１４．１９ｋｇ、７４．３％、ＨＰＬＣベース）を得た。
【００７１】
製剤Ｅ：
１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン；トルエン−４−スルホン酸が併存した化合物
【化８】
2010507589.tif 000010
１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン（２８０ｇ、１．３７モル）を含むメチルｔ−ブチルエーテル（１．４Ｌ）溶液を、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２１２．５ｇ、１．２３モル）を含むテトラヒドロフラン（９８０ｍＬ）の溶液に添加した。ｐＨが２．０となり、発熱し２８℃となった。１８℃に冷却し、固体を濾取した。濾過ケーキをメチルｔ−ブチルエーテル（１．４Ｌ）で洗浄した。濾過ケーキを常温で真空乾燥し、標題の化合物４０８ｇ（７９％）を白色固体として回収した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ８．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５），８．５３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５，８），８．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８），７．４６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８），７．１０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５），２．２７（ｓ，３Ｈ），１．６８（ｓ，６Ｈ）。
【００７２】
製剤Ｆ：
１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン
【化９】
2010507589.tif 000011
５Ｌの三つ口フラスコ中で、１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン（トルエン−４−スルホン酸（９９０ｇ、２．６３モル）が併存した化合物）を秤量した。氷浴で冷却して懸濁液を作成するため、メチルｔ−ブチルエーテル（２．４８Ｌ）を添加した。５Ｍ水酸化ナトリウム（５７８．６４ｍＬ、２．８９モル）溶液を添加し、ｐＨ１２．２の二相の混合物を得た。層分離させ、水（１２５ｍＬ）で有機層を抽出した。有機相を除去し、減圧下で濃縮し、残渣（２００ｇ）を得た。メチルｔ−ブチルエーテル（９９０ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１．３２Ｌ）の混合物で水相を抽出した。有機相を分離し、減圧下で濃縮し、別の残渣（２００ｇ）を得た。水相がｐＨ１０．１となり、更に５Ｎ  ＮａＯＨ（１５７．８ｍＬ、０．７８９モル）を添加し、ｐＨ１３とした。ジクロロメタン（１．３２Ｌ）で水層を抽出した。相分離させ、有機相を濃縮し、第３の残渣を得た。３種のアミン残渣を組み合わせ、混合しながらヘプタン（１ｌ）中で懸濁させ、懸濁液を濃縮し、白い結晶質固体として精製された標題の化合物４２７ｇ（７９．５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５），８．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２，８），７．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５），１．６８（ｂｒｓ，２Ｈ），１．５５（ｓ，６Ｈ）．
【００７３】
製剤Ｇ：
１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン塩酸塩
【化１０】
2010507589.tif 000012
アセトン（１０ｍＬ）中の製剤Ｆ（１．０ｇ、４．９ｍｍｏｌ）から１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミンを周囲温度で溶解させ、５分間撹拌した。継続して撹拌しながら濃塩酸（１２．１８Ｎ）（０．４ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ）を滴下すると、白色固体が生成した。反応混合物を０℃に冷却し、３０分間撹拌を続けた。得られた固体を濾取し、冷アセトン（２ｍＬ）で洗浄した。４０℃で真空乾燥し、白色固体として標題の化合物（０．７３ｇ、６２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１７（ｓ（ｂｒ），３Ｈ），９．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），８．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），７．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），１．７１（ｓ，６Ｈ）、１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４８．０，１４６．２（ｑ，ＪＣＦ＝３４．０Ｈｚ），１４２．４（ｄ，ＪＣＦ＝０．８Ｈｚ），１３６．０，１２１．９（ｑ，ＪＣＦ＝２７３Ｈｚ），１２０．８（ｔ，ＪＣＦ＝２．６Ｈｚ），５４．９，２７．５。
【００７４】
製剤Ｈ：
（±）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン
【化１１】
2010507589.tif 000013
氷酢酸（１２５ｍＬ）中の３−（トリフルオロメトキシ）−ベンズアルデヒド（２５．０ｇ、１３２ｍｍｏｌ）及びピルビン酸エチル（１５．３ｇ、１３２ｍｍｏｌ）を、周囲温度で１０分間撹拌した。継続して撹拌しながら４−（トリフルオロメチル）アニリン（４６．７ｇ、２９０ｍｍｏｌ）を１５分以上にわたり滴下し、溶液を３０℃に加温し、２２〜２４時間撹拌した。溶液を２６℃に冷却し、イソプロピルアルコール（１２５ｍＬ）及び水（１２５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１５分間撹拌し、沈殿物を濾取してイソプロピルアルコール：水＝１：１の混合溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄した。４０℃で真空乾燥し、白色の粉末として標題の化合物（６０．４６ｇ、８４％）を得た。ＨＰＬＣ（方法Ｃ）保持時間：１０．９分。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４５．１（Ｍ−１）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７６（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．７０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４４−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），６．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）．
【００７５】
製剤Ｉ：
（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−［（１Ｒ）−１−（４−クロロフェニル）−エチルアミノ］−５−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−１，５−ジヒドロピロール−２−オン
【化１２】
2010507589.tif 000014
エタノール（１２０ｍＬ）、氷酢酸（１５ｍＬ）、水（３．０ｍＬ、１６４．７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（６．２ｍＬ、８２．４ｍｍｏｌ）、（±）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン（３０．０ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）及び２，５−ジメトキシ−テトラヒドロフラン（１０．７ｍＬ、８２．４ｍｍｏｌ）を混合した。溶液を５０℃に加温し、反応混合物を１５〜１８時間撹拌した。溶液の加熱を停止し、水（３５ｍＬ）を添加し、反応混合物を−１９℃に冷却した。スラリーを濾過し、水：メタノール＝１：４の混合溶液（２０ｍＬ）で固体を洗浄した。濾液を分液漏斗へ移し、６％のブライン（２８０ｍＬ）で洗浄し、有機相に６％ブライン（１００ｍＬ）、メタノール（４０ｍＬ）、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム溶液（４３ｍＬ）を添加した。層を分離させ、メタノール（６０ｍＬ）を有機相に添加し、（±）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−２，３−ジオンを含んでなる、約１倍容の溶液となるまで濃縮した。メタノール（６０ｍＬ）及び（Ｒ）−４−クロロ−α−メチルベンジルアミン（７．８ｍＬ、５５．０ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２４時間撹拌した。ＨＰＬＣで反応の完了（方法Ｂ）をモニターし、溶液を−７℃に冷却してこの温度で７２時間撹拌を続けた。予め混合した水酸化カリウム（０．６９ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を含むメタノール（１１ｍＬ）の溶液を反応混合物に添加し、溶液を１０℃に加温し、更に４時間撹拌した。溶液を−７℃に冷却し、スラリーを濾過して反応生成物をメタノール（５ｍＬ×３）で洗浄した。真空下で固体を乾燥させ、白色固体として（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−［１（Ｒ）−（４−クロロ−フェニル）−エチルアミノ］−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン（１２．３ｇ、４７．７％）を得た。ＨＰＬＣ（方法Ｂ）保持時間：４．３分。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３９．０（Ｍ−１）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３８−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．２７（ｍ，３Ｈ），７．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５，１．０Ｈｚ），７．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），５．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），５．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），４．３５−４．３２（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）．
【００７６】
実施例１：
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン、４−メチルベンゼンスルホネート（１：１）
【化１３】
2010507589.tif 000015
（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−［（１Ｒ）−１−（４−クロロフェニル）−エチルアミノ］−５−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−１，５−ジヒドロピロール−２−オン（５０．０ｇ、９２．４ｍｍｏｌ）、トルエン（２００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）を周囲温度で１０分間撹拌した。トリフルオロ酢酸（５０．０ｍＬ、０．６６モル）を上記の二相溶液に添加し、わずかな発熱（２３〜３０℃）が観察された。ＨＰＬＣ（方法Ａ）で反応をモニターし、１〜２時間後に溶液を分液漏斗へ移し、水層を除去した。５Ｎ塩酸（２００ｍＬ×２）、水（２００ｍＬ）で有機相を洗浄し、有機層を分析し、（Ｒ）−４−クロロ−α−メチルベンジルアミンの除去を確認した。反応フラスコに有機溶液を入れ、一旦置いておいた。別のフラスコにおいて、１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン塩酸塩（３３．４ｇ、１３８．６ｍｍｏｌ）、トルエン（１５０ｍＬ）、２Ｎ水酸化ナトリウム（１１０ｍＬ、２１２．６ｍｍｏｌ）を混合し、周囲温度で３０分間撹拌した。有機層を分離し、清浄なフラスコへ移した。溶液を撹拌し、酢酸（５２ｍＬ）を添加すると、わずかな発熱（２３〜３２℃）が観察された。トルエン（２００ｍＬ）中に（５Ｒ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−２，３−ジオン（３７．３ｇ、９２．４ｍｍｏｌ、理論値）を含む上記の溶液を、反応混合液に添加し、１４〜１８時間撹拌しながら４５℃に加熱した。ＨＰＬＣ（方法Ａ）で溶液を分析し、（５Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン二量体（下記参照）の消失を確認し、溶液を周囲温度に冷却した。
【化１４】
2010507589.tif 000016
【００７７】
溶液を分液漏斗へ移し、３％塩化ナトリウム水溶液（１２０ｍＬ×２）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１２０ｍＬ）及び３％ブライン（１２０ｍＬ）で紫色の溶液を洗浄した。有機相をフラスコへ移し、約２倍容（１００ｍＬ）となるまで濃縮し、未使用のトルエン（１５０ｍＬ）を添加した。紫色の反応を窒素でパージしながら５分間撹拌し、周囲温度温でナトリウムトリアセトキシボロハイドライド（３９．２ｇ、１８４．９ｍｍｏｌ）を一部添加した。内部温度が３５℃を超えないように注意しながら、発熱（２３〜３４℃）が観察されるよう徐々にトリフルオロ酢酸（５０．０ｍＬ、６５５．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を周囲温度で２〜４時間撹拌し、ＨＰＬＣ（方法Ａ）で反応の完了をモニターした。水（２５０ｍＬ）、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１５０ｍＬ）を添加し、層を分離させた。２Ｎ水酸化ナトリウム（１５０ｍＬ）、水（１５０ｍＬ×２）で有機層を洗浄し、生成物を含んでなる有機層をフラスコに移した。約２倍容（１００ｍＬ）となるまで溶液を濃縮し、未使用のトルエン（４５０ｍＬ）を添加し、約２倍容（１００ｍＬ）となるまで再度濃縮した。未使用のトルエン（４５０ｍＬ）を添加し、撹拌しながら５０℃に溶液を加温し、エタノール（６０ｍＬ）中の溶液としての、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１４．１ｇ、７３．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合液を周囲温度に冷却し、１時間撹拌した。沈殿物を濾過し、トルエン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、４０℃で真空乾燥し、白色粉体として標題の化合物（３１．６ｇ、４４．８％）を得た。ＨＰＬＣ（方法Ａ）保持時間：８．０分。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２．１６４１（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６４−７．６２（ｍ，２Ｈ），７．５２−７．４７（ｍ，４Ｈ），７．４１−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１１−７．１０（ｍ，２Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．３，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｓ，１Ｈ），２．７８−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｄｄ，Ｊ＝２１．４，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ）。
【００７８】
実施例２：
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン、４−メチルベンゼンスルホネート（１：１）の精製
【化１５】
2010507589.tif 000017
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン、４−メチルベンゼンスルホネート（１：１）（５．０ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）、トルエン（７５ｍＬ）及び１０％含水炭酸ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）を周囲温度で１時間混合した。層を分離させ、水（２５ｍＬ×２）で有機相を洗浄した。有機相をフラスコに入れ、約２倍容（１０ｍＬ）となるまで濃縮した。未使用のトルエン（５０ｍＬ）を添加し、約２倍容（１０ｍＬ）となるまで溶液を濃縮し、未使用のトルエン（６５ｍＬ）を添加した。撹拌しながら溶液を５５℃に加温し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．２７ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）を含むエタノール（５．５ｍＬ）の溶液を添加した。反応混合液を周囲温度に冷却し、１時間撹拌した。得られるスラリーを濾過し、トルエン（５ｍＬ×２）で固体を洗浄し、４０℃で真空乾燥し、白い結晶質固体として標題の化合物（４．５ｇ、９０．４％）を得た。ＨＰＬＣ（方法Ａ）保持時間：８．０分。ＨＲＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２．１６４１（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６４−７．６２（ｍ，２Ｈ），７．５２−７．４７（ｍ，４Ｈ），７．４１−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１１−７．１０（ｍ，２Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．３，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｓ，１Ｈ），２．７８−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｄｄ，Ｊ＝２１．４，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ）。
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン、４−メチルベンゼンスルホネート（１：１）は、以下を利用して合成できる：
【００７９】
製剤Ｉａ：
（Ｓ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン
【化１６】
2010507589.tif 000018
及び、
製剤Ｉｂ：
（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−［３−トリフルオロメトキシ−フェニル］−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン
【化１７】
2010507589.tif 000019
（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミン（４５．０ｍＬ、３４９．８ｍｍｏｌ）を（±）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−２，３−ジオンを含む製剤Ｉに記載の有機層に添加した。周囲温度で７２時間、溶液を撹拌した。反応混合物を濃縮しシリカゲルクロマトグラフィ（５〜１５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）で精製し、黄褐色の泡状物としての（Ｓ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン（３２．４ｇ、３７％）と、淡いオレンジ色の油状物としての（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン（２６．０ｇ、２９％）を得た。
【００８０】
（Ｓ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３９−７．３４（ｍ，３Ｈ），７．２８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７，７．１Ｈｚ），７．２１−７．１４（ｍ，４Ｈ），６．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），５．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），４．３１−４．２３（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０７（Ｍ＋１）。
【００８１】
（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．２８−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．１４−７．０６（ｍ，２Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），６．９６（ｓ，１Ｈ），５．９６−５．９２（ｍ，２Ｈ），５．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），４．３６−４．２７（ｍ，１Ｈ），１．４４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０７（Ｍ＋１）。
【００８２】
実施例３：
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン
【化１８】
2010507589.tif 000020
及び、
実施例４：
（３Ｓ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン
【化１９】
2010507589.tif 000021
トルエン（１４４ｍＬ）及び水（５８ｍＬ）中の（Ｒ）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（（Ｒ）−１−フェニル−エチルアミノ）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オン（２８．９ｇ、５７．１ｍｍｏｌ）の２層混合液に、トリフルオロ酢酸（２１．６ｍＬ、２８５ｍｍｏｌ）を滴下した外気温で６０分間撹拌した。（Ｒ）−５−［３−トリフルオロメトキシ−フェニル］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−２，３−ジオンの顕著な形成が観察された（ＬＣ  ＭＳ  ８５％、保持時間＝４．２７分、方法Ｄ）、ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０２（Ｍ−１）。
【００８３】
水層を分離し、トルエン層を水、ｐＨ７の緩衝液及び飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。（Ｒ）−５−［３−トリフルオロメトキシ−フェニル］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ピロリジン−２，３−ジオンを含有するトルエン溶液に、酢酸（２６．２ｍＬ、４５６ｍｍｏｌ）及び１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミン（２３．３ｇ、１１４ｍｍｏｌ）を添加した。５５℃で１８時間加熱した。（Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オンの顕著な形成が観察された（ＬＣ  ＭＳ  １００％、保持時間＝５．５９分、方法Ｄ、ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９０（Ｍ＋１））。減圧下で濃縮した。酢酸（２８５ｍＬ）中に（Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−１，５−ジヒドロ−ピロール−２−オンの粗生成物を溶解させ、ナトリウムシアノボロハイドライド（７．２ｇ．１１４ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で１．７５時間撹拌し減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル中に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水及び飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で溶液を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（１０〜３０％の酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、黄色の油状物としての（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン（１８．０ｇ、５３％）、及び油状物としての（３Ｓ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン（０．９２ｇ、２．７％）を得た。
【００８４】
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８，７．８Ｈｚ），７．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），５．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７，６．２Ｈｚ），３．４７−３．３９（ｍ，１Ｈ），２．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），２．７０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．３，６．９，５．２Ｈｚ），１．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２１．８，１０．４Ｈｚ），１．４８（ｓ，３Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋１）。
塩の形成：トシレート  −  １当量のｐ−トルエンスルホン酸一水和物を添加し、イソプロパノールから結晶化させた。収率８５％、ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋１）。
塩の形成：塩酸塩  −  １当量の塩酸を含むジエチルエーテルを添加して塩酸塩を形成させ、イソプロパノールから再結晶化させた。収率６３％、ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋１）。
【００８５】
（３Ｓ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９２（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．７８−７．７０（ｍ，３Ｈ），７．６４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３９−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．１２（ｍ，２Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），３．５０−３．４３（ｍ，１Ｈ），２．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），２．４３−２．３３（ｍ，１Ｈ），２．０９−２．０２（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋１）。
塩の形成：トシレート−１当量のｐ−トルエンスルホン酸一水和物を添加し、イソプロパノール−ヘプタンから結晶化させた。８０％、ＭＳ、ｍ／ｚを得る：５９２（Ｍ＋１）。
【００８６】
ＣＢ１及びＣＢ２のインビトロ機能アッセイ：
抗体捕捉  ＳＰＡ  ＧＴＰ−γ−３５Ｓ結合：
ヒト又はラットのＣＢ１又はＣＢ２受容体を発現する細胞膜において、（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オン  ４−メチルベンゼンスルホネート（「実施例２」と称する）の、アンタゴニスト／逆アゴニストとしての機能的ＧＴＰ−結合を試験した。改良された抗体捕捉技術（ＤｅＬａｐｐら、１９９９）を使用した９６穴フォーマットでＧＴＰ−γ３５Ｓ結合を測定した。ＧＴＰ−結合アッセイ緩衝液（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）、ＣＢ１又はＣＢ２を発現するＣＨＯ又はＳｆ９細胞膜（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ボストン、ＭＡ、前述（ＤｅＬａｐｐら、１９９９）したとおり膜を調製）実施例２及び５００ｐＭのＧＴＰ−γ−３５Ｓ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ボストン、ＭＡ）を、室温で３０分間簡単に培養した。飽和量の完全アゴニスト（メタナンダミド（ｍｅｔｈａｎａｎｄａｍｉｄｅ））の存在下、アンタゴニスト用量反応を行った。０．２７％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ４０界面活性剤（Ｒｏｃｈｅ社、インディアナ州インディアナポリス）、抗Ｇｉ抗体（１：３００の最終希釈；Ｃｏｖａｎｃｅ社、ニュージャージー州プリンストン）及び１．２５ｍｇの抗ウサギ抗体シンチレーション近接アッセイビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を含有する混合物を添加し、プレートを封止し、更に３時間培養した。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＳ−６Ｒ遠心分離機を使用してプレートを７００×ｇで１０分間遠心分離し、Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘシンチレーションカウンタ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、マサチューセッツ州ボストン）を使用して１ウェルあたり１分間カウントした。
【００８７】
データを解析する際、全てのウェルからノイズを引いた。アゴニスト／逆アゴニスト用量反応データを、完全アゴニスト（メタナンダミド）反応に対して規格化することによって、アゴニスト有効性率を測定した。メタナンダミドの飽和濃度で生成した結果に対して規格化することにより、アンタゴニストの阻害率データを算出した。データを、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ  ａｎｄ  ＸＬＦｉｔ３（ＩＤＢＳ社、カリフォルニア州エメリービル）を用い、４パラメータのロジスティックフィットを使用して解析した。Ｋｂ値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ関係式の改変形：
Ｋｂ＝ＩＣ５０／（１＋［アゴニスト］／ＥＣ５０）を使用して決定した
（式中、ＩＣ５０は置換曲線の４パラメータフィットから決定し、［アゴニスト］＝完全アゴニストのＥＣ５０であり、ＥＣ５０は完全アゴニスト濃度反応曲線の４パラメータフィットから決定した）（ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆ  １９７３）。少なくとも３つの独立の測定値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）の平均として、平均Ｋｂ値を算出した。
【００８８】
表１は、ヒト又はラットのＣＢ１受容体を発現するＣＨＯ細胞又はヒトＣＢ２受容体を発現するＳｆ９細胞における、実施例２のアンタゴニスト／逆アゴニスト特性をまとめたものである。実施例２がヒトＣＢ２受容体に対する顕著なアンタゴニスト作用を有さずに、強力なヒト及びラットＣＢ１アンタゴニスト作用を示すと結論づけられる。上記データは、実施例２が、ヒトＣＢ２受容体のアンタゴニスト作用を有さない、ラット及びヒト受容体における強力なＣＢ１アンタゴニスト／逆アゴニストであることを示す。
【００８９】
表２は、ヒトＣＢ１又はＣＢ２受容体を発現する細胞からのＳｆ９細胞膜における、実施例２のアゴニスト特性をまとめたものである。これらのデータは、実施例２が、ゼロ未満のアゴニスト効果（表２）により証明されるとおり、ヒトＣＢ１受容体の逆アゴニストであることを証明するものであり、すなわち当該化合物がｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＢ１受容体のベース構成的活性を減少させたことを示すものである。実施例２は、検出できる程のＣＢ２アゴニスト活性を何ら示していない（表２）。
【００９０】
参考文献：
ＤｅＬａｐｐ  ＮＷ，ＭｃＫｉｎｚｉｅ  ＪＨ，Ｓａｗｙｅｒ  ＢＤ，Ｖａｎｄｅｒｇｒｉｆｆ  Ａ，Ｆａｌｃｏｎｅ  Ｊ，ＭｃＣｌｕｒｅ  Ｄ及びＦｅｌｄｅｒ  ＣＣ（１９９９）、  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ［３５Ｓ］ｇｕａｎｏｓｉｎｅ−５’−Ｏ−（３−ｔｈｉｏ）ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｏｖａｒｙ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｒａｔ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ａｎｔｉ−Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  ａｓｓａｙ（抗Ｇタンパク質シンチレーション近接アッセイを使用したチャイニーズハムスター卵巣細胞由来及びラット線条体由来の膜におけるコリン作動性ムスカリン受容体に媒介される［３５Ｓ］グアノシン−５’−Ｏ−（３−チオ）三リン酸結合の測定）、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ２８９：９４６−９５５。
Ｃｈｅｎｇ  ＹＣ及びＰｒｕｓｏｆｆ  ＷＨ．１９７３、Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ（Ｋｉ）  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｈｉｃｈ  ｃａｕｓｅｓ  ５０  ｐｅｒ  ｃｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（Ｉ５０）  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｒｅａｃｔｉｏｎ（阻害定数（Ｋｉ）と酵素反応の５０％阻害（Ｉ５０）を引き起こす阻害剤濃度との関係）、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２２：３０９９−３１０８。
【００９１】
表１：
ヒト又はラットのＣＢ１又はＣＢ２受容体を発現するＣＨＯ又はＳｆ９細胞膜における、実施例２の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏＣＢ１及びＣＢ２アンタゴニスト／逆アゴニストの機能的ＧＴＰ−結合
【表１】
2010507589.tif 000022
【００９２】
表２：
ヒト受容体を発現するＳｆ９細胞からの細胞膜における、ｉｎ  ｖｉｔｒｏＣＢ１及びＣＢ２アゴニストの化合物２へのＧＴＰ−結合
【表２】
2010507589.tif 000023
【００９３】
強制水泳試験（ＦＳＴ）：
ＮＩＨ雄Ｓｗｉｓｓマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、体重２０〜２５ｇ）を試験の７〜１０日前に入手した。１ケージあたり１２匹のマウスを収容した。２５〜３０ｇの体重の動物だけを試験した。試験の日、投薬の少なくとも１時間前に、動物を試験室に入れた。投薬の際、各投薬の間に６〜８分間の間隔を置き、マウスにビヒクル（１％ＣＭＣ、０．５％ＳＬＳ、０．０８％ポビドン、０．０５％消泡剤）又は実施例２を経口投与した。次に、マウスを無菌のケージに入れた（１ケージあたり４匹のマウス）。９０分後、実施例２又はビヒクルによる９０分の前処理に続き、試験を開始した。
【００９４】
マウスのＦＳＴ：
ＮＩＨ−Ｓｗｉｓｓマウスを、６ｃｍまで２２〜２５℃の水を入れた無菌のプラスチック製円筒容器（直径：１０ｃｍ、高さ：２５ｃｍ）に６分間入れた。６分間の試験のうちの最後の４分間における不動時間を記録した。マウスが身動きせず浮いているか、又はその頭を水上に保つために必要な動作のみを行っているとき、不動とみなした。ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ試験（α＝０．０５；ＪＭＰ）を用いて、ＡＮＯＶＡによりデータを解析した。ビヒクルのコントロールに対して統計的に有意な不動時間の減少が観察されるときの、化合物の最小用量として、最少有効用量（ＭＥＤ）を記録した。
【００９５】
バイオアベイラビリティ：
バイオアベイラビリティを評価する方法は当該技術分野で高く評価されている。１つのかかる参考文献としては、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  第２１巻  第５号  ３８２−３９６（２００１）が挙げられる。
【００９６】
表３：
（３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−メチル−１−（６−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−エチルアミノ］−１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピロリジン−２−オンの様々な塩の、アンタゴニスト／逆アゴニスト、選択性、（ＦＳＴ）及びバイオアベイラビリティの特性。
【表３】
2010507589.tif 000024
2010507589.tif 000025
＊ｈＣＢ１ＳＰＡ  ＧＴＰγ３５Ｓ  Ｓｆ９  Ｍｅｍ  ２２．７μｇタンパク質／ウェル  アンタゴニスト
＊＊ｔ−検定  Ｓｆ９（表３）  対  ＣＨＯ（表１）、ｐ＝０．１２７／ＮＤ＝測定できず。
【００９７】
皮質の活性化：ｃＦｏｓ活性化：
皮質及び皮質下領域の遺伝子発現及び神経化学的流出を活性化し、プロトタイプの非定型的な抗精神病薬クロザピンと相互作用する能力に関して、実施例２の製剤を解析した。
【００９８】
方法：
実験前１週間の間、雄ラット（１５５〜１７５ｇ）を収容した。１％カルボキシメチルセルロースナトリウム、０．５％ラウリル硫酸ナトリウム、０．０５％消泡剤、０．０８５％ポビドンを含むビヒクル中懸濁液中の実施例２の製剤を調製し、ラット（例えば雄ＳＤラット、１５５〜１７５ｇ）に経口投与（投与量：１又は１０ｍｇ／ｋｇ）した。コントロールのラットには、ビヒクルを投与した。１時間後に、０．４％乳酸のビヒクル溶液中８ｍｇ／ｍＬの濃度のクロザピン（Ｓｉｇｍａ社）を、８ｍｇ／ｋｇの投与量で、ｓ．ｃ．投与した。クロザピン又はクロザピン用ビヒクル投与の２時間後に、断頭によって動物を殺した（１群あたりｎ＝７〜８）。迅速に全脳を摘出し、その直後にドライアイス上でイソペンタン（２−メチルブタン）中に浸漬した。前頭前皮質（ＰＦＣ）、側座核（ＮＡｃ）及び背側線条体（ＤＬ−Ｓｔｒ）を通る冠状断面を１４μｍで裁断し、Ｆｏｓ免疫組織化学検査を実施した。以下の式を使用して、非定型インデックス（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら、１９９４）を評価した：
非定型インデックス＝（ＮＡｃＤ−ＮＡｃＶ）−（ＤＬ−ＳｔｒＤ−ＤＬ−ＳｔｒＶ）
式中、Ｆｏｓ−ｌｉ神経単位の平均数、ＮＡｃ＝側座核、Ｄ＝薬剤、Ｖ＝ビヒクル、ＤＬ−Ｓｔｒ＝背側線条体。更にＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌ’ｓ事後検定（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０３）により、一方向の分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用してデータを分析した。Ｐ＜０．０５を有意水準とした。
【００９９】
結果：
クロザピン及び実施例２の製剤はともに、個々に皮質及び皮質下のＦｏｓ反応性を強化する傾向、又は顕著な強化を示した。実施例２の製剤は、１及び１０ｍｇ／ｋｇ（経口）ともに、クロザピン単独での作用を強化することが観察された。
結論：
実施例２により、ラットの脳の前頭前皮質及び皮質下領域のｃＦｏｓ発現が強化された。クロザピンによっても、神経活性化に関する同様のスペクトラムが示された。クロザピンへの実施例２の製剤の添加により、認識機能及び陰性症状の制御にきわめて重要となる、脳域における、クロザピンにより誘発されるｃＦｏｓ発現の強化がもたらされた。クロザピン対する実施例２の製剤の全体的な効果により、腹側対背側の線条体のインパクトに関する、大きな非定型性の神経サインが生じることが観察された。
【０１００】
モノアミン神経伝達物質の放出刺激、及び認知に関連する脳領域のターンオーバー：
方法：
実験の５〜７日前に、カニューレ（ＢＡＳ社、ウェストラファイエット、ＩＮ）を用いて、雄ＳＤラット（２６０〜３００ｇ、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ社、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）の前頭前皮質（ＰＦＣ）に移植した。実験開始の約１６時間前に、カニューレにより、カニューレの下に延びる４ｍｍの膜チップを用いて、同心タイプのプローブを挿入し、前頭前皮質から微小透析液を回収し、モノアミン及びその代謝産物に関して分析した。全ての微小透析データを、３回の最終的な薬剤の事前注入における数値の平均（各群５〜６匹のラット）を１００％と定義した場合の、透析液のベース濃度からの増減率として算出した。ＡＮＯＶＡ、更にｐｏｓｔ−ｈｏｃボンフェローニ試験によりデータを分析した。
【０１０１】
結果：
実施例２の製剤の投与量がわずか１ｍｇ／ｋｇ（経口）でも、ラット皮層のモノアミン及びその代謝産物のレベルが増加した。
【０１０２】
エタノール要求行動：
アルコール嗜好ラットにおける、１２時間のエタノール消費（Ｐラット）：
高レベルのエタノール経口摂取量で選抜されたラット（Ｐラット）におけるエタノール消費を減少させる能力に関して、実施例２を評価した。更に、モチベーション又は挙動のコントロールに対する化合物の効果がエタノールによって評価できる条件下で、実施例２の効果を検討した。
【０１０３】
方法：
継続して自由にアクセスできるパラダイム下で、雌のアルコール嗜好（Ｐ）ラットにおけるアルコール消費に対する実施例２の効果を検討した。比較のため、標準的なオピオイドアンタゴニストであるナルトレキソンを用いて試験した。１５％（ｖ／ｖ）エタノールの自発的な消費をモニターした。ビヒクル（１％ＣＭＣ、０．５％ＳＬＳ、０．０８％ポビドン、０．０５％ダウコーニング消泡剤１５１０  ＵＳ）中に実施例２の製剤を懸濁し、暗サイクル開始の３時間前にｐ．ｏ．投与した。更に、赤外線センサにより自発運動を測定した。
【０１０４】
結果：
水ではなくエタノールの消費が、実施例２の製剤の経口投与によって用量依存的な態様で減少した。ナルトレキソンは、高用量において、エタノールの摂取量を減少させることができた。実施例２の製剤は、１０ｍｇ／ｋｇまでの投与量で、これらのラットの歩行活動を顕著に変化させなかった。
【０１０５】
エタノール要求行動：エタノールにより維持される、累進比率（ＰＲ）応答
エタノール摂取量を制御する動機的動因を減少させる、実施例２の能力を評価した。
方法：
応答により１５％エタノール（ｖ／ｖ）を生じさせるＰＲスケジュール下で、雌のアルコール嗜好（Ｐ）ラットを検討した。ＰＲスケジュール下では、エタノール配送に必要となる反応を、３回のエタノール供給の後、１〜２回から２回分増加させた。
【０１０６】
結果：
実施例２の製剤の投与により、エタノール要求行動及び消費エタノール量が用量依存的に減少した。実施例２の製剤は、用量依存的［Ｆ（４，２０）＝４．５２、ｐ＝０．００９］に、区切点（ラットが一定量のエタノールを得るための作業量）を減少させた。
【０１０７】
食餌モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ効果：
方法：
食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄ロングエバンスラットに、実施例２の製剤を投与した。離乳児の段階から、少なくとも１２週間、４０％の脂肪、３９％の炭水化物及び２１％のタンパク質のカロリー含量の食餌を自由摂取させることによって、ＤＩＯを作り上げた。Ｔ１７（１７ｇのビヒクル群との相違を創出するのに必要となる投与量）によって、化合物の効果を定義した。これはすなわち、ビヒクル処理と比較し、２週後の３〜４％の最小生物学的体重減少に相当する。
【０１０８】
結果：
１４日間の検討期間にわたり１日１回実施例２の製剤を経口投与することにより、累積的に摂食が減少した。摂食の減少と一致して、実施例２の製剤による１４日間の経口治療後の累積的体重減少から、Ｔ１７が０．１３ｍｇ／ｋｇであると推定された。身体組成分析を定量的核磁気共鳴（ＱＮＭＲ）により測定し、最も高い投与量においても除脂肪体重の変化が最小でありながら、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で、体脂肪量の顕著な減少を示した。
【０１０９】
非定型抗精神病薬による体重増加モデル：
方法：
痩せたメスの成体ＳＤラットを、通常の齧歯類用の餌であるＰｕｒｉｎａ  ＬａｂＤｉｅｔ  ５００１（脂肪１２．３％）及び水を自由摂取させる条件で飼育した。１つの群（ｎ＝７）を、１〜１４日目にビヒクル（１％乳酸）で処理し、一方、残りをオランザピン（２ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ）を含有するビヒクルで処理した。摂食続いて、２週間の処理期間にわたり、体重及び体脂肪量の変化をモニターした。14日間の薬物送達の後、オランザピン処理された動物（群あたりｎ＝８）を分け、１５〜２８日目に、第１の群を０．３ｍｇ／ｋｇの実施例２の製剤＋オランザピンで処理し、第２の群を１ｍｇ／ｋｇの実施例２の製剤＋オランザピンで処理し、最後の群をビヒクル＋オランザピンで処理した。
【０１１０】
結果：
ビヒクル処理のコントロールと比較し、オランザピンを１４日間にわたり１日１回処理した場合において、処理後の累積的な摂食、体重及び体脂肪量の増加を観察した。実施例２の製剤とオランザピンとによる処理では体除脂肪量を変化させることなく、実施例２の製剤を投与した２つの場合において、体脂肪量が顕著に減少した。
【０１１１】
結論：
ビヒクル処理のコントロールと比較し、実施例２の製剤を１４日間１日１回経口投与することにより、高エネルギー餌料を維持した食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄ロングエバンスラットにおいて体重の顕著な減少が見られた。コントロールに比べて体重変化を創出するのに要した実施例２の有効投与量（Ｔ１７）は、０．１３ｍｇ／ｋｇ／日であると推定された。身体組成の変化を分析した結果、観察された体重減少は、１０ｍｇ／ｋｇ（試験の中で最も高い投与量）までの投与量において、体脂肪量の顕著な減少によるものであることがわかった。２週間にわたるオランザピン処理と並行した、１４日間にわたる実施例２の製剤の１日１回経口投与を受けた雌ＳＤラットでは、オランザピン処理コントロールと比較し、体脂肪量の顕著な減少が助長されると評価できる。
【国際調査報告】
2010507589.tif 000030
2010507589.tif 000031
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