(57)【要約】  活性成分としてＧＨＲＨ分子を含む安定化された固体および液体医薬製剤、およびより具体的には、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドを含むＧＨＲＨ類似体を開示する。該製剤には陰イオン界面活性剤および非還元糖を含み、約４．０乃至約７．５のｐＨを有する。また、様々な状態の治療のための該製剤の使用、該製剤を調製する方法、さらに、それを含むキットを開示する。
2010523501.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固体医薬製剤であって
−ＧＨＲＨ分子と、
−陰イオン界面活性剤と、
−非還元糖と、を含み、
前記ＧＨＲＨ分子は式Ａ：
Ｘ−ＧＨＲＨペプチド（Ａ）
のＧＨＲＨ類似体であり、
前記ＧＨＲＨペプチドは式Ｂ：
Ａ１−Ａ２−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｌｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａ８−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａ１３−Ｌｅｕ−Ａ１５−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａ１８−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ２４−Ａ２５−ｌｌｅ−Ａ２７−Ａ２８−Ａｒｇ−Ａ３０−Ｒ０（Ｂ）（配列番号１）
のペプチドであり、式中、
Ａ１はＴｙｒまたはＨｉｓであり、
Ａ２はＶａｌまたはＡｌａであり、
Ａ８はＡｓｎまたはＳｅｒであり、
Ａ１３はＶａｌまたはｌｌｅであり、
Ａ１５はＡｌａまたはＧｌｙであり、
Ａ１８はＳｅｒまたはＴｙｒであり、
Ａ２４はＧｌｎまたはＨｉｓであり、
Ａ２５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、
Ａ２７はＭｅｔ、ｌｌｅまたはＮｌｅであり、
Ａ２８はＳｅｒまたはＡｓｎであり、
Ａ３０は結合、または１個乃至最大１５個の残基のアミノ酸配列であり、
Ｒ０はＮＨ2またはＮＨ−（ＣＨ2）ｎ−ＣＯＮＨ2（ｎ＝１〜１２）であり、
Ｘは、前記ペプチドのＮ末端を介して固定された疎水性尾部であり、前記疎水性尾部は、５個乃至７個の原子の主鎖を画定し、
前記主鎖は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、またはＣ6-12アリルによって置換することができ、前記主鎖は、前記主鎖の少なくとも２個の原子に連結される少なくとも１つの剛直化部分を含み、
前記部分は、二重結合、三重結合、飽和または不飽和Ｃ3-9シクロアルキル、またはＣ6-12アリルである、製剤。
【請求項２】
Ｘは、
【化１】
2010523501.tif 000013
【化２】
2010523501.tif 000014
【化３】
2010523501.tif 000015
である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
Ａ３０は、
（ａ） 結合、
（ｂ） 天然ＧＨＲＨペプチド（配列番号６）の３０位〜４４位に対応するアミノ酸配列、および
（ｃ） そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有する、配列番号６の前記アミノ酸配列である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記ＧＨＲＨペプチドは、
（ａ）配列番号２または３のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（ｂ）配列番号４または５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
または
（ｃ）（ａ）そのＣ末端からの１乃至１４のアミノ酸欠失を有する前記ポリペプチドである、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
前記ＧＨＲＨ類似体は（ヘキセノイルトランス−３）ｈＧＨＲＨ（１−４４）ＮＨ2（配列番号７）である、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
前記製剤は凍結乾燥される、請求項１乃至請求項５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７】
前記非還元糖はトレハロースまたはスクロースである、請求項１乃至請求項６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項８】
前記非還元糖はトレハロースである、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
前記非還元糖はスクロースである、請求項７に記載の製剤。
【請求項１０】
前記陰イオン界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステルである、請求項１乃至請求項９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１】
前記陰イオン界面活性剤はポリソルベート−２０である、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
水に懸濁させた際に計測すると約４．０乃至約７．５のｐＨを有する、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３】
前記製剤は増量剤をさらに含む、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４】
前記増量剤はマンニトールである、請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
前記製剤は抗酸化剤をさらに含む、請求項１乃至請求項１４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１６】
前記抗酸化剤はメチオニンである、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１７】
液体医薬製剤であって、
−ＧＨＲＨ分子と、
−陰イオン界面活性剤と、
−非還元糖と、を含み、
前記製剤は約４．０乃至約７．５のｐＨを有し、
前記ＧＨＲＨ分子は、式Ａ：
Ｘ−ＧＨＲＨペプチド（Ａ）、
のＧＨＲＨ類似体であって、
前記ＧＨＲＨペプチドは式Ｂ：
Ａ１−Ａ２−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｌｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａ８−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａ１３−Ｌｅｕ−Ａ１５−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａ１８−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ２４−Ａ２５−ｌｌｅ−Ａ２７−Ａ２８−Ａｒｇ−Ａ３０−Ｒ０（Ｂ）（配列番号１）
のペプチドであり、式中、
Ａ１はＴｙｒまたはＨｉｓであり、
Ａ２はＶａｌまたはＡｌａであり、
Ａ８はＡｓｎまたはＳｅｒであり、
Ａ１３はＶａｌまたはｌｌｅであり、
Ａ１５はＡｌａまたはＧｌｙであり、
Ａ１８はＳｅｒまたはＴｙｒであり、
Ａ２４はＧｌｎまたはＨｉｓであり、
Ａ２５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、
Ａ２７はＭｅｔ、ｌｌｅまたはＮｌｅであり、
Ａ２８はＳｅｒまたはＡｓｎであり、
Ａ３０は結合、または１個乃至最大１５個の残基のアミノ酸配列であり、
Ｒ０はＮＨ2またはＮＨ−（ＣＨ2）ｎ−ＣＯＮＨ2（ｎ＝１〜１２）であり、
Ｘは、ペプチドのＮ末端を介して固定された疎水性尾部であり、前記疎水性尾部は、５個乃至７個の原子の主鎖を画定し、
前記主鎖は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、またはＣ6-12アリルによって置換することができ、前記主鎖は、前記主鎖の少なくとも２個の原子に連結される少なくとも１つの剛直化部分を含み、
前記部分は、二重結合、三重結合、飽和または不飽和Ｃ3-9シクロアルキル、またはＣ6-12アリルである、製剤。
【請求項１８】
Ｘは、
【化４】
2010523501.tif 000016
【化５】
2010523501.tif 000017
【化６】
2010523501.tif 000018
である、請求項１７に記載の製剤。
【請求項１９】
Ａ３０は、
（ａ） 結合、
（ｂ） 天然ＧＨＲＨペプチド（配列番号６）の３０位〜４４位に対応するアミノ酸配列、または
（ｃ） そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有する、前記配列番号６である、請求項１７に記載の製剤。
【請求項２０】
前記ＧＨＲＨペプチドは、
（ａ） 配列番号２または３のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（ｂ） 配列番号４または５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、または
（ｃ） そのＣ末端からの１乃至１４のアミノ酸欠失を有する、前記（ａ）のポリペプチド、である、請求項１７に記載の製剤。
【請求項２１】
前記ＧＨＲＨ類似体は（ヘキセノイルトランス−３）ｈＧＨＲＨ（１−４４）ＮＨ2（配列番号７）である、請求項１７に記載の製剤。
【請求項２２】
前記非還元糖はトレハロースまたはスクロースである、請求項１７乃至請求項２１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２３】
前記非還元糖はトレハロースである、請求項２２に記載の製剤。
【請求項２４】
前記非還元糖はスクロースである、請求項２２に記載の製剤。
【請求項２５】
前記非還元糖は約０．１％乃至約５％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する、請求項１７乃至請求項２４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２６】
前記非還元糖は約２％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する、請求項２５に記載の製剤。
【請求項２７】
前記陰イオン界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステルである、請求項１７乃至請求項２６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２８】
前記陰イオン界面活性剤はポリソルベート−２０である、請求項２７に記載の製剤。
【請求項２９】
前記界面活性剤は約０．００１％（ｗ／ｗ）乃至約０．１％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する、請求項１７乃至請求項２８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３０】
前記界面活性剤は約０．０１％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する、請求項２９に記載の製剤。
【請求項３１】
約５．０乃至約６．０のｐＨを有する、請求項１７乃至請求項３０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３２】
約５．０のｐＨを有する、請求項３１に記載の製剤。
【請求項３３】
約５．５のｐＨを有する、請求項３１に記載の製剤。
【請求項３４】
約６．０のｐＨを有する、請求項３１に記載の製剤。
【請求項３５】
緩衝液をさらに含み、前記緩衝液は、（ｉ）琥珀酸緩衝液、（ｉｉ）ヒスチジン緩衝液、（ｉｉｉ）リン酸塩緩衝液、または（ｉｖ）（ｉ）乃至（ｉｉｉ）のいずれかの組み合わせである、請求項１７乃至請求項３４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３６】
前記製剤は増量剤をさらに含む、請求項１７乃至請求項３５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３７】
前記増量剤はマンニトールである、請求項３６に記載の製剤。
【請求項３８】
前記増量剤は約１％乃至約１０％（ｗ／ｗ）の量で存在する、請求項３６または３７に記載の製剤。
【請求項３９】
前記増量剤は約４％（ｗ／ｗ）の量で存在する、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４０】
前記製剤は抗酸化剤をさらに含む、請求項１７乃至請求項３９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４１】
前記抗酸化剤はメチオニンである、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４２】
−［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドと、
−約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０と、
−約２％（ｗ／ｗ）の（ｉ）トレハロース、（ｉｉ）スクロース、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のいずれかの組み合わせと、
−約４％（ｗ／ｗ）のマンニトールと、
−（ｉ）琥珀酸緩衝液、（ｉｉ）ヒスチジン緩衝液、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）のいずれかの組み合わせと、を含み、
前記製剤は約５．０乃至約６．０のｐＨを有する、請求項１７に記載の製剤。
【請求項４３】
−［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドと、
−約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０のと、
−約２％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
−約４％（ｗ／ｗ）のマンニトールと、
−ヒスチジン緩衝液と、を含み、
前記製剤は約６．０のｐＨを有する、請求項１７に記載の製剤。
【請求項４４】
−［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドと、
−約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０と、
−約２％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
−約４％（ｗ／ｗ）のマンニトールと、
−琥珀酸緩衝液と、を含み、
前記製剤は約５．５のｐＨを有する、請求項１７に記載の製剤。
【請求項４５】
−［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドと、
−約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０と、
−約２％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
−約４％（ｗ／ｗ）のマンニトールと、
−琥珀酸緩衝液と、を含み、
前記製剤は約５．０のｐＨを有する、請求項１７に記載の製剤。
【請求項４６】
−［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドと、
−約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０と、
−約２％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、
−約４％（ｗ／ｗ）のマンニトールと、
−琥珀酸緩衝液と、を含み、
前記製剤は約５．５のｐＨを有する、請求項１７に記載の製剤。
【請求項４７】
請求項１７乃至請求項４６のいずれか１項に記載の液体製剤を凍結乾燥させることによって調製される、凍結乾燥医薬製剤。
【請求項４８】
ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、あるいは慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つの治療のための、（ａ）請求項１７乃至請求項４６のいずれか１項に記載の液体医薬製剤、（ｂ）請求項１乃至請求項１６のいずれか１項に記載の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）請求項４７に記載の凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、の使用。
【請求項４９】
前記滅菌水溶液は滅菌水である、請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
液体医薬製剤（ａ）、（ｂ）または（ｃ）は、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内経路によって投与するためのものである、請求項４８または請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、または慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つの治療の薬剤の調製のための、（ａ）請求項１７乃至請求項４６のいずれか１項に記載の液体医薬製剤、（ｂ）請求項１乃至請求項１６のいずれか１項に記載の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）請求項４７に記載の凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、の使用。
【請求項５２】
前記滅菌水溶液は滅菌水である、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記液体医薬製剤（ａ）、（ｂ）または（ｃ）は、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内経路によって投与するためのものである、請求項５１または５２に記載の使用。
【請求項５４】
ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、または慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つの治療で使用するための、（ａ）請求項１７乃至請求項４６のいずれか１項に記載の液体医薬製剤、（ｂ）請求項１乃至請求項１６のいずれか１項に記載の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）請求項４７に記載の凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤。
【請求項５５】
前記液体医薬製剤（ａ）、（ｂ）または（ｃ）は、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内経路によって投与するためのものである、請求項５４に記載の製剤。
【請求項５６】
被験体において、ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、または慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つを治療するための方法であって、前記被験体に対して、（ａ）請求項１７乃至請求項４６のいずれか１項に記載の液体医薬製剤、（ｂ）請求項１乃至請求項１６のいずれか１項に記載の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）請求項４７に記載の凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤を投与するステップを含む、方法。
【請求項５７】
前記投与は、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内経路によるものである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
滅菌容器において、請求項１乃至請求項１６のいずれか１項に記載の固体医薬製剤、または請求項４７に記載の凍結乾燥製剤を含む、キット。
【請求項５９】
滅菌水溶液をさらに含む、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記滅菌水溶液は滅菌水である、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
ＧＨＲＨ分子の安定化された凍結乾燥医薬製剤を調製する方法であって、
（ａ）水溶液においてＧＨＲＨ分子と、非還元糖と、陰イオン界面活性剤とを混合することにより、液体医薬製剤を得るステップ、を含む、方法。
【請求項６２】
（ｂ）ステップ（ａ）の前記液体製剤を凍結乾燥させるステップ、をさらに含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記凍結乾燥製剤は、約４０℃以下において少なくとも６ヶ月間安定している、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記凍結乾燥製剤は、約４０℃以下において少なくとも４ヶ月間安定している、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記凍結乾燥製剤は、約４０℃以下において少なくとも３ヶ月間安定している、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
前記凍結乾燥製剤は、約４０℃以下において少なくとも２ヶ月間安定している、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
前記凍結乾燥製剤は、約４０℃以下において少なくとも１ヶ月間安定している、請求項６１に記載の方法。
【請求項６８】
前記滅菌水溶液によって前記凍結乾燥製剤を懸濁させるステップ（ｃ）をさらに含む、請求項６２乃至請求項６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記滅菌水溶液は滅菌水である、請求項６８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体医薬製剤および固体医薬製剤を含む、ＧＨＲＨ分子の医薬製剤に関する。さらに、本発明は、こうしたＧＨＲＨ分子の医薬製剤の調製の方法、およびその使用に関する
【背景技術】
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§  １１９（ｅ）に基づいて、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれている、２００７年４月４日に出願された米国暫定出願第６０／９０９，９８５号の利益を主張するものである。
【０００３】
成長ホルモン（ＧＨ）またはソマトトロピンは、脳下垂体によって分泌される。その活性は若い生命体の線形成長だけでなく、その成体の段階における完全性の維持のために必須である。ＧＨは、成長因子（インスリン様成長因子−１またはＩＧＦ−Ｉ）またはその受容体（表皮性成長因子またはＥＧＦ）の合成を刺激することにより、末梢器官に直接または間接的に作用する。ＧＨの直接作用は反インスリンと称される種類のものであり、脂肪組織レベルで脂肪分解に有利に働く。ＩＧＦ−Ｉ（ソマトメジンＣ）合成および分泌におけるその作用によって、ＧＨは、軟骨および骨の成長（構造的成長）、タンパク質合成、および筋肉および皮膚を含む複数の末梢器官における細胞増殖を刺激する。成体において、ＧＨはタンパク質同化状態の維持に関与し、外傷の後の組織の再生現象において主要な働きをする。
【０００４】
脳下垂体によるＧＨの分泌は、主に２つの視床下部のペプチドである、ソマトスタチンおよび成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ、成長ホルモン放出因子またはＧＲＦとしても知られる）によって制御される。ソマトスタチンがその分泌を抑制する一方で、ＧＨＲＨはこれを刺激する。
【０００５】
全ての公知のＧＨＲＨ分子の中で、本発明において定義される、疎水性尾部を含むＧＨＲＨ類似体は、生物学的環境においてより高いタンパク質分解の安定性を有することがわかっているヒトＧＨＲＨの改変型または類似体で構成されており、このため、これらの類似体は、より長い作用の持続時間を示し、その結果、成長ホルモン分泌およびインスリン様成長因子−１の合成が促進される（米国特許第５，８６１，３７９号および第５，９３９，３８６号）。天然のＧＨＲＨ（１−４４）アミドと比較して、そのプラズマ安定性および薬理学的な特性が優れているため、これらのＧＨＲＨ類似体は、例えば嚢胞性線維症およびＣＯＰＤに関連する衰弱（国際出願第ＷＯ  ０５／０３７３０７号）、股関節骨折からの回復、高齢世代における虚弱、免疫反応およびＨＩＶ関連のリポジストロフィの向上（米国特許第７，３１６，９９７号）におけるいくつかの医学的状態において治療効果をもたらすことが示された。
【０００６】
実用上、その製造プロセス、以降の処理および保管時において、薬学的な関心対象となるペプチドまたはタンパク質化合物の物理的および化学的な完全性を保全することは非常に重要である。生物学的有効性および効力の損失は、物理的（例えば、二次的およびより高次の構造における凝集、変性、変更）および化学的（例えば、個々のアミノ酸の酸化、脱アミド化、異性化）完全性における変化と関連している。
【０００７】
タンパク質およびペプチドは、特に高温で分解しやすい。低温では、概して、ペプチド／タンパク質分解は減少する。しかし、室温、すなわち約２０℃乃至２５℃でタンパク質を保管することがより経済的である。概して、室温（約２０℃乃至約２５℃）または冷蔵（約２℃乃至約８℃）における保管のために製剤安定性が望ましい。
【０００８】
さらに、製造時の処理、その長期の保管、および投与前の処理に関する、安定性の問題も存在する。長期の保管は、凍結、凍結乾燥、乾燥または脱水化によって実行可能である。これらの生物学的タンパク質の長期の保管方法は、分解、凝集、天然の構造の変性、アンフォールディングおよび／または非特異的吸着を妨げる。しかし、凍結乾燥プロセスそのものが困難を示している。凍結プロセス時に液体の容量が減少するにつれて、有効な塩濃度は劇的に増加し、これによって、タンパク質が変性し、再構成において有効な治療的活性が低下することがある。さらに、凍結プロセスにおける氷晶の形成は変性を引き起こし、さらに、利用可能な生物活性ペプチドまたはタンパク質の有効量を低減させることがある。
【０００９】
いくつかの変性の問題は、タンパク質分解、酵素分解、酸化、ｐＨに関する変性等の特定のアミノ酸またはいくつかのアミノ酸配列に特有である。ＧＨＲＨのアミノ酸配列は、液体の状態における長期の保管時および凍結乾燥または他の固化プロセス時の変性に左右されることが公知である。
【００１０】
したがって、長期の保管後にその生物活性の保持を向上させるために、ＧＨＲＨ分子の改善された製剤を提供する必要がある。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ＧＨＲＨ分子の医薬製剤または組成物、その調製方法、およびその使用に関する。
【００１２】
したがって、一態様において、本発明は、ＧＨＲＨ分子、陰イオン界面活性剤、および非還元糖を含む乾燥または固体医薬製剤に関する。一実施形態において、該製剤は、水に懸濁させた際に計測すると約４．０乃至約７．５のｐＨを有する。さらなる実施形態において、該製剤は、水に懸濁させた際に計測すると約４．０乃至約７．０のｐＨを有する。一実施形態において、固体製剤は凍結乾燥製剤である。一実施形態において、固体製剤は無水製剤である。本発明に従い、「固体」という用語は、凍結乾燥形態、無水形態、凍結形態および任意の他の固体形態を含むが、これらに限定しない。
【００１３】
本発明はまた、ＧＨＲＨ分子、陰イオン界面活性剤、および非還元糖を含み、約４．０乃至７．５のｐＨを有する液体医薬製剤に関する。一実施形態において、該製剤は約４．０乃至約７．０のｐＨを有する。
【００１４】
本発明は、さらに、上記の液体製剤を凍結乾燥または脱水化することによって調製される凍結乾燥または無水医薬製剤に関する。
【００１５】
本発明の液体医薬製剤は凍結乾燥または脱水に適しており、少なくとも１週、少なくとも２週、少なくとも３週、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月または少なくとも６ヶ月等の長期間、凍結乾燥形態、乾燥形態または固体形態で製剤を保存する場合に、高いＧＨＲＨ分子安定性を提供する。本発明の液体医薬製剤は、凍結乾燥または脱水に適しており、約２℃乃至約８℃、約２０℃乃至約２５℃、約４０℃、または約４０℃未満等の異なる温度条件において凍結乾燥／乾燥形態で製剤を保存する場合により高いＧＨＲＨ分子安定性を提供する。
【００１６】
一実施形態によると、ＧＨＲＨ分子は式ＡのＧＨＲＨ類似体：Ｘ−ＧＨＲＨペプチド（Ａ）であって、
ＧＨＲＨペプチドは式Ｂ：
Ａ１−Ａ２−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｌｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａ８−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａ１３−Ｌｅｕ−Ａ１５−ＧｌＮ−Ｌｅｕ−Ａ１８−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ２４−Ａ２５−ｌｌｅ−Ａ２７−Ａ２８−Ａｒｇ−Ａ３０−Ｒ０（Ｂ）（配列番号１）のペプチドであって、
式中、
Ａ１はＴｙｒまたはＨｉｓであり、
Ａ２はＶａｌまたはＡｌａであり、
Ａ８はＡｓｎまたはＳｅｒであり、
Ａ１３はＶａｌまたはｌｌｅであり、
Ａ１５はＡｌａまたはＧｌｙであり、
Ａ１８はＳｅｒまたはＴｙｒであり、
Ａ２４はＧｌｎまたはＨｉｓであり、
Ａ２５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、
Ａ２７はＭｅｔ、ｌｌｅまたはＮｌｅであり、
Ａ２８はＳｅｒまたはＡｓｎであり、
Ａ３０は結合、または１個乃至最大１５個の残基のアミノ酸配列であり、
Ｒ０はＮＨ2またはＮＨ−（ＣＨ2）ｎ−ＣＯＮＨ2（ｎ＝１〜１２）であり、
Ｘは、ペプチドのＮ末端を介して固定された疎水性尾部であり、疎水性尾部は、５個乃至７個の原子の主鎖を画定し、主鎖は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、またはＣ6-12アリルによって置換することができ、主鎖は、前記主鎖の少なくとも２個の原子に連結される少なくとも１つの剛直化部分を含み、前記部分は、二重結合、三重結合、飽和または不飽和Ｃ3-9シクロアルキル、またはＣ6-12アリルである。
【００１７】
さらなる実施形態において、式ＡのＸは、
【化１】
2010523501.tif 000003
【００１８】
【化２】
2010523501.tif 000004
【００１９】
【化３】
2010523501.tif 000005
【００２０】
【化４】
2010523501.tif 000006
【００２１】
である。
【００２２】
一実施形態において、式ＢのＡ３０は、
（ａ）結合、
（ｂ）天然ＧＨＲＨペプチド（配列番号６）の３０位〜４４位に対応するアミノ酸配列、および
（ｃ）そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有する、配列番号６のアミノ酸配列である。
【００２３】
一実施形態において、ＧＨＲＨペプチドは、
（ａ）配列番号２または３のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（ｂ）配列番号４または５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、または
（ｃ）（ａ）そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有するポリペプチドである。
【００２４】
一実施形態において、ＧＨＲＨペプチドは、
（ａ）配列番号２または３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、
（ｂ）配列番号４または５のアミノ酸配列を有するポリペプチド、または
（ｃ）（ａ）そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有するポリペプチドである。
【００２５】
別の実施形態において、ＧＨＲＨ類似体は（ヘキセノイルトランス−３）ｈＧＨＲＨ（１−４４）ＮＨ２（配列番号７）である。
【００２６】
一実施形態において、上記固体製剤は凍結乾燥製剤である。
【００２７】
上記の液体製剤内のＧＨＲＨ分子濃度は、特定の範囲に制限されない。例えば、上記の液体製剤内のＧＨＲＨ分子濃度は、約１ｍｇ乃至約２０ｍｇ／ｍｌの間（例えば１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌまたは２０ｍｇ／ｍｌ）とし得る。
【００２８】
本発明の実施形態によると、固体製剤および／または液体製剤の非還元糖はトレハロースまたはスクロースである。非還元糖は好適には安定化に効力がある量で存在する。一実施形態において、非還元糖はトレハロースである。別の実施形態において、非還元糖はスクロースである。一実施形態において、非還元糖は約０．１％（ｗ／ｗ）乃至約５％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。さらなる実施形態において、非還元糖は約２％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。非還元糖濃度および本明細書中に記載される以下の部分のいずれかの濃度は、液体製剤または固体製剤の懸濁によって得られる溶液の濃度に相当する。
【００２９】
本発明の実施形態によると、固体製剤および／または液体製剤の陰イオン界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステルである。さらなる実施形態において、ポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステルはポリソルベート−２０である。一実施形態において、陰イオン界面活性剤は界面に関する応力を防ぐために有効な量で存在する。界面に関する応力は、凝集、沈殿、アンフォールディング等を含むが、これらに限定しない。別の実施形態において、界面活性剤は、約０．００１％（ｗ／ｗ）乃至約０．１％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。さらなる実施形態において、界面活性剤は約０．０１％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。
【００３０】
本発明の実施形態によると、固体製剤および／または液体製剤は、任意で、さらに増量剤を含む。一実施形態において、増量剤は、液体製剤または固体製剤を懸濁することによって得られる溶液の所望の等張性を与えるために有効な量で存在する。一実施形態において、増量剤はマンニトールである。別の実施形態において、増量剤は約１％（ｗ／ｗ）乃至約１０％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。さらなる実施形態において、増量剤は約４％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。
【００３１】
本発明の別の実施形態によると、固体製剤および／または液体製剤は、任意で、さらに抗酸化剤を含む。一実施形態において、抗酸化剤はメチオニンである。一実施形態において、抗酸化剤は抗酸化作用に有効な量で存在する。別の実施形態において、抗酸化剤は約０．１ｍＭ乃至約１０ｍＭの濃度で存在する。さらなる実施形態において、抗酸化剤は約１ｍＭの濃度で存在する。
【００３２】
本発明の実施形態によると、固体製剤および／または液体製剤は、実質的にポリエチレングリコールを含まない。さらなる実施形態において、固体製剤および／または液体製剤はポリエチレングリコールを含まない。一実施形態において、固体製剤および／または液体製剤のポリエチレングリコール濃度は、安定化に有効な濃度未満である。一実施形態において、固体製剤および／または液体製剤は約０．１％（ｗ／ｗ）未満のポリエチレングリコールを含む。別の実施形態において、固体製剤および／または液体製剤は、約０．０１％未満のポリエチレングリコールを含む。さらなる実施形態において、固体製剤および／または液体製剤は、約０．００１％（ｗ／ｗ）未満のポリエチレングリコールを含む。
【００３３】
本発明の一実施形態によると、製剤は約５．０乃至約６．０のｐＨを有する。別の実施形態によると、製剤は約５．０のｐＨを有する。さらなる実施形態によると、製剤は約５．５のｐＨを有する。別のさらなる実施形態によると、製剤は約６．０のｐＨを有する。一実施形態において、製剤はさらに緩衝液を含む。別の実施形態において、緩衝液は（ｉ）琥珀酸緩衝液、（ｉｉ）ヒスチジン緩衝液、（ｉｉｉ）リン酸塩緩衝液、または（ｉｖ）（ｉ）乃至（ｉｉｉ）の任意の組み合わせを含む。実施形態において、ｐＨは凍結乾燥または固化以前の液体製剤のもの、または凍結乾燥製剤または固体製剤の液体形態への懸濁によって調製される液体製剤のものである。
【００３４】
一実施形態によると、製剤は［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド、約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０、約２％（ｗ／ｗ）の（ｉ）トレハロース、（ｉｉ）スクロース、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の任意の組み合わせ、約４％（ｗ／ｗ）のマンニトール、ならびに（ｉ）琥珀酸緩衝液、（ｉｉ）ヒスチジン緩衝液、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の任意の組み合わせを含み、製剤は約５．０乃至約６．０のｐＨを有する。
【００３５】
さらなる実施形態によると、製剤は、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド、約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０、約２％（ｗ／ｗ）のスクロース、約４％（ｗ／ｗ）のマンニトール、およびヒスチジン緩衝液を含み、製剤は約６．０のｐＨを有する。
【００３６】
さらなる実施形態によると、製剤は［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド、約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０、約２％（ｗ／ｗ）のスクロース、約４％（ｗ／ｗ）のマンニトール、および琥珀酸緩衝液を含み、製剤は約５．５のｐＨを有する。
【００３７】
さらなる実施形態によると、製剤は［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド、約０．０１％（ｗ／ｗ）のポリソルベート−２０、約２％（ｗ／ｗ）のスクロース、約４％（ｗ／ｗ）のマンニトール、および琥珀酸緩衝液を含み、製剤は約５．０のｐＨを有する。
【００３８】
さらなる実施形態によると、製剤は［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド、約０．０１％（ｗ／ｗ）ポリソルベート−２０、約２％（ｗ／ｗ）トレハロース、約４％（ｗ／ｗ）マンニトール、および琥珀酸緩衝液を含み、製剤は約５．５のｐＨを有する。
【００３９】
本発明はさらに、薬剤の調製のための、または薬剤としての（ａ）上記の液体医薬製剤、（ｂ）滅菌水溶液によって上記の固体医薬製剤を懸濁することにより調製された液体医薬製剤、または（ｃ）滅菌水溶液によって上記の液体医薬製剤を凍結乾燥させることにより得られる凍結乾燥医薬製剤を懸濁することにより調製される液体医薬製剤の使用に関する。
【００４０】
本発明はさらに、ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、ＧＨ欠乏、腹部肥満、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患に関連する衰弱、あるいは慢性疾患に関連する栄養失調の治療のための、（ａ）上記の液体医薬製剤、（ｂ）上記の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）上記の液体医薬製剤を凍結乾燥することで得られる凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤の使用に関する。
【００４１】
本発明はさらに、ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、あるいは慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つの治療のための薬剤を調製するための、（ａ）上記の液体医薬製剤、（ｂ）上記の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）上記の液体医薬製剤を凍結乾燥することで得られる凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤の使用に関する。
【００４２】
本発明はさらに、ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、または慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つの治療で使用するための、上記の液体医薬製剤、固体医薬製剤または凍結乾燥医薬製剤に関する。
【００４３】
本発明はさらに、被験体に対する、（ａ）上記の液体医薬製剤、（ｂ）上記の固体医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤、または（ｃ）上記の液体医薬製剤を凍結乾燥することで得られる凍結乾燥医薬製剤を滅菌水溶液に懸濁することで調製される液体医薬製剤の投与を含む、ＨＩＶ関連のリポジストロフィ、ＨＩＶ脂肪肥大症、腹部肥満、ＧＨ欠乏、虚弱、軽度の認知障害、免疫不全、慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する衰弱、あるいは慢性疾患または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の少なくとも１つを治療するための方法に関する。
【００４４】
慢性的疾患には、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳ、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、股関節骨折、外傷、および大手術が含まれるが、これらに限定しない。
【００４５】
滅菌水溶液は、一実施形態において、約４．０乃至約７．５のｐＨを有し、一実施形態において約４．０乃至約７．０のｐＨを有し、さらなる実施形態においては約５．０乃至約６．０のｐＨを有する滅菌水または滅菌緩衝溶液である。
【００４６】
本発明の実施形態によると、液体医薬製剤または懸濁（ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ）固体医薬製剤あるいは凍結乾燥医薬製剤は、皮下、筋肉内、静脈内または腹腔内経路によって投与される。
【００４７】
本発明はさらに、滅菌容器において、上記の固体医薬製剤または凍結乾燥医薬製剤を含むＧＨＲＨ分子製剤を懸濁するためのキットまたはパッケージに関する。一実施形態において、キットまたはパッケージはさらに、滅菌水溶液を含む。さらなる実施形態において、滅菌水溶液は滅菌水である。一実施形態において、キットまたはパッケージはさらに、液体形態において固体医薬製剤を懸濁または再構成するための指示を含む。
【００４８】
本発明はさらに、ＧＨＲＨ分子の安定化された凍結乾燥医薬製剤を調製する方法に関し、該方法は、
（ａ）水溶液においてＧＨＲＨ分子と、非還元糖と、陰イオン界面活性剤とを混合することにより、液体医薬製剤を得るステップを含む。
【００４９】
一実施形態において、安定化された医薬製剤を調製する上記の方法はさらに、（ｂ）ステップ（ａ）の液体製剤を凍結乾燥させるステップ、を含む。
【００５０】
一実施形態において、上記のＧＨＲＨ分子の安定化された医薬製剤は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月または少なくとも６ヶ月の間安定している。一実施形態において、上記のＧＨＲＨ分子の安定化された医薬製剤は、約２℃乃至約８℃、約２０℃乃至約２５℃、約４０℃または約４０℃未満等の異なる温度の状態で安定している。
【００５１】
別の実施形態において、安定化されたＧＨＲＨ分子の医薬製剤を調製する上記の方法はさらに、（ｃ）凍結乾燥製剤を滅菌水溶液で懸濁するステップを含む。一実施形態において、滅菌水溶液は滅菌水である。
【００５２】
本発明の他の目的、利点および特徴は、添付の図面を参照し、例としてのみ記載されているその具体的な実施形態の以下の非制限的な説明を一読することにより、より明らかとなるであろう。
【００５３】
本記載内容は多数の文書を参照しており、その内容は参照することによって、その全体として本明細書中に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】４０℃で凍結乾燥および保管される場合の［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの安定性における、４．０、５．０および６．０のｐＨの影響を示す（ＲＰ−ＨＰＬＣデータ）。
【図２】４０℃で凍結乾燥および保管される場合の安定剤である乳糖、トレハロースおよびスクロースの効果、および［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの安定性における抗酸化作用のとしてのメチオニンの効果を示す（ＲＰ−ＨＰＬＣデータ）。
【図３】４０℃で凍結乾燥および保管される場合の［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの安定性における増量剤であるマンニトール、グリシンおよびＰＥＧの効果を示す（ＲＰ−ＨＰＬＣデータ）。
【図４】４０℃での保管時の異なる凍結乾燥製剤における［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの純度を示す（ＲＰ−ＨＰＬＣデータ）。
【図５】１５ヶ月（ＲＰ−ＨＰＬＣデータ）の期間４℃で保管された、安定化されていない製剤（５Ｆ６４４）と比較した、凍結乾燥製剤（Ｆ１３およびＦ１４）における［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの純度を示す。
【図６】１５ヶ月の期間２５℃で保管された、非安定化製剤（５Ｆ６４４）と比較した、凍結乾燥製剤（Ｆ１３およびＦ１４）における［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの純度を示す（ＲＰ−ＨＰＬＣデータ）。
【図７】粉末形態および液体形態（２００ｍｇ／ｍｌで水に可溶化）における凍結乾燥製剤Ｆ４、Ｆ７およびＦ１０ならびに主活性成分（ＡＰＩ）のみを重ね合わせた比較を示す、ＦＴ／ＩＲ分析結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
例示的な実施形態の説明
本発明は、ＧＨＲＨ分子を含む医薬製剤、より具体的には、本明細書において以下に記載される式ＡのＧＨＲＨ類似体を提供する。［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドのいくつかの製剤を、本明細書において例示として示し、比較する。
【００５６】
本明細書で使用する「生物学的に容認可能」（または「薬事的に容認可能」）とは、生体内において有毒または有害な生物学的影響がない（または制限されている）ことを特徴とする物質を指す。また、これは、正常な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または合併症を伴わずに、妥当な利点／リスクの比率に見合う、対象（例えばヒト、動物）の体液および／または生体組織および／または生体器官と接触して使用するために適した、これらの化合物、製剤、製剤および／または薬剤形態を指す。
【００５７】
本明細書で使用する「製剤」または「医薬製剤」という用語は、活性剤（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド）等のＧＨＲＨ分子を有効にするような形態であり、製剤を投与する対象にとって有毒である添加物を含まない調製を指す。これは、活性製剤（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）および任意の緩衝液、増量剤、アジュバント、担体、安定剤、界面活性剤および製造、保管、処理、ならびに使用の際に活性剤の活性および安定性の容認可能なレベルを維持するために必要と考えられるこうした他の添加剤を指す。本発明の医薬製剤は、凍結乾燥形態における活性剤（例えば、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）の凍結乾燥および長期の保管に適している。
【００５８】
本発明の文脈で用いる「ＧＨＲＨ分子」という用語は、変異体のアミノ酸配列が天然のアミノ酸配列と少なくとも約９０％の相同性を有し、一実施形態においては天然のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するように、ヒトの天然ＧＨＲＨ（１−４４）およびフラグメント（１−４０）、（１−２９）、１−２９および１−４４配列の範囲のフラグメント、および任意の他のフラグメント、他の種からのＧＨＲＨおよびそのフラグメント、アミノ酸置換、添加および／または欠失を含むＧＨＲＨ変異体を含むがこれらに限定しない。一実施形態において、天然のＧＨＲＨ、例えば有機基を有するＧＨＲＨまたはフラグメントあるいはその変異体の誘導体、またはＮ末端、Ｃ末端あるいは側鎖でＧＨＲＨアミノ酸配列と結合する部分、および（ヒトのまたは他の種からの）ＧＨＲＨの塩、さらに、ＧＨＲＨフラグメント、変異体、類似体および誘導体の塩と比較して、上記のフラグメント／変異体は刺激性のＧＨ分泌の少なくとも約１０％の活性を保持する。本発明のＧＨＲＨ分子はさらに、アルブミン共役ＧＨＲＨ（米国特許第７，２６８，１１３号）、ペグ化されたＧＨＲＨペプチド（米国特許第７，２５６，２５８号および第６，５２８，４８５号）、ブタＧＨＲＨ（１−４０）（米国特許第６，５５１，９９６号）、イヌＧＨＲＨ（米国特許出願第２００５／００６４５５４号）、１−２９〜１−４４のアミノ酸長のＧＨＲＨ変異体（米国特許第５，８４６，９３６号、第５，６９６，０８９号、第５，７５６，４５８号および第５，４１６，０７３号、および米国特許出願第２００６／０１２８６１５号および第２００４／０１９２５９３号）、ならびにＰｒｏ°−ＧＨＲＨペプチドおよびその変異体（米国特許第５，１３７，８７２号）を含むが、これらに限定しない、現在当業者に公知のＧＨＲＨ分子も含む。
【００５９】
ＧＨＲＨ類似体は、同様にその合成方法が記載されている米国特許第５，６８１，３７９号および第５，９３９，３８６号に記載されているものを含む。より具体的には、これらのＧＨＲＨ類似体は以下の式Ａによって定義される。
Ｘ−ＧＨＲＨペプチド（Ａ）
【００６０】
ＧＨＲＨペプチドは式Ｂ：Ａ１−Ａ２−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｌｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａ８−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａ１３−Ｌｅｕ−Ａ１５−ＧｌＮ−Ｌｅｕ−Ａ１８−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ２４−Ａ２５−ｌｌｅ−Ａ２７−Ａ２８−Ａｒｇ−Ａ３０−Ｒ０（Ｂ）（配列番号１）のペプチドであり、
式中、
Ａ１はＴｙｒまたはＨｉｓであり、
Ａ２はＶａｌまたはＡｌａであり、
Ａ８はＡｓｎまたはＳｅｒであり、
Ａ１３はＶａｌまたはｌｌｅであり、
Ａ１５はＡｌａまたはＧｌｙであり、
Ａ１８はＳｅｒまたはＴｙｒであり、
Ａ２４はＧｌｎまたはＨｉｓであり、
Ａ２５はＡｓｐまたはＧｌｕであり、
Ａ２７はＭｅｔ、ｌｌｅまたはＮｌｅであり、
Ａ２８はＳｅｒまたはＡｓｎであり、
Ａ３０は１〜１５残基の結合またはアミノ酸配列であり、
Ｒ０はＮＨ2またはＮＨ−（ＣＨ2）ｎ−ＣＯＮＨ2（ｎ＝１〜１２）である。
基Ｘは、５個〜７個の原子の主鎖を画定するペプチドおよび疎水性尾部のＮ末端へのアミド結合によって固定される疎水性尾部である。主鎖は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、またはＣ6-12アリルに置換可能であり、主鎖は、主鎖の少なくとも２個の原子に結合される少なくとも１つの剛直化部分を含む。剛直化部分は二重結合、三重結合、飽和または不飽和Ｃ3-9シクロアルキル、またはＣ6-12アリルである。
【００６１】
一実施形態において、基Ｘは、
【００６２】
【化５】
2010523501.tif 000007
【００６３】
【化６】
2010523501.tif 000008
【００６４】
【化７】
2010523501.tif 000009
【００６５】
である。
【００６６】
一実施形態において、式Ｂでは、Ａ３０は、
（ａ）結合、
（ｂ）天然ＧＨＲＨペプチド（配列番号６）の３０位〜４４位に対応するアミノ酸配列、または
（ｃ）そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有する、（ｂ）（配列番号６）のアミノ酸配列、である。
【００６７】
一実施形態において、ＧＨＲＨペプチドは、
（ａ）配列番号２または３のアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（ｂ）配列番号４または５のアミノ酸配列を含むポリペプチド、または
（ｃ）そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有する（ａ）のポリペプチド、である。
【００６８】
一実施形態において、ＧＨＲＨペプチドは、
（ａ）配列番号２または３のアミノ酸配列を有するポリペプチド、
（ｂ）配列番号４または５のアミノ酸配列を有するポリペプチド、または
（ｃ）そのＣ末端からの１〜１４のアミノ酸欠失を有する（ａ）のポリペプチド、である。
【００６９】
一実施形態において、ＧＨＲＨ分子は、（ヘキセノイルトランス−３）ｈＧＨＲＨ（１−４４）ＮＨ2（配列番号７）である。［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド（（ヘキセノイルトランス−３）ｈＧＨＲＨ（１−４４）ＮＨ2とも称される）は、ヘキセノイル部分、Ｃ6側鎖がＮ末端においてＴｙｒ１上に固定されているヒト成長ホルモン放出因子（ｈＧＨＲＨ）の４４−アミノ酸配列を含む合成ヒト成長ホルモン放出因子類似体である。
【００７０】
［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドは、以下の構造を有する。（トランス）ＣＨ3−ＣＨ2−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＯ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌａ−ｌｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−ｌｌｅ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ2（配列番号７）
【００７１】
本発明の製剤の文脈において本明細書で使用する「固体」という用語は、水分が実質的に存在しない形態における製剤、例えば固体（例えば粉末）形態を指す。こうした固体の製剤は、例えば凍結乾燥、脱水化、または他の乾燥方法によって、水分を除去する任意の方法によって調製され得る。
【００７２】
本明細書で使用される「懸濁」という用語は、文脈により、懸濁、再懸濁、再構成および／または可溶化を指すことを意図する。用語の一貫性のため、本明細書で使用する「懸濁」という用語は、概して、適切な液体を固体製剤に添加することを指す。
【００７３】
本明細書で使用される「増量剤」という用語は、固体製剤の懸濁によって生成される溶液の適正または所望の等張性を与えるために用いられる化合物を指す。好適には、溶液の適正または所望の等張性は、溶液を投与する対象の生理液の等張性と等しいまたは近似である。例えば、１つ以上の糖を増量剤として使用することができる。本明細書で使用する糖は単糖類、オリゴ糖および多糖類を含むが、これらに限定しない。適切な糖の実施例はマンノース、ソルボース、キシロース、麦芽糖、乳糖、スクロース、およびデキストランを含むが、これらに限定しない。糖はさらにマンニトール、イノシトール、ズルシトール、キシリトールおよびアラビトール等の糖アルコールを含む。本発明に従うと、糖の混合物も使用し得る。一実施形態において、増量剤はマンニトールである。例えば、グリシン等の１つ以上のアミノ酸を増量剤として使用し得る。増量剤は、製剤において約１％（ｗ／ｗ）乃至約１０％（ｗ／ｗ）の濃度である。一実施形態において、増量剤は、約３％（ｗ／ｗ）乃至約５％（ｗ／ｗ）の濃度である。さらなる実施形態において、増量剤は約４％（ｗ／ｗ）の濃度である。
【００７４】
一実施形態において、本発明の医薬製剤は約４．０乃至約７．５のｐＨを有する。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤は約４．０乃至約７．０のｐＨを有する。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤は約５．０乃至約６．０のｐＨを有する。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤は約６．０のｐＨを有する。別の実施形態において、本発明の医薬製剤は約５．５のｐＨを有する。別の実施形態において、本発明の医薬製剤は約５．０のｐＨを有する。別の実施形態において、本発明の医薬製剤は５．０よりも高いｐＨを有する。
【００７５】
一実施形態において、本発明の製剤はさらに緩衝液を含む。緩衝液の適切な量は、使用される緩衝液の種類およびその緩衝能に依存して変化する。緩衝液は、最終的な製剤のｐＨを、上記のｐＨ範囲に維持するために、適切な種類のものであり、かつ十分な量で製剤内に存在する必要がある。一実施形態において、緩衝液は琥珀酸ナトリウム（琥珀酸）である。別の実施形態において、緩衝液はＬ−ヒスチジン（ヒスチジン）である。別の実施形態において、緩衝液はリン酸塩ナトリウム（リン酸塩）である。これらの緩衝液は、頻繁に、塩として入手可能である。一実施形態において、本発明の医薬製剤における緩衝液濃度は約０．１ｍＭ乃至約５０ｍＭである。別の実施形態において、本発明の医薬製剤における緩衝液濃度は約１ｍＭ乃至約３０ｍＭである。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤における緩衝液濃度は約５ｍＭ乃至約２０ｍＭである。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤における緩衝液濃度は約１０ｍＭである。
【００７６】
本発明の医薬製剤に含まれる主活性成分（例えば、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）の量は、治療対象の疾病の性質および／または重症度、患者の特徴（年齢、体重等）および他の因子によって決定可能である。概して、本発明の医薬製剤は約１μｇ／ｍｌ乃至約４００００μｇ／ｍｌの主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）を含む。一実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１０００μｇ／ｍｌ乃至約８０００μｇ／ｍｌ（約０．０９９重量％乃至約０．７９２重量％）の主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）を含む。別の実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１０００μｇ／ｍｌ乃至約４０００μｇ／ｍｌ（約０．０９９重量％乃至約０．３９６重量％）の主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）を含む。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１０００μｇ／ｍｌ（約０．０９９重量％）の主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）を含む。別の実施形態において、本発明の医薬製剤は、約４０００μｇ／ｍｌ（約０．３９６重量％）の主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）を含む。実施形態において、製剤は、約１ｍｇ以上であり、さらなる実施形態において、約１ｍｇ、さらなる実施形態において、約２ｍｇ、さらなる実施形態において、約２ｍｇ以上である、主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）の投与量に効力を与える主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）の量を含む。主活性成分（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド等のＧＨＲＨ分子）が高濃度であると、より高い濃度の緩衝液を使用してもよい。例えば、本明細書で記載している研究において、１０ｍｇ／ｍｌまたは３０ｍｇ／ｍｌの［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドを含む製剤のｐＨは、３０ｍＭのヒスチジン緩衝液で維持されている。
【００７７】
一実施形態において、本発明の医薬製剤は、１つ以上の界面活性剤をさらに含むことができる。界面活性剤の典型的な例には以下のものが挙げられる。
【００７８】
Ａ）非イオン界面活性剤、例えばモノカプリル酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルチミン酸ソルビタン等のソルビタン脂肪酸エステル、モノカプリル酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン等のグリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸デカグリセリル、ジステアリン酸デカグリセリル、モノリノール酸デカグリセリル等のポリグリセリン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルチミン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、テトラステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール等のポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリルモノステアレート等のポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ジステアリン酸ポリエチレングリコール等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンプロピルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル等のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油）等のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトールビーワックス等のポリオキシエチレンビーワックス誘導体、ポリオキシエチレンラノリン等のポリオキシエチレンラノリン誘導体、ポリオキシエチレンステアリン酸アミド等のポリオキシエチレン脂肪酸アミド。
【００７９】
Ｂ）陰イオン界面活性剤、例えばセチル硫酸塩ナトリウム、ラウリル硫酸塩ナトリウム、オレイル硫酸塩ナトリウム等のＣ10-18アルキル基を有するアルキル硫酸塩、ポリオキシエチレンラウリル硫酸塩ナトリウム等のポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ラウリルスルホ琥珀酸ナトリウム等のＣ8-18アルキル基を有するアルキルスルホ琥珀酸エステル塩。
【００８０】
Ｃ）天然界面活性剤、例えばレシチン、グリセロリン脂質、スフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質、Ｃ12-18脂肪酸のスクロース脂肪酸エステル。１つ以上のこれらの界面活性剤を、本発明の製剤に組み合わせて添加し得る。
【００８１】
一実施形態において、本発明の医薬製剤の界面活性剤は陰イオン界面活性剤である。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤の界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステルである。また別のさらなる実施形態において、本発明の医薬製剤の界面活性剤はポリソルベート−２０（Ｔ２０またはＴｗｅｅｎ−２０（商標）である。
【００８２】
別の実施形態において、本発明の医薬製剤内の界面活性剤の量は約０．０００１％（ｗ／ｗ）乃至約１０％（ｗ／ｗ）である。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤内における界面活性剤の量は約０．００１％（ｗ／ｗ）乃至約５％（ｗ／ｗ）である。また別のさらなる実施形態において、本発明の医薬製剤内の界面活性剤の量は約０．０１％（ｗ／ｗ）である。
【００８３】
一実施形態において、本発明の医薬製剤はさらに１つ以上の安定化剤または安定剤を含んでもよい。本明細書で使用するように、「安定剤」という用語は薬剤の治療的活性を低減させるであろう物理的、化学的、および／または生化学的プロセスに対し、治療薬を安定化させるために使用される化合物を意味することを意図する。適切な安定剤としては、例えば、スクロース（またはサッカロース）およびトレハロースが挙げられるが、これらに限定しない非還元糖、および、例えば、ソルビトール、マンニトール、麦芽糖、キシリトール、グリコール、グリセロールおよびエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定しない、非還元ポリオールである。市販のポリエチレングリコール源は、ＧＨＲＨ分子の分解をひきおこす可能性のある混入物質を含むことが多いため、適切ではない。一実施形態において、上記の製剤にはポリエチレングリコールは実質上含まれていない。さらなる実施形態において、上記の製剤にはポリエチレングリコールは含まれていない。
【００８４】
一実施形態において、本発明の医薬製剤は、非還元糖を含む。本明細書で使用する「非還元糖」は、ヘミアセタールを含有しない糖（例えば単糖類または多糖類）、例えば、糖単位の還元末端間にグリコシド結合が形成されており、ある糖単位の還元末端ともう一方の糖単位の非還元末端との間には形成されていないことを特徴とする炭水化物または糖を指す。さらなる実施形態において、上記の非還元糖はトレハロースまたはスクロースである。さらなる実施形態において、上記の非還元糖はスクロースである。別のさらなる実施形態において、上記の非還元糖はトレハロースである。非還元糖は本発明の製剤において、約０．１％（ｗ／ｗ）乃至約５％（ｗ／ｗ）の濃度である。一実施形態において、非還元糖は約１％（ｗ／ｗ）乃至約３％（ｗ／ｗ）の濃度である。さらなる実施形態において、非還元糖は約２％（ｗ／ｗ）の濃度である。
【００８５】
別の実施形態において、非還元糖は、医薬製剤において、約１％（ｗ／ｗ）乃至約５％（ｗ／ｗ）の量で存在する。さらなる実施形態において、非還元糖は、前記製剤において、約２％（ｗ／ｗ）の量で存在する。
【００８６】
本発明の医薬製剤はさらに、所望する場合、希釈剤、可溶化剤、賦形剤、ｐＨ改変剤、緩和剤、緩衝液、硫黄含有の還元剤、抗酸化剤等を含むことができる。例えば、硫黄含有の還元剤は、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アセチルホモシステイン、チオクト酸、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグリセロール、チオソルビトール、チオグリコール酸およびその塩、チオ硫酸塩ナトリウム、グルタチオン、メチオニンおよび１個〜７個の炭素原子を有するチオアルカン酸等のスルフヒドリル含有化合物を含む。抗酸化剤は、メチオニン、エリソルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、L−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−パルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸Ｌ−アスコルビル、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミル、没食子酸プロピルまたは、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）ニナトリウム（ｄｉｓｏｄｉｕｍ）等のキレート試薬、ピロリン酸塩ナトリウム、メタリン酸塩ナトリウムを含む。さらに、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、リン酸塩ナトリウム、リン酸塩カリウム、重炭酸ナトリウム等の無機塩類、およびクエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウム等の有機塩類等、他の一般に添加される材料を含有し得る。
【００８７】
安定製剤とは、製剤内の主活性成分、つまりＧＨＲＨ分子（例えば［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド）が、保管時においてその物理的および化学的安定性および完全性を保持する製剤である。タンパク質またはペプチド安定性を計測するための様々な分析技術が当業者に利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）、およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）で再考される。安定性は、選択した期間、選択した温度で計測することができる。迅速にスクリーニングを行うには、製剤は例えば、２週間乃至１ヶ月（最長６ヶ月）の間、約４０℃で保管してもよく、この間に安定性を計測する。製剤はさらに、例えば、約２℃乃至約８℃（例えば約４℃）で、または少なくとも６ヶ月環境温度の状態（約１５℃乃至約３０℃、好適には約２０℃乃至約２５℃）で保管してもよく、このときに安定性を計測する。本発明の製剤はその液体または固体形態においてＧＨＲＨ分子のより良好な安定性を提供し、高温（例：４０℃）、室温（つまり２０℃〜２５℃）、冷蔵温度（つまり２℃〜８℃）での保管期間において固体または凍結乾燥形態でのＧＨＲＨ分子の安定性を保持するためにも適している。保管期間は例えば、週、月または年で表してもよく、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月または少なくとも６ヶ月としてもよい。例えば、「安定」製剤は、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上の非分解活性剤が製剤内に存在するとし得る。本発明の製剤の安定性は、ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して計測し得る（例えば以下の実施例を参照）。本明細書で使用する「安定化に有効な量または濃度」とは、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上の非分解活性剤が製剤内に存在する、安定した製剤を得るために有効な量または濃度を指定することを意図している。
【００８８】
本発明の製剤は、例えば、リポジストロフィ（例：ＨＩＶ関連のリポジストロフィ）、脂肪肥大症、ＧＨ欠乏、腹部肥満、脂質異常症、高トリグリセリド血症、Ｘ症候群、生活の質の向上、虚弱、日中不眠症、思考、理性、問題解決および記憶を含む軽度の認知障害（または認知機能）、免疫不全、慢性的または長期にわたる疾患に関連する筋肉衰弱、または慢性的または長期にわたる疾患に関連する栄養失調の治療のための治療的な投与のための薬剤として有用である。慢性的または長期にわたる疾患には、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳ、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、股関節骨折、外傷、および大手術を含むが、これらに限定しない。一実施形態において、本発明の製剤は、ＨＩＶ関連のリポジストロフィの治療に有用である。別の実施形態において、本発明の製剤は、慢性閉塞性肺疾患の治療に有用である。別の実施形態において、本発明の製剤は、嚢胞性線維症の治療に有用である。
【００８９】
本明細書で使用する、「対象」または「患者」という用語は、哺乳類、例えば、ネコ、イヌ、マウス、モルモット、ウマ、ウシ、ヒツジおよびヒト等の温血動物を意味する。一実施形態において、対象は哺乳類である。さらなる実施形態において、上記の対象はヒトである。
【００９０】
本明細書で使用する「治療」という用語は、疾患／疾病、疾患／疾病の症状、または疾患／疾病に対する素因を治療、治癒、緩和、遅延、変化、是正、改善、向上または影響することを目的とする、疾患、疾病、疾患もしくは疾病の症状、疾患もしくは疾病の素因を有する対象、または対象からの分離組織または細胞系への治療薬の適用もしくは投与として定義される。
【００９１】
本発明はさらに、本明細書に記載されている製剤を調製するための方法を提供する。該方法は、所望の製剤（例えば製剤、濃度、ｐＨ等に関して）を得るための、条件下における成分の製剤化または化合（例えば溶解、混合）を含む。例えば、ｐＨに関して、製剤のｐＨを、所望の範囲内になるように、適宜決定および調整し得る。こうした方法の実施例を、以下の実施例に記載する。
【００９２】
さらに詳細に、以下の非制限的な実施例によって本発明を説明する。
【実施例】
【００９３】
実施例１：材料および方法
［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの合成［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドは、Ｒａｍａｇｅ  Ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  Ａｍｉｄｅ  Ｒｅｓｉｎから開始されるＦＭＯＣ固相ペプチド合成を使用して合成される。保護アミノ酸およびトランス−３−ヘキセノイル酸を結合のために使用し、これによって、各保護アミノ酸およびトランス−３−ヘキセノイル酸が、ＤＭＦに溶解され、酸化アルミニウムで処理してラセミ化を低減するためにＴＢＴＵと、および結合前の活性化を促進するためにＤＩＰＥＡとともに処理する。結合の完了は、Ｋａｉｓｅｒニンヒドリン試験（Ｅ．Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．“Ｃｏｌｏｒ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｒｅｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ａｍｉｎｏ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”）およびＴＮＢＳ試験（Ｍｅａｎｓ  ａｎｄ  Ｆｅｅｎｅｙ，  １９７１，  Ｈｏｌｄｅｎ−Ｄａｙ  Ｉｎｃ．  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  “Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”ｐ．２１７）によって監視される。
【００９４】
側鎖保護基およびペプチド樹脂結合は、９０％のＴＦＡ、５％のＥＤＴおよび５％の水で構成される開裂カクテルにおいて保護ペプチド樹脂をかき混ぜることにより、開裂される。粗ペプチドを、緩衝液（０．１％のＭＳＡ、ｐＨ６．５のＴＥＡＰおよび２％のＨＯＡｃ）を使用した三段階の精製方法による、ＨＰＬＣによって精製し、純［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド（≧９８．５％）をる。精製ペプチドのロットは０．５％酢酸で貯蔵および再構成され、凍結乾燥される。
【００９５】
凍結乾燥プロセス。試料は−５０℃での凍結、および保持、−１０℃でのアニール、および保持、１００ｍＴｏｒｒでの−１０℃の一次乾燥、および１００ｍＴｏｒｒでの２５℃の二次乾燥によって、凍結乾燥した。
【００９６】
製剤。表Ｉは、活性成分としての［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドのいくつかの試験した製剤の構成要素の詳細を示す。［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドは、製剤Ｆ１２を除き、表Ｉに記載される全ての製剤において４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し、ここで活性成分は８ｍｇ／ｍｌの濃度で示されている。
【００９７】
【表１】
2010523501.tif 000010
【００９８】
製剤を作製するためのプロセス
成分の組み合わせ、混合、および必要に応じたｐＨ調整により、製剤を調製された。例として、製剤１３および１４（Ｆ１３およびＦ１４、表Ｉを参照）の調製の詳細について以下に記載する。
【００９９】
Ｆ１３の調製方法
【０１００】
以下の原液を調製した。
０．１ＭのＨＣＬ原液、
１０ｍＭのヒスチジン原液、および
１％のポリソルベート２０原液（１ｇのポリソルベート２０を１０ｍＭヒスチジン原液と混合し、容量１００ｍｌにした）。
【０１０１】
成分は表ＩＩにより、次のように混合した。
【０１０２】
【表２】
2010523501.tif 000011
【０１０３】
成分を以下のように混合した。
・容器を０．９０ｋｇの滅菌水で充填した。
・混合しながら、１．５５ｇのヒスチジン（遊離塩基）を容器に加え、次に環境温度にて１０分間ゆっくりと攪拌した。
・混合しながら、４０ｇのマンニトールを容器に加え、次に環境温度にて１０分間ゆっくりと攪拌した。
・混合しながら、２０ｇのスクロースを容器に加え、次に環境温度にて１０分間ゆっくりと攪拌した。
・１０ｍｌのポリソルベート１％原液を加え、次に環境温度にて１５分間ゆっくりと攪拌した。
・製剤のｐＨを測定し、必要な場合、０．１ＭのＨＣＬ原液または１０ｍＭのヒスチジン原液を使用して、製剤を６．６±０．２のｐＨまで滴定した。
・４ｇの［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドを追加し、混合物を、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドが完全に溶解するまで、または環境温度で少なくとも３０分間、ゆっくりと攪拌した。
・製剤のｐＨを測定し、０．１ＭのＨＣＩ原液または１０ｍＭのヒスチジン原液を必要に応じて使用して、製剤を６．０±０．２のｐＨまで滴定した。
・滅菌水で溶液を１ｋｇにし、０．２２μｍの膜でろ過した。
【０１０４】
Ｆ１４の調製方法
【０１０５】
以下の原液を調製した。
０．１ＭのＮａＯＨ原液
１０ｍＭの琥珀酸ナトリウム原液、および
１％のポリソルベート２０原液（１ｇのポリソルベート２０を１０ｍＭの琥珀酸ナトリウム原液と混合し、容量１００ｍｌにした）
【０１０６】
次に、以下の表ＩＩＩのように成分を組み合わせた。
【０１０７】
【表３】
2010523501.tif 000012
【０１０８】
成分を以下のように組み合わせた。
・容器を０．９０ｋｇの滅菌水で充填した。
・混合しながら、２．７０ｇの琥珀酸ナトリウムを容器に加え、次に環境温度にて１０分間ゆっくりと攪拌した。
・混合しながら、４０ｇのマンニトールを容器に加え、次に環境温度にて１０分間ゆっくりと攪拌した。
・混合しながら、２０ｇのスクロースを容器に加え、次に環境温度にて１０分間ゆっくりと攪拌した。
・１０ｍｌの１％ポリソルベート原液を容器に加え、次に環境温度にて１５分間ゆっくりと攪拌した。
・製剤のｐＨを測定し、必要な場合、０．１ＭのＮａＯＨ原液または１０ｍＭの琥珀酸ナトリウム原液を使用して、製剤を６．１±０．２のｐＨまで滴定した。
・４ｇの［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドを追加し、混合物を、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドが完全に溶解するまで、または環境温度で少なくとも３０分間、ゆっくりと攪拌した。
・製剤のｐＨを測定し、０．１ＭのＮａＯＨ原液または１０ｍＭ琥珀酸ナトリウム原液を必要に応じて使用して、製剤を５．５±０．２のｐＨまで滴定した。
・滅菌水で溶液を１ｋｇにし、０．２２μｍの膜でろ過した。
【０１０９】
逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）。
ＨＰＬＣ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００（商標）のＨＰＬＣシステム、ＷＡＴＥＲＳ  ＤｅｌｔａＰａｋ（商標）ＨＰＩ  Ｃ１８カラム、１．０ｍｌ／分での移動相（アセトニトリル／ミリＱ水）および２１４ｎｍでの紫外検出を使用して実行した。
【０１１０】
逆相ＨＰＬＣを使用した［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの識別および定量化
［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの同定および定量化を、同じロットからの［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドから生成した調製したての較正した標準的な［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミド溶液の各保持時間と、試料におけるその保持時間を比較することで、実行した。試料における［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの量を、公知の濃度の連続希釈で得られた標準曲線と比較することで、算出した。
【０１１１】
実施形態２：結果
図１は、３つの異なる緩衝液（リン酸塩、ヒスチジンおよび琥珀酸）を使用して調製され、４０℃での凍結乾燥形態での保管後に３つの異なるｐＨ（４．０、５．０および６．０）を有する、製剤の組み合わせの［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドの純度レベルを比較する。凍結乾燥前、および１週間、２週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月および６ヶ月の４０℃での凍結乾燥期間後に再構成した際に試料を試験した。ｐＨ６．０（Ｆ５）のリン酸塩緩衝液、ｐＨ６．０（Ｆ４）のヒスチジン緩衝液およびｐＨ５（Ｆ１）の琥珀酸緩衝液の使用により、製剤は４０℃での保管において良好な安定性を有することが観察される。ｐＨ４（Ｆ３）の琥珀酸緩衝液は、４０℃での保管時において安定性が低くなっていたが、依然として適切な製剤を提供することができる。
【０１１２】
図２は、４０℃で凍結乾燥形態での保管後の、異なる安定剤（トレハロース、ラクトース、およびスクロース）および抗酸化剤（メチオニン）の有無を比較する。凍結乾燥前、および１週間、２週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月および６ヶ月の４０℃での凍結乾燥期間後の再構成の際に、試料を試験した。非還元糖のトレハロース（Ｆ１およびＦ１１）およびスクロース（Ｆ１０）が４０℃において良好な安定化を提供していることが観察される。抗酸化剤（Ｆ１１）としてのメチオニンの添加は、メチオニン（Ｆ１）を含まない同じ製剤と比較して安定性についてわずかにプラスの影響がある。対照的に、還元糖のラクトース（Ｆ９は）、４０℃において安定化を提供しない。
【０１１３】
図３は、４０℃で凍結乾燥形態で保管した後の様々な増量剤（マンニトール、グリシン、ＰＥＧ、マンニトールおよびＰＥＧ）を比較する。試料を、凍結乾燥の前、および４０℃で１週間、２週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月および６ヶ月の凍結乾燥期間後の再構成時に試験した。マンニトール（単独で使用）（Ｆ１）およびグリシン（Ｆ６）によって、４０℃での保管後に製剤の良好な安定性が提供さることが観察される。
【０１１４】
４０℃で凍結乾燥形態で１週間、２週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月および６ヶ月の保管した後の製剤Ｆ１、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９、Ｆ１０、Ｆ１１およびＦ１２のＲＰ−ＨＰＬＣの結果を図４に示す。負荷の大きい条件である４０℃で６ヶ月保管した後、最も安定した製剤は、製剤Ｆ１、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ１０、Ｆ１１およびＦ１２であった。
【０１１５】
図１、図２、図３および図４の結果に基づき、製剤Ｆ１３およびＦ１４に対応する構成要素の組み合わせを以下のように設計した。ヒスチジン緩衝液（Ｆ１３）中の４％マンニトール、２％スクロース、０．０１％ポリソルベート２０ｐＨ６．０、および琥珀酸ナトリウム緩衝液（Ｆ１４）中の４％マンニトール、２％スクロース、０．０１％ポリソルベート２０ｐＨ５．５。
【０１１６】
図５は、１５ヶ月において４℃で凍結乾燥形態の、製剤Ｆ１３およびＦ１４ならびに非安定化製剤（５Ｆ６４４）の安定性プロファイルを図示する。滅菌水による再構成は、純度試験の前に行われる。安定化されていない製剤（５Ｆ６４４）は、４％マンニトール、１ｍｇ／ｍｌの［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドを含み、ｐＨ６．０はＮａＯＨ添加によって得られる。図５は、純度プロファイルは４℃で製剤Ｆ１３およびＦ１４および安定化されていない製剤（５Ｆ６４４）と同様であることを示す。表Ｉの他の全ての製剤は、４℃（図示せず）で安定化されていない製剤（５Ｆ６４４）と同様の純度プロファイルを有する。
【０１１７】
図６は、製剤Ｆ１３およびＦ１４、および１５ヶ月間における２５℃での凍結乾燥形態の非安定化製剤の安定性プロファイルを示す。滅菌水による再構成は、純度試験の直前に行う。安定化されていない製剤（５Ｆ６４４）は、６ヶ月目で顕著な分解を示し、一方で、製剤Ｆ１３およびＦ１４は１５ヶ月後も安定していることを示す。
【０１１８】
２ヶ月目の全ての凍結乾燥製剤の含水量は、Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓにより１％未満であるという利点があった。Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＫＦ）は、生成物または組成物の含水量を測定するための標準的で、公知の試験である。
【０１１９】
図７は、粉末形態および液体形態（２００ｍｇ／ｍｌで水に可溶化）で主活性成分（ＡＰＩ）のみと比較した、製剤Ｆ４、Ｆ７およびＦ１０の凍結乾燥試料のＦＴ／ＩＲ分析を比較する。この場合、ＡＰＩは（ヘキセノイルトランス−３）ｈＧＨＲＨ（１−４４）ＮＨ2である。概して、ＦＴ／ＩＲ分析は、活性成分の二次構造に関する情報を提供する。より具体的に、図７は、［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドペプチドが、試験した製剤においてその天然構造を保持することを示す。１６６０ｃｍ-1のシグナルは、保存された［トランス−３−ヘキセノイル］ｈＧＨＲＨ（１−４４）アミドペプチドのα−らせん構造を示す。
【０１２０】
本発明をその特定の実施形態によって上述してきたが、添付の請求項に定義されているように、本発明の精神および本質から逸脱しない限り、これを修正することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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