(57)【要約】  本発明は、フラビウイルス科ウイルス感染症の治療に有用である、式ＩＡ2010509376.tif 000047によって表される化合物、またはその医薬上許容しうる塩および溶媒和物に関し、式中、Ｒ１はＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、Ｘは2010509376.tif 000048であり、Ｍは2010509376.tif 000049であり、Ｒ５は非置換のまたはＲ１３により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、Ｒ６は2010509376.tif 000050であるか、あるいは４位でＲ１４により置換されているシクロヘキシルであり、ならびにＹ、Ｒ１４ａおよびＲ１４は本明細書で規定されている通りである。
2010509376.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＡ：
【化１】
2010509376.tif 000043
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｘは、
【化２】
2010509376.tif 000044
であり、
Ｍは、
【化３】
2010509376.tif 000045
であり、
Ｒ５は、非置換のまたはＲ１３により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【化４】
2010509376.tif 000046
であるか、あるいは４位でＲ１４により置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７、ＣＯＣＯＯＲ７、Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、Ｓ（Ｏ）ＯＲ７、Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７、テトラゾール、ＣＯＮ（Ｒ７）ＣＨ（Ｒ７）ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＣＯＮ（Ｒ７）−ＳＯ２−Ｒ７、ＣＯＮＲ７ＯＨおよびハロゲンであり、
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜１２アルキル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルケニル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルキニル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ６〜１４アリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ７〜１６アラルキル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている６〜１８員ヘテロアラルキル、非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている３〜１２員複素環、あるいは非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている４〜１８員複素環−アルキルであるか、あるいは、Ｒ８およびＲ９は、窒素原子と一緒になって非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている３〜１０員複素環、または、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリールを形成し、ならびに
ＲａおよびＲｂは、それぞれ独立して、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜１２アルキル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルケニル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルキニル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ６〜１４アリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ７〜１６アラルキル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている６〜１８員ヘテロアラルキル、非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている３〜１２員複素環、あるいは非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている４〜１８員複素環−アルキルから選択されるか、あるいは、ＲａおよびＲｂは、酸素原子と一緒になって非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されている５〜１０員複素環、または、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリールを形成し、
Ｒ１０は、ハロゲン、オキソ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１〜４アルコキシ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｈ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｒ１１は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｈ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｒ１２は、ハロゲン、オキソ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｈ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｒ１３は、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル、−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキル、Ｃ６〜１４アリール、Ｃ６〜１４アリールオキシまたはＣ６〜１４アリールオキシ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｒ１４は、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−ＮＨ−、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−またはヘテロアリールであり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、ヘテロアリールまたはＣ６〜１４アリールである、
で表される化合物、またはその医薬上許容しうる塩。
【請求項２】
ＹがＣＯＯＲ７であり、Ｒ７がＨ、メチルまたはエチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＹがＣＯＯＲ７であり、Ｒ７がＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１４がＯＨ、フルオロ、Ｃ１〜６アルコキシまたはトリアゾールである、請求項１、２または３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１４がＯＨ、−ＯＣＨ３、１，２，３トリアゾールまたは１，２，４トリアゾールである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１がＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘが−ＮＲ６−ＣＯ−Ｒ５であり、Ｒ５が非置換のまたは４位でＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくは−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、カルボニル基に対してトランス位にある、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ５が非置換のまたはＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくは−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ５が４位でＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）または−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ５が４位でＣ１〜６アルキルにより置換されているシクロヘキシルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５が４位で−ＣＨ３により置換されているシクロヘキシルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ６がＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ６が４位でＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ６が４位で置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基がアミノ基に対してトランス位にある、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ６が４位でＯＨまたはＣ１〜６アルコキシにより置換されているシクロヘキシルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ６が４位でＯＨにより置換されているシクロヘキシルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ６が４位でＯＣＨ３により置換されているシクロヘキシルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ６が４位でＯＨまたはＣ１〜６アルコキシにより置換されているシクロヘキシルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ６が４位でＯＨにより置換されているシクロヘキシルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ６が４位でＯＣＨ３により置換されているシクロヘキシルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ１がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり、
Ｒ５が非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６がＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜４アルキルにより置換されているシクロヘキシルであり、
ＹがＣＯＯＨである、
請求項１または２に記載の化合物。
【請求項２５】
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（シス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（シス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；ヒドロクロリド；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−シス−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−フルオロ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸、
より選択される化合物、またはその医薬上許容しうる塩。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか１項に記載の１以上の化合物および１以上の医薬上許容しうる担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２７】
請求項１〜２５のいずれか１項に記載の１以上の化合物および１以上のさらなる薬剤を含む、医薬組合せ。
【請求項２８】
前記１以上のさらなる薬剤がウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、ウイルスヘリカーゼ阻害剤、免疫調節薬、抗酸化剤、抗菌剤、治療用ワクチン、肝臓保護薬、アンチセンス薬、ＨＣＶ  ＮＳ２／３プロテアーゼの阻害剤、および内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤から選択される、請求項２７に記載の医薬組合せ。
【請求項２９】
前記１以上のさらなる薬剤がリバビリンおよびインターフェロン−αから選択される、請求項２８に記載の医薬組合せ。
【請求項３０】
前記１以上のさらなる薬剤がリバビリンおよびペグインターフェロン−αから選択される、請求項２８に記載の医薬組合せ。
【請求項３１】
宿主におけるＣ型肝炎ウイルス感染症を治療するための、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
１以上のさらなる薬剤を投与することをさらに含む、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記１以上のさらなる薬剤がウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、ウイルスヘリカーゼ阻害剤、免疫調節薬、抗酸化剤、抗菌剤、治療用ワクチン、肝臓保護薬、アンチセンス薬、ＨＣＶ  ＮＳ２／３プロテアーゼの阻害剤、および内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤から選択される、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記１以上のさらなる薬剤がリバビリンおよびインターフェロン−αから選択される、請求項３２に記載の使用。
【請求項３５】
前記１以上のさらなる薬剤がリバビリンおよびペグインターフェロン−αから選択される、請求項３２に記載の使用。
【請求項３６】
前記宿主がヒトである、請求項３１〜３５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３７】
３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デス−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロ−ヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；または
３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−トリメチル−シラニルエチニル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル、
から選択される、化合物。
【請求項３８】
請求項１〜２５に記載の化合物の合成のための、下記化合物
３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デス−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロ−ヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；
３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル；または
３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−トリメチル−シラニルエチニル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル、
の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、および新規化合物を用いてフラビウイルス感染症を治療または予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝炎は、世界全域にわたって発生する疾患である。他の既知の原因は存在するが、肝炎は一般的にウイルス性である。ウイルス性肝炎は、群を抜いて肝炎の一般的な形態である。毎年ほぼ７５０，０００人のアメリカ人が肝炎に罹患し、そのうち、１５０，０００人超がＣ型肝炎ウイルス（「ＨＣＶ」）に感染する。
【０００３】
ＨＣＶは、フラビウイルス科に属するプラス鎖のＲＮＡウイルスであり、豚コレラウイルスおよびウシウイルス性下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）を含むペスチウイルス属との密接な関係を有する。ＨＣＶは、相補的マイナス鎖のＲＮＡ鋳型の産生により複製すると考えられている。前記ウイルスについては効率のよい培養複製システムがないため、ＨＣＶ粒子は、プールしたヒト血漿から分離され、電子顕微鏡により、約５０〜６０ｎｍの直径を有することが示された。ＨＣＶゲノムは、翻訳時および翻訳後に、成熟ウイルスタンパク質（コア、Ｅ１、Ｅ２、ｐ７、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ｂ）に切断される、３００９〜３０３０個のアミノ酸からなるポリタンパク質をコードする約９，６００ｂｐの一本鎖プラスセンスＲＮＡである。構造糖タンパク質Ｅ１およびＥ２は、ウイルス脂質包膜中に埋め込まれており、安定なヘテロ二量体を形成していると考えられている。また、構造コアタンパク質はウイルスＲＮＡゲノムと相互作用してヌクレオキャプシドを形成していると考えられている。ＮＳ２〜ＮＳ５と呼ばれる非構造タンパク質は、ウイルスの複製、ならびにポリメラーゼ、プロテアーゼおよびヘリカーゼを含むタンパク質のプロセシングに関与する、酵素機能を有するタンパク質を含む。
【０００４】
ＨＣＶの主な汚染源は、血液である。健康問題としてのＨＣＶ感染症の重大さは、高リスク群における罹患率により、明らかとなっている。例えば、西欧諸国における血友病者の６０％〜９０％および静脈内薬乱用者の８０％超は、ＨＣＶに慢性的に感染している。静脈内薬乱用者については、罹患率は、試験した集団によって約２８％〜７０％に亘っている。輸血後に関連する新たなＨＣＶ感染症の割合は、献血者をスクリーニングするのに用いられる診断手段の進歩により、最近著しく低下している。
【０００５】
ペグインターフェロンとリバビリンとの併用は、慢性のＨＣＶ感染症に対する最適な治療法である。この治療法は、最も優勢な遺伝子型（１ａおよび１ｂ）に感染した患者の大半には、持続性ウイルス学的著効（ＳＶＲ）をもたらさない。さらに、重大な副作用があると、現在の治療法への遵守が妨げられ、患者によっては、投与の減少または中止が必要となることがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、フラビウイルス感染症の治療または予防用の抗ウイルス薬を開発する必要性が大きい。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様において、本発明は、式Ｉ：
【０００８】
【化１】
2010509376.tif 000003
の化合物、またはその医薬上許容しうる塩を提供し、
式中、
Ｒ１は、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、ヒドロキシル、ＮＨ２、３〜１２員複素環またはＮＨＳＯ２Ｃ６〜１８アリールにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルまたはＣ６〜１４アリールであり、
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜６アルケニル、あるいは非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜６アルキニルであり、
Ｘは、
【０００９】
【化２】
2010509376.tif 000004
であり、
Ｍは、
【００１０】
【化３】
2010509376.tif 000005
であり、
Ｒ５は、非置換のまたはＲ１３により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００１１】
【化４】
2010509376.tif 000006
であるか、あるいはＲ１４により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７、ＣＯＣＯＯＲ７、Ｐ（Ｏ）ＯＲａＯＲｂ、Ｓ（Ｏ）ＯＲ７、Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７、テトラゾール、ＣＯＮ（Ｒ７）ＣＨ（Ｒ７）ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＣＯＮ（Ｒ７）−ＳＯ２−Ｒ７、ＣＯＮＲ７ＯＨおよびハロゲンであり、
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜１２アルキル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルケニル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルキニル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ６〜１４アリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ７〜１６アラルキル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている６〜１８員ヘテロアラルキル、非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている３〜１２員複素環、あるいは非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている４〜１８員複素環−アルキルであるか、あるいは、Ｒ８およびＲ９は、窒素原子と一緒になって、非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている３〜１０員複素環か、または、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリールを形成し、ならびに、
ＲａおよびＲｂは、それぞれ独立して、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜１２アルキル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルケニル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルキニル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ６〜１４アリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ７〜１６アラルキル、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリール、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている６〜１８員ヘテロアラルキル、非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている３〜１２員複素環、あるいは非置換のまたはＲ１２により１回もしくは２回以上置換されている４〜１８員複素環−アルキルから選択されるか、あるいは、ＲａおよびＲｂは、酸素原子と一緒になって、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されている５〜１０員複素環か、または、非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されている５〜１２員ヘテロアリールを形成し、
Ｒ１０は、ハロゲン、オキソ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１〜４アルコキシ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｈ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｒ１１は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｈ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｒ１２は、ハロゲン、オキソ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアノ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｈ、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｒ１３は、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ１〜４アルキル）２、−ＮＨＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＣＯＣ１〜４アルキル、−ＮＨＣＯＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、カルボキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル、−ＮＨＳＯ２Ｃ１〜４アルキル、Ｃ６〜１４アリール、Ｃ６〜１４アリールオキシまたはＣ６〜１４アリールオキシ−Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｒ１４は、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−ＮＨ−、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−または５〜１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、５〜１０員ヘテロアリールまたはＣ６〜１４アリールである。
その医薬上許容しうる塩。
【００１２】
本発明の化合物は、ＨＣＶポリメラーゼ阻害剤である。驚くべきことに、本発明に係る、特定の置換パターンを有する化合物は、他のチオフェンＨＣＶポリメラーゼ阻害剤と比べて改善された特性を示すことを見出した。したがって、本発明の化合物はＣ型肝炎感染症の治療および予防に対して優れた能力を有すると考えられる。
【００１３】
他の態様において、本発明の、治療上有効な量の化合物、組成物または組合せを患者に投与することを含む、患者におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防する方法を提供する。
【００１４】
他の態様において、本発明の１以上の化合物および１以上の医薬上許容しうる担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
他の態様において、本発明の化合物ならびにウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、ウイルスヘリカーゼ阻害剤、免疫調節薬、抗酸化剤、抗菌剤、治療用ワクチン、肝臓保護薬、アンチセンス薬、ＨＣＶ  ＮＳ２／３プロテアーゼの阻害剤、および内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤から選択される１または２以上のさらなる薬剤を含む組合せを提供する。
【００１６】
さらなる態様において、患者におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防するための、本発明の化合物、組成物または組合せの使用を提供する。
【００１７】
さらに他の態様において、患者におけるウイルスポリメラーゼの活性を阻害または低減するための、本発明の化合物、組成物または組合せの使用を提供する。
【００１８】
さらに他の態様において、患者におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防するための薬剤の製造用の、本発明の化合物、組成物または組合せの使用を提供する。
【００１９】
一実施形態において、本発明の化合物は、以下の実施形態が、独立して、または組み合わさって示されているものを含む。
【００２０】
好ましい化合物または方法の態様によれば、本発明の化合物は、式ＩＡ：
【００２１】
【化５】
2010509376.tif 000007
により表されるか、またはその医薬上許容しうる塩であり、
式中、Ｘ、ＹおよびＲ１はそれぞれ、上記で規定した通りである。
【００２２】
さらなる好ましい化合物または方法の態様によれば、本発明の化合物は、式ＩＢ：
【００２３】
【化６】
2010509376.tif 000008
により表されるか、またはその医薬上許容しうる塩であり、
式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、上記で規定した通りである。
【００２４】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ１は、非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルである。
【００２５】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ１は、非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルである。
【００２６】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ１は、Ｃ１〜６アルキルである。
【００２７】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
【００２８】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ１は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【００２９】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ１は、フェニルである。
【００３０】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ中のＺは、Ｈ、ハロゲン、あるいは非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルである。
【００３１】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ中のＺは、Ｈ、ハロゲン、あるいは非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜４アルキルである。
【００３２】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ中のＺは、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００３３】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ中のＺは、Ｈまたはメチルである。
【００３４】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＹは、ＣＯＯＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜１２アルキル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルケニル、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ２〜１２アルキニル、あるいは非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ６〜１４アリールである。
【００３５】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＹは、ＣＯＯＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキル、あるいは非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているＣ６〜１４アリールである。
【００３６】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＹは、ＣＯＯＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、非置換のまたはＲ１０により１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜４アルキル、あるいは非置換のまたはＲ１１により１回もしくは２回以上置換されているフェニルである。
【００３７】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＹは、ＣＯＯＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキルまたはフェニルである。
【００３８】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＹは、ＣＯＯＲ７であり、Ｒ７は、Ｈ、メチルまたはエチルである。
【００３９】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＹは、ＣＯＯＲ７であり、Ｒ７は、Ｈである。
【００４０】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ５は、非置換のまたはＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくは−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルである。
【００４１】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ５は、４位で置換されているシクロヘキシルである。
【００４２】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中、Ｘは、−ＮＲ６−ＣＯ−Ｒ５であり、Ｒ５は、４位で置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、カルボニルに対してトランス位にある。
【００４３】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ５は、非置換のまたは４位でＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくは−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により置換されているシクロヘキシルである。
【００４４】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中、Ｘは、−ＮＲ６−ＣＯ−Ｒ５であり、Ｒ５は、非置換のまたは４位で、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくは−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、カルボニル基に対してトランス位にある。
【００４５】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルである。
【００４６】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、４位で置換されているシクロヘキシルである。
【００４７】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、４位で置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、アミノ基に対してトランス位にある。
【００４８】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、４位で、ＯＨまたはＣ１〜６アルコキシにより置換されているシクロヘキシルである。
【００４９】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、
【００５０】
【化７】
2010509376.tif 000009
であり、Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、ヘテロアリールまたはＣ６〜１４アリールである。
【００５１】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、
【００５２】
【化８】
2010509376.tif 000010
であり、Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、ヘテロアリールまたはＣ６〜１４アリールである。
【００５３】
さらなる実施形態によれば、式Ｉ、ＩＡおよびＩＢ中のＲ６は、
【００５４】
【化９】
2010509376.tif 000011
であり、Ｒ１４ａは、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルである。
【００５５】
さらなる実施形態によれば、式ＩまたはＩＢ中、Ｒ６は、４位で、ＯＨ、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アルコキシにより置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、アミノ基に対してトランス位にある。
【００５６】
さらなる実施形態によれば、式ＩまたはＩＢ中、Ｒ６は、４位で、ＯＨ、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ１〜６アルコキシにより置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、アミノ基に対してトランス位にあり、Ｒ５は、非置換のまたは４位で、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン化Ｃ１〜６アルコキシ、シアノ、ニトロ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）もしくは−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２により置換されているシクロヘキシルであり、前記４位の置換基は、カルボニル基に対してトランス位にある。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のあるいはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｈａｌ（例えば、Ｆ）、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−ＮＨ−、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）−またはトリアゾリルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００５８】
本発明の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｈａｌ（例えば、Ｆ）、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−ＮＨ−、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）−またはトリアゾリルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００５９】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたは４位でＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、４位で、ＯＨ、Ｈａｌ（例えば、Ｆ）、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−ＮＨ−、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）−またはトリアゾリルにより置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００６０】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたは４位でＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、４位で、ＯＨ、Ｈａｌ（例えば、Ｆ）、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−ＮＨ−、Ｃ１〜４アルキル−ＣＯ−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）−またはトリアゾリルにより置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００６１】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００６２】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシまたはＣ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００６３】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のまたはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシまたはＣ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００６４】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシまたはＣ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００６５】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のあるいはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００６６】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、ＨまたはＣ１〜４アルキルである。
【００６７】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のあるいは−ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、もしくはヒドロキシル−ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＨである。
【００６８】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルもしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、ＯＨ、Ｆ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜４アルキルにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｙは、ＣＯＯＨである。
【００６９】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のあるいはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００７０】
【化１０】
2010509376.tif 000012
であり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、ヘテロアリールまたはＣ６〜１４アリールであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００７１】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００７２】
【化１１】
2010509376.tif 000013
であり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、−Ｓ（Ｏ）０〜２Ｃ１〜４アルキル、ヘテロアリールまたはＣ６〜１４アリールであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００７３】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のあるいはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００７４】
【化１２】
2010509376.tif 000014
であり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００７５】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００７６】
【化１３】
2010509376.tif 000015
であり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキルまたはハロゲン化Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００７７】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に、非置換のあるいはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００７８】
【化１４】
2010509376.tif 000016
であり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００７９】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００８０】
【化１５】
2010509376.tif 000017
であり、
Ｒ１４ａは、Ｃ１〜６アルキルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００８１】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、各場合に非置換のあるいはＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２もしくはヒドロキシルにより１回もしくは２回以上置換されているＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００８２】
【化１６】
2010509376.tif 000018
であり、
Ｒ１４ａは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００８３】
本発明の他の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、式（ＩＢ）の化合物およびその医薬上許容しうる塩から選択され、式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、非置換のまたはＯＨ、Ｃ１〜４アルキルおよび／もしくはＣ１〜４アルコキシにより１回もしくは２回以上置換されているシクロヘキシルであり、
Ｒ６は、
【００８４】
【化１７】
2010509376.tif 000019
であり、
Ｒ１４ａは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルであり、
Ｙは、ＣＯＯＲ７であり、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ６〜１４アリールである。
【００８５】
本発明の１つの態様によれば、本発明の化合物は、
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（シス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（シス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；ヒドロクロリド；
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−シス−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸；および
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−フルオロ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチルシクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸、から選択される。
【００８６】
１つの実施形態において、本発明は、本明細書に記載した本発明に係る１以上の化合物および１以上の医薬上許容しうる担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００８７】
１つの実施形態において、本発明は、本明細書に記載した本発明に係る１以上の化合物および本明細書に記載した本発明に係る１以上の化合物を含み、さらに、ウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、ウイルスヘリカーゼ阻害剤、免疫調節薬、抗酸化剤、抗菌剤、治療用ワクチン、肝臓保護薬、アンチセンス薬、ＨＣＶ  ＮＳ２／３プロテアーゼの阻害剤、および内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤から選択される１以上のさらなる薬剤を投与することを含む、医薬組成物を提供する。
【００８８】
他の実施形態において、本明細書に記載した本発明に係る１以上の化合物ならびにウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、ウイルスヘリカーゼ阻害剤、免疫調節薬、抗酸化剤、抗菌剤、治療用ワクチン、肝臓保護薬、アンチセンス薬、ＨＣＶ  ＮＳ２／３プロテアーゼの阻害剤および内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤から選択される１または２以上のさらなる薬剤を含む組合せを提供する。
【００８９】
一の組合せの実施形態において、前記化合物およびさらなる薬剤を逐次的に投与する。
【００９０】
他の組合せの実施形態において、前記化合物およびさらなる薬剤を同時に投与する。
【００９１】
上記の組合せは、医薬製剤の形での使用に対し都合良く提供することができ、したがって、上記で規定した組合せを医薬上許容しうる担体とともに含む医薬製剤は、本発明のさらなる態様を含む。
【００９２】
組成物用および組合せ用のさらなる薬剤は、例えば、リバビリン、アマンタジン、メリメポジブ、レボビリン、ビラミジンおよびマキサミンなどである。
【００９３】
本明細書で用いる「ウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤」という用語は、哺乳動物におけるＨＣＶセリンプロテアーゼを含むウイルスセリンプロテアーゼの機能を阻害するのに有効な薬剤を意味する。ＨＣＶセリンプロテアーゼの阻害剤としては、例えば、ＷＯ９９／０７７３３（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ９９／０７７３４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ００／０９５５８（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ００／０９５４３（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ００／５９９２９（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ０２／０６０９２６（ＢＭＳ）、ＷＯ２００６０３９４８８（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００５０７７９６９（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００５０３５５２５（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００５０２８５０２（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００５００７６８１（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００４０９２１６２（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００４０９２１６１（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ２００３０３５０６０（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ０３／０８７０９２（Ｖｅｒｔｅｘ）、ＷＯ０２／１８３６９（Ｖｅｒｔｅｘ）またはＷＯ９８／１７６７９（Ｖｅｒｔｅｘ）に記載されている化合物などがある。
【００９４】
本明細書で用いる「ウイルスポリメラーゼ阻害剤」という用語は、哺乳動物におけるＨＣＶポリメラーゼを含むウイルスポリメラーゼの機能を阻害するのに有効な薬剤を意味する。ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤としては、非ヌクレオシド、例えば、ＷＯ０３／０１０１４０（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ０３／０２６５８７（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＷＯ０２／１００８４６Ａ１、ＷＯ０２／１００８５１Ａ２、ＷＯ０１／８５１７２Ａ１（ＧＳＫ）、ＷＯ０２／０９８４２４Ａ１（ＧＳＫ）、ＷＯ００／０６５２９（Ｍｅｒｃｋ）、ＷＯ０２／０６２４６Ａ１（Ｍｅｒｃｋ）、ＷＯ０１／４７８８３（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、ＷＯ０３／０００２５４（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）およびＥＰ１２５６６２８Ａ２（Ａｇｏｕｒｏｎ）に記載されている化合物などがある。
【００９５】
さらに、ＨＣＶポリメラーゼの他の阻害剤としては、ヌクレオシド類似体、例えば、ＷＯ０１／９０１２１Ａ２（Ｉｄｅｎｉｘ）、ＷＯ０２／０６９９０３Ａ２（Ｂｉｏｃｒｙｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）およびＷＯ０２／０５７２８７Ａ２（Ｍｅｒｃｋ／Ｉｓｉｓ）およびＷＯ０２／０５７４２５Ａ２（Ｍｅｒｃｋ／Ｉｓｉｓ）に記載されている化合物などもある。
【００９６】
ＨＣＶポリメラーゼのヌクレオシド阻害剤の特定の例としては、Ｒ１６２６／Ｒ１４７９（Ｒｏｃｈｅ）、Ｒ７１２８（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＫ−０６０８（Ｍｅｒｃｋ）、Ｒ１６５６（Ｒｏｃｈｅ−Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ）およびバロピシタビン（Ｖａｌｏｐｉｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｉｄｅｎｉｘ）などがある。
【００９７】
ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤の特定の例としては、ＪＴＫ−００２／００３およびＪＴＫ−１０９（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、ＨＣＶ−７９６（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ）、ＧＳ−９１９０（Ｇｉｌｅａｄ）ならびにＰＦ−８６８，５５４（Ｐｆｉｚｅｒ）などがある。
【００９８】
本明細書で用いる「ウイルスヘリカーゼ阻害剤」という用語は、哺乳動物におけるフラビウイルス科ウイルスヘリカーゼを含むウイルスヘリカーゼの機能を阻害するのに有効な薬剤を意味する。
【００９９】
本明細書で用いる「免疫調節薬」は、哺乳動物における免疫系の応答を増大または増強するのに有効な薬剤を意味する。免疫調節薬としては、例えば、クラスＩインターフェロン（α−、β−、δ−およびΩ−インターフェロン、τ−インターフェロン、コンセンサスインターフェロン、およびアシアロインターフェロンなど）、クラスＩＩインターフェロン（γ−インターフェロンなど）ならびにペグインターフェロンなどがある。
【０１００】
本明細書で用いる「クラスＩインターフェロン」という用語は、１型受容体にすべて結合するインターフェロンの群から選択されるインターフェロンを意味する。これは、天然および合成により生成したクラスＩインターフェロンを含む。クラスＩインターフェロンの例としては、α−、β−、δ−およびΩ−インターフェロン、τ−インターフェロン、コンセンサスインターフェロンならびにアシアロインターフェロンなどがある。本明細書で用いる「クラスＩＩインターフェロン」という用語は、ＩＩ型受容体にすべて結合するインターフェロンの群から選択されるインターフェロンを意味する。クラスＩＩインターフェロンの例としては、γ−インターフェロンなどがある。
【０１０１】
アンチセンス薬としては、例えば、ＩＳＩＳ−１４８０３などがある。
【０１０２】
ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼの阻害剤の特定の例としては、ＢＩＬＮ−２０６１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＳＣＨ−６およびＳＣＨ−５０３０３４／ボセプレビル（Ｂｏｃｅｐｒｅｖｉｒ）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、ＶＸ−９５０／テラプレビル（ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒ）（Ｖｅｒｔｅｘ）およびＩＴＭＮ−Ｂ（ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ）、ＧＳ９１３２（Ｇｉｌｅａｄ）、ＴＭＣ−４３５３５０（Ｔｉｂｏｔｅｃ／Ｍｅｄｉｖｉｒ）、ＩＴＭＮ−１９１（ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ）、ＭＫ−７００９（Ｍｅｒｃｋ）などがある。
【０１０３】
内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤としては、ＩＳＩＳ−１４８０３（ＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＷＯ２００６０１９８３１（ＰＴＣ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）に記載されている化合物などがある。
【０１０４】
一実施形態において、前記さらなる薬剤は、インターフェロンα、リバビリン、マリアアザミ（silybum marianum）、インターロイキン−１２、アマンタジン、リボザイム、チモシン、Ｎ−アセチルシステインまたはシクロスポリンである。
【０１０５】
一実施形態において、前記さらなる薬剤は、インターフェロンα  １Ａ、インターフェロンα  １Ｂ、インターフェロンα  ２Ａまたはインターフェロンα  ２Ｂである。
【０１０６】
インターフェロンは、ペグ形および非ペグ形のものが入手可能である。ペグインターフェロンには、ＰＥＧＡＳＹＳ（商標）およびＰｅｇ−ｉｎｔｒｏｎ（商標）などがある。
【０１０７】
慢性Ｃ型肝炎に対するＰＥＧＡＳＹＳ（商標）単剤療法の推奨用量は、腹部または大腿部への皮下投与による、４８週の間、週１回１８０ｍｇ（１．０ｍＬバイアルまたは０．５ｍＬ前充てん注射器）である。
【０１０８】
慢性Ｃ型肝炎に対する、リバビリンと併用する場合のＰＥＧＡＳＹＳ（商標）の推奨用量は、週１回１８０ｍｇ（１．０ｍＬバイアルまたは０．５ｍＬ前充てん注射器）である。
【０１０９】
リバビリンの１日当たりの用量は、２つに分けた用量での経口投与される、８００ｍｇ〜１２００ｍｇである。前記用量は、ベースライン疾患特性（例えば、遺伝子型）、治療に対する反応および治療法の忍容性に応じて、患者ごとに個別化すべきである。
【０１１０】
ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ（商標）治療法の推奨用量は、皮下に１年間、１．０ｍｇ／ｋｇ／週である。前記用量は、同じ曜日に投与すべきである。
【０１１１】
リバビリンと併用投与する場合、ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎの推奨用量は、１．５μｇ／ｋｇ／週である。
【０１１２】
一実施形態において、ウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤は、フラビウイルス科ウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤である。
【０１１３】
一実施形態において、ウイルスポリメラーゼ阻害剤は、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼ阻害剤である。
【０１１４】
一実施形態において、ウイルスヘリカーゼ阻害剤は、フラビウイルス科ウイルスヘリカーゼ阻害剤である。
【０１１５】
さらなる実施形態において、
ウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤は、ＨＣＶセリンプロテアーゼ阻害剤であり、
ウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ＨＣＶポリメラーゼ阻害剤であり、
ウイルスヘリカーゼ阻害剤は、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤である。
【０１１６】
一実施形態において、本発明は、治療上有効な量の、式Ｉによる１以上の化合物を宿主に投与することを含む、宿主におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防する方法を提供する。
【０１１７】
一実施形態において、ウイルス感染症は、フラビウイルス感染症から選択される。
【０１１８】
一実施形態において、フラビウイルス感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ウシウイルス性下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）、豚コレラウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルスまたは黄熱病ウイルスである。
【０１１９】
一実施形態において、フラビウイルス科ウイルス感染症は、Ｃ型肝炎ウイルス感染症（ＨＣＶ）である。
【０１２０】
一実施形態において、本発明は、治療上有効な量の、本明細書に記載された本発明に係る１以上の化合物を宿主に投与することを含み、ウイルスセリンプロテアーゼ阻害剤、ウイルスポリメラーゼ阻害剤、ウイルスヘリカーゼ阻害剤、免疫調節薬、抗酸化剤、抗菌剤、治療用ワクチン、肝臓保護薬、アンチセンス薬、ＨＣＶ  ＮＳ２／３プロテアーゼの阻害剤、および内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）の阻害剤から選択される１以上のさらなる薬剤を投与することをさらに含む、宿主におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防する方法を提供する。
【０１２１】
一実施形態において、治療上有効な量の、本明細書に記載された本発明に係る化合物を宿主に投与することを含む、宿主におけるウイルスポリメラーゼの活性を阻害または低減する方法を提供する。
【０１２２】
一実施形態において、治療上有効な量の、本明細書に記載された本発明に係る化合物を宿主に投与することを含み、１または２以上のウイルスポリメラーゼ阻害剤を投与することをさらに含む、宿主におけるウイルスポリメラーゼの活性を阻害または低減する方法を提供する。
【０１２３】
一実施形態において、ウイルスポリメラーゼは、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼである。
【０１２４】
一実施形態において、ウイルスポリメラーゼは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。
【０１２５】
一実施形態において、ウイルスポリメラーゼは、ＨＣＶポリメラーゼである。
【０１２６】
前記組合せは、医薬製剤の形での使用に対して適宜提供することができ、したがって、上記で規定した組合せを医薬上許容しうる担体とともに含む医薬製剤は、本発明のさらなる態様を含む。
【０１２７】
本発明の方法または本発明の組合せでの使用に対する個々の成分は、別個のまたは配合した医薬製剤で逐次的または同時に投与することができる。
【０１２８】
一実施形態において、本発明は、宿主におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防するための、本明細書に記載された本発明に係る化合物の使用を提供する。
【０１２９】
一実施形態において、本発明は、宿主におけるフラビウイルス科ウイルス感染症を治療または予防するための薬剤の製造用の、本明細書に記載された本発明に係る化合物の使用を提供する。
【０１３０】
一実施形態において、本発明は、宿主におけるウイルスポリメラーゼの活性を阻害または低減するための、本明細書に記載された本発明に係る化合物の使用を提供する。
【０１３１】
本発明による化合物が立体異性体（例えば、光学異性体（＋および−）、幾何異性体（シスおよびトランス）ならびに配座異性体（アキシアルおよびエクアトリアル））として存在し得ることは、当業者により認識されるであろう。そのようなすべての立体異性体は、本発明の範囲に含まれる。
【０１３２】
本発明による化合物がキラル中心を含み得ることは、当業者により認識されるであろう。したがって、式で表される化合物は、２種の光学異性体（即ち、（＋）または（−）鏡像異性体）の形で存在し得る。そのようなすべての鏡像異性体およびラセミ混合物を含むその混合物は、本発明の範囲に含まれる。単一の光学異性体または鏡像異性体は、キラルＨＰＬＣ、酵素分解およびキラル補助基などの当該技術分野でよく知られている方法により得ることができる。
【０１３３】
一実施形態において、本発明の化合物は、対応する鏡像異性体を少なくとも９５％、少なくとも９７％、および少なくとも９９％含まない、単一の鏡像異性体の形で提供される。
【０１３４】
さらなる実施形態において、本発明の化合物は、対応する（−）鏡像異性体を少なくとも９５％含まない（＋）鏡像異性体の形である。
【０１３５】
さらなる実施形態において、本発明の化合物は、対応する（−）鏡像異性体を少なくとも９７％含まない（＋）鏡像異性体の形である。
【０１３６】
さらなる実施形態において、本発明の化合物は、対応する（−）鏡像異性体を少なくとも９９％含まない（＋）鏡像異性体の形である。
【０１３７】
さらなる実施形態において、本発明の化合物は、対応する（＋）鏡像異性体を少なくとも９５％含まない（−）鏡像異性体の形である。
【０１３８】
さらなる実施形態において、本発明の化合物は、対応する（＋）鏡像異性体を少なくとも９７％含まない（−）鏡像異性体の形である。
【０１３９】
さらなる実施形態において、本発明の化合物は、対応する（＋）鏡像異性体を少なくとも９９％含まない（−）鏡像異性体の形である。
【０１４０】
本発明の化合物の医薬上許容しうる塩も提供する。化合物の医薬上許容しうる塩という用語は、医薬上許容しうる無機および有機の酸および塩基から得られるものを意味する。適切な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸などがある。シュウ酸などの他の酸は、それら自体は医薬上許容しうるものでないが、本発明の化合物およびそれらの医薬上許容しうる酸付加塩を得る際の中間体として有用であり得る。
【０１４１】
アミノ酸から得られる塩も含まれる（例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン）。
【０１４２】
適切な塩基から得られる塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウム）、アンモニウム、ＮＲ４＋（ＲはＣ１〜４アルカリである）塩、コリンおよびトロメタミンなどがある。
【０１４３】
本発明に係る化合物に対する以下の言及は、当該化合物およびその医薬上許容しうる塩を含む。
【０１４４】
本発明の一実施形態において、医薬上許容しうる塩は、ナトリウム塩である。
【０１４５】
本発明の一実施形態において、医薬上許容しうる塩は、リチウム塩である。
【０１４６】
本発明の一実施形態において、医薬上許容しうる塩は、カリウム塩である。
【０１４７】
本発明の一実施形態において、医薬上許容しうる塩は、トロメタミン塩である。
【０１４８】
本発明の一実施形態において、医薬上許容しうる塩は、Ｌ−アルギニン塩である。
【０１４９】
本発明に係る化合物が様々な多形性形態で存在し得ることは、当業者により理解されるであろう。当該技術分野で知られているように、多形性とは、複数の異なる結晶または「多形」種として結晶化する化合物の能力である。多形とは、固体状態の化合物分子の少なくとも２つの異なる配列または多形性形態を有する化合物の固体結晶相である。いかなる所定の化合物の多形性形態も、同じ化学式または組成により規定され、２つの異なる化合物の結晶構造と同じように化学構造が異なっている。
【０１５０】
本発明に係る化合物が様々な溶媒和物（solvate）の形態、例えば、水和物で存在し得ることは、当業者によりさらに理解されるであろう。本発明の化合物の溶媒和物は、溶媒分子が、結晶化過程中に化合物分子の結晶格子構造に取り込まれるときにも生成し得る。
【０１５１】
特に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野において通常の技量を有する者により一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書で言及するすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それら全体の参照により引用される。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が優先するものとする。さらに、材料、方法および実施例は、例示的なものにすぎず、何ら限定するものではない。
【０１５２】
「アルキル」という用語は、線状、分枝または環状の炭化水素部分を意味する。「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、分子鎖に１もしくは２以上の二重結合または三重結合を有する線状、分枝または環状の炭化水素部分を意味する。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ネオヘキシル、アリル、ビニル、アセチレニル、エチレニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンテニル、ペンタジエニル、ヘキセニル、ヘキサジエニル、ヘキサトリエニル、ヘプテニル、ヘプタジエニル、ヘプタトリエニル、オクテニル、オクタジエニル、オクタトリエニル、オクタテトラエニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキセニル、シクロヘキシジエニルおよびシクロヘキシルを含むが、これらに限定されない。示される場合には、「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」は、１または２以上の水素原子がハロゲンにより置換されているハロアルキル（例えばハロゲン化アルキル）の場合のように、任意に置換されていてもよい。ハロアルキルの例は、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、ジクロロメチル、クロロメチル、トリフルオロエチル、ジフルオロエチル、フルオロエチル、トリクロロエチル、ジクロロエチル、クロロエチル、クロロフルオロメチル、クロロジフルオロメチル、ジクロロフルオロエチルを含むが、これらに限定されない。ハロゲンの他にも、示される場合には、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基は、例えば、オキソ、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、＝ＮＯ−Ｒｅ、ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）−ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂによって任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１５３】
「シクロアルキル」および「シクロアルケニル」という用語は、それぞれ環状炭化水素のアルキルまたはアルケニルを意味し、単環（例えば、シクロヘキシル）、スピロ（例えば、スピロ［２．３］ヘキサニル）、縮合（例えば、ビシクロ［４．４．０］デカニル）および架橋（例えば、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル）の炭化水素部分を含むことを意味する。
【０１５４】
「アルコキシ」、「アルケニルオキシ」および「アルキニルオキシ」という用語は、酸素原子を介して隣接原子に共有結合している、それぞれアルキル、アルケニルまたはアルキニル部分を意味する。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基と同様に、示される場合には、アルコキシ、アルケニルオキシおよびアルキニルオキシ基は、任意に置換されていてもよい。例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ、トリフルオロメトキシおよびネオヘキシルオキシが含まれるが、これらに限定されない。アルコキシ、アルケニルオキシおよびアルキニルオキシ基は、例えば、ハロゲン、オキソ、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、＝ＮＯ−Ｒｅ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂによって任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１５５】
「アリール」という用語は、１以上のベンゼノイドタイプの環（即ち、単環または多環であり得る）を含み、示される場合には、１または２以上の置換基で任意に置換されていてもよい炭素環部分を意味する。例として、フェニル、トリル、ジメチルフェニル、アミノフェニル、アニリニル、ナフチル、アントリル、フェナントリルまたはビフェニルが含まれるが、これらに限定されない。アリール基は、例えば、ハロゲン、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、任意に置換された５〜１２員ヘテロアリール、任意に置換された６〜１８員ヘテロアラルキル、任意に置換された３〜１２員複素環、任意に置換された４〜１８員複素環アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂにより任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１５６】
「アラルキル」という用語は、アルキル、アルケニルまたはアルキニルにより、隣接原子に結合しているアリール基を意味する。アリール基と同様に、示される場合には、アラルキル基もまた、任意に置換されていてもよい。例として、ベンジル、ベンズヒドリル、トリチル、フェネチル、３−フェニルプロピル、２−フェニルプロピル、４−フェニルブチルおよびナフチルメチルが含まれるが、これらに限定されない。示される場合には、アラルキル基は、例えば、ハロゲン、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、任意に置換された５〜１２員ヘテロアリール、任意に置換された６〜１８員ヘテロアラルキル、任意に置換された３〜１２員複素環、任意に置換された４〜１８員複素環アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂによって任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１５７】
「複素環」という用語は、任意に置換された非芳香族の飽和または部分的に飽和したもので、当該環状部分が酸素（Ｏ）、硫黄（Ｓ）または窒素（Ｎ）から選択される１以上のヘテロ原子により中断されているものを意味する。複素環は、単環式または多環式の環であり得る。例として、アゼチジニル、ジオキソラニル、モルホリニル、モルホリノ、オキセタニル、ピペラジニル、ピペリジル、ピペリジノ、シクロペンタピラゾリル、シクロペンタオキサジニル、シクロペンタフラニルが含まれるが、これらに限定されない。示される場合には、複素環基は、例えば、ハロゲン、オキソ、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、＝ＮＯ−Ｒｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ７〜１２アラルキル、Ｃ６〜１２アリール、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ６〜１０アリールオキシ、Ｃ７〜１０アリールアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂによって、任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１５８】
「複素環−アルキル」という用語は、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基により隣接原子に結合している、任意に置換されている複素環基を意味する。５〜１８員複素環−アルキル部分において、５〜１８員は複素環部分とアルキル、アルケニルまたはアルキニル基との双方に存在する原子を意味するものと理解される。例えば、以下の基は、７員複素環−アルキルに含まれる（＊は結合点を表す）。
【０１５９】
【化１８】
2010509376.tif 000020
【０１６０】
示される場合には、複素環−アルキル基は、例えば、ハロゲン、オキソ、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ６〜１０アリールオキシ、Ｃ７〜１０アリールアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、＝ＮＯ−Ｒｅ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂにより、任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１６１】
「ヘテロアリール」という用語は、任意に置換されている芳香環部分であって、当該環部分が酸素（Ｏ）、硫黄（Ｓ）または窒素（Ｎ）から選択される１以上のヘテロ原子により中断されているものを意味する。ヘテロアリールは、単環式または多環式の環であり得る。例として、アゼピニル、アジリジニル、アゼチル、ジアゼピニル、ジチアジアジニル、ジオキサゼピニル、ジチアゾリル、フラニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、オキシラニル、オキサジニル、オキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピリジル、ピラニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、チアトリアゾリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チエニル、テトラジニル、チアジアジニル、トリアジニル、チアジニル、チオピラニル、フロイソキサゾリル、イミダゾチアゾリル、チエノイソチアゾリル、チエノチアゾリル、イミダゾピラゾリル、ピロロピロリル、チエノチエニル、チアジアゾロピリミジニル、チアゾロチアジニル、チアゾロピリミジニル、チアゾロピリジニル、オキサゾロピリミジニル、オキサゾロピリジル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、イミダゾピラジニル、プリニル、ピラゾロピリミジニル、イミダゾピリジニル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾオキサチオリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジチオリル、インドリジニル、インドリニル、イソインドリニル、フロピリミジニル、フロピリジル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、チエノピリミジニル、チエノピリジル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサジニル、ベンゾチアジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾピラニル、ピリドピリダジニルおよびピリドピリミジニルが含まれるが、これらに限定されない。示される場合には、ヘテロアリール基は、例えば、ハロゲン、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ６〜１０アリールオキシ、Ｃ７〜１０アリールアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂにより、任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。
【０１６２】
「ヘテロアラルキル」という用語は、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基により隣接原子に結合している、任意に置換されているヘテロアリール基を意味する。示される場合には、ヘテロアラルキル基は、例えば、ハロゲン、−ＮＲｄＲｅ、−ＣＯＮＲｄＲｅ、−ＮＲｄＣＯＲｅ、カルボキシ、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆ、アジド、シアノ、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇ、ヒドロキシル、ニトロ、ニトロソ、−Ｎ（Ｒｈ）ＣＯＮＲｉＲｊ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルケニルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、Ｓ（Ｏ）０〜２Ｒａ、Ｃ６〜１０アリール、Ｃ６〜１０アリールオキシ、Ｃ７〜１０アリールアルキル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、ＮＲａＳＯ２ＮＲｂＲｃ、ＣＲａＮ＝ＯＲｂおよび／またはＮＲａＣＯＯＲｂにより、任意に置換されていてもよく、式中、Ｒａ〜Ｒｊは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニルまたはＣ２〜４アルキニルである。６〜１８員ヘテロアラルキル部分において、前記６〜１８員は、複素環部分とアルキル、アルケニルまたはアルキニル基との双方に存在する原子を意味すると理解される。例えば、以下の基は、７員ヘテロアラルキルに含まれる（＊は結合点を表す）。
【０１６３】
【化１９】
2010509376.tif 000021
【０１６４】
「ハロゲン原子」は、具体的にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子である。
【０１６５】
「アミジノ」という用語は、−Ｃ（＝ＮＲｄ）ＮＲｅＲｆを意味し、式中、Ｒｄ、ＲｅおよびＲｆは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ６〜１２アリールおよびＣ７〜１２アラルキルから選択されるか、あるいはＲｅおよびＲｆは、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換された４〜１０員複素環または任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールを形成している。
【０１６６】
「グアニジノ」という用語は、−Ｎ（Ｒｄ）Ｃ（＝ＮＲｅ）ＮＲｆＲｇを意味し、式中、Ｒｄ、Ｒｅ、ＲｆおよびＲｇは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ６〜１２アリールおよびＣ７〜１２アラルキルから選択されるか、あるいはＲｆおよびＲｇは、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換された４〜１０員複素環または任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールを形成している。
【０１６７】
「アミド」という用語は、−ＣＯＮＲｄＲｅおよび−ＮＲｄＣＯＲｅを意味し、式中、ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ６〜１２アリールおよびＣ７〜１２アラルキルから選択されるか、あるいはＲｄおよびＲｅは、それらが結合している窒素（または−ＮＲｄＣＯＲｅの場合には窒素原子およびＣＯ基）と一緒になって、任意に置換された４〜１０員複素環または任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールを形成している。
【０１６８】
「アミノ」という用語は、１または２以上の水素原子を置換することによって得られるアンモニアの誘導体を意味し、−ＮＲｄＲｅを含み、式中、ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ６〜１２アリールおよびＣ７〜１２アラルキルから選択されるか、あるいはＲｄおよびＲｅは、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換された４〜１０員複素環または任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールを形成している。
【０１６９】
「スルホンアミド」という用語は、ＳＯ２ＮＲｄＲｅおよび−ＮＲｄＳＯ２Ｒｅを意味し、式中、ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ６〜１２アリールおよびＣ７〜１２アラルキルから選択されるか、あるいはＲｄおよびＲｅは、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換された４〜１０員複素環または任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールを形成している。
【０１７０】
硫黄原子が存在する場合、その硫黄原子は、異なる酸化レベル、即ち、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ２であり得る。そのようなすべての酸化レベルは、本発明の範囲内にある。
【０１７１】
「独立して」という用語は、置換基が各項目（item）について同じか、または異なり得ることを意味する。
【０１７２】
「宿主」または「患者」という用語は、ヒトの男性または女性、例えば、小児、若者または成人を意味する。
【０１７３】
治療に用いるのに必要となる本発明の化合物の量は、選択される個々の化合物だけでなく、投与経路、治療を必要とする状態の性質、ならびに患者の年齢および状態によっても異なり、最終的には指導医（the attendant physician）または指導獣医の自由裁量であることは、理解されよう。しかし、一般に、適切な用量は、１日当たり約０．１〜約７５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、例えば、０．５〜６０ｍｇ／ｋｇ／日、または例えば、１〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内であろう。
【０１７４】
所望の用量は、単一用量で、または適当な間隔で投与される分割用量、例えば、１日当たり２、３、４もしくはそれを超える回数の用量として、適宜示され得る。
【０１７５】
化合物は、例えば、単位剤形当たり１０〜１５００ｍｇ、好都合には２０〜１０００ｍｇ、最も好都合には５０〜７００ｍｇの有効成分を含む、単位剤形で適宜投与される。
【０１７６】
理想的には、有効成分は、約１〜約７５μＭ、約２〜５０μＭ、約３〜約３０μＭという、活性化合物の最高血漿中濃度を達成するように投与すべきである。これは、例えば、任意により生理食塩水中での有効成分の０．１〜５％溶液の静脈内注射、または約１〜約５００ｍｇの有効成分を含むボーラスとして経口投与することにより、達成することができる。所望の血中濃度は、約０．０１〜約５．０ｍｇ／ｋｇ／時間を供給するための持続注入により、または約０．４〜約１５ｍｇ／ｋｇの有効成分を含む間欠注入により、維持することができる。
【０１７７】
本発明の化合物またはその医薬上許容しうる塩を、同じウイルスに対して活性のある第２の治療薬と併用する場合、各化合物の用量は、その化合物を単独で用いる場合と同じであってもよく、または異なっていてもよい。適当な用量は、当業者により容易に理解されるであろう。
【０１７８】
治療の用途で、本発明の化合物を未処理の化学物質として投与することは可能であるが、有効成分を医薬組成物として提供することが好ましい。したがって、本発明は、本発明の化合物またはその医薬上許容しうる誘導体、および１または２以上のそれらの医薬上許容しうる担体、ならびに、任意に、他の治療および／または予防の成分を含む、医薬組成物をさらに提供する。前記担体は、製剤の他の成分と適合性があり、その受容者に対して有害でないという意味において、「許容しうる」ものでなければならない。
【０１７９】
医薬組成物は、経口、直腸、鼻、局所（頬および舌下を含む）、経皮、膣または非経口（筋肉内、皮下および静脈内を含む）の投与に適するもの、あるいは吸入またはガス注入による投与に適する形態のものを含む。製剤は、適当な場合には、別個の剤形で都合良く提供することができ、薬学の技術分野でよく知られている任意の方法により調製することができる。すべての方法は、活性化合物を液状の担体もしくは微細な固体状の担体またはこれらの両方と結合した状態にし、それから、必要な場合には、生成物を所望の製剤に成形する段階を含む。
【０１８０】
経口投与に適する医薬組成物は、それぞれ予定量の有効成分を含むカプセル、カシェ剤または錠剤などの別個の剤形として；散剤または顆粒として；液剤、懸濁剤として、あるいは乳剤として、都合良く提供することができる。有効成分は、ボーラス、練り薬またはペースト剤としても提供することができる。経口投与用の錠剤およびカプセルは、結合剤、充填剤、滑沢剤、崩壊剤または湿潤剤などの従来の賦形剤を含んでいてもよい。錠剤は、当該技術分野でよく知られている方法に従って被覆してもよい。経口液体製剤は、例えば、水性もしくは油性の懸濁剤、液剤、乳剤、シロップ剤もしくはエリキシル剤の形態であってよく、または、使用前の水もしくは他の適切な媒体を伴った構成に対して乾燥品として提供することができる。そのような液体製剤は、懸濁化剤、乳化剤、非水媒体（食用油を含んでもよい）、または保存剤などの従来の添加剤を含んでいてもよい。
【０１８１】
本発明に係る化合物は、非経口投与（例えば、注射、例えば、ボーラス注射または持続注入による）用に製剤化されてもよいし、添加保存剤を有する、アンプル、前充てん注射器、少量の注入液（infusion）または多数回投与型容器中の単位剤形として提供してもよい。組成物は、油性または水性の媒体中の懸濁剤、液剤または乳剤のような剤形を採ってもよいし、懸濁剤、安定剤および／または分散剤のような製剤化剤を含んでもよい。あるいは、有効成分は、使用前の適切な媒体、例えば発熱物質を含まない滅菌水を伴った構成用の粉末の形態であり得、無菌固体の無菌的分離か、または溶液からの凍結乾燥によって得られる。
【０１８２】
表皮への局所投与のために、本発明に係る化合物は、軟膏剤、クリーム剤またはローション剤として、あるいは経皮貼付剤として製剤化されてもよい。そのような経皮貼付剤は、リナロール、カルバクロール、チモール、シトラール、メントールおよびｔ−アネトールなどの浸透促進剤を含んでもよい。軟膏剤およびクリーム剤は、例えば、適切な粘稠化剤および／またはゲル化剤の添加により、水性または油性の基剤を用いて製剤化することができる。ローション剤は、水性または油性の基剤を用いて調合することができ、通常、１または２以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、粘稠化剤または着色剤も含むであろう。
【０１８３】
口内局所投与に適する組成物としては、香料基剤（通常、スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴム）中に有効成分を含むロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴムのような不活性基剤中に有効成分を含む錠剤；ならびに適切な液体担体中に有効成分を含む口腔洗浄剤などがある。
【０１８４】
担体が固体である、直腸投与に適する医薬組成物は、例えば、単位用量坐剤として提供される。適切な担体としては、ココアバターおよび当該技術分野で一般的に使用される他の物質が挙げられ、坐剤は、活性化合物を軟化担体または溶融担体と混合した後に、冷却し、型取りすることによって、都合良く形成することができる。
【０１８５】
膣投与に適する組成物は、有効成分に加えて当該技術分野で適当であると知られているような担体を含む、膣坐剤、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、発泡剤または噴霧剤として提供することができる。
【０１８６】
鼻内投与のために、本発明の化合物は、液体の噴霧剤または分散性粉剤（dispersible powder）として、あるいは滴剤の形で用いることができる。滴剤は、さらに１つの分散剤、可溶化剤または懸濁化剤も含む、水性または非水性の基剤を用いて製剤化することができる。液体噴霧剤は、加圧パックから都合良く送出される。
【０１８７】
吸入による投与のために、本発明に係る化合物は、ガス注入器、噴霧器または加圧パックから、あるいはエアゾール噴霧剤を送出する他の好都合な手段により、都合良く送出される。加圧パックは、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスのような適切な噴射剤を含んでもよい。加圧エアゾール剤の場合、用量単位は、計測した量を送出するためのバルブを備えることにより決定し得る。
【０１８８】
あるいは、吸入またはガス注入による投与のために、本発明に係る化合物は、乾燥粉末組成物、例えば、前記化合物と、ラクトースまたはデンプンのような適切な粉末基剤との粉末混合物の形態を採り得る。前記粉末組成物は、粉末を吸入器またはガス注入器により投与することができる、例えば、カプセルまたはカートリッジあるいは、例えばゼラチンまたはブリスターパック中に、単位剤形として提供することができる。
【０１８９】
所望の場合には、有効成分の持続的放出をもたらすように構成された上述の製剤を用いることができる。
【０１９０】
式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：
【０１９１】
【化２０】
2010509376.tif 000022
の化合物を、式：
【０１９２】
【化２１】
2010509376.tif 000023
の化合物と、従来のソノガシラ（Sonogashira）カップリング条件下で反応させることによって調製することができ、
式中、
Ｘは、上記で規定したように、例えば、−ＮＲ６−ＣＯ−Ｒ５であり、
Ｒ１、Ｒ６およびＲ５は、本明細書で規定した通りであり、Ｐｇ１は、ＯＨまたはカルボキシル保護基であり、Ｈａｌは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ（例えば、Ｂｒ）である。
【０１９３】
さらなる実施形態において、Ｐｇ１は、メトキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシである。
【０１９４】
さらなる実施形態において、Ｐｇ１は、メトキシである。
【０１９５】
ソノガシラカップリング反応は、アセチレン含有化合物を製造するための、十分に確立された方法である。そのようなカップリングの条件は、当該技術分野でよく知られており、例えば、本願の実施例、Ｙａｍａｇｕｃｈｉら（Ｓｙｎｌｅｔｔ、１９９９年、５号、５４９〜５５０頁）、またはＴｙｋｗｉｎｓｋｉら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００３年、第４２号、１５６６〜１５６８頁）において見出すことができる。
【０１９６】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の合成に有用であり得る中間体も含む。特定の中間体は、式Ｗ
【０１９７】
【化２２】
2010509376.tif 000024
により表され、
式中、
Ｒ２、Ｈまたはアミノ保護基（例えば、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ｃｂｚ（ベンジルオキシカルボニル））およびＰｇ１は、ＯＨまたはカルボキシル保護基である。
【０１９８】
さらなる実施形態において、Ｐｇ１は、メトキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシである。
【０１９９】
さらなる実施形態において、Ｐｇ１は、メトキシである。
【０２００】
さらなる実施形態において、Ｒ２は、Ｈである。
【０２０１】
さらなる実施形態において、Ｒ２は、Ｂｏｃである。
【０２０２】
特定の中間体は、表Ａに示した化合物を含むが、これらに限定されない。
【０２０３】
【表１】
2010509376.tif 000025
【０２０４】
本発明のさらなる態様によれば、Ｘは、式３ａまたは１０ａまたは１０ｂの中間体を用いることを含む、
【０２０５】
【化２３】
2010509376.tif 000026
である式Ｉの化合物の調製の方法を提供する。
【０２０６】
本発明のさらなる態様によれば、Ｘは、式３ａまたは１０ａまたは１０ｂの中間体を用いることを含む、
【０２０７】
【化２４】
2010509376.tif 000027
である式Ｉの化合物の調製の方法を提供する。
【０２０８】
本発明のさらなる態様によれば、Ｒ１が式９ａまたは９ｂの中間体を用いることを含む３，３−ジメチル−ブト−１−イニルである、式Ｉの化合物の調製の方法を提供する。
【０２０９】
本発明のさらなる態様によれば、Ｒ１が式４ａの中間体を用いることを含む３，３−ジメチル−ブト−１−イニルであり、Ｒ６が式４ａの中間体を用いることを含む４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルである、式Ｉの化合物の調製の方法を提供する。
【０２１０】
本発明のさらなる態様によれば、Ｒ１が式５ａの中間体を用いることを含む３，３−ジメチル−ブト−１−イニルであり、Ｒ６が式５ａの中間体を用いることを含む４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルである、式Ｉの化合物の調製の方法を提供する。
【０２１１】
以下の一般的なスキームおよび実施例は、本発明の様々な実施形態を例示するために記載されており、範囲の限定とみなしてはならない。本発明の他の化合物は、一般的もしくは具体的に記載された反応物および／または以下の実施例で用いる操作条件を代えることによって得られることは、当業者により理解されるであろう。チオフェン化合物を得るための合成方法は、特許出願である米国特許第６，８８１，７４１号、２００３年１２月９日に出願されたＵＳＳＮ１０／７３０，２７２、２００５年１月２６日に出願されたＵＳＳＮ１１／０４２，４４２、２００６年５月１５日に出願されたＵＳＳＮ１１／４３３，７４９、ＷＯ０２／１００８５１、米国第２００４−０１１６５０９号、ＷＯ２００４／０５２８８５、米国第２００５−０００９８０４号、ＷＯ２００４／０５２８７９および米国第２００４−０１９２７０７号にも記載されている。チオフェンアルキニル化合物は、ＷＯ２００６／０７２３４７およびＷＯ２００６／０７２３４８にも開示されている。
【０２１２】
上記において、および以下の実施例において、すべての温度はセ氏温度で補正することなく示し、特に示さない限り、すべての部およびパーセントは重量基準である。
【０２１３】
下記の略語は、以下のように用いることができる。
Ｂｏｃ        ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＤＣＣ        １，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＥ        １，２−ジクロロエタン
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ    Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ        Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＴｏＡｃ    酢酸エチル
Ｈａｌ        ハロゲン
ＬＡＨ        水素化アルミニウムリチウム
ＭｅＯＨ      メタノール
ＴＦＡ        トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＬＤＡ        リチウムジイソプロピルアミド
ＴＬＣ        薄層クロマトグラフィー
ＲＢＯ        丸底フラスコ
【０２１４】
ＨＰＬＣによる精製はすべて、５μｍ粒子を充填した逆相Ｃ１８カラムを用いて行った。カラムの直径は１９ｍｍで、長さは１００ｍｍであった。溶出剤は、適当な勾配のアセトニトリルおよび３ｍＭ濃度のＨＣｌを含む水であった。
【０２１５】
実施例１：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸の調製
【０２１６】
【化２５】
2010509376.tif 000028
ステップＩ
３−アミノ−５−ブロモ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１７．０ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＴＨＦ（２１ｍＬ）の懸濁液を１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンケタール（１１．３ｍｇ、７２．０ｍｍｏｌ）で処理し、続いてジブチルチンジクロリド（１．０９８ｇ、３．６ｍｍｏｌ）で処理する。５分後に、フェニルシラン（９．７４ｍＬ、７９．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩攪拌する。濃縮後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ３、続いて食塩水で洗浄する。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、濃縮する。未精製（crude）の物質をヘキサン（５００ｍＬ）で希釈する。ろ過後、母液を蒸発乾固して、５−ブロモ−３−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デス−８−イルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２４．７９ｇ、収率９２％）を得る。
参照：ＷＯ２００４／０５２８８５
【０２１７】
ステップＩＩ
Ａ．トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリドの調製：
塩化オキサリル（ＤＣＭ中２Ｍ、１１７ｍＬ）を、トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸（１６．６ｇ、１１７ｍｍｏｌ）を含むＤＣＭ（３３ｍＬ）およびＤＭＦ（０．１ｍＬ）の懸濁液に１滴ずつ加え、反応混合物を室温で３時間攪拌する。ＤＣＭを減圧下で除去し、残留物をＤＣＭとともに共蒸発する。残留物をトルエンに溶解し、１Ｍ溶液とする。
【０２１８】
Ｂ．標的化合物の調製：
トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリドの１Ｍ溶液を、５−ブロモ−３−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２４．７９ｇ、６５ｍｍｏｌ）を含むトルエン（２５ｍＬ）の溶液に加え、続いてピリジン（５．７８ｍＬ、７１．５ｍｍｏｌ）を加える。次いで、得られた混合物を還流下で１６時間攪拌する。反応混合物をトルエン（６０ｍＬ）で希釈し、５℃まで冷却する。ピリジン（１２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５．６ｍＬ）を加えた後、混合物を５℃で２時間攪拌する。白色懸濁液をろ別し、トルエンを母液に加える。有機相を１０％クエン酸、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮する。残留物を沸騰へキサン（１５００ｍＬ）中で摩砕する。反応混合物を室温まで冷却させる。反応フラスコを氷浴に浸漬し、３０分間攪拌する。白色固体をろ別し、冷ヘキサン（２２５ｍＬ）で洗浄する。固体を、２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンを溶出剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、最終化合物である５−ブロモ−３−［（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチルシクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１０．５ｇ、３２％）を得る。
【０２１９】
ステップＩＩＩ
５−ブロモ−３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチルシクロヘキサン−カルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（８．６ｇ、１７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、３Ｎ  ＨＣｌ溶液（５０ｍＬ）で処理する。反応物を４０℃で３時間攪拌する。反応混合物を減圧下で蒸発させる。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、濃縮して、５−ブロモ−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−オキソシクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを固体（７．４ｇ、９５％）として得る。
【０２２０】
ステップＩＶ
Ｎ２雰囲気下、５−ブロモ−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−オキソシクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５．９ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を含む５０ｍＬのＭｅＯＨの冷（０℃）溶液にＮａＢＨ４（２５０ｍｇ、６．４ｍｍｏｌ）を少しずつ加える（約３０分）。添加が完結し、ＴＬＣ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１）により反応の完結を確認した後、１０ｍＬのＨＣｌ  ２％を加え、１５分間攪拌する。反応混合物を真空中で濃縮して乾燥する。反応混合物を水（２５ｍＬ）で回収した（recuperate）後、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相同士を合一し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濃縮乾燥する。残留物を、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：１）を溶出剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−ブロモ−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサン−カルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（４．５ｇ、収率７７％）を固体として得る。
【０２２１】
ステップＶ
化合物である５−ブロモ−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５００ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）および３，３−ジメチル−ブト−１−イン（３８５ｍｇ、４．６９ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（０．５ｍＬ）の溶液に、トリエチルアミン（１．０６ｍＬ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）（７０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＮ２雰囲気下、還流条件下で１６時間攪拌する。ＤＭＦおよびトリエチルアミンを減圧下で除去し、残留物を水と酢酸エチルとに分配する。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、残留物を酢酸エチルおよびヘキサン（１：２）を溶出剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを固体３３０ｍｇ（６６％）として得る。
【０２２２】
ステップＶＩ
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．１０ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ：メタノール：Ｈ２Ｏの３：２：１混合液（５．０ｍＬ）に溶解し、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏの１Ｎ溶液（０．６５ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）で処理する。６０℃で２時間攪拌した後、反応混合物をロータリーエバポレータで、減圧下で濃縮する。混合物を酢酸エチルと水とに分配する。水層を０．１Ｎ  ＨＣｌを用いて酸性化する。ＥｔＯＡｃ層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥する。ろ過、およびロータリーエバポレータでの減圧下での溶媒の除去後に、メタノールおよびジクロロメタン（１：９）を溶出剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を固体３０ｍｇ（３０％）として得る。ＥＳＩ−（Ｍ−Ｈ）：４４４．３。
【０２２３】
実施例２：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸の調製
【０２２４】
【化２６】
2010509376.tif 000029
ステップＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．２００ｇ、０．４３５ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＤＭＦ（２．０ｍＬ）の溶液に、ヨードメタン（０．１３６ｍＬ、２．１８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃まで冷却し、ＮａＨ（油中６０％懸濁液、３５ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を５分間に亘って少しずつ加える。混合物を０℃で１時間４０分攪拌し、水の添加により反応を停止させ、２Ｎ  ＨＣｌを用いて酸性にした。混合物を酢酸エチルで希釈し、食塩水で洗浄する。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮する。残留物を、０→５０％の酢酸エチルを含むヘキサンで溶出させる、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（６５ｍｇ、３２％）を得る。
【０２２５】
ステップＩＩ：
ステップＩからの５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを、前述（スキーム１、ステップＶＩ）のように加水分解して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を固体（６５ｍｇ、３２％）として得る。ＥＳＩ−（Ｍ−Ｈ）：４５８．３。
【０２２６】
実施例３：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸
【０２２７】
【化２７】
2010509376.tif 000030
ステップＩ
３−アミノチオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５．０ｇ、３１．８５ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＴＨＦ（９ｍＬ）の懸濁液を１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンケタール（５．０ｇ、３２．０５ｍｍｏｌ）で処理し、続いてジブチルチンジクロリド（４８２ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）で処理する。５分後に、フェニルシラン（４．３ｍＬ、３４．９６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩攪拌する。濃縮後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ３で洗浄し、続いて食塩水で洗浄する。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残留物を、３０％酢酸エチルを含むヘキサンを溶出剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、３−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（４．５ｇ、収率４７％）を得る。
【０２２８】
代替法：
３−アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１当量）をジクロロメタンに溶解し、続いて１，４−シクロヘキサンジオンモノエチレンアセタール（２当量）に溶解して、微黄色溶液を得る。この溶液を、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２．２当量）を含むジクロロメタンの懸濁液に加える。酢酸（２．４当量）を１５分間に亘って１滴ずつ加える。得られた懸濁液をＮ２下、２０〜２５℃で２４時間攪拌する。水を加えることにより反応を停止させ、１時間攪拌する。ジクロロメタン層を分離し、水で再び処理し、さらに１時間攪拌する。ジクロロメタン層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液に加え、２０〜２５℃で２０分間攪拌する。白色残留固体の一部をろ過し、次いで、有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発する。メタノールを残留物に加え、蒸発乾固する。残留物をメタノールに溶解し、０℃で２時間攪拌する。懸濁液を真空ろ過し、得られたろ過ケーキを冷メタノールで洗浄する。白色固体を真空下、３５〜４０℃で約２０時間乾燥して、標題の化合物を得る。
【０２２９】
ステップＩＩ
Ａ．トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリドの調製：
塩化オキサリル（ジクロロメタン中２Ｍ、１７ｍＬ）を、トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸（２．３ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（５ｍＬ）およびＤＭＦ（０．１ｍＬ）の懸濁液に１滴ずつ加える。反応混合物を室温で３時間攪拌する。揮発物を減圧下で除去して、未精製の酸クロリドを得、これを次の反応に直接用いる。
【０２３０】
Ｂ．トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリドを、３−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２．４ｇ、８．０８ｍｍｏｌ）を含むトルエン（１８ｍＬ）溶液に加え、続いてピリジン（０．７ｍＬ）に加える。次いで、得られた混合物を還流下で１６時間攪拌する。反応混合物をトルエン（７ｍＬ）で希釈し、５℃に冷却する。ピリジン（１．５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．８ｍＬ）を加えた後、混合物を５℃で２時間攪拌する。白色固体をろ過し、トルエンで洗浄する。ろ液を１０％クエン酸、ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮する。固体を２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンを溶出剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２．３ｇ、６８％）を得る。
【０２３１】
代替法：
窒素下、トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸（１．８当量）を含むトルエンの溶液に無水ＤＭＦを加える。反応混合物を攪拌し、塩化チオニル（２．１６当量）を３〜５分に亘って加える。次いで、混合物を室温で３時間攪拌する。反応が完結したとき、トルエンを反応混合物に加える。次いで、溶液を、減圧窒素下でその容積の半分まで蒸発させる。溶液をトルエンに溶解して、１Ｎ酸クロリド溶液を得る。
【０２３２】
３−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１当量）およびピリジン（２当量）を酸クロリド（１Ｎ）溶液に加える。反応混合物を還流下で１５時間攪拌する。反応が完結すると、反応混合物を室温に冷却し、次いで、メタノールおよびトルエンをそれに加える。反応混合物を室温で１時間攪拌し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を加える。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、約４倍量の溶媒になるまで蒸発する。溶液に、４倍量のヘプタンを攪拌しながら加える。反応フラスコを氷浴中に浸漬し、１２０分間攪拌し、ベージュ色の固体をろ別し、冷ヘプタンで洗浄し、次いで、真空オーブン中で一晩乾燥して、標題の化合物を得る。
【０２３３】
ステップＩＩＩ
ｎ−ＢｕＬｉ（２当量）を、ジイソプロピルアミン（１当量）を含む乾燥ＴＨＦの冷（−４０℃）溶液に、１０分に亘って１滴ずつ加える。反応混合物を同じ温度で３０分間攪拌する。次いで、３−［（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチルシクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１当量）を含むＴＨＦの溶液を、内部温度を約−４０℃に保ちながら１滴ずつ（３５分）加える。反応混合物を３０分間攪拌し、ヨウ素（２当量）を含むＴＨＦの溶液を１滴ずつ加え、ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液を加える前に同じ温度で３０分間攪拌する。反応混合物を酢酸エチルおよび水で希釈する。有機層を分離し、５％チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄する。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、懸濁液になるまで蒸発させ、次いで、ヘプタンを加える。懸濁液を０℃で３０分間攪拌し、ろ過し、ヘプタンで洗浄して、３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：（Ｍ＋Ｈ）：５４８．２１
【０２３４】
ステップＩＶ
窒素下、２５ｍＬのＲＢＦに、３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１当量）、ヨウ化銅（０．０２５当量）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）（０．０１当量）を加える。ＤＭＦ、トリエチルアミン（２．５当量）および３，３−ジメチル−ブト−１−イン（２当量）を加え、反応混合物をＮ２雰囲気下、４０℃で２時間攪拌する。反応混合物をセライトでろ過し、酢酸エチルで洗浄する。この溶液を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出する。有機相同士を合一し、水で３回洗浄する。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、約２ｍＬまで蒸発し、次いで、８ｍＬのヘプタンを加える。２〜４ｍＬまで蒸発し、氷浴中で冷却する。生成した白色固体をろ過し、ヘプタンで洗浄し、オーブン中で乾燥して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２３５】
ステップＶ
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１当量）をテトラヒドロフランに溶解し、３．６Ｎ  ＨＣｌ溶液で処理する。この反応物を４０℃で５時間攪拌する。次いで、水を加え、反応混合物を室温に冷却する。反応混合物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出する。合一した抽出物を、２５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および２×５０ｍＬの水で洗浄する。有機層を高粘性油になるまで濃縮し、５０ｍＬのヘプタンをこの混合物に加えて所望の化合物を沈殿させ、それをろ過して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−オキソ−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２３６】
ステップＶＩ
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−オキソ−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１当量）をＴＨＦに溶解する。水を反応混合物に加え、−２５℃に冷却する。温度を−２０℃未満に維持しながらＮａＢＨ４（０．５当量）を少しずつ加える。この混合物を−２５℃で２時間攪拌する。次いで、２Ｎ  ＨＣｌを加え、溶液を室温まで加温する。相を分離し、水層をＥｔＯＡＣで洗浄する。有機相同士を合一し、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮乾燥して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを、異性体の９３：７混合物として得る。未精製のシス／トランス混合物をメタノール中で再結晶して、＞９９％のトランス異性体を得る。
【０２３７】
ステップＶＩＩ
既に述べたもの（実施例１、ステップＶＩ）と同じ手順に従って、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：（Ｍ−Ｈ）：４４４．３
実施例４：
【０２３８】
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（シス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸および５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサン−カルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸
【０２３９】
【化２８】
2010509376.tif 000031
ステップＩ：
３−アミノ−５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例９）（０．３８７ｇ、１．６ｍｍｏｌ）および４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキサノン（０．２７ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＴＨＦの溶液に、ジブチルチンジクロリド（０．０２４ｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を加え、続いてフェニルシラン（０．２７６ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を室温で一晩攪拌する。溶媒を減圧下で蒸発し、残留物を酢酸エチルで希釈する。有機層を水および食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。残留物を、勾配のある５０〜１００％酢酸エチルを含むヘキサンを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２４０】
ステップＩＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．２０ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を含むトルエン（１ｍＬ）溶液に、トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリド１Ｍの溶液（１．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）、およびピリジン（０．０４６ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を加える。この混合物を１０５℃で一晩攪拌し、酢酸エチルで希釈する。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３（２×）および食塩水で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン〜１００％酢酸エチルに続いて１０％ＭｅＯＨ／酢酸エチル）により精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２４１】
ステップＩＩＩ：
上述した（実施例１、ステップＶＩ）ように、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．１３ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、水酸化リチウムを用いて加水分解し、ＨＰＬＣ精製の後に、純粋な異性体である５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（シス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸および５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：（Ｍ＋Ｈ）：４９７．４
実施例５：
【０２４２】
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（シス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸および５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサン−カルボニル）−（トランス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸
【０２４３】
【化２９】
2010509376.tif 000032
ステップＩ：
３−アミノ−５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．２３７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）および４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキサノン（０．１７０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の還元的アミノ化を、ジブチルチンジクロリドおよびフェニルシランを用いて、上述したのと同じ条件下で実施して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２４４】
ステップＩＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．２７ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を上述のように、トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリドを用いてアシル化して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２４５】
ステップＩＩＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．２４４ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を上述した（実施例１、ステップＶＩ）ように、水酸化リチウムを用いて加水分解し、ＨＰＬＣ精製の後に、純粋な異性体である５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（シス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸および５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：（Ｍ＋Ｈ）：４９７．４
実施例６：
【０２４６】
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸
【０２４７】
【化３０】
2010509376.tif 000033
ステップＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（シス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．９２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２の溶液に、０℃のメタンスルホニルクロリド（０．３１ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、続いてトリエチルアミン（０．５６ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で２４時間攪拌し、水で処理する。水層をＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（シス−４−メタンスルホニルオキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２４８】
ステップＩＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（シス−４−メタンスルホニルオキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１．１６ｇ、２．００ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＤＭＦの溶液に、アジ化ナトリウム（０．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を５０℃で４８時間攪拌する。この混合物を酢酸エチルで希釈し、水で３回、食塩水で１回洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、３−［（トランス−４−アジド−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２４９】
ステップＩＩＩ：
３−［（トランス−４−アジドシクロヘキシル）−（トランス−４−メチルシクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−（３，３−ジメチルブト−１−イニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１．０ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を含むトリメチルシリルアセチレン（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロ波で１２０℃２時間処理する。この混合物を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％酢酸エチル／ヘキサン〜１００％酢酸エチル）により精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−｛（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−［トランス−４−（４−トリメチルシラニル−［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル］−アミノ｝−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２５０】
ステップＩＶ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−｛（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−［トランス−４−（４−トリメチルシラニル−［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル］−アミノ｝−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．４８ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（２．０ｍＬ）の溶液に、ＴＢＡＦ１．０Ｍを含むＴＨＦ（１．２３ｍＬ、１．２３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を２４時間攪拌し、水および飽和塩化アンモニウム溶液で処理する。水層を酢酸エチルで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン〜１００％酢酸エチル）により精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２５１】
ステップＶ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（０．２７ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を上述した（実施例１、ステップＶＩ）ように、水酸化リチウムを用いて加水分解し、ＨＰＬＣ精製の後に、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（トランス−４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：（Ｍ＋Ｈ）：４９７．４
【０２５２】
中間体２：４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキサノン
【０２５３】
【化３１】
2010509376.tif 000034
ステップＩ：
メタンスルホン酸１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルエステル（２．８０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（３．８６ｇ、５９．３ｍｍｏｌ）を含む５０ｍＬの乾燥ＤＭＦの混合物を、窒素下、１００℃で２０時間攪拌する。最終混合物を室温に冷却し、食塩水で希釈し、エーテルで３回抽出する。有機部分を合一し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、８−アジド−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンを得る。
【０２５４】
ステップＩＩ：
８−アジド−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン（１．００ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）と１−（トリメチルシリル）プロピン（３．７６ｍＬ、２７．１ｍｍｏｌ）との混合物を、１２０℃で２時間マイクロ波にかける。混合物を真空下で濃縮して、過剰の１−（トリメチルシリル）プロピンを除去し、未精製の１−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−４−トリメチルシラニル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールを得る。
【０２５５】
ステップＩＩＩ：
１−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−４−トリメチルシラニル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール（１．６０ｇ、５．６８）を含む４１ｍＬの乾燥ＴＨＦの溶液を、テトラブチルアンモニウムフッ化物を含むＴＨＦの１Ｍ溶液（９．０ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）で処理する。得られた混合物を、窒素下、室温で４８時間攪拌する。それをＥｔＯＡｃで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液、水および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、１−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールを得る。
【０２５６】
ステップＩＶ：
１−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール（１．０６ｇ、５．０６ｍｍｏｌ）を、中間体１のステップＩＩＩの場合と同じ手段を行って、４−［１，２，３］トリアゾール−１−イル−シクロヘキサノンを白色固体として得る。
【０２５７】
中間体１：４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキサノン
【０２５８】
【化３２】
2010509376.tif 000035
ステップＩ：
メタンスルホン酸１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イルエステルを、Ｗｉｌｌｉａｍ、Ｃｏｌｌ．Ｍｅｄ．、Ｎａｔｌ．Ｔａｉｗａｎ  Ｕｎｉｖ．、Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎの、Ｃｈｅｎｇ  Ｃｈｅｎ  Ｙｕ、Ｗｕ  Ｓｈｏｕ  Ｃｈｉｅｎ、Ｈｓｉｎ  Ｌｉｎｇ  Ｗｅｉ、Ｔａｍ  Ｓ．による、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９２年）、第３５巻（１２号）、２２４３〜７頁に従って調製する。
【０２５９】
ステップＩＩ：
メタンスルホン酸１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イルエステル（５６７ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）および１，２，４−トリアゾール（２３２ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＤＭＦ（５．００ｍＬ）の溶液を、窒素下、室温で水素化ナトリウム６０％（１２５ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ）を用いて処理する。得られた混合物を６５℃で７２時間攪拌する。それを氷水（７５ｍＬ）に注ぎ込み、７５ｍＬのＥｔＯＡｃで３回抽出する。有機部分を合一し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮する。この固体を、溶出剤として１００％ＥｔＯＡｃから５％ＭｅＯＨ：ＥｔＯＡｃまでの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、最終化合物である１−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾールを白色固体として得る。
【０２６０】
ステップＩＩＩ：
１−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール（３７９ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦおよび３Ｎ  ＨＣｌ水溶液の１：１混合液（９ｍＬ）に溶解する。得られた混合物を４０℃で５時間攪拌する。ＴＨＦの大部分を真空下で除去し、次いで、残りの混合物を塩基性ｐＨに達するまで３Ｎ  ＮａＯＨ水溶液を用いて中和する。それを１０ｍＬのジクロロメタンで３回抽出する。有機部分を合一し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−シクロヘキサノンを白色ワックス状固体として得る。
実施例７：
【０２６１】
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−フルオロ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸の調製
【０２６２】
【化３３】
2010509376.tif 000036
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（シス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸（１０２ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）の懸濁液に、ＤＡＳＴ（ジエチルアミノスルフルトリフルオリド）（９０μＬ、０．６９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４時間攪拌する。次いで、それをＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水を混合物に加え、それを２０分間激しく攪拌する。有機画分を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−フルオロ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸を得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：［Ｍ＋Ｈ］：４４８．３０
実施例８：
【０２６３】
５−（３，３−ジメチルブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチルシクロヘキサンカルボニル）−（１−メチルピペリジン−４−イル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸ヒドロクロリドの調製：
【０２６４】
【化３４】
2010509376.tif 000037
ステップＩ：
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−５−ブロモ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（４．５６６ｇ、１３．５８ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＤＭＦ（４０ｍＬ）の溶液に、ヨウ化銅（Ｉ）（５２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２ｄｂａ３（６２２ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（９．４６ｍＬ、６７．９ｍｍｏｌ）を加え、溶液に窒素を１０分間通気することによって混合物を脱酸素する。次いで、ｔｅｒｔ−ブチルアセチレン（６．６２ｍＬ、５４．３２ｍｍｏｌ）およびＢＩＮＡＰ（６７６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を混合物に加え、それを窒素下６０℃で一晩加熱する。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄しながらセライトを通してろ過する。ろ液を食塩水で洗浄し、有機画分を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮し、残留物を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃの勾配を用いて溶出させるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ、ｐｐｍ：１．２７（ｓ，９Ｈ）、１．５１（ｓ，９Ｈ）、３．８４（ｓ，３Ｈ）、７．８７（ｓ，１Ｈ）、９．２４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：［Ｍ＋Ｈ］３３８．１７
【０２６５】
ステップＩＩ：
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（４．３４４ｇ、９．５８ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（３０ｍＬ）を加え、混合物を室温で一晩攪拌する。次いで、それを蒸発乾固し、得られた残留物をＣＨ２Ｃｌ２に再溶解し、水性のＮａＨＣＯ３および食塩水で洗浄する。有機画分を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、３．１３５ｇの未精製の５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ、ｐｐｍ：１．２８（ｓ，９Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、５．３６（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、６．４９（ｓ，１Ｈ）
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：［Ｍ＋Ｈ］２３８．１１
【０２６６】
ステップＩＩＩ：
５−（３，３−ジメチルブト−１−イニル）−３−アミノチオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１．５１２ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）およびＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペリジン−４−オン（１．１８９ｇ、５．９７ｍｍｏｌ）を含む２ｍＬの乾燥ＴＨＦの溶液に、ジブチルチンジクロリド（１８１ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素下、室温で１０分間攪拌する。次いで、フェニルシラン（８１０μＬ、６．５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２４時間攪拌する。さらに５９５ｍｇのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピペリジン−４−オン、９０ｍｇのジブチルチンジクロリドおよび４０５μＬのフェニルシランを加え、混合物をさらに２４時間攪拌する。次いで、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、食塩水で洗浄し、有機画分を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、５．１４２ｇの未精製の５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピペリジン−４−イル）アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２６７】
ステップＩＶ：
トランス−４−メチルシクロヘキシルカルボン酸クロリド（２３．８８ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．８９ｍＬ、３５．８２ｍｍｏｌ）を、ステップＩＩＩ由来の５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピペリジン−４−イル）アミノ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（５．１４２ｇ）を含む乾燥トルエン（５０ｍＬ）の溶液に加える。この混合物を２４時間還流し、次いで、それを室温にし、さらなる量のピリジン（１．０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）を加える。次いで、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、食塩水で洗浄し、有機画分を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、可変量の５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（ピペリジン−４−イル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを含む、５．１９８ｇの未精製の５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピペリジン−４−イル）アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２６８】
ステップＶ：
ステップＩＶの生成物（５．１９８ｇ）を、３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、２０ｍＬのトリフルオロ酢酸で処理する。混合物を室温で一晩攪拌し、次いで、それを蒸発乾固し、得られた残留物をＣＨ２Ｃｌ２に再溶解し、水性のＮａＨＣＯ３および食塩水で洗浄する。有機画分を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮して、５．３４０ｇの未精製の５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（ピペリジン−４−イル）アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２６９】
ステップＶＩ：
ステップＶ由来の生成物（５．３４０ｇ）を含む１，２−ジクロロエタン（６０ｍＬ）の溶液に、ホルムアルデヒド（１．９４ｍＬの３７％水溶液、２３．８８ｍｍｏｌ）を加え、続いて、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（２．４０３ｇ、１１．３４ｍｍｏｌ）を２０分にわたり少しずつ加える。混合物を室温で一晩攪拌し、次いで、水を混合物に加え、それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機画分を水性のＮａＨＣＯ３および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮し、０〜１０％のＭｅＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２を用いて溶出させるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを得る。
【０２７０】
ステップＶＩＩ：
ステップＶＩ由来の生成物（２８１ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を上述（実施例１、ステップＶＩ）のように、水酸化リチウムを用いて加水分解し、ＨＰＬＣ精製後に、５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸ヒドロクロリドを得る。
ＭＳ実測値（エレクトロスプレー）：［Ｍ＋Ｈ］：４４５．２９
実施例９：
【０２７１】
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサン−カルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸
【０２７２】
【化３５】
2010509376.tif 000038
ステップＩ
（実施例３由来の）３−［（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルをテトラヒドロフランに溶解し、３Ｎ  ＨＣｌ溶液で処理する。反応物を４０℃で３時間攪拌する。反応混合物を減圧下で蒸発させる。混合物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、濃縮して、標題の化合物を得る。
【０２７３】
ステップＩＩ
Ｎ２雰囲気下、５−ヨード−３−［（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−（４−オキソ−シクロヘキシル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを含むＭｅＯＨの冷（０℃）溶液に、ＮａＢＨ４を少しずつ加え、攪拌する。反応が完結した後、２％ＨＣｌを加え、１５分間攪拌する。反応混合物を真空下で濃縮して乾燥する。残留物を水とＥｔＯＡｃとに分配する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濃縮乾燥する。残留物を、ＥｔＯＡｃ：ヘキサンを溶出剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題の化合物を得る。
【０２７４】
ステップＩＩＩ
３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−ヨード−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルおよびエチニル−トリメチル−シランを含むＤＭＦの溶液に、トリエチルアミンおよびトリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）を加え、反応混合物をＮ２雰囲気下、６０℃で１６時間攪拌する。ＤＭＦおよびトリエチルアミンを減圧下で除去し、残留物を水と酢酸エチルとに分配する。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、残留物を、酢酸エチルおよびヘキサン（１：２）を溶出剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題の化合物を得る。
【０２７５】
ステップＩＶ
３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−トリメチル−シラニルエチニル−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルおよび２−クロロ−２−メチルプロパンをジクロロメタンに溶解し、新たに昇華させた塩化アルミニウムを−７８℃で加える。反応混合物を同じ温度で６時間攪拌する。反応混合物を水に注ぎこみ、ジクロロメタンで希釈する。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮する。残留物を、酢酸エチルおよびヘキサンを用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題の化合物を得る。
参照：Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９８２年、９５９〜９６０頁。
【０２７６】
ステップＶ
５−（３，３−ジメチル−ブト−１−イニル）−３−［（トランス−４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−（トランス−４−メチル−シクロヘキサン−カルボニル）−アミノ］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルを、ＴＨＦ：メタノール：Ｈ２Ｏの３：２：１混合液に溶解し、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏの１Ｎ溶液で処理する。６０℃で２時間攪拌した後、反応混合物をロータリーエバポレータで減圧下、濃縮する。混合物を、酢酸エチルと水とに分配する。水層を０．１Ｎ  ＨＣｌで酸性化する。ＥｔＯＡｃ層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥する。溶媒を除去し、残留物を、メタノールおよびジクロロメタン（１：９）を溶出剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題の化合物を得る。
【０２７７】
【表２−１】
2010509376.tif 000039
【０２７８】
【表２−２】
2010509376.tif 000040
実施例１０：
【０２７９】
ＨＣＶ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼアッセイにおける化合物の評価
以下の参考文献は、参照によりすべて引用される。
1. Behrens, S., Tomei, L., De Francesco, R. (1996) EMBO 15, 12-22
2. Harlow, E, and Lane, D. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbord Laboratory. Cold Spring Harbord. NY.
3. Lohmann, V., Korner, F., Herian, U., and Bartenschlager, R. (1997) J. Virol. 71, 8416-8428
4. Tomei, L., Failla, C., Santolini, E., De Francesco, R., and La Monica, N. (1993) J Virol 67, 4017-4026
【０２８０】
精製した組換えＨＣＶ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂタンパク質）を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏポリメラーゼアッセイを用いて化合物を評価する。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂは、組換えバキュロウイルスをベクターとして用いて昆虫細胞において発現させる。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂタンパク質のクローニング、発現および精製に用いた実験手順を以下に示す。以下は、化合物の試験のためのＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼアッセイの詳細である。
【０２８１】
昆虫細胞におけるＨＣＶ  ＮＳ５Ｂタンパク質の発現：
ＨＣＶ−Ｂｋ株、即ち遺伝子型１ｂのＮＳ５Ｂタンパク質全体をコードするｃＤＮＡを、プライマーであるＮＳ５Ｎｈｅ５’（５’−ＧＣＴＡＧＣＧＣＴＡＧＣＴＣＡＡＴＧＴＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧ−３’）およびＸｈｏＮＳ５３’（５’−ＣＴＣＧＡＧＣＴＣＧＡＧＣＧＴＣＣＡＴＣＧＧＴＴＧＧＧＧＡＧ−３’）と、鋳型のプラスミドｐＣＤ３．８−９．４とを用いてＰＣＲにより増幅した（Ｔｏｍｅｉら、１９９３年）。ＮＳ５Ｎｈｅ５’およびＸｈｏＮＳ５３’は、それぞれそれらの５’末端に２つのＮｈｅｌおよびＸｈｏｌ部位（下線の配列）を含む。プラスミドｐＥＴ／ＮＳ５Ｂを産生するために、増幅したＤＮＡフラグメントを細菌発現プラスミドｐＥＴ−２１ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ）に、制限部位ＮｈｅＩおよびＸｈｏＩの間でクローニングした。このプラスミドは、プライマーであるＮＳ５Ｂ−Ｈ９（５’−ＡＴＡＣＡＴＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＴＧＴＣＡＡＴＧＴＣＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧ−３’）およびＮＳ５Ｂ−Ｒ４（５’−ＧＧＡＴＣＣＧＧＡＴＣＣＣＧＴＴＣＡＴＣＧＧＴＴＧＧＧＧＡＧ−３’）を用いてＮＳ５Ｂコーディング領域をＰＣＲ増幅するための鋳型として、後で用いた。ＮＳ５Ｂ−Ｈ９は、プラスミドｐＥＴ−２１ｂにおける１５ヌクレオチドの領域、続いて翻訳開始コドン（ＡＴＧ）およびＮＳ５Ｂコーディング領域の５’末端に対応する８ヌクレオチド（アクセッション番号Ｍ５８３３５を有するＨＣＶ配列におけるｎｔ．７５９０〜７６０７）を含む。ＮＳ５Ｂ−Ｒ４は、２つのＢａｍＨＩ部位（下線）、続いてＨＣＶゲノムにおける終止コドンの回りの領域に対応する１８ヌクレオチド（ｎｔ．９３６５〜９３４７）を含む。１．８ｋｂの増幅された配列をＮｈｅＩおよびＢａｍＨＩで消化し、前消化されたｐＢｌｕｅＢａｃＩＩプラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にライゲーションした。得られた組換えプラスミドをｐＢａｃ／ＮＳ５Ｂと呼んだ。製造業者のプロトコールに記載されているように、Ｓｆ９細胞に、３μｇのｐＢａｃ／ＮＳ５Ｂを１μｇの線状化バキュロウイルスＤＮＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに同時にトランスフェクションした。２回のプラーク精製の後に、ＮＳ５Ｂ組換えバキュロウイルスＢａｃＮＳ５Ｂを単離した。組換えＮＳ５Ｂタンパク質の存在は、大腸菌で発現したＮＳ５Ｂタンパク質のＨｉｓのタグをつけた型に対するウサギポリクローナル抗血清（抗ＮＳ５Ｂ）を用いて、ＢａｃＮＳ５Ｂ感染Ｓｆ９細胞のウェスタンブロット分析（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、１９８８年）により判定した。このプラーク精製ウイルスによるＳｆ９細胞の感染は、細胞密度１．２×１０６細胞／ｍＬおよび感染多重度５で、１リットルスピンナーフラスコ中で行った。
【０２８２】
可溶性組換えＮＳ５Ｂタンパク質の調製：
Ｓｆ９細胞を上述のようにして感染させた。感染から６０時間後に、細胞を収集し、それからリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。Ｌｏｈｍａｎｎら（１９９７年）に記載されている方法を数点修正した方法により、総タンパク質を可溶化した。簡単に述べると、タンパク質を溶解緩衝液（ＬＢ）Ｉ、ＬＢＩＩおよびＬＢＩＩＩを用いて、３段階（Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３）で抽出した（Ｌｏｈｍａｎｎら、１９９７年）。ＬＢＩＩの組成は、この段階で可溶化されるＮＳ５Ｂタンパク質の量を減少させるために０．１％トライトンＸ−１００および１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含むように変更した。さらに、タンパク質の構造の完全性を保存するために、プロトコールを通して細胞抽出物の音波処理を避けた。
【０２８３】
高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を用いた組換えＮＳ５Ｂの精製：
Ｓ３画分中の可溶性ＮＳ５Ｂタンパク質を希釈して、ＮａＣｌ濃度を３００ｍＭに低下させ、次いで、Ｂｅｈｒｅｎｓら（１９９６年）により記載されたようにして、それをＤＥＡＥセファロースビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）とともにバッチ式で４℃で２時間インキュベートした。ＳＷ４１ローター（Ｂｅｃｋｍａｎ）を用いて２５０００ｒｐｍで４℃１５分間遠心分離して、非結合物質を除去した。上清をさらに希釈して、ＮａＣｌ濃度を２００ｍＭに低下させ、その後、ＦＰＬＣ（登録商標）システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に接続した５ｍＬのＨｉＴｒａｐ（登録商標）ヘパリンカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上に、１ｍＬ／分の流速で加えた。結合タンパク質を、２５ｍＬの容積に亘る、０．２〜１Ｍの連続的なＮａＣｌ勾配を用いて、１ｍＬ画分に溶出させた。ＮＳ５Ｂ含有画分は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）と、続く１：２０００の希釈度の抗ＮＳ５Ｂ抗血清を用いたウェスタンブロッティングにより、同定した。陽性画分をプールし、溶出緩衝液を、ＰＤ−１０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて、５０ｍＭ  ＮａＰＯ４  ｐＨ７．０、２０％グリセロール、０．５％トライトンＸ−１００および１０ｍＭ  ＤＴＴに対して交換した。次いで、試料を１ｍＬ  ＨｉＴｒａｐ（登録商標）ＳＰカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上に０．１ｍＬ／分の流速で加えた。結合タンパク質を、１５ｍＬの容積に亘る連続的な０〜１Ｍ  ＮａＣｌ勾配を用いて、溶出させた。溶出した画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットにより分析した。あるいは、製造業者により記載されたようなＳｉｌｖｅｒ  Ｓｔａｉｎ  Ｐｌｕｓキット（ＢｉｏＲａｄ）を用いた銀染色により、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの後にタンパク質を可視化した。陽性画分をＲｄＲｐ活性について試験し（下記を参照）、最も活性が高いものをプールし、４０％グリセロール溶液として−７０℃で保存した。
【０２８４】
類似体を評価するために用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＶ  ＲｄＲｐフラッシュプレートシンチレーション近接アッセイ（ＳＴＲＥＰ−ＦＬＡＳＨアッセイ）：
このアッセイは、ストレプトアビジン被覆シンチラント埋込みマイクロタイターＦｌａｓｈｐｌａｔｅｓ（商標）（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ、ＭＡ、ＵＳＡ、ＳＭＰ  １０３Ａ）の表面に捕捉された、ｐｏｌｙｒＡ／ビオチニル化オリゴｄＴ鋳型プライマー中の［３Ｈ］放射標識されたＵＴＰの取込みを測定することからなっている。簡単に述べると、４００ｎｇ／μＬ  ｐｏｌｙｒＡ溶液（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、２０ｐモル／μＬの５’ビオチンオリゴｄＴ１５と振とうさせつつ（volume to volume）、混合した。鋳型およびプライマーを９５℃で５分間変性させ、次いで、３７℃で１０分間インキュベートした。アニールされた鋳型−プライマーをその後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ含有緩衝液で希釈し、ストレプトアビジン被覆フラッシュプレートに一晩かけて結合させた。非結合物質を捨て、化合物を１０μＬ溶液に、続いて、５０ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、２５０ｍＭのＮａＣｌおよび５ｍＭのＤＴＴを含む１０μＬ溶液を加えた。酵素および基質を含む３０μＬ溶液の添加により酵素反応を開始させ、下記の濃度を得た：２５μＭ  ＵＴＰ、１μＣｉ［３Ｈ］ＵＴＰおよび１００ｎＭの組換えＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ。ＲｄＲｐ反応を室温で２時間進行させ、その後、ウェルを２５０μＬの０．１５Ｍ  ＮａＣｌ溶液で３回洗浄し、３７℃で風乾し、液体シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｅｘ、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて計数した。
実施例１１：
【０２８５】
細胞に基づくルシフェラーゼリポーターＨＣＶ  ＲＮＡ複製アッセイ細胞培養
本発明の化合物は、ＨＣＶポリメラーゼ阻害剤である。驚くべきことに、本発明に係る、特定の置換パターンを有する化合物は他のチオフェン類似体と比べて治療指数の改善を示すことが見出された。
【０２８６】
Ｈｕｈ−７肝臓癌細胞系由来のレプリコン細胞系であるＨｕｈ−７、５．２およびＥＴを、Ｋｒｉｅｇｅｒ  Ｎ、Ｌｏｈｍａｎｎ  Ｖ、Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ  Ｒによる、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ−ａｄａｐｔｉｖｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、２００１年、第７５巻、４６１４〜４６２４頁に一般的に記載されているようにして、培養中で維持した。Ｈｕｈ−７、５．２の細胞は、ネオマイシン遺伝子に加えて、ホタルルシフェラーゼ遺伝子に対する組込みコピーを有する、高度な細胞培養適応性のレプリコンＩ３８９ｌｕｃ−ｕｂｉ−ｎｅｏ／ＮＳ３−３’／５．１構成体を含む（Ｋｒｉｅｇｅｒ  Ｎ、Ｌｏｈｍａｎｎ  Ｖ、Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ  Ｒによる、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ−ａｄａｐｔｉｖｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、２００１年、第７５巻、４６１４〜４６２４頁）。この細胞系は、ルシフェラーゼ活性を測定することにより、ＨＣＶ  ＲＮＡの複製および翻訳の測定を可能にする。ルシフェラーゼ活性はこれらの細胞におけるレプリコンＲＮＡのレベルと密接に関連することが以前に示された（Ｋｒｉｅｇｅｒ  Ｎ、Ｌｏｈｍａｎｎ  Ｖ、Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ  Ｒによる、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ−ａｄａｐｔｉｖｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，２００１年、第７５巻、４６１４〜４６２４頁）。Ｈｕｈ−７、ＥＴ細胞系は、ＥＴ細胞がより頑健で、ＮＳ５Ａの代わりにＨＣＶ  ＮＳ４Ｂ遺伝子における適応的突然変異を含むことを除いて、Ｈｕｈ−７、５．２細胞系について述べたのと同じ特徴を有する。レプリコンＲＮＡのレベルは活発に増殖しつつある細胞において最高であるため、両細胞系は亜集密（sub-confluent）レベル（＜８５％）で培養中に維持した。細胞継代に用いた培地は、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１％グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウム、１％非必須アミノ酸および３５０μｇ／ｍＬのＧ４１８最終濃度を有する１０％ウシ胎児血清を加えられたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）からなっている。細胞は、５％ＣＯ２の大気中３７℃でインキュベートし、亜集密を維持するために週２回継代した。
【０２８７】
白色不透明の９６ウェルマイクロタイタープレートで１ウェル当たり約３０００の生存Ｈｕｈ−７、５．２またはＥＴ細胞（１００μＬ）を平板培養した。このアッセイに用いた細胞培地は、Ｇ４１８およびフェノールレッドを含まない点以外は、上述と同じであった。５％ＣＯ２インキュベーター中３７℃で３〜４時間のインキュベーション時間の後に、化合物（１００μＬ）を様々な濃度で加えた。次いで、細胞を５％ＣＯ２インキュベーター中３７℃でさらに４日間インキュベートした。次いで、培地を除去し、９５μＬのルシフェラーゼ緩衝液（ルシフェリン基質を含む緩衝界面活性剤）を添加して、細胞を溶解した。少なくとも１０分間、細胞溶解産物を室温でインキュベートし、直接光から保護した。ルミノメーター（Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（商標）、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて、ルシフェラーゼのカウントのためにプレートを読み取った。
【０２８８】
化合物当たり２連で１１種の濃度を用いた用量反応曲線から、阻害効果の５０％阻害濃度（ＩＣ５０ｓ）を求めた。非線型回帰分析を用いて曲線をデータポイントに適合させ、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア、ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて得られた曲線からＩＣ５０ｓを内挿した。
実施例１２：
【０２８９】
２１アミノ酸Ｃ末端切断ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ遺伝子型１ｂ株ＢＫ酵素アッセイにおける化合物の評価
以下の参考文献は、参照によりすべて引用される。
○Tomei, L., Failla, C., Santolini, E., De Francesco, R., and La Monica, N. (1993) J Virol 67, 4017-4026
○Lesburg, C. A. et al. Crystal structure of the RNA-dependent RNA polymerasefrom hepatitis C virus reveals a fully encircled active site. Nat. Struct. Biol. 6, 937-943(1999).
○Ferrari, E. et al. Characterization of soluble hepatitis C virus RNA-depen-dent RNA polymerase expressed in Escherichia coli. J. Virol. 73, 1649-1654 (1999).
【０２９０】
細菌細胞において発現する精製した組換えＨＣＶ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂタンパク質）を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏポリメラーゼアッセイを用いて、化合物を評価する。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂタンパク質のクローニング、発現および精製に用いた実験手順を以下に示す。以下は、化合物を試験するためのＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼアッセイの詳細である。
【０２９１】
昆虫細胞におけるＨＣＶ  ＮＳ５Ｂタンパク質の発現：
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂタンパク質の発現および精製
Ｎ末端ヘキサヒスチジンタグを含む２１アミノ酸Ｃ末端切断ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ遺伝子型１ｂ株ＢＫ酵素（Ｔｏｍｅｉら、１９９３年）を表す組換え可溶形を、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）においてクローニングし、発現させた。切断型酵素をＬｅｓｂｕｒｇら（１９９９年）およびＦｅｒｒａｒｉら（１９９９年）に記載された方法にわずかに修正を加えた方法で精製した。簡単に述べると、可溶性溶菌液をＨｉＴｒａｐニッケルキレート化アフィニティカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｂａｉｅ  ｄ’Ｕｒｆｅ、ＱＣ、Ｃａｎａｄａ）上に加えた。イミダゾール勾配を用いて結合酵素を溶出させた。次いで、イミダゾールをＰＤ−１０脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｂａｉｅ  ｄ’Ｕｒｆｅ、ＱＣ、Ｃａｎａｄａ）を用いて、プールした活性画分の緩衝液から除去した。さらなる精製は、溶出用のＮａＣｌ勾配を用いて陽イオン交換ＨｉＴｒａｐ  ＳＰセファロースカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｂａｉｅ  ｄ’Ｕｒｆｅ、ＱＣ、Ｃａｎａｄａ）にタンパク質調製物を流すことにより達成された。その後、ＰＤ−１０カラムを用いて、緩衝液を１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１０％グリセロール、５ｍＭ  ＤＴＴ、６００ｍＭ  ＮａＣｌに交換した。陽性画分をＲＮＡ依存性ポリメラーゼ活性について試験し、最も活性の高い画分をプールし、−７０℃で保存した。
【０２９２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＮＳ５Ｂアッセイ
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ重合活性に対する化合物の阻害作用の測定を、ホモ重合ＲＮＡ鋳型／プライマーを用いて、酵素により、新たに合成したＲＮＡへと取り込まれた放射標識されたＵＴＰの量を評価することによって行った。簡単に述べると、ホモ重合ｐｏｌｙ  ｒＡのＲＮＡ鋳型に対してアニールした１５−ｍｅｒの５’ビオチニル化ＤＮＡオリゴヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏ  ｄＴ）プライマーを、ストレプトアビジン被覆ビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｂａｉｅ  ｄ’Ｕｒｆｅ、ＱＣ、Ｃａｎａｄａ）の表面上に捕捉させる。本質的には、化合物は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｎＭの精製ＮＳ５Ｂ酵素、２５０ｎｇのｐｏｌｙｒＡ／ｏｌｉｇｏｄＴ１５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）、１５μＭの非放射標識されたＵＴＰ、および１μＣｉの［３Ｈ］ＵＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｂａｉｅ  ｄ’Ｕｒｆｅ、ＱＣ、Ｃａｎａｄａ）からなる最終容積５０μＬの反応混合物中、様々な濃度（０．００５〜２００μＭ）で試験した。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ酵素の重合活性は、伸長しつつあるプライマーの３’末端上の放射標識された［３Ｈ］ＵＴＰ基質の取込みを測定することによって定量化され、検出は、液体シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘ、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ（商標）、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて、シグナルを数えることにより達成される。
【０２９３】
［３Ｈ］チミジン取込みアッセイ
合計１，０００〜２，０００の細胞／ウェルを、１０％ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）および２ｍＭグルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を添加した１５０μＬの容積のＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）で、９６ウェルクラスタ皿に播種する。ペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）は、それぞれ５００Ｕ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬの最終濃度となるように加える。５％ＣＯ２の大気中３７℃で１８時間インキュベートした後、培地を除去し、培地で希釈した化合物と交換する。６連の２倍希釈の薬剤を、３つずつ試験する。さらに７２時間インキュベートした後、培地中、５０μＬの容積の［３Ｈ］メチルチミジン１０μＣｉ／ｍＬ溶液（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、Ｉｌｌ．；２Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を加え、プレートを３７℃でさらに１８時間インキュベートする。次いで、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、２分間トリプシン処理し、Ｔｏｍｔｅｃ細胞収集器（Ｔｏｍｔｅｃ、Ｏｒａｎｇｅ、Ｃｏｎｎ．）を用いてファイバーガラスフィルター上に収集する。フィルターを３７℃で１時間乾燥し、４．５ｍＬの液体シンチレーションカクテル（Ｗａｌｌａｃ  Ｏｙ、Ｔｕｒｋｕ、Ｆｉｎｌａｎｄ）を含むバッグに入れる。生存複製細胞を示す、［３Ｈ］メチルチミジンの蓄積を、液体シンチレーションカウンター（１４５０−Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ、Ｗａｌｌａｃ  Ｏｙ）を用いて測定する。ＳＯＰ：２６５−１６２−０３を参照のこと。この実験のために、用いた細胞系は、Ｈｕｈ−７ＥＴ（Ｈｕｈ−７細胞系（肝細胞癌、ヒト）由来で、ＨＣＶサブゲノムレプリコンを含む細胞）、Ｍｏｌｔ−４（末梢血液、急性リンパ球性白血病、ヒト）、ＤＵ−１４５（前立腺癌、脳への転移、ヒト）、Ｈｅｐ−Ｇ２（肝細胞癌、ヒト）およびＳＨ−ＳＹ５Ｙ（神経芽細胞腫、ヒト）細胞である。
【０２９４】
データ解析
細胞毒性に関する５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０ｓ）は、化合物当たり６〜８種の濃度をそれぞれ３つずつ用いて用量反応曲線から求める。非線型回帰分析を用いて曲線をデータポイントに適合させ、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア、ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて得られた曲線からＩＣ５０値を内挿する。
【０２９５】
ＴＩ：実施例１２からのＨＣＶレプリコン細胞（Ｈｕｈ−７ＥＴ細胞）におけるＣＣ５０／ＩＣ５０の比。化合物を２回以上試験する場合、ＴＩの平均値を示す。
【０２９６】
表２に、他のチオフェンＨＣＶポリメラーゼ阻害剤と比較した、本発明の代表的な、選択された化合物の治療指数（ＴＩｓ）を示す。
【０２９７】
【表３−１】
2010509376.tif 000041
【０２９８】
【表３−２】
2010509376.tif 000042
【０２９９】
化合物Ａ〜Ｉは、米国特許第６，８８１，７４１号、ＷＯ０２／１００８５１、ＷＯ２００４／０５２８８５またはＷＯ２００６／０７２３４７に記載されているようにして合成することができる。
実施例１３：
【０３００】
ヒトおよびラットのミクロソームにおける安定性ならびに培養ヒト肝細胞における誘導
本発明に係る、特定の置換パターンを有する化合物は、他のチオフェン類似体と比べて、ヒト肝細胞における改善されたミクロソーム安定性および／または誘導を示す。例えば、化合物１および２は、化合物Ｅと比べて、より優れたミクロソーム安定性プロファイルおよび誘導プロファイルを示した。
【０３０１】
ヒトおよびラットのミクロソームにおける安定性
各化合物を、肝ミクロソーム中（１．６ｍｇ／ｍＬ）で、酸化的およびグルクロン酸抱合の条件下（１．５ｍＭ  ＮＡＤＰＨおよび１．５ｍＭ  ＵＤＰＧＡを含むリン酸緩衝液、ｐＨ＝７．４）、３７℃でインキュベートする。ＮＡＤＰＨもＵＤＰＧＡも含まないインキュベーション（incubations）を対照として用いる。化合物は、５０μＭで０および６０分間インキュベートする。等量のアセトニトリルを加えることにより、反応を停止させる。混合物を遠心分離し、上清をＨＰＬＣ／ＵＶまたはＭＳ／ＭＳによって分析する。残っている親化合物のパーセントは、０分のインキュベーションでの親化合物の面積に対する６０分のインキュベーションでの親化合物の面積に、１００を掛けたものに相当する。
【０３０２】
培養ヒト肝細胞における誘導
誘導は、凍結保存または新たに培養したヒト肝細胞において実施する。細胞をコラーゲン上で４８時間培養する。この期間の後に、細胞に試験化合物または陽性対照誘導物質であるリファンピシンを含む、新たに添加された（spiked）インキュベーション培地を投与する。インキュベーションにおける試験化合物の最終濃度は、１、１０および１００ｍＭであるが、陽性対照は１０ｍＭで試験する。陰性対照（ＮＣ）は、０．１％ＤＭＳＯの最終含量で細胞をインキュベートすることからなっていた。細胞処理は、毎日交換した試験化合物または対照誘導物質を添加した（spiked）新たなインキュベーション培地を用いて合計４８時間行う。誘導期間の終了時に、誘導物質を含む培地を除去し、細胞を１２ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４を含む２００μＬのＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液（ＫＨ緩衝液）で２回洗浄する。次に、ＣＹＰ３Ａ４の誘導を、基質としてのテストステロンを用いた活性により、およびｍＲＮＡレベルにより測定する。ＣＹＰ３Ａ４活性については、２００ｍＭテストステロンを添加した（spiked）新たなＫＨ緩衝液を加え、細胞を３７℃で３０分間インキュベートする。インキュベーション時間の終了時に、培地を除去し、６−ベータ−ヒドロキシテストステロン定量用のＨＰＬＣ／ＭＳにより分析する。最大誘導（１００％誘導）は、１０ｍＭリファンピシン処理により測定する。試験化合物がＣＹＰ３Ａ４誘導を引き起こす能力は、標準的な誘導物質を用いて得られた最大誘導に対するパーセントとして表す。ｍＲＮＡレベルの測定については、肝細胞を収集し、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、ＯＮ）を用いて、製造業者の指示に従って全ＲＮＡを調製する。肝細胞のｃＤＮＡは、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｂａｄ、ＣＡ）を用い、ユニバーサルプライマー（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により全ＲＮＡから合成する。全ＲＮＡ試料中での特異的なｍＲＮＡ発現の分析は、Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍのＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００配列検出システムを用いた定量的リアルタイムＰＣＲにより実施する。ＣＹＰ３Ａ４に用いたプライマーは、フォワードプライマーが５’−ＴＣＡ  ＧＣＣ  ＴＧＧ  ＴＧＣ  ＴＣＣ  ＴＣＴ  ＡＴＣ  ＴＡＴ−３’であり、リバースプライマーが５’−ＡＡＧ  ＣＣＣ  ＴＴＡ  ＴＧＧ  ＴＡＧ  ＧＡＣ  ＡＡＡ  ＡＴＡ  ＴＴＴ−３’である。用いたプローブは、５’−／５６−ＦＡＭ／ＴＣＣ  ＡＧＧ  ＧＣＣ  ＣＡＣ  ＡＣＣ  ＴＣＴ  ＧＣＣ  Ｔ／３６−ＴＡＭＳｐ／−３’であった。データを、実時間検出により、リボソームの１８Ｓ  ｍＲＮＡ（ＶＩＣ）に対して標準化する。データ解析および統計学的アッセイは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌを用いて行う。結果は、以下の式による、対照群と比較した、倍率変化の（fold change）遺伝子発現として報告することができる。
ΔＣｔ＝Ｃｔ  ＦＡＭ  −  Ｃｔ  ＶＩＣ
ΔΔＣｔ＝ΔＣｔ薬剤候補  −  ΔＣｔ対照
誘導率（Fold Induction）：２−ΔΔＣｔ
【０３０３】
上記の実施例は、上記の実施例で用いたものについて、本発明の一般的または具体的に述べた反応物および／または操作条件を代えることによって、同様な成功をもって繰り返すことができる。
【０３０４】
前述のことから、当業者は、本発明の本質的特性を容易に確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、それを様々な使用および条件に適応させるために本発明の様々な変更および修正を行うことができる。
【国際調査報告】
2010509376.tif 000051
2010509376.tif 000052
2010509376.tif 000053
2010509376.tif 000054