(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）のスルホアミド化合物及び製薬学的に活性なその塩の使用に関し、Ｒ1は、Ｈ、ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチル、エチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、モルホリノからなる群より選択され、Ｒ2は、Ｈ、フェニル、置換フェニル、ＣＮ、−ＳＯ2Ｒから選択され、Ｒは、フェニル又はモルホリノ、−ＮＣ（Ｏ）Ｍｅ、−ＮＣ（Ｏ）Ｅｔ、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＥｔであり、Ｒ3は、Ｈ、ＮＯ2、ＮＨ2、ハロゲン、−ＣＯＯＭｅ、−ＣＯＯＥｔ、ＲＣ（Ｏ）Ｎ−、モルホリノからなる群より選択され、Ｒ4は、Ｈ、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、置換された又は置換されていないフェニル、アルキニル、Ｍｅ2ＳＯ2−、ＣＯＯＲからなる群より選択され、Ｒは、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、−ＭｅＯＣ（Ｏ）−、置換された又は置換されていない１、２又は３つのヘテロ原子を有する５又は６員環の芳香族あるいは非芳香族の複素環系、ヘタリール系、縮合ベンゾ複素環系であり、Ｘは、−ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ2−、エチニル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−、−ＮＨ−ＮＨ−ＳＯ2−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｍｅ）−、複素環系の一部の構造としての−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−からなる群より選択され２又は３つの原子を含む結合基、好ましくは、置換された又は置換されていないピラゾールもしくはピリダジン系である。さらに本発明は、特に癌の治療のための、薬剤としてのこれら化合物の使用に関する。【選択図】  なし
2010512358.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉのスルホンアミド化合物、及び製薬学的に活性なその塩。
2010512358.tif 000032
（Ｒ1は、Ｈ、ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチル、エチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、モルホリノからなる群より選択され、
Ｒ2は、Ｈ、フェニル、置換フェニル、ＣＮ、−ＳＯ2Ｒから選択され、Ｒが、フェニル又はモルホリノ、−ＮＣ（Ｏ）Ｍｅ、−ＮＣ（Ｏ）Ｅｔ、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＥｔであり、
Ｒ3は、Ｈ、ＮＯ2、ＮＨ2、ハロゲン、−ＣＯＯＭｅ、−ＣＯＯＥｔ、ＲＣ（Ｏ）Ｎ−、モルホリノからなる群より選択され、
Ｒ4は、Ｈ、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、置換された又は置換されていないフェニル、アルキニル、Ｍｅ2ＳＯ2−、ＣＯＯＲからなる群より選択され、Ｒが、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、−ＭｅＯＣ（Ｏ）−、置換された又は置換されていない１、２又は３つのヘテロ原子を有する５又は６員環の芳香族あるいは非芳香族の複素環系、ヘタリール系、縮合ベンゾ複素環系であり、
Ｘは、−ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ2−、エチニル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−、−ＮＨ−ＮＨ−ＳＯ2−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｍｅ）−、複素環系の一部の構造としての−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−からなる群より選択され、好ましくは、置換された又は置換されていないピラゾールもしくはピリダジン系である。）
【請求項２】
Ｒ1がオルト位置にある請求項１記載のスルホンアミド化合物。
【請求項３】
Ｒ1がハロゲンである請求項２記載のスルホンアミド化合物。
【請求項４】
Ｒ2がメタ位置にある請求項２又は３記載のスルホンアミド化合物。
【請求項５】
Ｒ2がパラ位置にある請求項２又は３記載のスルホンアミド化合物。
【請求項６】
Ｒ3がオルト位置にある請求項１〜５のいずれかに記載のスルホンアミド化合物。
【請求項７】
Ｒ3がハロゲンである請求項６記載のスルホンアミド化合物。
【請求項８】
ＸがＨである請求項７記載のスルホンアミド化合物。
【請求項９】
Ｒ3がメタ位置にある請求項１〜５のいずれかに記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１０】
Ｒ3がＨ、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＨ2、酸アミド残部である請求項９記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１１】
Ｘ−Ｒ4基がオルト位置にありＲ3に対してパラ位置にある請求項１０記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１２】
Ｘが、−ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ2−、エチニル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−、−ＮＨ−ＮＨ−ＳＯ2−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｍｅ）−、置換された又は置換されていないピラゾールの一部の構造としての−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−からなる群より選択される請求項１１記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１３】
Ｒ4は、Ｈ、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、置換された又は置換されていないフェニル、置換されたアルキニル、Ｍｅ2ＳＯ2−、ＣＯＯＲからなる群より選択され、Ｒが、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、−ＭｅＯＣ（Ｏ）−、置換された又は置換されていないピラゾリル、ピリジニル、ヘタリール系、縮合ベンゾ複素環系である請求項１２記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１４】
Ｒ3がＮＯ2である請求項１３記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１５】
Ｘが２つの窒素原子を有する構造である請求項１３又は１４記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１６】
Ｘは、−ＮＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ2−ＮＨ2−ＳＯ2−、−ＮＨ＝Ｎ−ＣＨ2−、置換された又は置換されていないピラゾール系の一部である−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ2−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−からなる群より選ばれる請求項１５記載のスルホンアミド化合物。
【請求項１７】
下記式IIで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000033
【請求項１８】
下記式IIIで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000034
【請求項１９】
下記式IVで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000035
【請求項２０】
下記式Ｖで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000036
【請求項２１】
下記式VIで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000037
【請求項２２】
下記式VIIで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000038
【請求項２３】
下記式VIIIで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000039
【請求項２４】
下記式IXで示される請求項１６記載のスルホンアミド化合物。
2010512358.tif 000040
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれかに記載の化合物の薬剤としての使用。
【請求項２６】
癌治療用医薬組成物の製造のための請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項２７】
請求項１〜２２のいずれかに記載の化合物又は製薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物。
【請求項２８】
少なくとも１つの製薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含む請求項２７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、β−カテニンとＢＣＬ９及び／又はＢＣＬ９Ｌ蛋白質との間の相互作用を阻害するスルホンアミド化合物、即ち、Ｗｎｔ伝達経路を阻害する化合物に関する。さらに本発明は、癌の治療に有用な医薬組成物の調製のためのそれら化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明で考えられている阻害物質は、幹細胞研究、又は、癌、骨および軟骨疾患[M., 2005 #198] [Westendorf JJ, 2004 #199]のような異常なＷｎｔ活性化によって特徴付けられる疾患の治療のために用いられ得る。例えば、Ｗｎｔ経路の病的な活性化は、結腸直腸癌（[Pinto D, 2005 #197]参照）、肝細胞癌[Lee HC, 2006 #194]、乳癌[Howe LR, 2004 #196]、メラノーマ[Lame L, 2006 #195]、中皮腫（[Fox S. , 2006 #191]参照）、リンパ腫[Bellei B, 2004 #193]、及び白血病[Jamieson CH, 2004 #192]において広く報告されてきた。そのうえ、Ｗｎｔ経路がＴ細胞の発達において必須の役割も担うことから（Staal，Meeldijk ら、2001；Staal and Clevers 2003）、ここで開示されるＷｎｔシグナル伝達回路阻害物質は、例えば臓器移植後の免疫抑制剤として、又は紅斑性狼瘡、多発性硬化症、及び関節リウマチといった特定の自己免疫疾患の治療のために用いられ得る。
【０００３】
Ｗｎｔ／Ｗｇ蛋白質は、応答細胞での特定標的遺伝子の発現を活性化することにより、脊椎動物の発達に多くの影響を及ぼす。これら標的遺伝子のいくつかは、特定されており、それら機能の一部は、細胞成長、細胞分化、及び細胞生存の制御と調和している（He, Sparks ら、1998；Crawford, Fingleton ら、 1999; Tetsu and McCormick 1999; Kolligs, Nieman ら、2002; Shtutman, Zhurinsky ら、 2002）。
【０００４】
リン酸化反応による分解を受けるβ−カテニンを通常はマークしている複雑な機構が確認されている。重要なことに、癌抑制遺伝子産物ＡＰＣ及びＡｘｉｎは、このβ−カテニン破壊複合物の必須成分である。Ｗｎｔ経路の活性化において、β−カテニンはこのリン酸化反応を逃れ、細胞質に蓄積し、核に侵入し、そこでＴＣＦ蛋白質及び最近確認されたＬｇｓ／ＢＣＬ９[Kramps, T.ら、 2002]蛋白質と共同作業し、標的遺伝子の転写コアクチベーターとして機能する。
【０００５】
重要な変換体が継続的に抑制されているこの状況は、その抑制成分における変異の影響を非常に受けやすい。実際、Ｗｎｔシグナルの下流成分における変異は、様々なヒトの癌と関連していることが発見された（Kinzler and Vogelstein 1996; Miller, Hocking ら. 1999）。例えば、生殖細胞ＡＰＣ変異は、多くの良性大腸腫瘍を起こし得るものであり、そのうちのいくつかが癌へと発展する。ＡＰＣ遺伝子の体細胞変異は、８５％の散発性大腸腺腫及び癌に関連しており（Kinzler and Vogelstein 1996）、β−カテニンリン酸化反応部位における変異が、直腸結腸癌、肝細胞癌、及びメラノーマといったヒトの多くの癌で確認されており（Morin, Sparks ら、 1997; Rubinfeld, Robbins ら. 1997）（Caca, Kolligs ら、 1999）、Ａｘｉｎ変異が肝細胞癌で特定されている（Satoh, Daigo ら、 2000）。そのうえ、いくつかの変異、及び／又はＬＲＰ５、ｓｆｒｐｓ、ＷＩＦ−１、ＤＫＫもしくはＷｎｔリガンドのような上流成分の発現における変化は、癌と関連しているだけでなく、骨及び軟骨疾患[Westendorf, 2004 #199]、[Sen, 2005 #198]、[Moon, 2004 #216]とも関連している。これら全ての変異は、核のβ−カテニンの蓄積につながることから、この蛋白質及び相互作用パートナーは、Ｗｎｔ依存性の遺伝子発現を抑制する格好の標的として浮上してきた。
【０００６】
実際のところ、β−カテニン−Ｔｃｆ４相互作用を標的としたＷｎｔ経路の抑制物質、及びそのような抑制物質を見つけ出す方法は、開示されている。
【０００７】
このトピックは、いくつかの特許広報で課題となってきた。特許文献１は、精製された蛋白質及び抑制物質をスクリーニングするための従来公知の方法を開示している。特許文献２には、Ｔｃｆ−β−カテニン抑制物質をスクリーニングするための従来公知の方法が記載されている。特許文献３は、Ｔｃｆ−β−カテニン抑制物質に関連している。特許文献４は、低分子β−カテニン抑制物質としてセファロスポリンを開示している。
【０００８】
特許文献５は、Ｔｃｆ４−β−カテニン相互作用の３Ｄモデルを用いてβ−カテニンにおける“目標設定可能な”ポケットを明らかにしている。この公報には、抑制物質を特定するための、前記相互作用に基づいたコンピュータでのスクリーニング方法だけでなく、この方法で特定された多くの抑制物質も記載されている。
【０００９】
上述のアプローチの主な欠点は、β−カテニン−Ｔｃｆ４相互作用の特性にある。特に、この蛋白質−蛋白質相互作用の表面は、非常に大きく、少なくともＥカドヘリンやＡＰＣの他のβ−カテニン相互作用パートナーと部分的に共有され（非特許文献１〜４）、これがその選択特異性について重大な問題を引き起こす。このような状況において、Ｗｎｔ経路でのこれに代わる標的が要望されている。
【００１０】
蛋白質のＬｅｇｌｅｓｓ（Ｌｇｓ）／ＢＣＬ９群は、キイロショウジョウバエのＡＰＣ癌抑制遺伝子のＷｎｔ経路下流の新規な正の調節因子として遺伝子検査で同定された。ヒトにおいて、２つの同族体、ＢＣＬ９及びＢＣＬ９類似（ＢＣＬ９、Ｂ９Ｌ又はＢＣＬ９−２として知られる）があり、これらは、キイロショウジョウバエ蛋白質のように、転写活性成分Ｐｙｇｏ及びβ−カテニンの間で不可欠なアダプター分子として活動する。β−カテニンへのＢＣＬ９蛋白質の結合は、癌細胞のＷｎｔシグナルの伝播に極めて重要である。蛋白質−蛋白質相互作用を中断させることができる、又は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によるＢＣＬ９Ｌ発現を減少することができる競合ペプチドは、強力にＷｎｔ経路を抑制し、分化していない悪性の型から中程度へよく分化した組織へと癌細胞の分化を導く（([Brembeck FH, 2004 #201]、 [Adachi S, 2004 #200]、US2002/0086986）。しかしながら、Ｗｎｔ経路における特異的で強力な抑制作用にもかかわらず、そのペプチド又はｓｉＲＮＡ分子は、低膜透過性及び低全身アベイラビリティー（低利用能）により、癌治療のための理想的な薬剤に相当するものとなっていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第９８／４２２９６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０２／４４３７８号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０３／００６４４７号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０２／０９６４３０号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０１／１９３５３Ａ２号パンフレット
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Graham, T. A., C. Weaver ら. (2000). "Crystal structure of a beta-catenin/Tcf complex." Cell 103(6): 885-96.
【非特許文献２】Eklof Spink, K., S. G. Fridman ら. (2001). "Molecular mechanisms of beta-catenin recognition by adenomatous polyposis coli revealed by the structure of an APC-beta-catenin complex." Embo J 20(22): 6203-12.
【非特許文献３】Huber, A. H. and W. I. Weis (2001). "The structure of the beta-catenin/E-cadherin complex and the molecular basis of diverse ligand recognition by beta- catenin." Cell 105(3): 391-402.
【非特許文献４】Poy, F., M. Lepourcelet ら. (2001). "Structure of a human Tcf4-beta-catenin complex." Nat Struct Biol 8(12): 1053-7.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
それゆえ、β−カテニン／ＢＣＬ９−ＢＣＬ９Ｌ相互作用の新規な阻害物質、特に、より低分子量で良好な細胞透過性といった改良された薬剤特性を備えた化合物を提供することが本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
この課題は、式Ｉの新規スルホンアミド化合物、及び製薬学的に活性なその塩の提供により解決される。
【００１５】
【化１】
2010512358.tif 000003
【００１６】
Ｒ1は、Ｈ、ＣＮ、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチル、エチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、モルホリノからなる群より選択され、
Ｒ2は、Ｈ、フェニル、置換フェニル、ＣＮ、−ＳＯ2Ｒから選択され、Ｒは、フェニル又はモルホリノ、−ＮＣ（Ｏ）Ｍｅ、−ＮＣ（Ｏ）Ｅｔ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＥｔであり、
Ｒ3は、Ｈ、ＮＯ2、ＮＨ2、ハロゲン、−ＣＯＯＭｅ、−ＣＯＯＥｔ、ＲＣ（Ｏ）Ｎ−、モルホリノからなる群より選択され、
Ｒ4は、Ｈ、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、置換された又は置換されていないフェニル、アルキニル、Ｍｅ2ＳＯ2−、ＣＯＯＲからなる群より選択され、Ｒは、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、−ＭｅＯＣ（Ｏ）−、置換された又は置換されていない１、２又は３つのヘテロ原子を有する５又は６員環の芳香族あるいは非芳香族の複素環系、ヘタリール系、縮合ベンゾ複素環系、好ましくは、置換されたあるいは置換されていないフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニル、イソキサゾリニル、チオフェニル、１，３，４−チアジアザゾリジニル、フラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラハイドロイソキノリニル、フラニル、及びクロメン−２−オニルであり、
Ｘは、−ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ2−、エチニル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−、−ＮＨ−ＮＨ−ＳＯ2−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｍｅ）−、複素環系の一部の構造としての−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−からなる群より選択され２又は３つの原子を含む結合基、好ましくは、置換された又は置換されていないピラゾールもしくはピリダジン系、又はイミダゾリル、イミダゾリジン−２−オニル、トリアゾリル及びテトラゾリル系である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の好ましい実施形態では、Ｒ1がオルトに位置し、これら化合物は、式Ｉａで示される。オルト位置はスルホンアミド部分のＮ原子に結合した環の２つの位置がある。置換基の意味は、上述のごとくである。
【００１８】
【化２】
2010512358.tif 000004
【００１９】
好ましい実施形態では、Ｒ1がハロゲンである。本発明において、“ハロゲン”は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＦを意味する。特に好ましくは、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＦである。
【００２０】
さらに好ましい実施形態では、Ｒ2がメタ位置にある。より深く理解するには、メタ位置はスルホンアミド部分のＮ原子に結合した環の３又は５位である。これに関して最も好ましくは、５位であり、即ち、Ｒ1及びＲ2が互いにパラ位にあり、これら化合物は式Ｉｂに示される。置換基の意味は、上述のごとくである。
【００２１】
【化３】
2010512358.tif 000005
【００２２】
他の好ましい実施形態では、Ｒ2がパラ位置、即ちスルホンアミド部分のＮ原子に結合した環の４位にある。
【００２３】
本発明のより好ましい実施形態では、Ｒ3がオルト位置にあり、ＸがＨである。オルト位置は、スルホンアミド部分の硫黄原子に結合した環の２位である。この場合、Ｒ3がハロゲンであり、最も好ましくは、Ｃｌ及びＢｒである。好ましい構造式は、次の式Ｉｃ及びＩｄで示される。
【００２４】
【化４】
2010512358.tif 000006
【００２５】
式Ｉｃ及びＩｄによる好ましい実施形態では、ＸがＨである。
【００２６】
さらに好ましい実施形態では、Ｒ３が式Ｉｅにおけるメタ位置にある。メタ位置は、スルホンアミド部分の硫黄原子に結合した環の５位である。
【００２７】
【化５】
2010512358.tif 000007
【００２８】
特に好ましい構造モチーフが式Ｉｆ、Ｉｇ及びＩｈによって示される（置換基の意味は、上述のごとくである）。
【００２９】
【化６】
2010512358.tif 000008
【００３０】
認識できるように、Ｘ−Ｒ4基がオルト位置にありＲ3に対してパラ位置にあることが特に好ましい。
【００３１】
これら式においては、Ｒ3がＨ、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＨ2、又は酸アミド（Ｒ’がＨ、メチル、エチル又はｎ−及びｉ−プロピルである−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’）残部であることが特に好ましい。
【００３２】
Ｘは、好ましくは、−ＮＨ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ2−、エチニル（Ｒ”がＨ、Ｃ1〜Ｃ8の分岐又は非分岐の、置換された又は置換されていないアルキル残部、好ましくは、メチル、エチル、ｎ−及びｉ−プロピル、ｎ−、ｉ−及びｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、シクロヘキシル、ｎ−ヘプチル、及びｎ−オクチル、又はシアノ置換されたその誘導体である  −ＣＣ−Ｒ”）、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−、−ＮＨ−ＮＨ−ＳＯ2−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−Ｎ＝Ｃ（Ｍｅ）−、置換された又は置換されていないピラゾール系の一部である−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−からなる群より選択される。
【００３３】
特に好ましくは、Ｒ4は、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、メトキシ、エトキシ、置換された又は置換されていないフェニル、置換されたアルキニル、Ｍｅ2ＳＯ2−、ＣＯＯＲからなる群より選択され、Ｒが、分岐又は非分岐のメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、−ＭｅＯＣ（Ｏ）−、置換された又は置換されていないピラゾリル、ピリジニル、ヘタリール系、縮合ベンゾ複素環系である。
【００３４】
本発明の最も好ましい実施形態では、Ｒ3がＮＯ2である。
【００３５】
本発明のさらに特に好ましい実施形態では、Ｘが２つの窒素原子を含む構造であり、より好ましくは、−ＮＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−、−ＮＨ2−ＮＨ2−ＳＯ2−、−ＮＨ＝Ｎ−ＣＨ2−、置換された又は置換されていないピラゾール系の一部である−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ2−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−からなる群より選ばれる。
【００３６】
細胞試験で特に高い活性を示す特に好ましい特定の化合物は、次の式で示される。
【００３７】
【化７】
2010512358.tif 000009
【００３８】
【化８】
2010512358.tif 000010
【００３９】
【化９】
2010512358.tif 000011
【００４０】
高い活性を有するさらに好ましい化合物は、式Ｖの化合物である。
【００４１】
【化１０】
2010512358.tif 000012
【００４２】
【化１１】
2010512358.tif 000013
【００４３】
【化１２】
2010512358.tif 000014
【００４４】
【化１３】
2010512358.tif 000015
【００４５】
【化１４】
2010512358.tif 000016
【００４６】
本発明のさらなる目的は、本発明に係る化合物の薬剤としての使用、及び、癌の治療のための医薬組成物の製造のための使用である。
【００４７】
本発明は、さらには、本発明に係る化合物又は製薬学的に許容されるその塩、そしてさらなる実施形態では、少なくとも１つの製薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００４８】
本発明の化合物は、単独で、又は、製薬学的に許容されるその塩のかたちで投与され得る。本発明の化合物を含む医薬組成物、又は製薬学的に活性なその塩は、さらに少なくとも１つの製薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含み得る。特定の実施形態では、活性化合物もさらに組成物中に含まれ得る。
【００４９】
本発明における化合物は、局所、経口、経皮、注射、舌下、経鼻、髄腔内、経直腸、吸入、静脈の投与のために、例えば、錠剤、ゲル、カプセル、布片、軟膏、クリームのかたちで剤型化され得る。非経口の伝達は、持続性薬剤、注射器、アンプル、又はバイアルによってなされ得る。
【００５０】
本発明の化合物は、このように、標準的な補助剤、担体又は希釈剤といっしょになって、医薬組成物及びその投薬単位のかたちへとなり、そのようなかたちで固体、液体、又は殺菌された注射用溶液のかたちで採用され得る。固体の担体が用いられた場合、調剤は錠剤、粉状またはペレット状でハードゼラチンカプセルに入った状態、又はトローチやドロップのかたちになり得る。固体の担体は、結合剤、錠剤滑剤、フィラー、崩壊剤、湿潤剤などの標準的な賦形剤を含み得る。錠剤は、標準的な技術でフィルムコートされ得る。液体の担体が採用された場合、調剤は、シロップ、エマルジョン、ソフトゼラチンカプセル、注入用賦形剤、水性又は非水性液体分散液のかたちになり得るものであり、又は、使用前に水又は他の適当な媒体で再構成されるための乾燥物になり得る。液体調剤は、分散剤、乳化剤、湿潤剤、非水媒体（食用油を含む）、防腐剤、香料及び／又は着色剤といった標準的な添加物を含み得る。非経口投与のためには、媒体は、塩水溶液、グルコース溶液などが用いられ得るが、通常、少なくとも大部分において滅菌水を含む。注射用分散液も用いられ、この場合、標準的な分散剤が採用され得る。標準的な防腐剤、緩衝剤なども非経口剤形に加えられ得る。しかしながら、投与は、例えば坐薬のかたちで直腸内に、例えばペッサリー、タンポン、クリームのかたちで経膣的に、例えば、軟膏、クリーム、チンキ剤のかたちで経皮的におこなわれることもあり得る。
【００５１】
ここで記載している疾患を患っている又は患いそうである哺乳類、特にヒトに対する本発明の化合物又は医薬組成物の適当な投与量は、活性成分で体重に対し約０．１μｇ／ｋｇ（ＮＢ：例えばホルモンといった、より低量で伝達される化合物のいくつかの例がある）から５００ｍｇ／ｋｇの量である。非経口投与のためには、静脈投与において投与量が体重あたり０．１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇになり得る。活性成分は、好ましくは、日々１回から４回等量で投与される。式（Ｉ）の化合物は、前駆体（プロドラッグ）のかたち、又は生体内で活性化合物を放出するような適切に変性されたかたちでも用いられ得る。通常、投与量は、治療されている宿主とって最適な効果量が決定されるまで徐々に増やされる。最適な投与量は、治療されている状況、投与される化合物の選択、投与経路、性、年齢、体重、及び各人の症状の重症度に関わる治療中の各人の特有の反応を含む関連事情により、医師又は他の当業者によって決定され得る。
【００５２】
医薬組成物は、活性成分、即ち本発明の化合物の適当量を含む所望の剤形に適した標準的な技術によって調製される。そのような医薬組成物及びその投与単位形態は、標準的な成分を標準的な割合で含み、さらなる活性化合物又は本質があってもなくてもよく、そのような単位投与形態は、採用される日々の目的とする投与量範囲と釣り合った活性成分の効果的な適当量を含み得る。
【００５３】
下記の試験例は、さらに、それら発明を実施するために発明者らによって考察された最良の形態を示している。これらの例は、好ましい実施形態に関しており、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。
【実施例】
【００５４】
（試験例１）
ＥＬＩＳＡに基づく蛋白質−蛋白質相互作用インビトロ試験
【００５５】
細菌における蛋白質の生成
Ｌｇｓ及びβ−カテニンの結合領域を含むｃＤＮＡをｐＧＥＸ−４Ｔ誘導性細菌発現ベクター（Pharmacia）中にグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）ｃＤＮＡの下流で融合した。製造者の推奨方法に従って融合蛋白質をＢＬ２１細菌（例えばStratagene社）中で作製した。
【００５６】
作製された融合蛋白質を単離すべく、細菌を超音波緩衝液（10 mM トリスHCl pH 8.0、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1.5% sarkosyl、2% Triton-X-100、1 mM DTT、及びプロテアーゼ阻害剤）中で溶解し、続いて氷中で短時間の超音波処理（例えば中出力で２０秒間を３回）をし、遠心分離した。透明な上澄みをグルタチオンビーズ（Amersham Pharmacia）と４℃で２時間ゆっくり回転させながらインキュベートした。最後にビーズを洗浄用緩衝液（20 mM トリスpH 8.0、200 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT, 1 mM MgCl2、0.5% NP40）で数回洗浄し、貯蔵用緩衝液（20 mM トリス pH 8.0、200 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、1 mM MgCl2、10 % グリセロール、0.5% NP40、及びプロテアーゼ阻害剤）に貯蔵した。生成物の性質を当業者に周知の標準方法によりＳＤＳ−ゲル電気泳動で確認した。
【００５７】
結合分析
対応するパートナーへの突然変異の結合を試験すべく、上記記載のグルタチオンビーズに固定されたグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）融合蛋白質を、結合緩衝液（20 mM トリス pH 8.0、200 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、1 mM MgCl2、10% グリセロール、0.5% NP40、0.05% BSA 及びプロテアーゼ阻害剤）中で４５分間ブロックした。固定化されたＧＳＴ蛋白質の２μｇを、次に結合緩衝液中で０．５〜４μｌのＩＶＴ蛋白質と１．５時間インキュベートした。次にビーズを洗浄緩衝液（20 mM トリス pH 8.0、200 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、1 mM MgCl2、0.5% NP40）で４回洗浄し、Laemmli SDS サンプルバッファー中で煮沸した。損傷を受けていないＧＳＴ−融合物及びＩＶＴ蛋白質の当量の使用を、クマシー染色及びオートラジオグラフィーを用いてそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって確認した。
【００５８】
（試験例２）
癌細胞におけるＷｎｔ活性の抑制
【００５９】
ＥＬＩＳＡに基づく蛋白質−蛋白質相互作用法で確認されたＷｎｔ経路におけるβ−カテニン／ＢＣＬ９抑制物質の効果は、転写因子のＴｃｆ／Ｌｅｆ群に応答するレポーター遺伝子を用いて、又は、適当な細胞株におけるＷｎｔ標的遺伝子の量的分析によって、細胞培養系において評価され得る。
【００６０】
レポーター遺伝子は、転写因子応答要素及び最小プロモーターにシスで結合し、β−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光蛋白質、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ又はルシフェラーゼのように容易に検出でき若しくは分析できる遺伝子を含む構築物である。用いた発現ベクターに応じて、この手順は例えば、哺乳類の細胞株にもショウジョウバエの細胞株にも適用され得る。例えば、ＳＷ６２０（ＡＴＣＣ）のような構造的に活性化しているＷｎｔ経路を備えた結腸癌細胞は、適した系である。これにより、Ｔｃｆ−４誘導ルシフェラーゼレポータープラスミド（即ちTOPFLASH Upstate biotechnology, New York, USA）は、一時的に又は安定的に公知のごとく細胞に核酸を導入する。細胞中に遺伝子材料を導入するための、感染、電気穿孔法、トランスフェクションを含むいかなる手段も用いることができ、これらに限られない。例えば、ＤＮＡをＳＷ６２０細胞に導入すべく、Lipofectamineトランスフェクション試薬（Life Technologies, Inc.）のようなリポフェクション試薬が用いられ得る。一過性トランスフェクション手順によって、２番目のレポーター遺伝子、例えばウミシイタケルシフェラーゼレポータープラスミドｐＲＬ−ＳＶ４０（Promega Corporation, Madison USA）は、トランスフェクション性能の標準化のためにコトランスフェクトされる必要がある。薬剤は、トランスフェクション（一過性トランスフェクション）の後２４時間、又は、細胞（安定にトランスフェクトされた細胞）の播種後２４時間で培地に加えられる。細胞抽出物は、２４〜４８時間後に用意され、製造者（例えば、ルシフェラーゼ活性： Promega Corporation）によって説明されているようにレポーター遺伝子活性のために試験される。溶媒のみで処理された細胞と比べて５０％以上レポーター遺伝子の活性が減少した化合物は、該当したものとして考えられる。平行して、例えば、黄色テトラゾリウム塩細胞増殖分析（ＭＴＴ）法によって毒性が評価され得る。
【００６１】
表１は、本発明に係る化合物のインビトロ活性を示す。ＴＧＣ  ＩＤは、被験物内部識別番号のことであり；特異性値は、β−カテニン−ＢＣＬ９−ＢＣＬ９Ｌの阻害に対する化合物の特異性を表現しており（特異性はＥ−カドヘリン−β−カテニン、Ｔｃｆ−４−βカテニン又はＢＣＬ９−Ｐｙｇｏ相互作用を著しく阻害しないことを意味する）；ＭＷは分子量を意味する。
【００６２】
ＥＬＩＳＡ法及び細胞試験（ＣＡ）測定は、上記試験例で記載されているようにおこなわれた。
【００６３】
ＥＬＩＳＡ及びＣＡ試験に関連する数字は、次のように解釈される。
１：０〜２０％阻害
２：２１〜４０％阻害
３：４１〜６０％阻害
４：６１〜８０％阻害
５：８１〜１００％阻害
【００６４】
【表１】
2010512358.tif 000017
2010512358.tif 000018
2010512358.tif 000019
2010512358.tif 000020
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2010512358.tif 000022
【００６５】
本発明の化合物を次のようにして調製した。
【００６６】
＜オルト−ブロモ  スルホンアミド＞
【００６７】
【化１５】
2010512358.tif 000023
【００６８】
ジクロロメタン（スルホニルクロリドの1 mL/ mmol）に溶解させた２−ブロモベンゼンスルホニルクロリド（１当量）及びピリジン（２当量）を丸底フラスコに入れた。反応混合物を０℃に冷却した。置換アニリン（１当量）をゆっくりと加えた。得られた混合物を終夜撹拌した。０．５Ｍの塩酸溶液を加えた。有機相を分離し、該有機相を水、次に塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、蒸発により乾燥させた。残渣を最少量のメタノールで粉にした。目的とする化合物を白色固体として得た。
【００６９】
＜オルト−アルキニル  スルホンアミド＞
【００７０】
【化１６】
2010512358.tif 000024
【００７１】
Ｎ−置換−２−ブロモベンゼンスルホンアミド（１当量）をジイソプロピルアミン（Ｎ−置換−２−ブロモベンゼンスルホンアミドの5 ml# / mmol）中で対応する末端アルキン（１当量）と混合した。この混合物に、トリフェニルホスフィン（０．０１当量）、ヨウ化銅（０．０１当量）、及びアセトニトリル  パラジウム混合物（０．０１当量）を加えた。得られた反応混合物を終夜還流し、セライトベッドでろ過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより、目的とする生成物が白色から黄色の粉体として得られた。
【００７２】
＜オルト−ヒドラゾン  スルホンアミド＞
【００７３】
【化１７】
2010512358.tif 000025
【００７４】
スルホンアミドヒドラジン（１当量）をＴＨＦ（5 mL / mmol対ヒドラジン）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸の触媒量の存在下で終夜還流温度にて相当するアルデヒド（１当量）で処理した。得られた反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をメタノールで再結晶、及び／又はカラムクロマトグラフィーにより、目的とする化合物を淡黄色粉体として生成させた。
【００７５】
＜オルト−ピラゾール  スルホンアミド＞
【００７６】
【化１８】
2010512358.tif 000026
【００７７】
スルホンアミドヒドラジン（１当量）を無水エタノール（5 mL / mmol対ヒドラジン）に溶解させ、還流温度にて４時間、相当するケトアルキン（１当量）で処理した。得られた反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をメタノールで再結晶、及び／又はカラムクロマトグラフィーで目的とする生成物を明黄色の粉体として得た。
【００７８】
＜オルト−カルボキサミド  スルホンアミド＞
【００７９】
【化１９】
2010512358.tif 000027
【００８０】
オルト−メチルカルボキシレートスルホンアミド（１当量）をアセトニトリル（5 mL/mmol対エステル）中で相当するベンジルアミン（１当量）と混合した。反応混合物を半時間５０℃に加熱し、トリエチルアミン（１．２当量）そのものを加えた。得られた反応混合物を終夜還流した。溶媒の蒸留において、カラムクロマトグラフィーによって目的とするカルボキシアミドスルホンアミドを白色固体として得た。
【００８１】
＜オルト−アミド  スルホンアミド＞
【００８２】
【化２０】
2010512358.tif 000028
【００８３】
置換されたアシルクロリド（１当量）をジクロロメタン（5 mL/mmol対クロリド）に溶解させ、０℃に冷却した。ジクロロメタン（5 mL/mmol対アシルクロリド）に溶解した冷却されたピリジン（２当量）をゆっくりと加え、得られた溶液を２時間以上かけて室温まで暖めた。得られた反応混合物を０℃に冷却した。２−アミノ−４−置換ベンゼンスルホニルアミド（１当量）のジクロロメタン（5 mL/ mmol対スルホニルアミド）の溶液をゆっくりと注入した。温度を室温まで上げる間、反応混合物を終夜撹拌した。０．５Ｍの塩酸溶液を加えた。有機相を分離し、水、次に塩水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムによって乾燥し、ろ過し、蒸留によって乾燥させた。残渣を最少量のメタノールで粉にして、カラムクロマトグラフィーによって目的とする生成物を白色固体として得た。
【００８４】
抜粋した質量分析（ＭＳ）及び１Ｈ−ＮＭＲのデータ（ｐｐｍで与えられた重水素含有ジメチルスルホキシドにおけるシグナル  ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｄｄ：二重線の二重線、ｄｔ：三重線の二重線、ｍ：多重線、ｂ：広幅）。
【００８５】
【表２】
2010512358.tif 000029
2010512358.tif 000030
2010512358.tif 000031
【００８６】
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2010512358.tif 000041
2010512358.tif 000042
2010512358.tif 000043