(57)【要約】  IL-13関連の障害または疾患の治療および／またはその治療をモニター観察する方法および組成物は、開示される。
2010512402.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象のIL−13関連の障害または疾患を治療または予防する方法であって、その障害または疾患の症状の一つ以上の発症または再発を低下または遅延するために有効な量のIL−13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストを単一処理間隔として対象に投与することからなる方法。
【請求項２】
単一処理間隔が、IL−13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストの単一用量である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
単一処理間隔が、本質的に、初期用量から１週以内に、IL−13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストの２回または３回用量からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
IL−13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストの投与が、障害または疾患の症状の検出可能な発症の前に行われる、請求項１−３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
IL−13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストの投与が、障害または疾患の症状の部分的な発症後に行われる、請求項１−３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
IL−13関連の障害または疾患を誘発または悪化させる試薬への曝露の前に、IL−13アンタゴニストまたはIL-4アンタゴニストが対象に投与される、請求項１−５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
抗原への季節的な曝露の前に、IL-13アンタゴニストまたはIL-4アンタゴニストが投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
IL-13アンタゴニストまたはIL-4アンタゴニストが、IL-13関連の障害または疾患の発赤または発症の再発の前に投与される、請求項４または５に記載の方法。
【請求項９】
IL-13アンタゴニストまたはIL-4アンタゴニストが、誘発または悪化させる試薬への曝露の前または後、１〜５日の間のいずれかに投与される、請求項１−５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
IL-13関連の障害を誘発または悪化させる試薬が、抗原、汚染物質、毒性試薬、感染およびストレスからなる群の中から選択されることを特徴とする、請求項６または９に記載の方法。
【請求項１１】
IL-13関連の障害または疾患の症状が、ＩｇＥレベルの増加、ヒスタミン放出の増加、エオタキシンレベルの上昇または呼吸器症状の一つ以上からなる、請求項１−１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
呼吸器症状が、呼吸困難、喘鳴、せき、息切れおよび／または通常の日常活動の実行困難の一つ以上からなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
対象が、IL−13関連の障害または疾患を有する、または、その危険性を有する、ヒト成人、青年または小児である、請求項１−１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
IL-13関連の障害または疾患が、炎症性、呼吸性、アレルギー性または自己免疫性の障害または疾患である、請求項１−１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
IL-13関連の障害または疾患が、IgE関連の障害、アトピー性障害、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および／または気道炎症、好酸球増加症、線維症または粘液生産過多より選択される一つまたは複数である、請求項１−１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
IL-13関連の障害または疾患が、皮膚の自己免疫疾患、アトピー性皮膚炎、炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、肝硬変、肝癌、強皮症、腫瘍、癌、白血病、グリア芽細胞腫、リンパ腫、ウイルス感染、または、肝臓の線維症より選択される一つまたは複数である、請求項１−１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
単一処理間隔が、約1−3mg/kgの量のIL−13アンタゴニストの用量からなる、請求項１−１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
IL-13アンタゴニストが、吸入によって、注入によって、または、経口的に投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
IL-13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストが、IL-13またはIL-4あるいはIL-13受容体またはIL-4受容体の一つ以上の生物学的な活性を阻害または低下させる、請求項１−１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
生物学的な活性が、ＣＤ２３発現の誘導、ヒトＢ細胞によるＩｇＥの産生、転写因子のリン酸エステル化、ＳＴＡＴ６タンパク質の活性化、インビボにおける抗原誘発性好酸球増加症；インビボにおける抗原誘発性気管支収縮、または、インビボにおける薬物誘発性気道過敏性より選択される一つまたは複数である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
IL-13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストが、IL-13、IL−13R、IL-4またはIL-4Rαに結合する抗体分子；可溶形態のIL−13RまたはIL-4Rα；対応する受容体に結合するが、該受容体を実質的に活性化しないIL-13またはIL-4変異タンパク質；STAT6の低分子阻害剤；ペプチド阻害剤；または、核酸発現の阻害剤である、請求項１−２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
IL−13Rが、1IL−13Rα2または1 IL−13Rα1である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
IL-13アンタゴニストが、IL-13/IL-13αR1、IL-13/IL-4Rα、IL-13/IL-13Rα1/IL-4Rα；またはIL-13/IL13Rα2から選択される複合体の形成を低下させる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
IL-4アンタゴニストが、IL-4/IL-4Rα、IL-4/γcommon、またはIL-4/IL-4Rα/γcommonから選択される複合体の形成を低下させる、請求項２１の方法。
【請求項２５】
抗体分子が、IL-13、IL−13R、IL-4またはIL-4Rαに結合する抗体またはその抗原結合性断片である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
抗体分子が10−1M未満のKｐによりIL-13と結合し、一つまたは複数の以下の特性：
(a)重鎖免疫グロブリン可変ドメインは、モノクローナル抗体MJ2−7（配列番号１７）、mAb 13.2（配列番号１９６）またはC65（配列番号１２３）の重鎖CDR3から3未満のアミノ酸の置換によって異なる重鎖CDR3からなる；
(b)軽鎖免疫グロブリン可変ドメインは、モノクローナル抗体MJ2−7（配列番号１８）、mAb 13.2（配列番号１９７）またはC65（配列番号１１８）の対応する軽鎖CDRから3未満のアミノ酸の置換によって異なる軽鎖CDR1からなる；
(c)重鎖免疫グロブリン可変ドメインは、V2.1（配列番号７１）、V2.3（配列番号７３）、V2.4（配列番号７４）、V2.5（配列番号７５）、V2.6（配列番号７６）、V2.7（配列番号７７）、V2.11（配列番号８０）、ch13.2（配列番号２０４）、h13.2v1（配列番号２０５）、h13.2v2（配列番号２０６）またはh13.2v3（配列番号２０７）の重鎖可変ドメインをコードしているヌクレオチド配列の相補鎖に対して、高いストリンジェントな条件でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列からなる；
(d)軽鎖免疫グロブリン可変ドメインは、V2.11（配列番号３６）またはh13.2v2（配列番号２１２）の軽鎖可変ドメインをコードしているヌクレオチド配列の相補鎖に対して、高いストリンジェントな条件でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列からなる；
(e)重鎖免疫グロブリン可変ドメインは、V2.1（配列番号７１）、V2.3（配列番号７３）、V2.4(配列番号７４）、V2.5（配列番号７５）、V2.6（配列番号７６）、V2.7（配列番号７７）、V2.11（配列番号８０）；ch13.2（配列番号２０８）、h13.2v1（配列番号２０９）、h13.2v2（配列番号２１０）またはh13.2v3（配列番号２１１）の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列からなる；
(f)軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、V2.11（配列番号３６）またはh13.2v2（配列番号２１２）の軽鎖可変ドメインと少なくとも９０％同一である；
(g)抗体分子は、ヒトIL-13への結合を、mAb MJ2−7、mAb13.2またはC65と争う；
(h)抗体分子は、配列番号２４または配列番号１７８の残基116、117、118、122、123、124、125、126、127、および128からなる群から選択されるIL-13からの一つ以上のアミノ酸残基と接触する：
(i)抗体分子は、ヒトIL-13（配列番号１９４）の残基81−93および114−132からなる群から選択されるか、または以下からなる群から選択されるIL-13からの一つ以上の残基と接触する：配列番号１９４［成熟した配列の位置；配列番号１９５］の位置６８［４９］のグルタミン酸、位置７２［５３］のアスパラギン、位置８８［６９］のグリシン、位置９１［７２］のプロリン、位置９２［７３］のヒスチヂン、位置９３［７４］のリジン、および、位置１０５［８６］のアルギニン；
(j)重鎖可変ドメイン配列は、超可変的なループ１、２および／または３において、mAb MJ2 7、mAb 13.2またはC65と同じ標準構造を有する；
(k)軽鎖可変ドメイン配列は、超可変的なループ１、２および／または３において、mAb MJ2−7、mAb 13.2またはC65と同じ標準構造を有する；そして、
(l)重鎖可変ドメイン配列および／または軽鎖可変ドメイン配列は、それぞれ生殖細胞系遺伝子DP−54およびDPK−9にコードされるＶＨ部分、または、生殖細胞系遺伝子DP−54およびDPK−9にコードされるＶＨ部分と少なくとも９５％同一の配列からのＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３フレームワーク領域を有する；そして、
(m)注入の少なくとも６週後、ヒツジ・モデルの回虫（Ascaris）抗原への曝露に対して注射後の保護効果を与える
を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
IL-13アンタゴニストおよびIL-4アンタゴニストが、同時または順次、併用投与される、請求項１−２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
IL-13アンタゴニストおよびIL-4アンタゴニストが、併用処方される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
L-13アンタゴニストおよびIL-4アンタゴニストが、：吸入されたステロイド、β−アゴニスト、ロイコトリエンのアンタゴニストまたはロイコトリエン受容体、ＩｇＥ抑制物質、ＰＤＥ４抑制物質、キサンチン、抗コリン薬、IL−5抑制物質、エオタキシン／ＣＣＲ３抑制物質または抗ヒスタミンの一つまたは複数より選択される他の治療薬と組み合わせて投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
IL-4アンタゴニストが、IL-4またはIL-4Rαと結合する抗体分子；可溶形態のIL-4R；IL-4変異タンパク質；STAT6の低分子阻害剤；ペプチド阻害剤；および核酸発現の阻害剤からなる群から選択され、また、IL-13アンタゴニストが、ヒトＩＬ−１３との結合についてｍＡｂ  ＭＪ２−７、ｍＡｂ１３．２またはＣ６５と競合する抗体分子またはIL-13Rα2の可溶性の断片である、IL-13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストからなる組成物または剤形。
【請求項３１】
インビトロ（in vitro）のサンプル中のIL-13の存在を検出する方法であって、支持体に固定される第１の抗IL-13抗体分子を提供すること；第２の抗IL-13抗体分子への対象の曝露後の対象から得られたサンプルを提供すること；固定化された第１の抗IL-13抗体分子にIL-13の結合が発生することを許す条件において、該サンプルを第１の抗ＩＬ−１３抗体と接触させること；そして、基準値と比較してサンプル中のIL-13を検出することを含み、ここで第１および第２の抗IL-13抗体は、IL-13上の異なるエピトープと結合するところの、方法。
【請求項３２】
第１の抗IL-13抗体分子が実質的に遊離しているIL-13と結合し、第２の抗IL-13抗体分子に結合したIL-13と実質的に結合しない、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
第１の抗IL-13抗体分子が実質的に遊離しているIL-13および第２の抗IL-13抗体分子に結合したIL-13と結合する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
固定化された第一の抗IL-13抗体分子に結合したIL-13の存在を検出することが、標識された第三の抗IL-13抗体分子またはIL-13の第一または第二の抗体分子の複合体を認識する標識された試薬を用いて行われる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
コントロールサンプルと比較して、サンプル中の第１の抗IL-13抗体分子に結合したIL-13のレベルの変化が、サンプル中のIL-13の存在の指標である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
その変化が、所定のレベルと比較して、サンプル中のIL-13のレベルの増加であり、その増加が、肺における炎症の増加の指標である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
サンプルが、血清サンプル、血漿サンプル、組織サンプルおよび生検からなる群から選択された生体サンプルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
請求項３１−３７のいずれかの方法に従って、サンプル中でIL-13に拮抗的な結合試薬に非結合および／または結合しているIL-13のレベルを検出することを含む、対象の肺炎症の低下において、IL-13に拮抗的な結合試薬の有効性を評価する方法であって、参照サンプルと比較して、非結合および／または結合しているIL-13のレベルの変化が、IL-13に拮抗的な結合試薬の有効性の指標である、方法。
【請求項３９】
さらに、サンプル中のエオタキシンレベル、好塩基球によるヒスタミン放出、ＩｇＥ力価の一つ以上の変化を評価すること、または、対象の症状の変化を評価することを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
IL-13に拮抗的な結合試薬に非結合および／または結合しているIL-13のレベルの低下、または、その拮抗的な結合試薬に結合しているIL-13のレベルの上昇が、IL-13に拮抗的な結合試薬が、対象の肺炎症を効果的に減少させていることの指標である、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
IL-13関連の障害または疾患を治療または防止する際、単一処理間隔としての使用の指示書を備える、請求項１−２９のいずれかにて用いるための、IL-13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストを含む、キット。
【請求項４２】
請求項１−２９のいずれかに記載の方法に用いられる組成物。
【請求項４３】
IL-13関連の障害または疾患を単一の処理間隔として治療または防止するための薬剤の製造における、IL-13アンタゴニストおよび／またはIL-4アンタゴニストを含む組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ−１３関連障害の治療方法および治療用組成物ならびにその治療をモニター観察するための方法に関する。
【０００２】
（関連出願への相互参照）
この出願は、2006年12月11日に出願された米国出願番号60／874、333、および、2007年4月23日に出願された米国出願番号60／925、932への優先権を主張し、その両方の内容を出典明示により本明細書の一部とする。
【０００３】
（配列表）
電子および書面の形式の配列表のコピーはこれと共に提出される。
【背景技術】
【０００４】
インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）は、Tリンパ球および肥満細胞により分泌されるサイトカインである（McKenzieら（1993）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90：3735−39；Bostら（1996）Immunology 87：663−41）。ＩＬ−１３は、ＩＬ−４といくつかの生物学的な活性を共有している。たとえば、ＩＬ−４またはＩＬ−１３のいずれかは、B細胞においてＩｇＥアイソタイプの交換を引き起こすことができる（Tomkinsonら（2001）J. Immunol. 166：5792−5800）。加えて、細胞表面のＣＤ２３および血清ＣＤ２３（ｓＣＤ２３）の増加したレベルが喘息患者において報告されている（Sanchez−Guererroら（1994）Allergy 49：587−92；DiLorenzoら（1999）Allergy Asthma Proc. 20：119−25）。加えて、ＩＬ−４またはＩＬ−１３のいずれかは、B細胞および単核細胞において、ＭＨＣクラスＩＩおよび親和性の低いＩｇＥ受容体（ＣＤ２３）の発現をアップレギュレートすることができ、それは、抗原提示の強化、およびマクロファージ機能の制御をもたらす（Tomkinsonら、前掲）。重要なこととして、ＩＬ−４またはＩＬ−１３のいずれかは、上皮細胞上のＶＣＡＭ−１の発現を増加させることができ、それは、好酸球（およびＴ細胞）の気道組織への優先的な補充を容易にする（Tomkinsonら、前掲）。ＩＬ−４またはＩＬ−１３のいずれかは、また、気道粘液分泌の増加を引き起こし、それは、気道の応答性を悪化させることができる（Tomkinsonら、前掲）。これらの見解は、ＩＬ−１３が、Ｔｈ２の発症を誘導することに必要ではない、または、その発症能さえ有していないが、ＩＬ−１３が、気道の好酸球増加症およびAHRの発症において重要なプレーヤーかもしれないことを示唆する（Tomkinsonら、前掲；Wills−Karpら（1998）Science 282：2258−61）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】McKenzieら（1993）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90：3735−39
【非特許文献２】Bostら（1996）Immunology 87：663−41
【非特許文献３】Tomkinsonら（2001）J. Immunol. 166：5792−5800
【非特許文献４】Sanchez−Guererroら（1994）Allergy 49：587−92
【非特許文献５】DiLorenzoら（1999）Allergy Asthma Proc. 20：119−25
【非特許文献６】Wills−Karpら（1998）Science 282：2258−61
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ＩＬ−１３関連の障害または疾患の処置および／または処置をモニターするための方法および組成物が開示される。ひとつの態様において、出願人は、ＩＬ−１３関連の障害または疾患の発症前に、ＩＬ−１３アンタゴニストまたはＩＬ−４アンタゴニストの対象への単独投与は、未処置の対象に比べて、その障害または疾患の一つ以上の症状を減少させることを見いだした。一つの試薬の投与後に検出された減少と比べて、ＩＬ−１３アンタゴニストとＩＬ−４アンタゴニストとの同時投与後には、その障害または疾患の症状の減少の強化が検出される。こうして、ＩＬ−１３アンタゴニストを単独に、または、ＩＬ−４アンタゴニストと併用して用いることにより、ＩＬ−１３関連の障害または疾患のひとつ以上の症状の減少または抑制、または、その発症の予防または遅延のための方法が開示される。他の実施形態においては、対象、例えば、ヒト対象におけるＩＬ−１３関連の障害または疾患の処置または予防におけるＩＬ−１３アンタゴニストの効能を評価する方法も開示される。
【０００７】
したがって、一つの態様において、本発明は、対象におけるＩＬ−１３関連の障害または疾患の処置または予防する方法を特徴とする。その方法は、その障害または疾患の一つ以上の症状を減少させるのに有効な量（例えば、対象におけるＩｇＥレベル、ヒスタミンの放出、エオタキシンレベルまたは呼吸器症状のひとつ以上を減少させるのに有効な量）で、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストを対象へ投与することを含む。予防用の使用（例えば、障害または疾患のひとつ以上の症状の発症または再発の抑制、減少、又遅延させるため）の場合には、対象は、障害または疾患のひとつ以上の症状を有しているか、または、有していないかもしれない。例えば、その症状の検出可能な発現よりも前に、または、その症状の全てではないが、少なくともいくつかが検出されるよりも後に、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／または、ＩＬ−４アンタゴニストは投与されることができる。治療用の使用の場合には、治療は、対象の障害または疾病を改善し、治療し、維持し、または、その期間を減少させることができる。治療用の使用においては、対象は、部分的または十分な症状有しているかもしれない。典型的な場合、治療は、医師により検出可能な程度に対象の障害または疾病を改善し、または、障害または疾病の悪化を防ぐ。
【０００８】
一つの実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／または、ＩＬ−４アンタゴニストは、単独の治療間隔で、たとえば、単独の治療間隔の間に単一用量として、または、2または３回用量よりも多くない反復用量として投与され、例えば、反復用量は、最初の用量から一週間以内の期間以内に投与される。例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３の障害または疾患に関連した一つ以上の症状の発症または再発よりも前に、しかし、その障害または疾患に関連した症状の十分な発症の前に、単独の治療間隔で投与されることができる。ある実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３の障害または疾患を起動または悪化させる物質、例えば、アレルギー抗原、汚染源、毒性物質、感染、および／または、ストレス、に曝露される前に、対象に投与される。いくつかの実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３に関連した障害または疾患を起動および／または悪化させる物質への曝露より前に、その間に、または、その後、すぐに投与される。例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、起動および／または悪化させる物質への曝露の、１、５、１０、２５または２４時間；２、３、５、１０、１５、２０または３０日間；または、４、５、６、７または８週間またはそれ以上、前または後に投与されることができる。典型的には、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、起動および／または悪化させる物質への曝露の前または後、２４時間および２日間の間のどこかで投与されることができる。その物質への曝露後に投与が行われる実施形態においては、対象は、その徴候を経験しないかもしれないし、徴候の部分的な発症を経験するかもしれない。例えば、対象は、その障害または疾患の初期の段階の症状を有するかもしれない。各々の投与量は、吸入または注射により、例えば、皮下に約0.5−１０ ｍｇ／ｋｇ（例えば、約0.7−5ｍｇ／ｋｇ、0.9−4ｍｇ／ｋｇ、1−3ｍｇ／ｋｇ、1.5−2.5ｍｇ／ｋｇ、2ｍｇ／ｋｇ）の量で投与され得る。
【０００９】
ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３に関連した障害または疾患を有する、または、その危険性を有する対象に投与されることができる。典型的には、対象は、ＩＬ−１３に関連した障害または疾患を有する、または、その危険性を有する哺乳動物、例えば、ヒト（例えば、小児、青年または成人）である。ＩＬ−１３に関連した障害または疾患の例は、これらに限定されないが、例えば、これに限定されないが、ＩＬ−１３またはＩＬ−４に対する高感受性を原因とする、アトピー性障害を含むＩｇＥ関連障害（例えば、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、および、アレルギー性疾患、例えば、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性胃腸炎）；呼吸器系障害、例えば、喘息（例えば、、アレルギー性および非アレルギー性喘息、（例えば、乳児における、例えば、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）に感染したことによる喘息））、慢性閉塞性肺疾患（ＣＤＰＤ）、および、気道炎症、好酸球増加症、繊維症、および、過度の粘液産生、例えば、嚢胞性繊維症、および、肺繊維症を含む他の疾患；炎症性、および／または、自己免疫性の障害または疾患、例えば、皮膚炎症性の障害または疾患（例えば、アトピー性皮膚炎）、胃腸の障害または疾患（例えば、炎症性腸障害（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、および／または、クローン病）、肝臓の障害または疾患（例えば、肝硬変、肝癌）、および、強皮症；腫瘍または癌（例えば、軟組織または固形腫瘍）、例えば、白血病、グリア芽細胞腫およびリンパ腫、例えば、ホジキンのリンパ腫；ウイルス感染（例えば、HTLV−1から）；他の器官の繊維症、例えば、肝臓の繊維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型ウイルスを原因とする繊維症）；および、保護タイプ１の免疫反応の発現（例えば、ワクチン接種の間）の抑制、からの一つ以上から選ばれた障害を含む。
【００１０】
例えば、対象は、季節的なアレルギー抗原、例えば、ブタクサに対するアレルギーを有するヒト、または、風邪またはインフルエンザへの曝露後、または、風邪またはインフルエンザの季節の間の喘息患者が可能である。症状の発症の前に（例えば、アレルギーまたは喘息の症状、または、アレルギーまたは風邪またはインフルエンザの季節の前またはその間）、抗ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストの単一用量間隔が対象に投与され、こうして、症状は減少し、および／または、障害または疾患の発症は遅れる。同様にして、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの投与は、障害または疾患の発火または発症の再発により特徴づけられる慢性疾患の治療時に障害または疾患に関連する一つ以上の症状の発症よりも前（例えば、症状の完全な発症前）に効果があり得る。アレルギー性鼻炎または他のアレルギー性障害を治療するための典型的な方法は、アレルギー抗原への曝露の前、例えば、アレルギー抗原への季節的な曝露の前、例えば、アレルギー抗原の開花の前に、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストによる治療の開始を含むことができる。そのような治療は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの単独の治療間隔、例えば、単一用量を含むことができる。他の実施形態においては、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの単独の治療間隔は、アレルギー免疫療法と併用して投与される。例えば、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの単独の投与間隔は、アレルギー免疫療法、例えば、ブタクサ、家ダニ、ライ麦のようなアレルギー抗原の一つ以上を含むワクチンと併用して投与される。単独の治療間隔は、対象において免疫性の望ましいレベルが獲得されるまで繰り返されることができる。
【００１１】
他の実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３関連の障害または疾患の一つ以上の症状を減少または抑制する、または、発症を抑制または遅延させるのに有効な量で投与される。例えば、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、（i）対象のＩＬ−１３のレベル；（ii）対象のエオタキシンのレベル；（iii）好塩基球（例えば、血液の好塩基球）により放出されるヒスタミンのレベル；（iv）対象のＩｇＥ力価、および／または、（v）対象の呼吸器症状（例えば、呼吸困難、喘鳴、咳、息切れ、および／または、通常の日常的な活動の行動の困難）の一つ以上の変化、の一つ以上を減少させる量で投与されることができる。
【００１２】
他の実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−４、または、ＩＬ−１３受容体（例えば、ＩＬ−１３受容体α１、または、ＩＬ−１３の受容体α２）またはＩＬ−４受容体（例えば、ＩＬ−４受容体α、または、そのサブユニット、例えば、γ−鎖に関連する受容体）の一つ以上の生物学的活性を抑制または減少させる。本願明細書において開示されるＩＬ−１３、および／または、ＩＬ−４アンタゴニストを用いることによって減少され得る典型的な生物学的活性は、これらに限定されないが、ＣＤ２３の発現の誘導、ヒトB細胞によるＩｇＥの産生、転写因子、例えば、ＳＴＡＴタンパク質（例えば、ＳＴＡＴ６タンパク質）のリン酸化、インビボにおいて抗原に誘導される好酸球増加症、インビボにおいて抗原に誘導される気管支収縮、および／または、インビボにおいて薬物に誘導される気道過敏症を含む。ＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒのアンタゴニストを用いた拮抗作用は、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒポリペプチド、および／または、ＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒポリペプチドの生物学的な活性の全ての消失を必ずしも示さない。
【００１３】
明確化の目的のために、本願明細書において用いられる「ＩＬ−１３アンタゴニスト」または「ＩＬ−４アンタゴニスト」という用語は、タンパク質（例えば、複数鎖ポリペプチド、ポリペプチド）、ペプチド、低分子、または、ＩＬ−１３およびＩＬ−１３Ｒ、または、ＩＬ−４およびＩＬ−４Ｒそれぞれの活性の一つ以上を減少、抑制、さもなければ遮断する抑制性核酸のような化合物を集合的に指す。一つの実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒポリペプチド（ここでも、また、「拮抗的なＩＬ−１３結合剤」として示される。）に対して相互作用、例えば、結合する。例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３受容体、好ましくは、哺乳動物、例えば、ヒトＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ（ここでも、また、個々に、「ＩＬ−１３アンタゴニスト」および「ＩＬ−１３Ｒアンタゴニスト」として、それぞれ示される。）に相互作用、例えば、結合することができ、また、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−１３Ｒに関連する生物学的な活性の一つ以上を減少または抑制することができる。他の実施形態においては、ＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒポリペプチド（例えば、哺乳動物、例えば、ヒトＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒ（ここでも、また、個々に、「ＩＬ−４アンタゴニスト」および「ＩＬ−４Ｒアンタゴニスト」として、それぞれ示される。）に対して相互作用、例えば、結合し、また、ＩＬ−４および／またはＩＬ−４Ｒに関連する生物学的な活性の一つ以上を減少または抑制する。アンタゴニストは、ＩＬ−１３ またはＩＬ−４、または、ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４Ｒ に高い親和性、例えば、親和定数が、少なくとも約１０7Ｍ−1、好ましくは、約１０8Ｍ−1、さらに好ましくは、約１０9Ｍ−1 〜１０１０Ｍ−1またはそれ以上で結合する。「ＩＬ−１３アンタゴニスト」または「ＩＬ−４アンタゴニスト」という用語は、本願明細書において開示される生物的な活性の一つ以上を抑制または減少させる試薬を含むが、ＩＬ−１３またはＩＬ−４に直接結合しなくてもよい。
【００１４】
「抗ＩＬ−１３結合剤」および「ＩＬ−１３結合剤」は、本願明細書においては、相互に変換可能に用いられる。本願明細書において用いられるこれらの用語は、ＩＬ−１３タンパク質、例えば、ほ乳動物のＩＬ−１３、特に、ヒトＩＬ−１３に結合する界面を含むタンパク質（例えば、複数鎖ポリペプチド、ポリペプチド）またはペプチドのような化合物を指す。結合剤は、一般に、5×１０−7Mよりも低いKd値で結合する。典型的なＩＬ−１３結合剤は、抗原結合部位を有するタンパク質、例えば、抗体である。抗ＩＬ−１３結合剤またはＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３に結合するＩＬ−１３アンタゴニストであってもよく、または、単にＩＬ−１３に結合するが、活性を誘発させないか、または、実際に、ＩＬ−１３活性を抑制するかもしれないＩＬ−１３結合剤も含むことができる。例えば、特定のＩＬ−１３結合剤、例えば、結合してＩＬ−１３の生物学的な活性の一つ以上を抑制する抗ＩＬ−１３抗体分子、例えば、抗体１３．２、ＭＪ２−７、および、Ｃ６５もまた、拮抗的なＩＬ−１３結合剤として、本願明細書において示される。本願明細書において定義されるようＩＬ−１３結合剤ではないＩＬ−１３アンタゴニストの例は、例えば、ＩＬ−１３シグナルの上流または下流の阻害剤（例えば、ＳＴＡＴ６阻害剤）を含む。
【００１５】
追加的な実施形態は、一つ以上の次の特徴を含んでもよい；
【００１６】
いくつかの実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニスト、または、ＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、または、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒに結合する抗体分子であってもよい。ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、単独で、または、他の部分（例えば、免疫グロブリンＦｃ 部位）に融合して、または、サブユニットのヘテロ二量体（例えば、可溶性ＩＬ−１３Ｒ−ＩＬ−４Ｒ ヘテロ二量体、または、可溶性ＩＬ−４Ｒ−γcommon ヘテロ二量体）として、ＩＬ−１３Ｒ（例えば、可溶性のＩＬ−１３Ｒα２ またはＩＬ−１３Ｒα１）またはＩＬ−４Ｒ （例えば、ＩＬ−４Ｒα）であってもよい。他の実施形態においては、アンタゴニストは、サイトカイン変異体（例えば、対応する受容体に結合するが、実質的に受容体を活性化しないＩＬ−１３またはＩＬ−４変異体）、または、毒素に接合したサイトカインである。他の実施形態においては、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、低分子量の阻害剤、例えば、ＳＴＡＴ６の低分子量の阻害剤、または、ペプチド阻害剤である。さらに他の実施形態においては、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、核酸の発現の阻害剤である。例えば、そのアンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、または、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒの遺伝子の発現を遮断または減らすアンチセンスＲＮＡまたはsiＲＮＡである。
【００１７】
一つの実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストまたは結合剤（例えば、抗体分子、可溶性受容体、サイトカイン変異体、または、ペプチド阻害剤）は、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒに結合し、ＩＬ−１３およびＩＬ−１３受容体、例えば、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３Ｒα２、および／または、ＩＬ−４Ｒαの間の相互作用（例えば、結合）を抑制または減少させ、それによって、シグナルの導入を抑制又は減少させる。例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストは、例えば、ＩＬ−１３およびＩＬ−１３Ｒα１（「ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１」）；ＩＬ−１３およびＩＬ−４Ｒα（「ＩＬ−１３／ＩＬ−４Ｒα」）；ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−４Ｒα（「ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒα」）；および、ＩＬ−１３およびＩＬ−１３Ｒα２（「ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα２」）から選択される複合体の一つ以上の成分に結合することができる。実施形態において、ＩＬ−１３アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒに結合し、ＩＬ−１３およびＩＬ−１３受容体複合体、例えば、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−４Ｒαからなる複合体との間の相互作用、例えば、結合を妨害（例えば、阻害、遮断、または、さもなければ、減少）する。他の実施形態において、ＩＬ−１３アンタゴニストは、ＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３およびＩＬ−１３受容体複合体のサブユニット、例えばＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−４Ｒαのそれぞれとの間の相互作用、例えば、結合を妨害（例えば、阻害、遮断、または、さもなければ、減少）する。さらに他の実施形態において、ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−１３抗体またはその断片は、ＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−４Ｒαの間の相互作用、例えば、結合を妨害（例えば、阻害、遮断、または、さもなければ、減少）する。典型的には、γL−１３アンタゴニストは、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−４Ｒαとの相互作用、例えば、結合を妨害（例えば、阻害、遮断、または、さもなければ、減少）する。典型的な抗体は、三元複合体、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒαの形成を阻害または防止する。
【００１８】
他の実施形態において、ＩＬ−４アンタゴニスト（例えば、抗体分子、可溶性受容体、サイトカイン変異体、または、ペプチド阻害剤）は、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒに結合し、ＩＬ−４およびＩＬ−４受容体、例えば、ＩＬ−４Ｒα、および／または、γcommonとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害または減少させ、それによって、シグナルの導入を減少または阻害し、それによって、シグナルの導入を阻害又は抑制する。例えば、ＩＬ−４アンタゴニストは、例えば、ＩＬ−４およびＩＬ−４Ｒα（「ＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒα」）、ＩＬ−４およびγcommon（「ＩＬ−４／γcommon」）、または、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒαおよびγcommon（「ＩＬ−４／L−4Rαγcommon」）から選ばれる複合体の１つ以上の成分に結合することができる。具体的な実施形態において、ＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−４に結合し、ＩＬ−４およびＩＬ−４受容体複合体のサブユニット、例えば、ＩＬ−４Ｒα、または、γcommonのそれぞれとの間の相互作用、例えば、結合を妨害（例えば、阻害、遮断、または、さもなければ、減少）する。さらに他の実施形態においては、ＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−４に結合し、ＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒα及びγcommonの間の相互作用、例えば、結合を妨害（例えば、阻害、遮断、または、さもなければ、減少）する。
【００１９】
一つの実施形態において、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒアンタゴニストまたは結合剤はＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒに結合する抗体分子（例えば、抗体、または、その抗原結合断片）である。例えば、抗体分子は、ＩＬ−１３またはＩＬ−４、または、ＩＬ−１３受容体またはＩＬ−４受容体（例えば、少なくとも１つの、典型的には２つの完全な重鎖、および、少なくとも１つの、典型的には２つの完全な軽鎖を含む抗体分子）、または、その抗原結合断片（例えば、重または軽鎖可変領域の単量体または二量体（例えば、ＶＨ、ＶＨＨ、Ｆａｂ、F（ab’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片）に結合する完全長のモノクローナル、または、単一特異性の抗体であってもよい。典型的には、抗体分子は、ヒト、ラクダ、サメ、ヒト化、キメラ、または、インビトロで産生された、ＩＬ−１３またはＩＬ−４、または、ＩＬ−１３受容体またはＩＬ−４受容体に対する抗体である。ある実施形態においては、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選ばれた；詳しくは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、さらに詳しくは、ＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１またはその変異体）の重鎖定常領域から選ばれた重鎖定常領域を含む。他の実施形態においては、抗体分子は、例えば、κまたはλの軽鎖の不変領域、好ましくは、κ（例えば、ヒトκ）から選ばれる軽鎖定常領域を有する。一つの実施形態においては、定常領域は、抗体分子の特性を修飾するため（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞の機能、または、補完する機能の一つ以上を増加または減少させるため）、変更、例えば、変異される。例えば、ヒトＩｇＧ１の定常領域は、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞の機能、または、補完する機能の一つ以上を減少させるために、一つ以上の残基、例えば、実施例５に記載されているように、残基２３４および２３７の一つ以上において変異されることができる。実施形態において、抗体分子は、配列番号１９３の一つ以上の残基において変異された、例えば、配列番号１９３の１１６および１１９位において変異されたヒトＩｇＧ１定常領域を含む。
【００２０】
一つの実施形態において、抗体分子は、抑制性または中和性の抗体分子である。例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３Ｒα２に比較した機能的な活性を有することができる。（例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３Ｒα１のＩＬ−１３の相互作用を減少または抑制する。）抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１の間の複合体の形成を阻害し、または、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１の間の複合体を分裂または不安定にするかもしれない。一つの実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、三元の複合体の形成、例えば、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−４−Rの間の複合体の形成を阻害する。一つの実施形態においては、抗体分子は、投与後、少なくとも６週間、アレルギー抗原、例えば、羊モデルの回虫抗原への曝露に対する投与後の保護的効果を与える。他の実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、約５０ｎＭ〜５ｐＭ、典型的には、約１００ないし２５０ｐＭまたはそれ以下の、例えば、より好ましい阻害のＩＣ50により、ＩＬ−１３に関連した生物学的な活性の一つ以上を阻害することができる。一つの実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、１０３〜１０８Ｍ‐1s−1、典型的には、１０４〜１０７Ｍ−1s−1の範囲の速度でＩＬ−１３に結合することができる。一つの実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、5×１０４〜8×１０５Ｍ−1s−1のkｏｎでヒトＩＬ−１３に結合することができる。さらに他の一つの実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、１０‐２〜１０−6s−1、典型的には、１０−2〜１０−5s−1.の解離速度を有する。一つの実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、モノクローナル抗体１３．２、ＭＪ２−７またはＣ６５、または、それらの変異体、例えば、それらのキメラ体、または、ヒト化体と同様の（例えば、因子20、10、または5以内）親和性および／または速度で、ＩＬ−１３、例えば、ヒトＩＬ−１３に結合する。ＩＬ−１３結合剤の親和性および結合速度は、例えば、バイオセンサー技術（BIACOREＴＭ）を用いて分析されることができる。
【００２１】
さらにもう一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトＩＬ−１３のエピトープ、例えば、線形または立体配置的なエピトープに特異的に結合する。例えば、抗体分子は、ヒトＩＬ−１３に結合するＩＬ−１３Ｒα１によって規定されるエピトープ、または、ヒトＩＬ−１３に結合するＩＬ−１３Ｒα２によって規定されるエピトープ、または、そのようなエピトープに重なるエピトープの少なくとも一つのアミノ酸に結合する。抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３、例えば、ヒトＩＬ−１３への結合のために、ＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２と競合するかもしれない。抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２のＩＬ−１３への結合を競合的に阻害するかもしれない。抗ＩＬ−１３抗体分子は、結合時に、ＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２との相互作用を立体的に阻害するＩＬ−１３のエピトープに相互作用するかもしれない。実施形態においては、抗ＩＬ−１３抗体分子は、特異的にヒトＩＬ−１３に結合し、該ヒトＩＬ−１３への２つ目の抗体の結合を競合的に阻害し、該２つ目の抗体は、ＩＬ−１３、例えば、ヒトＩＬ−１３に結合するために、１３．２、ＭＪ２−７および／またはＣ６５（または、本願明細書に開示される他の抗ＩＬ−１３抗体）から選ばれる。抗ＩＬ−１３抗体分子は、１３．２、ＭＪ２−７および／またはＣ６５のＩＬ−１３への結合を競合的に阻害するかもしれない。抗ＩＬ−１３抗体分子は、ヒトＩＬ−１３に結合する１３．２、ＭＪ２−７によって規定されるエピトープ、または、ヒトＩＬ−１３に結合するＣ６５によって規定されるエピトープの少なくとも一つのアミノ酸に結合するかもしれない。一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、１３．２、ＭＪ２−７および／またはＣ６５のそれと重なる、例えば、一般に、少なくとも１、２、３、または、４つのアミノ酸を含むエピトープ、または、結合時に、１３．２、ＭＪ２−７および／またはＣ６５との相互作用を立体的に阻害するに結合するかもしれない。例えば、抗体分子は、ヒトＩＬ−１３（配列番号194）の81−93残基および／または114−132残基の一つ以上から選ばれる、または、配列番号194[成熟配列配列番号195の位置]の68[49]位のグルタミン酸、72[53]位のアスパラギン、88[69]位のグリシン、91[72]位のプロリン、92[73]位のヒスチヂン、93[74]位のリジン、および／または、105[86]位のアルギニンの一つ以上から選ばれるＩＬ−１３からの残基の一つ以上に接するかも知れない。他の実施形態においては、抗体分子は、配列番号24 または配列番号178の、残基116、117、118、122、123、124、125、126、127および／または128の一つ以上から選ばれるＩＬ−１３からの一つ以上のアミノ酸残基に接する。一つの実施形態においては、抗体分子は、配列番号24の130位に存在する多形とは無関係にＩＬ−１３に結合する。
【００２２】
一つの実施形態においては、抗体分子は、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５からの、１、２、３、４、５または全ての６のＣＤＲ、または、本願明細書において開示される他の抗体、または、密接に関連したＣＤＲ、例えば、同一、または、少なくとも１つのアミノ酸の変更、しかし、２、３または４つの以上の変更（例えば、置換（例えば、保存的な置換）、欠失、または、挿入）を有しないＣＤＲを含む。選択的に、抗体分子は、本願明細書において開示されるいかなるＣＤＲを含んでもよい。実施形態においては、重鎖免疫グロブリン可変領域は、モノクローナル抗体ＭＪ２−７（配列番号：17）、ｍＡｂ１３．２（配列番号：196）またはＣ６５（配列番号：123）の重鎖ＣＤＲ３からの３未満のアミノ酸の置換により異なる重鎖ＣＤＲ３からなる。他の実施形態においては、軽鎖免疫グロブリン可変領域は、モノクローナル抗体ＭＪ２−７（配列番号：18）、ｍＡｂ１３．２（配列番号：197）またはＣ６５（配列番号：118）の対応する軽鎖ＣＤＲからの３未満のアミノ酸の置換により異なる軽鎖ＣＤＲ1からなる。ＭＪ２−７の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：130に示されるアミノ酸配列を有する。ＭＪ２−７の軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：133に示されるアミノ酸配列を有する。モノクローナル抗体１３．２の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：198に示されるアミノ酸配列を有する。モノクローナル抗体１３．２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：199に示されるアミノ酸配列を有する。
【００２３】
ある実施形態においては、抗体分子の重鎖可変領域は、一つまたは複数の
ＣＤＲ１にてG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H（配列番号：48）；
ＣＤＲ２にて（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−G
（配列番号：49）；および／または
ＣＤＲ３にてSEENWYDFFDY （配列番号：17）；または
ＣＤＲ１にてGFNIKDTYIH （配列番号：15）；
ＣＤＲ２にてRIDPANDNIKYDPKFQG （配列番号：16）；および／または
ＣＤＲ３にてSEENWYDFFDY （配列番号：17）
を含む。
【００２４】
他の実施形態においては、抗体分子の軽鎖可変領域は、一つ以上の
ＣＤＲ１にて（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）（配列番号：25）；
ＣＤＲ２にてK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−S （配列番号：27）；および／または
ＣＤＲ３にてQ−（GSA）−（ST）−（HEQ）−I−P（配列番号：28）；または
ＣＤＲ１にてRSSQSIVHSNGNTYLE（配列番号：18）；
ＣＤＲ２にてKVSNRFS（配列番号：19）；および 
ＣＤＲ３にてFQGSHIPYT（配列番号：20）
を含む。
【００２５】
他の実施形態においては、抗体分子は、配列番号：197、配列番号：200、配列番号：201、配列番号：202、配列番号：203および配列番号：196のアミノ酸配列からなるグループから選択されたアミノ酸配列を含む一つ以上のＣＤＲを含む。
【００２６】
さらにもう一つの実施形態においては、抗体分子は、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５、または、本願明細書において開示される他の全ての抗体から選ばれる抗体の重鎖可変領域からの、少なくとも１、２、または、３つのChothia高度可変ループ、または、、特に、少なくとも、I−１３と接触するこれらの高度可変ループからのアミノ酸を含む。さらにもう一つの実施形態においては、抗体またはその断片は、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５または、本願明細書において開示される他の全ての抗体から選ばれる抗体の軽鎖可変領域からの、少なくとも１、２、または、３つの高度可変ループ、または、少なくとも、ＩＬ−１３と接触するこれらの高度可変ループからのアミノ酸を含む。さらにもう一つの実施形態においては、抗体またはその断片は、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５、または、本願明細書において開示される他の抗体から選ばれる抗体の重鎖または軽鎖可変領域からの、少なくとも１、２、３、４、５または６つの高度可変ループを含む。
【００２７】
一つの実施形態においては、タンパク質は、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５または本願明細書において開示される抗体からの６つの全ての高度可変ループ、または、密接に関連した高度可変ループ、例えば、本願明細書において開示される配列と同一、または、少なくとも一つのアミノ酸の変更、しかし、２、３、または、４つ以上のアミノ酸の変更を有しない、高度可変ループを含む。選択的に、そのタンパク質は、本願明細書において開示されるいずれの高度可変ループを含んでもよい。
【００２８】
さらにもう一つの実施形態において、タンパク質は、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５または本願明細書において開示される他の抗体からの対応する高度可変ループと同じ標準構造、、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５の重鎖および／または軽鎖の可変領域または本願明細書において開示される他の抗体の少なくともループ１および／またはループ２と同じ標準構造を有する、１、２または３つの高度可変ループを含む。高度可変ループの標準構造については、例えば、Chothiaら（1992）J. Mol. Biol. 227：799−817；Tomlinsonら（1992）J. Mol. Biol. 227：776−798を参照。これらの構造は、これらの参考文献に開示される表の視察により決定されることができる。
【００２９】
一つの実施形態において、抗体分子（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、または、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を含むが、ＣＤＲを含まない配列）の重鎖の構造は、次の生殖細胞系Ｖ断片配列の一つの重鎖の構造に対して、少なくとも、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、または、それ以上に同一のあるアミノ酸配列を含む。：ＤＰ−２５、ＤＰ−１、ＤＰ−１２、ＤＰ−９、ＤＰ−７、ＤＰ−３１、ＤＰ−３２、ＤＰ−３３、ＤＰ−５８またはＤＰ−５４、または、標準構造クラス１−３に適合するもう一つのＶ遺伝子。（例えば、Chothiaら（1992）J. Mol. Biol. 227：799−817；Tomlinsonら（1992）J. Mol. Biol. 227：776−798、参照）標準構造クラス１−３に適合する他の構造は、Kabat番号に従う次の残基の一つ以上の構造を含む。26位のAla、Gly、Thr、またはVal、26位のGly、27位のTyr、PheまたはGly、29位のPhe、Val、IleまたはLeu、34位のMet、Ile、Leu、Val、Thr、Trp、またはIle、94位のArg、Thr、Ala、Lys、54位のGly、Ser、Asn、またはAsp、および、71位のArg。
【００３０】
一つの実施形態において、抗体分子（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、または、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を含むが、ＣＤＲを含まない配列）の軽鎖の構造は、ＶκＩＩサブグループの生殖細胞系配列の軽鎖、および、次の生殖細胞系Ｖ断片配列の一つに対して、少なくとも、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一のアミノ酸配列を含む。：Ａ１７、Ａ１、Ａ１８、Ａ２、Ａ１９／Ａ３またはＡ２３、または、標準構造クラス４−１に適合するもう一つのＶ遺伝子（例えば、Tomlinsonら（1995）EMBO J.  14：4628、参照）。標準構造クラス４−１に適合する他の標準構造は、Kabat番号に従う次の残基の一つ以上の構造を含む。2位のValまたはLeuまたはIle、25位のSerまたはPro、29位のIleまたはLeu、31d位のGly、33位のPheまたはLeu、および71位のPhe。
【００３１】
もう一つの実施形態において、抗体分子（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、または、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を含むが、ＣＤＲを含まない配列）の軽鎖の構造は、ＶκＩサブグループの生殖細胞系配列、例えば、DPK9配列の軽鎖の構造に対して、少なくとも、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３２】
もう一つの実施形態において、抗体分子（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、または、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を含むが、ＣＤＲを含まない配列）の重鎖の構造は、ＶＨＩサブグループの生殖細胞系配列、例えば、ＤＰ−25配列、または、ＶＨＩＩＩサブグループの生殖細胞系配列、例えば、ＤＰ−５４配列の軽鎖の構造と、少なくとも、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一であるアミノ酸配列を含む。
【００３３】
ある実施形態において、抗体分子の重鎖免疫グロブリン可変領域は、Ｖ2.1（配列番号：71）、Ｖ2.3（配列番号：73）、Ｖ2.4（配列番号：74）、Ｖ2.5（配列番号：75）、Ｖ2.6（配列番号：76）、Ｖ2.7（配列番号：77）、Ｖ2.11（配列番号：80）、ｃｈ１３．２ （配列番号：204）、ｈ１３．２ｖ１（配列番号：205）、ｈ１３．２ｖ２（配列番号：206）またはｈ１３．２ｖ３（配列番号：207）の重鎖の可変領域をコードする核酸配列の相補鎖に、高度にステリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸配列によってコードされるアミノ酸配列、または、Ｖ2.1（配列番号：71）、Ｖ2.3（配列番号：73）、Ｖ2.4（配列番号：74）、Ｖ2.5（配列番号：75）、Ｖ2.6（配列番号：76）、Ｖ2.7（配列番号：77）、Ｖ2.11（配列番号：80）；ｃｈ１３．２（配列番号：208）、ｈ１３．２ｖ１（配列番号：209）、ｈ１３．２ｖ２（配列番号：210）またはｈ１３．２ｖ３（配列番号：211）の重鎖の可変領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一であるアミノ酸配列を含む。実施形態において、抗体分子の重鎖免疫グロブリン可変領域は、配列番号：80のアミノ酸配列を含み、配列番号：116 または配列番号：117のアミノ酸配列を含む、重鎖の可変領域のフレームワーク領域４（ＦＲ４）を次にさらに含んでもよい。
【００３４】
他の実施形態において、抗体分子の軽鎖免疫グロブリン可変領域は、Ｖ2.1（配列番号：36）またはｈ１３．２ｖ２（配列番号：212）の軽鎖可変領域をコードする核酸配列の相補鎖に、高度にステリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸配列によってコードされるアミノ酸配列、または、Ｖ2.1（配列番号：36）またはｈ１３．２ｖ２（配列番号：212）の軽鎖可変領域に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一のアミノ酸配列を含む。実施形態において、抗体分子の軽鎖免疫グロブリン可変領域は、配列番号：47のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域のフレームワーク領域４（ＦＲ４）をさらに次に含む、配列番号：36のアミノ酸配列を含む。
【００３５】
さらにもうひとつの実施形態において、抗体分子は、
（i）49位に対応する位置、Gly;
（ii）72位に対応する位置、Ala;
（iii）48位に対応する位置、Ile、および、49位、Gly;
（iv）48位に対応する位置、Ile、49位、Gly、72位、Ala；
（v）67位に対応する位置、Lys、68位、Ala、および、72位、Ala、および／または
（vi）48位に対応する位置、Ile、49位、Gly、72位、Ala、79位、Ala
からなる重鎖可変領域の構造を含む。
【００３６】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、配列番号：177のアミノ酸配列（または、配列番号：177に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一のアミノ酸配列）からなる少なくとも一つの軽鎖、および、配列番号：176のアミノ酸配列（または、配列番号：176に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一のアミノ酸配列）からなる少なくとも一つの重鎖を含む。
【００３７】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、２つの免疫グロブリン鎖：配列番号：199、213、214、212または215を含む軽鎖、および、配列番号：198、208、209、210、または211を含む重鎖（または、配列番号：199、213、214、212または215、または、配列番号：198、208、209、210、または211に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一のアミノ酸配列）を含む。抗体分子は、重鎖に、配列番号：193のアミノ酸配列、および、軽鎖に、配列番号：216のアミノ酸配列（または、配列番号：193 または配列番号：216に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上に同一のアミノ酸配列）をさらに含んでもよい。
【００３８】
抗ＩＬ−１３抗体分子の更なる例は、CAT−354を開示するUS 07／0128192 またはWO 05／007699 およびBlanchard、C.ら（2005）Clinical and Experimental Allergy 35（8）：1096−1103 ；TNX−650を開示するWO 05／062967、WO 05／062972 および Clinical Trials Gov. Identifier： NCT00441818 ；QAX−576を開示するClinical Trials Gov. Identifier： NCT532233 ；Abgenix の名前で出願されたUS 06／0140948 またはWO 06／055638、；AMGEN に譲渡されたUS 6、468、528 ；出願人としてCentocor Inc. の名称のWO05／091856、；および Yangら（2004）Cytokine 28（6）：224−32 および Yangら（2005）J Pharmacol Exp Ther： 313（1）：8−15；に開示され、また 抗−ＩＬ−１３ 抗体は、Glaxo の名称で出願されたWO 07／080174、およびNovartis の名前でWO 07／045477 に開示されている。
【００３９】
ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストの更なる例は、これに限定されないが、ＩＬ−４に対する抗体（例えば、Hart、T.K.ら（2002）Clin Exp Immunol. 130（1）：93−100；Steinke、J.W.（2004）Immunol. Allergy Clin North Am 24（4）：599−614；およびRamanthanらU.S. 6、358、509に開示されるpascolizumab および関連する抗体）、ＩＬ−４Ｒａ（例えば、US 05／0118176、US 05／0112694 およびClinical Trials Gov. Identifier： NCT00436670 に開示されるAMG−317および関連する抗−ＩＬ4R 抗体）；ＩＬ−１３Ｒα１（例えば、出願人としてAMRAD の名称のWO 03／080675 に開示される抗−１３Ｒα１抗体）；およびＩＬ４および／またはＩＬ−１３と結合する、単一特異的または二重特異性抗体分子（例えば、WO 07／085815に開示される）を含む。
【００４０】
他の実施形態において、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−４の変異体（例えば、ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４受容体に結合するが、受容体の活性を著しく増加させないサイトカインの切形または変異体）または、毒素に結合したサイトカインである。ＩＬ−４変異体は、Weinzelら（2007）Lancet 370：1422−31により開示されている。ＩＬ−１３／ＩＬ−４阻害ペプチドの更なる例は、Andrews、A.L.ら（2006）J. Allergy and Clin Immunol 118：858−865に開示されている。サイトカイン−毒素の結合体の例は、WO 03／047632、Kunwar、S.ら（2007）J. Clin Oncol 25（7）：837−44 および Husain、S. R.ら（2003）J. Neurooncol 65（1）：37−48に開示されている。
【００４１】
他の実施形態において、ＩＬ−１３アンタゴニストまたはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３受容体ポリペプチド（例えば、ＩＬ−１３Ｒα２またはＩＬ−１３Ｒα１）またはＩＬ−４受容体ポリペプチド（例えば、ＩＬ−４Ｒα）の完全長、または、断片または修飾された形状である。例えば、アンタゴニストは、ＩＬ−１３受容体またはＩＬ−４受容体の可溶性の形状（例えば、サイトカイン結合領域からなる、哺乳動物（例えば、ヒト）のＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−４Ｒαの可溶性の形状、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）のＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−４Ｒαの細胞外領域の可溶性の形状）であることができる。典型的な受容体アンタゴニストは、例えば、Borish、L.C.ら（1999）Am J Respir Crit Care Med 160（6）：1816−23と同様に、WO 05／085284 およびEconomides、A.N.ら（2003）Nat Med 9（1）：47−52に開示される、例えば、ＩＬ−４Ｒ−ＩＬ−１３Ｒ結合融合体を含む。
【００４２】
ＩＬ−１３受容体またはＩＬ−４受容体、または、ＩＬ−１３またはＩＬ−４変異体の可溶性の形状は、単独で、または、発現、立体的な柔軟性、検出および／または単離または精製を容易にするための第二の成分、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域、血清アルブミン、pegylation、GST、Lex−A またはMBPポリペプチド配列に機能的に結合（例えば、化学的カップリング、遺伝子またはポリペプチド融合、非共有結合またはそれ以外により）されて用いられることができる。融合タンパク質は、第一の成分を第二の成分に結合させるリンカー配列を追加的に含んでも良い。例えば、可溶なＩＬ−１３受容体またはＩＬ−４受容体、または、ＩＬ−１３またはＩＬ−４の変異体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む種々のアイソタイプの重鎖定常領域に融合されることができる。典型的には、融合タンパク質は、可溶なＩＬ−１３受容体またはＩＬ−４受容体、または、ＩＬ−１３またはＩＬ−４変異体（または、それらに相同的な配列）、および、ヒト免疫グロブリンＦｃ鎖、例えば、ヒトIgG（例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ２またはそれらの変異体）の、例えば、融合される、細胞外領域を含むことができる。Ｆｃ配列は、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体結合、および／または、補完的な活性を減少させるために、一つ以上のアミノ酸において変異されることができる。
【００４３】
本願明細書において開示される抗体分子および可溶性または融合されたタンパク質は、他の分子の存在、例えば、抗体（例えば、二重特異的またはマルチ特異的な抗体）、毒素、ラジオアイソトープ、細胞障害性または細胞増殖抑制性の試薬の一つ以上に機能的に結合（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合またはそれ以外）されることができることが理解されるであろう。
【００４４】
もう一つの実施形態においては、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードする核酸の発現を抑制する。そのようなアンタゴニストの例は、核酸配列、例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードする核酸または転写制御領域にハイブリダイズし、また、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４ＲのｍＲＮＡの発現を遮断または減少させるアンチセンス分子、リボゾーム、ＲＮＡi、siＲＮＡ、三重らせん分子を含む。ISIS−369645は、ＩＬ−４Ｒα（ISIS Pharmaceuticalsにより開発され、例えば、Karras、J.G.ら（2007）Am J Respir Cell Mol Biol. 36（3）：276−86に開示される）の発現を抑制するアンチセンス核酸の例を提供する。ＩＬ−４またはＩＬ−１３をコードするＲＮＡにより干渉する、典型的な短い干渉ＲＮＡ（siＲＮＡ）は、WO 07／131274に開示されている。
【００４５】
さらにもう一つの実施形態においては、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、上流または下流のＩＬ−１３シグナルの阻害剤、例えば、低分子の阻害剤である（例えば、ＳＴＡＴ６阻害剤）。ＳＴＡＴ６阻害剤の例は、WO 04／002964、カナダの特許出願： CA 2490888 およびNagashima、S.ら（2007）Bioorg Med Chem 15（2）：1044−55；および US 6、207、391 および WO 01／083517において開示されている。
【００４６】
もう一つの実施形態においては、一つ以上のＩＬ−１３アンタゴニストは、一つ以上のＩＬ−４アンタゴニストと併用して投与される。併用療法は、ＩＬ−４アンタゴニストとともに処方および／または投与されるＩＬ−１３アンタゴニストを含むことができる。ＩＬ−１３アンタゴニストおよびＩＬ−４アンタゴニストは、同時および／または順次、投与される。順次、投与される場合、医師は、ＩＬ−４アンタゴニストと併用されるＩＬ−１３アンタゴニストを投与するための適切な配列を選ぶことができる。併用療法は、吸入ステロイド、β−アゴニスト、例えば、短時間作用性、または、長時間作用性のβ−アゴニスト；ロイコトリエンアンタゴニオストまたはロイコトリエン受容体；併用薬、例えば、ADVAIR（登録商標）；ＩｇＥ 阻害剤、例えば、抗−ＩｇＥ抗体（例えば、XOLAIR（登録商標））；ホスホジエステラーゼ阻害剤 （例えば、PDE4 阻害剤）;キサンチン；抗コリン薬；肥満細胞安定化剤、例えば、クロモリン、ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；および、抗ヒスタミン；の一つ以上から選ばれる他の治療薬も、また、含むことができる。このような併用は、喘息および他の呼吸器系障害を治療するために用いられることができる。ＩＬ−１３結合剤と併用投与および／または併用処方されることができる治療薬の更なる例は、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦ受容体の可溶性断片、例えば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体、または、それらの誘導体、例えば、75 kd ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（75 kD ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ENBREＴＭ））；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−９アンタゴニスト；インターフェロンγ；パーフェニドン；化学療法剤、例えば、メトトレキセート、レフルノマイドまたはシロリムス（ラパマイシン）またはそれらの類似体、例えば、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節剤；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦＰＢ阻害剤、その他、の一つ以上を含む。もう一つの態様において、この出願は、対象、例えば、ヒトまたは非ヒト対象の肺炎症の治療（例えば、減少）における、ＩＬ−１３拮抗性結合剤、例えば、本願明細書において開示される抗ＩＬ−１３抗体分子の効能を評価するための方法を提供する。
【００４７】
さらに他の実施形態において、本願明細書において開示された方法は、ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストの投与後の対象における次のパラメーターの一つ以上における変化を評価（例えば、検出）する段階をさらに含む。（i）本願明細書におけるインビトロ検出方法において開示されるように、サンプル、例えば、生物的なサンプル（例えば、血清、プラズマ、血液）において、ＩＬ−１３結合剤に対して非結合および／または結合するＩＬ−１３のレベルを検出すること、（ii）サンプル、例えば、生物的なサンプル（例えば、血清、プラズマ、血液）におけるエオタキシンレベルを測定すること、（iii）好塩基球によるヒスタミンの放出を検出すること、（iv）ＩｇＥ力価を検出すること、および／または、（v）対象（例えば、呼吸困難、喘鳴、咳、息切れおよび／または一般的な日常の活動の実行困難）の症状における変化を評価すること。実施形態において、パラメーター（i）−（v）の検出は、対象（例えば、治療を開始後、選択された間隔で）へのＩＬ−１３拮抗性結合剤（単独またはマルチ投与の後）の投与の前および／または後に、実行されることができる。 （i）−（v）における一つ以上の変化の検出および／または評価は、臨床医または補助者により実施されることができる。予め決定されたレベルに比較（例えば、治療の前後の比較）した（i）−（v）の一つ以上における変化、例えば、減少は、ＩＬ−１３遮断性結合剤は、対象の肺炎症を効果的に減少させていることを示す。実施形態においては、対象は、ヒト患者、例えば、大人または小児である。
【００４８】
もう一つの態様において、発明は、薬学的に許容し得る担体、および、ＩＬ−４アンタゴニストとともに処方されるＩＬ−１３遮断性結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子の少なくとも一つを含む組成物、例えば、医薬組成物または用量製剤を提供する。前記アンタゴニストおよび他の薬物、例えば、治療薬（例えば、一つ以上のサイトカインまたは成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、代謝抑制剤、酵素阻害剤および／または細胞障害性または細胞増殖抑制性の試薬との併用も、本願明細書において開示されるように、また、用いられることができる。
【００４９】
さらに他の態様において、本発明は、ＩＬ−１３関連障害または疾患（例えば、本願明細書において開示される障害または疾患）を治療または予防するための単独治療間隔として、アンタゴニストを投与するための説明と共に、本願明細書において開示される方法における使用のためのＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストを含むキットを特徴とする。
【００５０】
もう一つの態様において、本発明は、本願明細書において開示された方法における使用のためのＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストを含む組成物を特徴とする。
【００５１】
さらにもう一つの態様では、本発明は、ＩＬ−１３関連障害または疾患（例えば、本願明細書において開示された障害または疾患）を治療または予防する薬物の製造におけるＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストを含む組成物の使用を特徴とする。
【００５２】
もう一つの態様において、この出願は、インビボサンプル（例えば、生物学のサンプル、例えば、血清、プラズマ、組織、生検）におけるＩＬ−１３の存在を検出するための方法を提供する。対象の方法は、障害、例えばＩＬ−１３関連障害を診断するか、または治療の効能をモニターするために用いられることができる。その方法は、：（i）本願明細書において開示されているように、ＩＬ−１３結合剤、例えば、第一のＩＬ−１３結合剤または抗ＩＬ−１３抗体分子にサンプルを接触すること； そして、（ii）サンプルにおいて、第一のＩＬ−１３ 結合剤とL−１３（例えば、実質的にフリーなＩＬ−１３および／または、第二の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合するＩＬ−１３）の間の複合体の形成を検出することを含む。基準値またはサンプル（例えば、コントロールサンプル）と比較されるサンプル中の第一の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合するＩＬ−１３のレベルの統計的に顕著な変化は、サンプル中のＩＬ−１３の存在を示唆する。
【００５３】
ある実施形態において、第一の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子は、支持体（例えば、担体、例えば、ＥＬＩＳＡプレート、ビーズ）に固定される。
【００５４】
他の実施形態においては、本方法は、第二の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子への対象の曝露の前および／または後の対象からサンプルを得ることをさらに含む。サンプルは、実質的にフリーなＩＬ−１３および／または第二の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合するＩＬ−１３を含むことができる。サンプルは、固定化された第一の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子へのＩＬ−１３の結合の発生を許容する条件において、固定された第一の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子に接触することが許される。
【００５５】
実施形態においては、検出ステップは、例えば、標識された第三の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子、または、ＩＬ−１３の第一または第二の結合剤または抗体分子の複合体を認識する標識された試薬を用いて、固定された第一の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合するＩＬ−１３（例えば、実質的にフリーのＩＬ−１３および／または第二のＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合するＩＬ−１３）の存在を検出することを含む。標識、例えば、本願明細書において開示される蛍光、放射能、ビオチンアビジンは、抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子を、直接的または間接的に接触されることができる。例えば、抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子は、結合または非結合の抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質によって直接的または間接的に標識される。適切な検出可能な物質は、様々な酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光材料および放射性物質を含む。
【００５６】
一の実施形態において、第一の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子は、実質的にフリーなＩＬ−１３に結合し、第二のＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合したＩＬ−１３には実質的に結合しない。他の実施形態において、第一の抗ＩＬ−１３結合子薬または抗体分子は、実質的にフリーな第一のＩＬ−１３および第二の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子に結合したＩＬ−１３に結合する。
【００５７】
別の実施形態において、第一、第二および／または第三の抗ＩＬ−１３結合剤または抗体分子は、ＩＬ−１３の異なるエピトープに結合する。例えば、第一の抗ＩＬ−１３抗体分子は、ｍＡｂ１３．２またはそのヒト化バージョン（本願明細書およびUS06／0063228において開示されている）、またはＩＬ−１３への結合をｍＡｂ１３．２と競合することが可能なＩＬ−１３結合剤であり；、第二の抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＭＪ２−７またはそのヒト化バージョン；、および／または、第三の抗ＩＬ−１３抗体分子は、Ｃ６５抗体またはそのヒト化バージョン（本願明細書およびUS06／0073148において開示されている）（または、ＩＬ−１３への結合をmJ2−7またはＣ６５と競合することが可能なＩＬ−１３結合剤）である。抗ＩＬ−１３抗体分子のどのような注文も、その検出方法において用いられることができる。
【００５８】
実施形態において、第一のＩＬ−１３結合剤に固定される、第二のＩＬ−１３結合剤に結合するＩＬ−１３の複合体は、固定された複合体をＦｃ結合剤（例えば、抗Ｆｃ抗体分子）に接触することによって検出され、それによって、サンプル中の第二のＩＬ−１３結合剤に結合するＩＬ−１３の量を決定する。
【００５９】
実施形態においては、予め決定されたレベルと対比した対象のサンプル（例えば、生物学的なサンプル、例えば、血清、プラズマ、組織、生検）におけるＩＬ−１３のレベルの増加は、肺での増大した炎症を示す。
【００６０】
さらにもう一つの態様では、本発明は、インビボにおけるＩＬ−１３の存在を検出するための方法（例えば、対象のインビボ画像）が提供される。対象の方法は、障害、例えば、ＩＬ−１３関連障害を診断するか、または治療の効能を測定するために用いられることができる。その方法は、：（i）第一の抗ＩＬ−１３抗体分子のＩＬ−１３への結合を生じさせる条件の下、第一のＩＬ−１３結合剤、例えば、本願明細書において開示される第一の抗ＩＬ−１３抗体分子を対象に投与すること、および、（ii）検出可能に標識された第二のＩＬ−１３結合剤の用いて、インビボＩＬ−１３を検出すること（ＩＬ−１３および第一のＩＬ−１３結合剤の間の複合体の形成を検出すること）を含み、そこにおいて、コントロールの対象に対比した対象のＩＬ−１３のレベルの統計的に顕著な変化は、ＩＬ−１３の存在を示す。実施形態においては、予め決定されたレベルと対比した対象のＩＬ−１３のレベルの増加が、肺での増大した炎症を示す。
【００６１】
一の実施形態において、ＩＬ−１３結合剤、および、ＩＬ−１３アンタゴニストは、実質的にフリーなＩＬ−１３、および／または、第二のＩＬ−１３結合剤に結合するＩＬ−１３に結合する。1つの実施形態においては、ＩＬ−１３アンタゴニストおよびＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３の異なるエピトープを認識する。例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストは、ｍＡｂ１３．２またはそのヒト化バージョン（本願明細書およびUS 06／0063228において開示されている）、または、ＩＬ−１３への結合をｍＡｂ１３．２と競合することが可能なＩＬ−１３アンタゴニストであり；ＩＬ−１３結合剤は、ＭＪ２−７またはそのヒト化バージョンであり；、または、結合剤は、Ｃ６５抗体またはそのヒト化バージョン（本願明細書およびUS 06／0073148において開示されている）（または、ＩＬ−１３への結合をmJ2−7またはＣ６５と競合することが可能なＩＬ−１３結合剤）である。抗ＩＬ−１３アンタゴニストまたは結合剤のどのような注文も、その検出方法において用いられ得る。
【００６２】
別の態様において、本出願は、対象、例えば、ヒトまたは非ヒト対象の肺炎症の治療（例えば、減少）における、ＩＬ−１３拮抗性結合剤、例えば、本願明細書において開示される抗ＩＬ−１３抗体分子の効能を評価する方法を提供する。その方法は、
ＩＬ−１３アンタゴニストおよび／またはＩＬ−４アンタゴニストを対象に投与すること；
次のパラメーターの一つ以上における変化を検出すること；（i）インビトロ 検出方法において本願明細書において開示されるように、サンプル、例えば、生物的なサンプル（例えば、血清、プラズマ、血液）における、ＩＬ−１３結合剤に非結合および／または結合するＩＬ−１３のレベルの変化を検出することを含み、ここで、基準値（例えば、コントロールサンプル）に対比した非結合および／または結合するＩＬ−１３のレベルの変化は、試薬の効能を示す。
【００６３】
実施形態においては、その方法は、（i）サンプル、例えば、生体サンプル（例えば、血清、プラズマ、血液）におけるエオタキシンレベルを測定すること、（ii）例えば、好塩基球によるヒスタミンの放出を検出すること、（iii）ＩｇＥ−力価を検出すること； および／または、（iv）対象（例えば、困難呼吸、喘鳴、咳、息切れ、および／または正常な日常の活動の実行の困難）の症状の変化を検出することをさらに含む。パラメータ（i）−（v）の検出は、ＩＬ−１３拮抗性結合剤の対象（例えば、療法を開始した後の選ばれた間隔に）への投与の前および／または後（単独または複数投与の後）、実施されることができる。（i）−（v）のうちの1つ以上の変化の検出および／または評価は、臨床医またはサポートスタッフにより実施されることができる。予め決定されたレベルに対比（例えば、治療の前後の対比）される（i）−（v）のうちの1つ以上における変化、例えば、減少は、ＩＬ−１３遮断性結合剤は、対象において、肺炎症を効果的に減少させていることを示す。実施形態においては、対象は、ヒトの患者、例えば、大人または小児である。
【００６４】
実施形態において、ＩＬ−１３に関連するインビボ活性の一つ以上を中和することにおける、ＩＬ−１３結合剤（例えば、開示されている抗ＩＬ−１３抗体分子）の効能は、対象、例えば、非ヒトの対象、例えば、羊、齧歯類、非ヒトの霊長類（例えば、抗原、例えば、Ascaris suumに対して、本来、アレルギーのあるカニクイザル）において評価されることができる。例えば、ＩＬ−１３結合剤の効能は、ＩＬ−１３結合剤の存在または不存在におけるAscaris抗原による曝露の前および後、次の１つ以上を測定することによって評価され得る。（i）気道中への炎症細胞（例えば、好酸球、マクロファージ、好中球）を検出すること、（ii）エオタキシンレベルを測定すること、（iii）抗原に特異的な（例えば、Ascaris特異的な）好塩基球のヒスタミンの放出を検出すること、および／または、（iv）抗原に特異的な（例えば、Ascaris特異的な））ＩｇＥ力価を検出すること。予め決定されたレベルに対比（例えば、治療の前後の対比）される（i）−（iv）のうちの1つ以上におけるレベルの変化、例えば、減少は、ＩＬ−１３結合剤は、対象における気道の好酸球増加症を効果的に減少させていることを示唆する。
【００６５】
ＩＬ−１３結合剤、例えば、本願明細書において開示される抗ＩＬ−１３抗体分子を用いて、ＩＬ−１３に関連した疾患を診断する方法も、また、開示される。
【００６６】
本願明細書において用いられる、「a」および「an」という冠詞は、その冠詞の文法上の対象物の一つ以上（例えば、少なくとも一つ）を示す。
【００６７】
本願明細書において用いられる「または」という用語は、文脈が他のものを明らかに示していない限り、「および／または」という用語を意味し、その用語と交換可能に使われる。
【００６８】
「たんぱく質」と「ポリペプチド」という用語は、本願明細書において交換可能に使われる。
【００６９】
「約」および「おおよそ」は、一般に、測定された量の誤差の容認できる程度を意味し、測定の性質または精度が与えらる。誤差の具体的な程度は、与えられた値または値の範囲の20パーセント（％）以内であり、典型的には、10％以内、さらに典型的には、5％以内である。
【００７０】
この出願に全体にわたって引用される、すべての刊行物、係属中の特許出願、公開された特許出願（US 06／0073148 及び US 06／0063228を含む）および公開された特許の内容は、出典明示により本明細書の一部とする。
【００７１】
本発明の他の特徴、目的および効果は、詳細な説明および図面、およびクレームから明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１Ａは、完全長のヒトおよびカニクイザルのＩＬ−１３の配列、それぞれ、配列番号：178および配列番号：24である。アミノ酸の違いは、影付きの枠内の残基により示される。  RからQへの置換（それは、アレルギー患者の多形に相当する）の場所は、130位に枠で囲まれる。分裂サイトの位置は矢印により示される。図１Ｂは、カニクイザルのＩＬ−１３（それぞれ、配列番号：179−188）からの具体的なペプチドのリストでる。
【図２】ＣＤ２３+単球（ｙ軸）のパーセンテージで測定される、様々なＩＬ−１３結合剤によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。ＭＪ２−７ （Δ）、Ｃ６５ （◆）、およびｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（●）の濃度は、ｘ軸において示される。
【図３】ＭＪ２−７（ネズミ；●）またはヒト化ＭＪ２−７ｖ２.１１（○）によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。ＮＨＰ−ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）の関数として、ＳＴＡＴ６（ｙ軸）のリン酸エステル化により測定された。
【図４】ＭＪ２−７ｖ２.１１（○）またはｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（▲）によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。ＮＨＰ−ＩＬ−１３活性は、アンタゴニストの濃度（ｘ軸）の関数として、ＳＴＡＴ６（ｙ軸）のリン酸エステル化により測定された。
【図５】ＭＪ２−７（Δ）、Ｃ６５（◆）、またはｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（●）によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。ＮＨＰ−ＩＬ−１３活性は、アンタゴニストの濃度（ｘ軸）の関数として、ＳＴＡＴ６（ｙ軸）のリン酸エステル化により測定された。
【図６】図６Ａは、天然のヒトＩＬ−１３（ｘ軸）によるテネイシン生産（ｙ軸）の誘導を示すグラフである。  図６Ｂは、抗体濃度（ｘ軸）の関数としてテネイシン生産（ｙ軸）の誘導の阻害により測定される、ＭＪ２−７によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。
【図７】ＳＰＲチップに結合されたｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃに結合する、ＮＨＰ−ＩＬ−１３へのＭＪ２−７またはコントロール抗体の結合を示すグラフである。
【図８】捕捉されたｈＭＪ２−７Ｖ２−１１抗体への、ＮＨＰ−ＩＬ−１３の種々の濃度（0.09−600ｎＭ）の結合を示すグラフである。
【図９】マウスＭＪ２−７（●）、またはヒト化バージョン１（○）、バージョン２（◆）、またはバージョン３（Δ）抗体によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。ＮＨＰ−ＩＬ−１３活性は、抗体の濃度（ｘ軸）の関数として、ＳＴＡＴ６（ｙ軸）のリン酸エステル化により測定された。
【図１０】マウスＭＪ２−７ＶＨおよびＶＬ（●）、マウスＶＨおよびヒト化バージョン2 ＶＬ（Δ）、またはバージョン2 ＶＨおよびＶＬ（◆）を含む抗体によるＮＨＰ−ＩＬ−１３活性の中立化を示すグラフである。ＮＨＰ−ＩＬ−１３活性は、抗体の濃度（ｘ軸）の関数として、ＳＴＡＴ６（ｙ軸）のリン酸エステル化により測定された。
【図１１】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＥＬＩＳＡにより測定される、ＭＪ２−７抗体による、固定されたＩＬ−１３受容体へのＩＬ−１３の結合の抑制を示すグラフである。結合は４５０ｎｍでの吸光度（ｙ軸）として示される。ｘ軸においてＭＪ２−７抗体の濃度が示される。図１１Ａは、ＩＬ−１３Ｒα１への結合を示す。図１１ｂは、ＩＬ−１３Ｒα２への結合を示す。
【図１２】ＤＰＫ１８生殖細胞系のアミノ酸配列（配列番号：126）およびヒト化ＭＪ２−７バージョン３ＶＬ（配列番号：190）の配列である。
【図１３】図１３Ａは、成熟の被処理のヒトＩＬ−１３のアミノ酸配列（配列番号：124）である。図１３Ｂは、ヒトＩＬ−１３Ｒα１のアミノ酸配列（配列番号：125）を示す。
【図１４】図１４Ａ−14Ｄは、プレ−（ベースライン）サンプルに対比した、Ascaris抗原投与後のBAL流動体に存在する炎症性細胞のセル／ｍｌの合計およびパーセンテージの増加を示す。
【図１５】図１５Ａ−１５Ｂは、コントロール、および、Ascaris抗原投与の前および後の、抗体処理されたカニクイザルにおける、ＢＡＬ流体中のＢＡＬセル／ｍｌの合計を示す。コントロール（丸（○））；ＭＪ２−７−処理されたサンプル（白三角（△）、および、ｍＡｂ１３．２−処理されたサンプル（黒三角（▲））。（この研究においては、ＭＪ２−７（ＭＪ２−７ｖ2）およびｍＡｂ１３．２ｖ２のヒト化バージョンが使われた）。
【図１６】図１６Ａ−１６Ｂは、コントロールに対比して、Ascaris抗原投与後の抗体処理されたカニクイザルから収集した、濃縮されたＢＡＬ流体におけるエオタキシンレベルの変化を示す。図１６Ａは、ベースライン、抗原投与前の値に対比した、Ascaris抗原投与後のエオタキシンレベル（ｐｇ／ｍｌ）の増加示す棒グラフを示す。図１６Ｂは、コントロールに対比して、ｍＡｂ１３．２（灰色円）またはＭＪ２−７（灰色三角）抗体により処理されたカニクイザルからの濃縮されたBAL流体中のエオタキシンレベルの減少を示す。（ＭＪ２−７（ＭＪ２−７ｖ２）およびｍＡｂ１３．２ｖ２のヒト化バージョンは、この研究において使われた）。
【図１７】図１７Ａ−１７Ｂは、コントロールおよび抗原投与後８週間後の抗体処理されたサンプルにおける、Ascaris抗原に特異的なＩｇＥ−力価の変化を示す。図１７Ａは、無関係なＩｇによって処理される個々のサルにおける、Ascaris抗原に特異的なＩｇＥ−力価に変化がないこと（IVIG；動物性の20−45；トップパネル）、およびヒト化ＭＪ２−７ｖ２によって処理された個々のサルのAscaris抗原に特異的なＩｇＥの減少した力価（動物120−434；ボトムパネル）を示す代表的な例を示す。図１７Ｂは、Ascaris抗原投与後８週間、無関係なＩｇ−処理されたカニクイザル（ＩＶＩＧ（灰色円））に対比して、ｍＡｂ１３．２またはＭＪ２−７におけるAscaris抗原に特異的なＩｇＥ−力価（黒色円）の減少を示す。
【図１８】図１８Ａ−１８Ｂは、コントロールおよび抗体投与後２４時間および８週間の抗体処理されたサンプルにおける、Ascaris抗原に特異的な好塩基球のヒスタミンの放出の変化を示す。図１８Ａは、生食水（左）またはヒト化ｍＡｂ１３．２ｖ２（右）によって処理された代表的なサルそれぞれの以下のサンプルを示すグラフである：抗体処理前またはAscaris抗原投与されたサンプル（丸）；抗体処理後４８時間、Ascaris抗原投与後２４時間のサンプル（三角形）；そして、Ascaris抗原投与後８週間のサンプル（菱形）。図１８Ｂは、コントロール（黒）、ヒト化ｍＡｂ１３．２（白）、およびヒト化ＭＪ２−７ｖ.２（陰影）により処理されたカニクイザルにおける、Ascaris抗原投与前および８週間の標準化されたヒスタミンレベルにおける変化を示す棒グラフを示す。
【図１９】コントロール（白丸）および抗ＩＬ−１３−またはデキサメタゾンで処理されたサンプル（黒丸）における、Ascarisに特異的なヒスタミンの放出、および、Ascarisに特異的なＩｇＥレベルの間の相互関係を示す。
【図２０】ヒト化ＭＪ２−７（ｈＭＪ２−７ｖ２）によって処理された個々のカニクイザルの血清ＩＬ−１３レベルの変化を示す一連の棒グラフである。個々のパネル（例えば120−452）のラベルは、サルの識別番号に対応している。「プレ」サンプルは、抗体の投与の前に回収さた。時間「0」は、抗体投与後２４時間に回収されるが、Ascaris抗原投与の前であった。残りのタイムポイントは、Ascaris抗原投与の後であった。
【図２１】血清の不存在（「無血清」）；生食水またはIVIG−処理した動物からの血清の存在（「コントロール」）；または、抗ＩＬ−１３抗体処理された動物からの血清の存在において、抗体投与の前（「プレ」）、または、指示された抗体の投与後1−2週間のいずれかにおける、０、１または１０ｎｇ／ｍｌで非ヒト霊長類ＩＬ−１３のＳＴＡＴ６リン酸エステル化活性を示す棒グラフである。血清は1：4希釈度でテストされた。（ＭＪ２−７（ＭＪ２−７ｖ．２）およびｍＡｂ １３．２ｖ２のヒト化バージョンは、この研究において使われた）。
【図２２】図２２Ａ−２２ｃが、カニクイザル血清のヒト化ＭＪ２−７（ｈＭＪ２−７ｖ２）により捕捉された非ヒト霊長類ＩＬ−１３のレベルが、Ascaris抗原投与の後、BAL流体において測定された炎症のレベルと相関することを示す線形のグラフである。
【図２３】図２３Ａ−２３Ｂは、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３の気管内投与に反応して、マウスにおいて、変更された肺機能を示している線状グラフである。図２３Ａは、霧状にされたメタコリンの増加する用量に反応する気道抵抗（ＲＩ）における変化を示す。図２３Ｂは、霧状にされたメタコリンの増加する用量に反応する動的な肺圧縮率（Cdyn）において変化を示す。
【図２４】図２４Ａ−２４Ｂは、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３の鼻腔内投与に反応して、マウスで増大した肺炎症およびサイトカイン生産を示す棒グラフである。図２４Ａにおいて、気管支肺胞の洗浄液（ＢＡＬ）における好酸球と好中球のパーセンテージは、ディファレンシャル細胞カウントによって決定された。図２４ＢにおいてＢＡＬのサイトカイン、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−１およびＩＬ−６のレベルは、血球計算ビーズアレイにより決定された 。データは、一群に付き１０匹の動物の中央値±標準偏差である。
【図２５】図２５Ａ−２５Ｂは、気管内および静脈内投与の後、ＢＡＬおよび血清のヒト化ＭＪ２−７−１１（ｈＭＪ２−７ｖ．２−１１）抗体レベルを示している点図面である。動物は、ヒト組換えＲ１１０Ｑ  ＩＬ−１３、または、生食水の等価量（２０μＬ）により、気管内に１、２および３日目に処理された。ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体は、ヒト組換えＲ１１０Ｑ  ＩＬ−１３の各投与前の０日および２時間に投与された。図２５Ａは、抗体が、０日目に静脈内投与され、そして、１、２および３日目に腹膜内に投与されるか、または、鼻腔内に０、１、２および３日目に投与されたときの結果を表す。（図２５Ｂに示される）ＢＡＬおよび血清のヒトＩｇＧレベルは、ＥＬＩＳＡによって測定された。
【図２６】図２６Ａ−２６Ｃは、誘因されて肺機能を変更するヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３による鼻腔内投与後のヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体の効果を示す。（Ａ）図２６Ａは、ベースラインからの変化として表される肺抵抗（ＲＩ；ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／秒）の変化を示す。図２６Ｂは、基準線からの2.5ｍｌＨ2Ｏ／ｃｍ／秒の変化に対応する肺抵抗（ＲＩ）を顕在化させるために要求されるメタコリン用量として示されるデータを示す。中央値は、各処置群のために示される。ｐ値は、両側ｔ検定によって算出された。図２６Ｃは、ＢＡＬおよび血清中のヒトＩｇＧレベルの中央値を示す。
【図２７】図２７Ａ−２７Ｄは、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３の気管内投与およびヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体の鼻腔内投与に続く、単独で（図２７Ａ−２７Ｂ）、または、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体との複合体で（図２６Ｃ−２７Ｄ）投与されるヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３のＢＡＬおよび血清レベルの変化を示す。中央値は群毎に示される。n.d.は検出不可である。
【図２８】図２８Ａ−２８Ｂは、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３の鼻腔内投与およびヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１の５００、１００および、２０μｇおよびヒト化１３．２ｖ．２、生食水または５００μｇＩＶＩＧの鼻腔内投与の後、ＢＡＬレベルへの好酸球（図２８Ａ）および好中球（図２８Ｂ）の浸潤を示している点図面である。好酸球および好中球パーセンテージは、ディファレンシャル細胞カウントにより決定された。各グループにおける中央値は示されている。ｐ値は、両側検定によって測定され、ＩＶＩＧと比較して、抗体処理グループごとに示される。
【図２９】図２９Ａ−２９Ｃは、それぞれ、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３の鼻腔内投与およびヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１、ヒト化１３．２ｖ．２またはＩＶＩＧの５００μｇの鼻腔内投与に続く、サイトカインレベル、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−１およびＩＬ−６の変化を示している点図面である。点線は、分析感度の制限を示す。データは、グループごとに中央値を表す。両側ｔ検定によれば、ｐ値は、0.0001以下であった。
【図３０】図３０Ａ−３０Ｂは、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３レベルは、好酸球増加症で測定されたように、肺炎症に直接関連があり；そして、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３の鼻腔内投与およびヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体の５００、１００または２０μｇ用量の鼻腔内投与の後、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１ＢＡＬのレベルに反比例することを示している点プロット線である。ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体ＢＡＬレベルは、ＥＬＩＳＡで測定された。ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３  ＢＡＬレベルは、血球計算ビード分析法によって測定された。％好酸球は、ディファレンシャル細胞カウントで測定された。生食水コントロール動物、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３単独で処理されるマウス、および、ヒト組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３および５００、１００および２０μｇのヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体または５００μｇのＩＶＩＧ；および（図３０Ｂ）ヒト化ＭＪ２−７Ｖ２−１１およびＩＬ−６により処理されたマウスからのデータを含み、また、５００、１００および、２０μｇのヒト化ＭＪ２−７Ｖ２−１１で処理したマウスからのデータを含み、関連性は、（図３０Ａ）％好酸球性炎症およびヒト組換えＲ１１０Ｑ  ＩＬ−１３のレベルの間に示される。ｒ2およびｐ値は、線形回帰分析で測定された。
【図３１】ＯＶＡ抗原投与（スケジュール１）の１日前および１日後のｓＩＬ−１３Ｒa２、および、ＯＶＡ抗原投与（スケジュール２）の１日前のｓＩＬ−１３Ｒa２、抗ＩＬ−４、または、両方を投与するためのスケジュールを示す。
【図３２】図３２Ａ−３２Ｃは、ＯＶＡ抗原投与の一日前および後、ｓＩＬＲａ２．Ｒｃによる処理に続く、全血清ＩｇＥ（図３２Ａ）、ＯＶＡに特異的なＩｇＥ（図３２Ｂ）およびＯＶＡに特異的なＩｇＧ１（図３２Ｃ）を示す。図３２Ｂの点線は、分析感度の限界を示す。ｎ＝２０マウス／グループ
【図３３】図３３Ａ−３３Ｃは、ＯＶＡ抗原投与の１日前にｓＩＬＲａ２．Ｆｃによる単独処置に続く、全血清ＩｇＥ（図３３Ａ）、ＯＶＡに特異的なＩｇＥ（図３３Ｂ）およびＯＶＡに特異的なＩｇＧ１（図３３Ｃ）を示す。図３３Ｂの点線は、分析感度の限界を示す。ｎ＝２０マウス／群。
【図３４】図３４Ａ−３４Ｂは、ＯＶＡ抗原投与の１日前、ｓＩＬ−１３Ｒa2．Ｆｃまたは抗ＩＬ−４による単独処理に続く、全血清ＩｇＥ（図３４Ａ）およびＯＶＡに特異的なＩｇＥ（図３４Ｂ）を示す。図３４Ｂの点線は、分析感度の限界を示す。ｎ＝２０マウス／グループ。
【図３５】図３５Ａ〜３５Ｂは、併用されるｓＩＬ−１３Ｒa２．Ｆｃおよび抗ＩＬ−４によるＯＶＡ抗原投与の一日前の単独処理に続く、ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１（図３５Ａ）およびＯＶＡに特異的なＩｇＧ３（図３５Ｂ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
ＩＬ−１３関連の障害または疾患の処置および／または処置をモニターする方法および組成物が開示される。一つの態様では、出願人は、ＩＬ−１３関連の障害または疾患の発症前に、対象に対するＩＬ−１３アンタゴニストまたはＩＬ−４アンタゴニストの単独投与が、未処置の対象と対比して、障害または疾患の一つ以上の症状を減らすということを発見した。単剤の投与の後に検出される減少と比較して、障害または疾患の症状の促進された減少は、ＩＬ−４アンタゴニストとＩＬ−１３アンタゴニストとの併用投与の後に検出される。こうして、単独、または、ＩＬ−４アンタゴニストと併用して、ＩＬ−１３アンタゴニストを用いて、ＩＬ−１３関連の障害または疾患の一つ以上の症状を抑制、阻害または予防、または発症を遅延させる方法が開示される。他の実施形態において、ＩＬ−１３アンタゴニストの効能を評価する方法も、対象、例えば、ヒトまたは非ヒト対象において、開示される。
【００７４】
定義
便宜のために、特定の用語は、本願明細書において定義される。更なる定義は、明細書の全体にわたって見られることができる。
【００７５】
「ＩＬ−１３」という用語は、その成熟の、加工された形状と同様に、そのようなサイトカインの断片（少なくとも５つのアミノ酸の）または変異体と同様に、ＩＬ−１３（種起源および含んでいる哺乳動物（例えば、ヒトおよび非ヒトの霊長類ＩＬ−１３）にかかわりなく）としてその分野で知られているサイトカインの完全長未処理の形状が含まれる。
ＩＬ−１３配列の中の位置は、完全長の未処理のヒトＩＬ−１３配列のための番号の付け方に従って示されることができる。典型的な全長サルＩＬ−１３は、配列番号２４を参照、成熟した、処理されたサルＩＬ−１３は、配列番号１４を参照、全長ヒトＩＬ−１３は、配列番号：１７８を参照、また、成熟した、加工されたヒトＩＬ−１３は、配列番号１２４を参照。典型的な配列は、以下のように列挙される。
MALLLTTVIALTCLGGFASPGPVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFN （配列番号：178）
【００７６】
例えば、１３０位は、一般の多型の部位である。
【００７７】
ＩＬ−１３受容体タンパク質の典型的な配列およびその可溶性の形態（例えば、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２、または、その融合体）は、Donaldsonら（1998）J Immunol. 161：2317−24；U.S. 6、214、559；U.S. 6、248、714；および U.S. 6、268、480に記載されている。
【００７８】
ＩＬ−４、例えば、ヒトＩＬ−４の典型的な配列および特徴は、Stroberら（1988）Pediatr. Res. 24：549；およびRamanthanらU.S. 6、358、509に開示される。
【００７９】
ＩＬ−４受容体タンパク質の典型的な配列、可溶性の形態およびその融合体は、StahlらU.S. 7、083、949；Seipelt、I.ら（1997）Biochem and Biophys Res Comm 239：534−542；Stahl、N.ら（1999）FASEB Journal Abstract、1457；および Harada、N.ら（1990）Proc Natl Acad Sci USA 87：857−861に記載されている。ヒトＩＬ−４受容体の典型的な分泌された形態は、以下に列挙される：
. MGWLCSGLLFPVSCLVLLQVASSGNMKVLQEPTCVSDYMSISTCEWKMNGPTNCSTELRLLYQLVFLLSEAHTCIPENNGGAGCVCHLLMDDVVSADNYTLDLWAGQQLLWKGSFKPSEHVKPRAPGNLTVHTNVSDTLLLTWSNPYPPDNYLYNHLTYAVNIWSENDPADFRIYNVTYLEPSLRIAASTLKSGISYRARVRAWAQCYNTTWSEWSPSTKWHNSNIC （配列番号：224）
【００８０】
ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒポリペプチドおよび／またはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒポリペプチドの「生物学的な活性」という表現は、対応する成熟したＩＬ−１３またはＩＬ−４ポリペプチドの生物学的な活性の一つ以上を指し、（１）ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４Ｒポリペプチド（例えば、ヒトＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４Ｒポリペプチド）に相互作用、例えば、結合すること；（２）；シグナル伝達分子、例えば、γcommonと結合していること、（３）statタンパク質、例えば、ＳＴＡＴ６のリン酸エステル化および／または活性化を刺激すること、；（４）ＣＤ２３の発現の誘導；（５）ヒトＢ細胞によるＩｇＥの生産；（６）インビボ内の抗原誘導性の好酸球増加症の誘発；（７）インビボ内の抗原誘導性の気管支収縮の誘発；（８）インビボ内で薬物誘導性の気道過敏性の誘発；（9）インビボ内の初期毒素レベルの誘発、および／または、（10）好塩基球によりヒスタミン放出の誘導、を含むが、これらにに限定されない。
【００８１】
「ＩＬ−１３に関連した障害または疾患」は、ＩＬ−１３が原因となる障害または疾患の病状または症状である。したがって、ＩＬ−１３結合剤、例えば、ＩＬ−１３関連活性の一つ以上のアンタゴニストであるＩＬ−１３結合剤は、障害の治療または予防に使用されることができる。
【００８２】
本願明細書で使用するとき、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲアンタゴニストまたはＩＬ−４／ＩＬ−４アンタゴニストの「治療的に有効な量」は、対象（例えば、ヒト患者）への単一または複数の用量投与において、障害の症状の一つ以上を治療する、症状の重傷度を低下する、改善する、または、予防する際に、または、そのような治療がなされない場合に期待される対象の生存の延長において有効である薬剤の量のことをいう。
【００８３】
本願明細書で使用するとき、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲアンタゴニストまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒアンタゴニストの「予防的に有効な量」とは、対象（例えば、ヒト患者）への単一または複数の用量投与において、ＩＬ−１３関連の障害または疾患、例えば、本願明細書において開示される障害または疾患の発症または再発の発生を、予防すること、重傷度を低下させること、または、遅延させることにおいて、有効なＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲアンタゴニストまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒアンタゴニストの量のことをいう。
【００８４】
本願明細書で使用するとき、「単一処置間隔」とは、単一用量または限られた頻度での反復用量として投与されたときに、ＩＬ−１３関連の障害または疾患、例えば、本願明細書において開示される障害または疾患の発症または再発の発生を、予防防すること、重傷度を低下させること、または、遅延させる、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲアンタゴニストまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒアンタゴニストの量および／または頻度のことをいう。実施形態において、投与の頻度は、単一処理間隔の間に２または３回の用量までに限定され、例えば、反復用量は初期用量から１週以下以内に投与される。
【００８５】
「単離された」という用語は、その周囲の自然なものを実質的に含まない分子をいう。例えば、単離されたタンパク質は、それが誘導される細胞性の物質または細胞または組織源からの他のタンパク質を実質的に含まない。その用語は、単離されたタンパク質が治療組成物として投与されるために十分に純粋であるか、または、少なくとも７０％〜８０％（ｗ／ｗ）の純度、より好ましくは、少なくとも８０％−９０％（ｗ／ｗ）の純度、さらにより好ましくは、９０−９５％の純度、そして、最も好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％（ｗ／ｗ）の純度である製剤をいう。「分離された」化合物は、その化合物が得られたサンプルの少なくとも一つの成分の少なくとも９０％から取り出される化合物をいう。本願明細書において記載されているいかなる化合物も、単離または分離された化合物として提供されることができる。
【００８６】
本願明細書で使用するとき、「低いストリンジェント、中間のストリンジェント、高いストリンジェントまたは非常に高いストリンジェントな条件でハイブリダイズする」という用語は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載するものである。ハイブリダイゼーション反応を実行するためのガイダンスは、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons、N.Y. （1989）、6.3.1−6.3.6に見いだすことができる。水性および非水系の方法がその参考文献に記載され、いずれも用いられることができる。本願明細書において言及される特定のハイブリダイゼーション条件は、以下の通りである：
1）0.2X SSC、0.1％ SDS、少なくとも50℃（洗浄の温度は、低いストリンジェントな条件のためには55℃に上げることができる。）における2回の洗浄が続く、6ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（SSC）、約45℃の低いストリンジェントのハイブリダイゼーション条件；
2）0.2X SSC、0.1％SDS、60℃における1回以上の洗浄が続く、6ｘSSC、約45℃の中間のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件；
3）0.2X SSC、0.1％SDS、65℃における1回以上の洗浄が続く、6ｘSSC、約45℃の高いストリンジェントなハイブリダイゼーション条件；および、好ましくは、4）非常に高いハイブリダイゼーション条件は、0.2ｘSSC、1％SDS、65℃における1回以上の洗浄に続く、0.5Mリン酸ナトリウム、7％SDS、65℃である。非常に高いストリンジェントな条件（4）は、好適な条件であり、特に明記しない限り、用いられる条件である。
【００８７】
本発明の方法および組成物は、特定される配列またはそれと実質的に同一であるか類似する配列、例えば、特定の配列の少なくとも85％、90％、95％またはそれ以上、同一の配列を有するポリペプチドおよび核酸を含む。アミノ酸配列の文脈において、「実質的に同一である」という用語は、i）同一の、または、ii）第一および第二のアミノ酸配列が共通の構造領域および／または共通の機能的な活性を有することができるような第二のアミノ酸配列中の配列されたアミノ酸残基の保存的な置換である、十分または最小の数のアミノ酸残基を含む第一のアミノ酸のことをいうために、本願明細書において使われる。たとえば、特定される配列に対して、少なくとも約85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％の同一性を有する共通の構造領域を含むアミノ酸配列は、実質的に同一であると言われる。
【００８８】
ヌクレオチド配列の文脈において、「実質的に同一である」という用語が、第一のまたは第二のヌクレオチド配列が、共通の機能的な活性を有するポリペプチドをコードするか、または、共通の構造のポリペプチド領域、または、共通の機能的なポリペプチド活性をコードするように、第二のヌクレオチド配列における配列されたヌクレオチドと同一であるヌクレオチドの十分または最小の数を含む第一の核酸配列のことをいうために、本願明細書において使われる。例えば、特定される配列に対して、少なくとも約85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％の同一性を有するヌクレオチド配列は、実質的に同一であると言われる。
【００８９】
「機能的な変異体」という用語は、自然に生じる配列に実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、または実質的に同一のヌクレオチド配列によってコード化され、また、自然に生じる配列の一つ以上の活性を有することができるポリペプチドのことをいう。
【００９０】
配列間のホモロジまたは配列の同一性（この用語は、本願明細書において交換可能に用いられる）の算出は、以下の通りに実行される。
【００９１】
2つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、配列は、最適な比較効果（例えば、ギャップは、最適配置のため、第一および第二のアミノ酸または核酸配列の一つまたは両方に導入されることができ、そして、非相同的配列は比較効果のために無視されることができる。）のために配置される。好ましい実施形態において、比較効果のために配置される参照配列の長さは、その参照配列の長さの、少なくとも30％、好ましくは、少なくとも40％、より好ましくは、少なくとも50％、60％、および、さらにより好ましくは、少なくとも70％、80％、90％、100％である。対応するアミノ酸の位置またはヌクレオチドの位置のアミノ酸残基またはヌクレオチド基は、それから比較される。第一の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められるときに、分子はその位置（本願明細書において使用されるとき、アミノ酸または核酸の「ホモロジ」は、アミノ酸または核酸「同一性」と同等である。）で同一である。
【００９２】
２つの配列の最適な配置のために導入されることを必要とする、ギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、２つの配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。
【００９３】
配列の比較および２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成されることができる。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Blossum 62 matrixまたはPAM250 matrixのいずれか、および16、14、12、10、8、6または4のギャップ重量および1、2、3、4、5または6の長さ重量を用いて、ＧＣＧソフトウェア・パッケージ（http：／／www.gcg.comで利用できる）のＧＡＰプログラムに組み込まれたNeedleman and Wunsch （（1970）J. Mol. Biol. 48：444−453 ）アルゴリズムを用いて決定される。さらにもう一つの好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、NWSgapdna.CMP matrixおよび40、50、60、70または80のギャップ重量および1、2、3、4、5または6の長さ重量を用いて、ＧＣＧソフトウェア・パッケージ（http：／／www.gcg.comで利用できる）のＧＡＰプログラムを用いて決定される。パラメータ（および、他のものが特定されない限り使われなければならないもの）の特に好適なセットは、12のギャップ・ペナルティ、4のギャップ伸長ペナルティ、および、5のフレームシフトギャップ・ペナルティを有するBlossum 62 scoring matrixである。
【００９４】
２つのアミノ酸または核酸配列間のパーセント同一性は、PAM120重量残基テーブル、12のギャップ長ペナルティおよび4のギャップ・ペナルティを用いて、ALIGNプログラム（バージョン2.0）に組み込まれたE. Meyers and W. Miller （（1989）CABIOS、4：11−17）のアルゴリズムを用いて決定されることができる。
【００９５】
本願明細書において記載される核酸およびタンパク質配列は、公共データベースに対して検索を実行する「query sequence」として、例えば、他の同族メンバーまたは関連配列を特定するために用いられることができる。このような検索は、Altschul、ら（1990）J. Mol. Biol. 215：403−10のNBLASTおよびXBLASTプログラム（バージョン2.0）を用いて実行されることができる。BLASTヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同的なヌクレオチド配列を得るために、NBLASTプログラム、score=100、wordlength=12によって実行されることができる。BLASTタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同的なアミノ酸配列を得るために、XBLASTプログラム、score=50、wordlength=3によって実行されることができる。比較効果のためにギャップを調整した配置を得るために、Gapped BLASTは、Altschulら、（1997）Nucleic Acids Res. 25：3389−3402に開示されるように、利用されることができる。BLASTおよびGapped BLASTプログラムを利用するときに、それぞれのプログラム（例えば、XBLASTおよびNBLAST）のデフォルト・パラメータが使われることができる。http：／／www.ncbi.nlm.nih.gov.参照。
【００９６】
抗体分子
ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストおよび／または結合剤の例としては、抗体分子を含む。本願明細書において使用される「抗体分子」という用語は、少なくとも一つの免疫グロブリン可変領域配列からなるタンパク質を指す。抗体分子という用語は、例えば、完全長の成熟した抗体および抗体の抗原結合性断片を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域配列（ＶＨとして本願明細書において略記される）および、軽（Ｌ）鎖可変領域配列（ＶＬとして本願明細書において略記される）を含むことができる。他の例では、抗体分子は、１または２の重（Ｈ）鎖可変領域配列および／または２つの軽（Ｌ）鎖可変領域配列の一つを含む。抗原結合性断片の例は、以下のものを含む：（i）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１領域からなる一価の断片；（ii）Ｆ（ab’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ断片からなる二価の断片；（iii）ＶＨおよびＣＨ１領域からなるＦｄ断片；（iv）抗体のシングルアームのＶＬおよびＶＨ領域からなるＦｖ断片、（v）ＶＨまたはＶＨH領域、（vi）ＶＨ領域からなるｄＡｂ断片、（vii）ラクダ科のまたはラクダ化された可変領域；および、（viii）単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）。
【００９７】
ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存的な「フレームワーク領域」（FR）と称される領域に散在する、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と称される、超可変性の領域にさらに再分割されることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、正確に多くの方法によって定義されてきた。（Kabat、E. A.、ら（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest、Fifth Edition、U.S. Department of Health and Human Services、NIH Publication No. 91−3242；Chothia、C.ら（1987）J. Mol. Biol. 196：901−917；および the AbM definition used by Oxford Molecular’s AbM antibody modelling software参照。）一般には、例えば、Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In： Antibody Engineering Lab Manual （Ed.： Duebel、S. and Kontermann、R.、Springer−Verlag、Heidelberg）参照。通常、特に示されない限り、以下の定義が用いられる。：重鎖可変領域のＣＤＲ１のＡｂＭ定義、および、他のＣＤＲのためのKabat 定義。加えて、ＫａｂａｔまたはＡｂＭ ＣＤＲに関して記載されている本発明の実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループを使用して実施されることもできる。各ＶＨおよびＶＬは、次の順序、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配列される３つのＣＤＲおよび４つのFRsを典型的に含む。
【００９８】
本願明細書において使用されるとき「免疫グロブリン可変領域配列」は、免疫グロブリン可変領域の構造を形成することができるアミノ酸配列をいう。例えば、配列は、自然に生じる可変領域のアミノ酸配列の全部または一部を含むことができる。例えば、配列は、１つ、２つまたはより多くのＮまたはＣ末端アミノ酸を含むことができる、または、できないか、またはタンパク質構造の構成と互換性のある他の変更を含むことができる。
【００９９】
「抗原結合部位」という用語は、ＩＬ−１３、たとえば、哺乳類ＩＬ−１３、例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩＬ−１３またはそのエピトープに結合する界面を形成する決定基からなるＩＬ−１３結合剤の一部をいう。タンパク質（またはタンパク質の疑似体）に関して、抗原結合部位は、典型的には、ＩＬ−１３と結合する界面を形成する一つ以上のループ（少なくとも４つのアミノ酸またはアミノ酸の疑似体）を含む。典型的には、抗体分子の抗原結合部位は、少なくとも１つまたは２つのＣＤＲ、または、より典型的には、少なくとも３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲを含む。
【０１００】
「エピトープ」は、結合剤、例えば、抗体分子によって結合された標的化合物上の部位をいう。エピトープは、線形または立体配置的なエピトープまたはそれらの組み合わせでありえる。標的化合物がタンパク質である場合には、例えば、エピトープは結合剤により結合されるアミノ酸を指すことができる。重なり合うエピトープは、少なくとも一つの共通のアミノ酸残基を含む。
【０１０１】
本願明細書において用いられるとき、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物をいう。モノクローナル抗体組成は、特定のエピトープへの単一結合の特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、または、ハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え方法）によって製造されることができる。
【０１０２】
「効果的にヒト」タンパク質は、中和抗体反応、例えば、ヒト抗ネズミ抗体（ＨＡＭＡ）反応を引き起こさないタンパク質である。ＨＡＭＡは、多くの状況、たとえば、抗体分子が反復投与される場合、例えば、慢性または再発性の疾患の処置において、問題であることがありえる。ＨＡＭＡ反応は、血清からの増加された抗体の除去のため（例えば、Salehら、Cancer Immunol. Immunother.、32：180−190（1990）参照。）、および、潜在的アレルギー反応のため（例えば、LoBuglioら、Hybridoma、5：5117−5123 （1986）参照。）、抗体の反復投与を、潜在的に非効果的にすることができる。多くの方法は、抗体分子を得ることに利用できる。
【０１０３】
抗体分子を生成する１つの典型的な方法は、スクリーニング・タンパク質発現ライブラリ、例えば、ファージまたはリボソーム・ディスプレイ・ライブラリを含む。たとえば、ファージ・ディスプレイは、Ladnerら、U.S. Patent No. 5、223、409；Smith （1985）Science 228：1315−１３17；WO 92／18619；WO 91／17271；WO 92／20791；WO 92／15679；WO 93／01288；WO 92／01047；WO 92／09690；および WO 90／02809に記載されている。ディスプレイ・ライブラリの使用に加えて、他の方法は、抗ＩＬ−１３抗体分子を得るために用いることができる。例えば、ＩＬ−１３タンパク質またはそのペプチドは、非ヒト動物、例えば、齧歯動物、例えば、マウス、ハムスターまたはネズミの抗原として使われることができる。
【０１０４】
一つの実施形態において、非ヒト動物は、少なくとも、ヒト免疫グロブリン遺伝子の一部を含む。例えば、それは、ヒト免疫グロブリン・遺伝子座の大きな断片により、マウス抗体産生に欠損したマウス種を設計することが可能である。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する遺伝子から誘導される抗原に特異的なモノクローナル抗体が、産生および選択されることができる。例えば、XENOMOUSETM、Greenら（1994）Nature Genetics 7：13−21、1996年10月31日に発表されるUS 2003−0070185、WO 96／34096、published Oct. 31、1996 および1996年4月29日に出願のPCT出願番. PCT／US96／05928参照。
【０１０５】
もう一つの形態では、モノクローナル抗体は、非ヒト動物から得られて、そして、変更、例えば、ヒト化または非免疫化される。ウインタ−は、本願明細書（U.S. Patent No. 5、225、539）において記載されているヒト化抗体を製造するために用いることができる典型的なＣＤＲ−グラフト法を開示する。特定のヒト抗体のＣＤＲの全ては、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部と置き換えられることができ、または、ＣＤＲのいくつかのみは、非ヒトＣＤＲと交換されることができる。ヒト化抗体を予め定められた抗原に結合するために必要とされるＣＤＲの数を置き換えることだけが単に必要である。
【０１０６】
ヒト化抗体は、ヒトＦｖ可変領域と同等な配列と結合している抗原と直接的に関係しないＦｖ可変領域の配列を置き換えることによって生成することができる。ヒト化抗体分子を生成する典型的な方法は、Morrison （1985）Science 229：1202−1207；by Oiら（1986）BioTechniques 4：214；and by US 5、585、089；US 5、693、761；US 5、693、762；US 5、859、205；および US 6、407、213.によって提供されている。それらの方法は、重または軽鎖のうちの少なくとも１つから免疫グロブリンＦｖ可変領域の全部または一部をコードする核酸配列を単離、操作および発現することを含む。他の供給源からと同様に、上記の通りに、このような核酸は、予め定められた標的に対する抗体を生産するハイブリドーマから得られることができる。ヒト化抗体分子をコード化している組換えＤＮＡは、それから適切な発現ベクターにクローニングされることができる。
【０１０７】
抗体分子は、WO 98／52976 および WO 00／34317に開示される方法によって、ヒトＴ細胞エピトープ特異性欠損または「非免疫化」によって改変されることもできる。簡潔には、抗体の重および軽鎖可変領域は、ＭＨＣクラスIIと結合するペプチドのために分析されることができる；これらのペプチドは、潜在的Ｔ細胞エピトープ（WO 98／52976 および WO 00／34317において定義される）を表す。潜在的Ｔ細胞エピトープの検出のために、「ペプチド・スレッディング」と称されるコンピュータ・モデリング方法が適用され、加えて、WO 98／52976 および WO 00／34317に説明したように、ペプチドを結合しているヒトＭＨＣクラスＩＩのデータベースは、ＶＨおよびＶＬ配列に存在するモチーフで検索されることができる。これらのモチーフは、１８の主要なＭＨＣクラスＩＩＤＲアロタイプのいずれにも結合し、こうして潜在的Ｔ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的なＴ細胞エピトープは、可変領域のアミノ酸残基の少ない数の置換、または、好ましくは、単一アミノ酸の置換によって除去されることができる。典型的に、保存的な置換がなされる。しばしば、しかし、排他的にでなく、ヒト生殖細胞系抗体配列の位置に共通のアミノ酸が用いられることができる。
【０１０８】
ヒト生殖細胞系配列は、例えば、Tomlinson、ら（1992）J. Mol. Biol. 227：776−798；Cook、G. P.ら（1995）Immunol. Today Vol. 16 （5）： 237−242；Chothia、D.ら（1992）J. Mol. Biol. 227：799−817；および Tomlinsonら（1995）EMBO J. 14：4628−4638において開示される。
Ｖ  ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列（Tomlinson、I.A.らMRC Centre for Protein Engineering、Cambridge、UKにより編集される）の総合的なディレクトリを提供する。これらの配列が、ヒトの配列、例えば、フレームワーク領域およびＣＤＲの供給源として用いられることができる。共通するヒト・フレームワーク領域は、例えば、US 6、300、064にて説明したように、使われることもできる。
【０１０９】
さらに、キメラな、ヒト化された、そして、単鎖の抗体分子（例えば、ヒトおよび非ヒトの部分の両方を含むタンパク質）が、標準組換えＤＮＡ技術を使用して製造されることができる。例えば、ヒト重および軽鎖遺伝子を発現するが、内因性のマウス免疫グロブリン重および軽鎖遺伝子を発現することができないトランスジェニックマウスを使用して、ヒト化抗体を製造することもできる。
【０１１０】
さらに、また、本願明細書において記載されている抗体分子は、ＩＬ−１３と結合し、機能的なＩＬ−１３シグナル複合体の形成を阻害し、重鎖定常領域に突然変異があるものも含んでいる。定常領域の特定の断片を変異して不活発にすることは、時々、望ましい。例えば、重鎖定常領域の突然変異は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）および／または補体への結合を減少した抗体を生産するために製造されることができ、このような突然変異は、その分野で知られている。免疫グロブリンＧの重鎖定常領域のアミノ配列に対するこのような突然変異の例は、配列番号：１２８において提示されている。ＣＬおよびＣＨサブユニット（例えば、ＣＨ１）の特定の活性断片は、互いに共有的に結合する。更なる態様は、機能的なＩＬ−１３シグナル複合体を形成することに関与するＩＬ−１３の表面に特異的な抗原結合部位を得るための方法を提供する。
【０１１１】
典型的な抗体分子は、配列番号３０−４６に記載されるＶＬ鎖、および／または、配列番号：５０−１１５に記載されるＶＨ鎖の配列を含むことができるが、また、ＩＬ−１３への結合能力を保持するこれらの配列の変異体を含むこともできる。このような変異体は、その分野で知られる技術を使用して、与えられた配列から誘導されることができる。アミノ酸の置換、削除または追加は、ＦＲまたはＣＤＲのいずれかにおいて、なされることができる。フレームワーク領域の変化は、通常、安定性を改善して、抗体分子の免疫原性を減らすように設計されているのに対して、ＣＤＲの変化は、通常、その標的へも抗体分子の親和性を増加させるように設計されている。このような親和性を増加させる変化は、典型的に、ＣＤＲ領域を変えること、および、抗体分子をテストすることにより経験的に測定される。このような改変は、Antibody Engineering、2nd. ed. （1995）、ed. Borrebaeck、Oxford University Pressに記載されている方法に従ってなされることができる。
【０１１２】
本願明細書において記載されている重鎖可変領域配列の変異体である重鎖可変領域配列を得るための典型的な方法は、本願明細書において記載される重鎖可変領域配列中の、一つ以上のアミノ酸を、加えて、削除して、置換するかまたは嵌入することを含み、選択的には、重鎖可変領域配列を一つ以上の軽鎖可変領域配列と結合すること、ＩＬ−１３に特異的に結合する改変された重鎖可変領域配列を含むタンパク質をテストすること、および、（好ましくは）一つ以上のＩＬ−１３関連の活性を調整する抗原結合性領域の能力を試験することを含む。類似した方法は、本願明細書において記載されている軽鎖可変領域配列の一つ以上の配列変異体を使用することにより採用されることができる。
【０１１３】
抗体分子の変異体は、一つ以上の変化に富むＣＤＲを有するライブラリを作成して、たとえば、改良された親和性によって、ＩＬ−１３に結合するものを見つけるために、ライブラリをスクリーニングすることによって調製されることができる。例えば、マークスら（Bio／Technology （1992）10：779−83）は、可変領域の５’末端、または、それに隣接部を目指す共通プライマーが、ＣＤＲ３を欠いているＶＨ可変領域のレパートリを提供するために、ヒトＶＨ遺伝子の第３のフレームワーク領域への共通プライマーに連動して用いられる抗体可変領域のレパートリを産生する方法を記載する。レパートリは、特定の抗体のＣＤＲ３と結合されることができる。さらに、ＣＤＲ３から派生した配列は、ＣＤＲ３を欠いているＶＨまたはＶＬのレパートリ領域によって混ぜられることができ、そして、混ぜられた完全なＶＨまたはＶＬ領域は、特定の抗原結合性断片を提供するために、同種のＶＬまたはＶＨ領域と結合された。レパートリはそれから適切なホストシステム、例えば、WO 92／01047のファージ・ディスプレイシステムで示されることができ、その結果、適切な抗原結合性断片は選択されることができる。類似した混合または組合せの技術は、ステマー（Nature （1994）370：389−91）によっても開示される。さらなる変更は、全ての可変領域の中で突然変異を生成するために、一つ以上の選択されたＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダムな突然変異誘発を用いて、改変されたＶＨまたはＶＬ領域を生成することである。例えば、GramらProc. Nat. Acad. Sci. USA （1992）89：3576−80参照。
【０１１４】
用いられることができるもう一つの方法は、突然変異誘起をＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域にあてることである。このような技術は、例えば、Barbasら（Proc. Nat. Acad. Sci. USA （1994）91：3809-13）およびSchierら（J. Mol. Biol. （1996）263：551−67）によって開示される。同様に、一つ以上または３つすべてのＣＤＲは、ＶＨまたはＶＬ領域のレパートリ、または、他のscaffold（例えばフィブロネクチン領域）さえ結合されることができる。結果として生じるタンパク質は、ＩＬ−１３と結合する能力について評価される。
【０１１５】
ひとつの実施形態において、標的と結合する結合剤は、改変された結合剤のプールを提供するために、例えば、突然変異誘起によって改変される。改変された結合剤は、それから、機能的な特性（例えば、改良された結合、改良された安定性、インビボ内の長期化された安定性）を変えた一つ以上の改変された結合剤を特定するために評価される。ひとつの実施形態では、ディスプレイ・ライブラリ技術は、改変された結合剤のプールを選択またはスクリーンングするために用いられる。より高い親和性の結合剤は、それから第２のライブラリから、例えば、より高いストリンジェントまたはより競合的な結合および洗浄の条件を用いて特定される。他のスクリーニング技術が用いられることもできる。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、突然変異誘起は、結合表面において、知られているか、またはありそうな領域を標的とする。例えば、特定された結合剤が抗体分子である場合、本願明細書において記載されているように、突然変異誘起は重または軽鎖のＣＤＲ領域を目指すことができる。更に、突然変異誘起は、特に、ＣＤＲ結合の10、5または3アミノ酸の範囲内で、ＣＤＲ（例えば、フレームワーク領域）の近く、または、それに隣接したフレームワーク領域を目指すことができる。抗体の場合、例えば、段階的改良をもたらすために、例えば、突然変異誘起は一つまたはいくつかのＣＤＲに限られていることもできる。
【０１１７】
一つつの実施形態において、突然変異誘起は、抗体を一つ以上の生殖細胞系配列とより類似するために用いられる。１つの典型的な生殖細胞化の方法は、単離された抗体の配列と類似している（例えば、特定のデータベースにおいて最も類似した）一つ以上の生殖細胞系配列を特定することを含むことができる。それから、突然変異（アミノ酸レベルで）は、単離された抗体において、逐次または共にのいずれか、または、両方により、製造されることができる。例えば、可能な生殖細胞突然変異のいくつか、または、すべてをコードしている配列を含む核酸ライブラリが製造される。変異した抗体は、例えば、単離された抗体と比較して一つ以上の追加的な生殖細胞系残基を有し、そして、まだ有用な（例えば、機能的な活性を有する）抗体を特定するために、それから評価される。ひとつの実施形態において、できる限り多くの生殖細胞系残基は、単離された抗体に導入される。
【０１１８】
一つの実施形態において、突然変異誘起は、一つ以上の生殖細胞系残基をＣＤＲ領域に置換または挿入するために用いられる。例えば、生殖細胞系ＣＤＲ残基は、改変されている可変領域と類似している（例えば、最も類似している）生殖細胞系配列から由来することができる。突然変異誘起の後、抗体の活性（例えば、結合または他の機能的な活性）は、生殖細胞系残基か残基類が許容されるかどうか決定するために評価されることができる。
類似の突然変異誘起は、フレームワーク領域において実行されることができる。
【０１１９】
生殖細胞系配列を選択することは、異なる方法で実行されることができる。例えば、少なくとも特定のパーセント同一性、例えば、少なくとも75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または99.5％の同一性で、選択性または類似性のための所定の基準を満たす場合、生殖細胞系配列は選択されることができる。選択は、少なくとも2、3、5、または10の生殖細胞系配列を使用して実行されることができる。ＣＤＲ１およびＣＤＲ２の場合、類似の生殖細胞系配列を確認することは、そのような配列を選択することを含むことができる。ＣＤＲ３の場合、類似の生殖細胞系配列を確認することは、そのような配列を選択することを含むことができるが、アミノ末端部分およびカルボキシ末端部に別々に関与する２つの生殖細胞系配列を使用することを含んでもよい。他の実施形態において、例えば、コンセンサス配列を形成するために、１または２以上の生殖細胞系が用いられる。
【０１２０】
他の実施形態において、抗体は、変更されたグリコシル化パターン（すなわち、本来のまたは天然のグリコシル化パターンから変更される）を有するために変異されることができる。本願明細書において用いられるとき、「変異された」は、削除される一つ以上の炭化水素部分を有すること、および／または、本来の抗体に加えられる一つ以上のグリコシル化部位を有することを意味する。ここに開示される抗体へのグリコシル化部位の追加は、グリコシル化部位の共通配列を含むためにアミノ酸配列を変更することによって達成されることができ、このような技術は、その分野でよく知られている。抗体上の炭化水素部分の数を増加させる他の手段は、抗体のアミノ酸残基への糖鎖の化学的または酵素的な結合による。これらの方法は、例えば、WO 87／05330およびAplin and Wriston（1981）CRC Crit. Rev. Biochem. 22：259−306に記載されている。従来技術（Hakimuddinら（1987）Arch. Biochem. Biophys. 259：52；Edgeら（1981）Anal. Biochem. 118：131；および Thotakuraら（1987）Meth. Enzymol. 138：350）において記載されているように、抗体に存在するいかなる炭化水素部分の除去も、化学的または酵素的に達成されることができる。サルベージ受容体結合エピトープを提供することによってインビボの半減期を増加させる改変については、U.S. 5、869、046を参照。
【０１２１】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、本願明細書において開示される抗体、例えば、ＭＪ２−７の軽または重鎖可変領域からの少なくとも１、２、および、好ましくは３つのＣＤＲを含む。例えば、そのタンパク質は、ＣＤＲ領域内の以下の配列の一つ以上を含む：
GFNIKDTYIH （配列番号：15）、
RIDPANDNIKYDPKFQG （配列番号：16）、
SEENWYDFFDY （配列番号：17）、
RSSQSIVHSNGNTYLE （配列番号：18）、
KVSNRFS （配列番号：19）、 および 
FQGSHIPYT （配列番号：20）、
または、上記リストされた配列に比較して、10のアミノ酸（例えば、ＣＤＲの長さに比例する異なる数）ごとに、4、3、2.5、2、1.5、1または0.5までの変更（例えば、置換、挿入または削除）、例えば、ＣＤＲあたり、少なくとも1つの変更、しかし、2、3または4よりも多くない変更によって異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲ。
【０１２２】
例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子は、軽鎖可変領域配列において、ＣＤＲ領域内の以下の配列のうちの少なくとも1、2または3つを含むことができる：
RSSQSIVHSNGNTYLE （配列番号：18）、
KVSNRFS （配列番号：19）および 
FQGSHIPYT （配列番号：20）、
または、上記リスとされた配列と比較して、10のアミノ酸ごとに、4、3、2.5、2、1.5、1または0.5までに置換、挿入または削除によって異なるアミノ酸配列。
【０１２３】
抗ＩＬ−１３の抗体分子は、重鎖可変領域配列において、ＣＤＲ領域内の以下の配列のうちの、少なくとも1、2または3つを含むことができる：
GFNIKDTYIH （配列番号：15）、
RIDPANDNIKYDPKFQG （配列番号：16）および
SEENWYDFFDY （配列番号：17）、
または、上記リストされた配列と比較して、10のアミノ酸ごとに、4、3、2.5、2、1.5、1または0.5までの置換、挿入または削除によって異なるアミノ酸配列。重鎖ＣＤＲ３領域は、長さにおいて、13または12より少ないアミノ酸、例えば、長さにおいて、11のアミノ酸（ChothiaまたはKabat定義のいずれかを用いて）でありえる。
【０１２４】
もう一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、軽鎖可変領域配列において、ＣＤＲ領域内の次の配列の少なくとも１、２または３つを含む。（括弧のアミノ酸は、特定の位置における変更を表す。）
（i）（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）（配列番号：25）または（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−E （配列番号：26）、または（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−N−G−N−T−Y−L−（EDNQYAS）（配列番号：21）、
（ii） K−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−S （配列番号：27）またはK−（LV）−S−（NY）−R−F−S （配列番号：22）および
（iii）Q−（GSA）−（ST）−（HEQ）−I−P （配列番号：28）、F−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：23）またはQ−（GSA）−（ST）−（HEQ）−I−P−Y−T （配列番号：194）またはF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P−Y−T （配列番号：29）.
【０１２５】
一つの好ましい実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＭＪ２−７または密接に関連したＣＤＲ、例えば、同一である、または、少なくとも一つのアミノ酸の変更、しかし、て2、3または4つよりも多くない変更（例えば、置換、削除または挿入）を有するＣＤＲからのすべての６つのＣＤＲを含む。ＩＬ−１３結合剤は、ＭＪ２−７のアミノ酸残基に接触している少なくとも2、3、4、5、6または7つのＩＬ−１３を含むことができる。
【０１２６】
さらにもう一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、同じ標準構造およびＭＪ２−７の対応するＣＤＲ領域（例えば、ＭＪ２−７の重および／または軽鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１およびＣＤＲ2）を有する、少なくとも1、2または3つのＣＤＲ領域を含む。
【０１２７】
もう一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、重鎖可変領域配列において、ＣＤＲ領域内の以下の配列のうちの少なくとも1、2または3つを含むことができる。（括弧のアミノ酸は、特定の位置における変更を表す。）：
（i）G−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H （配列番号：48）、
（ii）（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−G （配列番号：49）および
（iii）SEENWYDFFDY （配列番号：17）.
【０１２８】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、本願明細書において開示される抗体、例えば、Ｃ６５の軽または重鎖可変領域から少なくとも1、2および、好ましくは3つのＣＤＲを含む。例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＣＤＲ領域内の以下の配列の一つ以上を含む：
QASQGTSINLN （配列番号：118）、
GASNLED （配列番号：119）、and 
LQHSYLPWT （配列番号：120）
GFSLTGYGVN （配列番号：121）、
IIWGDGSTDYNSAL （配列番号：122）、および
DKTFYYDGFYRGRMDY （配列番号：123）
または、上記リストされた配列に比較して、10のアミノ酸（例えば、ＣＤＲの長さに比例する異なる数）ごとに、4、3、2.5、2、1.5、1または0.5までの置換、挿入または削除、例えば、ＣＤＲあたり、少なくとも1つの変更、しかし、2、3または4よりも多くない変更によって異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲ。例えば、そのタンパク質は、軽鎖可変領域配列において、ＣＤＲ領域内の以下の配列のうちの少なくとも1、2または3つを含むことができる：
QASQGTSINLN （配列番号：118）、
GASNLED （配列番号：119）および 
LQHSYLPWT （配列番号：120）
または、上記リストされた配列と対比して、10のアミノ酸ごとに、4、3、2.5、2、1.5、1または0.5までの置換、挿入または削除によって異なるアミノ酸配列を有するアミノ酸配列。
【０１２９】
抗ＩＬ−１３の抗体分子は、重鎖可変領域配列において、ＣＤＲ領域内の以下の配列の少なくとも1、2または3つを含むことができる：
GFSLTGYGVN （配列番号：121）、
IIWGDGSTDYNSAL （配列番号：122）および
DKTFYYDGFYRGRMDY （配列番号：123）、
または、上記リストされた配列と比較して、10のアミノ酸ごとに、4、3、2.5、2、1.5、1または0.5までの置換、挿入または削除によって異なるアミノ酸配列を有するアミノ酸配列。
【０１３０】
実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、以下の配列のうちの１つを含むことができる：
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：30）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：31）
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：32）
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQPPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：33）
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：34）
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWLQQRPGQPPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：35）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQGSHIPYT （配列番号：36）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：37）
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC FQGSHIPYT （配列番号：38）
または、8、7、6、5、4、3または2つより少ない変更（例えば、置換、挿入または削除、例えば、保存的置換またはＭＪ２−７の対応する位置のアミノ酸残基の置換）を有する配列。典型的な置換は、以下のKabat位置の一つにある：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64−69、85、87、98、99、101、および102。置換は、例えば、ＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸を、ヒトフレームワーク領域に置換することができる。
【０１３１】
ＩＬ−１３抗体分子は、以下の配列のうちの１つを含むこともできる：
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISC−（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WYLQKPGQSPQLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC F−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：39）
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISC−（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WFQQRPGQSPRRLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：40）
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC−（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WYLQKPGQSPQLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：41）
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISC（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WYLQKPGQPPQLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：42）
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WYLQKPGQSPQLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：43）
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WLQQRPGQPPRLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：44）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WYQQKPGKAPKLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：45）
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC（RK）−S−S−Q−S−（LI）−（KV）−H−S−（ND）−G−N−（TN）−Y−L−（EDNQYAS）WYLQKPGQSPKLLIYK−（LVI）−S−（NY）−（RW）−（FD）−SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCF−Q−（GSA）−（SIT）−（HEQ）−（IL）−P （配列番号：46）
または、8、7、6、5、4、3または2つより少ない変更（例えば、置換、挿入または削除、例えば、保存的置換またはＭＪ２−７の対応する位置のアミノ酸残基の置換）を有する配列。典型的な置換は、以下のKabat位置の一つにある：2、4、6、35、36、38、44、47、49、62、64−69、85、87、98、99、101、および102。置換は、例えば、ＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸を、ヒトフレームワーク領域に置換することができる。配列の後に、ジペプチドTyr−Thrが続くこともできる。ＦＲ４領域は、例えば、配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：４７）を含むことができる。
【０１３２】
他の実施形態において、ＩＬ−１３抗体分子は、以下の配列のうちの１つを含むことができる：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：50）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQRLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：51）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQATGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：52）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：53）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATSEENWYDFFDY （配列番号：54）
QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQALEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：55）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：56）
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQARGQRLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAASEENWYDFFDY （配列番号：57）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：58）
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDSEENWYDFFDY （配列番号：59）
QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWIRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：60）
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTSEENWYDFFDY （配列番号：61）
EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHCARSEENWYDFFDY （配列番号：62）
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：63）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSEENWYDFFDY （配列番号：64）
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSEENWYDFFDY （配列番号：65）
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：66）
EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKDSEENWYDFFDY （配列番号：67）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：68）
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFNIKDTYIHWFRQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDGSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRSEENWYDFFDY （配列番号：69）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEYVSRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：70）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：71）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGKATISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：72）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：73）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：74）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGKATISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：75）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：76）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：77）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIDPANDNIKYDPKFQGRFTISRDNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：78）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：79）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：80）
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：81）
EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTGSGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLNSLTSEDTAVYYCARSEENWYDFFDY （配列番号：82）
または、8、7、6、5、4、3または2つより少ない変更（例えば、置換、挿入または削除、例えば、保存的置換またはＭＪ２−７の対応する位置のアミノ酸残基の置換）を有する配列。典型的な置換は、以下Kabat位置の一つ以上にある：2、4、6、25、36、37、39、47、48、93、94、103、104、106、および107。典型的な置換は、また、以下のKabat位置（配列番号に従って）の一つ以上にある：48、49、67、68、72および７９。置換は、例えば、ＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸を、ヒトフレームワーク領域に置換することができる。一つの実施形態において、配列は、以下の一つ以上を含む（配列番号に従って）：48位のIle、49位のGly、67位のLys、68位のAla、72位のAlaおよび79位のAla、好ましくは、例えば、48位のIle、49位のGly、72位のAlaおよび79位のAla。
【０１３３】
さらに、重鎖可変領域配列のフレームワークは、以下を含むことができる：
（i）49位に対応する位置、Gly;
（ii）72位に対応する位置、Ala;
（iii）48位に対応する位置、Ile、および、49位、Gly;
（iv）48位に対応する位置、Ile、49位、Gly、72位、Ala；
（v）67位に対応する位置、Lys、68位、Ala、および、72位、Ala、および／または
（vi）48位に対応する位置、Ile、49位、Gly、72位、Ala、79位、Ala。
【０１３４】
ＩＬ−１３抗体分子は、以下の配列のうちの１つを含むこともできる：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H、WVRQAPGQGLEWMG（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−GRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR SEENWYDFFDY （配列番号：83）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H、WVRQAPGQRLEWMG（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−GRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY （配列番号：84）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H、WVRQATGQGLEWMG（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−GRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEENWYDFFDY （配列番号：85）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H、WVRQAPGQGLEWMG（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−GRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR SEENWYDFFDY （配列番号：86）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H、WVRQAPGKGLEWMG（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−GRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT SEENWYDFFDY （配列番号：87）
QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASG−（YF）−（NT）−I−K−D−T−Y−（MI）−H、WVRQAPGQALEWMG（WR）−I−D−P−（GA）−N−D−N−I−K−Y−（SD）−（PQ）−K−F−Q−GRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR SEENWYDFFDY （配列番号：88）
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または、8つの、7つの、6つの、5つの、4つの、3つのまたは、2つより少ない変更（例えば、置換、挿入または削除、例えば、保存的置換またはＭＪ２−７の対応する位置のアミノ酸残基の置換）を有する配列。典型的な置換は、以下のKabat位置の一つ以上にある：2、4、6、25、36、37、39、47、48、93、94、103、104、106、および107。典型的な置換は、例えば、ＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸を、ヒトフレームワーク領域に置換することができる。ＦＲ４領域は、例えば、配列ＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号：１１６）またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１１７）を含むことができる。
【０１３５】
ＩＬ−１３によるＩＬ−１３Ｒ（例えば、ＩＬ−１３受容体複合体）への結合を妨げるＩＬ−１３抗体、または、そのサブユニットの更なる例は、「ｍＡｂ１３．２」およびその変異、例えば、そのキメラまたはヒト化された形態を含む。ｍＡｂ１３．２の重鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、各々、配列番号１９８、配列番号２１８として本願明細書において記載される。ｍＡｂ１３．２の軽鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、各々、配列番号１９９、配列番号２１８として本願明細書において記載される。典型的なキメラ体（例えば、ｍＡｂ１３．２の重および軽鎖可変領域からなる形態）は、本願明細書において、「ｃｈ１３．２」と称される。ｃｈ１３．２の重鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、各々、配列番号２０８、配列番号２０４として本願明細書において記載される。ｃｈ１３．２の軽鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、各々、配列番号２１３、配列番号２１９として本願明細書において記載される。ｍＡｂ１３．２のヒト化された形態は、本願明細書において、「h１３．２v1」と称され、各々、配列番号２０９、配列番号２０５として本願明細書において記載される重鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列を有する。h１３．２v1の軽鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、各々、配列番号２１４、配列番号２２０として本願明細書において記載される。ｍＡｂ１３．２のもう一つのヒト化された形態は、本願明細書において、「h１３．２ｖ２」と称され、各々、配列番号２１０、配列番号２０６として本願明細書において記載される重鎖可変領域のためのアミノ酸およびヌクレオチド配列を有する。h１３．２ｖ２の軽鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、配列番号２１２、配列番号２２１として本願明細書において記載される。ｍＡｂ１３．２の他のヒト化された形態は、本願明細書において、「ｈ１３．２ｖ３」と称され、配列番号２１１、配列番号２０７として本願明細書において記載される重鎖可変領域のためのアミノ酸およびヌクレオチド配列を有する。h１３．２v3の軽鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、配列番号３５、配列番号２２３として本願明細書において記載される。
【０１３６】
もう一つの実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＶＨの配列番号１９８、２０８、２０９、２１０、または２１１、および／または、ＶＬの配列番号１９９、２１３、２１４、２１２、または２１５において説明されるアミノ酸配列、または、それと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約85％、90％、95％、99％、またはそれ以上に同一な配列、または、配列番号１９９、２１３、２１４、２１２、１９８、２０８、２０９、２１０、２１５、または２１１から1、2、5、10または15アミノ酸残基までが異なる配列）を有する、少なくとも1、2、3または4つの抗原結合性領域（例えば、可変部）からなる。もう一つの実施形態では、抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＶＨの配列番号２２２、２０４、２０５、２０８、または２０７、および／または、ＶＬの配列番号２１８、２１９、２２０、２２１、または２２３において説明されるアミノ酸配列、または、それと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約85％、90％、95％、99％、またはそれ以上に同一な配列、または、配列番号２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２０４、２０５、２０６、２２３、または２０７から3、6、15、30、または45の核酸まで異なる配列）を有する核酸によりコードされるＶＨおよび／またはＶＬを含む。さらにもう一つの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ ＣＤＲ１−３の各々の配列番号２０２、２０３または１９６において説明した配列、または、それと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約85％、90％、95％、99％、またはそれ以上に同一な配列、または、および／または、一つ以上の置換、例えば、保存的な置換を有する配列）を有する重鎖可変領域からの、少なくとも1、2または3つのＣＤＲからなる。もう一つの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＬ ＣＤＲ１−３の各々の配列番号１９７、２００または２０１において説明した配列、または、それと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約85％、90％、95％、99％、またはそれ以上に同一な配列、または、および／または、一つ以上の置換、例えば、保存的な置換を有する配列）を有する軽鎖可変領域からの、少なくとも1、2または3つのＣＤＲからなる。もう一つの実施形態では、抗体またはその断片は、ＶＨ ＣＤＲ１−３の各々の配列番号２０２、２０３または１９６、および、ＶＬ ＣＤＲ１−３の各々の配列番号１９７、２００または２０１において説明した配列、または、それと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも約85％、90％、95％、99％、またはそれ以上に同一な配列、および／または、一つ以上の置換、例えば、保存的な置換を有する配列）を有する重および軽鎖可変領域からの、少なくとも1、2、3、4、5または6つのＣＤＲからなる。
【０１３７】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、Ｃ６５または密接に関連したＣＤＲ、例えば、同一か、または、少なくとも一つのアミノ酸を変更するが、2、3または4つよりも少ない変更（例えば、置換、削除または挿入）を有するＣＤＲからの6つのすべてのＣＤＲを含む。
【０１３８】
さらにもう一つの実施形態において、ＩＬ−１３結合剤は、同じ標準構造およびＣ６５の対応するＣＤＲ領域、例えば、Ｃ６５の重および／または軽鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１およびＣＤＲ２を有する、少なくとも1、2または3つのＣＤＲ領域を含む。
【０１３９】
一つの実施形態において、重鎖フレームワーク（例えば、個々のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、または、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３を含んでいるが、ＣＤＲを除外している配列）は、以下の生殖細胞系Ｖ部分配列の内の１つの重鎖フレームワークと少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上同一であるであるアミノ酸配列を含む。：ＤＰ−71またはＤＰ−67またはＣ６５の標準構造クラスと互換性のある他のＶ遺伝子（例えば、Chothiaら（1992）J. Mol. Biol. 227：799−817；Tomlinsonら（1992）J. Mol. Biol. 227：776−798参照）
【０１４０】
一つの実施形態において、軽鎖フレームワーク（例えば、個々のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、または、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３を含んでいるが、ＣＤＲを除外している配列）は、DPK−1またはDPK−9生殖細胞系配列、またはＣ６５の標準構造クラスと互換性のある他のＶ遺伝子の軽鎖フレームワークと少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上同一であるであるアミノ酸配列を含む。（例えば、Tomlinsonら（1995）EMBO J.  14：4628参照）
【０１４１】
もう一つの実施形態において、軽鎖フレームワーク（例えば、個々のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、または、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３を含んでいるが、ＣＤＲを除外している配列）は、ＶＩサブグループ生殖細胞系配列、例えば、DPK−9またはDPK−1配列と、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上同一であるであるアミノ酸配列を含む。
【０１４２】
もう一つの実施形態において、重鎖フレームワーク（例えば、個々のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、または、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３を含んでいるが、ＣＤＲを除外している配列）は、ＶＨIＶサブグループ生殖細胞系配列、例えば、ＤＰ−71またはＤＰ−67配列と、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上同一であるであるアミノ酸配列を含む。
【０１４３】
一つの実施形態において、軽または重鎖可変フレームワーク（例えば、少なくともＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および選択的にＦＲ４を含んでいる領域）は、以下から選択されることができる：（ａ）ヒト軽または重鎖可変フレームワーク、例えば、ヒト成熟抗体、ヒト生殖細胞系配列、ヒト・コンセンサス配列または本願明細書において記載されているヒト抗体からの軽または重鎖可変フレームワーク残基からのアミノ酸残基の、少なくとも80％、85％、90％、95％または、100％を含む、軽または重鎖可変フレームワーク；（ｂ）ヒト軽または重鎖可変フレームワーク、例えば、ヒト成熟抗体、ヒト生殖細胞系配列、ヒト・コンセンサス配列からの軽または重鎖可変フレームワーク残基、からのアミノ酸残基の、20％から80％、40％から60％、60％から90％または70％から95％を含む、軽または重鎖可変フレームワーク；（ｃ）非ヒト・フレームワーク（例えば、齧歯目のフレームワーク）、または、（ｄ）例えば、抗原性または細胞毒性決定要素を取り除くために改変、例えば、脱免疫化された、または、部分的にヒト化された、非ヒト・フレームワーク。一つの実施形態において、重鎖可変領域配列は、以下の位置（好ましくは少なくとも5、10、12または全て）の一つ以上で、ヒト残基またはヒト・コンセンサス配列残基を含む：（軽鎖可変領域ＦＲ中の）4L、35L、36L、38L、43L、44L、58L、46L、62L、63L、64L、65L、66L、67L、68L、69L、70L、71L、73L、85L、87L、98L、および／または（重鎖可変領域ＦＲ中の）2H、4H、24H、36H、37H、39H、43H、45H、49H、58H、60H、67H、68H、69H、70H、73H、74H、75H、78H、91H、92H、93H、および／または103H （Kabat numberingに従って）.
【０１４４】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子は、少なくとも１つの非ヒトＣＤＲ、例えば、ネズミＣＤＲ、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５からのＣＤＲ、および／またはその変異体（例えば、そのヒト化またはキメラの変異体）、および、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５および／またはその変異体のフレームワークとは、少なくとも一つのアミノ酸、例えば、5、8、10、12、15、または18のアミノ酸により異なる少なくとも一つのフレームワークの少なくとも一つを含む。例えば、そのタンパク質は、1、2、3、4、5、また6のそのような非ヒトＣＤＲを含み、また、HC ＦＲ１、HC ＦＲ２、HC ＦＲ３、LC ＦＲ１、LC ＦＲ２およびLC ＦＲ３.のうちの少なくとも３つにおいて、少なくとも一つのアミノ酸の違いを含む。
【０１４５】
一つの実施形態において、抗ＩＬ−１３抗体分子の重または軽鎖可変領域配列は、本願明細書において記載されている抗体、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５および／またはその変異体（例えば、そのヒト化であるかキメラの変異体）の可変領域配列に対して、少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％またはそれ以上同一の、または、本願明細書において記載されている抗体、例えば、ｍＡｂ１３．２、ＭＪ２−７、Ｃ６５および／またはその変異体（例えば、そのヒト化であるかキメラの変異体）の可変領域配列から、少なくとも1つか5つの残基であるが、40、30、20、または10より少ない残基で異なるアミノ酸配列を含む。一つの実施形態において、そのタンパク質の重または軽鎖可変領域配列は、本願明細書において記載されている核酸配列、または、本願明細書において記載されている核酸配列またはその補体に、例えば、低いストリンジェント、中間のストリンジェント、高いストリンジェントまたは非常に高いストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸によってコードされるアミノ酸配列を含む。
【０１４６】
一つの実施形態において、可変領域配列の一方または両方は、非ヒト抗体（例えば、ｍＡｂ１３．２のようなネズミ抗体）およびヒト抗体の両方またはまたは生殖細胞系配列にさまざまに由来するフレームワーク領域におけるアミノ酸位を含む。例えば、可変領域配列は、２つがその位置で同一であるので、非ヒト抗体およびヒト抗体（またはヒト生殖細胞系配列）の両方にアミノ酸残基が同一である多くの位置を含むことができる。好ましくは、非ヒトおよびヒトが異なる残りのフレームワーク位置の内、可変領域の位置の少なくとも50、60、70、80または90％が、非ヒトではなく、ヒト抗体（またはヒト生殖細胞系配列）と同一である。例えば、このような残りのフレームワーク位置のうちの0、または、少なくとも1、2、3または4つは、ヒトではなく、非ヒト抗体と同一である。例えば、HC ＦＲ１において、このような1または2つの位置は、非ヒトでありえる；HC ＦＲ２において、このような1つのまたは２つの位置は、非ヒトでありえる；ＦＲ３において、このような1、2、3または4つの位置は、非ヒトでありえる；LC ＦＲ１において、このような1、2、3または4つの位置は、非ヒトでありえる；LC ＦＲ２において、このような1または2つの位置は、非ヒトでありえる；LC ＦＲ３において、このような1または2つの位置は、非ヒトでありえる。フレームワークは、更なる非ヒトの位置を含むことができる。
【０１４７】
一つの実施形態において、抗体分子は、単に非実質的にＭＪ２−７、Ｃ６５または１３．２のそれらと異なるＣＤＲ配列を有する。非実質的な違いは、例えば、ＣＤＲ、例えば、コチアまたはカバットＣＤＲの配列における、典型的に、5~7の任意のアミノ酸から１または２の置換のような、軽微なアミノ酸変化を含む。典型的には、アミノ酸は、同程度の電荷、疎水性または立体化学的特徴を有する関連したアミノ酸によって置換される。このような置換は、当業者の通常の技術の範囲内である。ＣＤＲとは異なり、構造フレームワーク領域（ＦＲ）におけるより実質的な変化は、抗体の結合性に悪影響を与えずになされることができる。FRsに対する変化は、これに限定されないが、非ヒトに由来するフレームワークをヒト化すること、または、抗原接触または結合部位を安定させるために重要な特定のフレームワーク残基を操作すること、例えば、定常領域のクラスまたはサブクラスを変えること、Ｆｃ受容体結合（Lundら（1991）J. Immunol. 147：2657−62；Morganら（1995）Immunology 86：319−24）のようなエフェクター機能を改変するかも知られない特定のアミノ酸残基を変更すること、または、定常領域が由来する種を変えることを含む。抗体には、エフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体結合および補体活性化を減少または変更する重鎖のＣＨ２領域の突然変異を有することができる。例えば、抗体には、US5、624、821およびUS5、648、260に記載されているそれらのような突然変異を有することができる。ＩｇＧ１またはＩｇＧ２の重鎖において、例えば、このような突然変異は、配列番号：１７に記載されるアミノ酸配列に似せるようにつくられることができる。抗体は、免疫グロブリンの２つの重鎖の間のジスルフィド結合を安定させる突然変異、例えば、技術（e.g.、Angalら（1993）Mol. Immunol. 30：105−08）にて開示されるような、ＩｇＧ４のヒンジ領域の突然変異を有することもできる。
【０１４８】
抗ＩＬ−１３抗体は、完全な抗体、抗体の抗原結合部位、例えば、Fab、F（ab’）2、Fd、dAb、および scＦｖ断片、および、定常および／または可変領域において変異した完全な抗体または断片の形態であることができる（例えば、所望の特徴、例えば、促進されたＩＬ−１３結合および／または減少したＦｃＲの結合を有する抗体を生産するためだけでなく、キメラ、部分的にヒト化または完全にヒト化抗体を生産するための突然変異）。
【０１４９】
抗ＩＬ−１３抗体分子は、誘導体化または他の官能分子、例えば、他のペプチドまたはタンパク質（例えば、Ｆａｂ断片）に結合（例えば、化学カップリング、遺伝子の融合、非共有結合、またはその他）されることができる。例えば、結合剤は、他の抗体分子のような一つ以上の他の分子存在物、例えば、特に、他の抗体分子（例えば、二重特異性またはマルチ特異性の抗体分子を形成する）、毒素、ラジオアイソトープ、細胞障害能または細胞増殖抑制性試薬、その他に、機能的に結合されることができる。
【０１５０】
さらなるＩＬ−１３／ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒ結合剤
また、ＩＬ−１３ ＩＬ−４ポリペプチドまたは核酸、または、ＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４Ｒポリペプチドまたは核酸に結合する、抗体分子以外の他の結合剤が提供される。実施形態において、本願明細書において記載されている他の結合剤は、アンタゴニストであり、こうしてＩＬ−１３および／またはＩＬ−４（例えば、本願明細書において記載されている、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４の一つ以上の生物活性）の一つ以上の生物活性を減少、阻害または減弱させる。
【０１５１】
結合剤は、本願明細書において記載されている可変領域を修正すること、または、本願明細書において記載されている可変領域の一つ以上のＣＤＲを、他のscaffold領域上へ結合させることを含む、多くの方法によって確認されることができる。結合剤は、例えば、スクリーニングによって、多様なライブラリから確認されることもできる。タンパク質ライブラリをスクリーニングするための１つの方法は、ファージ・ディスプレイを使用する。タンパク質の特定領域は変化し、そして、ＩＬ−１３またはＩＬ−４またはそのレセプタと相互作用するタンパク質は、例えば、固体担体上の保持によって、または、他の物理的な関連性によって確認される。例えば、ＩＬ−１３上のＭＪ２−７、Ｃ６５またはｍＡｂ １３．２と同じエピトープまたは重なり合うエピトープと結合する特定の結合剤を確認するために、結合剤は、ＭＪ２−７、Ｃ６５またはｍＡｂ１３．２（または関連した抗体）を加えることによって溶出させられることができ、または、結合剤は、ＭＪ２−７、Ｃ６５またはｍＡｂ１３．２（または関連した抗体）の競合実験において評価されることができる。ＩＬ−１３およびＭＪ２−７、Ｃ６５またはｍＡｂ１３．２（または関連した抗体）を含む複合体にライブラリを接触させることによる他のエピトープと結合する試薬のライブラリを減少させることも可能である。削除されたライブラリは、それがＭＪ２−７、Ｃ６５またはｍＡｂ１３．２に結合するときにはＩＬ−１３に結合しないが、ＩＬ−１３と結合する結合剤を得るために、ＩＬ−１３に接触させられることができる。標的として、ＭＪ２−７、Ｃ６５エピトープまたはｍＡｂ１３．２を含むＩＬ−１３からペプチドを使用することも可能である。
【０１５２】
ファージ・ディスプレイは、例えば、U.S. Patent No. 5、223、409；Smith （1985）Science 228：1315−１３17；WO 92／18619；WO 91／17271；WO 92／20791；WO 92／15679；WO 93／01288；WO 92／01047；WO 92／09690；WO 90／02809；WO 94／05781；Fuchsら（1991）Bio／Technology 9：1370−1372；Hayら（1992）Hum Antibod Hybridomas 3：81−85；Huseら（1989）Science 246：1275−1281；Griffithsら（1993）EMBO J 12：725−734；Hawkinsら（1992）J Mol Biol 226：889−896；Clacksonら（1991）Nature 352：624−628；Gramら（1992）PNAS 89：3576−3580；Garrardら（1991）Bio／Technology 9：1373−1377；Rebarら（1996）Methods Enzymol. 267：129−49；and Barbasら（1991）PNAS 88：7978−7982.  Yeast surface display is described、e.g.、in Boder and Wittrup （1997）Nat. Biotechnol. 15：553−557.  Another form of display is ribosome display.  See、e.g.、Mattheakisら（1994）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91：9022 and Hanesら（2000）Nat Biotechnol. 18：1287−92；Hanesら（2000）Methods Enzymol. 328：404−30. およびSchaffitzelら（1999）J Immunol Methods. 231（1−2）：119−35.に記載されている。
【０１５３】
ＩＬ−１３またはＩＬ−４と結合する結合剤またはそのレセプタは、１つの骨格タンパク質（例えば、折り畳まれた領域）の構造的な特徴を有することができる。典型的なscaffold領域は、抗体に基づいて、モノクローナル抗体の重鎖可変領域から３つのβ鎖を削除して設計された「小型」scaffoldである。（Tramontanoら、1994、J. Mol. Recognit. 7：9；and Martinら、1994、EMBO J. 13：5303−5309）. この領域は、６１の残基を含んで、２つの超可変的なループ、例えば、本願明細書において記載されている可変領域の一つ以上の超可変的なループまたは本願明細書において記載されている変異体を提示するために用いられることができる。他の方法において、結合剤は、Ｖ−like領域（CoiaらWO 99／45110）.であるscaffold領域を含む。Ｖ−like領域は、抗体の可変的な重い（ＶＨ）または可変的な軽い（ＶＬ）領域に類似の構造的な特徴を有する領域のことをいう。他のscaffold領域は、テンダミスタチン（tendamistatin）、74の残基、２つのジスルフィド結合によって一緒に保持される６鎖βシート・サンドイッチに由来する（McConnell and Hoess、1995、J. Mol. Biol. 250：460）。この親タンパク質は、３つのループを含む。ループは修飾され、（例えば、本願明細書において記載されているＣＤＲまたは超可変的なループを用いて）、または、例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−４と結合する領域またはそのレセプタを選択するために、変異されることができる。WO 00／60070は、scaffold領域として使われることができるCTLA−4の自然に生じる細胞外領域に由来するβサンドイッチ構造を記載する。
【０１５４】
ＩＬ−１３／13RまたはＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒ結合剤のさらに別のscaffold領域は、フィブロネクチン・タイプＩＩＩ領域または関連したフィブロネクチン様タンパク質に基づく領域である。フィブロネクチン・タイプＩＩＩ（Fn3）領域の全体の折りたたみは、最も小さい機能的な抗体断片、抗体の重鎖の可変領域に密接に関連がある。Fn3は、Fn3が９でなく７のβ鎖を有しているということを除き、抗体ＶＨ領域のそれと類似する。Fn3の末端には、３つのループがある：BC、DEおよびFGループの位置は、抗体のＶＨ領域のＣＤＲ１、2および3の３のそれらにほぼ対応する。ジスルフィド結合を有しないので、Fn3は有利である。従って、Fn3は、抗体とその断片と異なり、還元条件下で安定である（WO 98／56915、WO 01／64942;WO 00／34784を、参照）Fn3領域は修飾され（例えば、本願明細書において記載されているＣＤＲまたは高度可変的なループを用いて）、または、例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−４またはそのレセプタと結合する領域を選択ために、変異されることができる。
【０１５５】
さらに他の典型的なscaffold領域は、以下からなる：Ｔ細胞レセプタ；ＭＨＣタンパク質；細胞外領域（例えば、フィブロネクチンType IIIリピート、EGFリピート）；プロテアーゼインヒビター（例えば、クーニッツ領域、エコチン、BPTI、その他）；TPRリピート；トリフォイル構造；Znフィンガー領域；ＤＮＡ結合性タンパク質；特に単一遺伝子性ＤＮＡ結合蛋白質；ＲＮＡ結合タンパク質；酵素（例えば、プロテアーゼ（特に、不活性化されたプロテアーゼ）、RNアーゼ；シャペロン（例えば、チオレドキシンおよびヒートショックタンパク質）；および、細胞内シグナル領域（例えば、SH2およびSH3領域）。US 20040009530は、他のscaffoldの例を記載する。
【０１５６】
小さいscaffold領域の実施例は、以下からなる：クーニッツ領域（58アミノ酸、3ジスルフィド結合）、Cucurbida maximaトリプシンインヒビター領域（31アミノ酸、3ジスルフィド結合）、グアニリン（14アミノ酸、2ジスルフィド結合）に関連した領域、グラム陰性菌（18アミノ酸、3ジスルフィド結合）からの耐熱性エンテロトキシンIAに関連した領域、EGF領域（50アミノ酸、3ジスルフィド結合）、クリングル領域（60アミノ酸、3ジスルフィド結合）、菌類の炭水化物結合領域（35アミノ酸、2ジスルフィド結合）、エンドセリン領域（１８アミノ酸、２ジスルフィド結合）およびストレプトコッカス（Streptococcal）G IgG結合領域（35アミノ酸、ジスルフィド結合はない）。小さい細胞内scaffold領域の例は、SH2、SH3およびEVH領域を含む。通常、細胞内または細胞外のいかなるモジュラ領域も使われることができる。
【０１５７】
scaffold領域を評価するための典型的な基準は、以下を含むことができる：（１）アミノ酸配列、（２）いくつかの相同的領域の配列、（３）三次元構造、および／または（４）pH、温度、塩分、有機溶剤、オキシダント濃度の範囲以上の安定性データ。一つの実施形態において、scaffold領域は、小さい、安定なタンパク質領域、例えば、100、70、50、40または30アミノ酸より少ないタンパク質である。領域は、一つ以上のジスルフィド結合を含むことができ、または、金属（例えば、亜鉛）をキレート化することができる。
【０１５８】
さらに他の結合剤は、ペプチド、例えば、30、25、24、20、18、15、または12アミノ酸より少ないアミノ酸配列を有するタンパク質に基づく。ペプチドは、より大きなタンパク質、しかし、典型的には、ＩＬ−１３、例えば、本願明細書において記載されているエピトープに、独立して結合することができる領域に組み込まれることができる。ペプチドは、ファージ・ディスプレイによって確認されることができる。US 20040071705参照。
【０１５９】
結合剤は、非ペプチド結合および他の化学修飾を含むことができる。例えば、結合剤の一部または全体は、ペプチド疑似体（peptidomimetic）、例えば、ペプトイド（peptoid）として合成されることができる。（例えば、Simonら（1992）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89：9367−71 およびHorwell （1995）Trends Biotechnol. 13：132−4  参照）結合剤は、一つ以上の（例えば、全ての）非加水分解性結合を含むことができる。多くの非加水分解性ペプチド結合は、このような結合を含んでいるペプチドの合成のための手順とともに、その分野において知られている。典型的な非加水分解性結合は、−−[CH2NH]−− 還元されたアミド・ペプチド結合、−−[COCH2]−−ケトメチレン・ペプチド結合、−−[CH（CN）NH]−−（シアノメチレン）アミノ・ペプチド結合、−−[CH2CH（OH）]−−ヒドロキシエチレン・ペプチド結合、−−[CH2O]−−ペプチド結合−、および、−−[CH2S]−− チオメチレン・ペプチド結合を含む。（例えば、U.S. Pat. No. 6、172、043参照）。
【０１６０】
他の実施形態において、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、リポカリン（例えば、ヒト・リポカリンscaffold）から誘導される。
【０１６１】
可溶性受容体
ＩＬ−１３またはＩＬ−４受容体または修飾された拮抗的なサイトカインの可溶性の形態は、単独で、または、機能的に第２の部分、例えば、免疫グロブリンＦｃ領域、血清アルブミン、PEG化、GST、Lex−AまたはＭＢＰポリペプチド配列に結合（例えば、化学結合、遺伝子またはポリペプチド融合、非共有結合またはその他によって）されて用いられることができる。本願明細書で用いられるとき、「融合タンパク質」は、２以上の操作可能に結合された、例えば、リンクされた部分（例えば、タンパク質部分）を含んでいるタンパク質のことをいう。典型的には、その部分は、共有結合性に結合する。その部分は、直接連結物でありえるか、またはスペーサまたはリンカーを介して接続されることができる。
【０１６２】
融合タンパク質は、さらに、第１の部分を第２の部分に結合しているリンカー配列を含むことができる。例えば、融合タンパク質は、例えば、アミノ酸の長さで、約4~20のペプチド・リンカーより好ましくは、5~10のペプチド・リンカーを含むことができ、ペプチド・リンカーは、長さとして8アミノ酸である。ペプチド・リンカーのアミノ酸の各々は、Gly、Ser、Asn、ThrおよびAlaからなる群から選択され、；ペプチド・リンカーは、Gly−Serセリン要素を含む。他の実施形態において、融合タンパク質はペプチド・リンカーを含み、そして、ペプチド・リンカーは、である式（Ser−Gly−Gly−Gly−Gly）yを有する配列（yは、1、2、3、4、5、6、7または8）を含む。
【０１６３】
他の実施形態において、付加的なアミノ酸配列は、発現、検出および／または単離または精製を容易にするために、融合タンパク質のＮまたはＣ末端に加えられることができる。例えば、レセプタ融合タンパク質は、一つ以上の付加的な部分、例えば、GST、His6 tag、FLAG tag、に結合されることができる。例えば、融合タンパク質は、融合タンパク質配列がＧＳＴ（すなわち、グルタチオンＳトランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合する融合タンパク質である、ＧＳＴ融合タンパク質にさらに結合されることができる。このような融合タンパク質は、レセプタ融合タンパク質の精製を容易にすることができる。
【０１６４】
もう一つの形態において、融合タンパク質は、そのＮ末端基で非相同的なシグナル配列（すなわち、レセプタ核酸によってコードされるポリペプチドに存在しないポリペプチド配列）を含む。例えば、天然のレセプタ・シグナル配列は、取り除かれることができて、他のタンパク質からシグナル配列と置き換えられることができる。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物の宿主細胞）において、レセプタの発現および／または分泌は、非相同的なのシグナル配列を用いることにより増加させることができる。
【０１６５】
本発明のキメラまたは融合タンパク質は、標準組換えＤＮＡ技術によって製造されることができる。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片は、慣用の技術、例えば、ライゲーションのためのブラント・エンド化（blunt−ended）またはスタジャー・エンド化（stagger−ended）された末端、適切な末端を提供するための制限酵素分解、適切な付着末端のfilling−in、望ましくない結合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、および、酵素的なライゲーションを用いる慣用の技術にしたがって、一緒にフレーム中にライゲートされる。もう一つの実施形態において、融合遺伝子は、自動ＤＮＡシンセサイザーを含む慣用技術によって合成することができる。あるいは、遺伝子断片のＰＣＲ増幅は、その後、キメラ遺伝子配列を生成するためにアニールまたは再増幅されることができる２つの連続的な遺伝子断片の間に補完的な突出部（overhangs）を生じさせるアンカー・プライマーを使用して行われることができる。（例えば、Ausubelら（eds.）Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons、1992参照）さらに、融合部分（例えば、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする多くの発現ベクターは市販されている。核酸をコードしている受容体は、融合部分が免疫グロブリン・タンパク質にフレーム中で連結されるように、このような発現ベクターにクローンされることができる。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、オリゴマー、例えば、ダイマーまたはトリマーとして存在する。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、受容体・ポリペプチド部分は、サイトカインへの受容体・ポリペプチドのより高い結合親和性（非変異の配列と対比して）をもたらす、自然に生じる受容体配列（ワイルドタイプ）の突然変異を有する変異体受容体・ポリペプチドとして提供されている。
【０１６８】
他の実施形態において、付加的なアミノ酸配列は、発現、立体的柔軟性、検出および／または単離または精製を容易にするために、融合タンパク質のＮまたはＣ末端に加えられることができる。第２のポリペプチドは、好ましくは、可溶性である。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、連結されたポリペプチドの半減期（例えば、血清半減期）を促進する。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のＢＭＰ−１０受容体・ポリペプチドとの融合ポリペプチドの結合を促進する配列を含む。実施形態において、第２のポリペプチドは、少なくとも免疫グロブリン・ポリペプチドの領域を含む。免疫グロブリン融合ポリペプチドは、公知技術であり、例えば、U.S. Pat. Nos. 5、516、964；5、225、538；5、428、130；5、514、582；5、714、147；および 5、455、165に記載されている。例えば、ＢＭＰ−１０受容体またはＢＭＰ−１０拮抗的なプロペプチドの可溶性の形態は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む、さまざまなアイソタイプの重鎖定常領域に融合することができる。典型的には、融合タンパク質は、ヒトＢＭＰ−１０受容体の細胞外領域またはＢＭＰ−１０プロペプチド（またはそれに相同的な配列）、および、例えば、融合させた、ヒト免疫グロブリンＦｃ鎖、例えば、ヒトＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ２またはその変異体））を含むことができる。
【０１６９】
Ｆｃ配列は、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体結合および／または補体活性を減らすために、一つ以上のアミノ酸で変異させることができる。抗体の定常領域を変異させる方法は、公知技術である。変更された機能、例えば、細胞上のＦｃＲ、または、補体のC1成分のような、エフェクター・リガンドへの変更された親和性を有する抗体は、異なったアミノ酸で、抗体の定常領域の少なくとも一つのアミノ酸残基を異なる残基で置き換えることによって製造されることができる。（例えば、EP 388、151 A1、U.S. Pat. No. 5、624、821 および U.S. Pat. No. 5、648、260参照）変異の同様のタイプは、もしネズミまたは他の種に適用する場合には、免疫グロブリンは、これらの機能を減らすかまたは消失することが説明される。特定の残基をその側鎖上の適当な機能を有する残基に置き換えることによって、または、例えば、グルタミン酸塩またはアスパラギン酸塩のような、帯電官能基、または、例えば、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンのような、おそらく芳香族無極性残基（例えばU.S. Pat. No. 5、624、821参照）を導くことによって、抗体（例えば、ＦｃＲ（例えば、ＦｃγR1）へのIgG、例えば、ヒトIgG）のＦｃ領域の親和性、または、C1q結合のの親和性を変更することが可能である。（例えば、U.S. Pat. No. 5、624、821参照）
【０１７０】
実施形態において、第２のポリペプチドは、野生型免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の中のエフェクター機能よりも少ないエフェクター機能を有する。Ｆｃエフェクター機能は、例えば、Ｆｃ受容体結合、補体の固定化およびＴ細胞枯渇活性（例えば、U.S. Pat. No. 6、136、310参照）を含む。Ｔ細胞枯渇活性、Ｆｃエフェクター機能および抗体安定性を分析するための方法は、公知技術である。一つの実施形態において、第２のポリペプチドは、Ｆｃ受容体に対して低いか検出可能でない親和性を有する。さらなる実施形態において、第２のポリペプチドは、補体タンパク質C1qに対して低いか検出可能でない親和性を有する。
【０１７１】
本願明細書において記載されている抗体分子および可溶性受容体または融合タンパク質は、その中に一つ以上の他の分子存在物、例えば、特に、抗体（例えば、二重特異性またはマルチ特異性の抗体）、毒素、ラジオアイソトープ、細胞障害性または細胞増殖抑制性の試薬に機能的に結合（例えば、化学結合、遺伝子の融合、非共有結合またはその他によって）されることができることが理解されよう。
【０１７２】
核酸アンタゴニスト
さらにもう一つの実施形態において、アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードしている核酸の発現を阻害する。このようなアンタゴニストの例は、核酸分子、例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコード化する核酸にハイブリダイズする、アンチセンス分子、リボザイム、ＲＮＡi、トリプルヘリックス分子、または、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４ＲのｍＲＮＡの発現を阻害または減少する転写制御領域を含む。
【０１７３】
実施形態において、核酸アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードする内因性遺伝子の発現を減少させるために使用した。一つの実施形態において、核酸アンタゴニストは、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコード化しているｍＲＮＡを標的とするsiＲＮＡである。拮抗的な核酸の他のタイプ、例えば、ｄｓＲＮＡ、リボザイム、トリプルヘリックス形成剤またはアンチセンス核酸も、用いられることができる。したがって、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、または、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードしている核酸分子への核酸阻害剤、例えば、アンチセンス、ＲＮＡiである単離された核酸分子が提供される。
【０１７４】
「アンチセンス」核酸は、例えば、タンパク質をコードしている「センス」核酸と相補的、例えば、二本鎖のｃＤＮＡ分子のコーディング鎖と相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチド配列を含むことができる。アンチセンス核酸は、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードする鎖の全体、または、その部分だけに相補的であることができる。もう一つの実施形態において、アンチセンス核酸分子は、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコードする核酸配列のコード鎖の「非コード領域」（例えば、5’および3’の非翻訳領域）へのアンチセンスである。アンチセンス試薬は、例えば、約8から約80の核酸塩基（すなわち、約8から約80のヌクレオチド）、例えば、約8から約50の核酸塩基、または、約12〜約30の核酸塩基を含むことができる。アンチセンス化合物は、リボザイム、外部のガイド配列（EGS）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、および、標的核酸にハイブリダイズして、その発現を調整する短い触媒ＲＮＡまたは触媒オリゴヌクレオチドを含む。アンチセンス化合物は、標的遺伝子の配列と相補的である少なくとも8つの連続的な核酸塩基の範囲を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズ可能な標的核酸配列に100％相補的である必要はない。オリゴヌクレオチドの標的への結合が有用性の低下を引き起こして標的分子の通常の機能を阻害するときに、オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズ可能であり、そして、特異的な結合が要求される条件、すなわち、インビボ分析または治療的な処置の場合、または、インビトロ分析の場合における生理学的条件下、分析が実行される条件下で、非標的配列へのオリゴヌクレオチドの非特異的な結合を回避するために十分な程度の相補性がある。
【０１７５】
ｍＲＮＡを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、ｍＲＮＡの通常機能の一つ以上を妨げることができる。妨げられるｍＲＮＡの機能は、すべての鍵となる機能、例えば、タンパク質翻訳部位へのＲＮＡの移行、ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、一つ以上のｍＲＮＡ種を産生するＲＮＡのスプライシング、および、ＲＮＡによって係合することができる触媒活性を含む。特定のタンパク質をＲＮＡに結合することは、ＲＮＡへのアンチセンス・オリゴヌクレオチド・ハイブリダイゼーションによっても妨げられることができる。
【０１７６】
典型的なアンチセンス化合物は、特異的に標的核酸、例えば、ＢＭＰ−１０／ＢＭＰ−１０受容体をコードしているｍＲＮＡにハイブリダイズするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む。相補的な領域は、約８〜約８０の間の核酸塩基に伸ばされることができる。化合物は、一つ以上の改変された核酸塩基を含むことができる。改変された核酸塩基は、例えば、５置換ピリミジン、例えば、5−ヨードウラシル、5−ヨードシトシンおよびC5−プロピニルピリミジン、例えばC5−プロピニルシトシンおよびC5−プロピニルウラシルのを含むことができる。他の適切に改変された核酸塩基は、N4−（C1−C12）アルキルアミノシトシンおよびN4、N4−（C1−C12）ジアルキルアミノシトシンを含む。改変された核酸塩基は、また、7−置換−8−アザ−7−ジアザプリンおよび7−置換−7−ジアザプリン、例えば、7−ヨウ化−7−ジアザプリン、7−シアノ−7−ジアザプリン、7−アミノカルボニル−7−ジアザプリンを含むこともできる。これらの例は、6−アミノ−7−ヨウ化−7−ジアザプリン、6−アミノ−7−シアノ−7−ジアザプリン、6−アミノ−7−アミノカルボニル−7−デアザプリン、2−アミノ−6−ヒドロキシ−7−ヨウ化−7−デアザプリン、2−アミノ−6−ヒドロキシ−7−シアノ−7−ジアザプリンおよび2−アミノ−6−ヒドロキシ−7−アミノカルボニル−7−ジアザプリンを含む。さらに、N6メチルアミノアデニン、およびN6、N6−ジメチルアミノアデニンを含む、N6 −（C1−C12）アルキル・アミノプリンおよびN6、N6−（C1−C12）ジアルキル・アミノプリンもまた、適切に改変された核酸塩基である。同様に、例えば、6−チオグアニンを含む他の６置換プリンは、適切に改変された核酸塩基を構成することができる。他の適切な核酸塩基は、2−チオウラシル、8−ブロモアデニン、8−ブロモグアニン、2−フルオロアデニンおよび2−フルオログアニンを含む。上述した改変した核酸塩基のいずれかの誘導体も適切である。前述の化合物のいずれかの置換基は、C1−C30アルケニル、C2−C30アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ハロ、アミノ、アミド、ニトロ、チオ、スルホニル、カルボキシル、アルコキシル基、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、および、そのようなものを含むことができる。核酸試薬の他のタイプの開示も利用可能である。例えば、U.S. Patent Nos. 4、987、071;. 5、116、742；and 5、093、246；Woolfら（1992）Proc Natl Acad Sci USA；Antisense RNA and DNA、D.A. Melton、Ed.、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、N.Y. （1988）；89：7305−9；Haselhoff and Gerlach （1988）Nature 334：585−59；Helene、C. （1991）Anticancer Drug Des. 6：569−84；Helene （1992）Ann. N.Y. Acad. Sci. 660：27−36；および Maher （1992）Bioassays 14：807−15.参照。
【０１７７】
本発明のアンチセンス核酸分子は、被検者（例えば、組織部位への直接注射によって）に典型的に投与さられるか、または、タンパク質の発現を阻害することにより、例えば、転写および／または翻訳を阻害することにより、ＢＭＰ−１０／ＢＭＰ−１０受容体タンパク質をコードする細胞性ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにハイブリダイズまたは結合するようにin situに発生する。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択される細胞を標的とするために変異され、それから全身的に投与されることができる。全身投与のために、例えば、細胞表面受容体または抗原と結合するペプチドまたは抗体にアンチセンス核酸分子を結合することによって、選択された細胞表面に発現される受容体または抗原に特異的に結合するように、アンチセンス分子は変異されることができる。アンチセンス核酸分子は、本願明細書において記載されているベクターを使用している細胞に伝達されることもできる。アンチセンス分子の充分な細胞内濃度を達成するために、アンチセンス核酸分子が強いpolIIまたはpol IIIプロモータの制御下に配置されるベクター構造物が好ましい。
【０１７８】
さらにもう一つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子である。αアノマー核酸分子は、通常のβユニットと反対に、鎖がそれぞれ平行しており、相補的ＲＮＡとともに、特定の二重鎖ハイブリッドを形成する。（Gaultierら（1987）Nucleic Acids. Res. 15：6625−6641）アンチセンス核酸分子は、2´−o−メチル・リボヌクレオチド（Inoueら（1987）Nucleic Acids Res. 15：6131−6148）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡの類似体（Inoueら（1987）FEBS Lett. 215：327−330）.からなることもできる。
【０１７９】
siＲＮＡsは、選択的に突出部を含む小さい二重鎖ＲＮＡ（dsＲＮＡ）である。例えば、siＲＮＡの二重領域は、18~25のヌクレオチドの長さ、例えば、約19、20、21、22、23、または24ヌクレオチドの長さである。典型的には、siＲＮＡ配列は、正確に標的ｍＲＮＡに相補的である。dsＲＮＡおよび特にsiＲＮＡは、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）の遺伝子発現を静まらせるために用いられることができる。siＲＮＡも29−塩基対ステム、および、2−ヌクレオチドの3’突出部を有する短いヘアピンＲＮＡ（shＲＮＡ）を含む。例えば、Clemensら（2000）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97：6499−6503；Billyら（2001）Proc. Natl. Sci. USA 98：14428−14433；Elbashirら（2001）Nature. 411：494−8；Yangら（2002）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99：9942−9947；Siolasら（2005）、Nat. Biotechnol. 23（2）：227−31；20040086884；U.S. 20030166282；20030143204；20040038278；および 20030224432参照。
【０１８０】
さらにもう一つ実施形態において、本発明のアンチセンス核酸は、リボザイムである。ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒをコード化する核酸に特異性を有するリボザイムは、本願明細書において開示される、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３ＲまたはＩＬ−４またはＩＬ−４ＲのｃＤＮＡのヌクレオチド配列に相補的な一つ以上の配列、および、ｍＲＮＡの裂開のための役割を果たす公知の触媒配列を有する配列を含むことができる。（U.S. Pat. No. 5、093、246 またはHaselhoff and Gerlach （1988）Nature 334：585−591参照）例えば、Tetrahymena L−19 IVS ＲＮＡの誘導体は、活性部位のヌクレオチド配列が、ＢＭＰ−１０／ＢＭＰ−１０受容体をコードするｍＲＮＡにおいて切断される核酸配列に相補的であるように構築されることができる。例えば、CechらU.S. Patent No. 4、987、071；および CechらU.S. Patent No. 5、116、742.参照。とりわけ、ＢＭＰ−１０／ＢＭＰ−１０受容体ｍＲＮＡは、特定のリボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡをＲＮＡ分子のプールから選択するために用いられることができる。例えば、Bartel、D. and Szostak、J.W. （1993）Science 261：1411−1418.参照。
【０１８１】
ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、またはＩＬ−４、または、ＩＬ−４Ｒの遺伝子発現は、標的細胞におけるＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、またはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒ遺伝子の転写を防止するトリプルヘリックス構造を形成するために、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、またはＩＬ−４、または、ＩＬ−４Ｒの制御領域（例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、またはＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒのプロモータおよび／またはエンハンサ）に相補的な核酸配列をターゲティングすることによって阻害されることができる。一般にHelene、C. （1991）Anticancer Drug Des. 6：569−84；Helene、C. i （1992）Ann. N.Y. Acad. Sci. 660：27−36；および Maher、L.J. （1992）Bioassays 14：807−15.参照。トリプルヘリックス形成のために標的とされることができる潜在的配列は、いわゆる「スイッチバック」核酸分子をつくることによって増加することができる。スイッチバック分子は、二重鎖の一つにおいてプリンまたはピリミジンのいずれかの大きなストレッチを存在させる必要性を除去し、二重鎖の最初の一つの鎖による塩基対、そして、それから、もう一つのというように、交互に5’−3’、3’−5’になる方法において合成される。
【０１８２】
本発明は、また、検出可能的に標識されたオリゴヌクレオチドプライマーおよびプローブ分子を提供する。典型的には、このような標識は、化学発光で、蛍光で、放射能または比色によるものである。
【０１８３】
ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒ、または、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒ核酸分子は、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは溶解性を改良するために、塩基部分、糖鎖部分またはリン酸塩主鎖において改変されることができる。改変による合成オリゴヌクレオチドの非限定的な例については、Toulme（2001）Nature Biotech. 19：17 and Fariaら（2001）Nature Biotech. 19：40−44参照。このようなホスホラミダイト・オリゴヌクレオチドは、有効なアンチセンス試薬でありえる。
【０１８４】
例えば、核酸分子のデオキシリボース・リン酸塩の主鎖は、ペプチド核酸を生成するために変更されることができる。（Hyrup B.ら（1996）Bioorganic & Medicinal Chemistry 4： 5−23参照）. 本願明細書において使用されるとき、「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」という用語は、核酸の疑似体、例えば、デオキシリボース・リン酸塩の主鎖が、偽ペプチド主鎖に置き換えられ、単に４つの天然の核酸塩基のみが維持されるＤＮＡ疑似体を指す。ＰＮＡの中立な主鎖は、低いイオン強度の状態の下で、ＤＮＡおよびＲＮＡに特異的なハイブリダイゼーションを許すことができる。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Hyrup B.ら（1996）前掲 and Perry−O’KeefeらProc. Natl. Acad. Sci. 93： 14670−675において開示されるように、標準固相ペプチド合成プロトコルを使用して実行されることができる。
【０１８５】
ＰＮＡｓが、治療および診断の適用で使われることができる。例えば、ＰＮＡｓは、例えば、転写または翻訳の停止を誘発するかまたは複製を阻害することによる遺伝子発現の配列特異的な調節のためのアンチセンスまたはアンチジーン試薬として使われることができる。核酸分子のPNAsは、遺伝子の単一塩基対突然変異の分析（例えば、ＰＮＡに誘導されたＰＣＲ固定によって）において、他の酵素（例えば、S1 nucleases （Hyrup B.ら（1996）前掲））と併用して使われるときに、「人工制限酵素」として、または、ＤＮＡ塩基配列決定またはハイブリダイゼーションのためのプローブまたはプライマーとして使われることもできる。（Hyrup B.ら（1996）前掲；Perry−O’Keefe 前掲）
【０１８６】
他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の追加の群（例えば、インビボで宿主細胞受容体を標的とするために）、または、細胞膜（例えば、Letsingerら（1989）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86：6553−6556；Lemaitreら（1987）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84：648−652；W088／09810参照）または血液脳関門（例えば、W0 89／10134参照）.の輸送を容易にしている試薬を含むことができる。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションを起動する裂開試薬（例えば、Krolら（1988）Bio−Techniques 6：958−976参照）または挿入剤（例えばZon （1988）Pharm. Res. 5：539−549参照）によって改変されることができる。この目的で、オリゴヌクレオチドは、他の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション起動の架橋剤、輸送因子またはハイブリダイゼーション起動の裂開試薬）に接合されることができる。
【０１８７】
結合剤の生産
いくつかの抗体分子、例えば、Ｆａｂまたは結合剤は、細菌細胞、例えば、大腸菌細胞において生産されることができる。例えば、Ｆａｂがディスプレイ存在物とバクテリオファージ・タンパク質（またはその断片）の間に抑制可能な終止コドンを含むファージ・ディスプレイベクターの配列によってコードされる場合、ベクター核酸は終止コドンを抑制することができない細菌細胞に伝達されることができる。この場合、Ｆａｂは、gene III タンパク質に融合せず、周辺質および／または培地に分泌される。
【０１８８】
抗体分子が、真核細胞において生産されることも可能である。一つの実施形態において、抗体（例えば、scＦｖのもの）は、ピチア属（例えば、Powersら（2001）J Immunol Methods. 251：123−35参照）、ハンセヌラ属、または、サッカロマイセス属のような酵母細胞において発現される。
【０１８９】
一つの実施形態において、抗体分子が、哺乳動物細胞において生産される。クローン抗体またはその抗原結合性断片を発現するための典型的な哺乳動物の宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵母細胞（CHO細胞）（Urlaub and Chasin （1980）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77：4216−4220に記載されるdhfr− CHO 細胞を含み、Kaufman and Sharp （1982）Mol. Biol. 159：601−621に記載される、DHFR選択マーカーが使用される。）、リンパ球性セルライン、例えば、NS0骨髄腫細胞およびSP2細胞、COS細胞、および、トランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳類からの細胞を含む。例えば、細胞は、乳房上皮細胞である。
【０１９０】
抗体分子をコードしている核酸配列に加えて、組換え発現ベクターは、付加的な配列、例えば、宿主細胞における複製を制御する配列（例えば、複製開始点）および選択可能な標識遺伝子を担持することができる。選択可能な標識遺伝子は、ベクターが導かれた宿主細胞の選択を容易にする（例えば、U.S. Patents Nos. 4、399、216、4、634、665 および 5、179、017参照）。例えば、典型的には、選択可能な標識遺伝子は、ベクターが導かれた宿主細胞に、耐薬物抵抗性、例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートを与える。
【０１９１】
抗体分子の組換え発現のための具体的なシステムにおいて、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードしている組換え発現ベクターは、第三リン酸カルシウムによって媒介される形質導入によってdhfr−CHO細胞に導入される。組換え発現ベクターの中で、抗体の重および軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高レベルを引き起こすために、エンハンサ／プロモータ調節エレメント（例えば、SV40、CMV、アデノウイルスおよびそれと似たものに由来して、例えば、CMVエンハンサ／AdMLPプロモータ制御要素、または、SV40エンハンサ／AdMLPプロモータ制御エレメント）に、それぞれ操作可能に結合される。組換え発現ベクターも、DHFR遺伝子を担持し、それは、メトトレキサート選択／増幅を使用することにより、そのベクターにより形質転換されたCHO細胞の選択を可能にする。選択された形質転換宿主細胞は、抗体も重および軽鎖の発現を可能にするために培養され、そして、完全な抗体は培地から回収される。標準分子生物学技術は、組換え発現ベクターを準備し、宿主細胞を形質転換させて、形質転換体を選択して、宿主細胞を培養して、培養溶媒から抗体分子を回収するために用いられることができる。例えば、いくつかの抗体分子は、Protein AまたはProtein G結合マトリックスを有するアフィニティークロマトグラフィによって単離されることができる。
【０１９２】
Ｆｃ領域を含む抗体分子のために、抗体産生システムは、好ましくは、Ｆｃ領域がグリコシル化される抗体を合成する。例えば、IgG分子のＦｃ領域は、CH2領域のアスパラギン297でグリコシル化される。このアスパラギンは、Biantennary−タイプのオリゴ糖による改変のための部位である。このグリコシル化がＦｃ受容体および補体C1qによって伝達されるエフェクター機能のために必要とされることが証明された（Burton and Woof （1992）Adv. Immunol. 51：1−84；Jefferisら（1998）Immunol. Rev. 163：59−76）.。一つの実施形態において、Ｆｃ領域が、適切にアスパラギン297に対応する残基をグリコシル化する哺乳類の発現系において生産される。Ｆｃ領域は、他の真核生物の翻訳後修飾を含むこともできる。
【０１９３】
抗体分子が、トランスジェニック動物によって生産されることができる。例えば、U.S. Patent No. 5、849、992は、トランスジェニック哺乳類の乳腺における抗体を発現する方法を開示する。ミルクに特異的なプロモータ、抗体分子をコードする核酸、および、分泌のためのシグナル配列を含む導入遺伝子が構築される。このようなトランスジェニック哺乳類である雌によって産生されるミルクは、そこに分泌され、目的の抗体を含む。抗体分子はミルクから精製され、または、いくつかの応用のために、直接使われる。
【０１９４】
結合剤の特徴
結合剤の結合特性は、いかなる方法によっても、例えば、以下の方法の内の１つにより、測定されることができる：BIACORTM分析、固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）、Ｘ線結晶構造解析、配列分析および突然変異誘起スキャニング。一つ以上のＩＬ−１３関連の活性を中和および／または阻害するタンパク質の能力は、以下の方法で測定されることができる：ＩＬ−１３に依存するセルライン、例えば、TFI、の増殖を測定するための分析；ＩＬ−１３によって媒介されるポリペプチドの発現を測定するための分析、例えば、ＣＤ２３の発現のフローサイトメトリー解析；下流のシグナル分子（例えば、ＳＴＡＴ６）の活性を評価する分析；テネイシンの生産を評価する分析；関連する動物モデル、例えば、カニクイザルにおいて喘息を予防するために本願明細書において記載されている抗体の効率をテストする分析、および、他の分析。ＩＬ−１３結合剤、特にＩＬ−１３抗体分子は、これらの分析の一つ以上において、統計的に有意な効果を有することができる。典型的な結合特性の分析は、以下を含む。
【０１９５】
ＩＬ−１３またはＩＬ−４結合剤および標的（例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−４）の結合相互作用は、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析されることができる。SPRまたはBiomolecular Interaction Analysis（BIA）は、反応体のいずれにも標識をつけずに、リアルタイムで生物特異性相互作用を検出する。ＢＩＡチップの結合表面の塊の変化（結合現象を表す）は、表面の近くでの光の屈折率の変化という結果になる。屈折力の変化は検出可能な信号を生成し、そして、それは生体分子間のリアルタイム反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用する方法は、例えば、U.S. Patent No. 5、641、640；Raether （1988）Surface Plasmons Springer Verlag；Sjolander and Urbaniczky （1991）Anal. Chem. 63：2338−2345；Szaboら（1995）Curr. Opin. Struct. Biol. 5：699−705 に記載され、オンラインによる材料の提供は、BIAcore International AB （Uppsala、Sweden）.による。
【０１９６】
ＳＰＲからの情報は、平衡解離定数（Ｋｄ）、および、分子を標的に結合するためのKon および Ｋｏｆｆを含む速度パラメータの正確および定量的な測定を提供するために用いられることができる。このようなデータは、異なる分子を比較するために用いることができる。ＳＰＲからの情報は、構造活性相関（ＳＡＲ）を開発するために用いられることもできる。例えば、異なる抗体分子の動的および平衡な結合パラメータが、評価されることができる。
特定の位置で異なるアミノ酸が、特定の結合パラメータ、例えば、高親和性および遅いKoffに関連があることが確認されることができる。この情報は、構造モデリング（例えば、ホモロジ・モデリング、エネルギー極小化またはＸ線結晶構造解析またはＮＭＲによる構造決定を使用して）と組み合わせられることができる。その結果、タンパク質とその標的との物理的相互作用の理解は、公式化されることができて、他の設計プロセスを導くために用いることができる。
【０１９７】
呼吸障害
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、これに限定されるものではないが、喘息（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息（例えば、より幼い小児における、例えば、感染により、例えば、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）により））、気管支炎（例えば、慢性気管支炎）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（例えば、気腫（例えば、タバコによって誘発された気腫）、気道炎症、好酸球増加症、繊維症および過剰な粘液生産、例えば、嚢胞性繊維症、肺線維症およびアレルギー性鼻炎を含んでいる疾患を含む呼吸障害を治療または予防するために用いられることができる。例えば、ＩＬ−１３結合剤（例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子）は、疾患を治療または予防するか、または疾患の少なくとも一つの症状を改善するのに有効な量において投与されることができる。
【０１９８】
喘息は、無数の状態、例えば、アレルゲンの吸入、上気道または耳の感染の存在などによって誘発されることができる （Opperwall （2003）Nurs. Clin. North Am. 38：697−711）。
アレルギー性喘息は、様々な特異的および非特異的な刺激への気道応答性亢進（ＡＨＲ）、高い血清免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）、過剰な気道粘液生産、水腫および気管支上皮損傷（Wills−Karp、前掲）によって特徴づけられる。アレルゲンが最も初期の気道反応を引き起こすときに、アレルギー性喘息は始まり、そして、その後、数時間後に後発性遅延相気道反応（ＬＡＲ）がしばしば続く （Hendersonら（2000）J. Immunol. 164：1086−95）。
ＬＡＲの間、気道壁および気管支流体の全体にわたって、好酸球、リンパ球およびマクロファージの流入がある（Hendersonら、前掲）。肺好酸球増加症は、アレルギー性喘息の特質で、呼吸上皮への損傷の多くの原因となる（Liら（1999）J. Immunol. 162：2477−87）。
【０１９９】
ＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞は、喘息に関連した慢性炎にとって重要である（Hendersonら、前掲）。いくつかの調査は、２型Ｔヘルパー（Ｔｈ２）細胞に対するＣＤ４＋細胞の関与および２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３）の次の生産がＡＨＲに至るアレルギーの炎症反応において重要であることを示した。（Tomkinsonら（2001）J. Immunol. 166：5792−5800、及びそこ引用される参考文献）.
第一に、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ネズミ・モデルのアレルギーによって誘発された喘息のために必要なことが示された。第二には、２型サイトカインを生産しているＣＤ４＋Ｔ細胞は、これらの動物モデルだけでなくアレルギー性喘息患者においても膨張を受ける。第三には、２型サイトカイン・レベルは、動物モデルおよび喘息患者の気道組織において増加する。第四には、Ｔｈ２サイトカインはアレルギー性喘息のネズミ・モデルの好酸球増加において中心的役割を果たすとして意味づけられ、そして、採用されて導入されたＴｈ２細胞は肺好酸球増加症と同様に肺のエオタキシン（強力な好酸球化学誘引物質）の増加したレベルと相関していた。（Wills−Karpら、前掲；Liら、前掲）。
【０２００】
本願明細書において記載されている喘息を治療または予防する方法は、外因性喘息（別名アレルギー性喘息またはアトピー型喘息）、内因性喘息（別名非アレルギー性喘息または非アトピー型喘息）または両方の組合せに対するものを含み、そして、それは混合喘息として呼ばれてきた。外因性またはアレルギー性喘息は、例えば、花粉、胞子、草または雑草のようなアレルゲン、ペットの鱗屑、塵、ダニ等が原因となる、または、関連する症状を含む。アレルゲンおよび他の刺激物が何年にもわたり様々な場所で現れるため、このような症状は、季節性喘息として呼ばれる。また、気管支喘息およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症は、外因性喘息のグループに含まれる。
【０２０１】
本願明細書において記載されている試薬によって治療または軽減されることができる疾患は、ウイルス（例えば、風邪および流感のウイルス、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）、パラミキソウイルス、ライノウイルスおよびインフルエンザウイルス）のような感染因子によって引き起こされる呼吸障害および喘息を含む。ＲＳＶ、ライノウイルスおよびインフルエンザウイルス感染は、小児において普通にあり、乳児および幼児の気道疾患の１つの主要な原因である。ウイルス性細気管支炎をもつ小児は慢性喘鳴および喘息を発病することができ、そして、それは本願明細書において記載されている方法を使用して治療されることができる。また、運動および／または冷気によって、いくつかの喘息患者にもたらされる喘息もまた含まれる。その方法は、例えば、煙、オゾン、有毒ガス、二酸化硫黄、亜酸化窒素、臭気（塗料、プラスチック、ポリウレタン類、ニス等からのイソシアネートを含む）、木、植物、または他の有機性粉末などのような、産業上および業務上の曝露と同様に、煙曝露（例えば、タバコによって誘発されたおよび産業上の煙）に関連した喘息に役立つ。その方法は、食品添加物、防腐剤または薬物に関連した喘息の症状にも役立つ。また、静喘息または咳喘息として称される喘息タイプを治療、阻害または軽減する方法もまた含まれる。
【０２０２】
本願明細書において開示される方法は、胃食道逆流（ＧＥＲＤ）に関連した喘息の治療および緩和にも有益であり、そして、それは気管支収縮を促進することができる。ＧＥＲＤは、維持される身体性の分泌物に加えて、咳を抑制し、アレルゲンおよびベッドルームの刺激物への曝露は、喘息疾患の一因となることができて、夜間喘息または夜間性喘息として集合的に称されてきた。ＧＥＲＤに関連した喘息の治療、抑制または緩和の方法において、ＧＥＲＤを治療するための試薬の薬学的に有効な量と併用して、本願明細書において記載されている、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストの薬学的に有効な量が使われることができる。これらの試薬は、これに限定はされないが、遅溶出性パントプファゾール・ナトリウム錠剤のPROTONIX（登録商標）、遅溶出性カプセルのPRＩＬOSEC（登録商標）、レベプラゾール・ナトリウム遅溶出性錠剤のACIPHEX（登録商標）、遅溶出性ランソプラゾール・カプセルのPREVACID（登録商標）のような、プロトンポンプ阻害試薬を含む。
【０２０３】
アトピー性障害とその症状
アトピー性患者からの細胞はＩＬ−１３への感受性を高めることが観察された。したがって、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、アトピー性疾患を治療または予防するのに有効な量において投与されることができる。「アトピー性」は、多くの場合、アレルギー反応を発病する遺伝的な傾向のある一群の疾病を指す。
【０２０４】
アトピー性疾患の例は、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、喘息および花粉症を含む。喘息は、間欠性呼吸器症状、例えば、気管支応答性亢進および可逆気流障害に関連した表現型的に雑多な疾患である。喘息の免疫組織学的な特徴は、例えば、気道上皮の削剥作用；基底膜の下のコラーゲン沈着、；水腫；肥満細胞活性化；および、炎症性細胞浸潤（例えば、好中球、好酸球およびリンパ球によって）を含む。気道炎症は、更に気道応答性亢進、気流制限、急性気管支収縮、粘液栓形成、気道壁リモデリングおよび他の呼吸器症状の一因となることができる。ＩＬ−１３結合剤（例えば、本願明細書において記載されている抗体分子のようなＩＬ−１３結合剤）は、これらの症状の一つ以上を緩和するのに有効な量において投与されることができる。
【０２０５】
アレルギー性鼻炎（花粉症）の症状は、かゆみ、涙、くしゃみ、鼻詰まり、および、目のかゆみを含む。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、これらの症状の一つ以上を緩和するために投与されることができる。アトピー性皮膚炎は、皮膚に影響を及ぼす慢性（持続性）疾患である。アトピー性皮膚炎に関する情報は、例えば、NIH Publication No. 03−4272から入手可能である。アトピー性皮膚炎において、皮膚は極めてかゆくなることになり、そして、赤み、膨張、ひび、透明な流体の滲出、そして最後に、外皮を生じてはげ落ちる。多くの場合に、皮膚が改善されるかまたは完全にきれいになったときに（緩解と呼ばれる）、疾患が悪くなる期間が続く（悪化または発赤拡大と呼ばれる）期間がある。アトピー性皮膚炎は、多くの場合、「湿疹」として呼ばれ、そして、それは皮膚の数種類の炎症の一般用語である。アトピー性皮膚炎は、湿疹の多くの種類の内で、最も一般的である。
アトピー性皮膚炎の例は、以下からなる：アレルギー性接触湿疹（皮膚炎：免疫系が異種として認識する物質、例えば、クリームおよびローション剤中のツタウルシ毒または特定の防腐剤に皮膚が接触したときの、赤い、かゆい、滲出する反応、）；湿疹（皮膚がアレルゲン（アレルギーを引き起こしている物質）、または、刺激物、例えば酸、清浄剤または他の化学薬品に接触したところの、赤み、かゆみ、炎症を含む局所的な反応）；異常発汗剤湿疹（かゆくて、熱い、透明な深い水疱によって特徴づけられる手掌上および足の裏の皮膚の炎症）；神経皮膚炎（ひっかかれるときに、強く刺激される局所的なかゆみ、例えば昆虫刺傷、によって引き起こされる頭部、すね、手首または前腕上の皮膚の鱗状斑）；貨幣状湿疹（最も一般的には、腕、背部、腰部およびすね上の、伸縮性の極端なかゆみのある、炎症を起こした皮膚のコイン状の班）；脂漏性湿疹（頭皮、顔、および、場合によっては体の他の部分の皮膚の黄色がかった、油のような、鱗状の斑）。さらなる特定の症状は、停滞皮膚炎、アトピー性プリーツ（デニー−モルガン層）、口唇炎、過剰線形手掌、色素過剰の眼瞼（炎症または花粉症により色彩が暗化した眼瞼）、魚鱗癬、毛孔性角化症、苔蘚化、丘疹およびじんま疹を含む。ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、これらの症状の一つ以上を緩和するために投与されることができる。
【０２０６】
アレルギー性鼻炎または他のアレルギー性疾患を治療する典型的な方法は、アレルゲンへの曝露の前、例えば、アレルゲンへの季節的な曝露の前、例えば、アレルゲンの開花の前に、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストで治療を開始することを含むことができる。このような治療は、一回以上の用量（例えば、定期的な間隔の用量）を含むことができる。
【０２０７】
癌
ＩＬ−１３およびその受容体は、少なくともいくつかの種類の癌、例えば、造血細胞に由来する癌または脳またはノイロン細胞（例えば、グリア芽細胞腫）に由来する癌の発現に関与している。例えば、可溶性のＩＬ−１３受容体またはＳＴＡＴ６欠損マウスの使用を介して、ＩＬ−１３の信号経路の遮断は、後発性腫瘍の発症、および／または、ホジキン・リンパ腫細胞系または転移性乳癌のそれぞれの成長を導く。（Trieuら（2004）Cancer Res. 64： 3271−75；Ostrand−Rosenbergら（2000）J. Immunol. 165： 6015−6019）. ＩＬ−１３Ｒを発現する癌（Husain and Puri （2003）J. Neurooncol. 65：37−48；Mintzら（2003）J. Neurooncol. 64：117−23）は、本願明細書において記載した抗ＩＬ−１３抗体によって、特異的に標的とされることができる。ＩＬ−１３アンタゴニストは、癌細胞の増殖またはその他の癌細胞の活性を阻害するために有益であることができる。癌とは、正常な成長調節の反応を失い、一般的に、対応する正常細胞に対比して、減少された制御により増殖する一つ以上の細胞をいう。
【０２０８】
ＩＬ−１３アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１３結合剤、例えば、本願明細書において記載されている抗体または抗原結合断片）が治療のために用いられることができる癌の例は、白血病、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病およびヒトＴ細胞白血病ウイルス・タイプ１（HTLV−1）形質転換Ｔ細胞；リンパ腫、例えば、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンのリンパ腫；グリア芽細胞腫；膵臓癌；腎癌；卵巣癌；AIDS−カポジ肉腫および乳癌を含む（Aspord、C.ら（2007）JEM 204：1037−1047に記載されている）。例えば、ＩＬ−１３結合剤（例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子）は、例えば、細胞増殖を減らすか、または障害の少なくとも一つの症状を緩和するために、障害を治療または予防するのに有効な量において投与されることができる。
【０２０９】
繊維症
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、炎症および繊維症、例えば、肝臓の繊維症を治療することに有効であることができる。ＩＬ−１３生産は、おそらく肝硬変に向かう肝臓炎症（例えば、ウイルス性肝炎）および肝癌の進行と相関した。（de Lallaら（2004）J. Immunol. 173：1417−1425）.繊維症は、例えば、正常組織が瘢痕組織と置き換えられるとき、発症し、そして、しばしば炎症に続く。Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎ウイルスは両方とも肝臓の線維症反応を引き起こし、そして、それは肝硬変へ進歩することができる。肝硬変は、次に、重症な合併症、例えば、肝不全または肝癌に進化することができる。本願明細書において記載したＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストを用いたＩＬ−１３の活性の遮断は、炎症および繊維症、例えば、肝疾患、特にＢおよびＣ型肝炎に関連した炎症、繊維症、肝硬変を減らすことができる。、例えば、アンタゴニストは、疾患を治療または予防するか、または炎症性および／または線維症疾患の少なくとも一つの症状を緩和するのに有効な量において投与されることができる。
【０２１０】
炎症性大腸疾患
炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）は、腸の炎症を引き起こす疾患の一般名称である。炎症性大腸疾患の２つの例は、クローン病および潰瘍性大腸炎である。ＩＬ−１３／ＳＴＡＴ６シグナル伝達が、マウス平滑筋の炎症によって誘発された過度な収縮、すなわち、炎症性大腸疾患のモデルに関係しているとわかった。（Akihoら（2002）Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282：G226−232）例えば、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、障害を治療または予防するかまたは炎症性腸疾患の少なくとも一つの症状を緩和するのに有効な量において投与されることができる。
【０２１１】
医薬組成物
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニスト（例えば、本願明細書において記載されているもの）は、インビトロ、ex vivo、または、インビボで使用されることができる。それらは、例えば、ＩＬ−１３結合剤を薬学的に受け入れられるキャリアと組み合わせることによって、医薬組成物に組み込まれることができる。このような組成物は、ＩＬ−１３結合剤およびキャリアに加えて、希釈液、充填剤、塩類、緩衝液、安定剤、可溶化剤および公知技術のさまざまな他の材料を含むことができる。薬学的に受け入れられる材料は、一般に、ＩＬ−１３結合剤の生物活性の効果を妨げない無毒性材料である。キャリアの特性は、投与ルートに依存することができる。
【０２１２】
本願明細書において記載されている医薬組成物は、他の因子、例えば、これに限定されないが、後で詳しく述べるように、他の抗サイトカイン抗体分子または他の消炎剤も含むことができる。このような更なる因子および／または試薬は、本願明細書において記載されているＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストとの相乗効果を生じる医薬組成物に含まれることができる。例えば、アレルギー性喘息の処理において、本願明細書において記載されている医薬組成物は、抗ＩＬ−４抗体分子またはアレルギー反応を減らすことが知られているの薬を含むことができる。
【０２１３】
本願明細書において記載されている医薬組成物は、他の薬学的に受け入れられるキャリアに加えて、ミセル、不溶性単層、液晶または水溶液中の薄板状層として、凝集された形の中に存在する脂質のような両親媒性試薬に、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニスト、例えば、本願明細書において記載されているもの、が組み合わされたリポソームの形であることができる。リポソーム型製剤のための適切な脂質は、これに限定されないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸、などが挙げられる。このようなリポソーム型製剤を調合する典型的な方法には、U.S. Patent Nos. 4、235、871；4、501、728；4、837、028；および 4、737、323に記載されている方法が含まれる。
【０２１４】
本願明細書において用いられるとき、「治療上有効量」という用語は、意味のある患者の利点、例えば、そのような疾患の症状の緩和、治癒または治癒速度の上昇を示すのに十分な医薬組成物または方法のそれぞれの活性成分の総量を意味する。それぞれの活性成分に適用し、単独投与するときは、その用語は、その成分のみを言う。組み合わせたものに適用する場合は、この用語は、連続または同時投与かにかかわらず、治療的効果を示す活性成分の合計量をいう。
【０２１５】
医薬組成物において使用されるＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの投与は、様々な従来方法、例えば、経口的な摂取、吸入または皮膚、皮下または静脈内注射により実施されることができる。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの治療上の有効量が、静脈内、皮膚または皮下注射によって投与されるとき、結合剤はパイロジェン・フリーの非経口的に受け入れられる水溶液として調合されることができる。このような非経口的に受け入れられるタンパク質溶液の組成物は、例えば、生理学的条件、結合剤安定性などを最適化するために、例えば、ｐＨ、等張性、安定性などの要因の視点について適用されることができる。静脈、皮膚または皮下注射のための医薬組成物は、例えば、等張溶媒、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル液注射、デキストロース注射剤、塩化ナトリウム、リンゲル液注射、乳酸塩リンゲル液注または公知の他の溶媒を含むことができる。医薬組成物は、安定剤、防腐剤、緩衝液、抗酸化剤または他の添加物を含むこともできる。
【０２１６】
医薬組成物中のＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの量は、治療されている状態の性質および重症度、および、患者が経験した以前の治療の性質に依存することができる。医薬組成物は、例えば、予防の様式で、通常の患者または症状を示さない患者に投与されることができる。主治医は、それぞれの患者を治療するＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの量を決定することができる。例えば、主治医は、アンタゴニストの低用量を投与し、患者の反応を観察することができる。最適治療効果が患者に得られるまで、アンタゴニストのより多くの用量が投与されることができ、そして、その時点で、一般的に投与量はそれ以上には増加しない。例えば、医薬は、ｋｇ体重あたり、約０．１ｍｇ〜５０ｍｇの間の抗体、例えば、ｋｇ体重あたり、約０．１ｍｇ〜５ｍｇ、または、約８ｍｇ〜５０ｍｇの抗体を含むことができる。抗体が皮下に1ヵ月につき２回よりも多くない頻度、例えば、一週おき、または毎月、投与される一つの実施形態において、組成物は、約０．７〜３．３、例えば、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．８〜１．２、１．２〜２．８または２．８〜３．３ｍｇ／ｋｇの量を含む。
【０２１７】
治療されている疾患の重症度および状態およびそれぞれの患者の潜在的な特異体質性の反応に応じて、医薬組成物を用いた治療法の期間は、変化することができる。一つの実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、例えば、1週につき１回、２４、４８、９６時間ごとに１回、または、このような間隔よりも多くない頻度で、皮下ルートを介して投与されることもできる。典型的な投与量は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲であることができる。その試薬は、例えば、２０、１０、５、または１ｍｇ／分より低い速度での静脈内点滴によって、約１〜５０ｍｇ／ｍ２または約５〜２０ｍｇ／ｍ２の用量に到達するために、投与されることができる。
【０２１８】
一つの実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの患者に対する投与は、例えば、副作用を減らすかまたは最小化するために、タンパク質の用量を変化させることことを含む。例えば、被検者は、第１の投与量、例えば、治療上有効量より少ない投与量を投与されることができる。次の間隔、例えば、少なくとも６、１２、２４、または４８時間後において、患者は、第２の投与量、例えば、第１の投与量よりも２５、５０、７５または１００％大きい投与量を投与されることができる。例えば、第２および／または比較可能な第３、４および５の投与量は、少なくとも治療上有効量の７０、８０、９０または１００％であることができる。
【０２１９】
吸入
ＩＬ−１３および／または、ＩＬ−４アンタゴニストを含む組成物は、吸入または肺到達の他の方法のために調製されることができる。本願明細書で用いられるとき、「肺組織」という用語は、他に示される場合を除き、気道のいかなる組織も指し、上下の気道の両方を含む。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、肺疾患の治療のための既存の理学療法の一つ以上と併用して投与されることができる。
【０２２０】
１つの実施形態において、ＩＬ−１３および／または、ＩＬ−４アンタゴニストは、噴霧器用に調製される。一つの実施形態において、ＩＬ−１３および／または、ＩＬ−４アンタゴニストは、凍結乾燥された形態（例えば、室温で）で保存されることができて、吸入の前に溶液において再組成されることができる。医療器具、例えば、吸入器を使用する吸入用に、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストを調製することも可能である。例えば、U.S.  6、102、035 （粉吸入器）および US 6、012、454 （乾燥粉末吸入器）参照。吸入器は、貯蔵に適しているｐＨにおいて、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストのための独立した区画、また、中和緩衝液のためのもう一つの区画、および、噴霧化の直前にＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストを中和緩衝液と組み合わせるための機構を含むことができる。一つの実施形態において、吸入器は、計量された用量の吸入器である。
【０２２１】
局所的に薬を肺気道に伝達するために用いられる３つの一般的なのシステムは、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩｓ）、計量された用量の吸入器（ＭＤＩｓ）および噴霧器を含む。ＭＤＩｓ、すなわち、吸入投与で最も普及している方法は、可溶化された形態で、または、分散剤として、薬剤を伝達するために用いられることができる。典型的には、ＭＤＩｓは、フレオン、または、装置の起動において、エアロゾル化薬剤を気道に圧入する他の比較的高い気圧噴霧器からなる。ＭＤＩｓとは異なり、ＤＰＩｓは、一般に、乾燥粉末形態の薬を肺にもたらす患者の吸気効果に完全に依存する。噴霧器は、エネルギーを液溶体に与えることによって、吸入される薬物エアゾールを形成する。フッ素化合物媒体を使用する液体換気または肺洗浄の間の薬の直接的な肺への伝達も研究された。これらの、および他の方法は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストを伝達するために用いられ得る。一つの実施形態において、例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、ポリマー、例えば、化合物の半減期を安定化または増加させるポリマーに関連している。
【０２２２】
例えば、吸入による投与のために、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、適切な噴霧剤または噴霧器を含む加圧された容器またはディスペンサからエアゾールスプレーの形で送達される。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、乾燥粒子の形態、または、液体であることができる。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストを含む粒子は、例えば、噴霧乾燥によって、電荷中和剤を有するＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの水溶液を乾燥させ、そして、乾燥粉から粒子をつくる、または、有機修飾剤の水溶液を乾燥させてた後、乾燥粉から粒子をつくることによって、調合されることができる。
【０２２３】
適切な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガス）を用いて、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、加圧パックまたは噴霧器からエアゾールスプレーの提示の形態で都合よく送達されることができる。加圧式エアゾールの場合、用量単位は、計量した量を送達するためのバルブを備えることにより測定することができる。吸入器または通気器に使用するカプセルおよびカートリッジは、粒子が調製された粒子である場合、ラクトースまたは澱粉のような適切な粉末ベースと、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストとの粉混合物を含ませて調製されることができる。調製されたまたは調製されてない化合物に加えて、例えば、１００％のＤＰＰＣまたは他の界面活性剤は、調製されたまたは調製されてない化合物の伝達および分散を促進するために、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストと混合されることができる。乾燥粒子を調合する方法は、例えば、WO 02／32406に記載されている。
【０２２４】
乾燥エーロゾル粒子のように、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、エアゾールの伝達のために、例えば、乾燥エアロゾル粒子として調製されることができ、それによって、投与後、急速に吸収されることができて、急速局所的または全身治療的な結果をもたらすことができる。投与は、投与の２分、５分、１時間または３時間以内に検出可能な活性を提供するように調整されることができる。いくつかの実施形態では、ピーク活性は、より急速に、例えば、半時間以内または１０分以内に達成されることができる。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、他の投与方法の変形剤としての使用のために、より長い生物学的半減期（例えば、PEGのようなポリマーとの結合によって）のために調製されることができ、例えば、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは肺から循環系に入り、他の器官または特定の標的器官に分配される。
【０２２５】
一つの実施形態において、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、少なくとも５％のポリペプチドの集団が下気道または深い肺に送達されるような量において送達される。深い肺は、極めて豊かな毛細管組織を有する。毛管のルーメンを肺胞気空間から切り離している呼吸膜は、非常に薄く（＜６μｍ）、極めて浸透性である。加えて、肺胞表面に沿って並んでいる液状層は、肺界面活性因子が豊富である。他の実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの組成物の少なくとも２％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％または８０％は、下気道または深い肺に送達される。これらの組織のどちらかまたは両方への伝達は、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの効果的な吸収率および高い生体利用率の結果である。一つの実施形態において、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、例えば、吸入器または噴霧器を使用しているメーターで計量された用量において提供されている。例えば、ＩＬ−１３結合剤は、少なくとも約0.02、0.1、0.5、1、1.5、2.5、10、20、40または50ｍｇ／puffまたはそれ以上の投与ユニットの形態で送達される。パーセント生体利用率は、以下の通りに算出されることができる：
【数１】
2010512402.tif 000003
【０２２６】
必ずではないが、界面活性剤のような伝達エンハンサは、更に肺到達を強化するために用いられることができる。本願明細書で使用されるとき、「界面活性剤」とは、親水および親油性部分を有するＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストをいい、それは、２つの混ざらない相の間で界面と相互作用することにより、薬の吸収を促進する。界面活性剤は、いくつかの理由、例えば、粒子の凝集の減少、マクロファージ貪食作用の減少等のため、乾燥粒子において有効である。肺界面活性因子に結合するときに、界面活性剤、例えば、ＤＰＰＣが化合物の拡散を非常に促進するので、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストのより効果的な吸収は達成されることができる。界面活性剤は、公知技術で、ホスホグリセリド、例えば、ホスファチジルコリン、Ｌ−α−ホスファチジルコリンジパルミトイル（ＤＰＰＣ）およびジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサデカノール；脂肪酸；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリオキシエチレン−９；アリルエーテル；パルミチン酸；オレイン酸；ソルビタン・トリ・オレアート（Span 85）；グリココール酸；サーファクチン；ポロキソマー；ソルビタン脂肪酸エステル；ソルビタン・トリ・オレアート；チロキサポール；およびリン脂質を含むが、これらに限定されるものではない。
【０２２７】
安定化
一つの実施形態において、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニストは、例えば、血液、血清、リンパ、気管支肺洗浄液または他の組織で、例えば、少なくとも1.5、2、5、10または50倍に循環系における安定化および／または保持を改善する部分と物質的に結合する。
【０２２８】
例えば、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ポリマー、例えば、実質的に非抗原性のポリマー、例えば、ポリアルキレン酸化物またはポリエチレンオキシドと結合することができる。適切なポリマーは、重量によって実質的に異なる。約200から約35、000（または約1、000〜約15、000および2、000〜約12、500）の範囲の分子数平均重量を有するポリマーが用いられることができる。
【０２２９】
例えば、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、水可溶性ポリマー、例えば、親水ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンに結合されることができる。ブロックコポリマーの水溶性が維持されると仮定するならば、このようなポリマーの非限定的なリストは、ポリアルキレン酸化物ホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化されたポリオール、そのコポリマーおよびそのブロックコポリマーを含む。さらなる有効なポリマーは、ポリオキシアルキレン、例えば、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー（プルロニック）；ポリメタクリレート；炭素構造単位；サッカライド・モノマーＤ−マンノース、Ｄ−およびＬ−ガラクトース、フコース、フラクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルクロン酸、シアリン酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸（例えば、ポリマンヌロン酸またはアルギン酸）、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ‐グルコースおよびノイラミン酸からなり、ホモ多糖およびヘテロ多糖、例えば、ラクトース、アミロペクチン、澱粉、ヒドロキシエチル澱粉、アミロース、デキストラン硫酸、デキストラン、デキストリン、グリコーゲン、または、酸性ムコ多糖、例えば、ヒアルウロン酸の多糖サブユニットを含む、分岐のあるまたは分岐のない多糖：糖アルコール、例えば、ポリソルビットおよびポリ・マンニトールのポリマー；ヘパリンまたはヘパランを含む。
【０２３０】
ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストおよびポリマーの接合体は、例えば、ゲル濾過またはイオン交換クロマトグラフィ、例えば、ＨＰＬＣによって、未反応の出発材料から分離されることができる。接合体の非相同の種は、同じ方法でお互いに精製される。異なる種（例えば、１または２つのＰＥＧ残基を含む）の分割も、また、未反応のアミノ酸のイオン特性の違いにより可能である。例えば、WO 96／34015参照。
【０２３１】
ＩＬ−１３およびＩＬ−４アンタゴニストの他の用途
さらにもう一つの実施形態では、本発明は、その活性を阻害するのに十分な量において、本願明細書において記載されているＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストを投与することによって、生体内のＩＬ−１３に関連した一つ以上の活性を調整（例えば、減少、中和および／または抑制）するための方法を特徴とする。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、ＩＬ−１３によって媒介される炎症反応の抑制が必要とされる被検者に投与されることもできる。これらの症状は、例えば、気道炎症、喘息、線維症、好酸球増加症および増加した粘液生産を含む。
【０２３２】
本願明細書において記載されている、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストの有効性は、例えば、豚回虫（Ascaris suum）アレルゲンにさらされるカニクイザルの気道炎症を調整するアンタゴニストの能力を評価することによって評価されることができる。ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、例えば、喘息および／またはその関連する症状を含むＩＬ−１３関連の症状を治療または防止するために、一つ以上のＩＬ−１３関連の活性を中和または阻害する、例えば、生体内のＩＬ−１３に関連する炎症を減少させるために用いることができる。
【０２３３】
一つの実施形態において、ＩＬ−１３またはＩＬ−４アンタゴニスト、またはその薬学的組成物は、併用療法において、すなわち、アレルギー性および炎症性疾患のような病的状態または障害を治療するために有効な他の医薬、例えば、治療薬と併用して投与される。この文脈における「組み合わせて」という用語は、同時に、または、順次、試薬が実質的に同時に与えられることを意味する。順次与えられる場合、第２の化合物の投与の開始において、２つの化合物のうちの第１のものは、治療部位において、有効濃度で、好ましくは、まだ検出可能である。
【０２３４】
例えば、併用療法は、ＩＬ−１３と結合し、一つ以上の付加的な治療薬、例えば、一つ以上のサイトカインおよび生育因子抑制物質、免疫抑制薬、消炎剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または、後で詳しく述べられる細胞毒性であるか細胞増殖抑制性の試薬と併用処方または併用投与される機能的なＩＬ−１３シグナル複合体の形成を妨げるＩＬ−１３結合剤（例えば、抗ＩＬ−１３結合剤を単独で、または、ＩＬ−４アンタゴニストと併用して）の一つ以上を含む。さらにまた、一つ以上のＩＬ−１３結合剤（例えば、抗ＩＬ−１３結合剤を単独で、または、ＩＬ−４アンタゴニストと併用して）は、本願明細書において記載されている治療薬のうちの２つ以上と併用して使われることができる。このような併用療法は、投与される治療薬の低い投与量を有利に利用することができ、こうして、さまざまな単独療法に関連する可能性のある毒性または合併症を回避する。さらに、本願明細書において開示される治療薬は、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３−受容体経路と異なる経路に作用し、こうして、ＩＬ−１３結合剤の効果を強化および／または相乗することが期待される。
【０２３５】
喘息または気道炎症の異なるトリガーを妨げる治療薬、例えば、アレルギー、上気道感染または耳感染症の治療において使用する治療薬は、ＩＬ−１３結合剤（例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストを単独で、または、ＩＬ−４アンタゴニストと組み合わせて）と併用して用いることができる。一つの実施形態において、ＩＬ−１３結合剤（例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストを単独で、または、ＩＬ−４アンタゴニストと組み合わせて）は、他のサイトカインまたは成長因子アンタゴニスト（例えば、可溶性の受容体、ペプチド抑制物質、小分子、付着因子）、他の標的に結合する抗体分子（例えば、他のサイトカインまたは成長因子またはそれらの受容体、または他の細胞表面分子に結合する抗体）、および抗炎症サイトカインまたはそのアゴニストのような付加的な試薬の一つ以上と、併用処方および／または併用投与されることができる。ＩＬ−１３結合剤（例えば、ＩＬ−１３アンタゴニストを単独で、または、ＩＬ−４アンタゴニストと組み合わせて）と併用して用いることができる試薬の非限定的な例としては、これに限定はされないが、吸入されたステロイド；β−アゴニスト、例えば、短時間作用性または長時間作用性β−アゴニスト；ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト；混合薬、例えば、ADVAIR（登録商標）；ＩｇＥ抑制物質抗、例えば、ＩｇＥ抗体（例えば、XOLAIR（登録商標））；ホスホジエステラーゼ抑制物質（例えば、ＰＤＥ４抑制物質）；キサンチン；抗コリン薬；肥満細胞−分解防止剤、例えば、クロモリン；ＩＬ−５抑制物質；エオタキシン／ＣＣＲ３抑制物質；および、抗ヒスタミン剤を含む。
【０２３６】
他の実施形態において、単独あるいはＩＬ−４アンタゴニストと併用される一つ以上のＩＬ−１３アンタゴニストは、一つ以上の抗炎症剤、免疫抑制薬または代謝または酵素の抑制物質によって併用処方および／または併用投与されることができる。ＩＬ−１３結合剤と併用して使われることができる薬または抑制物質の例は、これに制限されないが、以下の一つ以上が含まれる。：ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦ受容体の可溶性の断片、例えば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、75kdＴＮＦR−IgG（75kD ＴＮＦレセプタ−IgG融合タンパク質、ENBRELＴＭ））；ＴＮＦ酵素拮抗質、例えば、ＴＮＦα変換酵素（TACE）抑制物質）；ムスカリン受容体拮抗薬；TGF−Jアンタゴニスト；インターフェロンγ；パーフェニドン；化学療法剤、例えば、メトトレキサート、レフルノミドまたはシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えば、CCI−779；COX2およびcPLA2抑制物質；NSAID；免疫修飾物質；p38抑制物質、TPL−2、Mk−2およびNFRB抑制物質。
【０２３７】
ワクチン製剤
別の実施形態において、本発明は、免疫化に関連した免疫反応を修正する方法を特徴とする。ＩＬ−１３アンタゴニストは、単独で、または、ＩＬ−４アンタゴニストと併用して、ＩＬ−１３活性を阻害することによって免疫化の有効性を増加させるために用いることができる。アンタゴニストは、免疫原、例えば、ワクチンの投与、到達の前、その間、またはその後、投与されることができる。一つの実施形態において、ワクチン接種によって上昇する免疫は、例えば、細胞性免疫、例えば、癌細胞、または、ウイルスに感染している、例えば、レトロウイルスに感染している、例えば、ＨＩＶに感染している細胞に対する免疫である。一つの実施形態において、ワクチン製剤は、一つ以上のアンタゴニストおよび抗原、例えば、免疫原を含む。一つの実施形態において、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、免疫療法と組み合わせて（例えば、サワギク、ドクムギ、粉塵ダニ、およびそのようなものとの併用）投与される。他の実施形態では、例えば、それぞれの１時間、３時間、１日または２日以内に、アンタゴニストおよび免疫原は、別々に投与される。
【０２３８】
ＩＬ−１３の阻害剤は、例えば、細胞ワクチン、例えば、癌およびウイルス感染、例えば、レトロウイルス感染、例えば、ＨＩＶ感染、のような疾患に対するワクチンの効能を高めることができる。ワクチンによるＣＤ８＋細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）の誘導は、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって、可能性としてサイトカインＩＬ−１３を通して、調整される。ＩＬ−１３の抑制は、ＣＴＬ反応のワクチンの誘導を強化することが示された。（Ahlersら（2002）Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99：13020−10325）ＩＬ−１３アンタゴニストは、ワクチンと関連して、ワクチンの効能を増加させるために用いられることができる。癌およびウイルス感染（例えば、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶ）感染）は、細胞性のワクチン反応がそれらのに対して効果的である典型的な疾患である。ワクチンの有効性は、ワクチン投与時にＩＬ−１３シグナルを遮断することによって強化される。（Ahlersら（2002）Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99：13020−25）ワクチン製剤は、医薬または治療組成物の形で、被検者に投与されることができる。
【０２３９】
疾患を診断、予測、モニターする方法
ＩＬ−１３結合剤は、診断用薬として、生体外または生体内で使われることができる。１つの典型的な方法は、以下からなる：（i）ＩＬ−１３結合剤（例えば、ＩＬ−１３抗体分子）を被検者に投与すること；そして、（ii）被検者においてＩＬ−１３結合剤を検出すること。検出は、被検者におけるＩＬ−１３結合剤の位置を決定することを含むことができる。他の典型的な方法は、ＩＬ−１３結合剤をサンプル、例えば、被検者からのサンプルに接触させることを含む。サンプル中のＩＬ−１３の有無またはＩＬ−１３のレベル（定性的または定量的のいずれか）は、決定されることができる。
【０２４０】
別の実施形態において、本発明は、生体外（例えば、生体試料、例えば、組織、生検）、または、生体内（例えば、被検者の生体内イメージング）で、ＩＬ−１３の存在を検出するための診断方法を提供する。その方法は、以下からなる：（i）サンプルをＩＬ−１３結合剤に接触させること；そして、（ii）ＩＬ−１３結合剤とサンプルの複合体の形成を検出すること。この方法は、参照サンプル（例えば、コントロールサンプル）を結合剤に接触させ、同じ参照サンプルと比較して、結合剤とサンプルの間の複合体の形成の程度を決定することを含むこともできる。コントロールサンプルまたは対象と比較して、サンプルまたは対象における複合体の形成における変化、例えば、統計的に有意な変化は、サンプル中のＩＬ−１３の存在を示唆することができる。
【０２４１】
他の方法は、以下を含む：（i）ＩＬ−１３結合剤を被検者に投与すること；そして、（ii）ＩＬ−１３結合剤と被検者の間の複合体の形成を検出すること。検出は、複合体の形成の位置または時間を決定することを含むことができる。
【０２４２】
ＩＬ−１３結合剤は、結合または非結合のタンパク質の検出を容易にするために、直接または間接的に検出可能な物質で標識されることができる。好適な検出可能な物質は、さまざまな酵素、接合団、蛍光物質、発光材料および放射性物質を含む。
【０２４３】
ＩＬ−１３結合剤とＩＬ−１３の間の複合体形成は、ＩＬ−１３に結合した結合剤または非結合の結合剤を測定または視覚化することによって検出されることができる。従来の検出分析法、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または免疫組織細胞化学染色が用いられることができる。ＩＬ−１３結合剤に標識をつけることに関して、ＩＬ−１３の存在は、標識された検出可能な物質および標識のないＩＬ−１３結合剤を用いる競合イムノアッセイによって、サンプル中において分析されることができる。この分析の１つの実施形態において、生体試料、標識されたスタンダードおよびＩＬ−１３結合剤は結合され、そして、標識のない結合剤に結合した標識スタンダードの量は決定される。サンプルのＩＬ−１３の量は、ＩＬ−１３結合剤に結合した標識スタンダードの量に反比例する。
【０２４４】
喘息の診断、予後、および／またはモニターの方法
本願明細書において記載されている結合剤は、例えば、生体試料のＩＬ−１３のレベルを測定することによって喘息の経過を診断、予後、モニターする方法において使われることができる。さらに、この発見は、ＩＬ−１３シグナル伝達の新規な抑制物質の識別を可能にし、そして、それは喘息の処理においても有効である。アレルギー性および非アレルギー性喘息を診断するこのような方法は、生体試料、例えば、血清、プラズマ、気管支肺胞洗浄液、痰などのＩＬ−１３の変化（例えば、減少または増加）を検出することを含むことができる。「診断」または「診断する」は、病理学状態の有無を確認することを意味する。診断法は、被検者（ヒトまたは非ヒトの哺乳類）からの生体試料、例えば、、気管支肺胞洗浄液のＩＬ−１３ポリペプチドの試験量を決定すること、および、試験量を通常の量またはＩＬ−１３ポリペプチドの範囲（すなわち、喘息を患わないことが知られている個人からの量または範囲）と比較することを含む。特定の診断法が喘息の決定的な診断を提供することはできないが、その方法が診断を補助する陽性の表示を提供すれば十分である。
【０２４５】
喘息および／またはアトピー性疾患を予後する方法は、ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルで、ＩＬ−１３のアップレギュレーションを検出することを含むことができる。「予後」または「予後する」ことは、病理学状態の可能性のある発症および／または重症度を予測することを意味する。予後の方法は、被検者からの生体試料中のＩＬ−１３の試験量を決定して、試験量を予後の量またはＩＬ−１３の範囲（すなわち、喘息の様々な重症度をもつ個人からの量または範囲）と比較することを含む。試験サンプルのＩＬ−１３のさまざまな量は、喘息のための特定の予後と整合している。特定の予後のレベルのＩＬ−１３の量の検出は、被検者のための予後を提供する。
【０２４６】
本出願は、ＩＬ−１３のアップレギュレーションを検出することによって喘息の過程をモニターするための方法も提供する。モニター方法は、第１および第２の時刻に被検者から採取される生体試料のＩＬ−１３の試験量を決定して、総計を比較することを含む。喘息の緩解を示唆する量の減少、および、喘息および／またはアトピー性疾患の予後を示唆する量の増加とともに、第１および第２の時間の間のＩＬ−１３の量の変化は、喘息および／またはアトピー性疾患の経過の中で変化を示すことができる。このようなモニター分析法は、ＩＬ−１３に関連した障害のために治療されている患者への特定の治療的な処置（例えば、疾患減弱および／または反転）の効能を評価するためにも有効である。
【０２４７】
蛍光団、そして、発色団標識結合剤は、調合されることができる。蛍光部分は、３１０ナノメートルより長い、そして、好ましくは、４００ナノメートルより長い波長で実質的な吸収を有するように選択されることができる。様々な適切な蛍光剤および発色団は、Stryer （1968）Science、162：526 and Brand、L.ら（1972）Annual Review of Biochemistry、41：843−868によって記載されている。結合剤は、U.S. Patent Nos. 3、940、475、4、289、747、及び 4、376、110において開示される従来の手順により、蛍光発色団基で標識されることができる。上記の多くの望ましい特性を有する蛍光剤の１つの群は、キサンテン染料であり、そして、それはフルオレセインおよびローダミンを含む。蛍光化合物の他の群は、ナフチルアミンである。一旦、蛍光団または発色団について標識されると、結合剤は、例えば、蛍光顕微鏡検査法（例えば、共焦点または逆重畳積分顕微鏡）を使用して、サンプルのＩＬ−１３の存在または局在を検出するために用いることができる。
【０２４８】
組織学的解析。免疫組織細胞化学染色法は、本願明細書において記載されている結合剤を使用して実行されることができる。例えば、抗体の場合、抗体は、標識（例えば、精製またはエピトープtag）を用いて合成され、例えば、標識を標識結合性基に結合することによって、検出可能に標識される。例えば、キレート剤は、抗体に取り付けられることができる。抗体は、それから、病理組織の調製物（例えば、顕微鏡スライドにある組織の固定部分）に接触する。結合のための培養の後、調製物は、非結合の抗体を除去するために洗浄される。調製物は、抗体が調製物と結合したかどうか識別するために、例えば、、顕微鏡を使用して分析される。抗体（または他のポリペプチドまたはペプチド）は、結合する時に非標識化されることができる。結合および洗浄後、抗体は、それを検出可能にするために標識される。
【０２４９】
タンパク質アレイ。ＩＬ−１３結合剤（例えば、ＩＬ−１３結合剤であるタンパク質）は、タンパク質アレイに固定されることもできる。タンパク質アレイは、診断ツールとして、例えば、医学的なサンプル（例えば、単離された細胞、血液、血清、生検、など）を診断するために用いることができる。タンパク質アレイは、他の結合剤、例えば、ＩＬ−１３または他の標的分子に結合するものを含むこともできる。
【０２５０】
タンパク質アレイを製造する方法は、例えば、De Wildtら（2000）Nat. Biotechnol. 18：989−994；Luekingら（1999）Anal. Biochem. 270：103−111；Ge （2000）Nucleic Acids Res. 28、e3、I−VII；MacBeath and Schreiber （2000）Science 289：1760−1763；WO 01／40803 and WO  99／51773A1に記載されている。アレイのためのポリペプチドは、例えば、市販のロボット装置（robotic apparati）を用いて、例えば、Genetic MicroSystemsまたはBioRoboticsから、高速で配置されることができる。アレイ基板は、例えば、ニトロセルロース、プラスチック、ガラス、例えば、表面改質ガラスであることができる。アレイは、多孔性母材、例えば、アクリルアミド、アガロースまたは他のポリマーを含むこともできる。例えば、アレイは、例えば、De Wildt、前掲.に開示されるように、抗体のアレイであることができる。タンパク質を生産する細胞は、配置されたフォーマットのフィルタ上で成長することができる。タンパク質産生は誘発され、そして、発現されたタンパク質は、細胞の位置でフィルタに固定される。
【０２５１】
タンパク質アレイは、サンプルのＩＬ−１３の程度を決定するために、サンプルに接触することができる。サンプルが標識されていない場合、例えば、サンドイッチ法、例えば、ＩＬ−１３の結合を検出するために標識プローブを使用する方法が使われることができる。アレイの各アドレスにおける結合の程度に関する情報は、例えば、コンピュータ・データベースにおいて、プロフィールとして格納されることができる。タンパク質アレイは、複製して製造されることができ、また、例えば、異なるサンプルの中で結合プロフィールを比較するために用いることができる。
【０２５２】
フロー・サイトメトリー。ＩＬ−１３結合剤は、細胞、例えば、サンプル（例えば、患者試料）の細胞）に標識するために用いることができる。結合剤は、蛍光化合物に付着される（または、付着可能である）ことができる。細胞は、それからフローサイトメトリによって分析されることができ、および／または、ソートされる蛍光活性細胞を使用して（例えば、Becton Dickinson Immunocytometry Systems、San Jose CA；U.S. Patent No. 5、627、037；5、030、002；and 5、137、809も参照、から入手可能な選別機を用いて）選別される。検出器が通過する細胞を計数して、蛍光を検出することによって蛍光化合物が細胞に付着しているかどうか決定する一方、細胞が選別機を通過するときに、レーザー光線は蛍光化合物を励起する。各細胞に結合する標識の量は、サンプルを特徴づけるために、定量化され、分析されることができる。選別機は細胞を偏らせることもでき、そして、結合剤により結合していない細胞から結合剤により結合している細胞を選別することができる。分離された細胞は、培養され、および／または、特徴づけられることができる。
【０２５３】
生体内イメージング。さらにもう一つの実施形態において、本発明は、被検者の生体内でＩＬ−１３の存在を検出するための方法を提供する。その方法は、（i）被検者（例えば、ＩＬ−１３に関連する障害を有する患者）に、検出可能なマーカーに結合した抗ＩＬ−１３抗体分子を投与すること、（ii）被検者を検出可能な標識を検出するための手段にさらすことを含む。被検者は、例えば、ＮＭＲまたは他の断層撮影手段によって撮像される。
【０２５４】
画像診断のために有効な標識の例としては、放射性標識、例えば、131I、111In、123I、99mTc、32P、33P、125I、3H、14Cおよび 188Rh、蛍光標識、例えば、フルオレセインおよびローダミン、核磁気共鳴活性標識、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャナによって検出可能なポジトロンを発している同位元素、化学発光、例えば、ルシフェリン、および酵素標識、例えば、ペルオキシダーゼまたはフォスファターゼを含む。短い範囲の放射線エミッタ、例えば、短い範囲の検出用プローブによって検出可能な同位元素が使用されることもできる。結合剤は、周知の技術を使用して、このような試薬により標識されることができる。例えば、抗体の放射性標識に関する技術は、Wensel and Meares （1983）Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy、Elsevier、New York および Colcherら（1986）Meth. Enzymol. 121： 802−816参照。放射性同位元素を使って識別された結合剤は、生体外診断検査のために使われることもできる。放射性で標識された結合剤の特異的な活性は、半減期、放射性標識の同位体純度および標識が抗体に組み込まれる方法に依存する。放射性同位元素（例えば、14C、3H、35S、125I、99mTc、32P、33P and 131I）でポリペプチドを標識化する手順は、一般に公知である。例えば、U.S. 4、302、438；Goding、J.W. （Monoclonal antibodies ： principles and practice ： production and application of monoclonal antibodies in cell biology、biochemistry、and immunology  2nd ed. London；Orlando： Academic Press、1986. pp 124−126）およびその中の引用文献；および A.R. Bradwellら、“Developments in Antibody Imaging”、Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy、R.W. Baldwinら、（eds.）、pp 65−85 （Academic Press 1985）参照。
【０２５５】
本願明細書において記載されているＩＬ−１３結合剤は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）の造影剤に結合されることができる。いくつかのＭＲＩ技術は、EP−A−0 502 814にまとめられる。通常、異なる環境の還元水の緩和時定数Ｔ１およびＴ２の違いは、イメージを出すために用いられる。しかしながら、これらの違いは、鮮明な高分解能画像を提供するには不十分であることができる。これらの緩和時定数の違いは、造影剤によって強化されることができる。このようなコントラスト剤の例は、多くの磁気試薬、正磁性試薬（それは、主にＴ１を変える）および、強磁性であるか超常磁性（それは、主にＴ２反応を変える）を含む。
キレート（例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡおよびＮＴＡキレート）は、いくつかの常磁性体（例えば、Fe3+、Mn2+、Gd3+）に結合する（そして、毒性を減らす）ために用いることができる。他の試薬は、粒子、例えば、直径約１０μｍ未満、約１０ナノメートルまでの形態であり、そして、強磁性体、反強磁性体または超常磁性特性を有している。Pykett （1982）Scientific American、246：78−88に記載されているように、ＩＬ−１３の分布を位置決めし画像化するために、ＩＬ−１３結合剤はＮＭＲ活性19F原子を含む、表示基で標識されていることもできる。
【０２５６】
また、本願明細書において記載されている範囲の中で、キットは、インビトロ、例えば、ある被検者、例えば、サンプル中の、例えば、ＩＬ−１３関連障害を有する患者からの生検または細胞、または、対象を画像化することによるインビボで検出するために、ＩＬ−１３結合剤および診断使用、例えば、ＩＬ−１３結合剤（例えば、抗体分子または他のポリペプチドまたはペプチドは）の使用のための指示書からなる。キットは、最低さらに１つの試薬、例えば、ラベルまたは添加された診断用薬をさらに含むことができる。In vivo内の使用のために、結合剤は、医薬組成物として調製されることができる。
【０２５７】
キット
ＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子および／またはＩＬ−４アンタゴニストは、キットの成分として、キットにおいて提供されることができる。例えば、キットは、（ａ）ＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子および／またはＩＬ−４アンタゴニスト、および、選択的に、（ｂ）情報的な文献を含む。情報的な文献は、方法、例えば、本願明細書において記載されている方法に関する記述、インストラクション、マーケティングまたは他の文献であることができる。キットの情報的な文献は、その形態において制限されない。一つの実施形態において、情報的な文献は、化合物の生産、化合物の分子量、濃度、使用期限日、処理単位または生産サイト情報、その他に関する情報を含むことができる。一つの実施形態において、情報的な文献は、本願明細書において記載した疾患の、治療、予防、診断、予後またはモニターするために、ＩＬ−１３結合剤を使用することに関する。一つの実施形態において、情報的な文献は、単一の処理間隔としてＩＬ−１３結合（試薬）を投与するための指示書を含む。
【０２５８】
一つの実施形態において、情報的な文献は、本願明細書において記載されている方法を実行するために適切な方法、例えば、適切な用量、剤形または投与（例えば、本願明細書において記載されている投与の用量、剤形または方法）の方法で、ＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子を投与するための指示を含むことができる。もう一つの実施形態では、情報的な文献は、ＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子を、適切な被検者、例えば、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息またはＩＬ−１３関連障害、例えば、アレルギー性および／または炎症性障害またはＨＴＬＶ−１感染を有する、または、その危険性のあるヒトに投与する指示を含む。ＩＬ−１３生産は、ＨＴＬＶ−１感染と相関した（Chungら、（2003）Blood 102： 4130−36）。
【０２５９】
例えば、その文献は、患者、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息または、ＩＬ−１３関連疾患、例えば、アレルギー性および／または炎症性疾患またはＨＴＬＶ−１感染を有する、または、その危険性のある患者に、ＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子を投与する指示を含むことができる。
【０２６０】
キットは、ＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子を含んでいる組成物のための一つ以上の容器を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、組成物のための独立した容器、デバイダまたは区画および情報的な文献を含む。例えば、組成物は瓶、バイアルまたはシリンジに含まれることができ、そして、情報的な文献は、プラスチック製スリーブまたはパケットに含まれることができる。他の実施形態において、キットの独立した要素は、単一の、区画されない容器内に含まれる。例えば、組成物は、ラベルの形で情報的な文献をそれに付着させた瓶、バイアルまたはシリンジに含まれる。いくつかの形態では、キットはそれぞれの容器の複数（例えば、パック）を含み、そして、それぞれがＩＬ−１３結合剤（例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子）の一つ以上の単位用量形態（例えば、本願明細書において記載されている剤形）を含む。例えば、キットは複数のシリンジ、アンプル、箔パケット、アトマイザまたは吸入装置を含み、そして、それぞれがＩＬ−１３結合剤、例えば、抗ＩＬ−１３抗体分子または複数の単位投与量の単一の単位投与量を含む。
【０２６１】
キットは、任意に、組成物の投与に適している装置、例えば、シリンジ、吸入剤、ピペット、鉗子、測定された匙、スポイト（例えば、点眼剤）、綿（例えば、木綿、綿または木の綿棒）またはそのような伝達器具の任意のものを含む。好ましい実施形態において、その器具は、結合剤の測定された用量を投与する移植可能デバイスである。
【０２６２】
次の実施例は、本発明を理解する際に補助するために記載されるが、いかなる形であれその範囲を制限することを意図されず、また解釈してはならない。
【実施例】
【０２６３】
実施例１
（a）ＮＨＰ−ＩＬ−１３のクローニングおよびヒトＩＬ−１３に対するホモロジ
カニクイザルＩＬ−１３（ＮＨＰ−ＩＬ−１３）は、ハイブリッド形成プローブを使用してクローンされた。ヒトＩＬ−１３とカニクイザルＩＬ−１３のアミノ酸配列の比較は、図１Ａに示される。８つのアミノ酸の違いのため、２つの配列の間には、９４％のアミノ酸の同一性がある。これらの違いのうちの１つ（R130Q）は、喘息にかかった被検者において優先的に発現される共通のヒト多型を表す（Heinzmannら（2000）Hum. Mol. Genet. 9：549−559）。
【０２６４】
（b）ＮＨＰ−ＩＬ−１３のヒトＩＬ−１３Ｒα２への結合
ヒトＩＬ−１３は、ＩＬ−１３受容体のα２の形態（ＩＬ−１３Ｒα２）に高い親和性で結合する。
この受容体の可溶性の形態は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ尾部（ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ）によって発現された。ＩＬ−１３と結合すること、および、細胞表面ＩＬ−１３Ｒα１−ＩＬ−４Ｒシグナル伝達複合体からサイトカインを分離することによって、ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃは、ヒトＩＬ−１３生理活性の強力な阻害剤として作用することができる。ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃは、ＣＨＯ細胞または大腸菌によって産生されるＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合すること示された。
【０２６５】
（c）ヒト単球上のＮＨＰ−ＩＬ−１３の生理活性
（i）ヒト単球上のＣＤ２３発現。カニクイザルＩＬ−１３をコードしているｃＤＮＡは、大腸菌において発現されて、生理活性を維持するために、再び折り畳まれた。カニクイザルＩＬ−１３に対するヒト細胞の反応性は、健常なドナーからの通常の末しょう血液単核細胞が、３７℃において終夜、ＩＬ−１３で処置されたバイオアッセイを用いて示された。これは、単球の表面上のＣＤ２３発現のアップレギュレーションを誘発した。結果は、カニクイザルＩＬ−１３が主要なヒト単球上の生理活性を有することを示した。
【０２６６】
（ii）ＨＴ−２９細胞上のＳＴＡＴ６リン酸エステル化。ヒトＨＴ−２９上皮細胞系列は、ＳＴＡＴ６リン酸エステル化、ＩＬ−１３受容体によるシグナル伝達によって、ＩＬ−１３に反応する。ＳＴＡＴ６リン酸エステル化を誘発する組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３の能力を検定するために、ＨＴ−２９細胞は、３７℃で３０分間、ＮＨＰ−ＩＬ−１３に曝露され、そして、それから固定化され、透過性化され、ホスホ−ＳＴＡＴ６に蛍光抗体によって染色された。結果は、カニクイザルＩＬ−１３が効率的にこのヒト細胞系のＳＴＡＴ６リン酸エステル化を誘発することを示した。
【０２６７】
（d）ＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合する抗体の生成
マウスまたは他の適当な動物は、カニクイザルＩＬ−１３で、例えば、以下の方法の一つ以上を使用して、免疫化され、ブーストされることができる。免疫化のための１つの方法は、ブースティングと同じまたは異なる方法と組み合わせることができる：
【０２６８】
（i）大腸菌において発現され、封入体から精製され、生物活性を保存するために再び折り畳まれたカニクイザルＩＬ−１３タンパク質による免疫化。免疫化のために、タンパク質は完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）によって乳状化され、そして、マウスは標準プロトコルに従って免疫化される。ブースティングのために、同じタンパク質は、不完全なフロイントアジュバント（ＩＦＡ）によって乳状化される。
【０２６９】
（ii）成熟したカニクイザルＩＬ−１３の全ての配列にわたっているペプチドによる免疫化。各ペプチドは、カニクイザルＩＬ−１３に特有であり、ヒト・タンパク質に存在しない少なくとも一つのアミノ酸を含む。図１Ｂを参照。ペプチドはシステイン以外のＣ末端残基を有するが、担体タンパク質への結合のためにシステインが加えられる。ペプチドは、免疫原担体タンパク質、例えば、ＫＬＨに接合されて、標準プロトコルに従ってマウスを免疫化するために用いられる。免疫化のために、タンパク質は完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）によって乳状化され、そして、マウスは標準プロトコルに従って免疫化される。ブースティングのために、同じタンパク質は、不完全なフロイントアジュバント（ＩＦＡ）によって乳状化される。
【０２７０】
（iii）発現されたｃＤＮＡがコードするＮＨＰ−ＩＬ−１３による免疫化。ＮＨＰ−ＩＬ−１３をコード化しているｃＤＮＡは、リーダー配列を含んで、適切なベクターにクローンされる。このＤＮＡは、遺伝子銃によって皮内に注入されるゴールドビーズ上に被覆される。
【０２７１】
（iv）タンパク質またはペプチドは、タンパク質ライブラリ、例えば、ファージまたはリボソーム表示ライブラリをスクリーニングするための標的として使われることができる。例えば、ライブラリは、さまざまな免疫グロブリン分子、例えば、Ｆａｂ、scＦｖまたはFdを示すことができる。
【０２７２】
（e）ＮＨＰおよび選択的にヒトＩＬ−１３、例えば、天然のヒトＩＬ−１３と交差反応することができる抗体クローンの選択。
第一のスクリーン
抗体のための第一のスクリーンは、組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３への結合についてのＥＬＩＳＡによる選択であった。このＥＬＩＳＡにおいて、ウェルは、組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３でコートされている。免疫血清は、系列希釈において加えられて、室温で１時間、インキュベートされた。ウェルは、０．０５％のTWEEN（登録商標）−20（PBS−Tween）を含むＰＢＳで洗浄された。結合した抗体は、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−標識化された抗マウスＩｇＧおよびテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を使用して検出された。吸光度は、４５０ナノメートルで読み込まれた。一般的に、すべての免疫化されたマウスは、ＮＨＰ−ＩＬ−１３に対する抗体の高い力価を生じた。
【０２７３】
第二のスクリーン
第二のスクリーンは、組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３のｓＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃへの結合の抑制のについてのＥＬＩＳＡによる選択であった。ウェルは可溶性のＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃでコートされ、それに、FLAGタグを付けられたＮＨＰ−ＩＬ−１３が結合することができた。この結合は、ＨＲＰに接合した抗FLAG抗体により検出された。ＴＭＢ基質の加水分解は、４５０ナノメートルの吸光度として読み込まれた。分析において、FLAGタグを付けられたＮＨＰ−ＩＬ−１３は、免疫血清の濃度増大と共に加えられた。免疫血清がＮＨＰ−ＩＬ−１３に結合する抗体を含み、、それが、ｓＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃをコーティングしているウェルへの結合を妨げた場合、ＥＬＩＳＡシグナルは減少した。すべての免疫化されたマウスは、ｓＩＬ−１３Ｒα１−ＦｃとＮＨＰ−ＩＬ−１３への結合を競争した抗体を生産したが、しかし、力価はマウスによって異なった。その血清が、最も高い希釈度で、ＮＨＰ−ＩＬ−１３への抑制されたｓＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃの結合を示した動物から、融合のために脾臓が選択された。
【０２７４】
第三のスクリーン
ＮＨＰ−ＩＬ−１３生理活性の抑制について試験される第三のスクリーン。ＴＦ−１増殖分析、単球ＣＤ２３発現分析およびＨＴ−２９細胞ＳＴＡＴ６リン酸エステル化分析を含む、いくつかのバイオアッセイは、使用されることができる。免疫血清は、ＮＨＰ−ＩＬ−１３ に媒介されるＳＴＡＴ６リン酸エステル化の抑制について試験された。ＨＴ−２９ヒト上皮細胞系列は、マウス免疫血清の示された濃度の有無において、組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３に、３７℃で３０分間、曝露された。細胞は、それから固定され、透過性化されて、ホスホ−ＳＴＡＴ６（Pharmingen）に、ALEXAＴＭFluor 488を接合されたｍＡｂで染色された。ＩＬ−１３にＳＴＡＴ６リン酸エステル化を受けることで応答している細胞のパーセンテージは、フローサイトメトリで測定された。高い血清希釈剤においてＮＨＰ−ＩＬ−１３生理活性で最も強い抑制として決定される、最も強力な中和活性をもつマウスの脾臓は、ハイブリドーマの生成のために選択された。
【０２７５】
第四のスクリーン
ヒトＩＬ−１３を含んでいる粗調製物は、ヒトさい帯血単核細胞（BioWhittaker／Cambrex）から調製された。１０％の熱不活化FCＳ、５０Ｕ／ｍｌのペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを含んでいるＲＰＭＩ培地で、細胞は、５％のＣＯ２、３７℃のインキュベータで培養された。細胞は、マイトジェンPHA−P （Sigma）とともに３日間刺激され、組換えヒトＩＬ−４（R&D Systems）および抗ヒトＩＬ−12を有するＴｈ２の方へ歪曲された。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−2とともに１週間、増殖され、それからフォルボール12−ミリスチン酸エステル13−酢酸塩（ＰＭＡ）およびイオノマイシンと共に、３日間の処理によって、サイトカインの産生を活性化した。上澄みは、集められて、ＰＭＡおよびイオノマイシンを取り除くために透析された。ＩＬ−１３についてのバイオアッセイを妨げることができる、GM−CSFおよびＩＬ−４を減少させるために、上澄みは、GM−CSFおよびＩＬ−４（R&D Systems、Inc）に対するビオチン化された抗体で処理され、そして、ストレプトアビジン被覆された磁気ビーズ（Dynal）とともにインキュベートされた。ＩＬ−１３の最終濃度は、ＥＬＩＳＡ（Biosource）で測定され、総タンパクについては、、ブラッドフォード分析（Bio−Rad）により測定された。典型的な調製物は、重量にして0.0005％未満のＩＬ−１３を含む。
【０２７６】
ハイブリドーマ・クローンの選択
確立した方法を使用して、ハイブリドーマは、P3X63_AG8.653ミエローマ細胞系（ATCC）に融合する、上記のように選択されたマウスの脾臓から作り出された。細胞は限界希釈で塗布され、そして、クローンは上記のスクリーニング基準に従って選択された。データは、ＥＬＩＳＡによる、ＮＨＰ−ＩＬ−１３ｓのＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃへの結合を競合する能力に基づいて、クローンの選択のために収集された。クローンは、ＮＨＰ−ＩＬ−１３の生理活性を中和する能力についてさらに試験された。ハイブリドーマの上澄みは、ＨＴ−２９ヒト上皮細胞系列のＮＨＰ−ＩＬ−１３によって誘発されるＳＴＡＴ−６リン酸エステル化の競合について試験された。
【０２７７】
実施例２：ＭＪ２−７抗体
全ＲＮＡは、QIAGEN RNEASY3 Mini Kit（Qiagen）を使用して、ＭＪ２−７ハイブリドーマ細胞から調製された。ＲＮＡは、SMART3 PCR Synthesis Kit（BD Biosciences Clontech）を使用して、ｃＤＮＡに逆転写された。ＭＪ２−７重鎖の可変領域は、復帰プライマーとして、マウスＩｇＧ１定常領域のＣＨ１領域のＮ末端部分をコードしているＤＮＡにアニーリングする、前方のプライマーおよびmＩｇＧ１プライマーとして、SMARTＴＭオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲよって外挿された。ＤＮＡ断片をコードしているＭＪ２−７軽鎖可変領域は、SMARTＴＭおよびマウスκ特異的プライマーを使用して作り出された。ＰＣＲ反応は、DEEP VENTＴＭDNAポリメラーゼ（New England Biolabs）および25nMのdNTPsを使用して、２４サイクル（１分間の９４℃、１分間の６０℃、１分間の７２℃）で実施された。ＰＣＲの生産物は、ｐＥＤ６ベクターにサブクローンされ、そして、挿入物の配列はＤＮＡ塩基配列決定によって特定された。精製されたマウスＭＪ２−７抗体のＮ末端タンパク質の配列は、翻訳された配列が観察されたタンパク質配列に対応することを確認するために用いた。
【０２７８】
ＮＨＰ−ＩＬ−１３と相互作用し、それがヒトＩＬ−１３と相互作用することができることを示唆する特徴を有するマウス・モノクローナル抗体ＭＪ２−７の典型的なヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、以下の通りである：
【０２７９】
重鎖可変領域をコードしている典型的なヌクレオチド配列は、以下からなる：
2010512402.tif 000004
【０２８０】
重鎖可変領域の典型的なアミノ酸配列は、以下からなる：
2010512402.tif 000005
【０２８１】
ＣＤＲは、下線を引かれる。
可変領域は、選択的にリーダー配列、例えば、MKCSWVIFFLMAVVTGVNS （配列番号131）に先行される。軽鎖可変領域をコードしている典型的なヌクレオチド配列は、以下からなる：
GAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC 
TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT 
AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC 
TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG 
ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC 
AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA 
TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA （配列番号132）
【０２８２】
軽鎖可変領域の典型的なアミノ酸配列は、以下からなる：
2010512402.tif 000006
【０２８３】
ＣＤＲは、下線を引かれる。アミノ酸配列は、選択的にリーダー配列、例えば、MKLPVRLLVLMFWIPASSS （配列番号134）に先行される。本願明細書において、「ＭＪ２−７」という用語は、「ｍＡｂ7.1.1」という用語と交換可能に使われる。
【０２８４】
実施例３：Ｃ６５抗体
ＮＨＰ−ＩＬ−１３と相互作用する、そして、それがヒトＩＬ−１３と相互作用することができることを示唆する特徴を有する、マウス・モノクローナル抗体Ｃ６５の典型的なヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、次の通りである。
【０２８５】
重鎖可変領域のための典型的な核酸配列は、以下からなる：
1  ATGGCTGTCC TGGCATTACT CTTCTGCCTG GTAACATTCC CAAGCTGTAT 
51  CCTTTCCCAG GTGCAGCTGA AGGAGTCAGG ACCTGGCCTG GTGGCGCCCT 
101  CACAGAGCCT GTCCATCACA TGCACCGTCT CAGGGTTCTC ATTAACCGGC 
151  TATGGTGTAA ACTGGGTTCG CCAGCCTCCA GGAAAGGGTC TGGAGTGGCT 
201  GGGAATAATT TGGGGTGATG GAAGCACAGA CTATAATTCA GCTCTCAAAT 
251  CCAGACTGAT CATCAACAAG GACAACTCCA AGAGCCAAGT TTTCTTAAAA 
301  ATGAACAGTC TGCAAACTGA TGACACAGCC AGGTACTTCT GTGCCAGAGA 
351  TAAGACTTTT TACTACGATG GTTTCTACAG GGGCAGGATG GACTACTGGG 
401  GTCAAGGAAC CTCAGTCACC GTCTCCTCA （配列番号135）
【０２８６】
重鎖可変領域の典型的なアミノ酸配列は、以下からなる：
2010512402.tif 000007
ＣＤＲは、下線を引かれる。アミノ酸配列は、選択的にリーダー配列、例えば、MAVLALLFCL VTFPSCILS （配列番号137）に先行される。
【０２８７】
軽鎖可変領域をコード化している典型的なヌクレオチド配列は、以下からなる。
1  ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT 
51  TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 
101  CTGCATCTTT GGGAGACATT GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC 
151  ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AAGCTCCTAA 
201  GCTCCTGATC TTTGGTGCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT 
251  TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAAATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG 
301  GAGGATGAAG ATATGGCAAC TTATTTCTGT CTACAGCATA GTTATCTCCC 
351  GTGGACGTTC GGTGGCGGCA CCAAACTGGA AATCAAA （配列番号：138）
【０２８８】
軽鎖可変領域の典型的なアミノ酸配列は、以下からなる：
2010512402.tif 000008
【０２８９】
ＣＤＲは、下線を引かれる。アミノ酸配列は、選択的にリーダー配列、例えば、MNTRAPAEFLGFLLLWFLGARC （配列番号140）に先行される。
【０２９０】
実施例４：Ｆｃ配列
配列番号１２８の位置＃１のセリンは、セリンが重鎖可変領域の残基＃１１８に先行される第１の典型的な完全長抗体の番号付け方式において、アミノ酸残基＃１１９を表す。第１の典型的な完全長抗体の番号付け方式において、変異されたアミノ酸は、２３４および２３７の番号をつけられたところにあり、配列番号１２８の１１６位および１１９位に対応する。このように、以下の配列は、第１の典型的な完全長抗体の番号付け方式にしたがって、２つの突然変異、L２３４AおよびG２３７Aを有するＦｃ領域を表す。
ハツカネズミ（配列番号128）
【０２９１】
以下は、他の典型的なヒトＦｃ領域配列である：
STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （配列番号：141）
【０２９２】
エフェクター機能を減少させるために用いることができる他の典型的な変更は、L２３４A;L235A）、（L235A;G２３７A）およびN297を含む。
【０２９３】
実施例５：マウスにおけるＩＬ−１３およびＩｇＥ
ＩＬ−１３は、ＩｇＥ、すなわち、アトピー性疾患の重要な媒体の生産に関与している。ＩＬ−１３に欠けたマウスは、血清ＩｇＥおよび肥満細胞ＩｇＥ反応（自然なＩＬ−１３結合剤を欠いているマウス）の部分的な低下を有し、天然のＩＬ−１３結合剤、ＩＬ−１３Ｒα２−／−を失ったマウスは、ＩｇＥのレベルおよびＩｇＥエフェクター機能を向上させた。
【０２９４】
ＢＡＬＢ／ｃ雌マウスは、ジャクソン研究所（Bar Harbor、ME）から得られた。ＩＬ−１３Ｒα２−／−マウスは、例えば、Woodら（2003）J. Exp. Med. 197：703−9に記載されている。ＩＬ−１３に欠けたマウスは、例えば、McKenzieら（1998）Immunity 9：423−32に記載されている。すべての突然変異株は、ＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドに関するものであった。
【０２９５】
血清ＩｇＥレベルは、ＥＬＩＳＡで測定された。ＥＬＩＳＡプレート（MaxiSorp；Nunc、Rochester、NY）は、ラット抗マウスＩｇＥ（BD Biosciences、San Diego、CA）により、４℃で、終夜、被覆された。プレートは、ＰＢＳ中で０．５％のゼラチンを有する室温で１時間ブロックされ、０．０５％のTWEEN（登録商標）−20（PBS−Tween）を含んでいるＰＢＳで洗浄され、スタンダードとして、精製されたマウスＩｇＥ（BD Biosciences）により、または血清希釈剤により、室温で６時間、インキュベートされた。結合は、遮断剤としてマウスＩｇＧ（Sigma−Aldrich、St. Louis、MO）を使用して、ビオチン化された抗マウスＩｇＥ（BD Biosciences）により検出された。結合は、ペルオキシダーゼに結合されたストレプトアビジン（Southern Biotechnology Associates、Inc.、Birmingham、AL）およびSURE BLUEＴＭ 基質（KPL Inc.、Gaithersburg、MD）によって検出された。
【０２９６】
単純なマウスにおける安静時のＩｇＥレベルを維持するためのＩＬ−１３の条件を調査するために、血清は、野生型マウス、および、遺伝的にＩＬ−１３およびＩＬ−１３Ｒα２に欠けたマウスから、特異的な免疫化の非存在下で調査された。ＩＬ−１３に欠けたマウスは、血清ＩｇＥの実質的に検出不可能なレベルを有した。対照的に、抑制性受容体ＩＬ−１３Ｒα２を欠いているマウスは、血清ＩｇＥの高いレベルを示した。これらの結果は、ＩＬ−１３の遮断は、アトピー性疾患を治療または予防するために有効であり得ることを示す。
【０２９７】
実施例６：ＩＬ−１３およびアトピー性疾患
天然のヒトＩＬ−１３（1ng／ｍｌで）の生理活性を阻害するＭＪ２−７の能力は、ＳＴＡＴ６リン酸エステル化についての分析において評価された。ＭＪ２−７は、この分析において、約０．293nMのIC50で天然のヒトＩＬ−１３の活性を阻害した。ＭＪ２−７のネズミ重鎖およびヒト化軽鎖を有する抗体は、この分析において、約0.554nMのIC50で天然のヒトＩＬ−１３の活性を阻害した。
【０２９８】
非ヒト霊長類ＩＬ−１３（1ng／ｍｌ）を阻害するＭＪ２−７の能力は、ＣＤ２３発現についての分析において評価された。ＭＪ２−７は、この分析において、約0.242nMのIC50で非ヒトの霊長類ＩＬ−１３の活性を阻害した。ＭＪ２−７のネズミ重鎖およびヒト化軽鎖を有する抗体は、この分析において、約0.308nMのIC50で非ヒトの霊長類ＩＬ−１３の活性を阻害した。
【０２９９】
実施例７：マウスＭＪ２−７抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
重鎖可変領域（選択的に、リーダーを有する）をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  ATGAAATGCA GCTGGGTTAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 
51  CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCAGAGCTT GTGAAGCCAG 
101  GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGGTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC 
151  ACCTATATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT 
201  TGGAAGGATT GATCCTGCGA ATGATAATAT TAAATATGAC CCGAAGTTCC 
251  AGGGCAAGGC CACTATAACA GCAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA 
301  CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCGTCTATT ACTGTGCTAG 
351  ATCTGAGGAA AATTGGTACG ACTTTTTTGA CTACTGGGGC CAAGGCACCA 
401  CTCTCACAGT CTCCTCA  （配列番号142）
【０３００】
任意のリーダー（下線を引かれた）を有する重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
1  MKCSWVIFFL MAVVTGVNSE VQLQQSGAEL VKPGASVKLS CTGSGFNIKD 
51  TYIHWVKQRP EQGLEWIGRI DPANDNIKYD PKFQGKATIT ADTSSNTAYL 
101  QLNSLTSEDT AVYYCARSEE NWYDFFDYWG QGTTLTVSS 
（配列番号143）
【０３０１】
軽鎖可変領域をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  ATGAAGTTGC CTGTTAGGCT GTTGGTGCTG ATGTTCTGGA TTCCTGCTTC 
51  CAGCAGTGAT GTTTTGATGA CCCAAACTCC ACTCTCCCTG CCTGTCAGTC 
101  TTGGAGATCA AGCCTCCATC TCTTGCAGGT CTAGTCAGAG CATTGTACAT 
151  AGTAATGGAA ACACCTATTT AGAATGGTAC CTGCAGAAAC CAGGCCAGTC 
201  TCCAAAGCTC CTGATCTACA AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG 
251  ACAGGTTCAG TGGCAGTGGA TCAGGGACAG ATTTCACACT CAAGATTAGC 
301  AGAGTGGAGG CTGAGGATCT GGGAGTTTAT TACTGCTTTC AAGGTTCACA 
TATTCCGTAC ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GCTGGAAATA AAA （配列番号144）
【０３０２】
任意のリーダー（下線が引かれた）を有する軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
1  MKLPVRLLVL MFWIPASSSD VLMTQTPLSL PVSLGDQASI SCRSSQSIVH 
51  SNGNTYLEWY LQKPGQSPKL LIYKVSNRFS GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS 
RVEAEDLGVY YCFQGSHIPY TFGGGTKLEI K （配列番号145）
【０３０３】
実施例８：ＭＪ２−７抗体の典型的な第１のヒト化変異体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
ヒト化抗体Version 1（Ｖ１）は、最も近いヒト生殖細胞系クローンに基づく。hＭＪ２−７ Ｖ1重鎖可変領域（hＭＪ２−７ＶＨ Ｖ1）（任意のリーダー配列をコードしている配列によって）のヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  ATGGATTGGA CCTGGCGCAT CCTGTTCCTG GTGGCCGCTG CCACCGGCGC 
51  TCACTCTCAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG CGCCGAGGTG AAGAAGCCTG 
101  GCGCTTCCGT GAAGGTGTCC TGTAAGGCCT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC 
151  ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCCAGCGGC TGGAGTGGAT 
201  GGGCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTTC 
251  AGGGCCGCGT GACCATCACC CGCGATACCT CCGCTTCTAC CGCCTACATG 
301  GAGCTGTCTA GCCTGCGGAG CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG 
351  CTCCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC 
401  TGGTGACCGT GTCCTCT （配列番号146）
【０３０４】
重鎖可変領域（hＭＪ２−７ Ｖ1）のアミノ酸配列は、ＤＰ−25、ＶＨ−I、1−03に融合するＣＤＲに基づく。任意のリーダーを有するアミノ酸配列（第１の下線を引いた部分；次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）は、以下の通りである：
2010512402.tif 000009
【０３０５】
hＭＪ２−７ Ｖ1軽鎖可変領域（hＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ1）（任意のリーダー配列をコードしている配列によって）のヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG 
51  CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA 
101  CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCATCGTG 
151  CACTCCAACG GCAACACCTA CCTGGAGTGG TTTCAGCAGA GACCCGGCCA 
201  GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC 
251  CCGATCGGTT CTCCGGCAGC GGCTCCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC 
301  AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC 
351  CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG 
（配列番号148）
【０３０６】
このバージョンは、DPK18、Ｖ kappaIIに移植されるＣＤＲに基づく。hＭＪ２−７ Ｖ1軽鎖可変領域（hＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ1）のアミノ酸配列（第１の下線を引かれた領域としての任意のリーダーと；次に下線を引かれた領域のＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）は、以下の通りである：
2010512402.tif 000010
【０３０７】
実施例９：ＭＪ２−７抗体の典型的な第２のヒト化変異体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
以下の重鎖可変領域は、DP 54、ＶＨ−3、3−07に移植されるCＤＲに基づく。hＭＪ２−７ Version 2（Ｖ２）重鎖可変領域（hＭＪ２−７ＶＨ Ｖ2）（任意のリーダー配列をコードしている配列によって）のヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  ATGGAGCTGG GCCTGTCTTG GGTGTTCCTG GTGGCTATCC TGGAGGGCGT 
51  GCAGTGCGAG GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG CGGCGGACTG GTGCAGCCTG 
101  GCGGCTCTCT GCGGCTGTCT TGCGCCGCTT CCGGCTTCAA CATCAAGGAC 
151  ACCTACATCC ACTGGGTGCG GCAGGCTCCC GGCAAGGGCC TGGAGTGGGT 
201  GGCCCGGATC GATCCTGCCA ACGACAACAT CAAGTACGAC CCCAAGTTCC 
251  AGGGCCGGTT CACCATCTCT CGCGACAACG CCAAGAACTC CCTGTACCTC 
301  CAGATGAACT CTCTGCGCGC CGAGGATACC GCCGTGTACT ACTGCGCCCG 
351  GAGCGAGGAG AACTGGTACG ACTTCTTCGA CTACTGGGGC CAGGGCACCC 
401  TGGTGACCGT GTCCTCT  （配列番号150）
【０３０８】
任意のリーダーを有するhＭＪ２−７ Ｖ2重鎖可変領域（hＭＪ２−７ＶＨ Ｖ2）のアミノ酸配列（第１に下線を引いた領域；次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）は、以下の通りである：
2010512402.tif 000011
【０３０９】
hＭＪ２−７ Ｖ2軽鎖可変領域は、DPK9、Ｖ kappaI、02へのＣＤＲ移植に基づいた。hＭＪ２−７ Ｖ2軽鎖可変領域（hＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ2）（任意のリーダー配列をコードしている配列によって）のヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  ATGGATATGC GCGTGCCCGC TCAGCTGCTG GGCCTGCTGC TGCTGTGGCT 
51  GCGCGGAGCC CGCTGCGATA TCCAGATGAC CCAGTCCCCT TCTTCTCTGT 
101  CCGCCTCTGT GGGCGATCGC GTGACCATCA CCTGTCGGTC CTCCCAGTCC 
151  ATCGTGCACT CCAACGGCAA CACCTACCTG GAGTGGTATC AGCAGAAGCC 
201  CGGCAAGGCC CCTAAGCTGC TGATCTACAA GGTGTCCAAC CGCTTTTCCG 
251  GCGTGCCTTC TCGGTTCTCC GGCTCCGGCT CCGGCACCGA TTTCACCCTG 
301  ACCATCTCCT CCCTCCAGCC CGAGGATTTC GCCACCTACT ACTGCTTCCA 
351  GGGCTCCCAC ATCCCTTACA CCTTTGGCGG CGGAACCAAG GTGGAGATCA 
401  AGCGT  （配列番号152）
【０３１０】
hＭＪ２−７ Ｖ2軽鎖可変領域（hＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ2）（下線を引かれる任意のリーダーペプチド、および、次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲで）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000012
【０３１１】
ＭＪ２−７ Ｖ2重鎖可変領域のさらなるヒト化されたバージョンが製造された。これらのバージョンは、選択されたフレームワーク位置でネズミ・アミノ酸を有する復帰突然変異を含んだ。
【０３１２】
復帰突然変異V48I、A29Gによって重鎖可変領域「Version 2.1」またはＶ2.1をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号154）
【０３１３】
Ｖ2.1（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000013
【０３１４】
復帰突然変異（R67K;F68A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.2をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA 
201  GGCCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
CGTGTCCTCT  （配列番号156）
【０３１５】
Ｖ2.2（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000014
【０３１６】
復帰突然変異（R72A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.3をコードするヌクレオチド配列：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号158）
【０３１７】
Ｖ2.3（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000015
【０３１８】
復帰突然変異（A49G）を有する重鎖可変領域Ｖ2.4をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号160）
【０３１９】
Ｖ2.4（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000016
【０３２０】
復帰突然変異（R67K;F68A;R72A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.5をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCAA 
201  GGCCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
352  CGTGTCCTCT  （配列番号162）
【０３２１】
Ｖ2.5（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000017
【０３２２】
復帰突然変異（V48I;A49G;R72A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.6をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号164）
【０３２３】
Ｖ2.6（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000018
【０３２４】
復帰突然変異（A49G;R72A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.7をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号166）
【０３２５】
Ｖ2.7（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000019
【０３２６】
復帰突然変異（L79A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.8をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGCCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTCGCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号168）
【０３２７】
Ｖ2.8（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000020
【０３２８】
復帰突然変異（A49G;R72A;L79A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.10をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GGTGGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号170）
【０３２９】
Ｖ2.10（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000021
【０３３０】
復帰突然変異（V48I;A49G;R72A;L79A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.11をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCGCCG CTTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCGCCTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号172）
【０３３１】
Ｖ2.11（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000022
【０３３２】
復帰突然変異（V48I;A49G;R72A）を有する重鎖可変領域Ｖ2.16をコードしているヌクレオチド配列は、以下の通りである：
1  GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGCGGCGGA CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC 
51  TCTGCGGCTG TCTTGCACCG GCTCCGGCTT CAACATCAAG GACACCTACA 
101  TCCACTGGGT GCGGCAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATCGGCCGG 
151  ATCGATCCTG CCAACGACAA CATCAAGTAC GACCCCAAGT TCCAGGGCCG 
201  GTTCACCATC TCTGCCGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAC CTCCAGATGA 
251  ACTCTCTGCG CGCCGAGGAT ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGGAGCGAG 
301  GAGAACTGGT ACGACTTCTT CGACTACTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC 
351  CGTGTCCTCT  （配列番号174）
【０３３３】
Ｖ2.16（次に下線を引かれた領域に示されるＡｂＭ定義に基づくＣＤＲ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである：
2010512402.tif 000023
【０３３４】
以下は、変異したＣＨ２領域を有するヒト化MH 2−7 Ｖ2.11 ＩｇＧ１のアミノ酸配列である：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWIGRIDPANDNIKYDPKFQGRFTISADNAKNSAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSEENWYDFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEALGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （配列番号176）
【０３３５】
可変領域は、アミノ酸1−120；CH1  121−218；ヒンジ  219−233：CH２  234−343、および、CH3  344−450である。軽鎖は、1−133で可変領域を有する以下の配列を含む。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSHIPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC  （配列番号177）
【０３３６】
実施例１０  ＭＪ２−７の典型的な変異体の機能的な分析
ＭＪ２−７抗体およびヒト化変異体の能力は、ＩＬ−１３活性についての分析において、ヒトＩＬ−１３を阻害するために評価された。
【０３３７】
ＳＴＡＴ６リン酸エステル化分析
ＨＴ−２９ヒト結腸上皮細胞（ＡＴＣＣ）は、１０％のＦＢＳ、Pen−Strep、グルタミンおよび重炭酸ナトリウムを含んでいるMcCoy’s 5A培地において、付着した単層として成長した。分析のために、細胞は、トリプシンを使用しているフラスコから除去されて、新しい培地で洗われて、12x75 mmポリスチレン管に分注された。組換えヒトＩＬ−１３ （R&D Systems、Inc.）は、100 − 0.01ng／ｍｌの範囲の濃度で加えられた。ＩＬ−１３反応を阻害する抗体の能力を試験する分析のために、1ng／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１３は、500 − 0.4ng／ｍｌの範囲で抗体の希釈剤と一緒に加えられた。細胞は、３０〜６０分、３７℃の水浴においてインキュベートされ、そして、１％ＢＳＡを含んでいる氷冷ＰＢＳの中で洗浄された。細胞は、３７℃で１５分間、１％のパラホルムアルデヒドのＰＢＳにおいてインキュベートすることによって固定され、そして、１％ＢＳＡを含んでいるＰＢＳの中で洗浄された。核を透過させるために、細胞は、終夜、無水メタノールにおいて−２０℃でインキュベートした。それらは１％ＢＳＡを含んでいるＰＢＳ中で洗浄され、そして、それからＳＴＡＴ６（BD Biosciences）に対するALEXAＴＭ Fluor 488標識抗体で染色された。蛍光は、FACSCANＴＭ およびCELLQUESTＴＭソフトウェア（BD Biosciences）により分析された。
【０３３８】
ヒト単球上のＣＤ２３誘導
単核細胞は、HISTOPAQUE（登録商標）（Sigma）による積層によって、ヒト末しょう血液から分離された。細胞は、１０％の熱不活化FCＳ、５０のＵ／ｍｌのペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ｍＭのＬ−グルタミンを含んでいるＲＰＭＩにおいて洗浄され、４８ウェル組織培養プレート（Costar／Corning）において塗布された。組換えヒトＩＬ−１３（R&D Systems、Inc.）は、100 − 0.01ng／ｍｌの範囲の希釈剤とともに加えられた。ＩＬ−１３反応を阻害する抗体の能力を試験する分析のために、1ng／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１３は、500 − 0.4ng／ｍｌの範囲の抗体の希釈剤とともにに加えられた。細胞は、５％のＣＯ２インキュベータにおいて、３７℃で、終夜、インキュベートされた。その翌日、細胞は、非酵素的なCell Dissociation Solution（Sigma）を使用して、ウェルから収集されて、そして、１％のＢＳＡを含んでいる氷冷ＰＢＳにおいて洗浄された。細胞は、ヒトＣＤ２３に対するフィコエリトリン（ＰＥ）標識抗体（BD Biosciences、San Diego、CA）およびヒトＣＤ１１ｂに対するCy−Chrome標識抗体（BD Biosciences）とともにインキュベートされた。単球は、高い前方および横の軽い散乱およびＣＤ１１ｂの発現に基づいて導かれた。単球上のＣＤ２３発現は、FACSCANＴＭ （BD Biosciences）を使用して、フローサイトメトリで測定され、そして、ＣＤ２３＋細胞のパーセンテージはCELLQUESTＴＭ ソフトウェア（BD Biosciences）によって分析された。
【０３３９】
ＴＦ−１細胞増殖
ＴＦ−１細胞は、それらの長期の増加のために、インターロイキン３（ＩＬ−3）または顆粒球／マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を必要としている要因依存的なヒト造血細胞系である。ＴＦ−１細胞は、また、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）を含む様々な他のサイトカインに反応する。ＴＦ−１細胞（ＡＴＣＣ）は、１０％の熱不活化FCＳ、５０のＵ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ｍＭのＬ−グルタミンおよび５ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ（R&D Systems）を含んでいるＲＰＭＩ媒体で保持された。分析の前に、細胞は、終夜、ＧＭ−ＣＳＦを不足された。分析のために、ＴＦ−１細胞は９６ウェルの平底マイクロタイタープレート（Costar／Corning）において5000細胞／ウェルで繰り返し塗布され、ヒトＩＬ−１３（R&D Systems、Inc.）に、100 − 0.01ng／ｍｌの範囲で曝露された。５％のＣＯ２を有する３７℃のインキュベーターにおいて７２時間後に、細胞は、１μＣｉ／ウェル３Ｈ−チミジン（Perkin Elmer ／New England Nuclear）でパルスされた。それらはさらに４．５時間、インキュベートされ、そして、細胞は、TOMTEKＴＭ収穫器を使用して、フィルタ・マット上へ収集された。３Ｈ−チミジンの取り込みは、液体シンチレーション・カウンティングによって評価された。
【０３４０】
テネイシン生産分析
ＢＥＡＳ−２Ｂヒト気管支上皮細胞（ＡＴＣＣ）は、補助剤（Clonetics）とともに、ＢＥＧＭ培地で保持された。細胞は、終夜、９６ウェル平底培養プレートにおいて、ウェル当たりの20、000で塗布された。新しい培地は、指示された抗体の存在下または非存在下においてＩＬ−１３を含んで、加えられる。一晩の培養の後、上澄みは、回収されて、ＥＬＩＳＡによって細胞外基質成分（テネイシンＣ）の存在について分析される。ＥＬＩＳＡプレートは、PBS中でヒト・テネイシン（ＩｇＧ１、k；Chemicon International）に対するネズミ・モノクローナル抗体の1ug／ｍｌで終夜、コートされる。プレートは、0.05％のTWEEN（登録商標）−20（PBS−Tween）を含むＰＢＳで洗浄され、そして、１％ＰＢＳを含むＢＳＡでブロックされる。新しいブロッキング溶液は、合計３つの変化のために６分毎に加えられた。プレートは、PBS−Tweenで３回、洗浄された。細胞上澄みまたはヒトのテネイシンスタンダート（Chemicon International）は加えられ、３７℃で６０分間、インキュベートされた。プレートは、PBS−Tweenで３回、洗浄された。テネイシンは、テネイシン（ＩｇＧ２a、k;Biohit）に対するネズミ・モノクローナル抗体によって検出された。結合は、マウスＩｇＧ２ａに対するＨＲＰ−標識抗体によって検出され、そして、ＴＭＢ基質が続いた。反応は、０．０１Ｎ硫酸で終了した。吸光度は、４５０ナノメートルで読み込まれた。
【０３４１】
ＨＴ ２９ヒト上皮細胞系列は、ＳＴＡＴ６リン酸エステル化を分析するために用いることができる。ＨＴ ２９細胞は、３７℃で３０分間、試験抗体の増加する濃度の存在において、1ng／ｍｌの天然のヒトＩＬ−１３粗調製物とともにインキュベートした。リン酸化されたＳＴＡＴ６に対する抗体を有する細胞可溶化物のウェスタンブロット解析は、ＳＴＡＴ６の用量依存的なＩＬ−１３介在性リン酸エステル化を検出するために用いることができる。同様に、フローサイトメトリー解析は、３７℃で３０分間のＩＬ−１３の飽和濃度で処置され、固定され、透過性化され、ALEXAＴＭ Fluor 488−labeled ｍＡｂでリン酸化されたＳＴＡＴ６へ標識されたＨＴ ２９セルにおいて、リン酸エステル化ＳＴＡＴ６を検出することができる。結果の典型的な一群は、表１に記載される。Ｖ2.11の抑制性活性は、ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃのそれと同等だった。
【０３４２】
2010512402.tif 000024
【０３４３】
実施例１１：ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１間の結合相互作用部位
ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒα１（配列番号１２５の残基27−342）の細胞外領域およびヒトＩＬ−１３に結合する抗体の複合体は、Ｘ線結晶構造解析によって研究された。US 07／0048785参照。実質的な相互作用の２つのポイントは、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１の間に見られた。ＩＬ−１３Ｒα１の免疫グロブリン領域１とＩＬ−１３の間の相互作用は、２つの分子にわたっている拡張βシートの形成をもたらす。ＩＬ−１３（配列番号：１２４、成熟した配列［完全長配列（配列番号：１７８）］））の残基Ｔｈｒ８８［Ｔｈｒ１０７］、Ｌｙｓ８９［Ｌｙｓ１０８］、Ｉｌｅ９０［Ｉｌｅ１０９］およびＧｌｕ９１［Ｇｌｕ１１０］は、受容体（配列番号：１２５）の残基Ｌｙｓ７６、Ｌｙｓ７７、Ｉｌｅ７８およびＡｌａ７９と相互作用するβ鎖を形成する。加えて、ＩＬ−１３（配列番号：１２４［配列番号：１７８］）のＭｅｔ３３［Ｍｅｔ５２］の側鎖は、これらの隣接している鎖の側鎖によって形成される疎水性ポケットに達する。
【０３４４】
免疫グロブリン領域３を有する相互作用の優れた特徴は、受容体ＩＬ−１３Ｒα１の免疫グロブリン領域３の疎水性ポケットへのＩＬ−１３（配列番号：１２４［配列番号：１７８］）の疎水性残基（Ｐｈｅ１０７［Ｐｈｅ１２６］）の挿入である。ＩＬ−１３Ｒα１の疎水性ポケットは、残基Ｌｅｕ３１９、Ｃｙｓ２５７、Ａｒｇ２５６およびＣｙｓ３２０（配列番号：１２５）の側鎖によって形成される。ＩＬ−１３（配列番号：１２４［配列番号：１７８］）のＰｈｅ１０７［Ｐｈｅ１２６］との相互作用は、ＩＬ−１３Ｒα１（配列番号：１２５）のアミノ酸残基Ｉｌｅ２５４、Ｓｅｒ２５５、Ａｒｇ２５６、Ｌｙｓ３１８、Ｃｙｓ３２０およびＴｙｒ３２１、および、ＩＬ−１３（配列番号：１２４［配列番号：１７８］）のアミノ酸残基Ａｒｇ１１［Ａｒｇ３０］、Ｇｌｕ１２［Ｇｌｕ３１］、Ｌｅｕ１３［Ｌｅｕ３２］、Ｉｌｅ１４［Ｉｌｅ３３］、Ｇｌｕ１５［Ｉｌｅ３４］、Ｌｙｓ１０４［Ｌｙｓ１２３］、Ｌｙｓ１０５［Ｌｙｓ１２４］、Ｌｅｕ１０６［Ｌｅｕ１２５］、Ｐｈｅ１０７［Ｐｈｅ１２６］およびＡｒｇ１０８［Ａｒｇ  １２７］の間のファンデルワールス相互作用の広範囲な組をもたらす。これらの結果は、ＩＬ−１３Ｒα１との相互作用に関係するＩＬ−１３の領域に結合するＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３シグナル伝達を阻害するために用いることができることを証明する。
【０３４５】
実施例１２：COS細胞でのヒト化ＭＪ２−７抗体の発現
哺乳類の組換えシステムにおけるキメラ抗ＮＨＰ−ＩＬ−１３抗体の生産を評価するために、マウスＭＪ２−７抗体の可変領域は、ヒトκおよびＩｇＧ１mut定常領域を含んでいるｐＥＤ６発現ベクターにサブクローンされた。サル腎臓ＣＯＳ−１細胞は、１０％の熱不活化ウシ胎児血清、1mMのグルタミンおよび0.1ｍｇ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを含んでいるＤＭＥ培地（Gibco）において成長された。ＣＯＳ細胞の形質導入は、試薬供給元によって提案されるプロトコルに従って、TRANSITITＴＭ−LT1形質導入試薬（Mirus）を使用して実施された。形質導入されたＣＯＳ細胞は、１０％のＣＯ２の存在下、３７℃で２４時間、インキュベートされ、無菌のＰＢＳによって洗浄され、そして、調整培地における抗体の分泌および蓄積を許すために、４８時間、無血清培地Ｒ１ＣＤ１（Gibco）において成長された。ｃｈＭＪ２−７抗体の発現は、標準として、精製されたヒトＩｇＧ１／κ抗体を使用して、総ヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡによって定量化された。
【０３４６】
COS細胞におけるキメラＭＪ２−７抗体の生産は、コントロールキメラ抗体（表２）よりも著しくより低かった。従って、Ａｂ発現の最適化は、ＭＪ２−７ヒト化プロセスに含まれた。ヒト化ＭＪ２−７ Ｖ1は、最も同種的なヒト生殖細胞系クローン、ＤＰ  ２５上へマウスＭＪ２−７重鎖ＣＤＲを結合させたＣＤＲによって構築され、そして、それはよく発現され、典型的なヒト抗体反応に代表される。軽鎖のＣＤＲは、huＭＪ２−７ Ｖ1 ＶＬを作り出すために、ヒト生殖細胞系クローンＤＰＫ  １８上へサブクローンされた。ヒト化ＭＪ２−７ Ｖ2は、ＭＪ２−７重鎖可変領域のＣＤＲをＤＰ５４ヒト生殖細胞系遺伝子フレームワークの上に、および、ＭＪ２−７重鎖可変領域のＣＤＲをＤＰＫ９ヒト生殖細胞系遺伝子フレームワークの上に結合させるＣＤＲによって製造された。ＤＰ５４クローンは、ヒトＶＨ III生殖細胞系サブグループに属し、そして、ＤＰＫ９は、ヒト生殖細胞系遺伝子のＶκＩサブグループに由来する。ＶＨ IIIおよびＶκＩフレームワークを含む抗体分子は、大腸菌システムの高い発現レベル、および、水溶液中の高い安定性および溶解性を有する。（たとえば、Stefan Ewertら、J. Mol. Biol. （2003）、325；531−553、Adrian Aufら、Methods （2004）34：215−224参照。）我々は、いくつかの組換え抗体の生産におけるＤＰ５４／ＤＰＫ９ヒトフレームワークの組合せを使用して、一時的なＣＯＳ形質導入実験において、抗体の高い発現（＞20μｇ／ｍｌ）を達成した。
【０３４７】
2010512402.tif 000025
【０３４８】
ＭＪ２−７ Ｖ1、Ｖ2 ＶＨおよびＶＬ遺伝子に接合するＣＤＲは、２つの哺乳類の発現ベクター系（pED6kappa／pED6 ＩｇＧ１mutおよびpSMEN2kappa／pSMED2ＩｇＧ１mut）にサブクローンされ、そして、ヒト化ＭＪ２−７抗体の生産は、上記の通りに、一過性のＣＯＳ形質導入実験において評価された。実験の第１の一群において、huＭＪ２−７ ＶＬおよびＶＨのさまざまな組合せの、抗体発現上の効果は、評価された（表３）。ＭＪ２−７ ＶＬフレームワーク領域をＤＫＰ９に変えることは、8−10倍、抗体産生を増加させたが、ＶＬ Ｖ1（DPK 18に移植されるＣＤＲ）は、抗体産生の適度な増加だけを示した。ヒト化されたＶＬがキメラＭＪ２−７ＶＨ、および、ヒト化ＭＪ２−７ Ｖ1およびＶ2と結合されるときに、この効果は観察された。ＣＤＲ移植されたＭＪ２−７ Ｖ2は、同じ分析条件でＣＤＲ移植されたＭＪ２−７ Ｖ1よりも、３倍より高い発現レベルを有した。
【０３４９】
2010512402.tif 000026
【０３５０】
類似の実験は、重鎖可変領域（表４）の復帰突然変異を含むhuＭＪ２−７ Ｖ2で実施された。最高発現レベルは、マウスＭＪ２−７抗体の抗原結合および中和特性を保持したhuＭＪ２−７ Ｖ2.11について検出された。４８位および４９位（Ｖ４８ＩおよびＡ４９Ｇ）の復帰突然変異の導入は、ＣＯＳ細胞のhuＭＪ２−７ Ｖ2抗体の生産を増加させ、２３位、２４位、６７位および６８位（Ａ２３Ｔ；Ａ２４Ｇ；Ｒ６７ＫおよびＦ６８Ａ）のアミノ酸の復帰突然変異は、抗体発現への負の影響を有した。
【０３５１】
2010512402.tif 000027
【０３５２】
実施例１３：ＮＨＰ−ＩＬ−１３ FLAG ＥＬＩＳＡによるヒト化ＭＪ２−７抗体の抗原結着性の評価
ビオチン化されたマウスＭＪ２−７ AbとＮＨＰ−ＩＬ−１３−FLAGと結合することを競合する完全なヒト化ＭＪ２−７ｍＡｂ（Ｖ1、Ｖ2ｖ２）の能力は、ＥＬＩＳＡによって評価された。マイクロタイタープレート（Costar）は、１1μｇ／ｍｌの抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体Ｍ２（Sigma）でコートされた。10ng／ｍｌの濃度のFLAG  ＮＨＰ−ＩＬ−１３タンパク質は、ビオチンの標識が付いたマウスＭＪ２−７抗体の10ng／ｍｌおよび標識のないマウスおよびヒト化ＭＪ２−７抗体のさまざまな濃度と混ぜ合わせられた。混合物は、室温で、２時間、インキュベートされ、それから抗ＦＬＡＧ抗体がコートされたプレートに加えられた。FLAG  ＮＨＰ−ＩＬ−１３／bioＭＪ２−７ Ab複合体の結合は、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび3、3、5、5−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）によって検出された。ヒト化ＭＪ２−７ Ｖ2は著しく活性を失ったが、huＭＪ２−７ Ｖ2.11は完全に抗原結合活性を復元して、FLAG−ＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合するためのビオチン化されたＭＪ２−７ｍＡｂと競合することができた。BIACOREＴＭ分析は、ＮＨＰ−ＩＬ−１３が、固定化h1uＭＪ２−７ｖ２.11に対する急速な結合、および、遅い解離を有することも確認された。
【０３５３】
実施例１４：ヒト化ＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨの分子モデリング
ヒト化ＭＪ２−７重鎖バージョン２（ＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨ）をモデリングするための構造テンプレートは、Protein Data Bank（ＰＤＢ）に対するＢＬＡＳＴホモロジ検索に基づいて選択された。ＢＬＡＳＴ検索の出力から選択される２つの構造の他に、追加テンプレートは、タンパク質構造のin−houseデータベースから選択された。ＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨのモデルは、InsightII （Accelrys、San Diego）のテンプレートおよびホモロジーモジュールとして、３つのテンプレート構造、1JPS（ヒト化Ｆａｂ D3h44との複合体におけるヒト組織因子の共同結晶構造）、1N8Z（Herceptin Ｆａｂとの複合体におけるヒトＨｅｒ２の共同結晶構造）およびF１３．２（マウス抗体Ｆａｂ断片との複合体におけるＩＬ−１３）を使用して構築された。1JPS、1N8ZおよびF１３．２（16163−029001から入手可能な）の構造的に保存された領域（ＳＣＲｓ）は、各分子のためのＣα距離マトリックスに基づいて決定され、そして、テンプレート構造はＳＣＲの対応する原子の最小限のＲＭＳの偏差に基づいて補充された。標的タンパク質ＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨの配列は補充されたテンプレート・タンパク質の配列に整列配置され、そして、ＳＣＲの座標は標的タンパク質の対応する残基に割り当てられた。標的とＳＣＲの各々のテンプレートの配列の類似性の程度に基づいて、異なるテンプレートからの座標が、異なるＳＣＲのために使われた。ＳＣＲに含まれないループおよび可変領域のための座標は、ホモロジーモジュールで行うサーチループまたはジェネレートループ法によって作り出された。簡潔には、サーチループ法は、フランキングＳＣＲ残基のＣａ距離マトリックスを、フランキング残基および介在する所与の長さのペプチド・セグメントと同じ数を有するタンパク質構造から誘導される予め算出されたマトリックスと比較することにより、２つのＳＣＲを適切に適合するタンパク質構造を調査する。原子座標デノボを生じるジェネレートループ法は、所望の結果をもたらさなかったそれらのケースにおいて使われた。アミノ酸残基がテンプレートおよび標的において同一である場合、アミノ酸側鎖の高次構造はテンプレートのそれと同様に保たれた。しかしながら、回転異性体の高次構造の検索はなされ、そして、エネルギー的に最も好ましい高次構造はテンプレートおよび標的において同一でないそれらの残基のために保持された。この後に、２つのＳＣＲの間、または、ＳＣＲと可変領域の間の接合部で、適当な結合間隔および結合角を誘導するために分子力学シミュレーションを準備するＳｐｌｉｃｅ  Ｒｅｐａｉｒが続いた。最後に、そのモデルは、5  kcal／（mol Ａ）または500サイクルの最大の誘導体までSteepest Descentsアルゴリズム、また、5  kcal／（mol Ａ）または2000サイクルの最大の誘導体までConjugate Gradientsアルゴリズムを使用して、エネルギー極小化に当てられた。モデルの質は、ProStat／Struct_Check commandを使用して評価された。
【０３５４】
使用するテンプレートが1QBLおよび1QBM（ウマ抗チトクロームｃ抗体ＦａｂE8のための結晶構造）であったこと以外は、マウスＭＪ２−７ＶＨの分子模型はヒト化ＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨのために記載されている手順に従って構築された。
【０３５５】
モデルによって予測されるＣＤＲ−Framework水素結合の電位差
ｈＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨ：G26 − ｈＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨ：A24
ｈＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨ：Y109 − ｈＭＪ２−７ Ｖ2ＶＨ：S25
mＭＪ２−７ ＶＨ：D61 − mＭＪ２−７ ＶＨ：I48
mＭＪ２−７ ＶＨ：K63 − mＭＪ２−７ ＶＨ：E46
mＭＪ２−７ ＶＨ：Y109 − mＭＪ２−７ ＶＨ：R98
これらの違いは、以下の任意の復帰突然変異を示唆した：Ａ２３Ｔ、Ａ２４ＧおよびＶ４８Ｉ。
【０３５６】
これらに隣接して個々のアミノ酸の有意なＲＭＳの偏差およびアミノ酸残基の違いに基づいて示唆される他の任意の復帰突然変異は、以下の通りである：Ｇ９Ａ、Ｌ１１５ＴおよびＲ８７Ｔ。
【０３５７】
実施例１５：ＭＪ２−７およびＣ６５のＩＬ−１３中和活性
ＭＪ２−７およびＣ６５のＩＬ−１３中和容量は、一連のバイオアッセイにおいてテストされた。第一に、ＮＨＰ−ＩＬ−１３の生理活性を中和するこれらの抗体の能力は、単球ＣＤ２３発現分析において試験された。新たに単離されたヒトＰＢＭＣは、ＭＪ２−７、Ｃ６５またはｓＩＬ−１３ＲI2−Ｆｃの増加する濃度の存在下、3ng／ｍｌのＮＨＰ−ＩＬ−１３によって、終夜、インキュベートされた。細胞は、収集され、CYCHROME3−標識抗体によって単球に特異的な標識、CD11b、および、PE−標識抗体によってＣＤ２３に対する染色をつけられた。ＩＬ−１３処理に応答して、ＣＤ２３の発現は、単球の表面で上方制御され、そして、それはＣＤ１１ｂの発現に基づいて導かれた。ＭＪ２−７、Ｃ６５およびｓＩＬ−１３ＲI2−Ｆｃは、すべて、この分析のＮＨＰ−ＩＬ−１３の活性を中和することが可能だった。ＭＪ２−７およびｓＩＬ−１３ＲI2−Ｆｃの作用強度は、同等だった。Ｃ６５は、約２０倍、活性が低かった（図２）。
【０３５８】
第２のバイオアッセイにおいて、ＭＪ２−７およびＣ６５の天然のヒトＩＬ−１３に対する中和容量は、ＳＴＡＴ６リン酸エステル化分析においてテストされた。３７℃で３０分間、ＨＴ−２９上皮細胞系列は、ＭＪ２−７、Ｃ６５またはｓＩＬ−１３ＲI2−Ｆｃの増加する濃度の存在下、0.3ng／ｍｌの天然のヒトＩＬ−１３とともにインキュベートされた。細胞は、固定して、透過して、リン酸化されたＳＴＡＴ６に対するALEXAＴＭ Fluor 488標識抗体で染色された。ＩＬ−１３処理は、ＳＴＡＴ６リン酸エステル化を刺激した。ＭＪ２−７、Ｃ６５およびｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃは、すべて、この分析（図３）の天然のヒトＩＬ−１３の活性を中和することが可能だった。ネズミMJ−27抗体およびそのヒト化の形態（Ｖ2.11）のためのＩＣ５０は、それぞれ、0.48nMおよび0.52nMであった。ＭＪ２−７およびｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃの作用強度は、ほぼ等価だった。ｓＩＬ−１３Ｒα２−ＦｃのためのＩＣ５０は、0.33nM（図４）であった。Ｃ６５は、約２０倍、非活性であった（図５）。
【０３５９】
第３のバイオアッセイにおいて、天然のヒトＩＬ−１３を中和するＭＪ２−７の能力は、テネイシン生産分析において試験された。ヒトBEAS−2B肺上皮細胞系列は、ＭＪ２−７の濃度増大がある場合には、3ng／ｍｌの天然のヒトＩＬ−１３とともに、終夜、インキュベートされた。上澄みは、回収されて、ＥＬＩＳＡ（図６Ａ）によって、細胞外基質タンパク質（テネイシンＣ）の生産のために試験された。ＭＪ２−７は、約0.1nM（図６Ｂ）のＩＣ５０でこの反応を阻害した。
【０３６０】
これらの結果は、ＭＪ２−７がＮＨＰ−ＩＬ−１３および天然のヒトＩＬ−１３の有効な中和剤であることを示唆する。ＭＪ２−７のＩＬ−１３中和収容力は、ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃのそれに等しい。MJ1−65も、ＩＬ−１３中和活性を有するが、ＭＪ２−７より約20倍、強力ではなかった。
【０３６１】
実施例１６：ＳＰＲによるＭＪ２−７抗体のエピトープマッピング
ｓＩＬ−１３ＲI2−Ｆｃは、標準アミンカップリングによってＣＭ５チップ上へ直接被覆されていた。100nM濃度のＮＨＰ−ＩＬ−１３は注入され、そして、固定化ＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃに対するその結合はBIACOREによって検出された。100nMの抗ＩＬ−１３抗体のさらなる注入が加えられ、そして、結合の変化はモニターされた。hu ＩＬ−１３ＲI2との複合体であるときは、ＭＪ２−７抗体はＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合しなかったが、ポジティブコントロールの抗ＩＬ−１３抗体は結合した（図７）。これらの結果は、そのhu ＩＬ−１３ＲI2およびＭＪ２−７が、ＮＨＰ−ＩＬ−１３の同じであるか重なり合うエピトープと結合することを示唆する。
【０３６２】
実施例１７：ＮＨＰ−ＩＬ−１３とヒト化ＭＪ２−７ Ｖ2−１１抗体の間の相互作用のための動的な化学反応速度定数の測定
バイオセンサ面を準備するために、ヤギ抗ヒトIgG Ｆｃ特異抗体は、アミンカップリングを使用して、リサーチグレードのカルボキシメチルデキストラン・チップ（ＣＭ５）上へ固定された。表面は、0.1Mの1−エチル−3−（3−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）および0.05MのN−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物によって活性化された。捕捉している抗体は、酢酸ナトリウム緩衝液（pH 5.5）の10Tg／ｍｌの濃度で注入された。残りの活性化されたグループは、1.0Mのエタノールアミン（pH 8.0）によってブロックされた。コントロールとして、第一のフローセルが、容積屈折率、マトリックス効果、および非特異的結合を修正するための標準として用いられ、第２、第３および第４フローセルは、捕捉している分子で被覆された。
【０３６３】
動態解析のために、モノクローナル抗体ｈＭＪ２−７ Ｖ2−１１は、1Tg／ｍｌ溶液の40Tlを注入することによって、抗ＩｇＧ抗体面上へ捕捉された。基線と注入の完了の約３０秒後のポイントのネットの違いは、標的の結合の量を表すために利用された。600、200、66.6、22.2、7.4、2.5、0.8、0.27、0.09および0nM濃度のＮＨＰ−ＩＬ−１３の溶液は、２分間、1分につき１００μｌの流速で、三通りで注入され、そして、時間の関数としての結合した材料の量は記録された（図８）。十分に活性のある捕捉している表面を再生させるために、解離フェーズは、グリシン、pH 1.5の５μｌの２回の注入に従う同じ流速で、５分間、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液（150mMのNaCl、3mMのEDTAおよび0.005％（v／v）のSurfactant P20含んでいる10mMのHEPES、pH 7.4）においてモニターされた。すべての動的な実験は、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液の２２．５℃でされた。ブランクおよび緩衝液の効果は、二重に参照することを用いて、各センサーグラムのために減算された。
【０３６４】
動的なデータは、１：１モデルに適用されるBIAEVALUATIONＴＭソフトウェア3.0.2を使用して分析された。見かけの解離（ｋｄ）および結合（ｋａ）速度定数は、グローバル分析を使用しているセンサーグラムの適当な領域から算出された。抗体とＮＨＰ−ＩＬ−１３の間の相互作用の親和定数は、以下の式によって動的な速度定数から算出された：Ｋｄ＝ｋｄ／ｋａ。これらの結果は、huＭＪ２−７Ｖ2−１１は、それぞれ、2.05x１０7Ｍ−1s−1 および8.89x１０−4 1／sのオン、オフ速度を有し、HP−ＩＬ−１３に対する43pMの親和性を有する抗体に結果としてなっていることを示唆する。
【０３６５】
実施例１８：バイオアッセイのＭＪ２−７ヒト化中間体の抑制性活性
ヒト化プロセスのさまざまな中間体の抑制性活性は、ＳＴＡＴ６リン酸エステル化およびテネイシン生産バイオアッセイによって試験された。ＮＨＰ−ＩＬ−１３または天然のヒトＩＬ−１３の粗調製物の亜最高値のレベルは、生物反応を引き出すために用いられ、そして、反応の最大半減抑制のために必要とされるＭＪ２−７のヒト化バージョンの濃度は決定された。ヒトＩｇＧ１およびκ定常領域とともに発現されるｈＭＪ２−７ Ｖ1、ｈＭＪ２−７ Ｖ2およびｈＭＪ２−７ Ｖ3の解析は、Version 2が天然のヒトＩＬ−１３に対して中和活性を保持することを示した。天然のヒトＩＬ−１３の生理活性の最大半減抑制のために必要としたヒト化抗体Version2のこの濃度は、ネズミＭＪ２−７（図９）のそれより大きい約110倍大きかった。Ｖ1またはＶ2 ＶＬがネズミＭＪ２−７ＶＨと結合された半ヒト化形態の分析は、天然のヒトＩＬ−１３中和活性の減少が、ヒト化されたＶＬのためでなく、むしろＶＨ配列（図１０）のためであることを証明した。ＶＬ Ｖ1を有する半ヒト化ＭＪ２−７抗体は、部分的に中和活性を保持するだけだったのに対して、ヒト化ＶＬ Ｖ2を有するバージョンは親のマウス抗体と同じ程度に活性だった。従って、一連の復帰突然変異は、ネズミＭＪ２−７の天然のヒトＩＬ−１３中和活性を改良するために、Ｖ1 ＶＨ配列に導入された。
【０３６６】
実施例１９：ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２を有するＭＪ２−７ブロックＩＬ−１３相互作用
ＭＪ２−７は、未成熟のタンパク質（配列番号：２４）のアミノ酸残基１１４  −  １３２、および、成熟したタンパク質（配列番号：１４）の残基９５  −  １１３に対応する、ＮＨＰ−ＩＬ−１３のＣ末端１９−構造単位に特異的である。ヒトＩＬ−１３にとって、タンパク質のＤα‐ヘリックスの一部を形成するこの領域は、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２の両方への結合にとって重要な残基を含むことが報告された。ヒトＩＬ−１３変異体の分析は、Ａ、ＣおよびＤ−螺旋について、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒαシグナル伝達複合体のための重要な接触部位を含むことを確認した。（Thompson and Debinski （1999）J. Biol. Chem. 274： 29944−50）Ｄ−螺旋のアラニンをスキャンする突然変異誘起は、残基Ｋ１２３、Ｋ１２４およびＲ１２７（配列番号：２４）を、ＩＬ−１３Ｒα１と相互作用をする原因として、また、残基Ｅ１１０、Ｅ１２８、およびＥ１２２を、ＩＬ−１３Ｒα１のための重要な接触であるとして同定した。（Madhankmuarら（2002）J. Biol. Chem. 277： 43194−205）ＮＭＲで測定されるヒトＩＬ−１３の高分解能解構造は、公知の構造の関連したリガンド−受容体対への類似性に基づいてＩＬ−１３結合相互作用を予測した。これらのＮＭＲ研究は、ＩＬ−１３Ｒα１と重要な接触がなされる際のＩＬ−１３  ＡおよびＤ−螺旋の重要な役割を指示した。（Eisenmesserら（2001）J. Mol. Biol. 310：231−241；Moyら（2001）J. Mol. Biol. 310：219−230）
Ｃ末端に位置するこのエピトープへのＭＪ２−７の結合は、ＩＬ−１３のＤ−螺旋は、ＩＬ−１３のＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２との相互作用を損なうと予測された。
【０３６７】
ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２へのＮＨＰ−ＩＬ−１３の結合を阻害するＭＪ２−７の能力は、ＥＬＩＳＡによって試験された。ヒトＩＬ−１３Ｒα１−ＦｃおよびＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃの組換え可溶形態は、ＥＬＩＳＡプレート上へ被覆された。ＦＬＡＧにタグを付けられたＮＨＰ−ＩＬ−１３は、ＭＪ２−７の増加する濃度の存在下で加えられた。結果は、ＭＪ２−７がＮＨＰ−ＩＬ−１３に両方の可溶性の受容体の形態と結合を競合することを示した（図１１Ａおよび１１Ｂ）。これは、ＭＪ２−７によるＩＬ−１３生理活性の中和の基礎を提供する。
【０３６８】
実施例２０：軽鎖ＣＤＲが抗原結合に関与するＭＪ２−７
全３つの軽鎖ＣＤＲ領域がＮＨＰ−ＩＬ−１３へのＭＪ２−７抗体の結合のために必要とされるかどうか評価するために、ＭＪ２−７ ＶＬのさらに２つのヒト化バージョンは、ＣＤＲ接合によって構築された。ＶＬバージョン３は、ヒト生殖細胞系クローンからのＣＤＲ１およびＣＤＲ２およびマウスＭＪ２−７抗体（図１２）からのＣＤＲ３を含み、ヒト生殖細胞系クローンＤＰＫ１８に基づいて設計された。第２の構築（hＭＪ２−７ Ｖ4）において、ＭＪ２−７抗体のＣＤＲ１およびＣＤＲ２はＤＰＫ１８フレームワークに接合され、ＣＤＲ３は無関係なマウス・モノクローナル抗体から誘導された。
【０３６９】
ヒト化ＭＪ２−７ Ｖ3およびＶ4が、hＭＪ２−７ＶＨ Ｖ1をhＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ3およびＶ4と結合することによって、ＣＯＳ細胞において生産された。抗体の抗原結合特性は、直接的なＮＨＰ−ＩＬ−１３結合ＥＬＩＳＡによって試験された。ＭＪ２−７軽鎖ＣＤＲ３が不存在のhＭＪ２−７ Ｖ4は、ＮＨＰ−ＩＬ−１３を結合する能力を保持したが、軽鎖においてヒト生殖細胞系ＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含んだＶ３は、固定化ＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合しなかった。これらの結果は、ＭＪ２−７抗体軽鎖のＣＤＲ１およびＣＤＲ２が、おそらくこの抗体の抗原結合特性の原因であることを証明する。
【０３７０】
hＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ3のヌクレオチド配列
1  ATGCGGCTGC CCGCTCAGCT GCTGGGCCTG CTGATGCTGT GGGTGCCCGG 
51  CTCTTCCGGC GACGTGGTGA TGACCCAGTC CCCTCTGTCT CTGCCCGTGA 
101  CCCTGGGCCA GCCCGCTTCT ATCTCTTGCC GGTCCTCCCA GTCCCTGGTG 
151  TACTCCGACG GCAACACCTA CCTGAACTGG TTCCAGCAGA GACCCGGCCA 
201  GTCTCCTCGG CGGCTGATCT ACAAGGTGTC CAACCGCTTT TCCGGCGTGC 
251  CCGATCGGTT CTCCGGCTCC GGCAGCGGCA CCGATTTCAC CCTGAAGATC 
301  AGCCGCGTGG AGGCCGAGGA TGTGGGCGTG TACTACTGCT TCCAGGGCTC 
351  CCACATCCCT TACACCTTTG GCGGCGGAAC CAAGGTGGAG ATCAAG 
（配列番号189）
hＭＪ２−７ ＶＬ Ｖ3のアミノ酸配列
2010512402.tif 000028
hＭＪ２−７ VL V4のヌクレオチド配列
GATGTTGTGATGACCCAATCTCCACTCTCCCTGCCTGTCACTCCTGGAGAGCCAGCCTCC
ATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTGCATAGTAATGGAAACACCTACCTGGAATGG
TACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTT
TCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATC
AGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCT
CTCACCTTCGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA （配列番号191）
hＭＪ２−７ VL V4のアミノ酸配列
2010512402.tif 000029
【０３７１】
実施例２１：カニクイザルモデルの抗ＩＬ−１３抗体の活性を中和すること
生体内で一つ以上のＩＬ−１３関連の活性を中和することについてのＩＬ−１３結合剤（例えば、抗ＩＬ−１３抗体）の有効性は、豚回虫（Ascaris suum）に対する自然のアレルギーを有するカニクイザルの抗原によって誘発された気道炎症のモデルを使用して試験されることができる。これらの分析は、結合剤が、効果的にアレルゲンを曝露されるアレルギー性の動物の気道好酸球増加症を減らすことを確認するために用いることができる。このモデルにおいて、アレルギー性のサルへの豚回虫（Ascaris suum）抗原の曝露は、以下の一つ以上の結果をもたらす：（i）炎症細胞、例えば、好酸球の気道への流入；（ii）エオタキシンレベルの上昇；（iii）回虫に特異的な好塩基球のヒスタミン放出の増加；および／または、（iv）回虫に特異的なＩｇＥ力価の増加。
【０３７２】
炎症細胞の流入を防止する抗ＩＬ−１３抗体の能力を試験するために、抗体は、豚回虫（Ascaris suum）抗原への曝露の２４時間前に投与されることができる。曝露の日に、ベースライン肺胞洗浄液（ＢＡＬ）サンプルは、左肺から得られることができる。豚回虫（Ascaris suum）抗原は、気管内に右肺に点滴されることができる。２４時間後に、右肺は洗浄され、そして、抗体により静注で治療される動物からのＢＡＬ流体は未処置の動物からのＢＡＬ流体と比較された。抗体が気道炎症を減らす場合、パーセントＢＡＬ好酸球の増加は、抗体投与をうけている群でなく、無処置群の中で観察されることができる。
【０３７３】
図１４Ａ〜１４Ｄは、回虫（Ascaris ）を用いる気道曝露に続く２４時間、炎症細胞、例えば、好酸球（図１４Ｂ）、好中球（図１４Ｃ）およびマクロファージ（図１４Ｄ）の細胞総数およびパーセンテージの増加を表す。炎症細胞のパーセンテージの統計的に有意な増加は、ベースライン値と比較して曝露２４時間後に観察された。
【０３７４】
抗ＩＬ−１３抗体（ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１およびヒト化ｍＡｂ１３．２ｖ．２）は、豚回虫（Ascaris suum）抗原を用いる曝露の２４時間前に、カニクイザルに投与された。（ｍＡｂ １３．２およびそのヒト化形hｍＡｂ１３．２ｖ２は、共同所有のＰＣＴ出願WO 05／123126に記載され、その内容は、本願明細書において参考文献により内含されている）コントロール・サルは、生食水で処置された。１０ｍｇ／ｋｇのｈＭＪ２−７ｖ２−１１、hｍＡｂ１３．２ｖ２または無関係なヒト免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）は、静注で投与された。次の日、コントロールおよび処置をうけているサル（「control pre」および「Ab pre」としての図１５Ａに記載）からの予め曝露されたＢＡＬサンプルは、サルの左肺から集められた。サルは、右肺に気管内に０．７５マイクログラムの豚回虫（Ascaris suum）抗原で処置された。曝露後２４時間後、ＢＡＬサンプルは、コントロールまたは治療されたサルの右肺から集められて、細胞浸潤物（それぞれ、「control pre」および「Ab pre」として図１５Ｂを参照）を測定した。抗体処置されたサルから集められるＢＡＬサンプルは、対照動物（図１５Ａ）と比較して、細胞浸潤物の総数の統計的に有意な減少を示した。コントロールサンプルは、それぞれ、図１５Ａにおいて丸で示され、hｍＡｂ１３．２ｖ２およびｈＭＪ２−７ｖ２−１１で処理したサンプルは、黒または白の三角でそれぞれ示されている。ｈＭＪ２−７ｖ２−１１およびhｍＡｂ１３．２ｖ２は、このモデルの比較可能な有効性を示した。図１５Ｂは、回虫注入後の、ｈＭＪ２−７ｖ２−１１またはhｍＡｂ１３．２ｖ２の濃度を表している線形グラフを示す。比較可能な動態の減少は、両方の抗体に検出される。
【０３７５】
エオタキシンレベルは、回虫への曝露（図１６Ａ）の後、２４時間、著しく増加した。生食水投与をうけているコントロールと比較して、ｈＭＪ２−７ｖ２−１１およびhｍＡｂ１３．２ｖ２は、豚回虫（Ascaris suum）抗原を有する曝露２４時間後にカニクイザルからＢＡＬ流体において検出されるエオタキシンレベルを低下させた。
【０３７６】
豚回虫（Ascaris suum）に対して敏感なカニクイザルは、回虫抗原へのＩｇＥを発生する。ＩｇＥは、循環している好塩基球上のＦｃεＲＩと結合し、そして、回虫抗原の末しょう血液の好塩基球への生体外曝露は、ヒスタミンの脱顆粒および放出を誘導する。反復する抗原曝露は、好塩基球の感作を高め、そして、促進されたヒスタミン放出反応という結果をもたらす。ＩｇＥおよび好塩基球レベルのｈＭＪ２−７ｖ２−１１およびhｍＡｂ１３．２ｖ２の効果を試験するために、ヒト化ｈＭＪ２−７ｖ．２、hｍＡｂ１３．２ｖ２、無関係な免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）または生食水を投与されるカニクイザルは、上記の通り、回虫曝露後８週間で採血され、そして、プラズマ中の全ての、および、回虫に特異的なＩｇＥのレベルはＥＬＩＳＡで測定された。図１７Ａは、ＩＶＩＧまたはｈＭＪ２−７ｖ２−１１で処置された動物からの曝露８週前および後に得られたサンプルの希釈に関する吸光度の変化の線形グラフを示す。オープンサークルは、採決前の測定を表す：クローズドサークルは、治療後の測定である。吸光度の顕著な減少は、分析された全ての希釈において、曝露前の値と対比して、ｈＭＪ２−７ｖ２−１１で治療される曝露後のサンプルで検出された。図１７Ａは、代表的な例を表し、無関係な免疫グロブリンで処置されたそれぞれのサルの回虫に特異的なＩｇＥ（ＩＶＩＧ；動物２０−４５；上のパネル）の力価に変化がないこと、および、ｈＭＪ２−７ｖ２−１１（動物１２０−４３４；下のパネル）で処置されたそれぞれのサルにおける回虫に特異的なＩｇＥの減少した力価を示す。
【０３７７】
ヒト化ｈＭＪ２−７ｖ．２−１１またはhｍＡｂ１３．２ｖ２で処置された動物は、カニクイザル血清（図１７Ｂ）の回虫に特異的な循環しているＩｇＥのレベルの顕著な減少を示した。処置されたいずれの群にも、総ＩｇＥ力価には、顕著な変化はなかった。図１７Ａは、ＩＶＩＧまたはｈＭＪ２−７ｖ２−１１で処置される動物から、曝露の８週間前または後に得られたサンプルの希釈液に関する吸光度の変化の線形グラフを示す。オープンサークルは、採決前の測定を表す：クローズドサークルは、治療後の測定である。吸光度の顕著な減少は、分析されるすべての希釈剤において、曝露前のサンプルに対比して、ｈＭＪ２−７ｖ２−１１で治療される曝露後のサンプルにおいて検出された。名称「２０−４５」および「１２０−４３４」は、カニクイザル識別番号を指す。
【０３７８】
好塩基球のヒスタミン放出における抗ＩＬ−１３抗体の効果を評価するために、動物は、２４時間および８週間の回虫曝露後に採血された。全血は、３７°Ｃで３０分間、回虫抗原によって曝露され、そして、上澄みに放出されるヒスタミンはＥＬＩＳＡ（Beckman Coulter、Fullerton、CA）によって定量化された。図１８Ａ〜１８Ｂに示すように、対照動物は、回虫によって誘発された好塩基球のヒスタミン放出の増加したレベルが抗原曝露の後、特に８週に放出されることを証明した。（図１８Ａのダイヤモンドおよび図１８Ｂの左側バーによって表される。）対照的に、ヒト化ｈＭＪ２−７ｖ．２−１１またはhｍＡｂ１３．２ｖ２で処置される動物は、曝露後８週間で回虫に応答する好塩基球の感作のこの増加を示さなかった。（図１８Ａ〜１８Ｂ）ヒト化ｈＭＪ２−７ｖ．２−１１またはhｍＡｂ１３．２ｖ２で処置される大多数のそれぞれの動物は、曝露前または後２４時間と比較して、曝露後８週間の好塩基球のヒスタミンの放出の減少（図１８Ａの実施例）または変化がないことのいずれかを示した。このように、ヒト化抗ＩＬ−１３抗体の単一の投与は、このモデルにおいて、ヒスタミン放出を変更する持続的効果を有した。
【０３７９】
図１９は、回虫に特異的なヒスタミン放出と回虫に特異的なＩｇＥレベル間の相関を表す。より高い値は、抗ＩＬ−１３抗体、またはデキサメタゾン処理（暗青色の円）と比較して、コントロールサンプル（生食水またはＩＶＩＧ処理サンプル）（淡青色の円）において検出された。ヒト化抗ＩＬ−１３抗体（ヒト化ｍＡｂ１３．２ｖ．２）は、回虫の曝露の２４時間前に静脈内に投与され、または、デキサメタゾンは、1ｍｇ／ｋｇの濃度で、回虫の曝露前の２４時間または３０分に、筋肉内に投与される。回虫曝露後２４時間に、ＢＡＬ洗浄液は、右肺から集められて、ヒスタミン放出およびＩｇＥレベルについて分析された。
【０３８０】
本願明細書において示される結果は、ＢＡＬサンプルのサイトカイン・レベル、回虫に特有のＩｇＥの血清レベルおよび生体外で回虫曝露に応答する好塩基球のヒスタミン放出によって検出される比較可能なレベルで、ＭＪ２−７またはｍＡｂ１３．２を有するカニクイザルの前処理が、豚回虫（Ascaris suum）抗原によって誘発される気道炎症を減らしたことを示した。
【０３８１】
図２０は、ヒト化ＭＪ２−７（ｈＭＪ２−７ｖ２−１１）で処置されるそれぞれのカニクイザルの血清ＩＬ−１３レベルの増加を表している一連の棒グラフである。各パネル（例えば、１２０−４５２）のラベルは、サル識別番号に対応する。「pre」サンプルは、抗体の投与の前に集められた。時間「０」は、抗体投与後２４時間であるが、回虫曝露の前に回収された。残りの時点は、回虫曝露後であった。ＩＬ−１３レベルを検出するために用いる分析法は、ｈＭＪ２−７ｖ２−１１またはhｍＡｂ１３．２ｖ２抗体の存在下、ＩＬ−１３を検出することが可能である。より詳しくは、ＥＬＩＳＡプレート（MaxiSorp；Nunc、Rochester、NY）は、ＰＢＳ中の0.5ug／ｍｌのｍＡｂ１３．２とともに、４℃で、終夜、コートされた。プレートは、0.05％のTween−20（PBS−Tween）を含んでいるＰＢＳで洗浄された。ＮＨＰ−ＩＬ−１３標準またはカニクイザルからの血清希釈が加えられ、室温で、２時間、インキュベートされた。プレートは洗浄され、そして、0.3ug／ｍｌのビオチン化されたMJ1−64（本明細書において、Ｃ６５抗体と称される）はPBS−Tweenに加えられた。プレートは、室温で２時間、インキュベートされ、洗浄され、そして、結合がＨＲＰ−ストレプトアビジン（Southern Biotechnology Associates）およびSure Blue基質（Kirkegaard and Perry Labs）を使用して検出された。ｍＡｂ１３．２の存在下のＩＬ−１３の検出については、ＥＬＩＳＡプレートは、0.5ug／ｍｌのＭＪ２−７によって被覆されることを除き、同じプロトコルに従う。
【０３８２】
図２１は、抗ＩＬ−１３抗体で治療されるカニクイザルからの血清が、試験された非ヒト霊長類ＩＬ−１３の濃度で残余のＩＬ−１３中和能力を有することを示すデータを示す。図２１は、0、1または１０ng／ｍｌで非ヒト霊長類ＩＬ−１３のＳＴＡＴ６リン酸エステル化活性を、血清の不存在下（“no serum”）、生食水またはＩＶＩＧ処置動物からの血清の存在下（「コントロール」）、または、抗ＩＬ−１３抗体処置動物からの血清の存在下のいずれかで、抗体投与の前（「pre」）または指示された抗体の投与後１−２週間のいずれかを表している棒グラフである。血清は、１：４の希釈で試験された。ＭＪ２−７（ＭＪ２−７ｖ．２−１１）のヒト化バージョンは、この研究において使われた。ＳＴＡＴ６リン酸エステル化を測定するための分析は、本願明細書において開示される。
【０３８３】
図２２は、カニクイザル血清の１週間の時点のヒト化ＭＪ２−７（ｈＭＪ２−７ｖ２−１１）によって捕捉される非ヒト霊長類ＩＬ−１３のレベルが、回虫曝露後のＢＡＬ流体で測定される炎症のレベルと相関することを示している線形グラフである。このような相関は、炎症を有する対象を検出するためのバイオマーカとしての、血清ＩＬ−１３（抗ＩＬ−１３抗体に結合または非結合のいずれか）の検出を支持する。より重症な炎症を有する対象は、血清ＩＬ−１３の高いレベルを示した。非結合のＩＬ−１３のレベルが一般的に定量化するのが困難であるにもかかわらず、本願明細書において図２０に開示される分析は、抗ＩＬ−１３抗体に結合するＩＬ−１３を測定するための信頼性の高い分析を提供する。
【０３８４】
実施例２２：マウスにヒトＩＬ−１３の投与によって誘導される気道炎症、肺抵抗および動的な肺圧縮率に対するヒト化抗ＩＬ−１３抗体の影響
喘息のネズミ・モデルは、この障害のＩＬ−１３の役割を理解するための非常に貴重な手段を証明した。ＩＭＡ抗体列（ヒト化１３．２ｖ．２、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１）の生体内の有効性を評価するこのモデルの使用は、最初に、齧歯目のＩＬ−１３に交差反応するこれらの抗体の不能性によって妨げられる。この制限は、マウスにヒト組換えＩＬ−１３を投与することによって、本願明細書において迂回された。ヒトＩＬ−１３は、ネズミＩＬ−１３受容体に結合ができ、そして、外因的に投与されたとき、気道炎症、応答性亢進および他の喘息に関連するものを誘発する。
【０３８５】
非ヒト霊長類において、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１によって認識されるＩＬ−１３エピトープは、位置１１０でＧＬＮを含む。しかしながら、ヒトにおいて、位置１１０は多形性変異体であり、一般的にＡＲＧがＧＬＮ（例えば、R110）を置換されている。R110Q多形性変異体は、アトピー性疾患の上昇する罹患率に広く関連する。
【０３８６】
この例では、組換えヒトR110Q  ＩＬ−１３は、大腸菌で発現され、再び折り重なった。抗体１３．２（ＩｇＧ１、ｋ）は、ヒトＩＬ−１３によって免疫化されるＢＡＬＢ／ｃマウスからクローンされ、そして、この抗体のヒト化バージョンは、所定のヒト化１３．２ｖ．２（またはh１３．２ｖ．２）である。抗体ＭＪ２−７（ＩｇＧ１、k）は、非ヒト霊長類ＩＬ−１３のＮ末端１９のアミノ酸によって免疫化されるＢＡＬＢ／ｃマウスからクローンされ、そして、この抗体のヒト化バージョンは、所定のヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１（またはｈＭＪ２−７ｖ．２−１１）である。両方の抗体は、５％の蔗糖を含む１０ｍＭのＬ−ヒスチジン（pH 6）において調製された。静脈内Carimune NH免疫グロブリン（ヒトＩＶＩＧ）（ZLB Bioplasma Inc.、Switzerland）は、Protein Aクロマトグラフィによって精製されて、５％の蔗糖を含む、１０mMのＬ−ヒスチジン（pH 6）において調製された。
【０３８７】
組換えヒトR110Q  ＩＬ−１３の存在に対するマウス肺反応を分析するために、ＢＡＢＬ／ｃ雌マウスは、組換えヒトR110Q  ＩＬ−１３（例えば、約250のTg／ｋｇ）の5Tgまたは生食水（20TL）の等価量で処置され、１日目、２日目および３日目に気管内に投与された。４日目に、動物は、霧状にされたメタコリンの用量を増加させることに応答して、気道抵抗（RI）およびコンプライアンス（Cdyn）の徴候を見つけるため検査された。一時的に、麻酔および気管開口されたマウスは、気管に、ベンチレータの吸気および呼気ポートに、そして、圧力トランスジューサに接続するポートを有し、それぞれ室のヘッドプレートに組み込まれるマニホールドを有する全体体積変動計に入れられ、そして、気管圧力をモニターした。通気された動物の胸部の変化により、各体積変動計の内壁の呼吸気流計は、室の中へのまたは外への気流をモニターした。動物は、１５０呼吸／分の速度で、１５０ｍｌの一回換気量で通気された。抵抗計算は、共分散のアルゴリズムを用いて、気管圧力と気流信号から導かれた。
【０３８８】
図２３Ａ−２３Ｂに示すように、組換えヒトR110Q  ＩＬ−１３の、気管内投与は、メタコリン曝露に応答する増加した肺抵抗および減少した動肺コンプライアンスを誘発した。これらの観察は、しかしながら、強い肺炎症を伴わなかった。
【０３８９】
マウスの肺炎症反応を促進させるために、組換えヒトR110Q  ＩＬ−１３の５μｇまたは生食水の等価量（50TL）が、１、２および３日目に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに鼻腔内に投与された。動物は４日目に殺され、そして、肺胞洗浄液（ＢＡＬ）流体は回収された。分析前、ＢＡＬは、７０μｍ細胞濾過器を通してろ過され、ペレット細胞に１５分間、２、０００回転数／分で遠心分離した。細胞分画は総白血球の計数のために分析され、顕微鏡スライド上へ回転され（Cytospin；Pittsburgh、PA）、そして、差動分析のためのDiff−Quick（Dade Behring、Inc. Newark DE）で染色された。ＩＬ−6、ＴＮＦαおよびMCP−1レベルは、血球計算ビード・アレイで測定された（CBA；BD Pharmingen、San Diego、CA）。分析感度の範囲は、ＩＬ−6にとって、1pg／ｍｌ、および、ＴＮＦαおよびMCP−1にとって、5pg／ｍｌであった。
【０３９０】
図２４Ａに示すように、組換えヒトR110Q  ＩＬ−１３の鼻腔内投与は、ＢＡＬに高い好酸球および好中球の浸潤によって示唆される、強い気道炎症反応を誘発した。細胞浸潤物は、主に好酸球（例えば、約４０％）からなった。図２４Ｂに示すように、組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３の鼻腔内投与も、例えば、MCP−1、ＴＮＦ−IおよびＩＬ−6を含んでいるＢＡＬのいくつかのサイトカインのレベルを著しく上昇させた。
【０３９１】
ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１のための最善の伝達方法を決定するために、ＢＡＬおよび血清の抗体レベルは、鼻腔内に、または、気管内に投与される組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３による処理後の腹腔内および静脈内または鼻腔内投与に続いて分析された。簡潔には、ＢＡＬＢ／ｃ雌マウスは、組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３の５μｇまたは生食水の等価量を、気管内に、１、２および３日目に投与された。各ＩＬ−１３用量を投与する０および２時間前に、マウスは、０日目、そして、１、２および３日目に（図２５Ａ）腹腔内投与により静脈内に投与される500Tgのヒト化ＭＪ２−７ｖ．２で処置された。あるいは、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１の500Tgは、０、１、２、および３日目に鼻腔内に投与された。以下の通り、全ヒトＩｇＧは、ＥＬＩＳＡで測定された：ＥＬＩＳＡプレート（MaxiSorp；Nunc、Rochester、NY）は、25mMの炭酸塩 − 重炭酸塩緩衝液の50μl／ウェル、pH 9.6でヤギ抗ヒト免疫グロブリン（Ｍ＋Ｇ＋Ａ）Ｆｃ （ICN−Cappel、Costa Mesa、CA）の1：1500の希釈剤で、４°Ｃ、終夜、コーティングした。プレートは、ＰＢＳ中の0.5％ゼラチンとともに室温で１時間ブロックされ、そして、0.05％  Tween−20 （PBS−Tween）を含んでいるＰＢＳで洗浄された。ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１標準、および、1：500 − 1：50、000で始まっているヒツジ血清の6x1：2希釈剤が加えられ、室温で、２時間、インキュベートされた。プレートは、PBS−Tweenによって洗浄され、そして、ビオチン化されたマウス抗ヒトＩｇＧ（Southern Biotechnology Associates）の1：5000の希釈剤は室温で、２時間、インキュベートされた。プレートは、PBS−Tweenによって洗浄され、そして、結合はペルオキシダーゼにリンクされたストレプトアビジン（（Southern Biotechnology Associates）およびＳｕｒｅ  Ｂｌｕｅ基質（KPL Inc.）によって検出された。分析感度は、0.5ng／ｍｌのヒトＩｇＧであった。
【０３９２】
図２５Ａは、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体の腹腔内および静脈投与後、ＢＡＬと比較した血清のヒトＩｇＧの高いレベルを示す。図２５Ｂに示すように、μg／ｍｌにおける全体のＩｇＧレベルは、ＢＡＬで、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体の鼻腔内投与後の血清レベルより著しく高かった。
【０３９３】
ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体が上記の観察された肺機能および炎症反応を調整することができたかどうか決定するために、気道応答性亢進は、5Tgの組換えＲ１１０ＱＩＬ−１３または生食水の等価量（20TL）の、１、２および３日目の気管内投与によって誘発された。組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３の投与前、０および２時間に、動物は、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１の500Tg、ＩＶＩＧの500Tg、または生食水の等価量で鼻腔内に投与されて処置された。上記の通りで、動物は、霧状にされたメタコリンの用量を増加させることに応答して、気道抵抗（RI）およびコンプライアンス（Cdyn）について４日目に試験された。上記の通り、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２およびＢＡＬおよび血清のＩＶＩＧレベルは、ＥＬＩＳＡによって分析された。図２６Ａ−２６Ｂに示すように、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１は効果的に喘息反応を減らし、そして、肺抵抗の最大半減程度を達成することを必要とするメタコリンの用量の顕著な減少という結果をもたらした。対照的に、ＩＶＩＧの等価用量は、効果を有しなかった。動的な肺コンプライアンスの変化は、これらの条件で明らかでなかった。図２６Ｃに示すように、ＢＡＬ IgG抗体レベルは、血清レベルより約10−20倍高かった。
【０３９４】
ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１、抗ＩＬ−１３抗体の投与が、ＩＬ−１３の循環レベルの増加を促進したかどうか決定するために、以下の通り、ＢＡＬおよび血清は、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１３について分析された：簡潔には、図２６Ａ〜２６Ｂに記載されているように、ＢＡＬＢ／ｃ雌マウスが処置された。ＥＬＩＳＡプレート（Nunc Maxi−Sorp）は、ＰＢＳ中の0.5ｍｇ／ｍｌまで希釈された、５０μｌ／ウェルのマウス抗ＩＬ−１３抗体、ｍＡｂ１３．２とともに、終夜、被覆された。プレートは、0.05％ Tween−20 （PBS−Tween）を含むＰＢＳで３回、洗浄され、ＰＢＳ中の0.5％ゼラチンとともに、室温で２時間ブロックされた。プレートは、それから、洗浄され、ヒトＩＬ−１３標準（Wyeth、Cambridge、MA）およびマウス血清の希釈物（１：４から始まっている連続３倍希釈剤）は、２％のウシ胎仔血清（FCＳ）を含んでいるPBS−Tweenに加えられた。プレートは、室温で、更に４時間、インキュベートされ、洗浄された。ビオチン化されたマウス抗ヒトＩＬ−１３抗体、Ｃ６５は、ＰBS−Tweenの0.3μg／ｍｌで加えられた。プレートは、室温で、１−２時間、インキュベートされ、洗浄され、そして、室温で、１時間のＨＲＰ−ストレプトアビジン（Southern Biotechnology Associates、Birmingham、AL）によってインキュベートした。色はSure Blueペルオキシダーゼ基質（KPL、Gaithersburg、MD）を使用して構築され、そして、反応は０．０１Ｍ硫酸で中止した。吸光度は、SpectraMax plate reader （Molecular Devices Corp.、Sunnyvale、CA）の４５０ナノメートルで読み込まれた。血清ＩＬ−１３レベルは、プレートごとに独立して決定されるヒトＩＬ−１３標準曲線を参照することで決定された。
【０３９５】
図２６Ｃと整合した図２７Ａ−２７Ｂに示されるように、ＩＬ−１３レベルは、血清でなく、抗体治療マウスのＢＡＬで上昇した。さらに、我々は、これらのサンプルから分離されるＩＬ−１３が検出可能な生物活性（データは示されない）を有しないことを観察した。ＩＬ−１３生物活性のこの観察された欠如がＩＬ−１３およびＭＪ２−７ｖ．２−１１複合体形成に起因しているかどうか決定するために、ＥＬＩＳＡは、特にＩＬ−１３およびＭＪ２−７ｖ．２−１１複合体を検出するために開発された。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレート（Nunc Maxi−Sorp）は、ＰＢＳ中で0.5ｍｇ／ｍｌまで希釈された５０μｌ／ウェルのマウス抗ＩＬ−１３抗体、ｍＡｂ１３．２とともに、終夜、被覆された。プレートは、0.05％ Tween−20 （PBS−Tween）を含むＰＢＳで３回、洗浄され、ＰＢＳの0.5％ゼラチンで、室温で２時間ブロックされた。プレートはそれから再洗浄され、ヒトＩＬ−１３標準（Wyeth、Cambridge、MA）およびマウス血清（１：４から始まっている連続３Ｘ希釈剤）の希釈剤が２％のウシ胎仔血清（FCＳ）を含んでいるPBS−Tweenに加えられた。プレートは、その後、室温で、４時間インキュベートされた。PBS−Tweenで1：5000に希釈された、ビオチン化された抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）（Southern Biotechnology Associates、Birmingham、AL）は加えられた。プレートは、室温で、１−２時間インキュベートされ、洗浄されて、室温で、１時間のＨＲＰ−ストレプトアビジン（Southern Biotechnology Associates、Birmingham、AL）によって、最後にインキュベートされた。色はSure Blueペルオキシダーゼ基質（KPL、Gaithersburg、MD）を使用して構築され、そして、反応は0.01Mの硫酸で中止した。吸光度は、SpectraMax plate reader （Molecular Devices Corp.、Sunnyvale、CA）の４５０ナノメートルで読み込まれた。
【０３９６】
図２７D−２７Ｅに示されように、ＩＬ−１３およびヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１複合体は、このモデルにおいて、マウスのＢＡＬおよび血清から回収された。この観察は、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１が生体内でＩＬ−１３に結合でき、そして、この相互作用がＩＬ−１３生物活性を否定することができることを示唆する。
【０３９７】
ヒトＩＬ−１３を介する肺炎症およびサイトカイン生産に関するヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１の効果は、マウスにおいて試験されて、以下の通り、第二の抗体、１３．２ｖ．２と比較された。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６の雌マウス（１０／グループ）は、１、２、または3日目に鼻腔内に投与され、組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３（例えば、約250μg／ｋｇ）の５μｇまたは生食水の等価量（50μl）で処置された。ＩＬ−１３の各服用量を投与する０および２時間前に、マウスは、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１またはヒト化１３．２ｖ．２の５００μｇ、１００μｇまたは２０μｇの鼻腔内用量を与えられた。対照群は、５００μｇのＩＶＩＧまたは生食水の等価量を受け入れた。動物は４日目に殺され、そして、ＢＡＬは回収された。ＢＡＬへの好酸球および好中球の浸潤は、差動体細胞計数で測定され、パーセンテージとして表された。
【０３９８】
図２４Ａと整合して図２８Ａ−２８Ｂに示されるように、組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３処理は、好酸球および好中球の浸潤レベルの増加を引き起こした。面白いことに、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１およびヒト化１３．２ｖ．２は、コントロール（例えば、生食水、ＩＬ−１３、ＩＶＩＧ）と比較して、著しく好酸球（図２８Ａ）および好中球（図２８Ｂ）の浸潤を減らした。図２９Ａ〜２９Ｃに示すように、HＭＪ２−７Ｖ2−１１およびヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１も、MCP−1、ＴＮＦ−IおよびＩＬ−6サイトカイン・レベルの増加をさせなかった。
【０３９９】
ＢＡＬサイトカイン・レベルが正確に炎症の程度を表す確認に、Ｃ５７ＢＬ／６の雌マウスは組換えヒトＲ１１０ＱＩＬ−１３（例えば、約２５０μｇ／ｋｇ）の５μｇまたは生食水の等価量（５０μｌ）で、１、２および３日目に鼻腔内投与により治療された。ＩＬ−１３の各服用量を投与する０および２時間前に、マウスは、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１の５００、１００または、２０μｇの鼻腔内用量を与えられた。４日目に、動物は殺され、そして、ＢＡＬは回収された。上記の通り、ＢＡＬ中のヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１抗体レベルは、ＥＬＩＳＡで測定された。ＢＡＬ ＩＬ−6レベルは、血球計算ビード・アレイで測定された。好酸球パーセンテージは、差動体細胞計数で測定された。
【０４００】
図３０Ａ−３０Ｂに示すように、ＩＬ−6 ＢＡＬサイトカイン・レベルは、炎症の程度に関連があった。さらにまた、ＢＡＬ流体のヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１の高いレベルは、反対にサイトカイン濃度と相関し、治療効果を強く示した。
【０４０１】
このモデルにおいて生体内にＩＬ−１３生理活性を減らすために要求される抗体のレベルは、高かった。最高の有効性は、マウスの約25ｍｇ／ｋｇに対応する、500μgの抗体の用量で見られた。抗体のこの高用量の条件は、たぶん、肺反応を誘発するために用いるＩＬ−１３（5 μg ／dose x 3 doses）の高レベルの結果である。面白いことに、ヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１が鼻腔内に投与されたときだけ、そして、抗体が静脈か腹腔内を経て投与されるときでないときに、生体内のＩＬ−１３生理活性の良好な中和は見られた。分配研究は、静脈および腹腔内の投与に続いて、抗体の高レベルは犠牲時に血清において回収されたが、しかし、ＢＡＬでは非常に低いレベルで見られたことを示した。対照的に、鼻腔内投与に続いて、抗体の相当するレベルは、血清とＢＡＬで見られた。このように、ＢＡＬ流体のヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１のレベルは、静脈および鼻腔内の投与よりも、腹腔内投与に続く方が、約100倍高かった。鼻腔内の投与は有効だったが、静脈および腹腔内の投与はそうではなかったという観察は、このモデルで、抗体反応の部位が肺であったことを示唆する。この作用点はＩＬ−１３の気管内または鼻腔内到達ルートに基づいて予想され、抗体がＢＡＬ流体のＩＬ−１３を捕捉したという観察によって確認された、しかし、ごくわずかな抗体／ＩＬ−１３複合体しか血清に見られなかった。
【０４０２】
結論として、これらの所見は、さらに、生体内のヒト化ＭＪ２−７ｖ．２−１１のＩＬ−１３の中和活性を支持する。
【０４０３】
実施例２３：アレルゲンに特異的なＩｇＥ力価上に関する、アレルゲン曝露時でのＩＬ−１３および／またはＩＬ−４の中和の効果
ＩＬ−１３およびＩＬ−４は、ＩｇＥ、すなわち、アレルギー疾患の重要な媒体の産生を引き起こす（Oettgen、H.C. （2000）Curr Opin Immunol 12：618−623；Wynn、T.A. （2003）Anuu Rev. Immunol. 21：425−456）曝露の２４時間前に伝達される、ＩＬ−４またはＩＬ−１３アンタゴニストの単独投与のアレルゲンに特異的なＩｇＥレベルに関する効果が確認された。これらの問題は、標準ネズミＯＶＡ感作および曝露モデルを使用して対処された。
【０４０４】
６〜８週間目の雌のＢａｌｂ／ｃマウスは、ジャクソン研究所から購入された。マウスは、研究の前および実験の間に、環境的に制御された病原体フリーの条件で２週間、収容された。すべての手順は、Wyeth Researchの動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）によって確認し承認された。
【０４０５】
マウスの群は、ＰＢＳ中、４ｍｇ酸化アルミニウム三水和物／水酸化マグネシウム（ImjectAlum；Pierce、Rockford、ＩＬ）によって乳状にされる２０ｇＯＶＡ（grade V、Sigma−Aldrich、St Louis、MO）を含んでいる２００μｌの溶液を有する腹腔内注射によって、０日目および１３日目（図３１）に免疫化された。感作マウスは、２００μｇ／用量の可溶ネズミＩＬ−１３Ｒα２.ＩｇＧ融合タンパク質（ｓＩＬ−１３Ｒα２.Ｆｃ；Wyeth Research）または２００μｇ／用量のラット抗マウスＩＬ−４モノクローナル抗体（clone 30340；ラットＩｇＧ１ 抗マウス ＩＬ−４；R&D Systems、Minneapolis、MN）を、曝露の１日前に腹腔内注射によって投与された。対照動物は、マウスＩｇＧ２ａ（Wyeth Research）または精製したラットＩｇＧ１（Wyeth Research）を受け入れた。いくつかの群は、曝露の前または後１日目に、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃまたはコントロールで治療された。２１日目に、マウスは、Impac6 system （VetEquip、Pleasanton、CA）を使用しているイソフルラン溶液（Henry Schein、Melville、NY）によって麻酔されて、５０μｌＰＢＳの２０μｇＯＶＡ／マウスで、鼻腔内に曝露された。
【０４０６】
マウスは２８日目に殺され、そして、血液は心臓の穴から集められた。血清は、凝固活性化因子管を有するゲル・バリアを用いて得られた（CapiJect；Terumo Medical、Somerset、NJ）。
【０４０７】
ＩｇＥ力価を検定するために、ＥＬＩＳＡプレート（MaxiSorp；Nunc）は、ラット抗マウスＩｇＥ（BD Biosciences、San Jose、CA）で被覆された。プレートは、１時間、ＰＢＳ中の０．５％ゼラチンによってブロックされ、0.05％ Tween−20 （PBS−Tween）を含んでいるＰＢＳで洗浄され、標準として、精製されたマウスＩｇＥ（BD Biosciences）または血清の希釈剤を、ブロッカ−としてのマウスＩｇＧ（Sigma−Aldrich、St. Louis、MO）存在下、室温で６時間、インキュベートされた。分析は、ペルオキシダーゼに結合されたストレプトアビジン（Southern Biotechnology Associates、Birmingham、AL）およびＴＭＢ−基質溶液（SureBlue；Kirkegaard & Perry Laboratories、Gaithersberg、MD）を使用して開発された。ＯＶＡ−特異的なＩｇＥまたはＩｇＧサブタイプの決定のために、プレートは、終夜、ＯＶＡ（Sigma−Aldrich）で被覆された。結合したＩｇＥは、マウスＩｇＧ遮断剤（Sigma−Aldrich）の存在下、ビオチン化されたラット抗マウスＩｇＥ（BD Biosciences）によって定量化された。結合されたＩｇＧ１は、ビオチン化されたラット抗マウスＩｇＧ１またはラット抗マウスＩｇＧ３（BD Biosciences）によって定量化された。総ＩｇＥ濃度は、精製されたマウスＩｇＥ（BD Biosciences）の標準曲線を参照することで決定された。検出限界は、２ｎｇ／ｍｌであった。ＯＶＡに特異的な免疫グロブリンの力価は、所与の吸光度の値に達することを必要とする血清希釈剤として、標準と比較して、定量化された。検出限界は、０．５の相対的な力価であった。血清の系列希釈は、少なくとも３つの独立した分析において行われる各サンプルとともに、各分析において行われる。
【０４０８】
それぞれの試験ごとに、各動物からの反復測定の平均値が含まれた。２０匹の動物の群は、各分析において行われた。データは、GraphPad Prismソフトウェアを使用して分析された。すべての報告されたｐ値は、両側スチューデントｔ検定で測定された。
【０４０９】
抗原曝露に応答してＩｇＥ産生を引き起こすＩＬ−１３の条件について説明するために、ＩＬ−１３アンタゴニスト（ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ）は、抗原による鼻腔曝露の前および24時間後に、ＯＶＡを免疫化されたマウスに投与された。図３１で概説されるように、マウスは０日目にＯＶＡ／ミョウバンによって腹腔内投与で免疫化され、１３日目にＯＶＡ／ミョウバンによって膨張し、２１日目に鼻腔内に曝露される。ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ（２００μｇ）は、２０および２２日目に腹腔内に投与された。動物は２８日目に殺され、そして、血液は血清セパレータ管に集められた。全血清ＩｇＥは、ＥＬＩＳＡによって定量化された。コントロールマウスＩｇＧ２ａ（図３２Ａ）と比較して、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃで処置される動物の総ＩｇＥ力価に違いがなかった。ＩＬ−１３アンタゴニストの曝露の前および後に処置された動物は、アイソタイプコントロールで処置される動物と比較して、ＯＶＡに特異的なＩｇＥ力価を減らしたが、しかし、この違いは、ＯＶＡに特異的なＩｇＥ（図３２Ｂ）の検出可能な力価のない対照群のいくつかの動物の存在のため、統計的な有意性に達しなかった。ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１（図３２Ｃ）の力価に有意差がなかった。
【０４１０】
抗体投与の前および後の両方で、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃで治療される動物のＯＶＡに特異的なＩｇＥの減少した力価の傾向があったので、我々は、曝露の２４時間前に与えられたｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃの単一投与の効果を評価した。総血清ＩｇＥ濃度は、ＩｇＧ２ａコントロールと比較して、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃで治療されるマウスにおいて低下した（ｐ＜０．０５；図３３Ａ）。ＯＶＡに特異的なＩｇＥ力価は、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃの単一の投与の後も、減らされた（p < 0.01；図３３Ｂ）。ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１の力価には変化がなかった。
【０４１１】
ＩＬ−４の中和が、ＩＬ−１３の中和と類似の方法で、ＯＶＡ曝露へのＩｇＥ反応に影響を及ぼすことができるかどうか評価するために、マウスは、曝露２４時間前、２００μｇの抗ＩＬ−４の一用量の腹腔内投与を与えられた。マウスのさらなる群は、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃおよび抗ＩＬ−４（それぞれ２００μｇ）の併用で治療された。ＩＬ−１３（p < 0.05）またはＩＬ−４（p < 0.02）の中和は、総血清ＩｇＥ力価の顕著な減少をもたらした（図３４Ａ）。ＯＶＡに特異的なＩｇＥ力価は、抗ＩＬ−４（p < 0.02）またはｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ（p < 0.02）での処理の後も、著しく減らされた（図３４Ｂ）。ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１力価は、いずれの処理にも影響を受けなかった（図３５Ａ）。ＯＶＡに特異的なＩｇＧ３力価は、この研究においても測定され、抗ＩＬ−４処理ではなく、ＩＬ−１３アンタゴニスト（p < 0.001）による顕著な減少も示した（図３５Ｂ）。
【０４１２】
抗ＩＬ−４とｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃの投与は、それがいずれの試薬単独によっても生じたより大きな総血清ＩｇＥ力価の減少をもたらした（p < 0.001）（図３４Ａ）。同様に、ＯＶＡに特異的なＩｇＥ力価は、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃおよび抗ＩＬ−４による処理の後、いずれかのサイトカインを単独で防ぐことによって見られたものより、より大きな程度で減少した（p < 0.001）（図３４Ｂ）。ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃおよび抗ＩＬ−４の併用で治療されるマウスは、対照動物と比較して、ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１（図３５Ａ）またはＯＶＡ−ｓｅｐｃｉｆｉｃ  ＩｇＧ３（図３５Ｂ）の力価において異ならなかった。
【０４１３】
いくつかの研究は、ＯＶＡ免疫化またはＩｇＥ反応を調整する際に、曝露の過程の全体にわたって送達されるＩＬ−４またはＩＬ−１３の中和の有用性を検討した。（Zhou、C.Y.ら（1997）J Asthma 34：195−201；Yang、G.ら（2004）Cytokine 28：224−232）この処理方法が効果的であるにもかかわらず、本願明細書において述べられる、ＮＨＰモデルの研究は、有効なＩＬ−１３中和がＩｇＥ反応に長続きする影響を及ぼすことができることを示唆する。従って、ＩＬ−４またはＩＬ−１３中和剤の複数の投与の条件は、マウスモデルにおいて対象にされた。感作および曝露の最適条件の下で、ＩＬ−４またはＩＬ−１３中和剤による単一処理が、抗原へのＩｇＥ反応を効果的に調整することができるかどうかを我々は決定した。
【０４１４】
ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃは、強力なＩＬ−１３アンタゴニストであり、喘息の動物モデルの肺炎症、ＡＨＲおよび粘液産生を妨げることが示されている。（Wills−Karp、M.ら（1998）Science 282：2258−2261）ＩｇＥ生産に関するその効果を対象にしている以前の研究において、マウスは、最初の曝露に続いて、１０日（Wills−Karp、M.ら（1998）前掲）または６週間（Taube、C.ら（2002）J. Immunol. 169：6482−6489）、VOAによる肺の曝露が２回与えられた。二次抗原の曝露時にだけ送達されるｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃは、ＯＶＡに特異的なＩｇＥの血清力価を変えなかった（Wills−Karp、M.ら（1998）前掲、Taube、C.ら（2002）前掲）。ＩｇＥ力価に対する効果の欠如は、驚くべきことではないが、第２の曝露によって見られる強いＩｇＥ反応を与えられる（−Karp、M.ら（1998）前掲）。これと整合して、最初の曝露から始まる、ＩＬ−１３アンタゴニストのいくつかの服用量の到達は、より効果的だった。ＩＬ−１３に対する抗体が慢性の喘息モデルのＯＶＡを有する５毎週の鼻腔内曝露の各々の前に投与されるときに、ＩｇＧ１でなく、アレルゲンに特異的なＩｇＥの血清レベルは減らされた（Zhou、C.Y.ら（1997）前掲）。
【０４１５】
ＩＬ−１３中和剤を用いる単一投与の方法がマウスの特異的ＩｇＥ産生に影響を及ぼすかどうかを説明するために、ｓＩＬ−１３Ｒα２．ＦｃはＯＶＡを有する鼻腔内曝露の前に投与された。マウスは、０および１３日目にＯＶＡ／ミョウバンに対する感度を高められ、そして、それから２１日目にＯＶＡにより単一の鼻腔内曝露を与えられた。結果は、曝露の２４時間前に送達されるｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃの単一の投与は、２８日目に、犠牲時にＯＶＡに特異的なＩｇＥの力価を減らすことを示した。ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１の力価は、影響を受けなかった。総血清ＩｇＥ濃度は、大部分の実験においても低下した。面白いことに、曝露の24時間前および24時間後で、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃの２つの用量の伝達は、この治療の効力を高めなかった。
【０４１６】
ＩＬ−１３およびＩＬ−４中和の有効性を比較するために、マウスの群は、上記の通り、ＯＶＡに対して、感度を高められ、曝露されて、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ、ＩＬ−４に対する抗体のいずれか、または、ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃ、抗ＩＬ−４の両方による曝露の24時間前に治療された。ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃまたは抗ＩＬ−４による処理は、ＯＶＡに特異的なＩｇＥの力価を著しく減少させた。全血清ＩｇＥ濃度も、また、著しく減少した。ｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃおよび抗ＩＬ−４の両方の投与は、いずれか一方の単独の処理によって見られたものより、ＯＶＡに特異的な力価、および、総血清ＩｇＥ濃度において、より大きな程度の変化を生じた。しかし、ＯＶＡに特異的なＩｇＧ１、ＯＶＡに特異的なＩｇＧ３の力価のいずれもｓＩＬ−１３Ｒα２．Ｆｃおよび抗ＩＬ−４の併用による治療に影響を受けなかったので、これらの効果はＩｇＥに特異的のようである。
【０４１７】
これらの所見は、アレルギーを起こす曝露より前の単一投与のＩＬ−１３中和剤の伝達が、抗原へのＩｇＥ反応を下げることができるという、ＮＨＰ研究からの見解を支持する。ＩＬ−４中和剤は、類似の活性を有することができる。ＩＬ−４およびＩＬ−１３の中和は、ＩｇＥ反応の減少において、いずれのサイトカイン単独の中和よりも強い影響を及ぼした。これらの所見は、アレルギーを起こす曝露時におけるＩＬ−４およびＩＬ−１３の重要な条件を強調する。当業者は、本願明細書において記載されている特定の実施形態の多くの均等物を、日常的な試験だけを使用して確認することができ、または、確認するであろう。他の実施形態は、以下の請求項の範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年8月28日(2009.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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