(57)【要約】  本発明は、ヒトまたは動物の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存に適する溶液に関する。当該溶液は、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を含有する。本発明は、さらに、本発明による溶液の製造方法、および、様々な医療処置における、特に移植医療の分野における、当該溶液の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を含有することを特徴とする、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存のための溶液。
【請求項２】
少なくとも１種の可溶性グアニル酸シクラーゼの活性化剤を含有し、それは、ジカルボキシアミノ酸誘導体の群から選択され、以下の式（Ｉ）：
【化１】
2010529053.tif 000009
の化合物が好ましいことを特徴とする、請求項１に記載の溶液。
【請求項３】
少なくとも１種の可溶性グアニル酸シクラーゼの活性化剤を含有し、それは、硫黄置換スルホニルアミノカルボン酸Ｎ−アリールアミドの群から、好ましくは、以下の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）：
【化２】
2010529053.tif 000010
【化３】
2010529053.tif 000011
【化４】
2010529053.tif 000012
の化合物の群から選択されることを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の溶液。
【請求項４】
少なくとも１種の可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤を含有し、それは、置換ピラゾール誘導体、特に、ピラゾロピリジン誘導体の群から、好ましくは、以下の式（Ｖ）ないし（ＶＩＩＩ）：
【化５】
2010529053.tif 000013
の化合物の群から選択されることを特徴とする、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の溶液。
【請求項５】
少なくとも１種の可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤を含有し、それは、インダゾール誘導体、特にベンジルインダゾール誘導体の群から選択され、３−（５'−ヒドロキシメチル−２'−フリル）−１−ベンジルインダゾールが好ましいことを特徴とする、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の溶液。
【請求項６】
少なくとも１種の可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤を含有し、それは、アクリルアミド誘導体の群から選択され、３−［２−（４−クロロフェニルチオ）フェニル］−Ｎ−（４−ジメチルアミノブチル）アクリルアミドが特に好ましいことを特徴とする、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の溶液。
【請求項７】
当該活性物質を、好ましくは０.１ｎｍｏｌ／ｌないし１００μｍｏｌ／ｌ、特に０.５ｎｍｏｌ／ｌないし５μｍｏｌ／ｌの範囲の総濃度で含有する生理的電解質溶液の形態であることを特徴とする、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の溶液。
【請求項８】
基剤溶液として、好ましくは以下の基剤溶液：ＵＷ溶液（＝ウィスコンシン大学液）、Bretschneider's HTK 溶液、Euro-Collins 溶液、血漿、血清を含む群から選択される臓器保存または臓器灌流溶液を含有することを特徴とする、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の溶液。
【請求項９】
心臓麻痺性溶液として製剤化されていることを特徴とする、請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の溶液。
【請求項１０】
好ましくは血管拡張剤、血小板凝集阻害剤、血栓溶解剤、凝固阻害剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、プロスタグランジン、グルココルチコイド、抗炎症性活性物質および抗生物質を含む群から、１種またはそれ以上のさらなる医薬活性物質を含有することを特徴とする、請求項１ないし請求項９のいずれかに記載の溶液。
【請求項１１】
ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を、生理的電解質溶液に、好ましくは０.１ｎｍｏｌ／ｌないし１００μｍｏｌ／ｌ、特に０.５ｎｍｏｌ／ｌないし５μｍｏｌ／ｌの範囲の総濃度で添加することを特徴とする、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存のための溶液の製造方法。
【請求項１２】
活性物質が請求項２ないし請求項６に記載の活性物質から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織、組織の一部および／または細胞の保護溶液、保存溶液、貯蔵溶液または調製媒体としての、特に、外植前、中および後、または、エクスビボ処理中の、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液の使用。
【請求項１４】
特に外植前または中、または、外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部のエクスビボ貯蔵中、または、外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の移植前、中または後の、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流溶液または再灌流溶液としての、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液の使用。
【請求項１５】
−移植片における虚血損傷を防止または低減するための、または、
−再灌流損傷を防止または低減するための、特に、虚血再灌流症候群を防止するための；または、
−外植された臓器または組織の外植、貯蔵または輸送中の臓器または組織の損傷に対して保護するための；または、
−外植された臓器または組織の保存的処理のための、または、
−臓器または組織の再移植における機能回復を改善するための、または、
−血管移植における再狭窄を防止または低減するための；または、
−移植不全を防止するための、または、
−外科手術的介入における虚血時間を延長するための；
−術後合併症を防止または低減するための、
ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存溶液を製造するための、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される活性物質、または、そのような活性物質の少なくとも２種の組み合わせの使用。
【請求項１６】
人工心肺装置において使用するための灌流溶液を製造するための、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される活性物質、または、そのような活性物質の少なくとも２種の組み合わせの使用。
【請求項１７】
活性物質が請求項２ないし請求項６に記載の活性物質から選択されることを特徴とする、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
灌流または保存溶液が請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液であることを特徴とする、請求項１５または請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
当該臓器、臓器の一部、組織または組織の一部が、以下の群：心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、脾臓、腸、膀胱、血管、リンパ管から選択されることを特徴とする、請求項１３ないし請求項１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】
身体の臓器に対する外科手術的介入における、特に、心臓外科手術的介入における保護溶液または灌流溶液としての、好ましくは人工心肺装置の灌流溶液としての、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液の使用。
【請求項２１】
生命力を維持するか、または、臓器または組織の損傷に対して保護するための、単離または外植されたヒトまたは動物の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の処理方法であって、単離または外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質と接触させる工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２２】
単離または外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、当該活性物質を含有する液体と接触させるか、その中に浸漬、インキュベートまたは貯蔵するか、または、この液体で灌流し、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液を好ましくは使用することを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
移植、特に、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の同種または同系移植のための方法であって、以下の段階：
（ｉ）外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質と接触させる；
（ｉｉ）臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、レシピエントの身体に移植し、臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を当該活性物質と、移植前、中または後に接触させる、
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、方法。
【請求項２４】
臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液と、段階（ｉ）および／または段階（ｉｉ）において接触させることを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
以下の方法：灌流、浸漬、すすぎ、注入の１つまたはそれ以上を利用して接触させることを特徴とする、請求項２３または請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
臓器または組織が、ドナーの身体から取り出される前に、少なくとも１種の当該活性物質または当該溶液と、好ましくは灌流、浸漬、すすぎまたは注入により、既に接触していることを特徴とする、請求項２３ないし請求項２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
ヒトまたは動物由来の単離または外植された臓器、臓器の一部、組織、組織の一部または細胞を保存または貯蔵するための方法であって、臓器、臓器の一部、組織、組織の一部または細胞を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を含有する液体に浸漬し、その中で貯蔵し、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液を好ましくは使用することを特徴とする、方法。
【請求項２８】
臓器または組織の、特に虚血下での外科手術的処置のための方法であって、臓器または組織を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質と接触させる工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２９】
当該活性物質を含有する液体で臓器を灌流し、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の溶液を好ましくは使用することを特徴とする、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
当該臓器、臓器の一部、組織、組織の一部または細胞が、以下の群：心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、脾臓、腸、膀胱、血管、リンパ管、リンパ球、島細胞から選択されることを特徴とする、請求項２０ないし請求項２９のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存に適する溶液に関する。本発明は、さらに、本発明による溶液の製造方法、および、様々なタイプの医療処置における、特に移植医療の分野における、その溶液の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
臓器移植は今や医療の標準的な要素になったが、そのような手術の成功は、依然として満足のいくものではない。ドナーの臓器は、除去とレシピエントにおける移植との間の時間に血液を供給されないので、この虚血時間中の酸素の欠如のために、細胞の損傷および壊死性の組織の変化が起こり得、問題の臓器の生命力および機能性が損なわれる。虚血に誘導される血管内皮に対する損傷は、この場合に特に重要である。
【０００３】
さらに、移植された臓器の再灌流における酸化ストレスに起因するフリーラジカルおよび細胞のメディエーターの形成は、虚血再灌流症候群を引き起こし得、それは、移植片の不全を導く（＝一次移植不全または「初期非機能（initial nonfunction）」）。そこで、再灌流された臓器の機能回復は、全くないか、または、大幅に限定される。これは、本質的に、虚血および再灌流による微小循環の破壊または閉塞に起因する。
【０００４】
虚血および／または再灌流に誘導される組織、特に内皮に対する損傷は、長期の合併症、例えば、血栓性の血管の変化に起因する二次移植不全も引き起こし得る。血管移植片の場合、再狭窄への易罹患性が高まり得る。
【０００５】
上記の合併症は、臓器移植のみならず、虚血臓器への他の外科手術的介入においても、例えば、人工心肺装置の使用を伴う心臓外科手術において、起こり得る。
【０００６】
臓器、特に移植片において、虚血性損傷の発生をできるだけ低減するために、虚血時間は原則としてできるだけ短くあるべきである。その一方で、ドナーからレシピエントへ移植片を輸送するために、そして、組織の適合性に応じたドナーとレシピエントの最適な選択のために、十分な時間が残されるように、虚血時間を延長することが望ましい。虚血時間の延長は、長い手術時間を伴うより複雑な手術を可能にするためにも望ましい。
【０００７】
従来、様々なタイプの添加物を与えられた緩衝化生理的電解質溶液が、臓器を虚血性損傷から保護するために、保護、保存および灌流溶液として使用されている。先行技術において通常の標準的な溶液の例は、以下のものである：
- Bretschneider 液（ＥＰ１２２７２Ａ１、ＥＰ１３６２５１１Ａ１）；
- Bretschneider's HTK 液（ＥＰ５４６３５Ａ１；ヒスチジン、トリプトファンおよびα−ケトグルタル酸を含む）、商品：Custodiol（登録商標）；
- Euro-Collins 液（高浸透圧性溶液、そのイオン組成は細胞内空間のものに相当する）；
- UW 液 (ウィスコンシン大学液);
- St. Thomas' Hospital 液 (Plegisol（登録商標）);
- Viaspan（登録商標） ("Belzer UW"；ＵＳ４７９８８２４Ｂ１、ＵＳ４８７９２８３Ｂ１；DuPont-Pharma GmbH, Bad Homburg);
- Celsior（登録商標） (Imtix Sangstat, Lyon);
- Perfadex（登録商標） (Vitrolife AB, Gothenburg);
- Polysol（登録商標）（ＷＯ２００６／０５２１３３Ａ２）。
【０００８】
上記のタイプの標準的溶液を使用すると、虚血損傷または虚血再灌流損傷の発生が常に予測される。
虚血損傷の程度をできるだけ小さく維持するために、灌流溶液は、通常、低体温条件下（約４ないし１０℃）で用いられ、即ち、「冷虚血」を伴う。虚血再灌流損傷の発生は、これにより防止できない。
【０００９】
虚血損傷または虚血再灌流損傷の低減をもたらすことを意図する臓器灌流溶液の様々な添加物が、文献で提唱されてきた。例えば、ベンゾピロン（ＤＥ１９８４４１１６Ａ１）、グルタチオン（ＤＥ４１３８０４０Ａ１）、インシュリン（ＥＰ１１６４８４１Ｂ１）またはスーパーオキシドジスムターゼ（ＷＯ０２／３０１９２Ａ２）。しかしながら、そのような添加物の作用は不十分であり、それらの使用は、例えば副作用の発生、安定性の問題またはコストの増大などの不利益を伴う。
【発明の概要】
【００１０】
従って、既知の溶液の上記の不利益が回避または低減される、臓器および組織の灌流および保存溶液を提供することが、本発明の目的であった。特に、虚血時間の延長、虚血に誘導される損傷の低減および／または移植された臓器の機能回復の改善を可能にし、それにより、虚血再灌流損傷を回避または低減できる、灌流および保存溶液を提供することが目的であった。
【００１１】
驚くべきことに、この目的は、本発明に従い、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を含有する灌流および保存溶液を提供することにより達成される。この目的は、さらに、特許請求の範囲で定義される使用および方法により達成される。
【００１２】
虚血条件下での細胞、組織および臓器の損傷の発生は、本発明による灌流および保存溶液の使用により、有意に低減される。さらに、臓器または組織は、本発明による溶液での処理後に続く（再）移植において、当該活性物質を含有しない標準的溶液と比較して、機能回復の改善を示すことが見出された。本発明による溶液の使用により、一次または二次移植不全の発生頻度を有意に減らすことが可能であった。
【００１３】
本発明による溶液は、各々ヒトまたは動物由来の臓器、特に、中空の臓器および臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存（即ち、貯蔵）に特に適する。
【００１４】
ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の刺激剤および活性化剤は、当業者に知られている（EVGENOV O.E. et al., Nature Reviews Drug Discovery Vol. 5, Sept. 2006, 755-768）。一般に、これらは、ＮＯに依存しない（即ち、直接的）ｓＧＣの活性化または刺激、または、ＮＯに起因するｓＧＣの活性化の増大をもたらし、細胞内ｃＧＭＰ濃度の増大をもたらす化合物である。
【００１５】
ｓＧＣの活性化剤は、ヘムに依存しないｓＧＣの活性化をもたらす化合物を表す。このＮＯに依存せず、ヘムに依存しないｓＧＣの活性化剤（＝ｓＧＣ活性化剤）の活性物質の群は、ヘム欠損または酸化型のｓＧＣに対しても、即ち酸化ストレスの場合でも、活性化作用を有するので、これらの活性化剤は特に有利である。
【００１６】
ｓＧＣの刺激剤（＝ｓＧＣ刺激剤）は、ＮＯに依存しないがヘムに依存するｓＧＣの活性化をもたらす化合物を表す。
【００１７】
本発明の範囲にある刺激剤は、一般的に、ＮＯに依存しない刺激または活性化、ｓＧＣ活性の増加または増強を引き起こし、かつ／または、ＮＯまたはＣＯに起因するｓＧＣの活性化を相加的または相乗的に増強する、全ての化合物を含む。
【００１８】
本発明による溶液は、活性物質として、ＮＯに依存しないｓＧＣの刺激剤および活性化剤の群から、単一の化合物または２種またはそれ以上の化合物の組み合わせを含有し得る。
【００１９】
用語「溶液」の使用は、本発明による溶液が、溶解した物質の一部を、例えば、懸濁化、コロイド状または乳化形態で含有することを妨げない。
【００２０】
好ましい実施態様によると、本発明による溶液は、ジカルボキシアミノ酸誘導体の群から選択される少なくとも１種のＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの活性化剤を含有する。そのような活性物質およびそれらの製造および治療的使用は、ＷＯ０１／１９７８０Ａ２およびＷＯ２００７／０２５５９５Ａ１に開示されている。そこで開示された全ての活性物質、特に、ＷＯ０１／１９７８０Ａ２に記載の化合物（ｐｐ.９７−１７１；合成例１−２３２）は、本発明のために認識し得る。
【００２１】
以下の式（Ｉ）の化合物は、活性物質として特に好ましく使用される。この物質は、同様に、ＷＯ０１／１９７８０Ａ２に記載されている（１０３頁、実施例８参照）。
【化１】
2010529053.tif 000002
【００２２】
本発明に従い使用し得るさらなるジカルボキシアミノ酸誘導体およびジカルボン酸誘導体は、ＷＯ０１／１９３５５Ａ１、ＷＯ０１／１９７７６Ａ１、ＷＯ０１／１９７７８Ａ１、ＷＯ０２／０７０４６２Ａ１、ＷＯ２００２／０７０４５９Ａ１、ＷＯ０２／０７０５１０Ａ１、ＷＯ／２００７／０４５４３３Ａ１に開示されている。
【００２３】
他の好ましい実施態様によると、本発明による溶液は、硫黄置換スルホニルアミノカルボン酸Ｎ−アリールアミド類の群から選択される少なくとも１種の可溶性グアニル酸シクラーゼの活性化剤を含有する。そのような活性物質およびそれらの製造および医薬的使用は、ＷＯ００／０２８５１Ａ１に開示されている。そこで開示された全ての活性物質、特に実施例１−２２６（３９−６５頁）に記載の化合物は、本発明のために認識し得、下記の化合物（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）が特に好ましい：
【００２４】
【化２】
2010529053.tif 000003
【００２５】
【化３】
2010529053.tif 000004
【００２６】
【化４】
2010529053.tif 000005
【００２７】
他の好ましい実施態様によると、本発明による溶液は、置換ピラゾール誘導体の群から、特に、ピラゾロピリジン誘導体の群から選択される、少なくとも１種のヘムに依存する可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤を含有する。適するピラゾール誘導体およびそれらの製造方法は、例えば、ＷＯ９８／１６５０７Ａ１、ＷＯ９８／２３６１９Ａ１、ＷＯ９８／１６２２３Ａ１、ＷＯ００／０６５６７Ａ１、ＷＯ００／０６５６８Ａ１、ＷＯ００／０６５６９Ａ１、ＷＯ００／２１９５４Ａ１、ＷＯ０１／０８３４９０Ａ１、ＷＯ０２／０４２２９９Ａ１、ＷＯ０２／０４２３００Ａ１、ＷＯ０２／４２３０１Ａ１、ＷＯ０２／４２３０２Ａ１、ＷＯ０２／０９２５９６Ａ１、ＷＯ０３／００４５０３Ａ１、ＷＯ０３／０９５４５１Ａ１、ＷＯ０３／０９７０６３Ａ１、ＷＯ０３／０９５４５２Ａ１に記載されている。
【００２８】
置換ピラゾール誘導体の群の中で、以下の式（Ｖ）ないし（ＶＩＩＩ）の化合物が特に好ましい：
【化５】
2010529053.tif 000006
【００２９】
これらの化合物の製造は、ＷＯ００／０６５６９Ａ１（Ｖ）、ＷＯ００／０６５６９Ａ１およびＷＯ０２／４２３０１Ａ１（ＶＩ）、または、ＷＯ００／０６５６９Ａ１およびＷＯ０２／０９５４５１Ａ１（ＶＩＩ、ＶＩＩＩ）に記載されている。
【００３０】
ＷＯ００／２７３９４Ａ１に開示のピラゾール誘導体およびインダゾール誘導体も、ｓＧＣの刺激剤または活性化剤として認識し得、ｓＧＣ刺激剤３−［３−（ジメチルアミノ）プロポキシ］−Ｎ−（４−メトキシフェニル）−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド塩酸塩が特に好ましい。
【００３１】
他の好ましい実施態様によると、本発明による溶液は、インダゾール誘導体、特にベンジルインダゾール誘導体の群から選択される少なくとも１種のヘムに依存する可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤を含有し、３−（５'−ヒドロキシメチル−２'−フリル）−１−ベンジルインダゾールが好ましい（Ko FN et al., Blood 84 No. 12, 1994, 4226-4233)。さらなる適するインダゾール誘導体は、ＷＯ０３／０７６４０８Ａ２に開示されている。
【００３２】
他の好ましい実施態様によると、本発明による溶液は、アクリルアミド誘導体の群から選択される少なくとも１種のヘムに依存する可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤を含有し、３−［２−（４−クロロフェニルチオ）フェニル］−Ｎ−（４−ジメチルアミノブチル）アクリルアミドが特に好ましい（Miller LN et al., Life Sci., 72 (2003), 1015-1025; Nakane M et al., J. Pharmacol. Sci., Vol. 102, 231-238 (2006）参照）。
【００３３】
本発明による刺激剤として使用し得るさらなる化合物は、以下の文書に記載されている：ＷＯ２００４／００９５９０Ａ１（ピリミジン誘導体）、ＷＯ２００４／００９５８９Ａ１（２,５−二置換ピリミジン誘導体）、ＷＯ２００４／０３１１８６Ａ１（モルホリン架橋インダゾール誘導体）、ＷＯ２００７／０４５３６６Ａ１（カルボキシル−アイソスター基を有する複素環式化合物）、ＷＯ２００７／０４５３６７Ａ１（シクロプロピル酢酸誘導体）、ＷＯ２００７／０４５３６９Ａ１（ジフルオロフェノール誘導体）。
【００３４】
先行するセクションで参照した文書の内容、特に、一般的に述べた、そして、全て上記で特定して述べた化合物は、出典明示により本明細書の一部とする。
【００３５】
臓器、組織および細胞の灌流および保存用の溶液中の活性物質として本発明に従い使用し得る上記のｓＧＣの刺激剤および活性化剤は、各々、遊離塩基または遊離酸の形態で、または、それらの塩、水和物もしくは塩の水和物の形態で使用し得る。適する医薬的に許容し得る塩は、当業者に知られている。以下のものは、例えば、塩として認識し得る：塩酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、酪酸塩、メタンスルホン酸塩、硫酸塩、アスパラギン酸塩、デカン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、酒石酸水素塩、リン酸塩。
【００３６】
本発明による溶液は、好ましくは、該活性物質を含有する生理的電解質溶液として製剤化される。溶液中の総活性物質濃度は、好ましくは、０.１ｎｍｏｌ／ｌないし１００μｍｏｌ／ｌ、特に、０.５ｎｍｏｌ／ｌないし５μｍｏｌ／ｌの範囲にある。最適活性物質濃度は、当業者に知られている方法で各々決定され得る。本発明による溶液の製造に使用し得る好適な生理的電解質溶液は、当業者に知られている。
【００３７】
好ましい実施態様によると、本発明による溶液は、当該活性物質の添加により改変される基剤溶液として製造される。従来の、または、購入できる臓器保存または臓器灌流溶液を、好ましくは、基剤溶液として使用する。
【００３８】
特に、既に上記で述べた既知の溶液、即ち、ＵＷ液（＝ウィスコンシン大学液）、St. Thomas' Hospital 液; Bretschneider's HTK 液、Euro-Collins 液、Viaspan（登録商標）("Belzer UW")、Celsior（登録商標）、Perfadex（登録商標）、Polysol（登録商標）は、基剤溶液として認識し得る。既知の臨床的に常套の点滴液も、本発明による溶液を製造するための基剤溶液として使用し得る。血漿、血清または代用血液も、基剤溶液として使用し得る。
【００３９】
一般に、基剤溶液として適する生理的溶液は、電解質（ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、塩素）を細胞外または細胞内環境に相当する組成で、そして、バッファー系（例えば、リン酸バッファー、炭酸バッファー、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ；ｐＨ７.２−７.６で）、コロイド浸透圧物質（例えば、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ）およびグルコースまたは他の糖、および、マンニトール、グルタチオン、ＡＴＰ、グルコン酸塩、ラクトビオン酸塩などのさらなる任意成分を含有する。モル浸透圧濃度は、一般的に、血漿または細胞内環境のものに相当するように調節する。
【００４０】
本発明による溶液の製造に適する基剤溶液の例は、ＥＰ１２２７２Ａ１、ＥＰ１３６２５１１Ａ１、ＥＰ５４６３５Ａ１、ＵＳ４７９８８２４Ｂ１、ＵＳ４８７９２８３Ｂ１およびＷＯ２００６／０５２１３３Ａ２に記載されている。
【００４１】
他の好ましい実施態様によると、本発明は、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を各々含有する、心臓麻痺性溶液に関する。例えば、以下のものは、心臓麻痺性溶液として認識し得る：Bretschneider's HTK 液; St. Thomas' Hospital 心臓麻痺性溶液。例えば、以下のものは、心臓麻痺剤として使用し得る：カリウムイオン（＞１５ｍＭ）、リドカイン、ノボカイン（novocaine）、プロカイン。
【００４２】
他の好ましい実施態様によると、本発明は、また、ｓＧＣの刺激剤および活性化剤の群から選択されない１種またはそれ以上のさらなる医薬活性物質を付加的に含有する溶液を含む。これらのさらなる医薬活性物質は、特に、血管拡張剤、血小板凝集阻害剤、血栓溶解剤、凝固阻害剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、プロスタグランジン類、グルココルチコイド類、抗炎症性活性物質および抗生物質を含む群から選択され得る。
【００４３】
本発明による溶液は、一般的に、すぐに使用できる溶液として製造される。代わりに、溶液は、必要な最終濃度に調節するために使用前に適切に希釈される必要のある濃縮物の形態であってもよい。さらに、本発明は、上記の通り、所定の量の基剤溶液を、所定の量のｓＧＣの刺激剤および／または活性化剤と共に含有する、キットも含む。
【００４４】
本発明は、さらに、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流または保存溶液の製造方法に関する。その方法は、上記の通り、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質が、生理的電解質溶液、例えば、既知組成の保存または灌流溶液に添加されることを基礎とする。
【００４５】
本発明は、さらに、臓器、臓器の一部、組織、組織の一部および／または細胞の保護溶液、保存溶液、貯蔵溶液または調製媒体としての、上記の溶液の１つの使用に関する。当該臓器、臓器の一部等は、ヒトまたは動物由来であり得る。本発明による溶液は、特に、外植（即ち、臓器または組織の除去）前、中および後に、または、単離された臓器、臓器の一部、組織、組織の一部および／または細胞のエクスビボ処理中に、使用し得る。
【００４６】
本発明による溶液の臓器、組織および細胞の保護効果は、温虚血下（即ち、体温で、または、冷却手段の非存在下で）および冷虚血下の両方で達成される。特に１ないし１２℃、特に好ましくは４ないし８℃に冷却する場合に、好ましくはこの溶液を使用する。本発明による保存溶液を使用する場合、保存時間（即ち、「冷虚血時間」）は、単離された虚血臓器、例えば心臓または腎臓で、低体温条件下（約１ないし１２℃）で貯蔵して、このように保存された臓器の生命力および機能性を維持しながら、９６時間まで、好ましくは７２時間まで延長できる。
【００４７】
本発明は、さらに、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流溶液または再灌流溶液としての先行する請求項のいずれかに記載の溶液の使用に関する。本発明による灌流溶液は、特に、外植前、中および後に、または、外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部のエクスビボ貯蔵中に、用い得る。
【００４８】
本発明による溶液は、好ましくは、外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の移植前、中または後に、再灌流溶液として、即ち、先行する虚血時間の後、および、移植または再移植後の血液供給の回復が実施される前に、臓器などの再灌流のために用いる。
【００４９】
本発明は、さらに、身体の臓器に対する外科手術的介入における、特に、心臓外科手術的介入における保護溶液または灌流溶液としての、上記の本発明による溶液の使用を含む。本発明による溶液は、好ましくは、機械の灌流溶液として、例えば、人工心肺装置において、使用し得る。
【００５０】
他の実施態様によると、本発明は、以下の治療的または予防的目的のための、ヒトまたは動物由来の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の灌流および保存溶液を製造するための、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される活性物質、または、そのような活性物質の少なくとも２種の組み合わせの使用に関する：
−移植片における虚血損傷を防止または低減する、または、
−再灌流損傷を防止または低減する、特に、虚血再灌流症候群を防止する；または、
−外植された臓器または組織の外植、貯蔵または輸送中の臓器または組織の損傷に対して保護する；または、
−外植された臓器または組織の保存的処理、または、
−臓器または組織の再移植における機能回復を改善する、または、
−血管移植における再狭窄を防止または低減する；または、
−移植不全を防止する、または、
−外科手術的介入における、特に心臓外科手術的介入における、虚血時間を延長する；
−特に虚血条件下での介入後の、術後合併症を防止または低減する。
【００５１】
本発明に関して言及される臓器は、特に、心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、脾臓、腸または膀胱である。特に、以下のものは、臓器の一部として認識され得る：心臓弁、血管切片、肝葉、腸切片、筋肉調製物、肢。特に、皮膚移植片は、組織または組織の一部として認識される。細胞として、膵臓の島細胞が特に認識され得る。
【００５２】
用語「移植片」または「移植」は、特に、自家、同系、同種または異種の移植片または移植を表す。
【００５３】
他の実施態様によると、本発明は、生命力を維持し、臓器または組織の損傷に対して保護するための、単離または外植されたヒトまたは動物の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の処理方法に関する。本発明による方法は、単離または外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質と接触させる、少なくとも１つの工程を含む。上記の本発明による溶液の１つを、好ましくはこのために使用する。接触は、特に、単離または外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、当該活性物質を含有する液体と接触させるか、その中に浸漬、インキュベートまたは貯蔵するか、または、この液体で灌流することにより実施し得る。
【００５４】
本発明は、さらに、移植方法、特に、ヒトまたは動物の臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の同種または同系移植に関する。本発明による方法は、以下の段階の少なくとも１つを含む：
（ｉ）外植された臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質と接触させる；
（ｉｉ）臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を、レシピエントの身体に移植し、臓器、臓器の一部、組織または組織の一部を当該活性物質と、移植前、中または後に接触させる。
【００５５】
このために、上記の本発明による溶液の１種を好ましくは使用する。接触は、好ましくは、以下の方法の１つまたはそれ以上を利用して実施する：灌流、浸漬、すすぎ、注入。
【００５６】
臓器、臓器の一部、組織または組織の一部の当該活性物質による上記の処置により、臓器および組織への虚血損傷は抑制または防止され、虚血再灌流損傷に関して予防効果が達成される。
【００５７】
上記の方法の変法によると、臓器または組織は、ドナーの身体、例えば、ヒトの臓器ドナーから取り出される前に、少なくとも１種の当該活性物質または当該溶液と既に接触している。それにより、組織および細胞の損傷に対するドナーの臓器の早期に開始される保護が達成される。
【００５８】
本発明は、さらに、ヒトまたは動物由来の単離または外植された臓器、臓器の一部、組織、組織の一部または細胞の保存または貯蔵方法に関する。この方法は、臓器、臓器の一部、組織、組織の一部または細胞を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質を含有する液体に浸漬し、その中で貯蔵する工程を含む。上記のタイプの溶液を好ましくはその液体として使用する。
【００５９】
他の実施態様によると、本発明は、臓器または組織を、特に虚血下で、外科手術的に処置する方法に関する。本発明によると、これらの方法は、臓器または組織を、ＮＯに依存しない可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および活性化剤を含む群から選択される少なくとも１種の活性物質と接触させる工程を含む。これは、好ましくは、上記の溶液の１種での灌流を利用して行う。この方法は、特に心臓外科手術的介入において、例えばバイパス手術または心臓弁手術において、用い得る。
【実施例】
【００６０】
実施例
本発明およびその有利な効果は、以下の実施例によりさらに詳細に説明される：
１. 心臓麻痺性保存および灌流溶液
この溶液を製造するために、Bretschneider's HTK 液を基剤溶液として使用した。化合物（Ｉ）をこの溶液に最終濃度１０ｎｍｏｌ／ｌで添加した。
この溶液の組成は以下の通りである:
【表１】
2010529053.tif 000007
【００６１】
かくして得られる溶液を、例えば、ドナーの心臓の保存に、ドナーの心臓の外植前または後の灌流に、または、ドナーの心臓の移植前、中または後の再灌流に、使用し得る。一般に、この溶液を低体温条件下（４ないし８℃）で使用する。
【００６２】
１ａ. 心臓麻痺性保存および灌流溶液
この溶液は、１.に記載の溶液と同じ組成を有するが、但し、化合物（Ｉ）を化合物（ＩＩ）（１０μｍｏｌ／ｌ）により置き換えた。それは、１に記載の通りに使用し得る。
【００６３】
２. ウィスコンシン大学液（ＵＷ液）を基礎とする保存および灌流溶液
溶液を製造するために、購入できるＵＷ溶液を使用した。化合物（Ｉ）をこの溶液に最終濃度１５ｎｍｏｌ／ｌで添加した。
この溶液の組成は以下の通りである：
【表２】
2010529053.tif 000008
*ヒドロキシエチルスターチ
【００６４】
かくして得られる溶液は、例えば、肝臓、腎臓または肺などのドナーの臓器の保存に、外植前または後のこれらの臓器の灌流に、または、移植前、中または後の再灌流に、使用し得る。
一般に、この溶液は低体温条件下（４ないし８℃）で使用される。
【００６５】
２ａ. ウィスコンシン大学液（ＵＷ液）を基礎とする保存および灌流溶液
この溶液は、２.に記載の溶液と同じ組成を有するが、但し、化合物（Ｉ）を化合物（ＩＩ）（１０μｍｏｌ／ｌ）により置き換えた。それは、２.に記載の通りに使用する。
【００６６】
３. Euro-Collins 液を基礎とする保存および灌流溶液
この溶液を製造するために、購入できる Euro-Collins 溶液を使用した。化合物（Ｉ）をこの溶液に最終濃度１５ｎｍｏｌ／ｌで添加した。
かくして得られる溶液は、例えば、肝臓、腎臓または肺などのドナーの臓器または血管移植片の保存に、または、外植前または後のこれらの臓器の灌流に、または、移植前、中または後の再灌流に、使用し得る。
一般に、この溶液は低体温条件下（４ないし８℃）で使用される。
【００６７】
４. 保存効果
静脈のセグメント（大伏在静脈；長さ約２−６ｃｍ；バイパス患者から）を、８℃で、１２または２４時間にわたり、Euro-Collins 液（改変せず；対照実験）中で、または、３に記載の本発明による Euro-Collins 液中で、貯蔵した。さらなる一連の実験では、２に記載の本発明によるＵＷ液を使用し、標準的なＵＷ液を対照溶液として使用した。
【００６８】
次いで、血管内皮の保存状態を組織学的に調べた。特に２４時間貯蔵したサンプルの場合に、本発明による溶液で処理した血管サンプルの組織の完全性の保存は、対照よりも有意に良好であった。
【００６９】
保存された静脈切片の弛緩能力も調べた。この目的で、環状の切片（長さ約３−５ｍｍ）を静脈のセグメントから分離し、三角形のステンレス綱のフックで伸ばし、収縮と弛緩を記録するための増幅および測定器具に連結した。血管の輪を各保存溶液中に吊した。拡張反応を検出するために、血管の輪をフェニレフリンにより予め収縮させ、続いてアセチルコリンまたはニトログリセリンで処理した。本発明による溶液で処理された血管セグメントにおいて、４時間の貯蔵後でさえ収縮と弛緩の特性は実質的に保存されるが、一方、Euro-Collins 溶液中で貯蔵された血管セグメントでは収縮と弛緩の特性の悪化が起こることが見出された。保存された血管切片の生命力の有意に良好な保存が、本発明による溶液により達成された。
【００７０】
５. ラット心臓の灌流／貯蔵
単離したラットの心臓（個数：３６）を、ランゲンドルフ灌流装置を利用して灌流し、３０分後に保存溶液（４℃）中で貯蔵した。Bretschneider's HTK 溶液 （活性物質を添加しない；対照として）、上記１で特定される改変されたＨＴＫ溶液、または、上記１ａで特定される改変されたＨＴＫ溶液を、灌流および保存溶液として使用した。各場合で、１２個のラット心臓を当該溶液の１つで処理した。６時間の貯蔵時間の後、心臓を酸素添加した Tyrode 溶液で、３７℃で再灌流し（１時間）、冠血管の流速（ｍｌ／分）を測定した。冠血管の流速の最も良好な回復は、溶液「１」または溶液「１ａ」で処理した心臓で観察された。
【００７１】
６. 虚血後の再移植（心臓）
雄のウサギ (New Zealand White Rabbits；１２匹の動物）を麻酔し、開胸後に心臓を取り出し、動物を人工心肺装置に連結した。次いで、外植された部分を、灌流装置を利用して、（Ａ）本発明による心臓麻痺性溶液（上記１.参照）、または、（Ｂ）改変されていない HTK-Bretschneider 溶液（比較実験として）で灌流した。各群（Ａ、Ｂ）は６匹の動物を含んだ。灌流を５℃で９０分間実施した。次いで、心臓を再移植した。群Ａの全ての実験動物において、再移植された心臓は機能を取り戻し、動物の状態は完全な回復にまで改善された。群Ｂでは、急速な移植不全（即ち、初期非機能）が２匹の動物で起こり、この群の３匹の他の動物は再移植後の数日間しか生存しなかった。剖検結果により解明された通り、これは、壊死的に改変された移植片の機能不全に起因した。
【００７２】
この結果は、本発明による灌流溶液の使用により、再灌流損傷の発生が効果的に防止され得ることを示す。溶液（１.）の代わりに上記の溶液（１.ａ）を使用して、同様の結果が達成された。
【００７３】
７. 虚血後の再移植（腎臓）
この一連の実験には、ビーグル種のイヌを使用した（雄、体重約８−１０ｋｇ）。左の腎臓を各イヌから麻酔下で取り出し、灌流溶液ですぐに灌流した。次いで、外植された腎臓を、４℃で、同じ灌流溶液で各々浸漬し、４℃で３日間貯蔵した。
【００７４】
ＵＷ溶液を基礎とする本発明による溶液（上記２.参照）を、灌流溶液として使用した。対照実験のために、従来のＵＷ溶液を使用した。実験動物の各群は、４匹の動物を含んだ。
【００７５】
３日後、腎臓を、それを取り出したイヌに再移植した。同時に、反対側（右）の腎臓を取り出した。
【００７６】
手術終了後、血清クレアチニン濃度のプロフィールを１０日間にわたり測定した。腎臓を本発明による溶液で処理した実験動物の群では、血清クレアチニン濃度は、平均で、対照動物（改変されていないＵＷ溶液）で測定されたものの半分未満であった。このことは、本発明による溶液で腎臓を処理することにより、従来のＵＷ溶液を使用する場合よりも有意に良好な腎臓機能の保護と回復が達成されることを示した。このことは、臓器および組織の保存、並びに、虚血損傷および虚血再灌流損傷に対する保護における、本発明による溶液の有効性を裏付けた。
溶液（２.）の代わりに上記の溶液（２ａ）を使用して、匹敵する結果が達成された。
【国際調査報告】
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