(57)【要約】本発明は、特には一種又は複数種の有効成分（ＡＰ）をベクター化する際に有用な変性ポリアミノ酸をベースとした新規生分解性材料に関するものである。また、本発明は、これらポリアミノ酸をベースとした新規な薬剤、化粧品、健康食品又は植物防疫品組成物を対象とする。  本発明の目的は、ＡＰのベクター化に用いることができ、また、生体適合性、生分解性、多くの有効成分と容易に会合又は多くの有効成分を溶解させる能力、及び生体内でこれら有効成分を放出する能力、といった全ての要件を満たす新規なポリマー出発原料を提供することである。この目標は、脱プロトン化された場合に７又は７より大きなｐＫａを示すカチオン性基並びに８〜３０個の炭素原子を含む疎水性基によって変性された新規なポリグルタミン酸塩に関する本発明によって達成される。  これらカチオン性基によって変性されたポリグルタミン酸塩は、有効成分のベクター化のための粒子に容易かつ経済的に変換され、これら粒子はそれ自体安定な水性コロイド懸濁液を形成することができる。これら変性ポリグルタミン酸塩は、インスリン等のタンパク質に会合する能力を保持しながら、他の類似ポリマーよりも粘性が低いという利点を示す。いくつかは酸性のｐＨで水に可溶であり、生理的ｐＨ（７．４）で水に不溶となり、そのため、皮下注射の際に注射位置で沈殿を生じるはずである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルタミン酸残基を含む、ポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩であって、
前記グルタミン酸残基のいくつかは脱プロトン化された場合に７又は７より大きなｐＫａを示すカチオン性ペンダント基を有し、該カチオン性基は互いに同一もしくは異なり、
他のグルタミン酸残基は疎水性ペンダント基（ＧＨ）を有し、該疎水性基（ＧＨ）は互いに同一もしくは異なり、
前記カチオン性基が下記式：
【化１】
2010529214.tif 000025
［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨ、
Ｙ＝それぞれ独立してＨ又はＣＨ3、
Ｚ-＝クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテート、
Ｌ＝官能性カルボキシル基又はその誘導基で任意に置換された直鎖（Ｃ2〜Ｃ6）アルキレン］で表わされ、
前記疎水性基（ＧＨ）が、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができる直鎖もしくは分岐鎖のＣ8〜Ｃ30のアルキル、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリール又はアリールアルキル、及び
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環状化合物
からなる群から選択される、
ことを特徴とするポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
前記カチオン性ペンダント基がアミド又はエステル結合を介して前記グルタミン酸残基にグラフト化されている、請求項１に記載のポリアミノ酸。
【請求項３】
前記ポリアミノ酸が、α位のカルボキシル基でポリアミノ酸に結合しているＬ−グルタミン酸塩又はＬ−グルタミン酸のホモポリマーからなる、請求項１又は請求項２に記載のポリアミノ酸。
【請求項４】
前記カチオン性ペンダント基が、
【化２】
2010529214.tif 000026
［式中、Ｒａは、ヒドロキシル基、アルコキシ基又はアルキルアミノ基であり、好ましくは−ＯＭｅ基、−ＯＥｔ基、−ＮＨ2基、−ＮＨＣＨ3基又は−ＮＨ（ＣＨ3）2基であり、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであり、好ましくはクロライドである］からなる群から選択されるか、
或いは、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ3+，Ｚ-、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−Ｎ+（ＣＨ3）3，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−ＮＨ3+，Ｚ-
［式中、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであり、好ましくはクロライドである］である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項５】
前記ポリアミノ酸が、ポリマー鎖１つ当り平均で少なくとも３つの疎水性基（ＧＨ）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項６】
更に他のグルタミン残基が前記疎水性基（ＧＨ）以外の非イオン性ペンダント基を有し、該非イオン性基が互いに同一もしくは異なる、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項７】
前記非イオン性ペンダント基がヒドロキシエチルアミノである、請求項６に記載のポリアミノ酸。
【請求項８】
更にその他のグルタミン酸残基が、前記疎水性基（ＧＨ）とは異なる中性のｐＨでイオン化しない基を有し、該中性のｐＨでイオン化しない基が互いに同一もしくは異なる、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項９】
前記中性のｐＨでイオン化しない基が、下記式：
【化３】
2010529214.tif 000027
［式中、−Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯ2Ｈ、アルキルエステル（好ましくは−ＣＯＯＭe又は−ＣＯＯＥt）、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ3又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ3）2である］で表わされる、請求項８に記載のポリアミノ酸。
【請求項１０】
前記ポリアミノ酸が、グルタミン酸塩残基に結合したポリアルキレン（好ましくはポリエチレン）グリコールタイプのグラフトを少なくとも１つ有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１１】
前記ポリアミノ酸が、下記式（Ｉ）：
【化４】
2010529214.tif 000028
［式中、Ａは、それぞれ独立して、
ＲＮＨ−（ここで、Ｒは、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル基又はベンジル基である）、又は
式：
【化５】
2010529214.tif 000029
（式中、−Ｒ7は、−ＯＨ、−ＯＲ9又は−ＮＨＲ10であり、
Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＨ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル基又はベンジル基である）で表わされる末端アミノ酸残基であり、
Ｂは、直接的な結合、又は、好ましくは以下の基：
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ1〜Ｃ5のアルキル）−、１〜６個の炭素原子を含むアミノ酸（好ましくは天然アミノ酸）の、ジオールの、トリオールの、ジアミンの、トリアミンの、アミノアルコールの又はヒドロキシ酸の残基から選択される２価、３価若しくは４価の結合基であり、
Ｄは、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アシル基又はピログルタメートであり、
疎水性基（ＧＨ）は、それぞれ互いに独立して、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができる直鎖若しくは分岐鎖のＣ8〜Ｃ30のアルキル、又は
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリール若しくはアリールアルキル、又は
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環状化合物から選択される基であり、
Ｒ1は、下記式：
−ＮＨ−（ＣＨ2）w−ＮＨ3+，Ｚ-（ここで、ｗは２〜６の間、好ましくは４である）、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−Ｎ+（ＣＨ3）3，Ｚ-、
の一つで表わされる基、
式：
【化６】
2010529214.tif 000030
｛式中、Ｘは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、
Ｒ12は、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル或いはベンジルであり、
Ｒ13は、−（ＣＨ2）4−ＮＨ3+，Ｚ-、−（ＣＨ3）3−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、−（ＣＨ2）3−ＮＨ3+，Ｚ-（ここで、対アニオンＺ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであり、好ましくはクロライドである）である｝で表されるアミノ酸残基若しくはアミノ酸誘導基であり、
Ｒ3は、ヒドロキシエチルアミノ、アルキレングリコール、ポリアルキレングリコール基、又は式：
【化７】
2010529214.tif 000031
｛式中、−Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯ2Ｈ、アルキルエステル（好ましくは−ＣＯＯＭe又は−ＣＯＯＥt）、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ3又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ3）2である｝で表される基であり、
ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、正の整数であり、
（ｐ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、疎水性基ＧＨのモルでのグラフト度合で定義され、２〜９９モル％、好ましくは５〜５０モル％の間で変化し、但し、各コポリマー鎖は平均して少なくとも３つの疎水性のグラフトを有し、
（ｑ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、カチオン性基のモルでのグラフト度合で定義され、１〜９９モル％で変化し、
（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、１０〜１０００、好ましくは３０から５００の間で変化し、
（ｒ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、０〜９８モル％で変化し、
（ｓ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、０〜９８モル％で変化する］で表わされる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリアミノ酸を少なくとも１種含む、薬剤、化粧品、健康食品又は植物防疫組成物。
【請求項１３】
更に有効成分を少なくとも１種含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記有効成分が、共有化学結合以外の一つ又は複数の結合により前記ポリアミノ酸と会合している、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記有効成分が、ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、ＲＮＡ及びオリゴＲＮＡからなる群から選択される、請求項１３又は１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、水相若しくは油相中でのポリアミノ酸のナノ粒子及び／又はマイクロ粒子及び／又はミセルのコロイド懸濁液を含む、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記懸濁液が、酸性のｐＨでは水相中においてナノ粒子のコロイド溶液であり、生理的ｐＨでは沈殿を生じる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
薬剤、特には、経口投与、経鼻投与、経肺投与、経膣投与、経眼投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、腹腔内投与又は大脳内投与のための薬剤の調製方法あって、
該方法が、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリアミノ酸の少なくとも一種及び／又は請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の組成物を使用することを本質的に特徴とし、
前記薬剤の有効成分が、タンパク質、糖タンパク質、一つ又は複数のポリアルキレングリコール鎖に結合したタンパク質、ペプチド、多糖類、リポ多糖類、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、疎水性、親水性及び両親媒性の有機小分子、栄養分、化粧品及び植物防疫品からなる群から選択される
薬剤の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特には、一種又は複数種の有効成分（ＡＰ）をベクター化する際に有用なアミノ酸コポリマーを含む新規な生分解性材料に関するものである。
【０００２】
また、本発明は、これら変性ポリアミノ酸を含む新規な薬剤、化粧品、健康食品もしくは植物防疫組成物を対象とする。これら組成物は、ＡＰのベクター化を可能にするタイプのものとすることができ、好ましくはエマルション、ミセル、ナノ粒子、マイクロ粒子、ゲル、インプラント、又はフィルムの形態で提供される。
【０００３】
好適なＡＰは、経口、非経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、脳内、口腔ルート等を用いて、動物や人間の組織に投与できる、有益な生理活性化合物である。
【０００４】
本発明が特に関連する有効成分は、特に限定されるものではないが、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド、多糖類、リポ多糖類、オリゴ又はポリヌクレオチド、及び有機分子である。しかしながら、化粧品、又は、除草剤、殺虫剤、殺菌剤等の植物防疫品も想定される。
【背景技術】
【０００５】
有効成分、特には、医薬の有効成分のベクター化の分野では、
それらの分解（加水分解、酵素による消化など）を防ぎ、
及び／又は一定期間に渡って治療レベルを維持するために、それらの放出速度を制御し、
及び／又はそれらを（それらを保護しながら）作用部位まで運搬する
必要性がある。
【０００６】
何種類かのポリマーがこれらの目的のために研究され、中には市販されているものすらある。かかるポリマーの例としては、ポリ乳酸、ポリ乳酸／ポリグリコール酸、ポリオキシエチレン／オキシプロピレン、ポリアミノ酸、又は多糖ポリマーが挙げられる。これらのポリマーは、例えば、インプラント、マイクロ粒子、ナノ粒子、ベシクル、ミセル又はゲルを大量生産する際に出発原料として用いられる。これらのポリマーはかかる系の生産に適さなくてはならない一方、生体適合性、非毒性、非免疫応答性及び経済性を有さなければならず、また、体内から容易に排出され、及び／又は生分解性でなければならない。後者の側面に関しては、更に、体内で生分解されて非毒性の生成物を発生することが必須である。
【０００７】
ＡＰのベクター化系の調製のための出発原料として用いられるポリマーに関する先行技術の説明のために、以下に、様々な特許、特許出願及び科学文献を挙げる。
【０００８】
米国特許第４,６５２,４４１号には、ホルモンＬＨ−ＲＨをカプセル化するポリラクチドマイクロカプセルが記載されている。これらのマイクロカプセルは、水中油中水型のエマルションを調製することによって作製され、該エマルションは、ホルモンを含む水性の内部層、後者を固定化する物質（ゼラチン）、油性のポリラクチド層、及び水性の外部層（ポリビニルアルコール）を有する。ＡＰの放出は、皮下注射の後２週間より長い期間に渡って生じ得る。
【０００９】
米国特許第６,１５３,１９３号には、ドキソルビシン等の抗癌剤のベクター化用のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）の両親媒性ミセルをベースとした組成物が記載されている。
【００１０】
Ａｋｉｙｏｓｈｉら（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，１９９８，５４，３１３−３２０）は、コレステロールをグラフト化することで疎水性を高め、また水中でナノ粒子を形成する、プルランを記載している。これらのナノ粒子は、インスリンと可逆的に錯体を形成することができ、安定なコロイド懸濁液を形成する。
【００１１】
米国特許第４,３５１,３３７号には、有効成分の放出量を制御するためにインプラントやマイクロ粒子の形態で用いることができる、ロイシン及びグルタミン酸塩をベースとした両親媒性のアミノ酸コポリマーが記載されている。有効成分の放出は、ポリマーの分解速度に依存して、非常に長期間に渡って生じ得る。
【００１２】
米国特許第４,８８８,３９８号には、ポリグルタミン酸塩又はポリアスパラギン酸塩、及び任意選択的にアルコキシカルボニルメチル基をポリアミノ酸鎖にランダムに導入したポリロイシンをベースとするポリマーが記載されている。例えば、メトキシカルボニルメチル基等の側鎖でグラフト化されたポリアミノ酸を、持続的な放出のために、ＡＰを含む生分解性インプラントの形態で用いることができる。
【００１３】
米国特許第５,９０４,９３６号には、ポリロイシン／ポリグルタミン酸塩ブロックポリマーから得られるナノ粒子が記載されており、該ブロックポリマーは、安定なコロイド懸濁液を形成することができ、生理活性タンパク質を変性させることなく生理活性タンパク質と自発的に結合することができる。その後、該活性タンパク質を生体内において長期間に渡って制御した態様で放出させることができる。
【００１４】
米国特許第５,４４９,５１３号には、ポリオキシエチレンブロック、及び、例えばポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸塩）のようなポリアミノ酸ブロックを有する、両親媒性ブロックコポリマーが記載されている。これらのポリオキシエチレン／ポリベンジルアスパラギン酸塩ポリマーは、ドキソルビシン又はインドメタシン等の疎水性活性分子をカプセル化可能なミセルを形成する。
【００１５】
国際公開第９９／６１５１２号には、疎水性基（ポリリジン又は−オルニチンと結合させたパルミチン酸）及び親水性基（ポリオキシエチレン）で官能基化した、ポリリジン及びポリオルニチンが記載されている。これらのポリマー、例えばポリオキシエチレン及びパルミトイル鎖でグラフト化されたポリリジンは、コレステロールの存在下では、ドキソルビシン又はＤＮＡをカプセル化可能なベシクルを形成する。これらのポリリジンをベースとしたポリマーは、生理的媒体中においてカチオン性である。
【００１６】
欧州特許出願公開第９６３ ７５８号には、カチオン性基によって官能基化されたポリアミノ酸が記載されている。これらのポリマーは、核酸と錯体を形成することができ、遺伝子治療に用いることができる。該カチオン性基はアミノ酸に由来しないアミン誘導基であり、ポリアミノ酸は疎水性基を含まない。
【００１７】
Ｙａｎｇら（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００５，２７，９７７−９８２）は、直鎖アルキル基及びオリゴアルギニンによって官能基化したポリアスパラギン酸塩を記載している。これらのポリマーは、水中で８〜４０ｎｍの大きさのナノ粒子を形成し、また細胞に吸収され得る。これらの粒子は、疎水性分子をベクター化するのに使用できることが示唆されている。
【００１８】
同分野において、本出願人は、いくつかの特許出願において、関連した概念をもってポリグルタミン酸塩（アニオン性ポリマー）をベースとしたポリマーを記載している。
【００１９】
国際公開第０３／１０４３０３号には、α−トコフェロールによって官能基化したアニオン性ポリアミノ酸が記載されている。
【００２０】
国際公開第２００４／０１３２０６号には、複数の疎水性基を有し、これらの基が２つのアミド官能基を含む結合部を介して、特には、リシン又はオルニチンのスペーサーを介してポリマーに結合したアニオン性のポリアミノ酸が記載されている。
【００２１】
国際公開第２００４／０６０９６８号には、ロイシン、イソロイシン、バリン、及び／又はフェニルアラニンをベースとしたオリゴアミノ酸の少なくとも一種によって官能基化したポリアミノ酸が記載されている。
【００２２】
Ｗ．Ｃ．Ｓｈｅｎによる論文、“Ａｃｉｄ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｏｌｙ（ｌｙｓｉｎｅ） ａｎｄ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙ（ｇｌｕｔａｍａｔｅ） ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｄｒｕｇ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｆｒｏｍ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ ｅｎｄｏｓｏｍｅ”，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０３４（１），１２２−１２４，１９９０には、ヒスタミンによって４０％官能基化されたポリグルタミン酸塩が記載されている。しかしながら、この文献は、疎水化されたポリグルタミン酸塩骨格について全く述べていない。更には、記載されているポリマーは、ｐＨ４と５の間において沈殿し、生理的ｐＨでは溶解する。開発されている唯一の用途は、ｐＨ−感受性のポリリシンでの錯体の形成を対象としている。これらの錯体は、静電的相互作用によって形成される。特に、生理的ｐＨでは、ポリグルタミン酸塩−ヒスタミン／ポリリシン錯体が形成され、ｐＨ４〜５というエンドソーム内でのｐＨで分解する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許第４,６５２,４４１号
【特許文献２】米国特許第６,１５３,１９３号
【特許文献３】米国特許第４,３５１,３３７号
【特許文献４】米国特許第４,８８８,３９８号
【特許文献５】米国特許第５,９０４,９３６号
【特許文献６】米国特許第５,４４９,５１３号
【特許文献７】国際公開第９９／６１５１２号
【特許文献８】欧州特許出願公開第９６３ ７５８号
【特許文献９】国際公開第０３／１０４３０３号
【特許文献１０】国際公開第２００４／０１３２０６号
【特許文献１１】国際公開第２００４／０６０９６８号
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，１９９８，５４，３１３−３２０
【非特許文献２】Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００５，２７，９７７−９８２
【非特許文献３】“Ａｃｉｄ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｏｌｙ（ｌｙｓｉｎｅ） ａｎｄ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙ（ｇｌｕｔａｍａｔｅ） ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｄｒｕｇ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｆｒｏｍ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ ｅｎｄｏｓｏｍｅ”，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０３４（１），１２２−１２４，１９９０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
このように、医薬の活性成分をベクター化する従来技術において、多くの技術的解決策が開発され発表されてきたが、すべての要望に応えることは難しく、改良の余地が残っている。より具体的には、本発明は、有効成分と可逆的に会合され得るベクター化用のコロイド状のナノ粒子又はマイクロ粒子に変換されることが可能な生分解性ポリアミノ酸に関するものである。
【００２６】
ここで、本発明の本質的な目的の１つは、中性のｐＨ又は中性に近いｐＨにおける正電荷と、ペンダント（乃至垂れ下がった）基としての疎水性基との両方を有する新規な両親媒性のグルタミン酸塩コポリマーを提供することである。
【００２７】
これらのポリマーは、上述の特許若しくは特許出願に記載されているポリマーに対し、治療用のペプチド若しくはタンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡ又は小分子等の有効成分のベクター化の点で、改良点を示す。
【００２８】
本発明のもう１つの目的は、これらのポリマーを有効成分（ＡＰ）のベクター化に有用にすること、また、総ての要件、即ち、具体的には、
安定な水性のコロイド懸濁液を容易かつ経済的に形成する能力、
多くの有効成分と容易に会合する能力、
これら有効成分を生体内において放出する能力、
生体適合性、
生分解性、
加水分解に対する安定性
といった全ての要件の仕様を最適に満たすようにすることである。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
他の目的の中でも、この目的は本発明によって達成され、本発明は、グルタミン酸残基を含む、ポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩に関するものであり、前記グルタミン酸残基のいくつかは、脱プロトン化された場合に７若しくは７を超えるｐＫａを示すカチオン性ペンダント基をそれぞれ有し、該カチオン性基は互いに同一もしくは異なり、また、他のグルタミン酸残基はそれぞれ疎水性ペンダント基（ＧＨ）を有し、該疎水性基（ＧＨ）は互いに同一もしくは異なる。
【００３０】
以下の記述において、特に断りのないときは、「カチオン性基」という語句は、一般的に脱プロトン化できないカチオン性基及び脱プロトン化できて７以上のｐＫａを示すカチオン性基を意味する。
【００３１】
本発明によるポリアミノ酸の「薬学的に許容可能な塩」という語句は、ポリマーのイオン化作用によって会合した対イオンを有する全てのポリアミノ酸を包含するものと解される。
【００３２】
以下の記述において、「小分子」という語句は、分子量が１ｋＤａより小さな分子を意味するものと解される。
【００３３】
特に断りのないときは、アルキル基は１〜１０個の炭素原子を含む。
【００３４】
上に述べたように、本発明による各ポリグルタミン酸を、互いに同一もしくは異なる多重のカチオン性ペンダント基、および互いに同一もしくは異なる疎水性ペンダント基（ＧＨ）によって官能基化する。
【００３５】
本発明の意義において、「多重」との語句は、ポリグルタミン酸塩が、
少なくとも１％且つ多くとも９９％のカチオン性基（グルタミン酸残基についてのモル％）によって、
平均して、１分子当り少なくとも２つの疎水性ペンダント基（ＧＨ）によって
官能基化されていることを意味する。本発明によれば、ポリグルタミン酸は、疎水性ペンダント基（ＧＨ）に加え、コポリマー鎖の少なくとも一つの末端に結合している疎水性基（ＧＨ）を含むことができる。
【００３６】
本発明の意義において、「有する」との表現は、有されている基がペンダントである、即ち、該基がグルタミン酸残基に対して側基であって、該基を有するグルタミン酸残基のγ位において官能性カルボニル基の置換基であることを意味する。
【００３７】
また、本発明のポリグルタミン酸塩は、カチオン性基を有する。これらの基は、好ましくはアミド又はエステル結合を介してグルタミン酸残基に結合している。
【００３８】
本発明の他の実施態様によれば、他のグルタミン酸残基は、疎水性基（ＧＨ）とは異なる非イオン性ペンダント基をそれぞれ有することができ、該非イオン性基は互いに同一もしくは異なる。かかる非イオン性ペンダント基は、例えばヒドロキシエチルアミノ基とすることができる。
【００３９】
本発明の更に他の実施態様によれば、他のグルタミン酸残基は、カルボニルに対してγ位に、疎水性基（ＧＨ）とは異なる中性のｐＨでイオン化しない基をそれぞれ有することができ、該中性のｐＨでイオン化しない基は互いに同一もしくは異なる。例えば、かかる基は、下記式：
【化１】
2010529214.tif 000002
［式中、−Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯ2Ｈ、アルキルエステル（好ましくは−ＣＯＯＭeもしくは−ＣＯＯＥt）、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ3又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ3）2である］で表わされてもよい。
【００４０】
また、同時にカチオン性基、疎水性基、及び任意に非イオン性基（イオン化できない又は中性のｐＨでイオン化されない）を有するポリグルタミン酸塩は、官能基化されていないポリグルタミン酸のペンダント基のイオン化によって生じた（中性のｐＨで）負電荷を有することもできる。
【発明の効果】
【００４１】
本出願人は、カチオン性基を有し、多重の疎水性基によって官能基化され、安定なコロイド系を形成することが可能なポリグルタミン酸塩をベースとした新規なポリマー群を開発した。官能基化の割合の関数としてポリマーの充填量を調整することが可能であることは、
製剤段階において注入を容易にする又は使用を容易にするために、ポリマーの粘度を低減すること、
中性、アニオン性もしくはカチオン性の有効成分に対して良好な会合をもたらすこと
において、非常に有効であることを証明できる。
【００４２】
従って、本発明のポリマーは、
アニオン性、カチオン性もしくは中性であって、帯電した又は帯電していない有効成分と会合でき、
中程度の酸性（ｐＨ＝４〜５）においてカチオン性であって、中性のｐＨにおいて中性又は弱く帯電することができる。この場合、このｐＨ依存性により、ｐＨ＝４〜５の溶液中でそれらを有効成分と会合させた後、生理的媒体中で沈殿物を生じさせることができる。
【００４３】
更に、本発明におけるポリマーは、酵素存在下において容易に分解され、無害な異化生成物／代謝生成物（アミノ酸）を生成する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明の意義において、及び本書類を通じて、「会合」もしくは「会合する」との語句は、一種又は複数種の有効成分と変性ポリグルタミン酸塩との間の関係を特徴付けるのに用いられ、一種又は複数種の有効成分が、特には疎水性相互作用を介してポリグルタミン酸塩に結合もしくは連結させていること、並びに／或いは、ポリグルタミン酸塩によりカプセル化されていることを意味する。
【００４５】
有利なことに、本発明のポリアミノ酸は、Ｌ−グルタミン酸塩もしくはＬ-グルタミン酸ホモポリマーであり、好ましくは、ポリアミノ酸中で、これら残基はそれらのα位のカルボキシル基で連結されている。
【００４６】
グルタミン酸塩単位の官能基化に用いることが可能なカチオン性基は、互いに同一もしくは異なり、下記一般式：
【化２】
2010529214.tif 000003
［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨ、
Ｙ＝それぞれ独立してＨ又はＣＨ3、
Ｚ-＝クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテート、
Ｌ＝官能性カルボキシル基又はその誘導基で任意に置換された直鎖（Ｃ2〜Ｃ6）アルキレン］で表わされる。
【００４７】
好適な実施態様によれば、カチオン性基は、リシン、オルニチン、アルギニン及びそれらの誘導体、コリン、（酸素原子を介して連結させた）エタノールアミン、プトレッシン並びにアグマチンからなる群から選択される化合物から得られる。
【００４８】
リシン、オルニチン及びアルギニン誘導体は、例えば、エチルエステル及びメチルエステル、アミド並びにメチル化アミドであってもよい。
【００４９】
従って、本発明で用いることが可能なカチオン性基は、以下の基：
【化３】
2010529214.tif 000004
［式中、Ｒａは、ヒドロキシル基、アルコキシ基又はアルキルアミノ基であり、好ましくは−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＮＨ2、−ＮＨＣＨ3又は−ＮＨ（ＣＨ3）2であり、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであって、好ましくはクロライドである］
或いは、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ3+，Ｚ-、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−Ｎ+（ＣＨ3）3，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−ＮＨ3+，Ｚ-
［式中、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであって、好ましくはクロライドである］
から選択することができる。
【００５０】
例えば、本発明で用いることができるカチオン性基は、以下の構造式（式中、前駆体の名前をそれぞれの基の下に示す）：
【化４】
2010529214.tif 000005
［式中、Ｒａは、ヒドロキシル基、アルコキシ基又はアルキルアミノ基であり、好ましくは−ＯＭｅ基、−ＯＥｔ基、−ＮＨ2基、−ＮＨＣＨ3基又は−Ｎ（ＣＨ3）2基である］で表わすことができる。
【００５１】
好適な実施態様によれば、本発明のポリアミノ酸は、ポリマー鎖１つ当たり平均して少なくとも３つの疎水性基（ＧＨ）を有する。
【００５２】
有利なことに、疎水性基ＧＨの少なくとも１つは、少なくとも１つのスペーシング結合部（又は単位）（スペーサー）を有する疎水性のグラフト中に含まれ、該スペーサーは、疎水性基ＧＨがポリグルタミン酸塩鎖（例えば、ポリグルタミン酸塩の主鎖）に連結するのを可能とする。この結合部は、例えば少なくとも１つの直接的な共有結合及び／又は少なくとも１つのアミド結合及び／又は少なくとも１つのエステル結合を有することができる。例えば、結合部は、特には、ポリグルタミン酸塩の構成モノマー単位以外の「アミノ酸」残基、アミノアルコール誘導基、ポリアミン（例えばジアミン）誘導基、ポリオール（例えばジオール）誘導基及びヒドロキシ酸誘導基からなる群に属することができる。
【００５３】
ポリグルタミン酸塩鎖への複数のＧＨのグラフト化には、ポリグルタミン酸塩鎖に結合させることが可能なＧＨ前駆体の使用が含まれ得る。
【００５４】
複数のＧＨ前駆体は、実際には、特に限定されるものではないが、アルコール及びアミンからなる群から選択することができ、これらの化合物は当業者によって容易に官能基化される。複数のＧＨ基のグラフト化については、以下の本発明に従って変性ポリアミノ酸を得るための方法の説明において、より詳細に開示する。
【００５５】
好適な実施態様によれば、疎水性グラフト基の疎水性基（ＧＨ）は、８〜３０個の炭素原子を含む。
【００５６】
これらの疎水性基（ＧＨ）を、有利にかつ注意深く：
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができる直鎖もしくは分岐鎖のＣ8〜Ｃ30のアルキル、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリール又はアリールアルキル、
並びに、少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環状化合物
からなる群から選択する。
【００５７】
ＧＨと結合部を形成する疎水性のグラフトは、２価、３価若しくは４価の結合部とすることができる（実際は５価以上ですらあり得る）。２価の結合部の場合、疎水性グラフトは１つのＧＨ基を含み、一方、３価の結合部は二分の性質を疎水性グラフトに付与し、即ち、グラフトは２つのＧＨの「腕」を示す。３価の結合部の例としては、特に限定されるものではないが、例えば「グルタミン酸」等の「アミノ酸」残基、または、例えばグリセロール等のポリオール残基が挙げられる。従って、二分のＧＨを含む有利で非限定的な２つの例は、ジアルキルグリセロールおよびジアルキルグルタミン酸塩である。
【００５８】
疎水性基ＧＨは、例えば、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロールおよびコレステロールからなる群から選択される基から誘導することができる。
【００５９】
他の実施態様によれば、本発明のポリグルタミン酸塩は、グルタミン酸残基に結合したポリアルキレン（好ましくはポリエチレン）グリコール型のグラフトを少なくとも１つ有することもできる。
【００６０】
好ましくは、本発明のポリグルタミン酸塩の骨格は、α−Ｌ−グルタミン酸塩及び／又はα−Ｌ−グルタミン酸単位を含む。
【００６１】
より好ましくは、本発明のポリグルタミン酸塩は、下記式（Ｉ）：
【化５】
2010529214.tif 000006
［式中、Ａは、それぞれ独立して、
ＲＮＨ−（ここで、ＲはＨ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル基又はベンジル基である）、
式：
【化６】
2010529214.tif 000007
（式中、−Ｒ7は−ＯＨ、−ＯＲ9又は−ＮＨＲ10であり、
Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＨ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル基又はベンジル基である）で表される末端アミノ酸残基であり、
Ｂは、直接的な結合、又は、好ましくは以下の基：
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ1〜Ｃ5のアルキル）−、１〜６個の炭素原子を含むアミノ酸（好ましくは天然アミノ酸）の、ジオールの、トリオールの、ジアミンの、トリアミンの、アミノアルコールの又はヒドロキシ酸の残基から選択される２価、３価若しくは４価の結合基であり、、
Ｄは、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アシル基又はピログルタメートであり、
疎水性基（ＧＨ）は、それぞれ互いに独立して、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができる直鎖若しくは分岐鎖のＣ8〜Ｃ30のアルキル、又は
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリール若しくはアリールアルキル、又は
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環状化合物から選択される基であり、
好ましくは、この基は、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロールおよびコレステロールからなる群から選択され、Ｂを直接結合とし、
Ｒ１は、下記式：
−ＮＨ−（ＣＨ2）w−ＮＨ3+，Ｚ-（ここで、ｗは２〜６の間、好ましくは４である）、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−Ｎ+（ＣＨ3）3，Ｚ-、
の一つで表わされる基、
式：
【化７】
2010529214.tif 000008
｛式中、Ｘは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、
Ｒ12は、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル又はベンジルであり、
Ｒ13は、−（ＣＨ2）4−ＮＨ3+，Ｚ-、−（ＣＨ3）3−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、−（ＣＨ2）3−ＮＨ3+，Ｚ-（ここで、対アニオンＺ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであり、好ましくはクロライドである）である｝で表されるアミノ酸残基もしくはアミノ酸誘導基であり、
Ｒ3は、ヒドロキシエチルアミノ−、アルキレングリコール、ポリアルキレングリコール、又は式：
【化８】
2010529214.tif 000009
｛式中、−Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯ2Ｈ、アルキルエステル（好ましくは−ＣＯＯＭe又は−ＣＯＯＥt）、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ3又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ3）2である｝で表される基であり、
ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、正の整数であり、
（ｐ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、疎水性基ＧＨのモルでのグラフト度合で定義され、２〜９９モル％、好ましくは５〜５０モル％の間で変化し、但し、各コポリマー鎖は平均して少なくとも３つの疎水性のグラフトを有し、
（ｑ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、カチオン性基のモルでのグラフト度合で定義され、１〜９９モル％で変化し、
（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、１０〜１０００、好ましくは３０から５００の間で変化し、
（ｒ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、０〜９８モル％で変化し、
（ｓ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、０〜９８モル％で変化する］で表わされるもの、及びその薬学的に許容可能な塩である。
【００６２】
好ましくは、疎水性基ＧＨ及びカチオン性基は、ペンダンント基としてランダムに配置される。
【００６３】
一般的に、上記の式（Ｉ）は、ブロックコポリマーのみを表わすだけでなく、ランダムコポリマーやマルチブロックコポリマーも表わすと解すべきである。
【００６４】
更に、本発明のポリグルタミン酸塩の疎水性単位のモルでのグラフト度合は、２〜９９％の間が好ましく、好ましくは５〜５０％の間であり、但し、各ポリマー鎖は平均して少なくとも３つの疎水性グラフトを有する。
【００６５】
本発明のポリグルタミン酸塩の（ｑ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）比は、ポリグルタミン酸塩が正電荷を有する官能基を１〜約９７モル％含むことができることを意味する。
【００６６】
本発明のポリグルタミン酸塩の（ｓ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）比は、ポリグルタミン酸塩が中性のｐＨで、アニオン性、中性又はカチオン性となり得ることを意味する。
【００６７】
本発明の他の実施態様によれば、本発明のポリマーは、２ ０００〜２００ ０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは５ ０００〜１００ ０００ｇ／ｍｏｌの間のモル質量を有する。
【００６８】
また、本発明は、上に定義した変性ポリアミノ酸の混合物を包含することは明らかである。
【００６９】
本発明のポリグルタミン酸塩が、ポリグルタミン酸塩が有する電荷およびその重合度と同様に、疎水性基とカチオン性基の性質に依存して、さまざまな様式で用いることができることは注目に値することである。本発明により想定される様々な形態で有効成分をカプセル化するためのポリマーの形成方法は、当業者に公知である。更なる詳細については、例えば、これら幾つかの特に関連する文献を参照されたい：
“Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ， Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；第１巻、Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ｒ．Ａｒｓｈａｄｙ編，Ｃｉｔｕｓ Ｂｏｏｋｓ，１９９９．ＩＳＢＮ：０−９５３２１８７−１−６．
“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ”，Ｊ．Ｓｅｎｉｏｒ及びＭ．Ｒａｄｏｍｓｋｙ編，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，２０００．ＩＳＢＮ：１−５７４９１−１０１−５．
“Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９９４．ＩＳＢＮ：０−８２４７−９２１４−９．
“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ”，Ｄ．Ｌ．Ｗｉｓｅ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００．ＩＳＢＮ：０−８２４７−０３６９−３．
【００７０】
本発明のポリグルタミン酸塩（粒子又は粒子でない形状）は、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ又は小分子等の有効成分と容易に会合、或いは容易にそれらをカプセル化することができる。好適な形成方法は、出願人に交付された米国特許第６,６３０,１７１号に記載されたものであり、コポリマーを水中に分散させ、有効成分（ＡＰ）の存在下において溶液をインキュベートすることを本質とするものである。本発明のポルグルタミン酸塩からなるベクター化粒子のコロイド状溶液を、続いて０．２μｍのフィルターを用いて濾過し、その後、直接患者に注射することができる。
【００７１】
ポリマーがカチオン性であって過剰な正電荷に起因して酸性のｐＨで溶解し、かつその正電荷が中性のｐＨで部分的にもしくは完全に中性化される場合、そのようなポリマーはｐＨ依存性であると言われる。従って、このタイプのポリマーを用いて、例えば、皮下組織に投与した後に、沈殿物を形成することができる。
【００７２】
変性ポリグルタミン酸塩の残留官能性カルボキシル基は、ｐＨ及び組成に依存して、中性（ＣＯＯＨの形態）もしくはイオン性（ＣＯＯ-アニオン）のいずれかであることを理解すべきである。故に、ｉ）グルタミン酸塩の残基もしくはグルタミン酸残基、ｉｉ）ポリグルタミン酸もしくはポリグルタミン酸塩の、という語句は、相互変換できるものとして使用する。水溶液中において、対カチオンは、ナトリウム、カルシウムもしくはマグネシウム等の金属カチオン、又はトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等の有機カチオン、又はポリエチレンイミン等のポリアミンとすることができる。対カチオンが２価の場合、該対カチオンは、２つの閉じた１価のアニオン性基と塩を形成することができる。
【００７３】
カチオン性基の対アニオンは、好ましくはクロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートを含む群から選択される。対アニオンが２価の場合、該対アニオンは、２つの閉じた１価のカチオン性基と塩を形成することができる。従って、本明細書において、ポリマーの「薬学的に許容可能な塩類」という語句は、ポリマーのイオン化作用によって会合した対イオンを有する全てのポリマーを包含する。また、電荷の全て又は部分的な中和を、正電荷と負電荷が共存するある種の構造において想定することができる。正電荷と負電荷を等しい数有する（等電点の）ポリマーは、対アニオン又は対カチオンの存在しない条件において存在し得る。
【００７４】
本発明のコポリマーは、当業者に公知の方法を用いて得られる。まず始めに、αタイプのポリアミノ酸を得るのに最も広く用いられている技術は、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物（ＮＣＡ）の重合反応に基づくものであって、例えば、“Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，１９７６，１５，１８６９”及びＨ．Ｒ．Ｋｒｉｃｈｅｌｄｏｒｆ による研究、“ａｌｐｈａ−ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ Ｎ−ｃａｒｂｏｘｙ ａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ”，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９８７）に記載されている。ＮＣＡ誘導体は、好ましくはＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｒ3（Ｒ3＝メチル、エチル又はベンジル）である。ポリマーを、引き続き、その酸の形態で得るために適した条件下において加水分解する。これらの方法は、出願人に交付された仏国出願公開第２ ８０１ ２２６号にある記載をヒントにしている。
【００７５】
本発明に従って使用可能な何種類かのポリマー、例えば、種々の分子量のポリ（α−Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ，Ｌ−グルタミン酸塩）およびポリ（γ−Ｌ−グルタミン酸）は、市販されている。
【００７６】
好ましくは、本発明のコポリマーは、２つのルートに従って合成してもよい。１つ目では、最初にカチオン性基（例えばアルギニンアミド）及びＢ−ＧＨ基（例えばドデシルアミン）を同時に又は逐次的にポリ（Ｌ−グルタミン酸）にグラフト化させる。この反応は以下のような反応スキームに従って、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はＮＭＰ等の溶媒中で起こり得る。
【化９】
2010529214.tif 000010
【００７７】
上記機構において、ｑが０でないときは、窒素を介して結合したエタノールアミン等のＲ１基の前駆体は、カチオン性基と同時に合成中において導入される。
【００７８】
カチオン性基が、２つの化学的に差のない（例えば直鎖ジアミン）アミン官能基を有する場合、２つの官能基のうち１つを保護した形で導入することができる。その後、保護基の開裂の最終段階を上記反応スキームに加える。
【００７９】
ポリ（Ｌ−グルタミン酸）は、仏国出願公開第２ ８０１ ２２６号に記載されたルートに従って合成することができる。ＨＢ−ＧＨ基がエステル官能基を介して結合している場合には、カチオン性基をグラフト化する前に、初めに、カルボジイミドを用いた標準的なカップリング反応によってＢ−ＧＨ基をグラフト化するのがより容易である。
【化１０】
2010529214.tif 000011
【００８０】
上記機構において、ｑが０でないときは、窒素を介して結合したエタノールアミン等のＲ１基の前駆体は、カチオン性基と同時に合成中において導入される。
【００８１】
カチオン性基が、２つの化学的に差のない（例えば直鎖ジアミン）アミノ官能基を有する場合、２つの官能基のうち１つを保護した形で導入することができる。その後、保護基の開裂の最終段階を上記反応スキームに加える。
【００８２】
重合化学と、基をカップリングする反応は、当業者に周知の標準的な方法である（例えば上述した出願人の特許又は特許出願を参照）。
【００８３】
これらの方法は実施例の記載を通じて、より良く理解されるであろう。
【００８４】
重合度は、開始剤の単量体に対するモル比によって定義されるとみなすべきである。
【００８５】
疎水性グラフト（ＧＨ）とポリマーの酸基とのカップリングは、カップリング剤としてのカルボジイミド、任意で４−ジメチルアミノピリジン等の触媒の存在下、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリジン（ＮＭＰ）又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の適切な溶媒中において、ポリアミノ酸の反応によって容易に実行できる。カルボジイミドは、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドやジイソプロピルカルボジイミドである。また、クロロギ酸エステル等のカップリング剤も、アミド結合を形成するのに使用することができる（例えば、カップリング剤の例については、Ｂｏｄａｎｓｋｙの研究“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９８４参照）。グラフト度合は、構成成分と反応剤との化学量論、又は反応時間によって化学的に制御する。ポリマーのアミノ酸以外のアミノ酸によって官能基化された疎水性グラフトは、標準的なペプチドカップリング反応又は酸触媒による直接的な縮合によって得られる。これらの技術は当業者に周知である。
【００８６】
その他の側面によると、本発明は、薬剤、化粧品、健康食品もしくは植物保護剤の組成物にも及ぶものであり、少なくとも１種の上記に定義したポリグルタミン酸塩と、任意で治療、化粧品、健康食品又は植物防疫の有効成分となり得る少なくとも１種の有効成分とを含む薬剤、化粧品、健康食品又は植物防疫組成物を対象とする。
【００８７】
本発明の有利な実施態様によれば、有効成分を、共有結合以外の１つ又は２つ以上の結合を用いてカチオン性基によって変性されたポリアミノ酸と会合させる。
【００８８】
１種又は２種以上のＡＰを本発明の変性ポリアミノ酸と会合させる技術は、米国特許第６,６３０,１７１号に具体的に記載されている。該技術は、１種又は２種以上の有効成分ＡＰを投入した又は会合させたベクター化粒子（ＶＰ）のコロイド懸濁液を得るために、ベクター化粒子（ＶＰ）を含む液状媒体中に少なくとも１種の有効成分を組み込むことを本質とする。ＶＰによってＡＰを捕捉することとなる該組み込みは、以下の方法：
ＡＰを水へ溶解させ、次に、コロイド懸濁液の形態又は単離されたＶＰ（凍結乾燥物若しくは沈殿物）の形態のいずれかで、ＶＰを添加すること、
或いは、溶液又は純粋状態若しくは予備調合状態のいずれかで、ＡＰを、任意で水等の適切な溶媒の中で乾燥したＶＰを分散させて使用時に調製したＶＰ粒子のコロイド懸濁液に加えること、
で実行することができる。
【００８９】
有効成分は、好ましくは、タンパク質、糖タンパク質、２以上のポリアクキレングリコール鎖［好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）］に結合しているタンンパク質［“ＰＥＧ変性タンパク質”］、ペプチド、多糖類、リポ多糖類、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、及びそれらの混合物からなる群から選択され、
更により好ましくは、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、ダーベポエチン、ヘモグロビンラフィマー、それらの類似物若しくは誘導体等のエリスロポエチンの下位群；オキシトシン、バソプレッシン、副腎皮質刺激ホルモン、表皮増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、造血刺激因子、及びそれらの混合物、アルテプラーゼ、テネクテプラーゼ、因子VII（ａ）若しくは因子VII等の血液因子；ヘモグロビン、シトクロム、アルブミン、プロラクチン、ルリベリン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、及びリュープロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン若しくはナファレリン等の類似物；ＬＨＲＨ拮抗薬、ＬＨＲＨ競合物、ヒト、ブタ、仔ウシ成長ホルモン（ＧＨ）、成長ホルモン放出因子、インシュリン、ソマトスタチン、グルカゴン、インターロイキン又はそれらの混合物（ＩＬ−２、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２）、インターフェロンα、α−２ｂ、β、β−１ａまたはγ等のインターフェロン；ガストリン、テトラガストリン、ペンタガストリン、ウロガストロン、セクレチン、カルシトニン、エンケファリン、エンドモルフィン、アンジオテンシン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ベクラペルミン、トラフェルミン、アンセスチム又はケラチノサイト成長因子等の増殖因子、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージ−コロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、ヘパリナーゼ、骨形成タン白質（ＢＭＰ）、ｈＡＮＰ、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）、ＶＥＧ−Ｆ、組換Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ）、レニン、サイトカイン、ブラジキニン、バシトラシン、ポリミキシン、コリスチン、チロシジン、グラミシジン、エタネルセプト、イミグルセラーゼ、ドロトレコギンα、シクロスポリン及び合成類似物、酵素の、サイトカインの、抗体の、抗原の及びワクチンの薬学的活性を有する変性物及び断片、リツキシマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、エファリツマブ及びセツキシマブ等の抗体からなる群から選択される。
【００９０】
他の適した有効成分は、多糖類（例えばヘパリン）及びオリゴ若しくはポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｉＲＮＡ、抗生物質及び生細胞である。
【００９１】
適切な有効成分の他の分類は、中枢神経系に働く薬剤物質、例えば、リスペリドン、ズクロペンチロール、フルフェナジン、ペルフェナジン、フルペンチキソール、ハロペリドール、フルスピリレン、クエチアピン、クロザピン、アミスルプリド、スルピリド、ジプラシドン等を含む。
【００９２】
別の形態によると、有効成分は、疎水性、親水性又は両親媒性の有機小分子である。本明細書の意味において、「小」分子は、特には非タンパク質の小分子である。
【００９３】
本発明のポリアミノ酸と会合できる有効成分の例としては、（ナノ又はマイクロ）粒子の形態であるかないかに関わらず、特に限定されるものではないが、
インスリン、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エリスロポエチン又はサイトカイン等のタンパク質、
ロイプロリド又はシクロスポリン等のペプチド、
アントラサイクリン、タキソイド又はカンプトセシンの部類に属するもの等の小分子、
及びそれらの混合物
が挙げられる。
【００９４】
有利には、有効成分は、以下の部類の活性物質：
アルコール中毒治療のための薬剤、アルツハイマー病治療のための薬剤、麻酔薬、末端肥大症の治療のための薬剤、鎮痛剤、抗喘息薬、アレルギー治療薬、制ガン剤、抗炎症薬、抗凝血剤及び抗血栓剤、抗痙攣薬、抗てんかん薬、抗糖尿病薬、鎮吐薬、抗緑内障薬、抗ヒスタミン薬、抗感染薬、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス薬、抗パーキンソン病薬、抗コリン作動薬、鎮咳薬、炭酸脱水酵素阻害薬、心血管治療薬、抗高脂血症薬、抗不整脈薬、血管拡張剤、狭心症薬、抗高血圧薬、血管保護薬、コリンエステラーゼ阻害薬、中枢神経系疾患の治療薬、中枢神経系の興奮剤、避妊薬、妊娠促進薬、子宮運動の誘引剤及び阻害剤、嚢胞性繊維症の治療薬、ドーパミン受容体作用薬、子宮内膜症の治療薬、勃起障害の治療薬、不妊治療薬、消化器疾患の治療薬、免疫調節薬及び免疫抑制薬、記憶障害の治療薬、抗片頭痛薬、筋弛緩剤、ヌクレオシド類似体、骨粗鬆症の治療薬、副交感神経刺激薬、プロスタグランジン、精神病治療薬、鎮静剤、催眠薬及び精神安定剤、神経弛緩薬、抗不安剤、精神刺激薬、抗うつ剤、皮膚病治療薬、ステロイド及びホルモン、アンフェタミン、食欲減退薬、非無痛鎮痛剤、バルビツール酸塩、ベンゾジアゼピン、下剤、向精神薬、及びこれら製品の任意の組み合わせ
の少なくとも１種から選択される。
【００９５】
一実施態様によれば、本発明の組成物は、ゲル、溶液、エマルション、ミセル、ナノ粒子、マイクロ粒子、インプラント、粉末、懸濁液、又はフィルムの形状である。
【００９６】
特に好ましい形状の１つによれば、組成物は、有効成分が充填されているか否かに関わらず、水相若しくは油相中におけるポリアミノ酸のナノ粒子及び／又はマイクロ粒子及び／又はミセルの安定なコロイド懸濁液である。
【００９７】
マイクロ粒子は、凝集剤（２価若しくは３価のイオン又は多価電解質）の存在下における液滴形成、ｐＨの又はイオン強度の変化による沈殿、抽出／蒸発又は噴霧等の種々の方法で得ることができる。
【００９８】
特には、本発明の組成物は、生理的ｐＨで沈殿を生じ、酸性のｐＨで水相においてナノ粒子のコロイド懸濁液とすることができる。
【００９９】
有利には、過剰な正電荷を帯びている本発明のポリアミノ酸は、ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、ＲＮＡ、オリゴＲＮＡ等のアニオン性の有効成分をナノ若しくはマイクロ粒子の形態で濃縮することができ、そして、これらの粒子を細胞に取り込ませることができる。
【０１００】
他の実施態様においては、本発明の組成物は、生体適合性を有する溶媒の溶液の形態にあり、皮下又は筋肉注射する、或いは腫瘍に注射することができる。
【０１０１】
本発明の組成物は、薬剤の組成物であるため、経口、非経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、大脳内、又は口腔内、或いは肺ルートにより投与できる。
【０１０２】
また、組成物を、皮下に若しくは筋肉内に又は腫瘍中に注射できる生体適合性を有する溶媒又は生体適合性を有する溶媒の混合物の溶液の形態とすることも意図できる。
【０１０３】
他の実施態様によれば、組成物は、任意に、ｐＨの及び／又はオスモル濃度の調整のための、並びに／或いは安定性向上（酸化防止剤）のための、並びに／或いは抗菌物質としての、賦形剤を含むことができる。これらの賦形剤は、当業者に周知である（“Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”，Ｐ．Ｋ．Ｇｕｐｔａ他、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，１９９９との研究を参考文献とする）。
【０１０４】
また、本発明は、
特には、経口投与、経鼻投与、経膣投与、経眼投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、又は大脳内投与のための薬物であって、これら薬物の有効成分が特にはタンパク質、糖タンパク質、１つ又は複数のポリアルキレングリコール鎖{例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）｝と結合したタンパク質｛この場合、使用される語句は「ＰＥＧ変性」タンパク質である｝、ペプチド、多糖類、リポ多糖類、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、及び疎水性、親水性若しくは両親媒性の有機小分子とすることができる薬剤、
及び／又は栄養物、
及び／又は化粧品もしくは植物防疫品
の調製方法も対象とし、
該方法は、上記で定義したポリアミノ酸の少なくとも１種、及び／又は前記組成物を使用することを本質的に特徴とする。
【０１０５】
また、本発明は、本明細書に記されている組成物を、経口、非経口、経鼻、経膣、経眼、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、大脳内、又は口腔内、或いは肺ルートによって、投与することを本質的に特徴とする処置の治療方法に関するものでもある。
【０１０６】
本発明の特定の別の形態によれば、該処置の治療方法は、生体適合性を有する溶媒の溶液の形態にある前記組成物を用い、次に、好ましくは注射位置において沈殿物を形成するように、皮下に若しくは筋肉内に又は腫瘍中に注射することを本質的に特徴とする。
【０１０７】
本発明は、以下の本発明のポリマーの合成、ＡＰのベクター化系（安定な水性コロイド懸濁液液）への変換、かかる系をタンパク質と結合させ医薬組成物を作製できることの実証を記載する例によって、よく理解されることとなり、また、本発明の利点及び別の実施態様が明らかになるであろう。
【実施例】
【０１０８】
実施例１：ポリマー（１）の合成
【化１１】
2010529214.tif 000012
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝ｓ＝１１、ｑ＝１９８
【０１０９】
５％のα−トコフェノールのラセミ体でランダムにグラフト化された、重合度（ＤＰ）２２０のポリ（グルタミン酸）１０ｇを１２５ｍｌのＮＭＰに８０℃で溶解させる。この溶液を０℃に冷やし、８．７ｍｌのクロロギ酸イソブチルを加え、次に７．３５ｍｌのＮ−メチルモルホリンを加える。この反応混合物を０℃で１５分間撹拌する。同時に、２４.６７ｇのアルギニンアミド二塩酸塩を３０８ｍｌのＮＭＰ中に懸濁させ、１４．７ｍｌのトリエチルアミンを加える。得られた懸濁液を２０℃で数分間撹拌し、その後０℃に冷やす。次に、活性化されたポリマーの乳濁液をこの懸濁液に加え、反応混合物を０℃で２時間撹拌した後に２０℃で終夜撹拌する。３５％のＨＣｌ溶液２．１ｍｌを加えた後に、１００ｍｌの水を加え、反応混合物を１．６Ｌの水に滴下する。得られた溶液を、８倍量の生理食塩水（０．９％）に対して、次いで４倍量の水に対してダイアフィルターにかけ、約２５０ｍｌの容量になるまで濃縮する。グラフト化されたアルギニンアミドの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、９０％である。
【０１１０】
実施例２：ポリマー（２）の合成
【化１２】
2010529214.tif 000013
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝ｓ＝６、ｑ＝１０８
【０１１１】
５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された、重合度（ＤＰ）１２０のポリ（グルタミン酸）３．５ｇを７０ｍｌのＮＭＰに８０℃で溶解させる。この溶液を０℃に冷却し、３．２ｇのクロロギ酸イソブチルを加え、２．３７ｇのＮ-メチルモルホリンを加える。この反応混合物を０℃で１０分間撹拌する。同時に、４．６２gのＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−１，４−ブタンジアミン（ＢＯＣ−プトレッシン）を９ｍｌのＮＭＰに溶解させた後、０℃に冷却する。次に、活性化されたポリマーの乳濁液をこの反応溶液に加え、反応混合物を０℃で２時間撹拌し、その後２０℃で終夜撹拌する。３５％のＨＣｌ溶液０．７ｍｌを加えた後に、反応混合物を３１７ｍｌの水に滴下する。得られた溶液を１Ｎの水酸化ナトリウム溶液によりｐＨ＝７．４に調整した後、生理食塩水（０．９％）に対して、次いで水に対して透析を行う。得られた懸濁液を凍結乾燥すると、４．１ｇの白色粉末が得られる。この粉末をＴＦＡに再度溶解させ、溶液を２０℃で２時間撹拌した後、１Ｎの水酸化ナトリウム溶液でｐＨを約７に調整しつつ水中に滴下する。得られた溶液を、８倍量の生理食塩水（０．９％）に対して、次いで４倍量の水に対してダイアフィルターにかけ、約５０ｍｌの容量になるまで濃縮する。グラフト化されたＢＯＣ−プトレッシンの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、９０％である。
【０１１２】
実施例３：ポリマー（３）の合成
【化１３】
2010529214.tif 000014
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝１１、ｑ＝８８、ｒ＝９９、ｓ＝２２
【０１１３】
５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された、重合度（ＤＰ）２２０のポリ（グルタミン酸）１０ｇを１２５ｍｌのＮＭＰに８０℃で溶解させる。この溶液を０℃に冷却し、９．１ｍｌのクロロギ酸イソブチルを加え、次に、７．７１ｍｌのＮ−メチルモルホリンを加える。この反応混合物を０℃で１５分間撹拌する。同時に、８．２gのアルギニンアミド二塩酸塩を１０３ｍｌのＮＭＰに懸濁させ、９．３１ｍｌのトリエチルアミンを加える。また、１．６ｍｌのエタノールアミンも加え、得られた懸濁液を２０℃で数分間撹拌した後、０℃に冷却する。次に、活性化されたポリマーの乳濁液をこの反応溶液に加え、反応混合物を０℃で２時間撹拌する。１．２ｍｌのエタノールアミンを加えた後、２０℃で終夜撹拌する。３５％のＨＣｌ溶液２．１ｍｌを加えた後に、２００ｍｌの水を加え、ｐＨを約７．４に調整しながら、反応混合物を７００ｍｌの水中に滴下する。得られた溶液を、８倍量の生理食塩水（０．９％）に対して、次いで４倍量の水に対してダイアフィルターにかけ、約２５０ｍｌの容量になるまで濃縮する。グラフト化されたアルギニンアミド及びグラフト化されたエタノールアミンの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、それぞれ４０％及び４５％である。
【０１１４】
実施例４：ポリマー（４）の合成
【化１４】
2010529214.tif 000015
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝６、ｑ＝５９、ｒ＝５２、ｓ＝３
【０１１５】
５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された、重合度（ＤＰ）１２０のポリ（グルタミン酸）５ｇを６３ｍｌのＮＭＰに８０℃で溶解させる。この溶液を０℃に冷却し、４．３ｇのクロロギ酸イソブチルを加え、次に、３．７ｇのＮ−メチルモルホリンを加える。この反応混合物を０℃で１０分間撹拌する。同時に、３．１５ｇのＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−１，４−ブタンジアミン（ＢＯＣ−プトレッシン）を３９ｍｌのＮＭＰに溶解させた後、０℃に冷却する。この溶液を活性化されたポリマーの乳濁液に加え、反応混合物を０℃で２時間撹拌する。２ｍｌのエタノールアミンを加えた後、室温で終夜撹拌する。３５％のＨＣｌ溶液１．０４ｍｌを加えた後に、反応混合物を４０７ｍｌの水中に滴下する。得られた懸濁液を１Ｎの水酸化ナトリウム溶液によりｐＨ＝７．４に調節した後、生理食塩水に対して、その後、水に対して（１ｋＤのカットオフ閾値で）透析する。得られた懸濁液を凍結乾燥させると白色粉末が得られる。この粉末を１００ｍｌのＴＦＡに再度溶解させ、溶液を２０℃で１時間１５分撹拌し、その後１Ｎの水酸化ナトリウム溶液でｐＨを約７に調整しつつ、水（５００ｍｌ）中に滴下する。６００ｍｌのエタノールを加えた後、得られた溶液を８倍量の生理食塩水（０．９％）に対して、次いで４倍量の水に対してダイアフィルターにかけ、約１００ｍｌの容量になるまで濃縮する。グラフト化されたＢＯＣ−プトレッシンとグラフト化されたエタノールアミンの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、それぞれ４９％及び４３％である。
【０１１６】
実施例５：ポリマー（５）の合成
【化１５】
2010529214.tif 000016
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝５、ｑ＝８３、ｓ＝１２
【０１１７】
ポリマー（１）の合成に用いたのと同様の方法によって、５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）１００のポリ（グルタミン酸）１０ｇから出発し、９．６ｇのクロロギ酸イソブチル、７．７ｍｌのＮ−メチルモルホリン、２４．７ｇのアルギニンアミド二塩酸塩、及び１４．７ｍｌのトリエチルアミンから、濃度４８ｍｇ／ｇの溶液を約３００ｍｌ得る。アルギニンアミドの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、８３％である。
【０１１８】
実施例６：ポリマー（６）の合成
【化１６】
2010529214.tif 000017
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝１１、ｑ＝６２、ｓ＝１４７
【０１１９】
ポリマー（１）の合成に用いたのと同様の方法によって、５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）２２０のポリ（グルタミン酸）１０ｇから出発し、２．９ｇのクロロギ酸イソブチル、２．２ｍｌのＮ−メチルモルホリン、４．９３ｇのアルギニンアミド二塩酸塩、及び３．３ｍｌのトリエチルアミンから、濃度４３ｍｇ／ｇの溶液を約２５０ｍｌ得る。アルギニンアミドの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、２８％である。
【０１２０】
実施例７：ポリマー（７）の合成
【化１７】
2010529214.tif 000018
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝５、ｑ＝４０、ｒ＝４８、ｓ＝７
【０１２１】
ポリマー（３）の合成に用いたのと同様の方法によって、５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）１００のポリ（グルタミン酸）１０ｇから出発し、９．５８ｇのクロロギ酸イソブチル、７．７ｍｌのＮ−メチルモルホリン、８．２２ｇのアルギニンアミド二塩酸塩、２．８６ｇのエタノールアミン及び５．１ｍｌのトリエチルアミンから、濃度４１ｍｇ／ｇの溶液を約２００ｍｌ得る。アルギニンアミド及びエタノールアミンの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、それぞれ４０％及び４８％である。
【０１２２】
実施例８：ポリマー（８）の合成
【化１８】
2010529214.tif 000019
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝１１、ｑ＝１３９、ｓ＝７０
【０１２３】
ポリマー（１）の合成に用いたのと同様の方法によって、５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）２２０のポリ（グルタミン酸）１０ｇから出発し、６．３９ｇのクロロギ酸イソブチル、５．１ｍｌのＮ−メチルモルホリン、１３．１６ｇのアルギニンアミド二塩酸塩、及び７．５ｍｌのトリエチルアミンから、濃度５１ｍｇ／ｇの溶液を約２００ｍｌ得る。アルギニンアミドの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、６３％である。
【０１２４】
実施例９：ポリマー（９）の合成
【化１９】
2010529214.tif 000020
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝１１、ｑ＝１２１、ｓ＝８８
【０１２５】
５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された、重合度（ＤＰ）２２０のポリ（グルタミン酸）５ｇを６３ｍｌのＮＭＰに８０℃で溶解させる。この溶液を０℃に冷却し、２．３８ｍｌのクロロギ酸イソブチルを加え、次に、２．０２ｍｌのＮ−メチルモルホリンを加える。この反応混合物を０℃で１５分間撹拌する。同時に、４．９３ｇのアルギニンアミド二塩酸塩を６２ｍｌのＮＭＰに懸濁させ、２．８ｍｌのトリエタノールアミンを加える。得られた懸濁液を２０℃で数分間撹拌した後、０℃に冷却する。次に、この懸濁液に活性化されたポリマーの乳濁液を加え、反応混合物を０℃で２時間、その後２０℃で４時間撹拌する。３５％のＨＣｌ溶液１．０４ｍｌを加えた後、５０ｍｌの水を加え、反応混合物を、１ＮのＨＣｌ溶液でｐＨを約３〜４に維持しつつ５００ｍｌの酸性水溶液（ｐＨ＝３）中に滴下する。得られた溶液を８倍量の生理食塩水（０．９％）に対して、次いで４倍量の水に対してダイアフィルターにかけ、約２５０ｍｌの容量になるまで濃縮する。グラフト化されたアルギニンアミドの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、５５％である。
【０１２６】
実施例１０：ポリマー（１０）の合成
【化２０】
2010529214.tif 000021
指数及び基：Ｔ＝Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール、ｐ＝１１、ｑ＝８８、ｒ＝４８、ｓ＝７３
【０１２７】
５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された、重合度（ＤＰ）２２０のポリ（グルタミン酸）１０ｇを１２５ｍｌのＮＭＰに８０℃で溶解させる。この溶液を０℃に冷却し、５．６ｍｌのクロロギ酸イソブチルを加えた後、４．８ｍｌのＮ−メチルモルホリンを加える。この反応混合物を０℃で１５分間撹拌する。同時に、７．４ｇのアルギニンアミド二塩酸塩を９３ｍｌのＮＭＰに懸濁させ、次に、４．７ｍｌのトリエチルアミンと１．２ｍｌのエタノールアミンを加える。得られた懸濁液を２０℃で数分間撹拌した後、０℃に冷却する。次に、この懸濁液に、活性化されたポリマーの乳濁液を加え、反応混合物を０℃で２時間、その後２０℃で終夜撹拌する。３５％のＨＣｌ溶液２.０７ｍｌを加え、次に、水２００ｍｌを加えた後、反応混合物を、ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した水６７０ｍｌ中に、１ＮのＨＣｌ溶液でｐＨを約３に維持しつつ滴下する。得られた溶液を８倍量の生理食塩水（０．９％）に対して、次いで４倍量の水に対してダイアフィルターにかけ、約２５０ｍｌの容量になるまで濃縮する。グラフト化されたアルギニンアミドとグラフト化されたエタノールアミンの割合は、Ｄ2Ｏ中でのプロトンＮＭＲで決定したところ、それぞれ４０％及び２２％である。
【０１２８】
比較例１１：カチオン性基で官能基化されていない化合物Ｃ１
比較対象化合物Ｃ１は、カチオン性基で変性されたポリグルタミン酸塩、即ち、５％のα−トコフェロールのラセミ体でランダムにグラフト化された重合度（ＤＰ）２２０のポリグルタミン酸塩の前駆体（アニオン性の形態）である。この化合物は、国際公開第０３／１０４３０３号に記載されている方法によって得られる。
【０１２９】
実施例１２：インスリンの会合の検討
ｐＨ＝７．４で、１ｍｌあたり１０ｍｇのポリマーと２００ＩＵのインスリン（７．４ｍｇ）を含む水溶液を調製する。該溶液を室温で２時間インキュベートし、遊離のインスリンを限外濾過（閾値１００ｋＤａ、１０ ０００Ｇ、１８℃で１５分間）により、会合したインスリンから分離する。濾液から回収した遊離のインスリンを、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグフィー）により分析し、会合したインスリンの量を推定する。その結果を下記の表１に示す。
【０１３０】
【表１】
2010529214.tif 000022
【０１３１】
本結果は、本発明のポリマーがインスリンと強く会合して１００ｋＤａよりも大きなサイズのコロイド懸濁液を形成でき、また、インスリンの会合度が非常に高いことを示している。ポリマーＣ１と比較すると、触媒的な電荷の存在によってインスリンの会合レベルが減少しないことが分かる。
【０１３２】
実施例１３：２９ｍｇ／ｇの水溶液の速度勾配１０ｓ-1における剪断粘度（ｍＰａ・ｓ）の測定
【０１３３】
【表２】
2010529214.tif 000023
【０１３４】
本結果は、本発明のポリマーが対照となるカチオン性ペンダント基を含まないＣ１よりも粘度が顕著に低いことを示している。
【０１３５】
実施例１４：ｐＨの関数としての溶解性の検討
結果は、本発明のポリマー（実施例９及び１０）がｐＨに依存した溶解性を示し、化合物Ｃ１とは対照的に、中程度の酸性ｐＨ（ｐＨ＝４）で有効成分と共に製剤化でき、かつ生理的なｐＨ（ｐＨ７付近）では沈殿を生ず得ることを示している。
【０１３６】
【表３】
2010529214.tif 000024
【０１３７】
実施例１５：治療用ＲＮＡの会合の検討
水溶液中において、一定量の１４３３−ヌクレオチドの治療用ＲＮＡに対してポリマー（１）、（３）（ｐＨ＝７．４において全体的にカチオン性である本発明に従うポリマーの２つの例）又はＣ１の量を増やしながら、ポリマー／ＲＮＡの会合を実行する。これらの混合物を３７℃で２時間インキュベートした後、変性条件下、１％のアガロースゲルの電気泳動（ＲＮＡをエチジウムブロマイドで検出）によって分析する。ＲＮＡのみのものを完全性のポジティブコントロールとして用いる。市販のＲＮＡ分解酵素でインキュベートしたＲＮＡを分解したＲＮＡのコントロールとして用いる。
【０１３８】
結果は、検討したＲＮＡをポリマー（１）又は（３）でインキュベートしたときには、電気泳動において予想のサイズに移動するＲＮＡの量が、会合に用いたポリマーの量に従って徐々に減少し、一定値を超えると他のバンドが現れることなく消失することを示している。
【０１３９】
対照的に、成分Ｃ１を含む混合物中では、大過剰量のポリマーでも、移動するＲＮＡの量に変化はない。
【０１４０】
第２に、多量のポリマー（１）又は（３）をＲＮＡに加え、ＲＮＡの完全な会合が可能となる（ＲＮＡがゲルの予想サイズで見えなくなる条件）ようにし、これら混合物を３７℃で２時間インキュベートする。３７℃で２時間後、化合物Ｃ１の量を増加させながらこれら混合物に加え、３７℃で更に１６時間インキュベートする。
【０１４１】
得られた混合物を、変性条件下、１％のアガロースゲルの電気泳動（ＲＮＡをエチジウムブロマイドで検出）によって分析する。
【０１４２】
結果は、予想のサイズにおいて、ＲＮＡ／ポリマー（１）又はポリマー（３）の混合物に添加されるポリマーＣ１の量に関してＲＮＡの量が増加することを示している。
【０１４３】
これらの結果は、ｐＨ＝７．４において全体的にカチオン性であり本発明に従うあるポリマーがモデルの１４３３ヌクレオチオのＲＮＡと会合でき、また、この会合が全体的にアニオン性のポリマーで元に戻せることを示している。更に、調合されたＲＮＡは分解しない。
【０１４４】
実施例１６：モデルオリゴヌクレオチドの細胞膜透過の検討
ウシ胎仔血清を含まないＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）培地中で、Ｃｙ３により標識化した３０塩基のＲＮＡオリゴヌクレオチドと、該オリゴヌクレオチドと完全に会合させるのに必要な最低限量に近い量のポリマー（３）又は（７）とを混合する。この混合物を、２５ ０００細胞／ウェルで、２４ウェルプレートに生育したヒト肝細胞がん細胞Ｈｕｈ−７に接触させる。３７℃、５％のＣＯ2で、４時間、細胞を培養した後、２０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含むＤ−ＭＥＭ培地を、ＦＣＳの最終濃度が１０％になるように加える。オリゴヌクレオチド／ポリマー混合物で、２４時間培養した後、細胞を洗浄し、その細胞膜をビオチニル化コンカナバリンによって標識化した後、３．７％パラホルムアルデヒドで３分間細胞を固定する。
【０１４５】
ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞をＤＡＰＩ（核ＤＮＡ）で１０分間培養し、ＰＢＳで３回洗浄した後、ビオチニル化コンカナバリンを露呈させるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８で標識されたストレプトアビジンで培養する。
【０１４６】
細胞を共焦点顕微鏡により分析する。
【０１４７】
細胞の所在は、ビオチニル化コンカナバリンを露呈させるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８で染色されたストレプトアビジンを観察することで可能である。
【０１４８】
細胞を共焦点顕微鏡により分析する。
【０１４９】
細胞の所在は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８で染色された膜、及びＤＡＰＩで染色された核を観察することで可能である。
【０１５０】
Ｃｙ３で標識化したオリゴヌクレオチドの細胞による摂取を、Ｃｙ３の蛍光（５５０ｎｍで励起、５７０ｎｍで発光）によって可視化する。
【０１５１】
本結果は、細胞をオリゴヌクレオチドとポリマー（３）又は（７）の存在下で培養したとき、Ｃｙ３で標識化されたオリゴヌクレオチドがＨｕｈ−７細胞の細胞質中で観測されることを示している。比較として、オリゴヌクレオチドを単独で、又はポリマーＣ１と共に培養したところ、Ｃｙ３で標識されたオリゴヌクレオチドは細胞中で観測されなかった。
【手続補正書】
【提出日】平成22年1月5日(2010.1.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルタミン酸残基を含む、ポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩であって、
前記グルタミン酸残基のいくつかは脱プロトン化された場合に７又は７より大きなｐＫａを示すカチオン性ペンダント基を有し、該カチオン性基は互いに同一もしくは異なり、
他のグルタミン酸残基は疎水性ペンダント基（ＨＧ）を有し、該疎水性基（ＨＧ）は互いに同一もしくは異なり、
前記カチオン性基が下記式：
【化１】
2010529214.tif 000032
［式中、Ｘ＝Ｏ、ＮＨ、
Ｙ＝それぞれ独立してＨ又はＣＨ3、
Ｚ-＝クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテート、
Ｌ＝カルボキシル又はその誘導タイプの官能基で任意に置換された直鎖（Ｃ2〜Ｃ6）アルキレン］に対応するか、
或いは、以下の基：
【化２】
2010529214.tif 000033
［式中、Ｒａは、ヒドロキシル基、アルコキシ基又はアミノアルキル基を示し、好ましくは−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＮＨ2、−ＮＨＣＨ3、又は−ＮＨ（ＣＨ3）2基を示し、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートを示し、好ましくはクロライドを示す］、又は、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、
［式中、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートを示し、好ましくはクロライドを示す］
の群から選択され、
前記疎水性基（ＨＧ）が、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができる直鎖もしくは分岐鎖のＣ8〜Ｃ30のアルキル、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリール又はアリールアルキル、及び
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環状化合物
を含む群から選択される、
ことを特徴とするポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
下記式：
【化３】
2010529214.tif 000034
のカチオン性ペンダント基が、以下の基：
【化４】
2010529214.tif 000035
［式中、Ｒａは、ヒドロキシル基、アルコキシ基又はアミノアルキル基を示し、好ましくは−ＯＭｅ基、−ＯＥｔ基、−ＮＨ2基、−ＮＨＣＨ3基又は−ＮＨ（ＣＨ3）2基を示し、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートを示し、好ましくはクロライドを示す］、
或いは、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−Ｎ+（ＣＨ3）3，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−ＮＨ3+，Ｚ-
［式中、Ｚ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートを示し、好ましくはクロライドを示す］
の群から選択される、請求項１に記載のポリアミノ酸。
【請求項３】
前記ポリアミノ酸がｐＨ＝４〜５でカチオン性であって、中性のｐＨにおいて中性又は弱く帯電している、請求項１又は２に記載のポリアミノ酸。
【請求項４】
前記カチオン性ペンダント基がアミド又はエステル結合を介して前記グルタミン酸残基にグラフト化されている、請求項１又は２に記載のポリアミノ酸。
【請求項５】
前記ポリアミノ酸が、α位のカルボキシル基でポリアミノ酸に結合しているＬ−グルタミン酸塩又はＬ−グルタミン酸のホモポリマーからなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項６】
前記ポリアミノ酸が、ポリマー鎖１つ当り平均で少なくとも３つの疎水性基（ＧＨ）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項７】
更に他のグルタミン残基が前記疎水性基（ＧＨ）以外の非イオン性ペンダント基を有し、該非イオン性基が互いに同一もしくは異なる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項８】
前記非イオン性ペンダント基がヒドロキシエチルアミノである、請求項７に記載のポリアミノ酸。
【請求項９】
更にその他のグルタミン酸残基が、前記疎水性基（ＧＨ）とは異なる中性のｐＨでイオン化しない基を有し、該中性のｐＨでイオン化しない基が互いに同一もしくは異なる、請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１０】
前記中性のｐＨでイオン化しない基が、下記式：
【化５】
2010529214.tif 000036
［式中、−Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯ2Ｈ、アルキルエステル（好ましくは−ＣＯＯＭe又は−ＣＯＯＥt）、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ3又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ3）2である］で表わされる、請求項９に記載のポリアミノ酸。
【請求項１１】
前記ポリアミノ酸が、グルタミン酸塩残基に結合したポリアルキレン（好ましくはポリエチレン）グリコールタイプのグラフトを少なくとも１つ有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリアミノ酸。
【請求項１２】
前記ポリアミノ酸が、下記式（Ｉ）：
【化６】
2010529214.tif 000037
［式中、Ａは、それぞれ独立して、
ＲＮＨ−（ここで、Ｒは、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル基又はベンジル基である）、又は
式：
【化７】
2010529214.tif 000038
（式中、−Ｒ7は、−ＯＨ、−ＯＲ9又は−ＮＨＲ10であり、
Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立してＨ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル基又はベンジル基である）で表わされる末端アミノ酸残基であり、
Ｂは、直接的な結合、又は、好ましくは以下の基：
−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ1〜Ｃ5のアルキル）−、１〜６個の炭素原子を含むアミノ酸（好ましくは天然アミノ酸）の、ジオールの、トリオールの、ジアミンの、トリアミンの、アミノアルコールの又はヒドロキシ酸の残基から選択される２価、３価若しくは４価の結合基であり、
Ｄは、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アシル基又はピログルタメートであり、
疎水性基（ＧＨ）は、それぞれ互いに独立して、
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができる直鎖若しくは分岐鎖のＣ8〜Ｃ30のアルキル、又は
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30のアルキルアリール若しくはアリールアルキル、又は
少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を任意に含むことができるＣ8〜Ｃ30の（ポリ）環状化合物から選択される基であり、
Ｒ1は、下記式：
−ＮＨ−（ＣＨ2）w−ＮＨ3+，Ｚ-（ここで、ｗは２〜６の間、好ましくは４である）、
−ＮＨ−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−ＮＨ3+，Ｚ-、
−Ｏ−（ＣＨ2）2−Ｎ+（ＣＨ3）3，Ｚ-、
の一つで表わされる基、
式：
【化８】
2010529214.tif 000039
｛式中、Ｘは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、
Ｒ12は、Ｈ、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖若しくはＣ3〜Ｃ10の分岐鎖アルキル或いはベンジルであり、
Ｒ13は、−（ＣＨ2）4−ＮＨ3+，Ｚ-、−（ＣＨ3）3−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ3+，Ｚ-、−（ＣＨ2）3−ＮＨ3+，Ｚ-（ここで、対アニオンＺ-は、クロライド、スルフェート、ホスフェート又はアセテートであり、好ましくはクロライドである）である｝で表されるアミノ酸残基若しくはアミノ酸誘導基であり、
Ｒ3は、ヒドロキシエチルアミノ、アルキレングリコール、ポリアルキレングリコール基、又は式：
【化９】
2010529214.tif 000040
｛式中、−Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯ2Ｈ、アルキルエステル（好ましくは−ＣＯＯＭe又は−ＣＯＯＥt）、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ3又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ3）2である｝で表される基であり、
ｐ、ｑ、ｒ及びｓは、正の整数であり、
（ｐ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、疎水性基ＧＨのモルでのグラフト度合で定義され、２〜９９モル％、好ましくは５〜５０モル％の間で変化し、但し、各コポリマー鎖は平均して少なくとも３つの疎水性のグラフトを有し、
（ｑ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、カチオン性基のモルでのグラフト度合で定義され、１〜９９モル％で変化し、
（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、１０〜１０００、好ましくは３０から５００の間で変化し、
（ｒ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、０〜９８モル％で変化し、
（ｓ）／（ｐ+ｑ+ｒ+ｓ）は、０〜９８モル％で変化する］で表わされる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリアミノ酸又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のカチオン性基で変性されたグルタミン酸残基を含むポリアミノ酸を少なくとも１種含む、薬剤、化粧品、健康食品又は植物防疫組成物。
【請求項１４】
有効成分を少なくとも１種含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記有効成分が、共有化学結合以外の一つ又は複数の結合により前記カチオン性基で変性されたグルタミン酸残基を含むポリアミノ酸と会合している、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記有効成分が、ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、ＲＮＡ及びオリゴＲＮＡからなる群から選択される、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
水相若しくは油相中での、カチオン性基で変性されたグルタミン酸残基を含むポリアミノ酸のナノ粒子及び／又はマイクロ粒子及び／又はミセルのコロイド懸濁液である、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記懸濁液が、酸性のｐＨでは水相中においてナノ粒子のコロイド溶液であり、生理的ｐＨでは沈殿を生じる、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
薬剤、特には、経口投与、経鼻投与、経肺投与、経膣投与、経眼投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、腹腔内投与又は大脳内投与のための薬剤の調製方法あって、
これら薬剤の有効成分を、特には、タンパク質、糖タンパク質、一つ又は複数のポリアルキレングリコール鎖に結合したタンパク質、ペプチド、多糖類、リポ多糖類、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、疎水性、親水性若しくは両親媒性の有機小分子、及び／又は栄養分、及び／又は化粧品若しくは植物防疫品とすることができ、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリアミノ酸の少なくとも一種及び／又は請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の組成物を使用することを本質的に特徴とする
薬剤の調製方法。
【国際調査報告】
2010529214.tif 000041
2010529214.tif 000042
2010529214.tif 000043
2010529214.tif 000044