(57)【要約】   本発明は、カスパーゼ阻害剤として用いることができるピリドン誘導体、その製造方法、及びそれを含有するカスパーゼ阻害用医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化０１８】
2010509319.tif 000020
（式中の、
Ｉ）Ｒ１はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、アリール、または全ての天然アミノ酸の側鎖残基を表し、
ＩＩ）Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、アリール、または全ての天然アミノ酸の側鎖残基を表し、
ＩＩＩ）Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、またはハロゲンを表し、
ＩＶ）Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
Ｖ）Ｒ５はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
ＶＩ）Ｒ６はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
ＶＩＩ）Ｒ７及びＲ８はそれぞれ互いに独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
ＶＩＩＩ）Ｘは−ＣＨ２ＯＲ９（Ｒ９はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、−ＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１０（Ｒ１０はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、または−ＣＨ２−Ｗ（Ｗはハロゲンである）を表す）：
の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ６が、置換されていてもよいＣ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたは置換されていてもよいアリールで置換されていてもよいＣ１−Ｃ５−アルキルを表すか；または置換されていてもよいアリールを表す、請求項１に記載の化合物または薬剤学的に許容されるその塩。
【請求項３】
Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたはアリールで置換されていてもよいＣ１−Ｃ５−アルキルを表すか；またはＣ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基で置換されていてもよいアリールを表す、請求項２に記載の化合物または薬剤学的に許容されるその塩。
【請求項４】
Ｉ）Ｒ１が全ての天然アミノ酸の側鎖残基を表し、
ＩＩ）Ｒ２がＣ１−Ｃ５−アルキルを表し、
ＩＩＩ）Ｒ３がＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、またはハロゲンを表し、
ＩＶ）Ｒ４がＨを表し、
Ｖ）Ｒ５がＨを表し、
ＶＩ）Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたはアリールで置換されていてもよいＣ１−Ｃ５−アルキルを表すか；またはＣ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基で置換されていてもよいアリールを表し、
ＶＩＩ）Ｒ７及びＲ８がそれぞれ互いに独立して、Ｈを表し、
ＶＩＩＩ）Ｘが−ＣＨ２ＯＲ９（Ｒ９はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、−ＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１０（Ｒ１０はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、または−ＣＨ２−Ｗ（Ｗはハロゲンである）を表す、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
Ｉ)Ｒ１が−ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、
ＩＩ)Ｒ２がＣ１−Ｃ５−アルキルを表し、
ＩＩＩ）Ｒ３がＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、またはハロゲンを表し、
ＩＶ）Ｒ４がＨを表し、
Ｖ）Ｒ５がＨを表し、
ＶＩ）Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基でそれぞれ置換されていてもよいＣ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたはアリールにより置換されていてもよいＣ１−Ｃ５−アルキルを表すか；またはＣ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基で置換されていてもよいアリールを表し、
ＶＩＩ）Ｒ６及びＲ７がそれぞれ互いに独立して、Ｈを表し、
ＶＩＩＩ）Ｘが−ＣＨ２Ｏ−（２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）、−ＣＨ２Ｏ−（２，６−ジクロロベンゾイル）、または−ＣＨ２−Ｆを表す、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
３−{２−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル］−ブチリルアミノ}−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸。
【請求項７】
薬学的に許容される担体と共に、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を活性成分として含有する、カスパーゼ阻害用医薬組成物。
【請求項８】
炎症及びアポトーシスの予防用である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿病、胃潰瘍、肝炎による脳損傷、肝炎による肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、関節リウマチ、虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死、または肝硬変の治療または予防用である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
急性肝炎または肝硬変の治療用である、請求項７に記載の医薬組成物。  
【請求項１１】
関節リウマチの治療用である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
カスパーゼを阻害するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１３】
患者に、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の治療的有効量を投与することを含む、患者における炎症及びアポトーシスを予防する方法。
【請求項１４】
患者に、 請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の治療的有効量を投与することを含む、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿病、胃潰瘍、肝炎による脳損傷、肝炎による肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、関節リウマチ、虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死、または肝硬変を治療または予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カスパーゼ−１［インターロイキン−１β−変換酵素、ＩＣＥ］、カスパーゼ−３［アポパイン（apopain）／ＣＰＰ−３２］、カスパーゼ−８及びカスパーゼ−９を含む各種カスパーゼに対する阻害剤としてのピリドン誘導体または薬学的に許容されるその塩、及びそれを含むカスパーゼ阻害用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
カスパーゼは、最近１０余年の間に発見されたα２β２テトラマー形態の新しい種類のシステインプロテアーゼである。現在までに、約１４種類のカスパーゼが知られている。それらの中の一つであるカスパーゼ−１（ＩＣＥ）は、サイトカインの一種であり、生物学的に不活性なプロインターロイキン−１βを活性なインターロイキン−１βへ変換させるのに関与する。インターロイキン−１は、インターロイキン−１αとインターロイキン−１βとからなり、両方ともに単核細胞（monocytes）で３１ＫＤａの前駆物質の形態に合成される。その中で、プロインターロイキン−１βのみがＩＣＥによって活性化される。カスパーゼ−１によって加水分解される位置は、Ａｓｐ２７−Ｇｌｙ２８とＡｓｐ１１６−Ａｌａ１１７である。後者の位置が加水分解されると、インターロイキン−１βが得られる。インターロイキン−１βは、炎症発生において重要なメディエーターとして作用すると報告されている（非特許文献１，非特許文献５〜９）。カスパーゼ−１は１９８９年に初めて発見され、その３次元構造が、２つの独立した研究グループによってＸ線結晶学的方法で明らかにされた。
【０００３】
カスパーゼ−３（ＣＰＰ−３２）は、その役割または作用機序について広く研究されており、その３次元構造は１９９６年に明らかになった（非特許文献２〜４）。プロカスパーゼ−３から活性化されたカスパーゼ−３（アポパイン）は（Ｐ４）Ａｓｐ−Ｘ−Ｘ−Ａｓｐ（Ｐ１）モチーフの位置で加水分解され、公知の基質としては、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ、Ｕ１ ７０，０００Ｍｒの核内低分子リボヌクレオタンパク質及び４６０，０００ＭｒのＤＮＡ−依存性プロテインキナーゼの触媒的サブユニットなどが挙げられる。カスパーゼ−７のＸ線構造はカスパーゼ−３の構造とよく似ていると報告されている（非特許文献１０）。
【０００４】
カスパーゼ−８及び９はカスパーゼ−３、６、７の上流に存在し、このカスパーゼはいずれもアポトーシスカスケードに関与することが知られている。カスパーゼ−８のＸ線構造は１９９９年に明らかになっており（非特許文献１１、１２）、特に、その阻害剤はアポトーシスと関連した疾患を治療するのに有利に使用することができる。
【０００５】
カスパーゼ阻害剤とは、カスパーゼの活性を阻害して、カスパーゼ活性によって誘発される炎症やアポトーシスなどの症状を制御する化合物を意味する。この阻害剤を投与して治療または緩和しうる疾患または症状としては、たとえば、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿病、胃潰瘍、肝炎ウイルスによる脳損傷、肝炎による肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、関節リウマチ、虚血性心臓疾患、及び肝硬変が挙げられる（非特許文献１３〜３０）。
【０００６】
現在までに知られているカスパーゼ阻害剤の中で、最も知られている不可逆的阻害剤は次の化合物である：
【０００７】
【化００１】
2010509319.tif 000002
【０００８】
上記の二つの阻害剤は、酵素を不可逆的に不活性化して細胞アポトーシスを抑制する共通の機序に基づいてそれらの活性を阻害する（不可逆、広域スペクトル阻害剤）。不可逆的な阻害剤は可逆的阻害剤よりもずっと効果的な阻害活性を持っていると報告されている（非特許文献３１）。ＩＤＮ−１９６５（IDUN社製）とＭＸ−１０１３（Maxim社製）は、いずれも肝損傷関連細胞アポトーシスモデルで活性を示すことと報告されている（非特許文献３２、３３）。これらの化合物は現在、前臨床研究の段階にある。
【０００９】
不可逆的阻害剤であるＩＤＮ−６５５６は、Ｃ型肝炎患者への肝臓保護薬として臨床試験のフェーズIIの段階にある（非特許文献３４、２８）。
【００１０】
【化００２】
2010509319.tif 000003
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates, 2nd ed., ed by Gallin, Goldstein and Snyderman, Raven Press Ltd., New York, 1992, pp211-232; Blood, 1996, 87(6), 2095-2147
【非特許文献２】Wilson, K. P. et al., Nature, 1994, 370. 270
【非特許文献３】Walker, N. P. C. et al., Cell, 1994, 78, 343
【非特許文献４】Nature Structural Biology, 1996, 3(7), 619
【非特許文献５】Thornberry, N. A. et al., Nature, 1992, 356, 768
【非特許文献６】Nature Biotechnology, 1996, 14, 297
【非特許文献７】Protein Science, 1995, 4, 3
【非特許文献８】Nature, 1995, 376(July 6), 37
【非特許文献９】Protein Science, 1995, 4, 2149
【非特許文献１０】Wei, Y. et al., Chemistry and Biology, 2000, 7, 423
【非特許文献１１】Blanchard H. et al., Structure, 1999, 7, 1125
【非特許文献１２】Blanchard H. et al., J. of Mol. Biol., 2000, 302, 9
【非特許文献１３】カスパーゼ関連疾患の文献；  認知症：Arch Neurol 2003 Mar;60(3):369-76, Caspase gene expression in the brain as a function of the clinical progression of Alzheimer disease. Pompl PN, Yemul S, Xiang Z, Ho L, Haroutunian V, Purohit D, Mohs R, Pasinetti GM.
【非特許文献１４】カスパーゼ関連疾患の文献；  脳卒中：Proc Natl Acad Sci USA 2002 Nov 12;99(23):15188-93, Caspase activation and neuroprotection in caspase-3-deficient mice after in vivo cerebral ischemia and in vitro oxygen glucose deprivation. Le DA, Wu Y, Huang Z, Matsushita K, Plesnila N, Augustinack JC, Hyman BT, Yuan J, Kuida K, Flavell RA, Moskowitz MA.
【非特許文献１５】カスパーゼ関連疾患の文献；  ＡＩＤＳによる脳損傷：J Neurosci 2002 May 15;22(10):4015-24, Caspase cascades in human immunodeficiency virus-associated neurodegeneration. Garden GA, Budd SL, Tsai E, Hanson L, Kaul M, D'Emilia DM, Friedlander RM, Yuan J, Masliah E, Lipton SA.
【非特許文献１６】カスパーゼ関連疾患の文献；  糖尿病：Diabetes 2002 June;51(6):1938-48, Hyperglycemia-induced apoptosis in mouse myocardium: mitochondrial cytochrome C-mediated caspase-3 activation pathway. Cai L, Li W, Wang G, Guo L, Jiang Y, Kang YJ.
【非特許文献１７】カスパーゼ関連疾患の文献；  胃潰瘍：J Physiol Pharmacol 1998 Dec;49(4):489-500, Role of basic fibroblast growth factor in the suppression of apoptotic caspase-3 during chronic gastric ulcer healing. Slomiany BL, Piotrowski J, Slomiany A.
【非特許文献１８】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝炎ウイルスによる脳損傷：J Viral Hepat 2003 Mar;10(2):81-6, Cerebral dysfunction in chronic hepatitis C infection. Forton DM, Taylor-Robinson SD, Thomas HC.
【非特許文献１９】カスパーゼ関連疾患の文献；  劇症肝不全：Gastroenterology 2000 Aug;119(2):446-60, Tumor necrosis factor alpha in the pathogenesis of human and murine fulminant hepatic failure. Streetz K, Leifeld L, Grundmann D, Ramakers J, Eckert K, Spengler U, Brenner D, Manns M, Trautwein C.
【非特許文献２０】カスパーゼ関連疾患の文献；  敗血症：Nat Immunol 2000 Dec;1(6):496-501, Caspase inhibitors improve survival in sepsis: a critical role of the lymphocyte. Hotchkiss RS, Chang KC, Swanson PE, Tinsley KW, Hui JJ, Klender P, Xanthoudakis S, Roy S, Black C, Grimm E, Aspiotis R, Han Y, Nicholson DW, Karl IE.
【非特許文献２１】カスパーゼ関連疾患の文献；  臓器移植拒絶反応：Xenotransplantation 2001 May;8(2):115-24, In vitro prevention of cell-mediated xeno-graft rejection via the Fas/FasL-pathway in CrmA-transducted porcine kidney cells. Fujino M, Li XK, Suda T, Hashimoto M, Okabe K, Yaginuma H, Mikoshiba K, Guo L, Okuyama T, Enosawa S, Amemiya H, Amano T, Suzuki S.
【非特許文献２２】カスパーゼ関連疾患の文献；  関節リウマチ：Prog Med Chem 2002;39:1-72, Caspase inhibitors as anti-inflammatory and antiapoptotic agents. Graczyk PP.
【非特許文献２３】カスパーゼ関連疾患の文献；  虚血性心臓疾患：Am J Physiol Heart Circ Physiol 2002 Sep;283(3):H990-5, Hypoxia-induced cleavage of caspase-3 and DFF45/ICAD in human failed cardiomyocytes. Todor A, Sharov VG, Tanhehco EJ, Silverman N, Bernabei A, Sabbah HN.
【非特許文献２４】カスパーゼ関連疾患の文献；  抗炎症：J Immunol 2003 Mar 15;170(6):3386-91, A broad-spectrum caspase inhibitor attenuates allergic airway inflammation in murine asthma model. Iwata A, Nishio K, Winn RK, Chi EY, Henderson WR Jr, Harlan JM.
【非特許文献２５】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝炎ウイルスによる肝疾患：i) J Viral Hepat. 2003 Sep;10(5):335-42. Apoptosis in hepatitis C Kountouras J, Zavos C, Chatzopoulos D.
【非特許文献２６】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝炎ウイルスによる肝疾患：ii) Apoptosis. 2003 Dec;8(6):655-63. Apoptosis participates to liver damage in HSV-induced fulminant hepatitis. Pretet JL, Pelletier L, Bernard B, Coumes-Marquet S, Kantelip B, Mougin C.
【非特許文献２７】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝炎ウイルスによる肝疾患：iii) Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Jun 24;100(13):7797-802. Caspase 8 small interfering RNA prevents acute liver failure in mice. Zender L, Hutker S, Liedtke C, Tillmann HL, Zender S, Mundt B, Waltemathe M, Gosling T, Flemming P, Malek NP, Trautwein C, Manns MP, Kuhnel F, Kubicka S.
【非特許文献２８】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝硬変：i) J Pharmacol Exp Ther. 2004 Mar;308(3):1191-6,  The caspase inhibitor Idn-6556 attenuates hepatic injury and fibrosis in the bile duct ligated mouse. Canbay A., Fledstein A., Baskin-Bey E., Bronk FS.  Gores GJ.
【非特許文献２９】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝硬変：ii) Hepatology. 2004 Feb;39(2):273-8, Apoptosis: the nexus of liver injury and fibrosis. Canbay A, Friedman S, Gores GJ.
【非特許文献３０】カスパーゼ関連疾患の文献；  肝硬変：iii) Hepatology. 2003 Nov;38(5):1188-98, Kupffer cell engulfment of apoptotic bodies stimulates death ligand and cytokine expression. Canbay A, Feldstein AE, Higuchi H, Werneburg N, Grambihler A, Bronk SF, Gores GJ.
【非特許文献３１】Wu J. et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 1999, 17, 320.
【非特許文献３２】Hoglen N. C. et al., J. of Pharmacoloy and Experimental Therapeutics, 2001, 297, 811.
【非特許文献３３】Jaeschke H. et al., Toxicology and Applied Pharmacology, 2000, 169, 77.
【非特許文献３４】Hoglen N.C. et al., J. Pharmacol Exp. Ther., 2004, 309(2):634. Characterization of IDN-6556 (3-[2-(2-tert-butyl-phenylaminooxalyl)-amino]- propionylamino]-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-phenoxy)-pentanoic acid): a liver-targeted caspase inhibitor.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、カスパーゼに対して、効果的で、且つ高い選択性を有する阻害剤として使用しうる新しい化合物をデザインするために鋭意研究を行った。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記の目的を達成するために、本発明者らは様々な化合物を合成して、カスパーゼに対するそれらの結合能及び阻害活性を測定した。その結果、下記式（１）のピリドン化合物がこのような条件を満たすことを見出し、本発明に到った。
【００１４】
【化００３】
2010509319.tif 000004
【００１５】
式中の、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＸは下記の定義と同義である。
従って、本発明はカスパーゼに対して効果的な阻害活性を有する式（１）の新規なピリドン誘導体または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００１６】
また、薬学的に許容される担体と共に、式（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩を活性成分として含有している、カスパーゼを阻害する医薬組成物、具体的には消炎またはアポトーシスを予防する医薬組成物を提供することが本発明の他の目的である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る式（１）の化合物はカスパーゼに対する優れた阻害活性を有し、そしてカスパーゼが介在する様々な疾患及び症状の治療に有利に使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
まず第一に、本発明における重要用語は下記のように定義される：
ａ）Ｃ１−Ｃ５−アルキル基：１〜５個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の炭化水素であって、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００１９】
ｂ）Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル基：３〜１０個の炭素原子を有する環状炭化水素であって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００２０】
ｃ）アリール：アリール基は芳香族基とヘテロ芳香族基及びその部分還元誘導体を全て含む。芳香族基は単一または縮合された５〜１５員環の不飽和炭化水素である。上記ヘテロ芳香族基は酸素、硫黄及び窒素からなる群から選択された１〜５個のヘテロ原子を有する芳香族基である。アリール基はフェニル、ナフチル、インドリル、キノリニル、イソキノリル、イミダゾリニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリルなどを包含するが、これらに限定されない。
【００２１】
上記Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたはアリール基中の一つ以上の水素は、下記から選択された基で置換されていてもよい：アシル、アミノ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、チオ、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、スルホキシ及びグアニド基。
【００２２】
ｄ）天然アミノ酸は下記のものを含む：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、プロリン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン。
【００２３】
また、本明細書には下記の略語が含まれる：
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＨＡＴＵ ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＭＦ ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ：ジメチルスルホキシド
ＮＭＭ ：Ｎ−メチルモルホリン
ＡＩＢＮ： ２，２'−アゾビス（２−メチルプロピオニトリル）
ＴＥＭＰＯ：２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシ、フリーラジカル
ＬｉＨＭＤＳ：リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＨＥＰＥＳ：Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ'−（２'−エタンスルホン酸）
ＣＨＡＰＳ：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアミノ］−１−プロパンスルホネート
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＤＴＴ：ジチオスレイトール
【００２４】
以下、本発明をより具体的に説明する。本発明の一態様はカスパーゼに対する阻害剤として有用な、下記式（１）のピリドン誘導体または薬学的に許容されるその塩に関する：
【００２５】
【化００４】
2010509319.tif 000005
【００２６】
式中の、
Ｉ）Ｒ１はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、アリール、または全ての天然アミノ酸の側鎖残基を表し、
ＩＩ）Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、アリール、または全ての天然アミノ酸の側鎖残基を表し、
ＩＩＩ）Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、またはハロゲンを表し、
ＩＶ）Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
Ｖ）Ｒ５はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
ＶＩ）Ｒ６はＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
ＶＩＩ）Ｒ７及びＲ８はそれぞれ互いに独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールを表し、
ＶＩＩＩ）Ｘは−ＣＨ２ＯＲ９（Ｒ９はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、−ＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１０（Ｒ１０はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、または−ＣＨ２−Ｗ（Ｗはハロゲンである）を表す。
【００２７】
本発明に係る式（１）の化合物において、Ｒ１は、好ましくは全ての天然アミノ酸の側鎖残基、より好ましくは−ＣＨ２ＣＯＯＨを表す。式（１）の化合物は、Ｒ１基によってＲ１が結合された炭素が立体中心になるとき、２種の立体異性体、またはそれらの混合物（ジアステレオマー混合物）を含んでいてもよい。Ｒ１がカルボキシル部分を含むアミノ酸の側鎖残基のとき、式（１）の化合物はエステル形態（−ＣＯ２Ｙ１、ここで、Ｙ１はＣ１−Ｃ５−アルキルである）、スルホンアミド形態（−ＣＯＮＨＳＯ２Ｙ２、ここで、Ｙ２はＣ１−Ｃ５−アルキルである）、及び薬学的に許容される塩形態を含んでいてもよく；または）式（１）の化合物は、Ｒ１が塩基部分を含むアミノ酸の側鎖残基であるとき、薬学的に許容される塩の形態で存在していてもよい。
【００２８】
本発明の化合物（式（１ａ））は、Ｒ１が−ＣＨ２ＣＯＯＨであるとき、環状ケタールの形態（式（１ｂ））で存在できるので、当業者であれば環状ケタール（式（１ｂ））も本発明に含まれることを理解することができる。
【００２９】
【化００５】
2010509319.tif 000006
【００３０】
また、上記化合物の平衡形態には、それらの互変異性形態が含まれることを理解しなければならない。
【００３１】
Ｒ２は、好ましくはＣ１−Ｃ５−アルキルを表し、より好ましくはメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、またはｔ−ブチルを表す。式（１）の化合物は、Ｒ２基によってＲ２が結合した炭素が立体中心になるとき、２種の立体異性体、またはそれらの混合物（ジアステレオマー混合物）を含んでいてもよい。式（１）の化合物は、Ｒ２がカルボキシル部分を含むアミノ酸の側鎖残基であるとき、エステル形態（−ＣＯ２Ｙ１、ここで、Ｙ１はＣ１−Ｃ５−アルキルである）、スルホンアミド形態（−ＣＯＮＨＳＯ２Ｙ２、ここで、Ｙ２はＣ１−Ｃ５−アルキルである）、及び薬学的に許容される塩の形態を含んでいてもよく；または式（１）の化合物は、Ｒ２が塩基部分を含むアミノ酸の側鎖残基であるとき、薬学的に許容される塩の形態で存在していてもよい。
【００３２】
Ｒ３は、好ましくはＨ、Ｃ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、またはハロゲンを表し、より好ましくはＨ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、またはｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、フルオロ、またはクロロを表す。
Ｒ４は、好ましくはＨを表す。
Ｒ５は、好ましくはＨを表す。
【００３３】
Ｒ６は、好ましくはそれぞれが置換されていてもよいＣ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたはアリールによって置換されていてもよいＣ１−Ｃ５−アルキルを表すか；または置換されていてもよいアリールを表す。Ｒ６は、より好ましくはＣ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基でそれぞれが置換されていてもよいＣ３−Ｃ１０−シクロアルキルまたはアリールによって置換されてもよいＣ１−Ｃ５−アルキルを表すか；またはＣ１−Ｃ５−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ５−アルコキシ、及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基で置換されていてもよいアリールを表す。例えば、Ｒ６は、フェニル、ナフチル、インドリル、キノリニル、イソキノリル、イミダゾリニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、またはチアゾリルであるか；またはそれぞれがメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、トリハロメチル、及びハロゲンからなる群から選択された一つ以上の置換基で置換されていてもよい、フェニル、ナフチル、インドリル、キノリニル、イソキノリル、イミダゾリニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリルまたはシクロヘキシルで置換されたメチルである。
【００３４】
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ、好ましくは、Ｈを表す。
Ｒ９は、好ましくは一つ以上のハロゲンによって置換されたアリール、より好ましくは一つ以上のフッ素によって置換されたフェニル、最も好ましくは２，３，５，６−テトラフルオロフェニルを表す。
Ｒ１０は、好ましくは一つ以上のハロゲンによって置換されたアリール、より好ましくは一つ以上の塩素によって置換されたフェニル、最も好ましくは２，６−ジクロロフェニルを表す。
Ｗは、好ましくはＦを表す。
【００３５】
最も好ましい化合物は下記群から選択された化合物である：
５−フルオロ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸（１）；
３−［２−（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸（２）；
５−フルオロ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェネチル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸（３）；
５−フルオロ−３−［２−（１−イソブチル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸（４）；
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸（５）；
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸（６）；
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ペンタノイルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸（７）；及び
３−｛２−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル］−ブチリルアミノ｝−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸（８）。
【００３６】
カスパーゼに対して阻害作用を示す式（１）の新規なピリドン誘導体を製造する方法を、下記反応式１〜４に表す。しかし、下記反応式に説明された方法は、本発明で用いる典型的な方法のみを表す。操作の順序、試薬、反応条件、溶媒などは限定無く変更できる。
【００３７】
【化００６】
2010509319.tif 000007
【００３８】
反応式１に示されるように、アセチルアセトアルデヒドジメチルアセタール、マロノニトリル及びピペリジニウムアセテートを適切な溶媒、例えばトルエン中で反応させ、プロピリデンマロノニトリル（２）とプロペニリデンマロノニトリル（３）との混合物を得る。この混合物を濃硫酸で処理して、ピリドンカルボニトリル（４）を得る。このピリドンカルボニトリル（４）をメチルマグネシウムブロマイドと反応させて、アセチルピリドン（５）を得る。アセチルピリドン化合物（５）、硫黄及びモルホリンを反応させ、チオアミド化合物（６）を得た後、適切な溶媒、例えばメタノール中で濃硫酸と反応させ、目的とするピリドン化合物（７）を得る。Ｒ３基がＨであるときは、公知の方法（J Amer. Chem. Soc., 1959, 81, 740-743）によって所望の化合物を製造することができる。
【００３９】
【化００７】
2010509319.tif 000008
【００４０】
化合物（７）を適切なハロゲン化アルキルと反応させて化合物（８）を得る。このようにして得られた化合物（８）を ＬｉＨＭＤＳ 及び適切なハロゲン化アルキルと反応させて化合物（９）を得て、必要に応じてこれを 加水分解して、脱保護化されたカルボン酸化合物（１０）を得る。
【００４１】
【化００８】
2010509319.tif 000009
【００４２】
反応式３及び下記反応式４において、Ｚは−ＯＲ９（ここで、Ｒ９はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１０（ここで、Ｒ１０はＣ１−Ｃ５−アルキル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、またはアリールである）、または−Ｗ（Ｗはハロゲンである）を表す。
【００４３】
上記反応式３で示されるように、カルボン酸化合物（１０）をアスパラギン酸化合物（１３）（下記反応式４を参照されたい）とカップリングして化合物（１１）を得て、これをデス・マーチン(Dess−Martin)ペルヨージナン酸化反応させ、必要に応じて脱保護して所望の化合物（１）を得る。
【００４４】
反応式３で示した化合物（１）中の官能基Ｚは、下記反応式４の工程に従って所望のＺ基を既に有する化合物（１３）を合成し、続いて、これをカルボン酸化合物（１０）と反応させることにより形成できる（国際公開ＷＯ第００／２３４２１号公報を参照されたい）。または、カルボン酸化合物（１０）とアスパラギン酸（β−ｔ−Ｂｕ）メチルエステルとを混合して加水分解した後、反応式４の工程に従って所望のＺ基を導入することができる。ＺがＦであるときは、公知の方法（Tetrahedron Letters,1994,35(52),9693-9696）によってラセミ化合物を製造することができる。
【００４５】
【化００９】
2010509319.tif 000010
【００４６】
本発明に係る上記式（１）の化合物は、下記実験例の結果によって立証されるように、カスパーゼに対する広域スペクトルの阻害活性を有しており、これにより、炎症及びアポトーシスの予防効果を有している。従って、本発明は、薬学的に許容される担体と共に、式（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩を活性成分として含有する、カスパーゼ阻害用医薬組成物、具体的には炎症及びアポトーシスを予防するための治療用組成物を提供する。さらに詳しくは、本発明に係る組成物は認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿病、胃潰瘍、肝炎による脳損傷、肝炎による肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、関節リウマチ、虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死、または肝硬変の治療または予防効果を有する。
【００４７】
また、本発明はカスパーゼ阻害用、特に炎症及びアポトーシス予防用の式（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。さらに、本発明は患者に式（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩の治療的有効量を投与することを含む、患者における炎症及びアポトーシスを予防する方法を提供する。さらに、本発明は、患者に式（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩の治療的有効量を投与することを含む、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿病、胃潰瘍、肝炎による脳損傷、肝炎による肝疾患、急性肝炎、劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、関節リウマチ、虚血性心臓疾患による心臓細胞壊死、または肝硬変の治療または予防方法を提供する。
【００４８】
本発明の式（１）の化合物は、投与目的のために様々な医薬品形態に剤形化することができる。本発明に係る医薬組成物を製造するために、式（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩の有効量を、製造しようとする剤形に従って選択される薬学的に許容される担体と混合する。
【００４９】
カスパーゼ阻害化合物は適用目的によって注射用製剤、経皮用製剤または経口用製剤として剤形化できる。投与の容易性及び用量の均一性の側面から組成物を単位投与形態で剤形化するのが特に有利である。
【００５０】
経口用製剤の場合には、あらゆる通常の医薬用担体を使用することができる。例えば、懸濁液、シロップ剤、エリキシル及び溶液剤のような経口液体製剤に、水、グリコール、油、アルコールなどを使用することができ；散剤、丸剤、カプセル剤及び錠剤のような固体製剤に、でんぷん、糖類、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩解剤などを使用することができる。投与の容易性によって、錠剤及びカプセル剤が最も便利な服用形態である。錠剤及び丸剤は腸溶性製剤に製剤化することが好ましい。
【００５１】
非経口製剤の場合には、担体としては通常、滅菌水を使用し、溶解助剤のような他の成分も使用できる。注射用製剤、例えば，滅菌注射用水性または油性懸濁液は公知の技術に従い、適切な分散剤、湿潤剤、または懸濁剤を用いて製造できる。注射用製剤の製造に用いられる溶媒としては、水、リンゲル液及びＮａＣｌ等張液があり、滅菌固定油も溶媒または懸濁媒体として有利に使用できる。モノ−またはジ−グリセリドを含む無刺激性固定油もこのような目的のために使用できる。また、オレイン酸のような脂肪酸も注射用製剤に使用できる。
【００５２】
経皮製剤の場合には、担体として浸透促進剤及び／又は適当な湿潤剤を、任意に皮膚に対して顕著な刺激性のない適当な添加剤と共に混合して使用することができる。この添加剤は皮膚を通して投与を促進及び／又は所望の組成物の製造を支援することができる。経皮製剤は経皮用パッチ、滴下式または軟膏のような様々な方式で投与される。
【００５３】
本発明のカスパーゼ阻害化合物を臨床の目的で用いる場合は、１日に、体重１ｋｇ当たり０．１〜１００ｍｇの範囲の量で対象患者に投与するのが好ましい。１日の全投与量を１回または数回にわたって投与することができる。しかし、個々の患者に対する固有の投与量は、使われる特定化合物、患者の体重、性別、健康状態、または食生活、薬剤の投与時期または投与方法、排泄率、薬剤の混合比及び治療する疾患の重症度などによって変わり得る。
【実施例】
【００５４】
本発明を、下記実施例によってより具体的に説明する。しかし、これらの実施例は本発明に対する理解を助けるためだけのものであり、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【００５５】
製造例１−１）
２−（３，３−ジメトキシ−１−メチル−プロピリデン）−マロノニトリル
アセチルアセトアルデヒドジメチルアセタール（５０ｇ、３７８ｍｍｏｌ）とピペリジニウムアセテート（５．５ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）をトルエン（２００ｍＬ）に溶かし、そこに、マロノニトリル（２５ｇ、３７８ｍｍｏｌ）を２０分間に亘ってゆっくり加えて、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水硫酸ナトリウム）し、減圧下で濃縮して褐色の液体化合物（６３ｇ、収率：９２％）を得た。これを１Ｈ−ＮＭＲで分析した結果、２−（３，３−ジメトキシ−１−メチル−プロピリデン）−マロノニトリルと［（２Ｅ）−３−メトキシ−１−メチルプロプ−２−エン−１−イリデン］マロノニトリルとの約１０：１の混合物と確認された。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ４．５７（ｔ，１Ｈ），３．３９（ｓ，６Ｈ），２．８８（ｄ，２Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）
【００５６】
製造例１−２）
４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−カルボニトリル
２−（３，３−ジメトキシ−１−メチル−プロピリデン）−マロノニトリルと［（２Ｅ）−３−メトキシ−１−メチルプロプ−２−エン−１−イリデン］マロノニトリルとの１０：１の混合物（３８ｇ、２１１ｍｍｏｌ）に、濃硫酸（３４ｍＬ、６３３ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を５０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、そこに水（１００ｍＬ）を加えた。生成した固体化合物をろ過し、水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して表題化合物（２１．１ｇ、収率：７５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ１２．３１（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，１Ｈ），６．３０（ｄ，１Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ）
【００５７】
製造例１−３）
３−アセチル−４−メチル−１Ｈ−ピリジン−２−オン
メチルマグネシウムブロマイド（１．４Ｍトルエン／テトラヒドロフラン（７５／２５）溶液、３２７ｍＬ、４５８ｍｍｏｌ）に、製造例１−２）の化合物（２０．５ｇ、１５３ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、室温で１０分間加えて、混合物を還流下で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却して、再び１２時間撹拌した。反応混合物を０℃で６Ｎ塩酸水溶液（１００ｍＬ）にゆっくり加え、抽出し、乾燥（無水硫酸ナトリウム）して、減圧下で濃縮した。ジエチルエーテル（１００ｍＬ）を残渣に加えて、淡黄色の固体化合物を得た後、ろ過し、乾燥して表題化合物（２１．７ｇ、収率：９４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ１２．９４（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，１Ｈ），６．１８（ｄ，１Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ）
【００５８】
製造例１−４）
４−メチル−３−（２−モルホリン−４−イル−２−チオキソ−エチル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン
３−アセチル−４−メチル−１Ｈ−ピリジン−２−オン（２１．５ｇ、１４２ｍｍｏｌ）に、硫黄（４．７９ｇ，１４９ｍｍｏｌ）及びモルホリン（１８．７ｍＬ、２１３ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を１２０℃で８時間加熱した。反応混合物を室温に冷却した。エタノール（５０ｍＬ）を加えて灰色の固体化合物を得た後、ろ過し、乾燥して表題化合物（２７．３ｇ、収率：７６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ１１．３１（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，１Ｈ），６．０３（ｄ，１Ｈ），４．２４（ｔ，２Ｈ），４．００（ｔ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．６８（ｍ，４Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ）
【００５９】
製造例１−５）
（４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
４−メチル−３−（２−モルホリン−４−イル−２−チオキソ−エチル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン（２７．３ｇ、１０８ｍｍｏｌ）に、メタノール（３０ｍＬ）及び濃硫酸（３０ｍＬ）を加えて、混合物を１００℃に３時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、セライトを通してろ過して沈澱物を除去した。水層を塩化メチレンで抽出（５０ｍＬ× ３）し、乾燥（無水硫酸ナトリウム）して、減圧下で濃縮した。ジエチルエーテル（１００ｍＬ）を残渣に加えて淡褐色の固体化合物を得た後、ろ過し、乾燥して表題化合物（１６．９ｇ、収率：８６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ１２．３５（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，１Ｈ），６．１３（ｄ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ）
【００６０】
製造例１−６）
（４−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
製造例１−５）の化合物（１８１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（２４４ｍｇ、２．０当量）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２・Ｈ２Ｏ（４０ｍｇ、０．２当量）、ピリジン（０．１６ｍＬ、２．０当量）、ＴＥＭＰＯ（１７２ｍｇ、１．１当量）及びモレキュラーシーブ（１００ｍｇ、４Ａ、粉末、予備乾燥）の混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）を加えて、混合物を窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。反応混合物を空気に露出して、１日間撹拌した。そこに飽和酢酸アンモニウム（３０ｍＬ）を加えて、混合物を酢酸エチルで２回抽出（１００ｍＬ）した。抽出物を低濃度の炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜６０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（２３６ｍｇ、収率９２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４７−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．４０−７．３５（ｍ，３Ｈ），７．２１（ｄ，１Ｈ），６．１２（ｄ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｓ，２Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ）
【００６１】
製造例１−７）
２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸メチルエステル
製造例１−６）の化合物（２３０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした。そこに、１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（１．０７ｍＬ、１．２当量）を加えて、−７８℃の温度を保持しながら混合物を１０分間撹拌した。次に、ヨウ化エチル（０．１１ｍＬ、１．５当量）を加え、混合物を室温にゆっくり温めながら、２時間撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮して表題化合物（２６０ｍｇ）を化学量論的収率で得た。この化合物はさらに精製することなく、次の反応で使用した。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４４（ｔ，２Ｈ），７．４０−７．３４（ｍ，３Ｈ），７．１８（ｄ，１Ｈ），６．０９（ｄ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．２９−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），１．８７（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ）
【００６２】
製造例１−８）
２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸
製造例１−７）の化合物（２５３ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を溶媒混合物（６ｍＬ、テトラヒドロフラン：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝３：２：１）に溶かし、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１１２ｍｇ、３．０当量）を加え、混合物を加熱して約４時間撹拌した。反応混合物を１Ｎの塩酸水溶液で中和し、減圧下で蒸留して大部分のテトラヒドロフランを除去した。残渣を過剰の酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶かし、塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮して表題化合物（２４０ｍｇ）を化学量論的収率で得た。この化合物はさらに精製することなく、次の反応で使用した。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５３（ｔ，２Ｈ），７．４７（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｄ，２Ｈ），７．３２（ｄ，１Ｈ），６．３７（ｄ，１Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｍ，１Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ），０．９５（ｔ，３Ｈ）
【００６３】
製造例１−９）
５−フルオロ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例１−８）で得られたカルボン酸誘導体（２４０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、３−アミノ−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696を参照されたい；２１３ｍｇ、１．３当量 ）及びＨＡＴＵ（４０６ｍｇ、１．２当量）の混合物を０℃に冷却し、そこに、ＤＭＦ（５ｍＬ）溶媒中の、トリエチルアミン（０．５０ｍＬ、４．０当量）を加えて、混合物を１日間反応させた。溶媒を減圧下で蒸留した。残渣を酢酸エチルで抽出（３０ｍＬ×２）し、水、炭酸水素ナトリウム水溶液及び塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。このようにして得られた化合物とデス・マーチン試薬（７５５ｍｇ、２．０当量）に、無水ジクロロメタン（４ｍＬ）を加えて、混合物を室温で１時間撹拌した。イソプロピルアルコール（１ｍＬ）を加えて反応を終結した。反応混合物を減圧下でセライトを通してろ過して固体を除去し、酢酸エチルで抽出（２０ｍＬ×２）した。抽出物を水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（２９８ｍｇ、収率７３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３６−７．２２（ｍ，５Ｈ），７．１５（ｔ，１Ｈ），６．０８（ｍ，１Ｈ），５．２３−４．８２（ｍ，２Ｈ），４．７５（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｍ，１Ｈ），２．９０−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．３４及び２．３３（ｔｗｏ ｓ，３Ｈ），２．３０−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．４０及び１．３８（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．８７（ｍ，３Ｈ）
【００６４】
実施例１
５−フルオロ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸
【００６５】
【化０１０】
2010509319.tif 000011
【００６６】
製造例１−９）の化合物（２４０ｍｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこに、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温にゆっくり温めながら、１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー （１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製して表題化合物（１７９ｍｇ、収率８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８１（ｍ，１Ｈ），７．４６（ｍ，３Ｈ），７．３９（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｍ，２Ｈ），６．２１（ｔ，１Ｈ），５．３０−４．８０（ｍ，２Ｈ），４．５７−４．４５（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．４７（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０５−１．６８（ｍ，２Ｈ），０．７４（ｍ，３Ｈ）
【００６７】
製造例２−１）
（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
製造例１−５）の化合物（５４４ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）とＮａＨ（鉱油中６０％分散、１３２ｍｇ、１．１当量）との混合物に、ＤＭＦ（５ｍＬ）を加えて、混合物を０℃で１０分間撹拌した。そこにベンジルブロマイド（０．３６ｍＬ、１．０当量）を加えて、混合物を窒素雰囲気下、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を酢酸エチルで２回抽出（１００ｍＬ）した。抽出物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（ＮａＨＣＯ３、１００ｍＬ×２）と塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（６７６ｍｇ、収率８３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３５−７．２６（ｍ，５Ｈ），７．１０（ｄ，１Ｈ），６．０２（ｄ，１Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ）
【００６８】
製造例２−２）
２−（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸メチルエステル
製造例２−１）の化合物（２７１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（６ｍＬ）に溶かした。そこに、１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（１．１ｍＬ、１．１当量）を加えて、−７８℃の温度を保持しながら１０分間撹拌した。次に、ヨウ化エチル（０．２１ｍＬ、１．５当量）を加えて、混合物を室温にゆっくり温めながら２時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（４０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１４２ｍｇ、収率４７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３４−７．２２（ｍ，５Ｈ），７．０６（ｄ，１Ｈ），５．９８（ｄ，１Ｈ），５．１８−５．０１（ＡＢｑ，２Ｈ），３．７２（ｄｄ，１Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），２．２４（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｍ，１Ｈ），０．８８（ｔ，３Ｈ）
【００６９】
製造例２−３）
２−（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸
製造例２−２）の化合物（１４０ｍｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）を溶媒混合物（１０ｍＬ、テトラヒドロフラン：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝３：２：１）に溶かし、１ＮのＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．４ｍＬ、３．０当量）を加えて、混合物を加熱し約５時間撹拌した。反応混合物を１Ｎ塩酸水溶液で中和し、減圧下で蒸留して大部分のテトラヒドロフランを除去した。残渣を過剰の酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶かし、塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮して表題化合物（１３４ｍｇ、収率１００％）を得た。この化合物はさらに精製することなく、次の反応で使用した。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３４−７．２１（ｍ，６Ｈ），６．２６（ｄ，１Ｈ），５．２４−５．１４（ＡＢｑ，２Ｈ），３．７９（ｔ，１Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．２７（ｍ，１Ｈ），２．００（ｍ，１Ｈ），０．９２（ｔ，３Ｈ）
【００７０】
製造例２−４）
３−［２−（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例２−３）で得られたカルボン酸誘導体（１３３ｍｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）、３−アミノ−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696を参照されたい；１１６ｍｇ、１．２当量）及びＨＡＴＵ（２１３ｍｇ、１．２当量）の混合物を０℃に冷却し、そこにＤＭＦ（５ｍＬ）溶媒中の、トリエチルアミン（０．２６ｍＬ、４．０当量）を加えて、混合物を室温で２時間反応させた。溶媒を減圧下で蒸留した。残渣を酢酸エチルで抽出（３０ｍＬ×２）し、水、炭酸水素ナトリウム水溶液及び塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（４０〜６０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、３−［２−（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１４０ｍｇ、収率６３％）を得た。この化合物とデス・マーチン試薬（１８４ｍｇ、１．５当量）に、無水ジクロロメタン（４ｍＬ）を加えて、混合物を室温で１時間撹拌した。イソプロピルアルコール（１ｍＬ）を加えて反応を終結した。反応混合物を減圧下で、セライトを通してろ過して固体を除去し、酢酸エチルで抽出（２０ｍＬ×２）した。抽出物を水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜４０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１１０ｍｇ、収率８１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４０（ｔｗｏ ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３６−７．２２（ｍ，５Ｈ），７．１５（ｔ，１Ｈ），６．０８（ｍ，１Ｈ），５．２３−４．８２（ｍ，４Ｈ），４．７５（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｍ，１Ｈ），２．８８−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．２８及び２．２７（ｔｗｏ ｓ，３Ｈ），２．２８−２．０４（ｍ，２Ｈ），１．４１及び１．３８（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．８７（ｍ，３Ｈ）
【００７１】
実施例２
３−［２−（１−ベンジル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸
【００７２】
【化０１１】
2010509319.tif 000012
【００７３】
製造例２−４）の化合物（１００ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこにトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を、室温にゆっくり温めながら、１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製して表題化合物（６０ｍｇ、収率６８％、白色粉末）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７４（ｍ，１Ｈ），７．５６（ｔ，１Ｈ），７．２６−７．２１（ｍ，５Ｈ），６．１４（ｄ，１Ｈ），５．３０−４．６５（ｍ，２Ｈ），５．１６（ｍ，１Ｈ），４．９１（ｍ，１Ｈ），４．５０−４．３８（ｍ，１Ｈ），３．５０（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．４０（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．０４−１．６９（ｍ，２Ｈ），０．６９（ｍ，３Ｈ）
【００７４】
製造例３−１）
（４−メチル−２−オキソ−１−フェネチル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
製造例１−５）の化合物（５４４ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）とＮａＨ（鉱油中６０％分散、１３２ｍｇ、１．１当量）との混合物に、ＤＭＦ（５ｍＬ）を加えて、混合物を０℃で１０分間撹拌した。そこにフェネチルブロマイド（０．４５ｍＬ，１．１当量）を加えて、混合物を窒素雰囲気下、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を酢酸エチルで２回抽出（１００ｍＬ）した。抽出物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（ＮａＨＣＯ３、１００ｍＬ×２）と塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（４１４ｍｇ、収率４８％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．１４（ｍ，５Ｈ），６．７９（ｄ，１Ｈ），５．８９（ｄ，１Ｈ），４．０９（ｔ，３Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），３．０３（ｔ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ）
【００７５】
製造例３−２）
２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェネチル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸メチルエステル
製造例３−１）の化合物（４０５ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で、無水ＴＨＦ（６ｍＬ）に溶かした。そこに、１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（１．７０ｍＬ、１．２当量）を加えて、反応混合物を−７８℃に保持しながら１０分間撹拌した。次に、ヨウ化エチル（０．１７ｍＬ、１．５当量）を加えて、混合物を室温にゆっくり温めながら、２時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、そしてカラムクロマトグラフィー（３０〜４０％酢酸エチル／ヘキサン)で精製して表題化合物（３２０ｍｇ、収率７２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．１９（ｍ，５Ｈ），６．７４（ｄ，１Ｈ），５．８４（ｄ，１Ｈ），４．１３−４．０６（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．０２（ｔ，２Ｈ），２．２５（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｍ，１Ｈ），０．８９（ｔ，３Ｈ）
【００７６】
製造例３−３）
５−フルオロ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェネチル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例３−２）の化合物（３１３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を製造例２−３）と同様の方法で加水分解して、カルボン酸誘導体（２９６ｍｇ、９９％）を得た。このようにして得られたカルボン酸誘導体（２９０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）、３−アミノ−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696を参照されたい；２７０ｍｇ、１．３当量）及びＨＡＴＵ（４５６ｍｇ、１．２当量）の混合物を０℃に冷却し、そこに、ＤＭＦ（５ｍＬ）溶媒中の、トリエチルアミン（０．５６ｍＬ、４．０当量）を加えて、混合物を１日間反応させた。溶媒を減圧下で蒸留した。残渣を酢酸エチルで抽出（３０ｍＬ×２）し、水、炭酸水素ナトリウム水溶液及び塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（５０〜７０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェネチル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２３２ｍｇ、４９％）を得た。この化合物とデス・マーチン試薬（３００ｍｇ、１．５当量）に、無水ジクロロメタン（４ｍＬ）を加えて、混合物を室温で１時間撹拌した。イソプロピルアルコール（１ｍＬ）を加えて反応を終結した。反応混合物を減圧下でセライトを通してろ過して固体を除去し、酢酸エチルで抽出（２０ｍＬ×２）した。抽出物を水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（４０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１７０ｍｇ、収率７４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５２及び８．３７（ｔｗｏ ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．２８−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．１１（ｔ，２Ｈ），６．７７（ｔｗｏ ｄ，１Ｈ），５．９２（ｍ，１Ｈ），５．２６−４．９３（ｍ，２Ｈ），４．７９（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．０５（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｍ，１Ｈ），３．０８−２．９８（ｍ，２Ｈ），２．９３−２．６６（ｍ，２Ｈ），２．２５及び２．２４（ｔｗｏ ｓ，３Ｈ），２．２８−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．４２及び１．３９（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．８７（ｍ，３Ｈ）
【００７７】
実施例３
５−フルオロ−３−［２−（４−メチル−２−オキソ−１−フェネチル−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸
【００７８】
【化０１２】
2010509319.tif 000013
【００７９】
製造例３−３）の化合物（１６５ｍｇ、０．３３９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこに、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温にゆっくり温めながら１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（８０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１３５ｍｇ、収率９２％、白色粉末）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．８５−７．７５（ｄｄ，１Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｍ，２Ｈ），７．１８−７．１４（ｍ，３Ｈ），６．０２（ｔ，１Ｈ），５．４０−４．９７（ｍ，２Ｈ），４．５８−４．４２（ｍ，１Ｈ），４．０７（ｍ，１Ｈ），３．９８（ｍ，１Ｈ），３．４８（ｍ，１Ｈ），２．８７（ｍ，２Ｈ），２．７２（ｍ，１Ｈ），２．４３（ｍ，１Ｈ），２．１１（ｍ，３Ｈ），２．０１−１．７３（ｍ，２Ｈ），０．６９（ｍ，３Ｈ）
【００８０】
製造例４−１）
（１−イソブチル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
製造例１−５）の化合物（３６２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）とＣｓ２ＣＯ３（９７７ｍｇ、１．５当量）との混合物に、ＤＭＦ（６ｍＬ）とイソブチルブロマイド（０．２８ｍＬ、１．３当量）を加えて、混合物を窒素雰囲気下、６０℃で１日間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を酢酸エチルで２回抽出（１００ｍＬ）した。抽出物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（ＮａＨＣＯ３、１００ｍＬ×２）と塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（２２４ｍｇ、収率４７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０４（ｄ，１Ｈ），６．００（ｄ，１Ｈ），３．６９（ｄ,２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｄ，６Ｈ）
【００８１】
製造例４−２）
２−（１−イソブチル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸メチルエステル
製造例４−１）の化合物（２１７ｍｇ、０．９１６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした。そこに、１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（１．１０ｍＬ、１．２当量）を加えて、反応混合物を−７８℃の温度で保持しながら１０分間撹拌した。次に、ヨウ化エチル（０．１１ｍＬ、１．５当量）を加えて、混合物を室温にゆっくり温めながら２時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（３０〜４０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１８０ｍｇ、収率７４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０１（ｄ，１Ｈ），５．９６（ｄ，１Ｈ），３．７２−３．６６（ｍ，３Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．１２（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｍ，１Ｈ），０．９０−０．８４（ｍ，９Ｈ）
【００８２】
製造例４−３）
５−フルオロ−３−［２−（１−イソブチル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例４−２）の化合物（１８０ｍｇ、０．６７９ｍｍｏｌ）を製造例３−３）と同様の方法で反応させて、表題化合物（１４９ｍｇ、収率５０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４９及び８．４４(ｔｗｏ ｂｒ ｓ，１Ｈ)，７．０７（ｍ，１Ｈ），６．０６（ｍ，１Ｈ），５．２８−４．８８（ｍ，２Ｈ），４．７６（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｍ，３Ｈ），２．８９−２．６２（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｍ，３Ｈ），２．２６−２．０６（ｍ，３Ｈ），１．４２及び１．３８（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．９０（ｍ，６Ｈ），０．８７（ｍ，３Ｈ）
【００８３】
実施例４
５−フルオロ−３−［２−（１−イソブチル−４−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ]−４−オキソ−ペンタン酸
【００８４】
【化０１３】
2010509319.tif 000014
【００８５】
製造例４−３）の化合物（１４３ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこに、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温にゆっくり温めながら１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（８０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、表題化合物（１２１ｍｇ、収率９７％、白色粉末）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．８１−７．７２（ｄｄ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），６．０８（ｍ，１Ｈ），５．３３−４．９１及び４．６５−４．２８（ｍ，３Ｈ），３．７１（ｍ，１Ｈ），３．５４−３．４６（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｍ，１Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ），１．９９−１．７１（ｍ，２Ｈ），０．７８（ｓ，６Ｈ），０．６７（ｓ，３Ｈ）
【００８６】
製造例５−１）
（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
公知の方法（J. Amer. Chem. Soc. 1959, 81, p740）によって得られた（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸（１．５１ｇ、９．８５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶かし、そこにｃ−ＨＣｌを加えて、混合物を１時間還流した。反応混合物を減圧下で蒸留して、表題化合物（１．６５ｇ）を化学量論的収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１２．８６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，１Ｈ），６．２６（ｔ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ）
【００８７】
製造例５−２）
（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酢酸メチルエステル
製造例５−１）の化合物（３０３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）とＣｓ２ＣＯ３（９００ｍｇ、１．５当量）との混合物に、ＤＭＦ（４ｍＬ）とベンジルブロマイド（０．２８ｍＬ、１．３当量）を加えて、混合物を窒素雰囲気下、６０℃で１日間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を酢酸エチルで２回抽出（１００ｍＬ）した。抽出物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（ＮａＨＣＯ３、１００ｍＬ×２）と塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（３０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、表題化合物（３６０ｍｇ、収率７７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３５−７．２５（ｍ，６Ｈ），７．２２（ｄ，１Ｈ），６．１３（ｔ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ）
【００８８】
製造例５−３）
２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−酪酸メチルエステル
製造例５−２）の化合物（８０ｍｇ、０．３１１ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（４ｍＬ）に溶かした。そこに、１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（０．４０ｍＬ、１．２当量）を加えて、反応混合物を−７８℃で保持しながら１０分間撹拌した。次に、ヨウ化エチル（０．０４ｍＬ、１．５当量）を加えて、混合物を室温にゆっくり温めながら２時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、そしてカラムクロマトグラフィー（３０〜４０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、表題化合物（３３ｍｇ、収率３７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４５−７．２２（ｍ，６Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｔ，１Ｈ），５．２１−５．０７（ＡＢｑ，２Ｈ），３．９０（ｔ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），２．００−１．７６（ｍ，２Ｈ），０．９４（ｔ，３Ｈ）
【００８９】
製造例５−４）
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例５−３）の化合物（３３ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）を製造例３−３）と同様の方法で反応させて、表題化合物（４２ｍｇ、収率７９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８９及び７．８２（ｔｗｏ ｂｒ ｄ，１Ｈ），７．３５−７．２２（ｍ，７Ｈ），６．２４（ｍ，１Ｈ），５．２８−４．６５（ｍ，５Ｈ），３．７５（ｍ，１Ｈ），２．９１−２．５８（ｍ，２Ｈ），２．１８（ｍ，１Ｈ），１．７２（ｍ，１Ｈ），１．４１及び１．３９（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．９４（ｍ，３Ｈ）
【００９０】
実施例５
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸
【００９１】
【化０１４】
2010509319.tif 000015
【００９２】
製造例５−４）の化合物（４２ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこに、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温にゆっくり温めながら１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をＰｒｅｐ−クロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製して、表題化合物（３０ｍｇ、収率８１％、白色粉末）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．４８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．６９（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．２３（ｍ，５Ｈ），６．２３（ｍ，１Ｈ），５．３０−４．７６（ｍ，２Ｈ），５．０８（ｍ，２Ｈ），４．５６−４．４５（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．３２（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．５６（ｍ，２Ｈ），０．８０（ｍ，３Ｈ）
【００９３】
製造例６−１）
２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−酪酸メチルエステル
製造例５−２）の化合物（１７４ｍｇ、０．６７６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした。そこに１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（１．００ｍＬ、１．５当量）を加えて、反応混合物を−７８℃の温度で保持しながら１０分間撹拌した。次に、２−ヨードプロパン（０．１２ｍＬ、１．８当量）を加え、混合物をゆっくり−５０℃に温めながら０.５時間撹拌し、０℃で１.５時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２５〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（９５ｍｇ、収率４７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５０（ｄ，１Ｈ），７．３５−７．２５（ｍ，５Ｈ），７．１７（ｄ，１Ｈ），６．１５（ｔ，１Ｈ），５．２０−５．０９（ＡＢｑ，２Ｈ），３．９６（ｄ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｍ，１Ｈ），１．０２（ｄ，３Ｈ），０．８４（ｄ，３Ｈ）
【００９４】
製造例６−２）
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例６−１）の化合物（９５ｍｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）を製造例３−３）と同様の方法で反応させて表題化合物（１４ｍｇ、収率９７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９４及び７．８１（ｔｗｏ ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３８−７．２５（ｍ，７Ｈ），６．２３（ｍ，１Ｈ），５．２４−４．６６（ｍ，５Ｈ），３．４０（ｔｗｏ ｄ，１Ｈ），２．８６−２．５８（ｍ，Ｈ），２．５５（ｍ，１Ｈ），１．４１及び１．４０（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），１．０４（ｔｗｏ ｄ，３Ｈ），０．７８（ｄ，３Ｈ）
【００９５】
実施例６
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−ブチリルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸
【００９６】
【化０１５】
2010509319.tif 000016
【００９７】
製造例６−２）の化合物（１３２ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこに、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温にゆっくり温めながら１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（６０％酢酸エチル／ヘキサン及び１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製して表題化合物（９４ｍｇ、収率８１％、白色粉末）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．６３−８．５２（ｄｄ，１Ｈ），７．６６（ｍ，１Ｈ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．２７−７．２１（ｍ，５Ｈ），６．２３（ｍ，１Ｈ），５．２１−４．８６（ｍ，４Ｈ），４．５９−４．４３（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｍ，１Ｈ），２．７２−２．４１（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｍ，１Ｈ），０．８８（ｍ，３Ｈ），０．６９（ｍ，３Ｈ）
【００９８】
製造例７−１）
２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ペンタン酸メチルエステル
製造例５−２）の化合物（１８３ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした。そこに１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（０．９２ｍＬ、１．３当量）を加えて、反応混合物を−７８℃の温度で保持しながら１０分間撹拌した。次に、ヨウ化ｎ−プロピル（０．１０ｍＬ、１．５当量）を加えて、混合物を室温にゆっくり温めながら２時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１３３ｍｇ、収率６２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６−７．２７（ｍ，６Ｈ），７．１８（ｄｄ，１Ｈ），６．１４（ｔ，１Ｈ），５．２１−５．０８（ＡＢｑ，２Ｈ），３．９９（ｔ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），１．７３（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｍ，２Ｈ），０．９２（ｔ，３Ｈ）
【００９９】
製造例７−２）
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ペンタノイルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例７−１）の化合物（１３０ｍｇ、０．４３４ｍｍｏｌ）を製造例３−３）と同様の方法で反応させて表題化合物（１１０ｍｇ、収率５４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８８及び７．８２（ｔｗｏ ｄ，１Ｈ），７．３４−７．２４（ｍ，７Ｈ），６．２３（ｍ，１Ｈ），５．２４−４．６４（ｍ，５Ｈ），３．８４（ｍ，１Ｈ)，２．８９−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｍ，１Ｈ），１．６４（ｍ，１Ｈ），１．４１及び１．３８（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．９２（ｍ，３Ｈ）
【０１００】
実施例７
３−［２−（１−ベンジル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−ペンタノイルアミノ］−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸
【０１０１】
【化０１６】
2010509319.tif 000017
【０１０２】
製造例７−２）の化合物（１１０ｍｇ、０．２３３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶かして、そこに、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温にゆっくり温めながら１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製して表題化合物（５８ｍｇ、収率６０％、白色粉末）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．６８（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），７．３０−７．２３（ｍ，５Ｈ），６．２３（ｑ，１Ｈ），５．２２−４．６６（ｍ，２Ｈ），５．１２−５．０３（ｍ，２Ｈ），４．５５−４．４５（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｍ，１Ｈ），２．６２（ｍ，２Ｈ），１．７１−１．５０（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｍ，２Ｈ），０．８２（ｍ，３Ｈ）
【０１０３】
製造例８−１）
１−ブロモメチル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンゼン
１−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−ベンゼン（９４０ｍｇ、６．３４ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（１．２４ｇ、１．１当量）及びＡＩＢＮ（２０ｍｇ、触媒量）に、ＣＣｌ４（１２ｍＬ）を加えて、混合物を１時間還流した。懸濁した粒子をろ過で除去して、ＣＣｌ４で洗浄した。合わせた有機層を減圧下で濃縮して黄色液体（１．５ｇ）を化学量論的収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４６（ｍ,１Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ），７．２２−７．２１（ｍ,２Ｈ），４．８３（ｓ,２Ｈ）,１．４６（ｓ,９Ｈ）
【０１０４】
製造例８−２）
［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル］−酢酸メチルエステル
製造例５−１）の化合物（１７７ｍｇ、０．５９８ｍｍｏｌ）とＣｓ２ＣＯ３（２９２ｍｇ、１．５当量）との混合物に、ＤＭＦ（６ｍＬ）と製造例８−１）で得られた１−ブロモメチル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンゼン（１７７ｍｇ、１．３当量）を加えて、混合物を窒素雰囲気下、６０℃で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を酢酸エチルで２回抽出（１００ｍＬ）した。抽出物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬ×２）と塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）して、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１５％〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（１２２ｍｇ、収率６５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４６（ｄ，１Ｈ），７．３３（ｄ，１Ｈ），７．２５（ｔ，１Ｈ），７．１６（ｔ，１Ｈ），６．９７（ｄ，１Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ），６．１１（ｔ，１Ｈ），５．４２（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，２Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）
【０１０５】
製造例８−３）
２−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ-ピリジン−３−イル］−酪酸メチルエステル
製造例８−２）の化合物（１２０ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で無水ＴＨＦ（１０ｍＬ)に溶かした。そこに１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ／ＴＨＦ（０．５０ｍＬ、１．２当量）を加えて、反応混合物を−７８℃の温度で保持しながら１０分間撹拌した。次に、ヨウ化エチル（０．０５ｍＬ、１．５当量）を加えて、混合物を室温にゆっくり温めながら２時間撹拌した。飽和酢酸アンモニウム溶液を加えて反応を終結した。反応混合物を酢酸エチルで抽出（５０ｍＬ×２）し、塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（無水Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２５〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して表題化合物（５０ｍｇ、収率３８％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４６（ｄ，１Ｈ），７．３６（ｄ，１Ｈ），７．２５（ｔ，１Ｈ），７．１６（ｔ，１Ｈ），６．９３（ｄ，１Ｈ），６．８８（ｄ，１Ｈ），６．１２（ｔ，１Ｈ），５．４８−５．３４（ＡＢｑ，２Ｈ），３．９５（ｔ，１Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），２．００（ｍ，１Ｈ），１．８３（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），０．９５（ｔ，３Ｈ）
【０１０６】
製造例８−４）
３−｛２−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル］−ブチリルアミノ｝−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
製造例８−３）の化合物（５０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）を製造例３−３)と同様の方法で反応させて表題化合物（５６ｍｇ、収率７６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８９及び７．８０（ｔｗｏ ｄ，１Ｈ），７．４７（ｄ，１Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｔ，１Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｔ，１Ｈ），６．８２（ｔｗｏ ｄ，１Ｈ），６．２２（ｍ，１Ｈ），５．４８−５．３６（ｍ，２Ｈ），５．２４−４．６８（ｍ，３Ｈ），３．７７（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．１８（ｍ，１Ｈ），１．７４（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），１．４１及び１．３７（ｔｗｏ ｓ，９Ｈ），０．９５（ｍ，３Ｈ）
【０１０７】
実施例８
３−｛２−［１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル］−ブチリルアミノ｝−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸
【０１０８】
【化０１７】
2010509319.tif 000018
【０１０９】
製造例８―４）の化合物（５６ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶かして、そこにトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を、室温にゆっくり温めながら１時間撹拌して、減圧下で濃縮した。残渣をＰｒｅｐ−クロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製して表題化合物（４０ｍｇ、収率８０％、白色粉末）を得た。
１Ｈ―ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ―ｄ６）δ８．４２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．５２（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，１Ｈ），７．３７（ｄ，１Ｈ），７．１５（ｔ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ），６．２９（ｍ，１Ｈ），５．３３（ｍ，２Ｈ），５．２２―４．６６（ｍ，２Ｈ），４．５６―４．４５（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．６１―２．４６（ｍ，２Ｈ），１．７５―１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），０．７９（ｍ，３Ｈ）
【０１１０】
実験例１
カスパーゼ阻害効果の試験
公知の方法（Thornberry, N. A. et al., Nature, 1992, 356, 768; Thornberry, N. A. Methods in Enzymology, 1994, 244, 615; Walker, N. P. C. et al., Cell, 1994, 78, 343）を改変して、α２β２形態のシステインプロテアーゼとして知られているカスパーゼ−１とカスパーゼ−８を発現、精製及び活性化し、カスパーゼ−９も同様の方法で精製して、それらに対する阻害活性をテストした。簡略に説明すると、ｐ１０とｐ２０サブユニット（Thornberry, N. A. et al, Nature, 1992, 356, 768）を大腸菌で発現させ、ニッケルカラムとアニオン交換クロマトグラフィーで精製して、カスパーゼ−１、カスパーゼ−８及びカスパーゼ−９を得た。このようにして得られたカスパーゼ−１に対しては蛍光基質ＡｃＹＶＡＤ−ＡＦＣを、カスパーゼ−８に対してはＡｃＤＥＶＤ−ＡＦＣを、そしてカスパーゼ−９に対してはＡｃＬＥＨＤ−ＡＦＣを用いて、合成された阻害剤の比活性度を測定した。酵素反応は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５０）、１０％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．１％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、及び１０ｍＭのＤＴＴを含む緩衝溶液中、１０ｎＭのカスパーゼ−１に対しては５０μＭのＡｃＹＶＡＤ−ＡＦＣ、２．１ｎＭのカスパーゼ−８に対しては５０μＭのＡｃＤＥＶＤ−ＡＦＣ、及び２００ｎＭのカスパーゼ−９に対しては１５０μＭのＡｃＬＥＨＤ−ＡＦＣの存在下で、様々な濃度の阻害剤を用いて２５℃で遂行した。阻害剤の阻害定数であるＫｉ及びＫｏｂｓの値は蛍光スペクトロメータを用いて反応速度を経時的に測定して初期速度定数を求めることで決定した。Ｋｉはラインウィーバーバークプロット（Lineweaver Burk Plot）から算出し、Ｋｏｂｓは下記数式１から算出した。
【０１１１】
（数式１）
Ｋｏｂｓ＝−ｌｎ（１−Ａｔ／Ａｏｏ）／ｔ
式中、
Ａｔはｔ時点での開裂率（％）を意味し、そして
Ａｏｏは最大開裂率（％）を意味する。
【０１１２】
Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ  ＧｅｍｉｎｉＸＳ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（モレキュラーデバイス社製）を、励起波長４０５ｎｍ、発光波長５０５ｎｍで用いた。
【０１１３】
阻害剤のインビボ阻害活性は、ジャーカット細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ−１５２）をＦａｓ抗体（Upstate Biotech 05-201）でアポトーシスさせ、該細胞を阻害剤で処理時に生きているジャーカット細胞量を観察するために公知方法のＷＳＴ−１（Francoeur A.M. and Assalian A. (1996) Biochemica 3, 19-25）によって色の変化を測定して決定した。Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ ３４０ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（モレキュラーデバイス社製）を吸光波長４４０ｎｍで用いた。
【０１１４】
【表１】
2010509319.tif 000019
【０１１５】
実験例２
マウスにおけるＦａｓ抗体による肝損傷に対する治療効果
工程１）血液サンプルの製造
雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢、Charles River Laboratory、大阪、日本）を２２℃及び５５％の相対湿度下で１２時間ずつ明／暗を変えながら飼育した。この時、食料と水は不断給餌した。発熱物質フリーのホスフェート緩衝液に、Ｆａｓ抗体（Jo2; BD Pharmingen、San Diego, California）を溶かし、それを０．１５ｍｇ／ｋｇの量で各マウスの尾静脈に注射した。Ｆａｓ抗体を注射した直後に、試験化合物が溶解しているビヒクル（ＰＥＧ４００：エタノール＝２：１からなる混合物をホスフェート緩衝液で２０倍に希釈）またはビヒクル単独を実験動物に経口投与した。薬物投与から６時間後、心臓から血液サンプルを得た。
【０１１６】
工程２）血漿アミノトランスフェラーゼ活性の試験
工程１で得た血液サンプルに対して血漿ＡＬＴ活性を、ＡＬＴ試験キット（Asan Pharm. Co.、Seoul, Korea）を使用して、製造者の説明書に従って測定した。その結果、Ｆａｓ抗体投与により血漿内ＡＬＴ活性が急激に上昇して、試験化合物が上昇した酵素活性を用量−依存的に阻害することが分かった。これらの結果に基づいて、試験化合物のＥＤ５０値をＰｒｉｓｍソフトウェア（GraphPad社製）を用いて算出して、０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇの値を得た。
【産業上の利用可能性】
【０１１７】
上記実験例の結果から明らかなように、本発明に係る式（１）の化合物は優れたカスパーゼ阻害活性を有しており、特に、Ｆａｓ抗体による肝損傷動物モデルで治療効果を示す。従って、式（１）の化合物は、カスパーゼが介在する様々な疾患及び症状の治療に効果的に使用することができる。
【国際調査報告】
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