(57)【要約】  逆立方晶または逆六方晶のリオトロピック液晶材料を含む粒子の分散系を含む注射可能な製剤をヒトに投与することにより、ヒトにおける毒性効果または医学的に好ましくない効果を減衰させる方法。粒子は吸収、吸着または他の仕方で隔離することにより、薬剤および毒素の効果を減衰させ、救命薬、拮抗薬、または予防薬として利用し得る。本発明は、特に、間違って全身に送達された局所麻酔薬の有害効果を逆転させること、また治療の過程で全身麻酔薬の治療効果を減衰させることに応用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
臨床的な場面で麻酔薬の効果を管理する方法であって、
患者に１種以上の麻酔薬を投与する工程と、
医学的、臨床的もしくは外科手術処置または前記患者の観察を行う工程と、
前記患者における前記１種以上の麻酔薬の麻酔効果を減衰するために、前記ヒトまたは動物の患者に、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む粒子を含有する十分な量の１種の組成物を投与する工程とを含む方法。
【請求項２】
前記１種以上の麻酔薬が、プロポホール、エトミダート、ケタミン、チオペンタール、ベンゾジアゼピン、バルビツラート、オピオイド、ハロペリドール、ドロペリドール、およびフェンシクリジンから成る群から選択される少なくとも１種の全身麻酔薬を含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１種以上の麻酔薬がプロポホールを含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記１種以上の麻酔薬が、ブピバカイン、リドカイン、ロピバカイン、コカインおよびメピバカインから成る群から選択される少なくとも１種の局所麻酔薬を含む請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記粒子が被覆されておらず、イオン荷電されており、前記組成物が極性溶媒を含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記粒子が前記極性溶媒の中で懸濁して安定している請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記十分な量の組成物を投与する工程が、前記組成物の静脈内投与によって実行される請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記逆立方晶相材料または逆六方晶相材料が、（ｉ）脂質または界面活性剤、（ｉｉ）極性溶媒、および（ｉｉｉ）トコフェロール、リナロール、スクアレン、安息香酸ベンジル、およびジアセチル化モノグリセリドから成る群から選択される１種以上の疎水物質を含む請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物中の前記粒子がホスファチジルコリンおよびトコフェロールを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記１種以上の麻酔薬を投与する工程が、前記十分な量の組成物を投与する工程と同時または該工程の前に行われる請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記１種以上の麻酔薬を投与する工程が、前記十分な量の組成物を投与する工程の後に行われる請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記粒子の平均粒径が長さ８０ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物中の前記粒子が１種以上の標的化合物を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物中の前記粒子が、さらに前記立方晶相または六方晶相とは異なり、該相の内部にある１つの高疎水性相を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
薬剤または外因性物質もしくは内因性物質の薬理学的効果または毒性効果を優先的に減衰する方法であって、
諸組織または血流中に薬剤または外因性物質もしくは内因性物質を有する、または有すると疑われる患者を認定する工程と、
前記患者における前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質の効果を減衰するために、前記患者に、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む粒子を含有する十分な量の１種の組成物を投与する工程とを含む方法。
【請求項１６】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質はモルヒネであると認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質を１種の疎水性薬剤と認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質を一酸化炭素と認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質は１種の遊離基を含むと認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質を二原子窒素と認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質は、プロポホール、エトミダート、ケタミン、チオペンタール、ベンゾジアゼピン、バルビツラート、オピオイド、ハロペリドール、ドロペリドール、およびフェンシクリジンのうちの１種であると認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質は、ブピバカイン、リドカイン、ロピバカイン、メピバカイン、およびコカインのうちの１種であると認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記認定する工程が、前記薬剤または外因性物質もしくは内因性物質は、ベンゾジアゼピン、アヘン剤、中枢神経抑制薬、呼吸抑制薬、心血管抑制薬、精神運動興奮薬、向精神薬、鎮静剤、催眠薬、筋弛緩薬、オルガノホスファート、抗精神病薬、抗うつ薬、抗リウマチ薬、抗腫瘍薬および免疫調節薬から成る群から選択されると認定する請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
前記粒子が被覆されておらず、イオン荷電されており、前記組成物が極性溶媒を含む請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記粒子が前記極性溶媒の中で懸濁して安定している請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記十分な量の組成物を投与する工程が、前記組成物の静脈内投与によって実行される請求項１５に記載の方法。
【請求項２７】
前記逆立方晶相材料または逆六方晶相材料が、（ｉ）脂質または界面活性剤、（ｉｉ）極性溶媒、および（ｉｉｉ）トコフェロール、リナロール、スクアレン、安息香酸ベンジル、およびジアセチル化モノグリセリドから成る群から選択される１種以上の疎水物質を含む請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
前記組成物中の前記粒子がホスファチジルコリンおよびトコフェロールを含む請求項１５に記載の方法。
【請求項２９】
前記粒子の平均粒径が長さ８０ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲である請求項１５に記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物中の前記粒子が１種以上の標的化合物を含む請求項１５に記載の方法。
【請求項３１】
前記組成物中の前記粒子が、さらに前記立方晶相または六方晶相とは異なり、該相の内部にある１つの高疎水性相を含む請求項１５に記載の方法。
【請求項３２】
患者の組織、血流、または他の毒性活性、薬理学的活性もしくは抗原性活性の部位から１種以上の薬理学的に活性な材料または毒性材料を回収する方法であって、
逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含み、極性溶媒中に分散した、被覆されていない粒子を含有する１種の組成物を前記患者に静脈内投与する工程と、
前記１種以上の薬理学的に活性な材料または毒性材料に起因する前記患者における生物学的効果を減衰するために、前記粒子が前記患者の中にある前記１種以上の薬理学的に活性な材料または毒性材料を十分に回収できるようにする工程とを含む方法。
【請求項３３】
前記粒子が、イオン荷電されている請求項３２の方法。
【請求項３４】
前記逆立方晶相材料または逆六方晶相材料が、（ｉ）脂質または界面活性剤、（ｉｉ）極性溶媒、および（ｉｉｉ）トコフェロール、リナロール、スクアレン、安息香酸ベンジル、およびジアセチル化モノグリセリドから成る群から選択される１種以上の疎水物質を含む請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記組成物中の前記粒子が、ホスファチジルコリンおよびトコフェロールを含む請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記粒子が、トコフェロール、リナロール、スクアレン、安息香酸ベンジル、およびジアセチル化モノグリセリドから成る群から選択される１種以上の疎水物質を含有し、その他の活性薬理学的成分を含有しない請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記粒子の平均粒径が、長さ８０ｎｍ〜５００ｎｍの範囲である請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物が、さらに１種の活性薬理学的成分を含む請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記組成物中の前記粒子が、１種以上の標的化合物を含む請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記薬理学的に活性な材料または毒性材料が１種の疎水基を含む請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
前記組成物中の前記粒子が、さらに前記立方晶相または六方晶相とは異なり、該相の内部にある１つの高疎水性相を含む請求項３２に記載の方法。
【請求項４２】
ヒトにおける毒素の毒性効果を減衰する方法であって、
それを必要とするヒトに、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む被覆されていない粒子および極性溶媒を含む液体を含有する１種の組成物の有効量を投与する工程を含み、
前記粒子が前記液体の中で分散して安定しており、
前記粒子が前記毒素を吸着するか、吸収するか、他の仕方で回収する方法。
【請求項４３】
前記毒素が１種の薬理学的作用剤である請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記薬理学的作用剤が１種の局所麻酔薬である請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記局所麻酔薬が、ブピバカイン、リドカイン、ロピバカイン、メピバカイン、およびコカインから成る群から選択される請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記毒素が１種の乱用薬物である請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記毒素が１種の内因性化合物である請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記内因性化合物が、毒素、二酸化炭素、遊離基、および二原子窒素から成る群から選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記毒素が１種の外因性化合物である請求項４２に記載の方法。
【請求項５０】
前記外因性化合物が、一酸化炭素およびオルガノホスファートから成る群から選択される請求項４２に記載の方法。
【請求項５１】
前記毒素が少なくとも１種の疎水基を含む請求項４２に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物がさらに脂質および界面活性剤を含む請求項４２に記載の方法。
【請求項５３】
前記組成物がさらにトコフェロールを含む請求項４２に記載の方法。
【請求項５４】
前記組成物がホスファチジルコリンおよびトコフェロールを含む請求項４２に記載の方法。
【請求項５５】
前記組成物がさらに１種の活性薬理学的成分を含む請求項４２に記載の方法。
【請求項５６】
ヒトの中に存在する原薬の治療効果を減衰する方法であって、
それを必要とするヒトに、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む、被覆されていない、荷電が安定化した粒子および極性溶媒を含む液体を含有する１種の組成物の有効量を投与する工程を含み、
前記被覆されていない、イオン荷電された粒子が前記液体の中で分散して安定しており、
前記粒子が前記原薬を吸着するか、吸収するか、他の仕方で回収する方法。
【請求項５７】
前記原薬が１種の全身麻酔薬である請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記全身麻酔薬が、プロポホール、エトミダート、ケタミン、チオペンタール、ベンゾジアゼピン、バルビツラート、オピオイド、ハロペリドール、ドロペリドール、およびフェンシクリジンから成る群から選択される請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記粒子が、前記原薬を吸着するか、吸収するか、他の仕方で隔離する際に、鎮静の持続時間の短縮、覚醒に至る時間の短縮、無呼吸の持続時間の短縮および完全な認識に至る時間の短縮から成る群から選択される仕方で、前記全身麻酔薬の効果の持続時間を短縮する請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
ヒトの中の化学物質の効果を減衰する方法であって、
脂質、トコフェロールおよび極性溶媒を含む液体を含有する１種の安定化した組成物をヒトに投与する工程を含む方法。
【請求項６１】
逆立方晶相材料または逆六方晶相材料の、被覆されていない、荷電が安定化した粒子および極性溶媒を含む液体を含有する組成物であって、
前記粒子が前記液体中で分散して安定しており、
前記逆立方晶相材料または逆六方晶相材料が、（ｉ）脂質または界面活性剤、（ｉｉ）極性溶媒、および（ｉｉｉ）トコフェロール、リナロール、スクアレン、安息香酸ベンジル、および長鎖ジアセチル化モノグリセリドから成る群から選択される１種以上の疎水物質を含む組成物。
【請求項６２】
さらに１種の分散剤を含む請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
前記１種以上の薬理学的に活性な材料または毒性材料と被覆されていない粒子とを接触させる工程を含む１種以上の薬理学的に活性な材料または毒性材料を吸収、吸着、捕獲、隔離または他の仕方で回収する方法であって、
前記被覆されていない粒子が逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含み、
前記粒子のイオン荷電が、極性溶媒を含む液体に分散した複数の前記粒子を安定化させるに十分であり、
前記被覆されていない粒子が、前記１種以上の薬理学的に活性な材料または毒性材料を吸収、吸着、捕獲、隔離または他の仕方で回収する方法。
【請求項６４】
前記接触させる工程がヒトの血液中で行われる請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記１種以上の薬理学的に活性な材料が１種の薬剤である請求項６３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は２００４年７月１３日に出願された米国特許出願第１０／８８９，３１３号の一部係属出願であり、その全内容を引用により組み込むものである。本願は、２００６年１２月７日に出願された米国仮特許出願第６０／８６８，９５０号に基づく優先権を主張し、その全内容を引用により組み込んでいる。
【０００２】
本発明は、ヒトまたは他の哺乳動物の体内に存在する１種以上の化合物による有毒効果または医学的に好ましくない効果を減衰させるために投与される特定のリオトロピック液晶組成物の分散系に焦点を当てる。その分散した粒子は逆立方晶相液晶材料および／または逆六方晶相液晶材料を含み、該材料の内部には、毒素または原薬が溶け込むことができ、実質的に分配される。この粒子の分散系はヒトへの投与に適し、注射によって、特に好ましくは静脈内注射によって、体内の毒素および治療薬の効果を効果的に減衰させるのに十分な量が投与される。体内の毒素または原薬の効果は、毒素または治療薬を血漿から隔離すること、毒素を活性部位から転移させること、毒素の再配布を誘発すること、または他の機構によって減衰すると考えられる。組成物を各種の方法で調節することにより、粒子による毒素または原薬の吸収または吸着や、粒子および関連する毒素または原薬の肝臓による接取率を増加または減少させること、また、他の方法で、毒素または原薬の効果の減衰に影響を与えることができる。本発明は特に、全身に送達された局所麻酔薬の有害効果を逆転させること、および、治療の過程において全身麻酔薬の治療効果を減衰させることに適する。
【背景技術】
【０００３】
ほとんどの臨床的な適用では、局所麻酔薬は体の箇所または領域を有痛性の刺激に対して無感覚にする意図のもと、一つの部位またはその近傍に注射されるか、塗布されるのが一般である。一旦、塗布または投与されると、局所麻酔薬は全身で吸収され、場合によっては、注入液の一部が間違って脈管系に直接投与されることもある。いずれにせよ、局所麻酔薬は様々なレベルでの全身毒性作用を生みだし得る。毒性は通常、投与された局所麻酔薬の効力に直接比例する。ほとんどの局所麻酔薬は、αサブユニットと結合し、細胞内の位置から電圧作動性ナトリウムチャネルを遮断することによってナトリウムチャネルを構造的に不活性化し、ナトリウムイオンの流入を中断させて、膜の脱分極を防止することによって効果を発揮すると広く信じられている。局所麻酔薬は、また、カルシウム、カリウムおよびＮ−メチル‐Ｄ‐アスパルタート（ＮＭＤＡ）受容体を様々なレベルで遮断していることで知られている。これらの差異は、各局所麻酔剤と関連した固有の臨床プロファイルと関わる。
【０００４】
局所的麻酔を作用させるために計画された手順の中で、意図せずに局所麻酔薬（特にブピバカイン）を脈管内に投与することによって、深刻な心臓合併症を引き起こす可能性がある。合併症の反応は、著しい低血圧、房室解離心臓ブロック、心室律動異常とともに、心室頻拍および心室細動を含む。ブピバカインのＲ＋異性体が心臓ナトリウムチャネルの結合に強い親和力を持ち、この部位からの分離が非常に低速であることは、広く認められている。より高濃度では、カルシウムチャネルおよびカリウムチャネルも遮断され、心臓毒性効果がさらに激化する。
【０００５】
ブピバカインに誘発された心臓毒性は命に関わる緊急事態で、命を守るために思い切った手段を取る必要がある。これらの手段は、多くの場合、正常血管緊張を保つための血管昇圧剤はもとより、その後現われる、除脈、完全心臓ブロックおよび様々な心臓律動異常を制御するための他の薬剤を即座にまた繰り返し投与することを含む。心筋層が停止している間、生命維持に必要な器官の酸素化を維持するために心肺蘇生が必要であろう。破壊的な濃度のブピバカインが再配布、新陳代謝または他の方法で不活性化された後に、緊急に、膜酸化を伴う心肺バイパス（または似たような装置）を通して体外酸素化を行って正常化した心周期が戻るのを待ち、心筋周期を生理学的に正常化させることは珍しくない。
【０００６】
これまで、局所麻酔薬の毒性に対して、ブレチリウム、グルコース／インシュリン／カリウム注入、緊急蘇生努力（すわなち、心肺蘇生、ＣＰＲ）、および心肺バイパスを含む数多くの具体的な治療が提案されてきた。最近では、ブピバカインを化学的に除去することで毒性効果を逆転させることを目的として、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）という名で販売された製品に代表される脂肪乳剤の使用が試みられている。［例えば、非特許文献１］。同様に、ロピバカインの毒性に対するＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）の使用も検討された。［非特許文献２］。Ｔｅｂｂｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．は、ベラパミルの毒性に関わるラットモデルで生存率が上昇するのを発見した。［非特許文献３］。Ｂａｎｉａ、ＣｈｕおよびＳｔｏｌｂａｃｈはオルガノホスファート化合物であるパラオクソンによるマウスのＬＤ５０を上げようとしてＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）の使用を探った。［非特許文献４］。ＢａｎｉａおよびＣｈｕのグループはプロパノロール、ＶＥＲおよびアミトリプチリンからの毒性を治療するためにＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）の使用を検討した。［カリフォルニア州サンフランシスコでの２００６年米国ＳＡＥＭ会議で報告された］。Ｍａｔｈｙ−Ｈａｒｔｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．はホルボールミリスタートアセタートから製造された反応性酸素種に対するＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）の使用を検討したが、微弱な効果しか見いだせなかった。［非特許文献５］。Ｄｅｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．のグループは、ブピバカインを化学的に除去するために、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ界面活性剤、エチルブチラート、脂肪酸ナトリウム塩および水から生成されたマイクロエマルションを提案した。［Ｄｅｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、特許文献１、非特許文献６および非特許文献７参照］。Ｄｅｎｎｉｓと同僚とは特許文献２で毒を除去する酵素を含む粒子を提案した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許出願第１０／４２０，６０８号
【特許文献２】米国特許第６，９７７，１７１号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｗｅｉｎｂｕｒｇ  Ｇ，Ｒｉｐｐｅｒ  Ｒ，Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ  ＤＬ，Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｗ．  ＲＡ＆ＰＭ ２００３；２８：１９８；Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ８８（４）：１０７１
【非特許文献２】Ｌｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００６） Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ  ６１：８００
【非特許文献３】Ｔｅｂｂｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃａｃ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．（２００６）  １３：１３４
【非特許文献４】Ａｃａｄ  Ｅｍｅｒｇ  Ｍｅｄ（２００５）１２（５  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １）：１２
【非特許文献５】Ｍａｔｈｙ−Ｈａｒｔｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．（１９９８） ７：３２７
【非特許文献６】Ｖａｒｓｈｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６：５１０８
【非特許文献７】Ｒｅｎｅｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｒｅｇ．Ａｎｅｓ．Ｐａｉｎ  Ｍｅｄ．３０（４）：３８０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）および関連する非経口脂肪乳剤は、本願の文脈において、幾つかの欠点および限界を有する。そのうち、化合物の可溶化および乳剤液滴への分配においてトリグリセリド（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）では大豆油、他の脂肪乳剤では他の脂肪）に依拠することが最も重要だろう。その結果、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）および関連する非経口脂肪乳剤は大幅に制限される。大部分の溶媒の機能において、低分子量化合物に対応した混合の好ましいエントロピーが大切であるため、トリグリセリドの分子量は、効果的な可溶化剤として知られる大部分の化合物に比べて何倍も高い（ほぼ９００Ｄａ程度）。トリグリセリドは際立った疎水性を有するため、１つあるいは特に２つ以上の極性基を有する化合物にとって、極めて不適当な溶媒である。微生物汚染を支えるトリグリセリドの傾向は、トリグリセリドを現場での応用に適さないものとする。脂質乳剤中の高含量の多価不飽和脂肪を、酸素化に対抗するために低含量のトコフェロールと組み合わせたものは、反応性酸素種に関わる毒性の原因となる可能性のある過酸化物および他の遊離基起源の増加につながる。
【００１０】
普通薬が毒性を有する場合および医学的な治療または患者の管理など他の理由で効果の減衰が好ましい場合に、該普通薬の効果を減衰する、医薬的に受容可能な組成物および方法で、広範囲の薬剤および他の毒素に効果的に作用し、活動の様々な性質および異なる毒素に合わせて調節できるものが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の代表的な実施形態において、ヒトまたは他の哺乳動物における毒性効果の減衰方法は、毒素を内に持つまたは持つと疑われるヒトまたは他の哺乳動物に、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料から形成されるまたは該材料を含む粒子を含有する組成物の有効量を、ヒトまたは他の哺乳動物に投与することによって達成される。粒子は安定した分散系中に存在するのが好ましく、該分散系は極性溶媒を含有する液体を含む。粒子はイオン荷電されていてもよい（アニオン性またはカチオン性）。好ましくは注射（好ましくは静脈内）によって投与され、結果的に、粒子が毒素を吸収または吸着するか、他の方法で毒性活動の部位から隔離することによって、毒素の毒性効果を減衰させる。
【００１２】
また本発明の別の例示的な実施形態では、ヒトまたは他の哺乳動物中に存在する原薬の治療効果の減衰方法は、原薬を内に持つまたは持つと疑われるヒトまたは他の哺乳動物に、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料から形成されるまたは該材料を含む粒子を含有する組成物の有効量を、ヒトまたは他の哺乳動物に投与することによって達成される。粒子は極性溶媒を含有する液体を含む安定した分散系中に存在することが好ましい。粒子はイオン荷電されていてもよい（アニオン性またはカチオン性）。好ましくは注射（好ましくは静脈内）によって投与され、結果的に、粒子が原薬を吸収または吸着するか、他の方法で薬理学的活動の部位から隔離することによって、原薬の治療効果を減衰させる。
【００１３】
本発明のさらに別の例示的な実施形態は、脂質とトコフェロールと極性溶媒を含む液体とを含む安定した組成物をヒトに投与することを含めて、ヒトの体内で化学物質効果を減衰させる方法を提供するものである。
【００１４】
どのような具体的な治療用途を持っているかに関わらず、各薬剤は体内に最適な水準で存在するとは限らず、時として、それぞれの効果を減衰することが必要または有益となり得る。局所麻酔薬を特に顕著な例とする医学的用途の薬剤の一部は、間違って静脈または動脈に注射されると命にかかわる可能性があり、神経毒性および心臓毒性を回避または減少させるために除去または削減が要請される。プロポホールなどの全身麻酔薬およびベクロニウムなどの麻痺剤を含む外科手術処置に関わる薬剤など、医療用途の上記以外の薬剤が除去または削減を要請する状況は数多く存在する。例えば、外科手術処置の中断後または完了後であっても、術後の最適な患者管理に対して薬剤の正常な治療効果が有害、危険または障害となった全身麻酔薬または麻痺剤の残存効果を減衰することが好ましい。他には、循環中に毒性代謝産物を生成した関係で薬剤が副作用を有する場合もあれば、薬剤が患者を衰弱させる場合、または耐性または耽溺という点で有害な場合もあり、薬剤の効果を減衰することは重要な治療的要件だと考えられる。例えばコカインまたはモルヒネなどの、特定の化合物は、医療にも当然用いられるが、他にも乱用薬物として用いられるので、結果的に、解毒およびリハビリテーションの過程で除去または削減を必要とすると考えられる。さらに、コカインにおけるコカエチレンおよびメペレジンにおけるノル‐メペレジン（Ｄｅｍｅｒｏｌ（Ｒ））など、特定の薬剤の代謝産物は、相当の毒性を有しており、それらの除去は多くの場面で重要事となり得る。最後に、毒素は、自己抗体またはコルチソルのように内因性のものであってよい。本発明の具体的な実施形態において、発明は、外因性原薬および内因性毒素の活動部位からの除去においてだけではなく、選択的な基準で薬剤の治療効果を減衰させることを認めている。
【００１５】
プロポホールなどの治療剤および他の全身麻酔薬は、部分的に、治療効果の持続時間および強度に基づいて使用のために選択され、使用される。該薬剤を使用する過程で臨床的な状況が生じて治療効果を減衰することが必要となり得る。治療効果の減衰は、例えば、全身麻酔薬の作用からの覚醒時間または神経筋遮断剤の作用の持続時間を短縮させることによって行われる。代表的な実施形態において、本発明は、それらの効果を減衰させる能力を提供し、例えば外科手術の過程を最適に管理することだけでなく、患者の安全、快適さおよび便利さを目的とした付加的な手段を提供するであろう。例えば、成功裏にかつ予想よりも速やかに進行した外来患者の外科手術処置では、患者の明晰な意識の回復を早め、患者の帰宅を促すことが、患者にも提供者にも同様に有益である。計画通りに進行せず、変更または中断された外科手術処置では、全身麻酔薬または神経筋遮断剤の治療効果が消失した状態へ患者の復帰を早めることが有益である。
【００１６】
麻酔薬の送達または気道の確保の過程というもう一つの場面では、骨格筋を弛緩させることが決定的な意義を持つ。これを達成するには、脱分極系または非脱分極系のいずれかの神経筋遮断剤を用いることが最も一般的である。神経筋遮断剤は、骨格筋を弛緩させて特定の手術処置を実現することにより、気管内挿管を促して患者の気道を確保および維持すること、および特定の臨床的な場面における患者の安全を保証することのために用いられる。脱分極薬、すなわちスクシニルコリンは、アセチルコリン（Ａｃｈ）受容体作動薬として作用し、神経筋接合部からの急速な離散によって短期の筋弛緩を直ちに発生させ、非特異コリンエステラーゼによって加水分解される。反対に、非脱分極薬、すなわちベクロニウムは、競合的拮抗薬として機能する。非脱分極薬がアセチルコリンエステラーゼに新陳代謝されるのでも、Ａｃｈ受容体から速やかに溶出するのでもないという事実によって、神経筋終板の脱分極が引き延ばされ、筋弛緩の持続時間が延長されると予測される。神経筋遮断剤によって麻痺した者のケアにおける最善の臨床的プラクティスおよび最も安全な方法は、弛緩の必要がなくなり次第、薬剤、特に非脱分極薬の弛緩薬効果を可能な限り完全に逆転させることである。通常、非脱分極薬の逆転は、抗コリンエステラーゼ剤とも呼ばれるコリンエステラーゼ阻害剤、すなわちネオスチグミンの投与によって促進される。これらの薬剤はＡｃｈを分解する酵素に可逆的に結合することで、神経筋終板における正常な神経筋機能を再確立することによって、Ａｃｈ受容体から非脱分極薬を競合的に転移させるために利用可能なＡｃｈの量を間接的に増加させる。コリンエステラーゼ阻害剤の投与によって合併症および他の有害反応が起こり得る。これらの薬剤を新陳代謝させるか、低適用量で投与することもできるが、それは、受容体から非脱分極薬を非効率的な方法で転移させ、麻痺の潜在的かつ予想外の復活をもたらす原因となる。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を過度な適用量で投与することは、神経筋遮断薬の効果を逆説的に増強させ得る。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の使用に関連したＡｃｈの増加による周知の効果には、上記以外に、迷走神経媒介除脈、平滑筋の収縮から開始する気管支痙攣、興奮の拡散を含む中枢神経系への影響、腸管の痙攣、膀胱緊張の増大および乳頭狭窄が含まれる。したがって、神経筋遮断薬の逆転においてコリンエステラーゼ阻害剤を削減、補完または好適に回避する計画はどれも臨床の場面で複数の利益をもたらす。本発明の代表的な実施形態で、本発明はそのような計画を提示する。
【００１７】
シクロデキストリンがロクロニウムおよびベクロニウムなど数多くの薬剤分子と結合することは公知であり、そのため、ロクロニウムなどの化合物の拮抗薬として用いられている。なお、シクロデキストリンの静脈内使用は除脈と関連付けられることがあり、その事実は、除脈が深刻な命に関わる合併症である状況において、該化合物を局所麻酔薬の毒性からの救出に使用することに特別な問題を付与する。本発明のもう一つの代表的な実施形態において、シクロデキストリンの使用に対する代替案が提示されている。
【００１８】
本発明のもう一つの実施形態は、臨床の場面（例えば、病院、医師のオフィス、クリニック、ナースステーション等）での麻酔薬の使用の管理に関わる。実際には、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む粒子を含有する組成物の前後または同時に患者に麻酔薬を提供する。患者は医学的処置もしくは外科手術処置を施されるか、または、単純に観察される。麻酔薬の麻酔効果は逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む粒子によって減衰される。これは麻酔効果の制御を可能とし、患者の回復時間を向上し得る。この方法で管理し得る複数種の麻酔薬には、プロポホール、エトミダート、ケタミン、チオペンタール、ベンゾジアゼピン、バルビツラート、オピオイド、ハロペリドール、ドロペリドール、フェンシクリジン等の全身麻酔薬およびブピバカイン、リドカイン、ロピバカイン、メピバカインおよびコカイン等の局所麻酔薬の両方が含まれる。全身麻酔薬に関して、本発明は鎮静の持続時間の短縮、覚醒に至る時間の短縮、無呼吸の持続時間の短縮および完全な認識に至る時間の短縮に使用し得る。
【００１９】
本発明のもう一つの実施形態では、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料のいずれかを有する粒子を含む組成物を患者に提供することによって、広範囲にわたる薬剤種に含まれる各種医薬品の効果を選択的に減衰し得る。本発明の方法は、例えば、ベンゾジアゼピン、アヘン剤、中枢神経抑制薬、呼吸抑制薬、心血管抑制薬、精神運動興奮薬、向精神薬、鎮静剤、催眠薬、筋弛緩薬およびオルガノホスファートを摂取した、もしくは摂取したと疑われる患者、またはそれらを提供される患者との関連で使用し得る。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
Ａ．定義
薬剤効果または毒素の毒性効果の「減衰」とは、（本発明による治療がない場合との比較において）以下の１以上が生じることを意味する。それは、効果の強度の実質的な減少、効果の持続時間の実質的な減少、生理学的な傷害および損傷の実質的な減少、体内の活性部位または他の危険な（critical）部位からの薬剤または毒素の実質的に早められたクリアランス、薬剤または毒素に対する有害反応の徴候の実質的な減少、体内の危険な部位からの薬剤または毒素による毒性代謝産物１種以上の濃度の実質的な減少、または外因性物質（複数）もしくは内因性物質（複数）の病理学的な結合の実質的な減少である。この定義で、（例えば、強度の）減少など特定の効果が実質的だと認識されるのは、該効果がその状況で発明を使用することを保証すると当業者が認める程度に、臨床的または医学的に有用または有益であるか、または患者の管理に有用または有益である場合である。また、当業者の見解において、薬剤または毒素を減衰する効果が、好ましい減衰効果に反発する、または該効果を弱める他の効果または副作用に優先しなければならない。
【００２１】
「薬剤」とは医薬品有効成分（ＡＰＩ）から成る、または、それを含む化合物を意味する。
【００２２】
本開示の文脈における「毒素」は、日々の話し言葉の中で一般に暗示される意味よりもずっと広い。本開示において、「毒素」とは、哺乳動物またはヒトに健康上のリスクまたは医学的な不都合を及ぼす任意の化合物または密接に関わる化合物の一群（例えば、一つの薬剤の異なる複数の立体異性体または特定の脂質類の異なる複数の鎖長）を意味し、そのため、体内からの除去もしくは削減、または体内での再配布を要請する（例えば、組織から血液へ、または血液から肝臓へ、など）。毒素は、例えば自己抗体またはコルチゾルのように内因性であってもよいが、大抵の場合、外因性の化合物であり、最も典型的には、少なくともある状況において毒性または抗原性だと認められた外因性化合物である（本願では、抗原性材料を毒素として扱う）。例えば、コカインまたはモルヒネなどの特定の化合物は、医療にも当然用いられるが、他にも乱用薬物として用いられるので、解毒およびリハビリテーションの過程で除去または削減を必要とすると考えられ、本発明の文脈における毒素と言える。さらに、コカインにおけるコカエチレンなどのかかる化合物の代謝産物は、相当の毒性を有しており、それらの除去は多くの場面で重要事となり得る。局所麻酔薬を特に顕著な例とする他の医学的用途の薬剤は、間違って静脈または動脈に注射されると命にかかわる可能性があり、除去または削減が要請され、そのような場合は本開示の文脈における毒素となる。プロポホールなどの全身麻酔薬およびロクロニウムまたはベクロニウムなどの麻痺剤を含む医療用途の上記以外の薬剤で麻酔または痛み止めに関連したものなどが除去または削減を要請する状況は、過剰投与、悪性過温症（ＭＨ）および呼吸抑制などの危険な反応を引き起こすことを含めて数多く存在する。加えて、担当医または臨床医が、例えば、薬剤の正常な新陳代謝／排出に要する所要時間いっぱい待たずに病院またはクリニックから患者を安全に帰宅させるため、というような臨床的な理由で、麻酔効果の減衰を望む場合がある。レセルピンなど、特定の医学的用途の長時間作用性薬剤またはＤｅｐｏＭｏｒｐｈｉｎｅなどの持続放出性製剤は、活性の持続時間を短縮する必要が生じた場合に除去または削減を要請する可能性があり、その場合、該薬剤を本発明の文脈において毒素と解釈し得る。
【００２３】
「医薬的に受け入れ可能」とは、含まれる賦形剤のそれぞれが、食品医薬品局（Food and Drug Administration）もしくは他国の似たような組織によって医薬品もしくはワクチンの製剤での使用を認可されているか、または政府規制機関、通常はＦＤＡ、に医薬品等登録原簿（Drug Master File）が保管されている簡要な化合物分類に属するか、または、前記２条件ほど好ましくはないが、広範な毒性調査によって意図する投与経路（本発明の文脈においては静脈内が代表的だが、必ずしもそれには限らない）で安全であることが知られている化合物または組成物を一般に表す。認可された賦形剤の主成分である化合物も含まれる。認可された各賦形剤にその認可された様々な投与経路を付加したリストは、ＦＤＡの医薬品情報資源課（Division of Drug Information Resources）によって「不活性成分ガイド」の題名で時々発行され、１９９６年１月にも発行された。ＦＤＡに存在する医薬品等登録原簿は、任意の賦形剤が少なくとも特定の投与経路に関して医薬用途に受け入れ可能であることの追加証拠である。注射可能な製品の認可された賦形剤のリストは１９９７年に発行された。Ｎｅｍａ，  Ｗａｓｈｋｕｈｎ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｄｅｌ（１９９７）  ＰＤＡ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈｎｏｌ．５１（４）：１６６参照。ビタミン類やアミノ酸類などの特定の化合物で、「活性物質」として注射可能な製品（通常は非経口栄養として）に含まれ、そのために、注射した時に安全であると認識される化合物があるが、それらの化合物は注射用の賦形剤としても医薬的に受け入れ可能だと本願では考える。また現時点で認可された賦形剤として記載されていないが、多岐にわたる毒性調査の対象となっており、毒性が極めて低く非突然変異誘発性であることが示され、特定の適用形態に関して適切な行政当局に申請すれば認可され得る化合物も存在する。注射用に医薬的に受け入れ可能な製剤は無菌でなくてはならない。
【００２４】
「毒素または薬剤の活性部位」は、本願では、毒素または薬剤が臨床的に顕著な毒性効果または薬理学的効果を表す、分子的に規定された位置と定義され、該効果は本発明の文脈において、有害であるか他の理由で好ましくない効果であり、本発明の適用を動機づける。活性部位にあるということは、場合によって、組織、器官、血液および／または他の体液中にあることを含む。ある場合には、薬剤または毒素は、その瞬間に、受容体タンパク質において作動薬または拮抗薬として作用する、あるいは、酵素、脂質、糖、レクチン、核酸、ビタミン、鉄イオン、神経伝達物質、ホルモンまたは他の標的に結合して影響を与えるなどして、毒性効果または薬理学的効果を発揮することができるほど、分子結合のレベルで分子標的に近接する。微生物上または微生物内に活性部位を持ち、活性時にヒトの体内に存在する抗生化合物または抗真菌性化合物の場合のように、毒素または薬剤の活性部位自体が外因性であってもよい。
【００２５】
多数の粒子による毒素または薬剤の「回収」とは、粒子が、毒素または薬剤をその毒性もしくは薬理学的な活性部位もしくは複数の活性部位から実質的に（すなわち、臨床的に好ましい効果をもって）転移させるか、または粒子と毒素もしくは薬剤との相互作用によって転移が必要となる前に該部位との相互作用を防止することを意味し、粒子による毒素または薬剤の吸着または吸収を含むが、それに限定されない。回収を大まかに説明する一例は、分子標的との相互作用の力により、受容体、酵素または他の分子標的上またはその近傍に存在する毒素分子が、（疎水性相互作用などの）粒子との相互作用（複数）のおかげで粒子に隔離され、結果的に、該粒子による隔離、また場合によっては分子標的から離れる方向への粒子の移動とそれに続く毒素および／または粒子‐毒素の組み合わせのクリアランスのために分子標的と相互作用しにくくなるというものである。
【００２６】
本開示の文脈における「逆液晶相」は逆六方晶相および逆立方晶相を含み、逆立方晶相自体が逆両連続立方晶相および逆離散的立方晶相の両方を含む。これらの相は界面活性剤自己会合の技術分野において公知である。これらの相は全て、他の文献に詳述されたとおりであると理解される（例えば２００２年６月１３日に提出され、完全な内容が引用により本願に組み込まれた米国特許第６，６３８，６２１号）。
【００２７】
Ｂ．投与される組成物の構造
逆立方晶相材料および逆六方晶相材料は、水中油型乳剤およびリポソームと比べて極めて異質な形態およびそれに伴う特徴を有する。以下に、それぞれ上記４材料のいずれかで形成される、４種の異なる粒径２００ナノメートル粒子を比較する。粒子は形態、相、単分子層の曲率半径、具体的な表面積、疎水容積分率、極性ドメインまたは無極性ドメインへの最長距離、および収容能力によって比較される。
【００２８】
逆立方晶相材料は複雑な長距離ナノメートル尺度秩序を有し、固体材料または粒子形状で存在する。流体状の脂質二重層は繰り返し立方空間群中に正確な曲率で配置され、極性マイクロドメインと無極性マイクロドメインとが織り交ぜられた状態を形成する。その界面の表面積は非常に大きい。典型的な立方晶相の単分子層曲率半径はほぼ３ナノメートル程度である。具体的な表面積は約４０ｍ２／ｍＬである。疎水容積分率は約５０〜７５％になる。粒子内または粒子上の任意の点から極性または非極性ドメインへの最長距離は３ナノメートルに過ぎない。逆立方晶相粒子は、親水性ドメイン、疎水性ドメインおよび両種のドメインをまたがって疎水性、親水性および両親媒性化合物を担持することができる。
【００２９】
同様に、逆六方晶相材料も複雑な長距離ナノメートル尺度秩序を有し、固体材料または粒子形状である。また、該逆六方晶相材料は、正確な曲率で配置されて極性マイクロドメインを形成する流体状の脂質層から成るが、逆立方晶相材料とは反対に、六方晶系空間群に基づく繰り返しパターンに配置された円柱を構造単位とする。逆六方晶相材料の界面の表面積も大きいが、逆立方晶相のものほど大きくない。逆六方晶相の単分子層曲率半径は約１．５ナノメートル程度である。具体的な表面積は約２５ｍ２／ｍＬであり、疎水容積分率はざっと８０％である。逆立方晶相粒子と同様、極性または無極性ドメインへの最長距離は粒子内または粒子上の任意の点から約３ナノメートルである。逆立方晶相粒子と同様、逆六方晶相粒子も、親水性ドメイン、疎水性ドメインおよび両種のドメインをまたがって疎水性、親水性および両親媒性化合物を担持することができる。
【００３０】
反対に、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）などの水中油型乳剤は長距離ナノメートル尺度秩序を有さない。該乳剤は水性媒質中の高脂質層に囲まれた様々な大きさおよび形状の脂肪滴からなる。２００ナノメートルの乳剤油球は本願で比較する全粒子のうち最も低い界面表面積を有する。該粒子は高脂質相に囲まれた高油液相から成る。そのような乳剤粒子に対する単分子層曲率半径は１００ナノメートルである。具体的な表面積は６ｍ２／ｍＬに過ぎない。疎水容積分率は９５％だが、極性または無極性ドメインまでの最長距離は９８ナノメートルである。
【００３１】
リポソームもまた構造および特徴において逆立方晶相材料粒子および逆六方晶相材料粒子と著しく異なる。乳剤について言えるように、リポソームも長距離ナノメートル単位秩序を有さない。リポソームは粒子形状でしか存在しない。その基本構造は、一般的には球状の、１以上の固体（またはさほど一般的ではないが流体）脂質二重層が、大きな極性液相（通常は水性）の区画を内包するというものである。リポソームの界面表面積は非常に小さい。リポソームは液相のコアを持つ層状相材料から抽出される。２００ナノメートルのリポソームの単分子層の曲率半径は約１００ナノメートルである。具体的な表面積は１２ｍ２／ｍＬである。疎水容積分率は非常に小さく、例えば５％であり、極性または無極性ドメインまでの最長距離は乳剤液滴と同様、非常に長く９６ナノメートルある。
【００３２】
理論に縛られることを退けつつ、本発明による毒素効果および薬剤効果の逆転を、完全にではなくても少なくとも部分的に、粒子内部に毒素を吸収するかまたは粒子表面に毒素を吸着する粒子の働きの直接的な結果と理解することができる。前者すなわち吸収は液晶材料の毒素または薬物を可溶化する能力のおかげで起こる（実施例７で詳細に説明している）のに対して、後者の吸着は粒子の表面電荷、表面の特定の捕獲分子（例えば抗体）、疎水性相互作用、高ＰＥＧ層などの粒子の表層内における毒素の可溶化および分配、またはその他多数の相互作用のおかげで起こる。粒子の表層と明確な表面相とには差異があることを理解されたい。粒子のすぐ近傍の毒素分子がそのように粒子に摂取されると、自由な毒素と組織に結合した毒素との間に存在する１以上の平衡により、組織に結合した毒素分子は組織外へ放散され、離脱して粒子に隔離された毒素分子の残した空隙を埋めることにより、吸収／吸着され得るようになり、そのサイクルが続く。該プロセスのより完全な説明では、タンパク質に結合した毒素の粒子による接取、粒子のＲＥＳによる接取および他の効果を考慮するだろうが、いずれにせよ、該プロセスの主要な工程は粒子による毒素の吸収または吸着である。その時点で、本発明に従ってヒトまたは他の哺乳動物の患者に与えられた粒子が介入して、毒素の薬物動態学に対する効果を露わにする。
【００３３】
好ましい粒子構造（architecture）とは、電荷が安定した被覆されていない粒子のそれであり、その詳細は米国特許出願第１０／８８９，３１３号に記載されている。被覆されていない粒子には、媒質からの毒素の直接的な吸収または吸着を妨げる閉塞層がないという顕著な利点がある。したがって、たとえば、二重層にわたる拡散が遅いまたは限定的な毒素の場合、層状被覆は逆液晶相内部の毒素吸収特性を妨げるので、推奨しない。実際、特に両連続逆立方晶相は、被覆されていなければ、二重層不浸透性毒素を該相の孔空間に直接移動させ、そこで選択透過性、二重層との疎水性相互作用、二重層との静電的相互作用、ファンデルワース力、または立方晶相の内部構成要素との相互作用の何らかの組み合わせによって該毒素を実質的に維持することを可能とするミクロ構造を有する。粒子の大部分が逆立方晶相または逆六方晶相でさえあれば、他の粒子構造であってもよい。固体で被覆された粒子は、急速な毒素の接取という目的と対立するので、本発明の目的に合致しない。これは、晶質層状被覆にも固体（晶質または非晶質）非層状被覆にも当てはまる。大部分あるいはほぼ全ての粒子が逆液晶相であることが好ましく、中でも逆立方晶相が最も好ましい。
【００３４】
粒状形態の逆立方晶相材料または逆六方晶相材料は、該材料が体内の一部位にあるときに、該部位から該材料への毒素分子の拡散によって簡単に接触できなくてはならない。特に、該粒子は不浸透性被覆によって閉塞されるべきではない。不浸透性被覆とは、（ゲル相の脂質など）実質的に晶質であるか、またはより一般的には、被覆内での毒素の自己拡散係数が液晶材料内での自己拡散係数に対して大きく減少する被覆である。あるいは、ｐｙ１０ＰＣ（化学名１−パルミトイル−２−［１’−ピレンデカノイル］ホスファチジルコリン）として知られる浸透性のプローブを用いてもよく、不浸透性とは、Ｖａｚ  ｅｔ  ａｌ．で用いられた蛍光退色回復法で計測された被覆材料中のｐｙ１０ＰＣの自己拡散係数が約１μ２／秒未満であることを意味すると理解する。［Ｖａｚ，  Ｗ．Ｌ．Ｃ．，  Ｚ．Ｉ．Ｄｅｒｚｋｏ，  ａｎｄ  Ｋ．Ａ．Ｊａｃｏｂｓｏｎ（１９８２）  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆ  Ｒｅｖ．  ８：８３−１３６参照］。該刊行物において、Ｖａｚ  ｅｔ  ａｌ．は、ｐｙ１０ＰＣが、ゲルから液晶の温度より高温の脂質二重層で高いＤを示し、この転移温度より低温で二重層が液晶であるときに低いＤを示すことを明かした。この系の分岐点１μ２／秒は、被覆された粒子の一般的な被覆流動性を大まかに示唆する。米国特許出願第１０／８８９，３１３号で開示された被覆されていない粒子は、体温（ヒトにおいては３７℃）で、液相または液晶相の被覆によって被覆された逆立方晶相粒子および逆六方晶相粒子が一般的にそうであるように、明らかに接触可能である。
【００３５】
上述され、米国特許出願第１０／８８９，３１３号に詳述され、引用によって本願に組み込まれたイオン荷電（静電荷電）された二重層結合成分は、不浸透性被覆からもいかなる被覆からも自由に、静電相互作用によって毒素または薬理学的物質と結合し得る。
【００３６】
多くの適用形態において、Ａｎｄｅｒｓｏｎへの米国特許第６，４８２，５１７号および米国特許第６，６３８，６２１号に記載されているように、固体状被覆によって被覆された逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を有する粒子よりも、被覆されていない粒子、特に被覆されていないイオン荷電された粒子の方が好ましい。
【００３７】
本開示において注目する毒素の分析は、該毒素のほとんどが分子上に少なくとも１つの極性基を有し、大多数が１分子につき２つ以上の極性基を有することを明かす。例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）に含まれる１滴の２００ｎｍの乳剤液滴において、分子寸法が、リン脂質‐トリグリセリド粒子組成物の強度な極性基からの典型的な分子寸法、つまり３ナノメートル以内であるのは、液滴の容量の非常に小さな部分のみである。強度な極性基とは、例えば、米国特許第６，６３８，６２１号で述べられたように、界面活性剤の頭部基として有効な極性基を意味する。反対に、本発明の一粒子内では、粒子内のほぼ全ての点が、界面活性剤の頭部基として機能する極性基の３ナノメートル以内にある。したがって、毒素分子の疎水基が疎水二重層ドメインに局在している間、それと並行して、毒素上の任意の極性基がかかる界面活性剤の極性基および／または（界面活性剤の頭部基を水和する）水分子の極めて近くに局在し得、その結果として、大きなエントロピーの犠牲なく、好ましいエネルギーで極性相互作用が経験される。転じて、それが、本発明の粒子が乳剤液滴より高い毒素溶解度および分配係数を有することにつながり、これを直接言い換えると、必要な脂肪適用量の低さ（したがって、より少量の注射）、血液および／または組織からのより迅速かつ完全な毒素の除去、および本願に記載された治療によって効果的に減衰し得る毒素の範囲の拡大という点で、本発明が脂肪乳剤より優れた性能を有すると言うことである。
【００３８】
両連続立方晶相の２００ｎｍの粒子における接触可能な二重層表面の表面積は、同じ大きさのＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）乳剤液滴のものより一桁大きい。このこと自体が多くの状況において本発明の分散系を乳剤より好適なものとする。その状況とは、毒素が二重層に吸着するか二重層成分と結合する状況、毒素が二重層表面から延びる（抗体などの）成分と例えばスペーサーの腕によって結合する状況、毒素の取り入れが濃度勾配により制限され、該濃度勾配が乳剤液滴においては粒子の半径全長（したがって、約１００ｎｍ）にわたるが、立方晶相粒子においては二重層の厚みの半分（したがって、約２ｎｍ）に過ぎない状況、毒素が二重層に（α螺旋などの）疎水部分を挿入することによって粒子と結合する巨大分子である状況、および、毒素が低分配係数を有し水性ドメインに留まっているが、粒子の水性孔に実質的に留まるのに十分な程度に二重層と相互作用している状況である。列記した最初の状況の一例として、実施例１２で土類金属イオンの毒素が実際にホスファチジルコリン分子自体の頭部基と結合した場合を挙げる。
【００３９】
本発明の静脈内の実施形態における粒径は、好ましくは平均粒径が約８０〜１，０００ｎｍ、最も好ましくは１００〜７００ｎｍであり、粒子の総容量の９０％が粒径約１，５００ｎｍ未満、最も好ましくは約１，０００ｎｍ未満の粒子である。粒径の分布全体を調節することは、特に、粒径が約８０ｎｍ未満の粒子は８０ｎｍを超える粒子より低速で除去されると証明されていることから、粒径が約８０ｎｍ未満の粒子の画分を調節することは、処理条件（特に、均質化の時間および温度、および必要であればマイクロ流動化）を操作することにより可能で、特定の適用形態において、８０ｎｍ未満の粒子が存在しない場合と比べて長期間毒素除去が継続するように、長期循環する粒子の画分を含むことは好ましい。
【００４０】
好ましい実施形態の、分散した、被覆されていない粒子が血漿タンパク質と結合する強度は、乳剤液滴よりずっと低い。この点が重要なのは、大量の乳剤液滴または本発明の粒子が解毒のために提供された場合に、血流に固有に存在するタンパク質および他の成分を粒子または液滴が除去することは危険であるか、さもなければ不都合だからである。なお、当該技術分野において周知である、タンパク質のオプソニン化作用によるリポソーム破壊効果から類推して、脂質系粒子（特に、既に非平衡構造である乳剤など）によるタンパク質の明らかな接取は急速に粒子を不安定化し得る。本発明の粒子は弱い力で血漿タンパク質に引き寄せられるので、該粒子に関連する標的化合物または毒素捕獲化合物が粒子と血漿タンパク質との相互作用によって妨害される可能性はない。
【００４１】
Ｃ．本発明の組成物の投与による減衰になじみやすい毒素
本発明の粒子による隔離に特になじみやすい毒素は、少なくとも１つの疎水基を有し、それによって疎水性または両親媒性と理解される毒素である。厳密に親水性で、疎水基を有さない化合物（無機塩、グリシンおよびメタノールなどの化合物）は、本発明の粒子に優先的に分配されないので一般的に本発明になじみにくい。発明者の経験によれば、化合物が多量に本発明の粒子に分配する可能性が高いのは、以下の条件のうち１以上が満たされた場合である。
ａ）分子中に少なくとも６炭素原子の連続的なストリングまたは環を有するか、
ｂ）α‐トコフェロール中の溶解度が少なくとも１％であるか、
ｃ）オクタノール‐水分配係数が約１００以上であるか、
ｄ）低濃度（例えば１％未満）で、水の表面張力を約５０ｄｙｎ／ｃｍ未満に下げるか、
ｅ）ペプチドまたはタンパク質であれば、少なくとも４つの疎水性アミノ酸の連続的な配列を有する。
【００４２】
ブピバカインおよび他の多くの局所麻酔薬は明らかにこれらの条件の１以上を満たす。たとえば、ｐＨ７．４でのブピバカインのオクタノール‐水係数は１，０００を超える。なお、ここで従来のオクタノール‐水分配係数（ＫＯＷ）を参照したのは、この測定値が広範囲の化合物について高頻度で表にまとめられているか、それ以外の方法で入手可能だからである。とはいえ、本発明の文脈において最も関連性のある測定値は、オクタノールではなく本発明の粒子中の毒素の分配係数である。本開示は、水（またはより一般的に水性緩衝剤）に対する立方晶（Ｑ）相の分配係数を示すためにＫＱＷの名称を用いる。すなわち、毒素が、水および立方晶相の両塊との接触において平衡を得るのに十分な時間が経過した後の、立方晶相中の毒素の濃度に対する水中の毒素の濃度の比率である。この段落で言及されている、この立方晶相‐水分配係数は、アルブミン（本発明の特定の製剤中の立方晶相がアルブミンを一材料として製剤された場合は例外）または他のタンパク質が存在しない状態で測定するべきであることに留意されたい。以下の実施例で、本発明を体に適用した状態をより厳密に模倣するために、アルブミンの存在下で立方晶相への分配の測定が行われたが、この測定方法はいわゆる立方晶相‐水分配係数の測定とは区別すべきである。本願において「有効分配係数」の文言は、水性相がアルブミンを含有する場合に用いられ、典型的には、４０ｍｇ／ｍＬのアルブミン濃度が該当する。
【００４３】
これらの局所麻酔薬に加えて、プロポホールや他の全身麻酔薬も上記の条件を満たす。本発明はそれぞれオクタノール‐水分配係数が百（１００）を超える以下の静脈内全身麻酔薬の効果を減衰するために使用し得る。その静脈内全身麻酔薬とは、エルタノロン、ミナキソロン、メトヘキシタール、チアミラール、チオペンタール、ケタミン、クロルメチアゾール、アルファキサロン、およびペントバルビタールである。プロポホールの場合と同様、本発明によるこれらの麻酔薬の減衰は、過量投与の場合に、または単純に必要なくなった時に麻酔薬を逆転させるために実行することができる。臭化ベクロニウムおよび他の筋肉弛緩薬もまたこれらの条件を満たすか、それを超え（例えばステロイド性骨格鎖によって）、以下の実施例１５で示されているように、臭化ベクロニウムのオクタノール‐水分配係数は１００未満であるが、その立方晶相‐水分配係数は優に１００を超え、実際、少なくとも本発明で用いられる一部の立方晶相では１，０００を超える。
【００４４】
これらの薬剤に加えて、本発明を用いることによって減衰できる他の毒素には以下のものがある。（ｉ）プロパノール、アミトリプチリン、ベラパミル、ジゴキシン、レセルピン、ロクロニウム、パンクロニウム、プロポホール、エトミダート、ハロタン、エンフルラン、およびメトキシフルラン、ベンゾジアゼピン、Ｎ−メチル−３、４−メチレンジオキシアンフェタミン、パラセタモール、ビタミンＫ拮抗薬類（ワルファリン、アセノクマロール、フェニンジオン）、オピオイド類（モルヒネ、コデイン、メタドン、テバイン、ヘロイン、オキシコドン、ヒドロコドン、ジヒドロコデイン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、ニコモルヒネ）、クロザピン、リスペリドン、オランザピン（抗精神病薬）、パロキセチン（抗うつ薬）、インフリキシマブおよびエタネルセプト（抗リウマチ薬）、パクリタクセル（抗腫瘍薬）、インターフェロンベータ（免疫調節薬）、フェニルヘプチルアミン、ピペルアニリド、フェニルピペリジン、ジフェニルプロピルアミン誘導体、ベンゾモルファン誘導体、オリパビン誘導体、ならびに、亜酸化窒素、ハロタン、エンフルラン、イソフルラン、セボフルラン、およびデスフルランなどの揮発性麻酔薬などの医薬品化合物（一部は乱用薬物成分でもある）、（ｉｉ）ビタミン、特に脂溶性ビタミン、（ｉｉｉ）コカイン、ヘロイン、ＬＳＤ、「エクスタシー」、メスカリン、アンフェタミンなど他の乱用薬物、（ｉｖ）ストリキニーネ、一酸化炭素（比較的疎水性の気体）、（ｖ）農薬、オルガノホスファート、ジクロロジフェニルトリクロロエタン（ＤＤＴ）、モルフィナン誘導体、四塩化炭素、クロロホルム、トリクロロエチレン、テトラクロロエチレン、ジクロロメタン、クロロフルオロカーボン、ベンゼン、トルエン、キシレン、（ｖｉ）ＶＸなど軍隊およびテロリストの武器に用いられる毒素、（ｖｉｉ）蛇毒、クモ毒、昆虫毒素、リシンなどの植物および動物源の毒素、グルテン、落花生油などのアレルゲン、ならびに（ｖｉｉｉ）内毒素、コレラ毒素、大腸菌腸毒素、または実際にウィルス、プリオン、寄生虫、菌類、クリプトスポリジウム、もしくはバクテリアおよび他の微生物の一部または全体などの微生物学的起源の成分。リピドＡなどのリポ多糖内毒素は、本発明の例えばそれなどの脂質膜に極めて強度に分配され、本発明による除去に特に反応する。このような内毒素の効果の除去または減衰は、例えば敗血症を含む多様な症状の治療への道を開く可能性がある。
【００４５】
Ｄ．投与された材料の選択および組成
下記の実施例１７および１８で示したように、粒子の組成物を生体内で使用して、種々の薬理学的作用剤をその作用部位または血流から回収し、これらの作用剤の効果を減衰することができる。この結果を、実施例１〜１６およびここでの議論、特に実施例７と組み合わせると、種々の毒素もまた、逆立方晶相材料または逆六方晶相材料を含む粒子の組成物を用いて生体内で回収または捕獲が可能であることが示唆される。
【００４６】
いくつかの特定の適用形態においては、特定の組成を持つ粒子を選択することで、医薬品または毒素を吸着、吸収、隔離またはその他の方法で回収する能力が向上する。これは、対象となる毒素または医薬品をより好適に可溶化し、医薬的に受け入れ可能であり、好ましくは、対応するｐＨ（典型的には約７．４）で水性緩衝剤に対して高分配係数を記録する逆液晶組成物を選択することによって達成される。逆液晶相の組成は、１９９８年９月８日に提出された米国特許第６，４８２，５１７号、２００１年１１月２８に提出された米国特許出願第０９／９９４，９３７号、および２００３年１月１３日に提出された米国特許第１０／４６０，６５９号とともに、米国特許出願第１０／８８９，３１３号で存分に論じられており、各文献の完全な内容は引用により本願に組み込まれる。
【００４７】
要約すると、液晶組成物は臨床的に優れた毒素の回収を行う程度に毒素（または複数の毒素）を可溶化する必要がある。好ましくは、毒素は少なくとも０．０１質量％、より好ましくは約０．１質量％以上、最も好ましくは約１質量％の水準で、逆立方晶相液晶または六方晶相液晶内で可溶である。好ましい可溶化水準は、前の段落で引用された開示で存分に論じられ示されたように、逆液晶材料に固有な化合物可溶化特性を利用すること、さらに疎水物質を選択して液晶組成物を最適化することによって得られる。
【００４８】
逆液晶組成物は典型的には脂質または界面活性剤、疎水物質および水から成る。本発明の文脈において、「疎水物質」の文言は界面活性剤／水／第三成分の液晶組成物における第三の主要な（仮の）成分を意味し、この第三の成分が、厳密には、リナロールの場合のように、例えば水酸基の力によって両親媒性であっても変わらない。
【００４９】
本発明では、組成物内の主要な構造的脂質（「界面活性剤」の文言の定義に従った界面活性剤である、米国特許第６，４８２，５１７号）がホスファチジルコリン（「ＰＣ」）、または精製レシチンなどの高ホスファチジルコリン製品である液晶組成物が強く好まれる。本発明は固有に生じるリン脂質、特にホスファチジルコン、最も好ましくは体温より低いあるいは好ましくは周囲温度より低い転移温度を有するホスファチジルコリンを有益に利用する。使用される組成物はいわゆるクラフト線、すなわちそれより低い温度では結晶相が出現し、それより高い温度では液晶および／または液体相が出現する温度、を超えている。ホスファチジルコリンは、低毒性であることを最も重要な特徴とし、内因性、生体適合性、生分解性、非抗原性を有し、費用対効果が高く、静脈内製品として１日５〜２５グラムの水準で安全に用いられた何十年にもわたる歴史を有するという事実を含む一群の好ましい特徴に基づき、毒素除去用の注射可能な粒子の構造基盤として特に適していると提示されている。例えば、ポロキサマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ類）、Ｔｗｅｅｎ類、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ類、モノグリセリド類およびジグリセリド類などの他の界面活性剤および脂質を本発明で使用することは可能だが、これらに、毒素逆転の文脈において、危険で予測不可能な効果をもたらし得る毒性が存在するか綿密に調べなくてはならない。本発明の実施において、体への毒素の攻撃に直面したとき、比較的高容量の分散系（典型的にはほぼ１００〜４００ｍＬといった程度で、ほぼ５〜２０グラム程度の脂質を含む）が使用され得るので上記は特に必要である。
【００５０】
最も好ましくは、注射可能な製品の疎水物質は、以下の５つの疎水物質、すなわちトコフェロール、リナロール、スクアレン、安息香酸ベンジルおよび長鎖ジアセチル化モノグリセリドの１つ以上である。
【００５１】
最も好ましい方法における注射可能な製品では、当該技術分野において公知の方法を用いて、最初に、上記した５つの好ましい疎水物質それぞれにおける毒素の溶解度を決定する。必要であれば、溶解度テストの回数を管理可能な数（すなわち、１５）に維持したまま、これら５つの溶媒を２つ一組（１０の組み合わせ）で、好ましくは共溶媒の比率を５０：５０として、テストすることも可能である。一般的に、本発明の目的に沿って、毒素を最適に可溶化する疎水物質の混合物は、最大分配係数（液晶と水との間で測定される）を示す液晶粒子をももたらす。分配実験は、当該技術分野で周知の方法で、以下の実施例に記載したとおりに実施される。これらのテスト、および５つの疎水物質自体の相対的な安全性、というよりむしろ意図される投与経路における安全な使用の実績に基づいて、疎水物質または疎水物質の混合物を選択する。トコフェロールは、特に静脈内製品における安全な使用の実績が最も長い。というのも、トコフェロールは非経口栄養として何十年も、新生児に対しても、使用されてきたので、その観点から５つの疎水物質のうち最も好ましい。実際、トコフェロールは、毒性が非常に低いことが広く知られ、３０ｍｇ／Ｋｇ／日まで上る静脈内適用量はいかなる有害反応からも実質的に自由であり、該賦形剤は非経口栄養およびリポソーム製品の両方の静脈内製品において安全に使用されてきた長い実績がある。ジアセチル化モノグリセリド、特にＭｙｖａｃｅｔ（Ｒ）のブランドは、規制機関に認可された静脈内製品内の賦形剤として用いられてきた。安息香酸ベンジルは市販された注射可能製剤で使用されてきたが、まだ静脈内製剤では使用されていない。スクアレンはアジュバントとしてワクチンに使用されてきた。製品の用途が、免疫系のアジュバント刺激に対して禁忌を示すような適応である場合、そのような製品にスクアレンを加えないよう注意が必要である。リナロールは、一連の毒性調査で安全であること、および非突然変異誘発性であることが確認されたが［Ｕ．Ｓ．  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｐｏｒｔ，  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｃｏｎｔｒａｃｔ  Ｎｏ．ＮＯ２−ＣＢ−５０５１１，１９９７年６月］、市販された注射可能製剤に使用されたことはなく、適切な製品で正式に認可される候補となり得る。
【００５２】
トコフェロールは大抵の場合に疎水物質の混合物の一部として加え得る。その理由は、トコフェロールがリン脂質を酸敗から保護すること、逆立方晶相の形成および安定性を補助すること、広範な疎水性化合物および両親媒性化合物において驚くほど効果的な媒質であること、およびビタミンとしての洗浄効果は公知であり、本発明の解毒性の適用形態において役に立つことなど、数多く存在する。注射可能製品におけるエチルブチラートなどの蝋状成分の使用が検討されたが、エチルブチラートもどの蝋もＦＤＡの不活性成分ガイドに注射可能な賦形剤として記載されておらず、いずれも非経口活性または成分として使用されたことがないので、本発明はこれらの蝋を使用しない。
【００５３】
疎水物質が選択されると、その後、米国特許第６，６３８，８２１号に記載されるように、逆液晶相の組成物が単純な相挙動マッピングによって発見される。逆立方晶相の組成を決定するための定量的なガイドラインは、米国特許第１０／４６０，６５９号に提示されている。偏光顕微鏡検査法での粘度および外観の検査は、リオトロピック液晶材料および液晶材料の両相を示す。
【００５４】
分散した粒子を、その状態で一定期間安定に維持するために分散剤を組み込むことは一般的であるが、必須ではない。該粒子を、少なくとも二年間、有効粒子径の有害な伸長のないまま、特に約１．５μ（より好ましくは１μ）を超える粒子の画分が、容量として、好ましくは１０％未満、より好ましくは１％未満に留まるべきなので、該画分を増加させずに維持することが好ましい。本願において「分散剤」の文言は、化合物が、安定して分散した粒子の維持を補助するに過ぎず、所望の効果を得るために他の共分散剤に依拠する場合にも適用される。例えば、本発明のＤＭＰＧ含有分散系では、共分散剤としてＭｙｖａｃｅｔ（ケリーバイオサイエンス製の長鎖ジアセチル化モノグリセリド）が必要であった。（ＤＭＰＧはジミリストイルホスファチジルグリセロールの略語）。ほとんどの適用形態にとって、好ましい分散剤とは本願に記載した胆汁酸塩であり、グリココラートが最も好ましく、例外があるとすれば、毒素による危険が十分に低く、グリココラートの値段の高さに起因する、製品の原料費の高さを正当化できない場合であろう。胆汁酸塩が好ましい理由はほかにもある。それは、胆汁酸塩が、アポリポタンパク質Ｅおよび／または関連するタンパク質の結合によってであろうが、肝臓による粒子の接取を促進し、結果的に、循環から毒素を排除するためである。あるいは、粒子にコレステロールを組み込むことも可能で、静脈内用である本発明の粒子は一般に胆汁酸塩もしくはコレステロール、またはその両方を含む。他の好ましい分散剤として、ナトリウムオレアート（好ましくは分散系の０．０３質量％以下）、ならびにホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルイノシトール、およびホスファチジン酸を含む他の酸性ジアシルリン脂質が含まれる。経口および局所的製品にとって、他の好ましい分散剤として、ナトリウムドクサートおよび米国特許出願第１０／８８９，３１３号に記載された他の薬剤が挙げられる。米国での使用が意図される静脈内製品について、ナトリウムオレアートを含む脂肪酸塩は、静脈内賦形剤としてＦＤＡに認可されていないので、避けるべきであり、また、カプリル酸の場合は非常に低い水準でしか認可されておらず、効力を発揮するには低すぎる。
【００５５】
好ましい浸透圧調製剤は、グリシンまたはバリンなどの中性アミノ酸、およびマンニトール、グリセロール、デキストロースおよびキシリトールなど、他の標準ノニオン性浸透圧調製剤である。
【００５６】
Ｅ．組成物の投与による効果の減衰
例えば、間違えて、有毒な適用量の局所麻酔薬を注射により血流に直接注入することで起こり得る、局所麻酔薬の投与によって神経毒性または心臓毒性を患う患者の静脈内に有効量の組成物を投与することは、局所麻酔薬によって引き起こされた重度の神経毒性および心臓毒性を減衰するであろう。このような状況における有効量の組成物の投与は、毒性を部分的にまたは完全に減衰し、患者にとっての毒性危機を軽減するか、完全に終了させるであろう。
【００５７】
少し前に治療用の適用量で投与された全身麻酔薬プロポホールの影響下にある患者に有効量の組成物を投与すれば、該薬剤の効果が減衰し、患者は組成物を投与されないときより速く麻酔から覚醒し明晰な意識を回復する。薬効を短縮する作用は、医学的に重要な価値を持ち、安全および利便性の観点からケアの標準の一部となる可能性がある。同様に、ベクロニウムなどの骨格筋弛緩剤で処置され、その治療効果を体験している患者に有効量の組成物を投与すれば、該組成物を投与しない場合に比べて、その薬剤の麻痺効果を早く減衰できる。これらおよび他の投与は、手術室において重要な医学的ニーズに対応し得るもので、この種の実践における最適な作用剤の安全な使用を促す。
【００５８】
本発明を予防に用いることもまた可能である。予測されるヒトによる薬剤または毒素の経口接取、接触または投与の前または同時に有効量の分散系を投与することにより、毒素または薬剤の効果を最初から減衰することができ、その強度または期間が緩和されるか、実際に臨床的な適応が全く現れないほど減衰される。これは以下の実施例１６に示される。明らかに、毒素の効果を成功裏に減衰するためには（「減衰」の定義は障害の効果の実質的な減少を必要とするので）、分散系は傷害の時間に極めて近接した時間に投与する必要があり、毒素の経口接取または投与の前、約１５分未満であることが好ましく、約５分未満であれば一層好ましい。しかし、予防を目的として、本発明は何分間かよりも相当長い時間循環し得る実施形態を包含する。特に、当業者に公知の「ステルス」脂質を組み込むことにより、循環時間は大きく延びる。そのような、下記の実施例９で示すように本発明で対象となる粒子に容易に組み込まれる脂質には、ポリエチレングリコール‐２０００‐ホスファチジルエタノールアミン、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、および親水性ポリマー鎖の疎水脂質との共有結合により作成された他の脂質が含まれる。本発明による予防が医学的に重要となり得る場面として、危険度の高い部位への局所麻酔薬の投与（間違えて血流に注射することによる毒性効果から患者を保護する）、化学戦または生物学的戦争、有毒な廃棄所での清掃作業、および毒素への露出が起こり得る、または切迫している他の状況が挙げられる。
【００５９】
毒性作用部位から毒素を吸着または吸収することによる毒素の減衰は、解毒剤が入手可能であるとして、解毒剤の投与に依拠する他の方法と対照的である。競合的作用薬または競合的拮抗薬は、受容体または酵素との結合から優先的に毒素を転移させるかもしれないが、それにも関わらず、毒素は該部位に留まって受容体との結合において解毒剤と競合し続けることができ、毒素と解毒剤とが共通の酵素と結合する場合には、毒素が毒性障害のある器官に留まる限り、あるいは、時として循環に留まる限り、競合が続く。これが特に問題となるのは、毒素が肝臓などの器官によりゆっくりとしか解毒されない場合で、そのような場合に、本発明は肝臓による粒子の接取および肝臓による接取に基づく解毒を提供する。該粒子の接取は、容易に、肝臓による個々の分子の接取より１桁、２桁またはそれ以上速くなり得る。８０〜１０００ｎｍの範囲の脂質粒子は１０分未満で実質的に摂取され得る。したがって、毒素を受容体から退去させ得る場合でも、分散系が毒素よりも解毒剤を優先的にクリアランス（排除）することはないと確立できる限りにおいて、退去させた毒素をクリアランスするために本発明の分散系を投与することには利点があろう。本願の実施例で測定されたように、解毒剤における粒子への有効分配係数よりも毒素におけるそれが著しく高い場合、解毒剤が優先的にクリアランスされる可能性はほとんどなく、解毒剤が受容体とより強固に結合すればするほど、該手法は効果を発揮する。重要なブピバカインの場合を含めて、多くの場合、具体的な解毒剤は存在せず、特に、受容体または酵素などの分子標的から毒素を効果的に、素早く、安全に除去する薬剤は存在せず、バソプレシン、エピネフリン、ノルエピネフリン、アムリノン、アミオダロン、ミルリノン、リドカイン、カルシウムチャネル遮断薬、およびフェニトインの投与など、投与可能な薬剤は、毒性効果を打ち消そうという試みを表わすものだが、一定した安全性および効果を有すると証明されたものはない。［Ｒｅｎｅｈｅｎ  ＥＭ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｒｅｇ．Ａｎｅｓｔｈ．Ｐａｉｎ  Ｍｅｄ．  ３０（４）：３８０］。後者については、非転移性解毒剤（受容体部位で競合的阻害を示さない解毒剤）の適用において、毒素の毒性効果は解毒剤の反作用と並行して継続し、そのため、解毒剤は毒性障害の問題の根幹に作用しないので、驚くに値しない。さらに、受容体部位が明らかでさえない毒素が多く、その場合、本発明は、その知識がなくても毒性効果を減衰する上で効果的かもしれない。本発明は、例えば、患者が無意識、妄想状態、または乱用薬物などの毒性成分を摂取したことを認めたがらない人間の場合のように、毒素または複数の毒素の効果によって苦しめられていると考えられるが、それが明らかではない、哺乳動物の体を解毒するのに使用し得る。
【００６０】
Ｆ．組成物の変更
本発明の精神に一致する他の方法論として以下のものが含まれる。抗体、レクチン、リガンド、細菌接着受容体、補足核酸、胆汁酸塩、ビオチン誘導体等の標的化合物を組み込んで（米国特許出願第１０／８８９，３１３号）、毒素が蓄積する可能性がある、および／もしくは毒素による生理学的な危害が最も大きい部位に本発明の粒子を標的化するか、または、毒素を直接結合させるか、および／もしくは毒素の回収後に除去部位に粒子を誘導する。たとえば、コレステロールおよび／または胆汁酸塩を収容した本発明の粒子は、本願で論じたＡｐｏＥ機構により例えば肝臓に誘導され、そこに回収された毒素を運んで毒を除くか、または、そこで肝臓から毒素を隔離して、例えば自由な、未結合毒素の局所的な濃度を下げることもできる。フォルスマンの抗原などの糖脂質細菌接着受容体は、容易に本発明の液晶粒子に組み込まれ、そのような標識粒子は著しい特異性でバクテリアと結合し、感染性のバクテリアを除去するか、内毒素などの細菌性副産物を除去する。そのような捕獲は、結合した微生物を非感染性とするプロテアーゼ、ヌクレアーゼまたは抗生物質と組み合わせることができる。同様に、改めて、抗体、レクチン、リガンド、補足核酸、胆汁酸塩、ビオチン誘導体と、さらにキレート剤、シクロデキストリン等とは、本発明の粒子に組み込まれて毒素を回収する能力を増幅させることができる。
【００６１】
さらに、本発明は肝臓による粒子のクリアランス率を、組成物の簡単な調整によって、調整するための規定を含む。肝臓による毒素または薬剤を収容した粒子の接取は、毒素または薬剤を、それが薬理学的効果を及ぼす体内の組織から除去するための主要な機構を構成している。分散剤を、デオキシコール酸塩などの胆汁酸塩から、アポリポタンパク質Ｅに認識されない荷電されたリン脂質に変更することは、粒子の循環時間に大きく影響し得る。したがって、本発明において、粒子中のコレステロールおよび／または胆汁酸塩の濃度を上げることによって液晶粒子のクリアランス率を増加させることができ、これらの化合物の濃度を下げることによって減少させることができるというのは、極めて重要なことである。この調整に胆汁酸塩を用いるのであれば、２つの構造的要件を満たす必要がある。第一に、水酸基（−ＯＨ）がステロイド環系の３番目の位置に存在する必要があり、第二に、ステロイド環系のＣ１７の位置にアルキル側鎖が存在する必要がある。本発明で用いられる好ましい化合物の一部で、これらの要件を満たすものは、コール酸、グリココール酸、デオキシコール酸、およびケノデオキシコール酸の酸および塩（たとえば、ナトリウム塩）の形状が最も好ましく、それに劣るが、グリコケノデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸、リトコール酸、およびウルソデオキシコール酸のものも好ましい。グリココール酸およびデオキシコール酸塩は、一連の他の成分より疎水性が強く、毒性が弱く、荷電の信頼性が高いので、特に好ましい。デオキシコラートは、さらに、グリココラートより安価だという利点があるが、グリココラートより荷電の信頼性が低く、沈殿を防ぐためにｐＨを７．２より上で維持しなければならない。
【００６２】
反対に、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）などの脂質乳剤は、過度の実験をせずに胆汁酸塩またはコレステロールを追加のためには適していない。当該技術分野で周知のように、胆汁酸塩を脂肪乳剤に添加すると、混合ミセルが形成される傾向がある。少なくとも原則的には、少量のコレステロールを脂肪乳剤に導入することもできるが、コレステロールの水中への極端な水溶性の低さを考慮すると、調製が困難であり、脂肪乳剤を水性コレステロール溶液と混合する可能性を排除する。より一般的には、脂肪乳剤はその固有の不安定性により組成物の変化への感受性が非常に強くなっている。
【００６３】
また、反応性酸素種（ＲＯＳ）は、好ましい実施形態における粒子中の高トコフェロール濃度によって解毒が可能なので、本発明は有害な放射線を浴びたヒトまたは哺乳動物の事前処置または事後処置で利用可能である。ホスファチジルコリンもまた体内で摂取したＲＯＳの解毒を補助するという評判があり、本発明の好ましい実施形態は、トコフェロールとホスファチジルコリンとの組み合わせを提供することに留意する。さらに、本発明の粒子は、例えばビタミンＥの溶液製剤よりも効果的に反応性酸素種の解毒に作用すると合理的に期待される。なぜなら、本願で述べる可溶化効果および分配効果によってＲＯＳ化合物を隔離する粒子の能力は、毒素化合物およびトコフェロール（およびホスファチジルコリン）間の近接滞留時間の延長を意味する。極めて一般的に、本発明の粒子を隔離する効果は、解毒剤が粒子に埋め込まれたとき、該作用剤の効果を増幅するために利用することができる。
【００６４】
本発明の毒素減衰態様は、特定の毒素障害の処置において価値を発揮する、医学分野で公知の他の手段と組み合わせることができる。たとえば、毒素Ａの効果を減衰するために意図的に選択された本発明の粒子は、医薬品有効成分Ｂを坦持して、Ｂ剤を送達すると同時に毒素Ａを実質的に回収することができる。上記の議論に応じて、疎水性または親水性の医薬品剤の送達に関わる手段に関して、該医薬品剤自体が、近い時間内に共に投与されると本発明の粒子によって著しく隔離され得ることを憶える必要がある。したがって、麻酔薬、構成物質、麻痺薬および処置の過程で用いられる他の作用剤は、本発明のような処置と組み合わせられる場合、適用量および服用時間を調節する必要があるであろう。
【００６５】
Ｇ．他の適用形態
上述のとおり、麻酔薬の効果は、外科手術処置（例えば、選択的または非選択的）を行った後または患者の観察（例えば、単純に麻酔薬への患者の対応を観察する、等）の後、逆立方晶相材料または逆立方晶相材料を含む粒子を投与することによって減衰することができる。これらの方法は広範囲にわたる他の薬剤成分および毒素の隔離に適用可能である。以下に詳述する通り、これらの方法は多くの他の例示的な適用形態で活用し得る。
【００６６】
通常「ベンド」と呼ばれる物の一形態である減圧症は、血流中に窒素気泡が現れる状態で、潜水作業、加圧した鉱山、航空機および宇宙船内で発生する。本発明、特にフルオロカーボンが組み込まれた実施形態における分散系の投与は、粒子内で二原子窒素を可溶化することにより（つまり、窒素ガスを吸収することにより）、血流中の窒素の可溶性を実質的に向上させ、減圧における窒素の有害な効果を減衰する。これは、通常は無害な物質（Ｎ２）が、特定の状況下では本開示の意味での毒素となり得る例である。著者一同は、二原子窒素のオクタノール‐水分配係数の公表された値を認識していないが、水中での非常に低い可溶性（２５℃で約１７．３ｐｐｍ）および有機溶媒中の可溶性は、Ｋｏｗが非常に高いであろうことを示している。
【００６７】
同様に、一酸化炭素の水中での可溶性は乏しいが、一部の有機溶媒中ではかなりの程度可溶性であり、ここでも再び高Ｋｏｗを示すので、本発明は潜在的に一酸化炭素中毒の毒性効果を減衰するために使用され得る。一酸化炭素を隔離する上での本発明の粒子の効果は、特に既に毒素にさらされた哺乳動物において、ヘモグロビンまたは他のヘメ含有化合物を粒子に組み込むことによってさらに強化され、ヘメ結合一酸化炭素を運ぶ赤血球と対照的に、ＣＯを担持する本発明の粒子は、体から急速にクリアランスされる。
【００６８】
この毒性の問題で市場から引き取られたいくつかの薬剤を含む多くの薬剤が、ＱＴｃの延長および／またはトルサード・ド・ポワント（ＴｄＰ）に関連しており、本発明で提供されたような逆転剤が利用可能であることが、これらの薬剤の安全な使用を実現する。そのような薬剤の一部、かつ、これらの効果による潜在的な毒素、として含まれるのは、ジソピラミドと、プロカインアミドと、キニジンと、アミオダロンと、ブレチリウムと、ドフェチリドと、ソタロールと、アステミゾールと、テルフェナジンと、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、およびスパルフロキサシンなどのフルオロキノロン抗生物質と、クラリスロマイシンおよびエリスロマイシンなどのマクロライド抗生物質と、ケトコナゾールなどのイミダゾリン抗真菌薬と、クロロキン、ハロファントリンおよびキニンなどの抗マラリア薬と、コトリモキサゾール、ペンタミジンおよびスピラマイシンなどの他の抗菌剤と、プレニルアミンおよびテロジリンなどのカルシウム拮抗薬と、シサプリドと、プロブコールと、アミトリプチリン、クロミプラミン、デシプラミン、ドキセピン、イミプラミン、マプロチリン、ノルトリプチリンなどの三環系抗うつ薬および関連する抗うつ薬と、クロルプロマジン、ドロペリドール、チオリダジン、ジプラシドン、セルチンドールおよびピモジドなどの抗精神病薬である。
【００６９】
高原子量の土類金属、特にストロンチウムおよびバリウムは、リン脂質頭部基と結合するものであり、本作業の過程で、リン脂質を含む本発明の粒子と迅速かつ強固に結合することが見出された（実施例１２参照）。したがって、本発明はかかる毒素を体から除去するのに役立ち、毒素が本発明によって結合され得る機構をまた一つ指し示す。同様に、本発明は、がん治療の後に残留した放射性核種を除去するのに役立つ。
血中に胆汁酸塩が蓄積すると黄疸が発生するが、胆汁酸塩は強力に本発明の粒子へ分配されるので、本発明は黄疸の治療にも使用され得る。
【００７０】
手術室および緊急救命室で用いられる化合物の多くは、一部の人に、アナフィラキシーなどのアレルギー反応を発症させることで知られている。そのような化合物で、本発明の使用によってそのような毒素を除去できるも例として、サリチラート、スルホンアミド、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒおよびペニシリンが挙げられ、それに劣るが、ベンジルアルコールも挙げられる。
【００７１】
本発明の好ましい実施形態に著しい量のトコフェロールを加えたため、様々な原因から生じた反応性酸素種の損傷効果は、本発明によって改善し得る。上述のとおり、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）は、ホルボールミリスタートアセタートから製造された反応性酸素種に対してテストされたが、微弱な効果しか見られなかったが、これは驚くに値しない。というのも、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）は酸化防止力が強い如何なる化合物も、多量には含まないからである。反対に、本発明の好ましい実施形態の多くは、トコフェロールおよび前記の種が優先的に分配される、典型的に高トコフェロールである疎水ドメインの両方を多量に含む。
【００７２】
虚血および再潅流の領域では幾通りもの方法で本発明を活用することができる。もちろん、この潜在的な適用において、本発明のトコフェロール含有実施形態の、反応性酸素種を隔離するだけではなく（ラディカルをクエンチングすることで）解毒する能力は重要である。
【００７３】
他の例として、臓器移植において、心臓を停止させるために用いた心停止液（他の毒素もあるが、典型的には局所麻酔薬を含む）は、心臓の再始動を試みる前に心停止液を不活性化するために、例えば心臓切開点滴部位を介して、投与された本発明の方法及び組成物によって一掃することができる。
【００７４】
また、ドナー器官において通常の血液潅流が長期間不足していたことによるドナー器官内の生物学的廃棄物からも、傷害は発生する。血液供給の再付着および血流の開始において、代謝産物は宿主にとって「衝撃」となるが、現発明は受容者の体から代謝産物を除去する上で有益であろう。
【００７５】
本発明の一部の実施形態では、逆液晶相材料は内部に逆液晶相とは異なる高疎水物質相の液滴を含有する。これは、逆液晶相自体の構成要素である疎水ドメインと混同されるべきではない。高疎水物質の液滴は、約２０ｎｍから１００μの粒径で、主要な成分として疎水物質、つまり水溶性の低い（約３％未満の）および／または高オクタノール‐水分配係数（Ｋｏｗが約１０以上、より好ましくは約１００を超える）の成分を含み、その内部で毒素を可溶化し、さらに、第２容量の各成分の画分（微量であると思われる）を含む。疎水物質と脂質との混合物における任意の毒素の可溶性は、典型的には増加する疎水物質：脂質比の、急激に上昇する関数である。というのも、疎水物質は一般的に特定の毒素を可溶化する能力によって具体的に選択されるが、脂質の選択は必要とされる液晶を形成する能力（特に、疎水物質の存在下で）との関連が深いからである。そのような「油‐コア」逆液晶粒子は２００２年６月２１日に提出された米国特許第６，９９１，８０９号に記載され、その完全な内容は引用により本願に組み込まれる。
【００７６】
ブピバカインおよび他の局所麻酔薬、ならびに非常に広い範囲の全身麻酔薬の全身毒性を処置するための好ましい方法である静脈内注射以外に、本発明を投与し得る経路は、毒性攻撃の源および性質によって数多く存在する。関節内注射は哺乳動物の１以上の関節の傷害に特に有益である。より局所的な性質の傷害には、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与を使用することもできる。たとえば、薬剤の筋肉内または皮下への投与が好ましくない結果を伴うのであれば、本発明の分散系を局所的に注射することで好ましくない効果を逆転するか、少なくとも減衰することができる。さらに減衰する上で、毒素を搭載した、分散した粒子の除去は、例えば、シリンジで粒子含有流体を部位から除去するか、局所的に加圧または吸引するか、最初から粒子の分散系を潅注法に沿って用いることによって実現され得る。口から摂取した毒素に対する好ましい経路は、例えば、ピル、錠剤、ロゼンジ、カプセル、トローチ、シロップおよび懸濁剤などを介した経口経路だが、大概の場合、最も好ましいのは単純な分散系である。胃腸管内の毒素には直腸内投与もまた有益であろう。眼に対する毒性傷害には、本発明の粒子および特に分散系を、広範囲に及ぶ眼経路を通じて適用することができる。その眼経路とは、眼周囲、眼内、結膜、結膜下、経結膜、眼球周囲、眼球後、テノン嚢下、経強膜、局所的点眼剤、局所的ゲル、局所的分散系、眼窩内、強膜内、硝子体内、網膜下、経網膜、脈絡膜、ブドウ膜、房内、経角膜、角膜内および水晶体内である。また、全身に及びながら局所的な態様も有する毒性傷害に関しては（たとえば、咬合部位での局所的な濃度が非常に高いと同時にもちろん粒子の全身への適用も重要である蛇の咬傷に対して）、適切に選択された、くも膜下、筋肉内、皮下、動脈内、直腸、膣内、鼻腔内、吸入を介する、および局所的な経路を含むが、それらに限定されてない非経口経路を通じて本発明を適用することができる。「局所的」な性質を持つ適用、すなわち、主に毒素が除去される局所的な領域に分散系が制限された状態で分散系が投与される場合、に関しては、毒素をクリアリングするために分散系を局所的な部位から除去するか、別の方法で転移させることが有利な場合もある。これを達成するには、シリンジによる除去、水性緩衝剤または水溶液による洗浄、吸引または吸い取り（blotting）による除去等、数ある手段の一つを用いればよい。
【００７７】
本発明の精神において、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）の大豆油のような乳剤のトリグリセリドの代わりに、より強力な本発明の可溶化剤（すなわち、好ましい疎水物質）を活用する乳化製剤の可能性を原則として思い描くことができる。しかし、第一に、そのような系は、内在的に本発明の粒子に劣る。それは、逆液晶相中の極性（親水）基と無極性（疎水）基との極めて密接な結び付きが、上述のとおり、一般的に乳剤に比べて高い溶解度および分配係数を導くからである。さらに、あるいはより重要なことに、本発明の好ましい疎水物質の大部分、実際にはほぼ全ては、少なくとも部分的にホスファチジルコリン（圧倒的に好ましい界面活性剤）と混和性があり、よって、高水含量で、ＰＣとほとんど完全に混和性がない故に液晶ではなく乳剤を形成する長鎖トリグリセリドとは極めて対照的に、ＰＣおよび水と組み合わせられて水飽和逆液晶相を形成する。
【実施例】
【００７８】
以下の実施例は本発明を説明するものであるが、本発明を制限するものと解釈するべきではない。
【００７９】
（実施例１）
８６２．８３ｍｇ／ｍＬの無菌水、６．６８ｍｇ／ｍＬのデオキシコール酸ナトリウム、３６．３４ｍｇ／ｍＬのα‐トコフェロール、７１．１７ｍｇ／ｍＬのＰＣ−９０Ｇ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ製のＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ９０Ｇ）および２２．９８ｍｇ／ｍＬのグリシンから成る逆立方晶相の分散系の８００ｍＬバッチを調製した。最初に、１４％デオキシコール酸ナトリウム溶液を調製するために、５．６ｇのデオキシコール酸ナトリウムを３４．４ｇの脱イオン水中で超音波処理した。３８．６２ｇ量の該溶液を、６４．８４ｇのホスファチジルコリン製品Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ＰＣ−９０Ｇ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ製）および１６．５５ｇのα‐トコフェロールと十分に混合されるまで攪拌した。これを４８０ｇｍの脱イオン水にゆっくりと加え、その混合物を３時間均質化させて、攪拌せずに一晩放置した。後で、このサンプルを２時間再均質化させ、次に２００ｇの９．２％グリシン溶液を加えた。このサンプルをもう１時間均質化させて、１４．５５ｇのα‐トコフェロールを１０分間かけて添加した。分散系をもう２時間均質化させて、次に０．６０１６ｇのデオキシコール酸ナトリウムを加えて１時間均質化させた。その結果生じた分散系は、容量濃度が約５％で二重層表面（粒子内の内表面および外表面の両方）に対するζ電荷が極度に負である逆立方晶相材料のサブミクロン粒子から成り、ブピバカイン、または他の正に帯電したベクロニウムおよびモルヒネなどの毒素の接取によく適している。
【００８０】
（実施例２）
まず本発明に従って疎水物質の組成の異なる２種の分散系を調製し、続いて次の実施例で、それぞれの分散系のブピバカインを隔離する能力を、２０％のＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）と対比させてテストした。９３７．３８ｍｇ／ｍＬの無菌水、１．３０ｍｇ／ｍＬのデオキシコール酸ナトリウム、１８．６７ｍｇ／ｍＬのα‐トコフェロール、２１．８５ｍｇ／ｍＬのＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ＰＣ−９０Ｇ、および２０．８０ｍｇ／ｍＬのグリシンから成る、本発明の一分散系（以下「ＲＡ５Ｅ」とする）の７７０ｍＬバッチを調製した。１４．５２０ｇの無菌水に溶解させた１．４１６ｇのデオキシコール酸ナトリウムに２０．３２８ｇのα‐トコフェロールおよび２３．８０２ｇのＰＣ−９０Ｇを攪拌しながら加えた。この部分的な立方晶相４２．７ｇを１５分かけてゆっくりと７１５．４ｇの無菌水に添加した。この混合物を５４００ＲＰＭで５時間均質化させて精細な粒子を作製し、続いてグリシンを１６．１ｇ添加した。この分散系をスパージングし、バイアル瓶に入れ、オートクレーブに入れた。
本実施例の第２の分散系（以下「ＲＡ５ＥＬ」とする）では、逆立方晶相中の疎水物質はα‐トコフェロールとリナロールとの５０：５０混合物から成る。３０ｍＬビーカに、０．３２３６グラムのデオキシコール酸ナトリウム、２．６６２１グラムのα‐トコフェロールとリナロールとの５０：５０混合物、２．３０５２グラムの脱イオン水、および２．６６８２グラムの高ホスファチジルコリン製品Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ製）を加えた。この混合物を十分に混合されるまで攪拌した。２５ｍＬの目盛付シリンダ内で、この混合物１．６０８５グラムと脱イオン水８．３９９２グラムとを合わせ、この洗浄液を精細な粒子が形成されるまで均質化させ、ガラス瓶の中に入れ、１２１℃のオートクレーブに１５分間入れた。
【００８１】
（実施例３）
この実施例では実施例２の分散系でのブピバカインの分配を、２０％のＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）と対比させてテストした。４％のアルブミンおよび約０．１ｍｇ／ｍＬのブピバカインでＫｒｅｂｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝剤の溶液５０ｍＬを調製した。１５０ｍＬビーカ内で、２．００８１ｇのウシアルブミンを４９．９９８ｇのＫｒｅｂｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝剤に溶解するまで攪拌した。別の１００ｍＬビーカ内で、このアルブミンが入ったＫｒｅｂｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝剤５０．０２５２ｇを、０．００５４ｇのブピバカインに加えた。１ＮのＨＣｌ溶液をｐＨが２．０に達するまでビーカに添加し、ブピバカインが溶解するまで攪拌した。１ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨを７．４に再調整した。
一端を結んで閉じた長さ１５ｃｍの１，０００ＭＷ透析チューブに容積測定で１ｍＬの製剤（上記で調整されたＲＡ５Ｅ、ＲＡ５ＥＬ、または２０％のＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ））を加えた。袋の両端を結んで、脱イオン水に浸した。次にその袋を１０ｍＬの目盛付シリンダ内に配置し、４％のアルブミンと約０．１ｍｇ／ｍＬのブピバカインとの入ったＫｒｅｂｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝剤１０ｍＬを容積測定で加えた。このサンプルを、透析浴水のＨＰＬＣ分析が行われるまで、攪拌せずに置いておいた。
以下の表において、第１の数値はスパイク緩衝剤の貯槽から隔離されたブピバカイン総体の割合（％）を示し、第２の数値は、より大切な基準である、脂質１グラムにつき隔離された量の概算を示し、第３の数字は脂質相と緩衝剤との有効分配係数の概算である。
【００８２】
【表１】
2010512341.tif 000002
【００８３】
したがって、測定の結果、本発明の粒子に侵入したブピバカインの有効分配係数（アルブミンの存在下なので「有効」分配係数）は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）乳剤液滴に侵入したものの係数より一桁大きかった。
【００８４】
（実施例４）
本発明のこの実施例で、逆立方晶相の疎水物質は、α‐トコフェロールとＭｙｖａｃｅｔの名で販売されているジアセチル化モノグリセリド製品との５０：５０混合物から成る。逆立方晶相を調製するために、１２ｍＬの試験管の中で０．９４４ｇｍのＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ、ケルン、ドイツ）を０．７３３ｇｍの蒸留水と合わせ、均質な粘稠度が得られるまで攪拌した。次に０．２７２ｍｇのＭｙｖａｃｅｔ（Ｋｅｒｒｙ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅ、ノーウィッチ、ニューヨーク州）と０．２７３ｇｍのα‐トコフェロール（ＡＤＭ）とを加え、念入りに混ぜた後、この材料は光学的に等方性で高粘度となっており、まさに逆立方晶相だった。これを、デオキシコール酸が立方晶相の５質量％を占めるデオキシコール酸ナトリウムの水溶液中で液晶を均質化させて分散させることで本発明の粒子の分散系を作製し、次にこれをオートクレーブに入れた。Ｍｙｖａｃｅｔジアセチル化モノグリセリドは、ホスファチジルコリンおよび水と混合すると、大豆油などの長鎖トリグリセリドとは質的に大分異なる反応を示す。長鎖トリグリセリドは乳剤を形成する（例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ））ことがよく知られているが、この実施例は、ジアセチル化モノグリセリドが適切な組成物によって逆液晶相を形成することを示す。さらに、ジアセチル化モノグリセリドは、一般的に、長鎖トリグリセリドよりもはるかに好ましい溶媒である。
【００８５】
（実施例５）
本実施例において、逆立方晶相の疎水物質はα‐トコフェロールと安息香酸ベンジルとの５０：５０混合物で構成されていた。逆立方晶相を調製するために、１２ｍＬの試験管の中で０．９５０ｇｍのＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０を０．７５０ｇｍの蒸留水と合わせ、均質な粘稠度が得られるまで攪拌した。次に０．２７６ｍｇの安息香酸ベンジル（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）と０．２８５ｇｍのα‐トコフェロールとを加え、念入りに混ぜた後、この材料は光学的に等方性で高粘度となっていた。この逆立方晶相を、グリココール酸が立方晶相の約３．５質量％を占めるグリココール酸ナトリウム溶液中で分散させた。
【００８６】
（実施例６）
本実施例で、本発明の粒子に侵入した、強度に着色された抗メトヘモグロビン血症薬である化合物メチレンブルーの分配係数をＵＶ−Ｖｉｓ分光測定を用いて推定した。１０ｍＬシリンジに、実施例２に従って調製された本発明の「ＲＡ５Ｅ」分散系１ｍＬに５ｍＬの水と２５０マイクロリットルのメチレンブルー溶液とを加えた（spike）。この分散系の小部分を、３０秒ごとに６分目まで、続いて１分ごとに１２分目まで、続いて２分ごとに２４分目まで０．１μフィルターに通した。ＵＶ／Ｖｉｓ分光測光を用いて１分目および２２分目で収集したサンプルのメチレンブルー濃度を判断した。１分目のサンプルは１．１５の吸光度を示し、２２分目のサンプルは１．２６の吸光度を示し、これらは濾過工程の特異性から実験の誤差の範囲内と言える。試験管内のメチレンブルー濃度と対比させたメチレンブルー貯蔵液のＵＶ／Ｖｉｓ分析は、分散系においてログＫＱＷ＞１２を表出し、１分目および２２分目の濃度およびＫＱＷに関しては大きな違いを示さなかった。ここで、ＫＱＷは、立方晶相および水（または水性緩衝剤）の間で測定された分配係数を意味する。
【００８７】
（実施例７）
本実施例において、それぞれ水および大豆油トリグリセリド中（したがってＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）などの医薬品乳剤中）での可溶性が極めて低い、選択された相当強い効力の薬剤、すなわち潜在的な毒素の可溶性を、本発明の好ましいホスファチジルコリン／トコフェロール／水立方晶相中でテストした。
任意の化合物Ｘに関して、最初に大豆油およびトコフェロール中での可溶性を以下のように決定した。最初に複数の揮発性有機溶媒を、化合物Ｘおよび大豆油の両方またはトコフェロールを可溶化する能力によって選別した。メタノールとジクロロメタンがこの目的に特に有効だった。化合物と大豆油またはトコフェロールを共通の溶媒とともに可溶化した後、回転蒸発器を用いて共通の溶媒を蒸発させた。最終的な大豆油またはトコフェロール中の化合物の濃度で、遠心分離と顕微鏡検査を使って、沈殿の徴候がないか約４週間にわたってサンプルを観察した。顕微鏡検査は、微分干渉コントラスト（ＤＩＣ）、透過暗視野、および偏光の各モードを組み合わせて行った。トコフェロールの場合、トコフェロール中の化合物Ｘの溶液を二部に分け、ホスファチジルコリンと水とを適切な比率で加えて立方晶相を作製した（この組成は、約３４％のホスファチジルコリンと、３１％のトコフェロールと化合物と、３５％の水である。化合物の結晶の徴候を調べるために、立方晶相を観察した。様々な濃度の化合物Ｘについてこの処理を繰り返すことにより、大豆油、トコフェロール、およびＰＣ−トコフェロール‐水立方晶相において、本発明の目的を満足させる精度の化合物の溶解度の概算が求められた。パクリタクセルの場合、ＰＣ−トコフェロール‐水立方晶相と、トコフェロールをスペアミント油で置き換えた他の立方晶相の両方で溶解度が求められた。以下の表にこの作業の最終結果を示す。
【００８８】
【表２】
2010512341.tif 000003
【００８９】
表の結果は、薬剤および毒素を可溶化する好ましい立方晶相組成物の力と、この代表的な化合物の選択における、そのトリグリセリド系乳剤に対する広範囲での優位性とを明確に表している。
【００９０】
（実施例８）
逆立方晶相材料を調製するために、２５０ｍＬビーカ中で、２．００ｇｍのデオキシコール酸ナトリウム（Ｍａｒｃｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、４４．１５ｇｍの蒸留水、５６．５７ｇｍのホスファチジルコリン９０Ｇ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ），１５．７０ｇｍのリナロール（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）および２０．３９ｇｍのビタミンＥ（Ａｒｃｈｅｒ  Ｄａｎｉｅｌｓ  Ｍｉｄｌａｎｄ）を組み合わせた。各成分を加えた後、この混合物を念入りに攪拌し、結果的に生じた材料は光学的に等方性で高粘度となっていた。このうち、立方晶相１２８．５ｇｍを、事前に６３１．０ｇｍの蒸留水を添加してあった３Ｌステンレス鋼ビーカに添加した。この立方晶相／水溶液を、５１７４ｒｐｍで約２時間、標準均質化装置（Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ  ＡＸ−６０）を用いて分散させ、次に、この分散系に４０．０ｇｍのマンニトール（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）をゆっくりと添加し、１５分間均質化処理を継続した。測定されたｐＨは７．６だった（Ｈａｎｎａ  Ｉｎｓｔｒｕｎｍｅｎｔｓ）。その一部を５μ  Ｎｙｌｏｎ（Ｒ）シリンジフィルターを介して濾過し、複数の無菌の１０ｍＬ  Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ−Ｓｔｉｅｒガラスバイアル瓶に注入した。各バイアル瓶にキャップをかぶせ、１２１℃かつ気圧１５ｐｓｉのオートクレーブに２０分間入れた。冷却後に、ζ電荷を測定すると‐５８ｍＶ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｄｅｌｓａ  ４４０ＳＸ）であり、粒子径は実質的にサブミクロン大だった。本発明のこの製剤の粒子濃度は約１６容量％だった。
【００９１】
（実施例９）
本実施例は、本発明の粒子を製造するにあたって、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）種の乳剤液滴よりも血漿タンパク質を劇的に少なくし得ることを示している。最初に、薬剤プロポホールを収容した粒子の分散系を、米国出願第１０／８８９，３１３号に記載されているように調製した。製造業者からＤｉｐｒｉｖａｎ乳剤を入手した。これらの粒子はほぼ１０％程度のプロポホールを含むが、タンパク質に対する薬剤の効果は、以下の結果が示すように、胆汁酸塩、界面活性剤、およびコレステロールの効果と比べて小さいので、この実験は血漿タンパク質の結合に関する限り、概して本発明の分散系の合理的なモデルである。１０ミクロリットル定量の分散系または乳剤を１０００ミクロリットルの脱イオン水で希釈し、また３０ミクロリットルのヒト血漿を３０００ミクロリットルの脱イオン水で希釈した。８個の３００Ｋ  ＭＷＣＯのＮａｎｏｓｅｐ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌの中で、本発明の分散系または市販のＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）系プロポホール製剤のいずれか２００ミクロリットルによって２００ミクロリットルの希釈ヒト血漿溶液を培養した。Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ装置をミクロ遠心分離機上で２０分間スピンダウンし、未結合血漿タンパク質を粒子に結合した血漿タンパク質から分離した。粒子に結合した血漿タンパク質にＳＤＳ溶液を加え、沸騰水浴に入れて１時間加熱した。次に５０ミクロリットルの各サンプルを、９５０ミクロリットルのＬａｅｍｍｌｉ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒと一緒にゲル電気泳動にかけた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後に、標準電気泳動手順に従ってゲルを固定し、着色し、脱色し、撮影した。ゲルは１０のレーンを含んでいた。１０のレーンに対応するサンプルは下記のとおりであり、全てのサンプルは分散系または乳剤中において総量約１％（１０ｍｇ／ｍＬ）のプロポホールを含んでいる（それは、分散系または乳剤の相対的なタンパク質結合特性を質的に変えるとは思われない）。
レーン１：長距離タンパク質標準（コントロール、すなわち、分散系も乳剤も含まれていない）、
レーン２：Ｄｉｐｒｉｖａｎに結合した血漿タンパク質（市販されたプロポホール乳剤、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）の乳剤中の１％のプロポホール）、
レーン３：プロポホールを含み、胆汁酸塩で安定化された、被覆されていない逆立方晶相粒子の分散系に結合した血漿タンパク質、
レーン４：ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）およびＭｙｖａｃｅｔ（Ｒ）（長鎖ジアセチル化モノグリセリド）を分散剤として分散系に結合した血漿タンパク質、
レーン５：レーン３と同様だが、粒子に５％コレステロールが挿入されている分散系に結合した血漿タンパク質、
レーン６：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８を分散剤として、立方晶相中に５％コレステロールが含まれるホスファチジルコリン／トコフェロール／プロポホール／水逆立方晶相粒子の分散系に結合した血漿タンパク質、
レーン７：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８を分散剤として、ホスファチジルコリン／トコフェロール／プロポホール／水逆立方晶相粒子の分散系に結合した血漿タンパク質（コレステロールは含まない）、
レーン８：オレアートが極めて低濃度（０．０３％）のオレイン酸ナトリウムを分散剤として、ホスファチジルコリン／トコフェロール／プロポホール／水逆立方晶相粒子の分散系に結合した血漿タンパク質、
レーン９：脂肪乳剤に基づくＢａｘｔｅｒより販売された１％Ｐｒｏｐｏｆｏｌ乳剤に結合した血漿タンパク質、
レーン１０：血漿タンパク質（コントロール、すなわち、分散系も乳剤も含まない）。
着色した電気泳動ゲルの視覚による分析は、８つの製剤（レーン２〜９）の血漿タンパク質の結合を大きいものから順に、レーン９＞レーン２＞＞レーン８＞＞レーン６＞レーン３＞レーン４＝レーン５＞レーン７と順位づけることができる。最後の３つのレーンは、いかなる結合も示さないに等しい。
これらのデータから、乳剤液滴が結合した血漿タンパク質は、本発明のどの分散系が結合したものよりも多いことが明らかである。さらに、立方晶相粒子の中でもっとも疎水性が高いものが、すなわち、分散剤のオレイン酸ナトリウムの量が少ない粒子が、立方晶相製剤のうち最も高い結合を示し、最も低い結合はＰＥＧ化界面活性剤（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８）を分散剤とする「ステルス」粒子に見られる。
上記の各分散系のプロポホール（１％）は、プロポホール吸収後に粒子化学がどのような様相を示すかの適切な例を形成しており、この発明の潜在的な適用形態は実施例１８に示されているが、この電気泳動測定は、かかる適用形態において、この発明の逆立方晶相の血漿タンパク質との結合が粒子の組成を操作することによって増幅可能であることを明らかにする。これを使用して、本発明の適用形態における粒子の分布およびクリアランスに影響を与えることができ、オプソニン化作用、標的化および生理学的処理の最低限の破壊に関して粒子を最適化するかもしれない。
【００９２】
（実施例１０）
本実施例では、アルブミン存在下で、本発明の粒子への、パラオクソン、エトミダート、およびクロミプラミンの３毒素の接取を測定した。一方は約５．６容量％の粒子濃度で他方は約１５％である２種の分散系を下記のとおり調製した。１．４１９５ｇｍ量のデオキシコール酸ナトリウムを１４．５７０５ｇｍの注射用無菌水に溶解させ、そこに、１０．１３８２ｇｍのα‐トコフェロールおよび２３．８０６１ｇｍのホスファチジルコリン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ製のＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ９０Ｇ）を添加して、その混合物を勢いよく攪拌した。このうち３５．６６ｇｍを７０７．４２ｇｍの注射用無菌水と組み合わせ、この混合物を周囲温度でＳｉｌｖｅｒｓｏｎ  ＡＸ６０  １／２ＨＰ均質化装置を使って５２００ＲＰＭで均質化させ、氷水で外側を被うことによって温度を２６℃未満に維持した。７５分後に、７．２３７ｇｍのトコフェロールを分散系にゆっくりと滴下した。深さ２μのフィルターに続いて１．２μ膜フィルターで分散系を濾過できるほどの粒径になるまで、均質化処理を継続した。続いてこの分散系を半分に分け、その一方に８．０７ｇｍのグリシンと７．６のｐＨを得るのに十分なＮａＯＨとを添加した。分散系のもう半分は、丸底フラスコに入れて、回転蒸発器上に置き、そこで分散系の質量は３４４．３ｇｍから１１９．９ｇｍまで低下した。２．６０４ｇｍのグリシンと適量のＮａＯＨとを添加し７．７の最終ｐＨを得た。２０ミリリットルのバイアル瓶を充填し、スパージングし、１２１℃のオートクレーブに２０分間入れて、それぞれ粒子濃度が５．６％および１５％であることから「ＲＡ５−５Ｅ」および「ＲＡ５−１５Ｅ」と呼ばれる２種の無菌分散系を得た。それらのζ電荷はそれぞれ‐４６ｍＶおよび‐３２ｍＶと記録された。
３種類の毒素溶液を調製した。この３種類とは、４０ｍｇ／ｍＬのアルブミンを含む９ｍＬのＫｒｅｂｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝剤中のエトミダート１８ｍｇと、１０ｍＬの脱イオン水中のパラオクソン２０ミクロリットルと、アルブミンを含む３０ｍＬのＫｒｅｂｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝剤中のクロミプラミン１５．１ｍｇである。
外側の相から粒子を分離するためにＰａｌｌ  Ｆｉｌｔｒｏｎ製の３００，０００ＭＷＣＯのＮａｎｏｓｅｐ  Ｏｍｅｇａ遠心分離フィルターを使った。したがって、各フィルターチューブに、ＲＡ５−５ＥまたはＲＡ５−１５Ｅのいずれか（それぞれＬＴ−７２８（５Ｅ）およびＬＴ−７２８（１５Ｅ）と呼ばれる）を５０ミクロリットルと、毒素溶液を１００ミクロリットルと、蒸留水を１５０ミクロリットル入れた。これらを詰めたチューブを４０℃で４５分間培養し、Ｊｏｕａｎ高速遠心分離機に入れて１０，８００ＲＰＭで約１時間遠心分離した。
ＨＰＬＣ分析のために、底相液体（濾過液）を直接注入し、最上相（濃縮水）をメタノール５００ミクロリットルに溶解させてから注入した。ＨＰＬＣの移動相は、３０％がｐＨ８．１ホスファート緩衝剤で、３５％がアセトニトリルで、３５％がメタノールである。各毒素に対して標準を実行し、外側の（底）相および最上相濃縮水の毒素濃度を求めた。
以下の３つの表は３種類の毒素のデータ（アッセイ値はｍｇ／ｍＬで表される）とその分析を表わしている。以下の方法で分析を行った。最初に、５．６または１４％の液晶を５００ミクロリットルのメタノールに入れて希釈したことに留意して、最上相希釈因数を算出した。この結果と最上相アッセイ値から、粒子内の毒素の濃度を逆算した。次に、この結果を水性相（底相）が希釈されていないため、その濃度で除算して、有効分配係数を得た。計算の妥当性を確認するために、２つの濃度とそれぞれの容量を適切に組み合わせ、その結果が、クロミプラミンでは５０．３で他の２つでは２００である（クロミプラミン毒素溶液の毒素濃度が他のものの４分の１であることを反映している）、目標または理論値にどれだけ近似するか確認することで物質収支を行う。当業者は、この計算が、特に、測定した最上相の容量ではなく既知の粒子濃度を用いることにより、外側の相が粒子から完全に分離されていないことによる誤差を最小化するように設計されていること、粒子の完全な分離の必要性が回避されたことを認識するであろう。
【００９３】
【表３】
2010512341.tif 000004
【００９４】
したがってこの実験はエトミダートおよびパラオクソン、そして特にクロミプラミンが、本実験における本発明の粒子中に強力に分配されることを示す。これは、実験がアルブミンの存在下で行われ、その当然の結果として水中への毒素の溶解度が大きく向上し、真の（すなわちアルブミンのない状態での）分配係数で見られる値よりもずっと低い有効分配係数値を得たにも関わらず、真である。実際に、アルブミンを加えたのは、本発明が使用される状況により近いシミュレーションを作るためである。アルブミンのない状態で、エトミダートの実験を繰り返すと、有効分配係数として３０９が記録された（物質収支は理論値の５％以内）。
【００９５】
（実施例１１）
実施例１０と同じ分散系および方法を使って、アルブミンの存在下で、リドカイン、ベンゾカイン、およびブピバカインの有効分配係数を測定した。ＲＡ５−１５Ｅ分散系において、リドカインの示した値は５７（物質収支は理論値の３％以内）、ベンゾカインの値は１４８（物質収支は理論値９５に対して８４）、そしてブピバカインの値は６２（物質収支は理論値の３％以内）だった。
【００９６】
（実施例１２）
本実施例では、当該技術分野においてホスファチジルコリン頭部基と結合することが公知であるストロンチウムイオン（Ｓｒ２＋）が、本発明の高二重層立方晶相粒子に強力に結合することが明らかになった。この点を明らかにするために、実施例１０で調製された本発明の「ＲＡ５−１５Ｅ」分散系の一定量に１８．９ｍＭの塩化ストロンチウムが添加された。ストロンチウムイオンがＲＡ５−１５Ｅ中のホスファチジルコリンに高い割合で結合することは、分散系の底に遠心分離された立方晶相の速やかな沈澱によって明らかにされた。重いストロンチウムイオンと結合しなければ、立方晶相は水より低密度となり、粒子を沈殿させるための他の方法で一般的であるように、分散系の最上部に遠心分離されただろう。放射性ストロンチウム、また放射性ストロンチウムほどではないがストロンチウムは、関連するホスファチジルコリン結合金属と同様に公知の毒性効果を有する。より広範囲には、本実施例は立方晶相粒子の二重層表面積が大きいことが、二重層成分に結合する毒素の効果的な接取に、どのようにつながるかを示している。
【００９７】
（実施例１３）
本実施例では、（実施例１０で使用した）回転蒸発器を必要とせずに、本発明の１５％粒子濃度の分散系を作製した。１．９０９３ｇｍ量のデオキシコール酸ナトリウムを２４．７６１ｇｍの注射用無菌水に溶解させ、そこに、１５．９４ｇｍのα‐トコフェロールおよび２４．０６ｇｍのホスファチジルコリン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ製のＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ９０Ｇ）を添加して、その混合物を勢いよく攪拌した。このうち６０．０１ｇｍを５５４．９９ｇｍの注射用無菌水および２．００ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨと組み合わせ、この混合物を周囲温度でＳｉｌｖｅｒｓｏｎ  ＡＸ６０  １／２ＨＰ均質化装置を使って５２００ＲＰＭで均質化させ、氷水で外側を被うことによって温度を１９℃から２８℃の間で維持した。３時間後に３．６９９９ｇｍのトコフェロールを分散系の中にゆっくりと滴下した。均質化は２時間２０分続いた。グリセロールを２．３％の濃度まで添加して張性を得、分散系を深さ２μのフィルターを通して濾過し、ホスファート緩衝剤を２０ｍＭの濃度まで添加し、ｐＨを調整した。バイアル瓶を充填し、窒素でスパージングし、キャップをかぶせて１２１℃かつ１５ｐｓｉのオートクレーブに１５分間入れた。最終的な分散系は単峰形分析を用いて１９３ｎｍの平均粒径および８．０のｐＨを有した。
【００９８】
（実施例１４）
この実施例では粒子にフルオロカーボンを組み込むことによって、粒子を、必要となり得る減圧症（「ベンズ」および関連する症状）の治療または予防のための二原子窒素の接取に適したものとした。使用したフルオロカーボンは具体的にはヘキサフルオロプロパノールだった。手始めに、０．３１８ｇｍのデオキシコール酸ナトリウムを４．１２７ｇｍの水に溶解させた。そこに、４．０１ｇｍの大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ８０）と、１．９６ｇｍのα‐トコフェロールと、０．９６０ｇｍのヘキサフルオロプロパノールとが加えられた。これらを混合すると、高粘度の逆立方晶相が作製された。１０．１６ｇｍ量の該液晶を９４．９４ｇｍの水および１．８３７ｇｍのグリセロール（張性のため）と組み合わせ、この混合物をイントロンの実験室規模の均質化装置によって均質化させた。結果的に約１０％のフルオロカーボンが立方晶相である、あるいは別の言い方をすれば、立方晶相の二重層の約１７％がフルオロカーボンである、本発明の精細な分散系が作製された。
【００９９】
（実施例１５）
本実施例では、低オクタノール‐水分配係数を有する水溶性化合物である４級アンモニウム骨格筋弛緩薬臭化ベクロニウムの、ホスファチジルコリン／トコフェロール／水逆立方晶相と水との間の分配を測定したところ、その値が極めて高く、哺乳動物の体内の薬剤効果を減衰するために本発明を使用するのに十分な高さであることが見出された。０．６１６９ｇｍ量のホスファチジルコリン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｄ  ＧｍｂＨ製のＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ９０Ｇ）を０．６７３０ｇｍのα‐トコフェロールおよび水中に１０％の臭化ベクロニウムが含まれる水溶液０．２１９４ｇｍと混合した。１．１２２６ｇｍ量の該混合物を試験管の内壁に塗りつけ、６．４４９５ｇｍの水を試験管に加えて混合物に接触させた。水で膨張した混合物は逆立方晶相になった。立方晶相と水性相とを３日間接触させて、二相間での薬剤の均衡を得た後のＨＰＬＣ分析は、立方晶相中のベクロニウム濃度が１０．０ｍｇ／ｍＬであり、水性相中での濃度がわずか０．００６ｍｇ／ｍＬであることを示した。したがって、立方晶相と水との間の分配係数は約１，６００（またはｌｏｇ  ＫＱＷ＝３．２）だった。胆汁酸塩を組み込むことによってアニオン性脂質の含有量が大幅に増加すると、ｌｏｇ  ＫＱＷが約４に増加した。これは、二重相結合アニオンとの静電相互作用による新たな薬剤の結合を反映している可能性がある。当業者は、膨張して均衡に達した後の最終立方晶相の水含有量が約４０％だと推定すると、この値はこの実験室でこの立方晶相領域に関して得られた相ダイアグラムと完全に調和しているので、ベクロニウム物質収支が正確に一致することを認識するだろう。
【０１００】
（実施例１６）
一般的に致死であるブピバカインの静脈内注射を加えたラットモデルにおいて、実施例１０で調製したＲＡ５−５ＥおよびＲＡ５−１５Ｅの分散系を生体内で予防手段としてテストした。成体のオスのラット１６匹を、それぞれ４匹の動物から成る４グループに無作為に配分した。各グループは、一般的な生理食塩水  ４ｍｌ／Ｋｇ（グループＡ）、粒子濃度が１５％である本発明の分散系ＲＡ５−１５Ｅ  ４ｍｌ／Ｋｇ（グループＢ）、粒子濃度が５．６％である本発明の分散系ＲＡ５−５Ｅ  ６ｍｌ／Ｋｇ（グループＣ）、または経口栄養に有用な市販の脂肪乳剤である４ｍｌ／ＫｇのＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ）のいずれかの静脈内適用によって事前に処置された。次に、４グループ全ての動物に対して、公知の致死量（１２ｍｇ／Ｋｇ）のアミド局所的麻酔薬ブピバカインを静脈内に投与した。次に、ブピバカインの投与による心臓毒性の徴候および症状が出ないか各グループの動物を観察した。グループＡの動物は全４匹ともブピバカインを注射後１０秒以内に無脈となったが、それ以外の３グループの動物は皆、心臓毒性の臨床的な徴候もなく生き延びた。この実施例は、本発明が毒性障害への予防薬として使用可能であることを示している。
【０１０１】
（実施例１７）
実施例１０で調製したＲＡ５−５ＥとＲＡ５−１５Ｅは、その後、一般的に致死であるブピバカインの静脈内注射を加えたラットモデルにおいて、生体内で救命薬としてテストされた。成体のオスのラット１２匹を、それぞれ４匹の動物から成る３グループに無作為に配分した。各グループの動物に対して、公知の致死量（１２ｍｇ／Ｋｇ）のアミド局所的麻酔薬ブピバカインを静脈内に投与した。急性心臓毒性の徴候が出ないか各動物を観察した。全ての動物がブピバカインを注射後１０秒以内に無脈となった。無脈となった各動物は、即座に、軽い胸部圧迫と以下のいずれかの溶液とで処置した。その溶液とは、（ｉ）一般的な生理食塩水  ４ｍｌ／Ｋｇ（グループＡ）、（ｉｉ）粒子濃度が１５％である本発明の分散系ＲＡ５−１５Ｅ  ４ｍｌ／Ｋｇ（グループＢ）、または、（ｉｉｉ）粒子濃度が５．６％である本発明の分散系ＲＡ５−５Ｅ  ６ｍｌ／Ｋｇ（グループＣ）である。グループＡの動物は全４匹とも死んだが、グループＢおよびＣの全４匹は回復して本発明の分散系を投与した数分後には通常の脈を示した。本発明の分散系の投与は、過量の一般的な局所麻酔薬の全身毒性による死から動物を救出した。
【０１０２】
（実施例１８）
予め留置頚静脈孔内（ＩＪ）静脈カニューレを挿入された成体のラット１０匹に、留置ＩＪカテーテルを通して、静脈内麻酔薬誘導剤、プロポホール１０ｍｇ／ｋｇを投与した。これは治療量を構成する。各動物についてその麻酔からの覚醒時間（プロポホール注射の開始から閉眼した時間および眼瞼反射または睫毛反射を喪失した時間までの経過時間と定義される）を記録した。
２４時間後に、同じ１０匹の動物のグループに、留置ＩＪカテーテルを通して同じ１０ｍｇ／ｋｇの適用量のプロポホールを再び投与した。麻酔薬を誘導した直後に各動物に実施例１０の分散系ＲＡ５−１５Ｅを４ｍｌ／Ｋｇの量でＩＪ注射した。各動物の麻酔からの覚醒時間を１日目と同様に記録した。麻酔からの覚醒時間は、１０匹の動物の全てについて、１日目より２日目の方が短かった。１日目から２日目にかけての覚醒時間の平均短縮率は２３％で、最小短縮率は１３％、最大短縮率は３７％であった。分散系の投与は覚醒時間を短縮し、それによって、治療量で適用された一般的な全身麻酔薬プロポホールの治療効果を減衰する。
【０１０３】
（実施例１９）
アンホテリシンＢは、真菌性脂質生体膜内に活性部位を有する毒性の高いＡＰＩの例である。本実施例では、本発明の好ましい立方晶相（約３０％のホスファチジルコリン、３０％のα‐トコフェロールおよび４０％の水の組成物）と水（両相とも実験の残留ＤＭＳＯを含む）との間のアンホテリシンＢの分配係数を、ＨＰＬＣを用いて測定した結果、分配係数は約１，０００であった。
０．００８２ｇ量のアンホテリシンＢと０．８ｍＬのＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）とを１６ｍＬ試験管に加えた。試験管を６０℃に熱し、アンホテリシンＢが完全に溶解するまで続けた。第２の１６ｍＬ試験管に、ホスファチジルコリン製品Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ８０中の２．５％ＤＭＰＧ  ０．６９２ｇ、ＤＭＳＯ  ０．８ｍＬ、およびエタノール  ０．６ｍＬを加えた。この混合物を６０℃に熱して、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ８０／ＤＭＰＧが完全に溶解するまでボルテックス処理した。第３の１６ｍＬ試験管に０．６８７３ｇ量のビタミンＥおよび０．８ｍＬのＤＭＳＯを加えた。この混合物を６０℃に熱して、ビタミンＥが完全に溶解するまでボルテックス処理した。第２および第３の試験管の内容物を、アンホテリシンＢおよびＤＭＳＯの混合物を含有した第１の試験管に添加した。この混合物全体を収容する試験管を６０℃に３０分間熱して、確実に、全成分が完全に溶解するようにした。
１０ｍＬ量の脱イオン水を試験管に加えた。この試験管をＬａｂ−Ｌｉｎｅ  Ｊｕｎｉｏｒ  Ｏｒｂｉｔ  Ｓｈａｋｅｒに載せて４０ＲＰＭで３０分間軽く振動させた。水性部分を傾瀉して、Ａｌｄｒｉｃｈ中速濾紙を通して濾過し、清潔な試験管に入れ、「洗浄液１」とラベルを付けた。この洗浄手順をあと３回繰り返して「洗浄液２」、「洗浄液３」および「洗浄液４」を得た。
続いてＨＰＬＣ分析を行い、４つの洗浄液と最終的な４回洗浄された立方晶相におけるアンホテリシンＢ濃度を求めた。後者の濃度は１．７６ｍｇ／ｍＬだが、立方晶相は水を閉じ込めたポケットを含むことが確認されたので（例えば、不透明な外観によって証明される）、立方晶相自体の実際の濃度は約３ｍｇ／ｍＬだと推定された。反対に、「洗浄液３」および「洗浄液４」の溶液におけるアンホテリシンＢの濃度は共に約０．００３５ｍｇ／ｍＬであり、それによって分配係数はほぼ１，０００程度となった。
アンホテリシンＢは、毒性活性の部位であるヒトの腎臓内の細胞膜へよりも、薬理学的活性の部位である真菌性細胞膜内へより強力に分配されることが知られている。したがって、例えば、リン脂質／トコフェロール／水組成物を用いた本発明の適用は、アンホテリシンＢを回収するにあたって、好ましい薬理学的活性の部位よりも毒性活性の部位を優先して行うことができ、それによって、治療指数を増加させるか、抗真菌性活性を維持しながら毒性効果から患者を救い出すことができる。
【国際調査報告】
2010512341.tif 000005