(57)【要約】  アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための、ＢＳＨ活性を増加させ、その結果として血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、同時に前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させるその能力について選択された乳酸菌株、このような菌株の選択方法並びにこのような菌株を含む製品。
2010523144.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための、ＢＳＨ活性を増加させ、その結果として血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、同時に前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させる能力について選択されたラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株の生物学的に純粋な培養物。
【請求項２】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９及びＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５並びにそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の生物学的に純粋な培養物。
【請求項３】
アテローム性動脈硬化症における炎症の治療に有効な菌株を選択するための方法であって、ヒト由来のＴＨＰ−１単球細胞系を使用して、ＴＮＦ−αの濃度を減少させるのに有効である菌株を同定するステップを含む方法。
【請求項４】
請求項１に記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株の生物学的に純粋な培養物に由来する、アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分であって、前記菌株の増殖後の無細胞培養上清から得られ、ＴＮＦ−α量を減少させる能力を有する成分。
【請求項５】
ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９又はＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５及びそれらの混合物の生物学的に純粋な培養物から単離された無細胞培養上清。
【請求項６】
摂取可能な支持体と、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９及びＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５並びにそれらの混合物からなる群から選択されるラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株に由来する、アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分とを含む食品組成物。
【請求項７】
炎症を軽減する成分が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株の生物学的に純粋な培養物の細胞を含む、請求項６に記載の食品組成物。
【請求項８】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９及びＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５並びにそれらの混合物からなる群から選択される、請求項７に記載の食品組成物。
【請求項９】
医薬担体と、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９及びＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５並びにそれらの混合物からなる群から選択されるラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株に由来する、アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
前記成分が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株の生物学的に純粋な培養物の細胞を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９及びＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５並びにそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
摂取可能な支持体と、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５及びそれらの混合物からなる群から選択されるラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株に由来する、アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分とを含む栄養補助剤。
【請求項１３】
前記成分が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株の生物学的に純粋な培養物の細胞を含む、請求項１３に記載の栄養補助剤。
【請求項１４】
食品組成物を調製するための方法であって、
ａ．請求項３に記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株を選択するステップ、
ｂ．前記菌株から抗炎症性成分を得るステップ、及び
ｃ．前記成分を摂取可能な支持体に加えて、食品を提供するステップ
を含む方法。
【請求項１５】
医薬組成物を調製するための方法であって、
ａ．請求項３に記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株を選択するステップ、
ｂ．前記菌株から抗炎症性成分を得るステップ、及び
ｃ．前記成分を医薬担体に加えて、医薬組成物を提供するステップ
を含む方法。
【請求項１６】
栄養補助剤を調製するための方法であって、
ａ．請求項３に記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株を選択するステップ、
ｂ．前記菌株から抗炎症性成分を得るステップ、及び
ｃ．前記成分を摂取可能な支持体に加えて、栄養補助剤を提供するステップ
を含む方法。
【請求項１７】
アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を治療又は予防するための薬剤であって、請求項１及び３に記載のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株に由来する抗炎症性成分を含む薬剤。
【請求項１８】
アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を治療又は予防するための方法であって、アテローム性動脈硬化症を軽減できることを特徴とする少なくとも１種のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株を選択するステップ、及び前記少なくとも１種の菌株の細胞をヒトに投与するステップを含む方法。
【請求項１９】
前記細胞が経口投与される、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書において、本発明は、アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための、胆汁酸塩ヒドロラーゼ（ＢＳＨ）活性を増加させ、その結果として血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、同時に前炎症性サイトカインの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）の濃度を減少させるその能力について選択された特定の乳酸菌株、このような菌株の選択方法並びにこのような菌株を含む製品を提供する。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティクス
プロバイオティクスは、健康に有益な効果をもたらすことが示されている（Ｇｏｒｂａｃｈ，Ｓ．Ｌ．２０００．「プロバイオティクス及び胃腸の健康（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｈｅａｌｔｈ．）」Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．９５：Ｓ２〜Ｓ４）。多くのさまざまな活性がプロバイオティクスに帰するとされているが、これらの作用が達成される機序はよくわかっていない。これらの作用は、先天的及び後天的な免疫の増強（Ｇｉｌｌ，Ｈ．Ｓ．、Ｋ．Ｊ．Ｒｕｔｈｅｒｆｕｒｄ、Ｊ．Ｐｒａｓａｄ、及びＰ．Ｋ  Ｇｏｐａｌ．２０００．「ラクトバチルス・ラムノサス（ＨＮ００１）、ラクトバチルス・アシドフィルス（ＨＮ０１７）及びビフィドバクテリウム・ラクティス（ＨＮ０１９）による自然免疫及び後天性免疫の増強（Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｂｙ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（ＨＮ００１）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ（ＨＮ０１７）ａｎｄ  Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ（ＨＮ０１９）．）」Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８３：１６７〜１７６）、抗炎症性サイトカイン（ＩＬ−１０）の産生の増強（Ｐｅｓｓｉ，Ｔ．、Ｙ．Ｓｕｔａｓ、Ｍ．Ｈｕｒｍｅ及びＥ．Ｉｓｏｌａｕｒｉ．２０００．「ラクトバチルス・ラムノサスＧＧの経口投与後のアトピーの小児におけるインターロイキン−１０の産生（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｔｏｐｉｃ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｏｒａｌ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ．）」Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ３０：１８０４〜１８０８）、及び腸透過性の減少（Ｍａｄｓｅｎ，Ｋ．、Ａ．Ｃｏｒｎｉｓｈ、Ｐ．Ｓｏｐｅｒ、Ｃ．ＭｃＫａｉｇｎｅｙ、Ｈ．Ｊｉｊｏｎ、Ｃ．Ｙａｃｈｉｍｅｃ、Ｊ．Ｄｏｙｌｅ、Ｌ．Ｊｅｗｅｌｌ及びＣ．Ｄｅ  Ｓｉｍｏｎｅ．２００１．「プロバイオティック細菌は、マウス及びヒトの腸上皮細胞のバリア機能を増強させる（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｍａｒｉｎｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．）」Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２１：５８０〜５９１）を含む。さまざまなラクトバチルス株は動物及びヒトの両方において、特によく研究されている。それらは、旅行者下痢（Ｍａｒｔｅａｕ，Ｐ．Ｒ．、Ｍ．ｄｅ  Ｖｒｅｓｅ、Ｃ．Ｊ．Ｃｅｌｌｉｅｒ及びＪ．Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ．２００１．「プロバイオティクスの使用による胃腸疾患からの保護（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ．）」Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．７３：４３０Ｓ〜４３６Ｓ）、再発性クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染症（Ｇｏｒｂａｃｈ，Ｓ．Ｌ．１９８７．「細菌性下痢及びその治療（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｄｉａｒｒｈｏｅａ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．）」Ｌａｎｃｅｔ  ｉｉ：１３７８〜１３８２）、ロタウィルス（Ｓｚａｊｅｗｓｋａ，Ｈ．、Ｍ．Ｋｏｔｏｗｓｋａ、Ｊ．Ｚ．Ｍｒｕｋｏｗｉｃｚ、Ｍ．Ａｒｍａｎｓｋａ及びＷ．Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ．２００１．「幼児の院内下痢症の予防における、ラクトバチルスＧＧ（Ｌ．ＧＧ）の有効性（Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ＧＧ（Ｌ．ＧＧ）ｉｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ  ｄｉａｒｒｈｅａ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ．）」Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１３８：３６１〜３６５）及びヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）感染症（Ｍｕｋａｉ，Ｔ．、Ｔ．Ａｓａｓａｋａ、Ｅ．Ｓａｔｏ、Ｋ．Ｍｏｒｉ、Ｍ．Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ及びＨ  Ｏｈｏｒｉ．２００２．「プロバイオティックなラクトバチルス・ロイテリによる、ヘリコバクター・ピロリの糖脂質受容体への結合の阻害（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｂｙ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｎｉ．）」ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２：１０５〜１１０）の予防及び治療に有効であり得る。マウスの腸から単離されたＬ．ロイテリ（Ｌ．Ｒｅｕｔｅｒｉ）は、ＩＬ−１０トランスジェニック・ノックアウトマウスにおいて、大腸炎の発症を阻害した（Ｍａｄｓｅｎ，Ｋ．Ｌ．、Ｊ．Ｓ．Ｄｏｙｌｅ、Ｌ．Ｄ．Ｊｅｗｅｌｌ、Ｍ．Ｍ．Ｔａｖｅｒｎｉｎｉ及びＲ．Ｎ．Ｆｅｄｏｒａｋ．１９９９．「ラクトバチルス属種は、インターロイキン１０遺伝子欠損マウスにおいて、大腸炎を予防する（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １０  ｇｅｎｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．）」Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１６：１１０７〜１１１４）。プロバイオティクス混合物を用いた臨床試験により、慢性回腸嚢炎において相当の改善が示された（Ｇｉｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．、Ｆ．Ｒｉｚｚｅｌｌｏ、Ａ．Ｖｅｎｔｕｒｉ、Ｐ．Ｂｒｉｇｉｄｉ、Ｄ．Ｍａｔｔｅｕｚｚｉ、Ｇ．Ｂａｚｚｏｃｃｈｉ、Ｇ．Ｐｏｇｇｉｏｌｉ、Ｍ．Ｍｉｇｌｉｏｌｉ及びＭ．Ｃａｍｐｉｅｒｉ．２０００．「慢性回腸嚢炎を有する患者における維持療法としての経口細菌製剤療法：二重盲検の、プラセボを対照とした試験（Ｏｒａｌ  ｂａｃｔｅｒｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｓ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｏｕｃｈｉｔｉｓ：ａ  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ、ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．）」Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１９：３０５〜３０９）。
【０００３】
免疫応答（Ｔｈ−１／Ｔｈ２／ＴＲ）
炎症は、サイトカインとして知られる細胞内シグナルタンパク質によって仲介され、これらはマクロファージ及び樹状細胞によって、上皮において、抗原性刺激に反応して産生される。上皮と抗原の間の接触において、上皮中の抗原提示細胞（樹状細胞を含む）が、ナイーブなマクロファージにシグナルを伝播し、ナイーブなマクロファージはその後いわゆるＴｈ−１型応答で応答し、ＴＮＦα、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２を含む前炎症性サイトカインが、マクロファージによって産生される。これらのサイトカインは、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞及び他の細胞を順番に刺激し、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）が産生され、ナイーブなマクロファージは、Ｔｈ−２型応答で抗原に応答することもあり得る。この応答は、ＩＦＮγによって抑制される。これらのＴｈ−２型細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９及びＩＬ−１０などの抗炎症性サイトカインを産生する。
【０００４】
ＩＬ−１０は、ＩＦＮγの産生を阻害し、したがって免疫応答を抑制することが知られている。Ｔｈ−１型及びＴｈ−２型の細胞と、それらのそれぞれのサイトカインの産生とのバランスが、所与の抗原に対する炎症反応の程度を規定する。Ｔｈ−２型細胞は、免疫系を介して免疫グロブリンの産生もまた刺激できる。ＴＮＦαの濃度が低減される場所である消化管における抗炎症活性は、上皮細胞の増強（腸壁内膜の完全性）、したがって消化管病原体及び毒素により起こる負の作用の減少に相関する。
【０００５】
制御性Ｔ（ＴＲ）細胞は、免疫応答の不可欠な構成要素とみなされる。これらの細胞は、有害な免疫病理を最小にするために、まず防御的抗菌免疫を微調整すると思われる（Ｐｏｗｒｉｅ  Ｆ、Ｍａｌｏｙ  ＫＪ．２００３．「レギュレーターの制御（Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９９  １０３０〜１０３１）。ＴＲ細胞は、抗炎症性サイトカインのＩＬ−１０の濃度を増加させることが示された（Ｓｍｉｔｓ，Ｈ．Ｈ．、Ａ．Ｅｎｇｅｒｉｎｇ、Ｄ．ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｌｅｉｊ、Ｅ．Ｃ．ｄｅ  Ｊｏｎｇ、Ｋ．Ｓｃｈｉｐｐｅｒ、Ｔ．Ｍ．ｖａｎ  Ｃａｐｅｌ、Ｂ．Ａ．Ｊ．Ｚａａｔ、Ｍ．Ｙａｚｄａｎｂａｋｈｓｈ、Ｅ．Ａ．Ｗｉｅｒｅｎｇａ、Ｙ．ｖａｎ  Ｋｏｏｙｋ及びＬ．Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ．２００５．「選択的プロバイオティック細菌は、樹状細胞特異的細胞間接着分子３−捕捉非インテグリンを介して樹状細胞機能を調節することによって、インビトロでＩＬ−１０産生制御性Ｔ細胞を誘導する（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｉｎｄｕｃｅ  ＩＬ−１０−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ３−ｇｒａｂｂｉｎｇ  ｎｏｎｉｎｔｅｇｒｉｎ．）」Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１５：１２６０〜１２６７）。ＴＲ細胞の発生及び活性化を調節する因子は、（自己免疫疾患を治療し、臓器の移植片の生存を増強するために）ＴＲ細胞の活性の方向か、又は（ワクチン接種及び腫瘍拒絶を強化するために）ＴＲ細胞の活性から離れる方向どちらかに平衡を移すことができるはずである（Ｗａｌｔｅｒ  Ｊ．Ｄｏｂｒｏｇｏｓｚ．「Ｌ．ロイテリを用いたヒトの健康の増強、プロバイオティック、イムノバイオティック及びイムノプロバイオティック（Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｌｔｈ  ｗｉｔｈ  Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、Ａ  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｔｉｃ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｂｉｏｔｉｃ．）」ＮＵＴＲＡｆｏｏｄｓ．２００５：４（２／３）１５〜２８）。
【０００６】
プロバイオティクスの免疫調節作用
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）株ＧＧ（ＬＧＧ）は、潜在的プロバイオティック剤であり、多くの研究により、腸管にコロニーを形成し、粘膜上皮及び免疫応答を調節するＬＧＧの能力が実証されている。ＬＧＧは、単独定着ノトバイオートラットにおいて、腸細胞の増殖及び絨毛の大きさを増大させた（Ｂａｎａｓａｚ，Ｍ．、Ｅ．Ｎｏｒｉｎ、Ｒ．Ｈｏｌｍａ及びＴ．Ｍｉｄｔｖｅｄｔ．２００２．「ラクトバチルス・ラムノサスＧＧによる、単独定着ノトバイオートラットにおける腸細胞産生の増加（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ  ｒａｔｓ  ｍｏｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ．）」Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６８：３０３１〜３０３４）。ＬＧＧは、経口投与後に、エクスビボでマウスリンパ球応答の拡散もまた調節し（Ｋｉｒｊａｖａ（登録商標）ｉｎｅｎ，Ｐ．Ｖ．、Ｈ．Ｓ．ＥｌＮｅｚａｍｉ、Ｓ．Ｊ．Ｓａｌｍｉｎｅｎ、Ｊ．Ｔ．Ａｈｏｋａｓ及びＰ．Ｆ．Ｗｒｉｇｈｔ．１９９９．「マウスリンパ球増殖に関する、経口投与された、生存ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ及びプロピオニバクテリウム・フリューデンレイッヒイ亜種シャーマニィの作用（Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｖｉａｂｌｅ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ  ｓｕｂｓｐ．ｓｈｅｒｉｎａｎｉｉ  ＪＳ  ｏｎ  ｍｏｕｓｅ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．）」Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：７９９〜８０２）、Ｌ．パラカセイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）は、ＣＤ４＋Ｔリンパ球の調節性サイトカインのプロフィールを改変する（Ｖｏｎ  ｄｅｒ  Ｗｅｉｄ  Ｔ．、Ｃ．Ｂｕｌｌｉａｒｄ及びＥ．Ｊ．Ｓｃｈｉｆｆｒｉｎ．２００１．「形質転換増殖因子β及びインターロイキン−１０を産生する、低増殖能を有するＣＤ４（＋）Ｔ細胞の集団の乳酸菌による誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｆ  ａ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４（＋）Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｗ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０．）」Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：６９５〜７０１）。適応免疫応答に加え、ＬＧＧは先天性免疫応答に対する影響を有する。ＬＧＧは核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、並びにヒトマクロファージにおけるシグナル伝達物質及び転写活性化因子（ＳＴＡＴ）シグナル伝達経路を活性化し（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ，Ｍ．、Ａ．Ｌｅｈｔｏｎｅｎ、Ｉ．Ｊｕｌｋｕｎｅｎ、及びＳ．Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ．２０００．「乳酸桿菌及び連鎖球菌が、ヒトマクロファージにおいて、ＮＦ−κＢ及びＳＴＡＴシグナル伝達経路を活性化する（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ  ａｎｄ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ＮＦ−��ａｐｐａ  Ｂ  ａｎｄ  ＳＴＡＴ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．）」Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：３７３３〜３７４０）、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はマクロファージによるインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）の産生を刺激する（Ｈｅｓｓｌｅ，Ｃ．、Ｌ．Ａ．Ｈａｎｓｏｎ及びＡ．Ｅ．Ｗｏｌｄ．１９９９．「ヒト胃腸粘膜由来の乳酸桿菌は、ＩＬ−１２産生の強力な刺激因子である（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｕｃｏｓａ  ａｒｅ  ｓｔｒｏｎｇ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  ＩＬ−１２  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．）」Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１６：２７６〜２８２）。ＬＧＧはまた小児においてＩＬ−１０のような免疫調節性サイトカインの産生も刺激し（Ｐｅｓｓｉ，Ｔ．、Ｙ．Ｓｕｔａｓ、Ｍ．Ｈｕｒｍｅ及びＥ．Ｉｓｏｌａｕｒｉ．２０００．「ラクトバチルス・ラムノサスＧＧの経口投与後のアトピーの小児におけるインターロイキン−１０の産生（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−ｌ０  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｔｏｐｉｃ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｏｒａｌ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ．）」Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ３０：１８０４〜１８０８）、インビボで前炎症性応答を制御できる。マクロファージ、樹状細胞及び好中球のような先天性免疫のエフェクター細胞は、大部分の炎症反応の一次駆動体である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．Ａ．，Ｊｒ．及びＲ．Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ．２００２．「先天性免疫の認識（Ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．）」Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０：１９７〜２１６）。先天性免疫が、抗原に対する先天性応答及び後天性応答の両方の過程を、自己又は非自己として決定づけるという考えは、炎症の調節における先天性免疫の役割を強調している。
【０００７】
米国特許出願公開第２００２００１９０４３号は、サイトカインを産生するグラム陽性菌又はサイトカイン拮抗薬を産生するグラム陽性菌株を投与することによる、炎症性腸疾患の治療に関する。特定の実施形態において、サイトカイン又はサイトカイン拮抗薬は、ＩＬ−１０、可溶性ＴＮＦ−α受容体又は別のＴＮＦ−α拮抗薬、ＩＬ−１２拮抗薬、インターフェロン−γ拮抗薬、ＩＬ−１拮抗薬などから選択される。特定の実施形態において、グラム陽性菌は、全般にサイトカイン、サイトカイン拮抗薬などを産生するように、遺伝子操作されている。
【０００８】
Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）の免疫調節作用
Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）の免疫調節作用は、例えばプロバイオティック乳酸桿菌がそれらの免疫調節作用を、樹状細胞（ＤＣ）のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３／Ｔｒ１／ＴＲ促進能力を調節することによって発揮することを示した、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎによって報告された（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  Ｈ．Ｒ．、Ｈ．Ｆｒｏｋｉａｅｒ及びＪ．Ｊ．Ｐｅｓｔｋａ．２００２．「マウスの樹状細胞において、乳酸桿菌はサイトカイン及び成熟表面マーカーの発現を特異的に調節する（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．）」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：１７１〜１７８）。彼らは、マウスのＤＣが、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株を含むさまざまなラクトバチルス株の共培養に曝された場合、それらは、サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの産生並びに表面マーカーのＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６の上方制御が、濃度依存的方法で、特異的に調節されたことを示した。すべての乳酸桿菌が、ＤＣの成熟の指標である、表面ＭＨＣクラスＩＩ及びＣＤ８６マーカーを上方制御した。これらの研究において特に注目に値するのは、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）（１２２４６株）がＩＬ−１２の誘導因子としては弱いが、Ｌ．ジョンソニー（Ｌ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）又はＬ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）と共培養した場合、後者の２種によって刺激された前炎症性サイトカインシグナルＩＬ−１２、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αの産生を、特異的に阻害することであった。ＩＬ−１０の産生は、これらの条件下でも変化しなかった。これらの発見により、「Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）は、「危険なシグナル」を持たない抗原に対する耐性を支持し、同時にＬＰＳのような危険なシグナルを介して認識される病原体に対する応答能力は損なわれないまま維持する、腸の樹状細胞発生の環境調節に寄与できる」という彼らの結論が導かれた。彼らはまた、いくつかのＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株が、抗炎症性ＩＬ−１０を導入しながら、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−α（及びＩＬ−６）の産生を下方制御するのに有効な、潜在的な標的の細かい治療であり得、したがって、前炎症腸サイトカイン環境の釣り合いをとる、別の治療的取り組みを提示すると結論付けた。
【０００９】
Ｓｍｉｔｓは、これらの見解を拡大し、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）が、ＤＣに制御性Ｔ（ＴＲ）細胞の産生を刺激させる能力を有することを示した。彼らは、インビトロで共培養した３種の異なるラクトバチルス属種及びヒト単球由来のＤＣを使用した。乳酸桿菌の２種、ヒトＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）（ＡＴＣＣ  ５３６０９）株及びＬ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）は、これらのＤＣのＴＲ細胞の発生を刺激するが、Ｌ．プランタラム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｒ）株はしなかった。これらのＴＲ細胞は、ＩＬ−１０の産生濃度が増加することが示され、ＩＬ−１０依存的にそばにいるＴ細胞の増殖を阻害できた（Ｓｍｉｔｓ，Ｈ．Ｈ．、Ａ．Ｅｎｇｅｒｉｎｇ、Ｄ．ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｌｅｉｊ、Ｅ．Ｃ．ｄｅ  Ｊｏｎｇ、Ｋ．Ｓｃｈｉｐｐｅｒ、Ｔ．Ｍ．Ｍ．ｖａｎ  Ｃａｐｅｌ  Ｂ．Ａ．Ｊ．Ｚａａｔ、Ｍ．Ｙａｚｄａｎｂａｋｈｓｈ、Ｅ．Ａ．Ｗｉｅｒｅｎｇａ、Ｙ．ｖａｎ  Ｋｏｏｙｋ及びＬ．Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ．２００５．「選択的プロバイオティック細菌は、樹状細胞特異的細胞間接着分子３捕捉非インテグリンを介して、樹状細胞機能を調節することによって、インビトロでＩＬ−１０産生制御性Ｔ細胞を誘導する（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｉｎｄｕｃｅ  ＩＬ−  １０−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ３−ｇｒａｂｂｉｎｇ  ｎｏｎｉｎｔｅｇｒｉｎ．）」Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１５：１２６０〜１２６７）。Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）−ＤＣ相互作用に関するこれらの研究は、Ｈｏｒｉによる、根底を覆す研究に関連するとみなされる（Ｈｏｒｉ  Ｓ、Ｔ．Ｎｏｍｕｒａ及びＳ．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ．２００３．「転写因子Ｆｏｘｐ３による、制御性Ｔ細胞発生の調節（Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｆｏｘｐ３．）」Ｓｃｉｅｎｃｅ．２９９：１０５７〜１０６１）並びにＰａｓａｒｅ及びＭｅｄｚｈｉｔｏｖ（Ｐａｓａｒｅ  Ｃ．及びＲ．Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ．２００３．「樹状細胞によるＣＤ４＋Ｃｄ２５＋Ｔ細胞仲介抑制のＴｏｌｌ経路依存性阻害（Ｔｏｌｌ  ｐａｔｈｗａｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＣＤ４＋Ｃｄ２５＋  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．）」Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９９：１０３３〜１０３６）は、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）のイムノバイオティックな作用様式の１つに貴重な洞察を提供している。
【００１０】
神経増殖因子（ＮＧＦ）は、神経細胞に関するその活性に加えて、大腸炎のモデルを含むインビトロ及びインビボのいくつかの実験系において、有意な抗炎症作用を有する。Ｍａ他（２００４）は、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）の作用機序を、ヒト上皮細胞系において、サイトカイン及びＮＧＦの合成並びにＴＮＦ−αに対するＩＬ−８の応答を調査した。彼らは、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）は、強力な直接抗炎症活性を、ヒト上皮細胞において有し、それは摂取したプロバイオティクスの活性に関係すると思われると結論付けた。彼らはまた、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）は、独特の抗炎症性分子であるＮＧＦを上方制御し、ＮＦ−κＢの核への転移を阻害するとも結論付けた（Ｍａ，Ｄ．、Ｐ．Ｆｏｒｓｙｔｈｅ及びＪ．Ｂｉｅｎｅｎｓｔｏｃｋ．２００４．「生きたＬ．ロイテリは、腫瘍壊死因子αにより誘導されるインターロイキン８の発現の阻害作用に必須である（Ｌｉｖｅ  Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−８  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．）」Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２：５３０８〜５３１４）。
【００１１】
Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）を含む、ラクトバチルス属種の多種多様な菌株は、プロバイオティック製剤に使用されている。ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）は、動物の消化管の自然な常在菌の１つであり、ヒトを含む、健康な動物の腸において日常的に見出される。それは、抗菌作用を有することでも知られている。例えば、米国特許第５，４３９，６７８号、第５，４５８，８７５号、第５，５３４，２５３号、第５，８３７，２３８号及び第５，８４９，２８９号を参照されたい。Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）細胞が、嫌気条件下で、グリセロールの存在下で増殖する場合、それらは、β−ヒドロキシ−プロピオンアルデヒド（３−ＨＰＡ）として知られる抗菌物質を産生する。
【００１２】
アテローム性動脈硬化症
動脈硬化性疾患及びその心血管結果は、米国その他における死亡及び罹患の主原因である。アテローム性動脈硬化症は、「粥（ｇｒｕｅｌ）」又は「ベトベトしたもの（ｇｏｏ）」及び「硬化（ｈａｒｄｅｎｉｎｇ）」というギリシャ語に由来し、動脈の内壁にアテローム又は病巣が存在するとして定義される。プラークとしても知られる病巣は、脂肪性沈着物及び他の物質からなる。
【００１３】
アテローム性動脈硬化症を特に危険にしているものは、重要な大動脈に対して特別な親和力を有することと思われる。プラークの詰まった病巣の一部が、動脈の内壁から破裂した場合、脂肪性材料が、心臓及び脳に直接供給している下流の小さい動脈に流れ込み、そこでそれらが詰まり、栄養及び酸素に富んだ血液がこれらの重要臓器に到達することを妨げる。完全な封鎖が起こった場合、心臓発作又は脳卒中が起こり得る（Ｌｉｔｔｌｅ，Ｗ．Ｃ．、Ｍ．Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｅｓｃｕ、Ｒ．Ｊ．Ａｐｐｌｅｇａｔｅ、Ｍ．Ａ．Ｋｕｔｃｈｅｒ、Ｍ．Ｔ．Ｂｕｒｒｏｗｓ、Ｆ．Ｒ．Ｋａｈｌ及びＷ．Ｐ．Ｓａｎｔａｍｏｒｅ．「冠動脈造影は、軽度から中程度の冠動脈疾患を有する患者のその後の心筋梗塞部位を予測できるか？（Ｃａｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｔｈｅ  ｓｉｔｅ  ｏｆ  ａ  ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｉｌｄ−ｔｏ−ｍｏｄｅｒａｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ？）」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９８８．７８：１１５７〜６６）。伝統的に、アテローム性動脈硬化症は、脂質代謝障害であると考えられてきた。アテローム性動脈硬化症に伴う危険因子は、ＬＤＬの血中濃度の高さ、ホモシステイン、高血圧、喫煙、肥満、糖尿病を含む。治療は、コレステロール濃度の調節、例えば特定の乳酸菌による胆汁塩の代謝の促進に焦点が当てられてきた。
【００１４】
有効なプロバイオティクスとしての乳酸菌（ＬＡＢ）を使用する可能性を評価する場合、多くの人が、胆汁酸の作用に耐えるＬＡＢのその能力を評価する必要があると考えている。胆汁酸は、肝臓においてコレステロールから合成され、胆嚢から十二指腸に、グリシン又はタウリンと抱合されて分泌される。それらの機能は、食物中の脂肪を乳化することである。ヒトにおける最も一般的な一次胆汁酸は、コール酸及びケノデオキシコール酸であり、これらは、肝臓におけるコレステロール代謝の主要な最終産物である。腸における細菌活性の結果として、これらの酸はその後脱抱合及び脱ヒドロキシル化などの化学的修飾を受け、そこでアミノ酸は抱合型から加水分解する（Ｃａｒｄｏｎａ，Ｍ．Ｅ．、Ｖ．ｄｅ  Ｖａｎａｙ、Ｔ．Ｍｉｄｔｖｅｄｔ及びＫ．Ｅ．Ｎｏｇｉｎ．「ノトバイオノートマウスにおけるプロバイオティクス。インビトロ及びインビボにおける、コレステロールのコプロスタノールへの転換及びインビトロにおける胆汁酸の脱抱合（Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ  ｍｉｃｅ．Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｔｏ  ｃｏｐｒｏｓｔａｎｏｌ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ  ｄｅｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．）」Ｍｉｃｒｏｂ  Ｅｃｏｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｄｉｓ．２０００．１２：２１９〜２２４；Ｄｕｎｎｅ，Ｃ．、Ｌ．Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ、Ｌ．Ｍｕｒｐｈｙ、Ｇ．Ｔｈｏｒｎｔｏｎ、Ｄ．Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ、Ｓ．Ｏ’Ｈａｌｌｏｒａｎ、Ｍ．Ｆｅｅｎｅｙ、Ｓ．Ｆｌｙｎｎ、Ｇ．Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ、Ｄ．Ｄａｌｙ、Ｂ．Ｋｉｅｌｙ、Ｇ．Ｃ．Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ、Ｆ．Ｓｈａｎａｈａｎ及びＪ．Ｋ．Ｃｏｌｌｉｎｓ．「ヒト起源のプロバイオティック菌に関するインビトロの選択基準：インビボの発見との相関（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｒｉｇｉｎ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｆｉｎｄｉｎｇｓ．）」Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．２００１．７３（ｓｕｐｐｌ）：３８６Ｓ〜３９２Ｓ）。いくつかの胃腸（ＧＩ）細菌、例えば、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）は、酵素の胆汁酸塩ヒドロラーゼ（ＢＳＨ）を発現し、それは、抱合胆汁酸の加水分解を触媒し、遊離のグリシン又はタウリン及び非抱合型胆汁酸分子をもたらす（Ｔａｎａｋａ，Ｈ．、Ｋ．Ｄｏｅｓｂｕｒｇ、Ｔ．Ｉｗａｓａｋｉ及びＩ．Ｍｉｅｒａｕ．「胆汁塩ヒドロラーゼ活性のための乳酸菌のスクリーニング（Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｏｆ  ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｂｉｌｅ  ｓａｌｔ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．）」Ｊ  Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．１９９９．８２：２５３０〜２５３５；Ｂａｔｅｕｐ，Ｊ．Ｍ．、Ｍ．Ａ．ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ、Ｈ．Ｆ．Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎ及びＧ．Ｗ．Ｔａｎｎｏｃｋ．「胆汁塩ヒドロラーゼ活性、消化管のコロニー形成及びマウス宿主の増殖率に関する、ラクトバチルス株の比較（Ｃｏｍｐａ���ｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｓｐｅｃｔ  ｔｏ  ｂｉｌｅ  ｓａｌｔ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ、ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ、ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ｈｏｓｔ．）」Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９５．６１（３）：１１４７〜１１４９；Ｔａｎｎｏｃｋ，Ｇ．Ｗ．、Ｊ．Ｍ．Ｂａｔｅｕｐ及びＨ．Ｆ．Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎ．「乳酸桿菌のインビトロの増殖に関するタウロコール酸ナトリウムの効果（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｏｄｉｕｍ  ｔａｕｒｏｃｈｏｌａｔｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ．）」Ｍｉｃｒｏｂ  Ｅｃｏｌ．１９９７．３３：１６３〜１６７）。
【００１５】
ＧＩ管において、ＢＳＨの発現がどのように細菌の機能に影響を与えるかについて、２つの主要な仮説がある。一方は、いくつかの細菌は胆汁塩を脱抱合し、アミノ酸のタウリンを電子受容体として使用するというもので、これに反して他方は、脱抱合型は、界面活性が低下して可溶性が低いので、酵素が胆汁塩の毒性を脱抱合によって減少させ、その結果細菌が保護されると述べている。抱合胆汁酸及び脱抱合胆汁酸の両方が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、クレブシエラ属種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐ）及びエンテロコッカス属種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ）に対してインビトロで抗菌活性を示すことが見出されており、脱抱合型はより増殖阻害性である（Ｄｕｎｎｅ，Ｃ．、Ｌ．Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ、Ｌ．Ｍｕｒｐｈｙ、Ｇ．Ｔｈｏｒｎｔｏｎ、Ｄ．Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ、Ｓ．Ｏ’Ｈａｌｌｏｒａｎ、Ｍ．Ｆｅｅｎｅｙ、Ｓ．Ｆｌｙｎｎ、Ｇ．Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ、Ｃ．Ｄａｌｙ、Ｂ．Ｋｉｅｌｙ、Ｇ．Ｃ．Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ、Ｆ．Ｓｈａｎａｈａｎ及びＪ．Ｋ．Ｃｏｌｌｉｎｓ．「ヒト起源のプロバイオティック菌に関するインビトロの選択基準：インビボの発見との相関（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｒｉｇｉｎ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｆｉｎｄｉｎｇｓ．）」Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．２００１．７３（ｓｕｐｐｌ）：３８６Ｓ〜３９２Ｓ；Ｍｏｓｅｒ，Ｓ．Ａ．及びＤ．Ｃ．Ｓａｖａｇｅ．「乳酸桿菌において、胆汁塩ヒドロラーゼ活性と抱合胆汁塩の毒性に対する耐性とは、関連のない特性である（Ｂｉｌｅ  ｓａｌｔ  ｈｙｄｅｏｌａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｂｉｌｅ  ｓａｌｔｓ  ａｒｅ  ｕｎｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｉｎ  ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ．）」Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００１．６７（８）：３４７６〜３４８０）。
【００１６】
発酵乳製品の強力なコレステロール低下作用は、コレステロールの胆汁酸との結合及びミセル形成の阻害によって説明できる。これらの製品中のプロバイオティック細菌がコレステロール低下作用を有し得る機序は、肝細胞によってコレステロールから作られた胆汁酸のコール酸及びデオキシコール酸を介する。これらは、グリシン及びタウリンと抱合し、小腸へ入り、そこで吸収され、肝臓へ向かう。再吸収の間に、抱合胆汁酸は腸においてミクロフローラに曝される。発酵食品中の細菌、例えば、乳酸桿菌及び連鎖球菌は、抱合胆汁酸を加水分解する。腸において高い胆汁塩ヒドロラーゼ活性を有するラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株は、胆汁の加水分解が促進できる可能性がある。このことは、コレステロールの転換率をより速くし、より多くの胆汁酸を産生する。インビボでコレステロールが低下するのは、脱抱合胆汁酸は、結腸において再吸収されないので、排泄物を介して胆汁酸が排出されるためである。このことは、新たな胆汁の合成を促進し、身体の胆汁のプールを一定に保つ（Ｓｔ−Ｏｎｇｅ  Ｍ−Ｐ．、Ｅ．Ｒ．Ｆａｒｎｗｏｒｔｈ及びＰ．Ｊ．Ｈ．Ｊｏｎｅｓ．２０００．「発酵乳製品及び非発酵乳製品の摂取：コレステロールの濃度及び代謝に関する効果（Ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  ａｎｄ  ｎｏｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  ｄａｉｒｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．）」Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．７１：６７４〜６８１）。
【００１７】
胆汁酸の脱抱合は、血漿コレステロール濃度を低下させるであろう。しかし、これらの化合物は、大腸において、嫌気性細菌によって二次胆汁酸にさらに転換されることがあり、二次胆汁酸は、結腸癌の誘導因子候補として関係があるとされている。二次胆汁酸は、細胞系に対して有毒であり、それらは結腸粘膜において細胞毒性を発揮し、細胞増殖の増加をもたらすと考えられている。これらの過剰増殖性細胞は、変異原物質に対する感受性が増強されており、その結果結腸癌の危険性が増す（Ｈｅｐｎｅｒ，Ｇ．、Ｒ．Ｆｒｉｅｄ、Ｓ．Ｓｔ．Ｊｅｏｒ、Ｌ．Ｆｕｓｅｔｔｉ及びＲ．Ｍｏｒｉｎ．１９７９．「ヨーグルト及びミルクの高コレステロール作用（Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｙｏｇｈｕｒｔ  ａｎｄ  ｍｉｌｋ．）」Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．３２：１９〜２４）。幸運なことに、乳酸菌は、脱抱合胆汁塩及び二次胆汁塩の可溶性を減少させると思われ、その結果、それらの生体利用率が低下する。Ｄｅ  Ｂｏｅｖｅｒ他（２０００）による研究は、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）が、細菌培養物中の胆汁塩の毒性を減少させたことを示した。さらに重要なことには、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）を加えることにより、赤血球の溶解に対するほぼ完全な耐性及びヒーラ細胞における胆汁塩の毒性の阻害がもたらされた（Ｄｅ  Ｂｏｅｖｅｒ，Ｐ．、Ｒ．Ｗｏｕｔｅｒｓ、Ｌ．Ｖｅｒｓｃｈａｅｖｅ、Ｐ．Ｂｅｒｃｋｍａｎｓ、Ｇ．Ｓｃｈｏｅｔｅｒｓ及びＷ．Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ．「胆汁塩の細胞毒性に対する、胆汁塩ヒドロラーゼ活性ラクトバチルス・ロイテリの保護作用（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｉｌｅ  ｓａｌｔ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ−ａｃｔｉｖｅ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ａｇａｉｎｓｔ  ｂｉｌｅ  ｓａｌｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．）」Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０００．５３（６）：７０９〜１４）。
【００１８】
免疫疾患であるアテローム性動脈硬化症
科学者は、アテローム性動脈硬化症の発症に関する新規なスキームを表しており、この病状が、前炎症性Ｔ細胞と、沈静しているものであるＴＲとのバランスの悪さによりもたらされ得ることを示唆している。このことは、第二回欧州血管ゲノム科学ネットワーク会議（Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ）（ＥＶＧＮ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ−ハンブルグ、２００５年９月２７〜３０日）から現れた、興味をそそる科学的結果の１つである。これらの結果は、心疾患における炎症の役割に新しい洞察を提供し、血栓形成及び心臓発作をもたらす過程の新しい情報モデルの開発をもたらした。
【００１９】
ＬＤＬ粒子中の脂肪は内皮細胞を刺激し、単球及びＴリンパ球を含むいくつかの細胞型の細胞浸潤を引き起こすので、アテローム性動脈硬化症は、内皮における脂肪線条の形成により始まる。単球は、内皮層と相互に作用し、内皮に硬く付着し、内皮細胞下の空間に遊走し、そこで単球はマクロファージに分化する。マクロファージは、サイトカインを含むさまざまな化学物質を放出する。増殖因子の産生が刺激され、これにより細胞増殖及び基質産生並びに基質の変性をもたらすメタロプロテイナーゼがもたらされる。したがって、マクロファージは、病巣の増殖に寄与し、不安定事象及び血栓事象に寄与し得る（Ｒｏｓｓ  Ｒ．「アテローム性動脈硬化症−炎症性疾患（Ａｔｈｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ−Ａｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．）」Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．１９９９．３４０：１１５〜２６）。Ｔリンパ球は、アテローム性動脈硬化症の全段階において存在することが示されている。それらの存在が、免疫応答との関連のさらなる証拠を提供する（Ｋｏｌ，Ａ．及びＰ．Ｌｉｂｂｙ．１９９８．「感染性因子がアテローム性動脈硬化症に寄与し得る機序及びその臨床症状（Ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｂｙ  ｗｈｉｃｈ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ａｇｅｎｔｓ  ｍａｙ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ．）」Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．８：１９１〜９９；Ａｎｄｒｅｏｔｔｉ，Ｆ．、Ｆ．Ｂｕｒｚｏｔｔａ、Ａ．Ｍａｚｚａ、Ａ．Ｍａｎｚｏｌｉ、Ｋ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ及びＡ．Ｍａｓｅｒｉ．１９９９．「ホモシステイン及び動脈閉塞性疾患：簡潔な総説（Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ａｎｄ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：ａ  ｃｏｎｃｉｓｅ  ｒｅｖｉｅｗ．）」Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｉａ．４４：３４１〜５）。
【００２０】
炎症性物質産生の開始シグナルは、炎症シグナル伝達経路を活性化するいくつかの内在性分子を認識する、トール様受容体と呼ばれる受容体の関与に依存する（Ｋ．Ｅｄｆｅｌｄｔ、Ｊ．Ｓｗｅｄｅｎｂｏｒｇ、Ｇ．Ｋ．Ｈａｎｓｓｏｎ及びＺ．Ｙａｎ．２００２．「ヒトアテローム性動脈硬化症の病巣におけるトール様受容体の発現：プラーク活性化のための可能な経路（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  Ｌｅｓｉｏｎｓ：Ａ  Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  Ｐａｔｈｗａｙ  ｆｏｒ  Ｐｌａｑｕｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１０５：１１５８〜１１６１）。
【００２１】
トール様受容体（ＴＬＲ）は、微生物のモチーフを認識し、サイトカインの産生をもたらす一連の遺伝子を活性化する。伝統的に、ＴＬＲは、微生物感染のセンサーとみなされており、それらの役割は、炎症反応を誘導することである。しかし、ＴＬＲにより認識されるモチーフは、病原体に対して唯一ではなく、微生物のすべてのクラスによって共有される一般的モチーフであり、免疫系が、片利共生生物と病原菌とを、ＴＬＲを介してどのように識別するかは完全には理解されなかった。近年、ＴＬＲが、炎症反応の誘導におけるそれらの役割にもかかわらず、片利共生生物のミクロフローラを認識することによって腸内恒常性を維持する役割も担っているというデータが示された（Ｒａｋｏｆｆ−Ｎａｈｏｕｍ，Ｓ．、Ｊ．Ｐａｇｌｉｎｏ、Ｆ．Ｅｓｌａｍｉ−Ｖａｒｚａｎｅｈ、Ｓ．Ｅｄｂｅｒｇ及びＲ．Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ．２００４．「トール様受容体による片利共生生物のミクロフローラの認識は、腸内の恒常性にとって必要である。（Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｍｅｎｓａｌ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｂｙ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．）」Ｃｅｌｌ．２３；１１８（２）：２２９〜４１）。
【００２２】
炎症の血清マーカーが、心血管疾患の罹患及び死亡に関する独立した危険因子であることが確立されている。心血管疾患の終点にかかわる炎症性マーカーは、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αなどの前炎症性サイトカイン、フィブリノゲン並びにＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を含む（Ｌｉｂｂｙ，Ｐ．、Ｐ．Ｍ．Ｒｉｄｋｅｒ及びＡ．Ｍａｓｅｒｉ．２００１．「炎症及びアテローム性動脈硬化症（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．）」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００２．１０５：１１３５〜１１４３；Ｒｉｄｋｅｒ，Ｐ．Ｍ．「高感受性Ｃ反応性タンパク質：心血管疾患の一次予防における包括的リスク評価のための潜在的補助物質（Ｈｉｇｈ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｄｊｕｎｃｔ  ｆｏｒ  ｇｌｏｂａｌ  ｒｉｓｋ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．）」Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１０３：１８１３〜１８１８）。
【００２３】
アテローム性動脈硬化症における肺炎クラミジア（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏａｉｅ）及びＨ．ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）の役割
累積証拠により、アテローム性動脈硬化症が炎症性疾患であることが示唆されている。したがって、近年、感染性因子が心血管疾患の病因において役割を果たす可能性に多くの注目が集まっている。特定の感染性因子が、アテローム斑からそれらが単離されること、又は肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、単純ヘルペスウィルス及びサイトメガロウィルスなどの生命体に関して、血清学的な陽性判定がでることに基づき、関与が示されている。
【００２４】
プロスペクティブ研究は決定的な証拠の提供に欠けているが、肺炎クラミジア（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、アテローム性動脈硬化症に最も強力にかかわっていると思われる。肺炎クラミジア（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、死体解剖及び関節切除の標本から、並びに早期の病巣及び十分に発達した病巣の両方において単離されている。免疫学的細胞化学及び組織染色を用いた研究の場合、７０〜１００％の事例において、関連が見出されている。感染性因子がそれらの作用を発揮する可能な機序は、（ｉ）内皮細胞、平滑筋細胞又はマクロファージに対する局所作用、或いは（ｉｉ）サイトカインの産生、単球の刺激及び凝集性高進の促進による全身作用を含み得る。
【００２５】
コレステロール濃度の低下に関する従来の治療
血清コレステロール濃度の上昇は、アテローム性動脈硬化症及び冠動脈性心疾患に伴う危険因子であると長年にわたって認識されており、後者は西欧諸国における死亡の主原因である（Ｂａｒｒ，Ｄ．Ｐ．、Ａ．Ｍ．Ｒｕｓｓ及びＨ．Ａ．Ｅｄｅｒ．１９５１．「ヒト血漿におけるタンパク質−脂質の関係  ＩＩ．アテローム性動脈硬化症及び関連病態において（Ｐｒｏｔｅｉｎ−ｌｉｐｉｄ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ．ＩＩ．Ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．）」Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１：４８０〜４９３）。３−ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムＡ還元酵素阻害薬を含むコレステロールを低下させる多くの薬剤及び胆汁酸の正味の排出量を増加させる薬剤が、高コレステロール（ＨＣ）の個人を治療するために使用されてきた（Ｓｕｃｋｌｉｎｇ，Ｋ．Ｅ．、Ｇ．Ｍ．Ｂｅｎｓｏｎ、Ｂ．Ｂｏｎｄ、Ａ．Ｇｅｅ、Ａ．Ｇｌｅｎ、Ｃ．Ｈａｙｎｅｓ及びＢ．Ｊａｃｋｓｏｎ．１９９１．「コレスチラミン治療を用いたハムスターにおける、コレステロールの低下及び胆汁酸の排出（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｗｉｔｈ  ｃｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．）」Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ８９：１８３〜１９０）。
【００２６】
しかし、これらの化合物の望ましくない副作用により、それらの治療的使用が懸念される。（Ｅｒｋｅｌｅｎｓ，Ｄ．Ｗ．、Ｍ．Ｇ．Ａ．Ｂａｇｇｅｎ、Ｊ．Ｊ．Ｖａｎ  Ｄｏｏｒｍｅａｌ、Ｍ．Ｋｅｔｔｎｅｒ、Ｊ．Ｃ．Ｋｏｎｉｎｇｓｂｅｒｇｅｒ及びＭ．Ｊ．Ｔ．Ｍ．Ｍｏｌ．１９８８．「コレスチラミンと比較したシンバスタチンを用いた臨床経験（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ．）」Ｄｒｕｇｓ  ３９（Ｓｕｐｐｌ．）：８７〜９０）。
【００２７】
コレステロール濃度を低下させる治療としての乳酸菌
これらの治療手段に加えて、プロバイオティック乳酸菌の摂取が、ヒトにおいて血清コレステロール濃度を低下させるより自然な方法であると思われる。いくつかの研究により、発酵乳製品の大量摂取（６８０から５０００ｍｌ／ｄ）の間に血清コレステロールの低下が報告されているが、これらの結果は、摂取のより現実的条件が推定できない（Ｍａｎｎ，Ｇ．Ｖ．１９７７．「ヒトにおけるコレステロール血を低下させるヨーグルト中の因子（Ａ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｙｏｇｕｒｔ  ｗｈｉｃｈ  ｌｏｗｅｒｓ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ｉｎ  ｍａｎ．）」Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２６：３３５〜３４０；Ｍｃ  Ｎａｍａｒａ，Ｄ．Ｊ．、Ａ．Ｍ．Ｌｏｗｅｌｌ及びＪ．Ｅ．Ｓａｂｂ．１９８９．「血中脂質が正常な男性における、血漿中脂質及びリポタンパク質の濃度に関する、ヨーグルト摂取の効果（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｙｏｇｕｒｔ  ｉｎｔａｋｅ  ｏｎ  ｐｌａｓｍａ  ｌｉｐｉｄ  ａｎｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｎｏｒｍｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ｍａｌｅｓ．）」Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ７９：１６７〜１７１）。
【００２８】
Ｍａｓｓｅｙは、成人男性において、ヨーグルトの摂取により、初めはコレステロールが１０から１２％有意に低下したが、２週間後、ヨーグルトの摂取を続けていたにも関わらず、濃度が対照値まで戻ったことを示した（Ｍａｓｓｅｙ，Ｌ．１９８４．「ヒトの栄養摂取及び血清リポタンパク質に関する、ミルク及びヨーグルトの摂取を変えることによる効果（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｈａｎｇｉｎｇ  ｍｉｌｋ  ａｎｄ  ｙｏｇｈｕｒｔ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｉｎｔａｋｅ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ．）」Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．６７：２５５〜２６２）。類似の矛盾する結果が、ミルク及びその発酵製品を与えられた実験動物により得られた（Ｈｅｐｎｅｒ，Ｇ．、Ｒ．Ｓ．Ｔ．Ｆｒｉｅｄ、Ｓ．Ｊｅｏｒ、Ｌ．Ｆｕｓｅｔｔｉ及びＲ．Ｍｏｒｉｎ．１９７９．「ヨーグルト及びミルクのコレステロール低下作用（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｙｏｇｕｒｔ  ａｎｄ  ｍｉｌｋ．）」Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．３２：１９〜２４；Ｒａｏ，Ｄ．Ｒ．、Ｃ．Ｂ．Ｃｈａｗａｎ及びＳ．Ｒ．Ｐｕｌｕｓａｎｉ．１９８１．「ラットにおける、血漿コレステロール濃度及び肝臓コレステロール産生に関する、ミルク及びサーモフィルスミルクの影響（Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｍｉｌｋ  ａｎｄ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｍｉｌｋ  ｏｎ  ｐｌａｓｍａ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．）」Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．４６：１３３９〜１３４１）。Ｒａｏは、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）により発酵させたミルクを与えられたラットのＨＣ作用を報告した（Ｒａｏ，Ｄ．Ｒ．、Ｃ．Ｂ．Ｃｈａｗａｎ及びＳ．Ｒ．Ｐｕｌｕｓａｎｉ．１９８１．「ラットにおける、血漿コレステロール濃度及び肝臓コレステロール産生に関する、ミルク及びサーモフィルスミルクの影響（Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｍｉｌｋ  ａｎｄ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｍｉｌｋ  ｏｎ  ｐｌａｓｍａ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．）」Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．４６：１３３９〜１３４１）。Ｒｏｄａｓは、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）を与えられたＨＣブタにおいて同様の作用を見出した（Ｒｏｄａｓ，Ｂ．Ｚ．、Ｓ．Ｅ．Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ及びＣ．Ｖ．Ｍａｘｗｅｌｌ．１９９６．「ラクトバチルス・アシドフィルスＡＴＣＣ  ４３１２１のコレステロール低下作用及び食餌によって誘導された高コレステロール血症のブタにおけるカルシウム（Ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＡＴＣＣ  ４３１２１  ａｎｄ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｉｎ  ｓｗｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｄｉｅｔ．）」Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．７９：２１２１〜２１２８）。
【００２９】
以前に脂肪に富んだ食餌を与えられたマウスの血清中の、総コレステロール、トリグリセリド及び高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）と低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）との比に関する、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＣＲＬ  １０９８の作用を調査する研究において、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）により、トリグリセリドが４０％減少し、高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）と低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）との比は２０％増加し、ナイーブなミクロフローラの脾臓及び肝臓への細菌転移はなかった（Ｔａｒａｎｔｏ，Ｍ．Ｐ．、Ｆ．Ｓｅｓｍａ、Ａ．Ｐ．Ｒｕｉｚ  Ｈｏｌｇａｄｏ及びＧ．Ｆ．Ｖａｌｄｅｚ．１９９７．「胆汁塩ヒドロラーゼは、ラクトバチルス・ロイテリによるコレステロールの除去に関してカギとなる役割を果たす（Ｂｉｌｅ  ｓａｌｔｓ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  ｐｌａｙｓ  ａ  ｋｅｙ  ｒｏｌｅ  ｏｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｂｙ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ．）」Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｆｔ．９：２４５〜２４７）。これらのデータは、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＣＲＬ  １０９８が、低細胞濃度でマウスのために有効なコレステロール低下補助物質であることを示唆している。しかし、本明細書中の本発明の開示とは異なり、コレステロールの低下は、ＢＳＨ活性のみによるもので、ＢＳＨ活性及び免疫調節作用との組み合わせによるものではなかった。
【００３０】
コレステロール濃度を低下させる治療としての乳酸菌乳酸菌、免疫調節法
米国特許出願公開第２００５０１６９９０１号は、心血管障害を診断、予防及び治療するために、サイトカインの濃度又は活性を調節する方法に関する。このサイトカインの調節は、Ｔｈ２からＴｈ１へのサイトカインプロフィールの切り替えであり、切り替えが、Ｔｈ１のサイトカインプロフィールから選択的に離れＴＮＦ−α産生の減少に向かう、本明細書の本発明とは異なる。この出願人らは、プロバイオティックとして、いくつかの異なる細菌属及び菌株について述べており、プロバイオティックが、ＴＮＦ−α濃度の減少及び同時にＢＳＨ活性の増加に有効であるように選択された特定の乳酸菌である、本明細書の本発明とは異なる。
【００３１】
Ｂｕｋｏｗｓｋａは、高コレステロール血症の患者において、プロバイオティック細菌のラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）２９９ｖの補給により、ＬＤＬコレステロール及びフィブリノゲンの濃度を有意に低下させることを示した（Ｂｕｋｏｗｓｋａ  Ｈ．、Ｊ．Ｐｉｅｃｚｕｌ−Ｍｒｏｚ、Ｍ．Ｊａｓｔｒｚｅｂｓｋａ、Ｋ．Ｃｈｅｌｓｔｏｗｓｋｉ及びＭ．Ｎａｒｕｓｚｅｗｉｃｚ．１９９７．「中程度にコレステロールが上昇した対象における、ラクトバチルス・プランタラムを含む食餌を補給することに関するフィブリノゲン及びＬＤＬコレステロールの減少（Ｄｅｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ａｎｄ  ＬＤＬ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ｕｐｏｎ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｅｔ  ｗｉｔｈ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ｉｎ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ  ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．）」Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．１３７：４３７〜８）。このことは、米国特許第６，２１４，３３６号にも記載されている。同じグループは、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を含む食餌の補給が、喫煙者の代謝障害の予防及び治療に寄与できることを示した。この好ましい作用は、食物繊維の細菌発酵によるプロピオン酸の産生に直接関連していると考えられる。彼らは、プロピオン酸が、おそらく、核転写因子Ｂを調節し、単球−マクロファージによる炎症性サイトカインの産生を低下させる、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体のイブプロフェンによる活性化に関係する、今に至るまで未知の機序を介して特異的抗炎症作用を発揮することを示唆する（Ｍ．Ｎａｒｕｓｚｅｗｉｃｚ、Ｍ−Ｌ  Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ、Ｄ．Ｚａｐｏｌｓｋａ−Ｄｏｗｎａｒ及びＨ．Ｂｕｋｏｗｓｋａ、「喫煙者における心血管疾患の危険因子に関する、ラクトバチルス・プランタラム２２９ｖの作用（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ２９９ｖ  ｏｎ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｓｍｏｋｅｒｓ．）」Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．２００２．７６：１２４９〜１２５５）。
【００３２】
上記の本明細書の本発明とは異なり、参考文献は、ＢＳＨ−活性の増加、同時にＴＮＦ−αの濃度の減少の両方を可能にする菌株を記載していない。
【００３３】
前述のように、ＢＳＨ活性の上昇は、血清コレステロール濃度を低下させ、その結果、アテローム性動脈硬化症の危険性を低下させることが長年にわたって周知であった。アテローム性動脈硬化症が炎症性疾患であることもまた、以前に実証されており、さまざまなサイトカインの調節が疾患を止めることが示唆されてきた。これらの発見を考慮に入れて、非病原性細菌株を、ＢＳＨの低下及び免疫調節性の両方に関して選択した。驚いたことに、ＢＳＨ活性の増加を引き起こす菌株のいくつかは、前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させることが同時に見出された、図１。本発明は、その結果として、例えば、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ−ＰＴＡ４６５９、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ−６４７５又はＬ．コリニフォルミス（Ｌ．ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＡＴＣＣ−ＰＴＡ４６６０の、アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための製品の製造のための使用並びに同じ方法で選択された他の菌株及びそれらの混合物に言及する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３４】
したがって、本発明の目的は、血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させるその能力について選択された乳酸菌株を提供することである。他の目的及び有利性は、以下の開示及び添付の特許請求の範囲によりさらに完全に明らかになるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００３５】
本発明は、アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための、ＢＳＨ活性を増加させ、その結果として血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、同時に前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させるその能力について選択された特定の乳酸菌株、このような菌株の選択方法及びこのような菌株を含む製品を提供する。
【００３６】
本発明の他の目的及び特徴は、以下の開示及び添付の特許請求の範囲によりさらに完全に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】ＬＰＳ活性化単球によるＴＮＦ−αの産生に対するラクトバチルス順化培地の作用を示す棒グラフである。菌株及び対照は２４時間インキュベートした。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、アテローム性動脈硬化症などにおいて、炎症を軽減し、ＢＳＨ活性を増加させるその能力について選択された乳酸菌株を含む。このような菌株は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ−ＰＴＡ４６５９を含み、これはブダペスト条約のもとに、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡに、２００２年９月１１日に寄託されている。ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ−ＰＴＡ６４７５は、２００４年１２月２１日に、ＡＴＣＣに寄託された。これらの菌株の公衆への提供可能性に対するすべての制限は、特許が付与された場合に取り消し不能の条件で撤回されるであろう。これらの菌株に由来する全細胞又は成分、例えば、これらの菌株の無細胞培養物中に存在する、この能力を有する成分を含む、食品、栄養添加物、及び製剤などの製品、製剤又は医療用具は、当分野で公知のように、例えば、ラクトバチルス株のフリーズドライ培養物又はそれに由来する成分を含む硬ゼラチンカプセルとして製剤化することもできる。本明細書中で述べた菌株の混合物及び全細胞又はそれらの成分の混合物も本発明の範囲内である。
【００３９】
実施例３において選択された菌株、例えば、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５を標準的ヨーグルトに加えた。Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５株は、乳業において、ラクトバチルスを増殖するための標準的な方法を使用して増殖させ、凍結乾燥させた。この培養物を、その後、伝統的ヨーグルト培養物を使用して、あらかじめ発酵させたミルクに、１０Ｅ＋６  ＣＦＵ／ヨーグルトのグラムの濃度で加え、アテローム性動脈硬化症の予防として人に使用した。ヨーグルト以外の他の摂取可能な支持材料は、例えば、ミルク、カード、発酵乳、ミルクベースの発酵製品、発酵シリアルベースの製品、ミルクベースの粉末である。
【００４０】
適切なサイトカインを使用するモデル系を使用して、炎症を軽減又は増大させる因子を決定する。本明細書に提供された発明において、ヒト細胞ベースのアッセイを使用する。
【００４１】
ＴＨＰ−１細胞は、白血病患者に由来するヒト単球細胞系であり、これらは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに保存されている（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ２０２）。ヒトの宿主由来のこれらの細胞の起源により、それらは、ヒト胃腸免疫系とヒト共生細菌との相互作用の研究に、特に関係付けられる。
【００４２】
本発明のデータは、特定の菌株、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９及びＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５によるＴＮＦ−αの産生の強力な阻害並びにこの調節が、後期対数増殖期／定常増殖期の間に、これら２種の特定の菌株により増殖培地に放出される物質により仲介されることを示す。それどころか、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）の他の２種は、大腸菌毒に対する細胞の炎症反応を阻害できないだけでなく、それら自体が炎症反応を誘導した。
【００４３】
胆汁塩を含む選択的ｄｅ  Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ及びＳｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）固体培地を用いた直接プレート法を、胆汁塩ヒドロラーゼを排出する菌株をスクリーニングするために使用し、その基質に対する酵素特異的活性を確定した。ＢＳＨ産生細菌の増殖は、加水分解及び培地の酸性化を起こす。加水分解は、コロニーの周りに沈殿した遊離の胆汁塩のハロー形成として起こる（Ｄａｓｈｋｅｖｉｃｚ，Ｍ．Ｐ．及びＳ．Ｄ．Ｆｅｉｇｈｎｅｒ．１９８９．「胆汁塩ヒドロラーゼ活性ラクトバチルス属種のための分化用培地の開発（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉｕｍ  ｆｏｒ  ｂｉｌｅ  ｓａｌｔ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ−ａｃｔｉｖｅ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）」Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５５（１）：１１〜１６）。
【００４４】
本発明の特徴は、以下の実施例を参照することにより、より明確に理解されるであろうが、これらは本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００４５】
（実施例１）ＴＮＦ−αの濃度を減少させる能力を有する菌株の評価
ＴＨＰ−１細胞を対照培地、又は選択されたＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株であるＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４９７５、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ５５７３０及びＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＰＴＡ−４９６５の増殖によって得られる順化培地（Ｌ−ＣＭ）のどちらかと共にインキュベートした。順化培地（Ｌ−ＣＭ）は、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）培養物それぞれの９時間培養物又は２４時間培養物から得られる無細胞上清である。ＴＨＰ−１細胞は、３．５時間のインキュベーションの間に、対照培地又は大腸菌由来ＬＰＳ（正常な炎症反応においてＴＮＦ−αの産生をもたらす）のどちらかを用いて刺激し、その後、細胞を除去し、上清を、ＥＬＩＳＡ技術を使用してＴＮＦ−αに関して分析した。
【００４６】
材料：
ＴＨＰ−１単球白血病細胞系（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＴＩＢ２０２）
ＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（Ｓｉｇｍａ）
大腸菌、血清型Ｏ１２７：Ｂ８のリポ多糖類（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｌ３１３７）ＴＮＦ−α／ＴＮＦ−ＳＦＩＩヒトＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ開発キット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２１０）
ヒトＩＬ−１０  ＤｕｏＳｅｔ、２ｎｄジェネレーションキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２１７）
【００４７】
方法：
ＴＨＰ−１単球細胞系を使用する。５％（ｖ／ｖ）のＭＲＳ培地及び５％（ｖ／ｖ）のラクトバチルス順化培地を適切なウェルに加える。ラクトバチルス順化培地は、ＭＲＳ培地におけるラクトバチルス属種の２４時間培養物の上清である。その後、順化培地を高速真空乾燥し、ペレットを等量の培地に再懸濁することによってｐＨを調整する。加湿チャンバーは、液体蒸発が最小になるように設計されているが、４８時間のインキュベーション後、２４ウェルプレート中の細胞懸濁液の容量は、約４７５μｌまで減少する。
【００４８】
１００ｎｇ／ｍｌの大腸菌、血清型Ｏ１２７：Ｂ８のリポ多糖類を適切なウェルに加え、これらを３７℃、加湿、５％ＣＯ２のチャンバーにおいてインキュベートする。３．５時間のインキュベーション後、培養物を１．５ｍｌの遠心分離管に回収し、１５００ＲＣＦで５分間４℃において遠心分離機にかける。上清を回収する。
【００４９】
サイトカインの発現をＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＴＮＦ−α／ＴＮＦ−ＳＦＩＩ  ヒトＤｕｏＳｅｔ）によって試験する。
【００５０】
使用した培養培地は、１０％のＦＢＳ、２％のペニシリン−ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０であった。
【００５１】
結果−実施例１
ＬＰＳをＴＨＰ−１細胞に、Ｌ−ＣＭの不在下で加えることにより、３．５時間のインキュベート期間に１３０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−αの産生がもたらされた。これは、毒素に対するＴＨＰ−１細胞の予期された炎症反応である。Ｌ−ＣＭの添加に対する対照として機能する、増殖培地（ＭＲＳ）の添加により、１３２ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−αの産生がもたらされ、したがって、ＭＲＳはＬＰＳに対する反応に影響を与えなかった。Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ４６５９又はＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ６４７５由来の２４時間Ｌ−ＣＭの添加は、ＬＰＳにより刺激されたＴＮＦ−αの濃度を、それぞれわずか１３及び１１ｐｇ／ｍｌに、劇的に低下させた。これは、ＬＰＳにより刺激されたＴＮＦ−αの産生が、それぞれ９０及び９３％阻害されたことを示す。
【００５２】
反対に、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ５５７３０及びＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＰＴＡ−４９６５由来の２４時間Ｌ−ＣＭの存在下で、ＬＰＳは、ＬＰＳの不在下の濃度と比較して、ＴＮＦ−αの有意な上昇をさらに誘導できた。ＬＰＳにより刺激されたＴＮＦ−αの産生は、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ５５７３０及びＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４９６５由来のＬ−ＣＭの存在下にもかかわらず、それぞれ５４％及び４２％増加した（図１）。
【００５３】
Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ４６５９又はＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ６４７５由来の９時間Ｌ−ＣＭを用いて実施された同様の実験では、ＬＰＳにより刺激されたＴＮＦ−αの産生に関する阻害作用は、大幅に低いが、存在したことが実証された。したがって、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株をより長くインキュベートし、後期対数増殖期／定常増殖期にＬ−ＣＭ収穫することにより、ＴＮＦ−αの産生を阻害する効果が改善される。
【００５４】
（実施例２）直接プレートアッセイ−細胞外ＢＳＨ活性を用いた菌株の評価
ヒト乳酸菌の菌株を、酸素を制限した条件において、３７℃で、ＭＲＳブロス（Ａｃｕｍｅｄｉａ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ、Ｉｎｃ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）中で一晩増殖させ、１０％のグリセロール（ＢＤＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｕｐｐｌｉｅｓ、Ｅｎｇｌａｎｄ）を含む乳酸桿菌を有する培地（ＬＣＭ）に接種した。
【表１】
2010523144.tif 000003
【００５５】
培養物のストックを、さらなる使用のために−８０℃で保存した。菌株は、ＢｉｏＧａｉａ  ＡＢ研究室並びにＬｕｎｄ（スウェーデン）、Ｒａｌｅｉｇｈ（ＮＣ、米国）及びＬａｎｔｂｒｕｋｓｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅｔｅｔ（農業大学）、Ｕｐｐｓａｌａ（スウェーデン）の収集株から入手した。
【００５６】
細胞外ＢＳＨ活性についてスクリーニングするために、菌株を、一晩培養物から、３ｍＭの胆汁塩、ＧＤＣＡ  Ｓｉｇｍａ、Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＴＤＣＡ（Ｓｉｇｍａ）、ＧＣＡ（Ｓｉｇｍａ）及びＴＣＡ（Ｆｌｕｋａ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＭＲＳ−システイン（ＭＲＳ−ｃ）寒天（Ａｃｕｍｅｄｉａ）プレート上に、それぞれ画線した。プレートを３７℃で４８時間、嫌気的（ＡｎａｅｒｏＧｅｎ、Ｏｘｏｉｄ、ＵＫ）にインキュベートした。胆汁酸脱抱合の結果である沈殿を、視覚的に、その結果主観的に測定し、これをもとに、活性を、活性なし（−）、活性あり（＋）とした。胆汁塩を加えていないＭＲＳ−ｃ寒天プレートを増殖及び負の対照として使用した。
【００５７】
（実施例３）ＢＳＨ活性及び同時にＴＮＦ−αの濃度を減少させる能力を有する菌株の選択
【表２】
2010523144.tif 000004
【００５８】
上記の表のデータにより、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）のさまざまな菌株が、ＴＮＦ−α及びＢＳＨの産生に関してさまざまな作用を有し、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９株及びＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６４７５株が、アテローム性動脈硬化症への使用に特に適しているという驚くべき発見が確認された。
【００５９】
（実施例４）順化培地の使用
実施例１における方法を使用して、ＴＮＦ−αを有効に減少させる菌株に由来する順化培地、この実施例においては、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９に由来する培地を選択した。この培地を、菌株をｄｅ  Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ、Ｓｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）（Ｄｉｆｃｏ、Ｓｐａｒｋｓ、ＭＤ）で増殖することによって、大規模に作った。乳酸菌の一晩培養物を、ＯＤ６００が１．０になるように希釈し（およそ１０９細胞／ｍｌを表す）、さらに１：１０に希釈し、さらに２４時間増殖した。細菌細胞を含まない順化培地を、８５００ｒｐｍで１０分間４℃において遠心分離機にかけることによって回収した。順化培地を細胞のペレットから分離し、その後０．２２μｍのろ過孔ユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍａｓｓ．）を介してろ過した。その後、順化培地を凍結乾燥し、標準的な方法を使用して、錠剤に製剤化した。この錠剤を、アテローム性動脈硬化症を有効に治療する薬剤として、ヒトに使用した。
【００６０】
（実施例５）選択された抗炎症性ラクトバチルス・ロイテリ株の使用
実施例１及び２における方法を使用して、ＴＮＦ−αを有効に減少させ、同時にＢＳＨ活性を増加させる菌株、この実施例においてはＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９を選択した。Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株を、その後凍結乾燥し、標準的な方法を使用して、１０５〜１０９ｃｆｕの範囲でカプセルに製剤化した。このカプセルを、アテローム性動脈硬化症を有効に軽減する薬剤として、ヒトに使用した。
【００６１】
（実施例６）アテローム性動脈硬化症において頸動脈プラークを減少させる、ラクトバチルス・ロイテリ
総計１０５９例の患者に、ベースライン及び１年の追跡時に効果的な超音波測定を実施した。ベースライン及び１年の追跡時において、同じ超音波画像系及びトランスデューサー（Ａｃｕｓｏｎ  Ｘｐ１０  １２８、ＡＲＴ改良型、７．５−ＭＨｚリニアアレイ・トランスデューサー搭載、開口サイズ３８ｍｍ、ＳＩＥＭＥＮＳ）を使用した。Ｂ−モードの画像補正パラメーターを、固定値にプリセットし、いずれの調査の過程においても変更しない。仰臥位の対象を、頭をやや左に向けて、右の頸動脈を、いくつかの異なる超音波照射角度で、縦及び横の両方で、鎖骨のすぐ上から、分岐部に対して出来るだけ末梢側に離れてスキャンした。プラークを、血管壁の内腔への、隣接する内膜中膜厚（ＩＭＴ）と比較して少なくとも５０％の局所突起として定義する。各対象において、最大６個のプラークが、総頸動脈、分岐部及び内頸動脈の近く及び遠くの壁に、それぞれ記録された。それぞれのプラークに関して、トランスデューサーを用いて、血管壁に対して平行に、及び最大プラーク厚の点に対して出来るだけ垂直に、領域拡大選択を３８ｍｍ×２０ｍに設定して、さらなる画像を記録する。すべての記録は、Ｐａｎａｓｏｎｉｃ  ７６５０ビデオプレーヤーで、Ｓｕｐｅｒ  ＶＨＳテープに実施した。
【００６２】
ベースラインにおいて、１０５９例の男性にプラークが存在した（表１）。頸動脈プラーク面積は、いずれの年齢においても縮小した。ベースラインにおける平均総プラーク面積（ＳＥ）は、２４．１ｍｍ２である。Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４６５９（１０８ＣＦＵ）の１日容量を摂取後の、追跡期間において、すべての人が、総プラーク面積が縮小した。平均縮小は９．０ｍｍ２である。
【表３】
2010523144.tif 000005
【００６３】
本発明は特定の実施形態を参照して記載されているが、多くの変形、改善及び実施形態が可能であることが理解されると思われ、したがって、このような変形、改善及び実施形態もまた、本発明の精神及び範囲内であるとみなされる。
【００６４】
2010523144.tif 000006
2010523144.tif 000007
【図１】
2010523144.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】平成21年12月14日(2009.12.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物のアテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための乳酸菌株（ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株）を選択する方法であって、ａ）乳酸菌株細胞を選択培養し；ｂ）該菌株の無細胞培養上清を回収し；ｃ）該菌株の前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させる能力のレベルを評価し；ｄ）該菌株の細胞外ＢＳＨ活性を計測し；ｅ）ＢＳＨ活性を増加させ、その結果として血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、同時に前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させる能力を有するラクトバチルス株を選択する方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法により選択されたラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株から得られた無細胞培養上清。
【請求項３】
請求項１記載方法により選択されたのラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株に由来する、アテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分。
【請求項４】
ＢＳＨ活性を増加させ、その結果として血清ＬＤＬコレステロールを低下させ、同時に前炎症性サイトカインのＴＮＦ−αの濃度を減少させる能力を有する、請求項２記載の無細胞培養上清から得られた請求項３記載の成分。
【請求項５】
請求項１記載の方法により選択された乳酸菌株の細胞を含む、請求項３又は４記載の成分。
【請求項６】
摂取可能な支持体及び、請求項３−５のいずれかに記載されたアテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分を含む食品組成物。
【請求項７】
医薬担体及び、請求項３−５のいずれかに記載されたアテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分を含む医薬組成物。
【請求項８】
摂取可能な支持体及び、請求項３−５のいずれかに記載されたアテローム性動脈硬化症に随伴する炎症を軽減する成分を含む栄養補助剤。
【請求項９】
請求項３−５のいずれかに記載された炎症を軽減する成分を含む、アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療するための薬剤。
【請求項１０】
アテローム性動脈硬化症及び他の心血管疾患を予防及び／又は治療用の医薬を製造するための、請求項１記載の方法により得られた乳酸菌株の細胞を含む組成物の使用。
【請求項１１】
請求項１記載の方法により選択されたラクトバチルス株の細胞を含む生産物。
【国際調査報告】
2010523144.tif 000009
2010523144.tif 000010
2010523144.tif 000011
2010523144.tif 000012
2010523144.tif 000013