(57)【要約】  本発明は、式(II)及び式(III)に示す化合物から選択される少なくとも１つを活性成分として含んでいる医薬成分に関する。式(II)において、Ｓ原子はヌクレオシドにおけるＴの炭素又は３’の炭素に結合している。式(II)及び式(III)において、Ｂは天然ヌクレオチド基又は修飾ヌクレオチド基であり、ｘは０、１又は２であり、Ｒ１及びＲは、１若しくはそれ以上の原子及び／又は１若しくはそれ以上の原子を含む１若しくはそれ以上の基により置換及び／又は中断され得る炭酸基若しくは炭化水素分子レムナントであり、ここで原子は、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ、Ｘから選択され、該Ｘはハロゲンである。本発明は、医薬的に容認されるキャリアにも関する。2010507637.tif 000049【選択図】なし
2010507637.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式(I)に示す化合物であって、
【化３】
2010507637.tif 000040
Ｂはチミンであり、
ＲはＣＨ２-ＣＨ=ＣＨ２、Ｃ４Ｈ９、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２ＨＣｌのうちのいずれかであるヌクレオシドジスルフィド化合物。
【請求項２】
以下の化合物から選択される少なくとも１つの化合物を活性本源として含む医薬成分：
【化１】
2010507637.tif 000041
式(II)に示す化合物において、Ｓ原子はヌクレオシドの２’の炭素又は３’の炭素と結合する化合物、
【化２】
2010507637.tif 000042
前記式(II)及び式(III)に示す化合物において、Ｂは天然型又は修飾型のプリン又はピリミジンヌクレオチド基であり、
ｘは０、１又は２であり、
Ｒ１及びＲは、１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである化合物及び、
医薬品において容認される賦形剤である化合物。
【請求項３】
前記式(II)に示す化合物において、前記Ｒ１は、Ｒ３−Ｓｉ（Ｒ４）（Ｒ５）（Ｒ６）であって、
前記Ｒ３は２つの炭素原子の炭化水素鎖であり、該炭化水素鎖は、不飽和である且つ／又は置換されえて、
前記Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なり、それぞれ独立した炭化水素基であることを特徴とする請求項２に記載の成分。
【請求項４】
前記Ｒ３は、ＣＨ２−ＣＨ２であり、
前記Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、ＣＨ３であることを特徴とする請求項３に記載の成分。
【請求項５】
前記Ｂは、天然型又は修飾型ピリミジン基であることを特徴とする請求項３又は４に記載の成分。
【請求項６】
前記Ｓ原子は、前記ヌクレオシドの２’炭素と結合していることを特徴とする請求項３〜５のうちのいずれか１項に記載の成分。
【請求項７】
前記式(II)に示す化合物において、前記ｘは０であることを特徴とする請求項３〜６のうちのいずれか１項に記載の成分。
【請求項８】
前記化合物は、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジン１、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(3-メチルブチル)チオウリジン２、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジン３、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-3'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジン４及び、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオシチジン５のうちから選択される化合物であることを特徴とする請求項７に記載の成分。
【請求項９】
前記式(II)に示す化合物において、前記ｘは１であることを特徴とする請求項３〜６のうちのいずれか１項に記載の成分。
【請求項１０】
前記化合物は、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジンスルホキシド６又は、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジンスルホキシド８であることを特徴とする請求項９に記載の成分。
【請求項１１】
前記式(II)に示す化合物において、前記ｘは２であることを特徴とする請求項３〜６のうちのいずれか１項に記載の成分。
【請求項１２】
前記化合物は、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジンスルホン７であることを特徴とする請求項１１に記載の成分。
【請求項１３】
前記ｘは、０であり、
前記Ｒ１は、ＳＲ２であり、
前記Ｒ２は、１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンであることを特徴とする請求項３に記載の成分。
【請求項１４】
前記Ｒ２は、オルト-ニトロフェニル基、パラ-ニトロフェニル基及びトリクロロメチル基のうちのいずれかであることを特徴とする請求項１３に記載の成分。
【請求項１５】
前記Ｂは、天然型又は修飾型ピリミジン基であることを特徴とする請求項１３又は１４に記載の成分。
【請求項１６】
前記Ｓ原子は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシリボースの2'炭素に結合していることを特徴とする請求項１３〜１５のうちのいずれか１項に記載の成分。
【請求項１７】
前記化合物は、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシチミジン-2'-イルトリクロロメチルジスルフィド１２、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イルトリクロロメチルジスルフィド１３、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシチミジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド１４、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシチミジン-2'-イル2-ニトロフェニルジスルフィド１５、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド１６及び、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル2-ニトロフェニルジスルフィド１７のうちから選択されることを特徴とする請求項１６に記載の成分。
【請求項１８】
式(III)に示す化合物において前記Ｒは、ＣＨ２-ＣＨ=ＣＨ２、Ｃ４Ｈ９、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２ＨＣｌ並びにオルト-ニトロフェニル基、パラ-ニトロフェニル基及びトリクロロメチル基のうちのいずれかであることを特徴とする請求項２に記載の成分。
【請求項１９】
前記Ｂは、天然型又は修飾型ピリミジン基であることを特徴とする請求項１８に記載の成分。
【請求項２０】
前記化合物は、
3'-デオキシチミジン-3'-イルアリルジスルフィド２０、
3'-デオキシチミジン-3'-イル2-ヒドロキシエチルジスルフィド２１、
3'-デオキシチミジン-3'-イルトリクロロメチルジスルフィド２２、
3'-デオキシチミジン-3'-イルブチルジスルフィド２４、
3'-デオキシチミジン-3'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド２５、
3'-デオキシチミジン-3'-イル2-ニトロフェニルジスルフィド２６、
3'-デオキシチミジン-3'-イル2-アミノエチルジスルフィドヒドロクロライド２７、
3'-デオキシチミジン-3'-イルヘキシルジスルフィド３１、
3'-デオキシチミジン-3'-イルオクチルジスルフィド３０、
3'-デオキシチミジン-3'-イル6-ヒドロキシヘキシルジスルフィド３２、
2',3'-デオキシシチジン-3'-イルメチルジスルフィド１９及び、
5-ブロモ-2',3'-ジデオキシウリジン-3'-イルメチルジスルフィド２３のうちから選択される化合物であることを特徴とする請求項１９に記載の成分。
【請求項２１】
以下から選択される化合物を治療活性本源として用いる用途：
【化１】
2010507637.tif 000043
式(II)に示す化合物において、Ｓ原子はヌクレオシドの２’の炭素又は３’の炭素と結合する化合物及び、
【化２】
2010507637.tif 000044
前記式(II)及び式(III)に示す化合物において、Ｂは天然型又は修飾型のプリン又はピリミジンヌクレオチド基であり、
ｘは０、１又は２であり、
Ｒ１及びＲは、１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである化合物。
【請求項２２】
前記化合物は、請求項３〜２０のうちのいずれか１項において定義される化合物であることを特徴とする請求項２１に記載の用途。
【請求項２３】
以下から選択される化合物を癌治療のための薬物を得るために用いる用途：
【化１】
2010507637.tif 000045
式(II)に示す化合物において、Ｓ原子はヌクレオシドの２’の炭素又は３’の炭素と結合する化合物及び、
【化２】
2010507637.tif 000046
前記式(II)及び式(III)に示す化合物において、Ｂは天然型又は修飾型のプリン又はピリミジンヌクレオチド基であり、
ｘは０、１又は２であり、
Ｒ１及びＲは、１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである化合物。
【請求項２４】
前記化合物は、請求項３〜１７のうちのいずれか１項において定義される化合物であることを特徴とする請求項２３に記載の用途。
【請求項２５】
前記化合物は、増殖抑制効果及び／又は細胞毒性効果を有することを特徴とする請求項２３又は２４に記載の用途。
【請求項２６】
以下から選択される化合物をウイルス治療薬を得るために用いる用途：
【化１】
2010507637.tif 000047
式(II)に示す化合物において、Ｓ原子はヌクレオシドの２’の炭素又は３’の炭素と結合する化合物及び、
【化２】
2010507637.tif 000048
前記式(II)及び式(III)に示す化合物において、Ｂは天然型又は修飾型のプリン又はピリミジンヌクレオチド基であり、
ｘは０、１又は２であり、
Ｒ１及びＲは、１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである化合物。
【請求項２７】
前記ウイルス治療は、ＨＩＶ１又はＨＩＶ２に対する治療であることを特徴とする請求項２６に記載の用途。
【請求項２８】
前記化合物は、請求項１８〜２０のうちのいずれか１項において定義された化合物であることを特徴とする請求項２６又は２７に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チオヌクレオシドと、チオヌクレオシドを医薬品に用いることとに関する。
【発明の概要】
【０００２】
本発明は、下記の式(II)及び式(III)に示す化合物のうちの少なくとも１つを活性本源として含む医薬成分からなる。
【０００３】
【化１】
2010507637.tif 000003
【０００４】
式(II)において、Ｓ原子は、ヌクレオシドの２’炭素又は３’炭素と結合している。
【０００５】
【化２】
2010507637.tif 000004
【０００６】
式(II)及び式(III)において、Ｂは天然型又は修飾型のプリン又はピリミジンヌクレオチド基を表し、ｘは０、１又は２である。また、Ｒ１及びＲは、１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである。また、医薬成分は少なくとも１つの医薬品として容認される賦形剤を構成している。
【０００７】
本発明は、前記の化合物の用途にも関し、治療活性本源又は医薬としての用途について、以下に詳細に述べる。ここで、医薬とは、特に、本発明による医薬成分を組み入れることを意味する。
【０００８】
本発明は、特にＨＩＶ１及びＨＩＶ２に対するウイルス治療並びに癌治療の成分として用いる。
【０００９】
式(II)に対応する化合物は、以下の特徴のそれぞれを単独に満たす又は複数を満たす有利な化合物である。
【００１０】
Ｒ１は、Ｒ３−Ｓｉ（Ｒ４）（Ｒ５）（Ｒ６）であって、Ｒ３は２つの炭素原子を含む炭化水素鎖であり、該炭化水素鎖は不飽和である且つ／又は置換され得る。Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、同一又は異種であり、それぞれ独立した炭化水素基である。ここで、Ｒ３は、ＣＨ２−ＣＨ２であり、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、ＣＨ３であることが好ましい。
【００１１】
Ｂは、天然型又は修飾型ピリミジン基から選択されるヌクレオチド基である。ここで、修飾型は、当業者が文献等により、合成する方法及び使用方法を知ることができ、特に、天然型の類似体のようなものであり（例えば、Frontiers in Nucleosides and Nucleic Acids, 編集者 R.F. Schinazi及びD.C.Liotta, IHL出版, 2004, pp.3-55を参照）、例えば、5-ブロモウラシルである。
【００１２】
本発明に係る優先的な化合物は、上記の特徴を全て満たし、また、Ｓ原子はヌクレオシドの２’炭素と結合し、ｘは０である。このような化合物は、特に、下記から選択される化合物である。
【００１３】
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジン１、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジン３及び2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオシチジン５。
【００１４】
他に、本発明に係る有利な化合物は、上記の特徴を全て満たし、また、Ｓ原子はヌクレオシドの３’炭素と結合し、ｘは０である。このような化合物の好ましい例は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-3'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジン４である。
【００１５】
他に、本発明に係る優先的な化合物は、上記の特徴を全て満たし、また、Ｓ原子はヌクレオシドの２’炭素と結合し、ｘは１である。このような化合物は、特に、下記から選択される化合物である。
【００１６】
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジンスルホキシド６及び2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジンスルホキシド８。
【００１７】
さらに、他に、本発明に係る有利な化合物は、上記の特徴を全て満たし、また、Ｓ原子はヌクレオシドの２’炭素と結合し、ｘは２である。この好ましい化合物は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジンスルホン７である。
【００１８】
他に、本発明に係る有利な化合物は、式(II)の非シリル化合物であり、Ｓ原子はヌクレオシドの２’炭素と結合し、ｘは０であり、Ｒ１はアルキル基である。このような化合物は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(3-メチルブチル)チオウリジン２及び2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-メチルチオウリジン３１である。
【００１９】
化学式又は番号により同定される化合物の構造は、明細書の最後に示し、化合物の特性は発明を実施するための形態において示す。
【００２０】
式(II)に対応する他の化合物は、下記の特徴のうちの１つ又は複数を満たす有利な化合物である。
【００２１】
ｘは０であり、Ｒ１はＳＲ２であり、Ｒ２は１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである。ここで、Ｒ２はオルト-ニトロフェニル基、パラ-ニトロフェニル基及びトリクロロメチル基のうちのいずれかであることが有利である。
【００２２】
Ｂは天然型又は修飾型ピリミジン基から選択されるヌクレオチド基である。
【００２３】
Ｓ原子は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシリボースの2'炭素に結合している場合、以下から選択される化合物であることが好ましい。
【００２４】
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシチミジン-2'-イルトリクロロメチルジスルフィド１２、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イルトリクロロメチルジスルフィド１３、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシチミジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド１４、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシチミジン-2'-イル2-ニトロフェニルジスルフィド１５、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド１６及び、
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル2-ニトロフェニルジスルフィド１７。
【００２５】
上記の式(II)に対応する化合物は、増殖抑制効果及び／又は細胞毒性効果を有するため、癌の治療に用いることができる可能性がある。従って、本発明によると、式(II)に対応する化合物は癌治療の医薬を得るために有利に用いられると考えられる。
【００２６】
式(III)に対応する本発明の化合物は、下記の特徴のうちの１つ又は複数を満たす有利な化合物である。
【００２７】
Ｂは、上記に定義するように天然型又は修飾型ピリミジン基である。
【００２８】
Ｒは、ＣＨ２-ＣＨ=ＣＨ２、例えばＣＨ３、Ｃ４Ｈ９又はＣ８Ｈ１７等のアルキル基、例えばＣＨ２ＣＨ２ＯＨ又はＣ６ＨＨ１２ＯＨ等のヒドロキシアルキル基、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２ＨＣｌ並びにオルト-ニトロフェニル基、パラ-ニトロフェニル基及びトリクロロメチル基のうちから選択されることが好ましい。
【００２９】
このような化合物は、下記の化合物から選択されてもよい。
【００３０】
2',3'-デオキシシチジン-3'-イルメチルジスルフィド１９
3'-デオキシチミジン-3'-イルアリルジスルフィド２０、
3'-デオキシチミジン-3'-イル2-ヒドロキシエチルジスルフィド２１、
3'-デオキシチミジン-3'-イルトリクロロメチルジスルフィド２２、
5-ブロモ-2',3'-ジデオキシウリジン-3'-イルメチルジスルフィド２３
3'-デオキシチミジン-3'-イルブチルジスルフィド２４、
3'-デオキシチミジン-3'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド２５、
3'-デオキシチミジン-3'-イル2-ニトロフェニルジスルフィド２６、
3'-デオキシチミジン-3'-イル2-アミノエチルジスルフィドヒドロクロライド２７、
3'-デオキシチミジン-3'-イルオクチルジスルフィド２８、
3'-デオキシチミジン-3'-イルヘキシルジスルフィド２９及び、
3'-デオキシチミジン-3'-イル6-ヒドロキシヘキシルジスルフィド３０。
【００３１】
上記の式(III)に対応する化合物は、特にＨＩＶ１又はＨＩＶ２によるウイルス感染の治療に適用できる。本発明によると、式(III)に対応する化合物は、ＨＩＶ１又はＨＩＶ２の治療のようなウイルス治療の医薬を得るために有利に用いられると考えられる。
【００３２】
本発明はまた下記の式(I)に対応する新規のヌクレオシドジスルフィド化合物に関する。
【００３３】
【化３】
2010507637.tif 000005
【００３４】
ここで、Ｂはチミンであり、ＲはＣＨ２-ＣＨ=ＣＨ２、Ｃ４Ｈ９、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２ＨＣｌから選択される。
【００３５】
また、上記の式(I)において、Ｂはウラシル、シトシン及び5-ブロモウラシルから選択されるヌクレオチド基であり、ＲはＣＨ３であるジスルフィド化合物も含む。
【００３６】
これらの化合物の数種は、１９、２０、２１、２３、２４及び２７として明細書の最後に示されている。
【００３７】
本発明はまた下記の式(IV)に対応する化合物を調製する工程に関する。
【００３８】
【化４】
2010507637.tif 000006
【００３９】
ここで、Ｂ、ｘ及びＲ１は、先に式(II)において定義したものである。
【００４０】
この工程によると、
上記の式(II)に対応する化合物が供給され、この化合物において、Ｒ１はＲ３−Ｓｉ（Ｒ４）（Ｒ５）（Ｒ６）であって、ここで、Ｒ３は２つの炭素原子の炭化水素鎖であり、これは、不飽和である且つ／又は置換されえて、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なり、それぞれ独立した炭化水素基であり、この化合物は、ジスルフィドを得るために、ＲＳＸで示される化合物と反応し、ここでＸはハロゲンであり、Ｒは１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンである。
【００４１】
ジスルフィドはスルフィドに還元され、また、得られたスルフィドは、Ｒ’Ｘで示される化合物と反応し、ここで、Ｒ’は１つ若しくはそれ以上の原子及び／又は１つ若しくはそれ以上の原子を含む基と置換及び／又は中断され得る炭素基若しくは炭化水素の分子残基であって、ここでの原子とはＮ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、Ｓｉ及びＸから選択され、該Ｘは、ハロゲンであり、また、Ｒ’ＸにおけるＸもハロゲンである。
【００４２】
明細書の発明を実施するための形態において示している、本発明によるこの工程の合成模式図を、下記に示す。ここで、Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３である。
【００４３】
【化５】
2010507637.tif 000007
【００４４】
本発明のもう１つの主題は、明細書の発明を実施するための形態において記載の下記の合成模式図に従って、硫黄を含むアミノ酸のようなジスルフィド化合物を得るための一般の合成方法である。
【００４５】
【化６】
2010507637.tif 000008
【００４６】
当業者が上記の化合物及びその医薬特性を得るために実施できるように、合成工程を記載した例を挙げて、本発明について以下に詳細に記載する。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
I−本発明の化合物を得るための工程
後述の合成において、開始試薬として働く飽和シリルスルフィド化合物は、当業者には得るための工程が知られているため、その調整法は記載しない（C.Chambert等, J.Org.Chem.,2000,65,249; Stamm, J.Org.Chem.,1963,3264; Mahadevan等, Synth.Commun.,1994,3099; C.Chambert等, J.Org.Chem.,2002,67,1898-1904）。
【００４８】
2',3'-ジデオキシ-2'-(3-メチルブチル)チオウリジン２
【００４９】
【化７】
2010507637.tif 000009
【００５０】
アルゴン存在下で０℃に維持した状態において、無水ピリジン（２０ｍＬ）に2'-デオキシ-2'-(3'-メチルブチル)チオウリジン３３（０．５ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を含む溶液に、ジメトキシトリチルクロライド（１．０２３ｇ、３ｍｍｏｌ）及び4-(ジメチルアミノ)ピリジン（ＤＭＡＰ）（１８．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加える。この混合液を１５分間撹拌し、その後は室温までは温めてもよく、さらに５時間撹拌する。その後、溶媒を蒸発させ、トルエンと共に蒸発させる。得られた残留物を、ジクロロメタン／メタノール-２％トリチルアミンの混合液に入れ、シリカゲルを用い、９８／２のジクロロメタン／メタノール-２％トリチルアミンの混合液を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。
【００５１】
得られたトリチル生成物を、アルゴン存在下において０℃で１５分間、無水ピリジン（７ｍＬ）に溶解する。さらにメシルクロライド（０．１５ｍＬ、１．９２ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を１５時間撹拌する。さらにその混合液に水（５ｍＬ）を加え０℃で３０分間撹拌することにより中和する。溶媒は蒸発され、トルエンと共に蒸発される。
【００５２】
トリシルメシル化合物に、２％ジクロロ酢酸（ＤＣＡ）を含むジクロロメタン（２５ｍＬ）を１５分間処理する。その混合液に５％ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）を加えることにより中和し、残留物をジクロロメタンにより洗浄する。混合性の有機層を硫酸ナトリウム存在下において脱水し、その後、脱トリチル化したメシル生成物（０．２４５ｇ、０．６ｍｍｏｌ、４０％）を生じさせるために濃縮する。
【００５３】
この生成物をアルゴン存在下において、アセトニトリル（１．５ｍＬ）に１５分間溶解し、さらにＫ２ＣＯ３（０．０６ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加える。この混合液を６０℃で１９時間撹拌する。その後、無機塩を除去するためにろ過し、メタノールによりリンスする。ろ液を蒸発乾固させ、得られた生成物をシリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、2',3'-ジデオキシ-2'-(3-メチルブチル)チオウリジン２が白色の結晶として得られる（０．０８２ｇ、０．２６ｍｍｏｌ、７６．５％）。
【００５４】
融点：１３１℃〜１３３℃
１Ｈ ＮＭＲ(200MHz,CDCl3)δ8.76(1 H,s,3-H);7.58(1 H,d,J=8.1Hz,6-H);6.9(1 H,dd,J=1.5Hz,J=3.2Hz,1'-H);5.81(1 H,t,J=1.6Hz,3'-H);5.68(1 H,d,J=8.1Hz,5-H);4.95(1 H,m,4'-H);3.91(1 H,dd,J=2.6Hz,J=12.6Hz,5'-H);3.73(1 H,dd,J=3.2Hz,J=12.52Hz,5'-H);2.81(2 H,m,S-CH2);1.73(1 H,m,CH-(CH3)2);1.55(2 H,m,(CH2-CH));0.93(6 H,d,J=6.4Hz,(CH3-CH))
１３Ｃ ＮＭＲ(50MHz,CDCl3)δ163.27(CO);150.64(CO);141.0;134.9;123.68;102.67;90.33;87.37;63.54(5'-CH2);37.23(S-CH2);30.46(CH2-CH);27.5;22.18((CH3)2)
ＭＳ  (FAB+,グリセロール)M/Z313[M+H]+。
【００５５】
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジンスルホキシド６
【００５６】
【化８】
2010507637.tif 000010
【００５７】
この化合物は、下記に示す合成により、2'-デオキシ-2'-(2-(トリメチルシリル)-エチル)チオチミジン３７から調製される。
【００５８】
【化９】
2010507637.tif 000011
【００５９】
2,2'-アンヒドロチミジン（５ｇ、２２ｍｍｏｌ）と無水炭酸カリウム（１１ｇ、７９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１１０ｍＬ）に懸濁した液に2-(トリメチルシリル)エタンチオール（３．５ｇ、２６ｍｍｏｌ）を加える。その溶液をアルゴン存在下において１２０℃で３時間撹拌する。これをろ過し、ジクロロメタンを用いて無機塩をリンスした後に、溶媒を減圧下において蒸発させ、黄色の油状物を生じさせる。この残留物をシリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色固体の硫化物である３７が得られる（６．９ｇ、１９ｍｍｏｌ、８８％）。
【００６０】
融点：５８℃〜６０℃
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ8.73(1H,s,NH);7.25(1 H,d,J=8.0Hz,6-H);5.46(1 H,d,J=9.2Hz,1'-H);4.36(1 H,m,3'-H);4.24(1 H,m,4'-H);3.99(2 H,m,2'H+5'-H);3.81(1 H,m,5'-H);2.60(2 H,m,S-CH2);1.96(3 H,s,5-CH3);0.85(2 H,m,CH2Si);-0.02(9 H,s,Si(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ163.4(C2);150.5(C4);138.87(C6);111.4(C5);93.3(C1');86.6(C4');71.5(C3');63.1(5'-CH2);52.8(C2');28.4(S-CH2);18.1(CH2-Si);12.4(CH3);-1.8(Si(CH3)3)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン)m/z375[M+H]+,392[M+H+NH3]+。
【００６１】
メタノール（５ｍＬ）に2'-デオキシ-2'-(2-(トリメチルシリル)エチル)チオチミジン３７（０．０５ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）が溶解している溶液に、オキソンテトラブチルアンモニウム塩（１００ｍｇ、０．５５６ｍｍｏｌ）を３０分毎に２５ｍｇずつ（３７の０．５倍量ずつ）加える（ＴＬＣによる分析）。この混合液を１５時間撹拌し、その後、蒸発乾固させ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色粉末型の不飽和スルフォキシド６が得られる（３０ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、５８％）。
【００６２】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ8.69(1 H,s,NH);7.89(1 H,s,6-H);6.90(1 H,m,1'-H);6.89(1 H,m,3'-H);5.11(1 H,m,4'-H);3.99(2 H,m,5'-H×2);3.07-2.76(2 H,m,S-CH2);1.88(3 H,s,5-CH3);1.10-0.94(2 H,m,CH2Si);0.02(9 H,s,Si(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ163.7(C2);150.5(C4);140.1(C2');137.8(C3');135.8(C6);111.7(C5);87.6(C1'+C4');62.9(5'-CH2);48.1(S-CH2);12.4(CH3);6.7(CH2-Si);-1.9(Si(CH3)3)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン):m/z373[M+H]+。
【００６３】
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオチミジンスルホン７
【００６４】
【化１０】
2010507637.tif 000012
【００６５】
無水ジクロロメタン（１ｍＬ）に2'-デオキシ-2'-(2'-(トリメチルシリル)エチル)チオチミジン３７（０．０２ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）が含まれている溶液に、メタクロロペル安息香酸（ｍＣＰＢＡ）（１５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を、アルゴン存在下において１５時間撹拌し、その後、乾燥するように蒸発させ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色粉末型の不飽和スルホン７が得られる（１５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、６８％）。
【００６６】
融点：７８℃〜８０℃
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ7.60(1 H,s,6-H);7.18(1 H,m,1'-H);6.18(1 H,m,3'-H);5.08(1 H,m,4'-H);3.97(2 H,m,5'-H×2);3.03(2 H,m,S-CH2);1.88(3 H,s,5-CH3);0.98-0.87(2 H,m,CH2Si);0.02(9 H,s,Si(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ162.5(C2);150.9(C4);145.5(C2');138.8(C3');135.8(C6);110.5(C5);91.4(C1');85.8(C4');62.8(5'-CH2);50.9(S-CH2);13.1(CH3);8.5(CH2-Si);-2.1(Si(CH3)3)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン):m/z389[M+H]+。
【００６７】
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジンスルフォキシド８
【００６８】
【化１１】
2010507637.tif 000013
【００６９】
この化合物は、2'-デオキシ-2'-(2-(トリメチルシリル)エチル)-チオウリジン３７から調製される。
【００７０】
メタノール（５ｍＬ）に2'-デオキシ-2'-(2-(トリメチルシリル)エチル)-チオウリジン３７（０．１ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）が溶解している溶液にオキソンテトラブチルアンモニウム塩（２０８ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を３０分毎に５２ｍｇずつ（３７の０．５倍量ずつ）加える（ＴＬＣによる分析）。この混合液を１５時間撹拌し、その後、蒸発乾固させ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色粉末型の不飽和スルフォキシド８が得られる（７０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、６４％）。
【００７１】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ8.19(1 H,d,J=8.0Hz,6-H);6.87(1 H,m,3'-H);6.83(1 H,m,1'-H);5.77(1 H,d,J=8.0Hz,5-H);5.12(1 H,m,4'-H);3.97(2 H,m,5'-H×2);3.07-2.84(2 H,m,S-CH2);1.05-0.77(2 H,m,CH2Si);0.08(9 H,s,Si(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ163.5(C2);150.5(C4);143.9(C6);140.4(C2');103.9(C3');103.0(C5);87.9.(C1');87.7(C4');62.7(5'-CH2);53.4(S-CH2);6.6(CH2-Si);-1.9(Si(CH3)3)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン):m/z352[M+H]+。
【００７２】
2',3'-ジデオキシシチジン-3'-イルメチルジスルフィド１９
【００７３】
【化１２】
2010507637.tif 000014
【００７４】
無水ＴＨＦ（２ｍＬ）に2',3'-ジデオキシ-3'-(2-トリメチルシリル)エチルチオシチジン（０．０５ｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）及びメチルジスルフィド（３２０μＬ、３．５５ｍｍｏｌ）が溶解している溶液にジメチル(チオメチル)スルホニウムテトラフルオロボレート（３６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を加える。この混合液をアルゴン存在下において４８時間撹拌し、その後、炭酸水素ナトリウム溶液（１０％、１００μＬ）を加える。蒸発乾固させた後に、得られた残留物を最小量の水に溶解し、Ｃ１８カートリッジ（１ｇ）を用い、水／メタノール混合液（９／１）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。蒸発乾固させ、それを最小量の溶出液に入れ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９０／１０）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色泡沫状のメチルジスルフィド１９が得られる（３７ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ、９２％）。
【００７５】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,MeOD)δ8.17(1 H,d,J=7.6Hz,6-H);6.15(1 H,dd,J=6.8Hz,J=4Hz,1'-H);5.92(1 H,d,J=7.6Hz,5-H);4.03(1 H,m,4'-H);3.95-3.82(2 H,m,5'-H×2);3.53(1 H,m,3'-H);2.67(1 H,m,2'-H);2.42(1 H,m,2'-H);2.48(3 H,s,CH3-S)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,MeOD)δ163.4(C4);150.2(C2);143.7(C6);96.4(C5);88.0(C1');87.9(C4');62.5(5'-CH2);46.8(C3');40.9(2'-CH2);25.3(S-CH3)
ＭＳ  (FAB+,グリセロール):m/z290[M+H]+;312[M+Na]+。
【００７６】
5'-ブロモ-2',3'-ジデオキシウリジン-3'-イルメチルジスルフィド２３
【００７７】
【化１３】
2010507637.tif 000015
【００７８】
この化合物は、下記に示す合成により、2',3'-ジデオキシ-3'-(2-(トリメチルシリル)-エチル)チオウリジン３８から調製される。
【００７９】
【化１４】
2010507637.tif 000016
【００８０】
無水ＤＭＦ（８ｍＬ）に水素化ナトリウムを懸濁した液（６０％、２３４ｍｇ、７．０２ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（８ｍＬ）に2-(トリメチルシリル)エタンチオール（９８０μＬ、７．０２ｍｍｏｌ）が溶解した溶液を加える。この混合液をアルゴン存在下において１５分間撹拌し、誘導体５１（３ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）を加える。９０℃でアルゴン存在下において２４時間後に、未反応の水素化ナトリウムを３ｍＬのメタノールにより中和し、減圧下において溶媒を蒸発させる。この残留物をジクロロメタン（１００ｍＬ）に入れ、その溶液を、ＮａＨ２ＰＯ４溶液（１０％、１０ｍＬ）により中和させ、水（１００ｍＬ）により１度洗浄し、硫酸ナトリウムにより脱水し、さらに蒸発乾固させる。残留物をジクロロメタンに入れ、シリカゲルを用い、１％トリエチエルアミンを含むジクロロメタン／エチルアセテート混合液（８／２）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、黄色泡沫状のスルフィドが得られる。
【００８１】
得られた淡黄色の泡沫状物質を、ジクロロメタンを溶媒としたジクロロ酢酸溶液（２％、８０ｍＬ）に溶解する。得られた橙色の溶液をアルゴン存在下において４時間撹拌し、炭酸水素ナトリウム（５％、３０ｍＬ）を用いて中和する。水層をジクロロメタン（５０ｍＬ）を用いて抽出し、有機層を混合し、硫酸ナトリウムにより脱水し、さらに蒸発乾固させる。この残留物をジクロロメタンに入れ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／エチルアセテート混合液（６／４）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色固体状のスルフィド３８が得られる（１．０６ｇ、３．０８ｍｍｏｌ、６％（２段階））。
【００８２】
融点：１４８℃
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ9.47(1 H,s,NH);7.82(1 H,d,J=8.4Hz,6-H);6.12(1 H,dd,J=7.0Hz,J=3.6Hz,1'-H);5.73(1 H,d,J=8.4Hz,5-H);4.05(1 H,m,3'-H);3.85(2 H,m,5'-H×2);3.47(1 H,m,4'-H);2.64-2.50(4 H,m,2'-H×2,S-CH2);0.84(2 H,m,CH2-Si);-0.02(9 H,s,Si(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ163.9(CO);150.4(CO);140.9;101.9;86.2;85.7;61.0(5'-CH2);40.7;40.1(2'-CH2);27.5(S-CH2);17.4(CH2-Si);-1.8(Si(CH3)3)
ＭＳ  (FAB+,グリセロール):m/z=345[M+H]+
Ｃ１４Ｈ２４Ｎ２Ｏ４Ｓｓｉ０．３３Ｈ２Ｏの微量分析：
計算値  Ｃ４７．９７；Ｈ７．０９；Ｎ７．９９；Ｓ９．１５
測定値  Ｃ４７．８２；Ｈ７．１３；Ｎ７．７９；Ｓ９．６６。
【００８３】
無水ジクロロメタン（４ｍＬ）にシリルヌクレオシド３８（０．１５０ｇ、０．４４ｍｍｏｌが溶解してる溶液に、シアノゲンブロマイド（０．２３０ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を加える。この混合液をアルゴン存在下において、４０℃で９６時間撹拌する。ベージュ色の沈殿物として対称ジスルフィドが徐々に現れ、第２の生成物は溶液中に残る。リン酸緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、２ｍＬ）を用いて、３０分間加水分解を行った後に、溶媒を蒸発乾固させる。得られた残留物を最小量のジクロロメタンに入れ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／エチルアセテート混合液（９８／２その後９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。対称ジスルフィドが白色粉末として得られ（２７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、２１％）、望ましい下記のブロモシリル誘導体３９が白色粉末として得られる（４２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、２５％）。
【００８４】
【化１５】
2010507637.tif 000017
【００８５】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ8.41(1 H,s,6-H);6.09(1 H,dd,J=6.7Hz,J=3.2Hz,1'-H);4.14(1 H,s,5'-H);4.93(2 H,m,4'-H及び5'-H);3.95(1 H,m,3'-H);2.66(2 H,m,S-CH2);2.60-2.44(2 H,m,2'-H×2);1.28(1 H,t,5'-OH);0.88(2 H,m,CH2-Si);-0.02(9 H,s,Si(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ158.8(C2);149.3(C4);140.4(C6);96.1(C5);86.3(C1');86.2(C4');60.8(5'-CH2);41.2(2'-CH2);39.6(C3');27.6(S-CH2);17.5(CH2-Si);-1.5(Si(CH3)3)
ＭＳ  (FAB+,NBA):m/z=423[M+H]+。
【００８６】
無水ＴＨＦ（５００μＬ）に、5-ブロモ-2',3'-ジデオキシ-3'-(2-トリメチルシリル)エチルチオウリジン３９（０．０２ｇ、０．００５ｍｍｏｌ）及びメチルジスルフィド（１７０μＬ、１．９０ｍｍｏｌ）が溶解している溶液に、ジメチル（チオメチル）スルホニウムテトラフルオロボレート（２２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）を加える。この混合液を、アルゴン存在下において２４時間撹拌し、炭酸水素ナトリウム溶液（１０％、１００μＬ）を加える。蒸発乾固させた後に、得られた残留物を最小量の水に溶解し、Ｃ１８カートリッジ（１ｇ）を用い、水／メタノール混合液（９／１）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。続いて、蒸発乾固させた後に、最小量の溶出液に入れ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色の泡沫状のメチルジスルフィド２３が得られる（１１ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ、６５％）。
【００８７】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,MeOD)δ8.67(1 H,s,6-H);6.11(1 H,dd,J=6.8Hz,J=3.5Hz,1'-H);4.01(2 H,m,4'-H及び5'-H);3.84(1 H,m,5'-H);3.62(1 H,m,3'-H);2.64-2.52(2 H,m,2'-H×2);2.48(3 H,s,S-CH3)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,MeOD)δ160.3(C2);150.1(C4);140.7(C6);95.2(C5);86.0(C4');85.3(C1');59.7(5'-CH2);44.1(C3');39.5(2'-CH2);23.2(S-CH3)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン):m/z=369[M+H]+。
【００８８】
2'-デオキシ-2'-(3-メチルブチル)チオウリジン３３
【００８９】
【化１６】
2010507637.tif 000018
【００９０】
ジメチルホルムアルデヒドＤＭＦ（１１ｍＬ）に、2,2'-無水ウリジン（０．５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び無水炭酸カリウム（１．１ｇ、７．９ｍｍｏｌ）を懸濁した液に、3-メチルブタンチオール（０．２７１ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を加える。この溶液を、アルゴン存在下において、１２０℃で５時間撹拌する。ろ過を行い、ジクロロメタンを用いて無機塩をリンスした後に、減圧下において溶媒を蒸発させることにより、黄色の油状物が得られる。この残留物をジクロロメタン／メタノール混合液（９８／２）に入れ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色固体のスルフィド３３が得られる（０．３８７ｇ、１．１７ｍｍｏｌ、５４％）。
【００９１】
融点：６６℃〜６７℃
１Ｈ ＮＭＲ(200MHz,DMSO-d6)δ11.33(1 H,s,3-H);7.86(1 H,d,J=8.1Hz,6-H);6.0(1 H,d,J=8.8Hz,1'-H);5.69(1 H,d,J=8.1Hz,5-H);5.56(1 H,d,J=5.3Hz,3'-OH);5.06(1 H,t,J=5.1Hz,5'-OH);4.17(1 H,m,3'-H);3.86(1 H,m,4'-H);3.55(2 H,m,5'-H);3.4(1 H,dd,J=5.2Hz,J=8.75Hz,2'-H);2.4(2 H,m,S-CH2);1.55(1 H,m,CH-(CH3)2);1.3(2 H,m,(CH2-CH));0.7(6 H,m,(CH3-CH))
１３Ｃ ＮＭＲ(50MHz,DMSO-d6)δ162.74(CO);150.6(CO);140.3;102.3;87.67;86.5;72.08;61.35(5'-CH2);51.7;38.5(S-CH2);28.4(CH2-CH);26.7;21.9((CH3)2)
ＭＳ  (FAB+,グリセロール):m/z=331[M+H]+,219[M-ウラシル]+。
【００９２】
II−本発明の化合物の特徴
本発明の化合物の生物学的特徴及びその特徴による医薬への適用について下記に概説する。
【００９３】
これらの特徴は、癌治療に用いるための増殖抑制効果及び細胞毒性効果を示す試験並びに抗ウイルス効果を示す試験により証明される。
【００９４】
抗ガンへの適用
１．試験の詳細
１．１．増殖抑制効果
被検化合物に対し以下の２つの試験を行う。第１の試験は、リボヌクレオチド還元酵素に対する化合物の影響について測定する。第２の試験は、トリチウム標識をしたチミジンの組み込みに対する化合物の影響について測定する。
【００９５】
１．１．１．2'-デオキシリボヌクレオチド（ｄＮＴＰ）の細胞内濃度の測定
この試験を行うために採用したプロトコール（Roy,B.、Beuneu,C.、Rpux,P.、Buc,H.、Lemaire,G.、Lepoivre,M. 著。ポリメラーゼアッセイを用いるピリミジン又はプリンデオキシリボヌクレオシドトリホスファターゼの同時測定。Anal.BioChem.,1999,269,403-409）は、被検化合物の存在下において、ＣＥＭ−ＳＳヒトリンパ腫細胞を培養することから構成される。２４時間培養した後にｄＮＴＰ、特にｄＡＴＰの濃度を測定する。ｄＡＴＰは、ヒドロキシ尿素のような標準のリボヌクレオチド還元酵素阻害剤を用いる試験において、最も濃度が減少するため、コントロールとして用いられるヌクレオシド三リン酸である。
【００９６】
定量化は、トリパンブルーにより染色した後に数えられた生細胞の数又は細胞の最初の数（約２００万）に関係する。また、コントロールに対する割合として測定する。
【００９７】
１．１．２．トリチウム標識をしたチミジンの組み込み試験
これらのテストは、Ｌ１２１０細胞株（マウスリンパ腫）を用いて、公表されたプロトコール（Lepoivre M.,Flaman J.-M.,Bobe P.,Lemaire G.,Henry Y. J.Biol.Chem.,1994,269,21891-21897)に従って行う。細胞をウェルに播種し（１ウェルに１万個）、７２時間培養した後、［３Ｈ］チミジン及び被検化合物を培養培地に加える。８時間培養した後、他の細胞構成物からＤＮＡが分離され、組み込まれた標識チミジンの量は定量化され、コントロール（化合物が存在しない場合）と比較される。
【００９８】
１．２．細胞毒性効果
化合物の細胞毒性効果は、ヒトＣＥＭ細胞及びＭＣＦ−７ヒト乳ガン細胞を用いて、癌の化学療法に用いられる抗癌ヌクレオシドであるゲムシタビンに抵抗性又は非抵抗性の細胞を作成し、これらを用いて試験する。
【００９９】
細胞毒性（ＣＣ５０）は、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）が不溶性の紫色のホルマザンに還元する反応を測定することにより評価する。この試験を行うために、９６ウェルプレートにおいて、１ウェル毎に１０万個ずつの細胞（ヒトＣＥＭ−ＳＳ又はヒトＭＣＦ−７）を１００μＬの培養培地と共に播種する。２４時間後に、被検化合物を加え、さらに４８時間から７２時間培養する。その後、ＰＢＳに溶解した５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴを２０μＬ加える。その３時間後に、ＤＭＦ／酢酸／ＨＣｌ／ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を１００μＬ加える。３７℃で３時間培養した後、ホルマザンの吸光度を波長５９０ｎｍにおいて測定し、化合物を処理しない場合の吸光度と比較する。
【０１００】
２．試験結果
２．１．増殖抑制効果
２．１．１．2'-デオキシリボヌクレオチド（ｄＮＴＰ）の細胞内濃度の測定
ヌクレオシド１について下記の条件により試験を行った。
【０１０１】
ＤＮＡ合成に必要な2'-デオキシヌクレオシド5'三リン酸（ｄＮＴＰ）の濃度における、５０μＭの化合物１の効果は、２４時間後のｄＮＴＰ濃度の測定値から算出され、１００万個の細胞に対するｄＮＴＰ（ｐｍｏｌ）の量として定量される。データは、カウントした数値の４回の平均を用いたコントロールに対する割合として表され、抗癌剤であるヒドロキシ尿素（ＨＵ）を６３μＭの濃度で用いて試験した場合と比較される。
【０１０２】
下記の［表１］に示すように、化合物１は、ＤＮＡ合成に必要なヌクレオシド三リン酸の濃度を顕著に減少させることにより、Ｔリンパ腫細胞ＣＥＭ／ＳＳの増殖抑制効果を証明した。
【０１０３】
【表１】
2010507637.tif 000019
【０１０４】
２．１．２．コントロールに対するＬ１２１０細胞のトリチウム標識をしたチミジンの組み込みの減少
組み込まれたトリチウム標識をしたチミジンの濃度において、化合物１の５０μＭ及び２００μＭを処理したそれぞれの効果を、コントロールに対する割合として表す。
【０１０５】
その結果を［表２］に示す。
【０１０６】
【表２】
2010507637.tif 000020
【０１０７】
トリチウム標識をしたチミジンがＤＮＡに組み込まれることに対する阻害（化合物１の５０μＭ及び２００μＭを処理することによりそれぞれ３８％及び８６％の減少）は、化合物１の存在により認められるため、化合物１は、ＤＮＡ合成を阻害し、細胞増殖を阻害する。
【０１０８】
２．２．細胞毒性効果
２．２．１．式(II)のＲ１がＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３である化合物
化合物１及び３〜８は前記の式(II)のＲ１がＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３である化合物であり、非シリル化合物に対応する化合物２は式(II)に対応し、Ｒ１はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である。これらの化合物を用いてシリコンの影響の可能性について試験した。これらの化合物において、ヒトＣＥＭ細胞と、癌の化学療法に用いられるヌクレオシドであるゲムシタビンに抵抗性のＭＣＭ−７乳癌細部（ＭＣＭ−７＊）又は非抵抗性のＭＣＭ−７乳癌細部（ＭＣＭ−７）とに対する細胞毒性について試験した。
【０１０９】
その結果を［表３］に示す。
【０１１０】
【表３】
2010507637.tif 000021
【０１１１】
２．２．２．式(II)に示すｘが０で且つＲ１がＳＲ２であるジスルフィド化合物
上記の化学式に対応する不飽和ジスルフィド化合物１１、１２及び１３は、ヒトＣＥＭ細胞株及びヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７に対し細胞毒性を示し、下記の［表４］に結果を示す。
【０１１２】
【表４】
2010507637.tif 000022
【０１１３】
上記の式(II)に対応する不飽和ジスルフィド化合物１４、１５、１６及び１７は、ヒトＣＥＭ Ｔ４リンパ細胞、ヒトＭｏｌｔ４／Ｃ８細胞、マウス白血病細胞（Ｌ１２１０）及びマウス乳癌細胞（ＦＭ３Ａ）に対し細胞毒性を示し、下記の［表５］に結果を示す。
【０１１４】
ヒトＴ４−リンパ細胞ＣＥＭ及びＭｏｌｔ４／Ｃ８細胞、マウス白血病細胞（Ｌ１２１０）並びにマウス乳癌細胞（ＦＭ３Ａ）
【０１１５】
【表５】
2010507637.tif 000023
【０１１６】
２．２．３．式(I)の飽和ジスルフィド化合物
上記の式(I)に対応するジスルフィド化合物１８、１９、２０、２１、２２及び２３は、ＣＥＭ細胞に対して細胞毒性効果を示し、その結果を下記の［表６］に示す。
【０１１７】
【表６】
2010507637.tif 000024
【０１１８】
上述のジスルフィド化合物１８、２０、２１及び２２並びにジスルフィド化合物２４、２５、２６及び２７は、Ｌ１２１０／０、ＦＭ３Ａ／０、Ｍｏｌｔ４／Ｃ８、ＣＥＭ及びＨｅＬａ細胞に対して、細胞毒性効果を示し、その結果を［表７］に示す。
【０１１９】
【表７】
2010507637.tif 000025
【０１２０】
細胞毒性効果は、ジスルフィドの側鎖の性質及び細胞株に依存することが認められる。
【０１２１】
抗ウイルス性
１．試験の詳細
本評価試験は、Roy,B.、Chambert,S.、Lepoivre,M.、Aubertin,A.-M.、Balzarini,J.、Decout,J.-L.著、デオキシリボヌクレオシド2'-又は3'-混合ジスルフィド：リボヌクレオチド還元酵素を標的にする且つ／又はＨＩＶ逆転写の阻害をするプロドラッグ、J.Med.Chem.2003,46,2565-2568に示されている。
【０１２２】
毒性及び抗ウイルス活性は、異なる濃度において測定され、濃度の機能として転化することにより評価を可能とする。
【０１２３】
被検化合物の濃度の機能としてホルマザンの５４０ｎｍの吸光度の変化から、それぞれの被検化合物において、細胞の５０％がウイルスの非存在下において死滅する濃度（ＣＣ５０）及び、
ウイルスの逆転写活性の５０％減少を引き起こす化合物の濃度（ＥＣ５０）により表す。この濃度は、「残存する逆転写酵素」活性（被検化合物の存在下における逆転写酵素の活性と化合物未処理の場合の活性との割合により定義される）の割合の変化を表す曲線から、被検化合物の濃度の機能として決定される。
【０１２４】
下記の化合物の系統群から派生される化合物は、置換基Ｒにより調節される毒性を有する抗ＨＩＶ効果（ＨＩＶ１及び２）を示す。
【０１２５】
【化１７】
2010507637.tif 000026
【０１２６】
２．試験結果
２．１．抗ウイルス効果
下記の表に示されている化合物について試験し、抗ＨＩＶ−１及び抗ＨＩＶ−２効果について示す。
【０１２７】
下記の表において、
ＥＣ５０：ＨＩＶの細胞変性に対してＣＥＭ細胞の５０％を保護するのに必要な濃度。
【０１２８】
ＣＣ５０：細胞毒性濃度又はＣＥＭ細胞の生存率を５０％にまで減少させるのに必要な濃度。
【０１２９】
第１及び第２試験
【０１３０】
【表８】
2010507637.tif 000027
【０１３１】
第３試験
【０１３２】
【表９】
2010507637.tif 000028
【０１３３】
チミジンキナーゼ活性を表さないＣＥＭ細胞における効果（ＣＥＭ／ＴＫ−はチミジンキナーゼ活性をもたない細胞である）。
【０１３４】
【表１０】
2010507637.tif 000029
【０１３５】
これらの表が示す結果は、試験したヌクレオシドの大部分が、抗ＨＩＶ−１及び抗ＨＩＶ−２効果を持つことを示している。ＣＥＭ／ＴＫ−細胞において、抗ウイルス効果が顕著に減少したことから、抗ウイルス活性を引き起こすためには、細胞内においてヌクレオシドがリン酸化を受けなければならないことが確認された。活性化合物の毒性は、ジスルフィドの機能による側鎖由来の性質に大きく依存する。
【０１３６】
２．２．モロニー肉腫ウイルスにより引き起こされるマウス胚Ｃ３Ｈ／３Ｔ３細胞の形質転換に対する阻害効果（ＨＩＶの感染モデル）
【０１３７】
【表１１】
2010507637.tif 000030
【０１３８】
これらのデータは、評価した化合物が、抗レトロウイルス効果を有することが明白であると証明している。
【０１３９】
III−本発明の工程に従い、式(IV)の化合物を得る製造方法
以前に示された工程は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-メチルチオウリジン３１の合成のために、以下に示される。
【０１４０】
【化１８】
2010507637.tif 000031
【０１４１】
この化合物は、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド４０から調製され、安定性スルフィニルハライドによるこの化合物の合成を以下に示す。
2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド４０
【０１４２】
【化１９】
2010507637.tif 000032
【０１４３】
無水ジクロロメタン（６ｍＬ）に、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシ-2'-(2-トリメチルシリル)エチル)-チオウリジン（２００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）が溶解している溶液をアルゴン存在下において、4-ニトロベンゼンスルフェニルクロライド（３３３ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を加える。この混合液を１５時間撹拌し、溶媒を蒸発させる。得られた残留物を最小量のジクロロメタンに入れ、シリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９８／２その後９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより黄色粉末の化合物４０が得られる（１５２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、６６％）。
【０１４４】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ9.40(1 H,s,NH);8.16(2 H,m,Ar);7.65(1 H,d,J=8.0Hz,6-H);7.60(2 H,m,Ar);7.04(1 H,m,1'-H);6.48(1 H,m,3'-H);5.70(1 H,d,J=8.4Hz,5-H);4.99(1 H,ls,4'-H);3.94(1 H,m,5'-H);3.83(1 H,m,5'-H)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ162.9(C2);150.3(C4);146.8(C-NO2);143.9(C-SS);140.8(C6);135.1(C2');131.8(C3');126.6(2C,Ar);126.3(2C,Ar);102.8(C5);89.7(C1');87.0(C4');63.0(5'-CH2)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン):m/z396[M+H]+;413[M+NH3]+。
【０１４５】
無水メタノールに、2',3'-ジデヒドロ-2',3'-ジデオキシウリジン-2'-イル4-ニトロフェニルジスルフィド４０（３０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）が溶解している溶液にＤＴＴ（６．３ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加える。この溶液を３０分間撹拌し、炭酸水素ナトリウム（８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を含むヨウ化メチル（５０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）を加える。その１５時間後に、その反応液を蒸発させ、残留物に対してシリカゲルを用い、ジクロロメタン／メタノール混合液（９５／５）を溶媒としてクロマトグラフィーにかける。これにより、白色固体の不飽和化合物３１が得られる（６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、３１％）。
【０１４６】
１Ｈ ＮＭＲ(400MHz,CDCl3)δ7.60(1 H,d,J=8Hz,6-H);6.93(1 H,m,1'-H);5.76(1 H,s,3'-H);5.73(1 H,d,J=7.6Hz,5-H);4.99(1 H,m,4'-H);3.94-3.76(2 H,m,J=3.2Hz,J=11.6Hz,5'-H×2);2.41(Me)
１３Ｃ ＮＭＲ(100MHz,CDCl3)δ162.8(C2);150.5(C4);141.8(C6);136.4(C3');122.3(C2');102.8(C5);90.2(C1');87.2(C4');63.6(5'-CH2);15.1(Me)
ＭＳ  (DCI,NH3-イソブタン):m/z257[M+H]+。
【０１４７】
IV−本発明の他の工程
【０１４８】
【化２０】
2010507637.tif 000033
【０１４９】
システイン系のシリルスルフィド３５
【０１５０】
【化２１】
2010507637.tif 000034
【０１５１】
保護されたシステイン誘導体３４（１ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）とトリメチルビニルシラン（７４０ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）との溶液を、ＡＩＢＮの触媒作用量（１０％）の存在下において、容器を密封し、７０℃で２４時間撹拌する。この反応液を蒸発させると、淡黄色の油状の化合物３５（１．１ｇ、８１％）が得られる。
【０１５２】
１Ｈ ＮＭＲ CDCl3  δ5.40(1 H,d,NH);4.52(1 H,m,Hα);3.72(3 H,s,CH3);2.95(2 H,d,CH2S);2.52(2 H,m,CH2S);1.41(9 H,s,(CH3)3);0.81(2 H,m,CH2Si);0.12(9 H,s,(CH3)3Si)
１３Ｃ ＮＭＲ CDCl3 δ171.5(C=O);155.0(C=O);79.8(C Boc);53.2,52.3(2 CH2S);34.2(CH);28.2(3 CH3 Boc);17.2(CH2Si);-1.9(3 CH3Si)
ＨＲＭＳ  (C14H29NO4NaSSi)[M+Na]+:理論値：358.1484; 測定値：358.1483。
【０１５３】
システイン4-ニトロフェニルジスルフィド３６
【０１５４】
【化２２】
2010507637.tif 000035
【０１５５】
無水ジクロロメタン（５ｍＬ）に、シリルシステインスルフィド３５（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）が溶解している溶液に、4-ニトロベンゼンスルフェニルクロライド（１７７ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を不活性雰囲気において、室温で４８時間撹拌する。この混合液にジクロロメタンを加えて希釈し、水を用いて洗浄した後、蒸発させる。残留物に対してシリカゲルを用い、シクロヘキサン／ジクロロメタン混合液（５０／５０、その後に７０／３０、その後に０／１００）を溶媒としてクロマトグラフィーにかけることにより精製する。その結果、淡黄色の油状の化合物３６が得られる（７９ｍｇ、６９％）。
【０１５６】
１Ｈ ＮＭＲ CDCl3  δ8.22(2 H,d,arom,H);7.66(2 H,d,arom,H);5.31(1 H,m,NH),4.62(1 H,m,Hα);3.78(3 H,s,CO2CH3);3.32(1 H,dd,CH2);3.19(1 H,dd,CH2);1.46(9 H,s,(CH3)3)
１３Ｃ ＮＭＲ CDCl3 δ107.7(C=O);154.8(C=O);146.4,145.9(2C arom);126.2,124.1(2×2C arom);80.5(C(CH3)3);52.7(CO2CH3);41.2(CH2S);28.2(3 CH3)。
【０１５７】
以下に参照を示すことにより、明細書及び特許請求の範囲に記載の化合物を同定する。
【０１５８】
式(II)の化合物
不飽和スルフィド化合物
シリル化合物１及び３〜８はシリル化されており、化合物２及び３１はシリル化されていない。
【０１５９】
【化２３】
2010507637.tif 000036
【０１６０】
不飽和ジスルフィド化合物
【０１６１】
【化２４】
2010507637.tif 000037
【０１６２】
式(III)の化合物
【０１６３】
【化２５】
2010507637.tif 000038
【０１６４】
本発明の他の化合物
【０１６５】
【化２６】
2010507637.tif 000039
【国際調査報告】
2010507637.tif 000050
2010507637.tif 000051
2010507637.tif 000052
2010507637.tif 000053
2010507637.tif 000054
2010507637.tif 000055
2010507637.tif 000056
2010507637.tif 000057
2010507637.tif 000058
2010507637.tif 000059
2010507637.tif 000060
2010507637.tif 000061
2010507637.tif 000062
2010507637.tif 000063
2010507637.tif 000064
2010507637.tif 000065
2010507637.tif 000066
2010507637.tif 000067