(57)【要約】【課題】本発明は１以上のマーカーに連結した１以上の生体分子を含む複合体の形状における新規な造影剤に関する。【解決手段】本発明は１以上のマーカーおよび１以上の生体分子を含む複合体に関する。本発明に記載の複合体はイメージング法、たとえば磁気共鳴イメージングにおける造影剤として有用性のような、多様な有用性を有する。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体分子およびマーカーを含む、造影剤としての使用に適した複合体。
【請求項２】
生体分子がリンカーを介してマーカーに連結する、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
マーカーに連結した生体分子が超複合体を形成する、請求項１に記載の複合体。
【請求項４】
マーカーが常磁性マーカーである、請求項１〜３のいずれかに記載の複合体。
【請求項５】
マーカーが放射性マーカーである、請求項１〜３のいずれかに記載の複合体。
【請求項６】
マーカーが常磁性マーカーであり、常磁性マーカーの磁気モーメントが約６〜約９の範囲にある、請求項１〜４のいずれかに記載の複合体。
【請求項７】
マーカーが常磁性マーカーであり、前記常磁性物質の磁気モーメントが７より大きい、請求項１〜４のいずれかに記載の複合体。
【請求項８】
常磁性マーカーがアルミニウム、バリウム、カルシウム、ジスプロシウム、ガドリニウム、マグネシウム、マンガン、酸素、プラチナ、ナトリウム、ストロンチウム、テクネチウムおよびウランからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の複合体。
【請求項９】
常磁性マーカーがガドリニウムを含むか、またはガドリニウムからなる、請求項１〜４および６〜８のいずれかに記載の複合体。
【請求項１０】
生体分子が核酸、グリコシル化および他の方法で翻訳後修飾されたポリペプチドを含む、ポリペプチド、多糖ならびに脂質を含む群から選択される、請求項１〜９のいずれかに記載の複合体。
【請求項１１】
生体分子が改変されている、請求項１０に記載の複合体。
【請求項１２】
生体分子がポリペプチドである、請求項１〜１１のいずれかに記載の複合体。
【請求項１３】
ポリペプチドが球状ポリペプチドである、請求項１２に記載の複合体。
【請求項１４】
複合体がアニオン性である、請求項１〜１３のいずれかに記載の複合体。
【請求項１５】
複合体がカチオン性である、請求項１〜１３のいずれかに記載の複合体。
【請求項１６】
複合体が腎臓のイメージングに適している、請求項１〜１３に記載の複合体。
【請求項１７】
複合体が腎皮質において蓄積することが可能である、請求項１６に記載の複合体。
【請求項１８】
生体分子がメガリンおよび／またはキュブリンに結合することが可能である、請求項１６または１７に記載の複合体。
【請求項１９】
生体分子が１ｋＤａ〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の複合体。
【請求項２０】
生体分子が２ｋＤａ〜４５ｋＤａの分子量を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の複合体。
【請求項２１】
生体分子が５ｋＤａ〜４０ｋＤａの分子量を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の複合体。
【請求項２２】
生体分子が７．５〜１１．５の等電点を有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の複合体。
【請求項２３】
生体分子が８〜１０．５の等電点を有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の複合体。
【請求項２４】
生体分子がアプロチニン、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項２５】
生体分子がキモトリプシノーゲンＡ、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項２６】
生体分子がリゾチーム、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項２７】
生体分子がオボアルブミン、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項２８】
生体分子がリボヌクレアーゼ、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項２９】
生体分子がシトクロムｃ、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項３０】
生体分子がシスタチンｃ、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項３１】
生体分子がアンジオテンシン、またはそのフラグメントもしくは誘導体を含むか、あるいはそれらからなる、請求項１〜２３のいずれかに記載の複合体。
【請求項３２】
以下のステップ：
ａ．生体分子を提供すること、
ｂ．マーカーを提供すること、および
ｃ．ａ）およびｂ）で提供されるような生体分子とマーカーを連結し、それによって複合体を生み出すことを含む、請求項１〜３１のいずれかに記載の複合体を生み出すための方法。
【請求項３３】
以下のステップ：
ａ．生体分子を提供すること、
ｂ．マーカーを提供すること、
ｃ．生体分子をマーカーに連結すること、および
ｄ．複合体を選択することを含む、請求項１〜３１のいずれかに記載の複合体を生み出すための方法。
【請求項３４】
マーカーが常磁性である、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
マーカーが放射性である、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３６】
以下のステップ：
ａ．適切な溶媒中にある量の生体分子を溶解すること、
ｂ．適切な溶媒中にある量のリンカーを溶解すること、
ｃ．ある量の上記溶液を合わせ、溶液の混合物のｐＨを調整すること、
ｄ．適切な溶媒中に常磁性マーカーを溶解することを含む、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１〜３１のいずれかに記載の１以上の複合体およびキャリアを含む、造影剤としての使用のための組成物。
【請求項３８】
組成物が１種より多い複合体を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
組成物が少なくとも２種の異なる複合体を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
異なる複合体が異なる生体分子を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
生体分子がアプロチニンおよびリゾチームから選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４２】
異なる複合体が異なる常磁性マーカーを含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４３】
少なくとも前記複合体の１種がアプロチニンを含む、請求項３７〜４２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４４】
少なくとも前記複合体の１種がガドリニウムを含む、請求項３７〜４２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４５】
少なくとも前記複合体の１種がガドリニウムとアプロチニンを含む、請求項４２および４３のいずれかに記載の組成物。
【請求項４６】
少なくとも１種の前記複合体がガドリニウムとリゾチームを含む、請求項４２および４３のいずれかに記載の組成物。
【請求項４７】
組織または器官の画像を生み出すための方法であって、以下のステップ：
ａ．請求項１〜３１のいずれかに記載の複合体または請求項３７〜４６のいずれかに記載の組成物を対象に投与すること、
ｂ．複合体または組成物をある方法によって可視化すること、および
ｃ．前記コンパートメントの画像を捕らえることを含む、前記方法。
【請求項４８】
方法がＭＲＩまたはＭＲＩを基礎にする、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
方法がコンピュータートモグラフィーのようなＸ線撮影法に基づいている、請求項４７のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
腎臓組織の磁気共鳴画像を生み出すための方法であって、以下のステップ：
ａ．請求項１〜３１のいずれかに記載の複合体、または請求項３７〜４６のいずれかに記載の組成物を対象に投与すること、
ｂ．磁気共鳴イメージングまたは磁気共鳴イメージングを基礎にした方法によって複合体または組成物を可視化すること、および
ｃ．前記腎臓組織の画像を捕らえることを含む、前記方法。
【請求項５１】
小腸の磁気共鳴画像を生み出すための方法であって、以下のステップ：
ａ．請求項１〜３１のいずれかに記載の複合体、または請求項３７〜４６のいずれかに記載の組成物を対象に投与すること、
ｂ．磁気共鳴イメージングまたは磁気共鳴イメージングを基礎にした方法によって複合体または組成物を可視化すること、および
ｃ．前記小腸の画像を捕らえることを含む、前記方法。
【請求項５２】
標的コンパートメント機能の評価のための方法であって、請求項４８または４９の方法を実施し、それによって前記コンパートメントの画像を生み出し、画像を分析し、そしてコンパートメントの機能を評価するステップを含む、前記方法。
【請求項５３】
腎臓機能の評価のための方法であって、請求項４８または４９の方法を実施し、それによって該腎臓組織の画像を生み出し、画像を分析し、そして腎臓組織の機能を評価するステップを含む、前記方法。
【請求項５４】
２種の異なる複合体の画像が評価され、該複合体が同時に、または任意の順で連続して投与される、請求項５２および５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
少なくとも部分的に画像から得られる情報を基礎にして糸球体濾過率を計算する付加的なステップを含む、請求項５２〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
小腸機能評価のための方法であって、請求項４８または４９の方法を実施し、それによって該小腸組織の画像を生み出し、画像を分析し、そして小腸の機能を評価するステップを含む、前記方法。
【請求項５７】
２種の異なる複合体の画像が評価され、該複合体が同時に、または任意の順で連続して投与される、請求項５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
異なる常磁性マーカーを有する複合体、および異なる生体分子を有する複合体からなる群から選択される異なる複合体を使用して１回より多く請求項５２に記載の方法を実施し、そしてそれぞれの複合体から得られる情報を合わせることによってコンパートメント機能をプロファイリングするステップを含む、コンパートメント機能をプロファイリングするための方法。
【請求項５９】
コンパートメントが腎臓である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
コンパートメントが小腸である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
個体における腎臓機能をプロファイリングするための方法であって、以下のステップ：
ａ．ガドリニウムに連結したアプロチニンを含む複合体または組成物を対象に投与すること、
ｂ．磁気共鳴イメージングまたは磁気共鳴イメージングを基礎にした方法によって、ステップａにおいて投与された複合体または組成物を可視化すること、
ｃ．該個体の腎臓の画像を捕らえること、
ｄ．ガドリニウムに連結したリゾチームを含む複合体または組成物を対象に投与すること、
ｅ．磁気共鳴イメージングまたは磁気共鳴イメージングを基礎にした方法によって、ステップｄにおいて投与された複合体または組成物を可視化すること、および
ｆ．該個体の腎臓の画像を捕らえることを含む、前記方法。
【請求項６２】
複合体または組成物が静脈内投与される、請求項４７〜６１のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
複合体または組成物が経口投与される、請求項４７〜６１のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
本発明に記載の１以上の複合体または１以上の組成物、および本発明の方法におけるその使用のための説明書を含むパーツキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願に引用されたすべての特許および非特許参考文献はそのまま参照として本明細書に援用される。
本発明は１以上のマーカーおよび１以上の生体分子を含む複合体に関する。本発明に記載の複合体は多様な有用性、たとえば磁気共鳴イメージングのようなイメージング法における造影剤としての有用性を有する。
【０００２】
本発明はまた、本発明に記載の１以上の複合体を含む医薬組成物、複合体を含むパーツキット、ならびに本発明に記載の複合体および組成物を作製し、使用するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
腎臓の主要機能は体内の塩および水分量を調節し、それらを尿中に排出することにより、血漿から老廃物を除去することである。これを達成するために、通常１２０ｍｌの血漿が腎糸球体で毎分濾過される。
【０００４】
多数の腎疾患、たとえばＩｇＡ腎炎、糸球体腎炎、慢性腎盂腎炎および尿貯留は腎不全およびその後の減少した糸球体濾過率（ＧＦＲ）を導きうる。減少したＧＦＲは以下：蛋白尿、炎症、結合組織形成およびネフロン機能損失の１つまたはすべてを伴う可能性がある。
【０００５】
減少したＧＦＲは、今度は体内の老廃物の蓄積、電解質および内分泌物変動ならびに高血圧を導く。高血圧はさらに腎臓に傷害を与え、結果は進行性有害過程であり、そのことが結局すべての器官系に悪影響を与え、死亡率を増す。
【０００６】
ＧＦＲが６０ｍｌ／分以下に低下すると、減少したＧＦＲがいくぶんかは心臓血管疾患にとっての独立した危険因子である［Ｍａｎｊｕｎａｔｈ  ら（２００３）ａｂ］という理由で、相対死亡率は著しく増す。世界の人口の５％または約３億人もの多くの人々が危険な状態にある、すなわち６０ｍｌ／分より低いＧＦＲを有する可能性があると推測される。当然、危険群、たとえば糖尿病、高血圧、家族性腎不全、腎毒性薬物療法および蛋白尿の患者において、腎臓機能の正確で時を得た測定が主要な社会経済的、医学的および科学的利益を表すことになる。
【０００７】
腎臓機能を評価するために最も一般的に利用される方法は、クレアチニンレベルに関する血液試験である。しかし、個体におけるクレアチニンレベルは腎臓機能に依存するだけでなく、年齢、性、および人種によって変化するため、クレアチニンレベルは個体におけるＧＦＲのせいぜい近似にすぎない。
【０００８】
ＧＦＲの測定のための別の方法は、典型的には腎臓で支障なく濾過される物質を対象に投与し、その後回収された体液（たとえば尿）試料における該物質のレベルを測定することを含む。イヌリンはこれに関してＧＦＲのマーカーとして使用されてきた。イヌリンの尿クリアランスを測定することは手間が掛かり、時間を浪費し、そして個体の腎臓機能に関する情報を与えない。
【０００９】
この原則に沿った１つの成果は、米国特許第７，０４８，９０７号（Ｇｒｏｍａｎ）に開示される。‘９０７では、造影剤が対象に投与され、その後体液（たとえば尿）の試料が対象から回収される。この造影剤の体液へ放出は、回収された試料における造影剤のニュートロン活性化によって測定される。この方法は面倒で、侵襲的であり、そして時間を浪費するという点において、イヌリンの尿クリアランスに対して述べられた方法の不都合な点を共有する。
【００１０】
ウログラフィー（一連のＸ線画像を使用して尿道を可視化する）およびシンチグラフィー（放射性物質の静脈内注射およびその後の放射されたガンマ線のイメージング）は腎臓機能を可視化するために有用な２種の付加的な方法である。これらの方法は共に対象を電離放射線に曝す。さらに、これらの方法では局部的糸球体濾過率を計算することができない。
【００１１】
磁気共鳴イメージング（ＭＲイメージング）は、感度が高く、ただ１種の非電離放射線だけを使用するという利点を有する用途の多いイメージング技術である。ＭＲイメージングを利用する方法は、生体の組織および器官の動的画像を提供する。ＭＲイメージングでは、器官または組織の画像を鮮明にするために造影剤が日常的に対象に投与される。
【００１２】
ＭＲイメージングが機能的イメージングのために使用される器官の一例としては腎臓が挙げられる。腎臓の機能的ＭＲイメージングは、現在のところ低分子量造影剤に頼っている。これらの薬剤は腎臓において支障なく濾過され、そうして糸球体濾過率のマーカーとして役立っている。そのようなマーカーの例としてはイヌリンおよびガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸（Ｇｄ−ＤＰＴＡ）が挙げられる。これらの造影剤は短い半減期を有し、蛋白尿の源に関する情報を全く提供しない［Ｃｈｏｙｋｅら（２００６）］。
【００１３】
腎臓の機能的ＭＲイメージングにおける特定の腎実質疾患の評価のための高分子造影剤は当該技術分野で公知である。高分子造影剤は高分解能血管造影法を実施する場合に好ましい［Ｃｈｏｙｋｅら（２００６）］ため、当初は使用される造影剤の半減期を増すために開発された。
【００１４】
超微小酸化鉄粒子（ＵＳＰＩＯ）は腎臓で濾過されず、従ってそのような粒子は腎臓機能を評価する場合に通常観察されない。しかし、単球およびマクロファージはＵＳＰＩＯを取り込み、そしてこれらはその後炎症部位に局在するため、腎臓におけるそのような炎症部位が可視化される可能性がある。この方法はしかし、腎臓に対するこの損傷が炎症を伴う場合だけ腎臓がどこに損傷を受けたかに関する情報を提供することになる。しかし、ＧＦＲの低下または炎症を伴わない蛋白尿の源に関する情報は全く得ることができないことになる［Ｃｈｏｙｋｅら（２００６）］。
【００１５】
デンドリマーは重合して的確なサイズのナノ粒子を形成する有機分子である。異なる大きさのデンドリマーは、とりわけ腎臓における濾過／保持に関して異なる特性を有する。Ｋｏｂａｙａｓｈｉらは２００５に、動的マイクロ磁気共鳴リンパ管造影法（マイクロ−ＭＲＬ）を実施するために、造血器悪性腫瘍に注射するためのＧｄ標識デンドリマーナノ粒子の使用を開示する。
【００１６】
Ｇｄ−ＭＳ−３２５は静脈内に注射されるガドリニウムキレート化合物である。いったん注射されると、それは循環するアルブミンに結合する。しばらくして、ガドリニウム塩はアルブミンから解離し、尿と共に濾過されて取り除かれる［Ｃｈｏｙｋｅら（２００６）］。
【００１７】
ラット腎皮質における取り込みの測定のためのヨード化アプロチニンの使用は公知である［Ｔｅｎｓｔａｄら，１９９４ａｂ，１９９６；Ｗａｎｇら，１９９５，１９９６，１９９７ａｂ；Ｔｒｅｅｃｋら，１９９７，２００２；Ｒｏａｌｄら，２０００，２００４ａｂ，Ｂａｒａｎら，２００３ａｂ，２００６を参照されたい］。しかし、ＭＲＩ法の使用は開示されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は１以上のマーカーに連結した１以上の生体分子を含む複合体の形状における新規な造影剤に関する。
本発明に記載の複合体は、好ましくは標的コンパートメントに特異的に蓄積される。従って、造影剤は個体における標的コンパートメントを可視化するためのイメージング技術において有用である。
【００１９】
複合体を作製する方法は、特定の標的コンパートメントを可視化することにおける使用に複合体を適合させることを可能にする。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
可視化技術の例としては、磁気共鳴イメージングおよびＸ線写真を基礎にしたイメージング法、たとえばコンピュータートモグラフィーを基礎にしたイメージング法が挙げられる。
【００２１】
本発明の複合体が有用である例としては、腎臓の機能的評価のための使用、小腸の機能的評価のための使用、および血管系の評価のための使用が挙げられる。
腎臓の例では、腎臓における蓄積が、腎臓の感度の高い高分解能スキャンを実施することを可能にする。このことは今度は糸球体濾過率の定量的評価を可能にする。その上、蛋白尿が見られる腎臓は蛋白尿の源に依存して特徴的なＭＲＩスキャンを提示するため、本発明の方法はまた、減少したＧＦＲの基礎をなす原因に関する詳細な情報を集めることを可能にする。さらに、単一の腎臓からの情報を得ることができる。
【００２２】
以下に記載された図面のデータを得るために使用したＭＲＩハードウェアは、Ｐｈａｒｍａｓｃａｎ  ７Ｔ小動物ＭＲスキャナー（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ  ＭＲＩ  ＧｍｂＨ，Ｅｔｔｌｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ製）である。ソフトウェアはＰａｒａｖｉｓｉｏｎ４版（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ  ＭＲ  ＧｍｂＨ製）である。動的イメージングは、２ｍｍスライス厚さ、２５６ｘ２５６マトリックス、視野（ＦＯＶ）６ｃｍ、ＴＲ１５．５７６ｍｓ、ＴＥ３．７ｍｓ、２５０エボルーションサイクル（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｃｙｃｌｅｓ）、スキャン時間１２分２７秒のＦｌａｓｈシーケンスを使用して実施された。Ｔ１強調イメージングは、２ｍｍスライス厚さ、２５６ｘ２５６マトリックス，ＦＯＶ６ｃｍ、ＴＲ１５．５７ｍｓ、ＴＥ３．７ｍｓ、１０平均、スキャン時間３０秒のＦｌａｓｈ  Ｔ１シーケンスを使用して実施された。Ｔ２強調イメージングは、２ｍｍスライス厚さ、２５６ｘ２５６マトリックス、ＦＯＶ６ｃｍ、ＴＲ４２００ｍｓ、ＴＥ３６ｍｓ、３平均、スキャン時間６分４７秒のＴｕｒｂｏ  ＲＡＲＥ  Ｔ２シーケンスを使用して実施された。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンが、取り込まれたＧｄ−ＤＴＰＡの量に対応して減少するｐＩを持つプローブのいくつかのサブポピュレーションを生じることを説明する。右のピークは取り込まれないままの画分を示し（ネイティブのアプロチニンとの同時溶出物）、左のピークはＧｄ−ＤＴＰＡとともに最も多く取り込まれた画分を表す。アニオン性Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンは部分的に近位尿細管細胞によって再吸収され、部分的に尿に排出される。カチオン性Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンは糸球体で濾過され、ネイティブのアプロチニンと同じ様式で近位尿細管細胞に定量的に蓄積される。Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニン複合体は従って単一腎臓機能／糸球体濾過率の評価のためのＭＲイメージング造影剤として使用することができる。
【図２】６．５ｋＤａポリペプチドであるアプロチニンは支障なく糸球体で濾過され、吸着エンドサイトーシスにより、その親糸球体に近い近位尿細管に定量的に取り込まれることを例証する。濾過されたアプロチニンはその後、リソソームで消化され、分解産物は標識されたアプロチニン（アプロチニン＊）のｉ．ｖ．注射２０分後に血漿中で検出することができる。腎皮質の異なる層におけるアプロチニン＊の取り込みを記録することによって、単一の腎臓機能の詳細で正確な情報を得ることができる。
【図３】左パネル：１２５Ｉ−アプロチニンおよび１５３Ｇｄ−アプロチニンのｉ．ｖ．注射後の初期活性に比較した血漿中濃度±１ＳＥＭ。
【図４】１５３Ｇｄ−アプロチニンは右腎動脈にクランプを付けた麻酔ラットにｉ．ｖ．注射された。ラットはその２０分後に屠殺され、切除した腎臓のＭＲＩが実施された。左：機能に依存しない解剖学的詳細を提供するＴ２強調記録。中央：正常ＧＦＲを持つ腎臓のＴ１強調記録であって、右のクランプを付けた腎臓の同じプロトコルによる記録に比較して顕著なコントラスト強化を示す。表：ｉ．ｖ．注射２０分後の種々の器官におけるＧｄ−アプロチニンの相対蓄積。ｎ＝３。
【図５】ＴｏｓｏＨａａｓのＳＷ３０００ＸＬ  ＨＰＬＣカラムを使用したアプロチニン（参照分子）とＧｄ−アプロチニンのサイズ排除クロマトグラム。分子量標準（ＩｇＭ、ＢＳＡ、オボアルブミン、キモトリプシノーゲンＡおよびアプロチニン）の溶出量は矢印で示した。
【図６】１．ネイティブのリゾチーム（Ｌｙ）、２．標準プロトコルを使用したＧｄ−ＤＴＰＡ−リゾチーム（Ｇｄ−Ｌｙ−１）、３．１／４量のＤＴＰＡを使用したＧｄ−ＤＴＰＡ−リゾチーム（Ｇｄ−Ｌｙ−２）および４．ネイティブのオボアルブミン（ｏｖａｌｂ）のサイズ排除高速クロマトグラフィー（Ｔｏｓｏ  Ｈａａｓ  ｓｕｐｅｒ  ＳＷ３０００、直径４．６ｍｍｘ高さ６０ｃｍ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸バッファー＋０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＳＯ４、ｐＨ６．４、０．２ｍｌ／分で溶出）。
【図７】０．２ｍｇ  Ｇｄ−Ｌｙを添加した（Ａ）、および添加しない（Ｂ）１ｍｌリンゲル液の５分間ｉ．ｖ．注入後２０分のラット腎臓のｅｘ  ｖｉｖｏ（結腸切断面）でのＴ１強調ＭＲＩ記録を例証する。パネルＣはＧｄ−Ｌｙを含まない（中央の大きな１２ｍｌ試験管および左の小さな０．８ｍｌ試験管）、０．０２ｍｇ  Ｇｄ−Ｌｙ（真ん中の２つの小さな試験管）を含む、および０．０４ｍｇＧｄ−Ｌｙ（右の小さな試験管）を含むリンゲル液の入った試験管の横断面を示す。パネルＡに提示された腎臓に蓄積されたＧｄ−Ｌｙの総量は注射量の約１０％（〜０．０２ｍｇ）であった。
【図８】１．３０〜１５０ｋＤａの範囲の分子量を持つ別個の複合体（ａ〜ｄ）および約２００ｋＤａ〜９００ｋＤａより多い範囲の分子量を持つ、より大きな連続複合体を形成するＧｄ−ＤＴＰＡ−キモトリプシノーゲンＡ（Ｇｄ−Ｃｈｙｍ）、２．ネイティブのキモトリプシノーゲンＡ（Ｃｈｙｍ）、３．血漿のサイズ排除高速クロマトグラフィー（Ｔｏｓｏ  Ｈａａｓ  ｓｕｐｅｒ  ＳＷ３０００、直径４．６ｍｍｘ高さ６０ｃｍ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸バッファー＋０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＳＯ４、ｐＨ６．４、０．２ｍｌ／分で溶出）を例証する。血漿アルブミン、血漿ＩｇＧ、血漿ＩｇＭおよびネイティブのキモトリプシノーゲンＡの分子量が示される。
【図９】Ａ．３匹の麻酔ラットにおける、１２５Ｉ−アプロチニンとカチオン性１５３Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンのｉ．ｖ．注射後の初期活性に比較した血漿中濃度±１ＳＥＭ。Ｂ．麻酔ラットにおけるｉ．ｖ．注射後２０分の種々の器官におけるカチオン性１５３Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンの相対蓄積。
【図１０】Ａ．外部皮質（ＯＣ）におけるカチオン性１５３Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンの２０分間蓄積クリアランスと比較した、４個のホルマリン固定腎臓における２０分間蓄積クリアランス。組織試料は、パネルＢに示すように、５個の皮質セクター（ｓｅｃｔｏｒ）と内部髄質から得た。外部皮質（ＯＣ）；中央皮質（ＭＣ）；内部皮質（ＩＣ）。エラーバー；ＳＥＭ。Ｂ．解剖学的詳細を示す、ラット腎臓の冠状Ｔ２−強調磁気共鳴画像。皮質セクターおよび組織試料採取部位とのオーバーレイ。Ｃ．ホルマリンで固定した腎臓における微小繊維注射糸球体および近位尿細管。Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンを含む蛋白質は糸球体で濾過され、エンドサイトーシスによって近位尿細管内腔から取り込まれ、従って腎臓皮質だけに蓄積される。内部皮質１グラム毎の１５３Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンの２カ所の外部帯における低い活性は、近位尿細管を含まない外部髄質に由来する組織を一部包含することにより主に引き起こされる。黒い内腔は微小繊維充填がない糸球体を表す。Ｂａｒａｎら  ２００３ａを若干改変。
【図１１】（Ａ）Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニン約１ｍｇ、（Ｂ）造影剤無し、および（Ｃ）Ｇｄ−ＤＴＰＡ−リゾチーム約１ｍｇを含む８００μｌリンゲル液の３０秒ｉｎ  ｖｉｖｏ注入後２０分のラット腎臓冠状断片（ｅｘ  ｖｉｖｏ）のＴ１強調ＭＲＩ記録。複合体は両方とも、腎皮質における対比を選択的に高め、局所糸球体濾過を反映した。パネルＤ：機能に依存しない解剖学的詳細を提供する（Ｂ）と同じ部分のＴ２強調ＭＲＩスキャン。パネルＥ：１０時から時計回りに以下のものを含む、外縁を構成する９個の小さな０．８ｍｌの試験管の横断面：１；Ｂ（造影剤無し）で注射されたものと同種の溶液、２〜７；（Ｃ）で注射されたものと同種の溶液１０μｌ、５０μｌ、１００μｌ、２００μｌ、３００μｌおよび４００μｌ、８；Ｂ（造影剤無し）に由来する血漿、９：Ｇｄ−ＤＴＰＡ−Ｌｙ注入後２０分に集められたＣに由来する血漿。中央の大きな１２ｍｌ試験管はリンゲル液で満たした。
【図１２】０．８ｍｌリンゲル液中の１ｍｇ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ−Ｌｙの３０秒ｉ．ｖ．注入前（Ａ）および注入２０分後（Ｂ）の同じ麻酔ラットにおけるｉｎ  ｖｉｖｏＴ１強調冠状ＭＲＩスキャン。パネルＣ．（Ａ）および（Ｂ）と同じラットの死後スキャン（呼吸運動が全くないため画像の質が改善される）。パネルＤ．＊によって示された関心のある領域（ＡＯＩ）の局所シグナル強度の増加は、５、１０、２０および３０度のフリップアングルを持つフラッシュプラス−配列を使用することによって計算し、ｖｏｘｅｌベース（逆緩和時間、１／Ｔ１）に対するＲ１を推定した。定量的情報を含む変換された画像の例は、グラフの左（初期条件）および右（コントラスト強化２０分後）に示す。異なる皮質領域における局所糸球体濾過は、原則として全身血漿中の時間積分したシグナル強度で割った時間積分した局所シグナル強度を計算することにより導いてもよい。
【図１３】メガリンおよびキュブリンを含む器官（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＆  Ｂｉｒｎ  ２００２）。
【００２４】
定義
特記しない限り、本明細書で使用するすべての技術的および科学的用語は本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本発明のために、以下の用語が定義される。
【００２５】
ＤＰＴＡはジエチレントリアミン五酢酸である。
ＵＳＰＩＯは酸化鉄の超微小粒子である。
本明細書で使用する“アプロチニン”という用語は、少なくともウシ種の肺組織から得ることができる１本鎖ポリペプチドを表す。本明細書で使用する該用語は５０〜７０アミノ酸、たとえば約５８アミノ酸からなるポリペプチドに関する。それはある種の蛋白分解酵素の阻害剤である。
【００２６】
本明細書で使用する“リゾチーム”という用語はクラスＥＣ３．２．１．１７に属し、そして約１２０〜１４０アミノ酸、たとえば約１２９アミノ酸の１本鎖ポリペプチドからなる１０〜２０ｋＤａ，たとえば約１４．４キロダルトンの酵素を表す。該酵素は４個のジスルフィドブリッジを有する。
【００２７】
本明細書で使用する“キモトリプシノーゲンＡ”という用語は、消化酵素キモトリプシンの前駆体を表し、該前駆体は約２０，０００ｋＤａ〜３０，０００ｋＤａ、たとえば約２５，０００ｋＤａの分子量、および８．７〜９．５の等電点、たとえば約９．１のｐＩを有する。
【００２８】
“オボアルブミン”という用語は、卵白の主要成分を表す。ニワトリのオボアルブミン蛋白質は約３８５アミノ酸からなり、約４５ｋＤの相対分子量を有する。ニワトリ以外の源に由来するオボアルブミンも意味の範囲内に含まれる。
【００２９】
本明細書で使用する“生体分子”という用語は、天然の化合物、または合成された生体適合性化合物、たとえば生体分子が生み出される手段にかかわらず、生存する生物に本来存在するポリペプチドまたはいずれか他の化合物を表し、該化合物のすべての変異体を含む。たとえば、アプロチニン、アプロチニンフラグメント、アプロチニンと第２の蛋白質のキメラ、およびグリコシル化アプロチニンはすべて本明細書で使用される意味の範囲内の生体分子である。
【００３０】
本明細書で使用する“リンカー”という用語は、少なくとも２つの化学種、たとえば生体分子とマーカーを分ける残基または化学結合を表す。化学種は本質的に固定された距離で保持されていてもよく、あるいはリンカーがフレキシブルで、化学種にお互いに関してある程度の運動の自由を許してもよい。連結は共有結合または非共有結合でありうる。連結された化学種には、たとえば相補要素と基本成分の機能的実体、鋳型の隣り合うコーディング要素、相補鋳型の隣り合う相補要素、および鋳型となる分子の隣り合う官能基が挙げられる。
【００３１】
本明細書の“複合体”という用語を使用して、Ｂ−Ｘ−Ｍと（Ｂ−Ｘ−Ｍ）ｎの両方の形状を表し、式中ｎは正の整数である。
超複合体という用語を使用して（Ｂ−Ｘ−Ｍ）ｎを意味し、式中ｎは正の整数である。
【００３２】
本明細書では“造影剤”という用語を使用して、イメージング技術、たとえば磁気共鳴イメージング、またはコンピュータートモグラフィーのようなＸ線写真を基礎にした方法における身体構造の可視性を改善することが可能な化合物または複合体を表す。本明細書で使用する用語は“標識剤”と同義語である。本発明の複合体は式Ｂ−Ｘ−Ｍを有するか、または一緒に連結して超複合体（Ｂ−Ｘ−Ｍ）ｎを形成することができ、式中ｎは正の整数である。造影剤という用語は両方の形状を含む。本明細書では造影剤という用語は複合体という用語と相互に交換可能に使用される。
【００３３】
本明細書で使用する“高分子造影剤”という用語は、好ましくは１ｋＤａより大きい、そして好ましくは１５００ｋＤａより大きい分子量を持つ化合物を表す。
本明細書では“工学的に改変された”という用語を使用して、天然の分子を誘導体化するために合成されるか、またはいずれかの方法で改変される分子を表す。
【００３４】
本明細書では“磁気共鳴イメージング”という用語を使用して、とりわけ生体の画像を捕らえるための磁気共鳴の使用を表す。該用語は技術の結果として受け取った動的および静的画像の両方を含むと理解すべきである。
【００３５】
本明細書では“コンピュータートモグラフィー”という用語を使用してトモグラフィーを利用する医用イメージング法を表し、該方法ではデジタル幾何学処理を使用して、回転の単一軸の周りから撮影された大量の一連の２次元Ｘ線画像から物体内部の３次元画像を生み出す。本明細書で使用する用語は限定的でなく、ＣＴを基礎にした方法および組み合わせ法、たとえばＰＥＴ／ＣＴ（ポジトロンエミッショントモグラフィー）を含む。
【００３６】
本明細書で使用する“標的コンパートメント”という用語は、個体におけるいずれの位置を表してもよい。標的コンパートメントの例としては、以下のものが挙げられる：
−器官、たとえば、心臓、
−組織（たとえば、腎臓の皮質）、
−コンパートメント（たとえば、動脈の内腔）。
【００３７】
本明細書で使用する“個体”という用語は、生死にかかわらず、いずれかの動物種のいずれかの身体を表す。
本明細書で使用する“正常”という用語は、一般的基準によって正常であると評価される個体を表す。
【００３８】
本明細書では“差別的蓄積”という用語を使用して、たとえば、腎臓皮質における複合体の蓄積のように、周辺と比較して標的コンパートメント中のマーカーの量に差がある状況を説明し、あるいは正常な状況では複合体が保持される漏出性血管系の場合、複合体の損失は異常な状況を表す。
【００３９】
本明細書では“放射性”という用語を使用して、原子核の自然崩壊によって粒子（アルファまたはベータ放射）または放射線（ガンマ放射）の形状で放射エネルギーを放つか、放つことが可能な物質を説明する。元素の放射性同位体は原子核崩壊のプロセスを通して粒子およびエネルギーを失う。元素は異なる原子または同じ原子の異なる状態に崩壊してもよい。
【００４０】
本明細書では“糸球体濾過率（ＧＦＲ）”という用語を使用して、支障なく濾過可能な溶質を含む血漿水が個体の糸球体を通って濾過される割合を表す。
本明細書では“蛋白尿”という用語を使用して、蛋白質が尿中に見出される臨床状態を表す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
複合体を作製する方法
本明細書に記載の複合体は一般式Ｂ−Ｘ−Ｍによって例証されてもよく、式中Ｂは１以上の生体分子を表し、Ｘは付加的なリンカー部分、たとえばキレート剤であり、そしてＭはマーカー部分である。マーカー部分であるＭは、たとえば常磁性部分、放射性ラベルまたは蛍光ラベルであってもよい。
【００４２】
本発明の複合体は以下のステップを含む、新規な独創的な方法によって合成される：
所望する標的コンパートメントを基礎にした生体分子を提供すること、
マーカー部分を提供すること、
リンカーを介して生体分子をマーカーに連結すること、
ｐＩ、サイズおよび特異性に基づいて複合体を選択すること。
【００４３】
生体分子部分
複合体の生体分子部分は標的コンパートメント中、またはその近傍における複合体の差別的蓄積を達成するために選択されてもよい。差別的蓄積は、正常な場合に比較して標的コンパートメント中またはその近傍に存在する複合体の増大した量であってもよい。差別的蓄積はまた、正常な場合に比較して標的コンパートメント中またはその近傍に存在する複合体の減少した量であってもよい。
【００４４】
他の態様では、差別的蓄積は受動力の結果である。通常、大きなアニオン性複合体は血管系の内腔に保持される。漏出性血管系の場合、そのような複合体は周辺の組織に漏出する。従って、これらの複合体の漏出を可視化することは、たとえば血管が新規に形成されるといったような該血管系における特有の状況を表すか、または何らかの病変を表す。
【００４５】
ある態様では、差別的蓄積は標的コンパートメントの成分と特に相互作用し、その後保持されるか、または除去される生体分子を選択することによって達成される。
別の特有の態様は、標的器官に蓄積する能力を複合体に授けるか、そのようにするため必要な生体分子の能力を高めるように工学的に改変された生体分子を含む。
【００４６】
本発明の１以上の生体分子は好ましくは、核酸、ポリペプチド（この下に、グリコシル化された、および他の方法で翻訳後修飾されたポリペプチド）、多糖および／または脂質および／またはその混合物から選択される。
【００４７】
一態様では、生体分子は１核酸〜５，０００核酸、たとえば１核酸〜５核酸、たとえば５〜１０核酸、たとえば１０核酸〜１５核酸、たとえば１５〜２０核酸、たとえば２０核酸〜２５核酸、たとえば２５〜３０核酸、たとえば３０核酸〜３５核酸、たとえば３５〜４０核酸、たとえば４０核酸〜４５核酸、たとえば４５〜５０核酸、たとえば５０核酸〜７５核酸、たとえば７５〜１００核酸、たとえば１００核酸〜１５０核酸、たとえば１５０〜２００核酸、たとえば２００核酸〜２５０核酸、たとえば２５０〜３００核酸、たとえば３００核酸〜３５０核酸、たとえば３５０〜４００核酸、たとえば４００核酸〜４５０核酸、たとえば４５０〜５００核酸、たとえば５００核酸〜６００核酸、たとえば６００〜７００核酸、たとえば７００核酸〜８００核酸、たとえば８００〜９００核酸、たとえば９００核酸〜１０００核酸、たとえば１０００〜１５００核酸、たとえば１５００核酸〜２０００核酸、たとえば２０００〜２５００核酸、たとえば２５００核酸〜３０００核酸、たとえば３０００〜３５００核酸、たとえば３５００核酸〜４０００核酸、たとえば４０００〜４５００核酸、たとえば４５００〜５０００核酸の長さを持つ核酸である。
【００４８】
一態様では、生体分子は１アミノ酸〜２，０００アミノ酸、たとえば１〜５アミノ酸、たとえば５〜１０アミノ酸、たとえば１０〜１５アミノ酸、たとえば１５〜２０アミノ酸、たとえば２０〜２５アミノ酸、たとえば２５〜３０アミノ酸、たとえば３０〜３５アミノ酸、たとえば３５〜４０アミノ酸、たとえば４０〜４５アミノ酸、たとえば４５〜５０アミノ酸、たとえば５０〜７５アミノ酸、たとえば７５〜１００アミノ酸、たとえば１００〜１５０アミノ酸、たとえば１５０〜２００アミノ酸、たとえば２００〜２５０アミノ酸、たとえば２５０〜３００アミノ酸、たとえば３００〜４００アミノ酸、たとえば４００〜５００アミノ酸、たとえば５００〜６００アミノ酸、たとえば６００〜７００アミノ酸、たとえば７００〜８００アミノ酸、たとえば８００〜９００アミノ酸、たとえば９００〜１０００核酸、たとえば１０００〜１２００アミノ酸、たとえば１２００〜１４００アミノ酸、たとえば１４００〜１６００アミノ酸、たとえば１６００〜１８００アミノ酸、たとえば１８００〜２０００アミノ酸の長さを持つポリペプチドである。
【００４９】
一態様では、１以上の多糖は１以上の分枝したポリマーを含む。本発明はホモ多糖およびヘテロ多糖、ならびにその混合物に関する。多糖はグルコースおよび／またはマンノースおよび／またはガラクトースおよび／またはフルクトースおよび／またはマルトースおよび／またはスクロースおよび／またはラクトースおよび／またはセルロースを含んでいてもよい。
【００５０】
多糖はＣｎ（Ｈ２Ｏ）ｎ−１の一般式を有し、式中ｎは通常２００〜２５００の大きな数である。ポリマー骨格の反復ユニットがしばしば６炭素単糖であることを考慮すると、一般式はまた（Ｃ６Ｈ１０Ｏ５）ｎとして表すことができ、式中ｎ＝｛４０．．．３０００｝である。
【００５１】
一態様では、生体分子はＣｎ（Ｈ２Ｏ）ｎ−１の式を持つ多糖であり、式中ｎは２００〜２５００、たとえば２００〜３００、たとえば３００〜４００、たとえば４００〜５００、たとえば５００〜６００、たとえば６００〜７００、たとえば７００〜８００、たとえば８００〜９００、たとえば９００〜１０００、たとえば１０００〜１１００、たとえば１１００〜１２００、たとえば１２００〜１３００、たとえば１３００〜１４００、たとえば１４００〜１５００、たとえば１５００〜１６００、たとえば１６００〜１７００、たとえば１７００〜１８００、たとえば１８００〜１９００、たとえば１９００〜２０００、たとえば２０００〜２１００、たとえば２１００〜２２００、たとえば２２００〜２３００、たとえば２３００〜２４００、たとえば２４００〜２５００の数である。
【００５２】
別の態様では、生体分子は式（Ｃ６Ｈ１０Ｏ５）ｎを持つ多糖であり、式中ｎは４０〜３０００、たとえば４０〜１００、たとえば１００〜２００、たとえば２００〜３００、たとえば３００〜４００、たとえば４００〜５００、たとえば５００〜６００、たとえば６００〜７００、たとえば７００〜８００、たとえば８００〜１０００、たとえば１０００〜１２００、たとえば１２００〜１４００、たとえば１４００〜１６００、たとえば１６００〜１８００、たとえば１８００〜２０００、たとえば２０００〜２２００、たとえば２２００〜２４００、たとえば２４００〜２６００、たとえば２６００〜２８００、たとえば２８００〜３０００である。
【００５３】
一態様では、生体分子は脂質である。一態様では、脂質はいずれか脂溶性（親油性）の、天然に存在する分子、たとえば脂肪、油脂、ステロール、脂溶性ビタミン類（たとえば、ビタミンＡ、Ｄ、ＥおよびＫ）、リン脂質、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、脂肪酸、脂肪酸誘導体、コレステロールのようなステロール含有代謝産物からなる群から選択することができる。
【００５４】
脂質はおおまかに疎水性または両親媒性低分子として定義されてもよく、それらは完全に、または部分的に２種の異なる型の生化学的サブユニットまたは“基本成分”：ケトアシルおよびイソプレン基から生じる。このアプローチを使用して、脂質は８種のカテゴリー：脂肪酸アシル（ｆａｔｔｙ  ａｃｙｌ）、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、サッカロ脂質（ｓａｃｃｈａｒｏｌｉｐｉｄ）およびポリケチド（ケトアシルサブユニットの縮合に由来する）：ならびにステロール脂質およびプレノール脂質（イソプレンサブユニットの縮合に由来する）に分割されてもよい。脂肪酸アシル（脂肪酸を含む）は、マロニル−ＣｏＡまたはメチルマロニル−ＣｏＡ基によるアセチル−ＣｏＡプライマーの鎖−伸長によって合成される多様な分子群である。炭素鎖は飽和されていても、飽和されていなくてもよく、そして酸素、ハロゲン、窒素およびイオウを含む官能基がついていてもよい。生物学的に興味のある脂肪酸アシルの例としてはエイコサノイドが挙げられ、それらは、今度はプロスタグランジン、ロイコトリエン、およびトロンボキサンを含むアラキドン酸から誘導される。脂肪酸アシルのカテゴリー中の他の主要な脂質クラスは脂肪酸エステルおよび脂肪酸アミドである。脂肪酸エステルには、重要な生化学的中間体、たとえばワックスエステル（ｗａｘ  ｅｓｔｅｒ）、脂肪酸アシルチオエステルコエンザイムＡ誘導体、脂肪酸アシルチオエステルＡＣＰ誘導体および脂肪酸アシルカルニチンが挙げられる。脂肪酸アミドには、Ｎ−アシルエタノールアミン、たとえばアナンダミドが挙げられる。
【００５５】
糖脂質は主に、モノ−、ジ−、およびトリ−置換グルセロールからなり、最もよく知られたものは、グリセロールの脂肪酸エステル（トリアシルグリセロール）であり、それらはトリグリセリドとしても知られる。付加的なサブクラスはグリコシルグリセロールによって表され、それらはグリコシド結合によってグリセロールに連結する１以上の糖残基の存在によって特徴付けられる。このカテゴリーにおける構造の例としては、ジガラクトシルジアシルグリセロールおよびセミノリピドが挙げられる。
【００５６】
グリセロリン脂質はまたリン脂質とも呼ばれる。グリセロリン脂質は真核生物および真正細菌のグリセロール骨格のｓｎ−３位、または古細菌の場合のｓｎ−１位における極性頭部の性質に基づいて異なったクラスに細分割されてもよい。生体膜に見出されるグリセロリン脂質の例としてはホスファチジルコリン（ＰＣまたはＧＰＣｈｏ、およびレシチンとしても公知）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥまたはＧＰＥｔｎ）およびホスファチジルセリン（ＰＳまたはＧＰＳｅｒ）が挙げられる。真核細胞における一部のグリセロリン脂質、たとえばホスファチジルイノシトールおよびホスファチジン酸は、膜に由来するセカンドメッセンジャーの前駆体か、またはそれら自体がそのようなセカンドメッセンジャーである。典型的にはこれらのヒドロキシル基の１つまたは両方は長鎖脂肪酸によりアシル化されているが、アルキル−連結および１Ｚ−アルケニル−連結（プラスマローゲン）グリセロリン脂質、ならびに原核生物におけるジアルキルエーテル変異体も存在する。
【００５７】
スフィンゴ脂質は化合物の複合ファミリーであり、それらはセリンおよび長鎖脂肪酸アシルＣｏＡから新規に合成され、その後セラミド、ホスホスフィンゴ脂質、グリコスフィンゴ脂質および他の化学種に変換される共通の構造的特徴、スフィンゴイド塩基骨格を共有する。哺乳類の主要なスフィンゴイド塩基は一般にスフィンゴシンと呼ばれる。セラミド（Ｎ−アシル−スフィンゴイド塩基）はアミドに連結した脂肪酸を持つスフィンゴイド塩基誘導体の主要なサブクラスである。脂肪酸は典型的には飽和されているか、またはモノ−不飽和で、１４〜２６炭素原子の鎖長を持つ。哺乳類の主要なホスホスフィンゴ脂質はスフィンゴミエリン（セラミドホスホコリン）であるが、昆虫は主にセラミドホスホエタノールアミンを含み、そして真菌はフィトセラミドホスホイノシトールおよびマンノースを含む頭部を有する。グリコスフィンゴ脂質はグリコシド結合を介してスフィンゴイド塩基に連結した１以上の糖残基からなる多様な分子ファミリーである。これらの例としては、セレブロシドおよびガングリオシドのような単純、および複合グリコスフィンゴ脂質が挙げられる。
【００５８】
ステロール脂質、たとえばコレステロールおよびその誘導体は、グリセロリン脂質およびスフィンゴミエリンと共に膜脂質の重要な成分である。同じ融合した４環コア構造を同様に含むステロイドは、ホルモンおよびシグナリング分子としての異なる生物学的役割を有する。Ｃ１８ステロイドはエストロゲンファミリーを含むが、Ｃ１９ステロイドはテストステロンやアンドロステロンのようなアンドロゲンを含む。Ｃ２１サブクラスはプロゲステロンならびにグルココルチコイドおよびミネラロコルチコイドを含む。種々の形状のビタミンＤを含むセコステロイドはコア構造のＢリングの開裂によって特徴付けられる。ステロールの他の例としては胆汁酸およびそれらのコンジュゲートが挙げられる。
【００５９】
プレノール脂質は、主にメバロン酸（ＭＩＶＡ）経路を介して生み出される５−炭素前駆体イソペンテニルジホスフェートおよびジメチルアリルジホスフェートから合成される。単純なステロイド（線状アルコール、ジホスフェートなど）はＣ５ユニットの連続した付加によって形成され、これらのテルペンユニットの数に従って分類される。４０より多い炭素を含む構造はポリテルペンとして知られる。カロテノイドは重要な単純イソプレノイドであり、抗酸化剤として、およびビタミンＡの前駆体として機能する。別の生物学的に重要な分子のクラスはキノンおよびハイドロキノンが例として挙げられ、それらは非イソプレノイド起源のキノノイドコアについたイソプレノイド尾部を含む。ビタミンＥおよびビタミンＫ、ならびにユビキノンはこのクラスの例である。細菌は酸素についた末端イソプレノイドユニットが不飽和のままであるポリプレノール（バクトプレノールと呼ばれる）を合成するが、動物ポリプレノール（ドリコール）では末端イソプレノイドが還元されている。
【００６０】
サッカロ脂質は、脂肪酸が糖骨格に直接連結し、膜二重層に適合する構造を形成する化合物を説明する。サッカロ脂質では、糖はグリセロ脂質およびグリセロリン脂質に存在するグリセロール骨格の代わりとなる。最もよく知られたサッカロ脂質はグラム陰性菌におけるリポ多糖のリピドＡ成分のアシル化されたグルコサミン前駆体である。典型的なリピドＡ分子はグルコサミンの二糖であり、それらは７個もの脂肪酸アシル鎖によって誘導体化されている。大腸菌の増殖に必要な最小リポ多糖は、２つの３−デオキシ−Ｄ−マンノ−オクツロソン酸（Ｋｄｏ）残基によりグリコシル化されているグルコサミンのヘキサアシル化された二糖であるＫｄｏ２−リピドＡである。
【００６１】
ポリケチドは脂肪酸シンターゼと機構的特徴を共有する古典的酵素ならびに反復型および多モジュール型酵素によるアセチルおよびプロピオニルサブユニットの重合により合成される。それらは動物、植物、細菌、真菌および海洋生物に由来する非常に多くの二次代謝産物および天然産物を含み、著しい構造多様性を有する。多くのポリケチドは環状分子であり、それらの骨格はしばしばグリコシル化、メチル化、ヒドロキシル化、酸化、および／または他のプロセスによりさらに改変されている。一般に使用される多くの抗微生物剤、抗寄生虫剤、および抗癌剤は、ポリケチド、またはポリケチド誘導体、たとえばエリスロマイシン、テトラサイクリン、アベルメクチン、および抗腫瘍エポチロンである。
【００６２】
本発明の生体分子は先に述べた脂質でありうるが、それらに限定されない。
その上、本発明は１より多い生体分子を持つ常磁性生体分子複合体に関する。一態様では、１より多い生体分子は本明細書で述べた生体分子のいずれの組み合わせでもあり得る。
【００６３】
造影剤の生体分子部分は生体分子のフラグメントであってもよい。そのようなフラグメントは加水分解、酵素消化および組換え体法を含む、いずれの方法によって生み出されてもよい。
【００６４】
本発明の１以上の生体分子、またはそのフラグメントはいずれかの手段によってさらに改変されてもよい。改変の１例としては、たとえばポリペプチドのグリコシル化のような翻訳後修飾が挙げられる。
【００６５】
本発明に記載の生体分子を説明する、限定的でない例としては、１ｋＤａから好ましくは１５００ｋＤａ未満までの球状蛋白質、たとえばアプロチニン、キモトリプシノーゲンＡ，リゾチーム、オボアルブミン、リボヌクレアーゼおよびシトクロムＣ、ならびにそのフラグメントおよび／または変異体を含むか、またはそれらからなるポリペプチドが挙げられる。
【００６６】
さらに別の態様では、本発明は生体分子または複数の生体分子が遺伝子工学的に改変されている複合体を含む。そのようなエンジニアリングには生体分子、または生体分子のフラグメントもしくは変異体の組換え体生産を挙げることができる。
【００６７】
さらなる態様は、標的コンパートメント中で蓄積するための能力を複合体に授けるか、またはそのようにするために生体分子にとって不可欠な能力を高めるように工学的に改変された生体分子を含む。そのような工学的改変の例としてはメガリンおよび／またはキュブリンの結合部位を生体分子に導入することを含む。改変の付加的な例としては生体分子の電荷を変化させるように生体分子を工学的に改変することが挙げられる。
【００６８】
たとえば、生体分子部分は、腎臓の近位尿細管に存在するメガリン／キュブリン複合体と特定の相互作用をすることが可能な蛋白質を含む群から選択されてもよい。そのような蛋白質、またはそのフラグメントを含み、それゆえ腎臓において保持される複合体は腎臓を可視化することにおける使用、および腎臓におけるプロセスに有用である。
【００６９】
メガリンおよびキュブリンはまた、腎臓の近くの他の器官／組織に位置する（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＆  Ｂｉｒｎ  ２００２の図１３を参照されたい）。本発明はまた、これらの器官／組織に蓄積するように工学的に改変された生体分子に関する。
【００７０】
本発明の一態様では、本発明の１以上の生体分子はアプロチニンポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
本発明の付加的な態様では、本発明の１以上の生体分子はキモトリプシノーゲンＡポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
【００７１】
本発明の別の態様では、本発明の１以上の生体分子はリゾチームポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
本発明の付加的な態様では、本発明の１以上の生体分子はオボアルブミンポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
【００７２】
新規造影剤の生体分子部分は、ポリペプチド、たとえば球状ポリペプチドのような生体分子のフラグメント、たとえばアプロチニン、キモトリプシノーゲンＡ、リゾチームまたはオボアルブミンの１以上のフラグメントをさらに含んでいてもよい。
【００７３】
生体分子のサイズは標的コンパートメントにおける蓄積に影響を与えることができる。本発明の生体分子は好ましくは１５００ｋＤａ未満の分子量を有する。
好ましい態様は、１ｋＤａ〜５０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２５ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２４ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２３ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２２ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１７ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１６ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１５ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１４ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１３ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１２ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１１ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜１０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜９ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜８ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜７ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜６ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜５ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜５ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜２５ｋＤａ、２ｋＤａ〜２４ｋＤａ、２ｋＤａ〜２３ｋＤａ、２ｋＤａ〜２２ｋＤａ、２ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１７ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１６ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１５ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１４ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１３ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１２ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１１ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜１０ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜９ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜８ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜７ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜６ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜２５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜２４ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜２３ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜２２ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１７ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１６ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１４ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１３ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１２ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１１ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜１０ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜９ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜８ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜７ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜６ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜２５ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜２４ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜２３ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜２２ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１７ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１６ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１５ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１４ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１３ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１２ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜２５ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜２４ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜２３ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜２２ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜１７ｋＤａの範囲の分子量のようなＭＷを有する。
【００７４】
一態様では、生体分子は１ｋＤａ〜５０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜３ｋＤａ、たとえば３ｋＤａ〜４ｋＤａ、たとえば４ｋＤａ〜５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜６ｋＤａ、たとえば６ｋＤａ〜７ｋＤａ、たとえば７ｋＤａ〜８ｋＤａ、たとえば８ｋＤａ〜９ｋＤａ、たとえば９ｋＤａ〜１０ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１１ｋＤａ、たとえば１１ｋＤａ〜１２ｋＤａ、たとえば１２ｋＤａ〜１３ｋＤａ、たとえば１３ｋＤａ〜１４ｋＤａ、たとえば１４ｋＤａ〜１５ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜１６ｋＤａ、たとえば１６ｋＤａ〜１７ｋＤａ、たとえば１７ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば１８ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば１９ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば２０ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば２１ｋＤａ〜２２ｋＤａ、たとえば２２ｋＤａ〜２３ｋＤａ、たとえば２３ｋＤａ〜２４ｋＤａ、たとえば２４ｋＤａ〜２５ｋＤａ、たとえば２５ｋＤａ〜２６ｋＤａ、たとえば２６ｋＤａ〜２７ｋＤａ、たとえば２７ｋＤａ〜２８ｋＤａ、たとえば２８ｋＤａ〜２９ｋＤａ、たとえば２９ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば３０ｋＤａ〜３１ｋＤａ、たとえば３１ｋＤａ〜３２ｋＤａ、たとえば３２ｋＤａ〜３３ｋＤａ、たとえば３３ｋＤａ〜３４ｋＤａ、たとえば３４ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば３５ｋＤａ〜３６ｋＤａ、たとえば３６ｋＤａ〜３７ｋＤａ、たとえば３７ｋＤａ〜３８ｋＤａ、たとえば３８ｋＤａ〜３９ｋＤａ、たとえば３９ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば４０ｋＤａ〜４１ｋＤａ、たとえば４１ｋＤａ〜４２ｋＤａ、たとえば４２ｋＤａ〜４３ｋＤａ、たとえば４３ｋＤａ〜４４ｋＤａ、たとえば４４ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば４５ｋＤａ〜４６ｋＤａ、たとえば４６ｋＤａ〜４７ｋＤａ、たとえば４７ｋＤａ〜４８ｋＤａ、たとえば４８ｋＤａ〜４９ｋＤａ、たとえば４９ｋＤａ〜５０ｋＤａの範囲の分子量を有する。
【００７５】
本発明の生体分子はｐＩによって限定されない。本発明の１以上の生体分子は好ましくは４．５〜１１．５、たとえば４．５〜１１、たとえば４．５〜１０．５、たとえば４．５〜１０、たとえば４．５〜９．５、たとえば４．５〜９、たとえば４．５〜８．５、たとえば４．５〜８、たとえば４．５〜７．５、たとえば４．５〜７、たとえば４．５〜６．５、たとえば４．５〜６、たとえば４．５〜５．５、たとえば４．５〜５；たとえば５〜１１．５、たとえば５〜１１、たとえば５〜１０．５、たとえば５〜１０、たとえば５〜９．５、たとえば５〜９、たとえば５〜８．５、たとえば５〜８、たとえば５〜７．５、たとえば５〜７、たとえば５〜６．５、たとえば５〜６、たとえば５〜５．５；たとえば５．５〜１１．５、たとえば５．５〜１１、たとえば５．５〜１０．５、たとえば５．５〜１０、たとえば５．５〜９．５、たとえば５．５〜９、たとえば５．５〜８．５、たとえば５．５〜８、たとえば５．５〜７．５、たとえば５．５〜７、たとえば５．５〜６．５、たとえば５．５〜６；６〜１１．５、たとえば６〜１１、たとえば６〜１０．５、たとえば６〜１０、たとえば６〜９．５、たとえば６〜９、たとえば６〜８．５、たとえば６〜８、たとえば６〜７．５、たとえば６〜７、たとえば６〜６．５；６．５〜１１．５、たとえば６．５〜１１、たとえば６．５〜１０．５、たとえば６．５〜１０、たとえば６．５〜９．５、たとえば６．５〜９、たとえば６．５〜８．５、たとえば６．５〜８、たとえば６．５〜７．５、たとえば６．５〜７；たとえば７〜１１．５、たとえば７〜１１、たとえば７〜１０．５、たとえば７〜１０、たとえば７〜９．５、たとえば７〜９、たとえば７〜８．５、たとえば７〜８、たとえば７〜７．５；たとえば７．５〜１１．５、たとえば７．５〜１１、たとえば７．５〜１０．５、たとえば７．５〜１０、たとえば７．５〜９．５、たとえば７．５〜９、たとえば７．５〜８．５、たとえば７．５〜８；８〜１１．５、たとえば８〜１１、たとえば８〜１０．５、たとえば８〜１０、たとえば８〜９．５、たとえば８〜９、たとえば８〜８．５；８．５〜１１．５、たとえば８．５〜１１、たとえば８．５〜１０．５、たとえば８．５〜１０、たとえば８．５〜９．５、たとえば８．５〜９；たとえば９〜１１．５、たとえば９〜１１、たとえば９〜１０．５、たとえば９〜１０、たとえば９〜９．５；たとえば９．５〜１１．５、たとえば９．５〜１１、たとえば９．５〜１０．５、たとえば９．５〜１０；たとえば１０〜１１．５、たとえば１０〜１１、たとえば１０〜１０．５；たとえば１０．５〜１１．５、たとえば１０．５〜１１、たとえば１１〜１１．５の範囲の等電点を有する。
【００７６】
一態様では、生体分子は４．５〜１１．５、たとえば４．５〜４．６、たとえば４．６〜４．８、たとえば４．８〜５．０、たとえば５．０〜５．２、たとえば５．２〜５．４、たとえば５．４〜５．６、たとえば５．６〜５．８、たとえば５．８〜６．０、たとえば６．０〜６．２、たとえば６．２〜６．４、たとえば６．４〜６．６、たとえば６．６〜６．８、たとえば６．８〜７．０、たとえば７．０〜７．２、たとえば７．２〜７．４、たとえば７．４〜７．６、たとえば７．６〜７．８、たとえば７．８〜８．０、たとえば８．０〜８．２、たとえば８．２〜８．４、たとえば８．４〜８．６、たとえば８．６〜８．８、たとえば８．８〜９．０、たとえば９．０〜９．２、たとえば９．２〜９．４、たとえば９．４〜９．６、たとえば９．６〜９．８、たとえば９．８〜１０．０、たとえば１０．０〜１０．２、たとえば１０．２〜１０．４、たとえば１０．４〜１０．６、たとえば１０．６〜１０．８、たとえば１０．８〜１１．０、たとえば１１．０〜１１．２、たとえば１１．２〜１１．４、たとえば１１．４〜１１．５の範囲の等電点を有する。
【００７７】
複合体自体、および複合体の使用は以下にさらに説明され、例示される。
マーカー部分
複合体のマーカー部分は標的コンパートメントを可視化するために有用ないずれのマーカーであってもよい。マーカーはたとえば蛍光、常磁性または放射性であってもよい。好ましくは、マーカーは常磁性マーカーおよび放射性マーカーを含む群から選択される。常磁性マーカーはイメージング法において有用な常磁性シグナルを提供するいずれかの化合物または物質である。放射性マーカーは原子核の自然崩壊によって粒子（アルファまたはベータ放射）または放射線（ガンマ放射）の形状で放射エネルギーを放つか、放つことができる物質を含むか、またはそのような物質からなる。
【００７８】
一態様では、本発明は１以上の常磁性マーカーを含む複合体に関する。常磁性マーカーはたとえば、アルミニウム、バリウム、カルシウム、ジスプロシウム、ガドリニウム、マグネシウム、マンガン、酸素、プラチナ、ナトリウム、ストロンチウム、テクネチウムおよびウランからなる、１以上の常磁性同位体、またはいずれかその変異体および／またはその混合物であってもよい。
【００７９】
常磁性マーカーは好ましくは６より大きい、より好ましくは約７の磁気モーメントである。そのような常磁性マーカーの一例としてはガドリニウムが挙げられる。
複合体のマーカー部分はまた、放射性マーカーからなる群、より好ましくは、生存する個体が許容できる放射性マーカーからなる群から選択されてもよい。放射性マーカーは、たとえば、放射性テクネチウム、放射性ヨウ化種、または炭素の放射性同位体を含む物質であってもよい。
【００８０】
一態様では、マーカー分子は１ｋＤａ〜５０ｋＤａ、たとえば１ｋＤａ〜２ｋＤａ、たとえば２ｋＤａ〜３ｋＤａ、たとえば３ｋＤａ〜４ｋＤａ、たとえば４ｋＤａ〜５ｋＤａ、たとえば５ｋＤａ〜６ｋＤａ、たとえば６ｋＤａ〜７ｋＤａ、たとえば７ｋＤａ〜８ｋＤａ、たとえば８ｋＤａ〜９ｋＤａ、たとえば９ｋＤａ〜１０ｋＤａ、たとえば１０ｋＤａ〜１１ｋＤａ、たとえば１１ｋＤａ〜１２ｋＤａ、たとえば１２ｋＤａ〜１３ｋＤａ、たとえば１３ｋＤａ〜１４ｋＤａ、たとえば１４ｋＤａ〜１５ｋＤａ、たとえば１５ｋＤａ〜１６ｋＤａ、たとえば１６ｋＤａ〜１７ｋＤａ、たとえば１７ｋＤａ〜１８ｋＤａ、たとえば１８ｋＤａ〜１９ｋＤａ、たとえば１９ｋＤａ〜２０ｋＤａ、たとえば２０ｋＤａ〜２１ｋＤａ、たとえば２１ｋＤａ〜２２ｋＤａ、たとえば２２ｋＤａ〜２３ｋＤａ、たとえば２３ｋＤａ〜２４ｋＤａ、たとえば２４ｋＤａ〜２５ｋＤａ、たとえば２５ｋＤａ〜２６ｋＤａ、たとえば２６ｋＤａ〜２７ｋＤａ、たとえば２７ｋＤａ〜２８ｋＤａ、たとえば２８ｋＤａ〜２９ｋＤａ、たとえば２９ｋＤａ〜３０ｋＤａ、たとえば３０ｋＤａ〜３１ｋＤａ、たとえば３１ｋＤａ〜３２ｋＤａ、たとえば３２ｋＤａ〜３３ｋＤａ、たとえば３３ｋＤａ〜３４ｋＤａ、たとえば３４ｋＤａ〜３５ｋＤａ、たとえば３５ｋＤａ〜３６ｋＤａ、たとえば３６ｋＤａ〜３７ｋＤａ、たとえば３７ｋＤａ〜３８ｋＤａ、たとえば３８ｋＤａ〜３９ｋＤａ、たとえば３９ｋＤａ〜４０ｋＤａ、たとえば４０ｋＤａ〜４１ｋＤａ、たとえば４１ｋＤａ〜４２ｋＤａ、たとえば４２ｋＤａ〜４３ｋＤａ、たとえば４３ｋＤａ〜４４ｋＤａ、たとえば４４ｋＤａ〜４５ｋＤａ、たとえば４５ｋＤａ〜４６ｋＤａ、たとえば４６ｋＤａ〜４７ｋＤａ、たとえば４７ｋＤａ〜４８ｋＤａ、たとえば４８ｋＤａ〜４９ｋＤａ、たとえば４９ｋＤａ〜５０ｋＤａの範囲の分子量を有する。
【００８１】
一態様では、マーカー分子は４．５〜１１．５、たとえば４．５〜４．６、たとえば４．６〜４．８、たとえば４．８〜５．０、たとえば５．０〜５．２、たとえば５．２〜５．４、たとえば５．４〜５．６、たとえば５．６〜５．８、たとえば５．８〜６．０、たとえば６．０〜６．２、たとえば６．２〜６．４、たとえば６．４〜６．６、たとえば６．６〜６．８、たとえば６．８〜７．０、たとえば７．０〜７．２、たとえば７．２〜７．４、たとえば７．４〜７．６、たとえば７．６〜７．８、たとえば７．８〜８．０、たとえば８．０〜８．２、たとえば８．２〜８．４、たとえば８．４〜８．６、たとえば８．６〜８．８、たとえば８．８〜９．０、たとえば９．０〜９．２、たとえば９．２〜９．４、たとえば９．４〜９．６、たとえば９．６〜９．８、たとえば９．８〜１０．０、たとえば１０．０〜１０．２、たとえば１０．２〜１０．４、たとえば１０．４〜１０．６、たとえば１０．６〜１０．８、たとえば１０．８〜１１．０、たとえば１１．０〜１１．２、たとえば１１．２〜１１．４、たとえば１１．４〜１１．５の範囲の等電点を有する。
【００８２】
一態様では、マーカー分子は蛍光マーカー分子である。蛍光マーカー分子は、以下のものからなる群から選択することができる：５−（および６）−カルボキシフルオレセイン、５−または６−カルボキシフルオレセイン、６−（フルオレセイン）−５−（および６）−カルボキサミドヘキサン酸、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミン、テトラメチルローダミン、ＡＭＣＡを含む場合により置換されたクマリン、ＰｅｒＣＰ、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）およびアロフィコエリトリン（ＡＰＣ）を含むフィコビリン蛋白質（ｐｈｙｃｏｂｉｌｉｐｒｏｔｅｉｎ）、テキサスレッド（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、プリンセストンレッド（Ｐｒｉｎｃｅｓｔｏｎ  Ｒｅｄ）、緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）およびその類似体、およびＲ−フィコエリトリンまたはアロフィコエリトリンまたはテキサスレッドのコンジュゲート、および半導体ナノ結晶を基礎にした無機蛍光ラベル（たとえば量子ドットおよびＱｄｏｔ（登録商標）ナノ結晶）、およびＥｕ３＋およびＳｍ３＋のようなランタニドを基礎にした時間分解蛍光ラベル、蛍光色素、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ（登録商標）、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ（登録商標）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）（ＡＦ）、ＡＦ４０５、ＡＦ４８８、ＡＦ５００、ＡＦ５１４、ＡＦ５３２、ＡＦ５４６、ＡＦ５５５、ＡＦ５６８、ＡＦ５９４、ＡＦ６１０、ＡＦ６３３、ＡＦ６３５、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７００、ＡＦ７１０、ＡＦ７５０、ＡＦ８００、量子ドットを基礎にした色素、ＱＤｏｔ（登録商標）ナノ結晶（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｓ）、Ｑｄｏｔ（登録商標）５２５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５６５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５８５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６０５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６５５、Ｑｄｏｔ（登録商標）７０５、Ｑｄｏｔ（登録商標）８００、ＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）色素（Ｐｉｅｒｃｅ）（ＤＬ）、ＤＬ５４９、ＤＬ６４９、ＤＬ６８０、ＤＬ８００、フルオレセイン（Ｆｌｕ）またはいずれかその誘導体、Ｃｙ−色素、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、蛍光蛋白質、ＲＰＥ、ＰｅｒＣｐ、ＡＰＣ、緑色蛍光蛋白質；ＧＦＰおよびＧＦＰ由来変異体蛋白質；ＢＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰ、ＤｓＲｅｄ、Ｔ１、Ｄｉｍｅｒ２、ｍＲＦＰ１、ＭＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、タンデム色素、ＲＰＥ−Ｃｙ５、ＲＰＥ−Ｃｙ５．５、ＲＰＥ−Ｃｙ７、ＲＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）タンデムコンジュゲート；ＲＰＥ−Ａｌｅｘａ６１０、ＲＰＥ−ＴｘＲｅｄ、ＡＰＣ−Ａｌｅｃａ６００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６１０、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ７５０、ＡＰＣ−Ｃｙ５、ＡＰＣ−Ｃｙ５．５、イオノフォア；イオンキレーティング蛍光プロップ（ｐｒｏｐｓ）。
【００８３】
以下の表はマーカー分子の付加的な例を挙げる。
【００８４】
【表１】
2010529090.tif 000002
【００８５】
【表２】
2010529090.tif 000003
【００８６】
連結
第３のステップは、場合によりリンカーを介して生体分子をマーカー部分に連結することを含む。
【００８７】
生体分子とマーカー間の連結は直接でも間接でもよい。間接または直接連結の性質は、単一の性質からなっていてもよく、またはいくつかの結合の種、たとえば共有結合およびイオン相互作用の両方を含んでいてもよい。
【００８８】
間接連結を含む一態様では、生体分子は金属イオンキレート剤に連結し、そしてマーカーは該キレート剤によってキレートを形成してもよい。
キレート剤の例としては以下のものが挙げられる：ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ）、ジエチレントリアミン−ペンタメチレン亜リン酸（ＤＴＰＭＰ）、テトラアザシクロドデカン四酢酸（ＤＯＴＡ）またはＤＯＴＡの誘導体、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、テトラアザシクロドデカンテトラキス（メチレン亜リン酸）（ＤＯＴＰ）、ヒドロキシプロピルテトラアザシクロドデカン三酢酸（ＨＰ−ＤＯ３Ａ）、ジエチレントリアミン三酢酸ビスメチルアミド（ＤＴＰＡ−ＢＭＡ）およびＭＳ−３２５。
【００８９】
カップリング反応の条件に依存して、単一のキレート剤は２以上の生体分子複合体と一緒に連結（Ｂ−Ｘ−Ｍ）して超複合体を形成することができ、それらは偏見なしに（Ｂ−Ｘ−Ｍ）ｎ、ｎ＝正の整数として本明細書に提示される。造影剤という用語は、両方の複合体の組みを含む。別の態様では、生体分子複合体はＢｎ−Ｘｎ−Ｍｎを含むことができ、式中ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０などのような正の整数である。
【００９０】
本発明の一態様では、１以上の生体分子を伴った１以上の常磁性マーカーは、１以上の常磁性マーカーおよび１以上の生体分子を伴っている（ａｓｓｏｃｉａｔｉｎｇ）またはそれらに結合している（ｂｉｎｄｉｎｇ）リンカーを含む複合体を形成する。
【００９１】
カップリング反応の条件は、サイズおよび電荷（ｐＩ）が亜集団間で変化することになる、複合体の異なる亜集団を生ずるように操作することができる。
本発明はまた、１より多い異なる生体分子およびマーカーを含む複合体を包含する。これらは同じ反応混合物中で同時に合成されるか、または別個に合成され、その後のいずれかの段階で混合されてもよい。
【００９２】
本発明はたとえば、キレート剤およびキレートを形成した球状蛋白質を含んでいてもよい。たとえば、キレート剤はＤＴＰＡであってもよく、そして球状蛋白質は以下のものを含む群の１つであってもよい。
【００９３】
アプロチニンとＧｄ−ＤＴＰＡ間の化学反応は例証のための１例として役立つ。適切な反応条件は取り込まれたＧｄ−ＤＴＰＡの量に対応して減少するｐＩを持つＧｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニン複合体のいくつかの亜集団を生ずる。この例では、右の非常に小さな画分は取り込まれないままであり、ネイティブのアプロチニンといっしょに溶出する。ｇｄＡｐのアニオン性複合体はまた、この反応において生み出され、塩グラジエントの前のフロースルー中に見られる。これらは亜集団のＧｄ−ＤＴＰＡと共に最も多く取り込まれる。
【００９４】
マーカー分子と生体分子間の非共有結合相互作用を提供することが可能な、適切な分子には以下の分子対および分子類が挙げられる：ストレプトアビジン／ビオチン、アビジン／ビオチン、抗体／抗原、ＤＮＡ／ＤＮＡ、ＤＮＡ／ＰＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡ、ＰＮＡ／ＰＮＡ、ＬＮＡ／ＤＮＡ、たとえばＦｏｓ／Ｊｕｎのようなロイシンジッパー、ＩｇＧ二量体蛋白質、ＩｇＭ多価蛋白質、酸／塩基コイルドコイルへリックス、キレート化合物／金属イオン結合キレート化合物、ストレプトアビジン（ＳＡ）とビオチンおよびその誘導体、ビオチン、免疫グロブリン、抗体（モノクローナル、ポリクローナルおよび組換え体）、抗体フラグメントおよびその誘導体、ＡＰ−１のロイシンジッパードメイン（ｊｕｎおよびｆｏｓ）、ｈｅｘａ−ｈｉｓ（金属キレート化合物部分）、ｈｅｘａ−ｈａｔ  ＧＳＴ（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）グルタチオン親和性、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰ）、Ｓｔｒｅｐ−ｔａｇ、セルロース結合ドメイン、マルトース結合蛋白質、Ｓ−ペプチドタグ、キチン結合タグ、免疫反応性エピトープ、エピトープタグ、Ｅ２タグ、ＨＡエピトープタグ、Ｍｙｃエピトープ、ＦＬＡＧエピトープ、ＡＵ１およびＡＵ５エピトープ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕエピトープ、ＫＴ３エピトープ、ＩＲＳエピトープ、Ｂｔａｇエピトープ、蛋白質キナーゼ−Ｃエピトープ、ＶＳＶエピトープ、炭水化物、脂肪および蛋白質を含む多様な化合物への結合を媒介するレクチン、たとえばＣｏｎ  Ａ（カナバリアエンシホルミス（Ｃａｎａｖａｌｉａ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ））またはＷＧＡ（小麦胚芽凝集素）およびテトラネクチンまたはプロテインＡもしくはＧ（抗体親和性）。そのような結合実体の組み合わせも含まれる。
【００９５】
複合体の選択
所望する電荷および大きさの分子は精製され、イメージング法における造影剤として使用される。
【００９６】
分離の方法は当該技術分野で公知である。好ましい分離の方法には、大きさおよび電荷による分離が挙げられる。選択はたとえばゲルクロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーによって実施されてもよい。
【００９７】
本発明の複合体
本発明は先に記載の方法により得ることが可能な造影剤を含む、１以上のマーカーに連結した１以上の生体分子を含む複合体の形状における新規な造影剤に関する。
【００９８】
本発明に記載の複合体は一般式Ｂ−Ｘ−Ｍによって例証されてもよく、式中Ｂは１以上の生体分子を示し、Ｘは付加的なリンカー部分、たとえばキレート剤であり、そしてＭはマーカー部分である。Ｍは、たとえば常磁性部分、放射性ラベルまたは蛍光ラベルであってもよい。
【００９９】
複合体の一部である１以上の生体分子および１以上のマーカーは先にいっそう詳細に論じられている。
複合体の一部である１以上のマーカーは先にいっそう詳細に論じられている。
【０１００】
本発明に記載の複合体は好ましくは標的コンパートメント中に差別的に蓄積される。造影剤は個体中の標的コンパートメントを可視化するためのイメージング技術に有用である。
【０１０１】
複合体を作製する方法は、特定の標的コンパートメントを可視化する使用に複合体を適応させることを可能にする（上記を参照されたい）。
一態様では、本発明に記載の複合体は少なくとも１種の常磁性マーカーとしてガドリニウムを含む。付加的な態様では、本発明に記載の複合体はガドリニウムに連結したアプロチニンを含む。本発明に記載の別の態様はガドリニウムに連結したキモトリプシノーゲンＡを含む複合体に関する。本発明のさらに付加的な態様はガドリニウムに連結したリゾチームを含む複合体に関する。さらに別の態様では、本発明はガドリニウムに連結したオボアルブミンを含む複合体に関する。
【０１０２】
複合体を使用する方法
複合体は静的および動的イメージングプロセスの両方に有用である。動的イメージングプロセスの一例としては腎臓における糸球体濾過率を可視化することが挙げられる。静的イメージングの一例としては、悪性腫瘍の存在を突き止めるためのＣＴ−スキャンにおける複合体の使用である。
【０１０３】
付加的な態様では、本発明は、本発明に記載の複合体、またはそのような複合体を含む造影剤が使用される磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）を基礎にした方法に関する。とりわけ、個体における腎臓の糸球体濾過率の測定のための磁気共鳴イメージング法が提供され、該方法は本発明に記載の複合体を対象に投与し、該対象の腎臓の画像を捕らえ、そして捕らえられた画像を基礎にして糸球体濾過率を計算するステップを含む。
【０１０４】
可視化技術の例としては、磁気共鳴イメージングおよびコンピュータートモグラフィーを基礎にしたイメージング法のような、Ｘ線写真法が挙げられる。
本発明の複合体は、器官の機能的評価、たとえばヒトのような個体における腎臓の機能的評価、ヒトのような個体における小腸の機能的評価、およびヒトのような個体における血管系の評価のために使用することができる。
【０１０５】
腎臓の例では、腎臓における蓄積は実施されることになる腎臓の感度の高い高分解能スキャンを可能にする。このことは、今度はＧＦＲの定量的評価を可能にする。その上、蛋白尿の腎臓は、蛋白尿の源に依存した特徴的なＭＲＩスキャンを提示するため、本発明の方法はまた、減少したＧＦＲの根底にある原因に関する詳細な情報を集めることを可能にする。その上、単一の腎臓に由来する情報を得ることができる。
【０１０６】
別の態様では、本発明は異なる特徴を持つ複合体を使用して対象の連続したＭＲイメージングスキャンを実施することによる、腎臓の機能的評価のための方法を提供する。本発明の異なる複合体によるスキャンから獲得されたデータの組み合わせは、腎臓の障害／機能の型および範囲に関する詳細な情報を与える。
【０１０７】
本発明はまた、ＭＲイメージングスキャンを実施するための方法に関する。１より多い複合体の使用は、好ましくは単一の複合体の単一のスキャンによって得ることができる情報より多くの情報を与える。
【０１０８】
先に述べたＭＲイメージングを基礎にした方法は診断的および非診断的適用の両方に使用することができる。従って、本発明の一側面では、腎臓の異常な糸球体濾過率を患う個体を診断するための方法が提供される。
【０１０９】
別の態様では、腎臓の糸球体濾過率の評価が必要な個体における、そのような評価のための非診断的なＭＲイメージングを基礎にした方法が提供される。
複合体は同時に投与されてもよく、たとえば、１つより多い複合体が造影剤としての使用のために組成物中に存在してもよい。複合体はまた、いずれの順番で連続して投与されてもよく、その場合１つの複合体が始めに投与され、そして第２の複合体がある期間後に投与される。この時間間隔は５分間から約４８時間までの間であってもよい。
【０１１０】
本発明の生体分子複合体は以下に述べたものを含むいずれのＭＲＩ分析にも使用することができる。
−脳イメージング：脳卒中および腫瘍評価、血管イメージング、外科手術計画作成、ＭＲＩ血管造影法または静脈造影法研究、ＭＲＩ拡散および潅流イメージング、機能的ＭＲＩ、ＭＲＩ脳スペクトロスコピー。
−心臓イメージング：ＲＶ異形成、先天性、腫瘍、大きさ（Ｍａｓｓ）など。
−血管イメージング：ＭＲＩ血管造影法による血管のイメージングおよび強調（ｅｎｈａｎｃｉｎｇ）。
−脊椎イメージング：先天性異常、脊髄圧迫、腫瘍、ＨＮＰ、座骨神経痛などに対する頸椎、胸椎、腰椎および脊椎イメージング。
−腹部／骨盤イメージング：癌診断／ステージング、ＭＲＩまたはＭＲＶ血管造影研究、腎臓ドナー評価、移植片および動脈瘤評価
−整形外科イメージング：軟部組織、筋肉靱帯および骨のイメージング
腎臓のＭＲＩイメージングにおける使用のための複合体
本発明の複合体の使用の一例は、腎臓の糸球体濾過率を可視化するための使用に関する。
【０１１１】
本発明に記載の生体分子の例証となる、限定的でない例としては、１ｋＤａ〜好ましくは５００ｋＤａ未満の球状蛋白質、たとえばアプロチニン、キモトリプシノーゲンＡ、リゾチーム、オボアルブミン、リボヌクレアーゼおよびシトクロムＣ、ならびにそのフラグメントおよび／または変異体を含むか、それらからなるポリペプチドが挙げられる。
【０１１２】
本発明の一側面では、本発明の１以上の生体分子はアプロチニンポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
本発明の付加的な態様では、本発明の１以上の生体分子はキモトリプシノーゲンＡポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
【０１１３】
本発明の別の態様では、本発明の１以上の生体分子はリゾチームポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
本発明の付加的な態様では、本発明の１以上の生体分子はオボアルブミンポリペプチドを含むか、またはそれからなる。
【０１１４】
新規な造影剤の生体分子部分はさらに生体分子、たとえば球状ポリペプチドのようなポリペプチドのフラグメント、たとえばアプロチニン、キモトリプシノーゲンＡ、リゾチームまたはオボアルブミンの１以上のフラグメントを含んでいてもよい。
【０１１５】
さらに別の態様では、本発明は生体分子または複数の生体分子が遺伝子工学的に改変されている複合体を含む。そのような工学的改変には、生体分子または生体分子のフラグメントもしくは変異体の組換え体産生を含むことができる。
【０１１６】
付加的な特有の態様は、腎臓において蓄積する能力を複合体に授けるか、またはそのようにするために不可欠な生体分子の能力を高めるように工学的に改変された生体分子を含む。そのような工学的改変の例としては、生体分子にメガリンおよび／またはキュブリンに対する結合部位を導入することが挙げられる。改変の付加的な例としては、生体分子の電荷を変化させるように生体分子を工学的に改変することが挙げられる。
【０１１７】
特有の一態様では、複合体は生体分子としてアプロチニンを含む。アプロチニンはメガリン／キュブリン複合体と明確に相互作用し、近位尿細管によって明確に再吸収される。複合体はさらにリンカー部分としてＤＰＴＡを含む。複合体はマーカー部分としてのガドリニウムによって特徴付けられる。
【０１１８】
一例では、例証するためであって限定しないという条件で、ガドリニウムに連結したアプロチニンが患者に静脈内投与され、ＭＲイメージングが実施される。イメージングは該患者の糸球体濾過率を可視化する。その後、ガドリニウムに連結したリゾチーム誘導体を含む複合体は同じ患者に静脈内投与され、ＭＲイメージングが実施される。２つのスキャンにおいて獲得された画像は比較される。アプロチニンを含む複合体（損傷された尿細管によってさえ吸収される）の不足がない状態での、リゾチーム誘導体を含む複合体（尿細管損傷はこの複合体の吸収を阻止する）の取り込みの不足は、糸球体濾過率が現在のところ低下していない尿細管の局所的な障害（たとえば、急性虚血後）を示唆する。
【０１１９】
投与
本発明の複合体、または複合体を含む医薬組成物の投与様式は、経腸または非経口、たとえば経口、舌下、経鼻、吸入、注射、静脈内、皮下、直腸内、膣内、皮膚または経皮であってもよい。好ましい態様では、複合体は経口的に、または静脈内に投与される。複合体を含むか、または複合体からなる組成物はまた、注腸によって投与されてもよい。
【０１２０】
本発明の複合体、または複合体を含む医薬組成物を投与する好ましい一様式は、静脈内である。静脈内投与の例としては、注射または点滴によるものが挙げられるが、それらに限定されない。投与はたとえばボーラス注射であってもよい。投与様式の別の例は、たとえば１分間、たとえば２〜３分間、たとえば４分間、たとえば約５分間、たとえば約６分間、たとえば約７分間、たとえば約８分間、たとえば約９分間、たとえば約１０分間、たとえば約１２分間、たとえば約１５分間、たとえば約１６分間、たとえば約１７分間、たとえば約１８分間、たとえば約１９分間、たとえば約２０分間の短時間注入であってもよい。
【０１２１】
本発明に記載の複合体および組成物の個体への別の好ましい投与様式は、経口である。好ましい剤形は、液剤、トニック（ｔｏｎｉｃ）、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、チュワブル剤などでありうる。
【０１２２】
複合体の服用量は安全で十分な量の複合体を含み、それは好ましくは服用量ごとに約０．０１ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲である。服用量は、たとえば１ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜７ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜６ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜５ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜４ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜３ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜２ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜７ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜６ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜５ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜４ｍｇ、たとえば２ｍｇ〜３ｍｇ、たとえば３ｍｇ〜１０ｍｇ、またはたとえば３ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば３ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば３ｍｇ〜７ｍｇ、たとえば３ｍｇ〜６ｍｇ、たとえば３ｍｇ〜５ｍｇ、たとえば３ｍｇ〜４ｍｇ、たとえば４ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば４ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば４ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば４ｍｇ〜７ｍｇ、たとえば４ｍｇ〜６ｍｇ、たとえば４ｍｇ〜５ｍｇ、たとえば５ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば５ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば５ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば５ｍｇ〜７ｍｇ、たとえば５ｍｇ〜６ｍｇ、たとえば６ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば６ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば６ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば６ｍｇ〜７ｍｇ、たとえば７ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば７ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば７ｍｇ〜８ｍｇ、たとえば８ｍｇ〜１０ｍｇ、たとえば８ｍｇ〜９ｍｇ、たとえば９ｍｇ〜１０ｍｇ、または１０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１７０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１６０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜７０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜６０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ５０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜４０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜３０ｍｇ、たとえば１０ｍｇ〜２０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば２０〜１７０ｍｇ、たとえば２０〜１６０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜７０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜６０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜５０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜４０ｍｇ、たとえば２０ｍｇ〜３０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば３０〜１７０ｍｇ、たとえば３０〜１６０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜７０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜６０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜５０ｍｇ、たとえば３０ｍｇ〜４０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば４０〜１７０ｍｇ、たとえば４０〜１６０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜７０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜６０ｍｇ、たとえば４０ｍｇ〜５０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば５０〜１７０ｍｇ、たとえば５０〜１６０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜７０ｍｇ、たとえば５０ｍｇ〜６０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば６０〜１７０ｍｇ、たとえば６０〜１６０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば６０ｍｇ〜７０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば７０〜１７０ｍｇ、たとえば７０〜１６０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば７０ｍｇ〜８０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば８０〜１７０ｍｇ、たとえば８０〜１６０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば８０ｍｇ〜９０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば９０〜１７０ｍｇ、たとえば９０〜１６０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば９０ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１００〜１７０ｍｇ、たとえば１００〜１６０ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば１００ｍｇ〜１１０ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１１０〜１７０ｍｇ、たとえば１１０〜１６０ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば１１０ｍｇ〜１２０ｍｇ、たとえば１２０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１２０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１２０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１２０〜１７０ｍｇ、たとえば１２０〜１６０ｍｇ、たとえば１２０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば１２０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば１２０ｍｇ〜１３０ｍｇ、たとえば１３０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１３０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１３０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１３０〜１７０ｍｇ、たとえば１３０〜１６０ｍｇ、たとえば１３０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば１３０ｍｇ〜１４０ｍｇ、たとえば１４０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１４０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１４０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１４０〜１７０ｍｇ、たとえば１４０〜１６０ｍｇ、たとえば１４０ｍｇ〜１５０ｍｇ、たとえば１５０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１５０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１５０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１５０〜１７０ｍｇ、たとえば１５０〜１６０ｍｇ、たとえば１６０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１６０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１６０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１６０〜１７０ｍｇ、たとえば１７０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１７０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１７０ｍｇ〜１８０ｍｇ、たとえば１８０ｍｇ〜２００ｍｇ、たとえば１８０ｍｇ〜１９０ｍｇ、たとえば１９０ｍｇ〜２００ｍｇであってもよい。
【０１２３】
経口投与のための単位剤形の調製に適したキャリアは当該技術分野で公知である。
経口組成物にはさらに、液剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。そのような組成物の調製に適したキャリアは当該技術分野で公知である。液体経口組成物は好ましくは約０．００１％〜約５％の対象化合物を含む。
【０１２４】
複合体の全身送達を達成するために有用な他の組成物には舌下および口腔剤形が挙げられる。そのような組成物には、典型的には可溶性賦形剤物質；および結合剤が挙げられ、その上付加的な流動促進剤、潤沢剤、甘味剤、着色剤、酸化防止剤および香味剤がさらに含まれていてもよい。
【０１２５】
方法の組み合わせ
本発明の生体分子複合体はさらに本明細書の以下に記載の１以上のイメージング分析またはそのいずれかの組み合わせに使用することができる。本発明はまた、方法の組み合わせ、たとえばＣＴ−ＰＥＴに関する。
【０１２６】
ポジトロンエミッショントモグラフィー−コンピュータートモグラフィー（ＰＥＴ−ＣＴとしても公知）は単一架台システムにおいて、ポジトロンエミッショントモグラフィー（ＰＥＴ）とＸ線コンピュータートモグラフィーの両方を組み合わせる医用イメージングデバイスであるため、両方のデバイスから獲得された画像が同じ期間に連続して患者から撮影され、単一の重ね合わせ（同時に記録された）画像に組み合わせることができる。従って、ＰＥＴによって得られた体内の代謝的および生化学的活性の空間的分布を表す機能的イメージングはＣＴスキャンニングによって得られた解剖学的イメージングといっそう正確に一致させるか、または相関させることができる。二次元および三次元画像復元物が一般的ソフトウェアおよびコントロールシステムの相関的要素として与えられてもよい。
【０１２７】
本発明に記載の生体分子複合体は、たとえば腫瘍学、外科手術計画作成、放射線療法および癌のステージングにおけるＰＥＴ−ＣＴ分析に使用することができる。
ＵＳＧ（超音波診断法）、ＣＴおよびＭＲＩはたとえば、腫瘍の形態および大きさの優れたマッピングを提供する。ＣＴ／ＭＲ潅流、ＭＲスペクトロスコピー、機能的ＭＲにおける最近の進歩は、代謝活性にさえ、ある程度の情報を追加する。ＦＤＧと共に行われるＰＥＴは質的および量的両方の代謝情報を与え、それは初期の診断およびフォローアップに非常に有用である。歴史的にＵＳ／ＣＴ／ＭＲＩは放射線医の分野であり、ＰＥＴは核医学専門医によって操作される。
【０１２８】
ＭＲスペクトロスコピーは、高いコリンピークが細胞異形成において見られるため、たとえば、腫瘍検出において感度が高く、特殊性がある。ピルベートおよびラクテートは共に容易にＭＲＳで検出され、腫瘍の進行度を決め、腫瘍活性を評価することに役立つ。
【０１２９】
ＭＲおよびＣＴ潅流研究は共に、通常増大した潅流を示す生存可能な腫瘍組織を評価することにおいて有用である。ＣＴ潅流は、血液量、血流および腫瘍通過時間を直接定量することができるため、さらに有益である。これは、異なる投薬計画を受けている腫瘍のフォローアップに非常に役立つ。
【０１３０】
ＰＥＴでは解剖学的な詳細は得られず、病巣を正確に突き止め、正常なトレーサー取り込みを異常なものと識別するためにはＣＴのような他のイメージング手段と相関させる必要がある。一態様では、所望する器官の高分解能ＣＴは、基礎を成す解剖学的データにＰＥＴ画像を重ね合わせることにより得られ、優れたイメージング獲得を導く。
【０１３１】
ＣＴ−ＰＥＴは、たとえば直腸結腸癌、食道悪性腫瘍、リンパ腫、肺癌、メラノーマ、乳房悪性腫瘍、頭部および頸部腫瘍の診断、ステージングおよびフォローアップにおいて、ならびに肺結節の性状決定において十分に確立されている。その上ＣＴ−ＰＥＴは痕跡活性が増加した、かなり小さな部分の正確な位置を突き止めることにおいて非常に役立つことが見出されている。
【０１３２】
参考文献
Manjunath G, Tighiouart H, Coresh J, et al.: Level of kidney function as a risk factorfor cardiovascular outcomes in the elderly. Kidney Int 63:1121-1129, 2003a
US 7,048,097 4. US 7,048,907 B2 (Groman) Synthesis, compositions and methods for the measurement of the concentration of stable-isotope labeled compounds in life forms and life form excretory products.
Kobayashi et al: Detection of lymph node involvement in hematologic malignances using micromagnetic resonance lymphangiography with a gadolinium labelled dendrimer nanoparticles” Neoplasia. 2005 Nov, 7(11):984-91)
Choyke PL, Kobayashi H  “Functional magnetic resonance imaging of the kidney using macromolecular contract agents” Abdom Imaging. 2006 Mar-Apr, 31(2): 224-31.
Manjunath G, Tighiouart H, Ibrahim H, et al.: Level of kidney function as a risk factorfor atherosclerotic cardiovascular outcomes in the community. J Am Coll Cardiol 41:47-55, 2003b
Baran D, Tenstad O, Aukland K: Aprotinin uptake in the proximal tubules in the rat kidney. II. Uptake site relative to glomerulus. J Struct Biol 142:409-415, 2003a
Baran D, Tenstad O, Aukland K: Aprotinin uptake in the proximal tubules in the rat kidney I. Length of proximal tubular uptake segment. J Struct Biol 142:402-408, 2003b
Baran D, Tenstad O, Aukland K: Localization of tubular uptake segment of filtered Cystatin C and Aprotinin in the rat kidney. Acta Physiol (Oxf) 186:209-221, 2006
Roald AB, Aukland K, Tenstad O: Tubular absorption of filtered cystatin-C in the rat kidney. Exp Physiol 89:701-707, 2004a
Roald AB, Tenstad O, Aukland K: The effect of AVP-V2 receptor stimulation on local GFR in the rat kidney. Acta Physiol Scand 168:351-359, 2000
Roald AB, Tenstad O, Aukland K: The effect of AVP-V receptor stimulation on local GFR in the rat kidney. Acta Physiol Scand 182:197-204, 2004b
Tenstad O, Roald AB, Grubb A, et al.: Renal handling of radiolabelled human cystatin C in the rat. Scand J Clin Lab Invest 56:409-414, 1996
Tenstad O, Williamson HE, Aukland K: Repeatable measurement of local and zonal GFR in the rat kidney with aprotinin. Acta Physiol Scand 152:21-31, 1994a
Tenstad O, Williamson HE, Clausen G, et al.: Glomerular filtration and tubular absorption of the basic polypeptide aprotinin. Acta Physiol Scand 152:33-50, 1994b
Treeck B, Aukland K: Effect of L-NAME on glomerular filtration rate in deep and superficial layers of rat kidneys. Am J Physiol 272:F312-318, 1997
Treeck B, Roald AB, Tenstad O, et al.: Effect of exogenous and endogenous angiotensin II on intrarenal distribution of glomerular filtration rate in rats. J Physiol541:1049-1057, 2002
Christiansen RE, Roald AB, Gjerstad C, et al.: Renal hemodynamics in young and old spontaneously hypertensive rats during intrarenal infusion of arginine vasopressin.Kidney Blood Press Res 24:176-184, 2001
Christiansen RE, Roald AB, Tenstad O, et al.: Renal hemodynamics during development of hypertension in young spontaneously hypertensive rats. Kidney Blood Press Res 25:322-328, 2002
Christiansen RE, Tenstad O, Leh S, et al.: Glomerular charge selectivity is impaired in hypertensive nephropathy. Nephrol Dial Transplant 19:1083-1091, 2004
Wang X, Aukland K, Bostad L, et al.: Autoregulation of total and zonal glomerular filtration rate in spontaneously hypertensive rats with mesangiolysis. Kidney Blood Press Res 20:11-17, 1997a
Wang X, Aukland K, Iversen BM: Autoregulation of total and zonal glomerular filtration rate in spontaneously hypertensive rats during antihypertensive therapy. J Cardiovasc Pharmacol 28:833-841, 1996
Wang X, Aukland K, Iversen BM: Acute effects of angiotensin II receptor antagonist on autoregulation of zonal glomerular filtration rate in renovascular hypertensive rats. Kidney Blood Press Res 20:225-232, 1997b
Wang X, Aukland K, Ofstad J, et al.: Autoregulation of zonal glomerular filtration rate and renal blood flow in spontaneously hypertensive rats. Am J Physiol 269:F515-521,1995
AUKLAND, K., TENSTAD, O. & WIIG, H. (2001). Distribution spaces for hyaluronan andalbumin in rat tail tendons. Am J Physiol Heart Circ Physiol 281, H1589-1597.
BAKOUSH, O., TENCER, J., TORFFVIT, O., TENSTAD, O., SKOGVALL, I. & RIPPE, B. (2004).Increased glomerular albumin permeability in old spontaneously hypertensive rats. Nephrol Dial Transplant 19, 1724-1731.
BLETSA, A., BERGGREEN, E., FRISTAD, I., TENSTAD, O. & WIIG, H. (2006). Cytokine signalling in rat pulp interstitial fluid and transcapillary fluid exchange during lipopolysaccharide-induced acute inflammation. J Physiol 573, 225-236.
ERGA, K. S., PEEN, E., TENSTAD, O. & REED, R. K. (2000). Lactoferrin and antilactoferrinantibodies: effects of ironloading of lactoferrin on albumin extravasation in different tissues in rats. Acta Physiol Scand 170, 11-19.
GYENGE, C. C., TENSTAD, O. & WIIG, H. (2003). In vivo determination of steric and electrostatic exclusion of albumin in rat skin and skeletal muscle. J Physiol 552, 907-916.
KVEINE, M., TENSTAD, E., DOSEN, G., FUNDERUD, S. & RIAN, E. (2002). Characterization of the novel human transmembrane protein 9 (TMEM9) that localizes to lysosomes and late endosomes. Biochem Biophys Res Commun 297, 912-917.
LUND, U., RIPPE, A., VENTUROLI, D., TENSTAD, O., GRUBB, A. & RIPPE, B. (2003). Glomerular filtration rate dependence of sieving of albumin and some neutral proteins in rat kidneys. Am J Physiol Renal Physiol 284, F1226-1234.
NEGRINI, D., TENSTAD, O., PASSI, A. & WIIG, H. (2006). Differential degradation of matrix proteoglycans and edema development in rabbit lung. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 290, L470-477.
NEGRINI, D., TENSTAD, O. & WIIG, H. (2003). Interstitial exclusion of albumin in rabbit lung during development of pulmonary oedema. J Physiol 548, 907-917.
NEGRINI, D., TENSTAD, O. & WIIG, H. (2003). Interstitial exclusion of albumin in rabbit lung measured with the continuous infusion method in combination with the wick technique. Microcirculation 10, 153-165.
ROSENGREN, B. I., RIPPE, B., TENSTAD, O. & WIIG, H. (2004). Acute peritoneal dialysis in rats results in a marked reduction of interstitial colloid osmotic pressure. J Am Soc Nephrol 15, 3111-3116.
TENSTAD, O., HEYERAAS, K. J., WIIG, H. & AUKLAND, K. (2001). Drainage of plasma proteins from the renal medullary interstitium in rats. J Physiol 536, 533-539.
TORLAKOVIC, E., TENSTAD, E., FUNDERUD, S. & RIAN, E. (2005). CD10+ stromal cells form B-lymphocyte maturation niches in the human bone marrow. J Pathol 205, 311-317.
WIIG, H., AUKLAND, K. & TENSTAD, O. (2003). Isolation of interstitial fluid from rat mammary tumors by a centrifugation method. Am J Physiol Heart Circ Physiol 284, H416-424.
WIIG, H., GYENGE, C. C. & TENSTAD, O. (2005). The interstitial distribution of macromolecules in rat tumours is influenced by the negatively charged matrix components. J Physiol 567, 557-567.
WIIG, H., KOLMANNSKOG, O., TENSTAD, O. & BERT, J. L. (2003). Effect of charge on interstitial distribution of albumin in rat dermis in vitro. J Physiol 550, 505-514.
WIIG, H., REED, R. K. & TENSTAD, O. (2000). Interstitial fluid pressure, composition of interstitium, and interstitial exclusion of albumin in hypothyroid rats. Am J Physiol Heart Circ Physiol 278, H1627-1639.
WIIG, H. & TENSTAD, O. (2001). Interstitial exclusion of positively and negatively charged IgG in rat skin and muscle. Am J Physiol Heart Circ Physiol 280, H1505-1512.
WIIG, H., TENSTAD, O. & BERT, J. L. (2005). Effect of hydration on interstitial distribution of charged albumin in rat dermis in vitro. J Physiol 569, 631-641.
SvarstadE, Hultstroffi,D.,Jensen,D.,Jenssen,G.,Iversen,B.M. Renal artery thrombosis with acute failure after withdrawal of angiotensin converting enzyme inhibitor: a case report. Nephology Dialysis Transplantation 1 7: | -2, 2002.
Asarod,K, Iversen B.M, Hammerstrsm J, and Bostad, L and Jsrstad, S. Clinical outcome inpatientsw ith Wegnersg raulomatosistr eatedw ith plasmapheresis Blood Purification 20:167-173.2002
Roald, A, Ofstad, J and Iversen B.M. Attenuated buffering of renal pressure variation in juxtamedullaryc ortex in the spontaneouslyh ypertensiver at. Am. J.Physiol Renal Physiol282: F506-F511 . 2002.
Vikse, B E, Bostad, L, Aasarod,K, Dag Einar Lysebo, D E, and Iversen, BM. Prognostic factor in mesangioprqliferative glomerulonephritis. Nephrology Dialysis and transplantation 18: 17-23,2002.
SvarstadE, , Myking O, OfstadJ , and IversenB . M. Effect of light excersiseo n renal hemodynamicsin patientsw ith hjpertension and chronic renal disease.Scan J Urology Nephrology.3 6: 6, 464-473,2002
Christiansen, R F, Roald, A, Tenstad O and Iversen B M. Renal hemodynamics in young rats with genetich ypertdnsion.K idney and Blood PressureR eserarch2. 5: 322-328,2002.
Vikse, B E, Aasarod K, Bostad L and Iversen BM. Prognostic factors in.biopsy proven benign nephrosclerosisN. ephrology Dialysis and Transplantation:2 003: 18: 5I7-23
Svarstad, E and Iversen B.M. Renal artery thombosis and acute renal failure after ACE inhibition. Nephrology Dialysis and Transplation 2004: 5 65.
ChristiansenR .E, TenstadO , Leh S and IversenB M. Glomerularc harges electivity impaired in hypertensiven ephropathy.N ephrol Dialysis Transplantation:1 9: I 083-109I, 2004
Vagnes O, HansenF H, ChristiansenR E, Gjerstad,C and IversenB M: Age regulationo f the Vla receptori n rats with genetich ypertension. Amer. J. Physiol 286:F997-Fl003, 2004.
Svarstad,E, IversenB M and Bostad,L . Bedsides tereomicroscopyo f renal biopsiesm ay leadt o a rapidd iagnosiso f Fabry'sd isease. Nephrol.Dial.Transplant.;1 9: 3202 - 3203,2004.
Vikse BE, Vollset SE, Tell GS, Refsum H, Iversen BM. (2004). Distribution and determinants of serum creatinine in the general population: the Hordaland Health Study. Scand J Clin LabInvest, 64, l-14,2004. 
Ersver, E, Bertelsen,L -T, Espenes,L.CB, redholt,T,BAe, SO, Iversen,B M, Bruserud,O,Ulvestad,E , Gjerts-enB, T. Characterizationo f ribosomalP autoantibodiesin relation to cell destruction and autoimmune diseaqe. Scand. Jour. Immunology 60,189-198,2004.
Strommen, K., Stormark ,TA., Iversen, BM. and Matre K. Volume estimation of small phantoms and rat kidneys using three-dimensional ultrasonography and position sensor.30(9), 2004
SvarstadE , IversenB M, BostadL . Bedsides tereomicroscopyo f renal biopsiesm ay lead to a rapid diagnosis of Fabry's disease.Nephrol Dial Transp lant. 2004 Dec ; 1 9( 1 2) :3202-3 .
HansenF H, VagnesO B, IversenB M.Enhancedr esponseto argininev asopressin( AVP) in the interlobular artery (ILA) from the spontaneously hypertensive rat (SHR). Am J Physiol RenalPhysiol 288 (6) :F ]oa9 - 5 6,2005 .
Bivol LM, VagnesO B, IversenB M.The renal vascularr esponseto ANG II injection isreduced in the non-clipped kidney of two-kidney, one clip hypertension.Am J Physiol Renal Physiol. Am J Physiol Renal Physiol. A;289(2):F393-400, 2005
VagnesO , HansenF H, Feng JJ, IversenB M, ArendshorstW J.Enhance d Ca2+responset oAVP in preglomerular vessels from rats with genetic hypertension during different hydrationStates Am J Physiol R enal Physiol. 88(5):F1023-31, 2005.
Svarstad,E ., BostadL .,Kaabae, A,Houge,G., Tsndel,C.,L yngdal,P.T.a nd Iversen,B.M:Focal and segmental glomerular sclerosis (FSGS) in a man and a woman with Fabry'sDisease Clinical nephrology 63: 394-400, 2005
Svarstad,E , Urheim L and B.M.Iversen:C ritical renal artery stenosism ay causeaspectrum of cardiorenal failure and associated thromboembolic events. Clinical Nephrology63, 487-492, 2005.
Leh S, Vaagnes O, Margolin SB, Iversen BM, Forslund T.Pirfenidone and candesartanameliorate morphological damage in mild chronic anti-GBM nephritis in rats.Nephrol DialTransplant 20(1:)7 l -82, 2005 .
Ofstad J, Iversen BM. Glomerular and tubular damage in normotensive and hypertensive rats.Am J Physiol Renal Physiol. ;288(a) :F665- 7 2, 2005.
Svarstad,E ., BostadL .,Kaabae,6,HougqG., Tondel,C.,L yngdal,P.T.a nd Iversen,B.M:Focal and segmental glomerular sclerosis (FSGS) in a man and a woman with Fabry'sDisease Clinical Nephrology 63: 394-401, 2005
Vikse, B.E., Irgens,L., Bostad, L. and Iversen B.M.. Adverse perinatal outcome and latekidney diseasein the mother. J. Amer. Soc Nephrology. 2006
Helle , F, Vagnes O and Iversen BM: Angiotensin II indiced calcium- signalling in-twokidney -one clip hypertension Amer J. Physiolol, Renal, 2006
Erik Ilso Christensen & Henrik Birn, Nature Reviews Molecular Cell Biology 3, 258-268, April 2002
【実施例】
【０１３３】
実施例１：Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンプロトコル
材料：
・ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸二無水物、Ｓｉｇｍａ  Ｄ−６１４８、Ｃ１４Ｈ１９Ｎ３Ｏ８、分子量３５７．３２）。
・ウシ肺由来アプロチニン、Ｓｉｇｍａ  Ａ４５２９凍結乾燥粉末、３−７  ＴＩＵ／ｍｇ固体、分子量６５１１．４４）。
・ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｈ７５２３、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸、Ｃ８Ｈ１８Ｎ２Ｏ４Ｓ、分子量２３８．３０）。
・クエン酸（Ｓｉｇｍａ  Ｃ０７５９、ＨＯＣ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２  分子量１９２．１２）。
・クエン酸三ナトリウム二水和物（Ｓｉｇｍａ  Ｓ４６４１、ＨＯＣ（ＣＯＯＮａ）（ＣＨ２ＣＯＯＮａ）２・２Ｈ２Ｏ、分子量２９４．１０）。
・ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  ジメチルスルホキシド、Ｄ８４１８、（ＣＨ３）２ＳＯ、分子量７８．１３）。
・透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ３チューブ：３．５ｋ  ＭＷＣＯ  再生セルロース  Ｃａｔ．Ｎｏ．：１３２７２０）。
・ＮＴＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｎ０１２８、ニトリロ三酢酸二ナトリウム塩、Ｃ６Ｈ７ＮＯ６Ｎａ２、分子量２３５．１０
・ＧｄＣｌ３（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｃａｔ．Ｎｏ．：２０３７１２、ガドリニウムクロリド、Ｃｌ３ＧｄＨ１２Ｏ６、分子量：３７１．７）。
・０．５Ｎ  ＨＣｌ中のガドリニウム−１５３  放射性核種（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＮＥＺ１４２００１ＭＣ）
１日目：ＤＴＰＡ−アプロチニンの生産
２５０μｌの０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ８．８に１１ｍｇ  アプロチニンを溶解する。
【０１３４】
１ｍｌ  ＤＭＳＯに０．４８ｇ  ＤＴＰＡを溶解する。
２５μｌのＤＭＳＯ／ＤＴＰＡ溶液をアプロチニン溶液に添加し、１％クエン酸を使用してｐＨ６．５に調整した０．１Ｍクエン酸バッファー１０００ｍｌに対して一晩透析する。
【０１３５】
２日目：透析２回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
３日目：透析３回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
【０１３６】
４日目：Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンの生産
４ｍｌのｐＨ１．０  ＨＣｌに２６０ｍｇ  ＧｄＣｌ３を溶解することによりＧｄ（ＮＴＡ）２を作製する。ガンマ検出を使用する生物学的スクリーニングを所望する場合、１００μＣｉ  ガドリニウム−１５３を添加する。
【０１３７】
４９４ｍｇ  ＮＴＡを添加する（白色沈殿を得る）。ｐＨ４．９になるまで３Ｍ  ＮａＯＨを滴下して加える。
透析したＤＴＰＡ−アプロチニン溶液に２０μｌのＧｄ（ＮＴＡ）２を攪拌しながら添加する。
【０１３８】
攪拌を３時間継続し、先に記載のように、０．１Ｍクエン酸バッファー１０００ｍｌに対して一晩透析する。
５日目：透析２回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
【０１３９】
６日目：透析３回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンは少なくとも３ヶ月間、４〜８℃においてクエン酸バッファー中で安定である。
【０１４０】
実施例２：Ｇｄ−ＤＴＰＡ−リゾチームプロトコル
材料：
・ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸二無水物、Ｓｉｇｍａ  Ｄ−６１４８、Ｃ１４Ｈ１９Ｎ３Ｏ８、分子量３５７．３２）。
・ニワトリ卵白由来リゾチーム、Ｓｉｇｍａ  Ｌ６８７６、凍結乾燥粉末、分子量１４．７ｋＤａ。
・ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｈ７５２３、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸、Ｃ８Ｈ１８Ｎ２Ｏ４Ｓ、分子量２３８．３０）。
・クエン酸（Ｓｉｇｍａ  Ｃ０７５９、ＨＯＣ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２  分子量１９２．１２）。
・クエン酸三ナトリウム二水和物（Ｓｉｇｍａ  Ｓ４６４１、ＨＯＣ（ＣＯＯＮａ）（ＣＨ２ＣＯＯＮａ）２・２Ｈ２Ｏ、分子量２９４．１０）。
・ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  ジメチルスルホキシド、Ｄ８４１８、（ＣＨ３）２ＳＯ、分子量７８．１３）。
・透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ３チューブ：３．５ｋ  ＭＷＣＯ  再生セルロース  Ｃａｔ．Ｎｏ．：１３２７２０）。
・ＮＴＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｎ０１２８、ニトリロ三酢酸二ナトリウム塩、Ｃ６Ｈ７ＮＯ６Ｎａ２、分子量２３５．１０
・ＧｄＣｌ３（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｃａｔ．Ｎｏ．：２０３７１２ガドリニウムクロリド、Ｃｌ３ＧｄＨ１２Ｏ６、分子量：３７１．７）。
・０．５Ｎ  ＨＣｌ中のガドリニウム−１５３  放射性核種（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＮＥＺ１４２００１ＭＣ）
１日目：ＤＴＰＡ−リゾチームの生産
５ｍｌの０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ８．８に２２０ｍｇ  リゾチームを溶解する。
【０１４１】
１ｍｌ  ＤＭＳＯに０．４８ｇ  ＤＴＰＡを溶解する。
１００μｌのＤＭＳＯ／ＤＴＰＡ溶液をリゾチーム溶液に添加し、ｐＨを８．８に調整する。全部で５００μｌのＤＳＭＯ／ＤＴＰＡが添加されるように、このステップを５回繰り返す。１％クエン酸を使用することによりｐＨ６．５に調整した０．１Ｍクエン酸バッファー１０００ｍｌに対して一晩透析する。
【０１４２】
２日目：透析２回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
３日目：透析３回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
【０１４３】
４日目：Ｇｄ−ＤＴＰＡ−アプロチニンの生産
４ｍｌのｐＨ１．０  ＨＣｌにＧｄＣｌ３を２６０ｍｇ溶解することによりＧｄ（ＮＴＡ）２を作製する。ガンマ検出を使用する生物学的スクリーニングを所望する場合、１００μＣｉ  ガドリニウム−１５３を添加する。
【０１４４】
４９４ｍｇ  ＮＴＡを添加する（白色沈殿を得る）。ｐＨ４．９になるまで３Ｍ  ＮａＯＨを滴下して加える。
透析したＤＴＰＡ−リゾチーム溶液に４００μｌのＧｄ（ＮＴＡ）２を攪拌しながら添加する。
【０１４５】
攪拌を３時間継続し、先に記載のように、１０００ｍｌの０．１Ｍクエン酸バッファーに対して一晩透析する。
５日目：透析２回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
【０１４６】
６日目：透析３回目
新鮮なクエン酸バッファーに交換する。
Ｇｄ−ＤＴＰＡ−リゾチームは少なくとも３ヶ月間、４〜８℃においてクエン酸バッファー中で安定である。
【０１４７】
実施例３：患者における糸球体濾過率の研究
一例では、例証するためであって限定しないという条件で、ガドリニウムに連結したアプロチニンが患者に静脈内投与され、ＭＲイメージングが実施される。イメージングは該患者の糸球体濾過率を可視化する。その後、ガドリニウムに連結したリゾチームを含む複合体が同じ患者に静脈内投与され、ＭＲイメージングが実施される。２つのスキャンによって獲得された画像が比較される。アプロチニンを含む複合体（損傷した尿細管によってさえ吸収される）の不足がない状態での、リゾチーム誘導体を含む複合体（尿細管損傷はこの複合体の吸収を阻止する）の取り込みの不足は、糸球体濾過率が現在のところ低下していない尿細管の局所的な障害（たとえば、急性虚血後）を示唆する。
【０１４８】
実施例４：患者のＧＦＲの腎臓内分布の変化の研究
別の実例では、２つの腎臓における糸球体濾過率の皮質内分布を測定するために、ガドリニウムに連結したアプロチニンが片側腎動脈狭窄を患う患者に対して静脈内投与される。片側腎動脈狭窄は、狭窄した腎臓の外側皮質相においてネフロンの初期の混乱状態を生ずることが知られている。高血圧に曝された反対側の腎臓の内部皮質ネフロンは他方で、最初に糸球体硬化症を発症する。従って、２つの腎臓における局所糸球体濾過率の内部皮質対外部皮質の比は健康な対象では類似し、片側腎動脈狭窄では逆の傾向に変化するものであり、そのような比は非常に初期の機能的異常の検出を可能にし、臨床医が外科的処置の好ましい時期を決定することに役立つ。
【図１】
2010529090.tif 000004
【図２】
2010529090.tif 000005
【図３】
2010529090.tif 000006
【図４】
2010529090.tif 000007
【図５】
2010529090.tif 000008
【図６】
2010529090.tif 000009
【図７】
2010529090.tif 000010
【図８】
2010529090.tif 000011
【図９】
2010529090.tif 000012
【図１０】
2010529090.tif 000013
【図１１】
2010529090.tif 000014
【図１２】
2010529090.tif 000015
【図１３】
2010529090.tif 000016
【国際調査報告】
2010529090.tif 000017
2010529090.tif 000018
2010529090.tif 000019
2010529090.tif 000020
2010529090.tif 000021
2010529090.tif 000022
2010529090.tif 000023
2010529090.tif 000024
2010529090.tif 000025
2010529090.tif 000026
2010529090.tif 000027