(57)【要約】  哺乳動物対象のナノ粒子ベース治療の方法を提供する。該方法は、ナノ粒子および／または治療で目標とする生体表面に特異的に結合するために有用な親和性部分および親水性ポリマーコーティングを含む外表面を有するナノ粒子を使用する。親水性ポリマーコーティングは、ポリマー成分に対して共有結合しているか、または表面吸着しているポリマー鎖で構成されている。所望のナノ粒子生体内分布を達成した後、親和性薬剤は標的表面に結合してナノ粒子の内在化を促進する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療剤を哺乳動物対象に投与する方法であって、ポリマーマトリックスと二価陽イオンを含み、治療剤を含むナノ粒子組成物を、対象に全身的に投与することを含む方法。
【請求項２】
全身投与後、ポリマーマトリックスが周囲媒質からのカルシウムの隔離を阻止することにより、低カルシウム血症を防止する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該治療剤が水溶解性である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該治療剤が式（Ｉ）：
【化１】
2010501004.tif 000011
〔式中、
Ｒ１は、ヘテロ原子として、２−４個のＮ−原子または１もしくは２個のＮ−原子、ならびに１個のＯ−またはＳ−原子を含む５員ヘテロアリールラジカルであって、これは非置換であるか、または、低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換されているフェニル、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンによりＣ−置換されており、そして／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されており；そして、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ポリマーマトリックスがカルシウムイオンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ポリマーマトリックスがＰＬＧＡを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ナノ粒子組成物が約１０ナノメーター（ｎｍ）から約５００ｎｍの平均粒子サイズを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ナノ粒子組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ナノ粒子組成物がさらに親和性部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
治療剤を哺乳動物対象に投与する方法であって、対象に治療剤を含む二価陽イオンマトリックスを含むナノ粒子組成物を全身に投与することを含む方法。
【請求項１２】
治療剤を標的細胞に投与するための請求項１１に記載の方法であって、親和性部分が標的細胞の細胞表面受容体に特異的に結合するために有用なリガンドであり、そして、ナノ粒子が捕捉形態の治療剤をさらに含む方法。
【請求項１３】
親和性部分が腫瘍特異的受容体および／または抗原に特異的に結合するために有用である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
該治療剤が水溶解性である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
該治療剤が式（Ｉ）：
【化２】
2010501004.tif 000012
〔式中、
Ｒ１は、ヘテロ原子として、２−４個のＮ−原子または１もしくは２個のＮ−原子、ならびに１個のＯ−またはＳ−原子を含む５員ヘテロアリールラジカルであって、これは非置換であるか、または、低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換されているフェニル、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンによりＣ−置換されており、そして／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されており；そして、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
二価陽イオンがカルシウムイオンを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
ポリマーマトリックスがＰＬＧＡポリマーを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
ナノ粒子組成物が約１０ｎｍから約５００ｎｍの平均粒子サイズを有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
ナノ粒子組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
ナノ粒子組成物がさらに親和性部分を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
治療剤を含む二価陽イオンマトリックスを含むナノ粒子組成物。
【請求項２３】
該治療剤が水溶解性である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
該治療剤が式（Ｉ）：
【化３】
2010501004.tif 000013
〔式中、
Ｒ１は、ヘテロ原子として、２−４個のＮ−原子または１もしくは２個のＮ−原子、ならびに１個のＯ−またはＳ−原子を含む５員ヘテロアリールラジカルであって、これは非置換であるか、または、低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換されているフェニル、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンによりＣ−置換されており、そして／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されており；そして、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
二価陽イオンマトリックスがカルシウムイオンを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２７】
ナノ粒子組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２８】
ナノ粒子組成物がさらに親和性部分を含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２９】
（ａ）治療剤；
（ｂ）二価陽イオンマトリックス；
（ｃ）親水性ポリマーコーティング；および
（ｄ）所望により親和性部分
を含むナノ粒子組成物。
【請求項３０】
親和性部分が標的細胞の細胞表面受容体に特異的に結合するために有効なリガンドである、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３１】
親和性部分が腫瘍特異的受容体および／または抗原に特異的に結合するために有効である、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３２】
該治療剤が水溶解性である、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３３】
該治療剤が式（Ｉ）：
【化４】
2010501004.tif 000014
〔式中、
Ｒ１は、ヘテロ原子として、２−４個のＮ−原子または１もしくは２個のＮ−原子、ならびに１個のＯ−またはＳ−原子を含む５員ヘテロアリールラジカルであって、これは非置換であるか、または、低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換されているフェニル、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンによりＣ−置換されており、そして／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されており；そして、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３４】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３５】
二価陽イオンマトリックスがカルシウムイオンを含む、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３６】
ポリマーマトリックスがＰＬＧＡを含む、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３７】
ナノ粒子組成物が約１０ｎｍから約５００ｎｍの平均粒子サイズを有する、請求項２９に記載のナノ粒子組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、送達ビヒクルとしてナノ粒子製剤を使用する治療組成物および該製剤を使用する方法に関する。ナノ粒子は、所望により標的組織による結合および内在化を有効にするためにナノ粒子外表面に親和性部分を含む。ナノ粒子は、また、所望により立体安定性および長期循環のために親水性ポリマーの外表面コーティングを含む。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ナノ粒子は種々の治療目的、特に、ナノ粒子の全身投与による治療剤の標的細胞への送達のために使用できる。
種々の理由のため、ナノ粒子を使用して治療剤を保護することが望ましいかもしれない。ビスホスホネートクラスの薬物の治療効果を利用するために、薬剤の分布を、治療剤が有効に治療が目標とする標的表面に特異的に相互作用することができるように変化させなければならない。したがって、治療ナノ粒子組成物を提供することが望ましい。
【発明の概要】
【０００３】
発明の要旨
１つの局面において、本発明は：
（ｉ）ポリマーマトリックス；および
（ｉｉ）治療剤
を含むナノ粒子を全身に投与することを含む、哺乳動物対象のナノ粒子ベース治療方法を含む。
ポリマーマトリックスは、それがなければ慣用の製剤の溶液であり、そして迅速に全身に分配されるような治療剤に対する保護を提供する。
【０００４】
小胞ベースナノ粒子、例えば、リポソーム製剤は、標的薬剤送達の目的で、治療剤を投与するための他の方法である。ビスホスホネートの場合、驚くべきことに、このような小胞製剤が、全身投与後に周囲媒質から小胞内へのカルシウムの隔離によって、実際に低カルシウム血症を引き起こすことが分かった。これは、最後に、毒性となるかもしれない（参考：Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｐａｔｅｎｔ）。本発明に記載されているようにポリマーマトリックスベースナノ粒子の場合には、このようなカルシウムイオンの隔離は回避され、したがって、このような製剤は小胞ベースシステムと比較して、より優れた安全性を提供することが期待される。
【０００５】
さらなる局面において、本発明は、哺乳動物対象のナノ粒子ベース治療の方法であって、
（ｉ）ポリマーマトリックス；
（ｉｉ）治療剤；
（ｉｉｉ）立体安定性および長期循環のための親水性ポリマーコーティング；および、所望により
（ｉｖ）治療で目標とする標的表面に特異的に結合するために有用な親和性部分
を含むナノ粒子を対象に全身的に投与することを含む方法を含む。
【０００６】
親水性ポリマーコーティングは、ナノ粒子のポリマーマトリックスの外表面成分に共有結合しているか、または電荷相互作用によりポリマーマトリックス表面に吸着しているポリマー鎖で構成されている。
１つの態様において、ポリマーマトリックスはカルシウムイオンを含む。
【０００７】
１つの態様において、治療剤を標的領域に投与されるとき、親和性部分は標的領域で受容体に特異的に結合するために有用なリガンドであり、ナノ粒子は捕捉形態で治療剤を含む。この態様の例は固体腫瘍の処置であり、親和性部分は腫瘍特異的受容体または抗原に特異的に結合するために有用であり、ナノ粒子は約１０ｎｍから約５００ｎｍの平均サイズを有し、捕捉された薬剤を含む。
１つの態様において、ポリマーマトリックスは乳酸およびグリコール酸のコポリマーを含む。
【０００８】
発明の詳細な説明
Ｉ．ナノ粒子組成物
ナノ粒子ベース治療で使用するためのナノ粒子は、外表面を有する少なくとも１つの外層を有する。ナノ粒子はさらなる層を含んでもよいことが理解される。１つの態様において、外層は、ある場合には、共有結合している親水性ポリマーからなり、後者は、次いで標的部分に共有結合している。また、他の場合において、親水性ポリマーからなる外層は、一方では、標的部分に共有結合しており、加えて、他方では、荷電部分に共有結合で、また静電相互作用により結合している。荷電部分は種々のアミノ酸またはアミノ酸ベースポリマーから選択され、荷電部分はポリマーマトリックスと逆の荷電を有する。
【０００９】
ナノ粒子は、標的との相互作用に遭遇する前に、漏出から治療剤を遮蔽するために有効である二価陽イオンを含むポリマーマトリックスを含む。二価陽イオンマトリックスは、治療剤の封入効果および薬剤負荷を増加させ、薬剤を捕捉することによりナノ粒子からの治療剤の漏出性を減少させる。二価陽イオンマトリックスは高溶解性である治療剤を捕捉することを促進する。加えて、二価陽イオンマトリックスは、より効果的な腫瘍への治療剤送達を容易にすることができる。
【００１０】
１つの態様において、ナノ粒子に包含されているカルシウムイオンは、活性薬剤を標的と反応する前に拡散しないように保持することを促進する。
標的細胞または領域に対して投与される治療剤はナノ粒子に捕捉されている。本明細書においては、治療剤、化合物および薬剤なる用語は互換的に使用されている。
【００１１】
捕捉治療剤は、水溶解性薬剤、親油性化合物、または、例えば、小胞外表面に静電結合により安定に結合できる薬剤を含む、ポリマーマトリックスに捕捉され得る、多数の治療剤の何れであってもよい。典型的な水溶解性化合物はビスホスホネート群の薬剤を含む。治療剤の例は、下記化合物の製造、それらを含む医薬組成物および薬剤としてのその使用のための、置換アルカンジホスホン酸、特に式（Ｉ）：
【化１】
2010501004.tif 000002
〔式中、
Ｒ１は、ヘテロ原子として、２−４個のＮ−原子または１もしくは２個のＮ−原子、ならびに１個のＯ−またはＳ−原子を含む５員ヘテロアリールラジカルであって、これは非置換であるか、または、低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換されているフェニル、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンによりＣ−置換されており、そして／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されており；そして、
Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである〕
で示されるヘテロアリールアルカンジホスホン酸およびその塩である。
【００１２】
ヘテロ原子として、２−４個のＮ−原子または１もしくは２個のＮ原子、ならびに１個のＯ−またはＳ−原子を含む５員ヘテロアリールラジカルの例は、イミダゾリル、例えば、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イルまたはイミダゾール−４−イル、ピラゾリル、例えば、ピラゾール−１−イルまたはピラゾール−３−イル、チアゾリル、例えば、チアゾル−２−イルまたはチアゾル−４−イル、または、あまり好ましくないが、オキサゾリル、例えば、オキサゾール−２−イルまたはオキサゾール−４−イル、イソオキサゾリル、例えば、イソオキサゾール−３−イルまたはイソオキサゾール−４−イル、トリアゾリル、例えば、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルまたは４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イルまたは２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル、テトラゾリル、例えば、テトラゾール−５−イル、チアジアゾリル、例えば、１，２，５−チアジアゾール−３−イル、およびオキサジアゾリル、例えば、１，３，４−オキサジアゾール−２−イルである。これらのラジカルは、１個以上の同じまたは異なる、好ましくは１または２個の同じまたは異なる、前記の群から選択される置換基を含んでもよい。非置換であるか、または記載のとおりに置換されているラジカルＲ１は、例えば、非置換であるか、またはフェニルまたは記載されているとおりに置換されているフェニルによりＣ−置換されているか、またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチルによりＣ−もしくはＮ−置換されているイミダゾール−２−イルまたはイミダゾール−４−イルラジカルであり、一般的に、イミダゾール−２−イル、１−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾール−２−イル、例えば、１−メチルイミダゾール−２−イル、または２−もしくは５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾール−４−イル、例えば、２−もしくは５−メチルイミダゾール−４−イル、非置換であるか、またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチルにより置換されている非置換チアゾリルラジカル、例えば、チアゾル−２−イル、または１Ｈ−１，２，４−トリアゾールラジカル、例えば、１−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル、例えば、１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル、または、非置換であるか、またはフェニルまたは記載のとおりに置換されているフェニルまたはＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチルによりＣ−置換されているイミダゾール−１−イル、ピラゾリル−１−イル、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イルまたはテトラゾール−１−イルラジカル、例えば、イミダゾール−１−イル、２−、４−もしくは５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾール−１−イル、例えば、２−、４−もしくは５−メチルイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、３−もしくは４−Ｃ１−Ｃ４アルキルピラゾール−１−イル、例えば、３−もしくは４−メチルピラゾール−１−イル、１Ｈ−１，２，４−テトラゾール−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、例えば、３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イル、例えば、３−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イルまたは１Ｈ−１，２，４−テトラゾール−１−イルである。
【００１３】
“低級”なる用語により限定されているラジカルおよび化合物は、一般的に７個までの（７個を含む）炭素原子、好ましくは４個までの（４個を含む）炭素原子を含むものを意味すると理解される。これらの一般用語は、例えば、下記意味を有する：
低級アルキルは、例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、さらにＣ５−Ｃ７アルキル、例えば、ペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであってよい。
フェニル−低級アルキルは、例えば、フェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、好ましくは１−フェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えば、ベンジルである。
低級アルコキシは、例えば、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシである。
ジ−低級アルキルアミノは、例えば、ジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、ジプロピルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルアミノまたはジブチルアミノである。
低級アルキルチオは、例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオまたはブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオまたはｔｅｒｔ−ブチルチオである。
ハロゲンは、例えば、３５までの（３５を含む）原子番号を有するハロゲン、例えば、フッ素、塩素または臭素である。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物の塩は、特に薬学的に許容される塩基との塩、例えば、族Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａおよびＩＩｂの金属からの非毒性金属塩、例えば、アルカリ金属塩、好ましくはナトリウムまたはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、好ましくはカルシウムまたはマグネシウム塩、銅、アルミニウムまたは亜鉛塩、および、また、アンモニアまたは有機アミンまたは四級アンモニウム塩基、例えば、遊離またはＣ−ヒドロキシル化脂肪族アミン、好ましくはモノ−、ジ−もしくはトリ−低級アルキルアミン、例えば、メチルアミン、エチルアミン、ジメチルアミンもしくはジエチルアミン、モノ−、ジ−もしくはトリ（ヒドロキシ−低級アルキル）アミン、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミンまたはトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンまたは２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはＮ−（ヒドロキシ−低級アルキル）−Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキルアミンもしくはＮ−（ポリヒドロキシ−低級アルキル）−Ｎ−低級アルキルアミン、例えば、２−（ジメチルアミノ）エタノールまたはＤ−グルカミン、または、水酸化四級脂肪族アンモニウム、例えば、水酸化テトラブチルアンモニウムとのアンモニウム塩である。
【００１５】
上記の文脈から、式（Ｉ）の化合物は、置換基Ｒ１が十分に塩基性である限り、分子内塩の形態であってもよいことが述べられなければならない。これらの化合物は、したがって、また、強プロトン酸、例えば、ハロゲン化水素酸、硫酸、スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸、またはスルファミン酸、例えば、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸で処理することにより対応する酸付加塩に変換できる。
【００１６】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）、
Ｒ１が、非置換であるか、または１または２個の低級アルキル、低級アルコキシ、フェニルまたは１または２個の低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択されるメンバーにより置換されているフェニル、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンから選択されるメンバーによりＣ−置換されており、そして／または、非置換であるか、または１または２個の低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択されるメンバーにより置換されている低級アルキルまたはフェニル−低級アルキルにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されている、イミダゾリル、ピラゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリル、１Ｈ−１，２，４−トリアゾリルもしくは４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリルまたはチアジアゾリルラジカルであり；そして、
Ｒ２が、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである、
で示される化合物およびその塩、とりわけ塩基との内部塩および薬学的に許容される塩である。
【００１７】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）、
Ｒ１が、非置換であるか、または１または２個の低級アルキル、低級アルコキシ、フェニルまたは１または２個の低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択されるメンバーにより置換されているフェニル、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンから選択されるメンバーによりＣ−置換されており、そして／または、非置換であるか、または１または２個の低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択されるメンバーにより置換されている低級アルキルまたはフェニル−低級アルキルにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されているイミダゾリル、ピラゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリルもしくは４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリルまたはチアジアゾリルラジカルであり；そして、
Ｒ２が、水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである、
で示される化合物およびその塩、とりわけ塩基との内部塩および薬学的に許容される塩である。
【００１８】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）、
Ｒ１が、ラジカルが非置換であるか、または１または２個のＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、例えば、メトキシ、フェニル、ヒドロキシ、ジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、例えば、ジメチルアミノまたはジエチルアミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、例えば、メチルチオ、および／または３５までの（３５を含む）原子番号を有するハロゲン、例えば、塩素から選択されるメンバーによりＣ−置換されており、そして／または、Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチル、またはフェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えば、ベンジルにより置換できるＮ−原子でＮ−置換されている、イミダゾリルラジカル、例えば、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イルもしくはイミダゾール−４−イル、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリルラジカル、例えば、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イル、またはチアゾリルラジカル、例えば、チアゾル−２−イルであり；そして、
Ｒ２が、好ましくはヒドロキシ、または、あまり好ましくないが、水素またはアミノである、
で示される化合物およびその塩、とりわけ塩基との内部塩および薬学的に許容される塩である。
【００１９】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）、
Ｒ１が、非置換であるか、またはフェニルによりＣ−置換されているか、または、Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチル、例えば、イミダゾール−２−イル、１−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾール−２−イル、例えば、１−メチルイミダゾール−２−イル、または２−もしくは５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾール−４−イル、例えば、２−もしくは５−メチルイミダゾール−４−イルによりＣ−もしくはＮ−置換されている、イミダゾール−２−もしくは−４−イルラジカルであるか、または、非置換チアゾリルラジカル、例えば、チアゾル−２−イルであるか、または、非置換であるか、またはＣ１−Ｃ４アルキルにより置換されている１Ｈ−１，２，４−トリアゾリルラジカル、例えば、メチル、例えば、１−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル、例えば、１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イルであり；そして、
Ｒ２が、ヒドロキシ、または、あまり好ましくないが、水素である、
で示される化合物およびその塩、とりわけ塩基との内部塩および薬学的に許容される塩である。
【００２０】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）、
Ｒ１が、非置換であるか、またはフェニルまたはＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチルによりＣ−置換されている、イミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イルまたはテトラゾール−１−イルラジカル、例えば、イミダゾール−１−イル、２−、４−もしくは５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾール−１−イル、例えば、２−、４−もしくは５−メチルイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、３−もしくは４−Ｃ１−Ｃ４アルキルピラゾール−１−イル、例えば、３−もしくは４−メチルピラゾール−１−イル、１Ｈ−１，２，４−テトラゾール−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、例えば、３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イル、例えば、３−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−４−イルまたは１Ｈ−テトラゾール−１−イルであり；そして、
Ｒ２が、ヒドロキシ、または、あまり好ましくないが、水素である、
で示される化合物およびその塩、とりわけ薬学的に許容される塩である。
【００２１】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）、
Ｒ１が、非置換であるか、またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、メチルにより置換されている、イミダゾリルラジカル、例えば、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イル、１−メチルイミダゾール−２−イル、イミダゾール−４−イルまたは２−もしくは５−メチルイミダゾール−４−イルであり；そして、
Ｒ２が、ヒドロキシ、または、あまり好ましくないが、水素である、
で示される化合物およびその塩、とりわけ薬学的に許容される塩である。
【００２２】
本発明の好ましい態様において、ナノ粒子は固体腫瘍の処置のための封入薬剤、例えば、ゾレドロン酸を含む。
ナノ粒子の外表面は、好ましくはナノ粒子表面成分を保護するために有用なブラシ様コーティングを形成するために密に包まれている、親水性ポリマー鎖から成っている親水性ポリマーの表面コーティングを含んでもよい。本発明において、親水性ポリマー鎖は化学的にナノ粒子ポリマーに結合しているか、またはすべての化学結合なしで吸着している。
【００２３】
ナノ粒子の外表面は、ナノ粒子に基づく治療で標的とされる対象、例えば、生体表面、例えば、細胞膜、細胞マトリックス、組織または標的表面または領域に特異的に結合するために有用な親和性部分を含んでもよい。親和性部分は、ナノ粒子の表面成分および／または親水性ポリマーコーティングに対する共有結合／静電相互作用により、ナノ粒子外表面に結合している。親和性部分は、特異的に結合するリガンドであり、そして標的上に存在するリガンド結合性分子に対する高親和性を有している。例えば、１つの態様において、親和性部分は固形腫瘍で過剰発現している腫瘍−特異的抗原および／または受容体に結合するのに有効であり、さらなる態様において、親和性部分は炎症部位の細胞に結合するのに有効である。さらなる態様において、親和性部分はビタミン、ポリペプチドまたは多糖類またはタンパク質エフェクターである。
【００２４】
本発明のナノ粒子は、治療剤を標的に投与するために使用するものである。治療剤はナノ粒子内に捕捉されている。
本発明のナノ粒子組成物は、主としてポリマーマトリックスから成っている。このようなポリマーマトリックスは
（ａ）乳化により形成することができるか；
（ｂ）沈殿または表面沈着方法により形成することができるか；または、
（ｃ）当分野で既知の他のナノ粒子の製造法により形成することができる。
【００２５】
ナノ粒子マトリックスを形成するポリマーは、ポリラクチド、ポリグリコリドおよび上記ポリマーのコポリマー（ポリ乳酸グリコール酸またはＰＬＧＡとして一般に知られている）、ポリアミノ酸、ポリアミノ酸のコポリマー、グリコサミノグリカン、脂質化グリコサミノグリカンなどを含む。
【００２６】
さらに、ポリマーは、特定の流動性または剛性を達成するため、血清中のナノ粒子の安定性を制御するため、そしてナノ粒子中に捕捉された薬剤の放出速度を制御するために選択される。ポリマーにより決定されるナノ粒子の剛性は、また、後で述べるように、ナノ粒子の標的細胞への結合に寄与し得る。
【００２７】
本発明のナノ粒子は、ナノ粒子表面に結合しているポリマー鎖で構成されている親水性ポリマーコーティングを含んでもよい。このような親水性ポリマー鎖は、約１−２０モル％の親水性ポリマー−ポリマーマトリックス複合体を含むことによりナノ粒子に包含される。ポリマーコーティングに使用するために適当な親水性ポリマーは、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリヒドロキシプロピルポリメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリグリセリンおよびポリアスパルタミド、ヒアルロン酸、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロキサマー）、レシチン、ポリビニルアルコールを含む。
【００２８】
好ましい態様において、親水性ポリマーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、好ましくは５００−１０，０００ダルトンの分子量、より好ましくは２，０００−１０，０００ダルトンの分子量、さらに好ましくは１，０００−５，０００ダルトンの分子量を有するＰＥＧ鎖である。
さらなる好ましい態様において、親水性ポリマーはポリグリセリン（ＰＧ）、好ましくは４００−２０００ダルトンの分子量、より好ましくは５００−１，０００ダルトンの分子量、さらに好ましくは６００−７００ダルトンの分子量を有するＰＥＧ鎖である。
【００２９】
本発明のナノ粒子組成物は親和性部分を含んでもよい。親和性部分は一般に対象、すなわち、生体表面、例えば、標的細胞表面または膜、細胞表面受容体、細胞マトリックス、プラーク領域などに特異的に結合するために有用である。親和性部分は、後記されるとおり、ポリマーマトリックスのポリマー成分への直接結合、または、親水性ポリマー鎖への結合によりナノ粒子表面に結合する。
【００３０】
１つの態様において、親和性部分は、標的領域で受容体に特異的に結合するために有用なリガンド、特に、標的細胞の受容体に結合するリガンドである。本目的のために適当なリガンドの非限定的な例は表１に示されている。
表１  リガンド−受容体ペアおよび関連標的細胞
【表１】
2010501004.tif 000003
【００３１】
表１に記載されているリガンドが、本発明の１つの態様において、特定の標的細胞にナノ粒子を標的化するために使用されてもよい。例えば、ポリマーマトリックスのポリマーまたはＰＥＧ鎖の遠位端に結合している葉酸リガンドはナノ粒子に包含され得る。本発明で使用されるＰＥＧ鎖は、ナノ粒子に包含されているとき、リガンドが親水性ポリマー鎖の表面コーティングにより覆われているか、または遮蔽されているように選択された長さ（分子量）を有するＰＥＧ鎖を意味する。ナノ粒子に包含されている表面結合葉酸リガンドは、捕捉された治療剤の標的細胞への投与、例えば、上皮癌腫の処置のための抗腫瘍剤の投与に関して、上皮細胞の葉酸受容体への結合に効果的である。
【００３２】
親和性部分は、細胞結合活性を有し、そして受容体部位に対するリガンドと競合するのに効果的である短ペプチドである。リガンド−受容体細胞結合事象の阻害は、感染過程を阻止することとなる。
【００３３】
捕捉された薬剤を含むポリマーマトリックスは、既知の方法、例えば、上記のもの、一般的に、エマルジョン、両性エマルジョンおよびマイクロカプセル化にしたがって製造される。送達される化合物は、親油性化合物の場合、有機媒体に包含されているか、または、水溶解性治療剤の場合、水性媒体に包含されている。あるいは、治療剤は対象への投与前にあらかじめ製造されたマトリックスに負荷してもよい。
【００３４】
ＩＩ．ナノ粒子製造
Ａ．放出できるポリマーコーティングの製造
親水性ポリマー鎖は、選択された刺激に応答して開裂し得る結合を介して、ナノ粒子に結合している。１つの態様において、結合はペプチド、エステルまたはジスルフィド結合である。
【００３５】
ペプチド様結合化合物は、例えば、ポリアルキルエーテル、例えば、ＰＥＧをアミンと結合することにより製造する。末端保護されたＰＥＧはカルボニルジイミダゾールカップリング試薬で活性化され、活性化イミダゾール化合物を形成する。次に活性化ＰＥＧは示される典型的なトリペプチドのＮ−末端アミンに結合する。次にペプチドアミン基は、慣用のカルボジイミドカップリング試薬、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を介してカルボキシル基を結合するために使用できる。
【００３６】
エステル結合化合物は、例えば、無水物カップリング剤を介するアルコールを使用して、ポリマー酸、例えば、ポリ乳酸をポリアルキルエーテルの末端アルコール基に結合することにより製造できる。あるいは、内部エステル結合および適当な末端基、例えば、一級アミン基を含む短結合フラグメントは、ポリアルキルエーテルをアミドまたはカルバメート結合を介してマトリックス−形成ポリマーと結合するために使用できる。
【００３７】
Ｂ．親和性部分の結合
上記のとおり、本発明のナノ粒子は、ＰＥＧ−コーティングナノ粒子の表面に結合している親和性部分を含んでもよい。親和性部分は、当該部分の性質に依存して、ナノ粒子表面成分との直接結合、または、短いスペーサーアーム（spacer arm）もしくはテザー（tether）を介して、ナノ粒子に結合している。
【００３８】
各種の方法が、分子、例えば、親和性部分をポリマーマトリックスの表面に結合させるために利用できる。１つの好ましい方法において、親和性部分は下記結合反応によりポリマーに結合し、親和性部分−ポリマー複合体を形成する。この結合はナノ粒子の形成のために使用される。さらなる方法において、親和性部分の共有結合または他の相互作用（すなわち、静電）で活性化されるマトリックス−形成ポリマーはナノ粒子に包含される。
【００３９】
一般的に、スペーサーアームへの部分の結合は、マトリックス−形成ポリマー、一般的にＰＬＧＡを、親和性部分の結合のための反応性末端基を有する親水性ポリマー、例えば、ＰＥＧで誘導体化することにより達成できる。リガンドの活性化ＰＥＧ鎖への結合方法は、当分野の（Allen, et al., 1995; Zalipsky, 1993; Zalipsky, 1994; Zalipsky, 1995a; Zalipsky, 1995b）に記載されている。これらの方法において、ｍＰＥＧの不活性末端メトキシ基は結合反応に対して適当な反応官能基、例えば、アミノまたはヒドラジド基で置換されている。末端官能性ＰＥＧは脂質、一般的にＤＳＰＥに結合している。官能性ＰＥＧ−ポリマー誘導体はナノ粒子形成で使用され、所望のリガンドはナノ粒子形成の前または後でＰＥＧ鎖の反応性末端に結合させる。前記方法において、ポリマー成分への共有結合の効率は使用されるポリマーに依存して確立しなければならない。したがって、さらなる方法において、二官能性ポリマーは一方で標的部分およびもう一方で荷電部分と共有結合するために使用できる。荷電部分は、その荷電がポリマーマトリックスを形成するために使用されるポリマー成分の荷電と逆となるように選択される。
【００４０】
Ｃ．ナノ粒子製造
ナノ粒子は、種々の技術により、例えば、エマルジョンまたは両性エマルジョンで製造されてもよい。一般的に、ポリマーを有機溶媒に溶解し、薬剤を２つの相の比溶解度によって、有機溶媒または水性相のいずれかに溶解する。水中油エマルジョンが形成され、溶媒は、ポリマーをナノ粒子として沈殿させるように、迅速に分散する。この処理は、一般的に、ポリマーと同じ溶媒に溶解できる疎水性薬剤に適用できる。親水性薬剤において、複合両性エマルジョン（ｗ／ｏ／ｗ）処理を使用することができる。粒子サイズは、エネルギー入力、例えば、超音波処理により測定される。
【００４１】
本発明のナノ粒子を形成するために使用されるマトリックスポリマーは、好ましくはマトリックスの約２０−９８％で存在する。
本発明のナノ粒子の製造のために適当なさらなるナノ粒子製造の製造方法は、溶媒注入方法である。この製造法において、溶媒に溶解しているポリマーの混合物を、撹拌しながら水性媒体に注入し、ナノ粒子を形成する。該溶媒は適当な技術、例えば、透析または蒸発により除去する。
【００４２】
ナノ粒子は、好ましくは、一般的に約１０ｎｍから約５００ｎｍ、好ましくは５０ｎｍから約３００ｎｍ、より好ましくは８０ｎｍから約２００ｎｍの選択されるサイズ範囲で実質的に均一サイズを有するように製造される。
【００４３】
所望のとき、ナノ粒子は、例えば、蒸発または凍結乾燥により乾燥させ、何れかの所望の溶媒に再懸濁させることができる。ナノ粒子を凍結乾燥させるとき、非還元糖を、凍結乾燥の前またはナノ粒子製造中に、安定性をもたらすために加えることができる。このような糖の１つはマンニトール、スクロース、トレハロースである。他の安定化剤はアミノ酸、すなわち、グリシンを含むことができる。
【００４４】
二価陽イオンマトリックスを有するナノ粒子は、ナノ粒子製造中に、二価陽イオンを含む溶媒の添加により製造できる。
ナノ粒子は溶液の穏やかな撹拌により水性溶液に再懸濁することができる。該再水和は、室温またはナノ粒子およびそれらの内容物の組成物に適当な他の温度で実施できる。
【００４５】
ＩＩＩ．処置法
本発明は、１つの局面において、哺乳動物対象のナノ粒子ベース治療方法であって、対象に：
（ｉ）二価陽イオンマトリックス；および
（ｉｉ）治療剤
を含むナノ粒子を全身に投与することを含む方法を含む。
【００４６】
二価陽イオンマトリックスは、慣用のリポゾーム製剤では、貯蔵中に、もしくは体内に導入されたときに漏出するおそれがある治療剤の保護を提供する。さらなる局面において、本発明は、哺乳動物対象のナノ粒子ベース治療方法であって、対象に
（ｉ）二価陽イオンマトリックス；
（ｉｉ）治療剤；
（ｉｉｉ）安定性および長期循環のための親水性ポリマーコーティング；および、所望により
（ｉｖ）治療で目標とする標的表面に特異的に結合するために有用である親和性部分
を含むナノ粒子を全身に投与することを含む方法を含む。
【００４７】
親水性ポリマーコーティングはナノ粒子の表面ポリマー成分に共有結合しているか、または表面吸着しているポリマー鎖で構成されている。投与されたナノ粒子は、所望のナノ粒子の生体内分布が達成されるまで全身に循環され、それによって親和性薬剤が標的表面に曝される。
【００４８】
好ましい態様において、ナノ粒子は固体腫瘍の処置のために使用される。ナノ粒子は、封入形態の抗腫瘍薬剤を含み、腫瘍特異的抗原に特異的に結合するために有用な親和性部分により腫瘍領域に標的化する。例えば、ナノ粒子は、増殖中の腫瘍内皮細胞で発現されるＦｌｋ−１、２受容体へ選択的に結合するナノ粒子のＶＥＧＦリガンドを含むことにより、腫瘍の血管内皮細胞を標的化することができる。
【００４９】
この態様において、ナノ粒子は約１０−２００ｎｍ、好ましくは５０−１５０ｎｍ、より好ましくは８０−１２０ｎｍのサイズである。このサイズ範囲のナノ粒子は、腫瘍血管系の内皮細胞層に存在する“間隙”を介して腫瘍に侵入し得ることが示されている［Yuan, et al. (1995)］。
【００５０】
１つの態様において、治療剤は式（Ｉ）の化合物から選択される。式（Ｉ）の化合物およびその塩は、価値ある薬理学的特性を有する。特に、それらは温血動物のカルシウム代謝で顕著な制御作用を有する。さらに、特に、それらはラットにおける骨吸着の顕著な阻害を引き起こし、約０．０１−１．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量の皮下投与後の血清カルシウムレベルのＰＴＨ誘導増加の手段によるActa Endrocinol, Vol. 78, pp. 613-24 (1975)に記載されている実験手順、ならびに約０．０００３−１．０ｍｇの用量の皮下投与後のビタミンＤ３により誘発される高カルシウム血症の手段によるＴＰＴＸ（甲状腺副甲状腺摘出）ラットモデルで立証できる。Ｗａｌｋｅｒ２５６腫瘍により引き起こされる腫瘍カルシウム血症は、同様に、約１．０−１００ｍｇ／ｋｇの経口投与後、阻害される。加えて、約０．００１−１．０ｍｇ／ｋｇの用量で、Newbould, Brit J Pharmacol, Vol. 21, p. 127 (1963)およびKaibara et al., J Exp Med, Vol. 159, pp. 1388-96 (1984)にしたがう実験方法で皮下投与したとき、式（Ｉ）の化合物およびその塩は、アジュバント関節炎を有するラットにおいて関節炎状態の進行の顕著な阻害をもたらす。したがって、それらは、カルシウム代謝の障害、例えば、関節の炎症性状態、関節軟骨の変性過程、骨粗鬆症、歯周炎、副甲状腺機能高進症および血管または歯科用インプラントのカルシウム沈着と関連する疾患の処置のための薬剤として使用するために顕著に適当である。好都合な結果は、また、難溶解性カルシウム塩の異常沈着が、関節炎疾患、例えば、強直性脊椎炎、神経炎、滑液包炎、歯周炎および腱炎、線維形成異常症、変形性関節症または動脈硬化症として観察される疾患、ならびに身体硬組織の異常分解が、主な症状、例えば、先天性低ホスファターゼ症、関節軟骨の変性状態、異なる起源の骨粗鬆症、パジェット病および骨異栄養性繊維症、ならびに腫瘍誘発溶骨性状態である疾患の処置において達成される。
【００５１】
ナノ粒子の投与後、例えば、静脈内投与で対象中にナノ粒子が分布され腫瘍に浸潤することを可能にする十分な時間の経過後、ナノ粒子の親和性部分は標的細胞への結合および内在化をもたらす。１つの態様において、親水性表面コーティングはｐＨ感受性結合によりナノ粒子に結合し、該結合は、腫瘍領域の低酸素性質によって、ナノ粒子が腫瘍に浸潤した後、解放される。
【００５２】
前記から、本発明の種々の特性および目的に合う方法が理解できる。本発明のナノ粒子は、ナノ粒子を標的送達するための方法を提供する。親水性表面コーティングはナノ粒子の吸収を減少させ、ナノ粒子の分布のために血液循環の長期存在期間を達成する。分布後、ナノ粒子−結合親和性部分は、標的の多価提示および結合を可能にする。
【００５３】
下記実施例は、本発明のナノ粒子を製造するため、特徴付けるため、および、使用するための方法を説明する。実施例は、本発明の範囲を限定する意図は全くない。本発明を特定の態様について記載しているが、種々の変化および変法が本発明から逸脱することなくなされ得ることは当業者に明白である。
【実施例】
【００５４】
実施例
下記実施例において、ナノ粒子は両性エマルジョン方法により製造した。全てのサンプルは水または５％のマンニトール（または、他の適当な増量剤、すなわち、スクロース）の存在下で、超音波処理、蒸発、遠心分離および凍結乾燥により処理した。
下記実施例は二価陽イオンなしで製造し、この製剤マトリックスでは非常に低い薬剤負荷はされた。
【００５５】
実施例Ａ
【表２】
2010501004.tif 000004
工程１の薬剤溶液を工程２のポリマー溶液に超音波処理により加える。この最初のエマルジョンを工程３のＰＶＡ溶液に加え、超音波処理を続ける。ナノ粒子を溶媒蒸発により回収し、洗浄し、遠心分離する。生成物を水または５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【００５６】
実施例Ｂ
【表３】
2010501004.tif 000005
工程１の薬剤溶液を工程２のポリマー溶液に超音波処理により加える。この最初のエマルジョンを工程３のＰＶＡ溶液に加え、超音波処理を続ける。ナノ粒子を溶媒蒸発により回収し、洗浄し、遠心分離する。生成物を水または５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【００５７】
実施例Ｃ
【表４】
2010501004.tif 000006
工程１の薬剤溶液を工程２のポリマー溶液に超音波処理により加える。この最初のエマルジョンを工程３のＰＶＡ溶液に加え、超音波処理を続ける。ナノ粒子を溶媒蒸発により回収し、洗浄し、遠心分離する。生成物を水または５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【００５８】
実施例Ｄ
【表５】
2010501004.tif 000007
工程１の薬剤溶液を工程２のポリマー溶液に超音波処理により加える。この最初のエマルジョンを工程３のＰＶＡ溶液に加え、超音波処理を続ける。ナノ粒子を溶媒蒸発により回収し、洗浄し、遠心分離する。生成物を水または５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【００５９】
実施例Ｅ
【表６】
2010501004.tif 000008
工程１の薬剤溶液を工程２のポリマー溶液に超音波処理により加える。この最初のエマルジョンを工程３のＰＶＡ溶液に加え、超音波処理を続ける。ナノ粒子を溶媒蒸発により回収し、洗浄し、遠心分離する。生成物を水または５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【００６０】
実施例Ｆ
【表７】
2010501004.tif 000009
工程１の薬剤溶液を工程２のポリマー溶液に超音波処理により加える。この最初のエマルジョンを工程３のＰＶＡ溶液に加え、超音波処理を続ける。ナノ粒子を溶媒蒸発により回収し、洗浄し、遠心分離する。生成物を水または５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【００６１】
実施例Ｇ
【表８】
2010501004.tif 000010
工程２のポリマー溶液を工程１の薬剤溶液に混合により加える。アセトンを蒸発させ、ナノ粒子を回収する。生成物を５％のマンニトールの存在下で凍結乾燥させる。
【手続補正書】
【提出日】平成20年7月15日(2008.7.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゾレドロン酸を哺乳動物対象に投与する方法であって、ＰＬＧＡポリマーマトリックスとカルシウムイオンを含むナノ粒子組成物であって、該ＰＬＧＡポリマーマトリックスがゾレドロン酸を含む組成物を全身的に投与することを含む方法。
【請求項２】
ナノ粒子組成物が約１０ナノメーター（ｎｍ）から約５００ｎｍの平均粒子サイズを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ナノ粒子組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ナノ粒子組成物がさらに親和性部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＰＬＧＡポリマーマトリックスとカルシウムイオンを含むナノ粒子組成物であって、ＰＬＧＡポリマーマトリックスが治療剤としてゾレドロン酸を含むナノ粒子組成物。
【請求項６】
さらに親水性ポリマーを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
さらに親和性部分を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
（ａ）治療剤としてゾレドロン酸；
（ｂ）ＰＬＧＡポリマーマトリックスとカルシウムイオン；
（ｃ）親水性ポリマーコーティング；および
（ｄ）親和性部分
を含むナノ粒子組成物。
【請求項９】
親和性部分が標的細胞の細胞表面受容体に特異的に結合するために有効なリガンドである、請求項８に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１０】
親和性部分が腫瘍特異的受容体および／または抗原に特異的に結合するために有効である、請求項８に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１１】
約１０ｎｍから約５００ｎｍの平均粒子サイズを有する、請求項８に記載のナノ粒子組成物。
【国際調査報告】
2010501004.tif 000015
2010501004.tif 000016
2010501004.tif 000017
2010501004.tif 000018