(57)【要約】  Ｘ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲが、本明細書において記載された通りである、式（Ｉ）のスピロインドリノン誘導体、ならびにその医薬として許容される塩およびエステルが提供される。本発明の化合物は、細胞増殖性疾患、特に腫瘍性疾患の治療または抑制において有用である。
2010527954.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式
【化１】
2010527954.tif 000081
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシ、およびビニルからなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ2の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり；
Ｒ3およびＲ4の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり；
Ｒは、水素、低級アルキル、および置換低級アルキルからなる群から選択される］
で表される化合物、またはその医薬として許容される塩もしくはエステル。
【請求項２】
以下の式
【化２】
2010527954.tif 000082
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシ、およびビニルからなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ2の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり；
Ｒ3およびＲ4の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり；
Ｒは、水素、低級アルキル、および置換低級アルキルからなる群から選択される］
で表される、請求項１に記載の化合物、またはその医薬として許容される塩もしくはエステル。
【請求項３】
Ｘが、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシ、およびビニルからなる群から選択され、
Ｒ1が水素であり、
Ｒ3が水素であり、
Ｒ2／Ｒ4が、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から独立して選択され、ならびに
Ｒが、水素、低級アルキル、および置換低級アルキルからなる群から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが塩素または臭素であり、
Ｒ4が、
【化３】
2010527954.tif 000083
からなる群から選択される置換フェニルまたは置換ヘテロアリールを含む、置換フェニルまたは置換ヘテロアリールであり、ならびに
Ｒ2が、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から独立して選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが−Ｃｌであり；
Ｒ1およびＲ3が水素であり；
Ｒ4が３−クロロ−フェニルであり；
Ｒ2が、無置換である、またはハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ2-6アルキニル、−Ｏ−Ｃ2-8アルケニル、または−Ｃ1-8アルキルおよび−Ｏ−Ｃ1-8アルキルからなる群から独立して選択される置換基によって一回もしくは二回置換される−フェニルであって、前記Ｃ1-8アルキルは無置換であるか、また−ＯＨによって一回もしくは二回置換されていてもよく、あるいは
−Ｃ2-8アルケニルであり；ならびに
Ｒが水素、あるいは
無置換である、または
−Ｎ−（Ｃ1-8アルキル）2、
−Ｏ−Ｃ1-8アルキル、
−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-8アルキル、
−ＯＨ、
−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-8アルキル、
−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ1-8アルキル（前記アルキル基は、無置換であるか、または−ＯＨによって１回もしくは２回置換される）、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ3-6シクロアルキル、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ2、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ピペリジニル（前記ピペリジルは、無置換であるか、または−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ3によって置換される）
によって置換されるＣ1-8アルキルである、請求項１または２に記載の化合物；または
その医薬として許容される塩もしくはエステル。
【請求項６】
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−メトキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、および
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、および
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−エチニル−２−ヒドロキシ−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−ヨード−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、および
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−エチニル−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
以下の式
【化４】
2010527954.tif 000084
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシおよびビニルからなる群から選択され、
Ｒ1およびＲ2の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり、
Ｒ3およびＲ4の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり、
Ｒは、水素、低級アルキルおよび置換低級アルキルからなる群から選択される］
で表される化合物、またはその医薬として許容される塩もしくはエステル、ならびに医薬として許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
医薬としての使用のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
癌、特に固形腫瘍、より特に乳房、結腸、肺および前立腺の腫瘍の治療における医薬としての使用のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
癌、特に固形腫瘍、より特に乳房、結腸、肺および前立腺の腫瘍の治療のための医薬の製造のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
実質的に本明細書において先に記載された新規化合物、方法、工程、および使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ｐ５３タンパク質は、癌発生の予防において中心的な役割を果たす腫瘍抑制タンパク質である。それは細胞統合性を保護し、そして増殖停止またはアポトーシスの誘導によって、永続的な損傷を受けた細胞クローンの増殖を防止する。分子レベルにおいて、ｐ５３は細胞周期およびアポトーシスの調節に関与する遺伝子の一団を活性化することができる転写因子である。ｐ５３は、細胞レベルでＭＤＭ２によって堅固に調節される、強力な細胞周期阻害剤である。ＭＤＭ２およびｐ５３は、フィードバック制御ループを形成する。ＭＤＭ２はｐ５３と結合し、そしてｐ５３調節遺伝子を転写活性化する能力を阻害することができる。さらにＭＤＭ２は、ｐ５３のユビキチン依存性分解を媒介する。ｐ５３は、ＭＤＭ２遺伝子の発現を活性化することができ、したがってＭＤＭ２タンパク質の細胞レベルを上昇させることができる。このフィードバック制御ループは、ＭＤＭ２およびｐ５３の両方が正常な増殖細胞において低レベルで維持されることを保証する。ＭＤＭ２はまた、細胞周期において中心的な役割を果たすＥ２Ｆの補因子である。
【０００２】
ＭＤＭ２とｐ５３（Ｅ２Ｆ）との比は、多くの癌において調節されていない。例えば、ｐ１６ＩＮＫ４／ｐ１９ＡＲＦ遺伝子座において頻繁に生じる分子欠損は、ＭＤＭ２タンパク質の分解に影響を及ぼすことが示されている。野生型ｐ５３を有する腫瘍細胞におけるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害は、ｐ５３の蓄積、細胞周期停止、および／またはアポトーシスを引き起こすはずである。したがってＭＤＭ２拮抗薬は、単剤、または広範囲の他の抗腫瘍治療との併用での癌治療における新規手法を提供し得る。この方法の実現可能性は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害のための異なる高分子ツール（例えば抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド）を使用することによって示された。ＭＤＭ２はまた、ｐ５３の場合のように保存された結合領域を通じてＥ２Ｆと結合し、そしてサイクリンＡのＥ２Ｆ依存性転写を活性化し、このことは、ＭＤＭ２拮抗薬がｐ５３変異細胞において効果を有し得ることを示唆している。
【０００３】
ＭＤＭ２拮抗薬としての一連のスピロインドリノンが、以前にＪ．Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，２００５，１２７，１０１３０において開示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の小分子阻害剤であるスピロインドリノン誘導体を提供する。無細胞および細胞系アッセイにおいて、本発明の化合物は、ＭＤＭ２タンパク質とｐ５３様ペプチドとの相互作用を阻害することが示されている。細胞系アッセイにおいて、これらの化合物は機構的な作用を示す。癌細胞と野生型ｐ５３とのインキュベーションにより、ｐ５３の蓄積、ならびにＧ１期およびＧ２期における細胞周期停止が起こり、その結果、インビトロにおいて野生型ｐ５３細胞に対する強力な抗増殖活性をもたらす。対照的にこれらの活性は、変異型ｐ５３を有する癌細胞で、同程度の化合物濃度において観察されなかった。したがって、ＭＤＭ２拮抗薬の活性はその作用機構と関連しているらしい。これらの化合物は、強力かつ選択的な抗癌剤であり得る。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本発明は、式
【０００６】
【化１】
2010527954.tif 000003
【０００７】
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシおよびビニルからなる群から選択され、
Ｒ1およびＲ2の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり、
Ｒ3およびＲ4の一方は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から選択され、そして他方は水素であり、
Ｒは、水素、低級アルキルおよび置換低級アルキルからなる群から選択される］
で表されるスピロインドリノン、ならびにその医薬として許容される塩およびエステルに関する。
【０００８】
以下の式II
【０００９】
【化２】
2010527954.tif 000004
【００１０】
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、エチニル、シクロプロピル、メチル、エチル、イソプロピル、メトキシ、またはビニルであり、
Ｒ1は水素であり、
Ｒ3は水素であり、
Ｒ2／Ｒ4は、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニルおよび置換シクロアルケニルからなる群から独立して選択され、ならびに
Ｒは、水素、低級アルキルまたは置換低級アルキルである］
として示される立体化学的構造を有する、式Ｉで表される化合物、ならびにその医薬として許容される塩およびエステルが好ましい。
【００１１】
Ｘが塩素または臭素であり、
Ｒ1が水素であり、
Ｒ3が水素であり、
Ｒ4が：
【００１２】
【化３】
2010527954.tif 000005
【００１３】
からなる群から選択される置換フェニルまたは置換ヘテロアリールを含む、置換フェニルまたは置換ヘテロアリールであり、
Ｒ2が、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルケニル、および置換シクロアルケニルからなる群から独立して選択され、ならびに
Ｒが水素、低級アルキル、または置換低級アルキルである式IIの化合物がさらに好ましい。
【００１４】
本発明の別の好ましい実施形態において、
Ｘが−Ｃｌであり；
Ｒ1およびＲ3が水素であり；
Ｒ4が３−クロロ−フェニルであり；
Ｒ2が、無置換である、またはハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ2-6アルキニル、−Ｏ−Ｃ2-8アルケニル、または−Ｃ1-8アルキルおよび−Ｏ−Ｃ1-8アルキルからなる群から独立して選択される置換基によって一回もしくは二回置換される−フェニルであって、当該Ｃ1-8アルキルは無置換であるか、また−ＯＨによって一回もしくは二回置換されていてもよく、あるいは
−Ｃ2-8アルケニルであり；ならびに
Ｒが水素、あるいは
無置換である、または
−Ｎ−（Ｃ1-8アルキル）2、
−Ｏ−Ｃ1-8アルキル、
−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-8アルキル、
−ＯＨ、
−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1-8アルキル、
−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ1-8アルキル（当該アルキル基は、無置換であるか、または−ＯＨによって１回もしくは２回置換される）、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｃ3-6シクロアルキル、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ2、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ピペリジニル（当該ピペリジルは、無置換であるか、または−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ3によって置換される）
によって置換されるＣ1-8アルキルである、式ＩまたはIIの化合物；ならびに
その薬学的に許容される塩およびエステルが提供される。
【００１５】
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−メトキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
【００１６】
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
【００１７】
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−エチニル−２−ヒドロキシ−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−ヨード−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン、および
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−エチニル−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン
の式で表される化合物が最も好ましい。
【００１８】
本明細書において示された種々の置換基（Ｒ値）は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、（例えば、ベンゾジオキシル基を形成する）ジオキソ−低級アルキレン、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ3、ＮＨ2、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）、Ｎ（低級アルキル）2、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ2、低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、低級アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級アルキルカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級アルキル、フルオロ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−カルボニル−低級アルコキシ、カルボキシ−低級アルコキシ、カルバモイル−低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、ＮＨ2−低級アルコキシ、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）−低級アルコキシ、Ｎ（低級アルキル）2−低級アルコキシ、ベンジルオキシ−低級アルコキシ、モノ−またはジ−低級アルキルで置換されたアミノ−スルホニル、および場合によりハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ2、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）、またはＮ（低級アルキル）2で置換され得る低級アルキルからなる群から独立して選択される、１〜５個の、好ましくは１〜３個の置換基で置換されてもよい。アリール、ヘテロアリール、およびヘテロ環における好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、およびアミノである。
【００１９】
アルキル、アルケニル、アルキニル、または同様の基は、両方の末端で同一部分に結合される場合、環状構造が生じ得、ここで前記部分の二つの水素は、アルキル、アルケニル、アルキニル、または同様の基の２つの末端で置換され、その結果テトラリン、大員環、またはスピロ化合物のような環状構造を作り出す。
【００２０】
用語「アルキル」は、１〜約２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基のことである。特定の実施形態において、アルキル置換基は低級アルキル置換基であってもよい。用語「低級アルキル」は、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基のことであり、そして特定の実施形態において、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基である。アルキル基の例は、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、およびｓ−ペンチルを含む。
【００２１】
本明細書において使用される「シクロアルキル」は、炭素原子のみ、好ましくは３〜６個の炭素原子からなる、飽和である任意の安定な単環または多環系のことを意図している。シクロアルキルの例は、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、ビシクロアルキル、またはスピロ化合物を含み、当該ビシクロアルキルは、ビシクロオクタン、例えば［２．２．２］ビシクロオクタンまたは［３．３．０］ビシクロオクタン、ビシクロノナン、例えば［４．３．０］ビシクロノナン、およびビシクロデカン、例えば［４．４．０］ビシクロデカン（デカリン）を含む。
【００２２】
本明細書において使用される用語「アルケニル」は、一つの二重結合を含み、そして２〜８個の、好ましくは２〜６個の炭素原子を有する不飽和の直鎖または分岐鎖脂肪族炭化水素基を意味する。かかる「アルケニル基」の例は、ビニル（エテニル）、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、および５−ヘキセニルである。
【００２３】
用語「シクロアルケニル」は、炭素原子のみからなり、少なくともその一つの環が部分的に不飽和である任意の安定な単環または多環系のことを意図している。
【００２４】
シクロアルケニルの例は、限定されないが、シクロペンテニルまたはシクロヘキセニルを含む。
【００２５】
本明細書において使用される用語「アルキニル」は、一つの三重結合を含み、そして２〜６個の、好ましくは２〜４個の炭素原子を有する不飽和の直鎖または分岐鎖脂肪族炭化水素基を意味する。かかる「アルキニル基」の例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、および５−ヘキシニルである。
【００２６】
定義において使用される用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、ヨウ素、または臭素を、好ましくはフッ素および塩素を意味する。
【００２７】
「アリール」は、一価の、単環または二環の芳香族性炭素環式炭化水素基、好ましくは６〜１０員の芳香環系を意味する。好ましいアリール基は、限定されないが、フェニル、ナフチル、トリル、およびキシリルを含む。
【００２８】
「ヘテロアリール」は、２つまでの環を含む芳香族ヘテロ環系を意味する。好ましいヘテロアリール基は、限定されないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリル、チアキソリル（ｔｈｉａｘｏｌｙｌ）、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、およびテトラゾリルを含む。
【００２９】
二環であるアリールまたはヘテロアリールの場合において、一方の環がアリールであり、他方がヘテロアリールであってもよく、そして両方が置換されるかまたは無置換であることが理解されるべきである。
【００３０】
「ヘテロ環」は、１〜３個の炭素原子が窒素、酸素または硫黄原子から選択されるヘテロ原子によって置き換えられている、置換または無置換の、５〜８員の単環式または二環式、芳香族または非芳香族炭化水素を意味する。例は、ピロリジン−２−イル；ピロリジン−３−イル；ピペリジニル；モルホリン−４−イルなどを含む。
【００３１】
「ヘテロ原子」は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される原子を意味する。
【００３２】
「アルコキシ、アルコキシル、または低級アルコキシ」は、酸素原子と結合した任意の上記低級アルキル基のことである。通常の低級アルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、またはプロポキシ、ブチルオキシなどを含む。複数のアルコキシ側鎖、例えばエトキシエトキシ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシなど、および置換アルコキシ側鎖、例えばジメチルアミノエトキシ、ジエチルアミノエトキシ、ジメトキシ−ホスホリルメトキシなどが、アルコキシの意味の範囲内にさらに含まれる。
【００３３】
医薬として許容される担体、賦形剤などにおける、「医薬として許容される」とは、薬理学的に許容され、そして特定の化合物が投与される対象に対して実質的に無毒であることを意味する。
【００３４】
「医薬として許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的効果および特性を保持する従来型の酸付加塩または塩基付加塩のことであり、そして好適な無毒性の有機もしくは無機酸、または有機もしくは無機塩基から形成される。実例の酸付加塩は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、および硝酸から得られるもの、ならびに有機酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸などから得られるものを含む。実例の塩基付加塩は、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、および水酸化４級アンモニウム、例えば水酸化テトラメチルアンモニウムから得られるものを含む。医薬品（すなわち薬剤）の塩への化学修飾は、化合物の改善された物理および化学的安定性、吸湿性、流動性、および溶解性を得るための、薬化学者に周知の技術である。例えばＡｎｓｅｌ他，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（第６版、１９９５）の１９６ページ、および１４５６〜１４５７ページを参照。
【００３５】
式ＩまたはIIの化合物、およびそれらの塩は、少なくとも一つの不斉炭素原子を有し、従ってラセミ体混合物、または異なる立体異性体として存在してもよい。種々の異性体は、既知の分離法、例えばクロマトグラフィーによって単離され得る。本発明は全ての立体異性体を含む。
【００３６】
本発明の化合物は、細胞増殖性疾患、とくに腫瘍性疾患の治療または抑制において有用である。これらの化合物または前記化合物を含む製剤は、固形腫瘍、例えば乳房、結腸、肺および前立腺の腫瘍の治療または抑制において有用であり得る。
【００３７】
結果的に、本発明はまた、医薬としての使用のための式ＩまたはIIの化合物を提供する。特に本発明は、癌、より具体的には固形腫瘍、特に乳房、結腸、肺および前立腺の腫瘍の治療における医薬としての使用のための式ＩまたはIIの化合物を提供する。
【００３８】
本発明の化合物の治療上有効な量は、疾患の症状を防止、緩和、または改善するために、あるいは処置されるべき対象を延命するために有効な化合物量を意味する。治療上有効な量の決定は、当技術分野における技術の範囲内である。
【００３９】
本発明の化合物の治療上有効な量または投与量は、幅広い制限内で変化し得、そして当技術分野において既知の方法で決定され得る。かかる投与量は、投与される特定の化合物（単数もしくは複数）、投与経路、処置される条件、および処置される対象を含む、各々の特定の場合において、個々の必要性に応じて調節されるだろう。一般的に、体重約７０Ｋｇの成人への経口または非経口投与の場合において、約１０ｍｇ〜約１０，０００ｍｇ、好ましくは約２００ｍｇ〜約１，０００ｍｇの一日投与量が好適であるべきであるが、上限は、指示された場合においては超えてもよい。一日投与量は、単回投与で、または分割された投与量で投与され得、あるいは非経口投与のために連続的注入で与えられてもよい。
【００４０】
本発明の製剤は、経口、経鼻、局所性（口腔および舌下を含む）、直腸、膣内、および／または非経口投与に好適であるものを含む。当該製剤は、通常は単位投薬剤形で存在し、そして薬学の分野において周知の任意の方法によって製造されてもよい。単一の投薬剤形を製造するために担体材料と組み合わされ得る活性成分の量は、処置されるべき対象、および特定の投与形式に依存して変化するだろう。一般的には、単一の投薬剤形を製造するために担体材料と組み合わされ得る活性成分の量は、治療効果を生む式ＩまたはIIの化合物量であろう。一般的に１００パーセントの内、この量は約１〜約９９パーセントの活性成分、好ましくは約５〜約７０パーセントの活性成分、最も好ましくは約１０〜約３０パーセントの活性成分の範囲であろう。
【００４１】
これらの製剤または組成物を製造する方法は、本発明の化合物と担体、および場合により一つ以上の副成分とを結合させるステップを含む。一般的に当該製剤は、本発明の化合物と液体担体、もしくは微粉化された固体担体、または両方とを均一かつ密に結合させ、その後必要ならば当該産物を成形することによって製造される。
【００４２】
経口投与のために好適である本発明の製剤は、カプセル、カシェ（ｃａｃｈｅｔ）、サシェ（ｓａｃｈｅｔ）、丸薬、錠剤、ロゼンジ（香味基剤、通常スクロースおよびアカシア、またはトラガカントを使用）、粉末、顆粒の形態で、または水性もしくは非水性液体の溶液もしくは懸濁液として、または水中油型もしくは油中水型エマルションとして、またはエリキシル剤もしくはシロップとして、またはトローチ（不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアを使用）、および／または口腔洗浄剤などとして、あらかじめ決定された量の本発明の化合物を活性成分として各々含有して存在し得る。本発明の化合物はまた、急速静注剤、舐剤、またはペースト剤として投与され得る。
【００４３】
「有効量」は、疾患の症状を防止、緩和、または改善するために、あるいは処置されるべき対象を延命するために有効である量を意味する。
【００４４】
「ＩＣ50」は、具体的に測定された活性の５０％を阻害するために必要な特定の化合物の濃度のことである。ＩＣ50は特に、以下に記載した通りに測定され得る。
【００４５】
「医薬として許容されるエステル」は、通常にエステル化された、カルボキシル基もしくはヒドロキシ基を有する式ＩまたはIIの化合物のことであり、当該エステルは式Ｉの化合物の生物学的有効性および特性を保持しており、そしてインビボ（生物中）において、各々対応する活性なカルボン酸またはアルコールへと切断される。
【００４６】
式ＩまたはIIにおける本発明の化合物は、以下の一般的スキームに従って合成され得る。式Ｉ〜IIの化合物は、一般的合成経路において試薬または薬剤を置き換えることで製造され得ることが当業者にとって明白であろう。出発原料は市販であるか、また当業者にとって既知である、文献に記載の確立された方法のいずれかによって合成され得る。キラルクロマトグラフィーによる精製を使用することで、式IIの化合物は、光学的に純粋なまたは豊富なエナンチオマーとして得られる。
【００４７】
【化４】
2010527954.tif 000006
【００４８】
一般的に、好適に選択されたアルデヒドＩは、リチウムヘキサメチルジシラミド、クロロトリアルキルシランおよび塩化アセチルとワンポット法または多段階法で反応して、２−アザ−１，３−ブタジエンIIを生成され得（スキームII）、そして粗生成物として使用され得る。Ｇｈｏｓｅｚ，Ｌ．他は、２−アザ−１，３−ブタジエンの製造、およびヘテロ環を形成するためのアザ・ディールス−アルダー反応におけるそれらの使用を報告した（参考文献：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９５，１１０２１；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９９，２６１７；およびそれらで引用された文献）。好適に選択されたアルデヒドＩは市販か、または文献記載の確立された複数の方法のいずれかで合成され得る。
【００４９】
【化５】
2010527954.tif 000007
【００５０】
オキシインドールIII は、好適に置換されたアルデヒドまたはケトンと、塩基の存在中、加熱条件下、プロトン性溶媒、例えばメタノール、エタノール、または非プロトン性溶媒、例えばトルエン、ｏ−キシレンと反応して中間体IVを生成し得る。一般的に使用される塩基は、ピロリジンまたはピペリジンのいずれかである。中間体IVはその後、２−アザ−１，３−ブタジエンIIと、トルエンまたはｏ−キシレン中、１００℃〜１６０℃で加熱しながら無水条件下で反応して、他の少量の生成物と共に見られる、主生成物としてのスピロインドリノンＶおよびＶ’のラセミ体混合物を生成し得る。出発原料である６位置換オキシインドールIII は市販であるか、または文献記載の方法、例えばＫｒａｙｎａｃｋ，Ｅ．Ａ．；Ｄａｌｇａｒｄ，Ｊ．Ｅ．；Ｇａｅｔａ，Ｆ．Ｃ．Ａ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，３９，７６７９−７６８２に従って製造されるかのいずれかである（スキーム２）。
【００５１】
【化６】
2010527954.tif 000008
【００５２】
中間体IVは、保護されて中間体VIを生成し得る。保護基は、エチルクロロホルメート、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル、ＳＥＭ−Ｃｌ、臭化ベンジル、および塩基、例えば４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）、トリエチルアミン、ＮａＨ、またはＬｉＨを使用することによって、文献記載の確立された方法に従って結合され得る。保護基の形成およびそれらの脱保護の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．他「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ」において包括的に記載かつ概説されている。同様の方法で、中間体VIは、スキーム１で製造された選択されたブタジエンIIと、トルエンまたはｏ−キシレン中、１１０℃〜１６０℃で加熱しながら無水条件で反応して、他の少量の立体異性体と共に２つのエナンチオマーのラセミ体混合物として見られる、主生成物としての中間体VII およびVII ’を形成し得る（スキーム３）。ＶおよびＶ’、またはVII およびVII ’のラセミ体混合物は、キラル超液体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）、またはキラルＨＰＬＣ、またはキラルカラムクロマトグラフィー分離によって２つのキラル体エナンチオマーへと容易に分割されて、２つのキラル体エナンチオマーを生成し得る。
【００５３】
Ｖは、制御された条件下において選択的に保護されてVII を生成し得る。この場合において、本明細書において有用な保護基Ｐｇは、エチルカーバメート、またはｔｅｒｔ−ブチルカーバメート（ＢＯＣ）であり得る（スキーム４）。スキーム３におけるIVからVIへの変換と同様に、保護基は、ジクロロメタン中室温または低温で、エチルクロロホルメートまたは二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）のような塩基を使用することによって結合され得る。
【００５４】
【化７】
2010527954.tif 000009
【００５５】
トリアジノンＸIIの合成は、スキーム５に記載される。有機塩基、またはＣｓ2ＣＯ3、ＬｉＨ、もしくはＮａＨのような無機塩基のいずれか、および市販試薬であるアルキルブロモアセテート（ＢｒＣＨ2ＣＯＯＲ’、Ｒ’＝Ｍｅ、Ｅｔ、ｔＢｕ）を使用することによって、Ｎ−アルキル化された中間体VIIIは、VII から良好な収率で製造され得る。
【００５６】
トルエン中加熱条件下で、ローソン試薬によってラクタムカルボニルをチオカルボニルへと選択的に変換する、引き続き行なわれる反応は、中間体IXを高収率で提供する。メタノール中、封管容器中で加熱条件下、ヒドラジン一水和物または無水ヒドラジンを用いるIXの処理は、中間体Ｘをもたらす。アルキル化試薬Ｒ−Ｌ、およびＬｉＨまたはＮａＨのような塩基が、Ｘを中間体ＸＩへと変換するために使用され得る。Ｒは、低級アルキル、置換低級アルキル、低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキル基である。Ｌは優れた脱離基であり、例えばＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＭｓ、ＯＴｆ、ＯＴｓなどである。VII からＸＩへのこれらの変換において、有用なＰｇ基はトリメチルシロキシエトキシメチル（ＳＥＭ）である。トリメチルシロキシエトキシメチル（ＳＥＭ）基は、二段階による脱保護反応によって除去されて、式IIの化合物ＸIIを形成する：１）室温でジクロロメタン中、トリフルオロ酢酸；２）加熱条件下（１００℃）、メタノール中、ヒューニッヒ・ベース（ｉＰｒ2ＮＥｔ）。
【００５７】
【化８】
2010527954.tif 000010
【００５８】
Ｒ2がエチニル−１−プロピニルで置換されたフェニル基から選択される時、化合物ＸII−ｂへの経路を得るために別の合成法が使用され得る。通常は、対応するヨードまたはブロモ置換されたフェニルであるＲ2を有する類縁体ＸII−ａが、スキーム１〜５における方法に従って最初に製造され、その後触媒量のパラジウムで媒介される薗頭反応を行い、エチニルまたは他の置換アルキニル基で置換された対応するフェニルとしてのＲ2を有するＸII−ｂを生成する（スキーム６）。
【００５９】
【化９】
2010527954.tif 000011
【００６０】
スキーム５に記載された方法と同様に、式ＩにおけるＸIIおよびＸII’のラセミ体混合物は、出発原料VII を式ＩのVII およびVII ’のラセミ体混合物で置き換えることによって製造され得る。化合物ＸIIおよびＸII’、中間体ＶおよびＶ’、または中間体VII およびVII ’の全ては、ラセミ体混合物として最初は生成された。上の反応スキームにおけるこれらのラセミ体混合物の全てはまた、スキーム７における方法と同様、キラル体のエナンチオマー対へと速やかに分離され得る。
【００６１】
【化１０】
2010527954.tif 000012
【実施例】
【００６２】
以下の実施例および参考例は、本発明の理解を助けるために提供され、その真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載されている。
【００６３】
実施例１ａ
中間体である、Ｅ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンの製造
【００６４】
【化１１】
2010527954.tif 000013
【００６５】
メタノール（１０９ｍｌ）中、６−クロロオキシインドール（１６．２ｇ、９２ｍｍｏｌ）（クレッセント（Ｃｒｅｓｃｅｎｔ））および３−クロロ−ベンズアルデヒド（１２．９ｇ、９２ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）の混合物へ、ピロリジン（６．５５ｇ、９２ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を一滴ずつ加えた。当該混合物をその後、７０℃で３時間加熱した。４℃へ冷却後、当該混合物を濾過し、そして生じる沈殿物を回収し、乾燥してＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンの混合物を鮮黄色固体として得た（収量２５．２ｇ、９５％）。
【００６６】
実施例１ｂ
中間体である、Ｅ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンの製造
【００６７】
【化１２】
2010527954.tif 000014
【００６８】
実施例１ａで製造されたＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（２．３ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（２０ｍｌ）溶液へ、０℃でＮａＨ（ミネラルオイル中６０％）（０．３２ｇ、７．９ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を加え、その後２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（１．３２ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液を一滴ずつ加えた。反応混合物を０℃で０．５時間撹拌し、その後氷−水へ注いだ。当該粗生成物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した。溶媒を除去し、そして残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：５）で精製し、Ｅ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを黄色油として得た（収量３．０ｇ、９０％）。
【００６９】
実施例１ｃ
中間体である、１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの製造
【００７０】
【化１３】
2010527954.tif 000015
【００７１】
１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（１．６１ｇ、１０ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）へ、窒素下、室温でｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。それから乾燥テトラヒドロフラン（３０ｍｌ）を加え、その後５−フルオロ−２−メチル−ベンズアルデヒド（１．３８ｇ、１０ｍｍｏｌ）（Ｐｌａｔｔｅ）を加えた。当該混合物を室温で０．５時間撹拌後、トリメチルシリルクロリド（１．１ｇ、１０ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を一滴ずつ加えた。その後、当該混合物の温度を冷えた氷浴上で０℃へと冷却した。この混合物へトリエチルアミン（１．４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を一度に加え、その後一滴ずつ塩化アセチル（１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（５０ｍｌ）溶液を加えた。冷浴を取り除き、そして当該混合物を室温で１時間撹拌した。当該混合物を窒素下、セライト上で速やかにろ過し、そしてろ液を減圧下濃縮し、粗生成物の1-（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンを黄色粘性物質として得、そして更なる精製をせずに次のステップのために使用した。
【００７２】
同様の変換が、Ｇｈｏｓｅｚ，Ｌ．，Ｂａｙａｒｄ，Ｐｈ．，Ｎｓｈｉｍｙｕｍｕｋｉｚａ，Ｐ．，Ｇｏｕｖｅｒｎｅｕｒ，Ｖ．，Ｓａｉｎｔｅ，Ｆ．，Ｂｅａｕｄｅｇｎｉｅｓ，Ｒ．，Ｒｉｖｅｒｓ，Ｍ．，Ｆｈｑｕｅ−Ｈｅｓｂａｉｎ，Ａ．−Ｍ．およびＷｙｎａｎｔｓ，Ｃ．によって、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９５，１１０２１−１１０４２において報告されている。
【００７３】
実施例１ｄ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【００７４】
【化１４】
2010527954.tif 000016
【００７５】
実施例１ｃで製造された１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンのトルエン（５０ｍＬ）溶液へ、実施例１ｂで製造されたＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（３．０ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、窒素下、封管容器中、１４８℃で４０分間撹拌した。当該溶液を室温へ冷却後、メタノール（５０ｍＬ）を加え、その後当該混合物を濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）で精製し、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを灰色がかった白色の固体として得た（収量２．１ｇ、４９％）。
【００７６】
実施例１ｅ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【００７７】
【化１５】
2010527954.tif 000017
【００７８】
実施例１ｄで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（２０ｍＬ）溶液へ、室温でブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．８ｇ、４．１ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（３．０ｇ、９．２０ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応混合物を窒素下で４時間撹拌し、その後飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液へと注いだ。当該混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、そして濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）で精製し、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量０．５８ｇ、４８．７％）。
【００７９】
実施例１ｆ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【００８０】
【化１６】
2010527954.tif 000018
【００８１】
トルエン（２０ｍＬ）中、実施例１ｅで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、および２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド（１．５ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）の混合物を、１２０℃で０．５時間加熱した。当該混合物を室温に冷却し、その後濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で精製し、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを灰色がかった白色泡状物質として得た（収量１．０ｇ、９２％）。
【００８２】
実施例１ｇ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【００８３】
【化１７】
2010527954.tif 000019
【００８４】
メタノール（５０ｍｌ）中、実施例１ｆで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）、およびヒドラジン一水和物（５ｇ、約６４ｍｍｏｌ）（アルドリッチ、６４〜６５％）の混合物を容器中に封管し、そして１１０℃で２４時間加熱した。当該混合物を室温に冷却し、その後濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル）によって精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを灰色がかった白色固体として得た（収量０．３ｇ、３４％）。
【００８５】
実施例１ｈ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【００８６】
【化１８】
2010527954.tif 000020
【００８７】
実施例１ｇにおいて製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（２０ｍＬ）溶液へ、０℃でＬｉＨ（０．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を加え、その後ヨードメタン（０．３９ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応混合物を室温まで昇温し、そして室温で２時間撹拌した。当該混合物を酢酸エチルで希釈し、その後飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液で洗浄した。水層を酢酸エチルで抽出し、そして合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥した。溶媒を除去し、そして残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを得た（収量０．１５ｇ、９８％）。
【００８８】
実施例１ｉ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【００８９】
【化１９】
2010527954.tif 000021
【００９０】
実施例１ｈで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液へ、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で３時間撹拌した。当該反応混合物を濃縮した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で中和し、その後酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、そして濃縮した。残渣へメタノール（２０ｍＬ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１００℃で１時間加熱し、その後室温まで冷却し、濃縮した。残渣を酢酸エチルおよび水で分配した。有機層を分離し、そして濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：トリエチルアミン＝１００：０．１）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量８５ｍｇ、７２％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ28Ｈ23Ｃｌ2ＦＮ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５３７．１２５５。実測値：５３７．１２５５。
【００９１】
実施例１ｊ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【００９２】
【化２０】
2010527954.tif 000022
【００９３】
実施例１ｉで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（８０ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（３４ｍｇ、４２％）（ＲＯ５１７０５６６−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（３３ｍｇ、４１％）（ＲＯ５１７０５７９−０００）。
【００９４】
実施例２
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【００９５】
【化２１】
2010527954.tif 000023
【００９６】
実施例１ｉに記載された方法と同様の方法で、実施例１ｇにおいて製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（６５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）と、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ）と反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（２５ｍｇ、４７％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ27Ｈ21Ｃｌ2ＦＮ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５２３．１０９９。実測値：５２３．１０９９。
【００９７】
実施例３ａ
中間体である１−（１−メチレン−プロピル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの製造
【００９８】
【化２２】
2010527954.tif 000024
【００９９】
実施例１ｃに記載した方法と同様の方法で、エチルアクロレイン（２．１ｇ、２２ｍｍｏｌ）（ＴＣＩ−ＵＳ）を５−フルオロ−２−メチル−ベンズアルデヒドの代わりに出発原料として使用して、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（３．２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルクロリド（２．２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．９ｇ、２７ｍｍｏｌ）、および塩化アセチル（２ｇ、２７ｍｍｏｌ）と反応させて１−（1-メチレン−プロピル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンを得、そして更なる精製をせずに次のステップのために使用した。
【０１００】
実施例３ｂ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１０１】
【化２３】
2010527954.tif 000025
【０１０２】
実施例１ｄに記載した方法と同様の方法で、実施例１ｂで製造したＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロ−ベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（３ｇ、７．１ｍｍｏｌ）を、実施例３ａで製造した１−（１−メチレン−プロピル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（１９ｇ、９６ｍｍｏｌ）とトルエン（２００ｍＬ）中で反応させて、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量３．５ｇ、９０％）。
【０１０３】
実施例３ｃ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１０４】
【化２４】
2010527954.tif 000026
【０１０５】
実施例１ｅにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｂで製造したラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（７ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０ｇ、５１ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１１ｇ、３４ｍｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（５０ｍＬ）中室温で反応させて、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを黄色泡状物質として得た（収量５．７ｇ、６７％）。
【０１０６】
実施例３ｄ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１０７】
【化２５】
2010527954.tif 000027
【０１０８】
実施例１ｆに記載した方法と同様の方法で、実施例３ｃで製造したラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−１’−［｛ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（４．７ｇ、７．１ｍｍｏｌ）を、２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド（６ｇ、１５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）とトルエン（１００ｍＬ）中１２０℃で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量３．５ｇ、７３％）。
【０１０９】
実施例３ｅ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１１０】
【化２６】
2010527954.tif 000028
【０１１１】
実施例１ｇにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｄで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−（１−メチレン−プロピル）−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１．９ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（４ｇ、約５１ｍｍｏｌ）（アルドリッチ、６４〜６５％）と、メタノール中、封管容器中１２０℃で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量１．２ｇ、７１％）。
【０１１２】
実施例３ｆ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１１３】
【化２７】
2010527954.tif 000029
【０１１４】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１１ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、ＬｉＨ（０．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）およびヨードメタン（３ｇ、２１ｍｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（２０ｍＬ）中で反応させて、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量０．１１ｇ、９９％）。
【０１１５】
実施例３ｇ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１１６】
【化２８】
2010527954.tif 000030
【０１１７】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｆで製造された（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１１ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸と、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量６１ｍｇ、７０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ25Ｈ24Ｃｌ2Ｎ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：４８３．１３４９。実測値：４８３．１３４８。
【０１１８】
実施例３ｈ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１１９】
【化２９】
2010527954.tif 000031
【０１２０】
実施例３ｇで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（５８ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（１９ｍｇ、３３％）（ＲＯ５１７４０４０−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（２３ｍｇ、４０％）（ＲＯ５１７４０４１−０００）。
【０１２１】
実施例４ａ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１２２】
【化３０】
2010527954.tif 000032
【０１２３】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１１ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸と、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中で反応させて、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（４３ｍｇ、５５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ24Ｈ22Ｃｌ2Ｎ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：４６９．１１９３。実測値：４６９．１１８９。
【０１２４】
実施例４ｂ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１２５】
【化３１】
2010527954.tif 000033
【０１２６】
実施例４ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（４３ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（２１ｍｇ、５０％）（ＲＯ５１８６１１２−０００）、そしてキラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（１８ｍｇ、４２％）。
【０１２７】
実施例５ａ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１２８】
【化３２】
2010527954.tif 000034
【０１２９】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１２ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）をＬｉＨ（０．３ｇ、３８ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）、および３−ジメチルアミノプロピルクロリド塩酸塩（０．８ｇ、５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）と、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（１０ｍＬ）中、１００℃で３時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量０．１２ｇ、８８％）。
【０１３０】
実施例５ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１３１】
【化３３】
2010527954.tif 000035
【０１３２】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例５ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１２ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸と、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中で反応させて、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量５７ｍｇ、５７％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ29Ｈ33Ｃｌ2Ｎ5Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５５４．２０８４。実測値：５５４．２０８３。
【０１３３】
実施例６ａ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−メトキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１３４】
【化３４】
2010527954.tif 000036
【０１３５】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をＬｉＨ（０．３ｇ、３８ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）および２−ブロモエチルメチルエーテル（５ｇ、３６ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）とＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（１０ｍＬ）中、室温で１０時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−メトキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド[２，１−ｃ]［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色固体として得た（収量０．１ｇ、８９％）。
【０１３６】
実施例６ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−メトキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１３７】
【化３５】
2010527954.tif 000037
【０１３８】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例６ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（３−ジメチルアミノプロピル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．１ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸と反応させ、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−メトキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量３８ｍｇ、４７％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ27Ｈ28Ｃｌ2Ｎ4Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５２７．１６１１。実測値：５２７．１６１０。
【０１３９】
実施例７ａ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１４０】
【化３６】
2010527954.tif 000038
【０１４１】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．５ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）をＬｉＨ（０．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）および酢酸２−ブロモエチル（１．２ｇ、７ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）と、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（３０ｍＬ）中、室温で７２時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量０．５１ｇ、９０％）。
【０１４２】
実施例７ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１４３】
【化３７】
2010527954.tif 000039
【０１４４】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例６ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．５１ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸とジクロロメタン中、室温で５時間反応させ、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中１００℃で０．５時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量０．３５ｇ、８５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ28Ｈ28Ｃｌ2Ｎ4Ｏ4＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５５５．１５６１。実測値：５５５．１５５８。
【０１４５】
実施例８ａ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１４６】
【化３８】
2010527954.tif 000040
【０１４７】
実施例７ｂで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセトキシエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（０．３ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）およびメタノール（１５ｍＬ）の溶液へ、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｎ、１０ｍＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で２時間撹拌し、その後ＨＣｌ水溶液で「ｐＨ」７へと中和した。当該混合物をその後、酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮し、そして減圧下乾燥してラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（０．２２ｇ、７９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ26Ｈ26Ｃｌ2Ｎ4Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５１３．１４５５。実測値：５１３．１４５２。
【０１４８】
実施例８ｂ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１４９】
【化３９】
2010527954.tif 000041
【０１５０】
実施例８ａで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（２２０ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（９０ｍｇ、４１％）（ＲＯ５１８４３７５−０００）、そしてキラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシエチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（９８ｍｇ、４５％）（ＲＯ５１７４４２２−０００）。
【０１５１】
実施例９ａ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１５２】
【化４０】
2010527954.tif 000042
【０１５３】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例３ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（５０ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）を、ＬｉＨ（０．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）、ＮａＩ（０．２ｇ）、およびＮ−（２−クロロエチル）アセトアミド（１ｇ、８ｍｍｏｌ）（アルファ（Ａｌｆａ））を、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（３０ｍＬ）中、室温で７２時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量３２ｍｇ、５６％）。
【０１５４】
実施例９ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１５５】
【化４１】
2010527954.tif 000043
【０１５６】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例９ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（３２ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸と、ジクロロメタン中室温で１時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アセチルアミノエチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量１５ｍｇ、５７％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ28Ｈ29Ｃｌ2Ｎ5Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５５４．１７２０。実測値：５５４．１７１６。
【０１５７】
実施例１０ａ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１５８】
【化４２】
2010527954.tif 000044
【０１５９】
実施例３ｅで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．７５ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（５０ｍＬ）溶液中へ、室温でブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（３ｇ、１５ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を加えた。当該反応混合物を窒素下で５時間撹拌し、その後飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液へ注いだ。当該混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、そして濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色固体として得た（収量０．７ｇ、７８％）。
【０１６０】
実施例１０ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１６１】
【化４３】
2010527954.tif 000045
【０１６２】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１０ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．５９ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）と、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中室温で１８時間反応させ、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ）と、メタノール（１０ｍＬ）中１００℃で１時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量０．３ｇ、６９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ26Ｈ24Ｃｌ2Ｎ4Ｏ4＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５２７．１２４８。実測値：５２７．１２４７。
【０１６３】
実施例１１ａ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１６４】
【化４４】
2010527954.tif 000046
【０１６５】
実施例１０ｂで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−ヒドロキシカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（１ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍｌ）溶液へ、０℃でフッ化シアヌル（１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）（アルファ）およびピリジン（２ｇ、２５ｍｍｏｌ）を加えた。当該混合物を０℃で２時間撹拌後、当該混合物をＨ2Ｏおよびジクロロメタン間で分配した。有機層を分離し、そして水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮してラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを黄色固体として得、そして更なる精製をせずに次のステップのために使用した（収量：０．６１ｇ、６０％）。
【０１６６】
実施例１１ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１６７】
【化４５】
2010527954.tif 000047
【０１６８】
１１ａで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンのテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液へ、封管容器中、２−アミノエタノール（０．３ｇ、４．９ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．３ｇ、３ｍｍｏｌ）、および４−ジメチルアミノピリジン（７ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を加えた。当該混合物をマイクロ波照射下、１００℃で３０分間加熱した後、当該混合物を酢酸エチルで希釈し、Ｈ2Ｏで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、そして濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（メタノール：酢酸エチル＝１：８）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量：９２ｍｇ、２８％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ28Ｈ29Ｃｌ2Ｎ5Ｏ4＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５７０．１６７０。実測値：５７０．１６７１。
【０１６９】
実施例１１ｃ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１７０】
【化４６】
2010527954.tif 000048
【０１７１】
実施例１１ｂで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（８０ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’、７’、８’、９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（２８ｍｇ、３５％）（ＲＯ５１８５３７４−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−ヒドロキシエチルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（３０ｍｇ、３８％）（ＲＯ５１８５３７５−０００）。
【０１７２】
実施例１２ａ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１７３】
【化４７】
2010527954.tif 000049
【０１７４】
実施例１１ｂにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１１ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（０．１５ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を、シクロプロピルアミン（アルドリッチ）、Ｎ−メチルモルホリン、および４−ジメチルアミノピリジンと反応させて、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを黄色固体として得た（収量８５ｍｇ、５４％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ29Ｈ29Ｃｌ2Ｎ5Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５６６．１７２０。測定値：５６６．１７２１。
【０１７５】
実施例１２ｂ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１７６】
【化４８】
2010527954.tif 000050
【０１７７】
実施例１２ａにおいて製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（７５ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（２７ｍｇ、３６％）（ＲＯ５１８５３７９−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（２−シクロプロピルアミノ）カルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（２３ｍｇ、３１％）。
【０１７８】
実施例１３ａ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１７９】
【化４９】
2010527954.tif 000051
【０１８０】
実施例１１ａで合成されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（０．２ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を、アンモニア−メタノール溶液（７Ｎ、２０ｍＬ）中室温で２４時間撹拌した。当該反応混合物を濃縮し、そして残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝９：１）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量９８ｍｇ、４９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ26Ｈ25Ｃｌ2Ｎ5Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５２６．１４０７。実測値：５２６．１４０８。
【０１８１】
実施例１３ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１８２】
【化５０】
2010527954.tif 000052
【０１８３】
実施例１３ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（９０ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（３６ｍｇ、４０％）（ＲＯ５１８５３９０−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−２’−（２−アミノカルボニル−メチル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（３８ｍｇ、４２％）（ＲＯ５１８５３９１−０００）。
【０１８４】
実施例１４ａ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１８５】
【化５１】
2010527954.tif 000053
【０１８６】
実施例１１ｂにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１１ａで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−（２−フルオロカルボニル−メチル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（０．２ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を、１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミントリフルオロ酢酸塩（０．２ｇ）、Ｎ−メチルモルホリン、および４−ジメチルアミノピリジンと反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量４５ｍｇ、１７％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ32Ｈ36Ｃｌ2Ｎ6Ｏ5Ｓ＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：６８７．１９１８。実測値：６８７．１９１８。
【０１８７】
実施例１４ｂ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０１８８】
【化５２】
2010527954.tif 000054
【０１８９】
実施例１４ａで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（４０ｍｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（１５ｍｇ、３８％）（ＲＯ５１８５３９４−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−［（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）アミノカルボニル−メチル］−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（１５ｍｇ、３８％）（ＲＯ５１８５３９５−０００）。
【０１９０】
実施例１５ａ
中間体である、１−イソプロペニル−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの製造
【０１９１】
【化５３】
2010527954.tif 000055
【０１９２】
実施例１ｃにおいて記載された方法と同様の方法で、５−フルオロ−２−メチル−ベンズアルデヒドの代わりに２−メタクロレイン（２ｇ、２０ｍｍｏｌ）（アクロス）を出発原料として使用して、１、１、１、３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（３．２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルクロリド（２．２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．７ｇ、２７ｍｍｏｌ）、および塩化アセチル（２．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）と反応させて、１−イソプロペニル−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンを得、そして更なる精製をせずに次のステップのために使用した。
【０１９３】
実施例１５ｂ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１９４】
【化５４】
2010527954.tif 000056
【０１９５】
実施例１ｄにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１ｂで製造されたＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（８ｇ、２０ｍｍｏｌ）を、実施例１５ａで製造された１−イソプロペニル−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（２１ｇ、９９ｍｍｏｌ）とトルエン（２００ｍＬ）中で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色粘性物質として得た（３．５ｇ、３３％）。
【０１９６】
実施例１５ｃ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０１９７】
【化５５】
2010527954.tif 000057
【０１９８】
実施例１ｅにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１５ｂで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（３ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）を、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび炭酸セシウムと、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド中で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量：２．９８ｇ、７９％）。
【０１９９】
実施例１５ｄ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２００】
【化５６】
2010527954.tif 000058
【０２０１】
実施例１ｆにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１５ｃで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１．６ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を、２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド（３ｇ、７．５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）と、トルエン（１００ｍＬ）中、１２０℃で反応させて、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量１．５ｇ、９１％）。
【０２０２】
実施例１５ｅ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２０３】
【化５７】
2010527954.tif 000059
【０２０４】
実施例１ｇにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１５ｄで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１．５ｇ、２．２７ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（９ｇ、約０．１ｍｏｌ）（アルドリッチ、６４〜６５％）と、メタノール（２０ｍｌ）中、封管容器中１２０℃で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色固体として得た（収量０．９ｇ、６８％）。
【０２０５】
実施例１５ｆ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２０６】
【化５８】
2010527954.tif 000060
【０２０７】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１５ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．９ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を、ＬｉＨ（アルドリッチ）およびヨードメタンと、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド中で反応させて、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを灰色がかった白色の固体として得た（収量０．９ｇ、９７％）。
【０２０８】
実施例１５ｇ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２０９】
【化５９】
2010527954.tif 000061
【０２１０】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１５ｆで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．９ｇ，１．５ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸と反応させ、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量０．６ｇ、８５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ24Ｈ22Ｃｌ2Ｎ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：４６９．１１９３。実測値：４６９．１１８９。
【０２１１】
実施例１５ｈ
キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２１２】
【化６０】
2010527954.tif 000062
【０２１３】
実施例１５ｇで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（０．６ｇ）からの２つのエナンチオマーの分離をキラルＳＦＣによって行い、キラル体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得（０．２４ｇ、４０％）（ＲＯ５２０２２１７−０００）、そしてキラル体の（６’Ｓ，３Ｓ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（０．２４ｇ、４０％）（ＲＯ５２０２２１８−０００）。
【０２１４】
実施例１６
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２,３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２１５】
【化６１】
2010527954.tif 000063
【０２１６】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１５ｅで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（２４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸と、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（１８ｍｇ、９９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ20ＣＩ2Ｎ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：４５５．１０３６。実測値：４５５．１０３８。
【０２１７】
実施例１７ａ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２１８】
【化６２】
2010527954.tif 000064
【０２１９】
実施例１５ｂにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１ｂで製造されたＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（４２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、実施例１５ａで製造された１−イソプロペニル−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）とトルエン中で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色粘性物質として得た（１７０ｍｇ、３２％）。
【０２２０】
得られる他の生成物は、ラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランであった：白色泡状物質（１６０ｍｇ、３０％）。
【０２２１】
実施例１７ｂ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２２２】
【化６３】
2010527954.tif 000065
【０２２３】
実施例１５ｃにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１７ａで製造されたラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１６０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび炭酸セシウムと、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド中で反応させ、ラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量：１１０ｍｇ、５６％）。
【０２２４】
実施例１７ｃ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２２５】
【化６４】
2010527954.tif 000066
【０２２６】
実施例１５ｄにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１７ｂで製造されたラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１１０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド（アルドリッチ）と、トルエン中１１０℃で反応させ、ラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量７０ｍｇ、６２％）。
【０２２７】
実施例１７ｄ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２２８】
【化６５】
2010527954.tif 000067
【０２２９】
実施例１５ｅにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１７ｃで製造されたラセミ体の（２’Ｓ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２’−イソプロペニル−２，３−ジヒドロ−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−２−オキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（７０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（６ｇ、２．１ｍｍｏｌ）（アルドリッチ、６４〜６５％）と、メタノール（２ｍｌ）中、封管容器中１２０℃で２４時間反応させ、ラセミ体の（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色固体として得た（収量３３ｍｇ、５１％）。
【０２３０】
実施例１７ｅ
ラセミ体である、（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｒ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２３１】
【化６６】
2010527954.tif 000068
【０２３２】
実施例１６において記載された方法と同様の方法で、実施例１７ｄで製造されたラセミ体の（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−イソプロペニル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（３３ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸と、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンと、メタノール中１００℃で反応させ、ラセミ体の（６’Ｓ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（１−メチレン−プロピル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（２１ｍｇ、８２％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ23Ｈ20Ｃｌ2Ｎ4Ｏ2＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：４５５．１０３６。実測値：４５５．１０３６。
【０２３３】
実施例１８ａ
中間体、２−アリルオキシ−５−ヨード−ベンズアルデヒドの製造
【０２３４】
【化６７】
2010527954.tif 000069
【０２３５】
２−ヒドロキシ−５−ヨード−ベンズアルデヒド（１６ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）のＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（１００ｍＬ）溶液へ、Ｋ2ＣＯ3（１６ｇ、１１５ｍｍｏｌ）および臭化アリル（２０ｇ、１６５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を加えた。当該反応混合物を、１００℃で３時間撹拌し、その後室温へ冷却し、そして水へ注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮して２−アリルオキシ−５−ヨード−ベンズアルデヒドを白色固体として得た（収量：１８ｇ、９７％）。
【０２３６】
実施例１８ｂ
中間体、１−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの製造
【０２３７】
【化６８】
2010527954.tif 000070
【０２３８】
実施例１ｃにおいて記載された方法と同様の方法で、５−フルオロ−２−メチル−ベンズアルデヒドの代わりに、実施例１８ａで製造された２−アリルオキシ−５−ヨード−ベンズアルデヒド（１９ｇ、６５ｍｍｏｌ）を出発原料として使用して、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（１１ｇ、６８ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、１７ｍＬ、６８ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルクロリド（７．４ｇ、６８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（９．４ｇ、９２ｍｍｏｌ）、および塩化アセチル（７．２ｇ、９２ｍｍｏｌ）と反応させて、１−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンを得、更なる精製をせずに次のステップのために使用した。
【０２３９】
実施例１８ｃ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２４０】
【化６９】
2010527954.tif 000071
【０２４１】
実施例１ｄにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１ｂで製造されたＥ／Ｚ−６−クロロ−３−（３−クロロベンジリデン）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（６ｇ、１５ｍｍｏｌ）を、実施例１８ｂで製造された１−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−３−トリメチルシリルオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（２６ｇ、６５ｍｍｏｌ）とトルエン（１００ｍＬ）中で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（５ｇ、４４％）。
【０２４２】
実施例１８ｄ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２４３】
【化７０】
2010527954.tif 000072
【０２４４】
実施例１ｅにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１８ｃで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（５ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび炭酸セシウムと、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド中で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量：２．８ｇ、４９％）。
【０２４５】
実施例１８ｅ
中間体である、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２−ジオキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２４６】
【化７１】
2010527954.tif 000073
【０２４７】
実施例１ｆにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１８ｄで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２，６’−ジオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（２．８ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を、２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド（２ｇ、５ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）と、トルエン中１２０℃で反応させ、ラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２−ジオキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色泡状物質として得た（収量１．８ｇ、６２％）。
【０２４８】
実施例１８ｆ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２４９】
【化７２】
2010527954.tif 000074
【０２５０】
実施例１ｇにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１８ｅで製造されたラセミ体の（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−２’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−１’−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）メチル］−６−クロロ−４’−（３−クロロフェニル）−２，３−ジヒドロ−２−ジオキソ−６’−チオキソスピロ［インドール−３，３’−ピペリジン］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（１．８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（８ｇ、約８９ｍｍｏｌ））（アルドリッチ、６４〜６５％）と、メタノール（２０ｍｌ）中、封管容器中１２０℃で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色固体として得た（収量０．７３ｇ、４５％）。
【０２５１】
実施例１８ｇ
中間体である、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２オキソスピロ（３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランの製造
【０２５２】
【化７３】
2010527954.tif 000075
【０２５３】
実施例１ｈにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１８ｆで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．７３ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、ＬｉＨ（アルドリッチ）およびヨードメタンと、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド中で反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシランを白色固体として得た（収量０．６６ｇ、９０％）。
【０２５４】
実施例１８ｇ
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２５５】
【化７４】
2010527954.tif 000076
【０２５６】
実施例１ｉにおいて記載された方法と同様の方法で、実施例１８ｇで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロ−２−オキソスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３’−オン）］−１−メトキシエチルトリメチルシラン（０．４１ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸と反応させ、その後Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンとメタノール中反応させ、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量０．３１ｇ、９０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ30Ｈ25Ｃｌ2ＩＮ4Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：６８７．０４２１。実測値：６８７．０４２１。
【０２５７】
実施例１９
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−エチニル−２−ヒドロキシ−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２５８】
【化７５】
2010527954.tif 000077
【０２５９】
実施例１８ｇで製造された、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６’−（２−アリルオキシ−５−ヨード−フェニル）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（７０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（１４ｍＬ）溶液へ、トリメチルシリルアセチレン（２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）（アルファ）、ＣｕＩ（３９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）、およびトリエチルアミン（２１ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素下で１０分間脱気した後、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）ジクロリド（１４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）（ストレム（Ｓｔｒｅｍ））を加え、そして当該反応混合物を窒素下１００℃で３時間加熱した。反応混合物を室温へ冷却し、そして水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。
【０２６０】
残渣へメタノール（２ｍＬ）を加え、そしてＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、２ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水で希釈し、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（５−エチニル−２−ヒドロキシ−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを灰色がかった白色固体として得た（収量２１ｍｇ、３８％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ29Ｈ22Ｃｌ2Ｎ4Ｏ3＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：５４５．１１４２。実測値５４５．１１４２。
【０２６１】
実施例２０
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−ヨード−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２６２】
【化７６】
2010527954.tif 000078
【０２６３】
実施例１８ｇで製造されたラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−（２−ヒドロキシ−５−ヨード−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（１１８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液へ、ＯｓＯ4（４％水溶液、０．２２ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリンＮ−オキシド（４０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を濃縮し、そして当該残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝９：１）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−ヨード−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを白色固体として得た（収量８０ｍｇ、６５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ30Ｈ27Ｃｌ2ＩＮ4Ｏ5＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：７２１．０４７６。実測値：７２１．０４７８。
【０２６４】
実施例２１
ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−エチニル−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンの製造
【０２６５】
【化７７】
2010527954.tif 000079
【０２６６】
実施例１８ｇで製造された白色固体の、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−ヨード−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオン（８０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液へ、トリメチルシリルアセチレン（２２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）（アルファ）、ＣｕＩ（４２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）（アルドリッチ）、およびトリエチルアミン（２２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素下で１０分間脱気後、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）ジクロリド（１５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）（ストレム）を加え、そして反応混合物を窒素下１００℃で１時間加熱した。反応混合物を室温へ冷却し、そして水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。
【０２６７】
当該残渣へメタノール（１０ｍＬ）を加え、そしてＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、１ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水で希釈し、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製し、ラセミ体の（６’Ｒ，３Ｒ，８’Ｓ）−６−クロロ−８’−（３−クロロフェニル）−６’−［２−（２，３−ジヒドロキシ−プロポキシ）−５−エチニル−フェニル）−２’−メチル−６’，７’，８’，９’−テトラヒドロスピロ［３Ｈ−インドール−３，７’−（２Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン）］−２，３’（１Ｈ）−ジオンを灰色がかった白色固体として得た（収量５１ｍｇ、６４％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ+）  ｍ／ｚ  Ｃ32Ｈ28Ｃｌ2Ｎ4Ｏ5＋Ｈ［（Ｍ＋Ｈ）+］計算値：６１９．１５１０．実測値：６１９．１５０５。
【０２６８】
実施例２２
インビトロ活性アッセイ
ｐ５３とＭＤＭ２との間の相互作用を阻害する化合物の能力を、組み換えＧＳＴでタグをしたＭＤＭ２が、ｐ５３のＭＤＭ２相互作用領域と類似するペプチドと結合する、ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイによって測定した（Ｌａｎｅ他）。ＧＳＴ−ＭＤＭ２タンパク質と（Ｎ末端をビオチン化された）ｐ５３−ペプチドとの結合を、ユーロピウム（Ｅｕ）でラベル化した抗ＧＳＴ抗体と、ストレプトアビジンが結合したアロフィコシアニン（ＡＰＣ）との間のＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）によって記録した。黒色平底３８４ウェルプレート（コスター）中、９０ｎＭ ビオチン化ペプチド、１６０ｎｇ／ｍｌ ＧＳＴ−ＭＤＭ２、２０ｎＭ ストレプトアビジン−ＡＰＣ（パーキンエルマーワラック）、２ｎＭ Ｅｕラベル化抗ＧＳＴ抗体（パーキンエルマーワラック）、０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭ ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、および２０ｍＭ トリス−ホウ酸生理食塩水（ＴＢＳ）バッファーを含む、全容量４０μＬで、以下のように試験を行なった：各々のウェルへ、１０μＬのＧＳＴ−ＭＤＭ２（８４０ｎｇ／ｍｌ作用液）の反応バッファー液を加えた。各々のウェルへ、１０μＬの希釈された化合物（反応バッファーで１：５に希釈）を加え、振盪により混合した。各々のウェルへ、２０μＬのビオチン化ｐ５３ペプチド（１８０ｎＭ作用液）の反応バッファー液を加え、そして振盪機上で混合した。３７℃で１時間インキュベートした。２０μＬのストレプトアビジン−ＡＰＣとＥｕ−抗ＧＳＴ抗体との混合物（６ｎＭ Ｅｕ−抗ＧＳＴ、および６０ｎＭ ストレプトアビジン−ＡＰＣ作用液）のＴＢＳバッファー液（０．２％ＢＳＡ入り）を加え、室温で３０分間振盪し、そして８６５および６１５ｎｍでＴＲＦの可能なプレートリーダー（ビクター５、パーキンエルマーワラック）を使用して読み取った。指定しない限り、試薬をシグマ・ケミカル社から購入した。
【０２６９】
本発明の生物学的活性を示すＩＣ50は、約１０μＭ未満で活性を示す。
【０２７０】
実施例の生物学的活性値は以下の通りである：
【０２７１】
【表１】
2010527954.tif 000080
【国際調査報告】
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