(57)【要約】  本発明は、フラボノイド、特にラムノース含有フラボノイドの長時間にわたる、持続的な放出のための、さらに消化管内での前記フラボノイドの取込みを長持ちさせるための方法に関する。本発明はさらに、前記フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物に関する。本発明はまた、ヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシドとを含む組成物を包含する。【選択図】  図２【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物。
【請求項２】
α−ラムノシダーゼが、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
α−ラムノシダーゼがフラボノイドと直接接触していない、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
α−ラムノシダーゼがカプセル化されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
α−ラムノシダーゼが、α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物内にカプセル化されている、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
微生物が細菌である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
微生物が、ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属、バチルス属、スタフィロコッカス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、オエノコッカス属などから選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
微生物が、ラクトバチルスクリスパタスＡＴＣＣ３３８２０、ラクトバチルスクリスパタスＣＮＣＭ  Ｉ−３６５４、ラクトバチルスプランタルムＡＴＣＣ８０１４、ラクトバチルスプランタルムＣＮＣＭ  Ｉ−３６５３、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５又はこれらの混合物から選択される、請求項５〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
微生物が１０６〜１０１０ｃｆｕ／ｇの量で存在する、請求項５〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物がカプセル化されている、請求項５〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
フラボノイドがヘスペリジンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
α−ラムノシダーゼが、消化管上部において１０〜５０％のヘスペレチン７−グルコシド又はヘスペレチンを得るのに十分な量で存在する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ラムノース含有フラボノイドが、フラボノイド化合物のアグリコン当量０．０１ｍｇ〜１ｇに相当する量で存在する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
ラムノース含有フラボノイドが、フラボノイド化合物のアグリコン当量１０ｍｇ〜８００ｍｇに相当する量で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
栄養組成物、医薬組成物又は化粧組成物としての使用のために配合される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
液体、乾燥又は半乾燥組成物、例えば溶液、スプレー、粉末、錠剤、カプセル剤、ヨーグルト、ビスケット、ミルク、飲料、チョコレート、アイスクリーム、朝食用シリアルフレーク又はシリアルバー、粉末ミルク、大豆系製品、非ミルク発酵性製品、栄養補助食品、食物補助食品、ペット食品、乳児用調乳などから選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記フラボノイドの生物有効性及び／又はバイオアベイラビリティーの改善における使用のための、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、α−ラムノシダーゼとを含む組成物。
【請求項１８】
皮膚健康の改善における使用のための、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、α−ラムノシダーゼとを含む組成物。
【請求項１９】
ラクトバチルスクリスパタス、ラクトバチルスプランタルム、ラクトバチルスガセリ、ラクトバチルスアシドフィルス又はリューコノストックメゼンテロイデスから選択される、α−ラムノシダーゼ活性を有する細菌。
【請求項２０】
ラクトバチルスクリスパタスＡＴＣＣ３３８２０、ラクトバチルスクリスパタスＣＮＣＭ  Ｉ−３６５４、ラクトバチルスプランタルムＡＴＣＣ８０１４、ラクトバチルスプランタルムＣＮＣＭ  Ｉ−３６５３又はラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５である、請求項１９に記載の細菌。
【請求項２１】
前記フラボノイドの生物有効性及び／又はバイオアベイラビリティーの改善のための、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドを含む組成物の調製におけるα−ラムノシダーゼの使用。
【請求項２２】
皮膚健康の改善のための組成物の製造における、α−ラムノシダーゼ及び少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドの使用。
【請求項２３】
α−ラムノシダーゼが、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にある、請求項２１又は２２に記載の使用。
【請求項２４】
α−ラムノシダーゼがフラボノイドと直接接触していない、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
α−ラムノシダーゼがカプセル化されている、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
α−ラムノシダーゼが、α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物内にカプセル化されている、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
微生物が細菌である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
微生物が、ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属、バチルス属、スタフィロコッカス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、オエノコッカス属などから選択される、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
微生物が、ラクトバチルスクリスパタスＡＴＣＣ３３８２０、ラクトバチルスクリスパタスＣＮＣＭ  Ｉ−３６５４、ラクトバチルスプランタルムＡＴＣＣ８０１４、ラクトバチルスプランタルムＣＮＣＭ  Ｉ−３６５３、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５又はこれらの混合物から選択される、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
微生物が、１０６〜ｌ０１０ｃｆｕ／ｇの量で存在する、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物がカプセル化されている、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
フラボノイドがヘスペリジンである、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
α−ラムノシダーゼが、消化管上部において１０〜５０％のヘスペレチン７−グルコシド又はヘスペレチンを得るのに十分な量で存在する、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
ラムノース含有フラボノイドが、フラボノイド化合物のアグリコン当量０．０１ｍｇ〜１ｇに相当する量で存在する、請求項２３〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
ラムノース含有フラボノイドが、フラボノイド化合物のアグリコン当量１０ｍｇ〜８００ｍｇに相当する量で存在する、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
組成物が、ヨーグルト、ビスケット、ミルク、飲料、チョコレート、アイスクリーム、朝食用シリアルフレーク又はシリアルバー、粉末ミルク、大豆系製品、非ミルク発酵性製品又は栄養補助食品、食物補助食品、ペット食品、乳児用調乳などの形態である、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物の化粧品への使用。
【請求項３８】
ヒト又はペットの皮膚、外皮及び／又は毛を損傷から守る、及び／又は改善する、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物を提供するステップを含む、ラムノース含有フラボノイドのバイオアベイラビリティーを持続及び／又は改善するための方法。
【請求項４０】
少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物を経口的に提供するステップを含む、前記フラボノイド摂取後のラムノース含有フラボノイド代謝物の血漿中濃度を長持ちさせる方法。
【請求項４１】
前記α−ラムノシダーゼが、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にある、請求項３９又は４０に記載の方法。
【請求項４２】
α−ラムノシダーゼが、フラボノイドと直接接触していない、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
α−ラムノシダーゼが、ラムノース含有フラボノイドを含む組成物と別々に提供される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
α−ラムノシダーゼがカプセル化されている、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
α−ラムノシダーゼが、α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物内にカプセル化されている、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
微生物が細菌である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
微生物が、ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属、バチルス属、スタフィロコッカス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、オエノコッカス属などから選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
微生物が、ラクトバチルスクリスパタスＡＴＣＣ３３８２０、ラクトバチルスクリスパタスＣＮＣＭ  Ｉ−３６５４、ラクトバチルスプランタルムＡＴＣＣ８０１４、ラクトバチルスプランタルムＣＮＣＭ  Ｉ−３６５３、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５又はこれらの混合物から選択される、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
微生物が、１０６〜１０１０ｃｆｕ／ｇの量で存在する、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物がカプセル化されている、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
フラボノイドがヘスペリジンである、請求項３９〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
α−ラムノシダーゼが、消化管上部において１０〜５０％の間のヘスペレチン７−グルコシド又はヘスペレチンを得るのに十分な量で存在する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ラムノース含有フラボノイドが、フラボノイド化合物のアグリコン当量０．０１ｍｇ〜１ｇに相当する、好ましくは１０ｍｇ〜８００ｍｇに相当する量で存在する、請求項４１〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物を投与するステップ、又は少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を、別々及び同時に投与するステップを含む、皮膚健康を改善するための方法。
【請求項５５】
ヘスペリジン及びヘスペレチン−７−グルコシドの混合物を含む組成物。
【請求項５６】
ヘスペリジン及びヘスペレチン−７−グルコシドが、組成物中に、７０／３０〜５０／５０の間の比で存在する、請求項５５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、フラボノイド、特にラムノース含有フラボノイドの長時間にわたる、持続的な放出のための、さらに消化管内での前記フラボノイドの取込みを長持ちさせるための方法に関する。本発明はさらに、前記フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物に関する。本発明はまた、ヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシドとを含む組成物を包含する。
【背景技術】
【０００２】
フラボノイド又はビオフラボノイドは、大部分の植物において、種、果皮又は皮、樹皮、及び花に集中して存在するポリフェノール物質の広範なグループである。多数の植物薬はフラボノイドを含有しており、このフラボノイドは、抗菌性、抗酸化性、抗炎性、抗アレルギー性、抗変異原性、抗ウィルス性、抗腫瘍性、抗血栓性、及び血管拡張性の作用があると多くの著者から報告されてきた。
【０００３】
国際公開第２００５／０５８２５５  Ａ１号パンフレットに記載の最近の成果では、ヒト又はペットの皮膚、毛及び外皮の健康を改善するためのフラバノン含有組成物の利点も示されている。
【０００４】
本来、これらの化合物は主にグリコシドとして生じる。糖とのこの結合は、その吸収速度に著しい影響を与えている。例えば、フラボノイドグルコシドは、速い、早期の吸収を有する一方、フラボノイドルチノシド（ラムノース−グルコシド）は、遅い、後発性の吸収を有する。
【０００５】
ヘスペリジンなどのフラボノイドルチノシドに対するバイオアベイラビリティーは、哺乳動物において低く、後発性である。これは、前記フラボノイドルチノシドのラムノース部分を取り出すはずの小腸内の酵素α−ラムノシダーゼが不足しているためである。これにより、大腸までの消化管でのフラボノイドルチノシドの進行は、時間がかかることになる。
【０００６】
長時間作用性のフラボノイドグリコシドを含有する健康食品及び健康飲料が、特開２００３−０７３２７９に記載されており、この場合様々な度合いのグリコシル化を有するフラボノイドの混合物を食製品に含めることにより、消化管全体で吸収が生じている。
【０００７】
特開２０００−０７８９５５は、生理学的に活性のあるフラボノイドとその誘導体の混合物を提供することによって、食品中又は薬剤中のフラボノイドの吸収を改善する方法も記載している。
【０００８】
さらに、Ｅｓｐｉｎ  Ｊ．Ｃ．らは、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００４、５２（２０）、６１３６−６１４２頁で、果汁及び緑茶の生体内で吸収し得るグルコシドフラボノイドの製造について記載している。これは、アスペルギルスアクレアータス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｕｓ）からのラムノシダーゼ酵素で、果汁及び緑茶を処理することによって達成される。
【発明の目的】
【０００９】
したがって、フラボノイド組成物が、哺乳動物内で制御された効果を発揮できるようにする代替方法を提供する必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【００１０】
したがって、この必要性は、独立請求項の特徴により解決される。従属請求項では、本発明の中心的発想をさらに発展させている。
【００１１】
したがって、本発明の第１の態様において、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、α−ラムノシダーゼとを含む組成物。
【００１２】
本発明の組成物は、化粧品、栄養品、及び製薬への使用のために配合される。
【００１３】
第２の態様において、本発明は、α−ラムノシダーゼ活性を有する細菌に関し、この細菌は、ラクトバチルスクリスパタス、ラクトバチルスプランタルム、ラクトバチルスガセリ、ラクトバチルスアシドフィルス又はリューコノストックメゼンテロイデスから選択される。
【００１４】
さらなる態様において、本発明は、前記フラボノイドの生物有効性及び／又はバイオアベイラビリティーを改善するために、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドを含む組成物の調製においてα−ラムノシダーゼを使用することに関する。
【００１５】
本発明の別の態様において、皮膚健康の改善のための組成物の製造における、α−ラムノシダーゼ及び少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドの使用を提供する。
【００１６】
本発明の組成物の化粧品への使用はまた、本発明の別の様相を示すものである。
【００１７】
ラムノース含有フラボノイドのバイオアベイラビリティーを持続及び／又は改善する方法であって、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を提供するステップを含む方法も本発明に関連する。
【００１８】
前記フラボノイドの摂取後のラムノース含有フラボノイド代謝物の血漿中濃度を長持ちさせるための方法であって、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を経口的に提供するステップを含む方法は、本発明のさらなる態様である。
【００１９】
少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドとα−ラムノシダーゼとを含む組成物を経口的に投与するステップ、又は少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラバノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を別々及び同時に経口的に投与するステップを含む、皮膚健康の改善のための方法も本発明の一態様である。
【００２０】
最後に、本発明は、ヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシドの混合物を、好ましくは７０／３０〜５０／５０の間の比で含む組成物を包含する。
【００２１】
以下の付随する図において示される実施形態のいくつかを参考にして、これ以降の本明細書でさらに本発明を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１ａ】ヘスペリジンの分子構造を描写している。
【図１ｂ】ヘスペレチン−７−グルコシドの分子構造を描写している。
【図１ｃ】ヘスペレチンの分子構造を描写している。
【図２】ヘスペレチン−７−グルコシドだけを摂取した場合、ヘスペリジンだけを摂取した場合、又は本発明による組成物を消費した場合によって決まるヘスペレチンの血漿中濃度を比較したグラフである。
【図３】純粋なα−ラムノシダーゼ（ＣＴＲＬ＋）の存在下、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５（９０７ＥＣ）の全細胞の存在下、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５（９０７ＣＥ）の損傷細胞の存在下、又は任意の細菌／酵素（ＣＴＲＬ−）の非存在下での、小腸（ｐＨ６）に近い条件下でのインビトロでのヘスペリジンの消失を示している。
【図４】ｐＨ６でのヘスペレチン−７−グルコシドの生成（開始時のヘスペリジンの量（１００％）から算出）を示している。図中、ＣＴＲＬ＋、ＣＴＲＬ−、９０７ＣＥ及び９０７ＥＣは、図３と同じ意味を有する。
【図５】ヘスペリジンをラクトバチルスガセリ（ＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５）の全細胞又は損傷細胞で処置した場合の、ｐＨ６でのヘスペレチンの生成を示している。
【図６】純粋なα−ラムノシダーゼ（ＣＴＲＬ＋）の存在下、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５（９０７ＥＣ）の全細胞の存在下、ラクトバチルスガセリＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５（９０７ＣＥ）の損傷細胞の存在下、又は任意の細菌／酵素（ＣＴＲＬ−）の非存在下での、食事を消化した後の胃（ｐＨ４）に近い条件下でのインビトロでのヘスペリジンの消失を示している。
【図７】ｐＨ４でのヘスペレチン−７−グルコシドの生成（開始時のヘスペリジンの量（１００％）から算出）を示している。図中、ＣＴＲＬ＋、ＣＴＲＬ−、９０７ＣＥ及び９０７ＥＣは、図６と同じ意味を有する。
【図８】ＴＩＭ１実験の結果を例示している。菌種ラクトバチルスガセリ（ＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５）を用いた場合の、胃及び小腸でのヘスペリジンのヘスペレチン−７−グルコシドへの加水分解を３時間までにわたって監視した。細菌酵素は、胃の中では活性が不十分であり、小腸でのみ活性があり、化合物が消化器系を下に移動するにつれて、加水分解したヘスペリジンの量が減少することを図は示している。
【図９】純粋なα−ラムノシダーゼ酵素を用いた場合の、ヘスペリジンからヘスペレチン−７−グルコシドへの加水分解の度合いを図示している。このグラフは、純粋な酵素は、胃では活性があるが、消化器系路では活性が低いことを示している。
【発明の詳細な説明】
【００２３】
本発明は、哺乳動物においてラムノース含有フラボノイドの吸収を制御することによって、前記フラボノイド摂取後に、消化管の上部及び下部で等しく、又は消化管の長さ全体にわたり、吸収が生じるような方法に関する。
【００２４】
したがって、持続的な、制御された効果を達成するための本発明の基礎をなす基本原理とは、哺乳動物の消化管を通過する間はずっと、少なくとも部分的に吸収性の形態であるフラボノイドを、制御された形式で提供するための一方法である。通常フラボノイドは、消化管上部及び大腸内においても、少なくとも部分的に加水分解される。
【００２５】
本発明によると、消化（胃、小腸）の初期段階でのα−ラムノシダーゼの存在は、ラムノース含有フラボノイドの部分的な切断をある程度可能にする（図３〜９参照）。これによってフラボノイドは、消化工程のより早い時期で吸収性を増すことになる。さらに、大腸内に自然に存在する酵素がこの切断工程を促進させるので、消化管を通過する間はずっとフラボノイドの吸収が持続する結果となる。
【００２６】
したがって、本発明は、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、ラムノース含有フラボノイドを切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を提案する。
【００２７】
正しい条件（環境、ｐＨ、温度など）が満たされれば、α−ラムノシダーゼ酵素は通常、ラムノース部分を含む基質を切断する能力を有する。
【００２８】
しかし本発明の組成物において酵素は、その健常な機能を実行することが本質的に妨げられている状態にある。本組成物の摂取によってのみ酵素の環境は変化し、新しい条件（ｐＨ、温度など）により、酵素が活性化され、これによりフラボノイドのラムノース部分の切断が可能になる。
【００２９】
したがって、本発明の組成物、使用又は方法において、α−ラムノシダーゼは、ラムノース含有フラボノイドを切断することが本質的にできない状態にある。α−ラムノシダーゼは、組成物の摂取によってのみラムノース含有フラボノイドを切断することができる。
【００３０】
この「遅らせた」α−ラムノシダーゼ活性により、α−ラムノシダーゼによるフラボノイドの切断が、摂取時のみ生じることが確実となる。したがって、α−ラムノシダーゼ活性は、消化管条件下でしか生じない。
【００３１】
本発明の異なる実施形態に従い、いくつかの手段でこれを達成できる。
【００３２】
例えばこれは、組成物内のα−ラムノシダーゼを、それが「不活性」であるための条件、すなわちフラバノイドのラムノース部分を切断することができないような条件下に置くことで実現することができる。不活性なα−ラムノシダーゼとは例えば、消化管の条件が満たされる場合にのみα−ラムノシダーゼが活性となることができるように阻害剤で処理されているα−ラムノシダーゼである。
【００３３】
或いは、組成物内の状態は、例えば高いｐＨ数値を有するために酵素が「不活性」であるような状態でもよい。摂取によって、消化管の低いｐＨは、α−ラムノシダーゼが活性となるのに好ましい条件を提供することになる。
【００３４】
別の実施形態によれば、組成物中のα−ラムノシダーゼをフラボノイドから分離することによって、これを達成できる。この分離によって、α−ラムノシダーゼはフラボノイドと直接接触しなくなる。
【００３５】
この分離は、例えば、当分野で知られている手段でα−ラムノシダーゼをカプセル化することによって行うことができる。したがって、酵素をカプセル化することによって、消化管の条件下でのみ放出するようにしてもよい。
【００３６】
或いは、α−ラムノシダーゼを放出可能な微生物内にα−ラムノシダーゼをカプセル化すれば、α−ラムノシダーゼは組成物内のフラボノイドと直接接触しない。このような「バイオカプセル化」は、α−ラムノシダーゼ生成型の微生物によって達成することができ、この微生物は、低代謝率又はゼロ代謝率を示すような条件下（水分活性など）で維持される。したがって組成物内の条件（水分活性など）とは、微生物が酵素を放出しないような条件である。α−ラムノシダーゼは、微生物の細胞壁内、又は細胞の外壁上に「バイオカプセル化」される。
【００３７】
したがって、本発明において、「α−ラムノシダーゼは、ラムノース含有フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にある」とは、上述の酵素の形態のどれをも意味する。
【００３８】
本発明の組成物又は方法においてα−ラムノシダーゼを生成する微生物を使用する場合、それが細菌であることが好ましい。この微生物は、ラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属、バチルス属、スタフィロコッカス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、オエノコッカス属などから選択するのがより好ましい。
【００３９】
この微生物は、ラクトバチルスクリスパタス（ＡＴＣＣ３３８２０）、ラクトバチルスクリスパタス（ＣＮＣＭ  Ｉ−３６５４）、ラクトバチルスプランタルム（ＡＴＣＣ８０１４）、ラクトバチルスプランタルム（ＣＮＣＭ  Ｉ−３６５３）、ラクトバチルスガセリ（ＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５）又はこれらの混合物から選択するのが最も好ましい。
【００４０】
したがって、ラクトバチルスクリスパタス（ＡＴＣＣ３３８２０）、ラクトバチルスクリスパタス（ＣＮＣＭ  Ｉ−３６５４）、ラクトバチルスプランタルム（ＡＴＣＣ８０１４）、ラクトバチルスプランタルム（ＣＮＣＭ  Ｉ−３６５３）又はラクトバチルスガセリ（ＣＮＣＭ  Ｉ−３７９５）から選択されるα−ラムノシダーゼ活性を有する微生物は、本発明の一部分である。
【００４１】
微生物は、１０６〜１０１０ｃｆｕ／ｇの量で本発明の組成物内に存在するのが好ましい。１０９ｃｆｕ／ｇの量で存在するのがより好ましい。
【００４２】
α−ラムノシダーゼを生成可能な微生物はさらにカプセル化してもよい。微生物のカプセル化は、当業者にはよく知られた方法である。
【００４３】
本発明に使用するフラボノイドは、ラムノース部分を含む任意のフラボノイドから選択することができる。そのような任意のラムノース含有フラボノイドは、ヘスペリジン、ルチン、エリオトリシン、ナリンギン、ネオヘスペリジン、ジオスミン、リナリン、ポンシリン、プルニンなど、及びこのリストから２個以上の成分を含み、このリストからの任意の可能な組合せからなる群から選択することができる。フラボノイドはヘスペリジンであることが好ましい（図１ａ）。
【００４４】
ヘスペリジン（図１ａ）は、ルチノース（ラムノースグルコース）部分を含む。活性のあるα−ラムノシダーゼ酵素の存在下で、ヘスペリジンのラムノース部分は、ある程度切断され、ヘスペレチン−７−グルコシドを生成する（図１ｂ）。今度はヘスペレチン−７−グルコシドが、他の酵素、例えば消化管内に存在するグルコシダーゼ酵素などでさらに切断され、ヘスペレチンを生成する（図１ｃ）。
【００４５】
図２を参照すると、ヘスペレチン−７−グルコース（図１ｂ）摂取時のヘスペレチン（図１ｃ）の血漿中濃度が、一方では、摂取後直ちに鋭いピークを示していることがわかる。理論に縛られることなしに、これは、ヘスペレチンが容易に吸収されるようにグルコース部分を切断することができる酵素の存在によるものであると考えられる。
【００４６】
他方では、ヘスペリジン（図１ａ）摂取によって生じるヘスペレチンの血漿中濃度は、後段階でしか現れず、程度も小さい。理論に縛られることなしに、これは、消化管通過の後段階でしかヘスペリジンのルチノース部分を切断することができない酵素の存在によるものであると考えられる。
【００４７】
したがって、本発明の組成物は、より長い時間にわたり持続するヘスペレチンの血漿中濃度を有利に提供する（図２参照）。
【００４８】
さらに、本発明の別の実施形態によると、そのような持続するヘスペレチンの血漿中濃度は、ヘスペリジン（図１ａ）とヘスペレチン−７−グルコシド（図１ｂ）の混合物を含む組成物で提供される。これらは組成物中にヘスペリジンとヘスペレチン−７−グルコシドの比が７０／３０〜５０／５０の間で存在するのが好ましい。
【００４９】
本発明の組成物のフラボノイドの量は、フラボノイド化合物のアグリコン当量０．０１ｍｇ〜１ｇの範囲の量に相当する。フラボノイドは、フラボノイド化合物のアグリコン当量１０ｍｇ〜８００ｍｇの範囲の量で存在するのが好ましい。
【００５０】
例えば、ヘスペリジン（図１ａ）を本発明の組成物に使用する場合、０．０１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜８００ｍｇに相当するヘスペレチン（図１ｃ）を得ることになるような量で存在する。これは当業者であれば容易に算出される。
【００５１】
本発明の組成物において、α−ラムノシダーゼは、１０〜５０％の間の、フラボノイドアグリコン又は消化の初期段階で吸収可能なグリコシル化したフラバノイドの形態を得るのに十分な量で存在してもよい。
【００５２】
例えば、フラバノイドがヘスペリジンの場合、使用するα−ラムノシダーゼの量は、消化管（小腸）上部において１０〜５０％の間のヘスペレチン７−グルコシド（図１ｂ）又はヘスペレチン（図１ｃ）を得るのに十分な量とする。これは、当分野で知られている方法、例えばＴＮＯのＴＩＭ−１での実験及びインビボでの検証により容易に評価することができる（図８及び９を参照）。
【００５３】
本発明の組成物は、栄養組成物、医薬組成物又は化粧品組成物としての使用のために配合されるのが好ましい。
【００５４】
したがって、本発明の組成物は、乾燥、湿性、又は半湿性組成物であってよい。「乾燥」とは、水分活性が０．６未満の組成物を意味する。「半湿性」とは、水分活性が０．５〜０．９の間の組成物を意味し、「湿性」とは水分活性が０．９より高い組成物を意味する。
【００５５】
本発明の組成物は、液体、乾燥又は半乾燥の組成物、例えば溶液、スプレー、粉末、錠剤、カプセル剤、ヨーグルト、ビスケット、ミルク、飲料、チョコレート、アイスクリーム、朝食用シリアルフレーク又はシリアルバー、粉末ミルク、大豆系製品、非乳性の発酵製品、栄養補助食品、食物補助食品、ペット食品、乳児用調乳などから選択してもよい。
【００５６】
摂取のためには、経口組成物の多くの実施形態、及び特に食物補助食品が可能である。これらは、糖衣錠、ゼラチンカプセル剤、ゲル、乳濁液、錠剤、カプセル剤又は溶液を作製する通常の方法を用いて配合する。特に、ラムノース含有フラボノイド及びα−ラムノシダーゼ、又は異なる実施形態においては、ヘスペリジン及びヘスペレチン−７−グルコシドは、他のいかなる形態の食物補助食品又は濃縮食品、例えば食品バー、又は圧縮粉末若しくは非圧縮粉末などに組込んでもよい。粉末は、水で希釈したり、発泡性清涼飲料、乳製品又は大豆由来製品に入れたり、食品バーに組込むことができる。
【００５７】
組成物は、通常の賦形剤及び成分、例えば、食品領域では通例の、脂肪性及び／又は水性の成分、保湿剤、増粘剤、保存料、構成作用物質、矯味剤及び／又はコーティング剤、抗酸化剤、染料を含んでもよい。
【００５８】
本発明のさらなる態様によると、ラムノース含有フラボノイドの生物有効性及び／又はバイオアベイラビリティーを改善するために、少なくとも１種の前記フラボノイドを含む組成物の調製にα−ラムノシダーゼを使用することができ、この組成物内でα−ラムノシダーゼは、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にある。「組成物」とは、上述の、本発明による任意の組成物を網羅する。
【００５９】
生物有効性とは、摂取した栄養物の部分が、著しい生物学的効果を有する栄養物の活性化状態へと変換されることと定義される。これは、物質が体循環へと吸収される度合いとして定義されるバイオアベイラビリティーと密接に関係している。フラボノイドの生物有効性及び／又はバイオアベイラビリティーを改善することによって、本発明は、より長持ちし、持続的な効果を有する、より有効な組成物の利点を提供する。
【００６０】
このようにして本発明はまた、ラムノース含有フラボノイドのバイオアベイラビリティーを持続及び／又は改善する方法であって、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を提供するステップを含む方法を提供する。
【００６１】
ヘスペリジン摂取後（図１ａ）又はヘスペレチン−７−グルコシド摂取後（図１ｃ）の血漿中濃度の比較は、本発明の組成物との注目すべき差を示している。実際、本発明の組成物の摂取後のヘスペレチンの血漿中濃度は、より長い時間にわたり維持されている（図２）。
【００６２】
したがって本発明は、ラムノース含有フラボノイド摂取後の前記フラボノイド代謝物の血漿中濃度を長持ちさせる方法であって、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を経口的に提供するステップを含む方法をさらに包含する。
【００６３】
本発明の方法において、このα−ラムノシダーゼは、ラムノース含有フラボノイドを含む組成物と別々に提供することもできる。例えば前記α−ラムノシダーゼは、フラボノイドを含む組成物と同時に摂取することになる、錠剤、カプセル剤などとして提供することもできる。或いは、このα−ラムノシダーゼを、例えばフラボノイド含有組成物上にまき散らすための粉末として提供することもできる。当業者であれば、本明細書中に述べられた具体的な実施形態に対する様々な異なる代替法を容易に心に描くことができるであろう。
【００６４】
別の態様において、本発明による組成物は、化粧品として使用することもできる。「化粧品としての使用」とは、ヒト又はペットの皮膚、外皮及び／又は毛の美的側面若しくは快適さを改善し得る非治療用の使用を意味する。
【００６５】
この文脈において、化粧品としての使用は、ヒト又はペットの皮膚、外皮及び／又は毛を損傷から予防すること、及び／又は改善することを含み得る。そのような損傷は、特に光線及び老化による皮膚の損傷、例えば乾燥、不規則な色素沈着（特にそばかす、黒子、滴状色素減少症及び持続性の色素沈着過剰）、しわ（特に微細な表面の線及び深い溝）、星状偽創、弾力線維症、非弾性、末梢血管拡張、静脈湖、面皰、脂腺増殖症、尖端線維性軟肬及び脂漏角化上皮症を含み得る。
【００６６】
この化粧品への使用はまた、毛又は外皮の密度、線維直径、色、油性、光沢、皮脂生成の改善など、毛及び外皮に特定のメリットを有し、毛又は外皮の損失を予防するのを助けることができる。
【００６７】
本発明は、例えば皮膚科的使用などの治療的使用をさらに包含する。実際、皮膚健康の改善のための組成物の製造における、α−ラムノシダーゼ及び少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドの使用であって、このα−ラムノシダーゼが前記フラボノイドを切断することが本質的にできない状態にある使用は、本発明の別の態様の範囲内に入る。前記組成物はまた、炎症の予防、又は骨及び／若しくは循環器系の健康の改善に使用することもできる。「組成物」とは、上述の、本発明による任意の組成物を網羅する。
【００６８】
本実施形態において、本発明による組成物を利用することによって、例えばストレス性の状況、例えば化学的、生物学的又は物理的なストレスによるもの、例えばオキシダント若しくは癌原物への曝露、周囲の細胞及び／若しくは微生物から導かれた細菌、ウィルス、真菌類、脂質への曝露、又はＵＶ線への曝露などにより生じる皮膚の損傷などを治療並びに／又は予防することができる。
【００６９】
これらの損傷は、光線による角化上皮症、紫斑、老年性血管腫、基底細胞癌及び扁平上皮癌、皮膚火傷及び／又は水疱形成、表皮過形成、炎症、免疫抑制、並びに癌、例えば非メラノーマ皮膚癌及びメラノーマ皮膚癌などをさらに含む。
【００７０】
本発明による組成物の、ヒト又はペットの皮膚に対する効果は、最小紅斑量テスト（ＭＥＤ）、比色、経表皮性水分喪失、ＤＮＡ修復、インターロイキン及びプロテオグリカンの生成の測定、又はコラゲナーゼ活性、バリア機能又は細胞再生を含めた従来の方法を用いて測定することができる。
【００７１】
したがって、少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、α−ラムノシダーゼとを含む組成物を経口的に投与するステップ、又は少なくとも１種のラムノース含有フラボノイドと、前記フラボノイドのラムノース部分を切断することが本質的にできない状態にあるα−ラムノシダーゼとを含む組成物を別々に及び同時に経口的に投与するステップを含む、皮膚健康を改善するための方法もまた、本発明の一態様の範囲内に入る。本方法はまた、循環器及び骨の健康を改善するために有用である。
【００７２】
本発明の概念は、現在使用されている薬物適用を補助する補助療法として同様に適応してもよいことは理解されよう。本発明の組成物は、食料と共に容易に経口投与し得るので、目的物質を多量に含有する特別な臨床上の食品を投与することもできる。
【００７３】
さらに、本発明の概念は、ラムノース含有フラボノイドとα−ラムノシダーゼ酵素とを含む組成物の局所的施用へと同様に拡大することもできる。
【００７４】
本発明は、以下に記載する非限定的な例を用いてさらに例示される。
【実施例】
【００７５】
実施例１
材料
ヘスペリジナーゼ「Ａｍａｎｏ」Ｃｏｎｃ．（ＡＭＡＮＯ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＣＯ．，ＬＴＤ．）
インビトロでの細菌の粗抽出物によるヘスペリジン切断
細菌のα−ラムノシダーゼが基質としてヘスペリジンを認識及び切断することができるかどうか試験するために、ラムノースの存在下で成長した細胞の粗抽出物を、ヘスペリジンと共に、ｐＨ４及びｐＨ６で４時間及び８時間の間、インキュベートし、ＨＰＬＣで分析する。反応開始時のヘスペリジンの総量（０．０８ｍｇ／ｍＬ）に対するヘスペリジン又はその誘導体のパーセンテージとして、結果を以下の表に示す。試験は、最終生成物に対する目標とするヘスペリジンのおよその濃度であるヘスペリジン０．０８ｍｇ／ｍＬ及び３×１０９細菌／ｍＬの粗抽出物で実施した。
【００７６】
２つの菌株がα−ラムノシダーゼ及びβ−グルコシダーゼの両活性を有し、それによりヘスペリジンが、ヘスペレチン−７−グルコシド及びアグリコンへと、反応条件に応じて異なる度合いで切断されることがこれら結果によって示されている。これらの結果は、細菌を使用することによって、ヘスペリジンをその場で、ヘスペレチン−７−グルコシド及びアグリコンへと部分的に変換できることを示唆している。
【００７７】
【表１】
2010501503.tif 000002
Ｎｄ：未検
【００７８】
実施例２
０．２〜５０ｍｇのヘスペリジン／ｇ生成物を、１０７〜１０１０ｃｆｕ／（ｇ生成物）のα−ラムノシダーゼ活性の細菌と混合する。生成した混合物を適切な担体とブレンドする。担体は、発酵性ミルク、ヨーグルト、新鮮なチーズ、レンネットで処理したミルク、菓子バー、朝食用のシリアルフレーク又はシリアルバー、飲料、粉末ミルク、大豆系製品、非ミルク発酵性製品から選択し得る。
【図１ａ】
2010501503.tif 000003
【図１ｂ】
2010501503.tif 000004
【図１ｃ】
2010501503.tif 000005
【図２】
2010501503.tif 000006
【図３】
2010501503.tif 000007
【図４】
2010501503.tif 000008
【図５】
2010501503.tif 000009
【図６】
2010501503.tif 000010
【図７】
2010501503.tif 000011
【図８】
2010501503.tif 000012
【図９】
2010501503.tif 000013
【国際調査報告】
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2010501503.tif 000015
2010501503.tif 000016
2010501503.tif 000017
2010501503.tif 000018
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