(57)【要約】  本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、および疾患の、特に血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2010501504.tif 000060
［式中、
ｎは、１または２であり、
Ｘは、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１は、天然α−アミノ酸またはそのホモログまたは異性体の側鎖の基であり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ３は、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３は、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって、５員または６員の環を各々形成する］
の化合物、並びに、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項２】
式中、
ｎが、１または２であり、
Ｘが、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イル、３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素またはメチルであり、
Ｒ３が水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３が、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって、５員または６員の環を各々形成する、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、並びに、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項３】
式中、
ｎが、１または２であり、
Ｘが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素であり、
Ｒ３が、水素である、
請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物、並びに、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または、その塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物の１つの製造方法であって、
［Ａ］式
【化２】
2010501504.tif 000061
の化合物を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下で、式
【化３】
2010501504.tif 000062
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有し、そして、
Ｑは、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式
【化４】
2010501504.tif 000063
（式中、ｎは請求項１に記載の意味を有し、そして、
Ｑはこの請求項に記載の意味を有する）
の化合物に変換し、
次いで、後者を、
［Ａ１］不活性溶媒中、式
【化５】
2010501504.tif 000064
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、
Ｙは、ＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式
【化６】
2010501504.tif 000065
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、この請求項に記載の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法に従って除去し、式
【化７】
2010501504.tif 000066
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得るか、
または、
［Ａ２］不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化８】
2010501504.tif 000067
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
のα−アミノチオカルボン酸と反応させ、式
【化９】
2010501504.tif 000068
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
ＰＧは、この請求項に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法に従って除去し、式
【化１０】
2010501504.tif 000069
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を得るか、
あるいは、
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化１１】
2010501504.tif 000070
（式中、ｎは、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１２】
2010501504.tif 000071
（式中、ｎは、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基を常套の方法に従って除去し、式
【化１３】
2010501504.tif 000072
（式中、ｎは、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を得、次いで、塩基の存在下、式
【化１４】
2010501504.tif 000073
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、
ＡＧは、ヒドロキシルまたはハロゲン、好ましくは塩素または臭素であるか、または、カルボニル基と一体となって活性エステル、好ましくはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または、混合無水物、好ましくは炭酸アルキル、より好ましくは炭酸エチルを形成し、そして、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
の化合物を用いて、式
【化１５】
2010501504.tif 000074
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有し、そして、
ＰＧは、この請求項に記載の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法に従って除去し、式
【化１６】
2010501504.tif 000075
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に記載の意味を有する）
の化合物を得、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸を用いて、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換することを特徴とする、方法。
【請求項５】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項７】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項８】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、さらなる有効成分と組み合わせて含む、医薬。
【請求項９】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防のための、請求項７または請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
静脈内使用のための請求項７ないし請求項９のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項７ないし請求項１０のいずれかに記載の医薬を使用する、ヒトおよび動物における血栓塞栓性障害の処置および／または予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、および疾患の、特に血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロドラッグは、実際の有効成分が遊離する前に、インビボで酵素的および／または化学的生物変換を１つまたはそれ以上の段階で受ける、有効成分の誘導体である。プロドラッグの残基は、通常、基礎的有効成分の特性のプロフィールを改善するために使用される [P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)]。最適な効果のプロフィールを達成するために、これに関して、プロドラッグ残渣の設計並びに所望の遊離メカニズムを、個々の有効成分、適応症、作用部位および投与経路と非常に厳密に適合させることが必要である。多数の医薬が、プロドラッグとして投与され、それは、基礎的有効成分と比較して改善されたバイオアベイラビリティーを示し、それは、例えば、物理化学的プロフィール、特に溶解性、能動的または受動的吸収特性または組織特異的分布を改善することにより達成される。プロドラッグに関する多岐にわたる文献から言及し得る例は、H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985 である。
【０００３】
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［ＢＡＹ５９−７９３９、化合物（Ａ）］は、セリンプロテアーゼＸａ因子の経口で有効な直接的阻害剤であり、血液凝固の調節において本質的な機能を果たす。この化合物は、現在、血栓塞栓性障害の予防および治療用の可能性のある新有効医薬成分として、綿密な臨床試験を受けている［S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)］。
【化１】
2010501504.tif 000002
【０００４】
しかしながら、化合物（Ａ）には、水および生理的媒体において限られた溶解性しかなく、例えば有効成分の静脈内投与を困難にしている。従って、上述の媒体において改善された溶解性を有し、同時に、投与後に患者の体内で有効成分（Ａ）の制御された遊離を可能にする化合物（Ａ）の誘導体またはプロドラッグを同定することが、本発明の目的であった。
【０００５】
ＷＯ２００５／０２８４７３は、経口バイオアベイラビリティーを高めるのに役立つ、オキサゾリジノン類のアシルオキシメチルカルバメートプロドラッグを記載している。ＷＯ０１／００６２２は、イノシン−５'−モノホスフェートデヒドロゲナーゼのカルバメート阻害剤のアシルプロドラッグを開示している。基礎的有効成分を多段階の活性化メカニズムにより遊離させるオキサゾリジノン類のさらなるタイプのアミドプロドラッグは、ＷＯ０３／００６４４０に記載されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、一般式（Ｉ）
【化２】
2010501504.tif 000003
［式中、
ｎは、１または２であり、
Ｘは、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１は、天然α−アミノ酸またはそのホモログまたは異性体の側鎖の基であり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ３は、水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３は、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって、５員または６員の環を各々形成する］
の化合物、並びに、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物に関する。
【０００７】
本発明による化合物は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式（Ｉ）に包含される後述する式の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）に包含される例示的実施態様として後述する化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物（後述する式（Ｉ）に包含される化合物が、既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でない場合に）である。
【０００８】
本発明による化合物は、それらの構造によって、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、立体異性的に純粋な構成分を既知の方法で単離できる。
本発明による化合物が互変異性体で存在できる場合、本発明は、全ての互変異性体を包含する。
【０００９】
本発明の目的上、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。しかしながら、それら自体は医薬適用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も包含される。
【００１０】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１１】
本発明の目的上、溶媒和物は、固体または液体状態で、溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態である。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。本発明に関して、好ましい溶媒和物は水和物である。
【００１２】
本発明に関して、断りのない限り、置換基は、以下の意味を有する：
Ｒ１の意味におけるα−アミノ酸の側鎖の基は、天然産生α−アミノ酸の側鎖の基およびこれらのα−アミノ酸のホモログおよび異性体の側鎖の基の両方を包含する。α−アミノ酸は、これに関して、ＬおよびＤ配置の両方を有し得るか、または、Ｌ体およびＤ体の混合物であり得る。言及し得る側鎖の基の例は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、２−メチルプロパン−１−イル（ロイシン）、１−メチルプロパン−１−イル（イソロイシン）、ブタン−１−イル（ノルロイシン）、フェニル（２−フェニルグリシン）、ベンジル（フェニルアラニン）、ｐ−ヒドロキシベンジル（チロシン）、インドール−３−イルメチル（トリプトファン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、２−ヒドロキシエチル（ホモセリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、メルカプトメチル（システイン）、メチルチオメチル（Ｓ−メチルシステイン）、２−メルカプトエチル（ホモシステイン）、２−メチルチオエチル（メチオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、カルボキシメチル（アスパラギン酸）、２−カルボキシエチル（グルタミン酸）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、４−アミノ−３−ヒドロキシブタン−１−イル（ヒドロキシリジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）、３−ウレイドプロパン−１−イル（シトルリン）である。Ｒ２の意味における好ましいα−アミノ酸の側鎖の基は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）である。各場合でＬ配置が好ましい。
【００１３】
本発明による化合物中のラジカルが置換されている場合、そのラジカルは、断りのない限り、一置換または多置換されていてよい。本発明に関して、１回より多く出てくる全てのラジカルは、相互に独立の意味を有する。１個または２個の同一かまたは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００１４】
好ましいのは、式中、
ｎが、１または２であり、
Ｘが、酸素原子、硫黄原子またはＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イル、３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素またはメチルであり、
Ｒ３が水素であるか、
または、
Ｒ１およびＲ３が、（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を介して結合し、それらが結合している窒素または炭素原子と一体となって、５員または６員の環を各々形成する、
式（Ｉ）の化合物、並びに、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１５】
好ましいのは、また、式中、
ｎが、１または２であり、
Ｘが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルであり、
Ｒ２が、水素であり、
Ｒ３が、水素である、
式（Ｉ）の化合物、並びに、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１６】
好ましいのは、また、式中、ｎが２である式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、ＸがＮＨである式（Ｉ）の化合物である。
【００１７】
好ましいのは、また、式中、Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−グアニジノプロパン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルである式（Ｉ）の化合物である。
【００１８】
好ましいのは、また、式中、Ｒ１が、水素、メチル、プロパン−２−イル、２−メチルプロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−カルボキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、ベンジルまたは４−ヒドロキシベンジルである式（Ｉ）の化合物である。
【００１９】
好ましいのは、また、式中、Ｒ２が水素である式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、Ｒ３が水素である式（Ｉ）の化合物である。
【００２０】
本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供し、それは、
［Ａ］式
【化３】
2010501504.tif 000004
の化合物を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下で、式
【化４】
2010501504.tif 000005
（式中、ｎは上記の意味を有し、そして、
Ｑは、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式
【化５】
2010501504.tif 000006
（式中、ｎおよびＱは、上記の意味を有する）
の化合物に変換し、
次いで、後者を、以下のいずれかの方法に従い、
【００２１】
［Ａ１］不活性溶媒中、式
【化６】
2010501504.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、
Ｙは、ＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはαアミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式
【化７】
2010501504.tif 000008
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法に従って除去し、式
【化８】
2010501504.tif 000009
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、そして、
Ｘは、ＯまたはＳである）
の化合物を得るか、
または、
【００２２】
［Ａ２］不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化９】
2010501504.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
のα−アミノチオカルボン酸と反応させ、式
【化１０】
2010501504.tif 000011
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法に従って除去し、式
【化１１】
2010501504.tif 000012
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
あるいは、
【００２３】
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式
【化１２】
2010501504.tif 000013
（式中、ｎは、上記の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１３】
2010501504.tif 000014
（式中、ｎは、上記の意味を有する）
の化合物を得、
【００２４】
続いて、保護基を常套の方法に従って除去し、式
【化１４】
2010501504.tif 000015
（式中、ｎは、上記の意味を有する）
の化合物を得、次いで、塩基の存在下、式
【化１５】
2010501504.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有し、
ＡＧは、ヒドロキシルまたはハロゲン、好ましくは塩素または臭素であるか、または、カルボニル基と一体となって活性エステル、好ましくはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または、混合無水物、好ましくは炭酸アルキル、より好ましくは炭酸エチルを形成し、そして、
ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、式
【化１６】
2010501504.tif 000017
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＰＧは、上記の意味を有する）
の化合物を得、
【００２５】
続いて、保護基ＰＧを常套の方法に従って除去し、式
【化１７】
2010501504.tif 000018
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する）
の化合物を得、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸を用いて、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換することを特徴とする。
【００２６】
式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）および（ＩＸ）の化合物は、それらの塩の形態でも存在できる。これらの塩は、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基により、遊離塩基に変換できる。
【００２７】
ラジカルＲ１中に存在するいかなる官能基も、好都合または必要であれば、上記の連続反応において、一時的な保護形態で存在してもよい。そのような保護基並びに保護基ＰＧの導入および除去は、これに関して、ペプチド化学から知られている常套の方法により行う［例えば、T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999; M. Bodanszky and A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984 参照]。
【００２８】
必要に応じてＲ１中に存在するそのような保護基は、これに関して、ＰＧの除去と同時に、または、ＰＧの除去前または後の別の反応段階で、除去し得る。
【００２９】
上記方法において好ましく使用されるアミノ保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）である。これらの保護基の除去並びに工程（ＶＩＩＩ）→（Ｘ）における保護基の除去は、常套の方法により、好ましくは、塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸などの強酸と、ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸などの不活性溶媒中で反応させることにより、実施する。
【００３０】
工程（Ａ）＋（ＩＩ）→（ＩＩＩ）および（Ａ）＋（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、水素化ナトリウムである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００３１】
工程（ＩＩＩ）＋（ＶＩ）→（Ｖ−Ａ）および（ＩＸ）＋（Ｘ）→（ＸＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、エチルジイソプロピルアミンである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００３２】
工程（ＩＩＩ）＋（ＩＶ）→（Ｖ）は、好ましくは、溶媒としてのＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中で行う。この反応は、一般的に、０℃ないし＋５０℃の温度範囲で、好ましくは＋２０℃ないし＋５０℃で、大気圧下で行う。この反応は、また、超音波処理により有利に実施できる。
【００３３】
式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）および（Ｘ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または、文献中の常套の方法により製造できる。化合物（Ａ）の製造は、S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005) に記載されている。
【００３４】
本発明による化合物の製造は、以下の合成スキームにより例示説明できる：
スキーム
【化１８】
2010501504.tif 000019
【００３５】
本発明による化合物およびそれらの塩は、有効成分化合物（Ａ）の有用なプロドラッグである。一方では、それらは、例えばｐＨ４で良好な安定性を示し、他方では、それらはインビボで、有効成分化合物（Ａ）への効率的な変換を示す。本発明による化合物は、さらに、水および他の生理的に耐容される媒体中での良好な溶解性を有し、それらを特に静脈内投与での治療的使用に適するものにしている。
【００３６】
本発明はさらに、障害、好ましくは血栓塞栓性障害および／または血栓塞栓性合併症の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００３７】
本発明に関して、「血栓塞栓性障害」には、特に、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）または非ＳＴ上昇型心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）、安定狭心症、不安定狭心症、血管形成術または大動脈冠動脈バイパス術などの冠動脈介入後の再閉塞および再狭窄、末梢動脈閉塞疾患、肺栓塞症、深部静脈血栓症および腎静脈血栓症、一過性虚血発作および血栓性および血栓塞栓性卒中などの障害が含まれる。
【００３８】
従って、これらの物質は、例えば心房細動などの急性、間欠性または持続性心不整脈を有する患者、および電気的除細動を受けている者、また、心臓弁疾患を有するか、または人工心臓弁を有する患者における、心原性血栓塞栓症、例えば、脳虚血、卒中および全身性血栓塞栓症および虚血の予防および処置にも適する。加えて、本発明による化合物は、汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の処置に適する。
【００３９】
血栓塞栓性合併症は、また、微小血管障害性溶血性貧血、血液透析などの体外循環、および、心臓代用弁と関連して起こる。
【００４０】
さらに、本発明による化合物は、アテローム硬化性血管障害および炎症障害、例えば筋骨格系のリウマチ性障害の予防および／または処置にも、さらに同様に、アルツハイマー病の予防および／または処置にも適する。さらに、本発明による化合物は、腫瘍成長および転移形成の阻害、微小血管障害、加齢に伴う黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症および他の微小血管の障害、また、例えば、腫瘍患者における、特に大きい外科的介入または化学療法もしくは放射線治療を受けている者における、静脈血栓塞栓症などの血栓塞栓性合併症の予防および処置にも用いることができる。
【００４１】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００４２】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用に関する。
【００４３】
本発明は、さらに、本発明による化合物を使用する、障害、特に上述の障害の処置および／または予防方法に関する。
【００４４】
本発明は、さらに、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる有効成分を含む医薬に関する。好ましく言及し得る適当な組合せの有効成分の例は、以下のものである：
・脂質低下剤、特にＨＭＧ−ＣｏＡ（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ）リダクターゼ阻害剤；
・冠血管治療剤／血管拡張剤、特にＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤；ＡＩＩ（アンジオテンシンＩＩ）受容体アンタゴニスト；β−アドレナリン受容体アンタゴニスト；アルファ−１−アドレナリン受容体アンタゴニスト；利尿剤；カルシウムチャネル遮断剤；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の上昇をもたらす物質、例えば、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤；
・プラスミノーゲン活性化剤（血栓溶解剤／線維素溶解剤）および血栓溶解／線維素溶解を高める化合物、例えば、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子の阻害剤（ＰＡＩ阻害剤）またはトロンビン活性型繊維素溶解阻害因子の阻害剤（ＴＡＦＩ阻害剤）；
・凝血活性を有する物質（抗凝血剤）；
・血小板凝集阻害性物質（血小板凝集阻害剤、栓球凝集阻害剤）；
・フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト（糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト）；
・並びに抗不整脈薬。
【００４５】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と共に含む医薬、および、上述の目的でのそれらの使用に関する。
【００４６】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口、非経腸、肺または鼻の経路で、投与できる。本発明による化合物は、これらの投与経路に適する投与形で投与できる。
【００４７】
経口投与に適するのは、先行技術に準じて機能し、本発明による化合物を迅速におよび／または改変された様式で送達し、本発明による化合物を結晶形および／または無定形および／または溶解形態で含有する投与形であり、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、不溶であるか、または、遅れて溶解し、本発明による化合物の放出を制御する被覆を有する錠剤）、口中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤などである。
【００４８】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤の形態の注射および点滴用製剤である。
【００４９】
他の投与経路に適するのは、例えば、粉末吸入器または噴霧器などの吸入用医薬形、または、点鼻薬、液またはスプレーなどの、鼻腔投与できる医薬形である。
非経腸投与、特に静脈内投与が好ましい。
【００５０】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の隠蔽剤が含まれる。
【００５１】
一般に、非経腸投与で約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると明らかになった。経口投与では、投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００５２】
それにも拘わらず、必要に応じて、特に、体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別投与に分割するのが望ましいことがある。
【００５３】
以下の例示的実施態様は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
以下の試験および実施例における百分率のデータは、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に基づく。
【実施例】
【００５４】
Ａ. 実施例
略号および頭字語：
【表１】
2010501504.tif 000020
【００５５】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１ａ（分取用ＨＰＬＣ）：
カラム：VP 250/21 Nukleodur 100-5 C18 ec, Macherey & Nagel No. 762002；溶離剤Ａ：水／０.０１％トリフルオロ酢酸、溶離剤Ｂ：アセトニトリル／０.０１％トリフルオロ酢酸；グラジエント：０分０％Ｂ→２０分２０％Ｂ→４０分２０％Ｂ→６０分３０％Ｂ→８０分３０％Ｂ→９０分１００％Ｂ→１３２分１００％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；温度：室温；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５６】
方法１ｂ（分取用ＨＰＬＣ）：カラム：Symmetry PrepTM C18 7μM; 19 × 300 mm; Waters：溶離剤Ａ：水／０.０１％トリフルオロ酢酸、溶離剤Ｂ：アセトニトリル／０.０１％トリフルオロ酢酸；グラジエント：０分０％Ｂ→２０分２０％Ｂ→４０分２０％Ｂ→６０分３０％Ｂ→８０分３０％Ｂ→９０分１００％Ｂ→１３２分１００％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；温度：室温；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５７】
方法２（分析用ＨＰＬＣ）：カラム: XTerra 3.9 x 150 WAT 186000478；溶離剤Ａ：水２.５ｌ中の７０％過塩素酸１０ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０.０分２０％Ｂ→１分２０％Ｂ→４分９０％Ｂ→９分９０％Ｂ；温度：室温；流速：１ｍｌ／分。方法２ａの変法では、カラムを４０℃の温度で溶離する。
【００５８】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：装置：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ；HP 1100 Series; UV DAD；カラム：Phenomenex Gemini 3 μ 30 mm x 3.00 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分。２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００５９】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC HP 1100 Series を備えた Micromass ZQ; UV DAD；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６０】
方法５（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００６１】
方法６（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ： Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６２】
方法７（キラルＨＰＬＣ、分析用）：ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンジシクロプロピルメチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（２５０ｍｍｘ４.６ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル３５：６５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６３】
方法８（キラルＨＰＬＣ、分析用）：ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（２５０ｍｍｘ４.６ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル３５：６５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６４】
方法９（キラルＨＰＬＣ、分析用）：ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（２５０ｍｍｘ４.６ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル６５：３５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６５】
方法１０（キラルＨＰＬＣ、分取用）：ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンジシクロプロピルメチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（６７０ｍｍｘ４０ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル２５：７５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：８０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６６】
方法１１（キラルＨＰＬＣ、分取用）：ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（６７０ｍｍｘ４０ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル６５：３５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：５０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２６０ｎｍ。
【００６７】
方法１２（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２分６５％Ａ→４.５分５％Ａ→６分５％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００６８】
方法１３（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ, 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６９】
方法１４（ＬＣ−ＭＳ）：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 100 mm x 4.6 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１０％Ｂ→７.０分９５％Ｂ→９.０分９５％Ｂ；オーブン：３５℃；流速：０.０分１.０ｍｌ／分→７.０分２.０ｍｌ／分→９.０分２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７０】
ＮＭＲ分光法：
プロトン周波数４００.１３ＭＨｚまたは５００.１３ＭＨｚでＮＭＲ測定を実施する。サンプルを、通常、ＤＭＳＯ−ｄ６に溶解した；温度：３０２Ｋ。
【００７１】
出発化合物：
使用する出発物質は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］であり、その製造は、他で説明されている［S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)]。
【化１９】
2010501504.tif 000021
【００７２】
実施例１Ａ
５−クロロ−Ｎ−（４−クロロブタノイル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２０】
2010501504.tif 000022
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］１ｇ（２.３ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１００ｍｌにアルゴン下で溶解する。水素化ナトリウム（９８％強度）１１０ｍｇ（４.６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌する。次いで、クロロブタノイルクロリド４.３７ｇ（３０.９７ｍｍｏｌ）を添加し、反応温度を室温で維持する。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで水２５ｍｌと混合し、冷却しながら徐々に添加する。続いて、酢酸エチル３００ｍｌを添加し、さらに水５０ｍｌを添加する。相を分離し、酢酸エチル相を真空で濃縮する。残渣を酢酸エチルと撹拌し、濾過する。母液を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、溶離剤としてトルエン／エタノール５：１を用いて精製する。標的化合物を含有する適切な画分と、エノール化の後に形成されるビス−アシル化された化合物を含有する画分も合わせ、溶媒を除去する。残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液と混合し、室温で終夜撹拌する。続いて、これを真空で濃縮し、残渣を再度シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、トルエン／エタノール６：１を溶離剤として用いて精製する。適切な画分を濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥し、標的化合物９４ｍｇ（理論値の７.５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.23 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 2.13 分; m/z = 540 (M+H)+.
【００７３】
実施例２Ａ
５−クロロ−Ｎ−（４−クロロペンタノイル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２１】
2010501504.tif 000023
実施例１Ａを、化合物（Ａ）３ｇ（６.８８ｍｍｏｌ）および５−クロロペンタノイルクロリドから出発して繰り返し、標的化合物１００８ｍｇ（理論値の２６％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.35 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 2.22 分; m/z = 554 (M+H)+.
【００７４】
実施例３Ａ
Ｎ−（４−アミノブタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化２２】
2010501504.tif 000024
段階ａ）：
化合物（Ａ）１.３３ｇ（３.０６ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ７５ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム（９８％強度）２２０ｍｇ（９.２ｍｍｏｌ）と混合し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、無水ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した実施例５Ａ１１.５ｇ（３０.６ｍｍｏｌ）を添加する。このバッチを室温でさらに１５分間撹拌し、次いで水２０ｍｌと混合する。その後、バッチを濃縮し、残渣を酢酸エチル３００ｍｌに取り、１０％炭酸ナトリウム溶液３００ｍｌで３回抽出する。有機相を分離し、濃縮し、ジクロロメタン５０ｍｌに取る。次いで、ジエチルエーテル２５ｍｌを添加する。短時間撹拌した後、未溶解の残渣を濾過し、ジクロロメタン相を濃縮する。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用いて精製する。ビス−アシル化された分子量Ｍ＝１１１３の副生成物（モノ−アシル化合物のエノール化の後に形成される）を含有する適切な画分を濃縮する。続いて、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１０ｍｌと、２時間撹拌し、最初に形成されたエノールエステルを開裂する。これに続いて濃縮し、残っている残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用いて精製する。適切な画分を濃縮し、アミノ基で完全に保護された化合物１５１ｍｇ（理論値の７％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.83 分.
LC-MS (方法 6): Rt = 2.61 分; m/z = 775 (M+H)+.
【００７５】
段階ｂ）：
この保護化合物１５１ｍｇ（０.２ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸８ｍｌと室温で終夜撹拌する。バッチを高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸１００ｍｌに取り、ジクロロメタン７５ｍｌで抽出し、次いで酢酸エチルで２回抽出する。水相を濃縮し、残渣をｐＨ３の塩酸から凍結乾燥し、標的化合物７０ｍｇ（理論値の６４％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.13 分;
LC-MS (方法 5): Rt = 1.38 分; m/z = 521 (M+H)+.
【００７６】
実施例４Ａ
Ｎ−（５−アミノペンタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化２３】
2010501504.tif 000025
段階ａ）：
化合物（Ａ）２.８３ｇ（６.５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１００ｍｌにアルゴン下で溶解する。水素化ナトリウム４６８ｍｇ（１９.５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した実施例１０Ａ７.６ｇ（１９.５ｍｍｏｌ）を添加する。撹拌を室温でさらに１５分間継続し、次いで、バッチを、徐々に添加される水２０ｍｌと混合する。その後バッチを濃縮し、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１５０ｍｌと１時間撹拌し、その間に、エノール化の後最初に形成されたビス−アシル化合物（分子量Ｍ＝１１４１）を開裂する。これに続いて濃縮し、残渣を酢酸エチル７００ｍｌに取り、各回１０％炭酸ナトリウム溶液２００ｍｌで２回抽出する。有機相を分離し、濃縮し、酢酸エチル３０ｍｌに取り、次いでジエチルエーテル３０ｍｌと混合する。短時間撹拌した後、未溶解の残渣を濾過し、有機相を濃縮する。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、酢酸エチル／トルエン４：１を溶離剤として用いて精製する。適切な画分を濃縮し、残渣を酢酸エチル１０ｍｌに取る。冷たいジエチルエーテル１００ｍｌを添加し、バッチを０℃で３０分間静置する。濾過後、残渣をジエチルエーテル１００ｍｌでもう一度処理する。再び濾過した後、フィルター上の残渣を回収し、乾燥し、アミノ基で完全に保護された化合物１ｇ（理論値の２０％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.92 分.
LC-MS (方法 6): Rt = 2.68 分; m/z = 789 (M+H)+.
【００７７】
段階ｂ）：
この保護化合物１ｇ（１.３ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸７０ｍｌ中で６時間超音波処理する。バッチを高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸３５０ｍｌに取り、室温で１５分間撹拌した後、ジクロロメタン１００ｍｌで抽出する。これに続いて、酢酸エチル１００ｍｌで抽出する。水相を分離し、次いで短時間高真空下で蒸留し、残っている酢酸エチルを除去し、最後に凍結乾燥し、標的化合物５８６ｍｇ（理論値の８１％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.2 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 1.17 分; m/z = 535 (M+H)+.
【００７８】
実施例５Ａ
ベンジル（４−クロロ−４−オキソブチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化２４】
2010501504.tif 000026
４−アミノ酪酸から出発して、実施例１０Ａを繰り返す。
【００７９】
実施例６Ａ
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオ−Ｓ−酸
【化２５】
2010501504.tif 000027
Ｂｏｃ−バリンから、文献の方法［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) と同様に、表題化合物を製造する。
【００８０】
実施例７Ａ
［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エタンチオ−Ｓ−酸
【化２６】
2010501504.tif 000028
Ｂｏｃ−グリシンから、文献の方法 [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) と同様に、表題化合物を製造する。
【００８１】
実施例８Ａ
（２Ｓ）−２,６−ビス［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサンチオ−Ｓ−酸
【化２７】
2010501504.tif 000029
ビス−Ｂｏｃ−リジンから、文献の方法［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201）と同様に、表題化合物を製造する。
【００８２】
実施例９Ａ
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパンチオ−Ｓ−酸
【化２８】
2010501504.tif 000030
Ｂｏｃ−アラニンから、文献の方法［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201) と同様に、表題化合物を製造する。
【００８３】
実施例１０Ａ
ベンジル（５−クロロ−５−オキソペンチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化２９】
2010501504.tif 000031
５−アミノ吉草酸１０ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）、ｐ−アニスアルデヒド１７.４ｇ（１２８ｍｍｏｌ）および硫酸マグネシウム１０.３ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）をエタノール３３０ｍｌに取り、還流下で１時間加熱する。次いで、固体を濾過し、エタノールで洗浄し、続いて全部で１.９４ｇ（５１.２ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを数回に分けて１５分間かけて溶液に添加する。先ず水１０ｍｌを添加し、次いで２Ｍ水酸化ナトリウム溶液１２８ｍｌを添加する。５分後、混合物を水３００ｍｌで希釈し、次いで各回酢酸エチル２００ｍｌで３回抽出する。水相を４Ｍ塩酸でｐＨ２に調節し、真空で濃縮する。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、アセトニトリル／水／酢酸５：１：０.１を溶離剤として用いて精製する。適切な画分を濃縮し、酢酸エチルおよびジエチルエーテルと撹拌する。次いで、残渣を吸引濾過し、高真空下で乾燥する。ｐ−メトキシベンジル−保護されたアミノ酸９.１ｇ（理論値の４５％）を得る。
【００８４】
後者をジオキサン／水（１：１）１.６ｌに取り、水酸化ナトリウム溶液でｐＨ１０に調節し、次いでベンジルクロロカーボネート１２.９７ｇ（７６ｍｍｏｌ）を滴下して添加する。室温で１５分間撹拌した後、ジオキサンを真空で除去し、残っている溶液を２Ｍ塩酸でｐＨ２に調節する。酢酸エチルで抽出した後の有機相を水で２回洗浄する。次いで、有機相を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥する。これに続いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、アセトニトリルを溶離剤として用いて精製する。適切な画分を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥する。保護されたアミノ酸５.６ｇ（理論値の３８％）を得る。
LC-MS (方法 3): Rt = 2.47 分; m/z = 372 (M+H)+.
【００８５】
５−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（４−メトキシベンジル）アミノ｝吉草酸５.６ｇ（１５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、塩化チオニル２.２ｍｌを添加する。混合物を還流下で３０分間加熱する。次いでそれを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥する。標的化合物５.７ｇ（理論値の９８％）を得、これ以上精製および特徴解析をせずに反応させる。
【００８６】
例示的実施態様：
カルボン酸のセシウム塩または適切に保護されたアミノ酸誘導体を製造するための一般的方法１：
適当なカルボン酸１ｍｍｏｌをジオキサン１０ｍｌおよび水１０ｍｌの混合物に溶解し、炭酸セシウム０.５ｍｍｏｌを添加する。これに続いて、凍結乾燥する。
【００８７】
適切に保護されたアミノ酸誘導体のウレタン−保護Ｎ−カルボキシ無水物を製造するための一般的方法２：
【化３０】
2010501504.tif 000032
アミノ酸誘導体のウレタン−保護Ｎ−カルボキシ無水物は、購入できるか、または、以下の文献の方法により得ることができる：M. Johnston et al. J.Org.Chem. 1985, 50, 2200; W.D. Fuller et al. J.Am.Chem.Soc. 1990, 112, 7414; S. Mobasheri et al. J.Org.Chem. 1992, 57, 2755。
【００８８】
適切に保護されたアミノ酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを製造するための一般的方法３：
【化３１】
2010501504.tif 000033
アミノ酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルは、購入できるか、または、ペプチド化学の標準的な方法に従うことにより得ることができる。
【００８９】
実施例１
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−４−オキソブチルグリシネート塩酸塩
【化３２】
2010501504.tif 000034
段階ａ）：
実施例１Ａ１４ｍｇ（２６μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−グリシンのセシウム塩（Ｂｏｃ−グリシンから一般的方法１により製造）９.５ｍｇ（３１μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。５０℃で１６時間撹拌し、続いて濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物８ｍｇ（理論値の４５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.18 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 2.38 分; m/z = 679 (M+H)+.
【００９０】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られた、未精製の保護中間体７ｍｇ（１１μｍｏｌ）を、ジオキサン中の２２％強度塩化水素溶液１ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いてジオキサンから凍結乾燥し、表題化合物０.６ｍｇ（理論値の８％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.2 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.33 分; m/z = 579 (M+H)+.
【００９１】
実施例２
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチルグリシネート塩酸塩
【化３３】
2010501504.tif 000035
段階ａ）：
実施例２Ａ５９ｍｇ（１０６μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−グリシンのセシウム塩（Ｂｏｃ−グリシンから一般的方法１により製造）４３ｍｇ（１３８.４μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解する。５０℃で１６時間撹拌し、続いて濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２６ｍｇ（理論値の３５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.27 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 2.23 分; m/z = 693 (M+H)+.
【００９２】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体１２ｍｇ（１７μｍｏｌ）をジオキサン中の２２％強度塩化水素溶液３ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ４から凍結乾燥し、表題化合物７.２ｍｇ（理論値の６６％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.32 分;
LC-MS (方法 5): Rt = 1.48 分; m/z = 593 (M+H)+.
【００９３】
実施例３
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−５−オキソペンチル−Ｌ−バリネート塩酸塩
【化３４】
2010501504.tif 000036
段階ａ）：
実施例２Ａ５０ｍｇ（９０μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−バリンのセシウム塩（Ｂｏｃ−バリンから、一般的方法１により製造）４１ｍｇ（１１７μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解する。５０℃で４２時間撹拌し、続いて濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２６ｍｇ（理論値の３９％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.71 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 2.56 分; m/z = 733 (M-H)+.
【００９４】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体２６ｍｇ（３５μｍｏｌ）を、ジクロロメタン５ｍｌに取り、無水トリフルオロ酢酸２ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣をアセトニトリルと撹拌し、続いて溶媒を除去する。残渣を塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物２４ｍｇ（定量的）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.5 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.52 分; m/z = 635 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 0.95 (2d, 6H), 1.65 (m, 4H), 2.15 (m, 1H), 2.6 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.9 (d, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 7H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.3 (m, 3H).
【００９５】
実施例４
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化３５】
2010501504.tif 000037
段階ａ）：
実施例２Ａ５０ｍｇ（９０μｍｏｌ）を、実施例６Ａ４２ｍｇ（１８０μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１６μｌを添加し、混合物を６０℃で１６時間撹拌する。これに続いて濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ｂ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物１７ｍｇ（理論値の２５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.56 分;
【００９６】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体１７ｍｇ（２３μｍｏｌ）を無水トリフルオロ酢酸３ｍｌと混合する。１５分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸に取り、少量のジクロロメタンおよび酢酸エチルで２回抽出する。水相を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物７ｍｇ（理論値の４５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.65 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 1.5 分; m/z = 651 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 0.95 および 1.0 (2d, 6H), 1.5-1.7 (m, 4H), 2.15 (m, 1H), 2.55 (t, 2H), 3.0 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 6H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.3 (m, 3H).
【００９７】
実施例５
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）アミノエタンチオエート塩酸塩
【化３６】
2010501504.tif 000038
段階ａ）：
実施例２Ａ５０ｍｇ（９０μｍｏｌ）を、実施例７Ａ５２ｍｇ（２７１μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１５ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１６μｌを添加し、混合物を６０℃で４０時間撹拌する。この期間中に、さらに５２ｍｇの実施例７Ａを５回添加する。これに続き、濃縮する。残渣を酢酸エチルに取り、１０％炭酸ナトリウム溶液で２回抽出する。有機相を濃縮し、次いで残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。標的化合物を含む適切な画分は、依然として出発物質を含有する。それらから溶媒を真空で除去し、その形で次の段階に使用する。保護された表題化合物３８ｍｇ（理論値の５９％；粗生成物）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.43 分;
【００９８】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体３７ｍｇ（５２μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸３ｍｌと混合する。１５分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。この工程では、残っている出発物質を除去する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物８ｍｇ（理論値の２４％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.4 分;
LC-MS (方法 12): Rt = 2.1 分; m/z = 609 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.5-1.7 (m, 4H), 2.55 (m, 2H), 3.0 (t, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.05-4.25 (m, 7H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.3 (m, 3H).
【００９９】
実施例６
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２,６−ジアミノヘキサンチオエート二塩酸塩
【化３７】
2010501504.tif 000039
段階ａ）：
実施例２Ａ５０ｍｇ（９０μｍｏｌ）を、実施例８Ａ９８ｍｇ（２７１μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１５ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１６μｌを添加し、混合物を６０℃で４０時間撹拌する。この期間中に、さらに９８ｍｇの実施例８Ａを５回添加する。これに続き、濃縮する。残渣を酢酸エチルに取り、１０％炭酸ナトリウム溶液で２回抽出する。有機相を濃縮し、次いで残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。標的化合物を含む適切な画分を濃縮し、分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）を利用して２回目の精製を行う。標的化合物を純粋な形で含有する画分を合わせ、濃縮し、保護された表題化合物２６ｍｇ（理論値の３３％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.85 分;
【０１００】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護された中間体２５ｍｇ（２８μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸５ｍｌと混合する。５分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物１０ｍｇ（理論値の４９％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.2 分;
LC-MS (方法 13): Rt = 2.6 分; m/z = 680 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.3-1.5 (m, 2H), 1.5-1.7 (m, 6H), 1.7-1.9 (m, 2H), 2.55 (m, 2H),  2.75 (m, 2H), 2.95 (t, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 6H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 7.85 (m, 3H), 8.5 (m, 3H).
【０１０１】
実施例７
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）（２Ｓ）−２−アミノプロパンチオエート塩酸塩
【化３８】
2010501504.tif 000040
段階ａ）：
実施例２Ａ５０ｍｇ（９０μｍｏｌ）を実施例９Ａ５５ｍｇ（２７０μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１５ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１６μｌを添加し、混合物を６０℃で４０時間撹拌する。この期間中に、さらに５５ｍｇの実施例９Ａを５回添加する。これに続き、濃縮する。残渣を酢酸エチルに取り、１０％炭酸ナトリウム溶液で２回抽出する。有機相を濃縮し、次いで残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を合わせ、溶媒を除去し、保護された表題化合物２８ｍｇ（理論値の４３％）を得る。
【０１０２】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護された中間体２８ｇ（１９μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸３ｍｌと混合する。１５分後、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物１０ｍｇ（理論値の８１％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.46 分;
LC-MS (方法 14): Rt = 3.37 分; m/z = 623 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.45 (d, 3H), 1.5-1.7 (m, 4H), 2.55 (t, 2H),  2.95 (t, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.25 (m, 5H), 4.3 (q, 1H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.4 (m, 3H).
【０１０３】
実施例８
Ｓ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−４−オキソブチル）（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化３９】
2010501504.tif 000041
段階ａ）：
実施例１Ａ４８ｍｇ（８９μｍｏｌ）を、実施例６Ａ６２ｍｇ（２６６μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ１５ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１６μｌを添加し、混合物を６０℃で４０時間撹拌する。この期間中に、さらに６２ｍｇの実施例６Ａを５回添加する。これに続き、濃縮する。残渣を酢酸エチルに取り、１０％炭酸ナトリウム溶液で２回抽出する。有機相を濃縮し、次いで残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２２ｍｇ（理論値の３４％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.76 分;
【０１０４】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体２２ｍｇ（３０μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸３ｍｌと混合する。５分後、混合物を真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物１１ｍｇ（理論値の５２％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.55 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 1.43 分; m/z = 637 (M+H)+.
1H-NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 0.95 および 1.0 (2d, 6H), 1.8-1.9 (m, 2H), 2.2 (m, 1H), 2.65 (m, 2H),  3.0 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 6H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 8.4 (m, 3H).
【０１０５】
実施例９
５−クロロ−Ｎ−［４−（グリシルアミノ）ブタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化４０】
2010501504.tif 000042
段階ａ）：
実施例３Ａ４０ｍｇ（７２μｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２,５−ジオキソ−１,３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート１７ｍｇ（８６μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１３μｌを少しずつ添加し、撹拌を室温でさらに１０分間継続する。続いてバッチを濃縮し、次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２２ｍｇ（理論値の４４％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.74 分;
LC-MS (方法 5): Rt = 2.07 分; m/z = 678 (M+H)+.
【０１０６】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体２２ｍｇ（３２μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の飽和溶液１０ｍｌに取る。水１ｍｌを添加し、バッチを室温で５分間撹拌する。５分後、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ｂ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物４ｍｇ（理論値の２１％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.14 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.26 分; m/z = 578 (M+H)+.
【０１０７】
実施例１０
５−クロロ−Ｎ−［４−（グリシルアミノ）ペンタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化４１】
2010501504.tif 000043
段階ａ）：
実施例３Ａ３５ｍｇ（６１μｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２,５−ジオキソ−１,３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート３７ｍｇ（１８４μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。エチルジイソプロピルアミン１２μｌを少しずつ添加し、撹拌を室温でさらに１０分間継続する。続いてバッチを濃縮し、次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物１５ｍｇ（理論値の３６％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.85 分;
LC-MS (方法 6): Rt = 1.95 分; m/z = 692 (M+H)+.
【０１０８】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体１５ｍｇ（２２μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の飽和溶液３ｍｌに取り、水１滴を添加する。１０分間室温で撹拌した後、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮する。残渣を水性塩酸（ｐＨ３）３０ｍｌに取り、ジクロロメタンで２回、酢酸エチルで２回抽出する。水相を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物８ｍｇ（理論値の５８％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.24 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.36 分; m/z = 592 (M+H)+.
【０１０９】
実施例１１
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−プロリンアミド塩酸塩
【化４２】
2010501504.tif 000044
段階ａ）：
実施例４Ａ５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、先ず、ベンジル（２Ｓ）−２−（クロロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレート４７ｍｇ（１７５μｍｏｌ）と共に、ジクロロメタン８０ｍｌに加える。ＤＭＦに溶解した０.１Ｍエチルジイソプロピルアミン溶液２６３μｍｏｌを３分割して、３分以内に添加し、撹拌を室温でさらに１０分間継続する。これに続いて酢酸で酸性化し、濃縮する。残渣をＤＭＦ２ｍｌに取り、次いで分取用ＨＰＬＣ（方法１ｂ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物４０ｍｇ（理論値の６０％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.05 分;
【０１１０】
段階ｂ）：
段階ａ）で得られる保護中間体４０ｍｇ（５２μｍｏｌ）を無水トリフルオロ酢酸４０ｍｌに取る。室温で１６時間撹拌し、続いて真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ｂ）により精製する。適切な画分を濃縮し、続いて塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物１６ｍｇ（理論値の４６％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.28 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.39 分; m/z = 632 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.4 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.9 m (2H), 1.8 および 2.25 (2m, 2H), 2.55 (m, 2H),  3.0-3.3 (m, 4H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.05-4.25 (m, 6H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.5 (m, 2H).
【０１１１】
実施例１２
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−ヒスチジンアミド塩酸塩
【化４３】
2010501504.tif 000045
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ,１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ヒスチジネート１９９ｍｇ（４４１μｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＦ中の０.１Ｍエチルジイソプロピルアミン溶液６６１μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ２.５ｍｌに溶解した実施例４Ａ４２ｍｇ（７３μｍｏｌ）を、シリンジにより滴下して３０分間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ずアセトニトリルで、次いでアセトニトリル／水１０：１を溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣をもう一度分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。ビス−Ｂｏｃ−保護された実施例およびモノ−Ｂｏｃ−保護された実施例の混合物を含有する適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物１８ｍｇ（理論値の２８％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.48 分; 4.92 分
LC-MS (方法 3): Rt = 1.60 分; m/z = 772 (M+H)+; Rt = 2.58 分; m/z = 872 (M+H)+.
【０１１２】
段階ｂ）：
ビス−Ｂｏｃ−保護された中間体およびモノ−Ｂｏｃ−保護された中間体の混合物１８ｍｇを、無水トリフルオロ酢酸４ｍｌに取り、室温で２０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を２回塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物１５ｍｇ（理論値の９８％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.12 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.09 分; m/z = 672 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.35 (m, 2H), 1.5 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 3.0-3.3 (m, 4H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 6H), 4.95 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.5 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 8.5 (m, 3H), 8.7 (t, 1H), 9.0 (s, 1H).
【０１１３】
実施例１３
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−バリンアミド塩酸塩
【化４４】
2010501504.tif 000046
段階ａ）：
実施例４Ａ５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、先ず、ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｓ）−４−イソプロピル−２,５−ジオキソ−１,３−オキサゾリジン−３−カルボキシレート６４ｍｇ（２６２μｍｏｌ）と共に、ジクロロメタン２０ｍｌに加える。ＤＭＦ中の０.１Ｍエチルジイソプロピルアミン溶液８７４μｌを少しずつ添加し、撹拌を室温でさらに１０分間継続する。続いてバッチをジクロロメタンで希釈し、水で２回抽出する。有機相を濃縮し、次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ｂ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物４.５ｍｇ（理論値の７％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.14 分;
【０１１４】
段階ｂ）：
保護された化合物４.５ｍｇ（６μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸２ｍｌに取り、室温で１５分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、残渣を希塩酸（ｐＨ３）２０ｍｌに取り、ジクロロメタンで２回、酢酸エチルで１回抽出する。次いで、水相を塩酸ｐＨ３から凍結乾燥し、表題化合物３ｍｇ（理論値の７３％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.36 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.46 分; m/z = 634 (M+H)+.
【０１１５】
実施例１４
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−リジンアミド塩酸塩
【化４５】
2010501504.tif 000047
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イル−Ｎ２,Ｎ６−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジネート３９ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、実施例４Ａ２５ｍｇ（４４μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ４０ｍｌに溶解し、次いでＤＭＦ中の０.１Ｍエチルジイソプロピルアミン溶液３５０μｌを少しずつ添加する。室温で１０分間撹拌し、続いて濃縮する。残渣を酢酸エチルに取り、１０％炭酸ナトリウム溶液で２回抽出する。有機相を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ず酢酸エチルを、次いでトルエン／エタノール１：１を溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物５ｍｇ（理論値の１１％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 5.27 分
LC-MS (方法 3): Rt = 2.59 分; m/z = 863 (M+H)+.
【０１１６】
段階ｂ）：
保護された実施例５ｍｇを、無水トリフルオロ酢酸２.５ｍｌに取り、室温で２０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）に取り、ジクロロメタンで２回抽出する。水相を分離し、凍結乾燥し、表題化合物３.８ｍｇ（理論値の８９％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.12 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.02 分; m/z = 663 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.3 (m, 2H), 1.4 (m, 2H), 1.5-1.6 (m, 4H), 1.7 (m, 2H), 2.55 (m, 2H),  2.75 (m, 2H), 3.1 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 6H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 7.85 (m, 3H), 8.15 (m, 3H), 8.45 (t, 1H).
【０１１７】
実施例１５
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｎ−［５−（Ｌ−スレオニルアミノ）ペンタノイル］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化４６】
2010501504.tif 000048
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−スレオニネート２７７ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ずエチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共にＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を滴下して１時間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ず酢酸エチルを、後にトルエン／エタノール１：１を溶離剤として用いて、精製する。純粋でない標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２２ｍｇ（理論値の３４％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 4.8 分
LC-MS (方法 12): Rt = 3.13 分; m/z = 736 (M+H)+.
【０１１８】
段階ｂ）：
保護された化合物２２ｍｇ（３０μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸５ｍｌに取り、室温で２０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）３０ｍｌに取り、ジクロロメタン３０ｍｌで２回、酢酸エチル３０ｍｌで１回抽出する。水相を分離し、凍結乾燥し、表題化合物１５ｍｇ（理論値の７５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.2 分;
LC-MS (方法 3): Rt = 1.39 分; m/z = 636 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.1 (d, 3H), 1.4 (m, 2H), 1.6 (m, 2H), 2.6 (t, 2H), 3.0 および 3.15 (2m, 2H), 3.4 (m, 1H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (m, 2H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.95 (m, 1H), 5.5 (d, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.05 (m, 3H), 8.4 (t, 1H).
【０１１９】
実施例１６
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−チロシンアミド塩酸塩
【化４７】
2010501504.tif 000049
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−チロシネート３３１ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して１時間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ず酢酸エチルを、後にトルエン／エタノール１：１を溶離剤として用いて、精製する。純粋でない標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣をもう一度分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２６ｍｇ（理論値の３７％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 5.0 分
LC-MS (方法 3): Rt = 2.38 分; m/z = 798 (M+H)+.
【０１２０】
段階ｂ）：
保護された化合物２６ｍｇ（３３μｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸５ｍｌに取り、室温で１０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）６０ｍｌに取る。未溶解の画分を濾過する。次いで、水相を凍結乾燥し、表題化合物２３ｍｇ（理論値の９６％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.4 分;
LC-MS (方法 12): Rt = 2.09 分; m/z = 698 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.3 (m, 2H), 1.5 (m, 2H), 2.8-3.2 (m, 4H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (m, 2H), 3.95 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.9 (m, 1H), 6.7 (d, 2H), 7.0 (d, 2H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 8.1 (m, 3H), 8.3 (t, 1H), 9.4 (s, 1H).
【０１２１】
実施例１７
Ｎ１−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アスパルトアミド塩酸塩
【化４８】
2010501504.tif 000050
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパラギネート２８８ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して３０分間かけて添加する。室温でさらに３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。依然として少量の化合物（Ａ）を不純物として含有する適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物の粗生成物２９ｍｇを得、それをこれ以上精製せずに次の段階で使用する。
HPLC (方法 2): Rt = 4.5 分
LC-MS (方法 3): Rt = 2.07 分; m/z = 749 (M+H)+.
【０１２２】
段階ｂ）：
段階ａ）の保護された粗生成物２６ｍｇを、無水トリフルオロ酢酸５ｍｌに取り、室温で１０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）５０ｍｌに取る。未溶解の画分を濾過し、水相を濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥する。次いで、残渣をｐＨ３に調節した塩酸から凍結乾燥し、表題化合物１４ｍｇ（理論値の５３％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 4.1 分;
LC-MS (方法 12): Rt = 1.84 分; m/z = 649 (M+H)+.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ = 1.4 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.65 (m, 2H), 3.0-3.1 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 3.95 (m, 3H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.9 (m, 1H), 7.2 (s, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (m, 2H), 8.0 (m, 3H), 8.3 (t, 1H).
【０１２３】
実施例１８
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−フェニルアラニンアミド塩酸塩
【化４９】
2010501504.tif 000051
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニネート３１７ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して３０分間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮する。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ず、ジクロロメタン／酢酸エチル溶離剤を、比３：１、２：１および１：１で用いて溶離する。これに続いて、純粋な酢酸エチルで、最後にエタノールを溶離剤として用いて、溶離する。未精製の標的化合物を含有する対応する画分を精製し、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物３４ｍｇ（理論値の５０％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 5.34 分
LC-MS (方法 12): Rt = 3.47 分; m/z = 782 (M+H)+.
【０１２４】
段階ｂ）：
保護された化合物３３ｍｇ（４２μｍｏｌ）を、ジクロロメタンに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１.５ｍｌと混合し、室温で１０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）５ｍｌに取る。次いで、水相を凍結乾燥し、表題化合物２８ｍｇ（理論値の９３％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.5 分;
LC-MS (方法 12): Rt = 2.08 分; m/z = 682 (M+H)+.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 1.25 (m, 2H), 1.5 (m, 2H), 2.9-3,2 (m, 4H), 3.7 (m, 2H), 3.8 (t, 2H), 3.9 (m, 1H), 4.0 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.9 (m, 1H), 7.2 (d, 2H), 7.2-7.35 (m, 4H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 8.2 (m, 2H), 8.3 (t, 1H).
【０１２５】
実施例１９
Ｎ１−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−グルタムアミド塩酸塩
【化５０】
2010501504.tif 000052
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタミネート３００ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、３０分間かけて滴下して添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン／酢酸エチル／メタノールを、先ず、比１５０：５０：５で、次いで比１５０：５０：１０で、最後に比１５０：５０：２０で、溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物２４ｍｇ（理論値の３４％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 4.57 分
LC-MS (方法 12): Rt = 2.97 分; m/z = 763 (M+H)+.
【０１２６】
段階ｂ）：
保護された化合物２４ｍｇ（３５μｍｏｌ）を、ジクロロメタンに溶解し、無水トリフルオロ酢酸２ｍｌと混合し、室温で１０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）１５ｍｌに取る。バッチを、先ずジクロロメタンで２回、次いで酢酸エチルで１回抽出する。次いで、水相を凍結乾燥し、表題化合物１４ｍｇ（理論値の５９％）を得る。
LC-MS (方法 12): Rt = 1.60 分; m/z = 663 (M+H)+.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 1.4 (m, 2H), 1.6 (m, 2H), 1.9 (q, 2H), 2.15 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 3.1 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 4.0 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.9 (m, 1H), 6.9 (s, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (m, 3H), 7.5 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 8.1 (m, 3H), 8.4 (t, 1H).
【０１２７】
実施例２０
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アルファ−グルタミン塩酸塩
【化５１】
2010501504.tif 000053
段階ａ）：
５−ｔｅｒｔ−ブチル１−（２,５−ジオキソピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−グルタメート３５０ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して、３０分間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン／酢酸エチル／メタノールを、先ず比１５０：５０：５で、次いで比１５０：５０：１０で、最後に比１５０：５０：２０で、溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物３５ｍｇ（理論値の４９％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 5.4 分
LC-MS (方法 3): Rt = 2.63 分; m/z = 820 (M+H)+.
【０１２８】
段階ｂ）：
保護された化合物３５ｍｇ（４３μｍｏｌ）を、ジクロロメタンに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１.５ｍｌと混合し、室温で２時間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて、残渣を塩酸（ｐＨ３）１０ｍｌに取り、凍結乾燥し、表題化合物２９ｍｇ（理論値の９７％）を得る。
LC-MS (方法 12): Rt = 1.72 分; m/z = 664 (M+H)+.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 1.4 (m, 2H), 1.6 (m, 2H), 1.9 (q, 2H), 2.3 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 3.1 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 4.0 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.1 (m, 3H), 8.45 (t, 1H).
【０１２９】
実施例２１
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｎ−［５−（Ｌ−セリルアミノ）ペンタノイル］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化５２】
2010501504.tif 000054
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−セリネート３５０ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して３０分間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１を、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノールを比１５０：５０：５で、次いで比１５０：５０：１０で、最後に比１５０：５０：２０で、溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物３３ｍｇ（理論値の５２％）を得る。
LC-MS (方法 12): Rt = 2.87 分; m/z = 722 (M+H)+.
【０１３０】
段階ｂ）：
保護された化合物３３ｍｇ（４６μｍｏｌ）を、ジクロロメタンに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１.６ｍｌと混合し、室温で１０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を塩酸（ｐＨ３）５ｍｌに取り、凍結乾燥し、表題化合物２４ｍｇ（理論値の８０％）を得る。
LC-MS (方法 12): Rt = 1.81 分; m/z = 622 (M+H)+.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 1.4 (m, 2H), 1.6 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 3.1 (dt, 2H), 3.6-3.8 (m, 5H), 3.85 (dd, 1H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.95 (m, 1H), 5.4 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.1 (m, 3H), 8.4 (t, 1H).
【０１３１】
実施例２２
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−ロイシンアミド塩酸塩
【化５３】
2010501504.tif 000055
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ロイシネート２８７ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して３０分間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１を、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノールを比１５０：５０：５で、次いで比１５０：５０：１０で、最後に比１５０：５０：２０で、溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物１０ｍｇ（理論値の１５％）を得る。
LC-MS (方法 12): Rt = 3.44 分; m/z = 748 (M+H)+.
【０１３２】
段階ｂ）：
保護された化合物１０.２ｍｇ（１４μｍｏｌ）を、ジクロロメタンに溶解し、無水トリフルオロ酢酸０.５ｍｌと混合し、室温で１５分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて残渣を希塩酸（ｐＨ３）５ｍｌに取り、凍結乾燥し、表題化合物７ｍｇ（理論値の７３％）を得る。
LC-MS (方法 12): Rt = 2.25 分; m/z =  648 (M+H)+.
【０１３３】
実施例２３
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソブチル）−Ｌ−ヒスチジンアミド塩酸塩
【化５４】
2010501504.tif 000056
段階ａ）：
２,５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ,１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ヒスチジネート１９５ｍｇ（４３１μｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＦ中のエチルジイソプロピルアミン０.１Ｍ溶液６４５μｌと共に、ＤＭＦ３ｍｌに加える。ＤＭＦ１７ｍｌに溶解した実施例３Ａ４０ｍｇ（７２μｍｏｌ）を、滴下して１時間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ず、アセトニトリルを、次いでアセトニトリル／水１０：１を溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。ビス−Ｂｏｃ−保護された実施例およびモノ−Ｂｏｃ−保護された実施例の混合物を含有する適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、モノ−およびビス−Ｂｏｃ−保護された表題化合物の混合物３０ｍｇ（理論値の５５％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.47 分; 4.91 分
LC-MS (方法 3): Rt = 1.53 分; m/z = 758 (M+H)+; Rt = 2.45 分; m/z = 858 (M+H)+.
【０１３４】
段階ｂ）：
ビス−Ｂｏｃ−保護された中間体およびモノ−Ｂｏｃ−保護された中間体の混合物３０ｍｇを、無水トリフルオロ酢酸２ｍｌに取り、室温で１０分間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて、残渣を塩酸ｐＨ３から２回凍結乾燥し、表題化合物２４ｍｇ（理論値の８３％）を得る。
HPLC (方法 2): Rt = 4.07 分;
LC-MS (方法 13): Rt = 2.41 分; m/z = 658 (M+H)+.
【０１３５】
実施例２４
Ｎ−（５−｛［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ｝−５−オキソペンチル）−Ｌ−アルファ−アスパラギン塩酸塩
【化５５】
2010501504.tif 000057
段階ａ）：
５−ｔｅｒｔ−ブチル１−（２,５−ジオキソピロリジン−１−イル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルテート３３８ｍｇ（８７５μｍｏｌ）を、先ず、エチルジイソプロピルアミン１３.７μｌと共に、ＤＭＦ１ｍｌに加える。ＤＭＦ５ｍｌに溶解した実施例４Ａの化合物５０ｍｇ（８７μｍｏｌ）を、滴下して３０分間かけて添加する。室温で３０分間撹拌し、続いて濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより、先ずジクロロメタン／酢酸エチル３：１を、次いでジクロロメタン／酢酸エチル／メタノールを比１５０：５０：５で、次いで比１５０：５０：１０で、最後に比１５０：５０：２０で、溶離剤として用いて、精製する。未精製の標的化合物を含有する適切な画分を合わせ、真空で濃縮する。次いで、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１ａ）によりもう一度精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥し、保護された表題化合物３６ｍｇ（理論値の５１％）を得る。
HPLC (方法 2a): Rt = 5.4 分
LC-MS (方法 12): Rt = 3.52 分; m/z = 806 (M+H)+.
【０１３６】
段階ｂ）：
保護された化合物３６ｍｇ（４５μｍｏｌ）を、ジクロロメタンに溶解し、無水トリフルオロ酢酸１.５ｍｌと混合し、室温で２時間撹拌する。次いで、バッチを真空で、２５℃またはそれ以下で濃縮し、続いて、残渣を塩酸（ｐＨ３）５ｍｌに取り、凍結乾燥し、表題化合物２８ｍｇ（理論値の９１％）を得る。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 1.4 (m, 2H), 1.6 (m, 2H), 2.7 - 2.9 (m, 4H), 3.1 (m, 2H), 3.7 (t, 2H), 3.8 (dd, 1H), 4.0 (t, 2H), 4.1-4.3 (m, 5H), 4.9 (m, 1H), 7.3 (d, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.6 (d, 1H), 8.2 (m, 3H), 8.4 (t, 1H), 13.0 (m, 1H).
【０１３７】
Ｂ. 溶解性、安定性および遊離挙動の測定
ａ）溶解度の決定：
試験物質を水または希塩酸（ｐＨ４）に懸濁する。この懸濁液を室温で２４時間振盪する。２２４０００ｇで３０分間の超遠心後、上清をＤＭＳＯで希釈し、ＨＰＬＣにより分析する。ＤＭＳＯ中の試験化合物の２点較正プロットを定量に使用する。
【０１３８】
ＨＰＬＣ方法：
DAD (G1315A)、quat. ポンプ (G1311A)、オートサンプラーCTC HTS PAL、脱気装置 (G1322A) およびカラムサーモスタット (G1316A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil C18, 60 × 2.1 mm, 3.5 μm；温度：３０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル；流速：０.７ｍｌ／分；グラジエント：０−０.５分９８％Ａ、２％Ｂ；勾配０.５−４.５分１０％Ａ、９０％Ｂ；４.５−６分１０％Ａ、９０％Ｂ；勾配６.５−６.７分９８％Ａ、２％Ｂ；６.７−７.５分９８％Ａ、２％Ｂ。
【０１３９】
代表的な例示的実施態様の希塩酸（ｐＨ４）中の溶解性を、表１に示す：
表１
【表２】
2010501504.tif 000058
【０１４０】
これらの溶液における例示的化合物の分解は観察されない。
基礎的活性物質［化合物（Ａ）］の希塩酸（ｐＨ４）中の溶解性は、この試験で８.１ｍｇ／ｌであると測定される。
【０１４１】
ｂ）様々なｐＨ値のバッファー中での安定性：
試験物質０.３ｍｇを、２ｍｌのＨＰＬＣバイアルに量り入れ、アセトニトリル０.５ｍｌを添加する。物質を、サンプル容器を超音波浴に約１０秒置くことにより溶解する。次いで、各バッファー溶液０.５ｍｌを添加し、サンプルを再度超音波浴で処理する。
【０１４２】
用いるバッファー溶液：
ｐＨ４.０：Millipore 水１ｌを、１Ｎ塩酸でｐＨ４.０に調節する；
ｐＨ７.４：塩化ナトリウム９０ｇ、リン酸二水素カリウム１３.６１ｇおよび１Ｍ水酸化ナトリウム溶液８３.３５ｇを、Millipore 水で１ｌとし、次いで１：１０に希釈する。
試験溶液５μｌ分を、ＨＰＬＣにより、未変化の試験物質の内容量について、２５℃で２４時間にわたり毎時間分析する。適切なピークのパーセントの面積を定量に使用する。
【０１４３】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；カラム温度：３０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０−１.０分９８％Ａ、２％Ｂ→１.０−９.０分２％Ａ、９８％Ｂ；９.０−１３.０分２％Ａ、９８％Ｂ；１３.０−１３.５分９８％Ａ、２％Ｂ；１３.５−１５.０ ９８％Ａ、２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１４４】
各時点でのピーク面積（Ｆ）の比を、開始時のピーク面積と比較して、各例示的実施態様について表２に示す：
表２
【表３】
2010501504.tif 000059
【０１４５】
この試験では、ｐＨ７.４で、試験物質の内容量の減少と同時に有効成分化合物（Ａ）の増加が見出される。
【０１４６】
ｃ）ラットおよびヒト血漿におけるインビトロの安定性＊）：
所定の血漿体積（例えば２.０ｍｌ）を、水浴中の密閉試験管で３７℃に温める。意図した温度に達した後、所定の量の試験物質を溶液（溶媒の体積は、血漿体積の２％以下である）として添加する。血漿を振盪し、最初のサンプル（５０−１００μｌ）をすぐに取る。次いで４−６個のさらなるアリコートを、インキュベーション開始後２時間までの期間中に取る。
【０１４７】
アセトニトリルを血漿サンプルに添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清中の試験物質および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳ方法により定量的に測定する。
＊）ヘパリン化血液（ラットまたはヒト血液）における安定性の測定は、血漿について記載した通りに実施する。
【０１４８】
ｄ）肝細胞における代謝的安定性の測定：
肝細胞の存在下の新規試験化合物の代謝的安定性は、この実験において可能な限り線形の動態学的条件を確保するために、化合物を低濃度（好ましくは１μＭ未満）で、少数の細胞（好ましくは１ｘ１０６細胞／ｍｌ）とインキュベートすることにより測定する。化合物の半減期（分解）を測定するために、インキュベーション溶液の７個のサンプルを、固定した時間パターンで、ＬＣ−ＭＳ分析用に取る。様々なクリアランスパラメーター（ＣＬ）（下記参照）およびＦｍａｘ値をこの半減期から算出する（下記参照）。
【０１４９】
ＣＬおよびＦｍａｘ値は、肝細胞における「第１相」および「第２相」の化合物の代謝の測定を表す。インキュベーション混合物中の酵素に対する有機溶媒の影響を最小化するために、これらの濃度を一般的に１％（アセトニトリル）または０.１％（ＤＭＳＯ）に限定する。
【０１５０】
肝臓中の肝細胞の細胞数１.１ｘ１０８細胞／肝臓１ｇを、全ての種（species and breeds）について計算に使用する。インキュベーション時間（通常９０分間）を超えて延びる半減期に基づいて算出したＣＬパラメーターは、大まかなガイドラインと見なし得るだけである。
【０１５１】
算出したパラメーターおよびそれらの意味は、以下の通りである:
（ＱＨ＝種特異的な肝臓の血流）
Ｆｍａｘ十分に撹拌［％］    経口投与後の最大の可能なバイオアベイラビリティー
計算：    （１−ＣＬ血液十分に撹拌／ＱＨ）＊１００
ＣＬ血液十分に撹拌［Ｌ／（ｈ＊ｋｇ）］    算出される血液クリアランス（十分に撹拌したモデル）
計算：    （ＱＨ＊ＣＬ'内因性）／（ＱＨ＋ＣＬ'内因性）
ＣＬ'内因性［ｍｌ／（分＊ｋｇ）］    肝臓の血流が律速ではないと仮定した、化合物を代謝する肝臓の（肝細胞の）最大能力
計算：    ＣＬ'内因性、明白ｘ種特異的肝細胞数［１.１ｘ１０８／肝臓１ｇ］ｘ種特異的肝臓重量［ｇ／ｋｇ］
ＣＬ'内因性、明白［ｍｌ／（分＊ｍｇ）］    用いた肝細胞の細胞数ｘ（ｘ＊１０６／ｍｌ）で除去定数（elimination constant）を除すことにより、それを標準化する
計算：    ｋｅｌ［１／分］／（細胞数［ｘ＊１０６］／インキュベーション体積［ｍｌ］）
【０１５２】
ｅ）Wistar ラットにおけるｉ.ｖ.薬物動態：
物質投与の前日に、実験動物（オスの Wistar ラット、体重２００−２５０ｇ）の頸静脈に、血液を得るためのカテーテルを、イソフルラン（登録商標）麻酔下で移植する。
実験当日、所定の用量の試験物質を、Hamilton（登録商標）ガラスシリンジを使用して、溶液として尾静脈に投与する（ボーラス投与、投与期間＜１０秒）。血液サンプル（８−１２時点）を、カテーテルを通して、物質投与後２４時間の期間にわたり連続的に取る。ヘパリン処理管でサンプルを遠心分離することにより、血漿を得る。アセトニトリルを時点毎に所定の血漿体積に添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清における試験物質、および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳ方法を使用して定量的に測定する。
【０１５３】
測定される血漿濃度を使用して、試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｔ１／２（半減期）およびＣＬ（クリアランス）などの薬物動態的パラメーターを算出する。
【０１５４】
ｆ）ラットの動静脈シャントモデルにおける抗血栓効果の測定：
絶食中のオスのラット (系統: HSD CPB:WU) を、Rompun/Ketavet 溶液（１２ｍｇ／ｋｇ／５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により麻酔する。P.C. Wong et al. [Thrombosis Research 83 (2), 117-126 (1996)] により記載された方法に基づき、動静脈シャントで血栓形成を誘導する。この目的で、左頸静脈および右頸動脈を露出させる。８ｃｍ長のポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinsonより）を動脈に設置し、続いて、血栓形成性表面をもたらすために、二重ループにした粗いナイロンのループ（60 x 0.26 mm、Berkley Trileneより）を含む６ｃｍ長の Tygon チューブ (R-3606, ID 3.2 mm, Kronlabより）を設置する。２ｃｍ長のポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinson より）を頸静脈に設置し、６ｃｍ長のポリエチレンカテーテル（PE160、Becton-Dickinson より) により Tygon チューブに連結する。シャントを開く前に、そのチューブを生理塩水で満たす。体外循環を１５分間維持する。次いで、シャントを取り除き、すぐに血栓を伴うナイロン糸を秤量する。ナイロン糸の空の重量は、実験開始前に見出した。体外循環を取り付ける前に、試験物質（０.１Ｎ塩酸でｐＨ４に調節した生理塩水中の溶液として）をボーラス注射として投与する。
【０１５５】
Ｃ. 医薬組成物の例示的実施態様
本発明による化合物は、例えば、以下の方法で医薬製剤に変換できる：
ｉ.ｖ.溶液：
本発明による化合物を、生理的に耐容される溶媒に飽和溶解度より低い濃度で溶解する（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ ４００溶液、各々ｐＨ３−５に調節する）。溶液を必要に応じて濾過滅菌し、かつ／または、無菌かつパイロジェン不含の注射容器に分配する。
【国際調査報告】
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