(57)【要約】  遊離または塩または溶媒和物形態の式ＩａまたはＩｂの化合物(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ２０、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｘ、ＹおよびＺは、明細書中に示されている意味を有する)は、ＡＬＫ−５および／またはＡＬＫ−４受容体によって介在される疾患を処置するのに有用である。こうした化合物は、また、Ｐｉ３Ｋ受容体、ＪＡＫ−２受容体およびＴＲＫ受容体によって介在される疾患の処置に有用である。こうした化合物を含む医薬組成物およびこうした化合物の製造方法もまた述べられている。【化１】2010508315.tif 000045
2010508315.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離または塩または溶媒和物の形態の、式(Ｉａ)または(Ｉｂ)：
【化１】
2010508315.tif 000031
[式中、
Ｘは、ＯまたはＮＨであり；
Ｙは、ＣＲ１３またはＮでありｓ；
Ｒ１は、Ｈ、ＣＮ、ハロ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８および
【化２】
2010508315.tif 000032
から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ＣＮ、モルホリノ、テトラゾール(所望によりＣ１−Ｃ３アルキルによって置換されていることもある)、−Ｓ(Ｏ)２ＮＨ２、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８およびＣＨ２ＯＨから選択される。
但し、Ｒ１およびＲ２は、両方ともＨであることはなく、そして、Ｒ２が、Ｈ以外である場合は、Ｒ１は、Ｈまたはハロであり；そして、Ｒ１がＨ以外である場合は、Ｒ２は、Ｈであり；またはＲ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と一体となって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む６員ヘテロ環を形成し、このヘテロ環は、所望により、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはオキソ基によって置換されていることもあり；
Ｒ３は、Ｈ、ＭｅおよびＣＨ２ＯＨから選択され；
Ｒ４は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ５は、Ｈまたはハロゲンであり；
Ｒ７は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、(ＣＨ２)ｍｈｅｔおよび(ＣＨ２)ｎＮＲ９Ｒ１０から選択されるか；または、
Ｒ７およびＲ８は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により、更にＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を含んでいることもある、５員または６員ヘテロ環を形成し、この環は、所望により、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＮＲ１１Ｒ１２によって置換されていることもあり；
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ、独立して、ＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ１３は、Ｈまたはハロであり；
ｍおよびｎは、それぞれ、独立して、０、１または２であり；
ｈｅｔは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含む５員または６員ヘテロ環であり、この環は、所望により、Ｃ１−Ｃ３アルキルによって置換されていることもあり；
Ｚは、ＮまたはＣＲ２６であり；
Ｒ２０は、Ｈ、シクロプロピルおよびＲ２１から選択され、但し、ＺがＮである場合は、Ｒ２０は、Ｈ以外であり；
Ｒ２１は、
【化３】
2010508315.tif 000033
から選択され、
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ、独立して、ＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ２４は、ＨおよびＯＨから選択され；
Ｒ２５は、Ｈ、ＯＨおよびＣＨ２ＯＨから選択される；但し、Ｒ２４がＨである場合は、Ｒ２５は、ＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり；そしてＲ２４がＯＨである場合は、Ｒ２５はＨであり；そして、
Ｒ２６は、ＨおよびＲ２１から選択される；但し、Ｒ２０が、Ｈ以外である場合は、Ｒ２６は、Ｈであり；そしてＲ２０がＨである場合は、Ｒ２６はＲ２１である]
の化合物。
【請求項２】
Ｒ１が、Ｈ、ＣＮ、ハロ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８および
【化４】
2010508315.tif 000034
から選択され、
Ｒ２が、Ｈ、ＣＮ、モルホリノ、テトラゾール(所望によりＣ１−Ｃ３アルキルによって置換されていることもある)、−Ｓ(Ｏ)２ＮＨ２、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８およびＣＨ２ＯＨから選択されるが、但し、Ｒ１およびＲ２は、両方ともＨであることはなく、そして、Ｒ２が、Ｈ以外である場合は、Ｒ１は、Ｈであり；そして、Ｒ１がＨ以外である場合は、Ｒ２は、Ｈである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ４がＨまたはＭｅである請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５がＨまたはＦである請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ７が、ＨまたはＭｅである請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１３がＨである請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
４−(３−[２,４’]ビピリジニル−４−イル−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール；
４−{３−[２−(５−メチル−チオフェン−２−イル)−ピリジン−４−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ}−シクロヘキサノール；
４−[３−(２−フラン−３−イル−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−{３−[２−(１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリジン−４−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ}−シクロヘキサノール；
４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−[３−(２−シクロプロピル−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−[３−(３−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−[３−(４−[１,２,４]トリアゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
{４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノール；
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−メタノン；
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(２−モルホリン−４−イル−エチル)−ベンズアミド；
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−ジメチルアミノ−ピペリジン−１−イル)−メタノン；
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−モルホリン−４−イル−メタノン；
{３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−ベンズアミド；
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(１−エチル−ピロリジン−２−イルメチル)−ベンズアミド；
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−ベンズアミド；
４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンゼンスルホンアミド；
４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンズアミド；
４−{６−[(ＲまたはＳ)−１−(３−フルオロ−フェニル)−２−ヒドロキシ−エチルアミノ]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル；
３−{６−[(Ｒ)−１−(３−フルオロ−フェニル)−エチルアミノ]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル；
４−{６−[(Ｒ)−２−(３−フルオロ−フェニル)−ピロリジン−１−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル；
{４−[６−(３−フルオロ−ベンジルオキシ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−メタノール；および
テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸 {３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−アミド
から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
医薬として使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
抗炎症剤、気管支拡張剤、抗ヒスタミン剤、充血除去剤または鎮咳性の薬剤物質である別の薬剤物質と組み合わせる請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
活性成分として請求項１〜７のいずれかに記載の化合物と、適切な薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１１】
ＡＬＫ−５、Ｐｉ３Ｋ、ＴＲＫおよびＪＡＫ２の１種以上によって介在される状態を処置する薬剤の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の式ＩａまたはＩｂの化合物の使用。
【請求項１２】
ＡＬＫ−４受容体によって介在される状態を処置する薬剤の製造のための請求項１〜７のいずれかに記載の式ＩａまたはＩｂの化合物の使用。
【請求項１３】
肺高血圧症、慢性腎疾患、急性腎疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎疾患、鬱血性心不全、潰瘍、眼疾患、角膜損傷、糖尿病性腎症、神経学的機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、腎線維症、肺線維症および肝線維症、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、アルコール性肝炎、癌、ヘモクロマトーシス、原発性胆汁性肝硬変、再狭窄、後腹膜線維化症、腸間膜線維症、子宮内膜症、ケロイド、癌、骨機能異常、炎症性疾患、皮膚瘢痕化および光老化を処置する薬剤の製造のための、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１４】
肺高血圧症または肺線維症を処置する薬剤の製造のための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１５】
骨粗鬆症を処置する薬剤の製造のための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１６】
請求項１に記載の式ＩａまたはＩｂの化合物の製造方法であって、
(ｉ)(Ａ)式IIａ：
【化５】
2010508315.tif 000035
[式中、Ｑは、
【化６】
2010508315.tif 000036
(Ｘ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ２４およびＲ２５は、請求項１中の定義と同様である)であり、そしてＸ１は、ハロである]の化合物を、式IIIａまたはIIIｂ：
【化７】
2010508315.tif 000037
[式中、Ｔは、
【化８】
2010508315.tif 000038
(Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ２０は、請求項１の定義と同様である)であり、そして、
ＲｘおよびＲｙは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８−アルキルである]の化合物と反応させ、
(Ｂ)Ｑが窒素架橋基を含む式ＩａおよびＩｂの化合物の製造のために、
式IV：
【化９】
2010508315.tif 000039
(式中、Ｔは、上記の定義と同様であり、そして、Ｘ２は、ハロである)の化合物を、
式Ｖ：
【化１０】
2010508315.tif 000040
[式中、Ｒａは、
【化１１】
2010508315.tif 000041
(Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ２４およびＲ２５は、請求項１の定義と同様である)である]の化合物と反応させ、
(Ｃ)Ｑが窒素または酸素架橋基を含み、そしてＴは、上記の定義と同様である式ＩａおよびＩｂの化合物の製造のために
式VI：
【化１２】
2010508315.tif 000042
(式中、Ｑは、上記の定義と同様であり、Ｋは、６員芳香族ヘテロ環基であり、そしてＸ３は、ハロである)の化合物を、式VIIａまたはVIIｂ：
【化１３】
2010508315.tif 000043
(式中、Ｕは、−Ｒ１、−Ｒ２または−Ｒ２０であり、そして、ＲｘおよびＲｙは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８−アルキルである)の化合物と反応させるか；または、
(Ｄ)Ｑが酸素架橋基を含む式Ｉａの化合物の製造のために、式IV(ここで、Ｔは、上記の定義と同様であり、そしてＸ２は、ハロである)の化合物を、
式VIII
【化１４】
2010508315.tif 000044
(式中、ＲＣは、請求項１に定義されている化合物に応じる置換ベンジル基である)の化合物と反応させ；そして、
(ii)得られた式ＩａまたはＩｂの化合物を、遊離または塩または溶媒和物形態で回収することを含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、有機化合物ならびに医薬としてのその使用、特に肺高血圧症のような炎症性または閉塞性気道疾患、肺線維症、肝線維症；癌；筋萎縮症および筋ジストロフィーのような筋疾患および骨粗鬆症のような全身性骨格系障害の処置のための医薬としての使用に関する。
【発明の概要】
【０００２】
一つの局面では、本発明は、遊離または塩または溶媒和物の形態の、式ＩａまたはＩｂ：
【化１】
2010508315.tif 000003
[式中、
Ｘは、ＯまたはＮＨであり；
Ｙは、ＣＲ１３またはＮであり；
Ｒ１は、Ｈ、ＣＮ、ハロ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８および
【化２】
2010508315.tif 000004
から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ＣＮ、モルホリノ、テトラゾール(所望によりＣ１−Ｃ３アルキルによって置換されていることもある)、−Ｓ(Ｏ)２ＮＨ２、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８およびＣＨ２ＯＨから選択される。
但し、Ｒ１およびＲ２は、両方ともＨであることはなく、そして、Ｒ２が、Ｈ以外である場合は、Ｒ１は、Ｈまたはハロであり；そして、Ｒ１がＨ以外である場合は、Ｒ２は、Ｈであり；またはＲ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と一体となって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む６員ヘテロ環を形成し、このヘテロ環は、所望により、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはオキソ基によって置換されていることもあり；
Ｒ３は、Ｈ、ＭｅおよびＣＨ２ＯＨから選択され；
Ｒ４は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ５は、Ｈまたはハロゲンであり；
Ｒ７は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｒ８は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、(ＣＨ２)ｍｈｅｔおよび(ＣＨ２)ｎＮＲ９Ｒ１０から選択されるか；または、
Ｒ７およびＲ８は、それらが結合している窒素原子と一体となって、所望により、更にＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を含んでいてもよい、５員または６員ヘテロ環を形成し、この環は、所望により、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはＮＲ１１Ｒ１２によって置換されていることもあり；
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ、独立して、ＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ１３は、Ｈまたはハロであり；
ｍおよびｎは、それぞれ、独立して、０、１または２であり；
ｈｅｔは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含む５員または６員ヘテロ環であり、この環は、所望により、Ｃ１−Ｃ３アルキルによって置換されていることもあり；
Ｚは、ＮまたはＣＲ２６であり；
Ｒ２０は、Ｈ、シクロプロピルおよびＲ２１から選択される。但し、ＺがＮである場合は、Ｒ２０は、Ｈ以外であり；
Ｒ２１は、
【化３】
2010508315.tif 000005
から選択され、
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ、独立して、ＨおよびＣ１−Ｃ３アルキルから選択され；
Ｒ２４は、ＨおよびＯＨから選択され；
Ｒ２５は、Ｈ、ＯＨおよびＣＨ２ＯＨから選択される；但し、Ｒ２４がＨである場合は、Ｒ２５は、ＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり；そしてＲ２４がＯＨである場合は、Ｒ２５はＨであり；そして、
Ｒ２６は、ＨおよびＲ２１から選択される。但し、Ｒ２０が、Ｈ以外である場合は、Ｒ２６は、Ｈであり；そしてＲ２０がＨである場合は、Ｒ２６はＲ２１である]
の化合物を提供する。
【０００３】
本明細書中で使用される用語は、次の意味を有する：
本明細書中で使用されている“所望により、一つ、二つまたは三つの位置で置換されていることもある”とは、言及されている基が、その前に列挙されている基の任意の一つまたは任意の組み合わせによって、一つまたは二つまたは三つの位置で置換されていてもよいことを意味する。
【０００４】
本明細書で使用される“ハロ”または“ハロゲン”は、元素周期表の１７族(以前はVII族)に属している元素を意味し、例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素であってよい。
【０００５】
本明細書で使用される“Ｃ１−Ｃ８−アルキル”は、１〜８個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルキルを意味する。異なる炭素原子数が特定されているならば、例えば、Ｃ６またはＣ３この定義は対応して改めるものとする。
【０００６】
“４、５、または６員ヘテロ環基”は、窒素、酸素および硫黄から成る群から選択される少なくとも一つの環へテロ原子を含む４、５、または６員ヘテロ環基を意味し、それらは、飽和していても、部分的に飽和していてもよい。こうしたヘテロ環基の例としては、アゼチジン、ピロリジン、ピロリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジノン、モルホリン、オキサジン、エトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピラン、テトラヒドロピラン、１,４−ジオキサンおよび１,４−オキサチアンが含まれるが、これらに限定されない。このヘテロ環基は、非置換であっても、置換されていてもよい。
【０００７】
“Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル”は、３〜１０個の環炭素原子を有する完全に飽和されている炭素環式環、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニルまたはシクロデシルのような単環式基、または、二環式基、例えば、ビシクロヘプチルまたはビシクロオクチルを意味する。異なる炭素原子数が特定されているならば、例えば、Ｃ６またはＣ８、この定義は対応して改めるものとする。
【０００８】
本明細書で使用される“Ｃ１−Ｃ８−ハロアルキル”は、１個以上のハロゲン原子、好ましくは１、２または３個のハロゲン原子により置換されている上記定義のＣ１−Ｃ８−アルキルを意味する。個別の炭素原子数が特定されているならば、例えば、Ｃ６またはＣ３、この定義は対応して修正するものとする。
【０００９】
本明細書で使用される“Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ”および“ジ(Ｃ１−Ｃ８−アルキル)アミノ”は、上記定義の１または２個(同じでもまたは異なっていてもよい)のＣ１−Ｃ８−アルキル基によりそれぞれ置換されているアミノを意味する。異なる炭素原子数が特定されているならば、例えば、Ｃ６またはＣ３、この定義は対応して改めるものとする。
【００１０】
本明細書で使用される“Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ”は、１〜８個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルコキシを意味する。異なる炭素原子数、が特定されているならば、例えば、Ｃ６またはＣ３、この定義は対応して改めるものとする。
【００１１】
本明細書および添付の特許請求の範囲を通して、文脈上他の解釈が必要でない限り、用語“含む”または“含み”もしくは“含んでなる”のような変形体は、記述した整数または工程または整数群もしくは工程群を含むが、他のいかなる整数もしくは工程また整数群もしくは工程群を排除するものではないことを意味することが理解されるべきである。
【００１２】
上記の任意の場所に定義されている本発明の態様では、Ｒ１は、Ｈ、ＣＮ、ハロ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８および
【化４】
2010508315.tif 000006
から選択され、そして、
Ｒ２は、Ｈ、ＣＮ、モルホリノ、テトラゾール(所望によりＣ１−Ｃ３アルキルによって置換されていることもある)、−Ｓ(Ｏ)２ＮＨ２、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ７Ｒ８およびＣＨ２ＯＨから選択されるが、
但し、Ｒ１およびＲ２は、両方ともＨであることはなく、そして、Ｒ２が、Ｈ以外である場合は、Ｒ１は、Ｈであり；そして、Ｒ１がＨ以外である場合は、Ｒ２は、Ｈである。
【００１３】
上記の任意の場所に定義されている本発明の態様では、Ｒ４はＨまたはＭｅである。
上記の任意の場所に定義されている本発明の態様では、Ｒ５はＨまたはＦである。
上記の任意の場所に定義されている本発明の態様では、Ｒ７はＨまたはＭｅである。
【００１４】
上記の任意の場所に定義されている本発明の態様では、Ｒ１３はＨである。
上記の任意の場所に定義されている本発明の態様では、Ｒ２４はＨである。
【００１５】
本発明の更なる態様では、式ＩａまたはＩｂによる化合物は、
４−(３−[２,４’]ビピリジニル−４−イル−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール；
４−{３−[２−(５−メチル−チオフェン−２−イル)−ピリジン−４−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ}−シクロヘキサノール；
４−[３−(２−フラン−３−イル−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−{３−[２−(１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリジン−４−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ}−シクロヘキサノール；
４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−[３−(２−シクロプロピル−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−[３−(３−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
４−[３−(４−[１,２,４]トリアゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール；
{４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノール；
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−メタノン；
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(２−モルホリン−４−イル−エチル)−ベンズアミド；
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−ジメチルアミノ−ピペリジン−１−イル)−メタノン；
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−モルホリン−４−イル−メタノン；
{３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−ベンズアミド；
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(１−エチル−ピロリジン−２−イルメチル)−ベンズアミド；
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−ベンズアミド；
４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンゼンスルホンアミド；
４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンズアミド；
４−{６−[(ＲまたはＳ)−１−(３−フルオロ−フェニル)−２−ヒドロキシ−エチルアミノ]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル；
３−{６−[(Ｒ)−１−(３−フルオロ−フェニル)−エチルアミノ]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル；
{４−[６−(３−フルオロ−ベンジルオキシ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−メタノール；
および
テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸{３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−アミド
から選択される。
【００１６】
式ＩａまたはＩｂに従って、本明細書中の任意の場所に定義されている本発明の態様は、独立してでも、集合して、あるいは、いかなる組み合わせで組み込まれてもよい。
【００１７】
塩基性中心を含む式ＩａまたはＩｂの化合物は、酸付加塩、特に薬学的に許容される酸付加塩を形成することができる。式ＩａまたはＩｂの化合物の薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸；および有機酸、例えば、脂肪族モノカルボン酸、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸および酪酸、カプリル酸、ジクロロ酢酸、馬尿酸、脂肪族ヒドロキシ酸、例えば、乳酸、クエン酸、酒石酸またはリンゴ酸、グルコン酸、マンデル酸、ジカルボン酸、例えば、マレイン酸またはコハク酸、アジピン酸、アスパラギン酸、フマル酸、グルタミン酸、マロン酸、セバシン酸、芳香族カルボン酸、例えば、安息香酸、ｐ−クロロ−安息香酸、ニコチン酸、ジフェニル酢酸またはトリフェニル酢酸、芳香族ヒドロキシ酸、例えば、ｏ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、１−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸または３−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸およびスルホン酸、例えば、メタンスルホン酸またはベンゼンスルホン酸、エタンスルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、(＋)カンファー−１０−スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１,５−ジスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸の酸付加塩を含む。こうした塩は、公知の塩形成手順により、式ＩａまたはＩｂの化合物から製造することができる。薬学的に許容される溶媒和物は一般に水和物である。
【００１８】
酸性の、例えばカルボキシル基を含む式ＩａまたはＩｂの化合物は、また、塩基、特に薬学的に許容される塩基、例えば、当技術分野でよく知られているものと塩を形成することもできる；適当なこうした塩は、金属塩、特にアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムまたはカルシウム塩、またはアンモニアまたは薬学的に許容される有機アミンまたはヘテロ環式塩基、例えば、エタノールアミン、ベンジルアミンまたはピリジン、アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、ジエタノールアミン、４−(２−ヒドロキ−シエチル)モルホリン、１−(２−ヒドロキシエチル)ピロリジン、Ｎ−メチルグルタミン、ピペラジン、トリエタノール−アミンまたはトロメタミンとの塩を含む。こうした塩は、公知の塩形成法により、式Ｉの化合物から製造することができる。酸性の、例えば、カルボキシル基を含む式ＩａまたはＩｂの化合物は、また、四級アンモニウム中心を有する双性イオンとして存在することができる。
【００１９】
式ＩａまたはＩｂの化合物の遊離形を従来方法で塩形に変換でき、その逆もまた同様である。遊離形態または塩形態でのこの化合物は、水和物または、結晶化のために使用した溶媒を含む溶媒和物形態で入手できる。式ＩａまたはＩｂの化合物を従来方法で反応混合物から回収し、精製できる。異性体、例えば、エナンチオマーは、従来方法、例えば、分別結晶、または対応して不斉置換された、例えば、光学活性な出発物質から不斉合成により得ることができる。
【００２０】
本発明の多数の化合物は、少なくとも１個の不斉炭素原子を含み、従って、それらは個々の光学的に活性な異性体形またはそれらの混合物、例えば、ラセミ混合物として存在する。更なる不斉中心が存在する場合、本発明は、また、個々の光学的に活性な異性体および混合物、例えば、ジアステレオマー混合物をの両方を包含する。
【００２１】
本発明は、すべてのこのような形態、特に純粋な異性体形態を含む。異なる異性体形態を、従来方法により互いに分離または分割することができ、または任意のある異性体を従来の合成方法、または；立体特異性もしくは不斉合成により得ることができる。本発明の化合物は医薬組成物における使用を意図しているので、それらは、それぞれ好ましくは実質的に純粋な形態、例えば、少なくとも６０％純粋、より適当には少なくとも７５％純粋、および好ましくは少なくとも８５％、とりわけ少なくとも９８％純粋(％は重量対重量ベースである)で提供されることが容易に理解されるであろう。化合物の不純な生成物を、医薬組成物において使用される、より純粋な形態を製造するために使用してもよく；こうした低純度の本化合物の生成物は、少なくとも１％、より適当には少なくとも５％および好ましくは１０〜５９％の本発明の化合物を含むべきである。
【００２２】
本発明は、一個以上の原子が、原子番号は同一であるが、自然界に通常見出される原子質量または質量数と異なった原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられる、薬学的に許容される同位体標識した式ＩａまたはＩｂの化合物をすべて含む。本発明の化合物に含まれる適切な同位体の例としては、水素の同位体、例えば、２Ｈおよび３Ｈ、炭素の同位体、例えば、１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃ、塩素の同位体、例えば、３６Ｃｌ、フッ素の同位体、例えば、１８Ｆ、ヨウ素の同位体、例えば、１２３Ｉおよび１２５Ｉ、窒素の同位体、例えば、１３Ｎおよび１５Ｎ、酸素の同位体、例えば、１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏ、および硫黄の同位体、例えば、３５Ｓが含まれる。
【００２３】
同位体標識した式ＩａまたはＩｂの化合物のあるもの、例えば、放射性同位体を取り込んでいるものは、医薬および／または基質の組織分布研究に有用である。放射性同位体トリチウム(３Ｈ)および炭素−１４(１４Ｃ)は、取り込みの容易さおよび迅速な検出手段の観点からこうした目的に特に有用である。重水素(２Ｈ)のようなより重い同位体を用いる置換は、大きな代謝安定性による一定の治療的利点、例えば、イン・ビボの半減期の増大あるいは必要用量の減少を提供し得て、それゆえ、ある状況下では好ましいであろう。ポジトロン放出同位体、例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎを用いる置換は、基質受容体占有率を試験するためのポジトロン放出断層撮影(ＰＥＴ)検討に有用でありうる。
【００２４】
同位体標識した式ＩａまたはＩｂの化合物は、本技術分野の当業者に知られている従来の手法により、あるいは、以前に使用されていた非標識薬剤の代わりに適切な同位体標識した薬剤を用いて、付随する実施例中で述べられている方法に準じる方法によって、一般に調製することができる。
【００２５】
本発明による薬学的に許容される溶媒和物には、結晶化の溶媒が同位体で置換されていてよい、例えば、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトンまたはｄ６−ＤＭＳＯである溶媒和物が含まれる。
本発明の具体的な特に好ましい化合物は、実施例において後記の化合物である。
【００２６】
本発明は、また、遊離または塩または溶媒和物形態の式ＩａまたはＩｂの化合物の製造方法を提供する。これらは、
(ｉ)(Ａ)式IIａ：
【化５】
2010508315.tif 000007
[式中、Ｑは、上記の式ＩａおよびＩｂに定義されている該当する基を表し、すなわち：
【化６】
2010508315.tif 000008
(ここで、Ｘ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ２４およびＲ２５は、上記の任意の場所の定義と同様である)であり、そしてＸ１は、ハロである]
の化合物を、式IIIａまたはIIIｂ：
【化７】
2010508315.tif 000009
[式中、Ｔは、上記の式ＩａおよびＩｂ中に定義されている該当する基を表し、すなわち：
【化８】
2010508315.tif 000010
(ここで、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ２０は、上記の任意の場所の定義と同様である)であり、そして、
ＲｘおよびＲｙは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８−アルキルである]
の化合物と反応させ、
【００２７】
(Ｂ)Ｑが窒素架橋基を含む式ＩａまたはＩｂの化合物の製造のために、
式IV：
【化９】
2010508315.tif 000011
(式中、Ｔは、上記の定義と同様であり、そして、Ｘ２は、ハロである)の化合物を、
式Ｖ：
【化１０】
2010508315.tif 000012
[式中、Ｒａは、上記のＩａおよびＩｂで定義されている該当する基を表し、すなわち：
【化１１】
2010508315.tif 000013
(そしてここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ２４およびＲ２５は、上記の任意の場所の定義と同様である)である]
の化合物と反応させ；
【００２８】
(Ｃ)Ｑが窒素架橋基かまたは酸素架橋基を含み、そしてＴが上記の定義と同様である式ＩａまたはＩｂの化合物の製造のために、
式VI：
【化１２】
2010508315.tif 000014
(式中、Ｑは、上記の定義と同様であり、Ｋは、６員芳香族ヘテロ環基であり、そしてＸ３は、ハロである)の化合物を、式VIIａまたはVIIｂ：
【化１３】
2010508315.tif 000015
(式中、Ｕは、−Ｒ１、−Ｒ２または−Ｒ２０であり、そして、ＲｘおよびＲｙは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８−アルキルである)の化合物と反応させるか；または、
【００２９】
(Ｄ)Ｑが酸素連結基を含む式Ｉａの化合物の製造のために、式IV(ここで、Ｔは、上記の定義と同様であり、そしてＸ２は、ハロである)の化合物を、
式VIII
【化１４】
2010508315.tif 000016
(式中、ＲＣは、式Ｉａにより定義されている化合物に応じて置換されたベンジル基である)の化合物と反応させ；そして、
【００３０】
(ii)得られた式ＩａまたはＩｂの化合物を、遊離または塩または溶媒和物形態で回収することを含んでなる方法によって製造することができる。
【００３１】
製造法(Ａ)は、ハロゲン化ヘテロ環基を、アリール／ヘテロアリールボロン酸と反応させるときの公知の手順を用いるか、あるいは、実施例に後記の手順に準じて行うことができる。この反応は、有機溶媒、例えば、ジオキサンと水の混合液中、好ましくは、触媒、例えば、パラジウムジクロリドビストリフェニルホスフィン(palladium dichloridebistriphenylphosphine)、そして無機塩基、例えば、炭酸ナトリウムの存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、高温、例えば、１００℃〜１５０℃であり、約１００℃で、例えば、約１２０分間マイクロウェーブ処理することが好ましい。
【００３２】
製造法(Ｂ)は、ハロゲン化物、特にハロ−置換ヘテロ環化合物を、アミンと反応させる公知の手順を用いるか、あるいは実施例に後記の手順に準じて行うことができる。この反応は、有機溶媒、例えば、Ｎ−メチル−ピロリジノン(ＮＭＰ)を用い、所望により、無機塩基、例えば、炭酸ナトリウムの存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、１００℃〜２５０℃、好ましくは、１２０℃〜２２０℃、特に約１８０℃であり、例えば、マイクロウェーブ照射を用いて、例えば、約９０分間加熱することによる。
【００３３】
製造法(Ｃ)は、ハロゲン化ヘテロ環基をアリール／ヘテロアリールボロン酸と反応させる公知の手順を用いるか、または実施例に後記の手順に準じて行うことができる。この反応は、有機溶媒、例えば、ジオキサンと水の混合物中で、好ましくは、触媒、例えば、パラジウムジクロリドビストリフェニルホスフィン、および無機塩基、例えば、炭酸ナトリウムの存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、高温であり、例えば、１００℃〜１５０℃、好ましくは、約１２０℃で、例えば、約１２０分間マイクロウェーブ照射を用いる。
【００３４】
製造法(Ｄ)は、ハロゲン化物、特にハロゲン化ヘテロ環基を、第一級アルコールと反応させる公知の手順を用いるか、または実施例に後記の手順に準じて行うことができる。この反応は、有機溶媒中、例えば、ジメチルホルムアミド中で、好ましくは、塩基、例えば、水素化ナトリウムの存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、１０℃〜４０℃であるが、好ましくは室温である。
【００３５】
式IIａの化合物は、式IX：
【化１５】
2010508315.tif 000017
(式中、Ｘ１およびＸ４は、それぞれハロである)
の化合物を、式Ｘ：
【化１６】
2010508315.tif 000018
(式中、Ｑは、後記の定義と同様であるか、または後記の実施例中に述べられているものと同じである)の化合物と反応させることによって製造される。
【００３６】
この反応は、有機溶媒中で、例えば、Ｎ−メチル−２−ピロリドン(ＮＭＰ)中で、好ましくは、無機塩基、例えば、重炭酸ナトリウム(ＮａＨＣＯ３)の存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、高温であり、例えば、１００℃〜２００℃、好ましくは、約１８０℃で、例えば、約４０分間マイクロウェーブ照射を行う。
【００３７】
式IIIａまたはIIIｂの化合物は、商業上入手可能か、または公知の方法によって製造することができる。
【００３８】
式IVの化合物は、式XI：
【化１７】
2010508315.tif 000019
(式中、Ｘ２およびＸ５は、それぞれハロである)の化合物を、式IIIａまたはIIIｂ：
【化１８】
2010508315.tif 000020
(式中、Ｔは、上記の定義と同様であり、ＲｘおよびＲｙは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８−アルキルであるか、または実施例に後記のものと同じである)の化合物と反応させることによって製造される。この反応は、有機溶媒中で、例えば、ジオキサンと水の混合物中で、好ましくは、触媒、例えば、パラジウムジクロリドビストリフェニルホスフィン、および無機塩基、例えば、炭酸ナトリウムの存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、高温であり、例えば、１００℃〜１５０℃、好ましくは、約１００℃で、例えば、約１２０分間マイクロウェーブ照射をおこなう。
【００３９】
式Ｖの化合物は、商業上入手可能か、または公知の方法によって製造することができる。
【００４０】
式VIの化合物は、式IIａ(ここで、Ｑは上記の定義と同様であり、そして、Ｘ１はハロである)の化合物を、式XIIａまたはXIIｂ：
【化１９】
2010508315.tif 000021
(式中、Ｘ３は、ハロであり、Ｋは、上記の定義と同様であり、そしてＲｘおよびＲｙは、独立して、水素またはＣ１−Ｃ８−アルキルであるか、または実施例に後記のものと同じである)の化合物と反応させることによって製造される。
この反応は、有機溶媒中で、例えば、ジオキサンと水の混合物中で、好ましくは、触媒、例えば、パラジウムジクロリドビストリフェニルホスフィン、および無機塩基、例えば、炭酸ナトリウムの存在下で行うのが好都合である。適切な反応温度は、高温であり、例えば、１００℃〜１５０℃、好ましくは、約１００℃で、例えば、約１２０分間マイクロウェーブ照射を行う。
【００４１】
式VIIａまたはVIIｂ、VIII、IX、Ｘ、XI、XIIａまたはXIIｂの化合物は、商業上入手可能か、または公知の方法によって製造することができる。
【００４２】
薬学的に許容される塩形態での式ＩａおよびＩｂの化合物は、以下では“本発明の薬剤”という。こうした化合物は、医薬として有用である。
【００４３】
本発明の薬剤は、アクチビン様キナーゼ(“ＡＬＫ”)−５阻害剤として作用する。少なくとも多数のこうした化合物はまた、ＡＬＫ−４阻害剤としても作用する。
【００４４】
ＴＧＦ−β１は、１回膜貫通セリン／トレオニンキナーゼ受容体のファミリーを介してシグナル伝達する、ＴＧＦ−β、アクチビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質およびミュラー管抑制物質を含むサイトカインのファミリーの原型メンバーである。こうした受容体は２つのクラス、Ｉ型すなわちアクチビン様キナーゼ(ＡＬＫ)受容体およびII型受容体に分けることができる。ＡＬＫ受容体は、ＡＬＫ受容体が(ａ)セリン／トレオニンが豊富な細胞内末端を欠き、(ｂ)Ｉ型受容体の間できわめて相同であるセリン／トレオニンキナーゼドメインを有し、そして(ｃ)グリシンおよびセリン残基が豊富な領域から構成されるＧＳドメインと呼ばれる共通の配列モチーフを共有するという点でII型受容体と区別される。ＧＳドメインは、細胞内キナーゼドメインのアミノ末端であり、II型受容体による活性化に欠くことができない。ＴＧＦ−βシグナル伝達にはＡＬＫおよびII型受容体の両方が必要であることが、いくつかの検討で示された。具体的にいうと、II型受容体は、ＴＧＦ−βのＩ型受容体であるＡＬＫ５のＧＳドメインをＴＧＦ−βの存在下でリン酸化する。次にＡＬＫ５が、細胞質タンパク質であるｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３を２つのカルボキシ末端セリンでリン酸化する。リン酸化ｓｍａｄタンパク質は、核に移行し、そして細胞外マトリックスの製造に寄与する遺伝子を活性化する。それ故、本発明の好ましい化合物は、Ｉ型受容体を阻害する点で選択的である。
【００４５】
アクチビンはＴＧＦ−βと同様の方法でシグナルを伝達する。アクチビンはセリン／トレオニンキナーゼであるアクチビンII型受容体(ＡｃｔＲIIＢ)に結合し、そして活性化II型受容体がＡＬＫ４のＧＳ領域中のセリン／トレオニン残基を高リン酸化する。次いで活性化ＡＬＫ４がＳｍａｄ２およびＳｍａｄ３をリン酸化する。その結果として起こるＳｍａｄ４を含むヘテロ−Ｓｍａｄ複合体の形成によって、アクチビンによって誘導される遺伝子転写調節に導かれる。
【００４６】
ＴＧＦ−β１軸の活性化および細胞外マトリックスの拡大は、慢性腎臓疾患および血管疾患の発症および進行の初期のおよび持続する寄与因子である。Border W.A., et al, N. Engl. J. Med., 1994; 331(19), 1286-92。更に、ＴＧＦ−β１は、ＴＧＦ−β１受容体のＡＬＫ５によるＳｍａｄ３リン酸化の作用を通して、硬化性沈着の成分フィブロネクチンおよびプラスミノーゲンアクチベーター阻害因子１の形成の役割を果たす。Zhang Y., et al, Nature, 1998; 394(6696), 909-13; Usui T., et al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 1998; 39(11), 1981-9。
【００４７】
腎臓および心血管系の進行性線維症は、罹患および死の主要な原因であり、そして医療費の重要な一因である。ＴＧＦ−β１は多数の腎線維症と関連している。Border W.A., et al, N. Engl. J. Med., 1994; 331(19),1286-92。ＴＧＦ−β１は急性および慢性糸球体腎炎(Yoshioka K., et al, Lab. Invest., 1993; 68(2),154-63)、糖尿病性腎症(Yamamoto, T., et al, 1993, PNAS 90, 1814-1818)、同種移植片拒絶反応、ＨＩＶ腎症およびアンギオテンシン誘発腎症(Border W.A., et al, N. Engl. 5 J. Med., 1994; 331(19), 1286-92)において増大する。これらの疾患において、ＴＧＦ−β１発現のレベルは細胞外マトリックスの産生と一致する。３つの証拠によれば、ＴＧＦ−β１とマトリックス生産の間の因果関係が提案される。第１に、正常糸球体、メサンギウム細胞および非腎臓細胞は、細胞外マトリックスタンパク質の産生を誘導し、外因性ＴＧＦ−β１によるプロテアーゼ活性をイン・ビトロで阻害することができる。第２に、ＴＧＦ−β１に対する中和抗体は腎炎ラットの細胞外マトリックスの蓄積を予防することができる。第３に、ＴＧＦ−β１トランスジェニックマウスまたはイン・ビボでのＴＧＦ−β１遺伝子の正常ラット腎臓へのトランスフェクションによって、糸球体硬化症を急速に発症させることになる。Kopp J.B., et al, Lab. Invest., 1996; 74(6), 991 1003。従って、ＴＧＦ−β１活性の阻害は慢性腎臓疾患の治療的介入として指摘される。
【００４８】
ＴＧＦ−β１およびその受容体は、損傷血管中で増加し、そしてバルーン血管形成術後の内膜形成の兆しである。Saltis J., et al, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 1996; 23(3), 193-200。加えて、ＴＧＦ−β１はイン・ビトロでの平滑筋細胞(“ＳＭＣ”)遊走の強力な刺激因子であり、動脈壁へのＳＭＣの遊走はアテローム性動脈硬化症および再狭窄の病因における寄与因子である。更に、総コレステロールに対する内皮細胞生産物の多変量分析で、ＴＧＦ−β受容体であるＡＬＫ５は総コレステロール(Ｐ＜０.００１)と相関関係がある。Blann A.D., et al, Atherosclerosis, 1996; 120(1-2), 221-6。更に、ヒトアテローム性動脈硬化病変由来ＳＭＣはＡＬＫ５／ＴＧＦ−βII型受容体比を増加させる。ＴＧＦ−β１が線維増殖性血管病変で過剰発現しているため、受容体−Ｉ変異細胞は、細胞外マトリックス成分を過剰生産しながら、ゆっくりしているが、非制御的に増殖する(McCaffrey T.A., et al, Jr., J. Clin.; Invest., 1995; 96(6), 2667-75)。ＴＧＦ−β１は、活発なマトリックス合成がおこる場所であるアテローム性動脈硬化症病変で非泡沫状マクロファージに免疫局在化し、非泡沫状マクロファージがＴＧＦ−β依存メカニズムを介するアテローム動脈硬化症のリモデリングにおけるマトリックス遺伝子発現の調節に関与し得ることを示唆した。それ故、ＡＬＫ５におけるＴＧＦ−β１の作用を阻害することは、また、アテローム性動脈硬化症および再狭窄において指示される。
【００４９】
肝線維症は、多くの原因物質、例えば、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎ウイルス、アルコールまたは薬物、および自己免疫疾患により引き起こされる慢性肝臓損傷に対するアンバランスな創傷治癒応答の結果である。最終的に、肝線維症は生命を脅かす肝硬変症および肝臓癌に至り得る(Gressner et al (2006) J. Cell. Mol. Med. 2006, 10(1): 76-99によるレビュー文献参照)。
【００５０】
いくつかの細胞シグナル経路が慢性肝臓損傷において変化することが知られている。ＴＧＦβシグナル伝達、その受容体および関連Ｓｍａｄ−シグナル伝達タンパク質は、線維形成に関連する細胞型で存在することは、文書で十分に裏付けられている。ＴＧＦβの循環レベルは、肝線維症を含む線維症の多くの動物モデルで増加していることが判明している。ＴＧＦβ１の過剰発現を有するトランスジェニックマウスは、肝臓、腎臓、肺および心臓を含む多数の臓器における線維症を発症する。ＴＧＦβシグナル伝達の増加が肝線維症を含む線維症の種類のすべてに関連していることは明らかである。この概念は、更に線維症モデルにおいてＴＧＦβ阻害剤を使用するいくつかの試験でその妥当性が実証されている。ＴＧＦβは２つのｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼ受容体のＴＧＦβＲIIおよびＡＬＫ５に結合することによりシグナル伝達を仲介する。ドミナントネガティブＴＧＦβＲIIの発現は、ジメチルニトロサミン誘発肝線維症のラットモデルで有利な効果を示した(Qi et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. 96: 2345-9およびNakamura et al (2000) Hepatology 32: 247-55、参照)。アンチセンス方法を使用したＴＧＦβ発現阻害は、また、胆管結紮により誘発される肝線維症を減少させた(Arias et al (2003) BMC Gastroenterol. 3: 29、参照)。最近、ＡＬＫ５の小分子阻害剤であるＧＷ６６０４は、これをラットに治療的に与えると、ジメチルニトロサミン誘発肝線維症の処置において有意な効果を有している。ＧＷ６６０４は死亡率を４０％抑制(prevented)し、そして細胞外マトリックス沈着の６０％を阻害する(線維症の場合の主要測定)ということは、極めて注目に値することである。ＧＷ６６０４での３週間の処置でなんら明白な副作用がなかったことを示したことは、重要である(De Gouville et al (2005) Br. J. Pharmacol.  145: 166-77、参照)。総合すれば、こうした試験は、ＴＧＦβシグナル伝達の阻害が、肝臓線維症に対する有効な処置になり得ることを示唆する。
【００５１】
ＴＧＦ−β１は、また、創傷修復において必要とされる。ＴＧＦ−β１に対する中和抗体は、多くのモデルで使用されており、ＴＧＦ−β１シグナル伝達を阻害することにより、治癒経過中に過剰な瘢痕形成を制限することにより損傷後の復元機能において有益であることが示されている。例えば、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２に対する中和抗体は、ラットにおいて単球およびマクロファージの数を減少させ、ならびに皮膚フィブロネクチンおよびコラーゲン沈着を減少させることにより、瘢痕形成を減少させ、新真皮の細胞構築を改善させた(Shah M., J. Cell. Sci., 1995,108, 985-1002)。更に、ＴＧＦ−β抗体は、また、ウサギの角膜損傷の治癒を改善し(Moller-Pedersen T., Curr. Eye Res., 1998, 17, 736-747)、そしてラットの胃潰瘍の創傷治癒を加速する(Ernst H., Gut, 1996, 39, 172-175)。こうしたデータは、ＴＧＦ−βの活性の制限が多数の組織で有益であることを強力に示唆し、そしてＴＧＦ−βの慢性的増加を伴うすべての疾患が、ｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３シグナル伝達経路を阻害することにより利益を得るであろうことを示唆する。
【００５２】
ＴＧＦ−βは、また、腹膜癒着と関連している(Sand G.M., et al, Wound Repair Regeneration, 1999 Nov-Dec, 7(6), 504-510)。従って、ＡＬＫ５の阻害剤は外科手術後の腹膜および皮下線維症性癒着の防止に有益である。
【００５３】
ＴＧＦ−βは、また、皮膚の光老化にも関連している(Fisher GJ. Kang SW. Varani J. Bata-Csorgo Z. Wan YS. Data S. Voorhees J J., Mechanisms of photoaging and chronological skin ageing, Archives of Dermatology, 138(11):1462- 1470, 2002 Nov. および Schwartz E. Sapadin AN. Kligman LH. “UItraviolet B radiation increases steady state mRNA levels for cytokines および integrins in hairless mouse skin- modulation by 25 topical tretinoin”, Archives of Dermatological Research, 290(3):137-144, 1998 Mar. 参照)。
【００５４】
ＴＧＦ−βシグナル伝達は、また、肺障害、特に肺高血圧および肺線維症の発症にも関連している(Morrell NW, Yang X, Upton PD, Jourdan KB, Morgan N, Sheares KK, Trembath RC., Altered growth responses of pulmonary artery smooth muscle cells from patients with primary pulmonary hypertension to transforming growth factor-beta(1) and bone morphogenetic proteins. Circulation. 2001 Aug 14;104(7):790-5。Bhatt N, Baran CP, Allen J, Magro C, Marsh CB., Promising pharmacologic innovations in treating pulmonary fibrosis. Curr Opin Pharmacol. 2006 Apr 28、参照)。
【００５５】
ＴＧＦ−β１レベルは、肺高血圧の動物モデルで増加している(Mata-Greenwood E, Meyrick B, Steinhorn RH, Fineman JR, Black SM. Alterations in TGF-beta1 expression in lambs with increased pulmonary blood flow and pulmonary hypertension. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2003 Jul; 285(1):L209-21)。他の研究では、肺内皮細胞由来ＴＧＦ−β１が、肺高血圧を伴う個体の肺血管系で観察される筋肉形成(muscularisation)の増加の基礎となりうる、肺血管平滑筋細胞の増殖を刺激できることが示唆されている(Sakao S, Taraseviciene-Stewart L, Wood K, Cool CD, Norbert VF. Apoptosis of pulmonary microvascular endothelial cells stimulates vascular smooth muscle cell growth. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2006 Apr 14)。それ故、ＡＬＫ５におけるＴＧＦ−β１の作用の阻害は、肺高血圧における治療的介入として指示される。
【００５６】
更に、脱制御ＴＧＦ−βシグナル伝達は、また、特発性肺線維症の発症にも関連している。ＡＬＫ５の活性化は、Ｓｍａｄ３活性化ならびに線維形成過程に関連する、例えば、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１、プロコラーゲン３Ａ１および結合組織成長因子の遺伝子発現の下流調節をもたらす。ＴＧＦ−β１およびその下流の前線維性メディエーターのレベルは、気管支肺胞洗浄で特発性肺線維症を有する患者(Hiwatari (Hiwatari N, Shimura S, Yamauchi K, Nara M, Hida W, Shirato K, Significance of elevated procollagen-III-peptide and transforming growth factor-beta levels of bronchoalveolar lavage fluids from idiopathic pulmonary fibrosis patients, Tohoku J. Exp. Med. 1997 Feb; 181(2): 285-95)および特発性肺線維症の動物モデル(Westergren-Thorsson G, Hernnas J, Sarnstrand B, Oldberg A, Heinegard D, Malmstrom, Altered expression of small proteoglycans, collagen, and transforming growth factor-beta 1 in developing bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats, J. Clin. Invest. 1993 Aug;92(2):632-7)から採取したものにおいて、上方制御されていることが証明されている。
【００５７】
アデノウイルスベクター介在遺伝子導入を使用するマウス肺における活性ＴＧＦ−β１の一過性過剰発現は、野生型マウスでは進行性肺線維症となり、一方、ＴＧＦ−β１チャレンジ後２８日間までＳｍａｄ３ノックアウトマウスの肺で線維症は見られなかった(Khalil N, Parekh TV, O'Connor RN, Gold LI. Differential expression of transforming growth factor-beta type I and II receptors by pulmonary cells in bleomycin-induced lung injury: correlation with repair and fibrosis, Exp. Lung. Res. 2002 Apr-May; 28(3): 233-50)。従って、ＡＬＫ５のＴＧＦ−β１活性化の阻害は、また、肺線維症に対しても指示される。
【００５８】
アクチビンシグナル伝達およびアクチビンの過剰発現は、細胞外マトリックス蓄積および線維症(例えば、Matsuse, T. et al., Am. J. Respir Cell Mol. Biol. 13:17-24 (1995); Inoue, S. et al., Biochem. Biophys. Res. Comn. 205:441- 448 (1994); Matsuse, T. et al., Am. J. Pathol. 148:707-713 (1996); De Bleser et al., Hepatology 26:905-912 (1997); Pawlowski, J. E., et al., J. Clin. Invest. 100:639-648 (1997); Sugiyama, M. et al., Gastroenterology 114:550-558 (1998); Munz, B. et al., EMBO J. 18:5205-5215 (1999))、炎症応答(例えば、Rosendahl, A. et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25:60-68 (2001)、悪液質または消耗(Matzuk7 M. M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:8817-8821 (1994); Coerver, K. A. et al., Mol. Endocrinol. 10:531 543 (1996); Cipriano, S. C. et al., Endocrinology 141:2319-2327 (2000))、中枢神経系の疾患または病的反応(例えば、Logan, A. et al., Eur. J. Neurosci. 11:2367 - 2374 (1999); Logan, A. et al., Exp. Neurol. 159:504-510 (1999); Masliah, E. et al., Neurochem. Int. 39:393-400 (2001); De Groot, C. J. A. et al., J. Neuropathol. Exp. Neural. 58:174-187 (1999); John, G. R. et al., Nat. Med. 8:1115-1121 (2002))および高血圧(例えば、Dahly, A. J. et al., Am. J. Physiol. Regul.  Integr Comp. Physiol. 283: R757-767 (2002))を含む病的障害と関係している。研究では、ＴＧＦ−βおよびアクチビンが相乗的に作用し、細胞外マトリックス産生を誘導できることが示されている(例えば、Sugiyama, M. et al., Gastroerterology 114; 550-558 (1998))。
【００５９】
それ故、本発明の薬剤によるＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４の、Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３のリン酸化の阻害が、こうしたシグナル経路に関連する障害を処置および予防するために有用であり得ることとなる。
【００６０】
アクチビンシグナル伝達は、また、肺障害、特に肺高血圧および肺線維症の発症に関わる。例えば、間質性肺線維症に罹患した患者に起源する肺サンプル中のアクチビンＡの発現は、化生上皮、増殖性平滑筋細胞、剥離細胞および肺胞マクロファージでアクチビンＡの強い発現を示した。原発性または続発性肺高血圧に罹患している患者に起源する肺動脈は、平滑筋細胞で豊富な免疫反応性アクチビンＡを示した。こうした発見は、間質性肺線維症および肺高血圧に伴う肺組織リモデリングの病因における、この増殖因子であるアクチビンＡの潜在的役割を示唆する(Matsuse T, Ikegami A, Ohga E, Hosoi T, Oka T, Kida K, Fukayama M, Inoue S, Nagase T, Ouchi Y. Expression of immunoreactive activin A タンパク質 in remodelling lesions associated with interstitial pulmonary fibrosis. Am. J. Pathol. 1996 Mar;148(3):707-13)。線維芽細胞および関連結合組織の増殖は肺線維症および肺高血圧の特徴である。アクチビンＡは特に増殖および筋線維芽細胞への分化に対してヒト肺線維芽細胞(ＨＦＬ１)活性を調節することを示し、従って、アクチビンＡは肺線維芽細胞の増殖および筋線維芽細胞への分化の潜在的役割を有し、肺線維症および高血圧で観察される構造リモデリングに貢献し得る(Ohga E, Matsuse T, Teramoto S, Katayama H, Nagase T, Fukuchi Y, Ouchi Y. Effects of activin A on proliferation and differentiation of human lung fibroblasts, Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996 Nov 12;228(2):391-6)。ラットのブレオマイシン投与が介在する肺線維症の誘発は、肺に浸潤したマクロファージでアクチビンＡの上方制御発現をもたらし、線維性領域に蓄積した線維芽細胞中で検出された。アクチビンシグナル伝達のアンタゴニストであるホリスタチンのブレオマイシン処理ラットへの投与は、気管支肺胞洗浄中のマクロファージおよび好中球の数を有意に減少させ、またタンパク質含有量を減少させた。ホリスタチンは、浸潤細胞の数を著しく減少させ、肺構造の破壊を改善し、そして肺線維症を軽減した(Aoki F , Kurabayashi M, Hasegawa Y, Kojima I. Attenuation of bleomycin-induced pulmonary fibrosis by follistatin, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2005 Sep 15 ; 172(6) :713-20)。
【００６１】
それ故、ＡＬＫ４阻害を介するアクチビンシグナル伝達の阻害は、また、肺線維症および肺高血圧の処置に有用であり得る。
【００６２】
最近、エフェクターであるＳｍａｄ３を介するＴＧＦ−βシグナル伝達の減少は、骨マトリックスの機械的特性およびミネラル濃度ならびに骨量を増加させ、骨が骨折に良好に耐えることができることが示されている。こうした結果は、ＴＧＦ−βシグナル伝達の減少が、骨障害を処置するための治療標的として考えられ得ることを示唆する。(Balooch G, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2005 Dec 27; 102(52): 18813-8)。従って、ＡＬＫ５のＴＧＦ−β１活性化阻害は、また、骨のミネラル密度強度および含有量の増加に必要であり、例えば、骨減少症、骨粗鬆症、骨折および低骨ミネラル密度が疾患の顕著な特徴である他の障害を含む広範囲の状態を処置するのに利用することができる。
【００６３】
ＡＬＫ−５および／またはＡＬＫ−４受容体のこうした阻害を参酌すると、本発明の薬剤はＡＬＫ−５および／またはＡＬＫ−４受容体が介在する状態の処置に有用である。本発明による処置は対症的あってもよいしまたは予防的であってもよい。
【００６４】
それ故、更なる局面によれば、本発明は、ＡＬＫ−５阻害またはＡＬＫ−４阻害が介在する疾患または状態を処置または予防するための薬剤の製造における本発明の薬剤の使用を提供する。
【００６５】
ＡＬＫ−５阻害またはＡＬＫ−４阻害が介在する疾患または状態には、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、狼瘡腎炎、高血圧誘発腎症、間質性腎線維症、薬剤暴露の合併症による腎線維症、ＨＩＶ関連腎症、移植腎症、すべての病因による肝線維症、感染による肝機能障害、アルコール誘発肝炎、胆道系の障害、肺線維症、肺高血圧、急性肺損傷、成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、感染または毒物による肺疾患、梗塞後心臓線維症、うっ血性心不全、拡張型心筋症、心筋炎、血管狭窄、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、眼性瘢痕、角膜瘢痕、増殖性硝子体網膜症、外傷または外科創傷による創傷治癒中に起こる皮膚の過剰または肥厚性の瘢痕またはケロイド形成、腹膜および皮下癒着、強皮症、線維化硬化症(fibrosclerosis)、進行性全身性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、関節炎、潰瘍、神経機能障害、男性の勃起機能障害、アルツハイマー病、レイノー症候群、線維性癌、腫瘍転移増殖、放射線誘発線維症、血栓症、および骨減少症および骨粗鬆症のようなカルシウム減少または再吸収の増加に関連して起こるか、または骨形成の刺激および骨におけるカルシウム固定が望ましい骨状態が含まれる。
【００６６】
ＡＬＫ−５阻害が介在する疾患または状態は、特に慢性腎臓疾患、急性腎臓疾患、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓疾患、うっ血性心不全、炎症性または閉塞性気道疾患、肺高血圧、潰瘍(糖尿病性潰瘍、慢性潰瘍、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を含む)、眼疾患、角膜損傷、糖尿病性腎症、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、限定はしないが、腎線維症、肺線維症および肝線維症を含む線維症が主な要素であるすべての疾患、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス(ＨＢＶ)、Ｃ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)、アルコール誘発肝炎、ヘモクロマトーシス、原発性胆汁性肝硬変、再狭窄、後腹膜線維症、腸間膜線維症、子宮内膜症、ケロイド、癌、異常骨機能、炎症障害、瘢痕および皮膚の光老化を含む。
【００６７】
本発明が適用できる炎症性または閉塞性気道疾患は、内因性(非アレルギー性)喘息および外因性(アレルギー性)喘息の両方を含む、いかなるタイプもしくは起源の、喘息をも含む。喘息の処置は、例えば、年齢が４または５歳以下で、喘鳴症候群を示し、そして“喘鳴小児”と診断されるか、または診断できる主要な医学的懸念の確立された患者カテゴリーの、そして、またしばしば、初期のまたは早期の喘息としてみなされる患者の処置を包含すると理解されるべきである(便宜上、この特定の喘息状態は、“喘鳴小児症候群”と呼ぶ)。
【００６８】
喘息の処置における予防効果は、症候発作、例えば、急性喘息または気管支収縮発作の頻度または重症度の減少、肺機能の改善または気道過反応性の改善により証明される。さらに、他の対症療法、すなわち症候発作を、それが起きたとき、制限もしくは中止するための、またはそれを意図した治療、例えば抗炎症剤(例えば、コルチコステロイド)または気管支拡剤の必要性の減少により証明することができる。喘息における予防効果は、特に“モーニングディッピング(morning dipping)”になる傾向の対象において明らかになり得る。“モーニングディッピング”とは、喘息のかなりの割合に共通する、認識された喘息症候群であり、例えばおおよそ午前４−６の時間、すなわち、前に投与された何らかの喘息対症治療から通常相当離れた時間に起こる喘息発作により特徴付けられる。
【００６９】
本発明が適用できる他の炎症性または閉塞性気道疾患および状態は、成人／急性呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、それらと関連する慢性気管支炎もしくは呼吸困難を含む慢性閉塞性肺、または気道疾患(ＣＯＰＤまたはＣＯＡＤ)、気腫、ならびに他の薬剤治療、特に、他の吸入薬剤治療の結果生じる気道過反応性の悪化を含む。本発明はまた、急性、アラキジン性(arachidic)、カタール性、クループ性、慢性もしくは結核様(phthinoid)気管支炎を含む、いかなるタイプもしくは起源であれ、気管支炎の処置に適用できる。さらに本発明が適用できる炎症性または閉塞性気道疾患は、例えば、アルミニウム肺症、炭粉沈着症、石綿肺症、石肺症、羽毛肺症(ptilosis)、鉄沈着症、珪肺症、タバコ症および綿肺症を含む、いかなるタイプもしくは起源であれ、塵肺(しばしば気道の閉塞を伴い、慢性または急性であり、粉塵の繰り返し吸引により起こる、肺の炎症性の、一般に職業的な疾患)を含む。
【００７０】
好ましくは、ＡＬＫ−５阻害またはＡＬＫ−４阻害が介在する疾患または状態は、肺高血圧、肺線維症、肝線維症または骨粗鬆症である。
【００７１】
本発明に従って処置される肺高血圧は、原発性肺高血圧(ＰＰＨ)；続発性肺高血圧(ＳＰＨ)；家族性ＰＰＨ；散発性ＰＰＨ；前毛細管性肺高血圧；肺動脈性(pulmonary arterial)高血圧(ＰＡＨ)；肺動脈(pulmonary artery)高血圧；特発性肺高血圧；血栓性肺動脈症(ＴＰＡ)；多因性肺動脈症；機能クラスＩからIVの肺高血圧；そして、左心室機能障害、僧帽弁膜症、収縮性心内膜炎、大動脈狭窄、心筋症、縦隔線維症、肺静脈還流異常、肺静脈の閉塞性疾患、膠原病性血管疾患、先天性心臓疾患、ＨＩＶウイルス感染、薬剤および毒物、例えば、フェンフルラミン、先天性心臓疾患、肺静脈高血圧、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、睡眠時呼吸障害、肺胞低換気障害、高地への慢性暴露、新生児の肺疾患、肺胞−毛細管異形成、鎌状赤血球症、他の凝血障害、慢性血栓塞栓症、結合組織疾患、狼瘡、住血吸虫症、サルコイドーシスまたは肺毛細血管腫症に付随する、関連するまたは、続発する肺高血圧を含む。
【００７２】
本発明に従って処置される肺高血圧は、さらに特に、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、睡眠時呼吸障害、肺胞低換気障害、高度への慢性暴露、新生児の肺疾患および肺胞−毛細管異形成を含む、呼吸器系の障害を伴う肺高血圧および／または低酸素血症であり、とりわけ慢性閉塞性肺疾患である。
肺線維症には、特に特発性肺線維症が含まれる。
【００７３】
本化合物は、また、筋萎縮症(例えば、廃用性)、筋ジストロフィー(例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型ジストロフィー)、サルコペニアおよび悪液質を含む筋疾患を処置するために使用してもよい。
【００７４】
筋疾患、例えば、筋萎縮およびジストロフィーの処置は、医学的要求が大きく満たされていない。様々な筋障害、主に癌誘発およびＨＩＶ筋萎縮または悪液質の範囲で使用するために認可された化合物はほんのわずかであり、さらに数種の薬剤がこれらの適応症に対して未認可で使用されている。加えて、これらの薬剤の大部分は体重減少にのみ取り組んでおり、特異的に筋肉成長および機能に影響しない。それ故、悪液質(例えば、癌、ＨＩＶおよびＣＯＰＤにおける)、廃用性萎縮、サルコペニアおよびジストロフィーに関連する筋疾患に伴う機能障害を処置するための有効な治療にニーズがある。
【００７５】
形質転換成長因子β(ＴＧＦβ)のファミリーメンバーであるミオスタチンは、骨格筋量の重要な負の調節因子である。骨格筋肥大を有する筋肉二倍牛およびヒトにおいて、ミオスタチン遺伝子の異なる変異が検出された(McPherron et al (1997) Nature 387:83-90; Schuelke et al (2004) N. Engl. J. Med. 350:2682-2688)。骨格筋成長および障害に対するミオスタチンの重要な役割が広範囲なイン・ビボおよびイン・ビトロ試験で確認された。例えば、マウスにおいてミオスタチンの筋肉特異的過剰発現が筋肉量の喪失を引き起こし(Reisz-Porszasz et al (2003) AJP- Endo. 285:876-888)、一方ミオスタチンヌルマウスは骨格筋量が増加し、体脂肪が減少した(Lin et al (2002) Biochem. Biophys. Res. Comm. 291: 701-706)。ミオスタチンの全身投与によると、悪液質を誘発させ(Zimmers et al (2002) Science 296:1486-1488)、一方例えば、ミオスタチン中和抗体ＪＡ１６によるミオスタチンの阻害は、野生型およびジストロフィーｍｄｘマウスにおいて筋肉量および強度が増加する(Bogdanovich et al (2002) Nature 420: 418-421.2002; Wagner et al (2002) Ann. Neurol. 52: 832-836; Wolfman et al (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. 100(26): 15842-15846)。加えて、ミオスタチンレベルの増加は、実験および臨床の両方の筋萎縮、例えば、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、癌または肝硬変症ならびに高齢のサルコペニアに罹患している患者において、グルココルチコイド処置下で観察された(Ma et al (2003) Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 285: E363-371; Gonzales-Cadavid et al (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. 95: 14938-14943; Reisz-Porszasz et al (2003) AJP- Endo. 285:876-888 および Jespersen et al (2006) Scand. J. Med. Sci. Sports. 16: 74-82 も参照)。こうした知見は、ミオスタチン阻害剤が筋萎縮症およびジストロフィーのための処置剤として高い可能性があることを示す。
【００７６】
ミオスタチンの作用方法は、依然としてまだ研究中である。ミオスタチンはＳｍａｄ２／３を介してシグナル伝達することがかなり十分に確立している(Lee S. J. (2004) Ann. Rev. Dev. Biol. 20: 61-86)。その上、成熟ミオスタチンは、脂肪細胞中でアクチビンIIｂ型およびアクチビン受容体様キナーゼ(ＡＬＫ)受容体を介して作用することが示されている(Rebbarpragada et al (2003) Mol. Cell. Biol. 23: 7230-7242)。しかしながら、骨格筋細胞におけるそれぞれの知見について記載はない。ミオスタチンは分化を阻害し、ＡＬＫシグナル伝達を介して萎縮を引き起こすと考えられている。その上、ＡＬＫシグナル伝達の阻害によって、ｓｋＭＣ分化が促進され、そしてｓｋＭＣ肥大が引き起こされる。
【００７７】
骨粗鬆症は、低骨量および骨組織の微細構造の劣化、その結果として生じる骨脆弱性および骨折の危険性の増加により特徴付けられる全身性骨格障害である。骨粗鬆症症候群は、原発性障害、例えば、閉経後または加齢性骨粗鬆症、および疾患状態または薬物療法に伴う続発性状態を含む多面的である。骨量および構造と共に骨マトリックスの機械的特性および組成が、骨が骨折に抵抗することができるかの重大な決定要因である。
【００７８】
従って、更なる局面では、本発明は、カルシウム減少または再吸収の増加に関連した、あるいは骨形成を刺激すること、および骨中のカルシウムを固定することが望ましい、骨状態を防止または処置する方法であって、有効量の本発明の薬剤、またはその薬学的に許容されかつ薬学的に開裂可能なエステル、または酸付加塩を、こうした処置を必要とする患者に投与する方法を含む。
【００７９】
更に別の局面では、本発明は、カルシウム減少のまたは再吸収の増加に関連した、あるいは骨形成を刺激すること、および骨中のカルシウムを固定することが望ましい、骨状態を防止または処置する医薬組成物であって、本発明の薬剤、またはその薬学的に許容されかつ薬学的に開裂可能なエステル、または酸付加塩と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体を混合して含んでなる組成物を含む。
【００８０】
本明細書の下記の実施例の化合物は、一般的に１μM未満のＩＣ５０値を有する。例えば、実施例１.１、１.２、１.３、１.４、１.６、および１.７の化合物は、それぞれ０.０４２、０.０３６、０.００５、０.１５０、０.０１５および０.００５μMのＩＣ５０値を有する。
【００８１】
ＡＬＫ５のキナーゼ活性は、一般的な基質であるカゼインへの放射線標識リン酸(radiolabelled phosphate)[３３Ｐ]の取り込みを測定することにより評価する。ヒトＡＬＫ５のキナーゼドメイン(アミノ酸２００−５０３)をＮ末端ヒスチジンタグに融合させる。ＡＬＫ５のキナーゼ活性は、アミノ酸２０４の点変異(トレオニンからアスパラギン酸へ改変、ＡＬＫ５ Ｔ２０４Ｄ)を介して構成的になっており、該キナーゼ構築物を昆虫細胞中でバキュロウイルス発現構築物から発現されるように設計する。精製した、組み換え発現させたヒスチジンタグ付きＡＬＫ５ Ｔ２０４Ｄタンパク質を、５.４mg／mlで５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８.０、１５０mM ＮａＣｌ、５mM ＤＴＴに溶解させる。ＡＬＫ５ Ｔ２０４Ｄをアッセイバッファー(アッセイバッファー：２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７.４、１０mM ＭｇＣｌ２、２mM ＭｎＣｌ２)に、使用日に２.５μg／mlで溶解させる。
【００８２】
試験化合物および参照化合物を、ＤＴＴを含まない５％(ｖ／ｖ)のＤＭＳＯを含むアッセイバッファーに溶解する。試験および参照化合物のストック溶液を４.５％(ｖ／ｖ)のＤＭＳＯを含むＤＴＴ(１.２５mM)を加えたアッセイバッファーに希釈する。１０μlの試験または参照化合物を９６ウェルＵ底プレートの適切なウェルに加える。全酵素活性をＡＬＫ５ Ｔ２０４Ｄ活性をＡＬＫ５キナーゼ阻害剤参照化合物の非存在下で測定することにより決定する。非特異的結合(ＮＳＢ)をＡＬＫ５ Ｔ２０４Ｄの活性をＡＬＫ５キナーゼ阻害剤参照化合物の存在下で測定することにより決定する。１０μlの脱ホスホリル化カゼイン貯蔵溶液(脱ホスホリル化カゼインを２０mg／mlでｄｄＨ２Ｏに溶解させる)をウェルごとに加える(２００μg／ウェル 最終アッセイ濃度)。２０μlのＡＬＫ５ Ｔ２０４Ｄ(２.５μg／ml 溶液)をウェルごとに加える(５０ng／ウェル 最終アッセイ濃度)。プレートを室温で１０分間インキュベートする。
【００８３】
１０μlのＡＴＰ ミックス(mix)をウェルに加え、反応を開始する(０.６６nMの[３３Ｐ]ＡＴＰ／１μM 非標識ＡＴＰ／ウェル 最終アッセイ濃度)。ＡＴＰ ｍｉｘは下記のとおりに製造する、非標識ＡＴＰ(３mM)をｄｄＨ２Ｏに溶解し、そしてｐＨ７.４に調節する。[３３Ｐ]ＡＴＰの貯蔵濃度は１０μCi／μlである。適切な量の[３３Ｐ]ＡＴＰを、ウェルあたりの最終アッセイ濃度が０.１μCiとなるように、非標識ＡＴＰ溶液に加える。ＡＴＰ ｍｉｘを加え、プレートを室温で５０分間インキュベートする。キナーゼ反応を５０μLの停止バッファー(Stop Buffer)(２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７.４、１０mM ＥＤＴＡ)の添加により終了する。
【００８４】
反応プレートから７５μl／ウェルをMultiscreen-IPプレートに移す。MultiScreen-IPプレートはウェルあたり５０μLの７０％(ｖ／ｖ)エタノールを加え、５分間室温でインキュベートすることにより調製する。このエタノールをMultiScreen HTS Vaccum Manifold装置(Millipore,Cat no: MSVMHT500)を介して吸引により除去する。プレートを２００μl／ウェルのｄｄＨ２Ｏを加えることにより２回洗浄する)。MultiScreen-IPプレートを室温で３０分間インキュベートし、カゼインをプレートに結合させる。MultiScreen-IPプレートを２００μl／ウェルの１００mMのリン酸溶液を加えることにより３回洗浄し、ガスケットをMultiScreen-IPプレートの裏側から注意深く除去し、プレートを３０分間にわたり乾燥させる。MultiScreen-ＩＰプレートをバックシールし(backsealed)、５０μLのMicroscintＴＭ２０を加え、次にプレートをトップシールし(topsealed)、放射線標識カゼインを検出し、３３Ｐシンチレーションプロトコールを使用するTopCountＴＭプレートリーダーで定量する。
【００８５】
本発明の薬剤は、また他の薬物物質、例えば、抗炎症剤、気管支拡張、抗ヒスタミン剤、充血除去剤または鎮咳薬物物質と組み合わせて、特に前記したような閉塞性または炎症性気道疾患の処置において、例えば、こうした薬物の治療効果の増強剤として、またはこうした薬物の必要用量もしくは潜在的副作用を減少する手段として、使用するための共治療剤として有用である。本発明の薬剤は、１種以上の他の薬物物質と固定医薬製剤として混合されていてよく、あるいは、他の薬物物質の前に、他の薬物物質と同時にまたは後に、別々に投与してもよい。
【００８６】
こうした抗炎症剤は、ステロイド、特にグルココルチコステロイド、例えば、ブデソニド、ジプロピオン酸ベクラメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、シクレソニドまたはフロン酸モメタゾン、またはＷＯ ０２／８８１６７、ＷＯ ０２／１２２６６、ＷＯ ０２／１００８７９、ＷＯ ０２／００６７９[Novartis](とりわけ実施例３、１１、１４、１７、１９、２６、３４、３７、３９、５１、６０、６７、７２、７３、９０、９９および１０１のもの)、ＷＯ ０３／３５６６８、ＷＯ ０３／４８１８１、ＷＯ ０３／６２２５９、ＷＯ ０３／６４４４５、ＷＯ ０３／７２５９２、ＷＯ ０４／３９８２７およびＷＯ ０４／６６９２０に記載されているステロイド；非ステロイドのグルココルチコイド受容体アゴニスト、例えば、ＤＥ １０２６１８７４、ＷＯ ００／００５３１、ＷＯ ０２／１０１４３、ＷＯ ０３／８２２８０、ＷＯ ０３／８２７８７、ＷＯ ０３／８６２９４、ＷＯ ０３／１０４１９５、ＷＯ ０３／１０１９３２、ＷＯ ０４／０５２２９、ＷＯ ０４／１８４２９、ＷＯ ０４／１９９３５、ＷＯ ０４／２６２４８およびＷＯ ０５／０５４５２に記載されているもの；ＬＴＢ４アンタゴニスト、例えば、ＢＩＩＬ２８４、ＣＰ−１９５５４３、ＤＰＣ１１８７０、ＬＴＢ４エタノールアミド、ＬＹ２９３１１１、ＬＹ２５５２８３、ＣＧＳ０２５０１９Ｃ、ＣＰ−１９５５４３、ＯＮＯ−４０５７、ＳＢ２０９２４７、ＳＣ−５３２２８、および、ＵＳ ５４５１７００およびＷＯ ０４／１０８７２０に記載されているもの；ＬＴＤ４アンタゴニスト、例えば、モンテルカスト、プランルルカスト、ザフィルカスト、アコレート、ＳＲ２６４０、Ｗｙ−４８,２５２、ＩＣＩ １９８６１５、ＭＫ−５７１、ＬＹ−１７１８８３、Ｒｏ２４−５９１３およびＬ−６４８０５１；ドーパミン受容体アゴニスト、例えば、カベルゴリン、ブロモクリプチン、ロピニロールおよび４−ヒドロキシ−７−[２−[[２−[[３−(２−フェニルエトキシ)−プロピル]スルホニル]エチル]アミノ]エチル]−２(３Ｈ)−ベンゾチアゾロンおよびそれらの薬学的に許容される塩(Viozan(登録商標)−AstraZenecaの塩酸塩)；ＰＤＥ４阻害剤、例えば、シロミラスト(Ariflo(登録商標) GlaxoSmithKline)、ロフルミラスト(Byk Gulden)、Ｖ−１１２９４Ａ(Napp)、ＢＡＹ１９−８００４(Bayer)、ＳＣＨ−３５１５９１(Schering-Plough)、アロフィリン(Almirall Prodesfarma)、ＰＤ１８９６５９／ＰＤ１６８７８７(Parke-Davis)、ＡＷＤ−１２−２８１(Asta Medica)、ＣＤＣ−８０１(Celgene)、ＳｅｌＣＩＤ(ＴＭ)ＣＣ−１０００４(Celgene)、ＶＭ５５４／ＵＭ５６５(Vernalis)、Ｔ−４４０(田辺)、ＫＷ−４４９０(協和発酵工業)、ＧＲＣ３８８６(Oglemilast、Glenmark)、ＷＯ ９２／１９５９４、ＷＯ ９３／１９７４９、ＷＯ ９３／１９７５０、ＷＯ ９３／１９７５１、ＷＯ ９９／１６７６６、ＷＯ ０１／１３９５３、ＷＯ ０３／１０４２０４、ＷＯ ０３／１０４２０５、ＷＯ ０４／０００８１４、ＷＯ ０４／０００８３９およびＷＯ ０４／００５２５８(Merck)、ＷＯ ０４０１８４５０、ＷＯ ０４／０１８４５１、ＷＯ ０４／０１８４５７、ＷＯ ０４／０１８４６５、ＷＯ ０４／０１８４３１、ＷＯ ０４／０１８４４９、ＷＯ ０４／０１８４５０、ＷＯ ０４／０１８４５１、ＷＯ０４／０１８４５��、ＷＯ ０４／０１８４６５、ＷＯ ０４／０１９９４４、ＷＯ ０４／０１９９４５、ＷＯ ０４／０４５６０７、ＷＯ ０４／０３７８０５、ＷＯ ０４／０６３１９７、ＷＯ ０４／１０３９９８、ＷＯ ０４／１１１０４４、ＷＯ ０５０１２２５２、ＷＯ ０５０１２２５３、ＷＯ ０５／０１３９９５、ＷＯ ０５／０３０２１２、ＷＯ ０５／０３０７２５、ＷＯ ０５／０８７７４４、ＷＯ ０５／０８７７４５、ＷＯ ０５／０８７７４９およびＷＯ ０５／０９０３４５ならびにＷＯ ９８／１８７９６およびＷＯ ０３／３９５４４に記載されているもの；Ａ２ａアゴニスト、例えば、ＥＰ ４０９５９５Ａ２、ＥＰ １０５２２６４、ＥＰ １２４１１７６、ＷＯ ９４／１７０９０、ＷＯ ９６／０２５４３、ＷＯ ９６／０２５５３、ＷＯ ９８／２８３１９、ＷＯ ９９／２４４４９、ＷＯ ９９／２４４５０、ＷＯ ９９／２４４５１、ＷＯ ９９／３８８７７、ＷＯ ９９／４１２６７、ＷＯ ９９／６７２６３、ＷＯ ９９／６７２６４、ＷＯ ９９／６７２６５、ＷＯ ９９／６７２６６、ＷＯ ００／２３４５７、ＷＯ ００／７７０１８、ＷＯ ００／７８７７４、ＷＯ ０１／２３３９９、ＷＯ ０１／２７１３０、ＷＯ ０１／２７１３１、ＷＯ ０１／６０８３５、ＷＯ ０１／９４３６８、ＷＯ ０２／００６７６、ＷＯ ０２／２２６３０、ＷＯ ０２／９６４６２、ＷＯ ０３／０８６４０８、ＷＯ ０４／０３９７６２、ＷＯ ０４／０３９７６６、ＷＯ ０４／０４５６１８およびＷＯ ０４／０４６０８３に記載されているもの；およびＡ２ｂアンタゴニスト、例えば、ＷＯ ０２／４２２９８およびＷＯ ０３／０４２２１４に記載されているものを含む。
【００８７】
このような気管支拡張剤は、β−２−アドレナリン受容体アゴニストを含む。適切なβ−２−アドレナリン受容体アゴニストは、アルブテロール(サルブタモール)、メタプロテレノール、テルブタリン、サルメテロール、フェノテロール、プロカテロール、および、とりわけ、フォルモテロール、カルモテロール、ＧＳＫ１５９７９７およびそれらの薬学的に許容される塩、およびＷＯ ００／７５１１４(この文献は、引用によって本明細書に組み込まれる)の式Ｉの化合物(遊離または塩または溶媒和物形態)、好ましくはその実施例の化合物、とりわけ式：
【化２０】
2010508315.tif 000022
の化合物およびその薬学的に許容される塩、ならびにＷＯ ０４／１６６０１の式ＩまたはＷＯ ０４／０８７１４２の式Ｉの化合物(遊離または塩または溶媒和物形態)を含む。更に、適切なβ−２−アドレナリン受容体アゴニストは、ＥＰ １４７７１９、ＥＰ １４４０９６６、ＥＰ １４６００６４、ＥＰ １４７７１６７、ＥＰ １５７４５０１、ＪＰ ０５０２５０４５、ＪＰ ２００５１８７３５７、ＵＳ ２００２／００５５６５１、ＵＳ ２００４／０２４２６２２、ＵＳ ２００４／０２２９９０４、ＵＳ ２００５／０１３３４１７、ＵＳ ２００５／５１５９４４８、ＵＳ ２００５／５１５９４４８、ＵＳ ２００５／１７１１４７、ＵＳ ２００５／１８２０９１、ＵＳ ２００５／１８２０９２、ＵＳ ２００５／２０９２２７、ＵＳ ２００５／２５６１１５、ＵＳ ２００５／２７７６３２、ＵＳ ２００５／２７２７６９、ＵＳ ２００５／２３９７７８、ＵＳ ２００５／２１５５４２、ＵＳ ２００５／２１５５９０、ＵＳ ２００６／１９９９１、ＵＳ ２００６／５８５３０、ＷＯ ９３／１８００７、ＷＯ ９９／６４０３５、ＷＯ ０１／４２１９３、ＷＯ ０１／８３４６２、ＷＯ ０２／６６４２２、ＷＯ ０２／７０４９０、ＷＯ ０２／７６９３３、ＷＯ ０３／２４４３９、ＷＯ ０３／４２１６０、ＷＯ ０３／４２１６４、ＷＯ ０３／７２５３９、ＷＯ ０３／９１２０４、ＷＯ ０３／９９７６４、ＷＯ ０４／１６５７８、ＷＯ ０４／２２５４７、ＷＯ ０４／３２９２１、ＷＯ ０４／３３４１２、ＷＯ ０４／３７７６８、ＷＯ ０４／３７７７３、ＷＯ ０４／３７８０７、ＷＯ ０４／３９７６２、ＷＯ ０４／３９７６６、ＷＯ ０４／４５６１８、ＷＯ ０４／４６０８３、ＷＯ ０４／８０９６４、ＷＯ ０４／０８７１４２、ＷＯ ０４／８９８９２、ＷＯ ０４／１０８６７５、ＷＯ ０４／１０８６７６、ＷＯ ０５／３３１２１、ＷＯ ０５／４０１０３、ＷＯ ０５／４４７８７、ＷＯ ０５／５８８６７、ＷＯ ０５／６５６５０、ＷＯ ０５／６６１４０、ＷＯ ０５／７０９０８、ＷＯ ０５／７４９２４、ＷＯ ０５／７７３６１、ＷＯ ０５／９０２８８、ＷＯ ０５／９２８６０、ＷＯ ０５／９２８８７、ＷＯ ０５／９０２８７、ＷＯ ０５／９５３２８、ＷＯ ０５／１０２３５０、ＷＯ ０６／５６４７１、ＷＯ ０６／７４８９７またはＷＯ ０６／８１７３に記載されているもの、およびまたその化合物のような化合物を含む。
【００８８】
こうした気管支拡張剤は、また、他の抗コリン剤または抗ムスカリン性薬剤、特にイプラトロピウムブロマイド、オキシトロピウムブロマイド、チオトロピウム塩、グリコピロレート、ＣＨＦ４２２６(Chiesi)およびＳＶＴ−４０７７６、ならびに、ＥＰ４２４０２１、ＵＳ３７１４３５７、ＵＳ５１７１７４４、ＵＳ２００５／１７１１４７、ＵＳ２００５／１８２０９１、ＷＯ ０１／０４１１８、ＷＯ ０２／００６５２、ＷＯ ０２／５１８４１、ＷＯ ０２／５３５６４、ＷＯ ０３／００８４０、ＷＯ ０３／３３４９５、ＷＯ ０３／５３９６６、ＷＯ ０３／８７０９４、ＷＯ ０４／１８４２２、ＷＯ ０４／０５２８５、ＷＯ ０４／９６８００、ＷＯ ０５／７７３６１およびＷＯ ０６／４８２２５に記載されているものを含む。
【００８９】
適切なデュアル抗炎症および気管支拡張剤は、デュアルβ−２アドレナリン受容体アゴニスト／ムスカリンアンタゴニスト、例えば、ＵＳ ２００４／０１６７１６７、ＵＳ ２００４／０２４２６２２、ＵＳ ２００５／１８２０９２、ＵＳ ２００５／２５６１１４、ＵＳ ２００６／３５９３３、ＷＯ ０４／７４２４６、ＷＯ ０４／７４８１２、Ｗ０４／８９８９２およびＷＯ ０６／２３４７５に開示されているものを含む。
【００９０】
適切な抗ヒスタミン薬物物質は、塩酸セチリジン、レボセチリジン、アセトアミノフェン、フマル酸クレマスチン、プロメタジン、ロラチジン、デスロラチジン、ジフェンヒドラミンおよび塩酸フェキソフェナジン、アクリバスチン(activastine)、アステミゾール、アゼラスチン、ジメチンデン、エバスチン、エピナスチン、レボカバスチン、ミゾラスチン、およびテルフェナジン(terfenadine)ならびにＷＯ ０３／０９９８０７ＷＯ ０４／０２６８４１およびＪＰ ２００４１０７２９９に開示されているものを含む。
【００９１】
本発明の更なる態様によっては、本発明の薬剤は、補助剤または他の治療のアジュバントとして、例えば、骨吸収阻害剤を使用する治療、例えば、骨粗鬆症治療として、特にカルシウム、エルカトニン(ealeitonin)またはそれらの類似体もしくは誘導体、例えば、サケ、ウナギまたはヒトカルシトニン、ステロイドホルモン、例えば、エストロゲン、部分的エストロゲンアゴニストまたはエストロゲン−ゲスターゲン組合せ剤、ＳＥＲＭ(選択的エストロゲン受容体モジュレーター)、例えば、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、ＴＳＥ−４２４、ＦＣ１２７１、チボロン(Livial A)、ビタミンＤまたはそれらの類似体またはＰＴＨ、ＰＴＨ断片またはＰＴＨ誘導体、例えば、ＰＴＨ(１−８４)、ＰＴＨ(１−３４)、ＰＴＨ(１−３６)、ＰＴＨ(１−３８)、ＰＴＨ(１−３１)ＮＨ２またはＰＴＳ８９３を使用する治療に使用してもよい。
【００９２】
前述に従って、本発明は、また、閉塞性または炎症性気道疾患の処置法であって、それを必要とする対象、特にヒト対象に、本発明の薬剤またはその薬学的に許容される塩またはその溶媒和物を投与することを含んでなる方法を提供する。別の局面においては、本発明は、閉塞性または炎症性気道疾患の処置用薬剤の製造における使用のための、上記に述べられている本発明の薬剤またはその薬学的に許容される塩またはその溶媒和物を提供する。
【００９３】
本発明の薬剤は、任意の適切な経路で、例えば、経口で、例えば、錠剤またはカプセルの形で；非経腸的に、例えば、静脈内に；例えば、乾癬の処置で皮膚に局所的に；例えば、枯草熱の処置で経鼻で；または、好ましくは、閉塞性または炎症性気道疾患の処置で吸入により投与してもよい。特に、本発明の薬剤は、ＣＯＰＤおよび喘息の処置のために吸入可能製剤として提供されてもよい。
【００９４】
更なる局面において、本発明はまた、遊離形または薬学的に許容される塩形または溶媒和物形の本発明の薬剤を、所望により、その薬学的に許容される希釈剤または担体と一緒に含んでなる医薬組成物を提供する。このような組成物は従来用いられている希釈剤または賦形剤およびガレヌス分野で公知の技術を使用して製造され得る。従って、経口投与形態は、錠剤およびカプセルを含んでもよい。局所投与用製剤は、クリーム、軟膏、ゲルまたは経皮送達システム、例えば、パッチの形であってもよい。吸入用組成物は、エアロゾルもしくは他の噴霧可能製剤または乾燥粉末製剤を含んでもよい。
【００９５】
活性成分の吸入可能形がエアロゾル組成物であるとき、吸入デバイスは計量、例えば、１０〜１００μl、例えば、２５〜５０μlの組成物を送達するように適応させたバルブを備えたエアロゾルバイアル、すなわち計量吸入器として知られているデバイスであってもよい。適切なこのようなエアロゾルバイアルおよびエアロゾル組成物をその中に圧力下で入れる方法は吸入治療の本技術分野の当業者によく知られている。例えば、エアロゾル組成物は、例えば、ＥＰ−Ａ−０６４２９９２に記載されている被覆された缶から投与してもよい。活性成分の吸入可能な形態が噴霧可能水性、有機性または水性／有機性分散体であるとき、吸入デバイスは公知の噴霧器、例えば、１〜５０ml、一般に１〜１０mlの分散体を含んでもよい、例えば、慣用の含気性噴霧器、例えば、エアージェット噴霧器、または超音波噴霧器；または慣用の噴霧器よりも非常に少量の噴霧量、例えば、１０〜１００μlを可能とする、ソフト・ミストまたはソフト・スプレー吸入器として呼ばれることもある携帯型噴霧器、例えば、電子的に制御されたデバイス、例えば、AERx(Aradigm、ＵＳ)またはAerodose(Aerogen)、または機械デバイス、例えば、RESPIMAT(Boehringer Ingelheim)噴霧器であってよい。活性成分の吸入可能形態が微粉砕された粒子状形であるとき、吸入デバイスは、例えば、投与単位の(Ａ)および／または(Ｂ)を含む乾燥粉末を含むカプセルまたはブリスターから乾燥粉末を送達するために適用される乾燥粉末吸入デバイス、または例えば、作動あたり投与単位の(Ａ)および／または(Ｂ)を含む３−２５mgの乾燥粉末を送達するように適応されている複数投与用の乾燥粉末吸入(ＭＤＰＩ)デバイスであってもよい。乾燥粉末組成物は好ましくは希釈剤または担体、例えば、ラクトース、および水分による生成物の性能低下に対する保護に役立つ化合物、例えば、ステアリン酸マグネシウムを含む。適切なこのような乾燥粉末吸入デバイスは、ＵＳ ３９９１７６１(AEROLIZERＴＭデバイスを含む)、ＷＯ ０５／１１３０４２、ＷＯ ９７／２０５８９(CERTIHALERＴＭデバイスを含む)、ＷＯ ９７／３０７４３(TWISTHALERＴＭデバイスを含む)およびＷＯ ０５／３７３５３(GYROHALERＴＭデバイスを含む)に開示されているデバイスを含む。
【００９６】
本発明は、また(Ａ)吸入可能な形態の遊離形態の本発明の薬剤、またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物；(Ｂ)こうした吸入可能な形態の化合物を、吸入可能な形態の薬学的に許容される担体と共に含んでなる吸入可能な形態の薬物；(Ｃ)こうした吸入可能な形態の化合物を、吸入デバイスと組み合わせて含んでなる医薬生成物；および(Ｄ)吸入可能な形態のこうした化合物を含む吸入デバイスを含む。
【００９７】
本発明を実施する際に使用される本発明の薬剤の投与量は、もちろん、例えば、処置される特定の状態、所望の効果および投与形式に依存して変化する。一般に、吸入による投与の適切な１日用量は、患者あたり０.０００１〜３０mg／kg、一般に０.０１〜１０mgであり、一方、経口投与の適切な１日用量は、０.０１〜１００mg／kgである。
【００９８】
まったく予測できないことに、また式ＩａおよびＩｂの化合物が、有利な薬理学的特性を有し、そしてチロシンキナーゼの活性を阻害することも見出した。
【００９９】
様々な受容体チロシンキナーゼ阻害剤が、癌の処置に有用であることは、十分に確立されているが、しかしながら、どんな特定の化合物が、どんな特定のタイプの癌の処置にどんな特定のチロシンキナーゼ受容体で適合するかは明らかではない。ＴＲＫ受容体(ＮＴＲＫ遺伝子)は、受容体またはそのリガンド(ニューロトロフィン ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、またはＮＴ３／４)の量の増加を介して癌の発症および進行と相関関係にある。ＴＲＫの高発現が、ウイルムス腫瘍、前立腺癌および膵臓癌に見出される。ＴＲＫＣの高発現は、癌の顕著な特徴である。神経芽細胞腫では、高ＴＲＫＢ発現は、侵攻的な治療不可能な腫瘍に関連があり、そして標準的な細胞障害性療法に対する抵抗力を示すことに関連がある。癌転移のマウスモデルにおいて、ＮＴＲＫ２遺伝子(ＴＲＫＢタンパク質)は、転移を誘発し、そしてこの遺伝子を取り除くと、転移の可能性を戻す。証拠の大部分が、ＴＲＫ酵素を阻害すると、ＴＲＫが関連している様々な癌の増殖および広がりを阻止するであろうことを示唆している。更に、ＴＲＫの活性化変異は、７％の癌に存在する。従って、ＴＲＫの阻害剤である本発明の化合物は、癌、特に上記に言及されている特定の癌の処置に有用である。
【０１００】
更なる研究により、受容体の酵素活性の部分的喪失につながるヒトのＴＲＫＢにおける変異が発見された。この遺伝子障害は、食欲の増加および肥満(過食肥満)をもたらす。同様な結果は、マウスモデルで得られ、従って、ＴＲＫＢ活性を低下させると、摂食行動を調節するのに役立ち、そして、拒食症のような障害の処置に有用であろうという仮説を強化する。
【０１０１】
まったく意外なことに、また式ＩａおよびＩｂの化合物は、急性リンパ系癌およびグリア芽腫に対する癌療法の有用な標的でもあるＦＬＴ−３およびＲＯＳを阻害するということが見出された。
【０１０２】
いくつかの証拠によれば、ＮＴＲＫ１(ＴｒｋＡ)とその密接に関連しているファミリーメンバーＮＴＲＫ２(ＴｒｋＢ)およびＮＴＲＫ３(ＴｒｋＣ)は、おそらく、受容体、そのリガンド(Nerve Growth Factor, Brain Derived Neurotropic Factor, Neurotrophins)のいずれか、あるいは両方の上方制御によって、癌の発症および進行に関わっている。従って、本発明の化合物は、癌の発症および／または進行を阻害することによって癌の処置に有用である。
【０１０３】
Ｔｒｋファミリーキナーゼ受容体が腫瘍形成を進展させるメカニズムは、一部しか理解されていない。Ｔｒｋキナーゼ受容体は、腫瘍細胞増殖および生存ならびに分化、遊走および転移を制御することができるということが示されている。最近になって、ＮＴＲＫ２は、アノイキス(細胞のそのマトリックスへの接着喪失によって誘発されるアポトーシス)の強力な阻害剤であるということが示されている。ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ／タンパク質キナーゼＢシグナル伝達経路を活性化することによって、ＮＴＲＫ２は、３次元培養において非形質転換上皮細胞の生存を促進し、そして免疫無防備状態のマウスのこうした細胞の腫瘍形成および転移を誘発することが示された。
【０１０４】
いくつかの研究によれば、Ｔｒｋファミリーメンバー、殊に膵臓癌におけるＮＴＲＫ１およびＮＴＲＫ２の役割を示唆している；ｉ)Ｔｒｋファミリーおよびこれらの同族リガンドの高発現が、膵臓癌に罹患している患者からの組織サンプル中に示された。ii)ＮＴＲＫ２過剰発現は、膵臓癌の悪性の、高い転移性の表現型につながりがあることが最近になって示された。(iii)ＮＴＲＫ１／ＮＧＦの高発現は、増殖の増大、浸潤する挙動、および膵臓癌患者における疼痛と相関関係にあった。(iv)神経成長因子は、膵臓癌細胞株の浸潤可能性を増大することが示されている。最近の研究によって、膵臓癌のＴｒｋＡの過剰発現は、ＴｒｋＡのプロモーター領域中の負に制御されたＡＰ−１部位のメチル化によって引き起こされるはずであることが示唆された。
【０１０５】
ＮＴＲＫ１を含む遺伝子再構成は、乳頭様甲状腺癌の一部の顕著な特徴である。甲状腺特異的ＴＲＫ癌遺伝子は、ＮＴＲＫ１遺伝子を、三つの異なった活性遺伝子、すなわち、ＴＰＲ、ＴＰＭ３、およびＴＦＧで再構成することによって発生する。
【０１０６】
ＴｒｋＡ中のいくつかの機能喪失型変異は、疼痛感覚の欠如および無汗によって特徴付けられる障害である先天的無汗無痛症(ＣＩＰＡ)の要因である。より最近になって、アンタゴニストＴｒｋＡ抗体は、炎症性および神経障害性疼痛動物モデルにおいて有効であることが示されている。加えて、ＴｒｋＡおよびＮＧＦは、癌関連疼痛を引き起こすのに関連している。ＮＧＦは、腫瘍細胞によって分泌され、そして腫瘍浸潤マクロファージは、末梢の疼痛線維上に位置しているＴｒｋＡを直接的に刺激するＮＧＦを分泌することが示された。マウスとラットの両方の様々な腫瘍モデルを用いて、ＮＧＦを、モノクローナル抗体を用いて無力化させれば、癌関連疼痛が最大耐量のモルフィンと同様かまたはより優れた程度まで抑制されることが示された。それ故、ＴｒｋＡの選択的阻害剤は、癌に伴う疼痛の処置に使用することができる。
Ｔｒｋ阻害剤の他の非腫瘍適応症には、アトピー性皮膚炎および乾癬が含まれる。
【０１０７】
本発明の化合物は、Ｔｅｌ(ＥＴＶ６)転写因子の二量化ドメインおよび全長のｒＴｒｋＡおよびｍＮＧＦを共発現するＢａ／Ｆ３細胞と融合させることによって、ＢａＦ３細胞と比較して、活性化ＴｒｋＡ、Ｂ、またはＣを発現する親Ｂａ／Ｆ３細胞の細胞増殖を選択的に阻害する能力を測定するためにアッセイする。
【０１０８】
細胞ＴｒｋＡ／Ｂ／Ｃ依存性増殖の阻害
ルシフェラーゼを発現するＢａ／Ｆ３マウス前Ｂ細胞を、Ｔｅｌ−ＴｒｋＡ／Ｂ／ＣまたはＴｒｋＡ／ＮＧＦで形質転換する。細胞は、ペニシリン５０μg／mL、ストレプトマイシン５０μg／mLおよびＬ−グルタミン２００mMを補充したＲＰＭＩ／１０％ウシ胎子血清(ＲＰＭＩ／ＦＣＳ)中で保存する。非形質転換Ｂａ／Ｆ３細胞は、マウス組み換えＩＬ３を加えて、同様に保存する。細胞は、３８４−ウェルプレートフォーマットに、５０μLの培地中、５０００細胞／ウェルで分配する。本発明の化合物を溶解し、そしてジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)中に希釈する。１２点１：３階段希釈をＤＭＳＯ中に行い、一般に１０mM〜０.０５μMの範囲の濃度勾配を作製する。細胞を、５０nLの希釈化合物と共に加え、そして細胞培養インキュベーター中で４８時間インキュベートする。蛍光シグナルを、Bright glo(登録商標)(Promega)ルシフェラーゼ基質を加えた後、測定する。ＩＣ５０値を、１２点の濃度でのそれぞれの化合物の阻害パーセンテージの直線回帰分析によって計算する。
【０１０９】
Upstate KinaseProfilerＴＭ−放射−酵素フィルター結合アッセイ(Radio-enzymatic filter binding assay)
本発明の化合物を、一団のキナーゼの個々のメンバー(一部であり、非制限的なキナーゼリストには、次のものが含まれる：Ａｂｌ、オーロラ、ｃＳｒｃ、ＴＰＲ−Ｍｅｔ、Ｔｉｅ２、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ３、Ａｘｌ、Ｂｍｘ、ＢＴＫ、ｃ−ｋｉｔ、ＣＨＫ２、Ｆｌｔ３、ＭＳＴ２、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＰＤＧＦＲ、ＰＫＢ、ＰＫＣα、Ｒａｆ、ＲＯＣＫ−II、Ｒｓｋ１、ＳＧＫ、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ)を阻害する能力の有無を評価する。化合物は、この一般的なプロトコールに従い、最終濃度１０μMで２回テストされる。このキナーゼバッファー組成物および基質は、“Upstate KinaseProfilerＴＭ”パネル中に含まれている異なるキナーゼに対して変わる。化合物は、この一般的なプロトコールの後、最終濃度１０μMで２回テストされる。キナーゼバッファー(２.５μL、１０×(必要に応じてＭｎＣｌ２を含む))、活性キナーゼ(０.００１−０.０１ Units；２.５μL)、キナーゼバッファー中の、特異的またはポリ(Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ)ペプチド(５−５００μMまたは.０１mg／ml)およびキナーゼバッファー(５０μM；５μL)を、氷上でエッペンドルフ中で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰｍｉｘ(１０μL；６７.５(または３３.７５)mMＭｇＣｌ２、４５０(または２２５)μ ＭＡＴＰおよび１μCi／μl[γ−３２Ｐ]−ＡＴＰ(３０００Ci／mmol))を加え、そしてこの反応物を約３０℃で約１０分間インキュベートする。この反応混合物を、２cm×２cmＰ８１(ホスホセルロース、正の電荷を持つペプチド基質のため)またはＷｈａｔｍａｎ Ｎｏ.１(ポリ(Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ)ペプチド基質のため)ペーパースクエアにスポット(２０μL)する。このアッセイ・スクエアを、それぞれ５分間、０.７５％リン酸で４回洗浄し、そして５分間アセトンで一度洗浄する。このアッセイ・スクエアを、シンチレーションバイアルに移し、５mlのシンチレーションカクテルを加え、そしてこのペプチド基質に対する３２Ｐ取り込み(cpm)をベックマンシンチレーションカウンターで定量化する。阻害％をそれぞれの反応に対して計算する。
実施例３.１〜３.７の化合物は、例えば、すべてが１μM未満のＩＣ５０を示す。
【０１１０】
まったく意外なことには、また式ＩａおよびＩｂの化合物は、有利な薬理学的特性を有し、そして脂質キナーゼ、例えば、ＰＩ３−キナーゼおよび／またはＰＩ３−キナーゼ関連タンパク質キナーゼファミリーのメンバー(これらは、ＰＩＫＫともよばれ、そしてＤＮＡ−ＰＫ、ＡＴＭ、ＡＴＲ、ｈＳＭＧ−１およびｍＴＯＲを含む)、例えば、ＤＮＡタンパク質キナーゼの活性を阻害し、そして前記キナーゼの活性に依存している疾患または障害を処置するのに用いることができる。
【０１１１】
ホスファチジルイノシトール−３’−ＯＨキナーゼ(ＰＩ３Ｋ)経路は、細胞周期の進行、増殖、運動性、代謝および生存を含む多数の細胞機能にその影響を及ぼす中枢シグナル伝達経路の一つである。受容体チロシンキナーゼが活性化されると、ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール−(４,５)−二リン酸をリン酸化し、その結果膜結合ホスファチジルイノシトール−(３,４,５)−三リン酸に達する。後者は、ホスファチジルイノシトール−(３,４,５)−三リン酸を、キナーゼのプレクステリン相同(ＰＨ)ドメインと結合させることによって、様々なタンパク質キナーゼの細胞質から細胞膜への移転を促進する。ＰＩ３Ｋのキーポイントになる下流の標的であるキナーゼは、ホスホイノシチド−依存性キナーゼ１(ＰＤＫ１)およびＡＫＴ(これは、またタンパク質キナーゼＢとも呼ばれている)を含む。次いでこうしたキナーゼのリン酸化は、ＧＳＫ３、ｍＴＯＲ、ＰＲＡＳ４０、ＦＫＨＤ、ＮＦ−κＢ、ＢＡＤ、カスパーゼ−９などのようなメディエーターを含む、多数の他の経路の活性化または非活性化を可能にする。ＰＩ３Ｋ経路の重要な負のフィードバックメカニズムは、ＰＴＥＮであり、ホスファチジルイノシトール−(３,４,５)−三リン酸の脱リン酸化に触媒作用を及ぼし、ホスファチジルイノシトール−(４,５)−二リン酸をリン酸化するホスファターゼである。すべての固形癌の６０％以上は、ＰＩ３Ｋ経路の構造的活性化を可能にする、ＰＴＥＮが突然変異して不活性な形に至るものである。ほとんどの癌は固形癌であるので、こうした結果は、Ｐ１３Ｋ自体、あるいはＰ１３Ｋ経路中のそれぞれの下流のキナーゼを標的にすれば、多くの癌における異常調節を軽減するか、または消滅しさえし、従って正常な細胞機能および挙動を回復するための見込みのあるアプローチを提供するという証拠を提供している。しかしながら、このことによって、他のメカニズムが、本発明の薬剤のようなＰ１３Ｋ活性を修正する薬剤の有効な効果が要因でありうるということを排除しない。
【０１１２】
遊離または薬学的に許容される塩形態での式ＩａおよびＩｂの化合物は、ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼ酵素に対するそれらの阻害効果を参酌すると、一種以上のＰＩ３キナーゼファミリーメンバー、特にＰＩ３キナーゼ酵素の活性(正常な活性または特に過活性を含む)によって介在される状態、例えば、増殖性、炎症性またはアレルギー性状態、閉塞性気道疾患および／または、移植に関連して一般に起こる状態の処置に有用である。
【０１１３】
本発明に従って、“処置”は、治療的、例えば、対症的であってもよいし、および／または予防的であってもよい。温血相物、特にヒトの処置が好ましい。
【０１１４】
本発明の局面は、良性または悪性腫瘍、脳腫瘍、腎臓癌、肝臓癌、副腎癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、胃腫瘍、卵巣癌、結大腸癌、直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、膣癌または甲状腺癌、肉腫、グリア芽腫、多発性骨髄腫、または胃腸癌、特に、結大腸癌または結腸直腸腺腫または頚頭腫瘍、表皮過剰増殖、乾癬、前立腺肥大、新生組織形成、表皮性状(epithelial character)の新生組織形成、リンパ腫、乳癌または白血病から選択される増殖性疾患の処置における使用またはその使用のための式ＩａまたはＩｂの化合物を提供する。他の疾患には、コーデン症候群、レルミット・デュクロ病(Lhermitte-Dudos disease)およびバナヤン−ゾナナ症候群(Bannayan-Zonana syndrome)、またはＰＩ３Ｋ／ＰＫ３経路が異常に活性化されている疾患が含まれる。
【０１１５】
本発明による化合物は、また炎症性または閉塞性気道(呼吸管)疾患の処置に有益であり、この結果、例えば、組織損傷、気道炎症、気管支過敏症、リモデリングまたは疾患の進行の減少に至る。本発明が適用できる炎症性または閉塞性気道疾患には、内因性(非アレルギー性)喘息および外因性(アレルギー性)喘息の両方を含む、いかなるタイプもしくは起源であれ、喘息が含まれ、例えば、軽度喘息、中度喘息、重度喘息、気管支喘息、運動誘発性喘息、職業性喘息、および細菌感染後に誘発される喘息がある。喘息の処置は、また、主要な医学的懸念の確立された患者カテゴリーであり、現在、しばしば初期のまたは早期の喘息として同定される、喘鳴症状を示し、“喘鳴小児”と診断されるまたは診断可能である対象、例えば、４または５歳以下の対象の処置を包含すると理解されるべきである(便宜上、この特定の喘息状態は、“喘鳴小児症候群”と呼ぶ)。
【０１１６】
喘息の処置における予防有効性は、症候発作、例えば、急性喘息または気管支収縮発作の頻度または重症度の減少、肺機能の改善または気道反応亢進の改善により証明されうる。更に、他の対症療法、すなわち症候発作を、それが起きたとき、制限もしくは中止するための、またはそれを意図した治療、例えば抗炎症剤(例えば、コルチコステロイド)または気管支拡張剤の必要性の減少により証明することができる。喘息における予防利益は、特に“モーニングディッピング(morning dipping)”になる傾向の対象において明らかになり得る。“モーニングディッピング”とは、喘息のかなりの割合に共通する、認識された喘息症候群であり、例えばおおよそ午前４〜６時の間、すなわち、前に投与された何らかの喘息対症治療から通常相当離れた時間に起こる喘息発作により特徴付けられる。
【０１１７】
式ＩａおよびＩｂの化合物は、本発明が適応できる他の炎症性または閉塞性気道疾患および状態に有用であり得、そして慢性気管支炎またはそれに伴う呼吸困難、肺気腫、ならびに他の薬物治療、特に他の吸入薬物治療の結果として起こる気道過敏症の悪化を含むそして急性肺傷害(ＡＬＩ)、成人／急性呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、慢性閉塞性肺、気道または肺疾患(ＣＯＰＤ、ＣＯＡＤまたはＣＯＬＤ)を含む。
【０１１８】
本発明は、また、例えば、急性、アラキジン性(arachidic)、カタール性、クループ性、慢性もしくは結核様(phthinoid)気管支炎を含む、いかなるタイプもしくは起源であれ、気管支炎の処置に適用できる。更に本発明が適用できる炎症性または閉塞性気道疾患は、例えば、アルミニウム肺症、炭粉沈着症、石綿肺症、石肺症、羽毛肺症、鉄沈着症、珪肺症、タバコ症および綿肺症を含む、いかなるタイプもしくは起源であれ、塵肺(しばしば気道の閉塞を伴い、慢性でも、急性でも、そして粉塵の繰り返し吸引により引き起こされる、肺の炎症性の、一般に職業的な疾患)を含む。
【０１１９】
本発明化合物は、抗炎症活性、特に、好酸球活性の阻害に関連して考慮すると、また、気道および／または肺を襲う過好酸球増加症、ならびに例えば、レフラー症候群の結果として起こるか、同時に起こる気道の好酸球関連疾患、好酸球肺炎、寄生虫(特に後生動物)の侵入(熱帯性好酸球増多症を含む)、気管支肺アスペルギルス症、結節性多発動脈炎(チャーグ・ストラウス症候群を含む)、好酸球性肉芽腫、および薬物反応によって引き起こされる気道を冒す好酸球関連疾患を含む、好酸球関連疾患、例えば、好酸球増多症、特に、気道の好酸球関連疾患(例えば、肺組織の病的な好酸球浸潤を含む)の処置に有用である。
【０１２０】
本発明の化合物は、また、皮膚の炎症性またはアレルギー性状態、例えば、乾癬、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、多形滲出性紅斑、ジューリング疱疹状皮膚炎、強皮症、白斑、過敏性血管炎、じんましん、水庖性類天疱瘡、紅斑性狼瘡、天疱瘡、後天性表皮水疱症、および他の皮膚の炎症性またはアレルギー性状態の処置に有用である。
【０１２１】
本発明の化合物は、また、他の疾患または状態の処置のために使用することができ、例えば、炎症性要素を有している疾患または状態、例えば、結膜炎、乾燥性角結膜炎および春季結膜炎のような眼の疾患および状態、アレルギー性鼻炎を含む鼻を襲う疾患、そして自己免疫反応が関連するか、または自己免疫要素または原因を有している炎症性疾患の処置のために使用することができ、これには、自己免疫血液学的疾患(例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球貧血および特発性血小板減少性紫斑病)、全身性エリスマトーデス、多発性軟骨炎、スクレドーマ、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、ステーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫炎症性腸疾患(例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病)、内分泌性眼症状、グレブス病、サルコイドーシス、肺胞炎、慢性過敏性肺臓炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎(前部および後部)、乾燥性核結膜炎、および春季角結膜炎、間質性肺線維症、乾癬性関節炎および糸球体腎炎(ネフローゼ症候群、例えば、特発性ネフローゼ症候群または微小変化型ネフロパシーを伴うかまたは伴わない)が含まれる。
【０１２２】
更に、本発明は、増殖性疾患、炎症性疾患、閉塞性呼吸器疾患、または移植に関連して一般に起こる疾患を処置するための薬剤を製造するための、本明細書中の定義による化合物、またはその薬学的に許容される塩、または水和物もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【０１２３】
本発明は、上記または下記に言及されている疾患であり、その疾患が、ＰＩ３−キナーゼ−関連タンパク質キナーゼファミリーの一種以上のキナーゼ、とりわけＰＩ３キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)の阻害に応答し(有益な方法で、例えば、一種以上の症状を、完全な治癒または寛解まで、一部または完全に取り除くことによって)、殊にキナーゼが、不適切に高い活性を示すか、またはより好ましくは通常の(例えば、構造性の)活性に比較してより高い活性を示す(他の制御メカニズムに関連して)、一種以上の疾患の処置における、特に、式ＩａまたはＩｂの化合物(または、式ＩａまたはＩｂの化合物を含んでなる医薬組成物)の使用に関連する。
【０１２４】
“使用”または“使用される”という用語はどこに言及されていても、これは、温血動物、特にヒトの疾患、好ましくは上記または下記に言及されている一種以上の疾患の予防的および／または治療的処置において使用するための式ＩａまたはＩｂの化合物、式ＩａまたはＩｂの化合物を上記および下記に言及されている疾患の予防的および／または治療的処置に有効な量でこうした処置を必要とするヒトに投与することを含んでなる使用方法または処置方法、そのような処置に直ぐに使用できるようにすること(例えば、添付文書(例えば、パッケージリーフレットなど)、製剤、適当な調製物、特異的使用への適合、カスタマイズなど)を含み、特に式ＩａまたはＩｂの化合物(治療的に活性成分として)を、少なくとも一つの薬学的に許容される担体物質と混和することを含む、上記および下記に言及されている疾患の予防的および治療的処置における使用のための、医薬製剤／調製物の調製または製造方法、およびこうした製剤のための式ＩａまたはＩｂの化合物の使用、および／または上記または下記に言及されている他の予防的または治療的使用のすべてを含んでいることを意図している。こうした局面のすべては、本発明の態様である。
【０１２５】
ＰＩ３キナーゼ阻害剤としての式ＩａまたはＩｂの化合物およびその塩の有効性は、次のように示される：
キナーゼ反応は、ハーフエリアＣＯＳＴＡＲ、９６プレートのウェルあたり最終容量５０μL中で行われる。このアッセイでＡＴＰおよびホスファチジルイノシトールの最終濃度は、それぞれ、５μMおよび６μg／mLである。この反応は、ＰＩ３キナーゼｐ１１０βを添加することによって開始される。このアッセイの構成要素は、ウェルあたり以下のとおりである：
・カラム２−１のウェルあたり５％ＤＭＳＯ中に試験化合物１０μL。
・全活性は、カラム１の最初の４ウェルおよびカラム１２の最後の４ウェル中で、１０μLの５％(vol/vol)ＤＭＳＯを加えることによって決定される。
・バックグラウンド値は、カラム１の最後の４ウェルおよびカラム１２の最初の４ウェルに１０μMの対照化合物を加えることによって決定される。
・２mLの‘アッセイミックス’は、プレートあたり調製される：
１.９１２mLのＨＥＰＥＳアッセイバッファー
ウェルあたり５μMの最終濃度を付与するＡＴＰの３mMストック ８.３３μL
ウェルあたり、０.０５μCiを付与する活性日における１μLの[３３Ｐ]ＡＴＰ
ウェルあたり、６μg／mLの最終濃度を付与する１mg／mL ＰＩストック ３０μL
ウェルあたり、１mMの最終濃度を付与する１Ｍストック ＭｇＣｌ２ ５μL
・２０μLのアッセイミックスがウェルあたり加えられる。
・２mLの‘酵素ミックス’が、プレートあたり調製される(ｘ＊μL ＰＩ３キナーゼ ｐ１１０β(２mLのキナーゼバッファー中))。この‘酵素ミックス’は、アッセイプレートに添加する間、氷上に置いておく。
・２０μLの‘酵素ミックス’を、ウェルあたり加え、反応を開始させる。
・次いでこのプレートを室温で９０分間インキュベートする。
・この反応は、ウェルあたり、５０μLのＷＧＡ−ＳＰＡビーズ(小麦胚芽凝集素被覆シンチレーション近接アッセイプレートビーズ)懸濁液を加えることによって終了する。
・このアッセイプレートを、ポリスチレンマイクロプレート用ＴｏｐＳｅａｌ−Ｓ ヒートシール(PerkinElmer LAS (Deutschland) GmbH, Rodgau, Germany)を用いて密封し、そして室温で少なくとも６０分間インキュベートする。
・次いでこのアッセイプレートを、１５００rpmで２分間、Jouan bench top centrifuge (Jouan Inc., Nantes, France)を用いて遠心分離する。
・このアッセイプレートをPackard TopCountを用いてカウントする。各ウェルは、２０秒間十分にカウントされる。
＊酵素量は、使用するバッチの酵素活性によって左右される。
【０１２６】
化合物のいくつかは、異なったパラログＰＩ３Ｋアルファ、ベータ、ガンマおよびデルタに対して一定のレベルの選択性を示す。
【０１２７】
ＤＮＡ−ＰＫの有無の生物化学的アッセイの説明
このアッセイは、精製酵素調製物および細胞核抽出物中で、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ活性を定量化する、PromegaからのキットＶ７８７０(SignaTECT(登録商標) DNA-Dependent Protein Kinase Syste, comprises DNA-PK, biotinylated peptide substrate end further ingredients, Promega, Madison, Wisconsin, USA)を用いて行われる。ＤＮＡ−ＰＫは、活性のために二本鎖ＤＮＡ(ｄｓＤＮＡ)を必要とする核セリン／トレオニンタンパク質キナーゼである。ｄｓＤＮＡの酵素への結合は、活性な酵素を形成することになり、そしてまた、基質を酵素のより近くに移動し、リン酸化反応を進展させる。
【０１２８】
ＤＮＡ−ＰＫ Ｘ５反応バッファー(２５０mM ＨＥＰＥＳ、５００mM ＫＣｌ、５０mM ＭｇＣｌ２、１mM ＥＧＴＡ、０.５mM ＥＤＴＡ、５mM ＤＴＴ、ｐＨ ＫＯＨを加え７.５に)を、脱イオン水中に１／５希釈し、そしてＢＳＡ(ストック＝１０mg／ml)を加えて、最終濃度０.１mg／mlにする。
【０１２９】
活性化バッファーは、対照バッファー(１０mM トリス−ＨＣｌ(ｐＨ７.４)、１mM ＥＤＴＡ(ｐＨ８.０))中１００μg／mlの子牛胸腺ＤＮＡから作られる。管あたり、この反応ミックスは、次のものによって構成されている：２.５μl活性化または対照バッファー、５μlの×５反応バッファー、２.５μlのｐ５３−由来ビオチン化ペプチド基質(ストック＝４mM)、０.２μlのＢＳＡ(１０mg／mlでストック)および５μlの[γ−３２Ｐ]ＡＴＰ(５μlの０.５mM 冷却ＡＴＰ＋０.０５μlのRedivue[γ−３２Ｐ]ＡＴＰ＝Amersham ＡＡ００６８−２５０μCi、３０００Ci／mmol、１０μCi／μl(現在、GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Sweden)。
【０１３０】
ＤＮＡ−ＰＫ酵素(Promega V5811、濃度＝１００Ｕ／μL)を、Ｘ１反応バッファー中に１／１０希釈し、使用の直前まで氷上に置いておく。１０.８μlの希釈酵素を、１００μM化合物(純ＤＭＳＯ中の１０mMストックから水中に１／１００希釈する)１.２μlと共に、１０分間、室温でインキュベートする。この間、パースペックスガラス越しに、１５.２μlの反応ミックスを、ねじふたをした管に加える。次いで９.８μlの酵素を、反応ミックスを含んでいる管に移し、そして５分間、３０℃でインキュベーションした後、この反応を１２.５μlの終了バッファー(７.５Ｍ グアニジン・塩酸塩)を加えることによって停止させる。
【０１３１】
十分混合した後、各管の１０μl分量を、ＳＡＭ２(登録商標)ビオチン捕捉膜(Promega, Madison, Wisconsin, USA)上にスポットし、これを数分間乾燥させる。次いでこの膜を広範囲に洗浄し、過剰の遊離の[γ−３２Ｐ]ＡＴＰおよび非ビオチン化タンパク質を取り除く：２Ｍ ＮａＣｌ ２００ml中３０秒間で１回、２Ｍ ＮａＣｌ ２００mlで、それぞれ２分間で３回、１％Ｈ３ＰＯ４中の２Ｍ ＮａＣｌ中で、それぞれ２分間で４回、そして脱イオン水１００ml中、それぞれ３０秒間で２回。この膜は、引き続き、室温で３０〜６０分間空気乾燥させる。
【０１３２】
それぞれの膜スクエアを、かん子(forceps)およびはさみを使用して、分離し、そしてシンチレーションバイアル中に置き、その後、８mlのシンチレーション液体(Perkin-ElmerからのFlo-Scint 6013547)を加える。次いでＤＮＡ−ＰＫビオチン化ペプチド基質中に取り込まれた３２Ｐの量を、液体シンチレーションカウンティングによって決定する。
【０１３３】
本発明の化合物のＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ経路の活性を遮断する際の有効性は、次のとおりの細胞設定において証明できる：
【０１３４】
エライザ法によるＵ８７ＭＧ細胞中のｐｈｏｓｐｈｏ−ＰＫＢの検証のためのプロトコール：
Ｕ８７ＭＧ細胞(ヒトグリア芽細胞腫、ＡＴＣＣ Ｎｏ.ＨＴＢ−１４)を、トリプシン処理し、ＣＡＳＹセルカウンター(Schaerffe systems, Goettingen, Germany)でカウントし、ウェルあたり、４×１０４個の細胞を含む１５０μlの細胞懸濁液を充填するために新鮮な完全ＤＭＥＭ高グルコース培地中に希釈し、そして試験プレートを１８時間インキュベートする。並行して、５０μLの被覆抗体が、ＰＢＳ／Ｏ中、所望の濃度で、エライザプレートの各ウェル中に充填されており、そしてプレートを室温で２時間維持する。このエライザアッセイは、プレートシーラー(Costar-Corning, Ref: 3095)で密封されている黒色の平底９６ウェルプレート中で行われる(MicrotestＴＭ, Falcon Becton-Dickinson, Ref: 353941)。プレート中の培地を捨て、そして０.１％ＤＭＳＯか、またはＤＭＳＯ中、１０mM〜０.１５６mMの力価(７)の０.１％阻害剤のどちらかを含んでいる完全ＤＭＥＭ高グルコース培地に置換する。３０分間の接触後、この培地をすばやく吸引によって取り除き、次いでプレートを、氷上に置き、そしてすぐに７０μlの溶解バッファーを用いて細胞溶解する。並行して、被覆抗体(１／２５０ 希釈(ＰＢＳ／Ｏ中)Akt1 C-20, ヤギ, Santa-Cruz-1618, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, California, USA)で調製された９６ウェルプレートを、１分間で３回、０.０５％ツイーン２０および０.１％Top-Block(登録商標)(表面上の非特異的な結合部位をブロックするゼラチン誘導体；Sigma-Aldrich, Fluka, Buchs, Switzerland, Ref.: 37766)を含んでいるＰＢＳ／Ｏで洗浄し、そして残存するタンパク質結合部位を、Top-Block(登録商標)３％を含む２００μLのＰＢＳとの非特異的な相互反応を阻止して、室温で２時間、ブロックする。ウェル内容物を、処理細胞からの５０μLのサンプルで置換し、そしてプレートを、４℃で３時間インキュベートする。このエライザアッセイは、常に、６複製で次の対照群と並行して行われる：Ｕ８７ＭＧ(無処理対照)または溶解バッファーのみ(ＬＢ)。３×１５分間洗浄後、ウェルに、すべて、５０μLの二次抗体(１／２５０ 希釈(３％ top block中) Anti-S473P-PKB, ウサギ, Cell Signaling-9271, Cell Signaling Technologies, Inc., Danvers, Massachusetts, USA))を入れ、そして４℃で１６時間インキュベートする。３回洗浄後、プレートを第三のコンジュゲートした抗体(１／１０００希釈(３％ top block中)抗ウサギ(ＨＲＰ) Jackson Immuno Research 111-035-144)と共に、室温で２時間インキュベートする。最後に、この免疫複合体をＰＢＳ／Ｏ／ツイーン２０／top blockで１５秒間、２回、２００μLの水で１回洗浄し、そして最後に２００μLの水をそれぞれの試験ウェル中に残しておき、その後、暗所で４５分間インキュベーションする。次いでこのプレートを、(SuperSignal(登録商標)ELISA pico Chemiluminescent substrate, Pierce, Ref: 27070, Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, Illinois, USA)を用いてアッセイする。１００μLの基質を加え、そしてプレートを１分間振とうさせる。直ちにこの蛍光をTop-Count NXT(Packard Bioscience)ルミノメーターで読み取る。
【０１３５】
実施例化合物１.５、１.８および１.９は、それぞれ、０.１０６、０.６６６および０.７５３μMのＩＣ５０値を有することが判明した。
【０１３６】
式(I)の化合物のイン・ビボにおける抗腫瘍活性を示すことができる実験もある。
例えば、ヒトグリア芽腫Ｕ８７ＭＧ腫瘍を皮下移植された雌性Harlan(Indianapolis, Indiana, USA)無胸腺ｎｕ／ｎｕマウスが、ＰＩ３キナーゼ阻害剤の抗腫瘍活性を決定するのに使用することができる。０日目に、経口Forene(登録商標)(１−クロロ−２,２,２−トリフルオロエチルジフルオロメチルエーテル、Abbot, Wiesbaden, Germany)のもとで昏睡状態にある動物を用いて、約２５mgの腫瘍断片を、動物の左わき腹の皮膚下に置き、そしてこの小さな切り傷をクリップ縫合して閉じる。腫瘍が、１００ｍｍ３の体積に達した時、このマウスをランダムに６−８匹の群に分け、そして処置を開始する。この処置は、適切なビヒクル中の式(Ｉ)の化合物を規定の投与量で、経口、静脈内または腹腔内投与を毎日１回(またはより少ない頻度で)、２−３週間行う。この腫瘍を、ノギスで１週間に２回測定し、そして腫瘍の体積を計算する。
【０１３７】
細胞株Ｕ８７ＭＧの代わりに、他の細胞株もまた同様な方法で使用することができる。例えば、
・MDA-MB 468乳腺癌細胞株(ATCC No. HTB 132;In Vitro 14, 911-15 [1978]も参照)；
・MDA-MB 231乳癌細胞株(ATCC No. HTB-26;In Vitro 12, 331 [1976]も参照)；
・MDA-MB 453乳癌細胞株(ATCC No.HTB-131)；
・Colo 205結大腸癌細胞株(ATCC No. CCL 222; Cancer Res. 38, 1345-55 [1978]も参照)；
・DU145前立腺癌細胞株DU 145 (ATCC No. HTB 81; Cancer Res. 37, 4049-58 [1978]も参照)；
・PC-3前立腺癌細胞株PC-3(特に好ましい; ATCC No. CRL 1435; Cancer Res. 40, 524-34 [1980]も参照)およびPC-3M前立腺癌細胞株；
・A549ヒト肺腺癌(ATCC No. CCL 185; Int. J. Cancer 17, 62-70 [1976]も参照)；
・NCI-H596細胞株(ATCC No. HTB 178; Science 246, 491-4 [1989]も参照)；
・膵臓癌細胞株SUIT-2(Tomioka et al., Cancer Res. 61, 7518-24 [2001]参照)。
【０１３８】
本発明の化合物は、また、ＪＡＫ−２およびＪＡＫ−３キナーゼを含む、ヤヌスキナーゼのチロシンキナーゼ活性ならびにホスホイノシチド３−キナーゼの脂質キナーゼ活性の阻害剤としても有用である。この結果として、この化合物は、腫瘍疾患、白血病、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、および骨髄様化生を伴う骨髄線維症のような増殖性疾患の治療に有効であり得る。ＪＡＫ−３キナーゼの阻害を介して、本発明の化合物は、また、免疫抑制剤として、例えば、臓器移植拒絶反応、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、皮膚炎、クローン病、Ｉ型糖尿病およびＩ型糖尿病合併症のような疾患の処置のために有用性を有する。
【０１３９】
上記のとおり、本発明の化合物は、単独もしくは一種以上の他の治療剤と組み合わせて投与することができ、可能性のある組み合わせ治療は、固定した組み合わせの形態をとることもあるし、または本発明化合物と一種以上の他の治療薬の投与に時間差を設けるか、またはお互いに独立してか、または固定した組み合わせ物と１種以上の他の治療剤を組み合わせて投与してもよい。
【０１４０】
こうしたヤヌスキナーゼ阻害活性に関連して、更にまたは加えて、式ＩａまたはＩｂの化合物は、特に腫瘍治療のために、化学療法、放射線療法、免疫療法、外科介入、またはこれらの組合せと組み合わせて、投与することができる。上記のとおり、他の処置戦略の状況における補助療法であるので、長期治療も同様に可能である。他の可能性のある処置は、腫瘍退行後の患者の状況を維持するための治療、または更に、例えば、リスクのある患者における化学的予防療法ですらある。
【０１４１】
可能性のある組合せのための治療剤は、特に一種以上の、抗増殖性、細胞増殖抑制性または細胞障害性化合物であり、例えば、一つまたはいくつかの薬剤、ポリアミン生合成阻害剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、特にセリン／トレオニンタンパク質キナーゼ阻害剤、例えば、タンパク質キナーゼＣ、またはチロシンタンパク質キナーゼ、例えば、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ、例えば、イレッサ(登録商標)、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ、例えば、ＰＴＫ７８７またはアバスチン(登録商標)、またはＰＤＥＦ受容体チロシンキナーゼの阻害剤、例えば、ＳＴＩ５７１(グリベック(登録商標))、サイトカイン、負の成長調節因子、例えば、ＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−β、アロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール(フェマーラ(登録商標))またはアナストロゾール、ＳＨ２ドメインのリン酸化たんぱく質との相互作用阻害剤、抗エストロゲン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、イリノテカン、トポイソメラーゼII阻害剤、微小管活性剤、例えば、パクリタキセルまたはエポシロン、アルキル化剤、抗増殖性代謝拮抗剤、例えば、ゲムシタビンまたはカペシタビン、白金化合物、例えば、カルボプラチンまたはシスプラチン、ビスホスホネート、例えば、アレディア(登録商標)またはゾメタ(登録商標)、およびモノクローナル抗体、トラスツズマブのような例えば、ＨＥＲ２に対する抗体を含む群から選択される１種または数種の薬剤であるが、これらに限定されない。
【０１４２】
コード番号、一般名または商標名によって特定化される活性剤の構造は、標準的な一覧概要の現時点で存在している版“メルク・インデックス”から、あるいはデータベース、例えば、Patents International(例えば、IMS World Publications)から取り込むことができる。その対応する内容は、引用によって本明細書に組み込まれる。
【０１４３】
ＪＡＫ／ＴＹＫ−キナーゼファミリープロファイリングアッセイ
本発明の化合物のＪＡＫ／ＴＹＫ−キナーゼ活性阻害剤としての有効性は、次によって示すことができる：
【０１４４】
ＪＡＫ／ＴＹＫ−キナーゼファミリーの四つのキナーゼすべてが、活性のあるキナーゼドメインを含む、精製組み換えＧＳＴ融合タンパク質として使用された。GST-JAK1(866-1154)、GST-JAK3(811-1124)、およびGST-TYK2(888-1187)は発現され、そしてEPK biology unitでアフィニティークロマトグラフィーによって精製された。GST-JAK2(808-1132)は、Invitrogen (Carlsbad, USA, #4288)から購入された。
【０１４５】
このキナーゼアッセイは、LabChip 3000システムを用いる、キャリパー・モビリティ・シフトアッセイに基づく。このテクノロジーは、キャピラリー電気泳動に類似しており、そして基質の荷電誘導分離およびマイクロ流体チップ中の製品を使用する。
【０１４６】
キナーゼ反応のすべては、全反応容量１８μl中、３８４ウェルのマイクロタイタープレート中で行われた。このアッセイプレートは、段落“化合物希釈の調製”のもとに述べられている適切な試験濃度で、ウェルあたり０.１μlの試験化合物を加えて調製された。この反応は、９μlの基質ミックス(ペプチドおよびＡＴＰから構成されている)を９μlのキナーゼ希釈液と混ぜ合わせることによって開始された。この反応液を３０℃で６０分間インキュベートさせて、そして７０μlの停止バッファー(１００mM Ｈｅｐｅｓ、５％ＤＭＳＯ,０.１％コーティング剤、１０mM ＥＤＴＡ,０.０１５％Ｂｒｉｊ３５)を加えることによって停止させた。
【０１４７】
蛍光的に標識された合成ペプチドが反応のすべてに基質として使用された。ＩＲＳ−１の配列から誘導されるペプチド(ＩＲＳ−１ペプチド、FITC-Ahx-KKSRGDYMTMQIG-NH2)が、ＪＡＫ１およびＴＹＫ２の場合に使用され、そしてＪＡＫ２およびＪＡＫ３の場合には、ＪＡＫ３ｔｉｄｅという名前のペプチド(FITC-GGEEEEYFELVKKKK-NH2)が使用された。特定のアッセイ条件が表１に述べられている：
【０１４８】
【表１】
2010508315.tif 000023
【０１４９】
終了した反応液は、キャリパーLabChip 3000リーダーに移し、そしてそれぞれの反応の変換率を、基質／生成物率を決定することにより測定された。
実施例化合物、２.１、２.２、２.３、２.４、２.５、２.６および２.７は、それぞれ、０.０１６、０.００８、０.０１４、０.０２０、０.０２１、０.０１１および０.０１３μMのＪＡＫ２ ＩＣ５０の値を有していることが判明する。
【０１５０】
化合物希釈液の調製
試験化合物を、ＤＭＳＯ(１０mM)に溶解し、そしてそれぞれの化合物のハブによる特有の２Ｄマトリックスチップを持つ１.４mLの平底またはＶ形マトリックス管に移した。これらのチップの番号は、個々の化合物の識別番号に特徴的にリンクさせた。ストック溶液を、すぐに使用しない場合は、−２０℃で保存した。試験手順の場合には、バイアルを解凍し、そしてスキャナーにより同定し、これにより、作業工程を導くワーキングシートを作成する。化合物希釈液は、９６ウェルプレート中で作製された。この形式は、４個の参照化合物を含む最大４０の個々の試験化合物を、８種類の濃度(シングルポイント)でアッセイを可能とした。この希釈プロトコールは、プレ希釈用プレート、マスタープレートおよびアッセイプレートの製造を含んでいた。
【０１５１】
プレ希釈用プレート：９６ポリプロピレンウェルプレートが、プレ希釈用プレートとして使用された。全部で４個のプレ希釈用プレートが用意され、プレートポジションＡ１−Ａ１０にそれぞれ１０種類の試験化合物、Ａ１１に一つの標準化合物、そしてＡ１２に一つのＤＭＳＯ対照を含んでいた。希釈ステップは、すべてHamiltonSTARロボットで行われた。
【０１５２】
マスタープレート：標準化合物および４個の“プレ希釈用プレート”の対照群を含む１００μlの個々の化合物希釈液を、次の濃度を含んでいる３８４“マスタープレート”中に移した：それぞれＤＭＳＯ ９０％中、１’８２０、５６４、１８２、５４.６、１８.２、５.４６、１.８２および０.５４６μM。
【０１５３】
アッセイプレート：次いで同一のアッセイプレートをマスタープレートの化合物希釈液のそれぞれに１００nLを、３８４ウェル“アッセイプレート”中にそれぞれ１００nMずつピペッティングすることによって調製された。次に化合物を、９μlのアッセイ成分と、最終濃度、それぞれ１０、３.０、１.０、０.３、０.１、０.０３、０.０１および０.００３μMを可能にする１：１８１希釈工程に対応する９μLの酵素と混和する。マスタープレートの調製は、Matrix PlateMate Plus robotおよびHummingBird robotによるアッセイプレートの複製によって対処された。
【０１５４】
こうした検討に基づいて、本発明の化合物は、特にタンパク質キナーゼに依存する疾患に対して、特にＪＡＫ／ＴＹＫ キナーゼ活性によって介在される増殖性疾患に対して治療的有効性を示す。
【０１５５】
本発明は、次の実施例によって説明される。
実施例において使用されている略語は、次の意味を有している。
【表２】
2010508315.tif 000024
【表３】
2010508315.tif 000025
【実施例】
【０１５６】
実施例
本発明の実施例は、式IIｂ：
【化２１】
2010508315.tif 000026
(式中、ＱおよびＴは、下記の表１、２および３に示す通りである)の化合物を含む。製造方法を、以下に記載する。
【０１５７】
表１
【表４】
2010508315.tif 000027
【表５】
2010508315.tif 000028
【０１５８】
表２
【表６】
2010508315.tif 000029
【０１５９】
表３
【表７】
2010508315.tif 000030
【０１６０】
ＬＣＭＳは、Agilent 1100 LC systemで記録する：Waters Xterra ＭＳ Ｃ１８ ４.６×１００ ５μM カラム[アセトニトリル中５−９５％１０mM 炭酸水素アンモニウム水溶液で２.５分間にわたり(陰イオンエレクトロスプレーイオン化)溶出するか、あるいは、アセトニトリル中５−９５％水＋０.１％ＴＦＡ(陽イオンエレクトロスプレーイオン化)で溶出する。質量分析は、また、陽／陰イオンスプレーイオン化条件の下で、ＬＣグラジエント溶出を０.１％ギ酸の存在下で５％〜９５％のアセトニトリル−水で行って、得られる。[Ｍ＋Ｈ]＋および[Ｍ−Ｈ]−は、モノアイソトピック質量を意味する。Biotage OptimizerＴＭマイクロウェーブシンセサイザーおよびEmryOptimizerマイクロウェーブオーブンは、提供される標準の構成で使用される。
【０１６１】
中間体および最終化合物の製造
実施例１.１
４−(３−[２,４’]ビピリジニル−４−イル−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール
工程１：６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン
ジメトキシエタン(２００ml)中のブロモアセトアルデヒド(２当量、１０１mmol、１２ｇ)の溶液に、３−アミノ−６−クロロ−ピリダジン(１当量、５１mmol、７ｇ)を室温で加える。この反応を２４時間撹拌する。この粗生成物をろ過によって回収し、そして水(１５ml)に溶解する。次いでこの水溶性溶液を、重炭酸ナトリウムで処理してｐＨ＝８とし、一晩冷却し、その後この生成物、６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジンをろ過によって回収する。
１Ｈ ｎｍｒ(ＭｅＯＤ) 8.15 (1H, s), 8.05 (1H, d, J = 9.58 Hz), 7.80 (1H, s) および7.32 (1H, d, J = 9.58 Hz)。
【０１６２】
工程２：３−ブロモ−６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン
不活性雰囲気下で、酢酸(１０ml)中の６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン(１当量、１７mmol、２.４ｇ)に、臭素(１当量、１７mmol、０.８２ml)を滴下する。室温で４時間撹拌後、この反応混合物をろ過し、真空下で乾燥させて、３−ブロモ−６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジンを得る。
１Ｈ ｎｍｒ(ＭｅＯＤ) 8.42 (1H, d, J = 9.81 Hz), 8.07 (1H, s) および 7.91 (1H, d, J = 9.48 Hz)。
【０１６３】
工程３：４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール
Ｎ−メチル−２−ピロリドン(ＮＭＰ)(２ml)中のトランス−４−アミノシクロヘキサノール(５当量、２.５ｇ、２１.５mmol)およびＮａＨＣＯ３(１当量、３６１mg、４.３mmol)の溶液に、３−ブロモ−６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン(１当量、１.０ｇ、４.３mmol)を加える。この反応物を、１８０℃で４０分間マイクロウェーブ中で加熱する。この混合物を、水(２０ml)で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機部分を塩水で洗浄し、次いで乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、真空下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー(１０％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ)によって精製すると、４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノールを得る。
【０１６４】
工程４：４−[３−(２−クロロ−ピリジル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール
不活性雰囲気下で、ジオキサン(６.０ml)および水(３ml)中の４−(３−ブロモ−イミダゾ{１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)シクロヘキサノール(１当量、８.７mmol、２.７ｇ)、３−クロロピリド−４−イルボロン酸(１.５当量、１３mmol、２.０５ｇ)、Ｎａ２ＣＯ３(２当量、１７.４mmol、１.８４ｇ)の溶液に、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(０.１当量、０.８７mmol、６０９mg)を加える。この反応混合物を、マイクロウェーブ中、８０℃で２時間加熱する。この混合物を、Ｈ２Ｏ(５０ml)で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで抽出する。集めた有機部分を、塩水で洗浄し、次いで乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、そして真空下で濃縮する。この残渣をメタノール中の２−１０％をＥｔＯＡｃ用いて溶出するシリカクロマトグラフィーによって精製して、所望の最終化合物、４−[３−(２−クロロ−ピリジル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノールを得る；[M+H]＋ 345, 347。
【０１６５】
工程５：４−(３−[２,４’]ビピリジニル−４−イル−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール
ジオキサン(１ml)およびＨ２Ｏ(０.３３ml)中の４−[３−(２−クロロ−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]−ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール(１当量、１００mg、０.２９mmol)４−ピリジルボロン酸(１.５当量、０.４３mmol、５４mg)、Ｎａ２ＣＯ３(２当量、０.５８mmol、６２mg)に、不活性雰囲気下で、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)クロリド(０.１当量、０.０２９mmol、２１mg)を加える。この反応物を、マイクロウェーブ中、８０℃で２時間加熱する。この混合物を、Ｈ２Ｏ(５ml)で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機部分を、塩水で洗浄し、次いで乾燥させ(ＭｇＳＯ４)、そして、真空下で濃縮する。この残渣をメタノール中の２０％ＥｔＯＡｃを用いて溶出するシリカクロマトグラフィーにより精製して、最終化合物、４−(３−[２,４’]ビピリジニル−４−イル−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノールを得る；[M+H]＋ 387。
【０１６６】
実施例１.２〜１.４
これらの化合物、すなわち、
４−{３−[２−(５−メチル−チオフェン−２−イル)−ピリジン−４−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ}−シクロヘキサノール(実施例１.２)、
４−[３−(２−フラン−３−イル−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール(実施例１.３)
および
４−{３−[２−(１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−ピリジン−４−イル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ}−シクロヘキサノール(実施例１.４)を、実施例１.１の化合物を製造するのに使用したものに準じる手順を用いて製造する。
【０１６７】
実施例１.５
４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール
４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール(１５０mg；０.４６３mmol)(実施例１.１工程３)を、ＤＭＦ(３ml)中に溶解し、そして室温で[４−(１Ｈ−ピラゾール−１−イル)フェニル]ボロン酸(１３７mg；０.６４９mmol)、炭酸カリウム(１Ｍ溶液(水中)；２.１ml)およびビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)パラジウムジクロリド(１６.６mg；０.０２３mmol)で、アルゴン雰囲気下で処理する。暗黄色反応混合物を、１２０℃で２０分間、EmryOptimizerマイクロウェーブオーブン(３００Ｗ)中で撹拌する。この暗褐色懸濁液から減圧下で溶媒を取り除き、そしてクロマトグラフィー(40g Redisep, ISCO Sg-100；ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ ９５：５で溶出する)、続くＥｔＯＡｃからの再結晶により精製して、表題化合物を白色結晶として得る；[M+H]＋ 375。
【０１６８】
実施例１.６〜１.７
これらの実施例、すなわち、
４−[３−(２−シクロプロピル−ピリジン−４−イル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール(実施例.１.６)
および
４−[３−(３−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール(実施例１.７)は、実施例１.５の化合物を製造するのに使用したもの準じる手順を用いて製造する。
【０１６９】
実施例１.８
４−[３−(４−[１,２,４]トリアゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール
工程１：４−[３−(４−フルオロ−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール
この化合物は、[４−(１Ｈ−ピラゾール−１−イル)フェニル]ボロン酸に代えて４−フルオロ−ボロン酸を用いることによって実施例１.５に準じて製造される。
[M+H]＋327。
【０１７０】
工程２：４−[３−(４−[１,２,４]トリアゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール
４−[３−(４−フルオロ−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキサノール(６５.３mg；０.２mmol)をＤＭＦ(５ml)中に溶解し、そして１Ｈ−[１,２,４]トリアゾール(２８mg；０.２mmol)および炭酸カリウム(５６mg；０.２mmol)で処理する。この混合物を、EmryOptimizerマイクロウェーブオーブン(３００Ｗ)中で２２０℃に加熱する。室温に冷却後、ＥｔＯＡｃ(５０ml)を加え、そして有機物を水で２回洗浄する。この有機層から溶媒を減圧下で取り除く。精製をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル[０.０４０−０.０６３ｍｍ]Merck 1.09.385.1000]；９４：６ ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨを用いて溶出する)によって行い、続いてジオキサンから凍結乾燥して、オフホワイトの粉末として表題化合物を得る；[M+H]＋ 376。
【０１７１】
実施例１.９
{４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノール
工程１：[４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキシル]−メタノール
この化合物は、トランス−４−アミノシクロヘキサノールの代わりに(４−アミノ−シクロヘキシル)−メタノールを用いて、４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール(実施例１.１工程３)に準じて製造される；[M+H]＋ 327。
【０１７２】
工程２：４−[３−(４−ピラゾール−１−イル−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノール
この表題化合物は、４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキサノール(実施例１.１工程３)の代わりに、[４−(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イルアミノ)−シクロヘキシル]−メタノール(実施例１.９工程１)を用いて、実施例１.５に準じて製造される；[M+H]＋ 389。
【０１７３】
実施例２.１
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−メタノン
工程１：(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル)−(２,５−ジフルオロ−ベンジル)−アミン
３−ブロモ−６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン(１.００ｇ、４.３０mmol)[実施例１.１工程２]および２,５−ジフルオロベンジルアミン(１.０３ml、８.６０mmol)の懸濁液に、室温でＫＦ(２.５０ｇ、４３.０mmol)を加える。この反応混合物を、１時間、１８０℃に加熱する。室温に冷却後、この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液(３×)および飽和ＮａＣｌ水溶液(１×)で洗浄する。有機層を乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、ろ過し、そして、減圧下で濃縮する。得られる固体を、ＥｔＯＡｃでトリチュレートして、表題化合物をオフホワイト固体として得る。MS-ES: [M+H]＋ 341。
【０１７４】
工程２：４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−安息香酸
ＤＭＥ(５ml)中の(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル)−(２,５−ジフルオロ−ベンジル)−アミン(４００mg、１.１４mmol)、４−カルボキシフェニルボロン酸(２４０mg、１.３７mmol)、およびＫ２ＣＯ３(２.００ml、４.００mmol、２Ｍ(水中))の懸濁液に、室温、アルゴン雰囲気下でＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２(４１mg、０.０６mmol)を加える。この反応混合物を、２０分間、１５０℃にマイクロウェーブオーブン中で加熱する。室温に冷却後、この反応混合物を、Florisil padでろ過する。このパッドをＥｔＯＡｃで洗浄し、そしてろ液を捨てる。次いで、このパッドをＭｅＯＨで洗浄し、そしてこのろ液を減圧下で濃縮すると、粗表題化合物(純度７０％)がオフホワイト固形物として生じ、これは、更に精製することなく、次の工程に使用する。MS-ES: [M+H]＋ 381。
【０１７５】
工程３：{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−メタノン
ＤＭＦ(２ml)中の４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−安息香酸(５４mg、０.１００mmol、純度７０％)の溶液に、室温でＨＡＴＵ(５０mg、０.１３０mmol)およびＮＭＭ(２８μl、０.２５０mmol)を加える。５分間撹拌後、１−メチルピペラジン(１３μl、０.１１０mmol)を加え、そしてこの混合物を、さらに２時間撹拌する。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、そして飽和ＮａＨＣＯ３水溶液(２×)および飽和ＮａＣｌ水溶液(１×)で洗浄する。有機層を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、ろ過し、そして、減圧下で濃縮する。この残渣を逆相分取ＨＰＬＣ(Waters)によって精製して、表題化合物(実施例１)を、白色固体として得る(ＴＦＡ塩)。MS-ES: [M+H]＋ 463。
【０１７６】
実施例２.２〜２.７
これらの実施例、すなわち、
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(２−モルホリン−４−イル−エチル)ベンズアミド(実施例２.２)、
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−(４−ジメチルアミノ−ピペリジン−１−イル)−メタノン(実施例２.３)、
{４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−モルホリン−４−イル−メタノン(実施例２.４)、
{３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−ベンズアミド(実施例２.５)、
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(１−エチル−ピロリジン−２−イルメチル)−ベンズアミド(実施例２.６)および
４−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−Ｎ−(テトラヒドロ−ピラン−４−イル)−ベンズアミド(実施例２.７)
を、工程２において適切なカルボキシフェニルボロン酸および工程３において適切なアミンを用いて、実施例２.１に準じて得る。
【０１７７】
実施例３.１
４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンゼンスルホンアミド
工程１：(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル)−(３−フルオロ−ベンジル)−アミン
密閉管内で、ＮＭＰ(１６.５ml)中の３−ブロモ−６−クロロ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン(３.７ｇ、１５.９mmol)[実施例１.１工程Ｂ]と３−フルオロベンジルアミン(４.５４ml、３９.８mmol)の混合物を、１８０℃で加熱し、そして３時間撹拌する。この反応混合物を、室温に冷却し、水(３００ml)に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出する。集められた有機フラクションをＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、そして蒸発乾固する。残存残渣を、Combi-FlashCompanion(ＴＭ)(Isco Inc.)カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；グラジエント溶出、ＤＣＭ／[ＤＣＭ／ＭｅＯＨ−ＮＨ３ ９：１]９５：５→３：７)によって精製して、表題化合物を白色固体として得る。MS-ES [M+H]+=321.0。
【０１７８】
工程２：４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンゼンスルホンアミド
密閉管内で、ＤＭＥ(１ml)中の(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル)−(３−フルオロ−ベンジル)−アミン(５０mg、０.１５６mmol)、４−(４,４,５,５−テトラメチル−[１,３,２]ジオキサボロラン−２−イル)−ベンゼンスルホンアミド(５２.９mg、０.１８７mmol)、ＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２(５.５mg、０.００８mmol)および２Ｍ Ｎａ２ＣＯ３水溶液(０.２７ml)の混合物を、１５０℃で、１７分間マイクロウェーブオーブン中で加熱する。この反応混合物を、室温に冷却し、ろ過し、そしてろ過ケーキをＤＣＭで洗浄する。このろ液を蒸発乾燥し、そして残存残渣を逆相分取ＨＰＬＣ(Waters system)によって精製して、表題化合物を白色粉末として得る。MS-ES[M+H]+=398。
【０１７９】
実施例３.２〜３.５
これらの実施例、すなわち、
４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンズアミド
(実施例３.２)、
４−{６−[(ＲまたはＳ)−１−(３−フルオロ−フェニル)−２−ヒドロキシ−エチルアミノ]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル(実施例３.３)、
３−{６−[(Ｒ)−１−(３−フルオロ−フェニル)−エチルアミノ]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル}−ベンゾニトリル
(実施例３.４)、
{４−[６−(３−フルオロ−ベンジルオキシ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−メタノール
(実施例３.５)
を、工程１において適切なベンジル型アミンまたはベンジル型アルコールおよび工程２において適切なボロン酸またはエステルを用いて、実施例３.１に準じて得る。
【０１８０】
実施例３.６(上記の表にはない)
(３−フルオロ−ベンジル)−{３−[４−(２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル)−フェニル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル}−アミン
工程１：４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンゾニトリル
密閉管内で、ＤＭＥ(１０ml)中の(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル)−(３−フルオロ−ベンジル)−アミン(３００mg、０.９３４mmol)[実施例３.１工程Ａ]、４−シアノフェニルボロン酸(１６５mg、１.１２mmol)、ＰｄＣｌ２(ＰＰｈ３)２(３２.８mg、０.０４７mmol)および２Ｍ Ｎａ２ＣＯ３水溶液(１.６ml)の混合物を、１５０℃で、３０分間、マイクロウェーブオーブン中で加熱する。この反応混合物を、室温に冷却し、ＡｃＯＥｔ(１００ml)で希釈し、そして水(３０ml)および塩水(３０ml)で洗浄する。この有機フラクションを、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、そして蒸発乾固する。残存する残渣を、Combi-Flash Companion(ＴＭ)(Isco Inc.)カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；グラジエント溶出、ＤＣＭ／[ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １：１]９８：２→９：１)によって精製すると、表題化合物(２５７mg、０.７４８mmol、８０％)が白色固体として生じる。MS-ES [M+1]＋=344。
【０１８１】
工程２：(３−フルオロ−ベンジル)−{３−[４−(２Ｈ−テトラゾール−５−イル)−フェニル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル}−アミン
密閉管内で、ＤＭＦ(４ml)中の４−[６−(３−フルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−ベンゾニトリル(２５７mg、０.７４８mmol)、ＮＨ４Ｃｌ(１３４mg、２.２５mmol)およびＮａＮ３(１４６mg、２.２５mmol)の混合物を、１００℃で加熱し、そして２４時間撹拌する。この反応混合物を室温に冷却し、ＤＣＭ中に希釈し、そしてろ過する。このろ液を、濃縮乾固し、そして残存残渣をＭｅＯＨでトリチュレートする。得られる固体をろ過によって回収し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、そして真空下で乾燥させて、粗表題化合物をベージュ色固体として得る。MS-ES [M+H]＋=387。
【０１８２】
工程３：(３−フルオロ−ベンジル)−{３−[４−(２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル)−フェニル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル}−アミン
密閉管内で、ＤＭＦ(１ml)中の(３−フルオロ−ベンジル)−{３−[４−(２Ｈ−テトラゾール−５−イル)−フェニル]−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル}−アミン(７０mg、０.１８mmol)、Ｃｓ２ＣＯ３(８９.４mg、０.２７mmol)およびヨウ化メチル(０.０２８ml、０.４５mmol)の混合物を、５０℃で加熱し、２時間撹拌する。この反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ中に希釈し、そして水で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そして濃縮乾固する。残存する残渣を逆相分取ＨＰＬＣ(Waters system)によって精製して、表題化合物を白色粉末として得る。MS-ES [M+H]＋=401。
【０１８３】
実施例３.７(上記の表にはない)
テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸{３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−アミド
工程Ａ：[３−(３−アミノ−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル]−(２,５−ジフルオロ−ベンジル)−アミン
密閉管内で、ＤＭＥ(８ml)中の(３−ブロモ−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル)−(２,５−ジフルオロ−ベンジル)−アミン(４３３mg、１.２８mmol)[実施例２.１工程１]、３−アミノフェニルボロン酸(２１０mg、１.５３mmol)、Ｐｄ(ＰＰｈ３)４(７３.７mg、０.０６４mmol)および２Ｍ Ｎａ２ＣＯ３水溶液(２.２ml)の混合物を、１５０℃で１７分間、マイクロウェーブオーブン中で加熱する。この反応混合物を、室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ(１００ml)で希釈し、そして２Ｍ Ｎａ２ＣＯ３水溶液および塩水で洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、そして蒸発乾固する。残存残渣をCombi-Flash Companion(ＴＭ)(Isco Inc.)カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；グラジエント溶出、ＤＣＭ／[ＤＣＭ／ＭｅＯＨ−ＮＨ３ ９：１]９５：５→７：３)によって精製すると、表題化合物が、オレンジ色の固体として生じる。MS-ES [M+H]＋=352。
【０１８４】
工程Ｂ：テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸{３−[６−(２,５−ジフルオロ−ベンジルアミノ)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−３−イル]−フェニル}−アミド
ＤＭＦ(０.５ml)中の[３−(３−アミノ−フェニル)−イミダゾ[１,２−ｂ]ピリダジン−６−イル]−(２,５−ジフルオロ−ベンジル)−アミン(５０mg、０.１４mmol)およびテトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸(２２mg、０.１７mmol)の溶液に、ＮＭＭ(０.０７８ml、０.７１mmol)およびＨＡＴＵ(８２mg、０.２１mmol)を、室温で順に加える。この反応混合物を、室温で３時間撹拌し、次いで直接逆相分取ＨＰＬＣ(Waters system)による精製に付して、表題化合物を白色粉末として得る。MS-ES [M+H]＋=464。
【国際調査報告】
2010508315.tif 000046
2010508315.tif 000047
2010508315.tif 000048