(57)【要約】  ドライアイ症候群またはＬＫＣを治療および予防するためのゲニステインの使用ならびにそれを含む対応する組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
人間および動物のドライアイ症候群またはＬＫＣの治療および予防に有用な組成物を製造するためのゲニステインの使用。
【請求項２】
前記組成物が、全身、好ましくは経口または局所投与用である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ドライアイ症候群またはＬＫＣの治療および予防におけるゲニステインの使用であって、それを有効量含む組成物を、その必要に応じて人間または動物に投与することを特徴とする、使用。
【請求項４】
前記組成物が、全身的、好ましくは経口的に投与される、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
有効量のゲニステインを含む組成物を、その必要に応じて人間または動物に投与することによる、ドライアイ症候群またはＬＫＣの治療および予防方法。
【請求項６】
前記組成物が、全身的、好ましくは経口的に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ドライアイ症候群またはＬＫＣの治療および予防に使用するための組成物であって、有効量のゲニステインを含むことを特徴とする、組成物。
【請求項８】
全身、好ましくは経口投与用の、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
医薬品剤形である、請求項７または請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
食品もしくは飼料または対応する栄養補助剤である、請求項７または請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
ゲニステインまたはそれを含む組成物を補充した食品または飼料。
【請求項１２】
機能性食品または飲料である、請求項１１に記載の食品または飼料。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ゲニステインの新規な使用およびそれを含む組成物に関する。より正確には、本発明は、ゲニステインおよびそれを含む組成物のドライアイ症候群の治療および予防における使用ならびにそれを含む組成物に関する。
【０００２】
ドライアイは、１９９３年に国立眼病研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＮＥＩ）／産業ワークショップ（Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ）によって、涙液の分泌減少または蒸発亢進による涙液層の「障害」と定義されており、眼瞼間の眼表面の損傷を引き起こし、不快な症状を伴うものである（レンプ・Ｍ・Ａ（Ｌｅｍｐ，Ｍ．Ａ．）、ＣＬＡＯ  Ｊ．、１９９５年、第２１巻、ｐｐ．２２１〜２３２）。現在のドライアイに関する知見に基づけば、単なる涙液不足というよりも寧ろ眼表面の炎症性症候群と見なすことも妥当である。ドライアイで起こる眼表面疾患を表すのに乾性角結膜炎（ＫＣＳ）という用語が何十年もの間用いられているが、その定義により、既に炎症性の病因が認められている。したがって、ドライアイのより広い定義に沿えば、涙液性角結膜炎（ｌａｃｒｉｍａｌ  ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ）（ＬＫＣ）という用語の方が適切であると思われ、今日では、涙液層の機能不全から発展する眼表面の炎症を表現するのに広く用いられている（例えば、フリュークフェルダー・Ｓ・Ｃ（Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ，Ｓ．Ｃ．）、「厄介なドライアイ（Ｄｒｙ  ｅｙｅ：Ｔｈｅ  ｐｒｏｂｌｅｍ）」、ドライアイと眼表面障害（Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  ａｎｄ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）に収録、マーセルデッカー（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、２００４年、ｐｐ．１〜１０参照）。
【０００３】
ＬＫＣは多因性であるため、有望とされる様々な新しい治療、例えば、新規な涙液分泌促進剤（ｔｅａｒ  ｓｔｉｍｕｌａｎｔ）および免疫調節剤が提案されている（アルビエッツ・Ｊ・Ｍ（Ａｌｂｉｅｔｚ，Ｊ．Ｍ．）著、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｏｐｔｏｍ．、第８４巻、ｐｐ．４〜１８、２００１年における概説参照）が、どれも本当に優れた結果が得られるものではなかった。ドライアイ症候群の治療は、２００５年になってもなお、日常の眼科診療において最も成果の出ない臨床的問題の１つと見なされている（バーシュラ・Ｐ（Ｖｅｒｓｕｒａ，Ｐ．）ら、Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｅｎｄｃｒｉｎｏｌ．、第２０巻、ｐｐ．２８９〜２９８、２００５年）。多くの化合物が有効であると提案され、これらを含む組成物が市販されている一方で、涙腺を刺激することにより量的にも質的にも正常な涙液を副作用を起こすことなく産生させることができる物質が依然として活発に探索されている。バーシュラらはまた、眼の不快な症状を訴える閉経後の女性へのホルモン補充療法（ＨＲＴ）にも異論を唱えており、眼表面機能の損傷がエストロゲンもしくはアンドロゲンの欠乏またはこれらのアンバランスのどちらによるものなのかが明確でないため、ドライアイの治療としてＨＲＴをリスクライビング（ｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ）することに注意を喚起している。
【０００４】
したがって、植物中に含まれるエストロゲン活性を有することで知られる天然の化合物であるゲニステインをＬＫＣの治療に使用することができることを出願人らがここに見出したことは驚くべきことである。エストロゲンおよびアンドロゲンを全身治療薬として用いる考えについては議論されていたが、ゲニステインが使用できる可能性はこれまで提案されていなかった（スコット・Ｇ（Ｓｃｏｔｔ，Ｇ．）ら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．、第３９巻、ｐｐ．１１０９〜１０、２００５年）。
【０００５】
胸腺中にゲニステイン受容体が発見されており、それによってこれらが免疫系の調節に有効に作用する（クーケ・Ｐ・Ｓ（Ｃｏｏｋｅ，Ｐ．Ｓ．）ら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．、第１３６巻、ｐｐ．７０４〜８、２００６年）。ゲニステインはまた、アンドロゲン／エストロゲンによって誘導されるシグナル伝達経路に遺伝子応答の調節を介して影響を与えることも認められており（タカハシ・Ｙ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｙ．）ら、Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．、第４５巻、ｐｐ．１８〜２５、２００６年）、また、ゲニステインは、眼内血管新生を阻害する作用による特定の眼内活性（ｏｃｕｌａｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を有することが見出されている（クルーゼ・Ｆ・Ｅ（Ｋｒｕｓｅ，Ｆ．Ｅ．）ら、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、第９４巻、ｐｐ．１５２〜６、１９９７年）。
【０００６】
したがって、植物エストロゲンであるゲニステインが、免疫系およびアンドロゲン−エストロゲンシグナル伝達の両方の調節剤としての活性を有することが、それと同時に血管新生抑制活性を示すことに加えて眼表面に性ステロイド受容体が存在することとともに実証されたことは、ドライアイの治療および予防においてゲニステインが過去に報告されなかった驚くべき活性を示すことを証明するものである。
【０００７】
したがって、本発明は、ゲニステインの、人間もしくは動物のドライアイ症候群もしくはＬＫＣの治療および予防における使用または人間もしくは動物のドライアイ症候群もしくはＬＫＣの治療および予防に有用な組成物の製造における使用；人間または動物のドライアイ症候群またはＬＫＣを治療および予防する方法；ならびに有効量のゲニステインを含む、好ましくは経口投与用の、対応する組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ドライアイ症候群を研究するために確立された動物モデルであるスコポラミンで処理したラットの涙液産生に対するゲニステイン補充の効果を実証するものである。
【０００９】
本発明の文脈における「ゲニステイン」という用語は、４’，５，７−トリヒドロキシイソフラボンに関連するものであり、この化合物のあらゆる形態、すなわち、あらゆる供給源に由来する（すなわち、合成的に調製したものか、遺伝子工学により微生物で発現させたものか、または天然の供給源から単離されたものかに無関係）、幾分濃縮された形態および精製された形態にある、遊離形態または塩が包含される。本発明の文脈における「ゲニステイン」という用語はまた、ゲニステインの生物学的に等価な誘導体、すなわち、ゲニステインから誘導された天然の化合物（すなわち、天然の供給源に含まれるものまたは代謝経路におけるグリコシド（例えば、ゲニスチン）等の代謝産物としてまたはグルクロニドとして）または化学修飾もしくは合成によりゲニステインから得ることができる化合物にも関する。ゲニステインと生物学的に等価なあらゆる誘導体が包含され、これは、これらが投与された生物中においてゲニステインの薬理活性形態に変換されることを意味する。
【００１０】
本発明のゲニステイン含有組成物および投与形態は、当該技術分野において一般に周知の、他の医学的適応および疾患の治療および予防に既に使用されているものである。このような組成物には、医薬品製剤だけでなく栄養補助剤の形態の全身投与用（例えば、経口または非経口）製剤ならびに局部（ｌｏｃａｌ）および局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与用製剤、例えば、錠剤、カプセル剤、滴下型点眼剤（ｅｙｅ  ｄｒｏｐ）、軟膏剤、ゲル剤、パッチ剤、または噴霧剤、および他の生薬投与形態；食品または飼料補充用液剤、濃縮剤、プレミックス剤；ならびにあらゆる種類の食品または飼料そのもの（飲料を含む）が包含される。
【００１１】
「動物」という用語には、ドライアイ症候群またはＬＫＣを患う可能性のあるあらゆる動物、特に哺乳類、好ましくは、反芻類、馬、豚等の家畜類；猫や犬等のペット；および動物園に飼育されている動物が包含される。
【００１２】
好適な用量および投与設計は、当業者に周知の従来の範囲決定（ｒａｎｇｅ−ｆｉｎｄｉｎｇ）法により決定してもよい。ゲニステインの新規な使用における連日投与の典型的な範囲は、全身投与の場合は約１〜約５００ｍｇ、好ましくは約５〜約１００ｍｇである。局所用、特に眼内投与、例えば、滴下型点眼剤、エマルジョン型点眼剤（ｅｙｅ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、噴霧型点眼剤（ｅｙｅ  ｓｐｒａｙ）等の形態では、典型的には、総投与量が約０．１ｍｇ〜総投与量が約５ｍｇ、好ましくは総投与量が０．５〜１ｍｇとなるゲニステインを含むであろう。典型的な局所用液剤は、ゲニステインを０．００２５〜５％、好ましくは少なくとも０．０１％かつ好ましくは１％まで、より好ましくは０．５％まで、最も好ましくは０．０５％までの濃度（ｗ／ｖ）で含む。好ましい濃度は１００μＭである。ゲニステイン誘導体の場合は、ゲニステインそのものの生物学的利用能と比較したこれらの生物学的利用能に対応するようにこの値を適合させなければならない。ゲニステインの本新規使用における医薬組成物の場合に好適な処方に関するさらなる詳細は、既存の文献、例えば、国際公開第９９／４５９２０号パンフレットまたは国際公開第９８／２６７８４号パンフレットより入手可能である。
【００１３】
ゲニステインを含む医薬組成物は当該技術分野において周知の手順で調製することができる。例えば、ゲニステインは、一般的な従来の担体、結合剤、希釈剤、および添加剤と一緒に、錠剤、カプセル剤、散剤、懸濁剤、非経口および局所投与（静脈、筋肉、および皮下投与を含む）用液剤、ならびに経皮投与用パッチ剤に適用するための液剤に配合してもよい。好ましい実施形態においては、本発明の方法に使用される医薬品製剤は、純度が少なくとも４０％、好ましくは純度が少なくとも８５％のゲニステインを含む。医薬品製剤の形成に有用な薬学的に許容される不活性な担体としては、デンプン、マンニトール、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸誘導体、および／または糖類（スクロース、ラクトース、グルコース等）が挙げられる。結合剤としては、カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、ゼラチン、天然および合成ゴム（アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸塩を含む）、ポリゼチレン（ｐｏｌｙｔｈｅｙｌｅｎｅ）グリコール、ワックス等が挙げられる。本発明に有用な希釈剤としては、好適な油、生理食塩水、糖溶液（水性デキストロースすなわち水性グルコース等）、およびグリコール（ポリエチレンまたはポリプロピレングリコール等）が挙げられる。他の添加剤としては、滑沢剤（オレイン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（寒天、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デンプン、キサンタンガム等）、および吸着性担体（ベントナイトやカオリン等）が挙げられる。着色および着香剤も医薬品製剤に添加してもよい。
【００１４】
栄養製剤、食品組成物（ｄｉｅｔａｒｙ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）、または機能性食品中におけるゲニステインの使用は、当該技術分野において周知の、例えば、国際公開第２００５／０６３２２３号パンフレットまたは米国特許第６，００１，３６８号明細書に記載されている方法に従い達成される。
【００１５】
本発明の方法よる食品組成物は、ゲニステインを含む食品もしくは飼料成分または食品もしくは飼料であり、ゲニステインがどの供給源から得られたかに無関係に、食品を調製する過程で食品または食品成分にゲニステインを添加することにより調製してもよい。ゲニステイン化合物を添加してもよい食品または飼料としては、ほとんどすべての食品および飼料（飲料および飲料水を含む）が挙げられる。例えば、ゲニステインは、これらに限定されるものではないが、食肉（挽肉、乳化された肉（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｄ  ｍｅａｔ）、マリネ肉、乾燥肉、ソーセージ等）；機能性食品；飲料（栄養飲料、スポーツ飲料、プロテイン強化飲料、レモネード、果汁１００％ジュース、ミネラルウオーター、乳製品、乳、乳代用品、減量またはエネルギー補給用飲料等）；チーズ類（ハードおよびソフトチーズ、クリームチーズ、カッテージチーズ等）；氷菓（アイスクリーム、アイスミルク、低脂肪氷菓、乳成分を含まない氷菓等）；ヨーグルト；スープ；プリン；ベーカリー製品；ケーキ類およびクッキー類；サラダドレッシング；ディップおよびスプレッド（マヨネーズやチップ用ディップ（ｃｈｉｐ  ｄｉｐ）等）；ならびに押出成形されたスナック製品等の食品に添加してもよい。ゲニステインは、所望の用量を食品の消費者に送達するための選択された量で食品に添加される。好ましい実施形態においては、本発明の方法に従い食事療法用組成物として使用するための食品に添加されるゲニステイン組成物は、ゲニステインを少なくとも４０％、好ましくはゲニステインを少なくとも８５％含む。
【００１６】
ドライアイ症候群の治療薬としてのゲニステインの有効性の試験は、以下に示す周知の同状態の動物モデルを用いて実施した。
【００１７】
［ＯＶＸモデル］
オバレクトマイズド（Ｏｖａｒｅｃｔｏｍｉｚｅｄ）（ＯＶＸ）雌性スプラーグドーリーラット（１２０〜１６０ｇ）は人間の更年期状態のモデルであり（フリュークフェルダー・Ｓ・Ｃら、ドライアイと眼表面障害、マーセルデッカー、ニューヨーク、２００４年）、したがって、自然発生したドライアイ眼表面（ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｓｕｒｆａｃｅ）疾患のモデルの役割を果たす。さらに、ホルモン補充の効果をゲニステインを用いた処理と比較するために、ＯＶＸ動物の皮下をエストラジオールで処理してもよい。
【００１８】
［スコポラミンモデル］
ドライアイのモデルとして他に広く認められているのは、スコポラミンの皮下注射（１０ｍｌ中５ｍｇ）または皮膚パッチまたはゲル投与を用いることによって、自然な涙液を産生させる副交感神経を遮断することによりラットにドライアイ状態を誘発させるスコポラミンモデルである（ダーソン（Ｄｕｒｓｏｎ）ら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、第４３巻、ｐｐ．６３２〜８、２００２年）。
【００１９】
これらのモデルおよびその変形を用いて、ドライアイの影響を軽減するための混合飼料（低用量５０ｍｇ／ｋｇおよび高用量２５０ｍｇ／ｋｇ）として送達されるゲニステインの効果を試験した。さらに、１つの試験群は、イソフラボノイド類を添加しない、媒体飼料だけを与える対照とした。
【００２０】
被験動物群を以下に示すように動物（ラット）の数が等しくなるように振り分けた：
【００２１】
【表１】
2010523507.tif 000002
【００２２】
ゲニステインの効果を評価するために、ゲニステインまたは媒体を補充した生存動物の臨床試験を、表面染色液であるフルオレセインおよびローズベンガルを使用し、細隙灯顕微鏡を用いて眼を検査することによって実施した。
【００２３】
フルオレセインを使用することにより、断続部の染色によって視認される角膜上皮細胞の局所的な欠損の有無に加えて、細胞間の染色によってはっきりと示される完全な上皮の断裂の有無を観察した。フルオレセインは、蒸発の指標である、涙液層が破壊するまでの時間の長さ（涙液層破壊時間−ＴＢＵＴ）の測定にも使用した。ＴＢＵＴの正常範囲は１０秒であるが、被験動物を対照動物と比較することを主要な結果比較とした。
【００２４】
ローズベンガルは、未変性の細胞膜を染色する有機液体染料であり、したがって、湿潤過程が不十分な角膜上皮細胞を検出するのに用いられる。ローズベンガル染色の結果指標は、特に対照動物の検査と比較した場合の陽性染色の有無とした。
【００２５】
フェノールレッドを含浸させた吸収性の糸を用いて涙液量を評価した（ゾーンクイック検査）。結果指標は、検査指示書に記載されている基準および対照動物の結果との比較に従う。
【００２６】
図１はドライアイ症候群を研究するために確立された動物モデルであるスコポラミンで処理したラットの涙液産生に対するゲニステイン補充の効果を実証するものである。ゾーンクイック検査により涙液量を観測した。この生体試験は、涙液産生に関し標準化された指標である。これは、フェノールレッドを含浸させた糸からなり、糸を涙湖に適用すると、涙液で湿潤した長さだけ糸の色が変わる。この湿潤した糸の長さ（ｍｍ）は産生された涙液量に比例する。
【００２７】
［略語］
０−ＣＯＮ、０−ＳＣＯＰ：対照動物各８匹（スコポラミンなしまたはスコポラミンあり）
５０−ＳＣＯＰ：ゲニステイン５０ｐｐｍを補充した動物８匹（スコポラミンあり）
２５０−ＳＣＯＰ：ゲニステイン２５０ｐｐｍを補充した動物８匹（スコポラミンあり）
中間検査＝補充期間２．５週間
最終検査＝補充期間５．０週間
【００２８】
［結果］
ここからわかるように、スコポラミン処理されたラットにゲニステインを補充すると涙液量がほぼ対照値付近まで回復し、２５０ｍｇを補充した群は５０ｍｇの群よりもこの傾向がより顕著であり、用量反応相関が存在する可能性を示唆している。
【図１】
2010523507.tif 000003
【国際調査報告】
2010523507.tif 000004
2010523507.tif 000005
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