(57)【要約】  本発明は、ワクチンの製造のためのクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
十分に発育したブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用。
【請求項２】
成熟雌ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用。
【請求項３】
子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するための成熟雌ブタ用ワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用。
【請求項４】
子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用。
【請求項５】
十分に発育したブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用。
【請求項６】
成熟雌ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用。
【請求項７】
子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用。
【請求項８】
子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用。
【請求項９】
ベータ−２毒素を産生するクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌を使用する、請求項１〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
該ワクチンの製造のために更に、ブタ病原生物もしくはウイルスに由来する１以上の抗原、それらの抗原に対する抗体、またはそのような抗原をコードする遺伝情報を使用する、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１１】
該病原生物またはウイルスが、仮性狂犬病ウイルス、ＰＲＲＳウイルス、ブタインフルエンザウイルス、ブタパルボウイルス、伝染性胃腸炎ウイルス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エリジペロスリックス・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブラキスピラ・ヒョウディセンテリエ（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）およびアクチノバシラス・プリゥロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の群から選ばれる、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
該ブタ病原生物が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）である、請求項１０記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ワクチンの製造のためのクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロストリジウムはグラム陽性芽胞形成嫌気性細菌である。クロストリジウムは家畜および野生動物の両方の病原体として一般に認識されている。種々のクロストリジウムおよびそれらが引き起こす動物疾患の概説がＳｏｎｇｅｒ，Ｊ．Ｇ．ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ；Ｃｈａｐｔｅｒ  １０：Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｒｏｏｄ，Ｊ．Ｉ．ら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ（１９９７）ＩＳＢＮ  ０−１２−５９５０２０−９に記載されている。
【０００３】
現在公知のクロストリジウム種のうち、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）は、最も広く存在する細菌病原体であるとみなされうる。すべてのクロストリジウム種のなかで、それは、疑いなく、家畜におけるクロストリジウム腸疾患の最も重要な原因因子である。クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）種は、それが産生する主要毒素に基づいて、Ａ〜Ｅ型の５つの型に細分される。
【０００４】
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）ＡおよびＣ型ならびにクロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）はブタの主要腸クロストリジウム病原体である。ブタにおけるクロストリジウム腸感染は、Ｓｏｎｇｅｒ，Ｊ．Ｇ．およびＵｚａｌ，Ｆ．Ａ．（Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １７：５２８−５３６（２００５））により、より詳細に記載されている。
【０００５】
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型はブタ、ウシ、ニワトリ、ヒト、ヒツジ、イヌおよびウマに感染する。子ブタはクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型感染を最も受けやすい。１〜２日齢の子ブタにおいては、該感染は３０％〜５０％の罹患率および５０％〜１００％の致命率を招く。より年長の子ブタ（１〜２週齢）は、より長い感染経過を有しうる。成熟雌ブタ（ｓｏｗ）が一般的な感染源である。子ブタの防御のための一般的アプローチはクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型ワクチンでの成熟雌ブタのワクチン接種であり、その後代へ初乳を介して移行する抗体を誘導するためのものである。これは、クロストリジウム感染を最も受けやすい時期の子ブタにおける高レベルの防御をもたらす。そのようなワクチンはトキソイドに基づくものである。通常、それらは、細胞が存在しない解毒上清ワクチンである。トキソイドワクチンは、とりわけ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｓ．およびＳｅｌｂｉｔｚ，Ｈ．−Ｊ．（ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎ．ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２４：３３３−３３６（１９９９））により記載されている。
【０００６】
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型は子ヒツジ、ヤギ、子ウシ、ニワトリ、ブタ、ウマ、イヌおよびヒトに感染する。十分に発育したブタにおいては、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型は腸の正常フローラのメンバーである。したがって、十分に発育したブタは、腸内のクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型の存在による悪影響を受けないと現在考えられている。しかし、それは新生および離乳ブタにおいて壊死性全腸炎を引き起こしうる。クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型に対してブタを防御するためのワクチンは稀少である。現在、ただ１つの（条件付きで許可された）ワクチンが商業的に入手可能であるに過ぎない。この理由の１つは、前記のとおり、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型が正常フローラのメンバーであることにあろう。したがって、それが免疫応答を誘発するとは予想されないであろう。その結果、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型に対して抗体産生が誘導されるとは予想されないであろう。抗体が誘導されれば、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型は、正常フローラのメンバーであるどころか、腸内で生存することさえできないであろう。もう１つの結果として、もちろん、成熟雌ブタは初乳を介してそれらの後代にいずれの防御をも伝達しないと予想されるであろう。理由は何であれ、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型は十分な免疫刺激を誘導しないと思われる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ；Ｃｈａｐｔｅｒ  １０：Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｒｏｏｄ，Ｊ．Ｉ．ら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ（１９９７）ＩＳＢＮ  ０−１２−５９５０２０−９
【非特許文献２】Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １７：５２８−５３６（２００５）
【非特許文献３】ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎ．ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２４：３３３−３３６（１９９９）
【発明の概要】
【０００８】
驚くべきことに、解毒培養上清を含むクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型ワクチンはクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対する交差防御を誘導する高い能力を有することが、本発明において見出された。
【０００９】
より驚くべきことに、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清での成熟雌ブタ（ｓｏｗ）のワクチン接種はクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対するそれらの子ブタの有意な防御をもたらすことが見出された。
【００１０】
より一層驚くべきことに、このワクチン接種後には、成熟雌ブタでさえも、より良好に機能することが見出された。これは驚くべきことである。なぜなら、前記のとおり、成熟雌ブタのように十分に発育したブタはクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染による悪影響を受けないと一般に考えられていたからである。実際にはそれとは逆であることを、この知見は初めて証明するものである。
【００１１】
したがって、本発明の第１の実施形態は、十分に発育したブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用に関する。
【００１２】
本発明の第２の実施形態は、成熟雌ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用に関する。
【００１３】
本発明の第３の実施形態は、子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するための成熟雌ブタ用ワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用に関する。
【００１４】
本発明の第４の実施形態は、子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用に関する。
【００１５】
当業者に理解されるとおり、実際には、ワクチンの製造のためのクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌の使用は２工程の方法である。すなわち、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌を培地内での増殖のために使用して、本発明のワクチンの製造の基礎となる培養上清を得る。
【００１６】
したがって、本発明のもう１つの実施形態は、十分に発育したブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用に関する。
【００１７】
本発明の更にもう１つの実施形態は、成熟雌ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用に関する。
【００１８】
本発明の更にもう１つの実施形態は、子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用に関する。
【００１９】
また、本発明の１つの実施形態は、子ブタをクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型感染に対して防御するためのワクチンの製造のための、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清の使用に関する。
【００２０】
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型毒素型においては、ベータ−２−毒素を産生する株とそれを産生しない株との間で分類がなされうる。すべてのクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型株の約４０％がこの毒素を産生する。ベータ−２−毒素を産生するクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌は、ベータ−２−毒素を産生しないクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌より一層好適であることが判明した。そのような株およびそれらの同定は、とりわけ、Ｆｉｓｈｅｒ，Ｄ．Ｊ．ら（Ｉｎｆ．＆Ｉｍｍｕｎ．７４：５２００−５２１０（２００６））により記載されている。したがって、この実施形態の好ましい形態は、ベータ−２−毒素を産生するクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型細菌を使用する使用に関する。
【００２１】
前記のとおりに製造されるワクチンは、決して、商業的養豚の過程でブタに投与される唯一のワクチンではない。クロストリジウムワクチンは、他のブタ病原生物およびウイルスに対するワクチンとほぼ同時に頻繁に投与される。
【００２２】
したがって、もう１つの好ましい実施形態においては、本発明において記載されているとおりに製造されるワクチンは更に、ブタ病原生物もしくはウイルスに由来する１以上の抗原、それらの抗原に対する抗体、またはそのような抗原をコードする遺伝情報を含む。
【００２３】
そのような生物またはウイルスは、好ましくは、仮性狂犬病ウイルス、ＰＲＲＳウイルス、ブタインフルエンザウイルス、ブタパルボウイルス、伝染性胃腸炎ウイルス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エリジペロスリックス・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブラキスピラ・ヒョウディセンテリエ（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）およびアクチノバシラス・プリゥロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の群から選ばれる。したがって、この実施形態のより好ましい形態は、仮性狂犬病ウイルス、ＰＲＲＳウイルス、ブタインフルエンザウイルス、ブタパルボウイルス、伝染性胃腸炎ウイルス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エリジペロスリックス・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブラキスピラ・ヒョウディセンテリエ（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）およびアクチノバシラス・プリゥロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の群から選ばれるブタ病原生物またはウイルスに由来する１以上の抗原を更に含む、本発明において記載されているとおりに製造されたワクチンに関する。
【００２４】
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）感染に次いで、子ブタは、しばしば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）感染に罹患する。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）は子ブタにおける別の重症腸疾患の原因となる。したがって、子ブタまたは妊娠ブタは、しばしば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ワクチンでワクチン接種される。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ワクチンは当分野において一般に使用されており、それらは商業的に入手可能である。したがって、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型培養上清および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ワクチン成分の両方を含む混合ワクチンが非常に望ましい。なぜなら、それは、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）感染に対して防御するからである。
【００２５】
したがって、この実施形態の最も好ましい形態は、ブタ病原生物である大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）に由来する１以上の抗原を更に含む、本発明において記載されているとおりに製造されたワクチンに関する。
【００２６】
本発明は以下の実施例により非限定的に例示される。
【実施例】
【００２７】
実施例
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原の製造
標準的なクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型株である株５８７（Ｗｅｙｂｒｉｄｇｅ  Ｕ．Ｋ．ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎからのＣＷＣ  １／Ｓとも称される）を定常増殖期の開始まで発酵槽内で培養した。該培養物を遠心分離し、該細菌細胞を含有するペレットを廃棄した。ホルムアルデヒドを０．５％  ｖ／ｖの最終濃度まで該上清に加えて毒素を不活性化し、ついで限外濾過による濃縮および０．２μｍ濾過を行った。
【００２８】
ワクチンの製造
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原と、トコフェロールに基づくアジュバントとを混合することにより、ワクチンを製剤化した。ワクチンの各用量（２ｍｌ）は２μｌの１７倍濃縮クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原トキソイド培養上清濃縮物を含んでいた。該ワクチンは、Ｃ型ワクチンの効力および安全性に関して、欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）モノグラフ０３６３（獣医用クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）ワクチン）を満足するものであった。
【００２９】
また、この実験において、考えられうる大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染を抑制するために、精製された大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原（Ｆ４ａｂ、Ｆ４ａｃ、Ｆ５およびＦ６線毛および易熱性毒素）を加えた。これらの成分は当技術分野で公知であり、これらの成分に基づくワクチンの製造方法は当業者に公知であろう。しかし、その代わりに、当業者は、商業的に入手可能な、そのまま使用される大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ワクチン、例えばＰｏｒｃｉｌｉｓ  Ｐｏｒｃｏｌｉ  ＤＦ（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ  Ｉｎｔ．Ｂ．Ｖ．，Ｗｉｍ  ｄｅ  Ｋｏｒｖｅｒｓｔｒａａｔ  ３５，Ｂｏｘｍｅｅｒ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを介して入手可能）を使用することが可能であろう。
【００３０】
対照ワクチンは、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原が対照群には存在しないこと以外は同じ成分を含む。
【００３１】
成熟雌ブタの防御
臨床的なクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型の突発的発生が生じたオランダの養豚場をランダム化二重盲検フィールド効力研究のために選択した。該養豚場からのクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型分離体はα毒素およびβ２毒素の両方を産生することが判明した。
【００３２】
分娩の約６および２週間の時点の妊娠中、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原のみを含有するワクチン（対照群）または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原およびクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含有するワクチン（試験群）で成熟雌ブタの筋肉内にワクチン接種した。盲検が保証されるよう該ワクチンを色分けし（２×試験ワクチン、１×対照ワクチン）、それらの群にわたる該成熟雌ブタの分布は約２：１であった（表１）。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
第１ワクチン接種の日から子ブタの離乳時（分娩の３〜４週間後）まで、該成熟雌ブタを全身健康状態、食物摂取および下痢に関して３日ごとに観察した。統計分析を容易にするために、臨床スコア系を用いた（表２）。ワクチン接種された成熟雌ブタにおいて産まれた子ブタを、出生後の最初の週は毎日、第１週から離乳までは３日に１回、そしてその後、養育期間の終了までは毎週、観察した。全身健康状態、食物摂取、下痢および死亡率を記録した（表２）。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
結果
【００３７】
【表３】
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【００３８】
表３は、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含まないワクチンでのワクチン接種と比較した場合の、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含むワクチンでのワクチン接種の効果を示している。表３から明白に認められるとおり、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含むワクチンでのワクチン接種は該成熟雌ブタの健康状態の非常に有意な改善をもたらした。
【００３９】
ワクチン接種された成熟雌ブタの後代の防御
また、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含むワクチンでワクチン接種された成熟雌ブタの同腹子における死亡率を、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含まないワクチンでワクチン接種された成熟雌ブタの同腹子の場合と比較した。
【００４０】
表４から明白に認められるとおり、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含むワクチンでワクチン接種された成熟雌ブタの同腹子における死亡率は対照群の場合より有意に低かった。また、表５は、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含むワクチンでワクチン接種された成熟雌ブタからの子ブタが対照群より有意に低い臨床スコアを有していたことを示している。
【００４１】
【表４】
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【００４２】
【表５】
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【００４３】
結論：これらのデータは、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ｃ型抗原を含むワクチンでの成熟雌ブタのワクチン接種が、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ型の突発的発生に直面したワクチン接種成熟雌ブタおよびそれらの後代の両方の健康状態の有意な改善をもたらすことを示している。
【国際調査報告】
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