(57)【要約】  本発明は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において心筋梗塞を診断する方法に関する。さらに、本発明は、心臓インターベンションを行いうる被験者を特定する方法に関する。ただし、この被験者は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する。本発明に係る方法は、該被験者のサンプル中のH-FABPおよび場合によりミオグロビンを測定するステップ、ならびにH-FABPおよび場合によりミオグロビンの量を参照量と比較するステップに基づく。同様に本発明に包含されるのは、本発明に係る方法を実施するためのキットまたはデバイスである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性冠症候群（ACS）に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において心筋梗塞を診断する方法であって、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を少なくとも1つの参照量と比較するステップ、および
（c）ステップ（a）および（b）で得られた情報に基づいて心筋梗塞を診断するステップ
を含む、上記方法。
【請求項２】
前記サンプルがACSの症状の発現後4時間以内に取得されたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験者が、検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルをACSの症状の発現時にすでに有していた、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記H-FABPの量が、MIの最近の発症を除外するための参照量および／またはMIの最近の発症を確定するための参照量と比較される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
MIの最近の発症を確定するための参照量が5700pg/mlである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
MIの最近の発症を確定するための参照量よりも多いH-FABPの量が、MIの最近の発症を示すものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
MIの最近の発症を除外するための参照量が2500pg/mlである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
MIの最近の発症を除外するための参照量よりも少ないH-FABP量が、MIを発症しなかったことを示すものである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
追加として、ミオグロビンの量を決定するステップ（aa）が行われ、かつ決定されたミオグロビンの量がステップ（bb）で少なくとも1つのミオグロビンの参照量と比較される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ミオグロビンの量およびH-FABPの量が、MIの最近の発症を除外するためのミオグロビンの参照量およびH-FABPの参照量ならびに／またはMIの最近の発症を確定するためのミオグロビンの参照量およびH-FABPの参照量と比較される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
MIの最近の発症を確定するための参照量が、ミオグロビンについては77ng/mlおよびH-FABPについては5700pg/mlである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
MIの最近の発症を確定するための参照量よりも多いミオグロビン量およびH-FABP量が、MIの最近の発症を示すものである、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１３】
MIの最近の発症を除外するための参照量が、ミオグロビンについては55ng/mlおよびH-FABPについては2500pg/mlである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
MIの最近の発症を除外するための参照量よりも少ないミオグロビン量が、MIを発症しなかったことを示すものである、請求項１０または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記心筋トロポニンが心筋トロポニンTである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記被験者のトロポニンレベルが0.002ng/ml〜0.1ng/mlの範囲内である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
心臓インターベンションを行いうる被験者を特定する方法であって、該被験者が、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のステップ（a）および（b）ならびに場合によりステップ（aa）および（bb）を行うステップ、ならびに（c）得られた情報に基づいて心臓インターベンションを行いうる被験者を特定するステップを含む、上記方法。
【請求項１８】
急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者に対する可能な治療を決定する方法であって、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のステップ（a）および（b）ならびに場合によりステップ（aa）および（cc）を行うステップ、ならびに（c）得られた情報に基づいて心臓インターベンションの開始を推奨するかまたは心臓インターベンションを回避するステップを含む、上記方法。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法を実施するためのキットまたはデバイスであって、被験者のサンプル中のH-FABPの量を決定するための手段、ならびに、場合により、被験者のサンプル中のミオグロビンの量を決定するための手段、ならびにH-FABPの量および場合によりミオグロビンの量を少なくとも1つの参照量と比較するための手段を含む、上記キットまたはデバイス。
【請求項２０】
心筋トロポニンの量を決定するための手段を追加として含む、請求項１９に記載のキットまたはデバイス。
【請求項２１】
急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において心筋梗塞を除外する方法であって、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を心筋梗塞を除外するための参照量と比較するステップ、および
（c）H-FABPの量が心筋梗塞を除外するための参照量よりも少ない場合に心筋梗塞を除外するステップ、
を含む、上記方法。
【請求項２２】
前記被験者が、検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルをACSの症状の発現時にすでに有していた、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において、心筋梗塞を診断する方法に関する。さらに、本発明は、心臓インターベンションを行いうる被験者を特定する方法に関する。この場合、被験者は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する。本発明に係る方法は、該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）および場合によりミオグロビンを測定するステップ、ならびに心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）および場合によりミオグロビンの量を少なくとも1つの参照量と比較するステップに基づく。同様に本発明に包含されるのは、本発明に係る方法を実施するためのキットまたはデバイスである。
【背景技術】
【０００２】
現代医学の目標は、個人的もしくは個別的な治療レジメンを提供することである。それは、患者一人一人のニーズまたはリスクを考慮に入れた治療レジメンである。特に重大なリスクは、心血管合併症の存在、特定的には急性心血管イベントの存在である。心血管合併症は、西半球における罹病および死亡の主原因の1つである。心血管合併症に罹患している人の個別治療では、信頼性の高い診断は、その人の治療の成功に顕著な影響を及ぼす。このことは、急性冠症候群（ACS）の症状を示す患者では特に重要である。
【０００３】
急性冠症候群とは、急性心筋虚血により生じる一群の臨床症状を意味する。急性冠症候群の患者は、心臓死のリスクが顕著に増大するので、非外傷性胸部症状の患者の中から特定する必要がある（Morrow et al., National academy of clinical biochemistry guidelines: Clinical characteristics and utilization of biochemical markers in acute coronary syndrome, 2007, Circulation;115;356-375）。急性心血管イベント（例えば、20分間超の胸部不快感）の症状を呈して緊急評価のための診察を受ける患者は、一般的には、心電図検査により診察される。さらに、心筋トロポニンのレベルを決定するために血液サンプルが採取される。心筋トロポニン、例えばトロポニンTは、心筋梗塞（MI）のバイオマーカーである。心電図（ECG）は、診断のための重要な情報を提供する。特定的には、ECGがST部分の上昇を示す場合、ST上昇型心筋梗塞（STEMI）であると診断される。ECGがST部分の上昇を示さない場合、それぞれの患者のサンプル中に心筋トロポニンが検出されたときに非ST上昇型MI（NSTEMI）であると診断される。特徴的ECGを示さずかつ検出可能な心筋トロポニンを有していない患者は、不安定狭心症（UAP）であると推測される。不安定狭心症およびNSTEMIは、類似の臨床所見を共有する関連性の強い病態であると考えられる。しかしながら、それらは重症度が異なる。NSTEMIは、心筋壊死のバイオマーカーにより検出可能な不可逆的心筋障害を引き起こす虚血により不安定狭心症と区別される（Morrow et al., 上掲）。記載の場合のいずれにおいても、したがって、STEMI、NSTEMI、およびUAPのいずれにおいても、患者は、診断に従って治療される。
【０００４】
過去20年間で、心筋トロポニンのようなバイオマーカーは、心臓関連疾患の診断に有益なツールになってきた。心臓関連疾患のさらなるマーカーは、例えば、NTproBNPまたはクレアチンキナーゼアイソエンザイムMB（CK-MB）である。最近、ミオグロビンの測定は、ACSの症状を示す被験者の診断に有益なツールであることが示された（Brogan G.X et al. Evaluation of a new rapid quantitative immunoassay for serum myoglobin versus CK-MB for ruling out acute myocardial infarction in the emergency department. 1994. Ann. Emerg. Med. 24(4):665-71）。ミオグロビンの測定は、症状の発現直後（約1時間後）に濃度上昇を測定できるので有利であり、ACSの最初の数時間以内のAMI検出感度が高いことが研究により実証されている。しかしながら、心筋梗塞の診断のためのミオグロビンの使用は、いくつかの制約を有する。ミオグロビンの濃度は、症状の発現後に急速に上昇するが、この濃度は、約8〜16時間後に急速に低下する（James McCord J. at al. Ninety-Minute Exclusion of Acute Myocardial Infarction By Use of Quantitative Point-of-Care Testing of Myoglobin and Troponin I. 2001. Circulation 104:1483; Morrow D. A. et al. National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice Guidelines: Clinical Characteristics and Utilization of Biochemical Markers in Acute Coronary Syndromes. 2007. Circulation,115:356-375）。
【０００５】
より最近になって、心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）は、心筋梗塞の初期マーカーであることが示唆された。心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）は、低分子量細胞質タンパク質であり、心筋中に多量に存在する。心筋梗塞の場合のように心筋が損傷した場合、H-FABPをはじめとする低分子量細胞質タンパク質が血流中に放出されるので、血液サンプルでH-FABPレベルの上昇を検出しうる。(例えば、Okamoto et al., Clin Chem Lab Med 38(3):231-8 (2000) Human heart-type cytoplasmic fatty acid-binding protein (H-FABP) for the diagnosis of acute myocardial infarction. Clinical evaluation of H-FABP in comparison with myoglobin and creatine kinase isoenzyme MB; O'Donoghue et al., Circulation, 114;550-557 (2006) Prognostic Utility of Heart-Type Fatty Acid Binding Protein in patients with acute coronary syndrome; またはRuzgar et al., Heart Vessels, 21;209-314 (2006) The use of human heart-type fatty acid-binding protein as an early diagnostic marker of myocardial necrosis in patients with acute coronary syndrome, and its comparison with troponin-T and its creatine kinase-myocardial band)。
【０００６】
心筋トロポニン、例えば、心筋トロポニンT（TnT）または心筋トロポニンI（TnI）が心筋梗塞のマーカーであるという知見は、ACSの症状を示す患者の診断および管理に革命を起こした。特定的には、心筋トロポニンTは、心筋の損傷の非常に特異的なマーカーであり、したがって、ACSの症状を呈する患者でUAPとMIとの識別を可能にする。しかしながら、急性冠症候群の患者で心筋トロポニンを診断マーカーとして使用することに関連したいくつかの問題が依然として存在する。例えば、心筋トロポニンレベルは、一般的には、急性冠イベントの症状の発現時に上昇しない。一般的には、トロポニンレベルの上昇は、ACSの症状の発現の約4〜6時間後に検出可能である。したがって、急性心血管イベントの最初の0〜6時間の範囲内では、心筋梗塞の診断用バイオマーカーとしてトロポニンを使用すると偽陰性の結果の割合が比較的高くなる。したがって、心筋梗塞が心筋トロポニンアッセイにより認識されないことがあり、このため、治療が不適切になったりまたは遅れたりする可能性がある。前の世代のトロポニン検査よりも高感度であり、したがって、はるかに低い心筋トロポニンレベルを検出しうる新世代の心筋トロポニン検査を導入することにより、心筋トロポニンレベルの上昇の検出がより確実にかつより早期に行えるようになった。したがって、心筋イベントの場合、壊死をより早期に検出することが可能である。しかしながら、より高感度のトロポニン検査を用いた場合、急性イベントを患っていない安定冠心疾患の患者でも心筋トロポニンが再現性よく検出されうるという証拠が最近の研究によりもたらされた（未発表データ）。したがって、安定冠心疾患を有しかつまだ低いがすでに上昇した心筋トロポニンレベルを有する者がACSの症状を示した場合、検出可能な心筋トロポニンレベルの上昇が急性イベントによるものであるか、またはすでに存在する冠心疾患によるものであるかは不明である。これにより、誤診の可能性、例えば、UAPの代わりにMIと診断する可能性が増大し、その結果、有害な治療、間違った治療、および／または遅れた治療が行われる可能性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Morrow et al., National academy of clinical biochemistry guidelines: Clinical characteristics and utilization of biochemical markers in acute coronary syndrome, 2007, Circulation;115;356-375
【非特許文献２】Brogan G.X et al. Evaluation of a new rapid quantitative immunoassay for serum myoglobin versus CK-MB for ruling out acute myocardial infarction in the emergency department. 1994. Ann. Emerg. Med. 24(4):665-71
【非特許文献３】James McCord J. at al. Ninety-Minute Exclusion of Acute Myocardial Infarction By Use of Quantitative Point-of-Care Testing of Myoglobin and Troponin I. 2001. Circulation 104:1483
【非特許文献４】Morrow D. A. et al. National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice Guidelines: Clinical Characteristics and Utilization of Biochemical Markers in Acute Coronary Syndromes. 2007. Circulation,115:356-375
【非特許文献５】Okamoto et al., Clin Chem Lab Med 38(3):231-8 (2000) Human heart-type cytoplasmic fatty acid-binding protein (H-FABP) for the diagnosis of acute myocardial infarction. Clinical evaluation of H-FABP in comparison with myoglobin and creatine kinase isoenzyme MB
【非特許文献６】O'Donoghue et al., Circulation, 114;550-557 (2006) Prognostic Utility of Heart-Type Fatty Acid Binding Protein in patients with acute coronary syndrome
【非特許文献７】Ruzgar et al., Heart Vessels, 21;209-314 (2006) The use of human heart-type fatty acid-binding protein as an early diagnostic marker of myocardial necrosis in patients with acute coronary syndrome, and its comparison with troponin-T and its creatine kinase-myocardial band
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、急性冠症候群の症状を示しかつ検出限界近傍の心筋トロポニンレベルを有する被験者においてMIの確実かつ迅速な診断を可能にする診断および予後判定の手段および方法の必要性が明らかに存在する。該手段および方法は、該被験者の診断を可能し、かつ該被験者の適切な治療である心臓インターベンションを行いうる被験者の特定を可能にし、かつ上記に説明されたような現在の技術の欠点を回避するであろう。
【０００９】
したがって、本発明の根底にある技術的課題は、上述の必要性を満たす手段および方法の提供とみなされるものでなければならない。技術的課題は、特許請求の範囲および本明細書中の以下で特徴付けられる実施形態により解決される。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
したがって、本発明は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において心筋梗塞を診断する方法に関する。この方法は、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を少なくとも1つの参照量と比較するステップ、および
（c）ステップ（a）および（b）で得られた情報に基づいて心筋梗塞を診断するステップ
を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】H-FABPについての受信者動作特性（ROC）曲線。臨床転帰（非心筋梗塞（MI）変換者vs.心筋梗塞（MI）変換者）に基づいて所与の診断パラメータ（H-FABP）について診断感度vs.（1-特異性）を計算することによりROC曲線解析を行って診断精度を決定した。このROC曲線に組み込まれているのは、安定冠心疾患の患者およびACSの患者で得られたデータである（実施例参照）。臨床転帰MIについてのカットオフスコアは、4950pg/ml H-FABPである。（ROC-AUC：受信者動作特性曲線下面積、C.O. カットオフ）。
【図２】ミオグロビンについての受信者動作特性（ROC）曲線。臨床転帰（非心筋梗塞（MI）変換者vs.心筋梗塞（MI）変換者）に基づいて所与の診断パラメータ（ミオグロビン）について診断感度vs.（1-特異性）を計算することによりROC曲線解析を行って診断精度を決定した。このROC曲線に組み込まれているのは、安定冠心疾患の患者およびACSの患者で得られたデータである（実施例参照）。臨床転帰MIについてのカットオフスコアは、61ng/mlミオグロビンである。（ROC-AUC：受信者動作特性曲線下面積、C.O. カットオフ）。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明に係る上述の方法の一実施形態では、追加として、追加のステップ（aa）で該被験者のサンプル中のミオグロビンの量を決定し、追加のステップ（bb）でミオグロビンの少なくとも1つの参照量と比較する。したがって、ステップ（c'）では、ミオグロビンおよびH-FABPの決定された量と、ミオグロビンの量とミオグロビンの少なくとも1つの参照量との比較と、H-FABPの量とH-FABPの少なくとも1つの参照量との比較とに基づいて、心筋梗塞を診断する。好ましくは、ミオグロビンの測定の前にH-FABPの測定を行う。しかしながら、任意の順序で、すなわち、同時に、または最初にH-FABP、次にミオグロビンの順序で、または最初にミオグロビン、次にH-FABPの順序で、測定を行うことも考えられる。
【００１３】
本発明に係る方法は、好ましくは、in vitro法である。さらに、それは、上記で明示的に述べたステップに追加されるステップを含みうる。例えば、さらなるステップは、サンプルの前処理または本方法により得られた結果の評価に関連しうる。診断のモニタリング、確認、および細分類のために、本発明に係る方法を使用することも可能である。本方法は、手動で実施可能であるか、または自動化により支援可能である。好ましくは、ステップ（a）、（b）、および／または（c）は、自動化により、例えば、ステップ（a）では測定に好適なロボット装置もしくはセンサー装置により、またはステップ（b）ではコンピュータにより実行される比較により、全体的もしくは部分的に支援可能である。
【００１４】
「心筋梗塞を診断する」という用語は、本発明で規定される被験者（したがって、ACSに罹患しており、かつ検出可能であるがMIの指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者）において、心筋梗塞を最近発症したか否か、したがって、ACSの根本的な原因が心筋梗塞であるか不安定狭心症であるかを評価することを意味する。「心筋梗塞」という用語は、当業者に公知である。この用語は、長期間の虚血の結果として生じる心筋の不可逆的壊死を意味する。当業者であればわかるであろうが、診断は、通常、分析対象の被験者の100％に対して正しいことが意図されるわけではない。しかしながら、この用語は、診察対象の被験者の統計学的に有意な一部分に対して診断が妥当であることを必要とする。当業者であれば、あとは苦もなく、種々の周知の統計学的評価手段を用いて、例えば、信頼区間の決定、p値の決定、Studentのt検定、Mann-Whitney検定などを行って、一部分が統計学的に有意であるかどうかを決定することが可能である。詳細な内容は、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見いだされる。好ましい信頼区間は、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％、少なくとも98％、または少なくとも99％である。p値は、好ましくは、0.1、0.05、0.01、0.005、または0.0001である。好ましくは、本発明により想定される可能性として、所与のコホートの被験者の少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、または少なくとも90％に対して診断は正しいであろう。
【００１５】
本明細書中で用いられる「被験者」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを意味する。
【００１６】
被験者は、好ましくは、ACSの症状を示すものとする。「急性冠症候群」（ACS）という用語は、当業者であれば理解する。この用語は、急性心筋虚血により生じる一群の臨床症状を意味する。虚血自体は、冠動脈のアテローム性動脈硬化プラークの破壊から生じる。ACSの症状は、好ましくは、20分間超の胸痛、息切れ、悪心、嘔吐、および／または発汗である。さらに、胸痛は、多くの場合、左腕および左下顎角部に放射状に広がることが知られている。一般的には、こうした臨床症状、特定的には胸痛は、突然起こり、安静時またはごくわずかな労作後に現れることもある。さらに、本発明との関連では、「急性冠症候群」という用語はまた、ACSの疑いがあるか、ACSと推定されるか、またはACSの可能性があることを意味しうる。なぜなら、これらの表現は、ACSと一致する症状を示すが診断が最終的に確定していない患者に対して頻繁に用いられるからである（Morrow, 上掲を参照されたい）。ACS患者は、不安定狭心症（UAP）を発症する可能性があるか、またはこうした個体は、心筋梗塞（MI）に罹患している可能性がある。MIは、ST上昇型MI（STEMI）または非ST上昇型MI（NSTEMI）でありうる。MIは、冠心疾患CHDに属するものとして分類され、不安定狭心症UAPのようにCHDに属するものとして分類される他のイベントが先行する。ニトログリセリンの舌下投与により軽減される胸痛は、UAPの症状である。UAPは、低酸素血症および心筋虚血を引き起こす冠血管の部分閉塞により生じる。閉塞があまりにも重篤であるかまたは全体的である場合、不可逆的心筋壊死（これは心筋梗塞の根底をなす病理学的状態である）を生じる。一般的には、心電図（ECG）がST部分の上昇を示す場合、心電図検査によりSTEMIと診断される。ACSの症状の発現の少なくとも6時間後に心筋トロポニンレベルを決定することにより、UAPとNSTEMIとを識別することが可能である。トロポニンレベルが上昇した場合（心筋障害の指標となる）、NSTEMIであると推定される。MIは、明確な症状を示さずに発症することもある。すなわち、被験者は、なんら不快感を示さず、MIは、安定狭心症や不安定狭心症が先行しない。MIが起こると、続いて、左室機能不全（LVD）が起こる可能性がある。
【００１７】
特に想定されることとして、被験者は、ACSの前に冠心疾患（しばしば冠動脈疾患とも呼ばれる）に罹患しておりかつACSの症状の発現時に（したがって、症状の発現前にも）検出可能な心筋トロポニンレベルをすでに有しているものとする。特定的には、該被験者は、ACSの症状の発現時、検出可能であるがMIの指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有するものとする。該被験者に対して、本発明に係る方法は、特に有利であろう。なぜなら、ACSの場合、心筋トロポニンのレベルの上昇が急性イベント（進行中の壊死）の指標であるかまたはすでに存在する冠心疾患によるものであるか不明であるからである。
【００１８】
「心筋トロポニン」という用語は、心臓の細胞、好ましくは心内膜下の細胞で発現されるすべてのトロポニンアイソフォームを意味する。こうしたアイソフォームは、例えば、Anderson 1995, Circulation Research, vol. 76, no. 4: 681-686 および Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493に記載されるように、当技術分野で十分に特徴付けられている。好ましくは、心筋トロポニンは、トロポニンTおよび／またはトロポニンI、最も好ましくはトロポニンTを意味する。当然のことながら、トロポニンのアイソフォームは、一緒にすなわち同時にもしくは逐次的に、または個別にすなわち他のアイソフォームをまったく定量せずに、本発明に係る方法で測定可能である。ヒトトロポニンTおよびヒトトロポニンIのアミノ酸配列は、Anderson, 上掲および Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493に開示されている。
【００１９】
「心筋トロポニン」という用語はまた、上述の特異的トロポニンの変異体、すなわち、好ましくはトロポニンT（TnT）またはトロポニンI（TnI）の変異体を包含する。そのような変異体は、特異的心筋トロポニンと少なくとも同一の本質的な生物学的性質および免疫学的性質を有する。特定的には、それらが、本明細書中で参照される同一の特異的アッセイにより、例えば、該心筋トロポニンを特異的に認識するポリクロナール抗体またはモノクローナル抗体を用いたELISAアッセイにより、検出可能な場合、それらは、同一の本質的な生物学的性質および免疫学的性質を共有する。さらに、当然のことながら、本発明に従って参照される変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、および／または付加に起因して異なるアミノ酸配列を有する。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、特異的トロポニンのアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、または99％同一である。変異体は、対立遺伝子変異体、または任意の他の生物種特異的なホモログ、パラログ、もしくはオルソログでありうる。さらに、本明細書中で参照される変異体としては、特異的心筋トロポニンまたは上述のタイプの変異体の断片が挙げられるが、こうした断片は、上記で参照した本質的な免疫学的性質および生物学的性質を有するものでなければならない。そのような断片は、例えば、トロポニンの分解産物でありうる。さらには、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が挙げられる。
【００２０】
本明細書中で用いられる「心筋トロポニンレベル」という用語は、心筋トロポニンの濃度、好ましくはTnTの濃度を意味する。好ましくは、この用語は、被験者の血漿サンプル中または血清サンプル中の心筋トロポニンの濃度を意味する。「検出可能な心筋トロポニンレベル」という用語は、ゼロとは異なりかつ当技術分野で公知の手段および方法により、例えば、市販の心筋トロポニンアッセイにより検出可能な任意の心筋トロポニンレベルを意味する。好ましくは、「検出可能な心筋トロポニンレベル」は、トロポニンレベルの決定に用いられるアッセイの最小検出限界以上の濃度を意味する。好ましくは、検出可能なトロポニンレベルは、0.001ng/ml以上、0.005ng/ml以上、0.0075ng/ml以上、より好ましくは0.01ng/ml以上または0.002ng/ml以上の任意の濃度を意味する。最も好ましくは、検出可能な心筋トロポニンレベルは、0.002ng/ml以上の任意の濃度を意味する。当然のことながら、心筋トロポニンの検出可能なレベル（例えば0.002ng/ml超）は、そのようなレベルが健常者では通常検出されないので、該心筋トロポニンのレベルの上昇であるとみなされる。さらに、心筋トロポニンのレベルの上昇は、壊死の指標となる。
【００２１】
「心筋梗塞の指標とみなされるトロポニンレベル」という用語は、心筋梗塞の指標となる一般に認められるトロポニン濃度を意味する。好ましくは、心筋梗塞の指標とみなされるレベルは、好適な基準集団の99パーセンタイル濃度（カットオフスコア）を超える濃度を意味する。このレベルは、偽陽性の結果を回避すべくThe European Society of Cardiology および The American College of Cardiologyの合同委員会により作成された推奨基準に基づく（The Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee. Myocardial infarction redefined--a consensus document of the joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee for the Redefinition of Myocardial Infarction. J Am Coll Cardiol 2000;36:959-969）。当業者であれば、好適な基準集団をいかにして選択するかおよび99パーセンタイル濃度をいかにして決定するかを知っている。当然のことながら、この濃度は、心筋トロポニン濃度の決定に用いられるアッセイによって、また選択される基準集団によって異なる可能性がある。本発明との関連でMIの指標とみなされる好ましい心筋トロポニンレベルは、0.05ng/ml、0.075ng/ml、0.099ng/ml、0.1ng/ml、0.2ng/ml、および0.3ng/mlでありうるが、これらに限定されるものではない。本発明との関連でMIの指標とみなされる最も好ましい心筋トロポニンレベルは、0.1ng/mlである。
【００２２】
本発明に係る方法の好ましい実施形態では、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者のトロポニンレベル、特定的にはトロポニンTレベル（本出願で規定される）は、0.002〜0.1ng/mlの範囲内である（0.002ng/ml以上であるが0.1ng/ml未満である）。
【００２３】
本明細書中ではH-FABPまたは心臓脂肪酸結合タンパク質とも呼ばれる心臓型脂肪酸結合タンパク質は、心筋細胞内で長鎖脂肪酸の主要なトランスポーターとして機能する低分子サイトゾルタンパク質である。H-FABPは、心筋中に存在し、心筋傷害に応答して血流中に急速に放出されると一般に考えられている。いくつかの研究、例えば、Okamoto et al., Clin Chem Lab Med 38(3):231-8 (2000) Human heart-type cytoplasmic fatty acid-binding protein (H-FABP) for the diagnosis of acute myocardial infarction. Clinical evaluation of H-FABP in comparison with myoglobin and creatine kinase isoenzyme MB; O'Donoghue et al., Circulation, 114;550-557 (2006) Prognostic Utility of Heart-Type Fatty Acid Binding Protein in patients with acute coronary syndrome; または Ruzgar et al., Heart Vessels, 21;209-314 (2006) The use of human heart-type fatty acid-binding protein as an early diagnostic marker of myocardial necrosis in patients with acute coronary syndrome, and its comparison with troponin T and its creatine kinase-myocardial bandにより、H-FABPは、心筋梗塞の早期生化学的マーカーであることが示されている。H-FABPは、当技術分野で周知である。さらに、H-FABPの量を決定するアッセイもまた、周知である。
【００２４】
ミオグロビンは、154アミノ酸の単一ポリペプチド鎖よりなる細胞質ヘムタンパク質であり、ほぼ限定的に心筋細胞および有酸素性骨格筋繊維でのみ発現される。ヘモグロビンのように、ミオグロビンは、酸素に可逆的に結合するので、代謝活性増大期に赤血球からミトコンドリアへの酸素運搬を促進しうるか、または低酸素状態時もしくは無酸素状態時に酸素リザーバーとして機能しうる。Ordway G. and Garry D. J., Myoglobin: an essential hemoprotein in striated muscle. 2004. Journal of Experimental Biology 207, 3441-3446 (2004)。ミオグロビンは、当技術分野で周知である。さらに、ミオグロビンの量を決定するアッセイもまた、周知である。
【００２５】
本明細書中で用いられるミオグロビンおよびH-FABPは、それぞれ、ミオグロビンポリペプチドおよびH-FABPポリペプチドの変異体をも包含する。そのような変異体は、それぞれ、特異的H-FABPポリペプチドおよび特異的ミオグロビンポリペプチドと少なくとも同一の本質的な生物学的性質および免疫学的性質を有する。特定的には、それらが、本明細書中で参照される同一の特異的アッセイにより、例えば、それぞれ該H-FABPポリペプチドおよび該ミオグロビンポリペプチドを特異的に認識するポリクロナール抗体またはモノクローナル抗体を用いたELISAアッセイにより検出可能な場合、それらは、同一の本質的な生物学的性質および免疫学的性質を共有する。さらに、当然のことながら、本発明に従って参照される変異体は、少なくとも1つのアミノ酸の置換、欠失、および／または付加に起因して異なるアミノ酸配列を有する。この場合、変異体のアミノ酸配列は、依然として、好ましくは、それぞれ特異的H-FABPポリペプチドおよび特異的ミオグロビンポリペプチドのアミノ配列と少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、または99％同一である。2つのアミノ酸配列間の同一性の程度は、当技術分野で周知のアルゴリズムにより決定可能である。好ましくは、同一性の程度は、比較ウィンドウ全体にわたり最適にアライメントされた2つの配列を比較することにより決定されるべきである。この場合、比較ウィンドウ内のアミノ酸配列の断片は、最適アライメントで参照配列（これは付加や欠失を含まない）と比較して付加または欠失（例えばギャップまたはオーバーハング）を含みうる。同一アミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して一致位置の数を求め、一致位置の数を比較ウィンドウ内の位置の全数で除算し、その結果に100を掛けて配列同一性パーセントを求めることにより、パーセントを計算する。比較のための配列の最適アライメントは、Smith and Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981)の局所的相同性アルゴリズムにより、Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)の相同性アライメントアルゴリズムにより、Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad Sci. (USA) 85: 2444 (1988)の類似性検索法により、これらのアルゴリズムをコンピュータで実行することにより（GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI）、または目視検査により、実施可能である。比較のために2つの配列が特定されたとして、それらの最適アライメントひいては同一性の程度を決定するために、好ましくは、GAPおよびBESTFITを利用する。好ましくは、ギャップ加重として5.00およびギャップ長加重として0.30のデフォルト値を使用する。上記で参照した変異体は、対立遺伝子変異体、または任意の他の生物種特異的なホモログ、パラログ、もしくはオルソログでありうる。さらに、本明細書中で参照される変異体としては、それぞれ特異的H-FABPポリペプチドおよび特異的ミオグロビンポリペプチドまたは上述のタイプの変異体の断片が挙げられるが、こうした断片は、上記で参照した本質的な免疫学的性質および生物学的性質を有するものでなければならない。そのような断片は、例えば、それぞれH-FABPポリペプチドおよびミオグロビンポリペプチドの分解産物でありうる。さらには、リン酸化やミリスチル化のような翻訳後修飾に起因して異なる変異体が挙げられる。
【００２６】
「サンプル」という用語は、体液のサンプル、分離された細胞のサンプル、または組織もしくは器官に由来するサンプルを意味する。体液のサンプルは、周知の技術により取得可能であり、好ましくは、血液、血漿、血清、または尿のサンプル、より好ましくは、血液、血漿、または血清のサンプルを包含する。組織または器官のサンプルは、例えば生検により、任意の組織または器官から取得可能である。分離された細胞は、遠心分離や細胞分取のような分離技術により体液または組織もしくは器官から取得可能である。好ましくは、細胞サンプル、組織サンプル、または器官サンプルは、本明細書中で参照されるペプチドを発現または産生する細胞、組織、または器官から取得される。好ましくは、「サンプル」という用語は、血漿サンプルまたは血清サンプル、より好ましくは血清サンプルを意味する。
【００２７】
サンプルは、当業者に公知の適切な時点で取得される。好ましくは、サンプルは、急性冠症候群の症状の発現後すぐに、好ましくは2時間以下（したがって2時間以内）、より好ましくは4時間以下、より好ましくは6時間以下で、本発明による被験者から取得される。本発明に係る方法は、ACSの症状の発現後すぐにサンプルが取得される場合に特に有利である。そのような場合、検出可能な心筋トロポニンレベルの上昇が急性イベントによるものであるかまたはすでに存在する冠心疾患によるものであるかは不明である。
【００２８】
H-FABP、好ましくはヒトH-FABP、またはミオグロビン、好ましくはヒトミオグロビン、または本明細書中で参照される任意の他のペプチドもしくはポリペプチドもしくはタンパク質の量の決定とは、量または濃度を好ましくは半定量的または定量的に測定することを意味する。ポリペプチドおよびタンパク質という用語は、本出願全体を通して同義的に使用される。測定は、直接的または間接的に実施可能である。直接的測定とは、ペプチド自体またはポリペプチド自体から得られるシグナルおよびサンプル中に存在するペプチドの分子数と直接的に相関するシグナル強度に基づいてペプチドまたはポリペプチドの量または濃度を測定することを意味する。そのようなシグナル（本明細書中では強度シグナルと呼ばれることもある）は、例えば、ペプチドまたはポリペプチドの特異的な物理的性質または化学的性質の強度値を測定することにより取得可能である。間接的測定としては、二次成分（すなわち、ペプチド自体でもポリペプチド自体でもない成分）、または生物学的読取り系、例えば、測定可能な細胞応答、リガンド、標識、もしくは酵素反応生成物から得られるシグナルを測定することが挙げられる。
【００２９】
本発明によれば、ペプチドまたはポリペプチドの量の決定は、サンプル中のペプチドの量を決定するためのすべての公知の手段により達成可能である。該手段は、種々のサンドイッチアッセイ方式、競合アッセイ方式、または他のアッセイ方式で標識分子を利用しうるイムノアッセイのデバイスおよび方法を含む。該アッセイでは、ペプチドまたはポリペプチドの存在または不在の指標となるシグナルが発生されるであろう。さらに、シグナル強度は、好ましくは、サンプル中に存在するポリペプチドの量に直接的もしくは間接的に相関付けることができる（例えば反比例）。さらなる好適な方法は、ペプチドまたはポリペプチドに特異的な物理的性質または化学的性質、例えば、その正確な分子質量またはNMRスペクトルを測定することを含む。該方法は、好ましくは、バイオセンサー、イムノアッセイに連動された光学デバイス、バイオチップ、分析装置、例えば、質量分析計、NMR分析器、またはクロマトグラフィー装置を含む。さらに、方法としては、マイクロプレートELISAに基づく方法、完全自動化もしくはロボット化イムノアッセイ（例えば、ElecsysTM分析器を用いて実施可能）、CBA（酵素的コバルト結合アッセイ、例えば、Roche-HitachiTM分析器を用いて実施可能）、およびラテックス凝集アッセイ（例えば、Roche-HitachiTM分析器を用いて実施可能）が挙げられる。
【００３０】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドの量の決定は、（a）強度がペプチドまたはポリペプチドの量の指標となる細胞応答を引き起しうる細胞を適切な時間にわたり該ペプチドまたは該ポリペプチドに接触させるステップ、および（b）細胞応答を測定するステップを含む。細胞応答を測定するために、好ましくは、サンプルまたは処理サンプルを細胞培養物に添加して、内部または外部の細胞応答を測定する。細胞応答としては、レポーター遺伝子の測定可能な発現、またはペプチド、ポリペプチド、もしくは小分子などの物質の分泌が挙げられうる。発現または物質は、ペプチドまたはポリペプチドの量と相関する強度シグナルを生成するものとする。
【００３１】
また、好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドの量の決定は、サンプル中のペプチドまたはポリペプチドから取得可能な特異的強度シグナルを測定するステップを含む。以上に記載したように、そのようなシグナルは、質量スペクトルで観測されるペプチドもしくはポリペプチドに特異的なm/z変量における観測シグナル強度またはペプチドもしくはポリペプチドに特異的なNMRスペクトルでありうる。
【００３２】
ペプチドまたはポリペプチドの量の決定は、好ましくは、（a）ペプチドを特異的リガンドに接触させるステップ、（b）（場合により）非結合リガンドを除去するステップ、および（c）結合リガンドの量を測定するステップを含む。結合リガンドは、強度シグナルを生成するであろう。本発明に係る結合は、共有結合および非共有結合の両方を包含する。本発明に係るリガンドは、本明細書に記載のペプチドまたはポリペプチドに結合する任意の化合物、例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸、または小分子でありうる。好ましいリガンドとしては、抗体、核酸、ペプチドまたはポリペプチド、例えば、ペプチドまたはポリペプチドに対するレセプターまたは結合性パートナーおよびペプチドに対する結合ドメインを含むそれらの断片、ならびにアプタマー、例えば、核酸アプタマーまたはペプチドアプタマーが挙げられる。そのようなリガンドの調製方法は、当技術分野で周知である。例えば、好適な抗体またはアプタマーの同定法および産生法もまた、供給業者により提供される。当業者は、より高い親和性または特異性を有するそのようなリガンドの誘導体の開発方法に精通している。例えば、ランダム突然変異を核酸、ペプチド、またはポリペプチドに導入することが可能である。次に、当技術分野で公知のスクリーニング手順、例えば、ファージディスプレイにより、これらの誘導体を結合に関して試験することが可能である。本明細書中で参照される抗体は、ポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体の両方、さらにはそれらの断片、例えば、抗原またはハプテンに結合可能なFv、Fab、およびF(ab)2フラグメントを包含する。本発明はまた、一本鎖抗体、および所望の抗原特異性を呈する非ヒトドナー抗体のアミノ酸配列とヒトアクセプター抗体の配列とが組み合わされたヒト化ハイブリッド抗体を包含する。ドナー配列は、通常、ドナーの少なくとも抗原結合性アミノ酸残基を含むであろうが、ドナー抗体の他の構造上および／または機能上適合するアミノ酸残基をも含みうる。そのようなハイブリッドは、当技術分野で周知のいくつかの方法により調製可能である。好ましくは、リガンドまたは作用剤は、ペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合する。本発明に係る特異的結合は、リガンドまたは作用剤が分析対象のサンプル中に存在する他のペプチド、ポリペプチド、または物質に実質的に結合する（それらと「交差反応する」）ものであってはならないことを意味する。好ましくは、特異的に結合されるペプチドまたはポリペプチドは、任意の他の関連するペプチドまたはポリペプチドのアフィニティーの少なくとも3倍、より好ましくは少なくとも10倍、さらにより好ましくは少なくとも50倍のアフィニティーで結合されなければならない。非特異的結合は、それが、例えば、ウェスタンブロット上のサイズによりまたはサンプル中の比較的高い存在量により、依然として識別可能でありかつ明確に測定可能であるならば、許容されうる。リガンドの結合は、当技術分野で公知の任意の方法により測定可能である。好ましくは、該方法は、半定量的または定量的である。好適な方法について、以下で説明する。
【００３３】
第1に、例えば、NMRまたは表面プラズモン共鳴により、リガンドの結合を直接測定しうる。
【００３４】
第2に、リガンドが対象ペプチドまたは対象ポリペプチドの酵素活性の基質としても機能するのであれば、酵素反応生成物を測定することが可能である（例えば、切断された基質の量をウェスタンブロット上などで測定することにより、プロテアーゼの量を測定することが可能である）。他の選択肢として、リガンドが酵素的性質自体を呈しうるものであれば、「リガンド／ペプチドもしくはポリペプチド」複合体またはそれぞれペプチドもしくはポリペプチドにより結合されたリガンドを好適な基質に接触させて、強度シグナルの生成により検出を行えるようにすることが可能である。酵素反応生成物の測定では、好ましくは、基質の量は飽和状態である。また、反応前、検出可能な標識で基質を標識化することも可能である。好ましくは、サンプルを適切な時間にわたり基質に接触させる。適切な時間とは、検出可能な（好ましくは測定可能な）量の生成物を産生させるのに必要な時間を意味する。生成物の量を測定する代わりに、所与の（例えば検出可能な）量の生成物が出現するのに必要な時間を測定することも可能である。
【００３５】
第3に、リガンドを共有結合または非共有結合で標識に結合させることにより、リガンドの検出および測定を行えるようにすることが可能である。標識化は、直接的または間接的な方法により実施可能である。直接的標識化は、標識をリガンドに（共有結合または非共有結合で）直接結合させることを含む。間接的標識化は、一次リガンドに二次リガンドを（共有結合または非共有結合で）結合させることを含む。二次リガンドは、一次リガンドに特異的に結合するものでなければならない。該二次リガンドは、好適な標識に結合可能であり、かつ／または二次リガンドに結合する三次リガンドの標的（レセプター）でありうる。シグナルを増大させるために、二次、三次、またはより高次のリガンドがしばしば用いられる。好適な二次およびより高次のリガンドとしては、抗体、二次抗体、および周知のストレプトアビジン-ビオチン系（Vector Laboratories, Inc.）が挙げられうる。当技術分野で公知のように、リガンドまたは基質を1種以上のタグで「タグ付け」することも可能である。その場合、そのようなタグは、より高次のリガンドの標的でありうる。好適なタグとしては、ビオチン、ジゴキシゲニン、Hisタグ、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ、FLAG、GFP、mycタグ、A型インフルエンザウイルスヘマグルチニン（HA）、マルトース結合タンパク質などが挙げられる。ペプチドまたはポリペプチドの場合、タグは、好ましくはN末端および／またはC末端に存在する。好適な標識は、適切な検出方法により検出可能な任意の標識である。典型的な標識としては、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル、ルミノール、ルテニウム、酵素活性標識、放射性標識、磁気標識（「例えば、磁気ビーズ」、常磁性標識および超常磁性標識を包含する）、および蛍光標識が挙げられる。酵素活性標識としては、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびそれらの誘導体が挙げられる。検出に好適な基質としては、ジ-アミノ-ベンジジン(DAB)、3,3'-5,5'-テトラメチルベンジジン、NBT-BCIP（4-ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-ホスフェート（Roche Diagnosticsから既製のストック溶液として入手可能））、CDP-StarTM（Amersham Biosciences）、ECFTM（Amersham Biosciences）が挙げられる。好適な酵素-基質の組合せを用いれば、当技術分野で公知の方法（例えば、感光性フィルムまたは好適なカメラシステムを用いる方法）により測定しうる着色反応生成物（蛍光または化学発光）を生成させることが可能である。酵素反応の測定に関しては、上記に記載した判定基準が同じように適用される。典型的な蛍光標識としては、蛍光タンパク質（例えば、GFPおよびその誘導体）、Cy3、Cy5、Texas Red、フルオレセイン、およびAlexa色素（例えば、Alexa 568）が挙げられる。さらなる蛍光標識は、例えば、Molecular Probes (Oregon)から入手可能である。さらに、蛍光標識として量子ドットの使用も考えられる。典型的な放射性標識としては、35S、125I、32P、33Pなどが挙げられる。放射性標識は、任意の公知の適切な方法、例えば、感光性フィルムまたは蛍燐光体イメージャーにより、検出可能である。本発明に係る好適な測定方法としては、この他に、沈降（特定的には免疫沈降）、電気化学発光（電解発生化学発光）、RIA（放射免疫アッセイ）、ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、電気化学発光サンドイッチ免疫アッセイ（ECLIA）、解離増強ランタニド蛍光免疫アッセイ（DELFIA）、シンチレーション近接アッセイ（SPA）、比濁法、比朧法、ラテックス増強比濁法もしくはラテックス増強比朧法、または固相免疫試験が挙げられる。当技術分野で公知のさらなる方法（例えば、ゲル電気泳動、2Dゲル電気泳動、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）、ウェスタンブロッティング、および質量分析）を、単独でまたは標識化もしくは上記に記載の他の検出方法と組み合わせて、使用することが可能である。
【００３６】
ペプチドまたはポリペプチドの量はまた、好ましくは、次のように、すなわち、（a）上記で指定されたペプチドまたはポリペプチドに対するリガンドを含む固体支持体を、ペプチドまたはポリペプチドを含むサンプルに接触させて、（b）支持体に結合されたペプチドまたはポリペプチドの量を測定することにより、決定可能である。リガンド（好ましくは、核酸、ペプチド、ポリペプチド、抗体、およびアプタマーよりなる群から選択される）は、好ましくは、固相化形態で固体支持体上に存在する。固体支持体を製造するための材料は、当技術分野で周知であり、特に、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンのチップおよび表面、ニトロセルロースストリップ、膜、シート、ジュラサイト（duracyte）、反応トレーのウェルおよび壁、プラスチックチューブなどが挙げられる。リガンドまたは作用剤は、多種多様な担体に結合可能である。周知の担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリビニルクロリド、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然セルロースおよび変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、本発明の目的では、可溶性または不溶性のいずれも可能である。該リガンドの固定化／固相化に好適な方法は、周知であり、イオン性相互作用、疎水性相互作用、共有結合相互作用などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明に係るアレイとして「サスペンジョンアレイ」を使用することも考えられる（Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12）。そのようなサスペンジョンアレイでは、マイクロビーズやマイクロスフェアなどの担体は、懸濁状態で存在する。アレイは、さまざまなリガンドを担持する標識化されている可能性もあるさまざまなマイクロビーズまたはマイクロスフェアで構成される。そのようなアレイ、例えば、固相化学および光活性保護基に基づくアレイの製造方法は、広く知られている（US 5,744,305）。
【００３７】
好ましくは、H-FABPの量およびミオグロビンの量(ミオグロビンを測定する場合)は、本発明に規定される被験者から得られた血液サンプル中で決定される。好ましくは、そのような測定は、ELISAにより行われる。ELISAによるそのような測定は、例えば、それぞれ、H-FABPの量を決定するためのヒト心臓型脂肪酸結合タンパク質用のHBT ELISA Test Kit (HyCult Biotechnology, Uden, The Netherlands)を用いることにより、およびミオグロビンの量を決定するためのTina-Quant（登録商標） Myoglobin Test System (Roche Diagnostics)を用いることにより、実施可能である。
【００３８】
本明細書中で用いられる「量」という用語は、絶対量（例えば、H-FABPまたはミオグロビンの絶対量）、相対量または相対濃度（例えば、H-FABPまたはミオグロビンの相対量または相対濃度）、さらにはそれらと相関する任意の値またはパラメータを包含する。そのような値またはパラメータは、直接的測定により該ペプチドから得られるいずれも特異的な物理的性質または化学的性質に由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトルまたはNMRスペクトルの強度値を包含する。さらに、本明細書中の他の箇所に指定された間接的測定により得られるすべての値またはパラメータ、例えば、ペプチドに応答する生物学的読取り系から決定される発現レベル、または特異的に結合されたリガンドから得られる強度シグナルが包含される。当然のことながら、上述の量またはパラメータと相関する値もまた、いずれも標準的な数学演算により取得可能である。
【００３９】
本明細書中で用いられる「比較すること」という用語は、分析対象のサンプルに含まれるペプチド、ポリペプチド、タンパク質の量を本明細書中の他の箇所に指定された好適な参照元の量と比較することを包含する。当然のことながら、本明細書中で用いられる比較は、対応するパラメータまたは値の比較を意味する。例えば、絶対量は、絶対参照量と比較され、一方、濃度は、参照濃度と比較され、または被験サンプルから得られた強度シグナルは、参照サンプルの同一タイプの強度シグナルと比較される。本発明に係る方法のステップ（b）で参照される比較は、手動で実施可能であるかまたはコンピュータにより支援可能である。コンピュータにより支援される比較では、決定された量の値をデータベース中に記憶された好適な参照に対応する値とコンピュータプログラムにより比較することが可能である。コンピュータプログラムはさらに、比較の結果を評価することが可能である。すなわち、好適な出力形式で所望の評価を自動で提供することが可能である。ステップ（a）で決定された量と好適な参照量との比較に基づいて、前記被験者でMIを診断することが可能である。当然のことながら、本発明に係る方法のステップ（a）で決定されたH-FABPの量は、本出願中の他の箇所に指定されたH-FABPの参照量とステップ(b)で比較され、ミオグロビンの量は、ミオグロビンの参照量と比較される。
【００４０】
したがって、本明細書中で用いられる「参照量」という用語は、急性冠症候群に罹患しておりかつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者における（したがって、本発明に規定される被験者における）、MIの最近の発症の確定を可能にする量またはMIの最近の発症の除外を可能にする量のいずれかを意味する。これに関連する最近の発症とは、好ましくは、該被験者からサンプルを取得する前の6時間以内、より好ましくは4時間以内、最も好ましくは2時間以内にMIを発症したことを意味する。好ましくは、MIを確定するための参照量は、好ましくはサンプルを取得する前の6時間以内、より好ましくは4時間以内、最も好ましくは2時間以内にMIに罹患したことがわかっている本発明に規定される被験者から導出可能である。MIの最近の発症を除外するための参照量は、MIに罹患したことがないことがわかっている本発明に規定される被験者から導出可能である。さらに、MIの最近の発症を除外するための参照量は、低いが検出可能な心筋トロポニンレベル（上記で指定されたとおり）を有しかつMIに罹患しなかった安定冠心疾患の被験者から導出可能である。MIの発症を確定するための参照量よりも多い本発明に規定される被験者のH-FABPの量およびミオグロビンの量（ミオグロビンを測定する場合）は、該被験者におけるMIの最近の発症の指標となるものとする（したがって、ACSの原因がMIであることの指標となるものとする）。MIの発症を除外するための参照量よりも少ない本発明に規定される被験者のH-FABPの量および（ミオグロビンを測定する場合）ミオグロビンの量は、MI梗塞を最近発症していないこと、したがって該被験者が好ましくはUAPに罹患していることの指標であるものとする（したがって、ACSの原因がUAPであることの指標であるものとする）。本発明との関連では、当然のことながら、H-FABP量が上記で述べた参照量（MIの最近の発症を確定するための参照量およびMIの最近の発症を除外するための参照量）の間にある本発明に規定される被験者は、再度診断が必要であろう。好ましくは、これはまた、ミオグロビンおよびH-FABPの両方の量が決定されかつこれらの量が対応しない稀な場合、例えば、一方の量はそれぞれの参照量よりも多い（または少ない）が他方の量はそれぞれの参照量よりも多くない（または少なくない）稀な場合にも行われるであろう。新しい診断は、好ましくは、マーカー（複数種可）の量を決定することによりかつ該被験者の新しい（したがって、より最近取得した）サンプルで行われる。新しいサンプルは、好ましくは、最初のサンプルの取得の1時間後、2時間後、3時間後に被験者から取得可能である。それに加えて、該新しいサンプルでミオグロビンを測定することが可能である。サンプルの取得後、該新しいサンプルでH-FABPの量およびミオグロビンの量を決定することが可能である。次に、こうして得られた結果（複数可）を参照量（本出願中の他の箇所に記載される）と比較することが可能である。好ましくは、心筋トロポニンの量もまた、サンプルで決定され、診断に用いられる。好ましくは、ACSの症状を示した6時間後における0.1ng/mlよりも多い心筋トロポニンTの量は、MIの指標となる。
【００４１】
当業者であれば、参照量をいかにして決定するかを知っている。診断の所望の感度または特異性に基づいて参照量を選択することも可能であることはわかるであろう。したがって、当業者であれば、所望の感度および特異性に基づいて参照量を選択することが可能である。好適な参照量を決定するための手段は、当業者に公知であり、例えば、臨床試験に基づいてレシーバーオペレーター曲線（ROC）から参照量を決定することが可能である。
【００４２】
H-FABPの閾値量を規定する、本発明に規定される被験者におけるMIの最近の発症を確定するためのH-FABPの参照量は、4950pg/ml、5550pg/ml、もしくは6000pg/ml、またはより好ましくは5700pg/mlである。
【００４３】
MIの最近の発症を確定するためのH-FABPの参照量よりも多いH-FABPの量は、より好ましくは、MI（特定的にはNSTEMI）の最近の発症の指標となる。
【００４４】
H-FABPに加えて、本発明に規定される被験者のサンプル中でミオグロビンの量を決定して参照量と比較する場合、ミオグロビンの閾値量を規定する、本発明に規定される被験者におけるMIの最近の発症を確定するためのミオグロビンの参照量は、64ng/mlまたは69ng/ml、より好ましくは77ng/mlである。
【００４５】
MIの最近の発症を確定するためのミオグロビンの参照量よりも多いミオグロビンの量は、より好ましくは、被験者のサンプル中のH-FABPの量もまた同様にMIの最近の発症を確定するためのH-FABPの参照量より多いのであれば、MI（特定的にはNSTEMI）の最近の発症の指標となる。
【００４６】
H-FABPの閾値量を規定する、本発明に係る被験者におけるMIの最近の発症を除外するためのH-FABPの参照量は、2100pg/mlもしくは2300pg/ml、またはより好ましくは2500pg/mlである。
【００４７】
最近の発症を除外するためのH-FABPの参照量よりも少ないH-FABPの量は、より好ましくは、本発明に規定される被験者において心筋梗塞を発症しなかったことの指標となる。好ましくは、結果として、MIの発症を除外することが可能であり、かつ例えばUAPであると推定することが可能である。
【００４８】
H-FABPに加えて、本発明に規定される被験者のサンプルでミオグロビンの量を決定して参照量と比較する場合、ミオグロビンの閾値量を規定する、本発明に係る被験者におけるMIの最近の発症を除外するためのミオグロビンの参照量は、28ng/mlもしくは61ng/ml、またはより好ましくは55ng/mlである。
【００４９】
MIの最近の発症を除外するためのミオグロビンの参照量よりも少ないミオグロビンの量は、より好ましくは、被験者のサンプル中のH-FABPの量もまた同様にMIの最近の発症を除外するためのH-FABPの参照量よりも少ないのであれば、本発明に規定される被験者において心筋梗塞を発症しなかったことの指標となる。好ましくは、結果として、MIの発症を除外することが可能であり、かつ例えばUAPであると推定することが可能である。
【００５０】
「少なくとも1つの参照量」という用語は、1つもしくは1つより多い参照量（例えば2つの参照量）、例えば、MIの最近の発症を確定するための参照量およびMIの最近の発症を除外するための参照量を意味する。
【００５１】
有利には、本発明の根底をなす研究によれば、本発明に規定される被験者（したがって、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるがMIの指標とみなされるレベルよりも低いトロポニンレベルを有する被験者）におけるH-FABPの量の決定および決定された量と少なくとも1つの参照量との比較が該被験者におけるMIの診断に必要であることが判明した。ACSまたは推定ACSの症状の発現直後の心筋トロポニンTレベルが低いが検出可能である場合のMIの発症の評価にH-FABPが必要であることが判明したので、上述の方法は、先行技術のものよりも信頼性が高い。本発明の根底をなす研究では、ACSの症状を示す患者でH-FABPレベルおよびTnTレベルを決定した（症状の発現後の最初の2時間以内）。0.002ng/mlの検出限界を有する高感度トロポニンTアッセイを用いることによりTnTレベルを決定した。安定冠疾患の患者（すなわち、顕性急性イベントのない患者）でTnTおよびH-FABPの量を決定する対照実験を行った。これら実験から、安定冠疾患の被験者でもTnTが検出されうることがわかった。さらに、上述の研究のデータを含む受信者動作特性（ROC）曲線解析から、H-FABPが心筋梗塞の強力な生化学的マーカーであることが示された（図1）。特定的には、5700pg/mlよりも多い本発明に規定される被験者でのH-FABP量は、MIの最近の発症の指標となり（確定）、一方、2500pg/mlよりも少ない量は、MIを最近発症しなかったことの指標となる（除外）。さらに、追加として被験者のサンプル中のミオグロビンの量を決定してミオグロビンの参照量と比較する場合、本発明に規定される被験者のサンプル中のH-FABPの測定に基づく診断の感度および特異性は、より一層増大される。特定的には、77ng/mlよりも多い本発明に規定される被験者でのミオグロビン量は、MIの最近の発症の指標となり（確定）、一方、55ng/mlよりも少ない量は、MIを最近発症しなかったことの指標となる（除外）（図2）。本発明のこの態様のおかげで、低いが検出可能な（検出可能であるがMIの指標とみなされるレベルよりも低い）心筋トロポニンレベルを有するACSまたは推定ACSの患者の診断をより確実に行うことが可能である。本発明の根底をなす研究の知見は、（a）すでに存在する冠心疾患が原因で低いが検出可能な心筋トロポニンレベル（したがって心筋トロポニンレベルの上昇）をすでに有するうえにACSの症状をも示す被験者および（b）心筋トロポニンレベルを決定するためのサンプルを取得した時点で低いが検出可能な心筋トロポニンレベルを有する（例えば、サンプルをあまりにも早期に取得したため）がMIを最近発症したACSの被験者の診断に特に有利であろう。（a）および（b）のいずれの場合にも、H-FABPの測定は、診断に有益なツール、特定的にはUAPとMIとを識別するのに有益なツールであろう。診断後、それに応じて被験者を治療することが可能である。H-FABPを測定しない場合、診断を誤る可能性があり、その結果、指定の被験者の間違った治療、有害な治療、および／または遅れた治療が行われると推定される。さらに、ミオグロビンをも測定する場合、診断の感度および特異性をより一層増大させることが可能である。
【００５２】
本発明に係る方法の好ましい実施形態では、本方法は、急性冠症候群に罹患しておりかつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において、心筋梗塞（MI）と不安定狭心症（UAP）との識別を可能にする。
【００５３】
したがって、本発明に係る方法は、一実施形態では、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において心筋梗塞と不安定狭心症とを識別する方法である。この方法は、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を少なくとも1つの参照量と比較するステップ、および
（c）ステップ（a）および（b）で得られた情報に基づいて心筋梗塞と不安定狭心症とを識別するステップ
を含む。
【００５４】
特に想定されることとして、被験者は、ACSの症状の発現時に低いが検出可能な（したがって、検出可能であるがMIの指標とみなされるレベルよりも低い）心筋トロポニンレベルを有するものとする（したがって、ACSの前に該レベルを有するものとする）。好ましくは、該検出可能なレベルは、冠心疾患によるものである。以上に述べたように、ACSの場合、検出可能なレベルが既存の冠心疾患によるものであるかまたは当該ACSによるものであるかを決定するのは困難である。
【００５５】
したがって、本発明に係る方法の好ましい実施形態では、本方法は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、かつACSの症状の発現時に低いが検出可能な心筋トロポニンレベルをすでに有していた被験者における心筋梗塞の診断のためのものである。
【００５６】
したがって、本発明に係る方法は、一実施形態では、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞(MI)の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、かつACSの症状の発現時に低いが検出可能な心筋トロポニンレベルをすでに有していた被験者における心筋梗塞の診断方法である。この方法は、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を少なくとも1つの参照量と比較するステップ、および
（c）ステップ（a）および（b）で得られた情報に基づいて心筋梗塞を診断するステップ
を含む。
【００５７】
以上に従って、本発明を用いてACSに罹患している被験者においてMIを確定／除外することが可能である。
【００５８】
したがって、本発明に係る方法の他の好ましい実施形態では、本方法は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、かつACSの症状の発現時に（したがって、症状の発現の直前にも）低いが検出可能な心筋トロポニンレベルをすでに有していた被験者における心筋梗塞の除外のためのものである。好ましくは、H-FABPのレベルがMIを除外するための参照量よりも低い場合、MIは除外される。H-FABPおよびミオグロビンの両方を測定する場合、好ましくは両方のマーカーがMIを除外するためのそれぞれの参照量よりも少ないときにMIは除外される。
【００５９】
したがって、本発明に係る方法は、一実施形態では、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、かつ好ましくはACSの症状の発現時に低いが検出可能な心筋トロポニンレベルをすでに有していた被験者における心筋梗塞の除外方法である。この方法は、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を心筋梗塞を除外するための参照量と比較するステップ、および
（c）H-FABPの量が心筋梗塞を除外するための参照量よりも少ない場合に心筋梗塞を除外するステップ
を含む。
【００６０】
本発明に係る方法の他の好ましい実施形態では、本方法は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞（MI）の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、かつ好ましくはACSの症状の発現時に低いが検出可能な心筋トロポニンレベルをすでに有していた被験者における心筋梗塞の確定のためのものである。好ましくは、H-FABPのレベルがMIを確定するための参照量よりも多い場合、MIは確定される。H-FABPおよびミオグロビンの両方を測定する場合、好ましくは両方のマーカーがMIを確定するためのそれぞれの参照量よりも多いときにMIは確定される。
【００６１】
上述の方法に関して用いられる用語の説明は、本明細書中の他の箇所に見いだしうる。好ましくは、それらはまた、ミオグロビンの量の決定および該量と参照量と比較を含む。
【００６２】
当然のことながら、本明細書中で上記および下記に記載した本発明に係る方法によれば、H-FABPの量および好ましくはさらにミオグロビンの量またはそれらを決定するための手段は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者においてMIを診断するための診断組成物を製造するために使用可能である。
【００６３】
本発明はさらに、心臓インターベンションを行いうる被験者を特定する方法に関する。この場合、該被験者は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有し、該方法は、上述の方法のいずれか1つで説明されたステップ（a）および（b）ならびに場合によりステップ（aa）および（bb）を行うステップ、および（c）心臓インターベンションを行いうる被験者を特定するステップを含む。
【００６４】
上述の方法のおかげで、患者を心臓インターベンションに付す前にリスク／サクセス層別化を容易に行うことが可能である。心臓インターベンションを行えない患者であることが判明した場合、この危険で、時間がかかり、かつ／またはコストのかかる療法を回避することが可能である。したがって、被験者が心臓インターベンションに伴う有害かつ重篤な副作用を受けないようにすること以外に、本発明に係る方法は、資源が節約されるという点で保健システムに有益であろう。
【００６５】
当然のことながら、本発明に係る上述の方法との関連では、MIに罹患していると診断された被験者、したがって、MIを最近発症した被験者は、心臓インターベンションを行いうる。
【００６６】
本明細書中で用いられる「特定すること」という用語は、心臓インターベンションを行いうる被験者であるか否か評価することを意味する。当業者で理解するわかるであろうが、そのような評価は、通常、特定される対象の被験者のすべて（すなわち100％）に対して正しいことが意図されるわけではない。しかしながら、この用語は、統計学的に有意な一部分の被験者を特定しうることを必要とする（例えば、コホート試験におけるコホート）。当業者であれば、あとは苦もなく、種々の周知の統計学的評価手段を用いて、例えば、信頼区間の決定、p値の決定、Studentのt検定、Mann-Whitney検定などを行って、一部分が統計学的に有意であるかどうかを決定することが可能である。詳細な内容は、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見いだされる。好ましい信頼区間は、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％、少なくとも98％、または少なくとも99％である。p値は、好ましくは、0.1、0.05、0.01、0.005、または0.0001である。より好ましくは、集団の被験者の少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、または少なくとも90％は、本発明に係る方法により、適切に特定可能である。
【００６７】
「心臓インターベンション」という用語は、当業者により適切であるとみなされるMIの治療レジメンを包含する。この用語は、手術、顕微手術、心臓血管系（好ましくは心臓）に影響を及ぼす他の侵襲的療法、さらには保存的な（手術以外の）治療方法によるインターベンションを包含する。保存的方法は、当技術分野で公知であり、非薬理学的方法および薬理学的方法を包含する。薬理学的方法とは、治療有効量の医薬（例えば、ヘパリン、アセチルサリチル酸、クロピドグレル）の投与を意味する。好ましくは、本明細書中で用いられる心臓インターベンションは、心臓の適正酸素供給を回復することを目標とする治療レジメンである。これは、好ましくは、心臓を維持する血管すなわち冠血管全体にわたり血流を回復することにより達成される。そうした血管は、例えば、血栓性プラークまたはアテローム性動脈プラークにより障害される可能性がある。したがって、心臓インターベンションは、好ましくは、必要であれば、そのようなプラークの破壊および／または除去ならびに血管の回復を含むものとする。本発明に係る好ましい心臓インターベンションは、経皮的冠血管形成術、経皮経管的冠バルーン血管形成術、レーザー血管形成術、冠ステント留置術、バイパス移植術、または血流の回復、血管の開存、プラークの安定化、および／もしくは冠内血栓負荷の低減を目標とする管腔内技術よりなる群から選択される。
【００６８】
さらに、本発明は、急性冠症候群に罹患しており、かつ検出可能であるが心筋梗塞の指標とみなされるレベルよりも低い心筋トロポニンレベルを有する被験者に対する可能な治療を決定する方法に関する。この方法は、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中のH-FABPの量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を少なくとも1つの参照量と比較するステップ、および
（c）ステップ（a）および（b）で得られた情報に基づいて、心臓インターベンションの開始を推奨するかまたは心臓インターベンションを回避するステップ
を含む。
【００６９】
本発明に係る上述の方法の一実施形態では、追加として、ステップ（a）で被験者のサンプル中のミオグロビンの量を決定し、ステップ（b）でミオグロビンの少なくとも1つの参照量と比較する。したがって、ステップ（c）では、H-FABPおよびミオグロビンの決定された量、ミオグロビンの量とミオグロビンの少なくとも1つの参照量との比較、およびH-FABPの量とH-FABPの少なくとも1つの参照量との比較に基づいて、心臓インターベンションの開始の推奨または心臓インターベンションの回避を行う。
【００７０】
さらに、本発明に包含されるのは、被験者のサンプル中のH-FABPの量を決定するための手段、および該量を少なくとも1つの参照量と比較するための手段を含む、本発明に係る方法を実施するためのキットまたはデバイスである。好ましくは、キットまたはデバイスは、被験者のサンプル中のミオグロビンの量を決定するための手段、および該量を少なくとも1つの参照量と比較するための手段を含む。
【００７１】
本明細書中で用いられる「キット」という用語は、好ましくは個別にまたは単一の容器内に提供される一群の上述の手段を意味する。キットは、心筋トロポニンの量を決定するための手段を追加として含みうる。好ましくは、キットは、本発明に規定される被験者におけるMIの診断に関するいずれかの測定の結果を解釈するための利用者マニュアルを追加として含みうる。特定的には、そのようなマニュアルは、どのような決定された量がどのような種類の診断に対応するかに関する情報を含みうる。これについては、本明細書中の他の箇所に詳しく概説されている。このほかに、そのような利用者マニュアルは、それぞれのバイオマーカーの量を決定するためのキットの構成要素を正確に使用することに関する使用説明書を提供しうる。
【００７２】
本明細書中で用いられる「デバイス」という用語は、MIを診断できるようにまたは心臓インターベンションを行いうる被験者を特定できるように互いに作動的に連結された少なくとも上述の手段を含む手段のシステムを意味する。デバイスの発明は、心筋トロポニンの量を決定するための手段を追加として含みうる。ミオグロビンおよびH-FABPの量を決定するための好ましい手段ならびに比較を行うための手段は、本発明に係る方法に関連して上記に開示されている。いかにして手段を作動的に連結するかは、デバイスに組み込まれる手段のタイプに依存するであろう。例えば、ペプチドの量を自動決定するための手段を適用する場合、所望の結果が得られるように、該自動作動手段により得られたデータを例えばコンピュータプログラムにより処理することが可能である。好ましくは、そのような場合、手段は、単一のデバイス内に含まれる。したがって、該デバイスは、適用されたサンプル中のペプチドまたはポリペプチドの量を測定するための分析ユニット、および評価を行うべく得られたデータを処理するためのコンピュータユニットを含みうる。他の選択肢として、ペプチドまたはポリペプチドの量を決定するために検査ストリップのような手段を使用する場合、比較のための手段は、決定された量を参照量に割り付ける対照ストリップまたは対照テーブルを含みうる。検査ストリップは、好ましくは、本明細書中で参照されるペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合するリガンドに結合される。ストリップまたはデバイスは、好ましくは、該リガンドへの該ペプチドまたは該ポリペプチドの結合を検出するための手段を含む。検出のための好ましい手段については、本発明に係る方法に関する実施形態に関連して上記に開示されている。そのような場合、マニュアルに記載の指示および解釈に基づいてシステムの利用者が量の測定結果とその診断値または予後判定値とを合わせるという意味で、手段は作動的に連結されている。手段は、そのような実施形態では、個別のデバイスとして存在しうるが、好ましくは、キットとして一緒にパッケージングされる。当業者であれば、あとは苦もなく、いかにして手段を連結するかを理解するであろう。好ましいデバイスは、専門臨床医の特別な知識がなくても適用可能なもの、例えば、単にサンプルを充填することだけを必要とする検査ストリップまたは電子デバイスである。結果は、臨床医による解釈を必要とする生データの出力として与えられることもある。しかしながら、デバイスの出力は、好ましくは、解釈のために臨床医を必要としない処理済みすなわち評価済みの生データである。さらなる好ましいデバイスは、分析ユニット／デバイス（例えば、バイオセンサー、アレイ、ミオグロビンもしくはH-FABPを特異的に認識するリガンドに結合された固体担体、プラズモン表面共鳴デバイス、NMR分光計、質量分析計など）または本発明に係る方法に適合する上記で参照した評価ユニット／デバイスを含む。
【００７３】
本発明はまた、被験者において心筋梗塞を診断するための診断組成物を製造するための、H-FABPおよび好ましくはそれに加えてミオグロビンの使用、ならびに／またはH-FABPの量および好ましくはそれに加えてミオグロビンの量を決定するための手段の使用、ならびに／またはH-FABPの量および好ましくはそれに加えてミオグロビンの量を少なくとも1つの参照量と比較するための手段の使用に関する。
【００７４】
本明細書中で引用された参考文献はすべて、それらの全開示内容に関して参照により本明細書に組み入れられるものとし、かつ該開示内容は、本明細書中に明確に述べられているものとする。
【実施例】
【００７５】
以下の実施例は、単に本発明を例示したにすぎないものとする。それらはいずれも、本発明の範囲を限定するとみなさるものではない。
【００７６】
実施例1：急性冠症候群の患者中のミオグロビン、H-FABP、およびトロポニンT
ACSの特徴的症状（例えば胸痛）を示す69名の患者を検査した。症状の発現後の最初の2時間以内に血液サンプルを取得した。ST上昇型MIの診断のために、心電図検査により患者を検査した。この他に、0.01ng/mlの検出限界を有するトロポニンTアッセイを用いてトロポニンT濃度を決定した。STEMIまたはNSTEMIと診断できなかった患者からさらなる血液サンプルを取得した（0.01ng/mlより高いが0.1ng/ml未満であるTnT濃度、したがって、壊死の指標となるレベル）。症状の発現の少なくとも6時間後に取得したサンプル中の0.1ng/mlより高いトロポニンTレベルを、最近発症したMIの指標とみなし（MI変換者）、そうでなければUAPと診断した（非MI変換者）。
【００７７】
後の分析では、0.002ng/mlの検出限界を有する高感度TnTアッセイ、Tina-Quant（登録商標） Myoglobin Test System (Roche Diagnostics)およびH-FABP ELISA検査キット（ヒト心臓型脂肪酸結合タンパク質用のHBT ELISA検査キット; HyCult Biotechnology, Uden, The Netherlands）をそれぞれ用いることにより、STEMIまたはNSTEMIと診断できなかった患者に由来するサンプル中のTnT、ミオグロビン、およびH-FABPの濃度を決定した（最初のサンプル中のTnTは、検出可能であり0.01ng/mlより高いが0.1ng/ml未満である）。結果を以下の表に示す。
【表１】
2010528306.tif 000002
【００７８】
実施例2：安定冠心疾患の患者中のミオグロビン、H-FABP、およびトロポニンT
合計234名の安定冠心疾患の患者の血液サンプル中のミオグロビン、H-FABP、および高感度トロポニンTを測定した。患者は、明らかに急性冠イベントに罹患していなかった。以上に指定されたようにH-FABPを測定した。0.002ng/mlの検出限界を有する高感度トロポニンT検査によりトロポニンTを測定した。患者を心エコー検査および冠血管形成術をはじめとする詳細な心臓病学的研究に付した。冠心疾患を1枝病変、2枝病変、または3枝病変に細分類した。この場合、血管ごとに50％より多くの狭窄を生じるはずである。結果を以下の表に示す。
【表２】
2010528306.tif 000003
【表３】
2010528306.tif 000004
【図１】
2010528306.tif 000005
【図２】
2010528306.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成21年3月30日(2009.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性冠症候群（ACS）に罹患しており、かつ0.005ng/mlより高いが0.1ng/mlより低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において、心筋梗塞を確定または除外する方法であって、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を、心筋梗塞（MI）の最近の発症を確定するための参照量および心筋梗塞（MI）の最近の発症を除外するための参照量と比較するステップ、ならびに
（c）ステップ（a）および（b）で得られた情報に基づいて心筋梗塞を確定または除外するステップ
を含み、該サンプルはACSの症状の発現後6時間以内に取得されたものである、上記方法。
【請求項２】
前記サンプルがACSの症状の発現後4時間以内に取得されたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記サンプルがACSの症状の発現後2時間以内に取得されたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験者が、0.005ng/mlより高いが0.1ng/mlより低い心筋トロポニンレベルをACSの症状の発現時にすでに有していた、請求項１または３に記載の方法。
【請求項５】
前記サンプルが血清サンプルである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
MIの最近の発症を確定するためのH-FABPの参照量が5700pg/mlであり、該参照量よりも多い量が、MIの最近の発症を示すものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
MIの最近の発症を除外するためのH-FABPの参照量が2500pg/mlであり、該参照量よりも少ないH-FABP量が、MIを発症しなかったことを示すものである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
追加として、ミオグロビンの量を決定するステップ（aa）が行われ、かつ決定されたミオグロビンの量が、ステップ（bb）で、MIの最近の発症を確定するためのミオグロビンの参照量およびMIの最近の発症を除外するための参照量と比較される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
MIの最近の発症を確定するためのミオグロビンの参照量が77ng/mlであり、該参照量より多いミオグロビンの量およびMIの最近の発症を確定するためのH-FABPの参照量より多いH-FABPの量がMIの最近の発症を示すものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
MIの最近の発症を除外するためのミオグロビンの参照量が55ng/mlであり、該参照量より少ないミオグロビンの量およびMIの最近の発症を除外するためのH-FABPの参照量より少ないH-FABPの量がMIを発症しなかったことを示すものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記心筋トロポニンが心筋トロポニンTである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
心臓インターベンションを行いうる被験者を特定する方法であって、該被験者が、急性冠症候群に罹患しており、かつ0.005ng/mlより高いが0.1ng/mlより低い心筋トロポニンレベルを有し、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のステップ（a）および（b）ならびに場合によりステップ（aa）および（bb）を行うステップ、ならびに（c）得られた情報に基づいて心臓インターベンションを行いうる被験者を特定するステップを含む、上記方法。
【請求項１３】
急性冠症候群に罹患しており、かつ0.005ng/mlより高いが0.1ng/mlより低い心筋トロポニンレベルを有する被験者に対する可能な治療を決定する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のステップ（a）および（b）ならびに場合によりステップ（aa）および（cc）を行うステップ、ならびに（c）得られた情報に基づいて心臓インターベンションの開始を推奨するかまたは心臓インターベンションを回避するステップを含む、上記方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法を実施するためのキットまたはデバイスであって、被験者のサンプル中のH-FABPの量を決定するための手段、ならびに、場合により、被験者のサンプル中のミオグロビンの量を決定するための手段、ならびにH-FABPの量および場合によりミオグロビンの量を少なくとも1つの参照量と比較するための手段を含む、上記キットまたはデバイス。
【請求項１５】
心筋トロポニンの量を決定するための手段を追加として含む、請求項１４に記載のキットまたはデバイス。
【請求項１６】
急性冠症候群に罹患しており、かつ0.005ng/mlより高いが0.1ng/mlより低い心筋トロポニンレベルを有する被験者において心筋梗塞を除外する方法であって、以下のステップ：
（a）該被験者のサンプル中の心臓型脂肪酸結合タンパク質（H-FABP）の量を決定するステップ、
（b）ステップ（a）で決定されたH-FABPの量を心筋梗塞を除外するための参照量と比較するステップ、および
（c）H-FABPの量が心筋梗塞を除外するための参照量よりも少ない場合に心筋梗塞を除外するステップ、
を含み、該サンプルはACSの症状の発現後6時間以内に取得されたものであり、該参照量より少ないH-FABPの量がMIを発症しなかったことを示すものである、上記方法。
【請求項１７】
前記被験者が、0.005ng/mlより高いが0.1ng/mlより低い心筋トロポニンレベルをACSの症状の発現時にすでに有していた、請求項２１に記載の方法。
【国際調査報告】
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