(57)【要約】  本開示の主題は、連結基を介して又は直接結合でターゲティング部分と連結している金属結合部分を有する金属酸化還元酵素阻害剤、金属酸化還元酵素阻害剤をスクリーニングする方法、及び必要とする対象に金属酸化還元酵素阻害剤を投与することによる酸化還元酵素に関連する障害を治療する方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むラノステロールデメチラーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｐ）及び薬学的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化１】
2010510248.tif 000133
;
［式中、
ｈａｌ１及びｈａｌ２は、それぞれ独立にハロゲンであり；
Ｘ１は、ＣＨ又はＮであり；
Ａ１は、Ｈ、アルキル、分岐状アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、又は
【化２】
2010510248.tif 000134
;
（式中、
Ｒ１は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ２は、アルキル又は−ＣＲ３Ｒ４であり、
ここで、Ｒ３は、Ｈ又はアルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、アルキル、−ＯＨ及び−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５からなる群から選択され；ここで、Ｒ５は、−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ（ＣＨ２−フェニル）−ＮＨ２；−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２；−ＣＨ（ＣＨ２（ＣＨ３）２）−ＮＨ２；−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ２からなる群から選択される）
からなる群から選択される構造を有する部分からなる群から選択される］
（ｂ）
【化３】
2010510248.tif 000135
［式中、
ｍは、１〜５の整数であり；
ｐは、１〜４の整数であり；
Ｒ６は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ７は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＣＦ３；−Ｓ−ＣＦ３；−ＣＦ３；−Ｓ（＝Ｏ）−ＣＦ３；−ＣＦ３；−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２；及びそれらの組合せからなる群から選択される］
（ｃ）
【化４】
2010510248.tif 000136
［式中、
ｐは、０〜２の整数であり；
Ａ２は、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｒ８は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ９は、Ｈ、アルキル、−Ｏ−ＣＦ３；及び−ＣＦ３からなる群から選択される］
（ｄ）
【化５】
2010510248.tif 000137
［式中、
Ｒ１０は、ハロゲン、４−フルオロフェニルピペラジニル、３，４−メチレンジオキシ、３−メトキシプロピルアミノ、４−ベンジルオキシカルボニルアミノ、４−ＮＯ２−フェニル−ピペラジニル、及び４−メトキシイミノからなる群から選択される］
（ｅ）
【化６】
2010510248.tif 000138
［式中、
Ｘ２は、Ｏ又はＳであり；
点線は、結合が存在するか存在しないことを示し；
Ａｒは、−フェニル−Ｓ−フェニル；ハロ−又はジハロフェニル；ハロチエニル；ハロフェノキシメチル；及びハロ−３−ベンゾチエニルからなる群から選択される］
（ｆ）
【化７】
2010510248.tif 000139
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ又はＰ（＝Ｏ）Ｏ２であり；
Ｒ１２は、Ｈ及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１３は、
【化８】
2010510248.tif 000140
からなる群から選択される窒素含有複素環又は窒素含有縮合複素環である］
（ｇ）
【化９】
2010510248.tif 000141
［式中、
Ｒ１３は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｘ３は、−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−又は−ＮＲ１６−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ここで、ｑは、１〜８の整数であり、Ｒ１６は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ１５は、
【化１０】
2010510248.tif 000142
からなる群から選択される］
（ｈ）
【化１１】
2010510248.tif 000143
［式中、
ｔは、１〜２の整数であり；
Ｒ１７は、Ｈ又はハロゲンであり；
それぞれのＲ１８は、ハロゲンである］
（ｉ）
【化１２】
2010510248.tif 000144
［式中、
ｕは、１〜３の整数であり；
Ｒ１９は、Ｈ又はＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２であり；
Ｒ２０は、Ｈ又はアルキルである］
（ｊ）
【化１３】
2010510248.tif 000145
［式中、
ｔは、１〜２の整数であり；
それぞれのＲ２１は、ハロゲンである］
（ｋ）
【化１４】
2010510248.tif 000146
;
［式中、
ｔは、１〜２の整数であり；
それぞれのＲ２２は、独立にハロゲンであり；
Ｒ２３は、
【化１５】
2010510248.tif 000147
からなる群から選択される］
（ｌ）
【化１６】
2010510248.tif 000148
（ｍ）
【化１７】
2010510248.tif 000149
（ｎ）
【化１８】
2010510248.tif 000150
（ｏ）
【化１９】
2010510248.tif 000151
（ｐ）
【化２０】
2010510248.tif 000152
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化２１】
2010510248.tif 000153
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではなく、
ｈａｌ、ｈａｌ１、ｈａｌ２、ｈａｌ３、及びｈａｌ４は、それぞれ独立にハロゲンである］。
【請求項２】
図１６に示すラノステロールデメチラーゼ阻害剤の群から選択される、請求項１に記載のラノステロールデメチラーゼ阻害剤。
【請求項３】
【化２２】
2010510248.tif 000154
からなる群から選択される、請求項１に記載のラノステロールデメチラーゼ阻害剤。
【請求項４】
以下の式を有する、請求項３に記載のラノステロールデメチラーゼ阻害剤
【化２３】
2010510248.tif 000155
［式中、ＭＢＭは、３−チエニル、４−イミダゾリル、４−（１，２，４−トリアゾリル）、１−（１，２，３−トリアゾリル）、１−テトラゾリル、３−ピリジル、４−ピリジル、４−ピリミジニル、３−フラニル、１−イミダゾリル、３−ピロリル、５−チアゾリル、５−オキサゾリル、４−チアゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソチアゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル、２−テトラゾリル、２−クロロ−３−ピリジル、２−ピラジニル、４−チオモルホリニル、３−シアノ−４−ピロリル、５−メルカプト−１−（１，２，４−トリアゾリル）、６−ピリド−２−オン−イル、５−ピリミジニル、５−ピラジン−２−オン−イル、３−ピリダジニル、及び３−キノリニルからなる群から選択される］。
【請求項５】
以下の式を有する、請求項３に記載のラノステロールデメチラーゼ阻害剤
【化２４】
2010510248.tif 000156
;
［式中、ＭＢＭは、ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＳＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＳＯ２ＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｎ（ＯＨ）Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、２−メルカプト−１−イミダゾリル、４−チオモルホリニル、２−アミノ−５−チエニル、２−アミノ−５−ピリジル、４−アミノ−１−イミダゾリル、及び２−アミノ−１−イミダゾリルからなる群から選択される］。
【請求項６】
【化２５】
2010510248.tif 000157
である、請求項４に記載のラノステロールデメチラーゼ阻害剤。
【請求項７】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む５−リポキシゲナーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化２６】
2010510248.tif 000158
;
［式中、Ｒ２４及びＲ２５は、−ＯＨ及びＬｎ−ＭＢＭからなる群からそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｌｎは、連結基であり、ｎは、０〜１の整数であり、ＭＢＭは、金属結合部分であり、但し、Ｒ２５及びＲ２５の少なくとも１つはＬｎ−ＭＢＭである］
（ｂ）
【化２７】
2010510248.tif 000159
（ｃ）
【化２８】
2010510248.tif 000160
（ｄ）
【化２９】
2010510248.tif 000161
（ｅ）
【化３０】
2010510248.tif 000162
;
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカー（ここで、ｎは、０〜１の整数である）であり；
但し、金属結合部分は、
【化３１】
2010510248.tif 000163
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項８】
図１７に示す５−リポキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される、請求項７に記載の５−リポキシゲナーゼ阻害剤。
【請求項９】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むアロマターゼ阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化３２】
2010510248.tif 000164
;
［式中、
Ｒ２６及びＲ２７は、−ＯＨ、＝Ｏ、及びＬｎ−ＭＢＭ、及びそれらの組合せからなる群からそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｌｎは、連結基であり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり、ＭＢＭは、金属結合部分であり、但し、Ｒ２６及びＲ２７の少なくとも１つは、Ｌｎ−ＭＢＭであり；
Ｒ２８は、Ｈ又は＝Ｏであり；
点線は、結合が存在するか存在しないことを示している］
（ｂ）
【化３３】
2010510248.tif 000165
;
［式中、
Ｒ２９は、アルキルであり；
Ｘ４は、ＣＨ又はＮである］
（ｃ）
【化３４】
2010510248.tif 000166
;
（ｄ）
【化３５】
2010510248.tif 000167
;
（ｅ）
【化３６】
2010510248.tif 000168
;
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化３７】
2010510248.tif 000169
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項１０】
図１８に示すアロマターゼ阻害剤の群から選択される、請求項９に記載のアロマターゼ阻害剤。
【請求項１１】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むシクロオキシゲナーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｇ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化３８】
2010510248.tif 000170
;
［式中、
Ｒ３０は、アルキルであり；
Ｘ５は、ＣＨ又はＮであり；
Ａ３は、
【化３９】
2010510248.tif 000171
からなる群から選択される］
（ｂ）
【化４０】
2010510248.tif 000172
;
［式中、
Ｒ３１及びＲ３２は、Ｈ又は−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭであり、但し、Ｒ３１及びＲ３２の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｃ）
【化４１】
2010510248.tif 000173
;
［式中、Ｒ３３及びＲ３４は、ｈａｌ、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭ、及び
【化４２】
2010510248.tif 000174
からなる群から選択され、但し、Ｒ３３及びＲ３４の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｄ）
【化４３】
2010510248.tif 000175
;
［式中、Ｒ３５及びＲ３６は、Ｈ、−ＣＨ２−（フェニル）ｍ−Ｌｎ−ＭＢＭからなる群から選択され、ここで、ｍ及びｎは、０〜１の整数であり；但し、Ｒ３６及びＲ３６の少なくとも１つは、−ＣＨ２−（フェニル）ｍ−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｅ）
【化４４】
2010510248.tif 000176
;
［式中、
Ｒ３７は、アルキルであり；
Ｒ３８は、−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ−（Ｒ３９）−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ））ｚ−Ｌｎ−ＭＢＭであり；
ここで、
ｎ、ｙ、及びｚは、それぞれ独立に０〜１の整数であり；
Ｒ３９は、直鎖状又は分岐状アルキルである］
（ｆ）
【化４５】
2010510248.tif 000177
;
［式中、
Ｒ４０は、Ｈ又は−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭであり；
Ｒ４１は、ＣＨ３又は−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭであり、但し、Ｒ４０及びＲ４１の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｇ）
【化４６】
2010510248.tif 000178
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化４７】
2010510248.tif 000179
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項１２】
図１９に示すシクロオキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される、請求項１１に記載のシクロオキシゲナーゼ阻害剤。
【請求項１３】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むヘムオキシゲナーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化４８】
2010510248.tif 000180
;
［式中、
Ｒ４２は、Ｈ又は−ＮＨ２であり；
Ｒ４３は、Ｈ又はハロゲンである］
（ｂ）
【化４９】
2010510248.tif 000181
;
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化５０】
2010510248.tif 000182
（式中、Ｒは、金属結合部分が、リンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項１４】
図２０に示すヘムオキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される、請求項１１に記載のヘムオキシゲナーゼ阻害剤。
【請求項１５】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むキサンチンオキシダーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化５１】
2010510248.tif 000183
;
（ｂ）
【化５２】
2010510248.tif 000184
;
［式中、Ｒ４５及びＲ４６の少なくとも１つは、−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｃ）
【化５３】
2010510248.tif 000185
;
［式中、Ｒ４６は、Ｈ又はアルキルである］
（ｄ）
【化５４】
2010510248.tif 000186
;
［式中、Ｒ４７、Ｒ４８、及びＲ４９の少なくとも１つは、−Ｌｎ−ＭＢＭであり；  ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化５５】
2010510248.tif 000187
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項１６】
図２１に示すキサンチンオキシダーゼ阻害剤の群から選択される、請求項１５に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項１７】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む１７α−ヒドロキシラーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化５６】
2010510248.tif 000188
;
［式中、
Ｒ５０は、（＝Ｏ）及び−ＯＲ５１からなる群から選択され、ここで、Ｒ５１は、アルキルである］
（ｂ）
【化５７】
2010510248.tif 000189
［式中、
Ｒ５２及びそれぞれのＲ５３は、独立にＨ及びアルキルであり；
Ｒ５４は、Ｈ又はＯＨである］
（ｃ）
【化５８】
2010510248.tif 000190
;
［式中、
ＭＢＭは、環状炭化水素に縮合することがあり；
Ｒ５５＝Ｈ、ハロゲン、アルキル、ＣＯＮＨＲ５７であり、ここで、Ｒ５７は、アルキルであり；
Ｒ５６は、Ｈ又はＯＨである］
（ｄ）
【化５９】
2010510248.tif 000191
;
［式中、
ＭＢＭは、環状炭化水素に縮合することがあり；
Ｒ５８＝Ｈ、ハロゲン、アルキル、ＣＯＮＨＲ６０であり、ここで、Ｒ６０は、アルキルであり；
Ｒ５９は、Ｈ又はＯＨである］
（ｅ）
【化６０】
2010510248.tif 000192
;
［式中、
Ｒ６１及びＲ６２は、それぞれ独立に、−Ｌｎ−ＭＢＭ、又は非置換フェニル、又はハロゲン、アルキル若しくはアルコキシルで置換されたフェニルである］
【化６１】
2010510248.tif 000193
［式中、Ｒ６３及びＲ６４は、Ｈ、ハロゲン、アルキル、及びアルコキシからなる群からそれぞれ独立に選択される］
（ｆ）
【化６２】
2010510248.tif 000194
;
［式中、Ｒ６５は、Ｈ又はハロゲンである］
（ｇ）
【化６３】
2010510248.tif 000195
;
（ｈ）
【化６４】
2010510248.tif 000196
;
［式中、
Ｒ６６は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ６７は、Ｈ又はＯＨである］
（ｉ）
【化６５】
2010510248.tif 000197
;
［式中、
Ｒ６８は、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｒ６９及びＲ７０は、Ｈ又はアルキルである］
［式中、ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化６６】
2010510248.tif 000198
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項１８】
阻害剤が、図２２に示す１７α−ヒドロキシラーゼ阻害剤の群から選択される、請求項１７に記載の１７α−ヒドロキシラーゼ阻害剤。
【請求項１９】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むアルドステロン合成酵素阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｌ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化６７】
2010510248.tif 000199
［式中、
ｎ１は、０〜２の整数であり；
ｔは、０〜２の整数であり；
Ｒ７１は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｒ７２は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｒ７３は、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、及びＣＦ３からなる群から選択される］
（ｂ）
【化６８】
2010510248.tif 000200
;
［式中、
Ｒ７４は、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；点線は、結合が存在するか存在しなくてよいことを示している］
（ｃ）
【化６９】
2010510248.tif 000201
;
［式中、
Ｒ７５及びＲ７６は、それぞれ独立にＨ又はアルキルであり；
Ｒ７７は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択される］
（ｄ）
【化７０】
2010510248.tif 000202
;
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｘ６は、Ｏ又はＮＲであり、ここで、Ｒは、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｚ１は、Ｏ、ＮＲ、及び−ＣＨ２−からなる群から選択され；
Ｘ７は、Ｏ又は−ＣＨ２−である］
（ｅ）
【化７１】
2010510248.tif 000203
;
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｒ７９は、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｘ８は、Ｏ又はＮＲ８０であり、ここで、Ｒ８０は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｆ）
【化７２】
2010510248.tif 000204
;
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｒ８１は、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｘ９は、Ｏ又はＮＲ８２であり、ここで、Ｒ８２は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｇ）
【化７３】
2010510248.tif 000205
;
［ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｘ１０は、Ｏ又はＮＲ８３であり、ここで、Ｒ８３は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｚ２は、Ｏ、ＮＲ８４、−ＣＨ２−からなる群から選択され、ここで、Ｒ８４は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｈ）
【化７４】
2010510248.tif 000206
;
［式中、
Ｒ８５及びＲ８６は、それぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、シアノ、アルキル、及びアルコキシルであり；
Ｒ８７は、ＯＲ８８、ＮＲ８９Ｒ９０からなる群から選択され、ここで、Ｒ８８、Ｒ８９、及びＲ９０は、Ｈ、アルキル、及びアリールからなる群からそれぞれ独立に選択される］
（ｉ）
【化７５】
2010510248.tif 000207
;
［式中、
Ｒ９１及びＲ９２は、Ｈ、ハロゲン、シアノ、アルキル、アルコキシル、及びアリールからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｚ３は、Ｏ又は−ＣＨ２−である］
（ｊ）
【化７６】
2010510248.tif 000208
;
［式中、
Ｘ１１は、Ｏ、Ｓ、及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒ９３は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｋ）
【化７７】
2010510248.tif 000209
;
［式中、
Ｒ９４及びＲ９５は、それぞれ独立に、Ｈ若しくはアルキルであり；
Ｒ９６は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ９６は、縮合芳香族環構造の一部である］
（ｌ）
【化７８】
2010510248.tif 000210
［式中、Ｘ１２は、Ｏ又はＳであり；
Ｒ９７は、アルキルである］
［式中、ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化７９】
2010510248.tif 000211
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項２０】
図２３に示すアルドステロン阻害剤の群から選択される、請求項１９に記載のアルドステロン阻害剤。
【請求項２１】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むレチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化８０】
2010510248.tif 000212
;
［式中、Ｒ９８は、Ｈ又はアルキルである］
（ｂ）
【化８１】
2010510248.tif 000213
;
［式中、
Ｒ９９＝Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ１００及びＲ１０１は、Ｈ、アルキル、及びシクロアルキルからなる群からそれぞれ選択される］
（ｃ）
【化８２】
2010510248.tif 000214
;
［式中、
Ｒ１０２は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ１０３及びＲ１０４は、それぞれ独立にＨ、アルキル、シクロアルキルである］
（ｄ）
【化８３】
2010510248.tif 000215
;
（ｅ）
【化８４】
2010510248.tif 000216
;
［式中、Ｒ１０５は、Ｈ又はアルキルである］
（ｆ）
【化８５】
2010510248.tif 000217
;
［式中、Ｒ１０６は、Ｈ又はアルキルである］
［式中、ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化８６】
2010510248.tif 000218
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項２２】
図２４に示すレチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）阻害剤の群から選択される、請求項２１に記載のレチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）阻害剤。
【請求項２３】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むアルコール脱水素酵素阻害剤であり、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化８７】
2010510248.tif 000219
;
［式中、Ｒ１０７、Ｒ１０８、Ｒ１０９、及びＲ１１０は、それぞれ独立にＨ又はアルキルである］
（ｂ）
【化８８】
2010510248.tif 000220
;
［式中、Ｒ１１１は、アルキルである］
［式中、ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化８９】
2010510248.tif 000221
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項２４】
図２５に示すアルコール脱水素酵素阻害剤の群から選択される、請求項２３に記載のアルコール脱水素酵素阻害剤。
【請求項２５】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む１−デオキシ−ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクトイソメラーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化９０】
2010510248.tif 000222
［式中、ｎ１は、１〜２の整数である］
（ｂ）
【化９１】
2010510248.tif 000223
;
［式中、ｎ１は、１〜２の整数である］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化９２】
2010510248.tif 000224
（式中、
Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項２６】
図２６に示すデオキシキシルロースリン酸レダクトイソメラーゼ阻害剤の群から選択される、請求項２５に記載のデオキシキシルロースリン酸レダクトイソメラーゼ阻害剤。
【請求項２７】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤であり、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化９３】
2010510248.tif 000225
［式中、
Ｒ１１４は、Ｈ、アルキル、ＣＯ−アルキル、及びＣＯ−アリールからなる群から選択され；
Ｒ１１２及びＲ１１３は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、及びアルコキシからなる群からそれぞれ選択され；
Ａｒは、置換フェニル又はヘテロアリールである］
（ｂ）
【化９４】
2010510248.tif 000226
［式中、Ｒ１１５及びＲ１１６は、Ｈ、アルキル、ＣＯ−アルキル、及びＣＯ−アリール；及び
【化９５】
2010510248.tif 000227
;
からなる群からそれぞれ独立に選択される］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
Ｒ１１７及びＲ１１８は、Ｈ、アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、及び−Ｃ（＝Ｏ）−アリールからなる群から独立に選択され；
但し、金属結合部分は、
【化９６】
2010510248.tif 000228
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項２８】
図２７に示すインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される、請求項２７に記載のインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤。
【請求項２９】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む酸化窒素合成酵素阻害剤であり、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化９７】
2010510248.tif 000229
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｒ１１９及びＲ１２１は、Ｈ、アシル、及びアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ１２０及びＲ１２２は、それぞれ独立にＨ又はアルキルである］
（ｂ）
【化９８】
2010510248.tif 000230
［式中、
Ｒ１２３は、Ｈ、アシル、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１２４は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｚ４及びＺ５は、それぞれ独立にＯであるか又は存在しない］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化９９】
2010510248.tif 000231
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項３０】
図２８に示す酸化窒素合成酵素阻害剤の群から選択される、請求項２９に記載の酸化窒素合成酵素阻害剤。
【請求項３１】
ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む血管接着タンパク質−１阻害剤であり、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選択される式を有する金属酸化還元酵素阻害剤
（ａ）
【化１００】
2010510248.tif 000232
;
［式中、
Ｒ１２５は、Ｈ、アシル、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１２６は、Ｈ、アルキル、及びアミノアルキルからなる群から選択される］
（ｂ）
【化１０１】
2010510248.tif 000233
;
［式中、
Ｒ１２７は、Ｈ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１２８は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアラリルからなる群から選択される］
（ｃ）
【化１０２】
2010510248.tif 000234
;
［式中、
Ｒ１２９は、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｘ１３は、Ｎ又はＣＨであり；
Ａｒは、置換フェニルである］
（ｄ）
【化１０３】
2010510248.tif 000235
;
［式中、
ｎ１は、０〜２の整数であり；
Ｒ１３０は、Ｈ又はＣＯＮＨＲ１３２であり；
Ｒ１３１は、Ｈ、ＣＯＮＨＲ１３３ＣＯアルキル、及びＣＯ２アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１３２及びＲ１３３は、Ｈ、アルキル、及びアラルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【化１０４】
2010510248.tif 000236
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【請求項３２】
図２９に示す血管接着タンパク質−１阻害剤の群から選択される、請求項３１に記載の血管接着タンパク質−１阻害剤。
【請求項３３】
金属結合部分が、スルホニル部分、カルボニル部分、ボロン酸又はボロン酸エステル部分、硫黄含有部分、窒素含有部分、リン含有部分、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、１個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環、２個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環、６員芳香族環、１個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、２個のヘテロ原子を有する６員芳香族環、３又は４個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、１個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環、及び２個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環からなる群から選択され；
但し、金属結合部分が、
【化１０５】
2010510248.tif 000237
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］
からなる群から選択される金属結合部分ではない、請求項１〜３２のいずれかに記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項３４】
スルホニル部分が、以下の一般式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
【化１０６】
2010510248.tif 000238
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ１３４は、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨＮＨ２、−ＮＨＯＨ、−ＮＨＯＣＨ３、−ＮＨＮ（ＣＨ３）２、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ≡Ｎ、−ＣＨ２Ｃ≡Ｎ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、−ＮＨＣＨ２Ｃ≡Ｎ、−ＮＨＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ２Ｃ（＝ＮＯＨ）−ＮＨ２、−ＮＨＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、
【化１０７】
2010510248.tif 000239
からなる群から選択され；ここで、Ｘ１４は、ＮＨ、Ｏ、又はＳである］。
【請求項３５】
カルボニル部分が、以下の一般式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
【化１０８】
2010510248.tif 000240
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ２４は、−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＮＨＮＨ２、−Ｎ（ＯＨ）ＮＨ２、−ＮＨＯＨ、−ＮＣＨ３ＯＨ、−ＮＨＯＣＨ３、−ＮＣＨ３ＯＣＨ３、−ＮＨＮＨＣＨ３、−ＮＨＮＨＯＨ、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ≡Ｎ、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、−ＮＨＣＨ２Ｃ≡Ｎ、−ＮＨＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝ＮＯＨ）−ＮＨ２、−ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、
【化１０９】
2010510248.tif 000241
からなる群から選択され；ここで、Ｘ１５は、ＮＨ、Ｓ、若しくはＯであり；又はＲ１３５は、
【化１１０】
2010510248.tif 000242
からなる群から選択される］。
【請求項３６】
ボロン酸又はボロン酸エステル部分が、
【化１１１】
2010510248.tif 000243
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項３７】
硫黄含有部分が、Ｒ−ＳＨ、Ｒ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、
【化１１２】
2010510248.tif 000244
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項３８】
窒素含有部分が、以下の式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
【化１１３】
2010510248.tif 000245
［式中、Ｒは、金属結合部分がリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ１３６は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝ＮＯＨ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−Ｒ１３８（ここで、Ｒ１３８は、Ｈ又はアルキルである）、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−Ｒ１３９（ここで、Ｒ１３９は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から選択され；Ｒ１３７は、−Ｈ、−ＯＨ、及び−ＯＣＨ３からなる群から選択され；但し、Ｒ１３７が、ＯＨである場合、Ｒ１３６は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２若しくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３ではなく；又は、Ｒ１３７及びＲ１３６は、一緒になって
【化１１４】
2010510248.tif 000246
;
を形成し；ここで、Ｘ１６は、Ｓ又はＯであり；点線は、結合が存在するか又は存在しなくてよいことを示す］。
【請求項３９】
リン含有部分が、以下の式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
Ｒ−Ｒ１４０−Ｐ（＝Ｘ１７）（ＯＨ）（Ｒ１４１）
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｘ１７は、Ｏ又はＳであり；Ｒ１４０は、−ＣＨ２−、−Ｏ−、及び−ＮＨ−からなる群から選択され；Ｒ１４１は、−ＯＨ及び−ＯＣＨ３からなる群から選択される］。
【請求項４０】
１個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環が、以下の式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
【化１１５】
2010510248.tif 000247
,
［式中、Ｘ１８は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群から選択され；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］。
【請求項４１】
２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環が、
【化１１６】
2010510248.tif 000248
［式中、Ｘ１９は、Ｏ又はＳであり；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択され；但し、金属結合部分は、
【化１１７】
2010510248.tif 000249
ではない］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項４２】
３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環が、
【化１１８】
2010510248.tif 000250
［式中、Ｘ２０及びＸ２２は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群からそれぞれ独立に選択され；Ｘ２１及びＸ２３は、それぞれ独立にＯ又はＳであり；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択され；Ｒ１４２は、Ｈ又はアルキルであり；但し、金属結合部分は、
【化１１９】
2010510248.tif 000251
ではない］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項４３】
４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環が、
【化１２０】
2010510248.tif 000252
［式中、Ｘ２４は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群から選択され；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項４４】
１個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環が、
【化１２１】
2010510248.tif 000253
［式中、Ｘ２５は、ＮＨ、ＮＯＨ、Ｏ、及びＳからなる群から選択され；それぞれのＺは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４３（ここで、Ｒ１４３は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から独立に選択され；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ１４３は、Ｈ及びＯＨからなる群から選択され；ここで、点線は、結合が存在して又は存在しなくてよいことを示す］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項４５】
２個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環が、
【化１２２】
2010510248.tif 000254
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｘ２６、Ｘ２７、及びＸ２９は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群からそれぞれ独立に選択され；Ｘ２は、Ｏ又はＳであり；それぞれのＺは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４４（ここで、ＮＲ１４４は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から独立に選択される］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項４６】
６員芳香族環が、以下の式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
【化１２３】
2010510248.tif 000255
;
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；それぞれのＲｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］。
【請求項４７】
１個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環が、以下の式を有する、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤
【化１２４】
2010510248.tif 000256
;
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］。
【請求項４８】
２個のヘテロ原子を有する６員芳香族環が、
【化１２５】
2010510248.tif 000257
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項４９】
３又は４個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環が、
【化１２６】
2010510248.tif 000258
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項５０】
１個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環が、
【化１２７】
2010510248.tif 000259
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｚは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４５（ここで、Ｒ１４５は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から選択される］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項５１】
２個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環が、
【化１２８】
2010510248.tif 000260
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｘ３０は、ＮＲ１４６（ここで、Ｒ１４６は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から選択され；それぞれのＺは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４７（ここで、Ｒ１４７は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から独立に選択される］
からなる群から選択される、請求項３３に記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項５２】
リンカーが、存在しても存在しなくてよく、存在する場合には、アルキレン、置換アルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアルキレン、及びヘテロアリーレンからなる群から選択され、存在しない場合には、直接結合で表される、請求項１〜３２のいずれかに記載の金属酸化還元酵素阻害剤。
【請求項５３】
金属酸化還元酵素の阻害剤をスクリーニングする方法であって、
ａ）
ｉ）ターゲティング部分；
ii）金属結合部分；及び
iii）任意選択でリンカー
を含む候補阻害剤を提供すること；
ｂ）候補阻害剤を金属酸化還元酵素と接触させること；並びに
ｃ）金属酸化還元酵素の活性を決定すること
を含む方法。
【請求項５４】
ターゲティング部分がラノステロールを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ラノステロールがラノステロール誘導体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
ターゲティング部分がタンパク質を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
タンパク質がペプチドである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
金属結合部分が鉄の金属結合部分である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５９】
金属結合部分が、請求項３３〜５１のいずれかに記載の金属結合部分からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
金属酸化還元酵素がラノステロールデメチラーゼである、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
ラノステロールデメチラーゼが哺乳類のラノステロールデメチラーゼである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
ラノステロールデメチラーゼがヒトのラノステロールデメチラーゼである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
ラノステロールデメチラーゼが酵母のラノステロールデメチラーゼである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
ラノステロールデメチラーゼが変異ラノステロールデメチラーゼである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
複数の異なる候補阻害剤を金属酸化還元酵素と接触させる、請求項５３に記載の方法。
【請求項６６】
ターゲティング部分がラノステロール又はその誘導体であり、金属酸化還元酵素がラノステロールデメチラーゼ又はその変異体であり、活性の決定がラノステロールデメチラーゼ酵素の基質を測定することによって行われる、請求項５３に記載の方法。
【請求項６７】
基質がラノステロールである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ラノステロールがラノステロール誘導体である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
活性の決定が、少なくとも１つのステップによる基質の加水分解から得られる生成物を測定することによって行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
生成物が１４−脱メチル化代謝物である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
１４−脱メチル化代謝物が１４−脱メチル化代謝物誘導体である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
活性の決定が、複数のステップによる基質の脱メチル化から得られる生成物を測定することによって行われる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７３】
生成物が１４−脱メチル化代謝物誘導体である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
薬剤担体と、請求項１〜５２のいずれかに記載の組成物又はそのプロドラッグ若しくは塩とを含む薬剤組成物。
【請求項７５】
金属酸化還元酵素に関連する障害を治療する方法であって、必要とする患者に請求項１〜５２のいずれかに記載の組成物又はそのプロドラッグ若しくは塩を投与することを含む方法。
【請求項７６】
障害が、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチン酸化酵素に関連する障害から選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
金属酸化還元酵素を請求項１〜５２のいずれかに記載の阻害剤と接触させることを含む、金属酸化還元酵素を阻害する方法。
【請求項７８】
金属酸化還元酵素が、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチン酸化酵素からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示の主題は、連結基又は直接結合を介してターゲティング部分に連結している金属結合部分を有する金属酸化還元酵素阻害剤、金属酸化還元酵素阻害剤をスクリーニングする方法、及び酸化還元酵素に関連する障害の治療方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
酸化還元酵素は、１つの分子（酸化体、水素供与体又は電子供与体とも呼ばれる）から別の分子（還元体、水素受容体又は電子受容体とも呼ばれる）への電子の移動を触媒する酵素である。酸化還元酵素は、酵素のＥＣ番号分類におけるＥＣ１として分類される。酸化還元酵素は、２２のサブクラスにさらに分類される。多くの酸化還元酵素は、１又は複数の金属イオンを含む金属酵素である。この群のいくつかの例示的な酵素は、１−デオキシ−ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクトイソメラーゼ、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチンオキシダーゼである。
【０００３】
金属酸化還元酵素活性に対して金属イオンが重要であるにもかかわらず、金属酸化還元酵素阻害剤の現在の評価及び開発では、阻害剤の設計において金属イオンの活性が一般的に考慮されていない。例えば、数十年に及ぶキサンチンオキシダーゼ（ＸＯ，xanthine oxidase）阻害剤の研究を調べると、研究の多くが無作為に実施され、阻害剤の種々のタイプの区分を合理的に説明するのが困難であり、ＸＯの金属イオンと相互作用する阻害剤を重点的に取り扱った研究がないことが分かる。参照により本明細書に明確に組み込まれているBorges et al., Current Medicinal Chemistry, 9: 195-217 (2002)を参照されたい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Borges et al., Current Medicinal Chemistry, 9: 195-217 (2002)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本明細書でより詳しく記載されるように、特定の金属酸化還元酵素阻害剤の候補は、当技術分野で知られている。これらの候補のいくつかは、有望であるが、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチンオキシダーゼなどの酸化還元酵素の新規の選択的阻害剤のニーズが存在する。本開示の主題は、当技術分野におけるこれら及び他のニーズに、全体的に又は部分的に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示の主題は、金属酸化還元酵素の阻害の２面的な手法を対象とする。金属酸化還元酵素は、金属酵素であるので、本開示の主題は、任意選択でリンカーを介して連結されているターゲティング部分（ＴＭ，targeting moiety）と金属結合部分（ＭＢＭ，metal binding moiety）の組合せを対象とする。したがって、本開示の主題は、金属タンパク質の２つの異なるが隣接する部位の親和性と特異性を組み合わせることによって、より有効な阻害剤をもたらす。
【０００７】
このように、結合親和性及び結合特異性の両方を含めた付加的及び相乗的結合効果の両方を使用し得る。当業者には理解されるように、結合親和性及び結合特異性は、様々な形で作用し得る。ヒドロキサメートなどのいくつかの金属結合部分は、例えば、亜鉛イオンに緊密に結合する。しかし、これらの阻害剤は、非常に特異性ではない傾向があり、様々な金属タンパク質において結合している亜鉛からの毒性効果を示し得る。本開示の主題は、金属結合部位に近接する金属タンパク質の領域への特異性を使用することによって緊密な金属結合部分の増強された特異性を提供して、より良好なターゲティング及び非特異的結合による毒性の減少を可能にする。同様に、低い親和性及び／又は低い特異性を有する２つの部分の付加は、高い親和性及び／又は高い特異性を有する阻害剤をもたらし得る。したがって、「良好な」及び「不十分な」金属結合部分の任意の組合せは、「良好な」又は「不十分な」ターゲティング部分のいずれかに連結して「良好な」阻害剤をもたらし得る。
【０００８】
一実施形態においては、本開示の主題は、任意選択でリンカーと共に金属結合部分及びターゲティング部分を含む金属酸化還元酵素阻害剤を提供する。いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤には、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、１７−αヒドロキシラーゼ阻害剤、アルコール脱水素酵素阻害剤、アルドステロン合成酵素阻害剤、アロマターゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ヘムオキシゲナーゼ阻害剤、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤、酸化窒素合成酵素阻害剤、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ阻害剤、血管接着タンパク質−１阻害剤、及びキサンチンオキシダーゼ阻害剤が含まれる。
【０００９】
本開示の主題には、製薬担体と、１若しくは複数の本開示の金属酸化還元酵素阻害剤又はそれらのプロドラッグ若しくは塩とを含む薬剤組成物も含まれる。
【００１０】
いくつかの実施形態においては、金属結合部分は、スルホニル部分、カルボニル部分、ボロン酸又はボロン酸エステル部分、硫黄含有部分、窒素含有部分、リン含有部分、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、４個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、５個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、１個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環、２個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環、６員芳香族環、１個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、２個のヘテロ原子を有する６員芳香族環、３個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、４個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、１個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環、及び２個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環からなる群から選択され、但し、金属結合部分、ターゲティング部分、及び任意選択のリンカーの特定の組合せは、本開示の主題から排除される。
【００１１】
さらなる態様においては、本開示の主題は、金属酸化還元酵素の阻害剤をスクリーニングする方法を提供し、この方法は、（ａ）（ｉ）ターゲティング部分、（ii）金属結合部分、及び（iii）任意選択のリンカーを含む候補阻害剤を提供すること、（ｂ）阻害剤候補を金属酸化還元酵素と接触させること、並びに（ｃ）金属酸化還元酵素の活性を決定することを含む。スクリーニング方法のいくつかの実施形態においては、ターゲティング部分は、ラノステロール又はラノステロール誘導体を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態においては、本開示の主題は、金属酸化還元酵素に関連した障害の治療方法を提供し、この方法は、本開示の金属酸化還元酵素又はそれらのプロドラッグ若しくは塩のいずれかの組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、この障害は、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチンオキシダーゼに関連した障害から選択される。
【００１３】
さらなる態様においては、本開示の主題は、金属酸化還元酵素の阻害方法を提供し、この方法は、金属酸化還元酵素を本開示の阻害剤と接触させることを含み、該金属酸化還元酵素は、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチンオキシダーゼからなる群から選択される。
【００１４】
ここまで述べた本開示の主題のいくつかの態様は、本開示の主題によって全体的又は部分的に検討されたものであるが、他の態様は、以下に十分記載される添付の実施例及び図面に関連して検討される場合、説明が進むに従って明らかになるであろう。
【００１５】
本開示の主題を概括的にこのように記載したが、添付の図面（必ずしも原寸に比例して示されていないが）を参照されたい。
【００１６】
ここで、図面１〜１５は、本開示のターゲティング部分への結合点を含む典型的な金属結合部分及びそれらの誘導体を示す。図１〜１５のそれぞれにおいて、Ｒは、本明細書に記載された任意選択のリンカーを有するターゲティング部分の結合を表す。Ｘは、本明細書に概略が記載された任意選択の個別に選択される置換基を表す。Ｚは、酸素、窒素（例えば、ＮＨ又はＮ−アルキル）、及び硫黄の群から選択されるヘテロ原子である。当業者には理解されるように、ある場合には、Ｘ基は、水素であり、一般的に示されていない。さらに、水素ではないＸ置換基が用いられる場合、一般的に、１つだけのＸ基が望ましい。ある場合には、本明細書でのすべての構造について、以下に概略が記載されるように、２つの隣接するＸ基は、一緒になって環構造（環式芳香族構造を含む、１又は複数の環式及び／又は複素環式構造を含む）を形成し得る。
【００１７】
本明細書に引用される金属結合部分のすべてのクラスについて、本開示の主題は、個別にクラスの任意のメンバーを含むか、又は排除することができ、例えば、図１におけるスルホニルベースの金属結合部分の描写は、いくつかの実施形態において、任意のメンバー、例えば、「スルホンアミドを除くスルホニルベースの金属結合部分」を排除することができる。それぞれのメンバーは、明確に且つ独立に含まれるか、又は排除され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ−１Ｊ】図１Ａ〜１ＡＨは、スルホニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図１Ｋ−１Ｓ】図１Ａ〜１ＡＨは、スルホニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図１Ｔ−１ＡＣ】図１Ａ〜１ＡＨは、スルホニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図１ＡＤ−１ＡＨ】図１Ａ〜１ＡＨは、スルホニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図２Ａ−２Ｌ】図２Ａ〜２ＡＩは、カルボニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図２Ｍ−２Ｗ】図２Ａ〜２ＡＩは、カルボニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図２Ｘ−２ＡＧ】図２Ａ〜２ＡＩは、カルボニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図２ＡＨ−２ＡＩ】図２Ａ〜２ＡＩは、カルボニルベースの金属結合部分を示す図である。
【図３Ａ−３Ｅ】図３Ａ〜３ＡＡは、本開示の主題の様々な金属結合部分を示す図である。図３Ａ〜Ｂは、ボロン酸ベースの金属結合部分を示す。図３Ｃ〜Ｅは、硫黄ベースの金属結合部分を示す。
【図３Ｆ−３Ｓ】図３Ａ〜３ＡＡは、本開示の主題の様々な金属結合部分を示す図である。図３Ｆ〜３Ｓは、窒素ベースの金属結合部分を示す。
【図３Ｔ−３ＡＡ】図３Ａ〜３ＡＡは、本開示の主題の様々な金属結合部分を示す図である。図３Ｔ〜３ＡＡは、リンベースの金属結合部分を示す。
【図４Ａ−Ｃ】図４Ａ〜Ｃは、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図５Ａ−５Ｉ】図５Ａ〜５Ｉは、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図６Ａ−６Ｍ】図６Ａ〜６Ｏは、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図６Ｎ−６Ｏ】図６Ａ〜６Ｏは、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図７Ａ−７Ｉ】図７Ａ〜７Ｉは、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図８Ａ−８Ｉ】図８Ａ〜８Ｉは、１個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図９Ａ−９Ｋ】図９Ａ〜９Ｋは、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ヘテロ原子を有しない６員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１１Ａ】図１１Ａは、１個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１２Ａ−１２Ｃ】図１２Ａ〜１２Ｃは、２個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１３Ａ−１３Ｃ】図１３Ａ〜１３Ｃは、３又は４個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１４Ａ−１４Ｅ】図１４Ａ〜１４Ｅは、１個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１５Ａ−１５Ｉ】図１５Ａ〜１５Ｌは、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１５Ｊ−１５Ｌ】図１５Ａ〜１５Ｌは、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環（ここで、Ｒ及びＸは、本明細書に記載された通りである）ベースの金属結合部分を示す図である。
【図１６−１】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−２】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−３】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−４】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−５】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−６】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−７】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−８】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−９】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１０】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１１】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１２】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１３】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１４】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１５】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１６】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１７】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１８】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１６−１９】図１６は、ラノステロールデメチラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１７−１】図１７は、５−リポキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１７−２】図１７は、５−リポキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１７−３】図１７は、５−リポキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１８−１】図１８は、アロマターゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１８−２】図１８は、アロマターゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１９−１】図１９は、シクロオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１９−２】図１９は、シクロオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１９−３】図１９は、シクロオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１９−４】図１９は、シクロオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図１９−５】図１９は、シクロオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２０−１】図２０は、ヘムオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２０−２】図２０は、ヘムオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２１】図２１は、キサンチンオキシダーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２２−１】図２２は、１７−αヒドロキシラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２２−２】図２２は、１７−αヒドロキシラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２３−１】図２３は、アルドステロン合成酵素のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２３−２】図２３は、アルドステロン合成酵素のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２３−３】図２３は、アルドステロン合成酵素のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２４−１】図２４は、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２４−２】図２４は、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２５】図２５は、アルコール脱水素酵素のためのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２６】図２６は、デオキシキシルロースリン酸レダクトイソメラーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２７】図２７は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼのターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２８】図２８は、酸化窒素合成酵素のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【図２９】図２９は、血管接着タンパク質−１のターゲティング部分として有用な構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本開示の主題が、添付の図面を参照して以下により完全に記載され、ここで、本開示の主題のいくつかの、しかしすべてではない実施形態が示される。本明細書に記載される本開示の主題の多くの変更形態及び他の実施形態は、前述の記載及び関連図面に示す教示の利益を有して、本開示の主題が属する分野の技術者は思いつくであろう。したがって、本開示の主題 は、開示された特定の実施形態に限定されるべきでないこと並びに変更形態及び他の実施形態は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることを意図されていることを理解されたい。特定の用語が、本明細書で使用されるが、一般的且つ記述的な意味でのみで使用され、制限の目的で使用されるものではない。
【００２０】
用語「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その（the）」は、特許請求の範囲を含めて本出願において使用される場合、「１又は複数の」を指す。したがって、例えば、「試料（a sample）」の言及は、文脈が明らかに反対である（例えば、複数の試料（a plurality of samples））などの場合を除いて複数の試料を含む。
【００２１】
本明細書及び特許請求の範囲を通して、用語「含む（comprise）」、「含む（comprises）」、及び「含む（comprising）」は、文脈が他の意味を求めている場合を除き、非排他的な意味で使用される。
【００２２】
本明細書で使用される用語「約」は、値に言及する場合、指定された量からの、いくつかの実施形態では、±２０％、いくつかの実施形態では、±１０％、いくつかの実施形態では、±５％、いくつかの実施形態では、±１％、いくつかの実施形態では、±０．５％、及びいくつかの実施形態では、±０．１％の変動を含むことを意図されており、したがって、変動は、本開示の方法を実施するために、又は本開示の組成物を使用するために適切である。
【００２３】
Ｉ．金属酸化還元酵素の阻害剤
本開示の主題は、１又は複数の金属結合部分、ターゲティング部分、及び任意選択でリンカーを含む金属酸化還元酵素の阻害剤を提供する。
【００２４】
本明細書で「阻害剤」は、金属酸化還元酵素を阻害し得る分子を意味する。本明細書で「阻害する」は、阻害剤がない場合の金属酸化還元酵素の活性と比べて、金属酸化還元酵素の活性を減少させることを意味する。いくつかの実施形態においては、用語「阻害する」は、活性の少なくとも５％〜２５％の減少を表し、いくつかの実施形態においては、活性の５０％〜７５％の減少を表し、いくつかの実施形態においては、活性の９５％〜１００％の減少（例えば、活性の９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の減少）を表す。それぞれの金属酸化還元酵素の活性は、変化することがあり、本明細書でより詳細に記載される。個別の活性を測定するためのアッセイは、以下に記載される。
【００２５】
Ａ．金属結合部分
本明細書で「金属結合部分（ＭＢＭ）」は、ＭＢＭの１又は複数の配位原子を介して１又は複数の金属イオンに結合して、配位原子への金属の配位／共有結合をもたらし得る部分を意味する。一般的に、この結合は、少なくとも一対の不対電子を介して達成される。当業者には理解されるように、配位結合の性質は、共有結合特性を有することがあるが、「配位」又は「配位／共有」結合を一般的に称される。
【００２６】
いくつかの実施形態においては、金属結合部分は、ラノステロールデメチラーゼ分子のヘム鉄イオンなどの金属酸化還元酵素の金属イオンに結合するための単一の配位原子を提供する。他の実施形態においては、２個以上の配位原子が、金属結合部分によって提供される。２個以上の配位原子が、金属結合部分によって提供される場合、その金属結合部分は、「キレート剤」又は「リガンド」と呼ぶことができる。配位部位の数は、結合している金属の固有の性質であり、２個の異なる原子を使用して金属への２個の結合を形成する分子は、二座と言われる。三座、四座、五座などの用語は、３個、４個又は５個などの原子を使用してそれぞれ同じ数の結合を形成する金属結合部分を指す。
【００２７】
一般的に、配位原子の性質は、結合する金属によって決まる。一般的に、配位原子としての使用に有用なヘテロ原子には、窒素、酸素及び硫黄が含まれる。
【００２８】
当業者には理解されるように、種々の適切な金属結合部分が使用され得る。金属結合部分は、構造が大環状であるか又は非大環状であり得る。この文脈における「大環状」は、しばしばヘテロ原子を含み、環の内部に金属を結合し、一般的に平面の環状構造の少なくとも１２個の原子を含む。
【００２９】
多くの実施形態においては、金属結合部分は、大環状ではないが、環状構造を含み得る。
【００３０】
一般的に、いくつかの実施形態においては、金属結合部分は、スルホニル部分、カルボニル部分、ボロン酸又はボロン酸エステル部分、硫黄含有部分、窒素含有部分、リン含有部分、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環、１個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環、２個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環、６員芳香族環、１個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、２個のヘテロ原子を有する６員芳香族環、３又は４個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環、１個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環、及び２個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環からなる群から選択され；ここで、いくつかの実施形態においては、金属結合部分は、
【００３１】
【化１】
2010510248.tif 000002
【００３２】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］からなる群から選択される金属結合部分ではない。
【００３３】
適切な金属結合部分の１クラスは、少なくとも１個のヘテロ原子を有する５員環構造を含み、芳香族又は非芳香族であってよい。このクラスのサブクラスには、それだけには限らないが、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環（５Ａ１ＨＡ）及び１個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環（５ＮＡ１ＨＡ）を含む１個のヘテロ原子を有する５員環（５１ＨＡ）；２個のヘテロ原子を有する５員環（この場合もやはり、芳香族又は非芳香族のいずれか：５Ａ２ＨＡ及び５ＮＡ２ＨＡ）；３個のヘテロ原子を有する５員環（芳香族又は非芳香族のいずれか、５Ａ３ＨＡ及び５ＮＡ３ＨＡ）及び４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環（５Ａ４ＨＡ、５Ａ５ＨＡ）が含まれる。上記に概略が記載されたように、それぞれのクラス又はサブクラスは、個別にクラス又はサブクラスの任意のメンバーを含み又は排除し得る。さらに、それぞれのヘテロ原子は、同様に独立に且つ個別に含まれ又は排除されてよく、例えば、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環は、ヘテロ原子として窒素を排除し得る。
【００３４】
適切な金属結合部分の別のクラスには、芳香族又は非芳香族であってよい、ヘテロ原子を有しないか又は少なくとも１個のヘテロ原子を有する６員環構造が含まれる。このクラスのサブクラスには、それだけには限らないが、ヘテロ原子を有しない６員芳香族環（６Ａ）、１個のヘテロ原子を有する６員芳香族環（６Ａ１ＨＡ）及び１個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環（６ＮＡ１ＨＡ）を含む１個のヘテロ原子を有する６員環（６１ＨＡ）；２個のヘテロ原子を有する６員環（この場合もやはり、芳香族又は非芳香族のいずれか：６Ａ２ＨＡ及び６ＮＡ２ＨＡ）；３又は４個のヘテロ原子を有する６員環（芳香族又は非芳香族のいずれか、６Ａ３ＨＡ及び６ＮＡ３ＨＡ又は６Ａ４ＨＡ及び６ＮＡ４ＨＡ）が含まれる。上記に概略が記載されたように、それぞれのクラス又はサブクラスは、個別にクラス又はサブクラスの任意のメンバーを含み又は排除し得る。さらに、５員環構造については、それぞれのヘテロ原子は、同様に独立に含まれ又は排除され得る。
【００３５】
隣接する置換基が環状構造を形成する実施形態においては、実際の金属結合部分は、５又は６員環をベースにすることができ、さらなる環状構造を含むことができることを留意されたい。
【００３６】
図１Ａ〜１ＡＨは、それだけには限らないが、スルホン酸、スルホンアミド、チオスルホン酸、スルホニルヒドラジン、スルホニルヒドロキシルアミン、Ｎ−メトキシ−スルホンアミド、Ｎ−メチル−スルホンアミド、Ｎ−アセチル−スルホニルヒドラジド、Ｎ−アミノカルボニル−スルホニルヒドラジド、Ｎ−アミノチオカルボニル−スルホニルヒドラジド、Ｎ−シアノ−スルホンアミド、シアノメチル−スルホン、Ｎ−アセチルスルホンアミド、Ｎ−アミノカルボニル−スルホンアミド、Ｎ−アミノチオカルボニル−スルホンアミド、Ｎ−アミジノ−スルホンアミド、α−チオアセトアミド−スルホン、α−アセトアミド−スルホン、α−スルホニルメチル−ホスホン酸、α−シアノメチル−スルホンアミド、α−アセトアミド−スルホンアミド、Ｎ−ヒドロキシアミジノ−スルホンアミド、Ｎ−α−アセトキシ−スルホンアミド、Ｎ−スルホニル−イミダゾール、Ｎ−スルホニル−ピラゾール、Ｎ−スルホニル−１−（１，２，４−トリアゾール）、Ｎ−スルホニル−１−（１，２，３−トリアゾール）、Ｎ−スルホニル−ピロリジン−２−オン、Ｎ−スルホニル−イミダゾリノン、Ｎ−スルホニル−ヒダントイン、Ｎ−スルホニル−ピロリジン−２，３−ジオン、Ｎ−スルホニル−ピペラジン、Ｎ−スルホニル−モルホリン、及びＮ−スルホニル−チオモルホリンを含めた典型的なスルホニルベースの金属結合部分を示す。
【００３７】
いくつかの実施形態においては、スルホニル部分は、以下の一般式を有する
【００３８】
【化２】
2010510248.tif 000003
【００３９】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり； Ｒ１３４は、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨＮＨ２、−ＮＨＯＨ、−ＮＨＯＣＨ３、−ＮＨＮ（ＣＨ３）２、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ≡Ｎ、−ＣＨ２Ｃ≡Ｎ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、−ＮＨＣＨ２Ｃ≡Ｎ、−ＮＨＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ２Ｃ（＝ＮＯＨ）−ＮＨ２、−ＮＨＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、
【００４０】
【化３】
2010510248.tif 000004
【００４１】
からなる群から選択され；ここで、Ｘ１４は、ＮＨ、Ｏ、又はＳである］。
【００４２】
図２Ａ〜２ＡＩは、それだけには限らないが、カルボン酸、カルボキサミド、チオカルボン酸、チオアミド、アミジン、オキシム、ニトリル、ヒドロキサム酸、Ｎ−メチル−ヒドロキサム酸、Ｏ−メチル−ヒドロキサム酸、Ｎ，Ｏ−ジメチル−ヒドロキサム酸、Ｎ−ヒドロキシアミジン、ヒドラジド、Ｎ−メチル−ヒドラジド、Ｎ−ヒドロキシ−ヒドラジド、Ｎ−ヒドロキシ−ヒドラジド、Ｎ−アセチルカルボキサミド、Ｎ−カルボニル−ピロリジノン、Ｎ−シアノカルボキサミド、Ｎ−カルボニル尿素、Ｎ−カルボニル−チオ尿素、Ｎ−カルボニル−グアニジン、Ｎ−カルボニル−イミダゾリン−２−オン、Ｎ−カルボニル−イミダゾリン−２−チオン、アセトアセトアミド、α−カルボニル−メチルホスホン酸、Ｎ−カルボニル−Ｎ’−ヒドロキシグアニジン、グリコールアミド、Ｎ−カルボニル−グリシンアミド、Ｏ−アシル−オキシ酢酸、Ｎ−シアノメチルカルボキサミド、Ｎ−アシル−ピペラジン、Ｎ−アシル−ピペラジン−３−オン、Ｎ−アシルチオモルホリン、及びＮ−アシル−モルホリンを含めた典型的なカルボニルに基づく金属結合部分を示す。
【００４３】
いくつかの実施形態においては、カルボニル部分は、以下の一般式を有する
【００４４】
【化４】
2010510248.tif 000005
【００４５】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ２４は、−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＮＨＮＨ２、−Ｎ（ＯＨ）ＮＨ２、−ＮＨＯＨ、−ＮＣＨ３ＯＨ、−ＮＨＯＣＨ３、−ＮＣＨ３ＯＣＨ３、−ＮＨＮＨＣＨ３、−ＮＨＮＨＯＨ、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ≡Ｎ、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２、−ＮＨＣＨ２Ｃ≡Ｎ、−ＮＨＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝ＮＯＨ）−ＮＨ２、−ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、
【００４６】
【化５】
2010510248.tif 000006
【００４７】
からなる群から選択され；ここで、Ｘ１５は、ＮＨ、Ｓ、若しくはＯであり；又はＲ１３５は、
【００４８】
【化６】
2010510248.tif 000007
【００４９】
からなる群から選択される］。
【００５０】
図３Ａ及び３Ｂは、それだけには限らないが、ボロン酸及びピナコールボロン酸エステルを含めた典型的なホウ素に基づく金属結合部分を示す。
【００５１】
いくつかの実施形態においては、ボロン酸又はボロン酸エステル部分は、
【００５２】
【化７】
2010510248.tif 000008
【００５３】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］
からなる群から選択される。
【００５４】
図３Ｃ〜３Ｇは、それだけには限らないが、チオール、１，３−ジチオラン、５−ジチアン、２−ジチアン、及びチオアミドを含めた典型的な硫黄に基づく金属結合部分を示す。いくつかの実施形態においては、硫黄含有部分は、Ｒ−ＳＨ、Ｒ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、
【００５５】
【化８】
2010510248.tif 000009
【００５６】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］
からなる群から選択される。
【００５７】
図３Ｈ〜３Ｓは、それだけには限らないが、Ｎ−アセチル−Ｎ−ヒドロキシルアミン、Ｎ−アセチル−Ｎ−メトキシルアミン、Ｏ−メチル−カルバメート、尿素、グアニジン、２−オキソ−チアゾール（チアゾリジン）、Ｎ−ヒドロキシ尿素、Ｎ−ヒドロキシ−尿素、ヒドロキシ−グアニジン、２−オキソ−オキサゾール（オキサゾリジン）、Ｓ−アルキルチオカルバメート、及びＮ−置換チオ尿素を含めた典型的な窒素に基づく金属結合部分を示す。いくつかの実施形態においては、窒素含有部分は、以下の式を有する
【００５８】
【化９】
2010510248.tif 000010
【００５９】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ１３６は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＯＨ、−Ｃ（＝ＮＯＨ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−Ｒ１３８（ここで、Ｒ１３８は、Ｈ又はアルキルである）、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−Ｒ１３９（ここで、Ｒ１３９は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から選択され；Ｒ１３７は、−Ｈ、−ＯＨ、及び−ＯＣＨ３からなる群から選択され；但し、Ｒ１３７が、ＯＨである場合、Ｒ１３６は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２若しくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３ではなく；又は、Ｒ１３７及びＲ１３６は、一緒になって
【００６０】
【化１０】
2010510248.tif 000011
;
【００６１】
を形成し；ここで、Ｘ１６は、Ｓ又はＯであり；点線は、結合が存在するか又は存在しなくてよいことを示す］。
【００６２】
図３Ｔ〜３ＡＡは、それだけには限らないが、ホスホン酸、チオホスホン酸、リン酸、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホノアミン、ホスホラミド、及びチオホスホラミドを含めた典型的なリンに基づく金属結合部分を示す。いくつかの実施形態においては、リン含有部分は、以下の式を有する
Ｒ−Ｒ１４０−Ｐ（＝Ｘ１７）（ＯＨ）（Ｒ１４１）
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｘ１７は、Ｏ又はＳであり；Ｒ１４０は、−ＣＨ２−、−Ｏ−、及び−ＮＨ−からなる群から選択され；Ｒ１４１は、−ＯＨ及び−ＯＣＨ３からなる群から選択される］。
【００６３】
図４Ａ〜４Ｃは、それだけには限らないが、ピロール、フラン、及びチオフェンを含めた典型的な１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環を示す。いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環は、以下の式を有する
【００６４】
【化１１】
2010510248.tif 000012
,
【００６５】
［式中、Ｘ１８は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群から選択され；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］。
【００６６】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子は、酸素ではない。
【００６７】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子は、窒素ではない。
【００６８】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子は、硫黄ではない。
【００６９】
図５Ａ〜５Ｉは、それだけには限らないが、１−Ｎ−イミダゾール、置換１−Ｎ−イミダゾール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、１−Ｎ−ピラゾール、ピラゾール、イソオキサゾール、及びイソチアゾールを含めた典型的な２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環を示す。
【００７０】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環は、
【００７１】
【化１２】
2010510248.tif 000013
【００７２】
［式中、Ｘ１９は、Ｏ又はＳであり；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択され；但し、金属結合部分は、
【００７３】
【化１３】
2010510248.tif 000014
【００７４】
ではない］
からなる群から選択される。
【００７５】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、酸素ではない。
【００７６】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるいずれのヘテロ原子も、酸素ではない。
【００７７】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、窒素ではない。
【００７８】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるいずれのヘテロ原子も、窒素ではない。
【００７９】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、硫黄ではない。
【００８０】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるいずれのヘテロ原子も、硫黄ではない。
【００８１】
図６Ａ〜６Ｏは、それだけには限らないが、１−Ｎ−（１，２，４−トリアゾール）、置換１−Ｎ−（１，２，４−トリアゾール）、１，２，４−トリアゾール、置換４−Ｎ−（１，２，４−トリアゾール）、１，２，４−オキサジアゾール、１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−オキサジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、Ｎ−置換−１−Ｎ−（１，２，３−トリアゾール）、１，２，３−トリアゾール、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，３−チアジアゾール、１，２，５−オキサジアゾール、１，２，５−チアジアゾール、及び置換１−Ｎ−（１，２，４−トリアゾール−５−チオン）を含めた典型的な３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環を示す。
【００８２】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環は、
【００８３】
【化１４】
2010510248.tif 000015
【００８４】
［式中、Ｘ２０及びＸ２２は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群からそれぞれ独立に選択され；Ｘ２１及びＸ２３は、それぞれ独立にＯ又はＳであり；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択され；Ｒ１４２は、Ｈ又はアルキルであり；但し、金属結合部分は、
【００８５】
【化１５】
2010510248.tif 000016
【００８６】
ではない］
からなる群から選択される。
【００８７】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、酸素ではない。
【００８８】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の２つは、酸素ではない。
【００８９】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、酸素ではない。
【００９０】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、窒素ではない。
【００９１】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の２つは、窒素ではない。
【００９２】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、窒素ではない。
【００９３】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、硫黄ではない。
【００９４】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の２つは、硫黄ではない。
【００９５】
いくつかの実施形態においては、３個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、硫黄ではない。
【００９６】
図７Ａ〜７Ｉは、それだけには限らないが、Ｃ−テトラゾール、１，２，３，４−オキサトリアゾール、１，２，３，４−チアトリアゾール、Ｃ−置換−１−Ｎ−テトラゾール、１−Ｎ−テトラゾール、１−Ｎ−置換−Ｃ−テトラゾール、Ｃ−置換−２−Ｎ−テトラゾール、２−Ｎ−置換−Ｃ−テトラゾール、及びペンタゾールを含めた典型的な４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環を示す。
【００９７】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族複素環は、
【００９８】
【化１６】
2010510248.tif 000017
【００９９】
［式中、Ｘ２４は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群から選択され；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］
からなる群から選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、酸素ではない。
【０１０１】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の２つは、酸素ではない。
【０１０２】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の３つは、酸素ではない。
【０１０３】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、酸素ではない。
【０１０４】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、窒素ではない。
【０１０５】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の２つは、窒素ではない。
【０１０６】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の３つは、窒素ではない。
【０１０７】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、窒素ではない。
【０１０８】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、硫黄ではない。
【０１０９】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の２つは、硫黄ではない。
【０１１０】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子の３つは、硫黄ではない。
【０１１１】
いくつかの実施形態においては、４又は５個のヘテロ原子を有する５員芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、硫黄ではない。
【０１１２】
図８Ａ〜８Ｉは、それだけには限らないが、ピロリジノン、３−ヒドロキピロリジノン、スクシンイミド、マレイミド、Ｎ−ヒドロキシピロリジノン、ブチロラクトン、３−ヒドロキシブチロラクトン、チオブチロラクトン、及び３−ヒドロキシチオブチロラクトンを含めた典型的な１個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環を示す。
【０１１３】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環は、
【０１１４】
【化１７】
2010510248.tif 000018
【０１１５】
［式中、Ｘ２５は、ＮＨ、ＮＯＨ、Ｏ、及びＳからなる群から選択され；それぞれのＺは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４３（ここで、Ｒ１４３は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から独立に選択され；Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒ１４３は、Ｈ及びＯＨからなる群から選択され；ここで、点線は、結合が存在して又は存在しなくてよいことを示す］
からなる群から選択される。
【０１１６】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子は、酸素ではない。
【０１１７】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子は、窒素ではない。
【０１１８】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子は、硫黄ではない。
【０１１９】
図９Ａ〜９Ｋは、それだけには限らないが、ピラゾロン、イソチアゾリン−３−オン、イソチアゾリン−５−オン、イソオキサゾリン−３−オン、イソオキサゾリン−５−オン、２−イミダゾリン−２−オン、ヒダントイン、２−チアゾリドン、チアゾリジンジオン、２−オキサゾリドン、及びオキサゾリジン−２，４−ジオンを含めた典型的な２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環を示す。
【０１２０】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員飽和又は部分不飽和ヘテロアルキル環は、
【０１２１】
【化１８】
2010510248.tif 000019
【０１２２】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｘ２６、Ｘ２７、及びＸ２９は、ＮＨ、Ｏ、及びＳからなる群からそれぞれ独立に選択され；Ｘ２は、Ｏ又はＳであり；それぞれのＺは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４４（ここで、ＮＲ１４４は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から独立に選択される］
からなる群から選択される。
【０１２３】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、酸素ではない。
【０１２４】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、酸素ではない。
【０１２５】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、窒素ではない。
【０１２６】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、窒素ではない。
【０１２７】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、硫黄ではない。
【０１２８】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する５員非芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、硫黄ではない。
【０１２９】
図１０Ａは、それだけには限らないが、オルト−二置換ベンゼンを含めた典型的なヘテロ原子を有しない６員芳香族環を示す。
【０１３０】
いくつかの実施形態においては、６員芳香族環は、以下の式を有する
【０１３１】
【化１９】
2010510248.tif 000020
;
【０１３２】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；それぞれのＲｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］。
【０１３３】
図１１Ａは、それだけに限らないが、ピリジンを含めた典型的な１個のヘテロ原子を有する６員芳香族環を示す。
【０１３４】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環は、以下の式を有する
【０１３５】
【化２０】
2010510248.tif 000021
;
【０１３６】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］。
【０１３７】
図１２Ａ〜１２Ｃは、それだけには限らないが、ピリダジン、ピリミジン、及びピラジンを含めた典型的な２個のヘテロ原子を有する６員芳香族環を示す。
【０１３８】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員芳香族環は、
【０１３９】
【化２１】
2010510248.tif 000022
【０１４０】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］
からなる群から選択される。
【０１４１】
図１３Ａ〜１３Ｃは、それだけには限らないが、１，２，４−トリアジン、１，３，５−トリアジン、及び１，２，３，４−テトラジンを含めた典型的な３又は４個のヘテロ原子を有する６員芳香族環を示す。
【０１４２】
いくつかの実施形態においては、３又は４個のヘテロ原子を有する６員芳香族複素環は、
【０１４３】
【化２２】
2010510248.tif 000023
【０１４４】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｒｘは、水素、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールからなる群から選択される］
からなる群から選択される。
【０１４５】
図１４Ａ〜１４Ｅは、それだけには限らないが、Ｎ−置換−ジヒドロピリジノン、Ｎ−ヒドロキシ−２−ピリドン、３−ヒドロキシ−２−ピリドン、３−ヒドロキシ−４−ピリドン、及び３−ヒドロキシ−４−ピラノンを含めた典型的な１個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環を示す。
【０１４６】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環は、
【０１４７】
【化２３】
2010510248.tif 000024
【０１４８】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｚは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４５（ここで、Ｒ１４５は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から選択される］
からなる群から選択される。
【０１４９】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子は、酸素ではない。
【０１５０】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子は、窒素ではない。
【０１５１】
いくつかの実施形態においては、１個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子は、硫黄ではない。
【０１５２】
図１５Ａ〜１５Ｌは、それだけには限らないが、ピリダジン−３（２Ｈ）−オン、ジオキソピリダジン、グルタルイミド、オキサジン−２−オン、２，６−ジオキソピリミジン、オキサジン−２，４−ジオン、３−オキソピペラジン、モルホリノン、２，３−ジオキソピペラジン、２，５−ジオキソピペラジン、チオモルホリン、及びモルホリンを含めた典型的な２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環を示す。
【０１５３】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員不飽和又は部分飽和ヘテロアルキル環は、
【０１５４】
【化２４】
2010510248.tif 000025
【０１５５】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎ（ここで、ｎは、０又は１であってよい）を介してターゲティング部分に結合することができる結合部位であり；Ｘ３０は、ＮＲ１４６（ここで、Ｒ１４６は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から選択され；それぞれのＺは、Ｏ、Ｓ、及びＮＲ１４７（ここで、Ｒ１４７は、Ｈ又はアルキルである）からなる群から独立に選択される］
からなる群から選択される。
【０１５６】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、酸素ではない。
【０１５７】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、酸素ではない。
【０１５８】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、窒素ではない。
【０１５９】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、窒素ではない。
【０１６０】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子の１つは、硫黄ではない。
【０１６１】
いくつかの実施形態においては、２個のヘテロ原子を有する６員非芳香族環におけるヘテロ原子のいずれも、硫黄ではない。
【０１６２】
図に示すように、金属結合部分は、一般的に「Ｒ」として示される結合部位を有し、これは、任意選択でリンカー（ここで、リンカーは、存在するか又は存在しなくてよい）を用いて下記に記載されるターゲティング部分に結合するのに使用される。
【０１６３】
図に示す通り、金属結合部分の多くは、結合部位に加えて、例えば、「Ｘ」置換基を用いて示す通り任意選択で誘導体化されてもよく、これは、添付の特許請求の範囲に示す通り「Ｒｘ」基と呼ぶこともできる。いくつかの場合においては、Ｘ基、又はＲｘ基は、さらなる配位原子を提供し得る。適切な置換基は、当技術分野で知られており、それだけには限らないが、水素、リンカー（本明細書で「Ｌ」又は「Ｌｎ」（ｎは、０又は１である）として示し得る）、アルキル、アルコール、芳香族、アミノ、アミド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、エーテル、エステル、アルデヒド、スルホニル、ケイ素部分、ハロゲン、硫黄含有部分、リン含有部分、及びエチレングリコールが含まれる。本明細書に示された構造においては、Ｘは、その位置が置換されていない場合、水素である。いくつかの位置は、２つの置換基、Ｘ及びＸ’（この場合、Ｘ及びＸ’基は、同じであるか又は異なるかのいずれかであってよい）を可能にし得ることを留意されたい。一般的に、いくつかの実施形態においては、単一の非水素のＸ基のみが、任意の特定位置に結合しており；即ち、それぞれの位置におけるＸ基の少なくとも１つは、水素ではないことが好ましい。したがって、Ｘが、アルキル又はアリール基である場合、必ずしも本明細書に示されていないが、一般的に炭素に結合しているさらなる水素が存在する。さらに、隣接する炭素上のＸ基は、一緒になって環構造（複素環、アリール及びヘテロアリールを含む）を形成してよく、これは、本明細書に概略が記載されたようにさらに誘導体化されてよい。
【０１６４】
本明細書で「アルキル基」又は文法的同等物は、直鎖状又は分岐状アルキル基（直鎖状アルキルが好ましい）を意味する。分岐状である場合、１又は複数の位置において、定めのない限り、任意の位置において分岐していてよい。本文脈における「アルキル」には、アルケニル及びアルキニル、並びに単結合、二重結合及び三重結合の任意の組合せが含まれる。いくつかの実施形態においては、アルキル基は、格段に大きいこともあるが、アルキル基は、約１〜約３０個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ３０）の範囲に及ぶことができ、好ましい実施形態は、約１〜約２０個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ２０）を使用し、約Ｃ１から約Ｃ１２さらには約Ｃ１５までが好ましく、Ｃ１−Ｃ５が特に好ましい。同様に、アルキル基の定義内に含まれるのは、Ｃ５及びＣ６環などのシクロアルキル基、及び窒素、酸素、硫黄又はリンを含む複素環、並びに不飽和結合を含むシクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基である。アルキルには、ヘテロアルキルも含まれ、硫黄、酸素、窒素、及びケイ素のヘテロ原子が好ましい。アルキルには、置換アルキル基が含まれる。本明細書で「置換アルキル基」は、本明細書で定義されたように、１又は複数の置換部分「Ｘ」をさらに含む本明細書で定義されたアルキル基を意味する。
【０１６５】
本明細書で「アミノ基」又は文法的同等物は、−ＮＨ２、−ＮＨＸ及び−ＮＸ２基（Ｘは、本明細書で定義された通りである）を意味する。
【０１６６】
本明細書で「ニトロ基」は、−ＮＯ２基を意味する。
【０１６７】
本明細書で「硫黄含有部分」は、それだけには限らないが、チア−、チオ−及びスルホ−化合物、チオール（−ＳＨ及び−ＳＸ）、及び硫化物（−ＸＳＸ−）を含めた硫黄原子を含む化合物を意味する。本明細書で「リン含有部分」は、それだけには限らないが、ホスフィン及びホスフェートを含めたリンを含む化合物を意味する。本明細書で「ケイ素含有部分」は、ケイ素を含む化合物を意味する。
【０１６８】
本明細書で「エーテル」は、−Ｏ−Ｘ基を意味する。好ましいエーテルには、アルコキシ基が含まれ、−Ｏ−（ＣＨ２）２ＣＨ３及び−Ｏ−（ＣＨ２）４ＣＨ３が好ましい。
【０１６９】
本明細書で「エステル」は、カルボキシル基を含めた−ＣＯＯＸ基を意味する。本明細書で「カルボキシル」は、−ＣＯＯＨ基を意味する。
【０１７０】
本明細書で「ハロゲン」は、臭素、ヨウ素、塩素、又はフッ素を意味する。好ましい置換アルキルは、部分的又はＣＦ３などの完全にハロゲン化されたアルキルである。
【０１７１】
本明細書で「アルデヒド」は、−ＸＣＯＨ基を意味する。
【０１７２】
本明細書で「アルコール」は、−ＯＨ基、及びアルキルアルコール−ＸＯＨを意味する。
【０１７３】
本明細書で「アミド」は、−ＸＣＯＮＨ−又はＸＣＯＮＸ−基を意味する。
【０１７４】
本明細書で「エチレングリコール」又は「（ポリ）エチレングリコール」は、エチレン基のそれぞれの炭素原子も、Ｘで単一又は二重に置換（即ち、−（Ｏ−ＣＸ２−ＣＸ２）ｎ−（Ｘは、上記に記載された通りである））され得るが、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−基を意味する。酸素の代わりに他のヘテロ原子を含むエチレングリコール誘導体（即ち、−（Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、又は−（Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、又は置換基を含むもの）も有用である。
【０１７５】
本明細書で「アリール基」又は文法的同等物は、一般的に５〜１４個の炭素原子（より大きな多環式環構造を作り得るが）を含む芳香族単環又は多環式炭化水素部分及び任意の炭素環式ケトン又はそのチオケトン誘導体を意味し、ここで、自由原子価を有する炭素原子は、芳香族環のメンバーである。芳香族基には、アリーレン基及び３個以上の原子が除かれた芳香族基が含まれる。本出願の目的について、芳香族には、ヘテロアリールが含まれる。「ヘテロアリール」は、自由原子価を有する原子が、芳香族環の一員であり、表示された炭素原子の１〜５個が、窒素、酸素、硫黄、リン、ホウ素及びケイ素から選択されるヘテロ原子によって置き換えられた芳香族基、並びにその任意の複素環式ケトン及びチオケトン誘導体を意味する。したがって、ヘテロアリールには、例えば、ピロリル、ピリジル、チエニル、又はフラニル（単環、単一ヘテロ原子）；オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、又はイミダゾリル（単環、複数ヘテロ原子）；ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、又はベンズイミダゾリル、（多環、複数ヘテロ原子）；キノリル、ベンゾフラニル又はインドリル（多環、単一ヘテロ原子）が含まれる。「アリール」には、本明細書で定義された１又は複数のＸ基を有する置換アリール及び同様に置換ヘテロアリール基が含まれる。
【０１７６】
Ｘ置換基は、候補阻害剤の溶解性を改変するために、又は金属結合部分の電子環境を変えるために使用し得る。例えば、さらなる選択された環置換基を、水性又は有機溶媒中のいずれかの得られる候補阻害剤の溶解性を変えるために利用する。典型的には、金属結合部分へのアルキル、アルコキシ、ペルフルオロアルキル、ＣＮ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシの１−（アシルオキシ）アルキルエステル、アリール又はヘテロアリールの置換は、非極性溶媒により溶けやすい候補阻害剤をもたらす。別法として、置換は、「水溶性化基」、即ち、スルホン酸、スルホン酸の塩、アミンの塩、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルキルアミノ、又はカルボキシアルキルチオ又は水溶液により溶けやすい候補阻害剤をもたらす他の置換基による。同様に、リンカー及びターゲティング部分の種類の注意深い選択も、最終的な候補阻害剤の溶解性を改変するために使用され、帯電した又はイオン化可能な基を含む候補阻害剤は、通常、水溶性を増す。
【０１７７】
別法として、環置換基を、以下により完全に概略が記載されるように、反応部位として使用して担体又は基質に候補阻害剤が結合するように候補阻害剤をさらに改変する。
【０１７８】
多数の適切な金属結合部分が、図１〜１５に示されている。金属結合部分、ターゲティング部分、及び任意選択でリンカーのいくつかの組合せにおいては、金属結合部分は、
【０１７９】
【化２５】
2010510248.tif 000026
【０１８０】
［式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である］
からなる群から選択される金属結合部分ではないことを留意されたい。
【０１８１】
Ｂ．ターゲティング部分
本開示の阻害剤は、金属結合部分に加えて、ターゲティング部分を含む。本明細書で「ターゲティング部分」は、特定の位置又は関係を標的として阻害剤を送り込む又は導く働きをする官能基を意味する。したがって、例えば、ターゲティング部分は、ラノステロールデメチラーゼなどの金属酸化還元酵素の機能に不可欠である金属イオンの近傍に金属結合部分を運ぶために使用し得る。即ち、ターゲティング部分は、金属結合部分が金属イオンに結合できるように、好ましくは金属結合部位の近傍にラノステロールデメチラーゼへの結合親和性及び／又は結合特異性を有する。以下に記載されるように、任意選択のリンカーが、適切なスペースを提供するために使用される。以下の節に挙げられるすべての阻害剤は、ターゲティング部分としての用途を見出し；任意選択で、阻害剤の部分又はターゲティング部分は、除去されて金属結合部分及び任意選択のリンカーで置き換えられる。
【０１８２】
１．１−デオキシ−ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクトイソメラーゼ
ＤＸＰＲＩ又はＤＸＲとしても知られる１−デオキシ−ｄ−キシルロース−５−リン酸レダクトイソメラーゼは、細菌界を通して見出されるマンガンを含有する酸化還元酵素金属酵素である。イソペンテニル二リン酸は、すべての生物に不可欠である様々なイソプレノイドの前駆体である。これは、ヒトのメバロン酸経路によって生成されるが、植物、原生動物、及び多くの細菌における代わりの経路によって生成される。ＤＸＲは、この非メバロン酸経路の第２段階を触媒し、これは、２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリトリトール４−リン酸を形成するための１−デオキシ−Ｄ−キシルロース５−リン酸のＮＡＤＰＨ依存性転位及び還元を含む。ＤＸＲは、抗感染症薬の開発のための標的である。Henriksson et al., J. Biol. Chem. 2007 Jul 6; 282(27): 19905-16。
【０１８３】
ホスミドマイシンは、マラリアの治療のための臨床試験に到達している。ホスミドマイシンは、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）におけるＤＸＲの阻害によりイソプレノイドの合成を阻害し、インビトロで多剤耐性株の増殖を抑制する。ホスミドマイシンは、インビトロ及びマウスモデルで熱帯熱マラリア原虫に対する活性を有することが示された。非盲検非対照試験において７日間の８時間毎の１，２００ｍｇの経口量でホスミドマイシンの効能及び安全性が、ガボン及びタイにおける２０人の成人対象における急性の合併症のない熱帯熱マラリア原虫マラリアの治療において評価された。すべての対象は、第７日（第１終点）に臨床的且つ寄生虫学的に治った。寄生虫及び解熱（fever clearance）は、それぞれ４４及び４１時間の平均で急速であった。第２８日に、９対象のうちの７対象（７８％）がガボンで治り、９対象のうち２対象（２２％）がタイで治った。５対象で軽い胃腸の副作用が記録されたが、薬物は十分に許容された。血液学的及び生化学的なパラメーターの分析は、研究を通して臨床的に重大な変化を示さなかった。Lell et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2003 Feb; 47(2): 735-8。別の臨床試験においては、ホスミドマイシンを、それぞれ、９、８、及び１０人の評価が可能な患者において５、４、又は３日間（８時間毎に１．２ｇ）、投与した。すべての治療計画は、十分許容された。第１４日までの治癒率は、それぞれ、５、４、及び３日の治療期間で８９％（９人中８人）、８８％（８人中７人）、及び６０％（１０人中６人）であった。Missinou et al., Lancet 2002 Dec 14; 360(9349): 1941-2。
【０１８４】
イソプレノイドへのメチルエリトリトールリン酸経路の阻害剤である抗生物質のホスミドマイシンの類似体を合成し、組換えシネコシスティス属（Synechocystis sp.）ＰＣＣ６８０３  １−デオキシ−ｄ−キシルロース５−リン酸レダクトイソメラーゼに対して評価した。ホスミドマイシンのリン酸類似体であるホスホキサシン（Fosfoxacin）及びそのアセチル同類物は、ホスミドマイシンに比べてＤＸＲのより強力な阻害剤であることが見出された。Woo et al., Bioorg Med Chem. 2006 Apr 1; 14(7): 2375-85。制限された配座可動性を特徴とする一連のホスミドマイシン類似体が合成され、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース５−リン酸レダクトイソメラーゼの阻害剤として及び熱帯熱マラリア原虫の成長阻害剤として評価された。鏡像異性的に純粋なトランス−シクロプロピルＮ−アセチル類似体は、大腸菌（E. coil）ＤＸＲに対してホスミドマイシンと同程度の阻害活性を示し、熱帯熱マラリア原虫の成長阻害についてインビトロで試験した場合に同等に活性であることが分かった。反対に、α−フェニルシス−シクロプロピル類似体は、酵素の阻害を実質的に示さなかった。Devreux et al., J Med Chem. 2006 Apr 20; 49(8): 2656-60。一連のピリジン−２−オン及びキノリン−２−オン誘導体は、細菌性ＤＸＲに対して強力な活性を有することが実証された（国際公開第２００３／１０３６６８号パンフレットを参照されたい）。一連の新規な３’−アミド−３’−デオキシ−Ｎ（６）−（１−ナフチルメチル）アデノシンを合成し、熱帯熱マラリア原虫のＤｄ２株に対する抗マラリア活性について試験した。さらに、本系列及び６２のアデノシン誘導体を、１−デオキシ−ｄ−キシルロース５−リン酸レダクトイソメラーゼ阻害について分析した。生物学的分析によって、調査された３’，Ｎ（６）−二置換アデノシン誘導体は、低マイクロモル範囲において熱帯熱マラリア原虫寄生虫に対して中程度ながら有意な活性を示すことが明らかになった。Herforth et al., Bioorg Med Chem. 2004 Feb 15; 12(4): 755-62。
【０１８５】
図２６は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適する、いくつかのＤＸＲの阻害剤を示す。図２６は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の結合の可能な部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０１８６】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むＤＸＲ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０１８７】
【化２６】
2010510248.tif 000027
【０１８８】
［式中、ｎ１は、１〜２の整数である］
（ｂ）
【０１８９】
【化２７】
2010510248.tif 000028
;
【０１９０】
［式中、ｎ１は、１〜２の整数であり；
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０１９１】
【化２８】
2010510248.tif 000029
【０１９２】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０１９３】
いくつかの実施形態においては、デオキシキシルロースリン酸レダクトイソメラーゼ阻害剤は、図２６に示すデオキシキシルロースリン酸レダクトイソメラーゼ阻害剤の群から選択される。
【０１９４】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＤＸＲに結合することが示された他の既知のターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０１９５】
ＤＸＲ活性は、確立された方法で測定し得る。Shigi et al., J. Antimicrob. Chemother., 1989, 24: 131; Woo et al., Bioorg. Med. Chem., 2006 Apr 1; 14(7): 2375-85; _Devreux et al., _JMed Chem. 2006 Apr 20; 49(8): 2656-60を参照されたい。
【０１９６】
２．５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ，5-Lipoxygenase）
５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）（ＥＣ１．１３．１１．３４、ロイコトリエン−Ａ４合成酵素、Ｄ５−リポキシゲナーゼ；５Ｄ−リポキシゲナーゼ、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ、Ｃ−５−リポキシゲナーゼ、ＬＴＡ合成酵素、又はロイコトリエンＡ４合成酵素としても知られる）は、多価不飽和脂肪酸の酸化に触媒作用を及ぼす非ヘム、鉄含有酵素である。５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）は、アラキドン酸（ＡＡ，arachidonic acid）から、炎症性及びアレルギー性反応の媒介物質であるロイコトリエン（ＬＴ，leukotriene）への変換の第１段階に触媒作用を及ぼす。最近、５−ＬＯ経路は、アテローム性動脈硬化及び骨粗しょう症と関連付けられてもいる。細胞５−ＬＯ活性は、様々なシグナル経路を関与させ得る複雑な方法で調節されることも示されている。５−ＬＯは、細胞内Ｃａ２＋濃度の増加、ジアシルグリセロール、ＭＡＰＫＡＰキナーゼ−２によるリン酸化及びＥＲＫによって活性化され得る。Werz and Steinhilber, Biochem. Pharmacol., 70: 327-33 (2005)。
【０１９７】
植物ＬＯ及び哺乳類ＬＯの両方とも、機能的に重要なＣａ２＋により調節される膜との結合を受け、次いで脂質により誘導される生物活性媒介物質が生成されることが示された。哺乳類の５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）は、アラキドン酸（ＡＡ）を５−ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（５−ＨＰＥＴＥ，5-hydroperoxyeicosatetraenoic acid）に変換し、次いでアレルギー、炎症、アポプトーシス、及び腫瘍形成の強力な媒介物質として作用するすべてのロイコトリエンの生合成における重要中間体であるロイコトリエンＡ４に変換するため格別重要である。刺激された骨髄性細胞におけるロイコトリエン生成は、５−ＬＯの核膜へのＣａ２＋により媒介された結合によって先行される。Ｃａ２＋から独立した、リン酸化により媒介された５−ＬＯの核膜への転移及び活性化も記録された。Pande et al., Biophys J., 88: 4084-4094 (2005)を参照されたく、その中に引用された参考文献は、すべて明確に参照により組み込まれている。５−リポキシゲナーゼの概説については、Radmark, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 161: S11-S15 (2000)を参照されたい。
【０１９８】
５−リポキシゲナーゼを阻害する化合物が記載されている。米国特許第６，３７６，５２８号明細書は、５−ＬＯを阻害する化合物を記載している。米国特許第５，２３４，９５０号明細書は、テトラヒドロフラン誘導体を記載している。米国特許第５，０９８，９３２号明細書は、環状エーテル誘導体を記載している。米国特許第５，３５４，８６５号明細書は、テトラヒドロピランを記載している。米国特許第４，８７３，２５９号、５，２２０，０５９号及び５，２８８，７５１号明細書は、リポキシゲナーゼ阻害剤としてヒドロキシ尿素を記載している。アセチレン誘導体は、国際公開第９２／０１６２号パンフレットに５−ＬＯ阻害剤活性を有すると記載されている。これらのそれぞれは、特にその中に示された説明及び構造について参照により本明細書に組み込まれている。
【０１９９】
５−リポキシゲナーゼ阻害剤には、マソプロコール（ノルジヒドログアヤレチン酸）、テニダップ［５−クロロ−２，３−ジヒドロ−３−（ヒドロキシ−２−チエニルメチレン）−２−オキソ−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド］、ジレウトン、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン、Abbott社製A-121798、Abbott社製A-76745、Abbott社製A-78773、Abbott社製A-79175、Abbott社製ABT 761、Dainippon社製AL-3264、Bayer社製Bay-x-1005、Biofor社製BF-389、ブナプロラスト、Cytomed社製CMI-392、Takeda社製CV-6504、リン酸エナザドレム、Leo Denmark社製ETH-615、フレゼラスチン塩酸塩、Merck Frosst社製L 663536、Merckle社製ML-3000、3M Pharmaceuticals社製R-840、リロピロックス、Schering Plough社製SCH 40120、テポキサリン、リナゾラスト（TMK-688）、Zeneca社製ZD-2138、Bristol-Myers Squibb社製BU-4601A、カルバゾマイシンＣ、ラグナマイシン、Wellcome社製BW-70C、Ciba-Geigy社製CGS-26529、Warner-Lambert社製CI 1004、Warner-Lambert社製PD-136005、Warner-Lambert社製PD-145246、Elsai社製E 3040、Fujirebio社製F-1322、Fujisawa社製FR 110302、Merck Frosst社製L 699333、Merck Frosst社製L 739010、Lilly社製LY-269415、Lilly社製LY 178002、Hoechst Roussel社製P 8892、SmithKline Beecham社製SB-202235、American Home Products社製WAY-121520、American Home Products社製WAY-125007、Zeneca社製ZD 7717、Zeneca社製ZM-216800、Zeneca社製ZM 230487、１，２−ジヒドロ−ｎ−（２−チアゾリル）−１−オキソピロロ（３，２，１−ｋｌ）フェノチアジン−１−カルボキサミド、Abbott社製A-65260、Abbott社製A-69412、Abbott-63162、American Home Products社製AHR-5333、Bayer社製Bay-q-1531、Boehringer Ingelheim社製BI-L-357、Boehringer Ingelheim社製BI-L-93BS、Boehringer Ingelheim社製BIL 226XX、Bristol-Myers Squibb社製BMY-30094、カルバゾマイシンＢ、Wellcome社製BW-B218C、Chauvin社製CBS-1114、Ciba-Geigy社製CGS-21595、Ciba-Geigy社製CGS-22745、Ciba-Geigy社製CGS-23885、Ciba-Geigy社製CGS 24891、Ciba-Geigy社製CGS-8515、Chiesi社製CHF-1909、Warner-Lambert社製CI-986、Wamer-Lambert社製CI 987、シルシリオール、ドセベノン、Eisai社製E 5110、Eisai社製E-6080、エノフェラスト、エポカルバゾリン−Ａ、エプロバフェン、エバンダミン、Fisons社製FPL 62064、Zeneca社製ICI-211965、Kyowa Hakko社製KF-8940、Merck & Co社製L-651392、Merck & Co社製L-651896、Merck & Co社製L-652343、Merck & Co社製L-656224、Merck & Co社製L-670630、Merck & Co社製L-674636、Lilly社製LY-233569、Merck & Co社製MK-591、ニトロソキサシン−Ａ、Ono社製ONO-5349、Ono社製ONO-LP-219、Ono社製ONO-LP-269、Warner-Lambert社製PD-127443、Purdue Frederick社製PF-5901、Rhone-Poulenc Rorer社製Rev-5367、Rhone-Poulenc Rorer社製RG-5901-A、Rhone-Poulenc Rorer社製RG-6866、Roussel-Uclaf社製RU-46057、Searle社製SC-41661A、Searle社製SC-45662、Sandoz社製SDZ-210-610、SmithKline Beecham社製SK&F-104351、SmithKline Beecham社製SK&F-104493、SmithKline Beecham社製SK&F-105809、Synthelabo社製SL-81-0433、Teijin社製TEI-8005、Terumo社製TMK-777、Terumo社製TMK-781、Terumo社製TMK-789、Terumo社製TMK-919、Terumo社製TMK-992、Teikoku Hormone社製TZI-41127、American Home Products社製WAY-120739、American Home Products社製WY 47288、American Home Products社製Wy-48252、American Home Products社製Wy-50295、及びYoshitomi社製Y-19432も含まれる。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，３７６，５２８号明細書を参照されたい。
【０２００】
Ginkgo biloba leaves社製ビフラボンであるGinkgetinは、二重シクロオキシゲナーゼ−２／５−リポキシゲナーゼ阻害活性を有することが報告された。参照により本明細書に組み込まれているSon et al., Biological & Pharmaceutical Bulletin, 28: 2181-84 (2005)。
【０２０１】
図１７は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適する５−リポキシゲナーゼのいくつかの阻害剤を示す。図１７は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の結合の可能な部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０２０２】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む５−リポキシゲナーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０２０３】
【化２９】
2010510248.tif 000030
;
【０２０４】
［式中、Ｒ２４及びＲ２５は、−ＯＨ及びＬｎ−ＭＢＭからなる群からそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｌｎは、連結基であり、ｎは、０〜１の整数であり、ＭＢＭは、金属結合部分であり、但し、Ｒ２５及びＲ２５の少なくとも１つはＬｎ−ＭＢＭである］；
（ｂ）
【０２０５】
【化３０】
2010510248.tif 000031
【０２０６】
（ｃ）
【０２０７】
【化３１】
2010510248.tif 000032
【０２０８】
（ｄ）
【０２０９】
【化３２】
2010510248.tif 000033
【０２１０】
（ｅ）
【０２１１】
【化３３】
2010510248.tif 000034
【０２１２】
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカー（ここで、ｎは、０〜１の整数である）であり；
但し、金属結合部分は、
【０２１３】
【化３４】
2010510248.tif 000035
【０２１４】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０２１５】
いくつかの実施形態においては、５−リポキシゲナーゼ阻害剤は、図１７に示す５−リポキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される。
【０２１６】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又は５−リポキシゲナーゼに結合することが示された他の既知のターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０２１７】
５−リポキシゲナーゼ活性は、確立された方法で測定し得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれているRouzer et al., Proc Natl Acad Sci., 83: 857-861 (1986); Riendeau et al., Biochem..1, 263: 565-572 (1989)；及びPande et al., Biophys J., 88: 4084-4094 (2005)を参照されたい。
【０２１８】
３．１７−αヒドロキシラーゼ
１７−αヒドロキシラーゼ（ＡＨ，alpha hydroxylase）は、シトクロムＰ４５０ファミリーのヘム含有メンバーであり、ＣＹＰ１７としても知られている。ＡＨは、シトクロムＰ４５０酸化還元酵素及びミクロソーム電子伝達系を利用して２つの混合機能オキシダーゼの反応に触媒作用を及ぼす。Ｐ４５０ｃ１７により触媒される２つの反応は、Ｃ２１ステロイド、プレグネノロン（Δ５ステロイド）又はプロゲステロン（Δ４ステロイド）の１７α−ヒドロキシル化、次いでそれぞれＣ１９ステロイド、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ，dehydroepiandrosterone）又はアンドロステンジオンが生成されるＣ１７−２０結合の開裂である。それぞれの反応は、ＮＡＤＰＨの１分子及び分子Ｏ２の１分子を必要とする。この２段階の反応において、１７α−ヒドロキシプレグネノロン又は１７α−ヒドロキシプロゲステロンが、中間体として形成される。アンドロゲンの合成におけるＡＨの重要性により、ＡＨは、前立腺癌などのアンドロゲンに関連する疾患のための標的となっている。Payne and Hales, Endocrine Reviews, 25(6): 947-970。
【０２１９】
アンドロゲン依存性及び非依存性ダニングラット前立腺腫瘍に対するリアロゾールのインビボ抗腫瘍効果を試験した。１日当たり１００ｍｇ／ｋｇに相当する１２０ｍｇ／１００ｇｍの食物の用量におけるリアロゾールは、成長が遅い高分化したアンドロゲン依存性ダニング−Ｈ腫瘍（６０％の平均腫瘍体積減少）の成長を阻害した。同じ用量において、リアロゾールは、アンドロゲン非依存性の中程度に分化したＰＩＦ−１（−６０％）及びアンドロゲン依存性の未分化ＡＴ−６腫瘍（−７３％）の成長も著しく減少させた。Dijkman et al., J. Urol., 1994 Jan; 151(1): 217-22。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第４，８５９，６８４号明細書も参照されたい。
【０２２０】
一連の１−及び４−（２−ナフチルメチル）−１Ｈ−イミダゾール（３及び４）を合成し、Ｃ（１７，２０）−リアーゼ阻害剤として評価した。いくつかの６−メトキシナフチル誘導体は、強力なＣ（１７，２０）−リアーゼ阻害、ラットにおけるテストステロン生合成の抑制及びラットにおける前立腺及び精嚢の重量の減少を示した。Matsunaga et al., Bioorg Med Chem., 2004 Aug 15; 12(16): 4313-36。米国特許第６，５７３，２８９号及び７，０８４，１４９号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）も参照されたい。
【０２２１】
一連の新規なデルタ１６〜１７−アゾリルステロイドを、３β−アセトキシ−１７−クロロ−１６−ホルミルアンドロスタ−５，１６−ジエン（２）及びアゾリル求核試薬の求核ビニル「付加−脱離」置換反応により合成した。新規なデルタ１６〜１７アゾリルステロイドのいくつかは、ヒト及びラットの精巣Ｐ４５０（１７）αの強力な阻害剤であった。Njar et al., J. Med. Chem., 1998 Mar 12; 41(6): 902-12。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，９９４，３３５号も参照されたい。
【０２２２】
ＷＨＴマウスにおける、ＡＨの新規の強力なステロイド阻害剤の１７−（３−ピリジル）アンドロスタ−５，１６−ジエン−３β−オール（ＣＢ７５９８）及び１７−（３−ピリジル）アンドロスタ−５，１６−ジエン−３−オン（ＣＢ７６２７）のインビボ効果を、去勢及び２種の臨床的に活性な化合物であるケトコナゾール及びフルタミドのそれと比較した。フルタミド及び去勢手術は、腹側前立腺及び精嚢の重量に著しい減少を生じた。その３β−Ｏ−アセテート形態（ＣＢ７６３０）におけるＣＢ７５９８及びＣＢ７６２７は、２週間、１日に１回投与された場合、腹側前立腺、精嚢、腎臓及び睾丸の重量に著しい減少を生じた。Barrie et al., J. Steroid Biochem Mol Biol., 1994 Sep; 50(5-6): 267-73。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，６０４，２１３号明細書も参照されたい。
【０２２３】
一連の新規な非ステロイド性Ｃ（１７，２０）−リアーゼ阻害剤を、その基質である１７α−ヒドロキシプレグネノロンに基づく新規の設計を使用して合成し、いくつかの化合物は、強力なＣ（１７，２０）−リアーゼ阻害を示した。しかし、インビボ活性は、短時間であることが分かり、作用の持続時間を改善するために、一連のベンゾチオフェン誘導体を評価した。いくつかの化合物は、延長された作用の持続時間の強力なインビボ効能を有することが確認された。インビボ効能の重要な構造決定基は、ベンゾチオフェン環上の５−フルオロ基及び４−イミダゾリル部分であることが実証された。Matsunaga et al., Bioorg Med Chem., 2004 May 1; 12(9): 2251-73。
【０２２４】
図２２は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するＡＨのいくつかの阻害剤を示す。図２２は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の結合の可能な部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０２２５】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む１７α−ヒドロキシラーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０２２６】
【化３５】
2010510248.tif 000036
;
【０２２７】
［式中、
Ｒ５０は、（＝Ｏ）及び−ＯＲ５１からなる群から選択され、ここで、Ｒ５１は、アルキルである］
（ｂ）
【０２２８】
【化３６】
2010510248.tif 000037
【０２２９】
［式中、
Ｒ５２及びそれぞれのＲ５３は、独立にＨ及びアルキルであり；
Ｒ５４は、Ｈ又はＯＨである］
（ｃ）
【０２３０】
【化３７】
2010510248.tif 000038
;
【０２３１】
［式中、
ＭＢＭは、環状炭化水素に縮合する（fused to cyclic hydrocarbon）ことがあり；
Ｒ５５＝Ｈ、ハロゲン、アルキル、ＣＯＮＨＲ５７であり、ここで、Ｒ５７は、アルキルであり；
Ｒ５６は、Ｈ又はＯＨである］
（ｄ）
【０２３２】
【化３８】
2010510248.tif 000039
;
【０２３３】
［式中、
ＭＢＭは、環状炭化水素に縮合することがあり；
Ｒ５８＝Ｈ、ハロゲン、アルキル、ＣＯＮＨＲ６０であり、ここで、Ｒ６０は、アルキルであり；
Ｒ５９は、Ｈ又はＯＨである］
（ｅ）
【０２３４】
【化３９】
2010510248.tif 000040
;
【０２３５】
［式中、
Ｒ６１及びＲ６２は、それぞれ独立に、−Ｌｎ−ＭＢＭ又は不飽和フェニル又はハロゲン、アルキル、若しくはアルコキシルで置換されたフェニルである］
【０２３６】
【化４０】
2010510248.tif 000041
【０２３７】
［式中、Ｒ６３及びＲ６４は、Ｈ、ハロゲン、アルキル、及びアルコキシからなる群からそれぞれ独立に選択される］
（ｆ）
【０２３８】
【化４１】
2010510248.tif 000042
;
【０２３９】
［式中、Ｒ６５は、Ｈ又はハロゲンである］
（ｇ）
【０２４０】
【化４２】
2010510248.tif 000043
;
【０２４１】
（ｈ）
【０２４２】
【化４３】
2010510248.tif 000044
;
【０２４３】
［式中、
Ｒ６６は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ６７は、Ｈ又はＯＨである］
（ｉ）
【０２４４】
【化４４】
2010510248.tif 000045
;
【０２４５】
［式中、
Ｒ６８は、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｒ６９及びＲ７０は、Ｈ又はアルキルである］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０２４６】
【化４５】
2010510248.tif 000046
【０２４７】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０２４８】
いくつかの実施形態においては、１７α−ヒドロキシラーゼ阻害剤は、図２２に示す１７α−ヒドロキシラーゼ阻害剤の群から選択される。
【０２４９】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＡＨに結合することが示された他の既知のターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０２５０】
ＡＨ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。Duc et al., J. Steroid Biochem Mol Biol., 2003 Apr; 84(5): 537-42; _Matsunaga et al., Bioorg, Med. Chem. 2004 May 1; 12(9): 2251-73; Njar et al., J. Med. Chem., 1998 Mar 12; 41(6): 902-12を参照されたい。
【０２５１】
４．アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ，Alcohol Dehydrogenase）
アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ、ＥＣ１．１．１．１、アルデヒドレダクターゼ、アルコール脱水素酵素（ＮＡＤ）、脂肪族アルコール脱水素酵素、エタノール脱水素酵素、ＮＡＤ依存性アルコール脱水素酵素、ＮＡＤ特異的芳香族アルコール脱水素酵素、ＮＡＤＨ−アルコール脱水素酵素、ＮＡＤＨ−アルデヒド脱水素酵素、第１級アルコール脱水素酵素、又は酵母アルコール脱水素酵素としても知られている）は、エチレングリコール及びメタノールのそれらの有毒代謝物への代謝の初期段階に触媒作用を及ぼす。エチレングリコールは、グリコアルデヒドに最初に代謝され、これは、次いでグリコレート、グリオキシレート、及びオキサレートにさらに酸化される。エチレングリコール毒作用において見られる代謝性アシドーシス及び腎臓損傷に主として関与するのは、グリコレート及びオキサレートである。メタノールは、ホルムアルデヒドに最初に代謝され、次いで、ホルムアルデヒド脱水素酵素による続いての酸化を受けて、ギ酸になり、これは、メタノール毒作用に関係する代謝性アシドーシス及び視覚障害に主として関与する。
【０２５２】
アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）は、多くの生物に生じ、アルコール及びアルデヒド又はケトンの間の変換を促進する脱水素酵素のグループである。反応は、水素受容体として補酵素ＮＡＤ＋を必要とし、アルコール基質についての広い選択性を有する。ヒト及び多くの他の動物においては、それらは、さもないと有毒になり得るアルコールを分解するのに役立ち、酵母及び多くの細菌においては、それらは、発酵の一部として逆の反応に触媒作用を及ぼす。ＡＤＨは、メタノール及びエチレングリコール毒作用を治療する薬剤の開発のための標的である。Edenberg, Prog Nucleic Acid Res Mol Biol. 2000; 64: 295-341。
【０２５３】
ヒトのアルコール脱水素酵素アイソザイムは、４０ｋＤａのサブユニット分子量を有する二量体の亜鉛依存性酸化還元酵素である。ＡＤＨ系は、飲料エタノール並びにレチノール、３β−ヒドロキシステロイド、ω−ヒドロキシ脂肪酸、及び４−ヒドロキシノネナールのような生物学的に重要なアルコール又はアルデヒドの代謝のための主要な経路である。７つのＡＤＨ遺伝子（ＡＤＨ１〜ＡＤＨ７）が、ヒトにおいて確認されている。ＡＤＨ１〜ＡＤＨ５遺伝子は、α、β、γ、π、及びχサブユニットをそれぞれコードし、ＡＤＨ７遺伝子は、σサブユニットをコードする。多型は、ＡＤＨ２（β１、β２、β３）及びＡＤＨ３（γ１、γ２）遺伝子座の両方に生じ、したがって９つの異なったヒトＡＤＨサブユニットが確認されている。ヒトＡＤＨアイソザイムは、それらのアミノ酸配列、電気泳動及び酵素特性、並びにピラゾール及びその４−置換誘導体による阻害に対するそれらの感受性に基づいて５つの異なるクラスが割り当てられている。二量体のヒトαα、ββ、及びγγアイソザイム及びそれらの多型変異体は、クラスＩ形態を含み、４−メチルピラゾールによる阻害に最も敏感である。対照的に、ππ、χχ、σσ、及びＡＤＨ６アイソザイムは、クラスII、III、IV、及びＶ形態をそれぞれ含み、４−メチルピラゾール阻害により敏感ではない。Xie and Hurley, Protein Science, 8: 2639-2644 (1999)。ＮＡＤ＋結合ドメインは、αヘリックスが側面を固める６本鎖の中央βシートからなる。ＮＡＤ＋は、βシートのＣ末端に結合する。触媒ドメインもα／β構造を有する。ドメイン間のインターフェースは、活性な触媒部位を含むクレフトを形成する。インターフェースは、それぞれのドメインからのヘリックスが互いに交差する２つのヘリックスによって形成される。それぞれの二量体は、２つの亜鉛イオンＺｎ２＋を含み、触媒部位におけるものは、触媒作用のために必須である。アルコール基質は、Ｚｎ２＋カチオンがあるクレフトの中に結合し、ＮＡＤのニコチンアミド環は、クレフトを指すその経路を見出す。二量体は、２つのＮＡＤ結合ドメインと一緒になり、それらの２つの中央βシートは結合して１２本鎖のβシートを形成する。触媒ドメインは、対向する端部に位置する。
【０２５４】
ＡＤＨ阻害剤には、オーラミンＯ、アリシン、１，５−アニリノナフタレンスルホン酸、１，７−アニリノナフタレンスルホン酸、１，８−アニリノナフタレンスルホン酸、ベルベリン、カナバニン、２，２’−ジピリピル、イミダゾール、ｍ−メチルベンズアミド、４−メチルピラゾール、ピラゾール、４−ペンチルピラゾール、Ｏ−フェナントロリン、アルレスタチン、アントラニル酸、Ｏ−カルボキシベンズアルデヒド、２，３−ジメチルコハク酸、エタクリン酸、イソニコチン酸、フェナセミド、ケルセチン、ケルシトリン、ソルビニル、テトラメチレングルタル酸、バルプロ酸、プロプラノロール、２，２，２−トリクロロエタノール、４，５−ジアミノピラゾール及びその誘導体並びに２−エチル−５−メチル−２Ｈ−３，４−ジアミノピラゾールが含まれる。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００３０１３８３９０号明細書を参照されたい。
【０２５５】
フォメピゾール（４−メチルピラゾール）は、ＡＤＨの競合的阻害剤である。ピラゾール及びその４−置換誘導体は、ピラゾールの窒素が、亜鉛及びＮＡＤ＋の両方と相互作用する緊密な酵素ＮＡＤ＋阻害剤複合体の形成を通してアルコール基質の結合を競合的に阻害する。参照により本明細書に組み込まれているXie et al., J. Biol. Chem., 272: 18558-18563 (1997)。
【０２５６】
ＣＮＡＤ（５−β−Ｄ−リボフラノシルニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）は、ニコチンアミド環が、Ｃ−グリコシル（Ｃ５−Ｃ１’）結合により糖に連結しているＮＡＤの等配電子及び異性類似体である。ＣＮＡＤは、一般的な脱水素酵素阻害剤として作用するが、肝臓アルコール脱水素酵素への独特の特異性及び親和性を示す。参照により本明細書に組み込まれているGoldstein et al., J. Med. Chem., 37: 392-9 (1994)。
【０２５７】
他の阻害剤には、ジメチルスルホキシド、Perlman and Wolff, Science, 160: 317-9 (1968)；及びｐ−メチルベンジルヒドロペルオキシドSkursky et al., Biochem Int., 26: 899-904 (1992)が含まれ、参照により本明細書に組み込まれている。
【０２５８】
図２５は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＡＤＨの阻害剤を示す。図２５は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０２５９】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むアルコール脱水素酵素阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０２６０】
【化４６】
2010510248.tif 000047
;
【０２６１】
［式中、Ｒ１０７、Ｒ１０８、Ｒ１０９、及びＲ１１０は、それぞれ独立にＨ又はアルキルである］
（ｂ）
【０２６２】
【化４７】
2010510248.tif 000048
;
【０２６３】
［式中、Ｒ１１１は、アルキルである］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０２６４】
【化４８】
2010510248.tif 000049
【０２６５】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０２６６】
いくつかの実施形態においては、アルコール脱水素酵素阻害剤は、図２５に示すアルコール脱水素酵素阻害剤の群から選択される。
【０２６７】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はアルコール脱水素酵素に結合することが示された他の既知のターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０２６８】
アルコール脱水素酵素は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれているVallee and Hoch, Proc Natl Acad Sci USA, 41: 327-38 (1955); Kato et al., Clin. Chem., 30: 1817-20 (1984)を参照されたい。
【０２６９】
５．アルドステロン合成酵素
アルドステロン合成酵素（ＡＳ，aldosterone synthase）は、シトクロムＰ４５０ファミリーのヘム含有メンバーであり、ＣＹＰ１１Ｂ２としても知られる。１１−デオキシコルチコステロンからのアルドステロン合成は、ＡＳによって触媒され、１分子のＮＡＤＰＨ及び１分子の酸素及びミトコンドリア電子伝達系をそれぞれ使用する３つの逐次反応で起こる。３つの逐次反応は、１１−デオキシコルチコステロンの１１β−ヒドロキシル化、炭素１８のヒドロキシル化、次いでアルドステロンの形成をもたらす炭素１８アルデヒド基を得る炭素１８ヒドロキシル基の酸化である。アルドステロン及び電解質及び体液うっ滞の間の既知の関係のために、ＡＳは、高血圧及びうっ血性心不全を治療する薬剤の開発のための標的である。Payne and Hales, Endocrine Reviews, 25(6): 947-970。
【０２７０】
一連のイミダゾ［１，５ａ］ピリジン誘導体は、低カリウム血症、高血圧、うっ血性心不全、腎不全、再狭窄、アテローム性動脈硬化、肥満、及び他のアルドステロンに関連する状態の治療に潜在的に有用であるシトクロムＰ４５０酵素アルドステロン合成酵素を阻害する能力を実証した。米国特許第７，２２３，８６６号明細書及び米国特許出願公開第２００６／０５８，３４２号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）を参照されたい。
【０２７１】
一連のヘテロアリールで置換されたナフタレン及びキノリン（１〜３１）は、ＡＳの極めて活性且つ選択的な阻害剤であることが実証された。６−エトキシ誘導体は、ヒトＣＹＰ３Ａ４（５０ｎＭ）及びＣＹＰ２Ｄ６（２０ｎＭ）の阻害を示さず、最も選択的なＡＳ阻害剤（ＩＣ５０＝１２ｎＭ；Ｋ（ｉ）値＝８ｎＭ；ＣＹＰ１１Ｂ１  ＩＣ５０＝５４１９ｎＭ；選択度係数（selectivity factor）＝４５１）であることが見出された。Voets et al., J. Med. Chem. 2005 Oct 20; 48(21): 6632-42。
【０２７２】
一連のヘテロアリールで置換されたジヒドロナフタレン及びインデン（１〜１６）は、ヒトＡＳの強力且つ選択的な阻害剤であることが示された。最も活性な阻害剤は、１．３ｎＭのＫ（ｉ）値及び競合的タイプの阻害を示す６−メトキシジヒドロナフタレン誘導体（ＩＣ（５０）＝２ｎＭ）であった。Voets et al., J. Med. Chem. 2006 Apr 6; 49(7): 2222-31。
【０２７３】
広範囲のビス−複素環式イミダゾリル及び複素環式スピロ化合物は、強力なＡＳの阻害剤であることが実証された。国際公開第２００５１１８５４１号パンフレット、国際公開第２００６００５７２６号パンフレット、国際公開第２００６１２８８５１号パンフレット、国際公開第２００６１２８８５２号パンフレット、国際公開第２００６１２８８５３号パンフレット及び国際公開第２００７０６５９４２号パンフレット（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）を参照されたい。
【０２７４】
一連の縮合イミダゾロ誘導体は、ＡＳの強力な阻害剤であることが実証された。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００７／０４９６１６号明細書を参照されたい。
【０２７５】
図２３は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＡＳの阻害剤を示す。図２３は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０２７６】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むアルドステロン合成酵素阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｌ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０２７７】
【化４９】
2010510248.tif 000050
【０２７８】
［式中、
ｎ１は、０〜２の整数であり；
ｔは、０〜２の整数であり；
Ｒ７１は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｒ７２は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｒ７３は、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、及びＣＦ３からなる群から選択される］
（ｂ）
【０２７９】
【化５０】
2010510248.tif 000051
;
【０２８０】
［式中、
Ｒ７４は、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；点線は、結合が存在するか存在しなくてよいことを示している］
（ｃ）
【０２８１】
【化５１】
2010510248.tif 000052
;
【０２８２】
［式中、
Ｒ７５及びＲ７６は、それぞれ独立にＨ又はアルキルであり；
Ｒ７７は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択される］
（ｄ）
【０２８３】
【化５２】
2010510248.tif 000053
;
【０２８４】
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｘ６は、Ｏ又はＮＲであり、ここで、Ｒは、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｚ１は、Ｏ、ＮＲ、及び−ＣＨ２−からなる群から選択され；
Ｘ７は、Ｏ又は−ＣＨ２−である］
（ｅ）
【０２８５】
【化５３】
2010510248.tif 000054
;
【０２８６】
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｒ７９は、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｘ８は、Ｏ又はＮＲ８０であり、ここで、Ｒ８０は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｆ）
【０２８７】
【化５４】
2010510248.tif 000055
;
【０２８８】
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｒ８１は、シアノ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｘ９は、Ｏ又はＮＲ８２であり、ここで、Ｒ８２は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｇ）
【０２８９】
【化５５】
2010510248.tif 000056
;
【０２９０】
［ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｘ１０は、Ｏ又はＮＲ８３であり、ここで、Ｒ８３は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択され；
Ｚ２は、Ｏ、ＮＲ８４、−ＣＨ２−からなる群から選択され、ここで、Ｒ８４は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｈ）
【０２９１】
【化５６】
2010510248.tif 000057
;
【０２９２】
［式中、
Ｒ８５及びＲ８６は、それぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、シアノ、アルキル、及びアルコキシルであり；
Ｒ８７は、ＯＲ８８、ＮＲ８９Ｒ９０からなる群から選択され、ここで、Ｒ８８、Ｒ８９、及びＲ９０は、Ｈ、アルキル、及びアリールからなる群からそれぞれ独立に選択される］
（ｉ）
【０２９３】
【化５７】
2010510248.tif 000058
;
【０２９４】
［式中、
Ｒ９１及びＲ９２は、Ｈ、ハロゲン、シアノ、アルキル、アルコキシル、及びアリールからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｚ３は、Ｏ又は−ＣＨ２−である］
（ｊ）
【０２９５】
【化５８】
2010510248.tif 000059
;
【０２９６】
［式中、
Ｘ１１は、Ｏ、Ｓ、及びＮＨからなる群から選択され；
Ｒ９３は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキル、及びアリールからなる群から選択される］
（ｋ）
【０２９７】
【化５９】
2010510248.tif 000060
;
【０２９８】
［式中、
Ｒ９４及びＲ９５は、それぞれ独立に、Ｈ若しくはアルキルであり；
Ｒ９６は、Ｈ、シアノ、ハロゲン、アルキルからなる群から選択され；又は
Ｒ９６は、縮合芳香族環構造の一部である］
（ｌ）
【０２９９】
【化６０】
2010510248.tif 000061
【０３００】
［式中、
Ｘ１２は、Ｏ又はＳであり；
Ｒ９７は、アルキルである］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０３０１】
【化６１】
2010510248.tif 000062
【０３０２】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０３０３】
いくつかの実施形態においては、アルドステロン阻害剤は、図２３に示すアルドステロン阻害剤の群から選択される。
【０３０４】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＡＳに結合していることが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０３０５】
ＡＳ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。Ehmer et al., J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002 81: 173-179; Voets et al., J. Med. Chem. 2006 Apr 6; 49(7): 2222-31; Ulmschneider et al., J. Med. Chem. 2005, 48(5): 1563を参照されたい。
【０３０６】
６．アロマターゼ
アロマターゼ（ＣＹＰ１９）は、多くの生体異物、ステロイド、脂肪酸、ビタミン及びプロスタグランジンを含めた広範囲の基質に作用するヘム−チオレートタンパク質（Ｐ−４５０）の群であるＥＣ１．１４．１４．１．に属し、触媒される反応には、ヒドロキシル化、エポキシ化、Ｎ−酸化、スルホキシド化、Ｎ−、Ｓ−及びＯ−脱アルキル化、脱硫酸化、脱アミノ化、並びにアゾ、ニトロ及びＮ−酸化物基の還元が含まれる。
【０３０７】
アロマターゼは、４−エン−３−オンアンドロゲン、アンドロスト−４−エン−３，１７−ジオン（ＡＤ）及びテストステロンのエストロゲン、エストロン及びエストラジオールへの変換に関与するシトクロムＰ−４５０酵素複合体である。アンドロゲンの芳香族化は、それぞれ、Ｃ−１９位置において３つの逐次酸化により進むと考えられる。第３段階においては、Ｃ−１９における核間メチル基及び１ｂ，２ｂ−水素が、除去されてアンドロゲン分子のＡ−環の芳香族化がもたらされエストロゲンが形成される。ヒトにおいては、アロマターゼは、卵巣、骨、脳、胎盤、精巣、及び脂肪組織の顆粒膜細胞及び黄体細胞を含めた多くの組織に発現されるＣＹＰ１９遺伝子の産生物である。Kovacic et al., Molecular Endocrinology, 18: 252-259 (2004)。アロマターゼは、アンドロゲンを乳癌の発達に重要な役割を果たすエストロゲンに変換することによって乳癌の発達に重要な役割を果たす。閉経前の患者の約６０％及び閉経後の患者の７５％は、エストロゲン依存性の癌腫を有する。Kinoshita and Chen, Cancer Research, 63: 3546-55 (2003)。アロマターゼの阻害剤は、進行乳癌の治療における治療薬として有用である。Numazawa et al., Chem. Pharm. Bull., 50(5): 703-05 (2002)。
【０３０８】
ＣＹＰ１９は、Ｃ１９アンドロゲン（例えば、テストステロン）のＣ１８発情ステロイドへの変換に関与する重要なシトクロムＰ４５０である。エストロゲンは、妊娠を確立し維持すること及び二次性徴の発現に不可欠である。ＣＹＰ１９の阻害剤は、特に閉経後の患者におけるエストロゲン依存性乳癌を治療するために開発されてきた。ＣＹＰ１９阻害剤（例えば、環境有害物質）も「内分泌かく乱物質」の毒性に主要な役割を果たし得る。
【０３０９】
アロマターゼは、Ｐ４５０ヘムタンパク質スーパーファミリーの他の哺乳類メンバーのように、膜結合タンパクであり、Ｘ線結晶学的方法による構造機能解析に耐えた。そのようなものとして、アロマターゼの三次元（３−Ｄ）モデルは、可溶性の細菌Ｐ４５０の構造から確認された「コア構造」に基づき構成された。このモデリングは、既知の阻害剤であるボロゾールのイミダゾール環は、ヘムに向き、窒素の１つがヘム鉄と共有結合するのを可能にすることを示唆している。Graham-Lorence et al., Protein Science, 4: 1065-1080 (1995)。より最近になって、ヒトアロマターゼ（ＣＹＰ１９）の３−Ｄ構造が、真核性のシトクロムＰ４５０の最初に解かれたＸ線構造であるウサギＣＹＰ２Ｃ５の結晶構造に基づいてモデル化され、Ｓ−ファドロゾール及びステロイド競合的阻害剤の（１９Ｒ）−１０−チイラニルエステル−４−エン−３，１７−ジオンを酵素活性部位にドッキングすることによって評価された。Loge et al., Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 20: 581-585 (2005)。
【０３１０】
薬理学的に、アロマターゼ阻害剤は、２つのクラス、即ち、フェノバルビトン（アミノグルテチミドなどの）又はイミダゾール／トリアゾール誘導体（ファドロゾール、レトロゾール、及びアナストロゾール）のいずれかであるいわゆる非ステロイド阻害剤、或いはアンドロステンジオンの誘導体であるステロイド化合物（フォルメスタン、エキセメスタン）に分けることができる。これらの化合物は、アロマターゼ酵素へのそれらの効果が異なる。非ステロイド化合物は、アロマターゼタンパク質のｐ４５０ドメインに結合するが、ステロイド化合物は、基質ポケットに結合する。非ステロイド化合物は、可逆的に結合するが、ステロイド化合物は、不可逆的に結合し、それゆえ、「アロマターゼ不活性化剤」と新語を作られた。別の主要な違いは、エキセメスタンの主な代謝物である１７−ヒドロ−エキセメスタンは、アンドロゲン活性を有することである。これに一致して、エキセメスタンは、インビボで用量に依存した形で性ホルモン結合グロブリンを抑制する。フォルメスタンの非経口ではなく経口投与は、類似の効果を有する。第三世代アロマターゼ阻害剤であるアナストロゾール、レトロゾール、及びエキセメスタンは、初期段階の乳癌のアジュバント療法として予測無作為試験で評価された。これらの試験は、アロマターゼ阻害剤をアジュバントの設定に組み込むために様々な方法、即ち、（１）単剤療法（アナストロゾール）として、（２）タモキシフェン（アナストロゾール）との併用療法として、（３）２〜３年のタモキシフェンに続いての２〜３年のアロマターゼ阻害剤（アナストロゾール及びエキセメスタン）による逐次療法として、及び４）５年のタモキシフェンに続いてのアロマターゼ阻害剤又はプラセボ（レトロゾール）のいずれかによる逐次療法として評価した。Joensuu et al., Acta Oncol, 44: 23-31 (2005)。
【０３１１】
４β，１９−ジヒドロキシ−５−エンステロイドは、ステロイド化合物のうちでアロマターゼの最も強力な競合的阻害剤の１つであり、その構造的に関連する類似体である４−エン−６β，１９−ジオールは、弱いアロマターゼ阻害剤である。参照により本明細書に組み込まれているNumazawa et al., Chem. Pharm. Bull., 50: 703-05 (2002)。
【０３１２】
他の既知の阻害剤には、１９−メチルアンドロステンジオン（Numazawa et al., Biol. Pharm. Bull., 29: 1242-1245 (2006)）；２−及び４−ハロゲノ（Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒ）エストロン及びそれらのエストラジオール類似体並びに６β−メチル及びフェニルエストロン（Numazawa et al., Steroids, 71: 371-9 (2006)）；４−ヒドロキシアンドロステンジオン（Dowsett and Coombes, Breast Cancer Res. Tret., 30: 81-87 (1994); Vorozole, Wouters et al., Breast Cancer Res. Tret., 30: 89-94 (1994)）；２−（４−ピリジルメチ）−１−インダノンの二量体（Gupta, et al., Arch. Pharm. (Weinheim), 337: 398-401 (2004)）；１７α−メチルテストステロン（Mor et al., J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 79: 239-46 (2001)）；５−［（アリール）（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル］−１Ｈ−インドール（Leze et al., Bioorg Med. Chem. Lett., 16: 1134-7 (2006)）；１−［（ベンゾフラン−２−イル）（フェニルメチル）ピリジン、−イミダゾール、及び−トリアゾール（Saberi et al., J. Med. Chem., 49: 1016-22 (2006)）；及びICI 182,780（Long et al., J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 67: 293-304 (1998)）が含まれ、これらのすべては、特にそれらの中に示された説明及び構造について、参照により本明細書に組み込まれている。
【０３１３】
図１８は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのアロマターゼの阻害剤を示す。図１８は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０３１４】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むアロマターゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０３１５】
【化６２】
2010510248.tif 000063
;
【０３１６】
［式中、
Ｒ２６及びＲ２７は、−ＯＨ、＝Ｏ、及びＬｎ−ＭＢＭ、及びそれらの組合せからなる群からそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｌｎは、連結基であり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり、ＭＢＭは、金属結合部分であり、但し、Ｒ２６及びＲ２７の少なくとも１つは、Ｌｎ−ＭＢＭであり；
Ｒ２８は、Ｈ又は＝Ｏであり；
点線は、結合が存在するか存在しないことを示している］
（ｂ）
【０３１７】
【化６３】
2010510248.tif 000064
;
【０３１８】
［式中、
Ｒ２９は、アルキルであり；
Ｘ４は、ＣＨ又はＮである］
（ｃ）
【０３１９】
【化６４】
2010510248.tif 000065
;
【０３２０】
（ｄ）
【０３２１】
【化６５】
2010510248.tif 000066
;
【０３２２】
（ｅ）
【０３２３】
【化６６】
2010510248.tif 000067
;
【０３２４】
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０３２５】
【化６７】
2010510248.tif 000068
【０３２６】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０３２７】
いくつかの実施形態においては、アロマターゼ阻害剤は、図１８に示すアロマターゼ阻害剤の群から選択される。
【０３２８】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はアロマターゼに結合していることが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０３２９】
アロマターゼ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、参照により本明細書にすべてが組み込まれているLephart and Simpson, Methods Enzymol., 206: 477-483 (1991); Willingham et al., Gen. Comp. Endocrinol, 119: 202-207 (2000); Kragie et al., Endocr. Res., 28: 129 (2002)；及びStresser et al., Anal. Biochem., 284: 427 (2000)を参照されたい。
【０３３０】
７．シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ，cyclooxygenase）
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ、ＥＣ１．１４．９９．１、プロスタグランジン合成酵素、プロスタグランジンＧ／Ｈ合成酵素、（ＰＧ）Ｈ合成酵素、ＰＧシンテターゼ、プロスタグランジンシンテターゼ、脂肪酸シクロオキシゲナーゼ、又はプロスタグランジンエンドペロキシドシンテターゼとしても知られている）は、ジオキシゲナーゼとして及びペルオキシダーゼとしての両方で作用する。プロスタグランジンエンドペロキシドＨ合成酵素（ＰＧＨＳ，prostaglandin endoperoxide H synthase）は、Ｏ２の２分子のアラキドン酸への組込みに触媒作用を及ぼしてヒドロペロキシエンドペロキシドであるプロスタグランジンＧ２（ＰＧＧ２，prostaglandin G2）をもたらすヘムを含む二官能性酵素である。ＰＧＧ２は、シクロオキシゲナーゼ活性部位から拡散し、ペルオキシダーゼ活性部位に結合し、ここで、ヒドロキシエンドペロキシド、ＰＧＨ２、プロスタグランジンの前駆体、トロンボキサン、及びプロスタサイクリンに還元される。アラキドン酸（ＡＡ）のプロスタグランジン（ＰＧ，prostaglandin）Ｈ２、プロスタグランジンの直接前駆体、トロンボキサン、及びプロスタサイクリンへの変換。哺乳類の組織において、ＰＧＨＳ−１（又はシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１））及びＰＧＨＳ−２（又はＣＯＸ−２）と指名されたＰＧＨＳの２つのイソ型が存在する。ＣＯＸ−１は、多くの組織中に構成的に発現されるため酵素の恒常的形態であると一般的に考えられているが、ＣＯＸ−２は、広範囲の生理学的及び病理学的刺激によって多くの組織中で誘導に敏感である。非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ，non-steroidal anti-inflammatory drug）によるＣＯＸ酵素の阻害は、それらの抗炎症性及び鎮痛作用、並びにそれらの胃腸毒性の原因となる。選択的ＣＯＸ−２阻害剤の開発によって、胃腸の易罹病性が減少した。ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２は、長い疎水性チャネルへの入口を形成する両親媒ヘリックスからなる膜結合ドメインによって特徴付けられるよく似た構造を有する。このチャネルは、タンパク質の内部深くにつながっており、その上端においてシクロオキシゲナーゼ活性部位を含む。シクロオキシゲナーゼ活性部位は、残基Ａｒｇ−１２０、Ｔｙｒ−３５５、及びＧｌｕ−５２４で構成されるくびれによって膜結合ドメインの近くの開口部から引き離されている。アラキドン酸は、代謝回転のために生産的に結合した場合、そのカルボン酸がＡｒｇ−１２０とイオン対を成し、その１３−ｐｒｏ−Ｓ−水素が、触媒的に重要なＴｙｒ−３８５に近接し、そのω末端が、Ｇｌｙ−５３３に接するチャネルの中に突出して位置する。カルボン酸を含むＮＳＡＩＤを含むＣＯＸ酵素の結晶構造は、阻害剤は、Ａｒｇ−１２０に配位結合したそれらのカルボキシレート及びＴｙｒ−３８５に向けてシクロオキシゲナーゼ活性部位に突出しているそれらの芳香族官能基と同じように位置していることを示している。ＣＯＸ−２のジアリール複素環阻害剤は、Ａｒｇ−１２０上のシクロオキシゲナーゼ活性部位において結合し、それらのスルホンアミド又はスルホン基をＶａｌ−５２３によって仕切られたサイドポケットに挿入する。参照によりすべてが本明細書に組み込まれているRowlinson et al., J. Biol. Chem., 278: 45763-45769 (2003)；及びHarman et al., J. Biol. Chem., Vol. 279, Issue 41, 42929-42935, October 8, 2004。
【０３３１】
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）は、アラキドン酸のプロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）への変換に触媒作用を及ぼす。膜リン脂質の分解により産生されるアラキドン酸は、フリーラジカル超酸化物も産生する２段階反応においてＣＯＸによってＰＧＨ２に代謝される。ＣＯＸの３つのイソ型が存在する。ＣＯＸ−１は、大部分の細胞に存在し、胃液分泌及び血小板機能などの正常な細胞生理に関与する。ＣＯＸ−２は、脳などのいくつかの器官に構成的に発現されるが、多様な刺激（最も顕著に炎症性メディエータによって）によって著しく上方調節される。ＣＯＸ−１のスプライス変異体であるＣＯＸ−３は、アセトアミノフェンによる阻害に非常に敏感であり、心臓及び脳に最も豊富である。ＣＯＸ−２は、プロスタノイド合成のための律速酵素であり、卒中、多発性硬化及び神経変性疾患を含めたいくつかの脳疾患の基本的機構にかかわっている。疼痛及び関節リウマチ（ＲＡ，rheumatoid arthritis）の治療のための高度選択的なＣＯＸ−２阻害剤の食品医薬品局（ＦＤＡ，the Food and Drug Administration）による承認は、これらの薬剤が、卒中を含めた神経系の疾患の治療においても使用され得る可能性を高めた。しかし、ＣＯＸ−２阻害剤を受けている患者における重大な心血管系の合併症の発生は、好評なＣＯＸ−２阻害剤の市場からの最近の撤退をもたらし、これらの薬物の治療可能性の再評価を求めている。Iadecola et al., Stroke, 36: 182-85 (2005)。
【０３３２】
ＣＯＸ−２は、ＮＳＡＩＤの抗炎症作用、ＣＯＸ−１は、その副作用の標的であるようである。１９９０年代の初めより多くの研究が、広範囲の古典的なＮＳＡＩＤが、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の両方を阻害するが、ＣＯＸ−１選択性の一般的傾向を伴うことを示してきた。これは、胃腸毒性と関係があるようであり、よりＣＯＸ−１選択的な薬物は、より胃腸の損傷を引き起こす傾向を有するようである。これは、ＣＯＸ−２の選択的阻害剤の開発のための論拠を提供している。ＣＯＸ−２選択的薬剤としての周到な開発に続いて市場に参入した最初の２つの化合物は、ロフェコシキブ（Vioxx（商標））及びセレコキシブ（Celebrex（商標））であり、これらは、あるレベルのＣＯＸ−２選択性を示すいくつかの既存のＮＳＡＩＤ、特にエトドラク（Lodine（商標））、メロキシカム（Mobic（商標）、Mobicox（商標））、及びニメスリド（Aulin（商標）、Mesulid（商標）、Nimed（商標）など）に加わった。最近、治療上利用可能なＣＯＸ−２選択的薬剤の数は、バルデコキシブ（Bextra（商標））及びエトリコキシブ（Arcoxia（商標））、ルミラコキシブ（Prexige（商標））の追加により増加している。参照により本明細書に組み込まれているWarner and Mitchell, The FASEB Journal, 18: 790-804 (2004)。
【０３３３】
米国特許第６，３７６，５２８号明細書は、ＣＯＸ−２を阻害する化合物を記載している。ＣＯＸ−２を選択的に阻害する化合物が記載されている。米国特許第５，３８０，７３８号明細書は、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害するオキサゾールを記載している。米国特許第５，３４４，９９１号明細書は、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害するシクロペンテンを記載している。米国特許第５，３９３，７９０号明細書は、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害するスピロ化合物を記載している。ＷＯ文献国際公開第９４／１５９３２号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害するチオフェン及びフラン誘導体を記載している。国際公開第９４／２７９８０号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害するオキサゾールを記載している。国際公開第９５／００５０１号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する化合物を記載している。国際公開第９４／１３６３５号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する化合物を記載している。国際公開第９４／２０４８０号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する化合物を記載している。国際公開第９４／２６７３１号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する化合物を記載している。ＷＯ文献国際公開第９５／１５３１６号パンフレットは、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害するピラゾリルスルホンアミド誘導体を記載しており、これらの特許及び特許出願公開のすべては、特にその中に示された説明及び構造について、参照により本明細書に組み込まれている。
【０３３４】
既知の選択的ＣＯＸ−２阻害剤は、米国特許第６，６４９，６２９号明細書に要約されている多数の特許に記載されており、これらのすべては、特にその中に示された説明及び構造について、参照により本明細書に組み込まれている。
【０３３５】
さらに、ＣＯＸ−２選択的阻害剤であるアリール置換化合物は、米国特許第６，８２５，１８５号明細書に記載されている。同様に記載されているのは、化合物のクロメン類のメンバーである。米国特許出願公開第２００５０１０１５９７号明細書；１Ｈ−インドール誘導体、米国特許第６，５９９，９２９号明細書；４’−メタンスルホニル−ビフェニル誘導体、米国特許第６，５８３，３２１号明細書；３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ナフタレン誘導体、米国特許第６，７６８，０１９号明細書；ジアリール１，２，４−トリアゾール誘導体、米国特許出願公開第２００６０００９４９５号明細書；５−クロロ−３−（４−メタンスルホニルフェニル）−６’−メチル−［２，３’］ビピリジニル、米国特許第６，８５８，６３１号明細書；ビピリジニル誘導体、米国特許第６，９４６，５５８号明細書；エトドラク、Shigemura et al., Urology, 66: 1239-44 (2005)；ヌメスリド（numesulide）；Czembriek et al., Oncol. Rep., 14: 1523-6 (2005)；バルデコキシブ、これらの特許及び特許出願公開のすべては、特にその中に示された説明及び構造について、参照により本明細書に組み込まれている。
【０３３６】
Ginkgo biloba leaves社製ビフラボンであるGinkgetinは、二重シクロオキシゲナーゼ−２／５−リポキシゲナーゼ阻害活性を有することが報告されている。参照により本明細書に組み込まれているSon et al., Biological & Pharmaceutical Bulletin, 28: 2181-84 (2005)。
【０３３７】
シクロオキシゲナーゼ及び阻害剤の一般的な概括については、参照により本明細書に組み込まれているWarner and Mitchell, The FASEB Journal, 18: 790-804 (2004)を参照されたい。
【０３３８】
図１９は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＣＯＸの阻害剤を示す。図１９は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０３３９】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むシクロオキシゲナーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｇ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０３４０】
【化６８】
2010510248.tif 000069
;
【０３４１】
［式中、
Ｒ３０は、アルキルであり；
Ｘ５は、ＣＨ又はＮであり；
Ａ３は、
【０３４２】
【化６９】
2010510248.tif 000070
【０３４３】
からなる群から選択される］
（ｂ）
【０３４４】
【化７０】
2010510248.tif 000071
;
【０３４５】
［式中、
Ｒ３１及びＲ３２は、Ｈ又は−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭであり、但し、Ｒ３１及びＲ３２の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｃ）
【０３４６】
【化７１】
2010510248.tif 000072
;
【０３４７】
［式中、Ｒ３３及びＲ３４は、ｈａｌ、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭ、及び
【０３４８】
【化７２】
2010510248.tif 000073
【０３４９】
からなる群から選択され、但し、Ｒ３３及びＲ３４の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｄ）
【０３５０】
【化７３】
2010510248.tif 000074
;
【０３５１】
［式中、Ｒ３５及びＲ３６は、Ｈ、−ＣＨ２−（フェニル）ｍ−Ｌｎ−ＭＢＭからなる群から選択され、ここで、ｍ及びｎは、０〜１の整数であり；但し、Ｒ３６及びＲ３６の少なくとも１つは、−ＣＨ２−（フェニル）ｍ−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｅ）
【０３５２】
【化７４】
2010510248.tif 000075
;
【０３５３】
［式中、
Ｒ３７は、アルキルであり；
Ｒ３８は、−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ−（Ｒ３９）−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ））ｚ−Ｌｎ−ＭＢＭであり；
ここで、
ｎ、ｙ、及びｚは、それぞれ独立に０〜１の整数であり；
Ｒ３９は、直鎖状又は分岐状アルキルである］
（ｆ）
【０３５４】
【化７５】
2010510248.tif 000076
;
【０３５５】
［式中、
Ｒ４０は、Ｈ又は−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭであり；
Ｒ４１は、ＣＨ３又は−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭであり、但し、Ｒ４０及びＲ４１の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｇ）
【０３５６】
【化７６】
2010510248.tif 000077
【０３５７】
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０３５８】
【化７７】
2010510248.tif 000078
【０３５９】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０３６０】
いくつかの実施形態においては、シクロオキシゲナーゼ阻害剤は、図１９に示すシクロオキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される。
【０３６１】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はシクロオキシゲナーゼに結合することが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０３６２】
シクロオキシゲナーゼ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、参照により本明細書にすべてが組み込まれているKulmacz and Lands, Prostaglandins, 25: 531-540 (1983). Rowlinson et al., J. Biol. Chem., 278: 45763-45769 (2003), Xie et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 88, 2692-2696 (1991)；及びForghani et al., Anal. Biochem., 264: 216-221 (1998)を参照されたい。
【０３６３】
８．ヘムオキシゲナーゼ（ＨＯ，heme oxygenase）
ヘムオキシゲナーゼ（脱環化）（ＥＣ１，１４．９９．３）は、ＯＲＰ３３タンパク質、ヘムオキシゲナーゼ、ヘムオキシダーゼ、又はヘムオキシダーゼとしても知られる。哺乳類においては、一酸化炭素（ＣＯ，carbon monoxide）は、主としてその基質のヘムに対するヘムオキシゲナーゼ（ＨＯ）の作用によって形成される。正常な生理学的状態下で、ヒトにより産生されるＣＯの約８５％がヘムに由来し、残りは、脂質過酸化反応などのヘムを関与させないプロセスを通して発生する。ヘム酸化の大部分は、ヘムのハウスキーピング分解（housekeeping degradation）中に肝臓及び脾臓において起こるが、ヘムからのＣＯの形成は、血管、腎臓及び脳などの他の構造において著しい量で起こる。シトクロム、ペルオキシダーゼ、呼吸バーストオキシダーゼ、ピロラーゼ、カタラーゼ、酸化窒素合成酵素、ヘモグロビン、及びミオグロビンなどの遍在的に配置されたヘムタンパク質に由来する細胞ヘムは、ヘムオキシゲナーゼ酵素系によって分解される。ヘムオキシゲナーゼ酵素は、ヘム環を開環し、ビリベルジン、鉄、及び一酸化炭素の等モル量の遊離をもたらす。Agarwal and Nick, J. Am. Soc. Nephrol., 11: 965-973 (2000)。
【０３６４】
ヘムオキシゲナーゼ（ＨＯ）は、構成イソ酵素及び誘導イソ酵素（ＨＯ−１、ＨＯ−２）からなる。それらは、ヘムの胆汁色素（即ち、ビリベルジン及びビリルビン）への代謝的変換における律速段階に触媒作用を及ぼし、鉄及び一酸化炭素（ＣＯ）の主要な細胞内資源を構成する。内生的に産生されたＣＯは、それだけには限らないが、炎症、細胞増殖、及びアポトーシス細胞死を含めた多数の重大な細胞機能に影響を及ぼす興味深いシグナル伝達特性を有することが示されている。Ryter et al., Physiol Rev., 86: 583-650 (2006)。酸化的傷害から守るＨＯ−１の強固な能力と共に、ＨＯ−１は、その基質であるヘムによって、また酸化ストレスによって強力に誘発されるという事実は、酸化的ストレス損傷に対抗する系を示唆している。ＨＯ−１は、内皮細胞統合性及び酸化的ストレスの調節因子である。コバルトプロトポルフィリン（ＣｏＰＰ，cobalt protoporphyrin）を含めた薬剤によるＨＯ−１の上方調節は、インビトロ及びインビボでスーパーオキシドジスムターゼを増加し、活性酸素種（ＲＯＳ，reactive oxygen species）及びＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ活性を減少することが示されている。ヒト、ウサギ及びラットの内皮細胞におけるＨＯ−１遺伝子の過剰発現は、細胞を、酸化的ストレスを引き出す薬剤に耐性にするのみならず、ＨＯ−１に由来するＣＯによる細胞増殖及び血管形成を増進することも実証されている。ＨＯ−１の上方調節は、糖尿病ラットにおいて内皮細胞死及び腐肉の形成を防ぐことも示されている。Di Noia et al., J. Biol. Chem., 281: 15687-15693 (2006)。
【０３６５】
ＨＯ活性は、２つのイソ酵素、ＨＯ−１（分子量Ｂ３２ｋＤａ、熱衝撃、重金属、ヘム、及び活性酸素種を含めたいくつかの刺激により誘発されたストレスタンパク質）及びＨＯ−２（分子量Ｂ３６．５ｋＤａで構成的）に起因する。網内系細胞が豊富である脾臓などの組織は、生理学的状態下で最大限に上方調節されたレベルのＨＯ−１を含むと考えられるが、海馬及び血管内皮細胞は、その対応物であるＨＯ−２を有する。参照により本明細書に組み込まれているKinobe et al., British Journal of Pharmacology, 147: 307-315 (2006)。ＨＯ−１の結晶構造は、解明されており、ヘムが２つのヘリックスの間に挟まれた新規のヘリックスの重なりを明らかにしている。近位のヘリックスは、ヘム鉄リガンド、Ｈｉｓ２５を提供する。酸素結合部位に近い末端ヘリックスにおける保存されたグリシンは、基質結合及び産生物放出の柔軟性を提供することに加えて、ヘリックス骨格及びヘムの間の緊密な接触を可能にする。α−メゾヘム炭素の位置選択的酸化は、主として、末端ヘリックスの立体的影響による。Shuller et al., Nat. Struct. Biol. 1999 Sep; 6(9): 860-7。
【０３６６】
ヘムは、酵素の活性部位において又は調節補欠分子族として機能する、多くの生物学的に関連した分子に重要な役割を果たす。前者の例は、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）及び酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ，nitric oxide synthase）であり、後者の例は、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ，soluble guanylyl cyclase）である。ＨＯの金属ポルフィリン阻害剤は、適切な濃度で使用される場合、選択的且つ有用であり得ることが結論づけられた。例えば、クロムメゾポルフィリンIX（ＣｒＭＰ，chromium mesoporphyrin）は、破壊細胞試料（broken cell preparation）においてより有用な薬物の１つであり、ここで、１０ｍＭ濃度は、ｓＧＣ又はＮＯＳに少ししか又はまったく影響を及ぼさずにＨＯを９０％阻害した。Kinobe et al., British Journal of Pharmacology, 147: 307-315 (2006)。
【０３６７】
ＨＯ活性の阻害は、他の金属ポルフィリン、例えば、亜鉛プロトポルフィリンIX（ＺｎＰＰ，zinc protoporphyrin）、錫プロトポルフィリンIX（ＳｎＰＰ，tin protoporphyrin）、亜鉛ジュウテロポルフィリンIX２，４−ビス−エチレングリコール（ＺｎＢＧ，zinc deuteroporphyrin IX 2,4-bis-ethylene glycol）、及び亜鉛Ｎ−メチルプロトポルフィリンIX（ＺｎＭｅＰＰ，zinc N-methylprotoporphyrin）についても実証されている。参照により本明細書に組み込まれているAppleton et al., Drug Metabolism and Disposition, 27: 1214-1219 (1999)。
【０３６８】
ＨＯ阻害剤であることが同様に見出されたのは、鉄ジュウテロポルフィリン２，４ジスルホン酸、及び鉄ジュウテロポルフィリン２，４ビスグリコールである。参照により本明細書に組み込まれているMitrione et al, Am. J. Med. Sci., 296: 180-6 (1988)。
【０３６９】
哺乳類のラノステロール１４ａ−デメチラーゼの阻害のために設計されたイミダゾール−ジオキソラン化合物であるアザランスタットは、ＨＯ−２に比べてＨＯ−１に高い選択性を有する、ＨＯ−１及びＨＯ−２の酵素活性の阻害剤としてのイミダゾール−ジオキソラン化合物を開発するための先導化合物として使用されている。参照により本明細書に組み込まれているKinobe et al., British Journal of Pharmacology, 147: 307-315 (2006)。
【０３７０】
図２０は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのヘムオキシゲナーゼの阻害剤を示す。図２０は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０３７１】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むヘムオキシゲナーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０３７２】
【化７８】
2010510248.tif 000079
;
【０３７３】
［式中、
Ｒ４２は、Ｈ又は−ＮＨ２であり；
Ｒ４３は、Ｈ又はハロゲンである］
（ｂ）
【０３７４】
【化７９】
2010510248.tif 000080
;
【０３７５】
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０３７６】
【化８０】
2010510248.tif 000081
【０３７７】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０３７８】
いくつかの実施形態においては、ヘムオキシゲナーゼ阻害剤は、図２０に示すヘムオキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される。
【０３７９】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はヘムオキシゲナーゼに結合することが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０３８０】
ヘムオキシゲナーゼ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、Lutton, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 1432-1436 (1997); Appleton et al., Drug Metabolism and Disposition, 27: 1214-1219 (1999)；米国特許第５，８８８，９８２号明細書; Ryter et al., Free Radic. Biol. Med., 24: 959-71 (1998); Lee and Chau, Nature Medicine, 8: 240-246 (2002)；及びKinobe et al., British Journal of Pharmacology, 147: 307-315 (2006)を参照されたく、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０３８１】
９．インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ，indoleamine 2,3-dioxygenase）は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの生合成をもたらすトリプトファン異化における初期の律速段階に触媒作用を及ぼすヘムを含む金属酵素である。局所微小環境からトリプトファンを激減させることによって、ＩＤＯは、この必須アミノ酸の喪失に特に敏感であるＴリンパ球の活性化を阻止し得る。特に、ＩＤＯは、同種受胎産物（allogenic concepti）のＴ細胞により媒介される拒絶を防ぐために必要である。ＩＤＯは、免疫回避に関与している場合、多くの癌に過剰発現される。ＩＤＯは、変形性関節症などの炎症性疾患を治療するための薬剤の開発のための確立された標的でもある。Muller et al., Nature Medicine 11, 312-319 (2005)。
【０３８２】
ＩＤＯの阻害剤であるアセメタシンは、変形性関節症の治療用に市販されている。最近の報告は、アセメタシンは、これに関してセレコキシブに等しく有効であることを実証している。Leeb et al., 67th Ann. Sci. Meet. Am. Coll. Rheumatol. (October 23-28, Orlando) 2003, Abst 70。国際公開第２００４０９４４０９号パンフレットも参照されたい。
【０３８３】
新規のインドール誘導体のシリーズは、ＩＤＯの阻害剤であることが実証されている。国際公開第２００４０９４４０９号パンフレットを参照されたい。
【０３８４】
一連の置換ナフタレン及びアントラセンジオンは、強力且つ選択的なＩＤＯの阻害剤であることが実証されている。国際公開第２００６００５１８５号パンフレットを参照されたい。
【０３８５】
一連のカルボキサミジン誘導体は、ＩＤＯの阻害剤であることが実証されている。国際公開第２００６１２２１５０号パンフレットを参照されたい。
【０３８６】
一連のＮ−ヒドロキシアミジノ複素環は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼのモジュレーターとして記載されている。国際公開第２００７０７５５９８号パンフレットを参照されたい。
【０３８７】
一連のＮ−ヒドロキシグアニジンは、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼのモジュレーターとして記載されている。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願第２００７２０３１４０号明細書を参照されたい。
【０３８８】
アヌリンＡ（Annulin A）及びアヌリンＢ（Annulin B）は、北東太平洋ヒドロイド・ガルベイア・アヌラタ（hydroid Garveia annulata）から単離されたＩＤＯ阻害剤である。Pereira et al., J. Nat. Prod. 2006, 69(10): 1496。
【０３８９】
図２７は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＩＤＯの阻害剤を示す。図２７は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０３９０】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０３９１】
【化８１】
2010510248.tif 000082
【０３９２】
［式中、
Ｒ１１４は、Ｈ、アルキル、ＣＯ−アルキル、及びＣＯ−アリールからなる群から選択され；
Ｒ１１２及びＲ１１３は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、及びアルコキシからなる群からそれぞれ選択され；
Ａｒは、置換フェニル又はヘテロアリールである］
（ｂ）
【０３９３】
【化８２】
2010510248.tif 000083
【０３９４】
［式中、Ｒ１１５及びＲ１１６は、Ｈ、アルキル、ＣＯ−アルキル、及びＣＯ−アリール；及び
【０３９５】
【化８３】
2010510248.tif 000084
;
【０３９６】
からなる群からそれぞれ独立に選択される］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
Ｒ１１７及びＲ１１８は、Ｈ、アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、及び−Ｃ（＝Ｏ）−アリールからなる群から独立に選択され；
但し、金属結合部分は、
【０３９７】
【化８４】
2010510248.tif 000085
【０３９８】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０３９９】
いくつかの実施形態においては、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤は、図２７に示すインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤の群から選択される。
【０４００】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＩＤＯに結合することが示された他の既知のターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０４０１】
ＩＤＯ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。Pereira et al., J. Nat. Prod. 2006, 69(10): 1496; Malachowski et al., Drugs Fut. 2005, 30(9): 897を参照されたい。
【０４０２】
１０．ラノステロールデメチラーゼ
ラノステロールデメチラーゼ（ＥＣ１．１４．１３．７０、ステロール１４−デメチラーゼ、オブツシホリオール１４−デメチラーゼ；ラノステロール１４−デメチラーゼ；ラノステロール１４α−デメチラーゼ；ステロール１４α−デメチラーゼ、ステロール１４α−デメチラーゼ類、Ｅｒｇ１１ｐ、ＣＹＰ５１又はＰ４５０１４ＤＭとしても知られる）は、シトクロムＰ４５０スーパーファミリー（ＣＹＰ）のメンバーであり、これは、補欠分子族としてチオレート配位型鉄プロトポリフィリン（thiolate-ligated iron protoporphyrin）を有するモノオキシゲナーゼの群を含む。このようなヘムタンパク質は、多くの真核生物及びいくらかの細菌に広く分布しており、様々な生体異物を含めた多様な親油性化合物の酸化的変化に関与する。ＣＹＰ５１は、ポストスクアレンステロール前駆体（postsqualene sterol precursors）からの１４α−メチル基の酸化的除去に触媒作用を及ぼす。６６のラノステロールデメチラーゼ配列は、細菌からヒトまで知られており、それらの配列相同性は、門間で約２５％から門内で約８０％の範囲に及ぶ。生物界を通してわずか２２〜３３％のアミノ酸アイデンティティであっても、細菌から哺乳類のオーソロガス酵素は、厳格な触媒性の位置特異性及び立体特異性を保存しており、極めて限定された範囲の基質を有する。４種のみの既知のＣＹＰ５１基質：即ち、ラノステロール、２４，２５−ジヒドロラノステロール、２４−メチレンジヒドロラノステロール及びオブツシホリオールが存在し、他の化合物は、この酵素によって代謝されるという報告はない。Lepesheva et al., Journal of Biological Chemistry, 281: 3577-85 (2006)、及びYoshida et al., Journal of Biological Chemistry, 259: 1655-1660 (1984)を参照されたい。
【０４０３】
ステロール１４α−デメチラーゼ（１４ＤＭ）又はＣＹＰ５１としても知られるラノステロールデメチラーゼは、サッカロミセス・セレヴィシエ（Saccharomyces cerevisiae）及びカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）を含めた真菌においてフルコナゾール、エコナゾール、クロトリマゾール及びケトコナゾールなどのアゾール抗真菌化合物の主要な標的である。これは、内因性物質及び生体異物の代謝に関与するヘムを含むシトクロムＰ４５０酵素（ＣＹＰ）のスーパーファミリーのメンバーである。ラノステロールデメチラーゼは、すべてのステロール生合成経路における重要な酵素であり、細菌、真菌、及び哺乳類を含めた多くの種に見出される。すべての種において、ラノステロールデメチラーゼは、ステロール分子中のＣ−１４メチル基の除去に触媒作用を及ぼす。これは、動物、真菌、及び植物におけるコレステロール、エルゴステロール、及びフィトステロール合成における重要な段階である。ＬＤは、皮膚真菌病及び全身性真菌病を治療する薬剤の開発のための十分に確立された標的である。Akins, Med Mycol. 2005 Jun; 43(4): 285-318。
【０４０４】
真菌において、ラノステロールデメチラーゼ反応は、真菌の膜における必須成分であるエルゴステロールの重要な前駆体をもたらす。しかし、哺乳類及び真菌のラノステロールデメチラーゼ形態は、シトクロムＰ４５０活性を阻害することが知られているアゾール分子に結合するそれらの能力において差異を示す。例えば、真菌のラノステロールデメチラーゼは、哺乳類のイソ型に比べて数オーダーの大きさでより強くフルコナゾールに結合し、これは、真菌のラノステロールデメチラーゼ対ヒトの形態を標的としたアゾール阻害剤の設計の基礎である。
【０４０５】
アゾールは、ラノステロールデメチラーゼの活性部位に位置するヘム共同因子への競合的、可逆的結合によってラノステロールデメチラーゼ活性を阻害する。ラノステロールデメチラーゼ活性の阻害は、真菌において致命的である。しかし、静真菌性のアゾール化合物による治療は、時間と共に耐性臨床分離株の出現をもたらす。このような耐性に関与する２つの重要な公知の機構が存在する。１つは、ラノステロールデメチラーゼへのアゾール結合の減少をもたらすラノステロールデメチラーゼ遺伝子の突然変異による。２つめは、細胞内薬物蓄積の減少をもたらす排出ポンプ遺伝子の発現増加による。アゾール耐性に対抗し、治療可能な病原菌の範囲を拡げるために、より強力なアゾールが開発されている。一例は、ポサコナゾールであり、これは、フルコナゾール及びボリコナゾールと異なり、排出ポンプによって排出されない。Xiao et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 48: 568-574, (2004)。
【０４０６】
可溶性細菌のＰ４５０と異なり、現在まで特徴付けられているすべての真菌のＣＹＰ５１タンパクは、膜内在性タンパクであり、構造的及び生物物理学的特徴付けをより困難にしている。したがって、大部分の真菌ＣＹＰ５１と２５％を超える配列同一性を有する結核菌（Mycobacterium tuberculosis）からのＣＹＰ５１（ＭＴ−ＣＹＰ５１）のＸ線結晶構造を使用して、アスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus fumigatus）及びカンジダ・アルビカンスからのＣＹＰ５１タンパク（それぞれ、ＡＦ−ＣＹＰ５１Ａ、ＣＡＣＹＰ５１）のためのホモロジーモデルを構成した。Xiao et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 48: 568-574, (2004)。
【０４０７】
イトラコナゾール、ミカファンギン、及びポサコナゾールは、フルコナゾール予防薬の代替として研究されている。イトラコナゾールは、主として胃腸の副作用のために肝臓及び造血幹細胞移植の間の予防薬としてフルコナゾールに比べて劇的な改善は示さなかった。さらに、シクロホスファミド代謝への有害な変化が、造血幹細胞移植の受容者について指摘された。ミカファンギンは、造血幹細胞移植の移植前期間（pre-engraftment period）の間、フルコナゾールよりも優れていた。というのは、これは、カビの感染を防ぐことができ、経験的抗真菌療法により少ないスイッチしか必要とせず、イースト菌感染症の予防においてフルコナゾールと同様に機能したからである。Van Burik and Jo-Anne, Current Opinion in Infectious Diseases, 18: 479-483 (2005)、これらのすべては、特にそれらの中に示された説明及び構造について参照により本明細書に組み込まれている。
【０４０８】
R126638は、皮膚糸状菌に対するイトラコナゾールのそれと類似したインビトロ活性を有する新規のトリアゾールであり、ＣＹＰ５１の阻害剤であることが示唆されている。Vanden Bossche et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 48: 3272-8 (2004)。構造に基づく新規設計と化学合成及び生物的評価を一緒にすることにより、いくつかの非アゾールリード分子が得られ、リード分子のすべてが、カンジダ・アルビカンスのＣＹＰ５１に強い阻害効果を示した。Ji et al., J. Med. Chem., 46: 474-85 (2003)、これらのすべては、特にそれらの中に示された説明及び構造について、参照により本明細書に組み込まれている。
【０４０９】
他の既知のＣＹＰ５１阻害剤には、１５α−フルオロ−２４，２５−ジヒドロラノステロール（Morisaki et al., Chem Pharm Bull (Tokyo), 48: 1474-9 (2000)）；SCH 56592、トリアゾール（Urbina et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 42: 1771-7 (1998)）；アザランスタット（RS-21607）、哺乳類のラノステロール１４ａ−デメチラーゼの阻害用に設計されたイミダゾール−ジオキソラン化合物（Walker et al., J. Med. Chem., 36: 2235-2237 (1993)）；AFK-108 （１−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（（２Ｅ）−３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエニルオキシ）エチル］−１Ｈ−イミダゾール）（Ito et al., Biochem Pharmacol., 48: 1577-82 (1994)）が含まれ、これらのすべては、特にそれらの中に示された説明及び構造について参照により本明細書に組み込まれている。
【０４１０】
ＣＹＰ５１阻害剤として同様に知られており、ターゲティング部分としての使用に適するのは、メトロニダゾール、クロトリマゾール、ビブナゾール、フェンチコナゾール、クロコナゾール、ブトコナゾール、ビフォナゾール、オキシコナゾール、フルコナゾール、テルコナゾール、スルコナゾール、ケトコナゾール、硝酸ミコナゾール、チオコナゾール、オモコナゾール、ゲナコナゾール、ラノコナゾール、フルトリマゾール、エベルコナゾール、ネチコナゾール、セルタコナゾール、ボリコナゾール、ポサコナゾール、ルリコナゾール、イソコナゾール、エコナゾール、ホスフルコナゾール、KP-103、アルバコナゾール、テルビアミナゾール（terbiaminazole）、エムベコナゾール、BAL-8557、R-136203、FX-0549、FX-0685、RBx-9050である。
【０４１１】
いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼの阻害剤は、非置換イミダゾール（ヘテロ原子が両方とも窒素である５Ａ２ＨＡ）及びトリアゾール（ヘテロ原子がすべて窒素である場合５Ａ３ＨＡ）ではない金属結合部分を有する。さらに、いくつかの実施形態は、１つの置換基が、ブチル基（本実施形態のいくつかの場合、いずれのアルキルも好ましくない）であり、もう１つが、塩化物（本実施形態のいくつかの場合、ハロゲンは好ましくない）である二置換イミダゾールを使用しない。
【０４１２】
図１６は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＣＹＰ５１の阻害剤を示す。図１６は、は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０４１３】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むラノステロールデメチラーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｐ）及び薬学的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０４１４】
【化８５】
2010510248.tif 000086
;
【０４１５】
［式中、
ｈａｌ１及びｈａｌ２は、それぞれ独立にハロゲンであり；
Ｘ１は、ＣＨ又はＮであり；
Ａ１は、Ｈ、アルキル、分岐状アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、又は
【０４１６】
【化８６】
2010510248.tif 000087
;
【０４１７】
からなる群から選択される構造を有する部分からなる群から選択され；
式中、
Ｒ１は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ２は、アルキル又は−ＣＲ３Ｒ４であり、
ここで、Ｒ３は、Ｈ又はアルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、アルキル、−ＯＨ及び−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ５からなる群から選択され；ここで、Ｒ５は、−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ（ＣＨ２−フェニル）−ＮＨ２；−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２；−ＣＨ（ＣＨ２（ＣＨ３）２）−ＮＨ２；−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＮＨ２からなる群から選択される］
（ｂ）
【０４１８】
【化８７】
2010510248.tif 000088
【０４１９】
［式中、
ｍは、１〜５の整数であり；
ｐは、１〜４の整数であり；
Ｒ６は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ７は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＣＦ３；−Ｓ−ＣＦ３；−ＣＦ３；−Ｓ（＝Ｏ）−ＣＦ３；−ＣＦ３；−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２；及びそれらの組合せからなる群から選択される］
（ｃ）
【０４２０】
【化８８】
2010510248.tif 000089
【０４２１】
［式中、
ｐは、０〜２の整数であり；
Ａ２は、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｒ８は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ９は、Ｈ、アルキル、−Ｏ−ＣＦ３；及び−ＣＦ３からなる群から選択される］
（ｄ）
【０４２２】
【化８９】
2010510248.tif 000090
【０４２３】
［式中、
Ｒ１０は、ハロゲン、４−フルオロフェニルピペラジニル、３，４−メチレンジオキシ、３−メトキシプロピルアミノ、４−ベンジルオキシカルボニルアミノ、４−ＮＯ２−フェニル−ピペラジニル、及び４−メトキシイミノからなる群から選択される］
（ｅ）
【０４２４】
【化９０】
2010510248.tif 000091
【０４２５】
［式中、
Ｘ２は、Ｏ又はＳであり；
点線は、結合が存在するか存在しないことを示し；
Ａｒは、−フェニル−Ｓ−フェニル；ハロ−又はジハロフェニル；ハロチエニル；ハロフェノキシメチル；及びハロ−３−ベンゾチエニルからなる群から選択される］
（ｆ）
【０４２６】
【化９１】
2010510248.tif 000092
【０４２７】
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ又はＰ（＝Ｏ）Ｏ２であり；
Ｒ１２は、Ｈ及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１３は、
【０４２８】
【化９２】
2010510248.tif 000093
【０４２９】
からなる群から選択される窒素含有複素環又は窒素含有縮合複素環である］
（ｇ）
【０４３０】
【化９３】
2010510248.tif 000094
【０４３１】
［式中、
Ｒ１３は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｘ３は、−Ｓ−（ＣＨ２）ｑ−又は−ＮＲ１６−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ここで、ｑは、１〜８の整数であり、Ｒ１６は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ１５は、
【０４３２】
【化９４】
2010510248.tif 000095
【０４３３】
からなる群から選択される］
（ｈ）
【０４３４】
【化９５】
2010510248.tif 000096
【０４３５】
［式中、
ｔは、１〜２の整数であり；
Ｒ１７は、Ｈ又はハロゲンであり；
それぞれのＲ１８は、ハロゲンである］
（ｉ）
【０４３６】
【化９６】
2010510248.tif 000097
【０４３７】
［式中、
ｕは、１〜３の整数であり；
Ｒ１９は、Ｈ又はＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２であり；
Ｒ２０は、Ｈ又はアルキルである］
（ｊ）
【０４３８】
【化９７】
2010510248.tif 000098
【０４３９】
［式中、
ｔは、１〜２の整数であり；
それぞれのＲ２１は、ハロゲンである］
（ｋ）
【０４４０】
【化９８】
2010510248.tif 000099
;
【０４４１】
［式中、
ｔは、１〜２の整数であり；
それぞれのＲ２２は、独立にハロゲンであり；
Ｒ２３は、
【０４４２】
【化９９】
2010510248.tif 000100
【０４４３】
からなる群から選択される］
（ｌ）
【０４４４】
【化１００】
2010510248.tif 000101
【０４４５】
（ｍ）
【０４４６】
【化１０１】
2010510248.tif 000102
【０４４７】
（ｎ）
【０４４８】
【化１０２】
2010510248.tif 000103
【０４４９】
（ｏ）
【０４５０】
【化１０３】
2010510248.tif 000104
【０４５１】
（ｐ）
【０４５２】
【化１０４】
2010510248.tif 000105
【０４５３】
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０４５４】
【化１０５】
2010510248.tif 000106
【０４５５】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではなく、
ｈａｌ、ｈａｌ１、ｈａｌ２、ｈａｌ３、及びｈａｌ４は、それぞれ独立にハロゲンである］。
【０４５６】
いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤は、図１６に示すラノステロールデメチラーゼ阻害剤の群から選択される。より詳しくは、いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤は、
【０４５７】
【化１０６】
2010510248.tif 000107
【０４５８】
からなる群から選択される。
【０４５９】
いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤は、以下の式を有する
【０４６０】
【化１０７】
2010510248.tif 000108
;
【０４６１】
［式中、ＭＢＭは、３−チエニル、４−イミダゾリル、４−（１，２，４−トリアゾリル）、１−（１，２，３−トリアゾリル）、１−テトラゾリル、３−ピリジル、４−ピリジル、４−ピリミジニル、３−フラニル、１−イミダゾリル、３−ピロリル、５−チアゾリル、５−オキサゾリル、４−チアゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソチアゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル、２−テトラゾリル、２−クロロ−３−ピリジル、２−ピラジニル、４−チオモルホリニル、３−シアノ−４−ピロリル、５−メルカプト−１−（１，２，４−トリアゾリル）、６−ピリド−２−オン−イル、５−ピリミジニル、５−ピラジン−２−オン−イル、３−ピリダジニル、及び３−キノリニルからなる群から選択される］。
【０４６２】
いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤は、以下の式を有する
【０４６３】
【化１０８】
2010510248.tif 000109
;
【０４６４】
［式中、ＭＢＭは、ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＳＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＳＯ２ＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｎ（ＯＨ）Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、２−メルカプト−１−イミダゾリル、４−チオモルホリニル、２−アミノ−５−チエニル、２−アミノ−５−ピリジル、４−アミノ−１−イミダゾリル、及び２−アミノ−１−イミダゾリルからなる群から選択される］。
【０４６５】
一実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤は、
【０４６６】
【化１０９】
2010510248.tif 000110
【０４６７】
である。
【０４６８】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された、又はラノステロールデメチラーゼに結合することが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０４６９】
ラノステロールデメチラーゼ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれているYoshida et al., Journal of Biological Chemistry, 259: 1655-1660 (1984); Lamb, et al., Biochem. J., 364: 555-562 (2002); Stromstedt et al., Arch. Biochem. Biophys., 329: 73-81 (1996); Aoyama et al., J. Biol. Chem. 259: 1661-1666 (1984); Aoyama et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 178: 1064-1071 (1991)；及びYamashita et al., Journal of Biochemistry, 128: 93-99 (2000)を参照されたい。
【０４７０】
１１．酸化窒素合成酵素
酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）は、ＮＯＳＩ又は神経ＮＯＳ、ＮＯＳII又は誘導ＮＯＳ、及びＮＯＳIII又は内皮ＮＯＳと名付けられた３つのイソ型で生じるヘムを含む金属酵素ファミリーである。酸化窒素合成酵素は、Ｌ−アルギニン（Ｌ−Ａｒｇ）のグアニジノ窒素の５−電子酸化に触媒作用を及ぼすことによって酸化窒素を生ずる。Ｌ−ＡｒｇのＬ−シトルリンへの酸化は、中間体としてのＮω−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン（ＮＯＨＬＡ，Nω-hydroxy-L-arginine）を産生する２つの連続的なモノオキシゲネーション反応によって起こる。ＮＯＳ１は、中枢神経系及び末梢神経系の両方における神経組織中にＮＯを産生する。神経ＮＯＳも細胞通信に役割を果たし、プラズマ細胞膜とかかわり合いを持つ。ＮＯＳ２は、免疫系に見出し得るが、心臓血管系にも見出される。これは、病原菌に対する免疫防御においてマクロファージによって使用されるためにＮＯ（フリーラジカル）の酸化的ストレスを使用する。ＮＯＳ３は、血管中にＮＯを生じ、血管機能の調節とかかわり合いを有する。様々なＮＯＳイソ型は、敗血性ショック、卒中及び他の心臓血管疾患を治療する薬剤の開発のための十分に確立した標的である。Alderton et al., Biochem. J., 357, 593-615。
【０４７１】
阻害剤又はＮＯＳであるメシル酸チリラザドは、急性脳梗塞の治療用に現在市販されている。
【０４７２】
タルギニン及びティラルギニンは、ＮＯＳを阻害することが実証されている一連のＮＧ−モノメチル−Ｌ−アルギニン塩酸塩誘導体のうちの２つである。タルギニン及びティラルギニンは、敗血性ショックの治療における使用のために研究されている。米国特許第５，０２８，６２７号、５，０２８，７２７号及び５，７６７，３１２号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）を参照されたい。
【０４７３】
アミノテトラゾール誘導体は、ＮＯＳの強力且つ選択的な阻害剤として記載されている。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，６８４，００８号明細書を参照されたい。
【０４７４】
一連の縮合ピペラジン誘導体は、ＮＯＳの阻害剤であることが実証されている。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，２２８，８６６号明細書を参照されたい。
【０４７５】
一連のアミジノ誘導体は、ＮＯＳの阻害剤として特許請求されている。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，３６９，２７２号明細書を参照されたい。
【０４７６】
図２８は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＮＯＳの阻害剤を示す。図２８は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０４７７】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む酸化窒素合成酵素阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０４７８】
【化１１０】
2010510248.tif 000111
【０４７９】
［式中、
ｎ１は、０〜１の整数であり；
Ｒ１１９及びＲ１２１は、Ｈ、アシル、及びアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ１２０及びＲ１２２は、それぞれ独立にＨ又はアルキルである］
（ｂ）
【０４８０】
【化１１１】
2010510248.tif 000112
【０４８１】
［式中、
Ｒ１２３は、Ｈ、アシル、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１２４は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｚ４及びＺ５は、それぞれ独立にＯ又は存在しない］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０４８２】
【化１１２】
2010510248.tif 000113
【０４８３】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０４８４】
いくつかの実施形態においては、酸化窒素合成酵素阻害剤は、図２８に示す酸化窒素合成酵素阻害剤の群から選択される。
【０４８５】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＮＯＳに結合することが示された他の知られているターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０４８６】
ＮＯＳ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。Young et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10(6): 597; Alderton et al., Br. J. Pharmacol. 2005, 145(3): 301; Naka et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000, 270(2): 663を参照されたい。
【０４８７】
１２．レチノイン酸ヒドロキシラーゼ
レチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＲＡＨ，retinoic acid hydroxylase）は、シトクロムＰ４５０ファミリーのヘムを含むメンバーであり、ＣＹＰ２６としても知られる。ＲＡＨは、レチノイン酸の異化に重要な役割を果たす。ＲＡＨは、オールトランス−レチノイン酸及びその立体異性体である９−シス−レチノイン酸を含めたレチノイドに作用し、４−ヒドロキシル化及び１８−ヒドロキシル化の両方が可能である。ＲＡＨは、４−ＯＨ−レチノイン酸、４−オキソ−レチノイン酸及び１８−ＯＨ−レチノイン酸を含めたレチノイン酸のいくつかのヒドロキシル化形態の発生に関与する。様々な皮膚病及び癌におけるレチノイン酸の重要性のため、ＲＡＨは、乾癬、座瘡及びレチノイン酸の関係する癌を治療するための薬剤の開発のための標的である。Mulvihill et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15(6): 1669。
【０４８８】
レチノイン酸代謝遮断薬（ＲＡＭＢＡ，retionic acid metabolism-blocking agent）としても知られるＲＡＨ阻害剤は、公知であり、例えば、リアロゾール（Liazal（商標））及びR116010を含む。このようなＲＡＨ阻害剤は、インビトロで、インビボで、及び臨床環境において皮膚及び癌性状態において治療的有用性を実証している。いくつかの前臨床腫瘍モデルにおいて、リアロゾールは、減少した内因性レチノイン酸代謝と関係があり、したがって腫瘍細胞内のＲＡ蓄積の増加と関係がある抗腫瘍特性を示した。癌患者において、リアロゾールは、経口投与されたＲＡ及び１３−シス−ＲＡの半減期を増加することが示されている。しかし、リアロゾール及び文献に記載された多くのＲＡＨ阻害剤の限界の１つは、それらの特異性の欠如である。リアロゾール及び他のＲＡＨ阻害剤は、他のシトクロムＰ４５０により媒介される反応を阻害し、他のシトクロムＰ４５０酵素に対するそれらの特異性の欠如のために制限されている。したがって、非常に強力且つ選択的であり、他のシトクロムＰ４５０酵素へのより大きな選択性、より少ない副作用、及び十分な水溶性、バイオアベイラビリティ、十分な薬物動態特性、除去率、及び活性／毒性比のバランスをとる限定された毒性を含めた好ましい薬らしい特性を有し、様々な皮膚及び癌性状態の治療における使用のためのＲＡＨ阻害剤（ＲＡＭＢＡ’ｓ）のレチノイド療法内のニーズが明らかに存在する。Njar et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry, 14: 4323-4340 (2006)；及び米国特許出願公開第２００６０００９６４５号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）を参照されたい。
【０４８９】
米国特許第６，３０３，７８５号明細書は、シトクロムＰ４５０ＲＡＩの阻害剤を記載している。米国特許第６，２９１，６７７号及び６，１２４，３３０号明細書並びに国際特許公開第０２／０３９１２Ａ２号パンフレットは、シトクロムＰ４５０ＲＡＩの阻害剤を記載している。シトクロムＰ４５０ＲＡＩ酵素（ＲＡＨ）の阻害剤として同様に記載されているのは、ヘテロアリール−ナフタレニル−アルキルアミンである。米国特許出願公開第２００６０００９６４５号明細書；［２−イミダゾール−１−イル−２−（６−アルコキシ−ナフタレン−２−イル）−１−メチル−エチル］−ジメチル−アミン、Mulyihill et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 15: 1669-73 (2005)；３−［６−（２−ジメチルアミノ−１−イミダゾール−１−イル−ブチル）−ナフタレン−２−イルオキシ］−２，２−ジメチル−プロピオン酸及び類似体、Mulyihill et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 16: 2729-33 (2006)；１−［ベンゾフラン−２−イル−（４−アルキル／アリール−フェニル）−メチル］−１Ｈ−トリアゾール、Pautus et al., Bioorg. Med. Chem., 14: 3643-53 (2006)；２−ベンジルテトラロン及び２−ベンジリデンテトラロン誘導体、Yee et al., J. Med. Chem., 48: 7123-31 (2005)；並びにケトコナゾール、リアロゾール及びR116010、米国特許第６，８５５，５１２号明細書、これらの特許及び非特許刊行物のすべては、特にそれらの中に示された説明及び構造について参照により本明細書に組み込まれている。
【０４９０】
図２４は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＲＡＨの阻害剤を示す。図２４は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０４９１】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むレチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０４９２】
【化１１３】
2010510248.tif 000114
;
【０４９３】
［式中、Ｒ９８は、Ｈ又はアルキルである］
（ｂ）
【０４９４】
【化１１４】
2010510248.tif 000115
;
【０４９５】
［式中、
Ｒ９９＝Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ１００及びＲ１０１は、Ｈ、アルキル、及びシクロアルキルからなる群からそれぞれ選択される］
（ｃ）
【０４９６】
【化１１５】
2010510248.tif 000116
;
【０４９７】
［式中、
Ｒ１０２は、Ｈ又はアルキルであり；
Ｒ１０３及びＲ１０４は、それぞれ独立にＨ、アルキル、シクロアルキルである］
（ｄ）
【０４９８】
【化１１６】
2010510248.tif 000117
;
【０４９９】
（ｅ）
【０５００】
【化１１７】
2010510248.tif 000118
;
【０５０１】
［式中、Ｒ１０５は、Ｈ又はアルキルである］
（ｆ）
【０５０２】
【化１１８】
2010510248.tif 000119
;
【０５０３】
［式中、Ｒ１０６は、Ｈ又はアルキルである］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０５０４】
【化１１９】
2010510248.tif 000120
【０５０５】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０５０６】
いくつかの実施形態においては、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）阻害剤は、図２４に示すレチノイン酸ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ２６）阻害剤の群から選択される。
【０５０７】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＲＡＨに結合することが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０５０８】
ＲＡＨ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれているYee et al., J. Med. Chem., 48: 7123-31 (2005); Taimi et al., J. Biol. Chem., 279: 77-85 (2004)；米国特許第６，８５５，５１２号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０００９６４５号明細書を参照されたい。
【０５０９】
１３．血管接着タンパク質−１
血管接着タンパク質−１（ＶＡＰ−１，vascular adhesion protein-1）は、セミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ（又はＳＳＡＯ，semicarbazide-sensitive amine oxidase）としても知られる銅を含む金属酵素である。ＶＡＰ−１は、モノアミンオキシダーゼ活性を有する内皮細胞の膜に存在するタンパク質である。これは、リンパ球移動及び他の炎症性プロセスに役割を果たすことに関係があるとされている。ＶＡＰ−１の炎症性活性のために、これは、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎及び乾癬などの様々な炎症疾患を治療する薬剤の開発のための十分に確立された標的となっている。Merinen et al., Am. J. Pathol. 2005 March; 166(3): 793-800。
【０５１０】
一連のチアゾール誘導体は、ＶＡＰ−１の阻害剤として特許請求されている。米国特許第２００４２５９９２３号明細書を参照されたい。
【０５１１】
一連の１，３，４−オキサジアジン誘導体は、ＶＡＰ−１の強力な阻害剤であることが実証されている。国際公開第２００２００２５４１号パンフレットを参照されたい。
【０５１２】
一連のヒドラジン誘導体は、ＶＡＰ−１の阻害剤として特許請求されている。米国特許第６６２４２０２号明細書を参照されたい。
【０５１３】
一連の置換チアゾール誘導体は、ＶＡＰ−１の阻害剤であることが実証されている。米国特許第２００６０１１６３１号明細書及び国際公開第２００６０２８２６９号パンフレットを参照されたい。
【０５１４】
図２９は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するいくつかのＶＡＰ−１の阻害剤を示す。図２９は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の可能な結合の部位と共にこれらの既知の阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０５１５】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含む血管接着タンパク質−１阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０５１６】
【化１２０】
2010510248.tif 000121
;
【０５１７】
［式中、
Ｒ１２５は、Ｈ、アシル、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１２６は、Ｈ、アルキル、及びアミノアルキルからなる群から選択される］
（ｂ）
【０５１８】
【化１２１】
2010510248.tif 000122
;
【０５１９】
［式中、
Ｒ１２７は、Ｈ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１２８は、Ｈ、アルキル、アシル、及びアラリルからなる群から選択される］
（ｃ）
【０５２０】
【化１２２】
2010510248.tif 000123
;
【０５２１】
［式中、
Ｒ１２９は、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｘ１３は、Ｎ又はＣＨであり；
Ａｒは、置換フェニルである］
（ｄ）
【０５２２】
【化１２３】
2010510248.tif 000124
;
【０５２３】
［式中、
ｎ１は、０〜２の整数であり；
Ｒ１３０は、Ｈ又はＣＯＮＨＲ１３２であり；
Ｒ１３１は、Ｈ、ＣＯＮＨＲ１３３ＣＯアルキル、及びＣＯ２アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１３２及びＲ１３３は、Ｈ、アルキル、及びアラリルからなる群からそれぞれ独立に選択される］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ここで、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０５２４】
【化１２４】
2010510248.tif 000125
【０５２５】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０５２６】
いくつかの実施形態においては、血管接着タンパク質−１阻害剤は、図２９に示す血管接着タンパク質−１阻害剤の群から選択される。
【０５２７】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はＶＡＰ−１に結合することが示された他の知られているターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０５２８】
ＶＡＰ−１活性は、確立された方法を用いて測定し得る。Wang et al., J Med Chem 2006, 49(7): 2166; Yraola et al., J Med Chem 2006, 49(21): 6197を参照されたい。
【０５２９】
１４．キサンチンオキシダーゼ
キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ；ＥＣ１．１７．３．２、ヒポキサンチンオキシダーゼ、ヒポキサンチン：酸素酸化還元酵素、シャルディンガー酵素、ヒポキサンチン−キサンチンオキシダーゼ、キサンチン酸化還元酵素、キサンチン：Ｏ２酸化還元酵素、又はキサンチン：キサンチンオキシダーゼとしても知られる）及びキサンチン脱水素酵素（ＸＤ又はＸＤＨ，xanthine dehydrogense；ＥＣ１．１７．１．４、ＮＡＤ−キサンチン脱水素酵素、キサンチン−ＮＡＤ酸化還元酵素、キサンチン／ＮＡＤ＋酸化還元酵素、又はキサンチン酸化還元酵素としても知られる）は、キサンチン酸化還元酵素（ＸＯＲ，xanthine oxidoreductase）として知られる同じ遺伝子産物の相互変換可能な形態である。ＸＯＲは、ＮＡＤ＋又は分子酸素の同時に起こる還元を伴うヒポキサンチンのキサンチン及びキサンチンの尿酸への酸化に触媒作用を及ぼす複合金属フラビン酵素である。この酵素は、Ｍｒ３００，０００のホモ二量体タンパク質であり、独立したサブユニットからなり、それぞれのサブユニットは、１つのモリブドプテリン、２つの異なる鉄硫黄センター（［２Ｆｅ−２Ｓ］クラスター）、及び１つのＦＡＤを含む。キサンチンの尿酸への酸化的ヒドロキシル化は、モリブデンセンターで起こり、こうして導入される還元相当物は、２つの鉄硫黄センターを経由してＦＡＤに急速に運ばれ、ここで、生理学的酸化が起こる。Nishino et al., J. Biol. Chem., 280: 24888-24894 (2005)。
【０５３０】
キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）は、モリブド酵素ファミリーのメンバーであり、同時に起こる超酸化物の発生を伴うヒポキサンチン及びキサンチンの尿酸への代謝であるプリン分解におけるその触媒的役割で最も知られている。ＸＯＲの遺伝子発現は、酸素圧、サイトカイン及びグルココルチコイドによって調節される。さらに、ＸＯＲは、ＮＡＤＨオキシダーゼ活性により超酸化物を発生することがあり、硝酸塩及び亜硝酸還元酵素活性により酸化窒素を産生することがある。プリン代謝以外のＸＯＲの役割が、虚血再かん流傷害において最初に示唆されたが、ＸＯＲは、内皮機能不全、高血圧及び心不全にも関与する高まりつつある認識が存在する。重大なことには、ＸＯＲ阻害剤アロプリノール及びオキシプリノールは、これらの疾患状態においてＸＯＲにより引き起こされる機能障害を軽減する。心臓血管系における広範囲のＸＯＲ生物活性への注目は、特にうっ血性心不全について、いくつかの無作為化臨床転帰試験の開始を促した。Berry and Hare, J. Physiol., 555: 589-606 (2004)。
【０５３１】
ＸＤ及びＸＯの両方とも、モリブデンセンターにおけるプリンの尿酸塩への酸化（還元半反応）及び活性酸素種（ＲＯＳ）（超酸化物アニオンラジカル又は過酸化水素のいずれか）の発生を伴うフラビンセンターにおける続いてのＯ２の還元（酸化半反応）に触媒作用を及ぼす。しかし、ＸＤは、これらのレドックス反応のための電子受容体としてＮＡＤ＋を必要とし、それにより安定な産生物ＮＡＤＨを発生するが、ＸＯは、電子受容体としてＮＡＤ＋を使用することができず、このプリン酸化のために、代わりに分子酸素の還元を必要とし、極めて反応性に富む超酸化物フリーラジカルを発生させる。ＸＯにより発生した活性酸素種（ＲＯＳ）は、虚血／再かん流傷害及び多臓器不全を含めて様々な臨床病理学的疾患単位にかかわっている。ＸＯの阻害は、尿酸レベルを減少させ、抗高尿酸血症作用をもたらす。ＲＯＳにより媒介される生理的シグナル伝達のコンセプトが、提案されており、ＸＤの、インビボでの微小血管炎症反応のトリガーとして役立つ続いてのＲＯＳ発生を伴うＸＯへの変換の可能性が仮説として取り上げられている。Meneshian and Bulkley, Microcirculation, 9: 161-75 (2002)。キサンチンオキシダーゼの血清レベルは、肝炎、炎症、虚血−再かん流、発癌及び老化のような種々の病理状態において著しく増加し、酵素プロセスで生じるＲＯＳは、酸化的損傷に関与する。
【０５３２】
哺乳類の酵素は、正常な状態下の器官から新しく調製された試料においてＮＡＤ＋−依存形態（ＸＤＨ）で存在し、即ち、それらは、低いキサンチン／Ｏ２レダクターゼ活性を示すが、Ｏ２の存在下であっても高いキサンチン／ＮＡＤ＋レダクターゼ活性を示す。ＸＤＨは、システイン残基の酸化によってＸＯに可逆的に変換するか、又は制限タンパク分解によって不可逆的に変換することができる。ＸＯは、Ｏ２に対する高い反応性を有するが、ＮＡＤ＋に対するごくわずかな反応性しか有さない。ＸＯは、分子酸素を超酸化物及び過酸化水素に還元することができるので、ＸＯは、活性酸素種を生ずる重要な酵素の１つであると考えられる。Nishino et al., J. Biol. Chem., 280: 24888-24894 (2005)。
【０５３３】
牛乳ＸＤＨ及びタンパク分解的に産生されたＸＯの結晶構造が解明され、ＦＡＤの周りに大きな立体配座の差異を示した。塩基転位は、システイン修飾によって引き起こされるか又はタンパク質分解によって引き起こされるかにかかわらず同じように起こるようであるが、原因であるシステイン残基の同定は、未だ議論の問題である。ウシのＸＯＲの結晶構造は、Ｃｙｓ９９２は、分子の表面に位置するが、Ｃｙｓ５３５は、おそらくその柔軟性のために残基は結晶構造中に見えないが、ＦＡＤ及びモリブドプテリンドメインの間の長いリンカーペプチドに位置しているようであることを示している。タンパク質分解的切断部位もリンカーペプチド上にある。可逆的ＸＤＨ及びタンパク質分解ＸＯの結晶構造の詳細な分析、並びに部位特異的突然変異誘発法に基づき、ウシの酵素中のＰｈｅ５４９、Ａｒｇ３３５（ｒａｔ３３４に対応）、Ｔｒｐ３３６（ｒａｔ３３５）、及びＡｒｇ４２７（ｒａｔ４２６）の特異なアミノ酸クラスターは、システイン酸化又はタンパク質分解的切断によって引き起こされるリンカーペプチドの修飾を活性部位ループ（Ｇｌｎ４２３−Ｌｙｓ４３３）に伝達するリレー系の中心に位置することが結論づけられる。活性部位ループの動きは、ＸＤＨ及びＸＯの間の化学的挙動における変化の直接原因であると考えられる。Nishino et al., J. Biol. Chem., 280: 24888-24894 (2005)。
【０５３４】
潜在的な抗癌薬として最初に合成されたアロプリノールは、現在では痛風の治療に使用される臨床的に有用なキサンチンオキシダーゼ阻害剤である。オキシプリノールは、アロプリノールの主な代謝産物である。ＸＯの阻害のための長期のアロプリノール投与は、痛風に関係した高尿酸血症に対して臨床的に有効である。しかし、その望ましくない副作用は、他のタイプのＸＯ阻害剤を単離するか合成する努力を促している。さらに、アロプリノール及びオキシプリノールの両方とも、それらのプリン様の構造のために、対応するヌクレオチドへの変換を受けることが知られており、プリン代謝に関与する他の酵素との相互作用を引き起こすことがある。この理由で、新しい研究プログラムは、プリンに関係する構造又は異なるタイプの構造を有する新たなＸＯ阻害剤の発見及び最適化に焦点をおいていた。ＸＯ阻害剤として合成により得られた又は自然源から単離された化合物の大部分は、窒素及び酸素複素環である。これらの阻害剤には、グアニンに基づく９−（ｐ−クロロフェニル）−グアニン、９−フェニルグアニン、９−フェニル−６−チオグアニン、９−（ｐ−クロロフェニル）−８−アザグアニン及び８−アザグアニン；アデニンに基づく８−アザアデニンが含まれる。他の阻害剤には、フェニル置換された４（３Ｈ）−プテリドン、８−アリールヒポキサンチン、及び８−アリールキサンチン、８−フェニルヒポキサンチン、８−ブロモキサンチン、−ニトロピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン、２−ベンジルチオヒポキサンチン、３−フェニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オン、及びそのｍ−トルイル誘導体、５−（ｐ−クロロフェニル）ピラゾロ［１，５−α］ピリミジン−７−オン、５−（ｐ−ニトロフェニル）ピラゾロ［１，５−α］ピリミジン−７−オン、７−フェニルピラゾロ［１，５−α］−ｓ−トリアジン−４−オン、７−ヒドロキシピラゾロ［１，５−α］ピリミジン−５−オン、６−アリールメチリデンヒドラジノ−７Ｈ−プリン、トリアゾロプリン、３−置換７Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｃ］−ピリミジン−５（６Ｈ）−オン、２−アミノ−６−ヒドロキシ−８−メルカプトプリン、２−アミノ−６−プリン−チオール、２−アミノプリン、２−（チオアルキル）プリン、４−アミノ−６−ヒドロキシピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−６−メルカプトピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、及び４−アミノピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、チオプロピレン又はチオエチレン結合基を有するピリミジン、２−アミノ−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン及び２−グアニジノ−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、４−（アシルアミノ）−５−カルバモイルイミダゾール、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール誘導体、２−ピリジルイミダゾール、フラボン及びフラボノール及びフラボノイド誘導体、フラボノリグナン、デルフィニジン、クマリン、ノラチリオール（１，３，６，７−テトラヒドロキシキサントン）、スルフレチン、エラグ酸、コーヒー酸、クロロゲン酸、及びフェルラ酸及びそれらの誘導体、プルプロガリン、ペンタガロイルグルコース、フェニルエタノイドイソアクテオシド、トランス���ｐ−クマリルジアセテート、トランス−ｐ−コニフェリルジアセテート、［１’Ｓ］−１’−アセトキシチャビコールアセテート、［１’Ｓ］−１’−アセトキシオイゲノールアセテート、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、アントラガロール、アントラキノン、アントラロビン、ベンゾフェノン、フィトステロール、ステロイド配糖体、ピセアタノール、シルプシン（scirpusin）Ａ及びシルプシンＢ、及び葉酸が含まれる。ＸＯ阻害剤の概括については、特にそれらの中に示された説明及び構造について参照により本明細書に明確に組み込まれているBorges et al., Current Medicinal Chemistry, 9: 195-217 (2002)を参照されたい。
【０５３５】
キサンチンオキシダーゼの他の阻害剤には、いくつかのプテリジン（Oettl and and Reibnegger, Biochim. Biophys. Acta, 1430: 387-395 (1999)）；チアゾール（Okamoto et al., J. Biol. Chem., 278: 1848-1855 (2003)）；フェニルピラゾール（Ishibuchi et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 11: 879-882 (2001)）；アリールトリアゾール（Okamoto et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101: 7931-7936 (2004)）；及びフラボノイド（Lin et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 294: 167-172 (2002)、Van Hoorn et al., Eur. J. Pharmacol., 451: 111-118 (2002)）（これらのすべては、特にそれらの中に示された説明及び構造について参照により本明細書に組み込まれている）が含まれる。
【０５３６】
図２１は、本開示の主題におけるターゲティング部分としての使用に適するキサンチンオキシダーゼのいくつかの阻害剤を示す。図２１は、リンカー及び金属結合部分（「Ｒ」）の結合の可能な部位と共にこれらの知られた阻害剤の構造、並びに可能な誘導体を示している。
【０５３７】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素阻害剤は、ターゲティング部分、金属結合部分、及び任意選択でリンカーを含むキサンチンオキシダーゼ阻害剤であり、この阻害剤は、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群から選択される式を有する
（ａ）
【０５３８】
【化１２５】
2010510248.tif 000126
;
【０５３９】
（ｂ）
【０５４０】
【化１２６】
2010510248.tif 000127
;
【０５４１】
［式中、Ｒ４５及びＲ４６の少なくとも１つは、−Ｌｎ−ＭＢＭである］
（ｃ）
【０５４２】
【化１２７】
2010510248.tif 000128
;
【０５４３】
［式中、Ｒ４６は、Ｈ又はアルキルである］
（ｄ）
【０５４４】
【化１２８】
2010510248.tif 000129
;
【０５４５】
［式中、Ｒ４７、Ｒ４８、及びＲ４９の少なくとも１つは、−Ｌｎ−ＭＢＭである］
［式中、
ＭＢＭは、金属結合部分であり；
Ｌｎは、リンカーであり、ｎは、０〜１の整数であり；
但し、金属結合部分は、
【０５４６】
【化１２９】
2010510248.tif 000130
【０５４７】
（式中、Ｒは、金属結合部分が任意選択でリンカーＬｎを介してターゲティング部分に結合することができる結合部位である）
からなる群から選択される金属結合部分ではない］。
【０５４８】
いくつかの実施形態においては、キサンチンオキシダーゼ阻害剤は、図２１に示すキサンチンオキシダーゼ阻害剤の群から選択される。
【０５４９】
これらのターゲティング部分に加えて、以下に概略が記載されるスクリーニングによって確認された又はキサンチンオキシダーゼに結合することが示された他の知られたターゲティング部分を使用し得る。したがって、適切なターゲティング部分には、それだけには限らないが、既知の薬物及び薬物候補を含む有機小分子、多糖、脂肪酸、ワクチン、ポリペプチド、タンパク質（本明細書に記載されたように、ペプチドを含む）、核酸、糖質、脂質、タンパク質ホルモン及びステロイドホルモンを含むホルモン、成長因子、受容体リガンド、抗原、抗体及び酵素（以下に概略が記載されるように、集合的に「候補薬剤」）などが含まれる。
【０５５０】
キサンチンオキシダーゼ活性は、確立された方法を用いて測定し得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれているSasaoka, J. Chromatogr., 424: 392-7 (1988); Sugiura et al., Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), 29: 430-2 (1981)；及びNishino et al., J. Biol. Chem., 280: 24888-24894 (2005)を参照されたい。
【０５５１】
Ｃ．リンカー
本開示の主題の阻害剤は、リンカーも含んでよい。即ち、任意選択で、ターゲティング部分は、金属結合部分に直接結合している。少なくとも１個の原子を含むリンカーを使用してもよい。本明細書で「リンカー」は、金属結合部分及びターゲティング部分の間に共有結合を提供する少なくとも１個の原子を意味する。場合によっては、例えば、阻害剤が、ＭＢＭ−リンカー−ＴＭ又はＴＭ−リンカー−ＭＢＭの一般式を有する場合、単一のリンカーを使用し得る。別法として、例えば、複数の金属結合部分又はターゲティング部分が使用される場合（ＭＢＭ１−リンカー−ＭＢＭ２−リンカー−ＴＭ、など）、いくつかのリンカーを使用し得る。
【０５５２】
好ましいリンカーには、それだけには限らないが、本明細書に概略が記載された、置換されたアルキル及びヘテロアルキル及びアリール及びヘテロアリール基を含めたアルキル又はアリール基が含まれる。短い直鎖状アルキル鎖は、多くの実施形態において有用である。リンカーの選択は、一般的に周知の分子モデリング技術を用いて行われる。さらに、このリンカーの長さは、最適な結果を達成するために重要であり得る。一般的に、これは、酸化還元酵素の結晶構造を用いてモデル化し得る。
【０５５３】
場合によっては、金属結合部分及びターゲティング部分は、周知の化学反応を用いて共有結合される。多くの場合、金属結合部分及びターゲティング部分の両方とも、本明細書に概略が記載されたように、本開示の主題の成分を加えるのに使用される化学官能基を含む。したがって、一般的に、本開示の主題の成分は、結合のために使用し得るそれぞれにある官能基の使用によって結合される。結合のための好ましい官能基は、アミノ基、カルボキシ基、オキソ基及びチオール基である。これらの官能基はさらに、直接的に又はリンカーの使用によって間接的に結合し得る。リンカーは、当技術分野で公知であり、例えば、ホモ−又はヘテロ−二官能性リンカーは、公知である（参照により本明細書に組み込まれている1994 Pierce Chemical Company catalog, technical section on cross-linkers, pages 155-200を参照されたい）。別法として、２つの部分を結合させるのではなく、全体の分子を、段階的に合成する。
【０５５４】
Ｄ．本開示の阻害剤
本明細書で記載されたように、本開示の阻害剤は、１又は複数のターゲティング部分及び１又は複数の金属結合部分を含む。当業者には理解されるように、特定の本開示の阻害剤は、図面のものなどの、本明細書で概略が記載された金属結合部分のいずれかに、任意選択のリンカーと共に結合している本明細書で概略が記載されたターゲティング部分のいずれかを含む。したがって、図１Ａの構造は、図１６（１）の構造などと結合し得る。さらに、ターゲティング部分のいずれも、金属結合部分のクラス及び／又はサブクラスと結合し、阻害剤を形成してＫｉなどの特定の酵素特性について試験され得る。
【０５５５】
したがって、例えば、任意の独立に選択された金属結合部分、又は図面に挙げられた金属結合部分のクラス若しくはサブクラスは、任意の独立に選択されたターゲティング部分に添加し得る。例えば、ヘテロ原子を有する５員芳香族環は、図２６に示された任意の独立に選択されたラノステロールデメチラーゼ阻害剤に添加し得る。任意のサイズの任意及びすべての組合せ及び副組合せが考えられる。
【０５５６】
II．酸化還元酵素の生成
本開示の主題の酸化還元酵素タンパク質は、NCBIデータベースにより記載されたタンパク質配列より短いか長くてよい。したがって、好ましい実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質の定義に含まれるのは、すべてが参照により本明細書に明確に組み込まれているNCBIデータベースに記載された配列の部分又は断片である。酸化還元酵素タンパク質の部分又は断片は、ａ）それらが、少なくとも１つの抗原エピトープを共有する；又はｂ）少なくとも指示された相同性を有する；又はｃ）好ましくは、例えば（それがラノステロールデメチラーゼである場合）、それだけには限らないが、ポストスクアレンステロール前駆体からの１４α−メチル基の酸化的除去に触媒作用を及ぼす能力を含めた酸化還元酵素生物活性を有し；ｄ）（それがラノステロールデメチラーゼである場合）好ましくは、ラノステロールを選択的に加水分解するならば、酸化還元酵素タンパク質と見なされる。
【０５５７】
一般的に、阻害剤を試験するのに使用される酸化還元酵素は、組換え型である。「組換えタンパク質」は、上記に示す通り、組換え技術を用いて、即ち、組換え核酸の発現により作製されたタンパク質である。組換えタンパク質は、少なくとも１又は複数の特徴によって天然タンパク質と識別される。例えば、組換えタンパク質は、このタンパク質が、通常、その野生型宿主において結合しているタンパク質及び化合物の一部又は全部から単離又は精製することができ、したがって実質的に純粋であり得る。例えば、単離されたタンパク質は、このタンパク質が、通常、その自然状態で結合している物質の少なくとも一部を伴わず、所与の試料における全タンパク質の好ましくは少なくとも約０．５重量％、より好ましくは少なくとも約５重量％を構成する。実質的に純粋なタンパク質は、全タンパク質の少なくとも約７５重量％を含み、少なくとも約８０％が好ましく、少なくとも約９０％がとりわけ好ましい。本定義は、様々な生物又は宿主細胞における１種の生物からの酸化還元酵素タンパク質の産生を含む。別法として、組換えタンパク質は、このタンパク質が、高い濃度レベルで作製されるような誘導性プロモーター又は高発現プロモーターの使用によって通常見られるよりも著しく高い濃度で作ることができる。別法として、タンパク質は、以下に論じられるように、エピトープタグの添加又はアミノ酸置換、挿入及び欠失におけるように、自然で通常見られない形態であり得る。
【０５５８】
本開示の主題の酸化還元酵素タンパク質の定義に同様に含まれるのは、アミノ酸配列変異体である。これらの変異体は、３つのクラス：即ち、置換変異体、挿入変異体又は欠失変異体の１又は複数に分類される。これらの変異体は、通常、カセット又はＰＣＲ突然変異生成又は当技術分野で公知の他の技術を用いる、酸化還元酵素タンパク質をコードするＤＮＡにおけるヌクレオチドの部位特異的突然変異生成で、変異体をコードするＤＮＡを産生し、その後、上記に概略が記載された細胞培養において組換えＤＮＡを発現させることによって調製される。しかし、最大約１００〜１５０残基を有する変異体酸化還元酵素タンパク質断片は、確立された技術を用いるインビトロ合成によって調製し得る。アミノ酸配列変異体は、酸化還元酵素タンパク質アミノ酸配列の自然の対立遺伝子変異又は種間変異からそれらを分ける特徴である、予め定められた変異の性質によって特徴付けられる。以下により完全に概略が記載される改変された特徴を有する変異体を選択することもできるが、変異体は、典型的には自然発生的な類似体と同じ定性的な生物活性を示す。
【０５５９】
アミノ酸配列変異体を導入する部位又は領域は予め決められるが、突然変異それ自体は、予め決める必要はない。例えば、所与の部位における突然変異の実施を最適化するために、ランダム変異導入法は、標的のコドン又は領域において行うことができ、発現された酸化還元酵素変異体は、所望の活性の最適な組合せについてスクリーニングすることができる。既知の配列を有するＤＮＡにおいて予め定められた部位に置換突然変異を行うための技術は、公知であり、例えば、Ｍ１３プライマー突然変異誘発及びＰＣＲ突然変異誘発がある。突然変異体のスクリーニングは、酸化還元酵素タンパク質活性のアッセイを使用して行う。
【０５６０】
アミノ酸置換は、典型的には単一残基の置換であり；著しく大きな挿入が許容され得るが、挿入は、通常、約１〜２０アミノ酸である。場合によっては、欠失は、非常に大きいことがあるが、欠失は、約１〜約２０残基の範囲に及ぶ。
【０５６１】
置換、欠失、挿入又はそれらの任意の組合せを使用して、最終誘導体に到達することができる。一般的に、これらの変化は、いくつかのアミノ酸になされて分子の改変を最小にする。しかし、より大きな変化は、特定の状況で許容され得る。酸化還元酵素タンパク質の特徴における小さな改変が望ましい場合、置換は、一般的に表１に従って行われる。
【０５６２】
【表１】
2010510248.tif 000131
【０５６３】
機能又は免疫学的同一性における実質的な変化は、表Ｉに示すものに比べて保存的でない置換を選択することによってなされる。例えば、改変の領域、例えば、αヘリックス又はβシート構造；標的部位における分子の電荷又は疎水性；或いは側鎖のバルクにおけるポリペプチド骨格の構造により著しく影響を及ぼす置換を行い得る。ポリペプチドの性質における最大の変化を発生させることが一般的に予想される置換は、（ａ）親水性残基、例えば、セリル又はトレオニルによって、疎水性残基、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリル又はアラニルが置換される（又は逆）；（ｂ）システイン又はプロリンによって、任意の他の残基が置換される（又は逆）；（ｃ）陽性の側鎖を有する残基、例えば、リシル、アルギニル、又はヒスチジルによって、陰性の残基、例えば、グルタミル又はアスパルチルが置換される（又は逆）；或いは（ｄ）かさ高い側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンによって、側鎖を有さない残基、例えば、グリシンが置換される（又は逆）置換である。
【０５６４】
変異体は、必要に応じて酸化還元酵素タンパク質の特徴を変更するためにも選択されるが、変異体は、典型的には、自然発生的な類似体と同じ定性的な生物活性を示し、同じ免疫反応を発現させる。別法として、酸化還元酵素タンパク質の生物活性を改変するように変異体を設計し得る。例えば、グリコシル化部位は、改変するか又は除去することができ、或いは膜貫通ドメインは、アッセイ開発のために除去することができる。
【０５６５】
酸化還元酵素ポリペプチドの共有結合修飾は、本開示の主題の範囲内に含まれる。共有結合修飾の一タイプには、酸化還元酵素ポリペプチドの標的アミノ酸残基を、酸化還元酵素ポリペプチドの選択された側鎖又はＮ末端又はＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることが含まれる。二官能性薬剤による誘導体化は、以下により完全に記載されているように、例えば、酸化還元酵素を架橋して、抗酸化還元酵素抗体を精製する方法における使用又はスクリーニングアッセイのための不水溶性の支持マトリックス又は表面にするために有用である。一般的に使用される架橋剤には、例えば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、４−アジドサリチル酸とのエステル、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）などのジスクシンイミジルエステルを含めたホモ二官能性イミドエステル、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなどの二官能性マレイミド、及びメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの薬剤が含まれる。
【０５６６】
他の修飾には、グルタミニル及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のアミノ基のメチル化［T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)］、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。
【０５６７】
本開示の主題の範囲に含まれる酸化還元酵素ポリペプチドの共有結合修飾の別のタイプは、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンを変えることを含む。「天然グリコシル化パターンを変えること」は、本明細書の目的が、天然配列酸化還元酵素ポリペプチドに見出される１又は複数の炭化水素部分を欠失すること、及び／又は天然配列酸化還元酵素ポリペプチドに存在しない１又は複数のグリコシル化部位を付加することを意味することが意図されている。
【０５６８】
グルコシル化部位の酸化還元酵素ポリペプチドへの付加は、それらのアミノ酸配列を変えることによって達成し得る。改変は、例えば、天然配列酸化還元酵素ポリペプチドへの１又は複数のセリン又はトレオニン残基の付加、又はそれによる置換によって行うことができる（Ｏ結合したグリコシル化部位について）。酸化還元酵素アミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化によって、特に、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンが生じるように予め選択された塩基における酸化還元酵素ポリペプチドをコードするＤＮＡを突然変異させることによって変えてもよい。
【０５６９】
酸化還元酵素ポリペプチド上の糖質部分の数を増加させる別の手段は、ポリペプチドへのグリコシドの化学的又は酵素的カップリングによるものである。このような方法は、当技術分野において、例えば、１９８７年９月１１日に公開された国際公開第８７／０５３３０号パンフレット、及びAplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)に記載されている。
【０５７０】
酸化還元酵素ポリペプチド上に存在する糖質部分の除去は、化学的に又は酵素的に或いはグリコシル化の標的として役立つアミノ酸残基をコードするコドンの変異置換によって達成し得る。化学的脱グリコシル化技術は、当技術分野で公知であり、例えば、Hakimuddin, et al., Arch. Biochem. Biophys., 259: 52 (1987)及びEdge et al., Anal. Biochem., 118: 131 (1981)によって記載されている。ポリペプチド上の糖質部分の酵素的切断は、Thotakura et al., Meth. Enzymol., 138: 350 (1987)により記載されたように、様々なエンド及びエキソグリコシダーゼの使用によって達成し得る。
【０５７１】
酸化還元酵素の共有結合修飾の別のタイプは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第４，６４０，８３５号；４，４９６，６８９号；４，３０１，１４４号；４，６７０，４１７号；４，７９１，１９２号又は４，１７９，３３７号明細書に記載された方法で、種々の非タンパク様ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの１つに酸化還元酵素ポリペプチドを結合させることを含む。
【０５７２】
本開示の主題の酸化還元酵素ポリペプチドは、別の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合した酸化還元酵素ポリペプチドを含むキメラ分子を形成する方法で修飾することもできる。一実施形態においては、このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が、選択的に結合し得るエピトープを提供するタグポリペプチドと酸化還元酵素ポリペプチドの融合を含む。エピトープタグは、一般的に、酸化還元酵素ポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に置かれる。酸化還元酵素ポリペプチドのこのようなエピトープタグ化形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検知し得る。同様に、エピトープタグの提供によって、酸化還元酵素ポリペプチドが、抗タグ抗体又はエピトープタグに結合する別のタイプの親和性マトリックスを使用する親和性精製によって容易に精製され得るようになる。代わりの実施形態においては、キメラ分子は、酸化還元酵素ポリペプチドと免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定の領域との融合を含み得る。キメラ分子の二価形態について、このような融合は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域とのものであり得る。
【０５７３】
種々のタグポリペプチド及びそれらのそれぞれの抗体は、当技術分野で公知である。例には、ポリヒスチジン（poly-his）又はポリヒスチジン−グリシン（poly-his-gly）タグ；flu HAタグポリペプチド及びその抗体12CA5［Field et al., Mol. Cell. Biol., 8: 2159-2165 (1988)］；c-mycタグ及びそれに対する8F9、3C7、6E10、G4、B7及び9E10抗体［Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5: 3610-3616 (1985)］；並びに単純ヘルペスウイルス糖タンパクＤ（ｇＤ，glycoprotein D）タグ及びその抗体［Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6): 547-553 (1990)］が含まれる。他のタグポリペプチドには、Flag-ペプチド［Hopp et al., BioTechnology, 6: 1204-1210 (1988)］；KT3エピトープペプチド［Martin et al., Science, 255: 192-194 (1992)］；チューブリンエピトープペプチド［Skinner et al., J. Biol. Chem., 266: 15163-15166 (1991)］；及びT7遺伝子10タンパク質ペプチドタグ［Lutz-Freyermuth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6393-6397 (1990)］が含まれる。
【０５７４】
本開示の主題の酸化還元酵素タンパク質をコードする核酸は、当技術分野で公知であるように作製し得る。同様に、これらの核酸を使用して、種々の発現ベクターが作製される。発現ベクターは、自己複製染色体外ベクター又は宿主ゲノムに組み込まれるベクターのいずれかであり得る。一般的に、これらの発現ベクターには、酸化還元酵素タンパク質をコードする核酸に作動可能に結合した転写及び翻訳調節核酸が含まれる。用語「制御配列」は、特定の宿主生物において作動可能に結合したコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適する制御配列には、例えば、プロモーターを含み、オペレーター配列、及びリボソーム結合部位も含んでよい。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを使用することが知られている。
【０５７５】
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた場合、「作動可能に結合している」。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に結合しており；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に結合しており；或いは、リボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置している場合、コード配列に作動可能に結合している。一般的に、「作動可能に結合している」は、結合しているＤＮＡ配列が、連続的であり、分泌リーダーの場合は、連続的であり読み取り相にあることを意味する。しかし、エンハンサーは、必ずしも連続的でなくてよい。結合は、好都合な制限部位における連結反応によって達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが、従来の手法に従って使用される。転写及び翻訳調節核酸は、一般的に、当業者には理解されるように、酸化還元酵素タンパク質を発現するのに使用される宿主細胞に適しており；例えば、バシラス属（Bacillus）の転写及び翻訳調節核酸配列は、バシラス属において酸化還元酵素タンパク質を発現させるのに使用されることが好ましい。多数のタイプの適切な発現ベクター、及び適切な調節配列は、種々の宿主細胞について当技術分野で公知である。
【０５７６】
一般的に、転写及び翻訳調節配列には、それだけには限らないが、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始及び停止配列、翻訳開始及び停止配列、並びにエンハンサー又はアクチベーター配列が含まれ得る。好ましい実施形態においては、調節配列には、プロモーター及び転写開始及び停止配列が含まれる。
【０５７７】
プロモーター配列には、構成的及び誘導性プロモーター配列が含まれる。プロモーターは、自然のプロモーター、ハイブリッド又は合成プロモーターのいずれかであってよい。複数のプロモーターのエレメントを組み合わせるハイブリッドプロモーターも、当技術分野で公知であり、本開示の主題において有用である。
【０５７８】
さらに、発現ベクターは、さらなるエレメントを含み得る。例えば、発現ベクターは、２つの複製系を有することができ、したがって、２種の生物中、例えば、発現については哺乳類又は昆虫の細胞中で、クローニング及び増幅については原核生物の宿主において維持されることが可能になる。さらに、発現ベクターを組み込むために、発現ベクターは、発現構築物の両端にある、宿主細胞ゲノムに相同の少なくとも１つの配列、好ましくは２つの相同の配列を含む。組込み用ベクターは、ベクター中に挿入するのに適した相同配列を選択することによって宿主細胞中の特定の位置に導くことができる。組込み用ベクターの構築物及び適切な選択及びスクリーニングプロトコールは、当技術分野で公知であり、例えば、Mansour et al., Cell, 51: 503 (1988)及びMurray, Gene Transfer and Expression Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 7 (Clifton: Humana Press, 1991)に記載されている。
【０５７９】
さらに、好ましい実施形態においては、発現ベクターは、発現ベクターを含む形質転換宿主細胞の選択を可能にする選択遺伝子を含み、特に哺乳類細胞の場合、ベクターを含まない細胞は通常死滅するので、ベクターの安定性を確実にする。選択遺伝子は、当技術分野で公知であり、使用される宿主細胞に応じて様々である。本明細書で「選択遺伝子」は、選択剤に対する耐性を付与する遺伝子産物をコードする任意の遺伝子を意味する。適切な選択剤には、それだけには限らないが、ネオマイシン（又はその類似体G418）、ブラストサイジンＳ、ヒスチニドールＤ（histinidol D）、ブレオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシンＢ、及び他の薬物が含まれる。
【０５８０】
好ましい実施形態においては、発現ベクターは、遺伝子発現のレベルを増大させるために発現される、遺伝子の上流又は下流のＲＮＡスプライシング配列を含む。Barret et al., Nucleic Acids Res. 1991; Groos et al., Mol. Cell. Biol. 1987；及びBudiman et al., Mol. Cell. Biol. 1988を参照されたい。
【０５８１】
好ましい発現ベクター系は、一般的に、Mann et al., Cell, 33: 153-9 (1993); Pear et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90(18): 8392-6 (1993); Kitamura et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 92: 9146-50 (1995); Kinsella et al., Human Gene Therapy, 7: 1405-13; Hofmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 93: 5185-90; Choate et al., Human Gene Therapy, 7: 2247 (1996);国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／０１０１９号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９７／０１０４８号明細書及びそれらの中に引用された文献（これらのすべては、参照により本明細書に明確に組み込まれている）に記載されたものなどのレトロウイルスベクター系である。
【０５８２】
本開示の主題の酸化還元酵素タンパク質は、核酸で形質転換された宿主細胞、好ましくは酸化還元酵素タンパク質をコードする核酸を含む発現ベクターを、酸化還元酵素タンパク質の発現を誘導又は引き起こすのに適した条件下で培養することによって産生される。酸化還元酵素タンパク質の発現に適する条件は、発現ベクター及び宿主細胞の選択に応じて様々であり、常用の実験によって当業者によって容易に認識される。例えば、発現ベクターにおける構成的プロモーターの使用は、宿主細胞の成長及び増殖を最適化することが求められるが、誘導性プロモーターの使用は、誘導に適した成長条件を必要とする。さらに、いくつかの実施形態においては、回収の時期が重要である。例えば、昆虫細胞発現に使用されるバキュロウイルス系は、溶菌ウイルスであり、したがって、回収時期の選択は、産物の収率にとって極めて重要であり得る。
【０５８３】
適切な宿主細胞には、酵母、細菌、始原細菌、真菌、並びに昆虫及び哺乳類細胞を含めた動物細胞が含まれる。特に興味深いのは、キイロショウジョウバエ細胞、サッカロミセス・セレヴィシエ及び他の酵母、大腸菌（E. coli）、枯草菌（Bacillus subtilis）、ＳＦ９細胞、Ｃ１２９細胞、２９３細胞、アカパンカビ（Neurospora）、ＢＨＫ、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及びヒーラ細胞、線維芽細胞、神経鞘腫（Schwanoma）細胞株、不死化された哺乳類の脊髄及びリンパ細胞系、ジュルカット（Jurkat）細胞、肥満細胞及び他の内分泌及び外分泌細胞、並びに神経細胞である。参照により本明細書に明確に組み込まれているＡＴＣＣ細胞系カタログを参照されたい。
【０５８４】
好ましい実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質は、哺乳類細胞において発現される。哺乳類の発現系も当技術分野で公知であり、レトロウイルス系を含む。哺乳類のプロモーターは、哺乳類のＲＮＡポリメラーゼに結合し、酸化還元酵素タンパク質のｍＲＮＡへのコード配列の下流（３’）転写を開始し得る任意のＤＮＡ配列である。プロモーターは、コード配列の５’末端の近くに通常位置する転写開始領域、及び転写開始部位の２５〜３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスを有する。ＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼIIに正しい部位においてＲＮＡ合成を開始するよう指示すると考えられる。哺乳類プロモーターは、ＴＡＴＡボックスの１００〜２００塩基対上流に典型的に位置する上流プロモーターエレメント（エンハンサーエレメント）も含む。上流プロモーターエレメントは、転写が開始される速度を決定し、いずれの方向にも作用し得る。ウイルス遺伝子が、しばしば、高度に発現され、広い宿主範囲を有するため、哺乳類のプロモーターとして特に有用なのは、哺乳類のウイルス遺伝子からのプロモーターである。例には、ＳＶ４０初期プロモーター、マウス乳癌ウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、及びＣＭＶプロモーターが含まれる。
【０５８５】
典型的には、哺乳類細胞によって認識された転写停止及びポリアデニル化配列は、翻訳停止コドンの３’側に位置する調節領域であり、したがって、プロモーターエレメントと共にコード配列に隣接する。成熟ｍＲＮＡの３’末端は、部位特異的翻訳後切断及びポリアデニル化によって形成される。転写ターミネーター及びポリアデニル化シグナルの例には、ＳＶ４０から誘導されるものが含まれる。
【０５８６】
哺乳類宿主並びに他の宿主に外因性核酸を導入する方法は、当技術分野で公知であり、使用される宿主細胞によって様々である。技術には、デキストランの媒介による転写、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレンの媒介による転写、原形質融合、エレクトロポレーション、ウイルス感染、リポソーム中へのポリヌクレオチドのカプセル化、及び細胞核へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが含まれる。
【０５８７】
好ましい実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質は、細菌系において発現される。細菌発現系は、当技術分野で公知である。
【０５８８】
適切な細菌プロモーターは、細菌ＲＮＡポリメラーゼに結合し、ｍＲＮＡへの酸化還元酵素タンパク質のコード配列の下流（３’）転写を開始し得る任意の核酸配列である。細菌プロモーターは、コード配列の５’末端の近くに通常位置する転写開始領域を有する。この転写開始領域は、典型的には、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位及び転写開始部位を含む。代謝経路酵素をコードする配列は、特に有用なプロモーター配列を提供する。例には、ガラクトース、ラクトース及びマルトースなどの糖代謝酵素から導かれたプロモーター配列、及びトリプトファンなどの生合成酵素から導かれた配列が含まれる。バクテリオファージからのプロモーターも使用することができ、当技術分野で公知である。さらに、合成プロモーター及びハイブリッドプロモーターも有用であり；例えば、ｔａｃプロモーターは、ｔｒｐ及びｌａｃプロモーター配列のハイブリッドである。さらに、細菌プロモーターは、細菌ＲＮＡポリメラーゼに結合し転写を開始する能力を有する非細菌起源の自然のプロモーターを含み得る。
【０５８９】
機能プロモーター配列に加えて、効率的なリボソーム結合部位が望ましい。大腸菌において、リボソーム結合部位は、シャイン・ダルガーノ（ＳＤ，Shine-Delgarno）配列と呼ばれ、開始コドンの３〜１１ヌクレオチド上流に位置する開始コドン及び３〜９ヌクレオチドの長さの配列を含む。
【０５９０】
発現ベクターは、細菌において酸化還元酵素タンパク質の分泌をもたらすシグナルペプチド配列も含み得る。シグナル配列は、典型的に、当技術分野で公知のように、細胞からのタンパク質の分泌を指示する疎水性アミノ酸からなるシグナルペプチドをコードする。タンパク質は、培地中で分泌されるか（グラム陽性菌）又は細胞の内膜及び外膜の間に位置するペリプラズム空間で分泌される（グラム陰性菌）。
【０５９１】
細菌発現ベクターは、形質転換された菌種の選択を可能にする選択マーカー遺伝子も含み得る。適切な選択遺伝子には、アンピシリン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、カナマイシン、ネオマイシン及びテトラサイクリンなどの薬物に対して細菌を耐性にする遺伝子が含まれる。選択マーカーには、ヒスチジン、トリプトファン及びロイシン生合成経路におけるものなどの生合成遺伝子も含まれる。
【０５９２】
これらの構成成分は、発現ベクター中に組み込まれる。細菌の発現ベクターは、当技術分野で公知であり、とりわけ、枯草菌、大腸菌、クレモリス菌（Streptococcus cremoris）、及びストレプトコッカス・リビダンス（Streptococcus lividans）のベクターを含む。
【０５９３】
細菌発現ベクターは、塩化カルシウム処理、エレクトロポレーションなどの当技術分野で公知の技術を使用して細菌宿主細胞中に導入され形質転換される。
【０５９４】
一実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質は、昆虫細胞中で産生される。昆虫細胞の形質転換のための発現ベクター、特に、バキュロウイルスに基づく発現ベクターは、当技術分野で公知であり、例えば、O'Reilly et al., Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual (New York: Oxford University Press, 1994)に記載されている。
【０５９５】
好ましい実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質は、酵母細胞中で産生される。酵母発現系は、当技術分野で公知であり、サッカロミセス・セレヴィシエ、カンジダ・アルビカンス及びＣ．マルトーサ（C. maltosa）、ハンセヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）、クリュイベロミセス・フラギリス（Kluyveromyces fragilis）及びＫ．ラクティス（K. lactis）、ピチア・ギレリモンディ（Pichia guillerimondii）及びＰ．パストリス（P. pastoris）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、及びヤロウィア・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）の発現ベクターを含む。酵母中の発現のための好ましいプロモーター配列には、誘導ＧＡＬ１，１０プロモーター、アルコール脱水素酵素由来のプロモーター、エノラーゼ、グルコキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸−脱水素酵素、ヘキソキナーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、及び酸性ホスファターゼ遺伝子が含まれる。酵母選択マーカーには、ツニカマイシンへの耐性を与えるＡＤＥ２、ＨＩＳ４、ＬＥＵ２、ＴＲＰ１、及びＡＬＧ７；Ｇ４１８への耐性を与えるネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子；並びに酵母が銅イオンの存在下で増殖できるようにするＣＵＰ１遺伝子が含まれる。
【０５９６】
酸化還元酵素タンパク質は、当技術分野で公知の技術を使用して融合タンパク質としても生成し得る。したがって、例えば、モノクローナル抗体の生成について、所望のエピトープが小さい場合、酸化還元酵素タンパク質を担体タンパク質に融合させて免疫源を形成することができる。別法として、酸化還元酵素タンパク質は、発現を増加するため又は他の理由で融合タンパク質として、生成することができる。例えば、酸化還元酵素タンパク質が、酸化還元酵素ペプチドである場合、ペプチドをコードする核酸は、発現の目的で他の核酸に結合することができる。
【０５９７】
一実施形態においては、本開示の主題の酸化還元酵素核酸、タンパク質及び抗体は標識化される。本明細書で「標識化」は、本開示の主題の核酸、タンパク質及び抗体が、本開示の主題の核酸、タンパク質及び抗体の検知を可能にする少なくとも１つの結合した元素、同位元素又は化合物を有することを意味する。一般的に、標識は、３つのクラス：即ち、ａ）放射性又は重同位体であり得る同位体標識；ｂ）抗体又は抗原であり得る免疫標識；及びｃ）着色又は蛍光色素に分類される。標識は、任意の位置において化合物中に組み込むことができる。
【０５９８】
好ましい実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質は、発現後に精製又は単離される。酸化還元酵素タンパク質は、どんな他の成分が試料中に存在するかに応じて当業者に知られた種々の方法で単離又は精製し得る。標準の精製方法には、電気泳動技術、分子的技術、免疫的技術並びにイオン交換、疎水性、親和性、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー、及びクロマト分画を含めたクロマトグラフ技術が含まれる。例えば、酸化還元酵素タンパク質は、標準の抗酸化還元酵素抗体カラムを使用して精製し得る。タンパク質濃縮と併せて限外ろ過及びダイアフィルトレーション技術も有用である。適切な精製技術における一般的手引きについては、Scopes, R., Protein Purification, Springer-Verlag, NY (1982)を参照されたい。必要な精製の度合いは、酸化還元酵素タンパク質の使用に応じて変わる。任意選択で、精製は必要ではない。
【０５９９】
発現され必要に応じて精製されれば、酸化還元酵素タンパク質及び核酸は、多くの用途において有用である。
【０６００】
III．酸化還元酵素阻害剤のスクリーニング
酸化還元酵素タンパク質に結合し得るターゲティング部分を見出すためにスクリーニングを設計することができ、次いで、これらのターゲティング部分を、金属結合部分と結合させて酸化還元酵素候補阻害剤を形成させることができ、次いで、候補阻害剤が酸化還元酵素生物活性を調節する能力を評価するアッセイに使用する。別法として、ターゲティング部分を、金属結合部分と結合させて最初に酸化還元酵素との結合活性をスクリーニングし、次いで阻害活性をスクリーニングすることができ、又はその逆の順番でもよい。したがって、当業者には理解されるように、実施できるいくつかの異なるアッセイがあり、結合アッセイ及び活性アッセイがある。
【０６０１】
Ａ．ターゲティング部分スクリーニング
好ましい実施形態においては、本方法は、酸化還元酵素タンパク質及び候補ターゲティング部分を組み合わせること、並びにターゲティング部分の酸化還元酵素タンパク質への結合力を決定することを含む。一般的に、本明細書に記載されるように、本アッセイは、酸化還元酵素タンパク質を試験すべき１又は複数のターゲティング部分と接触させることによって行われる。
【０６０２】
ターゲティング部分は、多数の化学物質類を含む。一実施形態においては、ターゲティング部分は、有機分子、好ましくは、１００ダルトンを上回り約２，５００ダルトン未満の分子量を有する小さな有機化合物である。特に好ましいのは、１００ダルトンを上回り約２，０００ダルトン未満、より好ましくは、約１５００ダルトン未満、より好ましくは、約１０００ダルトン未満、より好ましくは、５００ダルトン未満の分子量を有する小さな有機化合物である。ターゲティング部分は、タンパク質との構造的相互作用、特に水素結合に必要な官能基を含み、典型的に、少なくとも１つのアミン、カルボニル、ヒドロキシル又はカルボキシル基、好ましくは、これらの官能化学基の少なくとも２つを含む。候補薬剤は、上記官能基の１又は複数で置換された環状炭素又は複素環構造及び／又は芳香族又は多環芳香族構造をしばしば含む。ターゲティング部分も、ペプチド、単糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造的類似体又はそれらの組合せを含めた生体分子の中に見出される。
【０６０３】
ターゲティング部分は、合成又は自然の化合物のライブラリーを含む多様なソースから得られる。例えば、多様な有機化合物及び生体分子（無作為化されたオリゴヌクレオチドの発現を含む）のランダム及び直接合成のために、多数の手段が利用可能である。別法として、細菌抽出物、真菌抽出物、植物及び動物抽出物の形態の自然化合物のライブラリーは、入手可能であるか、又は容易に生成される。さらに、自然又は合成的に生成されたライブラリー及び化合物は、通常の化学的、物理的及び生化学的手段によって容易に改変される。既知の薬剤は、アシル化、アルキル化、エステル化、アミド化（amidification）などの定方向又はランダムの化学修飾を受けさせて構造的類似体を生成することができる。
【０６０４】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、有機化学部分であり、種々のこれらのものが、文献で入手可能である。
【０６０５】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、組合せの化学ライブラリーから得られ、種々のこれらのものが、文献で入手可能である。本明細書で「組合せの化学ライブラリー」は、一般的に、それだけには限らないが、化学合成によって確定した又はランダムな方法で生成された様々な化合物の群を意味する。何百万の化合物を、組合せの混合により合成し得る。
【０６０６】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、糖質である。本明細書で「糖質」は、一般式Ｃｘ（Ｈ２Ｏ）ｙを有する化合物を意味する。単糖、二糖、及びオリゴ糖又は多糖は、すべて定義内に含まれ、グリコシド結合で連結された種々の糖分子のポリマーを含む。特に好ましい糖質は、ガラクトース、マンノース、フルクトース、ガラクトサミン、（特にＮ−アセチルグルコサミン）、グルコサミン、グルコース及びシアル酸のモノマー及びオリゴマーを含めた、糖化タンパク質の糖質成分、並びに、特に細胞表面受容体などの特定の受容体への結合を可能にする糖化成分のすべて又は部分を含むものである。他の糖質は、グルコース、リボース、ラクトース、ラフィノース、フルクトース、及び他の生物学的に重要な糖質のモノマー及びポリマーを含む。特に、多糖（それだけには限らないが、アラビノガラクタン、アラビアゴム、マンナンなどを含む）は、ＭＲＩ剤を細胞中に送達するのに使用されており；その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，５５４，３８６号明細書を参照されたい。
【０６０７】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、脂質である。本明細書で使用される「脂質」には、脂肪、脂肪油、ワックス、リン脂質、糖脂質、テルペン、脂肪酸、及びグリセリド、特にトリグリセリドが含まれる。脂質の定義に同様に含まれるのは、エイコサノイド、ステロイド及びステロールであり、これらのいくつかも、プロスタグランジンなどのホルモン、アヘン、及びコレステロールである。
【０６０８】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、タンパク質である。本明細書で「タンパク質」は、少なくとも２個の共有結合したアミノ酸を意味し、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド及びペプチドを含む。タンパク質は、天然のアミノ酸及びペプチド結合、又は合成ペプチド模倣構造で構成され得る。したがって、本明細書で使用される「アミノ酸」、又は「ペプチド残基」は、天然アミノ酸及び合成アミノ酸の両方を意味する。例えば、ホモ−フェニルアラニン、シトルリン及びノルロイシンは、本開示の主題の目的のためのアミノ酸と見なされる。「アミノ酸」は、プロリン及びヒドロキシプロリンなどのイミノ酸残基も含む。側鎖は、（Ｒ）又は（Ｓ）配置のいずれかであり得る。好ましい実施形態においては、アミノ酸は、（Ｓ）又はＬ配置である。非天然の側鎖が使用される場合、非アミノ酸置換基を使用して、例えばインビボ分解を防止又は遅らせることができる。酸化還元酵素のペプチド阻害剤は、特定の使用を見出す。
【０６０９】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、天然タンパク質又は天然タンパク質の断片である。したがって、例えば、タンパク質を含む細胞抽出物、又はタンパク性細胞抽出物のランダム若しくは定方向消化物を使用し得る。このように、原核生物及び真核生物のタンパク質のライブラリーを、本明細書に記載される系におけるスクリーニングのために作製することができる。本実施形態において特に好ましいのは、細菌タンパク質、真菌タンパク質、ウイルスタンパク質、及び哺乳類タンパク質のライブラリーであり、後者が好ましく、ヒトのタンパクが特に好ましい。
【０６１０】
いくつかの実施形態においては、候補薬剤は、ペプチドである。本実施形態においては、提示構造（presentation structure）を含むペプチド構築物を使用することが有用であり得る。本明細書で「提示構造」又は文法的同等物は、候補生物活性薬剤に融合した場合、候補薬剤に配座固定された形態をとらせる配列を意味する。タンパク質は、配座的に制約されたドメインを介して大いに相互に作用する。自由に回転するアミノ及びカルボキシル末端を有する小さなペプチドは、当技術分野で公知のように強力な機能を有し得るが、このようなペプチド構造の薬剤への変換は、ペプチド模倣合成のための側鎖位置を予測することができないため困難である。したがって、配座的に制約された構造におけるペプチドの提示は、薬剤の後世代のためになり、ペプチドの標的タンパク質とのより高い親和性相互作用をおそらくもたらすであろう。この事実は、組合せのライブラリー生成系において、細菌ファージ系における生物学的に生成された短ペプチドを使用して確認されている。多くの研究者が、ランダムペプチド構造を示すこともあり得る小ドメイン分子を構成している。好ましい提示構造は、外部ループにそれを示すことによってペプチドへのアクセシビリティを最大化する。したがって、適切な提示構造には、それだけには限らないが、小体構造（minibody structure）、構造に重要な影響のない残基がランダム化されたβシートターン上のループ及びコイルドコイルステム構造、亜鉛フィンガードメイン、システイン結合（ジスルフィド）構造、トランスグルタミナーゼ連結構造、環状ペプチド、Ｂループ構造、ヘリカルバレル又はバンドル、ロイシンジッパーモチーフなどが含まれる。その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，１５３，３８０号明細書を参照されたい。
【０６１１】
スクリーニングアッセイにおいて特に有用なのは、ファージディスプレイライブラリーであり、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；５，４０３，４８４号；５，５７１，６９８号；及び５，８３７，５００号明細書（これらのすべては、ファージディスプレイ及び構築物についてのそれらの全体が参照により明確に組み込まれている）を参照されたい。
【０６１２】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、約５〜約３０個のアミノ酸のペプチドであり、約５〜約２０個のアミノ酸が好ましく、約７〜約１５個が特に好ましい。ペプチドは、上記に概略が記載された天然タンパク質、ランダムペプチド、又は「偏った」ランダムペプチドの消化物であり得る。本明細書で「ランダム化」又は文法的同等物は、それぞれの核酸及びペプチドが、本質的にそれぞれランダムなヌクレオチド及びアミノ酸からなることを意味する。一般的に、これらのランダムペプチド（又は核酸、以下に論じられる）は、化学的に合成されるため、これらは、任意のヌクレオチド又はアミノ酸を任意の位置に組み込み得る。合成プロセスは、ランダム化タンパク質又は核酸を生成して、配列の長さにわたって可能な組合せのすべて又は大部分の形成が可能になるよう設計して、ランダム化ターゲティング部分のライブラリーを形成することができる。
【０６１３】
一実施形態においては、ライブラリーは、いずれの位置においても配列優先性又は定常性を有さず完全にランダム化される。好ましい実施形態においては、ライブラリーは、偏向している。即ち、配列内のいくつかの位置は、一定に維持されるか、又は限定された数の可能性から選択される。例えば、好ましい実施形態においては、ヌクレオチド又はアミノ酸残基は、決められたクラス、例えば、疎水性アミノ酸、親水性残基、立体的に偏った（小さいか又は大きい）残基のクラス、システインの産生に向けたクラス、架橋についてのクラス、ＳＨ−３ドメインのプロリンのクラス、リン酸化部位のセリン、トレオニン、チロシン又はヒスチジンのクラスなど、又はプリンのクラスなどの範囲内でランダム化される。
【０６１４】
好ましい実施形態においては、以下により完全に概略が記載されるように、候補薬剤は、ランダム化タンパク質（偏ったタンパク質又は融合パートナーを含むタンパク質を含む）又はｃＤＮＡライブラリー若しくは断片化されたものなどのｃＤＮＡライブラリー由来のライブラリーの発現産物（ランダムに断片化されたｃＤＮＡライブラリーを含む）のいずれかである。これらは、これらのタンパク質をコードする核酸として細胞に添加される。当業者には理解されるように、これらのｃＤＮＡライブラリーは、全長であるか断片であってよく、フレーム内、フレーム外であってよく、又はアンチセンス鎖から読める。
【０６１５】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は抗体である。用語「抗体」は、全体の抗体の修飾によって生成されたか、組換えＤＮＡ技術を用いて新たに合成された、Ｆａｂ  Ｆａｂ２、一本鎖抗体（例えばＦｖ）、キメラ抗体などを含む当技術分野で公知である抗体断片を含む。
【０６１６】
好ましい実施形態においては、本開示の主題の抗体ターゲティング部分は、ヒト化抗体又はヒト抗体である。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンから導かれた最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合性サブ配列などの）である。ヒト化抗体には、受容者の相補性決定領域（ＣＤＲ，complementary determining region）からの残基が、所望の特異性、親和性及び容量を有する、マウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置き換えられるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。任意選択で、ヒト免疫グロブリンのＦｖ骨格残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも導入されたＣＤＲ又は骨格配列中にも見出せない残基も含み得る。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべて又は実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ領域のすべて又は実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである、少なくとも１つ、典型的に２つの可変領域の実質的にすべてを含む。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン不変領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。［Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988)；及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992)］。
【０６１７】
非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野で公知である。一般的に、ヒト化抗体は、ヒトではないソースからその中に導入された１又は複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「インポート」残基と呼ばれ、これは、典型的には、「インポート」可変領域から取られている。ヒト化は、齧歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列で置換することによって、Winter及び共同研究者の方法［Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)］に従って本質的に実施し得る。したがって、このような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体（その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第４，８１６，５６７号明細書）であり、ここで、損なわれていないヒト可変領域を実質的に下回るものが、非ヒト種からの対応する配列で置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくらかのＣＤＲ残基及び任意選択でいくらかのＦＲ残基が、齧歯類抗体中の類似部位からの残基で置換されているヒト抗体である。
【０６１８】
ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー［Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581 (1991)］を含めた当技術分野で公知の種々の技術も使用して生成し得る。Coleら、及びBoernerらの技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である［Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)及びBoerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95 (1991)］。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を形質転換動物、例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が、部分的に又は完全に不活性化されているマウスに導入することによって作製し得る。課題に際しては、遺伝子再構成、アセンブリ、及び抗体レパートリーを含めたすべての点でヒトに見られるものに酷似しているヒト抗体の生成を観察する。この手法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；５，５４５，８０６号；５，５６９，８２５号；５，６２５，１２６号；５，６３３，４２５号；５，６６１，０１６号明細書、及び次の科学刊行物：Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature, 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature, 368: 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995)に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０６１９】
二重特異性抗体は、少なくとも２種の異なる抗原への結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒト抗体又はヒト化抗体である。この場合、結合特異性の１つは、第１の標的分子に対してであり、もう１つは、第２の標的分子に対してである。
【０６２０】
二重特異性抗体を作製する方法は、当技術分野で公知である。伝統的に、二重特異性抗体の組換え生成は、２種の免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、２つの重鎖は、異なる特異性を有する［Milstein and Cuello, Nature, 305: 537-539 (1983)］。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな組合せのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、これらのうち１種のみが、正しい二重特異構造を有する。正しい分子の精製は、親和性クロマトグラフィー段階によって通常達成される。同様な手順は、１９９３年５月１３日に公開された国際公開第９３／０８８２９号パンフレット及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655-3659 (1991)に開示されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０６２１】
所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変領域は、免疫グロブリン不変領域配列に融合させ得る。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖不変領域との融合である。融合の少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖不変領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合、及び、必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、別々の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時トランスフェクトする。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121: 210 (1986)を参照されたい。
【０６２２】
ヘテロコンジュゲート抗体も本開示の主題の範囲に含まれる。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に導くこと［米国特許第４，６７６，９８０号明細書］、及びＨＩＶ感染の治療に提案されており［国際公開第９１／００３６０号；第９２／２００３７３号パンフレット；欧州特許第０３０８９号明細書］、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。抗体は、架橋剤を関与させるものを含めた合成タンパク質化学反応における既知の方法を使用してインビトロで調製し得ることが検討される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いるか又はチオエーテル結合を形成することによって構成し得る。この目的に適する試薬の例には、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデート及び、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第４，６７６，９８０号明細書に開示されたものが含まれる。
【０６２３】
好ましい実施形態においては、候補生物活性剤は、核酸である。本明細書で「核酸」又は「オリゴヌクレオチド」又は文法的同等物は、一緒に共有結合した少なくとも２個のヌクレオチドを意味する。本開示の主題の核酸は、一般的にリン酸ジエステル結合を含むが、場合によっては、以下に概略が記載されるように、核酸類似体が含まれ、これは、例えば、ホスホルアミド（Beaucage, et al., Tetrahedron, 49(10): 1925 (1993)及びその中の文献; Letsinger, J. Org. Chem., 35: 3800 (1970); Sprinzl, et al., Eur. J. Biochem., 81: 579 (1977); Letsinger, et al., Nucl. Acids Res., 14: 3487 (1986); Sawai, et al., Chem. Lett., 805 (1984), Letsinger, et al., J. Am. Chem. Soc., 110: 4470 (1988)；及びPauwels, et al., Chemica Scripta, 26: 141 (1986))、ホスホロチオエート (Mag, et al., Nucleic Acids Res., 19: 1437 (1991)；及び米国特許第５，６４４，０４８号明細書）、ホスホロジチオエート(Briu, et al., J. Am. Chem. Soc., 111: 2321 (1989))、Ｏ−メチルホスホロアミダイト結合(Eckstein, Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, Oxford University Pressを参照されたい）、及びペプチド核酸骨格及び結合 (Egholm, J. Am. Chem. Soc., 114: 1895 (1992); Meier, et al., Chem. Int. Ed. Engl., 31: 1008 (1992); Nielsen, Nature, 365: 566 (1993); Carlsson, et al., Nature, 380: 207 (1996)を参照されたく、これらのすべては、参照により組み込まれている）を含む代わりの骨格を有し得る。他の核酸類似体には、正の骨格（Denpcy, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 6097 (1995)）；非イオン性骨格（米国特許第５，３８６，０２３号；５，６３７，６８４号；５，６０２，２４０号；５，２１６，１４１号；及び４，４６９，８６３号明細書；Kiedrowshi, et al., Angew. Chem. Intl. Ed. English, 30: 423 (1991); Letsinger, et al., J. Am. Chem. Soc., 110: 4470 (1988); Letsinger, et al., Nucleoside & Nucleotide, 13: 1597 (1994); Chapters 2 and 3, ASC Symposium Series 580, "Carbohydrate Modifications in Antisense Research", Ed. Y.S. Sanghui and P. Dan Cook; Mesmaeker, et al., Bioorganic & Medicinal Chem. Lett., 4: 395 (1994); Jeffs, et al., J. Biomolecular NMR, 34: 17 (1994); Tetrahedron Lett., 37: 743 (1996)）並びに米国特許第５，２３５，０３３号及び５，０３４，５０６号明細書、及びChapters 6 and 7, ASC Symposium Series 580, "Carbohydrate Modifications in Antisense Research", Ed. Y.S. Sanghui and P. Dan Cook, and peptide nucleic acidsに記載されたものを含めた非リボース骨格を有するものが含まれる。１又は複数の炭素環状糖を含む核酸も核酸の定義に含まれる（Jenkins, et al., Chem. Soc. Rev., (1995) pp. 169-176を参照されたい）。いくつかの核酸類似体は、Rawls, C&E News, June 2, 1997, page 35に記載されており、これらのすべては、参照により本明細書に明確に組み込まれている。リボース−リン酸骨格の修飾をして、標識などの追加の部分の付加を促進するか、又は生理環境においてこのような分子の安定性及び半減期を増加させることができる。さらに、天然核酸及び類似体の混合物を作製し得る。別法として、異なる核酸類似体、並びに天然核酸及び類似体の混合物の混合物を作製し得る。核酸は、指定に応じて、一本鎖又は二本鎖であってよく、又は二本鎖若しくは一本鎖配列の両方の部分を含み得る。核酸は、ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ及び相補的ＤＮＡの両方、ＲＮＡ又はハイブリッドであってよく、この核酸は、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドの任意の組合せ、並びに塩基の任意の組合せを含み、これらの塩基は、ウラシル、アデニン、チミン、シトシン���グアニン、イノシン、キササナイン（xathanine）、ハイポキササナイン（hypoxathanine）、イソシトシン、イソグアニン、４−アセチルシトシン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデノシン、アジリジニルシトシン、シュードイソシトシン（pseudoisocytosine）、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチル−アミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルシュードウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン（beta-D-mannosylqueosine）、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、オキシブトキソシン（oxybutoxosine）、シュードウラシル、クエオシン（queosine）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、シュードウラシル、クエオシン、２−チオシトシン、及び２，６−ジアミノプリンなどを含む。
【０６２４】
一実施形態においては、核酸は、アプタマーであり、米国特許第５，２７０，１６３号、５，４７５，０９６号、５，５６７，５８８号、５，５９５，８７７号、５，６３７，４５９号、５，６８３，８６７号、５，７０５，３３７号明細書、及び関連特許を参照されたく、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０６２５】
ヌクレオシド（リボースと塩基）及びヌクレオチド（リボース、塩基及び少なくとも１つのリン酸）は、他に指示のない限り、本明細書では互換的に使用されることを本開示の主題の文脈において留意されたい。
【０６２６】
タンパク質について一般的に上記に記載されたように、核酸ターゲティング部分は、天然核酸、ランダム及び／又は合成核酸、又は「偏った」ランダム核酸であってよい。例えば、原核生物のゲノム又は真核生物のゲノムの消化物は、タンパク質について上記に概略が記載されたように使用し得る。
【０６２７】
好ましい実施形態においては、様々なターゲティング部分のライブラリーが使用される。好ましくは、ライブラリーは、ランダム化薬剤の十分に構造的に多様な集団を提供して、特定の標的への結合を可能にする多様性の確率的に十分な範囲をもたらすべきである。したがって、相互作用ライブラリーは、そのメンバーの少なくとも１つが、標的への親和性をそれに付与する構造を有するように十分大きくあるべきである。相互作用ライブラリーの求められる絶対的なサイズを評価するのは難しいが、自然が、免疫応答にヒントを提供している。１０７〜１０８の様々な抗体の多様性は、生物が直面している最も潜在的な抗原と相互に作用するために十分な親和性を有する少なくとも１つの組合せを提供する。公開されたインビトロ選択技術も、１０７〜１０８のライブラリーサイズは、標的への親和性を有する構造を見出すのに十分であることを示している。本明細書で一般的に提案されたものなどの、長さが７〜２０アミノ酸のペプチドのすべての組合せのライブラリーは、２０７（１０９）〜２０２０をコードする潜在性を有する。したがって、１０７〜１０８の異なる分子のライブラリーを用いて、本方法は、７アミノ酸に理論的に完全な相互作用ライブラリーの「作業」サブセットを可能にし、２０２０ライブラリーに形状のサブセットを可能にする。したがって、好ましい実施形態においては、少なくとも１０６、好ましくは少なくとも１０７、より好ましくは少なくとも１０８及び最も好ましくは少なくとも１０９の異なる配列が、本方法において同時に分析される。好ましい方法によって、ライブラリーのサイズ及び多様性が最大化される。
【０６２８】
発現され精製された後、必要に応じて、酸化還元酵素タンパク質を、酸化還元酵素タンパク質に結合し酸化還元酵素活性を阻害する、金属結合部分及びターゲティング部分を含む酸化還元酵素候補阻害剤の確認のためのスクリーニングアッセイで使用する。
【０６２９】
好ましい実施形態においては、ターゲティング部分を、その所望の性質について本明細書で概略が記載された候補薬剤を用いて最初にスクリーニングし、次いで本開示の主題において提供される方法を用いて、金属結合部分と結合させてさらなるスクリーニング用の酸化還元酵素候補阻害剤を形成する。
【０６３０】
別の好ましい実施形態においては、ターゲティング部分は、予めスクリーニングしない。ターゲティング部分を、金属結合部分に結合させ、次いで、本開示の主題において提供される方法を用いるスクリーニングのために使用する。
【０６３１】
ターゲティング部分を、薬剤と標的の相互作用に有利である反応条件下で酸化還元酵素タンパク質と接触させる。一般的に、これは、生理的条件であろう。インキュベーションは、最適な活性を促進する任意の温度で、典型的には４℃〜４０℃の間で実施し得る。インキュベーション期間は、最適な活性について選択されるが、高速の大量処理スクリーニングを促進するよう最適化することもできる。典型的には、０．１〜１時間の間が、十分であろう。固相アッセイの場合、過剰な試薬は、一般的に除去又は洗い落とされる。アッセイの構成は、以下に論じられる。
【０６３２】
様々な他の試薬が、アッセイに含まれ得る。これらには、塩、中性タンパク質（例えば、アルブミン）、界面活性剤などのような試薬が含まれ、これらは、最適な酸化還元酵素タンパク質とターゲティング部分の結合を促進し、且つ／又は非特異的又は背景的相互作用を減少させるために使用し得る。プロテアーゼ阻害剤、ヌクレアーゼ阻害剤、抗菌剤などのアッセイの効率を別の方法で改善する試薬も使用し得る。成分の混合物は、必要な結合を提供するいずれの順序でも添加し得る。
【０６３３】
一実施形態においては、液相結合アッセイが行われる。一般的に、本実施形態においては、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ，fluorescence resonance energy transfer）アッセイが、重複スペクトルを有する様々な蛍光体でターゲティング部分及び酸化還元酵素タンパク質の両方を標識化することによって行われる。エネルギー移動は、距離に依存するため、結合が存在しない場合、１波長における励起は、発光スペクトルを生じない。２つの標識が近接する場合に限り、例えば、結合が起きている場合、１波長における励起が、第２の標識の所望の発光スペクトルをもたらすであろう。
【０６３４】
いくつかの実施形態においては、固相（不均一）アッセイが行われる。この場合、酸化還元酵素タンパク質又はターゲティング部分のいずれかが、不溶性固体支持体に不拡散的に結合しており、以下に記載される標識化された他の成分を添加することによって検知が行われる結合アッセイが行われる。
【０６３５】
不溶性支持体は、組成物が結合し得る任意の組成物で作製することができ、可溶性物質から容易に分離され、スクリーニングの全体の方法に別に適合する。このような支持体の表面は、中実又は多孔質であってよく、任意の好都合な形状であってよい。適切な支持体の例には、マイクロタイタープレート、アレイ、膜及びビーズが含まれ、それだけには限らないが、ガラス及び改変された又は機能化されたガラス、プラスチック（アクリル、ポリスチレン及びスチレン及び他の材料のコポリマー、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリブチレン、ポリウレタン、Teflonなどを含む）、多糖、ナイロン又はニトロセルロース、樹脂、ケイ素及び改変されたケイ素を含むシリカ又はシリカに基づく材料、炭素、金属、無機ガラス、プラスチック、セラミック、及び種々の他のポリマーが含まれる。いくつかの実施形態においては、固体支持体は、光学検知を可能にし、それら自体は感知できるほどには蛍光を発しない。さらに、当技術分野で公知のように、固体支持体は、デキストラン、アクリルアミド、ゼラチン、アガロースなどのポリマーを含めた任意の数の材料でコーティングし得る。例示的な固体支持体には、ケイ素、ガラス、ポリスチレン及び他のプラスチック及びアクリルが含まれる。マイクロタイタープレート及びアレイは、多数のアッセイが、少量の試薬及び試料を使用して同時に実施できるので、とりわけ好都合である。組成物の結合の特定の方法は、本開示の主題の試薬及び全体の方法と適合し、組成物の活性を維持し、不拡散性である限り、非常に重要ではない。
【０６３６】
好ましい実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質は、支持体に結合しており、ターゲティング部分のライブラリーがアッセイに添加される。別法として、ターゲティング部分は、支持体に結合しており、酸化還元酵素タンパク質が添加される。固体支持体との結合は、公知の方法を用いて達成され、結合される２つの材料の組成によって決まる。一般的に、共有結合については、次いで結合のために使用できるそれぞれの成分上の官能基の使用によって、結合リンカーが使用される。結合のための好ましい官能基は、アミノ基、カルボキシ基、オキソ基、ヒドロキシル基及びチオール基である。これらの官能基は、次いで、直接又はリンカーの使用により間接的に結合し得る。リンカーは、当技術分野で公知であり；例えば、ホモ又はヘテロ−二官能性リンカーは、公知である（参照により本明細書に組み込まれている1994 Pierce Chemical Company catalog, technical section on cross-linkers, pages 155-200を参照されたい）。いくつかの実施形態においては、吸収又はイオン相互作用が使用される。場合によっては、小分子候補薬剤は、例えば、ミクロスフェア上に直接合成され、これは、次いで、本開示の主題のアッセイに使用し得る。
【０６３７】
タンパク質又はターゲティング部分の結合の後、過剰な未結合物質は、洗浄により除去する。表面を、次いで、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ，bovine serum albumin）、カゼイン又は他の無毒のタンパク質又は他の部分とのインキュベーションにより遮断し得る。
【０６３８】
結合アッセイにおいては、酸化還元酵素タンパク質、ターゲティング部分（又は、場合によっては、金属結合部分、又は以下に記載される酸化還元酵素の基質）のいずれかが、標識化される。本明細書で「標識化された」は、検知可能なシグナルを提供する標識、例えば、放射性同位体、蛍光体（fluorescer）、酵素、抗体、磁性粒子などの粒子、化学発光物質（chemiluminescer）、又は特異的な結合分子などで直接又は間接のいずれかで化合物が標識化されることを意味する。特異的な結合分子には、ビオチン及びストレプトアビジン、ジゴキシン及び抗ジゴキシンなどのペアが含まれる。特異的な結合メンバーについては、補完的メンバーが、通常、上記に概略が記載された既知の手順に従って、検知を提供する分子で標識化される。標識は、直接又は間接的に検知可能なシグナルを提供する。
【０６３９】
特異的な標識には、それだけには限らないが、発色団、リン光体及び蛍光体を含めた光学色素が含まれ、後者が、多くの場合で特異的である。蛍光体は、「小分子」フルオレ（fluores）、又は上記に記載されたタンパク性フルオレのいずれかが含まれ得る。標識化された金属ドナー（例えば、金属結合成分）は、本明細書で記載された金属イオンを放出するときに分光学的変化を受ける化学プローブ（Zinquin又はZinbo5などの）であってよい。
【０６４０】
「蛍光標識」は、その固有の蛍光特性によって検知し得る任意の分子を意味する。適切な蛍光標識には、それだけには限らないが、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリトロシン、クマリン、メチルクマリン、ピレン、マラカイトグリーン、スチルベン、ルシファーイエロー、Cascade BlueJ、テキサスレッド、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC Red 640、Cy 5、Cy 5.5、LC Red 705、オレゴングリーン、Alexa-Fluor dyes （Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680）、カスケードブルー、カスケードイエロー及びＲ−フィコエリトリン（ＰＥ，phycoerythrin）（Molecular Probes社製, Eugene, OR）、FITC、ローダミン、及びテキサスレッド（Pierce社製, Rockford, IL）、Cy5、Cy5.5、Cy7（Amersham Life Science社製, Pittsburgh, PA）が含まれる。蛍光体を含めた適切な光学色素は、参照により本明細書に明確に組み込まれているMolecular Probes Handbook by Richard P. Hauglandに記載されている。
【０６４１】
一実施形態においては、酸化還元酵素タンパク質を支持体に結合し、標識化したターゲティング部分を付加し、過剰な試薬を洗い落とし、標識が固体支持体上に存在するかを決定する。当技術分野で公知の種々の遮断及び洗浄ステップを使用し得る。
【０６４２】
一実施形態においては、ターゲティング部分を、支持体に固定し、標識化した酸化還元酵素タンパク質を付加して結合性を決定する。
【０６４３】
活性アッセイは、当技術分野で公知であるように行われる。
【０６４４】
一実施形態においては、本明細書で概略が記載されるアッセイのいずれもハイスループットスクリーニング用のロボットシステムを使用し得る。多くのシステムは、９６（又はそれを上回る）ウェルマイクロタイタープレートの使用を一般的に対象としているが、当業者には理解されるように、任意の数の種々のプレート又は形態を使用し得る。さらに、本明細書で概略が記載される任意又はすべてのステップは、自動化することができ、したがって、例えば、システムは、完全に又は部分的に自動化することができる。
【０６４５】
当業者には理解されるように、使用し得る多種多様な構成部品があり、これらには、それだけには限らないが、１又は複数のロボットアーム；マイクロプレートの位置決めのためのプレートハンドラー；非二次汚染プレート上のウェル用の蓋を取り外し及び元に戻す自動蓋ハンドラー；使い捨てチップ付き試料分配用チップアセンブリ；試料分配用洗浄可能チップアセンブリ；９６ウェルローディングブロック（96 well loading block）；冷却試薬ラック；マイクロタイタープレートピペットポジション（microtitler plate pipette position）（冷却してもよい）；プレート及びチップ用積み重ねタワー；及びコンピューターシステムが含まれる。
【０６４６】
完全ロボット又はマイクロ流体システムは、スクリーニング用途のすべてのステップを行うための高速大量処理ピペット操作を含めた自動化液体−、粒子−、細胞−及び生物−ハンドリングを含む。これは、吸引、分注、混合、希釈、洗浄、正確な容量移送；ピペットチップの回収、及び廃棄；単一の試料吸引から多数送り出すための同一容量の反復ピペット操作などの液体、粒子、細胞、及び生物の操作を含む。これらの操作は、二次汚染防止の液体、粒子、細胞、及び生物の移送である。この装置は、マイクロプレート試料のフィルター、膜、及び／又は娘プレートへの自動化複製、高密度移送、完全プレート連続希釈、並びに大容量操作を行う。
【０６４７】
好ましい実施形態においては、化学的に誘導体化された粒子、プレート、チューブ、磁性粒子、又はアッセイ成分への特異性を有する他の固相マトリックスが使用される。マイクロプレート、チューブ又は任意の固相マトリックスの結合表面には、非極性表面、高度な極性表面、共有結合を促進するための改変デキストランコーティング、抗体コーティング、融合タンパク質又はペプチドに結合するための親和性媒体、組換えタンパクＡ又はＧなどの表面固定タンパク質、ヌクレオチド樹脂又はコーティング、及び本開示の主題において有用な他の親和性マトリックスが含まれる。
【０６４８】
好ましい実施形態においては、マルチウェルプレート、マルチチューブ、ミニチューブ、ディープウェルプレート、マイクロヒュージチューブ（microfuge tube）、クリオバイアル（cryovial）、スクウェアウェルプレート、フィルター、チップ、光ファイバー、ビーズ、及び他の固相マトリックス用のプラットホーム或いは種々の容量を有するプラットホームが、追加の容量のためのアップグレイダブルモジュラープラットホーム（upgradable modular platform）上に提供される。このモジュラープラットホームには、可変速度軌道シェーカー、エレクトロポレーター（electroporator）、及びソース試料用の多位置作業デッキ、試料及び試薬希釈、アッセイプレート、試料及び試薬リザバー、ピペットチップ、及び活性洗浄ステーションが含まれる。
【０６４９】
好ましい実施形態においては、サーモサイクラー（thermocycler）及び温度調節システムが、コントロールドブロック（controlled block）又はプラットホームなどの熱交換器の温度を安定させるために使用されて４℃〜１００℃の培養試料の正確な温度制御が提供される。
【０６５０】
いくつかの好ましい実施形態においては、装置は、検知器を含み、これは、標識及びアッセイに応じて多種多様な異なる検知器であり得る。好ましい実施形態においては、有用な検知器には、多チャンネルの蛍光を備える顕微鏡；単一及び二重波長エンドポイント及び動態能力、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ＳＰＲシステム、ルミネッセンス、クエンチング、二光子励起、及び強度再分配を備える、蛍光、紫外線及び可視光線の分光光度検出を提供するプレートリーダー；データ及び画像を捕捉し定量化可能なフォーマットに変換するＣＣＤカメラ；及びコンピューターワークステーションが含まれる。これらは、細胞、組織、及び生物上の特異的マーカーのサイズ、成長及び表現型発現のモニターリング；標的バリデーション；リード最適化；公開及び特許データベースを用いるハイスループットスクリーニングのデータ分析、検索、編成、及び統合を可能にする。
【０６５１】
これらの装置は、無菌の層流又はドラフトに適合することができ、必要に応じて密閉された自給システムである。フローサイトメトリ又はキャピラリー電気泳動フォーマットを、磁性及び他のビーズ、粒子、細胞、及び生物の個々の捕獲用に使用し得る。
【０６５２】
柔軟なハードウェア及びソフトウェアによって、多数用途への装置の適合性が可能になる。ソフトウェアプログラムモジュール（software program module）によって、方法の作成、改変、及び操作が可能になる。システム診断モジュール（system diagnostic module）によって、装置の配置、正しい接続、及び電動操作が可能になる。特製のツール、実験機器、及び液体、粒子、細胞及び生物移送パターンによって、様々な用途が実施可能になる。データベースによって、方法及びパラメーターの蓄積が可能になる。ロボット及びコンピューターのインターフェースによって、装置間の通信が可能になる。
【０６５３】
好ましい実施形態においては、ロボットワークステーションには、１又は複数の加熱又は冷却部品が含まれる。反応及び試薬に応じて、冷却又は加熱のいずれかを必要とすることができ、これは、Peltier システムを含めた任意の数の既知の加熱及び冷却システムを使用することによって行うことができる。
【０６５４】
好ましい実施形態においては、ロボット装置には、バスを介してメモリー及び入出力装置一式（例えば、キーボード、マウス、モニター、プリンターなど）と通信する中央演算処理装置が含まれる。中央演算処理装置、メモリー、入出力装置、及びバス間の一般的な相互作用は、当技術分野で公知である。したがって、行う実験に応じた様々な異なる手順が、ＣＰＵメモリーに格納される。
【０６５５】
したがって、いくつかの実施形態においては、本開示の主題は、金属酸化還元酵素の阻害剤をスクリーニングする方法を提供し、この方法は、（ａ）（ｉ）ターゲティング部分；（ii）金属結合部分；及び（iii）場合によってリンカーを含む候補阻害剤を提供すること；（ｂ）阻害剤候補を金属酸化還元酵素と接触させること；（ｃ）金属酸化還元酵素の活性を決定することを含む。
【０６５６】
本明細書で以下により詳細が記載されるように、いくつかの実施形態においては、ターゲティング部分はラノステロールを含み、金属酸化還元酵素はラノステロールデメチラーゼである。いくつかの実施形態においては、ラノステロールはラノステロール誘導体である。他の実施形態においては、ターゲティング部分はタンパク質を含む。いくつかの実施形態においては、タンパク質はペプチドである。
【０６５７】
いくつかの実施形態においては、金属結合部分は、鉄の金属結合部分である。いくつかの実施形態においては、金属結合部分は、図１〜１５に示す金属結合部分からなる群から選択される。
【０６５８】
いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素は、ラノステロールデメチラーゼである。いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼは、哺乳類のラノステロールデメチラーゼである。いくつかの実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼは、ヒトのラノステロールデメチラーゼであるが、他の実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼは、酵母のラノステロールデメチラーゼである。ラノステロールデメチラーゼは、変異ラノステロールデメチラーゼを含み得る。
【０６５９】
いくつかの実施形態においては、複数の異なる候補阻害剤を、ラノステロールデメチラーゼと接触させる。いくつかの実施形態においては、活性の決定は、ラノステロールデメチラーゼ酵素の基質を測定することによって達成し得る。いくつかの実施形態においては、基質は、ラノステロール又はラノステロール誘導体である。
【０６６０】
本開示のスクリーニング方法のいくつかの実施形態においては、活性の決定は、少なくとも１つのステップによる基質の加水分解から得られる生成物を測定することによって行われる。いくつかの実施形態においては、生成物は、１４−脱メチル化代謝物又はその誘導体である。
【０６６１】
他の実施形態においては、活性の決定は、２つ以上のステップによる基質の脱メチル化から得られる生成物を測定することによって行われる。いくつかの実施形態においては、生成物は、１４−脱メチル化代謝物誘導体である。
【０６６２】
Ｂ．ラノステロールデメチラーゼ阻害剤のスクリーニング
本明細書で直前に示したように、一実施形態においては、スクリーニングは、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤のラノステロールデメチラーゼ酵素活性を阻害する能力を直接評価することによって行われる。ラノステロールデメチラーゼ酵素の活性を評価するのに使用し得る種々のアッセイが存在する。例えば、参照により本明細書に組み込まれているYamashita et al., 128: 93-99 (2000)を参照されたい。
【０６６３】
いくつかの実施形態においては、生物活性アッセイは、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤が、ラノステロールデメチラーゼ酵素の生物活性を阻害するか試験するために行われる。結合アッセイについては、活性アッセイは、溶液に基づくか、又は固体支持体上に固定された成分の使用に依存し得る。この場合、生物活性アッセイは、ラノステロールデメチラーゼ酵素の生物活性によって決まり、それに応じて行われる。したがって、例えば、それだけには限らないが、ラノステロール又はその誘導体を含めた多種多様な一般的に市販されている基質を用いるラノステロールデメチラーゼ酵素活性アッセイは公知である。一般的に、複数のアッセイの組合せが、様々なラノステロールデメチラーゼ阻害剤候補の濃度で並行して行われて様々な濃度に対する差別的反応が得られる。典型的には、これらの濃度の１つは、陰性対照（即ち、ゼロの濃度又は検知のレベル未満における）として役立つ。
【０６６４】
一実施形態においては、この方法は、候補阻害剤をラノステロールデメチラーゼ酵素と接触させることを含む。候補阻害剤及びラノステロールデメチラーゼ酵素は、同時に又は逐次的に添加し得る。
【０６６５】
一実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素は、ラノステロールデメチラーゼ酵素を発現している細胞株によって発現された野生型である。別の好ましい実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素は、全体のラノステロールデメチラーゼ遺伝子又はその部分を担持しており、宿主細胞に形質転換され又は伝達され、宿主細胞の染色体に組み込まれ又は組み込まれていない組換えベクターからも発現することができる。ラノステロールデメチラーゼ酵素が、宿主細胞からの組換えタンパク質として生成される場合、それらは、細胞内に留まるか、又は細胞の外に分泌され得る。
【０６６６】
一実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素は、精製されない。
【０６６７】
別の実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素は、精製されるか、又は部分的に精製される。
【０６６８】
一実施形態においては、アッセイは、酵母又は哺乳類の細胞からのラノステロールを含むミクロソームを使用して行われる。
【０６６９】
一実施形態においては、基質はミセル中に含まれている。
【０６７０】
他の実施形態においては、アッセイは、ＮＡＰＤＨを含み、これは、ＮＡＰＤＨとして又はＮＡＰＤＨ生成系などのソースによって提供され得る。
【０６７１】
一実施形態においては、アッセイは、好気的に実施される。アッセイは、分子酸素を含む。それは、遊離酸素であるか、又は分子酸素生成系などのソースによって提供され得る。
【０６７２】
一実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ活性のアッセイは、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤を、ラノステロールデメチラーゼ酵素を発現している細胞培養物に添加することによって行われる。
【０６７３】
別の実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ活性のアッセイは、インビトロでラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤を、精製されたラノステロールデメチラーゼ酵素と混合することによって行われる。
【０６７４】
種々の他の試薬をスクリーニングアッセイに含み得る。これらには、塩、中性タンパク質、例えば、アルブミン、界面活性剤などのような試薬が含まれ、これらは、最適なラノステロールデメチラーゼ酵素活性を促進し、且つ／又は非特異的若しくは背景作用を減少させるのに使用し得る。同様に、プロテアーゼ阻害剤、ヌクレアーゼ阻害剤、抗菌剤などの別の方法でアッセイの効率を改善する試薬を使用し得る。成分の混合物は、必要なアッセイを提供する任意の順序で添加し得る。
【０６７５】
陽性対照及び陰性対照をアッセイに使用し得る。すべての対照及び試験試料は、統計的に有意な結果を得るために少なくとも３通り実施されることが好ましい。すべての試料のインキュベーションは、ラノステロールデメチラーゼ酵素が作用するのに十分な時間行われる。インキュベーション後、すべての反応を、ＥＤＴＡ又は他の界面活性剤などの反応停止剤を添加してラノステロールデメチラーゼ酵素を不活性化することによって停止する。加熱などの他の方法もラノステロールデメチラーゼ酵素を不活性化するために使用し得る。
【０６７６】
一実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素基質は、ラノステロールデメチラーゼ酵素及び／又はラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤と接触させる。
【０６７７】
別の実施形態においては、試験アッセイについては、ラノステロールデメチラーゼ酵素及びラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤を、好ましくは予備インキュベーション後に最初に接触させ、次いで、基質と接触させ；対照アッセイについては、ラノステロールデメチラーゼ酵素を、基質と直接に接触させる。別の好ましい実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤を、最初に基質と接触させ、次いで、ラノステロールデメチラーゼ酵素と接触させ；対照アッセイについては、基質を、ラノステロールデメチラーゼ酵素と直接に接触させる。
【０６７８】
好ましい実施形態においては、「陽性対照」及び／又は「陰性対照」は、アッセイの信頼性及び品質を制御するために使用し得る。陽性対照は、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤が、既知のラノステロールデメチラーゼ阻害剤によって置き換えられていることを除いて、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤の効果を試験するためのアッセイと本質的に同一のアッセイである。１つの既知のラノステロールデメチラーゼ特異性阻害剤は、フルコナゾールである。陰性対照は、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤が、既知のラノステロールデメチラーゼ非阻害剤によって置き換えられていることを除いて、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤の効果を試験するためのアッセイと本質的に同一のアッセイである。別の好ましい実施形態においては、複数の陽性対照及び／又は陰性対照が使用される。
【０６７９】
ラノステロールデメチラーゼ酵素の活性は、基質を触媒するそれらの能力によって測定し得る。本明細書で「基質」は、ラノステロールデメチラーゼ酵素が、それに対して作用し得る分子を意味する。基質を、ラノステロールデメチラーゼ酵素と接触させる場合、ラノステロールデメチラーゼは、基質にいくらかの変化を一般的にもたらすか、好ましくは、基質を異なる分子に変換する、基質が関与する化学反応を触媒する。したがって、ラノステロールデメチラーゼ酵素がそれに対して作用し得る任意の分子が基質であり、選択的に作用することが好ましい。１つの既知のラノステロールデメチラーゼ特異性基質は、ラノステロールである。化学的又は生物学的改変によるラノステロールの多くの誘導体も特異性基質であり、本開示の主題に適し得る。基質は、ラノステロール、ラノステロール誘導体、又はラノステロール類似体であり得る。好ましい実施形態においては、基質は、ラノステロールである。
【０６８０】
一実施形態においては、ラノステロール又はその誘導体の１つなどの基質は、直接に又は間接的に標識化されて、上記に記載された検知可能なシグナルを提供する。例えば、放射性同位体（３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、又は１２５Ｉなどの）、蛍光又は化学発光化合物（フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、又はルシフェリンなどの）、酵素（アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼなどの）、抗体、磁性粒子などの粒子、又は特異性結合分子など。特異性結合分子には、ビオチン及びストレプトアビジン、ジゴキシン及び抗ジゴキシンなどの対が含まれる。特異性結合メンバーについては、補完的メンバーが、通常、上記に概略が記載された既知の手順に従って検知を提供する分子で標識化される。標識は、直接的に又は間接的に検知可能なシグナルを提供し得る。蛍光体のより完全なリストは、ターゲティング部分の節に提供される。
【０６８１】
好ましい実施形態においては、基質は、合成ラノステロールである。
【０６８２】
別の実施形態においては、ラノステロールなどの基質は、標識されていない。
【０６８３】
ラノステロールデメチラーゼ酵素によるラノステロールの脱メチル化は、ラノステロールの減少又は脱メチル化の生成物である１４−脱メチル化代謝物の増加によって測定し得る。これは、ラノステロールデメチラーゼ酵素を、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤と接触させるアッセイ（「試験アッセイ」）及びラノステロールデメチラーゼ酵素を、ラノステロールデメチラーゼ阻害剤と接触させないアッセイ（「対照アッセイ」）を比較することによって行い得る。試験アッセイ及び対照アッセイは、本明細書で特に記載しない限り同一条件下で実施される。したがって、対照アッセイにおけるラノステロールは、対照アッセイに比較して減少するが、１４−脱メチル化代謝物又はラノステロールデメチラーゼ酵素の活性により生じる他の分子は増加する。対照的に、試験アッセイにおいては、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤の存在のため、対照アッセイにおけるラノステロールは、減少せず、酵素が作用するのを可能にする時間の後に、ラノステロールデメチラーゼ酵素による加水分解から得られる１４−脱メチル化代謝物又は他の分子は存在しない。
【０６８４】
好ましい実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素の活性は、基質の減少によって測定される。これは、ある時間の前後のアッセイ試料中の基質の量を比較することによって行い得る。
【０６８５】
好ましい実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素の活性は、ラノステロールなどの基質の減少によって測定される。これは、酵素が作用するのを可能にする時間の前後のアッセイ試料中の基質の量を比較することによって行い得る。
【０６８６】
好ましい実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素の活性は、ラノステロールデメチラーゼ酵素による脱メチル化生成物の増加によって測定される。本明細書で「脱メチル化生成物」は、ラノステロールデメチラーゼ酵素による基質の脱メチル化から得られる分子、又はラノステロールデメチラーゼ酵素による基質の加水分解後の１若しくは複数の下流反応から得られる分子を意味する。例えば、基質がラノステロールデメチラーゼである場合、脱メチル化生成物は、１４−脱メチル化代謝物、又はさらなる下流反応によって１４−脱メチル化代謝物から変換されるＮ−トリメチルシリルイミダゾールでトリメチルシリル化されたものなどの１４−脱メチル化代謝物のトリメチルシリル化誘導体である。
【０６８７】
好ましい実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素活性は、反応後のアデノシンの量によって決定される。本実施形態においては、ラノステロールデメチラーゼ酵素は、緩衝液中で、ラノステロールデメチラーゼ酵素活性に適した温度でラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤と共に、又はラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤なしにラノステロールなどの基質と共にインキュベートされる。所望の時間の後、ある時間、好ましくは３分間、１００度などの高温で加熱してラノステロールデメチラーゼ酵素を不活性化させることによって反応を停止する。試料をより低温に冷却した後、１４−脱メチル化代謝物を異なる形態に変換する第２の薬剤を添加する。好ましい実施形態においては、薬剤は、Ｎ−トリメチルシリルイミダゾールである。薬剤も酵素であり得る。適切な温度下、所望の時間、適切な緩衝液中での別のインキュベーション後、ある時間、高温で加熱することなどによって反応を停止する。次いで、１４−脱メチル代謝物のトリメチルシリル化誘導体は、存在すれば、当技術分野で公知の標準の方法を用いてラノステロール及び１４−脱メチル化代謝物から分離し得る。一実施形態においては、１４−脱メチル代謝物のトリメチルシリル化誘導体は、親和性カラムを使用してラノステロール及び１４−脱メチル化代謝物から分離される。別の実施形態においては、それらは、ガスクロマトグラフィーによって分離される。このような分離後、次いで、アデノシンの量を測定してラノステロールデメチラーゼ酵素の活性及びラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤のラノステロールデメチラーゼ酵素活性を阻害する能力を決定する。
【０６８８】
別の好ましい実施形態においては、スクリーニングは、競合的アッセイによって行う。このようなアッセイにおいては、フルコナゾールなどの既知のラノステロールデメチラーゼ阻害剤が使用される。次いで、並行アッセイにおいては、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤は、その他は同じアッセイにおいてフルコナゾールを置き換えることによってスクリーニングされる。
【０６８９】
好ましい実施形態においては、複数のラノステロールデメチラーゼ候補を、マトリックスと組み合わせて使用して混合物を形成することができ、混合物を、ラノステロールデメチラーゼ酵素活性を阻害する能力を試験するのに使用する。例えば、１００のラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤を、１０×１０マトリックスに割り当てることができ、それぞれの列及び行を混合し、ラノステロールデメチラーゼ酵素活性を阻害する能力について試験する。したがって、試験すべき合計２０試料が存在する。次いで、試験結果を、マトリックスに対してプロットし、マトリックス中の任意の二重陽性は、ラノステロールデメチラーゼ候補阻害剤のための陽性結果である。このマトリックスは、したがって、スクリーニングプロセスを迅速化し得る。このマトリックスは、３、４又は５次元などの３次元以上に拡張することもできる。
【０６９０】
一実施形態においては、候補阻害剤は、特異性について、他の酵素、特に他のＰ４５０酵素に対しても試験される。
【０６９１】
III．薬剤組成物及び治療の方法
先に論じたように、本開示の阻害剤は、酸化還元酵素の活性を阻害する。これらの活性の結果として、本開示の主題の活性化合物は、特に、酸化還元酵素活性が疾患状態にかかわる場合に活性を阻害するために種々のインビトロ、インビボ及びエキソビボ状況で使用し得る。
【０６９２】
したがって、いくつかの実施形態においては、本開示の主題は、金属酸化還元酵素を本開示の阻害剤と接触させることを含む、金属酸化還元酵素の阻害方法を提供する。いくつかの実施形態においては、金属酸化還元酵素は、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチンオキシダーゼからなる群から選択される。
【０６９３】
さらに、いくつかの実施形態においては、本開示の主題は、それを必要とする患者に本開示の阻害剤又はそれらのプロドラッグ若しくは塩の組成物を投与することを含む、金属酸化還元酵素に関連した障害の治療方法を提供する。いくつかの実施形態においては、障害は、５−リポキシゲナーゼ、１７−αヒドロキシラーゼ、アルコール脱水素酵素、アルドステロン合成酵素、アロマターゼ、シクロオキシゲナーゼ、ヘムオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、ラノステロールデメチラーゼ、酸化窒素合成酵素、レチノイン酸ヒドロキシラーゼ、血管接着タンパク質−１、及びキサンチンオキシダーゼに関連する障害から選択される。
【０６９４】
このような疾患を治療又は予防するために使用される場合、活性化合物は、単独で、１若しくは複数の活性化合物の混合物として、又はこのような疾患及び／若しくはこのような疾患に関連する症状を治療するために有用な他の薬剤との混合物若しくは併用で投与し得る。活性化合物は、他の障害を治療するのに有用な薬剤との混合物で又は併用でも投与し得る。活性化合物は、それ自体プロドラッグの形態で、又は活性化合物若しくはプロドラッグを含む薬剤組成物として投与し得る。
【０６９５】
本開示の主題の活性化合物（又はそれらのプロドラッグ）を含む薬剤組成物は、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、湿式粉砕、乳濁化、カプセル化、乳化又は凍結乾燥プロセスを用いて作製し得る。組成物は、活性化合物の薬学的に使用し得る製剤への加工を促進する、１又は複数の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤又は助剤を用いて通常の方法で製剤化し得る。
【０６９６】
活性化合物又はプロドラッグは、それ自体、薬剤組成物に、又は先に記載されたように、水和物、溶媒和物、Ｎ−酸化物若しくは薬学的に許容される塩の形態に製剤化し得る。典型的には、このような塩は、対応する遊離酸及び塩基に比べて水溶液により溶解性であるが、対応する遊離酸及び塩基に比べてより低い溶解性を有する塩も形成し得る。
【０６９７】
本開示の主題の薬剤組成物は、例えば、局所、眼内、経口、口腔、全身、経鼻、注射、経皮、直腸、膣内などを含めた事実上任意の方法の投与に適する形態、又は吸入又は吹送による投与に適する形態を取り得る。
【０６９８】
局所投与については、活性化合物又はプロドラッグを、当技術分野で公知であるように、溶液、ゲル、軟膏、クリーム、懸濁液などとして製剤化し得る。
【０６９９】
全身製剤には、注射、例えば、皮下、静脈内、筋内、くも膜下、又は腹腔内注射による投与のために設計されたもの、及び経皮、経粘膜、経口又は肺投与のために設計されたものが含まれる。
【０７００】
有用な注射製剤には、水性又は油性媒体中の活性化合物の無菌懸濁液、溶液又は乳濁液が含まれる。組成物は、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤などの製剤物質も含み得る。注射用製剤は、単位用量形態、例えば、アンプル又は多回用量容器で提供することができ、添加保存料を含むことができる。
【０７０１】
別法として、注射製剤は、使用前に、それだけには限らないが、無菌の発熱物質を含まない水、緩衝剤、デキストロース溶液などを含めた適切な媒体を用いる再構成用の粉末形態で提供し得る。この目的で、活性化合物は、凍結乾燥などの任意の当技術分野で公知の技術によって乾燥し、使用前に再構成し得る。
【０７０２】
経粘膜投与については、浸透すべきバリアに適する浸透剤が、製剤に使用される。このような浸透剤は、当技術分野で公知である。
【０７０３】
経口投与については、薬剤組成物は、結合剤（例えば、予めゼラチン化したトモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤を用いて通常の手段によって調製される、例えば、ロゼンジ、錠剤又はカプセルの形態を取り得る。錠剤は、例えば、砂糖又は腸溶コーティングを用いて当技術分野で公知の方法によってコーティングし得る。
【０７０４】
経口投与用の液体製剤は、例えば、エリキシル剤、溶液、シロップ若しくは懸濁液の形態を取ることができ、又は、使用前に水又は他の適切な媒体での構成用の乾燥製品として提供することができる。このような液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素添加食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）；非水性媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール又は分留された植物油）；及び保存料（例えば、メチル又はプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤と共に通常の手段によって調製し得る。製剤は、必要に応じて緩衝塩、保存料、着香剤、着色剤及び甘味料も含み得る。
【０７０５】
経口投与用の製剤は、公知のように、活性化合物又はプロドラッグの制御放出を得るよう適切に製剤化し得る。
【０７０６】
口腔投与については、組成物は、通常の方法で製剤化される錠剤又はロゼンジの形態を取り得る。
【０７０７】
投与の直腸及び膣経路については、活性化合物は、ココアバター又は他のグリセリドなどの通常の坐薬ベースを含む溶液（保持浣腸用）、坐薬又は軟膏として製剤化し得る。
【０７０８】
経鼻投与又は吸入若しくは吹送による投与については、活性化合物又はプロドラッグは、適切な高圧ガス、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、過フッ化炭化水素、二酸化炭素又は他の適切なガスを用いる加圧パック又は噴霧器からのエアゾールスプレーの形態で都合良く送達し得る。加圧エアゾールの場合、用量単位は、定量を供給するバルブを提供することによって決定し得る。吸入器又は吹送器における使用のためのカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンからなるカプセル及びカートリッジ）を製剤化して、化合物の粉末混合物及びラクトース又はデンプンなどの適切な粉末ベースを含むことができる。
【０７０９】
市販の経鼻スプレー器具を用いる経鼻投与に適する水性懸濁液製剤の特定の例には、次の成分：活性化合物又はプロドラッグ（０．５〜２０ｍｇ／ｍｌ）；塩化ベンザルコニウム（０．１〜０．２ｍｇ／ｍＬ）；ポリソルベート８０（TWEEN（登録商標）80；０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）；カルボキシメチルセルロースナトリウム又は微結晶セルロース（１〜１５ｍｇ／ｍｌ）；フェニルエタノール（１〜４ｍｇ／ｍｌ）；及びデキストロース（２０〜５０ｍｇ／ｍｌ）が含まれる。最終懸濁液のｐＨは、約ｐＨ５〜ｐＨ７の範囲に及ぶように調節することができ、約ｐＨ５．５のｐＨが典型的である。
【０７１０】
眼内投与については、活性成分又はプロドラッグは、眼への投与に適する溶液、乳濁液、懸濁液などとして製剤化し得る。眼への化合物の投与に適する種々の媒体が、当技術分野で公知である。特定の非限定的な例は、米国特許第６，２６１，５４７号明細書；米国特許第６，１９７，９３４号明細書；米国特許第６，０５６，９５０号明細書；米国特許第５，８００，８０７号明細書；米国特許第５，７７６，４４５号明細書；米国特許第５，６９８，２１９号明細書；米国特許第５，５２１，２２２号明細書；米国特許第５，４０３，８４１号明細書；米国特許第５，０７７，０３３号明細書；米国特許第４，８８２，１５０号明細書；及び米国特許第４，７３８，８５１号明細書に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０７１１】
持続性送達については、活性成分又はプロドラッグは、移植又は筋内注射による投与用のデポ製剤として製剤化し得る。活性成分は、適切なポリマー若しくは疎水性物質（例えば、許容される油における乳濁液）若しくはイオン交換樹脂を用いて、又は難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として製剤化し得る。別法として、経皮吸収のための活性化合物をゆっくりと放出する吸盤又はパッチとして作製される経皮送達系を使用し得る。この目的で、浸透促進剤を使用して活性化合物の経皮浸透を促進し得る。適切な経皮パッチは、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号明細書；米国特許第５，３５２，４５６号明細書；米国特許第５，３３２，２１３号明細書；米国特許第５，３３６，１６８号明細書；米国特許第５，２９０，５６１号明細書；米国特許第５，２５４，３４６号明細書；米国特許第５，１６４，１８９号明細書；米国特許第５，１６３，８９９号明細書；米国特許第５，０８８，９７７号明細書；米国特許第５，０８７，２４０号明細書；米国特許第５，００８，１１０号明細書；及び米国特許第４，９２１，４７５号明細書に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０７１２】
別法として、他の薬剤送達系を使用し得る。リポソーム及び乳濁液は、活性化合物又はプロドラッグを送達するのに使用し得る送達媒体の公知の例である。通常、より大きな毒性を犠牲にすることになるが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの特定の有機溶媒も使用することができる。
【０７１３】
薬剤組成物は、所望に応じて、活性化合物を含む１又は複数の単位剤形を含むパック又はディスペンサーデバイスで提供し得る。例えば、パックは、ブリスターパックなどの金属又はプラスチックホイルを含み得る。パック又はディスペンサーデバイスは、投与指示書が添付されていることがある。
【０７１４】
本開示の主題の活性化合物又はプロドラッグ、又はそれらの組成物は、一般的に、目的の結果を達成するのに有効な量で、例えば、治療される特定の疾患を治療又は予防するのに有効な量で使用される。化合物は、治療的利益を治療的に達成するために、又は予防利益を予防的に達成するために投与し得る。治療的利益は、患者が、基礎障害に未だ苦しんでいることもあるにもかかわらず、患者が気分又は状態における改善を報告するほどの、治療される基礎障害の根絶若しくは改善及び／又は基礎障害に関連する１又は複数の症状の根絶若しくは改善を意味する。例えば、アレルギーに悩む患者への化合物の投与は、基礎アレルギー応答が根絶されるか又は改善される場合のみならず、患者が、アレルゲンへの曝露後のアレルギーに関連する症状の重篤性又は期間における減少を報告する場合も、治療利益を提供する。別の例として、ぜんそくとの関連での治療利益には、ぜんそく発作の開始後の呼吸の改善、又はぜんそく症状の出現の頻度若しくは重篤性における減少が含まれる。治療的利益には、改善が認識されるかにかかわらず、疾患の進行を止めること又は遅くすることも含まれる。
【０７１５】
予防的投与については、化合物は、先に記載された疾患の１つを発現する危険性のある患者に投与し得る。別法として、予防的投与は、基礎障害を診断された患者における症状の開始を回避するために適用し得る。
【０７１６】
投与される化合物の量は、例えば、治療される特定の適応症、投与の方法、所望の利益が予防的であるか治療的であるか、治療される適応症の重篤性及び患者の年齢及び体重、特定の活性化合物のバイオアベイラビリティなどを含めた種々の要因によって決まる。有効な用量の決定は、当業者の能力に十分含まれる。
【０７１７】
有効な用量は、インビトロアッセイから初期的に予想し得る。例えば、動物における使用のための初期用量を、製剤化して、インビトロＣＨＭＣ又はＢＭＭＣ及び実施例の節に記載される他のインビトロアッセイなどのインビトロアッセイで測定して、特定の化合物のＩＣ５０以上である、活性化合物の循環血液又は血清濃度を達成することができる。特定の化合物のバイオアベイラビリティを考慮してこのような循環血液又は血清濃度を達成する用量を計算することは、十分に当業者の能力に含まれる。指針として、Fingl & Woodbury, "General Principles," In: Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, pp. 1-46, latest edition, Pagamonon Press、及びそれらの中に引用された文献を参照されたい。
【０７１８】
初期の用量は、動物モデルなどのインビボのデータからも予想し得る。上記に記載された種々の疾患を治療又は予防する化合物の効能を試験するために有用な動物モデルは、当技術分野で公知である。
【０７１９】
用量は、典型的には、約０．０００１又は０．００１又は０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であるが、いくつかある要因の中で特に、化合物の活性、そのバイオアベイラビリティ、投与の方法及び上記で論じられた種々の要因に応じてより高く又はより低くなり得る。用量及び間隔は、個別に調節して、治療又は予防効果を維持するのに十分である化合物の血漿濃度を提供することができる。局所／局所的投与などの局所投与又は選択的吸収の場合には、活性化合物の有効な局所濃度は、血漿濃度に関係することはない。当業者は、必要以上の実験をせずに有効な局所用量を最適化することができよう。
【０７２０】
化合物は、１日に１回、１日に少数回若しくは数回、又はさらには１日に多数回投与することができ、これは、とりわけ、治療される適応症及び処方医の判断によって決まる。
【０７２１】
化合物は、実質的な毒性を生じることなく治療的又は予防的利益を提供することが好ましい。化合物の毒性は、標準の薬学的手順を用いて決定することができる。毒性及び治療的（又は予防的）効果の間の用量比は、治療指数である。高い治療指数を示す化合物が好ましい。
［実施例］
【０７２２】
以下の実施例は、本開示の主題の代表的な実施形態を実施するために当業者に手引きを提供するために含まれている。本開示及び当業者の一般のレベルを踏まえて、当業者は、以下の実施例は、例示のみを意図しており、多数の変化形態、修正形態、及び変更形態は、本開示の主題の範囲を逸脱することなく使用し得ることを理解し得る。以下の実施例は、制限の目的ではなく、例証の目的で提供される。
【実施例１】
【０７２３】
ラットの肝臓及び精巣のＣＹＰ５１活性のアッセイ
ＣＹＰ５１活性を、主として以下のように評価した。肝臓のＣＹＰ５１活性を決定するための反応混合物は、ラノステロール（４７ｎｍｏｌ、Tween 80で分散されている）、ミクロソーム（５．０ｍｇタンパク質）、Ｓ−１００画分（１０ｍｇタンパク質）、ＫＣＮ（１ｍＭ）、ＮＡＤＰＨ生成系、及び０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５からなり；混合物の最終体積を２．０ｍｌにした。精巣のＣＹＰ５１活性の決定のための反応混合物は、Ｓ−１０画分（８．０ｍｇタンパク質）が、ミクロソーム及びＳ−１００画分の代わりに酵素源として使用されることを除いて上記と同じである。反応を、継続して振とうしながら１０分間（肝臓）又は３０分間（精巣）、３７℃で有酸素的に行う。反応を鹸化によって停止し、ステロールをジエチルエーテル／石油エーテル（５／９５）で抽出する。抽出したステロールは、ＴＬＣによって分離し、ラノステロール及びその１４−脱メチル化代謝物を含む画分を抽出する。抽出したステロールをトリメチルシリル化し、ＧＬＣによって分析する。デメチラーゼ活性を、クロマトグラフィーで測定したラノステロールの２つの脱メチル化代謝物への転換率及びインキュベーションのゼロ時間における反応混合物から抽出したステロールのガスクロマトグラムによる内因性代謝物の修正後のラノステロールの初期量から算出する。
【実施例２】
【０７２４】
再構成系によるラノステロール１４０−脱メチル化のためのアッセイ
標準の反応混合物（最終体積、２．０ｍｌ）は、０．３４ｎｍｏｌのＶＹＰ５１、１．１単位のＮＡＤＰＨ−シトクロムＰ−４５０レダクターゼ、８０ｎｍｏｌのＤＬＰＣミセル中に分散された１３ｎｍｏｌのラノステロール、０．２ｍｍｏｌのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）、２０ｍｍｏｌのグルコース６−リン酸、０．２単位のグルコース６−リン酸脱水素酵素、及び０．３ｐｍｏｌのＮＡＤＰＨからなる。緩衝液で希釈する前にレダクターゼのＰ−４５０１４ＤＭ１、及びラノステロールを含むＤＬＰＣミセルを混合することが重要である。この混合物は、ＣＹＰ５１及びレダクターゼ配合物からの微量（約０．００１％）のエマルゲン913及び０．０２５％のナトリウムコレートをそれぞれ含む。３０℃で２分間の混合物の前インキュベーション後、反応をＮＡＤＰＨの添加によって開始し、空気中で連続して振とうしながら３０℃で１０分間、反応を行い、メタノール中の５ｍｌの１０％ＫＯＨの添加によって停止する。８０℃で６０分間の混合物の鹸化後、ステロールを石油エーテル／ジエチルエーテル（９：１、ｖ／ｖ）で抽出し、抽出物を蒸発する。残渣を、１０ＰＩのＮ−トリメチルシリルイミダゾールに溶解し、１０ＰＩのＮ−トリメチルシリルイミダゾールでトリメチルシリル化し、水素炎イオン化検出器を備えるShimadzu社製GC-mini 2ガスクロマトグラフで分析する。誘導体化されたステロールの分離を、キャリアーガスとして窒素を使用し２５５℃で、ＯＶ−１７でコーティングされたガラス毛管カラム（０．３ｍｍ×５０ｍ）で行う。ラノステロールのトリメチルシリル化誘導体及びその脱メチル化生成物は、２つの相異なるピークとして明確に分離される。転換率を２つのピークの面積から算出し、活性（形成された生成物のナノモル／分）を、添加されたラノステロールの量及び転換率から得る。
【実施例３】
【０７２５】
再構成されたＣＹＰ５１触媒活性
それぞれの反応混合物は、１ｎｍｏｌ／ｍｌの精製されたＣＹＰ５１、８ｎｍｏｌの大腸菌フラボドキシン、４ｎｍｏｌの大腸菌フラボドキシンレダクターゼ及び２３ｎｍｏｌのラノステロール又は２４−ＭＤＬを含む。反応体積を１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．２）で９５０μＬに調節する。ＮＡＤＰＨを添加して１ｍＭの最終濃度にして反応を開始する。すべての反応物を、ゆっくりと攪拌しながら３７℃で２０分間、インキュベートする。反応を３ｍｌのメタノールの添加によって停止し、ステロールを、予め加熱した水浴中での８０℃で１時間、エタノール中の９０％（ｗ／ｖ）ＫＯＨでのインキュベーションによって抽出する。５０μＬのトルエン中の５０μＬのビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）での６０℃で１時間のシリル化の後、ステロール基質及び代謝物は、明確に分離され、GC-MS（VG 12-250; VG Biotech, Manchester, U.K.）によって同定する。活性（形成された脱メチル化生成物のｎｍｏｌ／分／ＣＹＰのｎｍｏｌ）を、添加された基質の量及び転換率（メチル化及び脱メチル化ステロールを示す２つのピークの面積から算出される）を用いて算出する。
【実施例４】
【０７２６】
テトラゾール及びイミダゾール−酸化還元酵素ＰＡ
４．１  ２−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−（５−フルオロピリミジン−４−イル）−１−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）ブタン−２−オールの合成のための手順
【０７２７】
【化１３０】
2010510248.tif 000132
【０７２８】
４．２  ４−（１−ブロモエチル）−６−クロロ−５−フルオロピリミジンの合成のための手順
ＣＣｌ４（１５０ｍＬ）中の４−クロロ−６−エチル−５−フルオロピリミジン１（１０ｇｍ、６２．５０ｍｍｏｌ）の攪拌している溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１２．７ｇｍ、７１．３５ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（５１１ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７５℃で４時間、還流した。反応の進行をＴＬＣによりモニターした。次いで、反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、水、メタ重亜硫酸ナトリウム（１００ｍＬ）溶液、水及びブライン溶液で連続して洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して黄色がかった油性シロップとして臭化物２を得た（１４ｇｍ、５８．５８ｍｍｏｌ、９４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：２．１０（ｄ，３Ｈ）、５．４０（ｑ，１Ｈ）、８．８０（ｓ，１Ｈ）。質量：２４１（Ｍ＋＋２）
【０７２９】
４．３  ２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）アセチルクロリドの合成のための手順
ベンゼン（２０ｍＬ）中の２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）酢酸３（１ｇｍ、７．８１ｍｍｏｌ）の攪拌している溶液に、オキサリルクロリド（１．５ｇ、１１．８１ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＦを添加した。反応混合物を、室温で３時間攪拌した。反応混合物を、真空下で濃縮し、得られた粗製酸塩化物４を精製することなく次ステップで使用した。
【０７３０】
４．４  １−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）エタノンの合成の手順
１，３−ジフルオロベンゼン（０．８６ｍＬ、７．５４ｍｍｏｌ）及び三塩化アルミニウム（１．２５ｇｍ、９．３６ｍｍｏｌ）を、上記反応で得られた粗製酸塩化物４に添加した。反応混合物を２時間攪拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによりモニターした。反応混合物を、氷水及び濃ＨＣｌの混合物に添加し、２分間攪拌した。水層を酢酸エチル（３×３回）で抽出した。合わせた酢酸エチル層を、水、飽和ブライン溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。減圧下での揮発分の蒸発によって粘稠な液体として粗製生成物を得た。溶離液として酢酸エチル／ヘキサンを用いるカラムクロマトグラフィーによる粗製物質の精製によって所望の生成物５（７００ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ、２ステップで４０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：５．８５（ｄ，２Ｈ）、６．９８〜７．２１（ｍ，２Ｈ）、８．０〜８．２０（ｍ，１Ｈ）、８．８０（ｓ，１Ｈ）。質量：２２５（Ｍ＋＋１）。
【０７３１】
４．５  ３−（６−クロロ−５−フルオロピリミジン−４−イル）−２−（２，４−ジフルオロフェニル）−１−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）ブタン−２−オールの合成の手順
二口丸底フラスコにおいて、亜鉛（新たに乾燥した）（６３０ｍｇ、９．６９ｍｍｏｌ）及び触媒量の鉛（１２ｍｇ）を、無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中に溶解した。この混合物に、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のヨウ素（３００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）の溶液を一滴ずつ添加し、室温で１０分間攪拌した。次いで、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のケトン５（６００ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）、臭化物２（７０７ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）及びヨウ素（３７７ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の混合物を、０℃、Ｎ２雰囲気下で上記溶液に導入した。反応混合物を、０℃で３時間攪拌した。反応の進行を、ＴＬＣでモニターした。反応混合物を、酢酸水溶液でクエンチし、セライトのベッドを通してろ過した。得られたろ液を、真空下で蒸溜してＴＨＦを除き、次いで酢酸エチルで希釈した。この溶液を、真空下で再び蒸溜し、最後に酢酸エチル（３０ｍＬ×３回）で抽出した。合わせた酢酸エチル層を、飽和ＥＤＴＡ溶液、水、飽和ブライン溶液で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。鏡像異性体の指示混合物（２Ｒ／３Ｓ及び２Ｓ／３Ｒ；２０５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、２０％）のクロマトグラフィーによる単離の後に、減圧下での蒸発によってアルコール６を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．１６（ｄ，３Ｈ）、４．１９〜４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．４３（ｄ，１Ｈ）、５．０８（ｄ，１Ｈ）、６．４２（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、６．８０〜６．９２（ｍ，２Ｈ）、７．５０〜７．５７（ｍ，１Ｈ）、８．５８（ｓ，１Ｈ）、８．８０（ｓ，１Ｈ）。質量：３８５（Ｍ＋＋１）。
【０７３２】
４．６  ２−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−（５−フルオロピリミジン−４−イル）−１−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）ブタン−２−オールの合成のための一般的手順
エタノール（５ｍｌ）中のアルコール６（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の攪拌している溶液に、Ｎ２雰囲気下で酢酸ナトリウム（６２ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）及び触媒量の５％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を注意深く添加した。次いで、反応混合物を、Ｈ２雰囲気下で１〜２時間攪拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによりモニターした。次いで、反応混合物をセライトのベッドを通してろ過し、セライトベッドをＤＣＭ（２０ｍＬ）で完全に洗浄し、次いで、得られたろ液を真空下で濃縮して９８．０７％のＨＰＬＣ純度を有する表題化合物７（７４ｍｇ、８１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．１３（ｄ，３Ｈ）、４．１７〜４．２３（ｍ，１Ｈ）、４．４２（ｄ，１Ｈ）、５．０８（ｄ，１Ｈ）、６．７０（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、６．８１〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、７．５０〜７．５８（ｍ，１Ｈ）、８．５８（ｓ，１Ｈ）、８．７２（ｓ，１Ｈ）、９．０１（ｓ，１Ｈ）。質量：３５０（Ｍ＋＋１）。
【実施例５】
【０７３３】
イミダゾール類似体
５．１  ２−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−（５−フルオロピリミジン−４−イル）−１−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ブタン−２−オール
１−Ｎ−イミダゾール−酢酸から出発して上記の手順に従い、表題化合物を白色固体（３ｍｇ、９８％ＨＰＬＣ純度）として単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：１．１３（ｄ，３Ｈ）、３．９５（ｄ，１Ｈ）、４．１０〜４．１４（ｍ，１Ｈ）、４．４０（ｄ，１Ｈ）、６．４０（ｓ，１Ｈ，）、６．７０（ｄ，２Ｈ）、６．８１〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、７．２３（ｓ，１Ｈ）、７．５５〜７．６２（ｍ，１Ｈ）、８．５８（ｓ，１Ｈ）、９．０１（ｓ，１Ｈ）。質量：３４９（Ｍ＋＋１）。
【実施例６】
【０７３４】
インビトロ抗真菌アッセイ
以下の試験プロトコールは、定評のあるＣＬＳＩガイドラインに従う。その全体が参照により本明細書に組み込まれているNCCLS. Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts; Approved Standard-Second Edition. NCCLS document M27-A2, NCCLS, Wayne, Pennsylvania, 2002を参照されたい。
【０７３５】
抗真菌剤を、ＤＭＳＯ又は水中の原液濃縮物として調製する。原液は、アリコートで凍結貯蔵（＜−７０℃）し得る。使用のために一度解かすと、原液製剤アリコートは、その日の終わりに廃棄される必要がある。陽性対照としては、フルコナゾール原液を、RPMI 1640に希釈して６４〜０．１２μｇ／ｍＬの最終濃度範囲にする。他の陽性対照である、ケトコナゾール、ボリコナゾール、及びアンフォテリシンＢを、RPMI 1640に希釈して１６〜０．０３μｇ／ｍＬ（及び１％ＤＭＳＯ）の最終濃度にする。パネルは、評価の直前に調製するか、又は調製して凍結貯蔵することができる。
【０７３６】
カンジダ・アルビカンスの懸濁液を、サブロー寒天プレート培養物から直接取られたコロニーを用いてRPMI-1640媒体中に調製する。懸濁液を、０．５マックファーランド標準液と等しい濁度に調節する。それぞれの試験物品の連続希釈濃度を、カンジダ・アルビカンスの標準懸濁液を用いＣＯ２を用いずに３５℃で２４時間又は４８時間インキュベートする。媒体のみからなる陰性対照ウェル、及び陽性対照ウェルに試験微生物懸濁液を入れる。インキュベーション後、プレートを、微生物の成長の阻害についてパネルリーダー（Cooke Microtiter System社製）を用いて検査する。成長の阻害がない場合、試験物品は、抗真菌活性を有さないと報告される。試験物品が、抗真菌活性を有する場合、最小阻止濃度（ＭＩＣ）を決定する。アンフォテリシンＢのＭＩＣは、マイクロダイリューションウェル（９６ウェルプレート）中のカンジダ・アルビカンスの成長を完全に阻害する試験物品の最低濃度である。フルコナゾール、ボリコナゾール、ケトコナゾール及び試験物品については、ＭＩＣは、５０％以上の成長阻害を生じる最低濃度である。
【０７３７】
本開示のイミダゾール及び１−テトラゾール類似体は、約０．０６μｇ／ｍＬ〜約１６．０μｇ／ｍＬのＭＩＣを有した。
【０７３８】
すべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照は、あたかもそれぞれの個別の刊行物、特許出願、特許、及び他の参照が、参照により明確且つ個別に組み込まれるよう指示されていたのと同じ程度に参照により本明細書に組み込まれている。多数の特許出願、特許、及び他の参照が、本明細書に引用されているが、このような参照は、これらの文献のいずれも当技術分野における周知の事実の部分を形成することの承認を構成するものではない。
【０７３９】
前述の主題が、理解の明確さの目的のために図解及び実施例を用いて詳細に記載されてきたが、特定の変化形態及び修正形態は、添付の特許請求の範囲内で実施され得ることを当業者は理解されよう。
【図１Ａ−１Ｊ】
2010510248.tif 000261
【図１Ｋ−１Ｓ】
2010510248.tif 000262
【図１Ｔ−１ＡＣ】
2010510248.tif 000263
【図１ＡＤ−１ＡＨ】
2010510248.tif 000264
【図２Ａ−２Ｌ】
2010510248.tif 000265
【図２Ｍ−２Ｗ】
2010510248.tif 000266
【図２Ｘ−２ＡＧ】
2010510248.tif 000267
【図２ＡＨ−２ＡＩ】
2010510248.tif 000268
【図３Ａ−３Ｅ】
2010510248.tif 000269
【図３Ｆ−３Ｓ】
2010510248.tif 000270
【図３Ｔ−３ＡＡ】
2010510248.tif 000271
【図４Ａ−Ｃ】
2010510248.tif 000272
【図５Ａ−５Ｉ】
2010510248.tif 000273
【図６Ａ−６Ｍ】
2010510248.tif 000274
【図６Ｎ−６Ｏ】
2010510248.tif 000275
【図７Ａ−７Ｉ】
2010510248.tif 000276
【図８Ａ−８Ｉ】
2010510248.tif 000277
【図９Ａ−９Ｋ】
2010510248.tif 000278
【図１０Ａ】
2010510248.tif 000279
【図１１Ａ】
2010510248.tif 000280
【図１２Ａ−１２Ｃ】
2010510248.tif 000281
【図１３Ａ−１３Ｃ】
2010510248.tif 000282
【図１４Ａ−１４Ｅ】
2010510248.tif 000283
【図１５Ａ−１５Ｉ】
2010510248.tif 000284
【図１５Ｊ−１５Ｌ】
2010510248.tif 000285
【図１６−１】
2010510248.tif 000286
【図１６−２】
2010510248.tif 000287
【図１６−３】
2010510248.tif 000288
【図１６−４】
2010510248.tif 000289
【図１６−５】
2010510248.tif 000290
【図１６−６】
2010510248.tif 000291
【図１６−７】
2010510248.tif 000292
【図１６−８】
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【図１６−９】
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【図１６−１０】
2010510248.tif 000295
【図１６−１１】
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【図１６−１２】
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【図１６−１３】
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【図１６−１４】
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【図１６−１５】
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【図１６−１６】
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【図１６−１７】
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【図１６−１８】
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【図１６−１９】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１７−３】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図１９−３】
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【図１９−４】
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【図１９−５】
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【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２１】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２３−３】
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【図２４−１】
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【図２４−２】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【国際調査報告】
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