(57)【要約】本発明は、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩがｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断により測定される、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、特に急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）のリスク層化のための方法に関する。驚くべきことに、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩは、急性冠動脈症候群の診断に高い感受性および特異性を有する（本明細書に記載の実施例および図を参照のこと）。【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法であって、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断により測定される、方法。
【請求項２】
急性冠動脈症候群、特に心筋梗塞および狭心症の高いリスクおよび／または好ましくない予後を有する患者を識別するための、請求項１に記載の急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法。
【請求項３】
前記患者が症候性および／または無症候性の患者、特に救急治療患者である、請求項１または２に記載の急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法。
【請求項４】
特に集中医療または救急医療において、急性冠動脈症候群、特に心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）の治療管理のための、請求項１から３の一項に記載の急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法。
【請求項５】
特に集中医療または救急医療において、特に薬物を用いたさらなる処置および治療についての臨床判断を下すための、請求項１から４の一項に記載の急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法。
【請求項６】
心筋梗塞または狭心症の早期もしくは鑑別診断または予後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法であって、マーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩが検査対象患者で測定される、方法。
【請求項７】
急性冠動脈症候群、特に心筋梗塞または狭心症のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断および／または早期もしくは鑑別診断および／または予後のための方法であって、マーカーニューロフィジンＩＩまたはその断片および部分ペプチドが、検査対象患者で測定される、方法。
【請求項８】
急性冠動脈症候群、心筋梗塞、または狭心症のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法であって、マーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩが、ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列との組み合わせで検査対象患者で測定される、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の急性冠動脈症候群、心筋梗塞、または狭心症のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法であって、予防、予後、鑑別診断的早期発見および識別、重症度評価、ならびに予後評価について、診断が治療と共に行われることを特徴とする、方法。
【請求項１０】
診断のために、前記マーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの６〜２０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ（閾値）、特に６〜１０ｐｍｏｌ／Ｌ、または予後のために、１０〜３０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ（閾値）、特に１０〜２０ｐｍｏｌ／Ｌが、有意（特異的）であることを特徴とする、請求項１〜９の一項に記載の方法。
【請求項１１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断の炎症マーカー、心臓血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群から選択される少なくとも１つの追加的なマーカーも使用して、測定が実行されることを特徴とする、請求項１〜１０の一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記炎症マーカーが、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−アルファのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１〜１１６および３〜１１６）、およびＶＣＡＭまたはＩＣＡＭのような接着分子を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１〜１１の一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記心臓血管マーカーが、クレアチンキナーゼ、ミオグロビン、ミエロペルオキシダーゼ、ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏ−ＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列、心筋トロポニン、あるいはＣＲＰ、ならびにプロガストリン放出ペプチド（ｐｒｏＧＲＰ）、プロエンドセリン−１、プロレプチン、プロニューロペプチド−Ｙ、プロソマトスタチン、プロニューロペプチド−ＹＹ、プロオピオメラノコルチン、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）、または各々の場合その部分配列のような循環調節（プロ）ホルモンを含む群に由来する少なくとも１つのマーカーから選択されることを特徴とする、請求項１〜１２の一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記虚血マーカーが、トロポニンＩおよびＴ、ならびにＣＫ−ＭＢを含む群に由来する少なくとも１つのマーカーから選択されることを特徴とする、請求項１〜１３の一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記神経ホルモンマーカーが、少なくとも１つのナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列であることを特徴とする、請求項１〜１４の一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記マーカーの並列または同時測定が実行されることを特徴とする、請求項１〜１５の一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記測定が少なくとも１つの患者試料に対して実行されることを特徴とする、請求項１〜１６の一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記測定が自動分析機、特にＫｒｙｐｔｏｒシステムを使用して実行されることを特徴とする、請求項１〜１７の一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記測定が、迅速検査、特に単一パラメーター測定または多重パラメーター測定を使用して実行されることを特徴とする、請求項１〜１８の一項に記載の方法。
【請求項２０】
リスク層化が、予後、鑑別診断的早期発見および識別、重症度評価、ならびに予後評価のために、急性冠動脈症候群の治療と併せて実行されることを特徴とする、請求項１〜１９の一項に記載の方法。
【請求項２１】
急性冠動脈症候群、心筋梗塞、または狭心症のリスク層化のための、および／あるいは心筋梗塞あるいは狭心症の早期もしくは鑑別診断または予後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）あるいはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの使用。
【請求項２２】
ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列と組み合わせた、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、および／または狭心症の診断のための、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの使用。
【請求項２３】
プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩを測定するための検出試薬、および場合により請求項１１から１５の一項に記載の追加的なマーカー、および補助試薬を含有する、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、および／または狭心症のリスク層化用キット。
【請求項２４】
請求項６から１５の一項に記載の方法を実行するための診断デバイス。
【請求項２５】
ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列、および場合により請求項１１から１５の一項に記載の追加的なマーカー、および補助試薬と組み合わせて、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩを測定するための検出試薬を含有する、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、および／または狭心症の診断用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロバソプレシン（ｐｒｏｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチン（ｃｏｐｅｐｔｉｎ）またはニューロフィジンＩＩ（ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎ  ＩＩ）がｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断により測定される、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、特に急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）のリスク層化のための方法に関する。本発明は、さらにｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断用のバイオマーカーの好適な組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
リスク層化は、無症候性の患者だけでなく症候性な患者の心臓病にとってますます重要になっている。特に、急性冠動脈症候群には、好適なリスク層化の多大な必要性が存在する。
【０００３】
リスク層化は、最適な臨床転帰を可能にする目的で、集中的な診断、および治療／処置のために、予後が好ましくない患者を識別するために使用される。したがって、好適なリスク層化の目的は、経皮的冠状動脈介入および最新薬を使用して、急性冠動脈症候群の効果的な治療法に従うことである。
【０００４】
適切な治療には、救急室入院時でさえ、急性冠動脈症候群の早期診断および鑑別が、臨床判断と共に必要とされる。急性冠動脈症候群における胸痛のような非特異的症状のため、急性冠動脈症候群の識別だけでなく他の疾病からの鑑別および画定も不可欠である。
【０００５】
従来技術では、生化学的マーカー、特に心筋トロポニン、ミオグロビン、およびＣＫ−ＭＢの大きさ（ｍａｓｓ）のような古典的マーカーの使用が、心筋梗塞の予後のために試みられてきた（非特許文献１）。ｐｒｏ−ＢＮＰ（ＮＴ−ＰｒｏＢＮＰ）と共に、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）（ＥＰ  １３６３１２８  Ｂ１、ＥＰ  １６６６８８１  Ａ２）は、心筋診断における別の効果的な生化学的マーカーであると判明した。
【０００６】
コペプチン（Ｃ末端ｐｒｏＡＶＰとも称される）は、ＡＭＩのｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断用のバイオマーカーとして、特許文献１（ＢＲＡＨＭＳ  ＡＧ）に記載されている。対応するコペプチンアッセイは、Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．に開示されている（非特許文献２）。
【０００７】
ニューロフィジンは、ニコチン摂取（非特許文献３）、悪性および非悪性のＡＤＨ分泌異常関連症候群（ＳＩＡＤＨ）、および腎性尿崩症（非特許文献４；非特許文献５）のマーカーとして記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００６／０１８３１５号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｋａｔｕｓ，Ｈ．Ａ．；Ｒｅｍｐｐｉｓ，Ａ．；Ｓｃｈｅｆｆｏｌｄ，Ｔ．；  Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｋ．Ｗ．，ａｎｄ  Ｋｕｅｂｌｅｒ，Ｗ．：Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｔｒｏｐｏｎｉｎ  Ｔ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄ  ａｎｄ  ｎｏｎｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ（１９９１）６７（１６）：１３６０−１３６７
【非特許文献２】Ｎｉｌｓ  Ｇ．Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ，Ｊｏａｃｈｉｍ  Ｓｔｒｕｃｋ，Ｃｈｒｉｓｔｉｎｅ  Ａｌｏｎｓｏ，ａｎｄ  Ａｎｄｒｅａｓ  Ｂｅｒｇｍａｎｎ，Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｐｅｐｔｉｎ，ａ  ｓｔａｂｌｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｏｆ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００６）５２：１１２−１１９
【非特許文献３】Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ａ．Ｇ．，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ａｓｓａｙ，ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎｓ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９７５；５５：３６０−３６７
【非特許文献４】Ｐｕｌｌａｎ  Ｐ．Ｔ．，Ｃｌａｐｐｉｓｏｎ  Ｂ．Ｈ．，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  Ｃ．Ｉ．，Ｐｌａｓｍａ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎｓ  ｉｎ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｔｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  １９７９；４９：５８０−５８７
【非特許文献５】Ｎｏｒｔｈ  Ｗ．Ｇ．，ＬａＲｏｃｈｅｌｌｅ  Ｆ．Ｔ．，Ｊｒ．，Ｍｅｌｔｏｎ  Ｊ．，Ｍｉｌｌｓ  Ｒ．Ｃ．，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐａｒｔｉａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎｓ：ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  １９８０；５１：８８４−８９１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、これまでに知られているマーカーを使用した公知の診断法の短所は、リスク患者の早期の完全な識別が達成されず、したがって、リスク層化が不適当であるということである。したがって、本発明の目的は、リスク患者の識別の改善を可能にする、急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法を開発することである。
【００１１】
さらなる短所は、マーカーの十分な感受性および／または特異性が、従来技術では通常達成されないということである。
【００１２】
したがって、さらなる目的は、少なくとも１つのマーカーまたはマーカーの組み合わせがｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断において十分な感受性および特異性を有する、急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
したがって、本発明の目的は、急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法を提供することである。本目的は、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断により測定される、急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法を使用することにより達成される（以下では、「本発明による方法」と称される）。
【００１４】
驚くべきことに、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩは、急性冠動脈症候群の診断に高い感受性および特異性を有する（実施例および図を参照）。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】心筋梗塞後の患者のコペプチン値。心筋梗塞後の様々な時点で、記載のように１３１患者から血漿試料を収集した。健康な被験体のコペプチン値（対照；２００個の値）もプロットした。これらの群のコペプチン値は、箱ひげ図（Ｂｏｘ−Ｗｈｉｓｋｅｒ−Ｐｌｏｔ）として図示する。
【図２】心筋梗塞後の患者のコペプチン値。心筋梗塞後の様々な時点で、記載のように血漿試料を収集した。その後、心不全による死亡または再入院がその後生じた（「事象」；１６患者）、または生じなかった（「ｓｕｒｖ」；１１５患者）かどうかを示す群に、患者を分類した。健康な被験体のコペプチン値（対照；２００個の値）も図示する。これらの群のコペプチン値は、箱ひげ図として図示する。
【図３】プレプロバソプレシン（１６４個のアミノ酸）アミノ酸配列と、ｐｒｏＡＶＰ（アミノ酸：２９〜１６４位）の部分ペプチドおよび断片、ニューロフィジンＩＩ（アミノ酸：３２〜１２４位）、ならびにコペプチン（アミノ酸：１２６〜１６４位）のアミノ酸配列とを図示した図。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
「急性冠動脈症候群」という用語は、直ちに生命に危険を及ぼす様々な段階の冠動脈性心疾患を包含する。本発明は、特に救急医療、具体的には急性心筋梗塞および／または狭心症だけでなく心臓突然死にも関する。ＷＨＯの基準（ＷＨＯ（１９７９）：Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｊｏｉｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ａｎｄ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｔａｓｋ  ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ５９（３）：６０７−６０９）により、ＳＴ部分の上昇および／または心筋酵素の増加と共に２０分より長く続く急性胸痛事象として定義される急性心筋梗塞に加えて、「不安定狭心症」（ＡＰ）という用語が確立されており、それは、本発明により「急性冠動脈症候群」として解釈される（Ｈａｍｍ  Ｃ．Ｗ．：Ｌｅｉｔｌｉｎｉｅｎ：Ａｋｕｔｅｓ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  （ＡＣＳ）−Ｔｅｉｌ  １：ＡＣＳ  ｏｈｎｅ  ｐｅｒｓｉｓｔｉｅｒｅｎｄｅ  ＳＴ−Ｈｅｂｕｎｇ［Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ａｃｕｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＣＳ）−Ｐａｒｔ１：ＡＣＳ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ＳＴ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ］，Ｚ  Ｋａｒｄｉｏｌ（２００４）９３：７２−９０；以下も参照：Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ  Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ  ２００４）。
【００１７】
本発明によれば、「リスク層化」という用語は、最適な臨床転帰を可能にする目的で、急性冠動脈症候群、特に心筋梗塞および狭心症の集中的な診断および治療／処置のために、好ましくない予後を有する患者、特に救急治療患者およびリスク患者を識別することを包含する。したがって、本発明によるリスク層化は、経皮的冠状動脈介入および最新薬を使用して、急性冠動脈症候群の効果的な治療法を可能にする。
【００１８】
したがって、本発明はさらに、急性冠動脈症候群、特に心筋梗塞および狭心症のリスクが増加した患者および／または好ましくない予後を有する患者、ならびに症候性および／または無症候性の患者、特に救急治療患者を識別することに関する。
【００１９】
本発明による方法は、救急および／または集中医療において信頼性の高い層化を提供するために、特に有利な様式で使用できる。したがって、本発明による方法は、迅速な治療成功および死亡回避をもたらす臨床判断を可能にする。そのような臨床判断は、さらに、急性冠動脈症候群、特に急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）を処置または治療するための薬物を用いた治療も含む。
【００２０】
したがって、本発明はさらに、好ましくは時間が重要となる集中医療または救急医療において、薬物を用いたさらなる処置および治療のような臨床判断を下すために、急性冠動脈症候群の患者をリスク層化するための方法に関する。
【００２１】
したがって１つのさらなる好ましい実施形態では、本発明による方法は、急性冠動脈症候群、特に急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）の治療管理に関する。
【００２２】
本発明による方法の１つのさらなる好ましい実施形態では、リスク層化は、予後、鑑別診断的早期発見（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｅａｒｌｙ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）および識別、重症度評価、ならびに予後評価のために治療と共に実行される。
【００２３】
１つのさらに好ましい実施形態では、本発明は、マーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩが検査対象患者で測定される、心筋梗塞または狭心症の早期もしくは鑑別診断または予後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法に関する。しかしながら、コペプチンまたはその断片もしくは部分配列、あるいはニューロフィジンＩＩまたはその断片もしくは部分配列が特に好ましい。
【００２４】
本発明は、症状の出現後にマーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの６〜２０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ（閾値）範囲が、診断および／またはリスク層化にとって有意（特異的）である、上記の実施形態の１つによる急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法、あるいは心筋梗塞または狭心症の早期もしくは鑑別診断または予後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法に関する。好ましくは症状の出現後の２時間までの、６〜２０ｐｍｏｌ／Ｌ、特に７．５ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ（閾値）も好ましい。
【００２５】
本発明は、症状の出現後にマーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの１０〜３０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ（閾値）範囲が、診断および／またはリスク層化にとって有意（特異的）である、上記の実施形態の１つによる急性冠動脈症候群のリスク層化のための方法、あるいは心筋梗塞または狭心症の早期もしくは鑑別診断または予後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法に関する。１０〜２０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ（閾値）も好ましい。これに基づいて、本発明によるこれらの方法は、有利に感受性が高い。
【００２６】
本発明による方法の一実施形態では、体液、特に血液、場合により全血または血清もしくは収集可能な血漿が検査対象患者から採取され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏで、即ちヒトまたは動物の体外で診断が行われる。マーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの測定の結果として、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、および狭心症についての高い感受性および特異性が達成され、診断またはリスク層化は、少なくとも１つの患者試料に存在する量に基づいて実施できる。しかしながら、マーカーコペプチン（ｐｒｏＡＶＰまたはプレプロバソプレシンの安定断片）またはその断片もしくは部分配列が、極めて特に好ましい。マーカーニューロフィジン（ｐｒｏＡＶＰまたはプレプロバソプレシンの安定断片）またはその断片もしくは部分配列も、特に好ましい。
【００２７】
本発明の範囲内では、「プロバソプレシン」とは、プレプロバソプレシンから取得され、プレプロバソプレシンについてはアミノ酸２９〜１６４位（国際公開第２００６／０１８３１５号および図３も参照）およびそれから取得可能な断片または部分ペプチド、特にコペプチン（断片：アミノ酸１２６〜１６４位（３９個のアミノ酸：配列：ＡＳＤＲＳＮＡＴＱＬ  ＤＧＰＡＧＡＬＬＬＲ  ＬＶＱＬＡＧＡＰＥＰ  ＦＥＰＡＱＰＤＡＹ）またはニューロフィジンＩＩ（断片：プレプロバソプレシンのアミノ酸３２〜１２４位（９３個のアミノ酸：配列：ＡＭＳＤＬＥＬＲＱＣ  ＬＰＣＧＰＧＧＫＧＲ  ＣＦＧＰＳＩＣＣＡＤ  ＥＬＧＣＦＶＧＴＡＥ  ＡＬＲＣＱＥＥＮＹＬ  ＰＳＰＣＱＳＧＱＫＡ  ＣＧＳＧＧＲＣＡＡＦ  ＧＶＣＣＮＤＥＳＣＶ  ＴＥＰＥＣＲＥＧＦＨ  ＲＲＡ）を含むヒトタンパク質またはポリペプチドを意味すると理解される。本発明によるこれらのポリペプチドは、グリコシド化、脂質化、または誘導体化のような翻訳後修飾を有してもよい。
【００２８】
１つのさらに好ましい実施形態では、本発明は、ニューロフィジンが検査対象患者で測定される、急性冠動脈症候群、特に急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）の診断、および／またはリスク層化、および／または早期もしくは鑑別診断、および／または予後に関する。
【００２９】
１つのさらなる実施形態では、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩは、追加的なマーカー、好ましくは急性冠動脈症候群、特に心筋梗塞または狭心症を既に示すマーカーを使用して測定されてもよい。
【００３０】
したがって、本発明は、検査対象患者の炎症マーカー、心臓血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群から選択される少なくとも１つの追加的マーカーを使用しても測定が実行される、本発明による方法のそのような実施形態に関する。
【００３１】
本発明によれば、炎症マーカーは、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−アルファのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１〜１１６、３〜１１６）、およびＶＣＡＭまたはＩＣＡＭのような接着分子を含む群から選択されてよく、心臓血管マーカー、特に心筋組織の壊死を示すマーカーおよび血圧に影響を与えるマーカーは、クレアチンキナーゼ、ミオグロビン、ミエロペルオキシダーゼ、ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列、心筋トロポニン、あるいはＣＲＰを含む群から選択されてよい。循環調節（プロ）ホルモン、特にプロガストリン放出ペプチド（ｐｒｏＧＲＰ）、プロエンドセリン−１、プロレプチン、プロニューロペプチド−Ｙ、プロソマトスタチン、プロニューロペプチド−ＹＹ、プロオピオメラノコルチン、プロアドレノメデュリン（ｐｒｏＡＤＭ）、または各々の場合その部分配列も含まれる。虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ならびにＣＫ−ＭＢを含む群に由来する少なくとも１つのマーカーから選択されてよい。さらに、神経ホルモンマーカーは、少なくとも１つのナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列であってよい。
【００３２】
１つの特に好ましい実施形態では、本発明は、バイオマーカーならびにプロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩと、ナトリウム利尿タンパク質、ＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列との特に有利な組み合わせに関する。
【００３３】
したがって、本発明は、マーカープロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩが、ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列との組み合わせで検査対象患者で測定される、急性冠動脈症候群、心筋梗塞または狭心症のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法に関する。前と同じように、ニューロフィジンＩＩ、コペプチンと、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、またはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰとの組み合わせ、特にコペプチンとｐｒｏＢＮＰとの組み合わせが、特に好ましい。
【００３４】
参照されたバイオマーカーの組み合わせが、上記（ｆｕｅｈｒｅｎ）を診断するための特異性および感受性の改善をもたらす相乗作用を有することが特に有利である（実施例を参照）。
【００３５】
本発明のさらなる実施形態では、本発明による方法は、測定が少なくとも１つの患者試料について実行されるマーカーの並列または同時測定によって（例えば、９６個以上の窪みを含有しているマルチタイタープレートを使用して）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のために実行できる。
【００３６】
さらに、本発明による方法およびそのための測定は、特にＫｒｙｐｔｏｒシステム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ／）を使用して、自動分析機に基づく診断デバイスで実行できる。
【００３７】
さらなる実施形態では、本発明による方法およびそのための測定は、単一パラメーター測定または多重パラメーター測定のいずれかの迅速検査（例えば側方流動検査（ｌａｔｅｒａｌ  ｆｌｏｗ  ｔｅｓｔ））を使用して実行できる。１つの特に好ましい実施形態は、自己診断検査、または救急治療診断に好適なデバイスを伴う。
【００３８】
本発明は、さらに、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、または狭心症のリスク層化のための、および／あるいは心筋梗塞または狭心症の早期もしくは鑑別診断または予後のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの使用に関する。
【００３９】
１つの特別な実施形態では、本発明は、ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列と組み合わせた、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、または狭心症の診断および／またはリスク層化のための、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩの使用に関する。
【００４０】
さらなる目的は、本発明による方法を実行するための、対応する診断デバイスを提供することである。
【００４１】
本発明の範囲内では、そのような診断デバイス、特にアレイまたはアッセイ（例えば、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡなど）が、最も幅の広い意味で本発明による方法を実行するためのデバイスとして理解される。
【００４２】
本発明は、さらに、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩを測定するための検出試薬、および場合により上述の追加的なマーカーを含有する、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、および／または狭心症のリスク層化用のキットに関する。例えば、そのような検出試薬には抗体が含まれる。
【００４３】
１つの特別な実施形態では、本発明は、ナトリウム利尿タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、もしくはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、または各々の場合その部分配列、および場合により上述の追加的なマーカーと組み合わせた、プロバソプレシン（ｐｒｏＡＶＰ）またはその断片および部分ペプチド、特にコペプチンまたはニューロフィジンＩＩを測定するための検出試薬を含有する、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、および／または狭心症の診断および／またはリスク層化用のキットに関する。例えば、そのような検出試薬には抗体が含まれる。
【００４４】
以下の実施例および図は、本発明のより詳細な説明に使用されるが、本発明を前記実施例および図に限定しない。
【実施例】
【００４５】
胸痛の１次症状で病院の救急治療に入院した患者は、初回診察中に血液試料を採取された。
【００４６】
心筋梗塞（ＭＩ）の患者１３１人（年齢の中央値：６４．０歳）を、合計１８０日の期間にわたって急性ＭＩ症状の出現について観察した。
【００４７】
症状（胸痛）の出現および病院入院後の最初の６時間以内で、ＭＩ症状出現の０〜２時間、２〜４時間、および４〜６時間後に各々１回の、３回の採血を行った。
【００４８】
各々の症例で、コペプチンおよびＮＴ−ＰｒｏＢＮＰを測定した。
【００４９】
入院後、治療介入（標準、Ｂｒａｕｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を参照）後の最初の４日以内（２〜５日目）に、各々の症例について１回の採血を実施して、その後コペプチンを測定した。
【００５０】
退院後（病院滞在の中央値：７．２日）、１８０日の期間にわたって患者を観察した。重篤な心不全の発症および／または患者の死亡が、決定すべき事象であった。観察された患者のうち、１１５人は事象を示さず（ｏ．Ｅ．）、１６人は事象を示した（＋Ｅ．）。群の年齢の中央値は、６３．８歳および６４．５歳だった。
【００５１】
ＭＩの早期診断およびリスク層化用バイオマーカーの診断有効度を評価するために、個々の患者採血からの結果を、ＭＩの症状を示さなかった（対照）２００個体（年齢の中央値：６５．２歳）からの結果と比較した。表１ならびに図１および図２に結果を示す。
【００５２】
表１は、症状の出現後の指定時間における、対照の対応する特異性（値＜カットオフ（閾値））と比較した、ＭＩ患者の感受性（値＞カットオフ（閾値））を示す。
【００５３】
最初期の観察期間（０〜２時間）以内に、コペプチンは、対照と比較して大きく上昇した。例えば、全対照のわずか４．５％だけが、７．５ｐｍｏｌ／Ｌ（例示的カットオフ（閾値））より高いコペプチン値を示した（特異性＝９５．５％）一方で、その後事象を示さなかった患者の７８．３％、および事象を示した患者の８７．５％もが、７．５ｐｍｏｌ／Ｌより高いコペプチン濃度を示した（感受性）。これは、慣例的な診断法でこれまで使用されているマーカー（トロポニン、ミオグロビン、ＣＫ−ＭＢ）と比較して、複数の時点での驚くべき感受性の増加をもたらし（トロポニン；ＣＫ−ＭＢは一般的に事象から６時間後にのみ出現した一方で、ミオグロビンはより低い感受性で初期に現れたが、その後およそ２時間後に再び低下し、不確実な診断窓をもたらした）、したがって、この増加は、これらのバイオマーカーが、急性冠動脈症候群のリスク層化だけでなくＭＩの早期または鑑別診断に使用されることを可能にした。有利なことには、コペプチンの増加、つまり採血の時間は、早期診断にとって２次的に重要だった（７．５ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフで、例えば、０〜２／２〜４／４〜６時間において、それぞれ７８．３／８０．０／７３％の感受性）。
【００５４】
ｐｒｏＢＮＰまたはＮＴ−ＰｒｏＢＮＰとの組み合わせ
驚くべきことに、ｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ−ＰｒｏＢＮＰ）とコペプチンとの組み合わせが、ＭＩ早期診断の感受性の著しい増加を可能にしたことが示された（表１を参照）。ｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ−ＰｒｏＢＮＰ）は、コペプチン＞７．５ｐｍｏｌ／Ｌおよび／またはｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ−ＰｒｏＢＮＰ）＞２００ｐｍｏｌ／ｍＬを、例えば、対応する個々のマーカーに匹敵するおよそ９５％の特異性で評価した結果、コペプチンの診断有効度より劣っていたが、個々のマーカーとしてのコペプチンの感受性と比較して、非事象群においては全ての時点で３〜６％の感受性の増加、および事象群においては６〜９．５％の増加を可能にした。
【００５５】
【表１】
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試料回収、バイオマーカー分析：
採血は、標準的な血清モノベット（ｍｏｎｏｖｅｔｔｅｎ）を使用して行った。２０〜４０分間の凝固時間後、２０００ｇで１５分間遠心分離を実施し、その後デカントにより血清を分離した。血清試料は、さらなる使用のために−２０℃で保管した。
【００５６】
Ｏｍｌａｎｄら（Ｏｍｌａｎｄ  Ｔ．，Ｐｅｒｓｓｏｎ  Ａ．，Ｎｇ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐｒｏ−Ｂ−ｔｙｐｅ  ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２；１０６：２９１３−２９１８）に従い、発光イムノアッセイを使用して、ＮＴ−ＰｒｏＢＮＰを測定した。  
【００５７】
ＢＲＡＨＭＳ  ＡＧ社製のコペプチン発光イムノアッセイを使用して、コペプチンを測定した。コペプチン測定法は、Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  Ｎ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．２００６  Ｊａｎ，５２（１），１１２−１１９で詳細に記載されている。要約すると、５０マイクロリットルの試料を、コペプチン抗体（ＡＢ１）で被膜された試験管にピペットで移し、アクリジニウムエステル標識抗コペプチン抗体（ＡＢ２）の２００マイクロリットル溶液と混合し、室温で２時間インキュベートした。非結合（遊離）の標識抗体を、洗浄溶液（Ｌｕｍｉｔｅｓｔ洗浄溶液、Ｂｒａｈｍｓ  ＡＧ）で４回洗浄することにより除去した後、結合したアクリジニウムエステル標識抗体を、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ社製のルミノメーターで測定した。
【００５８】
予後（事象発生の予測）：
驚くべきことに、入院後１８０日以内に事象を示したＭＩ患者は、事象を示さない患者よりさらに高いコペプチン濃度を示したことが示された。ＭＩ症状出現後の６時間以内に、コペプチンは、３０ｐｍｏｌ／Ｌの例示的カットオフ（閾値）で、およそ１：２の相対的リスクを示した（＜３０ｐｍｏｌ／Ｌの患者と比較して、コペプチン＞３０の患者は、その後の事象について２倍のリスクを有した）。
【００５９】
予想通りに、濃度は介入後に減少した（２日目以降．、表２ｂ）。この場合、驚くべきことに、その後事象を示した患者は、バイオマーカーの遥かに低い低減を示したことが示された。これは、３０ｐｍｏｌ／Ｌより高いコペプチン値を有する患者にとって、１：７．１４の値にまでリスクが急増することに結びついた。
【００６０】
【表２Ａ】
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【００６１】
【表２Ｂ】
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表中および図中の凡例：ｓｕｒｖ．＝生存、Ｅ．＝事象：死亡、重篤な心不全の発症、カットオフ＝ｐｍｏｌ／Ｌでの閾値、Ｓｅｎｓ＝感受性、Ｓｐｅｆ＝特異性、ｏ．＝無し。
【００６２】
ニューロフィジン：
上記の記載によりニューロフィジン用のラジオイムノアッセイを準備し（Ｐｕｌｌａｎ（上記））、神経下垂体ニューロフィジンを単離し定量した。このようにして、ウサギを免疫し、高力価の抗ニューロフィジン抗血清の回収をもたらした。最も高力価の抗血清を、イムノアッセイ用に１：１００，０００の濃度で使用した。クロラミンＴ法を使用して、精製ニューロフィジンを放射ヨウ素標識（ｒａｄｉｏｉｏｄｉｚｅ）し、アッセイにおいてトレーサーとして使用した。ウマ標準血清中の精製ニューロフィジンを希釈して、基準物質として使用した。アッセイは以下のように実行した。５０−μＬの試料または標準物質を、１００μＬのトレーサー（１測定当たり１２，０００ｄｐｍ）および１００μＬの希釈された抗ニューロフィジン抗血清と混合し、４℃で２４時間インキュベートした。１００ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５および０．１％ＢＳＡを、緩衝液として使用した。６０％エタノールを加え、次に４℃および５，０００ｇで１５分間遠心分離することにより、抗体に結合したトレーサーを遊離トレーサーから分離した。上澄みを廃棄し、ペレット中の残留放射能を測定した。分析は、Ｍｕｌｔｉｃａｌｃソフトウェアを使用して実施した。アッセイは、２２ｐｇ／ｍＬの分析検出限界を有していた。アッセイは、４００ｐｇ／ｍＬまでの測定範囲を有していた。下記に記述するように、様々な患者に由来する血漿試料を測定するためにアッセイを使用した。＞４００ｐｇ／ｍＬの測定値を有する試料は、測定範囲内の測定値をもたらすように適切に希釈して測定した。
【００６３】
心筋梗塞／診断
急性心筋梗塞の６６患者で、心筋梗塞の発生後６時間以内に試料を採取し、ニューロフィジンを測定した。比較の目的のために、２００人の健康対照でニューロフィジンを測定した。心筋梗塞の診断についての受信者−操作者−特性分析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ−Ｏｐｅｒａｔｏｒ−Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  Ａｎａｌｙｓｅ）は、０．９５のＡＵＣをもたらした。カットオフ値が２１３ｐｇ／ｍＬの場合、６２．６％の感受性が９８％の特異性で得られた。カットオフ値が１３６．１ｐｇ／ｍＬの場合、８４％の感受性が９５％の特異性で得られた。
【００６４】
心筋梗塞／予後
急性心筋梗塞の６６患者で、心筋梗塞の発生後６時間以内または梗塞後２日目に試料を採取し、ニューロフィジンを測定した。３６０日の期間、患者を観察した。この期間中、５８患者は有害事象を示さず、８人が死亡、または心不全にため再入院した。
【００６５】
１日目の予後（梗塞発生後＜６時間）：
受信者−操作者−特性分析を使用して、心不全による死亡または再入院の予後についての最良のカットオフ値（感受性および特異性の最大積として定義された）：７７７ｐｇ／ｍＬを決定した。このカットオフ値では、予後の感受性は６２．５％であり、特異性は７３％だった。７７７ｐｇ／ｍＬのカットオフ値における有害事象の尤度比は、２．３だった。
【００６６】
２日目の予後：
受信者−操作者−特性分析を使用して、心不全による死亡または再入院の予後についての最良のカットオフ値（感受性および特異性の最大積として定義された）：２６１ｐｇ／ｍＬを決定した。このカットオフ値では、予後の感受性は６８．８％であり、特異性は７３％だった。２６１ｐｇ／ｍＬのカットオフ値における有害事象の尤度比は、２．６だった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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