(57)【要約】本明細書において、VEGFアンタゴニストと、PDGF受容体チロシンキナーゼを少なくとも阻害することができるプロテインキナーゼ阻害剤とが、対象における腫瘍を処置または防止するのに十分な時間および量で投与される組み合わせ治療を使用して腫瘍を処置する方法が開示される。2010518013.tif 000003
2010518013.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
VEGFアンタゴニストおよびプロテインキナーゼ阻害剤を対象に投与する段階を含む、対象における腫瘍を処置する方法であって、
VEGFアンタゴニストがVEGFの細胞受容体との結合を妨害し、
プロテインキナーゼ阻害剤がPDGF受容体チロシンキナーゼを少なくとも阻害することができ、かつ
投与する段階が対象における腫瘍を処置または防止するのに十分な時間および量でなされる、
方法。
【請求項２】
VEGFアンタゴニストが、VEGFと特異的に結合することができるアプタマーである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
VEGFアンタゴニストが可溶性VEGF受容体タンパク質またはそのVEGF結合断片またはキメラVEGF受容体タンパク質である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
キメラVEGF受容体タンパク質が、Flt-1またはKDRに由来する細胞外ドメイン2を少なくとも含む、請求項3記載の方法。
【請求項５】
VEGFアンタゴニストが抗VEGF抗体である、請求項1記載の方法。
【請求項６】
抗VEGF抗体がモノクローナル抗体である、請求項5記載の方法。
【請求項７】
モノクローナル抗体が、キメラ抗体、完全ヒト抗体、またはヒト化抗体である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
抗VEGF抗体が、ベバシズマブ、G6シリーズ抗体、B20シリーズ抗体、またはそれらのVEGF結合断片である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
抗VEGF抗体がベバシズマブである、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
プロテインキナーゼ阻害剤が、PDGF受容体チロシンキナーゼおよびVEGF受容体チロシンキナーゼの両方を阻害することができる、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
プロテインキナーゼ阻害剤が、スニチニブまたは薬学的に許容されるその塩型である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
腫瘍が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（NHL）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド腫瘍、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、および多発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍が非小細胞肺癌である、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
癌が転移性である、請求項12記載の方法。
【請求項１５】
患者が以前に処置されていない、請求項12記載の方法。
【請求項１６】
VEGFアンタゴニストがベバシズマブであり、かつプロテインキナーゼ阻害剤がスニチニブである、請求項1記載の方法。
【請求項１７】
ベバシズマブが、隔週で10mg/kgで、または3週間毎に15mg/kgで、対象に静脈内投与され、かつスニチニブが、2、3、または4週間、25mgの1日用量で、対象に経口投与され、続いて1または2週間、休薬される、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
ベバシズマブが、3週間毎に15mg/kgで、対象に静脈内投与され、かつスニチニブが、2週間、25mgの1日用量で、対象に経口投与され、続いて1週間、休薬される、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
1種類または複数種類の化学療法剤を対象に投与する段階をさらに含む、請求項1または16記載の方法。
【請求項２０】
投与される化学療法剤がパクリタキセルである、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
投与される化学療法剤がカルボプラチンおよびパクリタキセルである、請求項19記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2007年2月1日出願の米国特許仮出願第60/887,688号の恩典を主張し、その開示は参照により完全に本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
血管系の発達は、多くの生理学的および病理学的な過程のための基本的要件である。胚および腫瘍のような活発に成長中の組織は、充分な血液供給を必要とする。それらは、血管形成と呼ばれる過程を介した新しい血管の形成を促進する血管形成促進因子を産生することによりこの必要を満たす。血管形成は、以下の工程の全てまたは多くを含む、複雑であるが整然とした生物学的事象である：（a）内皮細胞（EC）が既存の内皮細胞から増殖するか、または前駆細胞から分化する；（b）ECが遊走し癒合して索様構造を形成する；（c）次いで、血管索が管形成を受けて中心に内腔を有する管を形成する；（d）既存の索または管が出芽して二次的な血管を形成する；（e）原始血管叢がさらなるリモデリングおよび再形成を受ける；そして（f）内皮周囲細胞が動員されて内皮管を包囲し、血管に維持機能および調整機能を与える；そのような細胞には、毛細血管のための周皮細胞、より大きい血管のための平滑筋細胞、および心臓における心筋細胞が含まれる。Hanahan, D. Science 277:48-50 (1997); Hogan, B. L. & Kolodziej, P. A. Nature Reviews Genetics. 3:513-23 (2002); Lubarsky, B. & Krasnow, M. A. Cell. 112:19-28 (2003)。
【０００３】
血管形成が多様な障害の病原に関係していることは現在十分に確立されている。これらには、固形腫瘍および転移、動脈硬化、後水晶体線維増殖症、血管腫、慢性炎症、増殖網膜症、例えば、糖尿病性網膜症のような眼内新生血管疾患、加齢黄斑変性（AMD）、血管新生緑内障、移植された角膜組織およびその他の組織の免疫拒絶、関節リウマチ、ならびに乾癬が含まれる。Folkman et al., J. Biol. Chem., 267:10931-10934 (1992)；Klagsbrun et al., Annu. Rev. Physiol. 53:217-239 (1991)；およびGarner A., "Vascular diseases", In: Pathobiology of Ocular Disease. A Dynamic Approach, Garner A., Klintworth GK, eds., 2nd Edition (Marcel Dekker, NY, 1994), pp 1625-1710。
【０００４】
腫瘍成長の場合、血管形成は、過形成から新形成への移行のため、そして腫瘍の成長および転移のための栄養分の供給のため、重大であると考えられる。Folkman et al., Nature 339:58 (1989)。新血管形成により、腫瘍細胞は、正常細胞と比較して成長優位性および増殖自律性を獲得できるようになる。腫瘍は、通常、単一の異常細胞として始まり、それは、利用可能な毛細血管床からの距離のため数ミリメートル立方のサイズにしか増殖することができず、長期間、さらなる成長および播種なしに「休止」状態のままである場合がある。次いで、いくつかの腫瘍細胞が血管形成表現型に切り替わって内皮細胞を活性化し、それら内皮細胞が新しい毛細血管へと増殖し成熟する。これらの新たに形成された血管は、原発腫瘍の成長の継続を可能にするのみならず、転移性腫瘍細胞の播種および再コロニー形成をも可能にする。従って、乳癌およびその他のいくつかの腫瘍において、腫瘍セクション内の微小血管の密度と患者の生存率との間には相関が観察されている。Weidner et al., N Engl. J. Med 324:1-6 (1991)；Horak et al., Lancet 340:1120-1124 (1992)；Macchiarini et al., Lancet 340: 145-146 (1992)。血管形成切り替えを制御する正確な機序はよく理解されていないが、腫瘍塊の新血管形成は、多数の血管形成の刺激剤および阻害剤の正味のバランスに起因すると考えられている（Folkman, 1995, Nat Med 1(1):27-31）。
【０００５】
血管発達の過程は、厳密に調節されている。大部分が周囲の細胞によって産生される分泌因子である相当数の分子が、ECの分化、増殖、遊走、および索様構造への癒合を調節することが現在までに示されてきた。例えば、血管内皮増殖因子（VEGF）は、血管形成の刺激および血管透過性の誘導に関与している重要な因子として同定されている。Ferrara et al., Endocr. Rev. 18:4-25 (1997)。単一のVEGF対立遺伝子の損失ですら、胚致死をもたらすという所見は、この因子が血管系の発達および分化において果たしている交換不可能な役割を示している。さらに、VEGFは、腫瘍および眼内障害に関連した新血管形成の重要なメディエータであることが示されている。Ferrara et al., Endocr. Rev., 前記。VEGF mRNAは、調査されたヒト腫瘍の大多数により過剰発現されている。Berkman et al., J. Clin. Invest. 91 :153-159 (1993)；Brown et al., Human Pathol. 26:86-91 (1995)；Brown et al., Cancer Res. 53:4727-4735 (1993)；Mattern et al., Brit. J. Cancer 73:931-934 (1996)；Dvorak et al., Am. J. Pathol. 146:1029-1039 (1995)。
【０００６】
抗VEGF中和抗体は、ヌードマウスにおける多様なヒト腫瘍細胞系の成長を抑制し（Kim et al., Nature 362:841-844 (1993)；Warren et al., J. Clin. Invest. 95: 1789-1797 (1995)；Borgstrom et al., Cancer Res. 56:4032-4039 (1996)；Melnyk et al., Cancer Res. 56:921-924 (1996)）、虚血性網膜障害のモデルにおける眼内血管形成も阻害する。Adamis et al., Arch. Ophthalmol. 114:66-71 (1996)。従って、抗VEGFモノクローナル抗体またはその他のVEGF作用の阻害剤は、腫瘍および様々な眼内新血管形成障害の処置のための有望な候補である。そのような抗体は、例えば、1998年1月14日公開のEP817,648；ならびにいずれも1998年10月15日公開のWO98/45331およびWO98/45332に記載されている。
【０００７】
抗VEGF抗体のような血管形成阻害剤により達成される癌の処置における相当の進歩にも関わらず、改良された治療、特に全体的な効力をさらに増強するものが、依然として求められている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、VEGFアンタゴニストが、PDGFR阻止活性を少なくとも有するプロテインキナーゼ阻害剤と組み合わせられ、それにより抗腫瘍活性を生じる、腫瘍を処置するための組み合わせ治療を提供する。ある種の態様において、VEGFアンタゴニストは、VEGFの細胞受容体との結合を妨害する化合物である。そのようなVEGF阻止アンタゴニストの例には、可溶性VEGF受容体、VEGFに特異的なアプタマーまたはペプチボディ、および抗VEGF抗体が含まれるが、これらに限定はされない。一つの態様において、抗VEGF抗体はベバシズマブである。
【０００９】
一つの局面において、プロテインキナーゼ阻害剤はPDGFRに特異的である。他の局面において、プロテインキナーゼ阻害剤は、PDGFRおよびVEGFR-2を含む複数のRTKを標的とし、それによりPDGF経路およびVEGF経路の両方を阻止する。一つの態様において、プロテインキナーゼ阻害剤はスニチニブ（SUTENT（登録商標））である。
【００１０】
本発明の方法は、異なる癌、すなわち固形腫瘍および軟組織腫瘍の両方を同様に処置するために使用され得る。本発明の処置が受け入れられる癌の非限定的な例には、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（NHL）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド腫瘍、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、および多発性骨髄腫が含まれる。ある種の局面において、癌は転移性である。他の局面において、癌は非転移性である。
【００１１】
ある種の態様において、ベバシズマブおよびスニチニブが、腎細胞癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、乳癌、または膵臓癌のような癌の組み合わせ治療において使用される。ある種の態様において、組み合わせて使用される場合、ベバシズマブは、約0.05mg/kg〜約15mg/kgの範囲で投与される。一つの態様において、約0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg、5.0mg/kg、6.0mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、9.0mg/kg、10mg/kg、または15mg/kg（またはそれらの任意の組み合わせ）の1回または複数回の用量が対象に投与され得る。そのような用量は、間欠的に、例えば、毎日、3日毎、1週間毎、または2〜3週間毎に投与され得る。もう一つの態様において、組み合わせて使用される場合、ベバシズマブは、隔週で10mg/kg、または3週間毎に15mg/kg、対象に静脈内投与され、スニチニブは、1〜4週間、約25mg〜約50mgの1日用量で対象に経口投与され、続いて1〜2週間休薬される。さらにもう一つの態様において、スニチニブは、2週間、約25mg/日、投与され、続いて1週間休薬される。
【００１２】
処置される特定の癌適応症に依って、本発明の組み合わせ治療は、化学療法剤のような付加的な治療剤、または放射線治療もしくは手術のような付加的な治療と組み合わせられ得る。多くの公知の化学療法剤が、本発明の組み合わせ治療において使用され得る。ある種の態様において、本発明の組み合わせ治療は、複数種の化学療法剤と組み合わせられ得る。一つの態様において、本発明の組み合わせ治療は、化学療法剤パクリタキセルと組み合わせられる。もう一つの態様において、本発明の組み合わせ治療は、化学療法剤カルボプラチンおよびパクリタキセルと組み合わせられる。ある種の態様において、特定の適応症の処置にとって標準的な化学療法剤が使用される。もう一つの態様において、組み合わせにおいて使用される各治療剤の投薬量または頻度は、他の剤なしで使用された場合の対応する剤の投薬量または頻度と同一であるか、またはそれより少ない。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図1Aおよび1Bは、胸腺欠損ヌードマウスにおける確立されたLS174Tヒト結腸癌異種移植片の成長阻害を示す（各群n=10）。スニチニブおよび抗VEGF（MAb B20-4.1）についての投与スケジュールは、それぞれ矢じりおよび矢印によって示される。投薬の詳細に関しては、実施例1を参照のこと。図1Bは生存率を示すカプランマイヤープロットである。
【図２】図2Aおよび2Bは、胸腺欠損ヌードマウスにおける確立されたH1299ヒト非小細胞肺癌（NSCLC）異種移植片の成長阻害を示す（各群n=10）。図2Bは生存率を示すカプランマイヤープロットである。
【図３】もう一つのH1299異種移植片成長阻害研究の結果を示す（各群n=10）。二つの異なるスニチニブ用量が単独治療および組み合わせの両方のために使用された。投薬の詳細に関しては、実施例1を参照のこと。
【図４】胸腺欠損ヌードマウスにおける確立された786-O腎臓細胞癌（RCC）異種移植片の成長阻害を示す（各群n=10）。
【図５】図5Aおよび5Bは、胸腺欠損ヌードマウスにおける確立されたBx-PC3ヒト膵臓癌異種移植片の成長阻害を示す（各群n=10）。二つの異なるスニチニブ用量が単独治療および組み合わせの両方のために使用された。投薬の詳細に関しては、実施例1を参照のこと。図5Bは生存率を示すカプランマイヤープロットである。
【図６】SCIDマウスにおける確立されたCaki-2腎細胞癌（RCC）異種移植片の成長阻害を示す（各群n=10）。2種類の異なるスニチニブ用量が単独治療および組み合わせの両方のために使用された。投薬の詳細に関しては、実施例1を参照のこと。
【図７】図7Aおよび7Bは、Caki-2 RCC異種移植片（7A）およびH1299 NSCLC異種移植片（7B）の成長阻害を要約し比較する。各図中、低いスニチニブ用量の結果のみが示される。投薬の詳細に関しては、実施例1を参照のこと。
【図８】図8A〜Cは、処置されたH1299 NSCLC異種移植片における腫瘍の形態学的変化を例示する。8Aは、異なる処置の下での腫瘍壊死の程度を示す。壊死の百分率はH&E染色により測定される;8Bは、PECAM IHCによって測定されるような、異なる処置の下での血管密度の変化を表す;8Cは、抗VEGF（B20-4.1）およびスニチニブの組み合わせにより処置されたH1299異種移植片における腫瘍および腫瘍血管系を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
詳細な説明
I. 定義
本明細書を解釈するため、以下の定義が適用され、適切である場合は常に、単数形で使用された用語は複数形も含み、その逆も同様である。以下に示された定義が、参照によって本明細書に組み入れられる文書と矛盾する場合には、以下に示された定義が適用されるものとする。
【００１５】
「VEGF」または「VEGF-A」という用語は、 Leung et al. Science, 246:1306 (1989)およびHouck et al. Mol. Endocrin., 5: 1806 (1991)によって記載されたような、165アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子、ならびに関連する121アミノ酸、189アミノ酸、および206アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子、そしてそれらの天然に存在する対立形質型およびプロセシングされた型をさすために使用される。VEGF-Aは、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F、およびPlGFを含む遺伝子ファミリーの一部である。VEGF-Aは、主として、2種類の高親和性受容体チロシンキナーゼVEGFR-1（Flt-1）およびVEGFR-2（Flk-1/KDR）に結合し、後者は、VEGF-Aの血管内皮細胞分裂促進シグナルの主要な伝達物質である。さらに、ニューロピリン-1は、ヘパリン結合性VEGF-Aアイソフォームの受容体として同定されており、血管発達において役割を果たし得る。「VEGF」または「VEGF-A」という用語は、 マウス、ラット、または霊長類のような非ヒト種に由来するVEGFもさす。時に、特定の種に由来するVEGFは、ヒトVEGFのhVEGFまたはマウスVEGFのmVEGFのような用語により示される。「VEGF」という用語は、165アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子のアミノ酸8〜109または1〜109を含む、切断型ポリペプチドまたはポリペプチド断片をさすためにも使用される。任意のそのような型のVEGFの言及は、本願において、例えば、「VEGF(8〜109)」、「VEGF(1〜109)」、または「VEGF165」によって同定され得る。「切断型の」野生型VEGFについてのアミノ酸位置は、野生型VEGF配列に示されるように番号付けされる。例えば、切断型の野生型VEGFにおけるアミノ酸17位（メチオニン）は、野生型VEGFにおいても17位（メチオニン）である。切断型の野生型VEGFは、KDRおよびFlt-1受容体に対して、野生型VEGFに匹敵する結合親和性を有する。
【００１６】
「VEGFバリアント」という用語は、本明細書において使用されるように、野生型VEGF配列の中に一つまたは複数のアミノ酸変異を含むVEGFポリペプチドをさす。任意で、一つまたは複数のアミノ酸変異はアミノ酸置換を含む。本明細書に記載されたVEGFバリアントの簡潔な表記のため、番号は、（Leung et al., 前記およびHouck et al., 前記において提供された）推定野生型VEGFのアミノ酸配列に沿ったアミノ酸残基の位置をさすことに注意されたい。
【００１７】
「野生型配列」ポリペプチドは、天然由来のポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。従って、野生型配列ポリペプチドは、任意の哺乳動物に由来する、天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。そのような野生型配列ポリペプチドは、天然から単離することもできるし、または組換え手段もしくは合成手段によって産生することもできる。「野生型配列」ポリペプチドという用語は、具体的には、天然に存在する切断型または分泌型のポリペプチド（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在するバリアント型（例えば、オルタナティブスプライシングを受けた型）、およびポリペプチドの天然に存在する対立形質バリアントを包含する。
【００１８】
ポリペプチド「バリアント」とは、野生型配列ポリペプチドと少なくとも約80％のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのようなバリアントには、例えば、ポリペプチドのN末端またはC末端において、一つまたは複数のアミノ酸残基が付加または欠失しているポリペプチドが含まれる。通常、バリアントは、野生型配列ポリペプチドと少なくとも約80％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約90％のアミノ酸配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも約95％のアミノ酸配列同一性を有するであろう。
【００１９】
「VEGFの生物学的活性」には、任意のVEGF受容体との結合、または正常および異常の両方の血管形成および脈管形成の制御のような任意のVEGFシグナリング活性（Ferrara and Davis-Smyth (1997) Endocrine Rev. 18:4-25；Ferrara (1999) J. Mol. Med. 77:527-543）；胚の脈管形成および血管形成の促進（Carmeliet et al. (1996) Nature 380:435-439；Ferrara et al. (1996) Nature 380:439-442）；ならびに雌生殖器系における、および骨成長および軟骨形成のための周期的な血管増殖の調節（Ferrara et al. (1998) Nature Med. 4:336-340；Gerber et al. (1999) Nature Med. 5:623-628）が含まれる。血管形成および脈管形成における血管形成因子であることに加えて、VEGFは、多面的な増殖因子として、内皮細胞生存、血管透過性および血管拡張、単球走化性、ならびにカルシウム流入のようなその他の生理学的過程において複数の生物学的効果を示す（Ferrara and Davis-Smyth (1997), 前記およびCebe-Suarez et al. Cell. Mol. Life Sci. 63:601-615 (2006)）。さらに、最近の研究により、網膜色素上皮細胞、膵管細胞、およびシュワン細胞のような少数の非内皮細胞型に対するVEGFの分裂促進効果が報告されている。Guerrin et al. (1995) J. Cell Physiol. 164:385-394；Oberg-Welsh et al. (1997) Mol. Cell. Endocrinol. 126:125-132；Sondell et al. (1999) J. Neurosci. 19:5731-5740。
【００２０】
「血管形成阻害剤」または「抗血管形成剤」とは、血管形成、脈管形成、または望ましくない血管透過性を直接的または間接的に阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質をさす。抗血管形成剤には、血管形成因子またはその受容体に結合し、その血管形成活性を阻止する剤が含まれることが理解されるべきである。例えば、抗血管形成剤は、上で定義されたような血管形成剤に対する抗体またはその他のアンタゴニスト、例えば、VEGF-AまたはVEGF-A受容体（例えば、KDR受容体もしくはFlt-1受容体）に対する抗体、GLEEVEC（登録商標）（メシル酸イマチニブ）のような抗PDGFR阻害剤である。抗血管形成剤には、天然の血管形成阻害剤、例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン等も含まれる。例えば、Klagsbrun and D'Amore, Annu. Rev. Physiol., 53:217-39 (1991)；Streit and Detmar, Oncogene, 22:3172-3179 (2003)（例えば、悪性メラノーマにおける抗血管形成治療を列挙している表3）；Ferrara & Alitalo, Nature Medicine 5:1359-1364 (1999)；Tonini et al., Oncogene, 22:6549-6556(2003)（例えば、公知の抗血管形成因子を列挙している表2）；およびSato. Int. J. Clin. Oncol., 8:200-206(2003)（例えば、表1は、臨床試験で使用された抗血管形成剤を列挙している）を参照のこと。
【００２１】
「VEGFアンタゴニスト」とは、1種類または複数種類のVEGF受容体との結合を含む、VEGF活性を中和するか、阻止するか、阻害するか、抑止するか、低下させるか、または妨害することができる分子（ペプチド性または非ペプチド性）をさす。ある種の態様において、VEGFアンタゴニストは、VEGFの発現レベルまたは生物学的活性を少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、またはそれ以上、低下させるかまたは阻害する。一つの態様において、VEGFアンタゴニストによって阻害されるVEGFは、VEGF(8〜109)、VEGF(1〜109)、またはVEGF165である。本発明の方法において有用なVEGFアンタゴニストには、抗VEGF抗体およびそれらの抗原結合断片と、VEGFに特異的に結合するポリペプチドまたはそれらの断片と、VEGFに特異的に結合し、それにより一つまたは複数の受容体との結合を隔離する受容体分子および誘導体（例えば、可溶性VEGF受容体タンパク質、またはそのVEGF結合断片、またはキメラVEGF受容体タンパク質）のような、VEGFと特異的に結合するペプチド性化合物または非ペプチド性化合物；VEGFポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも一つの断片に相補的なアンチセンス核酸塩基オリゴマー；VEGFポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも一つの断片に相補的な低分子RNA；VEGFを標的とするリボザイム；VEGFに対するペプチボディ（peptibody）；ならびにVEGFアプタマーが含まれる。
【００２２】
「抗VEGF抗体」とは、十分な親和性および特異性でVEGFに結合する抗体である。選択される抗体は、通常、VEGFに対する十分に強い結合親和性を有し、例えば、該抗体は、100nM〜1pMの間のKd値でhVEGFに結合し得る。抗体親和性は、例えば、（PCT出願公開番号WO2005/012359に記載されたようなBIAcoreアッセイのような）表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ；酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）；および競合アッセイ（例えば、RIA）によって決定され得る。ある種の態様において、本発明の抗VEGF抗体は、VEGF活性が関与している疾患または状態を標的とし、それを妨害する際の治療剤として使用され得る。また、前記抗体は、例えば、治療薬としての有効性を評価するために、その他の生物学的活性アッセイに供され得る。そのようなアッセイは当技術分野において公知であり、標的抗原およびその抗体用に意図された使用に依存する。例には、（下記の実施例に記載されているような）HUVEC阻害アッセイ；（例えば、WO89/06692に記載されているような）腫瘍細胞増殖阻害アッセイ；抗体依存性細胞障害（ADCC）アッセイおよび補体媒介細胞障害（CDC）アッセイ（米国特許第5,500,362号）；ならびにアゴニスト活性アッセイまたは造血アッセイ（WO95/27062参照）が含まれる。抗VEGF抗体は、通常、VEGF-BまたはVEGF-Cのような他のVEGFホモログに結合せず、PlGF、PDGF、またはbFGFのような他の増殖因子にも結合しない。
【００２３】
ある種の態様において、抗VEGF抗体には、Presta et al. Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)に従って作製された組換えヒト化抗VEGFモノクローナル抗体である、ハイブリドーマATCC HB 10709によって産生されたモノクローナル抗VEGF抗体A4.6.1と同一のエピトープに結合するモノクローナル抗体が含まれる。一つの態様において、抗VEGF抗体は、「rhuMAb VEGF」または「AVASTIN（登録商標）」としても公知の「ベバシズマブ（BV）」である。それは、変異型ヒトIgG1フレームワーク領域と、ヒトVEGFのその受容体との結合を阻止するマウス抗hVEGFモノクローナル抗体A.4.6.1に由来する抗原結合相補性決定領域とを含む。フレームワーク領域の大部分を含むベバシズマブのアミノ酸配列のおよそ93％が、ヒトIgG1に由来し、該配列の約7％がマウス抗体A4.6.1に由来する。ベバシズマブは、約149,000ダルトンという分子量を有し、グリコシル化されている。ベバシズマブは、転移性結腸直腸癌（CRC）および非小細胞肺癌（NSCLC）を処置するための化学療法レジメンとの組み合わせ使用について、FDAによって承認されている。Hurwitz et al., N. Engl. J. Med. 350:2335-42 (2004)；Sandler et al., N. Engl. J. Med. 355:2542-50 (2006)。現在、ベバシズマブは、様々な癌適応症を処置するための多くの進行中の臨床試験において調査されている。Kerbel, J. Clin. Oncol. 19:45S-51S (2001)；De Vore et al, Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19:485a. (2000)；Hurwitz et al., Clin. Colorectal Cancer 6:66-69 (2006)；Johnson et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:315a (2001)；Kabbinavar et al. J. Clin. Oncol. 21 :60-65 (2003)；Miller et al., Breast Can. Res. Treat. 94:Suppl 1:S6 (2005)。
【００２４】
ベバシズマブおよびその他のヒト化抗VEGF抗体は、2005年2月26日発行の米国特許第6,884,879号にさらに記載されている。さらなる抗体には、PCT公開番号WO2005/012359、PCT公開番号WO2005/044853、および米国特許出願第60/991,302号に記載されるような、G6シリーズまたはB20シリーズの抗体（例えば、G6-31、B20-4.1）が含まれ、これらの特許出願の内容は、参照によって本明細書に明示的に組み入れられる。さらなる抗体については、米国特許第7,060,269号、第6,582,959号、第6,703,020号；第6,054,297号；WO98/45332；WO96/30046；WO94/10202；EP0666868B1；米国特許出願公開第2006009360号、第20050186208号、第20030206899号、第20030190317号、第20030203409号、および第20050112126号；ならびにPopkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)を参照されたい。その他の抗体には、残基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K1O1、E103、およびC104を含む、または残基F17、Y21、Q22、Y25、D63、I83、およびQ89を含むヒトVEGF上の機能性エピトープに結合するものが含まれる。
【００２５】
本発明に係る「G6シリーズ抗体」とは、その全開示が参照によって本明細書に明示的に組み入れられるPCT公開番号WO2005/012359の図7、24〜26、および34〜35のいずれかに記載のG6抗体またはG6由来抗体の配列に由来する抗VEGF抗体である。その全開示が参照によって本明細書に明示的に組み入れられるPCT公開番号WO2005/044853も参照のこと。一つの態様において、G6シリーズ抗体は、残基F17、Y21、Q22、Y25、D63、I83、およびQ89を含むヒトVEGF上の機能性エピトープに結合する。
【００２６】
本発明に係る「B20シリーズ抗体」とは、その全開示が参照によって本明細書に明示的に組み入れられるPCT公開番号WO2005/012359の図27〜29のいずれかに記載のB20抗体またはB20由来抗体の配列に由来する抗VEGF抗体である。その内容が参照によって明示的に本明細書に組み入れられるPCT公開番号WO2005/044853および米国特許出願第60/991,302号も参照のこと。一つの態様において、B20シリーズ抗体は、残基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K101、E103、およびC104を含むヒトVEGF上の機能性エピトープに結合する。
【００２７】
本発明に係る「機能性エピトープ」とは、抗体の結合に効果的に寄与する抗原のアミノ酸残基をさす。抗原における効果的に寄与する残基のいずれかの変異（例えば、アラニン変異またはホモログ変異による野生型VEGFの変異）は、抗体の結合を破壊し、抗体の相対親和性比（変異型VEGFのIC50/野生型VEGFのIC50）は5を越えると考えられる（WO2005/012359の実施例2を参照のこと）。一つの態様において、相対親和性比は、溶液結合（solution binding）ファージディスプレイELISAによって決定される。簡単に説明すると、96穴Maxisorpイムノプレート（NUNC）を、4℃で、PBS中2ug/mlの濃度の試験されるFab型抗体で一夜コーティングし、室温で2時間、PBS、0.5％BSA、および0.05％Tween20（PBT）でブロッキングする。hVEGFアラニン点変異体（8〜109残基型）または野生型hVEGF(8〜109)を提示しているファージのPBTによる段階希釈物を、室温で、15分間、Fabでコーティングされたプレート上でまずインキュベートし、該プレートをPBS、0.05％Tween20（PBST）で洗浄する。結合したファージを、PBTで1:5000希釈された抗M13モノクローナル抗体西洋ワサビペルオキシダーゼ（Amersham Pharmacia）コンジュゲートで検出し、およそ5分間、3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン（TMB, Kirkegaard & Perry Labs, Gaithersburg, MD）基質で発色させ、1.0M H3PO4でクエンチし、450nmで分光光度的に読み取る。IC50値の比率（IC50、アラニン/IC50、野生型）は、結合親和性の低下倍率（相対結合親和性）を表す。
【００２８】
本発明の明細書および特許請求の範囲を通して、免疫グロブリン重鎖の残基の番号付けは、参照によって本明細書に明示的に組み入れられるKabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)によるEUインデックスのものである。「KabatによるEUインデックス」とは、ヒトIgG1 EU抗体の残基の番号付けをさす。
【００２９】
「抗体」という用語は、最も広い意味において使用され、具体的には、所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を包含する。
【００３０】
本発明に係る「Kd」または「Kd値」は、一つの態様において、未標識VEGFの滴定系列の存在下で最小濃度の（125I）標識VEGF(109)でFabを平衡化し、次いで、抗Fab抗体でコーティングされたプレートを用いて、結合したVEGFを捕獲することにより、VEGFに対するFabの溶液結合親和性を測定するというアッセイによって説明されるように、Fab型抗体およびVEGF分子を用いて実施される放射標識VEGF結合アッセイ（RIA）により測定される（Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881）。アッセイの条件を確立するために、マイクロタイタープレート（Dynex）を、50mM炭酸ナトリウム（pH9.6）中5ug/mlの捕獲用抗Fab抗体（Cappel Labs）で一夜コーティングし、続いて、室温（およそ23℃）で2〜5時間、PBS中2％(w/v)ウシ血清アルブミンでブロッキングする。非吸着性プレート（Nunc#269620）において、100pMまたは26pM [125I]VEGF(109)を、関心対象のFab、例えば、Fab-12（Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599）の段階希釈物と混合する。次いで、関心対象のFabを一夜インキュベートする；しかしながら、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするため、65時間継続してもよい。その後、混合物を、室温で1時間のインキュベーションのため捕獲プレートに移す。次いで、その溶液を除去し、プレートをPBS中0.1％Tween-20で8回洗浄する。プレートが乾燥したら、150ul/ウェルのシンチラント（MicroScint-20；Packard）を添加し、プレートをTopcountガンマカウンター（Packard）上で10分間計数する。最大結合の20％以下を示す各Fabの濃度を、競合結合アッセイにおける使用のために選定する。もう一つの態様によると、KdまたはKd値は、およそ10応答単位（RU）で、固定化されたhVEGF(8〜109)CM5チップを用いて、25℃で、BIAcore（商標）-2000またはBIAcore（商標）-3000（BIAcore, Inc., Piscataway, NJ）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用することにより測定される。簡単に説明すると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（CM5, BIAcore Inc.）を、供給元の指示に従い、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩（EDC）およびN-ヒドロキシスクシンイミド（NHS）で活性化する。ヒトVEGFを10mM酢酸ナトリウム、pH4.8で5ug/ml（およそ0.2uM）に希釈した後、およそ10応答単位（RU）のタンパク質結合を実現するため、5ul/分の流速でインジェクションする。ヒトVEGFのインジェクションの後、未反応基をブロッキングするために1Mエタノールアミンをインジェクションする。速度論的測定のため、0.05％Tween 20を含むPBS（PBST）によるFabの2倍段階希釈物（0.78 nM〜500 nM）を、およそ25ul/分の流速で25℃でインジェクションする。会合速度（kon）および解離速度（koff）を、会合センサーグラムおよび解離センサーグラムの同時フィッティングにより、単純な1対1のラングミュア結合モデル（BIAcore Evaluation Software version 3.2）を使用して計算する。平衡解離定数（Kd）を、koff/kon比として計算した。例えば、Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881を参照のこと。on速度が上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって106M-1S-1を超える場合、on速度は、ストップフローが装備された分光光度計（Aviv Instruments）または撹拌されたキュベットを用いる8000シリーズSLM-Aminco分光光度計（Thermo Spectronic）のような分光計において測定されるような、増加する濃度のヒトVEGF短型（8〜109）またはマウスVEGFの存在下における、PBS、pH7.2中の20nM抗VEGF抗体（Fab型）の25℃での蛍光放射強度（励起=295nm；放射=340nm、16nmバンドパス）の増加または減少を測定する蛍光消光技術を使用することにより決定され得る。
【００３１】
「阻止」抗体または抗体「アンタゴニスト」とは、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害するかまたは低下させるものである。例えば、VEGFに特異的なアンタゴニスト抗体は、VEGFに結合し、血管内皮細胞増殖を誘導するVEGFの能力を阻害する。ある種の態様において、阻止抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を完全に阻害する。
【００３２】
他に示されない限り、「多価抗体」という表現は、本明細書を通して、3個以上の抗原結合部位を含む抗体を示すために使用される。多価抗体は、好ましくは、3個以上の抗原結合部位を有するように作られ、一般に、野生型配列のIgM抗体またはIgA抗体ではない。
【００３３】
「Fv」断片とは、完全な抗原認識および結合部位を含有している抗体断片である。この領域は、例えばscFvにおいて、実質的に共有結合性であり得る、一つの重鎖可変ドメインと一つの軽鎖可変ドメインとが緊密に会合した二量体からなる。この構成において、各可変ドメインの3個のCDRが相互作用し、VH-VL二量体の表面上に抗原結合部位を規定する。集合的に、6個のCDRまたはそれらのサブセットが、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（またはある抗原に特異的な3個のCDRのみを含むFvの半分）であっても、通常は結合部位全体より親和性が低いとはいえ、抗原を認識しそれに結合する能力を有する。
【００３４】
本明細書において使用されるように、「抗体可変ドメイン」とは、相補性決定領域（CDR；即ち、CDR1、CDR2、およびCDR3）ならびにフレームワーク領域（FR）のアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖および重鎖の部分をさす。VHとは、重鎖の可変ドメインをさす。VLとは、軽鎖の可変ドメインをさす。本発明において使用される方法によると、CDRおよびFRに割り当てられるアミノ酸位置は、Kabat（Sequences of Proteins of Immunological Interest（National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991））に従い規定され得る。抗体または抗原結合断片のアミノ酸番号付けも、Kabatのものに従う。
【００３５】
本明細書において使用されるように、「相補性決定領域」（CDR；即ち、CDR1、CDR2、およびCDR3）という用語は、その存在が抗原結合のために必要である抗体可変ドメインのアミノ酸残基をさす。各可変ドメインは、典型的には、CDR1、CDR2、およびCDR3として同定される3個のCDR領域を有する。各相補性決定領域は、Kabatによって規定される「相補性決定領域」に由来するアミノ酸残基（即ち、軽鎖可変ドメイン内の残基24〜34（L1）、50〜56（L2）、および89〜97（L3）、ならびに重鎖可変ドメイン内の31〜35（H1）、50〜65（H2）、および95〜102（H3）のあたり；Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）および／または「超可変ループ」に由来するアミノ酸残基（即ち、軽鎖可変ドメイン内の残基26〜32（L1）、50〜52（L2）、および91〜96（L3）、ならびに重鎖可変ドメイン内の26〜32（H1）、53〜55（H2）、および96〜101（H3）のあたり；Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）を含み得る。いくつかの事例において、相補性決定領域は、Kabatに従って規定されたCDR領域、および超可変ループの両方に由来するアミノ酸を含み得る。例えば、抗体4D5の重鎖のCDRH1はアミノ酸26〜35を含む。
【００３６】
「フレームワーク領域」（以後、FR）とは、CDR残基以外の可変ドメイン残基の領域である。各可変ドメインは、典型的には、FR1、FR2、FR3、およびFR4として同定される4個のFRを有する。CDRがKabatにより規定される場合、軽鎖FR残基は、残基1〜23（LCFR1）、35〜49（LCFR2）、57〜88（LCFR3）、および98〜107（LCFR4）のあたりに位置し、かつ重鎖FR残基は、重鎖残基内の残基1〜30（HCFR1）、36〜49（HCFR2）、66〜94（HCFR3）、および103〜113（HCFR4）のあたりに位置する。CDRが超可変ループに由来するアミノ酸残基を含む場合、軽鎖FR残基は、軽鎖内の残基1〜25（LCFR1）、33〜49（LCFR2）、53〜90（LCFR3）、および97〜107（LCFR4）のあたりに位置し、かつ重鎖FR残基は、重鎖残基内の残基1〜25（HCFR1）、33〜52（HCFR2）、56〜95（HCFR3）、および102〜113（HCFR4）のあたりに位置する。いくつかの事例において、CDRが、Kabatにより規定されるCDRおよび超可変ループのアミノ酸の両方に由来するアミノ酸を含む場合、FR残基は相応じて調整されるであろう。例えば、CDRH1がアミノ酸H26〜H35を含む場合、重鎖FR1残基は1〜25位にあり、かつFR2残基は36〜49位にある。
【００３７】
「Fab」断片は、軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン、ならびに重鎖の可変ドメインおよび第1定常ドメイン（CH1）を含有している。F(ab')2抗体断片は、それらの間のヒンジシステインによってカルボキシ末端の近くで一般に共有結合的に連結された一対のFab断片を含む。抗体断片のその他の化学的結合体も当技術分野において公知である。
【００３８】
「単鎖Fv」または「scFv」抗体断片は、抗体のVHドメインおよびVLドメインを含み、これらのドメインが単一のポリペプチド鎖内に存在する。一般に、Fvポリペプチドは、さらにVHドメインとVLドメインとの間にポリペプチドリンカーを含み、scFvは、それによって抗原結合のための所望の構造を形成することができる。scFvの概説に関しては、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照のこと。
【００３９】
「ダイアボディ（diabody）」という用語は、同一のポリペプチド鎖（VHおよびVL）内に軽鎖可変ドメイン（VL）に連結された重鎖可変ドメイン（VH）を含み、2個の抗原結合部位を有する、小さな抗体断片をさす。同一鎖上の2個のドメイン間の対形成を可能にしない程度に短いリンカーを使用することによって、このドメインは、もう一つの鎖の相補ドメインと対形成し、2個の抗原結合部位を作出するようになる。ダイアボディは、例えば、EP404,097；WO93/11161；およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)に、より完全に記載されている。
【００４０】
「直鎖抗体」という表現は、Zapata et al., Protein Eng., 8(10): 1057-1062 (1995)に記載された抗体をさす。簡単に説明すると、これらの抗体は、相補的な軽鎖ポリペプチドと共に一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムFdセグメント（VH-CH1-VH-CH1）を含む。直鎖抗体は二重特異性または単一特異性であり得る。
【００４１】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用されるように、実質的に均質の抗体の集団から入手される抗体をさし、即ち、この集団を構成する個々の抗体は、微量に存在する可能性のある自然発生突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して作られており、高度に特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して作られた異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナルの）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して作られている。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団から入手されるという抗体の特徴を示し、特定の方法による抗体の産生を要求するものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature 256:495 (1975)によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよいし、または組換えDNA法（例えば、米国特許第4,816,567号参照）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」は、例えば、Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)およびMarks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)に記載された技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
【００４２】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、具体的には、所望の生物学的活性を示す限りにおいて、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一もしくは相同であり、一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来するかまたは別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一もしくは相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびにそのような抗体の断片も含む（米国特許第4,816,567号；およびMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)）。
【００４３】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有しているキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域に由来する残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域に由来する残基に交換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの事例において、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク領域（FR）残基は、対応する非ヒト残基に交換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに改善するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、かつFR領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも1個、典型的には2個の可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。ヒト化抗体は、任意で、免疫グロブリン定常領域（Fc）、典型的にはヒト免疫グロブリンのFcの少なくとも一部分も含むであろう。さらなる詳細に関しては、Jones et al., Nature 321 :522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。
【００４４】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される、かつ／または本明細書に開示される任意のヒト抗体作製技術を使用して作製される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を保有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、当技術分野において公知の様々な技術を使用して産生され得る。一つの態様において、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択される（Vaughan et al. Nature Biotechnology 14:309-314 (1996): Sheets et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 95:6157-6162 (1998)）；Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)；Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)）。ヒト抗体は、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活化されているトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニックマウスにヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによっても作製され得る。抗原投与により、遺伝子の再構成、組み立て、および抗体レパートリーを含む全ての点でヒトで見られるものに酷似しているヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第5,545,807号；第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,661,016号、および以下の科学的な刊行物に記載されている：Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992)；Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994)；Morrison, Nature 368:812-13 (1994)；Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996)；Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996)；Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)。または、ヒト抗体は、標的抗原に対して作られた抗体を産生するヒトBリンパ球の不死化によって調製され得る（そのようなBリンパ球は、個体から回収されてもよいし、またはインビトロで免疫化されていてもよい）。例えば、Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；Boerner et al., J. Immunol, 147 (1):86-95 (1991)；および米国特許第5,750,373号を参照のこと。
【００４５】
「親和性成熟」抗体とは、改変を保有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改良をもたらす、1個または複数個のCDRにおける1個または複数個の改変を有する抗体である。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対するナノモルまたはさらにはピコモルの親和性を有すると考えられる。親和性成熟抗体は、当技術分野において公知の手法によって産生される。Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)は、VHドメインおよびVLドメインのシャッフリングによる親和性成熟を記載している。CDR残基および／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91 :3809-3813 (1994)；Schier et al. Gene 169:147-155 (1995)；Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)；Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)；およびHawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)によって記載されている。
【００４６】
抗体の「機能性抗原結合部位」とは、標的抗原に結合することができる部位である。抗原結合部位の抗原結合親和性は、その抗原結合部位が由来する親抗体ほどは必ずしも強くないが、抗体の抗原との結合を評価するための公知の多様な方法のいずれかを使用して、抗原結合能を測定できなければならない。さらに、本明細書における多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は、量的に同一である必要はない。本明細書における多量体抗体について、機能性抗原結合部位の数は、米国特許出願公開第20050186208号の実施例2に記載されるような超遠心分離分析を使用して評価され得る。この分析法によると、異なる比率の標的抗原と多量体抗体とが組み合わせられ、機能性結合部位の数が異なることを仮定して複合体の平均分子量が計算される。これらの理論値が、機能性結合部位の数を評価するため、入手された実際の実験値と比較される。
【００４７】
指定された抗体の「生物学的特徴」を有する抗体とは、同一抗原に結合する他の抗体からそれを区別する、その抗体の生物学的特徴のうちの一つまたは複数を保有する抗体である。
【００４８】
関心対象の抗体が結合する抗原上のエピトープに結合する抗体についてスクリーニングするためには、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)に記載されたもののようなルーチンのクロスブロッキングアッセイ（cross-blocking assay）が実施され得る。
【００４９】
「種依存性抗体」とは、第1の哺乳動物種に由来する抗原に対して、第2の哺乳動物種に由来するその抗原のホモログに対して有するよりも強い結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原に「特異的に結合」する（即ち、高々約1×10-7M、好ましくは高々約1×10-8M、最も好ましくは高々約1×10-9Mの結合親和性（Kd）値を有する）が、第2の非ヒト哺乳動物種に由来する抗原のホモログに対しては、ヒト抗原に対する結合親和性より少なくとも約50倍弱い、または少なくとも約500倍弱い、または少なくとも約1000倍弱い結合親和性を有する。種依存性抗体は、上で定義されたような様々な型の抗体のいずれかであり得る。一つの態様において、種依存性抗体はヒト化抗体またはヒト抗体である。
【００５０】
本明細書において使用されるように、「抗体変異体」または「抗体バリアント」とは、種依存性抗体のアミノ酸残基のうちの1個または複数個が修飾されている、種依存性抗体のアミノ酸配列バリアントをさす。そのような変異体は、必ず、種依存性抗体と100％未満の配列同一性または類似性を有する。一つの態様において、抗体変異体は、種依存性抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも75％、より好ましくは少なくとも80％、より好ましくは少なくとも85％、より好ましくは少なくとも90％、最も好ましくは少なくとも95％のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有すると考えられる。この配列に関する同一性または類似性は、最大の配列同一率を達成するために配列を整列化し、必要であればギャップを導入した後の、種依存性抗体残基と同一であるか（即ち、同一残基）、または類似している（即ち、共通の側鎖特性に基づく同一群に由来するアミノ酸残基、下記参照）候補配列内のアミノ酸残基の百分率として本明細書において定義される。可変ドメイン以外の抗体配列へのN末端、C末端、または内部における伸長、欠失、または挿入は、いずれも、配列同一性または類似性に影響を与えるものと解釈されるべきでない。
【００５１】
本発明のアミノ酸配列を含有している抗体またはポリペプチドの半減期を増加させるためには、例えば、米国特許第5,739,277号に記載されるように、抗体（特に、抗体断片）にサルベージ受容体結合エピトープを付加することができる。例えば、作製された核酸分子によって発現される融合タンパク質が、サルベージ受容体結合エピトープおよび本発明のポリペプチド配列を含むように、サルベージ受容体結合エピトープをコードする核酸分子が、本発明のポリペプチド配列をコードする核酸にインフレームで連結され得る。本明細書において使用されるように、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、IgG分子のインビボ血清半減期の増加を担うIgG分子（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4）のFc領域のエピトープをさす（例えば、Ghetie et al., Ann. Rev. Immunol. 18:739-766 (2000)、表1）。Fc領域に置換を有し、血清半減期が増加した抗体は、WO00/42072、WO02/060919；Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001)；Hinton, J. Biol. Chem. 279:6213-6216 (2004)にも記載されている。もう一つの態様において、血清半減期は、例えば、その他のポリペプチド配列を付加することによっても増加し得る。例えば、血清アルブミンが抗体またはポリペプチドに結合するように、本発明の方法において有用な抗体またはその他のポリペプチドを、血清アルブミン、またはFcRn受容体に結合する血清アルブミンの一部分、または血清アルブミン結合ペプチドに付加することができ、例えば、そのようなポリペプチド配列はWO01/45746に開示されている。一つの好ましい態様において、付加される血清アルブミンペプチドは、DICLPRWGCLWのアミノ酸配列を含む。もう一つの態様において、Fabの半減期がこれらの方法によって増加させられる。血清アルブミン結合ペプチド配列については、Dennis et al. J. Biol. Chem. 277:35035-35043 (2002)も参照のこと。
【００５２】
「キメラVEGF受容体タンパク質」とは、そのうちの少なくとも1種類はVEGF受容体タンパク質である少なくとも2種類の異なるタンパク質に由来するアミノ酸配列を有するVEGF受容体分子である。ある種の態様において、キメラVEGF受容体タンパク質は、VEGFに結合し、その生物学的活性を阻害することができる。
【００５３】
「単離された」ポリペプチドまたは「単離された」抗体とは、その天然環境の成分から同定され、分離され、かつ／または回収されたものである。天然環境の夾雑成分は、ポリペプチドまたは抗体の診断的または治療的な使用を妨害するであろう物質であり、酵素、ホルモン、およびその他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含み得る。一つの態様において、ポリペプチドまたは抗体は、（1）ローリー法によって決定されるように、95重量％超、最も好ましくは99重量％超のポリペプチドもしくは抗体にまで、（2）スピニングカップシーケネーター（spinning cup sequenator）の使用により、少なくとも15残基のN末端もしくは内部のアミノ酸配列を得るのに十分な程度にまで、または（3）クーマシーブルー染色もしくは好ましくは銀染色を使用した還元条件下または非還元条件下のSDS-PAGEにより、均質になるまで、精製されるであろう。組換え細胞内のインサイチューのポリペプチドまたは抗体は、ポリペプチドの天然環境の少なくとも1種類の成分が存在しないため、単離されたポリペプチドまたは抗体に含まれる。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも一つの精製工程により調製されるであろう。
【００５４】
「断片」とは、参照核酸分子または参照ポリペプチドの全長の少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、またはそれ以上を含有しているポリペプチド分子または核酸分子の一部を意味する。断片は、10、20、30、40、50、60、70、80、90、もしくは100、200、300、400、500、600、もしくはそれ以上のヌクレオチド、または10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、190、200、もしくはそれ以上のアミノ酸を含有している可能性がある。
【００５５】
「処置」とは、治療的処置および予防的または防止的な措置の両方をさす。処置を必要とするものには、良性、前癌性、または非転移性の腫瘍を既に有するもの、そして癌の存在または再発が防止されるべきものが含まれる。
【００５６】
「治療的に有効な量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を処置または防止するための治療剤の量をさす。癌の場合、治療的に有効な量の治療剤は、癌細胞の数を低下させ；原発腫瘍サイズを低下させ；末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し（即ち、ある程度まで減速させ、好ましくは中止させ）；腫瘍転移を阻害し（即ち、ある程度まで減速させ、好ましくは中止させ）；腫瘍成長をある程度まで阻害し；かつ／または障害に関連した症状のうちの一つもしくは複数をある程度まで軽減する。薬物は、既存の癌細胞の成長を防止し、かつ／または死滅させる程度に、細胞分裂抑制性かつ／または細胞障害性であり得る。癌治療の場合、インビボの効力は、例えば、生存期間、無増悪期間（time to disease progression/TTP）、応答率（RR）、応答期間、および／または生活の質を査定することにより測定され得る。
【００５７】
「癌」および「癌性」という用語は、典型的には、無調節の細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的条件をさすかまたは記述する。良性および悪性の癌が、この定義に含まれる。「初期癌」または「初期腫瘍」とは、侵襲性または転移性でなく、ステージ0、I、またはIIの癌として分類される癌を意味する。
【００５８】
「前癌性」という用語は、典型的に癌に先行するかまたは癌へと進展する状態または成長をさす。「前癌性」成長は、細胞周期調節、細胞増殖、または分化のマーカーによって決定され得る、異常な細胞周期調節、増殖、または分化を特徴とする細胞を有するであろう。
【００５９】
「異形成」とは、組織、器官、または細胞の異常な成長または発達を意味する。好ましくは、異形成は高悪性度または前癌性である。
【００６０】
「転移」とは、原発部位から体内の他の場所への癌の蔓延を意味する。癌細胞は、原発腫瘍から脱出し、リンパ管および血管に浸透し、血流中を循環し、そして体内の他の正常組織内の遠隔病巣において成長（転移）することができる。転移は、局所的であるかもしれないし、または遠隔性であるかもしれない。転移は、腫瘍細胞の原発腫瘍からの脱出、血流を通っての移動、および遠隔部位における滞留に依存する逐次過程である。新たな部位で、細胞は血液供給を確立し、生命を危うくする腫瘤を形成するまでに成長することができる。
【００６１】
腫瘍細胞内の刺激性分子経路および阻害性分子経路の両方が、この挙動を調節し、腫瘍細胞と遠隔部位における宿主細胞との間の相互作用も重要である。
【００６２】
「非転移性」とは、良性である癌、または原発部位にとどまり、リンパ管系もしくは血管系もしくは原発部位以外の組織に浸透していない癌を意味する。一般に、非転移性癌は、ステージ0、I、またはIIの癌である癌であり、ステージIII癌である場合もある。
【００６３】
「原発腫瘍」または「原発癌」とは、対象の体内のもう一つの組織、器官、または位置に位置する転移性の病変ではなく、最初の癌を意味する。
【００６４】
「良性腫瘍」または「良性癌」とは、起源の部位に限局し続け、遠隔部位に浸潤、侵入、または転移する能力を有していない腫瘍を意味する。
【００６５】
「腫瘍負荷量（burden）」とは、癌細胞の数、腫瘍のサイズ、または体内の癌の量を意味する。腫瘍負荷量は腫瘍負荷（load）とも呼ばれる。
【００６６】
「腫瘍数」とは、腫瘍の数を意味する。
【００６７】
「対象」とは、ヒト、またはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、もしくはネコのような非ヒト哺乳動物を含むが、これらに限定はされない、哺乳動物を意味する。一つの態様において、対象はヒトである。
【００６８】
「抗癌治療」という用語は、癌の処置において有用な治療をさす。抗癌治療剤の例には、例えば、化学療法剤、成長阻害剤、細胞障害剤、放射線治療において使用される剤、抗血管形成剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、ならびに癌を処置するためのその他の剤、例えば、抗HER-2抗体、抗CD20抗体、上皮増殖因子受容体（EGFR）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、HER1/EGFR阻害剤（例えば、エルロチニブ（Tarceva（商標）））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、Gleevec（商標）（メシル酸イマチニブ））、COX-2阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、以下の標的の一つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば中和抗体）ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-ベータ、BlyS、APRIL、BCMA、またはVEGF受容体、TRAIL/Apo2、ならびにその他の生理活性剤および有機化学的薬剤等が含まれるが、これらに限定はされない。それらの組み合わせも本発明に含まれる。
【００６９】
「細胞障害剤」という用語は、本明細書において使用されるように、細胞の機能を阻害もしくは防止し、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質をさす。その用語は、放射性同位体（例えば、I131、I125、Y90、およびRe186）、化学療法剤、ならびに細菌、真菌、植物、もしくは動物が起源の酵素活性毒素のような毒素、またはそれらの断片を含むものとする。
【００７０】
「化学療法剤」とは、癌の処置において有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、癌の処置において有用な化学的化合物が含まれる。化学療法剤の例には、チオテパおよびCYTOXAN（登録商標）シクロホスファミドのようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン（piposulfan）のようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、およびウレドパ（uredopa）のようなアジリジン類；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロロメラミン（trimethylolomelamine）を含むエチレンイミン類およびメチラメラミン類（methylamelamines）;アセトゲニン類（特に、ブラタシン（bullatacin）およびブラタシノン（bullatacinone））；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（callystatin）；CC-1065（そのアドゼレシン、カルゼレシン（carzelesin）、およびビゼレシン（bizelesin）合成アナログを含む）；クリプトフィシン類（特に、クリプトフィシン1およびクリプトフィシン8）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログKW-2189およびCB1-TM1を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（pancratistatin）；サルコジクチイン（sarcodictyin）；スポンジスタチン（spongistatin）；クロラムブシル、クロルナファジン（chlornaphazine）、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビキン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードのようなナイトロジェンマスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンのようなニトロソ尿素類；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、カリチアマイシンガンマ1IおよびカリチアマイシンオメガI1（例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)参照））のような抗生物質；ダイネミシン（dynemicin）Aを含むダイネミシン；クロドロネートのようなビスホスホネート類；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類（aclacinomysins）、アクチノマイシン、アウトラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（cactinomycin）、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン（carminomycin）、カルジノフィリン（carzinophilin）、クロモミシニス（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、6-ジアゾ-5-オキソ-L-ノルロイシン、ADRIAMYCIN（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、2-ピロリノ-ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン（marcellomycin）、マイトマイシンCのようなマイトマイシン類、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび5-フルオロウラシル（5-FU）のような代謝拮抗薬；デノプテリン（denopterin）、メトトレキサート、プテロプテリン（pteropterin）、トリメトトレキサート（trimetrexate）のような葉酸アナログ類；フルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリン（thiamiprine）、チオグアニンのようなプリンアナログ類；アンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンのようなピリミジンアナログ類；カルステロン（calusterone）、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンのようなアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎薬；フォリン酸のような葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミド（aldophosphamide）配糖体；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（bestrabucil）；ビサントレン（bisantrene）；エダトラキサート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジコン（diaziquone）；エルフォルニチン（elfornithine）；エリプチニウム（elliptinium）アセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（lonidainine）；マイタンシンおよびアンサミトシン（ansamitocins）のようなマイタンシノイド類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（mopidanmol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ロソキサントロン（losoxantrone）；ポドフィリン（podophyllinic）酸；2-エチルヒドラジド；プロカルバジン；PSK（登録商標）多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン；リゾキシン（rhizoxin）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；2,2',2"-トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、T-2毒素、ベラキュリン（verracurin）A、ロリジン（roridin）A、およびアングイジン（anguidine））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、TAXOL（登録商標）パクリタキセル（Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.）、ABRAXANE（商標）クレモフォールフリー（Cremophor-free）、パクリタキセルのアルブミンを用いて工作されたナノ粒子製剤（American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois）、およびTAXOTERE（登録商標）ドセタキセル（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル（chloranbucil）；GEMZAR（登録商標）ゲムシタビン；6-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンのような白金アナログ類；ビンブラスチン；白金；エトポシド（VP-16）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；NAVELBINE（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン（novantrone）；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Camptosar、CPT-11）（5-FUおよびロイコボリンと併せたイリノテカンの処置計画を含む）；トポイソメラーゼ阻害��RFS2000；ジフルオロメチルオルニチン（DMFO）；レチノイン酸のようなレチノイド類；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（LV）；オキサリプラチン処置計画（FOLFOX）を含むオキサリプラチン；細胞増殖を低下させるPKC-アルファ、Raf、H-Ras、EGFR（例えば、エルロチニブ（Tarceva（商標）））、およびVEGF-Aの阻害剤、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれる。
【００７１】
例えば、タモキシフェン（NOLVADEX（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン（droloxifene）、4-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（trioxifene）、ケオキシフェン（keoxifene）、LY117018、オナプリストン（onapristone）、およびFARESTONトレミフェンを含む抗エストロゲン薬および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（SERM）；例えば、4(5)-イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASE（登録商標）メゲストロールアセテート、AROMASIN（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタニー（formestanie）、ファドロゾール、RIVISOR（登録商標）ボロゾール、FEMARA（登録商標）レトロゾール、およびARIMIDEX（登録商標）アナストロゾールのような、副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、およびゴセレリンのような抗アンドロゲン薬のような腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するよう作用する抗ホルモン剤；ならびにトロキサシタビン（1,3-ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、PKCアルファ、Raf、およびH-Rasのような異常細胞増殖に関係したシグナリング経路内の遺伝子の発現を阻害するもの；VEGF発現阻害剤（例えば、ANGIOZYME（登録商標）リボザイム）およびHER2発現阻害剤のようなリボザイム；遺伝子治療ワクチン、例えば、ALLOVECTIN（登録商標）ワクチン、LEUVECTIN（登録商標）ワクチン、およびVAXID（登録商標）ワクチンのようなワクチン；PROLEUKIN（登録商標）rIL-2；LURTOTECAN（登録商標）トポイソメラーゼ1阻害剤；ABARELIX（登録商標）rmRH；ビノレルビンおよびエスペラミシン（米国特許第4,675,187号参照）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体も、この定義に含まれる。
【００７２】
「プロテインキナーゼ」とは、ATEからタンパク質およびペプチドのSer/ThrまたはTyrの側鎖上のヒドロキシル基へのγ-リン酸の転移を触媒し、様々な重要な細胞機能、最も顕著にはシグナル伝達、分化、および増殖の制御に密接に関与している酵素の大きいクラスをさす。これらのプロテインキナーゼの各々は、特定のタンパク質／ペプチド基質をリン酸化するが、それらは全て高度に保存されたポケットにおいて同一の第2の基質ATPに結合する。とりわけ癌を含む多数の疾患は、プロテインキナーゼにより媒介される細胞シグナリング経路の攪乱に関連している。
【００７３】
「プロテインキナーゼ阻害剤」とは、一つまたは複数のプロテインキナーゼ活性を阻止することができる高分子量または低分子量の化合物をさす。ある種の態様において、プロテインキナーゼ阻害剤は、腫瘍成長、病理学的血管形成、および癌の転移性の進行に関係付けられている1種類または複数種類の受容体チロシンキナーゼを標的とする低分子チロシンキナーゼ阻害剤（TKI）である。TKIは、受容体の細胞内キナーゼドメインを標的とし、それにより、シグナル伝達を低下させるかまたは遮断する。VEGFRの阻害に加えて、現在開発中の低分子TKIの多くは、他の受容体、特に、受容体チロシンキナーゼのスプリットキナーゼドメインファミリーのものを標的とする。受容体チロシンキナーゼの例には、上皮増殖因子受容体（EGFR）、血管内皮増殖因子受容体（VEGFR）、血小板由来増殖因子受容体（PDGFR）、および繊維芽細胞増殖因子受容体（FGFR）が含まれる。血小板由来増殖因子（PDGF）は、腫瘍関連血管形成のもう一つの重要なメディエータである。それは、多くの腫瘍によって傍分泌的に分泌され、内皮細胞増殖および間質形成を促進すると考えられている。VEGFと同様に、PDGFの産生は、不十分に血管新生化された腫瘍組織に見出されるもののような低酸素条件の下でアップレギュレートされる。PDGFは、癌細胞の自己分泌刺激および間質細胞の傍分泌刺激を含む複数の過程を介して腫瘍成長を促進する。Heldin et al., Physiol Rev 79-1283-1316 (1999)；Sundberg et al., Am J Pathol 151:479-492 (1997)。バタラニブ（PTK787）、エルロチニブ（TARCEVA（登録商標））、OSI-7904、ZD6474（ZACTIMA（登録商標））、ZD6126（ANG453）、ZD1839、スニチニブ（SUTENT（登録商標））、セマキサニブ（semaxanib）（SU5416）、AMG706、AG013736、イマチニブ（GLEEVEC（登録商標））、MLN-518、CEP-701、PKC-412、ラパチニブ（GSK572016）、VELCADE（登録商標）、AZD2171、ソラフェニブ（NEXAVAR（登録商標））、XL880、およびCHIR-265を含むが、これらに限定はされない、多くの治療用低分子TKIが、当技術分野において公知である。
【００７４】
「薬学的に許容される塩型」という用語は、スニチニブのような活性化合物の生物学的な有効性および特性を保持している塩型をさす。そのような塩には、以下のものが含まれる:（1）親化合物の遊離塩基の、塩酸、臭化水素酸、硝酸、5リン酸、硫酸、および過塩素酸等のような無機酸、または酢酸、シュウ酸、(D)もしくは(L)リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸等のような有機酸、好ましくは、塩酸またはスニチニブL-リンゴ酸塩のような(L)-リンゴ酸との反応によって入手される酸付加塩；または（2）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオンと交換された場合；または有機塩基と配位した場合に形成される塩。例示的なイオンには、通常の原子価のアルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛が含まれる。好ましい有機塩基には、プロトン化三級15アミンおよび四級アンモニウム陽イオンが含まれ、一部、トリメチルアミン、ジエチルアミン、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（N-メチルグルカミン）、およびプロカインが含まれる。
【００７５】
「プロドラッグ」という用語は、本願において使用されるように、親薬物と比較して、腫瘍細胞に対する細胞障害性が低く、かつより活性が高い親型に酵素的に活性化または変換され得る、薬学的活性を有する物質の前駆物質または誘導体型をさす。例えば、Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986)およびStella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery ," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)を参照のこと。本発明のプロドラッグには、より活性が高い細胞障害性の遊離の薬物に変換され得る、リン酸含有プロドラッグ、チオリン酸含有プロドラッグ、硫酸含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Dアミノ酸で修飾されたプロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β-ラクタム含有プロドラッグ、場合により置換されていてもよいフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、または場合により置換されていてもよいフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、5-フルオロシトシン、およびその他の5-フルオロウリジンプロドラッグが含まれるが、これらに限定はされない。本発明において使用するためのプロドラッグ型へ誘導体化され得る細胞毒性薬の例には、上記の化学療法剤が含まれるが、それらに限定はされない。
【００７６】
「放射線治療」とは、正常に機能する能力を限定するのに十分な細胞に対する傷害を誘導するため、または細胞を全て破壊するための、定方向のガンマ線またはベータ線の使用を意味する。処置の線量および期間を決定するための多くの手段が当技術分野において公知であることが認識されるであろう。典型的な処置は、一回投与として与えられ、典型的な線量は1日当たり10〜200単位（グレイ）の範囲である。
【００７７】
「低下させるかまたは阻害する」とは、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、またはそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。低下させるかまたは阻害する、とは、処置されている障害の症状、転移の存在もしくはサイズ、原発腫瘍のサイズ、または血管形成性障害における血管のサイズもしくは数をさすことができる。
【００７８】
治療剤
本発明は、対象における腫瘍を処置するための組み合わせ治療におけるVEGFアンタゴニストおよびプロテインキナーゼ阻害剤の使用を特徴とする。VEGFアンタゴニストとは、VEGFと結合することができるか、VEGF発現レベルを低下させることができるか、またはVEGFの1種類もしくは複数種類のVEGF受容体との結合ならびにVEGFにより媒介される血管形成および内皮細胞の生存もしくは増殖を含むVEGF生物学的活性を中和するか、阻止するか、阻害するか、抑止するか、低下させるか、もしくは妨害することができる分子をさす。本発明の方法において有用なVEGFアンタゴニストとしては、VEGFに特異的に結合するポリペプチド、抗VEGF抗体およびそれらの抗原結合断片、VEGFに特異的に結合し、それによりその1種類または複数種類の受容体との結合を隔離する受容体分子および誘導体、融合タンパク質（例えば、VEGF-Trap（Regeneron））、およびVEGF121-ゲロニン（gelonin）（Peregrine）が含まれる。VEGFアンタゴニストには、VEGFポリペプチドのアンタゴニスト性バリアント、VEGFに対するRNAアプタマーおよびペプチボディも含まれる。これらの各々の例は、以下に記載される。
【００７９】
本発明の方法において有用な抗VEGF抗体には、十分な親和性および特異性でVEGFと結合し、VEGFの生物学的活性を低下させるかまたは阻害することができる任意の抗体またはそれらの抗原結合断片が含まれる。抗VEGF抗体は、通常、VEGF-BまたはVEGF-Cのような他のVEGFホモログに結合せず、PlGF、PDGF、またはbFGFのような他の増殖因子にも結合しない。そのような抗VEGF抗体の例には、本明細書中の「定義」で提供されたものが含まれるが、それらに限定はされない。
【００８０】
2種類の最もよく特徴決定されているVEGF受容体は、VEGFR1（Flt-1としても公知）およびVEGFR2（マウスホモログについて、KDRおよびFLK-1としても公知）である。各VEGFファミリーメンバーの各受容体の特異性は変動するが、VEGF-AはFlt-1およびKDRの両方に結合する。全長Flt-1受容体は、7個のIgドメインを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼ活性を有する細胞内ドメインを含んでいる。細胞外ドメインはVEGFの結合に関与しており、細胞内ドメインはシグナル伝達に関与している。
【００８１】
VEGFに特異的に結合するVEGF受容体分子またはそれらの断片は、VEGFタンパク質に結合し、それを隔離し、それによりそのシグナリングを防止するために、本発明の方法において使用され得る。ある種の態様において、VEGF受容体分子またはそれらのVEGF結合断片は、sFlt-1のような可溶型である。可溶型の受容体は、VEGFに結合し、それにより、標的細胞の表面上に存在する天然の受容体にVEGFが結合するのを防止することにより、VEGFタンパク質の生物学的活性に対して阻害効果を及ぼす。VEGF受容体融合タンパク質も含まれ、その例は以下に記載される。
【００８２】
キメラVEGF受容体タンパク質とは、VEGFに結合し、その生物学的活性を阻害することができる、そのうちの少なくとも1種類は、VEGF受容体タンパク質（例えば、flt-1またはKDR受容体）である少なくとも2種類の異なるタンパク質に由来するアミノ酸配列を有する受容体分子である。ある種の態様において、本発明のキメラVEGF受容体タンパク質は、2種類の異なるVEGF受容体分子のみに由来するアミノ酸配列からなる；しかしながら、flt-1および／またはKDR受容体の細胞外リガンド結合領域に由来する1個、2個、3個、4個、5個、6個、または7個全部のIg様ドメインを含むアミノ酸配列が、他の無関係なタンパク質、例えば、免疫グロブリン配列に由来するアミノ酸配列に連結されてもよい。Ig様ドメインが組み合わせられる他のアミノ酸配列は、当業者には容易に明白になるであろう。キメラVEGF受容体タンパク質の例には、可溶性のFlt-1/Fc、KDR/Fc、またはFLt-1/KDR/Fc（VEGF Trapとしても公知である）が含まれる。（例えば、PCT出願公開WO97/44453を参照のこと）。
【００８３】
本発明の可溶性のVEGF受容体タンパク質またはキメラVEGF受容体タンパク質は、膜貫通ドメインを介して細胞の表面に固定されていないVEGF受容体タンパク質を含む。キメラ受容体タンパク質を含む可溶型のVEGF受容体は、それ自体、VEGFに結合し、それを不活化することができるが、膜貫通ドメインを含んでおらず、従って、一般に、分子が発現される細胞の細胞膜と会合しない。
【００８４】
アプタマーとは、VEGFポリペプチドのような標的分子に特異的に結合する三次構造を形成する核酸分子である。アプタマーの製造および治療的使用は、当技術分野においてよく確立されている。例えば、米国特許第5,475,096号を参照のこと。VEGFアプタマーは、細胞外VEGFに結合することを可能にする三次元コンフォメーションを採るペグ化修飾オリゴヌクレオチドである。加齢黄斑変性症の処置のためのVEGFを標的とする治療的に有効なアプタマーの一例は、ペガプタニブ（Macugen（商標）、OSI）である。アプタマーについてのさらなる情報は、米国特許出願公開第20060148748号に見出され得る。
【００８５】
ペプチボディとは、免疫グロブリン分子の断片または一部分をコードするアミノ酸配列に連結されたペプチド配列である。ポリペプチドは、ファージディスプレイ技術を含むが、これに限定はされない、任意の方法によって、特異的結合について選択されるランダム化配列に由来し得る。一つの態様において、選択されたポリペプチドは、免疫グロブリンのFc部分をコードするアミノ酸配列に連結され得る。VEGFに特異的に結合し、拮抗するペプチボディも、本発明の方法において有用である。
【００８６】
本発明において有用なプロテインキナーゼ阻害剤は、PDGFRチロシンキナーゼを標的とすることによりPDGFシグナリング経路を阻止する能力を少なくとも有するものである。ある種の態様において、阻害剤は、低分子非ペプチド化合物である。一つの態様において、本発明のプロテインキナーゼ阻害剤は、PDGFRチロシンキナーゼおよびVEGFR-2チロシンキナーゼの両方を標的とする。PDGFR/VEGFR-2二重阻害剤の一例は、スニチニブである。
【００８７】
スニチニブ（SUTENT（登録商標）、SU11248、Pfizer Inc）は、3種のVEGF受容体と共に、PDGFR-ベータ、KIT、およびFLT-3を含むいくつかの関連タンパク質チロシンキナーゼ受容体を標的とする経口阻害剤である。SUTENT（登録商標）は、スニチニブのリンゴ酸塩である。スニチニブリンゴ酸塩は、化学的には、N-[2-(ジエチルアミノ)エチル]-5-[(Z)-(5-フルオロ-1,2-ジヒドロ-2-オキソ-3H-インドール-3-イリジン)メチル]-2,4-ジメチル-1H-ピロール-3-カルボキサミドと化合したブタン二酸、ヒドロキシ-(2S)-（1:1）と記載される。分子式はC22H27FN4O2-C4H6O5である。Sun et al., J Med Chem 41 :2588-2603 (1998)。前臨床研究は、スニチニブが、VEGFRおよびPDGFR-ベータを通して媒介される抗血管形成効果、ならびに様々な腫瘍細胞系におけるKITを通した直接抗腫瘍活性を有することを示した。Abrams et al., Mol Cancer Ther 2:1011-21 (2003)；O'Farrell et al., Blood 101:3597-605 (2003)。ルイス肺癌腫瘍における最近の研究は、スニチニブが、原発腫瘍の退行は引き起こさなかったものの、腫瘍成長の進行を遅くし、転移の発達を減弱させたことを証明した。Osusky et al., Angiogenesis 7:225-33 (2004)。前臨床／臨床的な証拠に基づき、RCCにおけるスニチニブの活性の機序は、内皮細胞におけるVEGF経路および支持周皮細胞上に発現されたPDGFR-ベータの二重阻害によると考えられている。Motzer et al., JAMA 295:2516-24 (2006)。スニチニブは、進行した腎細胞癌および胃腸間質腫瘍（GIST）において使用するため米国において最近承認された。
【００８８】
組み合わせ治療
本発明は、VEGFアンタゴニストおよびプロテインキナーゼ阻害剤の活性の組み合わせからの有益な効果を提供することを目的とした特別な処置計画の一部としての、これらの治療剤の組み合わせ使用を特色とする。組み合わせの有益な効果には、治療剤の組み合わせに起因する薬物動態学的または薬力学的な共同作用が含まれるが、これらに限定はされない。本発明は、様々なステージの様々な型の癌の処置において特に有用である。
【００８９】
癌という用語は、前癌性成長、良性腫瘍、および悪性腫瘍を含むが、これらに限定はされない、増殖性障害の集まりを包含する。良性腫瘍は、起源部位に限局し続け、遠隔部位に浸潤、侵入、または転移する能力を有しない。悪性腫瘍は、周辺の他の組織に侵入し傷害を与えるであろう。それらは、最初の部位から脱出し、通常血流を通って、またはリンパ節が位置しているリンパ系を通って、体内の他の部分に蔓延（転移）する能力を獲得することもある。原発腫瘍は、それらが発生した組織の型によって分類され；転移性腫瘍は、癌細胞が由来する組織型によって分類される。時間の経過と共に、悪性腫瘍の細胞は、より異常になり、より正常細胞とは異なる様相を呈するようになる。この癌細胞の様相の変化は腫瘍悪性度と呼ばれ、癌細胞は、高分化（低悪性度）、中分化、低分化、または未分化（高悪性度）と記載される。高分化細胞は、かなり正常な様相を呈し、それらが起因した正常細胞に似ている。未分化細胞とは、細胞の起源を決定することがもはや不可能であるほどに異常になった細胞である。
【００９０】
癌進行度分類系は、癌が解剖学的にどの程度蔓延しているかを記載し、類似した予後および処置を有する患者を同一の進行度分類群に入れることを試みるものである。生検、ならびに胸部X線、マンモグラム、骨スキャン、CTスキャン、およびMRIスキャンのようなある種の画像化検査を含むいくつかの検査が、癌の進行度分類を補助するために実施され得る。血液検査および臨床的評価も、患者の全体的な健康を評価し、癌がある種の器官に蔓延しているか否かを検出するために使用され得る。
【００９１】
癌を進行度分類するために、American Joint Committee on Cancerは、まず、癌、特に固形腫瘍を、TNM分類系を使用した文字カテゴリーに置く。癌は、文字T（腫瘍サイズ）、N（触知可能な節）、および／またはM（転移）で表記される。T1、T2、T3、およびT4は、原発病変の増加するサイズを記載し；N0、N1、N2、N3は、連続的に進行する節関与を示し；そして、M0およびM1は、遠隔転移の欠如または存在を反映する。
【００９２】
Overall Stage GroupingまたはRoman Numeral Stagingとしても公知の第二の進行度分類法においては、癌は、節蔓延および遠隔転移の存在と共に原発病変のサイズも組み入れたステージ0〜IVに分けられる。この系において、症例は、ローマ数字I〜IVによって示された四つのステージに類別されるか、または「再発性」として分類される。乳癌の非浸潤性乳管癌または非浸潤性小葉癌のように、いくつかの癌の場合、0期は「非浸潤性（in situ）」または「Tis」と呼ばれる。高悪性度腺腫も0期として分類され得る。一般に、ステージIの癌は、通常治癒可能な小さな限局した癌であるが、ステージIVは、通常、手術不可能または転移性の癌を表す。ステージIIおよびIIIの癌は、通常、局所的に進行しており、かつ／または局所的なリンパ節の関与を示す。一般に、より高いステージ数は、より大きな腫瘍サイズ、ならびに／または近くのリンパ節および／もしくは原発腫瘍に隣接した器官への癌の蔓延を含む、より広範な疾患を示す。これらのステージは、正確に定義されているが、定義は癌の各種類によって異なっており、熟練した当業者には公知である。
【００９３】
NCIのSurveillance, Epidemiology, and End Results Program（SEER）のような多くの癌登録が、サマリーステージング（summary staging）を使用する。この系は全ての型の癌について使用される。それは癌症例を五つの主要なカテゴリーに類別する。
【００９４】
非浸潤性とは、それが開始した細胞の層にのみ存在する初期癌である。
【００９５】
限局性（Localized）とは、蔓延の証拠がなく、それが開始した器官に限定されている癌である
【００９６】
領域性（Regional）とは、最初の（原発）部位を越えて近くのリンパ節または器官および組織へと蔓延している癌である。
【００９７】
遠隔性（Distant）とは、原発部位から遠隔器官または遠隔リンパ節へと蔓延している癌である。
【００９８】
不明（Unknown）とは、ステージを示すのに十分な情報がない症例を記載するために使用される。
【００９９】
さらに、原発腫瘍が除去された後、数ヶ月後または数年後に、癌が復活することは一般的である。全ての可視の腫瘍が根絶された後に再発する癌は、再発性疾患と呼ばれる。原発腫瘍の区域において再発する疾患は、局所再発性であり、転移として再発する疾患は遠隔再発と呼ばれる。
【０１００】
腫瘍は、固形腫瘍または非固形もしくは軟部組織の腫瘍であり得る。軟部組織腫瘍の例には、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、成人急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、成熟B細胞急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、もしくは毛様細胞性白血病）、またはリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫、皮膚T細胞リンパ腫、もしくはホジキン病）が含まれる。固形腫瘍には、血液、骨髄、またはリンパ系以外の体組織の任意の癌が含まれる。固形腫瘍は、さらに、上皮細胞起源のものと非上皮細胞起源のものとに分けられ得る。上皮細胞固形腫瘍の例には、胃腸管、結腸、乳房、前立腺、肺、腎臓、肝臓、膵臓、卵巣、頭頸部、口腔、胃、十二指腸、小腸、大腸、肛門、胆嚢、内唇、鼻咽腔、皮膚、子宮、男性性器、泌尿器、膀胱、および皮膚の腫瘍が含まれる。非上皮起源の固形腫瘍には、肉腫、脳腫瘍、および骨腫瘍が含まれる。
【０１０１】
化学療法剤
本発明の組み合わせ治療は、さらに、1種類または複数種類の化学療法剤を含むことができる。組み合わせ投与には、別々の製剤または単一の薬学的製剤を使用する共投与または同時投与、および両方の（または全ての）活性薬剤が同時に生物学的活性を発揮する期間が存在する、いずれかの順序での連続投与が含まれる。
【０１０２】
化学療法剤は、投与される場合、通常、その既知の投薬量で投与され、または、任意で、薬物の作用の組み合わせのため、もしくは代謝拮抗化学療法剤の投与に起因する負の副作用のため、低下させられてもよい。そのような化学療法剤の調製および投薬スケジュールは、製造業者の指示に従って使用されてもよいし、または熟練した実務者によって経験的に決定されたようにして使用されてもよい。化学療法剤がパクリタキセルである一つの態様において、それは、毎週（例えば、約60〜90mg/m2で）または3週間毎に（例えば、約135〜200mg/m2で）投与される。適当なドセタキセル投薬量には、60mg/m2、70mg/m2、75mg/m2、100mg/m2（3週間毎）；または35mg/m2もしくは40mg/m2（毎週）が含まれる。
【０１０３】
組み合わせられ得る様々な化学療法剤は、上に開示されている。ある種の態様において、組み合わせられる化学療法剤は、タキソイド（ドセタキセルおよびパクリタキセルを含む）、ビンカ（ビノレルビンまたはビンブラスチンのような）、白金化合物（カルボプラチンまたはシスプラチンのような）、アロマターゼ阻害薬（レトロゾール、アナストロゾール、またはエキセメスタンのような）、抗エストロゲン薬（例えば、フルベストラントまたはタモキシフェン）、エトポシド、チオテパ、シクロホスファミド、メトトレキサート、リポソームドキソルビシン、PEG化リポソームドキソルビシン、カペシタビン、ゲムシタビン、COX-2阻害剤（例えば、セレコキシブ）、またはプロテアソーム阻害剤（例えば、PS342）からなる群より選択される。一つの態様において、本発明の組み合わせ治療は、パクリタキセルと組み合わせられる。もう一つの態様において、本発明の組み合わせ治療は、カルボプラチンおよびパクリタキセルと組み合わせられる。
【０１０４】
製剤、投薬量、および投与
本発明において使用される治療剤は、優良な医療行為（good medical practice）に合致する様式で、製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この情況において考慮される要因には、処置される特定の障害、処置される特定の対象、個々の患者の臨床的状態、障害の原因、剤の送達の部位、投与の方法、投与の予定、組み合わせられる剤の薬物-薬物相互作用、および医療実務者に公知のその他の要因が含まれる。
【０１０５】
治療用製剤は、所望の純度を有する活性成分を、任意の生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、当技術分野において公知の標準的な方法を使用して調製される（Remington's Pharmaceutical Sciences （20th edition）, ed. A. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA）。許容される担体には、生理食塩水、またはリン酸、クエン酸、およびその他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約10残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンのようなアミノ酸；単糖、二糖、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含むその他の糖質；EDTAのようなキレート化剤；マンニトールもしくはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような塩形成対イオン；ならびに／またはTWEEN（商標）、PLURONICS（商標）、もしくはPEGのような非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０１０６】
任意で、一つの態様において、製剤は、およそ生理的濃度で、塩化ナトリウムのような薬学的に許容される塩を含有する。任意で、もう一つの態様において、本発明の製剤は、薬学的に許容される保存剤を含有していてもよい。ある種の態様において、保存剤の濃度は、典型的にはv/vで、0.1〜2.0％の範囲である。適当な保存剤には、薬学分野において公知のものが含まれる。ベンジルアルコール、フェノール、m-クレゾール、メチルパラベン、およびプロピルパラベンが、好ましい保存剤である。任意で、さらにもう一つの態様において、本発明の製剤は、0.005〜0.02％の濃度で薬学的に許容される界面活性剤を含んでいてもよい。
【０１０７】
本明細書における製剤は、処置される特定の適応症のために必要であるような複数種の活性化合物、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含有していてもよい。そのような分子は、意図された目的にとって有効な量で組み合わせられて適当に存在する。
【０１０８】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタクリレート)マイクロカプセル、コロイド性薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）、またはマクロエマルジョンに封入されてもよい。そのような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 前記に開示されている。
【０１０９】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の適当な例には、成型品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である、抗体を含有している固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれる。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ(2-ヒドロキシエチルメタクリレート)またはポリ(ビニルアルコール)）、ポリラクチド（米国特許第3,773,919号）、L-グルタミン酸およびγエチル-L-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT（商標）（乳酸-グリコール酸コポリマーおよびリュープロリドアセテートから構成された注射可能マイクロスフェア）のような分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、ならびにポリ-D-(-)-3-ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン-酢酸ビニルおよび乳酸-グリコール酸のようなポリマーは、100日間を超える分子の放出を可能にするが、ある種のヒドロゲルはより短い期間でタンパク質を放出する。被包された抗体が体内に長時間残存する場合、それらは、37℃での水分曝露の結果として変性または凝集し、生物学的活性の損失および可能性のある免疫原性の変化をもたらし得る。関与する機序に依り、安定化のための合理的な戦略が考案され得る。例えば、凝集機序がチオジスルフィド交換を通した分子間S-S結合形成であることが発見されたなら、スルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、含水量の制御、適切な添加剤の使用、および特別のポリマーマトリックス組成物の開発により、安定化が達成され得る。
【０１１０】
本発明の治療剤は、ボーラスとしての静脈内投与、またはある期間にわたる連続注入、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、局所、もしくは吸入経路のような公知の方法に従い、ヒト患者に投与される。VEGFアンタゴニストの場合、広範な副作用または毒性がVEGF拮抗に関連しているのであれば、局所投与が特に望ましい。エクスビボ戦略も治療的適用のために使用され得る。エクスビボ戦略は、対象から入手された細胞を、VEGFアンタゴニストをコードするポリヌクレオチドによりトランスフェクトまたは形質導入することを含む。次いで、トランスフェクトまたは形質導入された細胞は、対象に戻される。細胞は、非限定的に、造血細胞（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、T細胞、もしくはB細胞）、繊維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、または筋細胞を含む広範囲の型のいずれかであり得る。
【０１１１】
例えば、VEGFアンタゴニストが抗体である場合、抗体は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内を含む任意の適当な手段によって投与され、局所的な免疫抑制処置のために望まれる場合には、病巣内投与によって投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下の投与が含まれる。さらに、抗体は、パルス注入、特に、減退する用量の抗体を用いたパルス注入によって適当に投与される。一つの態様において、投薬は注射により与えられる。もう一つの態様において、投薬は、静脈内注射または皮下注射により与えられるが、それは、投与が短期的であるか慢性であるかに部分的に依る。
【０１１２】
もう一つの例において、VEGFアンタゴニスト化合物は、障害または腫瘍の位置が許容する場合には、局所的に、例えば、直接注射によって投与され、注射は周期的に繰り返され得る。VEGFアンタゴニストは、局所再発または転移を防止するかまたは低下させるため、対象に全身送達されてもよいし、または腫瘍細胞に、例えば、腫瘍もしくは外科的な腫瘍切除後の腫瘍床に、直接送達されてもよい。
【０１１３】
治療剤の組み合わせ投与は、典型的には、画定された期間（通常、選択された組み合わせに依り、数分、数時間、数日、または数週間）にわたり実施される。組み合わせ治療には、これらの治療剤または治療剤のうちの少なくとも2種類の実質的に同時の投与と同様に、これらの治療剤の連続的な投与、即ち、各治療剤が異なる時点で投与されるものも内含されるものとする。
【０１１４】
治療剤は、同一経路によって投与されてもよいし、または異なる経路によって投与されてもよい。例えば、組み合わせのうちのVEGFアンタゴニストが静脈注射によって投与される一方、組み合わせのうちのプロテインキナーゼ阻害剤が経口投与されてもよい。または、特定の治療剤に依って、例えば、両方の治療剤が経口投与されてもよいし、または両方の治療剤が静脈注射によって投与されてもよい。治療剤が投与される順序も、特定の剤に依って変動する。
【０１１５】
例えば、1回もしくは複数回の別々の投与であっても、または連続注入であっても、疾患の型および重度に依って、約1μg/kg〜100mg/kg（例えば、0.1〜20mg/kg）の各治療剤が、患者への投与のための初期候補投薬量である。典型的な一日投薬量は、前述の要因に依って、約1μg/kg〜約100mg/kgまたはそれ以上の範囲であり得る。数日またはそれ以上にわたる反復投与の場合、状態に依って、処置は、前記の方法によって測定されるように、癌が処置されるまで、持続される。しかしながら、その他の投薬量計画が有用である可能性がある。一例において、VEGFアンタゴニストが抗体である場合、本発明の抗体は、約5mg/kg〜約15mg/kgの範囲の用量で、2〜3週間毎に投与される。プロテインキナーゼ阻害剤が経口低分子化合物である場合、薬物は、約25mg/日〜約50mg/日の範囲の用量で毎日投与される。さらに、本発明の経口化合物は、従来の高用量断続計画の下で投与されてもよいし、または予定された中断なしに、より低く、より頻回の用量を使用して投与されてもよい（「メトロノーム治療」と呼ばれる）。断続計画が使用される場合、例えば、薬物は、一日用量および特定の適応症に依り、2〜3週間、毎日与えられた後、1週間休薬されるか；または4週間、毎日与えられた後、2週間休薬され得る。本発明の治療の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易にモニタリングされる。
【０１１６】
以下の実施例は、本発明の実務を単に例示するためのものであり、限定のために提供されるのではない。本明細書中に引用された全ての特許および科学文献の開示は、参照によって完全に明示的に組み入れられる。
【０１１７】
実施例
実施例1.インビボのヒト腫瘍増殖を阻害するための抗VEGFおよびスニチニブの組み合わせ
この実験は、ヌードマウスにおける様々なヒト癌腫異種移植片に対する活性について、単独治療としての抗VEGFモノクローナル抗体B20-4.1、および低分子チロシンキナーゼ阻害剤スニチニブと組み合わせられた抗VEGFモノクローナル抗体B20-4.1を評価する。
【０１１８】
方法および材料
以下のヒト腫瘍細胞が異種移植片研究において使用された。
LS174Tヒト結腸癌
H1299ヒト非小細胞肺癌 
786-Oヒト腎細胞癌
Caki-2ヒト腎細胞癌
Bx-PC3ヒト膵臓癌
【０１１９】
雌胸腺欠損ヌードマウス（研究の1日目に10〜11週齢）またはC.B-17 SCIDマウス（研究の1日目に15〜16週齢）が使用された。異種移植片を、培養されたヒト癌腫細胞から（H1299細胞の場合）、または異種移植されたマウスにおいて維持された既存のヒト腫瘍から開始した。各試験マウスは、右側腹部に皮下移植された腫瘍細胞または腫瘍断片のいずれかを受容し、腫瘍の成長がモニタリングされた。試験される特定のヒト腫瘍に依って長さが決まる腫瘍成長の期間の後、マウスは、各々10匹のマウスからなる異なる群に置かれた。体積は以下の式を使用して計算された：
腫瘍体積（mm3）＝(W2×l)/2
式中、wは、ヒト腫瘍のmm単位の幅であり、lは長さである。腫瘍重量は、1mgが1mm3の腫瘍体積と等価であると仮定して推定され得る。
【０１２０】
対照IgG抗体および試験MAb B20-4.1、そしてスニチニブが、研究において使用された。対照抗体およびB20-4.1抗体は、各々、単一の用量レベル（最後まで5mg/kg i.p.2週間毎）で投与された。スニチニブは、2種類の用量レベル（最後まで25または50mg/kg p.o.1日1回）で投与された。
【０１２１】
同一の日に群に与えられた組み合わせ処置に関連して、抗体用量は、スニチニブ用量の30分前に投与された。PBS、対照IgG、またはB20-4.1の各用量は、体重20g当たり0.2mLの体積（10mL/kg）で投与され、スニチニブまたは媒体の各用量は、体重20g当たり0.1mLの体積（5mL/kg）で投与された。全ての用量が、動物の体重に応じて調整された。
【０１２２】
腫瘍は週2回ノギスを使用して測定された。腫瘍が2,000mm3の終点サイズに達するかまたは研究が完了するかのいずれか早い時点で、各動物を安楽死させた。処置成果は腫瘍成長阻害（TGI）に基づいていた。TGIは、処置関連（TR）原因または非処置関連（NTR）原因により死亡した動物を除く群中の全ての動物からのデータを評価するものであり、対照群の腫瘍体積中央値の百分率として表される、処置群と対照群との間の最終腫瘍体積中央値の差として定義される。このアッセイにおいて少なくとも60％のTGIを生ずる剤が、治療的活性を有するとして分類される。
【０１２３】
処置は、動物における腫瘍の部分退行（PR）または完全退行（CR）を引き起こし得る。PR応答においては、腫瘍体積が、研究の過程における3回の連続的な測定について、1日目体積の50％以下であり、かつこれらの3回の測定のうちの1回または複数回について、13.5mm3以上である。CR応答においては、腫瘍体積が、研究の過程における3回の連続的な測定について13.5mm3未満である。動物は退行応答についてモニタリングされた。
【０１２４】
動物は、腫瘍が2,000mm3という体積に達した時、または研究が完了した時に、安楽死させられた。血清、腫瘍、および腎臓の試料が、腫瘍および腫瘍血管系の組織学的査定を含むさらなるアッセイのために収集された。
【０１２５】
動物は、研究の最初の5日間、毎日計量され、その後は週2回計量された。マウスは、有害な処置関連副作用の明白な兆候について頻繁に観察され、毒性の臨床的徴候が観察された場合には、それが記録された。許容される毒性とは、研究中の20％未満の群平均体重損失、および10匹の処置された動物のうちの1例以下の処置関連（TR）死として定義される。より大きな毒性をもたらす投薬計画は、最大耐用量（MID）を超えていると見なされる。死は、臨床的徴候および／もしくは剖検によって証明されるような処置の副作用に起因する場合、または投薬期間中もしくは最後の用量の10日以内の未知の原因による場合、TRとして分類される。処置副作用に関係があったという証拠が存在しない場合、その死はNTRとして分類される。
【０１２６】
対照群と処置群との間の腫瘍負荷量中央値の差の統計分析は、マンホイットニーU検定を使用して分析された。両側統計分析が有意水準P=0.05で実施された。結果は、0.01<P<0.05で統計的に有意、P<0.01で高度に有意と見なされた。
【０１２７】
結果
LS174T結腸癌成長の阻害
図1Aは、LS174T結腸癌研究における各マウス群についての経時的な腫瘍成長を体積で示している。群2（菱形を含む曲線）は、対照抗体を与えられ；群4（四角形を含む曲線）は、B20-4.1単独の4用量を与えられ；群7（印のない曲線）は14日間毎日50mg/kg poでスニチニブを与えられ；そして、群11（三角形を含む曲線）は、単独治療群と同一の投薬スケジュールで、B20-4.1およびスニチニブの両方を与えられた。図1Bは、同一の研究結果のカプランマイヤープロットである。両方の図に示されるように、B20-4.1およびスニチニブの組み合わせは、いずれの単一薬剤処置よりも有意に増加した結腸腫瘍成長の阻害を生じた。
【０１２８】
別の25日間の研究において、高いスニチニブ用量（50mg/kg、毎日）および低いスニチニブ用量（25mg/kg、毎日）が、単独治療群および組み合わせ群の両方で使用された。異なる処置群のMTVおよびTGIが18日目に測定された。B20-4.1単独治療は、わずかな48％のTGIを生じた。スニチニブ単独治療は、用量依存性の応答を生じ、低用量ではTGIなし、高用量では非有意な43％のTGIを生じた。B20-4.1と低用量スニチニブとの組み合わせは、B20-4.1単独治療と比較可能な50％のTGIを生じた。B20-4.1と高用量スニチニブとの組み合わせは、75％のTGIをもたらした。全ての処置が、体重測定または臨床症状に基づく毒性の証拠がなく、耐容性がよいようであった。
【０１２９】
H1299 NSCLC成長の阻害
二つの研究が、H1299非小細胞肺癌（NSCLC）異種移植片について実施された。図2Aおよび2Bは、上記のようなLS174T研究と同様の短期処置研究からの結果を表す。群2（菱形を含む曲線）は対照抗体を与えられ；群4（四角形を含む曲線）は、B20-4.1単独の4用量を与えられ；群7（印なしの曲線）は14日間毎日50mg/kg poのスニチニブを与えられ；そして、群11（三角形を含む曲線）は、単独治療群と同一の投薬スケジュールで、B20-4.1およびスニチニブの両方を与えられた。図2Bは、同一の研究結果のカプランマイヤープロットである。両方の図に示されるように、B20-4.1およびスニチニブの組み合わせは、いずれの単一薬剤処置よりも有意に増加したNSCLC腫瘍成長の阻害を生じた。
【０１３０】
図3は、H1299 NSCLC腫瘍のより長期の処置研究からの結果を表わす。研究は、2種類のスニチニブ用量、毎日25mg/kgの低用量と毎日50mg/kgの高用量との間の効果も比較した。全てのマウスがまだ研究に残存していた19日目からの測定データを使用してTGIが計算された。B20-4.1単独治療は64％のTGIを生じ、これは、退行応答のない治療活性に相当した。25または50mg/kgのスニチニブによる処置は、32および62％の用量依存性のTGIを生じた。50mg/kgスニチニブ処置群は、1例の部分退行を有していた。B20-4.1と25または50mg/kgスニチニブとの組み合わせによる処置は、各群における2例の部分退行と共に、それぞれ74および82％のTGIを生じた。従って、低いスニチニブ用量または高いスニチニブ用量のいずれかとの組み合わせ処置は、対応するB20-4.1およびスニチニブによる単一薬剤処置よりも有意に改良された阻害活性を提供した。特に重要なことには、低用量で、単一薬剤としてのスニチニブは、この研究において治療活性を発揮し得なかったが、同一のスニチニブ用量でのB20-4.1／スニチニブ組み合わせは、NSCLC腫瘍成長の有意な阻害を提供した。全ての処置が、体重測定または臨床症状に基づく毒性の証拠がなく、耐容性がよいようであった。
【０１３１】
TGI測定に加えて、単独治療下での腫瘍の形態学的変化と、組み合わせ下での腫瘍の形態学的変化とを比較するため、組織学的アッセイにおいて腫瘍試料が使用された。腫瘍壊死および血管密度が、研究の最後に測定された。図8A〜8Cに示されるように、B20-4.1／スニチニブ組み合わせは、著しく増加した腫瘍壊死および減少した微小血管密度をもたらす。
【０１３２】
腎細胞癌成長の阻害
2種類の異種移植片系がヒト腎細胞癌についての腫瘍成長研究において使用された。図4は、786-0腎細胞癌異種移植片を使用した研究からの結果を示す。低用量および高用量両方のスニチニブが研究において使用されたが、高いスニチニブ用量（50mg/kg、毎日）のみが、単一薬剤群およびB20-4.1との組み合わせの両方について図に示される。この研究において、B20-4.1単独治療は67％のTGIをもたらし、スニチニブ単独治療は80％のTGIをもたらし、組み合わせは92％のTGIを示した。組み合わせ治療の活性は、単一薬剤スニチニブまたはB20-4.1より有意に良好であった（それぞれ、p=0.0002、p<0.0001）。組み合わせは、低用量のスニチニブ（25mg/kg qd）が抗VEGF治療と組み合わせられた場合ですら、優れた効力（TGI=77％）を示した（p=0.0029）。
【０１３３】
図6は、SCIDマウスにおけるCaki-2ヒト腎細胞癌異種移植片を使用した研究からの結果を示す。低いスニチニブ用量および高いスニチニブ用量の両方が示される。TGIは、研究の最終日である29日目に計算された。注目すべきことに、B20-4.1単独治療および低用量（25mg/kg）スニチニブ単独治療の両方が、研究の定義の下で治療的TGIには翻訳されない、446および352mm3という29日目平均腫瘍体積（MTV）をもたらした。対照的に、B20-4.1/スニチニブ組み合わせ処置は、65％という治療的TGIを生じ、それは、単独で与えられたいずれの剤と比べても有意で意味のある改良であった（P<0.001）。高用量（50mg/kg）スニチニブ単独治療は62％のTGIを生じたが、同一用量でのB20-4.1／スニチニブ組み合わせ処置は、73％という増加したTGIを生じた。退行応答はいずれの群においても立証されなかった。B20-4.1と50mg/kg 0-025694との組み合わせは、B20-4.1単独治療より有意に良好であったが、50mg/kgスニチニブ単独治療より有意に良好ではなかった。しかしながら、腫瘍成長曲線の平均値および中央値は、組み合わせ活性に対する傾向を示唆した。全ての処置が、体重測定または臨床症状に基づく毒性の証拠がなく、耐容性がよいようであった。
【０１３４】
膵臓癌成長の阻害
Bx-PC3ヒト膵臓癌異種移植片における腫瘍成長の研究は、上記のような他の研究と同様の剤および方法を使用して実施された。図5Aおよび5Bはその結果を示す。Caki-2腎細胞癌異種移植片における研究と同様に、低用量のスニチニブが投与された場合、B20-4.1およびスニチニブの組み合わせは、単一薬剤と比べて有意な改良を生ずるようである。群5を、群3または群2のいずれかを比較すること。理論によって拘束されることは望まないが、この研究およびCaki-2研究からの結果は、両方の用量において、スニチニブは、強いPDGFR阻止活性を示すが、高い用量でのみVEGFR活性の有効な阻止を示し；従って、低用量でのB20-4.1との組み合わせは単一薬剤より有意な阻害を提供したことを示唆している。そのような所見は、臨床的な用量のいずれかの単独治療に不十分に応答する腫瘍の処置において、またはスニチニブのより低い用量が望ましい場合に、抗VEGF剤およびスニチニブを組み合わせることの強い原理を提供する。
【０１３５】
図7Aおよび7Bは、低用量スニチニブ（25mg/kg、毎日）が、Caki-2 RCCモデル（図7A）およびH1299 NSCLCモデル（図7B）において使用された場合の組み合わせ効果をさらに例示する。
【０１３６】
総合すると、これらの異種移植片マウス研究は、VEGF経路およびPDGF経路の両方が効果的に標的とされ、相加的またはさらには相乗的な抗腫瘍活性をもたらし、従って、有意に改良された臨床成果をもたらす、組み合わせ治療の強い証拠を提供する。
【０１３７】
実施例2.乳癌を処置するための抗VEGFおよびスニチニブの組み合わせ
乳癌は、米国内の女性における全ての新たな癌診断のほぼ3分の1を占めており、2006年には214,000を超える症例が診断された。41,000人を超える女性が、毎年、それらの疾患で死亡すると推定されている。Jernal et al., CA Cancer J. Clin 56:106-30 (2006)。初期疾患のアジュバント処置における多くの進歩にも関わらず、女性の最大30〜40％が全身性再発を発症する。転移性乳癌（MTC）を有する女性のうち5年後に生存しているのはほんのわずかであり、2〜3％のみが長期生存者となる。Greenburg et al., J. Clin. Oncol. 14:2197-205 (1996)。
【０１３８】
この実施例は、有効用量のベバシズマブ、スニチニブ、およびパクリタキセルを対象に投与することにより、生存の延長および生活の質の改良をもたらし得る、抗VEGF、化学療法、およびスニチニブの組み合わせにより乳癌を処置する方法を提供する。例えば、ある種の態様において、対象は以下のものを投与される：（1）28日周期の1日目および15日目に、IV注入により、（例えば、1日目の対象の体重に基づき）10mg/kgのベバシズマブ、（2）3週間、1週間毎に、IV注入により、65mg/m2〜90mg/m2（典型的には、90mg/m2）の用量のパクリタキセル、続いて1週間休薬、および（3）3週間、毎日、20〜50mg/日、例えば、25mg/日または37.5mg/日の用量の、典型的には経口投与されるスニチニブ、続いて1週間休薬。ある種の態様において、処置周期は4週間と定義される。または、スニチニブは、4週間投薬、2週間休薬のスケジュールにより、50mg/日の用量で対象に投与され得る。Farve et al., J. Clin. Oncol. 24(1):25-35 (2006)。典型的には、ベバシズマブは、リン酸ナトリウム、トレハロース、ポリソルベート20、および注射用滅菌水からなる媒体と共にベバシズマブ（25mg/ml）16mlを含有している400mgのガラスバイアルで提供される。パクリタキセルは、5ml、16.7ml、および50mlのバイアルに、ポリオキシエチレンヒマシ油（Cremophor EL）50％および無水アルコール50％中6mg/mlの濃縮溶液として入手可能である。Sutent（登録商標）は、スニチニブのリンゴ酸塩である。スニチニブリンゴ酸塩は、化学的には、N-[2-(ジエチルアミノ)エチル]-5-[(Z)-(5-フルオロ-1,2-ジヒドロ-2-オキソ-3H-インドール-3-イリジン)メチル]-2,4-ジメチル-1H-ピロール-3-カルボキサミドと化合したブタン二酸、ヒドロキシ-(2S)-（1:1）と記載される。分子式はC22H27FN4O2-C4H6O5である。スニチニブカプセルは、不活性成分としてのマンニトール、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン（K-25）、およびステアリン酸マグネシウムと共に、12.5mgまたは25mgのスニチニブと等価なスニチニブリンゴ酸塩を含有している。
【０１３９】
成果尺度は、Response Evaluation Criteria in Solid Tumors（RECIST）および/またはIRF（X線写真）によって査定され得る腫瘍応答の（例えば、Independent Review Facility（IRF）査定によって行われる）分析に基づく無増悪生存期間（progression free survival/PFS）である。Therasse et al., J. Natl Cancer Inst. 92:205-16 (2000)。全生存率、12ヶ月生存率、客観的応答、客観的応答期間、および12ヶ月PFSも、成果尺度として使用され得る。可溶性タンパク質、例えば、sVEGFR2、sVEGFR3、VEGF-C、およびPDGF経路の血漿レベルも評価され得る。
【０１４０】
処置の方法の対象は、（例えば、組織学的または細胞学的な研究によって決定された）乳腺癌を有する対象である。典型的には、対象は、測定可能または測定不可能な局所再発性または転移性の疾患を有する。ある種の態様において、局所再発性の疾患は、根治的な意図での切除を受け入れられない。ある種の態様において、対象は、（例えば、1日目より2週間以上前に中止されていれば）、例えば、アジュバント設定または転移設定において、過去のホルモン治療を受容したことがあってもよい。ある種の態様において、対象は、（例えば、プログラム開始より6ヶ月以上前に中止されていれば）、アジュバント非タキサン化学療法を受容したことがあってもよい。ある種の態様において、対象は（例えば、1日目より12ヶ月以上前に中止されていれば）、アジュバントタキサン化学療法を受容したことがあってもよい。任意で、対象は、（例えば、研究参加前または研究参加から30日以内に開始されれば）、同時ビスホスホネート治療を受容してもよい。任意で、対象は、1日目より前に有意な（グレード3以上の）急性毒性から回復していれば、処置開始時に、過去の放射線治療を受容したことがあってもよい。
【０１４１】
ある種の態様において、排除される対象は、未知のHER2状態または公知のHER2陽性状態を有する対象である。一般に、HER2陽性状態は、当技術分野において公知の方法により、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）アッセイまたは3+免疫組織化学結果によって同定され得る。その他の排除される対象には、局所再発性もしくは転移性の疾患のための過去の化学療法を受けた対象、1日目までの2週間以内に過去のホルモン治療を受けた対象、1日目までの12ヶ月以内に過去のアジュバントもしくはネオアジュバントタキサン化学療法を受けた対象、1日目までの6ヶ月以内に過去のアジュバントもしくはネオアジュバント非タキサン化学療法を受けた対象、または最近の放射線治療を受容し、グレード3以上の急性毒性が進行中の対象が含まれる。排除される対象には、（例えば、低下した好中球数、低下した血小板数、もしくは1.5mg/dl超の総ビリルビンによって証明される）不充分な器官機能を有する対象、未管理の重篤な医学的もしくは精神医学的な疾病を有する対象、（例えば、抗高血圧薬物治療中の150mmHgを超える収縮期血圧および／もしくは100mmHgを超える拡張期血圧として定義される）管理が不充分な高血圧を有する対象、高血圧緊急症もしくは高血圧性脳症の過去の履歴を有する対象、1日目までの12ヶ月以内に心筋梗塞もしくは不安定狭心症の履歴を有する対象、1日目までの12ヶ月以内に脳卒中もしくは一過性脳虚血発作の履歴を有する対象、出血体質もしくは重度の凝固障害の証拠を有する対象、または重篤な非治癒性の創傷、活動性潰瘍、もしくは未処置の骨折を有する対象も含まれる。ベバシズマブおよびスニチニブのラベル上のさらなる排除も参照すること。
【０１４２】
実施例3.進行非小細胞肺癌を処置するための抗VEGFおよびスニチニブの組み合わせ
肺癌は、米国における癌死の主要な原因であり、2006年には174,470の新たな症例の発生および162,460例の死亡が起こると推定された。非小細胞肺癌（NSCLC）を有する患者のおよそ55％〜75％が、進行した疾患（切除不可能または転移性の疾患）を呈する。米国内の肺癌患者の全体5年生存率は、14％であり、過去20年間にわずかにしか改善していない。DeVita et al., Cancer: principles and practice of oncology, 6th ed. Philadelphia (PA): Lippincott Williams and Wilkins; 2001。ステージIIIbおよびステージIVの疾患を呈する患者は、それぞれ6％および8％という5年生存率を有する。Mountain, Chest 111 :1710-7 (1997)。外科的切除、放射線治療、化学療法、またはこれらのモダリティの組み合わせからなる決定的な初期処置の後、初期疾患を有する患者のおよそ50％および局所的に進行した疾患を有する患者の80％が再発し、ファーストライン（first-line）またはその後（later-line）の処置に向かう。
【０１４３】
この実施例は、有効用量のベバシズマブ、スニチニブ、パクリタキセル、およびカルボプラチンを対象に投与することにより、生存の延長および生活の質の改良をもたらし得る、抗VEGF、化学療法、およびスニチニブの組み合わせにより非小細胞肺癌を処置する方法を提供する。例えば、ある種の態様において、対象は以下のものを投与される：（1）21日周期の1日目に、IV注入により、（例えば、1日目の対象の重量に基づく）15mg/kgのベバシズマブ、（2）（以下に詳述される）Calvertの式に基づく曲線下面積（AUC=6）によって投薬されるようなカルボプラチン、（3）全部で4周期、各21日の周期の1日目に、IV注入により、（例えば、1日目の対象の重量に基づく）200mg/m2の用量のパクリタキセル、および（4）2週間、毎日、20〜50mg/日、例えば、25mg/日または37.5mg/日の用量の、典型的には経口投与されるスニチニブ、続いて1週間の休薬期。ある種の態様において、処置周期は3週間として定義される。または、スニチニブは、4週間投薬、2週間休薬のスケジュールにより、50mg/日の用量で対象に投与され得る。
【０１４４】
上述のように、カルボプラチンは、Calvertの式に基づく曲線下面積（AUC=6）によって投薬される:
全用量（mg）＝(標的AUC)×(GFR+25)
式中、GFRは、毎分ミリリットル（mL/分）単位の糸球体濾過速度であり、標的曲線下面積（AUC）は6mg/mL×分である。クレアチニンクリアランスとしてのGFRは、（好ましくは）24時間尿収集を介して測定されてもよいし、またはCockcroft-Gault式（Cockcroft and Gault 1976）を使用して血清クレアチニンに基づき計算されてもよい。男性の場合、GFRは、以下のように推定される：
GFR＝(140-年齢)×体重/[72×(血清クレアチニン)]。
【０１４５】
女性の場合、GFRはこの式の0.85倍である。年齢の単位は歳であり、重量の単位はキログラムであり、血清クレアチニンの単位は1デシリットル当たりのミリグラムである。
【０１４６】
典型的には、ベバシズマブは、リン酸ナトリウム、トレハロース、ポリソルベート20、および注射用滅菌水からなる媒体と共にベバシズマブ（25mg/ml）16mlを含有している400mgのガラスバイアルで提供される。
【０１４７】
カルボプラチンは、希釈および非経口投与のために準備された10mg/mLの予め混合された滅菌水性溶液として入手可能である。バイアルは、50mg、150mg、450mg、および600mgのサイズで入手可能である。
【０１４８】
パクリタキセルは、5ml、16.7ml、および50mlのバイアルに、ポリオキシエチレンヒマシ油（Cremophor EL）50％および無水アルコール50％中6mg/mlの濃縮溶液として入手可能である。
【０１４９】
スニチニブリンゴ酸塩は、化学的には、N-[2-(ジエチルアミノ)エチル]-5-[(Z)-(5-フルオロ-1,2-ジヒドロ-2-オキソ-3H-インドール-3-イリジン)メチル]-2,4-ジメチル-1H-ピロール-3-カルボキサミドと化合したブタン二酸、ヒドロキシ-(2S)-（1:1）と記載される。分子式はC22H27FN4O2-C4H6O5である。スニチニブカプセルは、不活性成分としてのマンニトール、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン（K-25）、およびステアリン酸マグネシウムと共に、12.5mgまたは25mgのスニチニブと等価なスニチニブリンゴ酸塩を含有している。
【０１５０】
成果尺度は、Response Evaluation Criteria in Solid Tumors（RECIST）および／またはIRF（X線写真）によって査定され得る腫瘍応答の（例えば、Independent Review Facility（IRF）査定によって行われる）分析に基づく無増悪生存期間（PFS）である。全生存率、客観的応答、客観的応答期間も、成果尺度として使用され得る。処置の過程の間、VEGF、可溶性VEGFR、PDGF、および可溶性PDGFRを含むが、これらに限定はされない、血管形成経路に関係づけられている分子のような予後的および予測的なバイオマーカーの血漿レベルを測定するため、血漿試料が患者から採取されてもよい。
【０１５１】
処置の方法の対象は、（例えば、組織学的または細胞学的な研究によって決定される）局所的に進行した、再発性の、または転移性の扁平上皮NSCLCを有する対象である。一つの態様において、排除される対象は、転移性疾患のための過去の全身化学療法を受けた対象である。その他の排除される対象には、肺癌以外の活動性悪性病変を有する対象、もう一つの実験的薬物研究に参加中であるか、最近（1日目の4週間以内）参加したか、または参加が予定されている対象、および抗VEGF剤またはスニチニブと類似の経路を標的とする剤による過去の処置を受けた対象が含まれる。一般的な医学的排除またはベバシズマブおよびスニチニブの治療にとって典型的なものを含むその他の排除基準も、使用され得る。
【０１５２】
実施例4.腎細胞癌を処置するための抗VEGFおよびスニチニブの組み合わせ
腎細胞癌（RCC）は、全ての悪性病変のおよそ2％を構成し、米国においては毎年39,000例の発生および毎年およそ13,000例の死亡が推定されている。最近まで、転移性疾患のための処置の有効性は極めて乏しかった。そのような処置には、利益をほとんど提供せずに、高度の毒性を提供した、サイトカイン（インターフェロンα［IFNα］およびインターロイキン-2［IL-2］）が含まれる。後者は、2005年後半まで、この疾患のために承認された唯一の剤であった。2種類の最近承認された薬剤スニチニブ（Sutent（登録商標））およびソラフェニブ（Nexavar（登録商標））による転移性RCC患者のための新たな処置が出現した。
【０１５３】
この実施例は、有効用量のベバシズマブおよびスニチニブを対象に投与することによる、生存の延長および生活の質の改良をもたらし得る、抗VEGFおよびスニチニブの組み合わせにより腎細胞癌を処置する方法を提供する。
【０１５４】
例えば、ある種の態様において、対象は以下のものを投与される:（1）各42日（6週間）周期の1日目、15日目、および29日目に、2週間毎に、IV注入により、（例えば、1日目の対象の体重に基づき）10mg/kgのベバシズマブ、および（2）4週間、50mg/日の用量で、典型的には経口投与され、続いて2週間休薬されるスニチニブ。ある種の態様において、処置周期は、4週間のスニチニブおよび2週間の休薬（6週間）として定義される。
【０１５５】
典型的には、ベバシズマブは、リン酸ナトリウム、トレハロース、ポリソルベート20、および注射用滅菌水からなる媒体と共にベバシズマブ（25mg/ml）16mlを含有している400mgのガラスバイアルで提供される。
【０１５６】
スニチニブリンゴ酸塩は、化学的には、N-[2-(ジエチルアミノ)エチル]-5-[(Z)-(5-フルオロ-1,2-ジヒドロ-2-オキソ-3H-インドール-3-イリジン)メチル]-2,4-ジメチル-1H-ピロール-3-カルボキサミドと化合したブタン二酸、ヒドロキシ-(2S)-（1:1）と記載される。分子式はC22H27FN4O2-C4H6O5である。スニチニブカプセルは、不活性成分としてのマンニトール、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン（K-25）、およびステアリン酸マグネシウムと共に、12.5mgまたは25mgのスニチニブと等価なスニチニブリンゴ酸塩を含有している。
【０１５７】
成果尺度は、Response Evaluation Criteria in Solid Tumors（RECIST）（Therasse et al., New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors, J. Natl Cancer Inst. 92:205-16 (2000)および／またはIRF（X線写真）によって査定され得る、腫瘍応答の（例えば、Independent Review Facility（IRF）査定によって行われる）分析に基づく無増悪生存期間（PFS）である。全生存率、客観的応答、および客観的応答期間も、成果尺度として使用され得る。処置の過程の間、VEGF、可溶性VEGFR、PDGF、および可溶性PDGFRを含むが、これらに限定はされない、血管形成経路に関係づけられている分子のような予後的および予測的なバイオマーカーの血漿レベルを測定するため、血漿試料が患者から採取されてもよい。
【０１５８】
一つの態様において、処置の方法の対象は、主に明細胞である（>50％）組織学的に確認された転移性RCCを有する対象である。もう一つの態様において、対象には、RECISTによって定義されるような、測定可能な疾患（従来の技術により20mmとして、またはスパイラルCTスキャンにより10mmとして少なくとも一つの寸法（記録される最長直径）において正確に測定され得る病変）を有する対象が含まれる。さらにもう一つの態様において、対象には、過去の腎摘出を受けた対象が含まれる。
【０１５９】
一つの態様において、排除される対象は、主に肉腫特色を有するRCCを有する対象である。その他の排除される対象には、RCCのための過去の全身治療またはアジュバント治療を受けた対象が含まれる。さらにもう一つの態様において、排除される対象は、疼痛管理の適応症のために与えられた一回（single-fraction）放射線治療を除き、1日目までの2日以内にRCCのための放射線治療を受けた対象である。さらにもう一つの態様において、排除される対象には、現在透析を必要としている対象、およびベバシズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、サリドマイド、またはVEGF阻害もしくは抗血管形成のいずれかの機序により作用する治験中もしくは市販後のその他の剤による処置を既に受けている対象が含まれる。一般的な医学的排除、またはベバシズマブおよびスニチニブの治療について典型的なものを含むその他の排除基準も、使用され得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【国際調査報告】
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