(57)【要約】  本発明は、試料における神経活性を決定するための方法を提供する。本発明の方法は、インビボ試料及びインビトロ試料の両方の神経活性を決定するのに有用であり、神経伝達障害をもたらす神経学的病態を有する疑いがある被験体の診断情報を得るのに特に有用である。また、本発明では、本発明の方法での使用に適した化合物並びに本発明の方法の実施に有用な医薬組成物も提供される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中に存在する標識化合物の発する信号を検出することを含む、試料における神経活性を求める方法であって、標識化合物が、電位開口型ナトリウムチャネルの不活性化又は活性状態に対して選択的親和性を有することを特徴とする方法。
【請求項２】
（ｉ）標識化合物を試料と接触させて、不活性化又は活性状態にある試料中のＶＧＳＣに標識化合物を結合させる段階、
（ｉｉ）標識化合物の発する信号を検出する段階、及び
（ｉｉｉ）信号を数値データ又は画像に変換する段階
を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
神経伝達障害に関連した神経学的病態の診断に用いられる、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記試料がインビボ試料である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
前記インビボ試料が患者又は患者体内の器官若しくは器官系である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記検出段階がＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ又は光学イメージングによって実施される、請求項４又は請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記検出段階がＳＰＥＣＴ又はＰＥＴによって実施される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
神経伝達障害に関連した神経学的病態に対処するための薬剤による被験体の治療効果をモニタするための請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の方法であって、薬剤による治療の前後及び途中に請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の方法を実施することを含む方法。
【請求項９】
前記標識化合物が、検出可能な標識で標識された式Ｉの化合物である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【化１】
2010529173.tif 000025
式中、
Ｒ1a〜Ｒ1cは、独立に、水素、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜3ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1〜3チオアルキル、Ｃ1〜3チオアルコキシ、ハロ、Ｃ1〜3ハロアルキル、Ｃ1〜3ハロアルコキシ、ニトロ、Ｃ1〜3ニトロアルキル、Ｃ1〜3ニトロアルコキシ、Ｃ4〜6シクロアルキル、又はＣ1〜3アルキルを介して結合したＣ3〜5ヘテロシクロアルキル基から選択されるＲ1基であり、
Ｒ2は、水素、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6ハロアルキル、又はＣ1〜6アルキルを介して結合したＣ4〜6シクロアルキル基であり、
Ａは、Ｓ又はＯであり、
ＸはＣであって破線の結合が二重結合であるか、或いはＸはＮであって破線の結合が単結合であり、
Ｙは、ＣＨ2又はＣＨ＝ＣＨである。
【請求項１０】
Ｒ1が水素、メチル、メトキシ、チオール、チオメチル、チオメトキシ、ハロ、ハロメチル、ハロメトキシ、ニトロ、ニトロメチル又はニトロメトキシであり、
Ｒ2が水素又はＣ1〜6ハロアルキルであり、
ＡがＯであり、
ＸがＮであって破線の結合が単結合であり、
ＹがＣＨ2である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ1が水素、メチル又はハロであり、
Ｒ2が水素である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ1が、水素、メチル、メトキシ、チオール、チオメチル、チオメトキシ、ハロ、ハロメチル、ハロメトキシ、ニトロ、ニトロメチル又はニトロメトキシであり、
Ｒ2が、水素又はＣ1〜3アルキルを介して結合したＣ4〜6シクロアルキル基若しくはＣ3〜5ヘテロシクロアルキル基であり、
ＡがＯであり、
ＸがＣであって破線の結合が二重結合であり、
ＹがＣＨ＝ＣＨである、請求項９記載の方法。
【請求項１３】
Ｒ1が水素、メチル又はハロであり、
Ｒ2が水素又はＣ1〜3アルキルを介して結合したＣ3〜5ヘテロシクロアルキル基である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記標識化合物が、検出可能な標識で標識された式ＩＩの化合物である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【化２】
2010529173.tif 000026
式中、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、Ｃ1〜10アルキル、Ｃ1〜10アルコキシ、Ｃ1〜4ハロアルキル、Ｃ1〜4ハロアルケニル、Ｃ1〜3ハロアルコキシ、Ｃ4〜6シクロアルキル、Ｃ1〜20ＰＥＧアルキル又はＣ1〜20ＰＥＧから選択され、
Ｒ5a及びＲ5bは、独立に、水素、Ｃ1〜4アルキル、ハロ、Ｃ1〜3ハロアルケニル、Ｃ1〜3アルコキシ、或いはＮ、Ｓ及びＯから選択される０〜３個のヘテロ原子を有する五員又は六員芳香族環系であって適宜Ｃ1〜3アルキル、ハロ又はＣ1〜3ハロアルキルで置換されたものから選択されるＲ5基である。
【請求項１５】
Ｒ3がＣ1〜6アルキル、Ｃ1〜6アルコキシ、Ｃ1〜4ハロアルケニル、Ｃ1〜4ハロアルキル又はＣ1〜3ハロアルコキシであり、
Ｒ4がＣ1〜6アルキル又はＣ1〜6アルコキシであり、
Ｒ5が、水素、ヨウ素、２−ヨードアルケニル、メトキシメタン、フェニル、４−フルオロフェニル、４−ヨードフェニル、ピリジン又は２−フルオロエチル−１，２，３−トリアゾールである、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
Ｒ3がプロピル、メトキシエチル、ヨードプロペニル、フルオロプロピル又はフルオロエトキシであり、
Ｒ4がプロピル又はメトキシエチルである、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
標識化合物が、以下の（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）から選択される検出可能な標識で標識される、請求項１乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法。
（ｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｉ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｉｉｉ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｉｖ）血管内検出に適したβ線放射体、
（ｖ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（ｖｉ）インビトロ診断法に適したレポーター、
（ｖｉｉ）放射性金属イオン、及び
（ｖｉｉｉ）常磁性金属イオン。
【請求項１８】
検出可能な標識が、
（ｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、又は
（ｉｉ）陽電子放出型放射性非金属
である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
請求項１乃至請求項１８のいずれか１項記載の方法で使用するための、電位開口型ナトリウムチャネルの不活性化又は活性状態に対して選択的親和性を有する標識化合物。
【請求項２０】
請求項１乃至請求項１８のいずれか記載の方法で使用される医薬組成物の製造のための、電位開口型ナトリウムチャネルの不活性化又は活性状態に対して選択的親和性を有する標識化合物の使用。
【請求項２１】
請求項９乃至請求項１３のいずれか１項で定義される式Ｉの標識化合物。
【請求項２２】
請求項１４乃至請求項１６のいずれか１項で定義される式ＩＩの標識化合物。
【請求項２３】
請求項２１又は請求項２２記載の標識化合物と生体適合性担体とを含む、請求項１乃至請求項１８のいずれか１項記載の方法で使用するための医薬組成物。
【請求項２４】
放射性医薬組成物である、請求項２３記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経活性の測定に関する。詳細には、本発明は、活性化神経細胞を標的とし得る検出可能な標識で標識された化合物を使用して、神経活性を測定する方法に関する。本方法は、神経伝達障害に関連した病態の診断に用途を有する。
【背景技術】
【０００２】
神経活性は電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）によって媒介され、膜電位の変化を契機としてナトリウムイオンを流入させることによって活性化電位を伝達する。活性化すると、ＶＧＳＣは素早く（約１ミリ秒以内）閉じ、長期にわたる不活性化状態に入り、その後、それらの休止状態に戻る（閉じるが活性化可能である。）。不活性化状態を選択的に目標とする化合物が、従来技術で周知である。
【０００３】
Ｓｈａｏ  ｅｔ  ａｌ［２００４  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７  ｐｐ４２７７−４２８５］には、強力な状態依存性ＶＧＳＣ遮断薬であるフェノキシフェニルピリジン化合物が開示されている。この化合物の２種について、有痛性ニューロパシーのＣｈｕｎｇインビボラットモデルで試験をし、化合物が用量依存的な手法で触覚性異痛症を逆行させたことが実証された。したがって、これらの化合物は、神経因性疼痛の治療に可能性があると結論付けられた。Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ［２００４  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７  ｐｐ１５４７−１５５２］には、やはり強力な状態依存性ＶＧＳＣ遮断薬である一群の３−（４−フェノキシフェニル）ピラゾールが開示されている。これらの化合物の１種を、Ｃｈｕｎｇモデルで試験した。化合物は、カルバメゼピン、即ち神経因性疼痛の治療に現在使用されている抗痙攣薬に引けを取らない抗異痛症効果を発揮することが示された。Ｌｉｂｅｒａｔｏｒｅ  ｅｔ  ａｔ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ，Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００４  １４  ｐｐ３５２１−３５２３］には、それらのラット脳部位２ナトリウムチャネルに対するトリチウム化バトラコトキシンの結合を阻害する能力に関してナノモルＩＣ50値を示す、一群の２−アルキル−４−アリールイミダゾールが開示されている。これらの化合物のナトリウムチャネル結合特性は、Ｌｉｂｅｒａｔｏｒｅ  ｅｔ  ａｌによって、リドカインやカルバマゼピン、ラモトリジンなどの神経障害に使用される公知の薬剤と比べて遜色ないことが示されている。
【０００４】
ヒトの脳の活動組織を撮像する幾つかの技術が開発されており、18ＦＤＧ、血流トレーサ及びｆＭＲＩが広く用いられている。しかし、これらの方法の中で、神経活性を直接測定するものはなく、エネルギー／酸素消費及び血流束への変化など、２次的作用を標的としている。その結果、現行の方法は、精度が低く、スパイク活性よりも入ってくる入力及び局所処理が過大評価されることが多々あり、活性化領域間の神経経路を明らかにすることができない（ＮＫ  Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ，４１２，２００１，ｐｐ  １５０−１５７）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｈａｏ  ｅｔ  ａｌ［２００４  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７  ｐｐ４２７７−４２８５］
【非特許文献２】Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ［２００４  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７  ｐｐ１５４７−１５５２］
【非特許文献３】Ｌｉｂｅｒａｔｏｒｅ  ｅｔ  ａｔ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００４  １４  ｐｐ３５２１−３５２３］
【非特許文献４】ＮＫ  Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ，４１２，２００１，ｐｐ  １５０−１５７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、神経活性の決定を改善することが求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、試料における神経活性を求める方法を提供する。本発明の方法は、インビボ試料及びインビトロ試料の両方の神経活性を決定するのに有用であり、特に、神経伝達障害に関連した病態を有することが疑われる被験体の診断情報を得るのに有用である。本発明の方法での使用に適した化合物並びに本発明の方法の実施に有用な医薬組成物も、本発明によって提供される。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
神経活性の測定方法
一態様では、本発明は、試料中に存在する標識化合物の発する信号の決定を含む、試料における神経活性を求める方法であって、標識化合物が、電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）の不活性化又は活性状態に関して選択的親和性を有することを特徴とする方法に関する。
【０００９】
本発明の方法は、以下の段階を含む。
（ｉ）標識化合物を試料と接触させて、不活性化又は活性状態にある試料中のＶＧＳＣに標識化合物を結合させる段階、
（ｉｉ）標識化合物の発する信号を検出する段階、及び
（ｉｉｉ）信号を数値データ又は画像に変換する段階。
【００１０】
本発明の方法は、正常な生理機能の評価に用途があるが、神経伝達障害に関連した神経学的病態の診断に好ましく適用される。かかる病態の例としては、特に限定されないが、癲癇、病理的疼痛、多発性硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー、統合失調症及び鬱病が挙げられる。
【００１１】
試料のタイプ
「試料」という用語は、ヒト及び動物のインビトロ、エキソビボ及びインビボ試料を包含する。
【００１２】
「インビトロ試料」は、ヒト又は動物の身体から採取され、体外で分析される組織又は流体試料である。標識化合物を試料と接触させる段階は、それらを生理的緩衝液のような適当な培地で一緒にすることによって実施される。本発明の方法で使用される好ましいインビトロ試料は、中枢若しくは末端神経系から採取された組織試料、又は血液、血清、血漿、若しくは脳脊髄液などの流体試料である。最も好ましいインビトロ試料は、流体試料である。本方法をインビトロ試料で実施する場合、標識化合物は、好適には、インビトロ診断法に適したレポーターである検出可能な標識を含む。かかる検出可能な標識は、以下でさらに詳しく説明する。かかる標識化合物の発する信号を検出する方法は、当業者に周知である。したがって、例えば放射標識は、写真用フィルム又はシンチレーションカウンタを使用して検出することができ、蛍光マーカーは、光検出器を使用して検出することができ、放出されたイルミネーションを検出する。酵素標識は、典型的には、酵素に基質を与え、基質に対する酵素の作用によって生成する反応生成物を検出することによって検出され、比色標識は、着色標識を単に視覚化することによって検出される。検出された信号は、問題とする試料の活性化ＶＧＳＣの数を表す。
【００１３】
エキソビボという用語は、生細胞の外又は生物の外部で生じる生物学的プロセス又は反応をいう。典型的な「エキソビボ試料」は細胞培養物であり、本発明の方法で使用される好ましい細胞培養物は、中枢又は末梢神経系の細胞から得られる。本発明の方法をエキソビボ試料で実施する際に用いられる検出可能な標識は、インビトロ試料で使用するものと同様である。
【００１４】
「インビボ試料」は、生きたヒト又は動物被験体に存在するものであり、本発明では典型的には器官又は器官系である。好ましくは、インビボ試料は被験体の神経系の一部であり、最も好ましくは脳である。試料がインビボ試料である場合、接触段階は、ＶＧＳＣの発現が高まる可能性のある試料中の細胞と確実に接触するように、標識化合物をヒト又は動物被験体に投与することによって実施してもよい。投与は、好ましくは静脈内投与によって達成される。
【００１５】
本発明の方法は、好ましくはインビボ試料中、最も好ましくは患者又は患者の器官若しくは器官系で実施される。
【００１６】
本発明の方法をインビボで実施する場合、標識化合物の発する信号は好ましくは画像に変換される。変換は、インビボ撮像技術、例えば単光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）又は光学イメージングによって実施し得る。好ましいインビボ撮像技術はＳＰＥＣＴ及びＰＥＴであり、最も好ましくはＰＥＴである。
【００１７】
好ましくは、本発明の方法で使用される標識化合物はインビボで容易に代謝されず、最も好ましくは人体で６０〜２４０分のインビボ半減期を示す。標識化合物は好ましくは腎臓経由で排泄（つまり尿中排泄）され、好ましくは病巣で１．５以上、さらに好ましくは５以上、特に好ましくは１０以上の信号対バックグラウンド比を示す。標識化合物が放射性同位体を含む場合、インビボで非特異的に結合しているか或いは遊離している標識化合物のピーク値の半量のクリアランスは、好ましくは放射性同位体の放射性崩壊の半減期以下の時間で起こる。
【００１８】
標識化合物又はその塩の有効インビボ用量は、投与すべき標識化合物、患者の体重その他当業者に自明な変数に応じて変動する。一般に、用量は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ、好ましくは０．０１μｇ／ｋｇ〜１．０μｇ／ｋｇである。
【００１９】
別の実施形態では、本発明の方法は、被験体の神経活性をインビボ撮像する方法であって、被験体に本発明の医薬組成物が予め投与されている方法を提供する。「予め投与」とは、医療従事者が関与する段階であり、患者に造影剤が投与されていること、例えば、静脈内注射が既に実施されていることを意味する。
【００２０】
本発明の方法は、神経伝達障害に関連した神経学的病態に対処するための薬剤による被験体の治療効果をモニタリングする方法であって、本発明の放射性医薬組成物を被験体に投与し、標識化合物の取込を検出し、任意ではあるが好ましくは、上記投与と検出を、薬剤による治療の前後途中に実施する方法を行うのにも適用できる。
【００２１】
別の態様では、本発明は、本発明の方法で使用するための本発明の標識化合物を提供する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、本発明の方法で用いられる医薬組成物の製造のための、標識化合物の使用を提供する。
【００２３】
検出可能な標識
本発明の方法では、電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）の不活性化又は活性状態に対して選択的親和性を有する標識化合物は、以下の（ｉ）〜（ｖｖｖ）から選択される検出可能な標識を含む。
（ｉ）γ線放出型放射性ハロゲン、
（ｉｉ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｉｉｉ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（ｉｖ）血管内検出に適したβ線放射体、
（ｖ）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（ｖｉ）インビトロ診断法に適したレポーター、
（ｖｉｉ）放射性金属イオン、及び
（ｖｉｉｉ）常磁性金属イオン。
【００２４】
検出可能な標識が「γ線放出型放射性ハロゲン」である場合、放射性ハロゲンは好適には123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ又は77Ｂｒから選択される。好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは123Ｉである。
【００２５】
検出可能な標識が「陽電子放出型放射性非金属」である場合、かかる陽電子放射体の好適なものとして、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、17Ｆ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ又は124Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は11Ｃ、13Ｎ、18Ｆ及び124Ｉであり、特に好ましくは11Ｃ及び18Ｆである。
【００２６】
検出可能な標識が「過分極ＮＭＲ活性核種」である場合、かかるＮＭＲ活性核種はゼロ以外の核スピンを有し、13Ｃ、15Ｎ、19Ｆ、29Ｓｉ及び31Ｐが挙げられる。これらのうち、13Ｃが好ましい。
【００２７】
検出可能な標識が「血管内検出に適したβ線放射体」である場合、かかるβ線放射体の好適なものとして、放射性金属の67Ｃｕ、89Ｓｒ、90Ｙ、153Ｓｍ、186Ｒｅ、188Ｒｅ又は192Ｉｒ並びに非金属の32Ｐ、33Ｐ、38Ｓ、38Ｃｌ、39Ｃｌ、82Ｂｒ及び83Ｂｒが挙げられる。38Ｃｌ、39Ｃｌ、82Ｂｒ及び83Ｂｒが好ましい。
【００２８】
検出可能な標識が「インビボ光学イメージングに適したレポーター」である場合、レポーターは光学イメージング法で直接又は間接的に検出できる部分であればよい。レポーターは光散乱体（例えば着色又は未着色粒子）でも、光吸収体でも、発光体でもよい。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような色素である。色素は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。最も好ましくはレポーターは蛍光特性を有する。
【００２９】
好ましい有機発色団及び蛍光団レポーターとしては、広範な非局在化電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素錯体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾体も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）と同様に、特定の状況で用いられる。
【００３０】
使用し得る発色団の具体例としては、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｃｙ７．５、マリーナブルー、パシフィックブルー、オレゴングリーン８８、オレゴングリーン５１４、テトラメチルローダミン並びにＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７００及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０が挙げられる。
【００３１】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの可視又は近赤外（ＮＩＲ）域に吸収極大を有する色素である。光学イメージングモダリティ及び測定法としては、特に限定されないが、発光イメージング、内視鏡検査、蛍光内視鏡検査、光干渉断層撮影、透過イメージング、時間分解透過イメージング、共焦点イメージング、非線形顕微鏡、光音響イメージング、音響光学イメージング、分光法、反射分光法、干渉分光法、コヒーレンス干渉法、拡散光トモグラフィー及び蛍光媒介拡散光トモグラフィー（連続波、時間領域及び周波数領域システム）、並びに光散乱、吸収、偏光、発光、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定が挙げられる。
【００３２】
「インビトロ診断法に適したレポーター」は、分光、光化学、生化学、免疫化学、電子、光又は化学的手段によって検出可能な標識である。本発明で有用なかかる標識としては、磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標））、蛍光色素（例えば、イソチオシアン酸フルオレセイン、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質）、放射性標識（例えば、3Ｈ、125Ｉ、35Ｓ、14Ｃ又は32Ｐ）、酵素（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼその他ＥＬＩＳＡ法で慣用されているもの）及びコロイド金又は着色ガラス若しくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの比色ビーズが挙げられる。当然ながら、放射性標識が好ましく、特に3Ｈ、125Ｉ及び14Ｃが好ましい。
【００３３】
造影基が「放射性金属イオン」つまり放射性金属である場合、好適な放射性金属は、64Ｃｕ、48Ｖ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、94mＴｃ又は68Ｇａのような陽電子放射体、或いは99mＴｃ、111Ｉｎ、113mＩｎ又は67Ｇａのようなγ線放射体である。好ましい放射性金属は99mＴｃ、64Ｃｕ、68Ｇａ及び111Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ放射体、特に99mＴｃである。
【００３４】
造影基が「常磁性金属イオン」である場合、かかる金属イオンの好適なものとして、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）又はＤｙ（ＩＩＩ）が挙げられる。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）及びＦｅ（ＩＩＩ）であり、Ｇｄ（ＩＩＩ）が特に好ましい。
【００３５】
好ましい検出可能な標識は、インビボ投与後に、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ及びＭＲ（特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴ）のような非侵襲的方法で外部から検出できるものである。最も好ましい検出可能な標識は放射性のもの、特に上記の検出可能な標識のリストの（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｖｉｉ）、特に（ｉ）及び（ｉｉ）が好ましい。これらの中で、123Ｉ、18Ｆ及び11Ｃが好ましい。
【００３６】
標識化合物
本発明の方法は、好ましくは、特定の標識化合物を使用して実施されるが、これらの化合物は本発明の別の態様をなす。特定の標識化合物については、以下でさらに詳しく説明する。
【００３７】
「標識化合物」という用語は、本明細書では、標識化合物自体、又はその塩若しくは溶媒和物を意味するのに使用される。
【００３８】
本発明で好適な塩としては、（ｉ）生理学的に許容される酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸などの鉱酸から誘導される塩、並びに酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸から誘導される塩、（ｉｉ）生理学的に許容される塩基の塩、例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルホリンなどの有機塩基との塩、及びアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩が挙げられる。
【００３９】
本発明で好適な溶媒和物としては、エタノール、水、生理的食塩水、生理的緩衝液及びグリコールで形成されたものが挙げられる。
【００４０】
ＶＧＳＣの不活性化又は活性状態に関する「選択的親和性」とは、標識化合物が、休止状態よりも不活性化又は活性状態で大きな結合能力を有することを意味する。かかる選択的親和性は、例えば、ＨＥＫ−２９３細胞内で安定に発現したｒＮａv１．２チャネルの休止状態との結合に関する解離定数を測定することによって求めることができる（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４  ４７  ｐｐ１５４７−１５５２）。
【００４１】
好ましくは、不活性化又は活性化状態の標識化合物のＫiは、１ｎＭ〜１００ｎＭであり、最も好ましくは１ｎＭ〜５０ｎＭであり、最も特に好ましくは１ｎＭ〜３０ｎＭである。
【００４２】
本発明の特定の標識化合物は、検出可能な標識で標識された式Ｉの化合物である。
【００４３】
【化１】
2010529173.tif 000002
式中、
Ｒ1a〜Ｒ1cは、独立に、水素、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ヒドロキシル、Ｃ1〜3ヒドロキシアルキル、チオール、Ｃ1〜3チオアルキル、Ｃ1〜3チオアルコキシ、ハロ、Ｃ1〜3ハロアルキル、Ｃ1〜3ハロアルコキシ、ニトロ、Ｃ1〜3ニトロアルキル、Ｃ1〜3ニトロアルコキシ、Ｃ4〜6シクロアルキル、又はＣ1〜3アルキルを介して結合したＣ3〜5ヘテロシクロアルキル基から選択されるＲ1基であり、
Ｒ2は、水素、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6ハロアルキル、又はＣ1〜6アルキルを介して結合したＣ4〜6シクロアルキル基であり、
Ａは、Ｓ又はＯであり、
ＸはＣであって破線の結合が二重結合であるか、或いはＸはＮであって破線の結合が単結合であり、
Ｙは、ＣＨ2又はＣＨ＝ＣＨである。
【００４４】
「検出可能な標識で標識」という表現は、（ｉ）式Ｉに固有の原子の同位体からなるものが検出可能な標識であるか、或いは（ｉｉ）検出可能な標識を含む化学基が、式Ｉの化合物に結合されることを意味する。
【００４５】
別途記載しない限り、「アルキル」という用語は、それ単独で又は他の用語との組合せで、好ましくは炭素原子数１〜１０、さらに好ましくは炭素原子数１〜５、最も好ましくは炭素原子数１〜３の直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例としては、特に限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチルが挙げられる。
【００４６】
別途記載しない限り、「ヒドロキシアルキル」という用語は、それ単独で又は他の用語との組合せで、上記で定義したアルキル基において、１個以上（炭素１原子当たり１個以下）の水素原子、好ましくは１〜４個の水素原子、さらに好ましくは１〜２個の水素原子、最も好ましくは１個の水素原子がヒドロキシル基で置換されたものを意味する。
【００４７】
別途記載しない限り、「アルコキシ」という用語は、それ単独で又は他の用語との組合せで、アルキルエーテル基（但し、アルキルは上記で定義した通りである。）を意味する。適当なアルキルエーテル基の例としては、特に限定されないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。
【００４８】
別途記載しない限り、「シクロアルキル」という用語は、それ単独で又は他の用語との組合せで、飽和又は部分飽和単環式、二環式又は三環式アルキル基を意味し、各環は、好ましくは環炭素原子数３〜８、さらに好ましくは環炭素原子数３〜７、最も好ましくは環炭素原子数４〜６のものであり、適宜ベンゾ縮合環であってもよく、本明細書でアリールの定義に関して規定したように置換されていてもよい。かかるシクロアルキル基の例としては、特に限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、オクタヒドロナフチル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデニル、アダマンチルが挙げられる。
【００４９】
「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素から選択される置換基を意味する。「ハロアルキル」及び「ハロアルコキシ」は、それぞれ、上記で定義したアルキル及びアルコキシ基が１個以上のハロ基で置換されたものである。
【００５０】
「チオール」という用語は、−ＳＨ基を意味する。「チオアルキル」及び「チオアルコキシ」は−ＳＲ基であり、Ｒはそれぞれ上記で定義したアルキル又はアルコキシである。
【００５１】
「ニトロ」という用語は、−ＮＯ2基を意味する。「ニトロアルキル」及び「ニトロアルコキシ」はそれぞれ上記で定義したアルキル及びアルコキシ基が−ＮＯ2基で置換されたものである。
【００５２】
好ましくは、式Ｉの化合物では、
Ｒ1は水素、メチル、メトキシ、チオール、チオメチル、チオメトキシ、ハロ、ハロメチル、ハロメトキシ、ニトロ、ニトロメチル又はニトロメトキシであり、
Ｒ2は水素又はＣ1〜6ハロアルキルであり、
ＡはＯであり、
ＸはＮであって破線の結合は単結合であり、
ＹはＣＨ2である。
【００５３】
さらに好ましくは、式Ｉの化合物では、
Ｒ1は水素、メチル又はハロであり、
Ｒ2は水素であり、
ＡはＯであり、
ＸはＮであって破線の結合は単結合であり、
ＹはＣＨ2である。
【００５４】
代替例において、式Ｉの好ましい化合物では、
Ｒ1は水素、メチル、メトキシ、チオール、チオメチル、チオメトキシ、ハロ、ハロメチル、ハロメトキシ、ニトロ、ニトロメチル又はニトロメトキシであり、
Ｒ2は、水素又はＣ1〜3アルキルを介して結合したＣ4〜6シクロアルキル基若しくはＣ3〜5ヘテロシクロアルキル基であり、
ＡはＯであり、
ＸはＣであって破線の結合は二重結合であり、
ＹはＣＨ＝ＣＨである。
【００５５】
これらの代替例の好ましい式Ｉの化合物では、最も好ましくは、
Ｒ1は、水素、メチル又はハロであり、
Ｒ2は、水素又はＣ1〜3アルキルを介して結合したＣ3〜5ヘテロシクロアルキル基であり、
ＡはＯであり、
ＸはＣであって破線の結合は二重結合であり、
ＹはＣＨ＝ＣＨである。
【００５６】
最も好ましくは、上述の２通りの式Ｉの好ましい標識化合物に関して、Ｒ1a、Ｒ1b、Ｒ1c又は−Ｃ＝Ｏ−ＮＨＲ2のいずれかは、検出可能な標識を含む。検出可能な標識が123Ｉ又は18Ｆである場合、好ましくはＲ1a、Ｒ1b又はＲ1cのいずれかに存在し、最も好ましくはＲ1b又はＲ1cのいずれかに存在する。123Ｉ又は18ＦのいずれかがＲ1b又はＲ1cに存在する場合、酸素橋に対して３、４又は５位にあるのが好ましい。検出可能な標識が11Ｃである場合、−Ｃ＝Ｏ−ＮＨＲ2基のカルボニル炭素であるのが好ましい。
【００５７】
検出可能な標識で標識された式Ｉの最も好ましい化合物の例の幾つかを以下に挙げる。
【００５８】
【表１】
2010529173.tif 000003
2010529173.tif 000004
別の実施形態では、本発明の標識化合物は、検出可能な標識で標識された式ＩＩの化合物である。
【００５９】
【化２】
2010529173.tif 000005
式中、
Ｒ3及びＲ4は、独立に、水素、Ｃ1〜10アルキル、Ｃ1〜10アルコキシ、Ｃ1〜10アルコキシアルキル、Ｃ1〜4ハロアルキル、Ｃ1〜4ハロアルケニル、Ｃ1〜3ハロアルコキシ、Ｃ4〜6シクロアルキル、Ｃ1〜20ＰＥＧアルキル又はＣ1〜20ＰＥＧから選択され、
Ｒ5a及びＲ5bは、独立に、Ｃ1〜4アルキル、ハロ、Ｃ1〜3ハロアルケニル、Ｃ1〜3アルコキシ、或いはＮ、Ｓ及びＯから選択される０〜３個のヘテロ原子を有する五員又は六員芳香族環系であって適宜Ｃ1〜3アルキル、ハロ又はＣ1〜3ハロアルキルで適宜置換されたものから選択されるＲ5基である。
【００６０】
「ＰＥＧ」という用語は、ポリエチレングリコール単位のみからなる鎖をいい、「ＰＥＧアルキル」という用語は、アルキルとポリエチレングリコール単位を含む鎖をいう。ポリエチレングリコール単位は、構造−（ＣＨ2）2−Ｏ−を有する。
【００６１】
好ましくは、式ＩＩに関して、
Ｒ3は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6アルコキシ、Ｃ1〜4ハロアルケニル、Ｃ1〜4ハロアルキル又はＣ1〜3ハロアルコキシであり、
Ｒ4は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ1〜6アルコキシであり、
Ｒ5は、水素、ヨード、２−ヨード−Ｃ1〜3アルケニル、メトキシメチル、フェニル、４−フルオロフェニル、４−ヨードフェニル、ピリジル、２−フルオロエチル−１，２，３−トリアゾールである。
【００６２】
最も好ましくは、式ＩＩに関して、
Ｒ3は、プロピル、メトキシエチル、ヨードプロペニル、フルオロプロピル又はフルオロエトキシであり、
Ｒ4は、プロピル又はメトキシエチルであり、
Ｒ5は、水素、ヨード、２−ヨードアルケニル、メトキシメタン、フェニル、４−フルオロフェニル、４−ヨードフェニル、ピリジン又は２−フルオロエチル−１，２，３−トリアゾールである。
【００６３】
式ＩＩに関して最も好ましくは、Ｒ3、Ｒ5a又はＲ5bのいずれかは、検出可能な標識を含む。検出可能な標識が123Ｉ又は18Ｆの場合、Ｒ3又はフェニル環の４位のＲ5bに存在するのが好ましい。検出可能な標識が11Ｃ又は99mＴｃの場合、フェニル環の４位のＲ5bに存在するのが好ましい。好ましい式ＩＩの標識化合物の例の幾つかを以下に挙げる。
【００６４】
【表２】
2010529173.tif 000006
標識化合物の調製
式Ｉの様々な非標識化合物に関する合成経路は、Ｓｈａｏ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４  ４７  ｐｐ４２７７−４２８５］及びＹａｎｇ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４  ４７  ｐｐ１５４７−１５５２］に記載されている。式ＩＩの様々な非標識化合物に関する合成経路は、Ｌｉｂｅｒａｔｏｒｅ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００４  １４  ｐｐ３５２１−３５２３］に記載されている。
【００６５】
式Ｉ及びＩＩの標識化合物は、前駆体化合物と、所望の検出可能な標識の適当な原料との反応によって簡便に調製できる。
【００６６】
「前駆体化合物」には、標識化合物の誘導体であって、適当な化学的形態の検出可能な標識との化学反応が部位特異的に起こり、最小限の段階数（理想的には一段階）で実施でき、しかも多大な精製を行わずに（理想的にはそれ以上精製しなくても）所望の造影剤が得られるように設計されたものが包含される。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学的純度で得ることができる。前駆体化合物は、適宜、前駆体化合物の官能基に対する保護基を含んでいてもよい。
【００６７】
「保護基」という用語は、不都合な化学反応は阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない十分穏和な条件下で当該官能基から脱離させることができる十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後に、所望の生成物が得られる。保護基は当業者に周知であり、好適には、アミン基については、Ｂｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から、カルボニル基については、メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル又はベンジルエステルから選択される。ヒドロキシ基に対する適当な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル［Ｔｒｔ］或いはテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。チオール基に対する適当な保護基は、トリチル及び４−メトキシベンジルである。その他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００６８】
以下、本発明の標識化合物を得るための方法について説明する。
【００６９】
放射性ヨウ素化
検出可能な標識が放射性ヨウ素である場合、適当な前駆体化合物は、求電子又は求核ヨウ素化或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を起こすような誘導体を含むものである。前者に属するものの例としては、以下の（ａ）〜（ｃ）が挙げられる。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えばトリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えばトリメチルシリル）又は有機ホウ素化合物（例えば、ボロン酸エステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体、
（ｂ）ハロゲン交換のための非放射性臭化アルキル、或いは求核ヨウ素化のためのアルキルトシレート、メシレート又はトリフレート、
（ｃ）求電子ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばフェノール）及び求核ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばアリールヨードニウム、アリールジアゾニウム、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。
【００７０】
放射性ヨウ素化のための前駆体化合は、好ましくは、ヨウ化又は臭化アリールのような非放射性ハロゲン原子（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、活性化アリール環（例えばフェノール基）、有機金属置換物（例えばトリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、トリアゼンのような有機置換物、或いはヨードニウム塩のような求核置換反応のための良好な脱離基を含む。放射性ヨウ素化では、好ましくは、前駆体化合物は有機金属置換物を含み、最も好ましくはトリアルキルスズを含む。
【００７１】
前駆体化合物及び放射性ヨウ素を有機分子に導入する方法は、Ｂｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］に記載されている。適当なボロン酸エステル有機ホウ素化合物及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ  ｅｔ  ａｌ［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｉ．，２９，８４１−８４３（２００２）ａｎｄ  ３０，３６９−３７３（２００３）］に記載されている。適当なオルガノトリフルオロボレート及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ  ｅｔ  ａｌ［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３１，９３５−９３８（２００４）］に記載されている。
【００７２】
放射性ヨウ素を結合させることのできるアリール基の例としては、以下のものがある。
【００７３】
【化３】
2010529173.tif 000007
式中、アルキルは、好ましくはメチル又はブチルである。これらの基は、芳香族環での放射性ヨウ素置換が容易な置換基を含んでいる。
【００７４】
放射性ヨウ素を含む他の置換基は、例えば以下のような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成することができる。
【００７５】
【化４】
2010529173.tif 000008
飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子はインビボで代謝され易く、放射性ヨウ素が失われ易いことが知られているので、放射性ヨウ素原子は好ましくは芳香族環（ベンゼン環など）又はビニル基に直接共有結合で結合させる。
【００７６】
式Ｉの標識化合物については、放射性ヨウ素化のための前駆体化合物は式Ｉａのものである。
【００７７】
【化５】
2010529173.tif 000009
式中、
Ｒ1c〜Ｒ1eのいずれかは、非放射性ヨウ素、ヒドロキシル又は［Ｃ1〜6アルキル］3Ｓｎ−Ｚ−（式中、Ｚは結合、Ｃ1〜6アルキル又はＣ1〜6アルケニルである。）であり、残りの２つは独立に、式Ｉで定義したＲ1基であり、
Ｒ2は式Ｉで定義した通りであり、
Ｘ及びＹは式Ｉで定義した通りである。
【００７８】
放射性ヨウ素化のための式Ｉａの前駆体化合物の例を以下に挙げる。
【００７９】
【化６】
2010529173.tif 000010
式ＩＩの標識化合物については、放射性ヨウ素化のための前駆体化合物は式ＩＩａのものである。
【００８０】
【化７】
2010529173.tif 000011
式中、
Ｒ3a又はＲ4aのいずれかが［Ｃ1〜6アルキル］3Ｓｎ−Ｚ−（式中、Ｚは結合、Ｃ1〜6アルキル又はＣ1〜6アルケニルである。）であるか、或いはＲ5c又はＲ5dのいずれかが非放射性ヨウ素、水素又は［Ｃ1〜6アルキル］3Ｓｎ−Ｚ−（式中、Ｚは結合、Ｃ1〜6アルキル又はＣ1〜6アルケニルである。）であり、残りの基に関しては、
Ｒ3aは、式ＩＩに関して上記で定義したＲ3であり、
Ｒ4aは、式ＩＩに関して上記で定義したＲ4であり、
Ｒ5c又はＲ5dは、独立に、式ＩＩに関して上記で定義したＲ5基である。
【００８１】
放射性ヨウ素化のための式ＩＩａの前駆体化合物の例を如何に挙げる。
【００８２】
【化８】
2010529173.tif 000012
上記トリアルキルスズ前駆体化合物は、放射性ヨウ素化合物の非放射性の形態のものから、［アルキル］3ＳｎＳｎ［アルキル］3とのパラジウム反応によって製造される。置換基で生じる反応は、以下の通りである。
【００８３】
【化９】
2010529173.tif 000013
放射性フッ素化
検出可能な標識がフッ素の放射性同位体である場合、フッ化アルキルはインビボ代謝に抵抗性であるので、放射性フッ素原子はフルオロアルキル基又はフルオロアルコキシ基の一部をなすものであってもよい。フルオロアルキル化は、フェノール、チオール、アミドのような反応性基を有する前駆体化合物とフルオロアルキル基との反応によって実施できる。18Ｆは、18Ｆ（ＣＨ2）3ＯＨ反応体を用いたＮ−ハロアセチル基のアルキル化によって導入することもでき、−ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）318Ｆ誘導体が得られる。
【００８４】
或いは、放射性フッ素原子は、芳香族環（例えばベンゼン環）に直接共有結合で結合させてもよい。アリール系については、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの18Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−18Ｆ誘導体への好適な経路である。
【００８５】
放射性フッ素化は、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する前駆体化合物の適当な化学基と18Ｆ−フッ化物との反応を用いた直接標識法でも実施できる。
【００８６】
18Ｆ−標識化合物は、18Ｆフルオロジアルキルアミンの形成、及び18Ｆフルオロジアルキルアミンが例えば塩素、Ｐ（Ｏ）Ｐｈ3又は活性化エステルを含有する前駆体化合物と反応する場合にはその後のアミド形成によって、得ることもできる。
【００８７】
トリアゾールを含有する標識化合物の場合、18Ｆを導入するための別の方法は、アルキン又はアジド置換基を含む前駆体化合物を、［18Ｆ］フルオロアルキルアジド又は［18Ｆ］フルオロアルキンとそれぞれ反応させることである。この標識戦略は、国際公開第２００６／０６７３７６号に詳細に記載されている。
【００８８】
18Ｆ−標識誘導体への合成経路のさらなる詳細は、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。
【００８９】
式Ｉの標識化合物について、放射性フッ素化のための前駆体化合物は式Ｉｂのものである。
【００９０】
【化１０】
2010529173.tif 000014
式中、
Ｒ1f、Ｒ1g、Ｒ1h又はＲ2bのいずれかは、アジド、Ｃ1〜6末端アルキン、ヒドロキシル、Ｎ−ハロアセチルであるか、或いはフェノール、チオール又はアミドのような反応性基であるか、或いはニトロ、トリメチルアンモニウム、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような脱離基を含むものであり、
残りの基に関しては、
Ｒ1f〜Ｒ1hは独立に、式Ｉに関して上記で定義したＲ1基であり、
Ｒ2bは、式Ｉに関して上記で定義したＲ2であり、
Ｘ及びＹは、式Ｉに関して上記で定義した通りである。
【００９１】
式Ｉｂの好ましい前駆体の場合、
Ｒ1g及びＲ1hの一方は、ニトロ又はトリメチルアンモニウムであり、他方はフッ素、塩素、ニトロ又は臭素であり、残りの基に関しては、
Ｒ1f〜Ｒ1hは独立に、式Ｉに関して上記で定義したＲ1基であり、
Ｒ2bは、式Ｉに関して上記で定義したＲ2である。
【００９２】
ニトロ又はトリメチルアンモニウム基は、18Ｆ−で置換できる脱離基（ＬＧ）として働き、フッ素、塩素、ニトロ又は臭素基は、電子求引基（ＥＷＧ）、例えば次式のように働く。
【００９３】
【化１１】
2010529173.tif 000015
式中、ＰＧは、上記で定義した保護基である。
【００９４】
式Ｉｂの前駆体化合物の例は、以下の通りである。
【００９５】
【化１２】
2010529173.tif 000016
式ＩＩの標識化合物について、放射性フッ素化のための前駆体化合物は式ＩＩｂのものである。
【００９６】
【化１３】
2010529173.tif 000017
式中、Ｒ3b及びＲ4bの一方はニトロ、トリメチルアンモニウム、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような脱離基を含み、Ｒ5e及びＲ5fの一方はアルキン又はアジドであり、残りの基に関しては、
Ｒ3bは、式ＩＩに関して上記で定義したＲ3であり、
Ｒ4bは、式ＩＩに関して上記で定義したＲ4であり、
Ｒ5e及びＲ5fは独立に、式ＩＩに関して上記で定義したＲ5基である。
【００９７】
式ＩＩｂの前駆体化合物の例は、以下の通りである。
【００９８】
【化１４】
2010529173.tif 000018
放射性カルボニル化
陽電子放出型非金属が11Ｃである場合、一つの標識法は、メチル化合物の脱メチル化型である前駆体化合物と、［11Ｃ］メチルヨウ化物とを反応させることである。所望の標識化合物の特定の炭化水素鎖のグリニャール試薬と［11Ｃ］ＣＯ2との反応によって11Ｃを導入することもできる。11Ｃは、芳香族環のメチル基として導入することもでき、その場合、前駆体化合物は、トリアルキルスズ基又はＢ（ＯＨ）2基を含んでもよい。
【００９９】
11Ｃの半減期はわずか２０．４分にすぎないので、中間体の11Ｃ部分が高い比活性を有していて、できるだけ迅速な反応プロセスを用いて生成させることが重要である。
【０１００】
かかる11Ｃ標識技術の概説は、Ａｎｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ“Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  11Ｃ−Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”ｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍｏｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｄ．Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ  ａｎｄ  Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ（２００３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ）に記載されている。
【０１０１】
式Ｉの標識化合物について、放射性カルボニル化のための前駆体化合物は式Ｉｃのものである。
【０１０２】
【化１５】
2010529173.tif 000019
式中、
Ｒ1i、Ｒ1j又はＲ1kのいずれかはトリメチルスズ、トリブチルスズ又はＢ（ＯＨ）2であり、Ｒ2cは、水素又はヒドロキシルであり、残りの基に関しては、
Ｒ1i〜Ｒ1kは独立に、式Ｉに関して上記で定義したＲ1基であり、
Ｒ2cは、式Ｉに関して上記で定義したＲ2であり、
Ｘ及びＹは、式Ｉに関して上記で定義した通りである。
【０１０３】
式Ｉｃの前駆体化合物の具体例としては以下のものが挙げられる。
【０１０４】
【化１６】
2010529173.tif 000020
式ＩＩの標識化合物について、放射性カルボニル化のための前駆体化合物は式ＩＩｃのものである。
【０１０５】
【化１７】
2010529173.tif 000021
式中、
Ｒ5cは、ヒドロキシル、トリメチルスズ、トリブチルスズ又はＢ（ＯＨ）2であり、Ｒ3c又はＲ4cは、Ｃ1〜6ヒドロキシアルキルであり、残りの基に関しては、
Ｒ3cは、式ＩＩのＲ3に関して上記で定義した通りであり、
Ｒ4cは、式ＩＩのＲ4に関して上記で定義した通りであり、
Ｒ5cは、式ＩＩのＲ5に関して上記で定義した通りである。
【０１０６】
式ＩＩｃの前駆体化合物の具体例としては以下のものが挙げられる。
【０１０７】
【化１８】
2010529173.tif 000022
過分極
「過分極」という用語は、ＮＭＲ活性核種の分極の程度がその平衡分極を超えていることを意味する。幾つかの過分極法が知られている。その幾つかは、Ｇｏｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．２００１，４６，１−５  ａｎｄ  Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．２００２，９（ｓｕｐｐｌ．２），Ｓ５０７−Ｓ５１０］に記載されている。
【０１０８】
13Ｃの天然存在比（12Ｃに対して）は約１％である。ＮＭＲ活性核種を天然存在比で含む化合物について過分極を実施することは可能であるが、投与前にＮＮＲ活性核種を濃縮しておくのが好ましい。適当な13Ｃ濃縮化合物は、標識化合物を得るため過分極する前に、好適には５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上の存在比となるように濃縮される。濃縮は１以上の部位での選択的濃縮であっても、すべての部位での均一な濃縮であってもよい。声は化学合成又は生物学的標識によって達成される。
【０１０９】
放射性金属化
検出可能な標識が放射性金属イオンである場合、標識化合物は好ましくは放射性金属イオンと合成配位子との金属錯体を含む。「金属錯体」という用語は、金属イオンと１以上の配位子との配位錯体を意味する。金属錯体は「キレート交換耐性」、つまり金属の配位部位に対する他の潜在的な競合配位子との配位子交換を容易には起こさないものであるのが極めて好ましい。潜在的な競合配位子としては、インビトロ製剤中の他の賦形剤（製剤に使用される例えば放射線防護剤又は抗菌保存剤）又はインビボでの内在性化合物（例えばグルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）がある。「合成」という用語はその通常の意味を有し、天然源（例えば哺乳類の身体）から単離されるものではなく、人工のものであるを意味する。かかる化合物は、その製造及び不純物プロフィルを完全に制御できるという利点を有している。
【０１１０】
キレート交換耐性の金属錯体を形成する本発明での使用に適した配位子としては、（金属ドナー原子同士が炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位骨格で連結されて）五又は六員キレート環が形成されるように２〜６個、好ましくは２〜４個の金属ドナー原子が配列したキレート剤、或いはイソニトリル、ホスフィン又はジアゼニドのように金属イオンに強く結合するドナー原子を含む単座配位子が挙げられる。キレート剤の一部として金属によく結合するドナー原子の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィン類は強固な金属錯体を形成し、単座又は二座ホスフィンであっても適当な金属錯体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドの線状構造は、それらをキレート剤に導入するのが容易ではないので、通例、単座配位子として使用される。適当なイソニトリルの例としては、ｔｅｒｔ−ブチルイソニトリルのような単純なアルキルイソニトリル、並びにＭＩＢＩ（すなわち、１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルが挙げられる。適当なホスフィンの例としては、テトロホスミン及び単座ホスフィン類、例えばトリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンが挙げられる。適当なジアゼニドの例としては、ＨＹＮＩＣ系配位子、すなわちヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミドが挙げられる。
【０１１１】
キレート交換耐性金属錯体を形成するテクネチウムに適したキレート剤の例としては、特に限定されないが、以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のものが挙げられる。
（ｉ）ジアミンジオキシム
（ｉｉ）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ3Ｓ配位子、例えばＭＡＧ3（メルカプトアセチルトリグリシン）及び関連配位子、又はジアミドピリジンチオールドナーセットを有するもの、例えばＰｉｃａ。
（ｉｉｉ）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ2Ｓ2配位子、例えばＢＡＴ又はＥＣＤ（すなわちエチルシステイネート二量体）又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するもの、例えばＭＡＭＡ。
（ｉｖ）テトラミン、アミドトリアミン又はジアミンジアミンドナーセットを有する開環又はマクロ環状配位子であるＮ4配位子、例えばサイクラム、モノオキシサイクラム又はジオキシサイクラム。
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ2Ｏ2配位子。
【０１１２】
幾つかの好ましいキレート剤の合成方法は、国際公開第０３／００６０７０号及び同第０６／００８４９６号に記載されている。
【０１１３】
医薬組成物
本発明の標識化合物は、好ましくは、標識化合物と生体適合性担体とを含む医薬組成物としてインビボ用途のため投与される。「医薬組成物」とは、本発明では、標識化合物又はその塩をヒトへの投与に適した形態で含む製剤と定義され、本発明の別の態様を構成する。投与は、好ましくは医薬組成物を水溶液として注射することによって行われる。かかる医薬組成物は、他の成分、例えば緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えばシクロデキストリン又はＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ若しくはリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えばアスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸））を適宜含んでいてもよい。好ましくは、医薬組成物は放射性医薬組成物であり、標識化合物は検出可能な放射性標識を含む。
【０１１４】
「生体適合性担体」とは、標識化合物を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、生理的食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性担体は、エタノールのような生体適合性の有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は製剤の可溶化に有用である。好ましくは、生体適合性担体はパイロジェンフリーの注射用水、等張塩類溶液又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性担体のｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内である。
【０１１５】
かかる医薬品は、好適には、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れて供給される。かかる容器は、患者の１回又は複数回分の用量を含むものでよい。好ましい多用量用容器は、患者の複数回分の用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ3のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードのシリンジに吸引することができる。プレフィルドシリンジは患者１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨て又はその他臨床用に適したシリンジである。医薬組成物が放射性医薬組成物の場合、プレフィルドシリンジは、適宜、オペレーターを放射能被曝から保護するためのシリンジシールドを備えていてもよい。かかる適当な放射性医薬品シリンジシールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなる。
【０１１６】
放射性医薬組成物は、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴイメージングのため所望の信号が得られる十分な量で患者に投与すればよく、典型的な放射性核種投与量は体重７０ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍＣｉ、好ましくは０．１〜５０ｍＣｉで通常は十分である。
【０１１７】
本発明の医薬組成物は、キットから調製することもできる。或いは、医薬組成物は、所望の滅菌生成物が得られるような無菌製造条件下で製造してもよい。医薬組成物を非滅菌条件下で調製した後、例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて最終的に滅菌してもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物はキットから調製される。かかるキットは、前駆体組成物（好ましくは滅菌された非発熱性の形態のもの）を含んでいて、検出可能な標識の滅菌供給源との反応で所望の医薬組成物を最低限の操作数で生ずる。かかる配慮は、放射性医薬組成物、特に放射性同位体の半減期が比較的短い放射性医薬品で重要であり、取扱いの容易さ及び放射性医薬品の取扱者の放射線被曝量の低減という点でも重要である。したがって、かかるキットの再構成用の反応溶媒は、好ましくは上記で定義した生体適合性担体であり、最も好ましくは水性担体である。
【０１１８】
適当なキット容器は、無菌健全性及び／又は放射能の安全性並びに適宜、不活性ヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）を維持することができ、しかも、シリンジで溶液の添加及び吸引もできる密封容器である。かかる容器として好ましいのはセプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通例アルミニウム製）でクリンプしたものである。かかる容器は、適宜、例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気などのため、蓋が真空に耐えることができるという追加の利点も有する。
【０１１９】
前駆体化合物をキットに用いる際の好ましい態様は、上記で説明した通りである。キットに用いられる前駆体化合物は、望ましい無菌の非発熱性物質を生じるように無菌製造条件下で用いられる。前駆体化合物を非滅菌条件下で使用し、最後に例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて滅菌してもよい。好ましくは、前駆体化合物は無菌非発熱性の形態で用いられる。最も好ましくは、無菌の非発熱性の前駆体化合物を上述の密封容器内で用いる。
【０１２０】
キットは、適宜、放射線防護剤、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤、充填剤のような追加の成分をさらに含んでいてもよい。
【０１２１】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元プロセスのような分解反応を阻害する化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（すなわち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（すなわち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）並びにこれらと生体適合性陽イオンとの塩から選択される。生体適合性陽イオン及びその好適な実施形態は上述の通りである。
【０１２２】
「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、濃度に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、再構成後の医薬組成物（つまり造影剤自体）での微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌保存剤は、再構成前の本発明の非放射性キットの１以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類、すなわちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。
【０１２３】
「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成したキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類への投与に関して許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかる適当なｐＨ調節剤としては、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容される塩基が挙げられる。前駆体化合物を酸塩の形態で用いる場合、キットのユーザーが多段階法の一部としてｐＨを調節できるようにｐＨ調節剤を適宜別のバイアル又は容器で提供してもよい。
【０１２４】
「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩並びに水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【０１２５】
実施例の簡単な説明
実施例１及び実施例２は、本発明の方法での使用に適した特定の標識化合物の合成経路について記載する。
【０１２６】
実施例３は、正常ウィスターラットにおける3Ｈ−標識化合物の生体内分布を示す。
【実施例】
【０１２７】
実施例１：３−［２，４−（ジフルオロ−フェノキシ）］−フェニル−ピラゾール−１−［（11Ｃ）カルボン酸］アミドの合成
【０１２８】
【化１９】
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適当な有機溶媒（ジクロロメタン、ジメチルホルミアミド、アセトニトリル又はテトラヒドロフランなど）中の前駆体の溶液に、Ｃ−１１標識ホスゲンを室温で導入する。ホスゲンが消費された後で、アンモニアを（溶液又はガスとして）導入し、得られた反応混合物を加熱する。次いで粗生成物の混合物を、セミ分取ＨＰＬＣで精製する。
【０１２９】
実施例２：３−［２−フルオロ，４−（18Ｆ−フルオロ）−フェノキシ］−フェニル−ピラゾール−１−カルボン酸アミドの合成
【０１３０】
【化２０】
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18Ｆ標識用の前駆化合物を、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４  ４７  ｐｐ１５４７−１５５２］に概説された方法で調製し、Ｂｏｃ保護基（上記スキームにおけるＰＧ）をアミンに添加した後、放射性フッ素化を行う。
【０１３１】
前駆体化合物を、アリールニトロ基の［18Ｆ］−フッ素化物核置換によって放射性フッ素化した後、酸加水分解によって脱保護することにより、標記化合物を得る。
【０１３２】
実施例３：ラットにおける3Ｈ化合物の生体内分布
トリチウム化型の３−［２，４−ジフルオロ−フェノキシ］−フェニル−ピラゾール−１−カルボン酸アミド（図１の「ハマースミス化合物」）は、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社（英国カーディフ）でカスタムメイドされたものであった。
【０１３３】
ラット（ウィスター、約１５０ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＵＫ社）に、尾静脈から、［3Ｈ］−３−［２，４−ジフルオロ−フェノキシ］−フェニル−ピラゾール−１−カルボン酸アミド０．３７ＭＢｑを静脈内ボーラスとして注射した。注射後（ｐ．ｉ．）２分、５分、２０分及び４０分で、ラットを頸部脱臼によって殺した。脳（皮質及び海馬として分離した）、血液及び主な器官を収集し、計量し、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｏｘｉｄｉｚｅｒモデル３０７（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社（米国コネティカット州メリデン）を用いて燃焼させた。次いで試料を、β線計測器（Ｒａｃｋ  Ｂｅｔａ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＬＡＳ（ＵＫ）社製）でカウントした。グラム当たりの注射用量のパーセンテージ（％ｉｄ／ｇ）を、各試料ごとに決定し、結果を図１に示す。これは、化合物の脳摂取が良好であり、時間活性曲線が可逆的結合と一致しており、プローブは灰質及び白質を描いていることを実証している（異なるレベルのＶＧＳＣを有すると予測される）。
【国際調査報告】
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