(57)【要約】  本開示は、とりわけ、新規なビスホスホネート化合物及びそうした化合物を作製し使用する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ファルネシル二リン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）、ゲラニルゲラニル二リン酸塩シンターゼ（ＧＧＰＰＳ）、及びデカプレニルピロリン酸シンターゼ（ＤＰＰＳ）の１つ又は複数を選択的に阻害することができるビスホスホネートを含む。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳの１つ又は複数を選択的に阻害することができる。複数の実施形態では、本発明の化合物及び方法は、制癌関連、免疫刺激関連及び他の関連などで優れた活性レベルを示し、いくつかの場合、旧世代ビスホスホネート薬物の活性レベルを複数桁で凌駕する活性レベルを示す。複数の実施形態では、本発明は、例えば、腫瘍又は癌細胞増殖阻害、γδＴ細胞の活性化、メバロネート代謝経路に関連するある種の酵素の阻害、骨吸収疾患、癌、免疫障害、免疫療法及び感染症のための研究や治療への適用に関連する化合物及び方法を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＸＡ１の化合物又はその塩若しくは水和物
【化１】
2010523709.tif 000024
（式中、
Ｘは、水素、ヒドロキシル基又はハロゲンであり、
Ｍは、化合物中の他のＭとは独立に、負電荷、水素、アルキル基、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯ−Ｒ又は−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−Ｒであり、但し、ｐは１〜６であり、Ｒは、水素、任意選択で置換されたアルキル又は任意選択で置換されたアリールであり、−ＯＭは形態−Ｏ−Ａ＋（Ａ＋はカチオンである）の塩であってよく、
ｎは、１、２又は３であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ互いに独立に、水素、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＳＲ’、ＯＲ’、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル及び任意選択で置換されたアリール基からなる群から選択され、但し、各Ｒ’は、列挙した任意の基の他の任意のＲ’とは独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル基及び任意選択で置換されたアリール基から選択され、Ｒ１の１つとＲ２の１つは一緒になって１〜３個のヘテロ原子、特にＮ、Ｓ及びＯを含む３〜１０員の炭素環又は複素環を形成しており、
Ｚは、
【化２】
2010523709.tif 000025
であり、式中、ＵはＨ又はＯＨであり、
存在する場合、Ｒ３〜Ｒ７は、互いに独立に、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲ”’、−ＣＯＯＲ”’、−ＯＣＯＯＲ”’、−ＣＯＲ”’、−ＣＯＮ（Ｒ”’）２、−ＯＣＯＮ（Ｒ”’）２、−Ｎ（Ｒ”’）２、−ＮＯ２、−ＳＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ”’）２若しくは−ＳＯＲ”’基、任意選択で置換されたアルキル基、任意選択で置換されたアルケニル基、任意選択で置換されたアルキニル基及び任意選択で置換されたアリール基からなる群から選択され、但し、Ｒ又はＲ”’はそれぞれ、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル基、任意選択で置換されたアリール基及び任意選択で置換されたアシル基から独立に選択され、
存在する場合、Ｒ３〜Ｒ７の少なくとも１つはＲＬであり、ＺがＺ６であり、Ｒ４がＲＬである場合、ＲＬは、そのそれぞれが任意選択で置換されている６〜２０個の炭素原子を有するアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アルケノキシ又はアルキノキシ基；その１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている６〜２０個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基；又は３−ＲＭ若しくは４−ＲＭ置換フェニル基から選択される基であり、但し、ＲＭは、３〜１５個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニオキシ、アルキノキシ又はアルキルエーテル基から選択され、そのフェニル環の他の環位置は、１つ若しくは複数のハロゲン、又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数の任意選択で置換されたアルキル基で任意選択で置換されており、
ＲＮは１〜３個の炭素原子を有する任意選択で置換されたアルキル基であり、
存在する場合、Ｒ８、Ｒ１０及びＲ１３は、６〜２０個の炭素原子を有するアルキル基；６〜２０個の炭素原子を有するアルケニル又はアルキニル基；その１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている６〜２０個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基；又は３−ＲＭ若しくは４−ＲＭ置換フェニル基から選択される基であり、但し、ＲＭは、３〜１５個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニオキシ、アルキノキシ又はアルキルエーテル基から選択され、そのフェニル環の他の環位置は、１つ若しくは複数のハロゲン、又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数の任意選択で置換されたアルキル基で任意選択で置換されており、
存在する場合、Ｒ９、Ｒ１１及びＲ１２は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル又はアルキニル基；その１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている１〜６個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基；或いは任意選択で置換されたフェニル基から選択される基であり、
存在する場合、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６は、水素又は１〜６個の炭素原子を有する任意選択で置換されたアルキル若しくは任意選択で置換されたアリール基から独立に選択され、但し、Ｒ９は、Ｒ８の第１炭素と結合して、飽和していても１つ若しくは２つの二重結合を有していてもよい５〜８員の炭素環を形成することができる）。
【請求項２】
ＺがＺ１〜Ｚ５のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＺがＺ６である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＺがＺ８又はＺ１０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＺがＺ１１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＺがＺ１であり、Ｒ４がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ＺがＺ１であり、Ｒ５がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ＺがＺ１であり、Ｒ６がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ＺがＺ２であり、Ｒ４がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ＺがＺ２であり、Ｒ５がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
ＺがＺ２であり、Ｒ６がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
ＺがＺ３であり、Ｒ３がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＺがＺ３であり、Ｒ５がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
ＺがＺ３であり、Ｒ６がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
ＺがＺ５であり、Ｒ３がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
ＺがＺ５であり、Ｒ４がＲＬである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
ＲＬが、７〜２０個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル若しくはアルキニル基、又は７〜２０個の炭素原子を有するアルコキシ基から選択される基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
ＲＬが、７〜２０個の炭素原子を有するアルキル若しくはアルキニル基、又は７〜２０個の炭素原子を有するアルコキシ基から選択される基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
ＲＬが、７〜１４個の炭素原子若しくは８〜１２個の炭素原子を有するアルキル又はアルキニル基から選択される基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
ＲＬが、７〜１４個の炭素原子又は８〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
ＲＬが、７〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
ＲＬが、８〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
ＺがＺ８又はＺ１０であり、Ｒ８又はＲ１０がそれぞれ、８〜２０個の炭素原子又は９〜１７個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
ＺがＺ８又はＺ１０であり、Ｒ８又はＲ１０がそれぞれ、８〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基又は９〜１７個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
ＺがＺ８であり、Ｒ８が８〜２０個の炭素原子又は９〜１７個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
前記アルキル基が直鎖アルキル基である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
ＺがＺ１〜Ｚ５であり、ＲＬがアルキニル基−Ｃ≡Ｃ−ＲＡＫであり、式中、ＲＡＫが４〜２０個の炭素原子又は５〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
ＲＬが、その１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている７〜２０個の炭素原子又は７〜１４個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２９】
ＲＬが３−ＲＭ又は４−ＲＭ置換フェニル基であり、ＲＭが３〜１５個の炭素原子若しくは６〜１２個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニオキシ、アルキノキシ又はアルキルエーテル基から選択され、そのフェニル環の他の環位置が１つ若しくは複数のハロゲン、又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数の任意選択で置換されたアルキル基で任意選択で置換されている、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ１３が、７〜２０個の炭素原子を有するアルキル若しくはアルキニル基、又はその１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている７〜２０個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基から選択される基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１３が、７〜２０個の炭素原子若しくは９〜１７個の炭素原子を有するアルキル又はアルキニル基から選択される基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３２】
ＺがＺ６であり、ＲＮがメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３３】
それが存在し、且つＲＬではない場合、Ｒ３〜Ｒ７が、水素、ハロゲン、任意選択で置換されたアルキル基、任意選択で置換されたアルケニル基、任意選択で置換されたアルキニル基、任意選択で置換されたアルコキシ基及び任意選択で置換されたアリール基からなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
それが存在し、且つＲＬではない場合、Ｒ３〜Ｒ７が、水素、ハロゲン、又は１〜３個の炭素原子を有する非置換アルキル基から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
それが存在し、且つＲＬではない場合、Ｒ３〜Ｒ７がすべて水素である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
ＺがＺ８であり、Ｒ９が１〜６個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
ＺがＺ８であり、Ｒ９がメチル基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３８】
存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２が同じ基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３９】
存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２が異なる基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２が１〜６個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４１】
存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２がメチル基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４２】
存在する場合、Ｒ１４及びＲ１５が水素である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４３】
存在する場合、Ｒ１５及びＲ１６が水素である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４４】
存在する場合、Ｒ１５及びＲ１６が水素であり、Ｒ１４が水素又は１〜３個の炭素原子を有するアルキル基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｒ４が、６〜２０個の炭素原子、７〜１７個の炭素原子又は８〜１５個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４６】
治療有効量の請求項１〜４５のいずれか一項に記載の１つ若しくは複数の化合物及び薬剤として許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項４７】
６３７、６３８、６７７、６８７、６８８、６９３、６９４、６９５、６９６、７１４、７１５、７１６、７１７、７２２、７５４、６７５、６７８及び７２８で表される化合物からなる群から選択される化合物、並びにそれぞれの前記化合物に対応する薬剤として許容されるその塩又はそのエステル。
【請求項４８】
治療有効量の前記請求項のいずれか一項に記載の１つ又は複数の組成物を含む医薬品。
【請求項４９】
本明細書で記載する状態を治療するための医薬品の作製方法。
【請求項５０】
前記癌細胞を有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む、癌細胞の成長を阻害する方法。
【請求項５１】
それを必要とする患者に治療有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、癌を治療する方法。
【請求項５２】
前記癌が乳癌である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記乳癌が実際の骨転移状態又は潜在的な骨転移状態を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
Ｔ細胞を、請求項１に記載の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む、Ｔ細胞を刺激する方法。
【請求項５５】
前記Ｔ細胞がγδＴ細胞である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
それを必要とする患者に治療有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む免疫治療法。
【請求項５７】
それを必要とする患者に治療有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、骨吸収障害を治療する方法。
【請求項５８】
それを必要とする患者に治療有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、骨痛状態を治療する方法。
【請求項５９】
前記感染性病原体を、有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む、感染性病原体の増殖を阻害する方法。
【請求項６０】
それを必要とする患者に治療有効量の請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、感染症を治療する方法。
【請求項６１】
前記感染症が、ウイルス、真菌、バクテリア及び寄生原生動物からなる群から選択される病原体と関係する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ウイルスがレトロウイルスである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記寄生原生動物が、リーシュマニア属、トキソプラズマ属、クリプトスポリジウム属、マラリア原虫及びトリパノソーマ属からなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記寄生原生動物が大形リーシュマニアである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記バクテリアが大腸菌又は黄色ブドウ球菌である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬製剤を合成する方法。
【請求項６８】
前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含む、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ酵素の２つ以上を選択的に阻害する方法。
【請求項６９】
前記有機化合物がビスホスホネート化合物である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記化合物が請求項１に記載の化合物である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記化合物が、癌細胞若しくは腫瘍成長阻害アッセイ及び／又は免疫刺激アッセイにおいて少なくとも４のｐＩＣ５０値を有する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７２】
前記化合物が、少なくとも５のｐＩＣ５０値を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記化合物が、少なくとも６のｐＩＣ５０値を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記化合物が、少なくとも７のｐＩＣ５０値を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含むＦＰＰＳ酵素、ＧＧＰＰＳ酵素及びＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害する方法であって、前記化合物が前記ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害することができる方法。
【請求項７６】
前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含むＧＧＰＰＳ酵素及びＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害する方法であって、前記化合物が前記ＧＧＰＰＳ酵素及び前記ＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害することができる方法。
【請求項７７】
前記化合物が、式ＸＡ１（Ｚ＝Ｚ１であり、Ｒ４＝ＲＬ）を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含む、ＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することなくＧＧＰＰＳ酵素を選択的に阻害する方法であって、前記化合物が、前記ＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することなく前記ＧＧＰＰＳ酵素を選択的に阻害することができる方法。
【請求項７９】
前記化合物が、式ＸＡ１（Ｚ＝Ｚ１２であり、Ｒ４＝ＲＬ）を有する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
哺乳動物細胞を、ＧＧＰＰＳ酵素及びＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することができる有機ビスホスホネート化合物と接触させることを含む、腫瘍又は癌細胞増殖の免疫刺激及び阻害の１つ又は複数の方法。
【請求項８１】
哺乳動物細胞を、ＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することなく、ＧＧＰＰＳ酵素を実質的に阻害することができる有機ビスホスホネート化合物と接触させることを含む、癌細胞増殖の阻害方法。
【請求項８２】
前記化合物が請求項１に記載の化合物である、請求項６８〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記化合物が化合物７１５である、請求項７６、７７又は８０に記載の方法。
【請求項８４】
前記化合物が化合物７５４である、請求項７８、７９又は８１に記載の方法。
【請求項８５】
１つ又は複数の特性のための有機ビスホスホネート試験化合物をスクリーニングする方法であって、
前記試験化合物を提供するステップと、
ＦＰＰＳ酵素アッセイ；
ＧＧＰＰＳ酵素アッセイ；
ＤＰＰＳ酵素アッセイ
からなる群から選択される少なくとも２つの酵素アッセイで前記試験化合物の性能特質を測定するステップと、
癌細胞又は腫瘍成長阻害アッセイ；
Ｔ細胞活性化アッセイ；
骨吸収アッセイ；
骨結合アッセイ
からなる群から選択される少なくとも２つの活性アッセイで前記試験化合物の活性レベルを測定するステップと、
前記性能特質及び前記活性レベルを分析するステップと、
前記特質及び活性レベルに基づいて前記試験化合物を選択するステップと、
それによって、前記１つ又は複数の特性について前記試験化合物をスクリーニングするステップと
を含む方法。
【請求項８６】
基準化合物を提供するステップと、前記基準化合物の性能特質を、前記試験化合物の前記性能特質と比較するステップとをさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
Ｚが、Ｚ６、Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９、Ｚ１０、Ｚ１１及びＺ１２のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８８】
Ｘがヒドロキシル又はハロゲンである、請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８９】
Ｘがヒドロキシルである、請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９０】
Ｘがハロゲンである、請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９１】
ＺがＺ１であり、ＲＬが７〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルコキシである、請求項１〜４５及び４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９２】
化合物７１５の構造式を有する化合物又はその塩、エステル若しくは医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
［０００１］本出願は、２００７年４月１２日出願の米国仮出願第６０／９１１，４２６号明細書の本出願（ｎｏｎｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）であり、２００７年３月１６日出願の米国特許出願第１１／６８７，５７０号明細書及び２００７年３月１６日出願の国際出願第ＵＳ０７／６４２３９号パンフレット（そのそれぞれは２００６年３月１７日出願の米国仮出願第６０／７８３，４９１号明細書の本出願である）の一部継続出願であり、２００５年１０月７日出願の米国特許出願第１１／２４５，６１２号明細書及び２００５年１０月７日出願の国際出願第ＵＳ０５／３６４２５号パンフレット（そのそれぞれは２００４年１０月８日出願の米国仮出願第６０／６１７，１０８号明細書の本出願である）の一部継続出願である。そのすべてを本開示に矛盾しない限り参照により本明細書に組み込む。本出願は、上記の出願に関する優先権の利益を請求するものである。
【０００２】
［連邦政府の支援による研究又は開発に関する陳述］
［０００２］本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）より授与されたＮＩＨの認可番号ＮＩＨ  ＧＭ５０６９４、ＧＭ６５３０７、ＧＭ７３２１６及びＡＩ−０６０４５２下での政府支援によりなされたものである。政府は本発明において一定の権利を有している。
【０００３】
［発明の背景］
［０００３］パミドロネート（アレディア（Ａｒｅｄｉａ（登録商標）））、アレンドロネート（フォサマックス（Ｆｏｓａｍａｘ（登録商標）））、リセドロネート（アクトネル（Ａｃｔｏｎｅｌ（登録商標）））、ゾレドロネート（ゾメタ（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標）））及びイバンドロネート（ボニバ（Ｂｏｎｉｖａ））などの窒素含有ビスホスホネートの旧世代化合物は、骨粗しょう症、パジェット病及び悪性腫瘍に起因する高カルシウム血症などの状態を治療するのに現在用いられている薬物を代表するものである。これらの化合物は主に、酵素ファルネシル二リン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）を阻害して、破骨細胞におけるタンパク質プレニル化のレベルを低下させることによって機能する。ある種のビスホスホネートは抗寄生虫活性を有し、ヒトγδＴ細胞を刺激することも分かっており、これらの旧世代の化合物を用いた癌関連の応用に関心がもたれている。しかし、代替の化合物及び治療への適用を含む使用方法のさらなる開発が引き続き求められている。より高い活性及び／又は他の有利な機能などの改善された特性を有する特定の化合物を含む、代替の化合物及び方法が依然として必要である。
【０００４】
［０００４］ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ経路又はメバロネート依存性（ＭＡＤ）ルートとも称されるメバロネート経路は、高等真核生物や多くのバクテリア中に見られる重要な細胞代謝経路である。この経路は、タンパク質プレニル化、細胞膜維持、ホルモン、タンパク質アンカリング及びＮ−グリコシル化などの様々な過程で用いられる分子生合成の基礎として作用する、ジメチルアリールピロホスフェート（ＤＭＡＰＰ）及びイソペンテニルピロホスフェート（ＩＰＰ）の生成に寄与するものである。そうした経路において単一の分子を阻止できることによって、機能改変のための選択肢及び経路の１つ又は複数のアウトプットを提供することが可能になる。しかし、そうした基本的に重要な経路の複数の分子標的と相互作用することができるということにより、より高いレベルの改変の機会の提供が可能になる。例えば、複数のポイントで輸送管路を同時に不通にすることができるということによって、輸送管路の流れ及び／又は産生する量を劇的に減らすことが可能になる。
【０００５】
［０００５］本発明の複数の実施形態では、ＦＰＰＳ、ゲラニルゲラニルピロリン酸シンターゼ（ＧＧＰＰＳ）及びデカプレニルピロリン酸シンターゼ（ＤＰＰＳ）を含む分子標的の阻害に関連した化合物及び方法に関する重要な発明を開示する。
【０００６】
［０００６］特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳの１つ又は複数を選択的に阻害することができるビスホスホネートを含む。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳの２つ以上を選択的に阻害することができる。複数の実施形態では、本発明の化合物及び方法は、制癌の関連などで優れた活性レベルを示す。いくつかの例では、それは旧世代のビスホスホネート薬物の活性レベルを桁違いのレベルで凌駕する。したがって、本明細書で開示する発明は、特定の実施形態では、高い効能レベルを示すことができる有用な薬剤の開発に大きな進歩を示すものである。
【０００７】
［発明の概要］
［０００７］本発明は、とりわけ、新規なビスホスホネート化合物及びその化合物を製造及び使用する方法を提供する。複数の実施形態では、本発明は、例えば、癌細胞増殖阻害、γδＴ細胞の活性化、ファルネシル二リン酸（ＦＰＰＳ）、ＧＧＰＰＳ及び／又はＤＰＰＳ酵素の阻害のため、また、骨吸収疾患、癌、免疫障害、免疫治療及び感染症の治療のための研究や治療への適用に関連した化合物及び方法を提供する。特定の実施形態に関して、構造上のある種の特徴が化合物の活性を著しく高めることが確認されている。有用であり、特定の実施形態では機能的な関連で高い活性レベルと相関する、構造的特徴を有する具体的な化合物を開示する。例えば、具体的な実施形態では、有機ビスホスホネート化合物の環成分に特定のアルコキシ置換基が存在すると、望ましい機能的活性に寄与する。さらなる変更形態も提供する。
【０００８】
［０００８］機能的な特性や活性と相関する化合物の構造的特徴が特定された。複数の実施形態では、本発明の化合物は、例えば、癌細胞の増殖阻害及び免疫刺激の阻害において著しい活性レベルを示すことができる。そうした特徴を有する化合物を合成し、試験した。この試験により、例えば、顕著な制癌及び免疫賦活の能力を有する第１群の化合物、並びに制癌能力を有しているが免疫賦活能は実質的に有していない第２群の化合物のさらなる特定及び開発が可能になる。
【０００９】
［０００９］一実施形態では、本発明の化合物は、望ましい活性、向上した活性及び／又は治療効果、低い有毒作用、及び／又はより有利な投与プロファイルを有するそうした治療効果及び／又は有毒作用などの利点を提供することができる。一実施形態では、そのより有利な投与プロファイルは、より少ない個別投薬量及び／又は総投薬量；より低頻度の投与レジーム等の１つ又は複数を含むことができる。一実施形態では、そうした利点又は性質の１つ又は複数は、別のビスホスホネート化合物と関連させて、例えば、承認されている薬物などの旧世代化合物と比較することによって判断することができる。
【００１０】
［０００１０］複数の実施形態では、本発明のビスホスホネート化合物は、ファルネシル二リン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）アッセイ、ＧＧＰＰＳアッセイ、ＤＰＰＳアッセイ、細胞性粘菌（Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）成長阻害アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、骨吸収アッセイ、感染症の治療、骨吸収臨床的障害の治療、免疫治療、癌の治療、骨痛の治療、免疫細胞及び／又は免疫系の刺激及び癌細胞又は腫瘍の増殖の阻害を含む１つ若しくは複数の関連で活性を示すことができる。
【００１１】
［０００１１］本発明は、ビスホスホネート化合物並びに関連する製造及び使用の方法を広範に提供する。複数の実施形態では、本発明は特に有機ビスホスホネート化合物及び／又は薬剤として許容されるその塩又はエステルを提供する。他の実施形態では、本発明は特にビスホスホネート化合物の他の変形体を提供する。複数の実施形態では、機能的に及び／又は治療上活性な本発明のビスホスホネートは本明細書で記載の一般的且つ具体的な構造を有する。
【００１２】
［０００１２］複数の実施形態では、本発明は、ビスホスホネートの化合物及び１つ又は複数のビスホスホネートを含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、ビスホスホネートは、１つ又は複数の機能に関して高い効能を有するビスホスホネートである。
【００１３】
［０００１３］複数の実施形態では、本発明は式ＸＡ１の化合物
【００１４】
【化１】
2010523709.tif 000002
【００１５】
又はその塩若しくは水和物を提供する。式中、
［０００１４］Ｘは、水素、ヒドロキシル基又はハロゲンであり、
［０００１５］Ｍは、化合物中の他のＭとは独立に、負電荷、水素、アルキル基、−（ＣＨ２）ｐＯ−ＣＯ−Ｒ又は−（ＣＨ２）ｐＯ−ＣＯ−Ｏ−Ｒ（ｐは１〜６である）であり、Ｒは、水素、任意選択で置換されたアルキル又は任意選択で置換されたアリールであり、また−ＯＭは形態−Ｏ−Ａ＋（Ａ＋はカチオンである）の塩であってよく、
［０００１６］ｎは、１、２又は３であり、
［０００１７］それぞれのＲ１及びＲ２は、互いに独立に、水素、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＳＲ’、ＯＲ’、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル及び任意選択で置換されたアリール基からなる群から選択され、各Ｒ’は、示した任意の基の他の任意のＲ’とは独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル基及び任意選択で置換されたアリール基から選択され、Ｒ１の１つとＲ２の１つは一緒になって１〜３個のヘテロ原子、特にＮ、Ｓ及びＯを含む３〜１０員の炭素環又は複素環を形成しており、
［０００１８］Ｚは
【００１６】
【化２】
2010523709.tif 000003
【００１７】
であり、
［０００１９］式中、ＵはＨ又はＯＨであり、
［０００２０］存在する場合、Ｒ３〜Ｒ７は、互いに独立に、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲ”’、−ＣＯＯＲ”’、−ＯＣＯＯＲ”’、−ＣＯＲ”’、−ＣＯＮ（Ｒ”’）２、−ＯＣＯＮ（Ｒ”’）２、−Ｎ（Ｒ”’）２、−ＮＯ２、−ＳＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ”’）２又はＳＯＲ”’基、任意選択で置換されたアルキル基、任意選択で置換されたアルケニル基、任意選択で置換されたアルキニル基及び任意選択で置換されたアリール基からなる群から選択され、Ｒ又はＲ”’のそれぞれはＨ、任意選択で置換されたアルキル基、任意選択で置換されたアリール基及び任意選択で置換されたアシル基から選択され、
［０００２１］存在する場合、Ｒ３〜Ｒ７の少なくとも１つはＲＬであり、ＺがＺ６である場合、Ｒ４はＲＬであり、但し、ＲＬは、そのそれぞれが任意選択で置換されている６〜２０個の炭素原子を有するアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アルケノキシ又はアルキノキシ基；その１つ又は複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている６〜２０個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基；又は３−ＲＭ若しくは４−ＲＭ置換フェニル基から選択される基であり、但し、ＲＭは、３〜１５個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニオキシ、アルキノキシ又はアルキルエーテル基から選択され、そのフェニル環の他の環位置は、１つ若しくは複数のハロゲン又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数の任意選択で置換されたアルキル基で任意選択で置換されており、
［０００２２］ＲＮは１〜３個の炭素原子を有する任意選択で置換されたアルキル基であり、
［０００２３］存在する場合、Ｒ８、Ｒ１０及びＲ１３は、６〜２０個の炭素原子を有するアルキル基；６〜２０個の炭素原子を有するアルケニル又はアルキニル基；１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている６〜２０個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基；又は３−ＲＭ若しくは４−ＲＭ置換フェニル基から選択される基であり、但し、ＲＭは、３〜１５個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニオキシ、アルキノキシ又はアルキルエーテル基から選択され、そのフェニル環の他の環位置は、１つ若しくは複数のハロゲン又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数の任意選択で置換されたアルキル基で任意選択で置換されており、
［０００２４］存在する場合、Ｒ９、Ｒ１１及びＲ１２は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル又はアルキニル基；そのうちの１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている１〜６個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基；又は任意選択で置換されたフェニル基から選択される基であり、
［０００２５］存在する場合、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６は、水素、又は１〜６個の炭素原子を有する任意選択で置換されたアルキル若しくは任意選択で置換されたアリール基であり、Ｒ９はＲ８の第１の原子と結合して、飽和していてもまた１個若しくは２個の二重結合を担持していてもよい５〜８員の炭素環を形成することができ、
［０００２６］但し、任意選択の置換は最も一般的には、１つ若しくは複数のハロゲン、１つ若しくは複数のシアノ、１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数のアルキル、ハロアルキル又はヒドロキシアルキル基、１〜４個の炭素原子を有する１つ若しくは複数のアルケニル、ハロアルケニル又はヒドロキシアルケニル基；１〜４個の炭素原子を有する１つ若しくは複数のアルキニル基、１つ若しくは複数のアシル又はハロアシル基；或いは−ＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒｓ）２、−ＯＣＯＮ（Ｒｓ）２、−Ｎ（Ｒｓ）２、−ＮＯ２、−ＳＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｓ）２又は−ＳＯＲ基から選択される１つ若しくは複数の基からなる群から選択される非水素置換基を有する上記の任意選択で置換された基の１つ又は複数の炭素の置換を意味する。但し、Ｒｓは、水素、１つ若しくは複数のハロゲン、ヒドロキシル基、アミノ基若しくはアルキルアミノ基で任意選択で置換された１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、或いは、アリール基、及び１つ若しくは複数のアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基、アシル基又はハロアシル基で任意選択で置換されたアリール基である。
【００１８】
［０００２７］特定の実施形態では、ＺはＺ１〜Ｚ５のいずれか１つであり、ＺはＺ６であり、ＺはＺ７であり、ＺはＺ９であり、ＺはＺ８又はＺ１０であり、ＺはＺ１１であるか又はＺはＺ１２である。特定の実施形態では、ＺがＺ１である場合、Ｒ４はＲＬであり、ＺがＺ１である場合、Ｒ５はＲＬであり、ＺがＺ１である場合、Ｒ６はＲＬであり、ＺがＺ２である場合、Ｒ４はＲＬであり、ＺがＺ２である場合、Ｒ５はＲＬであり、ＺがＺ２である場合、Ｒ６はＲＬであり、ＺがＺ３である場合、Ｒ５はＲＬであり、ＺがＺ３である場合、Ｒ６はＲＬであり、ＺがＺ４である場合、Ｒ４はＲＬであり、ＺがＺ４である場合、Ｒ６はＲＬであり、ＺがＺ５である場合、Ｒ３はＲＬであり、ＺがＺ５である場合、Ｒ４はＲＬであり、ＺがＺ１２である場合、Ｒ４はＲＬであるか、或いはＺがＺ１２である場合、Ｒ５はＲＬである。
【００１９】
［０００２８］特定の実施形態では、ＲＬは、７〜２０個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル若しくはアルキニル基又は７〜２０個の炭素原子を有するアルコキシ基から選択される基である。
【００２０】
［０００２９］特定の実施形態では、ＲＬは、７〜２０個の炭素原子を有するアルキル若しくはアルキニル基又は７〜２０個の炭素原子を有するアルコキシ基から選択される基である。他の実施形態では、ＲＬは、７〜１４個の炭素原子若しくは８〜１２個の炭素原子を有するアルキル又はアルキニル基から選択される基である。他の実施形態では、ＲＬは７〜１４個の炭素原子若しくは８〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基である。
【００２１】
［０００３０］特定の実施形態では、ＲＬは７〜２０個の炭素原子若しくは７〜１２個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。ＺがＺ１〜Ｚ５である特定の実施形態では、ＲＬは７〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。ＺがＺ１〜Ｚ５である特定の実施形態では、ＲＬは７〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。ＺがＺ１〜Ｚ４である特定の実施形態では、ＲＬは７〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。ＺがＺ１〜Ｚ２又はＺ４であり、Ｒ４がＲＬである特定の実施形態では、ＲＬは６〜１０個の炭素原子若しくは７〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。ＺがＺ１であり、Ｒ４がＲＬである特定の実施形態では、ＲＬは７〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。ＺがＺ１であり、Ｒ４がＲＬである特定の実施形態では、ＲＬは６〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルコキシ基である。ＺがＺ１であり、Ｒ４がＲＬである特定の実施形態では、ＲＬは７〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルコキシ基である。
【００２２】
［０００３１］ＺがＺ８又はＺ１０である特定の実施形態では、Ｒ８又はＲ１０は、それぞれ、８〜２０個の炭素原子を有するアルキル基である。ＺがＺ８又はＺ１０である特定の実施形態では、Ｒ８又はＲ１０は、それぞれ、９〜１７個の炭素原子を有するアルキル基である。ＺがＺ８又はＺ１０である特定の実施形態では、Ｒ８又はＲ１０は、それぞれ、８〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基又は９〜１７個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。ＺがＺ８である特定の実施形態では、Ｒ８は８〜２０個の炭素原子を有するアルキル基である。ＺがＺ８である特定の実施形態では、Ｒ８は８〜２０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。ＺがＺ８である特定の実施形態では、Ｒ８は９〜１７個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。
【００２３】
［０００３２］特定の実施形態では、ＺはＺ１〜Ｚ５であり、ＲＬはアルキニル基−Ｃ≡Ｃ−ＲＡＫであり、但し、ＲＡＫは４〜２０個の炭素原子又は５〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。特定の実施形態では、ＺはＺ１〜Ｚ４であり、ＲＬはアルキニル基−Ｃ≡Ｃ−ＲＡＫであり、但し、ＲＡＫは４〜２０個の炭素原子又は５〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。特定の実施形態では、ＺはＺ１〜Ｚ２又はＺ４であり、Ｒ４はＲＬであり、ＲＬはアルキニル基−Ｃ≡Ｃ−ＲＡＫであり、但し、ＲＡＫは４〜２０個の炭素原子又は５〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。特定の実施形態では、ＺはＺ１であり、Ｒ４はＲＬであり、ＲＬはアルキニル基−Ｃ≡Ｃ−ＲＡＫであり、但し、ＲＡＫは４〜２０個の炭素原子又は５〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。
【００２４】
［０００３３］特定の実施形態では、ＲＬは、その１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている７〜２０個の炭素原子又は７〜１４個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基である。
【００２５】
［０００３４］特定の実施形態では、ＲＬ又は３−ＲＭ又は４−ＲＭ置換フェニル基であり、但し、ＲＭは、３〜１５個の炭素原子若しくは６〜１２個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルケニオキシ、アルキノキシ又はアルキルエーテル基から選択され、そのフェニル環の他の環位置は、１つ若しくは複数のハロゲン又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数の任意選択で置換されたアルキル基で任意選択で置換されている。
【００２６】
［０００３５］特定の実施形態では、本明細書では１つ又は複数のアルキル基は１つ又は複数のハロゲンで任意選択で置換されている。他の実施形態では、アリール基は本明細書では、１つ若しくは複数のハロゲン又は１〜３個の炭素原子を有する１つ若しくは複数のアルキル基で任意選択で置換されたフェニル基である。
【００２７】
［０００３６］特定の実施形態では、Ｒ１３は、７〜２０個の炭素原子を有するアルキル又はアルキニル基；又はその１つ若しくは複数の非隣接炭素原子がＯで置き換えられている７〜２０個の炭素原子を有するアルキル基であるアルキルエーテル基から選択される基である。
【００２８】
［０００３７］特定の実施形態では、Ｒ１３は、７〜２０個の炭素原子若しくは９〜１７個の炭素原子を有するアルキル又はアルキニル基から選択される基である。
【００２９】
［０００３８］特定の実施形態では、ＺがＺ１２である場合、ＲＬはＲ４又はＲ５であり、ＲＬは７〜２０個の炭素原子を有する任意選択で置換されたアルキル若しくはアルコキシ基又は６〜２０個の炭素原子を有するアルキニル基である。他の実施形態では、ＺがＺ１２である場合、ＲＬは７〜２０個の炭素原子を有する非置換アルキル又はアルコキシ基である。追加の実施形態では、そのアルキル基は直鎖アルキル基であるか、又はアルコキシ基のアルキルは直鎖アルキル基である。他の特定の実施形態では、Ｒ４はＲＬである。他の実施形態では、そのアルキル又はアルコキシル基は７〜１７個の炭素原子を有する。他の実施形態では、そのアルキル又はアルコキシ基は８〜１２個の炭素原子を有する。特定の実施形態では、ＺはＺ１２であり、ＲＬはアルキニル基−Ｃ≡Ｃ−ＲＡＫであり、但し、ＲＡＫは４〜２０個の炭素原子又は５〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。
【００３０】
［０００３９］特定の実施形態では、ＺがＺ１２である場合、ＲＬは置換アリール、好ましくはフェニルであり、より好ましくはＲＬはスルホンアミド置換フェニル又はナフチルスルホンアミド置換フェニルである。
【００３１】
［０００４０］好ましい実施形態では、Ｍが塩である場合、そのカチオンＡ＋は薬剤として許容されるカチオンである。
【００３２】
［０００４１］上記に挙げた具体的な実施形態のそれぞれにおいて、以下の追加の具体的な実施形態が含まれる。
［０００４２］存在する場合、ＲＬではないＲ３〜Ｒ７は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されたアルキル基、任意選択で置換されたアルケニル基、任意選択で置換されたアルキニル基、任意選択で置換されたアルコキシ基及び任意選択で置換されたアリール基からなる群から選択される。
［０００４３］存在する場合、ＲＬではないＲ３〜Ｒ７は、水素、ハロゲン、又は１〜３個の炭素原子を有する非置換アルキル基であり、
［０００４４］存在する場合、ＲＬではないＲ３〜Ｒ７は水素であり、
［０００４５］存在する場合、各Ｒ９は１〜６個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００４６］存在する場合、各Ｒ９は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００４７］存在する場合、各Ｒ９は１〜３個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００４８］存在する場合、各Ｒ９はメチル基であり、
［０００４９］存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２は同じ基であり、
［０００５０］存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２は異なる基であり、
［０００５１］存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２は１〜６個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００５２］存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００５３］存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２は１〜３個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００５４］存在する場合、Ｒ１１又はＲ１２はメチル基であり、
［０００５５］存在する場合、Ｒ１４及びＲ１５は水素であり、
［０００５６］存在する場合、Ｒ１５及びＲ１６は水素であり、
［０００５７］存在する場合、Ｒ１５及びＲ１６は水素であり、Ｒ１４は水素又は１〜３個の炭素原子を有するアルキル基であり、
［０００５８］ＲＮはメチル基であるか；或いは、
［０００５９］Ｒ４は６〜２０個の炭素原子、７〜１７個の炭素原子又は８〜１５個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である。
【００３３】
［０００６０］他の特定の実施形態では、高い効能のビスホスホネートは式ＸＡ１（式中、ＺはＺ１Ａ、Ｚ２Ａ、Ｚ２Ｂ、Ｚ３Ａ、Ｚ４Ａ、Ｚ５Ａ、Ｚ１２Ａ又はＺ１２Ｂである）のものを含む。
【００３４】
【化３】
2010523709.tif 000004
【００３５】
［０００６１］式中、変数Ｒ３〜Ｒ７はＲＬではないが、上記した他のすべての値をとり、ＲＬは本明細書で挙げる様々な具体的実施形態を含む上記定義通りである。Ｚ１Ａ、Ｚ２Ａ、Ｚ３Ａ、Ｚ４Ａ又はＺ５Ａの特定の実施形態では、Ｒ３〜Ｒ７は、水素、ハロゲン又は１〜３個の炭素原子を有するアルキル基から選択されるか；或いはＲ３〜Ｒ７のすべては水素である。Ｚ１Ａ、Ｚ２Ａ、Ｚ３Ａ、Ｚ４Ａ、Ｚ５Ａ、Ｚ１２Ａ又はＺ１２Ｂの特定の実施形態では、ＲＬは７〜２０個の炭素原子若しくは７〜１７個の炭素原子を有するアルキル又はアルコキシ基である。Ｚ１Ａ、Ｚ２Ａ、Ｚ３Ａ、Ｚ４Ａ又はＺ５Ａの特定の実施形態では、ＲＬは、６〜２０個の炭素原子若しくは７〜１７個の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基である。Ｚ１Ａ、Ｚ２Ａ、Ｚ３Ａ、Ｚ４Ａ又はＺ５Ａの他の特定の実施形態では、ＲＬは８〜２０個の炭素原子若しくは９〜１７個の炭素原子を有するアルキニル基である。
【００３６】
［０００６２］上記に挙げた具体的な実施形態のそれぞれにおいて、以下の追加の具体的な実施形態が含まれる。即ち、
［０００６３］Ｒ１及びＲ２はすべて水素であり、
［０００６４］ｎは１であり、
［０００６５］ｎは２であり、
［０００６６］Ｘは水素であり、
［０００６７］Ｘはヒドロキシル基であり、
［０００６８］Ｘはフッ素であり、
［０００６９］Ｘは塩素であり、
［０００７０］すべてのＭは水素であり、
［０００７１］少なくとも１つのＭは負電荷であり、残りのＭは水素であり、
［０００７２］少なくとも１つのＭは−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯ−Ｒ又は−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯ−Ｒであり、但し、ｐは１〜６であり、Ｒは、水素、任意選択で置換されたアルキル又は任意選択で置換されたアリールであるか；或いは
［０００７３］−ＯＭの１つ又は２つは−Ｏ−Ａ＋であり、但し、Ａ＋はカチオンであり、残りのＭは水素であり、
［０００７４］Ｚは本明細書で示すＺの１つである。
【００３７】
［０００７５］特定の実施形態では、本発明は式ＸＡ１の化合物を提供する。式中、Ｚ＝Ｚ１２であり、Ｒ４＝ＲＬである。特定の実施形態では、本発明は式ＸＡ１の化合物を提供する。式中、Ｚ＝Ｚ１であり、Ｒ４＝ＲＬである。
【００３８】
［０００７６］一実施形態では、本発明は、６３７、６３８、６７７、６８７、６８８、６９３、６９４、６９５、６９６、７１４、７１５、７１６、７１７、７２２、７５４、６７５、６７８及び７２８からなる群から選択される化合物；並びにそれぞれの前記化合物に対応する薬剤として許容される塩又はそのエステルを提供する。一実施形態では、前記化合物は式ＸＡ１の化合物でもある。
【００３９】
［０００７７］一実施形態では、本発明は、本明細書の任意の式の本発明の化合物の医薬製剤を含む組成物を提供する。
【００４０】
［０００７８］一実施形態では、本発明は、治療有効量の１つ又は複数の本発明の組成物を含む医薬品を提供する。一実施形態では、本発明は、本明細書で記載する状態を治療するための医薬品を作製する方法を提供する。
【００４１】
［０００７９］一実施形態では、本発明は、癌細胞を、有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む癌細胞の成長を阻害する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む癌を治療する方法を提供する。一実施形態では、その癌は乳癌である。一実施形態では、乳癌は実際の骨転移状態又は潜在的な骨転移状態を含む。一実施形態では、その癌は当業界で知られている癌である。
【００４２】
［０００８０］一実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を本発明の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含むＴ細胞を刺激する方法を提供する。一実施形態では、前記Ｔ細胞はγδＴ細胞である。一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む免疫治療法を提供する。
【００４３】
［０００８１］一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む骨吸収障害を治療する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む骨痛状態を治療する方法を提供する。
【００４４】
［０００８２］一実施形態では、本発明は、感染性病原体を有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む感染性病原体の増殖を阻害する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む感染症を治療する方法を提供する。一実施形態では、その感染症は、ウイルス、真菌、バクテリア及び寄生原生動物からなる群から選択される病原体に関係する。一実施形態では、前記ウイルスはレトロウイルスである。一実施形態では、前記レトロウイルスはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である。一実施形態では、前記寄生原生動物は：リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、トキソプラズマ属（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）及びトリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）からなる群から選択される。一実施形態では、前記寄生原生動物は大形リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ）である。一実施形態では、前記バクテリアは大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）又は黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である。
【００４５】
［０００８３］一実施形態では、本発明は、本発明の化合物を合成する方法又はその医薬製剤を提供する。一実施形態では、合成スキームは、２００６年３月１７日出願の米国出願第１１６８７５７０号明細書；２００６年３月１７日出願のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０７／６４２３９号パンフレット；２００６年３月１７日出願の米国出願第６０７８３４９１号明細書；２００５年１０月７日出願の米国出願第１１／２４５，６１２号明細書（２００６年４月１３日公開の米国特許出願公開番号２００６００７９４８７も参照されたい）；２００４年１０月８日出願の米国出願第６０／６１７，１０８号明細書；２００５年１０月７日出願のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０５／０３６４２５号パンフレット（２００６年４月１３日公開の国際公開第２００６／０３９７２１号パンフレットも参照されたい）；２００５年５月２６日公開の米国特許出願公開番号２００５０１１３３３１；及び当業界で知られているものなどから適用される。
【００４６】
［０００８４］一実施形態では、本発明は、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ、ＤＤＰＰＳ及びＤＨＤＤＳ酵素の１つ又は複数を選択的に阻害する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ酵素の２つ以上を選択的に阻害する方法であって、前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含む方法を提供する。一実施形態では、前記有機化合物はビスホスホネート化合物である。一実施形態では、前記化合物は式ＸＡ１の化合物又は本明細書で記載する他の化合物である。一実施形態では、前記化合物は、癌細胞若しくは腫瘍成長阻害アッセイ及び／又は免疫刺激アッセイで少なくとも４のｐＩＣ５０値を有する。一実施形態では、前記化合物は少なくとも５のｐＩＣ５０値を有する。一実施形態では、前記化合物は少なくとも６のｐＩＣ５０値を有する。一実施形態では、前記化合物は少なくとも７のｐＩＣ５０値を有する。
【００４７】
［０００８５］一実施形態では、本発明は、ＦＰＰＳ酵素、ＧＧＰＰＳ酵素及びＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害する方法であって、前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含み、前記化合物が前記ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害することができる方法を提供する。
【００４８】
［０００８６］一実施形態では、本発明は、前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含む方法であって、前記化合物が前記ＧＧＰＰＳ酵素及び前記ＤＰＰＳ酵素を選択的に阻害することができる方法を提供する。一実施形態では、その化合物は式ＸＡ１（Ｚ＝Ｚ１であり、Ｒ４＝ＲＬである）である。一実施形態では、前記化合物は化合物７１５である。
【００４９】
［０００８７］一実施形態では、本発明は、ＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することなくＧＧＰＰＳ酵素を選択的に阻害する方法であって、前記酵素又は前記酵素を含む細胞を有機化合物と接触させることを含み、前記化合物が、前記ＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することなく前記ＧＧＰＰＳ酵素を選択的に阻害することができる方法を提供する。一実施形態では、その化合物は式ＸＡ１（Ｚ＝Ｚ１２であり、Ｒ４＝ＲＬである）である。一実施形態では、前記化合物は化合物７５４である。
【００５０】
［０００８８］一実施形態では、本発明は、免疫刺激及び腫瘍又は癌細胞増殖の阻害の１つ又は複数の方法であって、哺乳動物細胞を、ＧＧＰＰＳ酵素及びＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することができる有機ビスホスホネート化合物と接触させることを含む方法を提供する。
【００５１】
［０００８９］一実施形態では、本発明は、哺乳動物細胞を、ＤＰＰＳ酵素を実質的に阻害することなく、ＧＧＰＰＳ酵素を実質的に阻害することができる有機ビスホスホネート化合物と接触させることを含む癌細胞増殖の阻害方法を提供する。
【００５２】
［０００９０］上記方法のいずれか１つの実施形態において、前記化合物は式ＸＡ１の構造を有する。
【００５３】
［０００９１］一実施形態では、本発明は、１つ又は複数の特性について有機ビスホスホネート試験化合物をスクリーニングする方法であって、前記試験化合物を提供するステップと、ＦＰＰＳ酵素アッセイ；ＧＧＰＰＳ酵素アッセイ；ＤＰＰＳ酵素アッセイからなるグループから選択される少なくとも２つの酵素アッセイで前記試験化合物の性能特質を測定するステップと、癌細胞又は腫瘍成長阻害アッセイ；Ｔ細胞活性化アッセイ；骨吸収アッセイ；骨結合アッセイからなるグループから選択される少なくとも２つの活性アッセイで前記試験化合物の活性レベルを測定するステップと、前記性能特質及び前記活性レベルを分析するステップと、前記特質及び活性レベルに基づいて前記試験化合物を選択するステップと、それによって、前記１つ又は複数の特性について前記試験化合物をスクリーニングするステップとを含む方法を提供する。一実施形態では、この方法は、基準化合物を提供するステップと、前記基準化合物の性能特質と前記試験化合物の前記性能特質を比較するステップをさらに含む。
【００５４】
［０００９２］一実施形態では、本発明は、デヒドロドリキルジホスフェートシンターゼ（ｄｅｈｙｄｒｏｄｏｌｉｃｈｙｌ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）（ＤＨＤＤＳ）酵素を阻害する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、ＤＨＤＤＳ酵素を選択的に阻害する方法であって、前記酵素又は前記酵素を含む細胞を本発明の有機化合物又は組成物と接触させることを含む方法を提供する。その方法が標的を選択的に阻害すると説明されている本明細書の実施形態では、１つ又は複数の他の標的の特定の阻害が存在することが可能である。
【００５５】
［０００９３］一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む癌を治療する方法を提供する。一実施形態では、その癌は乳癌である。一実施形態では、乳癌は実際の骨転移状態又は潜在的な骨転移状態を含む。
【００５６】
［０００９４］一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、骨吸収障害を治療する方法を提供する。
【００５７】
［０００９５］一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、骨痛状態を治療する方法を提供する。
【００５８】
［０００９６］一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。一実施形態では、前記感染症は、ウイルス、真菌、バクテリア及び寄生原生動物からなる群から選択される病原体に関係する。一実施形態では、前記ウイルスはレトロウイルスである。一実施形態では、前記レトロウイルスはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である。一実施形態では、前記寄生原生動物はリーシュマニア属、トキソプラズマ属、クリプトスポリジウム属、マラリア原虫及びトリパノソーマ属からなる群から選択される。一実施形態では、前記寄生原生動物は大形リーシュマニアである。一実施形態では、前記バクテリアはマラリア原虫又は黄色ブドウ球菌である。
【００５９】
［０００９７］一実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤を投与することを含む免疫治療法を提供する。一実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を本発明の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含むＴ細胞を刺激する方法を提供する。一実施形態では、前記Ｔ細胞はγδＴ細胞である。
【００６０】
［０００９８］一実施形態では、本発明は、本発明の化合物を合成する方法又はその医薬製剤を提供する。
【００６１】
［０００９９］一実施形態では、本発明は、感染性病原体の増殖を阻害する方法であって、前記感染性病原体を有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む方法を提供する。
【００６２】
［００１００］一実施形態では、本発明は、腫瘍又は癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記腫瘍又は癌細胞を有効量の本発明の化合物又はその医薬製剤と接触させることを含む方法を提供する。
【００６３】
［００１０１］一実施形態では、本発明は、抗血管形成活性を有する化合物を提供する。一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象に有効量の本発明の化合物又は組成物を投与することを含む血管形成を阻害する方法を提供する。
【００６４】
［００１０２］一実施形態では、本発明は、ある化合物を含む組成物を提供する。実施形態では、前記組成物はその化合物を治療有効量で含む。一実施形態では、本発明は、ある化合物の医薬製剤を含む組成物を提供する。一実施形態では、前記医薬製剤は、１つ又は複数の賦形剤、担体及び／又は当業界で理解されているような他の成分を含む。一実施形態では、有効量の本発明の組成物は治療有効量であってよい。
【００６５】
［００１０３］一実施形態では、本発明の組成物を医薬品として使用する。一実施形態では、ある組成物を医薬品の調製又は製造において使用する。一実施形態では、その医薬品は、本明細書で記載され、且つ、当業界で理解されているような１つ又は複数の状態の治療のためである。
【００６６】
［００１０４］一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象に治療有効量の本発明の化合物を投与することを含むある病状を治療する方法を提供する。一実施形態では、その病状は骨吸収障害、癌、疼痛、免疫系障害及び／又は感染症である。
【００６７】
［００１０５］一実施形態では、本発明の組成物は単離されるか又は精製されたものである。
【００６８】
［００１０６］スクリーニング方法の実施形態では、細胞及び動物をベースとしたアッセイに加えて、精製したＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ、ＤＰＰＳ又は他の酵素を用いることができる。
【００６９】
［００１０７］特定の理論に拘泥するわけではないが、本発明に関連する根本的な原理若しくは機序の考え方又は理解を本明細書で論じることができる。機構の説明又は仮定が最終的に正しいかどうかにかかわらず、本発明の実施形態は有効であり且つ有用であることを理解されたい。
【００７０】
［００１０８］薬剤として許容される塩は、薬剤として許容されるアニオン及び／又はカチオンを含む。薬剤として許容されるカチオンには、とりわけ、アルカリ金属カチオン（例えば、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋）、アルカリ土類金属カチオン（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋）、非毒性重金属カチオン並びにアンモニウム（ＮＨ４＋）及び置換アンモニウム（Ｎ（Ｒ’）４＋（Ｒ’は、水素、アルキル又は置換アルキル（即ちメチル、エチル又はヒドロキシエチルを含む）、具体的には、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム及びトリエタノールアンモニウムカチオンである）が含まれる。薬剤として許容されるアニオンには、とりわけ、ハライド（例えば、Ｃｌ−、Ｂｒ−）、硫酸塩、酢酸塩（例えば、硫酸塩、トリフルオロ硫酸塩）、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩及び乳酸塩が含まれる。
【００７１】
［００１０９］本明細書で開示する具体的な分子は、１つ又は複数のイオン性基［プロトンを引き抜くか（例えば、−ＣＯＯＨ）又はそれを供与する（例えば、アミン）ことができる基、或いは四級化する（例えば、アミン）ことができる基］を含む。そうした分子及びその塩の可能性のあるすべてのイオン形態は、本明細書の開示に個別的に含まれるものとする。本明細書の化合物の塩に関して、当業者は、所与の用途のために本発明の塩を、調製するのに適した利用できる広範な対イオンから選択することができる。具体的にはその用途において、塩の調製のために所与のアニオン又はカチオンを選択することによって、高い溶解度又は低い溶解度の塩が得られる。
【００７２】
［００１１０］本発明の化合物はプロドラッグの形態を有することができる。本発明の化合物のプロドラッグは本発明の方法において有用である。インビボで転換されて生物学的、薬剤学的又は治療学的に活性な形態の本発明の化合物を提供する化合物はどれもプロドラッグである。プロドラッグの様々な例及び形態が当業界で知られている。プロドラッグの例は、とりわけ、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる編集（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第４２巻、３０９〜３９６頁、Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒ等による編集（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）；薬物設計及び開発のテキストブック（Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｋｒｏｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ及びＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる編集、第５章、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄの「プロドラッグの設計及び応用（Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ）」、１１３〜１９１頁、１９９１年）；Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、第８巻、１〜３８頁（１９９２年）；Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ等、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第７７巻、２８５頁（１９８８年）；並びにＮｏｇｒａｄｙ（１９８５年）Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、３８８〜３９２頁）に見られる。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】図１は、関連するケミストリー（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）の態様を示す図である。Ａ、一般的な窒素含有ビスホスホネート構造；Ｂ、腫瘍細胞、γδＴ細胞、破骨細胞及びマクロファージにおけるビスホスホネート活性に関係するいくつかの経路の概略図、Ｃ、カルボカチオン遷移状態／反応性中間体及びビスホスホネート類似物（赤い円で囲まれている）を示すＦＰＰ、ＧＧＰＰ生合成及びタンパク質プレニル化；Ｄ、ＦＰＰＳ阻害のための相対的分子類似性指標静電界（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｆｉｅｌｄ）（左、青＝正電荷が好ましい））及びファーマコフォア（右、緑＝疎水性、赤＝正、青＝負イオン性）；Ｅ、カチオン性ビスホスホネート；Ｆ、選択されたＧＧＰＰＳ阻害剤の構造。
【図２】図２Ａ〜２Ｉは、癌細胞増殖阻害及びγδＴ細胞活性化のためのデータを含む化合物の活性についてのアッセイによる広範な結果を示す図である。Ａ、ビスホスホネートによるＭＣＦ−７細胞成長阻害；Ｂ、ゾレドロネート細胞成長阻害のＦＯＨ、ＧＧＯＨレスキュー；Ｃ、ＢＰＨ−６７５細胞成長阻害のＦＯＨ、ＧＧＯＨレスキュー；Ｄ、酵素、細胞成長阻害及びＳｌｏｇＰについての相関マトリクス；Ｅ、ＦＰＰＳ及びＧＧＰＳ記述子を用いたＣｏＭＳＩＡ予測；Ｆ、ビスホスホネートによるγδＴ細胞活性化；Ｇ、γδＴ細胞活性化についてのＨＱＳＡＲ予測；Ｈ、増殖応答率％；Ｉ、（合計ＣＤ３＋細胞）の割合（％）。
【図３】図３Ａ〜３Ｅは、Ｘ線及びＮＭＲ試験による結果を示す図である。Ａ、Ｂ：リセドロネート（ＰＤＢファイル＃１ＹＶ５から）上に重ね合わせて示したヒトＦＰＰＳと結合したＢＰＨ−５２７及びＢＰＨ−４６１のＸ線構造；Ｃ、Ｄ、Ｔ．ブルーセイ（Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ）ＦＰＰＳと結合したビスホスホネート、ＩＰＰの３１Ｐマジックアングル（ｍａｇｉｃ−ａｎｇｌｅ）試料スピニングＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ  １Ｈ共鳴振動数）；Ｅ、ヒトＧＧＰＰＳ（ＰＤＢファイル２ＦＶＩ）と結合したＧＧＰＰ上に重ね合わせて示したＧＧＰＰＳ（サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）からの）と結合したＢＰＨ−６７５のＸ線構造。表８も参照されたい。
【図４】図４は、ビスホスホネート標的の概略を示す図である。
【図５】図５は、ＭＣＦ−７細胞成長阻害、ＦＰＰＳ阻害及びＧＧＰＰＳ阻害（図２Ｄ〜Ｇ）について検討した阻害剤の構造を示す図である。
【図６】図６は、ビスホスホネートによるＭＣＦ−７成長阻害のｐＩＣ５０値を、γδＴ細胞活性化のｐＥＤ５０値に対してプロットしたグラフである。検討した化合物の構造を図５に示す。
【図７】図７は、ＭＣＦ−７細胞成長阻害及びγδＴ細胞活性化を含むアッセイで検討した化合物の構造を示す図である。
【図８】図８は、ＭＣＦ−７細胞成長阻害及びγδＴ細胞活性化を含むアッセイで検討した化合物の構造を示す図である。
【図９】図９は、ＭＣＦ−７細胞成長阻害ｐＩＣ５０値対骨吸収のグラフである（ｐＥＤ５０結果、Ｗｉｄｌｅｒ等より）。検討した化合物の構造を図８に示す。
【図１０】図１０は、ＭＣＦ−７細胞成長阻害で試験した骨吸収薬物の構造を示す図である。
【図１１】図１１Ａ〜Ｄは、ビスホスホネート／ＩＰＰ／ＦＰＰＳ複合体の３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルを例示する図である。化合物の構造をスペクトルの上に示す。
【図１２】図１２Ａ及びＢは、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｅ  ｃｒｕｚｉ）ＦＰＰＳと結合した、例としてのビスホスホネートのＸ線構造を示す図である。Ａ、ＢＰＨ−５２７及びＢ、ＢＰＨ−４６１。リセドロネートをそれぞれの上に重ね合わせて示す。
【図１３】図１３Ａ及びＢは、Ｔ．ブルーセイＦＰＰＳと結合したスルホニウムビスホスホネート（ＢＰＨ−５２７）の代表的なＩＴＣ結果、及びΔＨ、ΔＳ相関を示す図である（新規なカチオン化合物は赤い矢印で示す。それ以外は文献から）。
【図１４】図１４は、ＳｌｏｇＰ記述子に加えてＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ酵素阻害をベースとした予測細胞成長阻害のグラフである。
【図１５】図１５は、ＦＰＰＳ及びＧＧＰＰＳ酵素阻害データをベースとした予測細胞成長阻害のグラフである。
【図１６】図１６は、本明細書で論じるいくつかの化合物の構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
［００１２７］複数の実施形態では、本発明は、ビスホスホネート、特に長鎖炭化水素鎖、特に７個以上の炭素原子を有する直鎖アルキル又はアルコキシ基を担持する少なくとも１つの置換基を有するものを含む特定の化合物が、細胞増殖の阻害及び／又は特定の酵素の阻害を含む関連で有用で高い活性を示すという発見に少なくとも部分的に関連するものである。
【００７５】
［００１２８］以下の略語が適用される。ＦＰＰＳ、ファルネシルジホスフェートシンターゼ（ファルネシルピロホスフェートシンテターゼ、ジメチルアリルトランストランスフェラーゼ、ゲラニルトランストランスフェラーゼ、ファルネシルジホスフェートシンターゼ及びファルネシルピロホスフェートシンテターゼとしても知られている）；ＧＧＰＰＳ、ゲラニルゲラニル二リン酸塩シンターゼ（ゲラニルゲラニルピロホスフェートシンテターゼとしても知られている）；ＤＰＰＳ、デカプレニルピロリン酸シンターゼ；ＵＰＰＳ（ウンデカプレニルピロホスフェートシンテターゼ；ウンデカプレニルジホスフェートシンターゼとしても知られている）；ＤＨＤＤＳ又はＤＤＰＰＳ、デヒドロドリキルジホスフェートシンターゼ；ｐＩＣ５０／ｐＥＣ５０、それぞれＩＣ５０及びＥＣ５０の負の対数（ＩＣ５０及びＥＣ５０はそれぞれ半値幅阻害又は活性化をもたらす濃度である）；Ｔ．ブルーセイ、トリパノソーマブルーセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）；Ｄ．ジスコイデウム（Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）、ディクチオステリウムジスコイデウム（Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ  ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）；γδＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞；ＩＴＣ、等温熱量測定。便宜上、概ね化合物／構造を番号で示す。
【００７６】
［００１２９］以下の定義が適用される。化学基の定義は、特に一般式ＸＡ１を有する化合物に関連するものであるが、本明細書で示す他の化合物にも適用することができる。
【００７７】
［００１３０］アルキル基は直鎖、分鎖及び環状のアルキル基を含む。アルキル基は１〜２０個の炭素原子を有するものを含む。アルキル基は１〜３個の炭素原子を有する小アルキル基を含む。アルキル基は４〜１０個の炭素原子を有する中位長（ｍｅｄｉｕｍ  ｌｅｎｇｔｈ）アルキル基を含む。アルキル基は、１０個を超える炭素原子を有する、特に１０〜２０個の炭素原子を有する長鎖アルキル基を含む。環状アルキル基は１つ又は複数の環を有するものを含む。環状アルキル基は、３−、４−、５−、６−、７−、８−、９−又は１０−員の炭素環を有するもの、特に３−、４−、５−、６−又は７−員の環を有するものを含む。環状アルキル基中の炭素環はアルキル基を担持することもできる。環状アルキル基は二環式及び三環式のアルキル基を含むことができる。アルキル基は任意選択で置換アルキル基を含む。置換アルキル基は、とりわけ、アリール基（これは任意選択でさらに置換されていてよい）で置換されているものを含む。具体的なアルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロブチル、ｎ−ペンチル、分鎖−ペンチル、シクロペンチル、ｎ−ヘキシル、分鎖ヘキシル及びシクロヘキシル基が含まれ、そのどれも任意選択で置換されている。
【００７８】
［００１３１］アルケニル基は直鎖、分鎖及び環状のアルケニル基を含む。アルケニル基は、１個、２個又はそれ以上の二重結合を有するもの、及び二重結合のうちの２個以上が共役二重結合であるものを含む。アルケニル基は２〜２０個の炭素原子を有するものを含む。アルケニル基は２〜３個の炭素原子を有する小アルキル基を含む。アルケニル基は４〜１０個の炭素原子を有する中位長アルケニル基を含む。アルケニル基は、１０個を超える炭素原子を有する長鎖アルケニル基、特に１０〜２０個の炭素原子を有するものを含む。環状アルケニル基は、１つ又は複数の環を有するものを含む。環状アルケニル基は、二重結合が環の中にあるか又は環と結合したアルケニル基の中にあるものを含む。環状アルケニル基は、３−、４−、５−、６−、７−、８−、９−又は１０−員の炭素環を有するもの、特に３−、４−、５−、６−又は７−員の環を有するものを含む。環状アルケニル基中の炭素環はアルキル基を担持することもできる。環状アルケニル基は二環式及び三環式のアルキル基を含むことができる。アルケニル基は任意選択で置換されている。置換アルケニル基は、とりわけ、アルキル又はアリール基（この基は任意選択でさらに置換されていてよい）で置換されているものを含む。具体的なアルケニル基には、エテニル、プロパ−１−エニル、プロパ−２−エニル、シクロプロパ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、シクロブタ−１−エニル、シクロブタ−２−エニル、ペンタ−１−エニル、ペンタ−２−エニル、分鎖ペンテニル、シクロペンタ−１−エニル、ヘキサ−１−エニル、分鎖ヘキセニル、シクロヘキセニルが含まれ、そのどれも任意選択で置換されている。
【００７９】
［００１３２］アリール基には、１つ若しくは複数の５−又は６−員の芳香族環又は芳香族複素環を有する基が含まれる。アリール基は１つ又は複数の縮合芳香環を含むことができる。芳香族複素環は環中に１個若しくは複数のＮ、Ｏ又はＳ原子を含むことができる。芳香族複素環は１個、２個又は３個のＮを有するもの、１個又は２個のＯを有するもの、及び１個又は２個のＳを有するものを含むことができる。アリール基は任意選択で置換されている。置換アリール基には、とりわけ、アルキル又はアルケニル基（この基は任意選択でさらに置換されていてよい）で置換されているものが含まれる。具体的なアリール基には、フェニル基、ビフェニル基、ピリジニル基及びナフチル基が含まれ、そのどれも任意選択で置換されている。
【００８０】
［００１３３］アリールアルキル基は、そのアルキル基が任意選択で追加の置換基を有する、１つ又は複数のアリール基で置換されたアルキル基であり、そのアリール基は任意選択で置換されている。具体的なアルキルアリール基はフェニル−置換アルキル基、例えばフェニルメチル基である。
【００８１】
［００１３４］アルキルアリール基は、そのアルキル基が任意選択で追加の置換基を有する、１つ又は複数のアルキル基で置換されたアリール基であり、そのアリール基は任意選択で置換されている。具体的なアルキルアリール基はメチルフェニルなどのアルキル−置換フェニル基である。
【００８２】
［００１３５］任意のＲ（例えば、Ｒ１及びＲ２）基のうちの２つ以上から形成されてよい環は、本明細書では、一緒になって、任意選択で置換されたシクロアルキル基、任意選択で置換されたシクロアルケニル基又は芳香族基となっていてよい。その環は、３、４、５、６、７個又はそれ以上の炭素を含むことができる。その環は、芳香環中の１、２若しくは３個の炭素がＮ、Ｏ又はＳで置き換えられている複素環式芳香族であってよい。その環は、環中の１つ若しくは複数のＣＨ２基がＯ、Ｎ、ＮＨ又はＳで置き換えられているヘテロアルキル又はヘテロアルケニルであってよい。
【００８３】
［００１３６］任意のアルキル、アルケニル及びアリール基の任意選択での置換は、以下の置換基、即ちハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ、−ＯＲ、−ＣＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）２、−ＯＣＯＮ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）２、−ＮＯ２、−ＳＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２又は−ＳＯＲ基の１つ若しくは複数での置換を含む。アルキル基の任意選択での置換は、そのアルケニル基又はアリール基が任意選択で置換されている１つ若しくは複数のアルケニル基、アリール基又はその両方での置換を含む。アルケニル基の任意選択での置換は、そのアルキル基又はアリール基が任意選択で置換されている１つ若しくは複数のアルキル基、アリール基又はその両方での置換を含む。アリール基の任意選択での置換は、アルキル基又はアルケニル基が任意選択で置換されている１つ若しくは複数のアルキル基、アルケニル基又はその両方でのアリール環の置換を含む。
【００８４】
［００１３７］アルキル、アルケニル及びアリール基のための任意選択の置換基には、とりわけ、
［００１３８］−ＣＯＯＲ（Ｒは水素又はアルキル基若しくはアリール基であり、より具体的には、Ｒはそのすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル又はフェニル基である）、
［００１３９］−ＣＯＲ（Ｒは水素又はアルキル基若しくはアリール基であり、より具体的には、Ｒはその基のすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル又はフェニル基である）、
［００１４０］−ＣＯＮ（Ｒ）２（他のＲとは独立に、各Ｒは水素又はアルキル基若しくはアリール基であり、より具体的には、Ｒはその基のすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル又はフェニル基であり、ＲとＲは１つ又は複数の二重結合を含む環を形成することができる）、
［００１４１］−ＯＣＯＮ（Ｒ）２（他のＲとは独立に、各Ｒは水素又はアルキル基若しくはアリール基であり、より具体的には、Ｒはその基のすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル又はフェニル基であり、ＲとＲは１つ又は複数の二重結合を含む環を形成することができる）、
［００１４２］−Ｎ（Ｒ）２（他のＲとは独立に、各Ｒは水素又はアルキル基、アシル基若しくはアリール基であり、より具体的には、Ｒはそのすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル若しくはフェニル又はアセチル基であるか、或いはＲとＲは１つ又は複数の二重結合を含む環を形成することができる）、
［００１４３］−ＳＲ、−ＳＯ２Ｒ又は−ＳＯＲ（Ｒはアルキル基又はアリール基であり、より具体的には、Ｒはそのすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル基であり、−ＳＲについては、Ｒは水素であってよい）、
［００１４４］−ＯＣＯＯＲ（Ｒはアルキル基又はアリール基である）、
［００１４５］−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２（Ｒは、水素、アルキル基又はアリール基であり、ＲとＲは環を形成することができる）、
［００１４６］−ＯＲ（Ｒ＝Ｈ、アルキル、アリール又はアシルであり、例えばＲがアシルであると−ＯＣＯＲ＊が得られる（但し、Ｒ＊は水素又はアルキル基又はアリール基であり、より具体的には、Ｒ＊はその基のすべてが任意選択で置換されているメチル、エチル、プロピル、ブチル又はフェニル基である））
が含まれる。
【００８５】
［００１４７］具体的な置換アルキル基には、ハロアルキル基、具体的にはトリハロメチル基、特にトリフルオロメチル基が含まれる。具体的な置換アリール基には、モノ−、ジ−、トリ−、テトラ−及びペンタハロ−置換フェニル基；モノ−、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−及びヘプタ−ハロ−置換ナフタレン基；３−又は４−ハロ−置換フェニル基、３−又は４−アルキル−置換フェニル基、３−又は４−アルコキシ−置換フェニル基、３−又は４−ＲＣＯ−置換フェニル、５−又は６−ハロ置換ナフタレン基が含まれる。より具体的には、置換アリール基には、アセチルフェニル基、具体的には４−アセチルフェニル基；フルオロフェニル基、具体的には３−フルオロフェニル及び４−フルオロフェニル基；クロロフェニル基、具体的には３−クロロフェニル及び４−クロロフェニル基；メチルフェニル基、具体的には４−メチルフェニル基及びメトキシフェニル基、具体的には４−メトキシフェニル基が含まれる。
【実施例】
【００８６】
［００１４８］本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに理解されよう。
実施例１．制癌及び／又は免疫賦活機能について高い効能を有する構造を含むビスホスホネート化合物
［００１４９］フォサマックス、アクトネル及びゾメタなどのビスホスホネートは、酵素ファルネシル二リン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）の強力な阻害剤であり、骨粗しょう症や骨肉腫を治療するのに使用される。これらは、破骨細胞及び腫瘍細胞に対して直接的な活性を有しており、また、先天性免疫系のγδＴ細胞も活性化して腫瘍細胞を死滅させる。ここで、本発明者らは、γδＴ細胞活性化及び腫瘍細胞の死滅化において、現在のビスホスホネートより約１００〜１０００倍（×）大きい活性を有する新規な化合物の開発を説明するのに加えて、ビスホスホネートは、ＦＰＰＳだけでなく、ゲラニルゲラニルジホスフェート及びデカプレニルジホスフェートシンターゼも阻害するポリファーマシューティカル（ｐｏｌｙｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）として作用することができることを示す。
【００８７】
［００１５０］フォサマックス、ボニバ及びゾメタなどのビスホスホネートは、骨粗しょう症、パジェット病及び悪性腫瘍に起因する高カルシウム血症などの骨吸収疾患を治療するために使用される薬物分子である（１、２）。さらに、それらは、γδＴ細胞（Ｖγ２ＶδＴ細胞受容体を含む）を活性化して腫瘍細胞を死滅させ（３〜５）、その上、腫瘍細胞（６〜９）や多くの寄生原虫に対して直接活性を有している（１０、１１）。これらは２０年間も臨床的に使用されてきたが、その作用機構は明らかでない。初期の研究では、ビスホスホネートは単に骨の表面を被覆することによって作用すると考えられたが、最近では、酵素ファルネシル二リン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ、ＥＣ２．５．１．１０）に関係があるとされる（１２）。ＦＰＰＳの阻害は、細胞シグナリングのパターンのかく乱（図１Ｂ）、及び、いくつかの原虫ではエルゴステロール生合成の阻害（１０）を引き起こすと予測される、低分子量ＧＴＰアーゼ（Ｒａｓ、Ｒｈｏ、Ｒａｐ、Ｒａｃなど）のプレニル化の低下をもたらす。より最近では、ＦＰＰＳのこの阻害は、高いレベルの基質、イソペンテニルジホスフェート（ＩＰＰ）をもたらすことが示されている（１３、１４）。このＩＰＰレベルの増大はγδＴ細胞を活性化することができる（１５）。またいくつかの細胞では、ＩＰＰはＡＴＰのイソペンテニルエステルであるＡｐｐｐＩに転換される。これは、ミトコンドリア透過性遷移孔の要素である、ミトコンドリアアデニンヌクレオチドトランスロカーゼ（ＡＮＴ）を阻害することができる（図１Ｂ）（１６）。
【００８８】
［００１５１］本明細書において、本発明者らは、ＦＰＰＳ阻害は常にビスホスホネートの作用の主要な標的であるか、また、免疫療法、癌において、また抗感染薬として、使用可能性のある、骨に対する結合力の小さいものを含む、活性があり且つ選択的な阻害剤を作製することが可能であるか、という質問に対する意義深い答えを開示するものである。本発明者らは、ビスホスホネート化合物が作用する他の重要な標的には、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳが含まれることを報告する。さらに、本発明者らは、様々な標的に対して高い効能と選択性を示す有機ビスホスホネート化合物を作製し、これを試験した。
【００８９】
［００１５２］タンパク質は、図１Ｃに示すようにして、ＩＰＰ及びジメチルアリルジホスフェート（ＤＭＡＰＰ）から合成される、ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）か又はゲラニルゲラニルジホスフェート（ＧＧＰＰ）のいずれかによってプレニル化される。この反応は、図２Ｃに赤丸で囲んで示すように、カルボカチオン遷移状態／反応性中間体（１７）を介して進行し、ビスホスホネート側鎖（例えばボニバの、赤色、図１Ａ）は電荷中心を模倣し、ビスホスホネートは、加水分解に対して安定したジホスフェートの類似体（１７）をもたらすと考えられる。本発明者らは、類似したタイプの遷移状態が、ＦＰＰＳとＧＧＰＰＳの両方、並びにデカプレニルジホスフェートシンターゼ（ＤＰＰＳ）に関連している可能性があることを提示した。ＤＰＰＳは、コエンザイムＱ１０の製造において使用されるヘテロ二量体性のプレニル−トランスフェラーゼである（１８）。本発明者らの提案に従って、本発明者らは複数の標的に影響を及ぼすことができるビスホスホネート化合物を設計した。
【００９０】
［００１５３］「１つの薬物、１つの標的」という従来の考え方を超える可能性を考慮した薬物設計アプローチへの意欲的な認識がなされている（１９）。ビスホスホネートが複数の標的を阻害する「ポリファーマシューティカル」となり得るという可能性を提示するものである。ビスホスホネートボニバは、コレステロール生合成において使用されるスクアレンシンターゼの強力な阻害剤とすることができ（２０）、多くのビスホスホネートが、植物中に見出される別のヘテロ二量体性のプレニルトランスフェラーゼ、ゲラニルジホスフェートシンターゼの強力な低ｎＭ阻害剤である（２１）。しかし、他の関連する標的酵素の潜在的重要性を判定し、阻害剤を開発できるようにするのにはさらなる検討を伴う。
【００９１】
［００１５４］本発明者らのポリファーマシューティカルな仮定を試験するために、本発明者らは３つの酵素：ヒトＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳに絞り、それぞれについて、一連のビスホスホネートによるその阻害を試験した。これら３つの酵素のそれぞれはビスホスホネートゾレドロネート（ゾメタ）によって阻害される。そのいくつかは表１のＩＣ５０（Ｋｉ）値で示されている。他のビスホスホネート化合物についての活性値も示す。即ち、本発明者らは、ビスホスホネートによって、３つのすべてのヒト酵素を強力に阻害可能であることを実証した。この発見は、ＦＰＰＳがビスホスホネートの唯一の標的ではないという可能性と一致する。本発明者らは以下の観察、即ち、ビスホスホネートの主要標的としてのＧＧＰＰＳの潜在的な重要性を提案するものであり、細胞増殖に対するビスホスホネートの影響は、ファルネソールではなく、ゲラニルゲラニオールの添加によってのみ逆転され、これは、コレステロール生合成を研究する関連で、ＦＰＰシンターゼ及びＧＰＰシンターゼが関与していると見なされるというＧｏｆｆｉｎｅｔら及びその他の観察（２２）に注目している。本発明者らのデータは、ある種の小分子は、他の標的に加えて、ＧＧＰＰＳ標的活性を高い効能で直接阻害することができることを実証している。
【００９２】
［００１５５］本発明者らは、ＧＧＰＰＳがビスホスホネート活性の主標的として働くかどうかという疑問、及び小分子阻害剤の付随する役目をさらに詳細に検討した。本発明者らは、有用な組成物を提供し、且つ特定の細胞の（腫瘍細胞の死滅化及びγδＴ細胞活性化）結果を解釈する助けとなるデータベースを提供するために、これら３つの酵素のうちの１つ又は複数に対して改善された活性を有する可能性のある一連の新規なビスホスホネートを設計した。ＦＰＰＳ阻害についての本発明者らの相対的分子類似性分析（ＣｏＭＳＩＡ）（２３）モデルの検討（２４）（図１Ｅ）は、正電荷特性を、例えば、図１Ｆに示す新規なビスホスホネートで見られるように、ビスホスホネート主鎖により近い方へ移動させることによって高い活性が得ることができることを示唆している。本発明者らは、ヒト組み換えゲラニルゲラニル二リン酸塩シンターゼの阻害についての従来の研究（２５）に注目している。正電荷の構造的特性に加えて、本発明者らは、大きな疎水性尾部（例えば、図１Ｆを参照されたい）を有することの潜在的重要性を仮定した。さらに、本発明者らは、そうした阻害剤はＣ５０プレニルトランスフェラーゼＤＰＰＳに対して特に強力であり、また細胞取り込みが改善される可能性があると考えた。したがって、本発明者らは、様々な化合物を意欲的に設計し合成することに至った。その代表的な具体的番号は化合物７１５である。
【００９３】
［００１５６］図２Ａに示すように、ＢＰＨ−７１５などのカチオン性のビスホスホネート種（図１Ｆ、左側）は実際、ＭＣＦ−７癌細胞増殖阻害において、ゾレドロネートやパミドロネートなどのビスホスホネートよりはるかに活性であり、約１５μＭ（ゾレドロネート）又は約３００μＭ（パミドロネート）のオーダーの値と比較すると約５０ｎＭのＩＣ５０値である。ファルネソールを加えても成長阻害からレスキューされることはなく、ゲラニルゲラニオールを加えるとごく部分的にレスキューされる（図２Ｂ）。これは２つ以上の標的を示唆している。他方、大きな疎水性ビスホスホネートＢＰＨ−６７５は５μＭのＩＣ５０を有するが、２０μＭのゲラニルゲラニオールを加えると、その成長阻害効果は本質的に完全にレスキューされる（図２Ｃ）。これは、ＢＰＨ−６７５が選択的ＧＧＰＰＳ阻害剤であり、他方、ＢＰＨ−７１５はＧＧＰＰＳを含む複数の標的を有することを強く示唆している。本発明者らは、成長培地において、どのビスホスホネートについてＣｏＱ１０を取り込んでも細胞成長阻害からレスキューされないことを見出した。しかし、これは、本発明者らの理解する機序を考えれば予想外のことではない。その理由は、血清中にＣｏＱ１０は存在しており、ＤＰＰＳ阻害の主作用は、ＣｏＱ１０添加によって影響を受けないＩＰＰ／ＡｐｐｐＩの上昇に対してであると想定されるからである。
【００９４】
［００１５７］酵素データに基づく細胞成長阻害のモデルを開発するために、本発明者らは次に、特定のビスホスホネートによる、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ阻害についてのＩＣ５０値を測定した（表１に具体的データを示す）。図２Ｄのデータマトリクスに示すように、細胞成長阻害とＧＧＰＰＳ阻害ｐＩＣ５０値との間には良好な相関があり、ＳｌｏｇＰ（原子寄与及びプロトン化状態をベースとしたオクタノール／水分配係数のＬｏｇ（２６））とは中程度の相関、ＤＰＰＳとは弱い相関がある。しかし、ＦＰＰＳ阻害とは相関性がない。これらの結果は、ＧＧＰＰＳ阻害が最も重要であるという考え方を強く支持しており、これは、本発明者らがＧＧＯＨ及びＦＯＨのレスキュー試験について得たデータと一致している（図２Ｂ、２Ｃを参照されたい）。
【００９５】
［００１５８］本発明者らは、部分最小二乗法を用いて、細胞のＩＣ５０の結果に対して酵素及びＳｌｏｇＰデータを回帰させることによる細胞成長阻害のためのより定量的なモデルの開発を追求した。即ち：
ｐＩＣ５０（細胞）＝ａ・ｐＩＣ５０（ＦＰＰＳ）＋ｂ・ｐＩＣ５０（ＧＧＰＰＳ）＋ｃ・ｐＩＣ５０（ＤＰＰＳ）＋ｄ・ＳｌｏｇＰ＋ｅ
式中、ｐＩＣ５０＝−ｌｏｇ１０（ＩＣ５０Ｍ）であり、ａ、ｂ．．．ｎは回帰係数である。
【００９６】
［００１５９］酵素阻害とＳｌｏｇＰデータだけを用いて、まさにＧＧＰＰＳ、ＤＰＰＳ及びＳｌｏｇＰ（ＧＧＰＰＳが支配的である（ＳＩ））で良好な全体相関性（Ｒ＝０．９０）が見出される。ＣｏＭＳＩＡフィールドを用いるとさらなる改善が得られる（図２Ｅ）。したがって、Ｒｈｏ、Ｒａｐ及びＲａｃの細胞生存経路が影響を受けるので、ビスホスホネートによる細胞成長阻害はＧＧＰＰＳの直接の阻害によって支配されており、これは、レスキュー実験と一致している。さらに、ＤＰＰＳ阻害は、生成ＤＰＰ分子当たり７モルのＩＰＰが消費されるので、大量のＩＰＰ（ＡｐｐｐＩ）を生成すると予測される。
【００９７】
［００１６０］次に本発明者らは、これらの新規なビスホスホネートがγδＴ細胞活性化において活性を有するかどうかの検討を試みた。図２Ｆから分かるように、ＢＰＨ−７１５などの長鎖ビスホスホネートはγδＴ細胞活性化において強力な活性を有する。最も活性な種（ＢＰＨ−７１６、Ｃ１２側鎖を含む）は、このアッセイで、古典的な合成ホスホ抗原のホスホスチム（Ｐｈｏｓｐｈｏｓｔｉｍ（登録商標））（ＩＰＰのブルモヒドリン）に対して約２倍（×）のＥＣ５０を有しており、従来の最も強力なビスホスホネートに対して約１００倍（×）のＥＣ５０を有している（図２Ｆ）。しかし、これらの最も強力な種はＦＰＰＳ（ＳＩ）に対してほとんど活性をもたないか又はまったくもたないが、これらはＤＰＰＳに対して、ゾレドロネート（約５００ｎＭ対約５μＭ）より約１０倍（×）活性である。さらに、これらははるかに好都合なＳｌｏｇＰ特性（３対−４）を有しており、これは、そうした種がよりたやすく細胞に侵入できることを意味している。もちろん、他の脂質抗原と同様にこれらの種を、γδＴ細胞に直接提供できるかということが議論になる可能性がある。しかし、プラバスタチン滴定実験とメバスタチン滴定実験の両方の結果（１４）によれば（ここで、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳへのイソプレノイドの流束（ｆｌｕｘ）はＨＭＧＣｏＡレダクターゼの阻害によって阻止される）、γδＴ細胞活性化において、強力な長鎖ビスホスホネート及びリセドロネートについて同じスタチンＩＣ５０値が示されている（図２Ｅ、Ｆ、Ｇ）。したがって、新規な種は、抗原提示細胞におけるＩＰＰ蓄積を介して、従来のビスホスホネート抗原と同じ仕方で作用する。癌細胞増殖阻害で用いたのと同じモデル化手法を本発明者らが適用することによって、予測性の高いモデルが得られた（図２１）。追加のＣｏＭＳＩＡフィールド記述子（ＳＩ）と合わせてＦＰＰＳ、ＤＰＰＳ、ＳｌｏｇＰ記述子を用いて、０．９８のｒ２値、ｑ２＝０．７４４）である。
【００９８】
［００１６１］γδＴ細胞活性化におけるＧＧＰＰＳ阻害についての役割の証拠を本発明者らは見出していない。例えば、ＧＧＰＰＳ阻害剤ＢＰＨ−６７５（これはＦＰＰＳ又はＤＰＰＳに対して効果はない）はγδＴ細胞活性化に対してまったく効果はない。同様に、側鎖電荷が存在していないＢＰＨ−７１５（ＢＰＨ−７５４）のフェニル類似体は良好なＧＧＰＰＳ阻害剤であることが分かった。ＭＣＦ−７細胞成長のその阻害はＧＧＯＨによってレスキューされたが、それはＦＰＰＳ又はＤＰＰＳ阻害に対して本質的に効果がないので（カルボカチオン電荷の特徴が欠如しているので）、γδＴ細胞活性化に対して効果はなかった。γδＴ細胞活性化におけるこの活性の欠如は驚くべきことのように当初は思われるかもしれないが、ＧＧＰＰＳだけでの阻害は１つのＩＰＰしか生成しないが、他方、ＤＰＰＳの阻害はこれを７つ生成し、さらに、細胞中におけるＤＰＰ／ＣｏＱ１０の生成は非常に豊富である。ドリコール生合成の阻害がＩＰＰの生成に関与することも可能である。
【００９９】
【化４】
2010523709.tif 000005
【０１００】
［００１６２］非骨吸収疾患の治療においてビスホスホネートを使用することの潜在的欠点は、それらが骨に急速に吸着されることであると予想される。しかし、驚くべきことに、本発明者らは、高度に疎水性の種ＢＰＨ−６７５及びＢＰＨ−７１５はインビボでごく弱くしか骨の上に吸着されず（ＳＩ）、骨吸収において中程度のＩＣ５０値しか得られないが（例えば、ＢＰＨ−７１５の約８００ｎＭに対して、ゾレドロネートの約７０ｎＭ、ＳＩ）、しかし、特定の状態、例えば免疫療法、感染症や様々な癌の治療の関連では弱い骨結合は望ましいことであることを見出す。
【０１０１】
［００１６３］本発明者らは、化合物７５４、及び関連する構造的特徴を有する特定の化合物は、ＧＧＰＰＳを強力に阻害するが、ＤＰＰＳ又はＦＰＰＳはほとんど阻害しない化合物類を提示できることに注目する。いくつかの例では、プロ免疫賦活効果（ｐｒｏ−ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ）はもたなくても、制癌活性などの特性を保持することは有利となる可能性がある。様々な炎症性疾患などのように、免疫刺激が、免疫系の過剰反応をもたらす可能性のある環境が存在する。興味ある構造的特徴には、環上のアルコキシ尾部置換基に加えて、ビスホスホネート成分に隣接する環部分についての正電荷の欠如が含まれる。逆に、他の構造的特徴（例えば、正電荷及び尾部置換基の存在）を共有する化合物は、複数の標的（例えば、化合物７１５の場合のＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ）の阻害などの付随する機能的特性を示すことができ、制癌及び免疫刺激などの活性の組合せを示すことができる。そうした組合せが有利である環境が存在する。
【０１０２】
［００１６４］次に本発明者らは、特定のビスホスホネート（例えば、ピリジニウム及びスルホニウム類似体）がどのようにＦＰＰＳやＧＧＰＰＳと結合するかを検討した。本発明者らは最初の検討として、ＦＰＰＳ阻害及び骨吸収において強力な活性を有することが先に判明している（２７）簡単なフルオロピリジニウムビスホスホネート（ＢＰＨ−４６１、図１Ｄ）、並びに最も簡単なスルホニウムビスホスホネート（ＢＰＨ−５２７、図１Ｄ）を選択する。データ収集及びリファインメント統計データ（ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）を、ヒト及びトリパノソーマブルーセイＦＰＰＳ酵素（後者は抗感染薬の開発のための標的として興味深い（２８））の両方について、例として表、例えば表４〜７に示す。すべての場合において、ＩＰＰが存在しなくても、ビスホスホネートは排他的にアリル／ＤＭＡＰＰ部位だけと結合した。ヒト酵素と結合したこれら２つのビスホスホネートの構造を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対して活性をやはり有する（３０）強力な骨吸収薬物（２９）であるＢＰＨ−２１０の構造の上に重ね合わせて、図３Ａ、Ｂに示す。Ｔ．ブルーセイ構造を図１２に示す）。従来のビスホスホネートとの結合に明らかに相当な類似性があり、ホスホネートと３Ｍｇ２＋の間に強い静電相互作用（大腸菌タンパク質においてＨｏｓｆｉｅｌｄ等によって最初に確認された（３１））を有する。
【０１０３】
［００１６５］ＩＰＰと一緒のＮＢＰ（窒素含有ビスホスホネート薬物）の存在下で、三元のビスホスホネート−ＩＰＰ−ＦＰＰＳ複合体が見出されている（３１〜３４）。これは、結晶学的にも、また、固体状３１Ｐ  ＮＭＲ分光法（ビスホスホネートとＩＰＰ３１Ｐ核の両方の組について個々の３１Ｐ  ＮＭＲ共鳴が見られる（３５））によっても実証されている。図３Ｃに示すように、ピリジニウムビスホスホネートＢＰＨ−４６１は、３Ｍｇ２＋に加えて１ＰＰを含む同じタイプの複合体を形成する。ＩＰＰ、Ｍｇ２＋との三元複合体の形成は、固体状３１Ｐ  ＮＭＲを用いても推定することができ、ピリジニウム及びスルホニウムビスホスホネートについての結果を図２Ｃ、Ｄ（及び図１１）に示す。これは、ピリジニウム、スルホニウム、ホスホニウム、アルソニウム及びグアニジニウムビスホスホネートのすべてが平均して１：１（±０．２）ビスホスホネート：ＩＰＰ化学量論量で三元複合体を形成することを示している。
【０１０４】
［００１６６］ＦＰＰＳとのカチオンビスホスホネート結合が、エントロピーによって推進されるかエンタルピーによって推進されるかどうかを判断するために、本発明者らは、等温滴定熱量測定法（ＩＴＣ）を用いた。ΔＨ値は小さく、吸熱的（約２〜４ｋｃａｌ）であり、圧倒的にエントロピーによって推進されていた（約−１０．５〜−１２．６ｋｃａｌ／モルの範囲のＴΔＳ値）。図１３及び表９を参照されたい。したがって、非従来型のビスホスホネートは、より従来型の窒素含有ビスホスホネートと同様に、同じタイプの複合体を形成するが、結合はもっぱらエントロピーによって推進されていた（非常に塩基性の側鎖を有するアレンドロネート及びイバンドロネートなどの従来型のビスホスホネートに見られるように（３４、３６））。
【０１０５】
［００１６７］最後に本発明者らは、その「阻害剤」部位のＧＧＰＰＳと結合するように設計された、ＧＧＰＰＳ阻害剤ＢＰＨ−７１５（ＩＰＰの存在下又は非存在下での）の構造を検討した。２つの構造についてのデータ収集及びリファインメント統計データを得た。両方の構造において、ＢＰＨ−７１５はＫａｖａｎａｇｈ等によって最初に確認された（３７）ＧＧＰＰ阻害剤部位と結合する。１つの構造では、本発明者らは、２つのＭｇ２＋及び１つのＩＰＰの存在を見出し、第２の構造では、リガンドは、三元複合体構造において見られるものから若干転移して、単独で結合する。１ＰＰ部位の位置は、より少ないピリジニウムビスホスホネートを有するＦＰＰＳで見られるものと類似している（図３Ｃ）。同じＧＧＰＰＳ阻害剤部位結合部位モチーフはＢＰＨ−６７５（ＰＤＢ２Ｅ９５）についても見られ、Ｋａｖａｎａｇｈ等（３７）によって提案されているような従来記載されているもの（２５）などの長鎖ＧＧＰＰＳ阻害剤に共通するもののようである。これは生成物（又は阻害剤）結合部位であるので、本発明者らは、正電荷特性の必要性はなく、カチオン側鎖含有種と中性側鎖含有種の両方が結合できるが、カチオン種だけがＤＰＰＳ（及びＦＰＰＳ）を阻害すると判断する。
【０１０６】
［００１６８］まとめると、それらが、ＦＰＰＳだけを標的とするものではない、特定のビスホスホネート薬物は、多くの場合ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ並びにＤＰＰＳ（及び、潜在的には、デヒドロドリキルジホスフェートシンターゼなどの他のプレニルトランスフェラーゼ）を阻害することができるポリファーマシューティカルであることを示しているので（図４に示した図２Ｂの改訂版を示唆している）、これらの結果は非常に興味深いものである。図４は、癌細胞増殖阻害は主にＧＧＰＰＳ阻害によって阻害されるが（コンピュータモデル、酵素阻害及びレスキュー実験によって証明されているように）、ＧＧＰＰＳ阻害はγδＴ細胞活性化において何ら役割を果たさず、それはＦＰＰＳ及びＤＰＰＳ阻害（及び、多分ドリコール生合成阻害）によって支配されるという本発明者らの理解を示すものである。ＩＰＰ／ＡｐｐｐＩ蓄積が依然として起こるので、ＣｏＱ１０は細胞増殖をレスキューしない。長鎖ビスホスホネートはＦＰＰＳに対して活性を有していないが、それでも、ＤＰＰＳ阻害及び高い疎水性のため、強力なγδＴ細胞活性化因子である。
【０１０７】
［００１６９］癌細胞増殖阻害において、ＧＧＰＰＳは大部分の強力な種にとっての主要標的であるが、γδＴ細胞活性化においては、ＧＧＰＰＳ阻害は、ＩＰＰ生成に依存するＴ細胞活性化に対して効果的ではない。適切な化学的改変によって、本発明者らは、癌細胞増殖阻害とγδＴ細胞活性化の両方において、既存のビスホスホネートより約１００〜１０００倍（×）高い活性を有するいくつかの新規な種を得た。これは、ポリファーマシューティカルのアプローチを用いた免疫療法や化学療法におけるビスホスホネートの使用への新たな道を示唆している。
【０１０８】
［００１７０］この実施例での具体的な化合物は、本明細書で記載する式ＸＡ１の化合物である。
【０１０９】
［００１７１］化合物の塩及びエステル形態を含む組成物の変形体。本発明の化合物、及び本発明の方法において有用な化合物は、上記式の化合物並びに薬剤として許容されるその塩及びエステルを含む。複数の実施形態では、塩には、ヒト又は獣医学的用途で使用するのに許容される、本明細書で示す式の酸から誘導される任意の塩が含まれる。複数の実施形態では、エステルという用語は、本明細書で示す式のジホスホネート化合物を含む化合物の加水分解性エステルを指す。複数の実施形態では、本明細書で示す式の化合物の塩及びエステルは、本明細書で示す式の化合物と同じ治療上又は薬剤学的な（ヒト又は獣医用）一般的特性を有するものを含むことができる。各ホスホネートが２−、１−又は中性電荷を担持する、様々な塩の組合せが可能である。原理上、本発明のビスホスホネート化合物を含む特定の化合物について、複数の荷電状態、例えば９つの荷電状態が可能である。
【０１１０】
実施例１の文献；
［００１７２］１．  Ｒ．  Ｇ．  Ｒｕｓｓｅｌｌ，  Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １０６８，  ３６７  （Ａｐｒ，  ２００６）．
［００１７３］２．  Ａ．  Ｊ．  Ｒｏｅｌｏｆｓ，  Ｋ．  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｓ．  Ｇｏｒｄｏｎ，  Ｍ．  Ｊ．  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２，  ６２２２ｓ  （Ｏｃｔ  １５，  ２００６）．
［００１７４］３．  Ｖ．  Ｋｕｎｚｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ９６，  ３８４  （Ｊｕｌ  １５，  ２０００）．
［００１７５］４．  Ｍ．  Ｗｉｌｈｅｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０２，  ２００  （Ｊｕｌ  １，  ２００３）．
［００１７６］５．  Ｊ．  Ｎ．  Ｂｌａｔｔｍａｎ，  Ｐ．  Ｄ．  Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０５，  ２００  （Ｊｕｌ  ９，  ２００４）．
［００１７７］６．  Ｓ．  Ｙａｍａｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６５，  １８６５  （Ｄｅｃ，  ２００４）．
［００１７８］７．  Ｓ．  Ｗａｋｃｈｏｕｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２，  ２８６２  （Ｍａｙ  １，  ２００６）．
［００１７９］８．  Ｐ．  Ｖ．  Ｄｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｕｒｇｅｒｙ  １４０，  ２２７  （Ａｕｇ，  ２００６）．
［００１８０］９．  Ｄ．  Ｓａｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  Ｏｎｃｏｌ  ３，  ３２５  （Ｊｕｎ，  ２００６）．
［００１８１］１０．  Ｍ．  Ｂ．  Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４４，  ９０９  （Ｍａｒ  １５，  ２００１）．
［００１８２］１１．  Ｂ．  Ｂｏｕｚａｈｚａｈ，  Ｌ．  Ａ．  Ｊｅｌｉｃｋｓ，  Ｓ．  Ａ．  Ｍｏｒｒｉｓ，  Ｌ．  Ｍ．  Ｗｅｉｓｓ，  Ｈ．  Ｂ．  Ｔａｎｏｗｉｔｚ，  Ｐａｒａｓｉｔｏｌ  Ｒｅｓ  ９６，  １８４  （Ｊｕｎ，  ２００５）．
［００１８３］１２．  Ｊ．  Ｒ．  Ｇｒｅｅｎ，  Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ  ４４，  ２８２  （２００５）．
［００１８４］１３．  Ｈ．  Ｊ．  Ｇｏｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７，  １６３  （Ｊａｎ  ２０，  ２００３）．
［００１８５］１４．  Ｋ．  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｍ．  Ｊ．  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ  １９，  ２７８  （Ｆｅｂ，  ２００４）．
［００１８６］１５．  Ｙ．  Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３７５，  １５５  （Ｍａｙ  １１，  １９９５）．
［００１８７］１６．  Ｈ．  Ｍｏｎｋｋｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １４７，  ４３７  （Ｆｅｂ，  ２００６）．
［００１８８］１７．  Ｍ．  Ｂ．  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｗ．  Ａｒｎｏｌｄ，  Ｈ．  Ｔ．  Ｈｅａｔｈ，  ３ｒｄ，  Ｊ．  Ａ．  Ｕｒｂｉｎａ，  Ｅ．  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２６３，  ７５４  （Ｏｃｔ  ５，  １９９９）．
［００１８９］１８．  Ｒ．  Ｓａｉｋｉ，  Ａ．  Ｎａｇａｔａ，  Ｔ．  Ｋａｉｎｏｕ，  Ｈ．  Ｍａｔｓｕｄａ，  Ｍ．  Ｋａｗａｍｕｋａｉ，  Ｆｅｂｓ  Ｊ  ２７２，  ５６０６  （Ｎｏｖ，  ２００５）．
［００１９０］１９．  Ａ．  Ｌ．  Ｈｏｐｋｉｎｓ，  Ｊ．  Ｓ．  Ｍａｓｏｎ，  Ｊ．  Ｐ．  Ｏｖｅｒｉｎｇｔｏｎ，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １６，  １２７  （Ｆｅｂ，  ２００６）．
［００１９１］２０．  Ｄ．  Ａｍｉｎ，  Ｓ．  Ａ．  Ｃｏｒｎｅｌｌ，  Ｍ．  Ｈ．  Ｐｅｒｒｏｎｅ，  Ｇ．  Ｅ．  Ｂｉｌｄｅｒ，  Ａｒｚｎｅｌｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ４６，  ７５９  （Ａｕｇ，  １９９６）．
［００１９２］２１．  Ｃ．  Ｂｕｒｋｅ，  Ｋ．  Ｋｌｅｔｔｋｅ，  Ｒ．  Ｃｒｏｔｅａｕ，  Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ４２２，  ５２  （Ｆｅｂ  １，  ２００４）．
［００１９３］２２．  Ｍ．  Ｇｏｆｆｉｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ６，  ６０  （２００６）．
［００１９４］２３．  Ｇ．  Ｋｌｅｂｅ，  Ｕ．  Ａｂｒａｈａｍ，  Ｔ．  Ｍｉｅｔｚｎｅｒ，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ３７，  ４１３０  （Ｎｏｖ  ２５，  １９９４）．
［００１９５］２４．  Ｊ．  Ｍ．  Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４６，  ５１７１  （Ｎｏｖ  ２０，  ２００３）．
［００１９６］２５．  Ｃ．  Ｍ．  Ｓｚａｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４５，  ２１８５  （Ｍａｙ  ２３，  ２００２）．
［００１９７］２６．  Ｓ．  Ａ．  Ｗｉｌｄｍａｎ，  Ｇ．  Ｍ．  Ｃｒｉｐｐｅｎ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３９，  ８６８  （ＳＥＰ−ＯＣＴ，  １９９９）．
［００１９８］２７．  Ｊ．  Ｍ．  Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４８，  ２９５７  （Ａｐｒ  ２１，  ２００５）．
［００１９９］２８．  Ａ．  Ｍｏｎｔａｌｖｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８，  １７０７５  （Ｍａｙ  ９，  ２００３）．
［００２００］２９．  Ｌ．  Ｗｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４５，  ３７２１  （Ａｕｇ  １５，  ２００２）．
［００２０１］３０．  Ａ．  Ｌｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４９，  ７３３１  （Ｄｅｃ  １４，  ２００６）．
［００２０２］３１．  Ｄ．  Ｊ．  Ｈｏｓｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９，  ８５２６  （Ｍａｒ  ５，  ２００４）．
［００２０３］３２．  Ｓ．  Ｂ．  Ｇａｂｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ６２，  ８０  （Ｊａｎ  １，  ２００６）．
［００２０４］３３．  Ｊ．  Ｍ．  Ｒｏｎｄｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ  １，  ２６７  （Ｆｅｂ，  ２００６）．
［００２０５］３４．  Ｋ．  Ｌ．  Ｋａｖａｎａｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｉ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０３，  ７８２９  （Ｍａｙ  １６，  ２００６）．
［００２０６］３５．  Ｊ．  Ｍａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２８，  １４４８５  （Ｎｏｖ  １５，  ２００６）．
［００２０７］３６．  Ｆ．  Ｙｉｎ，  Ｒ．  Ｃａｏ，  Ａ．  Ｇｏｄｄａｒｄ，  Ｙ．  Ｚｈａｎｇ，  Ｅ．  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２８，  ３５２４  （Ｍａｒ  ２２，  ２００６）．
［００２０８］３７．  Ｋ．  Ｌ．  Ｋａｖａｎａｇｈ，  Ｊ．  Ｅ．  Ｄｕｎｆｏｒｄ，  Ｇ．  Ｂｕｎｋｏｃｚｉ，  Ｒ．  Ｇ．  Ｒｕｓｓｅｌｌ，  Ｕ．  Ｏｐｐｅｒｍａｎｎ，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１，  ２２００４  （Ｍａｙ  １１，  ２００６）．
【０１１１】
実施例２．追加の化合物
［００２０９］本発明は、構造ＸＡ２
【０１１２】
【化５】
2010523709.tif 000006
【０１１３】
で表される化合物を提供する。
［００２１０］式中、変数としての基の選択は、本明細書の他の部分で記載するものと同様であってよい。
【０１１４】
［００２１１］好ましい実施形態では、ＲＬは７〜１２個の炭素を有するアルコキシである。一実施形態では、構造式ＸＡ２を有する化合物は、ＤＰＰＳを実質的に阻害することなくＧＧＰＰＳを選択的に阻害することができる。一実施形態では、そうした化合物を、腫瘍又は癌細胞増殖を阻害するために用いる。
【０１１５】
［００２１２］化合物７５４を合成し、活性を試験した。以下の１Ｃ５０値を有することが分かった（ミクロモル）：癌細胞増殖（平均）の阻害は０．５０であり、ヒトの乳癌細胞株ＭＣＦ７の阻害は０．４０１であり、ヒトのＣＮＳ癌ＳＦ２６８の阻害は０．５２４であり、ヒトの肺癌ＮＣＩＨ４６０の阻害は０．６７２であり、精製ＧＧＰＰＳの阻害は０．５９１８である。
【０１１６】
［００２１３］
実施例３．試験化合物の活性についての結果
【０１１７】
【表１】
2010523709.tif 000007
【０１１８】
［００２１４］上記表では、様々な化合物による、３つの癌細胞株の細胞成長阻害についてのデータを示す。また、有意の効能で複数の酵素を阻害することができる化合物を含み、化合物は、ＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＤＰＰＳ酵素の１つ又は複数を阻害可能である。予測値は１０倍交差検証モデルからのものである。平均絶対残余誤差は０．３８であり、これは、活性の２５００倍（×）の範囲にわたって、約２．３倍（×）のファクターの誤差に相当する。ＧＦＡの不適合度誤差指標（ｌａｃｋ−ｏｆ−ｆｉｔ  ｅｒｒｏｒ  ｍｅｔｒｉｃ）は０．３１である。
【０１１９】
【表２】
2010523709.tif 000008
【０１２０】
【表３】
2010523709.tif 000009
【０１２１】
【表４】
2010523709.tif 000010
【０１２２】
【表５】
2010523709.tif 000011
【０１２３】
【表６】
2010523709.tif 000012
【０１２４】
【表７】
2010523709.tif 000013
【０１２５】
【表８】
2010523709.tif 000014
【０１２６】
【表９】
2010523709.tif 000015
【０１２７】
【表１０】
2010523709.tif 000016
【０１２８】
【表１１】
2010523709.tif 000017
【０１２９】
材料及び方法
［００２１５］細胞成長阻害アッセイ。ヒト腫瘍細胞株ＭＣＦ−７（乳腺腺癌）、ＮＣＩ−Ｈ４６０（肺大細胞）及びＳＦ−２６８（中枢神経系膠芽腫）を国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から得た。すべての細胞株を、１００％湿度の５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で１０％ウシ胎仔血清及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充したＲＰＭＩ−１６４０培地中で培養した。各ビスホスホネートによる成長阻害についてのＩＣ５０値を判定するために培養液微量希釈法を用いた。１００μＬの最終容積になるように半対数連続により予め希釈した（０．３１６ｍＭ〜０．１ｐＭ）、１０μＬの試験化合物を含む９６ウェル平底培養プレート中に、５，０００細胞／ウェルの密度で細胞を播種した。ＮＢＰは通常最初にＨ２Ｏ（０．０１Ｍ）に溶解し、ＮＮＢＰは通常ＤＭＳＯ（０．０１Ｍ）に溶解した。次いでプレートを、１００％湿度の５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で４日間インキュベートし、続いて、ＭＴＴ（（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）細胞増殖アッセイ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）を用いて、用量応答曲線を得た。ＤＭＳＯキャリヤーは細胞増殖に対して効果がなかった。
【０１３０】
［００２１６］ウィンドウズ用のＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）バージョン４．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ｗｗｗ．ｇｒａｐｈｐａｄ．ｃｏｍ）を用いてデータを直角双曲線関数：Ｉ＝（ＩＭＡＸＣ）／（ＩＣ５０＋Ｃ）；
【０１３１】
【数１】
2010523709.tif 000018
【０１３２】
（式中、Ｉは阻害率％であり、ＩＭＡＸ＝１００％阻害であり、Ｃは阻害剤の濃度であり、ＩＣ５０は５０％成長阻害濃度である）
にあてはめた。典型的な用量応答曲線を本文の図２Ａに示す。「レスキュー」実験のために、ＦＯＨ又はＧＧＯＨのストック溶液を調製し（エタノール中で）、必要量をインキュベーション培地に加えて固定した２０μＭ濃度を得た。
【０１３３】
［００２１７］γδＴ細胞アッセイ。Ｖγ２Ｖδ２Ｔ細胞ＴＮＦ−αの放出及び増殖を、基本的には先に記載されているようにして１実施した。簡潔に述べると、Ｖγ２Ｖδ２Ｔ細胞についての生物活性を測定するために、ＣＤ４＋ＪＮ．２４、ＣＤ４＋ＨＦ．２、ＣＤ８αα＋１２Ｇ１２又はＣＤ４−８−ＨＤ．１０８Ｖγ２Ｖδ２Ｔ細胞クローンを、ＣＤ４＋クローンのためにはＣＰ．ＥＢＶ（ＥＢＶ形質転換させたＢ細胞株）、又はＣＤ８αα＋及びＣＤ４−８−クローンのためにはＶａ−２（形質転換させた線維芽細胞）の存在下、ホスホ抗原で刺激させた。ＡＰＣとして使用するために、ＣＰ．ＥＢＶ及びＶａ−２を０．０５％グルタルアルデヒド（ＥＭグレード、Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）で固定した。ホスホ抗原の相対的効能は同じようであったが、ＮＫＧ２Ｄ＋Ｖγ２Ｖδ２クローン、１２Ｇ１２及びＨＤ．１０８は、より高い抗原感受性を示したことに注目されたい。これは、Ｖａ−２細胞株によって発現されるＮＫＧ２Ｄリガンド、ＭＩＣＡ、ＵＬＢＰ２及びＵＬＢＰ３との相互作用による、そのＮＫＧ２Ｄ＋受容体を介した共刺激に起因するようである。本発明者らは先に、ＮＫＧ２Ｄ／ＭＩＣＡ相互作用が、抗原感受性を著しく増大させることを示した。５０％の観察Ｔ細胞応答（ＥＣ５０）を達成するのに要する濃度は、Ｓ字形用量応答関数を用いてＰｒｉｓｍ４．０プログラム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって得た。グローバルあてはめ技術（Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔｔｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を用いてＰｒｉｓｍ４．０で実施して、各実験（例えば、ＪＮ．２４細胞からのＴＮＦ−αの放出）について曲線あてはめ（最小）を判定した。何の制約も用いることなく、各個別化合物について曲線あてはめ（最大）を最適化した。
【０１３４】
［００２１８］ＮＭＲ分光法。スペクトルを、１４．１Ｔ、２インチ内径Ｏｘｆｏｒｄ  ｍａｇｎｅｔ及びＶａｒｉａｎ／Ｃｈｅｍａｇｎｅｔｉｃｓ  ３．２  ｍｍ  Ｔ３  ＨＸＹプローブを備えた６００ＭＨｚ（１Ｈ共鳴振動数）Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｐｌｕｓ分光計で、マジックアングル試料スピニング技術を用いて得た。スペクトルは、８５％オルトリン酸からなる外部標準を基準とした。１Ｈ横方向磁化は３．５μｓパルス（７５ｋＨｚ領域）で発生させ、シグナル強調のために交差分極を用い、続いてデータ取得の際にはＴＰＰＭデカプリング（８０ｋＨｚ  １Ｈ領域）を用いた。１Ｈ−３１Ｐ交差分極パルス波形及びデカプリングは、タンパク質試料についてのデータ取得に先行して、リセドロネート（アクトネル（Ａｃｔｏｎｅｌ））で最適化した。データは、１０μｓのドウェル（ｄｗｅｌｌ）時間（１００ｋＨｚスペクトル幅）、２０４８ポイント、２秒のリサイクル遅れ（ｒｅｃｙｃｌｅ  ｄｅｌａｙ）及び１３．３３３ｋＨｚのスピンニング速度を用いて取得した。すべてのスペクトルは、４０９６ポイントへのゼロ充てん、５０Ｈｚ指数乗算（ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ）、及びピーク積分の前の基準線補正のための多項式補正（ｐｏｌｙｎｏｍｉａｌ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を用いて処理した。スキャン数は３２ｋ〜８６ｋの範囲で変えた。
【０１３５】
［００２１９］ヒト組み換えＧＧＰＰＳ阻害。ヒト組み換えゲラニルゲラニル二リン酸塩シンターゼ（ｈＧＧＰＰＳ）の精製は、先に報告されている手順２に従った。ビスホスホネートによるＧＧＰＰＳ阻害は、先に報告されている放射アッセイ２を若干修正して用いて測定した。アッセイ溶液は、５０μＬの総容積に３００ｎｇのｈＧＧＰＰＳ、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ及び２５μＭ  ＦＰＰを含み、これを室温で１５分間、ビスホスホネートで予備インキュベートした。次いで、５μＬの［１４Ｃ］ＩＰＰの２５０μＭ溶液を加えて反応を開始させ、３７℃で２０分間インキュベートした。７５μＬのＨＣｌ／ＭｅＯＨを加えて反応を終了させた。３７℃での２回目の２０分間インキュベーションに続いて、アリルピロホスフェートを効果的に加水分解し、７５μＬの６Ｎ  ＮａＯＨを加えて反応混合物を中和し、５００μＬのヘキサンで抽出した。カウントするために、２００μＬの有機相をシンチレーション用バイアルに移した。データをＯｒｉｇｉｎ６．１（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ  Ｃｏｒｐ．、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ、ｗｗｗ．ＯｒｉｇｉｎＬａｂ．ｃｏｍ）で用量応答曲線にあてはめてＩＣ５０値を得た。
【０１３６】
［００２２０］ヒトＦＰＰＳ−ビスホスホネート複合体についての結晶化及びＸ線データ収集。Ｋ．Ｌ．Ｋａｖａｎａｇｈ等３によって記載されているものを若干修正した方法を基にして、Ｍｇ及びＢＰＨ−４６１か又はＢＰＨ−５２７と複合化した結晶ヒトＦＰＰＳ複合体を得た。ＦＰＰＳを、氷上で、２．５ｍＭビスホスホネート、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２で終夜インキュベートし、続いてドロップをセットした。２μＬのタンパク質溶液と、４０％（容積／容積）のポリエチレングリコール２，０００か又は４，０００及び０．１Ｍリン酸塩／クエン酸塩緩衝剤、ｐＨ４．２からなる１μＬの沈殿剤を混合して、シッティングドロップ法で結晶を室温で成長させた。ブルックヘブン国立シンクロトロン光源（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ）、ビームラインＸ２９（Ａ＝１．１Å）でＡＤＳＣ  Ｑ３１５  ＣＣＤ検出器を用いて１００Ｋで回折データを得た。データ収集の統計データを本明細書の実施例３の項で報告する。
【０１３７】
［００２２１］Ｔ．ブルーセイＦＰＰＳ−ビスホスホネート複合体の結晶化及びＸ線データ収集。最初の結晶化スクリーニング条件は、Ｍａｏ等４が報告している結晶化条件に基づいた。次いで、タンパク質濃度、沈殿剤の種類及び濃度、緩衝液の種類、緩衝液ｐＨ値及び金属イオン濃度の効果を最適化し、良好な回折パターンを示すタンパク質結晶を得た。５．５５ｍｇ／ｍＬのタンパク質を２．５ｍＭ  ＢＰＨ−４６１又はＢＰＨ−５２７、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２と混合し、氷上で終夜インキュベートし、続いてドロップをセットした。１μＬのＦＰＰＳ−ビスホスホネート混合液と、１００ｍＭ酢酸アンモニウム中の１０％（容積／容積）ＭＰＤ、ｐＨ５．７５からなる１μＬの沈殿剤を混合して、ハンギングドロップ法により室温で結晶を結晶化させた。データ収集の前に、抗凍結剤として４０％（容積／容積）ＭＰＤを加えた後、結晶をクリオループ（ｃｒｙｏｌｏｏｐ）にとりつけ、液体窒素中で急速冷凍させた。回折データを、ブルックヘブン国立シンクロトロン光源ビームラインＸ８Ｃ（λ＝１．１Å）でＡＤＳＣ  Ｑ４  ＣＣＤ検出器を用いて１００Ｋで得た。データ収集統計データを表６及び表７に報告する。
【０１３８】
［００２２２］ヒトＦＰＰＳ−ビスホスホネート複合体の構造決定。構造決定のために、分子置換法を用いて、ヒトＦＰＰＳ構造（１ＹＶ５）３からリセドロネートリガンドをマイナスしたものを検索モデルとして用いた。剛体リファインメントを、ＡＭｏＲｅ５を用いて得られたモデルに適用した。結晶構造を、Ｓｈｅｌｘｌ−９７６を用いてさらにリファインした。２Ｆｏ−Ｆｃ電子密度図においてプログラムＯ７を用いてリガンドの再構築とあてはめを実施した。具体的なリファインメント統計データは表４及び表５に含まれる。
【０１３９】
［００２２３］Ｔ．ブルーセイＦＰＰＳ−ビスホスホネート複合体の構造決定。Ｔ．ブルーセイＦＰＰＳ−ビスホスホネート複合体の結晶構造を、プログラムＡＭｏＲｅ５を用いた分子置換法により決定した。先に解明したＴ．ブルーセイＦＰＰＳ構造（２ＥＷＧ）８からミノドロネートリガンドをマイナスしたものを出発モデルとして使用した。ＣＮＳ９を用いて構造をさらにリファインした。ＣＮＳを用いたリファインメントとＣｏｏｔを用いた再構築を反復すると、その構造は表６及び表７に示す最終リファインメント統計データを有していた。
【０１４０】
［００２２４］２Ｄ  ＱＳＡＲ：分子記述子。阻害剤の構造を分子設計支援システム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）（ＭＯＥ）２００６．０８１０に持ち込んだ。具体的な分子記述子を計算するのに三次元構造を必要とした。０．０５ｋｃａｌ／モルの勾配及びＭＭＦＦ９４１１力場を用いて、すべての分子を最小化して三次元モデルを構築した。計算された２Ｄ分子記述子に加えて、ＧＧＰＰＳ及びＦＰＰＳ酵素ｐＩＣ５０値も用いた。ＭＯＥにおける、ＱＳＡＲのためのエキスパートシステムのＡｕｔｏＱｕａＳＡＲモジュール１２を用いた。これは、利用できる記述子のそれぞれの重要性を評価し、且つ、記述子の数の関数としてｒ２及びｑ２の軌道（リーブワンアウト交差検証されたｒ２）を得るために、より重要性の低いものを段階的に取り除くことによって、一連のモデルを反復して構築する。次いで、検討のために、最も少ない成分と最も高いｒ２及びｑ２を有するモデルを検討用に選択した。最終モデルのコンピュータアウトプットを表１０に示す。
【０１４１】
［００２２５］３Ｄ−ＱＳＡＲ：ＣｏＭＳＩＡ記述子及び分析。すべての化合物の配座異性体を、配座インポートユーティリティ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｍｐｏｒｔ  ｕｔｉｌｉｔｙ）を用いてＭＯＥ２００６．０８１０で作り出した。配列の際の偏りの可能性を避けるために、認知された特徴、具体的には：疎水性、芳香族性、カチオン、供与体及び受容体の重なりをベースにして、ファーマコフォア認知アルゴリズム（ＭＯＥで）を用いて、分子配列を作り出した。次いで推定ファーマコフォアのランク付けリストを初期配列１３のための基礎として供した。トップのファーマコフォア（カチオン性の特徴を含む）における分子の配列を選択し、ＭＯＥにおいて、ＴＡＦＦ（Ｔｒｉｐｏｓ）及びＭＭＦＦ９４力場で、フレキシブル配列モジュール（ｆｌｅｘｉｂｌｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｍｏｄｕｌｅ）を用いて連続的にリファインした。配列した分子及び電荷を、対応するＦＰＰＳ、ＧＧＰＰＳ及びＭＣＦ−７活性データとともにＳｙｂｙｌ７．３１４に取り込んだ。ＣｏＭＳＩＡ１５記述子を、ＦＰＰＳ  ｐＩＣ５０、ＧＰＰＳ  ｐＩＣ５０及びＳＬｏｇＰを含む、加えられた追加の記述子で配列した分子について計算した。成分のそれぞれの寄与を割り当てるためにＰＬＳを用いた。その結果はｑ２＝０．８０６（３成分）であった。コンピュータアウトプットを表１１に示す。
【０１４２】
［００２２６］次いで、このモデルが偶然に得られたものではないことを確認し、さらに、成分の最適数を検証するために、Ｓｙｂｙｌ７．３１４を用いて、そのデータについてスクランブル安定性試験を実施した。スクランブル法は、得られたモデルの予測性をモニターしながら、小さなランダム摂動をデータセットにかけた。不安定なモデルの予測性は一般に、小さな摂動であっても急速且つ過度に低下するが、他方堅牢なモデルはより高い予測安定性を示す１６。３成分での安定性を確認するアウトプット結果を表１１に示す。
【０１４３】
［００２２７］ホログラムＨＱＳＡＲ（ＨＱＳＡＲ）。ＣｏＭＳＩＡとは異なり、ホログラムＱＳＡＲは、一般的な三次元構造配列を必要とせず、比較し得る方法１７が凌駕することができない性能基準の役目を果たす、フラグメントをベースとした配列非依存型の方法である１７。ＨＱＳＡＲ法は、Ｓｙｂｙｌ７．３１４を用いて、構造的特徴と生物活性を相関させるために、拡張分子指紋（分子ホログラム）を用いる。６４の分子の構造をＳｙｂｙｌ７．３に取り込み、構造の検査及び検証を容易にするために、ＢＦＧＳ１８エネルギー最小化法により、０．０１ｋｃａｌ／モル勾配で最大で１０，０００ステップを用いて三次元座標を設けた。次いで構造を、所定のフラグメントサイズに自動的にフラグメント化した。次いで、３つのフラグメントを用い、フラグメントについての情報、重なりの可能性、及び構成要素のサブフラグメントを保持し、且つ、三次元構造情報を非明示的にコード化しながら、各分子についての分子ホログラム（指紋）を作り出した。次いでホログラムを、部分最小二乗法（ＰＬＳ）分析用に用いて、交差検証モデルを得た。ｑ２＝０．６７４、ｒ２＝０．８７１及び８３ビットの最適フラグメントサイズを有する最終モデルが得られた。
【０１４４】
この節で引用した文献：
［００２２８］１．  Ｓｏｎｇ，  Ｙ．；  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．；  Ｗａｎｇ，  Ｈ．；  Ｒａｋｅｒ，  Ａ．  Ｍ．；  Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋ，  Ｅ．；  Ｃｌａｒｋ，  Ａ．；  Ｍｏｒｉｔａ，  Ｃ．  Ｔ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｈｉｒａｌ  Ｐｈｏｓｐｈｏａｎｔｉｇｅｎｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  γδ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ２００４，  １４，  （１７），  ４４７１−７．
［００２２９］２．  Ｓｚａｂｏ，  Ｃ．  Ｍ．；  Ｍａｔｓｕｍｕｒａ，  Ｙ．；  Ｆｕｋｕｒａ，  Ｓ．；  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｓｅｎｇｕｐｔａ，  Ｓ．；  Ｃｉｅｓｌａｋ，  Ｊ．  Ａ．；  Ｌｏｆｔｕｓ，  Ｔ．  Ｃ．；  Ｌｅａ，  Ｃ．  Ｒ．；  Ｌｅｅ，  Ｈ．  Ｊ．；  Ｋｏｏｈａｎｇ，  Ａ．；  Ｃｏａｔｅｓ，  Ｒ．  Ｍ．；  Ｓａｇａｍｉ，  Ｈ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．，  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｂｙ  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ：  Ａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  Ｎｅｗ  Ｂｏｎｅ  Ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｐａｒａｓｉｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ．  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００２，  ４５，  （１１），  ２１８５−９６．
［００２３０］３．  Ｋａｖａｎａｇｈ，  Ｋ．  Ｌ．；  Ｇｕｏ，  Ｋ．；  Ｄｕｎｆｏｒｄ，  Ｊ．  Ｅ．；  Ｗｕ，  Ｘ．；  Ｋｎａｐｐ，  Ｓ．；  Ｅｂｅｔｉｎｏ，  Ｆ．  Ｈ．；  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｍ．  Ｊ．；  Ｒｕｓｓｅｌｌ，  Ｒ．  Ｇ．；  Ｏｐｐｅｒｍａｎｎ，  Ｕ．，  Ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ａｓ  ａｎｔｉｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ｄｒｕｇｓ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２００６，  １０３，  （２０），  ７８２９−３４．
［００２３１］４．  Ｍａｏ，  Ｊ．；  Ｇａｏ，  Ｙ．  Ｇ．；  Ｏｄｅｈ，  Ｓ．；  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  Ｈ．；  Ｍｏｎｔａｌｖｅｔｔｉ，  Ａ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．，  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆａｒｎｅｓｙｌ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｒｎａ  ｂｒｕｃｅｉ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ２００４，  ６０，  （Ｐｔ  １０），  １８６３−６．
［００２３２］５．  Ｎａｖａｚａ，  Ｊ．，  ＡＭｏＲｅ：  ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｐａｃｋａｇｅ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ．
Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇ．  ｓｅｃｔ．  Ａ  １９９４，  ５０，  １５７−１６３．
［００２３３］６．  Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，  Ｇ．；  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，  Ｔ．，  ＳＨＥＬＸＬ：  Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １９９７，  ２７７，  ３１９−３４３．
［００２３４］７．  Ｊｏｎｅｓ，  Ｔ．  Ａ．；  Ｚｏｕ，  Ｊ．  Ｙ．；  Ｃｏｗａｎ，  Ｓ．  Ｗ．；  Ｋｊｅｌｄｇａａｒｄ，  Ｍ．，  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｍａｐｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｒｒｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ａ  １９９１，  ４７，  １１０−１１９．
［００２３５］８．  Ｍａｏ，  Ｊ．；  Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ，  Ｓ．；  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．；  Ｃａｏ，  Ｒ．；  Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｓｏｎｇ，  Ｙ．；  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．；  Ｍｅｉｎｔｓ，  Ｇ．  Ａ．；  Ｇａｏ，  Ｙ．  Ｇ．；  Ｍｕｋｋａｍａｌａ，  Ｄ．；  Ｈｕｄｏｃｋ，  Ｍ．  Ｐ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．，  Ｓｏｌｉｄ−ｓｔａｔｅ  ＮＭＲ，  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ，  ａｎｄ  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ａｎｄ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ−ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  ２００６，  １２８，  （４５），  １４４８５−９７．
［００２３６］９．  Ｂｒｕｎｇｅｒ，  Ａ．  Ｔ．；  Ａｄａｍｓ，  Ｐ．  Ｄ．；  Ｃｌｏｒｅ，  Ｇ．  Ｍ．；  ＤｅＬａｎｏ，  Ｗ．  Ｌ．；  Ｇｒｏｓ，  Ｐ．；  Ｇｒｏｓｓｅ−Ｋｕｎｓｔｌｅｖｅ，  Ｒ．  Ｗ．；  Ｊｉａｎｇ，  Ｊ．  Ｓ．；  Ｋｕｓｚｅｗｓｋｉ，  Ｊ．；  Ｎｉｌｇｅｓ，  Ｍ．；  Ｐａｎｎｕ，  Ｎ．  Ｓ．；  Ｒｅａｄ，  Ｒ．  Ｊ．；  Ｒｉｃｅ，  Ｌ．  Ｍ．；  Ｓｉｍｏｎｓｏｎ，  Ｔ．；  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｇ．  Ｌ．，  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ＆  ＮＭＲ  ｓｙｓｔｅｍ：  Ａ  ｎｅｗ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｓｕｉｔｅ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  １９９８，  ５４，  （Ｐｔ  ５），  ９０５−２１．
［００２３７］１０．  ＭＯＥ，  ２００６．０８；  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｉｎｃ．：  Ｍｏｎｔｒｅａｌ，  Ｑｕｅｂｅｃ，  ２００６．
［００２３８］１１．  Ｈａｌｇｒｅｎ，  Ｔ．  Ａ．；  Ｎａｃｈｂａｒ，  Ｒ．  Ｂ．，  ＭＭＦ９４：  Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｆｏｒｃｅ  ｆｉｅｌｄ．  Ｂｒｉｄｇｉｎｇ  ｔｈｅ  ｇａｐ  −  Ｆｒｏｍ  ｓｍａｌｌ  ｏｒｇａｎｉｃｓ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ｏｆ  Ｐａｐｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １９９６，  ２１１，  ７０−ＣＯＭＰ．
［００２３９］１２．  Ｇｏｔｏ，  Ｊ．  ＡｕｔｏＱｕａＳＡＲ  ２００６．０８，  Ｒｙｏｋａ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．：  Ｔｏｋｙｏ，  Ｊａｐａｎ，  ２００６．
［００２４０］１３．  Ｚｈｕ，  Ｌ．  Ｌ．；  Ｈｏｕ，  Ｔ．  Ｊ．；  Ｃｈｅｎ，  Ｌ．  Ｒ．；  Ｘｕ，  Ｘ．  Ｊ．，  ３Ｄ  ＱＳＡＲ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ．  Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｆ  Ｃｏｍｐｕｔ  Ｓｃｉ  ２００１，  ４１，  （４），  １０３２−４０．
［００２４１］１４．  Ｓｙｂｙｌ  ７．３，  Ｔｒｉｐｏｓ，  Ｉｎｃ．：  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ．
［００２４２］１５．  Ｋｌｅｂｅ，  Ｇ．；  Ａｂｒａｈａｍ，  Ｕ．；  Ｍｉｅｔｚｎｅｒ，  Ｔ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ  ｉｎｄｉｃｅｓ  ｉｎ  ａ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  （ＣｏＭＳＩＡ）  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｔｈｅｉｒ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９９４，  ３７，  （２４），  ４１３０−４６．
［００２４３］１６．  Ｔｒｉｐｏｓ  Ｂｏｏｋｓｈｅｌｆ  ７．３，  Ｔｒｉｐｏｓ，  Ｉｎｃ．：  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ．
［００２４４］１７．  Ｇｅｄｅｃｋ，  Ｐ．；  Ｒｏｈｄｅ，  Ｂ．；  Ｂａｒｔｅｌｓ，  Ｃ．，  ＱＳＡＲ−−ｈｏｗ  ｇｏｏｄ  ｉｓ  ｉｔ  ｉｎ  ｐｒａｃｔｉｃｅ？
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｄｅｓｃｒｉｐｔｏｒ  ｓｅｔｓ  ｏｎ  ａｎ  ｕｎｂｉａｓｅｄ  ｃｒｏｓｓ  ｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｒｐｏｒａｔｅ  ｄａｔａ  ｓｅｔｓ．  Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｆ  Ｍｏｄｅｌ  ２００６，  ４６，  （５），  １９２４−３６．
［００２４５］１８．  Ｐｒｅｓｓ，  Ｗ．  Ｈ．，  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  ｒｅｃｉｐｉｅｓ  ｉｎ  Ｃ：  ｔｈｅ  ａｒｔ  ｏｆ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８８；  ｐ  ３２４．
［００２４６］１９．  Ｗｉｄｌｅｒ，  Ｌ．；  Ｊａｅｇｇｉ，  Ｋ．  Ａ．；  Ｇｌａｔｔ，  Ｍ．；  Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｋ．；  Ｂａｃｈｍａｎｎ，  Ｒ．；  Ｂｉｓｐｉｎｇ，  Ｍ．；  Ｂｏｒｎ，  Ａ．  Ｒ．；  Ｃｏｒｔｅｓｉ，  Ｒ．；  Ｇｕｉｇｌｉａ，  Ｇ．；  Ｊｅｋｅｒ，  Ｈ．；  Ｋｌｅｉｎ，  Ｒ．；  Ｒａｍｓｅｉｅｒ，  Ｕ．；  Ｓｃｈｍｉｄ，  Ｊ．；  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，  Ｇ．；  Ｓｅｌｔｅｎｍｅｙｅｒ，  Ｙ．；  Ｇｒｅｅｎ，  Ｊ．  Ｒ．，  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｆｅｍｉｎａｌ  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｆｒｏｍ  Ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  （Ａｒｅｄｉａ）  ｔｏ  Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ  （Ｚｏｍｅｔａ）．  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００２，  ４５，  （１７），  ３７２１−３８．
【０１４５】
実施例４．インビボでの腫瘍に対するものを含む制癌活性
［００２４７］腫瘍細胞侵襲性及びインビボでの結果。本発明者らは、親油性ビスホスホネートが、腫瘍細胞侵襲性に対して顕著な効果を有するかどうかを検討した。マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）侵襲性アッセイにおいて、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、侵襲性ヒト乳癌の腺癌細胞株を、ビスホスホネートと培養すると、親油性ビスホスホネート、ＢＰＨ−７１６は、ゾレドロネート（ＢＰＨ−７１６、約３０ｎＭ  ＩＣ５０；対ゾレドロネート、約４０μＭ  ＩＣ５０）より、約１０００倍阻害性が高かった。そうした化合物がインビボで活性を有しているかどうかを判断するために、本発明者らは、マウス異種移植片系（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｓｙｓｔｅｍ）のＳＫ−ＥＳ−１肉腫細胞（Ｋｕｂｏ２００７）を使用した。ゾレドロネートは、対照に対して癌細胞増殖の有意の（ｐ＜０．０１）低減を引き起こしたが、親油性ビスホスホネート（ＢＰＨ−７１５）の効果はより顕著であり（ｐ＝０．０３２対ゾレドロネート）、体重減少又は他の副作用は認められなかった。マウスγδＴ細胞には、ＩＰＰによる活性化に必要なＶγ２Ｖδ２Ｔ細胞受容体が欠如しているので、このマウスモデルにおける活性は、癌細胞の増殖及び侵襲性への直接活性に起因すると考えることができる。これらの結果は、より親油性のビスホスホネートは、インビトロとインビボの両方で、腫瘍細胞増殖／侵襲性に対して強力な直接的活性を有することを実証している。これらは、ヒトＴ細胞活性化において高い効能も有することができ、これはＩＰＰ蓄積に起因すると考えられる。
【０１４６】
［００２４８］インビボでの腫瘍細胞モデル。実験は、基本的にはＫｕｂｏ２００６等４７が記載されているようにして実施した。１．５×１０７細胞を、４匹の生後６週間の無胸腺ヌードマウス（ＣＬＥＡ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）の右側腹部に皮下注射して、ヒトＳＫ−ＥＳ−１細胞の異種移植を開始した。マウスに、５μｇのゾレドロネート、ＢＰＨ−７１５又は生理的食塩水を腹腔内注射により毎日施した。腫瘍の最小径及び最大径並びに体重を毎週測定した。以下の式：体積（ｍｍ３）＝（最小径）２×（最大径）／２を用いて腫瘍体積を算出した。統計的有意性を、Ｓｔａｔｃｅｌ（ＯＭＳ  Ｌｔｄ．、Ｓａｉｔａｍａ、Ｊａｐａｎ）を用いたワンウェイＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ法で判定した。ｐ＜０．０５は有意であると見なされた。
【０１４７】
文献：
［００２４９］Ｋｕｂｏ，  Ｔ．，  Ｓｈｉｍｏｓｅ，  Ｓ．，  Ｍａｔｓｕｏ，  Ｔ．，  Ｓａｋａｉ，  Ａ．  ＆  Ｏｃｈｉ，  Ｍ．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ，  ｍｉｎｏｄｒｏｎａｔｅ，  ｉｎ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐ３８  ｍｉｔｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｒ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｂｏｎｅ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ．
Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  （２００７）．
［００２５０］Ｋｕｂｏ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ，  ｍｉｎｏｄｒｏｎａｔｅ，  ｏｎ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｖａｒｉｅｔｙ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｂｏｎｅ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ．  Ｏｒｔｈｏｐ．  Ｒｅｓ．  ２４，  １１３８−４４  （２００６）．
【０１４８】
実施例５．化合物の構造式
［００２５１］本明細書及び図面においてほかに提供される化合物の構造式に加えて、具体的な構造式を以下に示す。
【０１４９】
【化６】
2010523709.tif 000019
【０１５０】
【化７】
2010523709.tif 000020
【０１５１】
【化８】
2010523709.tif 000021
【０１５２】
【化９】
2010523709.tif 000022
【０１５３】
［００２５２］図２Ｄの具体的データを以下の表１２にさらに示す。
【０１５４】
【表１２】
2010523709.tif 000023
【０１５５】
参照による本明細書への組み込み及び変更形態に関する記述。
［００２５３］本出願を通したすべての文献、例えば発行済み特許若しくは許諾済み特許又は均等物；特許出願公開を含む特許文献；及び非特許文献又は他の原資料の全体を、各文献が、本出願における開示と少なくとも部分的に、矛盾することのない程度に個別に参照により本明細書に組み込まれているかのように（例えば、部分的に矛盾する文献は、その文献の部分的に矛盾する部分を除いて、参照により本明細書に組み込まれる）、参照により本明細書に組み込む。
【０１５６】
［００２５４］本明細書で置換基のグループが開示されている場合、そのグループメンバーの任意の異性体、鏡像異性体及びジアステレオマーを含む、そのグループ及びすべての下位グループのすべての下位メンバーが別個に開示されているものと理解されたい。本明細書でマーカシュグループ又は他のグループ化が用いられている場合、そのグループのすべての個別メンバー並びに可能性のあるすべての組合せ及び下位組合せは、本開示に個別に含まれるものとする。いくつかの特定のグループの変数定義が本明細書で記載されている。特定のグループの変数定義のすべての組合せ及び下位組合せは、本開示に個別に含まれるものとする。ある化合物が、例えば式又は化学名において、その化合物の具体的な異性体、鏡像異性体又はジアステレオマーが指定されない形で本明細書において開示されている場合、その記述は、個別に又は任意の組合せで、記載されている化合物のそれぞれの異性体及び鏡像異性体を含むものとする。さらに、別段の指定のない限り、本明細書で開示の化合物のすべての同位性変形体は本開示に包含されるものとする。例えば、開示された分子中の任意の１個又は複数の水素を、重水素又は三重水素で置き換えることができることを理解されよう。ある分子の同位性変形体は、分子に関するアッセイの標準品として、また、分子又はその使用に関連した化学的及び生物学的研究において一般に有用である。放射性同位体を担持するものを含む同位性変形体は、診断アッセイや治療学において有用である。そうした同位性変形体の作製方法は当業界で周知である。当業者が同一化合物を異なって呼ぶことができることが知られているような化合物の具体的な名称は例示的なものであるとする。
【０１５７】
［００２５５］本明細書で記載又は例示した化合物のどの製剤又は組合せも、別段の言及のない限り、本発明の実施において使用することができる。
【０１５８】
［００２５６］本明細書において、ある範囲、例えば温度範囲、時間範囲、組成物若しくは濃度の範囲又は他の値の範囲が与えられている場合は常に、すべての中間体範囲及び下位範囲、並びにその与えられた範囲に含まれるすべての個別の値は、本開示に包含されるものとする。本明細書の記載に含まれるある範囲又は下位範囲中の任意の下位範囲又は個別の値を、本明細書の特許請求の範囲から排除できることを理解されよう。
【０１５９】
［００２５７］本明細書で挙げたすべての特許及び出版物は、本発明にふさわしい当業者のレベルを示すものである。本明細書で引用した文献のその全体を、いくつかの場合その出願日現在での最新技術を示すために、参照により本明細書に組み込む。この情報は、必要なら、従来技術である特定の実施形態を排除する（例えば、放棄する）ために本明細書で用いることができるものとする。例えば、ある化合物が特許請求されている場合、本明細書で開示されている文献に（特に参照されている特許文献に）開示されている特定の化合物を含む当業界で知られている化合物は、本発明の特許請求の範囲に包含されないことを理解すべきである。
【０１６０】
［００２５８］「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語が本明細書で用いられている場合、それらは、参照された記載特性、整数、ステップ又は成分の存在を指定するものであり、１つ又は複数の他の特性、整数、ステップ、成分若しくはそのグループの存在又は追加を排除するものではないと解釈されるべきである。本明細書で用いる、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」又は「特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」と同義語であり、包含的であるか又は末端が解放された（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）ものであり、挙げられていない追加の要素又は方法ステップを排除するものではない。本明細書で用いる、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、特許請求項要素において指定されていないどの要素、ステップ又は構成成分も排除する。本明細書で用いる、「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、特許請求項の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又はステップを排除しない。本明細書での各事例では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」と均等な用語はどれも、他の２つの用語のいずれかで置き換えて、範囲の差異を示すことができるそれぞれの意味を表すことができる。本明細書で例示的に適切に記載した本発明は、本明細書で具体的に開示されていないいずれの１つ又は複数の要素、１つ又は複数の限定がなくても実施することができる。
【０１６１】
［００２５９］種々の具体的且つ好ましい実施例及び技術を参照して、本発明を説明してきた。しかし、本発明の趣旨及び範囲内であれば、多くの変更及び修正を加えることができることを理解すべきである。本明細書で具体的に記載されているもの以外の方法、装置、装置要素、材料、手順及び技術を、本明細書で広く開示されているものとして、過大な実験を用いることなく、本発明の実施において適用することができることは当業者に明らかであろう。例えば、当業者は、具体的に例示されているもの以外の出発原料、生物学的材料、試薬、合成方法、精製方法、分析方法、アッセイ方法及び生物学的方法を、過大な実験を用いることなく、本発明の実施において用いることができることを理解されよう。本明細書で記載の方法、装置、装置要素、材料、手順及び技術の当業界で知られているすべての機能的均等物は、本発明に包含されるものとする。本発明は、これらに限定されないが、例又は説明図で与えられた図面で示されるか又は本明細書で例示されるいずれをも含む、開示された具体的な実施形態によって限定されるものではない。いくつかのケースでは、好ましい実施形態及び任意選択の特性によって本発明を具体的に開示してきたが、当業者は、本明細書の革新的な考え方に修正及び変更を加えることができ、且つ、そうした修正及び変更は添付の特許請求の範囲でさらに規定するような本発明の範囲内にあると考えられることを理解すべきである。
【０１６２】
文献
［００２６０］２００６年３月１７日出願の米国出願第１１６８７５７０号明細書；２００６年３月１７日出願のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０７／６４２３９号パンフレット；２００６年３月１７日出願の米国出願第６０７８３４９１号明細書；２００５年１０月７日出願の米国出願第１１／２４５，６１２号明細書（２００６年４月１３日公開の米国特許出願公開第２００６００７９４８７号明細書も参照されたい）；２００４年１０月８日出願の米国出願第６０／６１７，１０８号明細書；２００５年１０月７日出願のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０５／０３６４２５号パンフレット（２００６年４月１３日公開の国際公開第２００６／０３９７２１号パンフレットも参照されたい）；２００５年５月２６日公開の米国特許出願公開第２００５０１１３３３１号明細書；特に上記のそれぞれを本明細書に矛盾しない程度にその全体を参照により本明細書に組み込む。
［００２６１］Ｈｕｄｏｃｋ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．  （２００６）．  Ｅ６２，  ｏ８４３−ｏ８４５．
［００２６２］Ｃａｏ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．  （２００６）．  Ｅ６２，  ｏ１００３−ｏ１００５
［００２６３］Ｚｈａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．  （２００６）．  Ｅ６２，  ｏ１００６−ｏ１００８
［００２６４］Ｃａｏ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．  （２００６）．  Ｅ６２，  ｏ１０５５−ｏ１０５７
［００２６５］Ｚｈａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２００６  Ｓｅｐ  ２１；４９（１９）：５８０４−１４．
［００２６６］（１）  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｐ．  Ｎ．；  Ｇｅｕｓｅｎｓ，  Ｐ．；  Ｒｉｂｏｔ，  Ｃ．；  Ｓｏｌｉｍａｎｏ，  Ｊ．  Ａ．；  Ｆｅｒｒｅｒ−Ｂａｒｒｉｅｎｄｏｓ，  Ｊ．；  Ｇａｉｎｅｓ，  Ｋ．；  Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎ，  Ｎ．；  Ｍｅｌｔｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  Ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ  ｐｒｏｄｕｃｅｓ  ｇｒｅａｔｅｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｔｈａｎ  ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ  ｏｎ  ｂｏｎｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｌｏｗ  ｂｏｎｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ＥＦＦＥＣＴ  （ＥＦｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＦＯＳＡＭＡＸ  ｖｅｒｓｕｓ  ＥＶＩＳＴＡ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｔｒｉａｌ）  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．  Ｊ．  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．  ２００４，  ２５５，  ５０３−５１１．
［００２６７］（２）  Ｖａｓｉｒｅｄｄｙ，  Ｓ．；  Ｔａｌｗａｋａｒ，  Ａ．；  Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｈ．；  Ｍｅｈａｎ，  Ｒ．；  Ｓｗｉｎｓｏｎ，  Ｄ．  Ｒ．  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｐａｉｎ  ｉｎ  Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｏｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ．  Ｃｌｉｎ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２００３，  ２２，  ３７６−３８０．
［００２６８］（３）  Ｄａｗｓｏｎ，  Ｎ．  Ａ．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｂｅｎｅｆｉｔ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｂｏｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｅｘｐｅｒｔ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．  ２００３，  ４，  ７０５−７１６．
［００２６９］（４）  Ｒｏｓｅｎ，  Ｌ．  Ｓ．；  Ｇｏｒｄｏｎ，  Ｄ．  Ｈ．；  Ｄｕｇａｎ，  Ｗ．  Ｊｒ．；  Ｍａｊｏｒ，  Ｐ．；  Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，  Ｐ．  Ｄ．；  Ｐｒｏｖｅｎｃｈｅｒ，  Ｌ．；  Ｋａｍｉｎｓｋｉ，  Ｍ．；  Ｓｉｍｅｏｎｅ，  Ｊ．；  Ｓｅａｍａｎ，  Ｊ．；  Ｃｈｅｎ，  Ｂ．  Ｌ．；  Ｃｏｌｅｍａｎ，  Ｒ．  Ｅ．  Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｓ  ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ｔｏ  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｏｓｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２００４，  １００，  ３６−４３．
［００２７０］（５）  Ｃｒｏｍａｒｔｉｅ，  Ｔ．  Ｈ．；  Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｋ．  Ｊ．；  Ｇｒｏｓｓｍａｎ，  Ｊ．  Ｎ．  Ｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｉｔｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｈｅｒｂｉｃｉｄａｌ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈｙｓ．  １９９９，  ６３，  １１４−１２６．
［００２７１］（６）  Ｃｒｏｍａｒｔｉｅ，  Ｔ．  Ｈ．；  Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｋ．  Ｊ．  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｐｌａｎｔｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ．  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  ５，７５６，４２３，  Ｍａｙ  ２６，  １９９８．
［００２７２］（７）  ｖａｎ  Ｂｅｅｋ，  Ｅ．；  Ｐｉｅｔｅｒｍａｎ，  Ｅ．；  Ｃｏｈｅｎ，  Ｌ．；  Ｌｏｗｉｋ，  Ｃ．；  Ｐａｐａｐｏｕｌｏｓ，  Ｓ．  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅ／ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ  ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅｉｒ  ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １９９９，  ２５５，  ４９１−４９４．
［００２７３］（８）  ｖａｎ  Ｂｅｅｋ，  Ｅ．；  Ｐｉｅｔｅｒｍａｎ，  Ｅ．；  Ｃｏｈｅｎ，  Ｌ．；  Ｌｏｗｉｋ，  Ｃ．；  Ｐａｐａｐｏｕｌｏｓ，  Ｓ．  Ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｓ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １９９９，  ２６４，  １０８−１１１．
［００２７４］（９）  Ｋｅｌｌｅｒ，  Ｒ．  Ｋ．；  Ｆｌｉｅｓｌｅｒ，  Ｓ．  Ｊ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｍｉｎｏｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ａｃｔｉｏｎ：  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １９９９，  ２６６，  ５６０−５６３．
［００２７５］（１０）Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ，  Ｊ．  Ｄ．；  Ｂｏｓｔｅｄｏｒ，  Ｒ．  Ｇ．；  Ｍａｓａｒａｃｈｉａ，  Ｐ．  Ｊ．；  Ｒｅｓｚｋａ，  Ａ．  Ａ．；  Ｒｏｄａｎ，  Ｇ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｍｉｎｏｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ａｃｔｉｏｎ：  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２０００，  ３７３，  ２３１−２４１．
［００２７６］（１１）Ｇｒｏｖｅ，  Ｊ．  Ｅ．；  Ｂｒｏｗｎ，  Ｒ．  Ｊ．；  Ｗａｔｔｓ，  Ｄ．  Ｊ．  Ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ａｍｉｎｏｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ  ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ  ｉｓ  ｔｈｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ．  Ｊ．  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．  ２０００，  １５，  ９７１−９８１．
［００２７７］（１２）Ｄｕｎｆｏｒｄ，  Ｊ．  Ｅ．；  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｋ．；  Ｃｏｘｏｎ，  Ｆ．  Ｐ．；  Ｌｕｃｋｍａｎ，  Ｓ．  Ｐ．；  Ｈａｈａｎ，  Ｆ．  Ｍ．；  Ｐｏｕｌｔｅｒ，  Ｃ．  Ｄ．；  Ｅｂｅｔｉｎｏ，  Ｆ．  Ｈ．；  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｍ．  Ｊ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｙ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．  ２００１，  ２９６，  ２３５−２４２．
［００２７８］（１３）Ｌｕｃｋｍａｎ，  Ｓ．  Ｐ．；  Ｈｕｇｈｅｓ，  Ｄ．  Ｅ．；  Ｃｏｘｏｎ，  Ｆ．  Ｐ．；  Ｇｒａｈａｍ，  Ｒ．；  Ｒｕｓｓｅｌｌ，  Ｇ．；  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｍ．  Ｊ．  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＧＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ｒａｓ．  Ｊ．  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．  １９９８，  １３，  ５８１−５８９．
［００２７９］（１４）Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｊ．  Ｅ．；  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｍ．  Ｊ．；  Ｈａｌａｓｙ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｌｕｃｋｍａｎ，  Ｓ．  Ｐ．；  Ｈｕｇｈｅｓ，  Ｄ．  Ｅ．；  Ｍａｓａｒａｃｈｉａ，  Ｐ．  Ｊ．；  Ｗｅｓｏｌｏｗｓｋｉ，  Ｇ．；  Ｒｕｓｓｅｌｌ，  Ｒ．  Ｇ．；  Ｒｏｄａｎ，  Ｇ．  Ａ．；  Ｒｅｓｚｋａ，  Ａ．  Ａ．  Ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ：  ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｉｏｌ，  ａｎ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ  ｐａｔｈｗａｙ，  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，  ｂｏｎｅ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｋｉｎａｓｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９９９，  ９６，  １３３−１３８．
［００２８０］（１５）ｖａｎ  Ｂｅｅｋ，  Ｅ．；  Ｌｏｗｉｋ，  Ｃ．；  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｌｕｉｊｍ，  Ｇ．；  Ｐａｐａｐｏｕｌｏｓ，  Ｓ．  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  ｆｅｔａｌ  ｂｏｎｅ  ｅｘｐｌａｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：  Ａ  ｃｌｕｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｊ．  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．  １９９９，  １４，  ７２２−７２９．
［００２８１］（１６）Ｍｏｎｔａｌｖｅｔｔｉ，  Ａ．；  Ｂａｉｌｅｙ，  Ｂ．  Ｎ．；  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｓｅｖｅｒｉｎ，  Ｇ．  Ｗ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００１，  ２７６，  ３３９３０−３３９３７．
［００２８２］（１７）Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｇｏｍｅｚ，  Ａ．  Ｏ．；  Ｍａｏ，  Ｊ．；  Ｍｅｉｎｔｓ，  Ｇ．  Ａ．；  ｖａｎ  Ｂｒｕｓｓｅｌ，  Ｅ．  Ｍ．；  Ｂｕｒｚｙｎｓｋａ，  Ａ．；  Ｋａｆａｒｓｋｉ，  Ｐ．；  Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｐａｃａｎｏｗｓｋａ，  Ｄ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．  ３−Ｄ  ＱＳＡＲ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｂｙ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００３，  ４６，  ５１７１−５１８３．
［００２８３］（１８）Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｇｒｉｍｌｅｙ，  Ｊ．  Ｓ．；  Ｌｅｗｉｓ，  Ｊ．  Ｃ．；  Ｈｅａｔｈ，  Ｈ．  Ｔ．  ＩＩＩ；  Ｂａｉｌｅｙ，  Ｂ．  Ｎ．；  Ｋｅｎｄｒｉｃｋ，  Ｈ．；  Ｙａｒｄｌｅｙ，  Ｖ．；  Ｃａｌｄｅｒａ，  Ａ．；  Ｌｉｒａ，  Ｒ．；  Ｕｒｂｉｎａ，  Ｊ．  Ａ．；  Ｍｏｒｅｎｏ，  Ｓ．  Ｎ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．；  Ｃｒｏｆｔ，  Ｓ．  Ｌ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ，  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ，  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ，  Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ，  ａｎｄ  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ：  Ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００１，  ４４，  ９０９−９１６．
［００２８４］（１９）Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｋｅｎｄｒｉｃｋ，  Ｈ．；  ｄｅ  Ｌｕｃａ−Ｆｒａｄｌｅｙ，  Ｋ．；  Ｌｅｗｉｓ，  Ｊ．  Ｃ．；  Ｇｒｉｍｌｅｙ，  Ｊ．  Ｓ．；  ｖａｎ  Ｂｒｕｓｓｅｌ，  Ｅ．  Ｍ．；  Ｏｌｓｅｎ，  Ｊ．  Ｒ．；  Ｍｅｉｎｔｓ，  Ｇ．  Ａ．；  Ｂｕｒｚｙｎｓｋａ，  Ａ．；  Ｋａｆａｒｓｋｉ，  Ｐ．；  Ｃｒｏｆｔ，  Ｓ．  Ｌ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ
Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  ４５，  ２９０４−２９１４．
［００２８５］（２０）Ｍｏｒｅｎｏ，  Ｂ．；  Ｂａｉｌｅｙ，  Ｂ．  Ｎ．；  Ｌｕｏ，  Ｓ．；  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｋｕｈｌｅｎｓｃｈｍｉｄｔ，  Ｍ．；  Ｍｏｒｅｎｏ，  Ｓ．  Ｎ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．  ３１Ｐ  ＮＭＲ  ｏｆ  ａｐｉｃｏｍｐｌｅｘａｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ  ｏｎ  Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ  ｇｒｏｗｔｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．  ２００１，  ２８４，  ６３２−６３７．
［００２８６］（２１）Ｇｈｏｓｈ，  Ｓ．；  Ｃｈａｎ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｌｅａ，  Ｃ．  Ｒ．；  Ｍｅｉｎｔｓ，  Ｇ．  Ａ．；  Ｌｅｗｉｓ，  Ｊ．  Ｃ．；  Ｔｏｖｉａｎ，  Ｚ．  Ｓ．；  Ｆｌｅｓｓｎｅｒ，  Ｒ．  Ｍ．；  Ｌｏｆｔｕｓ，  Ｔ．  Ｃ．；  Ｂｒｕｃｈｈａｕｓ，  Ｉ．；  Ｋｅｎｄｒｉｃｋ，  Ｈ．；  Ｃｒｏｆｔ，  Ｓ．  Ｌ．；  Ｋｅｍｐ，  Ｒ．  Ｇ．；  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  Ｅ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ  ａｎｄ  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００４，  ４７，  １７５−１８７．
［００２８７］（２２）Ｙａｒｄｌｅｙ，  Ｖ．；  Ｋｈａｎ，  Ａ．  Ａ．；  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｓｌｉｆｅｒ，  Ｔ．  Ｒ．；  Ａｒａｕｊｏ，  Ｆ．  Ｇ．；  Ｍｏｒｅｎｏ，  Ｓ．  Ｎ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．；  Ｃｒｏｆｔ，  Ｓ．  Ｌ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ  ａｎｄ  Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ２００２，  ４６，  ９２９−９３１．
［００２８８］（２３）Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，  Ｎ．；  Ｂａｉｌｅｙ，  Ｂ．  Ｎ．；  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｂ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．；  Ｕｒｂｉｎａ，  Ｊ．  Ａ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．  Ｒａｄｉｃａｌ  ｃｕｒｅ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ．  Ｊ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．  ２００２，  １８６，  １３８−１４０．
［００２８９］（２４）Ｇａｒｚｏｎｉ，  Ｌ．  Ｒ．；  Ｃａｌｄｅｒａ，  Ａ．；  Ｍｅｉｒｅｌｌｅｓ，  Ｍ．  Ｎ．  Ｌ．；  ｄｅ  Ｃａｓｔｒｏ，  Ｓ．  Ｌ．；  Ｍｅｉｎｔｓ，  Ｇ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．；  Ｕｒｂｉｎａ，  Ｊ．  Ａ．  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ  ｏｎ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ．  Ｉｎｔｌ．  Ｊ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ２００４，  ２３，  ２７３−２８５．
［００２９０］（２５）Ｇａｒｚｏｎｉ，  Ｌ．  Ｒ．；  Ｗａｇｈａｂｉ，  Ｍ．  Ｃ．；  Ｂａｐｔｉｓｔａ，  Ｍ．  Ｍ．；  ｄｅ  Ｃａｓｔｒｏ，  Ｓ．  Ｌ；  Ｍｅｉｒｅｌｌｅｓ，  Ｍ．  Ｎ．  Ｌ．；  Ｂｒｉｔｔｏ，  Ｃ．；  Ｄｏｃａｍｐｏ，  Ｒ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．；  Ｕｒｂｉｎａ，  Ｊ．  Ａ．  Ａｎｔｉｐａｒａｓｉｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  Ｃｈａｇａｓ’  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｉｎｔｌ．  Ｊ．
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ２００４，  ２３，  ２８６−２９０．
［００２９１］（２６）Ｗａｎｇ，  Ｌ．；  Ｋａｍａｔｈ，  Ａ．；  Ｄａｓ，  Ｈ．；  Ｌｉ，  Ｌ．；  Ｂｕｋｏｗｓｋｉ，  Ｊ．  Ｆ．  Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｖｇａｍｍａ２Ｖｄｅｌｔａ２  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００１，  １０８，  １３４９−１３５７．
［００２９２］（２７）Ｋｕｎｚｍａｎｎ，  Ｖ．；  Ｂａｕｅｒ，  Ｅ．；  Ｆｅｕｒｌｅ，  Ｊ．；  Ｗｅｉｓｓｉｎｇｅｒ，  Ｆ．；  Ｔｏｎｙ，  Ｈ．  Ｐ．；  Ｗｉｌｈｅｌｍ，  Ｍ．  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  γδ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａｍｉｎｏｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．  Ｂｌｏｏｄ  ２０００，  ９６，  ３８４−３９２．
［００２９３］（２８）Ｋａｔｏ，  Ｙ．；  Ｔａｎａｋａ，  Ｙ．；  Ｍｉｙａｇａｗａ，  Ｆ．；  Ｙａｍａｓｈｉｔａ，  Ｓ．；  Ｍｉｎａｔｏ，  Ｎ．  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｇａｍｍａｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００１，  １６７，  ５０９２−５０９８．
［００２９４］（２９）Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｋ．；  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｍ．  Ｊ．  Ｓｔａｔｉｎｓ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇａｍｍａｄｅｌｔａ−Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ｊ．  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．  ２００４，  １９，  ２７８−２８８．
［００２９５］（３０）Ｓａｎｄｅｒｓ，  Ｊ．  Ｍ．；  Ｇｈｏｓｈ，  Ｓ．；  Ｃｈａｎ，  Ｊ．  Ｍ．  Ｗ．；  Ｍｅｉｎｔｓ，  Ｇ．；  Ｗａｎｇ，  Ｈ．；  Ｒａｋｅｒ，  Ａ．  Ｍ．；  Ｓｏｎｇ，  Ｙ．；  Ｃｏｌａｎｔｉｎｏ，  Ａ．；  Ｂｕｒｚｙｎｓｋａ，  Ａ；  Ｋａｆａｒｓｋｉ，  Ｐ．；  Ｍｏｒｉｔａ，  Ｃ．  Ｔ．；  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，  Ｅ．  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｆｏｒ  ｇａｍｍａｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００４，  ４７，  ３７５−３８４．
［００２９６］（３１）Ｗｉｌｈｅｌｍ，  Ｍ．；  Ｋｕｎｚｍａｎｎ，  Ｖ．；  Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ｓ．；  Ｒｅｉｍｅｒ，  Ｐ．；  Ｗｅｉｓｓｉｎｇｅｒ，  Ｆ．；  Ｒｕｅｄｉｇｅｒ，  Ｔ．；  Ｔｏｎｙ，  Ｈ．  Ｐ．  ｇａｍｍａｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．  Ｂｌｏｏｄ  ２００３，  １０２，  ２００−２０６．
［００２９７］（３２）  Ｍｉｙａｕｒａ，  Ｎ；  Ｙａｎａｇｉ，  Ｔ；  Ｓｕｚｕｋｉ，  Ａ．  Ｔｈｅ  ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｗｉｔｈ  ｈａｌｏａｒｅｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｂａｓｅｓ．  Ｓｙｎｔｈ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １９８１，  １１，  ５１３−５１９．
［００２９８］（３３）Ｋｒａｐｃｈｏ，  Ａ．  Ｐ．；  Ｅｌｌｉｓ，  Ｍ．  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｒｅｇｉｏｉｓｏｍｅｒｉｃ  ｄｉｆｌｕｏｒｏ−  ａｎｄ  ８−ｃｈｌｏｒｏ−９−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚ［ｇ］ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−５，１０−ｄｉｏｎｅｓ  ａｎｄ  ＳＮＡｒ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｂｙ  ｄｉａｍｉｎｅｓ：  ｂｉｓ（ａｍｉｎｏａｌｋｙｌ）ａｍｉｎｏｂｅｎｚ［ｇ］ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−５，１０−ｄｉｏｎｅｓ．  Ｊ．  Ｆｌｕｏｒｉｎｅ  Ｃｈｅｍ．  １９９８，  ９０，  １３９−１４７．
［００２９９］（３４）Ｚｈａｎｇ，  Ｌ．；  Ｌｉａｎｇ，  Ｆ．；  Ｓｕｎ，  Ｌ．；  Ｈｕ，  Ｙ．；  Ｈｕ，  Ｈ．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ３−ｕｎｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｉｎｄｏｌｉｚｉｎｅｓ．  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２０００，  １７３３−１７３７．
［００３００］（３５）Ｈａｒｅｌ，  Ｚ．；  Ｋｏｖａｌｅｖｓｋｉ−Ｌｉｒｏｎ，  Ｅ．；  Ｌｉｄｏｒ−Ｈａｄａｓ，  Ｒ．；  Ｌｉｆｓｈｉｔｚ−Ｌｉｒｏｎ，  Ｒ．  Ｕｓｅ  ｏｆ  ｃｅｒｔａｉｎ  ｄｉｌｕｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｍａｋｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄｓ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｐａｔｅｎｔ  ＷＯ０３０９７６５５，  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２７，  ２００３．
［００３０１］（３６）Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｍ．  Ｊ．；  Ｗａｔｔｓ，  Ｄ．  Ｊ．；  Ｒｕｓｓｅｌｌ，  Ｒ．  Ｇ．；  Ｊｉ，  Ｘ．；  Ｘｉｏｎｇ，  Ｘ．；  Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，  Ｇ．  Ｍ．；  Ｂａｙｌｅｓｓ，  Ａ．  Ｖ．；  Ｅｂｅｔｉｎｏ，  Ｆ．  Ｈ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｏｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ａｍｏｅｂａｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｌｉｍｅ  ｍｏｌｄ  Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ  ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ．  Ｊ．  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．  １９９４，  ９，  １０２９−１０３９．
［００３０２］（３７）ｖａｎ  Ｂｅｅｋ，  Ｅ．  Ｒ．；  Ｃｏｈｅｎ，  Ｌ．  Ｈ．；  Ｌｅｒｏｙ，  Ｉ．  Ｍ．；  Ｅｂｅｔｉｎｏ，  Ｆ．  Ｈ．；  Ｌｏｗｉｋ，  Ｃ．  Ｗ．；  Ｐａｐａｐｏｕｌｏｓ，  Ｓ．  Ｅ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｂｏｎｅ  ２００３，  ３３，  ８０５−１１．
［００３０３］ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔｓ：  ５５８３１２２  ｂｙ  Ｂｅｎｅｄｉｃｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １０，  １９９６；  ６，５６２，９７４  ｂｙ  Ｃａｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｍａｙ  １３，  ２００３；  ６５４４９６７  ｂｙ  Ｄａｉｆｏｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ａｐｒｉｌ  ８，  ２００３；  ６，４１０，５２０  ｂｙ  Ｃａｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｊｕｎｅ  ２５，  ２００２；  ６，３７２，７２８  ｂｙ  Ｕｎｇｅｌｌ，  ｉｓｓｕｅｄ  Ａｐｒｉｌ  １６，  ２００２；  ６，６３８，９２０  ｂｙ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２８，  ２００３；  ４７７７１６３  ｂｙ  Ｂｏｓｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １１，  １９８８；  ４９３９１３０  ｂｙ  Ｊａｅｇｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｊｕｌｙ  ３，  １９９０；  ４，８５９，４７２  ｂｙ  Ｄｅｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ａｕｇｕｓｔ  ２２，  １９８９；  ＵＳ  ５，２２７，５０６  ｂｙ  Ｓａａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｊｕｌｙ  １３，  １９９３；  ＵＳ  ６，７５３，３２４  ｂｙ  Ｊｏｍａａ，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｊｕｎｅ  ２２，  ２００４．  ＵＳ５２９４６０８
［００３０４］Ａｌｆｅｒ’ｅｖ，  Ｉ．  Ｓ．；  Ｍｉｋｈａｌｉｎ，  Ｎ．  Ｖ．，  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｗｉｔｈ  ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｅｓ．  ５．  Ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ａｍｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  ｔｏ  ｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ；  Ａｕｇｕｓｔ  １９９４，  Ｒｕｓｓｉａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ４４（８）：１５２８−１５３０  （ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｉｚｖｅｓｔｉｙａ  Ａｋａｄｅｍｉｉ  Ｎａｕｋ，  Ｓｅｒｉｙａ  Ｋｈｉｍｉｃｈｅｓｋａｙａ  １９９５，  ８，  １５９０−１５９２）．
［００３０５］Ａｌｆｅｒ’ｅｖ  ＩＳ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｚｖｅｓｔｉａｙ  Ａｋａｄｅｍｉｉ  Ｎａｕｋ  ＳＳＳＲ，  Ｓｅｒｉｙａ  Ｋｈｉｍｉｃｈｅｓｋａｙａ，  Ｎｏ．  １２，  ｐｐ．  ２８０２−２８０６，  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９８３  ［Ｂｕｌｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＳＲ，  Ｄｉｖ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．，  １９８３，  ３２：２５１５  （Ｅｎｇｌ．  Ｔｒａｎｓｌ．）］．
［００３０６］Ａｌｆｅｒ’ｅｖ  ＩＳ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｚｖ．  Ａｋａｄ．  Ｎａｕｋ  ＳＳＳＲ，  Ｓｅｒ．  Ｋｈｉｍ．，  １９８４：１１２２  ［Ｂｕｌｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＳＲ，  Ｄｉｖ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．，  １９８４，  ３３：１０３１  （Ｅｎｇｌ．  Ｔｒａｎｓｌ．）］．
［００３０７］Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ０３０７５７４１  ｂｙ  Ｗｉｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  １８  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００３；  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ２００４０２４１６５  ｂｙ  Ｂａｕｌｃｈ−Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ２５  Ｍａｒｃｈ  ２００４；  Ｇｅｒｍａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＤＥ１９８５９６６８  ｂｙ  Ｈａｓｓａｎ，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ３０  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９９；  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ２００４０５００９６  ｂｙ  Ｒｏｍａｇｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  １７  Ｊｕｎｅ  ２００４．
［００３０８］Ｗｉｄｌｅｒ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｇｅｍｉｎａｌ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．  Ｆｒｏｍ  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  （Ａｒｅｄｉａ）  ｔｏ  ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  （Ｚｏｍｅｔａ），  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２００２  Ａｕｇ  １５；４５（１７）：３７２１−３８．
［００３０９］Ｇｒｅｅｎ  ＪＲ，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｓ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ，  Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２００１  Ａｐｒ；  ２８（２  Ｓｕｐｐｌ  ６）：４−１０．
［００３１０］ＵＳ  ４，７１１，８８０  ｂｙ  Ｓｔａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ８，  １９８７  （Ａｒｅｄｉａ  ／  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）；  ＵＳ  ４６２１０７７，  ＵＳ  ５４６２９３２，  ＵＳ  ５９９４３２９，  ＵＳ  ６０１５８０１，  ＵＳ  ６２２５２９４  （Ｆｏｓａｍａｘ  ／  ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）；  ＵＳ  ５５８３１２２，  ＵＳ  ６０９６３４２；  ＵＳ  ６１６５５１３  （Ａｃｔｏｎｅｌ  ／  ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ）．
［００３１１］Ｗｉｌｈｅｌｍ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｇａｍｍａｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ，  Ｂｌｏｏｄ  １０２：  ２００−２０６．
［００３１２］Ｊａｇｄｅｖ  ＳＰ，  Ｃｏｌｅｍａｎ  ＲＥ，  Ｓｈｉｐｍａｎ  ＣＭ，  Ｒｏｓｔａｍｉ  ＨＡ，  Ｃｒｏｕｃｈｅｒ  ＰＩ  （２００１）；  Ｔｈｅ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ，  ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ，  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ：  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ｗｉｔｈ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８４：１１２６−１１３４．
［００３１３］ＵＳ  ４９２７８１４  ｂｙ  Ｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｍａｙ  ２２，  １９９０；  ＵＳ  ６２９４１９６  ｂｙ  Ｇａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｓｓｕｅｄ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２５，  ２００１；  ６，１４３，３２６  ｂｙ  Ｍｏｃｋｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  ｉｓｓｕｅｄ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ７，  ２０００  （ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ／ＢｏｎｉｖａO；  ６，５４４，９６７  ｂｙ  Ｄａｉｆｏｔｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｐｒｉｌ  ８，  ２００３．
［００３１４］Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４．  Ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｏｎｅ  ｐａｉｎ，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ３１（５  Ｓｕｐｐｌ  １０）：６７−７２．
［００３１５］Ｇｏｒｄｏｎ  ＤＨ，  ２００５．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｔｏ  ｂｏｎｅ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｔｒｉａｌｓ，  Ｃｌｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．  ６（２）：１２５−３１．
［００３１６］Ｄｅ  Ｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５．  Ｃｏｓｔ−ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ＩＶ  ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｏｒ  ＩＶ  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ  ｆｏｒ  ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ｏｒａｌ  ｈｏｒｍｏｎａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ．  Ｃｌｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  ２７（８）：１２９５−３１０．
［００３１７］Ｓａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ−１−ｙｌ  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  Ａｒｅ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｆａｒｎｅｓｙｌ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ  ａｎｄ  Ｂｏｎｅ  Ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００５，  ４８，  ２９５７−２９６．
［００３１８］Ｋｏｔｓｉｋｏｒｏｕ  Ｅｖａｎｇｅｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｘｏｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｖａｃｕｏｌａｒ  Ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００５，  ４８，  ６１２８−６１３９．
［００３１９］Ｉｎｏｕｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  １３：１９７１−１９７６．  Ｎｅｗ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｇｅｍ−Ｂｉｓ（ｐｈｓｏｐｈｏｎｏ）ｅｔｈｙｌｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．
［００３２０］Ｓｏｌｏｄｕｃｈｏ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７．  Ｐａｔｅｎｔ  ＰＬ９３−２９８４３６，  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  （ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）ｂｉｓ（ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）  ａｓ  ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ．
［００３２１］Ｌｅｃｏｕｖｅｙ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｔｅｔ．  Ｌｅｔｔ．  ４２：８４７５−８４７８，  Ａ  ｍｉｌｄ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｏｎｅ−ｐｏｔ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  １−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−１，１−ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄｓ．  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｔｒｉｐｏｄ  ｌｉｇａｎｄｓ．
［００３２２］Ｋｉｅｃｚｙｋｏｗｓｋｉ  ＧＲ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ  ６０：８３１０−８３１２，  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  （４−ａｍｉｎｏ−１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｌｉｄｅｎｅ）ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｎｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ，  ＭＫ−２１７  （ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）．  Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  １−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，１−ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄｓ．
［００３２３］Ｌｉａｎｇ  Ｐ−Ｈ，  ２００２，  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２６９，  ３３３９−３３５４  （２００２），  Ｒｅｖｉｅｗ  Ａｒｔｉｃｌｅ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｅｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ．
［００３２４］Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＪＬ，  Ｂｒｏｗｎ  ＭＳ：  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３４３：４２５，  １９９０．
［００３２５］Ｓｗａｎｓｏｎ  ＫＭ，  Ｈｏｈｌ  ＲＪ，  Ｃｕｒｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ．  ２００６  Ｆｅｂ；６（１）：１５−３７．  Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ  ｐａｔｈｗａｙ．
［００３２６］Ｗｉｅｍｅｒ  ＡＪ，  Ｔｏｎｇ  Ｈ，  Ｓｗａｎｓｏｎ  ＫＭ，  Ｈｏｈｌ  ＲＪ；  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２００７  Ｆｅｂ  ２３；３５３（４）：９２１−５．  Ｄｉｇｅｒａｎｙｌ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ．
【図１】
2010523709.tif 000026
【図２】
2010523709.tif 000027
【図３】
2010523709.tif 000028
【図４】
2010523709.tif 000029
【図５】
2010523709.tif 000030
【図６】
2010523709.tif 000031
【図７】
2010523709.tif 000032
【図８】
2010523709.tif 000033
【図９】
2010523709.tif 000034
【図１０】
2010523709.tif 000035
【図１１】
2010523709.tif 000036
【図１２】
2010523709.tif 000037
【図１３】
2010523709.tif 000038
【図１４】
2010523709.tif 000039
【図１５】
2010523709.tif 000040
【図１６】
2010523709.tif 000041
【国際調査報告】
2010523709.tif 000042
2010523709.tif 000043
2010523709.tif 000044
2010523709.tif 000045