(57)【要約】  本発明は、Ａｋｔ活性を阻害する置換ナフチリジン化合物を提供する。特に、開示される化合物は、Ａｋｔアイソフォームのうち１種又は２種を選択的に阻害する。本発明はまた、このような阻害性化合物を含む組成物及び癌の治療を必要とする患者に本化合物を投与することによってＡｋｔ活性を阻害する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ａ：
【化１】
2010512312.tif 000036
［式中、
Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、及びＭは独立して、Ｃ又はＮから選択され、ここで、各Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、及びＭは、Ｒ１で置換されていてもよく；
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；ｐは独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；
環Ｘは、１個ないし５個のＲ３で置換されていてもよい、３員ないし７員のシクロアルキル又は４員ないし７員のヘテロシクリルであり；
環Ｙは、１個ないし４個のＲ４で置換されていてもよい、４員ないし７員のシクロアルキル又は５員ないし７員のヘテロシクリルであり；
環Ｚは、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルから選択され；
Ｒ１は独立して、Ｈ、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７  Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７  Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ２は独立して、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ３は独立して、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は独立して、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７及びＲ８は独立して、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＳＨ、ＳＯ２Ｒａ、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲｂ２から選択され、当該アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ７及びＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、単環式又は二環式複素環（各環に３員ないし７員を含み、場合により、窒素に加えて、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１個又は２個のさらなるヘテロ原子を含んでもよい）を形成してもよく、当該単環式又は二環式複素環は、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
の化合物又は薬学的に許容される塩又はその立体異性体。
【請求項２】
【化２】
2010512312.tif 000037
が
【化３】
2010512312.tif 000038
から選択され、
すべてのその他の置換基及び変数が、請求項１に定義されるとおりである、式Ａの化合物、又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体。
【請求項３】
式Ｂ：
【化４】
2010512312.tif 000039
［式中、
ｐは０、１、又は２であり；
Ｒ２は独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；
すべてのその他の置換基及び変数は、請求項２に定義されるとおりである。］
で記載される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体。
【請求項４】
式Ｃ：
【化５】
2010512312.tif 000040
［式中、
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；ｐは、０、１、又は２であり；
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；
環Ｘは、１個ないし３個のＲ３で置換されていてもよい、３員ないし７員のシクロアルキル又は４員ないし７員のヘテロシクリルであり；
環Ｙは、１個ないし３個のＲ４で置換されていてもよい、４員ないし７員のシクロアルキル又は５員ないし７員のヘテロシクリルであり；
Ｒ１は、Ｈ、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ３は独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、及び（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルから選択され；
Ｒ４は独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、及び（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルから選択され；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７及びＲ８は独立して、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＳＨ、ＳＯ２Ｒａ、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲｂ２から選択され、当該アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ７及びＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、単環式又は二環式複素環（各環に３員ないし７員を含み、場合により、窒素に加えて、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１個又は２個のさらなるヘテロ原子を含んでもよい）を形成してもよく、当該単環式又は二環式複素環は、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
で記載される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体。
【請求項５】
式Ｄ：
【化６】
2010512312.tif 000041
［式中、
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；ｐは、０、１、又は２であり；
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ１は、Ｈ、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７及びＲ８は独立して、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＳＨ、ＳＯ２Ｒａ、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲｂ２から選択され、当該アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ７及びＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、単環式又は二環式複素環（各環に３員ないし７員を含み、場合により、窒素に加えて、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１個又は２個のさらなるヘテロ原子を含んでもよい）を形成してもよく、当該単環式又は二環式複素環は、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり、
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
で記載される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体。
【請求項６】
式Ｅ：
【化７】
2010512312.tif 000042
［式中、
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
で記載される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体。
【請求項７】
２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−メチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−イソプロピル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−シクロプロピル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル−３−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−｛４−［９−フェニル−３−（１，３−チアゾール−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−オール；
２−｛４−［３−（２−フリル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
３−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝フェノール；
メチル６−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝ピリジン−２−カルボキシレート；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−｛４−［３−（１Ｈ−インドール−５−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−イソキサゾール−３−イル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル−３−ピラジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
１−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝エタノール；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリジン−３−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−シクロブチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−｛４−［３−（シクロプロピルメチル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル−３−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（３−シクロペンタ−３−エン−１−イル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル−３−ピペリジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−｛４−［３−（４−メチル−１，３−チアゾール−５−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリジン−４−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−｛４−［９−フェニル−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
２−｛４−［３−（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−３−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
１−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−２−メチルプロパン−２−オール；
２−［４−（３−ｔ−ブチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン；
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−Ｎ−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−アミン；及び
Ｎ’−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン；
から選択される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体。
【請求項８】
２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミンである化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−Ｎ−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−アミンである化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｎ’−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミンである化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミンである化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
薬剤担体を含み、薬剤担体に請求項１に記載の化合物の治療上有効な量が分散された医薬組成物。
【請求項１３】
癌の治療又は予防を必要とする哺乳類における、癌の治療又は予防において有用な医薬を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明は、セリン／トレオニンキナーゼ、Ａｋｔ（ＰＫＢとしても知られる；本明細書では以下「Ａｋｔ」と呼ぶ）の１種以上のアイソフォームの活性の阻害剤である、置換ナフチリジン化合物に関する。本発明はまた、このような化合物を含む医薬組成物及び癌の治療において本化合物を用いる方法に関する。
【０００２】
アポトーシス（プログラム細胞死）は、胚発生及び種々の疾患、例えば、神経変性疾患、循環器疾患、及び癌の発病において重要な役割を果たしている。最近の研究によって、プログラム細胞死の調節又は遂行に関与している種々のアポトーシス促進性及び抗アポトーシス性遺伝子産物が同定された。抗アポトーシス性遺伝子、例えば、Ｂｃｌ２又はＢｃｌ−ｘＬの発現は、種々の刺激によって誘導されるアポトーシス性細胞死を阻害する。他方、アポトーシス促進性遺伝子、例えば、Ｂａｘ又はＢａｄの発現は、プログラム細胞死につながる（Ａｄａｍｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８１：１３２２〜１３２６頁（１９９８年））。プログラム細胞死の遂行は、カスパーゼ−１関連プロテアーゼ、例えば、カスパーゼ−３、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、及びカスパーゼ−９などによって媒介される（Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８１：１３１２〜１３１６頁（１９９８年））。
【０００３】
ホスファチジルイノシトール３’−ＯＨキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ経路は、細胞生存／細胞死の調節にとって重要であると思われる（Ｋｕｌｉｋら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１７：１５９５〜１６０６頁（１９９７年）；Ｆｒａｎｋｅら、Ｃｅｌｌ、８８：４３５〜４３７頁（１９９７年）；Ｋａｕｆｆｍａｎｎ−Ｚｅｈら、Ｎａｔｕｒｅ３８５：５４４〜５４８頁（１９９７年）；Ｈｅｍｍｉｎｇｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７５：６２８〜６３０頁（１９９７年）；Ｄｕｄｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７５：６６１〜６６５頁（１９９７年））。血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、及びインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）などの生存因子は、ＰＩ３Ｋの活性を誘導することによって種々の条件下で細胞生存を促進する（Ｋｕｌｉｋら、１９９７年）、Ｈｅｍｍｉｎｇｓ、１９９７年）。活性化されたＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）−三リン酸（ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３）の生成をもたらし、次いで、これが、プレクストリン相同（ＰＨ）−ドメインを含むセリン／トレオニンキナーゼＡｋｔと結合し、その活性化を促進する（Ｆｒａｎｋｅら、Ｃｅｌｌ、８１：７２７〜７３６頁（１９９５年）；Ｈｅｍｍｉｎｇｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７７：５３４頁（１９９７年）；Ｄｏｗｎｗａｒｄ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０：２６２〜２６７頁（１９９８年）、Ｄ．Ｒ．Ａｌｅｓｓｉら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１５：６５４１〜６５５１頁（１９９６年））。ＰＩ３Ｋの特異的阻害剤又はドミナントネガティブＡｋｔ突然変異体は、これらの増殖因子又はサイトカインの生存促進活性を無効にする。ＰＩ３Ｋの阻害剤（ＬＹ２９４００２又はワートマニン）は、上流キナーゼによるＡｋｔの活性化を阻止するということはこれまでに開示されてきた。さらに、構成的に活性なＰＩ３Ｋ又はＡｋｔ突然変異の導入は、通常、細胞がアポトーシス性細胞死を受ける条件下で細胞生存を促進する（Ｋｕｌｉｋら、１９９７年）、Ｄｕｄｅｋら、１９９７年）。
【０００４】
セカンドメッセンジャー調節性セリン／トレオニンタンパク質キナーゼのＡｋｔサブファミリーの３種のメンバーが、同定されており、それぞれ、Ａｋｔ１／ＰＫＢα、Ａｋｔ２／ＰＫＢβ、及びＡｋｔ３／ＰＫＢγと呼ばれている（本明細書では以下、「Ａｋｔ１」、「Ａｋｔ２」、及び「Ａｋｔ３」と呼ばれる）。これらのアイソフォームは、特に、触媒ドメインをコードする領域において相同である。Ａｋｔは、ＰＩ３Ｋシグナル伝達に応じて生じるリン酸化事象によって活性化される。ＰＩ３Ｋは、膜イノシトールリン脂質をリン酸化し、セカンドメッセンジャーホスファチジルイノシトール３，４，５−三リン酸及びホスファチジルイノシトール３，４−ビスホスフェートが生成し、これらはＡｋｔのＰＨドメインと結合することがわかっている。Ａｋｔ活性化の現在のモデルは、３’リン酸化されたホスホイノシチドによって、膜へ酵素が動員され、ここで、上流キナーゼによるＡｋｔの調節部位のリン酸化が起こることを提案する（Ｈｅｍｍｉｎｇｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７５：６２８〜６３０頁（１９９７年）；Ｈｅｍｍｉｎｇｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７７：５３４頁（１９９７年）；Ｊ．Ｄｏｗｎｗａｒｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２７９：６７３〜６７４頁（１９９８年））。
【０００５】
Ａｋｔ１のリン酸化は、２つの調節部位、触媒ドメイン活性化ループ中のＴｈｒ３０８及びカルボキシ末端付近のＳｅｒ４７３で起こる（Ｄ．Ｒ．Ａｌｅｓｓｉら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１５：６５４１〜６５５１頁（１９９６年））及び（Ｒ．Ｍｅｉｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３０４９１〜３０４９７頁（１９９７年））。同等の調節性リン酸化部位が、Ａｋｔ２及びＡｋｔ３中に生じる。活性化ループ部位でＡｋｔをリン酸化する上流キナーゼは、クローニングされており、３’−ホスホイノシチド依存性タンパク質キナーゼ１（ＰＤＫ１）と呼ばれる。ＰＤＫ１は、Ａｋｔだけでなく、ｐ７０リボソームＳ６キナーゼ、ｐ９０ＲＳＫ、血清及びグルココルチコイド調節性キナーゼ（ＳＧＫ）、及びタンパク質キナーゼＣもリン酸化する。カルボキシ末端付近のＡｋｔの調節部位をリン酸化する上流キナーゼは、まだ同定されていないが、最近の報告によって、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ−１）、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼ、又は自己リン酸化の役割が示唆されている。
【０００６】
ヒト腫瘍におけるＡｋｔレベルの分析によって、Ａｋｔ２は、相当数の卵巣癌において（Ｊ．Ｑ．Ｃｈｅｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：９２６７〜９２７１頁（１９９２年））及び膵臓癌において（Ｊ．Ｑ．Ｃｈｅｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：３６３６〜３６４１頁（１９９６年））過剰発現されていることがわかった。同様に、Ａｋｔ３は、乳癌及び前立腺癌細胞株において過剰発現されていることがわかった（Ｎａｋａｔａｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２１５２８〜２１５３２頁（１９９９年））。
【０００７】
ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３の３’ホスフェートを特異的に除去するタンパク質及び脂質ホスファターゼである、腫瘍抑制因子ＰＴＥＮは、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の負の調節因子である（Ｌｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：１９４３〜１９４７頁（１９９７年）；Ｓｔａｍｂｏｌｉｃら、Ｃｅｌｌ９５：２９〜３９頁（１９９８年）；Ｓｕｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６：６１９９〜６２０４頁（１９９９年））。ＰＴＥＮの生殖系列突然変異は、ヒト癌症候群、例えば、カウデン病に関与している（Ｌｉａｗら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１６：６４〜６７頁（１９９７年））。ＰＴＥＮは、ヒト腫瘍の大部分で欠失しており、機能的ＰＴＥＮがない腫瘍細胞株は、活性化Ａｋｔレベルの上昇を示す（Ｌｉら、上記；Ｇｕｌｄｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５７：３６６０〜３６６３頁（１９９７年）；Ｒｉｓｉｎｇｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５７：４７３６〜４７３８頁（１９９７年））。
【０００８】
これらの知見は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路は、腫瘍形成における細胞生存又はアポトーシスの調節にとって重要な役割を果たすということを実証する。
【０００９】
Ａｋｔ活性化及び活性の阻害は、ＰＩ３Ｋを、ＬＹ２９４００２及びワートマニンなどの阻害剤を用いて阻害することによって達成できる。しかし、ＰＩ３Ｋ阻害は、３種のＡｋｔアイソザイムすべてだけでなく、ＰｄｔＩｎｓ（３，４，５）−Ｐ３によって決まるその他のＰＨドメイン含有シグナル伝達分子、例えば、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーにも無差別に影響を及ぼす可能性を有する。さらに、Ａｋｔは、ＰＩ３Ｋとは無関係の増殖シグナルによって活性化され得ることが開示されている
【００１０】
あるいは、Ａｋｔ活性は、上流キナーゼＰＤＫ１の活性を阻止することによって阻害され得る。特異的ＰＤＫ１阻害剤は開示されていない。やはり、ＰＤＫ１の阻害は、その活性がＰＤＫ１に依存する複数のタンパク質キナーゼ、例えば、非定型ＰＫＣアイソフォーム、ＳＧＫ、及びＳ６キナーゼの阻害をもたらす（ＷｉｌｌｉａｍｓらＣｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０：４３９〜４４８頁（２０００年））。
【発明の概要】
【００１１】
Ａｋｔの阻害剤である新規化合物を提供することが本発明の目的である。
【００１２】
Ａｋｔの阻害剤である新規化合物を含む医薬組成物を提供することも本発明の目的である。
【００１３】
このようなＡｋｔ活性の阻害剤を投与することを含む癌を治療する方法を提供することも本発明の目的である。
発明の要旨
【００１４】
本発明は、Ａｋｔ活性を阻害する置換ナフチリジン化合物を提供する。特に、開示される化合物は、１種又は２種のＡｋｔアイソフォームを選択的に阻害する。本発明はまた、このような阻害性化合物を含む組成物及び癌の治療を必要とする患者に本化合物を投与することによってＡｋｔ活性を阻害する方法を提供する。
発明の詳細な説明
【００１５】
本発明の化合物は、セリン／トレオニンキナーゼＡｋｔの活性の阻害において有用である。この発明の第１の実施態様では、Ａｋｔ活性の阻害剤は、式Ａ：
【００１６】
【化１】
2010512312.tif 000002
【００１７】
［式中、
Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、及びＭは、独立して、Ｃ又はＮから選択され、ここで、各Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、及びＭは、Ｒ１で置換されていてもよく；
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；ｐは独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；
環Ｘは、１個ないし５個のＲ３で置換されていてもよい、３員ないし７員のシクロアルキル又は４員ないし７員のヘテロシクリルであり；
環Ｙは、１個ないし４個のＲ４で置換されていてもよい、４員ないし７員のシクロアルキル又は５員ないし７員のヘテロシクリルであり；
環Ｚは、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルから選択され；
Ｒ１は独立して、Ｈ、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ２は独立して、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ３は独立して、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は独立して、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７及びＲ８は独立して、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＳＨ、ＳＯ２Ｒａ、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲｂ２から選択され、当該アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいは、Ｒ７及びＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、単環式又は二環式複素環（各環に３員ないし７員を含み、場合により、窒素に加えて、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１個又は２個のさらなるヘテロ原子を含んでもよい）を形成してもよく、当該単環式又は二環式複素環は、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体によって示される。
【００１８】
本発明の第２の実施態様では、Ａｋｔ活性の阻害剤が、
【００１９】
【化２】
2010512312.tif 000003
【００２０】
が
【００２１】
【化３−１】
2010512312.tif 000004
【００２２】
【化３−２】
2010512312.tif 000005
【００２３】
から選択され、
すべてのその他の置換基及び変数が第１の実施態様に定義されるとおりである、式Ａの化合物又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体によって示される。
【００２４】
本発明の第３の実施態様では、Ａｋｔ活性の阻害剤は、式Ｂ：
【００２５】
【化４】
2010512312.tif 000006
【００２６】
［式中、
ｐは、０、１、又は２であり；
Ｒ２は独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；
すべてのその他の置換基及び変数は、第２の実施態様に定義されるとおりである。］
の化合物又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体によって示される。
【００２７】
第４の実施態様では、本発明の阻害剤は、式Ｃ：
【００２８】
【化５】
2010512312.tif 000007
【００２９】
［式中、
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；ｐは、０、１、又は２であり；
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；
環Ｘは、１個ないし３個のＲ３で置換されていてもよい、３員ないし７員のシクロアルキル又は４員ないし７員のヘテロシクリルであり；
環Ｙは、１個ないし３個のＲ４で置換されていてもよい、４員ないし７員のシクロアルキル又は５員ないし７員のヘテロシクリルであり；
Ｒ１は、Ｈ、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ３は独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルから選択され；
Ｒ４は独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルから選択され；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７及びＲ８は独立して、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＳＨ、ＳＯ２Ｒａ、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲｂ２から選択され、当該アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいは、Ｒ７及びＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、単環式又は二環式複素環（各環に３員ないし７員を含み、場合により、窒素に加えて、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１個又は２個のさらなるヘテロ原子を含んでもよい）を形成してもよく、当該単環式又は二環式複素環は、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はへテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
の化合物又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体によって示される。
【００３０】
第５の実施態様では、本発明の阻害剤は、式Ｄ：
【００３１】
【化６】
2010512312.tif 000008
【００３２】
［式中、
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；ｐは０、１、又は２であり；
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；
Ｒ１は、Ｈ、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７及びＲ８は独立して、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＳＨ、ＳＯ２Ｒａ、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲｂ２から選択され、当該アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、あるいはＲ７及びＲ８は、それらが結合する窒素と一緒になって、単環式又は二環式複素環（各環に３員ないし７員を含み、場合により、窒素に加えて、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１個又は２個のさらなるヘテロ原子を含んでもよい）を形成してもよく、当該単環式又は二環式複素環は、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
の化合物又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体によって示される。
【００３３】
第６の実施態様では、本発明の阻害剤は、式Ｅ：
【００３４】
【化７】
2010512312.tif 000009
【００３５】
［式中、
ａは、０又は１であり；ｂは、０又は１であり；ｍは、０、１、又は２であり；
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６は、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂアリール、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１−Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂＮＲ７Ｒ８、オキソ、ＣＨＯ、（Ｎ＝Ｏ）Ｒ７Ｒ８、Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）ｍ−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、又は（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒ６ａから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ６ａは、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ３）ペルフルオロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｓ（Ｏ）ｍＲａ、ＳＨ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリール、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ヘテロシクリル、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（Ｒｂ）２、Ｃ（Ｏ）Ｒａ、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｒａ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、及び（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−ＣＯ２Ｈから選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏａ（Ｃ＝Ｏ）ｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２から選択される最大３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒａは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、アリール、又はヘテロシクリルであり；
Ｒｂは独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又はＳ（Ｏ）ｍＲａである。］
の化合物又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体によって示される。
【００３６】
本発明の具体的な化合物としては、
２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１２）；
２−［４−（９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１３）；
２−［４−（３−メチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１４）；
２−［４−（３−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１５）；
２−［４−（３−イソプロピル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１６）；
２−［４−（３−シクロプロピル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１７）；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１８）；
２−［４−（９−フェニル−３−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１９）；
２−｛４−［９−フェニル−３−（１，３−チアゾール−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−２０）；
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−オール（１−２１）；
２−｛４−［３−（２−フリル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−２２）；
３−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝フェノール（１−２３）；
メチル６−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝ピリジン−２−カルボキシレート（１−２４）；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−２５）；
２−｛４−［３−（１Ｈ−インドール−５−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−２６）；
２−［４−（３−イソキサゾール３−イル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−２７）；
２−［４−（９−フェニル−３−ピラジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−２８）；
１−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝エタノール（１−２９）；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリジン−３−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３０）；
２−［４−（３−シクロブチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３１）；
２−｛４−［３−（シクロプロピルメチル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３２）；
２−［４−（９−フェニル−３−プロピル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３３）；
２−［４−（３−シクロペンタ−３−エン−１−イル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３４）；
２−［４−（９−フェニル−３−ピペリジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３５）；
２−｛４−［３−（４−メチル−１，３−チアゾール−５−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３６）；
２−［４−（９−フェニル−３−ピリジン−４−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３７）；
２−｛４−［９−フェニル−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３８）；
２−｛４−［３−（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−３−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−３９）；
１−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−２−メチルプロパン−２−オール（１−４０）；
２−［４−（３−ｔ−ブチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−４１）；
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−Ｎ−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−アミン（２−２）；及び
Ｎ’−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン（２−３）；
又はその薬学的に許容される塩又は立体異性体が挙げられる。
【００３７】
本発明の化合物としては、
２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１２）
又はその薬学的に許容される塩がある。
【００３８】
本発明の化合物としては、
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−Ｎ−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−アミン（２−２）；
又はその薬学的に許容される塩がある。
【００３９】
本発明の化合物としては、
Ｎ’−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン（２−３）
又はその薬学的に許容される塩がある。
【００４０】
本発明の化合物としては、
２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１８）
又はその薬学的に許容される塩がある。
【００４１】
本発明の化合物は、不斉中心、キラル軸、及びキラル面を有する場合があり（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ及びＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ、ステレオケミストリー・オブ・カーボン・コンパウンズ（Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９４年、１１１９〜１１９０頁に記載されるように）、光学異性体を含めた、すべてのあり得る異性体及びそれらの混合物を含む、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、及び個々のジアステレオマーとして生じる場合があり、このような立体異性体はすべて本発明に含まれる。
【００４２】
さらに、本明細書に開示される化合物は、互変異性体として存在する場合があり、一方のみの互変異性体構造が表されていても、両方の互変異性体の形とも本発明の範囲によって包含されるべく意図される。例えば、以下は、本発明の範囲内にある：
【００４３】
【化８】
2010512312.tif 000010
【００４４】
テトラゾールは、１Ｈ／２Ｈ互変異性体の混合物として存在する。テトラゾール部分の互変異性体の形もまた、本発明の範囲内にある。
【００４５】
任意の変数（例えば、Ｒ２など）が、任意の構成要素中に２回以上現れる場合は、各出現に関するその定義は、他のどの出現でも無関係である。また、置換基及び変数の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物をもたらす場合にのみ許容される。置換基から環系中に引かれる線は、示された結合が置換可能な環原子のいずれとも結合し得ることを表す。環系が二環式である場合には、結合は、二環式部分のいずれかの環上の適した原子のいずれとも結合することを意図する。
【００４６】
当業者ならば、化学的に安定であり、容易に入手可能な出発物質から当該技術分野における技術上既知の方法によって容易に合成できる化合物を提供するために、１個以上の炭素原子の代わりに、本発明の化合物中に１個以上のケイ素（Ｓｉ）原子が組み込まれてもよいことは理解される。炭素及びケイ素は、それらの共有結合残基が異なり、これが、類似のＣ原子及びＳｉ原子を比較した場合に、結合距離及び立体配置の相違をもたらす。これらの相違は、炭素と比較した場合の、ケイ素含有化合物の大きさ及び形のわずかな変化につながる。当業者ならば、大きさ及び形の相違が、効力、溶解度、オフターゲット活性の欠如、パッケージング特性などのわずかな又は劇的な変化につながり得ることを理解する（Ｄｉａｓｓ，Ｊ．Ｏら、Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ（２００６年）５：１１８８〜１１９８頁；Ｓｈｏｗｅｌｌ，Ｇ．Ａ．らＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００６年）１６：２５５５〜２５５８頁）。
【００４７】
本発明の化合物上の置換基及び置換パターンは、化学的に安定であり、容易に入手可能な出発材料から、当該技術分野における技術上既知の方法並びに以下に記載される方法によって容易に合成され得る化合物を提供するよう、当業者によって選択され得るということは理解される。置換基自体が２個以上の基で置換される場合には、複数の基は、安定な構造が生じる限り、同一炭素上にあっても、異なる炭素上にあってもよいということは理解される。語句「１個以上の置換基で置換されていてもよい」とは、語句「少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい」と同等であるととられるべきであり、このような場合には、好ましい実施態様は、０個ないし４個の置換基を有し、より好ましい実施態様は、０個ないし３個の置換基を有する。
【００４８】
本明細書で用いる場合、「アルキル」は、特定の数の炭素原子を有する、分枝及び直鎖双方の飽和脂肪族炭化水素基を包含することを意図する。例えば、「（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル」におけるようなＣ１−Ｃ１０は、直線又は分枝配置にある１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の炭素を有する基を包含するべく定義される。例えば、「（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル」として、具体的に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなどが挙げられる。
【００４９】
用語「シクロアルキル」とは、特定の数の炭素原子を有する、単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味する。例えば、「シクロアルキル」として、シクロプロピル、メチル−シクロプロピル、２，２−ジメチル−シクロブチル、２−エチル−シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられる。
【００５０】
「アルコキシ」は、酸素橋によって結合している示される数の炭素原子の環状又は非環状アルキル基のいずれかを表す。したがって、「アルコキシ」は、上記のアルキル及びシクロアルキルの定義を包含する。
【００５１】
炭素原子の数が特定されていない場合には、用語「アルケニル」は、２個ないし１０個の炭素原子と、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合とを含む、直鎖、分枝、又は環状の非芳香族炭化水素基を指す。１つの炭素−炭素二重結合が存在することが好ましいが、最大４つの非芳香族炭素−炭素二重結合が存在してもよい。したがって、「（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル」は、２個ないし１０個の炭素原子を有するアルケニル基を意味する。アルケニル基として、エテニル、プロペニル、ブテニル、２−メチルブテニル、及びシクロヘキセニルが挙げられる。アルケニル基の直鎖、分枝、又は環状部分は、二重結合を含む場合があり、置換されたアルケニル基が示される場合には、置換されてもよい。
【００５２】
用語「アルキニル」は、２個ないし１０個の炭素原子と、少なくとも１つの炭素間三重結合とを含む、直鎖、分枝、又は環状の炭化水素基を指す。最大３つの炭素間三重結合が存在してもよい。したがって、「（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル」は、２個ないし１０個の炭素原子を有するアルキニル基を意味する。アルキニル基として、エテニル、プロピニル、ブチニル、３−メチルブチニルなどが挙げられる。アルキニル基の直鎖、分枝、又は環状部分は三重結合を含む場合があり、置換されたアルキニル基が示される場合には、置換されてもよい。
【００５３】
（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリールなど、場合によっては、置換基が０を含む炭素の範囲で定義してもよい。アリールがフェニルであるととられる場合には、この定義は、フェニル自体並びに−ＣＨ２Ｐｈ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｐｈなどを含む。
【００５４】
本明細書で用いる場合、「アリール」は、少なくとも１つの環が芳香族性である、各環において最大７個の原子からなる任意の安定な単環式又は二環式炭素環を意味することを意図する。このようなアリール要素の例として、フェニル、ナフチル、テトラヒドロ−ナフチル、インダニル、及びビフェニルが挙げられる。アリール置換基が二環式であり、１つの環が非芳香族である場合には、結合は芳香環を介したものであると理解される。
【００５５】
用語ヘテロアリールは、本明細書で用いる場合、少なくとも１つの環が芳香族性であり、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群より選択される１個ないし４個のヘテロ原子を含む、各環において最大７個の原子からなる安定な単環式又は二環式環を表す。この定義の範囲内のヘテロアリール基として、それだけには限らないが、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、キノキサリニル、ピラゾリル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、インドリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、テトラヒドロキノリンが挙げられる。以下の複素環についての定義と同様、「ヘテロアリール」はまた、任意の窒素含有ヘテロアリールのＮ−オキシド誘導体を含むと理解される。ヘテロアリール置換基が二環式であり、一方の環が非芳香族であるか、又はヘテロ原子を含まない場合は、結合は、それぞれ、芳香環を介するか、又はヘテロ原子含有環を介すると理解される。置換基Ｑのためのこのようなヘテロアリール部分として、それだけには限らないが、２−ベンゾイミダゾリル、２−キノリニル、３−キノリニル、４−キノリニル、１−イソキノリニル、３−イソキノリニル、及び４−イソキノリニルが挙げられる。
【００５６】
本明細書で用いる場合、用語「複素環」又は「ヘテロシクリル」は、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群より選択される１個ないし４個のヘテロ原子を含む、３員ないし１０員の芳香族又は非芳香族複素環を意味することを意図し、二環式基を含む。したがって、「ヘテロシクリル」は、上記のヘテロアリール並びにそのジヒドロ及びテトラヒドロ類似体を含む。「ヘテロシクリル」のさらなる例として、それだけには限らないが、以下：ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾロニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ナフトピリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、オキサゾリン、イソキサゾリン、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、テトラゾロピリジル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、１，４−ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピリジン−２−オニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、及びテトラヒドロチエニル、及びそれらのＮ−オキシドが挙げられる。ヘテロシクリル置換基の結合は、炭素原子を介してか、又はヘテロ原子を介して生じ得る。
【００５７】
当業者には当然であろうが、本明細書で用いる場合「ハロ」又は「ハロゲン」は、クロロ（Ｃｌ）、フルオロ（Ｆ）、ブロモ（Ｂｒ）、及びヨード（Ｉ）を包含するべく意図される。
式Ｂの一実施態様では、式：
【００５８】
【化９】
2010512312.tif 000011
【００５９】
によって示される部分は、以下の構造：
【００６０】
【化１０】
2010512312.tif 000012
【００６１】
を含む。
【００６２】
式Ｂの別の実施態様では、式：
【００６３】
【化１１】
2010512312.tif 000013
【００６４】
によって示される部分は、
【００６５】
【化１２】
2010512312.tif 000014
【００６６】
である。
【００６７】
一実施態様では、環Ｚは、フェニル及びヘテロシクリルから選択される。
【００６８】
別の実施態様では、環Ｚは、
【００６９】
【化１３】
2010512312.tif 000015
【００７０】
から選択される。
【００７１】
さらに別の実施態様では、環Ｚはフェニルである。
【００７２】
一実施態様では、
【００７３】
【化１４】
2010512312.tif 000016
【００７４】
は、
【００７５】
【化１５】
2010512312.tif 000017
【００７６】
から選択される。
【００７７】
環Ｘ及びＹはまた、さらに置換されてもよいことが理解される。
【００７８】
一実施態様では、ｐは、０、１、２、又は３である。
【００７９】
さらなる実施態様では、ｐは、０、１、又は２である。
【００８０】
別の実施態様では、ｐは１である。
【００８１】
式Ａ又はＢの一実施態様では、Ｒ１は、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６ａで置換されていてもよい。
【００８２】
式Ａ又はＢの別の実施態様では、Ｒ１は、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、及びＮ（Ｒｂ）２から選択され、当該アルキルは、Ｒ６ａで置換されていてもよい。
【００８３】
式Ａ又はＢの別の実施態様では、Ｒ１は、オキソ、ＮＨ２、ＯＨ、ＳＨ、Ｏａ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、当該アルキルは、Ｒ６ａで置換されていてもよい。
【００８４】
式Ａ又はＢの別の実施態様では、Ｒ２は、オキソ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、及びＮ（Ｒｂ）２から選択され、当該アルキルは、Ｒｂ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、オキソ、及びＮ（Ｒｂ）２で置換されていてもよい。
【００８５】
式Ａ又はＢの別の実施態様では、Ｒ３は、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルから選択される。
【００８６】
式Ａ又はＢの別の実施態様では、Ｒ４は、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニルから選択される。
【００８７】
一実施態様では、Ｒｂは独立して、Ｈ及び（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される。
【００８８】
式Ｃの一実施態様では、Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；環Ｘは、４員ないし７員のヘテロシクリルであり；環Ｙは、シクロブチルであり；Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、ヘテロシクリル、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、当該アルキル及びヘテロシクリルは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及びＮ（Ｒｂ）２で置換されていてもよく、ここで、当該Ｒｂは独立して、Ｈ及び（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される。
【００８９】
式Ｃの一実施態様では、Ｒ２は、Ｈ及びハロから選択され；環Ｘは、３員ないし７員のヘテロシクリルであり；環Ｙは、シクロブチルであり；Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、ヘテロシクリル、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、当該アルキル及びヘテロシクリルは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及びＮ（Ｒｂ）２で置換されていてもよく、ここで、当該Ｒｂは独立して、Ｈ及び（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される。
【００９０】
式Ｄの一実施態様では、Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、及びＮＨ２から選択され；Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、ヘテロシクリル、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、当該アルキル及びヘテロシクリルは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及びＮ（Ｒｂ）２で置換されていてもよく、ここで、当該Ｒｂは独立して、Ｈ及び（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される。
【００９１】
式Ｃの一実施態様では、ｐは１であり；Ｒ２は、Ｈ及びハロから選択され；Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、ヘテロシクリル、ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、当該アルキル及びヘテロシクリルは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及びＮ（Ｒｂ）２で置換されていてもよく、ここで当該Ｒｂは独立して、Ｈ及び（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される。
【００９２】
式Ｄの一実施態様では、ｐは０であり、Ｒ１は、ＯＨ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、Ｒ６ａで置換されていてもよい。
【００９３】
式Ｄの一実施態様では、ｐは０であり、Ｒ１は、ＯＨ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、ＯＨ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２−フェニル、及び−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨで置換されていてもよい。
【００９４】
式Ｅの一実施態様では、Ｒ１は、ＯＨ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−アリール、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＯＨ、Ｏｂ（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）ａＮＲ７Ｒ８、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７Ｒ８、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２−（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、及び（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ−ヘテロシクリルから選択され、当該アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルは、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、ＯＨ、（Ｃ＝Ｏ）ａＯｂ（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２−フェニル、及び−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨで置換されていてもよい。
【００９５】
式Ａの化合物の遊離型並びにその薬学的に許容される塩及び立体異性体が本発明の化合物に含まれる。本明細書に例示される、単離された特定の化合物のいくつかは、アミン化合物のプロトン化塩である。用語「遊離型」は、非塩の形のアミン化合物を指す。包含される薬学的に許容される塩は、本明細書に記載される特定の化合物について例示される単離された塩だけでなく、式Ａの化合物の遊離型のすべての通常の薬学的に許容される塩も含む。記載される特定の塩化合物の遊離型は、当該技術分野における技術上既知の方法を用いて単離してもよい。例えば、遊離型は、塩を、適した希塩基水溶液、例えば、希ＮａＯＨ水溶液、炭酸カリウム、アンモニア、及び重炭酸ナトリウムで処理することによって再生してもよい。遊離型は、物理的特性、例えば、極性溶媒における溶解度において、特定のそれぞれの塩の形とは異なり得るが、酸性及び塩基性塩は、そのほかの点では、本発明の目的上、そのそれぞれの遊離型と薬学的に同等である。
【００９６】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、従来の化学法によって塩基性又は酸性部分を含む本発明の化合物から合成できる。通常、塩基性化合物の塩は、イオン交換クロマトグラフィーによってか、遊離塩基を、適した溶媒又は種々の溶媒の組合せ中で、化学量論量の、又は過剰の所望の塩を形成する無機又は有機酸と反応させることのいずれかによって調製する。同様に、酸性化合物の塩も、適当な無機又は有機塩基との反応によって形成される。
【００９７】
したがって、本発明の化合物の薬学的に許容される塩として、塩基性の発明の化合物を無機又は有機酸と反応させることによって形成されるような、本発明の化合物の従来の非毒性塩が挙げられる。例えば、従来の非毒性塩として、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などから誘導されるもの並びに有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ−安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）などから調製されたものが挙げられる。
【００９８】
本発明の化合物が酸性である場合、適した「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される非毒性塩基、例えば、無機塩基及び有機塩基から調製される塩を指す。無機塩基から誘導される塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン塩、マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛などが挙げられる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、及びナトリウム塩が特に好ましい。薬学的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩としては、第一、第二及び第三アミン、置換アミン、例えば、天然に存在する置換アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、アルギニン、ベタインカフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ１−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどの塩が挙げられる。
【００９９】
上記の薬学的に許容される塩及びその他の通常の薬学的に許容される塩の調製は、Ｂｅｒｇら「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９７７年：６６：１〜１９頁によってより十分に記載されている。
【０１００】
生理学的条件下では、化合物中の脱プロトン化酸性部分、例えば、カルボキシル基が陰イオン性であり得、この電子電荷が次いで、プロトン化又はアルキル化塩基性部分、例えば、第四窒素原子の陽イオン電荷に対して内部的にバランスが崩れている可能性があるので、本発明の化合物は、内部塩又は双性イオンの可能性があるということも留意される。
【０１０１】
有用性
本発明の化合物は、Ａｋｔの活性の阻害剤であり、したがって、癌、特に、Ａｋｔ及びＡｋｔの下流細胞標的の活性の異常と関連している癌の治療において有用である。このような癌として、それだけには限らないが、卵巣癌、膵臓癌、乳癌、及び前立腺癌、並びに腫瘍抑制因子ＰＴＥＮが突然変異されている癌（神経膠芽腫を含む）が挙げられる（Ｃｈｅｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９２年）８９：９２６７〜９２７１頁；Ｃｈｅｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６年）９３：３６３６〜３６４１頁；Ｂｅｌｌａｃｏｓａら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（１９９５年）６４：２８０〜２８５頁；Ｎａｋａｔａｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９９年）２７４：２１５２８〜２１５３２頁；Ｇｒａｆｆ、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ（２００２年）６（１）：１０３〜１１３頁；並びにＹａｍａｄａ及びＡｒａｋｉ、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．（２００１年）１１４：２３７５〜２３８２頁；Ｍｉｓｃｈｅｌ及びＣｌｏｕｇｈｅｓｙ、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．（２００３年）１３（１）：５２〜６１頁）。
【０１０２】
本明細書に提供される化合物、組成物、及び方法は、癌の治療にとって特に有用であると思われる。本発明の化合物、組成物、及び方法によって治療できる癌として、それだけには限らないが、以下が挙げられる：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、及び奇形腫；肺：非小細胞肺、気管支原性肺癌（扁平細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（導管腺癌、インスリノーマ、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）、結腸、結腸直腸、直腸；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱及び尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胚性期癌、奇形癌腫、絨毛癌、肉腫、間質性細胞癌腫、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝細胞腫（肝細胞癌）、胆管癌、胆芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨腫、及び巨細胞腫；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、メニンギオサルコーマ（ｍｅｎｉｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形神経膠芽腫、乏突起膠腫、シュワン腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、前腫瘍性子宮頸部形成異常）、卵巣（卵巣癌、［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類の癌腫］、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ−ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌腫）；血液学的：血液（骨髄性白血病［急性及び慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄性増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、ほくろ異形成母斑、脂肪腫、アンジオーマ、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；及び副腎：神経芽細胞腫。したがって、本明細書において提供される用語「癌性細胞」として、上記で同定される状態のいずれか１種を起こしている細胞が挙げられる。
【０１０３】
本発明の化合物、組成物、及び方法によって治療できる癌として、それだけには限らないが、乳房、前立腺、結腸、結腸直腸、肺、非小細胞肺、脳、精巣、胃、膵臓、皮膚、小腸、大腸、咽頭、頭頸部、口腔、骨、肝臓、膀胱、腎臓、甲状腺、及び血液の癌が挙げられる。
【０１０４】
本発明の化合物、組成物、及び方法によって治療できる癌として、乳房、前立腺癌、結腸、卵巣、結腸直腸、肺、及び非小細胞肺の癌が挙げられる。
【０１０５】
本発明の化合物、組成物、及び方法によって治療できる癌として、乳房、結腸、（結腸直腸）、及び肺（非小細胞肺）の癌が挙げられる。
【０１０６】
本発明の化合物、組成物、及び方法によって治療できる癌として、リンパ腫及び白血病が挙げられる。
【０１０７】
Ａｋｔシグナル伝達は、血管新生において複数の重要な段階を調節する。Ｓｈｉｏｊｉｍａ及びＷａｌｓｈ、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．（２００２年）９０：１２４３〜１２５０頁。癌の治療における血管新生阻害剤の有用性は文献において知られている。例えば、Ｊ．ＲａｋらＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５５：４５７５〜４５８０頁、１９９５年及びＤｒｅｄｇｅら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００２年）２（８）：９５３〜９６６頁参照のこと。癌における血管新生の役割は、多数の種類の癌及び組織において示されている：乳癌（Ｇ．Ｇａｓｐａｒｉｎｉ及びＡ．Ｌ．Ｈａｒｒｉｓ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、１９９５年、１３：７６５〜７８２頁；Ｍ．Ｔｏｉら、Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９９４年、８５：１０４５〜１０４９頁）；膀胱癌（Ａ．Ｊ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎら、Ｂｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、１９９４年、７４：７６２〜７６６頁）；結腸癌（Ｌ．Ｍ．Ｅｌｌｉｓら、Ｓｕｒｇｅｒｙ、１９９６年、１２０（５）：８７１〜８７８頁）；及び口腔腫瘍（Ｊ．Ｋ．Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．、１９９４年、１６８：３７３〜３８０頁）。その他の癌として、進行性腫瘍、有毛細胞白血病、メラノーマ、進行性頭頸部癌、転移性腎細胞癌、非ホジキンリンパ腫、転移性乳癌、乳腺癌、進行性メラノーマ、膵臓癌、胃癌、神経膠芽腫、肺癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、種々の充実腫瘍、多発性骨髄腫、転移性前立腺癌、悪性神経膠腫、腎癌、リンパ腫、難治性転移性疾患、難治性多発性骨髄腫、子宮頸癌、カポジ肉腫、再発性未分化神経膠腫、及び転移性結腸癌が挙げられる（Ｄｒｅｄｇｅら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００２年）２（８）：９５３〜９６６頁）。したがって、本出願に開示されるＡｋｔ阻害剤はまた、これらの血管新生関連癌の治療において有用である。
【０１０８】
新血管形成を起こしている腫瘍は、転移の可能性の増大を示す。実際、血管新生は、腫瘍成長及び転移にとって必須である。（Ｓ．Ｐ．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら、Ｃａｎ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６１：３２０６〜３２１１頁（２００１年））。したがって、本出願に開示されるＡｋｔ阻害剤はまた、腫瘍細胞転移を防ぐ、又は減少させるのに有用である。
【０１０９】
さらに、血管新生が関係している疾患を治療又は予防する方法が本発明の範囲内に含まれ、これは、このような治療を必要とする哺乳類に、治療上有効な量の本発明の化合物を投与することからなる。眼の血管新生疾患として、結果として生じる組織損傷の多くが、眼における血管の異常な浸潤に起因してもよい状態の一例がある（２０００年６月２日に公開されたＷＯ００／３０６５１参照のこと）。望ましくない浸潤は、虚血性網膜症、例えば、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、網膜静脈閉塞などに起因するものによって、又は、変性性疾患、例えば、加齢性黄斑変性症において観察される脈絡膜新血管形成によって引き起こされ得る。したがって、本化合物の投与による血管の増殖の阻害は、血管の浸潤を防ぐか、又は血管新生が関係している疾患、例えば、網膜血管化、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症などのような眼の疾患を予防若しくは治療する。
【０１１０】
さらに、血管新生が関係している非悪性疾患、例えば、それだけには限らないが、眼の疾患（例えば、網膜血管化、糖尿病性網膜症、及び加齢性黄斑変性症）、アテローム性動脈硬化症、関節炎、乾癬、肥満、及びアルツハイマー病を治療又は予防する方法が本発明の範囲内に含まれる（Ｄｒｅｄｇｅら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００２年）２（８）：９５３〜９６６頁）。別の実施態様では、血管新生が関係している疾患を治療又は予防する方法は、眼の疾患（例えば、網膜血管化、糖尿病性網膜症、及び加齢性黄斑変性症）、アテローム性動脈硬化症、関節炎、及び乾癬を含む。
【０１１１】
過剰増殖性障害、例えば、再狭窄、炎症、自己免疫疾患、及びアレルギー／喘息を治療する方法が、本発明の範囲内にさらに含まれる。
【０１１２】
ステントをコーティングするための本発明の化合物の使用、したがって、再狭窄の治療及び／又は予防のためのコーティングされたステント上の本発明の化合物の使用が本発明の範囲内にさらに含まれる（ＷＯ０３／０３２８０９）。
【０１１３】
変形性関節炎の治療及び／又は予防のための本発明の化合物の使用が本発明の範囲内にさらに含まれる（ＷＯ０３／０３５０４８）。
【０１１４】
高インスリン症を治療する方法が本発明の範囲内にさらに含まれる。
【０１１５】
本発明の化合物はまた、上記の疾患、特に、癌を治療するのに有用である医薬の調製において有用である。
【０１１６】
本発明の一実施態様では、本発明の化合物は、阻害効力がＰＨドメインに依存する選択的阻害剤である。この実施態様では、本化合物は、ＰＨドメインを欠く末端切断されたＡｋｔタンパク質に対するインビトロ阻害活性の低下又はインビトロ阻害活性がないことを示す。
【０１１７】
さらなる実施態様では、本発明の化合物は、Ａｋｔ１の選択的阻害剤、Ａｋｔ２の選択的阻害剤、及びＡｋｔ１及びＡｋｔ２両方の選択的阻害剤の群から選択される。
【０１１８】
別の実施態様では、本発明の化合物は、Ａｋｔ１の選択的阻害剤、Ａｋｔ２の選択的阻害剤、Ａｋｔ３の選択的阻害剤、及び３種のＡｋｔアイソフォームのうち２種の選択的阻害剤の群から選択される。
【０１１９】
もう１つの実施態様では、本発明の化合物は、３種のＡｋｔアイソフォームのうちすべての選択的阻害剤であるが、ＰＨドメイン、ヒンジ領域又はＰＨドメインとヒンジ領域の両方を欠失するよう修飾されたようなＡｋｔアイソフォームのうち１種、２種、又はすべての阻害剤ではない。
【０１２０】
本発明は、Ａｋｔ活性を阻害することを必要とする哺乳類に、薬学的に有効な量の本発明の化合物を投与することを含む、Ａｋｔ活性を阻害する方法をさらに対象とする。
【０１２１】
本発明の化合物は、哺乳類、例えば、ヒトに、単独で、又は標準的薬学のプラクティスにしたがって、医薬組成物中で、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と組み合わせて投与してもよい。本化合物は、経口的に、又は静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸、及び局所投与経路をはじめ、非経口的に投与してもよい。
【０１２２】
有効成分を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、水性若しくは油性懸濁液、分散性散剤若しくは顆粒剤、エマルジョン、ハード若しくはソフトカプセル剤又はシロップ剤若しくはエリキシル剤のような経口使用に適した形であってもよい。経口使用に意図される組成物は、医薬組成物の製造のための当技術分野で公知の任意の方法にしたがって調製してよく、このような組成物は、薬学的に洗練された、美味な製剤を提供するために、甘味剤、矯味剤、着色剤、及び保存剤からなる群から選択される１種以上の物質を含んでもよい。錠剤は、錠剤の製造に適している非毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合物中に有効成分を含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性の希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、又はリン酸ナトリウム；造粒剤及び崩壊剤、例えば、微晶質セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチ、又はアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニル−ピロリドン、又はアラビアゴム、及び滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクであってもよい。錠剤は、コーティングされていなくてもよいし、薬物の嫌な味をマスクするため、若しくは消化管における崩壊及び吸収を遅延し、それによって長期間にわたる持続作用を提供するために既知技術によってコーティングされていもよい。例えば、水溶性の味をマスクする物質、例えば、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース若しくはヒドロキシプロピルセルロース又は時間遅延物質、例えば、エチルセルロース、酢酸酪酸セルロースを使用してもよい。
【０１２３】
経口使用用製剤はまた、有効成分が不活性の固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム若しくはカオリンと混合されているハードゼラチンカプセル剤として、又は有効成分が水溶性担体、例えば、ポリエチレングリコール若しくはオイル媒体、例えば、ピーナッツオイル、流動パラフィン若しくはオリーブオイルと混合されているソフトゼラチンカプセル剤として提示してもよい。
【０１２４】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合物中に活性物質を含む。このような賦形剤として、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアガムがあり；分散剤又は湿潤剤は、天然に存在するリン脂質、例えば、レシチン、又はアルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、若しくはエチレンオキシドの長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレン−オキシセタノール、若しくはエチレンオキシドの、脂肪酸及びヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、若しくはエチレンオキシドの、脂肪酸及び無水ヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。水性懸濁液はまた、１種以上の保存料、例えば、エチル又はｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート；１種以上の着色剤；１種以上の矯味剤；及び１種以上の甘味剤、例えば、スクロース、サッカリン若しくはアスパルテームを含んでもよい。
【０１２５】
油性懸濁液は、有効成分を、植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ、若しくはココナッツオイル、又は鉱油、例えば、流動パラフィンに懸濁することによって製剤してもよい。油性懸濁液は、増粘剤、例えば、蜜蝋、ハードパラフィン、又はセチルアルコールを含んでもよい。美味な経口製剤を提供するために、上記のものなどの甘味剤及び矯味剤を加えてもよい。これらの組成物は、抗酸化物質、例えば、ブチル化ヒドロキシアニソール又はα−トコフェロールの添加によって保存できる。
【０１２６】
水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性散剤及び顆粒剤は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤及び１種以上の保存料との混合物中の有効成分を提供する。適した分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤は上記にすでに記載されているものによって示されている。さらなる賦形剤として、例えば、甘味剤、矯味剤、及び着色剤も存在してもよい。これらの組成物は、抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸の添加によって保存できる。
【０１２７】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形であってもよい。油相は、植物油、例えば、オリーブ油若しくはラッカセイ油、又は鉱油、例えば、流動パラフィン又はこれらの混合物であってもよい。適した乳化剤は、天然に存在するリン脂質、例えば、ダイズレシチン、並びに脂肪酸と無水ヘキシトールに由来するエステル若しくは部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、並びに前記部分エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。エマルジョンはまた、甘味料、矯味剤、保存料、及び抗酸化物質を含んでもよい。
【０１２８】
シロップ剤及びエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、又はスクロースを用いて製剤してよい。このような製剤はまた、鎮痛薬、防腐剤、矯味剤、及び着色剤、及び抗酸化薬を含んでもよい。
【０１２９】
本医薬組成物は、滅菌注射用水溶液の形であってもよい。使用してもよい許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。
【０１３０】
滅菌注射用製剤はまた、有効成分が油相に溶解している滅菌注射用水中油型マイクロエマルジョンであってもよい。例えば、有効成分をまず、ダイズオイルとレシチンの混合物に溶解してよい。次いで、このオイル溶液を、水とグリセロールの混合物に入れ、マイクロエマルジョンを形成するよう処理する。
【０１３１】
注射用溶液又はマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射によって患者の血流中に入れてもよい。或いは、本発明の化合物の一定循環濃度を維持するような方法で溶液又はマイクロエマルジョンを投与することが有利であってもよい。このような一定濃度を維持するために、連続的静脈内送達装置を利用してもよい。このような装置の一例として、Ｄｅｌｔｅｃ  ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ（商標）モデル５４００静脈内ポンプがある。
【０１３２】
本医薬組成物は、筋肉内投与及び皮下投与用の滅菌注射用水性又は油性懸濁液の形であってもよい。この懸濁液は、上記に記載されている適した分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用い、既知技術に従って製剤してよい。滅菌注射用製剤はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液のような、非毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液又は懸濁液であってもよい。さらに、滅菌固定油も、溶媒又は懸濁媒体として従来用いられている。この目的には、合成モノ又はジグリセリドをはじめ、任意の無刺激性固定油を使用してよい。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸は注射用物質の調製において用途がある。
【０１３３】
式Ａの化合物はまた、薬物の直腸投与のための坐剤の形で投与してもよい。これらの組成物は、薬物を、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、したがって、直腸で融解して薬物を放出する適した非刺激性賦形剤と混合することによって調製できる。このような物質として、ココアバター、グリセリン化ゼラチン、硬化植物油、種々の分子量のポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールの脂肪酸エステルの混合物が挙げられる。
【０１３４】
局所使用用には、式Ａの化合物を含む、クリーム、軟膏、ゼリー、溶液、又は懸濁液などが用いられる。（この適用目的上、局所適用はマウスウォッシュ及び口腔洗浄薬を含むものとする。）
【０１３５】
本発明の化合物は、適した経鼻ビヒクル及び送達装置の局所使用によって経鼻形態で、又は当業者に周知の経皮皮膚パッチの形のものを用いて経皮経路によって投与してもよい。経皮送達系の形で投与されるには、投与量の投与は、当然、投与計画を通じて間欠的ではなく連続となる。本発明の化合物はまた、ココアバター、グリセリン化ゼラチン、硬化植物油、種々の分子量のポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールの脂肪酸エステルの混合物などの基剤を用いて坐剤として送達してもよい。
【０１３６】
本発明の組成物をヒト被験体に投与する場合には、一日用量は、通常、処方医師によって決定され、投与量は、個々の患者の年齢、体重及び反応並びに患者の症状の重症度に従って変わる。
【０１３７】
本発明の化合物を利用する投与計画は、種類、種、年齢、体重、性別及び治療されている癌の種類、治療される疾患の重篤度（すなわち、病期）、投与経路、患者の腎機能及び肝機能並びに用いられる個々の化合物又はその塩をはじめとする種々の因子に従って選択できる。当業の医師又は獣医ならば、治療するため、例えば、疾患の進行を予防、阻害（完全又は部分的に）又は停止するための、必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、本発明の化合物は、最大１０，０００ｍｇの合計一日用量で投与してよい。本発明の化合物は、１日１回（ＱＤ）投与してもよいし、１日２回（ＢＩＤ）及び１日３回（ＴＩＤ）など複数回の１日用量に分割してもよい。本発明の化合物は、最大１０，０００ｍｇ、例えば、２，０００ｍｇ、３，０００ｍｇ、４，０００ｍｇ、６，０００ｍｇ、８，０００ｍｇ、又は１０，０００ｍｇの合計一日用量で投与してよく、これは、１回の一日用量で投与してよいし、又は上記のような複数回の一日用量に分割してもよい。
【０１３８】
例えば、本発明の化合物は、最大１，０００ｍｇの合計一日用量で投与してよい。本発明の化合物は、１日１回（ＱＤ）投与してもよいし、１日２回（ＢＩＤ）及び１日３回（ＴＩＤ）など複数回の一日用量に分割してもよい。本発明の化合物は、最大１，０００ｍｇ、例えば、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、又は１０００ｍｇの合計一日用量で投与してよく、これは、１回の一日用量で投与してよいし、又は上記のような複数回の一日用量に分割してもよい。
【０１３９】
さらに、投与は連続、すなわち、毎日であってもよいし、間欠的であってもよい。用語「間欠的」又は「間欠的に」とは、本明細書で用いる場合、規則的又は不規則的のいずれかの間隔で停止すること及び開始することを意味する。例えば、本発明の化合物の間欠的投与は、１週間あたり１ないし６日の投与である場合もあるし、又は周期的な（例えば、２ないし８連続週間の毎日の投与、次いで、最大１週間の投与を行わない休止期間）投与を意味する場合もあるし、又は一日おきの投与を意味する場合もある。
【０１４０】
さらに、本発明の化合物は、連続して２、３週間の間と、それに続く休止期間の間、上記のスケジュールのいずれかに従って投与してよい。例えば、本発明の化合物は、上記のスケジュールのいずれか１種に従って、２ないし８週間と、それに続く、１週間の休止期間の間、１００ないし５００ｍｇの用量で１日２回、１週間あたり３日ないし５日投与してもよい。別の特定の実施態様では、本発明の化合物は、１日３回、２連続週間と、それに続く休止の１週間の間投与してもよい。
【０１４１】
本発明の化合物の任意の１種以上の特定の投与量及び投与計画はまた、併用療法において使用される任意の１種以上の治療薬（本明細書において以下、「第２の治療薬」と呼ばれる）に適用できる。
【０１４２】
さらに、この第２の治療薬の特定の投与量及び投与スケジュールは、さらに変わる場合があり、最適用量、投薬スケジュール及び投与経路は、使用されている特定の第２の治療薬に基づいて決定される。
【０１４３】
当然、本発明の化合物の投与経路は、第２の治療薬の投与経路とは独立している。一実施態様では、本発明の化合物の投与は、経口投与である。別の実施態様では、本発明の化合物の投与は、静脈内投与である。従って、これらの実施態様に一致して、本発明の化合物は、経口的に又は静脈内に投与され、第２の治療薬は、経口的に、非経口的に、腹腔内に、静脈内に、動脈内に、経皮的に、舌下に、筋肉内に、直腸性に、経頬側的に、鼻腔内に、リポソームによって、吸入によって、経膣的に、眼内に、カテーテル、又はステントによる局所送達によって、皮下に、脂肪内に、関節腔内に、くも膜下腔内に、又は持続放出投与形で投与してよい。
【０１４４】
さらに、本発明の化合物及び第２の治療薬は、同一の投与様式によって投与してよい。すなわち、両薬剤が、例えば、経口的に、ＩＶによって投与される。しかし、本発明の化合物を１つの投与様式、例えば、経口によって投与し、かつ第２の治療薬を別の投与様式、例えば、ＩＶ又は本明細書において上記で記載される任意のその他の投与様式によって投与することも本発明の範囲内である。
【０１４５】
第１の治療手順、本発明の化合物の投与は、第２の治療手順、すなわち、第２の治療薬の前に行ってもよいし、第２の治療薬での治療の後におこなってもよく、第２の治療薬での治療と同時であってもよく、又はそれらの組み合わせであってもよい。例えば、合計治療期間は、本発明の化合物について決定されてもよい。第２の治療薬は、本発明の化合物での治療の開始前に投与してもよいし、本発明の化合物での治療の後に投与してもよい。さらに、抗癌治療は、本発明の化合物の投与期間中に投与してもよいが、本発明の化合物の全治療期間にわたって発生しなくてもよい。
【０１４６】
本発明の化合物はまた、治療薬、化学療法薬、及び抗癌剤と組み合わせても有用である。目下開示される化合物の、治療薬、化学療法薬、及び抗癌剤との組み合わせは、本発明の範囲内である。このような薬剤の例は、Ｖ．Ｔ．Ｄｅｖｉｔａ及びＳ．Ｈｅｌｌｍａｎ（編）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｂｙ、第６版（２００１年２月１５日）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓに見ることができる。当業者ならば、薬物及び関与する癌の個々の特徴に基づいて、薬剤のどの組み合わせが有用であるかを見極めることができる。このような薬剤として、以下が挙げられる：エストロゲンレセプターモジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、及びその他の血管新生阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、細胞増殖及び生存シグナル伝達の阻害剤、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ治療薬、γ−セクレターゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を干渉する薬剤及び細胞周期チェックポイントを干渉する薬剤。本発明の化合物は、放射線療法と同時投与される場合に特に有用である。
【０１４７】
「エストロゲン受容体モジュレーター」とは、機序に関わらず、エストロゲンの、受容体との結合を干渉するか、阻害する化合物を指す。エストロゲン受容体モジュレーターの例として、それだけには限らないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾン、及びＳＨ６４６が挙げられる。
【０１４８】
「アンドロゲン受容体モジュレーター」とは、機序にかかわらず、アンドロゲンの、受容体との結合を干渉するか、阻害する化合物を指す。アンドロゲン受容体モジュレーターの例として、フィナステライド及びその他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、及び酢酸アビラテロンが挙げられる。
【０１４９】
「レチノイド受容体モジュレーター」とは、機序に関わらず、レチノイドの、受容体との結合を干渉するか、阻害する化合物を指す。このようなレチノイド受容体モジュレーターの例として、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチナミド、及びＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが挙げられる。
【０１５０】
「細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤」とは、細胞死を引き起こすか、又は細胞が機能するのを直接的に干渉することによって主に細胞増殖を阻害するか、又は細胞有糸分裂を阻害若しくは干渉する化合物、例えば、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素で活性化可能な化合物、微小管阻害剤／微小管安定化剤、有糸分裂キネシンの阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、有糸分裂進行に関与しているキナーゼの阻害剤、増殖因子及びサイトカインシグナル伝達経路に関与しているキナーゼの阻害剤、代謝拮抗剤、生物応答修飾剤、ホルモン／抗ホルモン治療薬、造血性増殖因子、モノクローナル抗体によってターゲッティグされる治療薬、トポイソメラーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤、及びオーロラキナーゼ阻害剤を指す。
【０１５１】
細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤の例として、それだけには限らないが、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトール、ラニムスチン、ホテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファアミド、ＧＰＸ１００、（トランス、トランス、トランス）−ビス−ｍｕ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ｍｕ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（ＷＯ００／５００３２参照のこと）、ラフキナーゼ阻害剤（例えば、Ｂａｙ４３−９００６）、及びｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ＷｙｅｔｈのＣＣＩ−７７９）が挙げられる。
【０１５２】
低酸素で活性化可能な化合物の一例として、チラパザミンがある。
【０１５３】
プロテアソーム阻害剤の例として、それだけには限らないが、ラクタシスチン、及びＭＬＮ３４１（Ｖｅｌｃａｄｅ）が挙げられる。
【０１５４】
微小管阻害剤／微小管安定化剤の例として、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、オーリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポシロン（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号及び同６，２８８，２３７号参照のこと）、及びＢＭＳ１８８７９７が挙げられる。一実施態様では、エポチロンは、微小管阻害剤／微小管安定化剤に含まれない。
【０１５５】
トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかの例として、トポテカン、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−チャートリュウシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ルルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ、５ａＢ、８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロオキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−デ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、及びジメスナがある。
【０１５６】
有糸分裂キネシン、特に、ヒト有糸分裂キネシンＫＳＰの阻害剤の例は、公開ＷＯ０３／３９４６０、ＷＯ０３／０５００６４、ＷＯ０３／０５０１２２、ＷＯ０３／０４９５２７、ＷＯ０３／０４９６７９、ＷＯ０３／０４９６７８、ＷＯ０４／０３９７７４、ＷＯ０３／０７９９７３、ＷＯ０３／０９９２１１、ＷＯ０３／１０５８５５、ＷＯ０３／１０６４１７、ＷＯ０４／０３７１７１、ＷＯ０４／０５８１４８、ＷＯ０４／０５８７００、ＷＯ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、ＷＯ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７、ＷＯ０５／０１７１９０、ＵＳ２００５／０１７６７７６に記載されている。一実施形態では、有糸分裂キネシンの阻害剤として、それだけには限らないが、ＫＳＰの阻害剤、ＭＫＬＰ１の阻害剤、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害剤、ＭＣＡＫの阻害剤、及びＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害剤が挙げられる。
【０１５７】
「ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤」の例として、それだけには限らないが、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８、及びスクリプタイドが挙げられる。その他のヒストン脱アセチル化酵素阻害剤のさらなる参照は、以下の原稿中に見ることができる；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．らＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７〜５１１６頁（２００３年）。
【０１５８】
「有糸分裂進行に関与しているキナーゼの阻害剤」として、それだけには限らないが、オーロラキナーゼの阻害剤、ポロ様キナーゼの阻害剤（ＰＬＫ）（特に、ＰＬＫ−１の阻害剤）、ｂｕｂ−１の阻害剤、及びｂｕｂ−Ｒ１の阻害剤が挙げられる。「オーロラキナーゼ阻害剤」の一例として、ＶＸ−６８０がある。
【０１５９】
「抗増殖剤」として、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えば、Ｇ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、及びＩＮＸ３００１並びに代謝拮抗剤、例えば、エノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビン・オクホスフェート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）、ホステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクチナサイジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スウェインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒドチオセミカルバゾン、及びトラスツズマブが挙げられる。
【０１６０】
モノクローナル抗体によってターゲッティングされる治療薬の例として、癌細胞特異的又は標的細胞特異的モノクローナル抗体と結合している細胞傷害剤又は放射性同位元素を有する治療薬が挙げられる。例として、ベキサールが挙げられる。
【０１６１】
「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」とは、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼの阻害剤を指す。使用してもよいＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の例として、それだけには限らないが、ロバスタチン（メバコール（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８号、同４，２９４，９２６号、及び同４，３１９，０３９号参照のこと）、シンバスタチン（ゾコール（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４号、同４，８２０，８５０号、及び同４，９１６，２３９号を参照のこと）、プラバスタチン（プラバコール（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７号、同４，５３７，８５９号、同４，４１０，６２９号、同５，０３０，４４７号、及び同５，１８０，５８９号参照のこと）、フルバスタチン（レスコール（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２号、同４，９１１，１６５号、同４，９２９，４３７号、同５，１８９，１６４号、同５，１１８，８５３号、同５，２９０，９４６号、及び同５，３５６，８９６号参照のこと）、アトルバスタチン（リピトール（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５号、同４，６８１，８９３号、同５，４８９，６９１号、及び同５，３４２，９５２号参照のこと）、及びセリバスタチン（リバスタチン（ｒｉｖａｓｔａｔｉｎ）及びベイコール（ＢＡＹＣＨＯＬ）（登録商標）としても知られる；米国特許第５，１７７，０８０号参照のこと）が挙げられる。本方法において使用してもよいこれらの及びさらなるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の構造式は、Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ、「コレステロール・ロワーリング・ドラッグス（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｌｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ）」、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、８５〜８９頁（１９９６年２月５日）の８７頁及び米国特許第４，７８２，０８４号、及び同４，８８５，３１４号に記載されている。本明細書で用いる場合、用語ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、薬学的に許容されるラクトン及びオープンアシッド形（すなわち、ラクトン環が開環されて遊離酸を形成している）並びにＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有する化合物の塩及びエステルの形のすべてを含み、したがって、このような塩、エステル、オープンアシッド、及びラクトンの形の使用は本発明の範囲内に含まれる。
【０１６２】
「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤」とは、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素のうち任意の１種又は任意の組合せを阻害する化合物、例えば、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴアーゼ）、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴアーゼ−Ｉ）、及びゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴアーゼ−ＩＩ、Ｒａｂ  ＧＧＰＴアーゼとも呼ばれる）を指す。
【０１６３】
プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の例は、以下の刊行物及び特許に見ることができる：ＷＯ９６／３０３４３、ＷＯ９７／１８８１３、ＷＯ９７／２１７０１、ＷＯ９７／２３４７８、ＷＯ９７／３８６６５、ＷＯ９８／２８９８０、ＷＯ９８／２９１１９、ＷＯ９５／３２９８７、米国特許第５，４２０，２４５号、同５，５２３，４３０号、同５，５３２，３５９号、同５，５１０，５１０号、同５，５８９，４８５号、同５，６０２，０９８号、欧州特許公報０６１８２２１号、同０６７５１１２号、同０６０４１８１号、同０６９６５９３号、ＷＯ９４／１９３５７、ＷＯ９５／０８５４２、ＷＯ９５／１１９１７、ＷＯ９５／１２６１２、ＷＯ９５／１２５７２、ＷＯ９５／１０５１４、米国特許第５，６６１，１５２号、ＷＯ９５／１０５１５、ＷＯ９５／１０５１６、ＷＯ９５／２４６１２、ＷＯ９５／３４５３５、ＷＯ９５／２５０８６、ＷＯ９６／０５５２９、ＷＯ９６／０６１３８、ＷＯ９６／０６１９３、ＷＯ９６／１６４４３、ＷＯ９６／２１７０１、ＷＯ９６／２１４５６、ＷＯ９６／２２２７８、ＷＯ９６／２４６１１、ＷＯ９６／２４６１２、ＷＯ９６／０５１６８、ＷＯ９６／０５１６９、ＷＯ９６／００７３６、米国特許第５，５７１，７９２号、ＷＯ９６／１７８６１、ＷＯ９６／３３１５９、ＷＯ９６／３４８５０、ＷＯ９６／３４８５１、ＷＯ９６／３００１７、ＷＯ９６／３００１８、ＷＯ９６／３０３６２、ＷＯ９６／３０３６３、ＷＯ９６／３１１１１、ＷＯ９６／３１４７７、ＷＯ９６／３１４７８、ＷＯ９６／３１５０１、ＷＯ９７／００２５２、ＷＯ９７／０３０４７、ＷＯ９７／０３０５０、ＷＯ９７／０４７８５、ＷＯ９７／０２９２０、ＷＯ９７／１７０７０、ＷＯ９７／２３４７８、ＷＯ９７／２６２４６、ＷＯ９７／３００５３、ＷＯ９７／４４３５０、ＷＯ９８／０２４３６、及び米国特許第５，５３２，３５９号。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の役割の一例については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ第３５巻、９、１３９４〜１４０１頁（１９９９年）参照のこと。
【０１６４】
「血管新生抑制剤」とは、機序にかかわらず、新しい血管の形成を阻害する化合物を指す。血管新生抑制剤の例としては、それだけには限らないが、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１の阻害剤（ＶＥＧＦＲ１）、及びＦｌｋ−１／ＫＤＲの阻害（ＶＥＧＦＲ２）剤、上皮由来、繊維芽細胞由来又は血小板由来増殖因子の阻害剤、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤、インテグリン遮断薬、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ペントサンポリサルフェート、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、例えば、アスピリン及びイブプロフェンのような非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）並びにセレコキシブ及びロフェコキシブのような選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤（ＰＮＡＳ、第８９巻、７３８４頁（１９９２年）；ＪＮＣＩ、第６９巻、４７５頁（１９８２年）；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．第１０８巻、５７３頁（１９９０年）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ．、第２３８巻、６８頁（１９９４年）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、第３７２巻、８３頁（１９９５年）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．第３１３巻、７６頁（１９９５年）；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、第１６巻、１０７頁（１９９６年）；Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．第７５巻、１０５頁（１９９７年）；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、第５７巻、１６２５頁（１９９７年）；Ｃｅｌｌ、第９３巻、７０５頁（１９９８年）；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、第２巻、７１５頁（１９９８年）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７４巻、９１１６頁（１９９９年））、ステロイド性抗炎症薬（例えば、副腎皮質ステロイド、ミネラルコルチコイド、デキサミタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレド、ベタメタゾン）、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンギオスタチン、トロポニン−１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．）、１０５：１４１〜１４５頁（１９８５年）参照のこと）及びＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１７巻、９６３〜９６８頁（１９９９年、１０月）；Ｋｉｍら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２、８４１〜８４４頁（１９９３年）；ＷＯ００／４４７７７、及びＷＯ００／６１１８６参照のこと）が挙げられる。
【０１６５】
血管新生を調節又は阻害し、また、本発明の化合物と併用してもよいその他の治療薬として、血液凝固及び繊維素溶解システムを調節又は阻害する薬剤が挙げられる（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９〜６９２頁（２０００年）における総説を参照のこと）。血液凝固及び繊維素溶解経路を調節又は阻害するような薬剤の例として、それだけには限らないが、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０〜２３頁、（１９９８年）参照）、低分子量ヘパリン及びカルボキシペプチダーゼＵ阻害剤（活性トロンビン活性化可能繊維素溶解阻害剤［ＴＡＦＩａ］の阻害剤としても知られる）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．１０１：３２９〜３５４頁（２００１年）参照のこと）が挙げられる。ＴＡＦＩａ阻害剤は、米国出願第６０／３１０，９２７号（２００１年、８月８日に出願）、及び同６０／３４９，９２５号（２００２年１月１８日に出願）に記載されている。
【０１６６】
「細胞周期チェックポイントを干渉する薬剤」とは、細胞周期チェックポイントシグナルを伝達するプロテインキナーゼを阻害し、それによって癌細胞をＤＮＡ損傷剤に対して感作させる化合物を指す。このような薬剤として、ＡＴＲ、ＡＴＭ、及びＣＨＫ１１及びＣＨＫ１２キナーゼの阻害剤並びにｃｄｋ及びｃｄｃキナーゼ阻害剤が挙げられ、７−ヒドロキシスタウロスポリン、フラボピリドール、ＣＹＣ２０２（Ｃｙｃｌａｃｅｌ）、及びＢＭＳ−３８７０３２によって具体的に示される。
【０１６７】
「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を干渉する薬剤」とは、ＲＴＫを、したがって、発癌及び腫瘍進行に関与する機序を阻害する化合物を指す。このような薬剤として、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３、及びｃ−Ｍｅｔの阻害剤が挙げられる。さらなる薬剤として、Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ、４１１：３５５〜３６５頁、２００１年によって記載されるＲＴＫの阻害剤が挙げられる。
【０１６８】
「細胞増殖及び生存シグナル伝達経路の阻害剤」とは、細胞表面受容体のシグナル伝達カスケード下流を阻害する化合物を指す。このような薬剤として、セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤（例えば、それだけには限らないが、ＷＯ０２／０８３０６４、ＷＯ０２／０８３１３９、ＷＯ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６４３２、ＷＯ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ０３／０８６４０４、ＷＯ０３／０８６２７９、ＷＯ０３／０８６３９４、ＷＯ０３／０８４４７３、ＷＯ０３／０８６４０３、ＷＯ２００４／０４１１６２、ＷＯ２００４／０９６１３１、ＷＯ２００４／０９６１２９、ＷＯ２００４／０９６１３５、ＷＯ２００４／０９６１３０、ＷＯ２００５／１００３５６、ＷＯ２００５／１００３４４、ＵＳ２００５／０２９９４１、ＵＳ２００５／４４２９４、ＵＳ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９に記載されるようなＡｋｔの阻害剤）、Ｒａｆキナーゼの阻害剤（例えば、ＢＡＹ−４３−９００６）、ＭＥＫの阻害剤（例えば、ＣＩ−１０４０及びＰＤ−０９８０５９）、ｍＴＯＲの阻害剤（例えば、Ｗｙｅｔｈ  ＣＣＩ−７７９）、ＰＩ３Ｋの阻害剤（例えば、ＬＹ２９４００２）が挙げられる。
【０１６９】
上記のように、ＮＳＡＩＤとの組み合わせは、強力なＣＯＸ−２阻害剤であるＮＳＡＩＤの使用に向けられる。この明細書の目的上、ＮＳＡＩＤは、１μＭ以下ののＣＯＸ−２の阻害についてＩＣ５０を有すると、細胞又はミクロソームアッセイによって測定される場合に強力である。
【０１７０】
本発明はまた、選択的ＣＯＸ−２阻害剤であるＮＳＡＩＤとの組合せを包含する。この明細書の目的上、ＣＯＸ−２の選択的阻害剤であるＮＳＡＩＤは、細胞又はミクロソームアッセイによって評価される、ＣＯＸ−１のＩＣ５０を上回るＣＯＸ−２のＩＣ５０の比率によって測定される、少なくとも１００倍の、ＣＯＸ−１を上回るＣＯＸ−２の阻害に対する特異性を有するものとして定義される。このような化合物として、それだけには限らないが、すべて参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，４７４，９９５号、同５，８６１，４１９号、同６，００１，８４３号、同６，０２０，３４３号、同５，４０９，９４４号、同５，４３６，２６５号、同５，５３６，７５２号、同５，５５０，１４２号、同５，６０４，２６０号、同５，６９８，５８４号、同５，７１０，１４０号、ＷＯ９４／１５９３２、米国特許第５，３４４，９９１号、同５，１３４，１４２号、同５，３８０，７３８号、同５，３９３，７９０号、同５，４６６，８２３号、同５，６３３，２７２号、及び同５，９３２，５９８号に開示されるものが挙げられる。
【０１７１】
本治療方法において特に有用であるＣＯＸ−２の阻害剤として、３−フェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン；及び５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリジン；又はそれらの薬学的に許容される塩がある。
【０１７２】
ＣＯＸ−２の特異的阻害剤として記載されており、したがって、本発明において有用である化合物として、それだけには限らないが、以下が挙げられる：パラコキシブ、ベクストラ（登録商標）、及びセレブレックス（登録商標）、又はそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
【０１７３】
血管新生抑制剤のその他の例として、それだけには限らないが、エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジナナリン、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸マンノペンタオースホスフェート、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホネート）、及び３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）が挙げられる。
【０１７４】
上記で用いた「インテグリン遮断薬」とは、生理学的リガンドの、αｖβ３インテグリンとの結合を選択的に拮抗、阻害、又は対抗する化合物、生理学的リガンドの、αｖβ５インテグリンとの結合を選択的に拮抗、阻害、又は対抗する化合物、生理学的リガンドの、αｖβ３インテグリン及びαｖβ５インテグリンの両方との結合を拮抗、阻害、又は対抗する化合物及び毛細血管内皮細胞上に発現される特定のインテグリン（類）の活性を拮抗、阻害、又は対抗する化合物を指す。この用語はまた、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１、及びα６β４インテグリンのアンタゴニストも指す。この用語はまた、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１、及びα６β４インテグリンの任意の組合せのアンタゴニストも指す。
【０１７５】
チロシンキナーゼ阻害剤のいくつかの具体的な例として、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチリデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホネート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミン、及びＥＭＤ１２１９７４が挙げられる。
【０１７６】
抗癌化合物以外の化合物との組合せも、本方法に包含される。例えば、目下、特許請求される化合物の、ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニスト及びＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組合せは、特定の悪性腫瘍の治療において有用である。ＰＰＡＲ−γ及びＰＰＡＲ−δとは、核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ及びδである。内皮細胞上でのＰＰＡＲ−γの発現及び血管新生におけるその関与は、文献に報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８年；３１：９０９〜９１３頁；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）；２７４：９１１６〜９１２１頁；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０００年；４１：２３０９〜２３１７頁参照のこと）。より最近、ＰＰＡＲ−γアゴニストは、インビトロでＶＥＧＦに対する血管新生反応を阻害することがわかり、トログリタゾン及びマレイン酸ロシグリタゾンは両方とも、マウスにおいてレチナール新血管新生の発生を阻害する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００１年；１１９：７０９〜７１７頁）。ＰＰＡＲ−γアゴニスト及びＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例として、それだけには限らないが、チアゾリジンジオン（例えば、ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン、ロシグリタゾン、及びピオグリタゾン）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸（ＵＳＳＮ０９／７８２，８５６に開示される）、及び２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸（ＵＳＳＮ６０／２３５，７０８及び６０／２４４，６９７に開示される）が挙げられる。
【０１７７】
本発明の別の実施態様は、ここで開示される化合物の、癌の治療のための遺伝子療法との併用である。癌を治療するための遺伝子戦略の概観については、Ｈａｌｌら（Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６１：７８５〜７８９頁、１９９７年）及びＫｕｆｅら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第５版、８７６〜８８９頁、ＢＣ  Ｄｅｃｋｅｒ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ２０００）参照のこと。遺伝子療法は、任意の腫瘍抑制遺伝子を送達するために使用できる。このような遺伝子の例として、それだけには限らないが、組換えウイルス媒介遺伝子伝達によって送達され得るｐ５３（例えば、米国特許第６，０６９，１３４号参照のこと）、ｕＰＡ／ｕＰＡＲアンタゴニスト（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９８年８月；５（８）：１１０５〜１３頁中、「アデノウイルス・メディエイテッド・デリバリー・オブ・ア・ユーピーエー／ユーピーエーアール・アンタゴニスト・サプレセズ・アンギオジェネシス−ディペンデント・チューモア・グロース・アンド・ディセミネーション・イン・マイス（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｕＰＡ／ｕＰＡＲ  アンタゴニスト  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ）」、及びインターフェロンγ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００年；１６４：２１７〜２２２頁）が挙げられる。
【０１７８】
本発明の化合物はまた、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）、特に、輸送体タンパク質の高レベルの発現と関連しているＭＤＲの阻害剤と併用投与してもよい。このようなＭＤＲ阻害剤として、ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）の阻害剤、例えば、ＬＹ３３５９７９、ＸＲ９５７６、ＯＣ１４４−０９３、Ｒ１０１９２２、ＶＸ８５３、及びＰＳＣ８３３（バルスポダール）が挙げられる。
【０１７９】
本発明の化合物は、本発明の化合物の、単独又は放射線療法とともの使用に起因し得る、悪心又は嘔吐、例えば、急性、遅発性、晩期、及び先行嘔吐を治療するための制吐剤と併用してもよい。嘔吐の予防又は治療には、本発明の化合物を、その他の制吐剤、特に、ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ３受容体アンタゴニスト、例えば、オンダンセトロン、グラニセトロン、トロピセトロン、及びザチセトロン（ｚａｔｉｓｅｔｒｏｎ）、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニスト、例えば、バクロフェン、コルチコステロイド、例えば、デカドロン（デキサメタゾン）、ケナログ、アリストコート、ナサリド（Ｎａｓａｌｉｄｅ）、プレフェリド（Ｐｒｅｆｅｒｉｄ）、ベネコルテン（Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎ）、又は米国特許第２，７８９，１１８号、同２，９９０，４０１号、同３，０４８，５８１号、同３，１２６，３７５号、同３，９２９，７６８号、同３，９９６，３５９号、同３，９２８，３２６号、及び同３，７４９，７１２号に開示されるものなどのその他のもの；抗ドーパミン、例えば、フェノチアジン（例えば、プロクロルペラジン、フルフェナジン、チオリダジン、及びメソリダジン）、メトクロプラミ、又はドロナビノールと併用してもよい。別の実施態様では、本発明の化合物の投与に起因し得る嘔吐の治療又は予防のための、ニューロキニン−１受容体アンタゴニスト、５ＨＴ３受容体アンタゴニスト及びコルチコステロイドより選択される制吐剤との連結治療が開示される。
【０１８０】
本発明の化合物と組合せたニューロキニン−１受容体アンタゴニストの使用は、例えば、米国特許第５，１６２，３３９号、同５，２３２，９２９号、同５，２４２，９３０号、同５，３７３，００３号、同５，３８７，５９５号、同５，４５９，２７０号、同５，４９４，９２６号、同５，４９６，８３３号、同５，６３７，６９９号、同５，７１９，１４７号；欧州特許公報ＥＰ０３６０３９０、同０３９４９８９、同０４２８４３４、同０４２９３６６、同０４３０７７１、同０４３６３３４、同０４４３１３２、同０４８２５３９、同０４９８０６９、同０４９９３１３、同０５１２９０１、同０５１２９０２、同０５１４２７３、同０５１４２７４、同０５１４２７５、同０５１４２７６、同０５１５６８１、同０５１７５８９、同０５２０５５５、同０５２２８０８、同０５２８４９５、同０５３２４５６、同０５３３２８０、同０５３６８１７、同０５４５４７８、同０５５８１５６、同０５７７３９４、同０５８５９１３、同０５９０１５２、同０５９９５３８、同０６１０７９３、同０６３４４０２、同０６８６６２９、同０６９３４８９、同０６９４５３５、同０６９９６５５、同０６９９６７４、同０７０７００６、同０７０８１０１、同０７０９３７５、同０７０９３７６、同０７１４８９１、同０７２３９５９、同０７３３６３２、及び同０７７６８９３；ＰＣＴ国際特許公報ＷＯ９０／０５５２５、同９０／０５７２９、同９１／０９８４４、同９１／１８８９９、同９２／０１６８８、同９２／０６０７９、同９２／１２１５１、同９２／１５５８５、同９２／１７４４９、同９２／２０６６１、同９２／２０６７６、同９２／２１６７７、同９２／２２５６９、同９３／００３３０、同９３／００３３１、同９３／０１１５９、同９３／０１１６５、同９３／０１１６９、同９３／０１１７０、同９３／０６０９９、同９３／０９１１６、同９３／１００７３、同９３／１４０８４、同９３／１４１１３、同９３／１８０２３、同９３／１９０６４、同９３／２１１５５、同９３／２１１８１、同９３／２３３８０、同９３／２４４６５、同９４／００４４０、同９４／０１４０２、同９４／０２４６１、同９４／０２５９５、同９４／０３４２９、同９４／０３４４５、同９４／０４４９４、同９４／０４４９６、同９４／０５６２５、同９４／０７８４３、同９４／０８９９７、同９４／１０１６５、同９４／１０１６７、同９４／１０１６８、同９４／１０１７０、同９４／１１３６８、同９４／１３６３９、同９４／１３６６３、同９４／１４７６７、同９４／１５９０３、同９４／１９３２０、同９４／１９３２３、同９４／２０５００、同９４／２６７３５、同９４／２６７４０、同９４／２９３０９、同９５／０２５９５、同９５／０４０４０、同９５／０４０４２、同９５／０６６４５、同９５／０７８８６、同９５／０７９０８、同９５／０８５４９、同９５／１１８８０、同９５／１４０１７、同９５／１５３１１、同９５／１６６７９、同９５／１７３８２、同９５／１８１２４、同９５／１８１２９、同９５／１９３４４、同９５／２０５７５、同９５／２１８１９、同９５／２２５２５、同９５／２３７９８、同９５／２６３３８、同９５／２８４１８、同９５／３０６７４、同９５／３０６８７、同９５／３３７４４、同９６／０５１８１、同９６／０５１９３、同９６／０５２０３、同９６／０６０９４、同９６／０７６４９、同９６／１０５６２、同９６／１６９３９、同９６／１８６４３、同９６／２０１９７、同９６／２１６６１、同９６／２９３０４、同９６／２９３１７、同９６／２９３２６、同９６／２９３２８、同９６／３１２１４、同９６／３２３８５、同９６／３７４８９、同９７／０１５５３、同９７／０１５５４、同９７／０３０６６、同９７／０８１４４、同９７／１４６７１、同９７／１７３６２、同９７／１８２０６、同９７／１９０８４、同９７／１９９４２、及び同９７／２１７０２；及び英国特許公報第２２６６５２９号、同２２６８９３１号、同２２６９１７０号、同２２６９５９０号、同２２７１７７４号、同２２９２１４４号、同２２９３１６８号、同２２９３１６９号、及び同２３０２６８９号に十分に記載されている。このような化合物の調製は、参照により本明細書に組み込まれる前記の特許及び刊行物に十分に記載されている。
【０１８１】
一実施態様では、本発明の化合物と併用するためのニューロキニン−１受容体アンタゴニストは、米国特許第５，７１９，１４７に記載される、２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オキソ−１Ｈ，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、又はその薬学的に許容される塩より選択される。
【０１８２】
本発明の化合物はまた、貧血の治療において有用な薬剤とともに投与してもよい。このような貧血治療薬として、例えば、連続赤血球新生受容体アクチベーター（例えば、エポエチンα）がある。
【０１８３】
本発明の化合物はまた、好中球減少症の治療において有用である薬剤とともに投与してもよい。このような好中球減少症治療薬として、例えば、好中球の産生及び機能を調節する造血増殖因子、例えば、ヒト顆粒球コロニー刺激因子、（Ｇ−ＣＳＦ）がある。Ｇ−ＣＳＦの例として、フィルグラスチムが挙げられる。
【０１８４】
本発明の化合物はまた、免疫増強薬、例えば、レバミソール、イソプリノシン、及びザダキシンとともに投与してもよい。
【０１８５】
本発明の化合物はまた、Ｐ４５０阻害剤、例えば、生体異物、キニジン、チラミン、ケトコナゾール、テストステロン、キニーネ、メチラポン、カフェイン、フェネルジン、ドキソルビシン、トロレアンドマイシン、シクロベンザプリン、エリスロマイシン、コカイン、フィラフィリン（ｆｕｒａｆｙｌｉｎｅ）、シメチジン、デキストロメトルファン、リトナビル、インジナビル、アンプレナビル、ジルチアゼム、テルフェナジン、ベラパミル、コルチゾール、イトラコナゾール、ミベフラジル、ネファゾドン、及びネルフィナビルと組み合わせて、癌の治療又は予防するのに有用である。
【０１８６】
本発明の化合物はまた、Ｐｇｐ及び／又はＢＣＲＰ阻害剤、例えば、シクロスポリンＡ、ＰＳＣ８３３、ＧＦ１２０９１８、クレモホル（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ、フミトレモルギンＣ、Ｋｏ１３２、Ｋｏ１３４、イレッサ、メシル酸イマチニブ、ＥＫＩ−７８５、Ｃｌ１０３３、ノボビオシン、ジエチルスチルベストロール、タモキシフェン、レセルピン、ＶＸ−７１０、トリプロスタチンＡ、フラボノイド、リトナビル、サキナビル、ネルフィナビル、オメプラゾール、キニジン、ベラパミル、テルフェナジン、ケトコナゾール、ニフェデピン、ＦＫ５０６、アミオダロン、ＸＲ９５７６、インジナビル、アンプレナビル、コルチゾール、テストステロン、ＬＹ３３５９７９、ＯＣ１４４−０９３、エリスロマイシン、ビンクリスチン、ジゴキシン、及びタリノロールと組み合わせて、癌の治療又は予防するのに有用である。
【０１８７】
本発明の化合物はまた、ビスホスホネート（ビスホスホネート、ジホスホネート、ビスホスホン酸、及びジホスホン酸を含むと理解される）と組み合わせて、癌、例えば、骨癌の治療又は予防するのに有用である。ビスホスホネートの例として、それだけには限らないが、以下が挙げられる：エチドロネート（ダイドロネル）、パミドロネート（アレディア）、アレンドロネート（フォサマックス）、リセドロネート（アクトネル）、ゾレドロネート（ゾメタ）、イバンドロネート（ボニバ）、インカドロネート、又はシマドロネート、クロドロネート、ＥＢ−１０５３、ミノドロネート、ネリドロネート、ピリドロネート、及びチルドロネート並びにありとあらゆるその薬学的に許容される塩、誘導体、水和物、及び混合物。
【０１８８】
本発明の化合物はまた、アロマターゼ阻害剤と組合せて、乳癌を治療又は予防するのに有用であってもよい。アロマターゼ阻害剤の例として、それだけには限らないが、アナストロゾール、レトロゾール、及びエキセメスタンが挙げられる。
【０１８９】
本発明の化合物はまた、ｓｉＲＮＡ治療薬と組合せて、癌を治療又は予防するのに有用であってもよい。
【０１９０】
本発明の化合物はまた、γ−セクレターゼ阻害剤及び／又はＮＯＴＣＨシグナル伝達の阻害剤と組合せて投与してもよい。このような阻害剤として、ＷＯ０１／９００８４、ＷＯ０２／３０９１２、ＷＯ０１／７０６７７、ＷＯ０３／０１３５０６、ＷＯ０２／３６５５５、ＷＯ０３／０９３２５２、ＷＯ０３／０９３２６４、ＷＯ０３／０９３２５１、ＷＯ０３／０９３２５３、ＷＯ２００４／０３９８００、ＷＯ２００４／０３９３７０、ＷＯ２００５／０３０７３１、ＷＯ２００５／０１４５５３、ＵＳＳＮ１０／９５７，２５１、ＷＯ２００４／０８９９１１、ＷＯ０２／０８１４３５、ＷＯ０２／０８１４３３、ＷＯ０３／０１８５４３、ＷＯ２００４／０３１１３７、ＷＯ２００４／０３１１３９、ＷＯ２００４／０３１１３８、ＷＯ２００４／１０１５３８、ＷＯ２００４／１０１５３９、及びＷＯ０２／４７６７１に記載される化合物（例えば、ＬＹ−４５０１３９）が挙げられる。
【０１９１】
以下の公開；ＷＯ０２／０８３０６４、ＷＯ０２／０８３１３９、ＷＯ２／０８３１４０、ＵＳ  ２００４−０１１６４３２、ＷＯ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ０３／０８６４０４、ＷＯ０３／０８６２７９、ＷＯ０３／０８６３９４、ＷＯ０３／０８４４７３、ＷＯ０３／０８６４０３、ＷＯ２００４／０４１１６２、ＷＯ２００４／０９６１３１、ＷＯ２００４／０９６１２９、ＷＯ２００４／０９６１３５、ＷＯ２００４／０９６１３０、ＷＯ２００５／１００３５６、ＷＯ２００５／１００３４４、ＵＳ２００５／０２９９４１、ＵＳ２００５／４４２９４、ＵＳ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９中に開示されるＡｋｔの阻害剤及び本発明の化合物はまた、カリウム塩、マグネシウム塩、β−遮断薬（例えば、アテノロール）、及びエンドセリン−ａ（ＥＴａ）アンタゴニストと組み合わせて、心血管ホメオスタシスを維持する目的で有用である。
【０１９２】
以下の公開；ＷＯ０２／０８３０６４、ＷＯ０２／０８３１３９、ＷＯ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６４３２、ＷＯ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ０３／０８６４０４、ＷＯ０３／０８６２７９、ＷＯ０３／０８６３９４、ＷＯ０３／０８４４７３、ＷＯ０３／０８６４０３、ＷＯ２００４／０４１１６２、ＷＯ２００４／０９６１３１、ＷＯ２００４／０９６１２９、ＷＯ２００４／０９６１３５、ＷＯ２００４／０９６１３０、ＷＯ２００５／１００３５６、ＷＯ２００５／１００３４４、ＵＳ２００５／０２９９４１、ＵＳ２００５／４４２９４、ＵＳ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９中に開示されるＡｋｔの阻害剤及び本発明の化合物もまた、インスリン、インスリン分泌促進物質、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、メトホルミン、ソマトスタチン受容体アゴニスト、例えば、オクトレオチド、ＤＰＰ４阻害剤、スルホニル尿素、及びα−グルコシダーゼ阻害剤と組み合わせて、グルコースホメオスタシスを維持する目的で有用である。
【０１９３】
本発明の化合物はまた、ＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせて、癌を治療又は予防するのに有用であってもよい。
【０１９４】
本発明の化合物はまた、以下の治療薬と組み合わせて、癌を治療するのに有用であり得る：アバレリックス（プレナキス・デポー（Ｐｌｅｎａｘｉｓ  ｄｅｐｏｔ）（登録商標））；アルデスロイキン（プロキン（Ｐｒｏｋｉｎｅ）（登録商標））；アルデスロイキン（プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）（登録商標））；アレムツヅマブ（カンパス（登録商標））；アリトレチノイン（パンレチン（登録商標））；アロプリノール（ジロプリム（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ）（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサレン（登録商標））；アミホスチン（エチオール（Ｅｔｈｙｏｌ）（登録商標））；アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））；三酸化ヒ素（トリセノックス（登録商標））；アスパラギナーゼ（エルスパール（Ｅｌｓｐａｒ）（登録商標））；アザシチジン（ビダザ（Ｖｉｄａｚａ）（登録商標））；ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（アバスチン（登録商標））；ベキサロテンカプセル（タルグレチン（登録商標））；ベキサロテンゲル（タルグレチン（登録商標））；ブレオマイシン（ブレノキサン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）（登録商標））；ボルテゾミブ（ベルケード（登録商標））；ブスルファン静脈内（ブスルフェクス（登録商標））；ブスルファン経口（ミレラン（登録商標））；カルステロン（メトサルブ（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ）（登録商標））；カペシタビン（ゼローダ（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；カルムスチン（ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（グリアデル（登録商標））；ポリフェプロサン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒｏｓａｎ）２０インプラントととものカルムスチン（グリアデル  ウエハー（登録商標））；セレコキシブ（セレブレックス（登録商標））；セツキシマブ（アービタックス（登録商標））；クロラムブシル（ロイケラン（登録商標））；シスプラチン（プラチノール（登録商標））；クラドリビン（ロイスタチン（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（クロラー（Ｃｌｏｌａｒ）（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、ネオサール（Ｎｅｏｓａｒ）（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン注射（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン錠剤（登録商標））；シタラビン（シトサール（Ｃｙｔｏｓａｒ）−Ｕ（登録商標））；シタラビンリポソーム（デポシト（ＤｅｐｏＣｙｔ）（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ−ドム（Ｄｏｍｅ）（登録商標））；ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ（コスメゲン（登録商標））；ダルベポエチンアルファ（アラネスプ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（ダムオキソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ）（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（ダウノルビシン（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（セルビジン（登録商標））；デニロイキンジフチトクス（オンタック（Ｏｎｔａｋ）（登録商標））；デクスラゾキサン（ジネカード（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（登録商標））；ドセタキセル（タキソテール（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシンＰＦＳ（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、ルベックス（Ｒｕｂｅｘ��（登録商標））；ドキソルビシン（アドリアマイシンＰＦＳ注射（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（ドロモスタノロン（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（マステロン注射（登録商標））；エリオットＢ溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（エリオットＢ溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（登録商標））；エピルビシン（エレンス（Ｅｌｌｅｎｃｅ）（登録商標））；エポエチンアルファ（エポゲン（登録商標））；エルロチニブ（タルセバ（登録商標））；エストラムスチン（エムシト（Ｅｍｃｙｔ）（登録商標））；リン酸エトポシド（エトポフォス（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ）（登録商標））；エトポシド、ＶＰ−１６（ベプシド（登録商標））；エキセメスタン（アロマシン（登録商標））；フィルグラスチム（ニューポジェン（登録商標））；フロクスウリジン（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（フルダラ（登録商標））；フルオロウラシル、５−ＦＵ（アドルシル（Ａｄｒｕｃｉｌ）（登録商標））；フルベストラント（ファスロデックス（登録商標））；ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標））；ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））；ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ゾラデックスインプラント（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ゾラデックス（登録商標））；酢酸ヒストレリン（ヒストレリンインプラント（登録商標））；ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））；イブリツモマブ・ティウキセタン（ゼバリン（登録商標））；イダルビシン（イダマイシン（登録商標））；イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（グリーベック（登録商標））；インターフェロンアルファ２ａ（ロフェロンＡ（登録商標））；インターフェロンアルファ−２ｂ（イントロンＡ（登録商標））；イリノテカン（カンプトサール（登録商標））；レナリドマイド（レブリミド（登録商標））；レトロゾール（フェマーラ（登録商標））；ロイコボリン（ウェルコボリン（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ）（登録商標）、ロイコボリン（登録商標））；酢酸ロイプロリド（エリガード（登録商標））；レバミソール（エルガミソル（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）（登録商標））；ロムスチン、ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン、ナイトロジェンマスタード（マスタージェン（登録商標））；酢酸メゲストロール（メゲース（登録商標））；メルファラン、Ｌ−ＰＡＭ（アルケラン（登録商標））；メルカプトプリン、６−ＭＰ（プリネトール（登録商標））；メスナ（メスネックス（登録商標））；メスナ（メスネックスタブ（登録商標））；メトトレキサート（メトトレキサート（登録商標））；メトキサレン（ウバデックス（Ｕｖａｄｅｘ）（登録商標））；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（登録商標））；ミトタン（リソドレン（登録商標））；ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））；フェンプロピオン酸ナンドロロン（デュラボリン−５０（登録商標））；ネララビン（アラノン（Ａｒｒａｎｏｎ）（登録商標））；ノフェツモマブ（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）（ベルルマ（Ｖｅｒｌｕｍａ）（登録商標））；オプレルベキン（ニューメガ（Ｎｅｕｍｅｇａ）（登録商標））；オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））；パクリタキセル（パキセン（Ｐａｘｅｎｅ）（登録商標））；パクリタキセル（タキソール（登録商標））；パクリタキセルタンパク質結合粒子（アブラキサン（登録商標））；パリフェルミン（ケピバンス（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ）（登録商標））；パミドロネート（アレディア（登録商標））；ペガデマーゼ（アダジェン（ペガデマーゼウシ）（登録商標））；ペガスパルガーゼ（オンカスパール（Ｏｎｃａｓｐａｒ）（登録商標））；ペグフィルグラスチム（Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（ニューラスタ（登録商標））；ペメトレキセド二ナトリウム（アリムタ（登録商標））；ペントスタチン（ニペント（Ｎｉｐｅｎｔ）（登録商標））；ピポブロマン（ベルサイト（Ｖｅｒｃｙｔｅ）（登録商標））；プリカマイシン、ミトラマイシン（ミトラシン（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ）（登録商標））；ポルフィマーナトリウム（フォトフリン（登録商標））；プロカルバジン（マツラン（登録商標））；キナクリン（アタブリン（登録商標））；ラスブリカーゼ（エリテック（Ｅｌｉｔｅｋ）（登録商標））；リツキシマブ（リツキサン（登録商標））；サルグラモスチム（ロイキン（登録商標））；サルグラモスチム（プロキン（Ｐｒｏｋｉｎｅ）（登録商標））；ソラフェニブ（ネクサバール（登録商標））；ストレプトゾシン（ザノサール（登録商標））；マレイン酸スニチニブ（ステント（Ｓｕｔｅｎｔ）（登録商標））；タルク（スクレロソール（登録商標））；タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（登録商標））；テニポシド、ＶＭ−２６（ブモン（Ｖｕｍｏｎ）（登録商標））；テストラクトン（テスラック（Ｔｅｓｌａｃ）（登録商標））；チオグアニン、６−ＴＧ（チオグアニン（登録商標））；チオテパ（チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標））；トポテカン（ハイカムチン（登録商標））；トレミフェン（フェアストン（登録商標））；トシツモマブ（ベキサール（登録商標））；トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（ベキサール（登録商標））；トラスツズマブ（ヘルセプチン（登録商標））；トレチノイン、ＡＴＲＡ（ベサノイド（登録商標））；ウラシルマスタード（ウラシルマスタードカプセル（登録商標））；バルルビシン（バルスター（Ｖａｌｓｔａｒ）（登録商標））；ビンブラスチン（ベルバン（Ｖｅｌｂａｎ）（登録商標））；ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））；ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））；ゾレドロネート（ゾメタ（登録商標））；及びボリノスタット（ゾリンザ（登録商標））。
【０１９５】
したがって、本発明の範囲は、ここで特許請求される化合物の、エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、血管新生阻害剤、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、ＰＰＡＲ−δアゴニスト、固有の多剤耐性の阻害剤、制吐剤、貧血の治療において有用な薬剤、好中球減少症の治療において有用な薬剤、免疫増強薬、細胞増殖及び生存シグナル伝達の阻害剤、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ治療薬、γ−セクレターゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を干渉する薬剤、細胞周期チェックポイントを干渉する薬剤、及び上記で列挙される治療薬のいずれかから選択される第２の化合物と組合せた使用を包含する。
【０１９６】
本発明の化合物に関連して、用語「投与」及びその変形（例えば、化合物を「投与すること」）とは、化合物又は化合物のプロドラッグを、治療を必要とする動物の系に導入することを意味する。本発明の化合物又はそのプロドラッグが、１種以上のその他の活性物質（例えば、細胞傷害剤など）と組合せて提供される場合には、「投与」及びその変形は、本化合物又はそのプロドラッグとその他の物質の同時及び逐次導入を含むと各々理解される。
【０１９７】
本明細書で用いる場合、用語「組成物」とは、指定量の指定成分を含む生成物並びに指定量の指定成分の組合せに直接的又は間接的に起因する任意の生成物を包含するものとする。
【０１９８】
本明細書で用いる場合、用語「治療上有効な量」とは、研究者、獣医、医師又はその他の臨床医によって求められている、組織、系、動物又はヒトにおける生物学的反応又は医学的反応を誘発する活性化合物又は医薬品の量を意味する。
【０１９９】
用語「癌を治療すること」又は「癌の治療」とは、癌性状態に冒された哺乳類への投与を指し、また癌性細胞を死滅させることによって癌性状態を軽減する効果だけでなく、癌の増殖及び／又は転移の阻害をもたらす効果も指す。
【０２００】
一実施態様では、第２の化合物として用いられる血管新生阻害剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、上皮由来増殖因子の阻害剤、繊維芽細胞由来増殖因子の阻害剤、血小板由来増殖因子の阻害剤、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤、インテグリン遮断薬、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ペントサンポリサルフェート、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンギオスタチン、トロポニン−１、又はＶＥＧＦに対する抗体から選択される。一実施態様では、エストロゲン受容体モジュレーターは、タモキシフェン、又はラロキシフェンである。
【０２０１】
治療上有効な量の本発明の化合物を、放射線療法と組合せて、及び／又はエストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、血管新生阻害剤、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、ＰＰＡＲ−δアゴニスト、固有の多剤耐性の阻害剤、制吐剤、貧血の治療において有用な薬剤、好中球減少症の治療において有用な薬剤、免疫増強薬、細胞増殖及び生存シグナル伝達の阻害剤、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ治療薬、γ−セクレターゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を干渉する薬剤、細胞周期チェックポイントを干渉する薬剤、及び上記で列挙される治療薬のいずれかから選択される第２の化合物と組合せて投与することを含む癌を治療する方法も、特許請求の範囲に含まれる。
【０２０２】
本発明のさらにもう１つの実施態様は、治療上有効な量の本発明の化合物を、パクリタキセル又はトラスツズマブと組合せて投与することを含む、癌を治療する方法である。
【０２０３】
本発明は、治療上有効な量の本発明の化合物を、ＣＯＸ−２阻害剤と組合せて投与することを含む、癌を治療又は予防する方法をさらに包含する。
【０２０４】
本発明はまた、治療上有効な量の本発明の化合物と、エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、血管新生阻害剤、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、ＰＰＡＲ−δアゴニスト、細胞増殖及び生存シグナル伝達の阻害剤、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ治療薬、γ−セクレターゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を干渉する薬剤、細胞周期チェックポイントを干渉する薬剤及び上記で列挙される治療薬のいずれかから選択される第２の化合物とを含む、癌を治療又は予防するのに有用な医薬組成物を含む。
【０２０５】
特定される、すべての特許、刊行物、及び係属特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０６】
化学の説明において、及び以下の実施例において用いられる略語は以下の通りである：ＡＥＢＳＦ（ｐ−アミノエチルベンゼンスルホニルフルオリド）；ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）；ＢｕＬｉ（ｎ−ブチルリチウム）；ＣＤＣｌ３（クロロホルム−ｄ）；ＣｕＩ（ヨウ化銅）；ＣｕＳＯ４（硫酸銅）；ＤＣＥ（ジクロロエタン）；ＤＣＭ（ジクロロメタン）；ＤＥＡＤ（ジエチルアゾジカルボキシレート）；ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）；ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）；ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；ＤＰＰＡ（ジフェニルホスホリルアジド）；ＤＴＴ（ジチオトレイトール）；ＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；ＥＤＴＡ（エチレン−ジアミン四酢酸）；ＥＧＴＡ（エチレン−グリコール四酢酸）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；ＥｔＯＨ（エタノール）；ＨＯＡｃ（酢酸）；ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）；ＨＲＭＳ（高分解能質量スペクトル）；ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフ−質量分析計）；ＬＨＭＤＳ（リチウムビス（トリメチルシリル）アミド）；ＬＲＭＳ（低分解能質量スペクトル）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ＭＰ−Ｂ（ＣＮ）Ｈ３（マクロ多孔性シアノボロヒドリド）；ＮａＨＣＯ３（炭酸水素ナトリウム）；Ｎａ２ＳＯ４（硫酸ナトリウム）；Ｎａ（ＯＡｃ）３ＢＨ（ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド）；ＮＨ４ＯＡｃ（酢酸アンモニウム）；ＮＢＳ（Ｎ−ブロモスクシンアミド）；ＮＭＲ（核磁気共鳴）；ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）；ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）；Ｐｄ（ｄｐｐｆ）（［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム）；Ｐｄ（Ｐｈ３）４（パラジウム（０）テトラキス−トリフェニルホスフィン）；ＰＯＣｌ３（オキシ塩化リン）；ＰＳ−ＤＩＥＡ（ポリスチレンジイソプロピルエチルアミン）；ＰＳ−ＰＰｈ３（ポリスチレン−トリフェニルホスフィン）；ＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフロリド）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；及びＴＭＳＣＨ２Ｎ２（トリメチルシリルジアゾメタン）及びＡｃ（アセチル）；ＢＯＣ（ｔ−ブトキシカルボニル）；Ｂｕ（ブチル）；Ｃａｌ（計算値）；Ｃａｌｃ’ｄ（計算値）；ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）；ＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）；Ｅｑ（当量）；Ｅｔ（エチル）；ＨＯＢＴ（ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ＩＰＡ（イソプロパノール）；ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフ−質量分析計）；Ｍｅ（メチル）；ＭｅＣＮ（アセトニトリル）；ＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリジノン；Ｐｒ（プロピル）；Ｐｙｒ（ピリジン）；Ｓａｔ（飽和）、及びＴｏｓｉｃ（ｐ−トルエンスルホン酸）。
【０２０７】
本発明の化合物は、以下の反応スキームに示される反応、さらに、文献において公知であるか、又は実験手順に示されるその他の標準的な操作を用いることによって調製できる。したがって、以下の例示的反応スキームは、列挙される化合物に、又は例示目的のために用いられた任意の特定の置換基に制限されない。反応スキームにおいて示される置換基番号付けは、特許請求の範囲において用いられるものと必ずしも相関しておらず、本明細書において上記の式Ａの定義下で複数の置換基が場合により認められる場合には、明確にするために、化合物と結合される単一の置換基が示されていることが多い。
【０２０８】
反応スキームの概要
反応スキームＩ及びＩＩは、本発明の化合物を調製するための有用な詳細を提供する。必要な中間体は市販されている場合もあり、文献の手順に従って調製してもよい。
【０２０９】
反応スキームＩ中に示されるように、フェニル酢酸誘導体を、まず、ＬＨＭＤＳなどの塩基を用い、３−クロロ−２−クロロメチル−１−プロペンでアルキル化してＩ−１を得る。次いで、例えば、オゾンを用いてオレフィンを酸化的に開裂して、ケトンＩ−２を得、これをエチレングリコールなどのジオールと反応させてＩ−３を得る。次いで、塩基性条件下での環化及び加水分解による後処理によって、シクロアルキル化合物Ｉ−４が得られる。アシルアジドの生成と、それに続く転位及び得られたイソシアネートの適当なアルコールでの捕獲によって、カルバメートＩ−５が得られる。シアン化によって、この場合には、パラジウムによって触媒され、ニトリルＩ−６が得られる。Ｉ−６の脱保護と、それに続く、求核ベンジルグリニャール試薬との反応及び加水分解による後処理によって、ケトンＩ−７が得られる。塩基性条件下での、Ｉ−７の、アルデヒドＩ−８との縮合によって、クロロナフチリジンＩ−９が得られる。クロリンの、ヒドラジンでの置換によって、ヒドラジンＩ−１０が得られる。アシル化と、それに続く、酸性条件下でのｉｎ  ｓｉｔｕ環化によってトリアゾロナフチリジンＩ−１１が得られ、アミンの、この場合にはＴＦＡでの脱保護によって、Ｉ−１２が生じる。Ｒ１がアミノアルキル基である本発明の化合物は、反応スキームＩＩに概説される手順に従って調製できる。ヒドラジドＩ−１０を、カルボジイミドと反応させると、尿素が生じ、これを、酸性条件下でｉｎ  ｓｉｔｕ環化すると、アルキルアミノトリアゾールＩＩ−１が得られる。次いで、脱保護によって、ＩＩ−２が得られる。
【０２１０】
【化１６】
2010512312.tif 000018
【０２１１】
【化１７】
2010512312.tif 000019
【実施例】
【０２１２】
提供される実施例及びスキームは、本発明のさらなる理解を補助することを意図するものである。用いられる特定の材料、種、及び条件は、本発明をさらに例証することを意図するものであって、その妥当な範囲を制限するものではない。
【０２１３】
【化１８】
2010512312.tif 000020
【０２１４】
エチル２−（４−ブロモフェニル）−４−（クロロメチル）ペンタ−４−エノアート（１−１）
−７８℃で、ＴＨＦ（８００ｍＬ）中のエチル（４−ブロモフェニル）アセテート（１４３ｇ、５８８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の、１．１３当量）を加えた。３０分後、カニューレによって、−７８℃のＴＨＦ（５００ｍＬ）中の３−クロロ−２−クロロメチル−１−プロペン（１４７ｇ、１１８０ｍｍｏｌ）の溶液に、反応混合物を加えた。この反応物を−７８℃から室温に１５時間かけてゆっくりと加温させた。重炭酸ナトリウムに、反応混合物を注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、１〜２０％Ｅｔｏａｃ／ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を真空除去すると、ベンジル４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１−１）が、透明なオイルとして得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３３２．５。
【０２１５】
エチル２−（４−ブロモフェニル）−５−クロロ−４−オキソペンタノアート（１−２）
−７８℃の、メタノール（４０ｍＬ）及びＤＣＭ（４０ｍＬ）中のエチル２−（４−ブロモフェニル）−４−（クロロメチル）ペンタ−４−エノアート（１−１）（７．３ｇ、２５ｍｍｏｌ）の溶液）をとおして、反応液がわずかに青色に変わるまで（６時間）、Ｏ３をバブリングした。反応物を、さらに１時間撹拌させ、その時点で、反応混合物をとおして、溶液が無色になるまでＮ２ガスをバブリングした。反応物に、過剰の硫化メチル（３．７５ｇ、６０．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を−７８から室温に加温させた。反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、ＤＣＭで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、１〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いて溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を真空除去すると、エチル２−（４−ブロモフェニル）−５−クロロ−４−オコソペンタノアート（１−２）が、固体として得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：１５３．２。
【０２１６】
エチル２−（４−ブロモフェニル）−３−［２−（クロロメチル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］プロパノアート（１−３）
トルエン（３００ｍＬ）中のエチル２−（４−ブロモフェニル）−５−クロロ−４−オキソペンタノアート（１−２）（３５ｇ、１０５ｍｍｏｌ）及びエチレングリコール（１９．５ｇ、３１５ｍｍｏｌ）の溶液に、パラトルエンスルホン酸（１００ｍｇ）を加え、この反応物を、ディーンスタークトラップを用いて還流に６時間加熱した。反応混合物を濃縮し、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いて溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、濃縮し、得られた固体を、ＥｔＯＡｃ及びヘキサンから再結晶化させると、エチル２−（４−ブロモフェニル）−３−［２−（クロロメチル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］プロパノアート（１−３）が、白色固体として得られた。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３７８。
【０２１７】
２−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸（１−４）
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の、−７８℃に冷却したエチル２−（４−ブロモフェニル）−３−［２−（クロロメチル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］プロパノアート（１−３）（２７ｇ、７１．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（８．５８ｇ、２１４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を−７８℃から室温にゆっくりと加温させた。室温になると、１Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）を加え、反応混合物を一晩撹拌した。粗反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウムに注ぎ入れ、クロロホルムで洗浄した。水層をＨＣｌで酸性化し、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、１〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を濃縮し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶化させると、２−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸（１−４）が、白色固体として得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３１４。
【０２１８】
ｔ−ブチル［２−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル］カルバメート（１−５）
ｔ−ブタノール（２３１ｍＬ、３．２５ｍｏｌ）中の、２−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸（１−４）（４０．７ｇ、１３０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＰＰＡ（３５．８ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、Ｎ２下、１００℃に一晩加熱した。この反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、７〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を真空除去すると、ｔ−ブチル［２−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル］カルバメート（１−５）が得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３８５。
【０２１９】
ｔ−ブチル［２−（４−シアノフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル］カルバメート（１−６）
ジオキサン（１００ｍＬ）及びＤＭＦ（１００ｍＬ）中のｔ−ブチル［２−（４−ブロモフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル］カルバメート（１−５）（２１．３ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）の溶液に、シアン化亜鉛（６．５２ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）及びビス（トリ−ｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（２．８４ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、Ｎ２下、１２０℃で１時間加熱した。この反応混合物を室温に冷却し、濾過し、濃縮した。粗残渣を、１〜６０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を真空除去すると、ｔ−ブチル［２−（４−シアノフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル］カルバメート（１−６）が得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３３１。
【０２２０】
ｔ−ブチル｛２−［４−（フェニルアセチル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−７）
−７８℃の、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のｔ−ブチル［２−（４−シアノフェニル）−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル］カルバメート（１−６）（１５．０ｇ、４５．４ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化イソプロピルマグネシウム（ＴＨＦ中、２２．７ｍＬ、４５．４ｍｍｏｌ、２Ｍ）を加えた。１時間後、塩化ベンジルマグネシウム（（ＴＨＦ中）６８ｍＬ、１３５ｍｍｏｌ、２Ｍ）を加え、反応物を室温に５時間かけて、ゆっくりと加温させた。反応混合物を飽和塩化アンモニウム中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、１〜６０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を真空除去すると、ｔ−ブチル｛２−［４−（フェニルアセチル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−７）が得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４２４。
【０２２１】
ｔ−ブチル｛２−［４−（５−クロロ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−９）
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のｔ−ブチル｛２−［４−（フェニルアセチル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−７）（８．８ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１４．４ｇ、１０４ｍｍｏｌ）及び１−８（５．３３ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、１〜８０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶媒を真空除去すると、ｔ−ブチル｛２−［４−（５−クロロ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−９）が得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：５４５。
【０２２２】
ｔ−ブチル｛２−［４−（５−ヒドラジノ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−１０）
ジオキサン（１００ｍＬ）中のｔ−ブチル｛２−［４−（５−クロロ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−９）（５ｇ、９．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン（３．０ｇ、９２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃に１時間加熱した。この反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、ｔ−ブチル｛２−［４−（５−ヒドラジノ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−１０）が、黄色固体として得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：５４０。
【０２２３】
ｔ−ブチル（２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）カルバメート（１−１１）
ＤＭＡ（２００ｍＬ）中１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（７．０ｇ、５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣ（１１ｇ、５６ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（８．５ｇ、５６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、６０℃で１時間撹拌した。次いで、ｔ−ブチル｛２−［４−（５−ヒドラジノ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−１０）（３０ｇ、５６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６０℃でさらに２時間撹拌し、この時点で、酢酸（１７ｇ、２８０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８０℃で一晩撹拌した。この反応混合物を室温に冷却し、１Ｎ  ＮａＯＨでクエンチし、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、ＤＣＭ中の１０％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を、濃縮し、得られた固体を、メタノールから再結晶化させると、ｔ−ブチル（２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）カルバメート（１−１１）が、白色固体として得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６３０。
【０２２４】
２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１２）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｔ−ブチル（２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）（１−１１）の溶液に、Ｎ２下、室温で、ＴＦＡ（５０ｍＬ）を２時間かけて加えた。この反応物を１Ｎ  ＮａＯＨ（６５０ｍＬ）でクエンチし、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、メタノールから再結晶化させると、２−｛４−［３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１２）が、白色固体として得られた。
ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ＝５３０．２２９９，ｏｂｓｅｒｖｅｄ＝５３０．２３１５；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．４５−９．４（ｍ，１Ｈ），９．０５（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．４８−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．４０（ｍ，１Ｈ）７．３８−７．３（ｍ，７Ｈ），４．０３−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．９−３．８８（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），２．９０−２．８５（ｍ，２Ｈ），２．５５−２．４８（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｓ，２Ｈ）。
【０２２５】
以下の化合物は、実施例１−１２と同様の様式で調製した：
【０２２６】
【化１９−１】
2010512312.tif 000021
【０２２７】
【化１９−２】
2010512312.tif 000022
【０２２８】
【化１９−３】
2010512312.tif 000023
【０２２９】
【化１９−４】
2010512312.tif 000024
【０２３０】
【化１９−５】
2010512312.tif 000025
【０２３１】
【化１９−６】
2010512312.tif 000026
【０２３２】
【化１９−７】
2010512312.tif 000027
【０２３３】
【化２０】
2010512312.tif 000028
【０２３４】
ｔ−ブチル（２−｛４−［３−（エチルアミノ）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）カルバメート（２−１）
マイクロ波バイアルに、ｔ−ブチル｛２−［４−（５−ヒドラジノ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−１０）（１．８ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．６４ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えた。この反応混合物を、マイクロ波照射下、８０℃（高吸収）で５分間加熱した。酢酸（０．５ｍＬ）を加え、反応混合物を、マイクロ波照射下、８０℃（高吸収）で５分間加熱した。得られた残渣を、５〜９５％のアセトニトリル／（０．１％ＴＦＡ／水）勾配で溶出する逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８）によって精製した。適当な画分を、酢酸エチルに懸濁することによって遊離塩基とし、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、続いて、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮すると、ｔ−ブチル（２−｛４−［３−（エチルアミノ）−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル］フェニル｝−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）カルバメート（２−１）が、白色固体として得られた。
ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：５９３。
【０２３５】
８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−Ｎ−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−アミン（２−２）
室温で、２−１（２．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を加えた。０．５時間後、反応混合物を、真空濃縮し、５〜９５％のアセトニトリル／（０．１％ＴＦＡ／水）勾配で溶出する逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８）によって精製した。適当な画分を、酢酸エチルに懸濁することによって遊離塩基とし、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、続いて、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、メタノールから再結晶化すると、８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−Ｎ−エチル−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−アミン（２−２）が、白色固体として得られた。ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：実測値＝４９２．５７２３，計算値＝４９２．５６９８。
化合物２−３
【０２３６】
【化２１】
2010512312.tif 000029
【０２３７】
Ｎ’−｛８−［４−（２−アミノ−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル）フェニル］−９−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−３−イル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン（２−３）
化合物２−３を、実施例２−２と同様の方法で調製した；ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：実測値＝５５０．２９２５、計算値＝５５０．２９６４。
【０２３８】
【化２２】
2010512312.tif 000030
【０２３９】
ｔ−ブチル｛２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（３−１）
ＤＭＡ（２００ｍＬ）中のピリミジン−２−カルボン酸（１０．４６ｇ、４６．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣ（８．９８ｇ、４６．８ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（７．１７ｇ、４６．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、６０℃で１時間撹拌した。次いで、ｔ−ブチル｛２−［４−（５−ヒドラジノ−３−フェニル−１，６−ナフチリジン−２−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（１−１０）（２５．２７ｇ、４６．８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、６０℃でさらに２時間撹拌し、この時点で、酢酸（２０．８ｇ、４６０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、８０℃で一晩撹拌した。この反応混合物を室温に冷却し、１Ｎ  ＮａＯＨでクエンチし、飽和重炭酸ナトリウムに注ぎ入れ、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、ＤＣＭ中、１０％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を濃縮し、得られた固体をメタノールから再結晶化すると、ｔ−ブチル｛２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（３−１）が、白色固体として得られた。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６２８。
【０２４０】
２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１８）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｔ−ブチル｛２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタ−２−イル｝カルバメート（３−１）（５．０ｇ、７．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（５０ｍＬ）を、Ｎ２下、室温で２時間かけて加えた。反応物を１Ｎ  ＮａＯＨ（６５０ｍＬ）でクエンチし、飽和重炭酸ナトリウム中に注ぎ入れ、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、メタノールから再結晶化させると、２−［４−（９−フェニル−３−ピリミジン−２−イル［１，２，４］トリアゾロ［３，４−ｆ］−１，６−ナフチリジン−８−イル）フェニル］−５，８−ジオキサスピロ［３．４］オクタン−２−アミン（１−１８）が、白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．７３−９．６８（ｍ，１Ｈ），９．１８（ｓ，１Ｈ），９．０５−９．００（ｍ，２Ｈ），７．６０−７．５８（ｍ，１Ｈ），７．５０−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．４０（ｍ，１Ｈ）７．３８−７．３（ｍ，７Ｈ），４．０５−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．８５（ｍ，２Ｈ），２．９４−２．８５（ｍ，２Ｈ），２．５５−２．５０（ｍ，２Ｈ）。
【０２４１】
実施例１
ヒトＡｋｔアイソフォーム及びΔＰＨ−Ａｋｔ１のクローニング
ｐＳ２ｎｅｏベクター（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−３２５３として、２００１年４月３日にＡＴＣＣに寄託された）を、以下のとおりに調製した。ｐＲｍＨＡ３ベクター（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１６：１０４３〜１０６１頁（１９８８年）に記載されるように調製した）を、ＢｇｌＩＩで切断し、２７３４ｂｐ断片を単離した。ｐＵＣｈｓｎｅｏベクター（ＥＭＢＯ  Ｊ．４：１６７〜１７１頁（１９８５年）に記載されるように調製した）も、ＢｇｌＩＩで切断し、４０２９ｂｐのバンドを単離した。これら２種の単離した断片を、一緒にライゲーションしてｐＳ２ｎｅｏ−１と呼ばれるベクターを作製した。このプラスミドは、メタロチオニン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーターと、アルコールデヒドロゲナーゼポリＡ付加部位の間にポリリンカーを含む。それはまた、熱ショックプロモーターによって駆動されるｎｅｏ耐性遺伝子も有する。ｐＳ２ｎｅｏ−１ベクターは、Ｐｓｐ５ＩＩ及びＢｓｉＷＩで切断した。２種の相補的オリゴヌクレオチドを合成し、次いで、アニーリングした（ＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣ（配列番号１）及びＧＴＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧ（配列番号２））。切断されたｐＳ２ｎｅｏ−１及びアニーリングされたオリゴヌクレオチドを、一緒にライゲーションし、第２のベクター、ｐＳ２ｎｅｏを作製した。この変換に、Ｓ２細胞へのトランスフェクションに先立つ直線化を補助するようＮｏｔＩ部位を加えた。
【０２４２】
５’プライマー：５’ＣＧＣＧＡＡＴＴＣＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＴＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＧＣＴＡＴＴＧＴＧ３’（配列番号３）、及び３’プライマー：５’ＣＧＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＣＴＣＡＧＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣ３’（配列番号４）を用いてヒト脾臓ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から、ヒトＡｋｔ１遺伝子をＰＣＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）によって増幅した。５’プライマーは、ＥｃｏＲＩ及びＢｇｌＩＩ部位を含んでいた。３’プライマーは、クローニング目的で、ＸｂａＩ及びＢａｍＨＩ部位を含んでいた。得られたＰＣＲ産物を、ＥｃｏＲＩ／ＸｂａＩ断片としてｐＧＥＭ３Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にサブクローニングした。発現／精製目的で、ＰＣＲプライマー：５’ＧＴＡＣＧＡＴＧＣＴＧＡＡＣＧＡＴＡＴＣＴＴＣＧ３’（配列番号５）を用いて、全長Ａｋｔ１遺伝子の５’末端に中型Ｔタグを付加した。得られたＰＣＲ産物は、５’ＫｐｎＩ部位及び３’ＢａｍＨＩ部位を包含しており、これを用いて、断片を、ビオチンタグを含む昆虫細胞発現ベクター、ｐＳ２ｎｅｏを用いてフレーム内でサブクローニングした。
【０２４３】
Ａｋｔ１のプレクストリン相同ドメイン（ＰＨ）欠失（Δａａ４〜１２９、Ａｋｔ１ヒンジ領域の部分の欠失を含む）型の発現のために、鋳型としてのｐＳ２ｎｅｏベクターにおいて、全長Ａｋｔ１遺伝子を用いてＰＣＲ欠失突然変異誘発を行った。ＰＣＲを、欠失を含む、重複内部プライマー（５’ＧＡＡＴＡＣＡＴＧＣＣＧＡＴＧＧＡＡＡＧＣＧＡＣＧＧＧＧＣＴＧＡＡＧＡＧＡＴＧＧＡＧＧＴＧ３’（配列番号６）、及び５’ＣＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＣＡＧＣＣＣＣＧＴＣＧＣＴＴＴＣＣＡＴＣＧＧＣＡＴＧＴＡＴＴＣ３’（配列番号７））並びにＫｐｎＩ部位及び５’末端に中型Ｔタグを含む５’及び３’フランキングプライマーを用いて２段階で実施した。最終ＰＣＲ産物を、ＫｐｎＩ及びＳｍａＩで消化し、ｐＳ２ｎｅｏ全長Ａｋｔ１  ＫｐｎＩ／ＳｍａＩ切断ベクターにライゲーションし、クローンの５’末端を欠失型と効率的に置換した。
【０２４４】
ヒトＡｋｔ３遺伝子を、アミノ末端オリゴプライマー：５’ＧＡＡＴＴＣＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＴＧＡＧＣＧＡＴＧＴＴＡＣＣＡＴＴＧＴＧ３’（配列番号８）；及びカルボキシ末端オリゴプライマー：５’ＴＣＴＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＴＣＧＴＣＣＡＣＴＴＧＣＡＧＡＧ３’（配列番号９）を用いる成人脳ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＰＣＲによって増幅した。これらのプライマーは、クローニング目的で５’ＥｃｏＲＩ／ＢｇｌＩＩ部位及び３’ＸｂａＩ／ＢｇｌＩＩ部位を含んでいた。得られたＰＣＲ産物を、ｐＧＥＭ４Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ部位にクローニングした。発現／精製目的で、中型Ｔタグを、ＰＣＲプライマー：５’ＧＧＴＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＧＣＣＧＡＴＧＧＡＡＡＧＣＧＡＴＧＴＴＡＣＣＡＴＴＧＴＧＡＡＧ  ３’（配列番号１０）を用いて全長Ａｋｔ３クローンの５’部位に付加した。得られたＰＣＲ産物は、５’ＫｐｎＩ部位を包含しており、これによってビオチンタグを含む昆虫細胞発現ベクターｐＳ２ｎｅｏを用いたインフレームクローニングが可能となった。
【０２４５】
ヒトＡｋｔ２遺伝子を、アミノ末端オリゴプライマー：５’ＡＡＧＣＴＴＡＧＡＴＣＴＡＣＣＡＴＧＡＡＴＧＡＧＧＴＧＴＣＴＧＴＣ３’（配列番号１１）及びカルボキシ末端オリゴプライマー：５’ＧＡＡＴＴＣＧＧＡＴＣＣＴＣＡＣＴＣＧＣＧＧＡＴＧＣＴＧＧＣ３’（配列番号１２）を用いてヒト胸腺ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）からＰＣＲによって増幅した。これらのプライマーは、クローニング目的で５’ＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｇｌＩＩ部位及び３’ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ部位を含んでいた。得られたＰＣＲ産物を、ｐＧｅｍ３Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＥｃｏＲＩ部位にサブクローニングした。発現／精製目的で、ＰＣＲプライマー：５’ＧＧＴＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＧＣＣＧＡＴＧＧＡＡＡＡＴＧＡＧＧＴＧＴＣＴＧＴＣＡＴＣＡＡＡＧ  ３’（配列番号１３）を用いて、全長Ａｋｔ２の５’末端に中型Ｔタグを付加した。得られたＰＣＲ産物を、上記のようにｐＳ２ｎｅｏベクターにサブクローニングした。
【０２４６】
実施例２
ヒトＡｋｔアイソフォーム及びΔＰＨ−Ａｋｔ１の発現
ｐＳ２ｎｅｏ発現ベクター中の、クローニングされたＡｋｔ１、Ａｋｔ２、Ａｋｔ３及びΔＰＨ−Ａｋｔ１遺伝子を含むＤＮＡを精製し、これを用い、リン酸カルシウム法によってショウジョウバエＳ２細胞（ＡＴＣＣ）をトランスフェクトした。抗生物質（Ｇ４１８、５００μｇ／ｍｌ）耐性細胞のプールを選択した。細胞を１．０Ｌ容積（約７．０×１０６／ｍｌ）に増大させ、ビオチン及びＣｕＳＯ４を、それぞれ５０μＭ及び５０ｍＭの最終濃度に加えた。細胞を２７℃で７２時間増殖させ、遠心分離によって回収した。細胞ペーストを必要とされるまで−７０℃で凍結した。
【０２４７】
実施例３
ヒトＡｋｔアイソフォーム及びΔＰＨ−Ａｋｔ１の精製
実施例２に記載される１リットルのＳ２細胞から得た細胞ペーストを、５０ｍｌのバッファーＡ：（５０ｍＭ  ＴｒｉｓｐＨ７．４、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．２ｍＭ  ＡＥＢＳＦ、１０μｇ／ｍｌベンズアミジン、各５μｇ／ｍｌのロイペプチン、アプロチニン、及びペプスタチン、１０％グリセロール、及び１ｍＭ  ＤＴＴ）中の１％ＣＨＡＰＳとともに超音波処理によって溶解した。可溶性画分を、９ｍｇ／ｍｌの抗中型Ｔモノクローナル抗体を負荷し、２５％のグリセロールを含有するバッファーＡ中の７５μＭ  ＥＹＭＰＭＥ（配列番号１４）ペプチドで溶出する、プロテインＧセファロースファストフロー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カラムで精製した。Ａｋｔ／ＰＫＢ含有画分をプールし、タンパク質純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。精製されたタンパク質を、標準ブラッドフォードプロトコールを用いて定量した。精製されたタンパク質を、液体窒素で急速凍結し、−７０℃で保存した。
【０２４８】
Ｓ２細胞から精製されたＡｋｔ及びＡｋｔプレクストリン相同ドメイン欠失は、活性化が必要であった。Ａｋｔ及びＡｋｔプレクストリン相同ドメイン欠失は、１０ｎＭ  ＰＤＫ１（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．）、脂質小胞（１０μＭホスファチジルイノシトール−３，４，５−トリホスフェート-Ｍｅｔｒｅｙａ、Ｉｎｃ、１００μＭ  ホスファチジルコリン、及び１００μＭ  ホスファチジルセリン-Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  ｌｉｐｉｄｓ、Ｉｎｃ．）、及び活性化バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１．０ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１．０μＭ  ミクロシスチン-ＬＲ、０．１ｍＭ  ＡＴＰ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３３３μｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、及び０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ）を含有する反応物において活性化した（ＡｌｅｓｓｉらＣｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ７：２６１〜２６９頁）。この反応物を、２２℃で４時間インキュベートした。アリコートを液体窒素中で急速凍結した。
【０２４９】
実施例４
Ａｋｔキナーゼアッセイ
活性化されたＡｋｔアイソフォーム及びプレクストリン相同ドメイン欠失構築物を、ＧＳＫ由来ビオチン化ペプチド基質を用いてアッセイした。ペプチドリン酸化の程度を、ランタニドキレート（Ｌａｎｃｅ）が共役した、リンペプチド特異的なモノクローナル抗体を、ペプチドのビオチン部分と結合する、ストレプトアビジンが結合したアロフィコシアニン（ＳＡ−ＡＰＣ）フルオロフォアと組み合わせて用いる均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって調べた。Ｌａｎｃｅ及びＡＰＣが近接している（すなわち、同一のリンペプチド分子と結合している）場合には、ＬａｎｃｅからＡＰＣへの非放射エネルギー伝達、続いて、６６５ｎｍでのＡＰＣからの光の発光が起きる。
【０２５０】
アッセイに必要な材料：
Ａ．活性化されたＡｋｔアイソザイム又はプレクストリン相同ドメイン欠失構築物
Ｂ．Ａｋｔペプチド基質：ＧＳＫ３α（Ｓ２１）ペプチド番号３９２８ビオチン−ＧＧＲＡＲＴＳＳＦＡＥＰＧ（配列番号１５）、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ。
Ｃ．Ｌａｎｃｅ標識した抗ホスホＧＳＫ３αモノクローナル抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、クローン番号２７）。
Ｄ．ＳＡ−ＡＰＣ（Ｐｒｏｚｙｍｅカタログ番号ＰＪ２５Ｓロット番号８９６０６７）。
Ｅ．Ｍｉｃｒｏｆｌｕｏｒ（登録商標）Ｂ  Ｕ  Ｂｏｔｔｏｍ  マイクロタイタープレート（Ｄｙｎｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号７２０５）。
Ｆ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）ＨＴＲＦ  マイクロプレートアナライザー、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ。
Ｇ．１００×プロテアーゼ阻害剤カクテル（ＰＩＣ）：１ｍｇ／ｍｌベンズアミジン、０．５ｍｇ／ｍｌペプスタチン、０．５ｍｇ／ｍｌロイペプチン、０．５ｍｇ／ｍｌアプロチニン。
Ｈ．１０×アッセイバッファー：５００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１％  ＰＥＧ、ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１％  ＢＳＡ、２０ｍＭ  β−グリセロールリン酸。
Ｉ．クエンチバッファー：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．３、１６．６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  ＢＳＡ、０．１％  トリトンＸ−１００、０．１７ｎＭ  Ｌａｎｃｅ標識したモノクローナル抗体クローン番号２７、０．００６７ｍｇ／ｍｌ  ＳＡ−ＡＰＣ
Ｊ．ＡＴＰ／ＭｇＣｌ２作業溶液：１×アッセイバッファー、１ｍＭ  ＤＴＴ、１×ＰＩＣ、１２５ｍＭ  ＫＣｌ、５％グリセロール、２５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３７５ＴＭ  ＡＴＰ
Ｋ．酵素作業溶液：１×アッセイバッファー、１ｍＭ  ＤＴＴ、１×ＰＩＣ、５％グリセロール、活性Ａｋｔ。最終酵素濃度は、アッセイが線形応答範囲にあるように選択した。
Ｌ．ペプチド作業溶液：１×アッセイバッファー、１ｍＭ  ＤＴＴ、１×ＰＩＣ、５％グリセロール、２ＴＭ  ＧＳＫ３ビオチン化ペプチド番号３９２８
【０２５１】
反応物は、９６ウェルマイクロタイタープレートの適当なウェルに１６ＴＬのＡＴＰ／ＭｇＣｌ２作業溶液を加えることによって構築する。阻害剤又はビヒクル（１．０Ｔｌ）、続いて、１０Ｔｌのペプチド作業溶液を加える。１３Ｔｌの酵素作業溶液を加え、混合することによって反応を開始する。反応を５０分間進行させ、次いで、６０ＴｌのＨＴＲＦクエンチバッファーを加えることによって停止する。停止した反応物を、室温で少なくとも３０分間インキュベートし、次いで、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ機器で読み取った。
【０２５２】
ストレプトアビジンフラッシュプレートアッセイの手順：
工程１：
２０μｌの２×基質溶液（２０μＭ  ＧＳＫ３ペプチド、３００μＭ  ＡＴＰ、２０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２０μＣｉ／ｍｌ［γ３３Ｐ］ＡＴＰ、１×アッセイバッファー、５％グリセロール、１ｍＭ  ＤＴＴ、１×ＰＩＣ、０．１％  ＢＳＡ及び１００ｍＭ  ＫＣｌ）に、１μｌの１００％ＤＭＳＯ中の試験化合物の溶液を加えた。１９μｌの２×酵素溶液（６．４ｎＭ活性Ａｋｔ／ＰＫＢ、１×アッセイバッファー、５％  グリセロール、１ｍＭ  ＤＴＴ、１×ＰＩＣ及び０．１％ＢＳＡ）を加えることによって、リン酸化反応を開始した。次いで、反応物を、室温で４５分間インキュベートした。
【０２５３】
工程２：
１７０μｌの１２５ｍＭ  ＥＤＴＡを加えることによって、反応を停止した。２００μｌの停止した反応物を、ストレプトアビジンフラッシュプレート（登録商標）ＰＬＵＳ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＳＭＰ１０３）に移した。このプレートを、プレートシェーカー上、室温で、≧１０分間インキュベートした。各ウェルの内容物を吸引し、ウェルを、ウェルあたり２００μｌのＴＢＳで２回すすいだ。次いで、ウェルを、ウェルあたり２００μｌのＴＢＳで５分間、３回洗浄し、洗浄工程の間、プレートを、プラットフォームシェーカー上、室温でインキュベートした。
【０２５４】
これらのプレートを、シーリングテープで覆い、フラシュプレートにおいて［３３Ｐ］をカウントするのに適当な設定でＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔを用いてカウントした。
【０２５５】
ストレプトアビジンフィルタープレートアッセイの手順：
工程１：
上記のストレプトアビジンフラッシュプレートアッセイの工程１に記載されるように酵素反応を実施した。
工程２：
２０μｌの７．５Ｍの塩酸グアニジンを加えることによって反応を停止させた。５０μｌの停止された反応物を、ストレプトアビジンフィルタープレート（ＳＡＭ２（商標）ビオチン捕獲プレート、Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｖ７５４２）に移し、反応物を、フィルター上で１ないし２分間インキュベートし、その後、真空を適用した。
【０２５６】
次いで、このプレートを、以下のように真空マニホールドを使用して洗浄した：１）４×２００μｌ／ウェルの２Ｍ  ＮａＣｌ；２）６×２００μｌ／ウェルの１％  Ｈ３ＰＯ４を含む２Ｍ  ＮａＣｌ；３）２×２００μｌ／ウェルの蒸留水；及び４）２×１００μｌ／ウェルの９５％エタノール。次いで、メンブランを完全に風乾させ、次いで、シンチラントを加えた。
【０２５７】
プレートの底を、白色バッキングテープで密閉し、３０μｌ／ウェルのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、カタログ番号６０１３６２１）を加えた。プレートの上部を、透明なシーリングテープで密閉し、次いで、液体シンチラントとともに［３３Ｐ］にとって適当な設定で、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔを使用してプレートをカウントした。
【０２５８】
ホスホセルロースフィルタープレートアッセイの手順：
工程１：
基質として、ビオチン−ＧＧＲＡＲＴＳＳＦＡＥＰＧの代わりにＫＫＧＧＲＡＲＴＳＳＦＡＥＰＧ（配列番号１６）を使用して、ストレプトアビジンフラッシュプレートアッセイ（上記）の工程１に記載されるように酵素反応を実施した。
工程２：
２０μｌの０．７５％  Ｈ３ＰＯ４を加えることによって反応を停止させた。５０μｌの停止された反応物を、フィルタープレート（ＵＮＩＦＩＬＴＥＲ（商標）、Ｗｈａｔｍａｎ  Ｐ８１強力陽イオン交換体、白色ポリスチレン９６ウェルプレート、Ｐｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓ、カタログ番号７７００−３３１２）に移し、反応物をフィルター上で１ないし２分間インキュベートし、次いで、真空を適用した。
【０２５９】
次いで、プレートを、以下のように真空マニホールドを使用して洗浄した：１）９×２００μｌ／ウェルの０．７５％  Ｈ３ＰＯ４；及び２）２×２００μｌ／ウェルの蒸留水。プレートの底を白色バッキングテープで密閉し、次いで、３０μｌ／ウェルのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０を加えた。プレートの上部を透明なシーリングテープで密閉し、プレートを、［３３Ｐ］及び液体シンチラントにとって適当な設定で、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔを使用してカウントした。
【０２６０】
ＰＫＡアッセイ：
個々のＰＫＡアッセイ各々は、以下の成分からなる：
Ａ．５×ＰＫＡアッセイバッファー（２００ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ）
Ｂ．水で希釈したケンプチド（Ｋｅｍｐｔｉｄｅ）（Ｓｉｇｍａ）の５０μＭストック
Ｃ．１．０μｌの３３Ｐ−ＡＴＰ［１０ｍＣｉ／ｍｌ］を、２００Ｔｌの非標識ＡＴＰの５０μＭストックに希釈することによって調製した３３Ｐ−ＡＴＰ
Ｄ．１０μｌの、０．５ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡに希釈した、ＰＫＡ触媒サブユニット（ＵＢＩカタログ番号１４−１１４）の７０ｎＭストック
Ｅ．ＰＫＡ／ケンプチド（Ｋｅｍｐｔｉｄｅ）作業溶液：等容積の５×ＰＫＡアッセイバッファー、ケンプチド（Ｋｅｍｐｔｉｄｅ）溶液及びＰＫＡ触媒サブユニット。
【０２６１】
反応物は、９６ディープウェルアッセイプレート中で構築する。１０Ｔｌの３３Ｐ−ＡＴＰ溶液に、阻害剤又はビヒクル（１０Ｔｌ）を加える。各ウェルに、３０ＴｌのＰＫＡ／ケンプチド（Ｋｅｍｐｔｉｄｅ）作業溶液を加えることによって、反応を開始する。反応物を混合し、室温で２０分間インキュベートする。５０Ｔｌの１００ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１００ｍＭ  ピロリン酸ナトリウムを加え、混合することによって、反応を停止する。
【０２６２】
酵素反応生成物（リン酸化ケンプチド（Ｋｅｍｐｔｉｄｅ））を、ｐ８１ホスホセルロース９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上に集めた。プレートを調製するために、ｐ８１フィルタープレートの各ウェルを、７５ｍＭリン酸で満たした。プレートの底に真空を適用することによって、これらのウェルを、フィルターを通して空にした。各ウェルにリン酸（７５ｍＭ、１７０μｌ）を加えた。停止されたＰＫＡ反応物各々に由来する３０μｌのアリコートを、リン酸を含有するフィルタープレート上の対応するウェルに加えた。真空を適用した後、ペプチドはフィルター上に捕獲されており、フィルターを７５ｍＭのリン酸で５回洗浄した。最終の洗浄後、フィルターを風乾させた。各ウェルにシンチレーション液（３０μｌ）を加え、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）でフィルターをカウントした。
【０２６３】
ＰＫＣアッセイ：
各ＰＫＣアッセイは、以下の要素からなる：
Ａ．１０×ＰＫＣ同時活性化バッファー：２．５ｍＭ  ＥＧＴＡ、４ｍＭ  ＣａＣｌ２
Ｂ．５×ＰＫＣ活性化バッファー：１．６ｍｇ／ｍｌホスファチジルセリン、０．１６ｍｇ／ｍｌジアシルグリセロール、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、５０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール
Ｃ．１．０μｌの３３Ｐ−ＡＴＰ［１０ｍＣｉ／ｍｌ］を、１００μｌの非標識ＡＴＰの１００μＭストックに希釈することによって調製した３３Ｐ−ＡＴＰ
Ｄ．水に希釈したミエリン塩基性タンパク質（３５０μｇ／ｍｌ、ＵＢＩ）
Ｅ．  ０．５ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡに希釈したＰＫＣ（５０ｎｇ／ｍｌ、ＵＢＩカタログ番号１４−１１５）
Ｆ．ＰＫＣ／ミエリン塩基性タンパク質作業溶液：５容積のＰＫＣ同時活性化バッファー及びミエリン塩基性タンパク質の各々を、１０容積のＰＫＣ活性化バッファー及びＰＫＣの各々と混合することによって調製した
【０２６４】
アッセイは、９６ディープウェルアッセイプレートにおいて構築した。５．０μｌの３３Ｐ−ＡＴＰに、阻害剤又はビヒクル（１０Ｔｌ）を加えた。ＰＫＣ／ミエリン塩基性タンパク質作業溶液を加え、混合することで、反応を開始した。反応物を、３０℃で２０分間インキュベートした。５０Ｔｌの１００ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１００ｍＭ  ピロリン酸ナトリウムを加え、混合することによって反応を停止させた。リン酸化されたミエリン塩基性タンパク質を、９６ウェルフィルタープレート中のＰＶＤＦメンブラン上に集め、シンチレーション計数によって定量した。
【０２６５】
スキーム及び表に記載される本発明の化合物を、上記のアッセイにおいて試験し、Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、及びＡｋｔ３のうち１種以上に対して≦５０μＭのＩＣ５０を有することがわかった。
【０２６６】
実施例５
Ａｋｔ／ＰＫＢの阻害を調べるための細胞ベースのアッセイ
細胞（例えば、活性化された  Ａｋｔ／ＰＫＢを含む、ＬｎＣａＰ又はＰＴＥＮ（−／−）腫瘍細胞株）を、１００ｍＭディッシュにプレーティングした。細胞がおよそ７０ないし８０％コンフルエントである時点で、細胞に５ｍｌの新鮮培地を再供給し、溶液中に試験化合物を加える。対照は、未処理の細胞、ビヒクル処理した細胞及びそれぞれ、２０μＭ又は２００ｎＭの、ＬＹ２９４００２（Ｓｉｇｍａ）又はワートマニン（Ｓｉｇｍａ）のいずれかで処理された細胞を含んでいた。これらの細胞を、２、４、又は６時間インキュベートし、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、削り取り、遠心管に移した。それらをペレットにし、ＰＢＳで再度洗浄した。最後に、細胞ペレットを、溶解バッファー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％トリトン、１ｍＭ  ピロリン酸Ｎａ、１０ｍＭ  β−グリセロールリン酸、１０ｍＭ  ＮａＦ、０．５ｍｍ  ＮａＶＯ４、１μＭ  マイクロシスチン、及び１×プロテアーゼ阻害剤カクテル）に再懸濁し、氷上に１５分間おき、穏やかにボルテックス処理して細胞を溶解した。溶解物を、Ｂｅｃｋｍａｎ卓上超遠心機で、１００，０００×ｇ、４℃で２０分間回転させた。標準ブラッドフォードプロトコール（ＢｉｏＲａｄ）によって上清タンパク質を定量し、必要とされるまで−７０℃で保存した。
【０２６７】
透明な溶解物から、以下のようにタンパク質を免疫沈降（ＩＰ）させた：Ａｋｔ１／ＰＫＢαについては、溶解物を、ＮＥＴＮ（１００ｍＭ  ＮａＣｌ、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％ＮＰ−４０）中で、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｓｃ−７１２６（Ｄ−１７）と混合し、プロテインＡ／Ｇアガロース（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｓｃ−２００３）を加えた。Ａｋｔ２／ＰＫＢβについては、溶解物を、ＮＥＴＮ中で、抗Ａｋｔ２アガロース（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ番号１６−１７４）と混合し、Ａｋｔ３／ＰＫＢγについては、溶解物を、ＮＥＴＮ中で、抗Ａｋｔ３アガロース（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ番号６−１７５）と混合した。ＩＰを、４℃で一晩インキュベートし、洗浄し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。
【０２６８】
ウエスタンブロットを使用し、特異的抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）：抗総Ａｋｔ（カタログ番号９２７２）、抗ホスホＡｋｔセリン４７３（カタログ番号９２７１）、及び抗ホスホＡｋｔトレオニン３０８（カタログ番号９２７５）を使用して、総Ａｋｔ、ｐＴｈｒ３０８Ａｋｔ１、ｐＳｅｒ４７３  Ａｋｔ１、並びにＡｋｔ２及びＡｋｔ３上の対応するリン酸化部位、及びＡｋｔの下流標的を分析した。ＰＢＳ＋０．５％無脂肪粉乳（ＮＦＤＭ）で希釈した適当な一次抗体とともに、４℃で一晩インキュベートした後、ブロットを洗浄し、ＰＢＳ＋０．５％ＮＦＤＭ中の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−タグのついた二次抗体とともに、室温で１時間インキュベートした。ＥＣＬ試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＲＰＮ２１３４）を用いてタンパク質を検出した。
【０２６９】
実施例６
ヘレグリンによって刺激されたＡｋｔ活性化
ＭＣＦ７細胞（ＰＴＥＮ＋／＋であるヒト乳癌株）を、１００ｍＭプレートあたり１×１０６個細胞でプレーティングした。細胞が７０ないし８０％コンフルエントである時点で、細胞に、５ｍｌの血清不含培地を再供給し、一晩インキュベートした。翌朝、化合物を加え、細胞を１ないし２時間インキュベートし、その後、ヘレグリンを３０分間加え（Ａｋｔの活性化を誘導するために）、この細胞を上記のように分析した。
【０２７０】
実施例７
腫瘍増殖の阻害
癌細胞の増殖の阻害剤のインビボ有効性を、当技術分野で周知のいくつかのプロトコールによって確認してもよい。
【０２７１】
ＰＩ３Ｋ経路の調節解除を示すヒト腫瘍細胞株（例えば、ＬｎＣａＰ、ＰＣ３、Ｃ３３ａ、ＯＶＣＡＲ−３、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、Ａ２７８０など）を、６ないし１０週齢の雌のヌード（また、雄のマウス（１０ないし１４週齢））の左側腹部に皮下注射し、０日目に前立腺腫瘍異種移植［ＬｎＣａＰ及びＰＣ３］マウス（Ｈａｒｌａｎ）に用いる。マウスは、ビヒクル、化合物、又は併用治療群に無作為に割り当てる。毎日の皮下投与を、１日目に開始し、実験期間の間、継続する。あるいは、連続注入ポンプによって、阻害剤試験化合物を投与してもよい。化合物、化合物組み合わせ、又はビヒクルを、総容積０．２ｍｌで送達する。すべてのビヒクル処理動物が、直径０．５ないし１．０ｃｍの病変を示した時点、通常、細胞を注射した後、４ないし５．５週間で腫瘍を摘出し、秤量した。各細胞株の各処理群の腫瘍の平均重量を算出する。
【０２７２】
実施例８
スポットマルチプレックスアッセイ
この手順は、９６ウェル形式のプレートの同一ウェル中の複数のリン酸化タンパク質を検出するために用いられるサンドウィッチ免疫アッセイを説明する。細胞溶解物を、９６ウェルプレート中でインキュベートし、その上に、種々の捕獲抗体を、同一ウェル中の空間的に別個の場所におく。リン酸化特異的ウサギポリクローナル抗体を加え、電気化学発光タグで標識した抗ウサギ抗体によって複合体を検出する。
【０２７３】
９６ウェルＬＮＣａＰプレート＋／−化合物：
Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｊ６において、１２００ｒｐｍで１０分間回転させ、培地を吸引する。５０μｌ／ウェル：ＴＢＳ（Ｐｉｅｒｃｅ番号２８３７６−２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）＋１％トリトンＸ−１００＋プロテアーゼ、及びホスファターゼ阻害剤を加える。プラスチックラップで包み、完全に凍結するまで−７０℃のフリーザーに入れる。マルチプレックスプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を、１×Ｔｒｉｓ洗浄バッファー中の、３％  Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ、１５０μｌ／ウェルでブロッキングする。プレートシーラーで覆い、Ｍｉｃｒｏｍｉｘシェーカー上、室温で２時間（最小）インキュベートする。１×ＲＣＭ５１（ＴＴＢＳ）で洗浄する。細胞溶解物を氷上で解凍し、ブロッキングしたプレートに４０μｌの溶解物／ウェルを加える。プレートシーラーで覆い、Ｍｉｃｒｏｍｉｘシェーカー上、４℃で一晩インキュベートする。１×ＲＣＭ５１で洗浄する。１×Ｔｒｉｓ洗浄バッファー中の、１％  Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａで二次抗体を希釈する：単独又は組み合わせた、抗ホスホＡＫＴ（Ｔ３０８）、抗ホスホツベリン（Ｔ１４６２）。２５μｌ／ウェルを加え、プレートシーラーで覆い、Ｍｉｃｒｏｍｉｘシェーカー上、室温で３時間インキュベートする。１×ＲＣＭ５１で洗浄する。Ｒｕ−ＧＡＲを１×Ｔｒｉｓ洗浄バッファー中の、１％  Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａで希釈する。２５μｌ／ウェルを加え、プレートシーラーで覆い、Ｍｉｃｒｏｍｉｘシェーカー上、室温で１時間インキュベートする。１×ＲＣＭ５１で洗浄する。４×ＲｅａｄバッファーＴから１×に水で希釈し、２００μｌの希釈したＲｅａｄバッファー／ウェルを加える。
Ｓｅｃｔｏｒ６０００Ｉｍａｇｅｒで読み取る。
【０２７４】
プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤：
１μＭ最終濃度のミクロシスチン−ＬＲ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ４７５８１５（ストック＝５００μＭ）
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ番号５２４６２４、１００×Ｓｅｔ  Ｉ
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ番号５２４６２５、１００×Ｓｅｔ  ＩＩ
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ番号５３９１３４、１００×Ｓｅｔ  ＩＩＩ
抗ホスホＡＫＴ（Ｔ３０８）：
Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ番号９２７５
抗ホスホツベリン（Ｔ１４６２）：
Ｃｏｖａｎｃｅ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｐｕｒｉｆｉｅｄ（ウサギＭＳ２７３１／２７３２）
Ｒｕ−ＧＡＲ＝ルテニル化ヤギ抗ウサギ
１０×Ｔｒｉｓ洗浄バッファー、Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ及び４×ＲｅａｄバッファーＴ
１０×ＲＣＭ５１（１０×ＴＴＢＳ、ＲＣＭ５１）
１×＝２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０
【０２７５】
実施例９
細胞ベースの（インビボ）アッセイ
この手順は、Ａｋｔセリン／トレオニンキナーゼの細胞ベースの（インビボ）活性アッセイを説明する。活性化された内因性Ａｋｔは、ビオチン化されている特異的Ａｋｔ基質（ＧＳＫ３β）ペプチドをリン酸化可能である。検出は、ホスホペプチドに特異的なユーロピウムクリプテート（Ｅｕｒｏｐｉｕｍ  Ｋｒｙｐｔａｔｅ）［Ｅｕ（Ｋ）］共役抗体及びペプチド上のビオチン部分と結合するストレプトアビジンが結合したＸＬ６６５フルオロフォアを使用する均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって実施する。［Ｅｕ（Ｋ）］及びＸＬ６６５が近接している（すなわち、同一のホスホペプチド分子と結合している）場合には、Ｅｕ（Ｋ）からＸＬ６６５への非放射エネルギー伝達、続いて、６６５ｎｍでのＸＬ６６５からの光の発光が起こる。
【０２７６】
このアッセイを使用して、特異的抗体が各々存在する場合には、複数の異なる種から、３種のＡｋｔアイソザイム（Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、及びＡｋｔ３）のすべての阻害剤を検出できる。
【０２７７】
材料及び試薬
Ａ．細胞培養マイクロタイター平底９６ウェルプレート、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３５９８
Ｂ．  Ｒｅａｃｔｉ−ＢｉｎｄプロテインＡでコーティングされた９６ウェルプレート、Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ番号１５１３０。
Ｃ．Ｒｅａｃｔｉ−ＢｉｎｄプロテインＧでコーティングされた９６ウェルプレート、Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ番号１５１３１。
Ｄ．Ｍｉｃｒｏｍｉｘ５シェーカー。
Ｅ．Ｍｉｃｒｏｆｌｕｏｒ（登録商標）Ｂ  Ｕ  Ｂｏｔｔｏｍマイクロタイタープレート、Ｄｙｎｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号７２０５。
Ｆ．９６ウェルプレートウォッシャー、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、カタログ番号ＥＬ  ４０４。
Ｇ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）ＨＴＲＦマイクロプレートアナライザー、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ。
バッファー溶液
Ａ．ＩＰキナーゼ細胞溶解バッファー：１×ＴＢＳ；０．２％Ｔｗｅｅｎ２０；１×プロテアーゼ阻害剤カクテルＩＩＩ（ストックは１００×である、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、５３９１３４）；１×ホスファターゼ阻害剤カクテルＩ（ストックは１００×である、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、５２４６２４）；及び１×ホスファターゼ阻害剤カクテルＩＩ（ストックは１００×である、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、５２４６２５）
Ｂ．１０×アッセイバッファー：５００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５；１％ＰＥＧ；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；１ｍＭ  ＥＧＴＡ；及び２０ｍＭ  β−グリセロホスフェート。
Ｃ．ＩＰキナーゼアッセイバッファー：１×アッセイバッファー；５０ｍＭ  ＫＣｌ；１５０μＭ  ＡＴＰ；１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２；５％  グリセロール；１ｍＭ  ＤＴＴ；５０ｍｌアッセイバッファーあたり１錠剤プロテアーゼ阻害剤カクテル；及び０．１％ＢＳＡ
Ｄ．ＧＳＫ３β基質溶液：ＩＰキナーゼアッセイバッファー；及び５００ｎＭビオチン化ＧＳＫ３βペプチド。
Ｅ．Ｌａｎｃｅバッファー：５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５；０．１％  ＢＳＡ；及び０．１％トリトンＸ−１００。
Ｆ．Ｌａｎｃｅ停止バッファー：Ｌａｎｃｅバッファー；及び３３．３ｍＭ  ＥＤＴＡ。
Ｇ．Ｌａｎｃｅ検出バッファー：Ｌａｎｃｅバッファー；１３．３μｇ／ｍｌ  ＳＡ−ＡＰＣ；及び０．６６５ｎＭ  ＥｕＫ  Ａｂ  ａ−ホスホ（Ｓｅｒ−２１）ＧＳＫ３β
【０２７８】
多段階免疫沈降Ａｋｔキナーゼアッセイ
１日目
Ａ．Ｃ３３ａ細胞を播種する工程：９６ウェルマイクロタイタープレートに６０，０００個のＣ３３ａ細胞／ウェルをプレーティングする。
Ｂ．細胞を３７℃で一晩インキュベートする。
２日目
Ｄ．化合物添加工程：上記から得た９６ウェルプレートに、新鮮培地（α−ＭＥＭ／１０％ＦＢＳ、室温）中の化合物を加え、組織培養インキュベーター中で５時間インキュベートする。
Ｅ．細胞溶解工程：培地を吸引し、１００μｌのＩＰキナーゼ細胞溶解バッファーを付加する。
Ｆ．−７０℃で９６ウェルマイクロタイタープレートを凍結する（注記：この工程は、最小１時間又は一晩実施してもよい）
３日目
Ｇ．プロテインＡ／Ｇで９６ウェルプレートをコーティングする工程：１００μｌのＰＢＳ中の、適当な濃度のα−Ａｋｔ抗体（Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、又はＡｋｔ３）を、以下のウェルに加える：
α−Ａｋｔ１（２０ｎｇ／ウェル／１００μｌ）    Ｂ２＞＞＞＞＞＞Ｂ１０／列Ｂ-Ｇ／Ａｋｔ１プレート
α−Ａｋｔ２（５０ｎｇ／ウェル／１００μｌ）    Ｂ２＞＞＞＞＞＞Ｂ１０／列Ｂ-Ｇ／Ａｋｔ２プレート
ウサギ−ＩｇＧ（１５０ｎｇ／ウェル／１００μｌ）：すべてのプレート（Ａｋｔ１及びＡｋｔ２）でＢ１１-Ｇ１１
Ｈ．低温室（＋４℃）中で、Ｍｉｃｒｏｍｉｘ５（フォーム２０；アチチュード２）で４時間インキュベートする（注記：アチチュードは、どのＭｉｃｒｏｍｉｘ５機かに応じて変わる）。
Ｉ．α−Ａｋｔ抗体溶液を吸引除去し、各ウェルに１００μｌのＰＢＳを加える。
Ｊ．Ａｋｔ免疫沈降工程：工程（Ｉ）からの１００μｌのＰＢＳに、Ａｋｔ１プレートの解凍した細胞溶解物５μｌ及び、Ａｋｔ２プレートの解凍した細胞溶解物１０μｌを加える。注記：細胞溶解物は氷上で溶解する。解凍した溶解物を、ピペッティングで１０回上下することによって混合し、次いで、抗体プレートに移す。細胞溶解物プレートを氷上に維持する。細胞溶解物を抗体プレートに移した後、細胞溶解物プレートを−７０℃で再凍結する。
【０２７９】
Ｋ．低温室（＋４℃）中、Ｍｉｃｒｏｍｉｘ５シェーカー（フォーム２０、アチチュード３）上で一晩インキュベートする。
４日目
Ｌ．免疫沈降プレート洗浄工程：９６ウェルプレートを、９６ウェルプレートウォッシャーを使用してＴＴＢＳ（ＲＣＭ５１、１×＝２サイクル）で１回洗浄する。ウェルを、ＴＴＢＳで満たし、１０分間インキュベートする。９６ウェルプレートを、ＴＴＢＳで２回洗浄する。（注記：使用前にプレートウォッシャーを準備する：１．バッファーリザーバーを調べ、確実に満杯であるようにし、２．廃棄容器を空にする。
Ｍ．手動プレート洗浄工程：１８０μｌのＩＰキナーゼアッセイバッファーを加える。
Ｎ．Ａｋｔ酵素反応を開始する：上清を吸引する。６０μｌのＧＳＫ３β基質溶液を加える。
Ｏ．Ｍｉｃｒｏｍｉｘ５シェーカー上、室温で２．５時間インキュベートする。注記：インキュベーション時間は、カラム１０／カラム１１の比率が＞１０でないよう調整しなければならない。
Ｐ．３０μｌのＬａｎｃｅ検出バッファーを、３０μｌのＬａｎｃｅ停止バッファーと合わせ（合計６０μｌ／ウェル）、Ｍｉｃｏｒｆｌｕｏｒ  Ｕ底９６ウェル黒色プレートに加える。
Ｑ．Ａｋｔ酵素反応を停止する：工程（Ｏ）からのプロテインＡ／Ｇ９６プレートから得た４０μｌのＡｋｔ酵素反応混合物を、工程（Ｐ）からのＭｉｃｒｏｆｌｕｏｒ  Ｕ底９６ウェル黒色プレートに移す。Ｍｉｃｒｏｍｉｘ５シェーカー（フォーム２０、アチチュード３）上、室温で１ないし２時間インキュベートし、次いで、Ａｋｔプログラムを使用してＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＨＴＲＦマイクロプレートアナライザーで読み取る。
【０２８０】
ＩＰキナーゼ細胞溶解バッファー
【０２８１】
【化２３】
2010512312.tif 000031
【０２８２】
ＩＰキナーゼアッセイバッファー
【０２８３】
【化２４】
2010512312.tif 000032
【０２８４】
ＧＳＫ３β基質溶液
【０２８５】
【化２５】
2010512312.tif 000033
【０２８６】
Ｌａｎｃｅ停止バッファー
【０２８７】
【化２６】
2010512312.tif 000034
【０２８８】
Ｌａｎｃｅ検出バッファー
【０２８９】
【化２７】
2010512312.tif 000035
【配列表】
2010512312000001.app
【国際調査報告】
2010512312.tif 000043