(57)【要約】本発明は、発酵プロポリスとその生産方法を提供するものであって、前記発酵プロポリスは、エタノールを含有する溶媒でプロポリス原塊を抽出し、可溶部の０．１〜１０倍の量の結晶セルロースを添加し、粉末プロポリス抽出物を生産し、該抽出物では前記プロポリス抽出物が乾燥によって被覆され、重量比で１〜２０倍の水を前記粉末に添加し、低温殺菌し、酵母、バチルス（桿菌）、ラクトバチルス（乳酸桿菌）、アスペルギルス、アセトバクター（酢酸菌）などの細菌を接種し、次いでその生成物を発酵させることによって生産される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）エタノールまたは希釈エタノールを含有する溶媒でプロポリス原塊を抽出して抽出物を生産する工程と、
ｂ）抽出物を冷却することによって固形分として沈殿したワックスを除去して、ワックス除去プロポリス抽出物を製造する工程と、
ｃ）非水溶性セルロースを添加物として添加し、粉末プロポリスを生成するように乾燥させる工程と、
ｄ）粉末プロポリスを水で懸濁し、その混合液中で微生物を接種し、発酵を進行させて発酵プロポリスを作る工程と、
を含む発酵プロポリス抽出物の製造方法。
【請求項２】
ａ）において、エタノールの濃度が５０〜１００％（ｖ/ｖ：体積比）であり、溶媒の量がプロポリス原塊の重量の２〜１０倍である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｃ）において、前記セルロース粉末が添加物として前記抽出物中の固形分の重量の０．１〜１０倍の量で使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ｄ）において、接種される微生物が、酵母、バチルス（桿菌）、ラクトバチルス（乳酸桿菌）、アセトバクター（酢酸菌）、カビからなる群から選ばれる一つ以上の菌である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ｄ）において、水で懸濁して発酵させる時点で、粉末プロポリス抽出物の濃度が５〜５０％（ｗ/ｖ：重量体積比）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
シゾサッカロミセス・ポンベ、シゾサッカロミセス・オクトスポロンス（ｏｃｔｏｓｐｏｒｏｎｓ）、ハンセニアスポラ属、サッカロミコデス属、サッカロミセス属のサッカロミセス・セレビシエ（出芽酵母）、サッカロミセス・サケ（清酒酵母）、サッカロミセス・エリプソイデウス、サッカロミセス・フォルモセンシス、サッカロミセス・カールスベルゲンシス（ビール酵母）、サッカロミセス・パストリアヌス（ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ）、サッカロミセス・ディアスタティカス（糖化酵母）、サッカロミセス・ロウキシイ（醤油醸造酵母）、サッカロミセス・コレアヌス、ピキア属、ハンゼヌラ属、デバリオミケス属、リポマイセス属（油脂酵母）、クルイベロマイセス属のクルイベロマイセス・ラクティス、クルイベロマイセス・フラジリス、クリプトコッカス属、トルロプシス属、クロエケラ属、カンジダ属のカンジダ・ユティリス（油脂資化性酵母）、カンジダ・トロピカリス、カンジダ・リポリチカ、カンジダ・グイリエルモンディ（ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・ロブスタ、カンジダ・アルビカンス、ロドトルラ属、およびトリコスポロン属からなる群から選択される一種以上の酵母を用いることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ラクトバチルス（乳酸桿菌）属のラクトバチルス・カゼイ（乳酸桿菌）、ラクトバチルス・アシドフィルス（好酸性乳酸菌）、ラクトバチルス・ＳＮＵＬ、ビフィドバクテリウム属、レンサ球菌属のサーモフィラス種（高度好熱菌）、ロイコノストック属、およびペディオコッカス属からなる群から選択される一種以上のラクトバチルス（乳酸桿菌）が使用される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
アセトバクター・シュチェンバチ（ｓｃｈｕｅｔｚｅｎｂａｃｈｉｉ）、アセトバクター・アセンダンス、アセトバクター・ゲンゲナム（ｇｅｎｇｅｎｕｍ）、アセトバクター・メソキシダンス（ｍｅｓｏｘｙｄａｎｓ）、アセトバクター・メラノゲナム（ｍｅｌａｎｏｏｇｅｎｕｍ）、アセトバクター・サブオキシダンス、およびアセトバクター・アセチからなる群から選択される一種以上のアセトバクターが使用される、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
枯草菌、納豆菌、セレウス菌、巨大菌からなる群から選択される一種以上のバチルス属細菌が使用される、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
コウジカビ属から選択される一種以上のカビが使用される、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
１つ以上のおがくずと結晶セルロースが添加物として使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法によって生産される発酵プロポリス組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の発酵プロポリスを主成分として含有する食品組成物。
【請求項１４】
水、エタノール及びその混合物のうちの一つを用いて請求項１に記載の発酵物質を抽出することによって生産される抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
プロポリスの主成分はフラボノイドである。プロポリスは採取する木の種類によって異なるが、黄色から薄緑色を呈する。プロポリスに含まれるケイ皮酸及びクマル酸は独特の香りを有する。プロポリスの成分はその５０％以上が樹脂であり、これはフラボノイドの強い吸湿性と、高粘性とに寄与する。プロポリスが優れた機能性成分を含むことは古くから信じられており、各種疾病の治癒に利用されてきた。プロポリスは、ハチが外敵の進入を防ぐため、ハチの巣の隙間を埋めて強化するのに用いられる物質である。木から採取される樹脂と、ワックスと、プロポリスに含まれている各種酵素を含むハチの唾液とは、強い抗菌性、抗ウィルス性、及び耐虫性を有していることが知られている。
【０００２】
一般に、プロポリスは、ハチの巣から採取したプロポリス原塊の溶解成分から得られ、水または水性混合物によって抽出される。エタノール抽出物の場合、その中に多量のエタノールを含有することから、高齢者や子供の摂取に限界があり、微生物によって発酵させることもできない。エタノールの濃度が高すぎるため、微生物が増殖できない。これを水溶性にするために、プロポリス原塊に含まれる水溶性成分が極めて少ない。プロポリス抽出物に含まれる樹脂成分が水溶性でないため、前記抽出物が水で希釈されると非相溶性樹脂凝集部を形成することから、発酵をこの状況で進行させることができない。プロポリスをエタノール抽出物として摂取する場合、樹脂状物質が口中に溶出して歯に付着し、極めて不都合である。前記プロポリスが水に溶解される場合、非相溶性樹脂は不溶化して容器の外壁に付着してしまう。このような問題のため、前記プロポリス成分の摂取に限界があった。このような限界を回避するために、多くの研究者らが水溶性プロポリスの開発を試みてきたが、これまで注目に値する結果は報告されていない。水溶化プロポリス抽出物が調製されているという報告はいくつかなされているが、それらの事例では放射性照射を利用している。プロポリスをその効能のために摂取する癌患者には放射能自体が有害であり得る。単純な水抽出物の場合、その収率は著しく低く、有用な生理活性成分を有する樹脂が水に不溶性である。樹脂を抽出物に含むことができない場合、その抽出物の生理活性は低下してしまう。
【０００３】
このような抽出物は微生物を用いる発酵に適用できない。エタノール抽出物の場合、エタノールのために発酵を進行させることができない。水抽出物の場合、発酵には、高分子量物質を分解して生理活性を有する物質を作製することによって微生物増殖時に生産されるさまざまな酵素や細菌の生理作用を必要とすることから、樹脂が除去されると、発酵によって生理活性を高めるという概念を適用できない。
【背景技術】
【０００４】
本発明は、基本的に非水相溶性であるプロポリス抽出物を水中に浮遊させることによって、菌株を発酵させて前記プロポリス抽出物を発酵させることができる環境を提供する方法である。基本的な技術は、前記プロポリス抽出物を微粒非相溶性粉末に浸透させ、乾燥し、水上に浮遊させて、前記浮遊させたプロポリス抽出物の微生物によってその発酵を可能にする技術である。その発酵を可能にする基本的技術は、プロポリス抽出物を非相溶性物質に浸透させ、乾燥させて微小な粉末を作り、その粉末化したプロポリス抽出物を水上に懸濁させ、さらに、細菌を接種することによってその発酵を進行させる技術である。前記背景技術は、水の存在下で前記発酵菌株を発酵の対象物に比較的に大きな表面積で接触させることによって、前記抽出物が水に非相溶性である場合でさえも発酵を可能にする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、菌株を発酵させて非水相溶性プロポリス抽出物粉末を発酵させることによって発酵プロポリス抽出物を提供することにある。そして、プロポリス抽出物に含有される高分子量物質を発酵によって分解し、低分子量化し、水溶性発酵プロポリスの生産を可能にすることにある。水中において当初は非相溶性のプロポリスを発酵させることが本発明で解決しようとする主な課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
水不溶性の物質の発酵は通常固形分発酵によって達成される。このタイプの発酵は穀類の発酵に適用できる。しかしながら、プロポリス抽出物は非水相溶性であるのみならず、粒子状でなく、塊や粘液状で存在する。したがって、菌株の接種による発酵を効果的に進行させることはできない。この問題を解消し、前記プロポリス抽出物を微粒粉末として水中で懸濁させるには、プロポリス抽出物を非相溶性微結晶性セルロースに吸着させればよい。前記抽出物が乾燥し、粒子状に粉末化されている場合は、塊状で樹脂状のプロポリス抽出物を微結晶性セルロースを用いて微粒粉末に吸着させる。前記抽出物が水中に懸濁されている場合は、前記微粒粉末によって作られる比較的に大きな表面積が、前記固形分発酵の場合同様に前記接種菌株によるより効率的な発酵を可能にする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明は、微結晶性セルロースを用いて非水相溶性プロポリス抽出物から微粒粉末を作り、それを水中に懸濁させ、しかも、それに発酵細菌を接種することによって発酵プロポリス抽出物を提供する。これにより、元来発酵不可能なプロポリスを発酵可能とし、さらに、プロポリスに含まれる一部の物質を代謝によって新しい有用な物質に転換する。特に、アレルギー誘発物質であるアレルゲンが除去されるので、プロポリスに対してアレルギーを持つ者でさえもプロポリス生成物を摂取してその健康を増進することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明は以下のようないくつかの工程に分割することができる。
【０００９】
（１）抽出、ろ過、蒸発、及び乾燥を行うことにより粉末プロポリス抽出物を作る工程と、（２）（１）の工程で得られた生成物を水中で懸濁し、細菌を接種し、さらに、発酵と増殖を行う工程と、（３）発酵工程で溶媒として用いた水を除去することによって生成物を粉末化するか、または水、エタノール、またはそれらの混合物を添加して抽出物を作り、最終プロポリス抽出物を得る工程。
【００１０】
前記抽出物を粉末化する工程では、エタノールを５０〜１００%（ｖ/ｖ：体積比）の濃度、プロポリス重量の２〜１０倍の量で添加してエタノール希釈プロポリスを作り、その生成物を２０〜８０℃にて１〜２４時間攪拌して、その有用成分を抽出する。次いで、得られた生成物をろ過するか、または遠心分離して無用の不溶性成分を除去し、清澄な抽出物を得る。エタノールの最適濃度は７０〜９５％（ｖ/ｖ：体積比）である。添加する溶媒の量は天然プロポリス重量の２〜１０倍であるが、同溶媒の最適添加量は天然プロポリス重量の３〜５倍である。抽出後の固形分の量はプロポリス原塊の原産地、採取時期、及び含水量によって異なるが、通常２０〜５０％（ｗ／ｗ：重量比）の範囲である。抽出時の温度は２０〜８０℃でよいが、適正温度は４０〜７０℃である。抽出効率に関連する要素である抽出時間は１〜２４時間に設定た。結果として得られる抽出物を真空蒸発させて、その固形粉末の濃度を１０〜３０%（ｗ/ｗ：重量比）とし、さらに、１０℃以下に冷却して抽出中に溶媒に溶解したワックスを除去した。
【００１１】
結果として得られたプロポリス抽出物に固形分重量の０．１〜１０倍の量のセルロースを添加した後、真空乾燥させて微粒粉末を作った。この微粒粉末は、その上にプロポリス抽出物を拡散させてセルロースに吸着させるためのものである。本発明では、デキストリンは容易に水に溶解してしまうため、添加物として適当ではない。デキストリンの場合、粉末化特性を得ることが非常に困難であり、水中に懸濁して細菌を接種することもできない。でんぷんの場合も、水に溶解しやすく、発酵させるための低温殺菌時に水に溶解してしまうため、プロポリス抽出物を効果的に拡散させることができない。この観点で、セルロースはでんぷん、デキストリン、及び食品の原材料を粉末化するために使用されるラクトースから差別化される。
【００１２】
発酵生成物は水中でプロポリス抽出物粉末を５〜５０%（ｗ/ｖ：重量体積比）の濃度で添加し、低温殺菌を行い、細菌を接種し、さらにその細菌を増殖させて生産する。前記生成物は用いる接種細菌に応じて独特な特性を持ち得る。接種細菌としては、酵母、細菌、及びカビを使用できる。酵母の中では、サッカロミセス属に含まれる酵母を使用できる。細菌の中では、バチルス（桿菌）種、アセトバクター（酢酸菌）種、及び乳酸桿菌種 を使用できる。カビの中では、コウジカビ種を発酵に使用できる。食品に使用され、前記プロポリス抽出物粉末が懸濁されている液中で増殖できるものであれば全て発酵に使用することができる。発酵プロポリス抽出物は水、酒精及びエタノール、またはその混合液のような溶媒で再抽出して得ることもできる。
【００１３】
発明の実施態様
本発明の基本概念は、以下のような工程によってより良いプロポリス配合物と発酵プロポリスとを作ることにある。
【００１４】
プロポリス抽出物を酒精または希釈酒精を用いて製造する。粉末化させるためにセルロースを添加し、真空乾燥によってエタノールを除去する。得られた生成物を水中で５〜５０％（ｗ/ｖ：重量体積比）の比で懸濁させた後、細菌、カビ、酵母などの食用に用いられる細菌を前記粉末懸濁水に適量添加し、一定の温度と湿度で前記細菌を増殖させる。増殖細菌の生理代謝によって、多様な薬理成分と非相溶性高分子量物質とが分解されるか、または新しい成分に転換されて、より良いプロポリス配合物と発酵プロポリスが生産される。
【００１５】
以下に本発明を詳細に説明する。
【００１６】
本発明は以下のように分割できる。
【００１７】
抽出、ろ過、蒸発、及び乾燥させることによってプロポリス抽出物を生産する。粉末を水中に懸濁し、細菌を接種・増殖させる。溶媒として使用した水を除去することによって得られた生成物を粉末化させるか、または水、酒精、もしくはその混合物を添加することによって抽出物を製造することにより最終発酵プロポリスを製造する。
【００１８】
前記抽出物を粉末化させる工程では、先ずプロポリスをエタノールまたは水で希釈する。エタノールの場合、５０〜１００％（ｖ/ｖ：体積比）濃度のエタノールをプロポリス重量の２〜１０倍の量で添加する。２０〜８０℃にて１〜２４時間撹拌することによって抽出した後、有用成分を溶解させ、不溶性の無用の物質をろ過または遠心分離によって除去して澄んだエキスを得る。エタノールの濃度を５０〜１００％（ｖ/ｖ：体積比）に設定する理由は、エタノールの濃度が５０％（ｖ/ｖ：体積比）未満になるとタンニンや樹脂などの不溶性物質の抽出が著しく低下するためである。エタノールの最適濃度は７０〜９５％（ｖ/ｖ：体積比）である。溶媒の添加量はプロポリス重量の２〜１０倍である。抽出効率を最大化するか、または抽出溶媒の量を最小化するかという目的に応じて調整することができる。溶媒の量が増えるほど、抽出効率は高くなり、抽出時間を短縮することができる。溶媒の量がプロポリス重量の２倍未満の場合、抽出効率の著しい低下は避けられず、ろ過も非常に困難になる。溶媒の量がプロポリス重量の１０倍を超えると、理論的には問題ないが、過剰な溶媒は全工程の効率を低下させるきらいがある。従って、最適な溶媒の量はプロポリス重量の３〜５倍であり、場合によっては、プロポリス重量の１〜５倍の溶媒を添加することによって第２次抽出を行って第１次抽出後に残留したケーキをろ過することもできる。プロポリス原塊から得られる固形分の量は、天然プロポリスの原産地、採取時期、及び含水量によって異なるが、通常２０〜５０％（ｗ／ｗ：重量比）の範囲である。天然プロポリスには、採取時に花粉や粉塵などの異物が含まれことがある。清澄な抽出物を得るには、異物をフィルター除去する必要があるが、花粉は可食なので残存させてもよい。ろ過時には主に土壌や粉塵を除去する必要がある。抽出時の温度は２０〜８０℃である。温度が低すぎる場合は抽出に要する時間が長くなりする。温度が８０℃以上になる場合には、生理活性成分があまりに高い温度でその活性を失うこともあり得る。適切な抽出温度は、抽出時間と抽出効率を考慮すると４０〜７０℃である。この温度範囲では、生理活性成分の活性消失を最小化し、抽出効率を最大化することができる。抽出効率関連要素の抽出時間は１〜２４時間と設定する。抽出時間が短すぎる場合、抽出物の品質が低下する。抽出時間が２４時間を超える場合、その抽出効率はさらに高くなるが、生産性が低下して経済的でない。抽出物のみを生産できる場合には、抽出時間、溶媒の量、または抽出温度が生成物の品質や本発明の適用の決定要因にならない。得られた抽出物を真空蒸発して固形粉末の濃度を１０〜３０％（ｗ／ｗ：重量比）にさせ、次いで１０℃未満の温度に冷却してプロポリス原塊の抽出時に溶解したワックスを除去する。ワックスはプロポリス原塊に含有され、抽出段階で抽出さる。その抽出物を一部抽出して溶媒の量を減少させ冷却する場合、ワックスは薄茶色または白色の沈澱として析出する。それをろ過して除去すると、ワックスなしのプロポリス抽出物を得ることができる。ワックスを除去する理由は、ワックスは熱によって容易に液状化するためである。セルロースの添加時、加熱、及び溶媒の��去過程でプロポリスは３０〜７０℃の温度範囲で処理される。この条件下でワックスが残留していると、粘着性のワックスはプロポリスの粉末化を困難とする原因となる。
【００１９】
プロポリスが被覆されて微結晶性セルロース（ＭＣＣ）に吸着するような微粒粉末を作るには、抽出物固形分の０．１〜１０倍の量のセルロースを添加・攪拌し、次いで真空乾燥させる。ここで、セルロースはほとんどの樹木、植物の木質部、及び茎を形成する非相溶性物質である。通常、おがくず状のセルロースを使用できるが、より微小な粉末を作るには、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）を使用する方が良い。おがくずタイプの場合、その原木は松の木、カシの木、朝鮮五葉松の木であってもよく、微小であればあるほどよい。また、セルロースは、セルロースおがくずを添加し、真空乾燥によって溶媒を除去し、さらに粉砕機で粉砕した後に微粒粉末にすることもできる。容易に入手できる結晶セルロースは微結晶化セルロースであり、ＭＣＣ（微結晶性セルロース）とも略して呼ばれ、主に食品や医薬品の添加物として使用され、水またはエタノールには溶解しない。加えて、デキストリンやでんぷんを添加物として使用することもできるが、デキストリンの場合、高温で水に溶解しやすく、水中で懸濁して細菌を接種して発酵させることができないため、添加物として機能できず粉末形態をなすことはできない。でんぷんの場合も、水に容易に溶解するため、プロポリス抽出物を効率的に懸濁することができない。従って、本発明の最適添加物は水溶解性が全くないセルロースである。これが、本発明の中心となる考えであり、食品の粉末化に添加物として一般的に使用されてきたでんぷん、デキストリン、及びラクトースとの主な差別化点である。
【００２０】
エタノールが完全に除去されているプロポリス抽出物粉末を水中で懸濁して細菌の接種によって発酵させるか、またはプロポリス抽出物を発酵済みの液中で懸濁して追加発酵させる。プロポリス抽出物粉末を水に５〜５０％（ｗ/ｖ：重量体積比）の濃度比で添加した後、低温殺菌し、細菌を接種する。細菌が増殖すると、接種した細菌に応じて独特の発酵生成物が得られる。発酵させるために接種する微生物としては酵母、細菌、カビを使用することができる。酵母の中では、サッカロミセス属に含まれる酵母を使用できる。細菌の中では、バチルス（桿菌）種、アセトバクター（酢酸菌）種、及び乳酸桿菌種を使用できる。カビの中では、コウジカビ種を発酵に使用できる。食品用に適し、プロポリス抽出物粉末が拡散されている液中で増殖できるものであれば全て発酵に使用することができる。酵母の有用な品質は、容易に増殖することと、一般食品で広範に利用されていることと、その多様性により豊富な選択が可能であることにある。多くの場合、エタノールが発酵の副産物として生産され、酢酸または他の有機酸に酸化させると、その発酵液のｐＨを低下させるので、酸性条件下で溶解する有用な物質を多く抽出することができる。また、微生物の大きさは細菌に比べて相対的に大きいので、酵母を液体状態で容易にろ過することができる。代表的に用いられる酵母は、シゾサッカロミセス属のシゾサッカロミセス・ポンベとシゾサッカロミセス・オクトスポロンス（ｏｃｔｏｓｐｏｒｏｎｓ）、ハンセニアスポラ属、サッカロミコデス属、サッカロミセス属のサッカロミセス・セレビシエ（出芽酵母）、サッカロミセス・サケ（清酒酵母）、サッカロミセス・エリプソイデウス、サッカロミセス・フォルモセンシス、サッカロミセス・カールスベルゲンシス（ビール酵母）、サッカロミセス・パストリアヌス、サッカロミセス・ディアスタティカス（糖化酵母）、サッカロミセス・ロウキシイ（醤油醸造酵母）、サッカロミセス・コレアヌス、ピキア属、ハンゼヌラ属、デバリオミケス属、リポマイセス属（油脂酵母）、クルイベロマイセス属のクルイベロマイセス・ラクティス、クルイベロマイセス・フラジリス、クリプトコッカス属、トルロプシス属、クロエケラ属、カンジダ属のカンジダ・ユティリス（油脂資化性酵母）、カンジダ・トロピカリス、カンジダ・リポリチカ、カンジダ・グイリエルモンディ、カンジダ・ロブスタ、カンジダ・アルビカンス、ロドトルラ属、及びトリコスポロン属などである。
【００２１】
乳酸桿菌は、腸内細菌（腸管微生物叢）を変化させることによって腸内を浄化し、有用な有機酸を生産することで広く知られている。乳酸桿菌の中では、ラクトバチルス（乳酸桿菌）属のラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・アシドフィルス（好酸性乳酸菌）、ラクトバチルスＳＮＵＬ、ビフィドバクテリウム属、レンサ球菌属のサーモフィラス種（高度好熱菌）、ロイコノストック属、及びペディオコッカス属を使用できる。アセトバクター（酢酸菌）は、発酵によって有機酸を生産する代表的な菌で、酢の生産、酒の発酵などに広く利用されている。適用可能なアセトバクター（酢酸菌）は、アセトバクター・シュチェンバチ（ｓｃｈｕｅｔｚｅｎｂａｃｈｉｉ）、アセトバクター・アセンダンス、アセトバクター・ゲンゲナム（ｇｅｎｇｅｎｕｍ）、アセトバクター・メソキシダンス（ｍｅｓｏｘｙｄａｎｓ）、アセトバクター・メラノゲナム（ｍｅｌａｎｏｏｇｅｎｕｍ）、アセトバクター・サブオキシダンス、アセトバクター・アセチなどである。バチルス属細菌は稲わらに存在し、韓国では発酵大豆、豆ペーストおよび唐辛子中に多く用いられる。有用なバチルス（桿菌）は、枯草菌、納豆菌、セレウス菌、及び巨大菌などの豆ペースト発酵に関与することで知られているバチルス属に含まれる細菌である。カビの中では、コウジカビが有用であり、アスペルギルス属のニガー（黒コウジカビ）が代表的である。
【００２２】
上記の細菌を、水中で懸濁され低温殺菌された本発明のプロポリスに接種すると、接種された細菌の種類に応じた品質で発酵プロポリス抽出物が生産される。プロポリス粉末を発酵させるにあたって、一部の菌体の増殖はプロポリスに含まれた物質によって制限される。この場合、その菌体を予め培養して一定の濃度にまで増殖させ、次いでプロポリス粉末をその中で懸濁させる場合、このように再培養することによってプロポリス発酵物を生産できる。この場合、プロポリス粉末の懸濁がその菌体の増殖を停止しないことから、高濃度の菌体によって迅速な発酵を行うことができる。それは有用な菌体を用いることに非常に役立つが、同時にプロポリス抽出物の増殖は通常非常に緩慢になる。
【実施例】
【００２３】
以下、本発明の内容を詳細に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例によって限定されるものではない。
【００２４】
実施例（１）プロポリス抽出物粉末の生産
４，０００ｍｌのエタノールを１，０００ｇのプロポリス原塊に添加し、５０℃にて５時間撹拌することによってプロポリスを抽出する。得られた抽出物をろ過し、２，０００ｍｌのエタノールを残留する固形分に再度添加して再度抽出・ろ過する。その結果、合計５，６００ｍｌの抽出物を生産する。得られた抽出物を４，５００ｍｌになるまで真空蒸発させ、そのエキスを５℃に冷却することによって抽出液を生産してミツロウ（ワックス）沈殿物を除去する。この抽出液中の固形分含有量は５４０ｇであり、プロポリス原塊からの抽出効率は５４％（ｗ／ｗ：重量比）であった。５４０ｇのＭＣＣ（微結晶性セルロース）を生成物に添加し、真空下で蒸発させることによって溶媒を除去した。ほとんどの溶媒が除去された時点で、その生成物を採取してコンベクションオーブン内で５０℃にて完全乾燥させ、最終的に１，０５０ｇのプロポリス抽出物粉末を生産した。
【００２５】
実施例（２）発酵プロポリス抽出物粉末の生産
上記の実施例（１）で生産したプロポリス抽出物粉末を粉砕し、６０メッシュのステンレスふるいで選別し、ふるいを通過した微粉末のみを採取し、発酵に用いた。
【００２６】
３０ｇのプロポリス抽出物を３００ｍｌの水に添加し、混合した。得られた混合物を７０℃にて３時間放置して低温殺菌した。その生成物に、予め調製した酵母の一種であるサッカロミセス・セレビシエ（出芽酵母）を添加し、１５０ｒｐｍで遠心し、３７℃にて２日間インキュベートした。その結果、前記酵母の濃度は接種時の６５倍に増加し、フラボノイドの含有量は全国食品工業所定の方法で測定したところ、２１％増加していた。これは前記酵母が増殖するにつれて配糖体の形態で存在していたフラボノイド配糖体の糖質が除去され、その結果としてフラボノイドの含有量が増加したためと考察された。プロポリスの強臭は薄れ、その酸味が増加し、それを測定したところ、酸性度は２５％増加していた。
【００２７】
実施例（３）
上記の実施例（２）のように、３０ｇの培養液を調製し、それに５％（ｗ/ｖ：重量体積比）のグルコースを添加してその発酵性を増加させた。枯草菌を接種し、それを３９℃にて４０時間培養した。その結果、発酵終了時の菌体の量は発酵初期の７２倍に増加した。
【００２８】
実施例（４）
上記の実施例（２）のように培養液を調製し、それに１０％のグルコースを添加してその発酵性を増加させた。ラクトバチルス・アシドフィルス（好酸性乳酸菌）を接種し、それを３５℃にて６０時間培養した。その結果、菌体の量は６５倍増加し、酸性度は１８％低下した。
【００２９】
実施例（５）
上記の実施例（２）のように培養液を調製し、アスペルギルス・ニガー（黒コウジカビ）を接種し、３０℃にて４日間培養した。その結果、菌体の量は３２倍増加し、全国食品工業所定のプロテアーゼ・アミラーゼの分析法を行ったところ、プロテアーゼおよびアミラーゼの活性を確認した。この結果から、前記菌体が増殖するにつれて有用な酵素が生産されることを見出した。
【００３０】
実施例（６）
上記の実施例（２）のように培養液を調製し、種菌としてアセトバクター・アセチを接種し、３０℃にて３日間培養した。その結果、菌体の量は６０倍増加し、酸性度は６０％低下して非常に酸味が強くなった。
【００３１】
実施例（７）
上記の実施例（６）で生産した発酵物質に１００％の水を添加して全体積を２倍にし、その生成物を７０℃にて５時間抽出し、ろ過して無用の物質を除去した。得られた生成物を真空蒸発して固形分含有量を２５％（ｗ/ｖ：重量体積比）にすることによって、水溶性プロポリス抽出物を生産した。
【００３２】
実施例（８）
上記の実施例（１）で調製した１００ｇのプロポリス抽出物粉末に１００％の水を添加し、それを８０℃にて３０分加熱して低温殺菌した。サッカロミセス・サケ（清酒酵母）とアスペルギルス・ニガー（黒コウジカビ）とを接種し、３０℃にて３日間培養した。凍結乾燥後、９３ｇの発酵プロポリス粉末９３ｇを得た。
【００３３】
実施例（９）
上記の実施例（１）で調製した１００ｇのプロポリス抽出物粉末に２００ｇの水を添加し、それを８０℃にて３０分間加熱して低温殺菌した。それに納豆菌と枯草菌とを接種し、４０℃にて３日間培養した。凍結乾燥後、８９ｇの発酵プロポリス粉末を得た。
【００３４】
実施例（１０）
上記の実施例（８）で調製した５０ｇの発酵プロポリス粉末に抽出溶媒として２５０ｍｌの７０％（ｖ/ｖ：体積比）酒精を添加した。それを６０℃にて５時間抽出してろ過することによって不溶性物質を除去した。その生産した抽出物を真空蒸発して液状の発酵プロポリス中の固形分含有量を２５％（ｗ/ｖ：重量体積比）にすることによって溶媒を除去した。
【００３５】
実施例（１１）
上記の実施例（１）で調製した１００ｇのプロポリス抽出物粉末に２００ｇ水を添加し、それを８０℃にて３０分加熱して低温殺菌し、それに納豆菌を接種し、４０℃にて２日間培養した。アセトバクター・アセチを接種し、１日間培養後、凍結乾燥させて７８ｇの発酵プロポリス粉末を作った。
【００３６】
実施例（１２）
本発明で用いた菌株中、セレウス菌を前記プロポリス抽出物粉末が懸濁されている培養液中で増殖させることは一般的に不可能であった。その理由は、そのカビ（真菌）の増殖がプロポリスに含まれる一部の成分によって制限されるためである。従って、この場合には、１％（ｗ/ｖ：重量体積比）の大豆抽出物を５００ｍｌの前記抽出物に添加し、次いで、本発明の発酵プロポリスを生産するため、前記細菌を接種し、それを発酵させて菌体の濃度を８０倍を超えて増加させた。上記の実施例（１）で生産した１００ｇのプロポリス抽出物粉末を添加し、懸濁させた時点で、本発明の発酵プロポリスを生産するために４０℃にて１日間増殖させた。その発酵完了後に水を除去して最終的に１０８ｇの発酵プロポリス粉末を生産した。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明は発酵プロポリスの製造方法を提供するものである。プロポリス抽出物を本発明の方法によって発酵させる場合、プロポリス抽出物に含有される樹脂に起因する摂取限定問題を解消すると同時に、発酵により高分子量物質を低分子量物質に分解することによって水溶性プロポリス抽出物の生産を可能にした。これはプロポリス抽出物中に含有されたエタノールを子供が摂取するという問題を解消した。また、これは老齢者のプロポリス抽出物や粉末の摂取問題も解消できる。従って、さまざまな薬理効果を持つプロポリスを、発酵生成物の形態で開発することができ、プロポリス生成物を摂取する全ての人々に役立てることがでる。それは公衆衛生に大きく貢献し、市販される場合には市場で非常に高い評価を受け、その結果、企業の売上げ高増大に寄与するであろう。
【００３８】
シーケンスリスト（配列表）
なし
【国際調査報告】
2010527230.tif 000002
2010527230.tif 000003