(57)【要約】  本発明は、式中、ＸはＯまたはＳであり；Ｒ１はＯＲ２、ハロ、（ＣＲ２）ｎＲ３、ニトロ、シアノ、アミノ、アミド、スルホンアミド、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；Ｒ２はＨ、（ＣＲ２）ｎＲ３、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；Ｒ３は所望により置換されているアリール、ヘテロアリール、炭素環式環またはヘテロ環式環であり；ｍは１−３であり；そして、ｎは０−４である化合物（Ｉ）およびその医薬組成物、ならびに、さらに特に、カテプシン阻害剤として有用である二環式カルバメートおよびこのような化合物またはその薬学的に許容される塩を使用するための方法を提供する。【化１】2010507681.tif 000010
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2010507681.tif 000009
〔式中、
ＸはＯまたはＳであり；
Ｒ１はＯＲ２、ハロ、（ＣＲ２）ｎＲ３、ニトロ、シアノ、アミノ、アミド、スルホンアミド、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；
Ｒ２はＨ、（ＣＲ２）ｎＲ３、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；
Ｒ３は所望により置換されているアリール、ヘテロアリール、炭素環式環またはヘテロ環式環であり；
ｍは１−３であり；そして、
ｎは０−４である〕
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ｍが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がハロである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＯＲ２であり；そして、Ｒ２が所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、またはＣ３−６アルキニル；あるいは所望により置換されているアリール、ヘテロアリール、炭素環式環またはヘテロ環式環である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が所望により置換されているフェニル、ベンジル、またはＣ１−６アルキルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
該化合物がシスまたはトランス立体構造を有する、請求項１−５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
治療有効量の請求項１−６のいずれかに記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項８】
細胞恒常性、アポトーシス、腫瘍浸潤および転移、骨吸収または抗原提示であり、カテプシンプロテアーゼ介在状態または疾患である、カテプシンプロテアーゼ活性が介在する状態を処置するための薬物の製造のための請求項１−６のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩または医薬組成物の使用。
【請求項９】
該カテプシンプロテアーゼがパパイン様カテプシンプロテアーゼである、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
カテプシンプロテアーゼ活性を阻害するための薬物の製造における、請求項１−６のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩または医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、Ｕ．Ｓ．仮出願番号６０／８６２，５００、２００６年１０月２３日出願の利益を主張する（これを出典明示によりそれら全体を本出願に包含させる）。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
大部分のカテプシンはパパイン様システインプロテアーゼファミリーに属するエンドペプチダーゼである。カテプシンは一般的にリソソームおよびエンドソーム区画で高度に濃縮しており、広範囲の生理学的過程で役割を果たす。それらの中で、非特異的な機能、例えば、内在化されたおよび細胞タンパク質両方の分解、ならびに酵素およびホルモン過程におけるより特異的な機能がある。種々の疾患はあるプロテアーゼの過剰発現と関連している。例えば、特定のカテプシンプロテアーゼの阻害は細胞恒常性、アポトーシス、腫瘍浸潤および転移、骨吸収および抗原提示と関連する病的状態の治療と関連があると考えられる。
【０００３】
カテプシンに対するものを含むプロテアーゼの大部分の低分子阻害剤は、酵素における特定のポケットを認識し、基質選択性を規定するペプチド模倣剤、および触媒ドメインと重要な接触をする求電子“頭部”からなる。求電子基の性質は、これらの低分子の可逆性および不可逆性阻害剤への分類を決定する。いくつかの求電子基は酵素と阻害剤との共有結合性相互作用によるプロテアーゼの阻害において一般的に使用されている。例えば、アルデヒド、セミカルバゾン、ニトリルおよびケトンは、通常、可逆性阻害となるが、ハロメチルケトン、エポキシドおよびマイケルアクセプターはとりわけ不可逆性阻害のために使用される官能基である。
【０００４】
今日までに、比較的少ないプロテアーゼ阻害剤しか臨床試験を通して好結果で進行していない。主な問題は、阻害剤のペプチド部の非薬物様特性および／またはしばしばインビボでの求電子官能基と内因性求核原子との非特異的な相互作用による、選択性の欠如と関連する。基質に基づく薬物設計の典型的なアプローチで共通して見られるこれらの欠点を回避するため、新規分子概念を探索する必要がある。
【発明の概要】
【０００５】
発明の開示
本発明は、カテプシンプロテアーゼに対する阻害剤として有用であり得る化合物およびその医薬組成物を提供する。
【０００６】
１つの局面において、本発明は、式（１）
【化１】
2010507681.tif 000002
〔式中、
ＸはＯまたはＳであり；
Ｒ１はＯＲ２、ハロ、（ＣＲ２）ｎＲ３、ニトロ、シアノ、アミノ、アミド、スルホンアミド、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；
Ｒ２はＨ、（ＣＲ２）ｎＲ３、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；
Ｒ３は所望により置換されているアリール、ヘテロアリール、炭素環式環またはヘテロ環式環であり；
ｍは１−３であり；そして、
ｎは０−４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００７】
１つの態様において、ｍが１である。例えば、Ｒ１がハロまたはＯＲ２であり、ここで、Ｒ２が所望により置換されているフェニル、ベンジルまたはＣ１−６アルキルであってよい。いくつかの例において、式（１）を有する化合物はシス立体構造を有する。他の例において、式（１）を有する化合物はトランス立体構造を有する。
【０００８】
さらなる局面において、本発明は、式（１）を有する化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【０００９】
さらに他の局面において、本発明は、治療有効量の式（１）の化合物、またはその薬学的に許容される塩または医薬組成物を処置を必要とする系または対象に投与し、カテプシンプロテアーゼを阻害することを含む、該カテプシンプロテアーゼを阻害する方法を提供する。
【００１０】
本発明は、また、治療有効量の式（１）の化合物、またはその薬学的に許容される塩または医薬組成物を処置を必要とする系または対象に投与し、カテプシンプロテアーゼ介在状態または疾患を処置することを含む、該カテプシンプロテアーゼ活性が介在する状態または疾患を処置するための方法を提供する。１つの態様において、本発明は、細胞恒常性、アポトーシス、腫瘍浸潤および転移、骨吸収および抗原提示を含むが、これに限定されないパパイン様カテプシンプロテアーゼが介在する状態または疾患を処置するための方法を提供する。例えば、本発明の化合物は骨粗鬆症、関節炎、喘息、自己免疫疾患および腫瘍を処置するために使用され得る。
【００１１】
さらに他の局面において、本発明は、カテプシンプロテアーゼ、さらに特にパパイン様カテプシンプロテアーゼが介在する疾患を処置するための薬物の製造のための式（１）を有する化合物の使用を提供する。
【００１２】
本発明の化合物を使用するための上記方法において、式（１）を有する化合物を細胞または組織を含む系に投与してもよい。他の態様において、式（１）を有する化合物をヒトまたは動物対象に投与してもよい。
【００１３】
定義
基および他の基、例えばハロ−置換−アルキルおよびアルコキシの構造要素としての“アルキル”は、直鎖または分枝鎖であり得る。Ｃ１−６アルコキシは、メトキシ、エトキシなどを含む。ハロ−置換アルキルはトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどを含む。本明細書で使用される、所望により置換されているアルキル、アルケニルまたはアルキニルは所望によりハロゲン化（例えば、ＣＦ３）されていてもよく、または、ヘテロ原子、例えば、ＮＲ、ＯまたはＳで置換されているか、または置き換わっている１個以上の炭素（例えば、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、アルキルチオール、チオアルコキシ、アルキルアミンなど）を有してもよい。
【００１４】
“アリール”は炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環を意味する。例えば、アリールはフェニルまたはナフチルであり得る。“アリーレン”はアリール基から生じる二価のラジカルを意味する。
【００１５】
本明細書で使用される“ヘテロアリール”は１個以上の環員がヘテロ原子であるときの上記アリールについて定義するとおりのものである。例えば、ヘテロアリールはピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含み、これに限定されない。
【００１６】
本明細書で使用される“炭素環式環”は、所望により、例えば、＝Ｏで置換されていてもよい、炭素原子を含む飽和または部分的に不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環を意味する。炭素環式環の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピレン、シクロヘキサノンなどを含み、これに限定されない。
【００１７】
本明細書で使用される“ヘテロ環式環”は、１個以上の環炭素がヘテロ原子であるときの上記炭素環式環を定義する。例えば、ヘテロ環式環は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｎ＝、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２またはＮＲを含んでよく、ここで、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは保護基であり得る。ヘテロ環式環の例は、モルホリノ、ピロリジニル、ピロリジニル−２−オン、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニロン、１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デカ−８−イルなどを含み、これに限定されない。
【００１８】
他に記載のない限り、置換基が“所望により置換”されていると考えられるとき、それは、置換基が、個々に、かつ独立して、例えば、所望により、ハロゲン化されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルアミン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、モノおよびジ置換アミノ基を含むアミノ、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、カルボニル、炭素環式、シアノ、シクロアルキル、ハロゲン、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ環式、ヒドロキシ、イソシアネート、イソチオシアネート、メルカプト、ニトロ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、パーハロアルキル、パーフルオロアルキル、シリル、スルホニル、チオカルボニル、チオシアネート、トリハロメタンスルホニルおよびそれらの保護された化合物から選択される１個以上の基で置換されていてもよい基であることを意味する。上記置換基の保護された化合物を形成し得る保護基は、当業者に既知であり、そして、文献、例えば、Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999, and Kocienski, Protective Groups, Thieme Verlag, New York, NY, 1994で見つけることができる（これらを出典明示によりそれらの内容を本明細書に包含させる）。
【００１９】
本明細書で使用される“共投与”または“組合せ投与”などの用語は、一患者に選択された複数治療剤を投与することを含むことを意味し、そして必ずしも複数薬剤が同じ投与経路によりまたは同時に投与されない処置レジメンを含むことを意図する。
【００２０】
本明細書で使用される“医薬組合せ”なる用語は、活性成分の混合または組合せから得られる生産物を意味し、そして活性成分の固定された組合せおよび固定されていない組合せの両方を含む。“固定された組合せ”なる用語は、複数の活性成分、例えば式（１）の化合物、および共薬剤両方が、単一の物または投与形で同時に患者に投与されることを意味する。“固定されていない組合せ”なる用語は、複数の活性成分、例えば式（１）の化合物、および共薬剤両方が、同時に、共にまたは特定の時間制限なしに連続してのいずれかで、別々の物として投与することを意味し、このような投与は、治療有効量の活性成分を患者の体内に提供する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも適用する。
【００２１】
“治療有効量”なる用語は、研究者、獣医、医師または他に臨床医により求められる、細胞、組織、臓器、系、動物またはヒトの生物または医学応答を誘導する対象化合物の量を意味する。
【００２２】
対象化合物の“投与”または“投与する”なる用語は、処置を必要とする対象に本発明の化合物のプロドラッグを含む本発明の化合物を提供することを意味する。
【００２３】
発明の詳細な説明
本発明は、カテプシンプロテアーゼ、さらに特にパパイン様カテプシンプロテアーゼを阻害するための化合物および組成物を提供する。本発明は、また、治療有効量の式（１）の化合物、またはその薬学的に許容される塩または医薬組成物を処置を必要とする系または対象に投与し、パパイン様カテプシンプロテアーゼ介在状態または疾患を処置することを含む、カテプシンプロテアーゼ活性が介在する状態または疾患、特にパパイン様カテプシンプロテアーゼが介在する状態または疾患を処置する方法を提供する。
【００２４】
パパイン様システインプロテアーゼは変性、侵襲性、および免疫系関連障害における重要なタンパク質分解活性として同定されている（Lecaille et al., Chem. Rev. 2002, 102:4459-4488; Broemme et al., Curr. Pharm. Des. 2002, 8:1639-1658）。例えば、カテプシンＫは破骨細胞における主要な骨分解活性であり、その選択的な阻害は骨粗鬆症および特定の型の関節炎を阻止するために有効であり得る。カテプシンＳはＭＨＣクラスＩＩ依存抗原提示において重要な役割を果たす；カテプシンＳの阻害は抗原の応答を有意に減少させるため、カテプシンＳは喘息およびある自己免疫疾患に対する薬物標的となる。（Riese et al., J. Clin. Invest. 1998, 101:2351-2363）。カテプシンは、また、腫瘍浸潤および転移、および中枢神経系の腫瘍、例えば、星状細胞腫、膠芽腫および髄膜腫と関連している（Berquin et al., Perspect. Drug Discovery Design 1995, 2:371-388; Levicar et al., J. Neurooncol. 2002, 58:21-32）。
【００２５】
１つの局面において、本発明の化合物は、式（１）：
【化２】
2010507681.tif 000003
〔式中、
ＸはＯまたはＳであり；
Ｒ１はＯＲ２、ハロ、（ＣＲ２）ｎＲ３、ニトロ、シアノ、アミノ、アミド、スルホンアミド、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；
Ｒ２はＨ、（ＣＲ２）ｎＲ３、または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ３−６アルキニルであり；
Ｒ３は所望により置換されているアリール、ヘテロアリール、炭素環式環またはヘテロ環式環であり；
ｍは１−３であり；そして、
ｎは０−４である〕
を有する。
【００２６】
１つの態様において、本発明の化合物はパパイン様カテプシンプロテアーゼを阻害するために使用し得る。表１は、種々のカテプシンの阻害に対する種々の本発明の化合物の見かけの阻害定数（Ｋｉ（ａｐｐ）、μＭ）を示す。Ｓｔｒｅｌ＝相互の立体構造。
【化３】
2010507681.tif 000004
【表１】
2010507681.tif 000005
表１
【００２７】
環状カルバメート８および１２−１６は広範なパパイン様カテプシンプロテアーゼにわたって阻害活性を示した。このプロテアーゼファミリー内で、見かけのＫｉ値はカテプシンＢに対して最も低く、次にカテプシンＳ、Ｃ、ＬそしてＫである。中度の活性がカテプシンＶ、Ｘ、ＦおよびＨに対して見られる。本化合物は、他のシステインプロテアーゼのファミリー、例えば、カスパーゼ、およびセリンプロテアーゼファミリーメンバー、例えば、ヘプシン、トロンビン、ＭＴ−ＳＰ１またはトリプシンに対して不活性であることが示されている。
【００２８】
一般的に、シスをトランス配置立体異性体と比較すると、Ｋｉ値の低下がある（８対１２、参照）。より疎水性のジメチルフェニル基を含む類似体１２は、フェニル置換類似体１４と比較して、常にカテプシン群において強い活性を示すように見えた。チオカルバメート１３は、オキソ−カルバメートと比較して実質的に低い阻害作用を有する。アルキル−置換類似体１５（Ｒ＝ベンジル）および１６（Ｒ＝イソプロピル）は、一般的に１２または１４より約１０倍高いＫｉ値を示した。例外はカテプシンＢに対するベンジル置換類似体１５の低ナノモル活性であり、このシリーズ中でカテプシンＢに対する最も選択的な阻害を示す（１００倍）。
【００２９】
本発明を実施するためにメカニズムは必要ではないが、本発明の二環式カルバメートによる阻害のメカニズムを透析試験で試験する。簡潔に言うと、まず、カテプシンＢを触媒活性の完全抑制のために０．２μＭの化合物１２（２００×Ｋｉ）と３７℃でインキュベートする（阻害剤処置についての２．９ｒｆｕ／ｓｅｃ対ビヒクル対照についての１２１ｒｆｕ／ｓｅｃ）。次に、混合物を広く４℃で透析し、非結合阻害剤を除去し、その後カテプシン活性を３７℃で再測定する（阻害剤処置についての５１ｒｆｕ／ｓｅｃ対ビヒクル対照についての７１ｒｆｕ／ｓｅｃ）。化合物１２で処置されたサンプルにおけるカテプシンＢ活性の透析後の見かけの回復は、化合物１２が部分的に可逆性の阻害剤であることを示す。しかしながら、プログレス曲線の注意深い分析によると、基質変換がアッセイの間に加速されることが示された（点線矢印により示される）。この加速は、対照の基質変換がインキュベーション温度に影響を受けないため、活性部位からの共有結合している化合物１２の温度感受性の放出により引き起こされるようである。
【００３０】
カテプシンＢと阻害剤（化合物１２）との可能性のある付加物形成を、トリプシン／キモトリプシン消化後の質量分析により分析する。試験酵素（カテプシンＢ）の２つの活性部位フラグメントは未処理カテプシンＢサンプルから１９ＥＩＲＤＱＧＳＣＧＳＣ＊Ｗ３０および２２ＤＱＧＳＣＧＳＣ＊Ｗ３０と同定される。阻害剤で処理されたカテプシンＢについて、両方のフラグメントは、１２の触媒性システイン残基（Ｃ＊）への一つの共有結合に相当する２４７の質量を獲得した。この付加物の安定性は温度上昇に感受性である。氷上に維持している対照と比較すると、３７℃で２時間のインキュベートがこの酵素−阻害剤付加物の解離を促進し、代謝産物の存在量の４倍増加をもたらす。代謝産物の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）特性は、示唆される解離生成物１１のものと一致する。
【００３１】
要約すると、本発明は、Ｂ＞Ｓ＞Ｃ、Ｌ、Ｋ＞Ｖ、Ｘ、Ｆ、Ｈの順でサブタイプ選択性を有し、カテプシンファミリーに対して選択性である式（１）の化合物を提供する。カルバメートの酸素に対するシス配置での疎水性Ｒ基の優先性が観察され、一桁のナノモル範囲のカテプシンＢに対する見かけのＫｉ値を有する。骨格におけるカルバメート官能性が実質的に不安定化され、活性部位のシステインのチオールにより求核攻撃に対する弱点を提供する。その後、二環式は開環され、触媒性システインと共有結合し、酵素の阻害に至る。この仮説は消化された酵素の質量分光分析と一致する。化合物１２とインキュベート後、触媒性システインを含むフラグメントは共有結合で阻害剤と結合している。透析試験で見られる非線形回復速度およびＭＲＭによる代謝産物の特徴から、阻害剤が、環境温度でその開環された合成前駆体１１として酵素からゆっくり加水分解され脱離することが示唆される。
【００３２】
投与および医薬組成物
一般的に、本発明の化合物は単独でまたは１種以上の治療剤との組合せのいずれかで当分野で既知の通常のおよび許容される形式のいずれかを介して、治療有効量を投与される。治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康度、使用される化合物の有効性および他の要素に依存して広く変化し得る。一般的に、満足な結果は体重あたり約０．０３から２．５ｍｇ／ｋｇの１日投与量で全身に得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトにおいて指示される１日投与量は、例えば１日に４回までの分割用量でまたは遅延形で都合良く投与される約０．５ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。経口投与のための適当な単位用量形は約１から５０ｍｇの活性成分を含む。
【００３３】
本発明の化合物は任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤形もしくはカプセル形で、または非経腸的に、例えば注射溶液形もしくは懸濁液形で、局所的に、例えばローション形、ゲル形、軟膏形もしくはクリーム形で、または経鼻形もしくは坐薬形で医薬組成物として投与できる。少なくとも１種の薬学的に許容される担体もしくは希釈剤と一緒に遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を含む医薬組成物を、混合、造粒または被覆方法による慣用の方法で製造できる。
【００３４】
遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は混合、造粒または被覆方法による慣用の方法で製造され得る。例えば、経口組成物は、活性成分とａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤のために、ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；所望により、ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩または起沸性混合物；および／またはｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤を一緒に含む錠剤またはゼラチンカプセルと共に含む錠剤またはゼラチンカプセルであり得る。注射組成物は、等張水溶液または懸濁液であり得、そして座薬は脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造し得る。
【００３５】
該組成物は滅菌し得そして／またはアジュバント、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／またはバッファーを含み得る。加えて、それらはまた、治療に有効な他の物質を含み得る。適当な経皮投与用製剤は有効量の本発明の化合物を担体と含む。担体は宿主の皮膚を介する輸送を助けるために、薬理学的に許容される吸収性溶媒を含み得る。例えば、経皮デバイスは裏当て部分、化合物と所望により担体を含む貯蔵部、所望により長時間にわたって制御されたおよび予定された速度で宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御バリア、および皮膚にデバイスを固定するための手段を含む、バンデージ形である。マトリックス経皮製剤もまた使用され得る。例えば、皮膚および眼への、適当な局所投与用製剤は、当分野で既知の好ましくは水溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。このような製剤は、可溶化剤、安定化剤、等張増加剤、バッファーおよび保存剤を含み得る。
【００３６】
本発明の化合物は、治療有効量の１種以上の治療剤との組合せ（医薬組合せ）で投与され得る。本発明の化合物が他の治療と一緒に投与されるとき、共投与される化合物の用量は、使用される共薬剤の型、使用される特定の薬剤、処置される状態などに依存して変化する。
【００３７】
例えば、本発明の化合物は、また、細胞増殖性障害および腫瘍を処置するために、化学療法剤と組み合わせて使用し得る。本発明の組成物および方法で使用され得る化学療法剤の例は、アントラサイクリン、アルキル化剤（例えば、マイトマイシンＣ）、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗剤、葉酸類似体（例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、例えば、メトトレキサート）、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、プラチン含有剤、インターフェロンおよびインターロイキンを含み、これに限定されない。本発明の組成物および方法で使用され得る既知の化学療法剤の特定の例は、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾデパ、カルボクオン、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、トリメチロロメラミン、クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロルエタミン、塩酸メクロルエタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、アクラシノマイシン、アクチノマイシンＦ（１）、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、６−ジアゾ−５−オキソ−１−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、プロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアナイン、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、フルオロウラシル、テガフール、Ｌ−アスパラギナーゼ、パルモザイム、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アンサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、カルボプラチン、シスプラチン、デホファミド、デメコルシン、ジアジクオン、エルホルニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、エトポシド、フルタミド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、レンチナン、ロニダミン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、パクリタキセル、タモキシフェン、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンを含み、これに限定されない。
【００３８】
相乗効果が、また、他の免疫調節剤または抗炎症剤と共にで、例えば、シクロスポリン、ラパマイシン、またはアスコマイシン、またはそれらの免疫抑制剤類似体、例えば、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、または同等の化合物、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ブレキナル、レフルノミド、ミゾルビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制剤抗体、とりわけ白血球受容体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体、または他の免疫調節性化合物、例えば、ＣＴＬＡ４１ｇと組み合わせて使用するとき、起こり得る。
【００３９】
本発明はまた、ａ）遊離形または薬学的に許容される塩形の本明細書に記載のとおりの本発明の化合物である第１の薬剤、およびｂ）少なくとも１つの共薬剤を含む薬学的組合せ剤、例えばキットを提供する。該キットはその投与のための指示書を含み得る。
【００４０】
本発明の化合物の製造方法
本発明の化合物は、スキーム１にしたがって製造できる。
【化４】
2010507681.tif 000006
スキーム１
【００４１】
スキーム１において、反応剤および条件は：（ａ）ＣｂｚＣｌ、０．５ＭのＮａ２ＣＯ３／ジオキサン  ５：２、室温、５時間；（ｂ）ｍＣＰＢＡ、ＤＣＭ、０℃−室温、７時間；（ｃ）ＲＯＨ、２ＭのＮａＯＨ／ＭｅＣＮ  １：４、還流、４８時間；（ｄ）１ａｔｍのＨ２、Ｐｄ／Ｃ（ｃａｔ）、ＥｔＯＨ、室温、３時間；（ｅ）トリホスゲン、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、０℃、１時間；（ｆ）ＮａＨ、室温、１８時間；（ｇ）ＰＰｈ３、ＤＥＡＤ、ｐ−ニトロ安息香酸、ＴＨＦ、５０℃、４８時間；（ｈ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ、室温、１時間；（ｉ）１ａｔｍのＨ２、Ｐｄ／Ｃ（ｃａｔ）、ＥｔＯＨ、室温、３時間；（ｊ）ＯｓＯ４、ＮＭＯ、クエン酸、ｔＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：１、５０℃、１２時間；（ｋ）ＨＢｒ、ＨＯＡｃ、０℃−室温、３時間；（ｌ）２，３−ジメチルフェノール、Ｋ２ＣＯ３、ＭｅＣＮ、６０℃、１２時間；（ｍ）ＭｅＮＨ２、ＭｅＯＨ、５０℃、２時間；（ｎ）ＣＤＩ、ＤＭＡＰ、ベンゼン、還流、４時間である。化合物３−２１はラセミ混合物である。
【００４２】
Ｐａｉｏｎｉ（米国特許第４，１６０，８３７号、この内容を出典明示により本明細書に包含させる）に記載されている合成法にしたがって、テトラヒドロピリジン２をラセミ体のＣｂｚ−保護されたエポキシド３に２工程で変換する。塩基性水溶液条件下でエポキシド３（ＲＯＨ＝２，３−ジメチルフェノール）を開裂し、位置異性体の混合物を得る。好適なトランス−ジアキシアル開環について予期されるとおり、４−アリールオキシピペリジン４対３−アリールオキシピペリジン５の比は約５：１である。位置異性体をクロマトグラフィーにより分離し、水素分解により脱保護して、開形６および７を得る。６の環化は２工程が必要である。まずピペリジン−窒素をトリホスゲンおよびトリエチルアミンを使用して対応するクロロギ酸エステルに選択的にカルボニル化し、次に３−ヒドロキシ基を水素化ナトリウムを使用して脱プロトン化し、これが自発的分子内環化を引き起こし、ラセミ体のトランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン８が得られる。７のクロロギ酸エステル中間体を二環式９に環化する試みは、おそらく分子内閉環のために必要であるピペリジン環の不都合な舟形配座により成功しない。
【００４３】
求核分子としてｐ−ニトロ安息香酸を使用する光延反応を化合物４の３位で立体中心を反転するために使用する。あるいは、該反転はＰｙｒ・ＳＯ３およびＲｅｄ−Ａｌを使用する酸化／還元連鎖により達成し得る。メタノール性塩基中で中間体１０を鹸化し、次に脱保護し、ピペリジン１１を得る。上記製造法と同様の分子内環化でシス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン１２を得る。
【００４４】
立体異性体８および１２の両方は白色で、かつ安定な固体として単離される。該化合物は、また、塩基性または中性水溶液中で安定であるが、自発的開環が強酸性条件下（ｐＨ＜２）で観察される。類似体１３−１６（表１、上記）が１２と同様の合成法で合成される。類似体１３の場合、チオホスゲンを環化工程においてホスゲンの代わりに使用し；類似体１５および１６について、対応するアルコール（１５についてベンジルアルコール、１６についてイソプロパノール）をエポキシド３の開環におけるＮａＨと共に溶媒として使用する。ジヒドロキシル化を介する別の合成法は保護されたテトラヒドロピリジン１７となる。脱保護されたジオールの選択的環化およびアルキル化では所望の二環式カルバメート類似体を得ることができなかった。エポキシド３のＨＢｒとの処理で選択的にブロマイド１８を得、これをカルバメート１９に環化できるが、臭素で置換する試みは成功しなかった。対照化合物２１はエピブロモヒドリン２０から出発して３工程で合成される。
【００４５】
さらに、本発明の化合物は、遊離形、または塩形成基が存在するときその塩、またはエステル形成基が存在するときエステルで得ることができる。酸性基を有する本発明の化合物は、エーテル性またはアルコール性溶媒、例えば、低級アルカノールの存在下で有利に、薬学的に許容される塩基との塩、例えば、水性アルカリ金属水酸化物に変換し得る。得られた塩は、例えば、酸との処理により遊離化合物に変換し得る。これらの塩または他の塩は、また、得られた化合物の精製に使用し得る。アンモニウム塩は適当なアミン、例えば、ジエチルアミンなどとの反応により得ることができる。
【００４６】
ある局面において、塩基性基を有する本発明の化合物は、酸付加塩、とりわけ薬学的に許容される塩に変換し得る。これらは、例えば、無機酸、例えば、鉱酸（例えば、硫酸、リン酸またはハロゲン化水素酸）；有機カルボン酸（例えば、非置換であるか、またはハロゲンにより置換されていてもよい、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボン酸、例えば、酢酸；飽和または不飽和ジカルボン酸、例えば、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸またはフマル酸；ヒドロキシカルボン酸、例えば、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸またはクエン酸）；アミノ酸、例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）；有機スルホン酸（例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホン酸、例えば、メタンスルホン酸）；または、非置換であるか、または（例えば、ハロゲンにより）置換されていてもよい、アリールスルホン酸と形成し得る。好ましいものは、塩酸、メタンスルホン酸およびマレイン酸と形成される塩であってよい。
【００４７】
遊離化合物と塩形またはエステル形の化合物の密接な関係を考慮して、化合物の言及は、このようなことが可能または適当な環境下のとき、対応する塩またはエステルもまた意味する。塩を含む化合物は、また、それらの水和物形で得られてもよく、また、それらの結晶化のために使用される他の溶媒を含んでもよい。
【００４８】
遊離ヒドロキシル基を含有する本発明の薬物は、また、薬学的に許容される生理的に開裂可能なエステルの形態で存在してもよく、そしてそれらも本発明の範囲に包含させる。このような薬学的に許容されるエステルは、生理的条件下で加溶媒分解または開裂により、遊離ヒドロキシル基を含有する本発明の対応する薬物に変換できるもの、好ましくはプロドラッグエステル誘導体である。適当な薬学的に許容されるプロドラッグエステルは、カルボン酸、炭酸モノエステルまたはカルバミン酸とのもの、好ましくは所望により置換されている低級アルカン酸またはアリールカルボン酸とのエステルであり得る。
【００４９】
当業者に明らかであるとおり、ある本発明の化合物は、不斉炭素原子（光学中心）を有してもよく、また、二重結合；ラセミ体、ジアステレオマー、エナンチオマー、幾何異性体および個々の異性体もすべて本発明の範囲内に包含することを意図する。
【００５０】
式（１）の化合物の合成の詳細な例は、説明するためであり本発明を限定しない下記実施例に見ることができる。
【実施例】
【００５１】
実施例１
トランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（８）
３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（２）
１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（１．１ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０ｍＬ）に溶解する。０．５Ｍの炭酸ナトリウム水溶液（２５ｍＬ、１２．５ｍｍｏｌ）に次にクロロギ酸ベンジル（１．８ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を３時間室温で撹拌し、次に酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈する。有機層を分離し、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させる。溶媒を真空除去し、３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸ベンジルエステルを無色の液体として得る。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40-7.33 (m, 5H), 5.85 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.00 (t, J = 2 Hz, 2H), 3.60 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.72 (m, 2H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１６ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２１８．１、実測値２１８．３。
【００５２】
７−オキサ−３−アザ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルエステル（３）
３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル２（２．６ｇ、１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解する。ジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解したｍ−クロロ過安息香酸（４．５ｇ、１８ｍｍｏｌ）を２０分にわたり滴下する。混合物を室温で７時間撹拌し、次に溶液を１Ｍの炭酸ナトリウム水溶液で３回、塩水で１回洗浄する。有機相を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮し、ラセミ体であるエポキシド７−オキサ−３−アザ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルエステル（３）を無色の油状物として得る。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40-7.32 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 3.99 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.53 (m, 1H), 3.31 (m, 1H), 3.24 (m, 1H), 2.10 (m, 1H), 1.96 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１６ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２３４．１、実測値２３４．３。
【００５３】
トランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（４）およびトランス−３−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（５）
２，３−ジメチルフェノールおよび７−オキサ−３−アザ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルエステル（３）（１．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解する。２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加え、混合物を還流温度に４８時間加熱する。アセトニトリルを真空除去し、水性残渣を水（２０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮する。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  グラジエント）により分離し、トランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル４および位置異性体であるトランス−３−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル５を白色の固体として得る。4: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.58-7.50 (m, 5H), 7.24 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.35 (s, 2H), 4.44 (m, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.50 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.28 (m, 1H), 1.85 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ２１Ｈ２６ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値３５６．２、実測値３５６．３。5: 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.53-7.46 (m, 5H), 7.15 (t, br, 1H), 7.01 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.95 (d, br, 1H), 5.35 (br, 2H), 4.28-4.15 (m, 4H), 3.28-3.22 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.34 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.84 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ２１Ｈ２６ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値３５６．２、実測値３５６．３。
【００５４】
トランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−ピペリジン−３−オール（６）
トランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル４（７００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、触媒量のパラジウム（１０％炭素）を加える。３時間室温で１ａｔｍの水素下で撹拌し、混合物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＨで洗浄する。濾液を真空濃縮し、ピペリジノール６を白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, MeOD) δ = 7.04 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.16 (m, 1H), 2.97 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.27 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.83 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ２０ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２２２．１、実測値２２２．３。
【００５５】
トランス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（８）
ピペリジノール６（５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解する。トリホスゲン（４５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃に冷却する。次にトリエチルアミン（９６μＬ、０．６９ｍｍｏｌ）を５０分にわたってゆっくり増加するように加える。水素化ナトリウム（３０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温に温め、室温で１８時間撹拌する。混合物を０．２５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６．２）で洗浄し、有機層を分離し、（ＭｇＳＯ４）乾燥させ、濃縮する。粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  グラジエント、酸性添加剤なし）で精製し、８を白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.06 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.80 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 3.70 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.47-3.38 (m, 2H), 3.30 (m, 1H), 2.31 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.00 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１８ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２４８．１、実測値２４８．３。
【００５６】
実施例２
トランス−３−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−ピペリジン−４−オール（７）
トランス−３−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−ピペリジン−４−オール（７）を６の製造法にしたがって白色の固体として得る。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.03 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.12 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.12 (m, 1H), 1.64 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ２０ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２２２．１、実測値２２２．３。
【００５７】
実施例３
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１２）
ベンジルカルバメート４（０．９３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）にトリフェニルホスフィン（２．０７ｇ、７．９ｍｍｏｌ）およびｐ−ニトロ安息香酸（１．３２ｇ、７．９ｍｍｏｌ）と共に溶解する。混合物を０℃に冷却し、次にＤＥＡＤ（１．２４ｍＬ、７．９ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。混合物を５０℃で４８時間撹拌し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  グラジエント）により精製し、シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−（４−ニトロ−ベンゾイルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステルを白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.21 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.37-7.24 (m, 5H), 6.99 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.36 (m, 1H), 5.14 (m, 1H), 5.03 (m, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 3.96-3.46 (m, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.19 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.02 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ２８Ｈ２９Ｎ２Ｏ７（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値５０５．２、実測値５０５．３。
【００５８】
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（１０）
粉末のＮａＯＨ（０．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解する。シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−（４−ニトロ−ベンゾイルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（０．５ｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１時間室温で撹拌する。混合物を濃縮し、ＤＣＭを加え、有機層を水で２回洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステルを白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.39-7.28 (m, 5H), 7.05 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.55 (m, 1H), 3.94 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 3.52 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.09 (m, 1H), 1.74 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ２１Ｈ２６ＮＯ４（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値３５６．２、実測値３５６．３。
【００５９】
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−ピペリジン−３−オール（１１）
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（３００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、触媒量のパラジウム（１０％炭素）を加える。３時間室温で１ａｔｍの水素下で撹拌後、混合物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＨで洗浄する。濾液を真空濃縮し、シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−ピペリジン−３−オール（１１）を白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, MeOD) δ = 6.98 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.48 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.04 (m, 1H), 2.91 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.98 (m, 1H), 1.70 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ２０ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２２２．１、実測値２２２．３。
【００６０】
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１２）
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−ピペリジン−３−オール１１（５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解する。トリホスゲン（４５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃に冷却する。次にトリエチルアミン（９６μＬ、０．６９ｍｍｏｌ）を５０分にわたってゆっくり増加するように加える。室温に温めた後、水素化ナトリウム（３０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌する。混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄し、有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮する。粗生成物を逆相ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  グラジエント、酸性添加剤なし）で精製し、１２を白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.03 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.87 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 6.7 Hz, J = 9.5 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 5.1 Hz, J = 12.2 Hz, 1H), 3.47 (dd, J = 7.3 Hz, J = 14.1 Hz, 1H), 3.47 (dt, J = 4.9 Hz, J = 13.7 Hz, 1H), 2.89 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.35 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (m, 1H), 2.18 (s, 3H)。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１８ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２４８．１、実測値２４８．３。
【００６１】
実施例４
シス−４−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−チオン（１３）
トリホスゲンをチオホスゲンで置き換えて二環式カルバメート１２の製造法にしたがって、表題化合物１３を白色の固体として製造する：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.04 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.39 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 3.61 (m, 2H), 3.13 (m, 1H), 3.05 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.31 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.15 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１８ＮＯ２Ｓ（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２６４．１、実測値２６４．３。
【００６２】
実施例５
シス−４−フェノキシ−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１４）
２，３−ジメチルフェノールをフェノールで置き換えて二環式カルバメート１２の製造法にしたがって、表題化合物１４を白色の固体として製造する：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.34-7.28 (m, 2H), 7.05-6.94 (m, 3H), 4.93 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.51 (m, 1H), 2.99 (m, 1H), 2.94 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.20 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ１４ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２２０．１、実測値２２０．３。
【００６３】
実施例６
シス−４−ベンジルオキシ−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１５）
エポキシド３（１．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）をベンジルアルコール（５ｍＬ）に溶解する。水素化ナトリウム（０．８６ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で一晩撹拌する。次に溶媒を真空除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  グラジエント）により精製し、３−ヒドロキシ−４−イソブトキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステルを得る。二環式カルバメート１２の製造法にしたがって、表題化合物１５を白色の固体として製造する：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.38-7.32 (m, 5H), 4.82 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.67 (m, 1H), 3.52 (m, 1H), 3.41 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.78 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.21 (m, 1H), 2.04 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１６ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２３４．１、実測値２３４．３。
【００６４】
実施例７
シス−４−イソブトキシ−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１６）
ベンジルアルコールをイソブタノールで置き換えて二環式カルバメート１５の製造法にしたがって、表題化合物１６を白色の固体として製造する：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.83 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.56 (m, 2H), 3.43 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 2.89 (m, 1H), 2.81 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.21 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 0.92 (d, J = 6.7 Hz, 6H)。ＭＳ  Ｃ１０Ｈ１８ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２００．１、実測値２００．３。
【００６５】
実施例８
トランス−４−ブロモ−６−オキサ−１−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−７−オン（１９）
７−オキサ−３−アザ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルエステル（３）（１．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３２ｍＬ）に溶解する。溶液を０℃に冷却し、次に臭化水素酸（酢酸中で３０％、８ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を３時間室温で撹拌する。生成物を沈殿させ、濾過し、４−ブロモ−ピペリジン−３−オールヒドロブロマイド（１８）を白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, MeOD) δ = 4.46 (m, 1H), 4.25 (m, 1H), 3.77 (m, 1H), 3.51 (m, 1H), 3.36 (m, 2H), 2.88 (m, 1H), 2.28 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ５Ｈ１１ＢｒＮＯ（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値１８０．０、実測値１８０．３。
【００６６】
４−ブロモ−ピペリジン−３−オールヒドロブロマイド（１８）（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（８０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に懸濁し、０℃に冷却する。次にトリエチルアミン（３３２μＬ、２．４ｍｍｏｌ）を６０分にわたってゆっくり増加するように加える。室温に温めた後、混合物を室温で一晩撹拌する。フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  グラジエント）により精製し、１９を白色の固体として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.71 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 4.42 (m, 1H), 3.76 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.46-3.24 (m, 3H), 2.75 (m, 1H), 2.07 (m, 1H)。ＭＳ  Ｃ６Ｈ９ＢｒＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２０６．０、実測値２０６．３。
【００６７】
実施例９
５−（２，３−ジメチル−フェノキシメチル）−３−メチル−オキサゾリジン−２−オン（２１）
エピブロモヒドリン２０（０．７ｍＬ、８．２ｍｍｏｌ）、２，３−ジメチルフェノール（１．０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．１３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（２５ｍＬ）に懸濁し、６０℃で一晩撹拌する。混合物を濃縮し、残渣をＤＣＭで希釈し、水で２回洗浄する。有機層を乾燥させ濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  グラジエント）により精製し、２−（２，３−ジメチル−フェノキシメチル）−オキシランを無色の油状物として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.05 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 3.1 Hz, J = 11.0 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 5.4 Hz, J = 11.0 Hz, 1H), 3.38 (m, 1H), 2.91 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 2.79 (dd, J = 2.7 Hz, J = 5.0 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.18 (s, 3H)。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ１５Ｏ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値１７９．１、実測値１７９．１。
【００６８】
１−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−メチルアミノ−プロパン−２−オール
２−（２，３−ジメチル−フェノキシメチル）−オキシラン（０．３ｇ、１．７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解する。メチルアミン（Ｈ２Ｏ中で４０％、０．３ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２時間撹拌する。溶媒を真空除去し、残渣を逆相ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏグラジエント）で精製し、１−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−メチルアミノ−プロパン−２−オールを無色の油状物として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.02 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.42 (m, 1H), 3.98 (m, 2H), 3.26 (m, 2H), 2.80 (br, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.10 (s, 3H)。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ２０ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２１０．１、実測値２１０．１。
【００６９】
５−（２，３−ジメチル−フェノキシメチル）−３−メチル−オキサゾリジン−２−オン（２１）
１−（２，３−ジメチル−フェノキシ）−３−メチルアミノ−プロパン−２−オール（１８０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）をベンゼン（１０ｍＬ）に溶解する。カルボニルジイミダゾール（１６７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、次に触媒量のＤＭＡＰを加える。混合物を還流温度に４時間加熱する。溶媒を真空除去し、残渣を逆相ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏグラジエント）で精製し、２１を無色の油状物として得る：1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.05 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.11 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3.58 (t, J = 5.7 Hz, J = 8.6 Hz, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.12 (s, 3H)。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１８ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋）に対する計算値２３６．１、実測値２３６．１。
【００７０】
実施例１０
カテプシンＢ消化物の質量分光分析
サンプルのＬＣ−ＭＳ分析をLicklider et al., Anal. Chem. 74:3076-3083 (2002)に記載されているとおりに自動的に脱塩を形成する自作ナノスプレー源で改良されたＬＣＱ  Ｄｅｃａ  ＸＰ  Ｐｌｕｓ  質量分析計を使用して実施する。ペプチド消化物をＭｏｎｉｔｏｒ、５μｍ、Ｃ１８（Column Engineering, Ontario, Canada）で充填した１００μｍ内径のプレカラムに負荷し、０．１ＭのＨＯＡｃで５μＬ／分で５分間脱塩する。脱塩後、プレカラムを８ｃｍの同じ充填剤で充填した７５μｍ内径のプルドチップ（pulled tip）（５μｍ  開始）に一直線に置き、ＡＣＮ濃度を０％から５０％に９０分にわたって増加させる。次にカラムを９５％のＡＣＮで洗浄し０％に戻す。ＨＰＬＣポンプからの流量をプレカラム前に受動的に分離し、２５０ｎＬ／分とする。ＭＳ−ＭＳをデータ−依存スキャンモードにおいて１回フルスキャン、次に非常に強い前駆体イオンにおいて３回ＭＳ−ＭＳスキャンで得る。あらかじめ選択された前駆体の動的排除は１分である。タンデムＭＳデータをＴｕｒｂｏＳｅｑｕｅｓｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ）で分析する。８個のタンパク質を含む慣用のデータベースを、可変性のメチオニン酸化、システインとカルボキサミドメチルの付加物、およびシステイン（＋２４７）またはヒスチジン（＋２４７）とカルバメートの付加物のパラメーターを使用してサーチする。
【００７１】
実施例１１
阻害剤で処置されたカテプシンＢのＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより同定されたペプチド
カテプシンＢをトリプシンおよびキモトリプシンで消化する。ペプチドを方法の部で記載したとおりナノ−ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより同定する。“＾”はカルボキシメチル化システインを示し、そして“＃”は結合したカルバメート化合物による修飾を示す。注入する物質の量を制御したとき、非修飾ペプチドは修飾ペプチドより１１８倍少ない量で存在する。完全なタンパク質のＱ−Ｔｏｆ分析により測定されるとおり、自己活性化で酵素前駆体のさらなる開裂が起こり、代替えＮ−末端配列出発点を有する活性酵素が得られる。予期される主な開裂生成物に関して４位での開裂物を表２に記載する。
【表２】
2010507681.tif 000007
表２
【００７２】
実施例１２
二環式カルバメート付加物の温度効果
カテプシンＢのサンプルを化合物１２で阻害し、次に非カテプシン結合化合物を全て除去するために一晩透析する。次に透析したサンプルを、解離生成物１１の存在についてＬＣ−ＭＳにより分析する。ＬＣ−ＭＳ分析前に、サンプルを２時間、氷上または３７℃でインキュベートする。カルバメートが阻害するカテプシンＢのサンプルの温度効果をＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ／ＭＤＳ  ＳＣＩＥＸ  ４０００  Ｑ  ＴＲＡＰの多重反応モニタリング（ＭＲＭ）でＬＣ−ＭＳを使用して評価する。カルバメートの開形に対するＭＲＭ変化を総合的基準の導入により決定する。衝突エネルギーおよび放出電池電位を個々にそれぞれの選択された変化に対して最適化する。カテプシンＢのサンプルを２％のＡＣＮ、０．１ＭのＨＯＡｃ中でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ５カラム（３０×２ｍｍ）に負荷し、７０％のＡＣＮ、０．１ＭのＨＯＡｃへの５分直線グラジエント、流速３００μＬ／分を使用して溶離する。カラムからの流出物をＴｕｒｂｏＶイオン源を使用して４０００  ＱＴＲＡＰに導入する。源パラメーターは：Ｃｕｒ、１０；ＩＳ、４５００；ＴＥＭ、４５０；ＧＳ１、３０；ＧＳ２、１５である。
【００７３】
カテプシンＢを化合物１２で阻害し、一晩透析する。化合物１１を透析後（パネルＡ）、氷上（パネルＢ）または３７℃（パネルＣ）で２時間インキュベーション後にＭＲＭでＬＣ−ＭＳを使用して検出する。ＭＲＭ変化を化合物１１の合成標品の衝突的活性化による解離から選択する（挿入図）。５つのＭＲＭ変化が化合物１１の検出でモニタリングされ（２２２．１から１００．０、７１．１、６９．０、８１．９および５５．０）、非常に強い変化のみを明確にするためにグラフで示す（２２２．１から１００．０）。
【００７４】
実施例１３
歪ませた（strained）カルバメート−カテプシンＢ付加物の安定性に対する温度効果
化合物１２の代謝産物の存在をＭＲＭによりモニタリングする。ＭＲＭ変化を代謝産物の合成類似体（化合物１１）を使用して選択し、最適化する。化合物１１の量は３７℃で２時間インキュベート後、４倍に増加した。
【表３】
2010507681.tif 000008
【００７５】
ここに記載の例および態様は、説明の目的のためのみであり、それに照らした様々な修飾または変化が当業者には示唆され、それらは本発明の精神および範囲の範囲内および添付の特許請求の範囲内に包含されることは理解されるべきである。本明細書で引用する全ての刊行物、特許および特許出願は全ての目的のために引用して本明細書に包含する。
【国際調査報告】
2010507681.tif 000011
2010507681.tif 000012
2010507681.tif 000013
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