(57)【要約】  式（Ｉ）：2010527957.tif 000055を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩、前記化合物を含む組成物、前記化合物の医薬品、特にＨＣＶ感染症を治療または抑制するための医薬品における使用、及び前記化合物の製造方法が開示されている。
2010527957.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2010527957.tif 000048
［式中、
環Ｂは場合によりＲ９ａで置換されているアデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルまたは７−デアザアデニンであり、前記したアデニン、グアニン、シトシン及び７−デアザアデニンのＮＨ２基は場合によりＲ９ｂで置換されており；
Ｘは
【化２】
2010527957.tif 000049
であり；
Ｒ１は水素、または場合によりフルオロで置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２はフルオロまたはＯＲ１０であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【化３】
2010527957.tif 000050
のアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ４は水素、Ｃ１−６アルキル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルであり、前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドル−３−イルからなる群から選択される１個の置換基で置換されており、前記したフェニル、ベンジル及びフェネチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される１または２個の置換基で置換されており；
Ｒ５は水素またはメチルであり；或いは
Ｒ４及びＲ５はこれらが結合している炭素原子と一緒に、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；或いは
Ｒ４及びＸはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び１または２個の窒素原子を含有し、場合によりＣ７−１６アルキルで置換されている５員芳香族環系を形成し；
Ｒ６はＣ７−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）０−４Ｃ７−９シクロアルキル、（ＣＨ２）０−４Ｃ３−９シクロアルケニルまたはアダマンチルであり、各々は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及び（ＣＨ２）０−４ＮＲｘＲｙから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されており；
Ｒｘ及びＲｙは独立して水素及びＣ１−６アルキルから選択され；或いは
Ｒｘ及びＲｙはこれらが結合している窒素原子と一緒に、場合によりＮ、Ｏ及びＳから選択される１または２個の追加ヘテロ原子を含有しており、場合によりＣ１−６アルキルで置換されている４〜７員ヘテロ環式環を形成し；
各Ｒ７は独立して水素、Ｃ１−５アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルであり；
各Ｒ８は独立して水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニルまたはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９ａ及びＲ９ｂは独立して水素、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−８アルキル、ベンゾイル、及び
【化４】
2010527957.tif 000051
から選択され；
Ｒ１０は水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【化５】
2010527957.tif 000052
のアミノアシル残基からなる群から選択され；或いは
Ｒ３及びＲ１０はこれらが結合している酸素原子と一緒に、５員環状カーボネート、または構造式：
【化６】
2010527957.tif 000053
（式中、Ｒａ及びＲｂは独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル及びフェニルから選択され、これらは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ及びＣ１−４アルコキシで置換されている）
の５員環状アセタール／ケタールを形成し；
Ｒ１１は水素、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＣＨ２ＣＨ２ＳＲ１５、または（ＣＨ２）２−４−Ｏ−（ＣＨ２）１−１７ＣＨ３であり；
Ｒ１２はＣ６−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）０−２Ｃ７−９シクロアルキル、（ＣＨ２）０−２Ｃ３−９シクロアルケニル、ＯＣ１−６アルキルまたはアダマンチルであり；
Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素及びＣ１−６アルキルから選択され；或いは
Ｒ１３及びＲ１４はこれらが結合している炭素原子と一緒に、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ１５はＣ１−６アルキルである］
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩。
【請求項２】
Ｒ４及びＸはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び１または２個の窒素原子を含有し、場合によりＣ７−１６アルキルで置換されている５員芳香族環系を形成しない請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｂはシトシンまたは７−デアザアデニンである請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１は水素、メチルまたはフルオロメチルである請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２はヒドロキシである請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３は水素である請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４は水素またはメチルであり、Ｒ５は水素であり、Ｒ６は２−プロピルペンチルであり、Ｒ１２は１−プロピルブチルであり、Ｒ１３及びＲ１４は共に水素である請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物
【請求項８】
構造式（Ｉａ）：
【化７】
2010527957.tif 000054
（式中、Ｒ４及びＸは請求項１〜６のいずれか１項に関連して定義されている通りである）
を有する請求項１〜７のいずれかに記載の化合物及びその医薬的に許容され得る塩。
【請求項９】
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［（２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（シクロヘプチルオキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（シクロオクチルオキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［［［２−［（シクロヘプチルカルボニル）オキシ］エチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［２−［［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メチル水素｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝アミドホスフェート、
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾル−２−イル］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン、
５’−Ｏ−［ヒドロキシル［［１−メチル−２−オキソ−２−［（プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−７−デアザアデノシン、
５’−Ｏ−［ヒドロキシル［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−７−デアザアデノシン
から選択される請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の式Ｉを有する化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
【請求項１１】
Ａ：請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩及びＢ：ΗＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤の組合せ。
【請求項１２】
治療によりヒト身体を治療するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項１３】
Ｃ型肝炎ウイルスの治療または抑制用薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩の使用。
【請求項１４】
ＲＮＡ依存性ウイルス感染症の治療を要する患者に対して治療有効量の請求項１に記載の式Ｉを有する化合物を投与することを含むＲＮＡ依存性ウイルス感染症の予防または治療方法。
【請求項１５】
この治療を要する患者に対して治療有効量の請求項１に記載の式Ｉを有する化合物を投与することを含むＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制；ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療；ＨＣＶ複製の抑制；ＨＣＶ感染症の治療；ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害；またはＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヌクレオシドホスホロアミダート、その合成、及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体としてのその使用に関する。本発明の化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体であり、従ってＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症を治療するために有用である。これらの化合物は特に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、ＨＣＶ複製の阻害剤に対する前駆体として、及びＣ型肝炎感染症の治療のために有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症は重大な健康問題であり、世界の人口の２〜１５％と推定される多数の感染者が肝硬変や肝細胞癌のような慢性肝疾患に至っている。米国疾病対策センターによれば、米国だけでも感染者数は４５０万人と推定されている。世界保健機構によれば、世界中の感染者は２億人以上であり、毎年３〜４００万人が感染している。一度感染すると、感染者の約２０％はウイルスを除去できるが、残りは生涯ＨＣＶを有している。慢性感染者の１０〜２０％が最終的に肝臓を壊す肝硬変または癌にかかっている。このウイルス疾患は非経口的に、汚染された血液及び血液製剤により、汚染された注射針により、或いは性的に、感染している母親またはキャリアの母親からその子孫へと垂直に伝染する。ＨＣＶ感染症に対する現在の治療法は組換えインターフェロン−α単独でまたはヌクレオシドアナログのリバビリンと組み合わせて用いる免疫治療に限られているが、この治療の臨床効果も限定的である。更に、ＨＣＶに対して確立されたワクチンはない。従って、慢性ＨＣＶ感染症を効果的に撲滅させる改良された治療薬が緊急に必要とされている。ＨＣＶ感染症の治療の技術水準は検討されており、以下の刊行物を参照されたい：Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，“Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，１１：７９−９６（２０００）；Ｈ．Ｒｏｓｅｎら，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ”，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）；Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）；Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）；Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）；Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）；及びＣ．Ｃｒａｂｂ，“Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）。これらのすべての刊行物の開示内容は全文参照により本明細書に組み入れる。
【０００３】
ＨＣＶ治療に対する別のアプローチも採用されており、その中にはウイルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼ及びＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害、並びにワクチンの開発が含まれる。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３，０１０アミノ酸のポリタンパク質をコード化する約９６００塩基の単オリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有する包膜＋鎖ＲＮＡウイルスである。ＨＣＶ遺伝子のタンパク質産物は構造タンパク質Ｃ、Ｅ１及びＥ２と非構造タンパク質ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ及びＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂから構成されている。非構造（ＮＳ）タンパク質はウイルス複製のための触媒機構を与えると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼはポリタンパク質鎖からＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを放出させる。ＨＣＶ  ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶの複製サイクルにおいて鋳型として作用する一本鎖ウイルスＲＮＡから二本鎖ＲＮＡの合成のために必要である。従って、ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶ複製コンプレックスにおける必須成分であると考えられている［Ｋ．Ｉｓｈｉら，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ”，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２９：１２２７−１２３５（１９９９）；及びＶ．Ｌｏｈｍａｎｎら，“Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）を参照されたい］。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害すると二本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成が防止され、従ってＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害はＨＣＶ特異的抗ウイルス治療を開発するための魅力的なアプローチとなる。
【０００５】
ＨＣＶ感染症を治療できるＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤の開発は、Ｍ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら，“Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１２：１２６９−１２８０（２００３）及びＰ．Ｈｏｆｆｍａｎｎら，“Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２）”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１３：１７０７−１７２３（２００３）において検討されている。ＨＣＶポリメラーゼに対するプリンリボヌクレオシドの活性は、Ａ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐら，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｐｕｒｉｎｅ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＣＶ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４）により報告されている。ＨＣＶ治療に対する治療アプローチとしてのＨＣＶポリメラーゼの阻害剤として構造的に異なるヌクレオシド誘導体が要望され続けている。
【０００６】
公表されている国際公開第２００６／０６３１４９号パンフレット（Ｒｅｇｅｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）は、抗ウイルス及び抗癌活性を有するとして式：
【０００７】
【化１】
2010527957.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＸは明細書中に定義されている）
を有するヌクレオシドを開示している。
【０００８】
今回、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の強力な阻害剤に対する前駆体であることを知見した。このホスホロアミダートはインビボでそのヌクレオシド５’−ホスフェート（ヌクレオチド）誘導体に変換され、この誘導体はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である対応のヌクレオシド５’−トリホスフェート誘導体に変換される。インビトロでのホスホロアミダートのヌクレオシド５’−ホスフェート誘導体への変換は本明細書中に記載されているアッセイＢにおいてヒト肝細胞で説明されている。本ヌクレオシドホスホロアミダートはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症、特にＨＣＶ感染症を治療するために有用である。
【０００９】
従って、本発明の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用なヌクレオシドホスホロアミダートを提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスの複製の阻害剤に対する前駆体として、特にＣ型肝炎ウイルスの複製の阻害剤に対する前駆体として有用なヌクレオシドホスホロアミダートを提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療、特にＨＣＶ感染症の治療において有用なヌクレオシドホスホロアミダートを提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として使用するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを含む医薬組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体、特にＨＣＶ複製の阻害剤に対する前駆体として使用するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを含む医薬組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療、特にＨＣＶ感染症の治療において使用するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを含む医薬組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートをＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの抑制方法、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの抑制方法を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制方法、特にＨＣＶ複製の抑制方法を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療方法、特にＨＣＶ感染症の治療方法を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して活性な他の物質と組み合わせたＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療方法、特にＨＣＶに対して活性な他の物質と組み合わせたＨＣＶ感染症の治療方法を提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療、特にＨＣＶ複製の抑制及び／またはＨＣＶ感染症の治療のための薬剤として使用するためのヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療、特にＨＣＶ複製の抑制及び／またはＨＣＶ感染症の治療のための薬剤を製造するための本発明のヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物の使用を提供することである。
【００２３】
上記した及び他の目的は以下の詳細説明から容易に明らかなるであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２４】
【特許文献１】国際公開第２００６／０６３１４９号
【非特許文献】
【００２５】
【非特許文献１】Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，“Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，１１：７９−９６（２０００）
【非特許文献２】Ｈ．Ｒｏｓｅｎら，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ”，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）
【非特許文献３】Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）
【非特許文献４】Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）
【非特許文献５】Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）
【非特許文献６】Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）
【非特許文献７】Ｃ．Ｃｒａｂｂ，“Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）
【非特許文献８】Ｋ．Ｉｓｈｉら，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ”，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２９：１２２７−１２３５（１９９９）
【非特許文献９】Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎら，“Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）
【非特許文献１０】Ｍ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら，“Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１２：１２６９−１２８０（２００３）
【非特許文献１１】Ｐ．Ｈｏｆｆｍａｎｎら，“Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２）”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１３：１７０７−１７２３（２００３）
【非特許文献１２】Ａ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐら，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｐｕｒｉｎｅ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＣＶ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
本発明は、示されている立体化学配置の構造式（Ｉ）：
【００２７】
【化２】
2010527957.tif 000004
［式中、
環Ｂは場合によりＲ９ａで置換されているアデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルまたは７−デアザアデニンであり、前記したアデニン、グアニン、シトシン及び７−デアザアデニンのＮＨ２基は場合によりＲ９ｂで置換されており；
Ｘは
【００２８】
【化３】
2010527957.tif 000005
であり；
Ｒ１は水素、または場合によりフルオロで置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２はフルオロまたはＯＲ１０であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【００２９】
【化４】
2010527957.tif 000006
のアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ４は水素、Ｃ１−６アルキル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルであり、前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドル−３−イルからなる群から選択される１個の置換基で置換されており、前記したフェニル、ベンジル及びフェネチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される１または２個の置換基で置換されており；
Ｒ５は水素またはメチルであり；或いは
Ｒ４及びＲ５はこれらが結合している炭素原子と一緒に、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；或いは
Ｒ４及びＸはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び１または２個の窒素原子を含有し、場合によりＣ７−１６アルキルで置換されている５員芳香族環系を形成し；
Ｒ６はＣ７−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）０−４Ｃ７−９シクロアルキル、（ＣＨ２）０−４Ｃ３−９シクロアルケニルまたはアダマンチルであり、前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及び（ＣＨ２）０−４ＮＲｘＲｙから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されており；
Ｒｘ及びＲｙは独立して水素及びＣ１−６アルキルから選択され；或いは
Ｒｘ及びＲｙはこれらが結合している窒素原子と一緒に、場合によりＮ、Ｏ及びＳから選択される１または２個の追加ヘテロ原子を含有しており、場合によりＣ１−６アルキルで置換されている４〜７員ヘテロ環式環を形成し；
各Ｒ７は独立して水素、Ｃ１−５アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルであり；
各Ｒ８は独立して水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニルまたはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９ａ及びＲ９ｂは独立して水素、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−８アルキル、ベンゾイル、及び
【００３０】
【化５】
2010527957.tif 000007
から選択され；
Ｒ１０は水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【００３１】
【化６】
2010527957.tif 000008
のアミノアシル残基からなる群から選択され；或いは
Ｒ３及びＲ１０はこれらが結合している酸素原子と一緒に、５員環状カーボネート、または構造式：
【００３２】
【化７】
2010527957.tif 000009
（式中、Ｒａ及びＲｂは独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル及びフェニルから選択され、これらは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ及びＣ１−４アルコキシで置換されている）
の５員環状アセタール／ケタールを形成し；
Ｒ１１は水素、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＣＨ２ＣＨ２ＳＲ１５、または（ＣＨ２）２−４−Ｏ−（ＣＨ２）１−１７ＣＨ３であり；
Ｒ１２はＣ６−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）０−２Ｃ７−９シクロアルキル、（ＣＨ２）０−２Ｃ３−９シクロアルケニル、ＯＣ１−６アルキルまたはアダマンチルであり；
Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素及びＣ１−６アルキルから選択され；或いは
Ｒ１３及びＲ１４はこれらが結合している炭素原子と一緒に、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ１５はＣ１−６アルキルである］
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩に関する。
【００３３】
式（Ｉ）を有する化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である。前記化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特ＨＣＶ複製の阻害剤に対する前駆体でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療、特にＨＣＶ感染症の治療のために有用である。
【００３４】
作用メカニズムに限定を加えることことなく、本発明のホスホロアミダートは対応のヌクレオシド５’−モノホスフェートの前駆体として作用する。内因性キナーゼ酵素は、５’−モノホスフェートをその５’−トリホスフェート誘導体に変換させ、後者はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤である。よって、ホスホロアミダートは、ヌクレオシドそのものよりもより効率的に標的細胞を侵入させ得、代謝分解に対する感受性がより低いことがあり、肝臓のような特定組織をターゲットする能力を有し得、その結果抗ウイルス剤の全用量を低下させる広い治療指数が得られる。
【００３５】
化合物を単独でまたはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物、並びにＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制方法及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療方法も本発明の範囲内に包含される。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明は、示されている立体化学配置の構造式（Ｉ）：
【００３７】
【化８】
2010527957.tif 000010
［式中、
環Ｂは場合によりＲ９ａで置換されているアデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルまたは７−デアザアデニンであり、前記したアデニン、グアニン、シトシン及び７−デアザアデニンのＮＨ２基は場合によりＲ９ｂで置換されており；
Ｘは
【００３８】
【化９】
2010527957.tif 000011
であり；
Ｒ１は水素、または場合によりフルオロで置換されているＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２はフルオロまたはＯＲ１０であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【００３９】
【化１０】
2010527957.tif 000012
のアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ４は水素、Ｃ１−６アルキル、フェニル、ベンジルまたはフェネチルであり、前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドル−３−イルからなる群から選択される１個の置換基で置換されており、前記したフェニル、ベンジル及びフェネチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される１または２個の置換基で置換されており；
Ｒ５は水素またはメチルであり；或いは
Ｒ４及びＲ５はこれらが結合している炭素原子と一緒に、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；或いは
Ｒ４及びＸはこれらが結合している炭素原子と一緒に、酸素原子及び１または２個の窒素原子を含有し、場合によりＣ７−１６アルキルで置換されている５員芳香族環系を形成し；
Ｒ６はＣ７−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）０−４Ｃ７−９シクロアルキル、（ＣＨ２）０−４Ｃ３−９シクロアルケニルまたはアダマンチルであり、前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及び（ＣＨ２）０−４ＮＲｘＲｙから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されており；
Ｒｘ及びＲｙは独立して水素及びＣ１−６アルキルから選択され；或いは
Ｒｘ及びＲｙはこれらが結合している窒素原子と一緒に、場合によりＮ、Ｏ及びＳから選択される１または２個の追加ヘテロ原子を含有しており、場合によりＣ１−６アルキルで置換されている４〜７員ヘテロ環式環を形成し；
各Ｒ７は独立して水素、Ｃ１−５アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルであり；
各Ｒ８は独立して水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニルまたはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９ａ及びＲ９ｂは独立して水素、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−８アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−８アルキル、ベンゾイル及び
【００４０】
【化１１】
2010527957.tif 000013
から選択され；
Ｒ１０は水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【００４１】
【化１２】
2010527957.tif 000014
のアミノアシル残基からなる群から選択され；或いは
Ｒ３及びＲ１０はこれらが結合している酸素原子と一緒に、５員環状カーボネート、または構造式：
【００４２】
【化１３】
2010527957.tif 000015
（式中、Ｒａ及びＲｂは独立して水素、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル及びフェニルから選択され、これらは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ及びＣ１−４アルコキシで置換されている）
の５員環状アセタール／ケタールを形成し；
Ｒ１１は水素、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＣＨ２ＣＨ２ＳＲ１５、または（ＣＨ２）２−４−Ｏ−（ＣＨ２）１−１７ＣＨ３であり；
Ｒ１２はＣ６−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）０−２Ｃ７−９シクロアルキル、（ＣＨ２）０−２Ｃ３−９シクロアルケニル、ＯＣ１−６アルキルまたはアダマンチルであり；
Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素及びＣ１−６アルキルから選択され；或いは
Ｒ１３及びＲ１４はこれらが結合している炭素原子と一緒に、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ１５はＣ１−６アルキルである］
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩に関する。
【００４３】
式（Ｉ）を有する化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である。前記化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体でもあり、従ってＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療のために有用である。
【００４４】
本発明の１つの実施形態では、環Ｂはシトシンまたは７−デアザアデニンである。好ましくは、環Ｂはシトシンである。
【００４５】
本発明の別の実施形態では、Ｒ１は水素、または場合によりフルオロで置換されているＣ１−４アルキルである。好ましくは、Ｒ１は水素、または場合によりフルオロで置換されているＣ１−２アルキルである。より好ましくは、Ｒ１は水素、メチルまたはフルオロメチルである。最も好ましくは、Ｒ１はメチルである。
【００４６】
本発明の別の実施形態では、Ｒ２はヒドロキシ、フルオロまたはヒドロキシメチルである。好ましくは、Ｒ２はヒドロキシである。
【００４７】
本発明の別の実施形態では、Ｒ３は水素またはＣ１−６アルキルカルボニルである。好ましくは、Ｒ３は水素またはＣ１−２アルキルカルボニルである。より好ましくは、Ｒ３は水素である。
【００４８】
本発明の別の実施形態では、Ｒ４は水素またはＣ１−５アルキルである。好ましくは、Ｒ４は水素またはＣ１−３アルキルである。より好ましくは、Ｒ４は水素またはメチルである。
【００４９】
本発明の別の実施形態では、Ｒ４及びＸはこれらが結合している炭素原子と一緒に、場合によりＣ７−１６アルキルで置換されている酸素原子及び２個の窒素原子を含有する５員芳香族環系を形成する。好ましくは、５員芳香族環系はオキサジアゾール環である。好ましくは、Ｃ７−１６アルキル置換基はＣ７アルキル基、例えば１−プロピルブチルである。
【００５０】
本発明の１つの好ましい実施形態では、Ｒ４及びＸはこれらが結合している炭素原子と一緒に５員芳香族環系を形成しない。
【００５１】
本発明の別の実施形態では、Ｒ５は水素である。
【００５２】
本発明の別の実施形態では、Ｒ６はＣ７−１６アルキルである。より好ましくは、Ｒ６はＣ７−１０アルキルである。最も好ましくは、Ｒ６はオクチル、特に２−プロピルペンチルである。
【００５３】
本発明の別の実施形態では、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは独立して水素、Ｃ１−６アルキルカルボニルまたはＣ１−６アルコキシカルボニルである。好ましくは、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは独立して水素またはＣ１−４アルキルカルボニルである。より好ましくは、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは水素である。
【００５４】
本発明の別の実施形態では、Ｒ１０は水素またはメチルである。好ましくは、Ｒ１０は水素である。
【００５５】
本発明の別の実施形態では、Ｒ１１は水素またはＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ１５（ここで、Ｒ１５は前に定義されている通りである）である。好ましくは、Ｒ１１は水素またはＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−４アルキルである。より好ましくは、Ｒ１１は水素またはＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−２アルキルである。最も好ましくは、Ｒ１１は水素である。
【００５６】
本発明の別の実施形態では、Ｒ１２はＣ６−１６アルキルである。より好ましくは、Ｒ１２はＣ６−１２アルキルである。最も好ましくは、Ｒ１２はＣ７−１０アルキルである。特に、Ｒ１２はヘプチル、具体的には１−プロピルブチルである。
【００５７】
本発明の別の実施形態では、Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素及びＣ１−４アルキルから選択される。好ましくは、Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素及びＣ１−２アルキルから選択される。より好ましくは、Ｒ１３及びＲ１４は独立して水素またはメチルである。最も好ましくは、Ｒ１３及びＲ１４は共に水素である。
【００５８】
本発明の別の実施形態で、構造式（Ｉａ）：
【００５９】
【化１４】
2010527957.tif 000016
（式中、Ｒ４及びＸは式（Ｉ）に関して定義されている通りである）
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩が提供される。
【００６０】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である構造式Ｉを有する本発明の化合物の非限定的例は以下の化合物：
【００６１】
【化１５】
2010527957.tif 000017
及びその医薬的に許容され得る塩である。
【００６２】
以下の化合物は本明細書中に参考例としても記載されている：
【００６３】
【化１６】
2010527957.tif 000018
【００６４】
本発明の１つの実施形態では、本発明のヌクレオシドホスホロアミダートは＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤として、及び／または＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療のために有用である。この実施形態のクラスでは、＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスはフラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスまたはピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスである。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルスはライノウイルス、ポリオウイルスまたはＡ型肝炎ウイルスである。このクラスの第２サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、バンジ（Ｂａｎｚｉ）ウイルス及びウシ下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）からなる群から選択される。このクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルスである。
【００６５】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制、及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療を有する哺乳動物に対して治療有効量の構造式（Ｉ）を有する化合物を投与することを含む前記哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の抑制方法、及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症の治療方法に関する。
【００６６】
本発明のこの態様の１つの実施形態では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ  は＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼである。この実施形態のクラスでは、＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼはフラビウイルス科ウイルスポリメラーゼまたはピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼである。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼはライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼまたはＡ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。このクラスの第２サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱ウイルスポリメラーゼ、デング熱ウイルスポリメラーゼ、西ナイルウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、バンジウイルスポリメラーゼ及びウシ下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼからなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
【００６７】
本発明のこの態様の第２実施形態では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製は＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製である。この実施形態のクラスでは、＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製はフラビウイルス科ウイルス複製またはピコルナウイルス科ウイルス複製である。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルス複製はライノウイルス複製、ポリオウイルス複製またはＡ型肝炎ウイルス複製である。このクラスの第２サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製、黄熱ウイルス複製、デング熱ウイルス複製、西ナイルウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、バンジウイルス複製及びウシ下痢症ウイルス複製からなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製である。
【００６８】
本発明のこの態様の第３実施形態では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症は＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ウイルス感染症である。この実施形態のクラスでは、＋鎖一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症はフラビウイルス科ウイルス感染症またはピコルナウイルス科ウイルス感染症である。このクラスのサブクラスでは、ピコルナウイルス科ウイルス感染症はライノウイルス感染症、ポリオウイルス感染症またはＡ型肝炎ウイルス感染症である。このクラスの第２サブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス感染症はＣ型肝炎ウイルス感染症、黄熱ウイルス感染症、デング熱ウイルス感染症、西ナイルウイルス感染症、日本脳炎ウイルス感染症、バンジウイルス感染症及びウシ下痢症ウイルス感染症からなる群から選択される、このサブクラスのサブクラスでは、フラビウイルス科ウイルス感染症はＣ型肝炎ウイルス感染症である。
【００６９】
本明細書を通じて、以下の用語は指定されている意味を有している：
上に特定されているアルキル基は、直鎖状または分岐状配置で指定されている長さを有するアルキル基を含むと意図される。アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、１−プロピルブチル、オクチル、２−プロピルペンチル等である。
【００７０】
用語「アダマンチル」は１−アダマンチル及び２−アダマンチルの両方を含む。
【００７１】
用語「場合により置換されているベンジル」は、フェニル部分が場合により置換されている−ＣＨ２フェニルを意味する。
【００７２】
用語「アルケニル」は、全部で２〜１２個の炭素原子またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルケン（例：エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、オレイル等）を意味する。
【００７３】
用語「シクロアルキル」は、全部で３〜８個の炭素原子またはこの範囲内の炭素原子数を有するアルカンの環状環（すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチル）を意味する。
【００７４】
用語「シクロアルケニル」は、全部で３〜８個の炭素原子またはこの範囲内の炭素原子数を有するアルケンの環状環（すなわち、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、またはシクロオクテニル）を意味する。
【００７５】
用語「アルコキシ」は、特定されている炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルコキシド［すなわち、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシ等］を指す。
【００７６】
用語「アルキルアミノ」は、特定されている炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルアミノ）またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐状アルキルアミン［すなわち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ等］を指す。
【００７７】
用語「アルキルスルホニル」は、特定されている炭素原子数（例えば、Ｃ１−６アルキルスルホニル）またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルスルホン［すなわち、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニル等］を指す。
【００７８】
用語「アルキルオキシカルボニル」は、特定されている炭素原子数（例えば、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニル）またはこの範囲内の炭素原子数を有する本発明の化合物中に存在するカルボン酸またはカルバミン酸基の直鎖または分岐鎖エステル［すなわち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル、またはブチルオキシカルボニル］を指す。
【００７９】
用語「アルキルカルボニル」は、特定されている炭素原子数（例えば、Ｃ１−８アルキルカルボニル）またはこの範囲内の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルアシル基［すなわち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル、またはブチルオキシカルボニル］を指す。
【００８０】
用語「ハロゲン」は、ハロゲン原子のフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含むと意図される。
【００８１】
用語「ホスホリル」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２を指す。
【００８２】
用語「ジホスホリル」は、構造：
【００８３】
【化１７】
2010527957.tif 000019
を有する基を指す。
【００８４】
用語「トリホスホリル」は、構造：
【００８５】
【化１８】
2010527957.tif 000020
を有する基を指す。
【００８６】
用語「５員環状カーボネート環」は、ヌクレオシドのフラノース環のＣ−２及びＣ−３位でＣ−２及びＣ−３ヒドロキシルをカルボニル化剤（例えば、ホスゲン及び１，１’−カルボニルジイミダゾール）を用いてアシル化することにより形成される以下の環系を指す。
【００８７】
【化１９】
2010527957.tif 000021
Ｒ３、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂ及びＲ１０のアミノアシル残基実施形態中のＲ７が式：
【００８８】
【化２０】
2010527957.tif 000022
中の水素以外の置換基である場合、アミノアシル残基は不斉中心を含み、個々のＲ−及びＳ−立体異性体、並びにＲＳ−ジアステレオマー混合物を含むと意図される。１つの実施形態では、ステレオジェン炭素での立体化学はＳ−アミノ酸の立体化学、すなわち式：
【００８９】
【化２１】
2010527957.tif 000023
に示されているような天然に存在するα−アミノ酸立体化学に相当する。
【００９０】
用語「置換されている」は、挙げられている置換基による複数の置換を含むと見なされる。複数の置換基部分が開示乃至特許請求されている場合、置換されている化合物は独立して１つ以上の開示乃至特許請求されている置換基部分により１回または複数回置換されていてもよい。
【００９１】
用語「５’−トリホスフェート」は、以下の一般構造式（ＩＩ）：
【００９２】
【化２２】
2010527957.tif 000024
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＢは上に定義されている通りである）
を有する本発明のヌクレオシド化合物の５’−ヒドロキシル基のトリリン酸エステル誘導体を指す。
【００９３】
用語「アデニン」は、構造：
【００９４】
【化２３】
2010527957.tif 000025
を有する基を指す。
【００９５】
用語「グアニン」は、構造：
【００９６】
【化２４】
2010527957.tif 000026
を有する基を指す。
【００９７】
用語「シトシン」は、構造：
【００９８】
【化２５】
2010527957.tif 000027
を有する基を指す。
【００９９】
用語「チミン」は、構造：
【０１００】
【化２６】
2010527957.tif 000028
を有する基を指す。
【０１０１】
用語「ウラシル」は、構造：
【０１０２】
【化２７】
2010527957.tif 000029
を有する基を指す。
【０１０３】
用語「７−デアザアデニン」は、構造：
【０１０４】
【化２８】
2010527957.tif 000030
を有する基を指す。
【０１０５】
「医薬組成物」中のような用語「組成物」は、活性成分及び担体を構成する不活性成分からなる製品；及び２つ以上の成分の組合せ、複合体化または集合から、１つ以上の成分の解離から、または１つ以上の成分の他のタイプの反応または相互作用から直接または間接的に生ずる製品を包含すると意図される。従って、本発明の医薬組成物は本発明の化合物を医薬的に許容され得る担体と混合することにより製造される組成物を包含する。
【０１０６】
用語「化合物の投与」及び「化合物を投与する」は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを必要な個人に与えることを意味すると理解されるべきである。
【０１０７】
本発明の別の態様は、本発明の化合物をＨＣＶ感染症を治療するために有用な１つ以上の物質と一緒に用いるＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害、ＨＣＶ複製の抑制、またはＨＣＶ感染症の治療方法に関する。ＨＣＶに対して活性な物質にはリバビリン、レボビリン、ビラミジン、ニタゾキサニド、サイモシンα−１、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組合せ、ペグインターフェロン−αとリバビリンの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの組合せが含まれるが、これらに限定されない。インターフェロン−αには組換えインターフェロン−α２ａ（例：ニュージャージー州ナトリーに所在のＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅから入手可能なロフェロンインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（商品名））、インターフェロン−α２ｂ（例：ニュージャージー州ケニルワースに所在のＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．から入手可能なイントロン−Ａインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ｂ（Ｐｅｇｌｎｔｒｏｎ（商品名））、組換えコンセンサスインターフェロン（例：インターフェロンアルファコン−１）及び精製インターフェロン−α産物が含まれるが、これらに限定されない。Ａｍｇｅｎの組換えコンセンサスインターフェロンは商品名Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）を有している。レボビリンは、リバビリンに類似している免疫調節活性を有していることが公知のリバビリンのＬ−エナンチオマーである。ビラミジンは、（ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡されている）国際公開第０１／６０３７９号パンフレットに開示されているリバビリンのアナログに相当する。本発明のこの方法によれば、組合せの個々の成分を治療中の異なる時期に別々に投与しても、またはばらばらのまたは１つの配合剤の形態で同時に投与してもよい。従って、本発明は、同時または交互治療のすべてのレジメを包含すると理解され、用語「投与する」はそのように解釈されるべきである。本発明の化合物とＨＣＶ感染症の治療に有用な他の物質の組合せの範囲には原則としてＨＣＶ感染症を治療するための医薬組成物との組合せも含まれると理解されたい。本発明の化合物またはその医薬的に許容され得る塩をＨＣＶに対して活性な第２治療薬と一緒に使用する場合、各化合物の用量は当該化合物を単独で使用したときと同じでも異なっていてもよい。
【０１０８】
ＨＣＶ感染症を治療するために、本発明の化合物をＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤である物質と一緒に投与してもよい。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは必須のウイルス酵素であり、ＨＣＶ複製を抑制するための優秀な標的であることは記載されている。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の基質及び非基質をベースとする阻害剤は国際公開第９８／２２４９６号パンフレット、国際公開第９８／４６６３０号パンフレット、国際公開第９９／０７７３３号パンフレット、国際公開第９９／０７７３４号パンフレット、国際公開第９９／３８８８８号パンフレット、国際公開第９９／５０２３０号パンフレット、国際公開第９９／６４４４２号パンフレット、国際公開第００／０９５４３号パンフレット、国際公開第００／５９９２９号パンフレット、英国特許出願公開第２３３７２６２号明細書、国際公開第０２／１８３６９号パンフレット、国際公開第０２／０８２４４号パンフレット、国際公開第０２／４８１１６号パンフレット、国際公開第０２／４８１７２号パンフレット、国際公開第０５／０３７２１４号パンフレット及び米国特許第６，３２３，１８０号明細書に開示されている。ＨＣＶ複製の阻害剤を開発するため及びＨＣＶ感染症を治療するための標的としてのＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼはＢ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）において検討されている。本発明の化合物と組み合わされ得る具体的なＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤にはＢＩＬＮ２０６１、ＶＸ−９５０、ＳＣＨ６、ＳＣＨ７及びＳＣＨ−５０３０３４が含まれる。
【０１０９】
リバビリン、レボビリン及びビラミジンは、細胞内酵素イノシンモノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）を阻害することによりグアニンヌクレオチドの細胞内プールをモジュレートすることによりその抗ＨＣＶ効果を発揮し得る。ＩＭＰＤＨはデノボグアニンヌクレオチド生合成中の生合成ルートに対する律速酵素である。リバビリンは細胞内で容易にリン酸化され、モノホスフェート誘導体はＩＭＰＤＨの阻害剤である。よって、ＩＭＰＤＨの阻害はＨＣＶ複製の阻害剤を発見するための別の有用な標的に該当する。従って、本発明の化合物はＩＭＰＤＨの阻害剤、例えば国際公開第９７／４１２１１号パンフレット及び国際公開第０１／００６２２号パンフレット（Ｖｅｒｔｅｘに譲渡されている）に開示されているＶＸ−４９７；別のＩＭＰＤＨ阻害剤、例えば国際公開第００／２５７８０号パンフレット（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂに譲渡されている）に開示されているもの；またはミコフェノール酸モフェチル［Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎ，４４（Ｓｕｐｐｌ）：１６５（１９９３）を参照されたい］と一緒に投与してもよい。
【０１１０】
ＨＣＶ感染症を治療するために、本発明の化合物を抗ウイルス剤アマンタジン（１−アミノアダマンタン）［この物質の包括的記載については、Ｊ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓ．，１２：１−３６（１９８３）を参照されたい］と一緒に投与してもよい。
【０１１１】
ＨＣＶ感染症の治療のために、本発明の化合物をＲ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ’ｋｕｒｕら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２：１７５４−１７５９（１９９７）；Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３６：７６１１−７６１４（１９９５）；米国特許第３，４８０，６１３号明細書（１９６９年１１月２５日）、米国特許第６，７７７，３９５号明細書（２００４年８月１７日）、米国特許第６，９１４，０５４号明細書（２００５年７月５日）、国際公開第０１／９０１２１号パンフレット（２００１年１１月２９日）、国際公開第０１／９２２８２号パンフレット（２００１年１２月６日）、国際公開第０２／３２９２０号パンフレット（２００２年４月２５日）、国際公開第０２／０５７２８７号パンフレット（２００２年７月２５日）、国際公開第０２／０５７４２５号パンフレット（２００２年７月２５日）、国際公開第０４／００２４２２号パンフレット（２００４年１月８日）、国際公開第０４／００２９９９号パンフレット（２００４年１月８日）、国際公開第０４／００３０００号パンフレット（２００４年１月８日）、国際公開第０４／００２４２２号パンフレット（２００４年１月８日）、米国特許出願公開第２００５／０１０７３１２号明細書、米国特許出願公開第２００５／００９０４６３号明細書、米国特許出願公開第２００４／０１４７４６４号明細書、及び米国特許出願公開第２００４／００６３６５８号明細書に開示されている抗ウイルス性２’−Ｃ−分岐状リボヌクレオシドと組み合わせてもよい。これらの文献の各々の内容は全文参照により組み入れる。２’−Ｃ−分岐状リボヌクレオシドには２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−Ｃ−メチルウリジン、２’−Ｃ−メチルアデノシン、２’−Ｃ−メチルグアノシン及び９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン；フラノースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルの対応するアミノ酸エステル（例えば、バロピシタビン二塩酸塩またはＮＭ−２８３とも称されている３’−Ｏ−（Ｌ−バリル）−２’−Ｃ−メチルシチジン二塩酸塩、及び３’−Ｏ−（Ｌ−バリル）−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジン）、並びにその５’−ホスフェート誘導体の対応する場合により置換されている環状１，３−プロパンジオールエステルが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１２】
ＨＣＶ感染症を治療するために、本発明の化合物を抗ＨＣＶ特性を有する他のヌクレオシド、例えば米国特許第６，８６４，２４４号明細書（２００５年３月８日）；三菱製薬に譲渡されている国際公開第０２／５１４２５号パンフレット（２００２年７月４日）；Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ，Ｌｔｄ．に譲渡されている国際公開第０１／７９２４６号パンフレット、国際公開第０２／３２９２０号パンフレット及び国際公開第０２／４８１６５号パンフレット（２００２年６月２０日）；ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡されている国際公開第０１／６８６６３号パンフレット（２００１年９月２０日）；国際公開第９９／４３６９１号パンフレット（１９９９年９月２日）；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅに譲渡されている国際公開第０２／１８４０４号パンフレット（２００２年３月７日）；米国特許出願公開第２００２／００１９３６３号明細書（２００２年２月１４日）；国際公開第０２／１００４１５号パンフレット（２００２年１２月１９日）、国際公開第０３／０２６５８９号パンフレット（２００３年４月３日）；国際公開第０３／０２６６７５号パンフレット（２００３年４月３日）；国際公開第０３／０９３２９０号パンフレット（２００３年１１月１３日）；米国特許出願公開第２００３／０２３６２１６号明細書（２００３年１２月２５日）；米国特許出願公開第２００４／０００６００７号明細書（２００４年１月８日）；国際公開第０４／０１１４７８号パンフレット（２００４年２月５日）；国際公開第０４／０１３３００号パンフレット（２００４年２月１２日）；米国特許出願公開第２００４／００６３６５８号明細書（２００４年４月１日）；及び国際公開第０４／０２８４８１号パンフレット（２００４年４月８日）に開示されているものと組み合わせてもよい。
【０１１３】
１つの実施形態では、本発明のヌクレオシド誘導体と組み合わされ得るヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、以下の化合物：４’−アジド−シチジン、４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、並びにその医薬的に許容され得る塩及びプロドラッグから選択される。
【０１１４】
ＨＣＶ感染症を治療するために、本発明の化合物をＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤、例えばＴｕｌａｒｉｋ，Ｉｎｃ．に譲渡されている国際公開第０１／７７０９１号パンフレット（２００１年１０月１８日）；日本たばこ産業に譲渡されている国際公開第０１／４７８８３号パンフレット（２００１年７月５日）；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍに譲渡されている国際公開第０２／０４４２５号パンフレット（２００２年１月１７日）；Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  ｄｉ  Ｒｉｃｅｒｃｈｅ  ｄｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｏｌａｒｅ  Ｐ．  Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｓ．ｐ．Ａ．に譲渡されている国際公開第０２／０６２４６号パンフレット（２００２年１月２４日）；国際公開第０２／２０４９７号パンフレット（２００２年３月３日）；日本たばこ産業に譲渡されている国際公開第２００５／０１６９２７号パンフレット（特に、ＪＴＫ００３）；及びＨＣＶ−７９６（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）に開示されているものと組み合わせてもよい。これらの文献の各々の内容は全文参照により本明細書に組み入れる。
【０１１５】
１つの実施形態では、本発明のヌクレオシド誘導体と組み合わされ得る非ヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、以下の化合物：１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸メチル、（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸、１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド、３−クロロ−１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン１１−カルボン酸、Ｎ’−（１１−カルボキシ−１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾオキサゾシン−７−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタン−１，２−ジアミニウムビス（トリフルオロ酢酸塩）、１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾオキサゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−７−オキソ−５，���，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−（１−メチルピペリジン−４−イル）−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド、１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、６−アリル−１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−α］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１３−シクロヘキシル−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロフロ［３’，２’：６，７］［１，４］ジアゾシノ［１，８−ａ］インドール−１０−カルボン酸、１５−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，６］ベンゾジアゾシン−１２−カルボン酸、１５−シクロヘキシル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１２−カルボン酸、１３−シクロヘキシル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−インドロ［１，２−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０−カルボン酸；並びにその医薬的に許容され得る塩から選択される。
【０１１６】
「医薬的に許容され得る」とは、担体、希釈剤または賦形剤が製剤の他の成分と相容性でなければならず、レシピエントに対して有害であってはならないことを意味する。
【０１１７】
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。本発明の別の例は、上記した化合物を医薬的に許容され得る担体と組み合わせることにより製造される医薬組成物である。本発明の別の例は、上記した化合物を医薬的に許容され得る担体と組み合わせることを含む医薬組成物の製造方法である。
【０１１８】
有効量の本発明の化合物及び医薬的に許容され得る担体を含むＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するために有用な医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症、特にΗＣＶ感染症を治療するために有用な医薬組成物；ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にΗＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法；及びＲＮＡ依存性ウイルス複製、特にΗＣＶ複製の治療方法も本発明の範囲に含まれる。加えて、本発明は、治療有効量の本発明の化合物を治療有効量のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にΗＣＶに対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物に関する。ΗＣＶに対して活性な物質にはリバビリン、レボビリン、ビラミジン、サイモシンα−１、ΗＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組合せ、ペグインターフェロン−αとリバビリンの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの組合せが含まれるが、これらに限定されない。インターフェロン−αには組換えインターフェロン−α２ａ（例：ニュージャージー州ナトリーに所在のＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅから入手可能なロフェロンインターフェロン）、インターフェロン−α２ｂ（例；ニュージャージー州ケニルワースに所在のＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．から入手可能なイントロン−Ａインターフェロン）、コンセンサスインターフェロン及び精製インターフェロン−α産物が含まれるが、これらに限定されない。リバビリン及びそのＨＣＶに対する活性の検討については、Ｊ．Ｏ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒａｙｂｕｃｋ，“Ｉｎｏｓｉｎｅ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ”，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２０１−２１０（２０００）を参照されたい。
【０１１９】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の抑制、及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症、特にＨＣＶ感染症の治療のための薬剤を製造するためのヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物の使用を提供する。また、本発明の更なる態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の抑制、及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染症、特にＨＣＶ感染症の治療のための薬剤として使用するためのヌクレオシドホスホロアミダート及びその医薬組成物を提供する。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、活性成分として構造式（Ｉ）を有する化合物またはその医薬的に許容され得る塩を含み、医薬的に許容され得る担体及び場合により他の治療成分をも含み得る。
【０１２１】
前記組成物には経口、直腸内、局所、（皮下、筋肉内及び静脈内を含めた）非経口、眼内（点眼）、肺内（鼻腔内または口腔内吸入）、または鼻腔内投与に適した組成物が含まれるが、所与の場合に最も適したルートは治療対象の状態の種類及び重症度、並びに活性成分の種類に依存する。組成物は一般的には単位投与形態で提供され、製薬業界で公知の方法により製造される。
【０１２２】
実際の使用に際し、構造式（Ｉ）を有する化合物は活性成分として慣用の医薬コンパンディング技術に従って医薬用担体と均密に混合して組み合わされ得る。担体は、例えば経口または（静脈内を含めた）非経口投与のために所望する製剤の形態に応じて各種形態をとり得る。経口投与形態の組成物を製造するには、通常使用される医薬用媒体は、例えば懸濁液剤、エリキシル剤や溶液剤のような経口液体製剤の場合には水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存剤、着色剤等；散剤、硬または軟カプセル剤や錠剤のような経口固体製剤の場合には担体、例えばデンプン、糖、結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等である。固体経口製剤が液体製剤よりも好ましい。
【０１２３】
投与が容易であるために、明らかに固体の医薬用担体が使用されている錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口投与単位形態に相当する。所望ならば、錠剤に標準の水性または非水性技術によりコーティングを被せてもよい。前記した組成物及び製剤は少なくとも０．１％の活性化合物を含有していなければならない。前記組成物中の活性化合物の％は勿論変更可能であり、通常単位の約２〜約６０重量％であり得る。治療上有用な組成物中の活性化合物の量は有効用量が得られるような量である。活性化合物を、例えば液滴またはスプレーとして鼻腔内に投与してもよい。
【０１２４】
錠剤、ピル剤、カプセル剤等は結合剤、例えはトラガカントガム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチン；賦形剤、例えばリン酸ジカルシウム；崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム；及び甘味料、例えばスクロース、ラクトースまたはサッカリンをも含み得る。投与単位形態がカプセル剤の場合、上記したタイプの材料に加えて液体担体、例えば脂肪油を含み得る。
【０１２５】
コーティングとして、または投与単位の物理的形態を改変するために各種の他の材料を存在させてもよい。例えば、錠剤にシェラック及び／または糖をコーティングしてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は活性成分に加えて、甘味剤としてスクロース、保存剤としてメチル及びプロピルパラベン、染料及び着香剤（例えば、チェリーまたはオレンジフレーバー）を含み得る。
【０１２６】
構造式Ｉを有する化合物は非経口的にも投与され得る。活性化合物を含む溶液剤または懸濁液剤は、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）が適当に混合されている水中で製造され得る。分散液剤もグリセロール、液体ポリエチレングリコール及び油中のその混合物中で製造され得る。通常の貯蔵及び使用条件下で、これらの製剤は微生物の増殖を防止するために保存剤を含んでいる。
【０１２７】
注射用に適した医薬形態には、滅菌の水性溶液剤または分散液剤、及び滅菌注射用溶液または懸濁液を即時調製するための滅菌散剤が含まれる。いずれの場合も、医薬形態は滅菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性でなければならない。製造及び貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物（例えば、細菌及び真菌）の汚染作用から保護されていなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例：グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、その適当な混合物及び植物油を含有している溶媒または分散媒体であり得る。
【０１２８】
哺乳動物、特にヒトに有効量の本発明の化合物を与えるために適当な投与ルートが使用され得る。例えば、経口、直腸内、局所、非経口、眼内、肺内、鼻内等が使用され得る。剤形には錠剤、トローチ剤、分散液剤、懸濁液剤、溶液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏剤、エアゾール剤等が含まれる。構造式Ｉを有する化合物を経口投与することが好ましい。構造式Ｉを有する化合物を非経口投与することも好ましい。
【０１２９】
ヒトに対して経口投与するための用量範囲は分割用量で０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態では、用量範囲は分割用量で０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態では、用量範囲は分割用量で０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重である。経口投与のためには、治療対象の患者に対する用量を症状に合わせて調節するために組成物を１．０〜１０００ｍｇの活性成分、特に１、５、１０、１５，２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００及び１０００ｍｇの活性成分を含有する錠剤またはカプセル剤の形態で提供することが好ましい。
【０１３０】
使用する活性成分の有効用量は使用する特定化合物、投与モード、治療対象の状態及び治療対象の状態の重症度に応じて変更され得る。用量は当業者により容易に確定され得る。この用量レジメンは最適治療応答を得るために調節され得る。
【０１３１】
本発明の化合物は１つ以上の不斉中心を含み、よってラセミ体及びラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオマーとして存在し得る。Ｒ５が水素であり、構造式（Ｉ）中のリン原子に結合しているアミノアシル残基中のＲ４が式：
【０１３２】
【化２９】
2010527957.tif 000031
中の水素以外の置換基である場合には、アミノ酸残基は不斉中心を含み、個々のＲ−及びＳ−立体異性体、並びにＲＳ−立体異性体混合物を含むと意図される。１つの実施形態では、式
【０１３３】
【化３０】
2010527957.tif 000032
に示すように、ストレオジェン炭素での立体化学はＳ−アミノ酸の立体化学、すなわち
天然に存在するα−アミノ酸立体化学に相当する。
【０１３４】
更に、Ｘが
【０１３５】
【化３１】
2010527957.tif 000033
であり、Ｒ１３もＲ１４も水素でない場合には、カルボキシ残基は不斉中心を含み、個々のＲ−及びＳ−立体異性体、並びにＲＳ−立体異性体混合物を含むと意図される。よって、Ｒ４もＲ５も水素でない場合には、アミノアルコール残基は２つの不斉中心を含み、個々のＲ，Ｒ−、Ｒ，Ｓ−、Ｓ，Ｒ−及びＳ，Ｓ−ジアステレオマー、並びにその混合物を含むと意図される。
【０１３６】
構造式（Ｉ）を有する化合物中の四置換リンは別の不斉中心を構成し、本発明の化合物はリン原子での両方の立体化学配置を包含すると意図される。
【０１３７】
本発明は、下記構造式に示す５員フラノース環についてβ−Ｄ立体化学配置を有するヌクレオシドホスホロアミダート、すなわち５員フラノース環のＣ−１及びＣ−４の置換基がβ−立体化学配置（太線で示すような“上向き”配置）を有するヌクレオシドホスホロアミダートを包含すると解される。
【０１３８】
【化３２】
2010527957.tif 000034
【０１３９】
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはオレフィン二重結合を含み、別段の記載がない限りＥ及びＺ幾何異性体の両方を含むと解される。
【０１４０】
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはケト−エノール互変異性体のような互変異性体として存在し得る。個々の互変異性体及びその混合物も構造式（Ｉ）を有する化合物に包含される。本発明の化合物の範囲内に包含されると意図されるケト−エノール互変異性体の例を以下に示す。
【０１４１】
【化３３】
2010527957.tif 000035
【０１４２】
構造式（Ｉ）を有する化合物は、例えば適当な溶媒（例えば、メタノール及び／または酢酸エチル）から分別結晶により、または光学活性固定相を用いるキラルクロマトグラフィーにより個々のジアステレオマーに分離され得る。
【０１４３】
或いは、構造式（Ｉ）を有する化合物の立体異性体は、公知の配置を有する光学的に純粋な出発物質または試薬を用いる立体特異的合成により得られ得る。
【０１４４】
本発明の化合物を医薬的に許容され得る塩の形態で投与してもよい。用語「医薬的に許容され得る塩」は、無機または有機塩基及び無機または有機酸を含めた医薬的に許容され得る非毒性の塩基または酸から製造される塩を指す。用語「医薬的に許容され得る塩」の範囲に含まれる塩基性化合物の塩は、通常遊離塩基を適当な無機または有機酸と反応させることにより製造される本発明の化合物の非毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボナート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド及び吉草酸塩が含まれるが、これらに限定されない。更に、本発明の化合物が酸性部分を有している場合、その適当な医薬的に許容され得る塩にはアルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第一鉄、第二鉄、リチウム、マグネシウム、第一マンガン、第二マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等を含めた無機塩基から誘導される塩が含まれるが、これらに限定されない。アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩及びナトリウム塩が特に好ましい。有機の医薬的に許容され得る非毒性塩基から誘導される塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂（例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テンブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等）の塩が含まれる。
【０１４５】
また、本発明の化合物中にカルボン酸（−ＣＯＯＨ）またはヒドロキシル基が存在する場合には、カルボン酸誘導体の医薬的に許容され得るプロドラッグエステル、例えばメチル、エチルまたはピバロイルオキシメチルエステル；或いはリボースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルのプロドラッグアシル誘導体、例えばＯ−アセチル、Ｏ−ピバロイル、Ｏ−ベンゾイル及びＯ−アミノアシルを使用し得る。徐放性またはプロドラッグ製剤として使用するためにバイオアベイラビリティー、組織分布、溶解度、加水分解特性を改変するために当業界で公知のエステル及びアシル基が含まれる。考えられる誘導体はインビボで容易に所要化合物に変換される。よって、本発明の治療方法において、用語「投与する」及び「投与」は記載されているウイルス感染症を具体的に開示されている化合物または具体的に記載されていないが、ヒト患者を含めた哺乳動物に対して投与した後インビボで具体的化合物に変換する化合物を用いて治療することを包含すと考えられる。適当なプロドラッグ誘導体を選択及び製造するための一般的手順は、例えば全文参照により本明細書に組み入れる“Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【０１４６】
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートの製造：
２’−Ｃ−メチルシチジンは、Ｃ．Ｐｉｅｒｒａら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２４：７６７（２００５）、またはＪ．Ａ．Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｉら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６４：７４７（１９９９）に記載されているように製造した。２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジンは、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４８：５５０４−５５０８（２００５）に記載されているように製造され得る。本明細書中に記載されているような他の２’−Ｃ−メチル−ヌクレオシドは、Ａ．Ｂ．Ｅｌｄｒｕｐら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３（２００４）及びＭ．Ｍ．Ｂｉｏら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６９：２５７（２００４）及びここに引用されている文献に従って製造され得る。
【０１４７】
一般的手順：
溶媒はすべて市販業者から入手し、更に精製することなく使用した。反応は窒素雰囲気下、オーブン乾燥（１１０℃）したガラス器具を用いて実施した。有機抽出物を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥し、（乾燥剤を濾過した後）減圧下で操作する回転蒸発器を用いて濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーは、公表されている手順（Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４３：２９２３（１９７８））に従ってシリカゲルを用いて、または予充填カラムを用いる市販のフラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｂｉｏｔａｇｅ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ  Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ  ＩＩ）を用いて実施した。
【０１４８】
試薬は通常市販業者から直接入手し、供給されたまま使用したり、または科学文献に報告されているかまたは当業者に公知のルーチンの合成ステップを用いて容易に得ることができた。
【０１４９】
１Ｈ  及び３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、３００〜６００ＭＨｚの（報告されている）周波数で操作するＢｒｕｋｅｒ  ＡＭシリーズ分光計で記録した。交換不能なプロトン（及び、目に見える場合には交換可能なプロトン）に対応するシグナルの化学シフト（δ）はテトラメチルシランに対する百万部の部（ｐｐｍ）で記録し、基準として残留溶媒ピークを用いて測定する。シグナルを多重項（ｓ，一重項；ｄ，二重項；ｔ，三重項；ｑ，四重項；ｍ，多重項；ｂ，幅広、及びその組合せ）；ヘルツ（Ｈｚ）のカップリング定数；プロトン数の順で表示している。質量スペクトル（ＭＳ）データは、負（ＥＳ−）または正（ＥＳ＋）のイオン化モードで操作するＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＡＰＩ  １００またはＷａｔｅｒｓ  ＭｉｃｒｏＭａｓｓ  ＺＱを用いて得、結果を親イオンのみについての質量対荷電の比（ｍ／ｚ）として報告する。分取規模のＨＰＬＣ分離は、２４８７二重吸収デテクタを備えているＷａｔｅｒｓ  ２５２５ポンプ；ＵＶ１０００吸収モジュールを備えているＴＳＰ  ＳｐｅｃｔｒａシステムＰ４０００；または２５２５ポンプモジュール、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤデテクタ及び２５２５収集モジュールを含む自動化質量トリガーＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓシステムを用いて実施した。化合物は、いずれも０．１％  トリフルオロ酢酸またはギ酸を含有している水及びＭｅＣＮの直線勾配を用いて１０〜４０ｍＬ／分の流速で溶離させた。固定相としてシンメトリーＣ１８カラム（７μＭ，１９×３００ｍｍ）を使用した。
【０１５０】
以下の略号を実施例及びスキーム中で使用した。
ａｑ．：水性、Ａｒ：アリール、ａｔｍ：気圧、ＣＣｌ４：四塩化炭素、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ｅｑ：当量、Ｅｔ３Ｎ：トリエチルアミン、ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル、Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル、ｈ：時、Ｍｅ：メチル、ＭｅＣＮ：アセトニトリル、ＭｅＯＨ：メタノール、ｍｉｎ：分、ＭＳ：質量スペクトル、ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ＰＥ：石油エーテル、Ｐｙ：ピリジン、ｑｕａｎｔ．：定量的、ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー、ＲＴ：保持時間、ｓｅｃ：秒、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、及びＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
【０１５１】
以下の実施例は本発明の化合物を製造するために使用される条件の例を示している。これらの実施例は本発明の範囲を決して限定するものと意図されず、このように解釈されるべきでない。ヌクレオシド及びヌクレオチド合成の当業者は、本発明のこれらの化合物及び他の化合物を製造するために以下の製造手順の条件及び方法の公知の変更を使用し得ることを認識している。温度はすべて別段の記載がない限り℃である。
【０１５２】
【化３４】
2010527957.tif 000036
【０１５３】
参考例１（Ｒ６＝Ｅｔ）
ステップ１：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
亜リン酸ビスフェニルをピリジン（０．３Ｍ）中に溶解し、フルオレニルメチルアルコールをピリジン（０．３Ｍ）中に含む溶液を添加した。混合物を０℃で２０分間攪拌したた。次いで、２’−Ｃ−メチル−シチジンをピリジン（０．３Ｍ）中に含む溶液を０℃で添加した。生じた溶液を４０℃に加温し、この温度で１時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＤＭＡ（０．１９Ｍ）中に溶解した。生じた溶液をＬ−アラニン−エチルエステル塩酸塩（１．２当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）をｉＰｒＯＨ：ＣＣｌ４（０．２４Ｍ，１０：１）中に含む溶液に添加した。混合物を０℃で１０分間攪拌した後、溶媒を蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ及び水中に溶解した。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＸＴｅｒｒａ  Ｃ１８，５μｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相：ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  ５ｍＭ  ＡＭＢＩＣ）により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、ジアステレオマーの１：１混合物として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
ステップ２：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジンをＤＣＭ（０．０１２Ｍ）中に溶解し、ピペリジン（５６当量）を添加した。生じた溶液を蒸発させ、残渣を水で洗浄した。沈殿を捨て、溶液を濃縮すると、残渣が生じた。この残渣をＲＰ−ΗＰＬＣ（固定相：カラムＸＴｅｒｒａ  Ｃ１８，５μｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相：ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  ５ｍＭ  ＡＭＢＩＣ）により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、ＮＨ４塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：８．２３（ｄ，Ｊ＝７．６，１Ｈ），６．０８−６．０６（ｍ，２Ｈ），４．２５−４．１５（ｍ，３Ｈ），４．１０−４．０２（ｍ，２Ｈ），３．９５−３．８７（ｍ，２Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝７．１，３Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＭｅＯＤ）δ：６．８７。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ４３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
【化３５】
2010527957.tif 000037
【０１５６】
実施例２（Ｒ６＝２ＰｒＰｅｎ）
ステップ１：２’−Ｃ−メチル−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジン
２’−Ｃ−メチルシチジンをアセトン（０．０４Ｍ）で希釈し、ｐ−トルエンスルホン酸及び２，２−ジメトキシプロパンを添加した。生じたスラリーを室温で２４時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＭｅＯＨ中に溶解し、（予め２Ｎ  ＮａＯＨ及びＨ２Ｏで洗浄した）アンバーライトＡ−２６を添加した。生じた混合物を２時間攪拌した。アンバーライトを濾別し、溶液を蒸発させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９：１）により精製して、所望生成物を白色粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．９６（ｄ，Ｊ＝７．５６，１Ｈ），６．１８（ｓ，１Ｈ），５．９０（ｄ，Ｊ＝７．５６，１Ｈ），４．５１−４．４８（ｍ，１Ｈ），４．２８−４．２３（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄｄ，Ｊ＝１２．１２，３．０４，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝１２．１２，３．５２，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ２９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５７】
ステップ２：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジン
２’−Ｃ−メチル−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジンをモレキュラーシーブの存在下でピリジン（０．６７Ｍ）で希釈した。生じた溶液を０℃まで冷却し、亜リン酸ジフェニル（８０％，１．３当量）を添加し、混合物を０℃で１時間攪拌した。この溶液にベンジルアルコール（２．０当量）を添加し、混合物を室温で１時間攪拌した。溶媒を蒸発させ  残渣をＴＨＦ：ＣＣｌ４（０．０８Ｍ，１２：１）中に溶解した。生じた溶液を０℃まで冷却し、Ｅｔ３Ｎ（７．０当量）及びＬ−アラニン２−プロピルペンチルエステル塩酸塩（１．３当量）（以下の中間体１）をｉＰｒＯＨ中に含む溶液を添加した。混合物を０℃で３０分間攪拌した後、水を添加してクエンチした。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝９５：５）により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５８】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）−ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−メチル−Ｃ−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジンをＴＦＡ−Ｈ２Ｏ（０．１Ｍ，８：２）の溶液中に溶解した。生じた溶液を３０℃に加温し、２０分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水及びＥｔＯＡｃ中に溶解した。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９５：５）により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５９】
ステップ４：５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−［（２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジンをＭｅＯＨ（０．０８Ｍ）中に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％）（２０％ｗ／ｗ）を添加した。生じた懸濁液をＨ２雰囲気下、室温で１８時間攪拌した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をＭｅＣＮ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＸＴｅｒｒａ  Ｃ１８，５μｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相：ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  ５ｍＭ  ＡＭＢＩＣ）により精製した。純粋な化合物を含有する画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：８．２６（ｄ，Ｊ＝７．６５，１Ｈ），６．１１（ｄ，Ｊ＝７．４７，１Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），４．２７−４．２（ｍ，１Ｈ），４．１８−３．９０（ｍ，６Ｈ），１．７５−１．６（ｍ，１Ｈ），１．４−１．３５（ｍ，１１Ｈ），１．１６（ｓ，３Ｈ），０．９５−０．９（ｍ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：５．２２。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６０】
中間体１：Ｌ−アラニン２−プロピルペンチル塩酸塩
【０１６１】
【化３６】
2010527957.tif 000038
ステップ１：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニン２−プロピルペンチル
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニンをＤＣＭ（０．４２Ｍ）で希釈した。生じた溶液を０℃まで冷却し、２−プロピルペンタノール（１．０当量）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１当量）及びＤＭＡＰ（０．１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間攪拌した。生じた溶液を蒸発させた後、ＥｔＯＡｃ及びＮａＨＣＯ３（飽和）で希釈した。水性相を分離し、有機相をＮａＨＣＯ３（飽和，２×）及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。生成物を白色固体として単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．０６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），４．３９−４．２４（ｍ，１Ｈ），４．１３−３．９８（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．６３（ｍ，１Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝７．２６，３Ｈ），１．３５−１．２２（ｍ，８Ｈ），０．９５−０．８４（ｍ，６Ｈ）。
【０１６２】
ステップ２：Ｌ−アラニン２−プロピルペンチル塩酸塩
先の生成物をＥｔＯＡｃ（１Ｍ）中に溶解し、生じた溶液にＨＣｌをジオキサン中に含む冷溶液（４Ｍ，７当量）を添加した。混合物を室温で２時間攪拌した。生じた溶液を蒸発させると、黄色油状物が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．５１（ｂｓ，３Ｈ），４．２０−３．９６（ｍ，３Ｈ），１．７６−１．５９（ｍ，１Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝７．２５，３Ｈ），１．３６−１．１９（ｍ，８Ｈ），０．９７−０．７７（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１７０．０６，６７．７８，４７．８２，３６．１１，３２．７１，３２．６５，１９．１９，１５．６９，１４．１４。
【０１６３】
中間体２：Ｌ−アラニンシクロヘプチルエステル塩酸塩
【０１６４】
【化３７】
2010527957.tif 000039
化合物を中間体１に報告されているステップ１（シクロヘプタノールを使用した）及び２に従って製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．４３（ｂｓ，３Ｈ），４．９９−４．９１（ｍ，１Ｈ），４．０５−３．９８（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１６５】
【化３８】
2010527957.tif 000040
【０１６６】
実施例３（Ｒ１２＝４−Ｈｅｐ）
ステップ１：５’−Ｏ−［［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジン
２’−Ｃ−メチル−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジン（実施例２のステップ１に記載されているように製造）をモレキュラーシーブの存在下でピリジン（０．６７Ｍ）で希釈した。生じた溶液を０℃まで冷却し、亜リン酸ジフェニル（８０％，１．３当量）を添加し、混合物を０℃で１時間攪拌した。この溶液にベンジルアルコール（２．０当量）を添加し、混合物を室温で１時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＴＨＦ：ＣＣｌ４（０．０８Ｍ，１２：１）中に溶解した。生じた溶液を０℃まで冷却し、Ｅｔ３Ｎ（７．０当量）及び２−プロピルペンタン酸２−アミノエチル塩酸塩（１．３当量）をｉＰｒＯＨ−ＴＨＦ中に含む溶液を添加した。混合物を０℃で３０分間攪拌した後、塩を濾過した。生じた溶液を蒸発させた後、ＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。水性相を分離し、ＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９５：５）により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物（１：１）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．７８（ｂｓ，１Ｈ），８．０１（ｂｓ，１Ｈ），７．９５−７．８５（ｍ，１Ｈ），７．４２−７．３０（ｍ，５Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝７．２６，１Ｈ），５．４６−５．３８（ｍ，１Ｈ），５．０（ｄ，Ｊ＝７．４４，２Ｈ），４．５１（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｓ，１Ｈ），４．２２−４．１９（ｍ，２Ｈ），４．０６−４．０１（ｍ，２Ｈ），３．０９−３．０３（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．３（ｍ，１Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），１．５８−１．２１（ｍ，８Ｈ），１．３９（ｓ，３Ｈ），１．２１（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．２６，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１０．４，１０．２。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６７】
ステップ２：５’−Ｏ−［［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）−ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
５’−Ｏ−［［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−シチジンをＴＦＡ−Ｈ２Ｏの溶液（０．１Ｍ，８：２）中に溶解した。生じた溶液を３０℃に加温し、２０分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水及びＥｔＯＡｃ中に溶解した。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９５：５）により精製して、白色固体をジアステレオマーの混合物として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６８】
ステップ３：５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
５’−Ｏ−［［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジンをＭｅＯＨ（０．０８Ｍ）中に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％）（２０％ｗ／ｗ）を添加した。生じた懸濁液をＨ２雰囲気下、室温で１８時間攪拌した。混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をＭｅＣＮ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＸＴｅｒｒａ  Ｃ１８，５μｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相：ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  ５ｍＭ  ＡＭＢＩＣ）により精製した。純粋な化合物を含有している画分を凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．７６（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝７．８，１Ｈ），６．０５（ｄ，Ｊ＝５．８８，１Ｈ），５．７９（ｓ，１Ｈ），４．２１−４．１３（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．９５（ｍ，４Ｈ），３．６（ｄ，Ｊ＝９．１，１Ｈ），２．９６−２．９（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．２７（ｍ，１Ｈ），１．５１−１．３（ｍ，４Ｈ），１．２５−１．１６（ｍ，４Ｈ），１．０３（ｓ，３Ｈ），０．８２（ｔ，Ｊ＝６．３，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．８７。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６９】
実施例４（スキーム２；Ｒ６＝ｃＨｅｐ）
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（シクロヘプチルオキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
化合物を実施例２に報告されているステップ１、２（Ｌ−アラニンシクロヘプチルエステル塩酸塩を使用）、３及び４に従って製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９５−４．８５（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．１６（ｍ，１Ｈ），４．０８−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．９１−３．８２（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．５２（ｍ，８Ｈ），１．５１−１．３９（ｍ，２Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１０（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．８８。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５０５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７０】
中間体３：Ｌ−アラニンシクロオクチルエステル塩酸塩
化合物を中間体１に報告されているステップ１（シクロオクタノールを使用した）及び２に従って製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．５２（ｂｓ，３Ｈ），４．９７−４．８９（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．９５（ｍ，１Ｈ），１．８５−１．４１（ｍ，１４Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１７１】
実施例５（スキーム２参照；Ｒ６＝ｃＯｃｔ）
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（シクロオクチルオキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
化合物を実施例２に報告されているステップ１、２（Ｌ−アラニンシクロオクチルエステル塩酸塩を用いた）、３及び４に従って製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９７−４．８９（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．０９−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．９１−３．８０（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．６６（ｍ，６Ｈ），１．６５−１．４４（ｍ，８Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１０（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．９１。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７２】
実施例６（スキーム３；Ｒ１２＝ｃＨｅｐ）
中間体４：シクロヘプタンカルボン酸２−アミノエチル塩酸塩
ステップ１：シクロヘプタンカルボン酸２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル
ＤＣＭ（０．１２Ｍ）中の（２−ヒドロキシエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１当量）にシクロヘプタンカルボン酸（１当量）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１当量）及びＤＭＡＰ（０．１当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。生じた溶液をＤＣＭで希釈し、有機相をクエン酸及びＮａＨＣＯ３（飽和）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝８：２）により精製した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：４．７２（ｂｓ，１Ｈ），４．１２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４５−３．３５（ｍ，２Ｈ），２．５３−２．４４（ｍ，１Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，２Ｈ），１．７６−１．４８（ｍ，１０Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１７３】
ステップ２：シクロヘプタンカルボン酸２−アミノエチル塩酸塩
ＥｔＯＡｃ（０．９Ｍ）中のシクロヘプタンカルボン酸２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチル（１当量）にジオキサン（１０当量）中４Ｎ  ＨＣｌを添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、物質を真空下、Ｐ２Ｏ５の存在下で乾燥し、そのまま使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．００（ｂｓ，３Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５６−２．５０（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．４１（ｍ，１０Ｈ）。
【０１７４】
５’−Ｏ−［［［２−［（シクロヘプチルカルボニル）オキシ］エチル］アミノ］ヒドロキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
化合物を実施例３に報告されているステップ１（シクロヘプタンカルボン酸２−アミノエチル塩酸塩を使用した）、２及び３に従って製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２７−４．２２（ｍ，１Ｈ），４．１４−３．９６（ｍ，５Ｈ），３．１７−３．１０（ｍ，２Ｈ），２．５８−２．５２（ｍ，１Ｈ），１．９７−１．９２（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．４５（ｍ，１０Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：６．２１。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５０５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７５】
実施例７（スキーム３；Ｒ１２＝ＯｉＰｒ）
中間体５：炭酸２−アミノエチルイソプロピル塩酸塩
ステップ１：炭酸２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチルイソプロピル
ＤＣＭ（０．２Ｍ）中の（２−ヒドロキシエチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１当量）にＥｔ３Ｎ（１当量）、ＤＭＡＰ（０．１当量）及びクロリド炭酸イソプロピル（１当量）を添加した。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。溶液をＤＣＭで希釈し、有機相をクエン酸及びＮａＨＣＯ３（飽和）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝８：２）により精製した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：４．９２−４．８１（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４３−３．３８（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７６】
ステップ２：炭酸２−アミノエチルイソプロピル塩酸塩
ＥｔＯＡｃ（０．２Ｍ）中の炭酸２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］エチルイソプロピル（１当量）にジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（２０当量）を添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌した後、溶媒を蒸発させ、物質を真空下、Ｐ２Ｏ５での存在下で乾燥し、そのまま使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．１９（ｂｓ，３Ｈ），４．８５−４．７３（ｍ，１Ｈ），４．２５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７７】
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［２−［［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
化合物を実施例３に報告されているステップ１（炭酸２−アミノエチルイソプロピル塩酸塩を用いた）、２及び３に従って製造し、Ｋ＋塩として単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．０９（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８４−４．７９（ｍ，１Ｈ），４．２７−３．９４（ｍ，６Ｈ），３．１９−３．１０（ｍ，２Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：６．１１。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ４６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７８】
実施例８
【０１７９】
【化３９】
2010527957.tif 000041
【０１８０】
ステップ１：｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２−プロピルペンタンアミド（１．０当量）をジオキサン（０．２４Ｍ）で希釈し、無水トリフルオロ酢酸（３．０当量）を添加した。生じた溶液を０℃まで冷却し、トリエチルアミン（６．０当量）を１滴ずつ添加し、反応物をこの温度で２時間攪拌した。次いで、溶液を１Ｎ  ＮａＯＨ、１Ｎ  ＨＣｌ及びブラインで順次洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、すべての揮発物を真空中で除去して、生じたニトリルを無色油状物として得た。このニトリルをエタノール（０．３２５Ｍ）中に溶解し、ヒドロキシルアミン（１０当量，５０％水溶液として）を添加し、生じた溶液を８５℃に７時間加熱した。すべての揮発物を真空中で除去し、粗生成物をＤＣＭ中に溶解し、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥した後、すべての溶媒を除去し、中間体を後続ステップのためにそのまま使用した。Ｌ−Ｎ−Ｂｏｃ−アラニンをアセトニトリル（０．１８７Ｍ）中に溶解した後、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（１．０当量）を添加した。生じた溶液を１５分間エージングした後、先に合成した中間体をアセトニトリル（１．０Ｍ）中の溶液として添加し、反応物を室温で６時間攪拌した後、８０℃まで加熱し、１２時間攪拌した。すべての揮発物を除去し、生じた油状物をＥｔＯＡｃ中に溶解し、ＮＨ４Ｃｌ、水、ＮａＨＣＯ３、水及びブラインで洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝９：１）により精製して、標記化合物（５１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３００Ｋ）δ：７．６８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８９−２．７９（ｑｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），１．６２−１．５５（ｍ，４Ｈ），１．４５−１．４３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．４５−１．１５（ｍ，１３Ｈ），０．８７−０．８１（ｍ，６Ｈ）。
【０１８１】
ステップ２：（１Ｓ）−１−［３−（ｌ−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エタンアミニウムクロリド
｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをＥｔＯＡｃ（０．６７Ｍ）中に溶解し、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（１２．０当量）を０℃で添加した。反応物を室温まで加温し、２時間攪拌した。すべての溶媒を蒸発させ、残留油状物を石油エーテルから沈殿させて、標記化合物を白色固体（７６％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３００Ｋ）δ：８．８７（ｂｓ，３Ｈ），４．９０−４．８５（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），２．９３−２．８５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．６２−１．５７（ｍ，７Ｈ），１．２１−１．１８（ｍ，４Ｈ），０．８５−０．８１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１８２】
ステップ３：［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−２，２，６ａ−トリメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソル−４−イル］メチルフェニル｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝アミドホスフェート
（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エタンアミニウムクロリドを２−プロパノール／アセトニトリルの１：１混合物（０．２Ｍ）中に溶解した。ここに四塩化炭素（１４．０当量）及びトリエチルアミン（４．０当量）を添加した。溶液を０℃まで冷却し、すぐに［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−２，２，６ａ−トリメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソル−４−イル］メチルフェニルホスホネートをＴΗＦ（０．６Ｍ）中溶液として添加した。反応物を焼結ガラスフィルターを用いて濾過し、残留物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を水及びブラインで洗浄し、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、すべての揮発物を真空中で除去し、カラムクロマトグラフィー（９８：２→９０：１０のＤＣＭ：ＭｅＯΗ勾配）にかけた後、所望化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８３】
ステップ４：［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メチルフェニル｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝アミドホスフェート
［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−２，２，６ａ−トリメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソル−４−イル］メチルフェニル｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサゾアゾル−５−イル］エチル｝アミドホスフェートをＴＦＡ：水の４：１混合物（０．４Ｍ）で希釈し、生じた溶液を３０℃で７０分間攪拌した後、すべての揮発物を真空中で除去し、残留している粗生成物をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ΗＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ；移動相：アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡで緩衝したΗ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物をＴＦＡ塩（６５％）として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８４】
ステップ５：［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メチル水素｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝アミドホスフェート
［（３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メチルフェニル｛（１Ｓ）−１−［３−（１−プロピルブチル）−１，２，４−オキサジアゾル−５−イル］エチル｝アミドホスフェートをＥｔ３Ｎ：水の１：１混合物（０．０２３Ｍ）で希釈し、室温で７時間攪拌した後、すべての揮発物を真空中で除去し、残留粗生成物をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８，５μｍ，２５０×２１．２０ｍｍ；移動相：アセトニトリル／５ｍＭ  ＡＭＢＩＣで緩衝したＨ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、アンモニウム塩（５７％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，３００Ｋ）δ：８．３９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），４．７３−４．６３（ｍ，１Ｈ），４．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０８−３．９４（ｍ，３Ｈ），２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝５．５，９．０，１４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．７３−１．６１（ｍ，４Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２９−１．２１（ｍ，４Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８５】
中間体６：（１Ｓ）−１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾ−２−イル］エタンアミン塩酸塩
【０１８６】
【化４０】
2010527957.tif 000042
【０１８７】
ステップ１：［（１Ｓ）−２−ヒドラジノ−１−メチル−２−オキソエチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニンメチル（１．０当量）にヒドラジンをＴＨＦ（１．５当量）中に含む１Ｍ  溶液を添加し、混合物をａｃｅ管において攪拌し、一晩還流加熱した。溶媒を真空中で除去し、粗な生成物をそのまま使用した。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ２０４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８８】
ステップ２：｛（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［２−（２−プロピルペンタノイル）ヒドラジン］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
バルプロ酸をＤＣＭ（０．１７Ｍ）中に含む溶液を０℃まで冷却し、ここにＷＳＣＤＩ（１．５当量）、ＤＭＡＰ（０．１当量）及び［（１Ｓ）−２−ヒドラジノ−１−メチル−２−オキソエチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０当量）を添加した。混合物を室温で２時間攪拌した後、溶媒を除去し、ＥｔＯＡｃを添加した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３（飽和）、ブラインで処理し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空中で除去して、無色油状物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ３３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８９】
ステップ３：｛（１Ｓ）−１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾル−２−イル］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
｛（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［２−（２−プロピルペンタノイル）ヒドラジン］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１当量）をＴＨＦ（０．２Ｍ）中に含む溶液にバージェス試薬（１．５当量）を添加し、不均質混合物を３０分間還流加熱した。透明溶液を水でクエンチし、ＴＨＦを真空中で除去し、ＥｔＯＡｃを添加した後、有機層を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝８５：１５）により精製して、白色固体を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ３１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９０】
ステップ４：（１Ｓ）−１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾル−２−イル］エタンアミン塩酸塩
｛（１Ｓ）−１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾル−２−イル］エチル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１当量）をＥｔＯＡｃ（０．７Ｍ）中に含む溶液を０℃まで冷却し、ここにＨＣｌをジオキサン中に含む４Ｍ溶液（１０当量）を添加した。氷浴を外し、溶液を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空中で除去して、白色固体を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ２１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９１】
【化４１】
2010527957.tif 000043
【０１９２】
実施例９
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾル−２−イル］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
化合物を実施例８に報告されているステップ３（（１Ｓ）−１−［５−（１−プロピルブチル）−１，３，４−オキサジアゾル−２−イル］エタンアミン塩酸塩を使用した）、４及び５に従って製造した。ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＸ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８，５μｍ，３０×１５０ｍｍ；移動相：アセトニトリル：Ｈ２Ｏ，５ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３で緩衝した水）により精製した。純粋な化合物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色固体（５７％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３００Ｋ）δ：７．８２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｂｓ，１Ｈ），７．０１（ｂｓ，１Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），５．７０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｓ，１Ｈ），４．４８−４．３５（ｍ，１Ｈ），３．９６−３．７８（ｍ，４Ｈ），３．６８−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．０２−２．８７（ｍ，７Ｈ），１．６８−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．２５−１．０９（ｍ，１３Ｈ），０．９２（ｓ，３Ｈ），０．８３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．１８。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９３】
実施例１０：
【０１９４】
【化４２】
2010527957.tif 000044
【０１９５】
ステップ１：［（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，２，６ａ−トリメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソル−４−イル］メタノール
７−デアザ，２’−Ｃ−メチルアデノシン（１当量）及びｐ−トルエンスルホン酸（１．２当量）をアセトン（０．１Ｍ）中に含む懸濁液に２，２−ジメトキシプロパン（１０当量）を室温で添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗生成物をＭｅＯＨ中に溶解し、（予めＭｅＯＨで洗浄した）アンバーライトを添加した。２時間後、樹脂を濾過し、溶液を蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９３：７）により精製して、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３００Ｋ）δ：７．２６（ｓ，１Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５６（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４９−３．４５（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｄｄ，Ｊ＝３．２，１２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｄｄ，Ｊ＝３．２，１２．１Ｈｚ，１Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ），０．６０（ｓ，３Ｈ），０．３３（ｓ，３Ｈ）。
【０１９６】
ステップ２：２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［（２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］（フェニルメトキシ）ホスフィニル］−７−デアザ−２’−Ｃ−メチルアデノシン
ピリジン（０．４Ｍ）中の［（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，２，６ａ−トリメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソル−４−イル］メタノール（１．０当量）に、モレキュラーシーブの存在下で亜リン酸ジフェニル（１．３７当量）を０℃で添加し、反応混合物を２時間攪拌した。ベンジルアルコール（２．０当量）を添加し、反応混合物を室温で２時間攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、粗生成物をそのままＴＨＦ：ＣＣ１４（１２：１，０．０８Ｍ）中に溶解し、ｉＰｒＯＨ：ＣＨ３ＣＮ＝１：１（０．４Ｍ）中に溶解させたＬ−アラニン２−プロピルペンチル塩酸塩（中間体１の製造を参照されたい）に添加し、Ｅｔ３Ｎ（３当量）で処理した。反応は１０分で完了した。混合物を濾過し、溶液を蒸発させた。ＥｔＯＡｃを添加し、有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させると、化合物が得られた。この化合物をシリカゲカラムクロマトグラフィール（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９５：５）及びＨＰＬＣクロマトグラフィー（カラムＸＢｒｉｄｇｅ）により精製して、Ｐでジアステレオマーの混合物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３００Ｋ）δ：８．０６（ｓ，１Ｈ），７．４０−７．３２（ｍ，５Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｂｓ，２Ｈ），６．５９（ｔ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８２−５．７３（ｍ，１Ｈ），５．０２−４．９４（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．２１−４．１３（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．８０（ｍ，３Ｈ），１．７０−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．３１−１．１５（ｍ，１１Ｈ），１．０７（ｓ，３Ｈ），０．８２（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．５７，８．２２。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９７】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［（プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］（フェニルメトキシ）−ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−７−デアザアデノシン
２’，３’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［（２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］（フェニルメトキシ）ホスフィニル］−７−デアザ−２’−Ｃ−メチルアデノシン（１当量）をＴＦＡ：Ｈ２Ｏ（３ｍｌ，４：１）で処理し、３０℃で１５分間攪拌した。溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃに何回も取り、蒸発させ、そのまま使用した。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９８】
ステップ４：５’−Ｏ−［ヒドロキシル［［１−メチル−２−オキソ−２−［（プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−７−デアザアデノシン
ｉＰｒＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：２，６ｍｌ）中に溶解させた５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［（プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］（フェニルメトキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−７−デアザアデノシン（１当量）に５％  Ｐｄ／Ｃ（１６％ｗ／ｗ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で１時間攪拌した。混合物をセライトを介して濾過し、化合物をＫ＋塩として単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，３００Ｋ）δ：８．１２（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｓ，１Ｈ），４．３３−３．９０（ｍ，７Ｈ），１．７４−１．５７（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．３４−１．２２（ｍ，８Ｈ），１．０７（ｓ，３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．０３。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９９】
実施例１１
５’−Ｏ−［ヒドロキシ［［２−［（１−オキソ−２−プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチル−７−デアザアデノシン
【０２００】
【化４３】
2010527957.tif 000045
化合物を実施例１０に報告されているステップ１、２（２−アミノエチル−２−プロピルペンタノエート塩酸塩を用いた）、３及び４に従って製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，３００Ｋ）δ：８．０９（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），４．４２−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．１９−４．０７（ｍ，５Ｈ），３．２１−３．１２（ｍ，２Ｈ），２．４４−２．３６（ｍ，１Ｈ），１．６３−１．５１（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．３６（ｍ，２Ｈ），１．３５−１．２３（ｍ，４Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），０．７４（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，３００Ｋ）δ  ８．７５。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０１】
生物学的アッセイ：
化合物の活性トリホスフェートの形成についての能力はＡ及びＢに記載されているアッセイにより調べられ得る。
【０２０２】
Ａ．ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の抑制についてのアッセイ：
本発明の化合物をサブゲノムＨＣＶレプリコンを含んでいる培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞においてＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの複製に影響を及ぼす能力について評価する。アッセイの詳細を以下に記載する。このレプリコンアッセイは、Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎ，Ｆ．Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ−Ｏ．Ｋｏｃｈ，Ｕ．Ｈｅｒｉａｎ，Ｌ．Ｔｈｅｉｌｍａｎｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｕｂ−ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ａ  Ｈｅｐａｔｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：１１０（１９９９）に記載されているアッセイの改変である。
【０２０３】
プロトコル：
このアッセイは原位置リボヌクレアーゼ保護シンチレーション近傍ベースのプレートアッセイ（ＳＰＡ）である。１０，０００〜４０，０００細胞を９６ウェルのｃｙｔｏｓｔａｒプレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）において０．８ｍｇ／ｍＬのＧ４１８を含有する培地（１００〜２００μＬ）を用いて平板培養する。０〜１８時間目に化合物を１％  ＤＭＳＯ中最高１００μＭの各種濃度で細胞に添加した後、２４〜９６時間培養する。細胞を固定し（２０分間，１０％  ホルマリン）、透過性を付与し（２０分間，０．２５％  トリトンＸ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウイルスゲノム中に含まれている（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（または他の遺伝子）に相補性の一本鎖３３Ｐ  ＲＮＡプローブとハイブリダイズした（一晩，５０℃）。細胞を洗浄し、リボヌクレアーゼで処理し、洗浄し、６５℃に加熱し、Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔでカウントする。複製の抑制をカウント／分（ｃｐｍ）の減少として読取る。
【０２０４】
サブゲノムレプリコンを含むように選択されるヒトＨｕＨ−７肝癌細胞は、ＨＣＶ  ５’非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択マーカー、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）、及びＨＣＶ非構造タンパク質ＮＳ３〜ＮＳ５Ｂ、その後に３’ＮＴＲから構成される細胞質ＲＮＡを有している。
【０２０５】
複製アッセイで試験した代表的化合物及び結果を表１に報告する。
【０２０６】
【表１】
2010527957.tif 000046
【０２０７】
Ｂ．細胞内代謝についてのアッセイ：
本発明の化合物を、該化合物の細胞（ヒト肝癌細胞株、肝細胞）に侵入し、トリホスフェートへの細胞内変換を受ける能力についても評価した。この方法は各種の細胞株及び化合物を使用した。化合物を細胞とインキュベートした後、サンプルを抽出し、ＨＰＬＣにより定量する。
【０２０８】
細胞を以下のプロトコルに従って作成する：
懸濁液中の細胞：凍結保存した細胞に対しては、凍結保存細胞ハンドリングに関するＩｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国ニュージャージー州エジソンに所在）によるプロトコルに従った。新鮮な細胞作成については、Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ  ２００５，３５（１０３５−５４）；Ｇｉｕｌｉａｎｏ  Ｃらが発表しているプロトコルに従った。
【０２０９】
細胞（１０６細胞／ｍＬ）をＨＣＭ（イタリア国ミランに所在のＣａｍｂｒｅｘ  Ｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）で懸濁し、０．２ｍｌ／ウェルを滅菌アッセイプレート９６ウェル丸底（Ｃｏｓｔａｒ  ３７８８）に移した。化合物をＤＭＳＯ中に１：１０００希釈で添加し、振とう水浴（Ｄｕｂｎｏｆｆ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｈａｋｉｎｇ  Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）において９５％  Ｏ２／５％  ＣＯ２の雰囲気下、３７℃でインキュベートした。細胞懸濁液のアリコートを異なる時間に取り出し、４℃で高速で２０秒間遠心し、以下の抽出プロトコルにかけた。
【０２１０】
接着細胞株に対しては、細胞を前もって約１日６ウェルの組織培養処理プレートにおいて適切な培地で平板培養し、３７℃／５％  ＣＯ２でインキュベートした。平板培養から２４時間後、細胞を１：１０００に希釈した化合物で処理し、３７℃／５％  ＣＯ２で適当な期間インキュベートした。
【０２１１】
いずれの場合も、インキュベーション培地を吸引により除去した後、細胞を冷７０％  ＭｅＯＨ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２０ｍＭ  ＥＧＴＡで抽出し、遠心した。ライゼートを窒素下で乾燥し、固相抽出により精製し、分析まで−２０℃で保存した。
【０２１２】
分析：
乾燥したライゼートをエレクトロスプレーインターフェース（ＥＳＩ）を備えたＡＰＩ  ４０００質量分光計に接続させたＡｇｉｌａｎｔ  １１００  ＨＰＬＣでＺＩＣ−ＨＩＬＩＣ  ＳｅＱｕａｎｔカラム（１００×２．１ｍｍ，５μｍ）を用いて分析した。質量分析計は負イオンエレクトロスプレーモードで操作した。ＨＰＬＣ移動相は、溶離液Ａ：水＋０．１％  ギ酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸から構成した。標準に対する保持時間を比較することによりピークを同定した。活性は１０６細胞中で検出したヌクレオチドのピコモルとして表した。
【０２１３】
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートを以下のカウンタースクリーンで細胞毒性及び抗ウイルス特異性についても評価する。
【０２１４】
代表的化合物をヒト肝細胞と２時間インキュベートし、良好レベルのヌクレオシドトリホスフェートを形成することが判明した（表２）。
【０２１５】
【表２】
2010527957.tif 000047
【０２１６】
Ｃ．カウンタースクリーン：
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイにおいて調べる。
【０２１７】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼα及びβの抑制：
反応条件：
５０μＬの反応容量。
【０２１８】
反応緩衝液成分：
２０ｍＭ  トリスＨＣｌ（ｐＨ７．５）、
２００μｇ／ｍＬ  ウシ血清アルブミン、
１００ｍＭ  ＫＣｌ、
２ｍＭ  β−メルカプトエタノール、
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、
１．６μＭ  ｄＡ，ｄＧ，ｄＣ，ｄＴＴＰ、
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０２１９】
酵素及び鋳型：
０．０５ｍｇ／ｍＬ  ギャップ魚精子ＤＮＡ鋳型、
０．０１Ｕ／μＬ  ＤＮＡポリメラーゼαまたはβ。
【０２２０】
ギャップ魚精子ＤＮＡ鋳型の作成：
５μＬの１Ｍ  ＭｇＣｌ２を５００μＬの活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ  ７００７６）に添加する；
３７℃に加温し、３０μＬの６５Ｕ／μＬ  エキソヌクレアーゼＩＩＩ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ  １８０１３−０１１）を添加する；
３７℃で５分間インキュベートする；
６５℃に１０分間加熱することにより反応を停止させる；
５０〜１００μＬのアリコートを２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で平衡化したＢｉｏ−ｓｐｉｎ  ６クロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ７３２−６００２）に充填する；
１，０００×ｇで４分間遠心することにより溶離させる；
溶出液をプールし、２６０ｎｍでの吸光度を測定して、濃度を決定する。
【０２２１】
ＤＮＡ鋳型は適切な容量の２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）に希釈し、酵素は適切な容量の２ｍＭ  β−メルカプトエタノール及び１００ｍＭ  ＫＣｌを含有する２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌに希釈した。鋳型及び酵素をピペットで微量遠心管または９６ウェルプレートに移した。酵素非含有ブランク反応物及び試験化合物非含有対照反応物もそれぞれ酵素希釈緩衝液及び試験化合物溶媒を用いて調製した。反応を上にリストした成分を含む反応緩衝液を用いて開始した。反応物を３７℃で１時間インキュベートした。２０μＬの０．５Ｍ  ＥＤＴＡを添加することにより反応物をクエンチした。５０μＬのクエンチした反応物をＷｈａｔｍａｎ  ＤＥ８１フィルターディスクにスポットし、風乾した。１ｍＬの洗浄液が＜１００ｃｐｍとなるまでフィルターディスクを５０ｍＬの０．３Ｍ  ギ酸アンモニウム（ｐＨ８）で繰り返し洗浄した。ディスクを１５０ｍＬの無水エタノールで２回、１５０ｍＬの無水エーテルで１回洗浄し、乾燥し、５ｍＬのシンチレーション流体中でカウントした。
【０２２２】
抑制％は、以下の式：
抑制％＝
［１−（試験反応のｃｐｍ−ブランクのｃｐｍ）／（対照反応のｃｐｍ−ブランクのｃｐｍ）］×１００
に従って計算した。
【０２２３】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの抑制：
ヒトＤＮＡポリメラーゼγの抑制のポテンシャルは、２０ｍＭ  トリス（ｐＨ８）、２ｍＭ  β−メルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含有している緩衝液中に０．５ｎｇ／μＬの酵素、１０μＭのｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ及びＴＴＰ、２μＣｉ／反応物の［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰ、及び０．４μｇ／μＬの活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入）を含んでいる反応物中で調べた。反応を３７℃で１時間進行させ、０．５Ｍ  ＥＤＴＡを１４２ｍＭの最終濃度まで添加することによりクエンチする。産物の形成をアニオン交換フィルター結合及びシンチレーションカウントにより定量した。化合物を最高５０μＭで試験した。
【０２２４】
抑制％は、以下の式：
抑制％＝
［１−（試験反応のｃｐｍ−ブランクのｃｐｍ）／（対照反応のｃｐｍ−ブランクのｃｐｍ）］×１００
に従って計算した。
【０２２５】
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートがＨＩＶ感染性及びＨＩＶ蔓延を抑制する能力を以下のアッセイで調べる。
【０２２６】
ｃ．ＨＩＶ感染性アッセイ
アッセイは、低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現のために選択したＣＸＣＲ４及びＣＣＲ５の両方を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異体を用いて実施する。細胞を４８時間感染させ、組み込まれているＨＩＶ−Ｉ  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を化学発光性基質（Ｇａｌａｃｔｏ  ｌｉｇｈｔ  Ｐｌｕｓ，マサチューセッツ州ベッドフォードに所在のＴｒｏｐｉｘ）を用いて定量する。阻害剤を１００μＭから出発する２倍連続希釈で滴定する（２回）。各濃度での対照感染に対する抑制％を計算する。
【０２２７】
ｄ．ＨＩＶ蔓延の抑制
本発明の化合物がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の蔓延を抑制する能力は、いずれも全文参照により本明細書に組み入れる米国特許第５，４１３，９９９号明細書（１９９５年５月９日）及びＪ．Ｐ．Ｖａｃｃａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，，９１：４０９６−４１００（１９９４）に記載されている方法により調べる。
【０２２８】
本発明のヌクレオシドホスホロアミダートは、サブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞毒性について下記アッセイに記載されているＭＴＳ細胞ベースアッセイでもスクリーニングした。ＨｕＨ−７細胞株はＨ．Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４２：３８５８（１９８２）に記載されている。
【０２２９】
ｅ．細胞毒性アッセイ：
細胞培養物は、懸濁培養物に対しては３日間インキュベーションで約１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度、接着細胞物に対しては３日間インキュベーションで５．０×１０４細胞／ｍＬの濃度で作成する。９９μＬの細胞培養物を９６ウェルの組織培養処理プレートのウェルに移し、１μＬの１００倍最終濃度のＤＭＳＯ中試験化合物を添加した。プレートを３７℃及び５％  ＣＯ２で特定期間インキュベートした。インキュベートした後、各ウェルに２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ試薬（ＭＴＳ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを３７℃及び５％  ＣＯ２で最長３時間の追加期間インキュベートした。プレートを攪拌して十分に混合し、４９０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーを用いて読取った。懸濁培養細胞の標準曲線はＭＴＳ試薬を添加する直前に公知の細胞数で作成した。代謝的に活性な細胞はＭＴＳをホルマザンに還元した。ホルマザンは４９０ｎｍで吸光する。化合物の存在下での４９０ｎｍでの吸光度を化合物が添加されていない細胞の吸光度と比較した。
【０２３０】
参考文献：Ｃｏｒｙ，Ａ．Ｈ．ら，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ／ｆｏｒｍａｚａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｓｓａｙｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．，３：２０７（１９９１）。
【０２３１】
以下のアッセイは、本発明の化合物の他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対する活性を調べるために使用される。
【０２３２】
ａ．化合物のライノウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の測定（細胞変性効果抑制アッセイ）：
アッセイ条件は、Ｓｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ”，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２２：７９７−８０１（１９７１）の文献に記載されている。
【０２３３】
ウイルス：
ライノウイルスタイプ２（ＲＶ−２）の菌株ＨＧＰをＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に述べられているようにＫＢ細胞及び培地（０．１％  ＮａＨＣＯ３、抗生物質なし）と一緒に使用する。ＡＴＣＣから入手したウイルスは軽度の急性発熱性上気道疾患を患っている成人男性の喉スワブ由来である。ライノウイルスタイプ９（ＲＶ−９）菌株２１１及びライノウイルスタイプ１４（ＲＶ−１４）菌株Ｔｏｗもメリーランド州ロックビルに所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手する。ＲＶ−９はヒト喉洗浄液由来であり、ＲＶ−１４は上気道疾患を患っている若い成人の喉スワブ由来である。これらのウイルスは両方とも、ヒト頸部上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（バージニア大学のＦｒｅｄ  Ｈａｙｄｅｎ博士）と一緒に使用する。増殖培地として、５％  ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び０．１％  ＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ（イーグル最少必須培地）を使用する。これら３つのウイルスタイプのすべてに対する抗ウイルス試験培地は５％  ＦＢＳ、０．１％  ＮａＨＣＯ３、５０μｇ  ゲンタマイシン／ｍＬ及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含むＭＥＭであった。
【０２３４】
本発明の化合物をアッセイするために使用した最高濃度は２０００μｇ／ｍＬである。試験化合物から５分後にウイルスをアッセイプレートに添加した。正当な対照も使用する。アッセイプレートを湿潤空気及び５％  ＣＯ２、３７℃でインキュベートする。対照細胞において形態学的変化を顕微鏡検査することにより細胞毒性をモニターする。ウイルスＣＰＥデータ及び毒性対照データの回帰分析により、ＥＤ５０（５０％有効用量）及びＣＣ５０（５０％細胞毒性濃度）を求める。選択指数（ＳＩ）は式：ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０により計算する。
【０２３５】
ｂ．化合物のデング熱、バンジ及び黄熱に対するインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ抑制アッセイ）
アッセイの詳細は上記したＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に記載されている。
【０２３６】
ウイルス：
デング熱ウイルスタイプ２のニューギニア菌株は疾病対策センターから入手する。ウイルス（ベロ）を培養し、抗ウイルス試験（ＭＡ−１０４）を実施するために２株のアフリカミドリザル腎細胞を使用する。感染マウス脳から得た黄熱ウイルス１７Ｄ菌株及び南アフリカの発熱している少年の血清から単離したバンジウイルスＨ３３６菌株はいずれもＡＴＣＣから入手する。ベロ細胞はこれらの両細胞と一緒にアッセイのために使用する。
【０２３７】
細胞及び培地：
ＭＡ−１０４細胞（メリーランド州ウォーカーズビルに所在のＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ．）及びベロ細胞（ＡＴＣＣ）を５％  ＦＢＳ及び０．１％  ＮａＨＣＯ３を含有するが抗生物質を含有しない培地１９９において使用する。デング熱、黄熱及びバンジウイルスのためのアッセイ培地はＭＥＭ、２％  ＦＢＳ、０．１８％  ＮａＨＣＯ３及び５０μｇ  ゲンタマイシン／ｍＬである。
【０２３８】
本発明の化合物の抗ウイルス試験はＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に従って、上記ライノウイルス抗ウイルス試験と同様にして実施する。これらのウイルスの各々について十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）の測定を５〜６日後に実施する。
【０２３９】
ｃ．化合物の西ナイルウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ抑制アッセイ）
アッセイの詳細は上で引用したＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に記載されている。西ナイルウイルスのウシ脳由来のニューヨーク単離物は疾病対策センターから入手する。ベロ細胞を上記したように増殖させ、使用する。試験培地はＭＥＭ、１％  ＦＢＳ、０．１％  ＮａＨＣＯ３及び５０μｇ  ゲンタマイシン／ｍＬである。
【０２４０】
本発明の化合物の抗ウイルス試験は、ライノウイルス活性をアッセイするために使用されている方法に類似しているＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎの方法に従って実施する。十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）の測定を５〜６日後に実施する。
【０２４１】
ｄ．化合物のライノ、黄熱、デング熱、バンジ及び西ナイルウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の抑制（ニュートラルレッド取込みアッセイ）
上記したＣＰＥ抑制アッセイを実施した後に、“Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ：Ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔ”，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，３１：３５−３８（１９７６）に記載されている追加の細胞変性検出方法を用いる。アッセイプレートを読取るためにモデルＥＬ３０９マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用する。ＥＤ５０及びＣＤ５０は上記したように計算する。
【０２４２】
医薬製剤の例
本発明の化合物の経口組成物の１つの具体的実施形態では、５０ｍｇの実施例２または実施例３の化合物をサイズＯ硬ゼラチンカプセルを満たすために全量を５８０〜５９０ｍｇとするのに十分な微細ラクトースを用いて製剤化する。
【０２４３】
本発明の化合物の皮下組成物の１つの具体的実施形態では、５０ｍｇの実施例２または実施例３の化合物を５ｍＬの０．９％ｗ／ｖ塩類溶液中に溶解することにより製剤化する。
【０２４４】
本発明を具体的実施形態を参照して記載し、説明してきたが、当業者は本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく各種の変化、修飾及び置換を加え得ることを認識している。例えば、ＨＣＶ感染症の重症度に対する治療対象のヒトの応答性が異なる結果として本明細書中に上記した好ましい用量以外の有効量を適用してもよい。また、観察された薬理応答は、選択した特定の活性化合物または医薬用担体の存在の有無、使用する製剤のタイプ及び投与モードに従って及びこれらに応じて異なり得、結果の予想される違いまたは差は本発明の目的及びプラクティスに従って考えられる。従って、本発明は特許請求の範囲によってのみ限定され、特許請求の範囲は合理的に広く解釈されると意図される。
【国際調査報告】
2010527957.tif 000056
2010527957.tif 000057
2010527957.tif 000058
2010527957.tif 000059
2010527957.tif 000060
2010527957.tif 000061