(57)【要約】  本発明は、新規のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、具体的には１−（ピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの誘導体を提供する。この化合物は、腫瘍細胞を含む細胞に対する予期せぬ増殖抑制活性及び異種移植腫瘍モデルでの抗腫瘍活性を示すキナーゼ阻害剤である。前記化合物或いはその好適な塩又はプロドラッグは、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体の治療に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）式（Ｉ）の化合物又は（ｉｉ）（ｉ）の化合物の互変異性体である化合物。
2010528088.tif 000030
【請求項２】
請求項１に記載の化合物の薬剤的に許容できる塩。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物の塩酸塩又はマレイン酸塩である、請求項２に記載の薬剤的に許容できる塩。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物或いは請求項２又は３に記載の薬剤的に許容できる塩のプロドラッグ。
【請求項５】
（ｉ）請求項１に記載の化合物、請求項２又は３に記載の薬剤的に許容できる塩及び請求項４に記載のプロドラッグから選択される活性成分；及び（ｉｉ）薬剤的に許容できる希釈剤、賦形剤又はキャリアを含む医薬組成物。
【請求項６】
経口投与用に処方される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
静脈内投与用に処方される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
治療上有効な量の前記活性成分を含む、請求項５から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
投与の必要のある個体への投与用に処方される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記投与が、癌を患っている個体に対するものである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記個体がヒトである、請求項９又は１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項５から９のいずれか一項に記載の医薬組成物及び前記医薬組成物がその必要のある個体への投与用に使用できることを示す説明書を含む、包装された医薬製品。
【請求項１３】
前記説明書が、前記医薬組成物が、癌を患っている個体への投与用に使用できることを示す、請求項１２に記載の医薬品包装。
【請求項１４】
前記個体がヒトである、請求項１３に記載の医薬品包装。
【請求項１５】
前記個体に、（ａ）請求項１に記載の化合物、請求項２又は３に記載の薬剤的に許容できる塩及び請求項４に記載のプロドラッグから選択される活性成分；又は（ｂ）請求項５から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、ガンを患っている個体を治療する方法。
【請求項１６】
前記個体が、家庭内の哺乳類、齧歯類及びヒトからなる群から選択される哺乳動物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記個体がヒトである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
腫瘍細胞を請求項１に記載の化合物又はその塩形態に接触させる工程を含む、前記腫瘍細胞を殺傷し、或いはその増殖又は成長を阻害する方法。
【請求項１９】
前記腫瘍細胞が、個体中の悪性細胞である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記個体が、家庭内の哺乳類、齧歯類及びヒトからなる群から選択される哺乳動物である、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記個体がヒトである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍細胞が、前記化合物又はその塩形態に、インビトロで暴露される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９から選択される１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性に関連する疾患又は疾病を患っている個体を治療する方法であって、前記個体に、（ａ）請求項１に記載の化合物、請求項２又は３に記載の薬剤的に許容できる塩及び請求項４に記載のプロドラッグから選択される活性成分；又は（ｂ）請求項５から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【請求項２４】
前記疾患又は疾病がガンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記疾患が、ＣＤＫ９の活性に関連している、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記個体が、家庭内の哺乳類、齧歯類及びヒトからなる群から選択される哺乳動物である、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記個体がヒトである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１に記載の化合物、請求項２又は３に記載の薬剤的に許容できる塩及び請求項４に記載のプロドラッグから選択される活性成分の、ガンを患っている個体を治療するための薬剤を調製するための使用。
【請求項２９】
式（ＩＩ）により表される構造を有する化合物を、式（ＩＩＩ）により表される構造を有する化合物と反応させる工程であって、
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上式において、Ｘが、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、−Ｏ−アシル及びハロゲンから選択される工程；及び、任意に、得られた化合物を酸と反応させて酸塩を作る工程を含む、請求項１に記載の化合物又は任意にその塩を合成する方法。
【請求項３０】
Ｘが−ＯＥｔである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１に記載の化合物を酸と反応させる工程を含む、請求項２又は３に記載の薬剤的に許容できる塩を合成する方法。
【請求項３２】
前記酸が、塩酸塩又はマレイン酸塩である、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、具体的には１−（ピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの誘導体を提供する。この化合物は、腫瘍細胞を含む細胞に対する予期せぬ増殖抑制活性及び異種移植腫瘍モデルでの抗腫瘍活性を示すキナーゼ阻害剤である。前記化合物或いはその好適な塩又はプロドラッグは、ガン或いは他の増殖性疾病又は疾患を患っている個体の治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
キナーゼは、細胞分裂及び増殖の調節などの基本的な細胞機能を果たし、制御されていない細胞の増殖及び分化により特徴づけられる疾病状態などの多くの疾病状態に決定的な役割を果たしていると思われる重要な細胞酵素である。これらの疾病状態は、ガン、アテローム性動脈硬化、再狭窄及び他の増殖性疾患などの種々の細胞タイプ及び疾患を包含する。
【０００３】
生物学において最も重要で基本的なプロセスの１つは、細胞周期に介在される細胞分裂である。このプロセスは、規定された生体機能を持つ、後の世代の細胞の制御された産生を確実にする。それは高度に制御された現象であり、細胞内及び外部の源からの両方の細胞シグナルの複雑な組に応答する。腫瘍促進及び腫瘍抑制遺伝子産物の複雑なネットワークが、この細胞シグナル伝達プロセスの重要な要素である。腫瘍促進要素の過剰発現又はその後の腫瘍抑制産物の減少が、無秩序な細胞増殖及び腫瘍の発生につながるであろう（Ｐａｒｄｅｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：６０３−６０８，１９８９）。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）は、細胞周期機構の制御に重要な役割を果たしている。それらは、触媒サブユニット（キナーゼ）及び調節サブユニット（サイクリン）の２成分からなる複合体である。現在までに、１３のキナーゼサブユニット（サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）１−１３）が、サイクリン（Ｃｙｃ）Ａ−Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ及びＴ並びにＣＤＫ５、ｐ３５及び他のタンパク質を含むいくつかの調節サブユニットと共にヒトの中に確認されている。各キナーゼサブユニットは、１つ以上の調節サブユニットパートナーと組（複数可）を形成し、それぞれの場合において、そのような組は、活性のある触媒部分を構成する。細胞周期の各過渡期は、特定のサイクリン依存性キナーゼ複合体により制御されている：Ｇ１／Ｓは、ＣＤＫ２／ＣｙｃＥ、ＣＤＫ４／ＣｙｃＤ及びＣＤＫ６／ＣｙｃＤによる；Ｓ／Ｇ２は、ＣＤＫ２／ＣｙｃＡ及びＣＤＫｌ／ＣｙｃＡによる；Ｇ２／Ｍは、ＣＤＫｌ／ＣｙｃＢによる（総説には、Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２４：１７Ｏｆｆ，２００６を参照されたい）。これらのキナーゼ複合体の調和のとれた活性が、個々の細胞を導いて複製プロセスを通過させ、それぞれの後の世代の生命力を確実にする（Ｓｈｅｒｒ，Ｃｅｌｌ  ７３：１０５９−１０６５，１９９３；Ｄｒａｅｔｔａ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１５：３７８−３８２，１９９０）。
【０００４】
マウス生殖細胞系で、３種のＤ型サイクリンの全て、２種のＥ型サイクリン、サイクリンＤ依存性ＣＤＫ４及びＣＤＫ６又はサイクリンＥ依存性ＣＤＫ２をコードする遺伝子を破壊する実験は、これらの遺伝子のどれも細胞周期の進行に厳密には必須ではないことを示したが（Ｓｈｅｒｒ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １８：２６９９−２７１１，２００４に総説されている）、増えつつあるエビデンスが、腫瘍の発生とサイクリン依存性キナーゼ関連機能不全の間の関連を示している。サイクリン調節タンパク質の過剰発現及びその後のキナーゼの機能亢進は、数種のガンに関連づけられてきた（Ｓｈｅｒｒ  Ｃ．Ｊ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：１６７２−１６７７，１９９６；Ｊｉａｎｇ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：９０２６−９０３０．１９９３；Ｗａｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４３：５５５−５５７，１９９０）。実際に、ヒトの腫瘍の発生は、ＣＤＫタンパク質自体又はその調節因子の変化と一般に関連がある（Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ  Ｃ，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：５４５−５６０，１９９５；Ｋａｒｐ  Ｊ．Ｅ．ａｎｄ  Ｂｒｏｄｅｒ  Ｓ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１：３０９−３２０，１９９５；Ｈａｌｌ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ，Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８：６７−１０８，１９９６）。サイクリン依存性キナーゼの内因性で高度に特異的なタンパク質阻害因子が、細胞増殖に重大な影響を持つことが見いだされた（Ｋａｍｂ  Ａ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２７：１３９−１４８，１９９８；Ｋａｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：４３６−４４０，１９９４；Ｂｅａｃｈ，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：７０１−７０４，１９９３）。これらの阻害因子には、ｐ１６ＩＮＫ４（ＣＤＫ４／ＣｙｃＤ１の阻害因子）、ｐ２１ＣＩＰ１（一般的なＣＤＫ阻害因子）及びｐ２７ＫＩＰ１（特異的なＣＤＫ２／ＣｙｃＥ阻害因子）がある。ＣＤＫ２／ＣｙｃＡに結合したｐ２７の結晶構造は、これらのタンパク質が、サイクリン依存性キナーゼ複合体との多様な相互作用によりキナーゼ活性を効果的に阻害する様子を明らかにした（Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３８２：３２５−３３１，１９９６）。これらのタンパク質阻害因子は、それらの対応するサイクリン依存性キナーゼ複合体との特異的な相互作用により細胞周期を調節するのに役立つ。これらの阻害因子を欠損している細胞は、無秩序な成長及び腫瘍形成を起こしやすい。
【０００５】
細胞周期の進行の中心となるプロセスに主に関与しているＣＤＫ（ＣＤＫ１、２、４及び６）に加え、他のＣＤＫは、細胞周期の進行中の遺伝子発現プロセスの制御に責任がある。具体的には、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのＣ末端領域をリン酸化し、抗アポトーシス性タンパク質、Ｄ型サイクリン及び抗血管形成誘導因子（低酸素誘導性ＶＥＧＦのような）の発現を促進することが知られている。したがって、これらのいわゆる調節ＣＤＫも、また治療介入の魅力的な標的である（Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２４：１７７０ｆｆ，２００６を参照されたい）。
【０００６】
薬理学的なＣＤＫ阻害と細胞周期制御との間の明らかな関係により、腫瘍学におけるＣＤＫ阻害因子の潜在的な利用は早い時期に確認されており、異なる構造クラスに属する多くの小分子阻害剤、例えば、スタウロスポリン類、フラボン類（例えば、フラボピリドール（Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２４：１７０ｆｆ，２００６参照））、プリン類（例えば、プルバラノール；レスコビチン（例えば、Ｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：３１２０８ｆｆ，１９９５を参照））、ピリド［２，３−ｄ］ピリミジノン類、オキシインドール類、パウロン類、インデノピラゾール類、アニリノキナゾリン、アミノチアゾール類、又はジアリールウレア類が確認されており、最初の分子は、現在臨床評価を受けている（総説には、Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８：Ｓ３２−Ｓ３７，２００２；Ｈｕｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ．４２：２１２２−３８，２００３；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  ３：７４２−６，２００４；Ｆｉｓｃｈｅｒ  ａｎｄ  Ｇｉａｎｅｌｌａ−Ｂｏｒｒａｄｏｒｉ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  １４：４５７−７７，２００５を参照されたい）。
【０００７】
ＣＤＫ１、２、４及び６の生化学的な役割についての現在の理解に基づくと、これらの酵素の阻害剤により処理される細胞中で、成長停止が予期できる。ＣＤＫ４／ＣｙｃＤ及び／又はＣＤＫ６／ＣｙｃＤの直接的な阻害は、Ｇ１で細胞を停止するはずである（Ｂａｕｇｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：７６６１−７，２００６）。さらに、ＣＤＫ活性化キナーゼＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の阻害による対応するサイクリンパートナーの発現低下によるＣＤＫ１及びＣＤＫ４の間接的な阻害も、またＧ１で細胞を停止するはずである（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４，６４，２６２−７２；Ｍａｔｅｙａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９９，１９，４６７２−８３）。原則として、ＣＤＫ２活性の阻害はＧ１での細胞の停止を起こすはずであるが、この阻害がＣＤＫ４活性により回避されうることが、結腸ガン細胞中で遺伝学的に示されている（Ｔｅｔｓｕ  ＆  ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２３３−４５，２００３）。ＣＤＫ１／ＣｙｃＢの阻害は、後期促進複合体の成分のリン酸化の阻害により、有糸分裂からの出口を遮断するはずであり（Ｇｏｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７７：１５５５２−７，２００２；Ｌｉｓｔｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２５５：１８４−９１，２０００）、サバイビンのリン酸化の阻害によりアポトーシスを起こしうる（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．９７：１３１０３−７，２０００）。
【０００８】
上記の考察に照らして、特にＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９に対する、強力で釣り合いのとれたＣＤＫ阻害活性を持つ分子があれば、ガン又は他の増殖性疾病の治療における細胞増殖抑制剤／細胞傷害剤の開発のための見込みある候補であると予期されるであろう（ＤｅＰｉｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．５：２６４４−５８，２００６；Ｊｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．６：９１８−２５，２００７）。
【０００９】
しかし、例えば、インビトロの生化学的なキナーゼ阻害アッセイで測定されるＣＤＫ阻害活性は、研究におけるヒットアンドリード同定にとって非常に重要なパラメータであるが、治療用途の薬剤の開発の成功は、最終的には多くの追加の因子、例えばインビトロＡＤＭＥＴプロファイル（溶解度および透過性を含む）、細胞生物学研究（疾病関連細胞系の細胞阻害を含む）、薬物動態学（バイオアベイラビリティを含む）及び薬力学研究（最も重要なことだが、疾病関連動物モデルにおける活性を含む）及び毒理学プロファイルなどに依存するであろう。
【００１０】
特定の方法で置換されている、特定のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンが、薬理学的に有用な性質を持つことは知られている。具体的には、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの特定の誘導体は、増殖抑制活性を持つことが知られている（Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｉｄｅｄ  Ｍｏｌ．Ｄｅｓ．１９：１１１−２２，２００５；Ｍａｒｋｗａｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７：５８９４−９１１，２００４を参照されたい）。
【００１１】
ＰＣＴ公開国際公開第００／０２１９２６号は、特定の１−フェニル−及び１−ピリジル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンを表す一般的な構造を含む、１種のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンを広く開示している。しかし、特定の１−ピリジル−置換化合物は何も開示されておらず、その合成も記載されておらず、そのような化合物が、例えばＣＤＫ酵素アッセイにおいて阻害性を示すかどうかを示すデータが全く提示されていない。したがって、薬剤として有用な化合物の製造にピリジン置換基を選択するための詳述された教示はなく、実際に、１−ピリジル形態が、実際に合成された化合物と同じ程度有効であるか、又は開示された用途で本当に有効であるかの証明も全くない。特に、以下に開示される、特定の化合物１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−６−（３−ヒドロキシ−４−ピロリジノメチル−フェニル）メチル−３−イソプロピル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（化合物Ｉ）の教示は全くない。
【００１２】
ＰＣＴ公開国際公開第０３／０３３４９９号は、サイクリン依存性キナーゼを阻害し、腫瘍モデル中で特定の活性を有することが示される特定の１−フェニル−３−イソプロピル−６−アリールメチル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンを具体的に開示している（国際公開第２００４／０９２１３９号；国際公開第２００５／０６３７６５号を参照；Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．１２：１１０３−１５，２００５も参照されたい）。しかし、これらの出願が、対応する１−ピリジル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン類のいずれも具体的に開示せず、包括的に特許請求せず、その用途を示唆しないことは、重要である。国際公開第２００４／０９２１３９号及び国際公開第２００５／０６３７６５号の両方は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９に対してインビトロの生化学的なキナーゼ阻害アッセイにおいて釣り合いのとれたＣＤＫ阻害活性を有すると示すことのできる、１−（２，６−ジクロロフェニル）−６−（３−ヒドロキシ−４−ピロリジノメチル−フェニル）メチル−３−イソプロピル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（Ｐ）を開示する。
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しかし、この化合物は、溶解度および透過性の点で、特にヌードマウスの異種移植腫瘍モデルで満足できる性質を持たなかったため、ガンの治療のためのさらなる前臨床又は臨床開発は当然期待されなかったであろう。
【００１３】
したがって、なされた進歩にもかかわらず、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９に対してインビトロの生化学的なキナーゼ阻害アッセイにおいて釣り合いのとれたＣＤＫ阻害活性を持ち、異種移植腫瘍モデルで強い活性を示し、ガンの治療に有用な低分子量キナーゼ阻害剤化合物の探索が続く。そのような化合物は、さらに、ガン、腫瘍及び他の増殖性疾患又は疾病、例えば、再狭窄、血管形成、糖尿病性網膜症、乾癬、術後癒着、黄斑変性及びアテローム性動脈硬化症を含む広範な疾病の治療に有用であろう。そのため、キナーゼ阻害活性又は腫瘍細胞などの細胞に対する増殖抑制活性を有する組成物、医薬及び／又は薬剤を提供する強い必要性が存在する。そのような組成物、医薬及び／又は薬剤は、そのような活性を有するだけでなく、他のキナーゼ阻害剤又は抗増殖剤と比べて、副作用が我慢できる、許容できる、又は低減されているかもしれない。さらに、そのような組成物、医薬及び／又は薬剤による治療に敏感な腫瘍のタイプ又は他の疾病のスペクトルは広いかもしれない。そのような組成物、医薬及び／又は薬剤の活性成分は、単一の薬剤として、かつ／又は、他の治療薬に、放射線に、手術／外科処置に、温熱療法又は上記の適応症に公知の他の治療法に関連するにしても、併用療法において上記の適応症の治療における使用に好適であろう。
【発明の概要】
【００１４】
発明者らは、特にＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９に対する強力で釣り合いのとれたＣＤＫ阻害活性、腫瘍細胞に対する増殖抑制活性、高い溶解度、透過性及び経口バイオアベイラビリティを含む良好な薬物動態学的及び薬力学的性質を有し、Ａ２７８０腫瘍細胞を利用するモデルを含むヌードマウスの異種移植腫瘍モデルにおいて驚くほど強力な増殖抑制活性を示す、新規のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、具体的には１−（ピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの誘導体を発明した。この化合物は、ガンの株化細胞系及びインビボの異種移植ガンモデルでの試験に基づき、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病などのＣＤＫ脱調節又は細胞増殖に関連する疾病の有効な治療薬としての見込みを示す。
【００１５】
以下に詳述する比較試験に基づくと、本発明の化合物は、１種以上の形態のガンを患っている個体の治療或いは種々の他の増殖性疾患又は疾病の１種以上を患っている個体の治療に好適である。
【００１６】
本発明の種々の態様は、以下に示す式（Ｉ）により表される構造又はその任意の互変異性形態の構造を有する、標題化合物１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−６−（３−ヒドロキシ−４−ピロリジノメチル−フェニル）メチル−３−イソプロピル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンに関する。標題化合物は、任意に、薬剤的に許容できる塩を含む塩の形態として形成又は使用することができる。標題化合物はＣＤＫ阻害剤として有用であり、腫瘍細胞を含む細胞に対する増殖抑制活性及び異種移植腫瘍モデルにおける抗腫瘍活性を示し、かつ／又はガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体の治療に有用である。
【００１７】
一態様において、本発明は、薬剤的に許容できる希釈剤、賦形剤又はキャリア、及び、例えばガン或いは他の増殖性疾患又は疾病の影響を改善する、治療上有効な量などある量のそのような標題化合物を含む医薬組成物に関する。
【００１８】
本発明の他の態様は、上述のものなど標題化合物を含む医薬組成物及び前記医薬組成物がガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている患者への投与に使用できることを示す説明書を含む、包装された医薬品に関する。
【００１９】
他の態様において、本発明は、個体、細胞、組織、臓器又は生物に、治療上有効な量を含むある量の、標題化合物又は本願に開示される医薬組成物を投与又は接触させることを含む方法に関する。これらの方法には、細胞（腫瘍細胞を含む）の殺傷或いはその増殖又は成長の阻害；本願に開示される１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性に関連する疾患を患っている個体の治療；ガンを患っている個体の治療；或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体の治療があるが、これらに限定されない。
【００２０】
他の態様において、本発明は、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体の治療のための薬剤を調製するための標題化合物の使用に関する。
【００２１】
本発明の他の態様は、１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−６−（３−ヒドロキシ−４−ピロリジノメチル−フェニル）メチル−３−イソプロピル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの合成方法に関する。
【００２２】
したがって、本発明は、（ｉ）式（Ｉ）の化合物、
2010528088.tif 000003
（ｉｉ）（ｉ）の化合物の互変異性体である標題化合物を提供する。
【００２３】
本発明は、薬剤的に許容できる塩を含む標題化合物の塩の形態又は水和物を含む標題化合物の溶媒和物をさらに提供する。
【００２４】
本発明は、標題化合物のプロドラッグ形態をさらに提供する。
【００２５】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び請求項から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１ａ】（ａ）Ａ２７８０異種移植卵巣腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びシトキサン）の１日２回経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図１ｂ】（ａ）Ａ２７８０異種移植卵巣腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びシトキサン）の１日２回経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図２】Ａ２７８０細胞を接種され、化合物Ｐ、化合物Ｉ、ビヒクル又はシトキサンを投与された種々のマウスの群の対数線形プロットデータの線形回帰後のフィッティングされたデータ。
【図３ａ】（ａ）Ａ２７８０異種移植卵巣腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びＲ５４７）の連日経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図３ｂ】（ａ）Ａ２７８０異種移植卵巣腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びＲ５４７）の連日経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図４ａ】（ａ）Ｈ４６０異種移植肺腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びＲ５４７）の連日経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図４ｂ】（ａ）Ｈ４６０異種移植肺腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びＲ５４７）の連日経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図５ａ】（ａ）ＨＣＴ１１６異種移植結腸腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びＲ５４７）の連日経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図５ｂ】（ａ）ＨＣＴ１１６異種移植結腸腫瘍の成長；及び（ｂ）マウス体重に及ぼす化合物Ｉ又は化合物Ｐ（並びに対照ビヒクル及びＲ５４７）の連日経口投与の影響。マウスの各群の平均値は、各時間点でプロットされる。
【図６】化合物ＩによるＨＣＴ１１６細胞中のＣＤＫ９依存性ＲＮＡＰＩＩリン酸化の阻害。対照としてトータルＲＮＡＰＩＩ及びチューブリンタンパク質が示される。細胞及び溶解物は、実施例Ｄに記載のとおり処理された。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
定義
「互変異性体」という用語は当分野で認められており、単結合と隣接二重結合の交換を伴う、水素原子又はプロトンの形式的な原子移動から生じるある化合物の異性体を説明する。本願での互変異性体という用語は、式（Ｉ）の本発明の化合物の可能な互変異性形態のいずれも含む。化合物の異なる互変異性形態が、溶解状態又は固体状態で、例えば平衡状態で共存することがあり、１つの互変異性形態が、時間と共に異なる互変異性形態に変わりうることがさらに理解される。したがって、式（Ｉ）の化合物への言及は、（ｉ）式（Ｉ）により表される構造を有する化合物、（ｉｉ）（ｉ）の化合物の任意の互変異性体、或いは（ｉｉｉ）（ｉ）の化合物及びその任意の互変異性体（複数可）の混合物への言及であると理解されたい。
【００２８】
「異性体」という用語は、同一の分子式を有するが、それらの原子の結合の性質又は配列或いはそれらの原子の空間における配列が異なる１組の化合物のうちの１つを意味する。
【００２９】
本発明は、本化合物に存在する原子の全同位体を含むものとする。同位体は、原子番号が同じだが質量数が異なる原子である。一般的な例示として限定はされずに、水素の同位体には、１Ｈ、２Ｈ（重水素）及び３Ｈ（トリチウム）がある。炭素の同位体には、１２Ｃ及び１４Ｃがある。
【００３０】
本願での「活性成分」という用語は、医薬組成物に含まれ、それ自体活性薬剤である薬剤、或いは非限定的な例としてプロドラッグである活性成分又は活性薬剤である代謝物の形成につながる活性成分など、活性薬剤の形成をもたらす薬剤を意味する。
【００３１】
「活性薬剤」という用語は、例えば、活性成分を含む医薬組成物の投与時の個体の治療など、そのような薬剤を使用する治療方法などの方法の、治療活性などの望まれる活性の原因であり、又はそれに基本的に寄与する薬剤を意味する。活性薬剤は、単独でも、１種以上の追加の活性薬剤と組み合わせても、その活性を発揮できる。活性薬剤は公知のことも、公知でないこともあり、例えば、活性成分の代謝物により媒介される作用など、活性成分の作用が直接なのか間接なのか、知られていないこともある。特定の理論に拘束されることを意図しないが、本発明の化合物はそれ自体活性薬剤であると考えられている。
【００３２】
本願での「薬剤」という用語は、直接又は間接に、用語「薬剤」が使用される文脈で記載される状況において特定の活性を発揮する、又は発揮すると考えられている物質を意味する。
【００３３】
本願での「代謝物」という用語は、代謝又は代謝プロセスにより作られる物質を意味する。本願での代謝は、分子又は化学物質と接触する細胞、組織、系、又はヒトを含む個体中に存在するそのような分子又は化学物質の変換に関与する種々の物理的／化学的／生化学的／薬理学的反応（それぞれが「代謝プロセス」である）を意味する。
【００３４】
本願での「ＩＣ５０」は、測定可能な活性、表現型、又は応答、例えば腫瘍細胞などの細胞の成長又は増殖が５０％阻害される濃度である。ＩＣ５０値は、例えば、目視により、或いは適当な曲線近似又は統計ソフトウェアを利用して、適当な用量−応答曲線から推定できる。より正確には、ＩＣ５０値は、非線形回帰分析を利用して測定できる。
【００３５】
本願での「個体」という用語は、多細胞生物、例えば、霊長類を含む哺乳類などの動物を意味する。ヒトなどの霊長類に加え、種々の他の哺乳類が、個体という用語内に含まれうる。例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス或いは他のウシ科、ヒツジ科、ウマ科、イヌ科、ネコ科、又は齧歯類種を含むが、これらに限定されない他の哺乳類を使用できる。
【００３６】
本願での「増殖性疾患」又は「増殖性疾病」は、個体中の通常レベルを超えた細胞増殖、すなわち、同種の通常の非疾病細胞に見られる細胞増殖レベルを超えた増殖により特徴づけられる疾患又は疾病を含む。増殖性疾患又は疾病は、異常に制御された細胞成長、増殖、分化又は細胞の遊走を含む、細胞成長、分化又は増殖プロセスの変化により起こり、又は影響を受けることがある。増殖性疾患又は疾病には、腫瘍形成性疾患又は疾病がある。細胞成長又は増殖疾患の例には、腫瘍、ガン、自己免疫疾患、ウィルス性疾患、真菌症、神経変性疾患及び心臓血管疾患があるが、これらに限定されない。腫瘍又はガンの中に含まれ、それらを含み、又はそれらから誘導される細胞は、一般的に、増殖性細胞、典型的には過剰増殖性細胞であると理解され、他の状況では、腫瘍細胞は、形成異常であるかもしれず、又は増殖したかもしれない。
【００３７】
本願での「細胞成長、分化、又は増殖プロセス」は、細胞の数、大きさ又は含有量が増えるプロセスであり、細胞が、他の細胞とは異なる特殊化した１組の特性を発現するプロセスであり、或いは、細胞が、特定の位置又は刺激に近づき、又は遠ざかるプロセスであり、アミノ酸輸送及び分解並びに細胞の他の代謝プロセスを含む。
【００３８】
本願での「腫瘍形成性疾患又は疾病」は、腫瘍の形成又は腫瘍を形成する傾向を生み出す、異常に制御された細胞成長、増殖、分化、接着又は遊走により特徴づけられる疾患又は疾病を含む。本願での「腫瘍」には、例えば細胞の異常増殖により形成される、良性又は悪性の組織の塊がある。
【００３９】
本願での「抗ガン剤」という用語は、インビボ又はインビトロでガン細胞を殺傷し、ガン細胞中にアポトーシスを誘起し、転移を阻害（すなわち、防止、停止、妨害、遅くし、又は遅らせる）し、又は他の方法で抗ガン活性を示す能力を持つ活性薬剤を意味する。「抗増殖剤」という用語は、インビボ又はインビトロで成長細胞の増殖を阻害し、或いは増殖性細胞又は過剰増殖性細胞における細胞分裂の速度を低下させる能力を持つ活性薬剤を意味する。多くの薬剤が抗ガン剤及び／又は抗増殖剤であると知られており、そのような公知の薬剤には、アルトレタミン、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、チオテパ、クラドリビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、ゲムシタビン、チオグアニン、ペントスタチン、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、シタラビン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾトシン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ピコプラチン、ＬＡ−１２、イプロプラチン、テトラプラチン、ロバプラチン、ＪＭ２１６、ＪＭ３３５、サトラプラチン、フルダラビン、アミノグルテチミド、フルタミド、ゴセレリン、リュープロリド、酢酸メゲストロール、酢酸シプロテロン、タモキシフェン、アナストロゾール、ビカルタミド、デキサメタゾン、ジエチルスチルベストロール、プレドニゾン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキシルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ロソキサントロン、マイトマイシン−ｃ、プリカマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、トポテカン、イリノテカン、９−アミノカプトテカン、９−ニトロカプトテカン、ＧＳ−２１１、ＪＭ１１８、エトポシド、テニポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、プロカルバジン、アスパラギナーゼ、ＰＥＧ−アスパラギナーゼ、オクトレオチド、エストラムスチン及びヒドロキシウレアがあるが、これらに限定されない。前記用語には、抗体などの非小分子治療薬、例えば、国際公開第０１／８７３３７号及び国際公開第０１／９７３３８号に記載される１Ｄ０９Ｃ３及び他の抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、米国特許第５，７３６，１３７号、同第５，７７６，４５６号、同第５，８４３，４３７号に記載されるリツキサン、４Ｄ５、Ｍａｂ２２５、Ｃ２２５、ダクリズマブ（ゼナパックス）、アンテグレン、ＣＤＰ  ８７０、ＣＭＢ−４０１、ＭＤＸ−３３、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４７７、ＣＥＡ−ＣＩＤＥ、ＡＨＭ、バイタクシン、３６２２Ｗ９４、ゼレックス（Ｔｈｅｒｅｘ）、５Ｇｌ．１、ＩＤＥＣ−１３１、ＨＵ−９０１、マイロターグ、ザミル（ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５）、ＭＤＸ−２１０、ヒュミケード（Ｈｕｍｉｃａｄｅ）、リンホサイド、ＡＢＸ−ＥＧＦ、１７−１Ａ、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、ｒｈｕＭＡｂ）、エプラツズマブ、セツキシマブ（アービタックス（登録商標））、パーツズマブ（オムニターグ（登録商標）、２Ｃ４）、Ｒ３、ＣＤＰ８６０、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、トシツモマブ（ベキサール（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（ゼバリン（登録商標））、Ｍ１９５、１Ｄ１０、Ｈｕ１Ｄ１０（レミトゲ��（Ｒｅｍｉｔｏｇｅｎ）（登録商標）、アポリズマブ）、Ｄａｎｔｏｎ／ＤＮ１９２４、ＨＤ４又はＨＤ８などの「ＨＤ」抗体、ＣＡＭＰＡＴＨ−１及びＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ又はその他のバリアント、フラグメント、コンジュゲート、誘導体及び修飾体、或いは性質が向上又は最適化された他の等価な組成物、及びタンパク質又はペプチド、例えば、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１（１２）：５５６−５６２，２００３に記載のものなどがあるが、これらに限定されない。
【００４０】
「薬剤的に許容できる」という句は当分野に認識されており、化合物、物質、組成物、剤形などの性質であって、その性質が、そのような化合物、物質、組成物、剤形などを、医学的に許容できる利益／リスク比を提供することにより、合理的な医学的判断の範囲内で、個体への投与又は個体の医薬治療での使用に好適にする性質を意味すると理解される。そのような合理的な医学的判断は、例えば、そのような化合物、物質、組成物、剤形などをヒト又は動物の組織に接触させることにより、過度の毒性、刺激、アレルギー反応或いは提供される利益と釣り合わない他の問題又は合併症があることを当然排除する。したがって、「薬剤的に許容できる」は、化合物、物質、組成物、剤形などが利用される効用の文脈において（例えば、ガン又は他の増殖性疾患の治療において）、生物学的、化学的、又は他の方法で、体の化学作用及び生理機能と不適合でなく、かつ前記化合物、物質、組成物、剤形などの性質又は効能を許容できないほど低下させない化合物、物質、組成物、剤形などを意味するように使用される。
【００４１】
本願での「薬剤的に許容できる塩」という用語は当分野に認識されており、親化合物がその酸又は塩基塩の形成により修飾されており、そのような塩が薬剤的に許容できる、親化合物の誘導体を意味するように理解される。薬剤的に許容できる塩は、通常、活性成分の望ましい生物活性と、その望ましくない又は毒性の作用との間のバランスを保つか、又は改善すらするであろう。
【００４２】
酸塩には、無機酸又は有機酸と、親化合物中のアミンなどの塩基性残基との反応から得られる塩がある。好適な酸塩の非限定的な例には、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、重炭酸、炭酸などの無機酸から誘導されるもの；及び、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、マロン酸、アスコルビン酸、クエン酸、グルタミン酸、安息香酸、タンニン酸、パルモン酸、アルギニン酸、フェニル酢酸、ポリグルタミン酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、イセチオン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、α−ケトグルタル酸、β−グリセロリン酸、及びポリガラクツロン酸などの有機酸により形成された酸塩がある。
【００４３】
本発明の種々の態様の特定の実施形態において、標題化合物の塩形態は塩酸塩である。そのような態様の代わりとなる実施形態において、標題化合物の塩形態はマレイン酸塩であり、標題化合物とマレイン酸を１：１の比で含むそのような塩の特定の実施形態を含む。
【００４４】
塩基塩には、アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩基と、カルボン酸、フェノール性残基など、親化合物の酸性残基との反応から得られる塩がある。好適なアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩基には、水酸化リチウム、水酸化カリウム及び水酸化ナトリウム、又は水酸化カルシウム及び水酸化マグネシウムがある。他の好適な塩基には、亜鉛、ビスマス、バリウム又はアルミニウムなどの金属から誘導されるものがあり、さらに、アンモニア及びＮ，Ｎ−ジベンジルエチレン−ジアミン、Ｄ−グルコサミン又はエチレンジアミンなどの有機アミンがある。さらに、好適な塩には、酸と塩基との組み合わせから誘導されるもの、例えば、タンニン酸亜鉛塩がある。
【００４５】
薬剤的に許容できる塩は、塩基性又は酸性部分を含む親化合物から、従来の化学法により合成することができる。一般的に、そのような塩は、化合物の遊離の酸又は塩基形態を、水中で、又は有機溶媒中で、又はその２つの混合物中で、化学量論量又はわずかに過剰の適当な塩基又は酸と反応させて調製できる。一般的に、エーテル、ＥｔＯＡｃ、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルなどの非水溶媒が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，ｐ．１４４５にあり、その開示が参照により本明細書に取り込まれる。
【００４６】
例えば、対象とする化合物の合成及び／又は精製に使用される、薬剤的に許容できない酸及び塩基も本願中に企図される。したがって、式（Ｉ）の化合物の全ての「塩」が、本発明の範囲内に包含される。
【００４７】
本願での「プロドラッグ」という用語は、プロドラッグを含む医薬組成物の投与時に１つ以上のステップで活性薬剤に変換される活性成分を意味する。一般的にいうと、プロドラッグは、個体又は個体から得られた細胞への投与後に、転化又は代謝を受けて、生理活性のある種、すなわち活性薬剤になる薬剤自体の誘導体である。転化は、生理学的環境中での加水分解など自動的なこともあるが、酵素に触媒されることもある。プロドラッグには、酸化され、還元され、アミノ化され、脱アミノ化され、ヒドロキシル化され、脱ヒドロキシル化され、加水分解され、エステル化され、アルキル化され、脱アルキル化され、アシル化され、脱アシル化され、リン酸化され、及び／又は脱リン酸化されて、最終的に活性薬剤になることのできる化合物がある。プロドラッグは、共有結合しているキャリアであって、そのようなキャリアが個体に活性成分として投与される時にインビボで活性薬剤を放出するキャリアでもよい。プロドラッグは、医薬の多くの望ましい特性（例えば、溶解度、バイオアベイラビリティ、製造、輸送、薬力学など）を向上させることができる。例えば、プロドラッグは、親薬剤がバイオアベイラブルでない場合ですら、経口投与によりバイオアベイラブルであろう。プロドラッグは、例えば、プロドラッグの投与の途中で又はインビボで、修飾が可逆に親化合物を生み出すように、親化合物に存在する官能基を修飾して調製することができる。
【００４８】
一般的にプロドラッグに捧げられたおびただしい科学文献の中で、以下の例が引用される：Ｇａｎｇｗａｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｄｒｕｇ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｄｅｓ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｐｒｏｐ．Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  Ａｎａｌｏｇｓ，［Ｓｙｍｐ．］Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ  １９７６，４０９−２１，（１９７７）；Ｎａｔｈｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，“Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｓ：ａ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ”，Ｄｒｕｇｓ  ４５（６）：８６６−９４，１９９３；Ｓｉｎｈａｂａｂｕ  ａｎｄ  Ｔｈａｋｋｅｒ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１９（２）：２４１−２７３，１９９６；Ｓｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ．Ｄｏ  ｔｈｅｙ  ｈａｖｅ  ａｄｖａｎｔａｇｅｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ？”，Ｄｒｕｇｓ  ２９（５）：４５５−７３，１９８５；Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．３９（１−３）：１１７−１５１，１９９９；Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  Ｈ．ｅｄ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｂ．Ｖ．（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）１９８５，Ｃｈａｐｔｅｒ  １：Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐｓ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｉｅｓ（Ｈａｎｓ  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）２２：４５−５６，１９８４；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）２９：１９−２８，１９８６；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２：２５０３−２５０７，１９８９；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ９３：１３７９３５ｙ（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ９５：１３８４９３ｆ（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ９５：１３８５９２ｎ（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １１０：５７６６４ｐ（Ａｌｍｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １１５：６４０２９ｓ（Ｂｕｕｒ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １１５：１８９５８２ｙ（Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １１７：１４３４７ｑ（Ｂｕｎｄｇａ���ｒｄ  ｅｔ  ａｌ．）；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １１７：５５７９Ｏｘ（Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）；ａｎｄ  Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １２３：１７５９３ｂ（Ｔｈｏｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）
【００４９】
「投与された」、「投与」又は化合物を「投与する」という用語は当分野に認識されており、疾病又は疾患を患っている、又は治療を必要とする個体の利益のために治療活性などの活性を発揮する機会を化合物が持つように、そのような個体にそのような化合物を接触させる、又は他の方法でそのような個体をそのような化合物に暴露させることにより、ヒトを含む個体に化合物を与えることを意味すると理解される。
【００５０】
「インビトロ」という用語は、人工的な状態で体外での生物学的存在、生物学的プロセス又は生物学的反応を意味する。例えば、インビトロで成長した細胞は、例えば、試験管、培養皿又はマイクロタイタープレート中などの、体外の環境中で成長した細胞であると理解されたい。
【００５１】
「治療上有効な量」という用語は当分野に認識されており、そのような量を投与する医師により求められている、細胞、組織、系又はヒトを含む個体の生物学的、生理学的、薬理学的、治療的、又は医学的応答を引き出すであろう、標題化合物の量を意味すると理解される。医学的な状況において、そのような望ましい結果には、例えば、増殖性疾患又は疾病、例えば、ガン又は腫瘍などの疾患又は疾病の影響／症状の減少、又は腫瘍細胞などの増殖性細胞の殺傷又はその成長の阻害がある。治療上有効な量は、以下で本願の「用量」のセクションに記載されるものを含む、標準的な手順により決定できる。
【００５２】
「治療」という用語は当分野に認識されており、病気の症状又は関連する疾患の治療介入を含む、細胞又は個体の疾患又は疾病など、そのような病気の１形態以上の治療介入を含むものとし、病気、疾患又は疾病の検知可能な、又は接近可能な兆候の相当な部分を、例えば手術によるなど事前治療介入を行った後に行われる術後療法をさらに含む。有益な治療が、疾病又はその症状の開始を防ぐことがあり、疾病或いはその１種以上の症状又は兆候を緩和することがあり、疾病或いはその１種以上の症状又は兆候の進展及び拡がりを遅らせ、又は阻害することがあり、疾病或いはその１種以上の症状又は兆候の退行を起こすことがあり、疾病を治癒することがあり、疾病の１種以上の症状又は兆候を除去することがあると理解される。「治療」は、「治癒」と同義語ではない。
【００５３】
「さらに治療される」、「さらに投与する」又は「さらに投与される」という用語は、異なる活性成分、治療薬又は化合物が、共に、連続して、交互に、又は断続的に投与されることを意味する。そのようなさらなる投与は、例えば、異なる時間に、異なる日に、或いは異なる投与様式又は経路により、時間的又は空間的に分離していることがある。
【００５４】
本発明の化合物
ある実施形態において、本発明の化合物、その塩形態（薬剤的に許容できる塩を含む）、又はその溶媒和物形態（水和物を含む）は単離される。ある実施形態において、本発明の化合物又はその薬剤的に許容できる塩は、例えば、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、及びある実施形態において少なくとも９９％から選択される純度を持つように精製される。本願での純度は、絶対純度も相対純度も意味することがある。絶対純度は、対象とする化合物を含む組成物の総量に対する、そのような化合物の量を意味する。相対純度は、組成物中に含まれる１種以上の他の物質、例えば副生成物などの１種以上の不純物、分解産物（例えば、代謝物、酸化又は加水分解の生成物など）及び／又は分解して本発明の化合物を生み出す化合物（例えば、前駆体又はプロドラッグ）の量に対する、そのような組成物中の対象とする化合物の量を意味する。そのような他の物質（複数可）は、例えば、対象とするそのような化合物の合成化学スキームの生成物中に存在することがある。そのため、絶対純度は、対象とする化合物を含む組成物の他の全成分に対するそのような化合物の量を意味するが、相対純度は、密接に関係している物質に対する純度を記載するために主に利用され、そのため、賦形剤、安定剤、又は共同投与のための他の薬剤など、無関係な化合物が添加されても影響を受けない。純度は、他の化合物に対するある化合物の重量、体積又はモル比に基づき評価できる。純度は、元素存在度、ＵＶ−可視分光法、ＨＰＬＣ、ＧＣ−ＭＳ、ＮＭＲ、質量分析、及び薄層クロマトグラフィーなどの種々の分析技術により測定できる。本発明の化合物の純度を測定するのに好ましい方法は、ＨＰＬＣ、ＧＣ−ＭＳ又はＮＭＲである。
【００５５】
ある実施形態において、本発明の化合物又はその薬剤的に許容できる塩は合成により製造される。「合成により製造される」という用語は、そのような化合物を得る目的での、当業者に周知の合成技術を利用する化合物の生成を意味する。
【００５６】
ある実施形態において、本発明の化合物、薬剤的に許容される塩を含むその塩形態、水和物を含むその溶媒和物形態は、アモルファス形態にある。
【００５７】
ある実施形態において、本発明の化合物、薬剤的に許容される塩を含むその塩形態、水和物を含むその溶媒和物形態は、結晶形態にある。
【００５８】
本発明のさらに他の態様は、標題化合物又はその塩形態のプロドラッグに関する。そのようなプロドラッグには、本発明の化合物のフェニル置換基のヒドロキシル基或いはピロリジノ基、ピリジン置換基又はピラゾロピリミドン環系中の任意の窒素原子が、任意の基に結合しており、細胞、組織、ヒトを含む個体にそのようなプロドラッグが投与されると、その任意の基が開裂して、それぞれ遊離のヒドロキシル基又は窒素原子を形成するような化合物を含む。そのようなプロドラッグの例には、本発明の化合物中のフェノール性ヒドロキシル基の酢酸エステル、ギ酸エステル及び安息香酸エステル誘導体、又は本発明の化合物のＮ−アシルオキシアルキルピリジニウム誘導体があるが、これらに限定されない（Ｄａｖｉｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１９９４；３７：４４２３−９）。
【００５９】
製剤、用量及び用途
本発明は、薬剤的に許容できる希釈剤、賦形剤又はキャリアと共に；標題化合物、薬剤的に許容できる塩などの標題化合物の塩形態、及びそのプロドラッグから選択される活性成分；を含む、治療上有効な量のそのような活性成分を含む医薬組成物などの医薬組成物をさらに提供する。
【００６０】
製剤
本発明の組成物は、細胞、又はガンなどの疾患を患っている個体などの、治療の必要がある個体を含むヒトなどの個体の治療のために処方及び投与できる。そのような処方及び投与は、そのような個体の体内の細胞、例えばそのような個体内に存在する腫瘍又はガンに含まれる細胞などの、活性薬剤の作用部位に活性薬剤を接触させる任意の適当な手段によってよい。それらは、個々の治療用活性成分としても、複数の治療用活性成分を組み合わせても、医薬に関連した使用に利用可能な従来の手段により投与できる。それらは、単独で投与できるが、一般的には、選択される投与経路及び標準的な医薬慣例に基づいて選択される薬剤的に許容できる希釈剤、賦形剤又はキャリアとともに投与される。
【００６１】
本発明により使用される医薬組成物は、１種以上の薬剤的に許容できる希釈剤、賦形剤又はキャリアを利用して従来の方法で処方できる。本発明の医薬組成物は、全身及び局所又は局部投与を含む、種々の投与経路用に処方できる。技術及び製剤は、一般にＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｅａｄｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見いだすことができる。以下に詳述されるように、本発明の医薬組成物は、以下のもの向けを含む、固体又は液体形態での投与用に特に処方できる：（１）経口投与、例えば、水薬（水性又は非水性の溶液又は懸濁液）、錠剤、カプセル、丸薬、散剤、顆粒剤、舌に塗るためのペースト；（２）例えば、無菌液又は懸濁液としての、例えば、皮下注射、筋肉注射、又は静脈注射による非経口投与；（３）例えば、皮膚に塗布されるクリーム、軟膏又はスプレーとしての局所塗布；又は（４）膣坐薬、クリーム又はフォームとして膣内又は直腸内投与。ある実施形態において、医薬製剤は非発熱性のことがあり、すなわち、患者の体温を実質的に上昇させない。
【００６２】
ある実施形態において、本発明の医薬組成物は、経口投与用に処方される。
【００６３】
他のある実施形態において、本発明の医薬組成物は、静脈内投与用に処方される。
【００６４】
ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどの、湿潤剤、乳化剤及び潤滑剤並びに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、着香剤及び芳香剤、防腐剤及び酸化防止剤も、組成物中に存在してよい。
【００６５】
薬剤的に許容できる酸化防止剤の例には以下のものがある：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、炭酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性酸化防止剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェノールなどの油溶性酸化防止剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート化剤。
【００６６】
本発明の製剤は、経口、経鼻、局所（口内及び舌下を含む）、直腸内、膣内及び／又は非経口投与のために好適なものを含む。製剤は、好都合には、単位剤形に表すことができ、医薬の分野に周知のどのような方法で調製してもよい。キャリア物質と組み合わせて単一剤形を形成できる活性成分の量は、治療される個体並びに特定の投与様式により変動するであろう。キャリア物質と組み合わせて単一剤形を形成できる活性成分の量は、一般に、治療効果を生み出す活性成分の量であろう。一般的に、１００パーセントのうち、この量は、活性成分の重量で約１％から約９９％の範囲、ある実施形態において、約５％から約７０重量％、特定のそのような実施形態において、約１０％から約３０重量％であろう。
【００６７】
これらの製剤又は組成物を調製する方法は、本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグを、キャリア、及び任意に１種以上の副成分と結びつける工程を含む。一般的に、製剤は、本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグを、液体キャリア又は微粉砕固体キャリア或いはその両方と、均質かつ完全に結びつけ、必要な場合生成物を成型することにより調製される。
【００６８】
全身投与には、筋肉注射、静脈注射、腹膜内注射及び皮下注射（それぞれ、ｉ．ｍ．，ｉ．ｖ．，ｉ．ｐ．及びｓ．ｃ．）を含む、注射が好ましい。本願での「全身投与」、「全身に投与された」、「末梢投与」及び「末梢に投与された」という句は、化合物、薬物又は他の物質が患者の循環系に入り、代謝及び他の同様なプロセスを受けるような、中枢神経系への直接の投与以外の化合物、薬物又は他の物質の投与を意味する。
【００６９】
注射には、本発明の医薬組成物は、溶液に、好ましくはハンクス液又はリンゲル液などの生理学的に適合する緩衝液中に処方することができる。さらに、医薬組成物を、固体形態に処方し、使用直前に再溶解又は懸濁してもよい。凍結乾燥形態も含まれる。
【００７０】
本発明の医薬組成物は、経口投与に好適なように処方してもよく、それぞれ所定量の本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグを活性成分として含む、カプセル、カシェ剤、サシェ、丸剤、錠剤、トローチ剤（スクロース及びアラビアゴム又はトラガカントゴムなどの味付きの基剤を利用）、散剤、顆粒剤の形態をとり、或いは水性又は非水性の液体中の溶液又は懸濁液として、或いは水中油滴型又は油中水滴型液体エマルションとして、或いはエリキシル剤又はシロップとして、或いは芳香錠（ｐａｓｔｉｌｌｅｓ）（ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアラビアゴムなどの不活性な基材を利用）及び／又はマウスウォッシュなどとしての形態をとってよい。本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグは、丸薬、舐剤、又はペーストとして投与してもよい。
【００７１】
経口（ｐ．ｏ．）投与用の固体剤形（カプセル、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）に本発明の医薬組成物を処方する際、活性成分としての本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩又はそのような化合物のプロドラッグは、クエン酸ナトリウム又はリン酸水素カルシウムなどの１種以上の薬剤的に許容できるキャリア、及び／或いは以下のいずれか、又はその組み合わせと混合される：（１）スターチ、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／又はケイ酸などのフィラー又は増量剤；（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアラビアゴムなどのバインダー；（３）グリセロールなどの保水剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカスターチ、アルギン酸、特定のケイ酸塩及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；（５）パラフィンなどの溶解遅延剤；（６）四級アンモニウム化合物などの吸着促進剤；（７）例えばセチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤；（８）カオリン及びベントナイト粘土などの吸着剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物などの潤滑剤；及び（１０）着色剤。カプセル、錠剤及び丸剤の場合、医薬組成物は緩衝剤も含んでよい。類似のタイプの固体組成物を、ラクトース又は乳糖、高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を利用する、軟及び硬ゼラチンカプセル中でフィラーとして利用することもできる。
【００７２】
ゼラチンカプセルは、活性成分として本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグ並びにラクトース、スターチ、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などの粉体キャリアを含んでよい。類似のキャリアを使用して圧縮錠剤を製造することもできる。錠剤及びカプセルのどちらも、数時間にわたる薬剤の連続放出を与える徐放性製品として製造できる。圧縮錠剤に糖衣をかけ、又はフィルムコーティングして、不快な味を遮断し錠剤を大気から保護することができ、或いは消化管内の選択的な崩壊のために腸溶性コーティングできる。類似のタイプの固体組成物を、軟及び硬ゼラチンカプセル中でフィラーとして利用することもできる。この点での好ましい物質には、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコールがある。そのような製剤の具体例は、軟ゼラチンカプセル内に収容される、オイル、例えば、オリーブオイル、ミグリオール、カプムル中の溶液又は懸濁液である。長期の分解を防ぐため、適宜酸化防止剤を加えてもよい。
【００７３】
錠剤は、任意に、１種以上の副成分と共に、圧縮又は成型により作ることができる。圧縮錠剤は、バインダー（例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム又は架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤又は分散剤を使用して調製してよい。湿製錠剤は、不活性な液体希釈剤により湿らせた粉体組成物の混合物を、好適な機械中で成型して製造できる。
【００７４】
錠剤並びに本発明の医薬組成物の他の固体剤形、糖衣錠、カプセル、丸剤及び顆粒剤などは、任意に刻み目をつけ、又は腸溶性コーティング及び医薬調剤分野に公知の他のコーティングなどコーティング及びシェルを付けて調製してもよい。それらは、例えば、望ましい放出プロファイルを与えるための種々の比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／又は微小球を利用し、活性薬剤の遅い放出又は制御された放出を与える製剤でもよい。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過により、或いは使用直前に滅菌水又は他の滅菌注射可能媒体に溶解できる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を混合することにより滅菌できる。これらの組成物は、任意に不透明化剤を含んでもよく、活性成分（複数可）のみを放出する組成物、又はある実施形態において、消化管のある部分で、任意に遅延して放出する組成物でもよい。使用できる包埋用組成物の例には、ポリマー物質及び蝋がある。活性成分は、適切な場合、上述の賦形剤の１種以上と共に、マイクロカプセル化形態であってもよい。
【００７５】
本発明の医薬組成物の経口投与用の液体剤形には、薬剤的に許容できるエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルがある。活性成分に加え、液体剤形は、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤など、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、オイル（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブオイル、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル並びにこれらの混合物など、当分野で通常使われている不活性な希釈剤を含んでよい。
【００７６】
不活性な希釈剤の他に、経口投与用の医薬組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、着香料、着色料、芳香剤、及び保存料などの補助薬を含んでよい。
【００７７】
本発明の医薬組成物の他に、懸濁液は、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天及びトラガカントゴム並びにこれらの混合物などを含んでよい。
【００７８】
口内投与用には、医薬組成物は従来の方法で処方された錠剤及びトローチ剤の形態をとってよい。
【００７９】
吸入による投与には、本発明の医薬組成物を、好適な高圧ガス、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適な気体を利用し、加圧パック又はネブライザーからエアロゾルスプレーで提示する形態で送達するのが便利である。加圧エアロゾルの場合には、投与単位は、計量された量を送達するバルブを備えて、決定できる。例えば、吸入器又は吹付け器に使用するためのゼラチンのカプセル及びカートリッジは、治療薬及びラクトース又はスターチなどの好適な粉末基材の粉体混合物を含んで処方できる。
【００８０】
医薬組成物は、注射、例えばボーラス注入又は持続注入などによる非経口投与用に処方できる。注射用の製剤は、単位剤形、例えば、防腐剤を加えられたアンプル又は多数回使用容器で表すことができる。医薬組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルションの形態をとることがあり、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤などの製剤化用薬剤を含むことがある。その代わりに、活性成分が、好適なビヒクル、例えば滅菌無発熱水で使用前に構成するための粉末形態であってもよい。
【００８１】
本願での「非経口投与」及び「非経口投与された」という句は、通常注射による、腸管及び局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄膜内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、蜘蛛膜下、髄腔内、及び胸骨内注射及び注入があるが、これらに限定されない。
【００８２】
非経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグを、１種以上の薬剤的に許容できる滅菌等張水溶液又は非水溶液、分散液、懸濁液、又はエマルション、或いは使用直前に滅菌注射可能溶液又は懸濁液中に戻すことができる滅菌粉体を組み合わせて含み、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、意図されるレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質、或いは懸濁剤又は増粘剤を含んでよい。
【００８３】
本発明の医薬組成物に利用できる好適な水性及び非水性キャリアの例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びこれらの好適な混合物、オリーブオイルなどの植物油、オレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルがある。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング物質の使用により、分散液の場合要求される粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により維持できる。
【００８４】
これらの医薬組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの補助薬を含んでもよい。微生物の作用の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの種々の抗菌剤及び抗真菌剤の含有により確実になる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を医薬組成物中に含むことも望ましいであろう。さらに、注射可能な医薬形態の吸収の延長は、モノステアリン酸アルミニウム及び／又はゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤の含有によりもたらされることがある。
【００８５】
先に記載した製剤に加え、医薬組成物は、持続性製剤としても処方できる。そのような持続性製剤は、埋め込み（例えば、皮下又は筋肉内）又は筋肉内注射により投与できる。したがって、例えば、医薬組成物は、好適なポリマー性又は疎水性物質（例えば、許容できるオイル中のエマルションとして）又はイオン交換樹脂とともに、或いは難溶性誘導体として、例えば難溶性塩として処方してよい。
【００８６】
全身投与は、経粘膜又は経皮手段によることができる。経粘膜又は経皮投与には、浸透すべきバリアに適切な浸透剤が製剤中に使用される。そのような浸透剤は一般的に当分野に公知であり、例えば、経粘膜投与には、胆汁酸塩及びフシジン酸塩誘導体がある。さらに、洗剤を用いて浸透を容易にしてもよい。経粘膜投与は、点鼻薬によっても、坐薬を使用してもよい。局所投与には、本発明の医薬組成物は、当分野に一般的に知られる軟膏、膏薬、ゲル、又はクリームに処方される。
【００８７】
いくつかの場合において、本発明の化合物の治療効果を長くするために、皮下又は筋肉内注射からの、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグの吸収を遅くすることが望ましい。これは、水溶性の低い結晶性又はアモルファス物質の液体懸濁液の使用により達成できる。そうすれば、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグの吸収速度は、その溶解速度に依存し、次に溶解速度は結晶の大きさ及び結晶型に依存するであろう。その代わりには、非経口投与阻害剤形態の遅延した吸収が、油性ビヒクル中への、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグの溶解又は懸濁により達成される。
【００８８】
本発明の医薬組成物は、坐薬として直腸又は膣内投与用に処方できるが、これは、室温では固体だが体温では液体であり、そのため直腸又は膣内で溶けて活性成分を放出する、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、坐薬用蝋又はサリチラートを含む１種以上の好適な非刺激性賦形剤又はキャリアと、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグを混合することにより調製できる。
【００８９】
膣内投与に好適な本発明の医薬組成物の製剤には、当分野に好適であると知られているキャリアを含む、膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、又はスプレー製剤がある。
【００９０】
本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグの局所又は経皮投与のための剤形には、散剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、及び吸入剤がある。そのような化合物は、薬剤的に許容できるキャリアと、保存料、緩衝剤、又は必要であろう他の補助薬と、滅菌条件下で混合することができる。
【００９１】
軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグの他に、動物性又は植物性脂肪、油、蝋、パラフィン、スターチ、トラガカントゴム、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、又はこれらの混合物などの賦形剤を含んでよい。
【００９２】
散剤は、本発明の化合物又はそのような化合物のプロドラッグの他に、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミドパウダー、又はこれらの物質の混合物などの賦形剤を含むことがある。
【００９３】
経皮パッチは、本発明の化合物の体への制御された送達を与える追加の利点を有する。そのような剤形は、本発明の阻害剤を適切な媒体に溶解又は分散して作ることができる。吸収促進剤を使用して、皮膚を通る薬剤の流れを増すことができる。そのような流れの速度は、速度制御膜の提供によっても、本発明の化合物のポリマーマトリックス又はゲル中への分散によっても、制御できる。
【００９４】
眼用製剤、眼軟膏、散剤、溶液なども、本発明での使用に企図される。
【００９５】
医薬組成物は、望まれる場合、活性成分を含む１つ以上の単位剤形を含むパック又はディスペンサーデバイスで表すこともできる。パックは、例えば、ブリスターパックなどの、金属又はプラスティックホイルを含んでよい。パック又はディスペンサーデバイスには、投与のための説明書を付けてよい。他の実施形態において、パック又はディスペンサーは、外側のカートンにさらに包装されることがある。
【００９６】
本発明の医薬組成物は、徐放性及び／又は時限放出製剤としても処方できる。そのような徐放性及び／又は時限放出製剤は、以下に記載のものなど当業者に周知の徐放手段又は送達デバイスにより作ることができる：米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号；同第４，７１０，３８４号；同第５，６７４，５３３号；同第５，０５９，５９５号；同第５，５９１，７６７号；同第５，１２０，５４８号；同第５，０７３，５４３号；同第５，６３９，４７６号；同第５，３５４，５５６号；及び同第５，７３３，５６６号、それぞれ参照により本願に組み込まれている。本発明の医薬組成物を使用して、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、等張系、多層コーティング、微小粒子、リポソーム、微小球、又はそれらの組み合わせなどを利用して、１種以上の活性成分のゆっくりした放出又は徐放を与え、種々の比率で望ましい放出プロファイルを与えることができる。本願記載のものを含む、当業者に公知の好適な徐放性製剤は、本発明の医薬組成物との利用のために容易に選択できる。例えば、徐放用に適合された、錠剤、カプセル、ジェルキャップ、カプレット、散剤などがあるが、これらに限定されない、経口投与に好適な単一の単位剤形が本発明により包含される。
【００９７】
注射可能な持続性形態は、ポリラクチド−ポリグリコライドなどの生分解性ポリマー中の、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグのマイクロカプセル化マトリックスを形成して作ることができる。薬剤とポリマーとの比及び利用される特定のポリマーの性質により、薬剤放出の速度が制御できる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）がある。持続性注射可能製剤は、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグを、リポソーム又は身体組織と適合性のあるマイクロエマルションに閉じ込めても調製できる。
【００９８】
用量
例えば、ガン又は腫瘍などの症状の改善をもたらすに十分で、或いは、医者、獣医、薬剤師又は看護師などの医療専門家が合理的にそのように期待する、化合物の治療上有効な量であろう投与すべき用量は、特定の活性成分の薬力学的特性並びにその投与の様式及び経路；レシピエントの年齢、性別、健康及び体重：症状の性質及び程度；同時に行っている治療の種類、治療の頻度及び望まれる効果などの公知の因子によりもちろん変わるであろう。
【００９９】
単独で投与された場合に治療上有効であろうよりも低い投与量の本発明の化合物、或いはその塩又はプロドラッグを含む用量も、標題化合物が抗ガン剤など他の治療上活性な薬剤と組み合わせて使用されている場合などに、そのような組み合わせが治療上有効であるならば、利用されることがある。
【０１００】
本発明の医薬組成物の毒性及び治療効力は、例えばＬＤ５０（試験される集団の５０％に致死的な投与量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な投与量）を測定するための、細胞培養又は実験動物における標準的な製剤手順により決定できる。毒性と治療効力の間の投与量の比は治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０で表される。有利な治療指数を示す医薬組成物は多くの状況で有用である。特定の状況で、冒されていない細胞の潜在的な損傷を最小限にして副作用を低減又は局在化するために、そのような医薬組成物の活性薬剤を、冒されている組織の部位に標的として向けされる送達系を設計するよう注意が払われる場合など、衰弱させるような、又は毒性の副作用を示すような医薬組成物でさえ使用されることもある。
【０１０１】
細胞培養アッセイ及び動物実験から得られるデータを、ヒトに使用するための用量の範囲の公式化に使用できる。ある実施形態において、用量は、毒性がほとんど、又は全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、利用される剤形及び利用される投与経路によりこの範囲内で変わることがある。本発明の方法に使用される本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグでは、治療上有効な投与量は、最初は細胞培養アッセイから推定できる。投与量は、細胞培養で決定するＩＣ５０（すなわち、最大半量の症状の阻害又は生化学的活性の阻害を達成する、被験活性成分の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成する動物モデルにおいて公式化することができる。そのような情報を利用して、ヒトでの有用な投与量をより正確に決めることができる。例えば、高速液体クロマトグラフィーにより血漿中の濃度を測定できる。
【０１０２】
活性成分の適切な投薬は、当業者、例えば医師に公知のいくつかの因子によることが理解される。活性成分の投与量（複数可）は、例えば、個体の正体、体格、及び状態、並びに処理されるサンプルにより、さらには、化合物が投与される経路及び、当てはまる場合、疾病が起こり、症状又は影響が媒介される細胞、核酸、又はポリペプチドなど治療標的の標的に治療薬がもたらすことを医師が望む効果により、変わるであろう。
【０１０３】
代表的な投与量は、被験者又はサンプル重量のキログラム当たり、ミリグラム又はマイクログラム量の本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグであり、例えば、キログラム当たり１マイクログラムからキログラム当たり５００ミリグラム、キログラム当たり１００マイクログラムからキログラム当たり５０ミリグラム、或いはキログラム当たり１ミリグラムからキログラム当たり５ミリグラムである。
【０１０４】
当業者は、投与量が体表面積により計算できることを認識するであろう。７０ｋｇの人の体表面積は、おおよそ１．８平方メートルであり、投与量は、被験者又はサンプルの体表面積当たり、ミリグラム又はマイクログラム量の本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグで表すことができ、例えば、平方メートルあたり５０マイクログラムから平方メートルあたり１５グラム、平方メートルあたり５ミリグラムから平方メートルあたり１．５グラム、平方メートルあたり５０ミリグラムから平方メートルあたり１５０ミリグラムである。
【０１０５】
用途
本発明は、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのような化合物のプロドラッグを、療法に関して、さらに提供する。
【０１０６】
ある実施形態において、前記療法は、ガン、或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体の治療である。ある実施形態において、前記治療は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害によるなど、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性に関連する、ガンなどの疾患又は疾病を患っている個体の治療である。
【０１０７】
したがって、本発明は、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を有し又は患っている、ヒトを含む、哺乳動物などの個体の治療方法であって、前記個体に、治療上有効な量などの、ある量の標題化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグを投与する工程、或いは、上述の本発明の医薬組成物を投与する工程を含む方法をさらに提供する。ある実施形態において、前記個体はヒトである。ある実施形態において、前記治療は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害など、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害により治療できるガンの治療である。
【０１０８】
さらなる態様において、本発明は、家庭内の哺乳類、齧歯類及びヒトを含む哺乳動物などの疾病を患っている個体を治療する方法であって、前記個体を、治療上有効な量を含む、ある量の標題化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグに暴露又は接触させる工程を含む方法を提供する。ある実施形態において、前記疾病は、ガン、或いは他の増殖性疾患又は疾病である。ある実施形態において、前記個体はヒトである。さらに他の実施形態において、腫瘍又はガンに含まれる腫瘍細胞（例えば個体中の悪性細胞である腫瘍細胞）を含む、前記ガン、或いは前記他の増殖性疾患又は疾病に関連する細胞は、標題化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグに暴露される。ある実施形態において、前記化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグは、前記細胞が存在する個体に投与される。ある実施形態において、前記治療は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害など、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害により治療できるガンの治療である。
【０１０９】
さらなる態様において、本発明は、細胞を殺傷或いはその増殖又は成長を阻害する方法であって、細胞を、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグに接触させる工程を含む方法を提供する。一実施形態において、細胞は、そのような薬剤にインビトロで接触するが、代わりの実施形態において、細胞は個体中に存在する。特定の実施形態において、前記細胞はガン細胞、例えば、腫瘍細胞系の細胞或いは腫瘍又はガンに含まれる細胞であり、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害など、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害により治療できる腫瘍からのガン細胞を含む。
【０１１０】
本発明のさらに他の態様は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害など、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害により治療できるガンを含む、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病の治療又は予防のための薬剤の調製のための上述の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグの使用に関する。さらに、本発明は、上述の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグから選択される活性成分を、薬剤的に許容できる希釈剤、賦形剤又はキャリアとともに含む医薬組成物であって、そのような医薬組成物が、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害など、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害により治療できるガンを含む、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病などの疾患又は疾病を患っている個体への投与用である、医薬組成物に関する。
【０１１１】
さらに他の態様において、本発明は、腫瘍細胞を含む細胞を、治療上有効な量などのある量の標題化合物と接触させる工程を含む方法に関する。これらの方法は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９から選択されるキナーゼなど、本願に開示される１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害を含む。そのような態様の特定の実施形態において、阻害されるキナーゼはＣＤＫ９である。ある実施形態において、細胞はインビトロで標題化合物と接触するが、代わりの実施形態において、細胞は、ヒトを含む哺乳動物などの個体内に存在する腫瘍又はガンに含まれる。そのような個体は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７及び／又はＣＤＫ９の活性の阻害など、１種以上のサイクリン依存性キナーゼの活性の阻害により治療できるガン又は疾患を含む、増殖性疾患又は疾病を患っていることがある。
【０１１２】
このセクションで言及される方法の特定の実施形態において、そのような疾患又は疾病は、ＣＤＫ９の活性に関係している。他の実施形態において、そのような疾患又は疾病は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２及び／又はＣＤＫ４の活性に関係している。ある実施形態において、前記治療は、細胞中で、ＲＮＡＰＩＩ、Ｒｂ及びＥｇ−５から選択されるＣＤＫ基質のリン酸化の阻害につながる。ある実施形態において、ＲＮＡＰＩＩリン酸化の前記阻害は、Ｒｂ及び／又はＥｇ−５のリン酸化の前記阻害より、約２倍、約５倍、約１０倍、約５０倍及び１００倍超から選択される倍数で、より著しい。
【０１１３】
本願に企図される本発明のある治療方法において、腫瘍は、血液、骨髄、又はリンパ系以外の体組織のガンである固形腫瘍であることがある。他の実施形態において、腫瘍は、白血病及びリンパ腫などの血液腫瘍であることもある。白血病は、悪性に変化した白血球の増殖を特徴とする悪性の疾病の総称である。リンパ組織から起こる疾病はリンパ腫と呼ばれる。
【０１１４】
前記腫瘍は、肝臓ガン、胃ガン、結腸ガン、乳ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、皮膚ガン、腎ガン、骨ガン、甲状腺癌、扁平上皮細胞ガンを含む皮膚ガン、食道ガン、腎臓ガン、膀胱ガン、胆嚢ガン、子宮頸ガン、卵巣ガン、肺ガン（気道ガン、小細胞及び非小細胞肺ガンを含む）、胃ガン、及び頭頸部ガンから選択されるであろう。
【０１１５】
血液腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ性白血病、急性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性顆粒球性白血病（ＣＧＬ）、慢性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、通常型急性リンパ芽球性白血病、好酸球性白血病、赤白血病、節外性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、単球性白血病、前リンパ性白血病などの白血病であろう。
【０１１６】
血液腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、高悪性度リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、低悪性度リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、本態性血小板血症、ヘアリーセルリンパ腫、髄外骨髄腫、顆粒球性肉腫などのリンパ腫であろう。
【０１１７】
血液腫瘍は、急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び前骨髄球性白血病などの骨髄系統の腫瘍でもあろう。
【０１１８】
腫瘍は、繊維肉腫及び横紋筋肉腫など間葉起源であるかもしれない。さらに、腫瘍は、星状細胞種、神経芽細胞種、グリオーマ及びシュワン腫などの、中枢及び末梢神経系の腫瘍であることもある。腫瘍は、メラノーマ、セミノーマ、テトラカルシノーマ、骨肉腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、甲状腺濾胞性ガン、及びカポジ肉腫などの他の腫瘍であることもある。
【０１１９】
他の抗ガン剤又は抗増殖剤による治療に耐性があり、又は抗療性がある腫瘍も、本発明の方法及び医薬組成物による治療から利益を得ることがある。
【０１２０】
本願開示の化合物は、腫瘍の血管形成及び転移の阻害にも有用であろう。
【０１２１】
本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグは、放射線療法或いは他の抗ガン剤、抗増殖剤、細胞増殖抑制剤又は細胞傷害剤などの公知の抗ガン治療と組み合わせて（共に、又は連続して投与）も有用であろう。本発明の化合物と組み合わせて使用できる他の抗ガン剤及び抗増殖剤には、本願記載のものがある。併用治療において、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグは、本願開示の任意の他の抗ガン剤及び抗増殖剤とともにさらに投与することができる。
【０１２２】
固定された投与量として処方される場合、そのような組み合わせ製品は、本願に記載される用量範囲内の本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグ及び認可される用量範囲内の他の薬剤的に活性な薬剤又は治療を利用する。薬剤組み合わせの相乗効果及び投与の順序による活性に対する影響はこの分野に公知であり（例えば、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．，１０８：２８９７，１９９５；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：３３７５，１９９７を参照されたい）、用量及び送達の順序の最適化は、本発明の化合物を利用する分野の医師の技量の範囲内であろう。本願に記載される化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグは、組み合わせ製剤が不適切な場合、他の抗ガン剤及び抗増殖剤と連続して投与してよい。しかし、不利となる兆候がなければ、本発明は投与の順序に限定されない。その場合、本願に記載の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグは、他の抗ガン剤及び抗増殖剤の投与の前でも、それと同時でも、その後でも投与できる。例えば、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤フラボピリドールの細胞傷害活性が、抗ガン剤との投与の順序に影響されることが公知である（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７，３３７５，１９９７）。
【０１２３】
本発明のさらなる態様
本発明の他の態様は、医薬品包装を提供するが、前記包装は、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグ或いはそのような化合物、薬剤的に許容できる塩、又はプロドラッグを含む医薬組成物を含む。ある実施形態において、包装は、前記医薬組成物が、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体など、ヒトを含む、投与の必要のある個体への投与に使用してよいことを示す説明書を含む。他のある実施形態において、医薬品包装は、抗ガン剤又は抗増殖剤などの他の医薬成分とともに処方された、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグを含む。この場合、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグ及び他の医薬成分は、共に又は別々に、個別の用量で処方されていてよい。
【０１２４】
本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグと共に、又は別々に処方されていてよい他の医薬成分には、上述のものなど他の抗ガン剤及び抗増殖剤があるが、これらに限定されない。さらなる実施形態において、医薬品包装は、そのような活性成分を、その必要のある個体に投与するための説明書を含む。さらに他の態様において、本発明は、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体へ医薬組成物を投与するための医薬品包装を提供するが、前記包装は、少なくとも本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグを含む。さらなる実施形態において、医薬品包装は、ガン或いは他の増殖性疾患又は疾病を患っている個体へそのような医薬組成物を投与するための説明書を含む。
【０１２５】
本願での「医薬品包装」及び「医薬品パック」という用語は、個体の治療のための薬剤の個別の投与量を貯蔵し分配するための包装システムを意味する。好ましくは、医薬品包装は、治療期間に適当な、又は個体がレジメンを守るのを容易にするような量で十分な１日あたりの用量単位を含む。ある実施形態において、医薬品パックは、活性成分、例えば本発明の化合物を含む１つ以上の容器を含む。そのような容器は、瓶、バイアル、シリンジ、又はカプセルなどの容器でよく、或いは丸剤などの単位剤形でもよい。活性成分は、薬剤的に許容できる形態で容器に提供されても、例えば凍結乾燥した粉末として提供されてもよい。さらなる実施形態において、医薬品パックは、投与のためにそのような活性成分を含む医薬組成物を調製する溶媒を含むことがある。ある実施形態において、そのような活性成分を含む医薬組成物を、シリンジなどの送達装置中にすでに備えることができ、或いは好適な送達装置がパックに含まれてもよい。医薬品包装は、丸剤、液体、ゲル、錠剤、糖衣錠、又は他の任意の好適な形態の医薬製剤を含んでよい。包装は、１日当たりの医薬品用量単位をいくつ含んでもよい。包装はどのような形状でもよく、単位剤形は、丸、三角、台形、六角形、又は他のパターンなど、どのようなパターンに配置してもよい。１つ以上の投与量又はサブユニットを、カラーコード、ラベル、印刷、エンボス加工、切れ目入れ、又はパターンを利用することなど、そのような投与量又はサブユニットを明らかにすることにより、例えば、医師、薬剤師又は患者の助けとなるように示してもよい。医薬品包装はまた、投与される個体、医師、薬剤師、又はそのような個体に医薬組成物を投与する行動に関連する他の人のための説明書を含んでもよい。
【０１２６】
いくつかの実施形態は、本願に開示の化合物を含む、２種以上の活性成分の投与を含む。そのような投与は、同時にでも、連続にでも起こることがある。活性成分は、１回の投与が全成分を送達するように、一緒に処方されてよい。その代わりに、複数の活性成分を別々に処方してもよい。医薬品包装は、本発明の化合物及び他の医薬成分を単一の製剤に含むこともあり、すなわちそれらは一緒に処方されるが、或いは本発明の化合物及び他の医薬成分を個別の製剤に含んでもよく、すなわちそれらは別々に処方される。各製剤は、本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、そのプロドラッグ及び他の医薬成分（複数可）を個別の用量（ほぼ等しい量又は等しくない量）で含むことがある。本発明の化合物、その薬剤的に許容できる塩、又はそのプロドラッグ及び他の医薬成分（複数可）の投与は、典型的には、そのような組み合わせの場合に治療上有効な量である濃度を生じるようなものである。
【０１２７】
本願での「説明書」という用語は、製品ラベル、包装内印刷物及び／或いはキット又は包装された医薬品のアセンブリ、調製又は使用に関する関連資料又は方法論を記載する文書又は他の情報を意味する。これらの資料には、以下のものの任意の組み合わせがある：背景情報、貯蔵、調製又は投与のために従うべき工程又は手順、成分のリスト、使用上の注意、推薦される用量、可能性のある副作用に関する注意、活性成分（複数可）の投与のための説明書、過量服用又は無効の場合の説明書、技術サポート、及び他の関連文書。説明書は、包装ラベル又は包装内印刷物など、印刷された形態で供給することができる。包装された医薬又は医薬組成物のための説明書は、例えば、包装内印刷物など、配送用段ボール又は仕上げられた包装中に挿入でき、そのような文章は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）など当局による承認を必要とすることがある。その代わりに、又は補完的に、説明書は、電子形態で保管することもでき、例えば、コンピュータ読取可能な記憶装置、集中型データベース、ハードディスク、フロッピーディスク、磁気テープなどの磁気媒体などのコンピュータ読取可能な記憶媒体；コンパクトディスク、ＣＤ−ＲＯＭ及びホログラフィ装置などの光学媒体；フロプティカルディスクなどの光磁気媒体；特定用途向けＩＣ（ＡＳＩＣ）、プログラマブルロジックデバイス（ＰＬＤ）及びＲＯＭ（読出し専用メモリ）及びＲＡＭ（ランダムアクセスメモリ）などのプログラムコードを記憶し実行するように特別に構成されているハードウェアデバイスがある。説明書は、より詳細な説明書がダウンロードできるインターネットウェブサイト又は記録された説明のウェブアドレスを含んでよい。説明書は、１つ又は複数の文書或いは将来の改訂を含むことがある。
【０１２８】
本発明は、請求項１の化合物又は任意にその塩を合成する方法であって、式（ＩＩ）により表される構造を有する化合物を、式（ＩＩＩ）により表される構造を有する化合物と反応させる工程であって、
2010528088.tif 000004
上式において、Ｘが、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、−Ｏ−アシル及びハロゲンから選択される工程；及び得られた化合物を酸と反応させて酸塩を作る工程を含む方法に関する。
【０１２９】
特定の実施形態において、Ｘは−ＯＥｔである。
【０１３０】
本発明は、本発明の薬剤的に許容できる塩を合成する方法であって、本発明の化合物を酸と反応させる工程を含む方法にさらに関する。特定の実施形態において、酸は塩化水素酸である。他の特定の実施形態において、酸はマレイン酸である。
【実施例】
【０１３１】
標題化合物は、実施例Ａに記載のとおり発明され、実施例Ｂ．１からＢ．８に示すとおり合成可能である。異種移植腫瘍モデルにおける本発明の化合物の驚くべき抗増殖活性が、実施例Ｃ．１からＣ．５で示される。実施例Ｄは、標題化合物による細胞中のＲＮＡＰＩＩリン酸化の強力な阻害を示す。
【０１３２】
実施例Ａ  本発明の化合物の同定
国際公開第０３／０３３４９９号、国際公開第２００４／０９２１３９号；及び国際公開第２００５／０６３７６５号は、他の化合物の中でも１−（２，６−ジクロロフェニル）−６−（３−ヒドロキシ−４−ピロリジノメチル−フェニル）メチル−３−イソプロピル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（化合物Ｐ、上記参照）を含む、いくつかの特定の１−フェニル−３−イソプロピル−６−アリールメチル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンを開示している。
【０１３３】
発明者らは、さらなる開発のために好適な性質を持つ新規化合物を見いだすＣＤＫ阻害剤研究プログラムを確立した。そのプログラムの中で、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンのかなりの数の新規誘導体を合成して調査したが、それは表１に示される置換パターンの修飾に基づいていた。
表１：誘導戦略
2010528088.tif 000005
【０１３４】
合計で、１７０を超えるそのような異なる化合物を試験した。しかし、１つの場合を除き、得られた化合物は、望ましいパラメータ又はパラメータの組み合わせを示さず、表２に示される性質の１種以上に関して不合格であったので、ＣＤＫ阻害剤研究プログラムの下でのそのような化合物の研究を中止した。
表２：誘導結果
2010528088.tif 000006
【０１３５】
しかし、驚くべきことに、標題化合物、化合物Ｉは、ある決定的な性質に著しく向上したパラメータを示し、以下のとおり、最も構造の近い従来技術の化合物、化合物Ｐに比べ、他の重要な性質に望ましいパラメータを維持すらした：
驚くべきことに、化合物Ｉは、２種の異なる投与レジメンを利用するＡ２７８０異種移植モデルを含む種々の異種移植腫瘍モデルにおいて、化合物Ｐに比べ著しく強力な活性（実施例Ｃ参照）；
薬理学関連の向上したＡＤＭＥＴパラメータの透過性（化合物ＩではｐＨ＝７．４のＰＡＭＰＡアッセイにおいて、化合物Ｐの約５７％に比べ、約７０％の透過性）；
薬理学関連の向上したＡＤＭＥＴパラメータの溶解度（ｐＨ７．４で、化合物Ｐの約２１０μＭに比べ、化合物Ｉでは約３９０μＭ）；
とりわけ細胞系Ａ２７８０、ＨＣＴ−１１６、ＨＴ−２９、ＨｅｐＧ２、ＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ、０ＶＣＡＲ３、Ｈ４６０、ＩＭＲ−９０、Ｔ９８Ｇ、Ａ５４９を含む、１組のガンモデル細胞系において、著しい向上した増殖阻害、化合物ＩのＩＣ５０値は約８００ｎＭから約１０ｎＭ（化合物Ｐの、約１．６μＭから約１６ｎＭの範囲のＩＣ５０値と比較）；
ＣＤＫ１、ＣＤＫ２，ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９並びにＣＤＫ３及びＣＤＫ５に対する、インビトロの生化学的キナーゼ阻害アッセイにおける、著しい釣り合いのとれた阻害活性、化合物Ｐと同等な、化合物Ｉでの約１００ｎＭから約２ｎＭの範囲のＩＣ５０値（あるＣＤＫでは、さらにより強力）；
ＣＤＫに対する高い特異性とともに、非ＣＤＫキナーゼのパネルに対して低い阻害活性；
を示した。
【０１３６】
キナーゼ阻害剤の性質の測定に利用されるアッセイを、当業者に周知の標準的な手順に従い実施した。例えば、ＣＤＫに対する阻害活性測定アッセイ又は細胞内アッセイは、国際公開第００／２１８９６２号、国際公開第２００５／０２６１２９号及び国際公開第２００５／０６３７６５号に記載されている。ｐＨ７．４での溶解度アッセイは、基本的に、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ中のＡｖｄｅｅｆ，Ａ．による記載；Ｔｅｓｔａ，Ｂ．；ｖａｎ  ｄｅ  Ｗａｔｅｒｂｅｅｍｄ，Ｈ．；Ｆｏｌｋｅｒｓ，Ｇ．；Ｇｕｙ，Ｒ．Ｅｄｓ．；Ｗｉｌｅｙ−ＶＨＣ：Ｚｕｒｉｃｈ，２００１；ｐｐ  ３０５−３２６に記載のとおり実施した。ｐＨ７．４でのＰＡＭＰＡ透過性アッセイは、基本的に、Ｋａｎｓｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１：１００７−１０，１９９８に記載のとおり実施した。
【０１３７】
実施例Ｂ
６−（３−ヒドロキシ−４−（ピロリジノメチル）フェニルメチル）−３−イソプロピル−１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの合成（実施例Ｂ．１からＢ．７）
実施例Ｂ．１からＢ．８は、１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−６−（３−ヒドロキシ−４−（ピロリジノメチル）フェニルメチル）−３−イソプロピル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（化合物Ｉ）及びその塩を合成する工程を詳細に示す。当業者は、他の合成経路も利用できることを理解するであろう。特に、他の合成経路は、実際に、本発明のある態様に適用されることがある。当業者は、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｂ．Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｊｅｒｒｙ  Ｍａｒｃｈ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２０００），Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃａｍｉｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ａｃａｄｅｍｉａ  Ｐｒｅｓｓ，２００３）及びＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｔｈｅｏｓｏｒａ  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，１９９９）などの一般的な教科書を参照する。
【０１３８】
実施例Ｂ．１
（１−ヒドロキシ−２−メチルプロピリデン）メタン−１，１−ジカルボニトリルの合成
2010528088.tif 000007
ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のマロノニトリル（１９．８ｇ、３００ミリモル）の溶液を、ＴＨＦ（３７５ｍＬ）中のＮａＨ（油中６０％分散液、２４ｇ、６００ミリモル）の懸濁液に０℃で滴下した。次いで反応を室温に温め、１時間攪拌した。次いで、懸濁液を０℃に冷却し、ＴＨＦ（１２５ｍＬ）中のイソブチリルクロライド（３１．４ｍＬ、２９９．７ミリモル）の溶液を滴下して処理した。添加は、内部温度が１０℃を超えないように制御した。添加が終了すると、反応を室温に温め、２４時間攪拌した。次いで、反応をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で停止し、減圧下で濃縮した。次いで、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と５％ＨＣＬ水溶液（３００ｍＬ）の間で分配した。水相をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出し、あわせた有機層を塩水（５００ｍＬ）で洗浄し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、アセトニトリル（３００ｍＬ）とヘキサン（１００ｍＬ）の間で分配した。アセトニトリル層をヘキサン（１００ｍＬ）で洗浄し、蒸発させると、所望の生成物（３８ｇ、収率９３％）が得られた。
【０１３９】
実施例Ｂ．２
（１−クロロ−２−メチルプロピリデン）メタン−１，１−ジカルボニトリルの合成
2010528088.tif 000008
ＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）中の（１−ヒドロキシ−２−メチルプロピリデン）メタン−１，１−ジカルボニトリル（３８ｇ、２７９ミリモル）の溶液に、五塩化リン（６３ｇ、３０２ミリモル）を加えた。次いで、反応を室温で１６時間攪拌した。次いで、反応を氷（５００ｇ）上に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（７５０ｍＬ）とＨ２Ｏ（５００ｍＬ）の間で分配した。水相を、再びＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）で抽出し、あわせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（７５０ｍＬ）水溶液及び塩水（７５０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮すると、所望の塩化物（３５．６ｇ、収率８１％）が得られた。
【０１４０】
実施例Ｂ．３
５−アミノ−１−（３，５−ジクロロピリジル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルの合成
2010528088.tif 000009
ＴＨＦ（８７５ｍＬ）中の（１−クロロ−２−メチルプロピリデン）メタン−１，１−ジカルボニトリル（３５．６ｇ、２３０ミリモル）の溶液を、３，５−ジクロロピリジルヒドラジン（４０．９ｇ、２３０ミリモル）により、次いでトリエチルアミン（２３ｇ、２３０ミリモル）により処理した。次いで、反応を還流して１８時間加熱した。次いで、反応を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）と１ＭのＮａＯＨ水溶液（５００ｍＬ）の間で分配した。水相をＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を、１０％クエン酸（５００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮すると、所望の生成物（５６ｇ、収率８２％）が得られた。
【０１４１】
実施例Ｂ．４
５−アミノ−１−（３，５−ジクロロピリジル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドの合成
2010528088.tif 000010
５−アミノ−１−（３，５−ジクロロピリジル）−３−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５６ｇ、１８９ミリモル）を濃Ｈ２ＳＯ４（１６０ｍＬ）に溶解し、室温で１６時間攪拌した。次いで、反応を３ＭのＮａＯＨ水溶液（２Ｌ）に０℃で注いだ。次いで、得られた固体を濾過し、Ｈ２Ｏ（１Ｌ）で洗浄した。次いで、生成物を真空下で乾燥すると、所望のアミド（４９ｇ、収率８２％）が得られた。
【０１４２】
実施例Ｂ．５
３−ヒドロキシフェニル酢酸エチルエステルの合成
2010528088.tif 000011
濃Ｈ２ＳＯ４（２ｍＬ、３６ミリモル）を、ＥｔＯＨ（３４０ｍＬ）中の３−ヒドロキシフェニル酢酸（２５．９ｇ、１７０ミリモル）の懸濁液に加えた。反応混合物を還流下で４時間加熱し、次いで室温に冷却した。揮発物を真空で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に懸濁した。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１×１５０ｍＬ）、塩水（１×１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（無水ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮すると、無色の油としてエステルが得られた（２９．３ｇ、収率９６％）。
【０１４３】
実施例Ｂ．６
３−ヒドロキシ−４−（ピロリジノメチル）フェニル酢酸エチルエステルの合成
2010528088.tif 000012
ホルムアルデヒド水溶液（３７重量％、２．４７ｇ、２８ミリモル）を、ｉ−ＰｒＯＨ（５０ｍＬ）中のエステル（４．５ｇ、２５ミリモル）及びピロリジン（３．５６ｇ、５０ミリモル）の溶液に加えた。反応混合物を還流下で一晩加熱した。室温に冷却した後、揮発物を真空で除去した。粗残渣を、０．２５％ＮＨ４ＯＨを含むＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（３〜５％）で溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製すると、無色の油としてベンジルアミンが得られた（５．５ｇ、収率８４％）。
【０１４４】
実施例Ｂ．７
６−（３−ヒドロキシ−４−（ピロリジノメチル）フェニルメチル）−３−イソプロピル−１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（ＨＣｌ塩）の合成
2010528088.tif 000013
エステル（１６．０ｇ、６０．０ミリモル）及びピラゾール（６．２８ｇ、２０．０ミリモル）の混合物に、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの１Ｍ溶液（１２０．０ミリモル）１２０ｍＬを加えた。得られた混合物を８０℃で２時間攪拌し、ＨＰＬＣでモニタリングした。反応混合物を室温に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを減圧下で除去した。
【０１４５】
エステル（１７．６６ｇ、６６．２ミリモル）及びピラゾール（６．９３ｇ、２２．０５ミリモル）の混合物に、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの１Ｍ溶液（１３２．４ミリモル）１３２．４ｍＬを加えた。得られた混合物を８０℃で２時間攪拌し、ＨＰＬＣでモニタリングした。反応混合物を室温に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを減圧下で除去した。
【０１４６】
２つの反応を合わせ、５００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。有機層を、飽和塩化アルミニウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮すると、粗生成物が得られた。粗生成物を、１．０−２．５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３／ＮＨ３・Ｈ２Ｏ（０．１％）（０．１％の勾配増加）で溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製すると、きれいな生成物が得られた。エーテル中の１ＭのＨＣｌ溶液１００ｍＬを加えた。溶媒を除去し、真空で乾燥すると、８．７ｇの生成物（ＨＣｌ塩として）が得られた（収率３８％）。
【０１４７】
実施例Ｂ．８
６−（３−ヒドロキシ−４−（ピロリジノメチル）フェニルメチル）−３−イソプロピル−１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（マレイン酸塩）の合成
６−（３−ヒドロキシ−４−（ピロリジノメチル）フェニルメチル）−３−イソプロピル−１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（遊離の塩基として、実施例Ｂ．７参照）を、７０℃でイソプロピルアルコールに溶解し、イソプロピルアルコール中のマレイン酸（１．０５当量）の溶液を加えた。反応混合物を、７０℃で２０分間攪拌し、次いで室温まで一晩冷却し濾過した。得られた固体をＨ２Ｏに加え、スラリーを２４時間室温で攪拌し濾過した。融点２０９℃（示差走査型熱量測定による）；溶解度：２．５μｇ／ｍｌ。
【０１４８】
実施例Ｃ  異種移植腫瘍モデルにおける化合物の活性
標題化合物（化合物Ｉ）は、ヒトのガンの多くのインビボモデルにおいて驚くほど著しい抗腫瘍活性を示し、従来技術化合物（化合物Ｐ）に比べ驚くほど優れている。この驚くべき活性は、以下に記載するとおり実施された、一連の制御されたマウス異種移植実験において、化合物の経口投与の後で示された。
【０１４９】
方法論
異種移植腫瘍モデル
ＣＲＬから得た１００匹のメスのｎｕ／ｎｕ無胸腺マウス（６〜８週齢）を、４日間順応させた。それぞれの腫瘍タイプ（適宜、ヒトＡ２７８０卵巣腫瘍細胞（ＡＴＣＣ）、ＨＣＴ１１６結腸ガン細胞（ＡＴＣＣ）及びＨ４６０ＮＳＣＬＣ（ＡＴＣＣ））の細胞を、１５ｍｇ／Ｌのインスリン、１０％ＦＣＳ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補ったＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。およそ９０％コンフルエンスの第三継代の細胞をこれらの実験に使用した。簡単に言うと、０日に、マウスに、軽い麻酔下での乳腺近くの脂肪パッド領域への皮下注射により、細胞懸濁液（５０×１０６細胞／ｍｌ）としてそれぞれの細胞タイプの０．１ｍｌ（全部で５×１０６細胞）を接種した。全マウスの平均腫瘍重量が１００ｍｇを超えると（１０日）、平均腫瘍サイズ１３０ｍｇの８０匹のマウスを選択し、ランダムに８群に分けた。
【０１５０】
２０Ｇの胃管栄養針を経口治療に使用した。各化合物の処方は「結果」に記載のとおりであった。体重２０ｇあたり０．１ｍｌを腹腔内投与したシトキサン（シクロホスファミド）群（陽性対照）以外、投与の量は体重２０ｇあたり０．２ｍｌであった。
【０１５１】
腫瘍の成長及び体重をモニタリングし、週に３回記録した。腫瘍の測定は、デジタルノギスにより腫瘍の長さ及び幅を測定した。腫瘍の重量は以下の式を利用して推定した：腫瘍重量（ｍｇ）＝（ｗ２×ｌ）×０．５２、但し、ｗ＝ｍｍで表す腫瘍の幅及びｌ＝長さである。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）％は以下のとおり計算する：％ＴＧＩ＝１００（１−Ｔ／Ｃ）、但し、Ｔは、ある日の化合物で治療した群の平均腫瘍サイズであり、Ｃは、同じ日のビヒクル対照群の平均腫瘍サイズである。
【０１５２】
実験的治療は、腫瘍の部分退縮（ＰＲ）又は完全退縮（ＣＲ）を起こすことがある。ＰＲは、腫瘍サイズが、研究の間の３連続測定で、出発（１日目）サイズの５０％以下であるが０．０ｍｇより大きい場合に定義される。ＣＲは、３連続測定で測定できる腫瘍の塊が無い場合に起こる。治癒は、実験の終了までＣＲが維持される場合に定義される。
【０１５３】
マウスの腫瘍が１０００ｍｍ３終点体積に達すると、マウスを屠殺した。治療有効性は、殺細胞対数値（ＬＣＫ）として定義される。ＬＣＫは、治療開始の後で殺傷されたと思われる腫瘍細胞のパーセンテージを決める計算であり、有効性の定量的な尺度として使用できる：ＬＣＫ＝（Ｔ−Ｃ）／（３．３２）（Ｔｄ）、但し、Ｔ＝治療群のマウスが１０００ｍｇ腫瘍サイズに到達するのに要する推定時間、Ｃ＝対照群腫瘍が１０００ｍｇのサイズに到達する推定時間、Ｔｄ＝指数増殖の間の対照群の腫瘍の推定される腫瘍倍増時間及び３．３２＝集団が１−ｌｏｇ１０単位増えるのに要する倍増数。各ＬＣＫ単位は、細胞殺傷の１−ｌｏｇ１０単位を表す（例えば、１ＬＣＫ＝９０％殺傷、２ＬＣＫ＝９９％殺傷など）。
【０１５４】
毒性死は、疾病状態の進行でなく、化合物治療により起こる死として定義される。死は、最終的な化合物治療後２週間以内に動物が死に、腫瘍サイズが１０００ｍｇに達していないと毒性と考えられる。この点の後での非腫瘍関連死は記録されるが、毒性死とは考えられない。
【０１５５】
データ分析
ＬＣＫの推定値及び９５％信頼区間を、ブートストラップ手順を利用して決定した。簡単に述べると、Ｔ及びＴｄの実験的な分布を、ｎ匹の評価可能な動物を含む適当な群のマウスのｉ＝１，…，ｎの組からの置換を含む、ｎ匹の個別の動物のランダムな選択のＢ＝１０００の実現から、各時間点での動物のそのような選択の平均腫瘍サイズ及び時間に対するそのような平均の半対数プロットからの線形回帰分析を推定して、誘導した。死亡したマウス及び測定可能な腫瘍サイズでないマウスは欠測値として扱い、平均値計算の際に無視した。１０００実現の実験的分布の平均及び標準偏差を決定し、そこから、ＬＣＫ推定値及びそのような推定の９５％信頼区間を決定した。
【０１５６】
２つの群ｋ及びｌの間に観察された差異の重要性に対するより正確な試験を行うために、ノンパラメトリック並替検定を、治療群（又は対照治療）の一対比較に使用した。簡単に述べると、｜Ｔｋ−Ｔｌ｜の値を、動物が２群の間を多数回ランダムに入れ替わると得られる｜Ｔｋ（ｂ）−Ｔｌ（ｂ）｜値の分布と比較する。Ｔｋは、ｋ群のマウスが腫瘍サイズ１０００ｍｇに達するのにかかる推定時間である。｜Ｔｋ−Ｔｌ｜が、（｜Ｔｋ（ｂ）−Ｔｌ（ｂ）｜；ｂ＝１…Ｂ）の９０番目のパーセンタイルより大きい場合、Ｔｋ＝Ｔｌという帰無仮説が、１０％の信頼水準で棄却される。
【０１５７】
結果
実施例Ｃ．１  卵巣ガンモデル（Ａ２７８０細胞系）−１日２回経口投与
以下の表に要約したプロトコルに従い比較試験を計画したが、遊離塩基等価物投与量が角括弧の中に示されている。化合物Ｐ（塩酸塩として）を、３０％ＰＥＧ３００／７０％水中に処方し、化合物Ｉ（塩酸塩として）を、２０％ＰＥＧ３００／８０％Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水）中に処方し、１０日間毎日２回（ｂｉｄｘ１０）経口胃管栄養により投与したが、シトキサン対照は、１０日間にわたり、２日ごとに塩水中腹腔内投与した（ｑ２ｄｘ５）。
2010528088.tif 000014
【０１５８】
この実験でのＡ２７８０細胞系のインビボ倍増時間を、２．１日と推定した。代表的なデータを図１に示し、要約した結果を以下で表にまとめる。
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【０１５９】
化合物Ｉの抗腫瘍活性の驚くべき増加が、各場合で化合物Ｐの対応する投与量で治療された群よりも大きい治療群のＬＣＫにより示されている。線形回帰の後でフィッティングした値の対数線形プロットを図２に示すが、化合物Ｐに対する化合物Ｉの驚くほど増加した効力をさらに表している。個々のマウスでは、化合物Ｉの最高投与量で、腫瘍成長の部分的及び完全な応答が見られたばかりでなく、数匹の個別のマウスが完全に治癒した。すなわち、標題化合物（従来技術化合物又は陽性対照とすら異なり）は、実験の全期間で腫瘍の大きさを検出可能なレベル未満に低下させることができた。
【０１６０】
実際に、２群の間に活性の差はないという帰無仮定が棄却されうるか、すなわち実験で実際に見られた変動性（以下参照）を考慮し群のＬＣＫに有意な差があるかを試験する並替検定によるマウスのある群の一対分析は、化合物Ｉが、化合物Ｐより優る非常に著しい増加した活性を示したことを示した（有意な差が見られなかった最低の投与量の場合を除くが、この低投与量ですら、化合物Ｉは、対照群Ａに比べかなり活性があった）。さらに驚くべきことに、最高の投与量（Ｈ群）で、化合物Ｉが陽性対照シトキサン（Ｂ群）と同程度高い活性を有し、化合物Ｐの最高投与量（Ｅ群）では、化合物Ｉの中程度投与量（Ｇ群）よりもＬＣＫが低いが、この試験の感度は、このレベルの有意性では帰無仮説を棄却できなかった。
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【０１６１】
実施例Ｃ．２  卵巣ガンモデル（Ａ２７８０細胞系）−連日経口投与
以下の表に要約されるプロトコルを有する比較試験を計画したが、遊離塩基等価物投与量を角括弧中に示す。化合物Ｉ及び化合物Ｐを上述のとおり処方し、毎日経口で１０日間投与した（ｑｄｘ１０）。Ｂ群のマウスには、２０％ＤＭＡ／３０％ＰＥＧ３００／５０％水中に処方されたＲ５４７として知られる化合物（ＤｅＰｉｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ５：  ２６４４−２６５８，  ２００６）を投与した。
2010528088.tif 000017
備考：
＊  スケジュールは、元々はｑｄｘ１０であったが、５／１０マウスが最初の投与後に死んだ。
＊＊  ９回目の投与の後でマウスが１匹死んだ。
＊＊＊  ７回目の投与の後でマウスが１匹死んだ。
【０１６２】
この実験におけるＡ２７８０細胞のインビボ倍増時間を、１．７日と見積もった。代表的なデータを表３に示し、要約となる結果を以下の表にまとめる。
2010528088.tif 000018
【０１６３】
化合物Ｉは、対応する投与量の化合物Ｐに比べて各投与量で、ＬＣＫにより評価される抗腫瘍活性の全般的な増加を示す。並替検定によるマウスのある群の一対分析（以下参照）は、化合物Ｉが、最高の投与量で化合物Ｐに優る著しく増加した活性を示したことを示すが、化合物Ｐに対する化合物Ｉの全般的に観察される優位性は、この最も厳しい検定を利用して有意に結論づけることはできず、この検定はより低い２つの用量でこのレベルの有意性で帰無仮説を棄却することができなかった。
2010528088.tif 000019
【０１６４】
実施例Ｃ．３  肺ガンモデル（Ｈ４６０細胞系）−連日経口投与
研究設計を以下の表に示すが、遊離塩基等価物投与量を角括弧に示す。化合物Ｉ及び化合物Ｐを上述のとおり処方し、１０日間毎日経口投与した（ｑｄｘ１０）。Ｂ群のマウスには、Ｒ５４７（上述のとおり処方）を、２日ごとに１０日にわたり投与した（ｑ２ｄｘ５）。
2010528088.tif 000020
【０１６５】
この実験におけるＨ４６０細胞のインビボ倍増時間を、２．６日と見積もった。代表的なデータを図４に示し、要約となる結果を以下の表にまとめる。
2010528088.tif 000021
【０１６６】
化合物Ｉの抗腫瘍活性の驚くべき増加は、対応する投与量の化合物Ｐにより治療された群のものに比べ各場合で大きい治療群のＬＣＫにより示される。実際に、並替検定によるマウスのある群の一対分析（以下参照）は、化合物Ｐに対して化合物Ｉが非常に著しく増加した活性を示したことを示した（有意な差が見られなかった最低用量以外；この低用量でも、化合物Ｉは対照群Ａに比べ著しい活性があった）。さらにより驚くべきことに、最高投与量（Ｈ群）で、化合物Ｉは、陽性対照（Ｂ群）より著しく活性が高く、最高投与量の化合物Ｐ（Ｅ群）のＬＣＫは、中程度の投与量の化合物Ｉ（Ｇ群）のものと同等なだけであった。
2010528088.tif 000022
【０１６７】
実施例Ｃ．４  結腸ガンモデル（ＨＣＴ１１６細胞系）−連日経口投与
以下の表に要約されるプロトコルを有する比較試験を計画したが、遊離塩基等価物投与量を角括弧中に示す。化合物Ｐ及び化合物Ｉを上述のとおり処方し、毎日経口で１０日間投与した（ｑｄｘ１０）。Ｂ群のマウスには、Ｒ５４７（６％クレモフォアＥＬ（登録商標）／４０％ＰＥＧ３００／５４％塩水中の懸濁液として処方）を、毎日経口で１０日間投与した。
2010528088.tif 000023
【０１６８】
この実験におけるＨＣＴ１１６細胞のインビボ倍増時間を、６．８日と見積もった。代表的なデータを図５に示し、要約となる結果を以下の表にまとめる。
2010528088.tif 000024
【０１６９】
化合物Ｉは、対応する投与量の化合物Ｐに比べて各投与量（最低投与量以外）で、ＬＣＫにより評価される抗腫瘍活性の全般的な増加を示す。並替検定によるマウスのある群の一対分析（以下参照）は、化合物Ｉが、最高の用量で化合物Ｐに優る著しく増加した活性を示したことを示すが、化合物Ｐに対する化合物Ｉの全般的な優位性は、この最も厳しい検定を利用して有意に結論づけることはできず、この検定はより低い２つの用量でこのレベルの有意性で帰無仮説を棄却することができなかった。
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【０１７０】
実施例Ｃ．５  他のヒトのガンのインビボモデルにおける標題化合物の活性
標題化合物（化合物Ｉ）は、ヒトのガンの他のモデルにおいて、驚くべき予期せぬ活性を示す。この驚くべき活性は、上述のとおり実施できる制御されたマウス異種移植実験における化合物の静脈内又は経口投与の後に示される。試験のための腫瘍タイプには、ＰＣ３（前立腺）及びＡ２７８０（肺）がある。適当な腫瘍細胞系を使用する以外は上述のとおり実験を実施し、ある実験では被験化合物が、静脈内に（ｉ．ｖ．）適切に処方されて投与できる。
【０１７１】
実施例Ｄ  標題化合物による細胞内ＲＮＡＰＩＩリン酸化の強力な阻害
発明者らは、いくつかのヒト腫瘍細胞系における標題化合物の抗増殖活性の新規な作用機序を発見して驚いた。１−フェニル−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（国際公開第００／０２１９２６号；国際公開第０３／０３３４９９号；国際公開第２００４／０９２１３９号；国際公開第２００５／０６３７６５号；国際公開第２００４／０９２１３９号；国際公開第２００５／０６３７６５号；Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．１２：１１０３−１５，２００５；Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｉｄｅｄ  Ｍｏｌ  Ｄｅｓ．１９：１１１−２２，２００５；Ｍａｒｋｗａｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７：５８９４−９１１，２００４を参照）に関して当分野に公知であることと異なり、標題化合物Ｉは、以下のとおり今までに知られていなかった細胞活性の機構を示した：化合物Ｉは、哺乳類腫瘍細胞モデルのパネルにわたってＲＮＡＰＩＩの細胞内リン酸化（ＣＤＫ９により推進）を阻害する著しく一貫して強力な能力を示したが、対照的に、Ｅｇ−５及びＲｂの細胞内リン酸化（それぞれ、ＣＤＫ１及びＣＤＫ４／６活性により推進）の両方に対して阻害が弱く、阻害の変動もはるかに大きい。実際に、ＣＤＫ−９依存性ＲＮＡＰＩＩリン酸化の細胞内阻害は、ＣＤＫ−１又はＣＤＫ−４／６依存性基質リン酸化の細胞内阻害よりも、化合物Ｉの抗増殖活性の阻害に良好に相関している。
【０１７２】
方法論
以下の基質のＣＤＫ依存性リン酸化を、化合物Ｉ及びＲ５４７（ＤｅＰｉｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．５：２６４４−２６５８；２００６）による処理の後で、ガン細胞中で調査した：（ｉ）スレオニン９２７でのＣＤＫ−１依存性Ｅｇ−５リン酸化（Ｂｌａｎｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ，８３（７）：１１５９−１１６９）；（ｉｉ）セリン７８０でのＲｂのＣＤＫ−４／６特異性リン酸化（Ｚａｒｋｏｗｓｋａ  ＆  Ｍｉｔｔｎａｃｈｔ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７２（１９）：１２７３８−１２７４６  １９９７；Ｃｏｎｎｅｌｌ−Ｃｒｏｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ．８（２）：２８７−３０１  １９９７；Ｋｉｔａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，ＥＭＢＯ  Ｊ．１５（２４）：７０６０−７０６９；Ｓｃｈｍｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．１６９（３）：１０７４−１０７９；Ｂａｕｇｈｎ，２００６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：７６６１−７６６７）；（ｉｉｉ）セリン２でのＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ＲＮＡＰＩＩ）のＣＤＫ−９特異性リン酸化（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３６（１）：１９−２８）。このアッセイの組は、細胞周期の進行に関与するＣＤＫ（ＣＤＫ１、４／６）及び転写調節に関与する「調節ＣＤＫ」（ＣＤＫ９）を表す。
【０１７３】
以下のガン細胞系をこれらの研究の間に調査した：Ａ２７８０（卵巣）、ＨＣＴ１１６（結腸）、ＲＰＭＩ８２２６（骨髄腫）、ＳＫＭｅｌ２８（メラノーマ）、Ｃｏｌｏ２０５（結腸直腸）、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５（メラノーマ）、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３（乳、癌腫）、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（乳、腺癌）、Ａ５４９（肺）、Ｒａｊｉ（リンパ腫、バーキット）。細胞系は、公共の貯蔵所から入手した。細胞を、種々の濃度の化合物Ｉ又はＲ５４７で、１時間（Ｅｇ−５及びＲｂリン酸化）又は３時間（ＲＮＡポリメラーゼＩＩリン酸化）処理し、免疫ブロット分析により基質リン酸化の程度を測定し、以下に記載されるシグナルの定量化によりＩＣ５０値を決定した。図６は、記載された方法を利用して検出した、化合物Ｉによる処理でのＨＣＴ１１６細胞中のＲＮＡＰＩＩリン酸化の用量依存性レベルの例を示す。
【０１７４】
セリン２（Ｓｅｒ２）でのＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ＲＮＡＰＩＩ）のＣＤＫ９特異性リン酸化
非同期細胞を、適当な濃度の被験化合物又は対照としてＤＭＳＯにより処理した。３時間のインキュベーション（３７℃／５％ＣＯ２）の後、細胞をＣＬＢ−１溶解バッファ（Ｚｅｐｔｏｓｅｎｓｅ、スイス）で溶解し、溶解物を遠心分離（１０分間、１３０００ｒｐｍ、室温）で透明にし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。総タンパク質を、ＰＶＤＦメンブレン上にブロッティングし、Ｓ２−リン酸化ＲＮＡＰＩＩに対する抗体（Ｈ５、Ｃｏｖａｎｃｅ）又は発現対照としてのトータルＲＮＡＰＩＩ（Ｎ−２０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）を使用して分析した。マウス又はウサギＦｃテールに対するＡｌｅｘａ６８０−結合又はＩＲ８００−結合二次抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用し、Ｏｄｙｓｓｅｙ−ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｃｏｒ）で可視化した。特異的バンドを定量化し、ＲＮＡＰＩＩリン酸化阻害のＩＣ５０値を見積もった。
【０１７５】
スレオニン９２７でのＣＤＫ１−依存性Ｅｇ−５リン酸化（Ｔｈｒ９２７ｐｈｏｓ）
Ｔｈｒ９２７ｐｈｏｓは、２５ｎｇ／ｍｌのノコダゾール（最適化された最終濃度）により細胞をＧ２／Ｍ期に一晩停止し、次いで、対照としてのＤＭＳＯ又は適当な濃度の被験化合物で１時間処理して、調査した。剥がれた細胞並びに付着している細胞を回収し、ＣＬＢ−１溶解バッファで溶解した。溶解物を遠心分離により透明にし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。タンパク質をＰＶＤＦメンブレン上にブロッティングし、トータルＥｇ−５（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）及びＥｇ−５  Ｔｈｒ９２７Ｐｈｏｓ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する抗体により分析した。可視化及びＩＣ５０値の見積もりは、上述のとおり実施した。
【０１７６】
セリン７８０でのＲｂのＣＤＫ４／６特異性リン酸化（Ｓｅｒ７８０Ｐｈｏｓ）
非同期成長細胞を、適当な濃度の被験化合物又はＤＭＳＯで１時間処理した。製造業者（Ｑｉａｇｅｎ、ドイツ）の説明書に従い、ＡｌｌＰｒｅｐ  ＲＮＡ／Ｐｒｏｔｅｉｎキットを使用してタンパク質を抽出した。Ａｂ０５抗体（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｉｎｃ）を使用して、Ｒｂを一晩免疫沈降した。タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ＰＶＤＦメンブレンにブロッティングし、トータル（ｓｃ−１０２、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）又はＳｅｒ７８０−リン酸化Ｒｂタンパク質（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）に対する抗体で分析した。可視化及び定量化は上述のとおり実施した。
【０１７７】
結果
以下の表は、化合物Ｉ又はＲ５４７による、ＣＤＫ１、ＣＤＫ４／６及びＣＤＫ９の基質リン酸化阻害のＩＣ５０値を示す。
【０１７８】
化合物Ｉは、Ｒ５４７によるリン酸化のはるかに弱い阻害に比べ、ＲＮＡＰＩＩのＣＤＫ９−依存性リン酸化の一貫して強力な阻害剤であった。この違いは、上述の生化学的アッセイで見積もられたＣＤＫ９活性の酵素的ＩＣ５０値と比較することができ、化合物ＩとＲ５４７の両方で約１から１０ｎＭである。
2010528088.tif 000026
【０１７９】
対照的に、化合物Ｉは、Ｅｇ−５のＣＤＫ１依存性リン酸化の効力において高度の変動性を示すが、それに比べＲ５４７による同じアッセイでは比較的一貫したＩＣ５０である。この一貫性は、アッセイ自体が信頼できることを示す。生化学的アッセイにおいて、Ｒ５４７は、化合物Ｉよりも強力なＣＤＫ１阻害剤である（ＣＤＫ１に対するＩＣ５０は、それぞれ、約１から１０ｎＭ、約１０から５０ｎＭである）。
2010528088.tif 000027
【０１８０】
Ｒ５４７と比べた効力の変動は、ＲｂのＣＤＫ４／６依存性リン酸化の阻害の効力にも見られる。Ｒ５４７は、化合物Ｉ（ＣＤＫ４及びＣＤＫ６のＩＣ５０は、それぞれ、約５０ｎＭ及び約１０から５０ｎＭ）よりも、適度に強力なＣＤＫ４及びＣＤＫ６阻害剤である（ＣＤＫ４及びＣＤＫ６のＩＣ５０は、両方の場合で約１０ｎＭ）。
2010528088.tif 000028
【０１８１】
化合物Ｉの細胞内増殖のＩＣ５０（上述の方法により測定）と比べると、ＣＤＫ９依存性ＲＮＡＰＩＩリン酸化の細胞内阻害の対応するＩＣ５０は、おおよそ同じである。これは、はるかに変動が大きく、多くの場合でＣＤＫ１又はＣＤＫ４／６基質リン酸化に対するより弱いＩＣ５０とは対照的である。
2010528088.tif 000029
【０１８２】
理論に拘束されることを望まないが、これらのデータは、ヒトのガンの哺乳動物細胞モデルにおける化合物Ｉの細胞傷害活性が、少なくともＣＤＫ９活性の阻害に媒介されており、ある状況では、同時に起きるＣＤＫ１、ＣＤＫ４又はＣＤＫ６活性の阻害が低いという驚くべき仮説を示唆している。
【０１８３】
実施例Ｅ  医薬組成物の選択及び開発
（ｉ）最適な活性成分形態、すなわち化合物Ｉ自体、化合物Ｉの薬剤的に許容できる塩、又は化合物Ｉのプロドラッグを選択し、さらなる実験に入り、ガンなどの疾患及び疾病を治療するための治療薬組成物における使用のための適性を見積もるため；（ｉｉ）そのように同定された活性成分を含む最適な医薬組成物を選択するため、及び（ｉｉｉ）そのような医薬組成物を使用するための最適な適応症を選択するため、追加のデータが集められる。そのようなデータは、腫瘍細胞系のパネルにわたるインビトロの増殖阻害及び腫瘍成長阻害又は縮小データ及びインビボ動物モデルからの生存データを含みうる。さらに、そのような実験は、標題化合物の作用機序、標題化合物の標的又は標的プロファイル、並びに標的（複数可）への化合物の結合親和性又は標的（複数可）への化合物の結合部位及び薬物動態学的な性質などの標題化合物の他の
特性の解明及び／又は測定を含むことがある。そのような実験は、薬物−標的相互作用の分子モデリング及び投与後に形成される代謝物の同定又は活性薬剤の同定も含むことがある。
【０１８４】
細胞増殖の阻害、種々の腫瘍細胞系にわたるスペクトル、腫瘍成長の阻害又は腫瘍縮小データ及び／又は動物生存データ及び／又は他の特徴、例えばＡＤＭＥＴ、薬物動態学及び薬力学的性質を含む最適な結果を示す活性成分及び／又はそのような活性成分を含む医薬組成物を選択して、さらなる実験に入ることができる。そのような実験には、例えば、治療プロファイリング及び動物中の毒理学、ヒトでの第１相臨床試験及び他の臨床試験がある。
【０１８５】
当業者は、本発明が目的を実施するために、かつ、言及された、並びに本願に固有の目的及び利点を得るために適合していることを容易に認識する。本願に記載の方法及び試薬は、好ましい実施形態を表し、例示的であり、本発明の範囲に対する限定とするものではない。本願の修飾及び他の利用を当業者は思いつくであろう。そのような明らかな修飾及び代替利用は、本発明の精神の中に包含され、添付される請求項の範囲内に含まれるものとする。
【０１８６】
先に引用した参考文献及び刊行物の全ては、参照により本願に組み込まれている。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６】
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【国際調査報告】
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