(57)【要約】  本発明は色素障害の治療または予防における使用のための医薬または化粧品組成物の調製における一般式（I）の化合物の使用に関する。
2010529095.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
色素障害の治療および／または予防における使用のための医薬組成物の調製における、少なくとも一つの一般式(I) 
【化１】
2010529095.tif 000006
[式中、R1とR2は同一であるかまたは異なっており、
‐水素
‐C1〜C7アルキル基、
‐ヒドロキシメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチル基、
‐環の炭素原子の1つが酸素または硫黄原子で任意に置換され得る、C3〜C7シクロアルキル基、
‐C4〜C9シクロアルキルアルキル基、
‐モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニルまたはN-メチルピペラジニル基、
‐カルボキシル、
‐(C1〜C4アルコキシ)カルボニル
‐C1〜C6アルコキシ、または
‐ハロゲン、
を表し、R2がR1に対してオルト位にある場合、R1とR2は同一であるかまたは異なっており、C1〜C5アルキル基を表す、または5もしくは6の原子を含む炭化水素環を形成し、前記炭化水素環の1または2個の炭素原子は1または2個の酸素原子で任意に置換され得ることが理解される]
の化合物および式(I)の化合物の塩およびその互変異性型の使用。
【請求項２】
式(I)の化合物が医薬として許容される酸と形成される塩の形態で提供され、前記酸は無機酸および有機酸から選択されることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
式(I)の化合物が水和物または溶媒和物の形態で提供されることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
C3〜C7シクロアルキル基が、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル基から選択されることを特徴とする、請求項1から３の何れか一項に記載の使用。
【請求項５】
R1とR2は同一であるかまたは異なっており、水素またはC1〜C7アルキル基またはC3〜C7シクロアルキル基を表すことを特徴とする、請求項1から4の何れか一項に記載の使用。
【請求項６】
一般式(I)の化合物が下記の群：
4-フェニル-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-フェニル-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン塩酸塩
4-(4-メトキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(3-ブロモフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-ブロモフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(2-フルオロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(3-フルオロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-フルオロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(2-クロロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(3-クロロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-クロロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-ブトキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-メチルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-トリフルオロメチルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-イソプロピルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-プロピルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(4-tert-ブチルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(3,4-ジメトキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
4-(3-プロピルオキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン
から選択されることを特徴とする、請求項1から5の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
色素障害が、黒皮症、褐色斑、黒子、老人性黒子、光老化に関係する不規則な色素沈着過剰、そばかす、擦過傷および／または熱傷および／または瘢痕および／または皮膚病および／または接触アレルギーによる炎症後の色素沈着過剰、母斑、遺伝的に決定される色素沈着過剰、代謝性または薬物に起因する色素沈着過剰および黒色腫から選択されることを特徴とする、請求項１から６の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
皮膚の老化の徴候を予防および／または治療するための、請求項1から6の何れか一項に規定される化合物の美容的使用。
【請求項９】
身体または毛髪の衛生のための、請求項1から6の何れか一項に規定される化合物の美容的使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、色素障害の治療または予防における使用のための医薬または化粧品組成物の調製における、チロシナーゼ阻害剤としての４‐フェニルイミダゾール‐２‐チオンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚、特にヒトの皮膚の色素沈着は、樹状細胞であるメラニン細胞によるメラニンの合成によって生じる。メラニン細胞は、メラノソームとして知られる細胞小器官を含み、これはメラニンを角化細胞の上層に移動させ、その後角化細胞は表皮の分化によって皮膚の表面に輸送される(Gilchrest BA, Park HY, Eller MS, Yaar M, Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem Photobiol 1996; 63: 1 10; Hearing VJ, Tsukamoto K, Enzymatic control of pigmentation in mammals. FASEB J 1991; 5: 2902-2909)。
【０００３】
メラニン形成酵素の中で、チロシナーゼは、メラニン合成の最初の2つの段階を触媒する重要な酵素である。チロシナーゼの突然変異のホモ接合によって、メラニンの合成が全く存在しないことを特徴とする眼皮膚白皮症I型になる(Toyofuku K, Wada I, Spritz RA, Hearing VJ, The molecular basis of oculocutaneous albinism type 1 (OCA1): sorting failure and degradation of mutant tyrosinases results in a lack of pigmentation. Biochem J 2001; 355: 259-269)。
【０００４】
メラニン産生の増加によって生じる色素沈着の障害を治療するために、新規な治療法を開発することが重要であることは証明されているが、それに対して患者および皮膚科医のすべての期待に応える治療は存在しない。
【０００５】
既知の皮膚美白化合物の大部分は、フェノール／カテコールである。これらの化合物はチロシナーゼを阻害するが、その大部分は、キノン形成のためメラニン細胞に対して細胞毒性である。この毒性作用は皮膚の永続的な脱色素をもたらす恐れがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第4 798 843号
【特許文献２】WO第2006/019962号
【特許文献３】欧州特許第131 973号
【特許文献４】特開平05-132422
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Gilchrest BA, Park HY, Eller MS, Yaar M, Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem Photobiol 1996; 63: 1 10
【非特許文献２】Hearing VJ, Tsukamoto K, Enzymatic control of pigmentation in mammals. FASEB J 1991; 5: 2902-2909
【非特許文献３】Toyofuku K, Wada I, Spritz RA, Hearing VJ, The molecular basis of oculocutaneous albinism type 1 (OCA1): sorting failure and degradation of mutant tyrosinases results in a lack of pigmentation. Biochem J 2001; 355: 259-269
【非特許文献４】S. Maeda、M. Suzuki、T. Iwasaki、K. Matsumoto and Y. Iwazawa、Chem. Pharm. Bull.、1984、32、7、2536-2543
【非特許文献５】M. Mor、F. Bordi、C. Silva、S. Rivara、P. Crivori、P.V. Plazzi、V. Ballabeni、A. Caretta、E. Barocelli、M. Impicciatore、P.-A. Carrupt and B. Testa、J. Med. Chem.、1997、40、2471-2578
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
実際、本出願人の会社は現在、予想外にかつ驚くべきことに、従来技術において既知である4-フェニルイミダゾール-2-チオンのいくつかが、酵素チロシナーゼに対する非常に優れた阻害活性を有し、非常に低い細胞毒性を示すことを発見している。
【０００９】
これらの化合物は、ヒトの医学、特に皮膚科学、および化粧品の分野に応用される。
【００１０】
既知のイミダゾール-2-チオン誘導体のうち、いくつかは抗炎症活性を有すると記載されている(S. Maeda、M. Suzuki、T. Iwasaki、K. Matsumoto and Y. Iwazawa、Chem. Pharm. Bull.、1984、32、7、2536-2543)。
【００１１】
他のものは、米国特許第4 798 843号でドーパミンβ-ヒドロキシラーゼの阻害剤であることが報告されている。この特許に記載された化合物は、胃潰瘍の予防において有効である。
【００１２】
他のイミダゾール-2-チオンは、H3受容体拮抗薬の合成における反応中間体としても記載されている(M. Mor、F. Bordi、C. Silva、S. Rivara、P. Crivori、P.V. Plazzi、V. Ballabeni、A. Caretta、E. Barocelli、M. Impicciatore、P.-A. Carrupt and B. Testa、J. Med. Chem.、1997、40、2471-2578)。
【００１３】
他のものは、TLRおよびTNR-αの調節剤として、WO第2006/019962号に記載されている。この特許では、特許請求された化合物は、IBD(炎症性腸疾患)および胃腸疾患を治療するのに用いられる。
【００１４】
欧州特許第131 973号はまた、潰瘍の治療に有用な胃酸分泌抑制剤としての、イミダゾール-2-チオンから誘導されるいくつかの化合物の使用を教示している。
【００１５】
特開平05-132422は、チロシナーゼ阻害剤としてのいくつかのイミダゾール-2-チオンの使用を開示している。しかし、4位がアリールで置換されたイミダゾール-2-チオン誘導体は、この文献には記載されていない。4-アリールイミダゾール-2-チオン構造を有する化合物について、チロシナーゼに対する阻害活性は示されていない。実際、本出願人の会社は、予想外にかつ驚くべきことに、本発明の対象である4-フェニルイミダゾール-2-チオン構造を有するいくつかの化合物が、チロシナーゼに対し特開平05-132422の化合物よりも優れた阻害活性を示すことを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、本発明は色素障害の治療または予防における使用のための医薬組成物の調製における、以下の一般式(I) 
【００１７】
【化１】
2010529095.tif 000003
【００１８】
[式中、R1とR2は同一であるかまたは異なっており、
‐水素
‐C1〜C7アルキル基、
‐ヒドロキシメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはトリフルオロメチル基、
‐環の炭素原子の1つが酸素または硫黄原子で任意に置換され得る、C3〜C7シクロアルキル基、
‐C4〜C9シクロアルキルアルキル基、
‐モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニルまたはN-メチルピペラジニル基、
‐カルボキシル、
‐(C1〜C4アルコキシ)カルボニル
‐C1〜C6アルコキシ、または
‐ハロゲン、
を表し、R2がR1に対してオルト位にある場合、R1とR2は同一であるかまたは異なっており、C1〜C5アルキル基を表す、または5もしくは6の原子を含む炭化水素環を形成し、その炭化水素環の1または2個の炭素原子は1または2個の酸素原子で任意に置換され得ることが理解される]
で表される化合物、および式(I)の化合物の塩およびその互変異性型の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
互変異性型は、以下のように表すことができる。
【００２０】
【化２】
2010529095.tif 000004
【００２１】
医薬として許容される酸と一般式(I)の化合物との付加塩のうち、有機酸または無機酸との塩が好ましくは挙げられ得る。
【００２２】
適当な無機酸は、たとえば、塩酸や臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、硫酸、または硝酸である。
【００２３】
適当な有機酸は、たとえば、ピクリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、またはトリフルオロメタンスルホン酸である。
【００２４】
一般式(I)の化合物は、水との水和物または溶媒との溶媒和物の形でも存在できる。
【００２５】
溶媒和物または水和物を形成する適当な溶媒は、たとえば、エタノールやイソプロパノールなどのアルコール、または水である。
【００２６】
本発明においては、C3〜C7シクロアルキルは3〜7個の炭素原子を含む飽和の環式炭化水素を意味する。好ましくは、C3〜C7シクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル基から選択される。
【００２７】
本発明においては、C1〜C7アルキルは1〜7個の炭素原子を含む、飽和の直鎖状または分枝状の炭化水素鎖を意味する。好ましくは、C1〜C7アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、t-ブチル、ペンチル、ヘキシルおよびヘプチル基から選択される。
【００２８】
本発明においては、C4〜C9シクロアルキルアルキルはシクロアルキル基で置換され、4〜9個の炭素原子を含む、飽和の直鎖状または分枝状の炭化水素鎖を意味する。好ましくは、C4〜C9シクロアルキルアルキル基は、シクロプロピルメチル、シクロプロピルエチル、シクロブチルメチル、シクロブチルエチル、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチルおよびシクロヘキシルエチル基から選択される。
【００２９】
本発明においては、(C1〜C4アルコキシ)カルボニルは1〜4個の炭素原子を含むアルキル基で置換されたカルボキシル基を意味する。好ましくは、(C1〜C4アルコキシ)カルボニル基は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニルおよびブトキシカルボニル基から選択される。
【００３０】
本発明においては、C1〜C6アルコキシは1〜6個の炭素原子を含む飽和の直鎖状または分枝状の炭化水素鎖で置換された酸素原子を意味する。好ましくは、C1〜C6アルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシおよびヘキシルオキシ基から選択される。
【００３１】
本発明においては、ハロゲンはフッ素、塩素または臭素原子を意味する。
【００３２】
本発明においては、好ましい一般式(I)の化合物ではR1とR2は同一であるかまたは異なっており、ハロゲンまたはC1〜C7アルキル基またはC3〜C7シクロアルキル基を表す。
【００３３】
本発明においては、特に好ましい一般式(I)の化合物では、
‐R2が水素を表し、および
‐R1が、水素またはC1〜C7アルキル基またはC3〜C7シクロアルキル基を表す。
【００３４】
本発明の範囲内から来る式(I)の化合物のうち、以下の化合物が特に挙げられて良い。
1. 4-フェニル-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN6857-34-7
2. 4-フェニル-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン塩酸塩: RN93168-73-1
3. 4-(4-メトキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN10486-41-6
4. 4-(3-ブロモフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN192800-59-2
5. 4-(4-ブロモフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN 436095-86-2
6. 4-(2-フルオロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-13-0
7. 4-(3-フルオロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-14-1
8. 4-(4-フルオロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-15-2
9. 4-(2-クロロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-16-3
10. 4-(3-クロロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-17-4
11. 4-(4-クロロフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-18-5
12. 4-(4-ブトキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN192800-50-3
13. 4-(4-メチルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-19-6
14. 4-(4-トリフルオロメチルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN38575-47-2
15. 4-(4-イソプロピルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-20-9
16. 4-(4-プロピルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN192800-52-5
17. 4-(4-tert-ブチルフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN93103-21-0
18. 4-(3,4-ジメトキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN117877-37-9
19. 4-(3-プロピルオキシフェニル)-1,3-ジヒドロイミダゾール-2-チオン: RN192800-64-9。
【００３５】
有利なことに、本発明の化合物はチロシナーゼに関して10μM以下の、より格別には1μM以下のIC50(酵素活性の50%を阻害する用量)の値を示す。
【００３６】
したがって、本発明は、前記化合物がチロシナーゼ-阻害活性を有する医薬組成物または化粧品組成物の調製における、上記で定義した少なくとも1種の一般式(I)の化合物の使用を目標としている。
【００３７】
本発明はまた、色素障害の治療および／または予防における、その使用のための式(I)の化合物から選択された生成物に関する。
【００３８】
本発明はまた、前記化合物を含む医薬または化粧品組成物を、チロシナーゼ阻害剤として投与することを含む、治療上または美容上の処置方法に関する。
【００３９】
本発明はまた、色素障害、および好ましくは色素沈着過剰性障害の治療における使用のための医薬品の調製における、上記で定義した一般式(I)の化合物の使用に関する。
【００４０】
これは、本発明に従って使用される化合物が色素障害および好ましくは色素沈着過剰性障害、例えば黒皮症、褐色斑、黒子、老人性黒子、光老化に関係する不規則な色素沈着過剰、そばかす、擦過傷および／または熱傷および／または瘢痕および／または皮膚病および／または接触アレルギーによる炎症後の色素沈着過剰;母斑、遺伝的に決定される色素沈着過剰、代謝性または薬物に起因する色素沈着過剰、黒色腫、または何れか他の色素沈着過剰性病変、の治療および／または予防に特に適しているためである。
【００４１】
本発明の他の対象は、特に前述の状態の治療における使用のための、前記組成物のために選択された投与方法に適合する医薬として許容される賦形剤中に、その互変異性型の1つまたは医薬として許容される酸とのその塩の1つである少なくとも1種の一般式(I)の化合物を含む、医薬組成物である。
【００４２】
医薬として許容される賦形剤は、皮膚、粘膜および表面上の身体増殖に適合する媒体を意味するものと理解される。
【００４３】
本発明による組成物は、局所に投与できる。好ましくは、医薬組成物は、局所適用に適した形態で包装される。局所は、皮膚または粘膜への投与を意味するものと理解される。
【００４４】
本発明による医薬組成物は局所、より格別には皮膚および粘膜の治療を目的とし、液体、ペースト状または固体の形で、より格別には、軟膏剤、クリーム剤、乳剤、軟膏、散剤、含浸パッド、合成洗剤、液剤、ゲル剤、スプレー剤、発泡体、懸濁剤、スチック剤、シャンプーまたは洗浄基剤の形で提供できる。これはまた、制御放出を可能にするミクロスフェアもしくはナノスフェアの懸濁剤、または脂質もしくはポリマーベシクル、またはポリマーもしくはゲル状のパッチの形でも提供できる。
【００４５】
局所適用に使用する組成物は、本発明による化合物の濃度が、その組成物の全重量に対して、一般に0.001〜10重量%、好ましくは0.01〜5重量%である。
【００４６】
本発明による一般式(I)の化合物はまた、特に太陽の有害な側面から保護する上で、皮膚の光誘導性のまたは経時的な老化および表面上の身体増殖を予防および／または抑制するための、化粧品分野での適用が見出されている。
【００４７】
したがって、本発明の他の対象は、化粧品として許容される賦形剤中に少なくとも1種の一般式(I)の化合物を含む、化粧品組成物である。化粧品として許容される賦形剤は、皮膚、粘膜および表面上の身体増殖に適合する媒体を意味するものと理解される。
【００４８】
本発明の他の対象は、皮膚の老化の徴候を予防および／または治療するための、式(I)の化合物または少なくとも1種の一般式(I)の化合物を含む組成物の美容的使用である。
【００４９】
本発明の他の対象は、身体または毛髪の衛生のための、式(I)の化合物または少なくとも1種の一般式(I)の化合物を含む組成物の美容的使用である。
【００５０】
化粧品として許容される賦形剤中に、一般式(I)の化合物またはその互変異性型の1つまたは医薬として許容される酸とのその塩の1つを含む、本発明による化粧品組成物は、特に、クリーム剤、乳剤、ゲル剤、ミクロスフェアまたはナノスフェアまたは脂質もしくは高分子ベシクルの懸濁剤、含浸パッド、液剤、スプレー剤、発泡体、スチック剤、石けん、洗浄基剤またはシャンプーの形で提供できる。
【００５１】
化粧品組成物中の一般式(I)の化合物の濃度は、その組成物の全重量に対して、好ましくは0.001〜10重量%である。
【００５２】
上記の医薬組成物および化粧品組成物はさらに不活性の添加剤、または医薬組成物に関しては薬力学的に活性な添加剤でさえも、もしくはこれら添加剤の組み合わせを含んでよく、特にそれらは、
‐湿潤剤;
‐調味剤;
‐パラ-ヒドロキシ安息香酸エステルなどの保存剤;
‐安定化剤;
‐水分調整剤;
‐pH調整剤;
‐浸透圧調節剤;
‐乳化剤;
‐UV-AおよびUV-B遮断剤;
‐酸化防止剤、例えばα-トコフェロール、ブチル化ヒドロキシアニソールまたはブチル化ヒドロキシトルエン、スーパーオキシドジスムターゼまたはユビキノール;
‐皮膚軟化剤;
‐保湿剤、例えばグリセロール、PEG400、チアモルホリノンおよびその誘導体、または尿素;
‐抗脂漏剤または抗ざ瘡剤、例えばS-カルボキシメチルシステイン、S-ベンジルシステアミン、その塩または誘導体、または過酸化ベンゾイルである。
【００５３】
言うまでもなく、本発明に本質的に付随する有利な特性が、想定される添加により有害な影響を受けないように、または実質的に受けないように、当業者はこれらの組成物に添加されるための1種または複数の任意の化合物の選択に注意を払うであろう。
【００５４】
以下に、本発明による一般式(I)の化合物の調製のいくつかの例および前記化合物の生物活性の結果を、例示的に、制限する性質ではなく、示す。
【実施例】
【００５５】
実施例１：チロシナーゼ活性阻害アッセイ
B16F1細胞(マウスの黒色腫系)の溶解物から開始して、阻害剤の活性を測定する。L-チロシン基質の存在下で、これらの細胞中に存在するチロシナーゼは、L-チロシンのヒドロキシル化を触媒してL-DOPAを生成し、次いでL-DOPAの酸化を触媒してドパキノンを生成する。MBTH(3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン)の存在下で、520nmで吸収する淡紅色の複合体を形成するために、ドパキノンを捕獲する。
【００５６】
DMEM培地+10%ウシ胎仔血清+10-9Mのα-MSH中、7%のCO2下で37℃で4日間、B16F1細胞を培養する。それらを、トリプシンで処理し、PBSで洗浄し、数を数えペレット化する。ペレットを、107細胞/mlで溶解緩衝液(10mMリン酸ナトリウム、pH6.8 - 1%Igepal(登録商標))に溶解し、懸濁液を超音波で10秒間処理する。4000rpmで30分間遠心した後、得られた上澄みは、酵素アッセイでチロシナーゼの供給源として用いる細胞溶解物を構成する。
【００５７】
アッセイを、総体積50μlで384ウェルプレートに繰り返して実施する。各ウェルは、
‐緩衝液B(62.25mMリン酸ナトリウム、pH6.8 - 2.5%ジメチルホルムアミド)中に1.25mMのL-チロシン、6.25μMのL-DOPA(補因子)および3.75mMのMBTHを含む溶液40μl、
‐DMSOで希釈した阻害剤5μl、
‐pH7.5の50mMトリスHCl緩衝液で1/2に希釈した細胞溶解物5μl、を含む。
【００５８】
プレートを37℃でインキュベートし、6時間インキュベート後に、分光光度法による読み取りを520nmで実施する。生成物が起こし得るいかなる吸収をも避けるために、その系は、補正された吸光度(6時間での吸光度-時間ゼロの吸光度)を使用する。
【００５９】
IC50(酵素活性の50%を阻害する用量)を算出するために、用量反応に関して阻害剤をアッセイする。
【００６０】
各実験に、いくつかの内部標準を加える。すなわち、
‐100%の活性の対照:阻害剤5μlをDMSO 5μlに置き換える、
‐50%の活性の対照:阻害剤5μlをDMSO中300μMのフェニルチオ尿素5μlに置き換える、
‐0%の活性の対照:L-チロシン基質を緩衝液Bに置き換える。
【００６１】
本発明の化合物について得られた結果を、表Aに示す。
【００６２】
【表１】
2010529095.tif 000005
【００６３】
実施例２：配合物
この実施例では、本発明による化合物に基づく様々な具体的な配合物を例示している。
【００６４】
局所
(a)軟膏剤
‐化合物1                                                       0.020g
‐ミリスチン酸イソプロピル                                      81.700g
‐流動ワセリン                                                   9.100g
‐シリカ(「Aerosil 200」)                                         9.180g
(b)軟膏剤
‐化合物6                                                       0.300g
‐白色ワセリン医薬品等級                                    適量  全量100g
(c)非イオン性油中水型クリーム剤
‐化合物1                                                       0.100g
‐乳化性ラノリンアルコール、ろう、およびオイルの混合物(「無水ユーセリン」)
39.900g
‐パラヒドロキシ安息香酸メチル                                   0.075g
‐パラヒドロキシ安息香酸プロピル                                 0.075g
‐無菌の脱塩水                                       適量  全量100g
(d)ローション剤
‐化合物6                                                        0.100g
‐ポリエチレングリコール(PEG 400)                               69.900g
‐95%エタノール                                                 30.000g
(e)疎水性軟膏剤
‐化合物2                                                        0.300g
‐ミリスチン酸イソプロピル                                      36.400g
‐シリコーン油(「Rhodorsil 47V 300」)                            36.400g
‐蜜ろう                                                        13.600g
‐シリコーン油(「Abil 300000cst」)                        適量  全量100g
(f)非イオン性水中油型クリーム剤
‐化合物4                                                         1.000g
‐セチルアルコール                                                 4.000g
‐モノステアリン酸グリセロール                                     2.500g
‐ステアリン酸PEG-50                                             2.500g
‐シアバター                                                       9.200g
‐プロピレングリコール                                             2.000g
‐パラ‐ヒドロキシ安息香酸メチル                                     0.075g
‐パラ‐ヒドロキシ安息香酸プロピル                                   0.075g
‐無菌の脱塩水                                        適量  全量100g
【国際調査報告】
2010529095.tif 000007
2010529095.tif 000008
2010529095.tif 000009
2010529095.tif 000010
2010529095.tif 000011
2010529095.tif 000012