(57)【要約】  本発明は金属三角形（トリアングロ）化合物に関する。また、金属トリアングロ化合物を投与することを含む、細胞のアポトーシスを誘導する方法も提供する。また、金属トリアングロ化合物を投与することを含む、細胞の発癌を防止する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2010527328.tif 000015
の金属トリアングロ化合物。
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
ただし次の化合物は除外される：デカカルボニル［μ−［３−（ジエチルアミノ）−２、２−ジメチル−１−プロパンチオラト］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［１１−（メルカプト−κＳ：κＳ）ウンデカノアト］（２−）］］トリトリアングロオスミウム酸水素、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［２−（メルカプト−κＳ：κＳ）エタノラト］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［２−［１−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−２−オキソ−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキシ−１−イル］エチリデン］ヒドラジンカルボチオアミダト−κＳ：κＳ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［２−［１−（６，６−ジメチル−３−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキシ−２−イル）エチリデン］ヒドラジンカルボチオアミダト−κＳ：κＳ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［（３ａＲ、３ｂＲ、４ａＲ、５ａＳ）−３ａ、３ｂ、４、４ａ、５、５ａ−ヘキサヒドロ−５ａ−ヒドロキシ−３、４、４−トリメチル−１−Ｈ−シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２−ｃ］ピラゾール−１−カルボチオアミド−κＳ１：κＳ１］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、
デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［（１Ｒ、３Ｅ、４Ｓ、６Ｓ）−４−（メルカプト−κＳ：κＳ）−４、７、７−トリメチルビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−オン  オキシマート］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１，２−エタンジチオラト−κＳ：κＳ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ５−［２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンチオナト（２−）−κＮ１：κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［６−（メルカプト−κＳ：κＳ）−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２］］ヘキサオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム、［μ−（２−アミノベンゼンチオラト−κＳ：κＳ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−κＳ２：κＳ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、ウンデカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（チオウレアト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（４、６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（Ｎ、Ｎ’−ジフェニルチオウレアト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（フェニルチオウレアト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、トリアコンタカルボニル［μ６−［１、３、５−トリアジン−２、４、６（１Ｈ、３Ｈ、５Ｈ）−トリチオナト（３−）−Ｓ：Ｓ：Ｓ’：Ｓ’：Ｓ”：Ｓ”］ノナオスミウム、デカカルボニル［μ−［３−（ジエチルアミノ）−２、２−ジメチル−１−プロパンチオラト］］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（β、β−ジメチル−１−アゼチジンプロパンチオラト）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１、３−ジヒドロ−１−メチル−２Ｈ−イミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（ジエチルカルバモジチオアト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［Ｎ−（４−フルオロフェニル）メタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ−［μ−（Ｎ−フェニルメタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［Ｎ−（４−メチルフェニル）メタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（Ｎ−メチルメタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−チアゾリジンチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−イミダゾリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾキサゾールチオナト−Ｓ：Ｓ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１、３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾチアゾールチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［２−（ホスフィノ−κＰ：κＰ）ベンゼンアミナト］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−メチル−４−キノリンアミナト−κＮ４：κＮ４）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（６−フェニル−２−ピリジンアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−チアゾールアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（４、５−ジヒドロ−２−チアゾール−アミナト−κＮ２：κＮ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（４−メチル−２−ベンゾチアゾールアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリ−トリアングロオスミウム、［μ−（ベンゾ［ｈ］キノリン−２−アミナト−κＮ２：κＮ２）］
デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［４−［（１Ｅ）−（４−ニトロフェニル）アゾ］ベンゼンアミナト−κＮ：κＮ］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ピペリジンエタンアミナト−κＮＮ１：κＮＮ１）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［１、２、３、４−テトラヒドロ−１−［１−（イミノ−κＮ：κＮ）エチル］キノリナト］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（Ｎ、Ｎ−ジメチルメタンイミダミナト−Ｎ：Ｎ’）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（６−クロロ−２−ピリジンアミナト−Ｎ２：Ｎ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（ヒドラジンカルボキシアミダト−Ｎ：Ｎ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（２、２−ジメチルヒドラジンカルボキシアミダト−Ｎ：Ｎ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［１、２−ジヒドロ−４、６−ジメチル−２−（チオキソ−κＳ：κＳ）−３−ピリジンカルボニトリラト］］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム、デカカルボニル［μ−（４、６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム、［μ−（１、１’−ビナフタレン］−２、２’−ジアミナト−κＮ：κＮ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロルテニウム、および［μ−（４−アミノフェノラトＮ：Ｎ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロルテニウム。］
【請求項２】
Ｒ１は、０〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である請求項１に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項３】
芳香族部位は、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンからなる群から選択される請求項２に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項４】
Ｂ、Ｄ、およびＥは同一である請求項１乃至３のいずれか一項に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項５】
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯである請求項１乃至４のいずれか一項に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の金属トリアングロ化合物を形成する方法であって、
式（ＩＩＩ）：
【化２】
2010527328.tif 000016
［ここで、Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ４およびＬ５は、ＮＣ−ＣＨ３、ＣＯ、ＮＯ、およびＨからなる群から独立に選択される］
の化合物を一般式Ｒ１−ＡＨの化合物と接触させることを含む方法。
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、Ｎ＝Ｎ、Ｎ＝Ｏ、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、または、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基とからなる群から選択される。］
【請求項７】
一般式（ＩＩＩ）の前記化合物は一般式（ＩＶ）：
【化３】
2010527328.tif 000017
であり、前記方法は一般式（Ｖ）： 
【化４】
2010527328.tif 000018
の化合物を形成することを含む、請求項６に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項８】
式（ＩＶ）の化合物は、ビス（アセトニトリル）デカカルボニルトリオスミウムである請求項７に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項９】
一般式（Ｖ）の化合物を一般式Ｒ１−ＡＨの化合物に接触させることによって、一般式（Ｉ）の化合物を形成することをさらに含む、請求項７または８に記載の方法。
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｒ１はさらに電子豊富部位を含み、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択される。］
【請求項１０】
細胞のアポトーシスを誘導するための、または細胞の発癌を防止するための医薬の製造における式（Ｉ）
【化５】
2010527328.tif 000019
の金属トリアングロ化合物の使用。
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
請求項１において除外した化合物を含む。］
【請求項１１】
アポトーシスが誘導される細胞は腫瘍細胞である請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
腫瘍細胞に選択的にアポトーシスを誘導するための請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
腫瘍細胞のアポトーシスの誘導は、癌の処置または予防用の治療である請求項１１または１２に記載の使用。
【請求項１４】
細胞のアポトーシスの誘導は、細胞内の活性酸素種の増大を含む請求項１０乃至１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
細胞内の活性酸素種は、過酸化物、超酸化物、オゾン、ヒドロキシルラジカル、亜硝酸過酸化物、および次亜塩素酸のうちの１つ以上を含む請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
細胞のアポトーシスの誘導は細胞質ゾルの酸性化を含む請求項１０乃至１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
細胞のアポトーシスの誘導は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体遺伝子の発現の増大を含む請求項１０乃至１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
ＴＮＦ受容体はＡｐｏ−１／Ｆａｓ（ＣＤ９５）分子である請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
発現の増大は１つ以上のカスパーゼの活性化を含む請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
カスパーゼは、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ８、カスパーゼ９、およびカスパーゼ１０からなる群から選択される請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
細胞のアポトーシスの誘導は、ミトコンドリアからのシトクロムｃの放出の増大を含む請求項１４乃至２０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
細胞のアポトーシスの誘導は、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ／ＰＫＢ）のリン酸化を抑制することを含む請求項１０乃至２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
細胞のアポトーシスの誘導は、ミトコンドリアの外膜へのタンパク質Ｂａｘの移動とは無関係である請求項１０乃至２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
細胞は培養された細胞である請求項１４乃至２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
細胞は哺乳動物から取得された細胞である請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
哺乳動物は、ラット、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ムフロン、モルモット、ハムスター、チンパンジー、アカゲザル、およびヒトから取得される請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
細胞を一般式（Ｉ）の所定量の金属トリアングロ化合物と接触させることを含む請求項２４乃至２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
一般式（Ｉ）の２つ以上の異なる所定量の金属トリアングロ化合物の使用と、少なくとも第１および第２の腫瘍細胞とを含み、第１の細胞は２つの所定量のうちの少ない方の量と接触され、第２の細胞は２つの所定量のうちの多い方の量と接触される請求項２４乃至２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
第１の細胞および第２の細胞は同じ患者から取得される請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記細胞のアポトーシスを決定することをさらに含む請求項２８または２９に記載の使用。
【請求項３１】
一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物に対する患者の個別の応答を予測するための請求項２８乃至３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
細胞の発癌を防止することは、前記金属トリアングロと多環式芳香族炭化水素との錯体を形成させることを含む請求項１０乃至３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
金属トリアングロ化合物のＲ１は、０〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である請求項１０乃至３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
金属トリアングロ化合物の芳香族部位は、ベンゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、ナフタレン、アントラセン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンからなる群から選択される請求項３４に記載の使用。
【請求項３５】
金属トリアングロ化合物のＢ、Ｄ、およびＥは同一である請求項１０乃至３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯである請求項１０乃至３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
式（Ｉ）
【化６】
2010527328.tif 000020
の金属トリアングロ化合物を投与することを含む、細胞のアポトーシスを誘導する方法。［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
請求項１において除外した化合物を含む。］
【請求項３８】
金属トリアングロ化合物のＲ１は、０〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
芳香族部位は、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンからなる群から選択される請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
金属トリアングロ化合物のＢ、Ｄ、およびＥは同一である請求項３７乃至３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
細胞は哺乳動物に含まれる細胞である請求項３７乃至４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
細胞は哺乳動物から取得された細胞である請求項３７乃至４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物は、ラット、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ムフロン、モルモット、ハムスター、チンパンジー、アカゲザル、およびヒトから選択される請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
細胞は腫瘍細胞である請求項３７乃至４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１において除外した化合物を含む式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物を投与することを含む、細胞の発癌を防止する方法。
【請求項４６】
金属トリアングロ化合物は、多環式芳香族炭化水素との錯体を形成する請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
金属トリアングロ化合物と多環式芳香族炭化水素との間の錯体の形成によって、多環式芳香族炭化水素がＤＮＡとの錯体を形成することが防止される請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
（ａ）式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）キャリアまたは希釈剤と、
からなる細胞のアポトーシスを誘導するため、細胞の発癌を防止するため、またはその両方のための医薬組成物。
【請求項４９】
核酸アルキル化剤、ヌクレオシド類似物、アントラサイクリン、抗生物質、アロマターゼ阻害剤、葉酸拮抗剤、エストロゲン受容体調整因子、無機ヒ酸塩、微小管阻害剤、ニトロソ尿素、破骨細胞抑制剤、含白金化合物、レチノイド、トポイソメラーゼ１阻害剤、トポイソメラーゼ２阻害剤、チミジル酸合成酵素阻害剤、アロマターゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、イソフラボン、チロシンキナーゼ阻害剤、成長因子、ビスホスホネート、およびモノクローナル抗体のうちの１つ以上をさらに含む請求項４８に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金属三角形（トリアングロ；ｔｒｉａｎｇｕｌｏ）化合物およびその使用方法に関する。また、本発明は、細胞のアポトーシスを誘導する方法および発癌を防止する方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、世界で最も多い死因であり、複数の先進国においては第２の死因であるとともに、オーストラリア、日本、韓国、シンガポールにおいては第１の死因であり、英国およびスペインの男性においても第１の死因である。癌になる人の数は年々増えているが、この３０年間、癌治療によって癌死を減少させることはできずにいる。
【０００３】
細胞のアポトーシス（プログラムされた細胞死）が行われないことが、癌の発生に寄与する主な要因である。大抵の抗癌剤およびガンマ線照射は、アポトーシスを誘導することによって、その致死効果を働かせる。化学療法は、このように現在の所、大きくは用いられる化合物の細胞傷害効果（また一部の場合には真の細胞増殖抑制効果）、例えば、ＤＮＡのアルキル化、有糸分裂の抑制、代謝拮抗剤または構造的類似物による代謝への干渉、および抗生物質のＤＮＡインターカレーションに基づいている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の１つの目的は、細胞のアポトーシスを誘導するのに適切な化合物を提供することである。
本発明のさらなる目的は、細胞のアポトーシスを誘導する方法を提供することである。
【０００５】
本発明の別の目的は、細胞の癌発生（発癌）を防止する方法を提供することである。
本発明の別の目的は、腫瘍／癌を治療する、および／または、細胞の発癌を防止するための医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、本発明は一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物（すなわち、三角形構造の三核クラスタ）を提供する。
【０００７】
【化１】
2010527328.tif 000002
【０００８】
ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択される。この電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＯＨ、Ｎ＝Ｎ、Ｎ＝Ｏ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３から選択される官能基とのいずれかである。Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｎ、Ｏ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、Ｐ−（Ｒ２）３から選択される。ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、または、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、もしくは含芳香環脂環族基である。Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３、ＣＯ、ＮＣＣＨ３、ならびにＰ−Ｒ２から独立に選択される配位子である。ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、または、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、もしくは含芳香環脂環族基である。Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、イリジウム、スズ、およびロジウムから独立に選択される金属原子である。
【０００９】
さらなる一態様では、本発明は一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物を形成する方法を提供する。この方法は、一般式Ｒ１−ＡＨの化合物を提供することを含む。ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、または含芳香環脂環族基である。Ｒ１は、さらに電子豊富部位を含む。この電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＯＨ、Ｎ＝Ｎ、Ｎ＝Ｏ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかである。Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、Ｐ−（Ｒ２）３からなる群から選択される。ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＨと、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基とからなる群から選択される。この方法は、さらに、一般式Ｒ１−ＡＨの化合物を式（ＩＩＩ）の化合物に接触させることを含む。
【００１０】
【化２】
2010527328.tif 000003
【００１１】
この式において、Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、イリジウム、スズ、およびロジウムから独立に選択される金属原子である。Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、Ｒ２は上記において定義した通りである。Ｌ４およびＬ５は、互いから
独立に、ＮＣ−ＣＨ３、ＣＯ、ＮＯ、またはＨである。
【００１２】
別の態様では、本発明は、細胞のアポトーシスを誘導する、または細胞の発癌を防止するための医薬の製造における一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物の使用を提供する。
関連する一態様では、本発明は細胞のアポトーシスを誘導する方法を提供する。この方法は、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物を投与することを含む。
【００１３】
さらには、本発明は細胞の発癌を防止する方法を提供する。この方法は、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物を投与することを含む。
さらに別の態様では、本発明は、細胞のアポトーシスを誘導する、および／または、細胞の発癌を防止するための医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む。この医薬組成物は、キャリアまたは希釈剤も含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】一般式（Ｉ）の化合物の代表的な一例としての［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］の合成について示す概略図。
【図２】細胞生存率の検出を示す図。ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞系およびＨＬ−６０細胞系に対する［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］の抗腫瘍活性を決定した。全量１×１０６個の細胞／ｍｌを、２４時間、増大する濃度（０〜５０μＭ）の［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に晒し、細胞死をＭＴＴアッセイで決定した。示したデータは、３回の繰返し実験における中間値±３つの独立した実験のものである。
【図３】一般式（Ｉ）の化合物のさらなる例を示す図。Ａ：デカカルボニル［μ−［３−（ジエチルアミノ）−２、２−ジメチル−１−プロパンチオラト］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム（ケミカルアブストラクツ番号：１３９４０８−２１−２）、Ｂ：デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ピペリジンエタンアミナト−κＮＮ１：κＮＮ１）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：２１９９５１−９５−８）、Ｃ：デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［１１−（メルカプト−κＳ：κＳ）ウンデカノアト］（２−）］］トリトリアングロオスミウム酸水素（ＣＡＳ番号：８８１２００−２１−１）、Ｄ：デカカルボニル−μ−ヒドロ［２−（ホスフィノ−κＰ：κＰ）ベンゼンアミナト］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：５２４７４５−３３−３）、Ｅ：デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（４−ニトロベンゼンメタンイミナト−Ｎα：Ｎα］］トリトリアングロルテニウム（ＣＡＳ番号：１０７８２７−９５−２）、Ｆ：デカカルボニル［ｍ−［１、２−ジヒドロ−４、６−ジメチル−２−（チオキソ−κＳ：κＳ）−３−ピリジンカルボニトリラト］］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム（ＣＡＳ番号：８７２２５−２４−９）、Ｇ：［μ−（２−アミノベンゼンチオラト−κＳ：κＳ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１８６５０９−０８−０）、Ｈ：ノナカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−κＳ２：κＳ２）］−［１−（イソシアノ−κＣ）プロパン］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１８４６９５−９４−１）。
【図４Ａ】ＤＮＡ断片化の検出を示す図。［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］処理した腫瘍細胞のＤＮＡ開裂を、フローサイトメトリー分析を用いて評価した。ＨＬ−６０細胞を、１２．５μＭおよび２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で２４時間処理し、直ちにエタノール固定し、ＤＮＡ量分析用のＰＩで染色した。ＳｕｂＧ１群は、アポトーシス性のＤＮＡ断片化を表す二倍体以下の（ｓｕｂｄｉｐｌｏｄ）ＤＮＡ量を示す。示したデータは、３回以上の独立した実験についてのものである。
【図４Ｂ】ＤＮＡ断片化の検出を示す図。［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］処理した腫瘍細胞のＤＮＡ開裂を、フローサイトメトリー分析を用いて評価した。ＨＬ−６０細胞を、１２．５μＭおよび２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で２４時間処理し、直ちにエタノール固定し、ＤＮＡ量分析用のＰＩで染色した。ＳｕｂＧ１群は、アポトーシス性のＤＮＡ断片化を表す二倍体以下の（ｓｕｂｄｉｐｌｏｄ）ＤＮＡ量を示す。示したデータは、３回以上の独立した実験についてのものである。
【図４Ｃ】ＤＮＡ断片化の検出を示す図。［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］処理した腫瘍細胞のＤＮＡ開裂を、フローサイトメトリー分析を用いて評価した。ＨＬ−６０細胞を、１２．５μＭおよび２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で２４時間処理し、直ちにエタノール固定し、ＤＮＡ量分析用のＰＩで染色した。ＳｕｂＧ１群は、アポトーシス性のＤＮＡ断片化を表す二倍体以下の（ｓｕｂｄｉｐｌｏｄ）ＤＮＡ量を示す。示したデータは、３回以上の独立した実験についてのものである。
【図５Ａ】活性酸素種（ＲＯＳ）生成の例を示す図。ジャーカット細胞（２×１０６）を、１２．５μＭおよび２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］とともにインキュベートし、細胞間Ｏ２−をルシゲニンによる化学発光アッセイによって測定した。
【図５Ｂ】活性酸素種（ＲＯＳ）生成の例を示す図。ＨＬ−６０細胞（２×１０６）を、１２．５μＭおよび２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］とともにインキュベートし、細胞間Ｏ２−をルシゲニンによる化学発光アッセイによって測定した。
【図５Ｃ】細胞内ｐＨｉの減少の例を示す図。Ａの細胞質ゾルｐＨをｐＨ感受性プローブである２’、７’−ビス（２−カルボキシエチル）−５、６−カルボキシフルオレセインで決定した。
【図６Ａ】活性酸素種（ＲＯＳ）生成のさらなる例を示す図。ＨＬ−６０細胞（１×１０６）を、１０００ユニット／ｍＬのカタラーゼの存在化または非存在下に４時間、１２．５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で処理した。次いで、細胞をＤＣＦＨ−ＤＡ（５μＭ）と共に１５分間置き、発生した細胞内Ｈ２Ｏ２の量をフローサイトメトリーによって検出される蛍光シフトによって示した。
【図６Ｂ】活性酸素種（ＲＯＳ）生成のさらなる例を示す図。ＨＬ−６０細胞（１×１０６）を、１０００ユニット／ｍＬのカタラーゼの存在化または非存在下に４時間、２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で処理した。次いで、細胞をＤＣＦＨ−ＤＡ（５μＭ）と共に１５分間置き、発生した細胞内Ｈ２Ｏ２の量をフローサイトメトリーによって検出される蛍光シフトによって示した。
【図７Ａ】ＨＬ−６０細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）生成のさらなる例を示す図。１２．５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］を、細胞の存在下、ＤＣＨＦ−ＤＡ染料とともに、またはＤＣＨＦ−ＤＡ染料なしで培質に溶解し、分光蛍光計を用いてＨ２Ｏ２生成を測定した。
【図７Ｂ】ＨＬ−６０細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）生成のさらなる例を示す図。２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］を、細胞の存在下、ＤＣＨＦ−ＤＡ染料とともに、またはＤＣＨＦ−ＤＡ染料なしで培質に溶解し、分光蛍光計を用いてＨ２Ｏ２生成を測定した。
【図８】腫瘍細胞における［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］によるＣｄ９５の発現上昇を示す図。ＨＬ−６０細胞を、２５ｍＭ［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で１２時間、処理し、ＣＤ９５の表面発現を、「材料および方法」に記載したようなフローサイトメトリーによって分析した。陰の付いたヒストグラムは、染色されていない細胞を示す。マウスのＩｇＧ１ｋをアイソタイプのコントロールとして用いた。少なくとも１０，０００イベントが数えられた。また、示したデータは３回以上の別個の実験についてのものである。
【図９Ａ】［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］が誘導するカスパーゼ活性化を示す図。カスパーゼ８、２、９、３の活性を、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で処理したジャーカット細胞の可溶化液により決定し、未処理の細胞に対する増大を倍数で示した。
【図９Ｂ】［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］が誘導するカスパーゼ活性化を示す図。カスパーゼ８、２、９、３の活性を、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で処理したＨＬ−６０細胞の可溶化液により決定し、未処理の細胞に対する増大を倍数で示した。
【図１０Ａ】特定の抗体を用いるウェスタンブロット法によって検出される、カスパーゼ８および９の処理を示す図。
【図１０Ｂ】特定の抗体を用いるウェスタンブロット法によって検出される、カスパーゼ３の処理を示す図。
【図１０Ｃ】ウェスタンブロット法によって検出されるＨＬ−６０細胞可溶化液におけるカスパーゼ３基質ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の開裂を示す図。
【図１１】［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］が誘導するＤＮＡ断片化を示す図。ジャーカットＮｅｏ細胞およびジャーカットＢＣＬ２細胞を、１２．５μＭおよび２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で１８時間処理し、直ちにエタノール固定し、ＤＮＡ量分析用のＰＩで染色した。ＳｕｂＧ１群は、アポトーシスを表す二倍体以下のＤＮＡ量を示す。［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］によって誘導されたＤＮＡ断片化は、ＢＣｌ２のジャッカート細胞の過発現において抑制される。示したデータは、３回以上の独立した実験についてのものである。
【図１２Ａ】［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］が誘導するミトコンドリア経路を通じたアポトーシスを示す図。ＨＬ６０細胞（３０×１０６）を、１２．５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で１２時間処理し、細胞質ゾル画分およびミトコンドリア画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動にかけ、ＰＶＤＦ膜へ移動させ、抗Ｃｙｔ．Ｃ抗体および抗Ｂａｘ抗体（Ｃ）で調べた。抗βアクチン抗体を用いて等量の試料を評価した。
【図１２Ｂ】［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］が誘導するミトコンドリア経路を通じたアポトーシスを示す図。ＨＬ６０細胞（３０×１０６）を、２５μＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で１２時間処理し、細胞質ゾル画分およびミトコンドリア画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動にかけ、ＰＶＤＦ膜へ移動させ、抗Ｃｙｔ．Ｃ抗体および抗Ｂａｘ抗体（Ｃ）で調べた。抗βアクチン抗体を用いて等量の試料を評価した。
【図１３】［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］が誘導するホスホ−ＡＫＴの発現低下を示す図。［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］の用量を変化させることでＡｋｔの脱リン酸化および不活性化が可能であることが、ウェスタンブロットによって示された。ＨＬ−６０細胞（２×１０６）を、用量を変化させた［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］（１２．５μＭおよび２５μＭ）と共に２、４、６時間、インキュベートし、Ａｋｔのリン酸化状態のウェスタンブロット分析を行うための細胞可溶化液を取得した。
【図１４Ａ】コメットアッセイによるＤＮＡ損傷の決定を示す図。ＨＬ−６０細胞は、オスミウムトリアングロ化合物に晒されていない対照細胞である。細胞懸濁液をアガロース（ａｇｒｏｓｅ）スライド上に展開し、やはりアガロース層でプレコートした。４℃で５分間、ゲル化させた後、カバースリップを静かに除去し、第３層の１００μｌのＬＭＡを加え、４℃で５分間、凝固させた。次いでスライドを溶解液で充填した槽中に配置し（０．０３ＭのＮａＯＨ、１ＭのＮａＣｌ、０．１％のＳＬＳ、ｐＨ１２．５、４℃）、１時間冷却したまま保持した。次いでスライドを、０．０７５ＭのＮａＯＨ、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ１２．５（室温）のバッファで充填した電気泳動槽中に配置した。室温、１Ｖ／ｃｍ、約２４０ｍＡで２５分間、電気泳動を行った。最後に、スライドを超純水で静かに２回、洗浄した。そして、アクリジンオレンジ（水中に１００μｇ／ｍｌ、５０μｌ／スライド）で染色し、キューブＵ−ＭＷＢ（励起フィルタ：４５０〜４８０ｎｍ、バリアフィルタ：５１５ｎｍ）で読取を行った。この図のテール測定値をコントロールとして参照した。
【図１４Ｂ】コメットアッセイによるＤＮＡ損傷の決定を示す図。ＨＬ−６０細胞は、濃度１２．５ｕＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で４時間、処理したものである。細胞懸濁液をアガロース（ａｇｒｏｓｅ）スライド上に展開し、やはりアガロース層でプレコートした。４℃で５分間、ゲル化させた後、カバースリップを静かに除去し、第３層の１００μｌのＬＭＡを加え、４℃で５分間、凝固させた。次いでスライドを溶解液（０．０３ＭのＮａＯＨ、１ＭのＮａＣｌ、０．１％のＳＬＳ、ｐＨ１２．５、４℃）で充填した槽中に配置し、１時間冷却したまま保持した。次いでスライドを、０．０７５ＭのＮａＯＨ、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ１２．５（室温）のバッファで充填した電気泳動槽中に配置した。室温、１Ｖ／ｃｍ、約２４０ｍＡで２５分間、電気泳動を行った。最後に、スライドを超純水で静かに２回、洗浄した。そして、アクリジンオレンジ（水中に１００μｇ／ｍｌ、５０μｌ／スライド）で染色し、キューブＵ−ＭＷＢ（励起フィルタ：４５０〜４８０ｎｍ、バリアフィルタ：５１５ｎｍ）で読取を行った。図１４Ａのテール測定値をコントロールとして参照した。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物を提供する：
【００１６】
【化３】
2010527328.tif 000004
【００１７】
この式では、Ｒ１は、０〜６個のヘテロ原子（すなわち、炭素以外の原子）を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、または含芳香環脂環族基であってよく、通常、主鎖の長さは炭素原子が１〜約２０個である。それぞれのヘテロ原子は、例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、またはＳｉであってよい。脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、または含芳香環脂環族の部位は、他の極性、非極性、飽和、または不飽和の基（例えば、エポキシ基を含む）も含んでよい。幾つかの実施形態では、Ｒ１は、０〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である。Ｒ１は、さらに電子豊富部位を含む。電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅなどのヘテロ原子と、（ｉｉ）官能基とのいずれかである。それぞれの官能基の例には、次に限定されないが、−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３を含む。幾つかの代表的な例を挙げると、Ｒ１は、幾つかの実施形態では、カプリルアミド−８−イル、３−アミノシクロヘキサン−１−イル−、テトラヒドロフラン−３−イル−、またはｎ−ペンタノール−５−イル−である。幾つかの実施形態では、Ｒ１は、
複素環式の二座、三座、または四座部位であってよい。配座数（ｄｅｎｔｉｃｉｔｙ：記号Ｋ）は、ある部位が（少なくとも理論上は）それを通じて金属と相互作用することの可能な結合の数を表す。これは通常、ある部位が金属に結合することの可能な、隣接していないドナー部分の数を表す。
【００１８】
式（Ｉ）では、Ａは、Ｓ、Ｓｅ、Ｏ、Ｎ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３であってよい。部位Ｒ２は、Ｈであるか、または、０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、もしくは含芳香環脂環族基であってよく、通常、主鎖の長さは、炭素原子が１〜約１０、約１５、または約２０個である。それぞれのヘテロ原子は、例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉであってよい。Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は独立に選択される配位子であり、ＣＯ、ＮＣＣＨ３、およびＰ−Ｒ２であってよい。やはり、Ｒ２は、０〜６個のヘテロ原子（上記参照）を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、もしくは含芳香環脂環族基であるか、またはＨであってよい。幾つかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯである。Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、イリジウム、スズ、およびロジウムから独立に選択される金属原子である。したがって、式（Ｉ）の化合物は、中心Ｂ、Ｄ、およびＥとして１種類の金属原子（例えば、オスミウムまたはルテニウム）しか含まなくてもよく、２〜３種類の異なる金属原子、すなわち、混合金属原子（例えば、オスミウムおよびレニウム）を含んでもよい。
【００１９】
次の化合物は除外される：デカカルボニル［μ−［３−（ジエチルアミノ）−２、２−ジメチル−１−プロパンチオラト］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［１１−（メルカプト−κＳ：κＳ）ウンデカノアト］（２−）］］トリトリアングロオスミウム酸水素、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［２−（メルカプト−κＳ：κＳ）エタノラト］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［２−［１−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−２−オキソ−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキシ−１−イル］エチリデン］ヒドラジン−カルボチオアミダト−κＳ：κＳ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［２−［１−（６，６−ジ−メチル−３−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキシ−２−イル）エチリデン］ヒドラジンカルボチオアミダト−κＳ：κＳ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［（３ａＲ、３ｂＲ、４ａＲ、５ａＳ）−３ａ、３ｂ、４、４ａ、５、５ａ−ヘキサヒドロ−５ａ−ヒドロキシ−３、４、４−トリメチル−１Ｈ−シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２−ｃ］ピラゾール−１−カルボチオアミド−κＳ１：κＳ１］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［（１Ｒ、３Ｅ、４Ｓ、６Ｓ）−４−（メルカプト−κＳ：κＳ）−４、７、７−トリメチルビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−オン  オキシマート］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１，２−エタンジチオラト−κＳ：κＳ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ５−［２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンチオナト（２−）−κＮ１：κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［６−（メルカプト−κＳ：κＳ）−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２］］ヘキサオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム、［μ−（２−アミノベンゼンチオラト−κＳ：κＳ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−κＳ２：κＳ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、ウンデカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（チオウレアト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム
、デカカルボニル［μ−（４、６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（Ｎ、Ｎ’−ジフェニルチオウレアト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（フェニルチオウレアト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、トリアコンタカルボニル［μ６−［１、３、５−トリアジン−２、４、６（１Ｈ、３Ｈ、５Ｈ）−トリチオナト（３−）−Ｓ：Ｓ：Ｓ’：Ｓ’：Ｓ”：Ｓ”］ノナオスミウム、デカカルボニル［μ−［３−（ジエチルアミノ）−２、２−ジメチル−１−プロパン−チオラト］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（β、β−ジメチル−１−アゼチジン−プロパンチオラト）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１、３−ジヒドロ−１−メチル−２Ｈ−イミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（ジエチルカルバモジチオアト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１，２−エタンジチオラト−κＳ：κＳ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ−［μ−（Ｎ−フェニルメタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［Ｎ−（４−メチルフェニル）メタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（Ｎ−メチルメタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−チアゾリジンチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−イミダゾリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾキサゾールチオナト−Ｓ：Ｓ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１、３−ジヒドロ−１−ベンズ−２Ｈ−イミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾチアゾールチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［２−（ホスフィノ−κＰ：κＰ）ベンゼンアミナト］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−メチル−４−キノリンアミナト−κＮ４：κＮ４）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（６−フェニル−２−ピリジンアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−チアゾールアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（４、５−ジヒドロ−２−チアゾール−アミナト−κＮ２：κＮ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（４−メチル−２−ベンゾチアゾールアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリ−トリアングロオスミウム、［μ−（ベンゾ［ｈ］キノリン−２−アミナト−κＮ２：κＮ２）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニ���−μ−ヒドロ［μ−［４−［（１Ｅ）−（４−ニトロフェニル）アゾ］ベンゼンアミナト−κＮ：κＮ］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ピペリジンエタンアミナト−κＮＮ１：κＮＮ１）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［１、２、３、４−テトラヒドロ−１−［１−（イミノ−κＮ：κＮ）エチル］キノリナト］］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（Ｎ、Ｎ−ジメチルメタンイミダミナト−Ｎ：Ｎ’）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（６−クロロ−２−ピリジンアミナト−Ｎ２：Ｎ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（ヒドラジンカルボキシアミダトＮ：Ｎ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（２、２−ジメチルヒドラジンカルボキシアミダト−Ｎ：Ｎ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［１、２−ジヒドロ−４、６−ジメチル−２−（チオキソ−κＳ：κＳ）−３−ピリジンカルボニトリラト］］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム、デカカルボニル［μ−（４、６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム、［μ−（１、１’−ビナフタレン］−２、２’−ジアミナト−κＮ：κＮ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロルテニ
ウム、および［μ−（４−アミノフェノラトＮ：Ｎ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロルテニウム。
【００２０】
Ｂ、Ｄおよび、Ｅがオスミウムであり、Ａが硫黄である化合物の幾つかの実施形態では、次の部位Ｒ１（上記参照）は除外される：３−（ジエチルアミノ）−２、２−ジメチル−１−プロパン−イル−、１−ヒドロキシピリジン−２−イル−、４、６−ジメチルピリミジン−２−イル（異性体である４、６−ジメチル−２−ヒドロ−ピリミジン−２−エンイルを含む）、ウンデカン酸−１１−イル−、エタノール−２−イル−、メルカプトエタン−２−イル−、２−置換−エチリデンヒドラジンカルバミジル（置換基は、含酸素官能基および１つまでの酸素ヘテロ原子を含む脂環式部位である）、ピリジン−２−イル（異性体である２−ヒドロ−ピリジン−２−エンイルを含む）、１−ヒドロキシピリジン−２−イル（異性体である１−ヒドロキシ−２−ヒドロ−ピリジン−２−エンイルを含む）、３−ヒドロキシピリジン−２−イル（異性体である３−ヒドロキシ−２−ヒドロ−ピリジン−２−エンイルを含む）、６−メルカプトピリジンイル（異性体である６−メルカプト−２−ヒドロ−ピリジン−２−エンイルを含む）、２−アミノベンゼンイル−、ジアミノメタン−２−エンイル−、Ｎ−フェニルジアミノメタン−２−エンイル−、Ｎ、Ｎ’−ジフェニルジアミノメタン−２−エンイル−、Ｎ、Ｎ’−ジエチルアミノ−２、２−ジメチルプロパン−３−イル−、イミダゾリジン−２−エンイル−、１−メチルイミダゾール−２−イル（異性体である１−メチル−２−ヒドロ−イミダゾール−２−エンイルを含む）、Ｎ、Ｎ−ジエチルメタンチオアミド−１−イル−、Ｎ−４−メチルフェニルアミノメタン−１−イル（異性体であるＮ−４−メチルフェニルアミノメチレニル−を含む）、１、３−チアゾリジン−２−エンイル−、ベンズイミダゾリン−２−エンイル−、およびベンゾチアゾリン−２−イル−。
【００２１】
一般式（Ｉ）の化合物の幾つかの実施形態では、Ｂ、Ｄ、およびＥは同一である。Ｂ、Ｄ、およびＥは、例えば、オスミウムであってよい。そのような実施形態では、金属トリアングロ化合物は次式（ＩＩ）によって示される：
【００２２】
【化４】
2010527328.tif 000005
【００２３】
図３には、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物の幾つかの代表的な例を示す。さらなる例は、次に限定されないが、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾキサゾールチオナト−Ｓ：Ｓ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８７２２５−２７−２）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−イミダゾリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８７２２５−２８−３）、デカカルボニル［μ−（１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８７２２５−２９−４）、デ
カカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１７８４８４−９０−７）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−κＳ２：κＳ２）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１８４６９５−８１−６）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−κＳ２：κＳ２）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１７８４８４−９１−８）、デカカルボニル［μ−（４，６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１６２９７３−４０−２）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［２−（メルカプト−κＳ：κＳ）エタノラト］］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８７４７４８−５９−１）、デカカルボニル［μ−［２−［１−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）−２−オキソ−６−オキサビシクロ−［３．１．０］ヘキシ−１−イル］エチリデン］ヒドラジンカルボチオアミダト−κＳ：κＳ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：７５３４５３−９４−０）、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ５−［２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジチオナト（２−）−κＮ１：κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム（６Ｏｓ−Ｏｓ）（ＣＡＳ番号：２５２７５４−１６−８）、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［６−（メルカプト−κＳ：κＳ）−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２］］−ヘキサオスミウム（６Ｏｓ−Ｏｓ）（ＣＡＳ番号：２５２７５４−１５−７）、デカカルボニル［μ−［２−［１−（６，６−ジメチル−３−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキシ−２−イル）エチリデン］ヒドラジンカルボチオアミダト−κＳ：κＳ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：７５３４５３−９２−８）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［（１Ｒ，３Ｅ，４Ｓ，６Ｓ）−４−（メルカプト−κＳ：κＳ）−４，７，７−トリメチルビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−オンオキシマート］］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：２９６２４０−８０−７）、デカカルボニル［μ−［（３ａＲ，３ｂＲ，４ａＲ，５ａＳ）−３ａ，３ｂ，４，４ａ，５，５ａ−ヘキサヒドロ−５ａ−ヒドロキシ−３，４，４−トリメチル−１Ｈ−シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２−ｃ］ピラゾール−１−カルボチオアミド−κＳ１：κＳ１］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：７５３４５３−９０−６）、デカカルボニル［μ−（１，２−エタンジチオラト−κＳ：κＳ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：２８８１４１−５４−８）、デカカルボニル［μ−（ジエチルカルバモジチオラト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１０２９３１−０７−７）、デカカルボニル［μ−［Ｎ−（４−フルオロフェニル）メタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ］］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：７９７３７−５６−７）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（Ｎ−フェニル−メタンチオアミダト−Ｓ：���）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８４０２７−３５−０）、デカカルボニル−μ−（β，β−ジメチル−１−アゼチジンプロパンチオラト）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１３９４０８−２２−３）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［Ｎ−（４−メチルフェニル）メタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ］］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８４０２７−３６−１）、デカカルボニル［μ−（１，３−ジヒドロ−１−メチル−２Ｈ−イミダゾール−２−チオナト−κＳ２：κＳ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１０３６０２−１６−０）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（Ｎ−メチルメタンチオアミダト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８４０２７−３７−２）、デカカルボニル［μ−（Ｎ，Ｎ’−ジフェニルチオウレアト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１５４８２７−１７−５）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（フェニルチオウレアト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１５４８２７−１６−４）、トリアコンタカルボニル［μ６−［１，３，５−トリアジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリチオナト（３−）−Ｓ：Ｓ：Ｓ’：Ｓ’：Ｓ”：Ｓ”］］ノナオスミウム（ＣＡＳ番号：１５３０４７−２７−９）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（６−フェニル−２−ピリジナミナ
ト−κＮ２：κＮ２）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：６７４３１６−５４−２）、デカカルボニル［μ−（４，５−ジヒドロ−２−チアゾールアミナト−κＮ２：κＮ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：５１５８５３−０９−５）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［４−［（１Ｅ）−（４−ニトロ−フェニル）アゾ］ベンゼンアミナト−κＮ：κＮ］］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：２５２６６７−７３−５）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（４−メチル−２−ベンゾチアゾールアミナト−κＮ２：κＮ２）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：５１５８５３−０６−２）、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾチアゾールチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］デカカルボニル−μ−ヒドロ−トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８７３９１−６６−０）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−メチル−４−キノリンアミナト−κＮ４：κＮ４）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８８４６５０−７０−８）、ウンデカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（チオウレアト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１７４９０９−６９−４）、［μ−（ベンゾ［ｈ］キノリン−２−アミナト−κＮ２：κＮ２）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：４７７２１１−７８−２）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−［１，２，３，４−テトラヒドロ−１−［１−（イミノ−ｋＮ：ｋＮ）エチル］キノリナト］］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：１７５４０４−５０−９）、デカカルボニル［μ−（６−クロロ−２−ピリジナミナト−Ｎ２：Ｎ２）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８４０５６−２２−４）、デカカルボニル［μ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンイミダミダト−Ｎ：Ｎ’）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：９９３５０−８４−２）、デカカルボニル［μ−（ヒドラジンカルボキシアミダト−Ｎ：Ｎ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８２４５６−０７−３）、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２−チアゾリジンチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］トリトリアングロオスミウム（ＣＡＳ番号：８７２２５−２４−９）、デカカルボニル［μ−（１，２−ジヒドロ−４，６−ジメチル−２（チオキソ−κＳ：κＳ）−３−ピリジンカルボニトリラト］］−μ−ヒドロトリトリアングロルテニウム（ＣＡＳ番号：６７３４５０−９４−７）、［μ−（１，１’−ビナフタレン］−２，２’−ジアミナト−κＮ：κＮ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロルテニウム（ＣＡＳ番号：５１５１３４−５７−３）、［μ−（４−アミノフェノラト−Ｎ：Ｎ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム（ＣＡＳ番号：１３６２９１−９２−４）、およびデカカルボニル［μ−（４，６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロルテニウム（ＣＡＳ番号：１６２９７３−４３−５）を含む。
【００２４】
幾つかの実施形態では、Ｒ１は、０〜６個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である。式（ＩＩ）のオスミウムトリアングロ化合物のＲ１をそれぞれの芳香族部位（「ａｒ」）として示し、金属原子に番号を付けて示すと、式（ＩＩ）は次のようにも示される：
【００２５】
【化５】
2010527328.tif 000006
【００２６】
式（Ｉ）の化合物では、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、例えば、ＣＯ、または（改良された）水溶性を与える配位子（イオン化可能な基を有するホスフィンまたはホスファイト配位子など）であってよい。そのようなホスフィンおよびホスフェート配位子Ｌの代表的な例は、［Ｐ（Ｃ６Ｈ４ＳＯ３Ｎａ３）］および［Ｐ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＭｅ３Ｉ３）］を含む（コランジェロ（Ｃｏｌａｎｇｅｌｏ）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第９９巻、ｐ．５０５−５１２）。水溶性を与える他の配位子Ｌは、幾つか挙げると、ＰＰｈ５、ＰＰｈ３、Ｐ（Ｐｈ）２、ビピリジン、１、３−ジ−４−ピリジルプロパン（ｄｐｐ）、１、２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、２、３−ビス（２−ピリジル）キノキサリン（ジピリドキノキサリン、ｄｐｑ）、（ＰＰｈ）４ＣＨ２、［Ｃ６Ｈ４（ＰＰｈ）３］、ＴＴＰＩｎＮ３、またはＣＨ３Ｃ（ＣＨ２ＰＰｈ２）３）（Ｔｒｉｐｈｏｓ）を含む。配位子Ｌ１〜Ｌ３は同一であっても異なっていてもよく、例えば、ＣＯと、水溶性を与える配位子とのいずれかであってもよく、両者が存在してもよい。
【００２７】
用語「脂肪族」は、他に記載のない限り、直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖を意味し、飽和であっても、一不飽和または多不飽和であってもよく、ヘテロ原子（上記参照）を含んでもよい。不飽和脂肪族基は、１つ以上の二重および／または三重結合（アルケニルまたはアルキニル部位）を含む。炭化水素鎖の枝は、直鎖や非芳香族の環状部分も含んでよい。炭化水素鎖は、他に記載のない限り、任意の長さであってよく、任意の数の枝を含んでよい。通常、炭化水素鎖（主鎖）は、１〜５、〜１０、〜１５、または〜２０個の炭素原子を含む。アルケニル基の例は、１つ以上の二重結合を含む、直鎖または分岐鎖の炭化水素基である。アルケニル基は、通常、２〜２０個の炭素原子と、１〜２個の二重結合とを含む（約２〜約１０個の炭素原子と１個の二重結合など）。アルキニル基は、通常、２〜２０個の炭素原子と、１〜２個の三重結合とを含む（２〜１０個の炭素原子と１つの三重結合など）。アルキニル基の例は、１つ以上の三重結合を含む、直鎖または分岐鎖の炭化水素基である。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、それらの基のｎ異性体、イソプロピル、イソブチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、および３，３−ジメチルブチルである。主鎖および分岐鎖はいずれもさらにヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、またはＳｉ）を含んでよく、それらのヘテロ原子によって炭素原子が置換されてもよい。用語「脂環式」は、他に記載のない限り、非芳香族の環式炭化水素部位を意味し、飽和であっても、一不飽和または多不飽和であってもよい。環式炭化水素部位は、非芳香族の環状部分や鎖部分によって置換されてもよい。環式炭化水素部位の主鎖は、他に記載のない限り、任意の長さであってよく、任意の数の非芳香族環状部分と鎖部分とを含んでよい。環式炭化水素部位ならびに環状置換基および鎖置換基は、いずれもさらにヘテ
ロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、またはＳｉ）を含んでよい。
【００２８】
用語「脂環式」は、他に記載のない限り、非芳香族の環式炭化水素部位（例えば、炭化水素部位）を意味し、飽和であっても、一不飽和または多不飽和であってもよい。環式炭化水素部位は縮合環系を含んでもよく、非芳香族の環状部分や鎖部分によって置換されてもよい。環式炭化水素部位の主鎖は、他に記載のない限り、任意の長さであってよく、任意の数の非芳香族環状部分と鎖部分とを含んでよい。通常、炭化水素鎖（主鎖）は、１つのリングに３，４，５，６，７，または８個の主鎖原子を含む。そのような部位の例は、次に限定されないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、またはシクロオクチルを含む。環式炭化水素部位ならびに（存在する場合には）環状置換基および鎖置換基は、いずれもさらにヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、またはＳｉ）を含んでよく、それらのヘテロ原子によって炭素原子が置換されてもよい。用語「脂環式」は、不飽和の環式炭化水素である、シクロアルケニル部位も含み、一般に、約３〜約８個の環炭素原子を含む（例えば、５〜６個の環炭素原子）。シクロアルケニル基は、通常、それぞれの環系に二重結合を有する。シクロアルケニル基も置換されてよい。
【００２９】
用語「芳香族」は、他に記載のない限り、共役二重結合からなる平坦な環式炭化水素部位を意味し、１つの環であっても、複数の縮合環すなわち共有結合で結ばれた環（例えば、２、３、または４個の縮合環）であってもよい。用語「芳香族」は、アルキルアリールを含む。通常、炭化水素鎖（主鎖）は、１つの環式に５，６，７，または８個の主鎖原子を含む。例を挙げると、適切な芳香族部位の例は、次に限定されないが、ベンゼン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピロール、ピリダジン、フラン、インドール、ベンズインドール、チオフェン、ベンゾフラン、ナフトフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、アントラチオベンゼン、ナフタレン、トリアザアントラセン、［１０］アヌレン（１、３、５、７、９−シクロデカペンタエニル−）、［１２］アヌレン、［８］アヌレン、チア［１１］アヌレン、フェナレン（ペリナフテン）、１、９−ジヒドロピレン、クリセン（１、２−ベンゾフェナントレン）、アントラセン、キノリン、ナフサキノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、オキサゾール、オキソニン、オキセピン、ベンゾオキセピン、アゼピン、チエピン、セレニピン、チオニン、アゼシン（アザシクロデカペンタエン）、ジアゼシン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈアゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、ジアゾシン、ベンゾアゾシン、１Ｈアゾニン、アザウンデシン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンが含まれる。アルキルアリール部位の一例は、ベンジルである。環式炭化水素部位の主鎖は、他に記載のない限り、任意の長さであってよく、任意の数のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、およびＳ）を含んでよい。
【００３０】
したがって、幾つかの実施形態では、式（Ｉ）のＲ１は、ベンゼン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、ナフタレン、アントラセン、９、１０−アントラセンジオン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ−［３、２−ｂ］ピリジンなど、芳香族部位である。
【００３１】
したがって、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物の幾つかの実施形態は、含芳香環脂肪族化合物とも呼ばれる。用語「含芳香環脂肪族」は、１つ以上の芳香族部位が１つ以
上の脂肪族基で置換されている炭化水素部位を意味する。したがって、用語「含芳香環脂肪族」は、２つ以上のアリール基が任意の長さの１つ以上の脂肪族鎖（例えば、メチル基）により接続されている炭化水素部位を含む。通常、炭化水素鎖（主鎖）は、芳香族部位の各リングに５，６，７，または８個の主鎖原子を含む。含芳香環脂肪族の部位の例は、次に限定されないが、１−エチルナフタレン、１、１’−メチレンビスベンゼン、９−イソプロピルアントラセン、１、２、３−トリメチルベンゼン、４−フェニル−２−ブテン−１−オール、７−クロロ−３−（１−メチルエチル）−キノリン、３−ヘプチルフラン、ベンゾモルホリン、６−［２−（２、５−ジエチルフェニル）エチル］−４−エチルキナゾリン、１、３−ベンゾ−ジオキソール、９、１０−ジヒドロアントラセン、［３．３］オルトシクロファン（５、６、７、１２、１３、１４−ヘキサヒドロ−ジベンゾ［ａ、ｆ］シクロデセン）、または７、８−ジブチル−５、６−ジエチルイソキノリンを含む。
【００３２】
本明細書において用いられる「脂肪族」、「脂環式」、「芳香族」、および「含芳香環脂肪族」の各用語は、それぞれの部位の置換体および無置換体のいずれの意味も含む。置換基は任意の官能基であってよく、例えば、次に限定されないが、アミノ、アミド、アジド、カルボニル、カルボキシル、シアノ、イソシアノ、ジチアン、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、有機金属、有機ホウ素、セレノ、シリル、シラノ、スルホニル、チオ、チオシアノ、トリフルオロメチルスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、ブロモベンゼンスルホニル、ニトロベンゼンスルホニル、およびメタンスルホニルである。
【００３３】
ヘテロ原子は、炭素以外の任意の原子である。例は、次に限定されないが、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｓ、およびＳｅを含む。芳香族部位の１つ以上の環に幾つかのヘテロ原子が存在する場合、それらは独立に選択される。
【００３４】
Ｒ１が、０〜６個のヘテロ原子（上記参照）を含む単環〜六環式の芳香族部位である幾つかの実施形態では、Ｂ、Ｄ、およびＥ、ならびにＬ１、Ｌ２、およびＬ３は同一である。Ｌ１〜Ｌ３は、例えば、ＣＯであってよく、Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウムであってよい。その場合、金属トリアングロ化合物は、次式で表される（やはり金属原子に番号を付けて示す）。
【００３５】
【化６】
2010527328.tif 000007
【００３６】
代表的な一例として、一実施形態では、それぞれのオスミウムトリアングロ化合物は次式の構造である：
【００３７】
【化７】
2010527328.tif 000008
【００３８】
一般式（Ｉ）（上記参照）の金属トリアングロ化合物は、一般式（ＩＩＩ）の化合物を提供することによって形成されてよい。
【００３９】
【化８】
2010527328.tif 000009
【００４０】
この式において、Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、イリジウム、スズ、およびロジウムから選択される、独立に選択される金属原子である。Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は独立に選択される配位子であり、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、またはＰ−（Ｒ２）３であってよい。ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、または、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基である。Ｌ４およびＬ５は独立に選択される配位子であり、ＮＣ−ＣＨ３、ＣＯ、ＮＯ、およびＨであってよい。
【００４１】
式（ＩＩＩ）の化合物を一般式Ｒ１−ＡＨの化合物（Ｒ１およびＡは上記の通り）と反応させると、一般式（Ｉ）の化合物が得られる。有機化合物との金属錯体の形成中にＮＣ−ＣＨ３などの配位子が置換されることは、以前に示されている（例えば、Ｈｕｎｇ，Ｊ．−Ｔ．ら、Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ（１９９６）、１５、５６０５−５６１２、Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．ら、Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ（１９９９）、１８、３５１９−３５２７）。これに関して、本発明は、上記に定義した金属トリアングロ化合物を形成する方法を提供する。この方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を一般式Ｒ１−ＡＨの化合物に接触させることを含む。Ｒ１の例は、次に限定されないが、キノリン、イソキノリン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ピラゾール、ピラジン、インドール、ベンズインドー
ル、キナゾリン、チオフェン、ピリジン、またはナフタキノリン（さらなる例については上記を参照）を含み、いずれも置換されてよい。Ｒ１がキノリンである場合、化合物Ｒ１−ＡＨは、例えば、２−キノリンチオール、５−キノリンチオール（ケミカルアブストラクツ番号：３０５６−０３−９）４−キノリンチオール（ＣＡＳ番号：５１８１２−９６−５）、６−キノリンチオール（ＣＡＳ番号：１００６５３−５９−６）、８−キノリンチオール（ナトリウム塩のＣＡＳ番号：２８０１−１６−３）、３−メチル−８−キノリンチオール（ＣＡＳ番号：７５３５６−５６−８）、４−メチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：４４３７−６５−４）、６−メルカプト−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：１  １０１３１−１４−１）、３−メチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：１８３２０６−７４−８）、４、７−ジメチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：６４２１５−４８−１）、４−エチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：６４２１５−５０−５）、８−メルカプト−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：１  １７５３６−０８−０）、６−フェナントリジンチオン（ＣＡＳ番号：５４８１０−０３−６）、ベンゾキノリン−３−チオン（ＣＡＳ番号：６４２１５−５８−３）、３−ヒドロキシ−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：３４９２３−７２−３）、６−メトキシ−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：１１３９４２−９２−０）、５−メチル−１、６−ナフチリジン−２−チオン（ＣＡＳ番号：１４５３１６−４３−４）、４、６−ジメチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：４１９５７−２３−７）、ベンズイソキノリン−４−チオン（ＣＡＳ番号：７７３７７−２０−９）、４、８−ジメチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：５３７６１−６０−７）、５−ｓｅｃ−ペンチル−８−キノリンチオール（ＣＡＳ番号：５３９５１−６８−１）、５−（２−プロペニル）−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：８７６９２２−０９−７）、４−エチル−７−メチル−２−キノリンチオン（ＣＡＳ番号：６４２１５−５２−７）、７−メチル−４−キノリンチオール（ＣＡＳ番号：８５５７６６−５１−７）、１、２−ジヒドロ−２−チオキソ−３−キノリンカルボニトリル（ＣＡＳ番号：６９５１３−３５−５）、３−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：５８０−１７−６）、４−キノリンアミン（ＣＡＳ−５７８−６８−７番）、５−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：６１１−３４−７）、５−ｓｅｃ−オクチルアミノキノリン（ＣＡＳ番号：１１０３７８−６１−５）、６−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：５８０−１５−４）、７−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：５８０−１９−８）、４−メチル−７−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：１１４０５８−７９−６）、８−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：５７８−６６−５）、４、７−ジアミノキノリン（ＣＡＳ番号：４０１０７−１５−１）、４−アミノ−７−メチルキノリン（ＣＡＳ番号：８６０１９３−９２−６）、Ｎ−メチル−５−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：７５０６−６７−４）、Ｎ−メチル−７−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：１２８２７８−０８−０）、８−ｓｅｃ−オクチルアミノキノリン（ＣＡＳ番号：１１０３３６−３６−��）、５−イソシアノキノリン（ＣＡＳ番号：１９４２８１−９１−９）、６−メチル−７−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：１２９８４４−６９−５）、および８−メチル−７−キノリンアミン（ＣＡＳ番号：１１６６３２−６２−３）であってよい。同様に、イソキノリンが芳香族部位として用いられる場合、化合物Ｒ１−ＡＨは、１−イソキノリンチオール（ＣＡＳ番号：１１０１３１−１４−１）、５−イソキノリンチオール（ＣＡＳ番号：１９７５１１−９０−３）、４−イソキノリンチオール（ＣＡＳ番号：１３９２６６−０３−８）、７−イソキノリンチオール（ＣＡＳ番号：６６３６２３−４５−８）、８−イソキノリンチオール（ＣＡＳ番号：４９１−３３−８）、４−イソキノリンアミン（ＣＡＳ番号：２３６８７−２５−４）、５−イソキノリンアミン（ＣＡＳ番号：１１２５−６０−６）、および８−イソキノリンアミン（ＣＡＳ番号：２３６８７−２７−６）であってよい。さらなる例として、ピラゾールが芳香族部位として用いられる場合、化合物Ｒ１−ＡＨの例は、次に限定されないが、ピラゾール−４−チオール（ＣＡＳ番号：８２３５８−２０−１）、ピラゾール−３−チオール（ＣＡＳ番号：８２３５８−００−７）、４−ヒドロキシ−ピラゾール（ＣＡＳ番号：４８４３−９８−５）、４−アミノピラゾール（ＣＡＳ番号：２８４６６−２６−４）、４−（メチルアミノ）−ピラゾール（ＣＡＳ番号：２８４６６−２８−６）、４−アミノ−１−メチルピラゾール（ＣＡＳ
番号：６９８４３−１３−６）、４−ニトロソピラゾール（ＣＡＳ番号：３４６９０−９３−２）、および４−（エチルアミノ）−ピラゾール（ＣＡＳ番号：２８４６５−８４−１）を含む。
【００４２】
式（ＩＩＩ）の化合物と化合物Ｒ１−ＡＨとの反応は、通常、不活性な有機溶媒中、昇温下で行われる。適切な溶媒の例は、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、ピリジン、ジクロロメタン、１、２−ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素、二硫化炭素、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、またはテトラヒドロフランを含む。
【００４３】
それぞれの方法の幾つかの実施形態では、Ｌ１〜Ｌ３はＣＯである。一般式（ＩＩＩ）の化合物は、このとき、一般式（ＩＶ）によっても表される：
【００４４】
【化９】
2010527328.tif 000010
【００４５】
そのような実施形態では、一般式（Ｖ）の化合物が形成される：
【００４６】
【化１０】
2010527328.tif 000011
【００４７】
式（Ｖ）の化合物と式Ｒ１−ＡＨの化合物との反応によって、一般式（Ｖ）の化合物が形成される：
【００４８】
【化１１】
2010527328.tif 000012
【００４９】
式（Ｖ）の化合物におけるＣＯ配位子は、さらに、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、またはＰ−（Ｒ２）３との反応によって置換されてもよい。ここで、Ｒ２は上記において定義したのと同じである。得られる反応生成物は一般式（Ｉ）に相当し、配位子Ｌ１〜Ｌ３のうちの少なくとも１つは、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、または−Ｐ−（Ｒ２）３である。幾つかの実施形態では、したがって、本発明の方法は、一般式（Ｖ）の化合物をＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、およびＰ−（Ｒ２）３の群からなる化合物と接触させることを含む。一般式Ｒ１−ＡＨ部位の化合物において、Ｒ１およびＡは上記で定義した通りである。
【００５０】
本発明の発明者らは、驚くべきことに、一般式（Ｉ）の化合物が細胞、特に腫瘍細胞において、アポトーシスを誘導できることを見出した。例えば、これまでは、様々な構造のオスミウムトリアングロ化合物がＤＮＡに結合すること（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｅ．ら、Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．、（２００３）、６６８、ｐ．５１−５８）や、テロメラーゼ活性を抑制すること（コランジェロ、Ｄ．ら、Ｊ．Ｉｎｏｒｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（２００５）、９９、ｐ．５０５−５１２）しか分かっていなかった。
【００５１】
したがって、本発明は、腫瘍細胞（例えば癌細胞、前癌細胞）など細胞のアポトーシスを誘導するための式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物の使用にも関する。それぞれの使用は、例えば、この目的のための医薬の製造であってよい。したがって、本発明の方法は、医薬の製造における使用を含む、上記に定義したような化合物の使用を含む。一態様では、本発明は、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するための上記に定義したような化合物の使用にも関する。これに関して、本発明は、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するための上記に定義したような化合物にも関する。この用途における使用および化合物のそれぞれに上記および下記の記載が適用されることが理解される。これに関して、本発明は、化学療法薬としての一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物にも関する。
【００５２】
アポトーシスの誘導されるそれぞれの細胞は、哺乳動物、例えば、ラット、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ムフロン、モルモット、ハムスター、チンパンジー、アカゲザル、およびヒトから得られる。幾つかの実施形態では、それぞれの細胞は培養される。他の実施形態では、細胞は上記の例のうちの１つなど、哺乳動物に含まれている。
【００５３】
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、腫瘍細胞などの増殖障害を有する細胞のアポトーシスを選択的に誘導することを含む。腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することは、例えば、癌の処置または予防用の治療であってよい。腫瘍細胞などの細胞のアポトーシスを誘導することは、本発明の幾つかの実施形態では、細胞質ゾルの酸性化を含む（例えば、図５Ｃを参照）。なお、これに関して、細胞質ゾルの酸性化は、多くの場合、アポトーシ
スにおける初期のイベントである（例えば、Ａｈｍａｄ，Ｋ．Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００４）、６、，ｐ．７８６７−７８７８）。
【００５４】
幾つかの実施形態では、細胞のアポトーシスを誘導することは、細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）の増大を含む。活性酸素種は、細胞質ゾルの酸性化を媒介することが可能であり、フリーラジカルの最も一般的な種類のうちの１つである。それらは正常な細胞の呼吸および代謝中に全ての好気性細胞によって生成され、一般に、身体において生成される抗酸化剤によって調節される。毎日の生活において、汚染などの因子や、喫煙または運動などの生活様式因子によって、フリーラジカルの生成は増加する。本発明の方法の幾つかの実施形態では、抗酸化剤生成と活性酸素種の発生との間の平衡は、上記に定義した金属トリアングロ化合物の作用によって妨害される。その結果、プログラムされた細胞死、すなわちアポトーシスが誘導される。多数の報告によれば、例えば、Ｈ２Ｏ２によって癌細胞における細胞死を誘導可能であると実証されている。細胞のＨ２Ｏ２レベルの増大は、したがって、癌細胞を死滅させる効率的な手法である。これに関して、癌細胞はＨ２Ｏ２に誘導される細胞死を正常細胞よりも受け易いことも、実験的な証拠によって示されている。したがって、本発明の方法は、癌細胞の死滅に特に有用である。一例として、正常なリンパ細胞および正常な単核細胞における濃度２５０μＭに対し、バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫細胞においては５０μＭのＨ２Ｏ２で、より高い割合の細胞死が誘導されることが示されている（Ｐｏｈ，Ｔ．Ｗ．およびＰｅｒｖａｉｚ，Ｓ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、（２００５）、６５、１４、ｐ．６２６４〜６２７４。引用によって本明細書に完全に援用する）。
【００５５】
活性酸素種は、大きくは、ミトコンドリアにおいて生成する（概説として、Ａｄａｍ−Ｖｉｚｉ，Ｖ．およびＣｈｉｎｏｐｏｕｌｏｓ，Ｃ．、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．（２００６）、２７、１２、６３９−６４５）、細胞周期進行およびアポトーシス性細胞死の重要な媒介物質である。活性酸素種の例は、次に限定されないが、ペルオキシルラジカル、超酸化物（Ｏ２−）、オゾン、ヒドロキシルラジカル、亜硝酸過酸化物、次亜塩素酸、および過酸化水素を含む。なお、本発明の方法では、細胞内の活性酸素種のレベルに影響が与えられる。したがって、これらの活性酸素種のそれぞれの効果は、例えば、脳虚血の後や心臓の外傷性または炎症性疾病の一定の状態において中枢神経系で重要な役割を担う、細胞外の活性酸素種のレベルと混ざらない。
【００５６】
アポトーシス性細胞は、細胞サイズ減少、クロマチン凝縮、ＤＮＡ断片化、原形質膜小疱形成、およびアポトーシス性小体の形成など、顕著な特徴を示す。したがって、細胞のアポトーシスは、所望の場合、視覚的に監視されることができる。アポトーシスのコミットメントおよび遂行は、カスパーゼと呼ばれるシステインプロテアーゼの１ファミリーの活性化によっており、内因性または外因性のいずれの経路によっても進行可能である。外因性経路の主な刺激は、腫瘍壊死因子受容体（例えば、ＴＮＦ−α受容体、およびＡｐｏ−１／Ｆａｓ（ＣＤ９５）分子）などの細胞死受容体の連結を伴う。一部の実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ９５（例えば、図８を参照）、ＴＮＦＲｌ（ＴＮＦ受容体−１）、およびＴＲＡＩＬ（ＴＮＦ関連アポトーシス誘導配位子）受容体ＤＲ４およびＤＲ５など、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体遺伝子の発現の増大を伴う。アポトーシスへの内因性経路はミトコンドリアに依存しており、ミトコンドリアの膜間電位（Δψ）の早期の損失およびミトコンドリア膜透過性遷移（ＭＰＴ）の誘導を伴う。
【００５７】
外因性経路の場合、ＣＤ９５配位子（ＦａｓＬ）が表面ＣＤ９５に結合し、アダプタ分子ＦＡＤＤ（Ｆａｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）ならびにプロカスパーゼ−８および／またはプロカスパーゼ−１０のリクルートを行うことによって、細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の形成を開始する（例えば、Ｗａｎｇ，Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．Ｕ
．Ｓ．Ａ．（２００１）、９８、２４、１３８８４−１３８８８）。これによって、開裂に誘導されるカスパーゼ８およびカスパーゼ１０の活性化がそれぞれ生じることで、カスパーゼ−３、カスパーゼ−６、およびカスパーゼ−７の活性化を含む、アポトーシスのプログラムが開始される（例えば、Ｐｅｔｅｒ，Ｍ．Ｅ．ら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ
Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（２００５）、１７５５、２５−３６を参照）。
【００５８】
内因性経路が活性化されると、ミトコンドリアは数々のアポトーシス促進性因子を放出するよう誘導される。これによって、カスパーゼ−９が活性化されると、次いでカスパーゼ−３（アポトーシスにおいて観察される変化の大部分を担うエフェクターカスパーゼ）が活性化され、アポトーシスを導くことが可能となる。この経路は、アポトーシス促進性タンパク質および抗アポトーシス性タンパク質からなり、カスパーゼの活性化を調節する、Ｂｃｌ−２ファミリーのタンパク質を伴っている。アポトーシス促進性のＢｃｌ−２ファミリーメンバー（例えば、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｏｋ／Ｍｔｄ、Ｂｃｌ−ＸＳ）がミトコンドリアからのシトクロムｃの放出を媒介すると、これは次いで、カスパーゼ９の活性化によるカスパーゼカスケードの開始に関与する。Ｂａｘ、Ｂａｋ、およびＢｃｌ−ＸＳがアポトーシスをプロモートしている間、他のＢｃｌ−２タンパク質（例えば、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｂｃｌ−Ｗ、Ｂｃｌ−Ｂ、Ｍｃｌ−１、Ａｌ／Ｂｆｌ−１、ＮＲ−１３）は、アポトーシス性処理を抑制する。そのような抗アポトーシス性のＢｃｌ−２タンパク質の表現は、おそらくはミトコンドリア内に含まれる因子の放出をブロックすることによって、ミトコンドリアのアポトーシス性活性をブロックする。Ｂｃｌ−２ファミリーのタンパク質の第３のグループであるＢＨ３のみのタンパク質（例えば、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｎｏｘａ、Ｂｍｆ、ＢｉｍＬ／Ｂｏｄ）は、Ｂａｘなどアポトーシス促進性タンパク質を活性化させることによって、またはＢｃｌ−２など抗アポトーシス性タンパク質を抑制することによって、アポトーシスを誘導する。アポトーシス性細胞死受容体およびミトコンドリア細胞死経路は、カスパーゼ−３の活性化にて収束し、次いで細胞の分解を引き起こす。
【００５９】
しかしながら、外因性経路、すなわち細胞死受容体経路であっても、ミトコンドリアが関与することが明らかに実証された。これに関して、カスパーゼ−９ならびにＢｉｄおよびＢａｘなどＢｃｌ−２ファミリーのアポトーシス促進性タンパク質のの媒介者を必要とする、ＣＤ９５からの第２の種類の信号（上記のタイプＩ信号に対してタイプＩＩ信号）が識別されている。これは内因性経路と同様に、ミトコンドリア膜透過性遷移（ＭＰＴ）の誘導を伴う。これによって、シトクロムｃなどのミトコンドリア膜間タンパク質が細胞質へ流出し、アポトソームと、Ａｐａｆ−１、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ細胞死タンパク質ＣＥＤ−４同族体、およびプロカスパーゼ９とのアセンブリを生じ、したがってカスパーゼ−９が活性化される。次いで、カスパーゼ−９は、カスパーゼ−１０を含むさらなるカスパーゼを活性化させる。シトクロムｃは、例えばＡｐａｆ−１活性化、アポトソーム形成、および内因性カスパーゼカスケードの活性化に必要な補因子（ＡＴＰと共に）である。カスパーゼの活性化によって、次いで、ミトコンドリア膜間電位（Δψ）の損失も生じる（上記のタイプＩ信号を参照）（Ｓａｍｒａｊ，Ａ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、（２００６）、２８１、４０、ｐ．２９６５２−２９６５９）。
【００６０】
Ｂｉｄ（アポトーシスを誘導可能な、Ｂｃｌ−２ファミリーのＢＨ３のみのメンバー）は、カスパーゼ−８の基質であり、外因性経路によって活性化される。ミトコンドリアへ移動すると、Ｃ−末端の開裂したＢｉｄ（ｔＢｉｄ）はシトクロムｃの放出を強力に誘導する。したがって、Ｂｉｄは外因性の細胞死受容体経路および内因性のミトコンドリア経路を接続し、Ｆａｓ／ＴＮＦ−Ｒ１の活性化後のシトクロムｃ放出および下流のカスパーゼ活性を担う。
【００６１】
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、ミトコンドリアからのシトクロムｃの放出の
増大を含む。カスパーゼ活性化を引き起こすミトコンドリアからのシトクロムｃ放出は、予めアポトーシスに含まれている。上記を考慮すると、したがって、この効果が活性化を示さないこと、さらには内因性経路の唯一の活性化を示さないことが注目される。この効果は、単に本発明の方法において用いられる金属トリアングロ化合物の作用におけるミトコンドリアの関与を示すに過ぎない。
【００６２】
本発明の方法の幾つかの実施形態では、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体遺伝子の発現を増大することは、１つ以上のカスパーゼの活性化を含む（例えば、図９を参照）。それぞれのカスパーゼの例は、次に限定されないが、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ８、およびカスパーゼ９を含む。カスパーゼの活性化は、不活性なプロカスパーゼのタンパク質分解性開裂を含んでよい（図９Ａおよび図９Ｂを参照）。
【００６３】
上述のように、タンパク質Ｂａｘは、Ｂｃｌ−２ファミリーの細胞死促進メンバーとして知られている。Ｂａｘは、ミトコンドリア外膜の脂質のリポソームを透過性とすることが可能であると報告されている。アポトーシスの誘導においては、ミトコンドリアの外膜へＢａｘが移動し、オリゴマー化して、ミトコンドリアの機能不全およびトクロムｃの放出を生じ、続いてカスパーゼ経路を活性化させることが分かっている。この観察は、外因性経路を主として利用することが知られている細胞型と、内因性経路を主として利用することが知られている細胞型との両方において、Ｆａｓ受容体の活性化時に発生することが、最近確認されている。以前の刊行物では、化合物Ｎ、Ｎ’ジブチルチオ−４、５−イミダゾリンジオンおよび外部のＨ２Ｏ２の両方により、細胞内ｐＨの低下、活性酸素種、ミトコンドリア膜間電位ΔΨｍの低下、およびタンパク質Ｂａｘの細胞質ゾルからミトコンドリアへの移動（Ａｈｍａｄら、２００４年、上記）を介して、白血病細胞のアポトーシスが誘導されることが示されている。同じ著者によって、Ｂａｘの欠乏した細胞が外部のＨ２Ｏ２のアポトーシス性効果に対し抵抗し、外部のＨ２Ｏ２に応答したカスパーゼ９，３の活性化をほとんど示さないことが示されている。
【００６４】
これらの観察とは対照的に、本発明の方法は、一般に、Ｂａｘのそれぞれの準セル移動を必要としない、または含まない（図１１Ｂを参照）。理論によって拘束されるものではないが、したがって、ＢＨ３のみのタンパク質であるＢｉｄの状態の有意な変化が存在しないことは、ミトコンドリアに対する本発明の金属トリアングロ化合物の直接効果、または現在明らかでないか、知られていない機構を示すと仮定される。
【００６５】
幾つかの実施形態では、本発明の金属トリアングロ化合物の使用を含む本発明の方法は、「プロテインキナーゼＢ」（Ａｋｔ／ＰＫＢ）と呼ばれるセリン／トレオニンキナーゼのリン酸化を抑制することを含む。本明細書において用いられる用語「Ａｋｔ／ＰＫＢ」は、Ａｋｔファミリーのメンバーを表す（現在、３つのメンバー、Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、およびＡｋｔ３が知られている）。多くの癌では、Ａｋｔ／プロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）（ホスホイノシチド−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）活性化信号の下流の媒介物質）を構成する活性化が見られる。ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（３、４）−ピロ燐酸塩を燐酸化して、ホスファチジルイノシトール（３、４、５）−三燐酸塩（ＰＩＰ３）を形成させる。ＰＩＰ３が、次いで、膜へのＡｋｔ／ＰＫＢのリクルートを行い、燐酸化、したがってホスファチジル依存キナーゼ−１による活性化が行われる。Ａｋｔ／ＰＫＢは代謝を調節し、細胞エネルギの恒常性を維持することが可能である。これにより、ミトコンドリアの完全性がプロモートされ、燐酸化可能なヘキソース（例えば、グルコースまたは２−デオキシグルコース）の存在下のアポトーシス性刺激に続く、シトクロムｃ放出が抑制されることが示された。Ａｋｔのアポトーシスを抑制する能力は、したがって、グルコースの利用可能性に依存する（例えば、Ｒｏｂｅｙ，Ｒ．Ｂ．およびＨａｙ，Ｎ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００６）、２５、ｐ．４６８３−４６９６）。
【００６６】
最近の証拠では、活性化されたＡｋｔ／ＰＫＢ腫瘍が形成を増殖させる能力に寄与するだけではなく、Ｂａｄなど、下流の目標のリン酸化を通じ、薬剤性アポトーシスに対する抵抗を付与することが強く示唆されている。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔによる抗アポトーシス性シグナリングは、細胞質、およびおそらくは核において、原形質膜レベルで発生する。最近の発見では、核のＰＩ３Ｋが、核ホスファチジルイノシトール（３、４、５）トリスホスファート合成を通じ、細胞生存とアポトーシスとの平衡を保つ際に重要な役割を担っている可能性が示されている。
【００６７】
興味深いことに、チロシン受容体キナーゼの活性化などの従来の信号は別として、細胞内の活性酸素種（特に過酸化水素（Ｈ２Ｏ２））の生成とＡｋｔ／ＰＫＢの活性化との間の因果関係が説明されたのは最近であり、その説明によれば、Ｈ２Ｏ２の外的な添加によってＡｋｔ／ＰＫＢリン酸化の活性化が示された、とのことである。しかしながら、他のデータからは、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路の活性化によって、超酸化物（Ｏ２−）生成も引き起こされ、これがこの経路の下流の効果をさらに強化することを示唆していると思われる。
【００６８】
所望の場合、それぞれの細胞（例えば、腫瘍細胞）のアポトーシスの進行は、本発明の方法において、例えば、ヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｏｄｉｕｍ）染色またはフローサイトメトリー分析、ミトコンドリア機能不全（ＪＣ−１染色）、またはカスパーゼ３活性化によって、監視されてよい。幾つかの実施形態においてそれぞれの細胞のアポトーシスを決定することの他、本発明による方法は、それぞれの細胞の細胞生存率を決定することを含んでよい。それぞれの方法は、本技術分野におい充分に確立されている。
【００６９】
本発明において、その方法、化合物、および医薬組成物は、腫瘍または癌など、細胞増殖障害の処置に用いられることが可能である。例えば、良性腫瘍および転移性の悪性腫瘍を含む任意の腫瘍または癌が、処置の対象として選択されてよい。その例は、次に限定されないが、血液性腫瘍および固形腫瘍を含む。固形腫瘍は、例えば、結合組織または支持組織から生じる肉腫、身体の腺細胞および上皮細胞から生じる癌腫、またはリンパ節、脾臓、および胸腺などリンパ組織の癌であるリンパ腫を含む。固形腫瘍の例は、次に限定されないが、乳癌、肺癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫、結腸癌、直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、卵巣癌、前立腺癌、および黒色腫を含む。
【００７０】
幾つかの実施形態では、本発明による方法は、それぞれの細胞（腫瘍細胞など）を所定量の一般式（Ｉ）（上記参照）の化合物に接触させることを含む。幾つかの実施形態では、一般式（Ｉ）の２つ以上の異なる所定量の化合物が用いられる。それらの実施形態のうちの一部では、第１の細胞と、第２の細胞とが用いられる。第１の細胞は２つの所定量のうちの少ない方の量と接触され、第２の細胞は２つの所定量のうちの多い方の量と接触される。それぞれの実施形態は、例えば、スクリーニングアッセイ、細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｔｙ）試験、または用量／応答曲線の決定であってよい。
【００７１】
幾つかの実施形態では、第１の細胞（例えば、腫瘍細胞）および第２の細胞（例えば、腫瘍細胞）は同じ患者から取得される。そのような方法は、例えば、一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物に対する患者または患畜の個別の応答を予測する方法であってよい。一塩基変異多型および遺伝子発現における個人差によって、通常、投与された化合物に応答した患者間の個体差が生じる。幾つかの実施形態では、本発明のそれぞれの方法は、式（Ｉ）の化合物に対する患者の応答に影響を与える遺伝的変異を識別する方法でもあってよい。通常、薬剤として動物または患者に適用された化合物の効果は、多くのタンパク質によって決定されるので、化合物に対する応答は非遺伝的因子と結合された同義遺伝子における複合的な遺伝的多型によって決定される。本発明のそれぞれの方法は、このため、例えば、効能を最大とし副作用を最小とすることを確実にするために、患者の遺伝子型を
決定する方法であってもよい。
【００７２】
本発明は、細胞の発癌を防止する方法にも関する。本明細書において用いられる用語「発癌（癌発生）」は、正常細胞が増殖障害を有する細胞（特に腫瘍細胞）へ変換される過程を指す。それぞれの細胞は、良性腫瘍および／または悪性腫瘍（癌）を生じさせる場合がある。良性腫瘍は身体の他の部分に広がらず、他の組織へ浸潤しないが、生命に重要な組織を圧迫したり、生理学的に活性（例えば、ホルモンを生成することによって）であったりする場合、生命に対する脅威となることがある。悪性腫瘍は他の器官へ浸潤し、遠方の部位へ広がり（転移し）、生命に対する脅威委となることがある。それぞれの方法は、上記に定義した一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物を投与することを含む。
【００７３】
発癌性の化学物質は、細胞の巨大分子（一般にはＤＮＡ）との反応を通じ、その活性を示す。発癌物質−ＤＮＡ付加物の形成によって、腫瘍形成の開始を導く変異に生じることがある。それらの化合物のうち、多環式芳香族炭化水素（ＰＡＨ）は、それが環境中に広範囲に蔓延していること、およびその比較的高い腫瘍形成能のために、関連群を構成している（例えば、Ｂｏｒｏｓｋｙ，Ｇ．Ｌ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）、６４、７７３８−７７４４；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏ，Ｇ．ら、Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ、（１９９６）、１０４、１１、１１６６−１１７０；Ｍｅｎｄｅｌｅｚ−Ｃｏｌｏｎ，Ｖ．Ｊ．ら、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、（１９９９）、２０、１０、１８８５−１８９１；Ｒｙｂｉｃｋｉ，Ｂ．Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、（２００６）、２３９、１５７−１６７を参照）。多環式芳香族炭化水素は、工業プロセス、自動車排気、たばこの煙、ならびに炭火焼きの食品における、有機物および化石燃料の不完全燃焼時に形成される化合物の大分類を構成する。そのような化合物は、主として、アリール炭化水素受容体（Ａｈｒ）経路によって調節されたＰ４５０酵素によって活性化される。アリール炭化水素受容体は、細胞の増殖および分化の調節に重要な役割を担う。多環式芳香族炭化水素の酸化によって、ヒドロキシル化された多環式芳香族化合物や、ヒドロキシ部位およびエポキシ部位を有する飽和環を含む多環式の芳香族化合物が得られる（例えば、Ｂｏｒｏｓｋｙ、１９９９年、上記；Ｒｙｂｉｃｋｉら、２００６年、上記）。これらの酸化生成物は、共有結合でＤＮＡ分子に結合する（例えば、そのプリン塩基のＮ７位およびＣ８位にて）。それぞれの付加物は脱プリン化し、ＤＮＡに脱プリン部位を生じる場合がある（例えば、Ｍｅｎｄｅｌｅｚ−Ｃｏｌｏｎら、１９９９年、上記）。ＰＡＨ−ＤＮＡ付加物の免疫組織化学的検出を用いて、そのような付加物の形成と、例えば、前立腺における発癌との間の強い相関性が示されている（Ｒｙｂｉｃｋｉら、２００６年、上記）。
【００７４】
ＰＡＨは発癌性が高く、電子欠乏性であることが示されている。共有結合性ＤＮＡ付加物の形成は、ＰＡＨに誘導される発癌の開始の重要な第１のステップである。求電子性は、ＤＮＡのアミノ活性部位への結合に必要である。本発明の金属トリアングロ化合物には電子豊富部位が存在するため、本発明のこの方法の一部の実施形態では、金属トリアングロ化合物は多環式芳香族炭化水素との錯体を形成する。金属トリアングロ化合物と多環式芳香族炭化水素との間でそれぞれ錯体を形成することによって、多環式芳香族炭化水素がＤＮＡとの錯体を形成することを防止できる。
【００７５】
本発明による金属トリアングロ化合物は、代謝物質またはプロドラッグの形態で用いられてもよい。
本明細書において用いられる用語「プロドラッグ」は、例えば、酵素的、機構的、または電磁気的に、医療効果を有するその活性型へ、ヒトまたは動物の体内で変換または放出される化合物を意味する。「プロドラッグ」は、したがって、親分子である「薬剤」分子の薬理学的に不活性な誘導体であり、投与されるヒトまたは動物の生理系内における自発的または酵素的な生体内変化を必要とする。「プロドラッグ」は、一般に、安定性、毒性
、非特異性、または限定的な生体利用性に関連した問題を克服するために、本技術分野において用いられ、多くの場合、溶解度、組織適合性、または哺乳類の器官における徐放性という利点がある。代表的な一例として、「プロドラッグ」は、その特定の部位または官能基を保護することによって金属トリアングロ化合物の活性を可逆的に抑制する保護基を有する、金属トリアングロ化合物であってよい。それぞれの「プロドラッグ」は、保護基が加溶媒分解または酵素の除去を受けるとき、生体内または生体外で薬学的に活性となることができる。さらなる代表的な例として、官能基は、単に、酸化、リン酸化、またはグリコシル化などの生化学的変換により、金属トリアングロ化合物へ導入されてもよい。したがって、それぞれの「プロドラッグ」は、単にヒトまたは動物の身体において、酵素、胃酸などによって一般式（Ｉ）の化合物へ変換されてもよい。一般式（Ｉ）の化合物の「プロドラッグ」は、水和物であっても、非水和物であってもよい。一般的な「プロドラッグ」は、親の酸と適切なアルコール（例えば、低級アルカノール）との反応によって調製されるエステル、親の酸化合物とアミン（例えば、上述のような）との反応によって調製されるアミド、アシル化された塩基性誘導体（例えば、低級アルキルアミド）を形成すべく反応させられる塩基性基などの酸誘導体を含む。
【００７６】
適用可能な場合、金属トリアングロ化合物は、遊離塩基またはその任意の薬学的に許容可能な塩の形態で用いられてもよい（例えば、Ａの場合、クエン酸塩または酒石酸塩の形態のアミノ基を）。そのような形態は当業者には知られている。金属トリアングロ化合物は、水和物であっても、非水和物であってもよい。
【００７７】
上記に定義した金属トリアングロ化合物、または、その薬学的に許容可能な塩は、それ自体で用いることも、他の有効成分（併用療法におけるように）および／または適切なキャリアもしくは希釈剤と混合された医薬組成物として用いることも可能である。これに関して、本発明は、本発明は、細胞のアポトーシスを誘導する、および／または、細胞の発癌を防止するための医薬組成物にも関する。
【００７８】
医薬組成物に含まれ得る他の有効成分の例は、次に限定されないが、核酸アルキル化剤、ヌクレオシド類似物、アントラサイクリン、抗生物質、アロマターゼ阻害剤、葉酸拮抗剤、エストロゲン受容体調整因子、無機ヒ酸塩、微小管阻害剤、ニトロソ尿素、破骨細胞抑制剤、含白金化合物、レチノイド、トポイソメラーゼ１阻害剤、トポイソメラーゼ２阻害剤、チミジル酸合成酵素阻害剤、アロマターゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、イソフラボン、チロシンキナーゼ阻害剤、成長因子、ビスホスホネート、およびモノクローナル抗体を含む。
【００７９】
本発明の医薬組成物に含まれ得るアルキル化剤は、次に限定されないが、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）、Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、イソスファミド（ＭＥＳＮＡを含むまたは含まないＭｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））、グルフォスファミド、メルファラン／Ｌ−ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、およびテモゾロマイド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））を含む。代表的な一例として、化合物、２−ビス［（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１、３、２−オキサザホスホリン  ２−オキシド（一般にシクロホスファミドとしても知られる）は、ステージＩＩＩおよびＩＶの悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、白血病、菌状息肉腫、神経芽細胞腫、卵巣腺癌、網膜芽細胞腫、および胸癌腫の処置において用いられるアルキル化剤である。
【００８０】
本発明の医薬組成物に含まれ得るヌクレオシド類似物は、次に限定されないが、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ（登録商標））およびゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））
、２フッ素化デオキシシチジン類似物、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、プリン類似物、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉ−Ｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、ならびにそのプロドラッグであるアザチオプリン（イムラン（登録商標））を含む。
【００８１】
本発明の医薬組成物に含まれ得るアントラサイクリンは、次に限定されないが、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、バルルビシン（Ｖａｌｓｔａｒ（登録商標））、およびエピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））を含む。一例として、化合物、（８Ｓ、１０Ｓ）−１０−（４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）−６、８、１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−７、８、９、１０−テトラヒドロテトラセン−５、１２−ジオン（より一般的にはドキソルビシンとして知られている）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓの培養物から単離される細胞毒素アントラサイクリン系抗生物質である。ドキソルビシンは、急性リンパ性白血病、急性骨髄芽球性白血病、ウィルムス（Ｗｉｌｍ’ｓ）腫瘍、神経芽細胞腫、軟繊維肉腫および骨肉腫、胸癌腫、卵巣癌腫、膀胱移行細胞癌、甲状腺癌、ホジキン（Ｈｏｄｇｋｉｎ）型および非ホジキン型の両方のリンパ腫、気管支癌、および胃癌など、播種性腫瘍疾患を緩解させるために用いられ、成功している。
【００８２】
本発明の医薬組成物に含まれ得る抗生物質は、次に限定されないが、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））、ダウノルビシン／ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）、ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））、ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、エピルビシン（Ｐｈａｒｍｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））、およびミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））を含む。本発明の実施において有用なアロマターゼ阻害剤は、次に限定されないが、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））およびレトロゾール（ｌｅｔｒｏａｚｏｌｅ）（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得るビスホスホネート阻害剤は、次に限定されないが、ゾレドロネート（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））を含む。
【００８３】
本発明の組成物に含まれ得るシクロオキシゲナーゼ阻害剤は、次に限定されないが、アセチルサリチル酸（Ａｓｐｉｒｉｎ（登録商標））、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））および、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ（登録商標）、Ｃｅｏｘｘ（登録商標）、Ｃｅｅｏｘｘ（登録商標））を含む。本発明の組成物に含まれ得るエストロゲン受容体調節因子は、次に限定されないが、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））およびフルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））を含む。本発明の組成物に含まれ得る葉酸拮抗剤は、次に限定されないが、メトトレキサート（Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標））およびトリメトレキサート（Ｎｅｕｔｒｅｘｉｎ（登録商標））を含む。代表的な一例として、化合物、（Ｓ）−２−（４−（２、４−ジアミノプテリジン−６−イル）メチル）メチルアミノ）ベンズアミド）ペンタンジオン酸（一般にメトトレキサートとして知られている）は、それは、妊娠性絨毛癌の処置において、また破壊性絨毛膜腺腫および胞状奇胎の患者の処置において用いられている抗葉酸剤であり、悪性リンパ腫の進行段階における処置および菌状息肉腫の進行例の処置においても有用である。
【００８４】
本発明の組成物に含まれ得る無機ヒ酸塩は、次に限定されないが、三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））を含む。本発明の組成物に含まれ得る微小管阻害剤（本明細書において用いられる「微小管阻害剤」は、微小管の集合または分解を妨げる任意の薬剤である）は、次に限定されないが、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビン
ブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））、ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、エポチロンＢ、Ｄもしくはそのいずれかの誘導体、およびディスコデルモライドもしくはその誘導体を含む。
【００８５】
本発明の組成物に含まれ得るニトロソ尿素は、次に限定されないが、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、カルマスティン（ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標）、Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））、およびエストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得るヌクレオシド類似物は、次に限定されないが、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））、６−チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、フロクスウリジン（ＦＵＤＲ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、およびカペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））を含む。代表的な一例として、化合物、５−フルオロ−２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジン−ジオン（一般に５−フルオロウラシルとしても知られている）は、外科その他の手段によって不治であると考えられる患者における、結腸、直腸、胸、胃、および膵臓の癌腫の姑息的管理に効果的な代謝拮抗剤ヌクレオシド類似物である。ヌクレオシド類似物の別の例はゲムシタビンである。ゲムシタビンは、２’−デオキシ−２’、２’−ジフルオロシチジンであり、一塩酸塩およびベータ異性体として市販されている。また、化学的には、１−（４−アミノ−２−オキソ−１−Ｈ−ピリミジン−１−イル）−２−デスオキシ−２、２−ジフルオロリボースとして知られている。
【００８６】
本発明の医薬組成物に含まれ得る破骨細胞阻害剤の代表的な一例は、パミドロネート（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））である。本発明の医薬組成物に含まれ得る白金化合物は、次に限定されないが、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））およびカルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得るレチノイドは、次に限定されないが、ＡＴＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））、アリトレチノイン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））、およびベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得るトポイソメラーゼ１阻害剤は、次に限定されないが、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））およびイリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓｔａｒ（登録商標）、Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｎ−１１（登録商標））を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得るトポイソメラーゼ２阻害剤は、次に限定されないが、エトポシド（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）、Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））およびテニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））を含む。
【００８７】
本発明の医薬組成物に含まれ得るチロシンキナーゼ阻害剤の例は、次に限定されないが、ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、およびバンデタニブ（Ｚａｃｔｉｍａ（登録商標））を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得る（組換え）成長因子の例は、次に限定されないが、インターロイキン−１１、インターフェロン−α−２ｂ、およびインターロイキン−２を含む。本発明の医薬組成物に含まれ得るチミジル酸合成酵素阻害剤の代表的な例は、Ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ（登録商標）である。本発明の医薬組成物に含まれ得るモノクローナル抗体の例は、次に限定されないが、リツキシマブ（ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））またはセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））を含む。
【００８８】
これに関して、発癌を防止する本発明の方法は、上記に定義した金属トリアングロ化合物と、上記の医薬組成物の有効成分として挙げられるようなさらなる化合物とを組み合わせて投与することも含んでよい。一例として、そのような化合物による化学療法治療に対する腫瘍細胞の感度は、幾つかの実施形態では本発明の金属トリアングロ化合物またはその塩の投与によって強化される。理論によって拘束されるものではないが、細胞毒性の閾値近くまで増大したＲＯＳレベルは腫瘍細胞のミトコンドリアの呼吸鎖を通じて既に生成され得ることや、金属トリアングロ化合物がさらにＲＯＳレベルを増大させることによって、それぞれの腫瘍細胞が特に癌治療化合物の影響を受け易くなることが推測される。
【００８９】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、例えば、従来の混合、溶解、粒状化、糖衣形成、粉末化、乳化、カプセル化、取り込み、または凍結乾燥の処理など、それ自体は知られている方法によって製造されてよい。
【００９０】
本発明による使用のための医薬組成物は、活性化合物を薬学的に使用可能な調合剤へと処理する賦形剤および補助剤を含む１つ以上の生理学的に許容可能なキャリアを用いて、従来の方法により処方されてよい。適切な処方は選択される投与経路による。
【００９１】
それぞれの化合物（その塩を含む）または医薬組成物の代表的な投与経路は、経口、経皮、および非経口送達を含む。適切な投与経路は、例えば、デポ、経口投与、直腸投与、口腔経粘膜投与、または腸内投与、筋肉内注入、皮下注入、静脈内注入、髄内注入や、鞘内注入、脳室内直接注入、腹腔内注入、鼻腔内注入、眼内注入を含む非経口送達を含む。全身投与ではなく、例えば、デポまたは徐放性処方などで化合物を固形腫瘍へ直接注入することによって、化合物または医薬組成物を局所投与してもよい。さらに、それぞれの化合物または医薬組成物は、例えば、腫瘍に特異的な抗体でコーティングされたリポソームにより、目標の薬剤送達系において用いられてもよい。そのようなリポソームは、例えば、腫瘍によって選択的に目標とされ、取得される。
【００９２】
代表的な一例として、注入については、本発明による化合物または医薬組成物は、例えば、ハンクス（Ｈａｎｋｓ）液、リンゲル（Ｒｉｎｇｅｒ）液または生理的緩衝食塩水など、生理学的な互換性を有するバッファ水溶液により処方されてよい。口腔経粘膜投与については、通常、浸透されるバリアに適切な浸透剤が処方に用いられる。そのような浸透剤は、一般に、本技術分野において知られている。
【００９３】
経口投与については、それぞれの化合物または医薬組成物は、活性化合物を当技術分野においてよく知られている薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせることによって、容易に処方される。そのようなキャリアによって、本発明の化合物を、治療される患者による経口摂取のためのタブレット、ピル、ロゼンジ、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方することが可能である。
【００９４】
経口使用のための医薬品は、固体賦形剤を添加し（得られた混合物を随意で粉砕し）、所望の場合にはタブレットまたは糖衣錠の核を得るために適切な補助剤を添加した後に、粒状体の混合物を処理することによって得られる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、グルコース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類；コーンスターチ、デキストリンおよび小麦デンプン、米デンプン、ポテトスターチ、ヒドロキシプロピルスターチ、小麦デンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などデンプンおよびその誘導体；例えば、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースなどセルロース製剤；塩化ナトリウム、ホウ酸、硫酸カルシウム、リン酸カルシウム、および沈降炭
酸カルシウムなど無機化合物、などのフィラーである。所望の場合、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、もしくはアルギン酸、またはそれらの塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）など、崩壊剤が添加されてもよい。
【００９５】
糖衣錠の核は適切なコーティングを備える。この目的のため、濃い糖溶液が用いられてもよい。この溶液は、随意で、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでよい。様々な活性化合物服用の組み合わせを識別および判別するために、染料または色素がタブレットまたは糖衣錠のコーティングに添加されてもよい。
【００９６】
適切な流動化剤は、次に限定されないが、酸化マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸、マグネシウム酸化アルミニウム、含水ケイ酸、無水ケイ酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、およびカオリンを含む。適切な結合剤は、次に限定されないが、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリジン、ポリビニルアルコール、アラビアガム、トラガカントガム、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、およびグルテンを含む。適切な安定剤は、次に限定されないが、アルブミン、プロタミン、ゼラチン、およびグロブリンなどのタンパク質およびアミノ酸ならびにそれらの塩を含む。適切な増粘剤は、次に限定されないが、スクロース、グリセリン、メチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースを含む。適切なｐＨ調節剤は、次に限定されないが、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸塩、クエン酸塩、および炭酸塩を含む。
【００９７】
経口的に使用可能な医薬組成物は、次に限定されないが、ゼラチンからなるプッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセルや、ゼラチンおよびグリセリンまたはソルビトールなどの可塑剤からなる柔らかい密閉カプセルを含む。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどのフィラー、デンプンなどのバインダー、および／またはタルクかステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに随意で安定剤の混合物中に活性化合物を含んでよい。柔らかいカプセル剤では、化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液中に溶解されてもよく、懸濁されてもよい。加えて、安定剤が添加されてもよい。経口投与用の全ての処方は、そうした投与に適切な用量である。
【００９８】
頬側投与については、それぞれの医薬組成物は、従来の方法により処方されたタブレットまたはロゼンジの形態であってもよい。
吸入による投与については、本発明による使用のための医薬組成物は、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体）の使用によって、加圧されたパックまたはネブライザーからのエアゾールスプレー提示の形態で簡便に供給されてもよい。加圧されたエアゾールの場合、用量単位は測定量を供給するためのバルブを提供することによって決定されてよい。例えば、吸入器または通気器において使用されるゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、この化合物と、ラクトースまたはデンプンなどの適切な粉体ベースとからなる粉体混合物を含有して処方されてよい。
【００９９】
それぞれの医薬組成物は、注入（例えばボーラス注入または連続注入）によって、非経口投与のために処方されてもよい。注入用の処方は、単位服用形態（例えば、アンプル）で与えられてもよく、防腐剤の添加された多回服用容器で与えられてもよい。組成物は、油性または水性のビヒクルによる懸濁液、溶液、または乳液としての形態を取ってもよく、懸濁化剤、安定剤、および／または分散剤などの調剤用剤を含んでもよい。
【０１００】
非経口投与用の医薬処方は、水に可溶な形態の活性化合物の水溶液を含む。これに加えて、活性化合物の懸濁液が、適切な油性注入懸濁液として調製されてもよい。適切な親油
性の溶媒またはビヒクルは、胡麻油などの脂肪油、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームを含む。水性注入懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなど、懸濁液の粘度を増大させる物質を含有してもよい。随意では、この懸濁液は、化合物の溶解度を増大させて高濃度溶液の調製を可能とする、適切な安定剤または薬剤を含有してもよい。
【０１０１】
幾つかの実施形態では、上記の化合物などの有効成分は、使用の前に適切なビヒクル（例えば、無菌のパイロジェンフリー水）と共に構成するための粉体形態であってよい。
それぞれの医薬組成物は、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドなど従来の坐薬ベースを含有する、坐薬または停留浣腸などの直腸用組成物として処方されてもよい。
【０１０２】
上記の処方に加えて、化合物はデポ製剤として処方されてもよい。そのような長期活性処方は、移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉注射によって投与されてよい。したがって、例えば、化合物は適切なポリマー材料もしくは疎水性材料（例えば、許容可能な油による乳液として）またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性の誘導体として（例えば、難溶性の塩として）処方されてよい。
【０１０３】
本発明による医薬組成物は、例えば、経口、局所、真皮、眼、静脈内、関節内、直腸、膣、吸入、鼻腔内、舌下、または頬側経路によって、投与されてよい。したがって、本発明は、細胞または哺乳動物などの生体に一般式（Ｉ）（上記参照）の化合物（それぞれの化合物を含む組成物を含む）を投与することを提供する。任意の細胞が本発明の方法において用いられてよい。代表的な一例として、腫瘍細胞が用いられてよい。適切な哺乳動物の例は、次に限定されないが、ラット、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ムフロン、モルモット、ハムスター、チンパンジー、アカゲザル、およびヒトを含む。
【０１０４】
それぞれの化合物または医薬組成物の代表的な投与経路は、経口、経皮、および非経口送達を含む（上記を参照）。適切な投与経路は、例えば、デポ、経口投与、直腸投与、口腔経粘膜投与、または腸内投与、筋肉内注入、皮下注入、静脈内注入、髄内注入や、鞘内注入、脳室内直接注入、腹腔内注入、鼻腔内注入、眼内注入を含む非経口送達を含む。全身投与ではなく、例えば、デポまたは徐放性処方などで化合物を固形腫瘍へ直接注入することによって、化合物または医薬組成物を局所投与してもよい。さらに、それぞれの化合物または医薬組成物は、例えば、腫瘍に特異的な抗体でコーティングされたリポソームにより、目標の薬剤送達系において用いられてもよい。そのようなリポソームは、例えば、腫瘍によって選択的に目標とされ、取得される。
【０１０５】
用いられる有効成分の量は、通常の因子に関する当業者によって選択される。
本明細書に例示的に記載した本発明は、本明細書に詳細に開示してはいないが、１つ以上の要素または限定を欠いて実施されてもよい。したがって、例えば、「含む」、「備える」、「含有する」などの用語は、限定のない拡張的なものとして読まれる。これに加えて、本明細書に用いられる用語および表現は限定ではなく説明として用いたものであるので、そうした用語および表現の使用には、図示および説明した特徴ならびにそれらの一部の均等物を排除する意図はなく、本発明の範囲内で様々な変更が可能であることが認識される。本発明の追加の目的、利点、および特徴は、続く実施例を吟味することによって当業者には明らかとなる。実施例には限定の意図はない。したがって、本発明は例示的な実施形態によって詳細に開示されているが、当業者には本明細書に実施形態を示した本発明の随意の特徴、変更、および変形がもたらされること、また、そうした変更および変形が本発明の範囲内であると見なされることが理解される。
【０１０６】
本発明の理解を容易にし、実効が得られるように、ここで、以下の非限定的な例により、特定の実施形態について説明する。
［実施例］
ドデカカルボニルトリオスミウムの調製
この実施例では、上記に定義した金属トリアングロ化合物の前駆体の調製を示す（図１の化合物１を参照）。この合成やドデカカルボニルルテニウムの合成についてのさらなる情報は、例えば、ＪｏｈｎｓｏｎおよびＬｅｗｉｓによって以前に提供されている（Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ、１９７１年、１３、９２−９４）。出発物である四酸化オスミウム（ＯｓＯ４）および２−キノリンチオールは、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈから購入した。
【０１０７】
【化１２】
2010527328.tif 000013
【０１０８】
５．０ｇ（２０ｍｍｏｌ）のオスミウムテトラオキサイドおよび７０ｍｌの無水メタノール（削り状マグネシウムから蒸留したばかりの）を、２５０ｍｌのオートクレーブに加えた。一酸化炭素（ＣＰ等級）を圧力４０バールで充填し、次いでパージして、内部の空気を除去した。次いで、８０バールまで充填し、反応混合物を強く攪拌しながら１７５℃で１０時間、加熱した。加熱処理中、反応系の圧力は約１２０バールであった。加熱の停止後、残る一酸化炭素気体をパージする前に、オートクレーブおよびその内容物を自然に室温まで冷却させた（約１２時間が必要であった）。次いで、オートクレーブを開放したところ、黄緑色の溶液中に懸濁したドデカカルボニルトリオスミウムの鮮黄色結晶が見られた。生成物を濾別し、氷冷メタノールで２回洗浄してから、弱い窒素流下で乾燥させ、最後に真空下で乾燥させた（５．０ｇ、収率８３％）。得られた生成物は、ＩＲ分光法によって同定した。
【０１０９】
ＣＨ２Ｃｌ２中でのＩＲ（ν  ＣＯ）：２０６８（ｓ）、２０３４（ｓ）、２０１３（ｗ）、２０００（ｗ）ｃｍ−１。
ビス（アセトニトリル）デカカルボニルトリオスミウムの調製
この実施例では、上記に定義した金属トリアングロ化合物のさらなる前駆体の調製を示す（図１の化合物２を参照）。この合成についてのさらなる情報は、例えば、ＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＶａｒｇａｓによって開示されている（Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ、１９９０、２８、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｍｅｔ．  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．  Ｓｙｎｔｈ．、２３２−２３３）。
【０１１０】
【化１３】
2010527328.tif 000014
【０１１１】
１Ｌの３つ首丸底フラスコに、窒素雰囲気下、アセトニトリル（３００ｍＬ）およびジクロロメタン（３００ｍＬ）（いずれも窒素下で蒸留したばかりの）中に［Ｏｓ３（ＣＯ）１２］（５００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）の懸濁液を調製した。次いで、これを塊が完全に溶解するまで１時間、環流した。この溶液を４０℃まで冷却させた。アセトニトリル（２００ｍＬ）に、２モル等量よりわずかに多いトリメチルアミンオキシド（１００ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を、窒素下、等圧滴下漏斗を用いて、２時間掛けて添加した。この
混合物を、その温度でさらに２時間、攪拌し続けた。室温まで冷却した後、暗黄色の溶液を、シリカを通じて濾過し、過剰なトリメチルアミンオキシドを除去した。次いで、室温、真空下で溶媒を除去し、黄褐色の固体を得た。収率：４８６ｍｇ（９５％）。得られた生成物の赤外線スペクトルのカルボニル領域には、次の吸収が見られた（ジクロロメタン中でのｃｍ−１）、２０７９ｗ、２０２５（ｓ、ｓｈ）、２０２０ｖｓ、１９８０ｍ、１９５８ｗ。
【０１１２】
［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］（ＭＷ＝１０１１）の調製
オーブンで乾燥した１５０ｍＬの２首フラスコに、マグネティックスターラバー、ラバーセプタム、および窒素インレットを備えさせた。最初にフラスコを窒素でフラッシュしてから、３０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を添加した。ビス（アセトニトリル）デカカルボニルトリオスミウム、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（ＮＣＭｅ）２］（１５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）および２−キノリンチオール（ｑｔＳ）（２５ｍｇ、０．１７  ｍｍｏｌ）を、窒素を流しながら添加した。反応混合物を窒素下で連続的に撹拌しつつ１００℃で還流したところ、数分後に溶液の色が黄色から赤色へ変化した。この反応を、約４時間後、出発物が完全に消費されるまで、ＴＬＣを用いて監視した。過剰な溶媒を真空下で除去した。この残さを最小量のジクロロメタンに溶解し、ジクロロメタン−ヘキサン（１：３）の混合溶媒を溶出液として用い、ＴＬＣで分析した。純粋な生成物を、４度で約１ヶ月、結晶成長用の溶媒混合物中に置いた。Ｘ線結晶法、ＮＭＲ、質量分析、およびＩＲによって、最終生成物［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］を決定した（ＭＷ＝１０１１）。
【０１１３】
ＩＲスペクトルのカルボニル伸縮振動数は２２００〜１９００ｃｍ−１の範囲にあり、末端カルボニル基だけが存在することを示している。これは図１に（化合物（３）として）示す結晶構造と一致する。ＦＡＢ質量スペクトルは、ｍ／ｚ  １０１１に分子イオンピークを示す。これは式［Ｏｓ３（μ−Ｈ）（ＣＯ）１０Ｈ６ＮＳ］と矛盾しない。この薬剤の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのデータは、δ７．８〜７．５ｐｐｍの範囲にフェニルプロトンの多重線を示す。δ８．０ｐｐｍの三重線は窒素原子および硫黄原子によって脱遮蔽されている２つのプロトンに割り当てられる。δ−１７．０ｐｐｍの一重線ピークは、１つの橋かけ水素が存在することを示している。これはさらに単Ｘ線回折の結果によって確認されている。
【０１１４】
細胞および培養条件
ヒト前骨髄球白血病細胞系ＨＬ−６０細胞およびジャーカット細胞は、ＡＴＣＣ（ロックヴィル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）、メリーランド州）から取得した。これを、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベータ中で、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ；ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ、ガイサーズバーグ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）、メリーランド州）を補充したＲＰＭＩ１６４０の培養物により維持した。培養物における細胞密度は１×１０６細胞／ｍｌを超えることはなかった。
【０１１５】
細胞生存率アッセイによる細胞毒性の検出
ＨＬ−６０細胞およびジャーカット細胞（１×１０５／細胞）を、９６ウェルプレートにおいて２４時間、増大する濃度（０〜５０ｍＭ）の［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に晒した。細胞に、プレーンＲＰＭＩ１６４０において３ｍｇ／ｍｌの３−（４、５−ジメチルチアゾリル−２）−２、５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を補充し、３７℃で１〜２時間、インキュベートした。この細胞を、次いで、３０００回転／分で５分間、遠心分離した後、１００μｌのＤＭＳＯ＋１０μｌのＳｏｒｅｎｓｅｎグリシンバッファ（０．１Ｍのグリシン、０．１ＭのＮａＣｌ、ｐＨ１０．５）に再溶解した。自動式ＥＬＩＳＡ読取機を用いる分光測光法で、５７０ｎｍの吸光度波長により、細胞生存率を決定した。取得したデータを図２に示す。示したデータは、
３回の繰返し実験における中間値±３つの独立した実験のものである。細胞生存率は、未処理のコントロール細胞からの細胞生存の割合として、±ＳＤと共に示してある。５０％細胞生存率（ＩＣ５０）を抑制するＯｓ試薬の濃度は、約２５ｍＭであった（図２を参照）。
【０１１６】
ヨウ化プロピジウムによるＤＮＡ断片化
細胞内ＤＮＡ量の決定については、各細胞系から１×１０６細胞／ｍｌを、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］で処理した。処置後、細胞を１ｘＰＢＳ＋１％  ＦＢＳで２回洗浄した。試料調製およびＤＮＡ量についてのＰＩ染色を何処かに記載のように行った（３２）。簡潔には、細胞ペレットを０．５ｍｌの１ｘＰＢＳ＋１％  ＦＢＳに再懸濁させ、凝集を避けるために攪拌しつつ、５ｍｌの７０％エタノールを添加することによって直ちに固定した。
【０１１７】
固定した細胞を、４℃に３０ｍｉｎ置き、１０００ｘｇで５分間、遠心分離し、１ｘＰＢＳ＋１％  ＦＢＳで１回洗浄した。次いで、細胞ペレットを０．５ｍｌのＰＩ／ＲＮＡｓｅに懸濁させた。１／５０体積のＰＩストックおよび１／４０体積のＲＮＡｓｅを添加することによって、溶液を調製した。ストックを１ｘＰＢＳ＋１％  ＦＢＳに加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。染色した細胞を、励起４８８ｎｍおよび発光６１０ｎｍ（赤）に設定したフローサイトメトリーによって分析した。
【０１１８】
細胞が順方向（ＦＳ）に光を散乱する能力は、細胞の体積に相関する。Ｏｓ試薬で処理した細胞を、未処理のコントロール細胞と比較したＦＳの強度の変化について分析した。試料当たり合計１０，０００細胞を調べ、データをＷＩＮＭＤＩソフトウェアによって分析した。
【０１１９】
データを図４に示す。ＤＮＡ断片化の分析結果は、二倍体以下のＤＮＡの割合が有意に増加するにつれ、オスミウムトリアングロ化合物によって誘導される細胞死がアポトーシス性である（サブＧ１画分に見える）ことを明らかに示した。
【０１２０】
細胞内の超酸化物（Ｏ２−）の測定
ルシゲニンによる化学発光アッセイは、ＣｌｅｍｅｎｔおよびＰｅｒｖａｉｚが詳述しているように、実験室において日常的に用いられる（Ｐｅｒｖａｉｚ  Ｓ、Ｃｌｅｍｅｎｔ  ＭＶ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ、（２００２）、３５２、１５０−１５９）。簡潔には、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｓｉｒｉｕｓ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒを用いて、化学発光を監視した（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＧｍｂＨ、Ｂｌｅｉｃｈｓｔｒａｓｓｅ／Ｐｆｏｒｚｈｅｉｍ、ドイツ国）。データは、相対的な光単位／タンパク質のｍｇ数（ＲＬＵ／ｍｇ  タンパク質）として記載してある。タンパク質濃度を、製造者によって詳述されているように、Ｐｉｅｒｃｅ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、イリノイ州、米国）由来のタンパク質アッセイ試薬Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｐｌｕｓを用いて決定した。
【０１２１】
２’、７’−ビス（２−カルボキシエチル）−５、６−カルボキシフルオレセイン（ＢＣＥＣＦ）による細胞内ｐＨの測定
この実施例では、本発明のオスミウムトリアングロ化合物によって誘導されるアポトーシスが、細胞内のＲＯＳ生成の増大を伴うか否か、またはどの程度伴うかの決定について示す。細胞を［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に２時間または４時間、晒し、細胞内のＯ２−生成をルシゲニンによる化学発光アッセイによって測定した。
【０１２２】
細胞に細胞膜不透過性染料ＢＣＥＣＦ（Ｓｉｇｍａ）を加え、細胞内（ｐＨｉ）を測定
した。簡潔には、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に晒す（３７℃で２〜１２時間）前または後の細胞（１×１０６）を、ＨＢＳＳで１回洗浄し、０．１ｍｌのＨＢＳＳ中に再懸濁させ、１ｍＭのＢＣＥＣＦ  １０ｍｌを加え、３７℃で３０分間、暗所においた。次いで、細胞を０．５ｍｌのＨＢＳＳ中に再懸濁させ、励起４８８ｎｍに設定したＣｏｕｌｔｅｒ  Ｅｐｉｃｓ  Ｅｌｉｔｅ  ＥＳＰ（Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＬ）フローサイトメーターを用いて分析した。最少で１０，０００イベントを分析し、５２５、６１０でのＢＣＥＣＦの蛍光比を用いて、ｐＨ校正曲線からの細胞内ｐＨを得た。ｐＨ校正曲線を生成するために、細胞に上記の通りＢＣＥＣＦを加え、ＨＢＳＳで１回洗浄し、次いで、高Ｋ＋バッファバッファ（１３５ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、２０ｍＭのＮａＣｌ、および１１０ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、および２０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０〜８．０の範囲）中に再懸濁させた。フローサイトメトリーの直前に、細胞に、２０ｍＭのナイジェリシン（無水アルコール中の１ｍＭストック；Ｓｉｇｍａ）を加え、一定のｐＨ範囲を有するナイジェリシン含有バッファ中での細胞の蛍光比測定値（５２５ｎｍ／６１０ｎｍ）を用いて、ヒストグラムのチャンネル数をｉｐＨに関連付けた。示したように、ｉｐＨを、１μｇ／ｍｌのナイジェリシンの存在下、必要なｐＨで、培質において細胞をインキュベートすることによってクランプした。
【０１２３】
データを図５および図６に示す。初期における細胞内Ｏ２−の増大は、細胞質ゾルｐＨの有意な低下（図５Ｃ）と共に、Ｏｓクラスター化合物に晒した際の細胞で検出された（図５Ａ、Ｂ）。
【０１２４】
細胞内Ｈ２Ｏ２濃度のフローサイトメトリー分析
この実施例では、細胞の酸化還元状態に対する本発明のオスミウムトリアングロ化合物の効果を決定することについて示す。細胞内のＨ２Ｏ２生成に対する効果を、この目的で測定している。
【０１２５】
細胞内Ｈ２Ｏ２を、２、７−ジクロロフルオレセインジアセテート（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、ユージーン、オレゴン州）で染色することによって決定した。何処かに示されているように、２、７−ジクロロフルオレセインジアセテートはＨ２Ｏ２でジクロロフルオレセインへと酸化される（Ｈｉｒｐａｒａ，Ｊ．ら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．、２００１、２７６、５１４−５２１）。簡潔には、ＨＬ−６０細胞を、１２．５ｍＭおよび２５ｍＭの［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に４時間晒し、２０ｍＭの２’、７’−ジクロロフルオレセインジアセテートに３７℃で３０分間、置き、フローサイトメトリー（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｅｐｉｃｓ  Ｅｌｉｔｅ  ＥＳＰ；励起４８８ｎｍ）で分析した。カタラーゼ（１０００ユニット／ｍｌ）を用いて細胞内のＨ２Ｏ２を補足した後、薬剤を添加し、Ｈ２Ｏ２のフローサイトメトリー分析を４時間、続いてＨ２Ｏ２のフローサイトメトリーを行った。少なくとも１０，０００イベントを分析した。
【０１２６】
結果を図６に示す。腫瘍細胞をＯｓクラスター化合物（１２．５ｍＭおよび２５ｍＭ）に晒すことによって、４時間以内の処置で細胞内Ｈ２Ｏ２が有意に急増し、これはＨ２Ｏ２補足カタラーゼ（１０００Ｕ／ｍｌ）によって完全にブロックされた（図６）。
【０１２７】
さらに、Ｏｓクラスター化合物へ晒したことに続く細胞内ＲＯＳ生成の測定値の増大が細胞内ＲＯＳ生成に関係したものであるか、化合物と培地（細胞外）に存在する成分との相互作用による非特異的な増大であるかについても検証できた。これを行うために、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］（１２．５ｍＭおよび２５ｍＭ）の存在しないところで、感受性プローブＤＣＨＦ−ＤＡを存在させて、または存在させないで培地のインキュベートを行い、分光蛍光計を用いて蛍光の増大によってＨ２Ｏ２生成を監視された。これらの条件下ではＤＣＦ蛍光は有意に増大しなかった（図７）ため、［Ｏ
ｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］へ晒した際に生成したＨ２Ｏ２は、細胞内ＲＯＳ生成の活性化に関係したものであって、薬剤と培地の成分との非特異的な反応によるものではないことが示されている。
【０１２８】
カスパーゼ活性の決定
カスパーゼ２、３、８、９の活性について、Ｂｉｏ−Ｒａｄによって供給されたＡＦＣ共役基質を用いてアッセイを行った。細胞（１×１０６細胞／ｍｌ）を、時間を通じて薬剤と共にインキュベートし、１ｘＰＢＳで２回洗浄し、５０μｌの冷細胞溶解バッファ（サプライヤによって提供された）中に再懸濁させ、氷上で１０分間、インキュベートした。５０μｌｘ２の反応バッファ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ、１０ｍＭのＫＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのジチオトレイトール）および６ｍｌの蛍光発生性カスパーゼ特異的（カスパーゼ２にはＶＤＶＡＤ−ＡＦＣ、カスパーゼ３にはＤＥＶＤ−ＡＦＣ、カスパーゼ８にはＩＥＴＤ−ＡＦＣ、およびカスパーゼ９にはＬＥＨＤＡＦＣ）を各試料に添加し、３７℃で１時間、インキュベートした。プロテアーゼ活性を、分光蛍光計（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  ＬＳ５０Ｂ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、バッキンガムシャー、英国）を用いて、４００ｎｍでの励起に続く５０５ｎｍでの相対蛍光強度によって決定した。
【０１２９】
［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］による１２時間の腫瘍細胞の処置で、細胞死受容体ＣＤ９５の表面発現が有意に増大した（図８）。
ＣＤ９５のシグナリングは細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）のリクルートに依存するので、頂点のカスパーゼであるカスパーゼ８１５の開裂／活性化を引き起こすと、活性なカスパーゼ９、カスパーゼ−３、およびカスパーゼ−６を含む下流のカスパーゼカスケードが活性化される。腫瘍細胞を［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に晒すことによって、ＨＬ６０細胞およびジャーカット細胞の両方において６時間以内にカスパーゼ（カスパーゼ２、８、９、３）の活性化が生じ、この活性化はＨＬ６０細胞においてより顕著である（図９Ａ、Ｂ）。加えて、プロカスパーゼおよび開裂生成物のウェスタンブロット分析を行い、ディレクトを得た。
【０１３０】
フローサイトメトリーによるミトコンドリアの膜電位差（ΔΨｍ）の決定
電位感受性プローブ３，３’−ヨウ化ジヘキシルオキサカルボシアニン（ＤｉＯＣ６）を用いて、以前に記載したようにミトコンドリアのΔΨｍを測定した（Ｐｅｒｖａｉｚ，Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ（１９９９）９３、１２、４０９６−４１０８。引用によって本明細書に完全に援用する）。以前に記載したように、ミトコンドリアはラット肝臓（Ａｌｂｉｎｏ  ｒａｔｓ、Ｗｉｓｔａｒ  ｓｔｒａｉｎ）から単離した（Ｐｅｒｖａｉｚ、１９９９、上記）。簡潔には、肝細胞を１０ｍＬのバッファＡ（０．３ｍｏｌ／Ｌのスクロース、５ｍｍｏｌ／ＬのＴＥＳ、０．２ｍｍｏｌ／ＬのＥＧＴＡ、ＫＯＨによりｐＨ７．２とした）中でホモジナイズし、４℃で１０分間、２０００ｇにて遠心分離を行った。上澄み（Ｓｌ）を除去し、ペレットを、０．３ｍｏｌ／Ｌのスクロース、５ｍｍｏｌ／ＬのＴＥＳ、０．２ｍｍｏｌ／ＬのＥＧＴＡからなり、ＫＯＨによりｐＨ７．２とした１０ｍＬのバッファ中で再懸濁させ、４℃で１０分間、２０００ｇにて遠心分離を行った。得られた上澄み（Ｓ２）を、次いで、Ｓ１と合わせ、４℃で１０分間、８０００ｇにて遠心分離を行った。ペレットを、次いで、上記バッファで調製したパーコール勾配（６０％、３０％、１８％）の上に置き、１ｍＬのバッファＡ（０．３ｍｏｌ／Ｌのスクロース、５ｍｍｏｌ／ＬのＴＥＳ、０．２のｍｍｏｌ／ＬのＥＧＴＡ、ｐＨ７．２）中に再懸濁させ、４℃で１０分間、８０００ｇにて遠心分離を行った。次いで、ミトコンドリアを非ミトコンドリア膜および機能を持たない細胞器官から分離し、３０％／６０％の界面で収集し、１０体積の上記のバッファ（０．３ｍｏｌ／Ｌのスクロース、５ｍｍｏｌ／ＬのＴＥＳ、０．２ｍｍｏｌ／ＬのＥＧＴＡ、ｐＨ７．２）で洗浄し、４℃で１０分間、８０００ｇにて遠心分離して、パーコールを洗い落とした。次いで、ミトコンドリアを上記のバッファ（０
．３ｍｏｌ／Ｌのスクロース、５ｍｍｏｌ／ＬのＴＥＳ、０．２ｍｍｏｌ／ＬのＥＧＴＡ、ＫＯＨによりｐＨ７．２とした）２ｍＬ中に再懸濁させ、４℃に保持して穏やかに攪拌した。単離したミトコンドリアの実験は全て、調製の４時間以内に行った。
【０１３１】
５０マイクログラムの精製したラット肝臓ミトコンドリアを、４０ｎｍｏｌ／ＬのＤｉＯＣ６と共に、３７℃で１５分間、インキュベートした。１ｘＰＢＳで２回穏やかに洗浄した後、励起を４８８ｎｍに設定したＥｐｉｃｓ  Ｐｒｏｆｉｌｅ（Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｈｉａｌｅａｈ、フロリダ州）フローサイトメーターにより、ミトコンドリアを分析した。試料当たり少なくとも１０，０００イベントを収集し、データをＷＩＮＭＤＩソフトウェアによって分析した。
【０１３２】
同様に、１×１０６個の細胞を、３、３’−ＤｉＯＣ６（４０ｎＭ）と共に３７℃で１５分間、インキュベートした。細胞を１ｘＰＢＳで２回洗浄し、励起を４８８ｎｍに設定したＥｐｉｃ  Ｐｒｏｆｉｌｅフローサイトメーターで直ちに分析した。データを、ＷｉｎＭＤＩソフトウェアを用いて、１０，０００イベントについて、分析した。
【０１３３】
共焦点顕微鏡検査
細胞に４％（ｖ／ｖ）のパラホルムアルデヒドを加えて固定し、−２０℃で３０分間、インキュベートした。細胞を、氷冷１ｘＰＢＳで３回洗浄して過剰なパラホルムアルデヒドを除去してから、室温で１０分間、０．２％（ｖ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎＸ−１００に晒し、細胞を透過性とした。固定され透過性とされた細胞を、次いで、氷冷１ｘＰＢＳで３回洗浄してから、３７℃で３０  分間、１ｘＰＢＳ中の１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡでブロックした。この細胞を再び３回洗浄し、過剰なブロックバッファを除去した。ブロックバッファ中の第１マウスモノクローナル抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、オレゴン州、米国）および第１ウサギポリクローナルｂａｘ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、カリフォルニア州、米国）（１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡおよび１ｘＰＢＳ）を１：１０００に稀釈してＨＬ−６０細胞系へ添加した。この細胞を室温で１時間、インキュベートした。これに次いで、細胞を氷冷１ｘＰＢＳで３回洗浄して過剰な未結合の第１抗体を除去してから、ヤギ抗マウスＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ共役第２抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、オレゴン州、米国）と、ヤギ抗ウサギＦＩＴＣ共役第２抗体（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ、カリフォルニア州、ＵＳＡ）とを添加した。この細胞を室温で１時間、インキュベートし、氷冷１ｘＰＢＳで３回洗浄して過剰な未結合の第２蛍光抗体を除去した。この細胞を、次いで、１０μｌのＶｅｃｔｏｒｓｈｉｅｌｄと共に顕微鏡のスライドガラス（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ、ニューサウスウェールズ州、オーストラリア国）上に載せた。オリンパスＩＸ８１  ＦｌｕｏＶｉｅｗ（商標）５００共焦点顕微鏡（ニューヨーク州、米国）を用いて、、ＦＩＴＣおよびＴｅｘａｓＲｅｄについて、それぞれ波長４８８ｎｍ、１ｍＷのＨｅＮｅおよび波長５４３ｎｍ、４０ｍＷのアルゴンで蛍光色素を励起した。
【０１３４】
シトクロムｃのウェスタンブロット
シトクロムｃの放出を、以前に記載したように、３０×１０６個の細胞からの細胞質ゾル抽出物のウェスタンブロット分析によって評価した（Ｈｉｒｐａｒａ，Ｊ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）、２７６、５１４−５２１（引用によって本明細書に完全に援用する）；Ｐｅｒｖａｉｚ、１９９９、上記）。細胞質ゾルの画分を取得し、ウェスタンブロットによって分析した。
【０１３５】
簡潔には、細胞を、氷冷ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で２回洗浄してから、５分間、２００ｘｇで遠心分離した。次いで、細胞ペレットを、６００μＬの抽出バッファ（２００ｍｍｏｌ／Ｌのマンニトール、６８ｍｍｏｌ／Ｌのスクロース、５０ｍｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．４、５０ｍｍｏｌ／ＬのＫＣｌ、５ｍｍｏｌ／ＬのＥＧＴＡ、２ｍｍｏｌ／ＬのＭｇＣｌ２、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＴ、およびプロテアーゼ抑制剤を含有する
）中で再懸濁させた。（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ、マンハイム、ドイツ国）。氷上で３０分間、インキュベーションした後、細胞をＤｏｕｎｃｅ型ホモジナイザーでホモジナイズし、このホモジェネートを１５分間、間１４，０００ｘｇで回転させ、上澄みを除去し、ゲル電気泳動による分析まで８０℃で貯蔵した。モノクローナル抗Ｃｙｔ．Ｃ抗体（クローン７Ｈ８．２Ｃ１２；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いた。Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇキット（Ｐｉｅｒｃｅ）によって、信号を検出した。
【０１３６】
ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ開裂、Ｂａｘ、およびＢｉｄのウェスタンブロット分析
ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ開裂の分析では、２×１０６個の細胞からの可溶化液をサンプルバッファ（５０ｍｍｏｌ／Ｌのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、６ｍｏｌ／Ｌの尿素、３％のＳＤＳ、０．００３％のブロモフェノールブルー、および６％のβ−メルカプトエタノール）により調製し、記載したような抗ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（クローンＣ−２−１０、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）を用いるウェスタンブロット分析に掛けた（Ｐｅｒｖａｉｚ、１９９、上記）。Ｂａｘのウェスタンブロット分析については、細胞（２×１０６）を、冷却した１００ｍｌの１ｘ放射免疫沈降法アッセイバッファリシスバッファを加えることによって溶解し、５０μｇのタンパク質を１５％のＰＡＧＥに晒し、上記のようにポリビニリデンジフルオリドに移動させた。これに代えて、Ｂａｘの二量化／多量化の分析については、細胞可溶化液を１０％の未変成ゲル電気泳動に掛けた。膜を、１：２，０００に稀釈したマウスモノクローナル抗Ｂａｘ抗体（クローン６Ａ７、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ、サンディエゴ、カリフォルニア州）に２５℃で２時間、晒し、続いて、１：５，０００に稀釈したヤギ抗マウスＩｇＧ−ホースラディシュペルオキシダーゼに晒した。この抗Ｂａｘ抗体（６Ａ７）は、Ｂａｘの二量化ドメインの近傍に存在するエピトープを認識する。Ｍｒ２２，０００の完全な長さのＢｉｄを認識するウサギポリクローナル抗Ｂｉｄ  ＩｇＧ（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、パロアルト、カリフォルニア州）を用いて、細胞可溶化液全体に対し、Ｂｉｄ開裂のウェスタンブロット分析を行った。化学発光を上述のように検出した。
【０１３７】
図１０に示したデータから、Ｂｃｌ−２の過剰発現によって［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］に誘導されるアポトーシスがブロックされることが分かる。注目すべきことに、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］へ晒されると用量に応じてシトクロムｃが放出される（図１１Ａ）一方、Ｂａｘの準細胞局在性に有意な変化は存在しなかった（図１１Ｂ）。
【０１３８】
総Ａｋｔ（Ｔｏｔａｌ  Ａｋｔ）／プロテインキナーゼＢおよびＡｋｔ／プロテインキナーゼＢリン酸化レベルの検出
ＨＬ−６０細胞（２×１０６）を１２ウェルプレートに配置し、次いで薬剤へ晒した。細胞を採取し、ＰＢＳで１回洗浄し、次いで、細胞溶解バッファで溶解した［１５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１％のＮＰ４０］。次いで、細胞可溶化液（２００μｇ）を８％のアクリルアミドゲル上で電気泳動に掛けた。抗体を用いて、総Ａｋｔと、Ｓｅｒ４７３位のリン酸化されたＡｋｔ／ＰＫＢとを調べた（Ｃｅｌｌ
Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ベヴァリー、マサチューセッツ州）。タンパク質ブロットを、抗βアクチン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州）で調べた。
【０１３９】
図１１Ｃには、生存キナーゼの活性化に対する［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］の効果、Ａｋｔ／ＰＫＢのデータを示す。興味深いことに、総Ａｋｔの信号はほぼ変化しないままであった（図１１Ｃ、上側の欄）が、４〜６時間以内晒すと、Ａｋｔのリン酸化が強く抑制された（図１１Ｃ、中央の欄を参照）。これらのデータによ
って、［Ｏｓ３（ＣＯ）１０（μ−Ｈ）（μ−Ｓ）Ｃ９Ｈ６Ｎ］がアポトーシス性細胞死を誘導することに加え、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ生存経路を目標としてもいることの証拠が得られた。これは、臨床において極めて大きな意味を有する。
【０１４０】
コメットアッセイによるＤＮＡ損傷測定
何処かに記載のように、コメットアッセイを行った（Ｃｈｏｕｃｒｏｕｎ，Ｐ．ら、Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ、（２００１）４７８、８９−９６；その全体を引用によって本明細書に援用する）。簡潔には、各実験の前週に、霜で覆われた顕微鏡用スライドを洗浄し、アルコールで乾燥し、通常融点のアガロース（超純水中、０．６％）の２つの薄層でプレコートしてから、アガロースを乾燥させるように室温に置き、次いで、４℃で冷蔵した。
【０１４１】
アポトーシス誘導後の３０分または６０分毎（コントロールは誘導直前に取得した）に、１５μｌの細胞懸濁液の一定分量を取り、３７℃で、２００μｌの低融点アガロース（Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸バッファ塩水中、０．８％）中に懸濁させた。このアガロース細胞懸濁液の７５μｌの量を２つのプレコートしたスライド上に各々展開し、カバーグラスで覆った。４℃で５分間、ゲル化させた後、カバースリップを静かに除去し、第３層の１００μｌの低融点アガロースを加え、４℃で５分間、凝固させた。次いでスライドを溶解液で充填した槽中に配置し（０．０３ＭのＮａＯＨ、１ＭのＮａＣｌ、０．１％のＳＬＳ、ｐＨ１２．５、４℃）、１時間冷却したまま保持した。次いで、スライドを溶解液から除去し、巻戻し液（０．３ＭのＮａＯＨ、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ  １３、４℃）を含む槽へ移した。この槽を、４℃で３０分間、保持した。このスライドを、次いで、バッファ（０．０７５ＭのＮａＯＨ、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ１２．５、室温）で充填した電気泳動槽中に置いた。室温、１Ｖ／ｃｍ、約２４０ｍＡで２５分間、電気泳動を行った。最後に、スライドを超純水で静かに２回、洗浄した。臭化エチジウム溶液（２０μｇ／ｍｌ、５０μｌ／スライド）による染色の後、オリンパス社のエピ蛍光顕微鏡ＢＸ−４０およびキューブＵ−ＭＷＧ（励起フィルタ：５１０〜５５０ｎｍ、バリアフィルタ：５９０ｎｍ）を用いて、２００ｘの拡大率で、スライドの読取を直ちに実行した。各スライドについて、無作為に選択した５０の細胞を視覚および画像解析システムコメット３．１（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ）の両方で分析した。一部のスライドについては、アクリジンオレンジ（水中１００μｇ／ｍｌ、５０μｌ／スライド）により染色し、キューブＵ−ＭＷＢ（励起フィルタ：４５０〜４８０ｎｍ、バリアフィルタ：５１５ｎｍ）を用いて読取を行った。
【図１】
2010527328.tif 000021
【図２】
2010527328.tif 000022
【図３Ａ】
2010527328.tif 000023
【図３Ｂ】
2010527328.tif 000024
【図３Ｃ】
2010527328.tif 000025
【図３Ｄ】
2010527328.tif 000026
【図３Ｅ】
2010527328.tif 000027
【図３Ｆ】
2010527328.tif 000028
【図３Ｇ】
2010527328.tif 000029
【図３Ｈ】
2010527328.tif 000030
【図５Ａ】
2010527328.tif 000031
【図５Ｂ】
2010527328.tif 000032
【図５Ｃ】
2010527328.tif 000033
【図７Ａ】
2010527328.tif 000034
【図７Ｂ】
2010527328.tif 000035
【図１０Ｂ】
2010527328.tif 000036
【図１１】
2010527328.tif 000037
【図１４Ａ】
2010527328.tif 000038
【図１４Ｂ】
2010527328.tif 000039
【図４Ａ】
2010527328.tif 000040
【図４Ｂ】
2010527328.tif 000041
【図４Ｃ】
2010527328.tif 000042
【図６Ａ】
2010527328.tif 000043
【図６Ｂ】
2010527328.tif 000044
【図８】
2010527328.tif 000045
【図９Ａ】
2010527328.tif 000046
【図９Ｂ】
2010527328.tif 000047
【図１０Ａ】
2010527328.tif 000048
【図１０Ｃ】
2010527328.tif 000049
【図１２Ａ】
2010527328.tif 000050
【図１２Ｂ】
2010527328.tif 000051
【図１３】
2010527328.tif 000052
【手続補正書】
【提出日】平成21年5月12日(2009.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2010527328.tif 000053
の金属トリアングロ化合物。
［ここで、Ｒ１は、ヘテロ原子を含む主鎖を有する環式炭化水素部位を有する、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される６個以下のヘテロ原子を含み、Ｒ１は、電子豊富部位をさらに含み、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族
基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
ただし次の化合物は除外される：エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ５−［２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンチオナト（２−）−κＮ１：κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［６−（メルカプト−κＳ：κＳ）−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２］］ヘキサオスミウム、エイコサカルボニルジ−μ−ヒドロ［μ４−［２、４（１Ｈ、３Ｈ）−ピリミジンチオナト（２−）−κＳ２：κＳ２：κＳ４：κＳ４］］ヘキサオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（１−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−κＳ２：κＳ２）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル−μ−ヒドロ［μ−（３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］トリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（４、６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロオスミウム、トリアコンタカルボニル［μ６−［１、３、５−トリアジン−２、４、６（１Ｈ、３Ｈ、５Ｈ）−トリチオナト（３−）−Ｓ：Ｓ：Ｓ’：Ｓ’：Ｓ”：Ｓ”］ノナオスミウム、デカカルボニル［μ−（１、３−ジヒドロ−１−メチル−２Ｈ−イミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾキサゾールチオナト−Ｓ：Ｓ）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−（１、３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−チオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、［μ−（２（３Ｈ）−ベンゾチアゾールチオナト−Ｓ２：Ｓ２）］デカカルボニル−μ−ヒドロトリトリアングロオスミウム、デカカルボニル［μ−［１、２−ジヒドロ−４、６−ジメチル−２−（チオキソ−κＳ：κＳ）−３−ピリジンカルボニトリラト］］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム、およびデカカルボニル［μ−（４、６−ジメチル−２（１Ｈ）−ピリミジンチオナト−Ｓ：Ｓ）］−μ−ヒドロトリ−トリアングロルテニウム。］
【請求項２】
Ｒ１は、１〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である請求項１に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項３】
芳香族部位は、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンからなる群から選択される請求項２に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項４】
Ｂ、Ｄ、およびＥは同一である請求項１乃至３のいずれか一項に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項５】
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯである請求項１乃至４のいずれか一項に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の金属トリアングロ化合物を形成する方法であって、
式（ＩＩＩ）：
【化２】
2010527328.tif 000054
［ここで、Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ４およびＬ５は、ＮＣ−ＣＨ３、ＣＯ、ＮＯ、およびＨからなる群から独立に選択される］
の化合物を一般式Ｒ１−ＡＨの化合物と接触させることを含む方法。
［ここで、Ｒ１は、ヘテロ原子を含む主鎖を有する環式炭化水素部位を有する、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される６個以下のヘテロ原子を含み、Ｒ１は、電子豊富部位をさらに含み、
電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、Ｎ＝Ｎ、Ｎ＝Ｏ、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、または、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基とからなる群から選択される。］
【請求項７】
一般式（ＩＩＩ）の前記化合物は一般式（ＩＶ）：
【化３】
2010527328.tif 000055
であり、前記方法は一般式（Ｖ）： 
【化４】
2010527328.tif 000056
の化合物を形成することを含む、請求項６に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項８】
式（ＩＶ）の化合物は、ビス（アセトニトリル）デカカルボニルトリオスミウムである請求項７に記載の金属トリアングロ化合物。
【請求項９】
一般式（ＩＩＩ）の化合物を一般式Ｒ１−ＡＨの化合物に接触させることによって、一般式（Ｉ）の化合物を形成することをさらに含む、請求項７または８に記載の方法。
［ここで、Ｒ１は、ヘテロ原子を含む主鎖を有する環式炭化水素部位を有する、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される６個以下のヘテロ原子を含み、Ｒ１はさらに電子豊富部位を含み、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族
基からなる群から選択される。］
【請求項１０】
細胞のアポトーシスを誘導するための、または細胞の発癌を防止するための医薬の製造における式（Ｉ）
【化５】
2010527328.tif 000057
の金属トリアングロ化合物の使用。
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
請求項１において除外した化合物を含む。］
【請求項１１】
アポトーシスが誘導される細胞は腫瘍細胞である請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
腫瘍細胞に選択的にアポトーシスを誘導するための請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
腫瘍細胞のアポトーシスの誘導は、癌の処置または予防用の治療である請求項１１または１２に記載の使用。
【請求項１４】
細胞のアポトーシスの誘導は、細胞内の活性酸素種の増大を含む請求項１０乃至１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
細胞内の活性酸素種は、過酸化物、超酸化物、オゾン、ヒドロキシルラジカル、亜硝酸
過酸化物、および次亜塩素酸のうちの１つ以上を含む請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
細胞のアポトーシスの誘導は細胞質ゾルの酸性化を含む請求項１０乃至１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
細胞のアポトーシスの誘導は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体遺伝子の発現の増大を含む請求項１０乃至１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
ＴＮＦ受容体はＡｐｏ−１／Ｆａｓ（ＣＤ９５）分子である請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
発現の増大は１つ以上のカスパーゼの活性化を含む請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
カスパーゼは、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ８、カスパーゼ９、およびカスパーゼ１０からなる群から選択される請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
細胞のアポトーシスの誘導は、ミトコンドリアからのシトクロムｃの放出の増大を含む請求項１４乃至２０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
細胞のアポトーシスの誘導は、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ／ＰＫＢ）のリン酸化を抑制することを含む請求項１０乃至２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
細胞のアポトーシスの誘導は、ミトコンドリアの外膜へのタンパク質Ｂａｘの移動とは無関係である請求項１０乃至２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
細胞は培養された細胞である請求項１４乃至２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
細胞は哺乳動物から取得された細胞である請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
哺乳動物は、ラット、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ムフロン、モルモット、ハムスター、チンパンジー、アカゲザル、およびヒトから取得される請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
細胞を一般式（Ｉ）の所定量の金属トリアングロ化合物と接触させることを含む請求項２４乃至２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
一般式（Ｉ）の２つ以上の異なる所定量の金属トリアングロ化合物の使用と、少なくとも第１および第２の腫瘍細胞とを含み、第１の細胞は２つの所定量のうちの少ない方の量と接触され、第２の細胞は２つの所定量のうちの多い方の量と接触される請求項２４乃至２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
第１の細胞および第２の細胞は同じ患者から取得される請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記細胞のアポトーシスを決定することをさらに含む請求項２８または２９に記載の使用。
【請求項３１】
一般式（Ｉ）の金属トリアングロ化合物に対する患者の個別の応答を予測するための請求項２８乃至３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
細胞の発癌を防止することは、前記金属トリアングロと多環式芳香族炭化水素との錯体を形成させることを含む請求項１０乃至３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
金属トリアングロ化合物のＲ１は、０〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である請求項１０乃至３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
金属トリアングロ化合物の芳香族部位は、ベンゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、ナフタレン、アントラセン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンからなる群から選択される請求項３４に記載の使用。
【請求項３５】
金属トリアングロ化合物のＢ、Ｄ、およびＥは同一である請求項１０乃至３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯである請求項１０乃至３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
式（Ｉ）
【化６】
2010527328.tif 000058
の金属トリアングロ化合物を投与することを含む、細胞のアポトーシスを誘導する方法。［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、
Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
請求項１において除外した化合物を含む。］
【請求項３８】
金属トリアングロ化合物のＲ１は、０〜４個のヘテロ原子を含む、単環〜六環式の芳香族部位である請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
芳香族部位は、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、４Ｈ−ピラン、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、ピリジン、ビピリジン、インドール、２Ｈ−イソインドール、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、シンノリン、キノキサリン、チアジン、チアゾール、イソチアゾール、１Ｈ−アゼピン、ジベンゾピリジン、アゾシン、１Ｈ−アゾニン、オキセピン、チエピン、チアファントレン（ナフト［２、３−ｂ］チオフェン）、フェナントロ［３、２−ｂ］チオフェン、１−オキサ−１Ｈ−ベンズ［ｆ］インデン（ナフト［２、３−ｂ］フラン）、およびフロ［３、２−ｂ］ピリジンからなる群から選択される請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
金属トリアングロ化合物のＢ、Ｄ、およびＥは同一である請求項３７乃至３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
細胞は哺乳動物に含まれる細胞である請求項３７乃至４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
細胞は哺乳動物から取得された細胞である請求項３７乃至４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物は、ラット、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ムフロン、モルモット、ハムスター、チンパンジー、アカゲザル、およびヒトから選択される請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
細胞は腫瘍細胞である請求項３７乃至４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
式（Ｉ）
【化７】
2010527328.tif 000059
の金属トリアングロ化合物を投与することを含む、細胞の発癌を防止する方法。
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個の
ヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
請求項１において除外した化合物を含む。］
【請求項４６】
金属トリアングロ化合物は、多環式芳香族炭化水素との錯体を形成する請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
金属トリアングロ化合物と多環式芳香族炭化水素との間の錯体の形成によって、多環式芳香族炭化水素がＤＮＡとの錯体を形成することが防止される請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
（ａ）式（Ｉ）
【化８】
2010527328.tif 000060
［ここで、Ｒ１は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉからなる群から選択される０〜６個のヘテロ原子と、電子豊富部位とを含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、電子豊富部位は、（ｉ）Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択されるヘテロ原子と、（ｉｉ）−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、−ＣＯ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ２、−ＳＨ、ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ４Ｒ２、−ＳＯ２Ｒ２、−Ｓｅ、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＣ、−ＮＳ、−ＮＳｅ、−ＯＨ、−Ｎ＝Ｎ、−Ｎ＝Ｏ、−ＯＮＨＲ２、ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、Ｐ−（Ｒ２）３、および−ＣＦ３からなる群から選択される官能基とのいずれかであり、
Ａは、Ｓ、Ｓｅ、ＰＯ４、ＰＯ３（Ｒ２）、およびＰ−（Ｒ２）３からなる群から選択され、ここで、Ｒ２は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘ
テロ原子を含む、Ｈ、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、ＣＯ、−ＮＣ（Ｒ２）、ＣＮ−Ｒ２、および−Ｐ−（Ｒ２）３から独立に選択される配位子であり、ここで、Ｒ２は、Ｈであるか、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、およびＳｉの群から選択される０〜６個のヘテロ原子を含む、脂肪族、脂環族、芳香族、含芳香環脂肪族、および含芳香環脂環族基からなる群から選択され、
Ｂ、Ｄ、およびＥは、オスミウム、ルテニウム、レニウム、ロジウム、イリジウム、およびスズからなる群から独立に選択され、
請求項１において除外した化合物を含む。］
の金属トリアングロ化合物またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）キャリアまたは希釈剤と、
からなる細胞のアポトーシスを誘導するため、細胞の発癌を防止するため、またはその両方のための医薬組成物。
【請求項４９】
核酸アルキル化剤、ヌクレオシド類似物、アントラサイクリン、抗生物質、アロマターゼ阻害剤、葉酸拮抗剤、エストロゲン受容体調整因子、無機ヒ酸塩、微小管阻害剤、ニトロソ尿素、破骨細胞抑制剤、含白金化合物、レチノイド、トポイソメラーゼ１阻害剤、トポイソメラーゼ２阻害剤、チミジル酸合成酵素阻害剤、アロマターゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、イソフラボン、チロシンキナーゼ阻害剤、成長因子、ビスホスホネート、およびモノクローナル抗体のうちの１つ以上をさらに含む請求項４８に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2010527328.tif 000061
2010527328.tif 000062