(57)【要約】本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法には、ディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール、および／またはディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールとともにインキュベートした細胞が含まれる。ある実施形態において、これらの組成物および方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物もまた含む。本発明は１種以上の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートすることによる、細胞を活性化する方法、細胞の分化を促進する方法、および／または細胞の増殖を促進する方法もまた提供する。細胞はまた１種以上の成長因子および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法であって、該方法は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療の有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含し、ここで、該個体は、損傷関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、自閉症、自閉症スペクトラム障害、アスペルガー症候群、レット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、神経障害、および非神経系の適応症である、方法。
【請求項２】
前記状態は、該状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のために１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞の分化および／または増殖を促進するために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートする工程を包含する、細胞の分化および／または増殖を促進する方法。
【請求項４】
前記分化および／または増殖が、細胞の神経突起伸長の刺激および／または神経発生の増強を包含する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
個体における、神経突起伸長の刺激および／または神経発生の増強のための方法であって、該個体は、損傷関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、自閉症、自閉症スペクトラム障害、アスペルガー症候群、レット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、神経障害、および非神経系の適応症であり、該方法は、神経突起伸長を刺激するため、および／または神経発生を増強するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を投与する工程を包含する、方法。
【請求項６】
１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法であって、該方法は、（ｉ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたは薬学的に許容される前述のいずれかの塩を含む第１の治療、および（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療の組み合わせの有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項７】
１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法であって、該方法は、細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または前述の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療の有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項８】
１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法であって、該方法は、（ｉ）細胞を含む第１の治療、および（ｉｉ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療の組み合わせの有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項９】
個体の治療を補助する方法であって、多能性幹細胞を含む第１の治療、および多能性幹細胞の分化を誘導するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療を該個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
多能性幹細胞を分化させる方法であって、多能性幹細胞の分化を誘導するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに、個体から単離した培養多能性幹細胞をインキュベートする工程を包含する、方法。
【請求項１１】
神経系の適応症または非神経系の適応症を有する個体の治療を補助する方法であって、請求項３および１０のいずれかの方法によって製造された分化細胞を個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
前記素化ピリド［４，３−ｂ］インドールがディメボンである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記個体が哺乳動物である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記哺乳動物が、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、サル、マウス、ラット、およびヒトからなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
成長因子および／または抗細胞死化合物の投与をさらに包含する、請求項５および７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
成長因子および／または抗細胞死化合物とともに細胞をインキュベートする工程をさらに包含する、請求項３、４、および１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞型が、多能性幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される、請求項３〜４、および７〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞型が神経細胞であり、該方法が該神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる、請求項３〜４、および７〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞型が神経幹細胞であり、該方法が該神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する、請求項３〜４、および７〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記神経幹細胞が、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の治療および前記第２の治療が逐次的に投与される、請求項６、８〜９、および１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の治療および前記第２の治療が同時に投与される、請求項６、８〜９、および１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の治療および前記第２の治療が同じ薬学的組成物に含まれている、請求項６、８〜９、および１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１の治療および前記第２の治療が別々の薬学的組成物に含まれている、請求項６、８〜９、および１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１の治療および前記第２の治療が少なくとも相加的な効果を有する、請求項６、８〜９、および１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１の治療および前記第２の治療が相乗的な効果を有する、請求項６、８〜９、および１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記多能性幹細胞が神経幹細胞または非神経幹細胞である、請求項９、１０、および１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記神経幹細胞が、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記非神経幹細胞が、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞に分化する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記インキュベーションがエキソビボで行われる、請求項３、４、および１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記インキュベーションがインビボで行われる、請求項３、４、および１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
分化した細胞型を培養物から選択する工程をさらに包含する、請求項３、４、および１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記選択した分化した細胞型が、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記分化した細胞が、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項３５】
前記分化した細胞が非神経細胞である、請求項１１に記載の方法。
【請求項３６】
前記非神経細胞が、皮膚細胞、心筋細胞、肝細胞、腎細胞、および軟骨細胞である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記分化した細胞が、静脈注射によって全身投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項３８】
前記分化した細胞が、直接注射または外科的移植によって局所的に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項３９】
前記分化した細胞を、静脈注射によって全身投与する工程をさらに包含する、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
前記分化した細胞を、直接注射または外科的移植によって局所的に投与する工程をさらに包含する、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
（ａ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な量の、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療、および（ｂ）薬学的に許容されるキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項４２】
（ａ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療、および（ｂ）薬学的に許容されるキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項４３】
水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療をさらに含む、請求項４０または４１のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
（ａ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な量の、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療、ならびに（ｂ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その進行の緩徐化、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書を備えた、キット。
【請求項４５】
（ａ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療、ならびに（ｂ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その進行の緩徐化、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書を備えた、キット。
【請求項４６】
水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療をさらに含む、請求項４４および４５のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００７年５月２５日に出願された米国仮特許出願第６０／９３１，７７１号に対する優先権を主張する。米国仮特許出願第６０／９３１，７７１号は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
連邦により補助された研究のもとになされた発明に対する権利の申告
適用なし。
【０００３】
技術分野
本発明は、以下のいずれかの有効量をその必要がある個体に投与することによる、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための組成物および方法に関する：（１）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩；（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（３）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（６）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、または（７）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、および（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ。上記の治療はまた、本明細書において「治療（１）〜（７）」とも称する。ある実施形態において、成長因子と抗細胞死化合物の両方が個体に投与される。あるバリエーションにおいて、治療化合物はディメボンである。
【０００４】
本発明は、１種以上の治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートすることによって、細胞を活性化する方法、細胞の分化を促進する方法、および／または細胞の増殖を促進する方法もまた提供する。ある実施形態において、細胞はまた、１種以上の成長因子および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる。
【背景技術】
【０００５】
発明の背景
多くの適応症は、細胞死および／または細胞機能の減少と関係しており、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖から利益を得る。例えば、神経細胞死は、種々の神経系の適応症と関連があると考えられている。例えば、神経系および非神経系の適応症を治療および／または予防するための化合物および薬学的組成物、ならびに神経細胞死を阻害する方法および／または神経細胞の生存を増強する方法が強く望まれている。加えて、既存の神経細胞の有効性を高める化合物もまた治療的価値を有する。
【０００６】
水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールの概要
テトラ−およびヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体のクラスの既知化合物は、広範な生物学的活性を示す。一連の２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールにおいて、以下の型の活性が見出されている：抗ヒスタミン活性（ＤＥ  １，８１３，２２９、１９６８年１２月６日出願；ＤＥ  １，９５２，８００、１９６９年１０月２０日出願）、中枢抑制および抗炎症性活性（米国特許第３，７１８，６５７号、１９７０年１２月３日出願）、神経遮断活性（非特許文献１）など。２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体は、向精神活性（非特許文献２）、抗攻撃活性、抗不整脈活性、およびその他の型の活性を示す。
【０００７】
テトラ−またはヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体をベースとするいくつかの薬物、例えば、ジアゾリン（メブヒドロリン）、ディメボン、ドラスチン、カルビジン（ジカルビン）、ストバジン、およびゲボトロリンが製造されていることが知られている。ジアゾリン（２−メチル−５−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩）（非特許文献３において使用されている）およびディメボン（２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩）（非特許文献４）ならびにドラスチン（２−メチル−８−クロロ−５−［２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩）（薬物名のＵＳＡＮおよびＵＳＰ辞書（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ａｄｏｐｔｅｄ  Ｎａｍｅｓ、１９６１−１９８８、現行版ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ａｎｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ  ｄｒｕｇ  ｎａｍｅｓ）、１９８９、第２６版、１９６頁）は抗ヒスタミン薬物として知られており；カルビジン（ジカルビン）（シス（±）−２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩）は抗うつ効果を有する神経遮断薬であり（非特許文献５）、そしてその（−）異性体であるストバジンは抗不整脈薬として知られており（非特許文献６）；ゲボトロリン  ８−フルオロ−２−（３−（３−ピリジル）プロピル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩は抗精神病薬かつ抗不安薬である（非特許文献７）。ディメボンは、２０年以上の間、ロシアにおいては抗アレルギー薬として医薬に使用されてきた（発明者の認可証第１１３８１６４号、ＩＰ  Ｃｌａｓｓ  Ａ６１Ｋ  ３１／４７，５，Ｃ０７  Ｄ  ２０９／５２、１９８５年２月７日公開）。
【０００８】
米国特許第６，１８７，７８５号に記載されているように、ディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体は、ＮＭＤＡアンタゴニスト特性を有し、この特性により、これらはアルツハイマー病などの神経変性疾患の治療に有用である。米国特許第７，０７１，２０６号もまた参照のこと。特許文献１に記載されるように、ディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体は、例えば、皮膚・毛髪外皮の障害、視覚障害、および体重減少を含む、加齢に付随する、もしくは加齢に関連する徴候および／または病理もしくは状態の発症および／または発生を遅延させることによって、ヒトまたは獣医学的な老化防止剤として有用である。２００６年１０月４日に出願された米国特許出願シリアル番号第１１／５４３，３４１号、および２００６年１０月４日に出願された米国特許出願シリアル番号第１１／５４３，５２９号は、ハンチントン病を、治療し、および／または予防し、および／またはその進行もしくは発症、および／またはその発生を遅延する際の使用のための神経保護因子としての、ディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体を開示している。「Ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ  Ｐｙｒｉｄｏ［４，３−ｂ］ｉｎｄｏｌｅｓ（Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ），ａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｇｅｎｔ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｉｔ，ａｎｄ  ａ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｕｓｉｎｇ  ｉｔ．（水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール誘導体（バリエーション）に基づく統合失調症の治療のための薬剤、それに基づく医薬品、およびその使用方法）」という英語翻訳標題を有する、２００６年１月２５日に出願されたロシア特許出願もまた参照のこと。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００５／０５５９５１号パンフレット
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ｃ．Ａ．、Ｐｌａｔｔｎｅｒ  Ｓ．Ｓ．、Ｗｅｌｃｈ  Ｗ．Ｍ．、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．１９８０、１７（ｌ）：３８−４２
【非特許文献２】Ｗｅｌｃｈ  Ｗ．Ｍ．、Ｈａｒｂｅｒｔ  Ｃ．Ａ．、Ｗｅｉｓｓｍａｎ  Ａ．、Ｋｏｅ  Ｂ．Ｋ．、Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８６，２９（１０）：２０９３−２０９９
【非特許文献３】Ｋｌｙｕｅｖ  Ｍ．Ａ．、Ｄｒｕｇｓ、「Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔ．」、ＵＳＳＲ、Ｍｏｓｃｏｗ、「Ｍｅｄｉｔｚｉｎａ」Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９１、５１２頁
【非特許文献４】Ｍ．Ｄ．Ｍａｓｈｋｏｖｓｋｙ、「Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ」全２巻、第１巻−第１２版、Ｍｏｓｃｏｗ、「Ｍｅｄｉｔｚｉｎａ」Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９３、３８３頁
【非特許文献５】Ｌ．Ｎ．Ｙａｋｈｏｎｔｏｖ、Ｒ．Ｇ．Ｇｌｕｓｈｋｏｖ、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ、Ａ．Ｇ．Ｎａｔｒａｄｚｅ編、Ｍｏｓｃｏｗ、「Ｍｅｄｉｔｚｉｎａ」Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８３、２３４−２３７頁
【非特許文献６】Ｋｉｔｌｏｖａ  Ｍ．、Ｇｉｂｅｌａ  Ｐ．、Ｄｒｉｍａｌ  Ｊ．、Ｂｒａｔｉｓｌ．Ｌｅｋ．Ｌｉｓｔｙ、１９８５、ｖｏｌ．８４、Ｎｏ．５、５４２−５４９頁
【非特許文献７】Ａｂｏｕ−Ｇｈａｒｂｉ  Ｍ．、Ｐａｔｅｌ  Ｕ．Ｒ．、Ｗｅｂｂ  Ｍ．Ｂ．、Ｍｏｙｅｒ  Ｊ．Ａ．、Ａｒｄｎｅｅ  Ｔ．Ｈ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８７、３０：１８１８−１８２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
顕著な医学的必要性
１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための、付加的なまたは代替的な治療についての顕著な関心および必要性が依然として存在する。好ましくは、新たな治療は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態を有する個体にとって、生活の質を改善し、および／または生存時間を延長することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明の概要
水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールであるディメボンは、神経突起伸長および神経発生を刺激することが特定された。従って、ディメボンは成長因子として機能し、種々の細胞型の活性化、分化、および／または増殖を促進することが期待される。成長因子の多くが、ディメボンよりもはるかにより大きく、大きく異なる三次元構造を有するタンパク質であることを考えれば、小分子成長因子として機能するディメボンのこの能力は特筆すべきものである。
【００１３】
本発明は、以下のいずれかの有効量をその必要がある個体に投与することによる、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態、例えば、神経系の適応症の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための組成物および方法に関する：（１）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩；（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（３）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（６）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、または（７）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、および（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ。１つのバリエーションにおいて、この方法は、上記の治療（１）〜（７）のいずれかの有効量をその必要がある個体に投与することによる、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療のための方法である。別のバリエーションにおいて、この方法は、上記の治療（１）〜（７）のいずれかの有効量をその必要がある個体に投与することによる、疾患または状態と関連している変異遺伝子または異常な遺伝子を有する個体における、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の予防、またはその発症および／または発生の遅延のための方法である。別のバリエーションにおいて、この方法は、上記の治療（１）〜（７）のいずれかの有効量をその必要がある個体に投与することによる、疾患または状態を有すると診断された個体における、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の進行の遅延のための方法である。
【００１４】
本発明はまた、１種以上の治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および／または１種以上の成長因子、および／または抗細胞死化合物とともに、細胞をインキュベートすることによる、細胞を活性化する方法、および／または細胞の分化を促進する方法、および／または細胞の増殖を促進する方法を提供する。本明細書に記載される任意の方法には、このような治療の必要があるか、またはこのような治療を必要とするリスクがある個体（例えば、ヒト）を選別する工程が包含されてもよい。本明細書に記載される任意の方法または他の実施形態において、化合物は、治療化合物であるディメボンまたはその薬学的に許容される塩、例えば、その塩酸塩または二塩酸塩であってもよい。
【００１５】
薬学的組成物には、例えば、以下を含む薬学的組成物が含まれる：（ｉ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な量の治療化合物またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）薬学的に許容されるキャリア。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。別の局面において、本発明は、治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む薬学的組成物を提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（例えば、治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞）の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（例えば、治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞）、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。１つのバリエーションにおいて、上記またはここで記載した任意の組成物などの薬学的組成物は、薬学的に許容されるキャリアをさらに含む。本発明は、記載された組成物のいずれかが、医薬としての使用のため、および／または医薬の製造における使用のためであり得ることもまた提供する。
【００１６】
本発明の治療を含むキットもまた含まれ、これは、例えば以下を含むようなキットである：（ｉ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な量の治療化合物またはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような疾患または状態における使用のための指示書。１つの局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含むキットを提供する。別の局面において、本発明は、治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含むキットを提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含むキットを提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含むキットを提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（例えば、治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞）を含むキットを提供する。別の局面において、本発明は、（ｉ）治療化合物またはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（例えば、治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞）、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含むキットを提供する。上記のキットなどの本明細書に記載のキットのいずれかは、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態における使用のための指針を含み得る。
【００１７】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明白になる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、ビヒクル対照および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の陽性対照を伴う、初代ラット皮質ニューロンにおける神経突起伸長の用量応答曲線である。
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、ビヒクル対照（図２Ａ）、１４０ｎＭのディメボン（図２Ｂ）、または陽性対照の脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ、脳由来神経栄養因子）（図２Ｃ）で処理した皮質ニューロンの神経突起伸長の代表的な画像である。
【図３】図３は、ビヒクル対照および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の陽性対照を伴う、初代ラット海馬ニューロンにおける神経突起伸長の用量応答曲線である。
【図４】図４は、ビヒクル対照および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の陽性対照を伴う、初代ラット脊髄運動ニューロンにおける神経突起伸長の用量応答曲線である。
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、神経突起長（対照の％で表す、図５Ａ）およびニューロンあたりの神経突起の数（図５Ｂ）をそれぞれ測定することによって評価される初代海馬ニューロンを使用して、神経突起伸長に対するディメボン（１００ｎＭ）の効果を図示する。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、１４日後にＢｒｄＵで染色した海馬細胞数の総数（図６Ａ）およびニューロン海馬細胞数（図６Ｂ）のグラフである。図６Ａは、１０ｍｇ／ｋｇ（グループＡ）、３０ｍｇ／ｋｇ（グループＢ）、６０ｍｇ／ｋｇ（グループＣ）のディメボン、および同量のビヒクル（生理食塩水；グループＤ）で処理したラットの海馬におけるＢｒｄＵ  ＩＲ陽性細胞の数を示す。図６Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇ（グループＡ）、３０ｍｇ／ｋｇ（グループＢ）、６０ｍｇ／ｋｇ（グループＣ）のディメボン、および同量のビヒクル（生理食塩水；グループＤ）で処理したラットの海馬において、ＮｅｕＮ（このニューロン系統に特異的なマーカー）とＢｒｄＵ  ＩＲの両方に陽性である細胞の数を示す。ＢｒｄＵ陽性前駆細胞ならびにＢｒｄＵ陽性ニューロンの有意な増加は、６０ｍｇ／ｋｇ  ディメボンとビヒクル処理群の間で検出された。データは平均＋標準誤差で表す。＊．．．ｐ＝０．０５。
【図７】図７Ａおよび図７Ｂは、１４日後にＢｒｄＵで染色した全体の歯状回細胞数（図７Ａ）およびニューロン歯状回細胞数（図７Ｂ）のグラフである。図７Ａは、１０ｍｇ／ｋｇ（グループＡ）、３０ｍｇ／ｋｇ（グループＢ）、６０ｍｇ／ｋｇ（グループＣ）のディメボン、および同量のビヒクル（生理食塩水；グループＤ）で処理したラットの歯状回におけるＢｒｄＵ  ＩＲ陽性細胞の数を示す。図７Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇ（グループＡ）、３０ｍｇ／ｋｇ（グループＢ）、６０ｍｇ／ｋｇ（グループＣ）のディメボン、および同量のビヒクル（生理食塩水；グループＤ）で処理したラットの歯状回において、ＮｅｕＮ（このニューロン系統に特異的なマーカー）とＢｒｄＵ  ＩＲの両方に陽性である細胞の数を示す。ＢｒｄＵ陽性前駆細胞ならびにＢｒｄＵ陽性ニューロンの有意な増加は、６０ｍｇ／ｋｇ  ディメボンとビヒクル処理群の間で、ならびに３０ｍｇ／ｋｇ  ディメボン検処理後にビヒクルに対して先駆細胞について検出された。データは平均＋標準誤差で表す。＊．．．ｐ＝０．０５。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
明確に他のことが示されない限り、単数形（「ａ」、「ａｎ」など）の用語の使用は１つ以上をいう。
【００２０】
「約」という用語は、本明細書で使用される場合、この技術分野における当業者に容易に公知であるそれぞれの値についての通常の誤差範囲をいう。本明細書における「約」値またはパラメーターとの言及は、その値またはパラメーター自体に向けられる実施形態を含む（および記載する）。
【００２１】
明確に他のことが示されない限り、「個体」とは、本明細書で使用される場合、ヒト、ウシ、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、ブタ、およびヒツジなどの動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を意図する。従って、本発明は、ヒトの医薬と、家畜および家庭内ペットにおける使用を含む獣医学的な状況の両方において用途を見出す。個体は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態であると診断されたか、またはその疑いがあるヒトであり得る。この疾患または状態は、神経系の適応症または非神経系の適応症であり得る。この疾患または状態には、非神経系の適応症に関連する神経変性または神経変性障害または外傷が含まれ得る。この個体は、神経系の適応症と関連する１種以上の徴候を示すヒトであり得る。この個体は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態と関連する変異遺伝子または異常遺伝子を有するヒトであり得る。この個体は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態を遺伝的に発症するか、またはさもなくば発症する素因があるヒトであり得る。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「治療」または「治療する」とは、臨床的結果を含む、有益であるかまたは所望される結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益であるかまたは所望される結果には以下が含まれるがこれらに限定されない：１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態と関連する徴候の緩和、および／またはその徴候の程度の減少、および／またはその徴候の悪化の予防。その疾患または状態には以下が含まれるがこれらに限定されない：神経変性疾患；アルツハイマー病、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病および関連するポリグルタミン伸長疾患、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中、虚血性脳損傷もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、または軽度認知障害（ＭＣＩ）。例えば、アルツハイマー病を治療するために有益であるかまたは所望される結果には、以下の１つ以上が含まれるがこれらに限定されない：アミロイド斑の形成の阻害もしくは抑制、アミロイド斑の減少、除去、もしくは一掃、認知の改善もしくは認知衰退の逆転、生物学的液体中に循環している可溶性Ａβペプチドの封鎖、組織（例えば、脳）中のＡβペプチド（可溶型および沈着型を含む）の減少、脳中のＡβペプチドの蓄積の阻害および／または減少、組織（例えば、脳）中のＡβペプチドの毒性効果の阻害および／または減少、疾患から生じる１つ以上の徴候（例えば、記憶、問題解決、言語、計算、空間視覚認識、判断、および／または行動の異常性）の減少、生活の質の向上、疾患を治療するために必要とされる１つ以上の他の医薬の用量の減少、疾患の発生の遅延、ならびに／または個体の生存の延長。好ましくは、ディメボンなどの治療化合物またはその薬学的に許容される塩を用いる、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療には、副作用が伴わないか、もしくは現在利用されている治療に付随する副作用よりも少なく、そして／またはこのような治療は個体の生活の質を改善する。本発明は、細胞死、細胞傷害、細胞損失、細胞機能の損失もしくは減少、細胞増殖の損失もしくは減少、または細胞分化の損失もしくは減少を含むと考えられているか、またはこれらを含む、疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延を含み、ここで、細胞は、本明細書に記載される非神経細胞などの任意の特定の細胞型であり得る。従って、本発明の１つの局面は、非神経細胞と関連する疾患を治療しており、例えば、非神経細胞に関連する変性性障害または外傷の治療、心臓病の治療のための心筋細胞、糖尿病の治療のための膵島細胞、ＡＩＤＳ、癌、および化学療法を含む癌治療を含む多くの疾患と関連する食欲不振もしくは消耗の治療のための脂肪細胞、血管移植片および腸移植片において使用される平滑筋細胞、軟骨損傷ならびに軟骨および骨関節炎の変���状態を治療するために使用される軟骨を治療しており、ならびに細菌もしくはウイルス感染に対して損傷を受けたかもしくは失われた細胞、または外傷性損傷、例えば、熱傷、骨折、および裂傷に対して失われた細胞を置き換える。
【００２３】
本明細書で使用される場合、疾患または状態の発症を「遅延させる」とは、疾患または状態の発症を引き延ばし、妨害し、遅延させ、遅らせ、安定させ、および／または延期させることを意味する。この遅れは、疾患および／または治療される個体の履歴に依存して、時間の長さを変化させることができる。当業者に明白であるように、十分なまたは顕著な遅れは、個体が疾患または状態を発症しないという点で、効果において予防を含むことができる。例えば、アルツハイマー病の発生を「遅延させる」方法は、その方法を使用していない場合と比較して、所定の時間フレーム内で疾患の発症の可能性を減少し、および／または所定の時間フレーム内に疾患の程度を減少する方法である。このような比較は、典型的には、統計学的に有意な数の被験体を使用する臨床試験に基づく。例えば、アルツハイマー病の発症は、標準的な臨床技術、例えば、日常的な神経学的検査、患者へのインタビュー、神経画像処理、血清もしくは脳脊髄液中の特定のタンパク質（例えば、アミロイドタンパク質およびＴａｕ）のレベルの変化の検出、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、または磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を使用して検出可能である。同様の技術は、他の疾患および状態のために当該分野において公知である。発症はまた、最初には検出できない可能性がある疾患の発生をいってもよく、これには、発生、再発、および開始が含まれる。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「リスクがある」個体とは、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態を発症するリスクがある個体である。「リスクがある」個体は、検出可能な疾患または状態を有していてもよいし、または有していなくてもよく、本明細書に記載される治療方法に先立って検出可能な疾患を示していてもよいし、示していなくてもよい。「リスクがある」とは、個体が、疾患または状態の発症と相関し、当該分野において公知のパラメーターである、１つ以上のいわゆるリスク因子を有することを意味している。これらの１つ以上のリスク因子を有する個体は、これらのリスク因子を有さない個体よりも、疾患または状態を発症する可能性が高い。これらのリスク因子には、年齢、性別、人種、食事、以前の病歴、前兆となる病気の存在、遺伝的（すなわち、遺伝性の）考慮すべき事項、および環境的な曝露が含まれるがこれらに限定されない。例えば、アルツハイマー病のリスクがある個体には、例えば、この疾患を経験した親族を有する人、およびそのリスクが遺伝的または生化学的マーカーの分析によって特定される人が含まれる。アルツハイマー病のリスクの遺伝子マーカーには、ＡＰＰ遺伝子の変異、特に、それぞれＨａｒｄｙ変異およびＳｗｅｄｉｓｈ変異と呼ばれる７１７位の変異ならびに６７０位および６７１位の変異が含まれる（Ｈａｒｄｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２０：１５４−９、１９９７）。他のリスクマーカーは、プレセニリン遺伝子（例えば、ＰＳ１またはＰＳ２）の変異、ＡｐｏＥ４対立遺伝子の変異、アルツハイマー病の家族歴、高コレステロール血症、および／またはアテローム性動脈硬化症である。他のこのような因子は、他の疾患および状態について当該分野において公知である。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「非神経系の適応症」という用語は、非神経細胞死、および／または非ニューロン性機能の損失もしくは非ニューロン性機能の減少、または非神経細胞に関連する変性性障害もしくは外傷を含む疾患もしくは状態を含み、またはこれらに関連し、またはこれらを含むかもしくはこれらに関連すると考えられている、疾患または状態をいい、かつこれらを意図する。非神経細胞の例には、皮膚細胞、造血細胞、平滑筋細胞、心臓細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、骨細胞、軟骨細胞、膵臓細胞、または脂肪細胞が含まれるがこれらに限定されない。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「神経系の適応症」という用語は、神経細胞死、および／またはニューロン性機能の損失もしくはニューロン性機能の減少を含むか、またはこれらと関連するか、またはこれらを含みもしくはこれらと関連すると考えられている、疾患または状態をいい、かつこれらを意図する。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「神経細胞（ニューロン）」という用語は、動物の神経系の任意の一部から誘導される外胚葉性胚起源の細胞を表す。神経細胞は、ニューロフィラメントタンパク質、ＮｅｕＮ（神経細胞核マーカー）、ＭＡＰ２、およびクラスＩＩＩチューブリンを含む、十分に特徴付けられた神経細胞特異的マーカーを発現する。神経細胞として、例えば、海馬ニューロン、皮質ニューロン、中脳ドーパミン作動性ニューロン、脊髄運動ニューロン、感覚ニューロン、交感神経ニューロン、中隔コリン作動性ニューロン、および小脳ニューロンが含まれる。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「神経突起伸長」または「神経突起活性化」という用語は、既存の神経プロセス（すなわち、軸索および樹状突起）の伸長および新たな神経細胞プロセス（すなわち、軸索および樹状突起）の成長または出芽の拡張をいう。神経突起伸長または神経突起活性化は、神経の接続性を変化させる可能性があり、新たなシナプスの確立または既存のシナプスの再構築を生じる。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「神経発生」という用語は、多能性神経幹細胞としてもまた知られる未分化ニューロン前駆細胞からの新たな神経細胞の発生をいう。神経発生活性は、新たな神経細胞、星状細胞、神経膠、シュワン細胞、乏突起膠細胞、および他の神経系統を活動的に産生する。ヒト発生の初期において、多くの神経発生が起こるが、これは、特に、成体脳の特定の局在領域においては、より高齢期においても継続する。多能性神経幹細胞は、神経系の主な表現型を生成する、自己再生する多能性細胞であるが、これは、海馬、歯状回、および脳室下帯を含む成体脳の様々な領域から単離されており、通常は神経発生と関連しない領域、例えば、脊髄からも単離されてきた。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「神経の接続性」という用語は、生物における神経細胞間の接続（シナプス）の数、型、および質をいう。シナプスは、神経細胞間、神経細胞と筋肉の間（「神経筋接合部」）、および神経細胞と、内部器官、内分泌腺などを含む他の生物学的構造の間で形成する。シナプスは、それによって神経細胞が、互いに、ならびに非神経性の細胞、筋肉、組織、および器官に化学的または電気的な信号を伝達する、特殊化された構造である。神経の接続性に影響を与える化合物は、新たなシナプスを確立することによって（例えば、神経突起伸長または神経突起活性化によって）、または既存のシナプスを変化もしくは再構築することによって、これを行う可能性がある。シナプス再構築とは、特定のシナプスにおいて伝達されるシグナルの質、強度、または型の変化をいう。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「神経障害（ニューロパシー）」という用語は、神経系の一次病巣または他の機能不全によって開始されるかまたは引き起こされる、神経系の運動ニューロン、感覚ニューロン、および自律神経ニューロンの機能および構造の変化によって特徴付けされる障害をいう。末梢神経障害の４種の主要なパターンは、多発性神経障害、単神経障害、単発神経炎、および自律性神経障害である。最も一般的な型は、主として足および下肢に影響を与える（対称性）末梢神経障害である。神経根障害は脊髄神経根を含むが、末梢神経もまた含まれる場合には、神経根ニューロパシーという用語が使用される。神経障害の型は、原因、すなわち、関与する優勢な線維のサイズ、すなわち、大きな線維または小さな線維の末梢神経障害によって、さらに分けられてもよい。中枢神経障害性の痛みは、脊髄損傷、多発性硬化症、およびいくつかの発作、ならびに線維筋痛において起こり得る。神経障害は、虚弱、自律神経系の変化、および感覚的変化の様々な組み合わせと関連する可能性がある。筋肉量の損失または線維束収縮、筋肉の特定の精密な単収縮が見られる可能性がある。感覚性徴候には、痛みを含む、感覚および「積極的な」現象の喪失が含まれる。神経障害は、糖尿病（すなわち、糖尿病性神経障害）、線維筋痛、多発性硬化症、およびｈｅｒｐｅｓ  ｚｏｓｔｅｒ感染を含む種々の障害と関連があり、ならびに脊髄損傷および他の型の神経損傷と関連がある。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「統合失調症」という用語は、当該分野において公知であるすべての型および分類の統合失調症を含み、以下が含まれるがこれらに限定されない：緊張型、破瓜病型、解体型、偏執症型、残遺型、もしくは未分化型の統合失調症および欠損症候群、ならびに／またはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ、２０００もしくはＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓに記載のもの、もしくはさもなくば当業者に公知であるもの。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「老化防止活性」または「老化防止因子」とは、生命を脅かすものではないが、加齢プロセスと関連し、そして高齢者に典型的である病理または状態の量および強度のレベルの減少を介して、老化を遅くし、および／または寿命を長くし、および／または生活の質を増加もしくは改善する生物学的活性を意味する。生命を脅かすものではないが、加齢プロセスと関連する病理または状態には、視覚の喪失（白内障）、皮膚毛髪外皮の劣化（脱毛症）、ならびに筋細胞および／または脂肪細胞の死滅に起因する、年齢関連の体重減少のような病理または状態が含まれる。
【００３４】
本明細書で使用される場合、明確に他のことが示されない限り、「ＣＣＤＳの治療」または「ＣＣＤＳを治療すること」という用語は、ＣＣＤＳに関連する１つ以上の臨床的徴候の制御（改善または悪化の予防）を意味し、応答の持続期間および規模は、個々のイヌで変化する可能性があることを認識する。
【００３５】
「神経細胞死媒介性眼疾患」は、神経細胞の死が全体的にまたは部分的に関与する眼疾患を意図する。この疾患は、光受容体の死を含む可能性がある。この疾患は、網膜細胞死を含む可能性がある。この疾患は、アポトーシスによる眼神経の死を含む可能性がある。特定の神経細胞死媒介性眼疾患には以下が含まれるがこれらに限定されない：黄斑変性、緑内障、網膜色素変性症、先天性定常夜盲症（Ｏｇｕｃｈｉ病）、幼児期発症重度網膜ジストロフィー、レーバー先天性黒内障、バルデー・ビードル症候群、アッシャー症候群、視神経症由来の失明、レーバー遺伝性視神経萎縮、色覚異常、およびハンセン・ラーソン・ベルク症候群。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「黄斑変性」という用語は、当該分野において公知であるすべての型および分類の黄斑変性を含み、Ｂｒｕｃｈ膜、脈絡膜、神経網膜、および／または網膜色素上皮の異常性と関連する中心視野の進行性の喪失によって特徴付けられる疾患が含まれるがこれに限定されない。従って、この用語は、加齢関連眼変性（ＡＲＭＤ）、ならびに、ある場合においては人生の最初の１０年間で検出可能である若年発症性ジストロフィーなどの障害を含む。他の黄斑症には、ノースカロライナ黄斑ジストロフィー、ソーズビー眼底ジストロフィー、スタルガルト病、パターンジストロフィー、ベスト病、およびマラティア  レベンチネース（Ｍａｌａｔｔｉａ  Ｌｅｖｅｎｔｉｎｅｓｅ）が含まれる。
【００３７】
「筋萎縮性側索硬化症」または「ＡＬＳ」は、当該分野において理解されている用語であり、上位運動ニューロン（脳の運動ニューロン）および／または下位運動ニューロン（脊髄の運動ニューロン）に影響を与え、かつ運動ニューロンの死を生じる、進行性の神経変性疾患を意味するために本明細書で使用される。本明細書で使用される場合、「ＡＬＳ」という用語は、当該分野において公知であるすべてのＡＬＳの分類を含み、以下が含まれるがこれらに限定されない：古典的なＡＬＳ（典型的には、下位運動ニューロンと上位運動ニューロンの両方に影響を与える）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ、典型的には、上位運動ニューロンのみに影響を与える）、進行性球麻痺（ＰＢＰまたは延髄球発症、典型的には、嚥下、咀嚼、および会話の困難さで始まるＡＬＳの一種）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ、典型的には、下位運動ニューロンのみに影響を与える）、および家族性ＡＬＳ（ＡＬＳの遺伝性型）。
【００３８】
「パーキンソン病」という用語は、当該分野において理解されており、本明細書で使用される場合、個体がパーキンソン病と関連する１つ以上の徴候を経験する任意の医学的条件をいい、例えば、以下の１つ以上の徴候であるがこれらに限定されない：静止時振せん、歯車様硬直、運動緩徐、姿勢反射障害、１−ドーパ処理に対する良好な応答、顕著な動眼神経麻痺の不在、小脳または錐体路徴候、筋萎縮症、行動不全、および／または不完全失語症。特定の実施形態において、本発明は、ドーパミン作動性機能障害関連障害の治療のために利用される。特定の実施形態において、パーキンソン病の個体は、パーキンソン病と関連するシヌクレイン、パーキン、またはＮＵＲＲ１核酸の変異または多型を有する。１つの実施形態において、パーキンソン病の個体は、ドーパミン作動性ニューロンの発生および／または生存を調節する核酸の発現の欠損もしくは減少、またはその核酸の変異を有する。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「軽度認知障害」または「ＭＣＩ」という用語は、通常の加齢関連の減退について典型的であるものよりも、認知障害においてより顕著な劣化によって特徴付けられる認知障害の型をいう。結果として、ＭＣＩである高齢者または老人は、複雑な日々の仕事および学習する際に通常よりもより困難を伴うが、最終的には認知症を生じるアルツハイマー病、または他の同様の神経変性障害の患者に典型的であるように、通常の社会的な、毎日の、および／または職業的な機能を実施することが不可能であるわけではない。ＭＣＩは、機能障害の中でも、かすかな、臨床的に明白である認知、記憶、および機能によって特徴付けられ、これらは、アルツハイマー病または他の認知症の診断のための判断基準を満足するために十分な規模ではない。ＭＣＩはまた、特定の型の損傷、例えば、神経損傷（すなわち、脳震盪後症候群を含む戦傷など）、神経毒処理（すなわち、化学療法脳（ｃｈｅｍｏ  ｂｒａｉｎ）などを生じるアジュバント化学療法）、および、脳卒中、虚血、出血性発作、鈍器外傷などから生じる認知障害とは別であり区別される物理的な傷害または他の神経変性から生じる組織損傷から生じる認知障害として、本明細書で定義される損傷関連ＭＣＩを含む。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「加齢関連記憶障害」または「ＡＡＭＩ」とは、７つの主要な段階において加齢プロセスおよび進行性の変性性認知症を区別する包括的悪化スケール（ＧＤＳ）（Ｒｅｉｓｂｅｒｇら（１９８２）Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １３９：１１３６−１１３９）に対してＧＤＳ段階２として同定され得る状態をいう。ＧＤＳの第１段階は、任意の年齢の個体が、認知障害の主観的不満と機能障害の客観的証拠のいずれも有さないものである。これらのＧＤＳ段階１個体は正常であると見なされる。ＧＤＳの第２段階は、５年もしくは１０年前のようには名前を思い出せない、または５年もしくは１０年前のようには物を置いた場所を思い出せないなどの記憶および認知機能の困難さの不満を述べる、一般的には高齢者に適用される。これらの主観的な不満は、他の点では正常な高齢の個体において非常に一般的であるように見える。ＡＡＭＩは、ＧＤＳ段階２の人であり、この人は、正常でありかつ主観的な不満がない高齢の人、すなわち、ＧＤＳ段階１とは神経生理学に異なる可能性がある。例えば、ＡＡＭＩ被験体は、ＧＤＳ段階１の高齢者よりも、コンピュータ分析したＥＥＧ上でより大きな電気生理学的遅延があることが見い出されている（Ｐｒｉｃｈｅｐ、Ｊｏｈｎ、Ｆｅｒｒｉｓ、Ｒｅｉｓｂｅｒｇら（１９９４）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  １５：８５−９０）。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「自閉症」という用語は、社会的な相互作用およびコミュニケーションを損ない、制限されかつ反復的な行動を引き起こし、典型的には、幼児期または小児期早期の間に出現する、脳の発達障害をいう。認知および行動の欠損は、神経の接続性の変化から部分的に生じると考えられている。自閉症は、時折、「自閉症スペクトラム障害」と呼ばれる関連障害、ならびにアスペルガー症候群およびラット症候群を含む。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「神経損傷」または「神経傷害」という用語は、剥離損傷（すなわち、ここでは、神経が引き裂かれるかまたははぎ取られる）または脊髄損傷（すなわち、脳までまたは脳からの感覚信号および運動信号を伝達する、白質または有髄線維トラクトに対する損傷）などの神経に対する物理的損傷をいう。脊髄損傷は、物理的外傷（すなわち、自動車事故、スポーツ傷害など）、脊柱上に侵襲している腫瘍、発生障害、例えば、二分脊椎などを含む多くの原因から起こる可能性がある。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「重症筋無力症」という用語は、骨格筋の神経筋接合部におけるアセチルコリン受容体の免疫媒介性の損失によって引き起こされる、非認知性の神経筋障害をいう。臨床的には、ＭＧは、典型的に、患者の約３分の２において偶発的な筋力低下として、最も一般的には、外眼筋において最初に現れる。これらの初期の徴候は、最終的には悪化し、うなだれた眼瞼（眼瞼下垂）および／または複視（二重視）を生じ、しばしば、患者が医学的な配慮を求めることを引き起こす。最終的には、多くの患者が、毎週、毎日、またはより頻繁にさえ変動し得る一般的な筋力低下を発現する。一般化されたＭＧは、しばしば、表情、咀嚼、会話、嚥下、および呼吸を制御する筋肉に影響を与える；治療の最近の進歩以前には、呼吸不全が最も一般的な死因であった。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「ギラン・バレー症候群」という用語は、身体の免疫系が末梢神経系の一部を攻撃する、非認知性の障害をいう。この障害の最初の徴候には、様々な程度の脚の衰弱または刺痛が含まれる。多くの例において、衰弱および異常な感覚は腕および上体に広がる。特定の筋肉が全く使用できなくなるまで、これらの徴候は強度が増加し、重度になると、患者はほぼ全身的に麻痺する。これらの例において、障害は、生命に関わる−潜在的に呼吸を、時折、血圧または心拍数に干渉し−そして医学的な緊急事態と見なされている。多くの患者は、ギラン・バレー症候群の最も重篤な症例からさえ回復しているが、特定の程度の衰弱を有し続けている患者もいる。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「多発性硬化症」または「ＭＳ」という用語は、免疫系が中枢神経系（ＣＮＳ）を攻撃し、神経細胞の脱髄をもたらす自己免疫状態をいう。これは多くの徴候を引き起こす可能性があり、その多くは非認知性であり、しばしば、身体障害まで進行する。ＭＳは、白質として知られる脳および脊髄の領域に影響を与える。白質細胞は、プロセシングが行われる灰白質と、身体の残りの部分との間で信号を伝達する。より詳細には、ＭＳは、神経細胞が電気信号を伝達することを補助するミエリン鞘として知られる脂肪層を作製および維持するための原因の細胞である乏突起膠細胞を破壊する。ＭＳは、ミエリンの薄化または完全な喪失、および、より低頻度で、神経細胞の伸長または軸索の切断（切除）を生じる。ミエリンが失われた場合、神経細胞は、それらの電気信号をもはや効率的に伝導することはできない。ほぼいかなる神経学的徴候も、この疾患に付随し得る。ＭＳはいくつかの型をとり、別個の攻撃で起こるか（再発型）または時間の経過とともにゆっくりと蓄積するか（進行型）のいずれかである、新たな徴候を伴う。多くの人は、最初は再発性−寛解型ＭＳと診断されるが、何年も経った後に、二次進行性ＭＳ（ＳＰＭＳ）を発症する。攻撃の間に、徴候は完全になくなる可能性があるが、しかし、永続的な神経学的問題は、とりわけ、疾患の進行とともに、しばしば持続する。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「成長因子」は、細胞増殖、細胞分化、および／または細胞生存を刺激する化合物を意味する。成長因子の例には以下が含まれる：血管内皮細胞成長因子、栄養成長因子、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦα）、ＴＧＦβファミリーメンバー、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、ニュートロフィン−３、血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤＧＦ）、ＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）、上皮成長因子（ＥＧＦ）ファミリーメンバー、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、インスリン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、エリスロポエチン、トロンボポエチン、Ｗｎｔ、ヘッジホッグ、ヘレグリン、これらのフラグメント、およびこれらの模倣物。他の成長因子の例は本明細書に記載されている。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）」とは、ＶＥＧＦタンパク質、そのフラグメント、またはその模倣物、例えば、単一の、８エキソン、ＶＥＧＦ遺伝子またはそのホモログからのｍＲＮＡの選択的スプライシングから生じる任意のタンパク質を意味する。異なるＶＥＧＦスプライシング変異体は、それらが含むアミノ酸の数によって呼ばれる。ヒトにおいては、アイソフォームは、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、およびＶＥＧＦ２０６である；これらのタンパク質の齧歯類オルトログは１つ少ないアミノ酸を含む。これらのタンパク質は、ＶＥＧＦ遺伝子のエキソン６ａ、６ｂ、および７によってコードされる短いＣ末端ドメインの存在または非存在によって異なる。これらのドメインは、ＶＥＧＦスプライシング変異体の重要な機能的な因果関係を有する。これらは、細胞表面上のヘパリン硫酸プロテオグリカンおよびニューロピリン補助受容体との相互作用を媒介し、ＶＥＧＦシグナル伝達受容体に結合し、かつこれを活性化する能力を増強するからである。ＶＥＧＦは、その細胞表面受容体Ｆｌｋ−１を介して神経保護効果を発揮する。Ｆｌｋ−１はＰＩ３キナーゼ／ＡＫＴおよびＥＲＫを活性化して、神経保護効果を発揮する（Ｍａｔｓｕｚａｋｉら「Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｓｃｕｅｓ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ：ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｃａｓｃａｄｅｓ」ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、２００１  Ｍａｙ；１５（７）：１２１８−２０）。種々の実施形態において、ＶＥＧＦタンパク質またはタンパク質フラグメントのアミノ酸配列は、ヒトＶＥＧＦタンパク質の対応する領域のアミノ酸配列に対して、少なくともまたは約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％同一である。ある実施形態において、ＶＥＧＦフラグメントは、全長ＶＥＧＦタンパク質からの少なくとも２５個、５０個、７５個、１００個、１５０個、または２００個の連続するアミノ酸を含み、対応する全長ＶＥＧＦタンパク質の活性の少なくともまたは約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％を有する。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「栄養成長因子」とは、細胞死を阻害または予防し、細胞生存を促進し、および／または細胞機能（例えば、神経突起成長または神経発生）を増強する成長因子を意味する。例示的な栄養成長因子には、ＩＧＦ−１、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ニュートロフィン−３、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、またはＴＧＦα、およびその模倣物、およびそのフラグメントが含まれる。種々の実施形態において、栄養成長因子またはそのフラグメントのアミノ酸配列は、ヒト成長因子の対応する領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％同一である。ある実施形態において、成長因子フラグメントは、全長成長因子からの少なくとも２５個、５０個、７５個、１００個、１５０個、または２００個の連続するアミノ酸を含み、対応する全長成長因子の活性の少なくともまたは約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％を有する。他の栄養成長因子の例は本明細書に記載される。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「抗細胞死化合物」とは、細胞死を減少または除去する化合物を意味する。ある実施形態において、この化合物は、処理前の同じ被験体における対応する細胞死と比較した場合、または組み合わせ治療を受けていない他の被験体における対応する細胞死と比較した場合に、少なくともまたは約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％、細胞死（例えば、脳もしくは脳の１つの領域における神経細胞死、または非神経細胞死）を減少する。例示的な抗細胞死化合物には、抗アポトーシス化合物、例えば、ＩＡＰタンパク質、Ｂｃｌ−２タンパク質、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｔｒｋ受容体、Ａｋｔ、ＰＩ３キナーゼ、Ｇａｂ、Ｍｅｋ、Ｅ１Ｂ５５Ｋ、Ｒａｆ、Ｒａｓ、ＰＫＣ、ＰＬＣ、ＦＲＳ２、ｒＡＰｓ／ＳＨ２Ｂ、Ｎｐ７３、これらのフラグメント、およびこれらの模倣物が含まれる。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「抗アポトーシス化合物」とは、プログラムされた細胞死を減少または除去する化合物を意味する。ある実施形態において、この化合物は、処理前の同じ被験体における対応するプログラムされた細胞死と比較した場合、またはこの化合物を受けていない他の被験体における対応するプログラムされた細胞死と比較した場合に、少なくともまたは約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％、プログラムされた細胞死（例えば、脳もしくは脳の１つの領域における神経細胞死、または非神経細胞死）を減少する。例示的な抗アポトーシス化合物には、ＩＡＰタンパク質、Ｂｃｌ−２タンパク質、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｔｒｋ受容体、Ａｋｔ、ＰＩ３キナーゼ、Ｇａｂ、Ｍｅｋ、Ｅ１Ｂ５５Ｋ、Ｒａｆ、Ｒａｓ、ＰＫＣ、ＰＬＣ、ＦＲＳ２、ｒＡＰｓ／ＳＨ２Ｂ、Ｎｐ７３、これらのフラグメント、およびこれらの模倣物が含まれる。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「治療化合物」とは、「治療化合物」の表題で本明細書に開示されている任意の化合物を意味し、これには任意の薬学的に許容される塩が含まれる。１つのバリエーションにおいて、治療化合物はディメボンである。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「組み合わせ治療」とは、２つ以上の異なる薬学的に活性な化合物または細胞を含む治療を意味する。例示的な組み合わせ治療には以下が含まれる：（１）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（３）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、ならびに（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ。ある実施形態において、成長因子と抗細胞死化合物の両方が組み合わせ治療に含まれる。あるバリエーションにおいて、治療化合物はディメボンである。あるバリエーションにおいて、組み合わせ治療は、１種以上の薬学的に許容されるキャリアもしくは賦形剤、薬学的に活性ではない化合物、および／または不活性基質を任意に含む。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「薬学的に活性な化合物」「薬理学的に活性な化合物」、または「活性成分」とは、所望の効果、例えば、アルツハイマー病の治療、および／またはその予防、および／またはその発症の遅延を誘導する化学化合物を意味する。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、効力および毒性のそのパラメーターと組み合わせた、ならびに実務者の知識に基づいた、このような量の化合物または治療（例えば、治療化合物、成長因子、抗細胞死化合物、または細胞）が所定の治療型で有効であるはずであることを意図する。当該分野において理解されるように、有効量は、単回用量または複数回用量であり得、すなわち、単回用量または複数回用量は、所望の治療の終点を達成するために必要とされ得る。有効量は、１種以上の治療剤を投与する状況において考慮されてもよく、そして１種以上の他の薬剤とともに、所望のまたは有益な結果が達成され得るかまたは達成される場合に、単一の薬剤が有効量で与えられると見なされてもよい。本発明の組み合わせ治療における化合物および／または治療は、各化合物のための同じかまたは異なる投与の経路を使用して、逐次的に、同時に、または継続的に投与されてもよい。従って、組み合わせ治療の有効量には、逐次的に、同時に、または継続的に投与されたときに所望の結果を生じる、第１の治療の量、および第２の治療または引き続く治療の量が含まれる。任意の同時投与される化合物の適切な用量は、化合物の組み合わせ作用（例えば、相加的作用または相乗的作用）に起因して、任意に低下させてもよい。
【００５５】
種々の実施形態において、第１の治療および第２のまたは引き続く治療の組み合わせを用いる治療は、それぞれの治療単独の投与と比較して、相加的または相乗的でさえある（例えば、相加的よりも大きい）結果を生じる可能性がある。ある実施形態において、個々の治療のために一般的に使用される量と比較して、より少ない量の各化合物が、組み合わせ治療の一部として使用される。好ましくは、同じかまたはより大きな治療的利点が、個々の化合物単独のいずれかを使用することによるよりも、組み合わせ治療を使用して達成される。ある実施形態において、同じかまたはより大きな治療的利点は、個々の治療のために一般的に使用される量よりも、組み合わせ治療においてより少ない量の化合物（例えば、より少ない用量またはより頻度の少ない投薬スケジュール）を使用して達成される。好ましくは、少量の化合物の使用は、化合物に伴う１つ以上の副作用の数、重篤さ、頻度、または期間の減少を生じる。
【００５６】
「同時投与」という用語は、本明細書で使用される場合、組み合わせ治療における第１の治療および第２のまたは引き続く治療が、約１５分間を超えない時間の間隔で、例えば、約１０分間、５分間、または１分間のいずれかを超えない間隔で投与されることを意味する。治療が同時に投与される場合、第１の治療および第２の治療は、同じ組成物中に含まれてもよく（例えば、治療化合物と、成長因子および／または抗細胞死化合物の両方を含む組成物）、または別々の組成物中に含まれてもよい（例えば、治療化合物は１つの組成物中に含まれ、成長因子および／または抗細胞死化合物は別の組成物に含まれる）。本発明には、（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせの同時投与のための方法が含まれる。本発明にはまた、（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の同時投与のための方法も含まれる。本発明にはまた、（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の同時投与のための方法も含まれる。本発明にはまた、（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の同時投与のための方法も含まれる。本発明にはまた、（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の同時投与のための方法も含まれる。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「逐次的投与」という用語は、組み合わせ治療における第１の治療および第２の治療が、約１５分間よりも長い間隔で、例えば、約２０分間、３０分間、４０分間、５０分間、もしくは６０分間のいずれかよりも長い間隔で、または約１時間〜約２４時間、約１時間〜約４８時間、約１日間〜約７日間、約１週間〜約４週間、約１週間〜約８週間、約１週間〜約１２週間、約１ヶ月間〜約３ヶ月間、もしくは約１ヶ月間〜約６ヶ月間のいずれかよりも長いいずれかの間隔で、投与されることを意味する。第１の治療または第２の治療のどちらが先に投与されてもよい。第１の治療および第２の治療は別々の組成物中に含まれ、これらは、同じかまたは異なるパッケージまたはキットに含まれてもよい。本発明は、本明細書に記載されるすべての組み合わせ、例えば、先の段落に記載されるものの逐次投与を含む。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「単位剤形」とは、単位用量として適切である物理的に別々の単位をいい、各々が、必要とされる薬学的キャリアと関連する所望の治療的効果を生じるように計算された所定量の活性成分を含む。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「制御放出」という用語は、薬物の放出が即時的ではない、薬物を含む製剤またはその画分をいい、すなわち、「制御放出」製剤を用いると、投与は、吸収プールへの薬物の即時的な放出を生じない。この用語は、長時間の間にわたって徐々に薬物を放出するように設計されたデポー製剤を含む。制御放出製剤は、広範な種々の送達系を含むことができ、一般的に、所望の放出特性（すなわち、ｐＨ依存またはｐＨ非依存の溶解性、異なる度合いの水溶性など）を有するキャリア、ポリマー、または他の化合物と、薬物化合物を混合すること、および所望の送達の経路に従って、この混合物を製剤化すること（すなわち、被覆カプセル、移植可能リザーバー、生分解性カプセルを含む注射液など）を含む。
【００６０】
本発明における使用のために、明確に他のことが示されない限り、「持続放出系」（「系」または「システム」とも称する）という用語は、長時間であり得る所望の時間の間、個体への化合物の送達の速度を持続可能である薬物送達系をいう。所望の時間とは、対応する即時放出剤形が同じ量（例えば、重量またはモルによる）の化合物を放出するために必要とする時間よりも長い時間である、任意の時間であり得、数時間または数日間であり得る。所望の時間は、少なくとも、投与された化合物の薬物排出半減期であり得、例えば、少なくとも約６時間、または少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間、または少なくとも約３０時間、または少なくとも約４８時間、または少なくとも約７２時間、または少なくとも約９６時間、または少なくとも約１２０時間、または少なくとも約１４４時間以上であり得、そして少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約８週間、少なくとも約１６週間以上であり得る。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能」または「薬理学的に受容可能」とは、生物学的でないか、またはさもなくば望ましくない物質を意味し、例えば、この物質は、いかなる有意な望ましくない効果も引き起こすことなく、またはそれが含まれている組成物の他のいかなる成分とも有害な様式で相互作用することなく、患者に投与される薬学的組成物に組み込まれてもよい。薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤は、好ましくは、毒物学的および製造物の試験の必要である基準に合致しており、米国食品医薬品局によってまとめられた非活性成分ガイドに含まれている。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「精製細胞」という用語は、細胞が産生されるときに存在している１種以上の成分から分離されている細胞を意味する。ある実施形態において、細胞は、細胞が産生されるときに存在している他の成分が除去された状態で、約６０重量％である。種々の実施形態において、細胞は、少なくとも約７５重量％、９０重量％、または９９重量％の純度である。精製細胞は、例えば、天然の供給源からの精製（例えば、抽出）、蛍光活性化細胞ソーティング、または当業者に公知である他の技術によって得ることができる。純度は、適切な方法、例えば、蛍光活性化細胞ソーティングなどの任意の適切な方法によってアッセイすることができる。ある実施形態において、精製細胞は、本発明の薬学的組成物に組み入れられ、または本発明の方法において使用される。本発明の薬学的組成物は、精製細胞に加えて、添加物、キャリア、または他の成分を含んでもよい。
【００６３】
「多能性幹細胞」または「ＭＳＣ」は、（ｉ）少なくとも２つの細胞型に分化する潜在能力を有し、および（ｉｉ）細胞分裂の際に、２つの娘細胞の少なくとも１つもまた幹細胞であることを意味する、自己再生を示す。単一のＭＳＣの非幹細胞子孫は、複数の細胞型に分化可能である。例えば、神経幹細胞の非幹細胞子孫は、神経細胞、星状細胞、シュワン細胞、および乏突起膠細胞に分化可能である。同様に、非神経幹細胞の非幹細胞子孫は、非神経細胞（例えば、皮膚細胞、造血細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、骨細胞、軟骨細胞、膵臓細胞、または脂肪細胞）を含む他の細胞型に分化する潜在能力を有する。従って、幹細胞は、その子孫が複数の分化経路を有するので、「多能性」である。
【００６４】
方法の概説
本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供する。例示的な疾患および状態は、以下の１つ以上：細胞死、細胞傷害、細胞損失、細胞機能の損失もしくは減少、細胞増殖の損失もしくは減少、または細胞分化の損失もしくは減少を含むかもしくはこれらと関連性があると考えられており、またはこれらを含むかもしくはこれらと関連性がある疾患または状態を含み、ここで、細胞は、本明細書に記載される特定の細胞型を含む任意の細胞型であり得る。疾患または状態は、神経幹細胞、または神経細胞、または非神経細胞が有益であると予想されるか、または有益であるものであり得る。ある例示的な細胞型には任意の幹細胞型（例えば、任意の自己再生多能性細胞）が含まれる。例えば、「例示的な細胞および方法」の表題の下で記載されているがこれらに限定されない他の例示的な細胞型は、本明細書に記載されている本発明の治療および方法を使用して調節されてもよい。従って、本発明は、細胞死、細胞傷害、細胞損失、細胞機能の損失もしくは減少、細胞増殖の損失もしくは減少、または細胞分化の損失もしくは減少を含むと考えられており、またはこれらを含む疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延を含み、ここで、細胞は、本明細書に記載される特定の細胞型であり得る。
【００６５】
本発明はまた、１種以上の治療化合物またはその薬学的に許容される塩とともに、細胞をインキュベートすることによる、細胞の活性化、細胞の分化の促進、および／または細胞の増殖を促進するための方法も提供する。ある実施形態において、細胞はまた、１種以上の成長因子および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる。
【００６６】
本発明は、部分的に、ディメボン（代表的な水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール）が小分子成長因子として機能するという特筆すべき発見に基づいている。以下でさらに説明されるように、ディメボンは、神経細胞伸長および神経発生を刺激する（実施例１および２を参照のこと）。エキソビボまたはインビボでの神経細胞の活性化、分化、および／または増殖の刺激は、神経学的状態の治療のために有用である。加えて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩は、非神経細胞の活性化、分化、および／または増殖を促進するためにもまた有用であることが期待される。従って、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール（またはその薬学的に許容される塩）、または水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール（またはその薬学的に許容される塩）とともにインキュベートした細胞は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である任意の疾患または状態を治療するために有用であり得る。
【００６７】
細胞を活性化するための方法
従って、本発明は、細胞を活性化するために十分な条件下で、１種以上の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートすることによって、細胞を活性化する方法を提供する。例えば、治療化合物は、神経突起伸長を刺激することによって神経細胞を活性化するために使用することができる。実施例１に例証しているように、神経細胞のディメボンとのインキュベーションは、皮質ニューロン、海馬ニューロン、および脊髄運動ニューロンからの軸索の長さを増加した。ディメボンを用いる神経細胞の活性化に基づいて、ディメボンはまた、他の細胞型、例えば、非神経細胞を含む、本明細書に記載される任意の細胞型を活性化することが期待される。ある例示的な細胞型には任意の幹細胞（例えば、任意の自己再生多能性細胞）が含まれる。
【００６８】
治療化合物との細胞のエキソビボインキュベーションのための種々の実施形態において、生理食塩水中のディメボンなどの治療化合物は、約１ｐＭ〜約５ｍＭ、約１０ｐＭ〜約５００μＭ、約５０ｐＭ〜約１００μＭ、約０．２５ｎＭ〜約２０μＭ、約１ｎＭ〜約５μＭ、約６ｎＭ〜約８００ｎＭ、約３０ｎＭ〜約１６０ｎＭの範囲の濃度で細胞に加えられる。治療化合物との細胞のエキソビボインキュベーションのための種々の実施形態において、生理食塩水中のディメボンなどの治療化合物は、約０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．２５ｎＭ、１．２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３１．２５ｎＭ、１５６．２５ｎＭ、７８１ｎＭ、３．９０５μＭ、１９．５３０μｎＭ、９７．６６０μＭ、または４８８．２８０μＭの濃度で細胞に加えられる。
【００６９】
ある実施形態において、細胞はまた、成長因子（例えば、ＶＥＧＦタンパク質または栄養成長因子）および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる。細胞は、成長因子および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる前、その間、またはその後で、治療化合物とともにインキュベートすることができる。ある実施形態において、成長因子および／または抗細胞死化合物とのインキュベーションは、治療化合物単独とのインキュベーションと比較して、相加的または相乗的な効果を生じる。ある実施形態において、細胞は、成長因子と抗細胞死化合物の両方とインキュベートされる。
【００７０】
種々の実施形態において、インキュベーションはエキソビボまたはインビボで行われる。ある実施形態において、治療化合物は、インビボで細胞（例えば、神経幹細胞または神経細胞または非神経細胞）を活性化するために個体（例えば、１種以上の細胞型の必要がある個体）に投与される。ある実施形態において、成長因子および／または抗細胞死化合物は、インビボで細胞（例えば、神経幹細胞または神経細胞または非神経細胞）の活性化を増強するために個体に投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、経口的に、静脈内に、腹腔内に、皮下に、くも膜下腔内に、筋肉内に、眼内に、経皮的に、または局所的に（すなわち、点眼薬または点耳薬として）投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療組成物は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量（例えば、経口投与のための用量）の治療化合物が投与される。ある実施形態において、治療化合物は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下腔内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。あるバリエーションにおいて、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。
【００７１】
治療化合物（および任意に成長因子および／または抗細胞死化合物を伴う）とのインキュベーションによって活性化した細胞は、本発明の方法、組成物、およびキットのいずれかにおいて有用である。ある実施形態において、細胞は、（ｉ）細胞のインキュベーション前の軸索、または（ｉｉ）治療化合物、成長因子および／または抗細胞死化合物なしで同じ条件下でインキュベートした対応する対照細胞の軸索よりも少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％長い軸索を有する神経細胞である。
【００７２】
細胞の分化および／または増殖を促進するための方法
本発明はまた、細胞の分化および／または増殖を促進するために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートすることによる、細胞の分化および／または増殖を促進するための方法を特徴とする。実施例２に例証されているように、ディメボンは、ラット海馬において分裂している神経細胞の数を増加させた。従って、ディメボンは、分化した神経細胞への神経幹細胞の分化を刺激し、および／または神経幹細胞もしくは神経細胞の増殖を刺激する可能性がある。ディメボンの投与に起因する神経細胞の数の増加に基づいて、ディメボンはまた、他の細胞型、例えば、本明細書に記載された細胞型のいずれかの分化および／または増殖を促進することが予想される。ある例示的な細胞型には、任意の多能性幹細胞（例えば、任意の自己再生多能性細胞）が含まれる。
【００７３】
治療化合物との細胞のエキソビボインキュベーションのための種々の実施形態において、生理食塩水中のディメボンなどの治療化合物は、約１ｐＭ〜約５ｍＭ、約１０ｐＭ〜約５００μＭ、約５０ｐＭ〜約１００μＭ、約０．２５ｎＭ〜約２０μＭ、約１ｎＭ〜約５μＭ、約６ｎＭ〜約８００ｎＭ、約３０ｎＭ〜約１６０ｎＭの範囲の濃度で細胞に加えられる。治療化合物との細胞のエキソビボインキュベーションのための種々の実施形態において、生理食塩水中のディメボンなどの治療化合物は、約０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．２５ｎＭ、１．２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３１．２５ｎＭ、１５６．２５ｎＭ、７８１ｎＭ、３．９０５μＭ、１９．５３０μｎＭ、９７．６６０μＭ、または４８８．２８０μＭの濃度で細胞に加えられる。
【００７４】
ある実施形態において、細胞はまた、成長因子（例えば、ＶＥＧＦタンパク質または栄養成長因子）および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる。細胞は、成長因子および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる前、その間、またはその後で、治療化合物とともにインキュベートすることができる。ある実施形態において、成長因子および／または抗細胞死化合物とのインキュベーションは、治療化合物単独とのインキュベーションと比較して、相加的または相乗的な効果を生じる。
【００７５】
種々の実施形態において、インキュベーションはエキソビボまたはインビボで行われる。ある実施形態において、治療化合物は、インビボで細胞（例えば、神経幹細胞または神経細胞または非神経細胞）の分化および／または増殖を促進するために個体（例えば、１種以上の細胞型の必要がある個体）に投与される。ある実施形態において、成長因子および／または抗細胞死化合物は、インビボで細胞（例えば、神経幹細胞または神経細胞または非神経細胞）の分化および／または増殖を増強するために個体に投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、経口的に、静脈内に、腹腔内に、皮下に、くも膜下腔内に、筋肉内に、眼内に、経皮的に、または局所的に（すなわち、点眼薬または点耳薬として）投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療組成物は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量の治療化合物が投与される。ある実施形態において、治療化合物は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下腔内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。あるバリエーションにおいて、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。
【００７６】
従って、１つの局面において、本発明は、細胞の分化および／または増殖を促進するために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートする工程を包含する、細胞の分化および／または増殖を促進する方法を提供する。１つの実施形態において、分化および／または増殖は、細胞の神経突起伸長および／または神経発生を含む。１つの実施形態において、分化および／または増殖は神経発生を含む。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つの実施形態において、この方法はさらに、成長因子および／または抗細胞死化合物とともに細胞をインキュベートする工程を包含する。１つの実施形態において、細胞型は、多能性幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経細胞であり、そしてこの方法は、神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、そしてこの方法は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、非神経幹細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎臓細胞、または軟骨細胞に分化する。１つの実施形態において、インキュベーションはエキソビボで行われる。１つの実施形態において、インキュベーションはインビボで行われる。
【００７７】
別の局面において、本発明は、細胞の神経突起伸長を刺激するため、および／または神経発生を増強するために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートする工程を包含する、細胞の神経突起伸長を刺激し、および／または神経発生を増強する方法を提供する。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つの実施形態において、この方法はさらに、成長因子および／または抗細胞死化合物とともに細胞をインキュベートする工程を包含する。１つの実施形態において、細胞型は、多能性幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経細胞であり、そしてこの方法は、神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、そしてこの方法は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、インキュベーションはエキソビボで行われる。１つの実施形態において、インキュベーションはインビボで行われる。
【００７８】
細胞の分化および／または増殖を促進するために治療化合物（および任意に成長因子および／または抗細胞死化合物を伴う）とインキュベートした細胞は、本発明の方法、組成物、およびキットのいずれかにおいて有用である。ある実施形態において、細胞の数は、（ｉ）細胞のインキュベーション前の細胞の数、または（ｉｉ）治療化合物、成長因子および／または抗細胞死化合物なしの同じ条件下でインキュベートした同じ数の開始対照細胞から生じた細胞の数よりも少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％増加する。
【００７９】
多能性肝細胞の分化させるための方法
特定の局面において、本発明は、個体からＭＳＣを単離する工程、単離したＭＳＣをインビトロで培養する工程、多能性幹細胞が分化するように遊動するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに、培養したＭＳＣをインキュベートする工程、および培養物から所望の分化した細胞型を選択する工程によって、多能性幹細胞（ＭＳＣ）を分化させるための方法を特徴とする。１つの実施形態において、この方法は、多能性幹細胞の分化を誘導するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに、個体から単離した培養した多能性幹細胞をインキュベートする工程を包含する。特定の実施形態において、ＭＳＣは、皮質ニューロン、海馬ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。特定の実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。ＭＳＣは、少なくとも２種の異なる細胞型に分化し、かつ非対称的に分裂する潜在能力を有する細胞であり、各細胞分裂において、生成する２つの子孫細胞の少なくとも１つもまた多能性幹細胞であることを意味する。
【００８０】
特定の実施形態において、ＭＳＣは、成体ヒトまたは臍帯を含む胎児組織から単離される。ＭＳＣは、海馬、歯状回、および脳室下領域を含む、脳の種々の領域から単離できる。ＭＳＣはまた、皮膚の深い層、骨髄、または血漿から単離できる。ＭＳＣが複雑な生物学的混合物、例えば、骨髄、血漿、または他の組織サンプルの一部として単離される場合、さらなる精製工程が必要とされ得る。ＭＳＣは分化した細胞または他の生物学的材料から、当業者に公知である任意の標準的な方法、例えば、フローサイトメトリー、密度勾配遠心分離などによって分離されてもよい。
【００８１】
ヒトまたは胎児組織からの単離後、ＭＳＣは、洗浄され、そして必要な場合、粉砕され、次いで、所望の濃度まで、適切な培養培地（すなわち、神経基本（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地（ＧＩＢＣＯ））に懸濁され、そして適切な培養培地を含む適切な培養容器に配置される。培養培地は、例えば、Ｂ２７（ＧＩＢＣＯ）、Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ）、成長因子などの無血清培養補充物を含む、所望されるように細胞増殖を促進する因子を補充することができる。特定の実施形態において、ＭＳＣは、他の細胞型の非存在下で、補充されたかまたは補充されていない培地中で培養することができる。特定の実施形態において、ＭＳＣは、同じかまたは異なる発生の状況から分化した細胞型とともに同時培養することができる。例えば、海馬から得られた神経ＭＳＣは、分化した神経細胞、乏突起膠細胞、グリア細胞、またはシュワン細胞とともに培養することができる。細胞は、所望の量および適用に依存して、フラスコまたはポリ−Ｌ−リジンコートしたプレート上のウェルを含む種々の培養容器中で、５％  ＣＯ２−９５％空気雰囲気中、３７℃で増殖させることができる。一旦、ＭＳＣがプレートに接着し、正常に増殖していると、これらは、分化を誘導するために十分な濃度で、生理食塩水中のディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩で処理することができる。１つのバリエーションにおいて、細胞はまた、成長因子および／または抗細胞死化合物で処理されてもよい。
【００８２】
特定の実施形態において、ＭＳＣは、約１ｐＭ〜約５ｍＭ、約１０ｐＭ〜約５００μＭ、約５０ｐＭ〜約１００μＭ、約０．２５ｎＭ〜約２０μＭ、約１ｎＭ〜約５μＭ、約６ｎＭ〜約８００ｎＭ、約３０ｎＭ〜約１６０ｎＭの濃度範囲の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩での処理によって、神経細胞、星状細胞、シュワン細胞、または乏突起膠細胞などの特定の細胞型に分化するように誘導される。ある実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩は生理食塩水中のディメボンである。特定の実施形態において、ＭＳＣは皮質ニューロン、海馬ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。特定の実施形態において、ＭＳＣは、約０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．２５ｎＭ、１．２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３１．２５ｎＭ、１５６．２５ｎＭ、７８１ｎＭ、３．９０５μＭ、１９．５３０μＭ、９７．６６０μＭ、または４８８．２８０μＭの濃度範囲の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩での処理によって、神経細胞、星状細胞、シュワン細胞、または乏突起膠細胞などの特定の細胞型に分化するように誘導される。ある実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩は生理食塩水中のディメボンである。特定の実施形態において、ＭＳＣは皮質ニューロン、海馬ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。ある実施形態において、ＭＳＣは、ディメボンなどの治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール、および成長因子または抗細胞死化合物などの第２の化合物で処理される。ＭＳＣがこのような化合物の組み合わせで処理される場合、化合物は、同時にまたは任意の順番で逐次的に投与されてもよい。
【００８３】
特定の実施形態において、ＭＳＣは、神経細胞、星状細胞、シュワン細胞、または乏突起膠細胞から選択される少なくとも２つの細胞型に分化する潜在能力を有する神経細胞系統特異的幹細胞（すなわち、神経幹細胞）であり、自己再生を示す。特定の実施形態において、ＭＳＣは、他の系統からの多能性幹細胞である。特定の実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。特定の実施形態において、非神経幹細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞に分化する。生理食塩水中のディメボンなどの治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩での処理によって、ＭＳＣが単離、培養、および分化した後に、次いで、所望の型の細胞が、培養物から選択および精製される。所望の細胞型の分化した細胞は、例えば、特定の細胞型特異的表面マーカー（すなわち、神経細胞特異的マーカーＮｅｕＮなど）に対して陽性である細胞を同定すること、および培養細胞の混合集団から所望のマーカーに対して陽性または陰性である細胞を分類することによって、インビトロ細胞培養物から精製することができる。このような分類は、フローサイトメトリーまたは当業者に公知である他の確立された方法によって実施することができる。
【００８４】
１つの局面において、本発明は、多能性幹細胞の分化を誘導するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに、個体から単離した培養した多能性幹細胞をインキュベートする工程を包含する、多能性幹細胞を分化させる方法を提供する。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つの実施形態において、多能性幹細胞は、神経幹細胞または非神経幹細胞である。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、非神経幹細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞に分化する。１つの実施形態において、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物とともに多能性幹細胞をインキュベートする工程をさらに含む。１つの実施形態において、この方法は、培養物から分化した細胞型を選択する工程をさらに含む。１つの実施形態において、選択された分化細胞型は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、選択され分化した細胞型は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞である。
【００８５】
１種以上の細胞を含む治療方法
本発明の方法によって産生した分化細胞（すなわち、神経細胞または非神経細胞）は、本明細書に記載される種々の神経系および非神経系の適応症の治療を改善するために有用である。従って、特定の局面において、本発明は、本発明の方法によって産生した分化細胞（すなわち、神経細胞）の有効量を投与することによって、種々の神経系または非神経系の適応症の任意の１つに罹患している個体の治療を改善する方法を特徴とする。分化細胞の有効量は、灌流、注射、および外科的移植を含む、当業者に公知である任意の従来的な投与方法によって個体に投与することができる。投与は、例えば、静脈内投与によって全身的であり得、または、特定の部位における直接注射もしくは外科的移植によって局所的であり得る。例示的な投与の部位には、例えば、損傷を有する脳の特定の領域もしくは神経変性と関連する他の欠損における、または神経系の適応症と関連する一連の筋肉、例えば、重症筋無力症の個体の顔面筋における、剥離損傷もしくは脊髄損傷の部位が含まれる。ある実施形態において、分化した細胞は治療される個体と同じ種由来である。ある実施形態において、分化した細胞は、治療される個体または治療される個体の血縁者由来である。１つの実施形態において、非神経系の適応症の治療には、神経変性障害もしくは外傷の治療が含まれるがこれらに限定されず、この治療には、非神経細胞、例えば、心臓病の治療のための心臓細胞、糖尿病の治療のための膵島細胞、ＡＩＤＳ、癌、および癌治療を含む多くの疾患と関連する食欲不振または消耗の治療のための脂肪細胞、血管移植および腸移植において使用される平滑筋細胞、軟骨損傷および軟骨の神経変性状態および骨関節炎を治療するために使用される軟骨の投与が含まれ、ならびに細菌もしくはウイルス感染に対して損傷を受けたかもしくは失われた細胞、または外傷性損傷、例えば、熱傷、骨折、および裂傷に対して失われた細胞を置き換える。
【００８６】
水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とインキュベートされた細胞は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が、ヒトなどの個体において有益である状態の治療、および／またはその予防、および／またはその発症の遅延、および／またはその発生の遅延のために有用である。ある実施形態において、１種以上の細胞（例えば、神経幹細胞および／または神経細胞または非神経細胞）は、細胞を活性化するため、細胞の分化を促進するため、細胞の増殖を促進するため、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、治療化合物とともにインキュベートされる。ある実施形態において、細胞はまた、成長因子（例えば、ＶＥＧＦタンパク質または栄養成長因子）および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる。種々の実施形態において、細胞は、成長因子および／または抗細胞死化合物とともにインキュベートされる前、その間、またはその後で、治療化合物とともにインキュベートされる。インキュベートされる細胞の有効量が個体に投与される。ある実施形態において、治療化合物、成長因子、抗細胞死化合物、または上記の２つ以上の任意の組み合わせもまた、個体に投与される。治療化合物、成長因子、および／または抗細胞死化合物は、細胞の投与と逐次的にまたは同時に投与されてもよい。
【００８７】
従って、１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療の有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つの実施形態において、この方法はさらに、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療を個体に投与する工程をさらに含む。１つの実施形態において、細胞型は、多能性幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、多能性幹細胞は、非神経幹細胞である。１つの実施形態において、細胞型は神経細胞であり、この方法は神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、この方法は、神経細胞への神経幹細胞の分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、細胞型は非神経幹細胞であり、この方法は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞への非神経細胞の分化を促進する。
【００８８】
代替的には、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに事前にインキュベートした細胞が、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、および／またはその予防、および／またはその発症の遅延、および／またはその発生の遅延のために個体（例えば、ヒト）に投与できる。ある実施形態において、細胞は、治療化合物と組み合わせて個体に投与される。ある実施形態において、成長因子および／または抗細胞死化合物もまた、個体に投与される。ある実施形態において、成長因子と抗細胞死化合物の両方が個体に投与される。種々の実施形態において、治療化合物、成長因子、および／または抗細胞死化合物は、投与された細胞の活性化、分化、および／または増殖をインビボで促進する。ある実施形態において、治療化合物、成長因子、および／または抗細胞死化合物は、個体に移植されなかった内因性細胞の活性化、分化、および／または増殖を促進する。ある実施形態において、移植される細胞は、治療される個体と同じ種由来である。ある実施形態において、移植される細胞は、治療される個体または治療される個体の血縁に由来する。治療化合物、成長因子、および／または抗細胞死化合物は、細胞の投与と逐次的にまたは同時に投与されてもよい。
【００８９】
従って、１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、（ｉ）細胞を含む第１の治療、および（ｉｉ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせの有効量を、その必要がある個体に投与する工程を含む。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つの実施形態において、この方法はさらに、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療を個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、細胞型は、多能性幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経細胞であり、そしてこの方法は、神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、そしてこの方法は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、多能性幹細胞は非神経幹細胞である。１つの実施形態において、非神経幹細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞に分化する。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は逐次的に投与される。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は同時に投与される。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は同じ薬学的組成物中に含まれている。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は別々の薬学的組成物に含まれている。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は少なくとも相加的な効果を有する。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は相乗的な効果を有する。
【００９０】
別の局面において、本発明は、多能性肝細胞を含む第１の治療および多能性幹細胞が分化することを遊動するための有効量の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療を個体に投与する工程を包含する、個体の治療を補助する方法を提供する。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つの実施形態において、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療を個体に投与する工程をさらに含む。１つの実施形態において、多能性肝細胞は、神経幹細胞または非神経幹細胞である。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、非神経肝細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞に分化する。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は逐次的に投与される。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は同時に投与される。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は同じ薬学的組成物中に含まれている。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は別々の薬学的組成物に含まれている。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は少なくとも相加的な効果を有する。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は相乗的な効果を有する。
【００９１】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載される方法のいずれかによって産生される個体の分化細胞に投与する工程を包含する、神経系の適応症または非神経系の適応症を有する個体に治療を補助する方法を提供する。１つの実施形態において、分化細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンである。１つの実施形態において、分化細胞は非神経細胞である。特定の実施形態において、分化細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞である。１つの実施形態において、非神経細胞は皮膚細胞である。１つの実施形態において、分化細胞は静脈注射によって全身的に投与される。１つの実施形態において、分化細胞は、直接注射または外科的移植によって局所的に投与される。
【００９２】
ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、経口的に、静脈内に、腹腔内に、皮下に、くも膜下腔内に、筋肉内に、眼内に、経皮的に、または局所的に（すなわち、点眼薬または点耳薬として）投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療組成物は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量（例えば、経口投与のための用量）の治療化合物が投与される。ある実施形態において、治療化合物は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２０μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下腔内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。あるバリエーションにおいて、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。
【００９３】
本発明のさらなる方法
１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療の有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、細胞型は、幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞または神経細胞であり、ここで、第１の治療は、神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、第１の治療は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。
【００９４】
１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、（ｉ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたは前述のいずれかの薬学的に許容される塩を含む第１の治療、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療の組み合わせの有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、細胞型は、幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞または神経細胞であり、ここで、この方法は、神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、この方法は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。
【００９５】
１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療の有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、この方法は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療を個体に投与する工程をさらに包含する。１つの実施形態において、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療を個体に投与する工程をさらに包含する。１つの実施形態において、この方法は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療を個体に投与する工程、ならびに成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第３の治療を個体に投与する工程をさらに包含する。１つの実施形態において、細胞型は、幹細胞、神経幹細胞、非神経幹細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞または神経細胞であり、そしてこの方法は細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、そしてこの方法は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。
【００９６】
１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、（ｉ）細胞を含む第１の治療、および（ｉｉ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療の組み合わせの有効量をその必要がある個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第３の治療を個体に投与する工程をさらに包含する。１つの実施形態において、細胞型は、幹細胞、神経幹細胞、非神経幹細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞または神経細胞であり、そしてこの方法は、細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、そしてこの方法は神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、細胞は、個体への投与の前に、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートされていない。
【００９７】
上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は逐次的に投与される。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は同時に投与される。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は同じ薬学的組成物中に含まれている。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は別々の薬学的組成物中に含まれている。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は少なくとも相加的な効果を有する。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は相乗的な効果を有する。
【００９８】
１つの局面において、本発明は、細胞を活性化するために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートする工程を包含する、細胞を活性化する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物とともに細胞をインキュベートする工程をさらに包含する。１つの実施形態において、細胞は、幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞は神経幹細胞または神経細胞であり、ここで、このインキュベーションは、細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、このインキュベーションはエキソビボで行われる。１つの実施形態において、このインキュベーションはインビボで行われる。
【００９９】
１つの局面において、本発明は、細胞の分化および／または増殖を促進するために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともに細胞をインキュベートする工程を包含する、細胞の分化および／または増殖を促進する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物とともに細胞をインキュベートする工程をさらに包含する。１つの実施形態において、細胞は、幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞は、神経細胞に分化する神経幹細胞である。１つの実施形態において、細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する神経幹細胞である。１つの実施形態において、このインキュベーションはエキソビボで行われる。１つの実施形態において、このインキュベーションはインビボで行われる。１つの局面において、本発明は、本明細書に提供される方法のいずれかによって作製された精製細胞を提供する。
【０１００】
上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはテトラヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはヘキサヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは化学式：
【０１０１】
【化１】
2010528016.tif 000002
の化合物であり、
ここで、Ｒ１は低級アルキルまたはアラルキルから選択され；Ｒ２は水素、アラルキル、または置換ヘテロアラルキルから選択され；そしてＲ３は、水素、低級アルキル、またはハロから選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、アラルキルはＰｈＣＨ２−であり、そして置換ヘテロアラルキルは６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、またはＰｈＣＨ２−から選択され；Ｒ２はＨ−、ＰｈＣＨ２−、または６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−から選択され；そしてＲ３はＨ−、ＣＨ３−、またはＢｒ−から選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、シス（±）２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−５−（２−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−８−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールからなる群より選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される酸性塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容される塩は塩酸塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩である。
【０１０２】
上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨであり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３ＣＨ２−またはＰｈＣＨ２−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＰｈＣＨ２−であり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり、そしてＲ３はＨ−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＨ−またはＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＢｒ−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、成長因子には、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１，ＦＧＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＧＣＳ−Ｆ、ＧＭＣＳ−Ｆ、または上記の２つ以上の任意の組み合わせが含まれる。
【０１０３】
上記の実施形態のいずれかにおいて、疾患または適応症は、神経系の適応症または非神経系の適応症、例えば、アルツハイマー病、加齢と関連する認知障害、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、加齢関連黄斑変性、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、脊髄損傷と関連する神経障害、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。
【０１０４】
上記の実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、神経系の適応症、例えば、アルツハイマー病、加齢と関連する認知障害、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、加齢関連黄斑変性、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、または脊髄損傷と関連する神経障害である。
【０１０５】
上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、神経系の適応症、例えば、アルツハイマー病、加齢と関連する認知障害、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、または軽度認知障害（ＭＣＩ）である。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態はアルツハイマー病ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、アルツハイマー病でもなく、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）でもない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態はハンチントン病ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は統合失調症ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態はＭＣＩではない。１つのバリエーションにおいて、個体は、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、または統合失調症であると診断されていないか、またはこれを発症するリスクがあるとは見なされていないヒトである。１つのバリエーションにおいて、個体は、加齢に伴う認知障害を有さないか、または加齢プロセスと関連する生命を脅かす症状（例えば、失明（白内障）、皮膚毛髪外皮の劣化（脱毛症）、または筋肉および脂肪細胞の死滅に起因する加齢関連の体重減少）もしくはこれらの組み合わせを有さないヒトである。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、神経系の適応症、例えば、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、加齢関連黄斑変性、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、または脊髄損傷と関連する神経障害である。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、非神経系の適応症、例えば、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。
【０１０６】
例示的な状態
１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である任意の疾患または状態は、本発明の方法を使用して、予防、治療、阻害、および／または遅延することができる。本明細書に記載される疾患または状態と関連する細胞死（例えば、神経細胞死または非神経細胞死）を阻害する方法もまた本発明の範囲内にある。別の実施形態において、本発明は、疾患または状態と関連する変異遺伝子または異常な遺伝子（例えば、治療される疾患または状態がアルツハイマー病である場合、アルツハイマー病と関連するＡＰＰ変異、プレセニリン変異、および／またはＡｐｏＥ４対立遺伝子）を有する個体における疾患または状態の発症および／または発生の予防または遅延のための方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、疾患または状態と診断された個体における疾患または状態の進行を遅延させる方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、疾患または状態を発症するリスクがある個体（例えば、治療される疾患または状態がアルツハイマー病である場合、アルツハイマー病と関連するＡＰＰ変異、プレセニリン変異、および／またはＡｐｏＥ４対立遺伝子を有する個体）において、疾患または状態の発症および／または発生を予防または遅延させる方法を提供する。
【０１０７】
疾患もしくは状態の治療、予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のため、またはさもなくば疾患もしくは状態に関連する個体に本発明の化合物の投与に関連する、本明細書に記載されるいずれかの方法は、単独療法として（例えば、治療化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する）または組み合わせ治療として（例えば、治療化合物ならびに成長因子および／または抗細胞死化合物および／または本明細書に記載されるようにインキュベートした細胞）、本発明の化合物を個体に投与する工程を包含してもよい。種々の実施形態において、この方法は、以下のいずれかの有効量を個体に投与する工程を包含する：（１）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩；（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（３）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（６）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、または（７）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、および（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ。
【０１０８】
本発明の方法を使用して予防、治療、阻害、および／または遅延され得る例示的な状態には以下が含まれる：アルツハイマー病；ハンチントン病；光受容体細胞の死を含むかまたは網膜細胞を含むかまたはアポトーシスによる神経細胞死を含む神経細胞死媒介性眼疾患を含む、神経細胞死媒介性眼疾患（黄斑変性（乾燥型黄斑変性またはシュタルガルト黄斑変性）（ＳＴＧＤ））、緑内障、網膜色素変性症、先天性定常夜盲症（Ｏｇｕｃｈｉ病）、幼児期発症重度網膜ジストロフィー、レーバー先天性黒内障、バルデー・ビードル症候群、アッシャー症候群、視神経症由来の失明、レーバー遺伝性視神経萎縮、色覚異常、およびハンセン・ラーソン・ベルク症候群）；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；パーキンソン病；レヴィー小体認知症；メンケス病；ウィルソン病；クロイツフェルト・ヤコブ病；ファール病；統合失調症；イヌ認知障害症候群；脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作（本発明がそのために使用されてもよい適応症の例には、脳卒中、脳血流の減少（虚血）、および脳循環障害または脳出血発作、例えば、頭部波の外傷を含む外傷の際に起こり得るものが含まれる）。この方法は、脳循環および／または虚血性もしくは出血性発作の急性または慢性の機能不全と関連する神経学的な欠乏に起因する能力障害の重篤度を軽減する方法である。脳循環および／または虚血性もしくは出血性発作の急性不全に起因する神経細胞死に罹患した個体の認知機能を増強する方法もまた包含される。１つのバリエーションにおいて、この方法は、脳循環および／または虚血性もしくは出血性発作の急性不全；加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法を経験しているかまたは経験した個体における、動脈開存性（組織アクチベーター）の悪化の回復もしくは予防、ならびに／または血栓形成の発生もしくは悪化の予防（線維素溶解剤、抗凝固剤、凝集抑制剤）、ならびに／または生きている神経細胞の死の発症および／または進行の予防もしくは遅延を含み；例えば、皮膚・毛髪外皮の障害（例えば、禿または脱毛症）、視覚障害（例えば、白内障の発症）、および体重減少（筋肉および／または脂肪細胞の死に起因する体重減少を含む）を含むがこれらに限定されない、加齢に付随する、もしくは加齢に関連する徴候および／または病理もしくは状態の発症を遅延させるかまたはその進行を遅延させることによる、個体における老化の遅延を含む。例示的な疾患または状態には、他の神経系の適応症、例えば、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷または脊髄損傷から生じる神経損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、ｈｅｒｐｅｓ  ｚｏｓｔｅｒと関連する神経障害、脊髄損傷と関連する神経障害である。例示的な疾患または状態には、多数の非神経系の適応症、例えば、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度���もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷もまた含まれる。例示的な状態には、以下に記載されている疾患または状態のいずれかがさらに含まれる：米国特許第７，０７１，２０６号（「Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」米国特許出願第１１／００４，００１号、２００４年１２月２日出願）；米国特許出願第１１／６４４，６９８（「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｌｏｗｉｎｇ  Ａｇｉｎｇ」２００６年１２月２２日）；米国特許出願第１１／５４３，５２９号および第１１／５４３，３４１号（「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ」２００６年１０月４日出願）；米国特許出願第１１／６９８，３１８号（「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」２００７年１月２５日出願）；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／２０４８３（２００７年９月２０日出願）（「Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ  ｐｙｒｉｄｏ［４，３−ｂ］ｉｎｄｏｌｅｓ  ｓｕｃｈ  ａｓ  Ｄｉｍｅｂｏｎ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」）；米国仮出願第６０／８４６，１８４号（２００６年９月２０日出願）、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／２０５１６号（２００７年９月２０日出願）（「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ」）；ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／２２６４５号（２００８年１０月２６日出願）（「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ」）、これらは、それらの全体が、特に、疾患および状態に関して、参照により本明細書に援用される。
【０１０９】
神経系の適応症における使用のための方法
ある実施形態において、本明細書の方法は、神経系の状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のために使用される。神経変性障害などの神経学的状態の治療のために、神経細胞死を阻害し、神経の表現型を維持し、神経の損傷を修復し、神経細胞の増殖を促進し、神経細胞の分化を促進し、神経細胞の活性化（例えば、神経突起伸長）を促進し、または上記の任意の２つ以上である組成物が望ましい。神経栄養因子および対応する受容体の損傷誘導性の発現は、神経再生の能力において重要な役割を果たし得る。ＧＤＮＦ（Ｈｉｗａｓａら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔｓ．２３８：１１５−１１８，１９９７；Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．９１６：７６−８４、２００１）、ＢＤＮＦ、およびＮＧＦ（Ｗｏｚｎｉａｋ、１９９３）などのニュートロフィンは、ドーパミン作動性ニューロンの生存および機能をインビトロで維持し、ならびに神経突起の数および長さとして測定される神経突起伸長を増加することが示されてきた（Ｈｉｗａｓａら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔｓ．２３８：１１５−１１８、１９９７；Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．９１６：７６−８４、２００１；Ｗｏｚｎｉａｋ、Ｆｏｌｉａ  Ｍｏｒｐｈｏｌ（Ｗａｒｓｚ）．１９９３；５２（４）：１７３−８１）。神経突起伸長は、神経成長因子、神経伝達物質、および電気活動によって刺激されるプロセスである。このプロセスは、Ｄ２ドーパミンおよび皮質ニューロン、セロトニン−１Ｂ受容体および視床ニューロン、Ｎｅｕｒｏ２Ａ細胞におけるＣＢ１カンナビノイド受容体、種々の神経細胞における神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ニューロトロフィン−３、およびＦＧＦ（酸性／塩基性）などのＧタンパク質共役受容体のリガンド依存性活性化を含む。
【０１１０】
加えて、いくつかの知見は、神経発生が脳における天然の修復経路であることを示している（Ｃｒｅｓｐｅｌら、Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｌ．（Ｐａｒｉｓ）．２００４、１６０（１２）：１１５０−８）。海馬神経発生は、認知能力に直接的に寄与するようであり、このことは、神経発生の阻害が記憶障害を引き起こすという知見によって支持されている（Ｓｈｏｒｓら、Ｎａｔｕｒｅ、２００１、４１０（６８２６）：３７２−６．Ｎａｔｕｒｅ  ２００１  ４１４（６８６６）：９３８にて訂正）。さらに、認知訓練は、この領域における新たな神経細胞の形成を増加させる（Ｇｏｍｅｚ−Ｐｉｎｉｌｌａら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２００１  Ｊｕｎ  １５；９０４（ｌ）：１３−９）。この現象は、身体的運動（Ｖａｎ  Ｐｒａａｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９９、９６（２３）：１３４２７−３１）、成長因子、またはリチウム、バルプロエート、もしくは抗うつ剤（Ｂａｕｅｒら、２００３）などの他の化合物の適用によってもまた誘導され得る。
【０１１１】
種々の方法、例えば、神経細胞の生存を延長し、および／または神経細胞の機能を増強し、および／または細胞死を阻害する方法が本明細書に記載され、これは、神経細胞死の量および／または程度の減少、または神経細胞死の発症の遅延を含んでもよい。これらの記載される方法はまた、神経細胞死と関連する適応症、例えば、本明細書により詳細に記載されている適応症および状態を含むがこれらに限定されない、神経変性疾患または他の適応症もしくは状態の治療、および／またはその予防、および／またはその発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法において使用されてもよい。特定の徴候のために記載されるすべての方法を含む、本明細書に記載される任意の方法のために、１つのバリエーションにおいて、この方法は、以下の任意の有効量を固体に投与する工程を包含する：（１）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩；（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（３）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（６）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、または（７）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、および（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ。
【０１１２】
１つの局面において、本発明は、状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療の有効量をその必要がある個体に投与する工程を包含し、ここで、個体は以下を有する：傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、自閉症、自閉症スペクトラム障害、アスペルガー症候群、レット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、神経障害、および非神経系の適応症。特定の実施形態において、個体は、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、またはアジュバント化学療法を有する。１つの実施形態において、個体は、状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のために１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である障害を有する。１つの実施形態において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態を治療する方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態を予防する方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の発症を遅延させる方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の発生を遅延させる方法を提供する。特定の実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはディメボンである。特定の実施形態において、神経障害は、糖尿病性神経障害、線維筋痛、および脊髄損傷と関連する神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は糖尿病性神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は線維筋痛である。１つの実施形態において、神経障害は脊髄損傷と関連する神経障害である。特定の実施形態において、非神経系の適応症は、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。
【０１１３】
１つの局面において、本発明は、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための方法を提供し、この方法は、（ｉ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたは前述のいずれかの薬学的に許容される塩を含む第１の治療、および（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療の組み合わせの有効量を、その必要がある個体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはディメボンである。１つの実施形態において、細胞型は、多能性幹細胞、神経幹細胞、非神経幹細胞、および神経細胞からなる群より選択される。１つの実施形態において、細胞型は神経細胞であり、そしてこの方法は神経細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。１つの実施形態において、細胞型は神経幹細胞であり、そしてこの方法は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。１つの実施形態において、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。１つの実施形態において、細胞型は非神経幹細胞であり、そしてこの方法は、非神経幹細胞の分化を促進する。特定の実施形態において、非神経幹細胞は、皮膚細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、肝細胞、腎細胞、または軟骨細胞に分化する。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は逐次的に投与される。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は同時に投与される。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は同じ薬学的組成物中に含まれている。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は別々の薬学的組成物に含まれている。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は少なくとも相加的な効果を有する。１つの実施形態において、第１の治療および第２の治療は相乗的な効果を有する。
【０１１４】
１つの局面において、本発明は、神経突起伸長を刺激するための有効量の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩で個体を治療する工程を包含する、個体における神経突起伸長を刺激する方法を提供する。特定の実施形態において、個体は以下を有する：傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、自閉症、自閉症スペクトラム障害、アスペルガー症候群、レット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、神経障害、および非神経系の適応症。特定の実施形態において、個体は、戦傷から生じる傷害関連ＭＣＩ、脳震盪後症候群、またはアジュバント化学療法を有する。１つの実施形態において、神経障害は、糖尿病性神経障害、線維筋痛、および脊髄損傷と関連する神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は糖尿病性神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は線維筋痛である。１つの実施形態において、神経障害は脊髄損傷と関連する神経障害である。特定の実施形態において、非神経系の適応症は、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。特定の実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つのバリエーションにおいて、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物の投与をさらに包含する。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、経口的に、静脈内に、腹腔内に、皮下に、くも膜下腔内に、筋肉内に、眼内に、経皮的に、または局所的に（すなわち、点眼薬または点耳薬として）投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療組成物は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量（例えば、経口投与のための用量）の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩が投与される。ある実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下��内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。あるバリエーションにおいて、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。
【０１１５】
別の局面において、本発明は、神経発生を増強するための有効量の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩で個体を治療する工程を包含する、個体における神経発生を増強する方法を提供する。特定の実施形態において、個体は以下を有する：傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、自閉症、自閉症スペクトラム障害、アスペルガー症候群、レット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、神経障害、および非神経系の適応症。特定の実施形態において、個体は、戦傷から生じる傷害関連ＭＣＩ、脳震盪後症候群、またはアジュバント化学療法を有する。１つの実施形態において、神経障害は、糖尿病性神経障害、線維筋痛、および脊髄損傷と関連する神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は糖尿病性神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は線維筋痛である。１つの実施形態において、神経障害は脊髄損傷と関連する神経障害である。特定の実施形態において、非神経系の適応症は、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。特定の実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つのバリエーションにおいて、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物の投与をさらに包含する。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、経口的に、静脈内に、腹腔内に、皮下に、くも膜下腔内に、筋肉内に、眼内に、経皮的に、または局所的に（すなわち、点眼薬または点耳薬として）投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療組成物は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量（例えば、経口投与のための用量）の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩が投与される。ある実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下腔内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。あるバリエーションにおいて、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。
【０１１６】
さらに別の局面において、本発明は、神経突起伸長を刺激し、かつ神経発生を増強するための有効量の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩で個体を治療する工程を包含する、個体における神経突起伸長を刺激し、かつ神経発生を増強する方法を提供する。特定の実施形態において、個体は以下を有する：傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、自閉症、自閉症スペクトラム障害、アスペルガー症候群、レット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、神経障害、および非神経系の適応症。特定の実施形態において、個体は、戦傷から生じる傷害関連ＭＣＩ、脳震盪後症候群、またはアジュバント化学療法を有する。１つの実施形態において、神経障害は、糖尿病性神経障害、線維筋痛、および脊髄損傷と関連する神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は糖尿病性神経障害である。１つの実施形態において、神経障害は線維筋痛である。１つの実施形態において、神経障害は脊髄損傷と関連する神経障害である。特定の実施形態において、非神経系の適応症は、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。特定の実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。１つのバリエーションにおいて、この方法は、成長因子および／または抗細胞死化合物の投与をさらに包含する。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、経口的に、静脈内に、腹腔内に、皮下に、くも膜下腔内に、筋肉内に、眼内に、経皮的に、または局所的に（すなわち、点眼薬または点耳薬として）投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療組成物は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療化合物は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量（例えば、経口投与のための用量）の治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩が投与される。ある実施形態において、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２��ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下腔内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。あるバリエーションにおいて、治療用水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩はディメボンである。
【０１１７】
上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または適応症は、神経系の適応症または非神経系の適応症、例えば、アルツハイマー病、加齢と関連する認知障害、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、加齢関連黄斑変性、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、脊髄損傷と関連する神経障害、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。
【０１１８】
上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、神経系の適応症、例えば、アルツハイマー病、加齢と関連する認知障害、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、加齢関連黄斑変性、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、または脊髄損傷と関連する神経障害である。
【０１１９】
上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、神経系の適応症、例えば、アルツハイマー病、加齢と関連する認知障害、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、または軽度認知障害（ＭＣＩ）である。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態はアルツハイマー病ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、アルツハイマー病ではなく、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）でもない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態はハンチントン病ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は統合失調症ではない。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態はＭＣＩではない。１つのバリエーションにおいて、個体は、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、または統合失調症であると診断されていないか、またはこれを発症するリスクがあるとは見なされていないヒトである。１つのバリエーションにおいて、個体は、加齢に伴う認知障害を有さないか、または加齢プロセスと関連する生命を脅かす症状（例えば、失明（白内障）、皮膚毛髪外皮の劣化（脱毛症）、または筋肉および脂肪細胞の死滅に起因する加齢関連の体重減少）もしくはこれらの組み合わせを有さないヒトである。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、神経系の適応症、例えば、傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、戦傷から生じる傷害関連軽度認知障害（ＭＣＩ）、脳震盪後症候群、およびアジュバント化学療法、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、加齢関連黄斑変性、自閉症スペクトラム障害を含む自閉症、アスペルガー症候群、およびレット症候群、剥離損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、糖尿病性神経障害、線維筋痛、または脊髄損傷と関連する神経障害である。上記の局面または実施形態のいずれかにおいて、疾患または状態は、非神経系の適応症、例えば、心臓病、糖尿病、食欲不振、ＡＩＤＳもしくは化学療法関連の消耗、血管損傷、腸損傷、軟骨損傷、骨関節炎、細菌感染、ウイルス感染、第一度、第二度、もしくは第三度の熱傷、単純骨折、複雑骨折、疲労骨折、もしくは圧迫骨折、または裂傷である。
【０１２０】
例示的な細胞および方法
１つのバリエーションにおいて、方法は、ディメボンなどの治療化合物、および細胞を含む治療の投与を含み、ここで、細胞は、米国特許公開第２００７／０１１０７３０号に記載されるような例示的な細胞型であり、この文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。ある実施形態において、本発明は、治療化合物とともに細胞をインキュベートする工程を包含し、ここで、この細胞は、米国特許公開第２００７／０１１０７３０号に記載されるような例示的な細胞型である。ある実施形態において、治療化合物とともにインキュベートされた細胞は、その必要がある個体、例えば、神経系の適応症または非神経系の適応症を有するか、またはそのことが疑われている個体に投与される。本明細書に記載される方法のいずれかは、損傷または疾患を治療するために新規な細胞を精製するために使用することができる。ある実施形態において、細胞は、高い代謝回転速度を有し、損傷または疾患を被る可能性が最も高い組織、例えば、上皮細胞または血液細胞由来である。
【０１２１】
ある実施形態において、幹細胞は、哺乳動物の寿命にわたって長期的な自己再生が可能である多能性細胞である。ある実施形態において、幹細胞はそれ自体移植されてもよく、または移植のために分化した細胞（例えば、神経細胞、乏突起膠細胞、シュワン細胞、または星状細胞）を産生するために誘導されてもよい。移植幹細胞はまた、成長因子、サイトカイン、抗アポトーシスタンパク質などの治療用分子を発現させるために使用されてもよい。従って、幹細胞は、細胞または組織の損失を含む疾患の代替的な治療のための細胞の潜在的な供給源である。
【０１２２】
特定の実施形態において、細胞は、ドーパミン作動性ニューロンとして分化可能であり、従って、パーキンソン病患者への同型移植片のためのドーパミン作動性ニューロンの有用な供給源である。他の例示的な細胞は、平滑筋細胞、脂肪細胞、軟骨、骨、骨格筋、および心筋を含む多数の中胚葉性由来物として分化可能であり、腎細胞および造血細胞を含む他の中胚葉性由来物を産生可能であることが予想される。ある実施形態において、細胞は、内胚葉性の分化のマーカーを発現し、膵島細胞（例えば、α（アルファ）細胞、β（ベータ）細胞、Ψ（ファイ）細胞、δ（デルタ）細胞）、肝細胞などを含む細胞型に分化することが予想される。ある実施形態において、細胞は、３つすべての胚葉に由来する細胞に分化することが可能である。ある実施形態において、細胞は、例えば、他の神経変性疾患、障害、または異常な身体状態を治療するために、自系または異種移植片のために使用される。
【０１２３】
ある実施形態において、細胞は、出生後哺乳動物の末梢組織から精製された多能性幹細胞の子孫である。ある実施形態において、細胞は、有糸分裂細胞または分化した細胞（例えば、神経細胞、星状細胞、乏突起膠細胞、シュワン細胞、または非神経細胞）である。例示的な神経細胞には、以下の神経伝達物質：ドーパミン、ＧＡＢＡ、グリシン、アセチルコリン、グルタミン、およびセロトニンの１つ以上を発現する神経細胞が含まれる。例示的な非神経細胞には、心筋細胞、膵細胞（例えば、島細胞（α（アルファ）細胞、β（ベータ）細胞、Ψ（ファイ）細胞、δ（デルタ）細胞）、外分泌腺細胞、内分泌腺細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、肝細胞、造血細胞、および脂肪細胞が含まれる。これらの非神経細胞には、中胚葉由来物と内胚葉由来物の両方が含まれる。例示的な実施形態において、分化した細胞は精製されている。
【０１２４】
１つの局面において、本発明は、細胞の損失に伴う疾患を有する個体を治療する方法を特徴とする。１つの実施形態において、この方法は、細胞損失が存在する個体の領域に、多能性幹細胞などの細胞を移植する工程を包含する。１つの実施形態において、移植工程の前に、この方法は、末梢組織の培養物を提供する工程、および末梢組織から多能性幹細胞などの細胞を単離する工程を包含する。組織は、同じ患者から誘導されるか（自系）、または遺伝的に関連する個体もしくは関連しない個体のいずれかから誘導されてもよい。移植後、この方法は、失われた細胞を置き換えるために、細胞を所望の細胞型に分化させる（またはその分化を可能にする）工程をさらに含んでもよい。ある実施形態において、領域はＣＮＳまたはＰＮＳの領域であるが、この領域はまた、心臓組織、膵臓組織、または細胞の移植治療が可能である任意の他の組織であり得る。別の実施形態において、この方法は、細胞が細胞損傷の部位に向かう血流を介して、細胞損傷の部位に細胞を送達する工程を含む。１つの実施形態において、個体を治療するための方法は、幹細胞の子孫である分化した細胞の移植を含む。
【０１２５】
多能性幹細胞は、一連の範囲の神経細胞型および非神経細胞型に分化する驚異的な能力を有する。非神経細胞型には、中胚葉由来物と内胚葉由来物の両方が含まれる。ある実施形態において、細胞は、３つのすべての胚葉の由来物に分化することが可能である。この能力には、細胞の増殖、分化、および生存に影響を与える培養条件を調節することによってさらに影響を与えることができる。１つの実施形態において、培養条件の調節には、血清濃度を増減させることが含まれる。別の実施形態において、培養条件の調節には、プレーティング密度を増減させることが含まれる。さらに別の実施形態において、培養条件の調節には、培養培地への１種以上の薬理学的剤の添加が含まれる。別の実施形態において、培養条件の調節には、培養培地への１種以上の治療用タンパク質（例えば、成長因子および／または抗アポトーシスタンパク質）の添加が含まれる。上記の実施形態の各々において、薬理学的剤、治療用タンパク質、および小分子が、個々にまたは任意の組み合わせで投与可能であり、そして薬理学的剤、治療用タンパク質、および小分子の任意の組み合わせは、同時投与されるか、または異なる時点で投与することができる。
【０１２６】
ある実施形態において、細胞は、皮膚、嗅上皮、および舌の末梢組織からの精製多能性幹細胞である。これらの細胞は培地で増殖し、多数の幹細胞を産生する。これらの細胞は、培養条件を変化させることにより、例えば、神経細胞、星状細胞、および／または乏突起膠細胞に分化するように誘導することができる。これらはまた、平滑筋細胞、軟骨、骨、骨格筋、心筋、および脂肪細胞などの非神経細胞に分化するように誘導することができる。従って、実質的に精製されている神経幹細胞は、例えば、神経変性障害または外傷（例えば、脊髄損傷）の治療のための自系移植における使用のための細胞を生成するために有用である。１つの例において、多能性幹細胞は、ドーパミン作動性ニューロンに分化させ、パーキンソン病患者の黒質または線条体に移植されてもよい。別の例において、細胞は、多発性硬化症の治療のための自系移植物における使用のために乏突起膠細胞を産生するために使用されてもよい。別の例において、多能性幹細胞は、脊髄損傷の治療のためのシュワン細胞、心臓病の治療のための心臓細胞、または糖尿病の治療のための膵島細胞を生成するために使用されてもよい。ある実施形態において、多能性幹細胞は、ＡＩＤＳ、癌、および癌治療を含む多くの疾患と関連する食欲不振または消耗のための脂肪細胞を産生するために使用される。別の例において、多能性幹細胞は、血管移植片において使用される平滑筋細胞を生成するために使用されてもよい。別の例において、多能性幹細胞は、軟骨損傷および軟骨の変性状態を治療するために使用される軟骨を生成するために使用されてもよい。さらに別の例において、多能性幹細胞は、細菌もしくはウイルス感染に対して損傷を受けたかもしくは失われた細胞、または外傷性損傷、例えば、熱傷、骨折、および裂傷に対して失われた細胞を置き換えるために使用されてもよい。
【０１２７】
所望される場合、細胞は、例えば、成長因子および／または抗アポトーシスタンパク質を発現するように遺伝子が改変されてもよい。同様に、細胞の増殖、分化、または生存には、培養培地中の血清の濃度を増減させること、およびプレーティング密度を増減させることを含む、細胞培養条件を調節することによって、影響を与えることができる。１つの実施形態において、細胞は、プレーティングおよび分化の前に前選別され、その結果、細胞の一部の集団のみが分化条件に供される。細胞の前選別は、遺伝子またはタンパク質の発現（または発現の欠如）に基づいて、または接着もしくは形態学を含む分化細胞の特性に基づいて行うことができる。
【０１２８】
本発明はまた、疾患を有し、損傷を受け、または物理的に異常なＣＮＳ、ＰＮＳ、または他の組織に治療化合物を導入するための本発明の細胞の使用を特徴とする。従って、本発明は、ディメボンなどの治療化合物、および、ＣＮＳ、ＰＮＳ、または他の組織と関連がある細胞などの細胞を含む治療を個体に投与する方法を包含する。本発明はまた、ディメボンなどの治療化合物とともにインキュベートした、ＣＮＳ、ＰＮＳ、または他の組織と関連がある細胞などの細胞を個体に投与する方法を包含する。従って、細胞は、化合物を輸送するためのベクターとして働く。治療化合物の発現を可能にするために、適切な調節エレメントが種々の供給源から誘導されてもよく、当業者によって容易に選択されてもよい。調節エレメントの例には、転写プロモーターおよびエンハンサーまたはＲＮＡポリメラーゼ結合配列、ならびに翻訳開始シグナルを含むリボソーム結合配列が含まれる。加えて、利用されるベクターに依存して、他の遺伝子エレメント、例えば、選択マーカーが、組換え分子に組み込まれてもよい。組換え分子は、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡウイルスベクター、およびリポソームなどのインビトロ送達ビヒクルを使用して、幹細胞または幹細胞から分化した細胞に導入されてもよい。組換え分子はまた、マイクロインジェクションおよびエレクトロポレーションなどの物理的技術、またはリポソームへのＤＮＡの取り込みなどの化学的方法を使用して、インビボでこのような細胞に導入されてもよい。このような標準的な技術は、細胞に異種組換え分子を一時的にまたは安定的に導入するために使用することができる。遺伝的に変化した細胞は、ミクロスフェアにカプセル化させ、疾患を有するかもしくは損傷を有する組織にまたはその近位に移植させてもよい。
【０１２９】
１つの実施形態において、細胞は、神経学的適応症の治療のために使用される。別の局面において、多能性幹細胞などの細胞は、非神経細胞、例えば、脂肪細胞、骨、軟骨、および平滑筋の供給源として使用される。例として、ＰＣＴ出願ＷＯ９９／１６８６３は、インビボでの造血細胞系統の細胞への前脳多能性幹細胞の分化を記載している。従って、本発明は、幹細胞または幹細胞から誘導された細胞を患者に投与すること、および細胞を分化させて疾患または障害において失われた細胞を置き換えることによって、細胞の損失によって特徴付けられる任意の疾患または障害を有する個体を治療する方法を特徴とする。例えば、多能性幹細胞およびそれらの子孫の移植は、血液関連障害を治療するための、骨髄および造血幹細胞に対する代替物を提供する。多能性幹細胞の他の用途は、Ｏｕｒｅｄｎｉｋら（Ｃｌｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．５６：２６７−２７８、１９９９）に記載され、これは、その全体が参照により本明細書に援用される。多能性幹細胞およびそれらの子孫は、例えば、インビトロ研究のため、および移植のための脂肪細胞および平滑筋細胞の培養物を提供する。脂肪細胞は、悪液質、筋肉の消耗、および摂食障害を治療する際に望ましくあり得る種々の成長因子を分泌する。平滑筋細胞は、例えば、血管移植物、腸移植物などに取り込まれてもよい。軟骨細胞は、軟骨損傷（例えば、スポーツ傷害）、ならびに変性性疾患および骨関節炎を治療するための多数の整形外科的適用を有する。軟骨細胞は、単独で、または当該分野において周知である担体と組み合わせて使用することができる。このような担体は、軟骨細胞を必要な形状に成型するために使用される。
【０１３０】
治療化合物
特定の炭素数を有する有機残基または部分に言及する場合、明確に別のことが言及されない限り、これはそのすべての幾何異性体を意図する。例えば、「ブチル」は、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、およびｔ−ブチルを含み；「プロピル」はｎ−プロピルおよびイソプロピルを含む。
【０１３１】
「アルキル」という用語は、直鎖状、分枝状、または環状の炭化水素構造、およびその組み合わせを含む。好ましいアルキル基は、２０個の炭素原子（Ｃ２０）またはそれ以下を有するものである。より好ましくは、アルキル基は、１５個未満または１０個未満または８個未満の炭素原子を有するものである。
【０１３２】
「低級アルキル」という用語は、１〜５個の炭素原子のアルキル基をいう。低級アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチルなどが含まれる。低級アルキルはアルキルのサブセットである。
【０１３３】
「アリール」という用語は、単環（例えば、フェニル）または複数の縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）などを有する６〜１４個の炭素原子の不飽和芳香族炭素環をいい、この縮合環は芳香族であってもよいし、芳香族でなくてもよい（例えば、２−ベンゾキサゾリノン、２Ｈ−ｌ，４−ベンゾキサイン−３（４Ｈ）−オン−７−イル）。好ましいアリールにはフェニルおよびナフチルが含まれる。
【０１３４】
「ヘテロアリール」という用語は、環中、２〜１０個の炭素原子、および酸素、窒素、および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子である芳香族性炭素環をいう。このようなヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジルまたはフリル）または複数の縮合環（例えば、インドリジニルまたはベンゾチエニル）を有し得る。例示的なヘテロアリールには、例えば、イミダゾリル、ピリジニル、インドリル、チオフェネイル、チアゾリル、フラニル、ベンズイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、ピリニジニル、ピラジニル、テトラゾリル、およびピラゾリルが含まれる。
【０１３５】
「アラルキル」という用語は、アリール部分がアルキル残基を介して親の構造に結合している残基をいう。例は、ベンジル、フェネチルなどである。
【０１３６】
「ヘテロアラルキル」という用語は、ヘテロアリール部分がアルキル残基を介して親の構造に結合している残基をいう。例には、フラニルメチル、ピリジニルメチル、ピリミジニルエチルなどが含まれる。
【０１３７】
「置換ヘテロアラルキル」という用語は、１〜３個の置換基、例えば、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アミノ、アリール、カルボキシル、ハロ、ニトロ、およびアミノからなる群より選択される残基で置換されているヘテロアリール基をいう。
【０１３８】
「置換アラルキル」という用語は、１〜３個の置換基、例えば、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アミノ、アリール、カルボキシル、ハロ、ニトロ、およびアミノからなる群より選択される残基で置換されているアラルキル基をいう。
【０１３９】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードをいう。
【０１４０】
本明細書に記載されている方法、組成物、およびキットにおける使用のための治療化合物には、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩、例えば、その酸性塩または塩基性塩が含まれる。水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、テトラヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩であり得る。水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはまた、ヘキサヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩でもあり得る。水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール化合物は、１〜３個の置換基で置換できるが、３個より多くの置換基を有する非置換水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール化合物または水素化ピリド［４，３−ｂ］インドール化合物もまた意図される。適切な置換基には、アルキル、低級アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、置換ヘテロアラルキル、置換アラルキル、およびハロが含まれるがこれらに限定されない。
【０１４１】
特定の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは化学式ＡおよびＢによって例示される：
【０１４２】
【化２】
2010528016.tif 000003
ここで、Ｒ１はアルキル、低級アルキル、およびアラルキルからなる群より選択され、Ｒ２は水素、アラルキル、および置換ヘテロアラルキルからなる群より選択され；そしてＲ３は水素、アルキル、低級アルキル、およびハロからなる群より選択される。
【０１４３】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はアルキル、例えば、Ｃ１−Ｃ１５アルキル、Ｃ１０−Ｃ１５アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１５アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルキル、Ｃ４−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ１５アルキル、Ｃ１５−Ｃ２０アルキル；Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ１−Ｃ６アルキルからなる群より選択されるアルキルである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はアラルキルである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は低級アルキル、例えば、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルキル、およびＣ２−Ｃ５アルキルからなる群より選択される低級アルキルである。
【０１４４】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は直鎖アルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は分枝鎖アルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は環状アルキル基である。
【０１４５】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はメチルである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はエチルである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はメチルまたはエチルである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はメチル、またはベンジルなどのアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はエチル、またはベンジルなどのアラルキル基である。
【０１４６】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は、先の段落において列挙されたアルキルまたは低級アルキル置換基の任意の１つがアリール基（例えば、Ａｒ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ａｒ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、またはＡｒ−Ｃ１−Ｃ１５アルキル）でさらに置換されているアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は、先の段落において列挙されたアルキルまたは低級アルキル置換基の任意の１つが単一のアリール残基で置換されているアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１は、先の段落において列挙されたアルキルまたは低級アルキル置換基の任意の１つがフェニル基（例えば、Ｐｈ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＰｈ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｐｈ−Ｃ１−Ｃ１５アルキル）でさらに置換されているアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ１はベンジルである。
【０１４７】
あたかもＲ１、Ｒ２、およびＲ３の各々のおよびすべての組み合わせが具体的にかつ個別に列挙されようなことと同様に、Ｒ１のすべてのバリエーションは、Ｒ２およびＲ３について以下に言及される任意のバリエーションと組み合わせることが意図され、かつ明確に本明細書によって記載される。
【０１４８】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ２はＨである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２はアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は水素またはアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は水素または置換ヘテロアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２はアラルキル基または置換ヘテロアラルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は、水素、アラルキル基、および置換ヘテロアラルキル基からなる群より選択される。
【０１４９】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ２はアラルキル基であり、あたかもＲ１のために列挙された各々のおよびすべてのアラルキル基のバリエーションが別々にかつ個々にＲ２のために列挙されるようなことと同様に、Ｒ２は上記のＲ１のために記されたアラルキル基の任意の１つであり得る。
【０１５０】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアラルキルのアルキル部分は、アルキルまたは低級アルキル基、例えば、Ｒ１のために上記に列挙されているものであり得る。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアリール基は、１〜３個のＣ１−Ｃ３アルキル置換基（例えば、６−メチル−３−ピリジルエチル）であり得る。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアリール基は、１〜３個のメチル基であり得る。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアリール基は、低級アルキル置換基で置換されている。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアリール基は、１個のＣ１−Ｃ３アルキル置換基で置換されている。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアリール基は、１個または２個のメチル基で置換されている。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は置換ヘテロアラルキル基であり、ここで、ヘテロアリール基は、１個のメチル基で置換されている。
【０１５１】
他のバリエーションにおいて、Ｒ２はすぐ前の段落における置換ヘテロアラルキル基の任意の１つであり、ここで、ヘテロアラルキル基のヘテロアリール部分は単一の環ヘテロアリール基である。他のバリエーションにおいて、Ｒ２はすぐ前の段落における置換ヘテロアラルキル基の任意の１つであり、ここで、ヘテロアラルキル基のヘテロアリール部分は複数の縮合環ヘテロアリール基である。他のバリエーションにおいて、Ｒ２はすぐ前の段落における置換ヘテロアラルキル基の任意の１つであり、ここで、ヘテロアラルキル部分はピリジル基（Ｐｙ）である。
【０１５２】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。この部分を含む化合物の例はディメボンである。
【０１５３】
１つのバリエーションにおいて、Ｒ３は水素である。他のバリエーションにおいて、Ｒ３は、あたかもＲ１のために列挙されたアルキルのバリエーションが別々にかつ個々にＲ３のために列挙されるようなことと同様に、上記のＲ１のために記されたアルキル基の任意の１つである。別のバリエーションにおいて、Ｒ３はハロ基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３は水素またはアルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３はハロまたはアルキル基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３は水素またはハロ基である。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３は、水素、アルキル、およびハロからなる群より選択される。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３はＢｒである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３はＩである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３はＦである。１つのバリエーションにおいて、Ｒ３はＣｌである。
【０１５４】
特定のバリエーションにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩である。
【０１５５】
水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、その薬学的に許容される塩の型であり得、これは、当業者に容易に公知である。薬学的に許容される塩には、薬学的に許容される酸性塩が含まれる。特定の薬学的に許容される塩の例には、塩酸塩または二塩酸塩が含まれる。特定のバリエーションにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールの薬学的に許容される塩、例えば、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩（ディメボン）である。
【０１５６】
特定の水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはまた、化学式（１）または化学式（２）によって記載することができる。
【０１５７】
【化３】
2010528016.tif 000004
一般式（１）または（２）の化合物について、上記の置換基の任意の組み合わせの中で、
Ｒ１は−ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２−、またはＰｈＣＨ２−（ベンジル）を表し；
Ｒ２は−Ｈ、ＰｈＣＨ２−、または６ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり；
Ｒ３は−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｂｒである。
化学式（１）および（２）のすべての可能な組み合わせは、あたかも各々の単一のおよび個々の化合物が化学名で列挙されるようなことと同様に、特定のかつ個々の化合物として意図される。上記に列挙された置換基から１つ以上の可能な部分の任意の削除を伴う、化学式（１）または（２）の化合物：例えば、Ｒ１が−ＣＨ３を表す場合、もまた意図される。１つのバリエーションにおいて、Ｒ２は、−Ｈ、ＰｈＣＨ２−、または６ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり；そしてＲ３は−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｂｒであり、またはＲ１が−ＣＨ３を表す場合；Ｒ２は６ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり；そしてＲ３は−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｂｒを表す。
【０１５８】
上記のおよび本明細書の任意の治療化合物は、薬学的に許容される塩との塩の型、または四級化誘導体の型であり得る。薬学的に許容される塩とは、化合物の生物学的な効力および特性を保持し、かつ生物学的ではないかまたはさもなくば望ましくない塩をいう。多くの場合において、化合物は、アミノ基または類似の基によって酸性塩を形成可能である。薬学的に許容される塩基性塩は、構造および官能基が許容する場合、無機塩および／または有機塩から調製することができる。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および／または有機酸から調製されてもよい。例えば、無機酸には、塩酸、二塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。有機酸には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン産、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などが含まれる。１つのバリエーションにおいて記載される方法は、化合物（Ｉ）を塩酸塩または二塩酸塩として利用する。
【０１５９】
この化合物は、Ｒ１が−ＣＨ３であり、Ｒ２が−Ｈであり、そしてＲ３が−ＣＨ３である化学式（１）であり得る。この化合物は、Ｒ１が−ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２−、またはＰｈＣＨ２−によって表され；Ｒ２が−Ｈ、ＰｈＣＨ２−、または６ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり；Ｒ３が−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｂｒである化学式（２）であり得る。この化合物は、Ｒ１がＣＨ３ＣＨ２またはＰｈＣＨ２−であり、Ｒ２が−Ｈであり、そしてＲ３が−Ｈである化学式（２）であり得；またはＲ１が−ＣＨ３であり、Ｒ２がＰｈＣＨ２−であり、Ｒ３が−ＣＨ３である化合物；またはＲ１が−ＣＨ３であり、Ｒ２が６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり、そしてＲ３が−ＣＨ３である化合物；またはＲ１が−ＣＨ３であり、Ｒ２が−Ｈであり、Ｒ３が−Ｈまたは−ＣＨ３である化合物；またはＲ１が−ＣＨ３であり、Ｒ２が−Ｈであり、Ｒ３が−Ｂｒである化合物であり得る。
【０１６０】
本明細書に開示される方法において使用することが可能である文献から公知である化合物には以下の特定の化合物が含まれる：
１．シス（±）２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびその二塩酸；
２．２−エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；
３．２−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；
４．２，８−ジメチル−５−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびその二塩酸塩；
５．２−メチル−５−（２−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびそのセスキ硫酸塩；
６．２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４、５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびその二塩酸塩（ディメボン）；
７．２−メチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；
８．２，８−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびそのメチルヨウ化物；
９．２−メチル−８−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびその塩酸塩
１つのバリエーションにおいて、この化合物は化学式ＡまたはＢの化合物であり、Ｒ１は低級アルキルまたはベンジルから選択され；Ｒ２は水素、ベンジル、および６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−から選択され；そしてＲ３は水素、低級アルキル、またはハロから選択され、またはその任意の薬学的に許容される塩である。別のバリエーションにおいて、Ｒ１は−ＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２−、またはベンジルから選択され；Ｒ２は−Ｈ、ベンジル、または６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−から選択され；そしてＲ３は−Ｈ、−ＣＨ３または−Ｂｒから選択され、またはその任意の薬学的に許容される塩である。別のバリエーションにおいて、この化合物は以下からなる群より選択される：ラセミ混合物または実質的に純粋な（＋）型または実質的に純粋な（−）型としての、シス（±）２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−５−（２−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４、５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；または２−メチル−８−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール、または上記のいずれかの任意の薬学的に許容される塩。１つのバリエーションにおいて、この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は−Ｈであり、そしてＲ３は−ＣＨ３であり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１はＣＨ３ＣＨ２−またはベンジルであり、Ｒ２は−Ｈであり、そしてＲ３は−ＣＨ３であり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はベンジルであり、そしてＲ３は−ＣＨ３であり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり、そしてＲ３は−Ｈであり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は−Ｈであり、そしてＲ３は−Ｈまたは−ＣＨ３であり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。こ���化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は−Ｈであり、そしてＲ３は−Ｂｒであり、またはその任意の薬学的に許容される塩である。この化合物は、化学式ＡまたはＢの化合物であり得、ここで、Ｒ１は低級アルキルまたはアラルキルから選択され、Ｒ２は水素、アラルキルまたは置換ヘテロアラルキルから選択され、そしてＲ３は水素、低級アルキルまたはハロから選択される。
【０１６１】
本発明の系および方法における使用のための化合物は、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその任意の薬学的に許容される塩、例えば、その酸性塩、塩酸塩、または二塩酸塩であり得る。
【０１６２】
ピリド［４，３−ｂ］インドール環において２つの立体中心（化合物（１）の炭素４ａおよび９ｂ）を有する本明細書に開示される任意の化合物は、その立体中心がシス型またはトランス型の化合物である。組成物は、実質的に精製型であるこのような化合物を含んでもよく、例えば、実質的に純粋なＳ，ＳまたはＲ，ＲまたはＳ，ＲまたはＲ，Ｓ化合物の化合物である。実質的に純粋な化合物の組成物は、この組成物が、１５％以下または１０％以下または５％以下または３％以下または１％以下である異なる立体化学型の化合物の不純物を含むことを意味する。例えば、実質的に純粋なＳ，Ｓ化合物の組成物は、この組成物が、１５％以下または１０％以下または５％以下または３％以下または１％以下であるＲ，Ｒ型またはＳ，Ｒ型またはＲ，Ｓ型の化合物を含むことを意味する。この組成物は、このような立体異性体の混合物としての化合物を含んでもよく、ここで、この混合物は、等しい量または等しくない量のエナンチオマー（ｅｎａｎｔｅｏｍｅｒｓ）（例えば、Ｓ，ＳおよびＲ，Ｒ）またはジアステレオマー（例えば、Ｓ，ＳおよびＲ，ＳまたはＳ，Ｒ）であり得る。組成物は、任意の割合の立体異性体の中に、２種または３種または４種のこのような立体異性体の混合物としての化合物を含み得る。ピリド［４，３−ｂ］インドール環構造の中以外に立体中心を有する、本明細書に開示される化合物は、任意の割合のエナンチオマーおよびジアステレオマーを含むがこれらに限定されない、このような化合物のすべての立体化学的バリエーションを意図し、そしてラセミ混合物およびエナンチオマー富化混合物および他の可能な混合物を含む。立体化学が明確に構造を示さない限り、この構造は、描かれた化合物のすべての可能な立体異性体を含むことが意図される。
【０１６３】
文献から化合物１〜９として上記に列挙した化合物は以下の刊行物に詳述されている。シス（±）２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールおよびその二塩酸塩の合成および精神安定特性に関する研究は、例えば、以下の刊行物：Ｙａｋｈｏｎｔｏｖ、Ｌ．Ｎ．、Ｇｌｕｓｈｋｏｖ、Ｒ．Ｇ．、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ．Ａ．Ｇ．Ｎａｔｒａｄｚｅ編、Ｍｏｓｃｏｗ  Ｍｅｄｉｃｉｎａ、１９８３、２３４−２３７頁に記載されている。上記の化合物２、８、および９の合成、およびセロトニンアンタゴニストとしてのそれらの特性に関するデータは、例えば、Ｃ．Ｊ．Ｃａｔｔａｎａｃｈ、Ａ．Ｃｏｈｅｎ＆Ｂ．Ｈ．Ｂｒｏｗｎ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（Ｓｅｒ．Ｃ）１９６８、１２３５−１２４３頁に報告されている。上記の化合物３の合成は、例えば、Ｎ．Ｐ．Ｂｕｕ−Ｈｏｉ、Ｏ．Ｒｏｕｓｓｅｌ、Ｐ．Ｊａｃｑｕｉｇｎｏｎ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９６４、Ｎ  ２、７０８−７１１頁の記事において報告されている。Ｎ．Ｆ．ＫｕｃｈｅｒｏｖａおよびＮ．Ｋ．Ｋｏｃｈｅｔｋｏｖ（Ｇｅｎｅｒａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｒｕｓｓ．）、１９５６、２６：３１４９−３１５４）は、上記の化合物４の合成を記載している。上記の化合物５および６は、Ａ．Ｎ．Ｋｏｓｔ、Ｍ．Ａ．Ｙｕｒｏｖｓｋａｙａ、Ｔ．Ｖ．Ｍｅｌ’ｎｉｋｏｖａによって、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１９７３、Ｎ  ２、２０７−２１２頁において記載されている。化合物７の合成は、Ｕ、Ｈｏｒｌｅｉｎによって、Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．、１９５４、Ｂｄ．８７、ｈｆｔ  ４、４６３−４７２頁において記載されている。Ｍ．ＹｕｒｏｖｓｋａｙａおよびＩ．Ｌ．Ｒｏｄｉｏｎｏｖ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９８１、Ｎ  ８，１０７２−１０頁）。
【０１６４】
本発明のさらなる化合物
１つの局面において、本発明は、（ａ）細胞を活性化するため、細胞の分化を促進するため、細胞の増殖を促進するため、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な量で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療、および（ｂ）薬学的に許容されるキャリアを含む薬学的組成物を提供する。別の局面において、本発明は、（ａ）細胞を活性化するため、細胞の分化を促進するため、細胞の増殖を促進するため、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療、および（ｂ）薬学的に許容されるキャリアを含む薬学的組成物を提供する。
【０１６５】
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的組成物は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療をさらに含む。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的組成物は、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療をさらに含む。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的組成物は、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療をさらに含み、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第３の治療をさらに含む。
【０１６６】
１つの局面において、本発明は、（ａ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療、（ｂ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療、および（ｃ）薬学的に許容されるキャリアを含む薬学的組成物を提供する。１つの局面において、本発明は、（ａ）細胞を含む第１の治療、（ｂ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療、および（ｃ）薬学的に許容されるキャリアを含む薬学的組成物を提供する。
【０１６７】
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的組成物は、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第３の治療をさらに含む。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的組成物は、幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される細胞型を含む。上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞型は、神経幹細胞または神経細胞であり、そして薬学的組成物は、細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞型は神経幹細胞であり、そして薬学的組成物は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。上記の実施形態のいずれかにおいて、神経幹細胞は海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞は、個体への投与の前に、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートされない。
【０１６８】
上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはテトラヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはヘキサヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは化学式：
【０１６９】
【化４】
2010528016.tif 000005
の化合物であり、
ここで、Ｒ１は低級アルキルまたはアラルキルから選択され；Ｒ２は水素、アラルキル、または置換ヘテロアラルキルから選択され；そしてＲ３は、水素、低級アルキル、またはハロから選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、アラルキルはＰｈＣＨ２−であり、そして置換ヘテロアラルキルは６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、またはＰｈＣＨ２−から選択され；Ｒ２はＨ−、ＰｈＣＨ２−、または６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−から選択され；そしてＲ３はＨ−、ＣＨ３−、またはＢｒ−から選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、シス（±）２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−５−（２−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−８−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールからなる群より選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される酸性塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容される塩は塩酸塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩である。
【０１７０】
上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨであり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３ＣＨ２−またはＰｈＣＨ２−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＰｈＣＨ２−であり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり、そしてＲ３はＨ−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＨ−またはＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＢｒ−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、成長因子には、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１，ＦＧＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＧＣＳ−Ｆ、ＧＭＣＳ−Ｆ、または上記の２つ以上の任意の組み合わせが含まれる。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は逐次的に投与される。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は同時に投与される。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は同じ容器に含まれている。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は別々の容器に含まれている。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は少なくとも相加的な効果を有する。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は相乗的な効果を有する。
【０１７１】
第２のまたは追加の治療における使用のための化合物
適用可能である場合、方法は、（ｉ）治療化合物および／または細胞、ならびに（ｉｉ）１種以上の成長因子および／または抗細胞死化合物である、１種以上の第２のまたは追加の／次の治療を利用してもよい。
【０１７２】
成長因子
本明細書に記載される方法、組成物、およびキットにおける使用のための化合物には、成長因子（例えば、血管内皮細胞成長因子および／または栄養成長因子）、そのフラグメント、およびそれらの効果を模倣する化合物が含まれ得る。成長因子の例には、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５、ＨＧＦ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβファミリーメンバー、ニュートロフィン−３、ＰＤＧＦ、ＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）、ＥＧＦファミリーメンバー、ＩＧＦ、インスリン、ＢＭＰ、Ｗｎｔ、ヘッジホッグ、ヘレグリン、これらのフラグメント、およびこれらの模倣物が含まれる。
【０１７３】
血管内皮細胞成長因子
本明細書に記載される方法、組成物、およびキットにおける使用のための化合物には、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）、そのフラグメント、およびそれらの効果を模倣する化合物が含まれ得る。例示的なＶＥＧＦ分子には、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ２０６、他の遺伝子アイソフォーム、およびこれらのフラグメントが含まれる（Ｓｕｎ  Ｆ．Ｙ．、Ｇｕｏ  Ｘ．「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ」Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．，２００５，７９（１−２）：１８０−４）。ある実施形態において、ＶＥＧＦフラグメントは、全長ＶＥＧＦからの少なくとも２５個、５０個、７５個、１００個、１５０個、または２００個の連続するアミノ酸を含み、対応する全長ＶＥＧＦタンパク質の活性の少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％を有する。
【０１７４】
栄養成長因子
本明細書に記載される方法、組成物、およびキットにおける使用のための化合物には、栄養成長因子（例えば、ＩＧＦ−１、ＦＧＦ（酸性および塩基性）、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＧＣＳ−Ｆ、および／またはＧＭＣＳ−Ｆ）、そのフラグメント、およびそれらの効果を模倣する化合物が含まれ得る。ＧＣＳ−ＦおよびＧＭＣＳ−Ｆは新たな神経細胞増殖を刺激する。栄養成長因子は細胞増殖を刺激する可能性があるので、これらは、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態を改善、安定化、除去、遅延、または予防することが予想される。ディメボンなどの水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールと栄養成長因子の組み合わせは、新たな細胞増殖の刺激に伴って見られるアポトーシスの速度を減少する可能性がある。栄養成長因子の効果を模倣する例示的な化合物は、キサリプロデン（Ｘａｌｉｐｒｏｄｅｎ）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）［ＳＲ  ５７７４６Ａ、ｘａｌｉｐｒｏｄｅｎｅ；Ｘａｐｒｉｌａ］である。
【０１７５】
抗細胞死化合物
本明細書に記載される方法、組成物、およびキットにおける使用のための化合物には、抗細胞死化合物（例えば、抗アポトーシス化合物）が含まれ得る。例示的な抗細胞死化合物には、抗アポトーシス化合物、例えば、ＩＡＰタンパク質、Ｂｃｌ−２タンパク質、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｔｒｋ受容体、Ａｋｔ、ＰＩ３キナーゼ、Ｇａｂ、Ｍｅｋ、Ｅ１Ｂ５５Ｋ、Ｒａｆ、Ｒａｓ、ＰＫＣ、ＰＬＣ、ＦＲＳ２、ｒＡＰｓ／ＳＨ２Ｂ、Ｎｐ７３、これらのフラグメント、およびこれらの模倣物が含まれる。
【０１７６】
治療の投与、製剤、および投薬
明確に他のことが示されない限り、単独治療または組み合わせ治療としての、本発明における使用のための治療（例えば、以下のいずれか：（１）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩；（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（３）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（６）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、または（７）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、および（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ）は、任意の利用可能な投薬経路によって、任意の適切な剤型で、個体に投与されてもよい。１つのバリエーションにおいて、治療は、従来的な即時放出剤型として個体に投与される。治療が組み合わせ治療である場合、本発明はまた、組み合わせの少なくとも１つの成分が従来的な即時放出剤型として個体に投与されるような治療の投与を含む。１つのバリエーションにおいて、治療は、持続放出型もしくは持続放出系の一部として、または制御放出型として、個体に投与される。治療が組み合わせ治療である場合、本発明はまた、組み合わせの少なくとも１つの成分が持続放出型もしくは持続放出系の一部として、または制御放出型として個体に投与されるような治療の投与を含む。
【０１７７】
本発明における使用のための上記に記載されたような治療、例えば、上記に記載された治療（１）〜（７）のいずれかは、即時放出であるかまたは持続放出であるかに関わらず、任意の利用可能な送達経路のために製剤化されてもよく、これには、対応する経路による送達のための経口、粘膜（例えば、鼻、舌下、膣、口腔、または直腸）、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、皮下、または静脈内）、くも膜下、眼内、局所的、または経皮的送達型が含まれる。治療は、適切なキャリアとともに製剤化して送達型を提供してもよく、これは、以下を含むがこれらに限定されない持続放出型であり得るが、これに限定されない：錠剤、カプレット、カプセル（例えば、硬ゼラチンカプセルおよび軟ゼラチンカプセル）、カシェー、トローチ、ロゼンジ、ガム、分散液、坐剤、軟膏、パップ（湿布）、ペースト、散剤、ドレッシング、クリーム、溶液、パッチ、エアロゾル（例えば、鼻スプレーまたは吸入剤）、ゲル、懸濁液（例えば、水系または非水系液体懸濁液、水中油エマルジョン、または油中水エマルジョン）、溶液、およびエリキシル。同じかまたは異なる投与の経路および送達型が、組み合わせ治療の成分のために使用されてもよい。
【０１７８】
ある実施形態において、一定用量の治療は、１日１回、１日２回、１日３回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療は、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、またはそれ以上の頻度で投与される。ある実施形態において、一定用量の治療は、１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、またはさらに長い間隔で、制御放出製剤として投与される。ある実施形態において、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量（例えば、経口投与のための用量）の治療化合物が投与される。ある実施形態において、治療化合物は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の用量で、脳への注入（例えば、くも膜下腔内または脳室内投与）によって直接的に投与される。ある実施形態において、脳内の徐放放出ポンプまたは他のデバイスが、本明細書に記載される用量のいずれかを投与するために支給される。
【０１７９】
適用可能である場合、組み合わせ治療の１つ以上の成分の組み合わせ投与は、別々の製剤または単一の薬学的製剤または任意の順番の逐次投与を使用する、組み合わせ成分の同時投与または併用投与を含んでもよい。併用投与のある実施形態において、組み合わせ治療の１つの成分の投与は、組み合わせ治療の別の成分の投与と重複している。他の実施形態において、組み合わせ治療の成分の投与は同時ではない。例えば、ある実施形態において、組み合わせ治療の治療化合物の投与は、治療の他の成分（例えば、本明細書に記載される細胞および／または成長因子および／または抗細胞死化合物）が投与される前に終了する。ある実施形態において、治療の他の成分の投与は、治療化合物が投与される前に終了する。逐次投与のために、組み合わせの両方（またはすべての）成分がそれらの生物学的活性を同時に発揮する時間の長さが好ましく存在する。従って、治療化合物は、治療の別の成分の投与の前、その間、またはその後に投与されてもよい。種々の実施形態において、治療化合物の少なくとも１つの投与と、組み合わせ治療の別の成分の少なくとも１つの投与の間のタイミングは、約１５分間よりも長い間隔、例えば、約２０分間、約３０分間、約４０分間、約５０分間、もしくは約６０分間いずれかよりも長い間隔、または約１時間〜約２４時間、約１時間〜約４８時間、約１日間〜約７日間、約１週間〜約４週間、約１週間〜約８週間、約１週間〜約１２週間、約１ヶ月間〜約３ヶ月間、もしくは約１ヶ月間〜約６ヶ月間のいずれかよりも長い間隔である。別の実施形態において、組み合わせ治療の治療化合物および別の成分は、単一の製剤中または別々の製剤中で、個体に併用投与される。
【０１８０】
送達型中の各治療の量は任意の有効量であり得る。治療送達型中に含まれる各治療化合物の量は、約１０ｎｇ〜約１，５００ｍｇの治療化合物またはそれ以上であり得るが、これに限定されない。
【０１８１】
１つのバリエーションにおいて、送達型は、治療化合物の１日の用量が約３０ｍｇ未満の化合物であるような治療化合物の量を含む。ある実施形態において、送達型は、約１ｎｇ／日、１０ｎｇ／日、１００ｎｇ／日、２５０ｎｇ／日、５００ｎｇ／日、１μｇ／日、５μｇ／日、１０μｇ／日、２０μｇ／日、２５μｇ／日、４０μｇ／日、８０μｇ／日、１２５μｇ／日、１６０μｇ／日、３２０μｇ／日、または１２０ｍｇ／日の治療化合物の用量（例えば、経口用量のための用量）を含む。単独または組み合わせ治療の治療化合物の剤型を含む治療計画は、即時放出または持続放出系に関わらず、約０．１から約１０ｍｇ／ｋｇ体重の間の用量で、少なくとも１日１回、治療効果を達成するために必要とされる時間の間、個体に治療化合物を投与する工程を包含する。他のバリエーションにおいて、本明細書に記載される治療化合物の１日の用量（または他の投薬頻度）は以下である：約０．１から約８ｍｇ／ｋｇの間；約０．１から約６ｍｇ／ｋｇの間；または約０．１から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約０．１から約２ｍｇ／ｋｇの間；または約０．１から約１ｍｇ／ｋｇの間；または約０．５から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約１から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約２から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約４から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約６から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約８から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約０．１から約５ｍｇ／ｋｇの間；または約０．１から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約０．５から約５ｍｇ／ｋｇの間；または約１から約５ｍｇ／ｋｇの間；または約１から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約２から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約１から約３ｍｇ／ｋｇの間；または約１．５から約３ｍｇ／ｋｇの間；または約２から約３ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００１から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００１から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００１から約２ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０１から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０１ｍｇ／ｋｇから約２ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００５から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００５から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００５から約３ｍｇ／ｋｇの間；または約０．００５から約２ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０５から約１０ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０５から約８ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０５から約４ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０５から約３ｍｇ／ｋｇの間；または約０．０５から約２ｍｇ／ｋｇの間；または約１０ｋｇから約５０ｋｇの間；または約１０から約１００ｍｇ／ｋｇの間；または約１０から約２５０ｍｇ／ｋｇの間；または約５０から約１００ｍｇ／ｋｇの間；または約５０から約２００ｍｇ／ｋｇの間；または約１００から約２００ｍｇ／ｋｇの間；または約２００から約５００ｍｇ／ｋｇの間；または約１００ｍｇ／ｋｇより多い投薬量；または約５００ｍｇ／ｋｇより多い投薬量。ある実施形態において、ディメボンなどの治療化合物の１日の投薬量は、成長因子または抗細胞死化合物である第２の化合物を伴う組み合わせ治療として投与され、例えば、各投与される治療剤の一日の投薬量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ未満であり���これは、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、または約０．００１ｍｇ／ｋｇの一日の投薬量であり得るがこれらに限定されない。治療が成長因子および／または抗細胞死化合物を含む場合、上記の投薬量は、治療化合物と同様に、成長因子および／または抗細胞死化合物に適用されてもよい。
【０１８２】
組み合わせ治療（同時投与と逐次投与の両方について）を含むある実施形態において、第１の治療（例えば、ディメボンなどの治療化合物）および第２の治療（例えば、成長因子および／または抗細胞死化合物および／または細胞）は所定の比率で投与される。例えば、ある実施形態において、第２の治療に対する第１の治療（例えば、ディメボンなどの治療化合物）の重量比は、約１対１である。ある実施形態において、この重量比は、約０．００１対約１と約１０００対約１の間、または約０．０１対約１と１００対約１の間であり得る。ある実施形態において、第１の治療（ディメボンなどの治療化合物）対第２の治療の重量比は、約１００：１、５０：１、３０：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、および１：１のいずれか未満である。ある実施形態において、第１の治療対第２の治療の重量比は、約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、３０：１、５０：１、１００：１のいずれかより大きい。他の比率もまた意図される。
【０１８３】
本明細書上記に記載される、治療（１）〜（７）などの治療は、望ましい期間、例えば、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１２ヶ月、またはそれ以上の間、有効な投薬計画に従って個体に投与されてもよい。１つのバリエーションにおいて、治療は、個体に寿命の期間の間、毎日または断続的なスケジュールで投与される。組み合わせ治療の成分は、同じかまたは異なる期間の間投与されてもよい。
【０１８４】
本明細書に開示される任意の組み合わせを含む、本明細書に記載される治療（１）〜（７）などの治療のための投薬頻度は、１週間に約１回の投薬であり得る。投薬頻度は１日に約１回の投薬であり得る。投薬頻度は１週間に約１回より多くの投薬であり得る。投薬頻度は１日に３回未満の投薬であり得る。投薬頻度は１日に約３回未満の投薬であり得る。投薬頻度は１週間に約３回の投薬であり得る。投薬頻度は１週間に約４回の投薬であり得る。投薬頻度は１週間に約２回の投薬であり得る。投薬頻度は１週間に約１回より多くであるが、ほぼ毎日未満の投薬であり得る。投薬頻度は１ヶ月に約１回の投薬であり得る。投薬頻度は１週間に約２回の投薬であり得る。投薬頻度は１ヶ月に約１回より多くであるが、１週間に約１回未満の投薬であり得る。投薬頻度は断続的であり得る（例えば、７日間毎日の投薬、次に７日間投薬なし、任意の１４日間の期間の反復、例えば、約２ヶ月、約４ヶ月、約６ヶ月以上）。投薬頻度は連続的であり得る（例えば、数週間連続して１週間に１回の投薬）。いずれの投薬頻度も、本明細書に記載される任意の投薬量とともに本明細書に記載される任意の治療を利用でき、例えば、投薬頻度は、０．１ｍｇ／ｋｇ未満または約０．０５ｍｇ／ｋｇ未満の治療化合物ならびに成長因子および／または抗細胞死化合物および／または細胞である、第２のまたは次の治療の１日１回の投薬であり得る。
【０１８５】
同じかまたは異なる投薬頻度は、組み合わせ治療における成分のために使用することができる。別々に投与される場合、治療化合物ならびに成長因子および／または抗細胞死化合物および／または細胞は、異なる投薬の頻度または間隔で投与することができる。例えば、治療化合物は、毎週投与することができるが、一方、成長因子および／または抗細胞死化合物および／または細胞は、より高頻度でまたはより低頻度で投与することができる。
【０１８６】
薬学的製剤
本明細書に記載される治療、例えば、本明細書に記載される治療（１）〜（７）は、活性成分としての治療の成分を、当該分野において公知である薬理学的に許容されるキャリアとともに組み合わせることによって、製剤、例えば、薬学的製剤の調製において使用することができる。系の治療型（例えば、経皮パッチ対経口錠剤）に依存して、キャリアは種々の型であってもよい。加えて、薬学的調製物は、保存剤、可溶化剤、安定剤、再湿潤剤（ｒｅ−ｗｅｔｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、乳化剤（ｅｍｕｌｇａｔｏｒｓ）、甘味料、色素、調整剤、浸透圧の調整のための塩、緩衝剤、コート剤、または抗酸化剤を含んでもよい。ある実施形態において、薬学的組成物（例えば、細胞を含有する組成物）は、生理食塩水（例えば、ｐＨ＝７．０に緩衝化した生理食塩水）、脱イオン水（例えば、ｐＨ＝７．０まで脱イオン化）、またはＨＥＰＥＳ緩衝液（例えば、ｐＨ＝７．０のＨＥＰＥＳ緩衝液）を含む。組み合わせ治療を含む調製物はまた、価値のある治療特性を有する他の物質を含んでもよい。組み合わせ治療の成分は、一緒にまたは別々に投与される、同じかまたは異なる製剤の一部として調製することができる。治療型は、通常の標準用量によって表されてもよく、公知の薬学的方法によって調製されてもよい。組み合わせ治療の同時投与される成分のいずれかの適切な用量は、成分の組み合わせ作用（例えば、相加的効果または相乗的効果）に起因して、任意に低減してもよい。適切な製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第２０版（２０００）において見出すことができ、これは参照により本明細書に援用される。
【０１８７】
１つのバリエーションにおいて、治療（単独または組み合わせ）は、単位剤型として提供される。本発明は、治療（１）〜（７）のいずれかの単位剤型を含む。治療が細胞および治療化合物を要求するある実施形態において、１つ以上の細胞が、約１ｐＭ〜約５ｍＭ、約１０ｐＭ〜約５００μＭ、約５０ｐＭ〜約１００μＭ、約０．２５ｎＭ〜約２０μＭ、約１ｎＭ〜約５μＭ、約６ｎＭ〜約８００ｎＭ、約３０ｎＭ〜約１６０ｎＭの範囲の濃度の治療化合物（例えば、生理食塩水中のディメボン）とともに組み合わせられ得る。治療化合物との細胞のエキソビボインキュベーションのための種々の実施形態において、生理食塩水中のディメボンなどの治療化合物は、約０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．２５ｎＭ、１．２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３１．２５ｎＭ、１５６．２５ｎＭ、７８１ｎＭ、３．９０５μＭ、１９．５３０μＭ、９７．６６０μＭ、または４８８．２８０μＭの濃度で細胞に加えられる。
【０１８８】
キット
本発明は、以下を含むキットをさらに提供する：（ａ）本明細書に記載されるような治療、例えば、以下のいずれか：（１）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩；（２）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、ならびに（ｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（３）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、（４）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞の組み合わせ、（５）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞、ならびに（ｉｉｉ）成長因子および／または抗細胞死化合物の組み合わせ、（６）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）の組み合わせ、または（７）（ｉ）治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩、（ｉｉ）細胞（治療化合物もしくはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートしていない細胞など）、および（ｉｉｉ）成長因子および／もしくは抗細胞死化合物の組み合わせ；ならびに（ｂ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書。これらのキットは、本明細書に開示された治療のいずれか、例えば、治療（１）〜（７）および使用のための指示書を利用してもよい。１つのバリエーションにおいて、これらのキットはディメボンなどの１種以上の治療化合物を利用する。これらのキットは、本明細書に記載された任意の１つ以上の用途のために使用してもよく、従って、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態の治療、その予防、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延のための指示書を含んでもよく、この疾患または状態には以下が含まれるがこれらに限定されない：神経系の適応症、神経変性疾患、アルツハイマー病、加齢関連脱毛、加齢関連体重減少、加齢関連視覚障害、ハンチントン病、統合失調症、イヌ認知障害症候群（ＣＣＤＳ）、神経細胞死媒介性眼疾患、黄斑変性、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、レヴィー小体認知症、メンケス病、ウィルソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ファール病、脳循環を含む急性もしくは慢性の障害、例えば、脳卒中もしくは脳内出血発作、加齢関連記憶障害（ＡＡＭＩ）、または軽度認知障害（ＭＣＩ）。１つのバリエーションにおいて、このキットは、ディメボンを利用する。このキットの治療は、任意の許容される型で製剤化されてもよい。例えば、キット中に含まれる化合物は、凍結乾燥粉末として、単回使用アンプルとしてなどで緩衝液に供給されてもよい。ある実施形態において、このキットは、組み合わせ治療の成分が一緒にまたは別々に、例えば、別々の容器、バイアルなどに充填されている組み合わせ治療を含む。
【０１８９】
種々の実施形態において、キットは、成長因子（例えば、ＶＥＧＦタンパク質または栄養成長因子）および／または抗細胞死化合物の量または活性を増加させる化合物を含む。ある実施形態において、１つ以上のこれらの活性は、処理前の同じ被験体における対応する活性と比較して、または組み合わせ治療を受けていない他の被験体における対応する活性と比較して、少なくともまたは約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％変化する。
【０１９０】
キットは、一般的に、適切なパッケージングを含む。これらのキットは、本明細書に記載されている任意の化合物を含む１つ以上の容器を含み得る。適切なパッケージングには、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージング（例えば、プラスチックバッグ）などが含まれるがこれらに限定されない。各成分（１つより多くの成分が存在する場合）は、別々の容器にパッケージングすることができ、またはある成分は、交差反応性および使用期限が許容される場合に、１つの容器中で合わせることができる。キットは、緩衝剤などの付加的な成分を任意で提供してもよい。
【０１９１】
キットは、一連の指示書、一般的には、書面による指示書を任意に含むが、本発明の方法の成分の使用（例えば、神経系の適応症の治療、その予防、および／またはその発症の遅延、および／またはその発生の遅延）に関連して、指示書を含む電子保存媒体（例えば、磁気ディスクまたは光ディスク）もまた許容可能である。キットに含まれる指示書は、一般的には、成分、および個体へのそれらの投与に関する情報、例えば、投薬量、投薬スケジュール、および投与の経路に関する情報を含む。
【０１９２】
容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、またはサブユニット用量であり得る。例えば、長時間、例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、またはそれ以上の間、個体の有効な治療を提供するために、治療剤、ならびに／または成長因子および／または抗細胞死化合物および／または細胞である第２の化合物の十分な投薬量を含むキットが提供されてもよい。キットはまた、治療の複数の単位剤型、および使用のための指示書を含んでもよく、薬局（例えば、病院の薬局および調剤薬局）における保存および使用のために十分な量でパッケージされてもよい。
【０１９３】
本発明の付加的なキット
１つの局面において、本発明は以下を含むキットを提供する：（ａ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な量で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療、ならびに（ｂ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その進行の緩徐化、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書。別の局面において、本発明は、本発明は以下を含むキットを提供する：（ａ）細胞の活性化、細胞の分化の促進、細胞の増殖の促進、または上記の２つ以上の任意の組み合わせのために十分な条件下で、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートした細胞を含む第１の治療、ならびに（ｂ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その進行の緩徐化、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書。１つの実施形態において、キットは、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールもしくはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療をさらに含む。１つの実施形態において、キットは、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療をさらに含む。１つの実施形態において、キットは、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールもしくはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療をさらに含み、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第３の治療をさらに含む。
【０１９４】
１つの局面において、本発明は以下を含むキットを提供する：（ａ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第１の治療、（ｂ）成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第２の治療、ならびに（ｃ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その進行の緩徐化、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書。１つの局面において、本発明は以下を含むキットを提供する：（ａ）細胞を含む第１の治療、（ｂ）水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩を含む第２の治療、および（ｃ）１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益であるような状態の治療、その予防、その進行の緩徐化、その発症の遅延、および／またはその発生の遅延における使用のための指示書。１つの実施形態において、キットは、成長因子および／または抗細胞死化合物を含む第３の治療をさらに含む。
【０１９５】
上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞型は、幹細胞、神経幹細胞、非神経細胞、および神経細胞からなる群より選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞型は神経幹細胞または神経細胞であり、ここで、第１の治療および／または第２の治療は、細胞の１つ以上の軸索の長さを増加させる。上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞型は神経幹細胞であり、第１の治療および／または第２の治療は、神経幹細胞の神経細胞への分化を促進する。上記の実施形態のいずれかにおいて、神経幹細胞は、海馬ニューロン、皮質ニューロン、または脊髄運動ニューロンに分化する。上記の実施形態のいずれかにおいて、細胞は、個体への投与の前に、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩とともにインキュベートされていない。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはテトラヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールはヘキサヒドロピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、化学式
【０１９６】
【化５】
2010528016.tif 000006
の化合物であり、
ここで、Ｒ１は低級アルキルまたはアラルキルから選択され；Ｒ２は水素、アラルキル、または置換ヘテロアラルキルから選択され；そしてＲ３は、水素、低級アルキル、またはハロから選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、アラルキルはＰｈＣＨ２−であり、そして置換ヘテロアラルキルは６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、またはＰｈＣＨ２−から選択され；Ｒ２はＨ−、ＰｈＣＨ２−、または６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−から選択され；そしてＲ３はＨ−、ＣＨ３−、またはＢｒ−から選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、シス（±）２，８−ジメチル−２，３，４，４ａ，５，９ｂ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−ベンジル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−５−（２−メチル−３−ピリジル）エチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２−メチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；２，８−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール；および２−メチル−８−ブロモ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールからなる群より選択される。
【０１９７】
上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドールである。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される酸性塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、薬学的に許容される塩は塩酸塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールは、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨであり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３ＣＨ２−またはＰｈＣＨ２−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＰｈＣＨ２−であり、そしてＲ３はＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−であり、そしてＲ３はＨ−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は６−ＣＨ３−３−Ｐｙ−（ＣＨ２）２−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＨ−またはＣＨ３−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はＣＨ３−であり、Ｒ２はＨ−であり、そしてＲ３はＢｒ−である。上記の実施形態のいずれかにおいて、成長因子には、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１，ＦＧＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＧＣＳ−Ｆ、ＧＭＣＳ−Ｆ、または上記の２つ以上の任意の組み合わせが含まれる。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は逐次的に投与される。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は同時に投与される。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は同じ薬学的組成物中に含まれている。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は別々の薬学的組成物中に含まれている。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は少なくとも相加的な効果を有する。上記の実施形態のいずれかにおいて、第１の治療および第２の治療は相乗的な効果を有する。
【０１９８】
以下の実施例は本発明を例証するために提供され、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１９９】
実施例１  ディメボンとともに培養した神経細胞の神経突起伸長の増加
ディメボン、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）−エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩を、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールの代表的化合物として使用した。
【０２００】
【化６】
2010528016.tif 000007
式中、Ｒ１およびＲ２はメチルであり、そして
Ｒ２は２−（６−メチル−３−ピリジル）−エチルである。
【０２０１】
ディメボンは、皮質ニューロン、海馬ニューロン、および脊髄運動ニューロンの神経突起伸長を刺激するその能力を決定するために試験した。同様の方法は、海馬ニューロンなどの他の型の神経細胞における神経突起伸長を刺激するディメボンの能力を試験するために使用されてもよい。
【０２０２】
皮質ニューロンおよび脊髄運動ニューロンを単離するために、標準的な方法を使用した。初代ラット皮質ニューロンの単離のために、妊娠１７日目の妊娠ラットからの胎児脳をＬｅｉｂｏｖｉｔｚ培地（Ｌ１５；Ｇｉｂｃｏ）中で調製した。皮質を解剖し、髄膜を取り出した。トリプシン（Ｇｉｂｃｏ）を使用して、ＤＮＡｓｅ  Ｉを用いて、３７℃で３０分間、皮質ニューロンを分離させた。細胞は、１０％ウシ胎仔血清（「ＦＢＳ」）（Ｇｉｂｃｏ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（「ＤＭＥＭ」；Ｇｉｂｃｏ）中、１０ｍＬピペットの中で粉砕し、そして室温で１０分間、３５０×ｇにて遠心分離した。細胞は、２％Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ）および０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）を補充した神経基本（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地に懸濁した。細胞は、３７℃、５％ＣＯ２・９５％空気の雰囲気中にて、ポリ−Ｌ−リジンコートしたプレートのウェルあたり３０，０００細胞で維持した。接着後、ビヒクル対照またはディメボンを異なる濃度で培地に加えた。ＢＤＮＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）は、神経突起伸長の陽性対照として使用した。処理後、培養物をリン酸緩衝化生理食塩水（「ＰＢＳ」；Ｇｉｂｃｏ）中で洗浄し、そして、グルタルアルデヒド２．５％のＰＢＳ中で固定した。３日間の伸張後、細胞を固定した。神経突起を有する細胞の何枚かの写真（〜８０枚）を条件毎にカメラを用いて撮影した。長さ測定は、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ（Ｆｒａｎｃｅ）からのソフトウェアを使用する写真の分析によって行った。結果は、平均（ｓ．ｅ．ｍ．）として表現した。データの統計学的分析は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して実施した。
【０２０３】
海馬ニューロンを単離するために、妊娠１９日目の雌性ラットを、頸椎脱臼によって屠殺し、胎仔を子宮から取り出した。これらの脳を取り出し、氷冷したＬｅｉｂｏｖｉｔｚ（Ｌ１５、Ｇｉｂｃｏ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の培地中に配置した。髄膜を、注意深く取り出し、海馬を解剖した。海馬ニューロンを、ＤＮＡｓｅ  Ｉ（Ｒｏｃｈｅ；Ｍｅｙｌａｎ）の存在下で、３７℃で３０分間のトリプシン処理（トリプシン−ＥＤＴＡ；Ｇｉｂｃｏ）によって解離させた。反応は、１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）細胞培養培地の添加によって停止した。懸濁物を、１０ｍｌピペットを用いて、針シリンジ２１Ｇを使用して粉砕し、３５０×ｇで１０分間、室温にて遠心分離した。得られたペレットを、２％  Ｂ２７補充物（Ｇｉｂｃｏ）および２ｍＭ  グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）を補充した神経基本（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地（Ｇｉｂｃｏ）を含む培養培地に再懸濁する。生存細胞を、トリパンブルー排除試験（Ｓｉｇｍａ）を使用して、Ｎｅｕｂａｕｅｒサイトメーターで計数し、ポリ−Ｌ−リジンでプレコートしたペトリディッシュ（Ｎｕｎｃ）あたり３０，０００細胞に基づいて播種した。細胞を２時間接着させ、加湿インキュベーター中で、３７℃にて、５％ＣＯ２・９５％空気の雰囲気で維持した。接着後、ビヒクル対照またはディメボンを、様々な濃度で培地に加えた。ＢＤＮＦ（１．８５ｎＭ）は、神経突起伸長の陽性対照として使用した。処理後、培養物はリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）中で洗浄し、グルタルアルデヒド２．５％のＰＢＳ中で固定した。３日間の伸長後、細胞を固定した。神経突起を有し、いかなる分岐も有さない細胞の何枚かの写真（〜８０枚）を、条件毎に、顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、対物４０×）に固定したカメラ（Ｃｏｏｌｐｉｘ  ９９５；Ｎｉｋｏｎ）を用いて撮影した。長さ測定は、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ（Ｆｒａｎｃｅ）からのソフトウェアを使用する写真の分析によって行った。結果は、平均（ｓ．ｅ．ｍ．）として表現した。データの統計学的分析は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して実施した。適用可能な場合、複数の対比較のためにＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定を使用した。有意さのレベルはｐ≦０．０５に設定した。
【０２０４】
図１は、初代ラット皮質ニューロンの神経突起伸長についての用量応答曲線である。低濃度（すなわち、ピコモル濃度（ｐＭ）およびナノモル濃度（ｎＭ））のディメボンは、初代ラット皮質ニューロンの神経突起伸長を刺激した。図２Ａ〜２Ｃは、ビヒクル対照（生理食塩水）（図２Ａ）、０．１４ｎＭ  ディメボン（図２Ｂ）、または陽性対照ＢＤＮＦ（図２Ｃ）で処理した初代ラット皮質ニューロンの神経突起伸長の代表的な画像である。
【０２０５】
図３および４は、それぞれ、初代ラット海馬ニューロンおよび初代ラット脊髄運動ニューロンの神経突起伸長についての用量応答曲線である。ピコモル濃度およびナノモル濃度のディメボンが、これらの神経細胞において神経突起伸長を刺激した。
【０２０６】
初代海馬ニューロンを使用する、神経突起伸長に対するディメボン（１００ｎＭ）の効果を、神経突起の長さ（対照の％で表現）および神経細胞あたりの神経突起の数（図５Ｂ）を測定することによって評価した。ビヒクル、ディメボン、およびＢＤＮＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）の効果を、２４時間、４８時間、および７２時間のインキュベーション後に決定した。ディメボンは、ビヒクル処理と比較した場合に、神経突起の長さ、および神経細胞あたりの神経突起の数を増大した。これらの終点に対するディメボンの効果は、ＢＤＮＦを用いて得られた効果に匹敵するものであった。
【０２０７】
実施例２．ディメボンを投与したラットにおける神経発生の増加
ディメボン、２，８−ジメチル−５−（２−（６−メチル−３−ピリジル）−エチル）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール二塩酸塩を、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールの代表的な化合物として使用した。ディメボンは、インビボで神経発生を増大させるその能力を決定するために試験した。特に、健常ラットの脳における神経発生（例えば、海馬神経発生）を促進するディメボンの能力を決定した。
【０２０８】
ＷｉｓｔａｒラットはＣｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒまたはＨａｒｌａｎ  Ｗｉｎｋｅｌｍａｎｎ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。雄性ラットは動物集団で到着時に約３ヶ月齢であった。標準化された条件下で、かつオーストリア政府の科学省の動物保護規則に従い、動物は、動物施設の中で維持した。体重の記録を持続した。動物は、任意の実験操作の前の少なくとも１週間、順化させた。群あたり１２匹のラットを、１２時間の明／暗サイクルで維持した。動物の損失を補償するために、３匹のバックアップ動物を維持した。全てのラットは、ケージあたり４匹の群で収容し、食餌および水に自由に接近させた。
【０２０９】
ラットは、５−ブロモ−２−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ、Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ９２８５、５０ｍｇ／ｋｇ体重（ｂ．ｗ．））および（ｉ）ディメボン、１０ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｗ．／１日２回；（ｉｉ）ディメボン、３０ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｗ．／１日２回；（ｉｉｉ）ディメボン、６０ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｗ．／１日２回；または（ｉｖ）０．２ｍＬ  ビヒクル（生理食塩水）、１日２回のいずれかを腹腔内（ｉ．ｐ．）で受容した４つの異なる処理群に割り当てた。チミジンの合成ヌクレオシドアナログであるＢｒｄＵによる処理は、脳などの生きている組織中で増殖している細胞を検出するために一般的に使用される。ディメボンおよびビヒクルは、０．２ｍＬの量で１日に２回、経口投与する。ＢｒｄＵは１日おきに投与する。毎日のディメボンまたはビヒクル処理は、ＢｒｄＵ処理の数分前に実施した。１４日目に、動物は、最後のディメボン処理の４時間後、かつ最後のＢｒｄＵ処理の１日後に屠殺した。希釈したディメボンは毎日新鮮に調製した。
【０２１０】
屠殺の際に、標準的な麻酔を使用して、鎮静させた。リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、続いてパラホルムアルデヒド／ＰＢＳを用いる経心臓的灌流後、各ラットからの脳を注意深く取り出し、４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ中で後固定を１時間行い、凍結防止のために１５％スクロースに移し、そして液体イソペンタン中で瞬間凍結させた。脳は、低温切断まで−８０℃で保存した。
【０２１１】
脳は、クライオトーム（ｃｒｙｏｔｏｍｅ）を使用して矢状に切断し、染色するまで−２０℃に保存した。５つの層を、層毎に２０マイクロメートルの１０個の切片に切断し、１００マイクロメートルの層間の薄片の隙間が存在した。標準的なＣｒｅｓｙｌ−Ｖｉｏｌｅｔｔ染色を、動物あたり２つの連続する薄片上で実施した。ＢｒｄＵ免疫組織化学は、細胞分裂の形態学的な概観を提供するために定量化した。
【０２１２】
ＢｒｄＵ陽性細胞／神経細胞の評価のために、切片は、マウス抗神経細胞核（Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｎｕｃｌｅｉ）（ＮｅｕＮ）モノクローナル抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）および抗ＢｒｄＵ（Ａｂｅａｍ）との二重インキュベーションで処理した。層あたり１つの切片は、マウス抗神経核（ＮｅｕＮ）モノクローナル抗体１：８００（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｈｏｆｈｅｉｍ．、Ｇｅｒｍａｎｙ）および抗ＢｒｄＵ（ＢｒｄＵに対するヒツジポリクローナル）１：５００（Ａｂｅａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を用いる３日間の二重インキュベーションで処理した。二次抗体は、Ｃｙ−３結合体化純粋アフィンヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）１：２００（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）およびロバ抗ヒツジＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）１：１００（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）のＣｙ２結合体化純粋アフィンＦ（ａｂ’）２フラグメントであった。手短に述べると、抗ＮｅｕＮ抗体を４℃で一晩インキュベートし、翌日、Ｃｙ３抗体を室温で１時間インキュベートし、続いて、抗ＢｒｄＵ抗体を４℃で一晩、Ｃｙ２抗体を室温で１時間インキュベートした。ＢｒｄＵインキュベーションの前に細胞表面を開くために、切片を、２Ｎ  ＨＣｌで、４０℃で１５分間処理し、次いで、メタノール混液（６０ｍｌメタノール、２ｍｌ  Ｈ２Ｏ２、および０．６ｍｌ  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ）中で２０分間洗浄して、内因性のペルオキシダーゼをブロックした。Ｎｉｓｓ１染色を総括的染色として使用した。
【０２１３】
皮質および海馬を含む矢状薄片のタイル状画像を２００倍の倍率で記録した。各単独の画像は、ソフトウェア制御された（ＳｔａｇｅＰｒｏ）自動テーブルを備えたＮｉｋｏｎＥ８００顕微鏡に装着されたＰＣＯ  ＰｉｘｅｌＦｌｙカメラを使用した。蛍光色、ＮｅｕＮのための赤色と、ＢｒｄＵのための緑色の両方の蛍光色が別々に記録された。定量化のために画像を結合した。評価された変数には、領域の面積、ＢｒｄＵ陽性細胞の絶対数、ＢｒｄＵ陽性神経細胞の数が含まれ、そして、後者は、測定領域に関して２つの値を有する。評価は、全海馬、とりわけ、歯状回および脳室下帯に集中している。
【０２１４】
図６Ａ、６Ｂ、７Ａ、および７Ｂに図示されているように、ディメボン処理は、海馬および歯状回におけるＢｒｄＵ染色細胞の総数を増加し（それぞれ、図６Ａおよび７Ａ）、脳のこれらの同じ領域においてＢｒｄＵ染色神経細胞の総数を増加する（図６Ｂおよび７Ｂ）。
【０２１５】
実施例３  任意の治療（１）〜（７）などの本発明の治療が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａの眼の中の光受容体神経細胞のハンチンチン誘導性神経変性を阻害する能力の決定
本発明の治療は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａの眼の中の光受容体神経細胞の変異型ハンチンチン誘導性神経変性（これは、ハエの脳における神経変性性の変化を反映する）を阻害するそれらの能力について試験することができる。特に、齧歯動物およびＤｒｏｓｏｐｈｉｌａショウジョウバエのゲノムへのハンチントン病の原因であるハンチンチン遺伝子の挿入は、ヒトにおいて見られるハンチントン病の病理学的および臨床的な徴候の多くを誘導することが他者によって示されてきた。それゆえに、これらのトランスジェニック動物の研究は、ヒトにおいて試験する前に、潜在的なハンチントン病の治療の薬理学的活性を評価するために有用である。記載されたＤｒｏｓｏｐｈｉｌａモデルにおける結果は、歴史的に、ハンチントン病のトランスジェニックマウスモデルと非常に良好に相関してきた。ヒトハンチントン病の症状に対するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａモデルの密接な類似性は、Ｊ．Ｌ．Ｍａｒｓｈら「Ｆｌｙ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、２００３、１２（ｒｅｖｉｅｗ  ｉｓｓｕｅ  ２）：Ｒ１８７−Ｒ１９３に記載されている。
【０２１６】
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａショウジョウバエは、神経変性性疾患のモデル構築のための優秀な選択と見なされている。なぜなら、これは、哺乳動物の神経系のそれとは異なる様式で、視覚、嗅覚、学習、および記憶などの特定の機能を分ける構造を伴う、十分に機能的な神経系を備えているからである。さらに、ショウジョウバエの複眼は、特別な神経細胞の数百個の反復する一群から作られ、これらは、顕微鏡を通して直接的に可視化することができ、潜在的な神経保護薬物が神経細胞死を直接的にブロックする能力がその上で容易に評価できる。最後に、疾患と関連性があることが知られているヒト遺伝子の中で、約７５％がＤｒｏｓｏｐｈｉｌａショウジョウバエの対応物を有する。
【０２１７】
特に、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａショウジョウバエにおける変異型ハンチンチンタンパク質の発現は、ヒトハンチントン病の特徴のいくつかを示すハエ表現型を生じる。最初に、ハンチントン病の推定の病原因子（変異型ハンチンチンタンパク質）は、ポリグルタミンまたはポリＱタンパク質と呼ばれる反復する３つ組みのヌクレオチド（ＣＡＧ）によってコードされる。ヒトにおいて、ハンチントン病の重篤度は、ポリＱ反復の長さと相関する。同じポリＱの長さの依存性は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａにおいて見られる。第２に、変異型ハンチンチンタンパク質を発現しているハエの早期（初期の幼虫段階）においては神経変性が見られないが、後期の生命段階においては（成熟幼虫、さなぎ、および熟成成虫段階）、ハエは、一般的に一生のうちで４０代から５０代に開始するハンチントン病の最初の徴候および症状が現れるヒトと同様の疾患を発症する。第３に、変異型ハンチンチン遺伝子を発現しているハエにおいて見られる神経変性は進行性であり、ハンチントン病のヒト患者と同様である。第４に、ハンチンチンを発現しているハエにおける神経障害は、同様に罹患したヒト患者と同様に、運動機能の損失をもたらす。最後に、変異型ハンチンチンタンパク質を発現しているハエは、ハンチントン病の患者と同様に、早期に死亡する。これらの理由のために、ハンチントン病のＤｒｏｓｏｐｈｉｌａモデルにおいて神経保護効果を示す治療は、ヒトにおいて有益な効果を有する治療である可能性た最も高いことが期待される。
【０２１８】
このアッセイのために、本発明の治療（例えば、ディメボンなどの治療化合物を、例えば、０、１μＭ、５μＭ、１０μＭ，１００μＭ、１００、３００μＭ、または１，０００μＭの用量で含む治療）は、すべてのそれらの神経細胞中の変異型ハンチンチンタンパク質を発現するように操作されたトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの一群に投与される。これは、酵母ＧＡＬ４転写因子によって活性化される酵母の上流阿口ベーター配列の制御下で、転位性ｐ−エレメントＤＮＡベクターに外来性遺伝子をクローニングすることによって達成される。これらのプロモーター融合物は、トランスジェニック動物を産生するためにハエ胚に注入される。外来性遺伝子は、組織特異的な様式でＧＡＬ４遺伝子を発現するハエの別のトランスジェニック系統と交雑されるまでサイレントである。誕生時から死亡時までにすべての神経細胞中で導入遺伝子を発現するＥｌａｖ＞Ｇａｌ４が、記載される実験において使用される。
【０２１９】
治療の試験のために、２０〜３０  ＨｔｔｅｘｌｐＱ９３バージンをｅｌａｖ＞Ｇａｌ４雄と交雑させ、約２０時間、２５℃で卵を収集し、バイアルに分注する（Ｈｔｔ効果から約７０％の致死率を予想）。羽化の際に、少なくとも８０匹の、０〜８時間齢のハエを収集し、本発明の治療、例えば、治療含有食餌（バイアルあたり２０匹の羽化した成体）の上に配置するか、またはこれを与え、７日齢でスコア付けした。治療含有食餌は、被験体のハエが出現する直前に調製する。
【０２２０】
齢が十分に密接してマッチした対照を収集するために、２つの型のトランスジェニック動物を交雑させる。交雑させた齢がマッチした成虫（投薬群あたり約２０匹）を、治療含有食餌上に７日間配置する。動物は、治療の不安定さによって引き起こされるいかなる効果も最小化するために毎日新鮮な食餌に移す。生存を毎日スコア付けする。０日目の光受容体の平均数を、羽化の６時間以内に新たに羽化した試験同胞のスコア７〜１０によって決定した。これは、治療への曝露の時点での変性のベースラインを確立する。７日目に、動物を屠殺し、生存している光受容体ニューロンの数を計数する。スコア付けは、擬似瞳孔法（ｐｓｅｕｄｏｐｕｐｉｌ  ｍｅｔｈｏｄ）により、ここでは、個々の機能している光受容体が、頭部の背後に焦点を当てた光によって示され、そして眼の光受容体レベルで焦点を当てた複合顕微鏡下での光の焦点として可視化される。擬似瞳孔分析のために、ハエは頭部切除され、頭部を顕微鏡スライド上のマニキュア液滴中にマウントする。次いで、頭部を液浸油で覆い、５０倍オイル対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ  ＥＦＤ−  ３／Ｏｐｔｉｐｈｏｔ−２複合顕微鏡を使用して、ハエの眼を通して光を投影させる。
【０２２１】
複数の濃度の治療を試験する場合（例えば、５つ以上の治療の濃度）、試験は複数の日数に分けてもよい。このことは、擬似瞳孔分析のための時間を許容する。異なる日に出現したＥｌａｖ＞Ｇａｌ４；ＵＡＳ＞ＨｔｔＱ９３成虫ハエの間で違いが観察される可能性があるので、各々の日のために治療対照は設定しない。データを分析するために、未処理成虫は、同じ日に出現した治療処理成虫と比較する。
【０２２２】
実施例４  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａモデルにおける運動能力に対する本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかの効果の決定
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａの運動機能に対する本発明の治療の効果（上記の実施例に記載されるように入手）は、これらをバイアルの底にたたいて落としたときに、ハエが上方に上昇する、強力な負の重力向性を利用することにより評価し得る。例えば、Ｌｅ  ＢｏｕｒｇおよびＬｉｎｔ、（１９９２）Ｈｙｐｅｒｇｒａｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｇｉｎｇ  ｉｎ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ．４．Ｃｌｉｍｂｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．３８：５９−６４を参照のこと。動物は目盛り付きの容器中に配置する。１０秒間に上がってくる距離を、各動物について、３回の試行にわたって、５分間の休憩をともなって測定する。ガラスバイアルではなく薄いプラスチックの高いチューブを使用する別個の実験において、３０秒間における上昇距離もまた測定する。動物は、処理群の情報とは関係なく、結果についてスコア付けする。
【０２２３】
ハエは、上昇距離を測定する行動アッセイ（上昇アッセイ）を使用して、機能的レスキューについて試験する。ハエは負の重力向性を有し、従って、たたいて底に落とされたときに、すぐに容器の壁面を上昇する。このアッセイにおいて、上昇は盲検的にスコア付けされ、各動物は３回の試行を与えられ、次いで平均する。様々な濃度の本発明の治療（例えば、０、１０、１００、または１，０００μＭのディメボンなどの治療を含む治療）を含む食餌で育てた７日齢動物の上昇は、羽化の日の動物の上昇と比較する。２回の試行を実施する。１回目では、大きなガラスバイアル中で上昇する能力を１０秒間にわたってモニターする。２回目の試行は、動物を薄いプラスチックの高いチューブの中で３０秒間にわたって上昇を試験する以外は、１回目と同様である。
【０２２４】
実施例５  中脳培養物中のドーパミン作動性およびＧＡＢＡ作動性の神経細胞に関する、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかの毒特性の決定
細胞ベースのアッセイは、中脳培養物中のドーパミン作動性およびＧＡＢＡ作動性の神経細胞に対する、特定用量の本明細書に記載の治療の毒特性を決定するために実施することができる。異なる濃度の本発明の治療を中脳培養物に加え、そしてドーパミンおよびＧＡＢＡの取り込みを評価する。この実験は、以下の実施例において記載されるようなＭＰＰ＋毒性に対するその効果を試験するために使用され得る、本発明の治療の非毒性用量を確立する。
【０２２５】
０〜１００μＭの範囲の本発明の治療の用量は、標準的な方法を使用して試験する（例えば、Ｗ．ＣｈｕｒｃｈおよびＳ．Ｈｅｗｅｔｔ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．７３：８１１−８１７，２００３を参照のこと）。処理は典型的には３連で実施する。ＭＰＰ＋は陽性対照として使用してもよい。
【０２２６】
実施例６  ＭＰＰ＋による損傷から中脳培養物を保護する、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかの治療の能力の決定
中脳培養物は、治療がＭＰＰ＋誘導性ドーパミン作動性細胞損失に対抗するか否かを評価するために、本明細書に記載される治療のあるなしで、１−メチル−４−フェニルピリジン（「ＭＰＰ＋」）に曝露することができる。特に、中脳培養物は、１または５μＭの本発明の治療の存在下で２４時間インキュベートし、次いで、標準的な方法を使用して、１μＭ  ＭＰＰ＋に曝露する（例えば、Ｗ．ＣｈｕｒｃｈおよびＳ．Ｈｅｗｅｔｔ，Ｊ、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．７３：８１１−８１７、２００３を参照のこと）。処理は、典型的には３連で行う。ドーパミンおよびＧＡＢＡの取り込みは、それぞれの細胞の生存度のマーカーとして測定する。実験はまた、より少ない用量のＭＰＰ＋（０．５μＭ）を、例えば、１μＭ  治療とともにプレインキュベートした培養物に加えることによって実施してもよい。
【０２２７】
実施例７  １−メチル−４−フェニル−１，２，３．６−テトラヒドロピリジン（「ＭＰＴＰ」）誘導性黒質線条体変性のマウスモデルにおけるドーパミンおよびその誘導体の欠如を阻害する、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかの治療の能力の決定
パーキンソン病のインビボモデルもまた、本明細書に記載される治療のいずれかが、哺乳動物、例えば、ヒトにおけるパーキンソン病を治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる能力を決定するために使用することができる。パーキンソン病のいくつかの動物モデルが他の研究者によって開発されており、例えば、米国特許第６，８７８，８５８号；米国特許第５，８５３，３８５号；米国特許第７，１０５，５０４号；および米国特許第７，０３７，６５７号に記載されているものがある。他の有用なモデルには、黒質線条体変性（例えば、パラコート誘導性黒質細胞損失；例えば、Ａｍｙ  Ｍａｎｎｉｎｇ−Ｂｏｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２３（８）：３０９５−３０９９，２００３を参照のこと）および／または毒物誘導性の黒質線条体損傷の他のパラダイム（例えば、慢性ＭＰＴＰ曝露）が含まれる。
【０２２８】
１つの方法において、ＭＰＴＰ誘導性黒質線条体変性のマウスモデルは、パーキンソン病を治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる、本明細書に記載の治療の能力を分析するために使用する。特に、ＭＰＴＰによって引き起こされるマウス線条体中でのドーパミンおよびその化合物（ＤＯＰＡＣおよびＨＶＡ）の欠失を予防する本発明の治療の能力の測定を行う。
【０２２９】
詳細には、本発明の治療は、ＭＰＴＰ曝露の前、その時点、またはその後に投与する。動物は、ＭＰＴＰの前２日間、９：００ａ．ｍ．および４：００ｐ．ｍ．に、２回の治療の腹腔内注射を受ける。ＭＰＴＰ投与の日、９：００ａ．ｍ．にマウスに治療を注射し、次に１：００ｐ．ｍ．にＭＰＴＰ、そして再度治療を４：００ｐ．ｍに注射する。最後に、１日２回の治療の用量を、ＭＰＴＰ曝露後、６日間、マウスに与える。ＭＰＴＰは３０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下注射する。対照動物は、本発明の治療の代わりにビヒクルを、ＭＰＴＰの代わりに生理食塩水を受けた。動物は、ＭＰＴＰ曝露の７日後に頸椎脱臼により屠殺する。例示的な処理群は以下に要約する。
【０２３０】
【表１】
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実験の最後に、マウスを屠殺し、線条体（左側および右側）を氷上で解剖する。左側線条体は、すぐに氷冷０．４Ｍ  過塩素酸中に入れ、ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、およびＨＶＡのアッセイのために処理する。右側線条体ならびに中脳ブロックもまた解剖し、潜在的な将来の使用（例えば、ウェスタンによる、線条体サンプル中のチロシンヒドロキシラーゼレベルの測定、所望される場合、線条対サンプル中のドーパミントランスポーター結合の測定、および／または黒質におけるドーパミン作動性ニューロンの立体解析学的計数が後で実施されてもよい）のために保存する。ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、およびＨＶＡは、以前に記載された方法に従う電気化学的検出を用いて、ＨＰＬＣによって測定する（Ｐｕｒｉｓａｉら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．２０：８９８−９０６、２００５）。
【０２３１】
本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより少ない用量のこのプロトコールにおいて、または黒質線条体変性の他のモデル（例えば、パラコート誘導性黒質細胞損失）および／または毒素誘導性黒質線条体損傷の他のパラダイム（例えば、慢性ＭＰＴＰ曝露）を使用して、試験してもよい。
【０２３２】
実施例８  アルツハイマー病を治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）の能力を決定するためのインビボモデルの使用
アルツハイマー病のインビボモデルもまた、哺乳動物、例えば、ヒトにおけるアルツハイマー病を治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる、本明細書に記載の治療のいずれかの能力を決定するために使用することができる。例示的なアルツハイマー病の動物モデルには、「Ｓｗｅｄｉｓｈ」変異型アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ；Ｔｇ２５７６；Ｋ６７０Ｎ／Ｍ６７１Ｌ；Ｈｓｉａｏら、１９９６、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７４：９９−１０２）を過剰発現するトランスジェニックマウスが含まれる。これらのマウスに存在する表現型は十分に特徴付けがされている（Ｈｏｌｃｏｍｂ  Ｌ．Ａ．ら、１９９８、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、４：９７−１００；Ｈｏｌｃｏｍｂ  Ｌ．Ａ．ら、１９９９，Ｂｅｈａｖ．Ｇｅｎ．、２９：１７７−１８５；およびＭｃＧｏｗａｎ  Ｅ．，１９９９，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．６：２３１−２４４）。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより少ない用量のこのモデルにおいて、またはアルツハイマー病の他の動物モデルを使用して、試験してもよい。標準的な方法は、本発明の治療のいずれかが、これらのマウスの脳におけるＡβ沈着の量を減少させるか否かを決定するために使用することができる（例えば、ＷＯ２００４／０３２８６８、２００４年４月２２日公開を参照のこと）。
【０２３３】
実施例９  筋萎縮性側索硬化症を治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）の能力を決定するためのインビボモデルの使用
ＡＬＳのインビボモデルは、ＳＯＤ１変異によって誘導される細胞毒性を減少させる、本明細書に記載される治療のいずれかの能力を決定するために使用することができる。細胞毒性の減少は、哺乳動物、例えば、ヒトのＡＬＳを治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる能力を示す。
【０２３４】
例示的なＡＬＳのインビボモデルにおいて、Ｎ２ａ細胞（例えば、ＩｎＰｒｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ、ＵＳＡによって販売されているマウス神経芽細胞腫細胞系統（ｃｅｌｌ  ｃｌｉｎｅ））を、種々の濃度の本発明の治療の存在下または非存在下で、変異型ＳＯＤ１で一過性にトランスフェクトする。標準的な方法、例えば、Ｙ．Ｗａｎｇら（Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、４６（４）：６６７−６７４、２００５）によって記載されている方法が、このトランスフェクションのために使用できる。細胞毒性は、細胞計数、免疫染色、および／またはＭＴＴアッセイなどの任意の日常的な方法を使用して測定して、治療がＮ２ａ細胞中の変異型ＳＯＤ１媒介性毒性を軽減するか否かを決定できる（例えば、米国特許第７，０３０，１２６号；Ｙ．Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、９９（１１）：７４０８−７４１３，２００２；またはＳ．Ｆｅｒｎａｅｕｓら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔｓ．３８９（３）：１３３−６，２００５を参照のこと）。
【０２３５】
実施例１０  筋萎縮性側索硬化症を治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）の能力を決定するためのインビボモデルの使用
ＡＬＳのインビボモデルは、哺乳動物、例えば、ヒトのＡＬＳを治療し、予防し、その発症を遅延させ、そして／またはその発生を遅延させる、本明細書に記載の治療のいずれかの能力を決定するために使用できる。ＡＬＳまたは運動ニューロン変性のいくつかの動物モデルが他の研究者によって開発されており、これには、米国特許第７，０３０，１２６号および同第６，７２３，３１５号において記載されているものがある。
【０２３６】
例えば、家族型のＡＬＳの原因である変異型のＳＯＤを発現するトランスジェニックマウスのいくつかの系統が、ＡＬＳのマウスモデルとして構築されてきた（米国特許第６，７２３，３１５号）。グリシン９３のアラニンによる置換を有する変異型ヒトＳＯＤを過剰発現するトランスジェニックマウス（ＦＡＬＳＧ９３Ａマウス）は、それ自体を発現する、肢の麻痺による進行性の運動ニューロン変性を有し、４〜６ヶ月齢のときに死亡する（Ｇｕｒｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６４，１７７２−１７７５，１９９４）。最初の臨床的な徴候は、約９０日目の肢のふるえ、次いで、１２５日目の歩幅の減少からなる。組織学的レベルにおいて、ミトコンドリア起源の空胞が、約３７日目に運動ニューロンにおいて観察され、そして運動ニューロンの損失が９０日目から観察できる。ミエリンを有する軸索への攻撃が、主として腹側骨髄において、そして背側領域においてわずかに観察される。補償的側枝神経再生現象が、運動プラークのレベルで観察される。
【０２３７】
ＦＡＬＳＧ９３Ａマウスは、治療的ストラテジーの開発のためと同様に、ＡＬＳの生理病理学的メカニズムの研究のための非常に良好な動物モデルを構成する。これらのマウスは、非常に多くの組織病理学的および筋電図的な特徴を示す。ＦＡＬＳＧ９３Ａマウスの筋電図的な性能は、これらがＡＬＳの判断基準の多くを満たすことを示す：（１）付随する側枝神経再生に伴う、運動単位の数の減少、（２）後肢および前肢における自発的脱神経活性（フィブリル化）および線維束収縮の存在、（３）誘発された運動応答の減少と相関する運動誘導の速度の改変、および（４）感覚攻撃の欠如。さらに、顔面神経攻撃は、高齢のＦＡＬＳＧ９３Ａマウスにおいてでさえ、まれであり、これは患者においてもまたあり得る。ＦＡＬＳＧ９３Ａマウスは、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  （Ｌ’Ａｒｂｒｅｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）から利用可能である。さらに、ヒトＳＯＤ１（Ｇ９３Ａ）遺伝子を有するヘテロ接合性トランスジェニックマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ，ＵＳＡ）（米国特許第７，０３０，１２６号）から入手することができる。これらのマウスは、内因性プロモーターによって駆動される２５コピーのヒトＧ９３Ａ  ＳＯＤ変異を有する。マウスの生存はコピー数依存性である。この疾患を発症するマウスヘテロ接合体は、尾の一部の採取およびＤＮＡの抽出後にＰＣＲによって同定することができる。
【０２３８】
急性神経毒性傷害後（ＩＤＰＮを用いる、興奮性毒を用いる処理）または遺伝的欠損（ｗｏｂｂｌｅｒ、ｐｍｎ、ＭｎｄマウスまたはＨＣＳＭＡイヌ）に起因するかのいずれかである、運動ニューロン変性を有する他の動物モデルが存在している（米国特許第６，７２３，３１５号；Ｓｉｌｌｅｖｉｓ−ＳｍｉｔｔおよびＤｅ  Ｊｏｎｇ，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ，９１，２３１−２５８，１９８９；Ｐｒｉｃｅら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓｅａｓｅ，１，３−１１，１１９９４）。遺伝子モデルの中では、ｐｍｍマウスが、臨床的、組織学的、および筋電図的なレベルで、特に十分に特徴付けられている。ｐｍｍ変異は、常染色体劣性様式で伝達され、かつ第１３染色体上に局在している。ホモ接合性ｐｍｍマウスは、筋萎縮症および麻痺を発症し、これは、２〜３週齢の後方のメンバーから明示される。未処理のすべてのｐｍｍマウスが、６〜７週齢の前に死亡する。これらの運動ニューロンの変性は神経末端のレベルで開始し、運動神経、とりわけ、横隔膜の神経支配（ｉｎｅｒｖａｔｉｏｎ）を確実にする横隔神経における、ミエリンを有する線維の大量の損失で終了する。ＦＡＬＳＧ９３Ａマウスとは反対に、この筋肉脱神経は非常に迅速であり、軸索側枝の再成長による再神経支配の徴候を実質的に伴う。筋電図レベルでは、筋肉脱神経のプロセスは、フィブリル化の外見によって、および神経の過最大電気刺激後に引き起こされる筋肉応答の増幅の有意な減少によって特徴付けられる。
【０２３９】
Ｘｔ／ｐｍｎトランスジェニックマウスの系統もまた、ＡＬＳの別のマウスモデルとして以前から使用されてきた（米国特許第６，７２３，３１５号）。これらのマウスは、Ｃ５７／Ｂ１５６またはＤＢＡ２雌性マウスと、Ｘｔ  ｐｍｎ＋／Ｘｔ＋ｐｍｎ雄性マウス（１２９系統）を最初に交雑させること、続いて、２回目は、最初の雄と、子孫のＸｔ  ｐｍｎ＋／Ｘｔ＋ｐｍｎ＋ヘテロ接合性雌（Ｎ１）の間で行うことによって得た。子孫のマウス（Ｎ２）の間で、Ｘｔ対立遺伝子（余分の数字の表現型によって実証される）およびパン対立遺伝子（ＰＣＲによって決定される）を有するＸｔ  ｐｍｎ＋／Ｘｔ＋ｐｍｎ二重ヘテロ接合体（「Ｘｔ  ｐｍｎマウス」と呼ばれる）を、将来の交雑のために選択する。
【０２４０】
ＡＬＳのインビボモデルにおける本明細書に記載される治療の活性を試験するための１つの例示的な方法において、雌性マウス（Ｂ６ＳＪＬ）を購入して、グリシン９３のアラニンによる置換を有する変異型ＳＯＤを過剰発現するトランスジェニック雄（例えば、ＦＡＬＳＧ９３Ａマウス）と交雑させる。２匹の雌を各々のケージ内に１匹の雄とともに配置し、妊娠について少なくとも毎日モニターする。各妊娠雌を同定するときに、これはケージから取り出し、新たな妊娠していない雌を加える。４０〜５０％の仔がトランスジェニックであると予想されるので、例えば、少なくとも２００匹の仔のコロニーがほぼ同時に生まれ得る。３週齢での遺伝子型決定後、トランスジェニック仔は親から引き離し、性別によって異なるケージに分ける。
【０２４１】
少なくとも８０匹のトランスジェニックマウス（雄と雌の両方）を４つのグループにランダムに分ける：１）ビヒクル処理（２０匹マウス）、２）用量１（３ｍｇ／ｋｇ／日；２０匹マウス）３）用量２（１０ｍｇ／ｋｇ／日；２０匹マウス）および３）用量３（３０ｍｇ／ｋｇ／日；２０匹マウス）。マウスは毎日評価する。この評価は、体重、外見（毛皮コート、活動性など）、および運動協調性の分析を含む。処理は、ほぼ段階３で開始し、マウスを安楽死させるまで継続する。１つの局面において、試験される本発明の治療は、マウスの食餌中でマウスに投与される。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより少ない用量のこのプロトコールにおいて、またはＡＬＳの他のモデルを使用して試験されてもよい。
【０２４２】
臨床疾患の発症は、マウスの肢のふるえについて、および筋肉の強度について、マウスを試験することによってスコア付けする。マウスは、尾の基部によって優しく持ち上げ、いかなる筋肉のふるえも記録し、後肢の伸長を測定する。筋肉の脆弱さは、マウスがその後肢を伸ばせないことにおいて反映される。マウスは、運動ニューロン不全の徴候の５段階スケールでスコア付けする：５−徴候なし；４−１つ以上の肢の脆弱性；３−１つ以上の肢の跛行；２−１つ以上の肢の麻痺；１−背を下にして置かれたときに、正しい位置に戻ることができない、反転に対して陰性である動物。
【０２４３】
麻痺の徴候を示す動物において、湿らせた食餌ペレットをケージの内部に配置する。マウスが食餌ペレットに到達できない場合、栄養補給は、補助食餌（Ｅｎｓｕｒｅ（登録商標）、毎日２回、経口）を通して投与される。必要な場合、通常の生理食塩水を、腹腔内投与により、１日に１ｍｌを２回補充する。加えて、これらのマウスは毎日体重を測定する。必要な場合、マウスは、研究員により洗浄され、ケージのベッディングは頻繁に交換する。最終段階の疾患において、マウスは、それらのケージ中でそれらの側方を下にして横たわる。マウスが１０秒間以内にそれら自身で位置を変更できない場合、またはマウスの体重が２０％落ちたときには、マウスを直ちに安楽死させる。
【０２４４】
各処理群において、４番目、８番目、１２番目、１６番目、および２０番目に安楽死させたマウスから脊髄を収集する（処理群あたり合計で５匹、全体で２０匹の動物）。これらの脊髄は、標準的な方法を使用して、ミトコンドリア中の変異型ＳＯＤ含量について分析する（例えば、Ｊ．Ｌｉｕら、Ｎｅｕｒｏｎ，４３（１）：５−１７，２００４を参照のこと）。
【０２４５】
所望される場合、ＡＬＳマウスモデルにおける本発明の治療の効果は、二頭筋のサイズ、筋肉の形態、電気的刺激に対する筋肉の応答、脊髄運動ニューロンの数、筋肉の機能、および／または酸化的損傷の量を測定するための標準的な方法を使用して、例えば、米国特許第６，９３３，３１０号または同第６，７２３，３１５号に記載されるように、さらに特徴付けることができる。
【０２４６】
上記のＡＬＳのインビボモデルのいずれかにおけるビヒクル対照と比較した、より少ない筋肉の脆弱性および／または運動ニューロンの数のより少ない減少を生じる治療は、ＡＬＳの治療または予防のためにヒトにおける有益な効果を有する治療である可能性が最も高いことが期待される。
【０２４７】
実施例１１  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが神経細胞死媒介性眼疾患を治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するためのインビボモデルの使用
眼疾患のインビボモデルは、本明細書に記載される治療のいずれかが神経細胞死媒介性眼疾患を治療し、および／または予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するために使用することができる。
【０２４８】
神経細胞死媒介性眼疾患、例えば、乾燥型の黄斑変性および／またはＳｔａｒｇａｒｄｔ黄斑変性を含む黄斑変性を治療し、および／または予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する本明細書に記載される治療の活性を試験するための１つの例示的な方法は、Ｇ．Ｋａｒａｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００５，１０２（１１）：４１６４−４１６９）に記載されるようなＥＬＯＶＬ４変異型マウスモデルを利用する。このモデルは、網膜色素上皮（ＲＰＥ）による顕著なリポフスチン蓄積、続いて、ＲＰＥの死および光受容体変性を発症することをマウスに引き起こす、変異型のＥＬＯＶＬ４を発現するトランスジェニックマウスを含む。マウスは明白に黄斑（視力と最も激しく関連する中心網膜内の領域）を有さないのに対して、このモデルは、ＡＲＭＤに類似して、網膜の中心において網膜細胞の変性および死を引き起こし、ＡＲＭＤにおいて見られる沈着（ドルーゼ）に非常に類似した網膜沈着もまた引き起こす。このモデルは、ヒト乾燥型黄斑変性およびＳＴＧＤに密接に類似していると考えられている。
【０２４９】
Ｇ．Ｋａｒａｎ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００５，１０２（１１）：４１６４−４１６９）によって記載された方法に従って、４ヶ月の実験を、高用量処理のための６匹のマウス、低用量処理のための６匹のマウス、および未処理のための６匹の齢がマッチした対照（１９週まで引き離す）を使用して実施する。平均のマウスは２０ｇであり、１５ｍｌ／１００ｇ体重、または３ｍｌ／日を飲む。高用量の本発明の治療は、３６μｇ／ｇ／日または７２０μｇ／マウス／日の治療化合物を含む治療である。低用量の治療は、１２μｇ／ｇ／日または２４０μｇ／マウス／日の治療化合物を含む治療である。それゆえに、飲料水は、２４０μｇ／ｍｌ（高用量）および８０μｇ／ｍｌ（低用量）の治療を含む。各動物（別々のケージに収容されている）によって消費される治療の正確な量は、遡及的に決定されてもよい。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより低用量のプロトコールにおいて、または神経細胞死媒介性眼疾患の他のモデルを使用して、試験されてもよい。
【０２５０】
４ヶ月の治療の最後の分析は、組織学的切片化および光受容体細胞損失の定量を使用して実施する。組織学的切片化および定量は、Ｇ．Ｋａｒａｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００５，１０２（１１）：４１６４−４１６９）によって記載される方法、例えば、顕微鏡を含むものによって行われてもよい。
【０２５１】
例えば、以下の他の終点が考慮されてもよい：（１）毎週１回収集される体重；（２）ケージ側からのマウスの臨床的観察、例えば、１日１回〜１週間に２回、実験室ノートブックに記録した観察を伴う；（３）各マウスについての末端血漿サンプルの収集および分析、このサンプルは薬物動態学的または他の分析のためにＥＤＴＡ中に保持され得る；（３）水の中でマウスに対して利用可能である期間の間、治療が安定であることを実証するために、時折収集される水ボトルサンプルに対する収集および分析（例えば、０．５〜１ｍＬサンプルを保存、−８０℃で凍結）。
【０２５２】
実施例１２  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のＮＭＤＡ誘導性電流遮断特性を評価する方法
本発明の治療は、それらのＮＭＤＡ誘導性電流遮断特性を決定するために評価されてもよい。実験は、ラット脳皮質の新鮮に単離した神経細胞または培養したラット海馬ニューロンに対してパッチクランプ法によって実行する。培養のための神経細胞は、トリプシン処理、続いて、ピペッティングの方法によって、新生仔ラット（１〜２日齢）の海馬から得る。培養培地中に懸濁した細胞は、６ウェルプランシェット（Ｎｕｎｃ）のウェルまたはペトリディッシュに３ｍＬ量で配置し、ここでは、ポリ−Ｌ−リジンでコートしたガラスが最初に配置されている。細胞濃度は、典型的には、２．５×１０−６〜５×１０−６細胞／ｍＬである。培養培地は、１０％仔ウシ血清、２ｍＭ  グルタミン、５０μｇ／ｍｇ  ゲンタマイシン、１５ｍＭ  グルコース、および２０ｍＭ  ＫＣｌを補充し、ＮａＨＣＯ３を使用してｐＨを７〜７．４に調整したイーグル最少培地およびＤＭＲ／Ｆ１２培地（１：１）からなる。培養物を含むプランシェットは、３７℃、１００％湿度のＣＯ２インキュベーターに配置する。シトシンアラビノシド１０〜２０μＬを、培養の２日目から３日目に加える。６〜７日の培養後、１ｍｇ／ｍｌ  グルコースを培地に加え、または培地は、以下の実験に依存して交換する。培養した海馬ニューロンは、０．４ｍＬ作業チャンバーに配置する。作業溶液は以下の組成である：１５０．０ｍＭ  ＮａＣｌ、５．０ｍＭ  ＫＣｌ、２．６ｍＭ  ＣａＣｌ２、２．０ｍＭ  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ２．０、１０．０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、および１５．０ｍＭ  グルコース、ｐＨ  ７．３６。
【０２５３】
ＮＭＤＡの適用によって生じる膜透過電流は、全体細胞構成におけるパッチクランプ電気生理学的法によって記録される。物質の適用は、迅速な表面灌流の方法によって行う。電流は、以下の組成物：１００．０ｍＭ  ＫＣｌ、１１．０ｍＭ  ＥＧＴＡ、１．０ｍＭ  ＣａＣｌ２  １．０、１．０ｍＭ  ＭｇＣｌ２  １．０、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、および５．０ｍＭ  ＡＴＰ、ｐＨ  ７．２で満たされたホウケイ酸微小電極（抵抗が３．０〜４．５ｍＯｈｍ）の補助で記録される。ＥＰＣ−９機器（ＨＥＫＡ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を記録のために使用する。電流は、ＨＥＫＡからも購入されるパルス（ｐｕｌｓｅ）プログラムを使用してＰｅｎｔｉｕｍ（登録商標）−ＩＶ  ＰＣのハードディスク上に記録する。結果はＰｕｌｓｅｆｉｔプログラム（ＨＥＫＡ）の補助を伴って分析する。
【０２５４】
ＮＭＤＡの適用は、培養海馬ニューロン中での流入電流を誘導する。ＮＭＤＡの適用によって引き起こされる電流に対する遮断効果を有する本発明の治療は、ＮＭＤＡアンタゴニストとして、またはＮＭＤＡを含む本明細書に開示される疾患のいずれかの治療のための１つ以上のＮＭＤＡアンタゴニスト特性を有する治療として、有用であることが予想される。治療はまた、これらが培養ラット海馬ニューロン中でのＮＭＤＡ誘導性電流に対するＭＫ−８０１の遮断効果を減少するか否かを決定するために試験することができる。ＮＭＤＡ受容体上のＭＫ−８０１（および類似してフェンシクリジン）のチャネル遮断効果の減少は、それらの精神異常発現効果の減少をもたらす可能性があり、それゆえに、統合失調症に特徴的な徴候の除去をもたらす可能性がある。従って、ＭＫ−８０１の遮断効果を減少する本発明の治療は、統合失調症を治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延するために有用であることが予想される。
【０２５５】
実施例１３  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）が統合失調症を治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するためのインビボモデルの使用
統合失調症のインビボモデルは、本明細書に記載される治療のいずれかが神経細胞死媒介性眼疾患を治療し、および／または予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するために使用することができる。
【０２５６】
統合失調症を治療し、および／または予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する本明細書に記載される治療の活性を試験するための１つの例示的なモデルは、動物（例えば、非霊長類（例えば、ラット）または霊長類（例えば、サル））に慢性的に投与されるフェンシクリジンを利用し、統合失調症のヒトにおいて見られるものと類似の機能不全を生じる。Ｊｅｎｔｓｃｈら、１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：９５３−９５５およびＰｉｅｒｃｅｙら、１９８８，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．４３（４）：３７５−３８５を参照のこと。標準的な実験プロトコールは、この動物モデルまたは他の動物モデルにおいて利用されてもよい。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含む用量でこのプロトコールにおいて、または統合失調症の他のモデルを使用して、試験されてもよい。
【０２５７】
実施例１４  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）の治療のカルシウム遮断特性の決定
本発明の治療のカルシウム遮断特性の評価は、シナプトソームのＰ２画分を用いて実施し、これは、Ｂａｃｈｕｒｉｎら（「Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ＭＫ−８０１  ｆｌｅｘｉｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｓ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ」Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，２００１，９３９：２１９−２３５）によって記載されたプロトコールに従って新生（８〜１１日）の脳か単離される。このアッセイにおいて、グルタミン受容体と関連するイオンチャネルを介するカルシウムイオンの特異的取り込みを阻害する本発明の治療の能力を決定する。
【０２５８】
シナプトソームは、インキュベーション緩衝液Ａ（１３２ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）に配置し、全体の実験の間、０℃に保つ。シナプトソームのアリコート（５０μｌ）を、本発明の治療および放射性標識したカルシウム、４５Ｃａの調製物を含む培地Ａ中に配置する。カルシウムの取り込みは、１０ｍＭのグルタミン酸の２０μｌの培地への導入によって刺激される。３０℃で５分間のインキュベーション後、反応は、ＧＦ／Ｂフィルターを通した濾過によって中断され、次いで、これは、冷緩衝液Ｂ（１４５ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５ｍＭ  Ｔｒｉｌｏｎ  Ｂ）で３回洗浄する。次いで、フィルターを分析して、放射性標識されたカルシウムを検出する。測定は、ＳＬ−４０００液体シンチレーションカウンター（Ｉｎｔｅｒｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用して実施する。初期のスクリーニングは、各化合物の５μＭ溶液を用いて実施する。特異的なカルシウムの取り込みは以下の等式を使用して計算する：Ｋ（４３／２１）＝［（Ｃａ４−Ｃａ３）／（Ｃａ２−Ｃａ１）］＊１００％、ここで、Ｃａ１は対照実験におけるカルシウムの取り込みであり（グルタミン酸または薬物が加えられていない）；Ｃａ２はグルタミン酸のみ存在下でのカルシウムの取り込みであり（グルタミン酸誘導性のカルシウムの取り込み−ＧＩＣＵ）；Ｃａ３は治療のみの存在下でのカルシウムの取り込みであり（グルタミンは加えていない）；そしてＣａ４はグルタミンと治療の両方の存在下でのカルシウムの取り込みである。
【０２５９】
顕著なカルシウム遮断特性を有する治療は、老化防止剤としての潜在能力を有し得る（Ｚ．Ｓ．Ｋｈａｃｈａｔｕｒｉａｎ「Ｃａｌｃｉｕｍ  ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｂｒａｉｎ  ａｇｉｎｇ」Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９４，７４７：１−１１）。
【０２６０】
実施例１５  老化防止剤としての本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）の治療活性の決定
本発明の治療は、実験室動物において寿命を延長し、および／または生活の質を改善する（加齢に付随する病理の量または重篤度の変化によって特徴付けられる）薬剤として評価されてもよい。実験は、１２ヶ月齢から開始して、Ｃ５７／Ｂ雌性マウスを用いて実施する。マウスは、小区画あたり１０匹で、小区画に維持する。対照群と実験群の両方が、群あたり５０匹の動物を含む。動物は、食餌および水に自由に接近できる。昼−夜サイクルは１２時間である。
【０２６１】
実験の前に、１つの小区画の動物による１日のおよび１週間の水消費を測定する。１つの局面において、本発明の治療は、各動物が平均で１日あたり３ｍｇ／ｋｇの治療を消費するような量で水に加える。治療を含む水のボトルは７日毎に置き換える。対照群の動物は純粋を受容する。実験の前に、すべての動物の体重を量り、すべての小区画のすべての動物の総体重を同様に、平均体重を、すべての群およびすべての小区画で決定する。皮膚、毛、および眼の状態もまた、目視検査によって決定する。好ましくは、すべての動物は健常な外見であり、実験の前にいかなる眼に見える傷害も有していない。これらのパラメーターの評価は１ヶ月ベースで実施する。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより低用量でこのプロトコールにおいて、または老化防止の他のモデルを使用して、試験されてもよい。
【０２６２】
寿命
寿命の長さは、人口統計的な方法を使用して評価する。このパラメーターは、すべての齢のグループにおける死の可能性である。死の可能性を減少しまたは阻害する治療は、老化防止剤として有用であることが予想される。
【０２６３】
動物の体重の動力学
動物の体重の減少は、対照群における実験の間に予測される。これは自然なプロセスであり、加齢関連の体重減損として知られている。この体重損失を減少する治療は老化防止剤として有用であることが予想される。
【０２６４】
視覚障害
片目または両目の白内障の発症として現れる視覚障害が、対照群の動物において予想される。白内障の動物の数を減少させる治療は、老化防止剤として有用であることが期待される。
【０２６５】
皮膚および毛の状態
皮膚−毛外皮の障害を、毛のない部分、すなわちいわゆる脱毛症を有する動物が、対照群において予想される。脱毛症の動物の数または脱毛症の重篤度を減少する治療は、老化防止剤として有用であることが期待される。
【０２６６】
実施例１６  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）がイヌ認知障害症候群を阻害する能力の決定
以下の例示的な実験パラメーターが、以下の３つの実施例（実施例２４〜２６）において、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）がイヌ認知障害症候群を阻害する能力を試験するために使用できる。活動性の増加（例えば、日中活動の増加）、歩行運動活動性の増加、好奇心の増加、または探索的行動の増加は、イヌ認知障害症候群を阻害するために有用であること（例えば、イヌにおける加齢関連の行動の欠乏の症候性の改善を引き起こすこと）が予想される。
【０２６７】
被験体
例示的な被験体は表２に要約する。唯一の排除基準は、研究の目的または実施に干渉する任意の疾患または状態の非存在である。
【０２６８】
【表２】
2010528016.tif 000009
飼育小屋、飼料、および環境
例示的な試験施設はイヌの飼育小屋のための２つの領域を含む。第１のものは、１６個の対向する列である３２個のステンレス鋼の仕切りからなる。各仕切りは、５フィート×１６フィートであり、２フィート×４フィートの休憩台を有する。いくつかの仕切りは半分に区切る（２．５フィート×１６フィート）。第２のものは、１２個の対向する列である２４個の亜鉛メッキされた鋼の仕切りからなる。両方の領域において、床はエポキシ塗装され、加熱される。施設の外壁は床の近く（地表面からおよそ１０フィート）に窓を備え、これは、天然光が装置に入ることを可能にする。イヌは、適合性および性別に基づいて、ケージあたり一般的には４匹収容する。天然の明−暗スケジュールを使用する。仕切りは強力な洗浄機で毎日清掃する。
【０２６９】
イヌは、壁面に装着した自動給水システムを介して、またはボウル中で井戸水に自由に接近可能である。イヌは、毎日１回、標準の成犬維持食（例えば、Ｐｕｒｉｎａ  Ｐｒｏ  Ｐｌａｎ（登録商標）Ｃｈｉｃｋｅｎ  ＆  Ｒｉｃｅ）を与え、これは定常的な体重を維持するために調製されている。
【０２７０】
収容温度および湿度は、自動温度制御および連続的換気によって比較的一定に保持する。室内環境条件は、以下のような設計仕様である：１分間あたり最小限約２１００ｃ．ｆ．濾過空気交換、相対湿度６０±１０％、温度２０±３℃、および天然の明−暗サイクル。
【０２７１】
仕切りの仲間および／またはおもちゃの存在により、豊かさを提供する。すべてのイヌは、研究の開始の前に獣医学的な検査を受ける。研究の過程にわたって、必要な場合、訓練された担当者が、すべての有害な事象および責任のある獣医または研究責任者に連絡を取る。
【０２７２】
投薬および投与
イヌは研究開始の前に体重測定する。本発明の治療を含むカプセルは、体重に従って各イヌのために調製する。本発明の治療の以下の用量：２．６および２０ｍｇ／ｋｇが使用され得る。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより低い用量でこのプロトコールにおいて、またはイヌ認知障害症候群の他のモデルを使用して、試験されてもよい。他の点では本研究に関与していない技術者がカプセルを調製する。研究の対照フェーズの間、被験体に、空のゼラチンカプセルを投与する。試験および対照の物品を、湿潤性ドッグフードのミートボール中で、１日１回イヌに経口投与する。個々の被験体に、各処理日に同時にカプセルを投与する。
【０２７３】
実験設計
研究設計は、４回の７日間試験ブロックからなる（試験ブロックは、４日間の処理／試験期間と組み合わせた３日間の洗い出し期間である）。最初の試験ブロックは対照であり、この７日間の間に被験体は治療を受けない。引き続いて、ラテン方格（設計が続き、ここでは、すべての被験体を、異なる順番で、３つすべての用量レベルの試験品目で試験する（以下の表３を参照のこと）。これを達成するために、１２例の被験体を、性別および齢について可能な程度までバランスさせた２齢の被験体の６つのグループに分ける。
【０２７４】
表３。イヌグループ（グループＡ〜Ｆは、各々２匹のイヌを有するイヌグループをいう）および投薬順序（用量順序カラムのＡは２ｍｇ／ｋｇの用量をいい；用量順序カラムのＢは６ｍｇ／ｋｇの用量をいい；そして用量順序カラムのＣは２０ｍｇ／ｋｇの用量をいう）。
【０２７５】
【表３】
2010528016.tif 000010
対照試験ブロックを完了後、各グループは、そのグループのために処方された順序で３つの用量の試験品目を受容する。各試験ブロックのために、被験体は、最初の４日間の間、それらのそれぞれの処理を受容する。各試験ブロックの４日目において、被験体は、好奇心試験で２回試験する；１回目は物品投与の１時間後であり、２回目は物品投与の４時間後である。残りの３日間は、各試験ブロックのための洗い出し日と見なす。
【０２７６】
被験体は、処理の４日間および各試験ブロックの間の３日間の洗い出し日を受ける
【０２７７】
【表４】
2010528016.tif 000011
データ収集および分析
研究の開始において、Ａｃｔｉｗａｔｃｈ（登録商標）カラーを各イヌに配置し、カラーは研究の期間の間そのままにする。すべての行動試験は以前に確立したプロトコールに従う。オープンフィールド競技場で実施する行動試験のために、データ分析は、行動ソフトウェア（ＣａｎＣｏｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）を使用して実施する。Ａｃｔｉｗａｒｅ−Ｒｈｙｔｈｍ（登録商標）ソフトウェアを使用して、昼−夜基準のための活動計数を得る。
【０２７８】
Ａｃｔｉｗａｔｃｈ（登録商標）データは、治療に時間的に連関する活動パターンの変化と、昼−夜活動性の変化の両方を見るために分析する。
【０２７９】
治療条件と連関する活動の変化を評価するために、投薬後５時間の期間にわたる、時間毎の活動を計算する。次いで、データは、反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用い、被験体変数の中で、投薬後の時間（１〜５時間）、治療日数（各条件について１〜４日）、および用量（対照、２、６、および２０ｍｇ／ｋｇ）を用いて、分析を行う。試験順序は、初期の分析における被験体変数の中で機能する。昼夜活動レベルを試験するために、昼および夜の活動レベルは、各２４時間の期間の間、計算する。データは最初に、反復測定ＡＮＯＶＡを用い、被験体変数の中で、用量（対照、２、６、および２０ｍｇ／ｋｇ）、治療日数（各条件について１〜４日）、およびフェーズ（昼および夜）を用いて、分析を行う。再度、順序は被験体間変数として機能する。
【０２８０】
好奇心試験のために、各行動測定は、反復測定ＡＮＯＶＡ、用量（対照、２、６、および２０ｍｇ／ｋｇ）、被験体変数の中としての試験（１回目および２回目）、および被験体間変数としての順序を使用して分析する。
【０２８１】
すべてのデータは、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ  ６．０（登録商標）ソフトウェアパッケージ（Ｓｔａｔｓｏｆｔ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｌｓａ，ＯＫ，ＵＳＡ）を使用して分析する。ホスト−ホック−フィッシャー（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ）を使用して、主たる効果および相互作用を試験する。
【０２８２】
投薬後活動パターンおよび昼−夜活動リズム
活動は認知と関連するマーカーである。活動は、治療日の関数であるのと同様に、用量および治療後の時間の関数として評価する。
【０２８３】
投薬後活動パターンおよび２４時間の活動リズムは、Ａｃｔｉｗａｔｃｈ（登録商標）法を使用して評価し、これは、以前に記載されたように（Ｓｉｗａｋら、２００３，「Ｃｉｒｃａｄｉａｎ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｈｙｔｈｍｓ  ｉｎ  Ｄｏｇｓ  Ｖａｒｙ  ｗｉｔｈ  Ａｇｅ  ａｎｄ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｓｔａｔｕｓ」Ｂｅｈａｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１１１：８１３−８２４）、活動の変化および活動サイクルのフェーズの変化を検出する。手短に述べると、一般的な活動パターンを、イヌのために適合させたＭｉｎｉ−Ｍｉｔｔｅｒ（登録商標）Ａｃｔｉｗａｔｃｈ−１６（登録商標）活動モニタリングシステム（Ｍｉｎｉ−Ｍｉｔｔｅｒ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）を使用して２８日間連続でモニターする。Ａｃｔｉｗａｔｃｈ−１６（登録商標）は、５分間隔で全体の活動の計数を提供するようにプログラムされている活動センサーを備える。イヌのカラー上にＡｃｔｉｗａｔｃｈ−１６（登録商標）を配置することにより、中断されない活動および休止の記録が可能になる。
【０２８４】
実施例１７  本発明の治療がイヌ認知障害症候群を阻害する能力を決定するための一般的活動試験
Ａｃｔｉｗａｔｃｈ（登録商標）データの最初の分析は、行動活動性に対する治療の投薬後効果の全体的なイメージを提供することを意図している。従って、投薬後の５時間の期間を、最初に、５つの１時間のブロックに分割する。従って、各処理日の各被験体のデータは、５つの連続する１時間の活動スコアからなる。次いで、データは、反復測定分散分析を用いて、被験体変数として投与後時間（１〜５時間）、処理日数（各条件について１〜４日）、および用量（対照、２、６、および２０ｍｇ／ｋｇ）を用いて分析する。試験順序は、最初の分析の被験体変数間で機能する。
【０２８５】
実施例１８  本発明の治療がイヌ認知障害症候群を阻害する能力を決定するための昼夜活動アッセイ
昼／夜活動データは、反復測定ＡＮＯＶＡを用いて、用量、洗い出し日、および被験体変数中としてのフェーズ、および被験体変数間としての試験順序を用いて分析する。
【０２８６】
実施例１９  本発明の治療がイヌ認知障害症候群を阻害する能力を決定するための好奇心試験
これは、探索的行動の試験であり、環境に対する注意と歩行行動の両方を評価する（Ｓｉｗａｋら、２００１「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ａｇｅ  ａｎｄ  Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ａｎｄ  Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ  Ｂｅｈａｖｉｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｅａｇｌｅ  Ｄｏｇ」Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｍｅｍ．，８：３１７−２５８）。被験体は、１０分間の間、オープンフィールド競技場に置かれる。７例の被験体が競技場に置かれ、被験体は部屋および物体を自由に探索することが許される。
【０２８７】
オープンフィールド活動競技場は、追跡を容易にするための長方形のグリッドパターンである床に適用された電気的テープのストリップを備えた、空の試験部屋（約８フィート×１０フィート）からなる。試験部屋の床は、試験の前にかつイヌの間をモップかけして、試験に影響を与える嗅覚的手がかりを減少する。オープンフィールドで行う試験のために、イヌは試験部屋に配置し、これらの行動は５または１０分間にわたってビデオ録画する。しかし、すべてのイヌを対照と２０ｍｇ／ｋｇ用量で試験し、別の分析は、対照と高用量処理を比較して実行する。
【０２８８】
試験部屋内でのイヌの行動パターンを記録する。加えて、キーボードのキーを押して、以下を含む種々の挙動の発生の頻度を示す：嗅ぐ動作、排尿、毛繕い、跳躍、立ち上がり、不動、および発声。このソフトウェアはまた、歩行運動活性のための距離の全体測定を提供する。一般的活動に加えて、物体との相互作用（拾い上げ、接触、嗅ぐ動作、および物体上での排尿）は、探索的行動の尺度として評価および使用する。排尿頻度はマーキング行動を示す。
【０２８９】
実施例２０  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが動物モデルにおける認知機能および記憶を改善する能力の決定
神経細胞の以前の破壊が存在していなかった動物の記憶に対する治療の作用を研究するために、既知の対象物の新たな位置の認識の試験を使用することができる（Ｂ．ＫｏＩｂ，Ｋ．Ｂｕｈｒｍａｎｎ，Ｒ．ＭｃＤｏｎａｌｄおよびＲ．Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ，「Ｏｂｊｅｃｔ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｍｅｍｏｒｙ  ｔｅｓｔ」Ｃｅｒｅｂ．Ｃｏｒｔｅｘ，１９９４，６：６６４−６８０；Ｄ．Ｇａｆｆａｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１９９２，４３８１−３８８；Ｔ．Ｓｔｅｃｋｌｅｒ，Ｗ．Ｈ．Ｉ．Ｍ．Ｄｒｉｎｋｅｎｂｕｒｇｈ，Ａ．ＳａｈｇａｌおよびＪ．Ｐ．Ａｇｇｌｅｔｏｎ，Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，１９９８，５４：２８９−３１１）。
【０２９０】
実験は、３〜５月齢でありかつ２０〜２４ｇ体重のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスで実施する。動物は、動物施設において、５匹でケージ中で、０８：００〜２０：００まで明期である１２／１２時間の明／暗レジメで、水および食餌に自由にアクセスできるように維持する。観察チャンバーは、不透明有機ガラス製であり、４８×３８×３０ｃｍの寸法である。直径２．７ｃｍおよび高さ５．５ｃｍの茶色ガラスバイアルを試験物体として使用する。動物を導入する２〜３分前に、チャンバーおよび物体は８５％アルコールで拭き取る。動物は常にチャンバーの中央に置く。
【０２９１】
１つの局面において、本発明の治療は蒸留水に溶解し、動物体重の１０ｇあたり０．０５ｍｌの量で、訓練の１時間前に胃内に投与する。対応する量の溶媒を対照動物に投与する。
【０２９２】
最初の日に、マウスは試験室に運び、２０〜３０分間馴化させる。その後、各動物を、慣れさせるために、アルコールで前処理した空の行動チャンバーに１０分間配置する。次いで、動物はケージに再配置し、動物施設に入れる。
【０２９３】
翌日、同じマウスを試験室に運び、２０〜３０分間馴化させ、次いで治療（すなわち、本発明の治療を含む溶液）を胃内に与える。物質の投与の１時間後、動物を行動チャンバーに配置し、その底には、認識のための２つの同一の物体（ガラスバイアル）を、角から１４．５ｃｍの距離の対角線上に配置する。２０分後、これをケージに配置し、動物施設に入れる。
【０２９４】
試験は、訓練の４８時間後に実施する。この目的のために、馴化後に、動物を、１時間、慣れさせるために１分間チャンバー中に配置する。１分後、これを取り出し、チャンバーの底で、１つの物体を動物が知っている位置に配置し、他方を新たな位置に配置する。１０分間の時間にわたって各々の物体を別々に調べるためにかかった時間を、２つの電子式ストップウォッチを使用して、０．１秒の精度で記録する。動物の行動は、鏡を通して観察する。２ｃｍの距離で物体に向けて動物の鼻の目的のある接近、または鼻と物体との直接的接触は、正の調査応答と見なされる。
【０２９５】
各マウスのためのパーセント調査時間は、以下の式：ｔＮ１／（ｔＫｌ＋ｔＮｌ）×１００を使用して計算することができる。２つの物体を調べるためにかかった合計の時間は１００％とする。結果はさらに、スチューデントｔ検定法を使用して処理する。この動物モデルにおいて記憶を刺激する治療は、ヒトにおいても同様に働く可能性がある。
【０２９６】
実施例２１  頸動脈の不可逆的閉塞によって生じる虚血のラット脳モデルにおいて、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが虚血を減少する能力の決定
本発明の治療はまた、虚血を阻害するそれらの能力を測定するために試験することができる。ラット脳虚血は、頸動脈の不可逆的な閉塞によって生じ、脳循環および片頭痛の治療のための調製物の実験的研究のための方法論の指示書−「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ（ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ）ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ」Ｍｅｄｉｔｓｉｎａ，Ｍｏｓｃｏｗ，２００５，３３２−３３８頁−に従って実施する。
【０２９７】
実験は、体重が２００〜２５０ｇであり、抱水クロラールで麻酔した（３５０ｍｇ／ｋｇ，腹腔内）異種交配雄性白色ラットに対して実施する。一般的な頸動脈の不可逆的な単回段階の両側結紮を動物に対して実施する。擬似操作動物のグループにおいて、結紮は血管に適用されるが、締め付けない。操作の完了後、動物はランダムに以下ようにグループに分ける：グループ１ラットには、一定用量、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇの本発明の治療を、３０分間後、次いで、操作から１４日間、腹腔内に与える；グループ２ラットは、０．１ｍｇ／ｋｇのニモジピンを、３０分間後、次いで、操作から１４日間、腹腔内に与える。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより低い用量でこのプロトコールで、または虚血の他のモデルを使用して、試験されてもよい。ニモジピンは、本発明の治療の有効性を比較するために使用する。対照群および疑似操作動物には、同じ時間に、生理学的食塩水（０．９％塩化ナトリウム）を与える。データは、Ｂｉｏｓｔａｔプログラムの補助を用いて、パラメトリックまたはノンパラメトリック方法を使用して、統計学的に処理する。
【０２９８】
頸動脈の結紮によって誘導される脳虚血を有する動物における神経学的欠乏は、Ｉ．Ｖ．Ｇａｎｎｕｓｈｋｉｎａの修正におけるＭｃＧｒａｗ  Ｓｔｒｏｋｅ−ｉｎｄｅｘ（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｇｉｏａｒｃｈｉｔｅｃｔｏｎｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｍｅｄｉｔｓｉｎａ，１９７７，２２４頁）を使用して決定する。状態の重篤さは、対応するスコアの合計から決定する。発作（Ｓｔｒｏｋｅ）指標スケール（緩慢な動作、肢の虚弱さ、ヘミプトーシス、ふるえ、円形動作）に対して２．５ポイントまでの軽度の徴候を有し、かつ神経学的障害の重篤な徴候（３〜１０ポイント）−肢の麻痺、下肢の麻痺、側臥位−を有するラットの数は記録する。虚血に由来する損傷の量、その徴候の数または重篤度、または細胞死の数を減少する治療は、ヒトにおける虚血を治療する際に有効であると予想される。
【０２９９】
実施例２２  脳内外傷後血腫（出血性発作）における損傷を、本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが減少する能力の決定
本発明の治療は、脳内外傷後血腫（出血性発作）モデルにおける保護効果を有するか否かを見るために試験されてもよい。この研究は、Ａ．Ｎ．Ｍａｋａｒｅｎｋｏら（Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｌｏｃａｌ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ  ｉｎ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｂｒａｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｉｍａｌｓ．Ｚｈ．ｖｙｓｓｈ．ｎｅｒｖｎ．ｄｅｙａｔ，２００２，５２（６）：７６５−７６８）の修正における脳循環および片頭痛の治療のための調製物の実験的研究のための方法論−「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ（ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ）ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ」Ｍｅｄｉｔｓｉｎａ，Ｍｏｓｃｏｗ，２００５，３３２−３３８頁に従って実施する。
【０３００】
実験は、食餌（標準的なペレット状食餌）および水に自由に接近でき、天然の交互の昼夜を伴う動物施設で維持した、２００〜２５０ｇの体重の異種交配した白色ラットに対して実施する。特別なデバイス（マンドリン−ナイフ）および定位固定を使用して、ネムブタール（４０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）で麻酔したラットの脳組織を、内部の被膜の領域を破壊し、続いて（２〜３分後）、ラットの舌の下から取られた血液（０．０２〜０．０３ｍｌ）の損傷部位に導入する。頭蓋骨の頭皮処理および穿孔術を、擬似操作動物に対して実施する。
【０３０１】
動物は、４つのグループ：擬似操作されたグループ、出血性発作を有する動物のグループ、一定用量、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇで本発明の治療を受容した、出血性発作を有する動物のグループ、および０．１ｍｇ／ｋｇのニモジピンを受容した、出血性発作を有する動物のグループに分ける。本発明の治療の神経保護効果はまた、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇを含むより低い用量でこのプロトコールにおいて、または出血性発作の他のモデルを使用して試験してもよい。物質の効果は、操作の２４時間後、ならびに３、７、および１４日後に記録する。
【０３０２】
本発明の治療およびニモジピンは、発作を有する動物に、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇの同一の用量で、操作の３〜３．５時間後に腹腔内投与し、次いで、操作後１４日間、内皮値投与する。生理食塩水は、対照動物のグループに投与する。各グループは、実験の開始時に９〜１８匹の動物からなる。
【０３０３】
動物における神経学的な欠損は、Ｉ．Ｖ．Ｇａｎｎｕｓｈｋｉｎａ（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｇｉｏａｒｃｈｉｔｅｃｔｏｎｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｍｅｄｉｔｓｉｎａ，１９７７，２２４頁）の修正におけるｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ発作（Ｓｔｒｏｋｅ）指標を使用して決定する。状態の重篤度は、対応するスコアの合計から決定する。発作（Ｓｔｒｏｋｅ）指標スケール（緩慢な動作、肢の虚弱さ、ヘミプトーシス、ふるえ、円形動作）に対して２．５ポイントまでの軽度の徴候を有し、かつ神経学的障害の重篤な徴候（３〜１０ポイント）−肢の麻痺、下肢の麻痺、側臥位−を有するラットの数は記録する。ラットの死亡は観察の全体の期間（１４日間）にわたって記録する。データは、Ｂｉｏｓｔａｔプログラムの補助を用いて、パラメトリックまたはノンパラメトリック方法を使用して、統計学的に処理する。ニモジピン（０．１ｍｇ／ｋｇの用量で）は、上記のスキームを使用して、標準として利用する。
【０３０４】
出血性発作からの損傷の量、徴候の重篤度もしくは数、または死亡の数を減少する治療は、ヒトにおける出血性発作を治療する際に有用であることが予想される。
【０３０５】
実施例２３  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが、ＭＣＩを治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するためのインビトロモデルの使用
ＭＣＩのインビトロモデルもまた、哺乳動物、例えば、ヒトにおけるＭＣＩを治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する、本明細書に記載される治療のいずれかの能力を決定するために使用することができる。ＭＣＩのいくつかの動物モデルが他の研究者によって開発されている。
【０３０６】
例えば、高齢のイヌ（犬）における認知および神経病理学が、ＭＣＩおよびＡＡＭＩについてのモデルとして他の研究者によって使用されてきた（Ｃｏｔｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ．，２００２，２３（５）：８０９−１８）。また、脳低灌流の虚血性再灌流損傷モデルが使用できる。例えば、２血管頸動脈閉塞ラットモデル、例えば、２−ＶＯシステムは、慢性脳低灌流を生じ、ＭＣＩおよびＡＤ病理学における血管の変化を生じる（Ｏｂｒｅｎｏｖｉｃｈら、Ｎｅｕｒｏｔｏｘ  Ｒｅｓ．，１０（ｌ）：４３−５６，２００６）。同様に、Ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅら（Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．，２００５，２５（６）：６６３−７）は、ＭＣＩを模倣する慢性脳低灌流（ＣＢＨ）の加齢ラットモデルを報告している。
【０３０７】
実施例２４  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが、ＡＡＭＩを治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するためのインビトロモデルの使用
ＡＡＭＩのインビトロモデルもまた、哺乳動物、例えば、ヒトにおけるＡＡＭＩを治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する、本明細書に記載される治療のいずれかの能力を決定するために使用することができる。ＡＡＭＩのいくつかの動物モデルが他の研究者によって開発されている。例えば、先の実施例において注記されているように、イヌは、ヒトの加齢において観察されるＡＡＭＩおよびＭＣＩを含む認知の範囲の最も早期の減少を研究するためのより高度な動物モデルを表す（Ｃｏｔｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．，２００２，２３（５）：８０９−１８）。
【０３０８】
実施例２５  本発明の治療、例えば、治療（１）〜（７）のいずれかが、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態を治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定するためのヒト臨床試験の使用
所望される場合、本発明のいずれかの治療はまた、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態、例えば、本明細書に記載される神経系の適応症を治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延する能力を決定する治療の能力を決定するために、ヒトにおいて試験することもできる。標準的な方法、例えば、米国特許第５，５２７，８１４号または同第５，７８０，４８９号に記載されているものなどが、これらの臨床試験のために使用できる。
【０３０９】
１つの例示的な方法において、１種以上の細胞型の活性化、分化、および／または増殖が有益である疾患または状態を有する被験体は、米国特許第５，７８０，４８９号に記載されているものなどの標準的なプロトコールを使用して、治療の耐容性、薬物動態学、および薬力学のフェーズＩ研究に入れる。次いで、フェーズＩＩ、二重盲検ランダム化制御試験を、治療の効力を決定するために実施する（例えば、米国特許第５，７８０，４８９号を参照のこと）。所望される場合、治療の活性は、その疾患または状態のための任意の他の臨床的に使用されている治療と比較することができる。被験体は、標準的な方法、例えば、特定の徴候の機能評価スコアまたは分析を使用して、疾患または状態の進行について分析してもよい。また、適用可能な場合、生存の長さを、治療グループ間で比較することができる（例えば、米国特許第５，７８０，４８９号を参照のこと）。
【０３１０】
実施例２６  ランダム化された、二重盲検の、プラセボ制御されたアルツハイマー病研究
アルツハイマー病のための例示的なヒト臨床試験は、１０／２７／２００６に出願されたＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／８５４，８６６（例えば、段落［０１４４］〜［０１４９］を参照のこと）および２００６年７月４日に発行された米国特許第７，０７１，２０６号に開示されている。手短に述べると、軽度から中程度のアルツハイマー病を有する患者（例えば、約１００〜２００例の患者または患者の任意の標準数）を、６ヶ月間、本発明の治療（例えば、２０ｍｇ、経口、１日３回）またはプラセボにランダムに分ける。患者は、１２週および２６週に、ベースラインにおいて、ＡＤＡＳ−ｃｏｇ（主要エンドポイント）、ＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓ、ＭＭＳＥ、ＮＰＩ、およびＡＤＬを用いて評価する。アルツハイマー病評価スケール（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ）・認知サブスケール（ＡＤＡＳ−ｃｏｇ）スコアは、経時的に記憶および認知を評価する。ミニメンタルスケール試験（Ｍｉｎｉ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍ）（ＭＭＳＥ）もまた、記憶および認知を評価する。アルツハイマー病協同研究−変化の臨床的全体印象（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｓｔｕｄｙ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈａｎｇｅ）（ＡＤＣＳ−ＣＧＩＣ、ＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓとも呼ばれる）は、経時的に患者の全体状態を測定する。これは、記憶、認知、行動、および運動障害を考慮に入れている。神経精神病学的目録（Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）（ＮＰＩ）は、妄想、幻覚、動揺／攻撃、抑うつ／不快、不安、高揚感／多幸感、冷淡／無関心、脱抑制、興奮性／不安定性、運動障害、夜間行動、および食欲／接触を含む１２個のドメインにいて、患者の行動および精神障害を測定する。ＡＤＡＳ−ｃｏｇ、ＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓ、ＭＭＳＥ、ＮＰＩ、およびＡＤＬは、２６週でプラセボと比較してスコア付けする。本発明の治療を評価するために使用するスケールは当業者に公知であり、例えば、Ｄｅｌｅｇａｒｚａ，Ｖ．Ｗ．，２００３，Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓ．，６８：１３６５−１３７２、およびＴａｒｉｏｔ，Ｐ．Ｎ．ら、２０００，Ｎｅｕｒｏｌ，５４：２２６９−２２７６によって記載されている。ＡＤＡＳ−ｃｏｇ、ＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓ、ＭＭＳＥ、ＮＰＩ、および／またはＡＤＬのスコアを改善する本発明の治療は、アルツハイマー病を治療し、予防し、および／またはその発症を遅延し、および／またはその発生を遅延するために有用であることが予想される。
【０３１１】
実施例２７  本発明の方法が脊髄損傷を治療するための能力を決定するためのインビボモデルの使用
本発明の方法が脊髄損傷を治療する能力は、Ｗｉｓｔａｒラットを使用してインビボで評価する。１つの研究において、水素化ピリド［４，３−ｂ］インドールまたはその薬学的に許容される塩、例えば、ディメボンの脊髄損傷を治療するための効果を評価する。
【０３１２】
２ヶ月齢で２５０〜３００ｇの間の体重である８匹の雄性ラットおよび８匹の雌性ラットを、各々２匹の雄および２匹の雌を含む４つのグループに分ける。研究室での実験における動物の使用のための標準的な制度的なおよび倫理的プロトコールに従って、全体を通して１２時間の明／暗サイクルで、食餌および水は自由に利用可能にして、動物を収容する。３日間の馴化期間後、予防的用量の抗生物質シプロフロキサシンを動物に投与する。２時間後、筋肉内注射を介して投与した、２０％クロルプロマジン／８０％ケタミンを含む溶液で、動物を麻酔する。次いで、動物を、適切に配置し、消毒し、そして胸椎１３（Ｔ−１３）と腰椎３（Ｌ−３）の間で外科的脊髄切除を実施する。回復の際に、すべての動物は、脊髄切除のレベルより下に可動性を喪失し、下肢および尾の自発的な可撓性お完全に喪失する。ディメボンは、滅菌生理食塩水溶液中の適切な濃度まで希釈する。グループ１の動物は、８週間の間、１０ｍｇ／ｋｇのディメボンを１日２回与える。グループ２の動物は、８週間の間、３０ｍｇ／ｋｇのディメボンを１日２回与える。グループ３の動物は、８週間の間、６０ｍｇ／ｋｇのディメボンを１日２回与える。グループ４の動物は、８週間の間、同一量のビヒクル（すなわち、生理食塩水溶液）を１日２回与える。下肢および尾における自発的可動性は、各動物において毎週試験する。
【０３１３】
第２の研究において、本発明のエキソビボ方法によって生じた分化した神経細胞の投与が脊髄損傷を治療する能力を評価する。２ヶ月齢で２５０〜３００ｇの間の体重である８匹の雄性ラットおよび８匹の雌性ラットを、各々４匹の雄および４匹の雌を含む２つのグループに分ける。研究室での実験における動物の使用のための標準的な制度的なおよび倫理的プロトコールに従って、全体を通して１２時間の明／暗サイクルで、食餌および水は自由に利用可能にして、動物を収容する。
【０３１４】
３日間の馴化期間後、皮膚、骨髄、および血漿のサンプルを各動物から取り、そして多能性幹細胞（ＭＳＣ）を各々から、標準的な方法によって単離する。細胞を洗浄しかつ粉砕し、次いで、２％  Ｂ２７および０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン（すべてＧＩＢＣＯより）を補充した適切な量の神経基本（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地（ＧＩＢＣＯ）に懸濁する。細胞は、ポリ−Ｌ−リジンコートしたプレート上のウェル中に適切な密度でプレートし、５％ＣＯ２・９５％空気の雰囲気中、３７℃でインキュベートする。ＭＳＣがプレートに接着し、正常に増殖した後、細胞は、有効量の生理食塩水中の１０ｎＭ  ディメボンで毎日処理する。各ウェル中で観察される細胞の７０％より多くが神経突起を出芽し、または分化の他の徴候を示すまで、ＭＳＣの分化は毎日モニターする。次いで、細胞を滅菌神経基本培地で洗浄し、神経細胞特異的抗原と結合する抗ＮｅｕＮ抗体とともにインキュベートし、そしてフローサイトメーター上で分離する。神経細胞を収集し、抗体を解離するために洗浄し、そして上記のように調製した対麻痺ラットへの投与のために等張性緩衝液中で再度収集する。１つの動物のグループは、分化した神経細胞で処理するのに対して、対照グループは同量の等張性緩衝液で処理する。分化した神経細胞は、Ｔ−１３とＬ−３の間の脊髄切除の部位に移植する。下肢および尾における自発的可動性は、８週間の間、各動物において毎週試験する。本明細書に開示される任意の方法および組み合わせ治療は、この実験モデルにおいて試験してもよい。
【０３１５】
実施例２８  本発明の方法が実験的自己免疫脳脊髄炎（「ＥＡＥ」）を治療する能力を決定するためのインビボモデルの使用
実験的自己免疫脳脊髄炎（「ＥＡＥ」）は、ヒトにおける多発性硬化症（「ＭＳ」）のための十分に確立された動物モデルである。ＥＡＥは、神経細胞を取り囲む絶縁被覆であるミエリンを作るタンパク質または種々のタンパク質のフラグメントを用いる注射によって動物に獲得される、急性または慢性の再発性の、後天的な、炎症性の、脱ミエリン性の自己免疫疾患である。ＥＡＥを誘導するために一般的に使用されるタンパク質には、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、およびミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）が含まれる。これらのタンパク質は、動物における自己免疫応答を誘導し、動物自身のミエリンタンパク質み向けられる免疫応答を生じ、これは、次には、ヒトにおけるＭＳと密接に類似する疾患プロセスを生じる。
【０３１６】
ＥＡＥは、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、マカク、アカゲザル、およびマーモセットを含む多数の異なる動物種において誘導されてきた。免疫学的なツールの数、利用可能性、寿命、および動物の繁殖力、および誘導された疾患のＭＳへの類似性を含む種々の理由のため、マウスおよびラットが最も一般的に使用されている種である。同系交配系統は，ＥＡＥに感受性である動物を高い信頼性で産生する。ヒトとＭＳの関係と同様に、すべてのマウスまたはラットがＥＡＥを獲得するための天然の性向を有しているわけではない。
【０３１７】
２ヶ月齢で２５０〜３００ｇの間の体重である８匹の雄性ラットおよび８匹の雌性ラットを、各々４匹の雄および４匹の雌を含む２つのグループに分ける。研究室での実験における動物の使用のための標準的な制度的なおよび倫理的プロトコールに従って、全体を通して１２時間の明／暗サイクルで、食餌および水は自由に利用可能にして、動物を収容する。３日間の馴化期間後、皮膚、骨髄、および血漿のサンプルを各動物から取り、そして多能性幹細胞（ＭＳＣ）を各々から、標準的な方法によって単離する。ＭＳＣは培養されており、分化を受けているのに対して、各動物には、ＥＡＥを誘導するために十分な量のミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）を注射する。
【０３１８】
細胞を洗浄しかつ粉砕し、次いで、２％  Ｂ２７および０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン（すべてＧＩＢＣＯより）を補充した適切な量の神経基本（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地（ＧＩＢＣＯ）に懸濁する。細胞は、ポリ−Ｌ−リジンコートしたプレート上のウェル中に適切な密度でプレートし、５％ＣＯ２・９５％空気の雰囲気中、３７℃でインキュベートする。ＭＳＣがプレートに接着し、正常に増殖した後、細胞は、有効量の生理食塩水中の１０ｎＭ  ディメボンで毎日処理する。各ウェル中で観察される細胞の７０％より多くが神経突起を出芽し、または分化の他の徴候を示すまで、ＭＳＣの分化は毎日モニターする。次いで、所望の供給源からのＭＳＣ（すなわち、皮膚、骨髄、または血漿から精製）を滅菌神経基本培地で洗浄し、神経細胞特異的抗原と結合する抗ＮｅｕＮ抗体とともにインキュベートし、そしてフローサイトメーター上で分離する。神経細胞を収集し、抗体を解離するために洗浄し、そしてＥＡＥを有するラットへの投与のために等張性緩衝液中で再度収集する。１つのグループは、適切な部位で分化した神経細胞で処理するのに対して、対照グループは、グループＩにおいて使用したのと同じ部位で同量の等張性緩衝液で処理する。ＥＡＥの重篤度は、標準的な臨床診断判断基準に従って、４週間の間、毎週評価する。本明細書に開示される任意の方法および組み合わせ治療は、この実験モデルで試験してもよい。
【０３１９】
実施例２９  ディメボンはイオノホア、イオノマイシンによるカルシウムの過負荷に対してミトコンドリアを安定化する
初代神経細胞培養物を、示された妊娠日数のラット胎仔組織から、すなわち、皮質（１７日目）、海馬（１９日目）、または脊柱（１５日目）から調製した。神経細胞は、ＤＮＡｓｅＩの存在下でトリプシン処理によって開始し、２％  Ｂ２７、０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミンを補充した神経基本（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地（ＧＩＢＣＯ）中で培養した。細胞は、ポリ−Ｌ−リジンコートしたプレート上に配置し、接着させ、そして５％ＣＯ２・９５％空気の雰囲気中、３７℃で維持し、次いで、試験化合物を３日間の間加えた。培養物を２．５％グルタルアルデヒドを使用して固定した。状態あたり、約８０枚のデジタル画像を撮影した。神経突起伸長は、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ−Ｐｌｕｓを使用して計算した。各分析は、２回の別々の研究で実施した。ディメボンは、０．０１〜５００ｎＭの濃度で試験し、ＢＤＮＦは５０ｎｇ／ｍＬであった。ミトコンドリアの効果は、ディメボンまたはビヒクル、および０．２５μＭ  イオノマイシンで処理した初代ラット海馬細胞を用いて評価した。ＪＣ−１ミトコンドリア染色に対するディメボンの効果もまた、イオノマイシン処理ヒト神経芽細胞腫細胞（ＳＫ−Ｎ−ＳＨ）において評価した。ＪＣ−１のミトコンドリア蓄積は蛍光顕微鏡によって評価した。
【０３２０】
イオノマイシンおよびディメボン（０．２５ｎＭおよび２．５μＭ）で処理した初代ラット海馬細胞の使用は、ビヒクル処理と比較して、ミトコンドリアのＪＣ−１染色を維持した。同様に、ディメボン処理は、イオノマイシン処理したＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞中でのミトコンドリアのＪＣ−１染色を維持した。ディメボンは、イオノホア
イオノマイシンを用いるカルシウム過負荷に対してミトコンドリアを安定化し、このことは、この化合物が、ミトコンドリアの膜電位の損失を予防することを示唆する。
【０３２１】
前述の発明は、理解の明確化の目的で、図面および実施例によっていくぶん詳細に説明してきたが、特定のわずかな変更および改変が実施されることは当業者には明白である。それゆえに、上記の説明および実施例は、本発明の範囲を限定するものとして見なされるべきではない。
【０３２２】
本明細書に記載されるすべての参考文献、刊行物、特許、および特許出願は、それらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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