(57)【要約】【課題】一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症により生じる、細胞死を含む神経細胞の損傷を減少させる方法を提供する。【解決手段】一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の症状を有する対象を診断し、該症状の発症後１６時間以内に、中枢神経系覚醒剤（ＣＮＳＳ）、モノアミン神経伝達物質、モノアミン酸化酵素阻害剤（ＭＡＯＩ）、三環式抗欝剤（ＴＣＡ）から成る群から選択され、又はこれらの組み合わせである神経を保護できる量の医薬品を前記対象に投与する。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症により生じる神経細胞の損傷又は死の発生を減少させる方法において、
一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の症状を有する対象を診断し、該症状の発症後１６時間以内に、中枢神経系覚醒剤（ＣＮＳＳ）、モノアミン神経伝達物質、モノアミン酸化酵素阻害剤（ＭＡＯＩ）、三環式抗欝剤（ＴＣＡ）から成る群から選択され、又はこれらの組み合わせである神経を保護できる量の医薬品を前記対象に投与することを特徴とする方法。
【請求項２】
医薬品が、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチルフェニデート、メチレンデオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせである請求項１記載の方法。
【請求項３】
医薬品が、５ｍｇ／ｋｇ未満のユニット投与量で対象に投与されるメタアンフェタミンである請求項２記載の方法。
【請求項４】
医薬品が、ＭＡＯＩとＴＣＡから成る群から選択される少なくとも１種の追加薬剤を含む組み合わせである請求項２記載の方法。
【請求項５】
医薬品が、フェニルエチルアミン基を含むアンフェタミンである請求項４記載の方法。
【請求項６】
海馬の細胞に対する神経細胞損傷の発生を減少させる請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記症状が、低血圧、失血、心臓麻痺、絞首、手術、脳梗塞、虚血性視神経障害、又は気道閉塞により生じる請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記症状が、心臓手術により生じる請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記症状の発生後、１４時間以内に、医薬品の単一投与のみを行う請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記投与が、非経口又は経口投与である請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記医薬品が、薬学的に許容できるキャリアを含む薬学的組成物である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記薬学的組成物が、持続放出製剤である請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記医薬品が、ドーパミン、ノルエピネフリン、セロトニンから成る群から選択されるモノアミン神経伝達物質である請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が処置を必要としているヒトである請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記医薬品が、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチルフェニデート、メチレンデオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせである請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
医薬品が、フェニルエチルアミン基を含むアンフェタミンである請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
アンフェタミンがメタアンフェタミンである請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記症状が、虚血性脳梗塞、心臓手術又は虚血性視神経障害により生じる請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記症状が、虚血性脳梗塞、心臓手術又は虚血性視神経障害により生じる請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記医薬品が、手術の２時間以内に投与される請求項１９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症により生じる、細胞死を含む神経細胞の損傷を減少させる方法に関する。当該方法は、一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の症状を有する対象を診断し、該症状の発症後１６時間以内に、前記対象に神経を保護できる量の医薬品を投与することを含んで成る。当該医薬品は、中枢神経系覚醒剤（ＣＮＳＳ）、モノアミン神経伝達物質、モノアミン酸化酵素阻害剤（ＭＡＯＩ）、三環式抗欝剤（ＴＣＡ）から選択され、又はこれらの組み合わせであることが好ましい。好ましい医薬品には、アンフェタミン、メタアンフェタミン（ＭＡ）、メチルフェニデート、メチレンジオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【背景技術】
【０００２】
脳梗塞は、虚血性障害を含む８０％を超える成人の障害の主要な原因である。現在のところヒトに関しては、予防的又は神経保護的な治療が有効であることは証明されていない。アンフェタミンは、最も精力的に研究され、かつ神経細胞損傷が生じた後に脳梗塞の回復を容易にするために使用される有望な薬剤グループの１種である（非特許文献１４参照）。ラットでは、感覚運動皮質切除の２４時間後にアンフェタミン類（例えばデクスアンフェタミン）を単一投与すると、片麻痺の回復が促進される（非特許文献７）。この有用な効果は、多くの異なった病巣の損傷モデル及び種で確認されている（非特許文献６、１０、１１，１６，１９，２１）。これらの研究のそれぞれで、虚血性損傷は、血管成分の永続的な結紮／閉栓、又は皮膚の切除としてモデル化されている。
【０００３】
虚血性障害には異なったタイプがあり、脳への血流の一時的遮断及び再かん流が含まれる。海馬はこの種の虚血性障害に極度に鋭敏である。人間や齧歯類｛げっしるい｝の実験動物では、僅かな虚血性症状の発現が、海馬、特にＣＡ１セクタの錐体細胞に位置する神経細胞の選択的及び遅発性死を生じさせることがある（非特許文献１３）。このタイプの損傷は、空間記憶を含む認知的作業の行動を害する（非特許文献１８及び２５）。アンフェタミンを投与すると局所性虚血や皮層切除のモデルの挙動回復が起こるが、従来技術では、アンフェタミンで処置しても、閉塞体積を減少させるものではない、つまり神経系の予防薬にはならないと報告されている。従来技術は、更にアンフェタミンは、脳の可塑性に影響を与えることによる皮層損傷後の機能回復だけでなく（非特許文献９）、機能解離の解明（非特許文献１２及び２０）を容易にすることを示唆している。しかし従来技術は、中枢黒質の損傷を含む損傷後の回復には寄与しないことを教示している（非特許文献１５）。従来技術は更に、アンフェタミン類（例えばメタアンフェタミン：ＭＡ）を局所的虚血前に投与すると、皮層及び線条体領域の閉塞体積を実際に減少させることを教示している（非特許文献２４）。
【０００４】
それが起きないように神経細胞の損傷を防止し、かつ一時的な脳の低酸素及び／又は虚血性状態の発生後に損傷を最小化し又は防止するために神経細胞の保護したいという要請が依然として存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】アライ, H., ヤマモト, T., コバヤシ, Y.,フタガミ, K., カワサキ, H., ゴミタ, Y. 2002.  「モンゴルのスナネズミにおける脳虚血に起因する活動過剰に対するメタアンフェタミンとイミプラミンの効果」、Japan Journal of Pharmacology 88, 293-299.
【非特許文献２】バブコック, A.M., ベイカー, D. A., ロバック, R.  1993. 「虚血性スナネズミの自発運動」、 Brain Research 625, 351-354.
【非特許文献３】ボエソン, M.G., フィーニー, D.M. 1990.「脳室内のノレピネフリンは、感覚運動皮質の損傷後の運動回復を容易にする」Pharmacology Biochemistry Behavior 35, 497-501.
【非特許文献４】ボエソン, M.G., ハーモン, R. L., ジョーンズ, J. L. 1994. 「感覚運動皮質の損傷後の機能的運動回復への、フレオキシチン、アミトリプチリン及びセレトニンの比較効果」 American Journal Physical Medicine Rehabilitation 73, 76-83.
【非特許文献５】クルムジー  C, セムコワ L, クリーグルシュタイン  J. 1999. 「ＮＧＦは、ＮＧＦアンチセンス研究からの、インビボ及びインビトロのクレンブテロールに対するベータ２−アドレナリン受容体の神経防護効果を仲介する」Neurochemistry International 35, 47-57.
【非特許文献６】ディートリッヒ W.D., アロンソ O., ブスト R.,  ワトソンB.D., ロワY., ギンスベルクM.D. 1990. 「正常及び梗塞したラットの脳の体性感覚機能に対するアンフェタミン処理の影響」Stroke 21, III147-III150.
【非特許文献７】フィーニー D.M., ゴンザレスA., ロー W.A. 1982. 「アンフェタミン、ハロペリドール及び体験は、感覚運動皮質の損傷後の回復速度に影響を与えるよう作用する」Science 217, 855-857.
【非特許文献８】フォレサ  P., モケッティI. 1993. 「ラットの中枢神経システムにおける、ベータアドレナリン受容体活性化及びアドレナリンステロイドによる基本的な繊維芽細胞成長因子及び神経成長因子ｍＲＮＡの調節」Molecular Pharmacology 43, 132-138.
【非特許文献９】ゴールドP. E., デラノイR. L., メッリンJ. 1984. 「末梢投与されたアンフェタミン及びエピネフリンによる長期間相乗効果の調節」Brain Research 305, 103-107.
【非特許文献１０】ホブダD. A., フィーニー  D. M. 1985.「猫の両側の視覚皮質切除後に、ハロペリドールは、アンフェタミンに起因する両眼の奥行き知覚回復を阻害する」 Proceedings Western Pharmacology Society 28, 209-211.
【非特許文献１１】ホブダD. A., フィーニー  D. M. 1984.「猫の片側の前部皮質損傷後に、アンフェタミンは運動機能回復を促進する」Brain Research 298, 358-361.
【非特許文献１２】ホブダD. A.,サットンR.L.,フィーニー  D. M. 198７.「猫の視覚皮質切除後の、触覚性踏み直しの回復：機能解離の挙動的及び代謝的研究」Experimental Neurology  97, 391-402.
【非特許文献１３】キリノ  T. 1982. 「虚血後のスナネズミの海馬中の神経細胞の死の遅れ」  Brain Research 239,  57-69.
【非特許文献１４】マーチンソン  L., エクスボリ S. 2004  「脳梗塞回復用薬剤：アンフェタミンの例」Drugs Aging 21, 67-79.
【非特許文献１５】ミンツM., トーマー R. 1986. 「黒質損傷後にアンフェタミンに露出すると、挙動回復プロセスを阻害する」Pharmacology Biochemistry Behavior 25, 1307-1311.
【非特許文献１６】シャマンケ  T.D., アベリR. A., バースT.M. 1996.「ラットの皮質損傷後の機能回復に対するアンフェタミンの効果は、タスクの挙動的要求に依存する」Journal of Neurotrauma 13, 293-307.
【非特許文献１７】センコワL, シリングM.,ヘンリクーノワクP.,  ラミ A., クリーグルスタインJ. 1996.  「クレンブテロールは、ＮＧＦの誘導により、マウスの大脳皮質及びラットの海馬を虚血性損傷から保護し、培養された海馬の神経細胞中のグルタミン酸塩の神経毒性を弱める」Brain Research 717, 44-54.
【非特許文献１８】スクワイア L.R., ゾラーモルガン S. 1991. 「医学的な側頭葉メモリシステム」Science 253, 1380-1386.
【非特許文献１９】ストローマーR.P., ケント T. A.,  フルゼボッシュCE. 1998. 「ラットの新皮質梗塞後のＤ−アンフェタミン治療による卓越した新皮質の神経の発芽、シナプス形成及び作用回復」  Stroke 29, 2381-2393.
【非特許文献２０】サットンR.L., ホブダ D. A., チェンM. J., フィーニー D. M. 2000. 「アンフェタミン、シトクロム酸化酵素組織化学研究による脳損傷に起因する脳代謝減退の緩和」  Neural Plasticity 7, 109-125.
【非特許文献２１】サットンR.L., ホブダ D. A., J., フィーニー D. M. 1989  「アンフェタミンは、猫の両側前頭皮質切除後の運動機能の回復を加速する」Behavioral Neuroscience 103, 837-841.
【非特許文献２２】トイヒャートーヌートG, ダワースRR, ヒルデブラント K. 2000. 「成人をメタアンフェタミンで処置すると、スナネズミの海馬中の歯状回顆粒細胞の増殖が一時的に減少する」Journal Neural Transmission 107, 133-143.
【非特許文献２３】ワンD., コーベットD. 1990. 「脳虚血、運動活性及び空間マッピング」Brain Research 533, 78-82.
【非特許文献２４】ワンY., ハヤシT., チャンC.F.,チエンY.H., ツオL.I., スー  T.P., ボーロンガンC, リンS.Z. 2001.  「メタアンフェタミンは、一時的な中大脳動脈結紮後の虚血／再かん流の損傷の治療効果を高める」Stroke 32, 775-782.
【非特許文献２５】ゾラーモルガンS., スクワイア L.R.,アマラルD. G. 1986. 「ヒトの記憶喪失及び側頭葉領域：海馬のフィールドＣＡＩに限定された両側性病変後の記憶障害の耐性Journal of Neuroscience 6, 2960-2967.
【非特許文献２６】「レミントンの薬科学（１８版）」ペンシルベニア州イーストンのマック・パブリッシング社（１９９０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本明細書には前記予防方法が開示され、本発明は、損傷発生後に処置したり回復の促進を試みる替わりに、脳の神経細胞の損傷を防止し又は減少させる方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、一過性の脳の低酸素及び／又は虚血により生じる神経細胞の損傷の発生を減少させる方法に関する。当該方法は, 一過性の脳の低酸素及び／又は虚血状態にある対象を診断し、該症状の発症後１６時間以内に、神経を保護できる量の医薬品を前記対象に投与する工程を含む。当該医薬品は、中枢神経系覚醒剤（ＣＮＳＳ）、モノアミン神経伝達物質、モノアミン酸化酵素阻害剤（ＭＡＯＩ）、三環式抗欝剤（ＴＣＡ）から成る群から選択され、又はこれらの組み合わせである。
【０００８】
好ましい医薬品は、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチルフェニデート、メチレンデオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせを含む。
【０００９】
ある態様では、医薬品は、対象に対して、５ｍｇ／ｋｇ未満の単一投薬量で投与されるメタアンフェタミンである。
【００１０】
他の具体的な態様では、前記医薬品は、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチルフェニデート、メチレンデオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせ、又はこの組み合わせに、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチルフェニデート、メチレンデオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせに、モノアミン神経伝達物質、ＭＡＯＩ又はＴＣＡから成る群から選択される少なくとも１種の付加的な薬剤を加えたものである。該付加的な薬剤は、好ましくはドーパミン、ノレピネフリン又はセレトニンから成る群から選択されるモノアミン神経伝達物質を含んでいても良い。
【００１１】
本発明は、細胞死を含む脳神経細胞の損傷の発生を減少させることが好ましく、神経細胞への損傷の発生を減少させることがより好ましい。好ましい態様では、本発明は、海馬の神経細胞への損傷の発生を減少させる。
【００１２】
一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症状は、血液のロス、心臓発作、絞首、手術（例えば心臓手術）、脳梗塞、気道閉鎖、虚血性視神経障害、脊髄損傷、外傷性脳損傷又は低血圧により生じることが多い。しかしこれらの症状は、多くの条件により生じ、例えば神経細胞に到達する酸素及び／又はグルコースの欠乏による神経細胞の損傷を生じさせることが含まれる。
【００１３】
好ましい態様では、医薬品は症状の発症後、１６、１４、１２、１０、８、６、４又は２時間後に投与される。前記医薬品は、非経口的又は経口的に投与されることが好ましいが、他の経路も考慮され、症状に応じて使用できる。
【００１４】
他の態様では、前記医薬品は、薬学的に許容できるキャリアを含む薬学的組成物として投与する。症状や再発の可能性に応じて、前記薬学的組成物は、即効性又は持続性製剤とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、酸素―グルコース欠乏（ＯＧＤ）後のＭＡの神経保護の用量応答を示す。ＯＧＤ後４８時間に撮影した、ヨウ化プロピジウムで染色されたラットの海馬スライス培地の代表的な画像を示す。培地は、ＭＡの次の用量で処置した。（Ａ）非ＯＧＤコントロール、（Ｂ）１２５ｍのＭＡ添加したＯＧＤ後５分、（Ｃ）２５０μｍのＭＡ添加したＯＧＤ後５分、（Ｄ）５００μｍのＭＡ添加したＯＧＤ後５分、（Ｅ）１μＭのＭＡ添加したＯＧＤ後５分、（Ｆ）ＯＧＤのみ。グラフは、ＰＩ染色による相対蛍光強度（ＩＯＤ）の統計分析を示す。**=p<0.01, ワンウェイANOVA, Dunnet's Post-Hoc (OGD), エラーバー= mean & SEM; (OGD) n=10, (Non-OGD) n=13, (ImM MA) n=10, (500μM MA) n=１１, (250μM MA) n=9, (125μM MA) n=7
【図２】図２は、ＯＧＤ後のＭＡ媒介神経保護の一時的な分析を示す。ＯＧＤ後４８時間に撮影した、ヨウ化プロピジウムで染色されたラットの海馬スライス培地の代表的な画像を示す。２５０μＭの用量のＭＡを経過時間で脳梗塞発症後に投与した。（Ａ）非ＯＧＤ、（Ｂ）ＯＧＤ後０〜５分、（Ｃ）ＯＧＤ後２時間、（Ｄ）ＯＧＤ後４時間、（Ｅ）ＯＧＤ後８時間、（Ｆ）ＯＧＤ後１６時間、（Ｇ）ＯＧＤ後、未処置。グラフＨは、ＰＩ染色による相対蛍光強度（ＩＯＤ）の統計分析を示す。n=4, *=p<0.05, ワンウェイANOVA,  Dunnet's post-hoc (OGD),エラーバー= mean & SEM
【図３】図３は、新規な野外器具で移動した平均（±SEM）距離を示す。動物は、５分、２血管閉塞（ＶＯ）後、又は偽手術（Ｓｈａｍ）後、２４時間テストした。手術後（１〜２分）、スナネズミにメタアンフェタミン（５ｍｇ）又は生理食塩水ビヒクル（０ｍｇ）を与えた。スナネズミを中央領域に位置させ、新規環境で５分間診察した。挙動データを自動追跡システムを使用して集めた。メタアンフェタミン処置をしていない虚血したスナネズミは、薬剤処置していない偽手術のグループと比較して、かなり活動的であった。薬剤で処置した虚血性の及び偽手術のスナネズミには相違はなく、コントロール条件に関して活動レベルの実質的な変化は得られなかった。*P < 0.05 vs. Isch + 薬剤条件
【図４】図４は、虚血による損傷（Ｉｓｃｈ）又は偽コントロール手術（Ｓｈａｍ）後、２１日で評価した海馬部分の個々の組織学的な評価のスコアを示す。スナネズミは、手術後１〜２分で、メタアンフェタミン（５ｍｇ）又はビヒクル（０ｍｇ）で処置した。海馬ＣＡＩ領域への損傷を４点評価尺度を使用して評価した。各動物に、０の評価（通常の神経体のコンパクトな４〜５層）、１（変化したニューロンが存在する、４〜５のコンパクトな層）、２（「ゴースト・スペース」及び／又はそれらの間のグリア細胞を有するスペアの神経体）、３（ＣＡＩサブフィールドの強いグリオシスを有する稀な通常神経体のみが完全に存在しないか存在する）の評価を与えた。分析により、メタアンフェタミンでの処置が、虚血による損傷後の海馬ＣＡＩへの損傷を大きく減少させることが分かった。
【図５】図５は、虚血による損傷又は偽操作に続いてメタアンフェタミン（５ｍｇ／ｋｇ）又はビヒクルを投与し、その後、２１日の加工された海馬の断面の顕微鏡写真である。５分、２血管閉塞（ＶＯ）は、海馬ＣＡＩ領域中の錐体神経の選択的なロスを生じさせた（グラフＣ及びＤ）。期待されるように、偽手術（グラフＡ及びＢ）は神経細胞のロスを生じさせなかった。虚血による損傷後、１〜２分でメタアンフェタミンで処置したスナネズミは、海馬への損傷を示さなかった（グラフＥ及びＦ）。断面はクレシルバイオレットで染色した。スケールバー= 200 μm (A, C, E)及び60 μm (B, D, F).
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症により生じる、細胞死を含む脳神経細胞の損傷を減少させるために使用できる。当該方法は、海馬細胞の損傷の発生を減少させることが好ましい。一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の症状は、一時的な脳細胞への酸素及び／又はグルコースの欠乏を生じさせる多くの条件により発生する。例えば心臓麻痺、絞首、手術（例えば心臓の手術）、脳梗塞、失血、気道閉塞又は低血圧である。処置される対象は、例えば猿、犬、猫、馬、牛、羊、豚などの哺乳類であることが好ましく、人間であることがより好ましい。
【００１７】
神経細胞の損傷が実際に生じた後に、単にその回復を促進する従来技術と対照的に、本発明方法は、一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の発症後の、脳神経細胞を保護しかつ損傷を防止する。対象の神経を最大に保護するために、一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の発症後、１６時間以内（例えば１０、８．６、４、２時間）に神経を保護できる医薬品を投与すべきである。当該神経を保護できる医薬品は、中枢神経系覚醒剤（ＣＮＳＳ）、モノアミン神経伝達物質、モノアミン酸化酵素阻害剤（ＭＡＯＩ）、三環式抗欝剤（ＴＣＡ）又はこれらの組み合わせから選択されることが好ましい。
【００１８】
より好ましい態様では、前記神経を保護できる医薬品は、アンフェタミン、メタアンフェタミン、メチルフェニデート、エチレンジオキシメタアンフェタミン、又はこれらの組み合わせである。ある態様では、アンフェタミンは、フェニルエチルアミンを含む化合物である。フェニルエチルアミンは、例えばデキストロアンフェタミン・アスパラギン酸塩、デキストロアンフェタミン・硫酸塩、デキストロアンフェタミン・サッカラート、メタアンフェタミンのようなｄ−アンフェタミンである。非限定的な例は、アドレックス（ADREX）、ビフェタミン（BIPHETAMINE）、デソキシン（DESOXYN）、デキセドリン（DEXEDRINE）、フェルンデックス（FERNDEX）、ロベース（ROBESE）、スパンスル（SPANSULE）、オキシデス（OXYDESS）ＩＩ、デクストロスタット（DEXTROSTAT）を含む。
【００１９】
医薬品は、薬学的に受け入れられるキャリアを含む薬学的組成物として投与されることがある。該薬学的組成物は、再発の条件や可能性に応じて、即効性又は徐効性製剤とすることができる。前記組成物は、例えばモノアミン神経伝達物質、MAOI、TCAから成る群から選択される少なくとも１種の付加薬剤を含む、更に他の薬学的に活性な化合物を含んでいても良い。前記付加薬剤は、ドーパミン、ノレピネフリン、セレトニンから成る群から選択されるモノアミン神経伝達物質を含むことが好ましく、ノレピネフリンを含むことがより好ましい。
【００２０】
神経保護薬剤を含む薬学的に受け入れられる毒性のない組成物を調製するために使用する種々の合成方法は当業者に公知である。
【００２１】
薬学的組成物は、個々の投与形態で調製できる。従って本発明の薬学的組成物及び投与形態は、本明細書に開示した活性成分を含む。「医薬品」又は「神経保護薬剤」という表示は、本明細書に記載した本発明の化合物又はその塩を示す。本発明の薬学的組成物及び投与形態は、更に薬学的に受け入れられるキャリアを含んでいても良い。
【００２２】
「薬学的に受け入れられる」とは、動物用、特に人間用として連邦又は州政府の監督官庁により承認された、又は米国薬学方又の一般に認識された薬学方に列挙されていることを意味する。「キャリア」とは、活性成分とともに投与される希釈剤、補助薬、賦形剤又は増量剤を意味する。このような薬学的キャリアは、石油、動物、野菜又は合成由来の、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油を含む水や油のような液体でも良い。前記薬学的キャリアは、生理食塩水、ガム・アカシア、ゼラチン、でんぷん糊、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素等でも良い。更に他の補助薬を使用しても良い。
【００２３】
患者に対する、本発明の単一ユニット投与の形態は、経口、粘膜（例えば鼻、舌下腺、膣、口腔又は直腸）、非経口（例えば皮下、静脈、ボーラス注入、筋肉内又は動脈内）又は経皮性投与が適している。投与形態の例は、錠剤、カプレット、軟性ゼラチンカプセルなどのカプセル、封をしたもの、トローチ、薬用キャンディ、分散剤、坐薬、軟膏、湿布、ペースト、粉末、包帯剤、クリーム、絆創膏、溶液、パッチ、エアロゾル（例えば、鼻腔用スプレイ又は吸入器）及びゲルを含むがこれらに限定されない。患者への経口又は粘膜投与に適した液体投与の形態の例は、懸濁物（水性又は非水性液体懸濁物、水中油系乳剤又は水中油系液体乳剤）、溶液及びエリキシル剤を含むがこれらに限定されない。患者への非経口投与に適した液体投与の形態の例は、患者への非経口投与に適した液体投与の形態に戻すことができる滅菌固体（結晶性又は無定形固体）を含むがこれらに限定されない。これらの薬剤は非経口又は経口の経路を通って投与されるが、本明細書で述べたような他の経路も意図でき、虚血の状態に大きく依存する。
【００２４】
本発明における組成物、形状及び投与形態は、投与経路と処置される動物に応じて変化する。例えば非経口の投与形態は、同じ病状を処置するために使用される経口投与よりも少量の１又は２以上の活性成分を含む。当業者に明らかなように、本発明における具体的な投与形態の経路は互いに変化することがある（例えば非特許文献２６参照）。
【００２５】
薬学的組成物及び投与形態では、１又は２以上の賦形剤を含むことがある。好適な賦形剤は薬学の当業者に周知であるが、好適な賦形剤の非限定的な例を本明細書中で示す。特定の賦形剤を薬学的組成物中に組み入れるかあるいは投与形態に組み入れるかは、これに限定されるものではないが、患者に投与される投与形態の手法を含む当業者に周知な種々の因子に依存する。例えば錠剤のような経口投与形態では、非経口投与形態での使用に適さない賦形剤を含んでいても良い。特定の賦形剤の溶解度は、投与形態の特定の活性成分にも依存する。例えば活性成分の分解は、ラクトースのような賦形剤により、又は水に露出されることにより加速される。
【００２６】
本発明は、活性成分の分解速度を減少させる１又は２以上の化合物を含む薬学的組成物及び投与形態にも関連する。本発明で「安定剤」として参照されるこのような化合物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤、ｐＨ緩衝剤又は塩緩衝剤を含むが、これらに限定されない。
【００２７】
特定の条件又は処置方法に関して、投与は、既知方法が使用されて経験的に決定される。その決定に際しては、使用する特定の化合物の生物学的な活性、投与方法、対象の年齢、健康及び体重、症候の性質及び程度、処置の頻度、他の治療での投与、及び所望の効果などに依存する。以下に、例示のみの目的で、可能である種々の投与形態、及び投与方法を記載する。実際の投与及び投与又は受け渡しのその方法は当業者によって決定されるであろう。例えば神経保護薬剤が人間に投与されるメタアンフェタミンの場合、単一の投与量は５ｍｇ／ｋｇ未満である。投与量を増やすことは一般に有害であり、避けるべきである。
【００２８】
投与の頻度は、使用する化合物と、持続放出製剤を使用するかにも依存する。しかし殆どの疾患の処置の場合、単一投与が好ましい。
【００２９】
［経口投与形態］
経口投与に適した本発明の薬学的組成物は、錠剤（例えば噛み砕ける錠剤）、カプレット、カプセル及び液体（例えば香り付きシロップ）を含むがこれらに限定されない個々の投与形態で提供される。これらの投与形態は予め定めた量の活性成分を含み、当業者に周知な方法で調製される（非特許文献２６参照）。
【００３０】
本発明の典型的な投与形態の薬剤は、公知の製剤技術に従って、活性成分を少なくとも１種の賦形剤と十分に混合して調製される。賦形剤は、投与に望ましい調製形態に応じて種々の形態を取ることができる。例えば経口の液体又はエアロゾルの投与形態での使用に適した賦形剤は、水、グリコール、オイル、アルコール、着香料、防腐剤及び着色剤を含むが、これらに限定されない。固体の経口投与形態（粉末、錠剤、カプセル及びカプレット）での使用に適した賦形剤の例は、澱粉、砂糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、バインダ及び崩壊剤などを含むが、これらに限定されない。
【００３１】
その投与の容易性から、錠剤とカプセルは最も有利な経口投与形態であり、この場合には固体の賦形剤が使用される。望ましければ、錠剤を、標準的な水性又は非水性技術を使用して被覆しても良い。このような投与形態は、任意の薬学的方法で調製できる。一般に、薬学的組成物及び投与形態は、活性成分を液体キャリアと又は微細に分割された固体キャリアと、あるいはそれら両者と均一にかつ十分に混合し、次いで必要に応じて製品を所望の体裁に成形して調製される。
【００３２】
例えば錠剤は圧縮又は成型で調製できる。圧縮錠剤は、賦形剤と混合されていても良い、粉末又は粒状のような流動性の活性成分を好適な機械の中で圧縮することにより調製できる。成型錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿潤化した粉末化合物の混合物を好適な機械で成型することにより調製できる。
【００３３】
本発明の経口投与形態で使用できる賦形剤の例は、バインダ、充填剤、崩壊剤及び潤滑剤を含むが、これらに限定されない。薬学的組成物及び投与形態での使用に適したバインダは、コーンスターチ、じゃがいものでんぷん、又他のでんぷん、ゼラチン；アカシア、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギン酸塩、粉末トラガカント、グアーガム、セルロース及びその誘導体（例えばエチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）のような天然及び合成ゴム；ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ゼラチン化前のでんぷん、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えば番号２２０８、２９０６、２９１０）、微結晶セルロース、及びこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
【００３４】
好適な微結晶セルロースの形態は、アビセル（AVICEL）-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (ペンシルベニア州マーカスフックのエフエムシー・コーポレイションのアメリカン・ビスコース・ディビジョンのアビセル。セールスから販売)及びこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
【００３５】
具体的なバインダは、AVICEL RC-581として販売されている微結晶セルロースとナトリウムカルボキシメチルセルロースの混合物である。好適な無水物又は低湿度賦形剤又は添加物は、AVICEL-PH-103とでんぷん（Starch）1500 LMを含む。
【００３６】
本明細書で開示している、本発明の薬学的組成物及び投与形態は、滑石、炭酸カルシウム（粒状又は粉末）、微結晶セルロース、粉末セルロース、デキストレート、カオリン、マニトール、ケイ酸、ソルビトール、でんぷん、ゼラチン化前でんぷん、及びこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。本発明の薬学的組成物のバインダ又は充填剤は、薬学的組成物又は投与形態に対して、約５０から約９９重量％存在する。
【００３７】
本発明の組成物で使用される崩壊剤は、水性雰囲気に露出されたときに、錠剤を崩壊させる。大過剰の崩壊剤を含む錠剤は貯蔵中に崩壊することがあり、他方崩壊剤が少な過ぎると、所望速度及び所望条件で崩壊しなくなる。従って、活性成分の放出を有害なものに変えてしまうような過剰でも過小でもない十分な量の崩壊剤を使用して本発明の固体の経口投与形態を形成すべきである。使用する崩壊剤の量は、当業者が容易に認識できるように、組成物のタイプにより変化する。典型的な薬学的組成物は、約０．５から約１５重量％の、好ましくは約１から約５重量％の崩壊剤を含む。
【００３８】
本発明の薬学的組成物及び投与形態で使用できる崩壊剤は、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶セルロース、ナトリウムクロスカルメロース、クロスポビデン、カリウムポラクリリン、でんぷんグリコール酸ナトリウム、ジャガイモ又はタピオカのでんぷん、他のでんぷん、ゼラチン化前でんぷん、他のでんぷん、土、他のアルギン酸、他のセルロース、ガム、及びこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
【００３９】
本発明の薬学的組成物及び投与形態で使用できる潤滑剤は、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽鉱油、グリセリン、ソルビトール、マニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコ-ル類、ステアリン酸、硫酸ラウリルナトリウム、滑石、水素化植物油（ピーナッツ油、綿実油、ひまわり油、ごま油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天及びそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
【００４０】
付加的な潤滑剤は、例えばシロイド・シリカゲル（メリーランド州ボルチモアのＷ．Ｒ．グレース・カンパニーが製造するＡＥＲＯＳＩＬ２００）、合成シリカの凝固エアゾル（テキサス州ピアノのデグッサ・カンパニーが販売）、ＣＡＢ−０−ＳＩＬ（マサチューセッツ州ボストンのキャボット・カンパニーにより販売される発熱性の二酸化ケイ素製品）及びこれらの混合物を含む。潤滑剤を使用する場合には、具体的には、それが添加される薬学的組成物又は投与形態の１重量％未満の量とする。
【００４１】
本発明の固体の経口投与形態は、活性成分、無水ラクトース、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸、コロイド状無水シリカ、及びゼラチンを含むことが好ましい。
【００４２】
［非経口投与形態］
非経口投与形態は、皮下、静脈、ボーラス注入、筋肉内又は動脈内を含むが、これらに限定されない種々の経路で患者に投与できる。これらの投与は、不純物に対する患者の自然免疫能をバイパスするため、非経口投与形態は、患者への投与前に、無菌であること又は無菌にできることが好ましい。非経口投与形態の例は、注入できる溶液、薬学的に受け入れられる注入用補形剤（ビヒクル）に溶解又は懸濁させられる乾燥品、注入懸濁物及び乳化物を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
本発明の非経口投与形態に使用できる好適な補形剤は、当業者に周知である。その例は、注射用蒸留水（米国薬局方）を含むが、これらに限定されない。更に塩化ナトリウム注射、リンガー液、ブドウ糖注射、ブドウ糖及び塩化ナトリウム注射、乳酸加リンガー液などの水性補形剤を含むが、水性補形剤はこれらに限定されない。更にエチルアルコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールなどの水溶性補形剤を含むが、水溶性補形剤はこれらに限定されない。更にコーン油、綿種油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル及び安息香酸ベンジルなどの非水性補形剤を含むが、非水性補形剤はこれらに限定されない。
【００４４】
本発明を以下の非限定的な実施例により説明する。以下の記載は、本発明の好ましい態様に関するもので、特許請求の範囲に記載した本発明の範囲を逸脱することなく、修正することが可能であると理解すべきである。
【００４５】
［実施例］
一過性の脳の虚血症により生じる損傷後のアンフェタミンの神経保護作用の有効性に関しては従来は研究されていなかった。本実施例では、一過性の脳の虚血症のイン・ビトロ及びイン・ビボのモデルを使用してメタアンフェタミン（ＭＡ）を評価した。イン・ビトロのモデルでは、ラットの海馬のスライス培養から、酸素及びグルコースを除去した。一連の第２の実験では、５分、２血管閉塞（ＶＯ）海馬モデルを、インビトロでＭＡの神経保護効率をテストするための挙動テストと組み合わせて使用した。本実施例では、驚くべきことに、一過性の脳の虚血症後１６時間以内にＭＡを投与すると、実際に神経保護が起こり、死を含む神経細胞の損傷を減少させることが発見されかつ証明された。
【００４６】
［物質及び方法］
１．１動物
全ての実験動物の操作は、大学の動物の管理および使用に関する委員会により承認された。６０〜８０ｇの雄のモンゴルスナネズミ（メリオネス・アングイクラタス）２８匹を使用してインビボ実験を行った。これらの動物は、個々に、光（１２時間の光／暗サイクル）及び温度（２３℃）制御された環境に置いた。市販の殺鼠剤及び水を適宜供給した。
【００４７】
１．２  インビボの海馬スライス研究
出産後７日（Ｐ７）の新生ラット（Sprague-Dawley）を、無菌状態で頭部を切除し、海馬を分析した。海馬を、マクルウェイン（Ｍｃｌｌｗａｅｉｎ）の組織チョッパで４００μｍのスライスに切断し、個々のスライスを、５％ＣＯ２中３７℃で、６日間６枚のウェルプレート中のミリセル（Millicell）透過性膜（孔径０．４μｍ）上で培養した。最初の２日間は、スライスは、第１のプレート媒体（５０％ＤＭＥＭ（＋）グルコース、２５％ＨＢＳＳ（＋）グルコース、熱で不活性化した２５％ウマ血清、５ｍｇ／ｍＬのＤ−グルコース（シグマ社）、１ｍＭのグルタマックス、１．５％のペンストレプ／ファンギゾーン（ギブコ社）及び５０ＸＢ２７（ギブコ社）補液に酸化防止剤を加えたもの）に保持し、２４時間ごとに変化させた。４日目に、前記スライスを血清のない神経基礎媒体（１０ｍＬのニューロバーザルＡ、２００μＬの５０ＸＢ２７補液、１００μＬの１００Ｘファンギゾーン及び１００μＬの１００Ｘグルタマックス）に位置させ、この媒体を４８時間毎に変化させた。実験の２４時間前に、インサートを、血清を含まず、酸化防止剤のない神経細胞培養及びＢ２７補液中に位置させた。酸素―グルコース欠乏（ＯＧＤ）の前に、グルコースを含まない平衡塩類溶液（ＢＳＳ）（１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１．２５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、２ｍＭのＭｇＳＯ４，２ｍＭのＣａＣｌ２、２５ｍＭのＮａＨＣＯ３、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．３の２５ｍＭのサッカロース）を、５％ＣＯ２と１０Ｌ／時の窒素ガスを使用して、１時間で注入した。次いで、インサーチを、ヘモグロビンが減少したＢＳＳに移し、ガスレベルを、０．1％Ｏ２、５％ＣＯ２、９４．４％窒素に９０分間維持した酸素フィードバックセンサを有する３７oタンク（酸素濃度調節可）中に位置させた。ＯＧＤ後、スライスを、直ちに予備加熱した神経細胞培養に戻し、実験プロトコルに従って分析した。
【００４８】
１．３  一過性の脳の虚血症
スナネズミを、イソフルレンを使用して麻酔を掛け、恒温ブランケット（アメリカ合衆国サウスナチックのハーバード・アパラタス社）を使用し、手術の間、体の中央の温度を３７〜３８℃に維持した。首の中央線での切開を行い、総頚動脈を分離し、８５ｇの圧力動脈瘤クリップ（ＩＳＣＨ，ｎ＝１４）を使用して５分間塞いだ。頚動脈をクリップで固定しなかったこと以外は、第２のグループのスナネズミに同じ操作を行った。切開部を縫合し、２分間の再かん流内に、動物にメタアンフェタミン（ＭＡ，５ｍｇ／ｋｇ、ｉ.ｐ）又は同量の賦形剤（生理食塩水、０ｍｇ）を与えた。動物を暖めたケージに入れ、３０分間観察した。チレノール（８ｍｇ／ｍｌ）を飲料水に加え、術後鎮痛を行った。
【００４９】
１．４  挙動テスト及び組織学的評価
各スナネズミを、高さ１５ｃｍの壁を有する７７ｃｍ×７７ｃｍの金属スクリーンの床から成る野外器具で、術後の４８時間にテストした。動物を中央領域に位置させ、新規環境で５分間診察した。挙動データ（移動距離、速度）を自動追跡システム（イリノイ州ステーティング社のＡＮＹ−maze）を使用して集め、ＡＮＯＶＡ及び好適な事後テストを使用して評価した（Ｐ＜０．０５であると有意であると考えた）。術後２１日目に、ＣＯ２を使用してスナネズミを安楽死させ、リン酸緩衝生理食塩水次いで４％パラフォルムアルデヒドで再かん流した。ＭＡ（ＳＨＡＭ＋０ｍｇ）で処理した病気のスナネズミの組織は評価しなかった。これはＭＡを迅速に投与して、このグループの海馬を組織学的に変化させることが期待できなかったからである。脳を除去しかつ４８時間固定して、海馬領域から４０μｍのマイクロスライスしたセクションを集めた。これらのセクションをスライドに載せ、クレシル・バイオレットで染めた。海馬ＣＡＩ領域への損傷を、非特許文献２に記載した４点評価尺度を使用して、二人の別の観察者により、処理状態の知識なしに評価した。各動物に、０（通常の神経体の４〜５のコンパクトな層）、１（変化したニューロンが存在する、４〜５のコンパクトな層）、２（「ゴースト・スペース」及び／又はそれらの間のグリア細胞を有するスペアの神経体）、３（ＣＡＩサブフィールドの強いグリオシスを有する稀な通常神経体のみが完全に存在しないか存在する）の評価を与えた。評価尺度はノンパラメトリック統計で平均化しかつ評価した（Kruskal-Wallis 及びMann-Whitney のＵテスト、P < 0.05であると有意であると考えた）。
【００５０】
［結果］
２．１  インビボの海馬スライス研究
酸素―グルコース欠乏（ＯＧＤ）に90分間さらされかつメタアンフェタミン（ＭＡ）で処理されたラットの海馬スライスは、ヨウ化プロピジウムが摂取レベルが大きく（p=<0.01）減少することを示し、これはＯＧＤのみのスライスと比較して、神経細胞の死が減少することを示している（図１）。ＭＡの用量反応の研究では、ＭＡの最適投与量が２５０μＭで、この量から濃度が増加又は減少するにつれて、ＰＩ摂取量が増加することが見出された。しかしテストした全ての濃度（１２５μＭ、２５０μＭ、５００μＭ、及び１ｍＭ）で、ＯＧＤのみのスライスと比較して、顕著な神経保護（p=<0.01）が観察された。
【００５１】
更にＭＡの効果を評価するために、ＯＧＤ後の種々の経過時間で２５０μＭのＭＡを添加し、ＯＧＤ後、１６時間以内に投与すると、ＭＡは神経細胞の死を大きく（p=<0.05）減少させることが分かった。ＯＧＤ後２４時間でＭＡを添加しても神経細胞の死を減少させられたが、ＯＧＤから大きくは異なっていなかった。
【００５２】
２．２  一過性の脳の虚血症の研究
スナネズミはイソフロランが切れる１０分以内に強調運動を行った。ＭＡで処理した動物は、尾を立てて立毛した。動物は、術後４８時間、野外器具中でテストした。ＭＡ処置をしていない、虚血による損傷を受けたスナネズミは、１２９．４ｍ(± 20; SEM)動き、他方薬剤処置を行い又は行っていない病気のコントロールは、それぞれ７２．７ｍ(± ６)及び７３．２ｍ(± ７．５)動いた。術後に、ＭＡで処置された虚血したスナネズミは、６６．３ｍ(± ５．６)動いた。活動のデータを分析して、薬剤処置と手術条件(P < 0.05)の間に大きな関係があることが分かった。引き続く比較により、ＭＡ処置していない虚血したスナネズミは、薬剤処置していない病気のグループ(P < 0.05)より非常に活動的であることが分かった。虚血した及び病気のスナネズミは、大きくは異なっていなかった(P ＞0.05)。最後に、ＭＡによる処置は、コントロール条件(SHAM + 0 mg vs. SHAM + 5 mg; P > 0.05)に関して、活動レベルを大きく変えることはできなかった。速度データ（移動距離／時間）を分析して、生理食塩水で処置された虚血したスナネズミと類似したパターン（他の全ての実験グループに対して、非常に速い速度を示す）が見出された（データは示さない）。
【００５３】
評価したグループの組織病理学的評価と代表的な顕微鏡写真をそれぞれ図３及び図４に示す。ＩＳＣＨ＋０ｍｇの条件のスナネズミは、海馬ＣＡＩ領域に大きな損傷を示した。このグループの６匹のスナネズミのうちの４匹は、ＣＡＩサブフィールドの強いグリオシスを有する通常の神経細胞体が完全に存在しなかった。対照的に、ＳＨＡＭ＋０ｍｇグループの全てのスナネズミは、検知できる海馬への損傷を有していなかった（平均レート：０＋０）。ＩＳＣＨ＋５ｍｇＭＡの６匹の動物は、海馬中にコンパクトな４〜５層の通常の神経細胞体を有していた（グループのレート：０．０７± ０．０７)。この条件で、１匹のスナネズミのみが、ＣＡＩ領域への検知できる損傷を示した。評価を分析して、グループ間で大きな差があることが分かった(P < 0.05)。引き続く個々のグループの評価により、ＳＨＡＭ＋０ｍｇ及びＩＳＣＨ＋５ｍｇの条件では大きな差異はないことが分かり(P > 0.05)、これらの条件は両方ともＩＳＣＨ＋０ｍｇのグループ(P < 0.05)と大きく異なっていた。
【００５４】
［考察］
本研究の結果は次のことを示している。つまり、例えばＭＡである神経保護薬剤を、一過性の虚血による損傷から１６時間以内に投与すると、海馬中の神経細胞への損傷が減少しあるいは防止される。例えばＭＡは、酸素―グルコース欠乏が生じたラットの海馬スライス培地での用量依存性の神経保護応答を生じさせた。２５０μＭの用量は、最大限の保護が可能であり、かつ酸素―グルコース欠乏が生じた後、１６時間までに投与すると効果的であることを示した。ＯＧＤ後、２４時間で投与してもＰＩ摂取が大きく減少することはなく、ＭＡ投与は、ＯＧＤ後の比較例短時間内に行ない、これにより神経の損傷や死を減少させる機構を活性化する必要があることが分かった。
【００５５】
ＭＡの神経保護効率は、５分、スナネズミー２血管閉塞（ＶＯ）一過性の虚血モデルを使用するインビボでも示された。再かん流の１〜２分以内にＭＡを投与すると、海馬ＣＡＩ錐体細胞のロスを防止した。組織学的評価により、７匹のうちの１匹のみが海馬ＣＡＩ領域のほぼ完全な保護を行った、ＭＡで処置された虚血したスナネズミが、海馬中で検知できる神経病変を示すことが分かった。スナネズミの５分、血管閉塞は、海馬ＣＡＩ細胞死に関連する運動活性を増加させる（非特許文献２３及び非特許文献２）。本研究における、ＭＡで処置した虚血したスナネズミの運動活性は、コントロ−ルレベルに対応し、大きな神経保護を誘導できる。アンフェタミンが生じさせる覚醒及び強い活動は、虚血の挙動的効果と相互作用することが十分可能である。しかし本研究の挙動テストは、薬剤が代謝されたであろう（４８時間）後に行われた。この解釈と一致するのは、ＭＡで処置されたコントロールのスナネズミは、生理食塩水を使用した動物（ＳＨＡＭ＋０ｍｇ）と比較して、強い活動性を有さないという観察であった。インビボ実験で使用したＭＡ用量は、実験モデルとしてスナネズミを使用した従来の報文（非特許文献２２）から導いた。５ｍｇ／ｋｇより多い（例えば１０及び２０ｍｇ／ｋｇ）ＭＡ用量を使用する予備実験を行ったが、術後のスナネズミには致命的であることが分かり、更なる評価は行わなかった。
【００５６】
訓練と組み合わせてアンフェタミンを投与することが、脳梗塞からの回復のための確実な薬理的戦略であることが示された（非特許文献１４）。ＭＡを、損傷後の特定時間内に、つまり１６時間以内に投与すると、虚血性損傷後の検知できる海馬の損傷を実際に防止できるとする我々の観察は、新規な発見である。これらの発見が、神経保護は損傷後の挙動訓練とは無関係であることを示していることに注目すべきである。損傷が起きた後の従来技術の処置と対照的に、海馬の神経細胞の損傷を実際に保護しかつ防止するＭＡの能力は、一過性の脳の虚血症に有効であると考えることが可能である。局所的虚血や他のタイプの皮質障害とは違って、一過性の脳の虚血症は、海馬の錐体細胞に限定された遅発性細胞死のパターンにより特徴付けられる。このモデルの簡単な虚血の症状発現に続く再かん流は、損傷の３〜５日後に起こる細胞死のための重要事象である。
【００５７】
急性脳梗塞前にＭＡ投与を行う現在の研究は、ＭＡが神経細胞死を増加させることを示している（非特許文献２４）。しかし我々の今回の発見によると、脳梗塞の前にＭＡで処置すると、脳梗塞発症後に放出できないままに残る、貯蔵されたドーパミンやノルエピネフリンを消耗させることが十分に可能で、かつ神経信号の引き続く減少が、ＭＡ前処置及び脳梗塞で観察される損傷において重要な役割を果たす。非常に短時間に、極度に大量の神経伝達物質を放出するＣＮＳＳ，例えばＭＡの能力は、本実験において観察された神経保護効果を部分的に説明できる。更にＣＮＳＳ薬剤の神経保護機構の理解を目的とする将来の研究が、急性脳梗塞発症の正確な機構と処置を更に解明するであろう。
【００５８】
以上の技術的開示は、一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症により生じる神経細胞の損傷の発生を減少させる方法の例示的態様を記載するもので、本発明をこれらの態様の限定することを意図するものではない。更に当業者に自明な、薬学的塩誘導体又は非機能的な変化を含む、変化及び／又は修正は、本発明の範囲に含まれると理解すべきである。
【図１】
2010501581.tif 000002
【図２】
2010501581.tif 000003
【図３】
2010501581.tif 000004
【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年4月23日(2009.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症により生じる神経細胞の損傷又は死の発生を減少させる方法において、
一過性の脳の低酸素症及び／又は虚血症の症状を有する対象に、該症状の発症後１６時間以内に、神経を保護できる量のメタアンフェタミンを投与することを特徴とする方法。
【請求項２】
対象に投与されるメタアンフェタミンの量が、５ｍｇ／ｋｇ未満のユニット投与量である請求項１記載の方法。
【請求項３】
処置により、海馬の脳細胞への神経細胞損傷を減少させる請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記症状が、低血圧、失血、心臓麻痺、外傷性脳損傷、絞首、手術、脳梗塞、虚血性視神経障害、又は気道閉塞により生じる請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記症状が、心臓手術により生じる請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記症状が、外傷性脳損傷により生じる請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記症状の発生後、１４時間以内に、メタアンフェタミンの単一投与のみを行う請求項１記載の方法。
【請求項８】
投与がボーラス注入である請求項１記載の方法。
【請求項９】
メタアンフェタミンが、薬学的に許容できるキャリアを含む薬学的組成物である請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記薬学的組成物が、持続放出製剤である請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記対象が処置を必要としているヒトである請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記症状が、虚血性脳梗塞、心臓手術又は虚血性視神経障害により生じる請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
メタアンフェタミンが、手術の１２時間以内に投与される請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
メタアンフェタミンが、手術の２時間以内に投与される請求項１記載の方法。
【請求項１５】
外傷性脳損傷により生じる脳細胞の損傷又は死の発生を減少させる方法において、
外傷性脳損傷を有する対象を特定し、
該症状の発症後１６時間以内に、前記対象に、治療効果を有する量のメタアンフェタミンを投与することを特徴とする方法。
【国際調査報告】
2010501581.tif 000007