(57)【要約】小胞モノアミン輸送体２（ＶＭＡＴ２）の阻害剤である置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物を開示する。本発明の化合物は、次の構造を有し、式中、Ｒ１は、本明細書で定義される通りであり、これには、その立体異性体、ならびに薬剤として許容される塩および溶媒和物が含まれる。また、製薬上許容される担体と組み合わせた本発明の化合物を含む組成物、ならびにそれを必要とする対象での使用に関する方法も開示する。2010509366.tif 000015
2010509366.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造を有する化合物、
【化１０】
2010509366.tif 000014
ならびにその立体異性体、薬剤として許容される塩および溶媒和物
（式中、Ｒ１は、
ａ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−アルキル、または
ｂ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜６アルカンジイル−ＮＨ２であり、
ここで、該Ｃ１〜６アルカンジイルは、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｍｅ、−ＳＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、フェニル、−ＯＨ、４−ヒドロキシ−フェニル、イミダゾリル、およびインドリルから選択される基で場合により置換されている）。
【請求項２】
２−アミノ−３−メチル−酪酸−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル、またはその立体異性体、薬剤として許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項３】
２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル、またはその立体異性体、薬剤として許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル、またはその立体異性体、薬剤として許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物、および製薬上許容される担体または希釈剤を含む、薬剤組成物。
【請求項６】
前記化合物が、（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル、またはその立体異性体、薬剤として許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項５に記載の薬剤組成物。
【請求項７】
多動性障害の治療を必要とする対象に、薬剤として有効な量の請求項５に記載の薬剤組成物を投与することを含む、多動性障害の治療方法。
【請求項８】
前記多動性障害が、ハンチントン病、遅発性ジスキネジア、トゥレット症候群、またはチックである、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物、その調製、およびこのような化合物をそれを必要とする温血動物に投与して障害を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オンは、テトラベナジン（ＴＢＺ）としても知られており、数十年間薬剤として使用されている。テトラベナジンは、小胞モノアミン輸送体−２（ＶＭＡＴ２）によるカテコールアミン取込みの強力な可逆的阻害剤であり（ＩＣ５０＝３．２ｎＭ）（非特許文献１）、現在様々な多動性運動障害の治療において使用されている。ＴＢＺに関連する副作用としては、鎮静、うつ、静坐不能、およびパーキンソン症候群が挙げられる。ＴＢＺによってＶＭＡＴ２が阻害されると、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて脳モノアミンが減少する（非特許文献２）。ＴＢＺはまた、ラットの脳においてシナプス前部およびシナプス後部のドーパミン受容体を阻害する（非特許文献３；非特許文献４）。ＴＢＺのこの非特異的な活性が、いくつかの観察される副作用の原因となる可能性がある。
【０００３】
ＴＢＺは、２個のキラル中心を有し、２種の立体異性体のラセミ混合物であり、ｉｎ  ｖｉｖｏで迅速かつ広範囲にその還元型の、ジヒドロテトラベナジン（ＨＴＢＺ）としても知られている、３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オールに代謝される。ＨＴＢＺは、４種の個々の異性体（±）α−ＨＴＢＺおよび（±）β−ＨＴＢＺとして存在すると考えられている。２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲまたは（＋）α−ＨＴＢＺは、活性代謝産物の絶対立体配置であると考えられている（Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ  １９９７  ９：５９〜６２）。多動性障害の治療での成功にもかかわらず、テトラベナジンは、生物学的利用能がかなり低く可変的である。ヒトへのテトラベナジン投与は、広範囲な初回通過代謝によって複雑にされ、テトラベナジンは、尿中にほとんどまたはまったく観察されない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｃｈｅｒｍａｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、（１９８３年）８０巻：５８４〜８頁
【非特許文献２】Ｐｅｔｔｉｂｏｎｅ，  Ｄ．  Ｊ．ら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９８４年）１０２巻：４３１〜６頁
【非特許文献３】Ｌｏｇｉｎ，  Ｉ．  Ｓ．ら、（１９８２年）Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ１２巻：２５７〜６２頁
【非特許文献４】Ｒｅｃｈｅｓら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．（１９８３年）２２５巻：５１５〜５２１頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
当技術分野では、身体をジヒドロテトラベナジンのすべての立体異性体にさらすことなしにテトラベナジンの有利な特性を提供するテトラベナジン類似体が必要とされる。また、テトラベナジンより長い半減期を示すテトラベナジン類似体も必要とされる。同様に、当技術分野では、ＶＭＡＴ２に関してテトラベナジンより大きな選択性を示すテトラベナジン類似体も必要とされる。本発明は、身体をジヒドロテトラベナジンの単一の立体異性体にさらし、ＶＭＡＴ２に関してテトラベナジンより大きな選択性を示し、テトラベナジンより長い半減期を示し、各患者が必要とする用量のばらつきをより低くすることができる、テトラベナジン類似体を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の簡単な要旨）
要するに、本発明は、一般に、置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物、その個々のエナンチオマー、ならびにその調製方法および使用方法、ならびにそれらを含む薬剤組成物を対象とする。より詳細には、本発明の置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物は、次の一般構造（Ｉ）を有し、
【０００７】
【化１】
2010509366.tif 000003
これには、その立体異性体ならびに薬剤として許容される塩および溶媒和物が含まれ、式中、Ｒ１は、以下に定義する通りである。
【０００８】
本発明の置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物は、広範囲の治療用途にわたって有用性を有し、多動性運動障害の系統を含めた様々な障害の治療に使用することができる。さらに、これらの化合物は、小胞モノアミン輸送体２（ＶＭＡＴ２）の阻害に関連する他の疾患状態または病態の治療に有用であることがわかり得る。
【０００９】
本発明の方法は、有効量の置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オールを、好ましくは薬剤組成物の形で、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。したがって、さらに別の実施形態では、製薬上許容される担体および／または希釈剤と組み合わせた本発明の１種または複数の置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物を含む薬剤組成物を開示する。
【００１０】
本発明の上記その他の態様は、以下の詳細な説明を参照して明らかとなるであろう。この目的のため、より詳細な特定の背景情報、手順、化合物および／または組成物を記載する種々の参考文献が本明細書中に引用され、これらは各々が、その全体において本明細書中に参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１ａ、１ｂ、および１ｃは、ヒト肝細胞におけるテトラベナジン、化合物２−１、および化合物３−１のその代謝産物への転換を示すグラフである。
【図２】図２ａ〜ｆは、ラット、イヌ、およびヒトの肝ミクロソームにおける化合物３−１および化合物２−１の安定性プロフィルを示すグラフである
【図３】図３ａ〜ｄは、イヌおよびラットにおける化合物２−１および３−１、ならびにラットにおける１ｄ．１の薬物動態特性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
前述のように、本発明は、一般に、置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物を対象とする。本発明の化合物は、次の構造（Ｉ）、
【００１３】
【化２】
2010509366.tif 000004
ならびにその立体異性体、薬剤として許容される塩および溶媒和物を有し、
式中、Ｒ１は、
ａ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−アルキル；または
ｂ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜６アルカンジイル−ＮＨ２であり、
ここで、前記Ｃ１〜６アルカンジイルは、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｍｅ、−ＳＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、フェニル、−ＯＨ、４−ヒドロキシ−フェニル、イミダゾリル、およびインドリルから選択される基で場合により置換されている。
【００１４】
本明細書では、上記の用語は、以下の意味を有する。
【００１５】
「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を含む直鎖、あるいは分枝状、非環状、または環状、不飽和もしくは飽和の脂肪族炭化水素を意味しており、「Ｃ１〜４アルキル」という用語は、アルキルと同じ意味を有するが、１〜４個の炭素原子を含んでいる。「Ｃ１〜６アルキル」は、アルキルと同じ意味を有するが、１〜６個の炭素原子を含んでいる。代表的な飽和直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどが挙げられるが、飽和分枝状アルキルとしては、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルなどが挙げられる。代表的な飽和環状アルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロブチル、−ＣＨ２−シクロペンチル、−ＣＨ２−シクロへキシルなどが挙げられるが、不飽和環状アルキルとしては、シクロペンテニルやシクロヘキセニルなどが挙げられる。環状アルキルとしては、デカリンやアダマンチルなどのジ−およびポリ−同素環が挙げられる。不飽和アルキルは、隣接する炭素原子間に少なくとも１個の二重または三重結合を含む（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれる）。代表的な直鎖および分枝状のアルケニルとしては、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニルなどが挙げられるが、代表的な直鎖および分枝状のアルキニルとしては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどが挙げられる。
【００１６】
「Ｃ１〜６アルカンジイル」は、同じ炭素原子または異なる炭素原子から２個の水素原子が得られる二価のＣ１〜６アルキルを意味し、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−などである。
【００１７】
「アミノ酸残基」は、α−カルボキシル基のヒドロキシルを欠くアミノ酸構造を意味する。例えば、アラニン残基は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３である。
【００１８】
一実施形態では、構造（Ｉ）のＲ１は、構造（ＩＩ）に示すような−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アルキルであり、別の実施形態では、構造（Ｉ）のＲ１は、構造（ＩＩＩ）に示すような−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜６アルカンジイル−ＮＨ２である。
【００１９】
【化３】
2010509366.tif 000005
一実施形態では、構造（ＩＩＩ）の−Ｃ１〜６アルカンジイル−ＮＨ２は、構造（ＩＶ）に示すような（Ｓ）−１−アミノ−２−メチル−プロパン−１−イルである。構造（Ｖ）は、構造（Ｉ）の実施形態を示し、ここで、Ｒ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜６アルカンジイル−ＮＨ２であり、Ｃ１〜６アルカンジイルは、−ＣＯＯＨで置換されている。
【００２０】
【化４】
2010509366.tif 000006
別の実施形態では、構造（Ｉ）のＲ１は、構造（ＶＩ）に示すようなアミノ酸残基である。構造（ＶＩＩ）は、アミノ酸残基がバリンである構造（ＶＩ）の実施形態を示す。
【００２１】
【化５】
2010509366.tif 000007
一実施形態では、本発明の化合物は、ラセミ混合物として、ジアステレオマー対として、または個々のエナンチオマーもしくはエナンチオマーの混合物として存在することができる。構造（ＶＩＩＩ）は、本発明の置換３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール化合物に関して環に番号付けしたものを示す。立体中心は、環系の２、３、および１１ｂ位に位置する。本発明の化合物としては、２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ立体配置、ならびに２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＳ、２Ｒ，３Ｓ，１１ｂＲ、２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＲ、２Ｒ，３Ｓ，１１ｂＳ、２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＳ、２Ｓ，３Ｓ，１１ｂＲ、および２Ｓ，３Ｓ，１１ｂＳが挙げられる。２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲおよび２Ｓ，３Ｓ，１１ｂＳのエナンチオマーが、構造（ＩＸ）および（Ｘ）にそれぞれ示されている。
【００２２】
【化６】
2010509366.tif 000008
本発明の化合物は、実施例においてより詳細に記載する方法を含めた周知の有機合成技術によって調製され得る。一般に、上記の構造（Ｉ）の化合物は、以下の反応スキームによって作製され得、ここで、置換基はすべて、別段の指示がない限り上記で定義した通りである。
【００２３】
【化７】
2010509366.tif 000009
Ｒ，ＲおよびＳ，Ｓテトラベナジンのラセミ混合物を水素化ホウ素還元剤で還元して、ジヒドロテトラベナジンａを得る。還元剤が水素化トリ−ｓｅｃ−ブチルホウ素リチウム（Ｌ−セレクトライド）である場合、主に２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＲおよび２Ｒ，３Ｓ，１１ｂＳ異性体が生成される。水素化ホウ素ナトリウムを使用すると、４種の立体異性体すべての混合物が生じる。残りの立体異性体は、事前に生成した立体異性体のうちのいずれかまたはすべてを用い、それらを五塩化リンなどの脱水剤と反応させて不飽和化合物を形成し、次いで、例えば、ボラン−ＴＨＦを使用してボラン錯体を形成し、それを過酸化水素で適切なジヒドロテトラベナジンに酸化するヒドロホウ素化手順によって、この不飽和化合物を立体選択的に再水和することで合成され得る（Ｃｌａｒｋｅら、国際公開第ＷＯ２００５０７７９４６号）。ラセミ生成物はさらに、キラルクロマトグラフィーによって分離して、キラルクロマトグラフィーによる個々のエナンチオマーとすることができる。
【００２４】
【化８】
2010509366.tif 000010
クロロホルメート中間体ｃは、ａをホスゲンまたはトリホスゲンで処理することによって生成され得る。ＤＭＡＰなどの塩基の存在下でｃをアルコールで処理すると、カーボネート生成物ｄが生成する。あるいは、カーボネートｄは、ＤＭＡＰ触媒の作用下でアルコールａをピロカーボネートで処理することによって直接生成され得る。
【００２５】
【化９】
2010509366.tif 000011
ジヒドロテトラベナジンａを、ジメチルホルムアミドおよび塩化メチレン中で、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を使用して、ＢＯＣ保護されたアミノ酸と縮合させ、続いて、ＢＯＣ官能基を、例えば５０／５０のトリフルオロ酢酸／塩化メチレン溶液を用いて脱保護するとｅが得られる。あるいは、ジヒドロテトラベナジンａを、ＤＣＣ（１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド）を使用して、ＣＢＺ保護されたアミノ酸と縮合させ、続いて、適切な条件下で水素化してＣＢＺ官能基を脱保護することもできる。
【００２６】
本発明の化合物は、ＶＭＡＴ２に関してテトラベナジンより大きな選択性を示す。その結果、本発明の化合物は、望ましくないすべての副作用を有さずに、テトラベナジンの望ましい特性を提供することができる。さらに、図３ａ〜３ｄに示されるように、例えば化合物２−１などの本発明の特定の化合物は、予想外にテトラベナジンより長い作用持続時間を提供する。これによって必要とされる１日当たりの用量がテトラベナジンより少ない投与計画が可能になるので、これは特に有益となり得る。例えば、テトラベナジンは通常は１日当たり２〜３回投与されるが、例えば化合物２−１などの本発明の特定の化合物は、１日当たり１回だけの投与で治療上有効となり得る。したがって、これらの化合物によってもたらされる予想外により長い作用持続時間のために、１日１回の投薬を達成することができる。
【００２７】
本発明の化合物としては、次のエステルが挙げられる：
（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル。
【００２８】
本発明の化合物としては、次のカーボネートが挙げられる：
炭酸エチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル；
炭酸ブチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル；
炭酸ペンチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル；
炭酸イソブチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル；
炭酸ｓｅｃ−ブチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル；
炭酸３−メチル−ブチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル；および
炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル。
【００２９】
本発明の化合物は、一般に、遊離酸または遊離塩基として利用され得る。あるいは、本発明の化合物は、酸または塩基の付加塩の形で使用され得る。本発明の遊離アミノ化合物の酸付加塩は、当技術分野でよく知られている方法によって調製され得、有機酸および無機酸から形成され得る。適切な有機酸としては、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、ケイ皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸、およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。適切な無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸が挙げられる。塩基付加塩としては、カルボン酸陰イオンと形成される塩が挙げられ、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、バリウム、およびカルシウム）、ならびにアンモニウムイオンおよびその置換誘導体（例えば、ジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウムなど）から選択される陽イオンなど、有機および無機の陽イオンと形成される塩が挙げられる。したがって、構造（Ｉ）の「薬剤として許容される塩」という用語は、許容される塩形態のいずれもすべてを包含することを意図している。
【００３０】
立体異性体に関しては、構造（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有することができ、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、および個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在することができる。こうした異性体形のすべてが、その混合物も含めて本発明内に含まれる。さらに、構造（Ｉ）の化合物の結晶形のいくつかは、多形体として存在することができ、これも本発明内に含まれる。さらに、構造（Ｉ）の化合物のいくつかは、水または他の有機溶媒と溶媒和物を形成することもできる。こうした溶媒和物は、同様に本発明の範囲内に含まれる。
【００３１】
前述のように、本発明の化合物およびその塩は、ヒトモノアミン輸送体アイソフォーム２（ＶＭＡＴ２）を阻害することによって中枢神経系中のモノアミンの供給を減少させることができる。したがって、これらの化合物およびそれらの塩は、広範囲の治療用途にわたって有用性を有し、ヒトモノアミン輸送体アイソフォーム２の阻害によって引き起こされる、またはそれに関連する、様々な障害の治療に使用することができる。これらの障害には、多動性障害がある。
【００３２】
一実施形態では、本発明の化合物によって治療することができる病態としては、ハンチントン病、遅発性ジスキネジア、トゥレット症候群、チックなどの多動性障害の治療が挙げられるが、それだけに限定されるわけではない。
【００３３】
本発明の別の実施形態では、本発明の化合物およびその塩は、哺乳動物の身体中でヒトモノアミン輸送体アイソフォーム２を阻害することができる化合物に加水分解され得る。したがって、これらの化合物およびそれらの塩は、最大濃度や作用持続時間など哺乳動物における代謝産物のｉｎ  ｖｉｖｏ特性を変更するのにさらなる有用性を有することができる。
【００３４】
本発明の別の実施形態では、１種または複数のモノアミン再取込み阻害剤を含む薬剤組成物を開示する。投与のために、本発明の化合物は、薬剤組成物として配合され得る。本発明の薬剤組成物は、本発明のモノアミン再取込み阻害剤ならびに製薬上許容される担体および／または希釈剤を含む。ＶＭＡＴ２阻害剤は、特定の障害を治療するのに有効な量で、すなわち、中枢神経系中のモノアミンの供給を減少させるのに十分な量で、好ましくは患者に許容される毒性と共に組成物中に存在する。適切な濃度および用量は、当業者には容易に決定することができる。
【００３５】
製薬上許容される担体および／または希釈剤は、当業者に周知である。液体溶液として配合される組成物に関して、許容される担体および／または希釈剤としては、生理食塩水および滅菌水が挙げられるが、任意選択で、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および他の一般の添加剤を含むことができる。この組成物はまた、ＶＭＡＴ２阻害剤に加えて希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、および潤滑剤を含む丸薬、カプセル、顆粒、または錠剤としても配合され得る。当業者はさらに、適切な方法で、かつ一般に認められる手法、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、イーストン、ペンシルベニア州、１９９０年に記載されるものなどに従ってＶＭＡＴ２阻害剤を配合することができる。
【００３６】
別の実施形態では、本発明は、中枢または末梢神経系の障害を治療する方法を提供する。こうした方法は、温血動物に本発明の化合物を病態を治療するのに十分な量投与することを含む。この文脈において、「治療」は、予防投与を含む。こうした方法は、本発明のＶＭＡＴ２阻害剤の、好ましくは上述のように薬剤組成物の形での全身投与を含む。本明細書では、全身投与は、経口および非経口の投与方法を含む。経口投与に関して、適切な薬剤組成物としては、粉末、顆粒、丸薬、錠剤、およびカプセル、ならびに液剤、シロップ剤、懸濁剤、および乳剤が挙げられる。これらの組成物はまた、香味剤、保存剤、懸濁剤、増粘剤、乳化剤、および他の製薬上許容される添加剤を含むことができる。非経口投与に関しては、本発明の化合物は、注射用水溶液中に調製され得、これは、ＶＭＡＴ２阻害剤に加えて緩衝剤、抗酸化剤、静菌剤、およびこうした溶液中で一般に使用される他の添加剤を含むことができる。
【実施例】
【００３７】
サンプル分析のためのＨＰＬＣ方法
保持時間、ｔＲ（分）
分析ＨＰＬＣ−ＭＳ方法１
プラットフォーム：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズ：オートサンプラ、ＵＶ検出器（２２０ｎＭおよび２５４ｎＭ）、ＭＳ検出器（ＡＰＣＩ）を装備；
ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ−Ｍａｘ  ＲＰ  ８０Ａ、２．０×５０ｍｍカラム；
ＨＰＬＣ勾配：１．０ｍＬ／分、２．５分で１０％アセトニトリル水溶液から９０％アセトニトリル水溶液へ、９０％を１分間維持。アセトニトリルと水は共に０．０２５％ＴＦＡを含む。
【００３８】
分析ＨＰＬＣ−ＭＳ方法２
プラットフォーム：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズ：オートサンプラ、ＵＶ検出器（２２０ｎＭおよび２５４ｎＭ）、ＭＳ検出器（ＡＰＣＩ）を装備；
ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ−Ｍａｘ  ＲＰ  ８０Ａ、２．０×５０ｍｍカラム；
ＨＰＬＣ勾配：１．０ｍＬ／分、１３．５分で５％アセトニトリル水溶液から９５％アセトニトリル水溶液へ、９５％を２分間維持。アセトニトリルと水は共に０．０２５％ＴＦＡを含む。
【００３９】
分析ＨＰＬＣ−ＭＳ方法３
プラットフォーム：Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラ、３０℃で保持したＤｉｏｎｅｘ  Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｔｅｄ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ  ＴＣＣ−１００、Ｄｉｏｎｅｘ  ＰＤＡ−１００フォトダイオードアレイ検出器（２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ）、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ６８０  ＨＰＬＣポンプ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＭＳＱシングルクワッド分光計（ＡＰＣＩ）
ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ５μＣ１８  １１０Ａ、４．６×１５０ｍｍ
ＨＰＬＣ勾配：２．５ｍＬ／分、９．８６分で５％アセトニトリル水溶液から９０％アセトニトリル水溶液へ、０．１分で９０％アセトニトリル水溶液から９５％アセトニトリル水溶液へ、９５％で１．１９分間保持。アセトニトリルと水は共に０．０４％ＮＨ４ＯＨを含む。
【００４０】
分析ＨＰＬＣ−ＭＳ方法４
プラットフォーム：Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラ、３０℃で保持したＤｉｏｎｅｘ  Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｔｅｄ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ  ＴＣＣ−１００、Ｄｉｏｎｅｘ  ＰＤＡ−１００フォトダイオードアレイ検出器（２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ）、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ６８０  ＨＰＬＣポンプ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＭＳＱシングルクワッド分光計（ＡＰＣＩ）
ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ５μＣ１８  １１０Ａ、３．０×１５０ｍｍ
ＨＰＬＣ勾配：１．５ｍＬ／分、９．８６分で５％アセトニトリル水溶液から９０％アセトニトリル水溶液へ、０．１分で９０％アセトニトリル水溶液から９５％アセトニトリル水溶液へ、９５％で１．１９分間保持。アセトニトリルと水は共に０．０４％ＮＨ４ＯＨを含む。
【００４１】
キラル分離方法１に関するキラル超臨界流体クロマトグラフィー
プラットフォーム：Ａｕｔｏｃｈｅｍ製Ｂｅｒｇｅｒ  Ｍｕｌｔｉｇｒａｍ  ＩＩ  ＳＦＣシステム
カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ、２．１×２５ｃｍ、ＳＦＣカラム
モディファイヤー：２０％メタノール
流速：６０ｍＬ／分
圧力：１００ｂａｒ
オーブン温度：３５℃
充填：約１４ｍｇ／注入（メタノール）
キラル分離方法２に関するキラル超臨界流体クロマトグラフィー
プラットフォーム：Ａｕｔｏｃｈｅｍ製Ｂｅｒｇｅｒ  Ｍｕｌｔｉｇｒａｍ  ＩＩ  ＳＦＣシステム
カラム：ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈ、２．１×２５ｃｍ、ＳＦＣカラム
モディファイヤー：２０％メタノール
流速：６０ｍＬ／ｍｉｎ
圧力：１００ｂａｒ
オーブン温度：３５℃
充填：４０ｍｇ／注入（ＭｅＯＨ）
キラル分離方法３に関するキラル超臨界流体クロマトグラフィー
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２．１×２５ｃｍ、ＳＦＣカラム
モディファイヤー：２８％（メタノール／アセトン＝７：３）
流速：５５ｍＬ／分
圧力：１００ｂａｒ
オーブン温度：３５℃
充填：５０ｍｇ／注入
メタノール／アセトンの１：１混合物にサンプルを溶解した。最終濃度は５０ｍｇ／ｍＬとした。
【００４２】
（実施例１）
（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール  （（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−ジヒドロテトラベナジン）
ステップ１Ａ：３−ジメチルアミノメチル−５−メチル−ヘキサン−２−オン
塩酸ジメチルアミン（９０ｇ、１．１ｍｏｌ）、５−メチル−２−ヘキサノン（４５０ｍＬ、３．３ｍｏｌ）、およびパラホルムアルデヒド（５０ｇ、１．７ｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）中に懸濁させ、濃塩酸（２００μＬ）を添加した。反応混合物を１２時間８０℃に加熱した。この混合物を室温に放冷し、塩基性になるまで１０％ＮａＯＨを添加した。Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ、２回）で混合物全部を抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗反応混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０．５：９．５  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）によってカラム分離して、３−ジメチルアミノメチル−５−メチル−ヘキサン−２−オン１ａを３０ｇ（１７５ｍｍｏｌ）、収率１６％で得た。
ステップ１Ｂ：３−ジメチルアミノメチル−５−メチル−ヘキサン−２−オンメチオジド
丸底フラスコに３−ジメチルアミノメチル−５−メチル−ヘキサン−２−オン１ａ（３０ｇ、１７５ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）、続いてヨウ化メチル（２２ｍＬ、３５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を一晩撹拌すると、白色沈殿物が生じた。その沈澱物をろ過し、Ｅｔ２Ｏ（１５０ｍＬ、３回）で洗浄し、乾燥させると、３−ジメチルアミノメチル−５−メチル−ヘキサン−２−オンメチオジド１ｂ（４４．９ｇ、収率８１％）が綿毛状白色固体として生じた。
【００４３】
ステップ１Ｃ：テトラベナジン
丸底フラスコに６，７−ジメトキシ−３，４−ジヒドロイソキノリン（１３ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）、３−ジメチルアミノメチル−５−メチル−ヘキサン−２−オンメチオジド１ｂ（２６ｇ、８１．４ｍｍｏｌ）、およびＥｔＯＨ（１３０ｍＬ）を添加した。懸濁剤を一晩８０℃に加熱した。反応混合物を室温に放冷し、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）を添加して、沈澱物を形成した。ＥｔＯＨを真空下で除去し、ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）を添加した。塩基性になるまで１０％ＮａＯＨ溶液を混合物に添加した。次いで、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を一緒にし、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗反応混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０．５：９．５  アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２）で精製し、さらにＥｔＯＡｃおよびヘキサンから再結晶して、（３Ｓ，１１ｂＳ）および（３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オンのラセミ混合物１ｃ（テトラベナジン、ＴＢＺ）を１６．１ｇ（５１  ｍｍｏｌ）、収率７５％で得た。テトラベナジンのエナンチオマーを、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラムを利用するＳＦＣによって、０．５％ＤＭＥＡを加えた１５％ＣＡＮ／ＭｅＯＨを用いて１００ｂａｒおよび３５℃において２．５ｍＬ／分で分離して、（３Ｒ，１１ｂＲ）−テトラベナジン１ｃ．１を４．３ｇ、および（３Ｓ，１１ｂＳ）−テトラベナジン１ｃ．２を４．３ｇ得た。
（３Ｒ，１１ｂＲ）−テトラベナジン１ｃ．１：ＭＳ計算値：（３１７）；実測値３１８．７（Ｍ＋Ｈ）。
（３Ｓ，１１ｂＳ）−テトラベナジン１ｃ．２：ＭＳ計算値：（３１７）；実測値３１８．７（Ｍ＋Ｈ）。
【００４４】
ステップ１Ｄ：（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール
（３Ｒ，１１ｂＲ）−テトラベナジン１ｃ．１（２ｇ、６．３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（７０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。次いで、水素化ホウ素ナトリウム（２６１ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ添加した。３０分後に反応を完了し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（４ｍＬ）でクエンチした。生じた白色沈殿物をろ過し、ＥｔＯＨ（５ｍＬ、２回）で洗浄した。ＥｔＯＨを真空下で除去し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を一緒にし、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０．５：９．５、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）で精製して、（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール（（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−ジヒドロテトラベナジン）１ｄ．１を１．６ｇ（５ｍｍｏｌ）、および（２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール（（２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＲ）−ジヒドロテトラベナジン）１ｄ．２を４１０ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）得た。
（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−ジヒドロテトラベナジン１ｄ．１：ＭＳ計算値：（３１９）；実測値３２０．３（Ｍ＋Ｈ）。
（２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＲ）−ジヒドロテトラベナジン１ｄ．２：ＭＳ計算値：（３１９）；実測値３２０．３（Ｍ＋Ｈ）。
【００４５】
（実施例２）
（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル
ステップ２Ａ：（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル  ２−１
（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール１ｄ．１（２００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を、３ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２およびＤＭＡＰ（７５．０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）中に溶解させ、Ｃｂｚ−Ｌ−バリン（１９０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５分間撹拌した。ＤＣＣ（１５５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加すると、白色沈殿物が直ちに生じた。混合物を一晩撹拌し、次いでろ過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０．２：９．８、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）での精製によって、定量的収率で淡黄色固体として２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２ａが３６０ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）得られた。化合物２ａ（１６３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ／Ｃを添加し、混合物をＨ２でパージした。混合物を一晩撹拌し、セライトでろ過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０．５：９．５、ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）での精製によって、（Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−１を１０５ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、収率８５％で得た。ＭＳ計算値：（４１９）；実測値４１９．３  （Ｍ＋Ｈ）。
【００４６】
種々のアミノ酸を使用して同じ手順で合成された別の化合物としては、次のものが挙げられる：
（Ｒ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタン酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−２。ＭＳ計算値：（４３３）；実測値４３３．４（Ｍ＋Ｈ）。
（Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタン酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−３。ＭＳ計算値：（４３３）；実測値４３３．４（Ｍ＋Ｈ）。
（Ｓ）−２−アミノ−コハク酸１−（（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イル）エステル４−メチルエステル２−４。ＭＳ計算値：（４４９）；実測値４４９．３（Ｍ＋Ｈ）。
２−アミノ−２−メチル−プロピオン酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−５。ＭＳ計算値：（４０５）；実測値４０５．３（Ｍ＋Ｈ）。
（Ｒ）−２−アミノ−プロピオン酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−６。ＭＳ計算値：（３９１）；実測値３９１．３（Ｍ＋Ｈ）。
（Ｓ）−２−アミノ−プロピオン酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−７。ＭＳ計算値：（３９１）；実測値３９１．３（Ｍ＋Ｈ）。
（Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−酪酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−８。ＭＳ計算値：（４１９）；実測値４１９．４（Ｍ＋Ｈ）。
アミノ−酢酸（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル２−９。ＭＳ計算値：（３７７）；実測値３７７．３（Ｍ＋Ｈ）。
【００４７】
（実施例３）
炭酸エチルエステル（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル
ステップ３Ａ：炭酸エチルエステル（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル  ３−１
（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−オール１ｄ．１（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、３ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２およびＤＭＡＰ（１．０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）に溶解させ、ピリジン（５１μＬ、０．６３ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロギ酸エチル（４５μＬ、０．４７ｍｍｏｌ）を滴下で添加した。反応物を一晩撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（５ｍＬ）から抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：９、アセトン：ＣＨ２Ｃｌ２）で精製して、淡黄色泡沫として３−１を８８ｍｇ（２．２５ｍｍｏｌ）、収率７２％で得た。ＭＳ計算値：（３９２）；実測値３９２．３（Ｍ＋Ｈ）。
【００４８】
また、上記の手順によって次のものも調製した：
炭酸メチルエステル（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル  ３−２、収率３７％。ＭＳ計算値：（３７８）；実測値３７８．１（Ｍ＋Ｈ）。
炭酸ブチルエステル（２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ）−３−イソブチル−９，１０−ジメトキシ−１，３，４，６，７，１１ｂ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［２，１−ａ］イソキノリン−２−イルエステル  ３−３、収率４６％。ＭＳ計算値：（４２０）；実測値４２０．１（Ｍ＋Ｈ）。
【００４９】
（実施例４）
ヒト肝細胞における化合物の安定性の決定方法
１２人の各ドナーからの凍結保存されたヒト肝細胞を供給元の指示に従って解凍し、プールした。細胞生存率が８５％超であることを決定した。ＴＢＺ（１μＭ）を、個々のヒト肝細胞（１×１０６細胞／ｍＬ）と共に３７℃において９５％Ｏ２および５％ＣＯ２内で０、５、１５、３０、および６０分間インキュベートした。１．０μＭにするためにＴＢＺのＤＭＳＯ溶液を添加した（ＤＭＳＯは０．５％体積／体積未満であった）。濃度および細胞内容物はすべて、最終インキュベーション容量が１００μＬであることに関連した。ＬＣ／ＭＳ分析用の内部標準としてデキストロメトルファン（１．０μＭ）を含有する氷冷アセトニトリルの１％ギ酸溶液１００μＬを混合して、インキュベーションを終了させた。沈殿したタンパク質を遠心分離によって除去した（１５℃で３０分間１５００〜２５００×ｇ）。
【００５０】
簡単に述べると、サンプルを、ポンプ、カラムヒータ（４０℃）、および真空脱気装置／移動相トレイからなるＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣシステムによってグラジエントＨＰＬＣ法で分離した。移動相Ａは、０．１％ギ酸水溶液とし、移動相Ｂは、アセトニトリルの０．１％ギ酸溶液とした。勾配溶離は、以下の通りとした：移動相Ｂ：０〜０．７５分では０〜１０％、１．２５〜１．５分では４０〜９０％、１．７５〜２．０分では９０〜０％、実行時間は３分とした。逆相カラムは、ＢＥＨ  Ｃ１８カラムとした（５０×２．１ｍｍ、  １．７μｍ）。流速は０．８ｍＬ／分とし、注入量は７．５μＬとした。サンプルを、ＡＰＩ−３０００質量分析計、ならびにポジティブモードでのＥＳＩイオン源、ＴＢＺｍ／ｚ３１８．４＞２２０．４、ＨＴＢＺｍ／ｚ３２０．３＞３０２．３、およびデキストロメトルファンｍ／ｚ２７２．２＞１４７．２を用いてモニターした。
【００５１】
図１ａ、１ｂ、および１ｃは、ヒト肝細胞におけるテトラベナジン、化合物２−１、および化合物３−１の、テトラベナジンの場合はＨＴＢＺへの、ならびに化合物２−１および３−１の場合は１ｄ．１への転換を示している。テトラベナジンおよび化合物３−１はこの転換が急速であったことを示したが、化合物２−１は比較的遅かった。
【００５２】
（実施例５）
哺乳動物の肝ミクロソームにおける化合物の安定性の決定方法
簡単に述べると、プールしたヒト肝ミクロソーム（０．１または０．５ｍｇ／ｍＬ、ｎ＞１０、男女混合）を、５０ｍＭのｐＨ７．４リン酸カリウム緩衝剤、３ｍＭの塩化マグネシウム、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮＡＤＰ、５ｍＭのＧ−６−Ｐ、および１単位／ｍＬのＧ−６−ＰＤを含むＮＡＤＰＨ産生系の存在下で試験化合物と共に３７℃でインキュベートした。
【００５３】
改変した２．０ｍＬ容の９６ウェル深型ウェルプレート６枚において、各化合物を１μＭ（０．０１％ＤＭＳＯ）、全容量を２５０μｌとして、インキュベートした。各プレートは、１つの時点を表しており、各時点（０、５、１０、２０、４０、および６０分）での４８種の化合物を２個ずつ（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）行うことを考慮して、９６個のＴｉｔｅｒｔｕｂｅ（登録商標）マイクロチューブを含んだ。適切な停止試薬（所有の内部標準を含むアセトニトリル０．３ｍＬ）を添加して、反応を停止させた。沈殿したタンパク質を３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけて除去し、残りの親化合物の％について上澄み液（〜０．１ｍＬ）をＬＣ／ＭＳによって分析した。
【００５４】
サンプルを、ポンプ、カラムヒータ（４０℃）、および真空脱気装置／移動相トレイからなるＡｇｉｌｅｎｔ  ＬＣシステムによってグラジエントＨＰＬＣ法で分離した。移動相Ａは、０．１％ギ酸水溶液とし、移動相Ｂは、アセトニトリルの０．１％ギ酸溶液とした。勾配溶離は、以下の通りとした：移動相Ｂ：３−１に関しては、０〜０．３０分では０〜３０％、０．７〜１．１分では３０〜９８％、１．５０〜１．５１分では９８〜０％、実行時間は３分とした；移動相Ｂ：２−１に関しては、０．５〜２．５分では５〜９８％、４．０〜４．１分では９８〜５％、実行時間は６．５分とした。逆相カラムは、３−１に関してはＬｕｎａ  Ｃ１８カラム（２０×２ｍｍ、５μｍ）とし、２−１に関してはＳｙｎｅｒｇｉ  Ｃ１８カラム（１５０×２ｍｍ、５μｍ）とした。流速は、３−１に関して０．５５ｍＬ／分、２−１に関して０．４  ｍＬ／分とし、注入量は、２０μＬとした。サンプルを、ＡＰＩ−３０００質量分析計、ならびにポジティブモードでのＥＳＩイオン源、ＴＢＺｍ／ｚ３１８．４＞２２０．４、ＨＴＢＺｍ／ｚ３２０．３＞３０２．３、およびデキストロメトルファンｍ／ｚ２７２．２＞１４７．２を用いてモニターした。
【００５５】
図２ａ〜２ｆは、ラット、イヌ、およびヒトの肝ミクロソームにおける化合物２−１および化合物３−１の１ｄ．１への転換を示している。各々の種において、化合物２−１の１ｄ．１への転換は、化合物３−１の化合物１ｄ．１への場合に見られた転換より遅かった。
【００５６】
（実施例６）
薬物動態（ＰＫ）評価
動物用方法：
１．ラット
簡単に述べると、薬物動態評価のために、０．２５％メチルセルロースミリＱ水溶液に溶解させた１０％ＰＥＧ中の２−１および３−１の単回経口用量（１０ｍｇ／ｋｇ）をラット（３ラット／投与）に投与した。逐次サンプリングを使用して血液サンプルを収集し、それは経口投与の投与前から２４時間後の投与にわたる９時点（０、０．２５、０．５、１、２、４、６、８および２４時間）で処置した各動物から得た。血漿サンプルを、分析まで−８０℃以下で保管した。
【００５７】
２．イヌ
簡単に述べると、薬物動態評価のために、０．２５％メチルセルロースミリＱ水溶液に溶解させた１０％ＰＥＧ中の単回経口用量（３−１は６．１ｍｇ／ｋｇ、２−１は１０ｍｇ／ｋｇ）をイヌ（３イヌ／投与）に投与した。逐次サンプリングを使用して血液サンプルを集め、それは経口投与の投与前から２４時間後の投与にわたる９時点（０、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、８、１２、２４、３６および４８時間）で処置した各動物から得た。血漿サンプルを、分析まで−８０℃以下で保管した。
【００５８】
一般的生物分析法：
血漿サンプルを氷上で解凍し、血漿５０μＬを９６ウェルプレートに移した。７５ｎｇ／ｍＬの内部標準を含む事前冷却したアセトニトリル（ＡＣＮ）１５０μＬを添加して、血漿タンパク質を沈殿させた。追加のＡＣＮ／水（６０：４０）５０μＬを各サンプルに添加した。ＡＣＮ／水（６０：４０）における段階希釈によって、較正曲線サンプルを調製した。標準サンプル５０μＬをそれぞれ９６ウェルプレートに移し、続いて、７５ｎｇ／ｍＬの内部標準を含むアセトニトリル（ＡＣＮ）１５０μＬおよびブランクラットの血漿５０μＬを添加した。プレートに蓋をし、混合し、３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離にかけた。上澄み液を集め、定量化用ＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。未確認のアッセイ方法は、１〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度範囲にわたり３−１、２−１、および１ｄ．１の良好な直線性、特異性、および精度を示し、３−１、２−１、および１ｄ．１の定量化の下限は、すべて１ｎｇ／ｍＬであった。３−１、２−１、および１ｄ．１の３セットのＱＣサンプル（４、４０、４００、８００ｎｇ／ｍｌ）を、必要な研究用の品質管理として使用し、標準と同様の方法で調製した。加重（１／ｘ２）線形較正曲線にピーク面積比を適合させることによって、定量化を行った。
【００５９】
薬物動態方法：
個々の各ラットからの３−１、２−１、および１ｄ．１の血漿濃度に基づいて、記述薬物動態を導出し、評価した。薬物動態パラメータを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ薬物動態モデリングソフトウェアプロフェショナルバージョン５．０．１プログラム（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マウンテンビュー、カリフォルニア州）における３−１、２−１、および１ｄ．１の血漿濃度−時間プロフィルの非コンパートメント解析を使用して決定した。
【００６０】
図３ａは、経口投与した３−１からの化合物１ｄ．１および１ｄ．１のラット血漿濃度時間プロフィルの区別がつかないことを示している。３−１を経口投与した後のラットの血漿において３−１は検出されなかった。
【００６１】
図３ｂは、２−１の経口投与後の化合物１ｄ．１および２−１のラット血漿濃度時間プロフィルを示している。
【００６２】
図３ｃは、３−１の経口投与後の化合物１ｄ．１および３−１のイヌ血漿濃度時間プロフィルを示している。
【００６３】
図３ｄは、２−１の経口投与後の化合物１ｄ．１および２−１のイヌ血漿濃度時間プロフィルを示している。
【００６４】
これらの図は、化合物２−１を経口投与したときの１ｄ．１の血漿半減期が化合物３−１を経口投与したときよりも２〜３倍大きいことを示している。
【００６５】
（実施例７）
小胞モノアミン輸送体アイソフォーム２（ＶＭＡＴ２）結合アッセイ
（Ｔｅｎｇら、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、７１巻、２５８〜６５頁、１９９８年の改良）
手順Ａ：
ラット線条体小胞の調製
３匹のラットからラット線条体をプールし、０．３２Ｍのショ糖中でホモジナイズする。次いで、ホモジネートを、４℃で１０分間２，０００×ｇにて遠心分離にかけ、得られた上澄み液を、４℃で３０分間１０，０００×ｇにて遠心分離にかける。得られたペレットは、濃縮されたシナプトソーム分画（２ｍＬ）を含み、蒸留済Ｈ２Ｏ７ｍＬの添加によって浸透圧衝撃を受け、その後、懸濁液をホモジナイズする。浸透圧モル濃度を、０．２５ＭのＨＥＰＥＳ０．９ｍＬおよび１．０Ｍの中性Ｌ−（＋）−酒石酸二カリウム塩緩衝液（ｐＨ７．５）０．９ｍＬを添加することによって回復させ、続いて、２０分間遠心分離にかける（４℃で２０，０００×ｇ）。次いで、上澄み液を６０分間遠心分離にかけ（４℃で５５，０００×ｇ）、得られた上澄み液を４５分間遠心分離にかける（４℃で１００，０００×ｇ）。得られたペレットを、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＬ−（＋）−酒石酸二カリウム塩、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５ｍＭのＥＧＴＡ、ｐＨ７．５において、タンパク質濃度が１〜２ｍｇ／ｍＬになるように再懸濁させ、−８０℃で最高３週間貯蔵するが、結合活性はたいして低下しない。使用直前に、最終ペレットを結合緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＬ−（＋）−酒石酸二カリウム塩、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５ｍＭのＥＧＴＡ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、１．７ｍＭのアスコルビン酸、ｐＨ７．４）に再懸濁させる。
［３Ｈ］−ジヒドロテトラベナジン（ＤＨＴＢＺ）結合
小胞懸濁液のアリコート（０．１６ｍＬ、１ｍＬ当たりのタンパク質は１５μｇ）を、競争化合物（１Ｅ−６Ｍ〜１Ｅ−１２Ｍの範囲）および２ｎＭの［３Ｈ］−ジヒドロテトラベナジン（ＨＴＢＺ；比活性：２０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ）と共に全容量０．５ｍＬで室温にて１時間インキュベートする。Ｂｒａｎｄｅｌセルハーベスタを使用して、ＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｆフィルタ上でサンプルを急速ろ過することによって、反応を終了させる。２０μＭのテトラベナジン（ＴＢＺ）を使用して、非特異的結合を決定する。あらかじめフィルタを氷冷ポリエチレンイミン（０．５％）に２時間浸しておく。フィルタを氷冷緩衝液で３回洗浄した後、それらをシンチレーションカクテルが１０ｍＬ入ったシンチレーションバイアルに入れる。結合放射活性をシンチレーション分光測定法によって決定する。
【００６６】
手順Ｂ：
手順は、すでに記載されているもの（Ｎｅａｒ、（１９８６年）、Ｍｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３０巻：２５２〜７頁）を改良した。スプラーグ−ドーリーラットの前脳からのホモジネートを、すでに記載されている通りに（Ｈｏａｒｅら、（２００３年）Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２４巻：１８８１〜９７頁）、ホモジナイズし、遠心分離で洗浄することによって調製した。全容量が０．２ｍＬである低結合の９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３６０５）において、ＨＴＢＺ異性体または類似体の１２種の濃度を、ＶＭＡＴ２結合緩衝液（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中で、ラットの前脳ホメジネート（ｈｏｍｅｇｅｎａｔｅ）（１ウエル当たりの膜タンパク質は１００μｇ）上の６ｎＭの３Ｈ−ジヒドロテトラベネジン（ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｔｒａｂｅｎｅｚｉｎｅ）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｋｄ２．６ｎＭ）と競争させた。２５℃で２時間インキュベートした後、Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ−９６ハーベスタ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、ＧＦ／Ｂガラス繊維フィルタ上で急速ろ過することによって、結合放射性リガンドを収集した。フィルタプレートを０．１％ポリエチレンイミンで１０分間前処理し、続いて、採集したものをＶＭＡＴ２結合緩衝液８００μｌで洗浄した。結合放射性リガンドを、Ｔｏｐｃｏｕｎｔ  ＮＸＴ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、シンチレーション計数法によって定量化した。
【００６７】
【表１】
2010509366.tif 000012
データは、少なくとも２種の無関係な実験に関する平均±ＳＤである。Ｋｉ値は、公表されているラット線条体膜に関する１．２ｎＭのＫｄ値（Ｒｏｌａｎｄら、２０００年）を使用して決定された。
【００６８】
（実施例８）
受容体選択性結合アッセイ
本発明の４種のＨＴＢＺ立体異性体および化合物を、８０種の受容体、イオンチャネル、および輸送体のパネルに対してスクリーニングすることによって、受容体特異性に関して試験した（ハイスループットプロフィル、Ｃｅｒｅｐ，Ｓ．Ａ．）。その後、化合物を、以下に記載する受容体への親和性を決定するために、選択された競争結合アッセイにおいて一連の濃度にわたり試験した。
（ａ）ドーパミンＤ２Ｓ受容体：
参考文献：Ｇｒａｎｄｙら、（１９８９年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８６巻：９７６２〜６頁
原料：ヒト組換え体（ＣＨＯ細胞）
リガンド：［３Ｈ］スピペロン、１．０ｎＭ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、３ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４
非特異性リガンド：クロザピン（１０μＭ）
Ｋｄ：２７ｐＭ
Ｂｍａｘ：６．９ｐｍｏｌ／ｍｇ
特異的結合：６００ｃｐｍ
定量化法：シンチレーション計数法
（ｂ）ドーパミンＤ４．４受容体：
参考文献：Ｖａｎ  Ｔｏｌら（１９９２年）Ｎａｔｕｒｅ、３５８巻：１４９〜１５２頁
原料：ヒト組換え体（ＣＨＯ細胞）
リガンド：［３Ｈ］スピペロン、０．３ｎＭ
インキュベーション時間／温度：６０分／２２℃
非特異性リガンド：（＋）ブタクラモール（１０μＭ）
Ｋｄ：０．１９ｎＭ
定量化法：シンチレーション計数法
【００６９】
【表２】
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２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ−ＨＴＢＺ、ならびに２Ｒ，３Ｒ，１１ｂＲ−ＨＴＢＺの２種の構造類似体、化合物２−１および３−１は、ＶＭＡＴ２への選択性を示した。対照的に、２Ｓ，３Ｓ，１１ｂＳおよび２Ｒ，３Ｓ，１１ｂＳ  ＨＴＢＺの立体異性体は、Ｄ２（Ｓ）に高い親和性結合を示した。２Ｓ，３Ｒ，１１ｂＲ  ＨＴＢＺは、試験したドーパミン受容体でわずかな阻害を示した。いくつかのＨＴＢＺ異性体のこの非特異的な活性は、ＴＢＺで観察された副作用のうちのいくつかに寄与する可能性がある。
【００７０】
（実施例９）
ＶＭＡＴ２阻害剤誘発による自発運動活性の低下
ラット（スプラーグ−ドーリー、１００〜３００ｇ）を、試験前の少なくとも３日間単独収容に順応させる。ラットに、経口、腹腔内、皮下もしくは静脈経路（１〜１００ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクル対照によってテスト物質を投与する。１５〜６０分の前処理時間の後、ラットを、光電池検出器（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）に囲まれた透明なケージに入れる。ラットの自発運動活性は、光電池ビームの破断によって検出され、活性は、１セッション当たりのビーム破断の数として定義される。観察期間は、１５分〜２時間の範囲である。新規化合物の効果を、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  Ｎｅｕｍａｎ−Ｋｅｕｌ事後解析を用いて、ビヒクルおよび陽性対照（ジアゼパム３ｍｇ／ｋｇ）の効果と比較する。１試験条件当たり８〜１０匹のラットを使用する。
【００７１】
（実施例１０）
ＶＭＡＴ２阻害剤誘発による眼瞼下垂症
ラット（スプラーグ−ドーリー、１００〜３００ｇ）を、試験前の少なくとも３日間単独収容に順応させる。ラットに、経口、腹腔内、皮下もしくは静脈経路（１〜１００ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクル対照によってテスト物質を投与する。１５分の前処理時間の後、ラットを、眼瞼下垂症を観察するための透明なケージに入れる。眼瞼下垂症は、４段階で評価される：目は完全に開く＝０、目は１／４閉じている＝１、目は１／２閉じている＝２、目は３／４閉じている＝４、目は完全に閉じている＝４。測定は、化合物の投与後３時間まで１５分間隔で行う。新規化合物の効果を、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  Ｎｅｕｍａｎ−Ｋｅｕｌ事後解析を用いて、ビヒクルの効果と比較する。１試験条件当たり８〜１０匹のラットを使用する。
【００７２】
本発明の特定の実施形態を例示のために本明細書に記載しているが、様々な改変が本発明の精神および範囲から逸脱することなく実施され得ることが理解されよう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲によるもの以外で限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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