(57)【要約】  トップシート(2)を含む、生理用ナプキン、パンティライナー、失禁プロテクタ、おむつ、失禁パッド、女性用挿入物、またはタンポンなどの衛生用品(1)であって、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の少なくとも1種の細胞外産物および/または少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および5.5を超えないpKa値の少なくとも1つを有する有機酸および/またはその塩の形をとる少なくとも1種の添加剤を含む微生物阻害組成物(8)を含む衛生用品。
2010509982.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トップシート(2)を含む、生理用ナプキン、パンティライナー、失禁プロテクタ、おむつ、失禁パッド、女性用挿入物、タンポンなどの衛生用品(1)であって、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物および/または少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および5.5を超えないpKa値を有する有機酸および/またはその塩の形をとる少なくとも1種の添加剤を含む微生物阻害組成物(8)を含む衛生用品。
【請求項２】
前記pKa値が5を超えない、請求項1に記載の衛生用品。
【請求項３】
前記細胞外産物が、プロバイオティクス細菌の培養物の遠心分離または濾過によって得られる上清の形をとる、請求項1または2のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項４】
前記微生物阻害組成物(8)が、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および前記添加剤の少なくとも1種とを含む、請求項1または2のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項５】
前記微生物阻害組成物(8)が、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物、および前記添加剤の少なくとも1種を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項６】
前記微生物阻害組成物(8)が、プロバイオティクス細菌を実質的に含まず、好ましくは100CFU/mlよりも高い量で存在せず、より好ましくは10CFU/mlよりも高くない、請求項1から3のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項７】
前記プロバイオティクス細菌が乳酸産生細菌である、請求項1から6のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項８】
前記乳酸産生細菌が、ラクトバチルスプランタルムLB 931、発酵乳酸桿菌Ess-1、またはこれらの組合せである、請求項7に記載の衛生用品。
【請求項９】
前記添加剤が、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、コハク酸、および/またはこれらの塩から選択され、好ましくは、前記添加剤が、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、またはコハク酸、および/またはこれらの塩から選択され、最も好ましくは、前記添加剤が、アスコルビン酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、および/またはこれらの塩から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項１０】
前記塩がナトリウム塩であり、好ましくはプロピオン酸ナトリウムおよび/または酢酸ナトリウムである、請求項9に記載の衛生用品。
【請求項１１】
微生物阻害組成物(8)がトップシート(2)上に位置する、請求項1から10のいずれか一項に記載の微生物阻害組成物(8)を含む衛生用品。
【請求項１２】
請求項1から10のいずれか一項に記載の前記微生物阻害組成物(8)および前記衛生用品(1)を含むキット。
【請求項１３】
前記微生物阻害組成物(8)が、アンプル、ボトル、チューブ、ロールオンデバイス、スティック、またはスプレーとして提供される、請求項12に記載のキット。
【請求項１４】
前記衛生用品(1)と組み合わせた、請求項1から10のいずれか一項に記載の微生物阻害組成物(8)の使用。
【請求項１５】
前記微生物阻害組成物(8)を前記衛生用品(1)に付着させるステップを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の衛生用品(1)を作製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生理用ナプキン、パンティライナー、失禁プロテクタ、おむつ、またはタンポンなどの衛生用品に関し、その衛生用品は、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物および/または少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および選択された添加剤の少なくとも1種を含み、カンジダアルビカンス(Candida albicans)または他の望ましくない微生物に対して相乗的阻害効果を発揮する。
【背景技術】
【０００２】
泌尿生殖器領域は、50種を超える種々の細菌種を含んだ複雑な微生物生態系を有する(Hill et al.、Scand. J. Urol. Nephrol. 1984;86 (suppl.) 23〜29)。この領域で、妊娠可能な女性の場合に大半を占める種は、ラクトバチルス(Lactobacillus)属に属する乳酸産生細菌である。これらの乳酸産生メンバーは、これらの領域で健康な微生物叢を保持するのに重要であり、病原性微生物種に対して拮抗作用を有するプロバイオティクス細菌として作用する。乳酸産生細菌は、バイオフィルムを形成し入手可能な栄養素を得ようと競合することによって、コロニー形成に適した生態環境を占有することにより、他の微生物による成長およびコロニー形成を阻害し、それによって、有害な微生物によるコロニー形成が排除される。また、過酸化水素、バクテリオシンなどの特定の阻害物質、およびpHを低下させる有機酸(乳酸および酢酸を含む)の生成も、他の微生物の成長およびコロニー形成を阻害する。
【０００３】
健康な個体の微生物生態系は、抗生物質の使用によって、妊娠中やエストロゲンを含む避妊薬の使用などのホルモンの変化中、月経中、閉経後、糖尿病などに罹患している人において、妨げられる可能性がある。また、微生物は肛門から泌尿生殖器領域に広がる可能性もあり、この結果、正常な微生物叢が乱され、個体は、膣炎やカンジダ感染、尿路感染、皮膚感染などの微生物感染を受け易くなる。これらの種類の感染に一般に関連している微生物は、エシェリキア(Escherichia)属、エンテロコッカス(Enterococcus)属、シュードモナス(Pseudomone)属、プロテウス(Proteus)属、クレブシェラ(Klebsiella)属、ストレプトコッカス(Streptococcus)属、スタフィロコッカス(Staphylococcus)属、ガードネレラ(Gardnerella)属、およびカンジダ(Candida)属に属する。女性は、肛門と尿生殖路との間の距離がより短いので、特定の危険性に曝されており;特に危険に曝されているのは、泌尿生殖領域に十分に発達した微生物叢がまだない若い女性と、ほとんどの場合はもはや保護的な叢を持たない高齢の女性である。
【０００４】
泌尿生殖領域と同様に、皮膚には、その常在菌叢を形成する微生物の列がコロニー形成される。生物の数および種類は、種々の皮膚の部位同士で異なる。これは、皮膚の構造障壁と共に、侵入してくる細菌に対する優れた防御機能を宿主にもたらす。皮膚表面の細菌数は、前腕および背中の乾燥した表面でのcm2当たり2〜3百から、腋窩や鼠径などの湿り気のある領域でのcm2当たり何万まで様々である。この常在叢は、外来生物が皮膚上でコロニー形成するのを防ぐ際に重要な役割を演じるが、皮膚感染を避けるためにチェックし続ける必要がある。
【０００５】
黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)は、せつや膿瘍などの軽い皮膚感染、ならびにより重症な術後創傷感染の、最も一般的な原因である。治療ではドレナージを行い、これは、通常は軽い病変には十分であるが、感染が重症でありかつ患者に熱があるときは、さらに抗生物質を与える可能性がある。
【０００６】
毒素性ショック症候群は、毒素性ショック症候群の毒素を生成する黄色ブドウ球菌(S.aureus)株によって引き起こされた全身感染である。この疾患は、健康な女性によるタンポンの使用に関連して顕著になってきたが、女性に限られたものではなく、非生殖部位での黄色ブドウ球菌感染の結果として生じる可能性がある。
【０００７】
他の一般的な皮膚感染は、化膿連鎖球菌(Streptococcus pyogenes)(A群連鎖球菌)によって引き起こされる。生物は、感染した皮膚病変を有する他人との接触を通して獲得され、正常な皮膚でまずコロニー形成し、増殖し、その後、上皮の微小な破壊を通して侵入し、病変を発症させる可能性がある。
【０００８】
ペニシリンまたはエリスロマイシンによる治療が、この感染と闘うには必要と考えられる。
【０００９】
カンジダは、湿り気があり温かい皮膚の部位を好み、損傷した皮膚でも素早くコロニー形成する。したがって、皮膚の大部分の領域が比較的乾燥していることにより、カンジダの成長が防止され、したがって健康な皮膚では少数のカンジダが見られる。カンジダは、口腔および膣粘膜でもコロニー形成し、過成長の結果、これらの部位に疾患が生ずる。カンジダアルビカンス(C.albicans)は、おむつ皮膚炎に関連する。研究によれば、カンジダアルビカンスによって誘発された病変は、pHによって著しく影響を受け、皮膚のpHが低いほど病変は少なくなることが示されている(B. Runeman、Acta Derm Venereol 2000 ; 80: 421〜424)。
【００１０】
上述の感染の種類に関する問題を削減する1つの方法は、個人の衛生状態をよくすることである。しかし、洗浄剤の過剰な使用は、有害な微生物の量を低下させるだけではなく、有益な微生物叢に害を与える可能性があり、やはり病原性種のコロニー形成が行い易くなり、感染を引き起こす。あるいは、病原性種を打ち負かし、これらの領域で有益な微生物叢の回復および維持を促進させるために、乳酸産生細菌を泌尿生殖領域および皮膚に投与することは、微生物感染を治療し予防するための首尾良い手段であることがわかった。
【００１１】
乳酸産生細菌は、例えばWO 92/13577、WO 97/02846、WO 99/17813、WO 99/45099、およびWO 00/35502に記載されているように、おむつや生理用ナプキン、失禁ガード、パンティライナー、タンポンなどの吸収製品を介して送達できることが示唆されている。
【００１２】
皮膚および泌尿生殖領域のクリーニングおよびケアを可能にし、かつプロバイオティクス乳酸産生細菌の送達を可能にする衛生ティシュなど、乳酸産生細菌を伝達する他の方法も示唆されている(例えば、WO 04/060416)。
【００１３】
乳酸産生細菌の伝達に使用することが意図される製品の提供に関する主な問題は、細菌が、製品の輸送および貯蔵中に生存し続けなければならないことである。乳酸産生細菌は、半湿潤条件下でその生存力を素早く失い、したがって細菌は、貯蔵中に湿分に曝されないことが重要である。乳酸産生細菌が与えられた吸収製品におけるこの問題を、部分的に克服する1つの方法は、製品に細菌を供給し、前記製品を乾燥してその湿分のほとんどを除去し、製品を、湿分不透過性パッケージに入れることである(WO 99/17813)。
【００１４】
WO 00/61201は、バチルスコアギュランス(Bacillus coagulans)などの、有効量の生存可能な非病原性プロバイオティクス細菌、またはその細胞外産物を含有する、生理用品を開示する。
【００１５】
EP 1140226は、部分的に中和された超吸収材料の形をとるpH調節物質と、乳酸産生細菌との組合せについて述べている。
【００１６】
従来技術に照らせば、プレバイオティックおよび/またはプロバイオティクス効果が改善された、貯蔵および輸送が容易な衛生用品が、依然として求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】WO 92/13577
【特許文献２】WO 97/02846
【特許文献３】WO 99/17813
【特許文献４】WO 99/45099
【特許文献５】WO 00/35502
【特許文献６】WO 04/060416
【特許文献７】WO 00/61201
【特許文献８】EP 1140226
【特許文献９】EP-A-1035818
【特許文献１０】EP 1060240
【特許文献１１】WO 00/76878
【特許文献１２】WO 02/28446
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Hill et al.、Scand. J. Urol. Nephrol. 1984;86 (suppl.) 23〜29
【非特許文献２】B. Runeman,Acta Derm Venereol 2000 ; 80: 421〜424
【非特許文献３】Rainey,F.A.他、Int. J. Sys. Bacteriol. 1996 (46): 1088〜1092
【非特許文献４】Maidak,B.L.他、Nucl. Acids Res. 1999 (27): 171〜173
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
この従来技術に鑑み、本発明の目的は、プロバイオティクスおよび/またはプレバイオティック効果が高い微生物阻害組成物を含む、衛生用品を提供することである。また本発明の目的は、微生物阻害組成物がその微生物叢のバランスおよび健康増進機能を失うことなく、微生物阻害組成物を含む前記衛生用品が容易に輸送され貯蔵されることでもある。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
上記にて定められた問題は、生理用ナプキンやパンティライナー、失禁プロテクタ、おむつ、タンポンなどの衛生用品であって、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物および/または少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および5.5を超えないpKa値を有する有機酸および/またはその塩の形をとる少なくとも1種の添加剤を含む微生物阻害組成物を含み、相乗的プロバイオティクスおよび/またはプレバイオティック効果を発揮する衛生用品によって、本発明により解決される。
【００２１】
一態様では、前記pKa値は5を超えない。
【００２２】
本発明によれば、前記微生物阻害細胞外産物は、プロバイオティクス細菌の培養物の濾過または遠心分離によって得られた上清である。
【００２３】
本発明の一実施形態では、前記微生物阻害組成物は、プロバイオティクス細菌を実質的に含まず、好ましくは100CFU/mlよりも高い量で存在せず、より好ましくは10CFU/mlよりも高くない。
【００２４】
本発明の別の実施形態では、前記微生物阻害組成物は、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および前記添加剤の少なくとも1種を含む。
【００２５】
本発明のさらなる実施形態では、前記微生物阻害組成物は、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物および前記添加剤の少なくとも1種を含む。
【００２６】
本発明の一態様では、プロバイオティクス細菌は、乳酸産生細菌である。
【００２７】
本発明のさらなる態様では、乳酸産生細菌は、ラクトバチルスプランタルム(Lactobacillus Plantarum) LB 931である。本発明の他の一態様では、乳酸産生細菌が、発酵乳酸桿菌(Lactobacillus fermentum) Ess-1である。本発明のさらなる態様では、乳酸産生細菌は、ラクトバチルスプランタルムLB 931および発酵乳酸桿菌Ess-1の組合せである。
【００２８】
本発明の一態様では、前記添加剤は、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、コハク酸、および/またはこれらの塩から選択される。好ましくは、前記添加剤は、酢酸、プロピオン酸、乳酸、フェニルアラニン、クエン酸またはコハク酸、アスコルビン酸、および/またはこれらの塩から選択される。最も好ましくは、前記添加剤は、アスコルビン酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、および/またはこれらの塩から選択される。
【００２９】
本発明の別の態様では、前記塩はナトリウム塩であり、好ましくはプロピオン酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウムである。
【発明の効果】
【００３０】
プロバイオティクス細菌および/またはその細胞外産物および添加剤を組み合わせた本発明の微生物阻害組成物は、病原性微生物の阻害に予期せぬ相乗効果を発揮するので、この微生物阻害組成物を含む本発明による衛生用品は、高いプロバイオティクスおよび/またはプレバイオティック効果を発揮する。さらに、本発明の衛生用品は、微生物阻害組成物の有益な性質を失うことなく、輸送および貯蔵が容易である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】種々の酸/塩を添加した(50mM)、LB 931の細胞外産物中のC.アルビカンスの成長を示す図である。
【図２Ａ】種々の酸/塩を添加した(50mM)、LB 931の細胞外産物中の大腸菌(E.coli)の成長を示す図である。
【図２Ｂ】種々の酸/塩を添加した(50mM)、LB 931の細胞外産物中の腐敗性ブドウ球菌(S.Saprofyticus)の成長を示す図である。
【図３Ａ】発酵乳酸桿菌Ess-1の細胞外産物を、添加剤であるアスコルビン酸と組み合わせたときの、カンジダアルビカンスの成長を示す図である。
【図３Ｂ】発酵乳酸桿菌Ess-1の細胞外産物を、添加剤であるプロピオン酸と組み合わせたときの、カンジダアルビカンスの成長を示す図である。
【図４Ａ】本発明による衛生用品の平面図である。
【図４Ｂ】図4aの線II-IIから見た、衛生用品の断面図である。
【図５Ａ】本発明による衛生用品の平面図である。
【図５Ｂ】図5aの線II-IIから見た、衛生用品の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
(定義)
本発明の文脈におけるプロバイオティクス/プロバイオティクスは、適切な量で宿主に投与された場合に健康上の利益をもたらす生きている微生物に関する。
【００３３】
「乳酸産生細菌」は、乳酸を産生する細菌を意味する。本発明の目的に好ましい乳酸産生細菌には、ラクトバチルス属、ラクトコッカス(Lactococcus)属、およびペディオコッカス(Pediococcus)属の細菌が含まれる。使用される選択された細菌は、乳酸連鎖球菌(Lactococcus lactis)、発酵乳酸桿菌、ラクトバチルスラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルスアシドフィルス、またはラクトバチルスプランタルムの種から得られることが好ましい。細菌株は、ラクトバチルスプランタルムまたは発酵乳酸桿菌から選択されることが、より好ましい。乳酸産生細菌は、ラクトバチルムスプランタルムLB 931(寄託番号(DSMZ): DSM 11918)および発酵乳酸桿菌Ess-1(寄託番号(DSMZ): DSM 17851)であることが、さらにより好ましい。
【００３４】
本発明の文脈におけるプレバイオティクス/プレバイオティックは、適切な量で宿主に投与されたときに、バランスのとれた微生物叢を促進させる物質に関する。その例は、プロバイオティクス細菌の栄養素、プロバイオティクス細菌の宿主への付着を促進させる物質、pH調節物質、およびプロバイオティクス細菌からの細胞外産物である。
【００３５】
微生物阻害とは、他の微生物の成長、コロニー化、および/または生存の阻害を意味する。
【００３６】
細胞外産物とは、細胞外産物が抗菌効果を発揮するプロバイオティクス細菌の培養物中に分泌される産物を意味する。細胞外産物は、例えば濾過、遠心分離、またはこれらの両方によって、細菌細胞培養物から得られ、このように得られた細胞外産物を含む上清は、微生物阻害組成物で有用な抗菌活性を保持する。
【００３７】
「衛生用品」という用語は、尿や便、月経液などの身体からの浸出液を吸収し含有するように、着用者の皮膚に対して配置された製品を指し、この用品は、これらの領域にプロバイオティクス細菌を送達するのに使用することもできる。本発明は主に、使い捨ての衛生用品を指すが、これは使用後に、洗濯することを意図しない、またはその他の方法で回復させもしくは再使用することを意図しない用品を意味する。使い捨て衛生用品の例には、生理用ナプキン、パンティライナー、生理用ショーツ、女性用挿入物およびタンポンなどの、女性向け衛生用製品;幼児および失禁する成人用のおむつおよびパンツおむつ;失禁用パッド;およびおむつ挿入物などが含まれる。
【００３８】
(詳細な説明)
本発明は、泌尿生殖領域および/またはその使用中の衛生用品における、病原性微生物の成長、コロニー化、および/または生存の問題の解決に関する。
【００３９】
この問題は、衛生用品に対して、微生物阻害組成物を形成すると共に、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物および/または少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および5.5を超えないpKa値を有する有機酸および/またはその塩の形をとる少なくとも1種の添加剤を付着させることによって解決された、本発明の中にある。
【００４０】
当然ながら、本発明の細胞外産物を産生するために、2種以上のプロバイオティクス細菌株の組合せを使用できることに留意すべきである。また当然ながら、本発明による微生物阻害組成物で、少なくとも2種のプロバイオティクス細菌株の組合せを使用することも可能である。
【００４１】
従来技術は、プロバイオティクス細菌またはその細胞外産物のみ含む、衛生用品を開示している。しかし、微生物阻害効果は、必ずしも完全に満足のいくものではなく、先に論じたような、生存可能な微生物を含有する衛生用品を製造し保存する場合に克服すべき多くの問題がある。
【００４２】
本発明では、5.5を超えないpKa値、好ましくは5を超えないpKa値を有する有機酸および/またはその塩の形をとる添加剤を、プロバイオティクス細菌またはその細胞外産物に添加することによって、カンジダアルビカンスおよび例えば大腸菌や腐敗性ブドウ球菌などのいくつかの他の微生物の阻害が、驚くほど大きく増大したことがわかった。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明は、保存中の衛生用品の微生物阻害効果を保持することに関する問題の低減も対象とする。いくつかの実施形態における効果の全て、および他の実施形態における効果の少なくとも一部は、生物を実質的に含まない組成物から得られるものであり、微生物を生存可能に、したがって機能的に保つ問題が排除され、または低減される。
【００４４】
図4および5は、液体透過性トップシート2、バックシート3、およびこれらの間に包封された吸収体構造4を含む生理用ナプキン1の、例示的な実施形態を示す。液体透過性トップシート2は、不織材料から、例えばスパンボンド式、メルトブローン式、カード式、ヒドロエンタングル式、ウェットレイド式などの材料から構成することができる。適切な不織材料は、木材パルプや木綿繊維などの天然繊維、ポリエステルやポリエチレン、ポリプロピレン、ビスコースなどの人造繊維、または天然および人造繊維の混合物から構成することができる。トップシート材料はさらに、例えばEP-A-1035818に開示されているような結合パターンで互いに結合していてもよい、2種の繊維からなるものでよい。トップシート材料のさらなる例は、多孔質フォーム、アパーチャ付きプラスチックフィルムなどである。トップシート材料として適切な材料は、軟質で皮膚を刺激せず、かつ尿や月経液などの体液が容易に浸透するものであるべきである。
【００４５】
バックシート3は、薄いプラスチックフィルム、例えばポリエチレンまたはポリプロピレンフィルム、液体不透過性材料でコーティングされた不織材料、液体が浸透し難い疎水性不織材料からなるものでよい。プラスチックフィルムおよび不織材料の積層体を使用してもよい。バックシート材料は、液体がバックシート材料を通過しないようにした状態で、蒸気を吸収体構造から逃すことができるように、通気性であることが好ましい。
【００４６】
トップシート2およびバックシート3は、吸収体構造4よりもいくらか大きい張力を平面内に有し、その縁部の外側に延びて、突出部分5を形成する。層2および3は、例えば熱または超音波によって接着または溶接することにより、突出部分5内で互いに接続される。トップシートおよび/またはバックシートはさらに、熱または超音波による接着または溶接などの当技術分野で知られている任意の方法によって、吸収体構造に取着することができる。吸収体構造は、トップシートおよび/またはバックシートに取着しなくてもよい。
【００４７】
接着剤の領域6の形をとる固定手段は、使用中に着用者とは反対側になるバックシート面に設けられる。接着剤は、着用者の下着に取外し可能に取着することができる。剥離紙7は、使用前の接着領域6を保護する。接着領域6は、細長くまたは横向きのストリップや、ドット、全面コーティング領域など、任意の適切な構成を有してよい。
【００４８】
本発明の衛生用品の他の実施形態では(図示せず)、摩擦固定手段、テープタブ、またはフックアンドループ固定手段などの機械的固定手段など、他のタイプの固定手段を使用して、衛生用品を着用者の下着にまたはウェスト周りに固定することができる。いくつかの衛生用品はパンツの形をとり、したがって、特殊な固定手段である必要はない。他の場合には、衛生用品は、追加の固定手段を必要とすることなく、特殊な弾性パンツにより着用される。
【００４９】
吸収体構造4は、任意の従来からの種類のものにすることができる。一般に考えられる吸収材料の例は、セルロースフラッフパルプ、組織層、吸収性の高いポリマー(いわゆる超吸収体)、吸収フォーム材料、または吸収不織材料などである。吸収体構造でセルロースフラッフパルプと超吸収体とを組み合わせることは、一般的である。また、液体獲得能力、液体分散能力、および貯蔵能力に関して、異なる性質を有する異なる材料の層を含む吸収体構造を有することも、一般的である。これは当業者に周知であり、したがって、詳しく説明する必要はない。今日の衛生用品で一般的な薄い吸収体は、セルロースフラッフパルプと超吸収体との、圧縮された混合型または層状化構造をしばしば含む。吸収体構造のサイズおよび吸収能は、生理用ナプキン、パンティライナー、成人用失禁パッドおよびおむつ、乳児用おむつ、パンツおむつなど、種々の用途に適するように変えてよい。いくつかの場合には、衛生用品は、実質的に吸収機能を全く持たない女性用挿入物または失禁用挿入物の形をとるが、これらの物品の主な機能は、例えば健康増進物質を運び、おそらくは送達することである。挿入物の例は、不織層、穿孔プラスチックフィルム、またはフォーム層、またはこれらの積層体であり、これら全ては、好ましくは下着に取着するための手段を有するものである。前記挿入物は、任意選択でバックシート3を含むことができる。
【００５０】
本発明の目的は、体液を吸収すると同時に皮膚に移される、あるいは衛生用品の使用中に衛生用品自体の中にある望ましくない微生物の成長を阻害するための、微生物阻害組成物8を放出するのに適切な、生理用ナプキン、パンティライナー、おむつ、失禁ガードなどの衛生用品を提供することである。
【００５１】
上述のおよび図面に示される衛生用品は、非限定的な例を示すに過ぎず、本発明はそれらに限定するものではなく、上記にて定義された任意のタイプの衛生用品で使用することができることが理解される。
【００５２】
本発明で使用するのに適したプロバイオティクス細菌は、ほとんどの場合において酸を産生し、全ての場合において非病原性である。これらは、本明細書において以下に明らかにされる多くの適切な細菌であるが、本発明は、プロバイオティクス細菌の上述の機能および目的が満たされる限り、現在知られている細菌種および株に限定するものではない。
【００５３】
プロバイオティクス乳酸産生細菌の重要な特徴は、乳酸および場合によっては他の酸も産生することができることであり、前記乳酸は、皮膚粘膜の酸性度を上昇させ、それが、望ましくない真菌および細菌の成長、コロニー化、および生存の予防を助ける。したがって、酸産生のメカニズムにより、これらのプロバイオティクス細菌は、競合する有害な細菌および真菌の成長を阻害する。前記細菌のさらに重要な特徴は、過酸化水素および他の微生物阻害物質を産生でき、細胞表面に付着することもでき、それによって他の有害な細菌および真菌がこれらの表面に付着するのを予防できることである。
【００５４】
本発明の微生物阻害組成物に有用な、典型的なプロバイオティクス細菌は、効率的な乳酸産生体であるラクトバチルス、ラクトコッカス、またはペディオコッカスの全てのメンバーであり、バチルス(Bacillus)属の非病原性メンバー、ビフィズス菌(Bifidobacterium)属の全てのメンバー、およびシュードモナスリンベルギー(Pseudomonas limbergii)も含むが、下記のように、ある種は特に好ましい。
【００５５】
ラクトバチルス属の好ましいメンバーには、ラクトバチルスアシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルスブルガリカス(Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルスカセイ(Lactobacillus casei)、ラクトバチルスセレアル(Lactobacillus cereale)、ラクトバチルスデルブルケイ(Lactobacillus delbrukeii)、発酵乳酸桿菌、ラクトバチルスガセリ(Lactobacillus gaserii)、ラクトバチルスジェンセニ(Lactobacillus jensenii)、ラクトバチルスプランタルム、ラクトバチルスラムノサス、ラクトバチルスサリバリウス(Lactobacillus salivarius)、ラクトバチルスサーモフィルス(Lactobacillus thermophilus)、ラクトバチルスパラカサイ(Lactobacillus paracasai)種パラカサイ(paracasai)、ラクトバチルスクリスパタス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルスヘルベティカス(Lactobacillus helveticus)、および乳酸連鎖球菌などが含まれる。
【００５６】
新規な細菌である発酵乳酸桿菌Ess-1およびラクトバチルスプランタルムLB931が、特に好ましい。LB 931は、例えばEP 1060240において多数の病原性微生物の成長を阻害するように、泌尿生殖器感染を予防しかつ/または治療するのに価値があることが、既に見い出されている。発酵乳酸桿菌Ess-1(寄託番号(DSMZ): DSM 17851)は、ドイチェ  ザンムルンク  フォン  ミクロオルガニスメン  ウント  ツェルクルトゥレン  ゲーエムベーハー（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH）(Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig)で、ブダペスト条約に従って寄託された(寄託者Essum AB、Box 3160、SE 90304 Umea、スウェーデン、2006年1月6日寄託)。
【００５７】
しかし2種のラクトバチルス株のみ使用した下記の実施例では、これらの細菌株は、本発明の実施に際して有用なプロバイオティクス細菌のモデルとしてしか見られないことに、留意すべきである。したがって下記の実施例は、本発明を限定するものと見るべきではない。任意のプロバイオティクス細菌を、組成物中に使用することができることが意図される。
【００５８】
微生物阻害組成物が細胞外産物および前記添加剤の少なくとも1種を含む本発明の一実施形態では、前記組成物は、プロバイオティクス細菌を実質的に含まない。プロバイオティクス細菌を全く含まない組成物の製造は極めて難しく、したがってプロバイオティクス細菌は、100CFU/mlよりも高い量で微生物阻害組成物中に存在しないことが好ましく、10CFU/mlよりも高くないことがより好ましいことに留意されたい。この組成物には、細胞外産物が生きている微生物よりも持続性があるので、貯蔵要件がそれほど厳格ではないという利点がある。
【００５９】
本発明の細胞外産物は、細菌培養から得られる。本発明に適切な細菌は、本発明の目的に有用な抗菌活性を有する産物を分泌する。細胞外産物を得るために、細胞培養物を下記の通り収集し、上清を、遠心分離または濾過またはその両方によって得る。このように得られた上清は、その中に含まれる細胞外産物によって、微生物阻害活性を有する。細胞外産物をどのように調製できるかという例を、下記の実施例3に示す。
【００６０】
細胞外産物は、細菌培養物から直接得られたときのような形をとってもよいが、上清をさらに濃縮しかつ/または精製することも可能である。精製とは、微生物阻害物質の一部が、例えばクロマトグラフィ、結晶化、または蒸留によって単離され、別々にもしくは他の単離された物質と組み合わせて使用されることを意味する。
【００６１】
本発明のプロバイオティクス細菌および/または細胞外産物に添加される添加剤は、有機酸またはその塩の形をとる。前記添加剤を選択した場合、これは当然ながら、製品安全性の観点から作製すべきである。有機酸またはこれに対応する塩は、これらを衛生用品に適用した場合に、衛生用品の着用者にいかなる皮膚刺激も誘発しないような性質のもの、したがって有機酸のpKaが、25℃の水中で測定を行ったときに好ましくは2以上であるべきである。代わりにpKa値が高すぎる場合、有機酸またはその塩は、主にその酸形態をとることになる。これは、添加剤が、水素イオンとその脱プロトン化陰イオン形態、すなわちプロバイオティクス細菌および/またはその細胞外産物と前記相乗的微生物阻害効果を得るために必須と考えられる形態へと、十分に解離しなくなることを意味する。したがって、本発明に適した有機酸のpKa値は、5.5未満であるべきで、好ましくは5未満である。本発明に適した有機酸が、1pKaよりも高い値を有する場合、これらの値の少なくとも1つは、5.5未満であるべきで、好ましくは5未満である。
【００６２】
細胞外産物が上清の形をとる場合、これら有機酸および/または対応する塩の溶解度は、前記添加剤が上清に溶解できるように、十分高いものであるべきである。あるいは、添加剤が衛生用品で乾燥/乾燥済み形態をとる場合には、添加剤の溶解度は、この添加剤が衛生用品の使用中に体液に接触したときに素早く溶液状態になるような性質のものであるべきである。
【００６３】
本発明の好ましい実施形態では、添加剤は、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、コハク酸、および/またはその塩から選択される。好ましくは、前記添加剤は、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、またはコハク酸、および/またはその塩から選択される。最も好ましくは、前記添加剤は、アスコルビン酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、および/またはその塩から選択される。
【００６４】
本発明の一実施形態において、塩はナトリウム塩である。特に好ましい塩は、プロピオン酸ナトリウムおよび酢酸ナトリウムである。
【００６５】
本発明の衛生用品がプロバイオティクス細菌を含む場合、これらは、典型的には、衛生用品1個当たりの生存可能なプロバイオティクス細菌が約106〜1011CFUという量で提供される。典型的には細菌は、細胞または胞子の形をとり、これが懸濁液として提供され、衛生用品に加えられて、その後乾燥される。好ましくは、衛生用品は、衛生用品1個当たり約108〜1010CFU含むことになるが、これらの量は、特定の適用例、製品形態、および意図される使用に応じて変えてもよい。
【００６６】
プロバイオティクス細菌の代わりに衛生用品が細胞外産物を含む場合、衛生用品は、典型的には細胞外産物を約0.5〜100ml含み、好ましくは1〜10ml含む。
【００６７】
細胞外産物と組み合わせた場合、前記添加剤は、典型的には5〜100mMの濃度で添加される。プロバイオティクス細菌とだけ組み合わせた場合、前記添加剤は、典型的には0.15mg〜2.6gの量で、好ましくは0.3mg〜0.3gの量で衛生用品に添加されるが、これらの量は、特定の適用例、製品形態、および意図される使用に応じて変えてもよい。
【００６８】
微生物阻害組成物は、本発明による衛生用品に直接加えてもよく、または微生物阻害組成物の移動を高める医薬品として許容可能な担体に含めて提供してもよく、そのような例には、ワセリン、油、ワックスなどの粘着性ある物質が含まれる。
【００６９】
1つの好ましい実施形態では、微生物阻害組成物は懸濁液の形をとり、前記懸濁液は、含浸、噴霧、または印刷などによって衛生用品に直接加えてもよく、その後、生理用品を例えば熱乾燥によって乾燥する。
【００７０】
別の好ましい実施形態では、微生物阻害組成物は、粉末の形をとる。粉末は、上述の医薬品として許容される担体に混合してもよく、または粉末として衛生用品に直接加えてもよく、この後者の場合には、図5に示されるように、好ましくは吸収体構造に、または吸収体構造とトップシートの間に加えてもよい。粉末が、医薬品として許容される担体と混合される場合、この混合物を、含浸、噴霧、または印刷などによって衛生用品に加えてもよく、その後、衛生用品を乾燥してもよい。衛生用品のトップシートに取着される、おそらくは湿分を透過させない個別のポケットを意味する送達用具も、前記微生物阻害組成物を送達する有利な方法である。
【００７１】
上述による粉末は、上記にて論じた懸濁液を、熱乾燥、対流乾燥、噴霧乾燥、または凍結乾燥などによって蒸発させることにより得てもよい。微細な粉末を得るために、乾燥した微生物阻害組成物をさらに成型することも必要と考えられる。プロバイオティクス細菌は、好ましくは凍結乾燥される。
【００７２】
微生物阻害組成物は、使用時に衛生用品の使用者に接触している限り、衛生用品のどの場所に配置してもよい。微生物阻害組成物8は、好ましくは、図4に示される衛生用品のトップシート上に位置する。
【００７３】
図5に示される代替の好ましい実施形態では、微生物阻害組成物8は、トップシート2と吸収体構造4との間に位置する。
【００７４】
衛生用品が、生きているプロバイオティクス細菌を含む場合、その細菌は、湿分から保護されなければならない。したがって衛生用品は、湿分不透過性パッケージに密封状態で封入してもよい。WO 00/76878は、そのような湿分不透過性パッケージの例を示す。細菌をどのように保護することができるかという別の例は、例えばWO 02/28446に例示されている送達システムの使用によるものである。
【００７５】
さらなる可能性は、使用者が吸収体物品を直接付着させるのに都合の良い形で、例えばその液体形態で、粉末として、ローションに分散させて、油に分散させて、別々に前記微生物阻害組成物を送達することである。前記微生物阻害組成物を加えるための手段は、スプレー、ロールオンデバイス、チューブ、ボトル、アンプル、ストリップ、またはスティックでよい。
【００７６】
本発明のさらに別の態様では、微生物阻害組成物を、本発明による衛生用品と組み合わせて使用する。
【００７７】
本発明の別の態様は、前記微生物阻害組成物を前記衛生用品に加えるステップを含む、衛生用品の作製である。
【００７８】
(実験セクション)
(試験1)
この試験の目的は、選択された添加剤がカンジダアルビカンスの成長に影響を及ぼすか否か、また添加剤をラクトバチルスプランタルムLB 931の細胞外産物に添加したときに改善された成長阻害を実現することができるか否かを決定することである。この試験で使用した添加剤は、アスコルビン酸、クエン酸、フェニルアラニン、酢酸、プロピオン酸、およびプロピオン酸ナトリウムであった。
【００７９】
(方法)
(酵母株)
カンジダアルビカンスの臨床単離株(C.アルビカンス702と示す)を、試験株として使用した。膣カンジダ症に罹っている女性の膣から単離した。
【００８０】
(対照)
対照として、純粋なdMRSブロス(酢酸ナトリウムを添加しないMRSブロス)を使用した。指定された体積を、マイクロタイタープレートのウェルに移し、空気乾燥した(45℃、最短で20時間)。
【００８１】
(細胞外産物(ECP))
dMRSブロス中で成長させたLB 931の培養物を、遠心分離して細胞をペレットにし、LB 931細胞外産物を含むLB 931上清を得るために、0.22μmフィルタ(Milliporeフィルタ、Bedford、USA)を使用して滅菌濾過した。指定された体積の滅菌濾過済み上清を、マイクロタイタープレートのウェルに移し、空気乾燥し(45℃、最短で20時間)、その後、滅菌蒸留水に再懸濁して3倍の濃度にし、200μlを96ウェルマイクロタイタープレートに移した。
【００８２】
(添加剤を含む細胞外産物)
LB 931の滅菌濾過済み上清が入っている管に、添加剤を添加して50mMの最終濃度にした。指定された体積をマイクロタイタープレートのウェルに移し、空気乾燥し(45℃、最短で20時間)、その後、滅菌蒸留水に再懸濁して3倍の濃度にし(すなわち、滅菌蒸留水の体積は、空気乾燥前の指定体積の約3分の1である)、200μlを96ウェルマイクロタイタープレートに移した。
【００８３】
(添加剤を含んだブロス)
最終濃度が50mMになるように、添加剤をdMRSブロスに添加した。pHを、それぞれの添加剤ごとに添加剤を加えた細胞外産物の場合と同じpH値に調節した。指定された体積をマイクロタイタープレートのウェルに移し、空気乾燥し(45℃、最短で20時間)、その後、滅菌蒸留水に再懸濁して3倍の濃度にし、200μlを96ウェルマイクロタイタープレートに移した。
【００８４】
カンジダを添加して、その最終濃度をウェル当たり約104細胞にし、マイクロタイタープレートを37℃で24時間インキュベートした。
【００８５】
種々の添加剤に関するpHは、3.4±0.2の間で変化した。添加剤を含むブロスと添加剤を含む細胞外産物とのpHは、常に同じであった。
【００８６】
試験は、結果に影響を及ぼす先入観が無くなるように、ブラインド式にした。カンジダの阻害に関し、計算した平均値を示している濁度の目視観察に基づいた5から0のスケール上で、テンプレートを使用する2名によって評価し段階分けした。純粋なdMRSブロス中で強力に成長したカンジダを含むウェルを、5に段階分けし、一方、成長が見られないウェルを0に段階分けした。
【００８７】
(結果)
図1に見られるように、ごく僅かな添加剤そのものが、カンジダの成長に効果があることが判明したが、そのpHは非常に低かった。LB 931の細胞外産物は、カンジダの阻害に効果的であった。この効果は、LB 931の細胞外産物に添加剤を加えることによって、驚くほど高められた。LB 931の細胞外産物と組み合わせた全ての添加剤では、非常に良好な成長阻害効果が発揮された。最良の効果は、プロピオン酸をLB 931の細胞外産物に添加したときに発揮された(全く成長しなかった)。
【００８８】
(試験2)
これらの試験の目的は、選択された添加剤が細菌の成長に影響を及ぼすか否か、またラクトバチルスプランタルムLB 931の細胞外産物に添加したときに、改善された成長阻害を実現することができるか否かを決定することであった。この試験で使用された添加剤は、酢酸ナトリウム、コハク酸、プロピオン酸ナトリウム、酢酸であった。
【００８９】
(方法)
(細菌株)
大腸菌(E.coli 1と示す)およびスタフィロコッカスサプロフィティカス(S.saprophyticus 1)の臨床単離株を、試験株として使用した。これらは、尿路感染症に罹っている女性の生殖管から単離した。
【００９０】
(対照)
対照として、純粋なdM17ブロス(MnSO4(最終濃度0.04g/l)、MgSO4(最終濃度0.2g/l)、およびグルコース(最終濃度20g/l)の添加によって変性させたM17ブロス)を使用した。200μlを、96ウェルマイクロタイタープレートに添加した。
【００９１】
(細胞外産物(ECP))
LB 931細胞外産物を含むLB 931上清を得るために、dM17ブロス中で成長させたLB 931の培養物を遠心分離して、細胞をペレットにし、0.22μmフィルタ(Milliporeフィルタ、Bedford、USA)を使用して滅菌濾過した。200μlを、96ウェルマイクロタイタープレートに移した。
【００９２】
(添加剤を含む細胞外産物)
LB 931の滅菌濾過済み懸濁液が入っている管に、最終濃度が50mMになるように添加剤を添加した。200μlを96ウェルマイクロタイタープレートに移した。
【００９３】
(添加剤を含むブロス)
添加剤を、最終濃度が50mMになるようにdM17ブロスに添加した。200μlを、96ウェルマイクロタイタープレートに添加した。
【００９４】
共に100×希釈したE.coli resp,腐敗性ブドウ球菌(S, saprophyticus)を一晩培養した培養物10μlを、マイクロタイタープレートのウェルに添加し、これを37℃で一晩インキュベートした。
【００９５】
pHを、全ての試験において6.9に調節した。
【００９６】
試験は、結果に影響を及ぼす先入観が無くなるように、ブラインド式にした。E.coli resp,腐敗性ブドウ球菌の阻害に関し、計算した平均値を示している濁度の目視観察に基づいた5から0のスケール上で、テンプレートを使用する2名によって評価し段階分けした。純粋なdM17ブロス中で強力に成長したE.coli resp,腐敗性ブドウ球菌を含むウェルを、5に段階分けし、一方、成長が見られないウェルを0に段階分けした。
【００９７】
(結果)
図2Aからわかるように、試験がなされた添加剤単独でE.coliの成長に影響を及ぼすものは無いことが判明した。LB 931の細胞外産物は、E.coliの阻害に効果的であった。この効果は、LB 931の細胞外産物に添加剤を加えることによって、驚くほど高められた。LB 931の細胞外産物と組み合わせた全ての添加剤で、非常に良好な成長阻害効果が発揮された。
【００９８】
図2Bからわかるように、試験がなされた添加剤単独で腐敗性ブドウ球菌の成長に影響を及ぼすものは無いことが判明した。LB 931の細胞外産物は、腐敗性ブドウ球菌の阻害に効果的であった。この効果は、LB 931の細胞外産物に添加剤を加えることによって、驚くほど高められた。LB 931の細胞外産物と組み合わせた全ての添加剤で、非常に良好な成長阻害効果が発揮された。
【００９９】
(試験3)
この試験の目的は、発酵乳酸桿菌Ess-1の細胞外産物と、添加剤であるアスコルビン酸またはプロピオン酸とを組み合わせたときの、カンジダアルビカンスの阻害の亢進について評価することであった。
【０１００】
(方法)
Ess-1を、dMRSブロス(酢酸ナトリウムを添加しないMRSブロス)中で静止期まで成長させた。細菌培養物を遠心分離して、細胞をペレットにし、0.22μmフィルタ(Milliporeフィルタ、Bedford、USA)を使用して滅菌濾過し、それによって細胞外産物を含む上清を得た。プロピオン酸およびアスコルビン酸を、最終濃度が50mMになるように、細胞外産物が入っている管に添加した。濾液を、それぞれの酸のpKa値まで(アスコルビン酸は4.2、プロピオン酸は4.87)pH調節し、200μlを96ウェルマイクロタイタープレートのウェルに移した。C.アルビカンスを、最終濃度が約5×104CFUml-1になるように、各ウェルに添加した。プレートを37℃で20時間インキュベートし、その成長について、計算した平均値を示している濁度の目視観察に基づいた5から0のスケール上で、テンプレートを使用して2名が評価し段階分けした。純粋なdMRSブロス中で強力に成長したカンジダを含有するウェルを、5に段階分けし、一方、成長が目視されなかったウェルを0に段階分けした。
【０１０１】
(結果)
図3Aおよび3Bからそれぞれわかるように、Ess-1からの上清をアスコルビン酸またはプロピオン酸のどちらかと組み合わせたときに、予期せぬ阻害の増大が得られた。
【０１０２】
(試験4)
この試験の目的は、ラクトバチルスプランタルムLB 931の細胞成長と組み合わせた、酢酸Naからのカンジダ阻害の亢進について評価することであった。
【０１０３】
(方法)
2つのプレートをM17寒天で作製し、2つをMRS寒天で作製した。MRS培地(De Man、Rogosa、およびSharpeによって開発された)は、ラクトバチルスに一般に使用されている成長培地である。Merckから得たMRS寒天は、寒天1リットル当たり酢酸ナトリウムを5g含有する。M17(Oxoid)は、同様のラクトバチルス用の市販の基質であるが、酢酸ナトリウムは添加していない。これらの寒天は、パッケージ上に、記述されるように調製した。
【０１０４】
ラクトバチルスプランタルムLB 931を、5%CO2の下、37℃で、MRSブロス中で24時間培養した。カンジダアルビカンス702は、37℃のM17ブロス中で24時間培養した。
【０１０５】
穴(φ10mm)をプレートに開け、MRS寒天中に約107 LB 931を含有する寒天混合物の、250μlのプラグを充填した。プレートを30分間放置し、次いで5%CO2の下、37℃で24時間インキュベートした。M17ブロスでC.アルビカンスを一晩培養したものを、10倍に希釈し、100μlを各プレートの表面に塗り拡げた。次いでプレートを、37℃で24時間インキュベートした。対照として、穴(φ10mm)にMRS寒天のみ充填した。
【０１０６】
プレートを、そのカンジダ成長阻害に関して評価した。カンジダの成長が無いプラグの周りのゾーンを測定した(φmm)。
【０１０７】
(結果)
ゾーンのサイズを表1に見ることができる。
【０１０８】
【表１】
2010509982.tif 000003
【０１０９】
LB 931は、LB 931が接種されている全てのプラグで十分に成長した。M17寒天のプレート上に、カンジダが成長していないゾーンはなかった。MRS寒天プレートでは、LB 931プラグの周りに透明なゾーンがあるが、寒天のみのプラグの周りにはゾーンがなかった。
【０１１０】
LB 931を、非常に少ない量でプレートに付着させたが、このことは、M17寒天プレート上になぜカンジダの阻害が見られなかったのかを説明することができる。しかしこれは、LB 931と添加剤との相乗効果によるカンジダの効率的な阻害を示しており、この場合、酢酸ナトリウムがMRS培地に含まれていた。
【実施例】
【０１１１】
本発明に関する下記の実施例は、例示的なものであり、当然ながら、本発明を具体的に限定するものと解釈すべきではない。
【０１１２】
(実施例1)
Ess-1の単離および類別
この研究の最初の目的は、他のラクトバチルス株に比べてかなりの程度までカンジダアルビカンスおよびカンジダグラブラタ(Candida glabrata)の成長を阻害するラクトバチルス株を、単離し類別することである。
【０１１３】
(方法)
(酵母株)
カンジダアルビカンスおよびカンジダグラブラタの臨床単離株を、試験株として使用した。これらを、膣カンジダ症に罹っている女性の膣から、および健康な女性から単離した。
【０１１４】
(スクリーニング1)
ヒトの皮膚、喉、歯、乳児の便、野菜、および種子由来の、約140のラクトバチルス株を、MRSブロスで培養し、MRS寒天プレート上にスタンプした。この寒天プレートを、37℃の嫌気性条件下でインキュベートした。さらにSAB(Sabouraud)寒天(LAB M、Bury、UK)をMRS寒天上に注ぎ、凝結させた。C.アルビカンス培養物を寒天上に播き、プレートを、37℃で好気的にインキュベートした。阻害の視覚的評価を行った。参照株であるラクトバチルスプランタルムLB 931に等しくまたはそれよりも大量にC.アルビカンスを阻害する株を選択し、さらなるスクリーニング(スクリーニング2)にかけた。
【０１１５】
(スクリーニング2)
dMRSブロス(酢酸ナトリウムが添加されないMRS)で成長したラクトバチルスの懸濁液を、遠心分離し、滅菌濾過した。濾液を、以後、ラクトバチルス無細胞濾液、LCFと呼ぶ。指定された体積をマイクロタイタープレートのウェルに移し、空気乾燥させ、その後、滅菌蒸留水に再懸濁して3倍の濃度にし、96ウェルマイクロタイタープレートに移した。カンジダを、全てのバイアルに添加した(それぞれC.アルビカンスおよびC.グラブラタの3つの単離株を使用した)。阻害を、濁度の目視観察によって評価し、5から0のスケールでテンプレートを使用して、2名により段階分けした。純粋なdMRSブロスで強力に成長したカンジダ種を含有するウェルを、5に段階分けし、一方、成長が目視されなかったものを0に段階分けした。
【０１１６】
(API類別および遺伝子型類別)
種のレベルの同定を、API 50 CHLシステム(bioMerieux、フランス)を使用して、製造業者の取扱い説明書に従って行った。発酵試験から得たデータを、API Lab Plusソフトウェアを使用して分析した。遺伝子型類別は、16S rRNAの部分配列決定分析により、DSMZ(Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH)によって行った。
【０１１７】
(結果)
全ての株を、スクリーニング1でのC.アルビカンスに対する成長阻害能力に応じて評価した。LB 931の場合に匹敵しまたはそれを超える結果を有する23のラクトバチルス株を、スクリーニング2用に選択した。それらの23のラクトバチルス株の中で、3つは参照株であり、大多数の株は口道から単離したものであった。
【０１１８】
Ess-1は、カンジダの成長を阻害する包括的な能力を有することが判明した。試験がなされたラクトバチルス株の中で、C.アルビカンスおよびC.グラブラタの両方に対する影響に関してEss-1の活性と同様であるものはなかった。Ess-1に関する炭水化物発酵パターンおよび遺伝子型類別は、ラクトバチルス発酵種に属することが示された。
【０１１９】
(Ess-1の特徴付け)
株Ess-1(DSM 17851)から得た16S rDNAを、PCR増幅16S rDNAの約450ヌクレオチドの直接的な配列決定によって、DSMZ(Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH)により分析した。ゲノムDNA抽出、16S rDNAのPCR媒介型増幅、およびPCR産物の精製を、前述のように実施した(Rainey,F.A.他、Int. J. Sys. Bacteriol. 1996 (46): 1088〜1092)。精製したPCR産物について、CEQ(商標)DTCS-Quickstart Kit (Beckamn Coulter)を使用し、製造業者の取扱い説明書に従って配列決定した。配列反応産物を、CEQ(商標)8000遺伝子分析システムを使用して電気泳動させた。
【０１２０】
得られた配列データをアラインメントエディターae2 (Maidak,B.L.他、Nucl. Acids Res. 1999 (27): 171〜173)に入れ、手作業でアラインメントし、ファーミキューテス(Firmicutes)に属する生物の代表的な16S rRNA遺伝子配列と比較した(Maidak,B.L.他)。比較のため、16S rRNA配列を、EMBLデータベースまたはRDP(Maidak,B.L.他)から得た。
【０１２１】
この分析の結果、下記の表2にはこれらの生物が列挙され、その16S rRNA遺伝子配列は、Ess-1の16S rDNA配列に比べて最高の相似値を示している。
【０１２２】
【表２】
2010509982.tif 000004
【０１２３】
株Ess-1の部分16S rDNA遺伝子配列は、発酵乳酸桿菌に対して最高の相似性を示す。その結果、株Ess-1は、発酵乳酸桿菌の株であってもよいが、ラクトバチルス属の新種であってもよい。
【０１２４】
(実施例2)
プロバイオティクスラクトバチルスの産生
実験室規模において: ex. MRSブロスが入っている滅菌容器に、所望のラクトバチルス株の純粋な接種物を接種する。細菌を含むブロスを、好ましくは5%CO2の雰囲気と共に、37℃で一晩インキュベートする。次いで細胞を、遠心分離および滅菌生理食塩液を使用して洗浄してよい。保護糖、デンプン、またはタンパク質を添加し、細胞集団を凍結乾燥し、ミリング処理してよい。
【０１２５】
生産規模では、作業シードロットを種々のステップで、生産規模まで発酵させる。この生産は、特定の株が生産されるように制御され、最適化される。発酵後、培養物を洗浄し、かつ/または交差流精密濾過または遠心分離を使用して濃縮のみ行う。上述の保護糖を添加し、細胞を凍結乾燥しかつミリング処理しまたは噴霧乾燥することができる。
【０１２６】
(実施例3)
例えばラクトバチルスから得た細胞外産物の生成
実験室規模では、プロバイオティクス株を一晩培養したものを、実施例2のように生成する。濾過または遠心分離の後、上清を収集する。上清は、蒸発によって濃縮してもよく、または例えば乾燥空気中での対流乾燥、凍結乾燥、または噴霧乾燥によって、完全に乾燥してもよい。
【０１２７】
生産規模では、細菌培養物を、実施例2に従って発酵させる。この細胞外産物は、交差流精密濾過を使用して濾液として、または遠心分離を使用して上清として得られる。この場合も、蒸発を使用してさらに濃縮してもよく、または例えば噴霧乾燥を使用して完全に乾燥してもよい。
【０１２８】
(実施例4)
配合物
抗カンジダパンティライナー
この製品は、Libresse(登録商標)エクストラライナー(SCA Hygiene Products ABから販売されている)などの標準的な市販のパンティライナーを基にしており、添加剤と組み合わせたEss-1の細胞外産物が、下記の通り添加されている: Ess-1の細胞外産物10mlを1mlにまで蒸発させ、そこにプロピオン酸3.7mgを添加する。プロピオン酸で産生させた細胞外産物を、パンティライナーの表面にプリントし、これを包装する前に乾燥させる。
【０１２９】
細菌成長が少なく臭いが制御された軽失禁パッド
この製品は、Tena(登録商標)レディノーマル(SCA Hygiene Products ABから販売されている)などの標準的な市販の軽失禁パッドを基にしており、LB 931の細胞外産物が、下記の通り添加されている: LB 931の細胞外産物100mlを、クエン酸1gと混合する。混合物を蒸発させ、乾燥し、その後、粉末を、パッドの吸収芯に均質に混合する。
【０１３０】
改善された生殖衛生のための軽ライナー
この製品は、Libresse(登録商標)ライトライナー(SCA Hygiene Products ABから販売されている)などの標準的な市販のパンティライナーを基にしており、Ess-1およびLB 931の細胞外産物が、下記の通り添加されている: Ess-1の細胞外産物5mlおよびLB 931の細胞外産物5mlを混合し、1mlにまで蒸発させ、そこに、酢酸ナトリウム4.1mgを添加する。混合物を蒸発させ、乾燥し、粉末を、シリコーンワックス0.1gと混合し、最後にライナーのトップシートのセンターにプリントする。
【０１３１】
配合物の3つの例全てが、プロバイオティクス細菌としてラクトバチルスプランタルムLB 931および/または発酵乳酸桿菌Ess-1しか含まない場合であっても、前述のように本発明に適した全てのプロバイオティクス細菌を、同様に使用してもよいことに留意すべきである。
【符号の説明】
【０１３２】
図４ａ及び／または図４ｂの1  生理用ナプキン
図４ａ及び／または図４ｂの2  トップシート
図４ａ及び／または図４ｂの3  バックシート
図４ａ及び／または図４ｂの4  吸収体構造
図４ａ及び／または図４ｂの5  突出部分
図４ａ及び／または図４ｂの6  接着領域
図４ａ及び／または図４ｂの7  剥離紙
図４ａ及び／または図４ｂの8  微生物阻害組成物
【受託番号】
【０１３３】
受入番号(DSMZ): DSM 11918, ラクトバチルムスプランタルムLB 931
受入番号(DSMZ): DSM 17851, 発酵乳酸桿菌Ess-1
［寄託書］
2010509982.tif 000005
【図１】
2010509982.tif 000006
【図２Ａ】
2010509982.tif 000007
【図２Ｂ】
2010509982.tif 000008
【図３Ａ】
2010509982.tif 000009
【図３Ｂ】
2010509982.tif 000010
【図４ａ】
2010509982.tif 000011
【図４ｂ】
2010509982.tif 000012
【図５ａ】
2010509982.tif 000013
【図５ｂ】
2010509982.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成21年2月17日(2009.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トップシート(2)を含む、生理用ナプキン、パンティライナー、失禁プロテクタ、おむつ、失禁パッド、女性用挿入物、タンポンなどの衛生用品(1)であって、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物および/または少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および5.5を超えないpKa値を有する有機酸および/またはその塩の形をとる少なくとも1種の添加剤を含む微生物阻害組成物(8)を含む衛生用品。
【請求項２】
前記pKa値が5を超えない、請求項1に記載の衛生用品。
【請求項３】
前記細胞外産物が、プロバイオティクス細菌の培養物の遠心分離または濾過によって得られる上清の形をとる、請求項1または2のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項４】
前記微生物阻害組成物(8)が、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌および前記添加剤の少なくとも1種を含む、請求項1または2のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項５】
前記微生物阻害組成物(8)が、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌、少なくとも1種のプロバイオティクス細菌の細胞外産物、および前記添加剤の少なくとも1種を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項６】
前記微生物阻害組成物(8)が、プロバイオティクス細菌を実質的に含まず、好ましくは100CFU/mlよりも高い量で存在せず、より好ましくは10CFU/mlよりも高くない、請求項1から3のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項７】
前記プロバイオティクス細菌が乳酸産生細菌である、請求項1から6のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項８】
前記乳酸産生細菌が、ラクトバチルスプランタルムLB 931、発酵乳酸桿菌Ess-1、またはこれらの組合せである、請求項7に記載の衛生用品。
【請求項９】
前記添加剤が、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、コハク酸、および/またはこれらの塩から選択され、好ましくは、前記添加剤が、酢酸、プロピオン酸、乳酸、アスコルビン酸、フェニルアラニン、クエン酸、またはコハク酸、および/またはこれらの塩から選択され、最も好ましくは、前記添加剤が、アスコルビン酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、および/またはこれらの塩から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載の衛生用品。
【請求項１０】
前記塩がナトリウム塩であり、好ましくはプロピオン酸ナトリウムおよび/または酢酸ナトリウムである、請求項9に記載の衛生用品。
【請求項１１】
微生物阻害組成物(8)がトップシート(2)上に位置する、請求項1から10のいずれか一項に記載の微生物阻害組成物(8)を含む衛生用品。
【請求項１２】
請求項1から10のいずれか一項に記載の前記微生物阻害組成物(8)および前記衛生用品(1)を含むキットであって、前記微生物阻害組成物(8)が前記衛生用品(1)から別々に提供される、キット。
【請求項１３】
前記微生物阻害組成物(8)が、アンプル、ボトル、チューブ、ロールオンデバイス、スティック、またはスプレーとして提供される、請求項12に記載のキット。
【請求項１４】
前記衛生用品(1)と組み合わせた、請求項1から10のいずれか一項に記載の微生物阻害組成物(8)の使用。
【請求項１５】
前記微生物阻害組成物(8)を前記衛生用品(1)に付着させるステップを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の衛生用品(1)を作製する方法。
【国際調査報告】
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