(57)【要約】本発明は、ポリマーと共有結合しているビスホスホネートマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を含んでなる包帯組成物を提供し、これでは、包帯を創傷と接触させると、ビスホスホネートの実質的にすべてが、包帯組成物とともに留まり、創傷組織に入ることができない。本発明はまた、共有結合しているＭＭＰ阻害剤を含んでなる包帯組成物を、創傷液と接触させ、それによって、創傷組織中のものを阻害することなく、創傷液中の１種以上のＭＭＰを選択的に阻害することによって、創傷を治療する方法を提供する。
2010529047.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーと共有結合している、ビスホスホネートおよび／またはその誘導体または製薬上許容される塩を含んでなる包帯組成物であって、包帯を創傷と接触させると、前記ビスホスホネートの実質的にすべてが、前記包帯とともに留まり、創傷組織に入ることができない包帯組成物。
【請求項２】
前記ビスホスホネートが、アミノ−ビスホスホネートである、請求項１に記載の包帯組成物。
【請求項３】
前記アミノ−ビスホスホネートが、アレンドロネート、パミドロネート、ネリドロネートまたはインカドロネートからなる群から選択される、請求項２に記載の包帯組成物。
【請求項４】
前記アミノ−ビスホスホネートがアレンドロネートである、請求項３に記載の包帯組成物。
【請求項５】
前記ポリマーが、ヒドロゲルポリマーである、請求項１に記載の包帯組成物。
【請求項６】
前記ヒドロゲルポリマーが、アクリル酸またはメタクリル酸のヒドロキシアルキルエステルを含んでなる、請求項５に記載の包帯組成物。
【請求項７】
前記アクリル酸またはメタクリル酸のヒドロキシアルキルエステルが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）である、請求項６に記載の包帯組成物。
【請求項８】
前記ヒドロゲルポリマーが、ポリ（エチレングリコール）をさらに含んでなる、請求項７に記載の包帯組成物。
【請求項９】
前記ビスホスホネートが、前記ポリマーと共有結合しているモノマーと共有結合している、請求項１から８のいずれか一項に記載の包帯組成物。
【請求項１０】
前記モノマーが、アクリレート、メタクリレート、ビニルスルホンまたは官能基が付与されたポリ（エチレングリコール）からなる群から選択される、請求項９に記載の包帯組成物。
【請求項１１】
選択された前記モノマーが、カルボン酸、酸ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、エポキシド、スルホニルまたはスクシンイミドからなる群から選択される官能基を与える、請求項１０に記載の包帯組成物。
【請求項１２】
前記モノマーが、メタクリロイルクロリドである、請求項１１に記載の包帯組成物。
【請求項１３】
治療を必要とする患者において、創傷組織内のマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を阻害することなく、創傷液中のＭＭＰを選択的に阻害する方法であって、前記創傷液を、包帯組成物中のポリマーと共有結合しているＭＭＰ阻害剤と接触させ、それによって、創傷組織内の前記ＭＭＰを阻害することなく、前記創傷液内の前記ＭＭＰを選択的に阻害するステップを含む方法。
【請求項１４】
前記ＭＭＰ阻害剤が、ビスホスホネートおよび／またはその誘導体または製薬上許容される塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項２から請求項１２のいずれか一項による、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記創傷液内で阻害されている前記ＭＭＰが、ＭＭＰ−９である、請求項１３から請求項１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記患者が哺乳類である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記哺乳類がヒトである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
包帯組成物を製造する方法であって、ビスホスホネートをポリマーと共有結合させ、それによって、前記包帯組成物を製造するステップを含む方法。
【請求項２０】
請求項２から請求項１２のいずれか一項による、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ビスホスホネートがモノマーと共有結合しており、前記モノマーが照射によってポリマー中に組み込まれる、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷治癒に関する。さらに詳しくは、本発明は、慢性創傷の治癒を促進するための、共有結合しているＭＭＰ阻害剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性創傷の治療は、医療制度に対するかなりの負担に相当する。現在、オーストラリア人の１〜３％の間の集団が慢性創傷を患っており、年に５億ドル以上の医療費になる。
【０００３】
慢性創傷は、患者に対して衰弱させる効果を有する場合があり、生活の質に悪影響を与え得る。創傷と関連している疼痛の治療は、慢性創傷管理における主要な優先事項の１つとして確認されていることが多い。極端な場合には、病気に冒された手足の切断術が必要になる。
【０００４】
現在、慢性創傷のための単一の一般に認められた治療はない。増殖因子を用いる局所治療が、唯一部分的に有効であるとわかっている。この種の治療は、増殖因子の分解をもたらす慢性創傷液中に見られる、高レベルのプロテアーゼのために、ある程度の成果しか有さなかったと示唆されている。マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、特に、慢性創傷液中において高レベルで見られ、それらが、細胞外マトリックスならびに鍵となる因子、例えば、創傷治癒にとって欠かせない増殖因子の分解の原因であると考えられる。これに対応するために、いくつかの治療が、１種以上のＭＭＰを阻害して、タンパク質分解環境を低減することに焦点を合わせてきた。
【０００５】
特許文献１には、哺乳類における結合組織マトリックスタンパク質成分の過剰な分解を低減するための、ビスホスホネートのＭＭＰ阻害剤としての使用が開示されている。クロドロネートを用いる、ＭＭＰ−１およびＭＭＰ−８の阻害が、特に望ましいものとして記載されている。ビスホスホネートは、経口的に、静脈内にまたは局所的に送達される。すなわちその意図は、創傷組織および創傷液に対して、そして全身に、ビスホスホネートを利用できるようにすることである。
【０００６】
特許文献２は、ＭＭＰ阻害剤を付着させた縫合糸は、術後、縫合の周囲の組織が弱くなることまたは軟化を防ぐのに有用であり得ると教示している。阻害剤は、吸着、静電相互作用または共有結合によって縫合糸に付着させてもよい。したがって、この発明の目的は、組織が劣化し、そして、縫合が緩むのを防ぐために、縫合されている組織が直接接触するＭＭＰ阻害剤を実現することである。
【０００７】
組織と阻害剤間の局所接触は、全身送達の間が望ましい。しかし、ＭＭＰ阻害剤が、縫合糸と結合しているフィブリノゲンマトリックスから段階的に放出されることが望ましく、共有結合および静電的負荷の組合せが、縫合糸への付着の好ましい手段であると記載されている。したがって、ＭＭＰ阻害剤の大部分が、組織中および創傷の周囲に放出される。
【０００８】
特許文献３には、分解可能なリンカーを介して結合している生物活性薬剤もまた有する、ポリ（エチレングリコール）などのポリマーに共有結合しているビスホスホネートが開示されている。この発明では、ビスホスホネートは、単に、そのヒドロキシアパタイトを標的とする能力のために使用されている。
【０００９】
ビスホスホネートは、骨表面にポリマーをターゲッティングするために使用され、分解可能なリンカーが分解すると、生物学的に活性や薬剤が放出される。これによって、骨表面が、放出可能な生物学的因子の貯蔵所として使用されることが可能となる。ビスホスホネートは、いくつかの可能性ある送達経路によって全身に利用されるターゲッティング部分として純粋に存在する。
【００１０】
慢性創傷におけるＭＭＰの役割は、最初に考えられていたほど単純なものではない可能性があり、創傷液のタンパク質分解環境を作り出すことにおける、それらが果たす破壊的な役割は、全体像の一部にしか相当しない可能性があるということが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第５，６５２，２２７号明細書
【特許文献２】国際公開第２００６／１２６９２６号
【特許文献３】国際公開第２００２／０４００５８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
創傷組織中のいくつかのＭＭＰは、創傷治癒における重要なステップである、創傷床における増殖因子活性化および免疫系調節などの過程において、いくつかの重要な役割を有することがわかっている。先行技術のアプローチは、創傷液および創傷床両方中のすべてのＭＭＰは、ＭＭＰ阻害剤に曝され、これは、正常な治癒を達成するための最良の方法には相当しないことを意味する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、創傷の有効な治療の必要性を確認した。１つの特定の形では、本発明によって、創傷に適用される創傷包帯組成物の一部として、共有結合によってポリマーと結合しているＭＭＰ阻害剤の使用が可能となる。これは、慢性創傷液中のＭＭＰが阻害され、それによって、液のタンパク質分解性内容物が低減され、正常な治癒にとって必要である創傷床中のものは、影響を受けないか、実質的に、より少ない程度しか影響を受けないということを確実にする。
【００１４】
必ずしも唯一のまたは最も広い形態ではないが、１つの形態では、本発明は、ポリマーと共有結合しており、それによってＭＭＰ阻害剤の大部分が、包帯と結合されたままであり、創傷組織に入ることができないＭＭＰ阻害剤を含む包帯組成物を提供する。
【００１５】
本発明の第１の態様は、ポリマーと共有結合している、ビスホスホネートおよび／またはその誘導体または製薬上許容される塩を含んでなる包帯組成物であって、包帯を創傷と接触させると、前記ビスホスホネートの実質的にすべてが、前記包帯とともに留まり、創傷組織に入ることができない包帯組成物にある。
【００１６】
前記ビスホスホネートは、アミノ−ビスホスホネートであることが適している。
【００１７】
前記アミノ−ビスホスホネートは、アレンドロネートであることが好ましい。
【００１８】
前記ポリマーは、ヒドロゲルポリマーであることが適している。通常、このヒドロゲルポリマーは、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）を含んでなる。このヒドロゲルポリマーは、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）およびポリ（エチレングリコール）を含んでなることが好ましい。
【００１９】
必要な場合には、前記ビスホスホネートをモノマーと共有結合させ、これを前記ポリマーに組み込む。前記モノマーは、アクリレート、メタクリレート、ビニルスルホンまたはポリ（エチレングリコール）アルデヒドからなる群から選択されることが適している。好ましくは、前記モノマーは、メタクリロイルクロリドであることが好ましい。
本発明の第２の態様は、包帯組成物を製造する方法であって、ビスホスホネートをポリマーと共有結合させ、それによって、前記包帯組成物を製造するステップを含む方法にある。
【００２０】
本発明の第３の態様は、モノマーとカップリングしているＭＭＰ阻害剤を含んでなるＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートにある。
【００２１】
前記ＭＭＰ阻害剤は、アレンドロネートであることが適している。
【００２２】
前記モノマーは、メタクリロイルクロリドであることが好ましい。
【００２３】
本発明の第４の態様は、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを製造する方法であって、ＭＭＰ阻害剤をモノマーとカップリングし、それによって、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを形成するステップを含む方法にある。
【００２４】
本発明の第５の態様は、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートがカップリングしている包帯組成物にある。
【００２５】
本発明の第６の態様は、治療を必要とする患者において、創傷組織内のＭＭＰを阻害することなく、創傷液内のＭＭＰを選択的に阻害する方法であって、前記創傷液を、包帯組成物中のポリマーと共有結合しているＭＭＰ阻害剤と接触させ、それによって、創傷組織内の前記ＭＭＰを阻害することなく、前記創傷液内の前記ＭＭＰを選択的に阻害するステップを含む方法にある。
【００２６】
前記創傷液内で阻害されている前記ＭＭＰは、ＭＭＰ−９であることが好ましい。
【００２７】
本発明の第７の態様は、動物における創傷の治療的処置であって、動物に、第１または第３の態様の包帯組成物を投与するステップを含む処置にある。
【００２８】
前記動物は、哺乳類であることが好ましい。
【００２９】
前記動物はヒトであることがより好ましい。
【００３０】
本明細書を通じて、文脈が他を必要とするのでない限り、単語「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでなっている（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記載された整数または整数の群の包含を意味するが、任意のその他の整数または整数の群の排除を意味するものではないと理解される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】コンジュゲートを形成するためのアレンドロネートの、メタクリロイルクロリドとの反応およびｐＨＥＭＡポリマーへのその包含を示す図である。
【図２】アレンドロネートととものインキュベーションの前後の、６種の慢性創傷液サンプルのコラーゲン１型酵素電気泳動アッセイの結果を示す図である。
【図３】アレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートととものインキュベーションの前後の、６種の慢性創傷液サンプルのコラーゲン１型酵素電気泳動アッセイの結果を示す図である。
【図４】未処理対照と比較した、アレンドロネートおよびアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートでの阻害によって得られたプロテアーゼ活性の相対的減少を表す図である。
【図５】共有結合しているアレンドロネートを組み込んでいるポリマーととものインキュベーションの前後の、慢性創傷液サンプルのコラーゲン１型酵素電気泳動アッセイの結果を示す図である。
【図６】未処理対照と比較した、共有結合しているアレンドロネートを組み込んでいるポリマーでの阻害によって得られたプロテアーゼ活性の相対的減少を表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明の一態様は、ポリマーと共有結合している、ビスホスホネートおよび／またはその誘導体または製薬上許容される塩を含んでなる包帯組成物であって、包帯を創傷と接触させると、ビスホスホネートの実質的にすべてが、包帯とともに留まり、創傷組織に入ることができない包帯組成物にある。
【００３３】
特定の実施形態では、創傷は、慢性創傷である。
【００３４】
用語「慢性創傷」とは、本明細書において用いる場合、通常、長期の、または頻繁に再発する、または順序正しい、適時の修復の順序を経て進行することができない、皮膚の任意の破損または潰瘍を説明する。
【００３５】
用語「実質的にすべての」とは、本明細書において用いる場合、包帯組成物とともに留まるＭＭＰ阻害剤、例えば、ビスホスホネートの量を説明し、ＭＭＰ阻害剤の８０％以上が結合したままであることを意味する。特定の実施形態では、これは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および１００％を含む。
【００３６】
いずれか特定の理論に拘束されるものではないが、慢性創傷の創傷液中では、急性創傷のものと比較して、ＭＭＰのレベルの上昇が存在し、これは、正常な治癒にとって必要な増殖因子および結合組織タンパク質組み立てにとって極めて適さない、創傷のタンパク質分解環境の大きな一因となることがわかっている。本発明者らは、ＭＭＰ−９が、慢性創傷液におけるコラーゲン分解に関与する主なＭＭＰであることを示した。
【００３７】
創傷床から得た生検において見られる、活性なＭＭＰのレベルの低下が、非治癒性創傷の慢性化につながることがわかっている。ＭＭＰレベルはまた、慢性創傷床から単離された線維芽細胞では大幅に低減されることが実証されている。したがって、ＭＭＰは、創傷組織の正常な治癒において役割を果たすと考えられる。ＭＭＰ阻害剤を創傷に導入し、それによって、それらが創傷組織および全身循環中に自由に拡散すること、ならびに創傷液と接触することは、例えば、既存の治療では、そうではなく、従って、創傷治癒に関与する因子の最良の制御を提供する。
【００３８】
本明細書に提示される、この問題に対する解決策は、コラーゲンマトリックスおよび増殖因子分解に関与する慢性創傷液中のＭＭＰを阻害し、一方で、使用されたＭＭＰ阻害剤が、創傷床および周囲組織に実質的に拡散できない、そうでなければ、移動できないことを確実にし、その結果、正常な治癒のために、創傷床中で適当なレベルの活性ＭＭＰが維持され得るということである。
【００３９】
これは、１種以上のＭＭＰ阻害剤が共有結合している創傷包帯組成物の提供によって達成される。包帯は、慢性創傷液と接触し、そこで、ＭＭＰが阻害される。この方法では、慢性創傷液のタンパク質分解環境は、コラーゲンマトリックスの形成、そして、治癒を促進するよう制御される。１種以上のＭＭＰ阻害剤は共有結合しているので、創傷床中に実質的に放出されず、そのため、正常な治癒に必要な、その組織中のＭＭＰのレベルが、維持され得る。このようにして、創傷組織における正常な治癒機序の破壊を伴わずに、治癒環境の改善が創傷の表面で達成される。
【００４０】
したがって、結合しているＭＭＰ阻害剤は、創傷組織中の１種以上のＭＭＰの活性を阻害、抑制、不活化すること、または、ある程度低減することに優先的に、創傷液中の１種以上のＭＭＰの活性を阻害、抑制、不活化する、または、ある程度、低減すると理解されるべきである。
【００４１】
用語「創傷液」は、血管から浸出し、創傷組織に蓄積されたタンパク質および細胞成分の豊富な液である創傷滲出液を説明すると当業者によって理解される。
【００４２】
用語「創傷組織」および「創傷床」は、大気に曝された創傷の細胞上層ならびに組織再生およびその他の治癒プロセスに関与している細胞深層を含むと理解される。
【００４３】
創傷包帯が、創傷液と接触すると、液体が包帯中に吸い込まれ得る。これは、より多くの創傷液が、創傷床から吸い込まれ、そこで、より多くのＭＭＰが、包帯内のＭＭＰ阻害剤と接触することによって阻害されるので、特に望ましい。これはまた、創傷液中のＭＭＰが確実に阻害されるために、ＭＭＰ阻害剤が、必ずしも、創傷床との親密な接触に置かれる必要がなく、そのため、創傷床の細胞上層中のＭＭＰが不注意に阻害される機会がより少ないことも意味する。本発明の一実施形態では、創傷液を吸収し、それを貯蔵する能力を有する包帯組成物は、特に適している。
【００４４】
ヒドロゲルポリマーを、本発明の目的のために使用してもよい。ヒドロゲルは、高度に吸収性であり、その高い水分含量のために、天然組織のものと同様の柔軟度を有する天然ポリマーまたは合成ポリマーである。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、アクリルアミドゲルおよびポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（ｐＨＥＭＡ）はすべて、ヒドロゲルの例である。本発明の好ましい実施形態では、創傷包帯組成物ポリマーは、アクリル酸またはメタクリル酸のヒドロキシアルキルエステルである。特に好ましい実施形態では、包帯組成物ポリマーは、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）を含んでなるヒドロゲルである。創傷包帯ポリマーは、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含んでなるヒドロゲルであることがより好ましい。
【００４５】
ＭＭＰの任意の阻害剤は、慢性創傷の治療において使用するための創傷包帯との共有結合にとって適したものであり得る。このような阻害剤の例として、それだけには限らないが、陽イオンキレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、テトラサイクリンおよびその誘導体、ヒドロキサム酸およびビスホスホネートが挙げられる。
【００４６】
ビスホスホネートは、低い毒性しか示さず、主に、カルシウムおよび骨代謝障害の管理における、数年のヒト使用にとって耐容性がよかった。本発明の好ましい実施形態では、創傷包帯と結合しているＭＭＰ阻害剤は、ビスホスホネートである。このようなビスホスホネートの限定されない例として、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、パミドロネート、ネリドロネート（ｎｅｒｉｄｒｏｎａｔｅ）、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、ゾレドロネート、ＹＨ５２９、インカドロネート（ＹＭ１７５）およびＥＢ−１０５３が挙げられる。
【００４７】
後に議論される、包帯組成物の製造の容易さから、ポリマーに固定化されるビスホスホネートは、アミノ−ビスホスホネートであることが特に好ましい。限定されない例として、アレンドロネート、パミドロネート、ネリドロネート（ｎｅｒｉｄｒｏｎａｔｅ）またはインカドロネートが挙げられる。
【００４８】
ＭＭＰ−９は、慢性創傷液におけるコラーゲン分解に関与する主なプロテアーゼであるという発明者らの発見をかんがみて、ＭＭＰ−９の特異的阻害剤であるＭＭＰ阻害剤を選択することは特に望ましい。これは、創傷液のタンパク質分解環境を最適に阻害することにおいて望ましい効果を有するはずである。このようなＭＭＰ−９特異的阻害剤の１つの限定されない例として、アレンドロネートがある。好ましい実施形態では、アレンドロネートは、本発明の創傷包帯組成物と結合しているＭＭＰ阻害剤である。
【００４９】
ＭＭＰ阻害剤の別の例として、抗ＭＭＰ抗体がある。
【００５０】
これに関連して、抗ＭＭＰ−９モノクローナル抗体は、市販されており（例えば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（商標）由来のマウスｍＡｂ  ６０６Ｂ）、また、Ｓｙｍｏｗｉｃｚら、２００７、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７  ２０３０およびＡｎｄｒｅｗｓら、２０００、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．  １５７３０３に記載されている。
【００５１】
本発明はまた、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを製造する方法であって、ＭＭＰ阻害剤を、モノマーとカップリングし、それによって、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを形成するステップを含む方法を提供する。  必要な場合には、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを、包帯組成物のポリマーに組み込むことができる。
【００５２】
特定の一実施形態では、ＭＭＰ阻害剤−メタクリレートコンジュゲートを製造する方法であって、ＭＭＰ阻害剤を、メタクリレートモノマーとカップリングし、それによって、ＭＭＰ阻害剤−メタクリレートコンジュゲートを形成するステップを含む方法が提供される。
【００５３】
この種の反応の一例が、図１に示されている。コンジュゲートを形成するための反応は以下にさらに論じる。
【００５４】
別の態様では、本発明は、包帯組成物を製造する方法であって、ビスホスホネートを、ポリマーと共有結合させ、それによって、前記包帯組成物を製造するステップを含む方法にある。
【００５５】
一実施形態では、まず、ビスホスホネートをモノマーと共有結合させ、これをポリマーに組み込む。したがって、本発明は、包帯組成物を製造する方法であって、以下のステップを含む方法を含む：
ａ）ＭＭＰ阻害剤を、モノマーとカップリングして、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを形成するステップと；
ｂ）ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートをポリマーに組み込み、それによって包帯組成物を製造するステップ。
【００５６】
ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを形成するために使用されるモノマーは、広い範囲の適したモノマーから選択してよい。限定されない例として、アクリレート、メタクリレート、ビニルスルホンまたはポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）アルデヒドがある。アクリレートおよびメタクリレートは、特に有用であり、好ましい一実施形態では、選択されるモノマーは、メタクリレートモノマーである。
【００５７】
使用される特定のモノマーは、存在するはずであるか、存在するよう修飾され得る２つの官能基に基づいて選択される。第１のものは、ビスホスホネートと反応して、共有結合によって２つを一緒にカップリングする官能基であり、第２のものは、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートが、必要な場合には、別の共有結合によってポリマー中に組み込まれるのを可能にするために提示される官能性部分である。
【００５８】
ＭＭＰ阻害剤と反応させることを目的として、上記で同定されたモノマーによって示され得る有用な官能基のいくつかの例として、カルボン酸、酸ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、エポキシド、スルホニルおよびスクシンイミド、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよびマリミド（ｍａｌｉｍｉｄｅ）がある。これらの官能基は、ビスホスホネートによって与えられるヒドロキシまたはアミノ基などの部分による求核攻撃に対して特に感受性である。
【００５９】
モノマー上の利用可能な二重結合、例えば、ビニル基は、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートの、包帯組成物のポリマー中へのその後の組み込みにとって特に適していることがわかった。
【００６０】
当然のことではあるが、モノマーとの関連で論じられる官能基は、実際にはビスホスホネートによって与えられる場合もある。逆も同様である。重要な点は、２つが反応して共有結合を形成でき、ポリマーに組み込まれる必要な官能基を与えることができるということである。
【００６１】
好ましい一実施形態では、選択されるモノマーは、メタクリロイルクロリドであり、これは、ビスホスホネートの求核試薬とのカップリングのための高度に反応性の酸塩化物官能基と、ポリマー成分モノマーとの重合のためのビニル基を与える。
【００６２】
１種の創傷包帯に２種以上のＭＭＰ阻害剤を付着させてもよいことが有利である。これは、プロテアーゼの２種以上のサブタイプが、阻害のために特異的に標的とされる場合に有用であり得る。これを達成するために、阻害剤および／または阻害剤−モノマーコンジュゲートの別個の組成物を調製してもよい。次いで、これらの組成物を合わせ、その後、重合反応を開始して創傷包帯組成物を形成する。阻害剤またはコンジュゲートの官能基が異なる場合には、確実に、副作用または副反応がないよう、ポリマーまたは反応条件を注意深く選択しなくてはならない。
【００６３】
ＭＭＰ阻害剤を、モノマーとカップリングして、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートを形成する正確な機序は、選択される個々の阻害剤（の複数）およびモノマーに応じて変わる。
【００６４】
好ましい一実施形態では、論じられるように、ＭＭＰ阻害剤がアレンドロネートである場合は、コンジュゲーションのために選択されるモノマーは、メタクリロイルクロリドである。これらの化合物の反応は、図１に示されており、これでは、アレンドロネートの第一級アミンが、メタクリロイルクロリドの酸塩化物官能基と反応してアミド結合が得られる。アミド結合は、例えば、エステル結合と比較して、天然に存在する酵素によって容易には切断されないので特に望ましい。選択されるＭＭＰ阻害剤が、モノマー上に存在する官能基と反応し得る限り、そのモノマーは、本発明の創傷包帯において有用であり得るが、反応して、強く、安定な共有結合、例えば、アミド結合を形成するＭＭＰ阻害剤とモノマー官能基の組合せが好ましい。手短に言えば、創傷液中、生理学的条件下で、加水分解されるか、そうでなければ、任意の大きな程度に切断される可能性が低い任意の結合の形成は、ＭＭＰ阻害剤を、モノマーと結合させてコンジュゲートを形成すること、および／またはポリマーと結合させることにおいて特に好ましい。
【００６５】
上記のように、メタクリロイルモノマーの、ＭＭＰ阻害剤との反応によって生じたコンジュゲートは、通常、官能基を有し、次いで、これは、ポリマーに組み込まれることが可能となる。図１に示される例では、この官能基は、アルケン部分（この場合には、ビニル基である）。これは、重合反応の際の２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）モノマーの利用可能な二重結合との照射による反応に適している。次いで、図１に示されるように、共有結合しているアレンドロネートが組み込まれている最終ポリマーが形成される。
【００６６】
コンジュゲートを形成するためのアレンドロネートとメタクリロイルクロリドのこの組合せおよびｐＨＥＭＡへのその組み込みは、特に好都合なアプローチである。アレンドロネートは、遊離アミン官能基を与え、これがメタクリロイルクロリドの酸塩化物と共有結合し、反応に先立つ任意の修飾または官能基転換の必要性はない。これは、アミド結合によって結合されたアレンドロネートおよびメタクリレートを含むコンジュゲートを提供し、これは、慢性創傷液において見られる生理学的条件下での加水分解または酵素的切断に対して特に安定である。次いで、このコンジュゲートをＨＥＭＡに導入することができ、これは特に有用なヒドロゲルを形成し、コンジュゲートが組み込まれたポリマーが１回の照射ステップで形成される。したがって、コラーゲン分解（ＭＭＰ−９）に関与している創傷液中の主なＭＭＰを標的とする、共有結合しているビスホスホネート（アレンドロネート）を有する、安定な、超吸収性の包帯組成物が、最小数のステップで形成される。
【００６７】
創傷液における望ましくないタンパク質分解活性に関与している主なＭＭＰ（ＭＭＰ−９、本発明者らによって示されるように）に対する、包帯組成物の阻害活性に焦点を合わせることは有利である。これによって、このＭＭＰによって引き起こされる損傷を最小にすることに向けて、結合している治療薬が、すべて確実にターゲッティングされ、それによって損傷に治癒の最良の機会を与える。また、その他のＭＭＰの活性の見込みを、標的化アプローチが使用されるので実質的に減少しているものから、さらに減らし、このことは、正常な治癒にとって必要である。
【００６８】
創傷包帯を形成するために、選択されたＭＭＰ阻害剤および使用されるポリマーに応じて、まず、メタクリロイルモノマーと反応させることなく、ＭＭＰ阻害剤をポリマーに直接組み込むことが可能であり得る。例えば、モノマーにとって適していると前述した官能基は、ポリマーまたはその構成要素であるモノマーによって直接与えられ、その後、重合してもよい。また、重合に必要な官能基がアルケンではない場合には、必要な官能基を有し、阻害剤とカップリングする能力も有する異なる種類のモノマーを用いてもよい。
【００６９】
実施例の節には、本発明の好ましい一実施形態に従って創傷包帯を作製するための方法論が示されている。この実施例では、平均分子量２０，０００を有するポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）が、ポリマーを形成するための組成物中に含まれる。ＰＥＧは、必須の要素ではなく、架橋ｐＨＥＭＡと化学的に結合していなくてもよい。物理的特徴および得られたヒドロゲルの生体適合性を改善するための添加剤として存在する。
【００７０】
ＰＥＧは、創傷包帯組成物中に１０重量％〜８０重量％の範囲のパーセンテージで存在し得る。ＰＥＧは、創傷包帯組成物中に２０重量％〜６０重量％の範囲のパーセンテージで存在することが好ましい。ＰＥＧは、創傷包帯組成物中に２５重量％〜４０重量％の範囲のパーセンテージで存在することがより好ましい。ＰＥＧは、創傷包帯組成物の３０重量％であることがさらにより好ましい。
【００７１】
その他の添加剤は、得られた創傷包帯の種々の物理的特性、例えば、その物理的強度、密度、膨潤特性、すなわち、創傷液を吸収するために改善される能力、生体適合性などを改善するために創傷包帯組成物中に存在し得る。このような添加剤は、ポリマー化学およびその他の分野ではよく用いられ、当業者には周知である。
【００７２】
実施例には、ｐＨＥＭＡが、アレンドロネートが化学的に組み込まれているポリマーとして記載されている。ＭＭＰ阻害剤を組み込むことができ、創傷包帯として作用し得るか、創傷包帯に製造できる任意のポリマーは、本発明の範囲内である。従来の布製創傷包帯は、十分であり得るが、これまでに述べたように、その吸収特性のためにヒドロゲルポリマーが好ましい。
【００７３】
重合するとヒドロゲルの特性を有する任意のモノマーは、本発明の創傷包帯組成物中に含めるのに適したものであり得る。ポリマーを形成するために用いられるモノマーは、２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）モノマーであることが好ましい。
【００７４】
ヒドロゲルが有するよう望まれる特性に応じて、重合前創傷包帯組成物中のＨＥＭＡモノマーの重量パーセント量は、５重量％〜８０重量％であり得る。ＨＥＭＡモノマーは、１０重量％〜６０重量％存在することが好ましい。ＨＥＭＡモノマーは、１５重量％〜４０重量％存在することがより好ましい。ＨＥＭＡモノマーは、創傷包帯組成物の２０重量％を形成することがさらにより好ましい。
【００７５】
創傷包帯組成物を作製する溶媒の選択は、重合反応のために選択されるモノマーの性質に応じて変わる。有機溶液および水溶液は適したものであり得る。１つの好ましい形態では、選択される溶媒は水である。
【００７６】
本発明の別の態様は、メタクリレートモノマーとカップリングしているＭＭＰ阻害剤を含んでなるＭＭＰ阻害剤−メタクリレートコンジュゲートにある。
【００７７】
本発明の包帯組成物は、通常、すでに記載されているように製剤される。しかし、一実施形態では、ポリマー中への組み込みは実施されない。これによって、ＭＭＰ阻害剤−メタクリレートコンジュゲートが得られる。このコンジュゲートは、ＭＭＰ阻害剤が、創傷液中のＭＭＰと接触するが、創傷組織中に放出されないようにする任意の数の手段によって創傷を治療するために使用してもよい。実施例において記載されるような、創傷包帯を形成するためのポリマー中への組み込みは、結合しているＭＭＰ阻害剤を投与する単に１つの限定されない方法である。
【００７８】
本発明はまた、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートがカップリングされている、包帯、インプラントまたは人工器官にある。好ましいコンジュゲートとして、ＭＭＰ阻害剤−メタクリレートコンジュゲートがある。
【００７９】
上記のように、ＭＭＰ阻害剤−モノマーコンジュゲートは、創傷包帯よりも、さまざまなその他の装置、例えば、インプラントまたは人工器官に付着させてもよい。これらの装置は、包帯と同様に、ＭＭＰ阻害剤が、阻害剤を創傷組織中に、任意の大きな程度に放出することなく創傷液と接触するのを可能にする。
【００８０】
本発明のさらに別の態様は、このような治療を必要とする患者において、創傷組織内のＭＭＰを阻害することなく、創傷液内のＭＭＰを選択的に阻害する方法であって、創傷液を、包帯組成物中のポリマーと共有結合しているＭＭＰ阻害剤と接触させ、それによって、創傷組織内の前記ＭＭＰを阻害することなく、創傷液内の前記ＭＭＰを選択的に阻害するステップを含む方法にある。
【００８１】
一実施形態では、前記ＭＭＰ阻害剤は、ビスホスホネートである。
【００８２】
前記ＭＭＰ阻害剤は、アレンドロネートであることが好ましい。
【００８３】
前記ＭＭＰ阻害剤を、ポリマーに直接またはモノマーを介して固定化する、適したポリマーおよび手段は、これまでに記載されるとおりである。
【００８４】
治療されている患者は、哺乳類、例えば、それだけには限らないが、ヒト、家畜、パフォーマンス動物およびペットであることが好ましい。
【００８５】
患者はヒトであることがより好ましい。
【００８６】
阻害されている創傷液内のＭＭＰは、ＭＭＰ−９であることが好ましい。
【００８７】
これまでに記載したように、創傷の治療は、創傷液のタンパク質分解内容物を低減するためにＭＭＰ阻害剤の使用を含むべきであるが、同時に創傷組織中のＭＭＰを阻害することは、それらが正常な創傷治癒において重要な役割を有するので望ましくない。
【００８８】
好ましい実施形態では、ＭＭＰ阻害剤は、包帯組成物の一部として送達される。結合しているＭＭＰ阻害剤を創傷液に送達し、また、それが創傷組織に入ることは可能にしない任意の手段は、本発明の範囲内であることは理解されるべきである。
【００８９】
ＭＭＰ阻害剤はまた、ポリマースプレーによって送達され得るということが企図される。特定の一実施形態では、ポリマースプレーを塗布し、前記ＭＭＰ阻害剤を含んでなるポリマー層、フィルムまたはスポンジをその場で形成できる。ＭＭＰ阻害剤が創傷組織中に放出されないよう配置する、ポリマーを含んでなる軟膏またはクリームもまた、本発明の範囲内に考慮される包帯組成物である。
【００９０】
ポリマーフィルムの特定の利点は、慢性創傷は、炎症相に引き止められていることが多いという事実と関連する。これは、例えば、創傷床と接触するポリマーフィルムの層が炎症を調節できるよう、ポリマーフィルムにつながれたアミノ−ビスホスホネートを介して調節できる。これはまた、過剰な炎症および免疫応答のアップレギュレーションの結果であるバイオフィルム形成を最小にし得る。
【００９１】
本発明はまた、動物における創傷の治療的処置の方法であって、本明細書において先に記載される創傷包帯組成物を、動物に投与するステップを含む方法にある。
【００９２】
本発明の包帯組成物を用いる治療にとって特に適した慢性創傷は、順序正しい段階のセットをたどることによって、ほとんどの急性創傷の正常な時系列内に治癒しない任意の創傷である。慢性創傷の大部分は、静脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍および褥瘡の３つのカテゴリーに分類することができる。これらの慢性創傷は、治癒するのに何年もかかる場合もあり、または決して治癒しない場合もある。
【００９３】
実施例の節には、ＭＭＰ阻害剤としてのアレンドロネートの有効性が示されている。図２では、アッセイでのプロテアーゼ活性が、暗い背景に対して明るいバンドとして見られ、バンドは、６種の異なる患者から得た慢性創傷液のサンプルであるレーン１〜６に見ることができる。これは、創傷液中のタンパク質分解環境を明確に示す。レーン７〜１２は、アレンドロネートとともにインキュベーションした後の同一液体サンプル表す。プロテアーゼ活性が大きく低減されたことが、視認できる明るいバンドの数および強度の低減によって示される。したがって、ビスホスホネート、特に、アレンドロネートは、本発明の創傷包帯において使用するために適したクラスの創傷液ＭＭＰ阻害剤である。アレンドロネートを用いたこれらの結果は、本発明者らによって、コラーゲン形成に対して作用する主なプロテアーゼとして同定されたＭＭＰ−９を阻害するので特に印象的であると考えられる。創傷液におけるコラーゲンの分解において特に活性ではないＭＭＰの特異的阻害剤は、このような優れた結果を示さないことは明らかであり、そのためこの標的化アプローチは好ましい。
【００９４】
ＭＭＰ阻害剤が創傷包帯と共有結合しており、その結果、その実質的にすべてが固定されたままであることが本発明の利点である。このようにして、やはり、創傷液中のＭＭＰが阻害、抑制、不活化されるか、または何らかの方法で、大きな程度に創傷組織中のＭＭＰよりもその活性が減少される。
【００９５】
これは、阻害されているものからの正常な治癒にとって有用である創傷組織中の活性なＭＭＰを阻害するだけでなく、ＭＭＰ阻害剤からの任意のあり得る副作用も低減またはさらに排除する。例えば、テトラサイクリンおよびその類似体は、ＭＭＰ阻害剤として用いられてきたが、それらは、胃腸障害および抗生物質耐性問題の可能性などのいくつかの望ましくない副作用を示す。
【００９６】
その他の先行技術の治療は、全身に利用可能なＭＭＰ阻害剤を作製することを検討しているか、または少なくとも、それが組織または循環系中に広がるのを妨げないので、これらの副作用は真の問題であり得る。本発明の創傷包帯は、結合しているままである実質的にすべてのＭＭＰ阻害剤を有し、そのため、使用されるＭＭＰ阻害剤が有し得る任意のあり得る副作用の問題を回避する。
【００９７】
本発明のさらなる利点は、慢性創傷の患者のための単純化された治療計画を提供することである。治療的処置を創傷包帯中に組み込むことによって、経口、静脈内、局所投与などの必要性が回避される。通常、創傷は、ともかく覆われ、そのため、好都合であり、包帯組成物内に治療分子を含むための時間を節約する。
【００９８】
本発明の創傷包帯組成物は、慢性創傷の患者のための単独治療として提供してもよく、または創傷の治癒状態を改善するためにその他の既存の療法と併用してもよい。創傷包帯は、創傷が治癒するまで適用してもよいし、または少なくとも、その治癒状態の改善が観察されるまで適用してもよい。ＭＭＰ阻害剤は、創傷組織中に放出されないので、その投与量は、医療従事者によって調節されなくてもよい。創傷包帯は望ましい限りは使用してよい。
【００９９】
本発明の創傷包帯組成物によって、さらなる利点が提供される。通常、創傷包帯は、プロテアーゼを含み得る創傷液を吸着する。したがって、増殖因子、抗菌剤、薬物、抗生物質などのプロテアーゼ感受性治療薬が、創傷包帯によって同時に送達される場合には、包帯中に存在し得るＭＭＰ阻害剤は、プロテアーゼの活性を創傷床から離して不活化するか、または低減することができ、これらの治療薬の破壊を防ぐか、最小限にし、創傷床中へのタンパク質分解生成物の放出を減少させる。
【０１００】
本発明が容易に理解され、実施され得るよう、以下の限定されない例に言及する。
【実施例】
【０１０１】
アレンドロネートを用いるＭＭＰ阻害：
本発明者らは、ＭＭＰ−９が、慢性創傷液における細胞外マトリックスの分解に関与する主なプロテアーゼであると同定したので、ビスホスホネートを、ＭＭＰ、特に、ＭＭＰ−９活性を阻害するその能力について試験した。代表的なビスホスホネートとしてアレンドロネート（そのナトリウム塩として）を選択した。
【０１０２】
アレンドロネートナトリウム塩を、２ｍＭの濃度、３７℃で、２４時間、慢性創傷液サンプルとともにインキュベートした。次いで、コラーゲン１型酵素電気泳動を用いてプロテアーゼ活性を同定した。コラゲナーゼ感受性は、酵素電気泳動像において暗い背景に対する明るいバンドとして同定し、デンシトメトリー分析によって定量できた。
【０１０３】
図２は、このアッセイの結果を示す。レーン１〜６は、６種の異なる患者から得た慢性創傷液サンプルであり、サンプルあたり５００ｎｇの全タンパク質をロードした。レーン７〜１２は、サンプル１〜６と同じ慢性創傷液に相当し、２ｍＭアレンドロネートとともに３７℃で２４時間インキュベーションした後、サンプルあたり５００ｎｇの全タンパク質をロードした。
【０１０４】
アレンドロネートとともにインキュベーションした後、プロテアーゼ活性の大幅な低下が明確に視認できる。これによって、ビスホスホネート、特に、アレンドロネートは、ＭＭＰの効果的な阻害剤であり、そのため、慢性創傷において存在する過剰にタンパク質分解性の環境を中和し、それらを治癒状態に向けて調節する可能性を有することがわかる。
【０１０５】
アレンドロネートコンジュゲート形成およびヒドロゲル組み込み：
ビスホスホネートがアレンドロネートである、図１に示されるように、アレンドロネートの第一級アミン基を、メタクリロイルクロリドの酸塩化物官能基と反応させることができる。これによって、アレンドロネートを与え、また、ポリマー（図１では、ｐＨＥＭＡヒドロゲルポリマー）中への組み込みを可能にするためのアルケン官能基を有するコンジュゲートが提供される。
【０１０６】
これを達成するために、アレンドロネートナトリウム塩（３００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を、重合を阻害するために４−メトキシフェノールを含むＮａＯＨ水溶液（７．４ｍＬのＨ２Ｏ中、１４８ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）に溶解した。溶液を、氷塩浴中で冷却し、その後、新鮮な希釈メタクリロイルクロリド（１２０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ（５．５ｍＬのＨ２Ｏ中、１１１ｍｇ、２．７６８ｍｍｏｌ）を、１１を超えるｐＨを維持しながら段階的に添加した。反応物を２０時間激しく撹拌し、その後、ＨＣｌでｐＨ７に酸性化した。得られた生成物を蒸発乾固し、クロロホルムで抽出して、任意の不純物を除去した。次いで、水層をＤＭＦを用いて沈殿させると、アレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートが、４９％の収率で得られた。
【０１０７】
次いで、５０％水：３０％ＰＥＧ：２０％ＨＥＭＡの適当な割合で希釈２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）およびＰＥＧ２０，０００の水溶液を調製する。次いで、適した濃度、例えば、２０ｍＭのアレンドロネート／メタクリロイルコンジュゲートを加える。次いで、溶液を、シリコンガスケットによって分離された２つのガラスプレートの間に入れ、アルゴンでパージした。
【０１０８】
次いで、型を、６０Ｃｏ供給源を用いるＧａｍｍａ−ｃｅｌｌ２２０で、５ｋＧＹ〜１ＯｋＧｙの間の全線量を与えるようγ線照射した。ＮＩＲ  ＦＴ−Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙを用いて重合を特性決定し、これによって、ＨＥＭＡモノマーの、そのポリマーの形（ｐＨＥＭＡ）への完全な重合が示され、それによって、アレンドロネートは、ヒドロゲルから確実に全く放出され得ない。これは、特徴的な１６３９ｃｍ−１でのＣ＝Ｃピークの変化を同定することによって確かめた。
【０１０９】
創傷包帯ＭＭＰ阻害作用の特性決定：
機能性コラーゲン分解アッセイを用いて、慢性創傷液においてＭＭＰを阻害するためのヒドロゲルを含有する合成されたビスホスホネートの能力を分析できる。
【０１１０】
上記のように、慢性創傷液のプールされたサンプルを、非還元条件下、１０％全アクリルアミドゲルにおいて、０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度でコラーゲンＩ型を用いるコラーゲンＩ型酵素電気泳動像で実施した。電気泳動は、Ｌａｅｍｍｌｉ条件下、４℃で実施した。次いで、ゲルを２．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中で３０分間、さらに６０分間洗浄し、その後、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ＣａＣｌ２（１０ｍＭ）およびＮａＣｌ（５０ｍＭ）中、ｐＨ７．６で３７℃で２４時間インキュベートした。アレンドロネート官能基付与されたヒドロゲル（上記で調製されるような）を、小片に切断し、インキュベーションバッファーに含め、次いで、３７℃で２４時間インキュベートした。モノマー溶液中、２つの濃度、２ｍＭおよび２０ｍＭのアレンドロネート−メタクリレートの等価のビスホスホネートセグメントを用いて、２種の別個のヒドロゲルを作製した。酵素電気泳動も、２ｍＭのアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートについてのみ実施した。
【０１１１】
慢性創傷液中のプロテアーゼを、基質ゲル中に固定化し、次いで、阻害剤に曝露し、一方で、それらは３７℃／２４時間インキュベーションステップでは活性であった。インキュベーション後、ゲルを適切に染色し、プロテアーゼ活性を明るい（染色されていない）バンドとして可視化した。
【０１１２】
図３は、２４時間にわたって生理学的温度でアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートがＭＭＰを阻害できることを示す。図３中、レーン１〜６は、図２に関してと同様に、６種の異なる患者から得た慢性創傷液サンプル（５００ｎｇタンパク質）である。レーン７〜１２は、図１に示される２ｍＭのアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートとともにインキュベートした後の同一サンプルを表す。阻害活性は、アレンドロネート単独のものと比較してわずかに低下したレベルであった。
【０１１３】
図４は、未処理対照と比較した、アレンドロネートおよびアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートでの阻害によって得られたプロテアーゼ活性の相対的減少を表すものであり、そのため、図２および図３に示される結果を表す。デンシトメトリーを用いて、酵素電気泳動によって示されるタンパク質分解活性の低下を定量し、これは、図４にグラフによって表されている。未処理対照サンプルと比較した、アレンドロネート−メタクリレートコンジュゲート（官能基付与されたＡ  ２ｍＭと記された）およびアレンドロネート自体（Ａ  ２ｍＭと記された）のコラーゲン分解活性のＭＭＰ特異的阻害が示されている。統計的有意性は、未処理サンプルに対するものであり、Ｔｕｋｅｙ検定によって求められる＃（ｐ＜０．０１）として示されている。
【０１１４】
図４は、２ｍＭのアレンドロネートで処理した場合、Ｉ型コラーゲン分解が、未処理対照において見られるものの１０％以下であることを示す。アレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートは、対照において見られる３０％〜４０％の間であり、そのように、極めて有意なレベルのコラーゲン分解の阻害を表す。
【０１１５】
アレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートを含有するヒドロゲルもまた、良好なレベルのＭＭＰ阻害を実証した。２０ｍＭのアレンドロネート−メタクリレートを含有するヒドロゲルは、非ヒドロゲル処理対照と比較して、コラーゲンＩ型分解を大幅に低減する能力を示した。
【０１１６】
図５は、共有結合しているアレンドロネートを組み込んでいるヒドロゲルポリマーとともにインキュベートする前および後の、慢性創傷液サンプルのコラーゲン１型酵素電気泳動アッセイの結果を示す。３種の異なるヒドロゲルサンプルを作製し、このアッセイに用いた。すべてのヒドロゲルは、５．０ｇのＨ２Ｏ、２．０ｇのＨＥＭＡおよび３．０ｇのＰＥＧ２０，０００を用いて、上記のように合成した。第１のサンプル（図６では「Ｇ」と表される）は、これらの化合物のみを有し、ビスホスホネートは有しておらず、そのため、ヒドロゲル対照として作用した。第２の（図６では「ＧＡｌＸ」と表される）ヒドロゲルサンプルは、７．６８ｍｇのアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートをさらに含んでなり、第３のサンプル（図６では「ＧＡ１０Ｘ」と表される）は、７６．８０ｍｇのアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートを含んでいた。
【０１１７】
図５では、レーン１は、いずれの阻害剤も含まないプールされた慢性創傷液サンプルであるのに対し、レーン２〜４は、ヒドロゲルＧ、ＧＡ１ＸおよびＧＡ１０Ｘをそれぞれ含み、小片に切断され、３７℃で２４時間インキュベートされた同じ液体サンプルを示す。対照ヒドロゲルおよび２ｍＭアレンドロネート−メタクリレートコンジュゲートが両方とも、タンパク質分解活性を低減したのに対し、２０ｍＭコンジュゲート（ＧＡ１ＯＸ）は、明るいバンドのほとんどの消失から、最も効果的なサンプルであることは明らかである。
【０１１８】
図６は、図５に示される実験において得られたプロテアーゼ活性の相対的減少を表すものである。図６は、図４について記載されるのと同じ方法で作製した
【０１１９】
図６は、アレンドロネートを含まないヒドロゲルサンプル（サンプル「Ｇ」）が、ＭＭＰをある程度阻害する能力を有することを実証する。これは、本発明の包帯組成物においてこの種のポリマーを使用することのさらなる利点である。いずれか特定の理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、これは、ＭＭＰがその安定性のために必要とする陽イオンとのキレート化に利用可能である、ＨＥＭＡモノマー中の３個の酸素原子によるものであり得ると推論する。
【０１２０】
図６は、２ｍＭ（ＧＡ１Ｘ）ヒドロゲル−コンジュゲートサンプルは、阻害活性を示すが、２０ｍＭサンプル（ＧＡ１０Ｘ）は、より高いレベルの活性を示し、慢性創傷の治療における、創傷包帯組成物の一部としてヒドロゲルにつなげられたビスホスホネートの有効性を効果的に実証することをさらに示す。
【０１２１】
したがって、ポリマーと共有結合しているビスホスホネートを含んでなる本発明の包帯組成物は、創傷液中のＭＭＰを阻害するために上手く使用できる。
【０１２２】
当業者には当然のことながら、本発明は、本明細書に詳細に記載される実施形態に限定されず、さまざまな、本発明の広い趣旨および範囲と、なおも一致するその他の実施形態も企図され得る。
【０１２３】
本明細書において参照されるすべてのコンピュータプログラム、アルゴリズム、特許および科学文献は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
2010529047.tif 000003
【図１Ｂ】
2010529047.tif 000004
【図２】
2010529047.tif 000005
【図３】
2010529047.tif 000006
【図４】
2010529047.tif 000007
【図５】
2010529047.tif 000008
【図６】
2010529047.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成21年1月5日(2009.1.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーと共有結合している、ビスホスホネートおよび／またはその誘導体または製薬上許容される塩を含んでなる包帯組成物であって、包帯を創傷と接触させると、前記ビスホスホネートの実質的にすべてが、前記包帯とともに留まり、創傷組織に入ることができない包帯組成物。
【請求項２】
前記ビスホスホネートが、アミノ−ビスホスホネートである、請求項１に記載の包帯組成物。
【請求項３】
前記アミノ−ビスホスホネートが、アレンドロネート、パミドロネート、ネリドロネートまたはインカドロネートからなる群から選択される、請求項２に記載の包帯組成物。
【請求項４】
前記アミノ−ビスホスホネートがアレンドロネートである、請求項３に記載の包帯組成物。
【請求項５】
前記ポリマーが、ヒドロゲルポリマーである、請求項１に記載の包帯組成物。
【請求項６】
前記ヒドロゲルポリマーが、アクリル酸またはメタクリル酸のヒドロキシアルキルエステルを含んでなる、請求項５に記載の包帯組成物。
【請求項７】
前記アクリル酸またはメタクリル酸のヒドロキシアルキルエステルが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）である、請求項６に記載の包帯組成物。
【請求項８】
前記ヒドロゲルポリマーが、ポリ（エチレングリコール）をさらに含んでなる、請求項７に記載の包帯組成物。
【請求項９】
前記ビスホスホネートが、前記ポリマーと共有結合しているモノマーと共有結合している、請求項１から８のいずれか一項に記載の包帯組成物。
【請求項１０】
前記モノマーが、アクリレート、メタクリレート、ビニルスルホンまたは官能基が付与されたポリ（エチレングリコール）からなる群から選択される、請求項９に記載の包帯組成物。
【請求項１１】
選択された前記モノマーが、カルボン酸、酸ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、エポキシド、スルホニルまたはスクシンイミドからなる群から選択される官能基を与える、請求項１０に記載の包帯組成物。
【請求項１２】
前記モノマーが、メタクリロイルクロリドである、請求項１１に記載の包帯組成物。
【請求項１３】
治療を必要とする患者において、創傷組織内のマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を阻害することなく、創傷液中のＭＭＰを選択的に阻害する方法であって、前記創傷液を、包帯組成物中のポリマーと共有結合しているＭＭＰ阻害剤と接触させ、それによって、創傷組織内の前記ＭＭＰを阻害することなく、前記創傷液内の前記ＭＭＰを選択的に阻害するステップを含む方法。
【請求項１４】
前記ＭＭＰ阻害剤が、ビスホスホネートおよび／またはその誘導体または製薬上許容される塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記創傷液内で阻害されている前記ＭＭＰが、ＭＭＰ−９である、請求項１３または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が哺乳類である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳類がヒトである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
包帯組成物を製造する方法であって、ビスホスホネートをポリマーと共有結合させ、それによって、前記包帯組成物を製造するステップを含む方法。
【請求項１９】
ビスホスホネートがモノマーと共有結合しており、前記モノマーが照射によってポリマー中に組み込まれる、請求項１８に記載の方法。
【国際調査報告】
2010529047.tif 000010
2010529047.tif 000011