(57)【要約】  本発明は、合成グッグルリン脂質、それらの脂肪酸類似体、および他の生物活性分子の調製方法に関する。本発明は、ＥグッグルステロンおよびＺグッグルステロンまたはＥおよびＺグッグルステロンの混合物；ならびにグッグルリン脂質およびその類似体および塩、グッグルステロールの脂肪酸類似体、硫酸グッグル、およびその塩、リン酸グッグルおよびその塩に合成的に修飾される、ＥグッグルステロールおよびＺ グッグルステロールまたはＥおよびＺグッグルステロールの混合物；ならびにプロドラッグとしての使用のための薬物とコンジュゲートされるグッグルステロールに関する。また、本発明は、ＥおよびＺグッグルステロンの混合物からの、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロールの混合物の調製のための、新規な方法を提供する。本発明は、さらに、例えば、ヒトおよび動物の疾患の治療において使用するための疎水性または親水性薬物等の、他の活性薬剤を含み得る、リポソーム、複合体、エマルジョン、ベシクル、ミセル、および混合ミセル等の複合体に組み込まれる、グッグルリン脂質および他の生物活性分子に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造ＩＩＩ〜ＸＩＩ
【化１】
2010509355.tif 000011
から成る群から選択される一般構造を有する、グッグルベースの脂質分子であって、
ｉ）  構造ＩＩＩおよびＩＶにおいて、Ｒ１は、１から３４個の炭素原子を有する、飽和または不飽和アシルまたはアルキル基であり、
ｉｉ）  構造ＩＩＩおよびＩＶにおいて、Ｒ１およびＲ２は、アミノまたは置換アミノ基で置換されていてもよい飽和アルキルまたはアルキルオキシ基であり、
ｉｉ）  構造ＩＶにおいて、Ｒ１は、糖であり、
ｉｉｉ）  構造Ｖにおいて、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、前記Ｒ１またはＲ２のうちの少なくとも１つは、１から３４個の炭素原子を有する飽和または不飽和アシル基またはアルキル基であり、
ｉｖ）  構造ＩＶ〜Ｘにおいて、Ｘは、水素、メチル、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオン、または任意の非毒性イオンであり、
ｖ）  構造ＶＩにおいて、ＸおよびＹは、同一または異なり、水素、メチル、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオン、または任意の非毒性イオンであり、
ｖｉ）  構造ＶＩＩＩにおいて、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、同一または異なり、水素またはメチル基であり、Ｘは、水素またはメチル基であり、
ｖｉｉ）  構造Ｘにおいて、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）は、ｎが約１から約１０００の間である、エチレンオキシド単位、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から成る長鎖の線状または分岐合成高分子であり、
ｖｉｉｉ）  構造ＸＩにおいて、薬物は、活性薬剤であり、
ｉｘ）  構造ＸＩＩにおいて、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一または異なり、水素、メチル、アルキル、置換アルキル、アルキルオキシ、置換アルキルオキシ基から成る群から選択され、該組成物が全体的に正電荷を有するように、ヒドロキシル化、アミノ化、またはポリアミノ化されていてもよく、
かつ、
ｘ）  構造ＩＩＩ〜ＸＩＩは、Ｅ異性体、Ｚ異性体、またはＥおよびＺ異性体の混合物から成る群から選択される形態であり、
ｘｉ）  構造ＩＩＩ〜ＸＩＩは、光学的に純粋であるか、または構造ＩＩＩ〜ＸＩＩのうちの１つ以上は、光学異性体の混合物であり、
ｘｉｉ）  構造ＶＩＩＩは、Ｘがメチル基である場合、陽イオン性であり、
ｘｉｉｉ）  構造ＸＩＩは、陽イオン性である、グッグルベースの脂質分子。
【請求項２】
式ＩＩＩ〜ＸＩＩから成る群から選択される式のグッグル誘導体の調製方法であって、構造ＩＩＡ
【化２】
2010509355.tif 000012
を有するグッグルステロールを反応させて、式ＩＩＩ〜ＸＩＩから成る群から選択される式の、グッグル誘導体を含有する組成物を形成するステップを含む、方法。
【請求項３】
式ＩＩＩ〜ＸＩＩから成る群から選択される式のグッグル誘導体の調製方法であって、構造Ｉ
【化３】
2010509355.tif 000013
を有するグッグルステロンを反応させて、式ＩＩＩ〜ＸＩＩから成る群から選択される式の、グッグル誘導体を含有する組成物を形成するステップを含む、方法。
【請求項４】
前記グッグルステロンＩは、Ｅ異性体またはＺ異性体、もしくはＥおよびＺ異性体の混合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記グッグルステロールＩＩＡは、Ｅ異性体またはＺ異性体、もしくはＥおよびＺ異性体の混合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記グッグルステロールは、光学的に純粋であり、前記グッグルステロールは、光学異性体の混合物である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
グッグルステロールＩＩＡの調製方法であって、グッグルステロンＩを１つ以上のステップで処理し、グッグルステロールＩＩＡの調合剤を製造するステップを含む、方法。
【請求項８】
請求項１、２、または３に記載の式ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、またはＸの化合物の調製方法であって、少なくとも１つのステップは、ホスホルアミダイト試薬またはリン酸化剤の使用を含む、方法。
【請求項９】
前記ホスホルアミダイト試薬は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホルアミドクロライド、（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン、ベンジルオキシビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィン、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイト試薬、（２−シアノエチル）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン、ジフルオレニルジイソプロピルホスホルアミダイト試薬、メチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎテトライソプロピルホスホロジアミダイト、ジメチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト試薬、ジベンジルジイソプロピルホスホルアミダイト試薬、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト試薬、２−（ジフェニルメチルシリル）エチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイト試薬、（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ブチル、および（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ペンチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイト試薬から成る群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リン酸化剤は、２−ブロモエチルジクロロリン酸塩、トリメチルシリルエチルジクロロリン酸塩、メチルジクロロリン酸塩、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン、２−クロロフェニルジクロロリン酸塩、およびオキシ塩化リンから成る群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の組成物の産生方法であって、化合物ＸＩは、グッグルステロールを直接、またはリンカーを介して薬物と接合させることにより調製される、方法。
【請求項１２】
化合物ＸＩは、リンカーを介してグッグルステロールを接合することにより調製され、前記リンカーは、カルボニル、カルボキシル、炭酸塩、アミノ、アミド、エステル、チオエステル基、コハク酸塩、グルタル酸塩、カルバミン酸塩、エーテル、リン酸塩、ホスホン酸塩、二リン酸塩、およびピロリン酸塩から成る群から選択される官能基で置換されていてもよく、アルキル基である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載のグッグルベースの脂質分子を、リポソームまたは脂質複合体を含有する組成物に複合するステップを含む、方法。
【請求項１４】
前記複合体は、ミセル、ベシクル、およびエマルジョンから成る群から選択され、前記組成物が複数のミセルを含有する場合、前記ミセルは、単量体、２量体、重合体、または混合ミセルの形態である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
薬物をリポソームまたは複合体に保持する方法であって、請求項１に記載の１つ以上のグッグル誘導体を提供するステップ、または請求項２〜１１に記載の方法により１つ以上のグッグル誘導体を調製するステップと、前記１つ以上のグッグル誘導体および薬物を、リポソームまたは複合体を含有する組成物に複合するステップと、を含む、方法。
【請求項１６】
前記組成物は、リン脂質、ペグ化リン脂質、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、脂肪酸、ステロール、コール酸、またはαトコフェロールのうちの少なくとも１つをさらに含有する、請求項１３〜１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物は、少なくとも１つのリン脂質を含有し、前記リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、またはホスファチジン酸を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物は、少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含有し、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、２００〜２０，０００の平均分子量を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物は、少なくとも１つの脂肪酸を含有し、前記脂肪酸は、Ｃ４〜Ｃ３４の鎖長を有する脂肪酸から成る群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記脂肪酸は、飽和または不飽和であり、前記脂肪酸は、酸形態または塩形態である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物は、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、またはジオレオイルホスファチジルグリセロールのペグ化誘導体から成る群から選択される、少なくとも１つのペグ化リン脂質を含有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記コール酸は、デオキシコール酸ナトリウムである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物は、コレステロール、コレステロールの誘導体、硫酸コレステリル、コハク酸コレステロール、ヘミコハク酸コレステロール、オレイン酸コレステロール、コルチゾール、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、コレステロール−ＰＥＧ、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、βシトステロール、ラノステロール、カンペステロール、ラトステロール、スチグマステロール、スチグマスタノール、カルシフェロール、グッグルステロール、グッグルステロールの誘導体、およびそれらの混合物から成る群から選択されるステロールをさらに含有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬物は、治療上活性な薬剤を含有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記治療上活性な薬剤は、抗癌薬、抗ウイルス薬、抗菌薬および抗真菌薬、抗炎症薬、コレステロール低下薬を含み、前記治療上活性な薬剤のうちの少なくとも１つは、心臓血管疾患の治療、新組織形成の治療、記憶障害の改善、皮膚感染または皮膚疾患の治療、高血糖症の治療、または認知機能の強化のためのものである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の式ＶＩＩＩおよびＸＩＩのうちの少なくとも１つの陽イオン性グッグル誘導体が、ポリヌクレオチドの細胞間送達を促進するために使用される、方法。
【請求項２７】
細胞にポリヌクレオチドを形質移入する方法であって、（ａ）請求項１に記載の陽イオン性グッグル誘導体と、前記ポリヌクレオチドとを含有する組成物を調製するステップと、（ｂ）前記細胞を前記組成物に接触させることにより、前記ポリヌクレオチドが前記細胞に取り込まれるステップと、を含む、方法。
【請求項２８】
前記ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはＤＮＡとＲＮＡを含有するオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマー、およびリボザイムから成る群から選択され、前記ポリヌクレオチドは、１本鎖または２本鎖である、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物は、単層ベシクル、多層状ベシクル、またはそれらの混合物を含む、請求項１４〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記リポソームまたは複合体は、負電荷、陽電荷、または中性電荷から選択される全体的な電荷を有する、請求項１３〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記リポソームまたは複合体は、約２０ミクロンから１ミクロン未満の平均直径を有する、請求項１３〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記リポソームまたは複合体は、約５００ｎｍから１００ｎｍ未満の平均直径を有する、請求項１３〜３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記組成物は、凍結乾燥形態である、請求項１３〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
凍結乾燥形態の前記組成物は、抗凍結剤を含有し、前記抗凍結剤は、トレハロース、マルトース、乳糖、スクロース、およびデキストランから成る群から選択される１つ以上の糖を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記リポソームまたは複合体は、粉末形態または溶液形態、懸濁液形態、エマルジョン形態であり、また前記リポソームまたは複合体は、ゲル形態、ミセル形態、またはペースト形態である、請求項１３〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記組成物は、錠剤であるか、カプセルに充填される、請求項１３〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
細胞の治療方法であって、請求項１、または１３〜３６のいずれかに従って、組成物を調製するステップと、前記細胞を前記組成物に曝露するステップと、を含む、方法。
【請求項３８】
前記細胞は、対象のインビボにある、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ヒトまたは動物の疾患の治療方法であって、請求項１、１３〜３６に記載の方法に従って調製される、治療有効量の前記組成物を投与するステップと、前記組成物がヒトまたは動物の患者に送達されるように、それを必要とするヒトまたは動物に前記組成物を曝露するステップと、を含む、方法。
【請求項４０】
細胞の形質移入のキットであって、請求項１に記載の陽イオン性グッグル誘導体と、ポリヌクレオチド、陽イオン性グッグル誘導体およびポリヌクレオチドを調合剤に配合するための説明書、前記陽イオン性グッグル誘導体を使用して細胞を形質移入するための説明書、形質移入を促進するための試薬、前記陽イオン性グッグル誘導体を保管するための容器、前記ポリヌクレオチドを保管するための容器、前記試薬を保管するための容器、前記陽イオン性グッグル誘導体およびポリヌクレオチドを含む調合剤を保管するための容器、前記調合剤を調製するための容器、ならびに形質移入を促進するための材料から成る群から選択される１つ以上の要素と、を含む、キット。
【請求項４１】
請求項２〜２５または２７〜３６のいずれかに記載の方法に従って産生される、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年１１月６日に出願の、米国仮出願第ＵＳ６０／８５６，９５２号に対する優先権を主張し、前記出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ＥおよびＺグッグルステロンもしくはグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロンもしくはＥおよびＺグッグルステロールの混合物の、新規なリン脂質類似体および変異体の合成、ならびにヒトおよび動物の疾患の治療のためのそれらの標的送達に関する。
【背景技術】
【０００３】
アーユルベーダの実践者は、ヒトの疾患に対して全体論的な見方をする。それは、いかなる疾患も、単一の器官または生理的過程というよりも、むしろ身体全体の機能不全であるととらえる。したがって、アーユルベーダ薬のほとんどは、多くの器官および機能に関与する、身体の多くの機能不全に作用し得る。１９６０年代、カンラン科に属する小木コンミフォラワイティ（Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ  ｗｉｇｈｉｔｉｉ）から分離される、オレオゴム樹脂（ゴムグッグル）が、高血中コレステロールまたは脂質異常症の治療に使用できるその可能性について、研究された。コンミフォラ木は、概して、骨折、関節炎、肥満、炎症、心臓血管疾患、および脂質障害の治療における使用について、伝統的なアーユルベーダの文献で言及されている。ゴムグッグルの脂質低下活性の発見で、いくつかの化学的調査が行われ、ゴムグッグルが、リグナン、脂質、ジテルペノイド、および植物ステロイド等の様々な分類の化合物の複合混合物であることが見出された。ゴムグッグルの構造関数解析に基づき、ゴムの酢酸エチルにおける可溶部分、特にその中性部分が、脂質低下特性のほとんどを含有することが、確認された。中性画分が、最低２．５％の量で存在し、血中コレステロールの低下に関与する、ＺおよびＥグッグルステロンとして既知のステロール化合物源であることが見出された［Ｉｎｄｉａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ，  １９８８；  Ｇ．Ｖ．  Ｓａｔｙａｖａｔｉ，  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｌａｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５，  ４７  （１９９１）］。
【０００４】
粗薬およびその画分のいくつかに関する現代の薬理学的研究により、アーユルベーダの主張が支持された。抗関節炎および抗炎症活性が、Ｇｕｊｒａｌらにより確認された  ［Ｍ．Ｌ．Ｇｕｊｒａｌ，  Ｋ．  Ｓａｒｅｅｎ，  Ｋ．Ｋ．  Ｔａｎｇｒｉ，  Ｍ．Ｋ．Ｐ．  Ａｍｍａ，  ａｎｄ  Ａ．Ｋ．  Ｒｏｙ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４，  ２６７  （１９６０）］。ゴムグッグルの脂質低下効果について、混合型の機構が関係付けられている[Ｂｉｏｌ．１１，  ３９５  （１９７３）、  Ｎ．Ｋ．  Ｋａｐｏｏｒ  ａｎｄ  Ｓ．  Ｎｉｔｙａｎａｎｄ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｒｅｓ．  Ｓｕｐｐ−１．２２  （１９８８）］。血漿ＬＡＴの刺激、肝性リパーゼ、受容体媒介のＬＤＬ代謝、および便中への胆汁酸排出の増加、ならびに肝臓によるコレステロール生合成の抑制が、ゴムグッグルの脂質低下効果に関与する［Ｓ．  Ｎｉｔｙａｎａｎｄ  ａｎｄ  Ｎ．Ｋ．  Ｋａｐｏｏｒ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｅｘｐ．  Ｂｉｏｌ．  １１，  ３９５  （１９７３）、Ｎ．Ｋ．  Ｋａｐｏｏｒ  ａｎｄ  Ｓ．  Ｎｉｔｙａｎａｎｄ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｒｅｓ．  Ｓｕｐｐ−ｌ．２２  （１９８８）］。該ゴム樹脂の脂質低下活性の発見で、脂質低下活性に関与するゴム樹脂の化合物の特性を明らかにするために、体系的な化学的調査が行われた。Ｍｃ  Ｃｏｏｋらは、光る、好ましくない外観、および不快な触感に関連する、脂腺細胞からの皮脂分泌を抑制または防止するための、ゴムグッグルのアルコール抽出物を主張した［Ｊ．Ｐ．  Ｍｃ  Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  Ｎｏ．５，  ６９０，９４８  （１９９７）］。
【０００５】
すでに既知であるように、コレステロールは、神経ステロイドプレグネノロンの前駆体である。プレグネノロンの生体前駆体と、グッグルステロンまたはグッグルステロールとの類似［Ｖ．  Ｄ．  Ｐａｔｉｌ，  Ｕ．Ｒ．  Ｎａｙａｋ，  ａｎｄ  Ｓｕｋｈ  Ｄｅｖ，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２８，  ２３４１  （１９７２）］は、グッグルステロンまたはグッグルステロールに結合される、合成的に純粋で医薬的に活性な新規リン脂質の特性の探査を促した。行動学的研究により、記憶の増強のための、プレグネノロンの潜在的な役割が示唆された。プレグネノロンおよび硫酸プレグネノロンの脳室内（ｉ．ｃ．ｖ）投与が、齧歯動物における様々な記憶課題の改善を導く［Ｊ．Ｆ．  Ｆｌｏｏｄ，  Ｊ．Ｆ．  Ｍｏｏｒｌｅｙ，  ａｎｄ  Ｅ．  Ｒｏｂｅｒｔ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９，  １５６７  （１９９２）］。これらの記憶増強効果は、ＮＭＤＡアゴニストは、齧歯動物にける認知機能を損なうことが示されているため、硫酸プレグネノロンのＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸塩（ＮＭＤＡ）の拮抗特性によるものであり得る［Ｍ．  Ｒ．  Ｂｏｗｌｂｙ，  Ｍｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４３，８１３  （１９９３）］。
【０００６】
近年、ヒト疾患における、フリーラジカルの酸化的損傷の役割の理解への関心が高まっている。フリーラジカルは、タンパク質、脂質、およびＤＮＡを含む生体膜を酸化する可能性を有する、高反応性種である。酸化を阻止または軽減するための、豊富な天然の酸化防止機構が存在する。これらの酸化防止防衛機構が、多くの疾患において、不完全であることが見出されている。糖尿病およびアテローム性動脈硬化の病態生理学では、フリーラジカルの産生の増加が強く関係付けられている。グルコースは、非酵素的糖化反応において、血清タンパク質とリポタンパク質を組み合わせ、in situで自己酸化することができ、フリーラジカルを生成し、局所的酸化損傷を引き起こす［Ｊ．Ｖ．  Ｈｕｎｔ  ａｎｄ  Ｓ．Ｐ．  Ｗｏｌｆｆ，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １２−１３，  １１５  （１９９１）］。フリーラジカルを除去する抗酸化剤は、重要な構造が攻撃され得る前に、優先的にフリーラジカルと反応する。ゴムグッグルならびにＥおよびＺグッグルステロンは、抗酸化特性を有することもまた既知である［Ｋ．Ｓｉｎｇｈ，  Ｒ．Ｃｈａｎｄｅｒ，  ａｎｄ  Ｎ．Ｋ．Ｋａｐｏｏｒ，  Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １１，  ２９１  （１９９７）］。
【０００７】
本発明のグッグルリン脂質の方法および組成物は、これらの各分野における用途を見出す。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】Ｊ．Ｐ．  Ｍｃ  Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  Ｎｏ．５，  ６９０，９４８  （１９９７）
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｉｎｄｉａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ，  １９８８；  Ｇ．Ｖ．  Ｓａｔｙａｖａｔｉ，  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｌａｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５，  ４７  （１９９１）
【非特許文献２】Ｍ．Ｌ．Ｇｕｊｒａｌ，  Ｋ．  Ｓａｒｅｅｎ，  Ｋ．Ｋ．  Ｔａｎｇｒｉ，  Ｍ．Ｋ．Ｐ．  Ａｍｍａ，  ａｎｄ  Ａ．Ｋ．  Ｒｏｙ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４，  ２６７  （１９６０）
【非特許文献３】Ｂｉｏｌ．１１，  ３９５  （１９７３）
【非特許文献４】Ｎ．Ｋ．  Ｋａｐｏｏｒ  ａｎｄ  Ｓ．  Ｎｉｔｙａｎａｎｄ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｒｅｓ．  Ｓｕｐｐ−１．２２  （１９８８）
【非特許文献５】Ｓ．  Ｎｉｔｙａｎａｎｄ  ａｎｄ  Ｎ．Ｋ．  Ｋａｐｏｏｒ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｅｘｐ．  Ｂｉｏｌ．  １１，  ３９５  （１９７３）
【非特許文献６】Ｎ．Ｋ．  Ｋａｐｏｏｒ  ａｎｄ  Ｓ．  Ｎｉｔｙａｎａｎｄ，  Ｉｎｄ．  Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｒｅｓ．  Ｓｕｐｐ−ｌ．２２  （１９８８）
【非特許文献７】Ｖ．  Ｄ．  Ｐａｔｉｌ，  Ｕ．Ｒ．  Ｎａｙａｋ，  ａｎｄ  Ｓｕｋｈ  Ｄｅｖ，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２８，  ２３４１  （１９７２）
【非特許文献８】Ｊ．Ｆ．  Ｆｌｏｏｄ，  Ｊ．Ｆ．  Ｍｏｏｒｌｅｙ，  ａｎｄ  Ｅ．  Ｒｏｂｅｒｔ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９，  １５６７  （１９９２）
【非特許文献９】Ｍ．  Ｒ．  Ｂｏｗｌｂｙ，  Ｍｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４３，８１３  （１９９３）
【非特許文献１０】Ｊ．Ｖ．  Ｈｕｎｔ  ａｎｄ  Ｓ．Ｐ．  Ｗｏｌｆｆ，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １２−１３，  １１５  （１９９１）
【非特許文献１１】Ｋ．Ｓｉｎｇｈ，  Ｒ．Ｃｈａｎｄｅｒ，  ａｎｄ  Ｎ．Ｋ．Ｋａｐｏｏｒ，  Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １１，  ２９１  （１９９７）
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、新規なグッグルリン脂質化合物およびその合成および使用方法に関する。一部の実施形態において、本発明は、ＥグッグルステロンおよびＺグッグルステロンもしくはグッグルステロール、またはＥグッグルステロンおよびＺグッグルステロンの混合物、もしくはＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロールの混合物、ならびにそれらの類似体とコンジュゲートされる、合成の、医薬的に活性なリン脂質に関連する。リン脂質は、概して薬物送達に使用される。本発明のグッグルリン脂質および他の生物活性生成物は、異常な細胞成長、癌、心臓血管疾患、ウイルス感染、皮膚感染、記憶障害、肥満、炎症における増殖等の予防および治療等の、ヒトまたは動物の疾患の治療のために、追加の治療上活性な生成物と併用、またはそれを使用せずに、新規生成物の標的送達を助ける。
【００１１】
本発明の化合物は、例えば、ヒトおよび動物における、異常な細胞成長、炎症における増殖、上昇した低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および高コレステロール値の低下、および低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の上昇、新生物、および心臓血管疾患の予防および治療における使用を見出す。本発明は、認知機能障害、高血糖症、および皮膚感染の予防または制御のための、開示される化合物の使用方法もまた提供する。
【００１２】
一部の実施形態において、本発明は、図１で図式化される、一般構造ＩＩＩ〜ＸＩＩを有するグッグル誘導体を含む。一部の実施形態において、構造ＩＩＩおよびＩＶにおいて、Ｒ１は、１から３４個の炭素原子を有する、飽和または不飽和アシルまたはアルキル基である。一部の実施形態において、グッグル誘導体は、構造ＩＶを含み、Ｒ１は、糖である。一部の実施形態において、グッグル誘導体は、構造Ｖを含み、式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、Ｒ１またはＲ２のうちの少なくとも１つは、１から３４個の炭素原子を有する飽和または不飽和アシル基またはアルキル基である。
【００１３】
構造ＩＶ〜Ｘを含むグッグル誘導体の一部の実施形態において、側基Ｘは、水素、メチル、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオン、または任意の非毒性イオンである。
【００１４】
構造ＶＩを含むグッグル誘導体の一部の実施形態において、ＸおよびＹは、同一または異なり、水素、メチル、水素、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオン、または任意の非毒性イオンである。
【００１５】
構造ＶＩＩＩを含むグッグル誘導体の一部の実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、同一または異なり、水素またはメチル基である。式ＶＩＩＩは、Ｘがメチル基である場合、陽イオン性グッグル誘導体である。
【００１６】
構造Ｘを含むグッグル誘導体の一部の実施形態において、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）は、ｎが典型的には約１から約１０００の間である、エチレンオキサイド単位、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から成る長鎖の線状または分岐合成高分子である。
【００１７】
構造ＸＩを含むグッグル誘導体の一部の実施形態において、薬物は、活性薬剤である。
【００１８】
式ＸＩＩは、陽イオン性グッグル誘導体であり、式中、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一または異なり、水素、メチル、アルキル、置換アルキル、アルキルオキシ、置換アルキルオキシ基であり、任意でヒドロキシル化、アミノ化、および／またはポリアミノ化されていてもよく、グッグル誘導体は、全体的に正電荷を有する。
【００１９】
一部の実施形態において、構造ＩＩＩ〜ＸＩＩを含むグッグル誘導体は、Ｅ異性体、Ｚ異性体、またはＥおよびＺ異性体の混合物から成る群から選択される形態である。
【００２０】
一部の実施形態において、構造ＩＩＩ〜ＸＩＩを有するグッグル誘導体は、光学的に純粋であるが、一部の実施形態において、構造ＩＩＩ〜ＸＩＩは、光学異性体の混合物である。
【００２１】
一部の実施形態において、本発明は、構造ＩＩＡを有するグッグルステロールから、式ＩＩＩ〜ＸＩＩのグッグル誘導体を調製する方法を提供する。
【００２２】
一部の実施形態において、グッグルステロールＩＩＡは、Ｅ異性体であるが、他の実施形態においては、Ｚ異性体であり、さらに別の実施形態では、ＥおよびＺ異性体の混合物である。一部の実施形態において、グッグルステロールは、光学的に純粋であるが、一部の実施形態においては、グッグルステロールは、光学異性体の混合物である。本発明は、グッグルステロンＩからグッグルステロールＩＩＡを調製する方法もまた、提供する。
【００２３】
一部の実施形態において、本発明は、（図２に示す）構造Ｉを有するグッグルステロンから、式ＩＩＩ〜ＸＩＩのグッグル誘導体を調製する方法もまた、提供する。一部の実施形態において、グッグルステロンＩは、Ｅ異性体であるが、他の実施形態においては、Ｚ異性体であり、さらに別の実施形態では、ＥおよびＺ異性体の混合物である。
【００２４】
グッグルステロールＩＩＡまたはグッグルステロンＩから、グッグル誘導体を合成する方法の一部の実施形態において、グッグル誘導体（ＩＩＩ〜ＸＩＩ）は、単一ステップで前駆体から合成されるが、一部の実施形態においては、グッグル誘導体は、一連の複数のステップで合成される。
【００２５】
一部の実施形態において、グッグルステロールは、単一ステップまたは一連の複数のステップから調製されるが、一部の実施形態においては、グッグルステロールは、例えば商業的に入手される。
【００２６】
式ＩＶ〜ＶＩ、ＶＩＩＩ〜Ｘの化合物を調製する方法の一部の実施形態において、少なくとも１つのステップは、ホスホルアミダイト試薬またはリン酸化剤の使用を含む。一部の好ましい実施形態において、ホスホルアミダイト試薬は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホルアミドクロライド、（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン、ベンジルオキシビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィン、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイト、（２−シアノエチル）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン、ジフルオレニルジイソプロピルホスホルアミダイト、メチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎテトライソプロピルホスホロジアミダイト、ジメチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト、ジベンジルジイソプロピルホスホルアミダイト、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト、２−（ジフェニルメチルシリル）エチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイト、（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ブチル、および（Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ）ペンチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイトを含むが、それらに限定されない。一部の実施形態において、リン酸化剤は、２−ブロモエチルジクロロリン酸塩、トリメチルシリルエチルジクロロリン酸塩、メチルジクロロリン酸塩、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン、２−クロロフェニルジクロロリン酸塩、およびオキシ塩化リンを含むが、それらに限定されない。
【００２７】
本発明の方法の一部の実施形態において、構造ＸＩは、グッグルステロールを、例えば直接、またはリンカーを介して薬物とコンジュゲートすることにより調製される。リンカーが使用される一部の実施形態において、リンカーは、カルボニル、カルボキシル、炭酸塩、アミノ、アミド、エステル、チオエステル基、コハク酸塩、グルタル酸塩、カルバミン酸塩、エーテル、リン酸塩、ホスホン酸塩、二リン酸塩、ピロリン酸塩等の官能基と任意に置換される、アルキル基である。
【００２８】
一部の実施形態において、本発明の方法は、リポソームを含むが、それに限定されない、複合体の形成を含み、リポソームまたは複合体は、グッグル誘導体ＩＩＩ〜ＸＩＩを含む。一部の好ましい実施形態において、複合体は、ミセル、ベシクル、またはエマルジョンである。一部の実施形態において、本発明の方法は、複数のミセルを含む組成物の形成を含み、該ミセルは、単量体、２量体、重合体、または混合ミセルの形態である。
【００２９】
一部の実施形態において、本発明は、薬物をリポソームまたは複合体に保持する方法であって、本明細書に記載の方法によりグッグル誘導体を調製するステップと、グッグル誘導体および薬物をリポソームまたは複合体に含めるステップと、を含む、方法を含む。一部の実施形態において、本発明は、上述の通り調製されるリポソーム組成物を含む。
【００３０】
一部の実施形態において、本発明は、薬物をグッグル誘導体ＩＩＩ〜ＸＩＩと複合する方法を含む。一部の実施形態において、グッグル誘導体は、薬物と複合する前の複合体である。
【００３１】
一部の実施形態において、本発明は、上述の方法のうちのいずれかを含み、該複合体は、ミセル、混合ミセル、高分子ミセル、ベシクル、エマルジョン、およびリポソームを含む。
【００３２】
本発明の一部の実施形態において、上述の方法の組成物は、リン脂質、ペグ化リン脂質、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、脂肪酸、ステロール、コール酸、またはトコフェロールをさらに含有する。一部の実施形態において、コール酸は、デオキシコール酸ナトリウムである。ＰＥＧの使用を含む一部の好ましい実施形態において、ＰＥＧは、２００〜２０，０００の平均分子量を有する。脂肪酸を含む実施形態において、一部の実施形態では、脂肪酸のうちの少なくとも１つが、Ｃ４〜Ｃ３４の鎖長を有する脂肪酸から成る群から選択される。一部の実施形態において、脂肪酸のうちの少なくとも１つは、飽和しているが、一部の実施形態においては、脂肪酸のうちの少なくとも１つは、不飽和である。
【００３３】
一部の実施形態において、少なくとも１つの脂肪酸は、酸形態であるが、他の実施形態において、少なくとも１つの脂肪酸は、塩形態である。
【００３４】
特定の好ましい実施形態において、リン脂質のうちの少なくとも１つは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸を含む。特に好ましい実施形態において、該ホスファチジルコリンのうちの少なくとも１つは、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素化大豆ホスファチジルコリン、部分的に水素化された大豆ホスファチジルコリン、またはそれらの混合物である。さらなる好ましい実施形態において、該ホスファチジルエタノールアミンのうちの少なくとも１つは、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジアラキドノイルホスファチジルエタノールアミン、卵ホスファチジルエタノールアミン、またはそれらの混合物である。
【００３５】
一部の実施形態において、該ホスファチジルグリセロールのうちの少なくとも１つは、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジアラキドノイルホスファチジルグリセロール、またはそれらの混合物である。
【００３６】
一部の実施形態において、該ホスファチジルセリンのうちの少なくとも１つは、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジオレオイルホスファチジルセリン、ジアラキドノイルホスファチジルセリン、またはそれらの混合物である。
【００３７】
一部の実施形態において、該ホスファチジルイノシトールのうちの少なくとも１つは、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジステアロイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール、ジオレオイルホスファチジルイノシトール、ジアラキドノイルホスファチジルイノシトール、またはそれらの混合物である。
【００３８】
一部の実施形態において、該ホスファチジン酸のうちの少なくとも１つは、ジミリストイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジオレオイルホスファチジン酸、ジアラキドノイルホスファチジン酸、またはそれらの混合物である。
【００３９】
一部の実施形態において、該ペグ化リン脂質のうちの少なくとも１つは、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、およびジオレオイルホスファチジルグリセロールのペグ化誘導体から成る群から選択される、リン脂質のペグ化誘導体を含む。
【００４０】
一部の実施形態において、構造ＸＩは、グッグルステロールを、直接またはリンカーを介して薬物とコンジュゲートするステップにより調製され、本組成物は、コレステロール、コレステロールの誘導体、硫酸コレステリル、コハク酸コレステロール、ヘミコハク酸コレステロール、オレイン酸コレステロール、コルチゾール、コルチコステロン、ヒドロコルチゾン、コレステロール−ＰＥＧ、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、βシトステロール、ラノステロール、カンペステロール、ラトステロール、スチグマステロール、スチグマスタノール、カルシフェロール、またはそれらの混合物から成る群から選択されるステロールをさらに含有する。
【００４１】
本発明の方法および組成物の一部の実施形態において、本組成物は、少なくとも１つの薬物を含有し、少なくとも１つの薬物は、治療上活性な薬剤である。一部の好ましい実施形態において、少なくとも１つの治療上活性な薬剤は、抗癌薬を含むが、一部の好ましい実施形態においては、少なくとも１つの治療上活性な薬剤は、抗ウイルス薬を含む。さらにより好ましい実施形態において、少なくとも１つの治療上活性な薬剤は、抗真菌薬を含む。
【００４２】
本発明の方法および組成物の好ましい実施形態において、該治療上活性な薬剤のうちの少なくとも１つは、心臓血管疾患、新組織形成、記憶障害、炎症、抗炎症薬、皮膚感染もしくは皮膚疾患、血清コレステロール値、および高血糖症から成る群から選択される状態を治療するためのものである。一部の好ましい実施形態において、該治療上活性な薬剤のうちの少なくとも１つは、認知機能を改善する。
【００４３】
本発明の方法および組成物の一部の実施形態において、本組成物は、単層ベシクル、多層状ベシクル、またはそれらの混合物を含む、リポソーム組成物を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のリポソームまたは複合体のうちのいずれかは、全体的に負電荷を有するが、一部の実施形態においては、全体的に正電荷を有する。一部の実施形態において、それらは全体的に中性電荷を有する。
【００４４】
本発明の方法および組成物の一部の実施形態において、本組成物は、リポソームまたは複合組成物を含み、該リポソームまたは複合体は、約２０ミクロン以下の平均直径を有する。一部の好ましい実施形態において、リポソームまたは複合体は、約１０ミクロン以下の平均直径を有するが、一部の好ましい実施形態においては、リポソームまたは複合体は、約５ミクロン以下の平均直径を有する。一部の特に好ましい実施形態において、リポソームまたは複合体は、約１ミクロンの平均直径を有する。
【００４５】
本発明の方法および組成物の一部の実施形態において、本組成物は、凍結乾燥形態である。一部の実施形態において、凍結乾燥組成物は、１つ以上の糖等の抗凍結剤をさらに含有する。好ましい実施形態において、抗凍結剤は、トレハロース、マルトース、乳糖、スクロース、およびデキストランから成る群から選択される糖である。
【００４６】
本発明の方法および組成物の一部の実施形態において、１つ以上のグッグル誘導体を含有するリポソームまたは複合組成物は、粉末形態、溶液形態、懸濁液形態、エマルジョン形態、ミセル形態、ゲル形態、またはペースト形態から成る群から選択される形態である。
【００４７】
一部の実施形態において、本発明によるリポソームまたは複合組成物は、カプセルに被包される。好ましい実施形態において、カプセルは、腸溶コーティングを含む。「腸（Ｅｎｔｅｒｉｃ）」とは小腸を指し、したがって、「腸溶コーティング」は、概して、小腸に到達する前の薬の放出を実質的に阻止するコーティングを指す。本発明を、作用のいずれかの特定の機構に限定するわけではないが、ほとんどの腸溶コーティングは、酸性ｐＨでは安定しているが、より高いｐＨでは急速に分解される表面を呈することにより機能すると理解されたい。
【００４８】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のグッグル誘導体組成物を含む組成物で、細胞を治療する方法であって、本明細書に記載の通り組成物を調製するステップと、細胞を該組成物に曝露するステップとを含む、方法を含む。一部の好ましい実施形態において、細胞を曝露するステップは、例えば患者または対象の、インビボで生じる。
【００４９】
一部の実施形態において、対象における細胞を曝露するステップは、対象への組成物の経口送達を含むが、他の実施形態において、細胞を曝露するステップは、対象への組成物の静脈内送達を含むことが企図される。本発明での使用を見出す対象への本組成物の送達経路は、皮下送達、非経口送達、腹腔内送達、直腸送達、経膣送達、および／または局所送達を含むが、それらに限定されない。一部の好ましい実施形態において、対象は、哺乳動物である。一部の特に好ましい実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【００５０】
一部の実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物の疾患を治療する方法であって、本明細書に記載のグッグル誘導体を含有する、治療有効量の組成物を投与するステップと、本組成物がヒトまたは動物の患者に送達されるように、それを必要とするヒトまたは動物に、本組成物を曝露するステップと、を含む、方法を含む。
【００５１】
一部の実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物の疾患を治療する方法であって、本明細書に記載のグッグル誘導体を含有する、リポソームまたは複合体を含有する、治療有効量の組成物を投与するステップと、活性薬剤がヒトまたは動物の患者に送達されるように、それを必要とするヒトまたは動物に、本組成物を曝露するステップと、を含む、方法を含む。
【００５２】
一部の実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物の疾患の緩和方法であって、本明細書に記載のグッグル誘導体を含有する、治療有効量の組成物を投与するステップと、本組成物がヒトまたは動物の患者に送達されるように、それを必要とするヒトまたは動物に、本組成物を曝露するステップと、を含む、方法を含む。
【００５３】
一部の実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物の疾患の緩和方法であって、本明細書に記載のグッグル誘導体を含有する、リポソームまたは複合体を調製するステップと、本組成物がヒトまたは動物の患者に送達されるように、それを必要とするヒトまたは動物に、本組成物を曝露するステップと、を含む、方法を含む。
【００５４】
一部の実施形態において、治療される動物は、哺乳動物である。特定の実施形態において、疾患は、癌疾患である。特定の好ましい実施形態において、癌疾患は、頭部癌、頸部癌、脳癌、血液癌、骨癌、乳癌、肺癌、膵臓癌、脾臓癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、結腸癌、腎臓癌、子宮癌、卵巣癌、皮膚癌、骨髄癌、食道癌、胃癌、腸癌、喉頭癌、舌癌、および口腔癌から成る群から選択される。
【００５５】
一部の実施形態において、疾患は、ウイルス性疾患である。特定の好ましい実施形態において、ウイルス性疾患は、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、オルソポックスウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、結核、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、Ｇ型肝炎、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、コレラ、肺炎、ＳＡＲＳウイルス、カナリアウイルス、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、デング熱ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、コロナウイルス、ワクシニアウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、パピローマウイルス（ＰＶ）、およびエプスタインバーウイルスから成る群から選択される。
【００５６】
一部の実施形態において、本発明の方法および組成物は、真菌性疾患、心臓血管疾患、新組織形成、アルツハイマー病、炎症性疾患、皮膚疾患、脂質異常症の疾患、および認知機能障害の疾患から成る群から選択される疾患の治療に使用される。
【００５７】
本発明の特定の実施形態を、本発明の概要、および以下の、発明の簡単なおよび詳細な説明に記載する。本発明を、具体的な実施形態に関連して記載したが、請求される本発明は、そのような具体的な実施形態に必要以上に制限されるべきではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】化合物ＩＩＡおよび化合物ＩＩＩ〜ＸＩＩを図式化する図である。
【図２】化合物Ｉおよび化合物ＩＩＡ〜ＩＩＦを図式化する図である。
【図３】化合物ＩＩＡの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【図４】化合物ＶＩＩの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【図５】化合物ＩＩＩの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【図６】化合物ＶＩの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【図７】化合物Ｖの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【図８】化合物Ｖの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【図９】化合物ＶＩＩＩの模範的な合成スキームを図式化する図である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
定義
本明細書において使用される、「有効量」という用語は、有益または所望の結果をもたらすのに十分な、活性組成物（例えば脂質製剤中の成分として提供される医薬化合物または組成物）の量を指す。有効量は、１回以上の投与、塗布、または用量で投与され得、特定の製剤または投与経路に限定されることは意図しない。
【００６０】
本明細書において使用される、薬剤、組成物、または化合物を参照して使用される、「活性な」または「医薬的に活性な」という用語は、投与または塗布により、有益な、所望の、または期待される結果をもたらす、薬剤を指す。投与は、１回以上の投与、塗布、または用量であってもよく、特定の製剤または投与経路に限定されることは意図しない。該用語は、活性のいずれの特定レベルにも限定されない。
【００６１】
「薬剤」および「化合物」という用語は、本明細書において置き換え可能に使用され、帰属特性を有する任意の原子、分子、混合物、またはより複雑な組成物を指す。例えば、「活性薬剤」または「活性化合物」は、投与または塗布により、有益な、所望の、または期待される結果をもたらす、任意の原子、分子、調合剤、混合物等を指す。
【００６２】
本明細書において使用される、「投与」という用語は、薬物、プロドラッグ、もしくは他の活性薬剤、または治療的処置（例えば本発明の組成物）を、生理系（例えば対象またはインビボ、インビトロ、もしくはエキソビボの細胞、組織、および器官）に与える行為を指す。人体への投与の模範的な経路は、眼（眼科）、口（経口）、皮膚（経皮）、鼻（経鼻）、肺（吸入）、直腸、膣、口腔粘膜（口腔）、耳、注射（例えば静脈、皮下、腫瘍内、腹腔内等）等を介してであり得る。投与は、１回以上の投与、塗布、または用量であってもよく、特定の投与経路に限定されることは意図しない。
【００６３】
本明細書において使用される、「同時投与」という用語は、対象への少なくとも２つの薬剤（例えば異なる活性化合物を含有する、２つの別個の脂質組成物）または療法の投与を指す。一部の実施形態において、２つ以上の薬剤または療法の同時投与は、同時である。他の実施形態において、第１の薬剤／療法は、第２の薬剤／療法の前に投与される。当業者は、使用される様々な薬剤または療法の、製剤および／または投与経路は異なり得ることを理解する。同時投与に適した用量は、当業者には容易に決定され得る。一部の実施形態において、薬剤または療法が同時投与される場合、それぞれの薬剤または療法は、それらの単独投与に適したものよりも、低用量で投与される。したがって、同時投与は、薬剤または療法の同時投与が、潜在的に有害な（例えば有毒）薬剤の必須用量を低減する実施形態において特に望ましい。
【００６４】
本明細書において使用される、「有毒」という用語は、毒物の投与前の同一細胞または組織と比較して、対象、細胞、または組織に対する任意の悪影響または有害な影響を指す。
【００６５】
本明細書において使用される、「医薬組成物」という用語は、組成物を、特にインビトロ、インビボ、またはエキソビボの診断または治療的使用に適するようにする、活性薬剤（例えば活性医薬化合物）と、不活性または活性の担体（例えばリン脂質）との組み合わせを指す。
【００６６】
本明細書において使用される、「医薬的に許容される」または「薬理学的に許容される」という用語は、対象に投与される際、薬害反応、例えば毒性、アレルギー、または免疫学的反応を、実質的に発生しない、組成物を指す。
【００６７】
本明細書において使用される、「局所的に」という用語は、本発明の組成物の、皮膚の表面、ならびに粘膜細胞および組織（例えば歯槽、口腔、舌、咀嚼、あるいは鼻粘膜、および中空器官もしくは体腔の内側を覆う他の組織および細胞）への塗布を指す。
【００６８】
本明細書において使用される、「医薬的に許容される担体」という用語は、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン（例えば油／水または水／油エマルジョン等）、および様々な種類の湿潤剤、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、ラウリル硫酸ナトリウム、等張剤および吸収遅延剤、崩壊剤（例えばジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）等を含む、標準的な医薬担体のうちのいずれかを指すが、それらに限定されない。本組成物は、安定剤および保存料もまた含み得る。担体、安定剤、およびアジュバントの実施例については、（例えばＭａｒｔｉｎ，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １５ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  （１９７５）を参照されたく、参照により本明細書に組み込まれる）。さらに、特定の実施形態において、本発明の組成物は、園芸または農業利用向けに配合され得る。そのような配合には、浸液、散布剤、種子粉衣、茎部注入、散布剤、およびミストを含む。
【００６９】
本明細書において使用される、「医薬的に許容される塩」という用語は、標的対象（例えば哺乳動物の対象、および／またはインビボもしくはエキソビボの細胞、組織、または器官）において生理学的に耐容され得る、本発明の化合物の（例えば酸または塩基との反応により得られる）いずれかの塩を指す。本発明の化合物の「塩」は、無機または有機酸もしくは塩基から得られ得る。酸の実施例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等を含むが、それらに限定されない。シュウ酸等の他の酸は、それ自体では医薬的に許容されないが、本発明の化合物およびそれらの医薬的に許容される酸付加塩を得る上で、中間体として有用な、塩の調製において用いられ得る。
【００７０】
塩基の例には、アルカリ金属（例えばナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）水酸化物、アンモニア、およびＷがＣ１−４アルキルである、式ＮＷ４＋の化合物等を含むが、それらに限定されない。
【００７１】
塩の実施例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩（ｆｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモン酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、ウンデカン酸塩等を含むが、それらに限定されない。塩の他の実施例は、Ｎａ＋、ＮＨ４＋、およびＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１−４アルキル基）等の好適な陽イオンと化合した、本発明の化合物の陰イオンを含む。治療的使用向けに、本発明の化合物の塩は、医薬的に許容されるものとして、企図される。しかしながら、医薬的に許容されない酸および塩基の塩は、例えば、医薬的に許容される化合物の調製または精製においてもまた、その使用を見出し得る。
【００７２】
治療的使用向けに、本発明の化合物の塩は、医薬的に許容されるものとして、企図される。しかしながら、医薬的に許容されない酸および塩基の塩は、例えば、医薬的に許容される化合物の調製または精製においてもまた、その使用を見出し得る。
【００７３】
「ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）」という用語は、低級アルキレンオキサイド、特に、高分子の少なくとも１端にエステル化可能なヒドロキシル基を有するエチレンオキサイド（ポリエチレングリコール）の高分子、ならびにエステル化可能なカルボキシ基を有するそのような高分子の誘導体を含む。２００〜２０，０００の範囲の平均分子量のポリエチレングリコールが好ましく、５００〜２０００の範囲の平均分子量を有するものが、特に好ましい。
【００７４】
発明の簡単な詳細
本発明は、哺乳動物の疾患の治療のための、方法および組成物、ならびにその使用に関する。より具体的には、本発明は、上述の医薬的に活性なリン脂質、それらの類似体および変異体、ならびにそれらを含有する組成物の合成および使用に関し、概して、記憶増強薬、ならびに癌の一般の予防または治療として、コレステロールの低下および体重減少の治療、抗白血病効果、皮膚疾患、ウイルス感染の治療に関する。本方法により調製される医薬的に活性なリン脂質は、疎水性または親水性薬物等の、他の活性薬剤をも含み得る、リポソーム、および複合体、エマルジョン、ベシクル、ミセル等の他の製剤に組み込まれ得る。そのようなリポソームまたは脂質製剤は、ヒトまたは動物の疾患を治療するために使用され得る。リポソームは、特定の細胞型または特異組織を標的とするための、リガンドもまた含み得る。
【００７５】
疾患は、新組織形成、神経変性疾患、肺疾患、肥満、炎症性疾患、および心臓血管疾患であり得る。より好ましくは、新組織形成は、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である。より好ましくは、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。炎症性疾患としてのアルツハイマー病という概念により、記憶障害の改善における抗炎症剤の使用への関心が増した。本発明は、神経変性および上述の他の疾患の治療に有用であり得る、一連の新規化合物を提供する。
【００７６】
動物実験により、食物脂肪と、腫瘍成長率および転移の重症度との正相関が示された。ヒトにおける栄養分と癌との関連性、特に食物脂肪と、ヒトの結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、および子宮内膜癌の起源との関連が、推測される。腫瘍細胞における脂質合成の速度がかなり急速であることが、認められている。この現象は、急速に分裂する細胞は、ＤＮＡおよびタンパク質の新しいコピーを必要とするだけでなく、リン脂質およびコレステロールから成る新規生体膜の保全も必要とすることから、理解できる。コレステロールの合成経路が、腫瘍細胞の成長のプロモーターとして関係付けられている。他の主要なクラスの脂質、脂肪酸もまた、腫瘍細胞の成長に関与する。実際、多くのヒトおよび実験癌は、上昇したレベルの、内因性脂肪酸生合成を必要とする酵素である脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）を発現する。例えば、多くの乳癌患者から分離された予後の分子は、ＦＡＳと同定された。ＦＡＳの阻害は、乳癌細胞において、クローン原性能力の消失およびプログラム細胞死の誘導へと導く。自然発生のグッグル樹脂のグッグルステロンまたはグッグルステロールの構造は、コレステロールと非常に類似している。本発明のグッグルリン脂質が、リン脂質、脂肪酸、およびコレステロール源として、癌細胞を模倣することが提案される。可能性がある抗癌治療は、（ａ）Ｒａｓの細胞成長および分裂の刺激の不能を導く全てのコレステロール中間体のデノボ合成の遮断、ならびに（ｂ）脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）のための前駆体の供給を減少し、それにより腫瘍細胞増殖を遮断、を含むことが提案される。
【００７７】
本発明は、本発明の組成物のためのリポソーム送達系を提供する。リポソーム製剤は、水溶液中の疎水性薬物の可溶性を高める能力を有する。それらは、しばしば、薬物療法に関連する副作用を軽減する。リポソームは、一般的に、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、およびホスファチジルイノシトール等の自然発生のリン脂質から調製される。ホスファチジルグリセロール等の陰イオン性リン脂質を加えて、コロイド安定化を提供する負の表面電荷を生成することができる。これらのリン脂質は、しばしば、大豆および卵黄等の天然源から精製され、また、同一または異なる脂肪酸（飽和または不飽和）と化学的に合成され得る。
【００７８】
リポソームの表面電荷の性質および密度が、安定性、動態、生体内分布、および相互作用、ならびに標的細胞による摂取に影響を及ぼす。リポソーム表面電荷は、リポソームが機能するのを困難にし、標的細胞による摂取に影響する、リポソームの凝集傾向にもまた影響を及ぼす。したがって、中性の表面電荷を持つリポソームは、最も高い凝集傾向を有するが、全身投与後、細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞により取り除かれる可能性がより少ない。一方、負に荷電したリポソームは、凝集の軽減および安定性の増大を呈し、したがって、インビボの非特異細胞摂取を呈する。したがって、少量の負に荷電した脂質は、凝集依存摂取機構に対して中性リポソームを安定化させ得ることが、示唆されている［Ｄｒｕｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｖ．  ５１，６９１−７４３  （１９９９）；  Ｄ．  Ｃ．  Ｄｒｕｍｍｏｎｄ，  Ｏ．  Ｍｅｙｅｒ，  Ｋ．  Ｈｏｎｇ，  Ｄ．  Ｂ．  Ｋｉｒｐｏｔｉｎ，  Ｄ．  Ｐａｐａｈａｄｇｏｐｏｕｌｏｓ，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｖ．  ５１，６９１−７４３  （１９９９）．］。負に荷電した脂質は、天然または合成的に修飾されたリン脂質であってもよい。本発明は、改善されたリポソーム製剤のための、そのような方法および組成物を提供する。
【００７９】
本発明は、異常な細胞成長、炎症における増殖、コレステロールの低下および体重減少、座瘡罹患等の皮膚疾患、記憶障害、アルツハイマー病、新生物および心臓血管疾患の治療または予防のための、本発明のより定義された医薬的に活性なグッグルリン脂質、および他の生物活性分子の使用に関する。本発明の別の目的は、本発明の医薬的に活性な新規化合物の、可能性のある陽イオン性、または陰イオン性、またはペグ化類似体の、薬物担体としての、使用である。本発明の別の目的は、活性薬剤もしくは薬物を有する、または有さない、組成物における、脂肪酸がコンジュゲートしたグッグルステロンまたはグッグルステロールの使用、ならびにヒトおよび動物の疾患の治療におけるそれらの使用である。脂肪酸は、短鎖または長鎖、飽和または不飽和であってもよい［例えばグッグルミリスチン酸（Ｃ１４：０）、グッグルリノール酸塩（Ｃ１８：３）等］。さらに、本発明の方法は、哺乳動物の疾患に有効な薬物として、または医薬組成物の形態で、発明の化合物を投与するステップを含む。
【００８０】
本発明の合成グッグルリン脂質は、リポソーム、エマルジョン、ミセル、ベシクル、または複合体に、簡便に組み込むことができる。そのようなリポソームは、１つ以上の治療剤もまた含み得る。そのようなリポソームおよび他の製剤は、液体用量の形態、もしくは腸溶コーティングカプセルの中で経口、または静脈注射により与えられ、癌および他の疾患を治療または緩和するために使用され得る。該製剤は、皮膚疾患の治療のためのリポソームリップジェル、軟膏、またはクリームとして、塗布され得る。
【００８１】
本発明の別の目的は、任意の医薬調合剤として、活性に必要な量を、経口、局所、非経口、または他の投与方法で与えられる、本発明の医薬的に活性なグッグルリン脂質および他の生物活性分子の、認知増強効果を開発することである。
【００８２】
本発明の別の目的は、任意の医薬的に許容される製剤中の、本発明の医薬的に活性なグッグルリン脂質および他の生物活性生成物の消費により、高血糖状態の軽減、予防、または抑制方法を開発することである。さらに、グッグルリン脂質は、体重管理、脂肪消失、および脂質異常特性のための栄養補給剤として、消費され得る。任意の医薬的に許容される製剤において、本発明の生成物は、例えば、リン酸カルシウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム等から成る群から選択される、高繊維のリン酸塩、リポソーム製剤の技術分野において既知の（天然または合成）リン脂質等の、他の賦形剤を伴い、または伴わずに使用され得る。ホスファチジルコリン、好ましくは大豆ホスファチジルコリンまたは水素化大豆ホスファチジルコリンが使用される。ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール等の他のリン脂質もまた、独立して、またはそれらの混合物で、使用してもよい。リン酸塩は、好ましくは、カルシウム、カリウム、およびナトリウム塩の混合物である。体重管理製品は、カプセル、好ましくは腸溶コーティングカプセル、錠剤、軟質ゲルカプセル、エマルジョン、シロップ、食品バー等の形態で投与されてもよい。
【００８３】
本発明の別の実施形態において、本発明の医薬的に活性な生成物は、単独、または他の治療と組み合わせて、アルツハイマー病およびコルサコフ病等のヒトの記憶機能障害を罹患する患者の治療のために使用する。本発明の化合物は、神経変性疾患、好ましくは、アルツハイマー病の治療において、新規戦略を提供する。
【００８４】
本発明の別の目的は、例えば、一部の一般的な真菌性皮膚状態、および概して真皮の機能障害のような、感染した皮膚の治療のための、状態の改善方法を開発することである。
【００８５】
本発明の別の目的は、任意の医薬的に許容される製剤の本発明の新規生成物を消費することにより、ＨＩＶ、異常な細胞成長、炎症における増殖、新組織形成、および心臓血管疾患の軽減、予防、または抑制方法を開発することである。
【００８６】
本発明の重要な目的のうちの１つは、癌の予防および治療である。多くの動物実験により、食物脂肪と、腫瘍成長率および転移の重症度との明確な正相関が示された。腫瘍細胞における脂質合成が、かなり急速であることは周知である。この現象は、急速に分裂する細胞は、ＤＮＡおよびタンパク質の新しいコピーを必要とするだけでなく、リン脂質およびコレステロールから成る新規生体膜の保全も必要とすることから、理解できる。他の主要な脂質のクラスである、脂肪酸もまた、腫瘍細胞の成長に関与する。多くのヒトおよび実験癌は、内因性脂肪酸生合成を必要とする主要な酵素である、上昇したレベルの脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）、を発現する。本新規グッグルリン脂質は、癌細胞におけるプログラム細胞死を誘導し得る。
【００８７】
本発明の一実施形態は、本発明の化合物の合成、およびリポソーム、エマルジョン、ミセル、ベシクル、および複合体でのそれらの使用である。本発明において、「生物活性」は、細胞、より好ましくは、病態に関連する細胞に対する、胞傷害活性、抗増殖活性、および抗酸化活性を指す。好ましくは、該細胞は、異常な細胞成長を呈する。「疾患」とは、新組織形成、神経変性疾患、肺疾患、炎症性疾患、心臓血管疾患、または皮膚疾患を指す。より好ましくは、新組織形成は、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である。より好ましくは、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。本発明の個々の化合物またはその混合物は、医薬組成物に配合され得る。
【００８８】
本発明は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の合成を調節することもまた可能である。本発明の一実施形態は、本発明の生物活性分子によるＶＥＧＦ発現の刺激である。
【００８９】
本発明の全ての生成物（例えば組成物、複合体等）は、当技術分野において周知である、一般的な医薬組成物に組み込むことができる。
【００９０】
発明を実施するための形態
本発明は、一般式Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＩ〜ＸＩ（図１、２）を有する、医薬的に活性なグッグルリン脂質、それらの脂肪酸類似体、および他の生物活性分子を産生および使用するための、新規かつ斬新な合成方法を提供する。本組成物は、ヒトおよび動物における、異常な細胞成長、炎症における増殖、コレステロールの低下および体重減少、皮膚疾患、記憶障害、アルツハイマー病、新生物および心臓血管疾患を含む状態の予防または治療に有用であるが、それらに限定されない。本発明は、認知機能障害、高血糖症、ウイルスおよび皮膚感染を予防または抑制するためのそれらの使用もまた、提供する。本発明は、これらの医薬的に活性な分子、およびそれらを含有する組成物の合成方法および使用について記載する。
【００９１】
式ＩＩＩおよびＩＶにおいて、Ｒ１は、１から３４個の炭素原子を有する、飽和または不飽和アシルまたはアルキル基である。式Ｖにおいて、Ｒ１またはＲ２のうちの少なくとも１つは、好ましくは、１から３４個の炭素原子を有する、飽和または負飽和アシル基またはアルキル基である。好ましい実施形態において、式Ｖ中、Ｒ１およびＲ２は同一であり、Ｃ１からＣ３４の飽和および／または不飽和アシルまたはアルキル基を含み、好ましくは、６から２４個の炭素原子、より好ましくは、１２から２４個の炭素原子である。
【００９２】
「アルキル」という用語は、飽和または不飽和の直鎖および分枝鎖炭化水素分子を包含する。「置換アルキル」という用語は、ヒドロキシル、（低級アルキル基の）アルコキシ、（低級アルキル基の）メルカプト、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、（低級アシルの）オキシアシル、カルボキシル等から選択される、１つ以上の置換基をさらに持つ、アルキル基を含む。
【００９３】
「アシル」という用語は、飽和または不飽和の直鎖および分枝脂肪酸鎖を包含する。「置換アシル」という用語は、ヒドロキシル、（低級アルキル基の）アルコキシ、（低級アルキル基の）メルカプト、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈアシル、（低級アシルの）オキシアシル、カルボキシル等から選択される、１つ以上の置換基をさらに持つ、アシル基を含む。式ＩＶ〜Ｘにおいて、Ｘは、水素、メチル、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオン、または任意の非毒性イオン、より好ましくは、水素、ナトリウム、またはアンモニウムイオンである。式ＶＩにおいて、ＸおよびＹは、同一または異なり、水素、メチル、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウムイオン、または任意の非毒性イオン、より好ましくは、水素、ナトリウム、またはアンモニウムイオンである。
【００９４】
式ＩＶにおいて、Ｒ１は、糖でもあり得る。糖は、アロース、アルトロース、グルコース、フルクトース、マンノース、スクロース、ガラクトース、ソルビトール、グルコサミン、グルクロン酸、タロース、イドース、グロース、リボース、デオキシリボース、アラビノース、キシロース等から成る群から選択されるが、それらに限定されない。
【００９５】
式ＶＩＩＩにおいて、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、同一または異なり、Ｈまたはメチル基である。式ＶＩＩＩは、Ｘがメチル基である、陽イオン性グッグル誘導体である。
【００９６】
式Ｘにおいて、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）基は、ｎが、典型的には、約１から約１０００の間（１から約５００の間等）であるか、あるいは２００〜５０，０００ダルトンの分子量（ＭＷ）を有する化合物を提供するように異なり得る、エチレンオキサイド単位、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から成る長鎖の線状または分岐合成高分子である。
【００９７】
式ＸＩにおいて、薬物は、直接またはリンカーを介して連結される、治療上活性な薬剤であり得る。
【００９８】
式ＸＩＩは、陽イオン性グッグル誘導体であり、式中、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、同一または異なり、水素、メチル、アルキル、置換アルキル、アルキルオキシ、置換アルキルオキシ基であり、全体的に正電荷を有し、任意でヒドロキシル化、アミノ化、またはポリアミノ化される。
【００９９】
本発明におけるグッグル誘導体（ＩＩＩ、ＸＩＩ）、グッグルリン脂質（ＩＩＩ−Ｘ）、およびグッグル薬物コンジュゲート体（ＸＩ）は、いずれの形態の幾何異性体でもあり得る。例えば、式ＩＩＩ〜ＸＩＩは、Ｅ異性体、またはＺ異性体、またはＥおよびＺ異性体の混合物の形態であり得る。本発明における式ＩＩＩ〜ＸＩＩは、また、光学的に純粋であるか、または光学異性体の混合物であり得る。
【０１００】
本発明の一実施形態を、図１に説明し、それは、グッグルステロール（ＩＩＡ）から出発する、グッグル誘導体（ＩＩＩ、ＸＩＩ）、グッグルリン脂質ＩＶ〜Ｘ、およびグッグル薬物コンジュゲート体（ＸＩ）の合成の新規手法を示す。式ＩＩＩ〜ＸＩＩのグッグル誘導体、グッグルリン脂質、およびグッグル薬物コンジュゲート体は、任意の望ましい方法により調製することができ、本発明は、グッグル誘導体、グッグルリン脂質、およびそれらの類似体の調製方法を提供する。本発明における、グッグルステロールＩＩＡから化合物ＩＩＩ〜ＸＩＩを調製する方法は、単一ステップで、または一連の多くのステップで行われ得る。
【０１０１】
発明の方法によれば、本発明の式ＩＩＩのグッグル誘導体は、好適な溶媒中の塩基の存在下で、グッグルステロールＩＩＡと塩化アシルとの反応により、調製され得る。塩基の具体的な例には、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ブチルアミン等を含むが、それらに限定されない。好適な溶媒の実施例は、ピリジン、トリエチルアミン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、ヘキサン、１，２−ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等を含むが、それらに限定されない。
【０１０２】
本発明の別の方法は、好適な溶媒中で、Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下、グッグルステロールＩＩＡを、脂肪酸およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）と反応させることによる、式ＩＩＩのグッグル誘導体の調製方法を伴う。好適な溶媒の実施例は、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，２−ジクロロエタン、ベンゼン、トルエン、ピリジン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等を含むが、それらに限定されない。
【０１０３】
本発明の別の実施形態は、グッグルステロールＩＩＡを、塩基（例えばＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、不活性溶媒（例えばジクロロメタン等）中で、ホスホルアミダイト試薬と、次に、１Ｈ−テトラゾール等の活性剤の存在下、アルコール（ＲＯＨ）と反応させ、その後、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド等による酸化による、式ＩＶのグッグルリン脂質の調製方法を伴う。脱保護は、リン酸基に存在する保護基に応じて選択される、任意の好適な方法により、達成することができる。例えば、メチル基は、ヨウ化ナトリウムまたはトリメチルアミンで除去することができ、ベンジル基は、ヨウ化ナトリウムまたは接触水素化分解で除去することができ、シアノエチルおよびフルオレニルメチル基は、トリエチルアミン等の第３級塩基での処理により、シリル基は、フッ化物イオンまたは酸性媒質で脱保護され得る。
【０１０４】
本発明における好適なホスホルアミダイト試薬の実施例には、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホルアミドクロライド（Ｂｒｕｚｉｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｔｅｔ．  Ｌｅｔｔ．  １９９５，  ３６，  ２４１５−２４１８、（ベンジルオキシ）（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィン（例えばＰｒｅｓｔｗｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １９９１，  １１３，  １８２２−１８２５を参照）、ベンジルオキシビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィン（例えばＤｒｅｅｆ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  １９８８，  ２９，  ６５１３−６５１６を参照）、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトライソプロピルホスホルアミダイト（例えばＢｒｏｗｎｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．  １．  を含むが、それらに限定されない。
【０１０５】
本発明における他の好適なリン酸化試薬の例には、２−ブロモエチルジクロロリン酸塩（Ｗｉｓｓｎｅｒ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  １９８６，  ２９，  １３１５−１３１９）、トリメチルシリルエチルジクロロリン酸塩（Ｍａｒｔｉｎ，  Ｓ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  １９９４，  ５９，  ４８０５−４８２０）、メチルジクロロリン酸塩（Ａｎｄｒｅｓｅｎ，  Ｔ．Ｌ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００５，  ４８，  ７３０５−７３１４）、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（Ｍａｒｘ，  Ｍ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  １９８８，  ３１，  ８５８−８６３）、２−クロロフェニルジクロロリン酸塩、オキシ塩化リン（Ａｎｄｒｅｓｅｎ，  Ｔ．  Ｌ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００４，  ４７，  １６９４−１７０３）を含むが、それらに限定されない。
【０１０６】
好適なアルコールの例には、Ｒが、１から３４個の炭素原子を有する、飽和または不飽和アシルまたはアルキル基である、式ＲＯＨのアルコールを含むが、それに限定されない。「アルキル」という用語は、飽和または負飽和の直鎖および分枝鎖炭化水素分子を包含する。「置換アルキル」という用語は、ヒドロキシル、（低級アルキル基の）アルコキシ、（低級アルキル基の）メルカプト、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、アミド、イミノ、チオ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アシル、（低級アシルの）オキシアシル、カルボキシル等から選択される、１つ以上の置換基をさらに持つ、アルキル基を含む。
【０１０７】
本発明の別の実施形態は、グッグルステロールＩＩＡを、塩基（例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、不活性溶媒（例えばジクロロメタン等）中で、ホスホルアミダイト試薬と、次に、例えば１Ｈ−テトラゾール等の活性剤の存在下、１，２−二置換グリセロールと反応させ、その後、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド等による酸化による、式Ｖのグッグルリン脂質の調製方法を伴う。脱保護は、リン酸基に存在する特定の保護基に応じて、任意の好適な方法により、達成することができる。脱保護方法は、当業者には周知である。例えば、メチル基は、ヨウ化ナトリウムまたはトリメチルアミンで除去することができ、ベンジル基は、ヨウ化ナトリウムまたは接触水素化分解で除去することができ、シアノエチルおよびフルオレニルメチル基は、トリエチルアミン等の第３級塩基での処理により、そしてシリル基は、フッ化物イオンまたは酸性媒質で脱保護され得る。代替として、１，２−二置換グリセロールは、まずホスホルアミダイト試薬と、そしてその後グッグルステロールＩＩＡと反応させてもよい。
【０１０８】
式ＩＶおよびＶの調製のための本発明の別の方法は、それぞれ、アルコール（ＲＯΗ）または１，２−二置換グリセロールを、ｏ−クロロフェニルジクロロリン酸塩（ＣＰＤＣＰ）、そしてその後（例えば、ピリジン等）の塩基の存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタン等）中でグッグルステロールＩＩＡと反応させ、それぞれの中間体を提供することを伴う。ｏ−クロロフェニルの除去は、それぞれＩＶおよびＶを得るために、それぞれの中間体を、２−ピリジンアルドキシム（ＰＡＯ）および１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（ＴＭＧ）と反応させることにより達成することができる。２−ピリジンアルドキシム（ＰＡＯ）に加えて、ＴＭＧ存在下の２−ニトロベンズアルドキシム等の他の試薬を、ｏ−クロロフェニル基の除去のために使用することができる。
【０１０９】
式ＩＶおよびＶの調製のための本発明の別の方法は、それぞれアルキルホスファチジン酸または１，２−二置換−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸を、１，２−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、そしてその後（例えばジメチルアミノピリジン、ＤＭＡＰ）の塩基の存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタン等）中でグッグルステロールＩＩＡと反応させ、それぞれＩＶおよびＶを提供することを伴う。ＩＶおよびＶの異なる塩を、適切な塩基で処理することにより、得ることができる。例えば、希釈水酸化ナトリウムでの処理は、ＩＶおよびＶのナトリウム塩を提供し、希釈水酸化カリウムは、式ＩＶおよびＶのカリウム塩を提供し、希釈水酸化アンモニウムは、式ＩＶおよびＶのアンモニウム塩を提供する。
【０１１０】
式ＶＩのグッグルリン酸塩を調製するさらに別の方法は、グッグルステロールＩＩＡを、好適な溶媒（ジクロロメタン等）中で、塩基（例えば、ピリジン等）の存在下、オキシ塩化リンと反応させ、その後、水で処理することによってであり得る。ＶＩの異なる塩を、適切な塩基で処理することにより、得ることができる。例えば、希釈水酸化ナトリウムでの処理は、ＶＩのナトリウム塩を提供し、希釈水酸化カリウムは、式ＶＩのカリウム塩を提供し、希釈水酸化アンモニウムは、式ＶＩのアンモニウム塩を提供する。
【０１１１】
本発明の別の実施形態において、式ＶＩＩの硫酸グッグルは、グッグルステロールＩＩＡを、好適な溶媒（ジクロロメタン等）中で、塩基（例えば、ピリジン等）の存在下、クロロスルホン酸と反応させることにより、合成される。ＶＩＩの異なる塩を、適切な塩基で処理することにより、得ることができる。例えば、希釈水酸化ナトリウムでの処理は、ＶＩＩのナトリウム塩を提供し、希釈水酸化カリウムは、式ＶＩＩのカリウム塩を提供し、水酸化アンモニウムの希釈液は、式ＶＩＩのアンモニウム塩を提供する。
【０１１２】
本発明の別の実施形態において、式ＶＩＩＩ（Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５＝Ｈ）のグッグルリン脂質は、グッグルステロールＩＩＡを、不活性溶媒（例えばテトラヒドロフラン等）中で、塩基（例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、トリメチルシリルエチルジクロロリン酸塩と、次にＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エタノールアミンと反応させ、その後ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド等による酸化により、調製される。ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基およびトリメチルシリルエチル基の脱保護は、酸性条件下（例えばトリフルオロ酢酸等と）で行われ得る。
【０１１３】
本発明における式ＶＩＩＩ（Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５＝Ｈ）を調製するさらに別の方法は、グッグルステロールＩＩＡを、不活性溶媒中で塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下、メチルジクロロリン酸塩と反応させ、その後Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エタノールアミンと反応させるステップを伴う。リン酸塩メチル基の脱保護は、ヨウ化ナトリウムまたはトリメチルアミンを用いて達成することができる。
【０１１４】
本発明の別の実施形態は、本発明の式ＶＩＩＩ（Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５＝ＣＨ３）の調製方法を伴い、グッグルステロールＩＩＡを、塩基（例えばトリエチルアミンまたはピリジン等）の存在下、２−ブロモエチルクロロリン酸塩と反応させ、その後、クロロホルム等の好適な溶媒中で、トリメチルアミンで処理することにより、合成され得る。
【０１１５】
式ＶＩＩＩ（Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５＝ＣＨ３）の別の調製方法は、グッグルステロールＩＩＡを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホランと反応、そしてその後、不活性溶媒（例えばアセトニトリル等）中でトリメチルアミンと反応させることを伴う。
【０１１６】
ＶＩＩＩ（Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５＝ＣＨ３）を調製するさらに別の方法は、グッグルステロールＩＩＡを、塩基（例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、不活性溶媒（例えばジクロロメタン等）中でホスホルアミダイト試薬と、次に１Ｈ−テトラゾール等の活性剤の存在下、塩化コリンと反応させ、その後ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド等による酸化を伴う。脱保護は、リン酸基に存在する保護基に応じて、任意の好適な方法により、達成することができる。例えば、メチル基は、ヨウ化ナトリウムまたはトリメチルアミンで除去することができ、ベンジル基は、ヨウ化ナトリウムまたは接触水素化分解で除去することができ、シアノエチルおよびフルオレニルメチル基は、トリエチルアミン等の第３級塩基での処理により、シリル基は、フッ化物イオンまたは酸性媒質で脱保護され得る。
【０１１７】
本発明の式ＶＩＩＩは、グッグルステロールＩＩＡが、塩基（例えばトリエチルアミン等）の存在下、オキシ塩化リンと、そしてその後ピリジン等の好適な溶媒中でコリントシル酸塩と反応される、別の調製方法により、得ることができる。
【０１１８】
本発明の式ＩＸのグッグルリン脂質を調製する方法は、グッグルステロールを、不活性溶媒（例えばジクロロメタン等）中で塩基（例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、ホスホルアミダイト試薬と反応させ、その後１，２−イソプロピリデングリセロールと反応させることを伴う。イソプロピリデン基は、後に酸性条件（ＨＣｌ等）下で除去することができるが、リン酸塩上の保護基は、リン酸基に存在する保護基に応じて、任意の好適な方法により、達成することができる。例えば、メチル基は、ヨウ化ナトリウムまたはトリメチルアミンで除去することができ、ベンジル基は、ヨウ化ナトリウムまたは接触水素化分解で除去することができ、シアノエチルおよびフルオレニルメチル基は、トリエチルアミン等の第３級塩基での処理により、シリル基は、フッ化物イオンまたは酸性媒質で脱保護され得る。
【０１１９】
本発明の式Ｘは、グッグルステロールＩＩＡを、不活性溶媒中で塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下、メチルクロロリン酸塩と反応させ、その後Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）エタノールアミンと反応させて、その後にｍＰＥＧ−スクシンイミジル炭酸塩（ＳＣ−ＰＥＧ）と反応させた中間体を提供して、調製される。リン酸塩メチル基の脱保護は、ヨウ化ナトリウムまたはトリメチルアミンを用いて達成することができる。
【０１２０】
本発明の別の実施形態は、薬物を直接またはリンカーを介してグッグルステロールとコンジュゲートさせることにより、プロドラッグとしての式ＸＩを有するグッグル−薬物コンジュゲートを調製することである。
【０１２１】
本発明のさらに別の実施形態は、グッグルステロールＩＩＡまたはグッグルステロンＩから、式ＶＩＩＩ（Ｘ＝メチル基）およびＸＩＩを有する、陽イオン性グッグル誘導体（正に荷電したグッグル誘導体）を調製することである。
【０１２２】
本発明におけるグッグルステロールは、商業的に得るか、あるいは文献の手順により、合成することができる。本発明におけるグッグルステロールは、純粋な異性体または異性体の混合物であり得る。例えば、グッグルステロールは、Ｚグッグルステロール、またはＥグッグルステロール、またはＥグッグルステロールとＺグッグルステロールとの混合物であり得る。グッグルステロールは、光学的に純粋であるか、または光学異性体の混合物であり得る。
【０１２３】
本発明の別の実施形態を、図２に示し、そこでは、グッグルステロンＩから出発してグッグルステロールが合成される。好適な溶媒（例えば塩化メチレン、テトラヒドロフラン等）中で、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ）で還元中のグッグルステロンＩが、ＩＩＡ、ＩＩＢ、またはＩＩＡおよびＩＩＢの混合物を提供する。還元中、ある程度の量の式ＩＩＣ、ＩＩＤ、ＩＩＥ、およびＩＩＦが、ＩＩＡおよびＩＩＢに加えて、微量生成物として形成されると考えられる。化合物ＩＩＡは、カラムクロマトグラフィーにより分離することができる。化合物ＩＩＥは、ジクロロメタン等の好適な溶媒中で、例えば二酸化マンガン（ＭｎＯ２）等の好適な酸化剤でさらに酸化することにより、化合物ＩＩＡ、ＩＩＢ、またはＩＩＡおよびＩＩＢの混合物を提供する。
【０１２４】
本発明の別の実施形態を、図２に示し、そこでは、グッグルステロンＩから出発してグッグルステロールが合成される。好適な溶媒（例えば、塩化メチレン、テトラヒドロフラン等）中で、水素化アルミニウムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムで還元中のグッグルステロンＩが、ＩＩＡ、ＩＩＢ、またはＩＩＡおよびＩＩＢの混合物を提供する。還元中、ある程度の量の式ＩＩＣ、ＩＩＤ、ＩＩＥ、およびＩＩＦが、ＩＩＡおよびＩＩＢに加えて、微量生成物として形成されると考えられる。化合物ＩＩＡは、カラムクロマトグラフィーにより分離することができる。化合物ＩＩＥは、ジクロロメタン等の好適な溶媒中で、例えば二酸化マンガン（ＭｎＯ２）等の好適な酸化剤でさらに酸化することにより、化合物ＩＩＡ、ＩＩＢ、またはＩＩＡおよびＩＩＢの混合物を提供する。
【０１２５】
「プロドラッグ」という用語は、代謝的変換により活性薬剤に変換される、薬理学的に不活性な化合物として定義される。その目的は、本薬物を（そのプロドラッグに）化学的に改変して、一時的に不活性にすることである。インビボで、酵素の作用を介して、このプロドラッグが分解し、それにより、活性素（ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）を解放する。ほとんどの場合、思慮深く選択された化学基は、活性素に共有結合される。この基は、しばしば、プロドラッグの可溶性、その安定性、活性素およびその変換に必要とされる特定の酵素を解放する速度をつかさどる（Ｍａｌｅｔ−Ｍａｒｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．−  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ，  ２００２，  ２，  ２６７−３１０）。
【０１２６】
「リンカー」という用語は、本明細書において、脂質担体および生物学的に活性なヌクレオシドと共有結合するための、１つ以上の官能基を含有する基または鎖として定義される。好ましい実施形態は、少なくとも２つの官能基を有するリンカーを含み、リンカーは、第１端および第２端を有し、脂質は、第１のリンカー官能基を介してリンカーの第１端に付着され、ヌクレオシドは、第２のリンカー官能基を介してリンカーの第２端に付着される。これらの基は、リンカー官能基が、リンカーと、脂質担体または生物学的に活性なヌクレオシドのいずれかとの間に形成する、共有結合の安定性に基づき、強いまたは弱い基のいずれかとして指定され得る。弱い官能基には、ホスホルアミダイト、リン酸エステル（リン酸ジエステル、リン酸トリエステル、およびホスホン酸塩等）、炭酸塩、アミド、カルボキシル−ホスホリル無水物、エステル、およびチオエステルが含まれるが、それらに限定されない。強い官能基には、エーテル、チオエーテル、アミン、アミド、およびエステルが含まれるが、それらに限定されない。リンカーとヌクレオシドとの間の強いリンカー官能基の使用は、本化合物がインビボで放出される速度を減少させる傾向にあるが、リンカーとヌクレオシドとの間の弱いリンカー官能基の使用は、本化合物のインビボ放出を促進するように機能し得る。好ましい実施形態において、第１および第２の官能リンカー基のそれぞれは、ヒドロキシル基、第１級または第２級アミノ基、リン酸基またはその置換誘導体、カルボン酸、炭酸塩、カルバミン酸塩、またはカルボニル基である。本明細書における「リンカー」は、いずれかの端の官能基に加えて、中央に、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルバミン酸塩、アルデヒド、アミノ、ハロ、ポリアルコキシ、ＰＥＧ基、リン酸塩、ホスホン酸塩、およびピロリン酸基等の官能基で任意に置換される、（ＣＨ２）ｎ基（式中、ｎ＝０〜２０）もまた含む。
【０１２７】
本発明の方法を使用して、様々な長さおよび飽和／不飽和の脂肪酸／アルキル鎖を含む、医薬的に活性なグッグルリン脂質、それらの陽イオン性または陰イオン性類似体、それらの脂肪酸類似体、および変異体を調製することができる。リン脂質の一般構造は、脂肪酸炭化水素鎖およびカルボン酸基を含む。概して、脂肪酸炭化水素鎖の長さは、炭素約２から約３４個の範囲であり、飽和または不飽和であり得る。しかしながら、炭素鎖は、より典型的には、約４炭素から約２４炭素原子である。一部の実施形態において、炭化水素鎖は、例えば、少なくとも６個の炭素原子、または少なくとも約１２個の炭素原子、または少なくとも約１４個の炭素原子を含むことが望ましい。典型的には、脂肪酸炭化水素の長さは、炭素原子約２４個未満、またはさらに炭素原子約２０個未満である。実際、中間の長さの脂肪酸／アルキル鎖を含有する本発明の類似体もまた、本発明の方法により、調製することができる。
【０１２８】
本発明において使用される「リン酸保護基」という用語は、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ３  ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９９）により記載される、一般的に使用される保護基を指す。そのような保護基には、メチル、エチル、シクロヘキシル、ｔ−ブチルを含むアルキルリン酸塩、２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−（メチルジフェニルシリル）エチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（トリフェニルシリル）エチルを含む、２−置換エチルリン酸塩、２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリブロモエチル、２，２，２−トリフルオロエチルを含む、ハロエチルリン酸塩、４−クロロベンジル、フルオレニル−９−メチル、ジフェニルメチル、およびアミデートを含む、ベンジルリン酸塩を含む。
【０１２９】
リン脂質脂肪酸は、典型的には、炭化水素鎖（不飽和）中の２重または３重結合の数により分類される。飽和脂肪酸は、２重または３重結合を一切含まず、鎖内のそれぞれの炭素が、最大数の水素原子に結合する。脂肪酸の不飽和度は、炭化水素鎖中の２重または３重結合の数に依存する。この点について、１価不飽和脂肪酸は、１つの２重結合を含むが、多価不飽和脂肪酸は、２つ以上の２重結合を含む［例えばＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｒｅｖ  ．ｅｄ．，  Ａ．Ｄ．  Ｓｍｉｔｈ  （ｅｄ．），  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  （２０００）、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｂ．Ａ．Ａｌｂｅｒｔｓ（ｅｄ），  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９４）］。様々な鎖長および不飽和度の脂肪酸を使用して、本発明の化合物を調製することができる。好ましい脂肪酸は、炭素鎖長約２から３４個、好ましくは炭素約４から約２４個、またはさらに炭素原子約２０未満の範囲であり、テトラン酸（Ｃ４：０）、ペンタン酸（Ｃ５：０）、ヘキサン酸（Ｃ６：０）、ヘプタン酸（Ｃ７：０）、オクタン酸（Ｃ８：０）、ノナン酸（Ｃ９：０）、デカン酸（Ｃ１０：０）、ウンデカン酸（Ｃ１１：０）、ドデカン酸（Ｃ１２：０）、トリデカン酸（Ｃ１３：０）、テトラデカン（ミリスチン）酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、ヘキサデカン（パルミチン）酸（Ｃ１６：０）、ヘプタデカン酸（Ｃ１７：０）、オクタデカン（ステアリン）酸（Ｃ１８：０）、ノナデカン酸（Ｃ１９：０）、エイコサン（アラキジン）酸（Ｃ２０：０）、ヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）、ドコサン（ベヒニン（ｂｅｈｉｎｉｃ））酸（Ｃ２２：０）、トリコサン酸（Ｃ２３：０）、テトラコサン酸（Ｃ２４：０）、１０−ウンデカン酸（Ｃ１１：１）、１１−ドデカン酸（Ｃ１２：１）、１２−トリデカン酸（Ｃ１３：１）、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、１０−ペンタデカン酸（Ｃ１５：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、エイコセン酸（Ｃ２１：１）、エイコサジエン酸（Ｃ２０：２）、エイコサトリエン酸（Ｃ２０：３）、アラキドン酸（ｃｉｓ−５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸）、およびｃｉｓ−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸を含む。他の名称の脂肪酸もまた、使用することができる。そのような例には、エタン（または酢）酸、プロパン（またはプロピオン）酸、ブタン（または酪）酸、ヘキサコサン（またはセロチン）酸、オクタコサン（またはモンタン）酸、トリコンタン（ｔｒｉｃｏｎｔａｎｏｉｃ）（またはメリシン）酸、ドトリアコンタン（ｄｏｔｒｉｃｏｎｔａｎｏｉｃ）（またはラッセル（ｌａｃｃｅｒｏｉｃ））酸、テトラトリコンタン（ｔｅｔｒａｔｒｉｃｏｎｔａｎｏｉｃ）（またはゲダ）酸、ペントラトリコンタン（ｐｅｎｔａｔｒｉｃｏｎｔａｎｏｉｃ）（またはセロプラスチン（ｃｅｒｏｐｌａｓｔｉｃ））酸等の飽和脂肪酸、ｔｒａｎｓ−２−ブテン（またはクロトン）酸、ｃｉｓ−２−ブテン（またはイソクロトン）酸、２−ヘキセン（またはイソヒドロソルビン（ｉｓｏｈｙｄｒｏｓｏｒｂｉｃ））酸、４−デカン（またはオブツシリン）酸、９−デカン（またはカプロレイン（ｃａｐｒｏｌｅｉｃ））酸、４−ドデセン（またはリンデン（ｌｉｎｄｅｒｉｃ））酸、５−ドデセン（またはデンチセチン）酸、９−ドデセン（ラウロレイン）酸、４−テトラデセン（またはツズ）酸、５−テトラデセン（またはフィゼテリン）酸、６−オクタデセン（またはペトロセレン）酸、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセン（またはエライジン）酸、ｔｒａｎｓ−１１−オクタデセン（またはバクセン）酸、９−エイコセン（またはガドレイン）酸、１１−ドコセン（またはセトール）酸、１３−デコセン（またはエルカ）酸、１５−テトラコセン（またはネルボン）酸、１７−ヘキサコセン（またはヘキサコセン）酸、２１−トリアコンテン（またはルメクエン）酸，等の１価不飽和脂肪酸、２，４−ペンタジエン（またはβ−ビニルアクリル））酸、２，４−ヘキサジエン（またはソルビン）酸、２，４−デカジエン（またはステリング）酸、２，４−−ドデカジエン酸、９，１２−ヘキサデカジエン酸、ｃｉｓ−９−ｃｉｓ−１２−オクタデカジエン（またはα−リノール）酸、ｔｒａｎｓ−１０−ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカジエン（またはリノレアイジン）酸、ｔｒａｎｓ−１１−ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカジモン酸、１１，１４−エイコサジエン酸、１３，１６−ドコサジエン酸、１７，２０−ヘキサコサジエン酸等のジエン不飽和脂肪酸、６，１０，１４−ヘキサデカトリエン（またはヒラゴン）酸、７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、ｃｉｓ−６−ｃｉｓ−９−ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン（またはγ−リノール）酸、ｔｒａｎｓ８−ｔｒａｎｓ−１０−ｔｒａｎｓ−１２−オクタデカトリエン（またはβ−カレンデイン）酸、ｃｉｓ−８−ｔｒａｎｓ−１０−ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン（またはβ−カレンデイン）酸、ｃｉｓ−８−ｔｒａｎｓ−１０−ｃｉｓ−１２−オクタデカトリエン酸、ｃｉｓ−９−ｃｉｓ−１５−オクタデカトリエン（またはα−リノレン）酸、ｔｒａｎｓ−９−ｔｒαｎｓ−１２−ｔｒａｎｓ−ｌ５−オクタデカトリエン（またはα−リノレンエライジン）酸、ｃｉｓ−９−ｔｒａｎｓ−１１−ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン（またはα−エレオステアリン）酸、ｔｒａｎｓ−９−ｔｒａｎｓ−１１−ｔｒａｎｓ−１３−オクタデカトリエン（またはβ−エレオステアリン）酸、ｃｉｓ−９−ｔｒａｎｓ−１１−ｃｉｓ−１３−オクタデカトリエン（またはプニカ）酸、５，８，１１−エイコサトリエン酸、８，１１，１４−エイコサトリエン酸等のトリエン不飽和脂肪酸、４，８，１１，１４−ヘキサデカテトラエン酸、６，９，１２，１５−ヘキサデカテトラエン酸、４，８，１２，１５−オクタデカテトラエン（（またはモロクチン）酸、６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、９，１１，１３，１５−オクタデカテトラエン（またはα−またはβ−パリナリン）酸、９，１２，１５，１８−オクタデカテトラエン酸、４，８，１２，１６−エイコサテトラエン酸、６，１０，１４，１８−エイコサテトラエン酸、４，７，１０，１３−ドコサテトラエン酸、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、８，１２，１６，１９−ドコサテトラエン酸等のテトラエン不飽和脂肪酸、４，８，１２，１５，１８−エイコサペンタエン（またはティムノドン）酸、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、４，８，１２，１５，１９−ドコサペンタエン（またはクルパノドン）酸、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、４，８，１２，１５，１８，２１−テトラコサヘキサエン（またはニシン）酸等のペンタ−およびヘキサエン不飽和脂肪酸、３メチルブタン（またはイソ吉草）酸、８−メチルドデカン酸、１０−メチルウンデカン（またはイソラウリン）酸、１１−メチルドデカン（またはイソウンデシル）酸、１２−メチルトリデカン（またはイソミリスチン）酸、１３−メチルテトラデカン（またはイソペンタデカン）酸、１４−メチルペンタ−デカン（またはイソパルミチン）酸、１５−メチルヘキサデカン酸、１０−メチルヘプタデカン酸、１６−メチルヘプタデカン（またはイソステアリン）酸、１８−メチルノナデカン（またはイソアラキン）酸、２０−メチルヘネイコサン（またはイソベヘン）酸、２２−メチルトリコサン（またはイソリグノセリン）酸、２４−メチルペンタコサン（またはイソセロチン）酸、２６−メチルヘプタコサン（またはイソモナサン）酸、２，４，６−トリメチルオクタコサン（またはマイコセラニンまたはマイコセロシン）酸、２−メチル−ｃｉｓ−２−ブテン９ンゲリカ）酸、２−メチル−ｔｒａｎｓ−２−ブテン（またはチグリン）酸、４−メチル−ペンテン（またはピロテレビン）酸等の分枝鎖脂肪酸を含む。
【０１３０】
本発明のグッグルリン脂質は、リポソーム、エマルジョン、ミセル、ベシクル、複合体に、簡便に組み込まれ得る。そのようなリポソームは、１つ以上の治療剤もまた含み得る。本発明によるそのような製剤は、任意の好適な技法により調製することができる。本発明は、本発明の新規なグッグルリン脂質または他の生物活性分子を含有する、リポソーム、エマルジョン、ミセル、ベシクル、複合体、または他の脂質製剤の調製方法を提供する。
【０１３１】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、本リポソーム組成物または複合体は、他の脂質もまた含むことが可能であり、例えば、本組成物は、１つ以上の天然または合成リン脂質を含むことができる。リン脂質は、ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、水素化大豆ホスファチジルコリンおよびその混合物、卵ホスファチジルコリン、ジラウリロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジエライドイルホスファチジルコリン、ジアラキドノイルホスファチジルコリンおよび異なるモル比のその混合物、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、ならびにそれらの混合物から成る群から選択される。本発明の新規なグッグルリン脂質は、コレステロールまたはコレステロールの誘導体の代用物としての役目を果たすことができる、グッグルステロンまたはグッグルステロールを含む。代替として、またはさらに、本組成物は、必要であれば、コレステロール、コレステロールの誘導体、コレステリルエステル、コプロスタノール、コレスタノール、コレスタン、ヘミコハク酸コレステロール、コレステロール硫酸、グッグルステロール、およびグッグルステロールの誘導体、硫酸グッグル、グッグルステリルエステル、ならびにそれらの混合物等の、１つ以上のステロールを含むことができる。
【０１３２】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、本リポソーム組成物または複合体は、１つ以上の負に荷電したリン脂質もまた含むことができる。負に荷電したリン脂質は、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ポリ（エチレングリコール）−ホスファチジルエタノールアミン、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン、およびそれらの混合物から成る群から選択される。
【０１３３】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、本リポソーム組成物または複合体は、１つ以上の正電荷脂質もまた含むことができる。本発明の正電荷脂質の実施例には、式ＸＩＩおよびＶＩＩＩ（式中、Ｘはメチル基である）の化合物を含む。本リポソームまたは複合体は、該リポソームまたは複合体が全体的に正味正電荷の脂質を有するような、特定の比率の、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、およびコレステロールもしくはコレステロール誘導体等のリン脂質を、さらに含み得る。
【０１３４】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、本リポソーム組成物または複合体は、その他の成分の中でも特に、安定剤、吸収促進薬、抗酸化剤、生分解性高分子、および医学的に活性な薬剤もまた、含むことができる。一部の実施形態において、本発明の組成物、特にリポソーム組成物が、炭水化物またはタンパク質、あるいは、例えば細胞受容体を認識する、特異的基質に結合する他のリガンド等の、１つ以上の標的化薬剤を含むことが好ましい。炭水化物、または抗体、抗体フラグメント、ペプチド、ペプチドホルモン、細胞受容体に対する抗体等の受容体リガンド、およびそれらの混合物から成るタンパク質の群から選択される、１つ以上のタンパク質等の、薬剤の含有により、リポソームが所定の組織または細胞型を標的とするのを容易にすることが可能である。
【０１３５】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、本リポソーム組成物または複合体は、医薬用途の１つ以上の活性薬剤もまた含むことができる。単一の活性薬剤を含むことが可能であり、あるいは、活性薬剤（例えば２つ以上の活性薬剤）の混合物を、本組成物に含むことも可能である。活性薬剤（または「薬物」）は、任意の好適な様式で、本組成物に存在し得る。例えば、それらは、本組成物中の、本発明の医薬的に活性なグッグルリン脂質およびそれらの類似体との複合体であり得る。さらに、または代替として、本組成物がリポソーム組成物である場合、１つ以上の活性薬剤を、リポソーム内に封入することができる。
【０１３６】
本発明に適合する薬物、活性薬剤、または他の治療剤には、例えば、末梢神経、アドレナリン受容体、コリン作動性受容体、骨格筋、心臓血管系、平滑筋、血管系、シナプス部位、神経効果器機能部位、内分泌系およびホルモン系、免疫系、生殖器系、骨格系、消化器系および排泄系、ヒスタミン系、ならびに中枢神経系に作用する薬剤を含む。好適な薬剤は、例えば、タンパク質、酵素、およびホルモン、ヌクレオチド（センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む）（例えば米国特許第ＵＳ６，１２６，９６５号、２０００）、ポリヌクレオチド、核タンパク質、多糖、糖タンパク質、リポタンパク質、ポリペプチド、ステロイドから選択することができる。活性薬剤は、鎮痛剤、麻酔剤、抗不整脈剤、抗生剤、抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗癌剤、抗凝血剤、
本頁は、意図的に空白とする。
【０１３７】
抗体、サイトキシン、ドキソルビシン、エトポシド、前述のものの誘導体であり得る。本方法により送達され得る薬物のさらなる例には、プロクロルペラジンエディシレート、硫酸鉄、アミノカプロン酸、塩酸メカミラミン、塩酸プロカインアミド、硫酸アンフェタミン、塩酸メタンフェタミン、塩酸ベンザアンフェタミン、硫酸イソプロテレノール、塩酸フェンメトラジン、塩化ベタネコール、塩化メタコリン、塩酸ピロカルピン、硫酸アトロピン、臭化スコポラミン、よう化イソプロパミド、塩化トリジヘキセチル、塩酸フェンフォルミン、塩酸メチルフェニデート、テオフィリンコリネート、塩酸セファレキシン、ジフェニドール、塩酸メクリジン、マレイン酸プロクロルペラジン、フェノキシベンズアミン、マレイン酸チエチルペラジン、アニシンジオン、四硝酸ジフェナジオンエリトリチル、ジゴキシン、イソフルロフェート、アセタゾラミド、メタゾラミド、ベンドロフルメチアジド、クロロプロマイド、トラザミド、酢酸クロルマジノン、フェナグリコドール、アロプリノール、アスピリンアルミニウム、メトトレキサート、アセチルスルフィソキサゾール、エリスロマイシン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチコステロン、酢酸コルチゾン、デキサメサゾンおよびベタメタゾン等のその誘導体、トリアムシノロン、メチルテストステロン、１７−β−エストラジオール、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオール３−メチルエーテル、プレドニゾロン、１７−α−酢酸ヒドロキシプロゲステロン、１９−ノルプロゲステロン、ノルゲストレル、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチエデロン、プロゲステロン、ノルゲステロン、ノルエチノドレル、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、スリンダク、インドプロフェン、ニトログリセリン、硝酸イソソルビド、プロプラノロール、チモロール、アテノロール、アルプレノロール、シメチジン、クロニジン、イミプラミン、レボドパ、クロルプロマジン、メチルドパ、ジヒドロキシフェニルアラニン、テオフィリン、グルコン酸カルシウム、ケトプロフェン、イブプロフェン、セファレキシン、エリスロマイシン、ハロペリドール、ゾメピラク、乳酸鉄、ビンカミン、ジアゼパム、フェノキシベンズアミン、ジルチアゼム、ミルリノン、マンドール、クアンベンズ、ヒドロクロロチアジド、ラニチジン、フルルビプロフェン、フェヌフェン、フルプロフェン、トルメチン、アルクロフェナク、メフェナム、フルフェナム、ジフシナル、ニモジピン、ニトレンジピン、ニソルジピン、ニカルジピン、フェロジピン、リドフラジン、チアパミル、ガロパミル、アムロジピン、ミオフラジン、リジノルプリル、エナラプリル、エナラプリラートカプトプリル、ラミプリル、ファモチジン、ニザチジン、スクラルファート、エチンチジン、テトラトロール、ミノキシジル、クロルジアゼポキシド、ジアゼパム、アミトリプチリン、およびイミプラミンを含む。さらなる実施例は、限定するわけではないが、骨形態形成タンパク質、インスリン、コルヒチン、グルカゴン、甲状腺刺激ホルモン、副甲状腺および下垂体ホルモン、消化ホルモン、カルシトニン、レンニン、プロラクチン、コルチコトロピン、甲状腺刺激ホルモ��、卵胞刺激ホルモン、絨毛性ゴナドトロピン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、ウシ成長ホルモン、含む、タンパク質およびペプチドである。［
概して、ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含むリポソームまたは複合体は、正味の中性、負、または正電荷脂質を有し得る。例えば、正のリポソームは、天然または合成のホスファチジルコリン、コレステロールを伴う、または伴わない、本発明の陽イオン性ホスファチジルコリン、ならびに負電荷がある場合はそれに打ち勝つための十分なステアリルアミンを含有する溶液から形成することができる。負のリポソームは、天然または合成のホスファチジルコリン、コレステロール、およびホスファチジルグリセロール、または本明細書に記載の方法により調製される負に荷電したホスファチジルコリン変異体を含有する溶液から形成することができる。
【０１３８】
本発明のミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含むリポソーム組成物または複合体は、特定の組成物およびそれらの作製手順に応じて、多層または単層ベシクルであってもよい。ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含むリポソームまたは複合体は、約２０ミクロン以下、または約１０ミクロン以下、または約５ミクロン以下、または約１ミクロン以下、または約５００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、または約１００ｎｍ以下等の選択された粒径範囲の、実質的に均質な粒径を有するように調製することができる。効果的な一定寸方法は、リポソームの水性懸濁液を、選択された均一な細孔径を有する一連のポリカーボネート膜に通す押出を伴い、該膜の細孔径は、その膜を通る押出により産生されるリポソームの最大粒径に、概ね相当する。
【０１３９】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、本リポソーム組成物または複合体は、任意の所望の形態とすることができる。例えば医薬用途向けに、本組成物を患者へ投与するように準備することができる。代替として、本組成物は、乾燥または凍結乾燥形態であり得る。本組成物が乾燥または凍結乾燥している場合、本組成物は、抗凍結剤もまた含むことが好ましい。好適な抗凍結剤には、例えば、トレハロース、マルトース、乳糖、スクロース、グルコース、およびデキストラン等の糖を含み、性能的観点から最も好ましいものは、トレハロースおよびスクロースである。ストレプトマイシンおよびジヒドロストレプトマイシンを含む、例えばアミノグリコシド等の、他のより複雑な糖もまた、使用することができる。
【０１４０】
任意の好適な方法を用いて、ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、リポソームまたは複合体を形成することができる。例えば、天然または合成ホスファチジルコリン、コレステロールまたはコレステロール誘導体を伴う、または伴わない、本発明の医薬的に活性なグッグルリン脂質、ならびにαトコフェロール等の、脂溶性のリポソーム形成または脂溶性の複合体形成成分は、好適な溶媒中、または溶媒と乾燥の組み合わせで、溶解または分散することができる。好適な溶媒には、医薬的に許容されない残渣を残すことなく蒸発させることのできる、ｔ−ブタノール、エタノール、メタノール、クロロホルム、またはアセトン等の、任意のイオン性溶媒または任意の非極性もしくはわずかに極性のある溶媒を含む。乾燥は、凍結乾燥による等の、任意の好適な手段により行うことができる。脱水は、典型的には、真空下で達成され、リポソーム調合剤を予備凍結し、または予備凍結せずに、起こり得る。親水性成分は、水を含む極性溶媒中で溶解され得る。
【０１４１】
乾燥した脂溶性成分を、親水性混合物と混合することにより、リポソームまたは複合体を形成することができる。極性溶液の乾燥脂質薄膜との混合は、混合物を強力に均質化する任意の手段により行われ得る。ボルテックス、磁気攪拌および／または超音波分解で、均質化を達成することができる。
【０１４２】
活性薬剤（または活性薬剤の混合物）がリポソームまたは複合体に含まれる場合、本発明は、リポソームまたは複合体中で薬物を保持する方法を提供する。本発明の医薬的に活性なグッグルリン脂質、それらの類似体、または本明細書に記載の他の生物活性分子、および薬物（例えば活性薬剤または活性薬剤の混合物）が、リポソームまたは複合体内に含まれる。例えば、活性薬剤は、好適な溶媒中に溶解または分散することができ、混合前のリポソーム混合物に添加することができる。典型的には、親水性活性薬剤は、極性溶媒に直接添加され、疎水性活性薬剤は、他の成分を溶解するために使用される非極性溶媒に添加されるが、これは必要ではない。本活性薬剤は、第３の溶媒（例えばイオン性溶媒または溶媒混合液）で溶解することができ、混合物を均質化する前に、脂質薄膜との極性溶媒の混合物に添加することができるだろう。
【０１４３】
ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含むリポソームまたは複合体は、スクロース、エピクロロヒドリン、スクロースの分岐状親水性高分子、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレン酸化物、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ酢酸、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンのブロック共重合体、ポリビニルピロリドン、Ｘが９から２０であるポリオキシエチレンＸ−ラウリルエーテル、ならびにポリオキシエチレンソルビタンエステル等の、生分解性高分子でコーティングすることができる。
【０１４４】
本リポソーム組成物、複合体、または他の脂質組成物に、抗酸化剤を含むことができる。好適な抗酸化剤には、アスコルビン酸、トコフェロール、およびデテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ）メシラート等の化合物を含む。
【０１４５】
本リポソーム組成物、複合体、または他の脂質組成物に、吸収促進薬を含むことができる。好適な吸収促進薬には、サリチル酸−ケノデオキシコール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、ケノデオキシコール酸−デオキシコール酸およびポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、モノオレイン、タウロ−２４，２５−ジヒドロフシジン酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸を含む。ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレン１０−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン１６−ラウリルエーテル、アゾン（１−ドデシルアザシクロペプタン−２−オン）等の高分子吸収促進薬もまた、含むことができる。
【０１４６】
本発明の脂質（およびそれらのリポソームまたは複合体）組成物は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤もまた、含むことができる。例えば、医薬的に好適な賦形剤には、あらゆる種類の、固体、半固体、または液体の希釈剤、充填剤、および製剤助剤を含む。本発明は、用量単位の医薬調合剤もまた含む。これは、本調合剤は、個別の要素、例えばバイアル、注射器、カプセル、丸剤、坐薬、またはアンプルの形態であり、その中で、本活性薬剤のリポソームまたは複合体製剤の含有量が、個別の用量の一部または倍数に相当することを意味する。用量単位は、例えば、１、２、３、または４つの個別の用量、または個別の用量の１／２、１／３、または１／４を含み得る。個別の用量は、１回の投与で与えられ、通常、１日量の全部、半分、３分の１、または４分の１に相当する量の、活性薬剤を含むことが好ましい。
【０１４７】
錠剤、糖衣錠、カプセル、好ましくは腸溶コーティングカプセルまたは錠剤、丸剤、顆粒、坐薬、溶液、懸濁液、エマルジョン、ペースト、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、粉末、およびスプレーが、好適な医薬調合剤であり得る。坐薬は、リポソーム活性薬剤に加えて、好適な水溶性または不水溶性賦形剤を含有することができる。好適な賦形剤は、本発明のリポソーム活性薬剤が、その中で十分に安定しているために、治療的使用が可能となる、例えばポリエチレングリコール、特定の脂肪、およびエステル、またはこれらの物質の混合物である。軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、本リポソーム活性薬剤がその中で安定する、好適な賦形剤もまた含むことができる。本組成物は、注射用に好適である１つ以上の賦形剤（例えば緩衝生理食塩水）の含有により、注射（例えば静脈内、組織間腔内（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｌｙ）、腫瘍内等）用にもまた配合することができる。
【０１４８】
本活性薬剤またはその医薬調合剤は、静脈内、皮下、局所、経口（エマルジョン、または液体、またはカプセルとして）、非経口、腹腔内、および／もしくは直腸内、または治療を必要とする腫瘍または部位内に直接注射により、既知である、または開発されるそのような方法により、投与することができる。本発明の医薬的に活性なグッグルリン脂質およびそれらの類似体、ならびに他の生物活性分子は、局所的に、例えばクリーム、皮膚用軟膏、乾燥皮膚軟化剤、保湿剤等として、投与することができる。
【０１４９】
本組成物が、１つ以上の活性薬剤（例えば活性薬剤の混合物）を含む場合、本発明は、疾患の治療用の医薬品を調製するための、本組成物の使用を提供する。この意味において、本発明は、ヒトまたは動物の疾患の治療方法もまた提供する。本発明の方法に従い、活性薬剤のうちの１つまたは混合物を含有する本発明の組成物を、そのような治療を必要とするヒトまたは動物の患者に曝露（投与）する。このようにして、本活性薬剤が、患者に送達される。本発明における好ましい動物は、哺乳動物である。
【０１５０】
本方法を使用して、１つ以上の活性薬剤を投与することができる。活性薬剤は、界面活性剤の存在下で安定していることが一般的であると考えられる。親水性活性薬剤が好適であり、リポソーム２重層が、拡散障壁を形成し、身体全体に無作為に拡散するのを防ぐように、リポソームの内部に含めることができる。疎水性活性薬剤は、毒性の軽減を呈することにより有益であるだけでなく、リポソームの脂質２重層でよく可溶化される傾向にあるため、本方法での使用に特に適切であると考えられる。
【０１５１】
本活性薬剤がポリヌクレオチドである、特定の実施形態において、本発明の方法は、細胞のポリヌクレオチドとによる形質移入に用途を見出す。本実施形態の方法は、インビトロで細胞を形質移入、またはインビボで細胞に治療用または診断用ポリヌクレオチドを送達するために用いることができる。例えば、これらの実施形態の方法を使用して、遺伝子療法レジメンと関連させながら、遺伝子を培養細胞または患者に送達することができる。治療用途向けの、本発明のそのような実施形態は、したがって、例えば、１つ以上の核酸を含有する医薬組成物を、治療を必要とする患者に投与するステップを含み、該組成物は、陽イオン性脂質（例えば式ＸＩＩ）を含有する、遺伝子療法のための方法を提供する。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、遺伝子が、本発明の方法に従って形質移入後、細胞内に発現するように、遺伝子をコードする発現構造体を含む。
【０１５２】
本発明の脂質組成物を使用して、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはｓｉＲＮＡ等のオリゴヌクレオチド、および治療上活性なポリペプチドをコードする配列の細胞間送達を促進する。したがって、本発明の実施形態に従う、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、またはタンパク質の陽イオン性脂質介在送達は、限定するわけではないが、遺伝的疾患を含む様々な疾患のための療法を提供することができる。
【０１５３】
一部の実施形態において、本発明は、ポリヌクレオチドの細胞内への形質移入のためのキットもまた提供する。本キットは、例えば陽イオン性脂質（例えば化合物ＸＩＩ）を含み、形質移入のための所望のポリヌクレオチドもまた含むことができる（が、それらに限定されない）。本キットは、緩衝液、培地等の、形質移入を促進するための試薬もまた、含むことができる。
【０１５４】
治療用ポリヌクレオチドの実施例には、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ配列、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、およびアプタマー等のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、治療用ポリヌクレオチドは、病状に関連する遺伝子または遺伝子産物（例えば癌遺伝子またはウイルス遺伝子）等の、細胞内の所望の核酸またはアミノ酸配列を標的とする。所望の遺伝子を標的とするために好ましい治療用ポリヌクレオチドは、１０から４０ｍｅｒのアンチセンスポリヌクレオチド、または１０〜４０ｍｅｒのｓｉＲＮＡ配列、好ましくは、１５から２５ｍｅｒの配列である。オリゴヌクレオチドが本組成物に含まれる場合、例えば、ヌクレアーゼ耐性、ハイブリッド形成挙動等の特性を変更するために、例えばホスホチオエート連結または２’Ｏ−メチルリボースの、１つ以上の修飾を含み得る。一部の好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、２つのホスホチオエート連結を含む。２つのホスホチオエート連結を含む特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド組成物は、各末端部に１つのホスホチオエート連結を含むことができるが、該連結は、オリゴヌクレオチドの１つの端部からもう１方の端部のどこにでも（例えば端部の間）、存在することができる。ポリヌクレオチドは、１本鎖または２本鎖であり得る。
【０１５５】
本発明の組成物が治療のための使用を見出す疾患は、本明細書に記載したもの等の活性薬剤の選択に依存する。好ましい実施形態において、本組成物に組み込まれる少なくとも１つの活性薬剤は、癌の治療において使用するための、抗癌剤（例えば化学療法剤）である。抗癌剤は、そのような使用に好適である。抗癌剤を含有する、ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含む、リポソーム製剤または複合体は、直接癌細胞に抗癌剤を送達するために、腫瘍組織中に直接注射され得る。一部の実施形態において、例えば腫瘍の切除後、その結果生じた空洞内にリポソーム製剤を直接埋め込むことが可能であり、および／またはコーティングとして、残存組織に塗布することができる。リポソーム製剤または複合体が、術後に投与される事例では、脈管構造を通過する必要はないので、約１ミクロンのより大きな直径を有するリポソームを利用することが可能である。本発明による組成物は、いかなる種類の癌、特に哺乳動物の癌において、その使用を見出す。例には、頭部癌、頸部癌、脳癌、血液癌（例えば白血病、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、骨髄腫）、乳癌、肺癌、膵臓癌、骨癌、脾臓癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、結腸癌、腎臓癌、卵巣癌および皮膚癌（例えばカポジ肉腫）、骨髄癌、肝臓癌、胃癌、舌癌、口腔癌、および喉頭癌を含むが、それらに限定されない。本発明の活性化合物−脂質複合体は、癌細胞の、抗癌剤、化学療法、および放射線療法等の他の治療剤に対する耐性を生じる傾向の低下にもまたその使用を見出す。したがって、活性的組み合わせを形成し、あるいは個別の投与により、本発明と共に、他の治療剤を有利に利用することができる（例えば、他の治療剤を本発明の組成物の前または後に使用、あるいは同時に投与してもよい）。
【０１５６】
本発明の組成物を、限定するわけではないが、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ｓｐ．）、アスペルギルスフミガーツス、アスペルギルス肺炎、ブラストミセスデルマチチジス、カンジダアルビカンス、カンディダグイリアモンジ、カンジダトロピカリス、コクシジオイデスイミティス、クリプトコックスネオフォルマンス、フザリウムエスピー、ヒストプラスマカプスラーツム、ムコールムセド、ロドトルラエスピー（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｓｐ．）、スポロトリックスシェンキイ、アカントアメーバポリパーガ、エントモフトラ属（Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｐ．）、ヒストプラスマカプスラーツム、ブラジルリーシュマニア、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｐ．）、ロドトルラ属（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｓｐ．）、トルロプシスグラブラタ、パラコクシジオイデス症を含む、多数の菌類および寄生生物により引き起こされる感染を治療するために、用いることができる。さらなる菌類病原体には、トリコスポロン属、ムコ（Ｍｕｃｏ）、アルテルナリア属、ビポラリス、カーブラリア等を含む。
【０１５７】
本発明の組成物は、カラアザールとも呼ばれる内臓リーシュマニア症、およびレイシュマニアドノバニ複合体、Ｌ．ｄ  ドノバン、Ｌ．ｄ  インファンタム（ｉｎｆａｎｔｕｍ）、Ｌ．ｄ  アーチボルド、Ｌ．ｄ  チャゲシ（ｃｈａｇａｓｉ）、サシチョウバエ属（Ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｕｓ  ｓｐ．）およびスナバエ（Ｌｕｔｚｏｍｙａ  ｌｏｇｉｐａｌｐｉｓ）により引き起こされる感染の治療においてもまた、その使用を見出す。
【０１５８】
本発明の組成物を用いて、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−ＩおよびＨＳＶ２）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）により引き起こされるもの等の、ウイルス感染もまた治療することができる。
【０１５９】
一部の実施形態において、本発明の活性化合物−脂質複合体（例えば、タクロリムス−脂質複合体）を、臓器移植により引き起こされる拒絶反応を治療するために用い、例えば哺乳動物における、臓器または組織移植に投与することができる。この点で、本発明は、対象内で臓器または組織の拒絶を阻止するのに十分な量の、活性化合物脂質−複合体および脂質の複合体を含有する組成物を、対象（例えば、臓器または組織移植を受ける患者）に投与するステップを含む、臓器または組織の拒絶を阻止するための方法および組成物を提供する。
【０１６０】
本発明のリポソーム製剤または複合体を使用する治療に関するさらに他の疾患には、異常な細胞成長、感染における増殖、コレステロールの低下および体重減少、皮膚疾患、記憶障害、アルツハイマー病、新生物および心臓血管疾患、抗高血糖、認知増強剤、皮膚軟膏、ＨＩＶの阻止または治療を含むが、それらに限定されない。
【０１６１】
本発明の実施形態は、医薬的に活性なグッグルリン脂質およびそれらの類似体を、活性薬剤として（または混合物として他の活性薬剤と組み合わせて、または単独で）、細胞に送達するための方法もまた対象とする。本方法は、活性薬剤および医薬的に活性なグッグルリン脂質、それらの類似体、および／または本発明の他の生物活性分子を含む、ミセル、ベシクル、およびエマルジョンを含むリポソームまたは複合体の調製により、行うことができる。そして、リポソームまたは複合体が、所望に応じてインビトロ、またはインビボで、細胞に送達される。インビボ投与は、本明細書に記載の通り、または他の当業者に既知の通り、達成することができる。インビトロの使用については、活性薬剤の送達は、例えば、本組成物（例えばリポソームまたは複合体）を細胞培地に添加することにより、行うことができる。
【０１６２】
本発明の医薬組成物は、限定するわけではないが、静脈内、皮下、経口または非経口、腹腔内、局所、経皮、直腸内、および経膣投与を含む、任意の経路により投与され得る。
【０１６３】
（特に以下の特許請求の範囲との関連で）本発明について記載する文脈における、「ａ」、および「ａｎ」、および「ｔｈｅ」の用語、および類似の指示対象の使用は、本明細書において別途指示されるか、文脈により明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を対象とすると解釈されるべきである。「〜を含む（含有する）」、
「〜を含む」、「〜を有する」、および「〜を含有する（含む）」という用語は、別途指摘のない限り、制約のない用語（つまり、「〜を含むが、それらに限定されない」を意味する）として、解釈されるものとする。本明細書において提供される、あらゆる実施例、または例を示す言葉（例えば「〜等」）の使用は、単に、本発明の理解をより容易にすることが意図され、別途請求のない限り、本発明の範囲に制限を課すことはない。本明細書における言葉遣いから、いずれかの非請求要素を、本発明の実践に必須であると示していると、構成されるべきではない。
【０１６４】
本発明を実行するための、発明者らに知られる最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が記載される。これらの好ましい実施形態の変形物は、そのような変形物を適切に利用する当業者には、明白となり得、発明者らは、本発明が、本明細書に具体的に記載されたのとは別の方法で、実践されることを意図する。したがって、本発明は、適用法令により許可される、本明細書に添付される特許請求の範囲に挙げられる主題の全ての変形物および同等物を含む。さらに、上記要素の、それらの全ての可能性のある変形物の形態での、あらゆる組み合わせが、本明細書において別途指示されるか、文脈により明らかに矛盾しない限り、本発明により包含される。
【０１６５】
刊行物、特許出願、および本明細書において引用された特許を含み、以下のリストに記載のもの、ならびに本明細書において別途引用したものを含み、すべての参考文献は、各参考文献が、参照により組み込まれると個別にかつ具体的に示され、その全体が本明細書に記載されているのと同一程度に、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０１６６】
以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、当然ながら、いかようにもその範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１６７】
実施例１  ｉｉ−Ｅグッグルステロール、Ｚ−グッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロールの混合物の合成
【化１】
2010509355.tif 000002
【０１６８】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、あるいは市販されるＥグッグルステロンおよびＺグッグルステロンからのＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物、またはＥおよびＺグッグルステロン（Ｉ）の混合物の合成のための迅速かつ簡便な方法を示す。化合物（ＩＩＡ）は、図３に概略した合成経路を介して合成することができる。
【０１６９】
グッグルステロン（Ｉ）（５．０ｇ、１６．０２ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０ｍｌ）に溶解し、無水ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ４）（１．０ｇ、２６．３５ｍｍｏｌ）のスラリーに、温度を２０℃から２５℃に維持しながら３０分にわたって滴下で添加した。混合物を３時間撹拌した後、反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル；６：４、ｖ／ｖ）によって確認した。反応の完了後、少量の氷冷水を加えることによって、過剰のＬｉＡｌＨ４を破壊した。有機層を氷冷水で洗浄し、無水硫酸で乾燥させ、ろ過し、真空で蒸発させ、式（２）の４，１７（２０）−プレグナジエン−３β，１６α−ジオール（４．７３ｇ）を得た。
【０１７０】
式（２）の化合物を無水塩化メチレン（６０ｍｌ）に溶解し、活性酸化マンガン（ＩＶ）（ＭｎＯ２）（１０．０ｇ、１１５．０２ｍｍｏｌｅ）を添加し、室温で１．０時間撹拌し、次いで３０分間撹拌しながら４０℃まで加熱した後、室温でさらに８．０時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（塩化メチレン：アセトン；９：１、ｖ／ｖ）によって確認した。反応が完了した後、過剰な酸化マンガンを真空下でセリットパッドによってろ過した。溶媒を真空で除去し、黄色の粘性油として粗生成物（３．６６ｇ）を得た。最初に塩化メチレンで、その後、塩化メチレン中の２％アセトンで溶出することによって、粗生成物をシリカゲルカラム上で精製した。純粋な生成物を含有する留分をプールし、真空で濃縮した。得られた固体を、塩化メチレン／ヘキサン（１：１０、２０ｍｌ）で再結晶し、表題化合物（ＩＩＡ）の白色固体（１．６７ｇ；収率３３．２％）を得た。
【０１７１】
実施例２  硫酸グッグルステリル（ＶＩＩ）の調製
【化２】
2010509355.tif 000003
【０１７２】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物から、硫酸グッグルステリル（ＶＩＩ）を調製するための方法を示す。化合物ＶＩＩは、図４に概略した合成経路を介して合成することができる。窒素下で無水ピリジン（５ｍｌ）および無水塩化メチレン（５ｍｌ）の溶液に、クロロスルホン酸（０．５ｍｌ）を添加し、氷水漕で１５分間撹拌した。グッグルステロール（ＩＩＡ）（０．１０８ｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）を無水塩化メチレン（５ｍｌ）に溶解し、撹拌しながらピリジン−クロロスルホンの溶液に添加した。反応混合物を、氷水漕内で１５分間激しく撹拌した。次いで氷水漕を除去し、反応混合物を室温まで温めた。次いで反応フラスコを３時間還流した。溶媒を真空で除去し、白色固体を得、これを０．１  ＮａＯＨを添加し、その後高真空下で乾燥させることによって、ナトリウム塩に変換した。生成物の純度をＴＬＣ（塩化メチレン：アセトン；９：ｌｖ／ｖ）によって確認した。粗固体をジエチルエーテル（２５ｍｌ×２）で粉砕し、不純物を除去し、次いで、メタノールに沈殿させ、ろ過し、表題化合物（ＶＩＩ）（０．０６０ｇ、収率４１．９５％）を得た。
【０１７３】
実施例３  グッグルミリスチン酸の調製
【化３】
2010509355.tif 000004
【０１７４】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物から化合物ＩＩＩの特定の例である、グッグルミリスチン酸を調製するための方法を示す。化合物ＩＩＩは、図５に概略される合成経路を介して合成することができる。無水塩化メチレン（１５ｍｌ）中のグッグルステロール（ＩＩＡ）（０．１０９ｇ、０．３４８ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、Ｎ，Ｎ´−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１．５８ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）（０．１８７３ｇ、０．８２０ｍｍｏｌ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０５ｇ、０．４０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を終夜、室温で撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル、６：４、ｖ／ｖ）によってモニタした。反応の完了後、ＤＣＵの得られた白色沈殿物をろ過し、塩化メチレンで洗浄した。溶媒を、回転式蒸発器を用いて除去し、白色固体（２．０１ｇ）を得た。粗生成物を、最初にヘキサン（２００ｍｌ）で、その後ヘキサン：酢酸エチル（９０：１０、ｖ／ｖ）で溶出することによって、シリカゲルカラム（４０ｇ）で精製した。純粋な生成物を含有する留分をプールし、０．２μｍアクロディスクによってろ過した。溶媒を真空で除去し、高真空下で乾燥させ、表題化合物ＩＩＩ（０．１６ｇ、収率８７．６％）を得た。
【０１７５】
実施例４  グッグルホスファチジン酸（ＶＩ）の調製
【化４】
2010509355.tif 000005
【０１７６】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物からグッグルホスファチジン酸（ＶＩ）を調製するための方法を示す。化合物ＶＩは、図６に概略した合成経路を介して合成することができる。グッグルステロール（ＩＩＡ）（０．１５０ｇ、０．４７７ｍｍｏｌ）を窒素下で無水ピリジン（１０ｍｌ）に溶解し、オキシ塩化リン［ＰＯＣｌ３］（２ｍｌ）を滴下で添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌し、反応混合物を２時間還流した。次いで反応混合物を室温まで冷却し、回転式蒸発器を用いてピリジンを除去した。残渣をクロロホルム（２５ｍｌ）に溶解し、水（５０ｍｌ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過した。水酸化アンモニウム（２ｍｌ）をろ液に添加し、溶媒を真空で除去した。粗生成物を、塩化メチレン：アセトン（１：１０）に−２０℃で沈殿させ、ろ過し、高真空で乾燥させ、表題化合物ＶＩ（５３ｍｇ、収率２６．９％）を得た。
【０１７７】
実施例５  グッグルリン脂質（Ｖ）の調製
【化５】
2010509355.tif 000006
【０１７８】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物から、グッグルリン脂質（Ｖ）を調製するための方法を実証する。化合物Ｖは、図７に概略した合成経路を介して合成することができる。０℃の無水塩化メチレン（５ｍｌ）中のグッグルステロールＩＩＡ（０．１００ｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）の溶液に、温度を０℃〜５℃に維持しながら、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１．０ｍｌ、５．７１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホナミディッククロライド（１．０ｍｌ、５．１８ｍｍｏｌ）を順次滴下で添加した。反応混合物を６時間、０℃で撹拌し、反応の進行を、ＴＬＣ（塩化メチレン：アセトン、９：１）によってモニタした。グッグルステロールＩＩＡを完全に消費した後、氷浴を除去し、混合物を徐々に室温へ到達させた。テトラゾール溶液（アセトニトリル中０．４５Ｍ）（１．０ｍｌ）を添加し、その後、１，２−ジミリストイルグリセロール（０．１６ｇ、０．３１２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで反応混合物を−４０℃まで冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（１ｍｌ）を添加し、混合物を１時間撹拌した。反応混合物を徐々に室温に到達させ、撹拌をさらに１時間、室温で継続した。内容物を塩化メチレン（５０ｍｌ）で希釈し、有機層を氷冷５％ＨＣ１（１０ｍｌ×２）、重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ×２）、水（５０ｍｌ）、および塩水（５０ｍｌ）で連続して洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濃縮した。得られた中間体３を高真空下で乾燥させ、黄色粘性油（１．１６ｇ）を得た。得られた油を、塩化メチレン中の１％のメタノールで溶出し、シリカゲルカラム（１５ｇ）上で精製し、中間体３（０．５２ｇ）を産生した。
【０１７９】
２−ブタノン（２０ｍｌ）中の中間体３（０．５０ｇ；０．５５３ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、ヨウ化ナトリウム（０．２５０ｇ，１．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２．５時間還流させ、２５℃まで、その後−２０℃で終夜冷却した。表題化合物Ｖのナトリウム塩をろ過し、冷却アセトンで洗浄し、白色固体として、０．２２ｇ（７６．１２％）を得た。
【０１８０】
実施例６  グッグルリン脂質（Ｖ）の合成
【化６】
2010509355.tif 000007
【０１８１】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物から、グッグルリン脂質Ｖを合成するための、第２の手法を示す。化合物Ｖの合成のための別の手法を、図８に概略する。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸ナトリウム塩（４）（２００ｍｇ）をクロロホルム：メタノール（８：２、ｖ／ｖ）に溶解し、氷冷０．１ＮのＨＣｌで洗浄、その後、脱イオン水で洗浄し、その遊離酸形態に変換した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。使用前に、得られた１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、５（ＤＭＰＡ）（１９０ｍｇ、０．３２０ｍｍｏｌ）を、終夜高真空下、Ｐ２Ｏ５で乾燥させた。
【０１８２】
無水塩化メチレン（１５ｍｌ）中の、グッグルステロール（ＩＩＡ）（１００ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌｅ）の撹拌した溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１．５ｇ、７．６５７６ｍｍｏｌ）を添加し、室温で５分間撹拌した。無水塩化メチレン（５ｍｌ）中に溶解した化合物５（ＤＭＰＡ）を、反応混合物に添加し、その後触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２５ｍｇ）を添加した。反応混合物を終夜、室温で撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（塩化メチレン：アセトン；９：１、ｖ／ｖ）によってモニタした。反応の完了後、ＤＣＵの得られた白色沈殿物をろ過し、塩化メチレンで洗浄した。溶媒を真空で除去し、粘性油状物質（１．１９ｇ）を得た。粗生成物を、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ（７５：２０：５、ｖ／ｖ）で詰めたシリカゲルカラム（２０ｇ）で精製し、カラムを同一溶媒系で溶出した。純粋な生成物を含有する留分をプールし、０．２μｍアクロディスクによってろ過した。回転式蒸発器を使用して溶媒を除去し、高真空下で乾燥させ、表題化合物Ｖのアンモニア塩（１１５ｍｇ、収率６０．８％）を得た。
【０１８３】
実施例７  グッグルホスホコリン（ＶＩＩＩ）の調製
【化７】
2010509355.tif 000008
【０１８４】
本実施例は、ＥグッグルステロールおよびＺグッグルステロール、またはＥおよびＺグッグルステロール（ＩＩＡ）の混合物から、グッグルホスホコリン（ＶＩＩＩ）を調製するための方法を示す。化合物ＶＩＩＩは、図９に概略される合成経路を介して合成することができる。０℃の無水塩化メチレン（１０ｍｌ）中のグッグルステロールＩＩＡの溶液（０．１５０ｇ、０．４７７ｍｍｏｌ）に、Ｎ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（ｌ００μｌ）および２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホルアミダイト（１２０μｌ）を、順次０℃で添加した。反応混合物を、０℃で３時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ（塩化メチレン：アセトン；９：１）でモニタした。グッグルステロールＩＩＡを完全に消費した後、氷浴を除去し、混合物を徐々に室温へ到達させた。テトラゾール溶液（アセトニトリル中０．４５Ｍ）（５．０ｍｌ）を添加し、その後、塩化コリン（０．０７５ｇ、０．５３７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。そして、反応混合物を−２０℃まで冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（１００μｌ）を添加し、この温度で１時間撹拌し、徐々に室温へ到達させ、さらに１時間、室温で撹拌を継続した。内容物を塩化メチレン（５０ｍｌ）で希釈し、有機層を氷冷５％ＨＣｌ（１０ｍｌ×２）、重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ×２）、水（５０ｍｌ）、および塩水（５０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濃縮した。得られた中間体６を高真空下で乾燥させ、半固体（１．０２ｇ）を得た。アセトニトリル（１０ｍｌ）中の上記中間体６の溶液を、トリエチルアミン（Ｅｔ３  Ｎ）（１ｍｌ）と混合し、２４時間、室温で撹拌した。内容物を濃縮させ、溶出剤としてＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ（７５：２０：５、ｖ／ｖ）を用い、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、白色固体として表題化合物ＶＩＩＩのアンモニア塩（０．１１ｇ、４３．２％）を産生した。
【０１８５】
実施例８  タクロリムス、グッグルステロール、および大豆レシチンを含む粒子
タクロリムス（２０ｍｇ）、グッグルステロール（８ｍｇ）、および大豆レシチン（７９２ｍｇ）を水中（１５ｍＬ）で混合し、１０分間、均質化させた。懸濁液を４５℃で１０分間、超音波分解し、そして高圧ホモジナイザーを通過させた。そして、得られた懸濁液を７．５％のスクロース溶液（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥させた。Ｎｉｃｏｍｐ粒径計測器３８０を使用して、粒径を測定した。平均粒径は、２００ｎｍ未満になった。
【表１】
2010509355.tif 000009
【０１８６】
実施例９  パクリタキセル、グッグルステロール、および大豆レシチンを含む粒子
パクリタキセル（４０ｍｇ）、グッグルステロール（１４．７３ｍｇ）、および大豆レシチン（１．５８ｇ）を水中（１５ｍＬ）で混合し、１０分間、均質化させた。懸濁液を４５℃で１０分間、超音波分解し、そして高圧ホモジナイザーを通過させた。そして、得られた懸濁液を７．５％のスクロース溶液（５ｍＬ）と混合し、凍結乾燥させた。Ｎｉｃｏｍｐ粒径計測器３８０を使用して、粒径を測定した。平均粒径は、２００ｎｍ未満になった。
【表２】
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【０１８７】
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【図１】
2010509355.tif 000014
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2010509355.tif 000018
【図６】
2010509355.tif 000019
【図７】
2010509355.tif 000020
【図８】
2010509355.tif 000021
【図９】
2010509355.tif 000022
【国際調査報告】
2010509355.tif 000023
2010509355.tif 000024