(57)【要約】本発明は、ＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を有する新規化合物ならびにかかる化合物の調製方法を開示する。別の実施形態では、本発明は、かかる化合物を含む医薬組成物ならびにＨＣＶプロテアーゼ関連障害を治療するためのそれらの使用方法を開示する。本発明は、その多くの実施形態において、ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤としての新規化合物、該化合物の１つまたは複数を含有する医薬組成物、かかる化合物の１つまたは複数を含む製剤を調製する方法、かかる化合物の１つもしくは複数またはかかる製剤の１つもしくは複数を使用して、ＨＣＶを治療もしくは予防する、またはＣ型肝炎の症候の１つまたは複数を緩和する方法、およびかかる化合物の１つもしくは複数またはかかる製剤の１つもしくは複数を使用して、ＨＣＶポリペプチドとＨＣＶプロテアーゼの相互反応を調節する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下に列挙する構造
【化４４】
2010523666.tif 000092
【化４５】
2010523666.tif 000093
【化４６】
2010523666.tif 000094
【化４７】
2010523666.tif 000095
【化４８】
2010523666.tif 000096
【化４９】
2010523666.tif 000097
【化５０】
2010523666.tif 000098
【化５１】
2010523666.tif 000099
【化５２】
2010523666.tif 000100
【化５３】
2010523666.tif 000101
【化５４】
2010523666.tif 000102
【化５５】
2010523666.tif 000103
【化５６】
2010523666.tif 000104
【化５７】
2010523666.tif 000105
【化５８】
2010523666.tif 000106
【化５９】
2010523666.tif 000107
の化合物からなる群から選択される、ＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項２】
治療有効量の少なくとも１つの請求項１に記載の化合物を活性成分として含む医薬組成物。
【請求項３】
Ｃ型肝炎ウィルス（「ＨＣＶ」）関連障害の治療において使用するための、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
少なくとも１つの薬学的に許容できる担体をさらに含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
さらに少なくとも１つの抗ウィルス薬を含有する、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
またさらに少なくとも１つのインターフェロンを含有する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記少なくとも１つの抗ウィルス薬がリバビリンであり、前記少なくとも１つのインターフェロンがα−インターフェロンまたはペグ化インターフェロンである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＨＣＶ関連障害を治療するための医薬品の製造のための、治療有効量の少なくとも１つの請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物の使用。
【請求項９】
前記投与が、経口または皮下である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
構造
【化６０】
2010523666.tif 000108
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１１】
構造
【化６１】
2010523666.tif 000109
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１２】
構造
【化６２】
2010523666.tif 000110
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１３】
構造
【化６３】
2010523666.tif 000111
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１４】
構造
【化６４】
2010523666.tif 000112
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１５】
構造
【化６５】
2010523666.tif 000113
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１６】
構造
【化６６】
2010523666.tif 000114
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１７】
構造
【化６７】
2010523666.tif 000115
を有するＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す化合物、あるいは前記化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体またはラセミ体、あるいは前記化合物または前記鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体もしくはラセミ体の薬学的に許容できる塩または溶媒和物またはエステル。
【請求項１８】
精製形態の請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規Ｃ型肝炎ウィルス（「ＨＣＶ」）プロテアーゼ阻害剤、１つまたは複数のかかる阻害剤を含有する医薬組成物、かかる阻害剤の調製方法、ならびにＣ型肝炎および関連障害を治療するためのかかる阻害剤の使用方法に関する。本発明はさらに、ＨＣＶ  ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼの阻害剤としての新規化合物を開示する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）は、非Ａ、非Ｂ型肝炎（ＮＡＮＢＨ）、特に血液関連ＮＡＮＢＨ（ＢＢ−ＮＡＮＢＨ）の主な原因病原体とされている（＋）−センス一本鎖ＲＮＡウィルスである（国際特許出願公開ＷＯ８９／０４６６９および欧州特許出願公開ＥＰ３８１２１６参照）。ＮＡＮＢＨは、Ａ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、デルタ肝炎ウィルス（ＨＤＶ）、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）およびエプスタインバーウィルス（ＥＢＶ）などの他の種類のウィルスによって誘発される肝疾患、ならびにアルコール依存症および原発性胆汁性肝硬変などの他の形態の肝疾患と区別されるべきである。
【０００３】
近年、ポリペプチドプロセシングおよびウィルス複製に必要なＨＣＶプロテアーゼが同定され、クローン化され、発現された（例えば米国特許第５，７１２，１４５号参照）。この約３０００アミノ酸のポリタンパク質は、アミノ末端からカルボキシ末端までに、ヌクレオカプシドタンパク質（Ｃ）、エンベロープタンパク質（Ｅ１およびＥ２）および幾つかの非構造タンパク質（ＮＳ１、２、３、４ａ、５ａおよび５ｂ）を含有する。ＮＳ３は、約１８９３ヌクレオチドのＨＣＶゲノムによってコードされる約６８ｋｄａのタンパク質であり、２つの明確なドメイン、（ａ）約２００のＮ末端アミノ酸からなるセリンプロテアーゼドメイン、および（ｂ）タンパク質のＣ末端におけるＲＮＡ依存性ＡＴＰａｓｅドメインを有している。ＮＳ３プロテアーゼは、タンパク質配列、全体的な三次元構造および触媒作用機序が類似していることから、キモトリプシンファミリーの一員とみなされる。他のキモトリプシン様酵素は、エラスターゼ、因子Ｘａ、トロンビン、トリプシン、プラスミン、ウロキナーゼ、ｔＰＡおよびＰＳＡである。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは、ＮＳ３／ＮＳ４ａ、ＮＳ４ａ／ＮＳ４ｂ、ＮＳ４ｂ／ＮＳ５ａおよびＮＳ５ａ／ＮＳ５ｂ連結部におけるポリペプチド（ポリタンパク質）のタンパク質分解を担っており、したがってウィルス複製中に４種のウィルスタンパク質の生成を担う。これによって、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは抗ウィルス化学療法の格好の標的になっている。本化合物は、かかるプロテアーゼを阻害することができる。本化合物はまた、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）ポリペプチドのプロセシングを調節することができる。
【０００４】
約６ｋｄａのポリペプチドであるＮＳ４ａタンパク質は、ＮＳ３のセリンプロテアーゼ活性の補因子であると決定付けられている。ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼによるＮＳ３／ＮＳ４ａ連結部の自己切断は、分子内（即ちシス）で生じ、他の切断部位は、分子間（即ちトランス）でプロセシングされる。
【０００５】
ＨＣＶプロテアーゼの自然切断部位の分析によって、Ｐ１におけるシステインおよびＰ１’におけるセリンの存在が明らかになり、またこれらの残基が、ＮＳ４ａ／ＮＳ４ｂ、ＮＳ４ｂ／ＮＳ５ａおよびＮＳ５ａ／ＮＳ５ｂ連結部で厳密に保存されることが明らかになった。ＮＳ３／ＮＳ４ａ連結部は、Ｐ１においてトレオニンを、Ｐ１’においてセリンを含有する。ＮＳ３／ＮＳ４ａにおけるＣｙｓ→Ｔｈｒ置換は、この連結部においてトランスではなくシスプロセシングの要件の説明になると想定されている。例えば、Ｐｉｚｚｉら（１９９４年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ（ＵＳＡ）９１：８８８〜８９２頁、Ｆａｉｌｌａら（１９９６年）Ｆｏｌｄｉｎｇ  ＆  Ｄｅｓｉｇｎ  １：３５〜４２頁参照。ＮＳ３／ＮＳ４ａ切断部位はまた、他の部位よりも突然変異誘発に耐性がある。例えば、Ｋｏｌｌｙｋｈａｌｏｖ  ら（１９９４年）Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ６８：７５２５〜７５３３頁参照。切断部位の上流領域の酸性残基は、効率的な切断にとって必要であることも見出されている。例えば、Ｋｏｍｏｄａら（１９９４年）Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ６８：７３５１〜７３５７頁参照。
【０００６】
報告されているＨＣＶプロテアーゼの阻害剤は、抗酸化剤（国際特許出願公開ＷＯ９８／１４１８１参照）、特定のペプチドおよびペプチド類似体（国際特許出願公開ＷＯ９８／１７６７９、Ｌａｎｄｒｏら（１９９７年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３６：９３４０〜９３４８頁、Ｉｎｇａｌｌｉｎｅｌｌａら（１９９８年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３７：８９０６〜８９１４頁、Ｌｌｉｎａｓ−Ｂｒｕｎｅｔら（１９９８年）Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  ８：１７１３〜１７１８頁参照）、７０アミノ酸のポリペプチドであるエグリンｃをベースとする阻害剤（Ｍａｒｔｉｎら（１９９８年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３７：１１４５９〜１１４６８頁）、ヒト膵分泌性トリプシン阻害剤（ｈＰＳＴＩ−Ｃ３）およびミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）レパートリー（ＭＢｉｐ）から選択される阻害剤の親和性（Ｄｉｍａｓｉら（１９９７年）Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ７１：７４６１〜７４６９頁）、ｃＶＨＥ２（「キャメライズされた（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）」可変ドメイン抗体フラグメント）（Ｍａｒｔｉｎら（１９９７年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  １０：６０７〜６１４頁）、ならびにα１−抗キモトリプシン（ＡＣＴ）（Ｅｌｚｏｕｋｉら）（１９９７年）Ｊ．  Ｈｅｐａｔ．  ２７：４２〜２８頁）を含む。Ｃ型肝炎ウィルスＲＮＡを選択的に破壊するように設計されたリボザイムが、近年開示されている（ＢｉｏＷｏｒｌｄ  Ｔｏｄａｙ  ９（２１７）：４（１９９８年１１月１０日）参照）。
【０００７】
１９９８年４月３０日公開のＰＣＴ公開ＷＯ９８／１７６７９（Ｖｅｒｔｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）、１９９８年５月２８日公開のＷＯ９８／２２４９６（Ｆ．  Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  ＡＧ）、および１９９９年２月１８日公開のＷＯ９９／０７７３４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｃａｎａｄａ  Ｌｔｄ．）も参照のこと。
【０００８】
ＨＣＶは、肝硬変および肝細胞癌の誘発に関与しているとされてきた。ＨＣＶ感染症に罹患している患者の予後は、現在のところ良くない。ＨＣＶ感染症は、ＨＣＶ感染に伴う免疫または寛解が欠如しているために、他の形態の肝炎よりも治療が困難である。現在のデータは、肝硬変の診断後、５０％未満の４年生存率であることを示している。切除可能な限局性肝細胞癌と診断された患者は、１０〜３０％の５年生存率を有するが、切除不可能な限局性肝細胞癌と診断された患者は、１％未満の５年生存率を有する。
【０００９】
式
【００１０】
【化１】
2010523666.tif 000002
のペプチド誘導体を開示しているＷＯ００／５９９２９（２０００年１０月１２日公開の米国特許第６，６０８，０２７号、譲渡人：Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ（カナダ）Ｌｔｄ．）を参照されたい。
【００１１】
ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼの阻害剤の二環式類似体の合成を記載しているＡ．  Ｍａｒｃｈｅｔｔｉら、Ｓｙｎｌｅｔｔ、Ｓ１、１０００〜１００２頁（１９９９年）を参照されたい。それに開示されている化合物は、式
【００１２】
【化２】
2010523666.tif 000003
を有する。
【００１３】
アリルおよびエチル官能基を含有する幾つかのα−ケトアミド、α−ケトエステルおよびα−ジケトンの調製が記載されている、Ｗ．  Ｈａｎら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ、（２０００年）１０、７１１〜７１３頁も参照されたい。
【００１４】
式
【００１５】
【化３】
2010523666.tif 000004
（様々な原子は該明細書に定義されている。その一連の例示的化合物は、
【００１６】
【化４】
2010523666.tif 000005
である）
のペプチド誘導体が開示されている、ＷＯ００／０９５５８（譲渡人：Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｌｉｍｉｔｅｄ；２０００年２月２４日公開）も参照されたい。
【００１７】
式
【００１８】
【化５】
2010523666.tif 000006
（様々な原子は該明細書に定義されている。その一連の例示的化合物は、
【００１９】
【化６】
2010523666.tif 000007
である）
のペプチド誘導体が開示されている、ＷＯ００／０９５４３（譲渡人：Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｌｉｍｉｔｅｄ；２０００年２月２４日公開）も参照されたい。
【００２０】
【化７】
2010523666.tif 000008
（様々な原子は該明細書に定義されている）
のタイプのＮＳ３プロテアーゼ阻害剤が開示されている、米国特許第６，６０８，０２７号（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ、カナダ）も参照されたい。
【００２１】
Ｃ型肝炎の現在の治療は、インターフェロン−α（ＩＮＦα）ならびにリバビリンおよびインターフェロンとの併用療法を含む。例えば、Ｂｅｒｅｍｇｕｅｒら（１９９８年）Ｐｒｏｃ．  Ａｓｓｏｃ．  Ａｍ．  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  １１０（２）：９８〜１１２頁参照。これらの治療には、低い反応持続率および頻発する副作用の問題が伴う。例えば、Ｈｏｏｆｎａｇｌｅら（１９９７年）Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３３６：３４７頁参照。現在、ＨＣＶ感染症に利用できるワクチンはない。
【００２２】
Ｃ型肝炎ウィルスのＮＳ３−セリンプロテアーゼ阻害剤として、以下の一般式
【００２３】
【化８】
2010523666.tif 000009
（Ｒは該明細書に定義されている）の幾つかの化合物が開示されている、２００１年１０月１１日公開のＷＯ０１／７４７６８（譲渡人：Ｖｅｒｔｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ）をさらに参照されたい。
【００２４】
前述のＷＯ０１／７４７６８に開示の特定の一化合物は、以下の式
【００２５】
【化９】
2010523666.tif 000010
を有する。
【００２６】
特許文献１〜８および係属中の２００２年１月１８日出願の米国特許出願第１０／０５２，３８６号には、Ｃ型肝炎ウィルスのＮＳ３−セリンプロテアーゼ阻害剤として、様々な種類のペプチドおよび／または他の化合物が開示されている。これらの出願の開示は、それらを参照することよって本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２７】
【特許文献１】国際公開第０１／７７１１３号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０１／０８１３２５号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０２／０８１９８号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０２／０８２５６号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０２／０８１８７号パンフレット
【特許文献６】国際公開第０２／０８２４４号パンフレット
【特許文献７】国際公開第０２／４８１７２号パンフレット
【特許文献８】国際公開第０２／０８２５号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
ＨＣＶ感染症の新規治療および療法が必要とされている。Ｃ型肝炎の１つまたは複数の症候を治療または予防または緩和するのに有用な化合物が必要とされている。
【００２９】
Ｃ型肝炎の１つまたは複数の症候を治療または予防または緩和する方法が必要とされている。
【００３０】
本明細書で提供される化合物を使用して、セリンプロテアーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼの活性を調節する方法が必要とされている。
【００３１】
本明細書で提供される化合物を使用して、ＨＣＶポリペプチドのプロセシングを調節する方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
２００５年２月２４日出願の米国特許出願第１１／０６４，６７３号（２００７年２月２２日に米国特許出願公開第２００７／００４２９６８号として公開された）、その開示全体は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００３３】
本発明は、その多くの実施形態において、ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤としての新規化合物、該化合物の１つまたは複数を含有する医薬組成物、かかる化合物の１つまたは複数を含む製剤を調製する方法、かかる化合物の１つもしくは複数またはかかる製剤の１つもしくは複数を使用して、ＨＣＶを治療もしくは予防する、またはＣ型肝炎の症候の１つまたは複数を緩和する方法、およびかかる化合物の１つもしくは複数またはかかる製剤の１つもしくは複数を使用して、ＨＣＶポリペプチドとＨＣＶプロテアーゼの相互反応を調節する方法を提供する。本発明は、以下に列挙する構造の化合物から選択される化合物、ならびに前記化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物またはエステルを開示する。
【００３４】
【化１０】
2010523666.tif 000011
【００３５】
【化１１】
2010523666.tif 000012
【００３６】
【化１２】
2010523666.tif 000013
【００３７】
【化１３】
2010523666.tif 000014
【００３８】
【化１４】
2010523666.tif 000015
【００３９】
【化１５】
2010523666.tif 000016
【００４０】
【化１６】
2010523666.tif 000017
【００４１】
【化１７】
2010523666.tif 000018
【００４２】
【化１８】
2010523666.tif 000019
【００４３】
【化１９】
2010523666.tif 000020
【００４４】
【化２０】
2010523666.tif 000021
【００４５】
【化２１】
2010523666.tif 000022
【００４６】
【化２２】
2010523666.tif 000023
【００４７】
【化２３】
2010523666.tif 000024
【００４８】
【化２４】
2010523666.tif 000025
【００４９】
【化２５】
2010523666.tif 000026
【００５０】
【化２６】
2010523666.tif 000027
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明の一実施形態は、先に列挙し、後に表１に示す化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物もしくはエステルを開示する。
【００５２】
先および本開示を通して使用される場合、以下の用語は別段の指定がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００５３】
「患者」は、ヒトおよび動物の両方を含む。
【００５４】
「哺乳動物」とは、ヒトおよび他の哺乳動物を意味する。
【００５５】
化合物についての「単離された」または「単離形態」という用語は、合成過程もしくは天然源またはそれらの組合せから単離された後の前記化合物の物理状態を指す。化合物についての「精製された」または「精製状態にある」という用語は、本明細書に記載のまたは当業者に周知の１つまたは複数の精製過程から、本明細書に記載のまたは当業者に周知の標準的な分析技術によって特徴付けられる十分な純度で得られた後の、前記化合物の物理状態を指す。
【００５６】
本明細書の本文、スキーム、実施例および表における未充足の価数を有する任意のヘテロ原子は、価数を満たすための水素原子（複数可）を有すると推測されることにも留意されたい。
【００５７】
「１つまたは複数の」または「少なくとも１つの」という用語は、置換基、化合物、組み合わせる薬剤等の数を示す場合、文脈に応じて、少なくとも１つのおよび最大での、存在しまたは添加される化学的かつ物理的に許容される置換基、化合物、組み合わせる薬剤等の最大数を指す。かかる技術および知識は、当業者には周知である。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、特定の量の特定の成分を含む生成物、ならびに特定の量の特定の成分の組合せから直接または間接的に得られる任意の生成物を包含するものとする。
【００５９】
本発明の化合物のプロドラッグおよび溶媒和物も、本明細書で企図される。「プロドラッグ」という用語は、本明細書で使用される場合、対象に投与される際に、代謝過程または化学過程によって化学変換を受けて、式Ｉの化合物あるいはその塩および／または溶媒和物をもたらす薬物前駆体である化合物を指す。プロドラッグについての議論は、Ｔ．  ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．  Ｓｔｅｌｌａ、Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ＳｅｒｉｅｓのＰｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８７年）１４、およびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、（１９８７年）Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．  Ｒｏｃｈｅ、ｅｄ．、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓに提示されており、その両方を参照によって本明細書に組み込む。
【００６０】
「溶媒和物」とは、本発明の化合物と１つまたは複数の溶媒分子との物理的会合を意味する。この物理的結合は、水素結合を含む様々な度合のイオン結合および共有結合を含む。幾つかの場合、溶媒和物は、例えば１つまたは複数の溶媒分子が結晶固体の結晶格子内に取り込まれている場合、単離することができよう。「溶媒和物」は、液相および単離可能な溶媒和物の両方を包含する。適切な溶媒和物の非限定的な例には、エタノラート、メタノラート等が含まれる。「水和物」は、溶媒分子がＨ２Ｏである溶媒和物である。
【００６１】
「有効量」または「治療有効量」は、ＨＣＶ  ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼを阻害し、したがって所望の治療、改善、阻害または予防効果をもたらすのに有効な、本発明の化合物または組成物の量を説明することを意味する。
【００６２】
本発明の化合物は、やはり本発明の範囲に含まれる塩を形成することができる。本明細書における本発明の化合物への参照は、別段の指定がない限り、その塩への参照を含むと理解される。「塩（複数可）」という用語は、本明細書で使用される場合、無機および／または有機酸を用いて形成される酸性塩、ならびに無機および／または有機塩基を用いて形成される塩基性塩を示す。さらに、本発明の化合物が、それに限定されるものではないが、ピリジンまたはイミダゾールなどの塩基性部分と、それに限定されるものではないが、カルボン酸などの酸性部分の両方を含有する場合、両性イオン（「内塩」）を形成することができ、それらは本明細書で使用される「塩（複数可）」という用語に含まれる。薬学的に許容できる（即ち、非毒性の生理的に許容できる）塩が好ましいが、他の塩も有用である。本発明の化合物の塩は、例えば本発明の化合物を、塩が沈殿するようなものなどの媒体または水性媒体中で、当量などのある量の酸または塩基と反応させ、その後凍結乾燥することによって形成することができる。
【００６３】
例示的酸付加塩には、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩（トシラートとしても公知）等が含まれる。さらに、塩基性の医薬化合物から薬学的に有用な塩を形成するのに適すると一般にみなされている酸は、例えば、Ｐ．  Ｓｔａｈｌら、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．（ｅｄｓ．）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ．  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ．（２００２年）Ｚｕｒｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ；Ｓ．  Ｂｅｒｇｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７年）６６（１）１〜１９頁；Ｐ．  Ｇｏｕｌｄ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９８６年）３３  ２０１〜２１７頁；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９６年）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにより、およびＴｈｅ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ（Ｆｏｏｄ  ＆  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．  Ｃ．、そのウェブサイト上）に論じられている。これらの開示は、それらを参照することによって、本明細書に組み込まれる。
【００６４】
例示的塩基性塩には、アンモニウム塩、ナトリウム、リチウムおよびカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン、ｔ−ブチルアミンなどの有機塩基（例えば、有機アミン）との塩、およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩等が含まれる。塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物（例えば、メチル、エチルおよびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物）、硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチルおよび硫酸ジブチル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、デシル、ラウリルおよびステアリルの塩化物、臭化物およびヨウ化物）、アラルキルハロゲン化物（例えば、臭化ベンジルおよび臭化フェネチル）、および他のものなどの薬剤で四級化することができる。
【００６５】
全てのかかる酸塩および塩基塩は、本発明の範囲に含まれる薬学的に許容できる塩であるものとし、全ての酸および塩基塩は、本発明の目的のための対応化合物の遊離形態と等価であるとみなされる。
【００６６】
本化合物の薬学的に許容できるエステルには、以下の群、（１）エステル基のカルボン酸部分の非カルボニル部分が、直鎖または分岐鎖アルキル（例えば、アセチル、ｎ−プロピル、ｔ−ブチルまたはｎ−ブチル）、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アラルキル（例えばベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）、アリール（例えば、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキルまたはＣ１〜４アルコキシまたはアミノで任意選択で置換されている、例えばフェニル）から選択される、ヒドロキシ基のエステル化によって得られるカルボン酸エステル、（２）アルキル−またはアラルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル）などのスルホン酸エステル、（３）アミノ酸エステル（例えば、Ｌ−バリルまたはＬ−イソロイシル）、（４）ホスホン酸エステル、ならびに（５）モノ−、ジ−またはトリリン酸エステルが含まれる。リン酸エステルはさらに、例えばＣ１〜２０アルコールもしくはその反応性誘導体によって、または２，３−ジ（Ｃ６〜２４）アシルグリセロールによってさらにエステル化することができる。
【００６７】
本発明の化合物、ならびにそれらの塩、溶媒和物、エステルおよびプロドラッグは、それらの互変異性体で（例えばアミドまたはイミノエーテルとして）存在することができる。全てのかかる互変異性体は、本明細書では本発明の一部として企図される。
【００６８】
本化合物（該化合物の塩、溶媒和物、エステルおよびプロドラッグ、ならびに該プロドラッグの塩および溶媒和物のものを含む）の、鏡像異性体（不斉炭素が欠如している場合にも存在することができる）、回転異性体、アトロプ異性体およびジアステレオマー形態を含む、様々な置換基上の不斉炭素により存在することができるものなどの全ての立体異性体（例えば、幾何異性体、光学異性体等）は、位置異性体（例えば、４−ピリジルおよび３−ピリジルなど）のように、本発明の範囲内にあることを企図される。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば実質的に他の異性体を含まなくてもよく、あるいは例えばラセミ体として、または全ての他のもしくは他の選択された立体異性体と混合することができる。本発明の不斉中心は、ＩＵＰＡＣ  １９７４推奨によって定義されるＳまたはＲ配置を有することができる。「塩」、「溶媒和物」、「プロドラッグ」等の用語の使用は、本化合物の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、位置異性体、ラセミ体またはプロドラッグの塩、溶媒和物およびプロドラッグに等しく当てはまることが企図される。
【００６９】
本発明の化合物、ならびにそれらの塩、溶媒和物、エステルおよびプロドラッグの多形体は、本発明に含まれるものとする。
【００７０】
本明細書で論じる治療に適用するための本発明の化合物の利用性は、それ自体各化合物に適用することができ、または例えば直後の段落に例示する１つもしくは複数の化合物の１つもしくは複数の組合せに適用できることも理解されたい。同じ理解が、かかる１つまたは複数の化合物を含む医薬組成物（複数可）およびかかる１つまたは複数の化合物を伴う治療方法（複数可）にも当てはまる。
【００７１】
本発明の化合物は、薬理学的特性を有することができ、特に本発明の化合物は、各化合物それ自体で、または先に列挙した本発明の化合物から選択される１つもしくは複数の化合物と組み合わせて、ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤になることができる。本化合物（複数可）は、例えば、ＨＣＶ、ＨＩＶ、（ＡＩＤＳ、後天性免疫不全症候群）および関連障害などの疾患の治療、ならびにＣ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）プロテアーゼ活性の調節、ＨＣＶの予防、またはＣ型肝炎の１つもしくは複数の症候の緩和に有用となり得る。
【００７２】
本発明の化合物は、ＨＣＶプロテアーゼ関連障害を治療するための医薬品の製造に使用することができ、例えば該方法は、本発明の化合物と薬学的に許容できる担体とを密に接触させるステップを含む。
【００７３】
別の実施形態では、本発明は、１つまたは複数の本化合物を活性成分として含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は一般に、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体である希釈剤、賦形剤または担体（本明細書では総称的に担体材料と呼ぶ）をさらに含む。それらのＨＣＶ阻害活性により、かかる医薬組成物は、Ｃ型肝炎および関連障害の治療に有用性を有する。
【００７４】
さらに別の実施形態では、本発明は、本化合物を活性成分として含む医薬組成物の調製方法を開示する。本発明の医薬組成物および方法では、活性成分は、一般に、所期の投与形態、即ち経口用錠剤、カプセル剤（固体充填、半固体充填または液体充填のいずれか）、構成用粉末剤、経口用ゲル剤、エリキシル剤、分散可能な顆粒剤、シロップ、懸濁剤等に対して適切に選択された適切な担体材料と混合し、従来の薬務に従って投与されよう。例えば、錠剤またはカプセル剤の形態の経口投与について、活性薬物成分は、乳糖、デンプン、ショ糖、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、第２リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、タルク、マンニトール、エチルアルコール（液体形態）などの任意の薬学的に許容できる非毒性の経口用不活性担体と混合することができる。さらに、望ましいまたは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤も混合物に組み込むことができる。粉剤および錠剤は、本組成物約５〜約９５パーセントから構成され得る。
【００７５】
適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖、コーンシロップ、アカシアなどの天然および合成ガム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールおよびワックスが含まれる。滑沢剤の中では、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等、これらの形態で使用されるものを挙げることができる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、グアーガム等が含まれる。
【００７６】
甘味剤および香味剤および保存剤も、適切な場合に含めることができる。先に示した用語の幾つか、即ち崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、結合剤等を、以下により詳細に論じる。
【００７７】
さらに本発明の組成物は、成分または活性成分の任意の１つまたは複数を速度制御放出して、治療効果、即ちＨＣＶ阻害活性等を最適化するために、徐放形態で処方することができる。徐放に適した剤形には、様々な崩壊速度の層または活性成分を含浸させた制御放出用ポリマーマトリクスを含有し、かかる含浸させたまたは封入した多孔質ポリマーマトリクスを含有する錠剤形態もしくはカプセルの形状にした多層錠剤が含まれる。
【００７８】
液体形態の調製物には、溶剤、懸濁剤およびエマルジョンが含まれる。一例として、非経口注入または甘味剤の添加、ならびに経口溶剤、懸濁剤およびエマルジョン用のおしゃぶり（ｐａｃｉｆｉｅｒ）用の水または水−プロピレングリコール溶液が挙げられる。液体形態の調製物には、鼻腔内投与のための溶剤も含まれ得る。
【００７９】
吸入に適したエアロゾル調製物は、不活性な圧縮ガス、例えば窒素などの薬学的に許容できる担体と組み合わせることができる溶液および粉末形態の固体を含むことができる。
【００８０】
坐剤の調製では、カカオ脂などの脂肪酸グリセリドの混合物などの低融点ワックスを最初に溶融し、撹拌または類似の混合によって、その中に活性成分を均質に分散させる。次いで均質な溶融混合物を、好都合な大きさの型に注ぎ、冷却し、それによって固化させる。
【００８１】
使用直前に、経口または非経口投与のために液体形態の調製物に変換することを企図される固体形態の調製物も含まれる。かかる液体形態には、溶剤、懸濁剤およびエマルジョンが含まれる。
【００８２】
本発明の化合物は、経皮送達することもできる。経皮用組成物は、クリーム、ローション、エアロゾルおよび／またはエマルジョンの形態をとることができ、この目的のために当技術分野で慣習的なもののような、マトリクスまたは貯蔵タイプの経皮パッチに含めることもできる。
【００８３】
本発明の化合物は、経口、静脈内、鼻腔内または皮下投与することもできる。
【００８４】
本発明の化合物は、単位剤形の調製物を含むこともできる。かかる形態では、調製物は、適切な量の、例えば所望の目的を達成するのに有効な量の活性成分を含有する、適切な大きさの単位用量に分割される。
【００８５】
単位用量の調製物中の本活性組成物の量は、一般に、特定の用途に従って約１．０ミリグラム〜約１，０００ミリグラム、好ましくは約１．０〜約９５０ミリグラム、より好ましくは約１．０〜約５００ミリグラム、一般に約１〜約２５０ミリグラムに変えるまたは調節することができる。使用される実際の用量は、患者の年齢、性別、体重および治療を受ける状態の重篤度に応じて変わり得る。かかる技術は、当業者には周知である。
【００８６】
一般に、活性成分を含有するヒトの経口用剤形は、１日当たり１または２回投与することができる。投与の量および頻度は、担当医の判断に従って制御されよう。経口投与に一般に推奨される１日当たりの投与レジメンは、単回または分割用量で１日当たり約１．０ミリグラム〜約１，０００ミリグラムの範囲にすることができる。
【００８７】
幾つかの有用な用語を以下に記載する。
【００８８】
カプセルとは、活性成分を含む組成物を保持または含有するための、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、または変性ゼラチンもしくはデンプンで製造された特別な容器または封入物を指す。硬質殻のカプセルは、一般に比較的高いゲル強度の骨および豚皮のゼラチンのブレンドから製造される。カプセル自体は、少量の色素、不透明化薬剤、可塑剤および保存剤を含有することができる。
【００８９】
錠剤とは、活性成分と適切な希釈剤を含有する、圧縮または成型された固体剤形を指す。錠剤は、混合物もしくは湿式造粒、乾式造粒によって得られる顆粒の圧縮、または圧密によって調製することができる。
【００９０】
経口用ゲル剤とは、親水性半固体マトリクスに分散または可溶化した活性成分を指す。
【００９１】
構成用粉末剤とは、活性成分および水またはジュースに懸濁することができる適切な希釈剤を含有する粉末ブレンドを指す。
【００９２】
希釈剤とは、通常、組成物または剤形の主要部分を構成する物質を指す。適切な希釈剤には、乳糖、ショ糖、マンニトールおよびソルビトールなどの糖；小麦、トウモロコシ、米およびジャガイモ由来のデンプン；ならびに微結晶セルロースなどのセルロースが含まれる。組成物中の希釈剤の量は、全組成物の約１０〜約９０重量％、好ましくは約２５〜約７５％、より好ましくは約３０〜約６０重量％、さらにより好ましくは約１２〜約６０％の範囲であってよい。
【００９３】
崩壊剤とは、組成物に、それが分裂（崩壊）するのを助け、医薬品を放出させるために添加される材料を指す。適切な崩壊剤には、デンプン；カルボキシメチルデンプンナトリウムなどの「冷水に可溶性の」改変デンプン；ローカストビーン、カラヤ、グアー、トラガカントおよび寒天などの天然および合成ガム；メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体；クロスカルメロースナトリウムなどの微結晶セルロースおよび架橋微結晶セルロース；アルギン酸およびアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸塩；ベントナイトなどの粘土；ならびに発泡性混合物が含まれる。組成物中の崩壊剤の量は、組成物の約２〜約１５重量％、より好ましくは約４〜約１０重量％の範囲であってよい。
【００９４】
結合剤とは、粉末を一緒に結合または「接着」し、顆粒を形成することによってそれらを凝集させ、したがって処方物の「接着剤」として働く物質を指す。結合剤は、希釈剤または増量剤に既存の凝集力を増大する。適切な結合剤には、ショ糖などの糖；小麦、トウモロコシ米およびジャガイモ由来のデンプン；アカシア、ゼラチンおよびトラガカントなどの天然ガム；アルギン酸、アルギン酸ナトリウムおよびアルギン酸アンモニウムカルシウムなどの海藻の誘導体；メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース材料；ポリビニルピロリドン；ならびにケイ酸マグネシウムアルミニウムなどの無機物が含まれる。組成物中の結合剤の量は、組成物の約２〜約２０重量％、より好ましくは約３〜約１０重量％、さらにより好ましくは約３〜約６重量％の範囲であってよい。
【００９５】
滑沢剤とは、錠剤、顆粒剤等が圧縮された後、抵抗または摩擦の減少によって型またはダイから取り出せるように剤形に添加される物質を指す。適切な滑沢剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸カリウムなどのステアリン酸金属塩；ステアリン酸；高融点ワックス；ならびに塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコールおよびｄ’ｌ−ロイシンなどの水溶性滑沢剤が含まれる。滑沢剤は、顆粒剤の表面上およびそれらと打錠機の一部の間に存在せねばならないことから、通常、圧縮前のいよいよ最後のステップで添加される。組成物中の滑沢剤の量は、組成物の約０．２〜約５重量％、好ましくは約０．５〜約２％、より好ましくは約０．３〜約１．５重量％の範囲であってよい。
【００９６】
滑剤−ケーキングを防止し、流れが滑らかで均一になるように顆粒の流れ特性を改善する材料。適切な滑剤には、二酸化ケイ素およびタルクが含まれる。組成物中の滑剤の量は、全組成物の約０．１％〜約５重量％、好ましくは約０．５〜約２重量％の範囲であってよい。
【００９７】
着色剤−組成物または剤形に色を付与する賦形剤。かかる賦形剤には、食用色素および粘土または酸化アルミニウムなどの適切な吸着剤上に吸着する食品色素が含まれ得る。着色剤の量は、組成物の約０．１〜約５重量％、好ましくは約０．１〜約１％で変わることができる。
【００９８】
生体利用能とは、活性薬物成分または治療性部分が、標準または対照と比較して、投与剤形から体循環に吸収される速度および程度を指す。
【００９９】
従来の錠剤の調製方法は公知である。かかる方法には、直接圧縮、および圧密によって生成された顆粒の圧縮などの乾式法、または湿式法、または他の特別な手順が含まれる。例えば、カプセル、坐剤などの他の投与形態の従来の製造方法も周知である。
【０１００】
本発明の別の実施形態は、例えばＣ型肝炎などの疾患の治療のための、先に開示の本化合物または医薬組成物の使用を開示する。該方法は、治療有効量の本化合物または医薬組成物を、かかる１つまたは複数の疾患を有し、かかる治療を必要としている患者に投与するステップを含む。
【０１０１】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、単剤療法の方式で、あるいは例えば抗ウィルスおよび／または免疫調節剤との組合せなどの併用療法（例えば、２つの組合せ、３つの組合せ等）の方式で、ヒトのＨＣＶの治療に使用することができる。かかる抗ウィルスおよび／または免疫調節剤の例には、リバビリン（ニュージャージー州、マジソン、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）およびレボビリン（Ｌｅｖｏｖｉｒｉｎ）（商標）（カリフォルニア州、コスタメサ、ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製）、ＶＰ  ５０４０６（商標）（ペンシルバニア州、エクストン、Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ、Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ製）、ＩＳＩＳ  １４８０３（商標）（カリフォルニア州、カールズバッド、ＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製）、Ｈｅｐｔａｚｙｍｅ（商標）（コロラド州、ボールダー、Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製）、ＶＸ  ４９７（商標）（マサチューセッツ州、ケンブリッジ、Ｖｅｒｔｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製）、Ｔｈｙｍｏｓｉｎ（商標）（カリフォルニア州、サンマテオ、ＳｃｉＣｌｏｎｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製）、Ｍａｘａｍｉｎｅ（商標）（カリフォルニア州、サンディエゴ、Ｍａｘｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ミコフェノール酸モフェチル（ニュージャージー州、ナットレー、Ｈｏｆｆｍａｎ−ＬａＲｏｃｈｅ製）、インターフェロン（例えばインターフェロンα、ＰＥＧ−インターフェロンα複合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）など）等が含まれる。「ＰＥＧ−インターフェロンα複合体」は、ＰＥＧ分子に共有結合したインターフェロンα分子である。例示的なＰＥＧ−インターフェロンα複合体には、ペグ化インターフェロンα−２ａ（例えば、商標Ｐｅｇａｓｙｓ（商標）で市販）の形態のインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ（商標）、ニュージャージー州、ナットレー、Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｌａ−Ｒｏｃｈｅ製）、ペグ化インターフェロンα−２ｂ（例えば、商標ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ（商標）で市販）の形態のインターフェロンα−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ（商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）、インターフェロンα−２ｃ（Ｂｅｒｏｆｏｒ  Ａｌｐｈａ（商標）、ドイツ、インゲルハイム、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ製）、または天然に生じるインターフェロンαのコンセンサス配列の決定によって定義されるコンセンサスインターフェロン（カリフォルニア州、サウザンドオークス、Ａｍｇｅｎ製のＩｎｆｅｒｇｅｎ（商標））が含まれる。
【０１０２】
先に述べた通り、本発明は、本化合物の互変異性体、回転異性体、鏡像異性体および他の立体異性体も含む。したがって当業者が認識するように、本化合物の幾つかは、適切な異性体として存在することができる。かかる変形形態は、本発明の範囲内にあることを企図される。
【０１０３】
本発明の別の実施形態は、本明細書に開示の化合物の製造方法を開示する。該化合物は、当技術分野で公知の幾つかの技術によって調製することができる。例示的手順を、以下の反応スキームにまとめる。各例示は、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。代替の機構経路および類似構造は、当業者に明らかとなろう。
【０１０４】
以下の例示的スキームは、幾つかの代表的な本化合物の調製を説明しているが、天然および非天然アミノ酸両方のいずれかを適切に置換することによって、かかる置換に基づいて所望の化合物が形成されることを理解されたい。かかる変形形態は、本発明の範囲内にあることが企図される。
【０１０５】
以下に記載の手順では、以下の略語を使用する。
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＭｅＯＨ：メタノール
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ｐＨ：パーセント水素
Ｓａｔ．：飽和
ｎ−ＢｕＬｉ：ｎ−ブチルリチウム
ＲＴ：室温
ＤＰＰＡ：ジフェニルホスホリルアジド
標的化合物の調製についての一般スキーム
本発明の化合物を、記載の一般スキームを使用して合成して、以下に記載の調製例１２００および１２６１を作成した。
【０１０６】
調製例１２００
【０１０７】
【化２７】
2010523666.tif 000028
ステップ１
【０１０８】
【化２８】
2010523666.tif 000029
２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸シクロヘキシリデンアミド（１２００−Ｂ）：チタニウムテトラエトキシド（２当量、３．５６ｍＬ、ｄ１．０８８）を、窒素雰囲気下でシクロヘキサノン（１．２当量、１．０ｇ、１．０５ｍＬ、ｄ０．９４７）の乾燥ＴＨＦ２０ｍＬ中溶液に添加した。５分後、ＴＨＦ１０ｍＬ中（Ｓ）−ｔ−ブタンスルフィンアミド（１２００−Ａ、１．０２８ｇ）を滴下した。混合物を終夜６０℃に加熱した。反応混合物を、急速に撹拌しながら、等体積の飽和重炭酸ナトリウム水溶液に注ぎ、すぐにセライトを介して濾過した。濾過ケーキを酢酸エチル（５０ｍＬ）で洗浄した。濾液の層を分離し、水層を酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけて（勾配：エーテル／ヘキサン；１：９〜１：１）、生成物１２００−Ｂ（１．３ｇ；７６％）を無色の油として得た。生成物を−２０℃の不活性雰囲気下に維持した。
【０１０９】
ステップ２
【０１１０】
【化２９】
2010523666.tif 000030
Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｃ−［１−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−シクロヘキシル］−メタンスルホンアミド（１２００−Ｃ）：ｎ−ブチルリチウム（１．３当量、１．６Ｍのヘキサン中溶液８．０７ｍＬ）を、無水雰囲気下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンスルホンアミド（１．３５当量、１．６５ｇ）の乾燥ＴＨＦ１００ｍＬ中冷却（−７８℃）溶液に滴下した。混合物を、その温度で３０分間撹拌し、次いでスルフィニルイミン１２００−Ｂ（２．０ｇ）の乾燥ＴＨＦ中溶液１００ｍＬにカニューレを介して−７８℃で移した。添加が完了した後、反応混合物を１時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液２０ｍＬを添加することによって−７８℃で反応をクエンチした。混合物を静置して室温にし、次いでジクロロメタン（３００ｍＬ）と、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）に分けた。水層をジクロロメタンで抽出し直した（２×２００ｍＬ）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけて（勾配：ジクロロメタン／ヘキサン；１：１〜ジクロロメタン／ヘキサン；１：１中アセトン３０％）、生成物１２００−Ｃ（１．３６ｇ；４２％）を無色油として得た。
【０１１１】
ステップ３
【０１１２】
【化３０】
2010523666.tif 000031
Ｃ−（１−アミノ−シクロヘキシル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−メタンスルホンアミド塩酸塩（１２００−Ｄ）：スルフィンアミド１２００−Ｃ（１．３ｇ）を、メタノール４０ｍＬに溶解し、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ溶液１０ｍＬで処理した。全ての出発材料が消費されたことがＴＬＣ（ジクロロメタン／ヘキサン１：１中アセトン２０％）によって決定されるまで、約３０分間、混合物を撹拌した。混合物を乾燥するまで蒸発させた。ジクロロメタンを添加すると（１５ｍＬ）、濁った溶液が生成した。エーテル１００ｍＬの添加の際、白色沈殿物が形成した。生成物１２００−Ｄ（１．０２ｇ；９８％）を、濾紙Ｗｈａｔｍａｎ＃１を使用して、濾過によって回収した。
【０１１３】
ステップ４
【０１１４】
【化３１】
2010523666.tif 000032
Ｃ−（１−イソシアナト−シクロヘキシル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−メタンスルホンアミド（１２００−Ｅ）：アミン塩酸塩１２００−Ｄ（５２０ｍｇ）のジクロロメタン４０ｍＬ中溶液を、重炭酸ナトリウム飽和水溶液２０ｍＬで処理し、０℃で１０分間激しく撹拌した。撹拌を止め、層を分離させた。ホスゲン（トルエン中２０％溶液１０ｍＬ）を、一度に有機層（下層）に添加した。混合物を、０℃で１０分間添加した直後に、激しく撹拌し、さらに室温で３時間撹拌した。混合物をジクロロメタン１００ｍＬで希釈し、層を分離した。有機層を、重炭酸ナトリウム飽和冷却水溶液５０ｍＬで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。有機層を濾過し、トルエン１５ｍＬで希釈した。得られた溶液を減圧下で濃縮し、生成物１２００−Ｅを０．２Ｍの溶液として維持した。
【０１１５】
ステップ５
【０１１６】
【化３２】
2010523666.tif 000033
３−｛２−［３−（１−ジメチルスルファモイルメチル−シクロヘキシル）−ウレイド］−３，３−ジメチル−ブチリル｝−６，６−ジメチル−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸メチルエステル（１２００−Ｆ）：前述のＰ２〜Ｐ３アミン塩酸塩、２０．０７（米国特許出願第１１／０６４，６７３号、中間体２０．０７）（１．２当量、１．０ｇ）のジクロロメタン３０ｍＬ中溶液を０℃に冷却し、Ｎ−メチルモルホリン（２．５当量、０．７２ｍＬ、ｄ０．９２０）で処理した。５分後、イソシアネート１２００−Ｅ（トルエン中０．２Ｍ溶液１３．０ｍＬ）溶液も添加した。反応混合物をさらに３時間撹拌した（０〜２５℃の温度）。混合物を１Ｍの水性ＨＣｌ（５０ｍＬ）で処理し、生成物を酢酸エチル（３００ｍＬ）に取り込んだ。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけて（勾配：アセトン／ヘキサン；１：９〜４：６）、生成物１２００−Ｆ（８５０ｍｇ；６２％）を白色固体として得た。
【０１１７】
ステップ６
【０１１８】
【化３３】
2010523666.tif 000034
３−｛２−［３−（１−ジメチルスルファモイルメチル−シクロヘキシル）−ウレイド］−３，３−ジメチル−ブチリル｝−６，６−ジメチル−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（１２００−Ｇ）：メチルエステル１２００−Ｆ（８４０ｍｇ）のＴＨＦ／水２：１混合物３０ｍＬ中溶液を０℃に冷却し、水酸化リチウム一水和物（２．５当量、１６６ｍｇ）で処理した。混合物を１０分間撹拌し、冷却浴を除去した。全ての出発材料が消費されたことがＴＬＣ（アセトン／ヘキサン；３：７）によって決定されるまで、反応物を室温で撹拌した。２時間後、混合物を１Ｍの水性ＨＣｌ（約５０ｍｌ）で処理すると、混合物は酸性に変わった（ｐＨ２）。混合物をジクロロメタン（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、生成物１２００−Ｇ（８１５ｍｇ；９８％）を白色固体として得た。
【０１１９】
ステップ７
【０１２０】
【化３４】
2010523666.tif 000035
３−｛２−［３−（１−ジメチルスルファモイルメチル−シクロヘキシル）−ウレイド］−３，３−ジメチル−ブチリル｝−６，６−ジメチル−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸［１−（シクロプロピルカルバモイル−ヒドロキシ−メチル）−ペンチル］−アミド（１２００−Ｈ）：酸１２００−Ｇ（２５０ｍｇ）の乾燥ジクロロメタン５ｍＬおよび乾燥ＤＭＦ５ｍＬ中溶液を０℃で撹拌し、ＨＡＴＵ（１．４当量、２５９ｍｇ）で処理した。アミン塩酸塩８３７Ｉ（米国特許出願第１１／０６４，６７３号、実施例８３７、ステップＨで既に説明されている）（１．３当量、１４９ｍｇ）に次いで、Ｎ−メチルモルホリン（４当量、０．２１ｍＬ、ｄ０．９２０）を添加した。反応混合物を終夜撹拌した（温度０〜２５℃）。全ての揮発物をロータリーエバポレーター内で除去し、残渣を酢酸エチル８０ｍＬに溶解した。有機層を、水（１５ｍＬ）、１Ｍの水性ＨＣｌ（１５ｍＬ）、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１５ｍＬ）、およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーター内で濃縮した。生成物１２００−Ｈを、さらなる精製なしに使用した。
【０１２１】
ステップ８
【０１２２】
【化３５】
2010523666.tif 000036
３−｛２−［３−（１−ジメチルスルファモイルメチル−シクロヘキシル）−ウレイド］−３，３−ジメチル−ブチリル｝−６，６−ジメチル−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（１−シクロプロピルアミノオキサリル−ペンチル）−アミド（１２００）：ヒドロキシアミド１２００−Ｈ（０．４８５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン５ｍＬ中溶液を、デス−マーチンペルヨージナン（１．３当量、２６７ｍｇ）で処理した。混合物を室温で３０分間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム飽和水溶液（１０ｍＬ）を添加することによって、反応をクエンチした。混合物を１０分間撹拌した後、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２０ｍＬ）を添加した。混合物をさらに１０分間撹拌した。混合物をジクロロメタンで抽出した（３×２０ｍＬ）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーター内で濃縮した。残渣をシリカゲルで精製して（Ｂｉｏｔａｇｅ  ２５−Ｓカラム；勾配：ヘキサン中アセトン１０〜５０％）、生成物１２００（３３０ｍｇ；９８％）を白色固体として得た。
【０１２３】
調製例１２６１
【０１２４】
【化３６】
2010523666.tif 000037
３−［２−（３−｛１−［（シクロプロピル−メチル−スルファモイル）−メチル］−シクロヘキシル｝−ウレイド）−３，３−ジメチル−ブチリル］−６，６−ジメチル−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（１−シクロプロピルアミノオキサリル−ペンチル）−アミド（１２６１）
ステップ１
【０１２５】
【化３７】
2010523666.tif 000038
１−ヨードメチル−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（１２６１−Ｂ）：ＴＨＦ（１００ｍＬ）中−７８℃のジイソプロピルアミン（１３２ｍｍｏｌ、１８．６５ｍＬ）に、ｎ−ＢｕＬｉ（１２０ｍｍｏｌ、７５ｍＬ）を添加した。冷却浴を除去し、３０分後に元に戻した。シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル１２６１−Ａ（１５．５７ｇ、１０９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に滴下した。１時間後、温度を１０℃未満に維持しながらジヨードメタン（１０９ｍｍｏｌ、８．７８ｍＬ）を添加した。添加後、反応物を室温に温め、終夜撹拌した。１８時間後、反応をＮＨ４Ｃｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、生成物１２６１−Ｂ３５ｇを得た。
【０１２６】
ステップ２
【０１２７】
【化３８】
2010523666.tif 000039
１−アセチルスルファニルメチル−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（１２６１−Ｃ）：粗１２６１−Ｂ（１０９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（９０ｍｌ）中冷却溶液に、温度を３０℃未満に維持しながらチオ酢酸カリウム（１．２当量、１３１ｍｍｏｌ、１５ｇ）を添加した。反応物を１８時間撹拌し、次いで１０℃に冷却し、水（１６０ｍＬ）を添加した。反応物をＥｔＯＡｃで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、次いでブラインで洗浄した。暗色の有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して暗色油にした。精製−ＨＰＦＣ（高圧フラッシュクロマトグラフィー）７５＋Ｍプレパックシリカカートリッジ（１〜５％のＥｔＯＡｃ）、ＵＶ収集。濃縮後、２０．４３ｇの生成物１２６１−Ｃを得た。
【０１２８】
ステップ３
【０１２９】
【化３９】
2010523666.tif 000040
１−クロロスルホニルメチル−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（１２６１−Ｄ）：チオエステル１２６１−Ｃ（５３ｍｍｏｌ、１２．２３ｇ）の酢酸（５５ｍｌ）中撹拌溶液に、水（２１２ｍｍｏｌ、３．８ｇ）を添加した。次いで、塩素ガス（１１．３ｇ、フード内はかり、１５９ｍｍｏｌ）で、約１５〜２０分間軽くバブリングした。バブリングを止めると、はかりは約１１．５ｇを示した。内部温度は５５℃に上昇した。反応物を冷却した。ＴＬＣは、わずかにより極性の点への変換を示した。非常に少量の第２のより極性の点も見える。ＤＣＭで希釈し、水で洗浄し（２回）、次いでＮａＯＨ（０．５Ｎ）およびブラインで洗浄した。ＤＣＭ層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、１２６１−Ｄ１２ｇを淡黄色の油として得た。
【０１３０】
ステップ４
【０１３１】
【化４０】
2010523666.tif 000041
１−［（シクロプロピル−メチル−スルファモイル）−メチル］−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（１２６１−Ｅ）：スルホニルクロリド１２６１−Ｄ（４ｍｍｏｌ、１ｇ）を含有する室温のＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に、シクロプロピルアミン（１．５当量、６ｍｍｏｌ、０．３６ｇ）に次いでＥｔ３Ｎ（２ｍＬ）を添加した。５時間後、反応物をＥｔＯＡｃに注ぎ、ＮａＨＣＯ３、ＨＣｌ  １．０Ｎおよびブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、シクロプロピルスルホンアミド中間体１．２８ｇ（９９％）を得た。０℃のスルホンアミド（４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．５当量、６ｍｍｏｌ、２ｇ）に次いでＭｅＩ（１．８当量、７．２ｍｍｏｌ、０．４５ｍＬ）を添加した。反応物を終夜撹拌した。ＥｔＯＡｃで希釈し、水（２×５０ｍＬ）、ＮＨ４Ｃｌおよびブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、淡黄色の油１２６１−Ｅ（１．１５ｇ）を得た。
【０１３２】
ステップ５
【０１３３】
【化４１】
2010523666.tif 000042
１−［（シクロプロピル−メチル−スルファモイル）−メチル］−シクロヘキサンカルボン酸（１２６１−Ｆ）：エステル１２６１−Ｅ（４ｍｍｏｌ、１．１ｇ）を含有する室温のＭｅＯＨ溶液（３０ｍＬ）に、水性ＫＯＨ（１７．６ｍＬ、６１．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１８時間５５℃に曝した。揮発物を真空下で除去し、残渣をＨＣｌ  １．０ＮでｐＨ４の酸性にした。ＥｔＯＡｃで希釈し、水（２×２０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、酸１２６１−Ｆ（１．０９ｇ、９６％）を得た。
【０１３４】
ステップ６
【０１３５】
【化４２】
2010523666.tif 000043
Ｎ−シクロプロピル−Ｃ−（１−イソシアナト−シクロヘキシル）−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（１２６１−Ｇ）：酸１２６１−Ｆ（３．９６ｍｍｏｌ、１．０９ｇ）を含有する室温のトルエン溶液（１５ｍＬ）に、ＤＰＰＡ（０．８５ｍＬ、３．９６ｍｍｏｌ）に次いでＥｔ３Ｎ（０．５６ｍＬ、３．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１０分間撹拌し、次いで２時間還流した。反応物を室温に冷却し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈した。ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。揮発物を除去し、残渣をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈して、１２６１−Ｇを０．２６Ｍの溶液として得た。
【０１３６】
ステップ７
【０１３７】
【化４３】
2010523666.tif 000044
３−［２−（３−｛１−［（シクロプロピル−メチル−スルファモイル）−メチル］−シクロヘキシル｝−ウレイド）−３，３−ジメチル−ブチリル］−６，６−ジメチル−３−アザ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（１−シクロプロピルアミノオキサリル−ペンチル）−アミド（１２６１）：必要な生成物１２６１を、前述の手順を使用して（調製例１２００に類似）、イソシアネート１２６１−Ｇから得た。
【０１３８】
表１に示す全ての化合物（調製例）は、本質的に前述の手順（調製例１２００および１２６１）を使用して、適切な改変を用いて調製した。
【０１３９】
表１は、本化合物および後述のアッセイによって決定されるそれらのＨＣＶセリンプロテアーゼ阻害活性範囲を列挙する。活性は、Ｋｉ＊範囲（ナノモーラー）として示され、それらは（Ｋｉ＊範囲：Ａ＜７５ｎＭ、Ｂ＝７５〜２５０ｎＭ；Ｃ＞２５０ｎＭ）である。
【０１４０】
【表１−１】
2010523666.tif 000045
【０１４１】
【表１−２】
2010523666.tif 000046
【０１４２】
【表１−３】
2010523666.tif 000047
【０１４３】
【表１−４】
2010523666.tif 000048
【０１４４】
【表１−５】
2010523666.tif 000049
【０１４５】
【表１−６】
2010523666.tif 000050
【０１４６】
【表１−７】
2010523666.tif 000051
【０１４７】
【表１−８】
2010523666.tif 000052
【０１４８】
【表１−９】
2010523666.tif 000053
【０１４９】
【表１−１０】
2010523666.tif 000054
【０１５０】
【表１−１１】
2010523666.tif 000055
【０１５１】
【表１−１２】
2010523666.tif 000056
【０１５２】
【表１−１３】
2010523666.tif 000057
【０１５３】
【表１−１４】
2010523666.tif 000058
【０１５４】
【表１−１５】
2010523666.tif 000059
【０１５５】
【表１−１６】
2010523666.tif 000060
【０１５６】
【表１−１７】
2010523666.tif 000061
【０１５７】
【表１−１８】
2010523666.tif 000062
【０１５８】
【表１−１９】
2010523666.tif 000063
【０１５９】
【表１−２０】
2010523666.tif 000064
【０１６０】
【表１−２１】
2010523666.tif 000065
【０１６１】
【表１−２２】
2010523666.tif 000066
【０１６２】
【表１−２３】
2010523666.tif 000067
【０１６３】
【表１−２４】
2010523666.tif 000068
【０１６４】
【表１−２５】
2010523666.tif 000069
【０１６５】
【表１−２６】
2010523666.tif 000070
【０１６６】
【表１−２７】
2010523666.tif 000071
【０１６７】
【表１−２８】
2010523666.tif 000072
【０１６８】
【表１−２９】
2010523666.tif 000073
【０１６９】
【表１−３０】
2010523666.tif 000074
【０１７０】
【表１−３１】
2010523666.tif 000075
【０１７１】
【表１−３２】
2010523666.tif 000076
【０１７２】
【表１−３３】
2010523666.tif 000077
【０１７３】
【表１−３４】
2010523666.tif 000078
【０１７４】
【表１−３５】
2010523666.tif 000079
【０１７５】
【表１−３６】
2010523666.tif 000080
【０１７６】
【表１−３７】
2010523666.tif 000081
【０１７７】
【表１−３８】
2010523666.tif 000082
【０１７８】
【表１−３９】
2010523666.tif 000083
【０１７９】
【表１−４０】
2010523666.tif 000084
【０１８０】
【表１−４１】
2010523666.tif 000085
【０１８１】
【表１−４２】
2010523666.tif 000086
【０１８２】
【表１−４３】
2010523666.tif 000087
【０１８３】
【表１−４４】
2010523666.tif 000088
【０１８４】
【表１−４５】
2010523666.tif 000089
【０１８５】
【表１−４６】
2010523666.tif 000090
本発明は、新規ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤に関する。この有用性は、ＨＣＶ  ＮＳ２／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼを阻害するそれらの能力において明らかとなり得る。これを実証する一般手順を、インビトロアッセイで以下によって例示する。
【０１８６】
ＨＣＶプロテアーゼ阻害活性のアッセイ
分光光度アッセイ：ＨＣＶセリンプロテアーゼの分光光度アッセイは、その開示が参照によって本明細書に組み込まれる、Ｒ．  Ｚｈａｎｇら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７０（１９９９年）２６８〜２７５頁に記載の手順に従って、本化合物に対して実施することができる。色素生産性（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ）エステル基質のタンパク質分解に基づくアッセイは、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ活性の連続的なモニタリングに適している。この基質は、Ｃ末端カルボキシ基が４つの異なる発色性（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｉｃ）アルコール（３−もしくは４−ニトロフェノール、７−ヒドロキシ−４−メチル−クマリン、または４−フェニルアゾフェニル）の１つでエステル化されているＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ連結部配列（Ａｃ−ＤＴＥＤＶＶＸ（Ｎｖａ）、ただしＸ＝ＡまたはＰ）のＰ側に由来する。以下に例示したのは、これらの新規分光光度用エステル基質の合成、特徴付けおよび高性能スクリーニングへの適用、ならびにＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の詳細な動力学的評価である。
【０１８７】
材料および方法
材料：アッセイ関連の緩衝剤用の化学試薬は、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ミズーリ州、セントルイス）から得る。ペプチド合成用の試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（カリフォルニア州、サンディエゴ）、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州、フォスターシティ）およびＰｅｒｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（マサチューセッツ州、フラミンガム）製とした。ペプチドを手動で合成し、または自動化ＡＢＩモデル４３１Ａシンセサイザー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）内で合成する。ＵＶ／ＶＩＳ分光計モデルＬＡＭＢＤＡ  １２はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（コネチカット州、ノーウォーク）製とし、９６ウェルＵＶプレートはＣｏｒｎｉｎｇ（ニューヨーク州、コーニング）から得た。予熱ブロックは、ＵＳＡ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（フロリダ州、オカラ）製であってよく、９６ウェルプレートボルテックスミキサー（ｖｏｒｔｅｘｅｒ）はＬａｂｌｉｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（イリノイ州、メルローズパーク）製である。モノクロメーターを備えたＳｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｐｌｕｓマイクロタイタープレートリーダーを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（カリフォルニア州、サニーベール）から得る。
【０１８８】
酵素の調製：組み換え型ヘテロ二量体ＨＣＶ  ＮＳ３／ＮＳ４Ａプロテアーゼ（株１ａ）は、既に刊行されている手順（Ｄ．  Ｌ．  Ｓａｌｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７（１９９８年）３３９２〜３４０１頁）を使用して調製される。タンパク質濃度は、Ｂｉｏｒａｄ色素法によって、予めアミノ酸分析によって定量化した組み換え型ＨＣＶプロテアーゼ標準を使用して決定する。アッセイ開始前に、酵素保存緩衝剤（５０ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．０５％ラウリルマルトシドおよび１０ｍＭのＤＴＴ）は、Ｂｉｏｒａｄ  Ｂｉｏ−Ｓｐｉｎ  Ｐ−６プレパックカラムを利用して、アッセイ緩衝剤（２５ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ６．５、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．０５％ラウリルマルトシド、５μＭのＥＤＴＡおよび５μＭのＤＴＴ）と交換される。
【０１８９】
基質の合成および精製：基質の合成は、Ｒ．Ｚｈａｎｇら（前述）によって報告された通り行われ、標準プロトコル（Ｋ．  Ｂａｒｌｏｓら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．、３７（１９９１年）、５１３〜５２０頁）を使用して、Ｆｍｏｃ−Ｎｖａ−ＯＨを２−クロロトリチルクロリド樹脂に固定することによって開始される。続いてペプチドを、Ｆｍｏｃ化学的性質を使用して、手動または自動ＡＢＩモデル４３１ペプチドシンセサイザーのいずれかで集める。Ｎ−アセチル化され、完全に保護されたペプチドフラグメントは、３０分間でジクロロメタン（ＤＣＭ）中１０％酢酸（ＨＯＡｃ）および１０％トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）によって、または１０分間でＤＣＭ中２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によって、樹脂から脱離させる。濾液およびＤＣＭ洗浄物の混合物を、共沸的に蒸発させて（またはＮａ２ＣＯ３水溶液によって繰返し抽出して）、脱離に使用される酸を除去する。ＤＣＭ相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させる。
【０１９０】
標準の酸−アルコールカップリング手順（Ｋ．  Ｈｏｌｍｂｅｒら、Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｃａｎｄ．、Ｂ３３（１９７９年）４１０〜４１２頁）を使用してエステル基質を集める。１０モル当量の発色団および触媒量の（０．１当量）のパラ−トルエンスルホン酸（ｐＴＳＡ）を添加した無水ピリジン（３０〜６０ｍｇ／ｍｌ）に、ペプチドフラグメントを溶解する。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、３当量）を添加して、カップリング反応を開始する。生成物の形成をＨＰＬＣでモニタすると、室温で１２〜７２時間反応させた後に完了するのが見られる。ピリジン溶媒を真空下で蒸発させ、トルエンを用いる共沸的な蒸発によってさらに除去する。ペプチドエステルを、２時間、ＤＣＭ中の９５％ＴＦＡで脱保護し、無水エチルエーテルで３回抽出して、過剰の発色団を除去する。脱保護された基質を、逆相ＨＰＬＣによって、Ｃ３またはＣ８カラムで３０％〜６０％アセトニトリル勾配を用いて（６つのカラム体積を使用）精製する。ＨＰＬＣ精製後の全収率は、約２０〜３０％となり得る。分子量は、エレクトロスプレーイオン化質量分析によって確認することができる。基質は、乾燥下、乾燥粉末形態で保存される。
【０１９１】
基質および生成物のスペクトル：基質および対応する発色団生成物のスペクトルを、ｐＨ６．５のアッセイ緩衝剤中で得る。吸光係数は、１ｃｍのキュベット中、最適なオフピーク波長で（３−ＮｐおよびＨＭＣについては３４０ｎｍ、ＰＡＰについては３７０ｎｍ、および４−Ｎｐについては４００ｎｍ）、多数の希釈物を使用して決定する。最適なオフピーク波長は、基質と生成物との吸光度の最大差分（（生成物ＯＤ−基質ＯＤ）／基質ＯＤ）をもたらす波長と定義される。
【０１９２】
プロテアーゼアッセイ：ＨＣＶプロテアーゼアッセイを、３０℃で２００μｌの反応混合物を使用して、９６ウェルのマイクロタイタープレート内で実施する。アッセイ緩衝剤条件（２５ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ６．５、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．０５％ラウリルマルトシド、５μＭのＥＤＴＡおよび５μＭのＤＴＴ）を、ＮＳ３／ＮＳ４Ａヘテロ二量体に対して最適化する（前述のＤ．  Ｌ．  Ｓａｌｉら））。一般に、緩衝剤、基質および阻害剤の混合物１５０μｌをウェルに入れ（ＤＭＳＯの最終濃度≦４％ｖ／ｖ）、３０℃で約３分間、予めインキュベートさせる。次いで、アッセイ緩衝剤中の予熱したプロテアーゼ（１２ｎＭ、３０℃）５０μｌを使用して反応を開始する（最終体積２００μｌ）。プレートを、適切な波長（３−ＮｐおよびＨＭＣについては３４０ｎｍ、ＰＡＰについては３７０ｎｍ、および４−Ｎｐについては４００ｎｍ）における吸光度変化について、モノクロメーターを備えたＳｐｅｃｔｒｏｍａｘ  Ｐｌｕｓマイクロタイタープレートリーダーを使用して、該アッセイにわたって（６０分）モニタする（許容できる結果は、カットオフフィルターを利用するプレートリーダーで得ることができる）。Ｎｖａと発色団の間のエステル結合のタンパク質分解的切断を、非酵素的加水分解の対照としての酵素無しのブランクに対して、適切な波長でモニタする。基質の動的パラメータの評価を、３０倍の基質濃度範囲（約６〜２００μＭ）にわたって実施する。最初の速度を、線形回帰を使用して決定し、非線形回帰分析を使用してミカエリス−メンテンの式にデータをフィットすることによって、運動定数を得る（Ｍａｃ  Ｃｕｒｖｅ  Ｆｉｔ  １．１、Ｋ．  Ｒａｎｅｒ）。酵素が完全に活性であると想定して代謝回転数（ｋｃａｔ）を算出する。
【０１９３】
阻害剤および不活性剤の評価：競合阻害剤Ａｃ−Ｄ−（Ｄ−Ｇｌａ）−Ｌ−Ｉ−（Ｃｈａ）−Ｃ−ＯＨ（２７）、Ａｃ−ＤＴＥＤＶＶＡ（Ｎｖａ）−ＯＨおよびＡｃ−ＤＴＥＤＶＶＰ（Ｎｖａ）−ＯＨに関する阻害定数（Ｋｉ）を、競合阻害動態に合わせて再編したミカエリス−メンテンの式：ｖｏ／ｖｉ＝１＋［Ｉ］ｏ／（Ｋｉ（１＋［Ｓ］ｏ／Ｋｍ））（式中、ｖｏは阻害されていない最初の速度であり、ｖｉは、任意の所与の阻害濃度（［Ｉ］ｏ）の阻害剤の存在下での最初の速度であり、［Ｓ］ｏは、使用される基質濃度である）に従って、酵素および基質の固定濃度でｖｏ／ｖｉ対阻害剤濃度（［Ｉ］ｏ）をプロットすることによって実験的に決定する。得られたデータを、線形回帰を使用してフィットし、得られる傾斜、１／（Ｋｉ（１＋［Ｓ］ｏ／Ｋｍ）を使用してＫｉ値を算出する。本発明の幾つかの化合物の活性を、表１に一般的に示す。以下の表２は、幾つかの特定の本化合物についてのＫｉ＊値（マイクロモーラー）を列挙している。
【０１９４】
【表２】
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本発明を、先に示した特定の実施形態に関連して記載してきたが、その多くの改変形態、修正形態および他の変更形態が、当業者には明らかとなろう。かかる全ての改変形態、修正形態および変更形態は、本発明の精神および範囲に含まれるものとする。
【国際調査報告】
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