(57)【要約】  本発明は、20℃を超える温度で安定な筋弛緩薬を供給するための方法であって、前記筋弛緩薬が、複合体形成タンパク質を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物である方法に関する。
2010528999.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
20℃を超える温度で筋弛緩薬を供給する方法であって、前記筋弛緩薬が、複合体形成タンパク質を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物である、方法。
【請求項２】
前記供給が、保管および/または輸送を含み、および/または前記筋弛緩薬を調製するための方法中のステップである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記筋弛緩薬が、90日間以下の期間、20℃を超え70℃までの温度にさらされる、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記期間が、10分間から90日間の範囲である、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記温度が、20と60℃の間であり、前記期間が、10分間から90日間の範囲である、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記期間が、10分間から30日間の範囲である、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記温度が、20℃と70℃の間であり、前記期間が、10分間から10日間の範囲である、請求項1から6のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記筋弛緩薬が、人工冷却装置なしに、輸送されおよび/または保管される、請求項2から7のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が、ボツリヌストキシンの神経毒成分の凍結乾燥物である、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が、ショ糖および/またはヒト血清アルブミンをさらに含む、請求項1から9のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、それぞれショ糖およびヒト血清アルブミンとは異なる、抗凍結剤、安定化剤、pHバッファ、賦形剤、およびそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも1つの成分をさらに含む、請求項1から10のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記神経毒成分が、A型ボツリヌストキシンの神経毒成分である、請求項1から11のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高温で筋弛緩薬を供給する方法であって、前記筋弛緩薬が、複合体形成タンパク質を含有せず、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物である方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ボツリヌストキシンは、クロストリジウム(Clostridium)細菌によって産生される。ボツリヌストキシンには、ボツリヌストキシンA、B、C、D、E、F、およびGと呼ばれる7種の抗原性的に別々の血清型が存在する。ボツリヌストキシンは、溶解したクロストリジウム培養物から、普通は複合体の形で放出される。すなわち、ボツリヌストキシンの毒性の原因となっているサブユニット(いわゆる、「神経毒成分」)は、他の細菌タンパク質と結合しており、それらは共に毒素複合体を形成している。この複合体の分子量は、約300,000から約900,000Daの範囲であり得る。複合体形成タンパク質は、例えば、種々の赤血球凝集素である。この毒素複合体のタンパク質は、それ自体毒性ではなく、神経毒成分に安定性を与えると考えられており、ボツリヌス中毒の経口毒性の原因である。毒素複合体とは異なり、単離された純粋な形の神経毒成分は、すなわち、複合体を形成するクロストリジウムタンパク質がない状態では、酸に対して不安定で消化管中のような攻撃的な環境に抵抗性がない。
【０００３】
ボツリヌストキシン複合体の神経毒成分は、最初、血清型Aの場合には分子量約150Daを有する単鎖のポリペプチドとして形成される。その他の血清型では、神経毒成分は、細菌源に依存して、約145と約170kDaの間を変化することが観察されてきた。血清型Aの場合には、例えば、ポリペプチドのタンパク質分解プロセッシングにより、その結果、重鎖と軽鎖とからなる二本鎖ポリペプチドの形で活性化ポリペプチドが形成され、その重鎖および軽鎖はジスルフィド結合で結合されている。ヒトにおいては、重鎖は、前シナプスコリン作動性神経末端への結合および細胞中への毒素の取り込みを仲介する。軽鎖は、ジンク(zink)エンドペプチダーゼとして働き、膜融合(SNARE複合体)の原因である特定のタンパク質を切断し、毒性作用の原因であると考えられている。(例えば、Montecucco C.、Shiavo G.、Rosetto O.、「The mechanism of action of tetanus and botulinum neurotoxins」、Arch Toxicol.、1996年、第18巻、(付録:342〜354頁を参照。)
【０００４】
細胞内での膜融合の過程を遮断することにより、ボツリヌストキシンは、シナプス間隙へのアセチルコリンの放出を抑制する。神経-筋肉接合点でのボツリヌストキシンの全体としての作用は、神経-筋肉の伝達を妨げ、実際上は、筋肉を除神経することである。ボツリヌストキシンはまた、他の末梢コリン作動性シナプスにおいて活性を有し、流涎または発汗の減少をもたらす。
【０００５】
ボツリヌストキシン複合体の神経毒サブユニットは、本明細書では、「神経毒成分」または「複合体形成タンパク質を含まない神経毒成分」と称する。
【０００６】
本出願を通じて用いられるように、「ボツリヌストキシン」または「ボツリヌストキシン(複数)」という用語は、他のクロストリジウムタンパク質を全く含まない神経毒成分を意味するが、「ボツリヌストキシン複合体」をも意味する。「ボツリヌストキシン」という用語は、本明細書では、複合体であるか神経毒成分であるかの区別が必要でないかまたは望ましくない場合に用いる。複合体は、通常、追加の、いわゆる「非毒性の」タンパク質を含むが、そのタンパク質を「複合体形成タンパク質」または「細菌タンパク質」と称する。
【０００７】
「BoNT」または「NT」は、複合体形成タンパク質を含まないボツリヌストキシンのNT化合物に関連する普通に用いられる略語である。
【０００８】
その毒性作用にも拘わらず、ボツリヌストキシン複合体は、非常に多数の疾患に治療薬として用いられてきた。ボツリヌストキシン血清型Aは、斜視、眼瞼けいれん、およびその他の疾患の治療用として、アメリカ合衆国において1989年にヒトへの使用が認められた。ボツリヌストキシン複合体は、ボツリヌストキシンAタンパク質複合体として、例えば、商品名BOTOX(Allergan Inc社)または商品名DYSPORT(Ipsen Ltd社)として商業的に入手可能である。治療用の適用のために、複合体は、治療される筋肉へ直接注射される。生理学的なpHで、毒素はタンパク質複合体から放出され所望の薬理学的な効果が起こる。
【０００９】
典型的には罹患している筋肉中へ直接それを患者に筋肉内投与する前に、前記組成物を、生理学的食塩水に溶解させる。
【００１０】
ボツリヌストキシンに基づく薬物の組成物および投与量に関して、およびボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく薬物の組成物、投与量および投与の頻度に関しては、米国特許出願60/817756号が参照される。
【００１１】
複合体形成タンパク質の上述した機能に加えて、このタンパク質が、また、ボツリヌストキシン複合体の神経毒成分を厳しい環境条件から保護すること、およびそのような神経毒成分は、一般に、暖かいから暑い気候において、または夏の間に、保管および/または輸送などの短期間の温度ストレスにさらされた場合に特に、分解および/または不活性化を非常に受けやすいことが推定されてきた。
【００１２】
前記の理由により、一般に、ボツリヌストキシンに基づく薬物、および特にボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく薬物が、4℃を超える温度、例えば、20℃近くに達するのを防止するために、過去においては最大限の注意がはらわれている。大部分の場合、ボツリヌストキシンを含む固体乾燥組成物を入れたバイアルは、氷によりまたは少なくとも冷蔵庫(4℃付近)に入れて、凍結状態(-20℃付近)で保存された。冷却が必要ということは、薬物を供給するコストに加えられることを意味する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許出願60/817756号
【特許文献２】国際公開第2006/027207号
【特許文献３】国際公開第2006/114308号
【特許文献４】欧州特許出願公開第07014785.5号
【特許文献５】国際公開第00/74703号
【特許文献６】国際公開第2006/133818号
【特許文献７】PCT/欧州特許出願第2007/005754号
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Montecucco C.、Shiavo G.、Rosetto O.、「The mechanism of action of tetanus and botulinum neurotoxins」、Arch Toxicol.、1996年、第18巻、(付録):342〜354頁
【非特許文献２】W.R. PearsonおよびD.J. Lipman、PNAS、(1988年)、第85巻、2444〜2448頁
【非特許文献３】Simpson LL、Ann Rev Pharmacol Toxicol.、2004年、第44巻、167〜93頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
前記の状況を考慮して、本出願者は、ボツリヌストキシンに基づく筋弛緩薬の温度安定性に関して研究を行った。驚くべきことに、ボツリヌストキシンの神経毒成分は、当技術分野で予想されているよりも有意により温度安定であることが見出された。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、20℃を超える、例えば、30℃を超える、または45℃を超える高温で筋弛緩薬を供給する方法であって、前記筋弛緩薬が、複合体形成タンパク質を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物であり、好ましくは、保管および/または輸送を含む方法に関する。別の実施形態では、前記供給は、前記筋弛緩薬を調製するための方法中のステップ、例えば、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含むタンパク質が乾燥された後に実行されるステップである。
【００１７】
1つの実施形態では、45℃を超える温度で筋弛緩薬が供給され、その際、前記筋弛緩薬は、複合体形成タンパク質を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む、固体乾燥組成物である。
【００１８】
別の実施形態では、前記供給が、保管および/または輸送を含み、および/または前記筋弛緩薬を調製する方法中のステップである。
【００１９】
別の実施形態では、前記筋弛緩薬が、90日間以下の期間、45℃を超え70℃までの温度にさらされる。さらなる実施形態では、前記期間は、10分間から90日間までの範囲である。よりさらなる実施形態では、前記温度は、45と60℃の間であり、前記期間は10分間から90日間の範囲である。よりさらなる実施形態では、前記期間は、10分間から30日間までの範囲である。よりさらなる実施形態では、前記温度は65℃と70℃の間であり、前記期間は10分間から10日間の範囲である。
【００２０】
別の実施形態では、前記筋弛緩薬は、人工冷却装置なしに、輸送されおよび/または保管される。
【００２１】
別の実施形態では、前記組成物は、ボツリヌストキシンの神経毒成分の凍結乾燥物である。
【００２２】
別の実施形態では、前記組成物は、ショ糖および/またはヒト血清アルブミンをさらに含む。
【００２３】
別の実施形態では、前記組成物は、それぞれショ糖およびヒト血清アルブミンとは異なる、抗凍結剤、安定化剤、pHバッファ、賦形剤、およびそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも1種の成分をさらに含む。
【００２４】
別の実施形態では、前記神経毒成分は、A型ボツリヌストキシンの神経毒成分である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】60℃で30日間に至るまでの期間保管した後の、Xeomin(登録商標)の生物学的活性に与える温度の影響を示す図である。生物学的活性は、時間で示された点で試験した。
【図２】70℃で10日間に至るまでの期間保管した後の、Xeomin(登録商標)の生物学的活性に与える温度の影響を示す図である。生物学的活性は、時間で示された点で試験した。
【図３】80℃で10日間に至るまでの期間保管した後の、Xeomin(登録商標)の生物学的活性に与える温度の影響を示す図である。生物学的活性は、時間で示された点で試験した。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、20℃を超える温度で筋弛緩薬を供給する方法であって、前記筋弛緩薬が、複合体形成剤を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物である方法に関する。別の実施形態では、前記筋弛緩薬は、45℃および/またはそれを超える温度で供給され、その際、前記筋弛緩薬は、複合体形成剤を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物である。本発明の範囲内で、「供給する」という用語は、本明細書に定義される筋弛緩薬を供給するいかなる種類のもの、特に、保管、輸送、または前記筋弛緩薬の調製の中のステップを含む。また、「供給する」という用語は、前記筋弛緩薬が、凍結(-20℃)、または冷却(+4℃)状態から20℃を超える温度へ、その温度上昇にさらされるようなステップも含む。別の実施形態では、前記筋弛緩薬は、45℃および/またはそれを超える温度で供給され、その際、前記筋弛緩薬は、複合体形成剤を含まない、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む固体乾燥組成物である。
【００２７】
本発明の範囲内で、ボツリヌストキシンの神経毒成分のすべての型、特に、種々の血清型を使うことになる。それに加えて、それぞれの変異体、欠失体などを含めて、ボツリヌストキシンの修飾されたおよび/または組換えで生産された神経毒成分もまた本発明の範囲内である。適切な変異体に関しては、国際公開第2006/027207号、国際公開第2006/114308号、および欧州特許出願公開第07014785.5号が参照され、これらはすべて参照により本明細書に組み込まれる。さらに、本発明の範囲内で、種々の血清型の混合物(神経毒成分および/またはそれらの組換え体の形で、例えば、ボツリヌストキシンのA型とB型の混合物)を使用し得る。しかし、本発明は、例えば、特に、1つもしくは複数の面、または溶媒でさらされたアミノ酸の、ペグ化、グリコシル化、硫酸エステル化、リン酸化またはその他の修飾により、化学的に修飾された神経毒も言及する。
【００２８】
1つの実施形態では、前記組成物はA型ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む。別の実施形態では、ボツリヌストキシンは、抗原性的に別々の血清型A、B、C、D、E、F、またはGのボツリヌストキシンである。ボツリヌストキシン血清型A、B、C、D、E、F、またはGが記述されるときにはいつも、血清型A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3、E1、E2、E3、F1、F2、F3、またはG1、G2、G3のような血清型の公知の変異体もまた包含している。本発明によれば、1つの血清型または異なる血清型の混合物を使用し得る。1つの実施形態では、ボツリヌストキシンはボツリヌストキシンAである。
【００２９】
別の実施形態では、ボツリヌストキシンのアイソフォーム、ホモログ、オルソログ、およびパラログも包含され、これらは、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または100%に至るまでの配列相同性を示す。配列相同性は、信頼し得る結果を与える適切なアルゴリズムならばどのようなものによっても、例えば、FASTAアルゴリズム(W.R. PearsonおよびD.J. Lipman、PNAS、(1988年)、第85巻、2444〜2448頁)を用いることにより、計算し得る。
【００３０】
「神経毒成分」という用語は、また、クロストリジウムボツリヌス(Clostridium botulinum)の他の血清型において見出される機能性ホモログを含む。本発明の1つの実施形態においては、神経毒成分は、他のクロストリジウムボツリヌスタンパク質をなんら含まず、1つの実施形態においては、神経毒成分に潜在的に付随している可能性のあるRNAも含まない。神経毒成分は、約150kDaの単鎖前駆体タンパク質、または1つまたは複数のジスルフィド結合で結合されていてもよい、約50kDaの軽鎖(Lc)と約100kDaの重鎖(Hc)とを含む、タンパク質分解的に処理された神経毒成分であってもよい(概説として、例えば、Simpson LL、Ann Rev Pharmacol Toxicol.、2004年、第44巻、167〜93頁を参照)。別の実施形態では、単鎖および処理された神経毒成分の混合物を使用してもよい。
【００３１】
本発明の教示によれば、薬物は、ボツリヌストキシン複合体中に見出される神経毒成分以外のタンパク質を含まないことが可能である。しかし、神経毒成分の前駆体は、切断されていても切断されていなくてもよいが、1つの実施形態では、前駆体は重鎖と軽鎖とに切断されている。本明細書中の別の個所で指摘されているように、ポリペプチドは、野生型配列を有しても、または1個または複数個の残基の位置で修飾されていてもよい。修飾には、例えば、ポリペプチドの取り込みおよび安定性に対して有利であり得るような、例えば、グリコシル化、アセチル化、アシル化、アミド化などの化学的修飾を含む。神経毒成分のポリペプチド鎖は、しかし、1個または複数個のアミノ酸残基の付加、置換または欠失により、代替的にまたは付加的に修飾されていてもよい。
【００３２】
本明細書の上記で述べた神経毒成分は、組成物または医薬組成物の一部でもよい。本明細書で用いられるこの医薬組成物は、例えば、ただ1つの活性成分として神経毒成分の形で、ボツリヌストキシンを含んでもよく、または追加の薬学的に活性の成分、例えば、鎮痛薬および/またはさらに神経毒を含んでもよい。
【００３３】
本明細書で用いる「医薬組成物」は、薬物または診断として使用するための活性成分が含有または含まれている製剤である。そのような医薬組成物は、ヒトの患者に対する診断または治療のための投与(すなわち、筋肉内または皮下注射により)に適切であり得る。
【００３４】
本発明の1つの実施形態では、組成物は、神経毒成分およびヒアルロン酸および/またはポリビニルピロリドンおよび/またはポリエチレングリコールを含んでもよく、そのような組成物は、任意選択で、適切なpHバッファにより、特に酢酸ナトリウムバッファおよび/または抗凍結剤のポリアルコールによりpH安定化されている。
【００３５】
1つの実施形態では、神経毒成分は、マウスLD50試験で決定して、神経毒成分1ng当たり、50〜250LD50単位の生物学的活性を有する。別の実施形態では、神経毒成分は、約150LD50単位の生物学的活性を有する。前記150LD50単位は、1ナノグラム当たりの単位を意味する。一般に、本発明の医薬組成物は、神経毒成分を約6pgから約30ngの量で含む。
【００３６】
単離形でのA型ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む医薬組成物は、ドイツでは、Merz Pharmaceuticals GmbH社からXeomin(登録商標)の商品名で商業的に入手できる。A型ボツリヌストキシンおよびB型の神経毒成分の製造は、例えば、国際特許出願で国際公開第00/74703号および国際公開第2006/133818号に記載されている。
【００３７】
1つの実施形態では、前記組成物は、A型ボツリヌストキシンの神経毒成分を含む。前記組成物は、ボツリヌストキシンの神経毒成分の固体乾燥組成物である。別の実施形態では、組成物は、例えば、ショ糖またはヒト血清アルブミンまたは両方をさらに含み、さらに別の実施形態では、ショ糖に対するヒト血清アルブミンの比は、約1:5である。1つの実施形態では、組成物はXeomin(登録商標)である。別の実施形態では、前記ヒト血清アルブミンは、組換えヒト血清アルブミンである。別法として、前記組成物は、ヒト血清アルブミンなどの哺乳類由来のタンパク質を含んでいない。そのような溶液はどれも、血清アルブミンを他のタンパク質でない安定化剤(以下を参照)で置換することにより十分な神経毒安定性を与え得る。
【００３８】
本特許出願の範囲内で、A型ボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく薬物の使用が、および別の実施形態では、Merz Pharmaceutical社からXeomin(登録商標)の商品名で配布されている製品が、使用し得る。これは、Xeomin(登録商標)などのボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく医薬組成物を適用する場合に、A型ボツリヌストキシン複合体に基づく薬物を投与するときに比べて、患者の中に抗体を産生する傾向が低いことが見出されたためである。理論に固執するつもりはないが、ボツリヌストキシン複合体中の赤血球凝集素は、免疫系に活性を与える能力があると考えられている。
【００３９】
ボツリヌストキシンに基づく薬物の組成物と投与量に関しては、およびボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく薬物の組成物、投与量および投与の頻度に関しては、PCT/欧州特許出願第2007/005754号を参照されたい。
【００４０】
1つの実施形態では、前記組成物は、ボツリヌストキシンの神経毒成分の凍結乾燥物であり、前記組成物は、ショ糖および/またはヒト血清アルブミンをさらに含み得る。前記後者の組成物においては、ショ糖に対するヒト血清アルブミンの比は、例えば、約1:5であってもよい。1つの実施形態では、組成物は、Xeomin(登録商標)である。
【００４１】
そのような組成物は、追加の賦形剤を含んでもよい。「賦形剤」という用語は、医薬組成物中に存在する活性薬学的成分の他に医薬組成物中に存在する物質を意味する。賦形剤は、バッファ、担体、抗粘着剤、鎮痛剤、バインダー、錠剤分解物質、フィラー、希釈剤、防腐剤、ビヒクル、シクロデキストリン、および/または、アルブミン、ゼラチン、コラーゲン、塩化ナトリウム、防腐剤、抗凍結剤および/または安定化剤などの増量剤であり得る。
【００４２】
「pHバッファ」は、組成物、溶液などのpH値をある値、または特定のpH範囲に調整することのできる化学物質を意味する。1つの実施形態では、このpH範囲は、pH5からpH8であり得る。別の実施形態では、pH7からpH8、また別の実施形態では、7.2〜7.6、およびさらに別の実施形態では、pH7.4である。別の実施形態では、医薬組成物は、再構成された時または注射時に、約4と7.5の間のpHを有し、また別の実施形態では、約pH6.8とpH7.6であり、さらに別の実施形態では、pH7.4とpH7.6の間である。
【００４３】
1つの実施形態では、組成物は、1〜100mMの酢酸ナトリウムバッファも含み、別の実施形態では、10mMの酢酸ナトリウムバッファを含む。
【００４４】
表示したpH範囲は、単に典型的な例であって実際のpHは上にあげた数値の間のどのような間隔でも含み得る。本発明の教示による適切なバッファは、例えば、リン酸ナトリウムバッファ、酢酸ナトリウムバッファ、トリスバッファ、または上記のpH範囲内に緩衝するのに適しているどのようなバッファでもよい。
【００４５】
本明細書における「室温」という用語は、+20℃から+25℃の間のいずれの温度、さらにより好ましくは、+20℃、+21℃、+22℃、+23℃、+24℃または+25℃およびその間のどのような値の温度のどれをも意味する。
【００４６】
「安定化(stabilizing)」、「安定化する(stabilizes)」または「安定化(stabilization)」は、活性成分が、すなわち、再構成されたまたは水溶液医薬組成物中の神経毒成分が、生物学的に活性な神経毒成分が医薬組成物中に組み込まれる前に有していた毒性の約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、および約100%までよりも大きな毒性を有することを意味する。
【００４７】
そのような安定化剤の例は、ゼラチンまたはアルブミンであり、1つの実施形態では、ヒト起源または組換え源から得たものである。ヒト由来でなくまたは動物源からでないタンパク質もまた含まれる。安定化剤は、化学的な手段により、または組換え遺伝学により修飾されていてもよい。本発明の1つの実施形態においては、凍結乾燥の間にタンパク質を安定化するための抗凍結剤である賦形剤として、アルコール、例えば、イノシトール、マンニトールを使用することが考えられている。
【００４８】
本発明の別の実施形態では、安定化剤は、ヒアルロン酸、またはポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールまたはそれらのいかなる組合せを含む非タンパク質性安定化剤であってもよい。別の実施形態では、前記ポリビニルピロリドンは、例えば、(Kollidon(登録商標))であってもよい。さらなる安定化剤は、ヒドロキシエチルデンプンまたはアルギン酸塩でもよい。そのような組成物は、任意選択で、適切なpHバッファ、特に、酢酸ナトリウムバッファ、または抗凍結剤、またはその両方によりpH安定化されていてもよい。前記組成物は、上述した安定化剤に加えて、水およびマンニトールまたはソルビトールまたはそれらの混合物などの少なくとも1種のポリアルコールを含んでもよい。それは、グルコース、ショ糖または果糖などの、モノ、ジまたはそれより高度の多糖類を含んでもよい。そのような組成物は、驚くべき安定性を有する安全な組成物であると考えられている。
【００４９】
本医薬組成物中のヒアルロン酸は、1つの実施形態では、200U/mlのボツリヌストキシン溶液中に、1ml当たり、0.1〜10mg、特に、1mgのヒアルロン酸の量で、本神経毒成分と組み合わせる。
【００５０】
本組成物中に存在する場合、ポリビニルピロリドンは、200U/mlのボツリヌストキシンの神経毒成分溶液中に、1ml当たり、10〜500mg、特には、100mgのポリビニルピロリドンを含む再構成された溶液を与えるような量で、本神経毒成分と組み合わせる。別の実施形態では、再構成は、8ml溶液までになるように実行される。このことは、25U/mlの神経毒成分溶液中、1ml当たり、低下して12.5mgのポリビニルピロリドンの濃度となる。別の実施形態では、主題の溶液は、1〜100mM、さらに別の実施形態では、10mMの酢酸ナトリウムバッファも含む。
【００５１】
本医薬組成物中のポリエチレングリコールは、1つの実施形態では、200U/mlのボツリヌストキシン溶液中に、1ml当たり、10〜500mg、さらに別の実施形態では、100mgのポリエチレングリコールを含む再構成した溶液を与えるような量で、本神経毒成分と組み合わせる。別の実施形態では、主題の溶液は、1〜100mM、さらに別の実施形態では、10mMの酢酸ナトリウムバッファも含む。
【００５２】
本発明による医薬組成物は、1つの実施形態において、6カ月、1年、2年、3年および/または4年の期間、約+80℃と約-20℃の間の温度で保存されたとき、その効力を実質的に無変化に保つ。加えて、示された医薬組成物は、再構成時に約20%と約100%の間の効力または回復率を有し得る。
【００５３】
別の実施形態において、安定化剤は、チオアルキル、メチオニン、またはトレハロースではない当技術分野で公知の安定化剤から選択される。
【００５４】
「抗凍結剤」は、生物学的に活性な神経毒成分が医薬組成物に凍結乾燥される前に有していた毒性の約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、および約100%までよりも大きな毒性を有する、再構成されたまたは水溶液医薬組成物中の神経毒成分をもたらす賦形剤を意味する。前記「抗凍結剤」は、活性成分をもたらす賦形剤を意味する。
【００５５】
別の実施形態において、組成物は、抗凍結剤としてポリアルコールを含んでもよい。1つの実施形態においては、組成物は、ポリヒドロキシ化合物を含んでもよい。使用し得るポリアルコールの例としては、例えば、イノシトール、マンニトールおよび他の非還元性のアルコールを含む。組成物のいくつかの実施形態では、タンパク質性安定化剤を含まず、またはトレハロースまたはマルトトリオースまたは乳糖またはショ糖または関連する砂糖または時には抗凍結剤として使用される炭水化物化合物を含まない。
【００５６】
「防腐剤」および「防腐剤(複数)」という用語は、微生物、昆虫、細菌または他の汚染生物の前記組成物中での成長または生存を防止する物質または物質群をそれぞれ意味する。防腐剤は、また、前記組成物の望ましくない化学的変化を防止する。本特許の範囲内で使用し得る防腐剤は当技術分野で公知のすべての最新の防腐剤である。使用し得る防腐剤の例としては、とりわけ、例えば、ベンジルアルコール、安息香酸、塩化ベンザルコニウム、プロピオン酸カルシウム、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、亜硫酸塩(二酸化硫黄、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸水素カリウムなど)、EDTA二ナトリウム、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、珪藻土、エタノール、メチルクロロチアゾリノン、ブチル化ヒドロキシアニソールおよび/またはブチル化ヒドロキシトルエンが含まれる。
【００５７】
「鎮痛剤」という用語は、末梢および中枢神経系において種々の方法で働く鎮痛薬剤に関し、とりわけ、Paracetamol(登録商標)(アセトアミノフェン)、サリチル酸エステルなどの非ステロイド性抗炎症性薬(NSAID)、モルフィンなどの麻薬、Tramadol(登録商標)などの麻薬特性を有する合成薬およびそのほかの種々のものを含む。また、例えば、リドカイン、ベンジルアルコール、安息香酸および他のものなどの、局所的な鎮痛効果を有するいかなる化合物も含まれる。
【００５８】
1つの実施形態では、鎮痛剤は組成物の一部である。別の実施形態では、鎮痛剤は、化学的除神経薬剤を用いる治療の前、途中または後に投与される。
【００５９】
典型的には、上で述べた筋弛緩薬の供給は、筋弛緩薬の保管および/または輸送を含むか、または、それぞれ高温で、前記筋弛緩薬を調製する方法中のステップであり、より好ましくは、ボツリヌストキシンの神経毒成分を含むタンパク質が乾燥された後に実行されるステップである。「高温」という用語により、20℃を超える、例えば、25℃を超える、または30℃を超える温度を意味する。例外的な場合には、すなわち、ボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく筋弛緩薬が、0℃より低温で保管されている環境では、「高温」という用語は、0℃を超える、または4℃を超える、または10℃を超える、20を超える温度、または25または30℃の温度をそれぞれ意味する。
【００６０】
別の実施形態において、筋弛緩薬は、90日間以下の期間、30℃を超えて70℃までの範囲にある温度にさらされる。当業者ならば完全に気づくように、筋弛緩薬がそれぞれの温度にさらされる期間は、数分間と90日間の間の任意の時間間隔であり得る。典型的には、そのような筋弛緩薬を供給する状況および特に、保管および/または輸送が含まれる状況を考慮に入れると、期間は10分間以上であろう。このように短い期間は、輸送後で保管の前に暑い気候下で、筋弛緩薬が直射日光にさらされる、例えば、飛行場または道路上のような状況下では特に重要である。本発明における典型的な期間は、それ故、10分間、30分間、1時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日間、2週間、3週間、1カ月、2カ月、3カ月(90日間)である。上記の期間は単に典型的な例であることは言うまでもないが、実際の期間は、より長くも短くもあるであろうし、上記にあげた数値の間のいかなる間隔をも含み得る。
【００６１】
筋弛緩薬がさらされる温度に関しては、典型的には、20℃を超える温度の下限を当業者ならば認識する。本明細書で規定されている温度と温度範囲に関しては、当業者ならば、筋弛緩薬/組成物がさらされる温度の上限は、好ましくは、70℃以下であると理解する。つまり、筋弛緩薬がさらされる温度は、好ましくは、20℃を超え70℃までの範囲である。それ故、本発明の範囲内で、筋弛緩薬は、20℃を超え、または25℃を超え、または30℃を超え、または35℃を超え、または40℃を超え、または45℃を超え、または50℃を超え、または60℃を超え、または65℃を超え、70℃までの温度に、それぞれさらされる。また、筋弛緩薬が供給される、好ましくは、輸送されおよび/または保管される環境の結果としてもたらされる、20℃を超え70℃までの上述の値の間の特定のいかなる温度およびそれぞれの温度間隔は、本発明の範囲に含まれる。
【００６２】
以下に述べる温度および時間間隔は本発明の実施形態を表す。第1の実施形態によれば、筋弛緩薬は、90日間以下の期間、30℃を超え70℃までの温度に、より好ましくは、10分間から90日間の期間、30℃を超え70℃までの温度に、より好ましくは、10分間から90日間の期間、40と60℃の間の温度にさらされる。
【００６３】
さらなる実施形態では、期間は、10分間から30日間の範囲であり、一方、温度は、30℃を超え70℃まで、または40℃〜60℃、または50℃〜60℃の範囲である。
【００６４】
極端な条件を表すさらなる実施形態において、温度は65℃と70℃の間の範囲にあり、筋弛緩薬が前記温度にさらされている期間は、10分間から10日間、または10分間から3日の範囲にある。
【００６５】
本発明が基づいている発見により、人工冷却装置を用いないで上述したように筋弛緩薬を供給することが今や可能である。この発見は、そのような筋弛緩薬の輸送および/または保管のために特に重要である。さらに、本発明は、おそらくは同時に高湿度を伴うであろう高温環境に、特に関連している。
【００６６】
本発明は、ここで、以下に述べる非制限的な実施例を示すことによりさらに例示される。
【実施例】
【００６７】
実施例は商業的に入手可能な製品Xeomin(登録商標)を用いて行った。Xeomin(登録商標)は、活性成分として、ボツリヌス神経毒A型(150kD)を含む凍結乾燥粉末である。毒素は、ニックの入った二本鎖の形で存在する。すなわち、重鎖と軽鎖を含む。毒素はクロストリジウムボツリヌス培養物(ATCC3205株)から入手する。複合体形成タンパク質を含まなくなる程度にまで精製した。Xeomin(登録商標)は、さらに、ヒト血清アルブミンとショ糖を含有する。
【００６８】
Xeomin(登録商標)のサンプル(未開封のバイアルで、再構成されていない)を、60℃の温度で30日間(実施例1)、70℃で10日間(実施例2)、および80℃で10日間(比較例3)でそれぞれ保管した。保管は、温度許容範囲(±2℃)が狭い品質保証されたインキュベータを用いて行った。サンプルは、連続して1日毎にインキュベータから取りだし、分析に供するまで5℃で保管した。
【００６９】
Xeomin(登録商標)の安定性を評価するために、良く知られたマウスLD50試験を用いて生物学的活性を、pg/vial(バイアル)×10で神経毒成分の含量を、ショ糖含量(%で)およびHSA含量(%で)をそれぞれ決定した。上述の方法は、欧州薬局方に示されている要件に従って行った。
【００７０】
(実施例1)
前記の実施例に従い、Xeomin(登録商標)を60℃の温度で1カ月に至るまで保管した。結果を図1に示す。
【００７１】
前記の図から明らかなように、Xeomin(登録商標)の品質は、60℃で1カ月までの期間の保管により、影響を受けない。生物学的活性(LD50試験)および神経毒濃度(ELISA)は、保管の全期間、事実上変化しない。加えて、ヒト血清アルブミン(HSA)  およびショ糖の水準は、経時的になんらの有意な変化を示さない。それらを合わせると、Xeomin(登録商標)の保存寿命規定のすべてのパラメータは、60℃での1カ月保管後では満たされている。同様に、60℃より低い保管条件からの安定性データはすべて、製品品質になんらの有害な影響を示していない(データは示さず)。
【００７２】
(実施例2)
前記の実施例に従い、Xeomin(登録商標)を、70℃の温度で、10日間までの期間保管する。結果を図2に示す。
【００７３】
Xeomin(登録商標)の品質は、70℃で10日間までの期間の保管により、有意な影響を受けない。再び、生物学的活性、神経毒濃度、およびHSAおよびショ糖の含量は経時的になんらの有意な変化を示さない。それらを合わせると、実施例2は、Xeomin(登録商標)の品質は70℃で10日間に至るまでの保管により有意な影響を受けないことを実証している。
【００７４】
(比較例3)
この比較例では、Xeomin(登録商標)は、80℃で10日間に至る期間、保管する。60℃および70℃での安定性データと対照的に、生物学的活性(LD50試験)の急激な低下が観測され得る。神経毒は、保管の最初の3日間で活性のさらなる低下を伴いながら、5日以内で完全に不活性化される。比較例3は、少なくとも80℃の温度は、比較的短い期間後すでに、ボツリヌストキシンの神経毒成分に基づく筋弛緩薬の安定性に対して有害な影響を有することを示している。
【図１】
2010528999.tif 000003
【図２】
2010528999.tif 000004
【図３】
2010528999.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成22年2月2日(2010.2.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
25℃を超える温度で筋弛緩薬を供給する方法であって、前記筋弛緩薬が、複合体形成タンパク質を含まないボツリヌストキシンの神経毒成分、および、チオアルキル、メチオニン、またはトレハロースではない安定化剤を含む固体乾燥組成物である、方法。
【請求項２】
前記供給が、保管および/または輸送を含み、および/または前記筋弛緩薬を調製するための方法中のステップである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記筋弛緩薬が、90日間以下の期間、25℃を超え70℃までの温度にさらされる、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記期間が、10分間から90日間の範囲である、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記温度が、30と60℃の間であり、前記期間が、10分間から90日間の範囲である、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記期間が、10分間から30日間の範囲である、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記温度が、25℃と70℃の間であり、前記期間が、10分間から10日間の範囲である、請求項1から6のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記筋弛緩薬が、人工冷却装置なしに、輸送されおよび/または保管される、請求項2から7のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が、ボツリヌストキシンの神経毒成分の凍結乾燥物である、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物に含まれている安定化剤が、ショ糖および/またはヒト血清アルブミンである、請求項1から9のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、それぞれショ糖およびヒト血清アルブミンとは異なる、抗凍結剤、pHバッファ、賦形剤、およびそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも1つの成分をさらに含む、請求項1から10のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記神経毒成分が、A型ボツリヌストキシンの神経毒成分である、請求項1から11のいずれかに記載の方法。
【国際調査報告】
2010528999.tif 000006
2010528999.tif 000007
2010528999.tif 000008