(57)【要約】有効成分としてのジアゼパム、水、脂肪酸エステル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エタノール及びグリココール酸ナトリウムを含み、脂肪酸エステルの質量が水のそれよりも少なくとも２倍高く、そしてエタノールのそれよりも少なくとも２倍高いものである、経鼻抗けいれん医薬組成物を開示する。本発明によるジアゼパムの経鼻送達のための抗けいれん医薬組成物は、最小限の含有量の水及びエタノール、主成分としての脂肪酸エステルを含み、そして極性溶媒、例えばグリコールを使用せず、そして少量の水及びエタノールを用いることにより改善されたジアゼパムの溶解性及び経鼻透過性を示す。本発明はまた、開示された組成物の治療上の有効量を、その必要のある患者に経鼻的に投与することによるけいれんの治療を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてのジアゼパム、水、脂肪酸エステル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エタノール及びグリココール酸ナトリウムを含み、脂肪酸エステルの質量が水のそれよりも少なくとも２倍高く、そしてエタノールのそれよりも少なくとも２倍高いものである、経鼻抗けいれん医薬組成物。
【請求項２】
前記組成物の総質量に基づき、約０．１乃至１０．０質量％の量でジアゼパムが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記脂肪酸エステルが、カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリド、エチル  ラウレート  及びその混合物からなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記脂肪酸エステルが、前記組成物の総質量に基づき、約３０質量％より多くの量で含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記脂肪酸エステルが、前記組成物の総質量に基づき、約３５乃至４５質量％の量で含まれる、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記脂肪酸エステルが、前記組成物の総質量に基づき、約３８乃至４２質量％の量で含まれ、そして、カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリドとエチル  ラウレートとの４．５：３．５乃至５．５：２．５の質量比での混合物である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記グリココール酸ナトリウムが、前記組成物の総質量に基づき、約０．５乃至１．２質量％の量で含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、約４乃至６質量％のジアゼパム、約８乃至１２質量％の水、約３５乃至４５質量％の脂肪酸エステル、約３０乃至４５質量％のジエチレングリコールモノエチルエーテル及び約１２乃至１７質量％のエタノールを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
けいれんを患う患者へ請求項１の医薬組成物の治療上有効量を投与することを含む、けいれんを治療する方法。
【請求項１０】
ジアゼパムが、前記医薬組成物の総質量に基づき、約０．１乃至１０．０質量％の量で該組成物中に含まれる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記脂肪酸エステルが、カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリド、エチル  ラウレート  及びその混合物からなる群から選ばれる、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記脂肪酸エステルが、前記医薬組成物の総質量に基づき、約３０質量％より多くの量で該組成物中に含まれる、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記脂肪酸エステルが、前記医薬組成物の総質量に基づき、約３５乃至４５質量％より多くの量で該組成物中に含まれる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記脂肪酸エステルが、前記医薬組成物の総質量に基づき、約３８乃至４２質量％の量で該組成物中に含まれ、そして、カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリドとエチル  ラウレートの４．５：３．５乃至５．５：２．５の質量比での混合物である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記グリココール酸ナトリウムが、前記医薬組成物の総質量に基づき、約０．５乃至１．２質量％の量で該組成物中に含まれる、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物が、約４乃至６質量％のジアゼパム、約８乃至１２質量％の水、約３５乃至４５質量％の脂肪酸エステル、約３０乃至４５質量％のジエチレングリコールモノエチルエーテル及び約１２乃至１７質量％のエタノールを含む、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経鼻抗けいれん医薬組成物に関する。より具体的には、本発明は、ジアゼパムの改善された溶解性及び経粘膜的浸透性を有する、ジアゼパムを経粘膜的に送達するための抗けいれん医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
てんかん重積症（ＳＥ）即ち長期のてんかん発作は、全ＳＥ患者の３乃至３５％の死亡率を引き起こし得る神経学的な緊急事態というべきものである。てんかん重積症の発作が治療せず放置される期間が長い程、それを制御することがより難しくなり、そして永続的な脳の損傷のリスクがより大きくなるため、ＳＥ治療の第一のゴールは、病理学的な発作機能活動の迅速な管理にある。したがって、患者の管理に重要なことは、適切な用量における有効な薬剤成分を含む適切な医薬配合物の形態での医薬組成物の投与を含む迅速な治療である。
【０００３】
現在のところ、当該分野で知られた幾つかの投薬計画が、てんかん重積症の治療に有効であることが証明されている。ジアゼパムは、この目的のために最も広範に使用されているベンゾジアゼピン系薬のひとつである。ジアゼパムのような抗けいれん剤の静脈内（ＩＶ）投与は、てんかん発作の鎮静に最も迅速な方法である。しかし、例えば、滅菌設備及び熟練者の必要性のような技術的困難性のために、そして静脈炎の進行が予想されるために、静脈内投与が不都合があるかまたは遅延した場合に、その他の投与経路が、非常に望まれ得る。さらに、そのような薬剤の静脈内投与はしばしば、低血圧、不整脈又は中枢神経系（ＣＮＳ）抑制と関連する。これに関連して、Ｍｏｏｌｅｎａａｒら（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、５巻：１２７−１３７頁（１９８６年））は、筋肉内注射、経口用タブレット及び直腸用溶液のような幾つかのその他の経路を経たヒトへのジアゼパムの投与を試みた。直腸投与のみが、薬剤のかなり急速な吸収をもたらすことが見出され、そしてしたがって、ＩＶ注射の代替的投与経路として考えられ得た。しかし、直腸経路は、緊急治療を必要とする患者において特に、非常に不都合な薬剤投与方法である。
【０００４】
Ｂｕｒｇｈａｒｄｔに発行された米国特許第４８６３７２０号明細書は、活性薬剤成分がベンゾジアゼピンであり得る舌下用の噴霧可能な医薬製剤を開示している。そのような製剤は好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み、そしてエタノール、脂肪酸のジ−及び／又はトリグリセリド及び医薬品として許容できる推進剤ガスが必須の成分である。
【０００５】
より最近では、鼻粘膜は、種々の薬剤物質の治療効果のための投与の実用的方法を提供すると考えられている。鼻内投与は、必要とされる全身または局所効果を達成するために、興味ある薬剤が容易かつ簡単に投与され得る点で有利な効果を有する。しかし、鼻内の薬物投与に関連する主な問題は、たいていの薬剤分子は鼻粘膜を通じて拡散しにくくそしてゆっくり拡散し、したがって簡単な経鼻投与方法によっては治療薬の望ましいレベルを達成できないことである。経鼻投与に関する更なる限界は、通常少量に限られることである。即ち、鼻孔あたり約１５０μＬより多い用量レベルにおいて薬剤を投与することは一般的に不可能である。上記レベルを超える処方用量は流れ出てそして咽頭へ飲み込まれるであろう。したがって、薬剤の必要とされる用量がそのような容量において提供されることが必要である。
【０００６】
さらに、投与のための薬剤を溶解するために通常使用される水へのジアゼパムの低い溶解性に起因して、鼻腔用スプレーに適したジアゼパムの医薬配合物を開発することが困難
である。したがって、必要な薬剤、即ち、ジアゼパムを高濃度で溶解し得、一方で鼻粘膜への被刺激性を起こさない、溶媒ビヒクルの開発がぜひとも必要とされる。
【０００７】
鼻内薬剤吸収速度は、所望の薬剤と化学助剤または浸透促進剤との同時投与により増加され得る。例えば、Ｌａｕ及びＳｌａｔｔｅｒｙ（Ｌａｕ等、Ｉｎｔ．Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．，５４巻１７１−１７４頁（１９８９年））は、トリアセチン、ジメチルスルホキシド、ＰＥＧ４００、クレモホルＥＬ、リパール（Ｌｉｐａｌ）−９−ＬＡ、イソプロピルアジペート及びアズワン（Ａｚｏｎｅ）のような、種々の溶媒中にジアゼパムのようなベンゾジアゼピンを溶解させることにより、その鼻内投与を試みた。
【０００８】
しかし、溶媒の大部分は所望の濃度までジアゼパムを溶解する一方、得られた溶液は経鼻投与に使用するには刺激が高すぎることが見出された。クレモホルＥＬは鼻粘膜組織への刺激が最も少ないことが見出されたが、ヒトにおけるそのようなビヒクルの使用による薬剤の鼻内吸収は、比較的緩やかであり（Ｔｍａｘが１．４時間）、そしてピーク濃度は、静脈内投与後に観測されたものと比較して低いものであった。
【０００９】
近年では、Ｌｉ等（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２３７巻、７７−８５頁、２００２年）は、ジアゼパムの急速に発現する経鼻送達のためのミクロエマルジョンを開示した。
【００１０】
さらに、米国特許第６，６２７，２１１号明細書は、ジアゼパムが脂肪族アルコール、グリコール及び水を極性溶媒として用いて溶解された、可溶化製剤を通したジアゼパムの経鼻投与のための組成物を開示している。さらに、米国特許出願公開第２００５−０００２９８７号明細書は、等量の脂肪酸及び水と、残りは親水性界面活性剤及び極性溶媒、例えばグリコール、を含む、エマルジョンビヒクルを用いてジアゼパムが溶解された、ジアゼパムの経鼻投与のためのミクロエマルジョンを開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第４，８６３，７２０号明細書
【特許文献２】米国特許第６，６２７，２１１号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００５−０００２９８７号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｍｏｏｌｅｎａａｒ等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、５巻：１２７−１３７頁（１９８６年）
【非特許文献２】Ｌａｕ，Ｓｌａｔｔｅｒｙ等、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、５４巻：１７１−１７４頁（１９８９年）
【非特許文献３】Ｌｉ等、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２３７巻、７７−８５頁（２００２年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
米国特許第６，６２７，２１１号明細書に開示された医薬製剤は可溶化製剤であり、該製剤においては、脂肪族アルコール、極性溶媒としてのグリコール、及びアルコールが大量に使用される。この技術によれば、少量のジアゼパムが製剤中に含まれる場合、ジアゼパムの経鼻浸透性を高めることが可能である。しかし、ジアゼパムの含有量がその実施例４にあるような２．５％よりも高いレベルに増加した場合、ジアゼパムの乏しい溶解性を生じ、そしてその結果、薬剤の有効濃度を送達するために大容量でのジアゼパムの経鼻投与が必要となり、このことは、上述のように可能な最大鼻内投与量が１５０μＬのレベル
内で限られるため、繰り返し投与の必要性と関係する問題が生じ得る。さらに、米国特許出願公開第２００５−０００２９８７号明細書に開示された製剤は、等量の脂肪酸エステル及び水と大量の親水性界面活性剤及び極性溶媒、例えばグリコール及びアルコールを用いたミクロエマルジョン製剤である。この技術によると、製剤中のジアゼパムの濃度は４１ｍｇ／ｍＬでありそしてしたがってジアゼパムは約４．１％の濃度まで溶解し得るので、したがって、米国特許第６，６２７，２２１号明細書の製剤と比較してジアゼパムの高められた溶解性が得られる。しかし、この医薬配合物は減少した経鼻浸透性の弱点があり、そしてしたがって、薬剤の有効濃度を送達するために大容量においてジアゼパムの経鼻投与をまた必要とし、したがって、繰り返し投与の必要性と関連した不都合を生じる。したがって、ジアゼパムの改善された溶解性及び経鼻浸透性を有する、ジアゼパムの経鼻投与のための医薬組成物の必要性がある。そのような組成物及び治療方法が本発明によれば、提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明の開示
技術的解決
本発明の一態様によれば、ジアゼパム、水、脂肪酸エステル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エタノール及びグリココール酸ナトリウムを含み、脂肪酸エステルの質量が水のそれよりも少なくとも２倍高くそしてまたエタノールのそれよりも少なくとも２倍高い、経鼻抗けいれん医薬組成物が提供される。また、上記医薬組成物の治療上の有効量をけいれんを患う患者へ投与することを含むけいれんの治療方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
本発明は、添付の図面とともに以下の詳細な説明によりより明確に理解され得るであろう。即ち、
【図１】図１は、従来のジアゼパム配合物及び本発明によるジアゼパム配合物の静脈内（ＩＶ）及び経鼻（ＴＮ）投与後の薬物動態（ＰＫ）プロフィルを示すグラフであり、そして
【図２】図２は、本発明によるジアゼパム配合物の静脈内（ＩＶ）及び経鼻（ＴＮ）投与後のウサギの種々の脳の部位におけるジアゼパム濃度を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明を実施するための最良の形態
本発明による経鼻抗けいれん医薬組成物は、活性成分としてのジアゼパム、水、脂肪酸エステル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、エタノール及びグリココール酸ナトリウムを含み、脂肪酸エステルの質量が、水のそれよりも少なくとも２倍高く、またエタノールのそれよりも少なくとも２倍高い。本発明のジアゼパム含有経鼻抗けいれんミクロエマルジョン配合物は、上記記載のような文献に開示された同様の配合物と比較して優れた特性を有する。
【００１７】
種々の広範囲なそして集中的な研究及び実験の結果として、本発明の発明者らは、最小の含有量の水及びエタノール、主成分としての脂肪酸エステル及びジエチレングリコールモノエチルエーテルを含むジアゼパム含有経鼻抗けいれんミクロエマルジョン配合物が、米国特許第６，６２７，２１１号明細書（２．５％）及び米国特許出願公開第２００５−００２９８７号明細書（４．１％）の製剤と比較して、ジエチレングリコールモノエチルエーテルは６％までの改善されたジアゼパムの溶解性を示し、そしてまた、米国特許第６，６２７，２１１号明細書のものと比較して、２．２倍増加した生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）経鼻透過性を示すことを見出した。本発明は、これらの知見に基づき完成された。
【００１８】
本発明の医薬組成物は、有効成分としてジアゼパム、水、脂肪酸エステル、ジエチレン
グリコールモノエチルエーテル、エタノール及びグリココール酸ナトリウムを含み、脂肪酸エステルの質量が水のそれよりも少なくとも２倍高く、そしてエタノールのそれよりも少なくとも２倍高いものである。脂肪酸エステルの質量がこれらのレベルよりも低く減少すると、透明性が失われそして得られたミクロエマルジョンの安定性の減少という望ましくない結果が生じ得る。
好ましくは、組成物中の脂肪酸エステルの量は、存在する水の質量の２乃至４倍であり、エタノールの質量の２乃至３．５倍である。
【００１９】
本発明の組成物中に含まれる抗けいれん活性成分のジアゼパムは、好ましくは該組成物の総質量に基づき、約０．１乃至１０．０質量％の量で含まれる、がこれに限定されるものではない。
【００２０】
本発明に使用され得る脂肪酸エステルの例としては、カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリド及びエチル  ラウレートを含む。これらの物質は単独または任意の組合せにおいて使用され得る。脂肪酸エステルは、好ましくは組成物の総質量に基づき、約３０質量％より多い量で、そしてより好ましくは約３５乃至４５質量％の量で含まれる。最も好ましくは、前記脂肪酸エステルが、組成物の総質量に基づき、約３８乃至４２質量％の範囲で含まれる。好ましくは、脂肪酸エステルは、カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリドとエチル  ラウレートの４．５：３．５乃至５．５：２．５の質量比での混合物である。
【００２１】
水とエタノールの合計は、好ましくは、組成物の総質量に基づき、約２０乃至３０質量％である。グリココール酸ナトリウムは、組成物の総質量に基づき、約０．５乃至１．２質量％の量で含まれる。
【００２２】
ジエチレングリコールモノエチルエーテルは好ましくは、組成物の総質量に基づき、約３０乃至４５質量％の量で含まれる。本発明において使用され得るジエチレングリコールモノエチルエーテルは市販されており、そして例えばトランスカトール（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ）Ｐ（商標名、米国、ニュージャージー州ウエストウッドのガッテフォッセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）により製造販売）を含み得る。
【００２３】
1つの好ましい実施態様において、本発明の経鼻抗けいれん医薬組成物は、約４乃至６
質量％のジアゼパム、約８乃至１２質量％の水、約３５乃至４５質量％の脂肪酸エステル、約３０乃至４５質量％のジエチレングリコールモノエチルエーテル及び約１２乃至１７質量％のエタノールを含む。
【００２４】
対象となるエマルジョンは従来の技術により形成される。例えば、対象となるエマルジョンは以下のように製造され得る。油脂（エチルラウレート）及び界面活性剤／補助界面活性剤（トランスクトール／カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリド／エタノール）を正確に秤量しそしてマグネチックスターラーの適切な攪拌の下に完全に混合して透明で均一な混合物を形成させる。油脂／界面活性剤／補助界面活性剤混合物は次に、持続的かつ十分な攪拌（超音波処理をしながら）下、正確な量の蒸留水で滴下することにより滴定して、透明なミクロエマルジョンを形成させた。１ｗ／ｖ％のグリココール酸ナトリウム（ＳＧＣ：シグマ−アルドリッチ）を、１００ｍＬとするのに十分な量の上記基本のミクロエマルジョンへ１グラムのＳＧＣを溶解することにより製造した。ジアゼパムが取り込まれたミクロエマルジョンを、秤量した量の薬剤粉末（例えば、２ｇ、４ｇ、及び６ｇ）を全量１００ｍＬの透明な薬剤ミクロエマルジョン製剤を作成するのに十分な量の１％ＳＧＣ（ｗ／ｖ）／ＭＥへ溶解することにより製造した。
【００２５】
本発明の経鼻抗けいれん医薬組成物の利用は、薬物の投与を大いに促進する。非経口投
与と比較して、例えば、単純な噴霧器、点滴器、またはネブライザーが、薬剤、特に、てんかんの急性けいれん性発作の緊急治療のための薬の迅速で簡便な送達を提供するであろう。臨床的な観点から、経鼻投与は、しばしば抗けいれん作用の持続時間を改善する。本発明によれば、薬剤の治療効果及び持続期間は、本発明の製剤の単回−及び複数回−投与により効率的でそしてより的確にコントロールされ得る。本発明は、モデル化合物として抗けいれん剤に関して述べてきたが、種々のヒト及び動物の粘膜へ投与され得るその他の生物学的活性剤へもまた適用されることは明白であろう。
【実施例】
【００２６】
さて、本発明は、以下の実施例を参照してより詳細に説明されるであろう。これらの実施例は本発明を例証するためにのみ提供されるものでありそして本発明の範囲及び精神を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００２７】
実施例１：生体外鼻粘膜透過性の試験
生体外実験において使用される鼻粘膜は、２．５乃至３．０ｋｇのニュージーランドシロウサギから得た。ウサギをペントバルビタールナトリウムの静脈内（ＩＶ）注射により犠牲にした。鼻中隔を、外科用ハサミ及び骨切り鋸を用いて骨ブロックから注意深く取り除いた。次に２片の鼻粘膜を膜表面の中心に触れずに注意深く鼻中隔から剥がしそして通常の生理食塩液で洗浄した。鼻粘膜をガラス製の拡散セルシステムの２つの半電池の間に取り付けた。鼻粘膜の曝露部分は約０．１９６ｃｍ2であった。１０％のエタノール、４
０％のプロピレングリコール及び５０％の等張リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）の混合物の３．５ｍＬをレセプター小室へ加える一方、試験溶液または懸濁液（３．５ｍＬ）を、ドナー小室中の膜の粘膜側へ導入した。全体の拡散系を実験の間、３７℃に維持した。所定時間の間隔で、１００μＬのレセプター溶液をアッセイのために抜き取り、同等の容量の新しいレセプター媒体を補給して容量を一定に保持した。定常状態の流量値を、時間に応じて透過した薬剤の累積の量をプロットすることにより得られた直線の傾きから計算した。それぞれの実験は少なくとも２回行なわれた。
【００２８】
レセプター媒体中に含まれるジアゼパムの量を測定するために、試験は、マルチ溶媒送達システム（モデル６００Ｅ、ウォーターズ  アソシエート、米国マサチューセッツ州、ミルフォード）、オートインジェクター（モデル７１７プラスウォーターズ  アソシエート）、フォトダイオードアレイ検出器（モデル９９６、ウォーターズ  アソシエート）、逆相シンメトリック（ｓｙｍｍｅｔｒｉｃ）Ｃ18カラム（１５０ｍｍ×３．９ｍｍＩＤ、５μｍ）及びミレニアム２０１０ソフトウェアコンピューターシステムを装備した高速液体クロマトグラフィーシステムを採用した。移動相及びジアゼパムの分析に利用されたＵＶ波長は、それぞれ、２５４ｎｍにおいて７０％メタノールと３０％水；２５２ｎｍにおいて６０％メタノールと４０％水；そして２６２ｎｍにおいて２５％アセトニトリルと７５％水であった。この実験方法を実施例３で用いた。
【００２９】
実施例２：ジアゼパム配合物の製造
ウサギにおける薬剤の経鼻透過性の比較のために、米国特許第６，６２７，２１１号明細書に開示された経鼻製剤（配合物１）及び本発明のビヒクル系を使用したミクロエマルジョン製剤（配合物２）を製造した。両製剤は同量のジアゼパムを含むよう調整した。経鼻透過性実験のために、米国特許第６，６２７，２１１号明細書のジアゼパム製剤を、１％のグリココール酸ナトリウムを３０%エタノール（ＥＴＯＨ）、６０％プロピレングリ
コール(ＰＧ)及び１０％水（ＷＴ）からなる共溶媒ビヒクルへ添加し、次いで１％のジアゼパムを添加することにより製造した（配合物１）。１％のジアゼパムを含む製剤は、本発明のミクロエマルジョンビヒクル系（表１参照）を用いて製造した（配合物２）。カプリロカプロイル  マクロゴール−８−グリセリドとして、ラブラソール（米国、ニュージャージー州、ウエストウッドのガッテフォッセより入手可能）を使用した。ジエチルグリ
コールモノエチルエーテルとして、トランスクトールＰ（米国、ニュージャージー州、ウエストウッドのガッテフォッセより入手可能）を使用した。エチルラウレート、エタノール及びグリココール酸ナトリウムを含むその他の試薬は、シグマケミカルより購入した。
【００３０】
【表１】
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【００３１】
実施例３
この実施例は、新たに切除された鼻粘膜を通じての生体外での透過性試験を目的とする。この試験において、経鼻透過性を、上記米国特許第６，６２７，２１１号明細書にて提案された経鼻投与のための配合物１と本願発明による配合物２との間で比較した。
【００３２】
【表２】
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【００３３】
実施例４：ジアゼパム配合物の製造
ジアゼパムを含む本発明の製剤の生物学的利用能（バイオアベイラビリティ）をニュージーランドシロウサギ（個体数＝３−４）への経鼻適用後に試験した。比較のために、ジアゼパム注射剤の生物学的利用能を１ｍｇ／ｋｇの用量において静脈投与後に生体内で試験した。この注射可能な配合物（１０ｍｇ／２ｍＬ）はエルキンス−シンインコーポレーテッド（Ｅｌｋｉｎｓ−ｓｉｎｎ  Ｉｎｃ．）（米国、ニュージャージー州、チェリーヒル）から購入した、プロピレングリコール（０．４ｍＬ）、アルコール（０．１ｍＬ）、ベンジルアルコール（０．０１５ｍＬ）、安息香酸ナトリウム／安息香酸（５０ｍｇ）、及び注射用水適量で容量を１ｍＬとして調製したものである（配合物３）。
【００３４】
比較のため、米国特許第６，６２７，２１１号明細書の経鼻製剤（配合物４、２％ジアゼパム）、米国特許出願公開第２００５−０００２９８７号明細書の経鼻製剤（配合物５、４％ジアゼパム）及び本願発明のビヒクル系を用いたミクロエマルジョン製剤（配合物６、６％ジアゼパム）をそれぞれ調製した。全ての製剤を、最高の溶解度を示す量（質量
）においてジアゼパムを含むよう調合された。
【００３５】
経鼻透過性実験のために、米国特許第、６，６２７，２１１号明細書のジアゼパム製剤を、１％のグリココール酸ナトリウムを３０%エタノール（ＥＴＯＨ）、６０％プロピレ
ングリコール(ＰＧ)及び１０％水（ＷＴ）からなる共溶媒ビヒクルへ添加し、次いで２％のジアゼパムを添加することにより製造した（配合物４）。さらに、米国特許出願公開第２００５−０００２９８７号明細書のジアゼパム製剤を、４％のジアゼパムを、その実施例の処方Ａにより１５％エチルラウレート、２３．３％のポリソルベート−８０、２３．３％のプロピレングリコール、２３．４％のエタノール及び１５％の水を含むミクロエマルジョンビヒクルへ添加することにより製造した（配合物５）。６％のジアゼパムを含む製剤を、本発明のミクロエマルジョンビヒクルを用いて実施例２に記載されたように製造した（配合物６）。
【００３６】
実施例５：ジアゼパム配合物の生物学的利用能
試験の直前に、ウサギ（ｎ＝３−４）を計量しそしてウサギ固定機で固定した。静脈内（ＩＶ）注射投与のために、ウサギ（ｎ＝３）に、１ｍｇ／ｋｇのジアゼパムを、２０秒かけて配合物３の耳静脈を介した注射を受けさせた。経鼻（ＴＮ）投与のために、それぞれのウサギに、２ｍｇ／ｋｇのジアゼパムを、ファイファー（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ）噴霧器を用いて５秒以内に動物のそれぞれの鼻孔へ配合物４、５及び６の必要量を噴霧することにより受けさせた。
【００３７】
血液サンプル（１ｍＬ）を、ＩＶ及びＴＮ投与後０、２、５、１０、２０、３０、４５、６０及び１２０分の時間点においてウサギの耳静脈より採取した。血液サンプルから、血漿を遠心分離により分離しそして分析まで−２０℃において貯蔵した。
【００３８】
分析のために、血漿サンプル（０．５ｍＬ）を、正確に１．５ｍＬのポリプロピレン製の遠心分離チューブへ移した。メタノール（０．５ｍＬ）及びアセトニトリル（０．５ｍＬ）を血漿サンプルへ添加した後、その混合物をボルテックスで３０秒間攪拌しそして４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。ジアゼパムの血漿濃度をＨＰＬＣにより測定した。分析は、実施例１に記載したウォーターズ製ＨＰＬＣを用いて行なった。この研究において使用したカラムは、３．９ｍｍ×１５０ｍｍ×５μｍシンメトリックＣ18カラムであった。移動相は５０％メタノール：１０％アセトニトリル：４０％リン酸緩衝液（ｐＨ３．５）（ｖ／ｖ）であった。移動相の流量は、１ｍＬ／分であり、そして紫外線検出を２２９ｎｍにおいて行なった。ジアゼパムの検出限界は１５ｎｇ／ｍＬであった。０分から６０分までの薬剤血漿濃度−時間曲線のもとで面積（ＡＵＣ）を、直線台形法により計算した。
【００３９】
この方法において得られた生物学的利用能を以下の表３に示す。一のＩＶ投与製剤（配合物３）、従来技術によるジアゼパムの経鼻投与のための配合物４及び５、そして本発明の経鼻製剤（配合物６）の投与後に得られた生物学的利用能及び薬物動態プロフィルを図１に表す。
【００４０】
以下の表３の結果から分かるように、配合物４の生物学的利用能は配合物６よりも高いものであった。しかし、上記に論じたように、配合物４の最大のジアゼパム溶解性は約２％でありそして、配合物５のそれは約４％であり、一方配合物６は約６％であった。したがって、配合物４及び５は、望ましい治療効果を発揮するために２回またはそれ以上の経鼻投与を必要とし、一方、配合物６は単回の経鼻投与であっても望ましい効果を表し得、したがって、市場への商業化のために多いに有利である。
【００４１】
【表３】
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ａ  ＩＶ配合物３：０．５％ジアゼパム注射剤、ＵＳＰ、エルキンス−シンインコーポレーテッド
（ＰＧ／ＥＴＯＨ／ベンジルアルコール／安息香酸ナトリウム／安息香酸／注射用水）
ｂ  ＡＵＣ：曲線下での面積、１時間
下記式を用いて測定された標準化データ：
Ｆ＝ＡＵＣIN,2mg,1時間／（２×ＡＵＣIV,1mg,1時間）×１００
【００４２】
実施例６：ウサギの種々の脳の部位におけるジアゼパム分布の試験
試験の直前に、ウサギを計量しそしてウサギ固定機で固定した。３０羽のウサギを２つの群、即ち静脈内（ＩＶ）注射群及び経鼻（ＴＮ）投与群で、それぞれが１５羽からなるよう、分けた。静脈内（ＩＶ）注射投与群には、ウサギ（ｎ＝３）に、１ｍｇ／ｋｇのジアゼパムを、２０秒かけて配合物３の耳静脈を介した注射を受けさせた。このため、３羽からなる５つの群を準備した。経鼻（ＴＮ）投与群には、それぞれのウサギに、２ｍｇ／ｋｇのジアゼパムを、ファイファー（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ）噴霧器を用いて５秒以内に動物のそれぞれの鼻孔へ配合物６を噴霧することにより受けさせた。脳サンプルを、ＩＶ注射（配合物３）及びＴＮ投与(配合物６)の後５、１０、２０、４０及び６０分の時間点においてそれぞれ採取した。３羽の動物をそれぞれのサンプリング時間のために使用した。
【００４３】
血漿サンプル（それぞれ３ｍＬ）を、同じ時間点においてウサギの耳静脈より採取した。その後、動物を犠牲にし、そして１ｍＬの脳脊髄液（ＣＳＦ）を、大槽穿刺を用いて採取した。次に、脳を動物の頭蓋から分離した。このように分離された脳を速やかに生理学的食塩液で洗浄して凝固した血液を除去し、キンバリー−クラーク製のティッシュで拭き取り、そして速やかに−４０℃において分析まで貯蔵した。
【００４４】
分析のために、ウサギ脳を６部位：嗅球（ＯＢ）、嗅索（ＯＴ），大脳の前部（ＣＢ１）、大脳の中部（ＣＢ２）、大脳後部（ＣＢ３）、及び小脳（ＣＬ）、に分割した。
【００４５】
このように分離した脳の部位の中で、ＣＢ１、ＣＢ２及びＣＢ３部位を含む大脳が総脳容量の７２．４％の割合を占め、そして小脳（ＣＬ）が２０．３％の割合を占める。嗅索（ＯＴ）及び嗅球（ＯＢ）はそれぞれ４．７％及び２．６％の割合を占める。２．５乃至３ｋｇの重さの個々のウサギの全脳の質量は、７乃至１０ｇの範囲内であり、これは全体重の０．３％に相当する。正確な分析のために、それぞれの脳部位を注意深く分割しそして誤差範囲が±０．１ｍｇ以内で体重測定に供した。
【００４６】
分析は、血漿サンプル、ＣＳＦサンプル及び脳組織サンプルについて固相抽出（ＳＰＥ）を用いて行い、その間ジアゼパムはオアシス−ＨＬＢカートリッジを用いて抽出した。
【００４７】
血漿サンプル、ＣＳＦサンプル及び脳組織サンプル中のジアゼパムの含有量を測定するために、ＬＣ／ＭＳ（パーキン  エルマー  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ  １５０ＥＸ質量分析機）を使用した。５つのサンプリング時間点の第二の時間点に相当する１０分後に、ウサギの血漿、ＣＳＦ及び脳組織中のジアゼパムの濃度を測定し、そして図２に示す。
【００４８】
図２に示された結果から、それぞれのサンプルのジアゼパムは、ＩＶ注射及びＴＮ投与後１０分に同様の濃度に達したことが分かる。
【００４９】
実施例７：化学的安定性試験
本発明による医薬組成物中の薬剤の安定性を確認するために、安定性試験を、実施例４の配合物６について、７℃、２５℃及び４５℃の種々の貯蔵温度において２０週間以上の期間にわたり行なった。
【００５０】
サンプルを、所定の時間間隔において採取し、そしてジアゼパム濃度を実施例１のＨＰＬＣ法の方法により測定した。百分率で表す薬剤回収率に関して測定された化学的安定性データを、以下の表４に示す。
【００５１】
【表４】
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【００５２】
表４の結果から、本発明によるジアゼパムの経鼻配合物は、７℃、２５℃及び４５℃以上の貯蔵温度において２０週間の間、化学的に安定であることが確認できる。
【００５３】
米国特許第６，６２７，２１１号明細書及び米国特許出願第２００５−０００２９８７号明細書の先行技術の経鼻抗けいれん組成物は、ジアゼパムの治療上の有効濃度を達成させるために２回より多く繰り返し投与することが必要とされたが、一方、本発明の経鼻抗けいれん組成物は単回投与であってもジアゼパムの治療上の有効濃度を達成し得そしてしたがって、患者のための使用の利便性が著しく向上することは重要なことである。
【００５４】
上記記載から明らかなように、本発明によるジアゼパムの経鼻送達のための抗けいれん医薬組成物は、最小限の含有量の水及びエタノール、主成分としての脂肪酸エステル及びジエチレングリコールモノエチルエーテルを含み、そして少量の水及びエタノールを用いることにより改善されたジアゼパムの溶解性及び経鼻透過性を示す。
【００５５】
本発明の好ましい実施態様を、例証を目的として説明してきたが、当業者は、添付の特
許請求の範囲に開示された本発明の範囲と精神から逸脱することなく、種々の変更、追加及び置換が可能であることを理解するであろう。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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