(57)【要約】【課題】補因子依存的な酸化ストレスのパラメーターを用いて生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するためのバイオマーカーおよび方法、ならびにこのような方法の実施に適合したキットを提供すること。【解決手段】補因子は、テトラヒドロビオプテリンであることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するための方法であって、１つ以上の還元補因子に依存する１つ以上の酵素の活性を測定することを含む方法。
【請求項２】
前記補因子がテトラヒドロビオプテリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１つ以上の前記酵素の活性が１つ以上の代謝産物の濃度を測定することによって決定される、請求項１および／または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記酵素が、
フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、トリプトファンヒドロキシラーゼ、グリセリルエーテルモノオキシゲナーゼ、内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、および神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）
からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、
・フェニルアラニン／チロシン比の測定によってフェニルアラニンヒドロキシラーゼの活性を決定する方法と、
・チロシン／ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）比の測定によってチロシンヒドロキシラーゼの活性を決定する方法と、
・トリプトファン／５−ヒドロキシトリプトファン比の測定によってトリプトファンヒドロキシラーゼの活性を決定する方法と、
・１−アルキル−ｓｎ−グリセロール／１−ヒドロキシアルキル−ｓｎ−グリセロール比の測定によってグリセリルエーテルモノオキシゲナーゼの活性を決定する方法と、
・アルギニン／シトルリン比の測定によって内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）の活性を決定する方法と、
・アルギニン／シトルリン比の測定によって誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の活性を決定する方法と、
・アルギニン／シトルリン比の測定によって神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）の活性を決定する方法。
【請求項６】
前記生体試料が、哺乳動物、好ましくは、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ミニブタ、またはヒトに由来する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記測定が、定量分析法、好ましくは、クロマトグラフ法、分光法、および質量分析法に基づく、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
クロマトグラフ法が、ＧＣ、ＬＣ、ＨＰＬＣ、およびＵＰＬＣを含み、分光法が、ＵＶ／Ｖｉｓ、ＩＲ、およびＮＭＲを含み、質量分析法が、ＥＳＩ−ＱｑＱ、ＥＳＩ−ＱｑＴＯＦ、ＭＡＬＤＩ−ＱｑＱ、ＭＡＬＤＩ−ＱｑＴＯＦ、およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＴＯＦを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するためのマーカーとしてテトラヒドロビオプテリンを利用すること。
【請求項１０】
少なくとも１つの内部標準を含浸させた１つ以上のインサートと１つ以上のウェルとを備える装置を含むキットであって、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法の実施に適合したキット。
【請求項１１】
生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するためのバイオマーカーであって、１つ以上の還元補因子に依存する１つ以上の酵素活性を含むバイオマーカー。
【請求項１２】
前記補因子がテトラヒドロビオプテリンである、請求項１１に記載のバイオマーカー。
【請求項１３】
１つ以上の前記酵素活性が１つ以上の代謝産物の濃度によって示される、請求項１１および／または請求項１２に記載のバイオマーカー。
【請求項１４】
前記酵素が、
フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、トリプトファンヒドロキシラーゼ、グリセリルエーテルモノオキシゲナーゼ、内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、および神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）
からなる群から選択される、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のバイオマーカー。
【請求項１５】
請求項１４に記載のバイオマーカーであって、
・フェニルアラニン／チロシン比によってフェニルアラニンヒドロキシラーゼの活性を示すバイオマーカーと、
・チロシン／ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）比によってチロシンヒドロキシラーゼの活性を示すバイオマーカーと、
・トリプトファン／５−ヒドロキシトリプトファン比によってトリプトファンヒドロキシラーゼの活性を示すバイオマーカーと、
・１−アルキル−ｓｎ−グリセロール／１−ヒドロキシアルキル−ｓｎ−グリセロール比によってグリセリルエーテルモノオキシゲナーゼの活性を示すバイオマーカーと、
・アルギニン／シトルリン比によって内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）の活性を示すバイオマーカーと、
・アルギニン／シトルリン比によって誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の活性を示すバイオマーカーと、
・アルギニン／シトルリン比によって神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）の活性を示すバイオマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補因子依存的な酸化ストレスのパラメーターを用いて生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するためのバイオマーカーおよび方法、ならびにこのような方法の実施に適合したキットに関する。補因子は、テトラヒドロビオプテリンであることが好ましい。
【背景技術】
【０００２】
酸化ストレスを測定する装置および方法は、たとえば、ＷＯ第２００６／９０２２８号、ＷＯ第２００２／０４０２９号、ＷＯ第１９９９／６３３４１号、ＥＰ第０  ８４５  ７３２号などに記載されている。
【０００３】
フリーラジカルは、不対電子を含む原子または分子である。これらのフリーラジカルが膜脂質、タンパク質、核酸、および他の細胞基質と高い反応性を有することは周知である。また、フリーラジカルが環境中の発生源から生じ得ることや、あるいは哺乳動物の組織内で生成され得ることも知られている。これらの組織、ならびに体液を、フリーラジカルによる損傷から保護するために抗酸化酵素が存在し、その酵素活性はいくつかの補因子に左右される。
【０００４】
酸化ストレスは、「酸化促進／抗酸化の均衡を酸化促進側に乱して、（組織）損傷をもたらす恐れのあるもの」として定義される（Ｓｉｅｓ，Ｈ．、Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ．Ｏｘｉｄａｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ．１９９１，ニューヨーク州：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ．５０７）。この均衡は、体液の１つ以上の生化学的成分と関連し得る。酸化ストレスは、細胞機能障害および細胞死に共通する重要な経路として、かつ、癌、糖尿病、閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、心虚血、糸球体腎炎、黄斑変性症、および種々の神経変性疾患を含む広範囲にわたるヒトの疾患における潜在的な治療標的として関連づけられてきている（Ｈａｌｌｉｗｅｌｌ，Ｂ．およびＪ．Ｍ．Ｃ．Ｇｕｔｔｅｒｉｄｇｅ、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．第３版  １９９９，オックスフォード州：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ社  ７３６）。
【０００５】
細胞損傷／組織損傷のいくつかの最終産物はすでに知られており、タンパク質ニトロ化由来の３−ニトロチロシン、脂質過酸化由来の４−ヒドロキシノネナール、核酸損傷由来の８−ヒドロキシグアノシンなどがある。しかし、これらの検出方法は複雑であり、かつ酸化ストレスの緩やかな変化（たとえば、治療効果などによるもの）を検出するためには感度がじゅうぶんではない。
【０００６】
したがって、生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するために、きわめて感度が高く、酸化ストレスレベルのわずかな変化のみでも検出可能な改良された方法を提供することは、本発明の基礎をなす一目的である。
【０００７】
さらに、このような方法の実施に適合したキットを提供することも一目的である。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、１つ以上の還元補因子に依存する１つ以上の酵素の活性を測定することを含む、生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するためのバイオマーカーおよび方法、ならびに前記方法の実施に適合したキットを提供する。好ましい一実施形態では、補因子がテトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）である。さらに、クロマトグラフ法、分光法、質量分析法などの定量分析法を用いて代謝産物の濃度を測定することによって酵素活性を決定する。ＷＯ第２００７／００３３４４号およびＷＯ第２００７／００３３４３号に記載されるような方法および装置を用いることが特に好ましく、これらの出願はいずれも参照により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】糖尿病マウス群および健常対照群の血漿フェニルアラニン濃度を示した図である（実施例１）。
【図２】糖尿病マウス群および健常対照群の血漿チロシン濃度を示した図である（実施例１）。
【図３】糖尿病マウス群および健常対照群の血漿フェニルアラニン／チロシン比を示した図である（実施例１）。
【図４】高グレード（グリーソンスコアが８より大きい）の前立腺腫瘍におけるメチオニンスルホキシド濃度の上昇を示した図である。低グレード（グリーソンスコア６）の前立腺腫瘍と比較している。この上昇により、酸化ストレスの上昇が示唆される（実施例２）。
【図５】高グレード（グリーソンスコアが８より大きい）の前立腺腫瘍におけるトリプトファン濃度の上昇を示した図である。低グレード（グリーソンスコア６）の前立腺腫瘍と比較している。この上昇により、酸化ストレスによるトリプトファンヒドロキシラーゼの活性低下が示唆される（実施例２）。
【図６】高グレード（グリーソンスコアが８より大きい）の前立腺腫瘍におけるセロトニン濃度の低下を示した図である。低グレード（グリーソンスコア６）の前立腺腫瘍と比較している。この低下により、酸化ストレスによるトリプトファンヒドロキシラーゼの活性低下が示唆される（実施例２）。
【図７】高グレード（グリーソンスコアが８より大きい）の前立腺腫瘍におけるトリプトファン／セロトニン比の上昇を示した図である。低グレード（グリーソンスコア６）の前立腺腫瘍と比較している。この上昇により、酸化ストレスによるトリプトファンヒドロキシラーゼの活性低下が示唆される（実施例２）。
【図８】高所順応時のメチオニンスルホキシド／メチオニン比の上昇を示した図である。酸化ストレスの上昇が示唆される（実施例３）。
【図９】高所順応時、酸化ストレス上昇下における、フェニルアラニン／チロシン比の上昇を示した図である。フェニルアラニンヒドロキシラーゼの活性低下が示唆される（実施例３）。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するために、本発明の方法に従って、酵素活性の測定を行う。したがって、この酵素活性が酸化ストレスのバイオマーカーとなる。本発明のきわめて重要な特徴は、該当する複数の酵素活性が少なくとも１つの抗酸化性化合物の存在に依存していることである。このような化合物は、還元補因子とも呼ばれる。
【００１１】
本発明は、酸化ストレスレベルの上昇、すなわち、フリーラジカルの増加によって、いくつかの酵素に必須の補因子である特定の抗酸化性化合物の酸化が亢進されるという知見に基づいている。これらの補因子の量が不足すると、次いで、酵素活性の低下が引き起こされる。このとき、酵素依存的な代謝産物の濃度を測定することによって、酵素活性を決定する。詳細には、酵素の基質／産物の比を測定する。前記比の上昇（酵素活性の低下）は、酸化ストレスレベルの上昇に相当し、したがって、酸化ストレスレベルの上昇に起因するいくつかの疾患を示し得るパラメーターともなる。
【００１２】
還元補因子は、テトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）であることが好ましい。ＢＨ４の生化学的な機能、すなわち、ＢＨ４がビオプテリジン酸化還元系のメンバーとして芳香族環の酸化に関与することは、当技術分野において知られている。ＢＨ４は、特定のアミノ酸（たとえば、チロシン）、カテコールアミン、およびセロトニンのような、生物学的／生化学的に重要な化合物の生合成において必須の役割を果たしている。しかし、関連する酵素の補因子に関して、本発明がＢＨ４に限定されるわけではない。
【００１３】
本発明に用いる酵素は、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、トリプトファンヒドロキシラーゼ、グリセリルエーテルモノオキシゲナーゼ、内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、および神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）からなる群から選択されることが好ましいが、フェニルアラニンヒドロキシラーゼおよびトリプトファンヒドロキシラーゼであることがより好ましい。上記の酵素の主な生化学的機能も当技術分野において知られている。これらの酵素の活性が、いずれも還元補因子ＢＨ４の存在に依存していることに留意されたい。特に好ましい実施形態では、酵素がフェニルアラニンヒドロキシラーゼであってその必須補因子がＢＨ４であるか、あるいは酵素がトリプトファンヒドロキシラーゼであってその必須補因子がＢＨ４である。
【００１４】
詳細には、以下の代謝産物の濃度を（関連する基質／産物の比として）測定して酵素活性を示す。
・フェニルアラニン／チロシン比の測定によってフェニルアラニンヒドロキシラーゼの活性を決定し、
・チロシン／ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）比の測定によってチロシンヒドロキシラーゼの活性を決定し、
・トリプトファン／５−ヒドロキシトリプトファン比（または、分析に実用的である点から、トリプトファン／セロトニン比を代用する）の測定によってトリプトファンヒドロキシラーゼの活性を決定し、
・１−アルキル−ｓｎ−グリセロール／１−ヒドロキシアルキル−ｓｎ−グリセロール比の測定によってグリセリルエーテルモノオキシゲナーゼの活性を決定し、
・アルギニン／シトルリン比の測定によって内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）の活性を決定し、
・アルギニン／シトルリン比の測定によって誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の活性を決定し、
・アルギニン／シトルリン比の測定によって神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）の活性を決定する。
【００１５】
本発明に記載の方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法である。通常は、哺乳動物から生体試料を採取する。このとき、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ミニブタ、またはヒトから採取することが好ましい。生体試料中の代謝産物の濃度を測定するために、クロマトグラフ法、分光法、質量分析法などの定量分析法を用いるが、質量分析法が特に好ましい。クロマトグラフ法には、ＧＣ、ＬＣ、ＨＰＬＣ、およびＵＰＬＣが含まれることもあり、分光法には、ＵＶ／Ｖｉｓ、ＩＲ、およびＮＭＲが含まれることもあり、かつ質量分析法には、ＥＳＩ−ＱｑＱ、ＥＳＩ−ＱｑＴＯＦ、ＭＡＬＤＩ−ＱｑＱ、ＭＡＬＤＩ−ＱｑＴＯＦ、およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＴＯＦが含まれることもある。これらの分析法は、当業者に一般に知られている。
【００１６】
本発明の方法によってスクリーニングされる潜在的な治療標的には、種々の癌、糖尿病、閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、心虚血、糸球体腎炎、黄斑変性症、および多様な神経変性疾患などの広範囲にわたるヒトの疾患が含まれる。本発明の方法は、酸化ストレスの緩やかな変化、たとえば、治療効果による変化の検出にも有用である。
【００１７】
上記に基づいて、本発明は、生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するための（バイオ）マーカーとしてＢＨ４を直接的に利用することも明らかにしている。
【００１８】
さらに、本発明は、該方法の実施に適合したキットであって、少なくとも１つの内部標準を含浸させた１つ以上のインサートと１つ以上のウェルとを備える装置を含むキットも目的としている。このような装置は、ＷＯ第２００７／００３３４４号およびＷＯ第２００７／００３３４３号に詳細に記載されており、これらの出願はいずれも参照により本明細書に組み込まれる。
【００１９】
さらに、本発明は、生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するためのバイオマーカーそれ自体も目的としている。
【００２０】
以下に、好ましい実施形態のうちフェニルアラニンヒドロキシラーゼを用いた一実施形態に関して本発明を説明する。その基礎となる生化学的機構については、下記の図解でさらに詳細に説明する。フェニルアラニンヒドロキシラーゼは、テトラヒドロビオプテリン（ＢＨ４）存在下でフェニルアラニンをチロシンに変換する。酸化ストレスレベルが上昇、すなわちフリーラジカルが増加した状況下では、テトラヒドロビオプテリンが強力な抗酸化剤となって自身が酸化されることによって減少して、その結果、もはや必須の補因子としてじゅうぶんな量で存在しなくなる。この補因子量の不足によって、次いで、フェニルアラニンヒドロキシラーゼの酵素活性の低下が引き起こされる。このような酵素活性の低下は、フェニルアラニン／チロシン比が上昇し、かつ（絶対的にもチロシンと相対的にも）フェニルアラニンの蓄積がみられることによって示される。
【化１】
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図解：酸化ストレスにより引き起こされるフェニルアラニンヒドロキシラーゼ活性低下の生化学的機構。
【００２１】
たとえ本明細書において上記の機構をフェニルアラニンヒドロキシラーゼについて説明しているとしても、本発明はフェニルアラニンヒドロキシラーゼの活性を測定することに限定されない。全く対照的に、ＢＨ４または他の還元補因子に依存する他の酵素に関しても、同様のことがあてはまる。これは、以下の実施例および添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【実施例１】
【００２２】
２型糖尿病は、肝臓ならびに骨格筋および脂肪組織など他の組織のインスリン抵抗性を特徴とする重症代謝疾患である。初期症状は末梢血中のグルコース濃度の上昇であるが、付随的に、タンパク質の（非酵素的な）糖化―糖化ヘモグロビンとして測定されることが多い―および他のさまざまな代謝経路の調節異常の増加がみられる。このように病態生理学的な変調が多様なため、２型糖尿病の続発症は、最終的に心筋梗塞や卒中などに至る心血管の問題から腎臓学的疾患や神経学的疾患にまで及び、先進工業国の国民に絶えず増加している肥満を主な原因とする大きな社会経済的負担を象徴している。
【００２３】
２型糖尿病のきわめて重要な発症機序の１つは、タンパク質、脂質、および核酸のような重要な複数種の生体分子に直接的に損傷を与える酸化ストレス（上記を参照されたい）が顕著なことである。この実施例では、確立された２型糖尿病マウスモデル、すなわち、レプチン受容体経路にホモ接合性の遺伝的欠陥を有し、摂餌量が著しく増加して肥満となりインスリン抵抗性を発現させるｄｂ／ｄｂマウス由来の血漿試料を解析した。
【００２４】
この糖尿病動物の血漿試料は、有意に高い濃度のアミノ酸フェニルアラニンを含んでいた（５８．９±９．７μＭに対して８２．２±８．０μＭ、図１）一方、アミノ酸チロシンの濃度はわずかに低下していた（５６．０±７．１μＭに対して５１．５±２５．１μＭ、図２）。
【００２５】
したがって、フェニルアラニンヒドロキシラーゼの酵素活性を示す、チロシン濃度に対するフェニルアラニン濃度の臨界比は、糖尿病群において有意に上昇していた（０．８６±０．１４に対して１．４８±０．１９、図３）。
【実施例２】
【００２６】
第２の実施例には、腫瘍学的な指標として用いる。前立腺癌は、男性において最も多い死因の１つであり、７５歳を超えた米国男性においては癌の死因の第１位となっている。前立腺癌の原因となる実際の機構はよく知られていないが、少なくともいくつかの腫瘍はホルモン依存性であり（この場合、高レベルのテストステロンによって腫瘍の増殖が促進される）、さらに高脂肪食も危険因子であると言われている。
【００２７】
酸化ストレスは、前立腺癌において、原因因子として（Ｋｕｍａｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００８；６８（６）：１７７７−８５）、あるいは、食事要因と前立腺癌の感受性とを機械的に結びつける因子として（ＦｌｅｓｈｎｅｒおよびＫｌｏｔｚ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１９９８−１９９９；１７（４）：３２５−３０）、重要な役割を果たしていると言われることが多い。
【００２８】
いずれの場合においても、酸化ストレスは固形腫瘍の低酸素虚血状態の中心部で発生すると考えられている（Ｎｏｖｏｔｎｙら、Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｓｕｒｇ．２００８  Ｆｅｂ；４３（２）：３３０−４）。これは一見逆説的なようであるが、虚血や低酸素と関連のある他の疾患（たとえば、冠梗塞、卒中など）も、患部組織内で顕著な酸化ストレスを誘発する。
【００２９】
この実施例では、臨床試料における前立腺癌の代謝バイオマーカーについて検討した。より詳細には、根治的前立腺摘除術後の患者の予後に有意に影響する、低グレード（グリーソンスコア６、ｎ＝１２０）および高グレード（グリーソンスコアが８より大きい、ｎ＝８５）の前立腺癌患者における種々の代謝産物の組織内濃度の比較を行った。
【００３０】
この治験における主要な知見の１つは、メチオニンスルホキシド濃度の上昇（平均で、２．０３μＭに対して３．４３μＭ、図４）によって示されるように、より高いグリーソンスコアにおける酸化ストレスレベルの上昇であった。同様の比較により、トリプトファンの増加（平均で、１０１．３μＭに対して１１９．０μＭ、図５）およびセロトニンの減少（平均で、０．２８μＭに対して０．１５μＭ、図６）が確認された。さらに、それに対応してセロトニンに対するトリプトファンの比は上昇し（平均で、９９９に対して１１６９、図７）、この反応に必須の補因子であるテトラヒドロビオプテリンの欠乏によってトリプトファンヒドロキシラーゼの酵素活性が低下したことを示唆する。
【実施例３】
【００３１】
第３の実施例として、パミール地域のムスターグアタ山に遠征中のヒト健常成人志願者３３名の高所順応およびそれに伴う低酸素状態による代謝の変化を解析した。メチオニンに対するメチオニンスルホキシドの比の大幅な上昇（図８）によって示されるように、この低酸素状態は酸化ストレスの上昇も伴う。
【００３２】
このヒトの治験においても、第１の実施例として用いたモデル動物と類似して、フェニルアラニン／チロシン比の有意な上昇が測定され、フェニルアラニンヒドロキシラーゼの活性低下を示すことができた（図９）。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明は、生体試料中の酸化ストレスレベルを測定するための改良された方法を提供する。この方法は、きわめて感度が高く、酸化ストレスレベルのわずかな変化のみでも検出可能である。この方法には、少なくとも１つの還元補因子（好ましくはＢＨ４）に依存する酵素の活性を測定することが含まれる。換言すれば、酸化ストレスレベルの上昇、すなわち、フリーラジカルの増加によって、いくつかの酵素に必須の補因子である特定の抗酸化性化合物の酸化が亢進される。次いで、これらの補因子の量が不足することにより、酵素活性の低下が生じ、これを測定する。このように、酵素活性の低下が酸化ストレスレベルの上昇のバイオマーカーとなり、哺乳動物におけるいくつかの疾患および機能障害の検出を可能にする。
【００３４】
本発明の方法によってスクリーニングされる潜在的な治療標的には、種々の癌、糖尿病、閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、心虚血、糸球体腎炎、黄斑変性症、および多様な神経変性疾患などの広範囲にわたるヒトの疾患が含まれる。本発明の方法は、酸化ストレスの緩やかな変化、たとえば、治療効果による変化の検出にも有用である。したがって、該方法および該方法を実施するための該キットは、多くの医学分野において、診断および療法の両方にきわめて有効である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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