(57)【要約】本開示は、合成アルファ−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）類似体、およびそれらを免疫療法剤として使用することに関する。一つの態様において、被検対象におけるサイトカイン応答を活性化させる方法は、少なくとも一つのリンパ球および少なくとも一つの抗原提示細胞を含む細胞集団を含む適応免疫系を有する被検対象に、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程；該化合物と該抗原提示細胞との間に複合体を形成させ、その結果、上記リンパ球上にある受容体を活性化させる工程；およびリンパ球を活性化させてサイトカイン応答を生じさせる工程を含む。
2010523724.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、被検対象におけるサイトカイン応答を活性化させる方法：
有効量の化合物を被検対象に投与する工程であって、該被検対象は、少なくとも一つのリンパ球および少なくとも一つの抗原提示細胞を含む細胞集団を含む適応免疫系を有し、該化合物は、下記の化学式１の構造で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩である工程：
【化１９】
2010523724.tif 000021
（式中、ｎは０から２５であり、Ｘは、ＯおよびＳから選択され、Ｒ１は、Ｈ、ＣＨ３、およびフェニルから選択されるが、該フェニルが、任意で、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｆ、ＣＦ３、フェニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ２〜Ｃ６分枝状アルキルであり、Ｒ２は、ＯＨおよびＨから選択され、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１５アルキルおよびフェニルから選択されるが、該フェニルが、任意で、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｆ、ＣＦ３、フェニル、フェニル−Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ２〜Ｃ６分枝状アルキルであり、Ｒ４は、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｎａ、およびＯＳＯ３Ｋから選択され、かつ、Ｒ５は、ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈから選択される）；
該化合物と該抗原提示細胞との間に複合体を形成させる工程であって、該複合体形成が、該リンパ球上の受容体を活性化させる工程；および
リンパ球を活性化させてサイトカイン応答を生じさせる工程。
【請求項２】
前記サイトカイン応答が、ＴＨ１サイトカインを産生させるＴＨ１型サイトカイン応答である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＨ１サイトカインが、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、およびＭＣＰ−１からなる群から選択される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカイン応答が、ＴＨ２サイトカインを産生させるＴＨ２型サイトカイン応答である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＨ２サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、およびＭＣＰ−１からなる群から選択される、請求項４記載の方法。
【請求項６】
化合物の投与が、皮下投与、静脈内投与、鼻腔内投与、または筋肉内投与によって行われる、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも一つのリンパ球がＴリンパ球である、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記Ｔリンパ球がナチュラルキラーＴ細胞である、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記ナチュラルキラーＴ細胞がインバリアントナチュラルキラーＴ細胞である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも一つの抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記樹状細胞が、未成熟樹状細胞または成熟樹状細胞である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が、抗原提示細胞上のＣＤ１分子と複合体を形成する、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ１分子がＣＤ１ｄ分子である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｔリンパ球上の受容体がＴ細胞受容体である、請求項７記載の方法。
【請求項１５】
少なくとも一つの別のリンパ球を刺激して、サイトカイン応答を生じさせる工程をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも一つの別のリンパ球がＴヘルパー細胞である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物の投与によって、被検対象の適応免疫系において細胞集団の増殖がもたらされる、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
被検対象が、癌または感染症を患っている、請求項２記載の方法。
【請求項１９】
被検対象が、自己免疫疾患を患っている、請求項４記載の方法。
【請求項２０】
以下のものを含むワクチン：
有効量の化合物であって、該化合物が、以下のものからなる群から選択されるもの：
【化２０】
2010523724.tif 000022
（式中、Ｒは（ＣＨ２）１２ＣＨ３）、
【化２１】
2010523724.tif 000023
（式中、Ｒは、（ＣＨ２）７Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ、（ＣＨ２）２２ＣＨ３、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−Ｆ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ）、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｆ）、または（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−ＣＦ３））、
【化２２】
2010523724.tif 000024
（式中、Ｒは（ＣＨ２）２４ＣＨ３）、
【化２３】
2010523724.tif 000025
（式中、Ｒは（ＣＨ２）２２ＣＨ３）、
【化２４】
2010523724.tif 000026
または薬学的に許容されるそれらの塩；および
ワクチン成分。
【請求項２１】
前記ワクチン成分が、死滅微生物、弱毒化生ウイルス微生物、類毒素、および不活化微生物もしくは弱毒化微生物の断片からなる群から選択される、請求項２０記載のワクチン。
【請求項２２】
前記微生物が細菌または真菌である、請求項２１記載のワクチン。
【請求項２３】
前記類毒素が破傷風またはジフテリアである、請求項２１記載のワクチン。
【請求項２４】
ワクチン成分が、ワクチンを投与された被検対象において、免疫応答を誘導することができる、請求項２０記載のワクチン。
【請求項２５】
化合物が、免疫アジュバントとして働き、免疫系を刺激することによって、ワクチン成分によって誘導される免疫応答を修正または増強することができ、該化合物がない場合よりも活発にワクチンに応答する被検対象をもたらす、請求項２４記載のワクチン。
【請求項２６】
前記被検対象が、皮下投与、静脈内投与、鼻腔内投与、または筋肉内投与によってワクチンの投与を受ける、請求項２４記載のワクチン。
【請求項２７】
有効量の化合物を投与する工程を含む抗腫瘍免疫療法であって、該化合物が、以下のものからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるそれらの塩である方法：
【化２５】
2010523724.tif 000027
（式中、Ｒは（ＣＨ２）１２ＣＨ３）、
【化２６】
2010523724.tif 000028
（式中、Ｒは、（ＣＨ２）５Ｐｈ、（ＣＨ２）７Ｐｈ、（ＣＨ２）９Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ、（ＣＨ２）２２ＣＨ３、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−Ｆ）、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−Ｐｈ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−Ｆ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ｐＨ）、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ）、（ＣＨ２）１４Ｐｈ、（ＣＨ２）２０Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ−Ｆ）または（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｆ））、
【化２７】
2010523724.tif 000029
（式中、Ｒは（ＣＨ２）２４ＣＨ３）、
【化２８】
2010523724.tif 000030
。
【請求項２８】
投与が、少なくとも一つの癌、癌のリスク増加、または前癌性前駆体に基づいて行われる、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
化合物の投与によって、少なくとも一つの腫瘍細胞または癌細胞において応答が誘導される、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記誘導される応答が、腫瘍増殖の緩徐化である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記誘導される応答が、腫瘍の大きさの縮小である、請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
化合物の投与が、少なくとも一つのリンパ球を含む細胞集団を含み、誘導される応答が該細胞集団の増殖であるという適応免疫系をもたらす、請求項２７記載の方法。
【請求項３３】
前記適応免疫系における細胞集団の増殖が、Ｔ細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞の数の増大である、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物が添加されている癌ワクチンを提供する工程をさらに含む、請求項２７記載の方法。
【請求項３５】
前記癌が、肺癌、乳癌、肝臓癌、白血病、固形腫瘍、および癌腫からなる群から選択される、請求項２８記載の方法。
【請求項３６】
被検対象を抗菌免疫治療する方法であって、化合物が、以下のものからなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるそれらの塩の有効量を投与することを含む、方法：
【化２９】
2010523724.tif 000031
、（式中、Ｒは（ＣＨ２）２４ＣＨ３）、
【化３０】
2010523724.tif 000032
、（式中、Ｒは、（ＣＨ２）７Ｐｈ、（ＣＨ２）９Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−Ｆ）、または（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ−Ｆ））、
【化３１】
2010523724.tif 000033
（式中、Ｒは、（ＣＨ２）２４ＣＨ３）、および
【化３２】
2010523724.tif 000034
。
【請求項３７】
投与が、微生物性病原体の存在によって引き起こされる感染症に基づいている、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記微生物性病原体が、ウイルス、細菌、真菌、原生生物、多細胞寄生生物、および異常型タンパク質からなる群から選択される、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
前記微生物性病原体がウイルスである、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記ウイルスが、レトロウイルス科、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、トガウイルス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）、アレナウイルス科、レオウイルス科、ビルナウイルス科、ヘパドナウイルス科、パルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、およびイリドウイルス科からなる群から選択される、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
前記微生物性病原体が細菌である、請求項３８記載の方法。
【請求項４２】
前記細菌が、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラニューモフィリア菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、肺炎桿菌、マイコバクテリア種、黄色ブドウ球菌、淋菌、髄膜炎菌、リステリア菌、化膿連鎖球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、連鎖球菌、大便連鎖球菌、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、肺炎連鎖球菌、病原性カンピロバクター種、エンテロコッカス種、クラミジア種、インフルエンザ菌、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌、コルネバクテリウム種、ブタ丹毒菌、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス種、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、モニリホルム連鎖桿菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ペルテニュ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属、イスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）、スフィンゴモナス・カプスラータ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｃａｐｓｕｌａｔａ）、および野兎病菌からなる群から選択される、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
化合物を被検対象に投与すると、該化合物を投与されなかった被検対象と比較して細菌除去が促進される、請求項４１記載の方法。
【請求項４４】
化合物を投与すると、微生物因子の死滅がもたらされる、請求項３７記載の方法。
【請求項４５】
化合物を投与すると、増殖することができなくなる微生物因子がもたらされる、請求項３７記載の方法。
【請求項４６】
以下の化学式２によって表される化合物：
【化３３】
2010523724.tif 000035
（式中、Ｒは、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ−Ｆ）、（ＣＨ２）６Ｐｈ、（ＣＨ２）８Ｐｈ、および（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）から選択される）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年４月１３日に出願された、「Ｇｌｉｃｏｌｉｐｉｄ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ａｌｐｈａ−Ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ」と題する、米国仮特許出願第６０／９１１，７９８号の利益および同号に対する優先権を主張する。
【０００２】
本開示は、α−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）類似体、およびそれらを免疫療法剤として使用することに関する。
【背景技術】
【０００３】
ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）は、ＣＤ１ｄによって提示される天然または合成の糖脂質に対する反応性や、インバリアントＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）α鎖の発現などという特異的な性質をもつＴリンパ球のサブセットに相当する。ＮＫＴは、ナチュラルキラー細胞とＴ細胞の両方の性質をもち、それらのリガンドによる刺激を受けると直ちにＴＨ１型およびＴＨ２型の応答を生じさせることができる（自然免疫）という点で、機能的に分化した通常のαβ−Ｔ細胞とは異なる。ＮＫＴの活性化は、逆説めいているが、免疫応答の抑制と促進のいずれをももたらすことができる。例えば、ＴＨ１サイトカインの産生は、抗腫瘍活性、抗ウイルス／抗細菌活性、およびアジュバント活性による細胞性免疫を促進すると考えられているが、一方、ＴＨ２サイトカイン産生は、自己免疫疾患を抑制し、抗体産生を促進すると考えられている。ＮＫＴは、免疫系において調節的役割を果たしているため、免疫療法にとっては魅力的な標的である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一つの典型的な実施態様において、ＤＣの発生を、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を使用することによって促進することができる。または、別の典型的な実施態様では、インターロイキン（ＩＬ）−３を使用することによって促進することができるが、ＩＬ−３は、別の典型的な実施態様においては、ＤＣの生存率を高めることができる。
【０００５】
一つの典型的な実施態様において、本開示の方法で使用されるＤＣは、骨髄マーカー、例えば、ＣＤ１１ｃを発現することができるが、別の典型的な実施態様ではＩＬ−３受容体−α（ＩＬ−３Ｒα）鎖（ＣＤ−１２３）を発現することができる。別の典型的な実施態様においては、ＤＣはＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）を産生することができる。一つの典型的な実施態様において、本開示の方法で使用されるＤＣは、共刺激分子を発現する。別の典型的な実施態様において、本開示の方法で使用されるＤＣは、さらに別の接着分子を発現することができるが、それらは、一つの実施態様ではさらに別の共刺激分子として役立つか、または、別の実施態様では、後述するように、本開示の方法によって送達されると、インビボで特定の部位にＤＣを標的させるのに役立つかもしれない。
【０００６】
一つの典型的な実施態様において、本開示の方法で使用される樹状細胞は、一つの実施態様では、ＤＥＣ−２０５／ＣＤ２０５などの自己抗原の取り込みを増加させるエンドサイトーシス受容体であるＣＤ８３、またはＤＣ−ＬＡＭＰ（ＣＤ２０８）細胞表面マーカーを、または、別の実施態様では、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩの産物を提示するさまざまなレベルの抗原を、または別の実施態様では、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ５８、もしくはＣＤ８６などのアクセサリー分子（接着分子および共刺激分子）を、またはこれらを任意に組み合わせたものを発現することができる。別の実施態様において、該樹状細胞は、さまざまなレベルのＣＤ１１５、ＣＤ１４、ＣＤ６８、またはＣＤ３２を発現することができる。
【０００７】
一つの典型的な実施態様において、本開示の方法には、成熟樹状細胞が使用される。一つの実施態様において、「成熟樹状細胞」という用語は、ＣＤ１１５、ＣＤ１４、ＣＤ６８、またはＣＤ３２の発現が低下している樹状細胞の集団を意味し、または別の実施態様において、ＣＤ８６の発現が増加している細胞集団を意味し、またはこれらが併存する集団を意味する。別の実施態様において、成熟樹状細胞は、ｐ５５、ＣＤ８３、ＣＤ４０、またはＣＤ８６のうちの一つ以上のもの、またはこれらを組み合わせたものの発現の増加を示すであろう。別の実施態様において、本開示の方法で使用される樹状細胞は、その表面上にＤＥＣ−２０５受容体を発現させるであろう。別の実施態様において、ＤＣの成熟は、例えば、ＣＤ４０ライゲーション、ＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチドの付加、ＩＬ−１、ＴＮＦα、もしくはＴＯＬＬ様受容体リガンドのライゲーション、細菌のリポグリカンもしくは多糖の付加、またはＴＲＡＦ−６もしくはＮＦ−κＢなど細胞内経路の活性化によって行うことができる。
【０００８】
一つの典型的な実施態様において、ＤＣの成熟誘導は、予め選択された抗原のエンドサイトーシス受容体による送達と連動していてもよい。一つの実施態様において、エンドサイトーシス受容体による抗原の送達は、ＤＥＣ−２０５受容体の使用を介していてもよい。
【０００９】
一つの典型的な実施態様において、樹状細胞の成熟状態は、例えば、１）ｐ５５抗原、ＣＤ８３抗原、ＣＤ４０抗原、またはＣＤ８６抗原の一つ以上の発現増加；２）ＣＤ１１５抗原、ＣＤ１４抗原、ＣＤ３２抗原、またはＣＤ６８の抗原の消失；または３）ＰＢＭＣが未成熟樹状細胞に成熟するのを促進するサイトカインを除去した後に接着性が増大し、ベールが消失するということで特徴づけられるマクロファージ表現型への復帰のうちの一つ以上を、当技術分野においてよく知られている方法、例えば、免疫組織化学法、ＦＡＣＳ解析法などによって検出することで確認することができる。
【００１０】
ＮＫＴ増殖は、一つの実施態様では、提示抗原に応じて変化する。一つの実施態様において、樹状細胞がＮＫＴと接触するのと同時に、本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体が培養液中に供給される。別の実施態様では、すでに抗原処理を終えた樹状細胞を、ＮＫＴと接触させる。
【００１１】
一つの典型的な実施態様において、本明細書では、「標的細胞を接触させる」という用語は、細胞を、指示されたものに直接的および間接的に曝露することを意味する。一つの実施態様において、ＮＫＴを、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体、サイトカイン、増殖因子、樹状細胞、またはこれらを組み合わせたものに接触させるのは、直接的であるか、または間接的である。一つの実施態様において、細胞を接触させることは、当技術分野においてよく知られている方法、例えば、微量注入法などによって細胞を直接注入することを含みうる。別の実施多様においては、例えば、細胞を囲む培地中への供給や、または当技術分野においてよく知られている、下記に記載されているような経路を介した被検対象への投与によるなどして、細胞への供給を間接的に行うことも想定している。
【００１２】
樹状細胞を抗原刺激する方法は当業者によく知られており、例えば、Ｈｓｕら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２：５２−５８（１９９６）、またはＳｔｅｉｎｍａｎら、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９３／０３１４１号に記載されているように行うことができる。
【００１３】
一つに実施態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体を被検対象に投与し、別の実施態様では、樹状細胞を標的とするが、以下に記載するような方法では、インビボにおいて取り込みが起こる。
【００１４】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体の取り込みおよびプロセシングは、一つの実施態様では、２４時間以内に起こりうるが、別の実施態様では、より長い期間、例えば、４日以下の期間が必要となることがあり、別の実施態様では、より短い時間、例えば、約１〜２時間が必要となることがある。
【００１５】
別の実施態様において、本開示に係る方法における樹状細胞によって増殖されたＮＫＴは、その樹状細胞について、自家性、同系、または異種同系のものである。
【００１６】
一つの実施態様において、ＮＫＴを使用して、疾患特異的に免疫応答を調節することができる。すなわち、サイトカイン産生を促進するか、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、および／またはインターロイキン−４などの特定のサイトカインプロファイルを誘導することが望まれる任意の免疫応答において、本開示に係るＮＫＴ細胞を利用することができ、そのような免疫応答が、本開示の実施態様を代表するものであると理解されるべきである。
【００１７】
別の実施態様において、本開示に係る方法は、さらに、予め単離されたＮＫＴを、別の樹状細胞、および本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とともに一定の期間培養して、さらなるＮＫＴ増殖、サイトカイン産生、またはその両方を生じさせる工程を含むことができる。
【００１８】
別の実施態様において、本開示は、被検対象の発症年齢を遅らせ、発症率を低下させ、または病気を抑制する方法であって、培養液中でＮＫＴを樹状細胞および本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体と一定時間接触させて、ＮＫＴ増殖、サイトカイン産生、またはその両方を生じさせる工程、および、このようにして得られた、被検対象の発症年齢を遅らせ、発症率を低下させ、または病気を抑制するＮＫＴを被検対象に投与し、その結果、被検対象において発症年齢を遅らせ、発症率を低下させ、または病気を抑制する
一つの典型的な実施態様において、本開示で被検対象に投与される細胞は、組成物にして提供することができる。これらの組成物は、一つの実施態様では、非経口的または静脈内に投与することができる。投与用組成物は、一つの実施態様では、無菌溶液であってもよく、別の実施態様では、水性または非水性の懸濁液または乳液であってもよい。一つの実施態様において、本組成物は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、例えば、オレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステル、またはシクロデキストリンを含むことができる。別の実施態様において、組成物は、湿潤剤、乳化剤、および／または分散剤を含むこともできる。別の実施態様において、本組成物は、滅菌水、またはその他任意の無菌で注射可能な溶媒を含んでいてもよい。別の実施態様において、本組成物は、本明細書に記載された方法のいくつかのものでは、下記でさらに説明するように、免疫応答を促進することが望ましい場合には、当業者によく知られているアジュバント（例えば、ビタミンＣ、抗酸化剤など）を含むことができる。
【００１９】
一つの実施態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体、細胞、ワクチン、または本開示に係る組成物を、注射により被検対象に投与することができる。一つの実施態様において、注射は、当技術分野で知られた手段によればよく、例えば、リンパ内注射、または皮下注射なども可能である。
【００２０】
一つの実施態様では、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビボにおいて、定常状態で樹状細胞に送達されるが、これは、別の実施態様では、疾患改善作用のあるＮＫＴの増殖をもたらす。定常状態での類似体の送達は、一つの実施態様では、Ｂｏｎｉｆａｚら、（２００２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９６：１６２７−１６３８；Ｍａｎａｖａｌａｎら、（２００３）Ｔｒａｎｓｐｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：２４５−５８に記載されたところに従って行うことができよう。
【００２１】
別の典型的な実施態様において、限定された種類の樹状細胞が、インビボにおいて、ＮＫＴを抗原刺激するよう作用する。
【００２２】
別の典型的な実施態様において、本開示は、不適切または望ましくない免疫応答を調節する方法を提供する。一つの実施態様において、この免疫応答は、宿主に有害なサイトカインプロファイルを特徴とする。
【００２３】
一つの典型的な実施態様において、本開示に係るＮＫＴは、特定の病気の治療と同時に、例えば、標準的な抗癌療法と同時に患者に投与されて、所定の癌に対する補助療法として役立つかもしれない。別の実施態様において、本開示に係るＮＫＴは、もう一方の治療を行う前に投与することもできる。
【００２４】
別の典型的な実施態様において、本開示は、病原体による感染に対する免疫応答であって、被検対象を防御しない免疫応答を調節する方法を提供する。
【００２５】
別の典型的な実施態様において、この免疫応答は、宿主にとって有益ではないサイトカインプロファイルをもたらす。一つの実施態様において、このサイトカインプロファイルは病気を悪化させる。一つの実施態様において、ＴＨ１応答が宿主に有益な場合に、例えば、らい腫型ハンセン病などにおいて、ＴＨ２応答が開始される。別の実施態様において、例えば、虫卵病原に対する応答が住血吸虫病であるときには、対象者の体内でＴＨ１応答が開始して持続する。
【００２６】
別の典型的な実施態様において、本開示は、有効量の化合物または塩もしくは混合物を投与することによって、被検対象におけるサイトカイン応答を活性化させる方法を提供するが、該被検対象は、少なくとも一つのリンパ球および少なくとも一つの抗原提示細胞を含む細胞集団を含む適応免疫系を有し、該化合物は、化学式１の構造によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩である。
【００２７】
【化１】
2010523724.tif 000003
（１）
ただし、式中、ｎは０から２５であり、Ｘは、ＯおよびＳから選択され、Ｒ１は、Ｈ、ＣＨ３、およびフェニルから選択されるが、該フェニルが、任意で、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｆ、ＣＦ３、フェニル、フェニル−Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ２〜Ｃ６分枝状アルキルであり、Ｒ２は、ＯＨおよびＨから選択され、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１５アルキルおよびフェニルから選択されるが、該フェニルが、任意で、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｆ、ＣＦ３、フェニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ２〜Ｃ６分枝状アルキルであり、Ｒ４は、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｎａ、およびＯＳＯ３Ｋから選択され、かつ、Ｒ５は、ＣＨ２ＯＨおよびＣＯ２Ｈフェニルから選択される。本方法は、該化合物と該抗原提示細胞との間に複合体を形成させるが、この複合体の形成は、上記リンパ球上にある受容体の活性化をもたらす。また、本方法は、リンパ球を活性化させてサイトカイン応答を生じさせる。
【００２８】
本方法のいくつかの態様において、上記少なくとも一つのリンパ球はＴリンパ球であり、場合によっては、このＴリンパ球はナチュラルキラーＴ細胞である。場合によっては、該ナチュラルキラーＴ細胞は、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞である。いくつかの態様において。
【００２９】
いくつかの態様において、上記少なくとも一つの抗原提示細胞は樹状細胞である。場合によっては、この樹状細胞は、未成熟樹状細胞または成熟樹状細胞である。
【００３０】
本方法のいくつかの態様において、化合物の投与は、皮下投与、静脈内投与、鼻腔内投与、または筋肉内投与によって行われる。
【００３１】
本発明のいくつかの態様において、化合物は、抗原提示細胞上でＣＤ１分子と複合体を形成する。場合によっては、このＣＤ１分子はＣＤ１ｄ分子である。場合によっては、Ｔリンパ球上の受容体はＴ細胞受容体である。場合によっては、別の少なくとも一つのリンパ球を刺激するのは、サイトカイン応答を引き起こすためであり、場合によっては、このその他の少なくとも一つのリンパ球は、Ｔヘルパー細胞である。
【００３２】
本方法のいくつかの態様において、サイトカイン応答は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、およびＭＣＰ−１からなる群から選択することもできるＴＨ１サイトカインを産生するＴＨ１型サイトカイン応答である。
【００３３】
請求項１記載の方法のいくつかの態様において、サイトカイン応答は、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、およびＭＣＰ−１からなる群から選択することもできるＴＨ２サイトカインを産生するＴＨ２型サイトカイン応答である。
【００３４】
いくつかの典型的な実施態様において、本開示は、有効量の化合物、または薬学的に許容されるその塩、およびワクチン成分を含むワクチンを提供するが、該化合物は、以下のものからなる群から選択される：
【００３５】
【化２】
2010523724.tif 000004
式中、Ｒは（ＣＨ２）１２ＣＨ３、
【００３６】
【化３】
2010523724.tif 000005
式中、Ｒは、（ＣＨ２）７Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ、（ＣＨ２）２２ＣＨ３、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−Ｆ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｆ）、または（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、
【００３７】
【化４】
2010523724.tif 000006
式中、Ｒは（ＣＨ２）２４ＣＨ３、
【００３８】
【化５】
2010523724.tif 000007
式中、Ｒは（ＣＨ２）２２ＣＨ３、および
【００３９】
【化６】
2010523724.tif 000008
【００４０】
場合によっては、上記ワクチン成分は、死滅微生物、弱毒化生ウイルス、類毒素、および不活化微生物もしくは弱毒化微生物の断片からなる群から選択される。場合によっては、微生物は細菌または真菌である。場合によっては、類毒素は破傷風またはジフテリアである。場合によっては、ワクチン成分は、ワクチンを投与された被検対象において、免疫応答を誘導することができる。場合によっては、上記化合物は免疫アジュバントとして働き、免疫系を刺激することによって、ワクチン成分によって誘導される免疫応答を修正または増強することができ、該化合物がない場合よりも活発にワクチンに応答する被検対象をもたらす。
【００４１】
いくつかの典型的な実施態様において、本開示は、以下の化学式で表される化合物からなる群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩の有効量を投与することを含む抗腫瘍免疫療法を提供する：
【００４２】
【化７】
2010523724.tif 000009
式中、Ｒは（ＣＨ２）１２ＣＨ３、
【００４３】
【化８】
2010523724.tif 000010
式中、Ｒは、（ＣＨ２）５Ｐｈ、（ＣＨ２）７Ｐｈ、（ＣＨ２）９Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ、（ＣＨ２）２２ＣＨ３、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−Ｆ）、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）５Ｐｈ（ρ−Ｐｈ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−Ｆ）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ＣＦ３）、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−ｐＨ）、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ）、（ＣＨ２）１４Ｐｈ、（ＣＨ２）２０Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ−Ｆ）または（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｆ）、
【００４４】
【化９】
2010523724.tif 000011
式中、Ｒは（ＣＨ２）２４ＣＨ３、
【００４５】
【化１０】
2010523724.tif 000012
。
【００４６】
本方法のいくつかの態様において、投与は、少なくとも一つの癌、癌のリスク増加、または前癌性前駆体に基づいて行われる。本方法のいくつかの態様において、化合物の投与により、少なくとも一つの腫瘍細胞または癌細胞において応答が誘導される。本方法のいくつかの態様において、誘導される応答は腫瘍増殖の緩徐化である。本方法のいくつかの態様において、誘導される応答は腫瘍の大きさの縮小である。
【００４７】
いくつかの典型的な実施態様において、本方法は、少なくとも一つのリンパ球を含む細胞集団を含み、誘導される応答が細胞集団の増幅であるという適応免疫系をもたらすために上記化合物を投与することを含む。
【００４８】
本方法のいくつかの態様において、適応免疫系における細胞集団の増幅は、Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞の数が増加することを含む。いくつかの態様において、本方法は、上記化合物が添加されている癌ワクチンを提供することを含む。本方法のいくつかの態様において、癌は、肺癌、乳癌、肝臓癌、白血病、固形腫瘍、および癌腫からなる群から選択される。
【００４９】
いくつかの典型的な実施態様において、本方法は、被検対象に、化合物または薬学的に許容されるその塩の有効量を投与することを含む抗菌免疫療法を提供する。ただし、該化合物は、以下の化学式で表される化合物からなる群から選択される：
【００５０】
【化１１】
2010523724.tif 000013
、式中、Ｒは（ＣＨ２）２４ＣＨ３、
【００５１】
【化１２】
2010523724.tif 000014
、式中、Ｒは、（ＣＨ２）７Ｐｈ、（ＣＨ２）９Ｐｈ、（ＣＨ２）１０Ｐｈ、（ＣＨ２）７Ｐｈ（ρ−Ｆ）、または（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ−Ｆ）、
【００５２】
【化１３】
2010523724.tif 000015
式中、Ｒは、（ＣＨ２）２４ＣＨ３、および
【００５３】
【化１４】
2010523724.tif 000016
。
【００５４】
本方法のいくつかの態様において、投与は、微生物性病原体の存在によって引き起こされる感染症に基づいている。本方法のいくつかの態様において、微生物性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、原生生物、多細胞寄生生物、および異常型タンパク質からなる群から選択される。本方法のいくつかの態様において、微生物性病原体はウイルスである。本方法のいくつかの態様において、ウイルスは、レトロウイルス科、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、トガウイルス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）、アレナウイルス科、レオウイルス科、ビルナウイルス科、ヘパドナウイルス科、パルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、およびイリドウイルス科からなる群から選択される。本方法のいくつかの態様において、微生物性病原体は細菌である。本方法のいくつかの態様において、細菌は、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラニューモフィリア菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、肺炎桿菌、マイコバクテリア種、黄色ブドウ球菌、淋菌、髄膜炎菌、リステリア菌、化膿連鎖球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、連鎖球菌、大便連鎖球菌、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、肺炎連鎖球菌、病原性カンピロバクター種、エンテロコッカス種、クラミジア種、インフルエンザ菌、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌、コルネバクテリウム種、ブタ丹毒菌、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス種、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、モニリホルム連鎖桿菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ペルテニュ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属、イスラエル放射菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）、スフィンゴモナス・カプスラータ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｃａｐｓｕｌａｔａ）、および野兎病菌からなる群から選択される。本方法のいくつかの態様において、化合物を被検対象に投与すると、該化合物を投与されなかった被検対象と比較して細菌除去が促進される。本方法のいくつかの態様において、化合物を被検対象に投与すると、微生物因子の死滅がもたらされる。本方法のいくつかの態様において、該化合物の投与の結果、微生物因子が増殖できなくなる。
【００５５】
典型的な実施態様において、本開示は、以下の化学式２の構造によって表される化合物を提供する：
【００５６】
【化１５】
2010523724.tif 000017
式中、Ｒは、（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−Ｐｈ−Ｆ）、（ＣＨ２）６Ｐｈ、（ＣＨ２）８Ｐｈ、および（ＣＨ２）１０Ｐｈ（ρ−ＯＭｅ）から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
本特許または出願は、色つきで作成された少なくとも一つの図面を含む。カラー版の図面が載った本特許または本特許出願の公報は、請求を行い、必要な費用を支払えば、特許庁より提供されるはずである。
【図１】図Ａ〜Ｂは、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）の機能を示す略図である。図１Ａは、一般的な仕組みを示している。図１Ｂは、アルファ−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）、および本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、どのようにしてＣＤ１ｄに結合して、ＴＨ１およびＴＨ２の迅速なサイトカイン応答を刺激することができるかを示している。
【図２−１】α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）および、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ糖脂質（類似体とも呼ばれる）の化学構造を示しており、細菌由来の糖脂質（Ｃ３、Ｃ３、およびＣ１４）、スルホン化によって修飾された糖脂質（Ｃ４、Ｃ５、およびＣ９）、フェニル−アルキル鎖糖脂質（Ｃ６〜Ｃ８、Ｃ１０〜Ｃ１１、Ｃ１５〜Ｃ１６、Ｃ１８〜Ｃ３３、７ＤＷ８−５（ａｋａ、Ｃ８−５）および７ＤＷ８−６（ａｋａ、Ｃ８−６））およびフィトスフィンゴシン切断型糖脂質（Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１７）が含まれている。
【図２−２】α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）および、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ糖脂質（類似体とも呼ばれる）の化学構造を示しており、細菌由来の糖脂質（Ｃ３、Ｃ３、およびＣ１４）、スルホン化によって修飾された糖脂質（Ｃ４、Ｃ５、およびＣ９）、フェニル−アルキル鎖糖脂質（Ｃ６〜Ｃ８、Ｃ１０〜Ｃ１１、Ｃ１５〜Ｃ１６、Ｃ１８〜Ｃ３３、７ＤＷ８−５（ａｋａ、Ｃ８−５）および７ＤＷ８−６（ａｋａ、Ｃ８−６））およびフィトスフィンゴシン切断型糖脂質（Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１７）が含まれている。
【図２−３】α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）および、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ糖脂質（類似体とも呼ばれる）の化学構造を示しており、細菌由来の糖脂質（Ｃ３、Ｃ３、およびＣ１４）、スルホン化によって修飾された糖脂質（Ｃ４、Ｃ５、およびＣ９）、フェニル−アルキル鎖糖脂質（Ｃ６〜Ｃ８、Ｃ１０〜Ｃ１１、Ｃ１５〜Ｃ１６、Ｃ１８〜Ｃ３３、７ＤＷ８−５（ａｋａ、Ｃ８−５）および７ＤＷ８−６（ａｋａ、Ｃ８−６））およびフィトスフィンゴシン切断型糖脂質（Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１７）が含まれている。
【図２−４】α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）および、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ糖脂質（類似体とも呼ばれる）の化学構造を示しており、細菌由来の糖脂質（Ｃ３、Ｃ３、およびＣ１４）、スルホン化によって修飾された糖脂質（Ｃ４、Ｃ５、およびＣ９）、フェニル−アルキル鎖糖脂質（Ｃ６〜Ｃ８、Ｃ１０〜Ｃ１１、Ｃ１５〜Ｃ１６、Ｃ１８〜Ｃ３３、７ＤＷ８−５（ａｋａ、Ｃ８−５）および７ＤＷ８−６（ａｋａ、Ｃ８−６））およびフィトスフィンゴシン切断型糖脂質（Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１７）が含まれている。
【図３】本開示に係るＣ１２およびＣ１３のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の合成スキームを示している。
【図４】α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理されたマウス１．２ハイブリドーマによるＩＬ−２サイトカインの分泌量（ｐｇ／ｍｌ）を示している。
【図５Ａ】図Ａ〜Ｃは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＣＤ１４＋ＤＣと同時培養されたヒトＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋ＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＮＦ−γおよびＩＬ−４のサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−２およびＩＬ−６のサイトカイン産生、ならびに（図Ｃ）ＩＬ−１２およびＩＬ−１０のサイトカイン産生を、ＤＭＳＯ対照に対して標準化した「増加倍率」を示す。左側の図はＴＨ１型の応答を示し、右側の図はＴＨ２型の応答を示す。
【図５Ｂ】図Ａ〜Ｃは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＣＤ１４＋ＤＣと同時培養されたヒトＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋ＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＮＦ−γおよびＩＬ−４のサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−２およびＩＬ−６のサイトカイン産生、ならびに（図Ｃ）ＩＬ−１２およびＩＬ−１０のサイトカイン産生を、ＤＭＳＯ対照に対して標準化した「増加倍率」を示す。左側の図はＴＨ１型の応答を示し、右側の図はＴＨ２型の応答を示す。
【図５Ｃ】図Ａ〜Ｃは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＣＤ１４＋ＤＣと同時培養されたヒトＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋ＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＮＦ−γおよびＩＬ−４のサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−２およびＩＬ−６のサイトカイン産生、ならびに（図Ｃ）ＩＬ−１２およびＩＬ−１０のサイトカイン産生を、ＤＭＳＯ対照に対して標準化した「増加倍率」を示す。左側の図はＴＨ１型の応答を示し、右側の図はＴＨ２型の応答を示す。
【図６】図Ａ〜Ｂは、（図Ａ）ヒトＣＤ１６１＋ＣＤ３＋ＮＫＴの純度、および、（図Ｂ）図５に示されたデータから得られたＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生を対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化したものの比の「増加倍率」を示している。
【図７】α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、図５および図６のヒトＮＫＴの上清中の基礎サイトカイン濃度に対する増加倍率を示す表である。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｆは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＤＣと同時培養されたナイーブヒトＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカイン産生、（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生の比、（図Ｄ）ＩＬ−２サイトカイン産生、（図Ｅ）ＩＬ−１２サイトカイン産生、および（図Ｆ）ＩＬ−６サイトカイン産生を、対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化した「増加倍率」を示している。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｆは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＤＣと同時培養されたナイーブヒトＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカイン産生、（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生の比、（図Ｄ）ＩＬ−２サイトカイン産生、（図Ｅ）ＩＬ−１２サイトカイン産生、および（図Ｆ）ＩＬ−６サイトカイン産生を、対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化した「増加倍率」を示している。
【図８Ｃ】図８Ａ〜Ｆは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＤＣと同時培養されたナイーブヒトＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカイン産生、（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生の比、（図Ｄ）ＩＬ−２サイトカイン産生、（図Ｅ）ＩＬ−１２サイトカイン産生、および（図Ｆ）ＩＬ−６サイトカイン産生を、対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化した「増加倍率」を示している。
【図８Ｄ】図８Ａ〜Ｆは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＤＣと同時培養されたナイーブヒトＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカイン産生、（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生の比、（図Ｄ）ＩＬ−２サイトカイン産生、（図Ｅ）ＩＬ−１２サイトカイン産生、および（図Ｆ）ＩＬ−６サイトカイン産生を、対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化した「増加倍率」を示している。
【図８Ｅ】図８Ａ〜Ｆは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＤＣと同時培養されたナイーブヒトＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカイン産生、（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生の比、（図Ｄ）ＩＬ−２サイトカイン産生、（図Ｅ）ＩＬ−１２サイトカイン産生、および（図Ｆ）ＩＬ−６サイトカイン産生を、対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化した「増加倍率」を示している。
【図８Ｆ】図８Ａ〜Ｆは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理され、自家性の未成熟ＤＣと同時培養されたナイーブヒトＮＫＴによる、（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカイン産生、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカイン産生、（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４サイトカイン産生の比、（図Ｄ）ＩＬ−２サイトカイン産生、（図Ｅ）ＩＬ−１２サイトカイン産生、および（図Ｆ）ＩＬ−６サイトカイン産生を、対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化した「増加倍率」を示している。
【図９】表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答したｉＮＫＴの総数の変化の倍率を示している。
【図１０Ａ】図Ａ〜Ｅは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、（図Ａ）自家樹状細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｂ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｃ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ細胞、および（図Ｄ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−γサイトカイン産生を、賦形剤対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化したものを示す。（図Ｅ）は、ヒトのナイーブｉＮＫＴ、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴおよび、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴにおける、ＩＦＮ−γサイトカイン産生のさまざまな基礎レベルを示している。
【図１０Ｂ】図Ａ〜Ｅは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、（図Ａ）自家樹状細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｂ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｃ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ細胞、および（図Ｄ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−γサイトカイン産生を、賦形剤対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化したものを示す。（図Ｅ）は、ヒトのナイーブｉＮＫＴ、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴおよび、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴにおける、ＩＦＮ−γサイトカイン産生のさまざまな基礎レベルを示している。
【図１０Ｃ】図Ａ〜Ｅは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、（図Ａ）自家樹状細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｂ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｃ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ細胞、および（図Ｄ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−γサイトカイン産生を、賦形剤対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化したものを示す。（図Ｅ）は、ヒトのナイーブｉＮＫＴ、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴおよび、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴにおける、ＩＦＮ−γサイトカイン産生のさまざまな基礎レベルを示している。
【図１０Ｄ】図Ａ〜Ｅは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、（図Ａ）自家樹状細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｂ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｃ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ細胞、および（図Ｄ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−γサイトカイン産生を、賦形剤対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化したものを示す。（図Ｅ）は、ヒトのナイーブｉＮＫＴ、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴおよび、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴにおける、ＩＦＮ−γサイトカイン産生のさまざまな基礎レベルを示している。
【図１０Ｅ】図Ａ〜Ｅは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、（図Ａ）自家樹状細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｂ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されているナイーブｉＮＫＴ、（図Ｃ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ細胞、および（図Ｄ）ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞と同時培養されている、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−γサイトカイン産生を、賦形剤対照（ＤＭＳＯ）に対して標準化したものを示す。（図Ｅ）は、ヒトのナイーブｉＮＫＴ、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴおよび、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴにおける、ＩＦＮ−γサイトカイン産生のさまざまな基礎レベルを示している。
【図１１】図Ａ〜Ｃは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理されたヒトのナイーブｉＮＫＴによる（図Ａ）ＩＦＮ−γサイトカインの分泌レベル（ｐｇ／ｍｌ）、（図Ｂ）ＩＬ−４サイトカインの分泌レベル（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比を示している。
【図１２】α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理された、図１０で得られたヒトＮＫＴの上清中における血清の基礎濃度に対する増加倍率を示す表である。
【図１３】自家性の未成熟ＣＤ１４＋樹状細胞とともに培養され、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされたヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞）の増殖に関する代表的なフローサイトメトリーのデータを示している。
【図１４】図１３のＮＫ／ＮＫＴ混合物細胞に存在するｉＮＫＴ（１０３）の総数を示している。
【図１５Ａ】図Ａ〜Ｂは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされた自家性の未成熟ＣＤ１４＋樹状細胞とともに培養されたヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞）の増殖に関する代表的なフローサイトメトリーのデータを示している。図Ａは、ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞におけるＣＤ１６１＋／Ｖα２４ＴＣＲ＋細胞の割合の代表的なフローサイトメトリーのデータを示し、図Ｂは、ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞中に見出されたｉＮＫＴの総数の増加倍率を示している。
【図１５Ｂ】図Ａ〜Ｂは、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされた自家性の未成熟ＣＤ１４＋樹状細胞とともに培養されたヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞）の増殖に関する代表的なフローサイトメトリーのデータを示している。図Ａは、ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞におけるＣＤ１６１＋／Ｖα２４ＴＣＲ＋細胞の割合の代表的なフローサイトメトリーのデータを示し、図Ｂは、ＮＫ／ＮＫＴ混合細胞中に見出されたｉＮＫＴの総数の増加倍率を示している。
【図１６】未成熟のヒトＤＣを、α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とともにインキュベートした後の樹状細胞（ＤＣ）上における、表面タンパク質ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ８３、ならびにＭＨＣクラスＩＩ細胞表面受容体ＨＬＡ−ＤＲの発現量を、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示したものである。
【図１７Ａ】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１３がヒト単球由来のＤＣの成熟を促進する仕組みを示している。図Ａは、Ｃ１３に応答した、ＤＣにおけるＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＨＬＡ−ＤＲの発現のヒストグラムを示している。図Ｂは、Ｃ１３とともに４８時間インキュベートされたＤＣの形態を示している。
【図１７Ｂ】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１３がヒト単球由来のＤＣの成熟を促進する仕組みを示している。図Ａは、Ｃ１３に応答した、ＤＣにおけるＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＨＬＡ−ＤＲの発現のヒストグラムを示している。図Ｂは、Ｃ１３とともに４８時間インキュベートされたＤＣの形態を示している。
【図１８】ｉＮＫＴ細胞受容体のシグナル伝達経路の略図を示す。
【図１９Ａ】図Ａ〜Ｅは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ヒトＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、ＣＤ１ｄで形質転換されたＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）におけるＣＤ１ｄ発現を示している。図Ｂは、ホスホ−ＣＤ３εの細胞内レベルを示している。図Ｃは、ホスホ−ＥＲＫ１／２の細胞内レベルを示している。図Ｄは、ホスホ−Ｓｙｋの細胞内レベルを示している。図Ｅ、ホスホ−ＣＲＥＢの細胞内レベルを示している。
【図１９Ｂ】図Ａ〜Ｅは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ヒトＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、ＣＤ１ｄで形質転換されたＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）におけるＣＤ１ｄ発現を示している。図Ｂは、ホスホ−ＣＤ３εの細胞内レベルを示している。図Ｃは、ホスホ−ＥＲＫ１／２の細胞内レベルを示している。図Ｄは、ホスホ−Ｓｙｋの細胞内レベルを示している。図Ｅ、ホスホ−ＣＲＥＢの細胞内レベルを示している。
【図１９Ｃ】図Ａ〜Ｅは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ヒトＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、ＣＤ１ｄで形質転換されたＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）におけるＣＤ１ｄ発現を示している。図Ｂは、ホスホ−ＣＤ３εの細胞内レベルを示している。図Ｃは、ホスホ−ＥＲＫ１／２の細胞内レベルを示している。図Ｄは、ホスホ−Ｓｙｋの細胞内レベルを示している。図Ｅ、ホスホ−ＣＲＥＢの細胞内レベルを示している。
【図１９Ｄ】図Ａ〜Ｅは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ヒトＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、ＣＤ１ｄで形質転換されたＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）におけるＣＤ１ｄ発現を示している。図Ｂは、ホスホ−ＣＤ３εの細胞内レベルを示している。図Ｃは、ホスホ−ＥＲＫ１／２の細胞内レベルを示している。図Ｄは、ホスホ−Ｓｙｋの細胞内レベルを示している。図Ｅ、ホスホ−ＣＲＥＢの細胞内レベルを示している。
【図１９Ｅ】図Ａ〜Ｅは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ヒトＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、ＣＤ１ｄで形質転換されたＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）におけるＣＤ１ｄ発現を示している。図Ｂは、ホスホ−ＣＤ３εの細胞内レベルを示している。図Ｃは、ホスホ−ＥＲＫ１／２の細胞内レベルを示している。図Ｄは、ホスホ−Ｓｙｋの細胞内レベルを示している。図Ｅ、ホスホ−ＣＲＥＢの細胞内レベルを示している。
【図２０Ａ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｂ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｃ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｄ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｅ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｆ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｇ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｈ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｉ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｊ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｋ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２０Ｌ】図Ａ〜Ｌは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ナイーブヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）のＣＤ１ｄ依存性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化を促進する仕組みを明らかにしている。図Ａは、単離されたナイーブヒトＶα２４＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによる測定結果を示す。図Ｂ〜Ｌは、ｉＮＫＴ上におけるＴＣＲの活性化を示している。ＨｅＬａ細胞またはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞に、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１６、Ｃ２３、７ＤＷ８−５、７ＤＷ８−６、またはＣ２６を投入してから、細胞をナイーブＶα２４＋Ｔ細胞に添加した。以下のリン酸化タンパク質の細胞内レベルを測定して蛍光強度の中央値として表し、全投入タンパク質量に対して標準化した：（図Ｂ）ホスホ−ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（図Ｃ）ホスホ−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ−１３３）、（図Ｄ）ホスホ−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ−１８５／Ｔｙｒ−１８７）、（図Ｅ）ホスホ−ｐ３８（Ｔｈｒ−１８０／Ｔｙｒ−１８２）、（図Ｆ）ホスホ−ＩＫＢα（Ｓｅｒ３２）、（図Ｇ）ホスホ−Ｌｃｋ、（図Ｈ）ホスホ−Ｌａｔ、（図Ｉ）ホスホ−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（図Ｊ）ホスホ−ＳＴＡＴ５  Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ  ６９４／６９９）、（図Ｋ）ホスホ−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、および（図Ｌ）ホスホ−Ｚａｐ−７０（ホスホ−チロシン）。＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯ対照と比較した場合、および、＃、ｐ＜０．０５、α−ＧａｌＣｅｒと比較した場合。
【図２１】図Ａ〜Ｃは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体がどのようにして、より大きな細胞増殖を誘導し、ＣＤ１ｄ拘束性ＮＫＴおよびＴ細胞に結合する、より高い能力を示すのかを示している。０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体を静脈内（ＩＶ）注射した７２時間後にＢＡＬＢ／ｃマウスから脾臓を採取した。（図Ａ）マウスＮＫＴまたは（図Ｂ）Ｔ細胞の割合を測定した。（図Ｃ）は、ＣＤ１ｄ拘束性のＮＫＴおよびＴ細胞に対するα−ＧａｌＣｅｒまたは表示のα−ＧａｌＣｅｒ類似体のさまざまな結合アフィニティーを示している。
【図２２Ａ】図Ａ〜Ｄは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答した２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖およびＮＫ活性化を示している。図Ａ〜Ｃは、２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖を示している。α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した７２時間後、ＢＡＬＢ／ｃ野生型（ＷＴ）マウスまたはＣＤ１−ＫＯマウスから脾臓を採取した。応答した（図Ｂ）ＷＴマウスまたは（図Ｃ）ＣＤ１−ＫＯマウスにおける、ＮＫＴ、およびその２つのサブタイプで、ＮＫＴ１およびＮＫＴ２と名付けられたものの総数をＦＡＣＳにより測定した。（図Ｄ）ＮＫのＣＤ１依存型活性化。応答したＷＴマウス（左図）またはＣＤ１−ＫＯマウス（右図）のＮＫ総数の増加をＦＡＣＳにより測定した。
【図２２Ｂ】図Ａ〜Ｄは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答した２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖およびＮＫ活性化を示している。図Ａ〜Ｃは、２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖を示している。α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した７２時間後、ＢＡＬＢ／ｃ野生型（ＷＴ）マウスまたはＣＤ１−ＫＯマウスから脾臓を採取した。応答した（図Ｂ）ＷＴマウスまたは（図Ｃ）ＣＤ１−ＫＯマウスにおける、ＮＫＴ、およびその２つのサブタイプで、ＮＫＴ１およびＮＫＴ２と名付けられたものの総数をＦＡＣＳにより測定した。（図Ｄ）ＮＫのＣＤ１依存型活性化。応答したＷＴマウス（左図）またはＣＤ１−ＫＯマウス（右図）のＮＫ総数の増加をＦＡＣＳにより測定した。
【図２２Ｃ】図Ａ〜Ｄは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答した２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖およびＮＫ活性化を示している。図Ａ〜Ｃは、２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖を示している。α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した７２時間後、ＢＡＬＢ／ｃ野生型（ＷＴ）マウスまたはＣＤ１−ＫＯマウスから脾臓を採取した。応答した（図Ｂ）ＷＴマウスまたは（図Ｃ）ＣＤ１−ＫＯマウスにおける、ＮＫＴ、およびその２つのサブタイプで、ＮＫＴ１およびＮＫＴ２と名付けられたものの総数をＦＡＣＳにより測定した。（図Ｄ）ＮＫのＣＤ１依存型活性化。応答したＷＴマウス（左図）またはＣＤ１−ＫＯマウス（右図）のＮＫ総数の増加をＦＡＣＳにより測定した。
【図２２Ｄ】図Ａ〜Ｄは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答した２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖およびＮＫ活性化を示している。図Ａ〜Ｃは、２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存性増殖を示している。α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した７２時間後、ＢＡＬＢ／ｃ野生型（ＷＴ）マウスまたはＣＤ１−ＫＯマウスから脾臓を採取した。応答した（図Ｂ）ＷＴマウスまたは（図Ｃ）ＣＤ１−ＫＯマウスにおける、ＮＫＴ、およびその２つのサブタイプで、ＮＫＴ１およびＮＫＴ２と名付けられたものの総数をＦＡＣＳにより測定した。（図Ｄ）ＮＫのＣＤ１依存型活性化。応答したＷＴマウス（左図）またはＣＤ１−ＫＯマウス（右図）のＮＫ総数の増加をＦＡＣＳにより測定した。
【図２３Ａ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を静脈内（ＩＶ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（図Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２３Ｂ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を静脈内（ＩＶ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（図Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２３Ｃ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を静脈内（ＩＶ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（図Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２４Ａ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後における、さまざまなサイトカイン／ケモカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２４Ｂ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後における、さまざまなサイトカイン／ケモカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２４Ｃ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後における、さまざまなサイトカイン／ケモカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２５】α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射されたＢＡＬＢ／ｃマウスの上清における（サイトカイン基礎濃度の増加倍率で表された）結果の表である。サイトカイン／ケモカインは、１８時間後にピークを示した＊印を付けたもの以外はすべて、注射した２時間後にピークを示した。
【図２６Ａ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｂ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｃ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｄ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｅ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｆ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｇ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２６Ｈ】図Ａ〜Ｈは、図２３の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図２７Ａ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を皮下（ＳｕｂＱ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２７Ｂ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を皮下（ＳｕｂＱ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２７Ｃ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を皮下（ＳｕｂＱ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２８Ａ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｂ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｃ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｄ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｅ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｆ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｇ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２８Ｈ】図Ａ〜Ｈは、図２７の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯによって標準化されている。
【図２９Ａ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を筋肉内（ＩＭ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２９Ｂ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を筋肉内（ＩＭ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図２９Ｃ】図Ａ〜Ｃは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を筋肉内（ＩＭ）注射した０時間後、２時間後、１８時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（図Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図３０Ａ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｂ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｃ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｄ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｅ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｆ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｇ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３０Ｈ】図Ａ〜Ｈは、図２９の賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＭ注射に応答したときの（図Ａ）有核細胞の総数および脾臓の大きさ、（Ｂ）成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団、（図Ｃ）活性化ＮＫ、（図Ｄ）活性化ＮＫＴ、（図Ｅ）活性型Ｂ細胞、（図Ｆ）活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図Ｇ）活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞および（図Ｈ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示しているが、これらはすべて、ＤＭＳＯにより標準化されている。
【図３１Ａ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｂ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｃ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｄ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｅ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｆ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｇ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｈ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｉ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｊ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３１Ｋ】図Ａ〜Ｋは、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路（ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭ）の効果を示している。図Ａは、ＩＦＮ−γのマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｂは、ＩＬ−４のマウス血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。図Ｃは、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比（ｌｏｇ１０）を示している。図Ｄは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｅは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞の集団を示している。図Ｉは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｊは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示している。図Ｋは、ＣＤ８＋Ｔ細胞／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ａ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｂ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｃ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｄ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｅ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｆ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｇ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３２Ｈ】図Ａ〜Ｈは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または賦形剤のＩＶ投与に応答した脾細胞の増殖／活性化の用量応答を示している。図Ａは、マウス有核細胞（脾細胞）の総数を示している。図Ｂは、脾臓中の成熟樹状細胞などの自然免疫細胞集団を示している。図Ｃは、脾臓中の活性化ＮＫの集団を示している。図Ｄは、脾臓中の活性化ＮＫＴの集団を示している。図Ｅは、脾臓中の単球顆粒球細胞集団を示している。図Ｆは、脾臓中の活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｇは、脾臓中の活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を示している。図Ｈは、脾臓中の活性型Ｂ細胞集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３３Ａ】賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した０時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、賦形剤対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（ａ）ＩＦＮ−γ、（ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図３３Ｂ】賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した０時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、賦形剤対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（ａ）ＩＦＮ−γ、（ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図３３Ｃ】賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した０時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、７２時間後における、賦形剤対照に対して標準化された、さまざまなサイトカイン（ａ）ＩＦＮ−γ、（ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【図３４】図３３で得られた、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射されたＢＡＬＢ／ｃマウスの上清における結果（サイトカイン基礎濃度に対する増加倍率）の表である。サイトカイン／ケモカインは、１８時間後にピークを示した＊印を付けたもの以外はすべて、注射した２時間後にピークを示した。
【図３５Ａ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３５Ｂ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３５Ｃ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３５Ｄ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３５Ｅ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３５Ｆ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３５Ｇ】図Ａ〜Ｇは、野生型ＢＡＬＢ／ｃ（ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ｄ  ＫＯ  ＢＡＬＢ／ｃ（ＣＤ１ＫＯ）マウスに、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射した２時間後および１８時間後におけるさまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示している。（図Ａ）ＩＦＮ−γ。（Ｂ）ＩＬ−４。（図Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（ｌｏｇ１０）。（図Ｄ）ＩＬ−１０。（図Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０。（図Ｆ）ＫＣ。（図Ｇ）ＭＣＰ−１。
【図３６Ａ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｂ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｃ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｄ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｅ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｆ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｇ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｈ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３６Ｉ】図Ａ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける脾細胞の増殖／活性化を示し、図Ｇ〜Ｉは、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ注射された後の２種類のＮＫＴサブセット（Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスおよびＣＤ１ＫＯマウス）のＣＤ１ｄ依存性活性化を示している。図Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの有核細胞（脾細胞）の総数を示す。図Ｂは、成熟樹状細胞集団を示す。図Ｃは、活性化ＮＫの集団を示す。図Ｄは、活性型ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｅは活性型ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を示す。図Ｆは、ＤＭＳＯによって標準化された、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の比を示している。図Ｇは、フローサイトメトリーによるＷｔマウス中のＮＫＴの測定結果（左下の図）、ＮＫＴの総数（左上の図）、ならびにその２つのサブタイプであるＮＫＴ１（右上の図）およびＮＫＴ２（右下の図）を示している。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示す。図Ｉは、ＷｔマウスにおけるＴｒｅｇ細胞の総数を示す。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図３７Ａ】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌担持マウスの生存期間を延長できる仕組みを示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウス肺癌細胞（ＴＣ−１）をＩＶ接種し、その後、週２回４週間にわたって、対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理した。図Ａは、第Ｉ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｂは、第ＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｃは、第ＩＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｄは、第ＩＶ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。肺癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）および体重変化（右図）が示されている。対照は、腫瘍を接種されていないマウスである。
【図３７Ｂ】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌担持マウスの生存期間を延長できる仕組みを示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウス肺癌細胞（ＴＣ−１）をＩＶ接種し、その後、週２回４週間にわたって、対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理した。図Ａは、第Ｉ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｂは、第ＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｃは、第ＩＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｄは、第ＩＶ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。肺癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）および体重変化（右図）が示されている。対照は、腫瘍を接種されていないマウスである。
【図３７Ｃ】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌担持マウスの生存期間を延長できる仕組みを示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウス肺癌細胞（ＴＣ−１）をＩＶ接種し、その後、週２回４週間にわたって、対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理した。図Ａは、第Ｉ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｂは、第ＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｃは、第ＩＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｄは、第ＩＶ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。肺癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）および体重変化（右図）が示されている。対照は、腫瘍を接種されていないマウスである。
【図３７Ｄ】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌担持マウスの生存期間を延長できる仕組みを示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウス肺癌細胞（ＴＣ−１）をＩＶ接種し、その後、週２回４週間にわたって、対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理した。図Ａは、第Ｉ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｂは、第ＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｃは、第ＩＩＩ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。図Ｄは、第ＩＶ群のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の試験結果を示している。肺癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）および体重変化（右図）が示されている。対照は、腫瘍を接種されていないマウスである。
【図３８】図Ａ〜Ｂは、（図Ａ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または対照で処理され、ＴＣ−１細胞を腫瘍接種した１６日後に解剖されたマウスの肺の表面上の腫瘍小結節および大きさ、および（Ｂ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１または対照で処理され、マウス乳癌細胞細胞（４Ｔ−１）をＳｕｂＱ腫瘍接種した１６日後に解剖されたマウスの皮下腫瘍の腫瘍小結節および大きさを示している。
【図３９Ａ】図Ａ〜Ｂは、マウス乳癌細胞４Ｔ−１を皮下接種し、接種の３日後に、（図Ａ）ＩＶ注射、または（Ｂ）ＳｕｂＱ注射によって、週２回４週間にわたり、対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理したマウスのカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）および腫瘍増殖（右図）を示している。
【図３９Ｂ】図Ａ〜Ｂは、マウス乳癌細胞４Ｔ−１を皮下接種し、接種の３日後に、（図Ａ）ＩＶ注射、または（Ｂ）ＳｕｂＱ注射によって、週２回４週間にわたり、対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理したマウスのカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）および腫瘍増殖（右図）を示している。
【図４０】乳癌を担持し、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）のＩＶ注射またはＳｕｂＱ注射によって処理されたマウスのカプラン・マイヤー生存率曲線を示している。Ｃ１のＳｕｂＱ送達の方が、ＩＶ送達よりも、乳癌担持マウスの生存期間を延長するのに効果的である。
【図４１Ａ】図Ａ〜Ｃは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌治療プロトコルの投与量による最適化を示している。マウス肺癌細胞（ＴＣ−１）のＩＶ接種後、４週間にわたり、週２回または週１回、さまざまな投薬量のα−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体である７ＤＷ８−５またはＣ２６で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重変化（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）。（図Ａ）α−ＧａｌＣｅｒ。（Ｂ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体７ＤＷ８−５。（図Ｃ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２６。
【図４１Ｂ】図Ａ〜Ｃは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌治療プロトコルの投与量による最適化を示している。マウス肺癌細胞（ＴＣ−１）のＩＶ接種後、４週間にわたり、週２回または週１回、さまざまな投薬量のα−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体である７ＤＷ８−５またはＣ２６で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重変化（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）。（図Ａ）α−ＧａｌＣｅｒ。（Ｂ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体７ＤＷ８−５。（図Ｃ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２６。
【図４１Ｃ】図Ａ〜Ｃは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌治療プロトコルの投与量による最適化を示している。マウス肺癌細胞（ＴＣ−１）のＩＶ接種後、４週間にわたり、週２回または週１回、さまざまな投薬量のα−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体である７ＤＷ８−５またはＣ２６で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重変化（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）。（図Ａ）α−ＧａｌＣｅｒ。（Ｂ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体７ＤＷ８−５。（図Ｃ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２６。
【図４２Ａ】図Ａ〜Ｃは、経路および頻度を変えることによる、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌治療プロトコルの最適化を示している。図Ａは、マウス乳癌細胞４Ｔ−１をＳｕｂＱ接種し、接種の３日後に、ＩＶ経路またはＳｕｂＱ経路によって、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で週２回４週間にわたり処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腫瘍容積（ｍｍ３）（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）を示す。図Ｂは、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種し、接種の３日後に、ＩＶ経路またはＳｕｂＱ経路によって、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で週２回４週間にわたり処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重変化（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）を示す。図Ｃは、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種し、その後、ＩＶ経路によって、賦形剤またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６で、４週間にわたり週２回または週１回処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）に対する投与頻度の影響を示している。
【図４２Ｂ】図Ａ〜Ｃは、経路および頻度を変えることによる、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌治療プロトコルの最適化を示している。図Ａは、マウス乳癌細胞４Ｔ−１をＳｕｂＱ接種し、接種の３日後に、ＩＶ経路またはＳｕｂＱ経路によって、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で週２回４週間にわたり処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腫瘍容積（ｍｍ３）（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）を示す。図Ｂは、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種し、接種の３日後に、ＩＶ経路またはＳｕｂＱ経路によって、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で週２回４週間にわたり処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重変化（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）を示す。図Ｃは、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種し、その後、ＩＶ経路によって、賦形剤またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６で、４週間にわたり週２回または週１回処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）に対する投与頻度の影響を示している。
【図４２Ｃ】図Ａ〜Ｃは、経路および頻度を変えることによる、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌治療プロトコルの最適化を示している。図Ａは、マウス乳癌細胞４Ｔ−１をＳｕｂＱ接種し、接種の３日後に、ＩＶ経路またはＳｕｂＱ経路によって、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で週２回４週間にわたり処理したＢＡＬＢ／ｃマウスの腫瘍容積（ｍｍ３）（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）を示す。図Ｂは、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種し、接種の３日後に、ＩＶ経路またはＳｕｂＱ経路によって、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で週２回４週間にわたり処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重変化（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）を示す。図Ｃは、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種し、その後、ＩＶ経路によって、賦形剤またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６で、４週間にわたり週２回または週１回処理したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重（右図）およびカプラン・マイヤー生存率曲線（左図）に対する投与頻度の影響を示している。
【図４３】図Ａ〜Ｂは、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗腫瘍効果の評価を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、マウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種するか、またはマウス黒色腫Ｂ１６細胞をＳｕｂＱ接種した後、４週間にわたり週１回ずつ、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理した。図Ａは、カプラン・マイヤー生存率曲線を示す。図Ｂは、腫瘍容積（ｍｍ３）の増加曲線を示す。
【図４４】図Ａ〜Ｂは、（図Ａ）肺癌細胞（ＴＣ−１−ＧＲＰ−ルシフェラーゼ）または（Ｂ）乳癌細胞（４Ｔ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ）をＳＱ接種した後、４週間にわたり週１回、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍増殖のリアルタイム評価を示している。
【図４５Ａ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｂ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｃ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｄ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｅ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｆ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｇ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４５Ｈ】図Ａ〜Ｈは、ＴＨ−１バイアスがかかった、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌または黒色腫瘍において、より多くの腫瘍浸潤性リンパ球を誘導することを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌細胞（ＴＣ−１）における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ａは、ＣＤ３＋細胞の集団を示している。図Ｂは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｃは、ＮＫの集団を示している。図Ｄは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫細胞における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、３週間にわたり週１回ずつ、０．１μｇ／マウスの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２３、Ｃ８−５、もしくはＣ３０で処理した。図Ｅは、ＣＤ３＋細胞の集団を示す。図Ｆは、ＣＤ８  Ｔ細胞の集団を示している。図Ｇは、ＮＫの集団を示している。図Ｈは、ＮＫＴの集団を示している。すべての解析は、賦形剤に対して標準化して行われた。
【図４６】図Ａ〜Ｂは、破傷風トキソイド（ＴＴ）−タンパク質ワクチンに対する抗体応答に対するミョウバン、α−ＧａｌＣｅｒ、およびα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１のアジュバント効果を示している。（図Ａ）マウスに対し、０日目（初回ワクチン接種）および２８日目（４週後２回目ワクチン接種）に、従来型アジュバントであるミョウバン、α−ＧａｌＣｅｒ、もしくはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１とともに、またはそれらなしでＴＴをワクチン、またはこれらを含んだＴＴワクチンを接種した。抗ＴＴ−特異性抗体を測定するため、一週間毎に血清を採取した。図Ｂは、２回目ワクチン接種後２０週間の遅延型抗原ブーストに対する、従来型アジュバントであるミョウバン、α−ＧａｌＣｅｒ、およびα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１の効果を示している。
【図４７】Ｈ１Ｎ１ウイルス株のＭ２（Ｍ２ｅ）タンパク質の細胞外ドメインを含むペプチドに対する従来型アジュバントであるミョウバン、α−ＧａｌＣｅｒ、および本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体の、３回目の免疫化の２週間後のアジュバント効果を示している。０週目、３週目、および６週目に、α−ＧａｌＣｅｒおよび本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体とともに、またはそれらなしで、ＢＡＬＢ／ｃマウスに５μｇまたは４５μｇのＭ２ｅタンパク質をワクチン接種した。
【図４８Ａ】図Ａ〜Ｃは、鳥インフルエンザウイルスの完全長Ｈ５のコンセンサス配列を含むＤＮＡプラスミドであるｐＨＡで免疫されたマウスに対する、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）のアジュバント効果を示している。（図Ａ）０週目および３週目に、Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、５μｇから４５μｇのｐＨＡでマウスを免疫した。（図Ｂ）Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、低用量のｐＨＡワクチンでマウスを免疫化した。図Ｃは、２０ＬＤ５０のベトナム型合併結合変異インフルエンザウイルス株ＮＩＢＲＧ−１４によるウイルス曝露に対する、Ｃ１添加または無添加のＨ５ＤＮＡワクチンを接種した２週間後の防御作用を示す。
【図４８Ｂ】図Ａ〜Ｃは、鳥インフルエンザウイルスの完全長Ｈ５のコンセンサス配列を含むＤＮＡプラスミドであるｐＨＡで免疫されたマウスに対する、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）のアジュバント効果を示している。（図Ａ）０週目および３週目に、Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、５μｇから４５μｇのｐＨＡでマウスを免疫した。（図Ｂ）Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、低用量のｐＨＡワクチンでマウスを免疫化した。図Ｃは、２０ＬＤ５０のベトナム型合併結合変異インフルエンザウイルス株ＮＩＢＲＧ−１４によるウイルス曝露に対する、Ｃ１添加または無添加のＨ５ＤＮＡワクチンを接種した２週間後の防御作用を示す。
【図４８Ｃ】図Ａ〜Ｃは、鳥インフルエンザウイルスの完全長Ｈ５のコンセンサス配列を含むＤＮＡプラスミドであるｐＨＡで免疫されたマウスに対する、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）のアジュバント効果を示している。（図Ａ）０週目および３週目に、Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、５μｇから４５μｇのｐＨＡでマウスを免疫した。（図Ｂ）Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、低用量のｐＨＡワクチンでマウスを免疫化した。図Ｃは、２０ＬＤ５０のベトナム型合併結合変異インフルエンザウイルス株ＮＩＢＲＧ−１４によるウイルス曝露に対する、Ｃ１添加または無添加のＨ５ＤＮＡワクチンを接種した２週間後の防御作用を示す。
【図４８Ｄ】図Ａ〜Ｃは、鳥インフルエンザウイルスの完全長Ｈ５のコンセンサス配列を含むＤＮＡプラスミドであるｐＨＡで免疫されたマウスに対する、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）のアジュバント効果を示している。（図Ａ）０週目および３週目に、Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、５μｇから４５μｇのｐＨＡでマウスを免疫した。（図Ｂ）Ｃ１なしか、またはＣ１とともに、低用量のｐＨＡワクチンでマウスを免疫化した。図Ｃは、２０ＬＤ５０のベトナム型合併結合変異インフルエンザウイルス株ＮＩＢＲＧ−１４によるウイルス曝露に対する、Ｃ１添加または無添加のＨ５ＤＮＡワクチンを接種した２週間後の防御作用を示す。
【図４９】図Ａ〜Ｃは、Ｃ１または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とともに、またはそれらなしで、ｐＨＡによってマウスを免疫した後の抗ＨＡ−特異的ＩｇＧ抗体の誘導を示す。図Ａは、０．２μｇのｐＨＡで免疫した後のマウスにおける抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ３）の力価を示している。図Ｂは、０．２μｇのｐＨＡで免疫した後のマウスにおける抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ４）の力価を示している。図Ｃは、ウイルス曝露のマウス生存率を示している。
【図５０】図Ａ〜Ｂは、Ｃ１または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とともに、またはそれらなしで、ｐＨＡによってマウスを免疫した後の抗ＨＡ−特異的ＩｇＧ抗体の誘導を示す。図Ａは、０．５μｇのｐＨＡおよび表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で免疫した後の抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ４）の力価を示している。図Ｂは、ウイルス曝露後の生存率を示している。
【図５１】図Ａ〜Ｂは、（図Ａ）０．１μｇのｐＨＡまたは（図Ｂ）０．２μｇのｐＨＡと、表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって免疫した後の抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ５）のマウスの力価を示している。
【図５２】図Ａ〜Ｂは、（図Ａ）０．１μｇのｐＨＡまたは（図Ｂ）０．２μｇのｐＨＡと、０．１μｇまたは１μｇの表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって免疫した後の抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ６）のマウスの力価を示している。
【図５３】図Ａ〜Ｄは、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体による、抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体の誘導を示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ｐＨＡｃとともに、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、電気移動法により筋肉内にワクチン接種し、４週間後に同じ処方で１回追加免疫した。２回目のワクチン接種の２週間後に血液試料を採集し、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＡｃ特異的ＩｇＧ抗体価について試験した。図Ａは、抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ３）の力価を示している。図（Ｂ）は、抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ４）の力価を示している。（Ｃ）は、は、抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ５）の力価を示している。（Ｄ）は、は、抗−ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ１６）の力価を示している。
【図５４】図Ａ〜Ｂは、（図Ａ）ＨＡ特異的ＩＦＮ−γ産生細胞、および（図Ｂ）ＨＡ特異的ペプチド応答細胞を示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ｐＨＡとα−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とを、筋肉に電気移動法によってワクチン接種し、３週間後に同じ処方で１回追加免疫した。脾細胞を、ＨＡ特異的ペプチド（９量体）とともに培養し、１日後にスポットを測定した。
【図５５】ウイルス曝露に対する防御を示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ｐＨＡとα−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とを、筋肉に電気移動法によってワクチン接種し、３週間後に同じ処方で１回追加免疫した。２回目にワクチン接種した２週間後に、マウスを２００ＬＤ５０のＮＩＢＲＧ−１４ウイルスに曝露し、マウスの生存率を観測した。
【図５６】図Ａ〜Ｂは、単回ワクチン接種の効果を示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ｐＨＡ（２μｇ）とα−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（２μｇ）とを筋肉内に電気移動法によりワクチン接種した。（図Ａ）３週間後に血液試料を採集して、抗ＨＡｃ特異的ＩｇＧ抗体の力価を試験した。（図Ｂ）初回投与の３週間後、マウスを２００ＬＤ５０のＮＩＢＲＧ−１４ウイルスに曝露し、生存率を観測した。
【図５７】図Ａ〜Ｂは、糖鎖抗原に対する、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の効果を示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、グロボＨ−ＤＴと混合したα−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＭ注射によりワクチン接種し、２週間以内の間隔で２回追加免疫した。３回目のワクチン接種の２週間後に血液試料を採集して、（図Ａ）抗グロボＨ特異的ＩｇＧ抗体、および（図Ｂ）抗グロボＨ特異的ＩｇＭ抗体の産生について試験した。
【図５８】図Ａ〜Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、腹腔内（ＩＰ）経路を介したα−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって処理するのを、（図Ａ）ＦＬＵ−Ａウイルス血清型Ｈ１Ｎ１（ＷＳＮ）ウイルスに曝露した３０分後から開始した場合、および（図Ｂ）Ｈ１Ｎ１ウイルス曝露の２週間前から開始した場合のマウスの生存率を示している。
【図５９】図Ａ〜Ｂは、Ｈ１Ｎ１（ＷＳＮ）に感染したＢＡＬＢ／ｃマウスを、（図Ａ）高用量のＨ１Ｎ１（ＷＳＮ）ウイルスによるウイルス曝露の２週間前から、および（図Ｂ）鼻腔内経路を介して、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理したときのマウスの生存率の累積比率を示している。
【図６０】図Ａ〜Ｂは、インビトロにおけるメイディン・ダービー・イヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞の細胞変性効果（ＣＰＥ）を示している。ＭＤＣＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１３、Ｃ１４、またはＣ１６のいずれか一つで４時間予備処理した後、１０ＴＣＩＤ５０のＦＬＵ−Ａウイルス血清型Ｈ１Ｎ１（ＷＳＮ）に感染させた。図Ａは、インビトロにおいて糖脂質で処理した後の生存ウイルスの力価（ｌｏｇ１０）を示し、図Ｂは、感染４８時間後のＭＤＣＫ細胞におけるウイルス力価を示している。
【図６１】図Ａ〜Ｂは、スフィンゴモナス・カプスラータ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｃａｐｓｕｌａｔａ）に感染したマウスにおける、（図Ａ）１００μｇ／ｋｇまたは（Ｂ）５０μｇ／ｋｇで処理されたα−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗細菌作用を示す。
【図６２】図Ａ〜Ｂは、肺炎桿菌に感染したマウスにおける、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗細菌作用を示している。Ｃ１およびＣ１４は、注射後のマウスの（図Ａ）肺および（Ｂ）肝臓において、細菌の負荷量を有意に低下させることができる。
【図６３】５０μｇ／ｋｇのＣ２３およびＣ３０で処理された群の（肺における）ＣＦＵ数が、未処理群と比較して有意であることを示している。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
別の意味が下記に記載されていない限り、すべての科学用語は、当業者によって理解されている通りの通常の意味をもつものとして使用されている。矛盾する場合には、本明細書に記載された定義が優先するものとする。
【００５９】
本明細書において、「脂質」という用語は、細胞のシグナル伝達経路に関与する任意の脂溶性（親油性）分子を意味する。
【００６０】
本明細書において、「糖脂質」という用語は、細胞を認識するためのマーカーとして働く糖結合脂質を意味する。
【００６１】
本明細書において、「アルファ−ガラクトシルセラミド」および「α−ＧａｌＣｅｒ」という用語は、ナチュラルキラーＴ細胞を刺激してＴヘルパー（ＴＨ）１サイトカインおよびＴＨ２サイトカインを産生させる糖脂質を意味する。
【００６２】
本明細書において、「グリカン」という用語は、多糖、またはオリゴ糖を意味する。また、グリカンは、本明細書において、糖タンパク質、糖脂質、糖ペプチド、糖プロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖、またはプロテオグリカンなどの複合糖質の糖質部分を意味するためにも使用される。グリカンは、通常、単糖間のＯ−グリコシド結合のみからなる。例えば、セルロースは、β−１，４−結合型Ｄ−グルコースからなるグリカン（より具体的にはグルカン）であり、キチンは、β−１，４−結合型Ｎ―アセチル―Ｄ−グルコサミンからなるグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモポリマーでもヘテロポリマーでもよく、また、直鎖状でも分枝状でもよい。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンのように、タンパク質に結合して存在することができる。これらは、通常、細胞の外表面上に存在する。Ｏ−結合型グリカンおよびＮ−結合型グリカンは、真核生物では非常に一般的なものである。あまり一般的ではないが、原核生物でも存在する可能性がある。Ｎ−結合型グリカンは、シークオンのアスパラギンのＲ基窒素（Ｎ）に結合して存在する。シークオンとは、Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である、Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ配列またはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列のことである。
【００６３】
本明細書において、「糖タンパク質」という用語は、グリカンによって共有結合的に修飾されているタンパク質を意味する。糖タンパク質には四つの型がある：１）Ｎ−結合型糖タンパク質、２）Ｏ−結合型糖タンパク質（ムチン）、３）グリコサミノグリカン（ＧＡＧ、これもプロテオグリカンとも呼ばれる）、４）ＧＰＩ−アンカー型。大部分の糖タンパク質は、構造上のミクロ不均一性（同一のグリコシル化部位の内部に結合している複数の異なったグリカン構造体）、および構造上のマクロ不均一性（複数のグリカン結合部位と型）を有する。
【００６４】
本明細書において、「類似体」という用語は、構造が別の化合物の構造と類縁関係にあるが、化学的および生物学的な性質が全く異なっているかもしれない化合物、例えば、薬物を意味する。
【００６５】
本明細書において、「抗原」という用語は、免疫応答を誘導することができる物質であると定義される。
【００６６】
本明細書において、「病原体」という用語は、その宿主に対して疾患または病気の原因となる生物因子である。身体は、ヒト免疫系という形で、一般的な病原体のいくつか（ニューモシスティスなど）に対する自然の防御能を数多く含んでいる。
【００６７】
本明細書において、「免疫原」という用語は、抗原、または抗原産生を誘導することができる物質、例えば、ＤＮＡワクチンなどを意味する。
【００６８】
本明細書において、「免疫原性」という用語は、免疫原、抗原、またはワクチンが免疫応答を刺激する能力を意味する。
【００６９】
本明細書において、「免疫療法」という用語は、免疫系を調節して予防および／または治療という目的を達成するという概念に基づいた一連の治療戦略を意味する。
【００７０】
本明細書において、「ＣＤ１ｄ」という用語は、さまざまなヒト抗原提示細胞の表面上に発現される糖タンパク質のＣＤ１（分化クラスター１）ファミリーのメンバーを意味する。ＣＤ１ｄにより提示される脂質抗原は、ナチュラルキラーＴ細胞を活性化させる。ＣＤ１ｄは、糖脂質抗原が結合する深い抗原結合溝がある。樹状細胞上に発現されるＣＤ１ｄ分子は、糖脂質に結合して、それを提示することができる。
【００７１】
本明細書において、「適応免疫系」という用語は、病原体の攻撃を排除する、高度に特化した全身の細胞およびプロセスを意味する。適応免疫系の細胞は、一種の白血球で、リンパ球と呼ばれる。Ｂ細胞およびＴ細胞がリンパ球の主な型である。
【００７２】
本明細書において、「Ｔ細胞」および「Ｔ」という用語は、細胞性免疫において中心的な役割を果たしている、リンパ球として知られている一群の白血球を意味する。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と呼ばれる特別な受容体が、その細胞表面上に存在することによって、Ｂ細胞およびＮＫなどの他のリンパ球型と区別することができる。Ｔ細胞のいくつかの異なるサブセットが記載されているが、それぞれ明確な機能を持っている。ヘルパーＴ（ＴＨ）細胞は、適応免疫系の「仲介役」である。これらは活性化されると、すぐに分裂して、免疫応答を調節または「補助」するサイトカインと呼ばれる低分子タンパク質を分泌する。これらの細胞は、受け取ったサイトカインシグナルに応じて、さまざまなサイトカインを分泌する、ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ１７、またはその他のサブセットの一つに分化する。
【００７３】
本明細書において、「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）という用語は、その表面上で主要組織適合複合体（ＭＨＣ）と複合体を形成する外来抗原を提示する細胞を意味する。Ｔ細胞は、そのＴＣＲを用いて、この複合体を認識することができる。ＡＰＣは、プロフェッショナルおよび非プロフェッショナルという２つのカテゴリーに分けられる。樹状細胞（ＤＣ）は、プロフェッショナルのカテゴリーに入り、ＣＤ１に関連して、Ｔ細胞に抗原を提示することができる。典型的な実施態様において、本開示に係る方法で利用されるＤＣは、いくつかのＤＣサブセットのうちの任意のものであればよく、一つの実施態様においては、リンパ球系前駆体から分化し、別の実施態様においては、骨髄球系骨髄前駆体から分化する。
【００７４】
本明細書において、「ナイーブ細胞」という用語は、まだ特定の病原体を認識できるように特化していない、例えば、ＣＤ４Ｔ細胞などの未分化の免疫系細胞を意味する。
【００７５】
本明細書において、「ナチュラルキラー細胞」または「ＮＫ」という用語は、インターフェロンによって活性化されて、ウイルスまたはその他の細胞内病原体に対する先天性の宿主防御能に寄与するリンパ球系細胞のクラスを意味する。
【００７６】
本明細書において、「ナチュラルキラーＴ細胞」（ＮＫＴ）という用語は、通常のＴおよびＮＫの両方と特徴／受容体を共有する、Ｔ細胞のサブセットを意味する。これらの細胞の多くは、自己性および外来性の脂質および糖脂質に結合する抗原提示分子である非多型性ＣＤ１ｄ分子を認識する。ＮＫＴのＴＣＲは、ＣＤ１ｄ分子によって提示された（介添えされた）糖脂質抗原を認識することができる。ＮＫＴの主な応答は、刺激を受けると迅速に、ＩＬ４、ＩＮＦ−γ、およびＩＬ−１０などのサイトカインを分泌し、その結果、多様な免疫応答および発病過程に影響を及ぼす。ＮＫＴは同種集団であっても異種集団であってもよい。一つの典型的な実施態様において、この集団は、「非インバリアントＮＫＴ」であってもよいが、これは、例えば、多様なＴＣＲを発現し、また、大量のＩＬ−４およびＩＮＦ−γを産生することもできるＣＤ１ｄ応答性非インバリアントＴ細胞である、ヒトおよびマウスの骨髄Ｔ細胞集団およびヒト肝臓Ｔ細胞集団を含むことができる。最もよく知られたＣＤ１ｄ依存性ＮＫＴのサブセットは、インバリアントＴＣＲ−アルファ（ＴＣＲ−α）鎖を発現する。これらは、Ｉ型ＮＫＴまたはインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）と呼ばれる。これらの細胞は、ヒト（Ｖα２４ｉＮＫＴ）とマウス（Ｖα１４ｉＮＫＴ）の間で保存されており、数多くの免疫学的過程に関与している。
【００７７】
本明細書において、「サイトカイン」という用語は、それによって前駆細胞が明確な特化細胞型となる遺伝子発現の変化を通常含む免疫細胞分化過程に影響することによって、免疫応答の強度および持続時間を調節する無数の低分子分泌タンパク質の任意のものを意味する。サイトカインは、それらの推定機能、分泌する細胞、または作用の標的に基づいて、リンホカイン、インターロイキン、およびケモカインとさまざまに名付けられてきた。例えば、いくつかの一般的なインターロイキンには、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１、およびＴＧＦ−βが含まれるが、これらに限定されない。
【００７８】
本明細書において、「ケモカイン」という用語は、リンパ球を可動化および活性化させる手段を提供する、感染部位で放出される多様な低分子走化性サイトカインの任意のものを意味する。ケモカインは、白血球を感染部位に引き寄せる。ケモカインは、それらを４群に分けることができる保存的システイン残基を有する。これらの群は、代表的なケモカインによって、Ｃ−Ｃケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、およびＭＩＰ−１β）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（ＩＬ−８）、Ｃケモカイン（リンホタクチン）、およびＣＸＸＸＣケモカイン（フラクタルカイン）である。
【００７９】
本明細書において、「ＴＨ２型応答」という用語は、一定の型のサイトカイン、インターフェロン、ケモカインが産生されるようにするサイトカイン発現のパターンを意味する。典型的なＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０を含むが、これらに限定されない。
【００８０】
本明細書において、「ＴＨ１−型」という用語は、一定の型のサイトカイン、インターフェロン、ケモカインが産生されるようにするサイトカイン発現のパターンを意味する。典型的なＴＨ１サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＮＦ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＴＮＦ−βを含むが、これらに限定されない。
【００８１】
本明細書において、「ＴＨ１偏向」という用語は、ＴＨ１サイトカインおよび／またはケモカインの産生が、ＴＨ２サイトカインおよび／またはケモカインの産生よりも大きく増加する免疫原性応答を意味する。
【００８２】
本明細書において、「エピトープ」という用語は、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位に接触する、抗原分子の部分と定義される。
【００８３】
本明細書において、「ワクチン」という用語は、完全な病原生物（死滅または弱毒化させたもの）またはそのような生物の構成要素、例えば、タンパク質、ペプチド、または多糖からなる抗原を含む製剤であって、その生物が原因となる病気に対する免疫を与えるために用いられる製剤を意味する。ワクチン製剤は、天然のもの、合成のもの、または組み換えＤＮＡ技術によって得られたものであってもよい。
【００８４】
本明細書において、「抗菌剤」という用語は、細菌、真菌、またはウイルスなどの微生物を死滅させるか、または増殖を阻害する物質を意味する。
【００８５】
本明細書において、「類毒素」という用語は、化学薬品（ホルマリン）または加熱処理によって毒性が弱められるか、抑制されているが、その他の性質、一般的には免疫原性は維持されている細菌毒素を意味する。類毒素は、本来の毒素に対する免疫応答を誘導したり、別の抗原に対する応答を増加させたりするため、ワクチンに利用される。例えば、破傷風毒素は、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）によって産生され、破傷風の原因となるテタノスパスミンに由来するものである。破傷風類毒素は、血漿に富むワクチン（ｐｌａｓｍａ  ｒｉｃｈ  ｖａｃｃｉｎｅｓ）を開発するために、合衆国の数多くの血漿センターで利用されている。
【００８６】
本明細書において、「ＤＮＡワクチン」という用語は、細胞に導入され、次に、特異的抗原タンパク質に翻訳されるＤＮＡコンストラクトを意味する。
【００８７】
本明細書において、「プラスミド」という用語は、複製能をもつ、染色体外の環状ＤＮＡであって、クローニングベクターとして使用することができるものを意味する。
【００８８】
本明細書において、「微生物」という用語は、顕微鏡でしか見えない（小さすぎて人間の裸眼では見ることができない）生物を意味する。微生物は信じられないほど多様であり、細菌および真菌を含むが、これらに限定されない。
【００８９】
本明細書において、「免疫学的アジュバント」という用語は、免疫原ともに使用される物質で、該免疫原に対する応答を促進または改変する物質を意味する。典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を免疫学的アジュバントとして使用して、ワクチンに対してより強く反応するようワクチンを投与されている患者の免疫系を刺激することによって、ワクチンの作用を改変または増強する。
【００９０】
本明細書において、「ミョウバンアジュバント」という用語は、免疫アジュバント活性をもつアルミニウム塩を意味する。この薬剤は、溶液中でタンパク質抗原を吸収および沈殿させ、生じた沈殿物が、ワクチン接種部位に形成されるワクチンデポーからの抗原の徐放を促進させることによって、ワクチンの免疫原性を改善する。
【００９１】
本明細書において、「抗腫瘍免疫療法活性剤」という用語は、腫瘍を抑制、縮小、および／または除去する、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を意味する。
【００９２】
本明細書において、「顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子」（ＧＭ−ＣＳＦ）という用語は、白血球、特に顆粒球（好中球、好塩基球、および好酸球）、マクロファージ、および血小板の前駆体である、骨髄中の細胞の産生を促進するコロニー刺激因子として働くサイトカインを意味する。
【００９３】
本明細書において、「抗原特異的」という用語は、特定の抗原、または該抗原の断片を供給すると、特異的な細胞増殖が生じるような細胞集団の性質を意味する。
【００９４】
本明細書において、「フローサイトメトリー」または「ＦＡＣＳ」という用語は、光学的または電子的な検出装置によって、液流中に懸濁された粒子または細胞の物理的および化学的な性質を試験する技術を意味する。
【００９５】
本明細書において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体または合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、別段の記載がない限り、α−ガラクトシルセラミドを主材料とする、構造に基づいた合成糖脂質類似体を意味する。
【００９６】
ペプチドの中のアミノ酸残基は、本明細書では以後、次のように略されるものとする：フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦ；ロイシンはＬｅｕまたはＬ；イソロイシンはＩｌｅまたはＩ；メチオニンはＭｅｔまたはＭ；バリンはＶａｌまたはＶ；セリンはＳｅｒまたはＳ；プロリンはＰｒｏまたはＰ；トレオニンはＴｈｒまたはＴ；アラニンはＡｌａまたはＡ；チロシンはＴｙｒまたはＹ；ヒスチジンはＨｉｓまたはＨ；グルタミンはＧｌｎまたはＱ；アスパラギンはＡｓｎまたはＮ；リジンはＬｙｓまたはＫ；アスパラギン酸はＡｓｐまたはＤ；グルタミン酸はＧｌｕまたはＥ；システインはＣｙｓまたはＣ；トリプトファンはＴｒｐまたはＷ；アルギニンはＡｒｇまたはＲ；そしてグリシンはＧｌｙまたはＧである。アミノ酸のより詳細な説明については、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｂｙ  Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．Ｅ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３を参照されたい。
【００９７】
哺乳類またはマイコバクテリアの脂質は、ヒトのＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、およびＣＤ１ｄによって提示されることが知られている。海綿アゲラス・マウリチアヌス（Ａｇｅｌａｓ  ｍａｕｒｉｔｉａｎｕｓ）に見られる脂質であるα−ガラクトシルセラミドは、最も広範に研究されている、ＣＤ１ｄに対するリガンドである。α−ＧａｌＣｅｒによりマウス脾臓細胞をインビボで刺激したところ、ＮＫＴの増殖、および、それぞれＴＨ１型およびＴＨ２型の応答であるＩＦＮ−γおよびＩＬ−４の産生がもたらされたことが示されている。マウスの研究によって、細胞は、α−ＧａｌＣｅｒを担持する未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）によって迅速に活性化させることができること、および活性化ｉＮＫＴは、次にＤＣの完全な成熟を誘発することができることが示されている。
【００９８】
一つの態様において、本開示は、ＣＤ１分子上の結合溝によって結合してＣＤ１類似体複合体を形成することができるα−ＧａｌＣｅｒ類似体の一連の新規の脂質部位を提供する。これらのＣＤ１−類似体複合体は、Ｔ細胞受容体認識という手段によって、ＣＤ１拘束性Ｔ細胞（ＮＫＴ）に対して提示され、ＴＣＲを活性化させること、ＴＨ１サイトカインおよびＴＨ２サイトカインを放出させること、およびＮＫＴを増殖させることができる。一つの典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＣＤ１分子上の結合溝によって強い結合アフィニティーをもつように設計されており、ＴＨ１偏向免疫原応答と相関する。別の典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＣＤ１分子上の結合溝によって強い結合アフィニティーをもつよう設計されており、ＴＨ２偏向免疫原応答と相関する。
【００９９】
本開示の別の態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体を免疫療法薬として使用することができる。一つの典型的な実施態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体を癌免疫療法に使用することができる。一つの典型的な実施態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体をアジュバント免疫療法に使用することができる。別の典型的な実施態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体を、ワクチン接種などの抗微生物免疫療法に使用することができる。さらに別の典型的な実施態様において、α−ＧａｌＣｅｒ類似体を、自己免疫疾患を治療するための免疫抑制に使用することができる。
【０１００】
本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によるＴ細胞受容体の認識および活性化、ならびにその結果得られる免疫応答
図１Ａは、ＣＤ１ｄによって提示された糖脂質抗原をインバリアントＮＴＫが認識して、一連の事象をもたらす仕組みを示す概略図である。糖脂質抗原の脂質部分は、ＣＤ１分子の疎水性の結合溝に挿入されて、ＣＤ１−抗原複合体を形成するが、これが、ＮＫＴ上でＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と接触することができ、その結果、サイトカイン、ケモカイン、および共刺激分子が関与する一連の事象が生じる。サイトカイン産生の多様性および範囲は、細胞性免疫の促進（ＴＨ１型応答）から細胞性免疫の抑制（ＴＨ２型応答）まで、広範な影響を与える可能性がある。図１Ｂは、ＣＤ１ｄによって提示されたα−ＧａｌＣｅｒまたは本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、ＮＫＴ細胞が認識して、迅速なＴＨ１サイトカイン応答とＴＨ２サイトカイン応答を促進させる仕組みを示す概略図である。一つの典型的な実施態様において、ＴＨ１サイトカイン応答が開始される。別の典型的な実施態様において、ＴＨ２サイトカイン応答が開始される。さらに別の典型的な実施態様において、ＴＨ１およびＴＨ２の両方のサイトカイン応答が開始される。
【０１０１】
α−ＧａｌＣｅｒ、および本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体の化学構造を図２に示す。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体には、細菌由来のα−ＧａｌＣｅｒ類似体（第Ｉ群：Ｃ２、Ｃ３、およびＣ１４）、スルホン化によって修飾されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体（第ＩＩ群：Ｃ４、Ｃ５、およびＣ９）、フェニル−アルキル鎖α−ＧａｌＣｅｒ類似体（第ＩＩＩ群：Ｃ６〜Ｃ８、Ｃ１０〜Ｃ１１、Ｃ１５〜Ｃ１６、Ｃ１８〜Ｃ３３、Ｃ８−５、およびＣ８−６）、フィトスフィンゴシン切断型α−ＧａｌＣｅｒ類似体（第ＩＶ群：Ｃ１２、Ｃ１３、およびＣ１７）などがある。図３は、スフィンゴ糖脂質α−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１２およびＣ１３の合成例を示している。
【０１０２】
一つの態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＣＤ１ｄ分子と複合体を形成することができる。別の態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体には、ＮＫＴのＴ細胞受容体によって認識される能力をもつ。さらに別の態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＴＨ１型応答、ＴＨ２型応答、またはＴＨ１型とＴＨ２型の両応答を誘導することができる。一つの典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビトロにおいてＮＫＴを活性化させることができる。別の典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビボにおいてＮＫＴを活性化させることができる。
【０１０３】
本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体のいずれか一つを被検対象に投与することを含む、組織、細胞、および／または被検対象においてサイトカイン産生を刺激または促進する方法であって、被検対象中のＮＫＴが、該α−ＧａｌＣｅｒ類似体に接触すると活性化され、サイトカイン応答が開始される方法が提供される。このサイトカインは、例えば、インターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）またはインターロイキン−４（ＩＬ−４）などであろう。
【０１０４】
一つの典型的な実施態様において、本開示は、有効量の化合物または塩または混合物を投与して、組織、細胞、および／または被検対象におけるサイトカイン応答を活性化させる方法であって、該化合物が、Ｃ２〜Ｃ８、Ｃ８−５、Ｃ８−６、およびＣ９〜Ｃ３３からなる群から選択され、該被検対象が、少なくとも一つのリンパ球および少なくとも一つの抗原提示細胞を含む細胞集団を含む適応免疫系を有し、該化合物と該抗原提示細胞の間に複合体を形成させて、この複合体形成の結果、リンパ球上の受容体が活性化し、そして、リンパ球を活性化させることによって、上記サイトカイン応答を生じさせる方法を提供する。
【０１０５】
一つの典型的な実施態様において、マウス１．２ハイブリドーマ（ＣＤ１ｄ反応性Ｖα１４／Ｔ細胞ハイブリドーマ）をｍＣＤ１ｄで被覆した９６穴プレート中で培養し、対照であるＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体、１００ｎｇ／ｍｌでパルスした。図４に示した通り、培養後１８時間目に、組織培養培地中へのＩＬ−２放出を測定した。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のほとんどが、α−ＧａｌＣｅｒよりも高いＩＬ−２産生を誘導した。ヒトナイーブＮＫＴ（ＣＤ１６１＋ＣＤ３＋）におけるインビトロでのサイトカイン／ケモカイン産生を誘導する能力について、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を試験したときにも、同様の結果になった。ヒトナイーブＣＤ１６１＋ＣＤ３＋ＮＫＴを、自己未成熟樹状細胞（ＣＤ１４＋ＤＣ）とともに培養し、対照であるＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体、１００ｎｇ／ｍｌでパルスした。図５に示した通り、培養後１８時間目に、組織培養培地中に放出されたサイトカインを測定した。これらのα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＴＨ１サイトカインおよびＴＨ２サイトカインの分泌の強力なインデューサである。図５Ａは、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４の誘導を示し、図５Ｂは、ＩＬ−２およびＩＬ−６の誘導を示し、図５Ｃは、ＩＬ−１２およびＩＬ−１０の誘導を示している。第ＩＩＩ群および第ＩＶ群の芳香族化合物、特にＣ１１、Ｃ１６、およびＣ１３は、α−ＧａｌＣｅｒよりも有意に多いＩＦＮ−γ分泌を誘導したが、すべてのα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、α−ＧａｌＣｅｒよりも有意に少ないＩＬ−４を分泌した。図６は、ヒトＣＤ１６１＋ＣＤ３＋ＮＫＴの純度（上図）、および、ＤＭＳＯ対照に対して標準化されたＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比（下図）を示している。ＩＦＮ／ＩＬ−４比で表されている場合、Ｃ９、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、および第ＩＩＩ群化合物のすべてが、よりＴＨ１に偏向していたが、一方、Ｃ１、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ８、およびＣ１７は、よりＴＨ２に偏向していた。ヒトＣＤ１６１＋ＣＤ３＋ＮＫＴからのサイトカインおよびケモカインの誘導結果が図７に一覧されている。各サイトカインにつき、上位５つの値を太字で示した。試験したα−ＧａｌＣｅｒ類似体には、ケモカインにおいて、α−ＧａｌＣｅｒよりも強い誘導を示すものがあった。例えば、Ｃ１３は、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、およびＩＬ−８などのケモカインで顕著な増加を誘導した。芳香族化合物であるＣ１０、Ｃ１１、およびＣ１６は、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、およびＩＬ−１５のより高い誘導を示した。
【０１０６】
図８は、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、初代ナイーブヒトｉＮＫＴにおいてサイトカイン／ケモカイン産生を誘導する能力についての、インビトロにおける、さらなる結果を示している。初代ナイーブヒトｉＮＫＴを自家性未成熟ＤＣとともに培養し、対照であるＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示したα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ１１およびＣ１８〜Ｃ２９）でパルスした。図８Ａに示したように、試験した本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体はすべて、Ｃ１よりも高量のＩＮＦ−γ分泌を誘導した。α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ほぼ同等の量のＩＬ−４を誘導した（図８Ｂ参照）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、Ｃ１より高いＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比、すなわちＴＨ１／ＴＨ２偏向を誘導した（図８Ｃ参照）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ２０、Ｃ２４、およびＣ２６は、α−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１１よりも、有意に強力なＩＦＮ−γ産生、より高いＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比、およびより高量のＩＬ−２分泌を誘導した（図８Ｄ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２０およびＣ２４は、ＩＬ−１２産生を誘導し、また、試験されたその他のα−ＧａｌＣｅｒ類似体よりも多量のＩＬ−６放出を誘導した（図８Ｅおよび８Ｆ参照）。図９は、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１およびＣ１８〜Ｃ２９によるヒトｉＮＫＴの増殖を示している。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２０、Ｃ２２〜Ｃ２４、およびＣ２６〜Ｃ２７は、Ｃ１およびＣ１１よりも有意に高いＣＤ１ｄ拘束性ヒトｉＮＫＴ増殖を誘導した。
【０１０７】
図１０は、ナイーブヒトＮＫＴと、さまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされたヒトＮＫＴとの間におけるＩＦＮ−γ分泌量の違いを示している。図１０Ａは、未成熟ＣＤ１４＋ＤＣとともに培養され、対照であるＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされたヒトナイーブｉＮＫＴ（Ｖα２４＋）からのＩＦＮ−γ分泌を示している。図１０Ｂ〜Ｄは、以下の３つの相異なるｉＮＫＴ源における、α−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答したＩＦＮ−γ分泌を示している：（Ｂ）ヒトナイーブｉＮＫＴ、（Ｃ）α−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされたｉＮＫＴ、および（Ｄ）Ｃ１１でパルスされたｉＮＫＴ。これらのｉＮＫＴをＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞とともに培養し、対照ＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体で１８時間パルスした。図１０Ｅは、ヒトのナイーブｉＮＫＴ、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ、またはＣ１１でパルスされたｉＮＫＴにおけるＩＦＮ−γの基礎濃度の違いを示している。
【０１０８】
図１１は、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答したインバリアント・ヒト・ナイーブＮＫＴによるＴＨ１／ＴＨ２サイトカイン産生を示している。ヒトＶα２４＋ｉＮＫＴを、対照ＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされた自家性未成熟ＣＤ１４＋ＤＣとともに１８時間培養した。図１１Ａは、ＩＦＮ−γの誘導を示し、図Ｂは、ＩＬ−４の誘導を示し、また図Ｃは、ＤＭＳＯ対照に対して標準化された、ＩＬ−４に対するＩＦＮ−γの比を示している。ナイーブヒトＶα２４＋ｉＮＫＴからのサイトカインおよびケモカインの誘導結果が、図１２に一覧されている。
【０１０９】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体を用いたＮＫＴの増殖および活性化
一つの態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＮＫおよびｉＮＫＴを増殖および活性化させることができる。ヒト末梢血単核球中のｉＮＫＴ数の減少が、悪性腫を患っている患者で記録されているため、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって、このような患者のｉＮＫＴを増殖および活性化させることは治療的に有益であるかもしれない。典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビトロにおいて、ヒトｉＮＫＴを増殖させる能力がある。
【０１１０】
単離された培養増殖型ＮＫＴ集団を作成する方法であって、Ｖα１４ｉＴ細胞またはＶα２４ｉＴ細胞を、類似体特異的なＴ細胞の増殖が起きるまでの期間、樹状細胞または本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体と接触させること、および、このように得られた増殖Ｔ細胞を単離して、単離された培養増殖型ＮＫＴ集団を作成することを含む方法が提供される。一つの典型的な実施態様において、単離された培養増殖型ＮＫＴ集団を作成する方法は、さらに、樹状細胞、ＮＫＴ細胞培養物にサイトカインもしくは増殖因子を添加する工程を含む。
【０１１１】
ヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ細胞混合物）を自家性未成熟ＣＤ１４＋ＤＣとともに培養し、ＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、またはさまざまな本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスした。曝露後９日目に、ＮＫおよびＮＫＴの増殖／生存、およびＮＫＴの亜集団であるｉＮＫＴ（ＣＤ１６１＋／Ｖα２４＋／ＣＤ５６＋／ＣＤ３＋）の増殖／生存をフローサイトメトリー法によって測定した。図１３および１４に示したように、Ｃ２、Ｃ８〜Ｃ１２、およびＣ１５〜Ｃ１６で刺激すると、対照に対し有意なｉＮＫＴ増加が注目された。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体の中で、第ＩＩＩ群の芳香族化合物のいくつか、特にＣ１１、Ｃ１５、およびＣ１６は、Ｃ１よりも有効であった。
【０１１２】
図１５に示したように、ヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ混合物）を自家性未成熟ＣＤ１４＋ＤＣとともに培養し、２日目に１８時間、１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌのＤＭＳＯ、α−ＧａｌＣｅｒ、または本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスした。９日目にＮＫ／ＮＫＴ混合物中のＣＤ１６１＋／Ｖα２４  ＴＣＲ＋細胞の比率をフローサイトメトリーによってゲートした。図１５Ａは、１００ｎｇ／ｍｌに応答したＶα２４ｉＮＫＴの比率を示している。図１５Ｂは、さまざまな用量に応答したＶα２４ｉＮＫＴの総数の変化倍率を示している。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較して；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較して。
【０１１３】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体を用いた樹状細胞の成熟および伸長
最も効率的な抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、成熟した免疫適格な樹状細胞（ＤＣ）である。ＤＣは、未成熟な抗原捕捉細胞を成熟した抗原提示型のＴ細胞感作細胞に進化させ、抗原を免疫原に変え、サイトカイン、ケモカイン、共刺激分子、およびプロテアーゼなどの分子を発現させて免疫応答を開始させることができる。しかし、誘導されるＴ細胞媒介性免疫応答の種類（寛容対免疫、ＴＨ１対ＴＨ２）は、周囲の微環境から受け取る活性化シグナルのほかに、具体的なＤＣ系譜および成熟段階に応じて変わる可能性がある。
【０１１４】
ＤＣが免疫を調節する能力は、ＤＣの成熟化に依存している。その結果、ＤＣの成熟化が、免疫応答の開始に重大な意味を持つ。ＤＣ内部への抗原の取り込みおよびプロセッシングの後、さまざまな因子が成熟化を誘導することができる。ＤＣは、未成熟細胞から成熟細胞に変わる過程で、いくつかの表現型および機能の変化を経験する。ＤＣの成熟過程には、一般的に、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の細胞内区画からＤＣ表面への再分布、抗原内在化の下方制御、共刺激分子の細胞表面発現の増加、形態変化（例えば、樹状突起の形成）、細胞骨格再構成、ケモカイン、サイトカインおよびプロテアーゼの分泌、ならびに接着分子およびケモカイン受容体の細胞表面発現が含まれる。
【０１１５】
一つの態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ヒトＤＣの成熟を促進することができる。樹状細胞の成熟によって、適応免疫応答の促進がもたらされうる。樹状細胞を成熟させる方法であって、未成熟樹状細胞を供給する工程、および該未成熟樹状細胞を、一定濃度の本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体とともに、該未成熟樹状細胞が成熟するまでの期間インキュベートする工程を含む方法が開示される。一つの典型的な実施態様において、これらの成熟樹状細胞は、次に、免疫療法薬、例えば、癌免疫療法薬およびアジュバント免疫療法薬などとして使用することができる。別の典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、未成熟樹状細胞または成熟樹状細胞と組み合わせて、免疫療法薬、例えば、癌免疫療法薬およびアジュバント免疫療法薬などとして使用することができる。
【０１１６】
本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、マウス脾臓ＤＣの成熟を促進することができる。インビトロでは、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、樹状突起の伸長とともに、ヒトＤＣ上のＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ２０９、およびＨＬＡ−ＤＲ（ＭＨＣＩＩ分子）など、さまざまな細胞表面成熟化マーカーの発現量を直接的に増大させることができた。図１６に示したように、Ｃ１３は、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＨＬＡ−ＤＲの発現量の有意な増加を示し、ヒト単球由来ＤＣの成熟を促進する。図１７Ａは、Ｃ１３に応答したＤＣにおけるＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＨＬＡ−ＤＲのヒストグラムを示している。図１７Ｂは、Ｃ１３とともに４８時間インキュベートされたＤＣの形態を示している。
【０１１７】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体を用いた、ＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性ＴＣＲ活性化
さらに別の態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＣＤ１ｄ依存性のＴＣＲ活性化を誘導することができる。図１８は、ＮＫＴにおけるＴＣＲシグナル伝達経路をまとめた概略図を示している。ｉＮＫＴは、Ｔ細胞受容体複合体を介して、抗原提示細胞（ＡＰＣ）表面上に、ＣＤ１ｄに関連して提示された糖脂質抗原を認識する。糖脂質抗原の結合によって、ＥＲＫ１／２、ｐ３８、ＩκＢα、ＣＲＥＢ、ＳＴＡＴ３、およびＳＴＡＴ５のリン酸化など、ｉＮＫＴにおける細胞質キナーゼが活性化される。これらのシグナル伝達カスケードによって、ｉＮＫＴの増殖およびサイトカイン／ケモカインの産生がもたらされる。
【０１１８】
一つの典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ナイーブなヒトＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性ＴＣＲ活性化を誘導することができる。ＴＣＲ活性化がＣＤ１ｄ依存性であるか否かを識別するために、ヒトＣＤ１ｄを過剰発現しているＨｅＬａ−ＣＤ１ｄによって提示される、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体の効果、および対照であるＨｅＬａ細胞を測定した。また、さまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＮＫＴに提示することについて、ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ（非プロフェッショナルＡＰＣ）の能力を、未成熟ＤＣ（プロフェッショナルＡＰＣ）と比較した。図１９に示すように、Ｃ１、ならびにα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１１、Ｃ１３、およびＣ１７は、リン酸化ＣＤ３εの細胞内値を、ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞によって提示された場合には、それぞれ７．３倍、１０倍、７．３倍、および５．９倍増加させ、ＤＣによって提示された場合には、それぞれ１０．８倍、２１．３倍、１７．３倍、および１２倍増加させた。リン酸化ＥＲＫ１／２については、Ｃ１、ならびにα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１１、Ｃ１３、およびＣ１７が、ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞では、それぞれ６．６倍、１４．６倍、６．６倍、および３．３倍の増加を誘導し、ＤＣでは、それぞれ３０倍、４８．３倍、３５倍、および１８．６倍の増加を誘導した。リン酸化ＣＲＥＢの誘導はさらに驚くべきもので、Ｃ１、ならびにα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１１、Ｃ１３、およびＣ１７は、ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞によって提示された場合には、それぞれ２倍、１１７倍、４１倍、および２０倍の発現を誘導し、ＤＣによって提示された場合には、それぞれ６８倍、２０４倍、１５８倍、および４９倍の発現を誘導した。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体はいずれも、Ｂ細胞受容体のシグナル伝達には関与するが、ＴＣＲ経路には関与しないことが知られているタンパク質キナーゼであるＳｙｋのリン酸化には全く作用を及ぼさなかった。これらの知見は、本開示に係る芳香族のα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、強力なＴＣＲ活性化を、ＣＤ１ｄに依存する形で誘導したこと、および活性化の程度は、非プロフェッショナルＡＰＣと比較して、プロフェッショナルＡＰＣによって提示された場合に非常に増強されることを示唆している。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体はいずれも、対照であるＨｅＬａ細胞と同時培養されたＮＫＴ細胞におけるＣＤ３ε、ＥＲＫ１／２、またはＣＲＥＢのリン酸化に対して全く効果を示さなかった。全体的に見て、化合物Ｃ１１およびＣ１３の方が、化合物Ｃ１およびＣ１７よりも、ＴＣＲ活性化においては強力であると考えられるが、これらは、Ｃ１１によって開始されるＴＨ１に偏向したサイトカインプロファイルの誘導の方が、Ｃ１と比較するとより強いことと整合する。なぜなら、ＥＲＫ１／２およびＣＲＥＢ活性化が、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γなど、数多くのＴＨ１サイトカインの誘導に関与することが報告されているからである。Ｃ１３も、おそらく、ＤＣ上における共刺激分子の発現を促進させるユニークな能力の結果として、ＴＣＲの有意な活性化を開始させた。試験した４種類のα−ＧａｌＣｅｒ類似体で、特にＣ１３で、ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞によ���て提示された場合よりも、ＤＣによって提示された場合に、ＴＣＲがより強力に活性化された。Ｃ１によるよりも、α−ＧａｌＣｅｒ類似体のＣ１１による方が、より高度にリン酸化されたＣＤ３ε、ＥＲＫ１／２、およびＣＲＥＢが誘導されたことは、糖脂質がＣＤ１ｄに強く結合するほど、ＮＫＴ上におけるＴＣＲの促進をより強く誘導するという考えに合致している。
【０１１９】
図２０は、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、どのようにして、ＣＤ１ｄに依存したＴＣＲ活性化を誘導することができるかの別の実施態様を示している。さまざまな本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（具体的には、Ｃ１６、Ｃ２３、Ｃ２６、Ｃ８−５、およびＣ８−６）は、ＥＲＫ１／２、ｐ３８、ＩκＢα、ＣＲＥＢ、ＳＴＡＴ３、およびＳＴＡＴ５のリン酸化によって、ヒトｉＮＫＴ（Ｖα２４＋Ｔ細胞）におけるＴＣＲシグナル伝達経路を活性化させることができる。ＴＣＲ活性化がＣＤ１ｄ依存性であるか否かを識別するために、ヒトＣＤ１ｄを過剰発現しているＨｅＬａ−ＣＤ１ｄによって提示される、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体の効果、および対照であるＨｅＬａ細胞を測定した。図２０Ａは、９２％のナイーブＶα２４＋／ＣＤ３＋Ｔ細胞を含んだフローサイトメトリーによって、単離されたＶα２４＋Ｔ細胞の測定結果を示している。Ｃ１、ならびにα−ＧａｌＣｅｒ類似体、具体的には、Ｃ１６、Ｃ２３、Ｃ２６、Ｃ８−５、およびＣ８−６は、（Ｂ）リン酸化ＣＤ３ε（ホスホチロシン）、（Ｃ）リン酸化ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ１３３）、（Ｄ）リン酸化ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ１８５／Ｔｈｒ１８７）、（Ｅ）リン酸化ｐ３８（Ｔｈｒ１８０／Ｔｈｒ１８２）、（Ｆ）リン酸化ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）、（Ｇ）リン酸化Ｌｃｋ、（Ｈ）リン酸化Ｌａｔ、（Ｉ）リン酸化ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、（Ｊ）リン酸化ＳＴＡＴ５Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ６９４／６９９）、（Ｋ）リン酸化Ｓｙｋ（ホスホチロシン）、および（Ｌ）リン酸化Ｚａｐ−７０（ホスホチロシン）の細胞内の値を増大させた。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較した場合；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較した場合。
【０１２０】
また、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビトロにおいて、ＣＤ１ｄ拘束性マウスＮＫＴ／Ｔに対してより高い結合アフィニティーを示し（図２１）、インビボにおいて、２つのサブセットＮＫＴおよびＮＫのＣＤ１ｄ依存的な活性化も示す（図２２）。図２１に示されているように、表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ１、７ＤＷ８−５、Ｃ２６、Ｃ８、Ｃ１７）または賦形剤を、０．１μｇ／マウスにて静脈内（ＩＶ）注射した７２時間後に、ＢＡＬＢ／ｃマウスから脾臓を採取した。一定の割合のマウスＮＫＴ細胞（図２１Ａ）またはマウスＴ細胞（図２１Ｂ）を、α−ＧａｌＣｅｒを負荷されたｍＣＤ１ｄテトラマー（μｇあたり１０モル）で染色した。図２１Ｃは、ＣＤ１ｄ拘束性ＮＫＴおよびＴ細胞に対する、α−ＧａｌＣｅｒおよびフェノールα−ＧａｌＣｅｒ類似体７ＤＷ８−５の異なる結合アフィニティを示している。図２２は、２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１依存的な増殖を示している。ＤＭＳＯ対照、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ８、Ｃ１６、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２６、７ＤＷ８−５、および７ＤＷ８−６をＩＶ注射した７２時間後に、ＢＡＬＢ／ｃ野生型（ＷＴ）マウスまたはＣＤ１ノックアウト（ＫＯ）マウスから脾臓を採取した。表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答した（Ｂ）野生型マウスまたは（Ｃ）ＣＤ１ノックアウトマウスにおけるＮＫＴの総数、ならびにＮＫＴ１（ＣＤ３＋／ＮＫ＋／ＣＤ４９＋／ＣＤ６９）およびＮＫＴ２（ＣＤ３−／ＮＫ＋／ＣＤ４９／ＣＤ６９＋）と名付けられたＮＫＴの２つのサブタイプをＦＡＣＳによって測定した。図Ｄは、ＮＫのＣＤ１ｄ−依存型活性化を示している。表示してあるα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答したＷＴマウスまたはＣＤ１ＫＯマウスにおける活性型ＮＫ（ＣＤ３＋／ＮＫ＋／ＣＤ６９＋）の総数の増大を、ＦＡＣＳによって測定した。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較した場合、；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較した場合。
【０１２１】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体を用いた、インビボにおけるＴＨ細胞の活性化、脾細胞の増殖／活性化、およびＮＫＴのＣＤ１ｄ依存性ＴＣＲ活性化
さらに別の態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビボにおいてＴＨ細胞を活性化することができる。サイトカイン分泌への投与経路の影響を評価するために、α−ＧａｌＣｅｒおよび７つの本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、静脈内（ＩＶ）経路、皮下（ＳｕｂＱ）経路、および筋肉内（ＩＭ）経路にいずれかによってＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、サイトカイン産生への影響を測定した。図２３Ａ、図２７Ａ、および図２９Ａは、さまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体を異なった経路で注射した７２時間後のＩＦＮ−γの血清中濃度を示している。一般的に、サイトカイン産生の増加は早ければ２時間で検出可能となり、１８時間でピークに達し、４８時間かけて徐々にベースライン値まで低下した。ＩＶ経路によって導入された場合（図２３Ａ）、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９およびα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６が、Ｃ１の活性レベルに近い活性レベルを示し、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１３、Ｃ１１、Ｃ２、Ｃ１４、およびＣ３が、それらに続いた。特筆すべきは、同じα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ投与によって誘導されたＩＦＮ−γのレベル（図２７Ａ）は、ＩＶ経路でのレベルよりもずっと低く、一方、ＩＭ経路でのレベル（図２９Ａ）は中程度であったことである。Ｃ１は、ＩＶ投与された場合には、最も高量のＩＦＮ−γを誘導したが、ＳｕｂＱ経路およびＩＭ経路によって投与された場合には、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９の方がＣ１を上回った。図２３Ｂ、図２７Ｂ、および図２９Ｂは、さまざまな経路によってα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した後のＩＬ−４のレベルを示している。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体のすべて、およびα−ＧａｌＣｅｒは、ＳｕｂＱ経路で導入された場合には、ＩＬ−４をほとんど誘導しなかったが、ＩＭ投与された場合には、中程度の量のＩＬ−４が全てのα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって誘導された。これらのデータを、ＴＨ１／ＴＨ２偏向を反映させるためにＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比として表すと（図２３Ｃ、図２７Ｃ、および図２９Ｃ）、芳香族α−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１１、Ｃ１３、Ｃ１６、および細菌由来のＣ１４が、図２３Ｃ、図２７Ｃおよび図２９Ｃに示すように、ＩＶ経路では、２時間でＣ１よりも低いＴＨ２応答を誘導し、１８〜７２時間の間は、すべてのα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、ＴＨ１に偏向した応答を誘導した。さらに、ＳｕｂＱ経路で投与されると、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２およびＣ３以外のすべての試験された本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、２〜７２時間の全期間で、Ｃ１よりも高いＴＨ１／ＴＨ２比を示した。一方、ＩＭ注射によって投与されると、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、Ｃ１４以外はすべて、２時間でＴＨ２に偏向した応答を示し、１８〜７２時間の間は、再びＴＨ１に偏向した応答に変わった。後者は、２時間目には、より強いＴＨ１に偏向した応答を示し、２〜７２時間の間ずっとＴＨ１偏向を維持した。別の図では、図２４が、表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＶ投与した２時間後および１８時間後の分泌された（Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４のマウス血清中濃度、および（Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比を示している。
【０１２２】
ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４と同様に、その他のサイトカインおよびケモカインも、これら新規のα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答して、血清中で顕著に増加した。これらは、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＫＣ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、およびＭＩＰ−１などであり、図２５の表に列挙されている。ＩＶ投与では、これら新規のα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、Ｃ１よりも強いＴＨ１に偏向したサイトカイン応答およびケモカイン応答を誘導する。例えば、芳香族α−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１１、Ｃ１３、およびＣ１６は、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１β、およびＭＣＰ−１の顕著な増加を誘導し、Ｃ１４は、さらに強いＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２の誘導を示した。
【０１２３】
α−ＧａｌＣｅｒまたは表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射されたＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓における免疫細胞集団を測定するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスに注射し、注射の７２時間後に検査した。図２６に示されているように、ＩＶ投与後、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体はすべて、（Ａ）Ｃ１よりも高い効力を示すＣ９、Ｃ１３、およびＣ１６によって、脾細胞、（Ｂ）ＤＣ、（Ｃ）ＮＫ、（Ｄ）ＮＫＴ、（Ｅ）Ｂ細胞、（Ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、（Ｇ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（Ｈ）活性ＣＤ８＋／ＣＤ４＋比の顕著な増大を誘導した。図２８に示されているように、ＳｕｂＱ投与後、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体はいずれも、Ｃ１の効果と比較して、（Ａ）脾細胞の増殖に対して顕著な効果を示さなかった。図３０に示されているように、ＩＭ投与後、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体はすべて、Ｃ１より大きい効果を示すＣ９、Ｃ１３、およびＣ１４によって、（Ａ）脾細胞の増殖を誘導した。芳香族α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１２、Ｃ１３、およびＣ１６は、Ｃ１よりも、総ＤＣおよび成熟ＤＣの顕著な増加を誘導した（図２６Ｂ、図２８Ｂ、および図３０Ｂ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９、Ｃ１２、Ｃ１３、およびＣ１６は、ＮＫおよびＮＫＴを増殖／活性化させる最高の能力を示した（図２６Ｃ〜Ｄ、図２８Ｃ〜Ｄ、および図３０Ｃ〜Ｄ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６が、Ｂ細胞増殖に最も効果が高く、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２、Ｃ９、Ｃ１０、およびＣ１１も、Ｃ１よりは活性が高かった（図２６Ｅ、図２８Ｅ、および図３０Ｅ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞では、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１４が、細胞の増殖／活性化に最も有効であったが、ただし、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１６、Ｃ１２、およびＣ１３も、Ｃ１よりは活性が高かった（図２６Ｆ、図２８Ｆ、および図３０Ｆ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖／活性化において、Ｃ１よりも効果が高かった（図２６Ｇ、図２８Ｇおよび図３０Ｇ）。Ｔ細胞亜集団の中では、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体のすべてが、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋比の増大を誘導したが、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、およびＣ１６は、Ｃ１よりも強力であった（図２６Ｈ、図２８Ｈ、および図３０Ｈ）。ＳｕｂＱ経路によってα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理されたマウスにおいては、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９が、Ｃ１よりも有意に高い総ＤＣおよび成熟ＤＣの増殖を誘導したが、これ以外のα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、Ｃ１と同等であった（図２８Ｂ）。ＮＫおよびＮＫＴの増殖／活性化では、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、およびＣ１６が、Ｃ１と同等の活性を示したが、これら以外のα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、活性がより低いように思われた（図２８Ｃ〜Ｄ）。Ｂ細胞の増殖／活性化では、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１、Ｃ９、Ｃ１１、およびＣ１３が顕著な活性を示した（図２８Ｅ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞については、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、およびＣ１６が、Ｃ１よりも高い活性を示し、残りのα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、Ｃ１と同等の活性であると見られた（図２８Ｆ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞では、Ｃ１が最も有効であったが、���だし、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、およびＣ１６も、対照よりも活性が高かった（図２８Ｇ）。Ｔ細胞では、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体の大部分が、Ｃ１よりも高いＣＤ８＋／ＣＤ４＋比の増大を誘導した（図２８Ｈ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＩＭ経路を介して導入されると、すべてが、ＤＣ、ＮＫ、ＮＫＴ、Ｂ細胞、およびＣＤ８＋／ＣＤ４＋比の有意な増加を誘導した。新規のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の大多数は、Ｃ１よりも大きなＤＣ増殖を誘導した（図３０Ｂ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９およびＣ１４は、Ｃ１よりも強力なＮＫ細胞誘導を示した（図３０Ｃ）が、ＮＫＴ細胞には同等もしくはより低い効果を示した（図３０Ｄ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２、Ｃ１１、Ｃ１２、およびＣ１６は、Ｃ１よりも強力なＢ細胞の活性化を示した（図３０Ｅ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞では、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９およびＣ１６が、細胞の増殖／活性化について、Ｃ１と同等の活性を示したが、これら以外のα−ＧａｌＣｅｒ類似体も、対照と比べて有意な増加を誘導した（図３０Ｆ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞では、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２およびＣ９が、細胞の増殖／活性化について、Ｃ１と同等の活性を示したが、これら以外のα−ＧａｌＣｅｒ類似体も、対照と比べて有意な増加を誘導した（図３０Ｇ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ９、Ｃ１１、およびＣ１６は、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋比を増大させるのに、Ｃ１と同様の活性を示した（図３０Ｈ）。
【０１２４】
図３１は、サイトカインの動態および脾細胞の増殖／活性化に対する、α−ＧａｌＣｅｒ類似体の投与経路の効果の別の典型的な実施態様を示している。図３１Ａ〜Ｃは、異なった経路で投与されたＤＭＳＯ賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６に応答したサイトカインの動態を示している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＩＶ、ＳｕｂＱ、またはＩＭで、賦形剤、Ｃ１、またはＣ１６（マウス１匹あたり２μｇ）を注射した。血清試料を０、２、１８、３６、４８、７２時間目に採集し、サイトカイン：（Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４、および（Ｃ）ＩＬ−４に対するＩＦＮ−γの比率について、ＤＭＳＯ賦形剤に対して標準化して解析した。図３１Ｄ〜Ｋは、異なった経路で投与された賦形剤、Ｃ１、およびＣ１６に応答した脾細胞の増殖／活性化を示している。Ｃ１、Ｃ１６（マウス１匹あたり２μｇ）、または賦形剤をＩＶ注射、ＳｕｂＱ注射、またはＩＭ注射した７２時間後に、ＢＡＬＢ／ｃマウスから脾臓を採取した。図Ｄは、有核細胞の総数を示し、図Ｅ〜Ｇは、成熟樹状細胞（ＣＤ１１Ｃ＋／ＣＤ８０＋／ＣＤ８６＋）、活性化ＮＫ（Ｕ５Ａ２−１３Ａｇ＋／ＣＤ３−／ＣＤ６９＋）、活性ＮＫＴ（Ｕ５Ａ２−１３Ａｇ＋／ＣＤ３＋／ＣＤ６９＋）など自然免疫細胞集団を示し、図Ｈ〜Ｊは、活性化Ｂ細胞（ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２３＋／ＣＤ６９＋）、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４−／ＣＤ８＋／ＣＤ６９＋）、および活性化ＣＤ４  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ８−／ＣＤ６９＋）などの適応免疫細胞を示し、図Ｋは、ＤＭＳＯに対して標準化されたＣＤ８／ＣＤ４の比を示している。＊＊、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較した場合。
【０１２５】
別の典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をさまざまな用量でマウスに投与して、脾細胞の増殖／活性化について、用量反応が顕著であるか否かを判定した。図３２Ａ〜Ｈに示されているように、賦形剤またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１（マウス１匹あたり２μｇまたは０．１μｇ）をＩＶ注射した７２時間後に、ＢＡＬＢ／ｃマウスから脾臓を採取した。図Ａは、有核細胞の総数を示し、図Ｂ〜Ｈは、成熟ＤＣ（ＣＤ１１Ｃ＋／ＣＤ８０＋／ＣＤ８６＋）、活性化ＮＫ（Ｕ５Ａ２−１３Ａｇ＋／ＣＤ３−／ＣＤ６９＋）、活性化ＮＫＴ（Ｕ５Ａ２−１３Ａｇ＋／ＣＤ３＋／ＣＤ６９＋）、単球（ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ１−）、顆粒球（ＣＤ１１ｂ−Ｇｒ１＋）を含む自然免疫細胞集団を示し；図Ｆ〜Ｈは、活性化ＣＤ４  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ８―／ＣＤ６９＋）、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４―／ＣＤ８＋／ＣＤ６９＋）、および活性化Ｂ細胞（ＣＤ４５Ｒ＋／ＣＤ２３＋／ＣＤ６９＋）を含む適応免疫細胞を示している。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較した場合；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１１と比較した場合（マウス１匹あたり２μｇ）。
【０１２６】
さらに別の典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体によって誘導されたＴＨ１サイトカイン／ＴＨ２サイトカインの動態を評価した（図３３）。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、賦形剤、Ｃ１、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、ＩＶ注射した（マウス１匹あたり０．１μｇ）。血清試料を０、２、１２、２４、４８、および７２時間後に採集して、（Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４の分泌、および（Ｃ）ＩＬ−４に対するＩＦＮ−γの比について、ＤＭＳＯ対照（Ｄ）に対して標準化して評価した。２時間および１８時間後に採集された血清試料を示す図３４の表からわかるように、これら強力な本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体はサイトカイン／ケモカインを誘導した。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を（マウス１匹あたり０．１μｇ）、野生型（ＷＴ）およびＣＤ１ｄノックアウト（ＣＤ１ＫＯ）のＢＡＬＢ／ｃマウスにＩＶ投与した。図３５参照。血清試料を２時間および１８時間後に採集して、（Ａ）ＩＦＮ−γ、（Ｂ）ＩＬ−４、（Ｃ）ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４比、（Ｄ）ＩＬ−１０、（Ｅ）ＩＬ−１２ｐ７０、（Ｆ）ＫＣ、および（Ｇ）ＭＣＰ−１などのサイトカイン／ケモカインについて解析した。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較した場合。これらの結果は、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、マウスにおいてＣＤ１依存性のサイトカイン／ケモカイン分泌を誘導することを示している。
【０１２７】
図３６は、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した後の脾細胞の増殖／活性化および２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１ｄ依存的活性化の別の典型的な実施態様を示している。図Ａ〜Ｆは、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答した脾細胞の増殖／活性化を示している。賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（マウス１匹あたり０．１μｇ）をＩＶ注射した７２時間後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから脾臓を採取した。図Ａは有核細胞の総数を示し、図Ｂ〜Ｆは、成熟樹状細胞（ＣＤ１１Ｃ＋／ＣＤ８０＋／ＣＤ８６＋）、活性化ＮＫ（ＮＫ１１＋／ＣＤ３−／ＣＤ６９＋）、活性化ＣＤ４  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ８−／ＣＤ６９＋）、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４−／ＣＤ８＋／ＣＤ６９＋）、およびＣＤ８／ＣＤ４の比を、ＤＭＳＯに対して標準化して示している。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較した場合。図Ｇ−Ｈは、２つのＮＫＴサブセットのＣＤ１依存的増殖を示している。マウス１匹あたり０．１μｇの賦形剤、Ｃ１、７ＤＷ８−５、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２６、Ｃ３０、およびＣ１７をＩＶ注射した７２時間後、Ｃ５７ＢＬ／６野生型（Ｗｔ）マウスまたはＣＤ１ノックアウト（ＣＤ１ＫＯ）マウスから脾臓を採取した。図Ｇは、フローサイトメトリーによるマウスＮＫＴの測定を示している（左下図）。ＷｔにおけるＮＫＴ（右上図）、およびその２つの亜型であるＮＫＴ１（ＣＤ３＋／ＮＫ１．１＋／ＣＤ４９＋／ＣＤ６９−）（右上図）、およびＮＫＴ２（ＣＤ３＋／ＮＫ１．１＋／ＣＤ４９−／ＣＤ６９＋）（右下図）の総数の増加が、ＦＡＣＳにより観察された。図Ｈは、ＣＤ１ＫＯマウスにおけるＮＫＴの総数を示し、図Ｉは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体に応答したＷｔＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＦｏｘＰ３＋）の総数を示している。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較した場合；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較した場合。
【０１２８】
免疫療法
免疫系は、病原菌を排除することによってわれわれの身体が乗っ取られるのを効果的に妨げている。有効な免疫系がなければ、人々は、細菌、ウイルス、原生生物、寄生虫、および真菌に由来するあらゆる種類の感染症を容易に発症する。また、人々は癌を発症する可能性も高くなる。ＮＫＴは、免疫系において調節機能を果たしているため、免疫療法にとって格好の標的である。ＮＫＴの活性化は、逆説的に、免疫応答の抑制または促進をもたらすことができる。例えば、ＴＨ１サイトカインの産生は、抗腫瘍活性、抗ウイルス／抗細菌活性、およびアジュバント活性と相関すると考えられているが、ＴＨ２サイトカイン産生は、自己免疫疾患を抑えると考えられている。
【０１２９】
坑腫瘍免疫療法
現在では、免疫系と癌の間には強い関連性が見られ、免疫系を適切に刺激することによって、数多くの癌に影響を及ぼす可能性があると理解されている。α−ＧａｌＣｅｒでマウスを処理すると、肝臓、肺およびリンパ節への腫瘍転移を抑えることが明らかになっている。α−ＧａｌＣｅｒまたはα−ＧａｌＣｅｒ負荷ｉＤＣを注射された進行癌患者での２つの第Ｉ相臨床試験において、検出可能な数のＶα２４＋Ｖβ１１＋ＮＫＴを治療前から持っていた患者において免疫系の明らかな活性化が観察された。持続的な腫瘍退縮は見られなかったが、毒性のない安定した病状が何人かの患者で観察され、血清腫瘍マーカーまたは腫瘍サイズの一時的な減少を示す患者さえもいた。数回の臨床試験におけるα−ＧａｌＣｅｒの顕著な抗癌活性の欠如は、ＩＦＮ−γの効果がＩＬ−４（ＴＨ２サイトカイン）によって相殺され、その結果、最終的な有益性が生じないせいかもしれない。
【０１３０】
一つの態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体には、抗腫瘍免疫療法の活性薬剤としての用途がある。ＴＨ１に偏向するよう、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を設計することができる。これらのＴＨ１偏向α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＴＨ１サイトカイン応答を誘導して、癌に苦しむ動物の生存期間を増加させたり、癌に苦しむ動物の腫瘍増殖を遅らせたり、Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞など腫瘍浸潤性リンパ球を増加させたりすることができる。
【０１３１】
一つの典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、抗腫瘍療法において治療薬として作用する。これらのα−ＧａｌＣｅｒ類似体を癌ワクチンとして投与することができる。別の典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を併用免疫療法で使用することができるが、その場合、α−ＧａｌＣｅｒ類似体を既存の癌ワクチンと併用する。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のいずれかで治療される被検対象は、癌に苦しんでいたり、癌リスクが増大していたり、または前癌性前駆体を有していたりする。
【０１３２】
いくつかの典型的な実施態様において、本開示は、Ｃ３、Ｃ１０〜Ｃ１７、Ｃ１９〜Ｃ２８、Ｃ３０、およびＣ８−５からなる群から選択される化合物、またはその塩もしくは混合物の有効量を被検対象に投与することを含む抗腫瘍免疫療法を提供する。
【０１３３】
本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌効果を判定するために、一つの典型的な実施態様では、同系免疫応答性マウス（それぞれＣ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃ）において、ＴＣ１細胞株による転移性肺癌のマウスモデル、および４Ｔ１細胞株による乳癌の皮下腫瘍モデルを研究した。図３８Ａは、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１で処理されたマウスの肺表面上の腫瘍小結節数の減少による代表的な実験結果を示している。ＴＣ１腫瘍担持マウスの生存率に対する、第Ｉ〜ＩＶ群からのさまざまな本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＶ投与の効果が図３７に示されている。Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ１７以外の多くの試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体で、生存期間の顕著な延長および体重減少の低下が観察された。さらに、８種類の試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体、Ｃ３、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、およびＣ１６には、Ｃ１よりも有意に高い抗癌効果がある。次に、４Ｔ１乳癌を担持するマウスに対する、ＩＶ投与された８種類のα−ＧａｌＣｅｒ類似体およびＣ１の抗腫瘍効果を評価した。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１によって処理した１６日後にマウスの腫瘍サイズが減少したことが、図３８Ｂに一例として示されている。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体はすべて、対照と比較すると、腫瘍増殖を抑え、かつ生存期間を延長させることができ、すべてが、Ｃ１よりも効果的であった。図３９Ａ。これらの知見に基づき、最も活性が高い、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のいくつか（Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１６）およびＣ１のＳｕｂＱ送達の効果を試験した。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ送達によって、対照と比較すると、腫瘍増殖を抑え、かつ生存期間を延長することができた。α−ＧａｌＣｅｒ類似体であるＣ１３、Ｃ１４、およびＣ１６Ｃは、Ｃ１よりも有意に腫瘍サイズを抑えた。ただし、生存期間に対するそれらの効果には、Ｃ１の効果と有意な違いがなかった（図３９Ｂ）。Ｃ１は、ＩＶ経路よりもＳｕｂＱ送達で統計的に優れた効能を示したが（図４０）、投与経路は、試験された残余のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗腫瘍効果に顕著な影響を及ぼさなかった（図３９Ａ〜Ｂ）。α−ＧａｌＣｅｒ類似体のＳｕｂＱ注射を受けたマウスは、ＩＶ処理されたマウスよりも病的状態の程度が低いように見えたが、ＳｕｂＱ投与後のサイトカイン／ケモカインの血清中濃度の低下と矛盾しない。
【０１３４】
これら新規のα−ＧａｌＣｅｒ類似体の治療プロトコルを最適化するために、本発明者らは、経路、頻度、および投与量に特に重点を置いて、担腫瘍マウスにおける抗腫瘍効果を評価した（図４１〜４４参照）。その結果、最適な投与スケジュールは、週１回、マウス１匹あたり０．１μｇのα−ＧａｌＣｅｒをＩＶ投与することであることが示された。これは、黒色腫のみならず、乳癌および肺癌を担持するマウスの治療にも適用可能である（図４３および図４４参照）。新規のα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理すると、Ｔ、ＣＤ８Ｔ、ＮＫ、およびＮＫＴなど腫瘍浸潤性リンパ球が増加した（図４５参照）。図４１Ａ〜Ｂは、異なった投与経路の影響を示している。（図Ａ）ＢＡＬＢ／ｃマウスにマウス乳癌細胞４Ｔ−１をＳｕｂＱ接種した。腫瘍接種した３日後、マウスを、４週間にわたって週２回、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（マウス１匹あたり２μｇ）で処理した。３日おきに３３日間、腫瘍容積を記録し、７０日間まで生存しているかを観察した。左図：乳癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線；右図：腫瘍増殖曲線。（図Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種して、４週間にわたり週２回、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（マウス１匹あたり２μｇ）で（ＩＶまたはＳｕｂＱ）処理した。左図：肺癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線；右図：体重の変化。
【０１３５】
図Ｃは、投与頻度の影響を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウス肺癌細胞ＴＣ−１をＩＶ接種して、４週間にわたり週２回または週１回、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（マウス１匹あたり２μｇ）で（ＩＶまたはＳｕｂＱ）処理した。左図：肺癌担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線；右図：体重の変化。
【０１３６】
図４３および図４４は、最適化されたプロトコルによる、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗癌効果の評価を示している。図４３は、肺癌細胞（ＴＣ１）をＩＶ接種、または黒色腫細胞（Ｂ１６）をＳｕｂＱ接種され、その後、４週間にわたり週１回、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ２３、Ｃ２６、Ｃ３０、７ＤＷ８−５）（マウス１匹あたり０．１μｇ）でＩＶ処理されたＣ５７ＢＬ／６マウスを示す。図Ａは、ＴＣ１担持マウスのカプラン・マイヤー生存率曲線を示し、図Ｂは、Ｂ１６腫瘍の増殖曲線を示す。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体はすべて、ＴＣ−１担持マウスの生存期間を有意に延長させた。また、Ｂ１６担持マウスを本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体で処理したときには、腫瘍の顕著な縮小が見られた。図４４Ａ〜Ｂは、マウスにおける腫瘍増殖のリアルタイム評価を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、（Ａ）肺癌細胞（ＴＣ１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ）または（Ｂ）乳癌細胞（４Ｔ１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ）をＳｕｂＱ接種して、４週間にわたり週１回、賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ２３、Ｃ３０、７ＤＷ８−５およびＣ１７）でＩＶ処理した（マウス１匹あたり０．１μｇ）。インビボにおける腫瘍の生体発光画素を測定し、ＩＶＩＳ装置により計算した。左図：生体発光の定量データ；右図：腫瘍担持マウスの代表的な画像。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較したとき；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較したとき。肺癌細胞を接種されたマウスにおいて、α−ＧａｌＣｅｒ類似体のＣ３０、Ｃ２３、およびＣ８−５は、対照およびα−ＧａｌＣｅｒのどちらと比較しても、腫瘍増殖を顕著に減少させた。興味深いことに、これらのα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ３０、Ｃ２３、およびＣ８−５はすべて、上記の結果に示されているように、ＴＨ１に偏向した応答を引き起こすことが分かっている。乳癌を接種されたマウスにおいて、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ８−５は、対照およびα−ＧａｌＣｅｒのどちらと比較しても、腫瘍増殖を顕著に減少させた。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１７は、対照と比較して、腫瘍増殖を顕著に減少させたが、α−ＧａｌＣｅｒでも同様の結果であった。興味深いことに、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１７は、上記の結果に示されているように、ＴＨ２に偏向した応答を生じさせることが分かっている。これらの結果から、ＴＨ１サイトカインの産生が抗腫瘍活性と相関しているという考えが確認される。
【０１３７】
図４５は、典型的な実施態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体が、肺癌および黒色腫の腫瘍において、どのようにＴＨ１に偏向した腫瘍浸潤性リンパ球を誘導するかを示している。図Ａ〜Ｄは、肺癌中の腫瘍浸潤性リンパ球を示している。賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ２３、Ｃ３０、Ｃ８−５；０．１μｇ／マウス、週１回）で処理された、ＴＣ１腫瘍を担持しているＣ５７ＢＬ／６マウスから２１日目に採取した腫瘍の単一細胞懸濁液を、（図Ａ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、（図Ｂ）ＣＤ８  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４−／ＣＤ８＋）、（図Ｃ）ＮＫ（ＮＫ１．１＋／ＣＤ３−）、および（図Ｄ）ＮＫＴ（ＮＫ１．１＋／ＣＤ３＋）について染色し、ＤＭＳＯに対して標準化した。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ３０は、対照およびα−ＧａｌＣｅｒのどちらと比較しても、肺癌において顕著かつ有意にＴＨ１に偏向した腫瘍浸潤性リンパ球の数を増加させた。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２３およびＣ８−５も、（ＣＤ３＋Ｔ細胞に対する）対照と比較しても、また、（ＣＤ８Ｔ細胞、ＮＫおよびＮＴに対する）対照およびα−ＧａｌＣｅｒのどちらと比較しても、肺癌において顕著かつ有意に腫瘍浸潤性リンパ球の数を増加させた。図Ｅ〜Ｈは、黒色腫における腫瘍浸潤性リンパ球を示している。賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ２３、Ｃ３０、Ｃ８−５；０．１μｇ／マウス、週１回）で処理された、Ｂ１６黒色腫を担持しているＣ５７ＢＬ／６マウスから２１日目に採取した腫瘍の単一細胞懸濁液を、（図Ｅ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、（図Ｆ）ＣＤ８  Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４−／ＣＤ８＋）、（図Ｇ）ＮＫ（ＮＫ１．１＋／ＣＤ３−）、および（図Ｈ）ＮＫＴ（ＮＫ１．１＋／ＣＤ３＋）について染色し、ＤＭＳＯに対して標準化した。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２３、Ｃ８−５、およびＣ３０はすべて、対照およびα−ＧａｌＣｅｒのどちらと比較しても、黒色腫において顕著かつ有意にＴＨ１に偏向した腫瘍浸潤性リンパ球の数を増加させた。＊、ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯと比較したとき；＃、ｐ＜０．０５、Ｃ１と比較したとき。
【０１３８】
アジュバント免疫療法
ペプチド免疫原、タンパク質免疫原、多糖免疫原およびＤＮＡ免疫原に対するアジュバント効果
アジュバントは、免疫された生物種において抗原と併用されると、免疫応答を強化する化合物である。８０年以上の間、アジュバントは、ワクチンの効果を高めるために利用されてきた。弱毒型の感染性生物を含む生ワクチンは、一般的に、それ自体で問題なく作用する。しかし死生物を含むワクチン（不活性化ワクチン）または感染性生物の断片またはそれらの毒素を含むワクチン（無細胞ワクチンまたは組換えワクチン）は、一般に、それらの効果を強化するためにアジュバントを必要とする。ほとんどの場合、誘導される応答のタイプ（１型または２型）が、ワクチンの予防効果に大きな影響を与える。代替アジュバントには、特定の型の応答を助長する傾向がある。しかし、アジュバントの選択は、機能的に予測が不可能であることによって、また、商業的な制約および利用可能性によっても複雑なものになっている。
【０１３９】
ミョウバンとして知られているアルミニウム塩は、通常の予防ワクチン用に合衆国内で使用を認可された唯一のアジュバントである。しかし、アルミニウム塩は、ヒトにおいて、また動物においても、専らＴＨ２型応答（例えば、ＩＬ−４産生）への変化を増大させることが分かっている。アルミニウム塩がＴＨ１細胞媒介型免疫応答（例えば、ＩＦＮ−γ産生）を誘導することができないことが、それをアジュバントとして使用することへの主な制約である。特に、細胞内でのウイルス感染および細菌感染に対するワクチンにとって、細胞傷害性Ｔ細胞応答がないことは致命的である。
【０１４０】
本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、ＴＨ１偏向免疫原応答を開始させるように合成することができる。したがって、ＴＨ１型指向性免疫応答を示す改良型ワクチン、または、ＴＨ２型に加えて、免疫応答のＴＨ１型への変化も可能にするワクチンを、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をアジュバントに用いて実現することができる。そのため、ワクチン投与と同時に、一つ以上のα−ＧａｌＣｅｒ類似体をアジュバントとして投与する。さらに、すでに利用可能なワクチンに本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を加えれば、ＴＨ１型応答の誘導が可能になるため、該ワクチンを改良型にして提供することも可能であろう。
【０１４１】
いくつかの典型的な実施態様において、本開示は、Ｃ３、Ｃ１１、Ｃ１３〜Ｃ１４、Ｃ１６〜Ｃ１８、Ｃ２０、Ｃ２２〜Ｃ２４、Ｃ２６、Ｃ８−５、およびＣ８−６からなる群から選択される化合物、またはその塩もしくは混合物の有効量、およびワクチン成分を含むワクチンを提供する。場合によっては、ワクチン成分は、死滅微生物、生きた弱毒化ウイルス微生物、類毒素、および不活性化もしくは弱毒化された微生物の断片からなる群から選択される。場合によっては、微生物は細菌または真菌である。場合によっては、類毒素は破傷風またはジフテリアである。場合によっては、ワクチン成分は、該ワクチンを投与される被検対象において免疫応答を誘導することができる。場合によっては、本化合物は免疫学的アジュバントとして作用し、ワクチン成分によって免疫系を刺激して誘導される免疫応答を変更または増強することができる。その結果、被検対象は、本化合物を含まない場合よりも強くワクチンに応答するようになる。
【０１４２】
一つの態様において、適当なワクチンは、ペプチド免疫原、タンパク質免疫原、多糖免疫原、またはＤＮＡ免疫原を含むことができる。別の態様において、ワクチンは、一つ以上の市販ワクチン、例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、ロタウイルス、ジフテリア、破傷風、百日咳、ｂ型インフルエンザ桿菌、肺炎球菌、ポリオウイルス、インフルエンザ、はしか、流行性耳下腺炎、風疹、水痘、髄膜炎菌、ヒトパピロマウイルス、帯状疱疹、ライム病ボレリア、腸チフス、日本脳炎、狂犬病、ダニ媒介脳炎、コレラ、黄熱病、Ｈ５Ｎ１、西ナイル、パルボウイルス、猫鼻気管炎、カリシウイルス、汎白血球減少症ウイルス、オウム病クラミジア、ネコ白血病、イヌジステンパー、イヌアデノウイルス、イヌパラインフルエンザ、気管支敗血症菌、イヌコロナウイルス、ランブル鞭毛虫、レプトスピラ病（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｂａｃｔｅｒｉｎ）、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、パラインフルエンザ３型ウイルス、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、気腫疽菌、セプチカム（Ｓｅｐｔｉｃｕｍ）ヘモリチカム（Ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、セプチカム（Ｓｅｐｔｉｃｕｍ）ノビイ（Ｎｏｖｙｉ）、テタニ（Ｔｅｔａｎｉ）、ソルデリ（Ｓｏｒｄｅｌｌｉｉ）ペルフリンゲンス（Ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、モラクセラ・ボビス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｂｏｖｉｓ）、マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、パスツエラ・マルトシダ（Ｐａｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、レプトスピラ・ポモナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｐｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・ハルジオ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・グリポティフォーサ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・カニコーラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ）、および黄疸出血症レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ）などから選択することができる。
【０１４３】
被検対象において化合物、組成物、またはワクチンの免疫原性を促進する方法であって、本開示に記載されたアジュバントをさらに含む化合物、組成物、またはワクチンを該被検対象に投与することを含み、該アジュバントが、該化合物、組成物、またはワクチンの免疫原性を促進する方法が提供される。
【０１４４】
タンパク質ワクチンに対するアジュバント効果
α−ＧａｌＣｅｒ、および本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、破傷風類毒素（ＴＴ）不活化毒素など、既存のタンパク質ワクチンに対する免疫応答を促進する能力について試験した。０日目と２８日目に、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体なしで、またはこれとともに、ＴＴをマウスにワクチン接種した。抗ＴＴ特異的抗体を測定するために、血清を毎週採取した。図４６Ａは、ＴＴに対する抗体応答に対する、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のアジュバント効果を示している。図４６Ａに示されているように、抗ＴＴ特異的ＩｇＧ抗体の産生は、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）およびα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ１１）によって促進された。抗ＴＴ産生の動態は、従来からのアジュバントであるミョウバン（以下「Ａｌｕｍ」）によって誘導されものと同じであったが、Ｃ１は、Ａｌｕｍよりも顕著に高い抗体産生を誘導した。従来のＴＴ＋ＡｌｕｍにＣ１またはＣ１１を組み合わせると、抗体応答は、従来のワクチンのほぼ２倍までさらに増強された。これらの知見は、Ｃ１およびＣ１１が、Ａｌｕｍと相乗作用して免疫応答をさらに促進するアジュバント効果を持っていたことを示している。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１のアジュバント効果は、著しく持続的であった。２回目に免疫した２０週間後、マウスに（Ａｌｕｍもα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１も用いずに）ＴＴを単独で追加免疫投与したところ、１週間後、抗ＴＴ抗体が急速に増加した。図４６Ｂは、２回目にワクチン接種した２０週間後の遅延抗原追加投与に対するα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１の効果を示している。Ｃ１またはＣ１１で処理したマウスにおける抗体量は、ＴＴ＋Ａｌｕｍを与えられたマウスの２倍あり、図４６Ｂに示されているように、ＴＴのみを注射されたものの２５倍以上あった。これらの知見は、Ｃ１またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１１が、増強された追加免疫応答をもたらすメモリーＴ細胞およびＢ細胞に対して効果をもつことを示唆した。
【０１４５】
ペプチドワクチンに対するアジュバント効果
Ａ型インフルエンザウイルスのＨ１Ｎ１亜型のＭ２タンパク質の細胞外ドメインを含むペプチドワクチンによるアジュバント効果を評価した。このペプチドワクチンのアミノ酸配列はＭＳＬＬＴＥＶＥＴＰＩＲＮＥＷＧＣＲＣＮであった。０週目、３週目、および６週目に、本開示に係るさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１４、Ｃ１７）とともに、またはこれらなしで、５μｇまたは４５μｇのＭ２ｅペプチドをメスＢＡＬＢ／ｃマウスにワクチン接種した。図４７は、Ｍ２ｅペプチドワクチンに対する、さまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体のアジュバント効果を示している。図４７に示されているように、３回目に免疫した２週間後、Ｍ２ｅペプチドは単独で、５μｇおよび４５μｇの抗原投与量に対して、それぞれ１．８×１０５および５．４×１０５の抗Ｍ２ｅ特異的ＩｇＧ力価を誘導した。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を併用すると、１０〜３０倍高い抗Ｍ２抗体価が得られた。試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体のうち、Ｃ１１が、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）と等しく、Ｃ１よりも力価が３倍高い、最も優れたアジュバント効果を示した。これ以外のα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ９、Ｃ１４、およびＣ１７）はＣ１と同等であった。これらの知見は、α−ＧａｌＣｅｒおよびその類似体が、ペプチド抗原に対して強力なアジュバント活性をもち、Ｃ１１のように、アシルテールに芳香環を含むものが最も強力であることを示唆している。
【０１４６】
ＤＮＡワクチンに対するアジュバント効果
Ｈ５ＤＮＡコンストラクト（ｐＨＡ）を、鳥インフルエンザウイルスの完全長Ｈ５コンセンサス配列を含むプラスミドとして調製した。要するに、遺伝的変異性をカバーし、それによって異なるＨ５Ｎ１株全般にわたる交差防御を誘導するために、５００種類のＨ５Ｎ１ウイルス株のＨＡ遺伝子から、コンセンサスＨＡ配列を導き出して、これをワクチン開発に用いた。Ｈｏら（Ｊｉｎら、（２００２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６（５）：２３０６−２２１６）によって開発されたＨＩＶ用のＤＮＡワクチンであるＡＤＶＡＸと同様の戦略に基づいて、ＨＡのコンセンサス配列をｐＶＡＸベクターの中に構築してＤＮＡワクチンの候補とした。初回免疫した３週間後のマウスにおける、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）とともに、またはそれなしでＨ５ＤＮＡワクチン（ｐＨＡ）を投与した効果を図４８Ａに示す。α−ＧａｌＣｅｒとともに、またはそれなしで、５〜４５μｇのＨ５ＤＮＡワクチンによりマウスを免疫すると、５〜３０μｇのＨ５ＤＮＡでは、α−ＧａｌＣｅｒによって抗Ｈ５応答が促進されるが、４５μｇで横這いになることが示された。図４８Ｂは、２回目に免疫して２週間後の抗Ｈ５力価に対する、低用量のＨ５ＤＮＡワクチンおよびα−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）の効果を示している。Ｈ５ＤＮＡ投与量を０．２〜５μｇに減らすと、試験された全ての低投与量について、ｖ−ＧａｌＣｅｒのアジュバント効果がはっきりした。図４８Ｃは、Ｃ１とともに、またはそれなしで、低用量のＨ５ＤＮＡワクチンを投与した２週間後の、ベトナム交雑インフルエンザ株ＮＩＢＲＧ−１４によるウイルス抗原投与に対する防御を示している。α−ＧａｌＣｅｒなしでは、２０ＬＤ５０のＮＩＢＲＧ−１４ウイルスを抗原投与されると、＜２μｇで処理された動物はすべて生き残ることができなかったが、α−ＧａｌＣｅｒとともに０．２〜１μｇのｐＨＡで処理された動物では、８０％の防御が見られた（図４８Ｃ）。これらの知見によって、ＮＩＢＲＧ−１４に対する防御免疫の誘導に対して、低用量のｐＨＡワクチンと併用されたときにα−ＧａｌＣｅｒがアジュバント効果をもつことが確認される。
【０１４７】
他の本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体も、上記で使用されたものと同様のプロトコルおよびスケジュールを用いて（違いがあるときは特記する）、マウスにおけるｐＨＡワクチンと併用されるアジュバントとして試験した。６〜７週齢のメスＢＡＬＢ／ｃマウスに、ｐＨＡとともに、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、電気移動法により筋肉内にワクチン接種し、４週間後に同じ処方で１回追加免疫した。２回目のワクチン接種の２週間後に血液試料を採集し、ＥＬＩＳＡ法により抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体価について試験した。図４９Ａは、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ３、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、およびＣ１６とともに、またはそれらなしで、０．２μｇのｐＨＡで免疫した後のマウスにおける抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ３）の力価を示している。図４９Ｂは、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１０、Ｃ１３、Ｃ１８、Ｃ１９、およびＣ２０とともに、またはそれらなしで、０．２μｇのｐＨＡで免疫した後のマウスにおける抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ４）の力価を示している。図４９Ｃは、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体のいくつかについて、上記したようにウイルス投与した後のマウス生存率を示している。図５０Ａは、０．５μｇのｐＨＡおよび表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体で免疫した後の抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ４）を示している。図５０Ｂは、上記したようにウイルス投与した後のマウス生存率を示している。図５１は、（図Ａ）０．１μｇのｐＨＡ（ｐＨＡ０．１対ｐＨＡ０．１＋Ｃ２６：一方向ＡＮＯＶＡクルスカル−ワリス検定でｐ＜０．０１）、または（図Ｂ）０．２μｇのｐＨＡ（ｐＨＡ０．２対ｐＨＡ０．２＋Ｃ１７：ｐ＜０．０１、ｐＨＡ０．２対ｐＨＡ０．２＋Ｃ２６：一方向ＡＮＯＶＡクルスカル−ワリス検定でｐ＜０．０５）、および表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体で免疫した後の抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ５）のマウス力価を示している。図５２は、（図Ａ）０．１μｇのｐＨＡ、または（図Ｂ）０．２μｇのｐＨＡ、および０．１μｇまたは１μｇの表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体で免疫した後の抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体（ＡＹ６）のマウス力価を示している。０．２μｇのｐＨＡ投与量で、アジュバントとして特に有効な本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、Ｃ１３、Ｃ１７、Ｃ２０、およびＣ２６であった。
【０１４８】
図５３は、０．２μｇのｐＨＡｃと、α−ＧａｌＣｅｒ、または表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ３、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２３、Ｃ２４、Ｃ２６、７ＤＷ８−５、ならびにミョウバンで免疫した後のマウス抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体である（図Ａ）ＡＹ３、（図Ｂ）ＡＹ４、（図Ｃ）ＡＹ５、および（図Ｄ）ＡＹ１５の力価を示している。その結果、Ｃ１、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１７、Ｃ２６、および７ＤＷ８−５が、抗体価を高めるという点で、その他のものより優れたアジュバント活性をもっていたことを示している。ＨＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞応答が、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体をアジュバントとして使用することによって促進されるか否かを調べるために、Ｃ１、Ｃ２６、および７ＤＷ８−５をさらに評価した。図５４に示されているように、α−ＧａｌＣｅｒ類似体アジュバント群では、ＩＦＮ−γ分泌細胞が増加した。さらに、ＮＩＢＲＧ−１４ウイルスを抗原投与した後、Ｃ１アジュバント群、Ｃ２６アジュバント群、および７ＤＷ８−５アジュバント群の生存率は、ミョウバンアジュバント群またはｐＨＡのみの群のものより高かった（図５５）。
【０１４９】
本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体のアジュバント効果は、単回投与によるｐＨＡワクチン接種でも明らかになった。単回投与免疫した３週間後に、アジュバントとしてＣ２６およびＣ１で処理されたマウスでは、抗ＨＡ特異的ＩｇＧ抗体が増加した（図５６）。Ｃ１、Ｃ２６、または７ＤＷ８−５で処理されたマウスは、ＮＩＢＲＧ−１４ウイルス抗原投与による致死量の抗原投与から効果的に保護され、生存率は、８７．５％〜１００％であった。これらの知見は、単回ワクチン接種という状況で、Ｃ１、Ｃ２６、および７ＤＷ８−５が良好なアジュバント活性をもつことを示している。
【０１５０】
多糖免疫原に対するアジュバント効果
グロボＨは、六糖であるが（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１）、結腸癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、子宮内膜癌、肺癌、前立腺癌、および乳癌など多様な上皮細胞腫瘍上で過剰発現することが、モノクロ−ナル抗体ＭＢｒ１（ＩｇＭ）およびＶＫ−９（ＩｇＧ３）を用いて明らかになっている。正常な組織では、グロボＨは、免疫系に到達不能と考えられている部位である細胞内腔境界にある上皮細胞の先端面に限局されている。そのため、グロボＨは、乳癌およびその他の上皮癌の免疫療法にとって理想的な標的抗原である。
【０１５１】
α−ＧａｌＣｅｒ、ならびに本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２３および７ＤＷ８−５のアジュバント効果を、ジフテリア類毒素ワクチンに結合したグロボＨ（ＧＨ−ＤＴ）について評価した。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、２週間隔で３回、グロボＨ−ＤＴ／α−ＧａｌＣｅｒまたはグロボＨ−ＤＴ／α−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＭ注射した。３回目にワクチン接種した２週間後、血清を採集し、グリカンマイクロアレイを用いて、ＩｇＧ抗グロボＨ特異的抗体およびＩｇＭ抗グロボＨ特異的抗体について、それぞれ１：４８０および１：２４０の希釈率で試験した。図５７Ａに示されているように、ＧＨ−ＤＴは単独では、抗グロボＨ抗体を全く誘導しなかったが、Ｃ１または７ＤＷ８−５が添加されると、顕著にＩｇＧ抗体産生を誘導した。一方、ＩｇＭの産生は、７ＤＷ８−５アジュバント群でのみ観察され、Ｃ１処理群では観察されなかった（図５７Ｂ）。結論として、Ｃ１または７ＤＷ８−５をＧＨ−ＤＴワクチンに添加すると、糖鎖抗原に対する特異抗体の産生を促進することができた。
【０１５２】
抗微生物免疫療法
さらに別の態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、例えば、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、多細胞寄生虫、および異常タンパク質（プリオン）など微生物性病原体の存在が原因で起こる感染症の治療において使用される。
【０１５３】
いくつかの典型的な実施態様において、本方法は、Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３〜Ｃ１６、Ｃ２３、およびＣ３０からなる群から選択される化合物、またはその塩もしくは混合物の有効量を被検対象に投与することを含む抗微生物免疫療法を被検対象に提供する。
【０１５４】
抗ウイルス効果
抗ウイルス薬は、特にウイルス感染症を治療するのに使用される一群の薬物である。抗生物質と同様、特定のウイルスには特定の抗ウイルス薬が使用される。これらは宿主にとって比較的無害であるので、感染症を治療するために使用することができる。抗ウイルス薬は、わずかなウイルス性疾患を治療するためにしか利用できない。２種類の有用な抗ウイルス薬が、ヌクレオシド類似体およびインターフェロンである。インターフェロンには、α−インターフェロン、β−インターフェロン、およびγ−インターフェロンという３つのクラスがある。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、ウイルスに感染した細胞から分泌されるサイトカインである。これらは、隣接する細胞上にある特異的受容体に結合し、それらの細胞をウイルスによる感染から守る。これらは、ウイルスによる侵入に対する即応型宿主防御応答の一部をなしている。このような直接的な抗ウイルス効果に加え、α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、感染細胞の表面上にクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子が発現されるのも促進し、このようにして、特異的免疫細胞に対するウイルス抗原提示を促進する。これらの存在は、ウイルス感染の急性期の体液において証明することができる。現在、組換え型のα−インターフェロンおよびβ−インターフェロンが利用可能であり、慢性のＢ型およびＣ型の肝炎ウイルス感染症を治療するために使用されている。しかし、発熱、倦怠感、および体重減少などの副作用のせいで、その使用は制限されてきた。γ−インターフェロン（免疫インターフェロン）は、ＴＨ１型ＣＤ４細胞によって分泌されるサイトカインである。その機能は、特異的Ｔ細胞が媒介する免疫応答を促進することである。
【０１５５】
インターフェロンの作用メカニズムには以下が含まれる：１）特異的免疫応答の促進。インターフェロンは、感染細胞の表面上におけるＭＨＣクラスＩ分子の発現を増加させることにより、特異的細胞傷害性Ｔ細胞が感染細胞を認識して死滅させる機会を増やすこと；および２）直接的抗ウイルス効果：ａ）ウイルスｍＲＮＡの分解、およびｂ）タンパク質合成の阻害、これは、新たな細胞への感染を予防する。
【０１５６】
一つの態様において、本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、さまざまな感染性ウイルスの抗ウイルス薬治療および予防に使用される。本開示に係る方法によってか、または本開示に係るＮＫＴ、ワクチン、または組成物を用いて行うことができる防御免疫応答刺激が望ましい感染性ウイルスの例は、以下のものを含むが、これらに限定されない：レトロウイルス科（例えば、ヒト免疫不全ウイルス、例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、またはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶとも呼ばれる）、またはＨＩＶ−ＩＩＩ；およびその外の分離株、例えば、ＨＩＶ−ＬＰ）；ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキ−ウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を引き起こす系統）；トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（例えば、ハンタウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス、およびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えば、アフリカブタコレラウイルス）；ならびに未分類のウイルス（例えば、海綿状脳症の病原因子、デルタ型肝炎の病原因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトと考えられている）、非Ａ非Ｂ型肝炎因子（クラス１＝内部感染するもの、クラス２＝非経口感染するもの（すなわち、Ｃ型肝炎）；ノーウォークウイルスおよびその関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）。
【０１５７】
ウイルス抗原投与−インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１感染
α−ＧａｌＣｅｒ類似体のＩＰ注射による治療
図５８は、インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１感染後０〜１２日目におけるマウスの生存率を示している。マウスを、２μｇのα−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ２、Ｃ３、Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１４、およびＣ１６で処理し（ＩＰ注射）、対照ＤＭＳＯと比較した。３つの異なった処理計画を試験した。図５８Ａは、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｈ１Ｎ１ウイルスを抗原投与した３０分後から処理したときの生存率を示している。対照と比較したときのＰ値は、Ｃ１：０．４５５４、Ｃ２：０．５１４９、Ｃ３：０．５７６４、Ｃ９：０．５４６６、Ｃ１１：０．２０３１、Ｃ１６：０．０３５９であった。図５８Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｈ１Ｎ１ウイルス（ＷＳＮ）投与の２週間前から処理したときの生存率を示している。マウスは、２μｇの対照、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体で、−１４日間、−１０日間、−３日間、０．５時間、２日間、４日間、６日間、８日間、１０日間、および１２日間（ＩＰ注射）処理された。ウイルス投与の２週間前に処理を始め、週２回投与した場合には、試験したすべての類似体（Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１３、およびＣ１４）によるα−ＧａｌＣｅｒ処理で、マウスは、有意に高くなった生存率を示した。対照と比較したときのＰ値は、Ｃ１：０．０００１１６、Ｃ９：０．０００１２６、Ｃ１１：０．０２６２７、Ｃ１３：０．００００２７、およびＣ１４：０．０００１４７であった。図５９は、より高用量のＨ１Ｎ１ウイルスを感染させたマウスの生存の累積比率を示している。図５９Ａでは、Ｈ１Ｎ１（ＷＳＮ）で抗原投与する２週間前から、マウスの処理を開始した。マウスは、２μｇの対照、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体で、−１４日間、−１０日間、−３日間、０．５時間、２日間、４日間、および６日間（ＩＰ注射）処理された。第１群は対照群である。第６群は、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）で処理された。第７群は、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１３で処理された。第８群は、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１４で処理された。第９群は、α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６で処理された。α−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１６は生存期間を延ばし、Ｃ１６に直接的な抗ウイルス効果があることを示した。
【０１５８】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体の鼻腔内投与による治療
図５９Ｂは、Ｈ１Ｎ１を感染させたマウスの生存の累積比率を示している。Ｈ１Ｎ１（ＷＳＮ）によるウイルス抗原を投与する１時間前に、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、対照、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１３、Ｃ１４、またはＣ１６で鼻腔内経路によって処理した。Ｃ１３は生存期間を延長させ、直接的な抗ウイルス効果があることを示唆した。一般的に、一定のα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、直接的な抗ウイルス効果を及ぼすか、または免疫刺激を介して間接的に作用することができる。図６０は、インビトロにおけるメイディン・ダ−ビ−・イヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞の細胞変性効果（ＣＰＥ）を示している。ＭＤＣＫ細胞を、１０μｇ／ｍｌの賦形剤、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１３、Ｃ１４、またはＣ１６のうちの一つで４時間、前処理した後、１０ＴＣＩＤ５０にてＦＬＵ−Ａウイルス血清型Ｈ１Ｎ１（ＷＳＮ）を感染させた。感染させた４８時間後にＭＤＣＫ細胞のウイルス力価を測定した（右図）。α−ＧａｌＣｅｒ、および試験された３つのα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、インビトロにおいて、Ｈ１Ｎ１ウイルスの侵入／複製をわずかに阻害した。
【０１５９】
抗菌効果
ペニシリンが１９４０年代に臨床使用されるようになって以来、抗菌薬は何百万もの生命を救ってきた。しかし、抗菌耐性という長い影が、抗生物質以前の時代への回帰をもたらす脅威となっている。α−ＧａｌＣｅｒなどの合成糖脂質および天然の細菌性糖脂質が、ＮＫＴ細胞を活性化させて宿主の抗菌機能に貢献したＣＤ１ｄリガンドであることが実証された。α−ＧａｌＣｅｒの抗菌活性は、結核菌感染症の寛解、緑膿菌による肺感染の排除で実証された。マウスにおけるスフィンゴモナス・カプスラ−タ（Ｓｐｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｃａｐｓｕｌａｔｅ）およびエールリキア・ムリス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｍｕｒｉｓ）による感染も、糖脂質によるＮＫＴ細胞の活性化によって軽減した。
【０１６０】
本開示に係る方法によってか、または本開示に係るＮＫＴ、ワクチン、または組成物を用いて行うことができる防御免疫応答刺激が望ましい感染性細菌の例は、以下のものを含むが、これらに限定されない：ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、ライム病ボレリア菌（Ｂｏｒｅｌｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラニューモフィリア菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコバクテリア種（例えば、ヒト型結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、トリ型結核菌（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサイ（Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌（緑色）（ｖｉｒｉｄａｎｓ  ｇｒｏｕｐ））、大便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクタ−種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）、腸球菌種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）、クラミジア種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリア種（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウェルシュ菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクタ−・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツエラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス種（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、モリニホルム連鎖桿菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネ−マ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、ラセン菌トレポネ−マ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、イスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）、スフィンゴモナス・カプスラ−タ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｃａｐｓｕｌａｔａ）、および野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）。
【０１６１】
細菌排除の促進−スフィンゴモナス・カプスラ−タ感染マウス
スフィンゴモナス・カプスラ−タは、空気中や水中など多くの場所に存在する一般的な環境由来細菌である。これは、そのコロニーが黄色をしているため、栄養寒天平板上で容易に同定することができる。大部分のグラム陰性細菌とは異なり、スフィンゴモナス・カプスラ−タは、宿主の抗菌活性を活性化させるために動物によって利用されるリポ多糖類（ＬＰＳ）を含んでいない。糖脂質抗原の抗菌活性は、糖脂質が結合したＣＤ１ｄ分子によるＮＫＴ細胞の活性化を介しているため、スフィンゴモナス・カプスラ−タ感染症の病気モデルを用いて抗菌効力を評価することは、糖脂質結合によって活性化されるＮＫＴ介在経路の影響だけを見ることになる。６〜８週齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスに、スフィンゴモナス・カプスラ−タ細胞をＩＰ注射した。注射した４時間後に、対照、α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体（Ｃ３、Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１４、Ｃ１６、またはＣ１７）を５０μｇ／ｋｇまたは１００μｇ／ｋｇにてマウスにＩＰ注射した。細菌に感染させた２４時間後、マウスから肝臓を切り出してホモジナイズした。希釈した試料を栄養プレート上で平板培養して、肝ホモジネート中のスフィンゴモナス・カプスラ−タのコロニー形成単位（ＣＦＵ）を測定した。３７℃にて４８時間インキュベ−トした後、コロニーを計測した。図６１Ａは、１００μｇ／ｋｇのα−ＧａｌＣｅｒ、ならびにＣ１１、Ｃ１４、およびＣ１６で処理された群のＣＦＵ数が、細菌感染後２４時間で、対照群よりも有意に低くなっていることを示している。これらのα−ＧａｌＣｅｒ類似体の抗菌効力を確認するために、別の試験を行い、同一の病気モデルにおいて５０μｇ／ｋｇで感染マウスを処理して実験を反覆した。図６１Ｂは、Ｃ１１、Ｃ１４、Ｃ１６、およびＣ１５で処理されたマウスの抗菌効力が、未処理群と比較すると有意であることを示している。効力のあった３つの群、Ｃ１、Ｃ１１、およびＣ１５の間で、肝臓１グラムあたりのＣＦＵ値における差異は、統計学的に有意ではない。図６３は、５０μｇ／ｋｇのＣ２３およびＣ３０で処理された群の（肺中の）ＣＦＵ数が、未処理群と比較して有意であることを示している。同様の結果が、マウスをＣ２３およびＣ３０で処理した後の肝臓のＣＦＵ数で見られた。
【０１６２】
細菌排除の促進−肺炎桿菌感染マウス
肺炎桿菌は、肝膿瘍を引き起こすグラム陰性菌で、台湾における糖尿病患者では重篤な病気となりつつある。図６２は、Ｃ１およびＣ１４がともに、注射後、マウスの肺および肝臓において細菌負荷を有意に低下させうることを示している。ＢＡＬＢ／ｃＢｙｌメスマウスに、単回投薬量の生きた肺炎桿菌を強制経口投与した。細菌感染させてから４時間後と８時間の２回、１００μｇ／ｋｇの対照、α−ＧａｌＣｅｒ、またはα−ＧａｌＣｅｒ類似体Ｃ１４をマウスに注射した。注射した２４時間後、各マウスから肝臓と肺を採集して、ホモジナイズした。細菌数は、上記のようにして測定した。
【０１６３】
Ｃ１４による細菌排除の程度は、図６２に示されているように、Ｃ１による排除よりも高いことが分かった。
【０１６４】
抗真菌効果
１型ヘルパーＴ細胞（ＴＨ１）媒介性免疫は、さまざまな感染性真菌に対する防御において決定的な役割を果たしている。さらに別の態様において、本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を抗真菌療法に用いることができる。抗真菌薬を用いて、真菌によって引き起こされる感染症を治療し、免疫系が弱い患者において真菌性感染症が進行するのを防ぐことができる。真菌性感染症は、免疫抑制患者における罹患率および死亡率をもたらす主な要因の一つとなっている。
【０１６５】
真菌性疾患に対する宿主の先天的防御は、貪食細胞（ＰＭＮＬおよびマクロファージ）の作用に基づいており、これらの細胞の数と機能はともに、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）によって調節することができる。一方、獲得防御は、抗原提示細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、およびＮＫの間の相互作用を必要とする、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γのようなサイトカインによって操作および調節される細胞性免疫および液性免疫を含む。日和見真菌に対する宿主防御においてサイトカインを介した免疫活性化が重要であるかもしれないことが、いくつかの研究対象となっており、カンジダおよびアスペルギルスによる感染症に対する新規の抗真菌戦略について、いくつか興味深い問題を提起してきた。サイトカインのさまざまな潜在的な役割については既述されている。まず、真菌およびそれらの抗原への曝露は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の放出を誘導することができる。これらのサイトカインは、次に、カンジダ種およびアスペルギルス種に対する貪食細胞の抗真菌機能を活性化または促進することができる。
【０１６６】
本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体を単独または抗真菌薬と併用して投与することによって行うことができる防御免疫応答刺激が望ましい感染性真菌の例は、以下のものを含むが、これらに限定されない：クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストマイセス・デルマティティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）。その他の感染性生物（すなわち、原生生物）は、プラスモジウム種（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、ライシュマニア種（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、シストソ−マ種（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）およびトキソプラズマ種（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）などである。
【０１６７】
自己免疫疾患の免疫療法
自己免疫は、自己抗原および組織に向けられた炎症反応をもたらす、免疫系における調節の破綻が原因となっている。自己免疫疾患は、合衆国において、癌および心臓病に次いで第三位の最も一般的な病気のカテゴリ−であり、人口の約５％〜８％、すなわち１４００万〜２２００万人が罹っている。Ｔリンパ球による自己抗原の破壊を伴う自己免疫疾患には、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、および関節リウマチがあるが、これらに限定されない。
【０１６８】
現在の定説によれば、心筋炎などの炎症性自己免疫疾患は、主に、ＩＦＮ−γを原型サイトカインとするＴＨ１応答に一次的に起因するものであり；一方、ＩＬ−４が中心となるＴＨ２応答は、自己免疫を軽減させると考えられている。本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体は、ＴＨ２に偏向した免疫原応答を開始するように設計することができるため、これらのα−ＧａｌＣｅｒ類似体を自己免疫疾患用の免疫治療薬として用いることができる。
【実施例】
【０１６９】
α−ＧａｌＣｅｒの糖脂質類似体、試薬、およびマウス
α−ＧａｌＣｅｒ（Ｃ１）、および本開示に係る合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体を、Ｆｕｊｉｏら、（２００６）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２８：９０２２−９０２３；Ｘｉｎｇら、（２００５）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：２９０７−２９１６；Ｋｉｎｊｏら、（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  ４３４：５２０−５２５；Ｗｕら、（２００６）Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  １０３：３９７２−３９７７；およびＷｕら、（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  １０２：１３５１−１３５６で既述された手法により、カラムクロマトグラフィ法によって合成および精製した。これらの文献は、参照して本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
図２に示されているように、本開示にかかる合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体は、その化学構造に基づいて４つの群に分けられた。第Ｉ群：Ｃ２、Ｃ３、およびＣ１４は、細菌起源のものである。第ＩＩ群：Ｃ４、Ｃ５、およびＣ９は、セラミドへのＯ−結合の硫黄修飾（Ｃ４）、またはガラクトース部分の３”−ＯＨにおける硫酸基（Ｃ５、Ｃ９）を含む。第ＩＩＩ群：Ｃ６〜Ｃ８、Ｃ８−５、Ｃ８−６、Ｃ１０〜Ｃ１１、Ｃ１５〜Ｃ１６、およびＣ１８〜Ｃ３３は、それらのアシルテールにある芳香環で修飾されている。第ＩＶ群：Ｃ１２、Ｃ１３、およびＣ１７は切断型フィトスフィンゴシンを含む。これら新たな類似体のうち、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１６、Ｃ２７、Ｃ２８、Ｃ２９は、脂肪アミド鎖がさまざまな長さのフェニル基で修飾されている（Ｐｈ）；Ｃ１８、Ｃ２２は、フェニル環においてメトキシ基（−ＯＭｅ）で修飾されている；Ｃ１９、Ｃ２３、７ＤＷ８−５は、フェニル環においてフルオリド基（−Ｆ）で修飾されている；Ｃ２０、Ｃ２４、７ＤＷ８−６は、フェニル環においてトリフルオロメチル基（−ＣＦ３）で修飾されている；Ｃ２１、Ｃ２５、Ｃ２６は、フェニル環においてフェニル基（−Ｐｈ）で修飾されている；Ｃ３０は、フェニル環において４’−フルオロフェニル基（−Ｐｈ−Ｆ）で修飾されている；そして、Ｃ１７は、切断型フィトスフィンゴシンを含む。
【０１７１】
スフィンゴ糖脂質化合物Ｃ１２およびＣ１３の合成が、略図１（図３）に要約されている。これらの化合物に関する特性データについては後述する。
【０１７２】
化合物Ｃ１３（ｌｏｔ．ＭＦＪ３−０１７−１）：
【０１７３】
【化１６】
2010523724.tif 000018
化合物Ｃ１２（ｌｏｔ．ＭＦＪ３−０１８−１）：
【０１７４】
【化１７】
2010523724.tif 000019
【０１７５】
【化１８】
2010523724.tif 000020
合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体はすべて、元来、濃度１〜２ｍｇ／ｍｌで１００％のＤＭＳＯに溶解されていた。インビボ実験のために、マウスに注射する直前に、合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体を食塩水で２０μｇ／ｍｌまたは１μｇ／ｍｌに希釈した。６〜１０週齢の無菌のＢＡＬＢ／ｃ（野生型またはＣＤ１ｄノックアウト型）およびＣ５７ＢＬ／６のメスマウスを、国立研究所動物センター（台北、台湾）から入手した。ＣＤ１ｄ欠損型のＢＡＬＢ／ｃおよびＣ５７ＢＬ／６はそれぞれ、ジャクソン研究所（Ｃ．１２９Ｓ２−ＣＤ１ｔｍ１Ｇｒｕ／Ｊ，Ｕ．Ｓ）から入手したか、Ｓｔｅｖｅ  Ｒ．Ｒｏｆｆｌｅｒ博士（Ａｃａｄｅｍｉａ  Ｓｉｎｉｃａ，Ｔａｉｗａｎ）から提供された。これらのマウスはすべて、無菌動物施設で維持した。
【０１７６】
ヒトＮＫ細胞株、未成熟単球由来樹状細胞、およびＮＫ／ＮＫＴの単離と生成
ナイーブＶα２４ｉＮＫＴ細胞を、間接的に抱合された抗Ｖα２４ｉＴＣＲマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，ＵＳＡ）を用いて分離した。単離された細胞を５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ）存在下でインキュベートし、３日毎に新鮮な培地を補充した。α−ＧａｌＣｅｒまたはフェニル糖脂質でパルスされたＶα２４ｉＮＫＴの生成を次のようにして行った。それぞれが磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）に結合している抗Ｖα２４ｉＴＣＲｍＡｂｓおよび抗ＣＤ１４ｍＡｂｓを連続的に使用して、ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋ）からＶα２４ｉＮＫＴ細胞およびＣＤ１４細胞を単離した。未成熟樹状細胞は、このＣＤ１４細胞から、３００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）および１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下で２日間インキュベートした後生成した。２０００ラドで照射した後、この未成熟樹状細胞を、１０〜１４日間、１００ｎｇ／ｍｌのα−ＧａｌＣｅｒまたはＣ１１と５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下で同系ＣＤ１６１と同時培養した。α−ＧａｌＣｅｒでパルスされたｉＮＫＴ細胞、またはフェニル糖脂質でパルスされたｉＮＫＴ細胞を生成させるために、それぞれ、１００ｎｇ／ｍｌのα−ＧａｌＣｅｒパルスされた照射未成熟樹状細胞またはＣ１１パルスされた照射未成熟樹状細胞でＶα２４ｉＮＫＴ細胞を２度目に刺激した後。すべてのｉＮＫＴ細胞株（ナイーブ株、α−ＧａｌＣｅｒでパルスされた株、またはフェニル糖脂質でパルスされた株）が、フローサイトメトリーによって、Ｖα２４ｉ  Ｔ細胞抗原受容体（９５％純度）を発現することが明らかにされた。ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞は、抗ＣＤ５６マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，ＵＳＡ）を用いて、ヒトロイコパックから単離した。
【０１７７】
α−ＧａｌＣｅｒ類似体でパルスされたヒトＮＫＴ細胞株の生成を、Ｆｕｊｉらの方法に従って行い、これらの細胞を用いて、試験されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体に対するサイトカイン応答を評価した（図５および図６参照）。未成熟ＤＣは、３００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦおよび１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４と２日間インキュベートした後のロイコパック中のＣＤ１４＋細胞に由来していた。照射（３，０００ラド）後、このｉＤＣを、１００ｎｇ／ｍｌのα−ＧａｌＣｅｒおよび１０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２の存在下で自家性ＣＤ１６１＋細胞と一緒に１０日間培養した。この刺激を反復した後、ＮＴ細胞株が生成し、ＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋／Ｖα２４ｉＴＣＲ＋（純度９９％）を発現することが示された。ヒト単球に由来する未成熟ＤＣを生成させるために、３００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦおよび１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４の存在下でロイコパックの中のＣＤ１４＋細胞を６日間培養した。これらのＤＣは、未成熟表現型（ＣＤ１４−ＣＤ８０＋ＣＤ８６＋ＣＤ８３ｗｅａｋＨＬＡ−ＤＲ＋）を有し、成熟ＤＣよりも高いＣＤ１ｄ発現を示した。このｉＤＣに、３μｇ／ｍｌのさまざまなα−ＧａｌＣｅｒ類似体をパルスし、４８時間後、それらの表現型および形態を調べた。
【０１７８】
間接的に抱合した抗ＣＤ１６１マルチソート型マイクロビーズを用いて、ＴＣＲ活性化実験（図１９参照）に使用するナイーブＮＫＴ（ＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋）を単離し、抗ＣＤ３マイクロビーズによってさらに分離した。この単離細胞を、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２の存在下でインキュベートし、３日毎に新鮮な培地を補充した。
【０１７９】
インビトロ・ヒトＮＫＴ細胞サイトカイン分泌アッセイ
９６ウェル平底プレートの中で、１０μｇ／ｍｌの本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体の存在下、Ｖα２４ｉヒトＮＫＴ細胞（１×１０５）を５×１０４個の被照射未成熟ＣＤ１４＋ＤＣと同時培養した。１８時間後に採集された上清中のサイトカイン／ケモカインを、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  ２２−ｐｌｅｘ  Ｍｕｌｔｉ−Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて定量し、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）１００ＴＭ装置によって測定した。
【０１８０】
ｉＮＫＴのインビトロにおける増殖
ｉＮＫＴ細胞増殖実験に使用されるヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ混合物）（図１３および図１４参照）を、抗ＣＤ５６マイクロビーズを用いてヒトロイコパックから単離した。ヒトＣＤ５６＋細胞（ＮＫ／ＮＫＴ混合物）を、３μｇ／ｍｌの表示されているα−ＧａｌＣｅｒ類似体、または０．３％ＤＭＳＯで、２日目に１８時間パルスされたか（図１３および１４参照）、または１０ｎｇ／ｍｌもしくは１００ｎｇ／ｍｌで２日目に１８時間パルスされた（図１５参照）４×１０５個の自家性未成熟ＣＤ１４＋ＤＣと培養した。３日目に、この懸濁細胞を新しい培養皿に移し、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２存在下で培養し、３日毎に新鮮な培地を補充した。ＮＫ／ＮＫＴ混合物中のＣＤ１６１＋／Ｖα２４ＴＣＲ＋細胞の集団を、フローサイトメトリーによって９日目にゲートし、Ｖα２４ｉＮＫＴの総数を計測した。
【０１８１】
ヒトＮＫＴのＴＣＲ活性化
一つの典型的な実施態様において、ＨｅＬａ、ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ、または自家性ｉＤＣを、２４穴プレート上で、１０μｇ／ｍｌのＣ１、Ｃ１１、Ｃ１３、もしくはＣ１７、またはＤＭＳＯとともに２時間インキュベートしてから、３×１０５個のナイーブＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋ＮＫＴを加えた（図１９参照）。別の典型的な実施態様において、ＨｅＬａまたはＨｅＬａ−ＣＤ１ｄに、１００ｎｇ／ｍｌのＣ１、Ｃ１６、Ｃ２３、Ｃ８−５、Ｃ８−６、もしくはＣ２６、またはＤＭＳＯを２時間負荷してから、３×１０５個のナイーブＣＤ１６１＋／ＣＤ３＋ＮＫＴを加えた（図２０参照）。５〜１０分間刺激した後、懸濁液中の細胞を試験管に移し、ＰＢＳで洗浄して、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒを用いて４℃にて溶解させた。ライセート中のリン酸化−ＣＤ３ε（ホスホ−チロシン）、リン酸化−ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ１８５／Ｔｙｒ１８７）、リン酸化−ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ１３３）、リン酸化−Ｓｙｋ（ホスホ−チロシン）、リン酸化−ｐ３８（ＴＨｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）、リン酸化−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２）、リン酸化−Ｌｃｋ、リン酸化−Ｌａｔ、リン酸化−ＳＴＡＴ３（Ｓｅｒ７２７）、リン酸化−ＳＴＡＴ５Ａ／Ｂ（Ｔｙｒ６９４／６９９）、およびリン酸化−Ｄａｐ−７０（ホスホ−チロシン）の濃度を、アッセイプロトコルに従って、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍによって評価し、Ｌｕｍｉｎｅｘ１００装置によって測定した。数値を総投入タンパク質の量で標準化した。
【０１８２】
インビトロＣＤ１ｄ−テトラマーアッセイ
製造業者のプロトコルに従い、１μｇの可溶性二価マウスＣＤ１ｄ−ＩｇＧ１融合タンパク質（マウスＣＤ１ｄ−ＩｇＧ１テトラマー、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、１０モルの各α−ＧａｌＣｅｒ類似体と、３７℃および中性ｐＨにて一晩インキュベートした。この糖脂質負荷ＣＤ１ｄ−ＩｇＧ１テトラマーを、マウスＮＫＴと４℃にて６０分間インキュベートした後、ＦＩＴＣ−抱合抗マウスＩｇＧ１  
ｍＡｂｓ（Ａ８５−１）とともにインキュベートした。この細胞も、ＰＥ抱合抗ＮＫｍＡｂｓおよびＡＰＣ抱合抗ＣＤ３ｍＡｂｓ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で表面染色した。
【０１８３】
マウス脾細胞の調製
表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体または賦形剤で処理されたＢＡＬＢ／ｃマウスを、注射した７２時間後に殺処理した。脾臓を回収した。要するに、脾臓を７０μｍのストレーナーに押しつけて通し、赤血球を溶解させた後、有核細胞をハンクス液中に再懸濁し、４℃にて５分間、３００ｇで遠心分離してから、ＦＡＣＳ解析を行った。
【０１８４】
マウス脾細胞亜集団の測定
表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（２μｇ／マウス）または賦形剤（ＰＢＳ中の１％ＤＭＳＯ）で処理されたＢＡＬＢ／ｃマウスを７２時間後に殺処理し、脾臓を回収した。要するに、脾臓を７０μｍのストレーナーに押しつけて通し、赤血球を溶解させた後、有核細胞をハンクス液中に再懸濁し、４℃にて５分間、３００ｇで遠心分離してから、ＦＡＣＳ解析を行った。抗ＣＤ３ｅ−アロフィコシアニン、抗ＣＤ４−ＰＥ、抗ＣＤ８α−アロフィコシアニン−シアニド−ｄｙｅ７、抗ＣＤ１１ｃ−アロフィコシアニン、抗ＣＤ２３−ＰＥ、抗４５Ｒ−アロフィコシアニン、抗ＣＤ６９−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ８０−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ８６−ＰＥ、抗Ｌｙ６Ｇ−ＰＥ、およびＵ５Ａ２−１３Ａｇ＋−ＰＥは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。
【０１８５】
マウス脾細胞のＮＫＴ亜集団およびＮＫ亜集団の測定
表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（０．１μｇ／マウス）または賦形剤（ＰＢＳ中の０．１％ＤＭＳＯ）で処理されたＢＡＬＢ／ｃマウスを７２時間後に殺処理し、脾臓を回収した。要するに、脾臓を７０μｍのストレーナーに押しつけて通し、赤血球を溶解させた後、有核細胞をハンクス液中に再懸濁し、４℃にて５分間、３００ｇで遠心分離してから、ＦＡＣＳ解析を行った。抗ＣＤ３ｅ−アロフィコシアニンおよびＮＫマーカーであるＵ５Ａ２−１３Ａｇ＋−ＰＥは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。
【０１８６】
血清サイトカイン／ケモカイン
賦形剤または本開示にかかる合成α−ＧａｌＣｅｒ類似体を投与した０、２、１８、３６、４８、および７２時間後にマウス血清試料を採集した。さまざまなサイトカイン／ケモカインの血清中濃度を、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）Ｍｏｕｓｅ  ２１−ｐｌｅｘ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍによって測定し、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）１００ＴＭ装置で読み取った。。
【０１８７】
マウスの肺癌モデル
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢、メス）に、０．１ｍｌのＰＢＳ中に懸濁された２×１０５個の同系肺癌（ＴＣ１）細胞をＩＶ注射した。１時間したところで、Ｃ５７ＢＬ／６マウス群（ｎ＝５）を、４週間にわたり週２回、表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体（マウスあたり２μｇ）または賦形剤をＩＶ投与で処理した。体重を１月間記録し、生存しているかを５０日間観察した。
【０１８８】
マウスの乳癌モデル
ＢＡＬＢ／Ｃマウス（６〜８週齢、メス）の背中の右下部に、２×１０５個の同系乳癌（４Ｔ１）細胞をＳｕｂＱ接種した。ＢＡＬＢ／ｃマウス群（ｎ＝６）を、腫瘍接種した３日後から４週間にわたり週２回、表示されている本開示に係るα−ＧａｌＣｅｒ類似体または賦形剤をＩＶもしくはＳｕｂＱで処理した。このα−ＧａｌＣｅｒ類似体を、腫瘍接種部位の遠位にある部位に注射した。腫瘍容積を、長軸（ａ）、短軸（ｂ）、および高さ（ｃ）に沿ってノギスで測定して、１ヶ月間３日おきに記録した。腫瘍容積（ｍｍ３）をａ×ｂ×ｃの式により算出し、生存しているかを７０日間観察した。
【０１８９】
マウスにおける腫瘍増殖のリアルタイム評価
Ｘｅｎｏｇｅｎ社のＩＶＩＳ（登録商標）２００シリーズ、およびＬｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ（登録商標）ソフトウェア（Ｘｅｎｏｇｅｎ，Ｕ．Ｓ．）によってマウスの画像を得て解析した。黒色腫モデルでは、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢、メス）に、０．１ｍｌのＰＢＳ中で懸濁した２×１０５個の同系黒色腫細胞（Ｂ１６）を静脈内注射した。３日後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群（ｎ＝５）を、表示してある治療プロトコルに従って、表示されている糖脂質で静脈内から処理した。２４日間３日おきに腫瘍容積を記録した。
【０１９０】
フローサイトメトリー解析によるリンパ球の浸潤
対照マウスおよび糖脂質処理マウスから、腫瘍移植後２１日目に無菌的に腫瘍を取り出し、培養ペトリ皿の中で手作業により２〜３ｍｍの切片に切り分けた。そして、小さな組織片を、ＲＰＭＩ１６４０中０．０１％のＤＮＡ分解酵素、０．０１％のヒアルラニダーゼ（ｈｙａｌｕｒａｎｉｄａｓｅ）、および０．１％のコラーゲナーゼ（すべてＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．製）によって、持続的に攪拌しながら、３７℃で２〜３時間分解した。次に、得られた単一細胞懸濁液を、ＰＢＳ中０．１％のＦＣＳで２回洗浄し、標準的なフローサイトメトリー法により染色した。これらの組織を浸潤するリンパ球の亜集団を検出するために、以下の抱合抗体をＦＡＣＳに使用した：ＦＩＴＣ−抗ＣＤ３、ＰＥ−抗ＮＫ、ＡＰＣＣｙ７−抗ＣＤ８、（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。
【０１９１】
免疫組織化学染色
２×１０５個のＴＣ１腫瘍細胞をｉ．ｖ注射され、３週間後殺処分されたＢ６マウスから肺小結節を取り出して、パラフィン包埋切片にした。厚さ３μｍの切片を５６℃のオーブンで一晩処理し、その後、脱パラフィンおよび熱による抗原回復（ｐＨ９のＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液中、１２１℃で７．５分間）を行い、一般的なリンパ球抗原の指標としての抗ＣＤ４５ＲＡ抗体（クローンＲＡ３−６Ｂ２；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）とともに、１：１００の力価で４℃にて一晩インキュベートした。ホースラディッシュペルオキシダーゼを抱合した二次抗体およびＤＡＢ基質を加えることによって、結合した一次抗体を検出する。マウントする前に、すべての切片をヘマトキシリンで対比染色した。
【０１９２】
統計学的解析
ＰＲＩＳＭソフトウェアによるデータ解析のために、スチューデントの独立両面ｔ検定を用いた。グラフは３回反復実験の平均値を示し、エラーバーはＳＤを表している。ログランク検定を用いて、各群の腫瘍防御の差異を解析した。ｐ＜０．０５を、統計学的に有意であるとみなした。
【０１９３】
抗菌効果実験
α−ＧａｌＣｅｒの糖脂質類似体
抗細菌研究で使用されたα−ＧａｌＣｅｒ類似体の構造が、図２のＣ３、Ｃ９、Ｃ１１およびＣ１４〜Ｃ１７に示されている。α−ＧａｌＣｅｒ類似体の保存液を、１ｍｇ／ｍｌのＤＭＳＯ溶液として調製した。使用前に、α−ＧａｌＣｅｒ類似体をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で１０μｇ／ｍｌに希釈した。
【０１９４】
動物および細菌
６〜８週齢のメスのＣ５７Ｌ／６マウスおよびＢＡＬＢ／ｃ−Ｂｙｌマウスを研究に使用した。マウスを、自由に餌および水を摂ることができるプラスチック製ケージに収容し、実験開始の少なくとも１週間前に順応させた。スフィンゴモナス・カプスラータ細菌株（ＡＴＣＣ  １４６６６）は、台湾のＢＣＲＣから得たものであった。肺炎桿菌株（ＮＴＵＨ−ＫＰ２０４４）は、台湾国立大学病院のＪ．Ｔ．Ｗａｎｇ博士から贈られたものである。
【０１９５】
スフィンゴモナス・カプスラータ感染マウスを用いた抗細菌効力実験
６〜８週齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスに、５×１０８個のスフィンゴモナス・カプスラータ細胞をＩＰ注射した。マウスを、群あたり４〜６匹の処理群および対照群に分けた。感染の４時間後、処理群のマウスに、５０μｇ／ｋｇまたは１００μｇ／ｋｇの試験α−ＧａｌＣｅｒ類似体をＩＰ注射し、対照群のマウスには同じ体積のＰＢＳを注射した。細菌感染の２４時間後、すべての群のマウスを殺処理した。マウスから肝臓を取り出し、組織ホモジナイザーを用いて、０．９％ＮａＣｌ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０の中でホモジナイズした。肝臓ホモジネート中のスフィンゴモナス・カプスラータのコロニー形成単位（ＣＦＵ）を、栄養培地プレート上で希釈試料を平板培養して測定した。３７℃で４８時間インキュベートした後、コロニー数を数えた。
【０１９６】
肺炎桿菌感染マウスを用いた抗細菌効力実験
ＢＡＬＢ／ｃ−Ｂｙｌメスマウス（一群あたり１０匹）に、単回投与量（１０６ＣＦＵ）の生きた肺炎桿菌を強制経口投与した。処理群のマウスには、細菌に感染させた４時間後および８時間後の２回、１００μｇ／ｋｇの試験α−ＧａｌＣｅｒ類似体を注射した。対照群のマウスには、４時間目および８時間目にＰＢＳを注射した。感染の２４時間後に、すべてのマウスを殺処理した。各マウスから肝臓および肺を採集してホモジナイズした。上記と同様に細菌数を測定した。
【０１９７】
統計学的解析
試験α−ＧａｌＣｅｒ類似体の相対的効力を、処理群の器官ＣＦＵの値を対照群の値と比較して示し、また効力の有意性を、それぞれ０．０５または＜０．０１のｐ値で示した。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図１９Ｅ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
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【図２０Ｅ】
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【図２０Ｆ】
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【図２０Ｇ】
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【図２０Ｈ】
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【図２０Ｉ】
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【図２０Ｊ】
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【図２０Ｋ】
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【図２０Ｌ】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２２Ｄ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２６Ｅ】
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【図２６Ｆ】
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【図２６Ｇ】
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【図２６Ｈ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【図２８Ｅ】
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【図２８Ｆ】
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【図２８Ｇ】
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【図２８Ｈ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図２９Ｃ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３０Ｄ】
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【図３０Ｅ】
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【図３０Ｆ】
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【図３０Ｇ】
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【図３０Ｈ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３１Ｄ】
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【図３１Ｅ】
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【図３１Ｆ】
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【図３１Ｇ】
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【図３１Ｈ】
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【図３１Ｉ】
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【図３１Ｊ】
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【図３１Ｋ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３２Ｃ】
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【図３２Ｄ】
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【図３２Ｅ】
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【図３２Ｆ】
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【図３２Ｇ】
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【図３２Ｈ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３４】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【図３５Ｄ】
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【図３５Ｅ】
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【図３５Ｆ】
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【図３５Ｇ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３６Ｄ】
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【図３６Ｅ】
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【図３６Ｆ】
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【図３６Ｇ】
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【図３６Ｈ】
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【図３６Ｉ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３７Ｄ】
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【図３８】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４１Ｃ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４２Ｃ】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４５Ｃ】
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【図４５Ｄ】
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【図４５Ｅ】
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【図４５Ｆ】
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【図４５Ｇ】
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【図４５Ｈ】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ｂ】
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【図４８Ｃ】
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【図４８Ｄ】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【国際調査報告】
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2010523724.tif 000214
2010523724.tif 000215