(57)【要約】  本発明は組織培養した参（オタネニンジン）不定根そのものを含む化粧料組成物およびその製造方法に関する。本発明の化粧料組成物は、組織培養した参不定根の抽出物を別途に製造して含むものではなく、組成物に含まれた、組織培養した参不定根そのものから有用成分の浸出を誘導することを特徴とする。本発明の組成物は前記浸出した有用成分およびその含量が持続的に維持され、また、組成物内の参不定根を視覚的に認知できるという点で使用者の信頼感と使用満足度が向上される。また、前記化粧料組成物の製造方法は、組織培養した参不定根から有用成分を抽出、分離、および精製するための別途の過程を行う必要がないため、工程が単純化し、費用が節減され、且つ前記工程による有用成分の消失も防止できる長所がある。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織培養した参不定根そのものおよび化粧料成分が配合されることを特徴とする、化粧料組成物。
【請求項２】
前記化粧料組成物は、組成物総重量に対し、０．１〜５重量％の組織培養した参不定根そのものと、９５〜９９．９重量％の化粧料成分が配合されることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項３】
前記参は、山参、人参、および長脳参からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項４】
前記化粧料成分は、溶媒、体質顔料、無機顔料、有機顔料、無機粉体、乳剤、化粧料に配合できる界面活性剤、シリコン含有界面活性剤、増粘剤、安定剤、防腐剤、酸化防止剤、および香料からなる群から一つ以上選択して組み合わせることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項５】
前記組成物総重量に対し、溶媒成分として多価アルコールを１〜５重量％用いており、保湿効果を示すことを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項６】
前記組成物総重量に対し、溶媒成分として多価アルコールを５〜３０重量％用いており、シワ改善効果を示すことを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項７】
前記組成物総重量に対し、溶媒成分として多価アルコールを５〜３０重量％および炭素数１〜４のアルコールを１〜５０重量％用いており、美白効果を示すことを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項８】
通常の化粧料成分を混合する第１ステップ；および
前記第１ステップの化粧料成分混合物に組織培養した参不定根そのものを添加する第２ステップを含むことを特徴とする、組織培養した参不定根そのものを含む化粧料組成物の製造方法。
【請求項９】
前記化粧料組成物が、有用成分として保湿、シワ改善、または美白に有効な成分を含むことを特徴とする、請求項８に記載の化粧料組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は組織培養した参（オタネニンジン Panax ginseng C.A.Meyer）不定根（adventitious root）そのものを含む化粧料組成物およびその製造方法に関する。本出願は２００７年１月１７日に韓国特許庁に提出された韓国特許出願第１０−２００７−０００５２３７号の出願日の利益を主張し、その内容の全ては本明細書に含まれる。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、植物抽出物を含有する機能性化粧品は、抽出物を精製する際に培養、回収、洗浄、乾燥、浸漬、熟成、および濾過などを含む色々なステップを経て抽出物を収得し化粧料組成物として利用するため、時間的、経済的な費用の面で不利な短所がある。
【０００３】
溶媒を用いた抽出法または超臨界抽出法によれば、短時間内に大量の高純度の成分の抽出を期待できる。しかし、前記方法により抽出された成分は、時間経過に伴い、光、空気、温度などの影響によりそのものが沈澱したり、色変化が発生したりするなどの安定性に問題があり、組成物に添加した時に組成物の性質に影響を与えるという短所がある。
【０００４】
前記抽出物は、十分な熟成期間を経ることなく、大半の場合、短期間、短時間の浸漬や熟成により収得するため、有用成分に対する十分な抽出効果が期待できない短所がある。また、さらなる分離および／または精製ステップを経ずには、有用成分だけを多量に抽出することができないため、抽出物そのものだけで高濃度の有用成分を含有する化粧品を製造するには不利な面がある。
【０００５】
機能性化粧品を購入して使おうとする消費者は、有用成分を含む抽出物含有の有無および含有量を視覚的に確認することができず、単に化粧品のパッケージに書かれている組成含有量を認知して購買し使用するしかない。
【０００６】
前記短所を改善するための方法として、機能性成分を含有する植物の抽出物ではなく、植物そのものを化粧料組成物に含ませて製造する方法が提案された。しかし、前記方法は、植物そのものを滅菌する過程に対する費用が発生し、組成物に添加される植物の大きさなどが異なって品質の均一性が落ちるという短所がある。
【０００７】
最近の組織培養技術を用いた植物の未分化カルスを含む化粧料組成物に関する特許（韓国登録特許第６３７３４２号）が開示されている。しかし、カルスそのものは細胞の機能が定まれていない細胞塊を示すものであり、分化結果物である完全個体が有する有効成分の種類および含量とは大きな差があると知られている。
【０００８】
機能性成分を多量に含有した植物の一例として、ウコギ科（Araliacea）の人参（オタネニンジン  Panax ginseng C.A.Meyer）に属する山参（korean wild ginseng）は、山に自生しているオタネニンジンである。山参は、発芽するとき、花柄が葉および茎と共に成長する顕花植物に属しつつ、被子植物にも属し、半陰生植物である。東医宝鑑では「神草」と記録されており、昔から神秘の霊薬として取り扱われる稀な植物であって、様々な疾病に対する治療剤および補養剤として利用されてきた。
【０００９】
人参（オタネニンジン）の主要成分は配糖体であり、これらの混合物を酸で加水分解すれば、ブドウ糖、ラムノース、スクロース、フルクトースなどの遊離糖とアグリコンが生成され、サポニンの配糖体としてはパナキサジオールとパナキサトリオール、β−シストステロール、およびオレアノール酸が生成される。セスキテルペノイド系の化合物であるパナセン（ｐａｎａｃｅｎ）は固有の香り成分である。その他に、β−シストステロール、スチグマステロール；アルカロイド；ケンフェロール、トリホリン、およびパナセノイドなどのフラボノイド（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ）；Ｂ複合体、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、およびビオチンなどのビタミン類；マンガン、銅、バナジウム、コバルト、ヒ素、ゲルマニウム、リン、アルミニウム、およびニッケルなどの微量元素；ゲルマニウム細胞酵素；およびアミラーゼ、フェノラーゼなどの酵素が含まれていることが明らかになった。
【００１０】
臨床学的研究結果により報告された人参の効能としては、抗糖尿作用、抗癌作用、心臓強化および血圧調整、肝機能強化、胃腸機能強化、ストレス解消および強壮効果、体力（精力）増進、脳機能強化、老化抑制、放射線照射防御作用、貧血回復効果および造血作用、免疫機能増進、消炎作用および虚弱体質改善効果などがある。山参の効能は栽培されたオタネニンジン（人参）と似ているが、薬理的効果面で遥かに優れていると知られている。
【００１１】
山参は天種、地種、人種、長脳参の４種類に分類され、詳細には、自然に山でできて種が落ちて育った天種（天然山参）、野生動物や鳥類が山参の種を食べて山中に排泄して育った地種、人が種をまいて育った人種、および山参の種子を採取して深山の中に種をまいて野生状態で人為的に育てた長脳参(家参)である。一般的には、野生山参は種子をまいても発芽しにくく、たとえ育つといっても数年を生きずに腐ってしまう場合が多いため、栽培が容易ではない非常に稀な植物である。
【００１２】
最近、このような山参の稀貴性と高付加価値性の短所を補完するために、薬として主に用いられる山参の根の組織と一般化された植物組織培養技術を利用して不定根を大量増殖させる方法が知られている。これにより、均一で優れた品質の山参不定根を短期間内に少ない費用で大量培養および生産して色々な食品や原料に用いている。例えば、酒類を製造する時に人参、梅、金などを入れ熟成させて味と香りを改善させたことがあり、飲み物に浸された人参そのものの視覚的効果により製品に対する信頼感を満足させたことがある。しかし、山参不定根そのものを含む化粧料組成物は公知でもなく開示されてもいない。
【００１３】
そこで、本発明者らは、参（オタネニンジン）の有用成分を安定に含有する化粧料組成物の製造に対して研究する最中、組織培養した参（オタネニンジン）不定根そのものを化粧料組成物に添加することにより、前記参不定根から浸出した成分相が均一に維持され、官能テストの結果、満足度が高いことを確認して本発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、組織培養した参不定根そのものが含有している有用成分が自然的、持続的に浸出し維持され、使用者に含まれていた参不定根そのものを視覚的に認知できるようにして有用成分の含有に対する信頼感を与えることができる、組織培養した参不定根そのものを含む化粧料組成物およびその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
前記目的を達成するために、本発明は、組織培養した参（オタネニンジン）不定根そのものおよび化粧料成分が配合されることを特徴とする化粧料組成物を提供する。
本発明の化粧料組成物は、組成物総重量に対し、０．１〜５重量％の組織培養した参不定根と、９５〜９９．９重量％の化粧料成分が配合されることを特徴とする。
本発明の参（オタネニンジン）は山参、人参、および長脳参からなる群から選択することができる。
本発明の化粧料成分は溶媒、体質顔料、無機顔料、有機顔料、無機粉体、乳剤、化粧料に配合できる界面活性剤、シリコン含有界面活性剤、増粘剤、安定剤、防腐剤、酸化防止剤、および香料からなる群から一つ以上選択して組み合わせることを特徴とし、これは当業界の通常の化粧料成分を含む。
前記組成物は、組成物総重量に対し、溶媒成分として多価アルコールを１〜５重量％用いる場合、配合された参不定根から保湿有用成分を浸出させることを特徴とする。
前記組成物は、組成物総重量に対し、溶媒成分として多価アルコールを５〜３０重量％用いる場合、配合された参不定根からシワ改善有効成分を浸出させることを特徴とする。
前記組成物は、組成物総重量に対し、溶媒成分として多価アルコールを５〜３０重量％およびエタノールを１〜５０重量％用いる場合、配合された参不定根から美白有用成分を浸出させることを特徴とする。
また、本発明は、通常の化粧料成分を混合する第１ステップ；および前記第１ステップの化粧料成分混合物に組織培養した参不定根を添加する第２ステップを含むことを特徴とする、組織培養した参不定根そのものを含む化粧料組成物の製造方法を提供する。
本発明の有用成分は保湿、シワ改善、または美白に有効な成分を含む。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の化粧料組成物は組織培養した参不定根から浸出した有用成分およびその含量が持続的に維持され、また、使用者が参不定根の含有を視覚的に認知することにより使用者の信頼感と使用満足度が向上される長所を有する。また、前記化粧料組成物の製造方法は、参不定根から有効成分を抽出、分離、および精製する付加的な過程を行う必要がないため、工程が単純化し、費用が節減され、且つ参不定根そのものから有用成分が浸出するために有用成分が消失しない長所がある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】組織培養した山参不定根の写真である。
【図２】組織培養した山参不定根そのものを含む化粧品と、組織培養した山参不定根の抽出物を含有する化粧品の各々に対する選好度を示すグラフである。
【図３】本発明の実施例の組織培養した山参不定根を含むクリームおよびエッセンスの写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明をより具体的に説明する。
本発明の化粧料組成物は、通常の化粧料成分を混合する第１ステップ；および前記第１ステップの化粧料成分混合物に、５０〜６０℃で熱風乾燥させた、組織培養した参（オタネニンジン）不定根を添加する第２ステップを含むことを特徴とする化粧料組成物の製造方法によって製造される。
【００１９】
前記第１ステップにおける化粧料成分は当業者が通常に行う方法によって混合してもよい。
【００２０】
本発明の組織培養した参不定根は韓国特許第０３５３６３６号明細書に記載された組織培養方法によって収得することを特徴とする。
【００２１】
本発明の化粧料組成物のうちの組織培養した参不定根は組成物総重量に対し０．１〜５重量％含まれることが好ましい。前記参不定根の含量が０．１重量％未満であれば、浸出する有用機能成分の含量が不足し、５重量％を超過すれば、粘度などの製品の性状に影響を及ぼし得るし、使用者に刺激を誘発する可能性がある。
【００２２】
本発明の化粧料組成物において、組成物総重量に対し、化粧料成分のうちの溶媒成分として多価アルコール、好ましくは１，３−ブチレングリコールを１〜５重量％用いる場合、配合された参不定根から保湿有用成分、好ましくは糖質（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ）を浸出させることを特徴とする。
【００２３】
本発明の化粧料組成物において、組成物総重量に対し、化粧料成分のうちの溶媒成分として多価アルコール、好ましくは１，３−ブチレングリコールを５〜３０重量％用いる場合、配合された参不定根からシワ改善有用成分、好ましくはビタミン、サポニン（ｓａｐｏｎｉｎ）類を浸出させることを特徴とする。
【００２４】
本発明の化粧料組成物において、組成物総重量に対し、化粧料成分のうちの溶媒成分として多価アルコール、好ましくは１，３−ブチレングリコールを５〜３０重量％および炭素数１〜４のアルコール、好ましくはエタノールを１〜５０重量％用いる場合、配合された参不定根から美白有用成分、好ましくはフラボノイド類を浸出させることを特徴とする。
【００２５】
本発明の化粧料組成物は、浸出３０日後から組成物内の参不定根から浸出した有用成分を７０％以上含有すると測定され、熟成後１８０日まで有用成分の含量低下が観察されないため、機能性化粧料組成物として有用に利用することができる。
【００２６】
本発明の化粧料組成物に含まれる組織培養した参不定根は、組成物が多様な微生物などによって汚染されれば、参不定根の色と形状が変化することによって化粧料の使用可能の可否および汚染の指標として活用できるため、本発明の組成物を安心して使うことができる（Ｄａｔａ未記載）。
【００２７】
本発明の化粧料組成物は、組織培養した参不定根そのものが含有している有用成分が自然的、持続的に浸出し維持され、また、消費者には参不定根そのものを視覚的に認知させて有効成分の含有に対する信頼感を与えることができ、参不定根が有する自然の香りによって満足感を増大させることができる。
【００２８】
本発明の化粧料組成物は保湿、シワ改善、または美白効果のための化粧品、洗顔剤、およびシャンプーなどに多様に利用することができる。本組成物を添加できる製品の例としては各種スキンローション、皮膚軟化剤、化粧水、アストリンジェント、ローション、乳液、栄養ローション、マッサージクリーム、栄養クリーム、ハンドクリーム、ファンデーション、エッセンス、栄養エッセンス、パック、ソープ、洗顔フォーム、クレジングローション、クレンジングクリーム、ボディーローション、およびボディーソープなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
以下、本発明を下記実施例および実験例によってより詳細に説明する。
但し、下記実施例および実験例は本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の内容が下記実施例および実験例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００３０】
参照例：組織培養した山参不定根の準備
本発明に用いられた組織培養した山参不定根は、ＣＢＮバイオテク（ＣＢＮ  ｂｉｏｔｅｃｈ、韓国）から購入して用いた。前記山参不定根は韓国登録特許第３５３６３６号に記載された方法により組織培養し、大量増殖させたものであり、使用前に５０〜６０℃で熱風乾燥して用いた。
【００３１】
実施例１：組織培養した山参不定根そのものを含む保湿用エッセンスの製造
組織培養した山参不定根そのものを含む保湿用エッセンスを下記表１の組成により製造した。
【表１】
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【００３２】
Ａを十分に分散および湿潤して均一なゲル（Ｇｅｌ）状になるようにし、Ｂを添加して中和した。（Ａ＋Ｂ）にＣを添加し均一に攪拌して可溶化させた後、Ｄを室温で添加して均一に分布するように攪拌し、容器に入れて製品化した。前記方法により製造されたエッセンスは皮膚に塗布した時に持続的に保湿効果を維持した。
【００３３】
実施例２：組織培養した山参不定根そのものを含む保湿用クリームの組成および製造
組織培養した山参不定根そのものを含む保湿用クリームを下記表２の組成により製造した。
【表２】
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【００３４】
本実施例２のクリームは前記実施例１の製造方法と同じ過程により製造された。前記方法により製造されたクリームは皮膚に塗布した時に持続的に保湿効果を維持した。
【００３５】
実施例３：組織培養した山参不定根そのものを含むシワ改善用エッセンスの組成および製造
組織培養した山参不定根そのものを含むシワ改善用エッセンスを下記表３の組成により製造した。
【表３】
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【００３６】
本実施例３のエッセンスは前記実施例１の製造方法と同じ過程により製造された。前記方法により製造されたエッセンスは皮膚に塗布した時に持続的なシワ改善効果を維持した。
【００３７】
実施例４：組織培養した山参不定根そのものを含むシワ改善用クリームの組成および製造
組織培養した山参不定根そのものを含むシワ改善用クリームを下記表４の組成により製造した。
【表４】
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【００３８】
本実施例４のクリームは前記実施例１の製造方法と同じ過程により製造された。前記方法により製造されたクリームは皮膚に塗布した時に持続的なシワ改善効果を維持した。
【００３９】
実施例５：組織培養した山参不定根そのものを含む美白用エッセンスの組成および製造
組織培養した山参不定根そのものを含む美白用エッセンスを下記表５の組成により製造した。
【表５】
2010515723.tif 000007
【００４０】
本実施例５のエッセンスは前記実施例１の製造方法と同じ過程により製造された。前記方法により製造されたエッセンスは皮膚に塗布した時に持続的な美白効果を維持した。
【００４１】
実施例６：組織培養した山参不定根そのものを含む美白用クリームの組成および製造
組織培養した山参不定根そのものを含む美白用クリームを下記表６の組成により製造した。
【表６】
2010515723.tif 000008
【００４２】
本実施例６のクリームは前記実施例１の製造方法と同じ過程により製造された。前記方法により製造されたクリームは皮膚に塗布した時に持続的な美白効果を維持した。
【００４３】
比較例１〜６：組織培養した山参不定根を含まない化粧料の製造
組織培養した山参不定根を含まない化粧料を、前記実施例１〜６の組成から組織培養した山参不定根を除いた組成により製造した。
【００４４】
試験例１：本発明に係る化粧料の効能調査試験
１−１：保湿能試験
本発明に係る化粧料の保湿効果を調査するために皮膚の水分含量測定を実施した。前記実施例１および２、比較例１および２の剤形により製造された化粧料の各々について、２０〜５０才の女性２０人を対象に、塗布前および塗布後の皮膚の水分含量を下記のように測定した。
【００４５】
皮膚の水分含量は、皮膚表面の水分含量を皮膚静電負荷容量計測法で測定する装置である皮膚水分量測定器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ  ８２５、Ｃｏｕｒａｇｅ  ＆  Ｋｈａｚａｋａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して測定した。試験開始１時間前から室内で待機した支援者の上腕部にそれぞれのサンプルを２．０ｍｇ／ｃｍ２の濃度で均一に塗布し、試料を塗布しない他方の上腕部を対照群にした。塗布直前および塗布直後の皮膚水分含量を測定し、その後、１時間、３時間、５時間が経過した時の皮膚水分含量を各々測定した。
【表７】
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【００４６】
【表８】
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【００４７】
表７および８に示すように、実施例１または２の化粧料を塗布した部位の皮膚水分含量は非塗布部位の皮膚水分含量とは明確な差を示した。
【００４８】
製造後３０日以上経過した実施例１または２の化粧料を塗布した部位の水分含量は、比較例１または２の化粧料を塗布した対照群の水分含量に比べて優れていた。また、製造後１８０日が経過した実施例１または２の化粧料を塗布した部位も前記の優れた水分含量を維持することを確認することができた。
【００４９】
１−２：コラーゲン生合成促進試験
本発明に係る化粧料のシワ改善効果を調査するために線維芽細胞を用いたコラーゲン生合成促進試験を実施した。
【００５０】
マウス線維芽細胞（３Ｔ３−Ｌ１、ＫＣＬＢ  １００９２．１、韓国細胞株バンク）を１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ、ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ、ＭＤ、ＵＳＡ）、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ−ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ、ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ、ＭＤ、ＵＳＡ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を利用して３７℃、５％  ＣＯ２の条件下で培養した。細胞培養後、トリプシンを処理して細胞を収得し、２４ウェルプレートに１×１０５細胞数／ｍｌ／ｗｅｌｌになるように分株して２４時間培養した。細胞培養後、新しい培地に前記実施例３および４、比較例３および４の剤形により製造された化粧料を０．０１％に薄めて細胞に処理し、２４時間培養して下記実験に用いた。
【００５１】
前記線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）において実際的にコラーゲンの合成が増加したことを確認するために培養した細胞の培養上清液を採取してコラーゲンの量を定量した。
【００５２】
詳細には、培養上清液１００μｌにｄｙｅ  ｒｅａｇｅｎｔ（ピクリン酸（ｐｉｃｒｉｃ  ａｃｉｄ）１００ｍｌにＳｉｒｉｕｓ  ｒｅｄ  ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＤＨ、ＵＫ）０．１ｇを溶かして製造）１ｍｌを添加し、３０分間室温で徐々に攪拌しながら反応させた。Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄは陰イオン系色素であって、コラーゲンに特異的に結合する。３０分間反応させた後、反応液を５０００×ｇ以上で２０分間遠心分離してコラーゲン−色素結合体を沈殿させた。沈殿物に０．５Ｍ  ＮａＯＨを加え、室温で５分間溶解させた。前記溶液の吸光度をマイクロウェルプレートリーダーにより５４０ｎｍで測定して下記表９および表１０に示し、これを非試験群の吸光度値と比較してコラーゲン生合成促進効果を評価した。
【表９】
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【００５３】
【表１０】
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【００５４】
表９および１０に示すように、実施例３または４の化粧料を処理した線維芽細胞のコラーゲン合成率は、比較例３または４の化粧料を処理した対照群と比較した時に明確な差を示した。コラーゲン合成率は、製造後３０日経過の化粧料処理群から製造後１８０日経過の化粧料処理群まで着実に増加した。化粧料処理群は対照群に比べて約１．２倍のコラーゲン合成率を維持することを確認することができた。
【００５５】
１−３：チロシナーゼ活性阻害試験
本発明に係る化粧料の美白活性を調査するためにチロシナーゼ活性阻害試験を実施した。試験のために、チロシナーゼ酵素液をキノコチロシナーゼ（ｍｕｓｈｒｏｏｍ  ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ、Ｔ−３８２４、１５３０Ｕ／ｍｇ、Ｓｉｇｍａ）が１０００Ｕ／ｍｌになるようにリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）で溶かして準備し、基質溶液をＬ−チロシン（Ｌ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ、４５１６０−０４１０、Ｊｕｎｓｅｉ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏ．Ｌｔｄ）が１．５ｍＭになるようにリン酸塩緩衝液（ｐＨ  ６．５）で溶かして準備した。
【００５６】
前記実施例５および６、比較例５および６の剤形により製造された化粧料を、各々、２０ｇ精製水に添加および攪拌して総体積が５００ｍｌになるようにした後、１Ｎ塩酸を利用してｐＨ２．０に調整した。前記液を分液漏斗に取り、ここに、同量のクロロホルムを入れて激しく振り混ぜ、放置した後、水層を分取した。前記操作を２回繰り返して収得した水層を６０℃で減圧濃縮した後、１Ｎ水酸化ナトリウムを入れてｐＨを６．５に調整し、精製水を入れて２０ｍｌになるようにした。前記液を濾過し、濾液５ｍｌを取ったものにリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）を入れ１０ｍｌにして試験液とした。試験液１７０μｌ、チロシナーゼ酵素液１０μｌを入れ、３７℃で１０分間放置した。ここに基質溶液２０μｌを入れ、３７℃で１０分間反応させた後、直ちに氷中に５分間放置した後、波長４９０ｎｍにおいてＥＬＩＳＡリーダー（ＵＶ  ｍａｘ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ  ０１４１４、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＳＡ）を利用して吸光度を測定した。
【００５７】
前記で測定した吸光度を下記数学式１に代入してチロシナーゼ活性阻害率を計算し、下記表１１および表１２に示す。試験液の代わりにリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）を入れて操作した液をブランク溶液とし、基質溶液の代わりにリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）を入れて操作した液をキャリブレーション溶液とした。
［数学式１］
チロシナーゼ活性阻害率（％）=100-[(A-A')/(B-B')]×100
Ａ：試験液反応後の吸光度
Ｂ：ブランク溶液の反応後の吸光度
Ａ’：試験液のキャリブレーション溶液
Ｂ’：ブランク溶液のキャリブレーション溶液
【表１１】
2010515723.tif 000013
【００５８】
【表１２】
2010515723.tif 000014
【００５９】
前記表１１および表１２に示すように、本発明に係る実施例５および６の化粧料は、製造後３０日〜１８０日間熟成時、山参不定根から美白有効成分が持続的に浸出し、チロシナーゼ活性阻害率が高まることを確認することができた。これにより、美白有効成分の活性が維持されることを確認することができた。
【００６０】
試験例２：組織培養した山参不定根を含む化粧品に対する選好度調査
前記実施例１および２の剤形と比較剤形（山参不定根抽出物を含有するエッセンスおよびクリーム）の各々に対し、２０〜５０才女性１００人を対象に比較品評を実施し、各剤形に対する選好度結果を図２に示す。
【００６１】
図２に示すように、山参不定根そのものが化粧品に含まれていることを視覚的に認知できるという点で、女性１００人のうちの８４人が山参不定根含有剤形を山参不定根抽出物含有剤形に比べて圧倒的に好むことが分かる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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