(57)【要約】 本発明は、（ａ）水と酢酸エチルとに同時にまたは連続的に茶葉を接触させ、茶葉に対する水の重量比が０．５から１０の範囲である分散物を形成する工程；及び（ｂ）前記分散物から酢酸エチルを分離する工程を含み、テアフラビンの酢酸エチル抽出物を生産する、茶葉からのテアフラビンの抽出方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）水と酢酸エチルとに同時にまたは連続的に茶葉を接触させ、茶葉に対する水の重量比が０．５から１０の範囲である分散物を形成する工程；及び
（ｂ）前記分散物から酢酸エチルを分離する工程
を含み、テアフラビンの酢酸エチル抽出物を生産する、茶葉からのテアフラビンの抽出方法。
【請求項２】
前記分散物を形成する工程（ａ）が
（ｉ）水と茶葉を接触させ、均一な茶葉の塊を形成する工程；その後
（ｉｉ）酢酸エチル中に前記塊を攪拌する工程
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）の茶葉に対する水の重量比が０．５から８の範囲である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
工程（ａ）の水と酢酸エチルとの全重量に対する茶葉の重量比が１：１０から１：７５の範囲である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
テアフラビンの酢酸エチル抽出物をパウダーに乾燥する更なる工程を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記茶葉が紅茶葉、ウーロン茶葉、またはそれらの混合物である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記茶葉が紅茶葉である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させる工程（ａ）が５から５０℃の範囲の温度で実施される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させる工程（ａ）が４から９の範囲のｐＨで実施される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。  
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、茶葉からのテアフラビンの抽出のための改良された方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
二つのポピュラーなお茶製品は、紅茶と緑茶である。一般的に、紅茶を調製するために、Camellia sinensis植物の新鮮な葉を干し（摘んだ茶葉の水分を失わせ、特に芳香における化学的／生化学的変化をもたらす工程）、マセレーションし、発酵し（茶葉中の酵素が大気中の酸素を使用して各種の基質を酸化し、着色生成物を生ずる工程）、次いで高温で乾かす（酵素を不活性化するため）。緑茶は、茶葉を発酵に曝す工程が存在しないことを除き、紅茶の製造に使用されるものと同一の方法によって生産される。「ウーロン茶」として既知の中間タイプのお茶を生産するためには、部分的発酵が使用される。
【０００３】
テアフラビンは、お茶の生産の間で生産されるポリフェノールである。ほとんどのテアフラビンは、抗酸化剤であることが既知である。それ故、各種の食料品にテアフラビンを生産して取り込ませることに、食品、飲料、及び健康産業において大きな興味が存在する。テアフラビンは、紅茶及びウーロン茶において存在する。
【０００４】
茶葉は、お茶植物から摘まれた際に、カテキンとして既知のポリフェノールを含む。これらのカテキンは、無色の化合物である。茶葉中の４種の主たるカテキンは、エピカテキン（ＥＣ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン-3-ガレート（ＥＣＧ）、及びエピガロカテキン-3-ガレート（ＥＧＣＧ）である。テアフラビンは、紅茶を生産するために茶葉の酸化的発酵の間で生産される。上述の名称のカテキン（及び他の微量のカテキン類）は、テアフラビン（ＴＦ）として既知の二量体化合物、及びテアルビジン（ＴＲ）として既知の高分子量化合物に酸化的生体変換を受ける。ＴＦの構造はかなりよく研究されており、４種の主たるテアフラビン類は、テアフラビン（ＴＦ１）、テアフラビン-3-モノガレート（ＴＦ２）、テアフラビン-3'-モノガレート（ＴＦ３）、及びテアフラビン-3-3'-ジガレート（ＴＦ４）であり、以下の一般式（Ｉ）の構造を有する：
【化１】
2010539912.tif 000002
［式中、Ｒ及びＲ’は独立にＨ及びＧから選択され、Ｇは没食子酸から由来し、式（２）を有する：
【化２】
2010539912.tif 000003
］。
【０００５】
特に４種の主たるＴＦは、以下の条件の式（１）を有する：
ＴＦ１については、Ｒ＝Ｒ’＝Ｈ；
ＴＦ２については、Ｒ＝Ｇ、Ｒ’＝Ｈ；
ＴＦ３については、Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝Ｇ；
ＴＦ４については、Ｒ＝Ｒ’＝Ｇ。
【０００６】
煎じられた紅茶に特徴的な橙褐色は、ＴＦとＴＲの存在のためである。それらはまた、煎じたお茶に渋みと深みを与える。ＴＲはＴＦよりサイズが大きく色が濃い。
【０００７】
お茶は、世界中で消費されているポピュラーで低コストの飲料である。インド亜大陸でのその消費は特に高い。一般的に、ストレートの紅茶は、一般的にそれ自体健康飲料とて既知である。これにも関わらず、世界中でのお茶の高い一人当たりの消費のため、お茶をよりヘルシーにするための多くの試みがなされている。これを達成するための一つの方法は、お茶中のヘルシーなテアフラビンの量を増大することである。これを実施するための一つのアプローチは、テアフラビンの生産を促進するように酸化的工程を操作することである。別のアプローチは、良質の紅茶葉、またはお茶繊維のような低量の茶製品、茶パウダー等からテアフラビンを抽出し、抽出されたテアフラビンを紅茶に添加し直し、最上質のお茶を調製することである。
【０００８】
本発明者らも、テアフラビン富化されたお茶を提供する際の問題に直面していた。US 2002/0146472-Aは、熱湯に紅茶葉を漬けることによるテアフラビンの抽出方法を記載している。その後の水性の濾液からカフェインを抜く。その後水性抽出物を酢酸エチルで抽出し、粗テアフラビンを得る。同様な方法は、US 5,532,012にも記載されており、この場合テアフラビンは、お茶抽出物のクリームの部分から抽出されている。本発明者らは、これらの既知の従来技術の方法を使用すると、高い抽出収率を得るという問題、または分離工程の問題という特定の問題が存在することを確認した。茶葉からのテアフラビンの抽出のために約２５℃で水を使用すると、得ることができた最大の収率は、約５−８％のオーダーであった。熱湯（約８０−８５℃）を使用した際には、約３０−３５％のテアフラビンが抽出できたが、使用された高温は、長期的な暴露の際にテアフラビンを分解する傾向を有した。アルコールのような有機溶媒を使用すると、ほぼ１００％のテアフラビンが抽出できたが、下流の分離において特定の問題が存在した。テアフラビンは、アルコール及び酢酸エチルのような溶媒に非常に可溶性であり、それ故酢酸エチルのような溶媒を使用する周知の溶媒抽出方法を使用して、アルコールからＴＦを分離することは、全体的な抽出効率を乏しくしてしまった。それゆえ本発明者らは、茶葉からのＴＦの抽出を促進するための方法の開発に着手した。
【０００９】
本出願人の継続インド特許出願722/MUM/2007では、茶葉を尿素の水溶液と接触させる工程を含む、茶葉からのテアフラビンの一つの促進された抽出方法を開示している。この作業の過程で本発明者らは、茶葉からのテアフラビンの促進された抽出を提供する別の方法を開発した。本発明者らは驚くべきことに、選択された量の水と酢酸エチルとに茶葉を接触させた際に、高量のテアフラビンが酢酸エチル相に抽出されることを見出した。
【００１０】
EP 0 552 519(Tea Project, 1993)は、緑の部分的に加工されたまたは紅茶葉を、有機溶媒媒体と一度以上接触させることによる溶媒抽出に供する工程を含むデカフェ茶製品の調製方法を記載しており、そこでは有機溶媒媒体は酢酸エチルを含み、（ｉ）デカフェ茶との接触に事前に供されており、または（ｉｉ）非デカフェ茶との接触に事前に供されており、次いでカフェインが選択的に除去されていることにより、ノンカフェ茶生成物で富化されている。有機溶媒媒体を調製するための好ましい方法は、湿ったデカフェ茶を１０分まで酢酸エチルを含むその重量の有機溶媒と接触させ、かくして生産された有機溶媒を分離し、必要であれば、それぞれ先行する接触（各々）によって生産された有機溶媒媒体と連続的に、湿ったデカフェ茶の更なるバッチと接触させる工程を含む。かくして、茶葉は水と酢酸エチルとの混合物で抽出されているが、かくして生産された溶媒媒体をその後使用し、デカフェ茶を調製している。この文献は、水と酢酸エチルとを含む溶媒混合物が、テアフラビンの促進された抽出のために使用できることは教示していない。
【００１１】
JP 61-130285(Mitsui, 1986)は、茶葉からカテキンを得る方法を記載している。この方法は、互いに適合性の疎水性有機溶媒と親水性有機溶媒の混合物（好ましくはクロロホルムとメタノールとの組み合わせ）で茶葉を洗浄し、茶葉からカフェインと顔料を除去する工程を含み、前記溶媒は茶葉から蒸留される。処理された茶葉を水で湿らせ（０．６５から１．３部の水／茶葉の部の範囲の茶葉に対する水の比で）、有機溶媒（好ましくは酢酸エチル）と接触させ、溶媒にカテキン含有成分を抽出する。この文献は、水と酢酸エチルとの混合物を使用するデカフェ茶葉からのカテキンの抽出を教示しているが、加工された茶葉からのテアフラビン（緑茶葉には存在しないが、発酵されたまたは部分的な発酵された茶葉には存在する）の抽出は教示していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】US 2002/0146472-A
【特許文献２】US 5,532,012
【特許文献３】継続インド特許出願722/MUM/2007
【特許文献４】EP 0 552 519
【特許文献５】JP 61-130285
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
かくして、本発明の目的は、茶葉からのテアフラビンの促進された抽出方法を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、単純で、経済的で、且つスケールアップが容易な方法を使用して、茶葉からのテアフラビンの促進された抽出方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、
（ａ）水と酢酸エチルとに同時にまたは連続的に茶葉を接触させ、茶葉に対する水の重量比が０．５から１０の範囲である分散物を形成する工程；及び
（ｂ）前記分散物から酢酸エチルを分離する工程
を含み、テアフラビンの酢酸エチル抽出物を生産する、茶葉からのテアフラビンの抽出方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、茶葉からのテアフラビンの抽出のための改良された方法に関する。
【００１７】
本発明の目的のための「茶葉」は、テアフラビンを含む、Camellia sinensis var. Sinensis及び／またはCamellia sinensis var. Assamica由来の物質を意味する。本発明の方法のための適切な原料は、紅茶葉び／またはウーロン茶葉である。紅茶葉は、良質な茶葉、並びに紅茶製造の間で生産される規格外のものを含む。テアフラビンの抽出のための最も好ましい供給源は紅茶葉である。
【００１８】
完全な発酵工程によって生産され、黒色／褐色の色に見える茶葉は紅茶葉と称される。生産される茶葉の大部分はこの種類を有する。紅茶葉製造技術は本質的に、茶の芽の細胞強度の破壊により、基質（ポリフェノール）と酵素（ポリフェノールオキシダーゼ）を混合可能とする工程を含む。これは、大気酸素の取り込みと、茶葉に特徴的な芳香を与える揮発性香料化合物と共に、茶葉に特徴的である酸化ポリフェノール化合物の形成という、一連の生化学的及び化学的反応の開始を導く。
【００１９】
発酵が部分的に実施される場合、生成した茶葉はウーロン茶葉と称される。ウーロン茶葉は、主として医学的な重要性のために消費されている。
【００２０】
茶葉からのテアフラビンの抽出のための本発明の方法は、（ａ）水と酢酸エチルとに茶葉を接触させ、茶葉に対する水の重量比が０．５から１０の範囲である分散物を形成する工程；及び（ｂ）前記分散物から酢酸エチルを分離する工程を含み、テアフラビンの酢酸エチル抽出物を生産することを含む。
【００２１】
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させる工程（ａ）は、同時であっても連続的であっても良い。かくして、酢酸エチルと水とは事前に混合され、混合物を形成してから前記混合物と茶葉を接触させても良い。別法として、茶葉は水と接触させられ、湿った茶葉の塊を形成してから、前記湿った茶葉の塊を酢酸エチルと接触させる。かくして、分散物の形成の好ましい方法では、工程（ａ）は、（ｉ）茶葉を水と接触させ、均一な塊を形成する工程、次いで（ｉｉ）均一な塊を酢酸エチル中に攪拌する工程を含む。
【００２２】
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させる工程（ａ）は、好ましくは５から５０℃の範囲、より好ましくは１５から３０℃の範囲の温度で実施する。この接触工程（ａ）は、好ましくは４から９の範囲、より好ましくは５から８の範囲のｐＨで実施する。前記茶葉は、好ましくは３０から１２０分、より好ましくは６０から１２０分の期間で、水と酢酸エチルとと接触させる。工程（ａ）の間の茶葉に対する水の重量比は、０．５から１０の範囲、好ましくは０．５から８．０の範囲である。抽出工程の間の酢酸エチルと水の全重量に対する茶葉の重量比は、好ましくは１：１０から１：７５の範囲、より好ましくは１：２５から１：７５の範囲である。かくして本発明は、水と酢酸エチルとでの茶葉の抽出を提供し、抽出の収率は、高度に選択された水の量と、好ましい実施態様では、選択された酢酸エチルの量においてのみ良好である。規定された限界値の外側では、わずかな抽出効率のみが得られる。
【００２３】
テアフラビンを酢酸エチル相中に抽出すると、例えば単純なデカンテーションにより、工程（ｂ）で分散物から酢酸エチルが分離される。
【００２４】
酢酸エチル相に抽出されたテアフラビンは、例えば酢酸エチルの蒸発とテアフラビンのパウダーへの乾燥により、好ましくはパウダーに濃縮される。
【実施例】
【００２５】
本発明は、ここで実施例で説明されるであろう。実施例は説明のためのみのものであり、いずれの態様でも本発明の範囲を制限するものではない。
【００２６】
本発明の開発するのに使用された成分の供給源と由来
【表１】
2010539912.tif 000004
【００２７】
比較例Ａ及びＢ：各種の温度、各種の抽出時間での水を使用する効果
テアフラビンの抽出を、各種の温度条件で水を使用して実施した。テアフラビン抽出物のサンプルを、各種の抽出時間で採取した。抽出は、水に対する茶葉の重量比が１：５０である条件で実施した。水溶液中のテアフラビンの量、及び茶葉中のテアフラビンの量を測定する方法が以下に記載される。茶葉中の全テアフラビンのパーセンテージとして抽出されたテアフラビンの量が計算され、そのデータが表１に要約されている。
【００２８】
抽出物中のテアフラビンの量は、安定化溶液（０．５ｇ／Ｌのアスコルビン酸、０．５ｇ／ＬのＥＤＴＡ、１０％ｖ／ｖのアセトニトリル、及び９０％ｖ／ｖの水）でのサンプルの適切な希釈の後に、ＨＰＬＣ分析により測定される。紅茶葉中に存在する全テアフラビン濃度を測定するために、テアフラビンの定量的な抽出が生じる方法を使用し、その方法は、５０：１の茶葉に対する水の重量比で、８０−８５℃の温度で、１０分間７０％メタノールで茶葉を抽出する工程を含む。水性媒体または他の抽出媒体中の茶葉の抽出を研究し、それは、テアフラビンの部分的抽出を生じ、次いで二つのサンプルを分析し、ａ）水性抽出媒体（またはいずれかの他の抽出媒体）及びｂ）出がらしの茶を、上述の７０％メタノールで再抽出する。茶葉中の初期全テアフラビン濃度は既知であるため、抽出物及び出がらし中のテアフラビンの測定は完全な重量バランスとなり得る。これはまた、使用される抽出方法の間のいずれかのテアフラビンの分解の定量化を可能にする。
【００２９】
テアフラビン濃度は、ＨＰＬＣによって測定された４種の主たるテアフラビンの濃度の合計である。サンプル中の４種のテアフラビンの量を、４０℃のカラム温度で３８０ｎｍの検出、２０μＬの注入体積、及び１ｍＬ／分の流速を備えたオクタデシルシリカ（Ｃ１８）カラム(Nova-pak ex. Waters, 3.8mm i.d.×150mm)を使用してＨＰＬＣにより分析する。テアフラビン分析のための移動相は、水中（移動相Ａ）及びアセトニトリル中（移動相Ｂ）の２％（ｖ／ｖ）酢酸であった。５０分に亘り８％のＢから６９％のＢまでの勾配を使用し、４種のテアフラビン（ＴＦ１、ＴＦ２、ＴＦ３、ＴＦ４）を分離し、次いで８％のバッファーＡで５分間カラムを平衡化した。純粋なテアフラビンを、定量化のためのスタンダードとして使用した。
【００３０】
【表２】
2010539912.tif 000005
【００３１】
表１のデータは、平均約３３％以下のテアフラビンしか、８５℃程度の高温でさえ水中に抽出できないことを示す。
【００３２】
実施例１〜１５：本発明の方法によるテアフラビンの抽出
比較例Ｃ〜Ｅ：本発明の範囲外の方法によるテアフラビンの抽出
テアフラビンの抽出を、以下の方法を使用して実施した：
茶葉（１グラム）をガラス容器に採取し、水と酢酸和エチルとの混合物で、表２に示された各種の条件で抽出した。変更するパラメータは、（ｉ）茶葉に対する水の重量比、及び（ｉｉ）（酢酸エチル＋水）に対する茶葉の重量比であった。実験を２５℃で実施した。全テアフラビンの収率を上述の通り測定し、そのデータが表２に要約されている。
【００３３】
比較例Ｆ：従来技術の方法によるテアフラビンの抽出
水性茶葉抽出物の液体−液体抽出において酢酸エチルを使用する従来技術の既知の方法を使用して、実験を実施した。略記すると、５０：１の水：茶葉重量比で１０分間、８５℃の熱湯で紅茶葉を抽出し、熱湯中に茶葉の水性抽出物を得た。この抽出物を２５℃に冷却し、水性抽出物中のテアフラビンを、等体積の酢酸エチルで更に抽出した。酢酸エチル分画中のテアフラビンの収率が、表２に要約されている。
【００３４】
【表３】
2010539912.tif 000006
【００３５】
表２のデータは、本発明による方法（実施例１〜１５）が、本発明の範囲外の条件（比較例Ｃ〜Ｅ）と比較して増大したテアフラビンの収率を提供したことを示す。この収率は、熱湯抽出（比較例Ｂ）、または熱湯抽出とその後の水性抽出物の酢酸エチルでの液体−液体抽出（比較例Ｆ）で得られたものより、一般的に良好である。
【００３６】
実施例１６：テアフラビン抽出の速度論
紅茶葉（１グラム）をガラス容器に採取し、水（２．５グラム）と酢酸エチル（４７．５グラム）との混合物で抽出した。実験を２５℃で実施した。全テアフラビンの収率を上述のように測定し、データが表３に要約されている。
【００３７】
【表４】
2010539912.tif 000007
【００３８】
表３のデータは、３０から１２０分の間の接触時間について、非常に良好な収率が得られることを示す。
【００３９】
実施例１６〜１８：成分の連続添加の効果
実施例１６：以下の方法条件で実験を実施した：
紅茶葉の重量（アッサム紅茶）＝１グラム
水：紅茶葉の重量比＝２．５：１
紅茶葉：（水＋酢酸エチル）の重量比＝１：５２．５
抽出温度＝２５℃
抽出時間＝９０分
この実験では、水を紅茶葉に添加して均一な塊を形成し、その後酢酸エチルを添加して混合した。
【００４０】
実施例１７：酢酸エチルを最初に茶葉に添加して均一な塊を形成し、その後水を添加する点を除いて、実施例１６による方法条件で実験を実施した。
【００４１】
実施例１８：水と酢酸エチルを最初に混合して分散物を形成し、次いで攪拌しながら分散物に紅茶葉を添加する点を除いて、実施例１６による方法条件で実験を実施した。
【００４２】
実施例１６〜１８のそれぞれにおけるテアフラビンの抽出の収率が、以下の表４に要約されている。データは３回の読み取りの平均である。
【００４３】
【表５】
2010539912.tif 000008
【００４４】
表４のデータは、抽出工程の間の成分の添加のいずれの連続でも、熱湯を使用して得られた収率よりも非常に優れた収率を与えることを示す。
【００４５】
かくして本発明は、単純で、経済的で、且つスケールアップが容易な方法である、茶葉からのテアフラビンの増大した抽出方法を提供する。
【手続補正書】
【提出日】平成21年7月8日(2009.7.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）−酢酸エチルと水とを事前混合して混合物を形成し、その後茶葉を前記混合物と接触させるという同時的に；または
−茶葉を水と接触させて湿らせた茶葉の塊を形成し、その後前記湿らせた茶葉の塊を酢酸エチルと接触させるという連続的に
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させ、茶葉に対する水の重量比が０．５から１０の範囲である分散物を形成する工程；及び
（ｂ）前記分散物から酢酸エチルを分離する工程
を含み、テアフラビンの酢酸エチル抽出物を生産する、茶葉からのテアフラビンの抽出方法。
【請求項２】
前記分散物を形成する工程（ａ）が
（ｉ）水と茶葉を接触させ、均一な茶葉の塊を形成する工程；その後
（ｉｉ）酢酸エチル中に前記塊を攪拌する工程
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）の茶葉に対する水の重量比が０．５から８の範囲である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
工程（ａ）の水と酢酸エチルとの全重量に対する茶葉の重量比が１：１０から１：７５の範囲である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
テアフラビンの酢酸エチル抽出物をパウダーに乾燥する更なる工程を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記茶葉が紅茶葉、ウーロン茶葉、またはそれらの混合物である、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記茶葉が紅茶葉である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させる工程（ａ）が５から５０℃の範囲の温度で実施される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
水と酢酸エチルとに茶葉を接触させる工程（ａ）が４から９の範囲のｐＨで実施される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】
2010539912.tif 000009
2010539912.tif 000010
2010539912.tif 000011