(57)【要約】  本発明は切断型ＧＬＰ−1アナログに関し、特にｉ）ＧＬＰ−１（７−３５）と比較して、ａ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基、及びｂ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基を含む、総数で２、３、４、５、６、７、８又は９つのアミノ酸置換を有し、修飾ＧＬＰ−１（７−３５）（配列番号１）であるＧＬＰ−１アナログ、並びにその誘導体、及び治療的使用及び組成物に関する。これらのアナログと誘導体は非常に強力であり、高いＧＬＰ−１レセプター結合親和性を有し、週１回投与の可能性がある持続性の安定なＧＬＰ−１化合物の取得に潜在的に関連するＧＬＰ−１レセプターの細胞外ドメインにも結合する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基と、
ｂ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基とを含む
ｉ）ＧＬＰ−１（７−３５）と比較して、総数で２、３、４、５、６、７、８又は９つのアミノ酸置換を有する、修飾ＧＬＰ−１（７−３５）（配列番号１）であるＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項２】
ＧＬＰ−１（７−３５）の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５と同じ位置のアミノ酸が存在せず、但し、位置３０、３１、３２、３３又は３４のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しない、請求項１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項３】
ＧＬＰ−１アナログがｉ）Ｃ−末端カルボキシル基又はｉｉｉ）Ｃ−末端アミド基を含む、請求項１又は２の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項４】
アルブミン結合残基で誘導体化され又はペグ化された、請求項１から３の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項５】
位置３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２８アミノ酸である、請求項１から４の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項６】
位置３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２７アミノ酸である、請求項１から５の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【請求項７】
位置３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２６アミノ酸である、請求項１から６の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【請求項８】
位置３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２５アミノ酸である、請求項１から７の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。    
【請求項９】
位置３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２４アミノ酸である、請求項１から８の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１０】
位置３０、３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２３アミノ酸である、請求項１から９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１１】
式（Ｉ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ
式（Ｉ）（配列番号２）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ９はＧｌｕ又はアルファ、アルファジメチル−ＧｌｕのようなＧｌｕ誘導体であり；
Ｘａａ１６はＶａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２０はＬｅｕ、Ｌｙｓ又はＣｙｓであり；
Ｘａａ２３はＧｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２４はＡｌａ又はＡｓｎであり；
Ｘａａ２５はＡｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７はＧｌｕ、Ａｌａ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３１はＴｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在せず；
但し、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３２、Ｘａａ３３、又はＸａａ３４が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基が存在しない｝
の配列を有する、請求項１から１０の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１２】
式（ＩＩ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ   
式（ＩＩ）（配列番号３）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在しない｝
の配列を有する、請求項１から１０の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１３】
少なくとも一のアミノ酸残基が、
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−
｛Ａ−は、
2010538049.tif 000090
からなる群から選択され、
ここで、ｎは１４、１５、１６  １７、１８及び１９からなる群から選択され、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からからなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2010538049.tif 000091
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され、
−Ｃ−は、
2010538049.tif 000092
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、ｃ及びｆは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１若しくは２であり、又は、ｃが１若しくは２の場合、ｂは０であり、及び、ｆが０の場合、ｅは１若しくは２であり、又は、ｆが１若しくは２の場合、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、リンカーである｝
で誘導体化された、請求項１から１２の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１４】
Ｄは、
2010538049.tif 000093
2010538049.tif 000094
なる群から選択され、
ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６から選択される、
請求項１３に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１５】
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３３）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）ペプチド；
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン３１｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（デスアミノＨｉｓ７、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン３１｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（デスアミノＨｉｓ７、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｎｌｅ３０、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］−［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１−（７−３３）アミド；
［デスアミノＨｉｓ７、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］−ＧＬＰ−１（７−３４）；
［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［デスアミノＨｉｓ７、Ａｓｐ１１、Ｇｌｕ１８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ａｓｐ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３３）−アミド；
Ｎ−イプシロン３１−｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝
エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−Ｎ−ベータ３４−（２−（ビス−カルボキシメチルアミノ）アセチル）［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１、Ｄａｐ３４］ＧＬＰ−１（７−３４）アミド、
から選択される、請求項１から１４の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【請求項１６】
請求項１から１５の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体又はその製薬的に許容可能な塩、アミド、アルキル、又はエステル、及び製薬的に許容可能な賦形剤、を含有する医薬組成物。
【請求項１７】
医薬として使用するための、請求項１から１５の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための、請求項１から１５の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための医薬の製造における、請求項１から１５の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は請求項１６に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２０】
請求項１から１５の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は請求項１６に記載の医薬組成物の薬学的に活性な量を投与することによる、高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は治療用ペプチドの分野に関する。即ち、新規切断型クリカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アナログとその誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ活性のより長期の持続性を提供するため、グルコガン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）化合物の構造を修飾するための種々の異なる方法が使用される。
【０００３】
国際公開第２００６／０９７５３８号、国際公開第２００６／０９７５３６号、国際公開２００６／０３７８１０号、国際公開第２００６／００５６６７号、国際公開第２００５／０２７９７８号。国際公開第９８／０８８７１号及び米国特許第２００１／０１１０７１号には、種々のＧＬＰ−１アナログとその誘導体が記載されている。
【０００４】
本発明の優先日後に出版された、Ｒｕｎｇｅら（「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、２８３巻、１７号、ｐ．１１３４０−１１３４７）の記事は、リガンドが結合したＧＬＰ−１レセプターの細胞外ドメインの結晶構造を開示している。
【０００５】
多くの糖尿病患者、特に第２型糖尿病は所謂「針恐怖症」、即ち、注射自身への強い恐怖に陥りやすい。第２型糖尿病の殆どの患者は経口低血糖薬を用いた治療を受けるが、これらの患者に投与されるＧＬＰ−１化合物は注射可能な医薬であることが期待されるので、臨床的に非常に有望な化合物の普及の深刻な障害になり得る。従って、一日一回以下、例えば、二日又は三日に一回、好ましくは一週間に一回、の投与でも良く、一方で許容できる臨床上のプロファイルを維持している、又は所望により、肺、鼻、舌下、頬又は経口投与のような非侵襲の投与法によって投与され得る新規な化合物の開発が必要である。
【０００６】
本発明の一つの目的は、化学的、物理的又は酵素学的に安定なＧＬＰ−１アナログ又はそれらの誘導体を提供することである。
【０００７】
本発明の更なる目的は、持続的に働く、即ち、上記の投与計画を有するＧＬＰ−１アナログとその誘導体を提供することである。
【０００８】
この発明の別の目的は、週一回の皮下投与又はその代わりに、非侵襲の送達のために用いられる治療量を減少させるために、高い効能（レセプター親和性）を持つＧＬＰ−１アナログとその誘導体を提供することである。
【０００９】
この発明の別の目的は、ＧＬＰ−１レセプター（ＧＬＰ−１Ｒ）に高い結合親和性を持つＧＬＰ−１化合物を提供することである。
【００１０】
この発明の更なる目的は、ＧＬＰ−１レセプターの細胞外ドメインに高い結合親和性を持つＧＬＰ−１化合物を提供することである（ｎＧＬＰ−１Ｒ）。
【００１１】
この発明の別の目的は、ペプチドのタンパク質分解を防ぐ高アルブミン結合親和性を有するＧＬＰ−１アナログとその誘導体を提供し、ペプチドの腎クリアランスを減少することである。
【００１２】
効能、ＧＬＰ−１レセプター、及び恐らくは更に、ＧＬＰ−１レセプターの細胞外ドメインへの結合親和性が、持続性があり、安定で勿論、活性がある、一週間に一回投与の可能性を持つＧＬＰ−１誘導体を達成するという全体の目的に、潜在的に関連する性質である。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、切断型ＧＬＰ−１（７−３７）アナログ及びその誘導体に関する。
【００１４】
本発明は切断型ＧＬＰ−1アナログに関し、特にｉ）ＧＬＰ−１（７−３５）と比較して、ａ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基、及びｂ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基を含む、総数で２、３、４、５、６、７、８又は９つのアミノ酸置換を有し、修飾ＧＬＰ−１（７−３５）（配列番号１）であるＧＬＰ−１アナログ、並びにその誘導体、及び治療的使用及び組成物に関する。
【００１５】
本発明はこれらの誘導体とアナログの組成物と使用法に更に関する。
【００１６】
所望により、ＧＬＰ−１（７−３５）の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５と同じ位置のアミノ酸は存在しなくても良く、位置３０、３１、３２、３３又は３４のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しない。
【００１７】
更に所望により、本発明のＧＬＰ−１アナログはＣ末端にアミド基か又はＣ末端にカルボキシル基を含む。
【００１８】
更なる態様では、医薬組成物及び方法及び本発明に従ったアナログと誘導体の使用法が提供される。
【００１９】
発明の詳細
定義と特定の実施態様
本発明において、以下の用語は指定の意味を有する。即ち、「ポリペプチド」及び「ペプチド」なる用語は、本明細書において、ペプチド結合で連結した、少なくとも５つの連続したアミノ酸からなる化合物を意味する。連続したアミノ酸は遺伝コードにコードされたアミノ酸の集団でも良く、そして、それらは遺伝子コードにコードされていない天然のアミノ酸及び合成アミノ酸でも良い。遺伝コードにコードされていない天然のアミノ酸には、例えば、γ−カルボキシグルタメート、オルニチン、ホスファセリン、Ｄ−アラニン、Ｄ−グルタミンがある。合成アミノ酸は化学合成で製造されたアミノ酸、即ち、Ｄ−アラニン、Ｄ−ロイシンのような、遺伝コードにコードされたアミノ酸のＤ−異性体、Ａｉｂ（α−アミノイソブチル酸）、Ａｂｕ（α−アミノブチル酸）、Ｔｌｅ（ｔｅｒｔ−ブチルグリシン）、β−アラニン、３−アミノメチル安息香酸、アントラニル酸を含む。
【００２０】
２２個のタンパク新生のアミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンである。
【００２１】
従って、非タンパク新生（非天然とも呼ばれる）アミノ酸はペプチド結合でペプチドに取り込まれ得る部位であるが、タンパク新生のアミノ酸ではない。例えば、γ−カルボキシグルタメート、オルニチン、フォスフォセリン、Ｄ−アラニン、Ｄ−グルタミンのようなＤ−アミノ酸、化学合成で製造されたアミノ酸を含む合成非タンパク新生アミノ酸、即ち、Ｄ−アラニン、Ｄ−ロイシンのような、遺伝コードにコードされたアミノ酸のＤ−異性体、Ａｉｂ（α−アミノイソブチル酸）、Ａｂｕ（α−アミノブチル酸）、Ｔｌｅ（ｔｅｒｔ−ブチルグリシン）、β−アラニン、３−アミノメチル安息香酸、アントラニル酸、デス−アミノ−ヒスチジン、β−アラニン等のようなアミノ酸のベータアナログ、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン酸又は４−ピリジルアラニン、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロへプチル）カルボン酸又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸。
【００２２】
ポリペプチドについて言及するここで使用される「アナログ」なる用語は、一又はそれ以上のアミノ酸残基がその他のアミノ酸残基で置換されるか、及び／又は一又はそれ以上のアミノ酸残基がＣ−末端ペプチドから除去された、修飾ペプチドを意味する。
【００２３】
ここで使用される「修飾ペプチド」なる用語は上で定義されたような修飾ペプチドを意味する。本発明の目的のために、この用語は、「修飾ペプチド配列」と同様の意味で使用される。一貫して、ペプチド配列に関連してここで使用される「修飾」なる用語は、アミノ酸置換、付加、及び／又は欠失を意味する。
【００２４】
本発明の目的のために、本明細書に配列番号１として含まれる、ヒトＧＬＰ−１（７−３５）配列について、幾つかのアミノ酸置換、欠失、及び／又は付加が言及される。しかし、アミノ酸残基の番号付けは通常１番から開始するが、本発明の目的のために、当該分野における常法に従って、アミノ酸残基の７番から開始し、それに７番を割り当てる。従って、一般的に、ＧＬＰ−１（７−３５）配列の位置番号についての如何なる言及も位置７のＨｉｓから開始し、位置３５のＧｌｙで終わる。
【００２５】
アナログを記載するために、単純なシステムがしばしば使用される：例えば［Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１（７−３７）Ｌｙｓは位置３４の自然発生のリジンがアルギニンに置換され、リジンが末端アミノ酸残基、即ち、Ｇｌｙ３７に付加される。
【００２６】
ここで修飾ＧＬＰ−１（７−３５）配列を特徴付けるために使用される「と同じ位置」なる表現は、天然の（配列番号１の配列を有する）ＧＬＰ−１（７−３５）配列に対応する位置を意味する。対応する位置は、例えば、単純な手書き及び目視によって、容易に推測される。その代わりに、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ整列である「ａｌｉｇｎ」のような、標準的なタンパク質又はペプチド整列プログラムを用いても良い。アルゴリズムはＮｅｅｄｌｅｍａｎ、Ｓ．Ｂ．及びＷｕｎｓｃｈ、Ｃ．Ｄ．、１９７０年、「Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、４８巻、ｐ４４３−４５３、及び「Ｏｐｔｉｍａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｓｐａｃｅ」ＣＡＢＩＯＳ（ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１９８８年、４巻、ｐ．１１−１７のＭｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒによる整列プログラムに記載される。整列のために、初期設定の重み行列ＢＬＯＳＵＭ５０及び初期設定の単位行列を用いても良く、ギャップにおける最初の残基のペナルティーは−１２でも良く、付加的な残基のギャップにおけるペナルティーは−２でも良い。
【００２７】
光学異性体が記述されない全てのアミノ酸はＬ−異性体を意味すると理解される。
【００２８】
ここで使用される「それぞれのアミノ酸残基の下流」なる用語は、特定のアミノ酸からＣ末端に側に位置するそれぞれのアミノ酸を意味する。例として、Ｌｙｓ３４及びＧｌｙ３５はそれぞれＧＬＰ−１（７−３５）中のＶａｌ３３の下流のアミノ酸残基である。
【００２９】
本発明の実施態様において、最大８個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大７個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大６個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大５個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大４個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大８個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大３個のアミノ酸が修飾される。本発明の実施態様において、最大２個のアミノ酸が修飾される。
【００３０】
本発明の実施態様において、一又は複数のアミノ酸が、Ｃ末端から欠失する。
【００３１】
本発明の一態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体のＣ末端が酸又はアミドで停止され得る。好ましい態様では、アナログ又は誘導体のＣ末端はアミドである。
【００３２】
一態様では、本発明は、位置３５、３６及び３７のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２８アミノ酸である、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、位置３４、３５、３６及び３７のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２７アミノ酸である、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、位置３３、３４、３５、３６及び３７のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２６アミノ酸である、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、位置３２、３３、３４、３５、３６及び３７のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２５アミノ酸である、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、位置３１、３２、３３、３４、３５、３６及び３７のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２４アミノ酸である、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、位置３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６及び３７のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２３アミノ酸である、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３３】
一態様では、本発明は、Ｃ末端にアミド基を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３４】
一態様では、本発明は、位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、３つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４からなる群から選択される位置に置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４からなる群から選択される置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択される置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３５】
一態様では、本発明は、位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、４つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４からなる群から選択される位置に２つの置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４からなる群から選択される２つの置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択されるアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択されるアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３６】
一態様では、本発明は、位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、５つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４からなる群から選択される位置に３つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４からなる群から選択される３つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される２つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される２つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３７】
一態様では、本発明は、位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、６、７又は８つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４からなる群から選択される位置に４、５又は６つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４からなる群から選択される４、５又は６つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される４、５又は６つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。更なる態様では、本発明は、デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される４、５又は６つのアミノ酸置換を有する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３８】
一態様では、本発明は、式（Ｉ）の配列を有し、
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ
式（Ｉ）（配列番号２）
上記式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ９はＧｌｕ又はアルファ、アルファジメチル−ＧｌｕのようなＧｌｕ誘導体であり；
Ｘａａ１６はＶａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２０はＬｅｕ、Ｌｙｓ又はＣｙｓであり；
Ｘａａ２３はＧｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２４はＡｌａ又はＡｓｎであり；
Ｘａａ２５はＡｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７はＧｌｕ、Ａｌａ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ又は存在せず；
Ｘａａ３１はＴｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂ又は存在せず；
Ｒはアミド又は存在せず；
Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３２、Ｘａａ３３、又はＸａａ３４が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基が存在しない、
ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００３９】
別の態様では、式（ＩＩ）の配列を有し、
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ   
式（ＩＩ）（配列番号３）
上記式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂ又は存在せず；
Ｒはアミド又は存在しない、
ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【００４０】
本発明の一態様では、Ｒは存在しない。本発明の更なる態様では、Ｘａａ３５及びＲは存在しない。本発明の更なる態様では、Ｘａａ３４、Ｘａａ３５及びＲは存在しない。本発明の更なる態様では、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４、Ｘａａ３５及びＲは存在しない。本発明の更なる態様では、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４、Ｘａａ３５及びＲは存在しない。
【００４１】
ペプチドに関して、ここで使用される「誘導体」なる用語は、少なくとも１つの置換が未修飾のペプチド又はその誘導体に存在しない、化学的に修飾された修飾ペプチド又はその誘導体、即ち、共有結合的に修飾されたペプチドを意味する。
【００４２】
典型的な修飾は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル及びその類似体である。本発明に記載の誘導体の一例は、自然発生の位置２０のＴｙｒがリジンで置換されたＮイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３３）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド（構造１）であり、Ｎ−イプシロン２０において、位置８の自然発生アラニンがＡｉｂに置換され、位置２２のグリシンがグルタミン酸に、位置２５のアラニンがバリンに、位置２６のリジンがアルギニンに、位置２７のグルタミン酸がロイシンに、位置３０のアラニンがグルタミン酸に、及び位置３３のバリンがリジンアミドに置換された、イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝に誘導体化される。
2010538049.tif 000002
【００４３】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基で誘導体又はペグ化された、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体が提供される。
【００４４】
一態様では、本発明は、ペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化されたアミノ酸が、Ｌｙｓ残基又はＣｙｓ残基であるＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。一態様では、ペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化されたアミノ酸が、Ｌｙｓ残基である。一態様では、ペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化されたアミノ酸が、Ｌｙｓ残基である。一態様では、位置１８、２０、２３、３１、３３、３４又はＣ−末端アミノ酸がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。更なる態様では、位置１８がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。更なる態様では、位置２０がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。更なる態様では、位置２３がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。更なる態様では、位置３１がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。更なる態様では、位置３３がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。更なる態様では、位置３４がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。
【００４５】
一態様では、アルブミン結合残基で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。
【００４６】
ここで使用される「誘導体化」なる用語は、共有結合を介して化学的に連結されることを意味する。例えば、リジン残基又はシステイン残基は、アルブミン残基に化学結合を介して連結される。このような化学結合は、長鎖脂肪酸のようなアルブミン結合残基の活性エステルを用いて、リジンのイプシロンアミノ基をアシル化し、誘導体化することにより、得られる一例である。
【００４７】
本発明に使用される２つの化学的部分の連結の別の例は、限定するものではないが、アルキル化、エステル形成、アミド形成又はマレイミドカップリングがある。
【００４８】
ここで使用される「リンカー」なる用語は、ペプチド及びアルブミン結合残基又はポリエチレングリコールを分離するスペーサーを意味する（本明細書において、スペーサー及びリンカーの二つの用語が同義的に使用される）。
【００４９】
本発明の一態様では、リンカーは、１から５のアルケングリコールユニットのような、一又はそれ以上のアルケングリコールユニットを含む。アルキレングリコールユニットは、更なる態様では、エチレングリコール、プロピレングリコール又はブチレングリコールであるが、より高級のアルケングリコールであっても良い。
【００５０】
本発明の別の態様では、リンカーは、
−（ＣＨ２）ｌＤ［（ＣＨ２）ｎＥ］ｍ（ＣＨ２）ｐ−Ｑｑ−から選択される親水性リンカーであり、ここで、
ｌ、ｍ及びｎは、独立して１から２０であり、ｐは０から１０であり、
Ｑは−Ｚ−（ＣＨ２）ｌＤ［（ＣＨ２）ｎＧ］ｍ（ＣＨ２）ｐ−であり、
ｑは０から５の範囲の整数であり、
それぞれＤ、Ｅ及びＧは独立して−Ｏ−、−ＮＲ３−、−Ｎ（ＣＯＲ４）−、−ＰＲ５（Ｏ）−、及び−Ｐ（ＯＲ６）（Ｏ）−であり、ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は独立して、水素又はＣ１−６−アルキルを示し、
Ｚは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−、Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ、（ＣＨ２）ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−又はＮＨＣ（Ｏ）−から選択され、ここで、ｓは０又は１である。
【００５１】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、ｌは１又は２、ｎ及びｍは独立して、１から１０及びｐは０から１０である、親水性リンカーである。
【００５２】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、Ｄが−Ｏ−である親水性リンカーである。
【００５３】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、Ｅが−Ｏ−である親水性リンカーである。
【００５４】
本発明の更に別の態様では、親水性リンカーは−ＣＨ２Ｏ［（ＣＨ２）２Ｏ］ｍ（ＣＨ２）ｐＱｑ−であり、ここで、ｍは１から１０、ｐは１から３及びＱは−Ｚ−ＣＨ２Ｏ［（ＣＨ２）２Ｏ］ｍ（ＣＨ２）ｐ−であり、ここで、Ｚは上のように定義される。
【００５５】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、ｑが１である親水性リンカーである。
【００５６】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、Ｇが−Ｏ−である親水性リンカーである。
【００５７】
本発明の別の態様では、上で定期がされたように、Ｚが−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２−、及び−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−からなる群から選択される、親水性リンカーである。
【００５８】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、ｑが０である親水性リンカーである。
【００５９】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、ｌが２である親水性リンカーである。
【００６０】
本発明の別の態様では、上で定義されたように、ｎが２である親水性リンカーである。
【００６１】
本発明の一態様では、ペプチドと化学的部分の付いたアルブミン結合部位を分離する「親水性リンカー」が使用される。
【００６２】
本発明の一態様では、親水性リンカーは、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｌ−Ｏ−［（ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ］ｍ−（ＣＨ２）ｐ−［ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｌ−Ｏ−［（ＣＨ２）ｎ−Ｏ］ｍ−（ＣＨ２）ｐ］ｑ−ＮＨ−であり、
ここで、ｌ、ｍ、ｎ、及びｐは独立に１から５であり、ｑは０から５である。
【００６３】
本発明の別の態様では、親水性リンカーは、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２［ＮＨＣ（Ｏ）−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２］ｑ−ＮＨ−であり、
ここで、ｑは０から５である。
【００６４】
本発明の別の態様では、親水性リンカーは、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨＣ（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ−である。
本発明の更に別の態様では、親水性リンカーは、−［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］ｍ＋１（ＣＨ２）ｐＱｑ−であり、
ここでｍ及びｐは独立して０から１０であり、
Ｑは、上で定義されたように、−Ｚ−（ＣＨ２）ｌＤ［（ＣＨ２）ｎＧ］ｍ（ＣＨ２）ｐ−である。
本発明の更に別の態様では、親水性リンカーは、
−（ＣＨ２）ｌ−Ｏ−［（ＣＨ２）ｎ−Ｏ］ｍ−（ＣＨ２）ｐ−［Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｌ−Ｏ−［（ＣＨ２）ｎ−Ｏ］ｍ−（ＣＨ２）ｐ］ｑ−であり、
ここで、ｌ、ｍ、ｎ、及びｐは独立して１から５であり、ｑは０から５である。
【００６５】
本発明の更なる態様では、リンカーはＣｙｓ又はＧｌｙ−Ｌｙｓのようなジペプチドを除くアミノ酸残基を含む。本明細書では、「Ｇｌｙ−Ｌｙｓのようなジペプチド」なる表現は、Ｃ末端アミノ酸残基がＬｙｓ、Ｈｉｓ又はＴｒｐ、好ましくはＬｙｓ、であり、Ｎ末端アミノ酸残基がＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ及びＰｒｏからなる群から選択されるジペプチドを指定するために使用される。適切なＰＥＧポリマーは通常商業的に利用可能であるか、又は当業者に周知の技術によって調製できる。
【００６６】
本発明の一態様では、ＰＥＧポリマーは７００Ｄより大きい分子量を有し、更なる態様では、５ｋＤより大きい分子量を有し、更なる態様では、１０ｋＤａより大きく、更なる態様では、２０ｋＤより大きい。ＰＥＧポリマーは直線又は分岐でも良い。ＰＥＧポリマーが２０ＫＤあより大きい場合、ＰＥＧポリマーは、好ましくは例えば４３ｋＤ分岐ＰＥＧ−ペプチド（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ、２００１年、カタログ番号２Ｄ３ＸＯＴ０１、ｍＰＥＧ２−ＭＡＬ）のような分岐構造を有する。
【００６７】
無傷ペプチドにおけるＰＥＧの連結は、レセプターと相互作用するペプチド表面の反対側にＰＥＧを連結することにより達成することができる。
【００６８】
ＰＥＧをペプチドにカップリングする幾つかの方法があるが（例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ、「Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ」、２２巻、ｐ４０５−４１７、２００１年）、それらの全てが、ここでそれら全体で参照として含まれる。従って、当業者は、ＰＥＧポリマーをここに記載されたヒトアミリン又はアミリンアナログに連結するために、周知の技術を利用することができる。
【００６９】
簡潔には、システインＰＥＧ化は、部位特異的なＰＥＧ化の一方法であり、唯一のシステイン変異を、ヒトアミリン又はアミリンアナログ上の特定の位置の１つに導入し、得られたペプチドを、ＰＥＧ−マレイミドのようなシステイン特異的なＰＥＧ化試薬を用いて反応させることにより達成される。部位特異的なＰＥＧ化のために、ペプチドに変異を導入する必要があり得る。例えば、ペプチドがシステイン残基を含む場合、部位特異的なＰＥＧ化を保証するために、それらは保存アミノ酸に置換する必要があるだろう。更に、限定されるものではないが、「ＧＧＳ」、「ＧＧＳＧＧＳ」、及び「ＰＰＰＳ」を含む剛直なリンカーをＣ末端に付加しても良いが、ＰＥＧ付加部位の前である（即ち、唯一のシステイン残基）。
【００７０】
本発明の一態様では、アルブミン結合残基は脂溶性残基である。更なる態様では、脂溶性残基は、好ましくはリンカーを介して、アルキル化、アシル化、エステル形成、アミド形成、又はアミド形成のような共役化学によって、リジン残基に、又はマレイミドカップリングによって、システイン残基に連結される。
【００７１】
本発明の更なる態様では、アルブミン結合残基は、生理学的ｐＨにおいて、負に帯電している。本発明の別の態様では、アルブミン結合残基は負に帯電可能な基を含む。負に帯電することが可能な好ましい基の一つは、カルボン酸基である。
【００７２】
本発明の更に別の態様では、アルブミン結合残基は、直鎖アルキル基、分岐アルキル基、ω−カルボン酸を有する基、及び部分的に若しくは完全に水素化された、シクロペンタノフェナントレン骨格からなる群から選択される。
【００７３】
本発明の更なる態様では、アルブミン結合残基はシバクロニル残基である。
【００７４】
本発明の更なる態様では、アルブミン結合残基は、６から４０個の炭素原子、８から２６個の炭素原子、又は８から２０個の炭素原子を有する。
【００７５】
本発明の更なる態様では、アルブミン結合残基は、ＣＨ３（ＣＨ２）ｒＣＯ−からなる群から選択され、ここで、ｒは４から３８の整数であり、好ましくは４から２４の整数であり、より好ましくは、ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１６ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）１８ＣＯ−、ＣＨ３（ＣＨ２）２０ＣＯ−及びＣＨ３（ＣＨ２）２２ＣＯ−からなる群から選択される。
【００７６】
本発明の別の態様では、アルブミン結合残基は、直鎖又は分岐アルカン、ω−ジカルボン酸からなるアシル基である。
【００７７】
一態様では、少なくとも１つのアミノ酸残基がＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−で誘導体化された、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関し、
ここでＡ−は、
2010538049.tif 000003
をからなる群から選択され、
ここで、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択され、
−Ｂ−は、    
2010538049.tif 000004
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され、
−Ｃ−は、  
2010538049.tif 000005
，
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、ｃ及びｆは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１若しくは２であり、又は、ｃが１若しくは２の場合、ｂは０であり、及び、ｆが０の場合、ｅは１若しくは２であり、又は、ｆが１若しくは２の場合、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、リンカーである。
【００７８】
本発明の一態様では、本発明に記載の１つのアミノ酸残基が、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−で誘導体化される。
【００７９】
一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基がアミノ基を含む。更なる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基が側鎖に第１級アミノ基を含む。本発明の更なる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はリジンである。
【００８０】
一態様では、Ａ−は、
2010538049.tif 000006
である。
【００８１】
一態様では、ｎは１５及び１７からなる群から選択され、より好ましくは１７である。
【００８２】
一態様では、Ａ−は、
2010538049.tif 000007
である。
【００８３】
一態様では、ｐは１２、１３及び１４からなる群から選択され、より好ましくは１３であるる。一態様では、ｄは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、より好ましくは０、１、２であり、最も好ましくは１である。一態様では、ｄは０、１及び２からなる群から選択され、ｐは１２、１３又は１４からなる群から選択され、より好ましくはｄは１及び２からなる群から選択され、ｐは１３及び１４からなる群から選択され、最も好ましくは、ｄは１及びｐは１３である。
【００８４】
一態様では、−Ｂ−は、
2010538049.tif 000008
である。
【００８５】
一態様では、−Ｂ−は、
2010538049.tif 000009
である。
【００８６】
一態様では、−Ｂ−は、
2010538049.tif 000010
である。
【００８７】
一態様では、−Ｂ−は、
2010538049.tif 000011
である。
【００８８】
一態様では、ｘは０、１及び２からなる群から選択され、より好ましくはｘは０及び１からなる群から選択され、最も好ましくはｘは１である。
【００８９】
一態様では、−Ｂ−は、
2010538049.tif 000012
である。
【００９０】
一態様では、ｙは２、３、４、５、６、７、８、９及び１０からなる群から選択され、より好ましくは、ｙは２、３、４、５、６、７、及び８からなる群から選択される。
【００９１】
一態様では、−Ｃ−は、
2010538049.tif 000013
である。
【００９２】
一態様では、ｃは０及び１からなる群から選択され、ｂは１及び２からなる群から選択され、より好ましくは、ｂは１及びｃは０である。
【００９３】
一態様では、−Ｃ−は、
2010538049.tif 000014
である。
【００９４】
一態様では、ｆは０及び１からなる群から選択され、ｅは１及び２からなる群から選択され、より好ましくはｅは１及びｆは０である。
【００９５】
一態様では、−Ｃ−は、
2010538049.tif 000015
である。
【００９６】
一態様では、Ｄは、  
2010538049.tif 000016
2010538049.tif 000017
なる群から選択され、
ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６から選択される。
【００９７】
一態様では、−Ｄ−は、
2010538049.tif 000018
である。
【００９８】
一態様では、ｋは１、２、３、１１及び２７からなる群から選択され、より好ましくはｋは１である。一態様では、ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される。
【００９９】
一態様では、−Ｄ−は、
【０１００】
一態様では、−Ｄ−は、
2010538049.tif 000019
である。
【０１０１】
一態様では、−Ｄ−は、
2010538049.tif 000020
である。
【０１０２】
一態様では、−Ｄ−は、
2010538049.tif 000021
である。
【０１０３】
一態様では、−Ｄ−は、
2010538049.tif 000022
である。
【０１０４】
一態様では、ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される。
【０１０５】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は、
2010538049.tif 000023
2010538049.tif 000024
から選択され結合される。
【０１０６】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は、
2010538049.tif 000025
2010538049.tif 000026
から選択され、結合される。
【０１０７】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−は、
2010538049.tif 000027
2010538049.tif 000028
2010538049.tif 000029
からなる群から選択される。
【０１０８】
一態様では、本発明は、少なくとも１つのアミノ酸がＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−で誘導体化され、該誘導体がアルブミンに結合する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１０９】
一態様では、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄはアルブミン結合フラグメントＡ−Ｂ−Ｃ−及び親水性リンカーＤからなる。
【０１１０】
ここで使用される「ＧＬＰ−１ペプチド」なる用語は、ＧＬＰ−１（７−３５）（配列番号１）又はそのＧＬＰ−１（７−３５）アナログを意味する。
【０１１１】
一態様では、本発明に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体はインスリン分泌薬である。
【０１１２】
アナログが誘導体化された、本発明の一態様では、ＧＬＰ−１アナログの何れかのアミノ酸の位置が誘導体化され得る。本発明の一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はアミノ基を含む。アミノ基を含むアミノ酸残基の例は、リジン、オルニチン、イプシロン−Ｎ−メチルリジン、Ｏ−アミノエチルセリン、Ｏ−アミノプロピルセリン、又はより長鎖の１級又は２級のアミノ基を側鎖に含むＯアルキル化セリンのような、イプシロン−Ｎ−アルキル化リジンである。
本発明の更なる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基は１級アミノ基を側鎖に含む。１級アミノ基を含むアミノ酸残基の例は、リジン、オルニチン、Ｏ−アミノエチルセリン、Ｏ−アミノイソプロピルセリン又は、より長鎖の１級アミノ基を側鎖に含むＯアルキル化セリンである。
本発明の更なる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はリジンである。本発明の更なる態様では、本発明に記載の誘導体は、１つの位置が唯一、誘導体化され、例えば、唯一のアミノ酸残基が誘導体化される。本発明の別の態様では、誘導体化されるアミノ酸残基は、システインである。
【０１１３】
機能的特性
本発明の幾つかのＧＬＰ−１化合物は、実験の部に記載されるように合成され、試験された。
【０１１４】
本発明のＧＬＰ−１化合物は、下記に実施例の参照により説明されるように、幾つかの利点と有益な特性を有する。
【０１１５】
本発明で使用される「インスリン分泌薬」なる用語は、ヒトＧＬＰ−１レセプターの作動薬であるＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体であり、即ち、ヒトＧＬＰ−１レセプターを含む適切な培地（下に開示されたような一の培地）中で、ｃＡＭＰの形成を刺激するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体を意味する。
【０１１６】
一態様では、許容できる好ましくは（レセプターにおいて）高い薬効を有する、ＧＬＰ−アナログ又はその誘導体である。
【０１１７】
本発明のＧＬＰ−１化合物のようなインスリン分泌薬の薬効は、実施例２１に記載されたように、用量反応曲線からＥＣ５０値を計算することにより決定され得る。
【０１１８】
本発明の特定の実施態様では、（ｉ）クローン化ヒトＧＬＰ−１レセプターを発現するベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞が使用され、好ましくはＢＨＫ−４６７−１２Ａ、より好ましくは、ＢＨＫ−４６７−１２Ａ（ｔｋ−ｔｓ１３）である。（ｉｉ）細胞を、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μＬ／ｍＬのストレプトマイシン、５％の仔ウシ血清及び０．５ｍｇ／ｍＬのジェネテシンＧ−４１８（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加したＤＭＥＭ培地中、好ましくは５％のＣＯ２で増殖させる。（ｉｉｉ）細胞は、好ましくは約８０％コンフルエントで、リン酸緩衝生理食塩水中で、２回洗浄する。（ｉｖ）細胞を、ヴェルセンのような、エチレンジアミン四酢酸テトラナトリウム塩水溶液を用いて収穫する。（ｖ）血漿膜は、好ましくはバッファー１中で、ホモジナイズにより細胞から調製される；ホモジネートを遠心する。例えば、４℃で、４８，０００×ｇで１５分間；及び／又は（ｖｉｉ）ペレットをバッファー２中でホモジナイズすることにより懸濁させる。（工程（ｖｉ）及び（ｖｉｉ）は好ましくは繰り返される。例えば、１又は２回以上。
機能レセプターアッセイは、実施例２１に記載されたように、インスリン分泌薬を用いた刺激に対する応答としてサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）を測定することにより実施され得る。ｃＡＭＰ形成は好ましくはアルファスクリーン（商標）ｃＡＭＰキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって定量される。インキュベーションは９６穴マイクロタイタープレートの半領域で、総量５０μｌのバッファー３中（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣＩ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で、次の添加物と共に実施され得る。：１ｍＭのＡＴＰ、１μＭのＧＴＰ、０．５ｍＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、０．１％のＢＳＡ、６μｇの膜調製、１５μｇ／ｍＬのアクセプタービーズ、６ｎＭビオチニル−ｃＡＭＰと共に事前インキュベートした２０μｇ／ｍＬのドナービーズ。作動活性の試験に用いられるアナログ又は誘導体は好ましくはバッファー３に溶解し希釈する。ＧＴＰは実験毎に新しく調製される。プレートは暗所で、３時間ゆっくり攪拌しながら室温でインキュベーションし、次いで、Ｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（パーキンエルマー・ライフサイエンス）中でカウントした。濃度−応答曲線は、それぞれのアナログ又は誘導体及び予想されたＥＣ５０値に対し、Ｐｒｉｓｍバージョン４．０又は５．０（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）の４パラメータロジスティックモデルを用いることによりプロットした。
【０１１９】
第一の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを用いて決定されたように、１０．００未満、好ましくは９．００未満、より好ましくは８．００未満、更により好ましくは７．００未満、最も好ましくは６．００未満（ｎＭ）の薬効（ｎＭにおけるＥＣ５０）を有する。
【０１２０】
第二の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを用いて決定されたように、５．００未満、好ましくは４．００未満、より好ましくは３．００未満、更により好ましくは２．００未満、最も好ましくは１．００未満（ｎＭ）の薬効（ｎＭにおけるＥＣ５０）を有する。
【０１２１】
第三の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを用いて決定されたように、０．８０未満、好ましくは０．６０未満、より好ましくは０．４０未満、更により好ましくは０．２０未満、最も好ましくは０．１０未満（ｎＭ）の薬効（ｎＭにおけるＥＣ５０）を有する。
【０１２２】
第四の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを用いて決定されたように、０．０９０未満、好ましくは０．０８０未満、より好ましくは０．０７０未満、更により好ましくは０．０６０未満、最も好ましくは０．０５０未満（ｎＭ）の薬効（ｎＭにおけるＥＣ５０）を有する。
【０１２３】
第五の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを用いて決定されたように、０．０４０未満、好ましくは０．０３０未満、より好ましくは０．０２０未満、最も好ましくは０．０１０未満（ｎＭ）の薬効（ｎＭにおけるＥＣ５０）を有する。
【０１２４】
従って、本発明のＧＬＰ−１誘導体の例示的な薬効の範囲（ｃＡＭＰアッセイを用いて決定されたようにｎＭにおけるＥＣ５０）は、０．０１０−１０．０、０．０１０−８．０、０．０１０−６．０、０．０１０−４．０、０．０１０−２．０、０．０１０−１．００、０．０１０−０．８０、０．０１０−０．６０、０．０１０−０．４０、０．０１０−０．３０、０．０１０−０．２０、０．０１０−０．１０、及び０．０１０−０．９０（ｎＭ）であり、好ましくは０．０１０−０．４０、０．０１０−０．３０、０．０１０−０．２０、０．０１０−０．１０、及び０．０１０−０．９０（ｎＭ）である。
【０１２５】
第二の態様では、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体（「ＧＬＰ−１化合物」）は、ＧＬＰ−１レセプターに対する高い親和性を有する。ＧＬＰ−１レセプターに対する親和性は、実施例２３に記載されたように決定され得る。即ち、レセプターから１２５Ｉ−ＧＬＰ−１を置換する方法による。ＢＨＫ細胞は膜調製に使用され得、好ましくはｔｋ−ｔｓ１３株である。膜は好ましくは実施例２３に記載されたように精製しても良い。好ましい結合アッセイ法は、実施例２３のＳＰＡアッセイである。ＩＣ５０値はレセプターから１２５ＩＧＬＰ−１を５０％置換する濃度として、得られた（結合）曲線から決定され得る。
【０１２６】
第一の特定の態様では、ＩＣ５０値は５００ｎＭ未満であり、好ましくは４００ｎＭ未満であり、より好ましくは３００ｎＭ未満であり、更に好ましくは２００ｎＭ未満であり、最も好ましくは１００ｎＭ未満である。
【０１２７】
第二の特定の態様では、ＩＣ５０値は８０ｎＭ未満であり、好ましくは６０ｎＭ未満であり、より好ましくは５０ｎＭ未満であり、更に好ましくは４０ｎＭ未満であり、最も好ましくは３０ｎＭ未満である。
【０１２８】
第三の特定の態様では、ＩＣ５０値は２０ｎＭ未満であり、好ましくは１５ｎＭ未満であり、より好ましくは１０ｎＭ未満であり、更に好ましくは５．０ｎＭ未満であり、最も好ましくは４．０ｎＭ未満である。
【０１２９】
第四の特定の態様では、ＩＣ５０値は３．０ｎＭ未満であり、好ましくは２．０ｎＭ未満であり、より好ましくは１．０ｎＭ未満であり、更に好ましくは０．８０ｎＭ未満であり、最も好ましくは０．６０ｎＭ未満である。
【０１３０】
第五の特定の態様では、ＩＣ５０値は０．５０ｎＭ未満であり、好ましくは０．４０ｎＭ未満であり、より好ましくは０．３０ｎＭ未満であり、更に好ましくは０．２０ｎＭ未満であり、最も好ましくは０．１０ｎＭ未満である。
【０１３１】
従って、例示的なＩＣ５０の範囲は：０．１−４００、０．２−３００、０．３−２００、０．４−１００、０．５−５０及び１−１０ｎＭである。
【０１３２】
第三の態様では、本発明は、ＧＬＰ−１レセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の単離されたＮ末端の細胞外ドメインに、高い親和性で結合するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。親和性は、例えば、実施例２２に記載されたように、１２５Ｉ−エクセンジン−４（９−３９）のｎＧＬＰ−１Ｒへの結合を置換する能力として測定され得る。
【０１３３】
このアッセイにおいて、エクセンジン４は５ｎＭのＩＣ５０値でｎＧＬＰ−１Ｒに結合し、ＧＬＰ−１（７−３７）はｎＧＬＰ−１Ｒに１１２０ｎＭのＩＣ５０値で結合し、リラグルチドはｎＧＬＰ−１Ｒに１５００ｎＭのＩＣ５０値で結合する。本発明の一態様では、本発明のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体はｎＧＬＰ−１Ｒにリラグルチドよりも低いＩＣ５０値で結合する。より好ましくは、本発明のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体はｎＧＬＰ−１Ｒに１００ｎＭ未満、更により好ましくは１０ｎＭ未満又は更に５ｎＭ未満のＩＣ５０値で結合する。
【０１３４】
タンパク質ｎＧＬＰ−１ＲはＲｕｎｇｅら、２００７年（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、４６巻、ｐ５８３０−５８４０）に記載されたように調製され得る。タンパク質は次いでビオチニル化及び、好ましくはストレプトアビジンを被覆したＳＰＡビーズ上に固定化される。０．１ＭのＮａＨＣＯ３のような適切なバッファー中で、ｎＧＬＰ１Ｒは７５ｇのＢＮＨＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｈ１７５９）を用いて、１ｍｇのタンパク質にビオチン化され得る。ビオチン化されたｎＧＬＰ１Ｒは続いて好ましくはＰＢＳに対し透析する。全ての試薬及びアナログ又は誘導体は、好ましくは０．０５％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中で希釈される。結合アッセイは、例えば、９６穴オプティプレート（パーキンエルマー６００５２９０）中で、最終容量２００μｌで実施され得る。各ウェルは２ｍｇのＳＰＡビーズ（パーキンエルマーＲＰＮＱ００７）で被覆されたストレプトアビジン、０．１ｐｍｏｌのビオチン化されたｎＧＬＰ１Ｒ、５０ｐＣｉの１２５Ｉ−エクセンジン（９−３９）及び適切な最終濃度、例えば、１０００ｎＭから０．０６４ｎＭの範囲、の試験ペプチドを含み得る。プレートは振盪器において、好ましくは室温で３時間インキュベートする。ＳＰＡ粒子は例えば、１５００ｒｍｐで１０分間遠心することにより、スピンダウンし得、プレートは例えばトップカウント−ＮＸＴ（パーキンエルマー）でカウントする。
【０１３５】
親和性は、５０％の１２５Ｉ−エクセンジン−４（９−３９）のｎＧＬＰ−１Ｒへの結合を置換するＧＬＰ−１誘導体の濃度として曲線から決定されるＩＣ５０値として表現され得る。
【０１３６】
第一の特定の実施態様において、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、実施例２２のアッセイにおいてＩＣ５０／ｎＭとして測定される、１５００未満、好ましくは１０００未満、更に好ましくは９００未満、最も好ましくは８００未満（ｎＭ）の、ＧＬＰ−１レセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の細胞外ドメインへの親和性を有する。
【０１３７】
第二の特定の実施態様において、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、実施例２２のアッセイにおいてＩＣ５０／ｎＭとして測定される、７００未満、好ましくは６００未満、更に好ましくは５００未満、最も好ましくは４００未満（ｎＭ）の、ＧＬＰ−１レセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の細胞外ドメインへの親和性を有する。
【０１３８】
第三の特定の実施態様において、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、実施例２２のアッセイにおいてＩＣ５０／ｎＭとして測定される、３００未満、好ましくは２００未満、更に好ましくは１００未満、最も好ましくは８０未満（ｎＭ）の、ＧＬＰ−１レセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の細胞外ドメインへの親和性を有する。
【０１３９】
第四の特定の実施態様において、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、実施例２２のアッセイにおいてＩＣ５０／ｎＭとして測定される、６０未満、好ましくは５０未満、更に好ましくは４０未満、最も好ましくは３０未満（ｎＭ）の、ＧＬＰ−１レセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の細胞外ドメインへの親和性を有する。
【０１４０】
第五の特定の実施態様において、本発明のＧＬＰ−１誘導体は、実施例２２のアッセイにおいてＩＣ５０／ｎＭとして測定される、２０未満、好ましくは１５未満、更に好ましくは１０未満、最も好ましくは５．０未満（ｎＭ）の、ＧＬＰ−１レセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の細胞外ドメインへの親和性を有する。
【０１４１】
従って、本発明のＧＬＰ−１誘導体のｎＧＬＰ−１Ｒへの親和性（ｎＭにおけるＩＣ５０）の例示的な範囲は：５−１５００、５−１０００、１０−５００、２０−３００、５０−５００、１０−５００、及び５−５０（ｎＭ）。
【０１４２】
ポリペプチドを言及する、ここで使用される「ＤＰＰ−ＩＶから保護された」なる用語は、前記誘導体を血漿ペプチダーゼジペプチジルアミノペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−ＩＶ）耐性にするために化学的に修飾されたポリペプチドを意味する。血漿中のＤＰＰ−ＩＶ酵素は幾つかのペプチドホルモン、例えば、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２、エクセンジン−４等の分解に含まれることが知られている。従って、ＤＰＰ−ＩＶによる分解速度を遅延するために、ＤＰＰ−ＩＶを介した加水分解を受けやすいポリペプチドのアナログ及び誘導体を開発する多大な努力がなされる。  
【０１４３】
一態様では、本発明に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体は、ＤＰＰ−ＩＶで保護されたＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体である。
【０１４４】
一態様では、本発明に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体は、リラグルチドよりもＤＰＰ−ＩＶに耐性のある、ＤＰＰ−ＩＶで保護されたＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体である。
【０１４５】
ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる分解に対するペプチドの耐性は、次の分解アッセイにより測定される：
０．１Ｍのトリエチルアミン-ＨＣｌバッファー１００μＬ、ｐＨ７．４において、ペプチドのアリコート(５ｎｍｏｌ)を、５ｍＵ酵素活性に相当する１μＬの精製されたジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に、３７℃で１０−１８０分インキュベートする。１０％のトリフルオロ酢酸５μＬを添加することにより、酵素反応を終結させ、ペプチド分解産物を分離し、ＨＰＬＣ分析を使用して定量する。この分析を実施するための一方法は次の通りである：Ｓｉｅｇｅｌら、「Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔ」、１９９９年、７９巻、ｐ９３−１０３及びＭｅｎｔｌｅｉｎら、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」、１９９３年、２１４巻、ｐ８２９−３５に従って、混合物をＶｙｄａｃ Ｃ１８ワイドポア(３０ｎｍ細孔、５μｍの粒子)２５０×４．６ｍｍのカラムに加え、０．１％のトリフルオロ酢酸に線形段階的勾配をつけてアセトニトリルが入ったもの(３分間は０％のアセトニトリル、１７分間は０−２４％のアセトニトリル、１分間は２４−４８％のアセトニトリル)を、１ｍｌ／分の流量で溶離させる。ペプチドとその分解産物は、２２０ｎｍ(ペプチド結合)又は２８０ｎｍ(芳香族アミノ酸)の吸光度をモニターし得、標準体に対するそれらのピーク領域を積分することにより定量する。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによるペプチドの加水分解速度はインキュベーション時間で推定され、加水分解されるペプチドの１０％未満になる。
その代わりに、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる分解に対するペプチドの耐性は、次の分解アッセイにより測定される：
０．０８５Ｍのトリス−ＨＣｌバッファー４０μＬ、ｐＨ８．０において、ペプチドのアリコート(４ｎｍｏｌ)を、１．６％のヒト血漿アルブミンの存在下又は非存在下、１０．９ｍＵの精製されたジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に、３７℃で２２時間インキュベートする。０、４、及び２２時間後に１０μｌのサンプルを回収し、１％のトリフルオロ酢酸１００μＬを混合することにより、酵素反応を終結させる。ペプチド分解産物を分離し、ＨＰＬＣ解析を用いて定量する。この解析を実施する一方法は次の通りである：混合物をＡｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ１８（５μｍ粒子）１５０×２．１ｍｍのカラムに加え、０．１％のトリフルオロ酢酸から０．０７％ＴＦＡを含む１００％のアセトニトリルへの３０分間の線形段階的勾配で、０．５ｍｌ／分の流量で溶離させる。ペプチド及びその分解産物は、２１４ｎｍの吸光度をモニターし、それらのピーク領域を積分することにより定量する。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶに対するペプチドの安定性は、無傷ペプチドと、切断後の２つのアミノ末端のアミノ酸を失った分解産物のピーク領域の合計に対する無傷ペプチドのピーク領域として決定される。
【０１４６】
ここで使用される「薬学的に許容可能な」なる用語は、通常の製薬学的な応用に適した手段、つまり患者等に重大な副作用を生じない手段を意味する。
【０１４７】
ここで使用される「賦形剤」なる用語は、医薬組成物に通常添加される化学的な化合物、例えばバッファー、等張剤、保存料等を意味する。
【０１４８】
ここで使用される「有効量」なる用語は、治療されない患者と比較して患者の治療に有効であるのに十分な投薬量を意味する。
【０１４９】
ここで使用される「医薬組成物」なる用語は、薬学的賦形剤、例えばバッファー、保存料、及び場合によっては張度調整剤及び／又は安定剤と共に本発明の活性なＧＬＰ−１アナログ又は誘導体を含む生成物を意味する。よって、医薬組成物はまた医薬製剤としても知られている。
【０１５０】
ここで使用される「疾病の治療」なる用語は、疾病、病状又は疾患を発症した患者の管理及び世話(ケア)を意味する。治療の目的は、疾病、症状又は疾患と闘うことである。治療には、疾病、症状又は疾患を排除し又は制御するため、並びに疾病、症状又は疾患に伴う徴候又は合併症を緩和するための本発明の活性のアナログ又は誘導体の投与を含む。
【０１５１】
別の態様では、本発明はアルブミン及びＧＬＰ−１レセプターに同時に結合できるＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１５２】
別の態様では、本発明は、１００ｎＭ未満、好ましくは２％のアルブミンの存在下において３０ｎＭ未満の親和性でＧＬＰ−１レセプターに結合するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１５３】
別の態様では、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体（「ＧＬＰ−１化合物」）は、２％のヒトアルブミンの存在下における親和性と、極小濃度（例えば、０．００５％から０．２％）のヒトアルブミンの存在下における親和性を比較した際、わずかに減少するに過ぎないＧＬＰ−１レセプターに対する親和性を有する。これらの条件下で結合力のシフトは５０倍未満であり、好ましくは３０倍未満であり、より好ましくは１０倍未満である。
【０１５４】
別の態様では、本発明は、エクセンジン−４−特に酸化と脱アミノ化に通常見られる化学的分解に対して安定なＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１５５】
別の態様では、本発明はレセプターにおいて高い効能を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。１００ｎＭ未満の結合親和性を有する、非常に強力なアルブミン結合アナログに関し、ＧＬＰ−１薬効は３マイクロモーラ−をより多く、好ましくは薬効はｃＡＭＰアッセイにおいて１マイクロモーラ−をより多い。
【０１５６】
５００ｎＭ未満の結合親和性を有する、非常に強力なアルブミン結合アナログに関し、ＧＬＰ−１薬効は１マイクロモーラ−をより多く、好ましくは薬効はｃＡＭＰアッセイにおいて０．２マイクロモーラ−をより多い。
【０１５７】
別の態様では、本発明は高いアルブミン結合親和性を有するＧＬＰ−１アナログ又は誘導体に関する。本発明のアナログ又は誘導体は１マイクロモーラ−未満のアルブミン結合親和性を有する。より好ましくは、本発明のアナログ又は誘導体は、５００ｎＭ未満のアルブミン結合親和性を有し、更により好ましくは２００ｎＭ未満又は更に１００ｎＭ未満である。
【０１５８】
アルブミン結合親和性は次のアッセイを用いて測定することができる：
アルブミン結合アッセイ：
ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体のヒト血漿アルブミン（ＨＳＡ）に対する親和性は、競合シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）により測定した。ストレプトアビジン−ＳＰＡビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＲＰＮＱ０００９）をビオチン化したＨＳＡと共に５時間インキュベートする。結合していないＨＳＡを除くために、ビーズをバッファーで洗浄する。ビーズを１２５Ｉで標識化した、Ｎ−イプシロン２６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［Ａｉｂ８、１２５Ｉ−Ｔｙｒ１９、Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１（７−３７）又はＮ−イプシロン３７−［２−（２−［２−（（Ｓ）−４−（（Ｓ）−４−（１２−［４−（１６−（１Ｈ−テトラゾール−５−ｙｌ）ヘキサデカノイルスルファモイル）ブチリルアミノ］ドデカノイルアミノ）−４−カルボキシブチリルアミノ）−４−カルボキシブチリルアミノ）エトキシ］エトキシ）アセチル］［Ａｉｂ８、１２５Ｉ−Ｔｙｒ１９、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、３４、Ｌｙｓ３７］ＧＬＰ−１（７−３７）−ＮＨ２のようなアシル化ＧＬＰ−１アナログと、１００ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．０２５％のＴｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４を含むバッファー中で混合する。混合物はパーキンエルマー・オプティプレート−９６、６００５２９０（１００μｌ／ウェル）のウェルにピペットで入れ、同じバッファー中に１００μｌの測定するＧＬＰ−１アナログ又は誘導体の一連の希釈液を添加する。室温で２０時間緩やかに振揺させた後、プレートを遠心しトップカウンターでカウントした。結合ｃｐｍはＧＬＰ−１アナログ又は誘導体の濃度の関数としてプロットし、競合曲線のＥＣ５０値はＨＳＡに対するアナログ又は誘導体の親和性の測定に使用される。
【０１５９】
別の態様では、本発明は、齧歯類及び非齧歯類モデルにおいて、リラグルチドと比較して、大幅に改善された最終半減期を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６０】
本発明の一態様では、本発明は、齧歯類又は非齧歯類モデルにおいて、リラグルチドと比較して、少なくとも３倍に改善された最終半減期を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６１】
本発明の別の態様では、本発明は、齧歯類又は非齧歯類モデルにおいて、リラグルチドと比較して、少なくとも６倍に改善された最終半減期を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６２】
本発明の別の態様では、本発明は、ラットに対する静脈投与後、少なくとも１０時間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６３】
本発明の別の態様では、本発明は、子豚への皮下投与後、少なくとも５０時間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有し、好ましくは子豚への皮下投与後、少なくとも８０時間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有するＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６４】
本発明の別の態様では、本発明は、経肺投与に最適な粒子として処方することができるＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６５】
本発明の別の態様では、本発明は、中性のｐＨ、最も好ましくは６から８の範囲において、化学的及び物理的に安定なＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１６６】
本発明の別の態様では、本発明は、凝集する傾向が殆ど又は全くない、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。一態様では、凝集傾向は、チオフラビンアッセイにおいて試験した際に、リラグルチドの凝集傾向と比較して、著しく改善される。
【０１６７】
本発明の別の態様では、本発明は、肺送達に適したＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。これは経肺製剤に有用な物理的又は化学的態様に関し得る。その代わりに、アナログ又は誘導体は気道や肺における酵素分解に対し安定である。
【０１６８】
本発明の実施態様において、上の特徴の組み合わせが達成される。
【０１６９】
ここで使用される「アルブミン結合部位」なる用語はヒト血漿アルブミンに非共有的に結合する残基を意味する。治療用ポリペプチドに連結したアルブミン結合残基は、典型的には１マイクロモーラ−未満、好ましくは５００ｎＭ未満、更により好ましくは２００ｎＭ未満又は更に１００ｎＭ未満のアルブミン結合親和性を有する。
【０１７０】
末端酸性基を有する４から４０個の炭素原子直線及び分枝の脂溶性部位中、幾つかのアルブミン結合残基が知られている。
【０１７１】
ここで使用される「親水性リンカー」なる用語は、ペプチドとアルブミン結合残基を、３０から５０％が窒素又は酸素ではない、少なくとも５つの水素でない原子を含む化学的部位で分離するスペーサーを意味する。
一態様では、修飾ＧＬＰ−１配列と、一又はそれ以上のアルブミン結合残基の間の親水性リンカーを含むＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体に関する。
【０１７２】
一態様では、親水性リンカーは、修飾ＧＬＰ−１のアミノ基と、アルブミン結合残基の官能基の間に架橋する、適切な官能基を両末端に有する、非分枝のオリゴエチレングリコール部位である。
【０１７３】
ここの式において、連結された基の末端の結合は、連結結合と見なされ、言及されない限りメチレン基で終わらない。
【０１７４】
本発明の一態様では、ＧＬＰ−１アナログ又は誘導体は、
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３３）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）ペプチド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、及び
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド
からなる群から選択される。
【０１７５】
製剤
本発明の他の目的は、０．１ｍｇ／ｍｌから２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している本発明に記載のアナログ又は誘導体を含有する医薬製剤を提供することであり、該製剤は３．０から９．０のｐＨを有する。製剤は、緩衝系、保存料(類)、等張化剤(類)、キレート剤(類)、安定剤及び界面活性剤を更に含有しうる。
【０１７６】
本発明の一実施態様では、製薬用製剤は水溶液、すなわち水分を含有する製剤である。このような製剤は、典型的には溶液又は懸濁液である。
【０１７７】
本発明のさらなる実施態様では、製薬用製剤は水溶液である。
【０１７８】
「水性製剤」なる用語は、少なくとも５０％(重量／重量)の水分を含有する製剤と定義される。同様に「水溶液」なる用語も、少なくとも５０％(重量／重量)の水分を含有する溶液と定義され、「水性懸濁液」なる用語は、少なくとも５０％(重量／重量)の水分を含有する懸濁液と定義される。
【０１７９】
別の実施態様では、医薬製剤は凍結乾燥製剤であり、医師又は患者が使用前にそれに溶媒及び／又は希釈剤を加える。
【０１８０】
別の実施態様では、医薬製剤は、如何なる事前の溶解も必要なしに使用準備が整っている乾燥製剤(例えば凍結乾燥又はスプレー乾燥)である。
【０１８１】
更なる実施態様では、本発明は、本発明に記載のアナログ又は誘導体及びバッファーの水溶液を含有する医薬製剤に関し、前記アナログ又は誘導体は０．１ｍｇ／ｍｌ又はそれ以上の濃度で存在し、該製剤は約３．０から約９．０のｐＨを有する。
【０１８２】
本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約７．０から約９．５である。本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約３．０から約７．０である。本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約５．０から約７．５である。本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約７．５から約９．０である。本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約７．５から約８．５である。本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約６．０から約７．５である。本発明の別の実施態様では、製剤のｐＨは約６．０から約７．０である。別の実施態様では、製剤のｐＨは約８．０から約８．５である。
【０１８３】
本発明の実施態様では、それぞれの投与は０．０１ｍｇから１０ｍｇの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は０．０５ｍｇより多い本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は０．１ｍｇより多い本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は１０ｍｇまでの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は９ｍｇまでの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は８ｍｇまでの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は７ｍｇまでの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は６ｍｇまでの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は５ｍｇまでの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。本発明の実施態様において、それぞれの投与は０．２ｍｇから５ｍｇの本発明に記載の活性アナログ又は誘導体を含む。
【０１８４】
本発明の更なる実施態様では、バッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン（ｂｉｃｉｎｅ）、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はそれらの混合物から選択される。これらの特定のバッファーの各一が本発明の別の実施態様を構成する。
【０１８５】
本発明の更なる実施態様では、製剤は、薬学的に許容可能な保存料を更に含有する。本発明の更なる実施態様では、保存料は、フェノール、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ブチル、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、及びチオメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネシン（ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｅｓｉｎｅ）（３ｐ−クロルフェノキシプロパン−１，２−ジオール）又はそれらの混合物からなる群から選択される。一実施態様では、保存料はフェノール又はｍ−クレゾールである。本発明の更なる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の更なる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の更なる実施態様では、保存料は、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の更なる実施態様では、保存料は、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。これらの特定の保存料の各一が、本発明の別の実施態様を構成する。医薬組成物中に保存料を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５が参照される。
【０１８６】
本発明の更なる実施態様では、製剤は等張化剤を更に含有しうる。本発明の更なる実施態様では、等張化剤は、塩（例えば塩化ナトリウム）、糖又は糖アルコール、アミノ酸（例えば、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン）、アルジトール（例えばグリセロール（グリセリン）、１、２−プロパンジオール（プロピレングリコール）、１、３−プロパンジオール、１、３−ブタンジオール）ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００）、又はそれらの混合物からなる群から選択される。任意の糖、例えば単糖類、二糖類又は多糖類、又は水溶性グルカン類、例えばフルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、及びカルボキシメチルセルロース−Ｎａを使用することができる。一実施態様では、糖添加剤はスクロースである。糖アルコールは、少なくとも一の−ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素と定義され、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール（ｇａｌａｃｔｉｔｏｌ）、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールを含む。一実施態様では、糖アルコール添加剤はマンニトールである。上述した糖又は糖アルコールは、個々に又は組合せて使用されてよい。使用される量は、糖又は糖アルコールが液状調製物に溶解し、本発明の方法を使用して得られた安定化効果に悪影響を与えない限りは、固定された限界値があるものではない。一実施態様では、糖又は糖アルコールの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌである。本発明の更なる実施態様では、等張化剤は１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌである。本発明の更なる実施態様では、等張化剤は１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、等張化剤は５ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、等張化剤は８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍｌである。本発明の更なる実施態様では、等張化剤は２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定の等張化剤の各一が本発明の別の実施態様を構成する。医薬組成物に等張化剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５が参照される。
【０１８７】
本発明の更なる実施態様では、製剤はキレート剤を更に含有する。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、及びアスパラギン酸の塩、及びそれらの混合物から選択される。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定のキレート剤の各一が本発明の別の実施態様を構成する。医薬組成物にキレート剤を使用することは当業者によく知られている。簡便には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５が参照される。
本発明の更なる実施態様では、製剤は安定剤を更に含有する。医薬組成物に安定剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５が参照される。
【０１８８】
より詳細には、本発明の組成物は安定した液状医薬組成物であり、その治療的活性化合物は、液状医薬製剤の保存中に凝集体の形成を示す可能性のあるポリペプチドを含む
【０１８９】
「凝集体形成」とは、オリゴマーを形成するポリペプチド分子間の物理的相互作用を意図しており、これは、可溶性か、又は溶液から沈殿する大きな可視できる凝集体として残る。「保存中」とは、液状製薬用組成物又は調製されて直ぐの製剤が、被験者に直ぐ投与されるものではないことを意図している。むしろ、調製後に、液状の形態、凍結状態、液状形態に後で再構成される乾燥した形態、又は被験者への投与に適した他の形態で、包装又は保存されている。「乾燥した形態」とは、液状製薬用組成物又は製剤が、フリーズドライ（すなわち凍結乾燥；例えばＷｉｌｌｉａｍｓ及びＰｏｌｌｉ（１９８４）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３８：４８−５９を参照）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ（１９９１）Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第５版；Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ、  Ｅｓｓｅｚ、  Ｕ．Ｋ．）、ｐｐ．４９１−６７６；Ｂｒｏａｄｈｅａｄ等、（１９９２）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．１８：１１６９−１２０６；及びＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒ等、（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２−２０）、又は空気乾燥（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ及びＣｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２５：４５９−４７０；及びＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７−５３）により乾燥されることを意図している。液状医薬組成物の保存中におけるポリペプチドによる凝集体形成は、ポリペプチドの生物活性に悪影響を及ぼすおそれがあり、医薬組成物の治療効果が損なわれる。更に凝集体形成は、例えばチューブ、膜、又はポリペプチド含有医薬組成物が注入システムを使用して投与される場合はポンプの閉塞のような、他の問題を生じさせうる。
【０１９０】
本発明の医薬組成物は、組成物の保存中、ポリペプチドによる凝集体形成を低減させるのに十分な量のアミノ酸塩基を更に含有しうる。「アミノ酸塩基」とは、アミノ酸又はアミノ酸の組合せを意図しており、任意の与えられたアミノ酸が、その遊離塩基の形態又はその塩の形態の何れかで存在している。アミノ酸の組合せを使用する場合、全てのアミノ酸が遊離塩基の形態で存在していてもよく、全てが塩の形態で存在していてもよく、又は幾つかが遊離塩基の形態で存在していてもよく、残りが塩の形態で存在していてもよい。一実施態様では、本発明の組成物の調製に使用されるアミノ酸は、帯電側鎖を担持しているもの、例えばアルギニン、リジン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸である。特定のアミノ酸(例えば、メチオニン、ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン及びそれらの混合物)の任意の立体異性体(すなわち、Ｌ、Ｄ、又はそれらの混合物)、又はこれらの立体異性体の組合せが、該特定のアミノ酸が遊離塩基の形態又は塩の形態の何れかで存在している限り、本発明の製薬用組成物中に存在していてもよい。一実施態様では、Ｌ-立体異性体が使用される。また本発明の組成物は、これらのアミノ酸の類似体と共に製剤化されてもよい。「アミノ酸類似体」とは、本発明の液状製薬用組成物の保存中に、ポリペプチドによる凝集体形成を低減させるという所望の効果をもたらす天然に生じるアミノ酸の誘導体を意図している。適切なアルギニン類似体は、例えばアミノグアニジン、オルニチン及びＮ−モノエチル−Ｌ−アルギニンを含み、適切なメチオニン類似体はエチオニン及びブチオニンを含み、適切なシステイン類似体はＳ−メチル−Ｌ−システインを含む。他のアミノ酸と同様、アミノ酸アナログは、遊離塩基の形態又は塩の形態の何れかで組成物中に導入される。本発明の更なる実施態様では、アミノ酸又はアミノ酸アナログは、タンパク質の凝集を防止し又は遅延化させるのに十分な濃度で使用される。
【０１９１】
本発明の更なる実施態様では、メチオニン(又は他の硫黄含有アミノ酸又はアミノ酸アナログ)は、治療剤として作用するポリペプチドが酸化を受けやすい少なくとも一のメチオニン残基を有するポリペプチドである場合、メチオニン残基のメチオニンスルホキシドへの酸化を阻害するために添加されうる。「阻害」とは、経時的なメチオニン酸化種の蓄積を最小にすることを意図している。メチオニン酸化を阻害すると、適切な分子形態でのポリペプチドの保持が更に高まる。メチオニン(Ｌ又はＤ)の任意の立体異性体又はそれらの任意の組合せを使用することができる。添加される量は、メチオニンスルホキシドの量が規制機関にとって許容可能であるような、メチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量とするべきである。典型的には、これは、組成物が約１０％から約３０％を越えるメチオニンスルホキシドを含まないことを意味する。一般的に、これは、メチオニン残基に添加されるメチオニンの比率が、約１：１から約１０００：１、例えば１０：１から約１００：１の範囲になるようにメチオニンを添加することで、達成することができる。
【０１９２】
本発明の更なる実施態様では、製剤は高分子量ポリマー又は低分子量化合物の群から選択される安定剤を更に含有する。
【０１９３】
本発明の更なる実施態様では、安定剤は、ポリエチレングリコール(例えばＰＥＧ３３５０)、ポリビニルアルコール(ＰＶＡ)、ポリビニルピロリドン、カルボキシ−/ヒドロキシセルロース又はそれらの誘導体(例えばＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬ、ＨＰＣ−Ｌ及びＨＰＭＣ)、シクロデキストリン類、硫黄含有物質、例えばモノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２−メチルチオエタノール、及び異なった塩(例えば塩化ナトリウム)から選択される。これらの特定の安定剤の各一が本発明の別の実施態様を構成する。
【０１９４】
医薬組成物は、その中の治療的に活性なポリペプチドの安定性を更に高める付加的な安定剤をまた含有しうる。
【０１９５】
本発明にとって特に関心のある安定剤は、限定されるものではないが、メチオニンの酸化に対してポリペプチドを保護するＥＤＴＡ及びメチオニン、及び凍結−解凍又は機械的剪断に関連する凝集からポリペプチドを保護する非イオン性界面活性剤を含む。
【０１９６】
本発明の更なる実施態様では、製剤は界面活性剤を更に含む。別の実施態様では、医薬組成物は２つの異なる界面活性剤を含む。ここで使用される「界面活性剤」なる用語は、水溶性(親水性)部分、頭部、脂溶性(親油性)セグメントを含む任意の分子又はイオンを称する。界面活性剤は、好ましくは界面に蓄積され、親水性部分は水(親水性相)に向いており、親油性部分は油又は疎水性相(すなわち、ガラス、空気、油等)に向いている。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は、臨界ミセル濃度、すなわちＣＭＣとして公知である。更に、界面活性剤は液体の表面張力を低下させる。界面活性剤は両親媒性化合物として公知である。「洗浄剤」なる用語は、一般的に界面活性剤と同義語として使用される。製薬用組成物に界面活性剤を使用することは、当業者によく知られている。
【０１９７】
アニオン性界面活性剤は：ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム塩、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、デオキシコール酸メチルエステル、ジギトニン、ジギトキシゲニン、Ｎ、Ｎ−ジメチルドデシルアミンＮ−オキシド、ドキュセートナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸水和物、グリコデオキシコール酸一水和物、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコリトコール酸３硫酸二ナトリウム塩、グリコリトコール酸エチルエステル、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ−ラウロイルサルコシン、Ｎ−ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸リチウム、ルゴール、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１−ブタンスルホン酸ナトリウム、１−デカンスルホン酸ナトリウム、１−ドデカンスルホン酸ナトリウム、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム、１−ノナンスルホン酸ナトリウム、１−プロパンスルホン酸ナトリウム一水和物、２−ブロモエタンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム水和物、雄牛又は羊の胆液、コール酸ナトリウム水和物、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ヘクサン硫酸ナトリウム、オクチル硫酸ナトリウム、ペンタン硫酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩一水和物、タウロリトコール酸３硫酸二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、トリズマ（Ｔｒｉｚｍａ）（登録商標）ドデシルサルフェイト、ＤＳＳ（ドキュセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号  ［５７７−１１−７］）、ドキュセートカルシウム（ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドキュセートカリウム（ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム）、ドデシルホスホコリン（ＦＯＳ−コリン−１２）、デシルホスホコリン（ＦＯＳ−コリン−１０）、ノニルホスホコリン（ＦＯＳ−コリン−９）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウム、及び／又はウルソデオキシコール酸の群から選択され得る。
【０１９８】
カチオン性界面活性剤は：臭化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザイルコニウム、塩化ベンザイルコニウム、塩化ベンジルジメチルヘクサデシルアンモニウム、塩化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、テトラクロロよう素酸ベンジルトリメチルアンモニウム、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化エチルヘクサデシルジメチルアンモニウム、臭化エチルヘクサデシルジメチルアンモニウム、臭化ヘクサデシルトリメチルアンモニウム、臭化ヘクサデシルトリエチルアンモニウム、臭化ヘクサデシルトリメチルアンモニウム、ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−タロウ−１、３−ジアミノプロパン、臭化トンゾニウム、及び／又は臭化トリメチル（テトラデシル）アンモニウムの群から選され得る。
【０１９９】
非イオン性界面活性剤は：ＢｉｇＣＨＡＰ、ビス（ポリエチレングリコールビス［イミダゾイルカルボニル］）、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドであるブロックコポリマー、ポロキサマーのようなブロックコポリマー、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、Ｂｒｉｊ（登録商標）５６、Ｂｒｉｊ（登録商標）７２、Ｂｒｉｊ（登録商標）７６、Ｂｒｉｊ（登録商標）９２Ｖ、Ｂｒｉｊ（登録商標）９７、Ｂｒｉｊ（登録商標）５８Ｐ、クレモフォール（登録商標）ＥＬ、デカエチレングリコールモノドデシルエステル、Ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、アルキルポリグルコシド、エトキシ化ヒマシ油、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ヘクサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、イゲパルＣＡ−６３０、イゲパルＣＡ−６３０、メチル−６−Ｏ−（Ｎ−ヘプチルカルバモイル）−ベータ−Ｄ−グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグカミン、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグカミン、オクタエチレングリコールモノデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ペンタエチレングリコールモノデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘクシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクチルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルＷ−１、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン１００ステアレ−ト、ポリオキシエチレン２０イソヘクサデシルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアレ−ト、ポリオキシエチレン５０ステアレ−ト、ポリオキシエチレン８ステアレ−ト、ポリオキシエチレンビス（イミダゾイルカルボニル）、ポリオキシエチレン２５、プロピレングリコールステアレ−ト、キラヤ樹皮からのサポニン、Ｓｐａｎ（登録商標）２０、Ｓｐａｎ（登録商標）４０、Ｓｐａｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）６５、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、Ｓｐａｎ（登録商標）８５、タージトール１５−Ｓ−１２型、タージトール１５−Ｓ−３０型、タージトール１５−Ｓ−５型、タージトール１５−Ｓ−７型、タージトール１５−Ｓ−９型、タージトールＮＰ−１０型、タージトールＮＰ−４型、タージトールＮＰ−４０型、タージトールＮＰ−７型、タージトールＮＰ−９型、テトラデシル−ｂ−Ｄ−マルトシド、テトラエチレング���コールモノデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノドデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコールモノデシルエーテル、トリエチレングリコールモノドデシルエーテル、トリエチレングリコールモノヘクサデシルエーテル、トリエチレングリコールモノオクチルエーテル、トリエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ＴｒｉｔｏｎＣＦ−２１、ＴｒｉｔｏｎＣＦ−３２、ＴｒｉｔｏｎＤＦ−１２、ＴｒｉｔｏｎＤＦ−１６、ＴｒｉｔｏｎＧＲ−５Ｍ、ＴｒｉｔｏｎＱＳ−１５、ＴｒｉｔｏｎＱＳ−４４、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＴｒｉｔｏｎＸ−１０２、ＴｒｉｔｏｎＸ−１５、ＴｒｉｔｏｎＸ−１５１、ＴｒｉｔｏｎＸ−２００、ＴｒｉｔｏｎＸ−２０７、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１６５溶液、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−３０５溶液、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−７０５−７０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８１、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８５、チロキサポール、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）、ソルトールＨＳ１５（マクロゴール１５ヒドロキシステアレートとしても知られている）、ｄ−アルファ−コハク酸トコフェリルポリエチレングリコール１０００（ビタミンＥＴＰＧＳ又はＴＰＧＳとしても知られている）、及びフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）、リン脂質、及び／又はｎ−ウンデシルβ−Ｄ−グルコピラノシドの群から選択し得る。
【０２００】
双性イオン界面活性剤は：ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルミリスチルアンモニオ）プロパンスルホン酸、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルオクタデシルアンモニオ）プロパンスルホン酸、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルオクチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルパルミチルアンモニオ）プロパンスルホン酸、Ｎ−アルキル−Ｎ、Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホン酸、３−クロロアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホン酸、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリゾホスファチジルコリン、両性洗浄剤３−１２（Ｎ−ドデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸）、両性洗浄剤３−１０（３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸内塩）、両性洗浄剤３−０８（３−（オクチルジメチルアンモニオ）プロパンスルホン酸）、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、アルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、リゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルコキシ（アルキルエーテル）−誘導体、例えば、リゾホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及びコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、リゾホスファチジルセリン及びリゾホスファチジルスレオニンである極性頭部基の修飾、アシルアルニチン及び誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンのＮベータ−アシル化誘導体、又はリジン又はアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンと中性又は酸性アミノ酸の何れか組合わせを含むジペプチドのＮベータ−アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの荷電アミノ酸の何れか組合わせを含むトリペプチドのＮベータ−アシル化誘導体、又はイミダゾリン誘導体、長鎖脂肪酸及びそれらの塩Ｃ６−Ｃ１２（例えば、オレイン酸酸及びカプリル酸）の群から選択される界面活性剤、Ｎ−ヘクサデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸、アニオン性（アルキル−アリール−スルホン酸）、一価の界面活性剤、パルミトイルリゾホスファチジルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン、リゾリン脂質（例えば、エタノールアミン、コリン、セリン又はスレオニンの１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸エステル）、又はこれらの混合物の群から選択し得る。
【０２０１】
ここで使用される「アルキルポリグルコシド」なる用語は、マルトシド、サッカリド等のような１以上のグルコシド部分によって置換されたＣ５−２０−アルキル、−アルケニル又は−アルキニルの直鎖型又は分枝型に関する。これらのアルキルポリグルコシドの実施態様はＣ６−１８−アルキルポリグルコシドを含む。これらのアルキルポリグルコシドの具体的実施態様はＣ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８及びＣ２０アルキル鎖のような偶数の炭素鎖を含む。グルコシド部分の具体的実施態様はピラノシド、グルコピラノシド、マルトシド及びスクロースを含む。発明の実施態様において、６より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、５より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、４より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、３より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。発明の実施態様において、２より少ないグルコシド部分がアルキル基に結合する。アルキルポリグリコシドの具体的な実施態様はｎ−デシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、デシルβ−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、テトラデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、デシルβ−Ｄ−マルトシド、ヘクサデシルβ−Ｄ−マルトシド、デシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、テトラデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ヘクサデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ｎ−ドデシル−スクロース、ｎ−デシル−スクロース、スクロースモノカプレート、スクロースモノラウレート、スクロースモノミリステート及びスクロースモノパルミテートのようなアルキルグリコシドである。
【０２０２】
医薬組成物中における界面活性剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１９版、１９９５が参照される。
【０２０３】
本発明の更なる実施態様では、製剤はＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）やベンズアミジン塩酸塩のようなプロテアーゼ阻害剤を更に含有するが、他の市販のプロテアーゼ阻害剤もまた使用することができる。プロテアーゼ阻害剤の使用は、自触媒作用を阻害するためにプロテアーゼのチモーゲンを含有している医薬組成物において特に有用である。
【０２０４】
その他の成分が本発明のペプチド医薬製剤に存在することもありうる。そのような更なる成分には、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、張度調節剤、キレート剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）及び双性イオン（例えばベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン、ヒスチジンのようなアミノ酸）が含まれる。そのような更なる成分は、当然ながら、本発明の医薬製剤の全体の安定性に悪影響を及ぼしてはならない。
【０２０５】
本発明に記載のアナログ又は誘導体を含む医薬組成物は、そのような治療を必要とする患者の幾つかの部位に投与され得、例えば局所的部位、例えば皮膚及び粘膜部位、吸収をバイパスする部位、例えば動脈、静脈、心臓への投与、及び吸収を含む部位、例えば皮膚、皮下、筋肉又は腹部への投与である。
【０２０６】
本発明に記載の医薬組成物の投与は、幾つかの投与経路、例えば舌、舌下、頬、口、経口、胃及び腸、鼻、肺を介して、例えば細気管支及び肺胞及び／又はそれらを組合せたもの、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼を介して、例えば結膜、尿管、及び非経口を介して、そのような治療を必要としている患者になされうる。
【０２０７】
本発明の組成物は、いくつかの投薬形態、例えば溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、多相エマルション、フォーム、膏薬、ペースト、プラスター、軟膏、錠剤、コート錠剤、チューインガム、リンス、カプセル、例えば硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、坐薬、直腸用カプセル、ドロップ、ゲル、スプレー、パウダー、エアゾール、吸入剤、点眼剤、眼軟膏、眼用リンス、膣用ペッサリー、膣用リング、膣用軟膏、注射液、インサイツ形質転換溶液、例えばインサイツゲル化、インサイツ硬化、インサイツ沈殿、インサイツ結晶化のもの、輸液、及び移植片として投与されうる。
本発明の組成物は、本発明に記載のアナログ又は誘導体の安定性を更に高め、生物学的利用能を増加させ、溶解度を高め、副作用を低減させ、当業者によく知られている時間療法を達成し、また患者のコンプライアンスを高め、又はそれらの任意の組合せのために、例えば共有的、疎水的及び静電気的相互作用を介して、医薬担体、医薬デリバリー系及び先端医薬デリバリー系に更に配合され、又は結合され得る。担体、医薬デリバリー系及び先進医薬デリバリー系の例には、限定されるものではないが、ポリマー、例えばセルロース及び誘導体、多糖類、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体、ポリ(ビニルアルコール)、アクリレート及びメタクリレートポリマー、ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそれらのブロックコポリマー、ポリエチレングリコール、担体タンパク質、例えばアルブミン、ゲル、例えばサーモゲル化系、例えば当業者によく知られているブロックコポリマー系、ミセル、リポソーム、ミクロスフィア、ナノ粒子、液晶及びそれらの分散液、脂質-水系における相挙動の当業者によく知られているＬ２相とそのディスパージョン、ポリマーミセル、多相エマルション、自己乳化、自己-マイクロ乳化、シクロデキストリン及びその誘導体、及びデンドリマーが含まれる。
【０２０８】
本発明の組成物は、全ての装置が当業者によく知られたものである例えば定量吸入器、乾燥パウダー吸入器及びネブライザーを使用し、本発明に記載のアナログ又は誘導体を肺に投与するための固形物、半固形物、パウダー及び溶液の製剤に有用である。
【０２０９】
本発明の組成物は、制御された徐放性、持続性、遅延及び持続放出薬物デリバリー系の製剤に特に有用である。より詳細には、限定されるものではないが、組成物は、当業者によく知られている非経口用の制御放出及び徐放系（双方の系は、投与数を何倍も低下させる)製剤に有用である。更により好ましくは、皮下投与される制御放出及び徐放系である。本発明の範囲を限定するものではないが、有用な制御放出系及び組成物の有用な例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマーミセル、ミクロスフィア、ナノ粒子である。
【０２１０】
本発明の組成物に有用な徐放系の製造方法は、限定されるものではないが、結晶化、凝縮、共結晶化、沈殿、共沈殿、乳化、分散、高圧ホモジナイズ、カプセル化、噴霧乾燥、マイクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、ミクロスフィアを製造するための溶媒蒸発、押出及び超臨界プロセスを含む。一般的には、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｗｉｓｅ、Ｄ．Ｌ．編  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２０００）及びＤｒｕｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｖｏｌ．９９：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（ＭａｃＮａｌｌｙ、Ｅ．Ｊ．編  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２０００）を参照。
【０２１１】
非経口投与は、シリンジ、場合によってはペン状シリンジによる皮下、筋肉内、腹膜内又は静脈内注射によって実施することができる。あるいは、非経口投与は輸液ポンプにより実施することができる。更なる選択肢は、鼻用又は肺用スプレーの形態で本発明のアナログ又は誘導体を投与するための溶液又は懸濁液であってもよい組成物である。また更なる選択肢としては、本発明に記載のアナログ又は誘導体を含む医薬組成物を、例えば針のない注射、又はイオン導入パッチであってよいパッチによる経皮投与、又は頬等の経粘膜投与用に適合させることもできる。
【０２１２】
本発明に記載のアナログ又は誘導体は、肺薬剤送達に適した任意の公知の種類の装置を使用し、ビヒクル、例えば溶液、懸濁剤又は乾燥パウダーとして、肺経路を介して投与することができる。これらの例には、限定されるものではないが、肺薬剤送達用に作製された一般的には３種類のエアゾールが含まれ、ジェット又は超音波噴霧器、定量吸入器、又は乾燥パウダー吸入器も含まれ得る（Ｙｕ  Ｊ、Ｃｈｉｅｎ  ＹＷ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ａｓｐｅｃｔｓ．Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒ  Ｓｙｓ  １４（４）（１９９７）３９５−４５３を参照）。
【０２１３】
標準化された試験法に基づき、粒子の空気動力学的直径(ｄａ)を、単位密度(１ｇ／ｃｍ３)の参照基準球形粒子の幾何学的相当直径として定義する。最も単純な場合、球形粒子に対して、ｄａは記載されるような密度比の平方根の関数として、参照直径(ｄ)に関連している。
【０２１４】
この関係は非球形粒子に対しては修正される（Ｅｄｗａｒｄｓ  ＤＡ、Ｂｅｎ−Ｊｅｂｒｉａ  Ａ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｌａｒｇｅ、ｐｏｒｏｕｓ  ｉｎｈａｌｅｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ８４（２）（１９９８）３７９−３８５を参照）。「ＭＭＡＤ」及び「ＭＭＥＡＤ」なる用語は、詳しく記載されており、当該分野で知られている（Ｅｄｗａｒｄｓ  ＤＡ、Ｂｅｎ−Ｊｅｂｒｉａ  Ａ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ、及び空気動力学的粒子径分布の中央値の測定値を表す。Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｌａｒｇｅ、ｐｏｒｏｕｓ  ｉｎｈａｌｅｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ８４（２）（１９９８）３７９−３８５を参照）。空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）及び有効空気動力学的中央粒子径（ＭＭＥＡＤ）（ｍａｓｓ  ｍｅｄｉａｎ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｅｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）は、交換可能に使用され、統計パラメータであり、実際の形状、サイズ又は密度に無関係に、肺中に沈着するそれらの可能性に関連して、エアゾール粒子のサイズが経験的に記載されている（Ｅｄｗａｒｄｓ  ＤＡ、Ｂｅｎ−Ｊｅｂｒｉａ  Ａ、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｌａｒｇｅ、ｐｏｒｏｕｓ  ｉｎｈａｌｅｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ８４（２）（１９９８）３７９−３８５を参照）。通常、ＭＭＡＤは、空気中における粒子の慣性挙動を測定する装置、衝突体を用いてなされる測定から算出される。
更なる実施態様では、製剤は、１０μｍ、好ましくは１−５μｍ、最も好ましくは１−３μｍ未満のエアゾール粒子のＭＭＡＤを達成するために、任意の既知のエアゾール化技術、例えばネブライゼーションによりエアゾール化することができる。好ましい粒子径は、肺の奥深くまで医薬を送達せしめるのに最も効果的なサイズに基づいており、タンパク質が最適に吸収されるようになされる（例えば、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＤＡ、Ｂｅｎ−Ｊｅｂｒｉａ  Ａ、Ｌａｎｇｅｒ  Ａ、Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｌａｒｇｅ、ｐｏｒｏｕｓ  ｉｎｈａｌｅｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ８４（２）（１９９８）３７９−３８５を参照）。
【０２１５】
本発明に記載のアナログ又は誘導体を含有する肺用製剤を肺の奥深くに付着させることは、吸入技術、例えば限定されるものではないが：低吸入速度（例えば３０Ｌ／分）、呼吸停止及び作動のタイミングを修正して最適化されうる。
【０２１６】
「安定化された製剤」なる用語は、物理的安定性が増した、化学的安定性が増した、又は物理的及び化学的安定性が増した製剤を意味する。
【０２１７】
ここで使用されるタンパク質製剤の「物理的安定性」なる用語は、タンパク質が熱-機械的ストレスに暴露され、及び／又は不安定な表面及び界面、例えば疎水性表面及び界面と相互作用する結果として、タンパク質が生物学的に不活性になり及び／又は不溶性の凝集体が形成されるというタンパク質の傾向を意味する。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、適切な容器(例えばカートリッジ又はバイアル)に充填された製剤を、様々な時間、異なる温度で機械的／物理的ストレス(例えば攪拌)に暴露した後に、視覚検査及び／又は濁度測定することで評価される。製剤の視覚検査は、暗色背景で、鋭く集光されたライト下において実施される。製剤の濁度は、例えば０から３のスケールで、濁りの程度をランク付けする視覚スコア(濁りのない製剤は視覚スコア０に相当し、日光下で視覚的に濁りのある製剤は視覚スコア３に相当する)により特徴付ける。製剤は、日光下で視覚的濁りを示す場合に、タンパク質会合に関して物理的に不安定であると分類される。また製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定法により評価することもできる。また水性タンパク質製剤の物理的安定性は、タンパク質の構造状態のプローブ又は分光剤を使用して評価することもできる。プローブは、好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子分光プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴは、アミロイド原繊維の検出に広範囲に使用されている蛍光染料である。原繊維、おそらく他のタンパク質立体配置が存在すると、チオフラビンＴが約４５０ｎｍで新たな励起極大を引き起こし、原繊維タンパク質形態に結合した時に、約４８２ｎｍで増強発光する。未結合のチオフラビンＴは、本質的にはその波長で非蛍光性である。
【０２１８】
天然から非天然状態までのタンパク質構造における変化のプローブとして、他の小分子を使用することができる。例えば、タンパク質の暴露された疎水性パッチに優先的に結合する「疎水性パッチ」プローブである。疎水性パッチは、その天然状態にあるタンパク質の３次構造内に一般的に埋められているが、タンパク質の展開及び変性が始まると、暴露されるようになる。これらの小分子の例、分光プローブは、芳香族の疎水性染料、例えばアントラセン、アクリジン、フェナントロリン等である。他の分光プローブは金属-アミノ酸錯体、例えば疎水性アミノ酸、例えばフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、及びバリン等のコバルト金属錯体である。
【０２１９】
ここで使用されるタンパク質製剤の「化学的安定性」なる用語は、天然のタンパク質構造と比較して、免疫原性の潜在的増加及び／又は生物学的有効性の潜在的低下を伴う、化学的な分解産物の形成に至るタンパク質構造における化学的共有変化を意味する。種々の化学的な分解産物は、天然タンパク質の性質及び種類、及びタンパク質が暴露される環境に応じて形成されうる。化学的分解の排除は、多くの場合、完全に回避することはできず、当業者によく知られているように、タンパク質製剤の保存及び使用中に、化学的な分解産物の量の増加が見られる。殆どのタンパク質は、脱アミド化する傾向にあり、グルタミニル又はアスパラギニル残基の側鎖アミド基が加水分解されて、遊離カルボン酸を形成する。他の分解経路は高分子量の形質転換産物の形成に関与しており、２又はそれ以上のタンパク質分子は、アミド転移及び／又はジスルフィド相互作用を介して互いに共有結合し、共有結合した二量体、オリゴマー及びポリマーの分解産物の形成に至る（Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｈｒａｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ａｈｅｒｎ．  Ｔ．  Ｊ．  ＆ａｍｐ；  Ｍａｎｎｉｎｇ  Ｍ．Ｃ．、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９２）。（例えばメチオニン残基の）酸化も、化学的分解の他の変形例として挙げることができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なる環境条件に暴露させた後、種々の時点での化学的な分解産物の量を測定することにより評価することができる（分解産物の形成は、多くの場合、例えば温度上昇により促進される）。個々の分解産物の各々の量は、多くの場合、様々なクロマトグラフィー技術（例えばＳＥＣ−ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用し、分子サイズ及び／又は電荷に応じて、分解産物を分離することにより測定される。
【０２２０】
よって、上に概要を述べたように、「安定化された製剤」とは、物理的安定性が増加、化学的安定性が増加、又は物理的及び化学的安定性が増加した製剤を意味する。一般的に、製剤は、有効期限に到達するまで、使用及び保存中に(推奨される用途及び保存条件で)安定していなければならない。
【０２２１】
本発明の一実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体を含有する医薬製剤は、６週間以上の使用と、３年以上の保存に対して安定している。
【０２２２】
本発明の別の実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体を含有する医薬製剤は、４週間以上の使用と、３年以上の保存に対して安定している。
【０２２３】
本発明の更なる実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体を含有する医薬製剤は、４週間以上の使用と、２年以上の保存に対して安定している。
【０２２４】
本発明の更なる実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体を含有する医薬製剤は、２週間以上の使用と、２年以上の保存に対して安定している。
【０２２５】
別の実施態様では、本発明は、医薬調製のための本発明に記載のアナログ又は誘導体の使用に関する。
【０２２６】
一実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体は、高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防のための医薬の調製のために使用される。
【０２２７】
別の実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体は、２型糖尿病の疾患進行の遅延又は予防のための医薬の調製のために使用される。
【０２２８】
別の実施態様では、本発明に記載のアナログ又は誘導体は、食事摂取減少、β細胞アポトーシス低減、β細胞機能及びβ細胞容積の増加、及び／又はβ細胞に対するグルコース感受性の回復のための医薬の調製のために使用される。
【０２２９】
本発明に記載のアナログ又は誘導体を用いた治療は、例えば抗糖尿病薬、抗肥満薬、食欲調節剤、高血圧治療薬、糖尿病から生じるか又は糖尿病に関連する合併症の治療及び／又は予防のための薬剤及び肥満から生じるか肥満に関連する合併症及び疾患の治療及び／又は予防のための薬剤から選択される第二又はそれより多い薬学的に活性な物質と組み合わせることもできる。これらの薬学的に活性な物質の例は、インスリン、スルホニル尿素類、ビグアニド類、メグリチニド類、グルコシダーゼ阻害剤、グルカゴンアンタゴニスト、ＤＰＰ−ＩＶ（ジペプチジルペプチダーゼ-ＩＶ)インヒビター、グルコース新生及び／又はグリコーゲン分解の刺激に関与している肝酵素のインヒビター、グルコース取り込みのモジュレーター、脂質代謝を調節する化合物、例えばＨＭＧＣｏＡインヒビター(スタチン類)のような抗高脂血症剤、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ類）、食糧摂取量を低下させる化合物、ＲＸＲアンタゴニスト及びβ細胞のＡＴＰ依存性カリウムチャンネルに作用する薬剤；コレスチラミン、コレスチポール、クロフィブラート、ジェムフィブロジル、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、プロブコール、デキストロチロキシン、ネテグリニド、レパグリニド；β遮断薬、例えば、アルプレノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、プロプラノロール、及びメトプロロール、ＡＣＥ(アンギオテンシン変換酵素)阻害薬、例えば、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、アラトリオプリル、キナプリル及びラミプリル、カルシウムチャネル遮断薬、例えば、ニフェジピン、フェロジピン、ニカルジピン、イスラジピン、ニモジピン、ジルチアゼム及びベラパミル、及びα遮断薬、例えば、ドキサゾシン、ウラピジル、プラゾシン及びテラゾシン；ＣＡＲＴ(コカインアンフェタミン調節転写)アゴニスト、ＮＰＹ(神経ペプチドＹ)アンタゴニスト、ＰＹＹアゴニスト、Ｙ２レセプターアゴニスト、Ｙ４レセプターアゴニスト、混合Ｙ２／Ｙ４レセプターアゴニスト、ＭＣ４(メラノコルチン４)アゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、ＴＮＦ(腫瘍壊死因子)アゴニスト、ＣＲＦ(コルチコトロピン放出因子)アゴニスト、ＣＲＦＢＰ(コルチコトロピン放出因子結合タンパク質)アンタゴニスト、ウロコルチンアゴニスト、β３アゴニスト、ＭＳＨ(メラノサイト刺激ホルモン)アゴニスト、ＭＣＨ(メラノサイト集中ホルモン)アンタゴニスト、ＣＣＫ(コレシストキニン)アゴニスト、セロトニン再摂取インヒビター、セロトニン及びノルエピネフェリン再摂取インヒビター、混合セロトニン及びノルアドレナリン作動性化合物、５ＨＴ(セロトニン)アゴニスト、ボンベシンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、成長ホルモン、成長因子、成長ホルモン放出化合物、ＴＲＨ(チロトロピン放出ホルモン)アゴニスト、ＵＣＰ２又は３(脱共役タンパク質２又は３)モジュレーター、レプチンアゴニスト、ＤＡアゴニスト(ブロモクリプチン、ドプレキシン)、リパーゼ／アミラーゼインヒビター、ＲＸＲ(レチノイドＸレセプター)モジュレーター、ＴＲβアゴニスト；ヒスタミンＨ３アンタゴニスト、胃抑制ポリペプチドアゴニスト又はアンタゴニスト（ＧＩＰアナログ類）ガストリン及���ガストリンアナログである。
【０２３０】
本発明のアナログ又は誘導体を用いた治療はグルコース量及び／又は脂質代謝に影響を及ぼす、胃結束又は胃バイパスのような外科手術と組み合わせることができる。
【０２３１】
本発明のアナログ又は誘導体と上述の化合物の一又は複数と場合によっては一又は複数の更なる薬学的に活性な物質の任意の適切な組合せが本発明の範囲内にあると考えられることが理解されなければならない。
【０２３２】
アナログの製造法
配列に依存して、本発明のアナログは、ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を含み、ペプチドの発現を可能にする条件下で適切な栄養培地中でポリペプチドを発現することができる宿主細胞を培養し、その後、得られたペプチドを培地から回収することを含む方法により生産することができる。
【０２３３】
細胞を培養するのに使用される培地は、宿主細胞の増殖に適した任意の一般的な培地、例えば適切な栄養補助剤を含む複合培地又は最少培地でありうる。適切な培地は市販供給者から入手可能であり、また刊行されている処方（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ）に従い調製することができる。ついで、細胞により産生されたペプチドを、遠心分離又は濾過により培地から宿主細胞を分離し、塩、例えば硫酸アンモニウムにより上清又は濾液のタンパク質様成分を沈殿させ、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等、当該ペプチドの種類に応じて様々なクロマトグラフィー手順により精製することを含む一般的な手順により、培養培地から回収され得る。
【０２３４】
治療用ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、適切には、例えばゲノム又はｃＤＮＡライブラリを調製し、標準的な技術に従い合成オリゴヌクレオチドプローブを使用するハイブリダイゼーションによりポリペプチドの全て又は一部をコードするＤＮＡ配列をスクリーニングすることにより得られる、ゲノム又はｃＤＮＡ由来のものでありうる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ、Ｆｒｉｔｓｃｈ、ＥＦ及びＭａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９を参照）。また、ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、確立された標準的な方法、例えばＢｅａｕｃａｇｅ及びＣａｒｕｔｈｅｒｓ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２２、（１９８１）、１８５９−１８６９に記載されているホスホアミジト（ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｉｔｅ）法、又はＭａｔｔｈｅｓら、ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ３、（１９８４）、８０１−８０５に記載されている方法により、合成的に調製されてもよい。またＤＮＡ配列は、例えばＵＳ４６８３２０２、又はＳａｉｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９、（１９８８）、４８７−４９１に記載されているように、特定のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応により調製されてもよい。
【０２３５】
ＤＮＡ配列は、便宜的に、組換えＤＮＡ手順にかけられている任意のベクターに挿入されてよく、ベクターの選択は、多くの場合、導入される宿主細胞に依存する。例えば、ベクターは自己複製ベクター、すなわち染色体外実体として存在するベクターであってよく、その複製は染色体複製とは無関係、例えばプラスミドである。また、ベクターは、宿主細胞に挿入された場合に、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、組み込まれた内部の染色体と共に複製されるものであってよい。
【０２３６】
ベクターは、好ましくは、ペプチドをコードするＤＮＡ配列が、プロモータ等、ＤＮＡの転写に必要な付加的なセグメントに作用可能に結合している発現ベクターである。プロモータは、選択された宿主細胞において転写活性を示す任意のＤＮＡ配列であってよく、宿主細胞に対して同族又は異種であるタンパク質をコードする遺伝子から誘導されてもよい。種々の宿主細胞において本発明のペプチドをコードするＤＮＡの転写を指向するのに適切なプロモータの例は当該技術でよく知られている。例えば上掲のＳａｍｂｒｏｏｋらを参照。
【０２３７】
また、ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、必要ならば、適切なターミネーター、ポリアデニル化シグナル、転写エンハンサー配列、及び翻訳エンハンサー配列に作用可能に結合していてもよい。本発明の組換えベクターは、当該宿主細胞においてベクターの複製を可能にするＤＮＡ配列を更に含みうる。
【０２３８】
更に、ベクターは選択可能なマーカー、例えばその産物が宿主細胞における欠損を補完する遺伝子、又は、例えばアンピシリン、カイナマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ハイグロマイシン、又はメトトレキセートのような医薬に対して耐性を付与するものを更に含んでいてもよい。
【０２３９】
宿主細胞の分泌経路に本発明の親ペプチドを向かわせるために、分泌シグナル配列（リーダー配列、プロプレ配列又はプレ配列としても知られている）が、組換えベクター中に提供されてもよい。分泌シグナル配列は、正しいリーディングフレームでペプチドをコードするＤＮＡ配列に結合している。分泌シグナル配列は、通常、ペプチドをコードするＤＮＡ配列に対し５’に位置している。分泌シグナル配列は、通常ペプチドに関連しているもの、又は他の分泌タンパク質をコードする遺伝子由来のものであってもよい。
本発明のペプチドをコードするＤＮＡ配列、プロモータ及び場合によってはターミネーター及び／又は分泌シグナル配列をそれぞれライゲーションし、複製に必要な情報を含む適切なベクター中にそれらを挿入するのに使用される手順は、当業者にはよく知られている（例えば、上掲のＳａｍｂｒｏｏｋらを参照）。
【０２４０】
ＤＮＡ配列又は組換えベクターが導入される宿主細胞は、本ペプチドを生成可能な任意の細胞であってよく、細菌、酵母、真菌及び高等真核細胞を含む。当該分野でよく知られ使用される適切な宿主細胞の例は、限定されるものではないが、大腸菌、出芽酵母、又は哺乳類ＢＨＫ又はＣＨＯ細胞系である。
【発明の実施態様】
【０２４１】
１．ａ）配列番号１の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基と
ｂ）配列番号１の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基とを含む
ｉ）配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で２、３、４、５、６、７、又は８つのアミノ酸置換を有し、
ｉｉ）所望により、配列番号１の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５と同じ位置のアミノ酸が存在しなくても良く、但し、位置３０、３１、３２、３３又は３４のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しなくても良く、
ｉｉｉ）所望により、Ｃ末端アミド基を有する、
修飾ＧＬＰ−１配列（配列番号１）を含む、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２４２】
２．アルブミン結合残基で誘導体化され又はペグ化された実施態様１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２４３】
３．位置３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２８アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２４４】
４．位置３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２７アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２４５】
５．位置３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２６アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２４６】
６．位置３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２５アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。    
【０２４７】
７．位置３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２４アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２４８】
８．位置３０、３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２３アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２４９】
９．Ｃ末端アミド基を有する実施態様１から８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２５０】
１０．式（Ｉ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ
式（Ｉ）（配列番号２）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ９はＧｌｕ又はアルファ、アルファジメチル−ＧｌｕのようなＧｌｕ誘導体であり；
Ｘａａ１６はＶａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２０はＬｅｕ、Ｌｙｓ又はＣｙｓであり；
Ｘａａ２３はＧｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２４はＡｌａ又はＡｓｎであり；
Ｘａａ２５はＡｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７はＧｌｕ、Ａｌａ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３１はＴｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在せず；
但し、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３２、Ｘａａ３３、又はＸａａ３４が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基が存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２５１】
１１．式（ＩＩ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ   
式（ＩＩ）（配列番号３）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２５２】
１２．少なくとも一のアミノ酸残基が、
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−
｛Ａ−は、
2010538049.tif 000030
からなる群から選択され、
ここで、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からからなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2010538049.tif 000031
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され、
−Ｃ−は、
2010538049.tif 000032
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、ｃ及びｆは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１若しくは２であり、又は、ｃが１若しくは２の場合、ｂは０であり、及び、ｆが０の場合、ｅは１若しくは２であり、又は、ｆが１若しくは２の場合、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、リンカーである｝
で誘導体化された、実施態様１から１１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２５３】
１３．Ｄは、
2010538049.tif 000033
なる群から選択され、
ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６から選択される、
実施態様１２に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２５４】
１４．実施態様１から１３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体及び製薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【０２５５】
１５．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための、実施態様１から１４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２５６】
本発明記載のヒトＧＬＰ−１（７−３５）のアミノ酸配列は、配列表に配列番号１として含まれ、配列番号２及び３はその誘導体である。
【０２５７】
配列表において、番号付けはアミノ酸残基１番から始まる。従って、例えば、配列番号１の位置１はＧＬＰ−１（７−３５）の位置７（Ｈｉｓ）と同じであり、配列番号１の位置１６はＧＬＰ−１（７−３５）の位置２２（Ｇｌｙ）と同じであり、配列番号１の位置２０はＧＬＰ−１（７−３５）の位置２６（Ｌｙｓ）と同じであり、その他の位置及びその他の配列については逆である。
【０２５８】
従って、本発明は、上記実施態様１において、
ａ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２２（配列番号１の位置１６）と同じ位置にＧｌｕ残基と
ｂ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２６（配列番号１の位置２０）と同じ位置にＡｒｇ残基とを含む
ｉ）配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で２、３、４、５、６、７又は８つのアミノ酸置換を有し、
ｉｉ）所望により、ＧＬＰ−１（７−３５）の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５（それぞれ配列番号１の位置２４、２５、２６、２７、２８、又は２９）と同じ位置のアミノ酸が存在しなくても良く、但し、ＧＬＰ−１（７−３５）の位置３０、３１、３２、３３又は３４（それぞれ配列番号１の位置２４、２５、２６、２７、又は２８）のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しなくても良く、
ｉｖ）所望により、Ｃ末端アミド基を有する、
修飾ＧＬＰ−１配列（配列番号１）を含む、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体も提供する。
【０２５９】
本発明は、上記実施態様１のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体について、上に説明され、上に示されたように、対応する位置の番号付けが修正された、本発明記載の上記実施態様及び特定の実施態様の何れかに対応する、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、方法とその使用、及びそれらの内容物を含む医薬組成物を更に提供する。
【０２６０】
１．ａ）配列番号１の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基と
ｂ）配列番号１の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基とを含む
ｉ）配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で２、３、４、５、６、７、又は８つのアミノ酸置換を有し、
ｉｉ）所望により、配列番号１の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５と同じ位置のアミノ酸が存在しなくても良く、但し、位置３０、３１、３２、３３又は３４のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しなくても良く、
ｉｉｉ）所望により、Ｃ末端アミド基を有する、
修飾ＧＬＰ−１配列（配列番号１）を含む、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２６１】
２．アルブミン結合残基で誘導体化され又はペグ化された実施態様１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２６２】
３．位置３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２８アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２６３】
４．位置３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２７アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２６４】
５．位置３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２６アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２６５】
６．位置３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２５アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。    
【０２６６】
７．位置３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２４アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２６７】
８．位置３０、３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２３アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２６８】
９．Ｃ末端アミド基を有する実施態様１から８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２６９】
１０．式（Ｉ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ
式（Ｉ）（配列番号２）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ９はＧｌｕ又はアルファ、アルファジメチル−ＧｌｕのようなＧｌｕ誘導体であり；
Ｘａａ１６はＶａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２０はＬｅｕ、Ｌｙｓ又はＣｙｓであり；
Ｘａａ２３はＧｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２４はＡｌａ又はＡｓｎであり；
Ｘａａ２５はＡｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７はＧｌｕ、Ａｌａ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３１はＴｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在せず；
但し、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３２、Ｘａａ３３、又はＸａａ３４が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基が存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７０】
１１．式（ＩＩ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ   
式（ＩＩ）（配列番号３）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７１】
１２．少なくとも一のアミノ酸残基が、
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−
｛Ａ−は、
2010538049.tif 000034
からなる群から選択され、
ここで、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からからなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2010538049.tif 000035
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され、
−Ｃ−は、
2010538049.tif 000036
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、ｃ及びｆは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１若しくは２であり、又は、ｃが１若しくは２の場合、ｂは０であり、及び、ｆが０の場合、ｅは１若しくは２であり、又は、ｆが１若しくは２の場合、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、リンカーである｝
で誘導体化された、実施態様１から１１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７２】
１３．Ｄは、
2010538049.tif 000037
2010538049.tif 000038
なる群から選択され、
ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６から選択される、
実施態様１２に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７３】
１４．実施態様１から１３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体及び製薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【０２７４】
１５．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための、実施態様１から１４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７５】
１．ａ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基と
ｂ）ＧＬＰ−１（７−３５）の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基とを含む
ｉ）ＧＬＰ−１（７−３５）と比較して、総数で２、３、４、５、６、７、８又は９つのアミノ酸置換を有する、修飾ＧＬＰ−１（７−３５）（配列番号１）であるＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７６】
２．ＧＬＰ−１（７−３５）の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５と同じ位置のアミノ酸が存在せず、但し、位置３０、３１、３２、３３又は３４のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しない、実施態様１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７７】
３．ＧＬＰ−１アナログがｉ）Ｃ−末端がカルボキシル基又はｉｉｉ）Ｃ−末端にアミド基を含む、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７８】
４．アルブミン結合残基で誘導体化又はペグ化された実施態様１から３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２７９】
５．位置３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２８アミノ酸である、実施態様１から４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８０】
６．位置３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２７アミノ酸である、実施態様１から５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２８１】
７．位置３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２６アミノ酸である、実施態様１から６の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２８２】
８．位置３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２５アミノ酸である、実施態様１から７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。    
【０２８３】
９．位置３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２４アミノ酸である、実施態様１から８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８４】
１０．位置３０、３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２３アミノ酸である、実施態様１から９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８５】
１１．式（Ｉ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ
式（Ｉ）（配列番号２）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ９はＧｌｕ又はアルファ、アルファジメチル−ＧｌｕのようなＧｌｕ誘導体であり；
Ｘａａ１６はＶａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２０はＬｅｕ、Ｌｙｓ又はＣｙｓであり；
Ｘａａ２３はＧｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２４はＡｌａ又はＡｓｎであり；
Ｘａａ２５はＡｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７はＧｌｕ、Ａｌａ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３１はＴｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在せず；
但し、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３２、Ｘａａ３３、又はＸａａ３４が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基が存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から１０の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８６】
１２．式（ＩＩ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ   
式（ＩＩ）（配列番号３）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から１０の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８７】
１３．少なくとも一のアミノ酸残基が、
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−
｛Ａ−は、
2010538049.tif 000039
からなる群から選択され、
ここで、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択され、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からからなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2010538049.tif 000040
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され、
−Ｃ−は、
2010538049.tif 000041
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、ｃ及びｆは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１若しくは２であり、又は、ｃが１若しくは２の場合、ｂは０であり、及び、ｆが０の場合、ｅは１若しくは２であり、又は、ｆが１若しくは２の場合、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、リンカーである｝
で誘導体化された、実施態様１から１２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８８】
１４．Ｄは、
2010538049.tif 000042
なる群から選択され、
ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６から選択される、
実施態様１３に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２８９】
１５．［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３３）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）ペプチド；
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン３１｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（デスアミノＨｉｓ７、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン３１｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（デスアミノＨｉｓ７、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｎｌｅ３０、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛トランス−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］−［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１−（７−３３）アミド；
［デスアミノＨｉｓ７、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］−ＧＬＰ−１（７−３４）；
［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド；
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［デスアミノＨｉｓ７、Ａｓｐ１１、Ｇｌｕ１８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ａｓｐ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド；
［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３３）−アミド；
Ｎ−イプシロン３１−｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝
エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−Ｎ−ベータ３４−（２−（ビス−カルボキシメチルアミノ）アセチル）［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１、Ｄａｐ３４］ＧＬＰ−１（７−３４）アミド、
から選択される、実施態様１から１４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２９０】
１６．実施態様１から１５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体又はその製薬的に許容可能な塩、アミド、アルキル、又はエステル及び製薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【０２９１】
１７．医薬として使用するための、実施態様１から１５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は実施態様１６に記載の医薬組成物。
【０２９２】
１８．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための、実施態様１から１５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は実施態様１６に記載の医薬組成物。
【０２９３】
１９．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための医薬の調製における、実施態様１から１５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は実施態様１６に記載の医薬組成物の使用。
【０２９４】
２０．実施態様１から１５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体、又は実施態様１６に記載の医薬組成物の薬学的に活性な量を投与することによる、高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防の方法。
【実施態様】
【０２９５】
１．配列番号１の位置２２と同じ位置にＧｌｕ残基と
配列番号１の位置２６と同じ位置にＡｒｇ残基とを含む、
配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で２、３、４、５、６、７、又は８つのアミノ酸置換を有し、
所望により、配列番号１の位置３０、３１、３２、３３、３４、又は３５と同じ位置のアミノ酸が存在しなくても良く、但し、位置３０、３１、３２、３３又は３４のアミノ酸が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基も存在しなくても良く、
所望により、Ｃ末端アミド基を有する、
修飾ＧＬＰ−１配列（配列番号１）を含む、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２９６】
２．アルブミン結合残基で誘導体化され又はペグ化された実施態様１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２９７】
３．位置３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２８アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０２９８】
４．位置３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２７アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０２９９】
５．位置３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２６アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０３００】
６．位置３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２５アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。    
【０３０１】
７．位置３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２４アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０２】
８．位置３０、３１、３２、３３、３４及び３５のアミノ酸が存在せず、ＧＬＰ−１アナログの全長が２３アミノ酸である、実施態様１又は２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０３】
９．Ｃ末端アミド基を有する実施態様１から８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０４】
１０．位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、３つのアミノ酸置換を有する、実施態様１から９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０５】
１１．配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４からなる群から選択される位置に置換を有する、実施態様１から１０の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０６】
１２．デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４からなる群から選択される置換を有する、実施態様１１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０７】
１３．デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される置換を有する、実施態様１１から１２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０８】
１４．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択される置換を有する、実施態様１１から１３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３０９】
１５．位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、４つのアミノ酸置換を有する、実施態様１から９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１０】
１６．配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４からなる群から選択される位置に２つの置換を有する、実施態様１から９及び１５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１１】
１７．デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４からなる群から選択される２つの置換を有する、実施態様１５から１６の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１２】
１８．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択されるアミノ酸置換を有する、実施態様１５から１７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１３】
１９．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８から成る群から選択されるアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択されるアミノ酸置換を有する、実施態様１５から１８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１４】
２０．位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、５つのアミノ酸置換を有する、実施態様１から９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１５】
２１．配列番号１の配列７から３５と比較して、位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４の群から選択される位置に３つのアミノ酸置換を有する、実施態様１から９及び２０の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１６】
２２．デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４の群から選択される３つのアミノ酸置換を有する、実施態様２０から２１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１７】
２３．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択される一つのアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される２つのアミノ酸置換を有する、実施態様２０から２２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１８】
２４．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択される一つのアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される２つのアミノ酸置換を有する、実施態様２０から２３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３１９】
２５．位置２２及び２６の置換を含む、配列番号１の配列７から３５と比較して、６つのアミノ酸置換を有する、実施態様１から９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２０】
２６．位置７、８、１８、２０、２３、２４、２５、２７、３０、３１、３３及び３４の群から選択される位置に４つのアミノ酸置換を有する、実施態様１から９及び２５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２１】
２７．デスアミノＨｉｓ７、Ａｉｂ８、Ｌｙｓ１８、Ｃｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｃｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｃｙｓ２３、Ａｓｎ２４、Ｖａｌ２５、Ａｌａ２７、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｃｙｓ３１、Ｌｙｓ３３、Ｃｙｓ３３、Ｌｙｓ３４、Ｃｙｓ３４及びＡｓｎ３４の群から選択される４つのアミノ酸置換を有する、実施態様２５から２６の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２２】
２８．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択される一つのアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される３つのアミノ酸置換を有する、実施態様２５から２７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０３２３】
２９．デスアミノＨｉｓ７及びＡｉｂ８からなる群から選択される一つのアミノ酸置換と、Ｌｙｓ１８、Ｌｙｓ２０、Ｌｙｓ２３、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１、Ｌｙｓ３３及びＬｙｓ３４からなる群から選択される３つのアミノ酸置換を有する、実施態様２５から２８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２４】
３０．式（Ｉ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ
式（Ｉ）（配列番号２）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ９はＧｌｕ又はアルファ、アルファジメチル−ＧｌｕのようなＧｌｕ誘導体であり；
Ｘａａ１６はＶａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２０はＬｅｕ、Ｌｙｓ又はＣｙｓであり；
Ｘａａ２３はＧｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２４はＡｌａ又はＡｓｎであり；
Ｘａａ２５はＡｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７はＧｌｕ、Ａｌａ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３１はＴｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｃｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在せず；
但し、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３２、Ｘａａ３３、又はＸａａ３４が存在しない場合、各々の下流のアミノ酸残基が存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から２９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２５】
３１．式（ＩＩ）
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｒ   
式（ＩＩ）（配列番号３）
｛上式中、
Ｘａａ７はＬ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニン又は４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロヘプチル）カルボン酸、又は（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８はＳｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３３はＶａｌ、Ｌｙｓであるか又は存在せず；
Ｘａａ３４はＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇであるか又は存在せず；
Ｘａａ３５はＧｌｙ、Ａｉｂであるか又は存在せず；
Ｒはアミドであるか又は存在しない｝
の配列を有する、実施態様１から２９の何れか一項に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２６】
３２．Ｒが存在しない実施態様３０から３１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２７】
３３．Ｘａａ３５及びＲが存在しない実施態様３０から３２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２８】
３４．Ｘａａ３４、Ｘａａ３５及びＲが存在しない実施態様３０から３３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３２９】
３５．Ｘａａ３３、Ｘａａ３４、Ｘａａ３５及び及びＲが存在しない実施態様３０から３４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３０】
３６．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で２つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３１】
３７．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で３つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号２において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１６、Ｘａａ１８、Ｘａａ２０、Ｘａａ２３、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２７、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される１つのアミノ酸置換である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３２】
３８．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で４つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号２において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１６、Ｘａａ１８、Ｘａａ２０、Ｘａａ２３、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２７、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される２つのアミノ酸置換である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３３】
３９．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で５つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号２において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１６、Ｘａａ１８、Ｘａａ２０、Ｘａａ２３、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２７、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される３つのアミノ酸置換である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３４】
４０．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で６つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号２において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１６、Ｘａａ１８、Ｘａａ２０、Ｘａａ２３、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２７、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される４つのアミノ酸置換である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３５】
４１．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で７つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号２において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１６、Ｘａａ１８、Ｘａａ２０、Ｘａａ２３、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２７、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される５つのアミノ酸置換である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３６】
４２．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で８つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号２の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号２の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号２において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１６、Ｘａａ１８、Ｘａａ２０、Ｘａａ２３、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２７、Ｘａａ３０、Ｘａａ３１、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される３つのアミノ酸置換である、実施態様３０及び３２から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３７】
４３．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で２つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３８】
４４．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で３つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号３において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１８、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される１つのアミノ酸置換である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３３９】
４５．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で４つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号３において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１８、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される２つのアミノ酸置換である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４０】
４６．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で５つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号３において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１８、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される３つのアミノ酸置換である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４１】
４７．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で６つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号３において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１８、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される４つのアミノ酸置換である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４２】
４８．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で７つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号３において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１８、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される５つのアミノ酸置換である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４３】
４９．配列番号１の配列７から３５と比較して、総数で８つのアミノ酸置換を有し、それらが配列番号３の位置２２と同じ位置のＧｌｕ残基と、配列番号３の位置２６と同じ位置のＡｒｇ残基と、配列番号１の配列７から３５と比較して、配列番号３において、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１８、Ｘａａ３０、Ｘａａ３３、Ｘａａ３４及びＸａａ３５からなる群から選択される３つのアミノ酸置換である、実施態様３１から３５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４４】
５０．Ｘａａ７がデスアミノ−ヒスチジンである実施態様３０から４９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４５】
５１．Ｘａａ８がＡｉｂである実施態様３０から４９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４６】
５２．ペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化されたアミノ酸が、Ｌｙｓ残基又はＣｙｓ残基である、実施態様１から５１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４７】
５３．ペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化されたアミノ酸が、Ｌｙｓ残基である、実施態様１から５１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４８】
５４．Ｃ−末端アミノ酸がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３４９】
５５．位置１８、２０、２３、３１、３３、３４又はＣ−末端アミノ酸がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５０】
５６．位置１８がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５１】
５７．位置２０がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５２】
５８．位置２３がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５３】
５９．位置３１がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５４】
６０．位置３３がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５５】
６１．位置３４がペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５６】
６２．ペグ化又はアルブミン結合残基で誘導体化された、実施態様１から５５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５７】
６３．少なくとも一のアミノ酸残基が、
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−
｛Ａ−は、
2010538049.tif 000043
からなる群から選択され、
ここで、ｎは１４、１５、１６  １７、１８及び１９からなる群から選択され、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からからなる群から選択され、
−Ｂ−は、
2010538049.tif 000044
からなる群から選択され、
ここで、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択され、
−Ｃ−は、
2010538049.tif 000045
からなる群から選択され、
ここで、ｂ及びｅは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、ｃ及びｆは０、１及び２からなる群から各々独立に選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１若しくは２であり、又は、ｃが１若しくは２の場合、ｂは０であり、及び、ｆが０の場合、ｅは１若しくは２であり、又は、ｆが１若しくは２の場合、ｅは０であり、
−Ｄ−は前記アミノ酸残基に結合し、リンカーである｝
で誘導体化された、実施態様１から６２の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５８】
６４．１つのアミノ酸残基が、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−で誘導体化された、実施態様６１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３５９】
６５．誘導体化されたアミノ酸残基がアミノ酸残基を含む実施態様６３から６４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６０】
６６．誘導体化されたアミノ酸残基が１級アミノ基を側鎖に含む、実施態様６３から６５の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６１】
６７．誘導体化されたアミノ酸残基がリジンである、実施態様６３から６６の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６２】
６８．唯一のアミノ酸残基が誘導体化された、実施態様６３から６７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０３６３】
６９．Ａ−は、
2010538049.tif 000046
である、実施態様６３から６８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６４】
７０．ｎは１５及び１７からなる群から選択され、より好ましくは１７である、実施態様６３から６９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６５】
７１．Ａ−は、
2010538049.tif 000047
である、実施態様６３から６８の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６６】
７２．ｐは１２、１３及び１４からなる群から選択され、より好ましくは１３である、実施態様６３から６８及び６９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６７】
７３．ｄは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、より好ましくは０、１、２であり、最も好ましくは１である、実施態様６１から６８及び６９から７０の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６８】
７４．ｄは０、１及び２からなる群から選択され、ｐは１２、１３又は１４からなる群から選択され、より好ましくはｄは１及び２からなる群から選択され、ｐは１３及び１４からなる群から選択され、最も好ましくは、ｄは１及びｐは１３である、実施態様６３から６８及び６９から７１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３６９】
７５．−Ｂ−は、
2010538049.tif 000048
である、実施態様６３から７４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７０】
７６．−Ｂ−は、
2010538049.tif 000049
である、実施態様６３から７４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７１】
７７．−Ｂ−は、
2010538049.tif 000050
である、実施態様６３から７４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７２】
７８．−Ｂ−は、
2010538049.tif 000051
である、実施態様６３から７４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７３】
７９．ｘは０、１及び２からなる群から選択され、より好ましくはｘは０及び１からなる群から選択され、最も好ましくはｘは１である、実施態様７８に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７４】
８０．−Ｂ−は、
2010538049.tif 000052
である、実施態様６３から７４の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０３７５】
８１．ｙは２、３、４、５、６、７、８、９及び１０からなる群から選択され、より好ましくは、ｙは２、３、４、５、６、７、及び８からなる群から選択される、実施態様８０に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７６】
８２．−Ｃ−は、
2010538049.tif 000053
である、実施態様６３から８１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７７】
８３．ｃは０及び１からなる群から選択され、ｂは１及び２からなる群から選択され、より好ましくは、ｂは１及びｃは０である、実施態様８２に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３７８】
８４．−Ｃ−は、
2010538049.tif 000054
である、実施態様６３から８１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０３７９】
８５．ｆは０及び１からなる群から選択され、ｅは１及び２からなる群から選択され、より好ましくはｅは１及びｆは０である、実施態様８４に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８０】
８６．−Ｃ−は、
2010538049.tif 000055
である、実施態様６３から８１の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。  
【０３８１】
８７．Ｄは、
2010538049.tif 000056
なる群から選択され、
ここで、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６から選択される、
実施態様６３から８６の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８２】
８８．−Ｄ−は、
2010538049.tif 000057
である、実施態様６３から８７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８３】
８９．ｋは１、２、３、１１及び２７からなる群から選択され、より好ましくはｋは１である実施態様８８に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８４】
９０．ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される、実施態様８８から８９の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８５】
９１．ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される、実施態様９１に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８６】
９２．−Ｄ−は、
2010538049.tif 000058
である、実施態様６３から８７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８７】
９３．ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される、実施態様９３に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８８】
９４．−Ｄ−は、
2010538049.tif 000059
である、実施態様１から８７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３８９】
９５．ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される、実施態様９５に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９０】
９６．−Ｄ−は、
2010538049.tif 000060
である、実施態様１から８７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９１】
９７．ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される、実施態様９７に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９２】
９８．−Ｄ−は、
2010538049.tif 000061
である、実施態様１から８７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。    
【０３９３】
９９．ｍは０、１、２、３、及び４からなる群から選択され、より好ましくは、ｍは０、１及び２からなる群から選択される、実施態様９９に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９４】
１００．Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−が、
2010538049.tif 000062
2010538049.tif 000063
から選択及び結合される、実施態様１から１００の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９５】
１０１．Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−が、
2010538049.tif 000064
2010538049.tif 000065
から選択及び結合される、実施態様１から１００の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９６】
１０２．Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−が、
2010538049.tif 000066
2010538049.tif 000067
から選択及び結合される、実施態様１から１００の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９７】
１０３．修飾ＧＬＰ−１配列と一又は複数のアルブミン結合残基の間に親水性リンカーを含む、実施態様１から１０３の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９８】
１０４．親水性リンカーが、修飾ＧＬＰ−１配列のアミノ基とアルブミン結合残基の官能基の間の架橋を形成する、両末端に適切な官能基を有する、非分岐オリゴエチレングリコール部位である、実施態様１０４に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０３９９】
１０５．［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３３）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）ペプチド、
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド、及び
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド、
からなる群から選択される、上記実施態様の何れかに記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０４００】
１０６．修飾ＧＬＰ−１の配列７−３７（配列番号１）が、前記実施態様の何れかに開示された、誘導体化又はペグ化されることを特徴とする、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体の患者中の効能時間を増加するための方法。
【０４０１】
１０７．修飾ＧＬＰ−１の配列７−３７（配列番号１）が、前記実施態様の何れかに開示された、誘導体化又はペグ化されることを特徴とする、ＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体の患者中の効能時間を約４０時間以上に増加するための方法。
【０４０２】
１０８．実施態様１から１０７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体と製薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【０４０３】
１０９．非経口投与に適合した実施態様１０９に記載の医薬組成物。
【０４０４】
１１０．医薬の調製のための実施態様１から１０７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体の使用。
【０４０５】
１１１．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防のための医薬の調製のための、実施態様１から１０７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体の使用。
【０４０６】
１１２．２型糖尿病の疾患進行の遅延又は予防のための医薬の調製のための、実施態様１から１０７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体の使用。
【０４０７】
１１３．食事摂取減少、β細胞アポトーシス低減、β細胞機能及びβ細胞容積の増加、及び／又はβ細胞に対するグルコース感受性の回復のための医薬の調製のための、実施態様１から１０７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体の使用。
【０４０８】
１１４．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、肥満、高血圧、Ｘ症候群、脂質異常症、認知障害、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の心臓血管疾患、卒中、炎症性腸症候群、消化不良及び胃潰瘍の治療又は予防に使用するための、実施態様１から１０７の何れか一に記載のＧＬＰ−１アナログ又はその誘導体。
【０４０９】
ここに引用した刊行物、特許出願及び特許を含む全ての文献は、各文献が個々にかつ特に出典明示により援用され、その全体がここに記載されているのと同じ程度に、出典明示によりここに援用される。
【０４１０】
全ての表題及び副題は、ここでは便宜的にのみ使用されており、決して本発明を限定するものとは解してはならない。
【０４１１】
その全ての可能な変形例における上述の要素の任意の組合せも、他の記載が示されていないか文脈上はっきりと矛盾していない限りは、本発明に包含される。
【０４１２】
発明を記述する文脈で使用される「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」なる用語と類似の指示対象は、ここで別の記載がなされていないか、文脈上はっきりと矛盾していない限りは、単数形及び複数形の双方をカバーしていると解されるものである。
【０４１３】
ここでの値の範囲の記載は、他の記載が示されていない限りは、その範囲に入るそれぞれ別個の値に個々に言及することを省略する方法となるものであることを単に意図しており、それぞれ別個の値は、ここで個々に列挙されているように、明細書に援用される。他の記載がなされない限り、ここで提供される全ての正確な値は、対応する近似値の代表例である(例えば、特定の因子又は測定に対して提供される全ての正確な例示的値は、適切な場合は「約」により修飾される、対応する近似測定値をまた提供すると考えることができる)。
【０４１４】
ここで記載される全ての方法は、ここで示され、前後関係ではっきりと矛盾していない限りは、任意の適切な順序で実施することができる。
【０４１５】
ここに提供される任意かつ全ての例、又は例示的言語(例えば「等」)の使用は、単に本発明をより明らかにすることを意図しており、特に別段の記載がない限り、本発明の範囲に限定をもたらすものではない。明細書中の如何なる語句も、明示的に記載していない限り、如何なる要素も本発明の実施に必須であることを示しているものと解してはならない。
【０４１６】
ここでの特許文献の引用及び援用は単に便宜上なされているもので、そのような特許文献の有効性、特許性、及び／又は権利行使性についての見解を反映させるものではない。
【０４１７】
他に言及しない又は前後関係ではっきりと矛盾していない限りは、要素又は要素群に関して、「含有する」、「有する」、「含む」又は「含んでいる」等の用語を使用する本発明の任意の実施態様又は実施態様のここでの記載は、その特定の要素又は要素群「からなる」、「本質的になる」、又は「実質的に含む」本発明の類似した実施態様又は実施態様をサポートすることを意図したものである(例えば、特定の要素を含むものとしてここに記載されている製剤は、他に言及しない限り又は前後関係ではっきりと矛盾していないならば、その要素からなる製剤をまた記載しているものと理解すべきである)。
【０４１８】
本発明は、適用される法律によって許容される最大の範囲で、ここに提示された実施態様又は特許請求の範囲に記載された主題事項のあらゆる変形例及び均等物を含む。
【０４１９】
本発明を次の代表的な実施例で更に例証するが、これは本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。
【０４２０】
上記説明及び次の実施例において開示した特徴は、別個にかつその任意の組合せとしても、本発明をその多様な形態で実施するための材料になり得る。
【実施例】
【０４２１】
使用される略語：
ｒ．ｔ：  室温
ＤＩＰＥＡ：  ジイソプロピルアミン
Ｈ２Ｏ：  水
ＣＨ３ＣＮ：  アセトニトリル
ＤＭＦ：  Ｎ、Ｎジメチルホルムアミド
ＨＢＴＵ：  ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−）−１、１、３、３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｆｍｏｃ：  ９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル
Ｂｏｃ：  ｔｅｒｔブチルオキシカルボニル
ＯｔＢｕ：  ｔｅｒｔブチルエステル
ｔＢｕ：  ｔｅｒｔブチル
Ｔｒｔ：  トリフェニルメチル
Ｐｍｃ：  ２、２、５、７−ペンタメチル−クロマン−６−スルフォニル
Ｄｄｅ：  １−（４、４−ジメチル−２、６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル
ｉｖＤｄｅ：  １−（４、４−ジメチル−２、６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル
Ｍｔｔ：  ４−メチルトリチル
Ｍｍｔ：  ４−メトキシトリチル
ＤＣＭ：  ジクロロメタン
ＴＩＳ：  トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ：  トリフルオロ酢酸
Ｅｔ２Ｏ：  ジエチルエーテル
ＮＭＰ：  １−メチル−ピロリジン−２−オン
ＤＩＰＥＡ：  ジイソプロピルエチルアミン
ＨＯＡｔ：  １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＣ：  ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＢＵ：  １、８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセン−７
ＭＷ：  分子量
【０４２２】
Ａ：樹脂結合ペプチドの合成
ＳＰＰＳ法Ａ
ＨＢＴＵ（２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−)−１、１、３、３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）又はＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアソール−１−イル）−１、３、３、３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロフォスフェート）を介したＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリジン）中でのカップリング、及びＦｍｏｃ保護基の除去のＵＶモニターを用いた製造元提供のＦａｓｔＭｏｃＵＶプロトコルを用いた、０．２５ｍｍｏｌ又は１．０ｍｍｏｌスケールのアプライドバイオシステムズ４３３ペプチド合成機において、Ｆｍｏｃ法に従って保護されたペプチジル樹脂を合成した。ペプチドアミドの合成に用いた開始樹脂はＲｉｎｋ−ａｍｉｄｅ樹脂であり、Ｗａｎｇ又はクロロトリチル樹脂をカルボキシＣ末端のペプチドとして用いた。用いた保護されたアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ（Ｆｍｏｃ−アミノイソブチル酸）のような非天然のアミノ酸を除いて、ＡＢＩ４３３Ａ合成機に適合するように事前計量されたカートリッジで提供される標準的なＦｍｏｃ−アミノ酸（例えば、Ａｎａｓｐｅｃ、又はＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから提供される）であった。Ｎ末端アミノ酸はアルファアミノ基がＢｏｃ保護された（例えば、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）ＯＨはＮ末端をヒスチジンのペプチドに用いた）。位置２６のリジンのイプシロンアミノ基は、アルブミン結合部位とスペーサーの連結のための経路に依存して、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、又はＢｏｃ、の何れかで保護した。ペプチド合成は、幾つかの場合において、限定されるものではないが、２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル又は２、４、６−トリメトキシベンジルのような酸性条件下で開裂し得る基で、ジペプチドアミド結合が保護されたジペプチドを使用することにより改善し得る。セリン又はスレオニンがペプチド中に存在する場合、シュードプロリンジペプチドを使用しても良い。（例えば、Ｎｏｖｏｂｉｏｃｈｅｍ  ２００２／２００３のカタログ又は新版、又は「Ｊ．Ｐｅｐ．Ｓｃｉ．」、５巻、ｐ．４０３を参照されたい。
【０４２３】
ＳＰＰＳ法Ｂ
ペプチド合成の別の方法は、マイクロ波ベースのＬｉｂｅｒｔｙペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）でのＦｍｏｃ化学によった。樹脂はＴｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ ＲＡＭで０．２４ｍｍｏｌ／ｇの負荷であった。カップリング化学はＮＭＰ中０．３Ｍのアミノ酸溶液と８−１０倍のモル過剰を用いるＮＭＰ中のＤＩＣ／ＨＯＡｔであった。カップリング条件は７０℃までで５分であった。脱保護は、７０℃まででＮＭＰ中の５％ピペリジンを用いた。リジン側鎖の化学修飾が望ましい場合、リジンをＬｙｓ(ｍｔｔ)として導入した。Ｍｔｔ基を、適切なヘキサフルオロイソプロパノール中に２０分間樹脂を懸濁させることにより除き、ついでＤＣＭ及びＮＭＰで洗浄した。リジンの化学修飾をマニュアル合成によるか又はＬｉｂｅｒｔｙでの一又は複数の自動化工程とその後のマニュアルカップリングによって実施した。ペプチド合成の他の方法は、ＨＢＴＵカップリングを伴うＡＢＩ４３３でのＦｍｏｃ化学を用いるものであった。合成後、樹脂をＤＣＭで洗浄し、乾燥させ、ペプチドをＴＦＡ／ＴＩＳ／水(９２．５／５／２．５)での２時間の処理によって樹脂から切断し、ジエチルエーテルで沈殿させた。ペプチドを３０％酢酸又は類似の溶媒に再溶解させ、アセトニトリル／ＴＦＡを使用してＣ１８カラムでの標準的ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。ペプチドの同一性はＭＡＬＤＩ−ＭＳによって確認した。
【０４２４】
ＳＰＰＳ法Ｃ
ＤＩＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）及びＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）を介したＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリジン）中でのカップリングを用いた製造元提供のプロトコルを用いた、０．２５ｍｍｏｌスケールのアドバンストケムテック合成機（ＡＰＥＸ３４８）において、保護されたペプチジル樹脂をＦｍｏｃ法に従って合成した。ペプチドアミドの合成に用いられる開始樹脂はＲｉｎｋ−ａｍｉｄｅ樹脂であり、Ｗａｎｇ又はクロロトリチル樹脂をカルボキシＣ末端のペプチドとして用いた。用いた保護されたアミノ酸誘導体は、標準的なＦｍｏｃ−アミノ酸（例えば、Ａｎａｓｐｅｃ、又はＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから提供される）であった。Ｎ末端アミノ酸はアルファアミノ基がＢｏｃ保護された（例えば、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）ＯＨはＮ末端がヒスチジンのペプチドに用いられる）。位置２６のリジンのイプシロンアミノ基は、アルブミン結合部位とスペーサーの連結のための経路に依存して、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、又はＢｏｃ、の何れかで保護した。ペプチド合成は、幾つかの場合において、例えば、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍのシュードプロリン、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔｂｕ）−Ｓｅｒ（Ｍｅ、Ｍｅ）−ＯＨのようなジペプチドを使用することにより改善し得る。例えば、Ｎｏｖｏｂｉｏｃｈｅｍ  ２００２／２００３のカタログ又は新版、又は「Ｊ．Ｐｅｐ．Ｓｃｉ．」、５巻、ｐ．４０３を参照されたい。
【０４２５】
ｉｖＤｄｅ又はＤｄｅ−保護の除去の手順。
樹脂（０．２５ｍｍｏｌ）は、手動の浸透／濾過装置に設置され、Ｄｄｅ又はｉｖＤｄｅ基を除去するために、Ｎ−メチルピロリドン（２０ｍｌ、２×１２分）中の２％のヒドラジンで処理し、Ｎ−メチルピロリドン（４×２０ｍｌ）で洗浄した。
【０４２６】
Ｍｔｔ又はＭｍｔ−保護の除去の手順。
樹脂（０．２５ｍｍｏｌ）は、手動の浸透／濾過装置に設置され、Ｍｔｔ又はＭｍｔ−基を除去するために、２％ＴＦＡ及びＤＣＭ（２０ｍｌ、５−１０分を繰り返し６から１２回）中の２から３％のＴＩＳで処理し、ＤＣＭ（２×２０ｍｌ）、１０％ＭｅＯＨ及びＤＣＭ（２×２０ｍｌ）中の５％ＤＩＰＥＡ及びＮ−メチルピロリドン（４×２０ｍｌ）で洗浄した。
【０４２７】
Ｍｔｔ−保護の除去の別の手順：
樹脂はシリンジに設置し、Ｍｔｔ基をだつ保護するために、ヘキサフルオロイソプロパノールで２×１０分処理した。その後、樹脂はＤＣＭ及びＮＭＰで上記のように洗浄した。
【０４２８】
リジン残基の側鎖への付加の手順。
アルブミン結合残基（式ＩのＢ−Ｕ−側鎖）は、樹脂結合ペプチドへのアシル化又は、限定されるものではないが、ＤＩＣ、ＨＯＢｔ／ＤＩＣ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ又はＨＢＴＵのような、標準的なアシル化剤を用いて、溶液中で保護されていないアミノ酸をアシル化することによって、ペプチドに付加し得る。
【０４２９】
樹脂結合ペプチドへの付加：  
経路Ｉ
オクタデカン二酸モノ−（２、５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステルのような活性化（活性エステル又は対称無水物）アルブミン結合残基（Ａ−Ｂ）−式Ｉの側鎖）（ＥｂａｓｈｉらＥＰ５１１６００、樹脂結合ペプチドに対して４モル等量）をＮＭＰ（２５ｍＬ）に溶解させ、樹脂を添加し、室温で終夜振盪した。反応混合物を濾過し、樹脂はＮＭＰ、ジクロロメタン、２−プロパノール、メタノール及びジエチルエーテル十分に洗浄した。
【０４３０】
経路ＩＩ
アルブミン結合残基（式ＩのＡ−（Ｂ）−側鎖）をＮ−メチルピロリドン／塩化メチレン（１：１、１０ｍｌ）に溶解させた。ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（樹脂に対し４モル等量）及びジイソプロピルカルボジイミドのような活性化試薬（樹脂に対し４モル等量）を添加し、溶液を１５分間振盪した。溶液を樹脂に添加し、ジイソプロピルエチエルアミン（樹脂に対し、４モル等量）を添加した。樹脂は室温で２から２４時間振盪した。樹脂はＮ−メチルピロリドン（２×２０ｍｌ）、Ｎ−メチルピロリドン／塩化メチレン（１：１）（２×２０ｍｌ）及び塩化メチレン（２×２０ｍｌ）で十分に洗浄した。
【０４３１】
経路ＩＩＩ
オクタデカン二酸モノ−（２、５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステルのような活性化（活性エステル又は対称無水物）アルブミン結合残基（Ａ−Ｂ）−式Ｉの側鎖）（ＥｂａｓｈｉらＥＰ５１１６００、樹脂結合ペプチドに対して１から１．５モル等量）をアセトニトリル、ＴＨＦ、ＤＭＳＯのような有機溶媒又は水／有機溶媒（１から２ｍｌ）に溶解させ、１０等量のＤＩＰＥＡと共に水中のペプチド溶液（１０−２０ｍｌ）に添加した。ｔｅｒｔ−ブチルのようなアルブミン結合残基の保護基の場合、反応混合物は終夜凍結乾燥させ、その後単離された粗ペプチドを脱保護した。ｔｅｒｔ−ブチル基の場合、ペプチドはトリフルオロ酢酸、水、トリイソプロピルシラン（９０：５：５）の混合物に溶解させた。３０分後混合物を真空蒸発させ、最終ペプチドは分取ＨＰＬＣで精製した。
【０４３２】
Ｆｍｏｃ−保護の除去の手順：
樹脂（０．２５ｍｍｏｌ）を手動振盪装置中の濾過フラスコに設置し、Ｎ−メチルピロリドン／塩化メチレン（１：１）（２×２０ｍｌ）及びＮ−メチルピロリドン（１×２０ｍｌ）、Ｎ−メチルピロリドン中２０％ピペリジン溶液で処理した（３×２０ｍｌ、各１０分）。樹脂はＮ−メチルピロリドン（２×２０ｍｌ）、Ｎ−メチルピロリドン／塩化メチレン（１：１）（２×２０ｍｌ）及び塩化メチレン（２×２０ｍｌ）で洗浄した。
【０４３３】
ペプチドの樹脂からの切断の手順：
トリフルオロ酢酸、水及びトリイソプロピルシラン（９５：２．５：２．５から９２：４：４）の混合物と共に室温で１８０分間攪拌することによりペプチドを樹脂から切断した。切断混合物を濾過し、濾液は窒素ガスによって油脂に濃縮した。粗ペプチドは４５ｍｌのジエチルエーテルを用いて沈殿させ、４５ｍｌのジエチルエーテルで１から３回洗浄した。
【０４３４】
精製：  
粗ペプチドは分取ＨＰＬＣを用いて、５μ又は７μのＣ−１８シリカを封入した２０ｍｍ×２５０ｍｍカラムにおいて精製した。ペプチドに依存して、一又は二の精製システムを用いた。
ＴＦＡ：  乾燥後、粗ペプチドは５ｍｌ５０％の酢酸水に溶解させ、水で２０ｍｌに希釈し、カラムに注入し、４０℃で５０分間、１０ｍｌ／分で、４０％から６０％の０．１％ＴＦＡ中アセトニトリルの勾配溶出した。画分を含むペプチドを回収した。精製したペプチドは溶出液を水で希釈した後に凍結乾燥した。
【０４３５】
硫酸アンモニウム：  カラムは濃硫酸でｐＨ２．５に調整された０．０５Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４中の４０％のＣＨ３ＣＮで平衡化した。乾燥後、粗ペプチドを５ｍｌ、５０％の酢酸水に溶解させ、水で２０ｍｌに希釈し、カラムに注入し、４０℃で５０分間、１０ｍｌ／分で、４０％から６０％の、０．０５ＭのｐＨ２．５の（ＮＨ４）２ＳＯ４中アセトニトリルの勾配溶出した。画分を含むペプチドを回収し、３倍量の水で希釈し、０．１％ＴＦＡで平衡化したＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）Ｃ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  ｐａｒｔ．５１９１０番）に通した。それらは次いで０．１％ＴＦＡを含む７０％アセトニトリルで溶出し、精製したペプチドは溶出液を水で希釈下の後に凍結乾燥させることにより単離した。
得られた最終産物はＲＰ−ＨＰＬＣ（保持時間）及びＬＣＭＳによって同定した。
ＲＰ−ＨＰＬＣ分析は２１４ｎｍでのＵＶ検出及び例えば、Ｖｙｄａｃ、２１８ＴＰ５４、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μ、Ｃ−１８シリカカラム（Ｔｈｅ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｇｒｏｕｐ、ヘスペリア、ＵＳＡ）によって行われ、４２℃で１ｍｌ／分で溶出される。最も多くは下の具体的な条件の一つを用いた：
【０４３６】
方法０３−Ａ１−１
ＨＰＬＣ(方法０３−Ａ１−１)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ２６９０システムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で１ｍｌ／分で溶出する、２１８ＴＰ５４ ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ ５μ Ｃ−１８シリカカラム（Ｔｈｅ  Ｓｅｐｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｈｅｓｐｅｒｉａ）において、２１４、２５４、２７６及び３０１ｎｍにて収集した。カラムを、４Ｍの硫酸でｐＨ２．５に調整した１０％の０．５Ｍの硫酸アンモニウムで平衡にした。注入後、サンプルを５０分間、同様の水系緩衝液中で０％から６０％のアセトニトリルの勾配溶出させた。
【０４３７】
方法０３−Ｂ１−２
ＨＰＬＣ(方法０３−Ｂ１−２)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ２６９０システムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で０．５ｍｌ／分で溶出する、Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ  Ｃ−１８（４、５×１５０ｍｍ、５μ）において、２１４、２５４、２７６及び３０１ｎｍにて収集した。カラムを、水にＴＦＡの入った水溶液（０．１％）で平衡にした。注入後、サンプルを５０分間、水にＴＦＡの入った水溶液（０．１％）で０％から６０％のアセトニトリル(＋０．１％のＴＦＡ)の勾配溶出させた。
【０４３８】
方法０２−Ｂ１−１
ＨＰＬＣ(方法０２−Ｂ１−１)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ２４８７二重バンド検出器が取り付けられたアライアンスウォーターズ２６９５システムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で、Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ５３、Ｃ１８、３００Å、５ｕｍ、３．２ｍｍ×２５０ｍｍカラムにおいて、２１４及び２５４ｎｍにて収集した。流速０．５０ｍｌ／分で５０分間、０％から６０％のアセトニトリル、９５から３５％の水及び５％の水中トリフルオロ酢酸（１．０％）の線形勾配溶出させた。
【０４３９】
方法０１−Ｂ４−２
ＨＰＬＣ(方法０１−Ｂ４−２)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ６００Ｓシステムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で、Ｓｙｍｍｅｔｒｙ３００  Ｃ１８、５ｕｍ、３．９ｍｍ×１５０ｍｍカラムにおいて、２１４及び２５４ｎｍにて収集した。流速１．０ｍｌ／分で１５分間、５％から９５％のアセトニトリル、９０から０％の水及び５％の水中トリフルオロ酢酸（１．０％）の線形勾配溶出させた。
【０４４０】
方法０２−Ｂ４−４
ＨＰＬＣ(方法０２−Ｂ４−４)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ２４８７二重バンド検出器が取り付けられたアライアンスウォーターズ２６９５システムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で、Ｓｙｍｍｅｔｒｙ３００  Ｃ１８、５ｕｍ、３．９ｍｍ×１５０ｍｍカラムにおいて、２１４及び２５４ｎｍにて収集した。流速１．０ｍｌ／分で１５分間、５％から９５％のアセトニトリル、９０から０％の水及び５％の水中トリフルオロ酢酸（１．０％）の線形勾配溶出させた。
【０４４１】
ＨＰＬＣ法０２−Ｂ６−１
ＨＰＬＣ(方法０２−Ｂ６−１)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ２４８７二重バンド検出器が取り付けられたウォーターズ２６９５システムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で、Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ５３、Ｃ１８、３００Å、５ｕｍ、３．２ｍｍ×２５０ｍｍカラムにおいて、２１４及び２５４ｎｍにて収集した。流速０．５０ｍｌ／分で５０分間、０％から９０％のアセトニトリル、９５から５％の水及び５％の水中トリフルオロ酢酸（１．０％）の線形勾配溶出させた。
【０４４２】
ＨＰＬＣ法０３−Ｂ６−１
ＨＰＬＣ(方法０３−Ｂ６−１)：  ＲＰ−分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ２６９０システムを使用して実施した。ＵＶ検出を、４２℃で１ｍｌ／分で溶出する、２１８ＴＰ５４ ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ ５μ Ｃ−１８シリカカラム（Ｔｈｅ  Ｓｅｐｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｈｅｓｐｅｒｉａ）において、２１４、２５４、２７６及び３０１ｎｍにて収集した。カラムを、水にＴＦＡの入った水溶液（０．１％）で平衡にした。注入後、サンプルを５０分間、水にＴＦＡの入った水溶液（０．１％）で０％から６０％のアセトニトリル(＋０．１％のＴＦＡ)の勾配溶出させた。カラムを、水にＴＦＡの入った水溶液（０．１％）で平衡にした。注入後、サンプルを５０分間、水にＴＦＡの入った水溶液（０．１％）で０％から９０％のアセトニトリル(＋０．１％のＴＦＡ)の勾配溶出させた。
【０４４３】
ＨＰＬＣ（方法Ｉ−ＢＤＳＢ２）：
バッファーＡ：  １０ｍＭトリス、４ＮのＨ２ＳＯ４でｐＨ７．３に調整された１５ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４、２０％ｖ／ｖのアセトニトリル
バッファーＢ：  ８０％ｖ／ｖのアセトニトリル
流速：  １．０ｍｌ／分
勾配：  ０−２０分は１０−５０％のＢ
カラム：  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｊｕｐｉｔｅｒ  ４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、Ｃ４、  ５μ、３００Å
カラム温度：  ４０℃。
【０４４４】
その代わりに、分取勾配溶出は、上記のように実施し得、化合物が溶出されたアセトアセトニトリルのパーセンテージが示された。同一性はＭＡＬＤＩによって確認された。
【０４４５】
以下の装置を用いる：
ＬＣＭＳはＳｃｉｅｘ  ＡＰＩ  １００  Ｓｉｎｇｌｅ  ｑｕａｄｒｏｐｏｌｅ  ＭＳ、パーキン・エルマー・シリーズ２００  Ｑｕａｒｄポンプ、パーキン・エルマー・シリーズ２００オートサンプラー、アプライドバイオシステムズ７８５ＡＵＶ検出器、Ｓｅｄｅｘ７５蒸発光散乱式検出器から構成される設定に基づいて実施される。
【０４４６】
装置の制御とデータの取得は、ウィンドウズ２０００コンピュータで実行されるＳｃｉｅｘ  Ｓａｍｐｌｅ制御ソフトによって行われる。
【０４４７】
ＨＰＬＣポンプは、
Ａ：  水中の０．０５％トリフルオロ酢酸
Ｂ：  アセトニトリル中の０．０５％トリフルオロ酢酸
を含む２つの溶出リザーバに接続される。
【０４４８】
分析は、アセトニトリルで勾配溶出されるカラム上に適切な容量のサンプル（好ましくは２０μｌ）を、室温で注入することにより実施される。
【０４４９】
使用されるＨＰＬＣ条件、検出器の設定及びＭＳ設定は下の表に記載される。
【０４５０】
カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ−１８×３ｍｍ  ｉｄ  ５μｍ
勾配：  １．５ｍｌ／分で、７．５分間、５％から９０％のアセトニトリル線形
検出器：  ２１０ｎｍ（ＤＡＤからアナログ出力）
ＥＬＳ（ＥＬＳからアナログ出力）、４０°Ｃ
ＭＳイオン化モードＡＰＩ−ＥＳ
【０４５１】
別のＬＣＭＳはヒューレットパッカードシリーズ１１００Ｇ１３１２Ａビンポンプ、ヒューレットパッカードシリーズ１１００カラム室、ヒューレットパッカードシリーズ１１００Ｇ１３１５Ａ ＤＡＤダイオードアレイ検出器、ヒューレットパッカードシリーズ１１００ＭＳＤ及びＨＰケムステーションソフトウェアで制御されたＳｅｄｅｒｅ７５蒸発光散乱式検出器から構成される設定において実施される。ＨＰＬＣポンプは、
Ａ：  水中の１０ｍＭのＮＨ４ＯＨ
Ｂ：  ９０％アセトニトリル中の１０ｍＭのＮＨ４ＯＨ
を含む２つの溶出容器に接続される。
分析は、Ａ及びＢで勾配溶出されるカラム上に適切な容量のサンプル（好ましくは２０μｌ）を、２３℃で注入することにより実施される。
ＨＰＬＣ条件、使用される検出器の設定及びＭＳの設定は下の表に記載される。
カラム  Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ−１８  ×  ３ｍｍ  ｉｄ  ５μｍ
勾配  １．５ｍｌ／分で、６．５分間、５％から１００％のアセトニトリル線形
検出器  ２１０ｎｍ（ＤＡＤからアナログ出力）
ＥＬＳ（ＥＬＳからアナログ出力）
ＭＳイオン化モードＡＰＩ−ＥＳ。スキャン１００−１０００ａｍｕステップ０．１ａｍｕ
【０４５２】
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：
ペプチドの分子量をマトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析法(ＭＡＬＤＩ−ＭＳ)を使用して定量し、Ｍｉｃｒｏｆｌｅｘ（Ｂｒｕｋｅｒ）で記録した。α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸の基質を使用した。
【０４５３】
分析ＨＰＬＣ条件（方法Ｉ）：
０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏを用いたカラム（Ｘｔｅｒｒａ（商標）ＭＳ  Ｃ１８、５ｕｍ、４．６×１５０ｍｍカラム、Ｐ７Ｎ  １８６  ０００４９０）の平衡化及び２５分間の０％ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏから６０％ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、次いで５分間の６０％から１００％の勾配溶出。
【０４５４】
この発明の実施例において、命名法と構造図の意味は以下の通り：
天然アミノ酸は一文字表記を用い、例えばＨはＬ−ヒスチジンをＡはＬ−アラニン等を示す。アミノ酸の三文字略語を用いても良く、例えば、ＨｉｓはＬ−ヒスチジンを、ＡｌａはＬ−アラニン等を示す。非天然アミノ酸は、アミノイソブチル酸がＡｉｂであるように、三文字略語を用いる。アミノ酸の位置は、Ｌｙｓ３３のようにアミノ酸表記の後ろに上付き数字を用いるか、又はＬｙｓ３３のように示し得る。Ｎ−末端アミノ基はＮＨ２のように又はＨのように表記し得る。Ｃ−末端カルボキシル基は−ＯＨのように又は−ＣＯＯＨのように表記し得る。Ｃ−末端アミド基は−ＮＨ２のように表記される。
下の構造
2010538049.tif 000068
共にＨｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅを意味する。
【０４５５】
リジンのイプシロンアミノ基はギリシャ文字ε又は綴りで「イプシロン」と表記される。
【０４５６】
下の実施例の構造は、幾つかの場合において、天然のアミノ酸の一文字表記とアミノイソブチル酸の三文字略語Ａｉｂと組み合わせである。幾つかの場合において、幾つかのアミノ酸は全構造に拡大されて表示される。従って、誘導体化されたリジンは、位置２０のリジンが拡大された実施例２のように全構造に拡大されて表示され得る。従って、位置１９のチロシンと位置２０の拡大されたリジンの間の、（Ｈで示された）窒素は、実施例２において２つのアミノ酸を連結するペプチド結合の窒素である。上の手順に従って、本発明を限定するものではない実施例として、下記の誘導体は調製される：
【０４５７】
実施例１
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000069
調製法：  Ｂ
ペプチドは６４％アセトニトリルで溶出した。
構造はＭＡＬＤＩ−ＭＳで確認した。  
計算されたＭＷ＝３０５６．４
【０４５８】
実施例２
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３３）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000070
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護された。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳで同定された。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３２分  
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ  ＝  ３９０１      
計算されたＭＷ  ＝  ３９００．５
【０４５９】
実施例３
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000071
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護された。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳで同定された。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３２．９分  
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ＝３８５８．７      
計算されたＭＷ＝３８５９．３
【０４６０】
実施例４
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000072
調製法：  Ａ
ＨＰＬＣ（方法０３−Ａ１−１）
ＲＴ＝４４．６分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１０２９、２（Ｍ＋３Ｈ）３＋ 
計算されたＭＷ＝３０８４．４
【０４６１】
実施例５  
［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000073
調製法：  Ｂ
ペプチドは６０％アセトニトリルで溶出された。
構造はＭＡＬＤＩ−ＭＳで確認した。  
計算されたＭＷ＝３１７１．５
【０４６２】
実施例６
Ｎイプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｇｌｕ３０］ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000074
調製法：  Ｂ
ペプチドは７０％アセトニトリルで溶出された。
構造はＭＡＬＤＩ−ＭＳで確認した。  
計算されたＭＷ＝３８８７．４
【０４６３】
実施例７  
［Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３３）ペプチド
2010538049.tif 000075
調製法：  Ａ
ＨＰＬＣ（方法Ｂ６）：  
ＲＴ＝２８．０９分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋３Ｈ）３＋ 
計算されたＭＷ＝３０５７．３
【０４６４】
実施例８
［Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド
2010538049.tif 000076
調製法：  Ａ
ＨＰＬＣ（方法０３−Ａ１−１）
ＲＴ＝４１．９分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝９９６、０（Ｍ＋３Ｈ）３＋ 
計算されたＭＷ＝２９８５．３
【０４６５】
実施例９
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６）  ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000077
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護される。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＬＣ−ＭＳで同定される。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３４．３１分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１２７７（Ｍ＋３Ｈ）３＋
計算された  ＭＷ＝３８３１
【０４６６】
実施例１０
Ｎ−イプシロン３１｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000078
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護される。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＬＣ−ＭＳで同定される。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３４．０２分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１２５３（Ｍ＋３Ｈ）３＋
計算されたＭＷ＝３７５９
【０４６７】
実施例１１
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（デスアミノＨｉｓ７、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000079
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護される。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＬＣ−ＭＳで同定される。
ＲＴ＝３３．３分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１２５７．７（Ｍ＋３Ｈ）３＋
計算されたＭＷ＝３７７３
【０４６８】
実施例  １２
Ｎ−イプシロン３１｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（デスアミノＨｉｓ７、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３３）アミド
2010538049.tif 000080
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護される。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＬＣ−ＭＳで同定される。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３３．２分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１２３３．９（Ｍ＋３Ｈ）３＋
計算されたＭＷ＝３６９９
【０４６９】
実施例１３
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、  Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３２）アミド
2010538049.tif 000081
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護された。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳで同定された。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３２．６分  
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：  ３７１５．５
計算されたＭＷ＝３７１４．３
【０４７０】
実施例１４  
Ｎ−イプシロン２０｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−（Ａｉｂ８、  Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｎｌｅ３０、Ｌｙｓ３１）ＧＬＰ−１（７−３２）アミド
2010538049.tif 000082
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護された。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳで同定された。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝３３分  
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：  ３６９６．９
計算されたＭＷ＝３６９８
【０４７１】
実施例１５
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（｛ｔｒａｎｓ−４−［（１９−カルボキシノナデカノイルアミノ）メチル］シクロヘキサンカルボニル｝アミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］−［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１−（７−３３）アミド
2010538049.tif 000083
調製法：  方法Ｃはペプチドが８から１０倍モル過剰なアミノ酸を用いて、Aｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｔｅｃｈのＡｐｅｘ３９６において調製されることを除き、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ（１：１）及びＭｔｔ基はヘキサフルオロイソプロパノールを用いて脱保護された。最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳで同定された。
ＨＰＬＣ（方法０２−Ｂ６−１）：
ＲＴ＝  ３９．３分  
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：  ３６９６．９
計算されたＭＷ＝３６９８
【０４７２】
実施例１６
［デスアミノＨｉｓ７、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６］−ＧＬＰ−１（７−３４）
2010538049.tif 000084
ＨＰＬＣ（方法Ｉ−ＢＤＳＢ２）
ＲＴ＝５．６５分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝１０５７．５（Ｍ＋３Ｈ）３＋ 
計算されたＭＷ＝３１７０．５
【０４７３】
実施例１７  
［Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２０、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｅｕ２７、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３２）アミド
2010538049.tif 000085
ＳＰＰＳ法Ｂに類似の調製
ＨＰＬＣ方法０２−Ｂ６−１：  
ＲＴ＝２７．０９分  
ＬＣＭＳ：  ｍ／ｚ＝７３５（Ｍ＋４Ｈ）４＋ 
計算された（Ｍ）＝２９４０．３
【０４７４】
実施例１８
Ｎ−イプシロン３１−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル］［デスアミノＨｉｓ７、Ａｓｐ１１、Ｇｌｕ１８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ａｓｐ２７、Ｇｌｕ３０、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３３）−ペプチドアミド
2010538049.tif 000086
ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ  Ｒｉｎｋアミド樹脂（０．２４ｍｍｏｌ／ｇ、０．４ｇ）における調製法Ｂ。
ＨＰＬＣ（０２−Ｂ４−４）：  Ｒｔ＝１０、６４９分；  ９９．６％  純度
ＨＰＬＣ（０３−Ａ３−１）：  Ｒｔ＝８．４９１分；  ９４．３％  純度
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：  アルファ−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸；  ｍ／ｚ：  ３８２４．５４３（ネガティブモード）
【０４７５】
実施例１９
［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ｌｙｓ３１］ＧＬＰ−１（７−３３）−アミド
2010538049.tif 000087
調製法：  ペプチドはＳＰＰＳ法Ｃによって調製され、最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳによって同定された。
ＨＰＬＣ（０２−Ｂ６−１）：  ＲＴ＝３１．５分
ＨＰＬＣ（０４−Ａ３−１）：  ＲＴ＝８．６分
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：  ３０４３．６
計算されたＭＷ＝３０４０．４
【０４７６】
実施例２０
Ｎ−イプシロン３１−｛２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）ブチルアミノ］エトキシ｝
エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチル｝−Ｎ−ｂｅｔａ３４−（２−（ｂｉｓ−カルボキシメチルアミノ）アセチル）［Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ｖａｌ２５、Ａｒｇ２６、Ｌｙｓ３１、Ｄａｐ３４］ＧＬＰ−１（７−３４）アミド
2010538049.tif 000088
調製法：  ペプチドはＳＰＰＳ法Ｃによって調製され、最終産物は分析ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳによって同定された。
ＨＰＬＣ（０２−Ｂ６−１）：  ＲＴ＝３６．７分
ＨＰＬＣ（Ａ４−Ａ３−１）：  ＲＴ＝８．９分
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：  ４０１５．９
計算されたＭＷ＝４０１５．５
【０４７７】
生物学的知見
静脈又は皮下投与後のＧＬＰ−１Ｐ誘導体の突出
本発明の幾つかのＧＬＰ−１化合物の突出は、下記の方法を用いて、健康な豚に皮下投与後の血漿中の濃度をモニターすることにより決定される。皮下投与後の血漿中のＧＬＰ−１（７−３７）の濃度の比較も下記の通りである。本発明の他のＧＬＰ−１化合物の突出は同様に決定され得る。
【０４７８】
子豚中のＧＬＰ−１の薬物動態試験
試験物質は皮下又は静脈投与に適した運搬対に溶解させる。濃度は投与量が約１ｍｌになるように調整される。  
【０４７９】
試験はエレガードゲッティンゲン子豚ＡｐＳの１２匹の雌のゲッティンゲン子豚中で実施された。動物試験の前に約１０日間の順応期間が設けられた。子豚の順化期間の開始時点は約５か月齢であり、体重は８から１０ｋｇである。
【０４８０】
試験は室温が２１から２３℃及び相対湿度が５０％の適切な動物部屋で行われた。部屋は１２時間明期と１２時間暗期の周期になるように照明される。明期は６時間から１８時間である。
動物は藁を敷いたペン中で飼育され、それぞれのペンには６匹である。
動物は試験中、国産の飲料水に自由に接近するが、投与前の約午後４時から投与の約１２時間後まで絶食される。
動物は搬入時と投与の日に計量される。
【０４８１】
動物は１回の静脈又は皮下注射を受ける。皮下注射は首の右側、耳から約５から７ｃｍ及び首の中央から７から９ｃｍになされる。注射は注射針にストッパーがなされ、注射針の０．５ｃｍが導入される。
それぞれの試験物質は３匹の動物になされる。それぞれの動物は２ｎｍｏｌ／ｋｇ体重の投与量を受ける。
６匹の動物が隔週で投与され、その間残りの６匹は休憩する。
【０４８２】
それぞれの動物から全血漿濃度−時間プロファイルが得られる。血液サンプルは以下の計画に従って収集される：
【０４８３】
静脈投与後：
投与前（０）、投与後０．１７（１０分間）、０．５、１、２、４、６、８、１２、２４、４８、７２、９６、及び１２０時間。
【０４８４】
皮下投与後：
投与前（０）、０．５、１、２、４、６、８、１２、２４、４８、７２、９６、及び１２０時間。
各サンプリング時間において、それぞれの動物から２ｍｌの血液が採られる。血液は頸静脈から採られる。
【０４８５】
血液サンプルは、ＧＬＰ−１化合物の酵素分解を防ぐための安定化緩衝液を含む試験管に回収される。  
【０４８６】
血漿は即時に微小試験管に移される。約２００μｌの血漿が各試験管に移される。血漿は評価まで−２０℃で保存される。血漿サンプルは免疫アッセイを用いてＧＬＰ−１の含有量を評価される。
【０４８７】
血漿濃度−時間プロファイルは非区分薬物動態解析によって解析される。それぞれの場合において、下の薬物動態学的パラメータが計算される：  ＡＵＣ、ＡＵＣ／Ｄｏｓｅ、ＡＵＣ％Ｅｘｔｒａｐ、Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、λｚ、ｔ１／２、ＣＬ、ＣＬ／ｆ、Ｖｚ、Ｖｚ／ｆ及びＭＲＴ。
【０４８８】
本発明の選択された化合物がＤａｎｉｓｈ  Ｌａｎｄｒａｃｅ豚中で試験される。
【０４８９】
ＧＬＰ−１化合物の豚中での薬物動態試験
実験の開始から豚（５０％のＤｕｒｏｃ、２５％のＹｏｒｋｓｈｉｒｅ、２５％のＤａｎｉｓｈ  Ｌａｎｄｒａｃｅ、約４０ｋｇ）は絶食させる。それぞれの豚に５０μＭの等張液（５ｍＭのリン酸、ｐＨ７．４、０．０２％のＴｗｅｅｎ−２０（Ｍｅｒｃｋ）、４５ｍｇ／ｍｌのマンニトール（ピロゲンフリー、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）中の試験化合物が、０．５ｎｍｏｌ／ｋｇ投与される。血液サンプルは頸静脈からカテーテルで採られる。５ｍｌの血液サンプルが下記の溶液を１７５μｌ含む凍結ガラスに注がれる：０．１８ＭのＥＤＴＡ、１５０００ＫＩＥ／ｍｌのアプロチニン（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）及び０．３０ｍＭのバリン−ピロリジン（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ｐＨ７．４。  ３０分以内に、サンプルは５から６０００＊ｇで１０分間遠心される。温度は４℃に保持される。上清は別のガラスにピペットで取られ、使用まで２０℃で保持される。
【０４９０】
ペプチドの血漿濃度は異なるモノ−又はポリクローナル抗体を用いて、サンドイッチＥＬＩＳＡ又はＲＩＡで決定される。抗体の選択はＧＬＰ−１化合物に依存する。血漿中で極大濃度に達する時間は、選択された特定のＧＬＰ−１化合物に依存して、広い限度内で変化する。
【０４９１】
９６穴マイクロタイタープレート中でのサンドイッチＥＬＩＳＡの一般的な評価プロトコル
コーティングバッファー（ＰＢＳ）：  リン酸バッファー生理食塩水、ｐＨ７．２
洗浄−バッファー（ＰＢＳ−洗浄）：  リン酸バッファー生理食塩水、０．０５％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．２
評価−バッファー（ＢＳＡ−バッファー）：  リン酸バッファー生理食塩水、１０ｇ／ｌウシ血清アルブミン（フルカ０５４７７）、０．０５％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．２
ストレプトアビジン−バッファー   リン酸バッファー生理食塩水、０．５ＭのＮａＣｌ、０．０５％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．２
標準：  血漿基質中の各化合物
Ａ−ＴＮＰ：  ナンセンス抗体
ＡＭＤＥＸ：  ストレプトアビジン−西洋わさび−ペルオキシダーゼ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＲＰＮ４４０１Ｖ）
ＴＭＢ−基質：  ３、３’、５、５’テトラメチルベンジジン（＜０．０２％）、過酸化水素
【０４９２】
評価は下記のように行われた。（容積／ウェル）：  
１．）ＰＢＳ−バッファー中の５μｇ／ｍｌの補足抗体１００μｌで被覆する
・終夜インキュベーション、４℃
・５×  ＰＢＳ−洗浄  
・最低３０分間の最終洗浄でブロックする
・次いでプレートを空にする
２．）１０μｇ／ｍｌのＡ−ＴＮＰを含むＢＳＡ−バッファー中、２０μｌのサンプル＋１００μｌのビオチン化された検出抗体１μｇ／ｍｌ。  
・振盪器において、室温で、２時間インキュベーション、５×ＰＢＳ−洗浄、次いでプレートを空にする
３．）ストレプトアビジン−バッファー中の１００μｌのＡＭＤＥＸ１：８０００
・振盪器において、室温で、４５から６０分インキュベーション
・５ｘ  ＰＢＳ−洗浄、次いでプレートを空にする
４．）１００μｌのＴＭＢ−基質
・振盪器において、室温で、インキュベーションｘ分
・４ＭのＨ３ＰＯ４で反応を停止
【０４９３】
６２０ｎｍを参照として、４５０ｎｍの吸収を読む。
【０４９４】
ＲＩＡの一般的な評価プロトコル
ＤＢ−バッファー：  ８０ｍＭのリン酸  バッファー、０．１％ヒト血漿アルブミン、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．６ｍＭのチオメルサール、ｐＨ  ７．５
ＦＡＭ−バッファー：  ４０ｍＭのリン酸バッファー、０．１％ヒト血漿アルブミン、０．６ｍＭのチオメルサール、ｐＨ７．５
チャコール：  ４０ｍＭのリン酸バッファー、０．６ｍＭのチオメルサール、１６．７％ウシ血漿、１５ｇ／ｌの活性炭素、ｐＨ７．５（使用前に４℃で最小１時間、上清を混合する。）
標準：  血漿基質中のそれぞれの化合物
【０４９５】
評価は１２×７５ｍｍ（体積／試験管）ミニソープ試験管中で下のように行われる：  
2010538049.tif 000089
【０４９６】
混合−４℃で３０分間インキュベーション−３０分間、３０００ｒｐｍで遠心−新しい試験管に上清を移した直後に、ストッパーを用いて終了し、１分間ガンマ−カウンターでカウントする。
それぞれの標準曲線からサンプル中の濃度が計算される。
【０４９７】
ＧＬＰ−１ラジオレセプターアッセイ（ＲＲＡ）：
この方法は、ＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ造影粒子を用いた放射性リガンド結合アッセイである。該アッセイは、ＧＬＰ−１レセプター、標識されていないＧＬＰ−１アナログ、１２５Ｉで標識されたヒトＧＬＰ−１及び小麦胚芽凝集素（ＷＧＡ）で被覆されたＰＳ  ＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ粒子を含む膜フラグメントから構成される。コールド及び１２５Ｉで標識したＧＬＰ−１はレセプターへの結合で競合するであろう。ＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ粒子が添加された際、それらはＷＧＡ−残基を介して膜フラグメント上の炭水化物残基に結合するであろう。１２５Ｉ−分子とＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ粒子が接近し、粒子からの発光が起きる。ＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒは発光を造影し、サンプル中に存在するＧＬＰ−１アナログ量に逆相関するであろう。
【０４９８】
試薬と材料：
動物血漿の前処理：  動物血漿は５６℃で４時間処理し、１０分間１００００ｒｐｍで遠心する。その後、Ｖａｌ−Ｐｙｒ（１０μＭ）及びアプロテニン（５００ＫＩＥ／ｍＬ）を添加し、使用まで−１８℃未満で保存する。
ＧＬＰ−１アナログ校正液：  約１μＭから１ｐＭの範囲の希釈線を得るため、ＧＬＰ−１アナログを加熱した血漿に混合する。
ＧＬＰ−１  ＲＲＡアッセイバッファー：  ２５ｍＭのＮａ−ＨＥＰＥＳ（ｐＨ＝７．５）、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％の卵白アルブミン、０．００３％ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％バシトラシン、０．０５％ＮａＮ３．
ＧＬＰ−１レセプター上清：  ＧＬＰ−１レセプター膜フラグメントはヒト膵臓ＧＬＰ−１レセプター恒常発現ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞から精製される。
−８０℃未満で保存される。
ＷＧＡ連結ポリスチレンＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ造影ビーズ（ＲＰＮＱ０２６０、アマシャム）：  ビーズはＧＬＰ−１ＲＲＡアッセイバッファーで、１３．３ｍｇ／ｍＬの濃度に再構築される。次いで、ＧＬＰ−１レセプター膜上清を加え、使用１時間前に回転保冷（２から８℃）する。
［１２５Ｉ］−ＧＬＰ−１（７−３６）アミド（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ）。  使用まで−１８℃未満で保存する。
エタノール９９．９％体積（Ｄｅ  Ｄａｎｓｋ  Ｓｐｒｉｔｆａｂｒｉｋｋｅｒ  Ａ／Ｓ）：  使用まで−１８℃未満で保存する。
ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）Ｓｏｌｖｉｎｅｒｔ  ０．４５μｍの疎水性ＰＴＦＥプレート（ＭＳＲＰＮ０４５０、ミリポア株式会社）
ポリプロピレンプレート（カタログ番号６５０２０１、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）
白色ポリスチレン３８４−穴プレート（カタログ番号７８１０７５、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）
【０４９９】
装置：
水平プレートミキサー
標準スイングバケット、マイクロタイタープレートローターアセンブリ付き遠心分離器
ＵｌｔｒａＶａｐ−ドライダウンサンプル濃縮器（Ｐｏｒｖａｉｒ）
ＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ（商標）マルチモーダル造影システム（アマシャム）
【０５００】
評価手順：
サンプル調製：
濾液を回収するために、（例えば、ポリプロピレンプレートのような）化学的に同等な容器上にＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）Ｓｏｌｖｉｎｅｒｔフィルタープレートを付ける。ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）Ｓｏｌｖｉｎｅｒｔフィルターの空きウェルに９９．９％の氷冷アルコール１５０μｌを加え、その後、５０μｌの校正液又は血漿サンプルを加える。フィルタープレートに保存蓋を設置する。
水平プレートミキサー上に１８から２２℃で１５分間インキュベーションする。
蓋付きのフィルターと容器プレートを標準スイングバケット、マイクロタイタープレートアセンブリーに設置する。次いで、濾液を２分間、１５００ｒｍｐで容器プレートの空きウェルに回収する。
濾液を、窒素で１５分間加熱した（４０℃）ＵｌｔｒａＶａｐを用いてドライダウンした。それぞれのウェルにＧＬＰ−１ＲＲＡアッセイバッファーを１００μｌ添加することにより、乾燥物質を再構成した。水平ミキサーで５分間インキュベーションした。    
【０５０１】
ＧＬＰ−１ラジオレセプターアッセイ：
下記のピペッティング計画及び白色ポリスチレン３８４−穴プレート：
・３５μＬのＧＬＰ−１  ＲＲＡアッセイバッファー
・５μＬの再構成された濾液
・１０μＬの［１２５Ｉ］−ＧＬＰ−１（７−３６）アミド。ストック溶液は使用前にＧＬＰ−１  ＲＲＡアッセイバッファーで２０．０００ｃｐｍ／ウェルに希釈される。
・１５μＬのＧＬＰ−１レセプター膜フラグメント（約０．５μｇ／ウェル）をＷＧＡ−ポリスチレンＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ造影ビーズ（０．２ｍｇ／ウェル）に事前被覆する。
【０５０２】
プレートを密閉し、１８から２２℃で終夜インキュベーションする。
【０５０３】
各ウェルからの発光は、ＬＥＡＤｓｅｅｋｅｒ（登録商標）マルチモーダル造影システムを用いて、１０分間検出される。
【０５０４】
実施例２１：  クローン化されたヒトＧＬＰ−１レセプターを発現する細胞株におけるｃＡＭＰ形成の刺激
本発明の幾つかのＧＬＰ−１アナログ及び誘導体（実施例１から７、９から１７、及び１９から２０の化合物）の効能、即ち、ヒトＧＬＰ−１レセプターを含む培地におけるサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の形成の刺激、を下記のように決定した。比較として、切断型された天然のＧＬＰ−１（７−３３）の効能も決定した。
【０５０５】
安定に形質転換された細胞株である、ヒトＧＬＰ−１レセプターを発現するＢＨＫ４６７−１２Ａ（ｔｋ−ｔｓ１３）から精製された血漿膜は、問題のＧＬＰ−１化合物で刺激され、ｃＡＭＰ産生の効能は、パーキンエルマー・ライフサイエンスのアルファスクリーン（商標）ｃＡＭＰアッセイキットを用いることにより測定された。
【０５０６】
安定に形質転換された細胞株は、ＮＮ  Ａ／Ｓ、デンマーク、で調製され、高発現クローンがスクリーニングに選択される。細胞は５％のＦＣＳ、１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ペニシリン／ストレプトマイシン）及び０．５ｍｇ／ｍｌの選択マーカーＧ４１８を含むＤＭＥＭ中、５％のＣＯ２下、で培養される。
【０５０７】
細胞は約８０％コンフルエントで２回ＰＢＳ（リン酸バッファー生理食塩水）で洗浄し、ヴェルセン（エチレンジアミン四酢酸の四ナトリウム塩水溶液）を用いて収穫し、１０００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を取り除く。付加的な工程は全て氷上で行われる。細胞ペレットは、Ｕｌｔｒａｔｈｕｒａｘを用いて、１０ｍｌのバッファー１（２０ｍＭのＮａ−ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４）中で、２０から３０秒間ホモジナイズし、２０．０００ｒｐｍで１５分間遠心し、ペレットは１０ｍｌのバッファー２（２０ｍＭのＮａ−ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４）中で再懸濁する。懸濁液は２０から３０秒間ホモジナイズし、２０．０００ｒｐｍで１５分間ホモジナイズする。バッファー２の懸濁液は、１回ホモジナイズ及び遠心を繰り返し、膜はバッファー２に再懸濁し、更なる解析のための準備又は−８０℃で保存する。
【０５０８】
機能レセプターアッセイは、アルファスクリーンテクノロジーにより、ペプチド誘導ｃＡＭＰ産生を測定することにより実施された。アルファスクリーンテクノロジーの基本原理は、内在性のｃＡＭＰと外部から添加されたビオチンｃＡＭＰの競合である。ｃＡＭＰの補足は、アクセプタービーズに共役された特定の抗体を用いることにより達成される。形成されたｃＡＭＰは、アルファフュージョン・マイクロプレートアナライザーによってカウント及び測定される。ＥＣ５０の値は、Ｇｒａｐｈ−Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍｅソフトウェア（バージョン５）を用いて計算された。
【０５０９】
切断型天然ＧＬＰ−１（７−３））ペプチドは効能がとても低い（高ＥＣ５０値は１１．３ｎｍ）。本発明で試験されたＧＬＰ−１化合物は、全て効能がとても高い（６つの化合物がＥＣ５０が０．１０ｎＭ未満であり、６つの化合物がＥＣ５０が０．１０から０．５０ｎＭの範囲である。）。  
【０５１０】
興味深いことに、実施例１、４、５、及び７の化合物は、誘導体化されたものはなく、非常に驚くべきことには、ＥＣ５０が０．３０ｎｍ未満のものもない。
【０５１１】
実施例２２：  ＧＬＰ−１レセプターの細胞外ドメインへの結合
本発明のＧＬＰ−１化合物の幾つかについて（実施例１から１７の化合物）、ＧＬＰ−１Ｒレセプター（ｎＧＬＰ−１Ｒ）の単離されたＮ末端の細胞外ドメインへの結合親和性が、下記のように測定された。比較のため、切断型天然ヒトＧＬＰ−１（７−３３）の効能も決定された。
【０５１２】
親和性は、問題のＧＬＰ−１誘導体が、１２５Ｉ−エクセンジン−４（９−３９）のｎＧＬＰ−１Ｒへの結合を置換する能力の測定値である：即ち、タンパク質ｎＧＬＰ−１Ｒは、Ｒｕｎｇｅら２００７年（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、４６巻、ｐ５８３０−５８４０）に記載されているように調製し、ビオチン化し、ストレプトアビジンで被覆されたＳＰＡビーズに固定した。０．１ＭのＮａＨＣＯ３中のｎＧＬＰ１Ｒは、１ｍｇのタンパク質に対し、７５μｇのＢＮＨＳ（シグマＨ１７５９）を用いることによりビオチン化した。ビオチン化したｎＧＬＰ１Ｒを続いてＰＢＳに対して透析した。全ての試薬及び誘導体は０．０５％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎを含むＰＢＳで希釈した。結合アッセイは、９６穴オプティプレート（パーキンエルマー６００５２９０）で、最終体積が２００μｌで実施された。それぞれのウェルはＳＰＡビーズ（パーキンエルマーＲＰＮＱ００７）で被覆された２ｍｇのストレプトアビジン、０．１ｐｍｏｌのビオチン化されたｎＧＬＰ１Ｒ、５０ｐＣｉの１２５Ｉ−エクセンジン（９−３９）及び最終濃度の範囲が、１０００ｎＭから０．０６４ｎＭの試験ペプチドを含む。プレートは振盪器において室温で３時間インキュベーションした。ＳＰＡ粒子は１５００ｒｐｍで１０分間遠心し、スピンダウンし、プレートをＴｏｐＣｏｕｎｔ−ＮＸＴ（パーキンエルマー）でカウントした。
【０５１３】
ＩＣ５０値は、５０％の１２５Ｉ−エクセンジン−４（９−３９）のｎＧＬＰ−１Ｒへの結合を置換する問題のＧＬＰ−１化合物の濃度として、それぞれの曲線から読まれる。
【０５１４】
切断型（天然、ヒト）ＧＬＰ−１（７−３３）のｎＧＬＰ−１Ｒ（ＩＣ５０）への親和性は８８６ｎＭと決定された。本発明で試験されたＧＬＰ−１化合物のうち、１１個が６００ｎｍ未満の親和性を持っていた（２０から５５６（ｎｍ）の範囲、６個の化合物が１００ｎｍ未満）。従って、本発明の幾つかのＧＬＰ−１化合物は、Ｎ末端ＧＬＰ−１レセプターに非常に良い親和性を示した。（ＩＣ５０の値がより低いほど、結合がより良い。）。実施例２１でも議論した化合物１、４、５、及び７は２００から１５００ｎｍの範囲の許容可能な結合親和性を有し、それらのうち、３個は２００から６００ｎｍの範囲だった。
【０５１５】
実施例２３：  ＧＬＰ−１レセプターへの親和性
本発明の幾つかのＧＬＰ−１化合物（実施例１から７及び９から１８の化合物）のヒトＧＬＰ−１レセプターへの親和性は、レセプターから１２５Ｉ−ＧＬＰ−１を置換する能力によって測定された。
【０５１６】
条件
種（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）：  ハムスター
生物学的終了点：  レセプター結合
アッセイ方法：  ＳＰＡ
レセプター：  ＧＬＰ−１レセプター
細胞株：  ＢＨＫ  ｔｋ−  ｔｓ１３  
【０５１７】
膜精製：
細胞（約８０％コンフルエント）はＰＢＳ中で２回洗浄し、収穫し（ＰＢＳ＋ＥＤＴＡ又はヴェルセン）、次いで５分間１０００ｒｍｐで遠心分離した。細胞／細胞ペレットは、次の工程が可能な程度に、氷上で保つ。細胞ペレットは、適切な量（細胞量に依存するが、例えば、１０ｍｌ）のバッファー１中、Ｕｌｔｒａｔｈｕｒｒａｘで２０から３０秒間ホモジナイズした。ホモジネートは２００００ｒｐｍで１５分間遠心する。ペレットは１０ｍｌのバッファー２に再懸濁し、再遠心した。この工程はもう一度繰り返した。得られたペレットはバッファー２に再懸濁し、タンパク質濃度を決定した。膜は−８０℃に保存した。
【０５１８】
バッファー１：  ２０ｍＭのＮａ−ＨＥＰＥＳ＋１０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ  ７．４
バッファー２：  ２０ｍＭのＮａ−ＨＥＰＥＳ＋０．１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ  ７．４
【０５１９】
結合アッセイ：
ＳＰＡ：          
試験化合物／ペプチド、膜、ＳＰＡ−粒子及び［１２５Ｉ］はアッセイバッファーで希釈する。２５ｕｌ（マイクロリットル）の試験化合物／ペプチドをオプティプレートに添加する。バッファーを添加する（５０ｕｌ）。（好ましくはそれぞれの膜調製に最適化された）０．１から０．２ｍｇのタンパク質／ｍｌに相当する５から１０ｕｇのタンパク質／サンプル（５０ｕｌ）を添加する。０．５ｍｇ／ウェル（５０ｕｌ）のＳＰＡ−粒子（小麦胚芽凝集素ＳＰＡビーズ）ＲＰＮＱ  ０００１）を添加する。［１２５Ｉ］−ＧＬＰ−１（４９．８８０ＤＰＭ、２５ｕｌに相当する最終濃度０．０５ｎＭ）と共にインキュベーションを開始する。プレートはＰｌａｔｅＳｅａｌｅｒで密閉する。振盪しながら３０℃で１２０分間インキュベーションする。プレートを遠心し（１５００ｒｐｍ、１０分間）、トップカウンターでカウントする。
アッセイバッファー：  ５０ｍＭのＨＥＰＥＳ                                
５ｍＭのＥＧＴＡ
５ｍＭのＭｇＣｌ２
０．００５％のＴｗｅｅｎ２０
ｐＨ７．４
【０５２０】
ＩＣ５０値は５０％の１２５Ｉ−ＧＬＰ−１をレセプターから置換する濃度として曲線から読まれる。
【０５２１】
ＧＬＰ−１（７−３３）（切断型天然ＧＬＰ−１）のＩＣ５０値は２４１ｎＭであった。一つの化合物を除き、本発明の全ての試験された化合物は、より優れたＧＬＰ−１レセプターへの結合を有した（即ち、ＩＣ５０値がより低い）。６つの化合物は、１．００ｎＭ未満の値を有し、５つの化合物は２０から２００ｎＭの範囲であった。前の実施例で論じた１、４、５、及び７の化合物は、０．２４ｎＭから４４ｎＭの範囲のＩＣ５０値を有し、それらのうち、３つが２．０ｎＭ未満であった。
【配列表】
2010538049000001.app
【国際調査報告】
2010538049.tif 000095
2010538049.tif 000096
2010538049.tif 000097
2010538049.tif 000098