(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体からなる薬剤、およびそれらの薬学上許容可能な酸付加塩に関する。2010515767.tif 000057（式中、Ｘは酸素またはＮＨであり、Ｒｎは独立して水素であるかまたは必要に応じてハロゲンで置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、Ｒ１は水素、フッ素、塩素または臭素であるか、またはＣＦ３またはＣＨＦ２または必要に応じて１以上のハロゲン原子によって置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルケニルまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキニルであり、Ｒは水素であるか、または必要に応じて１以上のハロゲン原子によって置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキルであり、ＲａおよびＲｂは独立して水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ６）アシルであり、またＲａおよびＲｂは４〜６個の炭素原子を含む炭化水素化した環であり、かつ、ｎは２〜１４の整数である）。
2010515767.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤としての、下記一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体、およびその薬学上許容可能な酸付加塩：
【化１】
2010515767.tif 000047
（式中、
Ｒｎは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
Ｒ１は、水素、フッ素、塩素もしくは臭素原子、または−ＣＦ３もしくは−ＣＨＦ２基であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキニル、アルケニルもしくはアルキル基であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
Ｒは、水素原子であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基を表す基Ｒ’、または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアシル基であり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができ、かつ
ｎは、２〜１４の整数である）。
【請求項２】
ＲａおよびＲｂが水素原子である、請求項１に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項３】
Ｒが水素原子である、請求項１または２に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項４】
Ｒｎが水素原子である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項５】
Ｒ１が水素原子またはフッ素である、請求項２〜４のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項６】
ｎが２〜１０である、請求項２〜５のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項７】
ｎが３〜５である、請求項２〜５のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項８】
ｎが９〜１４である、請求項２〜５のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項９】
ｎが３に等しい、請求項２〜５のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項１０】
ＺもしくはＥ異性体、または任意の量のＺ異性体とＥ異性体との混合物の形態である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項１１】
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファー−スルホン酸、クエン酸、エタン−スルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、またはトリフルオロ酢酸から形成される薬学上許容可能な酸塩の形態である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項１２】
（Ｅ）−６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−８−アミノ−オクタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−９−アミノ−ノナ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−１０−アミノ−デカ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−１４−アミノ−テトラデカ−２−エン酸塩酸塩、
ＺおよびＥ異性体の混合物としての６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｚ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
ＺおよびＥ異性体の混合物としての７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｚ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
９−アミノ−２−フルオロ−ノナ−２−エン酸塩酸塩、
１０−アミノ−２−フルオロ−デカ−２−エン酸塩酸塩、および
１４−アミノ−２−フルオロ−テトラデカ−２−エン酸塩酸塩
から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の新規化合物としての一般式（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体であって、
６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸、その塩酸塩およびそのトリフルオロ酢酸塩、８−アミノ−オクタ−２−エン酸トリフルオロ酢酸塩、８−（ジメチルアミノ）−オクタ−２−エン酸、１２−（ジメチルアミノ）−ドデカ−２−エン酸、６−（イソプロピルアミノ）−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸エチル、６−（第三ブチルアミノ）−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸エチル、６−アミノ−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸メチル、７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸メチル、７−アミノ−２−メチル−ヘプタ−２−エン酸メチルおよび７−アミノ−４−メチル−ヘプタ−２−エン酸メチルの化合物を除外した、誘導体。
【請求項１４】
活性成分として請求項１〜１２いずれか一項に記載の少なくとも１種類の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体を、皮膚科学上許容可能な賦形剤と共に含んでなる、皮膚科学組成物。
【請求項１５】
ラジカル防止、抗炎症、抗痒疹、抗コラゲナーゼ皮膚化粧組成物の製造を目的とする、および／または皮膚老化の治療を目的とする、および／または角質化および色素沈着疾患の治療を目的とする、および／または治癒の向上を目的とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の使用。
【請求項１６】
前記組成物が乾癬、掻痒症および／またはアトピー性皮膚炎の治療を目的とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記組成物が毛髪または皮膚、特に年齢による白い染みの再色素形成を目的とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記組成物が皮膚を明るくしまたは年齢による褐色の染みの治療を目的とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
下記の一般式（Ｉ）
【化２】
2010515767.tif 000048
（式中、
Ｒｎは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
Ｒ１は、水素、フッ素、塩素もしくは臭素原子であるか、または−ＣＦ３もしくは−ＣＨＦ２基であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキニル、アルケニルもしくはアルキル基であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
Ｒは、水素原子であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基を表す基Ｒ’、または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であり、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアシル基であり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができ、かつ
ｎは２〜１４の整数である）
の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の製造方法であって、
下記の一般式（ＩＩ）
【化３】
2010515767.tif 000049
（式中、
Ｒ１は、前記で定義した通りであり、
Ｒ’は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、好ましくはエチル基であり、
Ｒ”およびＲ'''は互いに独立して、１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、好ましくはメチルまたはエチル基であり、前記の基Ｒ”およびＲ'''は２〜４個の炭素原子を含む炭化水素環を形成してもよい）
のホスホン酸塩を、下式（ＩＩＩ）
【化４】
2010515767.tif 000050
（式中、
ｎは、前記で定義した通りであり、
ＧＰは、隣接窒素原子と共に特にカルバメート型の基を形成するための保護基であり、Ｎ−ＧＰは好ましくは第三ブチルまたはベンジルカルバメートである）
の化合物に作用させることによるウィッティッヒ・ホルナー（Wittig-Horner）反応の適用により、または
Ｒ１＝Ｈであるときには、式Ｒ’ＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（式中、Ｒ’は前記で定義した通りである）のマロン酸誘導体を、前記式（ＩＩＩ）の化合物に作用させることによるデーブナー・クネーフェナーゲル（Doebner-Knoevenagel）反応の適用により、
下式（ＩＶ）
【化５】
2010515767.tif 000051
（式中、ＧＰ、Ｒ’、Ｒ１、Ｒｎおよびｎは前記で定義した通りである）
の化合物を得て、
必要に応じて、前記一般式（ＩＶ）の化合物のケン化反応により、下記の一般式（Ｖ）
【化６】
2010515767.tif 000052
（式中、ＧＰ、Ｒ１、Ｒｎおよびｎは前記で定義した通りである）
の化合物を得て、
式（ＩＶ）または（Ｖ）の化合物の窒素の脱保護反応により、式（Ｉ）（式中、ＲａおよびＲｂは水素である）の化合物を得て、
必要に応じて、式（Ｉ）（式中、ＲａおよびＲｂは水素である）の化合物のＮ−アルキル化またはＮ−アシル化反応により、式（Ｉ）（式中、ＲａおよびＲｂの少なくとも１個は水素ではない）の化合物を得る
ことを含んでなる、製造方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、
一般式（ＩＩＩ）
【化７】
2010515767.tif 000053
の化合物を、一般式（ＶＩ）
【化８】
2010515767.tif 000054
（式中、ｎおよびＲｎは請求項１９に記載の通りである）
の化合物から、下記：
式（ＶＩ）の化合物のアミド官能基の窒素をＧＰ基により保護することによって、下記の一般式（ＶＩＩ）
【化９】
2010515767.tif 000055
（式中、ｎ、ＲｎおよびＧＰは請求項１９で定義した通りである）
の化合物を得、ついで
前記で定義した式（ＶＩＩ）の化合物のカルボニル官能基を還元し、この工程を水素化ジイソブチルアルミニウムのような水素化アルミニウムを用いて低温で行う
工程により合成する、方法。
【請求項２１】
ＲａおよびＲｂが水素である、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒが水素である、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒｎが水素である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ１が水素またはフッ素である、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
合成中間体としての、下記一般式（ＶＩＩＩ）の化合物であって、
【化１０】
2010515767.tif 000056
（式中、
Ｒｃは、水素であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、
Ｒ１は水素原子、フッ素、塩素もしくは臭素原子であるか、または−ＣＦ３もしくは−ＣＨＦ２基であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキニル、アルケニルもしくはアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
Ｒｎは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
ｎは、２〜１４の整数であり、
ＧＰは、特に隣接窒素原子と共にカルバメート型の基を形成するための保護基であり、Ｎ−ＧＰは好ましくは第三ブチルまたはベンジルカルバメートであり、
Ｒｄは、水素であるか、またはＧＰについて前記で定義した通りの保護基ＧＰ’であり、特にＮ−ＧＰ’は第三ブチルまたはベンジルカルバメートである）、
（Ｅ）−６−（Ｎ，Ｎ−ジ−第三ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘキサ−２−エン酸第三ブチル、（Ｅ）−６−（Ｎ−第三−ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘキサ−２−エン酸エチル、（Ｅ）−７−（Ｎ−第三−ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘプタ−２−エン酸メチル、および（Ｅ）−７−（Ｎ−第三−ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘプタ−２−エン酸の化合物を除外した、化合物。
【請求項２６】
Ｒｎが水素である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ１が水素またはフッ素である、請求項２６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の目的は、新規な不飽和脂肪族アミノ酸および皮膚化粧品におけるそれらの使用である。
【０００２】
更に詳細には、本発明は、薬剤としての、一般式（Ａ）
【化１】
2010515767.tif 000003
（式中、
・Ｘは、酸素またはＮＨ基であり、
・Ｒｎは互いに独立して、水素原子または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒ１は、水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素および／または１個以上の酸素、窒素および／または硫黄原子で置換されてなるものであり、
・Ｒは、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素および／または１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、
・ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアシル基であって、必要に応じて１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができて、必要に応じて１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、かつ
・ｎは２〜１４の整数である）
の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体並びにそれらの薬学上許容可能な酸付加塩である。
【０００３】
「アルキル」基とは、好ましくは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐の飽和炭化水素鎖、例えばメチル、エチル、イソプロピル、第三ブチル、ペンチル基などを意味する。
【０００４】
「アルケニル」基とは、少なくとも１個の二重結合を含みかつ好ましくは２〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐の炭化水素鎖、例えばエテニル、プロペニル、２，４−ヘキサジエニル基などを意味する。
【０００５】
「アルキニル」基とは、少なくとも１個の三重結合を含みかつ好ましくは２〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐の炭化水素鎖、例えばエチニル、プロピニル、２，４−ヘキサジイニルなどを意味する。
【０００６】
「シクロアルキル基」とは、３〜６個の炭素原子を含む飽和の炭化水素環基、例えばシクロプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチル基などを意味する。
【０００７】
「アシル」基とは、アルキル−カルボニル基、すなわちカルボニル基を介して結合した前記で定義した通りのアルキル基、例えばアセチルを意味する。
【０００８】
「ハロゲン」とは、フッ素、臭素、ヨウ素または塩素を意味する。
【０００９】
本発明は、詳細には一般式（Ｉ）
【化２】
2010515767.tif 000004
（式中、
・Ｒｎは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒ１は、水素、フッ素、塩素もしくは臭素原子であるか、または−ＣＦ３もしくは−ＣＨＦ２基であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル基であて、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒは、水素原子であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基を表す基Ｒ’、または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアシル基であり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができ、かつ
・ｎは２〜１４の整数である）
にの不飽和脂肪族アミノ酸誘導体並びにそれらの薬学上許容可能な酸付加塩に関する。
【００１０】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒｎは、Ｒｎが１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されているものを除く炭素鎖の総ての炭素原子上の水素原子であり、
・Ｒは、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、Ｒは好ましくは水素原子であり、
・ｎ、Ｒａ、ＲｂおよびＲ１は前記で定義した通りである
という基準を満たしている。
【００１１】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ＲａおよびＲｂが水素原子である
という基準を満たしている。
【００１２】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒが水素原子である
という基準を満たしている。
【００１３】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒｎが水素原子である
という基準を満たしている。
【００１４】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒ１が水素またはフッ素原子である
という基準を満たしている。
【００１５】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ｎは３〜５の間に含まれる
という基準を満たしている。
【００１６】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ｎは９〜１４の間に含まれる
という基準を満たしている。
【００１７】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ｎは３に等しい
という基準を満たしている。
【００１８】
一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、前記で定義したようにＺまたはＥ異性体としてまたは任意の量のＺ異性体とＥ異性体との混合物として存在することができる。
【００１９】
本発明の意味では、「薬学上許容可能な酸付加塩」という用語は、酸が化合物に付加することによって形成され、非毒性でありかつ親化合物の薬理活性を有する塩を意味する。
【００２０】
酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸のような無機酸から、あるいは酢酸、ベンゼン−スルホン酸、安息香酸、カンファー−スルホン酸、クエン酸、エタン−スルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２−ヒドロキシエタン−スルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタン−スルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレン−スルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸、酒石酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、トリメチル酢酸またはトリフルオロ酢酸のような有機酸から形成させることができる。
【００２１】
好ましい薬学上許容可能な塩は、塩酸から形成される塩である。
【００２２】
本発明の目的である化合物は、好ましくは塩酸塩として存在する。
【００２３】
好都合には、本発明の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、
（Ｅ）−６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−８−アミノ−オクタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−９−アミノ−ノナ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−１０−アミノ−デカ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−１４−アミノ−テトラデカ−２−エン酸塩酸塩、
ＺおよびＥ異性体の混合物としての６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｚ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
ＺおよびＥ異性体の混合物としての７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｚ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
９−アミノ−２−フルオロ−ノナ−２−エン酸塩酸塩、
１０−アミノ−２−フルオロ−デカ−２−エン酸塩酸塩、および
１４−アミノ−２−フルオロ−テトラデカ−２−エン酸塩酸塩
から選択される。
【００２４】
本発明は、新規化合物としての、一般式（Ａ）
【化３】
2010515767.tif 000005
（式中、
・Ｘは、酸素またはＮＨ基であり、
・Ｒｎは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒ１は、水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素および／または１個以上の酸素、窒素および／または硫黄原子で置換されてなるものであり、
・Ｒは、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素および／または１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、
・ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアシル基であって、必要に応じて１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができて、必要に応じて１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、かつ
・ｎは２〜１４の整数である）
の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体並びにその薬学上許容可能な酸付加塩であって、
６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸、その塩酸塩およびそのトリフルオロ酢酸塩、８−アミノ−オクタ−２−エン酸トリフルオロ酢酸塩、８−（ジメチルアミノ）−オクタ−２−エン酸、１２−（ジメチルアミノ）−ドデカ−２−エン酸、６−（イソプロピルアミノ）−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸エチル、６−（第三ブチルアミノ）−２−メチル−ヘキサ−  ２−エン酸エチル、６−アミノ−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸メチル、７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸メチル、７−アミノ−２−メチル−ヘプタ−２−エン酸メチルおよび７−アミノ−４−メチル−ヘプタ−２−エン酸メチル、並びにＲａおよびＲｂが１個以上の酸素原子で置換されているときには、６−（２−エトキシ−５−オキソ−ピロリジン−１−イル）−ヘキサ−２−エン酸メチルおよび７−（２−エトキシ−５−オキソ−ピロリジン−１−イル）−ヘプタ−２−エン酸メチル
を除外した化合物にも関する。
【００２５】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ｉ）
【化４】
2010515767.tif 000006
（式中、
・Ｒｎは互いに独立して、水素原子または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒ１は、水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒは水、素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基を表す基Ｒ’であり、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキルもしくはアシル基であり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができ、かつ
・ｎは２〜１４の整数である）
の新規化合物としての本発明の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体、並びにその薬学上許容可能な酸付加塩であって、
下記の化合物、すなわち６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸、その塩酸塩およびそのトリフルオロ酢酸塩、８−アミノ−オクタ−２−エン酸トリフルオロ酢酸塩、８−（ジメチルアミノ）−オクタ−２−エン酸、１２−（ジメチルアミノ）−ドデカ−２−エン酸、６−（イソプロピルアミノ）−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸エチル、６−（第三ブチルアミノ）−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸エチル、６−アミノ−２−メチル−ヘキサ−２−エン酸メチル、７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸メチル、７−アミノ−２−メチル−ヘプタ−２−エン酸メチル、および７−アミノ−４−メチル−ヘプタ−２−エン酸メチルを除外するものである。
【００２６】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒｎは、Ｒｎが１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されているものを除く炭素鎖の総ての炭素原子上の水素原子であり、
・Ｒが水素原子であるまたは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されており、Ｒは好ましくは水素原子であり、
・ｎ、Ｒａ、ＲｂおよびＲ１は前記で定義した通りである
という基準を満たしている。
【００２７】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ＲａおよびＲｂが水素原子である
という基準を満たしている。
【００２８】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒが水素原子である
という基準を満たしている。
【００２９】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒｎが水素原子である
という基準を満たしている。
【００３０】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・Ｒ１が水素またはフッ素原子である
という基準を満たしている。
【００３１】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ｎは３〜５の間に含まれる
という基準を満たしている。
【００３２】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ｎは９〜１４の間に含まれる
という基準を満たしている。
【００３３】
本発明の特定の態様によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、下記の
・ｎは３に等しい
という基準を満たしている。
【００３４】
一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、前記で定義したようにＺまたはＥ異性体としてまたは任意の量のＺ異性体とＥ異性体との混合物として存在することができる。
【００３５】
本発明の意味では、「薬学上許容可能な酸付加塩」という用語は、酸が化合物に付加することによって形成され、非毒性でありかつ親化合物の薬理活性を有する塩を意味する。
【００３６】
酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸のような無機酸から、あるいは酢酸、ベンゼン−スルホン酸、安息香酸、カンファー−スルホン酸、クエン酸、エタン−スルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２−ヒドロキシエタン−スルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタン−スルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレン−スルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸、酒石酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、トリメチル酢酸またはトリフルオロ酢酸のような有機酸から形成させることができる。
【００３７】
好ましい薬学上許容可能な塩は、塩酸から形成される塩である。
【００３８】
本発明の目的である化合物は、好ましくは塩酸塩として存在する。
【００３９】
好都合には、本発明の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、
（Ｅ）−６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−８−アミノ−オクタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−９−アミノ−ノナ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−１０−アミノ−デカ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−１４−アミノ−テトラデカ−２−エン酸塩酸塩、
ＺおよびＥ異性体の混合物としての６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｚ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｅ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸塩酸塩、
ＺおよびＥ異性体の混合物としての７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
（Ｚ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸塩酸塩、
９−アミノ−２−フルオロ−ノナ−２−エン酸塩酸塩、
１０−アミノ−２−フルオロ−デカ−２−エン酸塩酸塩、および
１４−アミノ−２−フルオロ−テトラデカ−２−エン酸塩酸塩
から選択される。
【００４０】
本発明は、活性成分として、薬剤として誘導体について前記で定義した一般式（Ａ）または（Ｉ）の少なくとも１個の脂肪族アミノ酸誘導体を皮膚化粧品で許容可能な賦形剤と共に含んでなる皮膚科学組成物にも関する。
【００４１】
本発明は、薬剤として誘導体について前記で定義した一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の、ラジカル防止、抗炎症、抗痒疹、抗コラゲナーゼ皮膚化粧組成物の製造を目的とする、および／または皮膚老化の治療を目的とする、および／または角質化および色素沈着疾患の治療を目的とする、および／または治癒の向上を目的とする使用にも関する。
【００４２】
一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、更に詳細には乾癬、掻痒症および／またはアトピー性皮膚炎、並びに毛髪または皮膚、特に白い年齢による染みの再色素形成を目的とする。
【００４３】
本発明によれば、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、更に詳細には皮膚を明るくしまたは褐色の年齢による染みの治療を目的とする組成物を目的とする。
【００４４】
ラジカル防止活性により、一般式（Ａ）または（Ｉ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、皮膚の光発癌の早期回避または制限にも有用であり、従って、それらは皮膚の様々な腫瘍性疾患の予防および治療に用いることができる。
【００４５】
本発明は、下記の一般式（Ａ）
【化５】
2010515767.tif 000007
（式中、
・Ｘは、酸素またはＮＨ基であり、
・Ｒｎは互いに独立して、水素原子または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒ１は、水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素および／または１個以上の酸素、窒素および／または硫黄原子で置換されてなるものであり、
・Ｒは、水素原子であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素および／または１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、
・ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアシル基であって、必要に応じて１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができて、必要に応じて１個以上の酸素および／または窒素原子で置換されてなるものであり、かつ
・ｎは２〜１４の整数である）
の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の製造方法であって、下式（ＩＩ）
【化６】
2010515767.tif 000008
（式中、
・Ｒ１は、前記で定義した通りであり、
・Ｒ’は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキル基であり、好ましくはエチル基であり、
・Ｒ”およびＲ'''は互いに独立して、１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキル基であり、好ましくはメチルまたはエチル基であり、前記の基Ｒ”およびＲ'''は２〜４個の炭素原子を含む炭化水素環を形成してもよい）
のホスホン酸塩を、下式（ＩＩＩ）
【化７】
2010515767.tif 000009
（式中、
・ｎは前記で定義した通りであり、
・ＧＰは隣接窒素原子と共に特にカルバメート型の基を形成するための保護基であり、Ｎ−ＧＰは好ましくは第三ブチルまたはベンジルカルバメートであり、
ＧＰは、特に「有機合成における保護基」第三版、Theodora GREEN & Peter WUTS 著、Wiley Interscience ISBN 0-471-16019-9、第２章、p.17-246に定義されている保護基に相当する）
の化合物に作用させることによるウィッティッヒ・ホルナー（Wittig-Horner）反応の適用により、
または
Ｒ１＝Ｈであるときには、式Ｒ’ＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（式中、Ｒ’は前記で定義した通りである）のマロン酸誘導体を、前記式（ＩＩＩ）の化合物に作用させることによるデーブナー・クネーフェナーゲル（Doebner-Knoevenagel）反応の適用により、
下式（ＩＶ）
【化８】
2010515767.tif 000010
（式中、ＧＰ、Ｒ’、Ｒ１、Ｒｎおよびｎは前記で定義した通りである）
の化合物を得て、
必要に応じて、前記一般式（ＩＶ）の化合物のケン化反応により、下記の一般式（Ｖ）
【化９】
2010515767.tif 000011
（式中、ＧＰ、Ｒ１、Ｒｎおよびｎは前記で定義した通りである）
の化合物を得て、
上式（ＩＶ）または（Ｖ）の化合物の窒素の脱保護反応により、式（Ａ）（式中、ＲａおよびＲｂは水素であり、Ｘは酸素である）の化合物を得て、
必要に応じて、上式（Ａ）（式中、Ｘは酸素であり、ＲａおよびＲｂは水素である）の化合物のＮ−アルキル化および／またはＮ−アシル化および／またはアミド化反応により、式（Ａ）（式中、ＲａおよびＲｂの少なくとも１個は水素ではない）の化合物を得る
ことを含んでなる製造方法にも関する。
【００４６】
本発明の方法により、収率だけでなく微量の汚染物もない品質のいずれに関しても優れた条件下で不飽和脂肪族アミノ酸の製造が可能になり、この方法は工業的に換えることができる。
【００４７】
本発明の方法によって得られる不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、ＺまたはＥ立体異性体としてまたはこれらの異なる形態の混合物として存在することができる。
【００４８】
特定の態様では、本発明の方法は、式（Ａ）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の製造について前記で定義した異なる工程に従って、式（Ｉ）
【化１０】
2010515767.tif 000012
（式中、
・Ｒｎは互いに独立して、水素原子または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基であって、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒ１は、水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキニル、アルケニルもしくはアルキル基であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・Ｒは、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐アルキル基または３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基を表す基Ｒ’であって、必要に応じて１個のハロゲン原子、特にフッ素で置換されてなるものであり、
・ＲａおよびＲｂは互いに独立して、水素原子であるか、または１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは分岐のアルキルまたはアシル基であり、ＲａおよびＲｂは一緒になって４〜６個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができ、かつ
・ｎは２〜１４の整数である）
の不飽和脂肪族アミノ酸を製造することができる。
【００４９】
好都合には、前記の一般式（ＩＩＩ）
【化１１】
2010515767.tif 000013
の化合物は、一般式（ＶＩ）
【化１２】
2010515767.tif 000014
（式中、ｎおよびＲｎは前記で定義した通りである）
から、下記の
式（ＶＩ）の化合物のアミド官能基の窒素をＧＰ基により保護することによって、下記の一般式（ＶＩＩ）
【化１３】
2010515767.tif 000015
（式中、ｎ、ＲｎおよびＧＰは前記で定義した通りである）
の化合物を得た後、
前記で定義した式（ＶＩＩ）の化合物のカルボニル官能基を還元し、この工程を水素化ジイソブチルアルミニウムのような水素化アルミニウムを用いて低温で行う
工程により合成することができる。
【００５０】
Ｒａおよび／またはＲｂが水素原子とは異なるときには、Ｎ−アルキル化またはＮ−アシル化またはアミド化またはこれらの反応の組合せは、当業者に知られている方法によって行われる（「マックの最新有機化学」、第五版、ISBN 0-471-58589-0、Michael.B. Smith and Jerry March、pp. 501-552および511）。
【００５１】
式（Ａ）または（Ｉ）（式中、Ｒは水素原子ではない）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体は、通常は酸官能基からカップリングによって得られる。
【００５２】
構造（ＶＩ）の化合物が市販されていないときには、当業者に周知の方法に準じて、すなわち環状ケトンをヒドロキシルアミンの作用によってオキシムに変換した後、広く知られているベックマン反応（「マックの最新有機化学」、第五版、ISBN 0-471-58589-0、Michael.B. Smith and Jerry March、pp. 1349、1381、1384および1415-1416）に準じて強酸媒質中で処理してこれらのオキシムをラクタムとすることによって対応する環状ケトンから調製することが常に可能である。
【化１４】
2010515767.tif 000016
【００５３】
また、Ｒｎが水素でないときには、化合物（ＩＩＩ）を下記のヒドロキシケトン
【化１５】
2010515767.tif 000017
から、下記の連鎖反応、すなわちアルコール官能基を保護し、ウィッティッヒ・ホルナー反応によりα，β−不飽和エステルを得て、二重結合を水素化し、エステルをアルデヒドに還元し、アルコール官能基を脱保護し、ミツノブまたはガブリエル反応によって合成することが可能である。
【００５４】
本発明の方法の特定の態様によれば、ＲａおよびＲｂは水素である。
【００５５】
本発明の方法の特定の態様によれば、Ｒは水素である。
【００５６】
本発明の方法のもう一つの特定の態様によれば、Ｒｎは水素である。
【００５７】
本発明の方法のもう一つの特定の態様によれば、Ｒ１は水素またはフッ素である。
【００５８】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物に対応する一般式（Ｉ−１）
【化１６】
2010515767.tif 000018
（式中、
・Ｒａ、Ｒｂ、ＲｎおよびＲは水素であり、
・Ｒ１は、前記で定義した通りであり、すなわち水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素、および／または１個以上の酸素、窒素および／または硫黄原子で置換されており
・ｎは２〜１４の整数である）
の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の製造方法であって、
式（ＶＩ）（式中、Ｒｎ＝Ｈ）の化合物に相当する下式（ＶＩ−１）
【化１７】
2010515767.tif 000019
（式中、ｎは式（Ｉ−１）において前記で定義した通りである）
の化合物のアミド官能基を保護して、
アミド官能基が保護されておりかつ式（ＶＩＩ）（式中、Ｒｎ＝Ｈ）の化合物に相当する下式（ＶＩＩ−１）
【化１８】
2010515767.tif 000020
（式中、
・ｎは式（Ｉ−１）において前記で定義した通りであり、
・ＧＰは隣接窒素原子と共に特にカルバメート型の基を形成するための保護基であり、Ｎ−ＧＰは好ましくは第三ブチルまたはベンジルカルバメートであり、
ＧＰは、特に「有機合成における保護基」第三版、Theodora GREEN & Peter WUTS 著、Wiley Interscience ISBN 0-471-16019-9、第７章、pp. 494-654に定義されている保護基に相当する）
の化合物を得る工程、
前記で定義した式（ＶＩＩ−１）の化合物のカルボニル官能基を還元して、式（ＩＩＩ）（式中、Ｒｎ＝Ｈ）の化合物に相当する下式（ＩＩＩ−１）
【化１９】
2010515767.tif 000021
（式中、ｎおよびＧＰは式（ＶＩＩ−１）において前記で定義した通りである）
の化合物を得る工程であって、
この工程は、特にヒンダード水素化アルミニウムのような通常の還元剤、例えば水素化イソブチルアルミニウムを用いて低温で行われ、
式（ＩＩＩ−１）の前記の保護した化合物に、下式（ＩＩ）
【化２０】
2010515767.tif 000022
（式中、
・Ｒ１は前記で定義した通りであり、
・Ｒ’は１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキル基であり、好ましくはエチル基であり、
・Ｒ”およびＲ'''は互いに独立して１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキル基であり、好ましくはメチルまたはエチル基であり、前記の基Ｒ”およびＲ'''は一緒になって２〜４個の炭素原子を含む炭化水素環を形成することができる）
のホスホン酸塩を反応させることによるウィッティッヒ・ホルナー反応の適用、または
Ｒ１＝Ｈであるときには、式Ｒ’ＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（式中、Ｒ’は前記で定義した通りである）のマロン酸誘導体を反応させることによるデーブナー・クネーフェナーゲル反応の適用により、
式（ＩＶ）（式中、Ｒｎ＝Ｈ）の化合物に相当する下式（ＩＶ−１）
【化２１】
2010515767.tif 000023
（式中、ｎ、ＧＰ、Ｒ１およびＲ’は前記で定義した通りである）
の化合物を得て、
上式（ＩＶ−１）の化合物のケン化反応により一般式（Ｖ）（式中、Ｒｎ＝Ｈ）の化合物に相当する下式（Ｖ−１）
【化２２】
2010515767.tif 000024
（式中、ｎ、ＧＰおよびＲ１は前記で定義した通りである）
の化合物を得て、
上式（Ｖ−１）の化合物の窒素の脱保護反応により式（Ｉ−１）の化合物を得る
工程を含んでなる、前記製造方法にも関する。
【００５９】
従って、本発明の目的である不飽和脂肪族アミノ酸は、対応するラクタムから誘導される環化α−ヒドロキシルアミンであってそのアミン官能基が予め保護されるものに、（フッ素化されたまたはされていない）ホスホン酸塩からのウィッティッヒ・ホルナー型の反応またはトリメチルホスホニウムから出発するウィッティッヒ型の反応を適用することによって製造することができる（以下に展開される合成図を参照されたい）。
【００６０】
あるいは、保護されたアミノエステルのケン化反応によりアミノ酸が得られ、これは酸加水分解によって脱保護されて、一般式
【化２３】
2010515767.tif 000025
（式中、ｎ’＝ｎ−２であり、Ｒ１＝Ｈ、ハロゲンまたはアルキルである）
の不飽和脂肪族アミノ酸が得られる。
【００６１】
ウィッティッヒ・ホルナー反応は、「最新合成反応」、第二版、Herbet O.House, ウィッティッヒ・ホルナー反応、pp. 682-709に記載の反応であり、当該技術分野の状態において記載される任意の実験条件を本発明の範囲内で用いることができる。一例としては、ウィッティッヒ・ホルナー反応は、トリエチルホスホノアセテートおよび炭酸カリウムの存在下にてエタノール媒質で行うことができる。
【００６２】
アミン官能基を保護方法は、塩基性条件（エステル官能基を脱ほごする条件）下で加水分解性でなくかつ他の親核試薬に対して不活性であるというその利点により一般に用いられる標準的方法である（文献： T. Kunieda, T. Higuchi, Y. Abe, and M. Hirobe, Chem. Pharm. Bull., 32, 2174, 1984; I. Grapsas, Y. J. Cho, and S. Mobashery, J. Org. Chem., 59, 1918; 1994）。
【００６３】
ラクタムを部分的に還元する工程は、水素化ジイソブチルアルミニウムのような還元剤の存在下にて行われる。反応の終了時に、アルミニウム塩はローゼン塩の存在下にて水溶性錯体を形成することによって除去される（Reagents for organic synthesis, vol. 1, Louis Fieser and Mary Fieser, pp. 36）。
【化２４】
2010515767.tif 000026
Ｒｎ＝メチルである誘導体の合成の一例は、ヒドロキシケトンから出発する一連の保護、脱保護、ウィッティッヒ・ホルナーおよびガブリエル反応によって説明することができる。アルコール官能基を保護した後、一連のウィッティッヒ・ホルナー反応を行う。酸媒質中でアルコール官能基を脱保護した後、ガブリエル反応を行ってアミン官能基を生成させる。
【００６４】
本発明は、下記の一般式（ＶＩＩＩ）
【化２５】
2010515767.tif 000027
（式中、
・Ｒｃは水素であるかまたは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキル基であり、
・Ｒ１は水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素、酸素、窒素および／または硫黄原子で置換されており、
・Ｒｎは互いに独立して水素原子または１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐アルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されており、
・ｎは２〜１４の整数であり、
・ＧＰは隣接窒素原子と共に特にカルバメート型の基を形成するための保護基であり、Ｎ−ＧＰは好ましくは第三ブチルまたはベンジルカルバメートであり、
ＧＰは、特に「有機合成における保護基」第三版、Theodora GREEN & Peter WUTS 著、Wiley Interscience ISBN 0-471-16019-9、第２章、pp. 17-246に定義されている保護基に相当し、
・Ｒｄは水素であるかまたはＧＰについて前記で定義した通りの保護基ＧＰ’であり、特にＮ−ＧＰ’は第三ブチルまたはベンジルカルバメートである）
の合成中間体としての化合物にも関し、
下記の化合物：（Ｅ）−６−（Ｎ，Ｎ−ジ−第三ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘキサ−２−エン酸第三ブチル、（Ｅ）−６−（Ｎ−第三−ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘキサ−２−エン酸エチル、（Ｅ）−７−（Ｎ−第三−ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘプタ−２−エン酸メチルおよび（Ｅ）−７−（Ｎ−第三−ブトキシ−カルボニルアミノ）−ヘプタ−２−エン酸の化合物は除外される。
【００６５】
本発明の特定の態様によれば、式（ＶＩＩＩ）の化合物は下記の基準、すなわちＲ１が水素、フッ素、塩素または臭素原子であるか、あるいは−ＣＦ３または−ＣＨＦ２基であるか、あるいは１−６個の炭素原子を含む直鎖または分岐のアルキニル、アルケニルまたはアルキル基であり、必要に応じて１個以上のハロゲン原子、特にフッ素で置換されている
を満たしている。
【００６６】
本発明の特定の態様によれば、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、下記の基準、すなわちＲｄが水素である
を満たしている。
【００６７】
本発明の特定の態様によれば、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、下記の基準、すなわちＲｎ水素である
を満たしている。
【００６８】
本発明のもう一つの特定の態様によれば、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、下記の基準、すなわちＲ１が水素またはフッ素である
を満たしている。
【００６９】
本発明を、以下に示す合成例の範囲内で説明する。
【００７０】
１）  本発明による化合物の合成
１．１）  化合物１２（（Ｅ）−１０−アミノ−デカ−２−エン酸）
【化２６】
2010515767.tif 000028
【００７１】
段階１
三つ口フラスコ中で、窒素気流下にてカプリロラクタム１０．０ｇ（７０．８ミリモル）をテトラヒドロフラン１５０ｍｌに可溶化する。トリエチルアミン１０．０６ｍｌ（１．０１当量）並びに４−ジメチルアミノピリジン８．７４ｇ（１．０１当量）を加え、最後にジ第三ブチルジカーボネート３０．９１ｇ（２当量）を加える。反応媒質を、室温にて一晩攪拌する。ＴＬＣで追跡することによって、反応の終点を確認することが可能である。反応媒質を濃縮し、水および酢酸エチルに溶解させる。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、集めた有機相を５％塩酸溶液で洗浄した後、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄する。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、赤色油状生成物を得る。
特性決定：  
ｍ＝２４．０ｇ  １００％収率。
Ｒｆ＝０．８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９９／１）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＣＤＣｌ３）：１．５０（ｓ，９Ｈ）；１．５３（ｍ，６Ｈ）；１．６７（ｍ，２Ｈ）；１．８２（ｍ，２Ｈ）；２．８７（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｔ，２Ｈ）。
【００７２】
段階２
三つ口フラスコ中で、窒素気流下にてＢｏｃ基によって保護されたカプリロラクタム１７．１ｇ（７０．８ミリモル）をトルエン１７０ｍｌに可溶化させる。媒質を−７８℃に冷却し、媒質の温度を−８０℃〜−７５℃に保持しながらトルエンの２０％Ｄｉｂａｌ−Ｈ溶液５９．２  ｍｌ（１．０１当量）を１時間かけて滴加する。ＴＬＣで追跡することによって、反応の終点を確認することが可能である。−７８℃にて、飽和の二重酒石酸溶液４８０ｍｌを徐々に加え、混合物を一晩激しく攪拌する。有機相を抽出する。水相を酢酸エチルで３回抽出する。集めた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、橙色固形生成物を得る。
特性決定：
ｍ＝２０．０ｇ，９９％収率。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ７／３）
ＮＭＲ（１Ｈ，ＣＤＣｌ３）：１．４０−１．８０（ｍ，２０Ｈ）；２．８５−２．８９（ｍ，２Ｈ）；３．７５−３．７９（ｍ，２Ｈ）。
【００７３】
段階３
三つ口フラスコ中で、窒素気流下にて、段階２からの化合物２．０ｇ（８．２２ミリモル）をエタノール２０ｍｌに可溶化させる。炭酸カリウム１．７０ｇ（１．５当量）を媒質に加え、トリエチルホスホノアセテート１．９６ｍｌ（１．２当量）を徐々に加える。次いで、混合物を４５℃まで一晩加熱する。ＴＬＣで追跡することによって、反応の終点を確認することが可能である。反応媒質を濃縮した後、残渣を酢酸エチルおよび水に溶解させる。水相を酢酸エチルで３回抽出する。集めた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮する。得られた粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（ヘプタン／ＡｃＯＥｔグラディエント）、黄色油状生成物を得る。
特性決定：
ｍ＝１．６０ｇ  ６２％収率。
Ｒｆ＝０．４（ヘプタン／酢酸エチル  ７／３）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δ  １．２８−１．４６（ｍ，２２Ｈ）；２．１６−２．１９（ｍ，２Ｈ）；３．１０（ｍ，２Ｈ）；４．２０（ｑ，２Ｈ）；５．８２（ｄｔ，ＩＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）；６．９７（ｄｔ，ＩＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
【００７４】
段階４
フラスコ中で、段階３からの化合物１．６０ｇ（５．１０ミリモル）をＴＨＦ１６ｍｌに溶解する。２Ｍ  ＮａＯＨ  ６．４０ｍｌ（２．５当量）を加え、反応媒質を６５℃に一晩加熱する。ＴＬＣで追跡することによって、反応の終点を確認することが可能である。次いで、混合物のｐＨを、塩酸を加えることによって４に調整した。媒質を濃縮し、ＡｃＯＥｔ／水に溶解する。水相を酢酸エチルで（３回）抽出し、集めた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空濃縮し、ベージュ色固形生成物を得る。
特性決定：
ｍ＝１．２ｇ  ８２％収率。
Ｒｆ＝０．２（ヘプタン／酢酸エチル  ７／３）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δ  １．３０−１．４６（ｍ，１９Ｈ）；２．２０−２．２７（ｍ，２Ｈ）；３．１３（ｍ，２Ｈ）；５．８０−５．８６（ｄｔ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）；７．０（ｄｔ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
【００７５】
段階５ 
窒素雰囲気下フラスコ中で、段階４からの化合物１．２ｇ（４．２８ミリモル）を２Ｍ  ＨＣｌエーテル溶液７．５ｍｌ（３．５当量）に可溶化する。媒質を３５℃で一晩攪拌する。ＴＬＣで追跡することによって、反応の終点を確認することが可能である。媒質を真空濃縮し、ジクロロメタンに溶解し、濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、真空乾燥し、白色固形生成物を得る。この固形生成物を、エタノールから数回再結晶させる。
特性決定
ｍ＝０．５９ｇ  ８２％収率。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）：δ  １．５０−１．６９（ｍ，１０Ｈ）；２．２１−２．２８（ｑ，２Ｈ）；２．９３（ｔ，２Ｈ）；５．８０（ｄ，ＩＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）；６．９５（ｄｔ，ＩＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８６（計算値１８５）。
【００７６】
１．２）化合物１３（１０−アミノ−２−フルオロ−デカ−２−エン酸）
【化２７】
2010515767.tif 000029
【００７７】
段階１および２は、前記と同じ方法でカプリロラクタムについて行った。
【００７８】
段階３
三つ口フラスコ中で、窒素気流下にて、段階２からの化合物２．０ｇ（８．２２ミリモル）をエタノール２０ｍｌで可溶化する。炭酸カリウム１．７０ｇ（１．５当量）を媒質に加え、トリエチルホスホノアセテート２．０６ｇ（ｌ．ｌ当量）を徐々に加える。次いで、混合物を４５℃に一晩加熱する。ＴＬＣで追跡することによって、反応の終点を確認することが可能である。反応媒質を濃縮した後、残渣を酢酸エチルおよび水に溶解させる。水相を酢酸エチルで３回抽出する。集めた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮する。得られた粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（ヘプタン／ＡｃＯＥｔグラディエント）、淡黄色油状生成物を得る。
特性決定：
ｍ＝１．７０ｇ  ６５％収率。
Ｒｆ＝０．５（ヘプタン／酢酸エチル  ７／３）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δ  １．３２−１．３９（ｍ，２２Ｈ）；２．２１（ｍ，２Ｈ）；３．１１（ｍ，２Ｈ）；４．３０（ｑ，２Ｈ）；５．８９−５．９６（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝２１．９Ｈｚ，Ｅ体）；６．０６−６．１８（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝３３．３Ｈｚ，Ｚ体）。
【００７９】
段階４および５は、前記と同様に行い、下記の特性決定をえる。
段階４の特性決定：
ｍ＝１．４ｇ  ８７％収率。
Ｒｆ＝０．２（ヘプタン／酢酸エチル  ７／３）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＣＤＣｌ３）：δ  １．２３−１．４６（ｍ，１９Ｈ）；２．２６−２．５５（ｍ，２Ｈ）；３．１２（ｍ，２Ｈ），５．９８−６．３２（ｄｄｔ，ＩＨ，ＥおよびＺ体）．
【００８０】
段階５の特性決定：
ｍ＝０．９ｇ  ９５％収率。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．４１−１．５３（ｍ，８Ｈ）；１．６５−１．７０（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．２９（ｍ，ＩＨ  Ｚ体）；２．５３−２．５６（ｍ，ＩＨ，Ｅ体）；２．９１−２．９６（ｔ，２Ｈ），５．９０−６．０３（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝２１．６Ｈｚ，Ｅ体）；６．０８−６．２５（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝３３．３Ｈｚ，Ｚ体）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０４（計算値２０３）。
【００８１】
１．３）化合物７（（Ｅ）−８−アミノ−オクタ−２−エン酸）
【化２８】
2010515767.tif 000030
化合物１２の調製に用いた一般的手続きをε−カプロラクタムに応用し、（Ｅ）−８−アミノ−オクタ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δｌ．４１−１．５７（ｍ，４Ｈ）；１．６７−１．７５（ｍ，２Ｈ）；２．２４−２．３１（ｍ，２Ｈ）；２．９３−２．９８（ｍ，２Ｈ）；５．８６（ｄｄ，ＩＨ）；６．９８（ｄｔ，ＩＨ）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５８（計算値１５７）。
【００８２】
１．４）化合物８（（Ｅ）−９−アミノ−ノナ−２−エン酸）
【化２９】
2010515767.tif 000031
【００８３】
化合物１２の調製に用いた一般的手続きをエナントラクタムに応用し、（Ｅ）−９−アミノ−ノナ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２９−１．５４（ｍ，８Ｈ）；２．１６−２．２３（ｍ，２Ｈ）；２．７１−２．７６（ｍ，２Ｈ；５．７７（ｄｄ，ｌＨ，Ｊ＝１８Ｈｚ）；６．８１（ｄｔ，ｌＨ，Ｊ＝１８Ｈｚ）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１７２（計算値１７１）。
融点：１０４℃。
【００８４】
１．５）化合物９（９−アミノ−２−フルオロ−ノナ−２−エン酸）
【化３０】
2010515767.tif 000032
【００８５】
化合物１３の調製に用いた一般的手続きをエナントラクタムに応用し、９−アミノ−２−フルオロ−ノナ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δｌ．４０−１．７１（ｍ，８Ｈ）；２．３０−２．３５（ｍ，２Ｈ）；２．９１−２．９６（ｍ，２Ｈ）；５．９２−６．０５（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝２１．９Ｈｚ，Ｅ体）；６．０９−６．２６（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝３３．３Ｈｚ，Ｚ体）。
質量分析法：［Ｍ−Ｈ］”＝１８８（計算値１８９）。
融点：１２０℃。
【００８６】
１．６）化合物１１（（Ｅ）−１４−アミノ−テトラデカ−２−エン酸）
【化３１】
2010515767.tif 000033
【００８７】
化合物１２の調製に用いた一般的手続きをアザシクロデカノンに応用して、（Ｅ）−１４−アミノ−テトラデカ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．３１−１．６９（ｍ，１８Ｈ）；２．２０−２．２７（ｍ，２Ｈ）；２．９０−２．９５（ｍ，２Ｈ）；５．８０（ｄｄ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）；６．９６（ｄｔ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４２（計算値２４１）。
融点：１５３℃。
【００８８】
１．７）化合物１０（１４−アミノ−２−フルオロ−テトラデカ−２−エン酸）
【化３２】
2010515767.tif 000034
【００８９】
化合物１３の調製に用いた一般的手続きをアザシクロデカノンに応用して、１４−アミノ−２−フルオロ−テトラデカ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．３４−１．６７（ｍ，１８Ｈ）；２．２１−２．２６（ｍ，ＩＨ  Ｚ体）；２．４８−２．５４（ｍ，ＩＨ，Ｅ体）；２．９２（ｔ，２Ｈ），５．９１−６．０４（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝２１．９Ｈｚ，Ｅ体）；６．０９−６．２５（ｄｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝３３．３Ｈｚ，Ｚ体）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６０（計算値２５９）。
融点：１４８．５℃。
【００９０】
１．８）化合物１（（Ｅ）−６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸）
【化３３】
2010515767.tif 000035
【００９１】
化合物１２の調製に用いた一般的手続きを２−ピロリドンに応用し、（Ｅ）−６−アミノ−ヘキサ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．８１−１．９１（ｍ，２Ｈ）；２．３２−２．４０（ｍ，２Ｈ）；２．９５−３．００（ｍ，２Ｈ）；５．９０（ｄｄ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）；６．９６（ｄｔ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３０（計算値１２９）。
【００９２】
１．９）化合物２（（Ｅ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸）および化合物３（（Ｚ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸）
【化３４】
2010515767.tif 000036
【００９３】
化合物１３の調製に用いた一般的手続きを２−ピロリドンに応用し、（Ｚ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸（３）および（Ｅ）−６−アミノ−２−フルオロ−ヘキサ−２−エン酸（２）を得て、この場合には分離した。
Ｚ体
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ）；２．３３−２．４２（ｍ，２Ｈ）；２．９５−３．００（ｍ，２Ｈ）；６．１２−６．２８（ｄｔ，ＩＨ，Ｊ＝３２．７Ｈｚ，Ｚ体）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４８（計算値１４７）。
Ｅ体
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．７７−１．８９（ｍ，２Ｈ）；２．６０−２．６８（ｍ，２Ｈ）；２．９４−２．９９（ｍ，２Ｈ）；５．９６−６．０８（ｄｔ，ＩＨ，Ｊ＝２１．０Ｈｚ，Ｅ体）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４８（計算値１４７）。
【００９４】
１．１０）化合物４（（Ｅ）−７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸）
【化３５】
2010515767.tif 000037
【００９５】
化合物１２の調製に用いた一般的手続きをδ−バレロラクトンに応用し、（Ｅ）−７−アミノ−ヘプタ−２−エン酸を得る。
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．５６−１．７４（ｍ，４Ｈ）；２．２８−２．３４（ｍ，２Ｈ）；２．９４−２．９９（ｍ，２Ｈ）；５．８４（ｄｄ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）；６．９７（ｄｔ，ｌＨ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４４（計算値１４３）。
【００９６】
１．１１）化合物５（（Ｚ＋Ｅ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸）および化合物６（（Ｚ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸）
【化３６】
2010515767.tif 000038
【００９７】
化合物１３の調製に用いた一般的手続きをδ−バレロラクトンに応用し、（Ｚ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸（６）および混合物（Ｚ＋Ｅ）−７−アミノ−２−フルオロ−ヘプタ−２−エン酸（５）を得る。
Ｚ体
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．５５−１．７１（ｍ，４Ｈ）；２．３２−２．３５（ｍ，２Ｈ）；２．９３−２．９８（ｍ，２Ｈ）；６．１１−６．２８（ｄｔ，ＩＨ，Ｊ＝３３．３Ｈｚ，Ｚ体）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６２（計算値１６１）。
Ｅ＋Ｚ体  
Ｒｆ＝０．１（ヘプタン／酢酸エチル  ５／５）。
ＮＭＲ（１Ｈ，ＭｅＯＤ）：δ  １．５４−１．７５（ｍ，４Ｈ）；２．３０−２．４１（ｍ，０．６Ｈ）；２．５６−２．６４（ｍ，１．４Ｈ，Ｅ体）；２．９４−２．９９（ｍ，２Ｈ）；５．９５−６．０８（ｄｔ，０．７Ｈ，Ｊ＝２１．６Ｈｚ，Ｅ体）；６．１２−６．２８（ｄｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝３３．３Ｈｚ，Ｚ体）。
質量分析法：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６２（計算値１６１）。
【００９８】
２）炎症の脂質メディエーターで分析した抗炎症作用
表皮の最も代表的細胞であるケラチノサイトは、環境に存在する多くの細胞外因子に応答して生物活性メディエーター、特に皮膚の炎症反応の開始および調節に重要な役割を果たしておりかつ免疫応答の調節にも関与しているプロスタグランジンおよびロイコトリエンを放出する。プロスタグランジンＰＧ６ＫＦ１αは刺激を受けたケラチノサイトによって産生される主要な代謝物の１つであり、シクロオキシゲナーゼ経路に由来するアラキドン酸の代謝の代謝物産生の調節の代表的なものである。
【００９９】
２．１）手続き
１０％  ＦＣＳを含むＤＭＥＭ中のケラチノサイトの懸濁液を６穴のプレート（１．２  ｘ  １０６個／ウェル）に散布し、５％  ＣＯ２の雰囲気中で３７℃にて１６時間インキュベーションする。次に、ケラチノサイトをＰＢＳで洗浄して非接着細胞を除去した後、ＦＣＳ（分析を妨げる可能性がある）を含まないＤＭＥＭに含まれる試験を行う生成物に暴露する。
【０１００】
試験した培養物濃度は３μｇ／ｍｌである。これを、予備試験の後に細胞毒性の評価（ニュートラルレッド）の目的で保持したが、細胞毒性ではない。
【０１０１】
それぞれの処理について、３ウェルを生成した。細胞を試験を行う生成物と６０分間予備インキュベーションした後、アラキドン酸のカスケードを刺激する薬剤であるカルシウムイオノフォアを５時間加え、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７を１μＭの濃度で用いる。
【０１０２】
これらの５時間の培養の後、それぞれのウェルの培地を回収し、３０００ｒｐｍで遠心分離し、−８０℃で保管する。
【０１０３】
それぞれの試験についてのプロスタグランジン６ＫＦｌαの産生をＥｌｉｓａキットＥＵＲＯＭＥＤＥＸで測定する。
【０１０４】
２．２）結果
結果を表１にまとめてあり、活性／刺激を受けたコントロールの百分率で表している。
【０１０５】
【表１】
2010515767.tif 000039
【０１０６】
得られたデータを総合することによって、特に化合物１１、５、７および１０の抗炎症性を明らかにすることができ、化合物１１についての有効用量４５（ＤＥ４５）は１０μｇ／ｍｌであり、化合物５については２５μｇ／ｍｌである。
【０１０７】
３）抗炎症特性：炎症促進性サイトカインＩＬ８の合成の阻害
皮膚バリヤー機能によって外部環境から保護することが可能であり、表皮のケラチノサイトは多種多様な刺激性またはアレルギー誘発薬剤に直接応答し、皮膚の炎症および免疫過程に特にタンパク質性のメディエーターである炎症促進性サイトカインの生成を介して積極的に関与することがある。これらの生物活性分子の中で、ＩＬ１α（インターロイキン１α）およびＴＮＦα（腫瘍壊死因子α）主要なサイトカインであると考えられ、その放出は内皮細胞における接着分子の誘発およびケモカインのような走化性因子の誘発による炎症の誘発に十分である。ケモカイン系は炎症応答中の白血球輸送を制御し、本質的かつ適応性のある免疫応答の相互作用が必要である。
【０１０８】
本研究において、本発明者らは、更に具体的には、炎症性応答および特に炎症促進性分子の放出を刺激することによる好中性多核細胞を回復し活性化する主機能の増幅に強く関与しているケモカイン（インターロイキン８）に関心を持った。
【０１０９】
９６穴プレートで行ったこの研究では、本発明者らは、フォルボールエステルＰＭＡおよびカルシウムイオノフォアＡ２３１８７によりケラチノサイトで誘導されたインターロイキン８の産生についてアミノ−アルケン酸の活性を評価した。
【０１１０】
３．１）手続き
補足されたＫＳＦＭのケラチノサイト懸濁液を９６穴プレート（３．１０４個／ウェル）に散布し、５％  ＣＯ２の雰囲気中で３７℃にて１６時間インキュベーションする。次いで、ケラチノサイトをＰＢＳで洗浄して非接着細胞を除去した後、補足していないＫＳＦＭ（分析を妨げる可能性がある）に含まれる試験を行う生成物に暴露する。
【０１１１】
試験した培養物濃度は３μｇ／ｍｌである。これを、予備試験の後に細胞毒性の評価（ニュートラルレッド）の目的で保持したが、細胞毒性ではない。
【０１１２】
それぞれの処理について、３ウェルを生成した。細胞を、試験を行う生成物と６０分間予備インキュベーションした後、刺激剤を全く含まないネガティブコントロールと平行して１μＭフォルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）＋０．１μＭカルシウムイオノフォア（Ａ２３１８７）で刺激した。
【０１１３】
５％  ＣＯ２を含む湿潤空気雰囲気中で３７℃にて６時間インキュベーションする。
【０１１４】
それぞれのウェルの培地を回収し、３０００ｒｐｍで遠心分離し、−８０℃で保管する。
【０１１５】
サイトカインの分析：ＩＬ８を、ＥＬＩＳＡキット（Immunotech）を用いる免疫酵素法によって分析する。
【０１１６】
３．２）結果
結果を表２にまとめてあり、活性／刺激を受けたコントロールの百分率で表している。
【０１１７】
【表２】
2010515767.tif 000040
【０１１８】
得られたデータを要約すると、特に化合物１１および９の抗炎症性を明らかにすることができ、化合物１１についての有効用量５０（ＤＥ５０）は１１μｇ／ｍｌである。
【０１１９】
４）酸素活性種（ＯＡＳ）に対するラジカル防止効果の検討
通常の細胞代謝の際には、ストレス薬剤への皮膚の時折の暴露中または皮膚科学的異常中に、酸素活性化種（ＯＡＳ）とも呼ばれる反応性酸素化種が生成する（Y. M. W. Janssen et al,1993）。反応性の極めて高い代謝産物として記載されているこれらのＯＡＳは、炎症、老化および腫瘍促進のようなかなりの数の過程に重要な役割を果たしている。
【０１２０】
ＯＡＳは、酸化ストレスの細胞シグナル形成において「第二のメッセンジャー」と考えられ、従って炎症の早期メディエーターと考えられる（A. Van Der Vliet and A. Bast,1992）。
【０１２１】
それらの過剰な産生は、細胞の重大な損傷を誘発する。次に、ある種の細胞成分はこのような酸化ストレスの主要な標的であり、血漿膜の脂質成分（脂質過酸化）、タンパク質（変性および分解）、および遺伝子材料またはＤＮＡ（突然変異）が変更されることがある。細胞は、様々な抗ラジカル防御組織（酵素性および非酵素性酸化防止剤）によってこれらの酸化性損傷を制限することができる（B. P. Yu,1994 ;H. Steiling et al,1999）。
【０１２２】
しかしながら、ある種の条件下では、ＯＡＳが細胞の酸化防止活性が不十分であるような量で産生され、これらのＯＡＳは炎症性異常や組織老化を誘発する要因となる（Y. Miyachi et al,1986 ;M. Kress et al,1995）。
【０１２３】
イン・ビトロで酸化ストレスを生成することができる様々な化学薬剤（例えば、Ｈ２Ｏ２）または物理的薬剤（例えば、ＵＶＡ）がある。例えば、産生したＯＡＳは様々な細胞標的（膜、ＤＮＡまたはタンパク質）を変化させ、その変化は、脂質の脂質過酸化についてのＴＢＡＲＳの分析またはプローブＨ２ＤＣＦ−ＤＡによる細胞内ＯＡＳのイン・ビトロ分析のような広く用いられている生化学的方法によって分析することができる。
【０１２４】
本発明者らは、膜脂質の酸化によって誘発される連鎖反応により細胞内ＯＡＳを多量に生成するＨ２Ｏ２／鉄、Ｈ２Ｏ２によって誘発される酸化ストレスのイン・ビトロ研究のモデルを設定した。
【０１２５】
この手法は蛍光プローブである６−カルボキシ−２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート、ジ（アセトキシメチルエステル）（Ｈ２ＤＣＦ−ＤＡ）の使用に基づいており、これは一旦細胞に浸透すると細胞内エステラーゼによって脱アセチル化された後、Ｈ２ＤＣＦを形成する。この生成物は細胞内ＯＡＳによって酸化されて、蛍光性の高い化合物２’，７’−ジクロロフルオレセイン（ＤＣＦ）となる（Suematsu M et al,1996,「フリーラジカル  実際的研究法（Free Radicals Pratical Approach）」，Punchard監修，pp. 83-99）。
【０１２６】
細胞内ＯＡＳのイン・ビトロ分析に用いる装置および方法を、以下に示す。
【０１２７】
ａ）細胞工具
ネズミの皮膚繊維芽細胞系Ｌ９２９。
【０１２８】
ｂ）装置
平底の９６穴マイクロプレート
細胞蛍光計Cytofluor II：Ref.PERSEPTIVE BIOSYSTEMS
【０１２９】
ｃ）試薬
細胞培養試薬
培地：ダルベッコの改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）
ウシ胎児血清（ＦＣＳ）
リン酸緩衝液ＰＢＳ  ｐＨ７．４
トリプシンＥＤＴＡ（１Ｘ）
【０１３０】
蛍光プローブ
６−カルボキシ−２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート，ジ（アセトキシメチルエステル）（分子量：６７５．４３）
【０１３１】
細胞刺激産物
過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）３％：Ｒｅｆ．ＧＦＩＲＥＲ（Laboratoire Gifrer Barbezat）
硫酸第一鉄アンモニウム（Ｆｅ２＋）
硫酸第二鉄アンモニウム（Ｆｅ３＋）
【０１３２】
ｄ）試験生成物
試験を行った濃度は、非細胞毒性濃度である。細胞毒性は、生成物を３時間インキュベーションした後ニュートラルレッド法によって評価した。
【０１３３】
対照ラジカル防止生成物は、ビタミンＥまたはα−トコフェロール（分子量：４３０．７）（ＳＩＧＭＡ，ｒｅｆ：Ｔ−１５３９）である。
【０１３４】
母液はＤＭＳＯ中４００ｍｇ／ｍｌで調製し、−２０℃で保管する。前処理溶液は、ＦＣＳなしの培地中４００μｇ／ｍｌで随時調製する。
【０１３５】
不飽和脂肪族アミノ酸誘導体を評価するため、希釈液を培地中０．０２、０．２、２および２０  ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で随時調製する。
【０１３６】
ｅ）手続き
細胞の播種
繊維芽細胞系Ｌ９２９の細胞を、１０％  ＦＣＳを補足したＤＭＥＭ  １００μｌ中で平底の９６穴マイクロプレートに播種した後、５％  ＣＯ２での湿潤雰囲気中で３７℃にて一晩インキュベーションする。
【０１３７】
細胞なしのプレートブランクを、６ウェルで評価する。
【０１３８】
細胞の前処理
試験を行う生成物および対照分子の希釈をＦＣＳを含まない培地で行った後、ウェル当たり１００μｌの量で７ウェルで沈降させる。
【０１３９】
細胞を、次に５％  ＣＯ２での湿潤雰囲気中で３７℃にて一晩インキュベーションする。
【０１４０】
「コントロール」細胞（天然細胞蛍光）、「プローブコントロール」細胞（ＯＡＳの基本的産生）および「刺激を受けた」細胞（酸化性処理の後のＯＡＳの産生）を、ＤＭＥＭ  １００μｌでカバーする。
【０１４１】
「プローブコントロール」細胞は、プローブと共にインキュベーションするが、前処理も処理も行わない。
【０１４２】
「刺激を受けた」細胞は、プローブと共にインキュベーションし、処理を行うが、前処理は行わない。
【０１４３】
「コントロール」細胞は、前処理も、プローブと共にインキュベーションも、処理も行わない。
【０１４４】
プローブと一緒の細胞のインキュベーションおよび酸化ストレス
【０１４５】
細胞を、ウェル当たり１００μｌの量のＰＢＳ  １Ｘで洗浄する。次いで、細胞を、５％  ＣＯ２および５μＭ  Ｈ２ＤＣＦ−ＤＡ  ５０μｌを用いて湿潤雰囲気中で３７℃にて３０分間インキュベーションするように設定する。
【０１４６】
プローブのみと３０分間接触させた後、細胞を８００μＭ  Ｈ２Ｏ２  ２５μｌおよび８ｍＭ  硫酸第一鉄および第二鉄溶液２５μｌを加えた５％  ＣＯ２での湿潤雰囲気中で３７℃にて３０分間インキュベーションし、Ｈ２Ｏ２  ２００μＭおよび第一鉄および第二鉄２ｍＭの最終濃度とする。
【０１４７】
次いで、細胞をウェル当たり１００μｌの量のＰＢＳ  １Ｘで洗浄した後、５％  ＣＯ２およびＰＢＳ  １Ｘ  １００μｌでの湿潤雰囲気中で３７℃にて３０分間インキュベーションする。
【０１４８】
これらの３７℃での１時間３０分のインキュベーションにより、細胞内エステラーゼがＨ２ＤＣＦプローブを脱アセチル化して、細胞内ＯＡＳによって蛍光化合物であって、その形成が細胞内ＯＡＳの量に比例するＤＣＦに酸化することができる。
【０１４９】
蛍光強度は、細胞蛍光計を用いてλ励起＝４８５ｎｍおよびλ放射＝５３０ｎｍで読み取る。それは、生成した細胞内ＯＡＳの量を反映している。
【０１５０】
検討手順の略図
【化３７】
2010515767.tif 000041
【０１５１】
ＯＡＳ細胞内産生に対する保護％の計算
（蛍光強度またはＦＩはＯＡＳの細胞内放出を表すので、）下記の比を用いて、試験生成物のそれぞれの濃度について、細胞内ＯＡＳの産生に対する保護％を計算することができる。
【数１】
2010515767.tif 000042
【０１５２】
表３に示される値は、「コントロール」細胞（１００％）および「刺激を受けた」細胞（０％）に対する外因性の酸化ストレス後の細胞内ＯＡＳ産生の阻害率である。
【０１５３】
Ｌ９２９系に対する４種類の濃度での１３種類の試験分子についての平均保護率を、下表３に示す。
【０１５４】
【表３】
2010515767.tif 000043
【０１５５】
結論
イン・ビトロでは、細胞スケールでは、Ｈ２Ｏ２／Ｆｅ２＋−Ｆｅ３＋による外因性ストレスは、蛍光プローブによって検出される細胞内ＯＡＳを生成することができる。
ビタミンＥ（対照ラジカル防止分子）は、４００μｇ／ｍｌで３１％の平均保護を有する。
本発明による短鎖（Ｃ７−Ｃ９）の不飽和脂肪族アミノ酸誘導体、特に化合物８、７および６はラジカル防止特性を有する（活性＞２５％）。
【０１５６】
５）ラジカル防止作用の検討。脂質過酸化の分析
更に、通常の細胞代謝の際には、ストレス薬剤への皮膚の時折の暴露中または皮膚科学的異常中に、遊離酸素化ラジカル（ＦＯＲ）とも呼ばれる反応性酸素化種が生成する（Y. M. W. Janssen et al,1993）。反応性の極めて高い代謝産物として記載されているこれらのＦＯＲは、炎症、老化および腫瘍促進のような多数の過程に重要な役割を果たしている。
【０１５７】
ＦＯＲは、酸化ストレスの細胞シグナル形成において「第二のメッセンジャー」と考えられ、従って炎症の早期メディエーターと考えられる（A. Van Der Vliet and A. Bast,1992）。
【０１５８】
それらの過剰な産生は、細胞の重大な損傷を誘発する。次に、ある種の細胞成分はこのような酸化ストレスの主要な標的であり、血漿膜の脂質成分（脂質過酸化）、タンパク質（変性および分解）、および遺伝子材料またはＤＮＡ（突然変異）が変更されることがある。細胞は、様々な抗ラジカル防御組織（酵素性および非酵素性酸化防止剤）によってこれらの酸化性損傷を制限することができる（B. P. Yu,1994 ;H. Steiling et al,1999）。
【０１５９】
しかしながら、ある種の条件下では、ＦＯＲが細胞の酸化防止活性が不十分であるような量で産生され、これらのＦＯＲは炎症性異常や組織老化を誘発する要因となる（Y. Miyachi et al,1986 ;M. Kress et al,1995）。
【０１６０】
本発明による様々な誘導体のラジカル防止活性を高めるため、本発明者らは、対照酸化防止剤であるビタミンＥと比較して酸化性（化学）ストレスによって誘発される細胞膜の変化に対する防御力を分析した。
【０１６１】
血漿膜はＦＯＲの主要かつ第一の標的を形成し、脂質に富んでおり、これが過酸化増加の部位となる（A. W. Girotti,1985）。この脂質酸化の際に生成した過酸化物も、極めて反応性であり、タンパク質やゲノム材料を分解することができる。
【０１６２】
膜の変化を評価するため、本発明者らは、脂質酸化生成物とチオバルビツール酸の錯体のイン・ビトロ分析による脂質過酸化を測定した。これらの錯体はＴＢＡＲＳ（チオバルビツール酸反応性物質）と呼ばれ、この試験はＴＢＡＲＳの試験と呼ばれる。
【０１６３】
化学的酸化ストレスを模倣するため、本発明者らは、繊維芽細胞系Ｌ９２９を過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）および鉄（Ｆｅ２＋／Ｆｅ３＋）からなる錯体で処理することによって、ＦＯＲおよび更に詳細にはヒドロキシルラジカル（ＯＨ０）の供給源であるフェントン反応を再生した（D .A Vessey et al,1992）。
Ｈ２Ｏ２＋Ｆｅ２＋→ＯＨ０＋ＯＨ−＋Ｆｅ３＋
【０１６４】
生成物をネズミの繊維芽細胞系Ｌ９２９について評価した。細胞を様々な濃度の生成物で１６時間処理した後、錯体Ｈ２Ｏ２−Ｆｅ２＋／Ｆｅ３＋（２００μＭ−１ｍＭ）で１時間刺激した。
母液：１００ｍｇ／ｍｌ、エタノール、４℃。
最終溶液：０．０２ｎｇ／ｍｌ。
【０１６５】
膜脂質の過酸化を、ＴＢＡＲＳの測定によって分析する（Morliere et al.(1991)の手続き参照ＰＬ  番号２）。
【０１６６】
試験原理
９５℃の酸性媒質では、チオバルビツール酸反応性物質についてＴＢＡＲＳと表される錯体が、脂質酸化生成物（マロン酸ジアルデヒドまたはＭＤＡ）とチオバルビツール酸（ＴＢＡ）との間に形成され、これはＭＤＡを用いる標準範囲に対して蛍光によって分析することができる。次に、ＴＢＡＲＳの投薬量を、ピコモル／μｇタンパク質で表す。タンパク質とＴＢＡＲＳを、細胞内媒質中で分析する。
【０１６７】
細胞膜の保護率の計算
ピコモル／μｇタンパク質でのＴＢＡＲＳの計算から、膜脂質の酸化に対する様々な生成物の保護効率を計算した。
【数２】
2010515767.tif 000044
【０１６８】
７回の独立した実験を行った。これらの実験中に、様々な化合物を評価した（試験では、１０個を上回る分子を同時に評価することはできない）。数回評価した化合物を、ラジカル防止活性も測定する他の試験（酸素活性種ＯＡＳの分析試験）で得られた結果に準じて選択した。
【０１６９】
この実験（フェントン反応）で用いたモデルは、繊維芽細胞Ｌ９２９においてかなりの脂質過酸化を誘発する。従って、このＯＨ−ヒドロキシルラジカルの多量の放出は、細胞レベルで、特に膜レベルで酸化ストレスを生じる。しかしながら、この型の酸化反応では、脂質過酸化の生成物は細胞に内在化され（internalized）、次にＴＢＡＲＳが細胞内媒質で分析される。
【０１７０】
４００μｇ／ｍｌのビタミンＥは錯体Ｈ２Ｏ２−Ｆｅ２＋／Ｆｅ３＋によって誘発された脂質過酸化を還元し、細胞膜を極めて効果的に保護する。
【０１７１】
下表４に、７回の実験結果を示す。
【表４】
2010515767.tif 000045
【０１７２】
結論
【０１７３】
この検討で示したイン・ビトロモデルは、血漿膜である主要な細胞標的に対する主要な酸化ストレスによる結果を反映している。例えば、脂質過酸化の分析は酸化ストレスの良好なマーカーであり、細胞膜における活性成分のヒドロキシルラジカルに対する酸化防止作用を評価することができる。
【０１７４】
本発明者らの実験条件下では、化合物８、９、１０、７、５および６は有意なラジカル防止活性を有しており、細胞膜を効果的に保護することを観察している。
【０１７５】
化合物８、７および６は、最も有意なラジカル防止活性と膜の保護を有する。
【０１７６】
６）イン・ビトロでのメラニンの合成に対する本発明による不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の効果
メラノサイトは星のような外観を有する細胞であり、表皮の基底層に少数存在する。その主な機能は、メラニンを特殊化した細胞小器官であるメラノソームで合成した後、樹状突起を介して隣接するケラチノサイトに輸送して分布させる過程であるメラニン形成を提供することである。このケラチノサイトとの接触により、紫外線の突然変異誘発効果から表皮を保護する機構である皮膚の色素沈着を生じる。それぞれのメラノサイトは約３６個のケラチノサイトと結合しており、これにより表皮のメラニン沈着単位を形成している。
【０１７７】
メラニン形成は一連の酵素的および自発性反応からなり、その前駆体はチロシンである。この過程には３個の主要な酵素、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質１および２（ＴＲＰ  １および２）が関与している（Jimbow et al.,2000）。チロシナーゼは、チロシンのドパキノンへの変換を触媒する。そこからは、２つの合成経路、ユーメラノゲネシス（eumelanogenesis）およびフェオメラノゲネシス（pheomelanogenesis）が可能である。ドパキノンのユーメラニン（eumelanine）への転換は、ＴＲＰ−１およびＴＲＰ−２を含む一連の連続した酸化反応によって行われる。ユーメラニンは、硫黄含量が少ない黒褐色色素に相当し、光保護力を確保している。フェオメラノゲネシスでは、高硫黄含量の分子がドパキノンに組込まれ、赤毛（redheads）の皮膚に含まれる黄橙色のフェオメラニン（pheomelanin）を提供する。
【０１７８】
メラニン合成の生理学的刺激は日光であり、メラノサイトの数の増加、メラニンの新たな合成、およびメラノサイトの形態変化を引き起こし、その樹状性（dendricity）の増加はメラノソームのケラチノサイトへの転換の増加と関連している。分子レベルでは、日光への暴露は、α−メラノソーム刺激ホルモンの合成および分泌を刺激する。α−ＭＳＨはメラノサイト内のＡＭＰｃ濃度を増加し、転写因子Ｍｉｔｆを活性化し、これは次にチロシナーゼ、ＴＲＰ−１およびＴＲＰ−２をコードする遺伝子の転写活性を刺激する。
【０１７９】
ある種の外来分子も、メラニン形成の負の調節を行うことが知られている。ヒドロキノンはチロシナーゼの基質として現れることによってメラニンの合成を阻害し、その活性をそらす（Curto et al,1999）。ビタミンＣはチロシナーゼを阻害するが、酸化によるメラニンの着色を防止することによって強力な還元剤としても作用する。
【０１８０】
６．１）メラニン形成に対する不飽和脂肪族アミノ酸誘導体の調節効果を分析した。このため、比色分析法によるメラニン合成の測定をネズミ黒色腫の細胞系Ｂ１６−Ｆ１０について行った。
【０１８１】
生成物の効果を基底状態およびα−ＭＳＨによるメラニン形成の刺激後に検討し、脱色素力を測定する。
【０１８２】
メラニンの分析
次に、細胞外および細胞内メラニンのレベルを、手順に従って４０５ｎｍの波長で分光光度法によって測定する（Meun,Y. J. et al）。色素の量を、メラニンの標準的範囲およびＭｉｃｒｏｗｉｎソフトウェアパッケージ（Berthold Biotechnologies）での分析によって決定する。総タンパク質の分析は、細胞内メラニンの試料について５４０ｎｍでＢＣＡ−銅法によって行う。標準的範囲は、標準タンパク質ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）で生成する。
【０１８３】
６．２）結果
【０１８４】
基底状態では、１μＭ  α−ＭＳＨは、コントロール細胞と比較してメラニン産生を１００％を上回る量だけ増加する。
【０１８５】
このメラニンの増加は、１μｇ／ｍｌのヒドロキノンまたは４０μｇ／ｍｌのビタミンＣのような脱色素剤によって相殺され、メラニン形成は約６０％だけ阻害される。
【０１８６】
脱色素分子
３０μｇ／ｍｌでは、分子１１は細胞内および細胞外メラニンをそれぞれ約４５％および３０％だけ弱く阻害する。しかしながら、分子１１は、１０μｇ／ｍｌではメラニン合成に全く影響しないままである。
【０１８７】
色素沈着分子
３、１０および３０μｇ／ｍｌでは、分子６は細胞内メラニンの量を約１００％増加させる。分子５も色素沈着効果を有すると思われるが、分子６の効果より弱い。
【０１８８】
７）抗コラゲナーゼ活性の検討
抗コラゲナーゼ活性を測定するには、特に２００３年３月１４日に公表された仏国特許出願第２ ８２９ ４９１号明細書を参照することができる。
【０１８９】
７．１．冷凍したヒトの皮膚切片
７．１．１．手続き
この研究は、１％および２％の活性成分濃度の様々な溶液について、賦形剤のみ、緩衝液コントロールおよびコラゲナーゼと比較して行った。用いた活性成分は、ＤＨＡ、ヒドロキシ−１０−デセン−２（トランス）酸２−ジメチルアミノエチルエステル（ＭＬ４０）およびヒドロキシ−１０−デセン−２（トランス）酸グリセロールエステル（ＧＭ）である。
【０１９０】
５４歳女性の乳房移植からの冷凍した５μｍ切片を組織スライドに置く（４切片／スライド）。それぞれの溶液を、スライド上で試験する。
【０１９１】
切片を試験を行う溶液でカバーし、湿潤室内で３７℃にて２時間インキュベーションする。溶液を洗浄を繰り返して除き、切片をピクロシリウスで染色する。顕微鏡による検討を行う。
【０１９２】
７．１．２．結果
本発明の生成物は、以前に知られているＤＨＡの活性より大きな活性を有する。
【０１９３】
７．２．生きたままで保持される外植片
７．２．１．手続き
５％  ＧＭ生成物について、賦形剤（ヒドロセリン）、ポジティブコントロールおよびコントロールを１００Ｕ／ｍｌのコラゲナーゼの存在下にて比較検討する。ヒドロセリンは、適用される生成物を調製するために賦形剤として用いる。
【０１９４】
この検討は２回行った。最初の検討では、＋２日目のコラゲナーゼの作用は大きく制限されたままであり、有意ではないことに注目した。第二の検討では、適用時間を延ばし、外植片の採取は＋２日目および＋４日目に行う。
【０１９５】
７．２．１．１．外植片の調製
それぞれ３つの外植片を用いる１６バッチで調製して配分したヒトの皮膚外植片を、表５に準じて生きたまま保持する。
【０１９６】
【表５】
2010515767.tif 000046
【０１９７】
７．２．１．２．    ５％  ＧＭでの生成物および本発明による生成物の適用
生成物を、外植片当たり２０ｍｇの量で０日目および＋２日目に適用し、コラゲナーゼを最後の２４バッチの培地に組込む。
【０１９８】
７．２．１．３．  組織学
それぞれのバッチの３個の外植片を＋２日目および＋５日目  ＋４日目に採取し、通常のブワン塩で固定し、組織学的処理を行う。組織学的検討は、
パラフィンへの浸漬、
切片、レッド・シリウスＦ３Ｂによる染色、
画像解析によるコラーゲンの比色測定、
写真による記録
を含んでなる。
【０１９９】
７．２．２  結果
２日目に行った試料は、検討したバッチに関係なくコラゲナーゼの有意な活性は示さない。このため、生存、接触および適用を＋４日目まで延長する。コラゲナーゼの作用を、コラーゲン網状組織の着色強度および皮膚構造の厚みの２通りで記録する。この検討を用いて、活性成分の浸透およびコラゲナーゼに対するその阻害活性を相関させる。得られた結果は、下記の通りである。
コラゲナーゼなしのコントロールについては、皮膚は総ての区画に規則的なコラーゲン束を有する正常な構造を有し、
コラゲナーゼを有するコントロールについては、コラーゲン束は著しく分解し、皮膚の厚みは半分だけ減少し、
賦形剤とコラゲナーゼを有する外植片については、コラーゲン束は大きく分解しているが、変化はコラゲナーゼを有するコントロールで見られたより小さく、皮膚の厚みはほぼ半分だけ減少している。
【０２００】
ＧＭ生成物と比較することによって、本発明による生成物は、ＤＨＡのエステル（ＧＭ）より優れておりかつ一層速やかな抗コラゲナーゼ活性を示す。
【０２０１】
引用文献
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Van Der Vliet A.and Bast A.(1992)Chem.Biol.Interactions 85:95-116
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Jimbow K.,Hua C.,Gomez P.,Hirosaki K.,Shinoda K.,Salopek T.,Matsusaka H.,Jin H.,Yamashita T.ユーおよびフェオメラノソーム生物発生におけるチロシナーゼ遺伝子ファミリータンパク質の細胞内小胞輸送(2000)Pigment cell res.13:110-117
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2010515767.tif 000059
2010515767.tif 000060
2010515767.tif 000061
2010515767.tif 000062
2010515767.tif 000063
2010515767.tif 000064
2010515767.tif 000065