(57)【要約】  本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤として有用である化合物およびその医薬組成物、ならびに異常なまたは無秩序なキナーゼ活性と関連する状態を処置、改善または予防するためのこのような化合物を使用するための方法を提供する。いくつかの態様において、本発明は、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型の異常活性化を含む疾患または障害を処置、改善または予防するためのこのような化合物を使用するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2010506948.tif 000098
〔式中、
ＹおよびＺは、独立して、ＣＲまたはＮであり；
Ｌは、ＮＲ−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）、ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲＣＯ、ＮＲＳ（Ｏ）０−２またはＮＲＣＯＮＲＳ（Ｏ）０−２であり；
Ｒ１およびＲ３は、独立して、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ２は、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９、（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ４は、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＯＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ５は、Ｈ、ハロまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、所望により置換されているＣ３−７シクロアルキルまたは所望により置換されている５−１２員アリール、ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋ−Ｒ６または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；または、Ｒ７およびＲ８は、それぞれのＮＲ７Ｒ８におけるＮと一体となって、所望により置換されている環を形成してもよく；
Ｒ９は、Ｈ、（ＣＲ２）ｋ−Ｒ６または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
それぞれのＲは、Ｈまたは所望によりＮ、Ｏ、＝Ｏ、Ｓで置換されているか、または置き換わっている炭素を有するＣ１−６アルキルであるか；または、（ＣＲ２）ｋの２個のアルキレン基は、アルケニルまたはアルキニルを形成してもよく；
それぞれの所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルは、所望によりハロゲン化されているか、または所望によりＮ、ＯまたはＳで置換されており；
ｋは０−６であり；そして、
ｎは０−２である；
ただし、Ｒ１がハロ、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８またはＣ５−８ヘテロシクロアルキルであり、そして、Ｒ２がＣ１−６アルキルであるとき、ＬはＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）、ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲＣＯまたはＮＲＣＯＮＲＳ（Ｏ）０−２である〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ＹがＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＺがＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９、または、所望により置換されているＣ１−６アルキルもしくはＣ２−６アルケニルであり；
Ｒ２がＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９または（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ６がフェニル、Ｃ３−７シクロアルキル、または、Ｎ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり、これらそれぞれは、所望によりハロまたは所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルで置換されており；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９が、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであるか；または、Ｒ７およびＲ８が、一体となって、所望により置換されている５−７員ヘテロ環式環を形成してもよく；そして、
それぞれのｋが０−４である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｎが１であり；そして、Ｒ３がハロまたはＣ１−６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４がＣ１−６アルキル、（ＣＲ２）ｋＯ（Ｃ１−６アルキル）または（ＣＲ２）ｋＲ６であり；
Ｒ６が所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；そして、
ｋが０−４である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
該５−１２員ヘテロ環またはヘテロアリールが、チアゾリル、チエニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、フラニル、ピロリル、ジヒドロピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、アゼチジニル、チアジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾジオキソリル、インダゾリル、インドリル、インデニル、ジヒドロインデニルまたはジヒドロベンゾフランである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
該所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールが、所望によりハロ、シアノ、ニトロ、ＮＲ７Ｒ８、ＮＲＣＯＲ７、ＮＲＣＯ（ＣＲ２）ｐＮＲ７Ｒ８、ＮＲＣＯＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｐＯＲ９、（ＣＲ２）ｐＲ１０および所望によりハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシまたはシアノで置換されているＣ１−６アルキルからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されており；
それぞれのＲが、Ｈまたは所望によりＮ、Ｏ、＝Ｏ、Ｓで置換されているか、または置き換わっている炭素を有するＣ１−６アルキルであるか；または、（ＣＲ２）ｋの２個のアルキレン基が、アルケニルまたはアルキニルを形成してもよく；
Ｒ７およびＲ８が、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキルまたは（ＣＲ２）ｐ−Ｒ１０であるか；または、Ｒ７およびＲ８が、それぞれのＮＲ７Ｒ８におけるＮと一体となって、所望により置換されている環を形成してもよく；
Ｒ９が、Ｈ、所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルまたは（ＣＲ２）ｐＲ１０であり；
Ｒ１０が、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり、これらそれぞれは、所望により１個以上の該置換基で置換されており；そして、
ｐが０−４である、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
該化合物が式（２）：
【化２】
2010506948.tif 000099
で示される化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキルもしくはＣ２−６アルケニルであり；
Ｒ２が、Ｃ１−６アルキル、（ＣＲ２）Ｒ６’、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９または（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ３が、ハロまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ４が、Ｃ１−６アルキル、（ＣＲ２）ｋＯ（Ｃ１−６アルキル）または（ＣＲ２）ｋＲ６であり；
Ｒ６’が、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキル、または、Ｎ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ６が、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキル、または、Ｎ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９が、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであるか；または、Ｒ７およびＲ８が、一体となって、所望により置換されている５−７員ヘテロ環式環を形成してもよく；そして、
それぞれのｋが０−４である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ６’が、所望によりハロまたは所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルで置換されおり；そして、Ｒ６が、所望によりハロ、シアノ、ニトロ、ＮＲ７Ｒ８、ＮＲＣＯＲ７、ＮＲＣＯ（ＣＲ２）ｐＮＲ７Ｒ８、ＮＲＣＯＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｐＯＲ９、（ＣＲ２）ｐＲ１０、所望によりハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシまたはシアノで置換されているＣ１−６アルキルからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されており；
それぞれのＲが、Ｈまたは所望によりＮ、Ｏ、＝Ｏ、Ｓで置換されているか、または置き換わっている炭素を有するＣ１−６アルキルであるか；または、（ＣＲ２）ｋの２個のアルキレン基が、アルケニルまたはアルキニルを形成してもよく；
Ｒ７およびＲ８が、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキルまたは（ＣＲ２）ｐ−Ｒ１０であるか；または、Ｒ７およびＲ８が、それぞれのＮＲ７Ｒ８におけるＮと一体となって、所望により置換されている環を形成してもよく；
Ｒ９が、Ｈ、所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルまたは（ＣＲ２）ｐＲ１０であり；
Ｒ１０が、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；そして、
ｐが０−４であり、
ここで、それぞれの該所望により置換されているＣ３−７シクロアルキル、アリールまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールが、該１個以上の置換基でさらに置換されていてもよい、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
該化合物が式（３）：
【化３】
2010506948.tif 000100
で示される化合物である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
該化合物が：
【化４】
2010506948.tif 000101
【化５】
2010506948.tif 000102
【化６】
2010506948.tif 000103
【化７】
2010506948.tif 000104
【化８】
2010506948.tif 000105
【化９】
2010506948.tif 000106
【化１０】
2010506948.tif 000107
【化１１】
2010506948.tif 000108
【化１２】
2010506948.tif 000109
【化１３】
2010506948.tif 000110
【化１４】
2010506948.tif 000111
【化１５】
2010506948.tif 000112
【化１６】
2010506948.tif 000113
【化１７】
2010506948.tif 000114
【化１８】
2010506948.tif 000115
【化１９】
2010506948.tif 000116
【化２０】
2010506948.tif 000117
【化２１】
2010506948.tif 000118
【化２２】
2010506948.tif 000119
【化２３】
2010506948.tif 000120
【化２４】
2010506948.tif 000121
【化２５】
2010506948.tif 000122
【化２６】
2010506948.tif 000123
【化２７】
2010506948.tif 000124
【化２８】
2010506948.tif 000125
【化２９】
2010506948.tif 000126
【化３０】
2010506948.tif 000127
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
治療有効量の請求項１−１３のいずれかに記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１５】
キナーゼ活性を調節するための請求項１−１３のいずれかに記載の化合物もしくはその医薬組成物の使用であって、該キナーゼが、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、Ｆｍｓ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型である使用。
【請求項１６】
治療有効量の請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物を必要とする系または対象に投与することを含むキナーゼ活性を調節するための方法であって、該キナーゼが、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、Ｆｍｓ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型である方法。
【請求項１７】
インビトロまたはインビボで請求項１に記載の化合物をｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαまたはＰＤＧＦＲβまたはそれらの変異形と直接接触させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
キナーゼ介在状態を処置するための薬物の製造のための、所望により治療有効量の第２の薬剤と組み合わせた、請求項１−１３のいずれかに記載の化合物またはそれらの医薬組成物の使用であって、該キナーゼが、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、Ｆｍｓ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型である使用。
【請求項１９】
該キナーゼ介在状態または疾患がｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαまたはＰＤＧＦＲβキナーゼにより介在される、請求項１８に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
第２の薬剤が、気管支拡張剤、抗炎症剤、ロイコトリエンアンタゴニストまたはＩｇＥ遮断剤であり；そして、該第２の薬剤が、請求項１に記載の化合物に対して前、同時、後に投与される、請求項１８に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
該キナーゼ介在疾患または状態が、肥満細胞介在疾患、新生物障害、アレルギー障害、炎症性疾患、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自己免疫性疾患、移植片対宿主病、メタボリックシンドローム、ＣＮＳ関連障害、神経変性障害、疼痛状態、薬物濫用障害、プリオン病、癌、心臓病、線維症、特発性肺高血圧（ＩＰＡＨ）、原発性肺高血圧（ＰＰＨ）、神経膠腫または心血管疾患である、請求項１８に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
該肥満細胞介在疾患が、アクネ、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）、炎症および組織破壊、嚢胞性線維症；腎臓疾患、炎症性筋疾患、ＨＩＶ、脳虚血、肥満細胞症、黄斑変性症、鼻ポリープ、髪喪失、細菌感染、間質性膀胱炎、腫瘍血管形成または骨損失の予防または最小化であり；
該新生物障害が、肥満細胞症、消化管間質腫瘍、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌腫、胃癌腫、精巣癌、膠芽細胞腫または星状細胞腫であり；
該アレルギー障害が、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー症候群、蕁麻疹、血管浮腫、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、結節性紅斑、多形性紅斑、皮膚壊死性細静脈炎、虫刺されによる皮膚炎症または吸血寄生虫侵入であり；
該炎症性疾患が、リウマチ性関節炎、結膜炎、リウマチ様脊椎炎、骨関節症または痛風関節炎であり；
該自己免疫性疾患が、多発性硬化症、乾癬、腸炎症性疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性、不確定または感染性大腸炎；クローン病、リウマチ性関節炎、多発性関節炎、局所または全身性強皮症、全身性エリテマトーデス、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、皮膚筋炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸疾患または増殖性糸球体腎炎であり；
該移植片対宿主病が、臓器移植移植片拒絶反応であり；
該メタボリックシンドロームが、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病または肥満であり；
該ＣＮＳ関連障害が、鬱病、気分変調性障害、気分循環性障害、食欲不振、過食症、月経前症候群、月経後症候群、精神機能低下、集中力低下、苦労性（pessimistic worry）、激越、自己非難および性欲減退、不安障害、精神疾患または統合失調症であり；
該神経変性障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、プリオン疾患、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）であり；
該疼痛状態が、急性疼痛、術後疼痛、慢性疼痛、侵害受容性疼痛、癌疼痛、神経障害性疼痛または心因性疼痛症候群であり；
該薬物使用障害が、薬物耽溺、薬物濫用、薬物嗜癖、薬物依存、退薬症候群または過剰摂取であり；
該癌が、黒色腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、小細胞肺癌または他の固形腫瘍であり；そして、
該線維症が、心臓線維症、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、肝臓線維症、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変症、肺線維症または骨髄線維症である、請求項２１に記載の化合物の使用。
【請求項２３】
臓器移植が、腎臓移植、膵臓移植、肝臓移植、心臓移植、肺移植または骨髄移植である、請求項２２に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
式：
【化３１】
2010506948.tif 000128
からなる群から選択される化合物またはそれらの薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００６年１０月２０日出願の米国仮出願番号６０／８６２，４３０の利益を主張する（これを出典明示によりその全体を本出願に包含させる）。
【０００２】
技術分野
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤およびこのような化合物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
タンパク質キナーゼは、広範囲の細胞過程の制御ならびに細胞機能の制御の維持の中心的役割を有する、タンパク質の大きなファミリーを代表する。これらのキナーゼの部分的、非限定的リストは下記を含む：受容体チロシンキナーゼ、例えば、血小板由来増殖因子受容体キナーゼ（ＰＤＧＦＲ）、幹細胞増殖因子受容体（ｃ−ｋｉｔ）、神経増殖因子受容体（ｔｒｋＢ）、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ３）およびコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）；非受容体チロシンキナーゼ、例えば、Ａｂｌ、融合キナーゼＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｆｅｓ、ＬｃｋおよびＳｙｋ；ならびにセリン／スレオニンキナーゼ、例えば、ｂ−ＲＡＦ、ＭＡＰキナーゼ（例えば、ＭＫＫ６）ならびにＳＡＰＫ２β。異常なキナーゼ活性は、良性および悪性増殖性障害ならびに免疫系および神経系の不適切な活性化に由来する疾患を含む、多くの疾患状態で観察されている。
【発明の概要】
【０００４】
発明の開示
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤として有用であり得る化合物およびその医薬組成物を提供する。
【０００５】
１つの局面において、本発明は、式（１）：
【化１】
2010506948.tif 000002
〔式中、
ＹおよびＺは、独立して、ＣＲまたはＮであり；
Ｌは、ＮＲ−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）、ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲＣＯ、ＮＲＳ（Ｏ）０−２またはＮＲＣＯＮＲＳ（Ｏ）０−２であり；
Ｒ１およびＲ３は、独立して、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ２は、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９、（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ４は、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＯＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ５は、Ｈ、ハロまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、所望により置換されているＣ３−７シクロアルキルまたは所望により置換されている５−１２員アリール、ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋ−Ｒ６または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；または、Ｒ７およびＲ８は、それぞれのＮＲ７Ｒ８におけるＮと一体となって、所望により置換されている環を形成してもよく；
Ｒ９は、Ｈ、（ＣＲ２）ｋ−Ｒ６または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
それぞれのＲは、Ｈまたは所望によりＮ、Ｏ、＝Ｏ、Ｓで置換されているか、または置き換わっている炭素を有するＣ１−６アルキルであるか；または、（ＣＲ２）ｋの２個のアルキレン基は、アルケニルまたはアルキニルを形成してもよく；
それぞれの所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルは、所望によりハロゲン化されているか、または所望によりＮ、ＯまたはＳで置換されており；
ｋは０−６であり；そして、
ｎは０−２である；
ただし、Ｒ１がハロ、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８またはＣ５−８ヘテロシクロアルキルであり、そして、Ｒ２がＣ１−６アルキルであるとき、ＬはＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）、ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲＣＯまたはＮＲＣＯＮＲＳ（Ｏ）０−２である〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００６】
上記式（１）において、ＹがＣＨであり得る。他の例において、ＺがＮである。さらなる他の例において、ｎが１であり；そして、Ｒ３がハロまたはＣ１−６アルキルである。
【０００７】
上記式（１）において、Ｒ４がＣ１−６アルキル、（ＣＲ２）ｋＯ（Ｃ１−６アルキル）または（ＣＲ２）ｋＲ６であり得；
Ｒ６が、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；そして、
ｋが０−４である。
【０００８】
１つの態様において、本発明は、式（２）：
【化２】
2010506948.tif 000003
〔式中、Ｒ１は、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキルもしくはＣ２−６アルケニルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、（ＣＲ２）Ｒ６’、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９または（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ３は、ハロまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、（ＣＲ２）ｋＯ（Ｃ１−６アルキル）または（ＣＲ２）ｋＲ６であり；
Ｒ６’は、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたは、Ｎ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであるか；または、Ｒ７およびＲ８は、一体となって、所望により置換されている５−７員ヘテロ環式環を形成し；そして、
それぞれのｋは０−４である〕
で示される化合物を提供する。
【０００９】
上記式（２）において、Ｒ６’が、所望により、ハロまたは所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルで置換されていてもよく；そして、Ｒ６が、所望により１個以上の下記定義の置換基で置換されていてもよい。
【００１０】
他の態様において、本発明は、式（３）：
【化３】
2010506948.tif 000004
で示される化合物を提供する。
【００１１】
上記式（１）、（２）または（３）において、Ｒ１が、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキルもしくはＣ２−６アルケニルであり；
Ｒ２が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９または（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ６が、フェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたは、Ｎ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり、これらそれぞれは、所望によりハロまたは所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルで置換されており；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９が、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであるか；または、Ｒ７およびＲ８が、一体となって、所望により置換されている５−７員ヘテロ環式環を形成してもよく；そして、
それぞれのｋが０−４である。
【００１２】
上記式（１）、（２）および（３）における適当な５−１２員ヘテロ環またはヘテロアリールＲ６基の例は、チアゾリル、チエニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、フラニル、ピロリル、ジヒドロピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、アゼチジニル、チアジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾジオキソリル、インダゾリル、インドリル、インデニル、ジヒドロインデニルまたはジヒドロベンゾフランを含み、これに限定されない。
【００１３】
適当なＲ１０基の例は、所望により置換されているフェニル、ピペラジン−２−オニル、モルホリニル、チアゾリル、チエニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、イミダゾリジン−２−オニル、ピラゾリル、フラニル、ピロリル、ジヒドロピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、アゼチジニル、チアジアゾリルまたはテトラヒドロピラニルを含み、これに限定されない。
【００１４】
上記式（１）、（２）および（３）において、所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルのそれぞれが、所望によりハロゲン化されているか、または所望によりＮ、ＯまたはＳ（例えば、ヒドロキシル、ウレアイルまたはグアニジニル）で置換されていてもよい。
【００１５】
上記式（１）、（２）および（３）において、該所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールのそれぞれが、所望によりハロ、シアノ、ニトロ、ＮＲ７Ｒ８、ＮＲＣＯＲ７、ＮＲＣＯ（ＣＲ２）ｐＮＲ７Ｒ８、ＮＲＣＯＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｐＯＲ９、（ＣＲ２）ｐＲ１０および所望によりハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシまたはシアノで置換されているＣ１−６アルキルからなる群から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく；
それぞれのＲが、Ｈまたは所望によりＮ、Ｏ、＝Ｏ、Ｓで置換されているか、または置き換わっている炭素を有するＣ１−６アルキルであるか；または、（ＣＲ２）ｐの２個のアルキレン基が、アルケニルまたはアルキニルを形成してもよく；
Ｒ７およびＲ８が、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキルまたは（ＣＲ２）ｐ−Ｒ１０であるか；または、Ｒ７およびＲ８が、それぞれのＮＲ７Ｒ８におけるＮと一体となって、所望により置換されている環を形成してもよく；
Ｒ９が、Ｈ、所望によりハロゲン化されているＣ１−６アルキルまたは（ＣＲ２）ｐＲ１０であり；
Ｒ１０が、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり、これらそれぞれは、所望により１個以上の該置換基で置換されており；そして、
ｐが０−４である。
【００１６】
他の局面において、本発明は、治療有効量の式（１）、（２）または（３）を有する化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
さらに他の局面において、本発明は、治療有効量の式（１）、（２）または（３）を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩または医薬組成物を必要とする系または対象に投与し、キナーゼ活性を調節する、キナーゼ活性を調節するための方法を提供する。１つの態様において、本発明は、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型を調節するための方法を提供する。他の態様において、本発明は、インビトロまたはインビボでｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαまたはＰＤＧＦＲβと直接接触させ得る、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβまたはそれらの変異型を調節するための方法を提供する。
【００１８】
本発明は、また、キナーゼ活性の調節が疾患または状態の病状および／または総体症状を予防、阻害または改善することができる疾患または状態を処置するための方法であって、系または対象に、所望により治療有効量の第２の薬剤と組み合わせられた、治療有効量の式（１）、（２）または（３）を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩または医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。第２の薬剤を共に投与するとき、式（１）、（２）または（３）の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩または医薬組成物は、第２の薬剤に対して前、同時、後に投与され得る。１つの例において、第２の薬剤は、気管支拡張剤、抗炎症剤、ロイコトリエンアンタゴニストまたはＩｇＥ遮断剤である。
【００１９】
１つの態様において、本発明は、系または対象に、治療有効量の式（１）、（２）または（３）を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩または医薬組成物を投与することを含む、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型が介在する疾患または状態を処置するための方法を提供する。特定の例において、本発明は、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαまたはＰＤＧＦＲβまたはそれらの変異型が介在する疾患または状態を処置するための方法を提供する。
【００２０】
本発明の化合物および組成物を使用して介在され得るキナーゼ介在疾患または状態の例は、新生物障害、アレルギー障害、炎症性疾患、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、自己免疫性疾患、移植片対宿主病、肥満細胞介在疾患、メタボリックシンドローム、ＣＮＳ関連障害、神経変性障害、疼痛状態、薬物濫用障害、プリオン病、癌、心臓病、線維症、特発性肺高血圧（ＩＰＡＨ）、原発性肺高血圧（ＰＰＨ）、神経膠腫および心血管疾患を含み、これに限定されない。
【００２１】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る肥満細胞介在疾患の例は、アクネおよびアクネ菌、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）、化学または生物兵器（例えば、炭疽菌および硫黄マスタード）への暴露による炎症および組織破壊、嚢胞性線維症；腎臓疾患、炎症性筋疾患、ＨＩＶ、ＩＩ型糖尿病、脳虚血、肥満細胞症、黄斑変性症、鼻ポリープ、薬物依存および禁断症候群、ＣＮＳ障害、髪喪失、細菌感染、間質性膀胱炎、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎および感染性大腸炎）、腫瘍血管形成、自己免疫性疾患、炎症性疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、アレルギー性疾患（喘息を含む）および骨損失を含み、これに限定されない。
【００２２】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る新生物障害の例は、肥満細胞症、消化管間質腫瘍、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌腫、胃癌腫、精巣癌、膠芽細胞腫および星状細胞腫を含み、これに限定されない。
【００２３】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得るアレルギー障害の例は、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー症候群、蕁麻疹、血管浮腫、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、結節性紅斑、多形性紅斑、皮膚壊死性細静脈炎、虫刺されによる皮膚炎症および吸血寄生虫侵入を含み、これに限定されない。
【００２４】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る炎症性疾患の例は、リウマチ性関節炎、結膜炎、リウマチ様脊椎炎、骨関節症および痛風関節炎を含み、これに限定されない。
【００２５】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る自己免疫性疾患の例は、多発性硬化症、乾癬、腸炎症性疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性、不確定または感染性大腸炎、クローン病、リウマチ性関節炎、多発性関節炎、局所または全身性強皮症、全身性エリテマトーデス、円板状紅斑性狼瘡、皮膚狼瘡、皮膚筋炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸疾患および増殖性糸球体腎炎を含み、これに限定されない。
【００２６】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る移植片対宿主病の例は、臓器移植、例えば、腎臓移植、膵臓移植、肝臓移植、心臓移植、肺移植および骨髄移植の移植片拒絶反応を含み、これに限定されない。
【００２７】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得るメタボリックシンドロームの例は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病および肥満を含み、これに限定されない。
【００２８】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得るＣＮＳ関連障害の例は、鬱病、気分変調性障害、気分循環性障害、食欲不振、過食症、月経前症候群、月経後症候群、精神機能低下、集中力低下、苦労性（pessimistic worry）、激越、自己非難および性欲減退、不安障害、精神疾患および統合失調症を含み、これに限定されない。
【００２９】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る鬱病状態の例は、双極性鬱病、重度またはメランコリー型鬱病、非定型鬱病、難治性鬱病および季節性鬱病を含み、これに限定されない。本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る不安障害の例は、過呼吸と心臓不整脈を伴う不安、恐怖性障害、強迫神経症、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害および全般性不安障害を含み、これに限定されない。本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る精神疾患の例は、精神病を含むパニック発作、妄想性障害、転換性障害、恐怖症、躁病、錯乱状態、解離性健忘、解離性遁走および解離性自殺行動を含む解離性の発症、自虐（self-neglect）、暴力性もしくは攻撃性行動、心的外傷、境界性人格障害、および急性精神病、例えば、妄想型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症および鑑別不能型統合失調症を含む統合失調症を含み、これに限定されない。
【００３０】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る神経変性障害の例は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、プリオン疾患、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含み、これに限定されない。
【００３１】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る疼痛状態の例は、急性疼痛、術後疼痛、慢性疼痛、侵害受容性疼痛、癌疼痛、神経障害性疼痛および心因性疼痛症候群を含み、これに限定されない。
【００３２】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る薬物使用障害の例は、薬物耽溺、薬物濫用、薬物嗜癖、薬物依存、退薬症候群および過剰摂取を含み、これに限定されない。
【００３３】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る癌の例は、黒色腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、小細胞肺癌および他の固形腫瘍を含み、これに限定されない。
【００３４】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る線維症の例は、心臓線維症、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、肝臓線維症、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変症、肺線維症および骨髄線維症を含み、これに限定しない。
【００３５】
本発明の化合物および組成物を使用して処置され得る心臓疾患の例は、狭心症、心筋梗塞、鬱血性心不全、心筋症、高血圧、動脈狭窄および静脈狭窄を含み、これに限定されない。
【００３６】
１つの態様において、式（１）、（２）または（３）を有する化合物は、過好酸球増加症、線維症、肺高血圧、神経膠腫および心血管疾患を処置するために使用してもよい。
【００３７】
さらに、本発明は、キナーゼ、特にｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型の活性により調節される疾患または状態の処置のための薬物の製造における、所望により治療有効量の第２の薬剤と組み合わせた、式（１）、（２）または（３）を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩または医薬組成物の使用を提供する。特定の態様において、本発明の化合物は、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ｃ−ｋｉｔキナーゼ受容体またはそれらの変異型により調節される疾患または状態の処置のための薬物の製造において使用される。
【００３８】
本発明の化合物を使用するための上記方法において、式（１）、（２）または（３）を有する化合物を細胞または組織を含む系に投与し得る。他の態様において、式（１）、（２）または（３）を有する化合物をヒトまたは動物対象に投与し得る。
【００３９】
定義
基および他の基、例えばハロ置換アルキルおよびアルコキシの構造成分としての“アルキル”は、直鎖または分岐鎖であり得る。本明細書で使用される所望により置換されているアルキル、アルケニルまたはアルキニルは、所望によりハロゲン化されているか（例えば、ＣＦ３）、または、ヘテロ原子、例えば、ＮＲ、ＯまたはＳで置換されている、または、置き換えられている１個以上の炭素を有しても良い（例えば、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、アルキルチオール、チオアルコキシ、アルキルアミン等）。
【００４０】
“アリール”は炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環を意味する。例えば、アリールはフェニルまたはナフチルであり得る。“アリーレン”はアリール基から生じる二価のラジカルを意味する。
【００４１】
“ヘテロアリール”は１個以上の環員がヘテロ原子であるときの上記アリールを定義する。ヘテロアリールの例は、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含み、これに限定されない。
【００４２】
本明細書で使用される“炭素環式環”は、所望により、例えば、＝Ｏで置換されていてもよい、炭素原子を含む飽和または部分的に不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環を意味する。炭素環式環の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピレン、シクロヘキサノンなどを含み、これに限定されない。
【００４３】
本明細書で使用される“ヘテロ環式環”は、１個以上の環炭素がヘテロ原子であるときの上記炭素環式環を定義する。例えば、ヘテロ環式環は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｎ＝、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２またはＮＲを含んでよく、ここで、Ｒは水素、Ｃ１−４アルキルまたは保護基であり得る。ヘテロ環式環の例は、モルホリノ、ピロリジニル、ピロリジニル−２−オン、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニロン、１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デカ−８−イルなどを含み、これに限定されない。
【００４４】
他に記載のない限り、置換基が“所望により置換”されていると考えられるとき、それは、置換基が、個々に、かつ独立して、例えば、所望により、ハロゲン化されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルアミン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、モノおよびジ置換アミノ基を含むアミノ、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、カルボニル、炭素環式、シアノ、シクロアルキル、ハロゲン、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロ環式、ヒドロキシ、イソシアネート、イソチオシアネート、メルカプト、ニトロ、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、パーハロアルキル、パーフルオロアルキル、シリル、スルホニル、チオカルボニル、チオシアネート、トリハロメタンスルホニルおよびそれらの保護された化合物から選択される１個以上の基で置換されていてもよい基であることを意味する。上記置換基の保護された化合物を形成し得る保護基は、当業者に既知であり、そして、文献、例えば、Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999、およびKocienski, Protective Groups, Thieme Verlag, New York, NY, 1994で見つけることができる（これらを出典明示によりそれらの内容を本明細書に包含させる）。
【００４５】
本明細書で使用される“共投与”または“組合せ投与”などの用語は、個々の患者に選択された治療剤を投与することを含むことを意味し、そして必ずしも薬剤が同じ投与経路によりまたは同時に投与されない処置レジメンを含むことを意図する。
【００４６】
本明細書で使用される“薬学的組合せ”なる用語は、活性成分の混合または組合せから得られる生産物を意味し、そして活性成分の固定された組合せおよび固定されていない組合せの両方を含む。“固定された組合せ”なる用語は、複数の活性成分、例えば式（１）の化合物、および共薬剤両方が、単一の物または投与形で同時に患者に投与されることを意味する。“固定されていない組合せ”なる用語は、複数の活性成分、例えば式（１）の化合物、および共薬剤両方が、同時に、共にまたは特定の時間制限なしに連続してのいずれかで、別々の物として投与することを意味し、このような投与は、治療有効量の活性成分を患者の体内に提供する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも適用する。
【００４７】
“治療有効量”なる用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床医により求められる、細胞、組織、臓器、系、動物またはヒトの生物または医学応答を誘導する対象化合物の量を意味する。
【００４８】
対象化合物の“投与”または“投与する”なる用語は、処置を必要とする対象に本発明の化合物およびそのプロドラッグを提供することを意味する。
【００４９】
“ＢＣＲ−Ａｂｌの変異型”は、野生型配列からの１個以上のアミノ酸変化を意味する。変異の第１の群（Ｇ２５０Ｅ、Ｑ２５２Ｒ、Ｙ２５３Ｆ／Ｈ、Ｅ２５５Ｋ／Ｖ）はＡＴＰのためのリン酸結合ループ（Ｐループとしても既知）を形成するアミノ酸を含む。変異の第２の群（Ｍ３５１Ｔ、Ｅ３５５Ｇ）は触媒ドメインの近くに集中する。変異の第３の群（Ｈ３９６Ｒ／Ｐ）はキナーゼ活性化／非活性化を調節する分子スイッチである構造である活性ループに位置する。変異の第４の群（Ｖ２８９Ａ、Ｆ３１１Ｌ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７Ｌ）が、また、報告されている。特に明記しない限り、Ｂｃｒ−Ａｂｌは本酵素の野生型および変異型を意味する。
【００５０】
本発明の実施モード
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤として有用であり得る化合物およびその医薬組成物を提供する。
【００５１】
１つの局面において、本発明は、式（１）：
【化４】
2010506948.tif 000005
〔式中、
ＹおよびＺは、独立して、ＣＲまたはＮであり；
Ｌは、ＮＲ−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）、ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲＣＯ、ＮＲＳ（Ｏ）０−２またはＮＲＣＯＮＲＳ（Ｏ）０−２であり；
Ｒ１およびＲ３は、独立して、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ２は、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９、（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ４は、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＯＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
Ｒ５は、Ｈ、ハロまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、所望により置換されているＣ３−７シクロアルキルまたは所望により置換されている５−１２員アリール、ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋ−Ｒ６または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；または、Ｒ７およびＲ８は、それぞれのＮＲ７Ｒ８におけるＮと一体となって、所望により置換されている環を形成してもよく；
Ｒ９は、Ｈ、（ＣＲ２）ｋ−Ｒ６または所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであり；
それぞれのＲは、Ｈまたは所望によりＮ、Ｏ、＝Ｏ、Ｓで置換されているか、または置き換わっている炭素を有するＣ１−６アルキルであるか；または、（ＣＲ２）ｋの２個のアルキレン基は、アルケニルまたはアルキニルを形成してもよく；
それぞれの所望により置換されているＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルは、所望によりハロゲン化されているか、または所望によりＮ、ＯまたはＳで置換されており；
ｋは０−６であり；そして、
ｎは０−２である；
ただし、Ｒ１がハロ、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８またはＣ５−８ヘテロシクロアルキルであり、そして、Ｒ２がＣ１−６アルキルであるとき、ＬはＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ、ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲＣ（Ｏ）、ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲＣＯまたはＮＲＣＯＮＲＳ（Ｏ）０−２である〕
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００５２】
１つの態様において、本発明は、式（２）：
【化５】
2010506948.tif 000006
〔式中、Ｒ１は、ハロ、（ＣＲ２）ｋＲ６、（ＣＲ２）ｋＮＲ７Ｒ８、（ＣＲ２）ｋＯＲ９、（ＣＲ２）ｋＳＲ９または所望により置換されているＣ１−６アルキルもしくはＣ２−６アルケニルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、（ＣＲ２）Ｒ６’、（ＣＲ２）１−４ＯＲ９または（ＣＲ２）１−４ＮＲ７Ｒ８であり；
Ｒ３は、ハロまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、（ＣＲ２）ｋＯ（Ｃ１−６アルキル）または（ＣＲ２）ｋＲ６であり；
Ｒ６’は、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたは、Ｎ、ＯまたはＳを含む５−７員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、所望により置換されているフェニル、Ｃ３−７シクロアルキルまたはＮ、ＯまたはＳを含む５−１２員ヘテロ環もしくはヘテロアリールであり；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであるか；または、Ｒ７およびＲ８は、一体となって、所望により置換されている５−７員ヘテロ環式環を形成し；そして、
それぞれのｋは０−４である〕
で示される化合物を提供する。
【００５３】
他の態様において、本発明は、式（３）：
【化６】
2010506948.tif 000007
で示される化合物を提供する。
【００５４】
上記式（１）、（２）または（３）において、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のための他の置換基は、当業者に既知のものを使用できる。例えば、Ｒ１およびＲ３は、シアノ、ニトロまたは他の電子求引性または電子供与性置換基であってよい。
【００５５】
式（１）、（２）または（３）を有する化合物は、タンパク質キナーゼ阻害剤として有用であり得る。例えば、式（１）、（２）または（３）を有する化合物およびそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、Ｎ−オキシド、プロドラッグおよび異性体は、キナーゼ介在状態または疾患、例えば、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型が介在する疾患の処置のために使用し得る。
【００５６】
本発明の化合物は、また、タンパク質キナーゼが介在する状態、例えば、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαまたはＰＤＧＦＲβ−介在状態を改善するために第２の治療剤と組み合わせて使用され得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、喘息を処置するために第２の治療剤と組み合わせて使用され得る。例えば、第２の治療剤は、気管支拡張剤、抗炎症剤、ロイコトリエンアンタゴニストまたはＩｇＥ遮断剤であり得る。
【００５７】
本発明の化合物は、また、リンパ腫、骨肉腫、黒色腫または乳房、腎臓、前立腺、結腸直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、神経、肺、子宮または消化器の腫瘍を含み、これに限定されない細胞増殖性障害を処置するために、化学療法剤と組み合わせて使用し得る。本発明の組成物および方法で使用され得る化学療法剤の例は、アントラサイクリン、アルキル化剤（例えば、マイトマイシンＣ）、スルホン酸アルキル、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、抗生物質、代謝拮抗剤、葉酸類似体（例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、例えば、メトトレキサート）、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、プラチン含有剤、インターフェロンおよびインターロイキンを含み、これに限定されない。本発明の組成物および方法で使用され得る既知の化学療法剤の特定の例は、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾデパ、カルボクオン、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、トリメチロロメラミン、クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロルエタミン、塩酸メクロルエタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、アクラシノマイシン、アクチノマイシンＦ（１）、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、６−ジアゾ−５−オキソ−１−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、プロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアナイン、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、フルオロウラシル、テガフール、Ｌ−アスパラギナーゼ、パルモザイム、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アンサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、カルボプラチン、シスプラチン、デホファミド、デメコルシン、ジアジクオン、エルホルニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、エトポシド、フルタミド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、レンチナン、ロニダミン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、パクリタキセル、タモキシフェン、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンを含み、これに限定されない。
【００５８】
薬理学および有用性
本発明の化合物は、タンパク質チロシンキナーゼの活性を調節し、タンパク質チロシンキナーゼ、特にｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型が疾患の病状および／または総体症状に関与する疾患または障害の処置に有用である。
【００５９】
ｃ−Ｋｉｔ
肥満細胞は、ＣＤ３４、ｃ−ｋｉｔおよびＣＤ１３抗原を発現する造血幹細胞の特定のサブセット由来の組織要素である。肥満細胞は、組織の位置および構造に関してのみでなく、機能および組織化学レベルでの不均一性により特徴付けられる。未成熟な肥満前駆細胞は血流中を循環し、種々の組織に分化される。これらの分化および増殖プロセスはサイトカインの影響下にあり、その中の重要な１つはＫｉｔリガンド、Ｓｔｅｅｌ因子または肥満細胞増殖因子とも呼ばれる幹細胞因子（ＳＣＦ）である。幹細胞因子受容体は、造血前駆細胞、肥満細胞、胚細胞、カハールの間質細胞（ＩＣＣ）およびいくつかのヒト腫瘍で発現され、また、非造血細胞によっても発現されるプロトオンコジーンｃ−ｋｉｔによりコードされている。
【００６０】
チロシンキナーゼは、ＡＴＰの末端リン酸塩をタンパク質のチロシン残基に移動させ、シグナル形質導入経路を活性化または不活性化させる受容体型または非受容体型タンパク質である。幹細胞因子受容体であるｃ−ｋｉｔは、ＳＣＦとの結合により細胞増殖および増殖シグナル形質導入カスケードを開始する３型膜貫通受容体タンパク質チロシンキナーゼである。ｃ−ｋｉｔ受容体とＳＣＦが結合すると、その二量体化、次にそのトランスリン酸化を誘導し、種々の細胞質内基質の補充および活性化を引き起こす。これらの活性化した基質は、細胞増殖および活性化に関与する多数の細胞内シグナル伝達経路を誘導する。これらのタンパク質は、崩壊の場合、異常細胞増殖および移動のような障害、ならびに炎症を引き起こす、多数の細胞メカニズムに関与することが既知である。本発明の化合物は、ＳＣＦに関連する細胞過程を阻害し得る、例えば、ＭＡＰＫキナーゼ（マイトージェン−活性タンパク質キナーゼ）のＳＣＦ受容体自己リン酸化およびＳＣＦ刺激活性化を阻害する。
【００６１】
ｃ−ｋｉｔ受容体タンパク質チロシンキナーゼの活性は、正常細胞で制御されており、ｃ−ｋｉｔ遺伝子産物の正常機能活性は正常造血、メラニン形成、遺伝子形成ならびに肥満細胞の増殖および分化の維持に対して重要である。正常細胞生理学活性におけるその重要性に加えて、ｃ−ｋｉｔは、あるヒト癌の生物学的局面における役割を果たし、非制御ｃ−ｋｉｔキナーゼ活性は、ヒト癌およびある型の腫瘍の病因に関連する。ｃ−ｋｉｔが介在する腫瘍細胞増殖は、リガンド独立活性化で起こるｃ−ｋｉｔポリペプチドの特定の変異または受容体の自己分泌刺激により起こる。前記の場合において、ＳＣＦ結合なしでｃ−ｋｉｔキナーゼ活性の構成的活性化を引き起こす変異は、胚細胞腫瘍、肥満細胞腫瘍、消化管間質腫瘍、小細胞肺癌、黒色腫、乳癌、急性骨髄性白血病、神経芽腫および肥満細胞症を含む悪性ヒト癌と関連している。
【００６２】
患者の組織に存在する肥満細胞は、疾患、例えば、自己免疫性疾患（多発性硬化症、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、アレルギー性疾患（アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性鼻炎および喘息）、腫瘍血管形成、炎症性疾患および間質性膀胱炎の発症に関連するか、または発症の一因となる。これらの疾患において、肥満細胞は、異なるプロテアーゼおよびメディエーター、例えば、ヒスタミン、中性プロテアーゼ、脂質由来メディエーター（プロスタグランジン、トロンボキサンおよびロイコトリエン）および種々のサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−Ａ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−ＬＡ、ＭＩＰ−ｌｂ、ＭＩＰ−２およびＩＦＮ−ｙ）の混合物を放出することにより組織の破壊に関与する。
【００６３】
ヒトは、現代社会において、アレルギー性疾患、例えば、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性鼻炎および喘息にますます苦しめられている。例えば、ＵＳＡのみで、８７００万人以上のヒトがいくつかの型のアレルギー性疾患に対処していると概算される。これらのアレルギー性疾患は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー症候群、蕁麻疹、血管浮腫、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、結節性紅斑、多形性紅斑、皮膚壊死性静脈炎および虫刺されによる皮膚炎症を含むが、気管支喘息が、ヒトを非常に苦しめているもっとも一般的で再発性の疾患である。
【００６４】
喘息は、気流閉塞、気管支過敏症および気道炎症により特徴付けられる。気道炎症は喘息の発症および永続化における主な因子である。アレルギー性喘息において、アレルゲンがアレルゲン特異的ＩｇＥの生産をするＴリンパ球介在応答（ＴＨ２）を誘導することにより炎症プロセスを開始すると考えられている。ＩｇＥはその高親和性受容体である肺肥満細胞のＦｃεＲＩに結合し、Ｉ型（ＩｇＥ−介在）即時アレルギー反応を引き起こす。
【００６５】
肥満細胞活性化は、種々のエフェクター応答、例えば、アレルギー性メディエーター、プロテアーゼ、ケモカイン、例えば、ＭＣＰ−１およびＲＡＮＴＥＳ、ロイコトリエン、プロスタグランジンおよびニューロトロフィンの分泌；およびサイトカイン遺伝子転写の誘導（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＴＮＦＡおよびＧＭ−ＣＳＦ）を誘導する。これらのメディエーターは、内皮細胞、平滑筋細胞および繊維芽細胞ならびに細胞外マトリックスに対する効果により、そして他の炎症細胞を招集することにより、喘息表現型の形成に寄与する。
【００６６】
肥満細胞は、ヒト化抗ＩｇＥモノクローナル抗体処理により示唆されるとおり喘息において役割を果たし得る。抗ＩｇＥ治療の原理は、ＩｇＥを特異的に標的とし、遊離抗ＩｇＥが不活性化させ、さらなるＩｇＥ生産を停止させる。加えて、ＩｇＥレベルがＩｇＥ受容体であるＦｃεＲＩの発現レベルの主なレギュレーターであるため、この治療の１つの目的は肥満細胞および好塩基球でのＦｃεＲＩ発現を減少させ、結果として、活性化されるこれらの細胞の能力を減少させることである。ＦｃεＲＩ発現を減少させるための抗ＩｇＥの能力を好塩基球で証明した。好塩基球におけるＦｃεＲＩ発現の減少は、好塩基球が活性化によりメディエーターを分泌する能力の減少と関連する。
【００６７】
Ｃ−ｋｉｔ阻害剤は、また、インスリンが細胞によるグルコース吸収の促進において効果がなく、血中のグルコース濃度が増加するときに現れる慢性疾患である、ＩＩ型糖尿病としても知られている非インスリン依存糖尿病（ＮＬＤＤＭ）の処置において使用され得る。この疾患は世界で約１億人が罹患しており、この７５％は診断時に肥満である。長年にわたる、グルコース吸収制御の衰えがＩＩ型糖尿病を発症させ、血中グルコース濃度を医薬で制御することが必要となる。最終的に、制御されていない血中グルコース濃度は、血管、腎臓および眼損傷、ならびに心臓疾患に関与する。この組織損傷が糖尿病患者の死亡の一因となる。
【００６８】
加えて、異なる刺激、例えば、ストレス、外傷、感染ならびに神経伝達物質による肥満細胞の活性化は、ＣＮＳ障害を引き起こす化学的不均衡の悪化に関与し得る。より具体的には、肥満細胞脱顆粒は、一般的な神経伝達物質、例えば、ニューロテンシン、ソマトスタチン、サブスタンスＰおよびアセチルコリンにより、成長または生存因子、特に、例えば、ＮＧＦにより刺激される。このような刺激への応答に関連している肥満細胞は脳肥満細胞であり得るだけでなく、最終的に感覚、運動または脳のニューロンに到達する血流にそれらの顆粒の内容物を放出する他の肥満細胞であり得る。脳肥満細胞染色はＣＴＭＣ染色様であるが、それらが特異性を提示する肥満細胞の特定のサブセットを構成することを意味するＭＭＣの分泌パターンを示す。
【００６９】
肥満細胞活性化後、放出された顆粒は神経伝達およびニューロン生存を調節および変化させることができる種々の因子を遊離する。このような因子中で、遊離セロトニンレベルの増加が鬱病患者で観察されているため、セロトニンは重要である。あるいは、セロトニンの突然の増加に続いてセロトニン不足が起こり、疼痛および偏頭痛に至り得る。結果として、肥満細胞がオートクリンまたはパラクリン作用で神経伝達の脱制御を悪化させると考えられている。神経伝達物質、例えば、セロトニンの、例えば、不安またはストレス誘導放出は肥満細胞を活性化させ、それが次にこれらの顆粒の内容物を放出し、さらにＣＮＳ障害を引き起こす脳の化学的不均衡に関与する。
【００７０】
肥満細胞により放出される他のメディエーターは血管作用性、侵害受容性、炎症性および他の神経伝達物質に分類できる。統合すると、これらの因子は、感覚ニューロンであれ、運動ニューロンであれ、ＣＮＳニューロンであれ、ニューロンの活性の顕著な妨害を誘導することができる。加えて、肥満細胞症に罹患している患者は、正常集団より多くＣＮＳ障害を発症する傾向がある。これは、肥満細胞の脱顆粒および化学的不均衡および神経伝達変化に関与する因子の突発を誘導するｃ−ｋｉｔ受容体の活性化変異の存在により説明することができる。
【００７１】
いくつかの場合において、活性化された肥満細胞は、また、種々のプロテアーゼと、予め形成された顆粒関連メディエーター（ヒスタミン、プロテオグリカンおよび中性プロテアーゼ）、脂質由来メディエーター（プロスタグランジン、トロンボキサンおよびロイコトリエン）および種々のサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−Ａ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−ＬＡ、ＭＩＰ−ｌｂ、ＭＩＰ−２およびＩＦＮ−ｙ）の３群に分類されるメディエーターの混合物を放出することにより神経組織の破壊に関与できる。活性化された肥満細胞によるメディエーター（ＴＮＦ−Ａ、ヒスタミン、ロイコトリエン、プロスタグランジンなど）ならびにプロテアーゼの放出は、ｉ）炎症および血管拡張を誘導し、そしてｉｉ）神経組織破壊プロセスに関与し得る。ｃ−ｋｉｔ活性の阻害は細胞増殖を減少させ、疾患および／または状態に関与する肥満細胞を枯渇させ、それにより、ｃ−ｋｉｔ依存疾患および／または状態、例えば、ＣＮＳ障害の処置におけるｃ−ｋｉｔの阻害剤の使用の役割を示唆する。
【００７２】
肥満細胞は、また、薬物依存および退薬症状に関与するか、または一因であるとも同定されている。薬物依存は、薬物の最大効果を維持するために薬物用量を増加する必要性がある耐性と呼ばれる現象の、および薬物に対する身体の慣れである身体的依存性の結果である。薬物摂取が停止すると、個体は不快な退薬症候群を経験し得る。
【００７３】
サリチル酸誘導体、モルヒネ誘導体、オピオイド、ヘロイン、アンフェタミン、アルコール、ニコチン、鎮痛剤、麻酔剤および抗不安剤を含むが、これに限定されない種々の薬物による肥満細胞の活性化は、薬物嗜癖および退薬症候群を担う化学的不均衡の悪化に関与する肥満細胞の脱顆粒を引き起こす。肥満細胞の活性化後、放出された顆粒は神経伝達を調節および変化させることができる種々の因子を遊離させる。このような因子中で、モルヒネは、肥満細胞顆粒中に捕捉され、貯留される。タバコ煙は、また、イヌ科肥満細胞からメディエーターの放出を誘導し、プロスタグランジン生産を変化させ、喘息に至る。加えて、肥満細胞症に罹患している患者は、正常集団よりも物質使用障害を発症する傾向がある。これは、肥満細胞の脱顆粒および化学的不均衡および神経伝達変化を誘導する因子の突発を誘導するｃ−ｋｉｔ受容体の活性化変異の存在により説明することができる。
【００７４】
現在、これらの物質嗜癖から抜け出すために、個体に対して救済および助けを提供する処置はない。Ｃ−ｋｉｔ阻害剤は、肥満細胞を枯渇することができる化合物をこのような処置を必要とするヒトに投与することを含む、薬物濫用障害、特に薬物耽溺、薬物濫用、薬物嗜癖、薬物依存、退薬症候群および過剰摂取を処置するために使用され得る。
【００７５】
ｃ−ＫｉｔはＰＤＧＦ受容体およびＣＳＦ−１受容体（ｃ−Ｆｍｓ）とかなりの相同性を有する。種々の赤血球性および骨髄性細胞系の研究は、分化の早期段階でのｃ−Ｋｉｔ遺伝子の発現を示す（Andre et al., Oncogene 1989 4:1047-1049）。特定の腫瘍、例えば、膠芽細胞腫細胞は同様にｃ−Ｋｉｔ遺伝子の顕著な発現を示す。
【００７６】
ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）
ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）は、一般的に存在する増殖因子であり、正常増殖および、発癌および血管の平滑筋細胞の疾患、例えばアテローム性動脈硬化症および血栓症で見られるような、病的細胞増殖の両方において重要な役割を果たす。本発明の化合物は、ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）活性を阻害し得、したがって、神経膠腫、肉腫、前立腺腫瘍、および結腸、乳房および卵巣の腫瘍のような腫瘍疾患の処置に適当であり得る。
【００７７】
本発明の化合物は、例えば小細胞肺癌における腫瘍阻害物質としてだけでなく、またアテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症および線維症のような非悪性増殖性障害の処置剤としても使用し得る。本発明の化合物は、また、例えば、５−フルオロウラシルのような化学療法剤の血液毒性作用と戦うための幹細胞の保護に有用であり；そして、また、喘息および過好酸球増加症の処置のために有用であり得る。本発明の化合物は、とりわけＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻害に応答する疾患の処置に有用であり得る。
【００７８】
本発明の化合物は、移植、例えば、同種移植に起因する障害、とりわけ閉塞性細気管支炎（ＯＢ）、すなわち同種肺移植の慢性拒絶のような、組織拒絶反応の処置に有効であることを示し得る。ＯＢのない患者と比較して、ＯＢを有する者は、しばしば気管支肺胞洗浄液中のＰＤＧＦ濃度の上昇を示す。
【００７９】
本発明の化合物は、また、線維症ならびに再狭窄およびアテローム性動脈硬化症のような、血管平滑筋細胞移動および増殖（ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦＲがしばしば役割を果たす場所である）が関連する疾患に対して有用であり得る。血管平滑筋細胞の増殖または移動に対するインビトロおよびインビボでのこれらの効果およびそれらの結果は、本発明の化合物の投与により、またインビボでの血管内膜の機械的損傷後の肥厚に対する影響の試験により証明し得る。
【００８０】
ＣＳＦ１Ｒ（ＦＭＳ）
この遺伝子によりコードされるタンパク質は、マクロファージの生産、分化および機能を制御するサイトカインである、コロニー刺激因子１に対する受容体である。ＣＳＦＲ１は、このサイトカインの生物学的効果の全部ではないにしてもほとんどを介在する。コードされたタンパク質は、チロシンキナーゼ膜貫通受容体およびチロシン−タンパク質キナーゼのＣＳＦ１／ＰＤＧＦ受容体ファミリーメンバーである。この遺伝子の変異は骨髄性悪性腫瘍の素因と関連している（例えば、Casas et al., Leuk. Lymphoma 2003, 44:1935-41参照）。
【００８１】
Ａｂｌ、Ｔｒｋ、Ｓｙｋ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＡＰＫ、ＴＧＦβ、ＦＧＦＲ３、ｃ−Ｓｒｃ、ＳＡＰＫ、Ｌｃｋ、Ｆｅｓ、Ｃｓｋ
アベルソンチロシンキナーゼ（すなわちＡｂｌ、ｃ−Ａｂｌ）は、細胞サイクルの制御、遺伝毒性ストレスに対する細胞応答、およびインテグリンシグナル伝達を介した細胞環境についての情報伝達に関与する。Ａｂｌタンパク質は、種々の細胞外および細胞内供給源からのシグナルを統合し、細胞サイクルおよびアポトーシスに関する決定に影響を与える、細胞性モジュールとして複雑な役割を果たしているように見える。アベルソンチロシンキナーゼは、脱制御されたチロシンキナーゼ活性を伴うキメラ融合体（オンコプロテイン）ＢＣＲ−Ａｂｌまたはｖ−Ａｂｌのようなサブタイプ誘導体を含む。
【００８２】
融合タンパク質であるＢＣＲ−Ａｂｌは、ＡｂｌプロトオンコジーンとＢｃｒ遺伝子を融合する相互転座の結果である。そうすると、ＢＣＲ−Ａｂｌはマイトジェン活性の増加を介してＢ−細胞を形質転換することができる。この増加は、アポトーシスへの感受性を減少させ、ＣＭＬ前駆細胞の接着およびホーミングを変化させる。
【００８３】
ＢＣＲ−Ａｂｌは、９５％の慢性骨髄性（myelogenous）白血病（ＣＭＬ）および１０％の急性リンパ性白血病の病因において重要である。ＳＴＩ５７１（GLEEVEC（登録商標））は発癌性ＢＣＲ−Ａｂｌチロシンキナーゼの阻害剤であり、慢性骨髄性(myeloid)白血病（ＣＭＬ）の処置に使用されている。しかしながら、ＣＭＬの急性転化期にある患者の幾分かは、ＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼの変異により、ＳＴＩ−５７１に耐性である。２２を超える変異が今日までに報告されており、例えば、Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７ＬおよびＭ３５１Ｔである。
【００８４】
本発明の化合物は、ａｂｌキナーゼ、例えば、ｖ−ａｂｌキナーゼを阻害し得る。本発明の化合物はまた野生型ＢＣＲ−ＡｂｌキナーゼおよびＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼの変異を阻害し得、故に、白血病（とりわけアポトーシス作用の機構が見られるとき、とりわけ慢性骨髄性（myeloid）白血病および急性リンパ芽球性白血病）のようなＢｃｒ−ａｂｌ−陽性癌および腫瘍疾患の処置に適当であり得る。本発明の化合物は、また、白血病性幹細胞に対する効果を示し、これらの細胞を、該細胞を摘出した後（例えば、骨髄摘出）インビトロで精製し、これらの細胞を、それらが癌細胞から浄化された後に再移植する(例えば、精製骨髄細胞の再移植)ために有用であり得る可能性がある。
【００８５】
ニューロトロフィン受容体のＴｒｋファミリー（ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ）は、腫瘍細胞増殖および生存ならびに分化、遊走および転移を制御することができる。Ｔｒｋ受容体下流のシグナル伝達経路は、Ｓｈｃ、活性化Ｒａｓ、ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２遺伝子を介するＭＡＰＫ活性化のカスケードならびにＰＬＣ−γ形質導入経路を含む（Sugimoto et al., Jpn J Cancer Res. 2001, 92: 152-60）。Ｔｒｋチロシンキナーゼが、例えば、乳房および前立腺癌を含む種々の癌の発症に関わっていることが証明されている（Guate et al., Expression of p75LNGFR and Trk Neurotrophin Receptors in Normal and Neoplastic Human Prostate, BJU Int. 1999, 84:495 502; Tagliabue et al., J. Biol Chem. 2000, 275:5388 5394）。さらに、Ｔｒｋキナーゼシグナル伝達の媒介は有益な生物学的効果を提供する証拠がある（LeSauteur et al., Adv. Behav. Biol. 1998, 49:615 625; Zhu et al., (1999) J. Clin. Oncology, 1999, 17:2419 28; Friess et al., Annals of Surgery 1999, 230:615-24）。
【００８６】
Ｓｙｋは、肥満細胞の脱顆粒および好酸球の活性化において重要な役割を果たすチロシンキナーゼである。したがって、Ｓｙｋキナーゼは種々のアレルギー性疾患、特に喘息に関与する。ＳｙｋがＮ−末端ＳＨ２ドメインを介してＦｃεＲ１受容体のリン酸化されたガンマ鎖に結合し、下流シグナル伝達に重要であることが示されている。
【００８７】
Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達経路は増殖シグナルに対する細胞応答を仲介する。Ｒａｓはヒト癌の〜１５％で癌形に変異する。Ｒａｆファミリーはセリン／スレオニンタンパク質キナーゼに属し、それは３個のメンバー、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ（またはＲａｆ−１）を含む。Ｂ−Ｒａｆは活性化Ｒａｓ対立遺伝子の関与が必要でないある腫瘍の形成において重要な役割を有し得る（Nature 2002, 417:949-954）。Ｂ−Ｒａｆ変異は悪性黒色腫の多くにおいて検出されている。
【００８８】
黒色腫に対する既存の医薬的処置はとりわけ後期黒色腫に対してそれらの有効性が制限される。本発明の化合物は、また、ｂ−Ｒａｆキナーゼと関連する細胞過程を阻害し、ヒト癌、とりわけ黒色腫の処置のための新規治療機会を提供する。
【００８９】
マイトージェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は転写因子、翻訳因子および種々の細胞外シグナルに応答する他の標的分子を活性化する保存されたシグナル伝達経路のメンバーである。ＭＡＰＫはマイトージェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＫＫ）による配列Ｔｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒを有する二重リン酸化モチーフでのリン酸化により活性化される。高等真核生物において、ＭＡＰＫシグナル伝達の生理学的役割は細胞的事象、例えば、増殖、腫瘍形成、発生および分化と相関している。したがって、これらの経路を介して（特にＭＫＫ４およびＭＫＫ６を介して）シグナル伝達を調節する能力は、ＭＡＰＫシグナル伝達と関連するヒトの疾患、例えば、炎症性疾患、自己免疫性疾患および癌に対する処置および予防治療の発達をもたらすことができた。
【００９０】
それぞれ異なる遺伝子によりコードされているｐ３８ＭＡＰＫの多数の型（α、β、γ、δ）は、浸透ストレス、ＵＶ光およびサイトカイン介在事象を含む種々の刺激に対する細胞の応答に関与するキナーゼカスケードの部分を形成する。これらのｐ３８の４つのイソ型は細胞内シグナル伝達の異なる局面を調節すると考えられる。その活性化は、炎症性サイトカイン様ＴＮＦαの合成および生産を引き起こすシグナル伝達事象のカスケードの部分である。Ｐ３８は他のキナーゼおよび転写因子を含む下流の基質をリン酸化することにより機能する。ｐ３８キナーゼを阻害する薬剤は、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１βを含み、これに限定されないサイトカインの生産を妨害することを示した。
【００９１】
末梢血単球（ＰＢＭＣ）は、インビトロでリポ多糖類（ＬＰＳ）で刺激されたとき、炎症性サイトカインを発現および分泌することが示されている。Ｐ３８阻害剤は、ＬＰＳでの刺激前にＰＢＭＣをこのような化合物であらかじめ処理したとき、効果的にこの作用を妨害する。Ｐ３８阻害剤は炎症性疾患の動物モデルにおいて有効である。多数の疾患状態の破壊的作用は、炎症性サイトカインの過剰生産により引き起こされる。この過剰生産を調節するｐ３８阻害剤の能力により、これらは疾患を調節する薬剤として有用である。
【００９２】
ｐ３８機能を妨害する分子は、骨吸収、炎症ならびに他の免疫および炎症に基づく病状の阻止に有効であることが示されている。したがって、安全で有効なｐ３８阻害剤は、ｐ３８シグナル伝達の調節により制御できる衰弱性疾患を処置するための手段を提供する。したがって、ｐ３８活性を阻害する本発明の化合物は、炎症、骨関節症、リウマチ性関節炎、癌、自己免疫性疾患の処置および他のサイトカイン介在疾患の処置に有用である。
【００９３】
形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦβ）は、例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３を含むタンパク質のスーパーファミリーを意味し、それは細胞増殖および分化、胚および骨発生、細胞外マトリックス形成、造血、免疫性および炎症性応答の多面的モジュレーターである。ＴＧＦβファミリーメンバーは、最終的に、細胞サイクルを調節するか、増殖性応答を制御するか、または細胞外シグナル伝達、細胞接着、移動および細胞間伝達を介在する細胞外マトリックスタンパク質に関する、遺伝子発現を引き起こす細胞内シグナル伝達経路を開始する。
【００９４】
結果として、ＴＧＦβ細胞内シグナル伝達経路の阻害剤である本発明の化合物は、制御されていないＴＧＦβ活性と関連する腎臓障害を含む線維増殖性疾患、および糸球体腎炎（ＧＮ）、例えば、メサンギウム増殖性ＧＮ、免疫性ＧＮおよび半月体形成性ＧＮを含む過剰な線維化の治療のために有効である。他の腎臓状態は、糖尿病性腎症、腎間質線維症、シクロスポリンを使用している移植患者の腎臓線維症およびＨＩＶ関連ネフロパシーを含む。膠原血管病は、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、強皮症、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、局性強皮症、またはレイノー症候群の発症と関連するものを含む。過剰ＴＧＦβ活性による肺線維症は、成人呼吸窮迫症候群、ＣＯＰＤ、自己免疫性疾患としばしば関連する特発性肺線維症および間質性肺線維症、例えば、全身性エリテマトーデスおよび強皮症、化学品接触性炎症、またはアレルギーを含む。線維増殖性特性と関連するさらなる自己免疫性疾患はリウマチ性関節炎である。線維増殖性状態は外科的眼処置と関連し得る。このような処置は、増殖性硝子体網膜症による網膜復位術、眼内レンズ挿入術を伴う白内障摘出および緑内障後排水手術を含む。
【００９５】
繊維芽細胞増殖因子受容体３は骨増殖の負の調節効果および軟骨細胞増殖の阻害を発揮することが示された。致死性異形成は、繊維芽細胞増殖因子受容体３の様々な変異体により引き起こされる。１つの変異、ＴＤＩＩ  ＦＧＦＲ３は、転写因子Ｓｔａｔｌを活性化する構成的チロシンキナーゼ活性を有し、細胞周期阻害剤の発現、増殖停止および異常な骨の発達をもたらす(Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292)。ＦＧＦＲ３は、また、しばしば多発性骨髄腫型癌において発現される。
【００９６】
ｃ−Ｓｒｃキナーゼは多数の受容体の発癌シグナルを伝達する。例えば、腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は、悪性細胞の特徴であるが正常細胞には存在しないｃ−ｓｒｃの構成的活性化をもたらす。他方、ｃ−ｓｒｃ発現を欠損するマウスは大理石骨病表現型を発現し、破骨細胞機能におけるｃ−ｓｒｃの重要な関与および関連疾患へ関与している可能性を示す。
【００９７】
ヒトリボソームＳ６タンパク質キナーゼのファミリーは少なくとも８個のメンバー（ＲＳＫ１、ＲＳＫ２、ＲＳＫ３、ＲＳＫ４、ＭＳＫ１、ＭＳＫ２、ｐ７０Ｓ６Ｋおよびｐ７０Ｓ６Ｋｂ）からなる。リボソームタンパク質Ｓ６タンパク質キナーゼは重要な多面的な機能を果たし、とりわけ、タンパク質生合成中のｍＲＮＡ翻訳の調節において重要な役割を果たす（Eur. J. Biochem 2000, 267(21): 6321-30; Exp Cell Res. 1999, 253 (1):100-9; Mol Cell Endocrinol. 1999, 151(1-2):65-77）。ｐ７０Ｓ６によるＳ６リボソームタンパク質のリン酸化はまた細胞運動（Immunol. Cell Biol. 2000, 78(4):447-51）および細胞増殖（Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 2000, 65:101-27）の調節と関連しており、故に腫瘍転移、免疫反応および組織修復ならびに他の疾患状態において重要であり得る。
【００９８】
ＳＡＰＫ（“ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ”または“ＪＮＫ”とも呼ばれる）は、ｃ−ｊｕｎ転写因子の活性化およびｃ−ｊｕｎにより調節される遺伝子の発現をもたらすシグナル伝達経路における最後から２番目の段階を表すタンパク質キナーゼのファミリーである。特に、ｃ−ｊｕｎは遺伝毒性障害により損傷を受けたＤＮＡの修復と関連するタンパク質をコードする遺伝子の転写と関連している。細胞におけるＳＡＰＫ活性を阻害する薬剤は、ＤＮＡ修復を防止し、ＤＮＡ損傷を誘導することにより作用する癌治療法に対して細胞を感受性にする。
【００９９】
ＬｃｋはＴ細胞シグナル伝達において役割を果たす。Ｌｃｋ遺伝子を欠くマウスは胸腺細胞の発達に対して乏しい能力を有する。Ｔ細胞シグナル伝達の正の活性剤としてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋ阻害剤が自己免疫疾患、例えば、リウマチ性関節炎を処置するために有用であり得ることを示唆する。
【０１００】
Ｆｅｓは脊髄造血細胞で高度に発現され、骨髄性白血球における分化および生存シグナル伝達経路の両方と関連する。ＣＳＫは、癌、特に結腸直腸および乳癌と関連する。
【０１０１】
前記によって、本発明は、さらに、処置を必要とする対象における、上記のいずれかの疾患または障害を処置する方法であって、該対象に治療的有効量の式（１）、（２）または（３）の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。上記の全ての使用に関して、必要な投与量は投与形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化する（下記“投与および医薬組成物”参照）。
【０１０２】
投与および医薬組成物：
一般に、本発明の化合物は単独でまたは１種以上の治療剤との組合せのいずれかで当分野で既知の通常のおよび許容される形式のいずれかを介して、治療有効量を投与される。治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康度、使用される化合物の有効性および他の要素に依存して広く変化し得る。一般に、満足な結果は体重あたり約０．０３から２．５ｍｇ／ｋｇの１日投与量で全身に得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトにおいて指示される１日投与量は、例えば１日に４回までの分割用量でまたは遅延形で都合良く投与される約０．５ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。経口投与のための適当な単位用量形は約１から５０ｍｇの活性成分を含む。
【０１０３】
本発明の化合物は、医薬組成物として任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤形もしくはカプセル形で、または非経腸的に、例えば注射溶液形もしくは懸濁液形で、局所的に、例えばローション形、ゲル形、軟膏形もしくはクリーム形で、または経鼻形もしくは座薬形で投与してもよい。
【０１０４】
少なくとも１種の薬学的に許容される担体もしくは希釈剤と共に遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物を含む医薬組成物を、混合、造粒または被覆方法による慣用の方法で製造できる。例えば、経口組成物は、活性成分とａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤のために共にｃ）結合剤、例えば、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；そして所望によりｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩または起沸性混合物；および／またはｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤を共に含む錠剤またはゼラチンカプセルであり得る。注射組成物は、等張水溶液または懸濁液であり得、そして座薬は脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造し得る。
【０１０５】
該組成物は滅菌し得そして／またはアジュバント、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／またはバッファーを含み得る。加えて、それらはまた、治療に有効な他の物質を含み得る。適当な経皮投与用製剤は有効量の本発明の化合物を担体と含む。担体は宿主の皮膚を介する輸送を助けるために、薬理学的に許容される吸収性溶媒を含み得る。例えば、経皮デバイスは裏当て部分、化合物と所望により担体を含む貯蔵部、所望により長時間にわたって制御されたおよび予定された速度で宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御バリア、および皮膚にデバイスを固定するための手段を含む、バンデージ形である。マトリックス経皮製剤もまた使用され得る。例えば、皮膚および眼への、適当な局所投与用製剤は、当分野で既知の水溶液、軟膏、クリームまたはゲルであり得る。このような製剤は、可溶化剤、安定化剤、等張増加剤、バッファーおよび保存剤を含み得る。
【０１０６】
本発明の化合物は、治療有効量の１種以上の治療剤との組合せ（薬学的組合せ）で投与され得る。例えばシクロスポリン、ラパマイシン、もしくはアスコマイシン、またはそれらの免疫抑制剤類似体、例えばシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、もしくは同等な化合物、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ブレキナール、レフルノミド、ミゾルビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスパガリン、免疫抑制性抗体、とりわけ白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８もしくはそれらのリガンド、または他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４１ｇと共に使用されるとき、例えば、相乗効果が、他の免疫調節剤もしくは抗炎症剤と生じ得る。本発明の化合物が他の治療と共に投与されるとき、共投与される化合物の用量は、使用される共薬剤の型、使用される特定の薬剤、処置される状態などに依存して変化する。
【０１０７】
本発明はまた、ａ）遊離形または薬学的に許容される塩形の本明細書に記載のとおりの本発明の化合物である第１の薬剤、およびｂ）少なくとも１つの共薬剤を含む薬学的組合せ、例えばキットを提供する。該キットはその投与のための指示書を含み得る。
【０１０８】
本発明の化合物の製造方法
本発明の化合物を製造するための一般製造法（Ａ−Ｎ）を、下記実施例に記載する。記載されている反応において、最終産物において望まれる反応性官能基、例えば、ヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基をこれらの望ましくない反応への参加を避けるために保護し得る。慣用の保護基は、標準的技法にしたがって使用し得る。例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991参照。
【０１０９】
本発明の化合物を、遊離塩基形の化合物を薬学的に許容される無機酸または有機酸と反応させることにより薬学的に許容される酸付加塩として製造し得る。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を、遊離塩基形の化合物を薬学的に許容される無機塩基または有機塩基と反応させることにより製造し得る。あるいは、塩形の本発明の化合物を出発物質または中間体の塩を使用して製造し得る。
【０１１０】
遊離酸形または遊離塩基形の本発明の化合物を、対応する塩基付加塩形または酸付加塩形、各々から製造し得る。例えば酸付加塩形の本発明の化合物は、適当な塩基（例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど）と処理することにより対応する遊離塩基に変換し得る。塩基付加塩形の本発明の化合物は、適当な酸（例えば、塩酸など）と処理することにより対応する遊離酸に変換し得る。
【０１１１】
非酸化形の本発明の化合物を、適当な不活性有機溶媒（例えば、アセトニトリル、エタノール、ジオキサン溶液など）中で、０から８０℃で還元剤（例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化物など）と処理することにより本発明の化合物のＮ−オキシドから製造し得る。
【０１１２】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を当業者に既知の方法で製造し得る（例えばさらなる詳細のためにSaulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照のこと）。例えば、適当なプロドラッグを本発明の非誘導化化合物を適当なカルバミル化剤（例えば、１，１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど）と反応させることにより製造し得る。
【０１１３】
本発明の化合物の保護された誘導体を当業者に既知の方法で製造し得る。保護基の創造およびその除去に適用できる技術の詳細な説明はT. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999において見ることができる。
【０１１４】
本発明の化合物を、本発明の工程中に溶媒和物（例えば、水和物）として都合良く製造または形成し得る。本発明の化合物の水和物を、有機溶媒、例えばジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールを使用し、水性／有機溶媒混合物から再結晶することにより都合良く製造し得る。
【０１１５】
本発明の化合物を、化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分割剤と反応させ、一組のジアステレオマー化合物を形成し、該ジアステレオマーを分離し、そして光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、それらの個々の立体異性体として製造し得る。エナンチオマーの分離は本発明の化合物の共有結合ジアステレオマー誘導体を使用して、または、分離できる複合体を使用することにより（例えば、結晶のジアステレオマー塩）行い得る。ジアステレオマーは異なる物理的性質（例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など）を有し、そしてこれらの相違を利用して容易に分離し得る。ジアステレオマーをクロマトグラフィー、または溶解度の差異に基づく分割／分離技術により分割し得る。次いで光学的に純粋なエナンチオマーを、ラセミ化をもたらさないであろう実用的手段により分割剤と共に回収する。ラセミ混合物から化合物の立体異性体の分離に適用できる技術のより詳細な説明はJean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981において見ることができる。
【０１１６】
手短に言えば、式（１）、（２）または（３）の化合物を下記の工程を含む方法により製造し得る：
（ａ）実施例に記載されている一般製造工程；ならびに
（ｂ）所望により本発明の化合物の薬学的に許容される塩への変換；
（ｃ）所望により塩形の本発明の化合物の非塩形への変換；
（ｄ）所望により非酸化形の本発明の化合物の薬学的に許容されるＮ−オキシドへの変換；
（ｅ）所望によりＮ−オキシド形の本発明の化合物の非酸化形への変換；
（ｆ）所望により異性体の混合物からの本発明の化合物の個々の異性体への分離；
（ｇ）所望により本発明の非誘導化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体への変換；および
（ｈ）所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体のその非誘導化形態への変換。
【０１１７】
下記実施例は説明するために提供するが、本発明を限定しない。出発物質の製造において特に記載のない限り、化合物は既知であるか、または当分野で既知の方法に準じてもしくは下記の実施例に記載のとおりに製造し得る。当業者は、下記実施例が本発明の化合物の製造法の単なる代表例であり、そして他の既知の方法を同様に使用し得ることを理解できよう。
【実施例】
【０１１８】
実施例１
中間体の合成
３−（５−アミノ−２−メチルフェニル）−７−クロロ−１−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（８）
【化７】
2010506948.tif 000008
２Ｌフラスコにジエチル１，３−アセトンジカルボキシラート１（１６０ｇ、０．７９ｍｏｌ）、オルトギ酸トリエチル（１２９ｇ、０．８７ｍｏｌ）および無水酢酸（１６１ｇ、１．５８ｍｏｌ）を入れる。得られた混合物を１２０℃に１．５時間加熱する。混合物を室温に冷却し、揮発性物質を９０−１００℃で減圧蒸留（１５０−２００ｍｍＨｇ）により除去する。明黄色の油状物を凝縮器に回収する。次にフラスコ内の残留物を氷浴で冷却し、３０％アンモニア（６５ｍＬ）と混合する。反応物を氷浴中に１時間置き、次にｐＨ＜５に２ＮのＨＣｌで酸性化する。混合物を真空濃縮し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）を使用して精製する。生成物２を無色油状物として単離する。
【０１１９】
４，６−ジヒドロキシニコチン酸エチルエステル２（５ｇ、０．３ｍｏｌ）を２Ｌフラスコ中でＰＯＣｌ３（５００ｍＬ）と混合し、１１０℃に３時間加熱する。室温に冷却後、大部分のＰＯＣｌ３を真空除去する。粗製の暗い色の生成物を少量の氷−水混合物に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和する。生成物を酢酸エチルで２回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液を使用して洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：３）を使用して精製し、４，６−ジクロロニコチン酸エチルエステル３である生成物を白色の固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.85 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 4.43 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。
【０１２０】
４，６−ジクロロニコチン酸エチルエステル３（４３ｇ、１９５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（６００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、メチルアミン（１２５ｍＬの４０％水溶液、９７７ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。反応物を０℃で３０分撹拌し、さらに３時間で室温に温める。溶媒を真空除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）を使用して精製する。生成物４を白色の固体として単離する。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 1H), 8.12 (bs, 1H), 6.53 (s, 1H), 4.34 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。
【０１２１】
６−クロロ−４−メチルアミノニコチン酸エチルエステル４（３３ｇ、１５６ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５００ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却する。溶液にＴＨＦ（５００ｍＬ）中のＬＡＨ（１２．５ｇ、３２９ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり加える。添加完了後、反応物を−７８℃で１時間維持する。混合物を室温に温め、少量のＭｅＯＨ：酢酸エチル＝１：１をゆっくり加え、過剰のＬＡＨを破壊する。粗生成物をセライト栓を介して濾過し、酢酸エチルを使用して２回洗浄する。溶媒を真空除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）により精製する。生成物５を白色の固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 7.36 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.55 (bs, 1H), 4.63 (s, 2H), 2.89 (d, J = 5.1 Hz, 3H)。
【０１２２】
化合物５（２０ｇ、１１６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２５０ｍＬ）に溶解し、ＭｎＯ２（１００ｇ、１．１６ｍｏｌ）を加える。反応物を室温で一晩撹拌し、次にセライト栓を介して濾過し、酢酸エチルを使用して洗浄する。溶媒を真空除去後、６を得、さらなる精製なしで次の工程に使用する。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 9.85 (s, 1H), 8.59 (bs, 1H), 8.31 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 2.96 (d, J = 5.1 Hz, 3H)。
【０１２３】
６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド６（１９．８ｇ、１１６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１Ｌ）中の２−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）酢酸メチルエステル７（２７ｇ、１５１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４８．１ｇ、３４８ｍｍｏｌ）と混合する。混合物を１００℃に１６時間加熱する。室温に冷却し、溶媒を真空除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）を使用して精製する。表題化合物８を青白い固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.56 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 2.4, 8.1 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.71 (s, 2H), 2.10 (s, 3H)。
【０１２４】
メチル２−（５−アミノ−２−メチルフェニル）アセテート（７）
【化８】
2010506948.tif 000009
２−メチル−５−ニトロ安息香酸９（１２５ｇ、６９０ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１．２５Ｌ）に溶解する。ボラン（５１７ｍＬのＴＨＦ中の２Ｍの溶液、１．０４ｍｏｌ）を加えた後、反応物を室温で１８時間撹拌する。反応を炭酸カリウム水溶液（２．５Ｌで１１２．５ｇ）を使用してクエンチする。ＴＨＦを真空除去後、水溶液をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。濾過し、溶媒を真空除去後、生成物１０を薄い黄色の固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 3 Hz, 1H), 8.50 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 4.78 (s, 2H), 2.41 (s, 3H)。
【０１２５】
（２−メチル−５−ニトロフェニル）メタノール１０（９６ｇ、５７４ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（２．５Ｌ）に溶解し、０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（７２ｇ、６３２ｍｍｏｌ）およびジ−イソプロピルエチルアミン（８９ｇ、６８９ｍｍｏｌ）で３０分処理する。反応物を室温に温め、さらに３０分撹拌する。それを水（６００ｍＬ）を加えることによりクエンチする。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。溶媒を真空除去後、生成物１１を黄色の油状物として単離し、さらなる精製なしで次の工程に使用する。
【０１２６】
アセトニトリル（４Ｌ）中の粗物質１１（１４１ｇ、０．５７５ｍｏｌ）の溶液にシアン化ナトリウム（８４．４ｇ、１．７ｍｏｌ）を加え、得られた混合物を還流温度で８時間加熱する。反応物を室温に冷却し、溶媒を真空除去する。粗生成物をＤＣＭに溶解し、濾過する。濾液を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶媒を真空除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：１）を使用して精製する。生成物１２を黄色の固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 2.4, 8.1 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.78 (s, 2H), 2.48 (s, 3H)。
【０１２７】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）エタンニトリル１２（８７ｇ、４９４ｍｍｏｌ）をメタノール：水＝１：１（１．２Ｌ）に溶解する。水（１Ｌ）中の水酸化カリウム（２７７ｇ、４．９４ｍｏｌ）を加え、反応物を還流温度で１４時間加熱する。室温に冷却し、メタノールを真空除去後、水性層をＤＣＭおよびエーテルで洗浄する。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。溶媒を真空除去後、生成物１３を橙色の固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.07 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.78 (s, 2H), 2.43 (s, 3H)。
【０１２８】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）酢酸１３（３０ｇ、１５４ｍｍｏｌ）をメタノール（７００ｍＬ）に溶解し、ＨＣｌ（７９ｍＬの１，４−ジオキサン中で４Ｍの溶液、３１６ｍｍｏｌ）を加える。反応物を還流温度に１４時間加熱する。室温に冷却し、溶媒を真空除去後、粗生成物を水（５００ｍＬ）に溶解し、２Ｎの水酸化ナトリウムを使用してｐＨ＞１２に塩基性にする。溶液を酢酸エチルを使用して抽出し、合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。溶媒を真空除去後、生成物１４を暗黄色の固体として得る。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 8.06 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.72 (s, 2H), 2.41 (s, 3H)。
【０１２９】
２−（２−メチル−５−ニトロフェニル）酢酸メチルエステル１４（３２ｇ、１５３ｍｍｏｌ）をエタノール（７５０ｍＬ）に溶解する。この溶液に１０％パラジウム炭素（３．２ｇ）を加える。反応フラスコを酸素でパージ後、水素で満たされたバルーンを装着させる。反応物を室温で１６時間撹拌する。セライト栓を介して濾過し、溶媒を真空除去することにより触媒を除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝５：１）を使用して精製する。生成物７を黄色の油状物として単離する。1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 6.9 (d, J = 7.8 Hz), 6.59 (m, 1H), 6.56 (m, 1H), 3.69 (s, 3H)。
【０１３０】
３−（５−アミノ−２−メチルフェニル）−１，７−ジメチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（１５）
【化９】
2010506948.tif 000010
ジオキサン（３ｍＬ）中の３−（５−アミノ−２−メチルフェニル）−７−クロロ−１−メチル−１，６−ナフチリジン−２−オン８（０．５３ｍｍｏｌ）の溶液にトリフェニルホスフィン（０．０８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１６ｕｍｏｌ）およびトリメチルアルミニウム（０．８ｍＬのトルエン中で２．０モル溶液）を加える。混合物を１０分脱気し、次に反応バイアルを密閉し、１０分１５０℃でマイクロ波を介して加熱する。反応物を室温に冷却し、１ＭのＨＣｌ（３０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで洗浄する。水性層を３ＭのＮａＯＨで中和し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、還元し、乾燥させる。粗い黄色の油状物を溶離剤として３−５％のＭｅＯＨを有するジクロロメタンでシリカフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、黄色のガラス状固体１５を得る。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 2.11 (s, 3H)。MS (m/z) (M+1)+: 280.1。
【０１３１】
３−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−メチル−１−フェニル−１Ｈ−［１，６］ナフチリジン−２−オン（２０）
【化１０】
2010506948.tif 000011
４，６−ジクロロニコチン酸エチルエステル１６（５００ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）を無水ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、アニリン（０．６６ｍＬ、７．７２ｍｍｏｌ）を加える。反応物を１００℃で一晩撹拌する。溶媒を真空除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）を使用して精製し、６−クロロ−４−フェニルアミノ−ニコチン酸エチルエステル１７を得る。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.77 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 7.33-7.37 (m, 2H), 7.15-7.21 (m, 3H), 6.80 (s, 1H), 4.31 (q, 2H), 1.34 (t, 3H)。
【０１３２】
６−クロロ−４−フェニルアミノニコチン酸エチルエステル１７（３５ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）を１．２ｍＬの無水ＴＨＦに溶解し、−７８℃に冷却する。溶液にＬＡＨ（ＴＨＦ中で１Ｍ、０．１４ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり加える。添加完了後、反応物を−７８℃でさらに１時間維持する。混合物を室温に２時間で温め、少量のＭｅＯＨ：酢酸エチル＝１：１をゆっくり加え、過剰のＬＡＨを破壊する。粗生成物をセライト栓を介して濾過し、酢酸エチルで洗浄する。溶媒を真空除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）を使用して精製する。対応するアルコールを黄色の固体として得る。アルコール（２６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＭｎＯ２（５６ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を加える。反応物を室温で一晩撹拌し、次にセライト栓を介して濾過し、酢酸エチルで洗浄する。溶媒を真空除去後、６−クロロ−４−フェニルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド１８を得、さらなる精製なしで次の工程に使用する。
【０１３３】
６−クロロ−４−フェニルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド１８（２１ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）中の２−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）酢酸メチルエステル７（１８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）と混合する。混合物を１００℃に１６時間加熱する。室温に冷却し、溶媒を真空除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）を使用して精製する。表題化合物である３−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−クロロ−１−フェニル−１Ｈ−［１，６］ナフチリジン−２−オン１９を青白い固体として得る。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.53 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.53-7.57 (m, 2H), 7.47 -7.51 (dt 1H), 7.20-7.23 (m, 2H), 6.96 (d, 1H), 6.59 (dd, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 2.05 (s, 3H)。
【０１３４】
バイアルを１９（２０８ｍｇ、０．５７５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２６ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）およびＰｈ３Ｐ（３７ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）で満たす。バイアルを脱気し、Ｎ２で再び満たす。ジオキサン（１２ｍＬ）をバイアルに加え、溶液をＡｌＭｅ３（０．８６ｍＬのヘキサン中の２Ｍの溶液、１．７２ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を電子レンジで１４０℃で２０分加熱する。バイアルを室温に冷却し、混合物を酢酸エチルで抽出する。有機相を１ＮのＮａＯＨ溶液、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄する。溶媒を真空除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）を使用して精製し、３−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−メチル−１−フェニル−１Ｈ−［１，６］ナフチリジン−２−オン２０を得る。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.58-7.63 (m, 2H), 7.52-7.56 (m, 1H), 7.28-7.30 (m, 2H), 7.03 (d, 1H), 6.67 (d, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.32 (s, 1H), 3.60 (brs, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.18 (s, 3H)。
【０１３５】
３−ブロモ−５−（トリフルオロメチル）−Ｎ−（３−（１，２−ジヒドロ−１，７−ジメチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミド（２２）
【化１１】
2010506948.tif 000012
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の３−ブロモ−５−トリフルオロメチル−安息香酸２１（１９３ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）の溶液にＨＡＴＵ（２７２ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）およびジ−イソプロピルエチルアミン（２７８ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を室温で加える。得られた混合物を２分撹拌する。ＤＭＦ（５ｍＬ）中の３−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−１，７−ジメチル−１Ｈ−［１，６］ナフチリジン−２−オン１５（２００ｍｇ、０．７１６ｍｍｏｌ）の溶液を加える。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で３回洗浄する。有機層を（ＭｇＳＯ４）で乾燥させ、濃縮する。残渣を自動クロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物２２を白色がかった固体として得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.50 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.66 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 8.3, 2.2 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 1H),  3.63 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.08 (s, 3H)。
【０１３６】
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチル安息香酸（２９）
【化１２】
2010506948.tif 000013
メチル３−ブロモ−４−メチルベンゾアート２３（２．２８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、ボロン酸エステル（１０ｍｍｏｌ）、ＣｓＦ（３．０４ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１．１６ｇ、１ｍｍｏｌ）を撹拌棒を備えた１０ｍＬのＳｃｈｌｅｎｋフラスコに加える。フラスコを脱気し、窒素で再充填する操作を５回行う。ＴＨＦ（８ｍＬ）をシリンジにより加える。Ｓｃｈｌｅｎｋフラスコを密閉し、１４０℃で２０分マイクロ波で加熱する。反応完了後、溶媒を真空除去する。残渣をＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶解し、水で洗浄する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、粗生成物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：７）により精製し、２つの異性体の混合物を得、これはさらなる精製なしで次の工程に使用できる。
【０１３７】
メチル３−アリル−４−メチルベンゾアート２４（１．１８ｇ、６．１８ｍｍｏｌ）を含む混合物をＣＣｌ４：ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ：６０ｍＬ：８０ｍＬ）に溶解させる。次にＮａＩＯ４（６．６ｇ）およびＲｕＣｌ３Ｈ２Ｏ（０．２１ｇ）を加える。反応混合物を室温で１０分撹拌する。混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、粗生成物を得る。粗生成物２５をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、ＴＭＳＣＨＮ２（１８．０ｍＬ、ヘキサン中で２Ｍ）を溶液にゆっくり加える。反応混合物を室温でさらに１０分撹拌する。反応完了後、溶媒を除去し、粗生成物２６を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製する。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 (s, 1H), 7.84 (d, J = 10 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 10 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.68 (m, 5H), 2.34 (s, 3H)。LC/MS (M+Na, m/z): 245。
【０１３８】
６−クロロ−４−メチルアミノ−ピリジン−３−カルバルデヒド６（２３３ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８ｍＬ）中のメチル３−（（メトキシカルボニル）メチル）−４−メチルベンゾアート２６（３０３ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５６４ｍｇ、４．０８ｍｍｏｌ）と混合する。混合物を１００℃に１６時間加熱する。室温に冷却し、溶媒を真空除去後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）を使用して精製する。化合物２７を固体として得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.43 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 2.21 (s, 3H)。LC/MS (M+Na, m/z): 365, 367。
【０１３９】
メチル３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルベンゾアート２７（３ｇ、８．６ｍｍｏｌ）、ＡｌＭｅ３（１３．２ｍＬ、２６．４ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（３１８ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（２４０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を撹拌棒を備えた５０ｍＬのＳｃｈｌｅｎｋフラスコに加える。フラスコを脱気し、窒素で再充填する操作を５回行う。１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）をシリンジにより加える。Ｓｃｈｌｅｎｋフラスコを密閉し、１００℃に１６時間加熱する。反応完了後、１ＮのＨＣｌをゆっくり加え（１００ｍＬ）、反応をクエンチする。混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で抽出する。有機相をさらに１ＮのＨＣｌ（２×５０ｍＬ）で洗浄する。合わせた水性相をｐＨ＝１０まで６ＮのＬｉＯＨで処理する。黄色の固体を濾過し、真空乾燥させ、生成物２８を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中で５−１０％のＭｅＯＨ）により精製する。LC/MS (M+1, m/z):323.1。
【０１４０】
メチル３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルベンゾアート２８（３ｇ、９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／水（１：１、ｍＬ）の混合物に懸濁し、ＮａＯＨ（２．２ｇ、５５ｍｍｏｌ）で８０℃で２時間処理する。ＭｅＯＨを真空除去する。得られた混合物をｐＨ＝７に酸性化し、固体生成物を濾過し、水で洗浄し、一晩乾燥させ、２９を得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.8 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 7.9, 1.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。LC/MS (M+1, m/z): 309.1。
【０１４１】
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルベンゾイルイソシアネート（３１）
【化１３】
2010506948.tif 000014
ＳＯＣｌ２（２ｍＬ）中の３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチル安息香酸２９（６２０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）の溶液を還流温度で２時間加熱する。過剰のＳＯＣｌ２を真空除去し、得られた固体をＴＨＦに懸濁し、アンモニア水溶液を室温で加える。得られた固体を濾過し、真空乾燥させ、３０を白色の固体として得る。LC/MS (M+1, m/z): 308.1。
【０１４２】
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルベンズアミド３０（３１０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン（２ｍＬ）中の塩化オキサリル（１ｍＬ）で還流温度で２時間処理する。溶媒を蒸発させ、３１を白色の固体として得、これを精製なしで使用する。
【０１４３】
典型的な化合物の製造
実施例２
３−（５−アミノ−２−メチルフェニル）−７−クロロ−１−メチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン（Ａ１）
一般製造法Ａ
【化１４】
2010506948.tif 000015
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の３−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−７−クロロ−１−メチル−１Ｈ−［１，６］ナフチリジン−２−オン８（７４９ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）および３−トリフルオロメチルベンジルクロライド（５２１ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）の溶液にジ−イソプロピルエチルアミン（４５２ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を室温に温め、１６時間撹拌する。溶媒を真空除去する。残渣を酢酸エチル：ヘキサン（０：１００から１００：０）の勾配を有する自動クロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物Ａ１を明黄色の固体として得る。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.65-7.60 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.04 (s, 3H)。
【０１４４】
型Ａの構造の化合物もまた、スキーム４にしたがって合成することができる他のＮ−置換ナフチリジノンを使用して、同じ製造法で製造することができる。表１は適当な薬物を使用して実施例２に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表１
【表１】
2010506948.tif 000016
【０１４５】
実施例３
Ｎ−［３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル］−３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−５−トリフルオロメチル−ベンズアミド（Ｂ１）
一般製造法Ｂ
【化１５】
2010506948.tif 000017
ＤＭＦ（０．８ｍＬ）中の３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−５−トリフルオロメチル−安息香酸ＨＣｌ塩（１５．０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）およびジ−イソプロピルエチルアミン（２１ｕＬ、０．１２１ｍｍｏｌ）の溶液にＨＡＴＵ（１６．５ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）を加える。１０分室温で撹拌後、ＤＭＦ（０．２５ｍＬ）中の３−（５−アミノ−２−メチル−フェニル）−１，７−ジメチル−１Ｈ−［１，６］ナフチリジン−２−オン１５（１１．４ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）の溶液を反応物に加える。反応混合物を室温で１時間撹拌する。反応混合物をＤＭＳＯ（１ｍＬ）で希釈し、ＬＣＭＳにより精製し、表題化合物Ｂ１をＴＦＡ塩として得る。MS m/z 564.5 (M+1)。
【０１４６】
表２は適当な反応剤を使用して実施例３に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表２
【表２】
2010506948.tif 000018
【表３】
2010506948.tif 000019
【０１４７】
【表４】
2010506948.tif 000020
【表５】
2010506948.tif 000021
【０１４８】
【表６】
2010506948.tif 000022
【表７】
2010506948.tif 000023
【０１４９】
【表８】
2010506948.tif 000024
【表９】
2010506948.tif 000025
【０１５０】
【表１０】
2010506948.tif 000026
【表１１】
2010506948.tif 000027
【０１５１】
【表１２】
2010506948.tif 000028
【表１３】
2010506948.tif 000029
【０１５２】
【表１４】
2010506948.tif 000030
【表１５】
2010506948.tif 000031
【０１５３】
【表１６】
2010506948.tif 000032
【表１７】
2010506948.tif 000033
【表１８】
2010506948.tif 000034
【０１５４】
実施例４
Ｎ−［４−メチル−３−（７−メチル−２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−フェニル］−３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−５−トリフルオロメチル−ベンズアミド（Ｃ１）
一般製造法Ｃ
【化１６】
2010506948.tif 000035
ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（０．３ｍＬ）中のアミン２０（１８．７ｍｇ、０．０５４８ｍｍｏｌ）および３−（トリフルオロメチル）−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）安息香酸（２１．４ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）の溶液にジ−イソプロピルエチルアミン（２８μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を真空除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）を使用して精製し、Ｃ１を得る。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.36 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.70-7.73 (m, 3H), 7.58-7.67 (m, 4H), 7.40-7.42 (m,2H), 7.36 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 6.31 (s, 1H), 3.25-3.30 (m, 4H), 2.3-2.50 (m, 4H), 2.40(s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.18 (s,3H)。
【０１５５】
型Ｃの構造の化合物もまた、スキーム４にしたがって合成することができる他のＮ−置換ナフチリジノンを使用して、同じ製造法で製造することができる。表３は適当な反応剤を使用して実施例４に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表３
【表１９】
2010506948.tif 000036
【表２０】
2010506948.tif 000037
【表２１】
2010506948.tif 000038
【０１５６】
実施例５
Ｎ−［３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル］−３−ピペラジン−１−イル−５−トリフルオロメチル−ベンズアミド（Ｄ１）
一般製造法Ｄ
【化１７】
2010506948.tif 000039
密閉チューブを３−ブロモ−Ｎ−［３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル］−５−トリフルオロメチル−ベンズアミド２２（２５ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）、ピペラジン（４．９ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４．３ｍｇ、０．００４７ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６．３ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（５．９ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）およびトルエン（０．３０ｍＬ）で窒素雰囲気下で満たす。密閉チューブを油浴中で８０℃で１６時間加熱する。溶媒を真空除去する。残渣をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、分取ＬＣＭＳにより精製し、生成物Ｄ１を白色の固体として得る。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.67 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.57-7.52 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.20 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.28-3.26 (m, 4H), 3.03-3.02 (m, 4H), 2.60 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。
【０１５７】
表４は適当な反応剤を使用して実施例５に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表４
【表２２】
2010506948.tif 000040
【０１５８】
実施例６
Ｎ−［４−メチル−３−（１−メチル−２−オキソ−７−プロピル−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−フェニル］−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド（Ｅ２）
一般製造法Ｅ
【化１８】
2010506948.tif 000041
ＴＨＦおよび水の混合物（４：１、０．７５ｍＬ）中のＮ−［３−（７−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−フェニル］−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドＡ１（３５．４ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）、ｔｒａｎｓ−プロペニルボロン酸（９．７ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（５．３ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（５５．６ｍｇ、０．５２５ｍｍｏｌ）の懸濁液を窒素で脱気し、９０℃で１６時間加熱する。溶媒を真空除去する。残渣を分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｅ１を白色の固体として得る。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.97 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.76-7.73 (m, 2H), 7.61 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.18-7.12 (m, 1H), 6.73 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
【０１５９】
ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中のＮ−［４−メチル−３−（１−メチル−２−オキソ−７−プロペニル−１，２−ジヒドロ−［１，６］ナフチリジン−３−イル）−フェニル］−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドＥ１（１２ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の溶液に１０％のパラジウム活性炭素（湿性、１２ｍｇ）を加える。得られた混合物を水素下で室温で１時間撹拌する。Ｐｄ／Ｃを濾取し、濾液を濃縮する。残渣を分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｅ２を白色の固体として得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.48 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.84 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.78 (q, J = 7.5 Hz, 3H), 0.96 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
【０１６０】
表５は適当な反応剤を使用して実施例６に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表５
【表２３】
2010506948.tif 000042
【表２４】
2010506948.tif 000043
【０１６１】
【表２５】
2010506948.tif 000044
【表２６】
2010506948.tif 000045
【０１６２】
【表２７】
2010506948.tif 000046
【表２８】
2010506948.tif 000047
【０１６３】
実施例７
１−（３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−（４−メチルベンジル）ウレア（Ｆ２４）
一般製造法Ｆ
【化１９】
2010506948.tif 000048
ＴＨＦ（１ｍＬ）中の３−（５−アミノ−２−メチルフェニル）−１，７−ジメチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン１５（２０ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）の溶液にトリホスゲン（６．３８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．１５８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で３０分撹拌し、次に４−メチルベンジルアミン（０．１０８ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を８時間室温で続ける。濾液を濃縮する。残渣を分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｆ２４を得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.16 (m, 4H), 4.22 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.06 (s, 3H)。
【０１６４】
表６は適当な反応剤を使用して実施例７に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表６
【表２９】
2010506948.tif 000049
【表３０】
2010506948.tif 000050
【０１６５】
【表３１】
2010506948.tif 000051
【表３２】
2010506948.tif 000052
【０１６６】
【表３３】
2010506948.tif 000053
【表３４】
2010506948.tif 000054
【０１６７】
実施例８
Ｎ−（３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニルカルバモイル）−４−メトキシベンズアミド（Ｇ８）
一般製造法Ｇ
【化２０】
2010506948.tif 000055
１，２−ジクロロエタン（２ｍＬ）中の４−メトキシベンズアミド（５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の溶液に塩化オキサリル（０．３３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を５５℃で１時間加熱する。反応混合物を冷却後、３−（５−アミノ−２−メチルフェニル）−１，７−ジメチル−１，６−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン１５（０．１６ｍｍｏｌ）を加え、加熱を８時間続ける。反応物を濃縮し、分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｇ８を得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 8.05 (m, 3H), 7.76 (s, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.72 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (s, 3H)。
【０１６８】
表７は適当な反応剤を使用して実施例８に記載されている製造法にしたがって製造される化合物を記載している。
表７
【表３５】
2010506948.tif 000056
【表３６】
2010506948.tif 000057
【０１６９】
【表３７】
2010506948.tif 000058
【表３８】
2010506948.tif 000059
【表３９】
2010506948.tif 000060
【０１７０】
実施例９
１−アセトフェノニル−３−（３−（１，２−ジヒドロ−１，７−ジメチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）チオウレア（Ｈ１）
一般製造法Ｈ
【化２１】
2010506948.tif 000061
アセトニトリル（３ｍＬ）中の塩化ベンゾイル（６２μＬ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液にＫＳＣＮ（５２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を加え、５５℃で１時間加熱する。室温に冷却後、反応物を乾燥濃縮し、エタノール（２ｍＬ）に再溶解し、次にトルエン／エタノール（５／１ｍＬ）中の１５の溶液で処理する。不均一の反応混合物を室温で６時間撹拌し、次に氷浴で冷却し、エタノールと共に濾過する。沈殿を水およびエタノールで洗浄する。白色の固体を真空乾燥させる。1H NMR 400 MHz (DMSO-d6) δ 12.65 (s, 1H), 11.60 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.00-7.97 (m, 3H), 7.72-7.65 (m, 2H), 7.57-7.52 (m, 3H), 7.47 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8 Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.17 (s, 3H); MS m/z 443.1 (M+1)。
【０１７１】
実施例１０
Ｎ−（３−（１，２−ジヒドロ−７−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミド（Ｉ１）
【化２２】
2010506948.tif 000062
Ｎ−（３−（７−クロロ−１，２−ジヒドロ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミドＡ６（７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をナトリウムメトキシド（０．８ｍＬのメタノール中で０．５Ｍ溶液）で処理し、６５℃に３時間加熱する。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃおよび水性塩化アンモニウムで分配する。有機層を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を除去する。粗生成物をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物を得る。1H NMR 400 MHz (MeOD) δ 8.56 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.64-7.46 (m, 5H), 7.28 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.84 (1H), 4.05 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.20 (s, 3H); MS m/z 400.2 (M+1)。
【０１７２】
表８は上記の製造法と類似の方法にしたがって製造される本発明の他の典型的な化合物を記載している。
表８
【表４０】
2010506948.tif 000063
【０１７３】
実施例１１
Ｎ−（３−（７−（ジメチルアミノ）−１，２−ジヒドロ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミド（Ｊ１）
【化２３】
2010506948.tif 000064
Ｎ−（３−（７−クロロ−１，２−ジヒドロ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミドＡ６（４５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、ジメチルアミン（０．５６ｍＬのメタノール中で２．０Ｍの溶液）で処理する。反応混合物を１００℃に１２時間加熱する。室温に冷却後、反応物を分取ＬＣＭＳにより精製する。1H NMR 400 MHz (DMSO-d6) δ 10.23 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.97-7.94 (m, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.68-7.66 (m, 2H), 7.61-7.51 (m, 3H), 7.23 (d, J = 9 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.20 (s, 6H), 2.12 (s, 3H); MS m/z 413.2 (M+1)。
【０１７４】
実施例１２
１−（３−（７−（ジメチルアミノ）−１，２−ジヒドロ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−フェニルウレア（Ｋ１）
【化２４】
2010506948.tif 000065
１−（３−（７−クロロ−１，２−ジヒドロ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）−３−フェニルウレアＡ６（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、ジメチルアミン（０．６０ｍＬのメタノール中で２．０Ｍの溶液）で処理する。反応混合物を１００℃に１２時間加熱する。室温に冷却後、反応物を分取ＬＣＭＳにより精製する。1H NMR 400 MHz (DMSO-d6) δ 8.65 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.45-7.42 (m, 2H), 7.38 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 3H), 7.15 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.96 (m, 1H), 6.37 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.19 (s, 6H), 2.08 (s, 3H); MS m/z 428.2 (M+1)。
【０１７５】
実施例１３
１−メチル−７−（メチルチオ）−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミド（Ｌ１）
【化２５】
2010506948.tif 000066
Ｎ−（３−（７−クロロ−１，２−ジヒドロ−１−メチル−２−オキソ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルフェニル）ベンズアミドＡ６（７０ｍｇ０．１７ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメタンチオレート（１５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物を１００℃に１２時間加熱する。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃおよび水で分配する。有機層を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を除去する。粗生成物をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、分取ＬＣＭＳにより精製する。1H NMR 400 MHz (MeOD) δ 8.82 (s, 1H), 7.95-7.92 (m, 2H), 7.67-7.50 (m, 5H), 7.41 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.21 (s, 3H); MS m/z 416.1 (M+1)。
【０１７６】
実施例１４
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−Ｎ−（５−メチルピリジン−２−イル）ベンズアミド（Ｍ６）
【化２６】
2010506948.tif 000067
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチル安息香酸２９（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液をＨＡＴＵ（９７ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）、５−メチルピリジン−２−アミン（２２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０８９ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）で８０℃で２時間処理する。残渣を分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｍ６を白色がかった固体として得る。1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 9.12 (s, 1H), 8.26 (m, 1H),  8.22 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H),  8.07 (dd, J = 8, 1.6 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.57 (d, J = 8 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.87 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.35 (s, 3H);  LC/MS (M+1, m/z): 399.2。
【０１７７】
実施例１５
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−Ｎ−（５−フルオロピリジン−２−イル）−４−メチルベンズアミド（Ｍ３２）
【化２７】
2010506948.tif 000068
ＳＯＣｌ２（１ｍＬ）中の３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチル安息香酸２９（１５４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を還流温度で２時間加熱する。過剰のＳＯＣｌ２を真空除去し、得られた固体を５−フルオロピリジン−２−アミン（１１２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．４ｍＬ、５ｍｍｏｌ）の溶液に室温で加える。得られた混合物を３０分撹拌し、蒸発させる。残渣を分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｍ３２を白色がかった固体として得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (s, 1H), 8.28 (m, 1H),  8.04 (s, 1H), 7.95 (dd, J = 8, 2 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.65 (dt, J = 9.1, 2.9 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.48 (d, J = 8 Hz, 1H), 3.8 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.32 (s, 3H);  LC/MS (M+1, m/z): 403.1。
【０１７８】
表９は上記の製造法と類似の方法にしたがって製造される本発明の他の典型的な化合物を記載している。
表９
【表４１】
2010506948.tif 000069
【表４２】
2010506948.tif 000070
【０１７９】
【表４３】
2010506948.tif 000071
【表４４】
2010506948.tif 000072
【０１８０】
【表４５】
2010506948.tif 000073
【表４６】
2010506948.tif 000074
【０１８１】
【表４７】
2010506948.tif 000075
【表４８】
2010506948.tif 000076
【表４９】
2010506948.tif 000077
【０１８２】
実施例１６
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチル−Ｎ−（フェニルカルバモイル）ベンズアミド（Ｎ１）
【化２８】
2010506948.tif 000078
３−（１，７−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，６−ナフチリジン−３−イル）−４−メチルベンゾイルイソシアネート３１（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をアニリン（３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を有するＤＣＭに室温で１時間懸濁する。溶媒を除去し、残渣を分取ＬＣＭＳにより精製し、所望の生成物Ｎ１を得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11 (s, 1H), 10.8 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.1 (s, 1H),  8.01 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.12 (t, J = 7 Hz, 1H), 2.7 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.25 (s, 3H);    LC/MS (M+1, m/z): 427.2。
【０１８３】
表１０は上記の製造法と類似の方法にしたがって製造される本発明の他の典型的な化合物を記載している。
表１０
【表５０】
2010506948.tif 000079
【表５１】
2010506948.tif 000080
【０１８４】
【表５２】
2010506948.tif 000081
【表５３】
2010506948.tif 000082
【０１８５】
【表５４】
2010506948.tif 000083
【表５５】
2010506948.tif 000084
【０１８６】
表１１は上記の一般製造法Ａ−Ｎのいずれかを使用して製造され得る関連化合物および他の化合物を記載している。
表１１
【表５６】
2010506948.tif 000085
【表５７】
2010506948.tif 000086
【０１８７】
【表５８】
2010506948.tif 000087
【表５９】
2010506948.tif 000088
【０１８８】
【表６０】
2010506948.tif 000089
【表６１】
2010506948.tif 000090
【０１８９】
【表６２】
2010506948.tif 000091
【表６３】
2010506948.tif 000092
【０１９０】
【表６４】
2010506948.tif 000093
【表６５】
2010506948.tif 000094
【０１９１】
【表６６】
2010506948.tif 000095
【表６７】
2010506948.tif 000096
【表６８】
2010506948.tif 000097
【０１９２】
アッセイ
本発明の化合物を、一般的に下記のアッセイまたは当分野で既知のアッセイを使用して、タンパク質キナーゼ、例えば、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型を阻害する能力についてアッセイする。例えば、本発明の化合物を、野生型Ｂａ／Ｆ３細胞ならびにＴｅｌ  ｃ−ｋｉｔキナーゼおよびＴｅｌ  ＰＤＧＦＲ融合チロシンキナーゼで形質転換されたＢａ／Ｆ３細胞の増殖を選択的に阻害する能力、および、Ｍｏ７ｅ細胞におけるＳＣＦ依存増殖を選択的に阻害する能力を測定するためにアッセイする。
【０１９３】
増殖アッセイ：ＢａＦ３ライブラリー−Ｂｒｉｇｈｔ  ｇｌｏ読出しプロトコール
化合物がＢａ／Ｆ３細胞およびＴｅｌ融合チロシンキナーゼで形質転換されたＢａ／Ｆ３細胞の増殖を阻害する能力を試験する。形質転換されていないＢａ／Ｆ３細胞は組み換えＩＬ３を含む培地で維持する。細胞を１ウェルあたり５０μｌ中で５，０００細胞で３８４−ウェルＴＣプレートに入れ、０．０６ｎＭから１０μＭの試験化合物を加える。次に細胞を４８時間３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートする。細胞をインキュベート後、２５μＬのＢＲＩＧＨＴ  ＧＬＯ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の指示に従って各ウェルに加え、プレートをAnalyst GT-Luminescence mode-50000 integration time in RLUを使用して読む。５０％阻害に必要とする化合物濃度であるＩＣ５０値を用量応答曲線から決定する。
【０１９４】
Ｂａ／Ｆ３  ＦＬ  ＦＬＴ３増殖アッセイ
使用するマウス細胞系は全長ＦＬＴ３構築物を発現するＢａ／Ｆ３マウスＢ前駆細胞系である。これらの細胞を、ペニシリン５０μｇ／ｍＬ、ストレプトマイシン５０μｇ／ｍＬおよびＬグルタミン２００ｍＭ、マウス組み換えＩＬ３を添加したＲＰＭＩ１６４０／１０％胎児ウシ血清（ＲＰＭＩ／ＦＢＳ）に維持する。Ｂａ／Ｆ３全長ＦＬＴ３細胞を１６時間、ＩＬ３飢餓条件にし、次に３８４ウェルＴＣプレートにウェルあたり２５μｌ培地中で５，０００細胞で入れる；そして、０．０６ｎＭから１０μＭの試験化合物を加える。化合物を添加後、ＦＬＴ３リガンドまたは細胞毒性対照ＩＬ３をウェルあたり２５μｌの培地で適当な濃度で加える。次に細胞を４８時間３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートする。細胞をインキュベート後、２５μＬのＢＲＩＧＨＴ  ＧＬＯ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の指示に従って各ウェルに加え、プレートをAnalyst GT-Luminescence mode-50000 integration time in RLUを使用して読む。
【０１９５】
Ｍｏ７ｅアッセイ
Ｍｏ７ｅ細胞は、増殖をＳＣＦに依存するヒト前巨核球性白血病細胞系である。本明細書に記載されている化合物は、９６ウェルフォーマットでｃ−ｋｉｔを内在的に発現するＭｏ７ｅ細胞を使用して、ＳＣＦ依存増殖の阻害について試験する。簡潔には、２倍希釈した試験化合物（Ｃｍａｘ＝１０μＭ）をヒト組み換えＳＣＦで刺激されたＭｏ７ｅ細胞の抗増殖活性を評価する。４８時間３７℃でインキュベーション後、細胞生存をＰｒｏｍｅｇａのＭＴＴ比色分析アッセイを使用することにより測定する。
【０１９６】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性増殖の阻害（ハイスループット法）
マウス細胞系３２Ｄ造血前駆細胞系は、ＢＣＲ−Ａｂｌ  ｃＤＮＡで形質転換され得る。これらの細胞を、ペニシリン（５０μｇ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（５０μｇ／ｍＬ）およびＬ−グルタミン（２００ｍＭ）を添加したＲＰＭＩ／１０％胎児ウシ血清（ＲＰＭＩ／ＦＣＳ）に維持する。形質転換されていない３２Ｄ細胞を、ＩＬ３の源として１５％のＷＥＨＩ馴化培地を添加して同様に維持する。
【０１９７】
５０μｌの３２Ｄまたは３２Ｄ−ｐ２１０細胞懸濁液を５０００細胞／ウェルの密度でＧｒｅｉｎｅｒ３８４ウェルマイクロプレート（black）に播種する。５０ｎＬの試験化合物（ＤＭＳＯ貯蔵溶液中で１ｍＭ）をそれぞれのウェルに加える（ＳＴＩ５７１を陽性対照として包含する）。細胞を７２時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。１０μｌの６０％ＡＬＡＭＡＲ  ＢＬＵＥＴＭ溶液（Tek diagnostics）をそれぞれのウェルに加え、細胞をさらに２４時間インキュベートする。蛍光強度（５３０ｎｍで励起、５８０ｎｍで放射）でＡＣＱＵＥＳＴＴＭシステム（Molecular Devices）を使用して定量する。
【０１９８】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性増殖の阻害
３２Ｄ−ｐ２１０細胞を９６ウェルＴＣプレートに１５，０００細胞／ウェルの密度で播種する。５０μＬの試験化合物の２倍連続希釈（Ｃｍａｘは４０μＭ）をそれぞれのウェルに添加する（ＳＴＩ５７１を陽性対照として包含する）。細胞を４８時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベート後、１５μＬのＭＴＴ（Promega）をそれぞれのウェルに添加し、細胞をさらに５時間インキュベートする。５７０ｎｍの光学密度を分光測光により定量し、ＩＣ５０値を用量応答曲線から決定する。
【０１９９】
細胞サイクル分布に対する効果
３２Ｄおよび３２Ｄ−ｐ２１０細胞を６ウェルＴＣプレートに、５ｍｌの培地中２．５×１０６細胞／ウェルで播種し、１または１０μＭの試験化合物を添加する（ＳＴＩ５７１を対照として包含する）。細胞を次いで２４時間または４８時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。２ｍｌの細胞懸濁液をＰＢＳで洗浄し、７０％ＥｔＯＨに１時間固定し、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＲＮａｓｅ  Ａで３０分処置する。ヨウ化プロピジウム（Ｃｆ＝１０μｇ／ｍｌ）を添加し、蛍光強度をＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒＴＭシステム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのフローサイトメトリーにより定量する。いくつかの態様において、本発明の試験化合物は、３２Ｄ−ｐ２１０細胞に対してアポトーシス作用を証明できるが、３２Ｄ親細胞ではアポトーシスを誘発しない。
【０２００】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化に対する効果
ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を、ｃ−ａｂｌ特異的捕捉抗体および抗ホスホチロシン抗体を使用した、捕捉Ｅｌｉｓａで定量する。３２Ｄ−ｐ２１０細胞を９６ウェルＴＣプレートに、５０μＬの培地中２×１０５細胞／ウェルで播種する。５０μＬの試験化合物の２倍連続希釈（Ｃｍａｘは１０μＭ）をそれぞれのウェルに添加する（ＳＴＩ５７１を陽性対照として包含する）。細胞を、９０分、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。次いで、細胞を１時間、氷上でプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む１５０μＬの融解緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡおよび１％ＮＰ−４０）で処理する。５０μＬの細胞融解物を、予め抗ａｂｌ特異的抗体でコーティングし、ブロックした９６ウェルｏｐｔｉｐｌａｔｅに添加する。プレートを、４時間、４℃でインキュベートする。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０緩衝液で洗浄後、５０μＬのアルカリホスファターゼ結合抗ホスホチロシン抗体を添加し、プレートをさらに一晩４℃でインキュベートする。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０緩衝液で洗浄後、９０μＬの発光基質を添加し、発光をＡＣＱＵＥＳＴＴＭシステム（Molecular Devices）を使用して定量する。
【０２０１】
Ｂｃｒ−ａｂｌの変異型を発現する細胞の増殖に対する効果
本発明の化合物を、ＢＣＲ−Ａｂｌの野生型または、ＳＴＩ５７１に対する耐性を付与するか感受性を低下させる変異型（Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３５１Ｔ）のいずれかを発現するＢａ／Ｆ３細胞に対するそれらの抗増殖効果を試験できる。変異体ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞および非形質転換細胞に対するこれらの化合物の抗増殖性効果を、上記のとおり（ＩＬ３欠如培地中で）１０、３．３、１．１および０．３７μＭで試験できる。非形質転換細胞に対して毒性がない化合物のＩＣ５０値を、上記のとおりに得た用量応答曲線から決定する。
【０２０２】
ＦＧＦＲ（酵素アッセイ）
精製ＦＧＦＲ３（Upstate）でキナーゼ活性アッセイをキナーゼバッファー（３０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５ｍＭのＭｇＣｌ２、４．５ｍＭのＭｎＣｌ２、１５μＭのＮａ３ＶＯ４および５０μｇ／ｍＬのＢＳＡ）中の０．２５μｇ／ｍＬの酵素、および基質（５μｇ／ｍＬのビオチン−ポリ−ＥＹ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）（CIS-US, Inc.）および３μＭのＡＴＰ）を含む最終容量１０μＬで行う。２つの溶液を作る：キナーゼバッファー中にＦＧＦＲ酵素を含む５μｌの第１の溶液を、まず３８４フォーマットＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ（登録商標）（Perkin-Elmer）に分配し、次いでＤＭＳＯ中に溶解させた５０ｎＬの化合物を加える。キナーゼバッファー中に基質（ポリ−ＥＹ）およびＡＴＰを含む第２の溶液（５μｌ）をそれぞれのウェルに加える。反応物を室温で１時間インキュベートし、３０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、０．５ＭのＫＦ、５０ｍＭのＥＴＤＡ、０．２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、１５μｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＸＬ６６５（CIS-US, Inc.）および１５０ｎｇ／ｍＬのクリプタート結合抗ホスホチロシン抗体（CIS-US, Inc.）を含む１０μＬのＨＴＲＦ検出混合物の添加により停止する。ストレプトアビジン−ビオチン相互作用をするため室温で１時間インキュベーション後、時間分解蛍光シグナルはＡｎａｌｙｓｔ  ＧＴ（Molecular Devices Corp.）で読む。ＩＣ５０値は１２個の濃度（５０μＭから０．２８ｎＭの１：３希釈）でそれぞれの化合物の阻害％の線形回帰分析により計算する。
【０２０３】
ＦＧＦＲ３（細胞アッセイ）
本発明の化合物をＦＧＦＲ３細胞キナーゼ活性に依存している形質転換Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３細胞増殖を阻害する能力に対して試験することができる。Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３を培養培地として１０％の胎児ウシ血清を補ったＲＰＭＩ  １６４０を含む懸濁液中に８００，０００細胞／ｍＬまで培養する。細胞を５０μＬの培養培地中に５０００細胞／ウェルで３８４ウェル形式のプレート中に分配する。本発明の化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解し、希釈する。一般的に１０ｍＭから０．０５μＭの範囲の濃度勾配を作るため、１：３連続希釈で１２点をＤＭＳＯ中に作る。細胞を５０ｎＬの希釈化合物と加え、４８時間、細胞培養インキュベーター中でインキュベーションする。増殖している細胞により作られる還元環境をモニタリングするために使用できるＡＬＡＭＡＲ  ＢＬＵＥ（登録商標）（TREK Diagnostic Systems）を最終濃度１０％で細胞に加える。３７℃で細胞培養インキュベーター内でさらに４時間インキュベーション後、還元ＡＬＡＭＡＲ  ＢＬＵＥ（登録商標）（５３０ｎｍで励起、５８０ｎｍで放射）からの蛍光シグナルをＡｎａｌｙｓｔ  ＧＴ（Molecular Devices Corp.）で定量化する。ＩＣ５０値は１２個の濃度でそれぞれの化合物の阻害％の線形回帰分析により計算する。
【０２０４】
ＦＬＴ３およびＰＤＧＦＲβ
ＦＬＴ３およびＰＤＧＦＲβの細胞活性における本発明の化合物の効果を、Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３、Ｂａ／Ｆ３−ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＢａ／Ｆ３−Ｔｅｌ−ＰＤＧＦＲβを使用する代わりに各々を使用すること以外は、ＦＧＦＲ３細胞活性を上記と同じ方法を使用して実施する。
【０２０５】
ｂ−Ｒａｆ（酵素アッセイ）
本発明の化合物を、それらのｂ−Ｒａｆの活性を阻害する能力について試験できる。アッセイを、黒色壁かつ透明底の３８４ウェルＭａｘｉＳｏｒｐプレート（NUNC）で行う。基質、ＩκＢαをＤＰＢＳ（１：７５０）で希釈し、１５μｌをそれぞれのウェルに添加する。プレートを４℃で一晩インキュベートし、ＥＭＢＬＡプレート洗浄機を使用して、３回ＴＢＳＴ（２５ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で洗浄する。プレートをＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（１５μｌ／ウェル）で３時間、室温でブロックし、ＴＢＳＴで３回洗浄し、軽く叩いて乾燥させる。２０μＭのＡＴＰ（１０μｌ）含有アッセイ緩衝液、続いて１００ｎｌまたは５００ｎｌの化合物をそれぞれのウェルに添加する。Ｂ−Ｒａｆをアッセイ緩衝液で希釈し（２５μｌ中に１μｌ）、１０μｌの希釈したｂ−Ｒａｆをそれぞれのウェルに添加する（０．４μｇ／ウェル）。プレートを室温で２．５時間インキュベートする。キナーゼ反応を、プレートを６回ＴＢＳＴで洗浄することにより停止させる。Ｐｈｏｓｐｈ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２／３６）抗体をＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ中で希釈し（１：１０，０００）、１５μｌをそれぞれのウェルに添加する。プレートを４℃で一晩インキュベートし、ＴＢＳＴで６回洗浄する。ＡＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧをＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋで希釈し（１：１，５００）、１５μｌをそれぞれのウェルに添加する。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＴＢＳＴで６回洗浄する。１５μｌのＡｔｔｏｐｈｏｓ  ＡＰ基質をそれぞれのウェルに添加し、プレートを室温で１５分インキュベートする。プレートをＡｃｑｕｅｓｔまたはＡｎａｌｙｓｔ  ＧＴで、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  Ｎａｎｘｉｎ  ＢＢＴ  ａｎｉｏｎ（５０５ダイクロイックミラー）を使用して読み取る。
【０２０６】
ｂ−Ｒａｆ（細胞アッセイ）
本発明の化合物をＡ３７５細胞でＭＥＫのリン酸化を阻害する能力に対して試験できる。Ａ３７５細胞系（ＡＴＣＣ）はヒト黒色腫患者由来であり、Ｂ−Ｒａｆ遺伝子にＶ５９９Ｅ変異を有する。リン酸化ＭＥＫのレベルがＢ−Ｒａｆ変異のため上昇する。サブコンフルエントからコンフルエントＡ３７５細胞を化合物と２時間３７℃で無血清培地中でインキュベーションする。次いで細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄し、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００を含む溶解バッファーで溶解する。遠心分離後、上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、次いでニトロセルロース膜に移す。次いで膜を抗リン酸−ＭＥＫ抗体（ｓｅｒ２１７／２２１）（細胞シグナル）でウエスタンブロッティングに付す。リン酸化ＭＥＫの量はニトロセルロース膜のリン酸−ＭＥＫバンドの密度によりモニタリングする。
【０２０７】
ヒトＴＧ−ＨＡ−ＶＳＭＣ増殖アッセイ
ヒトＴＧ−ＨＡ−ＶＳＭＣ細胞（ＡＴＣＣ）を、１％のＦＢＳおよび６ｅ４細胞／ｍＬで３０ｎｇ／ｍＬの組み換えヒトＰＤＧＦ−ＢＢを補ったＤＭＥＭ中で再懸濁する前に、１０％のＦＢＳを補ったＤＭＥＭ中で８０−９０％のコンフルエンスまで培養する。次に細胞を５０μＬ／ｗｅｌｌで３８４ウェルプレートに分配し、２０時間３７℃でインキュベートし、次に４８時間３７℃で０．５μＬの１００×化合物で処理する。処理後、２５μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏをそれぞれのウェルに１５分で加え、次にプレートをＣＬＩＰＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で読む。
【０２０８】
ＵＰＳＴＡＴＥ  ＫＩＮＡＳＥ  ＰＲＯＦＩＬＥＲＴＭ−放射酵素的フィルター結合アッセイ
本発明の化合物を、一連のキナーゼの個々のメンバー、例えば、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆおよびｂ−ｒａｆキナーゼを阻害する能力についてアッセイできる。化合物を、１０μＭの最終濃度でデュプリケートで、この一般的プロトコールに従い試験する。キナーゼ緩衝液組成物および基質は一連の“Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ  ＰｒｏｆｉｌｅｒＴＭ”を含んでいる異なるキナーゼに対して変化することを留意する。キナーゼ緩衝液（２．５μＬ、１０×−必要であればＭｎＣｌ２含有）、キナーゼ緩衝液中の活性キナーゼ（０．００１−０．０１単位；２．５μＬ）、特異的またはポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド（５−５００μＭまたは．０１ｍｇ／ｍｌ）およびキナーゼ緩衝液（５０μＭ；５μＬ）を、氷上でエッペンドルフで混合する。Ｍｇ／ＡＴＰミックス（１０μＬ；６７．５または３３．７５ｍＭのＭｇＣｌ２、４５０または２２５μＭのＡＴＰおよび１μＣｉ／μｌ［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を約３０℃で約１０分インキュベートする。反応混合物を２ｃｍ×２ｃｍのＰ８１（ホスホセルロース、正に荷電したペプチド基質のため）またはＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１（ポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド基質のため）方眼紙にスポット（２０μＬ）する。アッセイ升目を４回、それぞれ５分、０．７５％リン酸で、そして１回アセトンで５分洗浄する。アッセイ升目をシンチレーションバイアルに移し、シンチレーションカクテル（５ｍｌ）を添加し、ペプチド基質への３２Ｐ取り込み（ｃｐｍ）をＢｅｃｋｍａｎシンチレーションカウンターで計数する。それぞれの反応について阻害パーセントを計算する。
【０２０９】
遊離形の式（１）、（２）または（３）の化合物または薬学的に許容される塩形は、例えば、本出願に記載のインビトロ試験法により示される通り、重要な薬理学的特性を示すことができる。これらの実験におけるＩＣ５０値は、阻害剤なしの対照を使用して得られる細胞数よりも５０％少ない細胞数となる対象の試験化合物の濃度である。一般的に、本発明の化合物は、１ｎＭから１０μＭのＩＣ５０値を有する。いくつかの例において、本発明の化合物は、０．０１μＭから５μＭのＩＣ５０値を示す。他の例において、本発明の化合物は、０．０１μＭから１μＭ、または、さらに特に１ｎＭから１μＭのＩＣ５０値を有する。さらに他の態様において、本発明の化合物は、１ｎＭ未満または１０μＭより大きいＩＣ５０値を有する。１０μＭの濃度で式（１）または（２）の化合物は、１種以上の下記キナーゼ：ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ１Ｒ、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＣＳＫ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ｐ３８、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＴＧＦβ、ＳＲＣ、ＥＧＦＲ、ｔｒｋＢ、ＦＧＦＲ３、Ｆｅｓ、Ｌｃｋ、Ｓｙｋ、ＲＡＦ、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＳＡＰＫ２β、ＢＲＫ、ＫＤＲ、ｃ−ｒａｆまたはｂ−ｒａｆキナーゼまたはそれらの変異型に対して５０％以上の阻害％、または他の態様において、好ましくは約７０％以上の阻害％を示すことができる。
【０２１０】
ここに記載の例および態様は、説明の目的のためのみであり、それに照らした様々な修飾または変化が当業者には示唆され、それらは本発明の精神および範囲の範囲内および添付の特許請求の範囲内に包含されることは理解されるべきである。本明細書で引用する全ての刊行物、特許および特許出願は全ての目的のために引用して本明細書に包含する。
【国際調査報告】
2010506948.tif 000129
2010506948.tif 000130
2010506948.tif 000131
2010506948.tif 000132
2010506948.tif 000133