(57)【要約】  本発明は、式（１）2010538004.tif 000083の新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、ならびにかかる化合物を用いる方法を提供する。例えば本発明のピリミジン誘導体は、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−１Ｒ）または未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害に応答する状態を処置、改善または予防するために使用することができる。
2010538004.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2010538004.tif 000065
〔式中、
Ｒ１ａはＨ、ハロ、ＯＲ８、ＮＲ（Ｒ８）、ＳＲ８；それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＮＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ８、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、ＮＳ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ９；または所望により置換されていてもよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
Ｒ１ｂはＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ２は所望により置換されたＣ６−１０炭素環式、またはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくは５〜７員ヘテロ環式環であり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５、Ｒ６およびＲ７は独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−（ＣＲ２）ｑ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
あるいは、２個の隣接したＲ５基はそれらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換された９〜１４員環を形成してもよく；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は独立して（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；またはＲ７およびＲ８は独立してＨであり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により１〜３個のＲ６基で置換されていてもよく；
ｍおよびｐは独立して１〜４であり；
ｎおよびｑは独立して０〜４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１ｂがＨである、請求項１の化合物。
【請求項３】
式（２Ａ）または（２Ｂ）：
【化２】
2010538004.tif 000066
〔式中、
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃの１個はＨであり、他のものとＲ６は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５ａ、Ｒｂ、Ｒ５ｃおよびＲ６は独立してハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ８およびＲ９は独立して、（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノもしくはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくははＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ８はＨであり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により１〜３個のＲ６基で置換されていてもよく；
ｐは１〜４であり；
ｑは０〜４である〕
の化合物である、請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒ５ｂがＨであり；
Ｒ５ａおよびＲ５ｃが独立して、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシであり；
Ｒ６がＣ１−６アルキル、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９または−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８である、請求項３の化合物。
【請求項５】
Ｒ５ｃがＨであり；Ｒ５ａおよびＲ５ｂが独立して、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシである、請求項３の化合物。
【請求項６】
式（３Ａ）または（３Ｂ）：
【化３】
2010538004.tif 000067
〔環Ｂは所望により置換されたＣ５−７炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５〜１０員ヘテロアリールもしくは５〜７員ヘテロ環式環である〕
の化合物である、請求項１の化合物。
【請求項７】
Ｂが結合しているフェニル環と一体となって、所望により置換されていてもよいナフタレンまたはテトロヒドロナフタレンを形成する、請求項６の化合物。
【請求項８】
Ｒ１ａがハロ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルである、請求項１〜７の何れかの化合物。
【請求項９】
Ｒ２がピラゾリル、ピロリル、チオフェニル、ピリミジニル、イソオキサゾリル、ピリジル、アゼパン−２−オニル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、インダゾリル、キノリニルまたはビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エニルであり、これらはそれぞれ所望により１〜２個のＲ６基で置換されていてもよい、請求項１〜８の何れかの化合物。
【請求項１０】
Ｒ３がＨまたはＣＯ（Ｒ７）であり、Ｒ７がＣ１−６アルキルであり；Ｒ４がＨである、請求項１〜９の何れかの化合物。
【請求項１１】
次の群：
【表１】
2010538004.tif 000068
【表２】
2010538004.tif 000069
【表３】
2010538004.tif 000070
【表４】
2010538004.tif 000071
【表５】
2010538004.tif 000072
【表６】
2010538004.tif 000073
【表７】
2010538004.tif 000074
【表８】
2010538004.tif 000075
【表９】
2010538004.tif 000076
【表１０】
2010538004.tif 000077
から選択される、請求項１〜１０の何れかの化合物。
【請求項１２】
式（４）：
【化４】
2010538004.tif 000078
〔式中、
Ｒ１はＨ、ハロ、ＯＲ８、ＮＲ（Ｒ８）、ＳＲ８；それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＮＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ８、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、ＮＳ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ９；または所望により置換されていてもよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；またはＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１は独立して、（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノもしくはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ７、Ｒ８およびＲ１１は独立してＨであり；
Ｒ１０はＮＲ（Ｒ８）、ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、ＮＲ（ＣＲ２）ｑＣ（Ｏ）Ｒ８またはＲ９であり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により、１〜３個のＲ５基で置換されていてもよく；
ＺはＣＯまたはＳ（Ｏ）１−２であり；
ｍおよびｐは独立して１〜４であり；
ｑは０〜４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
式（４Ａ）：
【化５】
2010538004.tif 000079
〔式中、
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃの１個はＨであり、他のものは独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃは独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１は独立して、（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノもしくはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ８およびＲ１１は独立してＨであり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により、１〜３個のＲ５基で置換されていてもよく；
ｐは１〜４であり；
ｑは０〜４である〕
の化合物である、請求項１２の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５ｂがＨであり；Ｒ５ａおよびＲ５ｃが独立して、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８または−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８であり；
ここでＬが結合であり；
Ｒ８が（ＣＲ２）ｑＹであり；
ｑがそれぞれ０であり；
Ｙが５〜７員ヘテロ環式環である、請求項１２または１３の化合物。
【請求項１５】
次の群：
【表１１】
2010538004.tif 000080
【表１２】
2010538004.tif 000081
【表１３】
2010538004.tif 000082
から選択される、請求項１２〜１４の何れかの化合物。
【請求項１６】
治療上有効量の請求項１〜１５の何れかの化合物と薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
ＩＧＦ−１Ｒまたは未分化リンパ腫キナーゼを阻害する方法であって、細胞もしくは組織系または哺乳類対象に、治療上有効量の請求項１〜１５の何れかの化合物またはその薬学的に許容される塩を、所望により第２の治療薬剤と組み合わせて投与して、該キナーゼを阻害することを含む方法。
【請求項１８】
第２の治療薬剤が化学療法剤である、請求項１７の方法。
【請求項１９】
化合物を第２の治療薬剤の前、それと同時またはその後に投与する、請求項１７または１８の方法。
【請求項２０】
ＩＧＦ−１Ｒまたは未分化リンパ腫キナーゼによって介在される状態の処置用医薬の製造のための、所望により化学療法剤と組み合わせた、請求項１〜１５の何れかの化合物またはその医薬組成物の使用であって、当該状態が自己免疫疾患、移植疾患、感染症または細胞増殖性障害である、使用。
【請求項２１】
細胞増殖性障害が多発性骨髄腫、神経芽腫、リンパ腫、白血病、黒色腫、肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、ユーイング肉腫、肝がん、消化器間質腫瘍または乳房、腎臓、前立腺、結直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、肺、子宮、呼吸管、脳、消化管、尿路、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺または副甲状腺の固形腫瘍である、請求項２０の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００７年８月２８日に出願した米国仮出願第60/966,449号および２００８年６月２５日に出願した米国仮出願第61/075,556号についての優先権の利益を主張する。この出願の全開示は、その全体において、あらゆる目的のために、参照により本明細書に包含される。
【０００２】
技術分野
本発明は、プロテインキナーゼ阻害剤、特に新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、ならびにそれらの医薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−１）シグナル伝達は、主たる因子としてのＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）と共に、がんに深く関与している。ＩＧＲ−１Ｒは腫瘍形質転換および悪性細胞の生存に重要であるが、正常細胞の増殖には部分的にしか関与していない。ＩＧＦ−１Ｒを標的とすることは、がん治療の有効な選択肢であることが示唆されている（Larsson et al., Br. J. Cancer 92:2097-2101 (2005)）。
【０００４】
受容体チロシンキナーゼのインスリン受容体スーパーファミリーのメンバーである未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）は、造血系および非造血系腫瘍の発がんに関与している。神経芽腫およびグリア芽腫における全長ＡＬＫ受容体タンパク質の異常な発現が報告されており；ＡＬＫ融合タンパク質が未分化大細胞リンパ腫において生じる。ＡＬＫ融合タンパク質の研究はまた、ＡＬＫ陽性悪性腫瘍を有する患者の新規治療処置の可能性をもたらす（Pulford et al., Cell. Mol. Life Sci. 61:2939-2953 (2004)）。
【０００５】
ＩＧＦ−１ＲおよびＡＬＫの新たな疾患に関連した役割のため、ＩＧＦ−１ＲおよびＡＬＫの阻害に応答する疾患の処置および予防に有用であり得る化合物が継続して必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
発明の開示
本発明は新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、ならびに医薬としてのその使用に関する。
【０００７】
一つの局面において、本発明は、式（１）
【化１】
2010538004.tif 000003
〔式中、
Ｒ１ａはＨ、ハロ、ＯＲ８、ＮＲ（Ｒ８）、ＳＲ８；それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＮＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ８、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、ＮＳ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ９；または所望により置換されていてもよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；またはＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
Ｒ１ｂはＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ２は所望により置換されたＣ６−１０炭素環式、またはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくは５〜７員ヘテロ環式環であり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５、Ｒ６およびＲ７は独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−（ＣＲ２）ｑ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
あるいは、２個の隣接したＲ５基はそれらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換された９〜１４員環を形成してもよく；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は独立して（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；またはＲ７およびＲ８は独立してＨであり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により１〜３個のＲ６基で置換されていてもよく；
ｍおよびｐは独立して１〜４であり；
ｎおよびｑは独立して０〜４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００８】
具体的な例において、上記式（１）のＲ１ｂはＨである。ある例において、ｍは２〜４であり；より具体的にはｍは２である。
【０００９】
一つの態様において、本発明は式（２Ａ）または（２Ｂ）：
【化２】
2010538004.tif 000004
〔式中、
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃの１個はＨであり、他のものとＲ６は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５ａ、Ｒｂ、Ｒ５ｃおよびＲ６は独立してハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｙ、ｐおよびｑは式（１）で定義のとおりである〕
の化合物を提供する。
【００１０】
ある態様において、上記式（２Ａ）または（２Ｂ）のＲ５ｂはＨであり；Ｒ５ａおよびＲ５ｃは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシである。具体的な例において、Ｒ５ｂはＨであり；Ｒ５ａはハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシまたはＣ１−６アルキルであり；Ｒ５ｃはハロ、Ｃ１−４アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルである。別の例において、Ｒ５ｃはＨであり；Ｒ５ａおよびＲ５ｂは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルコキシである。
【００１１】
他の態様において、本発明は式（３Ａ）または（３Ｂ）：
【化３】
2010538004.tif 000005
〔式中、
環Ｂは所望により置換されたＣ５−７炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５〜１０員ヘテロアリールもしくは５〜７員ヘテロ環式環であり；
Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は式（１）で定義のとおりである〕
の化合物を提供する。
【００１２】
上記式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）および（３Ｂ）において、Ｒ２はピラゾリル、ピロリル、チオフェニル、ピリミジニル、イソオキサゾリル、ピリジル、アゼパン−２−オニル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、インダゾリル、キノリニル、シクロヘキシルまたはビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エニルであってよく、これらはそれぞれ所望により、１〜２個のＲ６基で置換されていてもよい。ある例において、Ｒ２はＣ１−６アルキル、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８または−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８で置換されていてもよく、ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり、Ｒ、Ｒ８、Ｙおよびｑは上記定義のとおりである。
【００１３】
上記式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）および（３Ｂ）において、Ｒ６はＣ１−６アルキル、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９または−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８であってよく、ここでＲ、Ｒ８およびＲ９は上記定義のとおりである。
【００１４】
別の局面において、本発明は式（４）：
【化４】
2010538004.tif 000006
〔式中、
Ｒ１はＨ、ハロ、ＯＲ８、ＮＲ（Ｒ８）、ＳＲ８；それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＮＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ８、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、ＮＳ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ９；または所望により置換されていてもよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；またはＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ７、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１は独立して、（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノもしくはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ７、Ｒ８およびＲ１１は独立してＨであり；
Ｒ１０はＮＲ（Ｒ８）、ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、ＮＲ（ＣＲ２）ｑＣ（Ｏ）Ｒ８またはＲ９であり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により、１〜３個のＲ５基で置換されていてもよく；
ＺはＣＯまたはＳ（Ｏ）１−２であり；
ｍおよびｐは独立して１〜４であり；
ｑは０〜４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１５】
ある例において、上記式（４）のｍは２〜４である。具体的な例において、ｍは２である。
【００１６】
ある態様において、本発明は、式（４Ａ）：
【化５】
2010538004.tif 000007
〔式中、
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃの１個はＨであり、他のものは独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃは独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｙ、Ｚ、ｐおよびｑは式（４）で定義のとおりである〕
の化合物を提供する。
【００１７】
ある例において、上記式（４Ａ）のＲ５ｂはＨであり；Ｒ５ａおよびＲ５ｃは独立してハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換Ｃ１−６アルキル、ハロ置換Ｃ１−６アルコキシまたは−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８であり；
ここでＬが結合であり；
Ｒ８は（ＣＲ２）ｑＹであり；
ｑはそれぞれ０であり；
Ｙは５〜７員ヘテロ環式環である。
【００１８】
上記式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）および（４Ａ）において、Ｒ１ａはハロ、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであってもよい。別の例において、Ｒ３はＨまたはＣＯ（Ｒ７）であり、ここでＲ７はＣ１−６アルキルであり；Ｒ４はＨである。具体的な例において、Ｒ３およびＲ４はＨである。
【００１９】
さらに別の局面において、本発明は、式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）を有する化合物と薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
さらにまた、本発明は、ＩＧＦ１ＲもしくはＡＬＫを阻害するためまたはＩＧＦ１ＲもしくはＡＬＫによって介在される状態を処置するための方法であって、細胞もしくは組織系または哺乳類対象に治療上有効量の式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは互変異性体を、所望により第２の治療薬剤と組み合わせて投与して；該キナーゼを阻害するかまたはＩＧＦ１ＲもしくはＡＬＫによって介在される状態を処置する方法を提供する。
【００２１】
本発明はまた、ＩＧＦ−１ＲまたはＡＬＫの阻害に応答する状態を処置し、改善しまたは予防する方法であって、かかる処置を必要とする系または対象に治療上有効量の式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物を、所望により第２の治療薬剤と組み合わせて投与して、当該状態を処置することを含む方法を提供する。あるいは本発明は、ＩＧＦ−１ＲまたはＡＬＫによって介在される状態の処置用医薬の製造における、式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）を有する化合物の使用を提供する。具体的な態様において、本発明の化合物は、ＩＧＦ−１ＲまたはＡＬＫによって介在される状態の処置のために単独でまたは第２の治療薬剤と組み合わせて使用することができ、ここで当該状態は自己免疫疾患、移植疾患、感染症または細胞増殖性障害である。
【００２２】
さらにまた本発明は、細胞増殖性障害を処置する方法であって、かかる処置を必要とする系または対象に治療上有効量の式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）を有する化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物を、所望により第２の治療薬剤と組み合わせて投与して、当該状態を処置する方法を提供する。あるいは本発明は、細胞増殖性障害の処置用医薬の製造における式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）を有する化合物の使用を提供する。具体的な例において、本発明の化合物は、多発性骨髄腫、神経芽腫、滑膜肉腫、肝細胞肉腫、ユーイング肉腫ならびに骨肉腫、黒色腫および乳房、腎臓、前立腺、結直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、肺、子宮または消化器の腫瘍から選択される固形腫瘍を含むがこれらに限定されない細胞増殖性疾患の処置のために、単独でまたは第２の治療薬剤と組み合わせて使用してもよい。
【００２３】
本発明の化合物を使用する上記方法において、式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）または（４Ａ）を有する化合物は、細胞もしくは組織を含む系または哺乳類対象、例えばヒトまたは動物対象に投与することができる。
【００２４】
定義
「アルキル」は、基またはハロ置換アルキルおよびアルコキシのような他の基の構造要素を意味し、直鎖または分枝鎖であってよい。所望により置換されたアルキル、アルケニルまたはアルキニルは、本明細書において使用するとき、所望によりハロゲン化されていてよく（例えばＣＦ３）、あるいはＮＲ、ＯまたはＳのようなヘテロ原子で置換または置き換えられた１個以上の炭素原子を有していてもよい（例えば−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、アルキルチオール、チオアルコキシ、アルキルアミン等）。
【００２５】
「アリール」は、炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環集合体を意味する。「アリーレン」は、アリール基に由来する二価基を意味する。例えばアリール基はフェニル、インデニル、インダニル、ナフチルまたは１，２，３，４−テトラヒドロナフタレニルであってよく、これらは所望により、オルト、メタまたはパラ位で置換されていてもよい。
【００２６】
「ヘテロアリール」は、本明細書において使用するとき、１個以上の環員がヘテロ原子であるが、上記アリールについて定義のとおりである。例えば本発明の化合物に使用するヘテロアリール置換基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む単環式または二環式５〜１０員ヘテロアリールであってよい。ヘテロアリールの例は、ピリジル、ピラジニル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニル、ピロリル、イソキノリニル、プリニル、チアゾリル、テトラジニル、ベンゾチアゾリル、オキサジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル等を含むがこれらに限定されない。
【００２７】
「炭素環式環」は、本明細書において使用するとき、炭素原子を含む飽和または部分不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環を意味し、これは所望により、例えば＝Ｏで置換されていてもよい。炭素環式環の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロプロピレン、シクロヘキサノン等を含むが、これらに限定されない。
【００２８】
「ヘテロ環式環」は、本明細書において使用するとき、１個以上の環炭素がヘテロ原子であるが、上記炭素環式環について定義のとおりである。例えば、本発明の化合物に使用するヘテロ環式環はＮ、ＯおよびＳまたはそれらの組合せ、例えば−Ｓ（Ｏ）または−Ｓ（Ｏ）２−から選択される１〜３個のヘテロ原子を含む４〜７員ヘテロ環式環であり得る。ヘテロ環式環の例は、アゼチジニル、モルホリノ、ピロリジニル、ピロリジニル−２−オン、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニロン、１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デシ−８−イル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリニル等を含むが、これらに限定されない。ヘテロ環式環は、本明細書において使用するとき、二環式アミンおよび二環式ジアミンを含んでいてもよい。
【００２９】
本明細書において使用するとき、何れかの置換基（例えばＣＨ２）のＨ原子は、あらゆる好適な同位体、例えばＨ、２Ｈおよび３Ｈを含む。
【００３０】
「共投与」または「組合せ投与」などの用語は、本明細書において使用するとき、選択した治療薬物を１人の患者に投与することを意味しており、薬物を必ずしも同じ投与経路または同時に投与することのない処置レジメンを含むことを意図する。
【００３１】
用語「医薬組合せ剤」は、本明細書において使用するとき、複数の有効成分の混合または組合せによって得られる製品を意味しており、複数の有効成分の固定された組合せ剤および固定されていない組合せ剤のいずれをも含む。用語「固定された組合せ剤」は、有効成分、例えば式（１）の化合物と共薬物が共に、同時に、１個の物または投与形で患者に投与されることを意味する。用語「固定されていない組合せ剤」は、有効成分、例えば式（１）の化合物と共薬物を、いずれも１人の患者に、別々の物として、同時に、同時一体的にまたは逐次的に、特に時間の限定なく、かかる投与によって患者の体内で２種の化合物の治療上有効濃度が得られるように投与することを意味する。後者はまた、カクテルセラピー、例えば３種以上の有効成分の投与に適用する。
【００３２】
用語「治療上有効量」は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められる、細胞、組織、臓器、系、動物またはヒトにおいて生物学的または医学的応答を誘発する対象化合物の量を意味する。
【００３３】
用語対象化合物の「投与」または「投与すること」は、処置を必要としている対象に本発明の化合物またはそのプロドラッグを処置を与えることを意味する。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
発明を実施する形態
本発明は、新規ピリミジン誘導体およびその医薬組成物、ならびにかかる化合物を用いる方法を提供する。
【００３５】
一つの局面において、本発明は、式（１）：
【化６】
2010538004.tif 000008
〔式中、
Ｒ１ａはＨ、ハロ、ＯＲ８、ＮＲ（Ｒ８）、ＳＲ８；それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＮＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ８、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、ＮＳ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ９；または所望により置換されていてもよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；またはＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
Ｒ１ｂはＨまたはＮＨ２であり；
Ｒ２は所望により置換されたＣ６−１０炭素環式、またはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくは５〜７員ヘテロ環式環であり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５、Ｒ６およびＲ７は独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−（ＣＲ２）ｑ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
あるいは、２個の隣接したＲ５基はそれらが結合している炭素原子と一体となって、所望により置換された９〜１４員環を形成してもよく；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は独立して（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；またはＲ７およびＲ８は独立してＨであり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により１〜３個のＲ６基で置換されていてもよく；
ｍおよびｐは独立して１〜４であり；
ｎおよびｑは独立して０〜４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３６】
一つの態様において、本発明は式（２Ａ）または（２Ｂ）：
【化７】
2010538004.tif 000009
〔式中、
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃの１個はＨであり、他のものとＲ６は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５ａ、Ｒｂ、Ｒ５ｃおよびＲ６は独立してハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ、Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｙ、ｐおよびｑは式（１）で定義のとおりである〕
の化合物を提供する。
【００３７】
他の態様において、本発明は、式（３Ａ）または（３Ｂ）：
【化８】
2010538004.tif 000010
〔式中、
環Ｂはは所望により置換されたＣ５−７炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；または５〜１０員ヘテロアリールもしくは５〜７員ヘテロ環式環であり；
Ｒ１ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は式（１）で定義のとおりである〕
の化合物を提供する。
【００３８】
別の局面において、本発明は、式（４）：
【化９】
2010538004.tif 000011
〔式中、
Ｒ１はＨ、ハロ、ＯＲ８、ＮＲ（Ｒ８）、ＳＲ８；それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル；Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＮＣ（Ｏ）Ｒ９、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ８、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、ＮＳ（Ｏ）２Ｒ９、Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ９；または所望により置換されていてもよいＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリール；またはＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールまたはヘテロ環式環であり；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ１−６アルキルまたはハロ置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５、Ｒ１２およびＲ１３は独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８であり；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１は独立して、（ＣＲ２）ｑＹまたはそれぞれ所望によりハロ、アミノもしくはヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ７、Ｒ８およびＲ１１は独立してＨであり；
Ｒ１０はＮＲ（Ｒ８）、ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、ＮＲ（ＣＲ２）ｑＣ（Ｏ）Ｒ８またはＲ９であり；
ＲはそれぞれＨまたはＣ１−６アルキルであり；
ＹはＣ３−１２炭素環式環、Ｃ６−１０アリールまたはそれぞれＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む５〜１０員ヘテロアリールもしくはヘテロ環式環であり；ここでＹは所望により、１〜３個のＲ５基で置換されていてもよく；
ＺはＣＯまたはＳ（Ｏ）１−２であり；
ｍおよびｐは独立して１〜４であり；
ｑは０〜４である〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３９】
一つの態様において、本発明は、式（４Ａ）：
【化１０】
2010538004.tif 000012
〔式中、
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃの１個はＨであり、他のものは独立して、それぞれ所望によりハロ、アミノまたはヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルであるか；あるいはＲ５ａ、Ｒ５ｂおよびＲ５ｃは独立して、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＲ２）ｐ−ＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−ＮＲ−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｒ９、−Ｌ−Ｙ、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）Ｏ０−１−（ＣＲ２）ｑ−Ｒ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ−（ＣＲ２）ｐ−ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ２）ｑ−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ９、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳＲ８、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ（ＣＲ２）ｐＳ（Ｏ）１−２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２Ｒ９、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲＲ８、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＮＲ（Ｒ８）、−Ｌ−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ（ＣＲ２）ｐＯＲ８；ここでＬは（ＣＲ２）１−４または結合であり；
Ｒ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｙ、Ｚ、ｐおよびｑは式（４）で定義のとおりである〕
の化合物を提供する。
【００４０】
上記式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）または（３Ｂ）において、５〜１０員ヘテロアリールまたは５〜７員ヘテロ環式環Ｒ２基の例は、ピラゾリル、ピロリル、チオフェニル、ピリミジニル、イソオキサゾリル、ピリジル、アゼパン−２−オニル、２Ｈ−、３Ｈ−チオピラン（thipyran）、４Ｈ−チオピラン（thipyran）、テトラヒドロチオピラン、２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、１，２−ジチイン、１，２−ジチアン、１，３−ジチイン、１，３−ジチアン、１，４−ジチイン、１，４−ジチアン、１，２−ジオキシン、１，２−ジオキサン、１，３−ジオキシン、１，３−ジオキサン、１，４−ジオキシン、１，４−ジオキサン、ピペラジン、１，２−オキサチイン、１，２−オキサチアン、４Ｈ−１，３−オキサチイン、１，３−オキサチアン、１，４−オキサチイン、１，４−オキサチアン、２Ｈ−１，２−チアジン、テトラヒドロ−１，２−チアジン、２Ｈ−１，３−チアジン、４Ｈ−１，３−チアジン、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チアジン、４Ｈ−１，４−チアジン、テトラヒドロ−１，４−チアジン、２Ｈ−１，２−オキサジン、４Ｈ−１，２−オキサジン、６Ｈ−１，２−オキサジン、２Ｈ−１，３−オキサジン、４Ｈ−１，３−オキサジン、４Ｈ−１，４−オキサジン、モルホリン、トリオキサン、４Ｈ−１，２，３−トリチイン、１，２，３−トリチアン、１，３，５−トリチアン、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、ピロリン、ピロリジン、ピロリドン、ピロリジノン、ピラゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、１，２−ジオキソール、１，２−ジオキソラン、１，３−ジオキソール、１，３−ジオキソラン、３Ｈ−１，２−ジチオール、１，２−ジチオラン、１，３−ジチオール、１，３−ジチオラン、イソキサゾリン、イソキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、チアゾリン、チオゾリジン、３Ｈ−１，２−オキサチオール、１，２−オキサチオラン、５Ｈ−１，２−オキサチオール、１，３−オキサチオール、１，３−オキサチオラン、１，２，３−トリチオール、１，２，３−トリチオラン、１，２，４−トリチオラン、１，２，３−トリオキソール、１，２，３−トリオキソラン、１，２，４−トリオキソラン、１，２，３−トリアゾリンおよび１，２，３−トリアゾリジンを含むが、これらに限定されない。
【００４１】
上記式それぞれにおいて、何れかの不斉炭素原子は（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ，Ｓ）−立体配置で存在していてもよい。したがって本化合物は、異性体の混合物または純粋な異性体、例えば純粋なエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在していてもよい。さらに本発明は、本発明の化合物の可能な互変異性体を含む。
【００４２】
本発明はまた、本発明の化合物の全ての好適な同位体置換体またはその薬学的に許容される塩を含む。本発明の化合物の同位体置換体またはその薬学的に許容される塩は、少なくとも１個の原子が同一の原子数であるが天然で通常見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置換されているものと定義される。本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩に導入され得る同位体の例は、水素、炭素、窒素および酸素の同位体、例えば２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌおよび１２３Ｉを含むがこれらに限定されない。ある本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩の同位体置換体、例えば３Ｈまたは１４Ｃのような放射性同位体が導入されているものは、薬物および／または基質組織分布試験において有用である。
【００４３】
具体的な例において、３Ｈおよび１４Ｃ同位体は製造および検出が容易であるために使用され得る。他の例において、２Ｈのような同位体置換によって、より大きな代謝安定性からもたらされるある治療利益、例えば上昇したインビボ半減期または減少した必要用量を得ることができる。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の同位体置換体は、一般に、好適な適切な同位体置換体の反応剤を用いた常套の方法によって製造することができる。本化合物の同位体置換体は、化合物の代謝速度を変化させ、そして／または疎水性等のような物理的特性をわずかに変化させる能力を有する。同位体置換体は効果および安全性を向上させ、生物学的利用能および半減期を上昇させ、タンパク質結合能を変化させ、生体内分布を変化させ、活性代謝産物の割合を増加させ、そして／または反応性もしくは毒性代謝産物の形成を減少させる能力を有する。
【００４４】
上記式のそれぞれにおいて、それぞれ所望により置換されていてもよい基は、それぞれ所望によりハロゲン化されていてもよいか、あるいは所望によりＮ、Ｓ、Ｏで置換または置き換えられていてもよい炭素を有するＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ３−６アルキニルまたはそれらの組合せ（例えばヒドロキシルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル）；ハロ、アミノ、アミジノ、Ｃ１−６アルコキシ；ヒドロキシル、メチレンジオキシ、カルボキシ；Ｃ１−８アルキルカルボニル、Ｃ１−８アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｃ１−８アルキルカルバモイル、スルファモイル、シアノ、オキソ、ニトロまたは所望により置換された炭素環式環、ヘテロ環式環、上記アリールまたはヘテロアリールで置換されていてもよい。
【００４５】
薬理および有用性
本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩は、インビトロで無細胞キナーゼアッセイおよび細胞アッセイで試験すると、有用な薬理学的特性を示し得て、したがって医薬として有用である。
【００４６】
一つの局面において、本発明の化合物は未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）およびＮＰＭ−ＡＬＫの融合タンパク質のチロシンキナーゼ活性を阻害することができる。このプロテインチロシンキナーゼはヌクレオホスミン（ＮＰＭ）とＡＬＫの遺伝子融合によってもたらされ、これはプロテインチロシンキナーゼ活性をＡＬＫリガンド非依存性にする。ＮＰＭ−ＡＬＫは多数の造血細胞および他のヒト細胞において重要な役割を果たしており、例えば未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、特にＡＬＫ＋ＮＨＬまたはAlkomasにおいて、炎症性筋線維芽腫瘍（ＩＭＴ）および神経芽腫のような血液学的疾患および腫瘍性疾患を導く（Duyster et al. 2001 Oncogene 20, 5623-5637）。ＮＰＭ−ＡＬＫに加えて、ヒト血液学的疾患および腫瘍性疾患において他の遺伝子融合が同定されている；例えば、ＴＰＭ３−ＡＬＫ（非筋肉性トロポミオシンとＡＬＫの融合）。
【００４７】
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性の阻害は、既知の方法を用いて、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189 (2000)に記載されているＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じたＡＬＫの組換えキナーゼドメインを用いて示すことができる。一般に、ＧＳＴ−ＡＬＫプロテインチロシンキナーゼを用いたインビトロ酵素アッセイは、２０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ＝７．５、３ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、０．１μＣｉ／アッセイ（＝３０μｌ）の［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰ、２μＭのＡＴＰ、３μｇ／ｍＬのポリ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ  ４：１）Ｐｏｌｙ−ＥＹ（Sigma P-0275）、１％のＤＭＳＯ、２５ｎｇのＡＬＫ酵素中のフィルター結合アッセイとして９６ウェルプレートで実施される。アッセイを周囲温度で１０分間インキュベートする。１２５ｍＭのＥＤＴＡを５０μｌ加えて反応を停止させ、反応混合物を予めメタノールで湿らせたMAIP Multiscreen プレート（Millipore, Bedford, MA, USA）に移し、Ｈ２Ｏで５分間水分補給する。洗浄（０．５％のＨ３ＰＯ４）した後、プレートを液体シンチレーションカウンターで対比染色する。阻害率の直線回帰分析によってＩＣ５０値を計算する。
【００４８】
本発明の化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過剰発現マウス（DSMZ Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH, Germany）の増殖を強力に阻害することができる。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現は、ＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターｐＣｌｎｅｏ（商標）（Promega Corp., Madison WI, USA）でＢａＦ３細胞系をトランスフェクトし、次いでＧ４１８耐性細胞の選択によって得ることができる。非トランスフェクトＢａＦ３細胞は細胞増殖に関してＩＬ−３に依存する。逆に、ＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞（以後ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫと称する）は、ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖シグナルを得るため、ＩＬ−３の非存在下で増殖することができる。したがって、ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は増殖シグナルを無効にして、抗増殖活性をもたらし得る。しかしＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖活性は、ＮＰＭ−ＡＬＫ非依存メカニズムを介して増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加によって克服することができる。ＦＬＴ３キナーゼを用いた同様の細胞系も記載されている（E Weisberg et al. Cancer Cell; 1, 433-443 (2002)参照）。
【００４９】
本発明の化合物の阻害活性は次のとおりに測定することができる。一般に、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞（１５，０００／マイクロタイタープレートウェル）を９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。ＤＭＳＯの最終濃度が１％（ｖ／ｖ）未満であるような連続濃度（連続希釈）の試験化合物のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を加える。添加後、試験化合物を含まない対照培地が２回の細胞分裂サイクルを実施することができる間、該プレートを２日間インキュベートする。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖は、ＹＯＰＲＯ（商標）染色によって測定する［T Idziorek et al. J. Immunol. Methods; 185: 249-258 (1995)］：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ４．０、２６．８ｍＭの塩化ナトリウム、０．４％のＮＰ４０、２０ｍＭのＥＤＴＡおよび２０ｍＭを含む溶解バッファー２５μｌを各ウェルに加える。細胞溶解は室温で６０分で完了し、ＤＮＡと結合したＹＯＰＲＯ（商標）の総量をCytofluor II  ９６ウェルリーダー（PerSeptive Biosystems）を次の設定：励起波長（ｎｍ）４８５／２０および放出波長（ｎｍ）５３０／２５を用いて測定して、決定する。
【００５０】
別の局面において、本発明の化合物はインスリン様増殖因子受容体１（ＩＧＦ−１Ｒ）を阻害することができる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性の阻害剤としての本発明の化合物の効果は、細胞捕捉ＥＬＩＳＡを用いて示すことができる。このアッセイにおいて、ＩＧＦ−１Ｒの（ＩＧＦ−１）誘導性自己リン酸化に対する本発明の化合物の活性を測定する。
【００５１】
本発明の化合物は、ＩＧＦ−１Ｒおよび／またはＡＬＫ介在性疾患の処置において有用であり得る。ＩＧＦ−１Ｒおよび／またはＡＬＫ介在性疾患の例は、腫瘍のような増殖性疾患、例えば乳房、腎臓、前立腺、結直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、神経、肺、子宮および胃腸の腫瘍ならびに骨肉腫および黒色腫を含むが、これらに限定されない。
【００５２】
本発明の化合物はまた、急性もしくは慢性炎症性疾患もしくは障害または自己免疫疾患、例えばリウマチ様関節炎、骨関節炎、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）およびそれに関連した障害、呼吸器疾患、例えば喘息または炎症性肝臓損傷、炎症性糸球体損傷、免疫介在性障害もしくは疾患の皮膚症状、炎症性および過増殖性皮膚疾患（例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎）、炎症性眼疾患、例えばショーグレン症候群、角結膜炎もしくはブドウ膜炎、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎の処置および／または予防に有用であり得る。
【００５３】
上記にしたがって、本発明は次の態様を提供する：
（１）医薬として使用するための本発明の化合物；
（２）例えば上記具体的な適用の何れかに使用するための、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤として使用するための本発明の化合物；
（３）上記適用の何れかに使用するための医薬組成物であって、有効成分としての本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体を含む医薬組成物；
（４）処置を必要とする対象における上記何れかの具体的な適応症の処置のための方法であって、有効量の本発明の化合物またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む方法；
（５）ＩＧＦ−１Ｒ活性が役割を果たすかあるいは関与する疾患または状態の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
（６）治療上有効量の本発明の化合物と１種以上のさらなる薬物を例えば同時または逐次的に共投与することを含む上記（４）に定義の方法であって、当該さらなる薬物は、上記具体的な適用の何れかに有用である、方法；
（７）治療上有効量の本発明の化合物と１種以上のさらなる薬物を含む組合せ剤であって、当該さらなる薬物は、上記具体的な適用の何れかに有用である、組合せ剤；
（８）未分化リンパ腫キナーゼの阻害に応答する疾患の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
（９）処置する疾患が未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維腫瘍、神経芽腫および腫瘍性疾患から選択される、上記（８）の使用；
（１０）本化合物が実施例の何れか一つの化合物またはその薬学的に許容される塩である、上記（８）または（９）の使用；
（１１）未分化リンパ腫キナーゼの阻害に応答する疾患、特に未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維腫瘍、神経芽腫および腫瘍性疾患から選択される疾患の処置のための方法であって、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
【００５４】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物は治療上有効量で、当該技術分野において既知の何れかの通常の許容される形態で、単独でまたは１種以上の治療薬物と組み合わせて投与する。治療上有効量は疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康、使用する化合物の能力および他の要因に従って広範に変化し得る。例えば、腫瘍性疾患および免疫系障害の処置のために必要とされる用量はまた、投与形態、処置する具体的な状態および望まれる効果に従って変化する。
【００５５】
一般に、全身的な１日用量約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、特に約０．０３〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示１日用量は約０．５ｍｇ〜約２０００ｍｇ、またはより具体的には約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲であり、簡便には、例えば１日４回までの分割用量または徐放形態で投与する。経口投与に好適な単位投与形態は、約１〜５０ｍｇの有効成分を含む。
【００５６】
本発明の化合物は何れかの常套の経路によって；例えば経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤またはカプセル剤の形態で；非経腸的に、例えば注射液または懸濁液の形態で；または局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形態で、あるいは経鼻または座薬形態で投与することができる。
【００５７】
遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物と少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物は、常套の方法で、混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥プロセスによって製造することができる。例えば、本発明の化合物と少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物は、常套の方法で、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合して製造することができる。経口投与用単位投与形態は、例えば有効成分約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇを含む。
【００５８】
一つの態様において、本医薬組成物は、有効成分の懸濁液または分散剤を含む溶液、例えば等張水溶液である。有効成分を単独でまたはマンニトールのような担体と共に含む凍結乾燥組成物の場合、分散剤または懸濁液を使用前に調製することができる。本医薬組成物は滅菌し、および／またはアジュバント、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調節のための塩および／またはバッファーを含んでいてもよい。好適な保存剤は、アスコルビン酸のような抗酸化剤またはソルビン酸もしくは安息香酸のような殺菌剤を含むが、これらに限定されない。溶液または懸濁液はさらに増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ゼラチンまたは可溶化剤、例えばTween 80（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）を含んでいてもよいが、これらに限定されない。
【００５９】
油中懸濁液は油性成分として、注射用として慣用の植物油、合成油または半合成油を含んでいてもよい。例には、８〜２２個の炭素原子、またはある態様においては１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸を酸成分として含む液体脂肪酸エステルが含まれる。好適な液体脂肪酸エステルは、例えばラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸またはリノレイン酸を含むがこれらに限定されず、所望により、抗酸化剤、例えばビタミンＥ、β−カロチンまたは３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンを含んでいてもよい。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は６個の炭素原子を有していてよく、そして１価または多価、例えば１、２または３価アルコールであり得る。好適なアルコール成分は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノールまたはその異性体；グリコールおよびグリセロールを含むが、これらに限定されない。
【００６０】
他の好適な脂肪酸エステルは、エチルオレエート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、LABRAFIL（登録商標）M 2375、（ポリオキシエチレングリセロール）、LABRAFIL（登録商標）M 1944 CS（不飽和ポリグリコール化グリセリド、杏仁油のアルコール分解によって製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルを含む）、LABRASOL（商標）（飽和ポリグリコール化グリセリド、ＴＣＭのアルコール分解によって製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルを含む；Gattefosse, Franceから全て入手可能）および／またはMIGLYOL（登録商標）812（Ｃ８〜Ｃ１２鎖長の補和脂肪酸のトリグリセリド、Huels AG, Germanyから）および植物油、例えば綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、大豆油、およびとりわけラッカセイ油を含むが、これらに限定されない。
【００６１】
経口投与用医薬組成物は、例えば有効成分と１種以上の固体担体を混合し、所望により得られた混合物を造粒し、さらなる賦形剤を加えて混合物または顆粒を処理して、錠剤または錠剤コアを得ることができる。
【００６２】
好適な担体は、特に増量剤、例えば糖、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース製剤および／またはリン酸カルシウム、例えばリン酸トリカルシウムまたはリン酸水素カルシウム、および結合剤、例えばデンプン、例えばトウモロコシ、コムギ、コメまたはポテトのスターチ、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、および／または、所望により、崩壊剤、例えば上記デンプンおよび／またはカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムを含むが、これらに限定されない。さらなる賦形剤は、とりわけ流動化剤および滑沢剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、および／またはポリエチレングリコールまたはその誘導体を含む。
【００６３】
錠剤コアは、とりわけ、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／またはチタンジオキシド、または好適な有機溶媒もしくは溶媒混合物中のコーティング溶液、あるいは腸溶コーティングの製造のために、好適なセルロース製剤、例えば酢酸フタル酸セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液を含み得る濃縮糖溶液を使用して、好適な、所望により腸溶の、コーティングを施す。着色剤または色素を錠剤または錠剤コーティングに、例えば区別するため、または有効成分の用量が異なることを示すために、加えることができる。
【００６４】
経口投与用医薬組成物にはゼラチンからなる硬カプセル剤およびゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤からなる軟カプセル剤が含まれる。硬カプセル剤は顆粒の形態で、例えば増量剤、例えばコーンスターチ、結合剤および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、ならびに所望により安定化剤と混合して含んでいてもよい。軟カプセル剤では、有効成分は好適な液体賦形剤、例えば脂肪油、パラフィン油、または液体ポリエチレングリコールまたはエチレングリコールもしくはプロピレングリコールの脂肪酸エステル中に溶解または懸濁している。これに安定化剤および例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル型の界面活性剤も加えることができる。
【００６５】
直腸投与用医薬組成物は例えば、例えば有効成分と座薬基材の組合せを含む座薬である。好適な座薬基材は例えば、天然または合成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級アルカノールである。
【００６６】
非経腸投与用医薬組成物は、増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および所望により、安定化剤を含む水溶性形態、例えば水溶性の塩の有効成分の水溶液、または水性注射用懸濁液を含んでいてもよい。所望により賦形剤と共にある有効成分は、凍結乾燥製剤製剤の形態であっても良く、非経腸投与の前に適当な溶媒を加えて溶液を調製することができる。例えば非経腸投与に使用されるような溶液は輸液としても使用することができる。注射製剤の製造は、通常滅菌条件下で実施し、例えばそのままアンプルまたはバイアルに充填して、該容器を密封する。
【００６７】
本発明の化合物は有効成分単独で、または腫瘍性疾患に有用な他の薬剤もしくは免疫調節レジメンに有用な他の薬剤との組合せで投与することができる。例えば、本発明の化合物は上記多様な疾患に有効な医薬組成物との組合せで、例えばシクロホスファミド、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、シスプラチン、カルボプラチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、イリノテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、リツキサン、ドキソルビシン、ゲフィチニブまたはイマチニブ；あるいはシクロスポリン、ラパマイシン、アスコマイシンまたはそれらの免疫調節アナログ、例えばシクロスポリンＡ、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、シロリムスまたはエベロリムス、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、シクロホスファミド、アザチオプレン、メトトレキサート、金塩、スルファサラジン、抗マラリア剤、ブレキナー、レフルノマイド、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球レセプターのモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−４またはそれらのリガンド、または他の免疫調節性化合物、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇとの組合せで、本発明に使用することができる。
【００６８】
本発明はまた、ａ）本明細書に記載の、遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物である第１の薬物とｂ）少なくとも１種の共薬薬物を含む医薬組合せ剤、例えばキットを提供する。該キットは投与のための指示書を含んでいてもよい。
【００６９】
本発明の化合物の製造方法
本発明の化合物を製造する一般的な方法は、後記実施例に記載されている。記載の反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基は、これらが最終生成物において反応への望ましくない参加を避けることが望まれるとき、保護する必要があり得る。標準的な技術に従って、常套の保護基を用いることができる。例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照されたい。
【００７０】
本発明の化合物およびその塩はまた、水和物の形態で用いることができ、あるいはそれらの結晶は例えば結晶化に使用した溶媒を含んでいてもよい（溶媒和物として存在する）。塩は通常、例えば好適な塩基性反応剤、例えばアルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素炎またはアルカリ金属ヒドロキシド、例えば炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理して、遊離形の化合物に変換することができる。塩基付加塩形の本発明の化合物は、好適な酸（例えば塩酸など）で処理して対応する遊離酸に変換することができる。遊離形の新規化合物と、例えば新規化合物の精製または単離において中間体として使用することができる塩を含むそれらの塩形の密接な関係の観点から、遊離化合物に関するあらゆる記載は、適切であるとき、対応する塩についても言及していると理解される。
【００７１】
したがって塩形成基を有する本発明の化合物の塩は、自体公知の方法で製造することができる。式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）および（４Ａ）の化合物の酸付加塩は、酸または好適なアニオン交換剤で処理して得ることができる。本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば酸付加塩として、有機または無機酸によって、塩基性窒素原子を有する式（１）、（２Ａ）、（２Ｂ）、（３Ａ）、（３Ｂ）、（４）および（４Ａ）の化合物から形成させることができる。
【００７２】
好適な無機酸は、ハロゲン酸、例えば塩酸、硫酸またはリン酸を含むが、これらに限定されない。好適な有機酸は、カルボン酸、リン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼラン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アミノ酸、例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、桂皮酸、メタン−もしくはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１，５−ナフタレン−ジスルホン酸、２−、３−もしくは４−メチルベンゼンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−もしくはＮ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機プロトン酸、例えばアスコルビン酸を含むが、これらに限定されない。単離または精製のため、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を用いることも可能である。治療的使用には、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみが使用される（医薬製剤の形態で適用可能であるとき）。
【００７３】
非酸化形の本発明の化合物は、還元剤（例えば硫黄、硫黄ジオキシド、トリフェニルホスフィン、ホウ化水素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭素化リン等）で、好適な不活性有機溶媒（例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサン等）中、０〜８０℃で処理して、本発明の化合物のＮ−オキシドから製造することができる。
【００７４】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法によって製造することができる（さらに詳しくは、例えばSaulnier et al., (1994)、Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照されたい）。例えば、適切なプロドラッグは、本発明の化合物を好適なカルバミル化剤（例えば１，１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカルボネート等）と反応させて製造することができる。
【００７５】
本発明の化合物の保護誘導体は、当業者に既知の方法によって製造することができる。保護基の形成とその除去に適用される技術の詳細な説明は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。
【００７６】
本化合物のラセミ混合物を光学活性分割剤と反応させ、ジアステレオ異性化合物のペアを形成し、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、その個々の立体異性体として本発明の化合物を製造できる。エナンチオマーの分割は、本発明の化合物の共有結合性ジアステレオマー誘導体を使用して行ってもよいが、解離可能な複合体が好ましい（例えば、結晶性ジアステレオマー塩）。ジアステレオマーは異なる物理的性質（例えば、融点、沸点、溶解性、反応性等）を有し、これらの差を利用して容易に分割できる。ジアステレオマーは、分画結晶化、クロマトグラフィーにより、または溶解度の差に基づく分離／分割技術により分離できる。次いで、ラセミ化をもたらさないであろう任意の実際的手段により、光学的に純粋なエナンチオマーを分割剤と共に回収する。化合物の立体異性体のそのラセミ混合物からの分割に適用可能な技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【００７７】
要約すると、本発明の化合物は、実施例に記載の方法によって：
（ａ）所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換すること；
（ｂ）所望により塩形の本発明の化合物を非塩形態に変換すること；
（ｃ）所望により酸化されていない形態の本発明の化合物を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換すること；
（ｄ）所望によりＮ−オキシド形態の本発明の化合物をその酸化されていない形態に変換すること；
（ｅ）所望により本発明の化合物の個々の異性体を異性体混合物から分離すること；
（ｆ）所望により誘導体化されていない本発明の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換すること；および
（ｇ）所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を非誘導体化形態に変換すること
によって製造することができる。
【００７８】
出発物質の製造が特に記載されていない場合、その化合物は既知であるか、または、当分野で既知の方法に準じて、または以下の実施例に開示のとおり、製造し得る。当業者は、上記の変換は本発明の化合物の製造の単なる代表例であって、他の既知の方法を同様に使用してよいことを認識しよう。本発明はさらに、本発明の化合物の製造を説明する次の実施例によって例示されるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００７９】
中間体１
２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン
【化１１】
2010538004.tif 000013
５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（３．００ｇ、３０．９ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５．６７ｇ、３０．９ｍｍｏｌ、１当量）とＮａ２ＣＯ３（３．６０ｇ、３４．０ｍｍｏｌ、１．１当量）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）混合物を４０℃で２４時間加熱する。真空下で溶媒を除去する。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）で分配する。ＥｔＯＡｃ層を水（３ｘ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１ｘ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。得られたＥｔＯＡｃ溶液を真空下で濃縮して、生成物２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミンを得る；ESMS m/z 244.0 (M + H+)。
【００８０】
中間体２
２−クロロ−５−メチル−Ｎ−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン
【化１２】
2010538004.tif 000014
５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（３．００ｇ、３０．９ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロ−５−メチルピリミジン（５．０３ｇ、３０．９ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａ２ＣＯ３（３．６０ｇ、３４．０ｍｍｏｌ、１．１当量）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）混合物を４０℃で２４時間加熱する。真空下で溶媒を除去する。得られた残渣をＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）で分配する。ＥｔＯＡｃ層を水（３ｘ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１ｘ）、で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮する。得られた粗生成物をＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）中で超音波処理し、生じた沈殿を濾過して回収する。この粉末をさらにＥｔ２Ｏで洗浄して、生成物２−クロロ−５−メチル−Ｎ−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミンを得る；ESMS m/z 224.1 (M + H+)。
【００８１】
中間体３
２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ベンズアミド
【化１３】
2010538004.tif 000015
２−アミノベンズアミド（６８１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（２．７５ｇ、１５ｍｍｏｌ、３当量）および濃ＨＣｌ（ａｑ）（１．７２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、４当量）の２−プロパノール（１００ｍＬ）混合物を６０℃で１２時間加熱する。真空下で２−プロパノール溶媒を除去する。１ＮのＮａＯＨ（ａｑ）を加えて得られた残渣をｐＨ＝約７に中和し、次いでＥｔＯＡｃと水で分配する。ＥｔＯＡｃと水で分配すると、顕著な量の沈殿が生じる。この沈殿を真空濾過によって回収し、少量のＥｔＯＡｃおよび水で洗浄して、生成物２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ベンズアミドを得る；ESMS m/z 283.0 (M + H+)。
【００８２】
中間体４
３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ピリジン−２（１Ｈ）−オン
【化１４】
2010538004.tif 000016
ＭｅＯＨ（６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（３ｍＬ）の混合物中の３−アミノピリジン−２（１Ｈ）−オン（９９ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（１６５ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＨＣＯ３（７６ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を室温で２４時間撹拌する。生じた沈殿を真空濾過によって回収し、少量のＭｅＯＨおよび水で洗浄して、生成物３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ピリジン−２（１Ｈ）−オンを得る；ESMS m/z 257.0 (M + H+)。
【００８３】
中間体５
（±）−ｃｉｓ−２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）シクロヘキサンカルボキサミド
【化１５】
2010538004.tif 000017
ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）の混合物中の（±）−ｃｉｓ−２−アミノシクロヘキサンカルボキサミド（２８ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（３７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＨＣＯ３（１７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を室温で１２時間撹拌する。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水（２ｘ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、生成物（±）−ｃｉｓ−２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）シクロヘキサンカルボキサミドを得る；ESMS m/z 289.1 (M + H+)。
【００８４】
中間体６
２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン
【化１６】
2010538004.tif 000018
３−アミノ−５−フェニルピラゾール（１０３ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（７４．５μＬ、０．６５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（６８．９ｍｇ、０．６５）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を、４０℃で一夜加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミンを得る；ESMS m/z 306.0 (M + H+)。
【００８５】
中間体７
メチル４−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレート
【化１７】
2010538004.tif 000019
４−アミノ−１−メチル−ピロール−２−カルボン酸メチルエステルヒドロクロライド（９５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（１０６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を４０℃で一夜加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、メチル４−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシレートを得る；ESMS m/z 301.0 (M + H+)。
【００８６】
中間体８
２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）−４−メチルチオフェン−３−カルボキサミド
【化１８】
2010538004.tif 000020
２−アミノ−４−メチルチオフェン−３−カルボキサミド（７８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を４０℃で一夜加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）−４−メチルチオフェン−３−カルボキサミドを得る；ESMS m/z 303.0 (M + H+)。
【００８７】
中間体９
Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）ピリミジン−２−アミン
【化１９】
2010538004.tif 000021
ピリミジン−２−アミン（４８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６９ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の３ｍＬの１，４−ジオキサン混合物を１１０℃で一夜加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）ピリミジン−２−アミンを得る；ESMS m/z 242.0 (M + H+)。
【００８８】
中間体１０
２，５−ジクロロ−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン
【化２０】
2010538004.tif 000022
１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（４８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を４０℃で一夜加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、２，５−ジクロロ−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミンを得る；ESMS m/z 244.0 (M + H+)。
【００８９】
中間体１１
エチル３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【化２１】
2010538004.tif 000023
エチル３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（８０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を４０℃で一夜加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、エチル３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレートを得る；ESMS m/z 302.0 (M + H+)。
【００９０】
中間体１２
Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）イソキサゾール−３−アミン
【化２２】
2010538004.tif 000024
イソキサゾール−３−アミン（３６μＬ、０．５０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を６０℃で４８時間加熱する。沈殿を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）イソキサゾール−３−アミンを得る；ESMS m/z 231.0 (M + H+)。
【００９１】
中間体１３
２，５−ジクロロ−Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−２−イル）ピリミジン−４−アミン
【化２３】
2010538004.tif 000025
４，６−ジメチルピリジン−２−アミン（６１ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（５７μＬ、０．５ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（１６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＤＭＡ混合物を９０℃で一夜加熱する。該混合物を真空下で濃縮し、得られた粗生成物をＥｔＯＡｃと塩水で分配する。有機抽出物を回収し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮して、２，５−ジクロロ−Ｎ−（４，６−ジメチルピリジン−２−イル）ピリミジン−４−アミンを得る；ESMS m/z 269.0 (M + H+)。
【００９２】
中間体１４
Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−５−メチルイソキサゾール−３−アミン
【化２４】
2010538004.tif 000026
５−メチルイソキサゾール−３−アミン（９８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（３４４μＬ、３．０ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（１０６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の３ｍＬのＥｔＯＨ混合物を６０℃で一夜加熱する。反応混合物を濃縮し、次いでＥｔＯＡｃと塩水で分配する。有機抽出物を回収し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：１／９）で精製して、Ｎ−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−５−メチルイソキサゾール−３−アミンを得る；ESMS m/z 245.0 (M + H+)。
【００９３】
中間体１５
２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン
【化２５】
2010538004.tif 000027
５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（２４６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（３６７ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａ２ＣＯ３（２３３ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ、１．１当量）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）混合物を４０℃で１６時間加熱する。粗反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水（３ｘ）、飽和水溶液ＮａＣｌ（１ｘ）で連続して洗浄する。得られたＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、次いで真空下で濃縮して、２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミンを得る；ESMS m/z 270.0 (M + H+)。
【００９４】
中間体１６
３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）アゼパン−２−オン
【化２６】
2010538004.tif 000028
ＭｅＯＨ（１２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（６ｍＬ）の混合物中の（±）−α−アミノ−ε−カプロラクタム（２５６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、２，４，５−トリクロロピリミジン（３６６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＨＣＯ３（１６８ｍｇ、２ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を室温で１５時間撹拌する。生じた沈殿を真空濾過によって回収し、少量のＭｅＯＨおよび水で洗浄して、生成物３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）アゼパン−２−オンを得る；ESMS m/z 275.0 (M + H+)。
【００９５】
中間体１７
４’−アミノ−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
【化２７】
2010538004.tif 000029
４−ブロモ−２−フルオロ−５−メチルアニリン（２０３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、４−（メチルカルバモイル）フェニルボロン酸（１７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（８２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（９１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＫ３ＰＯ４（４２４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の５．０ｍＬのｎ−ブタノール混合物を脱気し、１３０℃で１時間加熱する。反応混合物を真空下で濃縮する。粗生成物混合物をＥｔＯＡｃと塩水で分配し、有機抽出物を回収し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１／４）で精製して、４’−アミノ−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを得る；ESMS m/z 259.1 (M + H+)。
【００９６】
中間体１８
４’−アミノ−２’−イソプロピル−Ｎ，５’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
【化２８】
2010538004.tif 000030
工程１：２−イソプロピル−５−メチルフェニルトリフルオロメタンスルホネート
２−イソプロピル−５−メチルフェノール（１ｇ、６．６７ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、撹拌下でＮ−フェニルビス−トリフルオロメタンスルホンアミド（２．６２ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を加える。該混合物を１２時間撹拌し、濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中５％の酢酸エチル）で精製して、２−イソプロピル−５−メチルフェニルトリフルオロメタンスルホネートを無色油状物として得る。
【００９７】
工程２：２−イソプロピル−５−メチル−４−ニトロフェニルトリフルオロメタンスルホネート
２−イソプロピル−５−メチルフェニルトリフルオロメタンスルホネート（工程１、１．３ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の酢酸（１０ｍＬ）溶液に、ゆっくりと濃硫酸および濃硝酸の混合溶液（２ｍＬ／０．５ｍＬ）を０℃で加える。室温で２時間撹拌した後、混合物を氷水に注ぐ。混合物を酢酸エチル（３ｘ２０ｍＬ）で抽出する。合併した有機相を炭酸ナトリウム水溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを乾燥させた。濃縮後、粗２−イソプロピル−５−メチル−４−ニトロフェニルトリフルオロメタンスルホネートを、精製することなく次の工程に直接使用する。
【００９８】
工程３：２’−イソプロピル−Ｎ，５’−ジメチル−４’−ニトロビフェニル−４−カルボキサミド
マイクロウェーブチューブ中で粗２−イソプロピル−５−メチル−４−ニトロフェニルトリフルオロメタンスルホネート（工程２、２００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、４−（メチルカルバモイル）フェニルボロン酸（１４２ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）およびフッ化セシウム（１８５ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍＬ）混合物に、パラジウムビス（トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）（１５ｍｇ、１０％ｍｍｏｌ）を加える。該チューブを密封する。混合物をＮ２で３分間パージし、次いで１２０℃で１０分間、マイクロウェーブ照射下で加熱する。混合物を冷却し、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中６０％酢酸エチル）で精製して、白色固体を２’−イソプロピル−Ｎ，５’−ジメチル−４’−ニトロビフェニル−４−カルボキサミドとして得る。ESMS m/z 313..2 (M + H+)。
【００９９】
工程４：４’−アミノ−２’−イソプロピル−Ｎ，５’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
２’−イソプロピル−Ｎ，５’−ジメチル−４’−ニトロビフェニル−４−カルボキサミドをメタノール（２０ｍＬ）に溶解させる。この溶液にＰｄ／Ｃ（１０％）を加える。反応混合物を脱気し、Ｈ２で数回パージし、次いでＨ２（１ａｔｍ）下で一夜撹拌する。混合物を濾過し、濃縮して表題化合物４’−アミノ−２’−イソプロピル−Ｎ，５’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを白色固体として得る。1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.87 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.35 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.31 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.95 (d, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.15 (d, 6H, J = 6.8 Hz); ESMS m/z 283.2 (M + H+)。
【０１００】
中間体１９
４’−アミノ−５’−エチル−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
【化２９】
2010538004.tif 000031
工程１：１−ブロモ−５−クロロ−２−メチル−４−ニトロベンゼン
２−ブロモ−４−クロロ−１−メチルベンゼンを用いて上記方法に従って（中間体１８、工程２）、１−ブロモ−５−クロロ−２−メチル−４−ニトロベンゼンを黄色固体として得る。この物質をさらに精製することなく次の工程に使用する。
【０１０１】
工程２：５’−クロロ−Ｎ，２’−ジメチル−４’−ニトロビフェニル−４−カルボキサミド
工程１の粗生成物（４００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、４−（メチルカルバモイル）フェニルボロン酸（２８６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（３４０ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）のジメトキシルエタン／水（１２／４ｍＬ）混合物に、パラジウムテトラキス（トリフェニルホスフィン）（９３ｍｇ、５％ｍｍｏｌ）を加える。混合物をＮ２で３分間パージし、次いで密封し、９０℃で３時間加熱する。混合物を冷却し、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中３０％の酢酸エチル）で精製して、５’−クロロ−Ｎ，２’−ジメチル−４’−ニトロビフェニル−４−カルボキサミドを黄色固体として得る。ESMS m/z 305.1 (M + H+)。
【０１０２】
工程３および４：４’−アミノ−５’−エチル−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
５’−クロロ−Ｎ，２’−ジメチル−４’−ニトロビフェニル−４−カルボキサミド（工程２、１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、ビニルボロン酸ジブチルエステル（９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２４５ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（８／２ｍＬ）混合物に、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（１２ｍｇ、５％ｍｍｏｌ）を加える。反応チューブを密封し、混合物をＮ２で３分間パージし、次いで９０℃でＮ２下で一夜加熱する。反応物を室温に冷却し、飽和塩化アンモニア水溶液に注ぐ。粗反応混合物を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合併し、塩水で洗浄し、濃縮する。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中３０％の酢酸エチル）で精製して、Ｎ，２’−ジメチル−４’−ニトロ−５’−ビニルビフェニル−４−カルボキサミドを黄色固体として得る。得られた固体をメタノール（２０ｍＬ）に溶解させる。この溶液にＰｄ／Ｃ（１０％）を加える。反応混合物を脱気し、Ｈ２で数回パージし、水素雰囲気下で一夜撹拌する。混合物を濾過し、濃縮して４’−アミノ−５’−エチル−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを黄色固体として得る。ESMS m/z 269.2 (M + H+)。
【０１０３】
中間体２０
４−（４−アミノ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド
【化３０】
2010538004.tif 000032
４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−アミン
５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−アミン（１ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．９ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、アセチルクロライド（５８７ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を室温で２時間撹拌する。次いで、混合物を濃縮し、酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液で分配する。有機層を分離し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。濃縮後、得られたＮ−（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド（２００ｍｇ）を酢酸（３０ｍＬ）に溶解させる。この溶液に臭素（１７０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を５０℃で一夜加熱する。亜硫酸ナトリウム水溶液を加えて反応物をクエンチする。混合物を酢酸エチル（３ｘ２０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合併し、重炭酸ナトリウム水溶液、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。濃縮した後、粗Ｎ−（４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミドを褐色固体として得る。得られた固体をメタノール（５ｍＬ）および濃ＨＣｌ（１５ｍＬ）に溶解させる。混合物を９５℃で一夜環流する。室温に冷却した後、混合物を氷水に注ぎ、濃ＮａＯＨ水溶液でｐＨ＝１２に塩基性化する。次いで、混合物を酢酸エチル（３ｘ２０ｍＬ）で抽出する。合併した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮する。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１５％の酢酸エチル）で精製して、４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−アミンをベージュ色固体として得る。ESMS m/z 226 (M + H+)。
【０１０４】
工程３の生成物を用いて上記方法に従って（中間体１７）、４−（４−アミノ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）−Ｎ−メチルベンズアミドを白色固体として得る、ESMS m/z 281.2 (M + H+)。
【０１０５】
中間体２１
メチル４−アミノ−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレート
【化３１】
2010538004.tif 000033
工程１：メチル５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）−４−ニトロビフェニル−２−カルボキシレート
窒素下で、メチル２−クロロ−４−メトキシ−５−ニトロベンゾエート（２９２ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、４−（メチルカルバモイル）フェニルボロン酸（３１９ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（４１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（３７８ｍｇ、３．５７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）および水（２ｍＬ）混合物を、４０℃で一夜加熱する。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃと塩水で分配する。有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１／３）で精製して、メチル５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）−４−ニトロビフェニル−２−カルボキシレートを得る；ESMS m/z 345.1 (M + H+)。
【０１０６】
工程２：メチル４−アミノ−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレート
メチル５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）−４−ニトロビフェニル−２−カルボキシレート（工程１、２７５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（活性炭素上１０重量％、２７ｍｇ）およびＭｅＯＨ（２０ｍＬ）の混合物を脱気して空気を除去し、次いで反応物を水素バルーン下で、出発物質が消費されるまで撹拌する。Ｐｄ／Ｃを濾取し、濾液を真空下で濃縮して、メチル４−アミノ−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレートを得る；ESMS m/z 315.1 (M + H+)。
【０１０７】
中間体２２
４’−アミノ−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
【化３２】
2010538004.tif 000034
４−クロロ−２−メトキシ−５−メチルアニリン（２．０ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）、４−（メチルカルバモイル）フェニルボロン酸（２．０８ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（１．２０ｇ、２．９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１．１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＫ３ＰＯ４（７．４ｇ、３４．９ｍｍｏｌ）の８０ｍＬのｎ−ブタノール混合物を脱気し、１３０℃で一夜加熱する。反応混合物をセライトパッドで濾過し、真空下で濃縮する。粗生成物混合物をＥｔＯＡｃおよび塩水で分配し、回収した有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１／４）で精製して、４’−アミノ−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを得る；ESMS m/z 271.1 (M + H+)。
【０１０８】
実施例１
４’−（５−クロロ−４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（１）
【化３３】
2010538004.tif 000035
２，５−ジクロロ−Ｎ−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−４−アミン（中間体１、１４２ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と４’−アミノ−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（中間体１７、１５０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の２−プロパノール混合物を、水性濃ＨＣｌ（６滴）で処理する。混合物を密封し、マイクロウェーブ中、１４０℃で２０分間加熱する。混合物を濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣで残渣を精製して、表題化合物４’−（５−クロロ−４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを白色固体として得る。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (br, 1H), 9.23 (br,  2H), 8.50 (m, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.90 (d, 2H), 7.77 (m, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.14 (d, 1H), 6.19 (s, 1H), 2.82 (d, 3H), 2,19 (s, 3H), 2.15 (s, 3H);  ESMS m/z 466.1 (M + H+)。
【０１０９】
実施例２
５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチル−４’−（４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミノ）ビフェニル−４−カルボキサミド（２）
【化３４】
2010538004.tif 000036
工程１：４’−（４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
２，４−ジクロロ−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の０．５ｍＬのＤＣＥおよび０．５ｍＬのｔ−ＢｕＯＨ混合物に塩化亜鉛（０．４６ｍＬのエーテル中１．０Ｍ、０．４６ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌する。４’−アミノ−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（１１１ｍｇ、０．４１４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４６ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を連続的に加え、反応物を室温で一夜撹拌する。沈殿を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させて、４’−（４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを白色固体として得る；ESMS m/z 451.1 (M + H+)。
【０１１０】
工程２：５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチル−４’−（４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミノ）ビフェニル−４−カルボキサミド
４’−（４−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（工程１、２０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）、５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（４．３ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）、キサントホス（５．０ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）、パラジウムアセテート（ＩＩ）（１．０ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２８．６ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の２．０ｍＬのＴＨＦ混合物をマイクロウェーブリアクター中、１５０℃で２５分間加熱する。反応混合物を濾過し、濾液を真空下で濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチル−４’−（４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−２−イルアミノ）ビフェニル−４−カルボキサミドを得る；ESMS m/z 512.2 (M + H+)。
【０１１１】
実施例３
（±）−４’−（５−クロロ−４−（２−オキソアゼパン−３−イルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（４２−４４）
【化３５】
2010538004.tif 000037
３−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）アゼパン−２−オン（中間体１６、２８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、４’−アミノ−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（中間体１７、３１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＴＦＡ（３７μＬ、５７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、５当量）の２−プロパノール（３ｍＬ）混合物を撹拌し、密封チューブ内、１００℃で４８時間撹拌する。得られた溶液を濃縮し、次いで分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、（±）−４’−（５−クロロ−４−（２−オキソアゼパン−３−イルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを得る；ESMS m/z 497.2 (M + H+)。
【０１１２】
（±）−４’−（５−クロロ−４−（２−オキソアゼパン−３−イルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−フルオロ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドをキラルＨＰＬＣでその個々のエナンチオマーに精製する。キラルＨＰＬＣ条件は：２０ｘ２５０ｍｍ  ChiralPak ADカラム、８０／１０／１０：ヘキサン／ＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ、室温、流速２０ｍＬ／分、モニター３１０ｎＭ、実行時間３０分を用いる。短い保持時間のエナンチオマーに対する長いものの絶対立体配置の同定は、光学的に純粋なα−アミノ−ε−カプロラクタムを出発物質として用いて中間体１６と実施例３の合成シーケンスを反復し、キラルＨＰＬＣにラセミ実施例３と光学的に純粋な最終生成物を共に注入して、実施する。（Ｓ）エナンチオマーはこれらの条件下で保持時間〜１９．２分で、長い保持時間のエナンチオマーである。（Ｒ）エナンチオマーはこれらの条件下で保持時間〜１２．７１分で、短い保持時間のエナンチオマーである。長および短保持時間ピークの濃度は、それぞれ（Ｓ）および（Ｒ）エナンチオマーを提供する。
【０１１３】
適切な出発物質を用いて上記実施例に記載の方法を反復して、次の表１に示す化合物を得る。
表１
【表１】
2010538004.tif 000038
【表２】
2010538004.tif 000039
【表３】
2010538004.tif 000040
【表４】
2010538004.tif 000041
【表５】
2010538004.tif 000042
【表６】
2010538004.tif 000043
【表７】
2010538004.tif 000044
【表８】
2010538004.tif 000045
【表９】
2010538004.tif 000046
【表１０】
2010538004.tif 000047
【表１１】
2010538004.tif 000048
【表１２】
2010538004.tif 000049
【表１３】
2010538004.tif 000050
【表１４】
2010538004.tif 000051
【表１５】
2010538004.tif 000052
【表１６】
2010538004.tif 000053
【表１７】
2010538004.tif 000054
【表１８】
2010538004.tif 000055
【表１９】
2010538004.tif 000056
【０１１４】
実施例４
４’−（５−クロロ−４−（２−（シクロプロピルカルバモイル）フェニルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（７２）
【化３６】
2010538004.tif 000057
工程１：メチル２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ベンゾエート
２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）安息香酸（３００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０／５ｍＬ）溶液にトリメチルシリルジアゾメタンのエチルエーテル溶液（２．０Ｍ、２ｍＬ）を加える。混合物を３０分間撹拌し、濃縮してメチル２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ベンゾエートを黄色固体として得る。
【０１１５】
工程２：４’−（５−クロロ−４−（２−（シクロプロピルカルバモイル）フェニルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド
メチル２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ベンゾエート（工程１、５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と４’−アミノ−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミド（中間体３１、４６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の２−プロパノール混合物を濃ＨＣｌ水溶液（４滴）で処理する。混合物を密封し、マイクロウェーブ中、１２０℃で２０分間処理する。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルと炭酸ナトリウム水溶液で分配する。有機層を濃縮して粗メチル２−（５−クロロ−２−（５−メトキシ−２−メチル−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−４−イルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）ベンゾエートを褐色固体として得る。得られた粗生成物をシクロプロピルアミン原液（０．５ｍＬ）で処理する。混合物を密封チューブ中、１１０℃で一夜加熱する。混合物を濃縮し、精製のために残渣をＲＰ−ＨＰＬＣにアプライして、４’−（５−クロロ−４−（２−（シクロプロピルカルバモイル）フェニルアミノ）ピリミジン−２−イルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ，２’−ジメチルビフェニル−４−カルボキサミドを白色固体として得る。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.75 (m, 1H), 8.49 (m, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.91 (d, 2h0, 7.73-7.71 (m, 1H), 7.60 (m, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.30-7.26 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.96 (s. 3H), 2.90-2.86 (m,1H), 2.15 (s, 3H), 0.86-0.83 (m, 2H), 0.67-0.65 (m, 2H);  ESMS m/z 557.2 (M + H+).
【０１１６】
実施例５
４’−（３−（２−カルバモイルフェニルアミノ）−４−クロロフェニルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ−メチル−２’−（ピロリジン−１−カルボニル）ビフェニル−４−カルボキサミド（７３）
【化３７】
2010538004.tif 000058
工程１：メチル４−（３−（２−カルバモイルフェニルアミノ）−４−クロロフェニルアミノ）−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレート
メチル４−アミノ−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレート（中間体２７、１１７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イルアミノ）ベンズアミド（中間体３、３１６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の３ｍＬのｉ−ＰｒＯＨ溶液に、水性濃ＨＣｌを５滴加える。反応混合物をマイクロウェーブリアクター中、１５０℃で３０分間加熱し、次いで濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：１／９）で精製して、メチル４−（３−（２−カルバモイルフェニルアミノ）−４−クロロフェニルアミノ）−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレートを得る； ESMS m/z 559.2 (M + H+)。
工程２：４’−（３−（２−カルバモイルフェニルアミノ）−４−クロロフェニルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ−メチル−２’−（ピロリジン−１−カルボニル）ビフェニル−４−カルボキサミド
【０１１７】
メチル４−（３−（２−カルバモイルフェニルアミノ）−４−クロロフェニルアミノ）−５−メトキシ−４’−（メチルカルバモイル）ビフェニル−２−カルボキシレート（工程１、２２０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）と１ｍＬのピロリジンの混合物を１００℃で一夜加熱する。粗生成物を真空下で濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣにアプライして、４’−（３−（２−カルバモイルフェニルアミノ）−４−クロロフェニルアミノ）−５’−メトキシ−Ｎ−メチル−２’−（ピロリジン−１−カルボニル）ビフェニル−４−カルボキサミドを得る；ESMS m/z 598.2 (M + H+)。
【０１１８】
適切な出発物質を用いて上記実施例に記載の方法を反復して、次の表２に示す化合物を得る。
表２
【表２０】
2010538004.tif 000059
【表２１】
2010538004.tif 000060
【表２２】
2010538004.tif 000061
【表２３】
2010538004.tif 000062
【表２４】
2010538004.tif 000063
【表２５】
2010538004.tif 000064
【０１１９】
アッセイ
薬物のＩＣ５０を用量依存曲線を構成し、アゴニスト活性の反転に対する多様な濃度のアンタゴニストの効果を試験して、測定することができる。ＩＣ５０値は、該アゴニストの最大生物学的応答の半分を阻害するために必要な濃度を決定して、所定のアンタゴニストについて計算することができる。ＩＣ５０値を計算するため、一連の用量依存データ（例えば、薬物濃度ｘ１、ｘ２、・・・ｘｎと増殖阻害ｙ１、ｙ２、・・・ｙｎ、ｙの値は０〜１の範囲である）を作成する。ＩＣ５０値は次の式：
ｙ＝Ｄ＋（（Ａ−Ｄ）／（１＋１０（ｘ−ｌｏｇ（ＩＣ５０）Ｂ）
（式中、Ａは最低薬物濃度と対照の増殖阻害の比であり；Ｂはシグモイド曲線の傾きであり；Ｄは最高薬物濃度と対照の増殖阻害の比である）
を用いたコンピューター利用システムによって求めることができる。
【０１２０】
ＩＣ５０値は阻害剤の非存在下での対照を用いて得られるものよりも５０％低い増殖阻害が得られる試験化合物の濃度として与えられる。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物は、例えば本明細書に記載のインビトロ試験によって示されるように、有用な薬理学的特性を示し得る。一般に、本発明の化合物は、１ｎＭ〜１０μＭのＩＣ５０値を有する。いくつかの例において、本発明の化合物は０．０１μＭ〜５μＭのＩＣ５０値を有する。他の例において、本発明の化合物は、０．０１μＭ〜１μＭ、より具体的には１ｎＭ〜１μＭのＩＣ５０値を有する。さらに別の例において、本発明の化合物は１ｎＭ未満または１０μＭ以上のＩＣ５０値を有する。本発明の化合物は、１０μＭで、ＩＧＦ−１Ｒに対して５０％以上の阻害率を示し、また他の態様において約７０％以上の阻害率を示し得る。
【０１２１】
Ｂａ／Ｆ３細胞系群および反応剤
Ｂａ／Ｆ３は、マウスＩＬ−３依存性プロ−Ｂリンパ腫細胞系である。親Ｂａ／Ｆ３細胞を用いて、ＴＥＬのアミノ末端部分（アミノ酸１〜３７５）またはＢＣＲとの融合によって活性化した個々のチロシンキナーゼで安定的に形質導入して、増殖および生存をＩＬ−３非依存性にした亜系群を作製する。Ｔｅｌ−チロシンキナーゼ（ＴＫ）融合によって形質転換したＢａ／Ｆ３細胞系を作製するため、それぞれのＴＥＬ−融合キナーゼを有するレトロウイルスに親Ｂａ／Ｆ３細胞を感染させて、プロマイシン選択およびＩＬ−３離脱に付して、ＩＬ−３非依存性形質転換Ｂａ／Ｆ３細胞を得る。
【０１２２】
形質転換されたＢａ／Ｆ３細胞をそれぞれ、１０％のＦＢＳ（Hyclone Cat #SV30014.03, Logan, UT）、４．５ｇ／Ｌのグルコース（Sigma #G5400, St.Louis, MO）、１．５ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウム（Biowhittaker #17-613E, Walkersville, MD）およびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Gibco #10378-016, Carlsbad, CA）を補ったＲＰＭＩ−１６４０培地（Gibco Cat #11875093, Carlsbad, CA）で培養する。細胞を週２回分離する。
【０１２３】
Ｂａ／Ｆ３細胞生存能阻害アッセイ
多様なＴｅｌ−ＴＫ形質転換Ｂａ／Ｆ３系に対する試験化合物の能力を次のとおりに測定する。指数関数的に増殖するＢａＦ３  Ｔｅｌ−ＴＫ細胞を新鮮な培地で７５，０００細胞／ｍＬに希釈し、μＦｉｌｌ液体分注機（BioTek, Winooski, VT, USA）を用いて３８４ウェルプレート（３７５０細胞／ウェル）に５０μＬ／ウェルで播種する。各細胞系について２連でプレートを作製する。試験化合物および対照化合物をＤＭＳＯで連続希釈し、ポリプロピレン３８４ウェルプレートにアレイする。ピン−トランスファーデバイスを用いてアッセイプレートに５０ｎＬの化合物を移し、プレートを３７℃（５％のＣＯ２）で４８時間インキュベートする。２５μＬのBritelite（Perkin Elmer）を加え、Analyst GT（Molecular Devices）を用いて蛍光を定量する。特注のカーブフィッティングソフトウェアを用いて、細胞生存能のロジスティックフィットを阻害剤濃度の対数の関数として作製する。ＤＭＳＯ対照の５０％に細胞生存能を低下させるために必要な化合物の濃度としてＩＣ５０を内挿する。ＩＬ−３（最終濃度１ｎｇ／ｍｌ）の存在下で維持し、培養した親Ｂａ／Ｆ３細胞を、ＩＬ−３（最終濃度１ｎｇ／ｍｌ）を含む新鮮な培地で上記と同じ方法で、７５，０００細胞／ｍＬに希釈する。
【０１２４】
酵素ＨＴＲＦアッセイ
ＩＧＦ−１ＲおよびＩＮＳＲ（インスリン受容体）をUpstateから購入する。次の反応剤を社内で調製する；１０×キナーゼバッファー（ＫＢ）（２００ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．０）、１００ｍＭのＭｇＣｌ２、３０ｍＭのＭｎＣｌ２、５０ｎＭのＮａＶＯ４）、１０ｍＭのＡＴＰ、１００ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、０．５ＭのＥＤＴＡ、４ＭのＫＦ。セットアップアッセイのためにPerkin-Elmer社のProxiplate３８４を用いる。基質（ビオチン−ポリ−ＧＴ（６１ＧＴ０ＢＬＢ）、Ｍａｂ  ＰＴ６６−Ｋ、（６１Ｔ６６ＫＬＢ）、ストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔ（６１１ＳＡＸＬＢ））を含むＨＴＲＦ反応剤は、全てCIS-US, Incから購入する。
【０１２５】
ＡＴＰ（最終濃度３μＭ）とビオチニル化ポリ−ＧＴ（最終濃度１０ｎｇ／μｌ）を１×ＫＢに加えて基質／ＡＴＰ混合物を調製し、μＦｉｌｌ（Bio-TEK）を用いてProxiplate-３８４に５μｌ／ウェルで分注する。５０ｎＬピンヘッドを用いて連続希釈化合物（ＤＭＳＯ中）をプレートに移す。μＦｉｌｌ（Bio-TEK）を用いて５μＬの調製した酵素混合物（酵素（最終濃度５ｎｇ／μｌ）を１×ＫＢ中のＢＳＡおよびＤＴＴと混合する）を加えてキナーゼ反応を開始させる。アッセイプレートを室温で２時間インキュベートする。ＫＦ（最終濃度１２５ｍＭ）、ＥＤＴＡ（最終濃度５０ｍＭ）およびＢＳＡ（最終濃度１００μｇ／ｍｌ）を含む０．５×ＫＢ溶液にＭａｂ  ＰＴ６６−Ｋとストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔの両方を加えて検出混合物を調製する。反応終了時に１０μＬの検出混合物を加え、３０分間室温でインキュベートした後、測定する。Ａｎａｌｙｓｔ−ＧＴ（molecular Devices）を用いてＨＴＲＦシグナルを検出する。
【０１２６】
がん細胞増殖阻害アッセイ
がん細胞系をルシフェラーゼ化するため、発現がＬＴＲによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子とプロマイシン耐性遺伝子の両方を担持する両性レトロウイルスで各細胞系を形質導入する。簡潔には、Ｆｕｇｅｎｅ６（Roche）を用いて、製造業者の指示に従って、レトロウイルスベクターｐＭＳＣＶ−Ｐｕｒｏ−ＬｕｃをＰｈｏｅｎｉｘ細胞系にトランスフェクトする。トランスフェクションの２日後、ウイルスを含む上清を回収し、０．２μｍのフィルターで濾過する。回収したウイルスはすぐに使用するか、あるいは−８０℃で保存する。感染のため、培養したがん細胞を回収し、６ウェル組織培養プレートに播種する（１ｍｌの培地中５×１０５細胞／ウェル）。各ウェルについて、３ｍｌのウイルス上清を４００μｌのＦＢＳ、４０μｌの１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）および４μｌのポリブレン（１０μｇ／ｍｌ、Specialty培地）と共に加える。該プレートを２５００ｒｐｍで９０分間遠心分離してスピン感染させて、一夜感染させるためにインキュベーターに移す。翌日、新鮮な培地を含むＴ−７５フラスコに感染した細胞系を移し、１日間インキュベートする。感染２日後、プロマイシンを最終濃度１μｇ／ｍｌで加えて、選択を開始する。１〜２週間以内にプロマイシン耐性細胞系が確立され、次いで少なくとも２回株を分け、ルシフェラーゼ化株として保存する。
【０１２７】
各細胞系はトリプシン処理によって対数増殖期に回収し、それぞれの培地で適切な密度に希釈した後、播種する。μＦｉｌｌ（BioTeK）を用いて細胞を５０μｌ／ウェルで白色壁付透明底プレート（Greiner）に播種する。次いで細胞を３７℃のインキュベーターに入れ、５％のＣＯ２を一夜供給する。５０ｎＬ／ウェルPintool技術を用いてPlatemate（マトリックス）を介して化合物を移す。次いでアッセイプレートをインキュベーターに３日間戻す。化合物移動後３日で、アッセイプレートにBRITELITE（登録商標）（Perkin Elmer、製造業者の示唆に従って希釈）を加えて、Analyst GT（Molecular Devices）またはEnvision（Perkin Elmer）で読み取る。生データはＲＬＵで作製される。
【０１２８】
本明細書に記載の実施例および態様は説明のみを目的としており、その範囲内の多様な修飾または変形が当業者に示唆されており、本明細書および特許請求の範囲の精神および範囲に含まれることが理解される。本明細書において言及した全ての公報、特許および特許出願は、あらゆる目的のために参照により本明細書に包含する。
【国際調査報告】
2010538004.tif 000084
2010538004.tif 000085
2010538004.tif 000086
2010538004.tif 000087
2010538004.tif 000088