(57)【要約】  ＣｐＧ免疫賦活性モチーフ、ならびに二重鎖および高次構造を含めた二次構造をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで形成することができる第２のモチーフを含有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドを開示する。これらには、５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）を含む塩基配列を有する、核酸、または薬学的に許容できるその塩が含まれ、ここで、それぞれのＣはメチル化されておらず、３’は核酸の３’末端を指す。オリゴヌクレオチドは、Ｂ細胞およびＮＫ細胞を活性化し、Ｉ型インターフェロンおよびインターフェロン−γの発現を誘発する。オリゴヌクレオチドは、アレルギー、喘息、感染、および癌を含めた様々な障害および状態の治療に有用である。単一薬剤および組合せ療法としてのその使用に加えて、開示したオリゴヌクレオチドは、ワクチン中のアジュバントとして有用である。【図１】2010536335.tif 000009
2010536335.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドであって、Ｃがメチル化されておらず、３’がオリゴヌクレオチドの３’末端を指す免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
ヌクレアーゼ耐性の骨格を有する、請求項１に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
少なくとも１つのヌクレオチド間結合がリン酸骨格の修飾を有する、請求項１に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
骨格修飾がホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート修飾である、請求項３に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
それぞれのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート修飾を有する、請求項１に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）からなる配列を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
長さが１００塩基以下である、請求項１から５のいずれか一項に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号２）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドであって、＊が安定化したヌクレオチド間結合を表し、＿がリン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合を表す免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
５’がオリゴヌクレオチドの５’末端を指し、３’がオリゴヌクレオチドの３’末端を指す、請求項８に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号３）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドであって、＊が安定化したヌクレオチド間結合を表し、長さが２３〜２６ヌクレオチドである免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
配列番号２または配列番号３中の＊がホスホロチオエートヌクレオチド間結合を表し、配列番号２中の＿がリン酸ジエステルヌクレオチド間結合を表す、請求項８から１０のいずれか一項に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドであって、Ｃがメチル化されておらず、長さが２３〜２６ヌクレオチドである免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４３’（配列番号６）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドであって、Ｃがメチル化されておらず、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４が、それぞれ独立してヌクレオチド塩基であり、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４が、ＴＴＴＴではない免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
前記請求項のいずれか一項に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチド、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項１５】
対象における障害または状態を治療する方法であって、治療を必要としている対象に、請求項１から１３のいずれか一項に記載の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを有効量投与することを含み、障害または状態が、感染、アレルギー状態、および癌から選択される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、本明細書中に参照により組み込まれている、２００７年８月１３日出願の米国仮出願第６０／９６４，４７７号の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、免疫賦活性核酸、それを含有する組成物、ならびに癌を含めた様々な状態および障害を治療するための免疫賦活性核酸の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
いくつかのクラスの免疫賦活性核酸が知られている。その多くは非メチル化シトシン−グアニン（ＣｐＧ）塩基配列モチーフを共有するが、これらは、それぞれのクラスを特徴づける明白な免疫賦活活性を生じる構造的差異も保有する。例えば、Ｋｒｉｅｇ，ＡＭ（２００６）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、５：４７１〜８４；Ｊｕｒｋ，Ｍ他（２００４）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ、２０９：１４１〜５４；Ｖｏｌｌｍｅｒ，Ｊ他（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３４：２５１〜６２；Ｋｒｉｅｇ，ＡＭ（２００１）、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、９：２４９〜５２を参照されたい。例えば、ＡクラスＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）には、典型的には、一方または両方の末端に３つ以上の連続的なグアニンからなるヌクレアーゼ耐性の（安定化した）塩基配列（ポリＧモチーフ）、および自己相補的な回文構造内に含有される１つまたは複数のＣｐＧジヌクレオチドからなる中心領域が含まれる。ＡクラスＣｐＧ  ＯＤＮのメンバーはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化し、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）からのインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）の分泌を誘発する。ＢクラスＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチドには、典型的には、１つまたは複数のＣｐＧジヌクレオチドを含む安定化した非回文構造のヌクレオチド配列が含まれる。ＡクラスＯＤＮとは対照的に、ＢクラスＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチドはＢ細胞を強力に活性化するが、比較的弱いＩＦＮ−α分泌しか誘発しない。
【０００４】
同一出願人による公開国際特許出願ＷＯ０３／０１５７１１（’７１１号出願）は、第３のクラスの免疫賦活性核酸を記載している。ＣクラスＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチドには、典型的には、５’領域内に位置する１つまたは複数のＣｐＧモチーフ、および３’末端またはその付近に位置する回文構造配列が含まれる。これらは、ＩＦＮ−αの分泌の誘発およびＮＫ細胞の活性化を含めた、ＡクラスおよびＢクラスのＣｐＧ  ＯＤＮのどちらにも特徴的な免疫賦活活性を示す。同様の濃度で、Ｃクラスオリゴデオキシリボヌクレオチドは、一般に、ＡクラスＣｐＧ  ＯＤＮで観察されるものよりも高いが、ＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮで典型的に見られるものよりも低いＢ細胞活性化を示す。
【０００５】
最近の研究により、ＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチドがトール様受容体９（ＴＬＲ９）との相互作用によって免疫賦活活性を誘発することが示されている。Ｒｕｔｚ，Ｍ他（２００４）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３４：２５４１〜５０；Ｂａｕｅｒ，Ｓ他（２００１）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８（１６）：９２３７〜４２；およびＬａｔｚ，Ｅ他（２００４）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５（２）：１９０〜９８を参照されたい。いくつかのＴＬＲ９作用剤が、感染症、癌、およびアレルギー関連障害に関連するヒト臨床治験において評価されているか、または現在評価を受けている。例えば、Ｋｒｉｅｇ，ＡＭ（２００６）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、５：４７１〜８４を参照されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、感染症、癌、およびアレルギー関連障害を含めた免疫系に関連する疾患、状態、および障害を治療するために使用し得る、免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシリボヌクレオチドを含めた免疫賦活性オリゴヌクレオチドに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一態様は、５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドを提供し、ここで、塩基配列中のそれぞれのＣはメチル化されておらず、配列番号１中の３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を指す。
【０００８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチド（配列番号１）はヌクレアーゼ耐性の骨格を有し得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート修飾などのリン酸骨格修飾を有する少なくとも１つのヌクレオチド間結合を有し得る。一部の実施形態では、すべてのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート修飾を有し得る。
【０００９】
さらに、前述の免疫賦活性オリゴヌクレオチドのいずれかは、配列番号１中の５’が免疫賦活性オリゴヌクレオチドの５’末端を指す塩基配列を有し得る。
【００１０】
他の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチド（配列番号１）の長さは、１００ヌクレオチド以下であり得る。
【００１１】
本発明の別の態様は、５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号２）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドを提供し、ここで、配列番号２中のそれぞれのアスタリスク「＊」は、安定化したヌクレオチド間結合を表し、配列番号２中のアンダーバー「＿」は、リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合を表す。
【００１２】
一部の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチド（配列番号２）は、５’がオリゴヌクレオチドの５’末端を指し、３’がオリゴヌクレオチドの３’末端を指す配列を有し得る。
【００１３】
本発明の別の態様は、５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号３）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドを提供し、ここで、配列番号３中のそれぞれのアスタリスク「＊」は、安定化したヌクレオチド間結合を表し、オリゴヌクレオチドは長さが２３〜２６ヌクレオチドである。
【００１４】
一部の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチド（配列番号２または配列番号３）は、それぞれのアスタリスク「＊」がホスホロチオエートヌクレオチド間結合を表し、アンダーバー「＿」がリン酸ジエステルヌクレオチド間結合を表す配列を有し得る。これには、配列番号２または配列番号３中の５’および３’の表示がそれぞれオリゴヌクレオチドの５’および３’末端を指す免疫賦活性オリゴヌクレオチドが含まれる。
【００１５】
本発明の別の態様は、５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）を含む塩基配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドを提供し、ここで、配列番号１中のそれぞれのＣはメチル化されておらず、オリゴヌクレオチドは長さが２３〜２６ヌクレオチドである。
【００１６】
本発明のさらなる態様は、５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４３’（配列番号６）を含む配列を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドを提供し、ここで、Ｃはメチル化されておらず、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４は、それぞれ独立してヌクレオチド塩基であり、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４は、ＴＴＴＴではない。
【００１７】
本発明はまた、上記に定義した免疫賦活性オリゴヌクレオチドのいずれか、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物も提供する。
【００１８】
医薬組成物には、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原または寄生生物抗原などの抗原が含まれ得る。一部の例では、抗原はワクチンであり、組成物にはワクチンアジュバントが含まれる。
【００１９】
本発明はまた、対象における障害または状態を治療する方法も提供する。この方法は、治療を必要としている対象に、上記に定義した免疫賦活性オリゴヌクレオチドのいずれかを有効量投与することを含み、疾患または状態は、感染、アレルギー状態、または癌である。
【００２０】
この方法には、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、および寄生生物感染からなる群から選択される感染を有する、もしくはそれを生じる危険性にある対象を治療することが含まれてもよく、または、この方法には、アレルギー性喘息などのアレルギー状態を有する対象を治療することが含まれてもよい。
【００２１】
この方法には、以下の種類の癌のうちの１つまたは複数を有する、またはそれを生じる危険性にある対象を治療することが含まれ得る：基底細胞癌；胆管癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部癌；胃癌；上皮内新生物；腎臓癌；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌；ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含めたリンパ腫；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；腎臓癌；呼吸器系癌；肉腫；皮膚癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮癌；泌尿器系癌、ならびに他の癌腫および肉腫。
【００２２】
特許請求に係る免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、癌医薬品、放射線照射、外科的処置、またはその何らかの組合せなどの抗癌治療と併せて投与し得る。
【００２３】
本発明はまた、感染、アレルギー状態、または癌から選択される疾患または状態を治療する医薬品を調製するための、上記に定義した免疫賦活性オリゴヌクレオチドのいずれかの使用も提供する。
【００２４】
本発明はまた、１型インターフェロン（ＩＦＮ）の発現を誘発する方法、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する方法も提供する。この方法には、ＮＫ細胞または１型ＩＦＮを発現することができる細胞を、上記に定義した免疫賦活性オリゴヌクレオチドのいずれかと、それぞれＮＫ細胞を活性化するまたは１型ＩＦＮの発現を誘発するために有効な量で接触させることが含まれる。
【００２５】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、遊離酸（例えば双性イオン）および塩形態（例えば、酸または塩基付加塩、例えばナトリウム塩）を含めた、様々な形態で存在し得る。したがって、記載する説明および特許請求の範囲中で免疫賦活性オリゴヌクレオチドに言及する場合はすべて、その遊離酸およびその塩を含めたオリゴヌクレオチドのすべての形態が包含される。塩には、すべての薬学的に許容できる塩が含まれる。
【００２６】
本発明は、他の実施形態を含み、様々な方法で実施または実行され得る。本明細書中で使用する表現法および用語は、説明することを目的とし、限定するものとみなされるべきでない。単語「含める」、「含む」、「有する」、「含有する」、「関与する」、およびその変形の使用は、その後に記載した事項およびその均等物ならびに追加の事項を包含することを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ヒトおよびマウスのＴＬＲ９レポーターアッセイを示す一組のグラフである。ヒトＴＬＲ９  ｈＴＬＲ９−ＮＦκＢ−２９３細胞を、示した濃度のＯＤＮと共に１６時間インキュベートし、その後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を決定した（図１Ａ）。マウスＴＬＲ９  ｍＴＬＲ９−ＮＦκＢ−２９３細胞を、示した濃度のＯＤＮと共に１６時間インキュベートし、その後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を決定した（図１Ｂ）。
【図２】単離したｐＤＣ中でのＩＦＮ−αの誘発を示すグラフである。ＣＤ１４枯渇による２人のドナーの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からのｐＤＣの磁気単離に次いで、ＢＤＣＡ−４（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いた陽性選択を行った。データ（平均＋／−ＳＥＭ）は、示したＯＤＮ濃度を用いた２４時間のインキュベーション、次いでＩＦＮ−αのＥＬＩＳＡについて示す。
【図３】単離したｐＤＣ中でのＣＤ８６およびＣＣＲ７を示す一組のグラフである。ＣＤ１４枯渇による２人のドナーのＰＢＭＣからのｐＤＣの磁気単離に次いで、ＢＤＣＡ−４（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いた陽性選択を行った。データ（平均＋／−ＳＥＭ）は、示したＯＤＮ濃度を用いた２４時間のインキュベーション、次いで、ＣＤ８６発現（図３Ａ）（ＣＤ８６ＦＩＴＣ、ＣＣＲ−７ＰＥ、ＣＤ１４ＰｅｒＣＰ、ＢＤＣＡ−４ＡＰＣ）またはＣＣＲ７（図３Ｂ）のフローサイトメトリー分析について示す。
【図４】ＰＢＭＣ中でのサイトカイン誘発を示す一組のグラフである。２人のドナーからのＰＢＭＣを、０．０１６〜１μＭのＣｐＧ  ＯＤＮと共にインキュベートした。２４時間後、上清を採取し、２５プレックス（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）によって試験した。２人のドナーのＰＢＭＣによって分泌されたサイトカインＩＦＮ−α（図４Ａ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｂ）、およびＩＰ−１０（図４Ｃ）の平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図５】ＰＢＭＣ中でのサイトカイン誘発を示す一組のグラフである。２人のドナーからのＰＢＭＣを、０．０１６〜１μＭのＣｐＧ  ＯＤＮと共にインキュベートした。２４時間後、上清を採取し、２５プレックス（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）によって試験した。２人のドナーのＰＢＭＣによって分泌されたサイトカインＩＬ−１β（図５Ａ）、ＩＬ−２Ｒ（図５Ｂ）、ＧＭ−ＣＳＦ（図５Ｃ）、およびＭＣＰ−１（図５Ｄ）の平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図６】ＰＢＭＣ中でのサイトカイン誘発を示す一組のグラフである。２人のドナーからのＰＢＭＣを、０．０１６〜１μＭのＣｐＧ  ＯＤＮと共にインキュベートした。２４時間後、上清を採取し、２５プレックス（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）によって試験した。２人のドナーのＰＢＭＣによって分泌されたサイトカインＩＬ−６（図６Ａ）、ＩＬ−１０（図６Ｂ）、ＩＬ−１２（図６Ｃ）、およびＩＬ−１５（図６Ｄ）の平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図７】ＰＢＭＣ中でのサイトカイン誘発を示す一組のグラフである。２人のドナーからのＰＢＭＣを、０．０１６〜１μＭのＣｐＧ  ＯＤＮと共にインキュベートした。２４時間後、上清を採取し、２５プレックス（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）によって試験した。２人のドナーのＰＢＭＣによって分泌されたサイトカインＭＩＰ−１α（図７Ａ）、ＭＩＰ−１β（図７Ｂ）、およびＴＮＦ−α（図７Ｃ）の平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図８】ヒトＮＫ細胞の細胞毒性を示す一組のグラフである。ヒトＰＢＭＣを、示したように０．２５μＭ（図８Ａ）または１μＭ（図８Ｂ）のＯＤＮと共に１６時間インキュベートし、次いで、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した標的細胞（Ｋ５６２、慢性骨髄性白血病）と共に、様々なエフェクター：標的の比でさらに４時間インキュベートした。細胞死滅は、７−アミノ−アクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）を用いた染色およびフローサイトメトリーによって決定した。３人のドナーの平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図９】ヒトＢ細胞の増殖を示すグラフである。３人のドナーからのＣＦＳＥで標識したＰＢＭＣを、０．０１６〜１μＭのＣｐＧ  ＯＤＮと共に５日間インキュベートし、次いで、Ｂ細胞を区別するためにＣＤ１９を用いて細胞表面染色した。ＣＦＳＥ染色が減少していたＢ細胞の割合を決定した。３人のドナーの平均＋／−ＳＥＭを示す。
【図１０】ヒトＴＬＲ８およびＮＦκＢのレポーター遺伝子アッセイを示す一組のグラフである。ｈＴＬＲ８−ＮＦκＢ−２９３（図１０Ａ）およびＮＦκＢ−２９３（図１０Ｂ）細胞を、示した濃度のＯＤＮまたはＴＮＦ−αと共に１６時間インキュベートし、その後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を決定した。
【図１１】マウスＢ細胞の増殖を示すグラフである。ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞（４×１０６個／ｍＬ）を、培地（データ分析で親集団として用いる陰性対照）またはＯＤＮと共にインキュベートした。５日間のインキュベーションの後、脾細胞（Ｂ細胞）の増殖をＣＦＳＥ染色によって測定した。増殖指数は、Ｖｅｒｉｔｙ  ＭｏｄＦｉｔ５．１ソフトウェアを用いて測定した。
【図１２】マウス脾細胞中でのｉｎ  ｖｉｔｒｏサイトカイン誘発を示す一組のグラフである。ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞（５×１０６個／ｍＬ）をＯＤＮと共にインキュベートした。インキュベーションの４８時間後の培養上清を、ＩＬ−６（図１２Ａ）、ＩＬ−１２（図１２Ｂ）、ＩＦＮ−γ（図１２Ｃ）、およびＴＮＦ−α（図１２Ｄ）について、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術（マウスサイトカイン２０プレックス；カタログ番号ＬＭＣ０００６、ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ、カリフォルニア州Ｃａｍａｒｉｌｌｏ）を用いて試験した。
【図１３】マウス中でのｉｎ  ｖｉｔｒｏサイトカイン誘発を示す一組のグラフである。雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（５匹／群）に、様々な用量（１００ｍｇ、２５０ｍｇまたは５００ｍｇ）のＣｐＧ  ＯＤＮまたは非ＣｐＧ対照ＯＤＮ（配列番号５）を皮下（ＳＣ）注射した。動物を注射の３時間後に出血させ、血漿を、ＩＰ−１０（図１３Ａ）およびＩＬ−６（図１３Ｂ）について、ＥＬＩＳＡによって試験した。
【図１４】ＮＫ活性の増強を示す一組のグラフである。ＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞（３０×１０６個）を、示したように０μｇ／ｍＬ（培地単独）、１μｇ／ｍＬ（図１４Ａ）、３μｇ／ｍＬ（図１４Ｂ）または１０μｇ／ｍＬ（図１４Ｃ）のＯＤＮと共に、２４時間インキュベートした。ＮＫ活性は、ＹＡＣ−１標的細胞を用いた標準の５１Ｃｒ放出アッセイを使用して、様々なエフェクター：標的の比で評価した。
【図１５】ルイス肺癌の生存および腫瘍体積を示す一組のグラフである。雌のＣ５７Ｂｌ／６（研究の開始時に約２０ｇまで；１０匹／群）に、１×１０５個のＬＬＣ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ１６４２）を背下部に皮下注射した。ＯＤＮ（２００ｍｇ）を、腫瘍の周辺に、第１日目および第３日目、その後は週に２回、皮下注射した。動物を、腫瘍体積によって測定した腫瘍増殖（図１５Ｂ）、および生存（図１５Ａ）についてモニターした。腫瘍の大きさ（長さおよび幅）は、デジタルバーニアノギスを用いて測定した。腫瘍体積は以下の式を用いて計算した：腫瘍体積＝（０．４）（ａｂ２）［式中、ａは長さ（大きい方の直径）であり、ｂは幅（小さい方の直径）である］。平均腫瘍体積の変化は、それぞれの動物群において５０％が死亡するまで示す。マウスを腫瘍測定日に安楽死させ、グラフには含めていない。
【図１６】神経芽細胞腫の治療を示す一組のグラフである。雌のＡ／Ｊマウスに、１×１０６個の神経２ａ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＣＬ１３１）を上部左脇腹に皮下注射した（研究の開始時に約２０ｇまで；１０匹／群）。１００ｍｇのＯＤＮを、腫瘍注射の１０日後から開始して、腫瘍の周辺に皮下注射した。マウスは、毎日または３日毎に、１５日間治療した。動物を、腫瘍体積によって測定した腫瘍増殖（図１６Ｂ）、および生存（図１６Ａ）についてモニターした。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
上述のように、本発明は、免疫賦活性オリゴデオキシリボヌクレオチドを含めた、免疫賦活性核酸および薬学的に許容できるその塩に関する。これらの化合物には、以下から選択される塩基配列が含まれる：
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号１）；
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号２）；
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号３）；および
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４３’（配列番号６）；
ここで、配列番号２および配列番号３中のアスタリスク「＊」のそれぞれは、安定化したヌクレオチド間結合を表し、配列番号２中のアンダーバー「＿」は、リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合を表し、Ｘ１Ｘ２Ｘ３およびＸ４は、それぞれ独立してヌクレオチド塩基であり、配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４は、ＴＴＴＴではない。例えば、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４は、ＴＴＴＡ、ＴＴＴＧ、ＴＴＴＣ、ＴＴＡＡ、ＴＴＣＧ、ＴＴＣＣ、ＴＴＧＧ、ＴＴＡＴ、ＴＴＣＴ、ＴＴＧＴ、ＴＡＴＴ、ＴＣＴＴ、またはＴＧＴＴであり得る。別段に記述しない限りは、説明中の免疫賦活性核酸、オリゴヌクレオチド、オリゴデオキシリボヌクレオチド、オリゴリボヌクレオチドなどへの言及はすべて、遊離酸および任意の薬学的に許容できるその塩をいう。
【００２９】
一般に、配列番号中の３’および５’の表示は、塩基配列中の塩基および対応するヌクレオチドの相対的位置（方向）をいう、すなわち、この表示は、別のヌクレオチドが結合し得る、標識した塩基（それぞれ配列番号１〜３中のＴおよびＴまたは配列番号６中のＸ４およびＴ）と会合した、五炭素糖の３’および５’炭素原子をいう。しかし、一部の例では、説明により、３’は核酸の３’末端をいい、その代わりにまたはそれに加えて、５’は核酸の５’末端を指すことが記載される。そのような場合には、３’および／または５’の表示は、ヌクレオチド（またはヌクレオシド）が、核酸中の標識した塩基（ヌクレオチドまたはヌクレオシド）と会合している糖部分のそれぞれ３’および／または５’の位置とは直接連結していないことを示す。ヌクレオチドは存在しないが、３’および５’末端は、リンカーまたは脱塩基分子などの非ヌクレオチド分子と結合していてもよい。
【００３０】
本明細書中で使用する「核酸」および「オリゴヌクレオチド」とは、互換性があるように使用し、以下に記載のように修飾されていてもよい複数のヌクレオチド、すなわち、ホスフェート基と連結した糖部分（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子、および、置換ピリミジン、例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）もしくはウラシル（Ｕ）、または置換プリン、例えば、アデニン（Ａ）もしくはグアニン（Ｇ）のいずれかである交換可能な有機塩基をいう。本明細書中で使用するこれらの用語は、オリゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）をいう。これらの用語には、ポリヌクレオシド、すなわち、ホスフェート基がないポリヌクレオチドも含まれ得る。核酸分子は、既存の核酸源、例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡから得ることができるが、好ましくは合成であり、例えば核酸合成によって生成する。
【００３１】
本明細書中で使用する「免疫賦活性核酸」、「免疫賦活性オリゴヌクレオチド」、「免疫賦活性核酸」、および「免疫賦活性オリゴヌクレオチド」は等価な用語であり、免疫系の細胞の機能的側面を誘発するその能力によって特徴づけられている、リボ核酸またはデオキシリボ核酸分子、その誘導体または類似体をいう。そのような免疫系の細胞の機能的側面には、例えば、サイトカインもしくはケモカインの同化、細胞表面マーカーの発現、抗体の分泌、増殖、または、抗原もしくは抗原を保有する膜と結合した標的に応答したもしくはそれに向けられた、他の活性が含まれることができる。
【００３２】
免疫賦活性核酸は、例えば、β−シアノエチルホスホルアミダイト方法およびヌクレオシドＨ−ホスホネート方法を含めた、任意の数の周知の手順を用いて新規合成することができる。β−シアノエチルホスホルアミダイト方法の記載については、Ｂｅａｕｃａｇｅ，ＳＬおよびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，ＭＨ（１９８１）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、２２：１８５９〜６２ならびに以下のスキームＩを参照されたい。ヌクレオシドＨ−ホスホネート方法の記載については、Ｇａｒｅｇｇ，ＩＬ他（１９８６）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、２７（３４）：４０５１〜５４、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ，ＢＣ他（１９８６）、Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ、１４（１３）：５３９９〜４０７、Ｇａｒｅｇｇ，ＩＬ他（１９８６）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、２７（３４）：４０５５〜５８、およびＧａｆｆｎｅｙ他（１９８８）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、２９（２２）：２６１９〜２２）を参照されたい。これらの化学は、様々な市販されている自動核酸合成機を用いて行うことができる。これらの核酸は合成核酸と呼ばれる。
【００３３】
あるいは、免疫賦活性核酸は、プラスミド中で大規模に産生してより小さな小片に分けるか、または全体を投与することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｔ．他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照されたい。核酸は、制限酵素、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを用いるものなどの既知の技術を使用して、既存の核酸配列（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から調製することができる。この様式で調製した核酸は、単離核酸と呼ばれる。単離核酸とは、一般に、それが天然において通常関連している構成成分から分離された核酸をいう。例えば、単離核酸は、細胞から、核から、ミトコンドリアからまたはクロマチンから分離されたものであり得る。本明細書中に記載する免疫賦活性核酸には、合成核酸および単離核酸が包含される。
【００３４】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用には、免疫賦活性核酸は、分解に対して任意選択で耐性であってもよい（例えば安定化）。「安定化した核酸分子」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏ分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して、同じ塩基配列および標準のリン酸結合を有するものよりも耐性がある核酸をいう。核酸の安定化は、リン酸骨格の修飾によって達成することができる。好ましい安定化した核酸は、修飾されたリン酸骨格を有する。一般に、核酸骨格の修飾は、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与した場合に、増強された核酸の免疫賦活活性をもたらすことが示されている。一部の例では、ホスホロチオエート結合を有する免疫賦活性核酸は改善した活性を保有し、核酸を細胞内エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から保護する。他の核酸骨格修飾には、リン酸ジエステルおよびホスホロチオエート結合の組合せ（すなわちキメラ骨格）、および、アルキルホスホネート（例えばメチルホスホネート）基、アルキルホスホロチオエート（例えばメチルホスホロチオエート）基、ホスホロジチオエート基、エチルホスフェート基など（これらの組合せを含む）からなる骨格が含まれる。
【００３５】
修飾された骨格を有する核酸は、既知の方法を用いて調製し得る。例えば、ホスホロチオエートなどの修飾された骨格は、ホスホルアミデートまたはＨ−ホスホネート化学のどちらかを用いた自動技術を使用して合成し得る。アリール−およびアルキル−ホスホネートは、米国特許第４，４６９，８６３号に記載のように作製することができ、アルキルホスホトリエステル（例えばリン酸エチル）は、米国特許第５，０２３，２４３号に記載のように、市販の試薬を用いた自動固相合成によって調製することができる。他の核酸骨格修飾および置換を行う方法が記載されている。例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ，ＥおよびＰｅｙｍａｎ，Ａ（１９９０）、Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ、９０（４）：５４４〜８４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ（１９９０）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ、１（３）：１６５〜８６を参照されたい。
【００３６】
テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコールなどのジオールを片方または両方の末端に含有する核酸も、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性があることが示されている。
【００３７】
免疫賦活性核酸の一部の実施形態は、柔らかいまたは中程度に柔らかい骨格を含む、部分的に安定化したキメラ骨格を有し得る。前述したように、キメラ骨格には、リン酸ジエステルおよび修飾された骨格の結合が含まれる。柔らかいオリゴヌクレオチドとは、リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合が、少なくとも１つの内部ピリミジン−グアニン（ＹＧ）ジヌクレオチド塩基配列の内部、またはそれにすぐ隣接している場合にのみ起こる、部分的に安定化した骨格を有する免疫賦活性核酸である。したがって、内部ＹＧジヌクレオチドには、（ｉ）ピリミジンヌクレオシドとグアノシンまたはデオキシグアノシン部分（すなわち、Ｙ＿Ｇ）とを結合する、ならびに（ｉｉ）隣接ヌクレオチド、または内部ＹＧジヌクレオチドに対して５’、３’、もしくは５’および３’の両方のヌクレオチドを結合する、リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合が含まれる。好ましくは、隣接リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合は、内部ヌクレオチド間結合である。
【００３８】
中程度に柔らかいオリゴヌクレオチドとは、リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合が、少なくとも１つの内部ピリミジン−グアニン（ＹＧ）ジヌクレオチド塩基配列の内部でのみ起こる、部分的に安定化した骨格を有する免疫賦活性核酸である。中程度に柔らかいオリゴヌクレオチドは、完全に安定化した骨格を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドに勝るいくつかの利点を有する場合がある。例えば、中程度に柔らかいオリゴヌクレオチドは、対応する完全に安定化した免疫賦活性オリゴヌクレオチドよりも増加した免疫賦活力価を保有し得る。
【００３９】
リン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合とは、リン酸ジエステル結合と化学的にかつ／またはジアステレオマー的に類似のリン含有架橋基である。リン酸ジエステル結合との類似性の尺度には、ヌクレアーゼ消化に対する感受性およびＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化する能力が含まれる。したがって、例えば、リン酸ジエステルオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ消化に感受性があるがホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは感受性がない一方で、リン酸ジエステルおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドはどちらもＲＮＡｓｅ  Ｈを活性化する。好ましい実施形態では、リン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合は、ボラノリン酸（または等価にボラノホスホン酸）結合である。例えば、米国特許第５，１７７，１９８号、米国特許第５，８５９，２３１号、米国特許第６，１６０，１０９号、米国特許第６，２０７，８１９号、およびＳｅｒｇｕｅｅｖ，ＤＳおよびＳｈａｗ，ＢＳ（１９９８）、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ、１２０：９４１７〜２７を参照されたい。別の好ましい実施形態では、リン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合は、ジアステレオマー的に純粋なＲｐホスホロチオエートである。一部の実施形態では、用語「リン酸ジエステル様ヌクレオチド間結合」とは、ホスホロジチオエートおよびメチルホスホネートのヌクレオチド間結合を具体的に排除する。
【００４０】
スキームＩは、固相β−シアノエチルホスホルアミダイト方法を用いてオリゴデオキシリボヌクレオチドを調製する１つのプロセスを示す。このプロセスでは、単量体β−シアノエチル−ジイソプロピルホスホルアミダイト構成単位、Ｔ−アミダイト、Ｇアミダイト、およびＣアミダイトを用い、その構造を以下に示す：
【００４１】
【化１】
2010536335.tif 000003
単量体構成単位は、それぞれのデオキシリボース部分の５’−ヒドロキシ官能基を保護する、酸に不安定な４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基を含有する。構成単位はまた、合成中にホスファイト（またはホスフェート）基を保護するβ−シアノエチル基、ならびに核酸塩基の第一級アミノ官能基（グアニンおよびシトシン）を保護する塩基に不安定なアシル基（例えば、イソブタノイルおよびベンゾイル）も含有する。
【００４２】
スキームＩは、ｎ個の塩基（Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、．．．Ｂｎ）およびヌクレオシドを含有するＯＤＮ（式ＸＩＩ）の調製を例示する。合成は、充填された固体支持体媒体床（例えば、細孔制御ガラス、ポリスチレンなど）を含有するステンレス鋼カラムからなる流動反応器モジュールを含む、コンピュータ制御の固相オリゴヌクレオチド合成機を用いて行う。合成機は、試薬および洗浄液を送達し、プロセスの過程をモニターする。プロセスの鎖延長部分中に中間体は単離されない。出発物質は、ＤＭＴで保護した５’−ヒドロキシ官能基および核酸塩基Ｂ１を含む最初のヌクレオシド（式Ｉ）である。最初のヌクレオシドは、デオキシリボース部分の３’位でスクシニルリンカーによって固体支持体媒体と連結される。上述のように、第一級アミン基を有する核酸塩基には、処理中の望ましくない副反応を防止するために、塩基に不安定なアシル基が含まれる。
【００４３】
このプロセスにはｎ−１回のサイクルが含まれ、そのそれぞれが、４つの主要なステップ、すなわち、（ａ）固体に支持されたＯＤＮの５’末端を脱ブロッキングまたは脱トリチル化するステップと；（ｂ）必須の単量体構成単位（Ｔ−アミダイト、Ｇ−アミダイトまたはＣ−アミダイト）を脱保護したＯＤＮの５’末端とカップリングさせるステップと；（ｃ）カップリングステップで配置されたヌクレオシドを固体に支持されたＯＤＮと連結させる、ホスファイト架橋を酸化する（例えばチオール化）ステップと；（ｄ）未反応の脱保護した出発物質または脱保護した中間体をすべてキャッピングするステップとを含む。それぞれの主要なステップ（ａ〜ｄ）の間でアセトニトリル（ＡＣＮ）洗浄を行うことで、過剰の反応物質（例えば単量体構成単位）を除去する。プロセス中、ＯＤＮは３’から５’の方向に構築される。ｎ−１回のサイクルの後、完全長ＯＤＮ（５’末端にＤＭＴ基を有する）を固体支持体から切断し、核酸塩基の第一級アミンを脱保護し、ＯＤＮをカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＤＭＴ基を除去して、所望のＯＤＮ（ＸＩＩ）またはその塩が得られる。
【００４４】
上述およびスキームＩに示すように、ＯＤＮ合成の第１のステップ（ａ１）には、酸、例えばトルエン中のジクロロ酢酸（ＤＣＡ）と短時間接触させることによって、出発物質（式Ｉ）の５’−ヒドロキシ官能基からＤＭＴ保護基を除去することが含まれる。脱保護の後、５’−ヒドロキシ基（式ＩＩ）は、必須のホスホルアミダイト構成単位（式ＩＩＩ）とのカップリングステップ（ｂ１）の反応の準備ができている。ホスホルアミダイト単量体（式ＩＩＩ）をまずサッカリンＮ−メチルイミダゾール塩（ＳＭＩ）などのカップリング剤で活性化させ、その後、脱保護した出発物質（式ＩＩ）と反応させて、二塩基の中間体（式ＩＶ）が得られる。次に、新しく配置されたＢ２−ヌクレオシドをＢ１−ヌクレオシドと連結しているホスファイト部分を、より安定な５価のリン酸トリエステル架橋へと酸化する（ｃ１）。ホスホロチオエート結合（式Ｖ中のＸ＝Ｓ）が所望される場合は、中間体（式ＩＶ）を硫黄転移試薬、例えば、ピリジン中の５−アミノ−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−３−チオン（水素化キサンタン）などのチオール化試薬と反応させる。リン酸ジエステル結合（式Ｖ中のＸ＝Ｏ）が所望される場合は、中間体（式ＩＶ）をヨウ素／水と反応させる。第１サイクルの最終ステップ（ｄ１）では、未反応の５’−ヒドロキシ基（式ＩＩ）をすべて、アシル化剤、例えば、ＡＣＮおよびピリジン中のイソブタン酸無水物およびＮ−メチルイミダゾールの混合物と反応させることによってキャッピングする。これにより、未完成のＯＤＮ鎖がＯＤＮ構築プロセスで後に反応することが、防止される。
【００４５】
【化２】
2010536335.tif 000004
【００４６】
続くサイクルは、新しく付加したヌクレオシドの５’−ヒドロキシ官能基からＤＭＴ基を除去することから開始する。したがって、スキームＩに示すように、保護されたジヌクレオチド（式Ｖ）を酸と接触させて（ａ２）５’−ヒドロキシ部分（式ＶＩＩ）を露出させ、続いて、これを、単量体の活性化後に必須のホスホルアミダイト構成単位（式ＶＩＩＩ）と反応させる（ｂ２）。新しく配置されたＢ３−ヌクレオシドをＢ２−ヌクレオシドと連結している新しく形成されたホスファイト部分（式ＩＸ）の酸化（ｃ２）により、ＤＭＴで保護した５’−ヒドロキシ末端を有するトリヌクレオチド（式Ｘ）が得られる。すべての未反応の５’−ヒドロキシ基（式ＶＩＩ）を、アシル化剤との反応によってキャッピング（ｄ２）することで、第２サイクルが完了する。式ＶＩＩおよび式ＩＸ〜ＸＩＩ中の置換基Ｘは、ホスホロチオエートまたはリン酸ジエステルヌクレオチド間結合が所望されるかに応じて、ＳまたはＯであることに注目されたい。
【００４７】
（ｎ−１）回の最後のサイクルが完了した後、ＯＤＮ（式ＸＩ）をヒンダード第一級脂肪族アミン、例えばｔｅｒｔ−ブチルアミンと接触させることによって、β−シアノエチル保護基を除去する。続いて、生じるＤＭＴでキャッピングされたＯＤＮ（示さず）を、塩基、例えば濃水酸化アンモニウムと接触させ、これにより、塩基に不安定なスクシニルリンカーが切断され、ＤＭＴで保護したＯＤＮが固体支持体から解放される。また、塩基との接触は、核酸塩基上の第一級アミンの脱保護も行う。
【００４８】
完成したＯＤＮ（式ＸＩＩ）は、イオン交換カラムクロマトグラフィーによって単離および精製する。この方法では、ＤＭＴでキャッピングされた完全長ＯＤＮが、末端５’−ＤＭＴ基を欠く未完成のＯＤＮ（例えば、式ＶＩ）と比較して、固定相中の親和性が高いことを活用する。ＯＤＮのナトリウム塩を得るために、ＤＭＴでキャッピングされたＯＤＮを含有する、粗アンモニア水酸化物水溶液の洗浄液をイオン交換カラム上に吸着させ、ＮａＯＨ水溶液で洗浄する。未完成のＯＤＮは、ＮａＣｌ／ＮａＯＨ水溶液で洗浄することによってカラムから除去される。これにより、固定相と結合したＤＭＴでキャッピングされたＯＤＮが残る。続いて、酢酸水溶液、次いで水、およびＮａＯＨ水溶液で洗浄することによってＤＭＴ基を除去して、ＯＤＮ（式ＸＩＩ）をナトリウム塩へと再変換して戻す。その後、ＯＤＮを、ＮａＯＨ中のＮａＣｌの直線勾配を用いたカラム上で精製する。画分を採取し、偽プールを調製し、ＨＰＬＣおよびキャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）によって分析する。ＯＤＮの規格を満たす対応する偽プールの画分を一緒にプールし、濃縮し、接線流濾過（ＴＦＦ）を用いて脱塩する。生じる濃縮水を濾過し（例えば０．２２μＭのフィルターを用いる）、溶液を凍結乾燥して、完成したＯＤＮが得られる。
【００４９】
免疫賦活性核酸は、対象を治療して、免疫応答を誘発するため、または、例えば、感染症、癌、およびアレルギー性障害などの免疫関連疾患を治療するために使用し得る。
【００５０】
本明細書中で使用する「対象」とは、ヒト、およびそれだけには限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ウサギ、ラット、マウスなどを含めた脊椎動物をいう。
【００５１】
本明細書中で使用する用語「治療する」、「治療すること」、「治療した」、およびその変形とは、そのような用語が適用される疾患、障害もしくは状態の進行を、逆転、緩和、阻害すること、もしくはそれを予防すること、または、そのような疾患、障害もしくは状態の１つもしくは複数の症状の進行を、逆転、緩和、阻害すること、もしくはそれを予防することをいう。「治療」とは、「治療する」行為をいう。
【００５２】
したがって、治療することとは、予防的治療、すなわち、対象が疾患を発生することに対する耐性を増加させる、または対象が疾患を発生する可能性を減少させる、または疾患の発生を遅延させる治療をいい、また、対象が疾患を発生した後の治療、すなわち、疾患を減少もしくは排除しようとする、疾患の悪化を予防しようとする治療をいう。例えば、感染症の治療に関して使用した場合、治療することとは、対象の微生物に対する耐性を増加させる、または対象が微生物の感染症を発生する可能性を減少させる予防的治療、および、感染症と戦うための、例えば、それを完全に減少もしくは排除する、またはそれの悪化を予防するための、対象が感染した後の治療をいう。癌などの疾患に関して使用した場合、これらの用語は、（ｉ）癌の発生を予防することもしくは（ｉｉ）遅延させること、（ｉｉｉ）癌の症状を減少させること、（ｉｖ）確立された癌の成長を阻害することもしくは（ｖ）遅延させること、または（ｉ）〜（ｖ）の組合せをいう。
【００５３】
したがって、核酸は、感染性生物の感染を生じる危険性、またはアレルギー性障害を生じる危険性、または癌を生じる危険性にある対象において、免疫を誘発させる予防剤として有用である。「危険性にある対象」とは、一般に、疾患、状態または障害に関連する１つまたは複数の危険因子を示す、既に定義した任意の対象をいう。危険因子とは、疾患、状態または障害を発生させる確率を増加させ得るものすべてである。例えば、感染症またはアレルギー関連疾患の危険因子には、特定の種類の感染性因子またはアレルゲンが見つかる地域への旅行；生活スタイル、職業、医療処置などによる、感染性生物を含有し得る体液との接触；感染性生物またはアレルゲンが同定された地域および感染性因子またはアレルゲンへの直接曝露が起こった地域での居住；テロ攻撃（例えば生物戦）の対象地域での居住が含まれる。また、感染を生じる危険性にある対象には、医療機関が特定の感染性生物抗原でのワクチン接種を推奨する一般集団も含まれる。抗原がアレルゲンであり、対象がその特定の抗原に対してアレルギー応答を発生し、対象が抗原に曝露される場合、すなわち、花粉の季節である場合、対象は、抗原に曝露される危険性にある。
【００５４】
癌を発生する危険因子には、特定の癌の遺伝的素因および家族歴；癌の以前の治療；加齢（例えば６５歳以上）；タバコ製品の使用；質の悪い食生活（例えば高脂肪食）；肥満症；アルコールの過剰消費（例えば２オンス（５９．１ｍｌ）／日より多く）；運動不足；電離放射線（例えば、放射性降下物、Ｘ線、ラドン）への曝露；過剰な太陽光、およびアスベスト、ベンゼン、ベンジジン、カドミウム、ニッケル、または塩化ビニルを含めた発癌性化学物質への曝露；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎ウイルス、ヒトＴ細胞白血病／リンパ腫ウイルス（ＨＴＬＶ−１）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）、およびピロリ細菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）を含めた、一部のウイルスおよび細菌の感染；ならびに、単独またはプロゲスチンと組み合わせたエストロゲン、およびジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）を含めた特定のホルモンを用いた治療が含まれる。
【００５５】
また、核酸は、感染症、癌およびアレルギー性障害の治療における治療剤としても有用である。
【００５６】
「感染を有する対象」とは、感染性病原体に曝露され、体内に急性または慢性の検出可能なレベルの病原体を有する対象である。核酸は、単独で、または抗原もしくは抗細菌薬などの他の治療剤と併せて使用して、感染性病原体のレベルを減少させる、またはそれを根絶することができる免疫応答を開始することができる。この方法には、感染を治療するために、感染を有する、またはそれを生じる危険性にある対象に、有効量の本発明の免疫賦活性核酸を投与することを伴う。この方法は、ヒトおよび非ヒト脊椎動物対象においてウイルス、細菌、真菌、および寄生生物の感染を治療するために使用することができる。
【００５７】
本明細書中で使用する「感染」および等価に使用する「感染症」とは、対象の体内に外来微生物が存在することから生じる疾患をいう。外来微生物は、ウイルス、細菌、真菌、または寄生生物であり得る。感染性ウイルスの例には、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる）などのヒト免疫不全ウイルス；およびＨＩＶ−ＬＰなどの他の単離物；ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ウマ科動物脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラウイルス科（Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱ウイルス）；コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばインフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ハンタンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルスおよびナイロウイルス）；アレナウイルス科（Ａｒｅｎａ  ｖｉｒｉｄａｅ）（昜出血性発熱ウイルス）；レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばレオウイルス、オルビビウルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科（Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）：ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（パルボウイルス）；パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；イリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばアフリカブタ発熱ウイルス）；ならびに未分類のウイルス（例えば、海綿状脳症の病原因子、Ｄ型肝炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠陥性付随体であると考えられる）、非Ａ型非Ｂ型肝炎の因子（クラス１＝内部伝染；クラス２＝非経口伝染（すなわちＣ型肝炎）；ノーウォークおよび関連ウイルス、アストロウイルス）が含まれる。
【００５８】
感染性細菌の例には、イスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ））、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）ｓｐｐ．、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、トラコーマ病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コルネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐｐ．、エンテロバクター・エアロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．、ブタ丹毒素（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、マイコバクテリア属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）ｓｐｐ．（例えば、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、エム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、エム・イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、カンサシ菌（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、エム・ゴルドナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ））、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）ｓｐ．、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（嫌気性ｓｐｐ．）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（緑色連鎖球菌（ｖｉｒｉｄａｎｓ）群）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａａｃｔｉａｅ）（ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）Ｂ群）、ストレプトコッカス・ボリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｒｉｓ）、大便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ）（ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）群Ａ属）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、およびフランベジアトレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）が含まれる。
【００５９】
感染性真菌の例には、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラータム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、およびブラストミセス・デリフィアティティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｉｆｉａｔｉｔｉｄｉｓ）が含まれる。
【００６０】
他の感染性生物（すなわち原生生物）には、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、および三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）などのプラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）ｓｐｐ．が含まれる。血液媒介性寄生生物および／または組織寄生生物には、プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）ｓｐｐ．、ネズミバベシア（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、バベシア・ダイバージェンス（Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）、熱帯リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ）、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）ｓｐｐ．、ブラジルリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、ガンビアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）およびローデシアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）（アフリカ睡眠病）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）（シャガス病）、ならびにトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）が含まれる。
【００６１】
前述のウイルス、細菌、真菌、および他の感染性微生物のリストは、代表的なものであり限定的でないことを理解されたい。他の医学的に関連性のある微生物は、文献中に広範に記載されており、例えば、その内容の全体が参照により本明細書中に組み込まれている、Ｃ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ、Ｍｅｄｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ、英国（１９８３）を参照されたい。
【００６２】
上記に記載した微生物因子の多くはヒトの障害に関連しているが、本発明は、非ヒト脊椎動物の治療にも有用である。非ヒト脊椎動物も、本明細書中に開示した免疫賦活性核酸を用いて予防または治療することができる感染を発生する場合がある。例えば、感染性ヒト疾患の治療に加えて、本発明の方法は、動物の感染の治療に有用である。
【００６３】
ヒトおよび非ヒト脊椎動物の感染性ウイルスには、レトロウイルス、ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスが含まれる。このレトロウイルスの群には、単純レトロウイルスおよび複合レトロウイルスがどちらも含まれる。単純レトロウイルスには、Ｂ型レトロウイルス、Ｃ型レトロウイルスおよびＤ型レトロウイルスの亜群が含まれる。Ｂ型レトロウイルスの例はマウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）である。Ｃ型レトロウイルスには、Ｃ型Ａ群（ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）、および骨髄芽球症ウイルス（ＡＭＶ）を含む）の亜群、ならびにＣ型Ｂ群（ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、脾臓壊死ウイルス（ＳＮＶ）、細網内皮症ウイルス（ＲＶ）およびサル肉腫ウイルス（ＳＳＶ）を含む）が含まれる。Ｄ型レトロウイルスには、マソン−ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）および１型サルレトロウイルス（ＳＲＶ−Ｉ）が含まれる。複合レトロウイルスには、レンチウイルス、Ｔ細胞白血病ウイルスおよび泡沫状ウイルスの亜群が含まれる。レンチウイルスにはＨＩＶ−１が含まれるが、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ビスナウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、およびウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）も含まれる。Ｔ細胞白血病ウイルスには、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−ＩＩ、サルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ）、およびウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）が含まれる。泡沫状ウイルスには、ヒト泡沫状ウイルス（ＨＦＶ）、サル泡沫状ウイルス（ＳＦＶ）およびウシ泡沫状ウイルス（ＢＦＶ）が含まれる。
【００６４】
脊椎動物における感染性因子である他のＲＮＡウイルスの例には、それだけには限定されないが、オルトレオウイルス属（Ｏｒｔｈｏｒｅｏｖｉｒｕｓ）（哺乳動物およびトリレトロウイルスの両方の複数の血清型）、オルビウイルス属（Ｏｒｂｉｖｉｒｕｓ）（ブルータングウイルス、ユージナンジー（Ｅｕｇｅｎａｎｇｅｅ）ウイルス、ケメロボウイルス、アフリカ馬疫ウイルス、およびコロラドダニ熱ウイルス）、ロタウイルス属（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）（ヒトロタウイルス、ネブラスカ子ウシ下痢ウイルス、サルロタウイルス、ウシまたはヒツジロタウイルス、トリロタウイルス）を含めたレオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）；エンテロウイルス属（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）（ポリオウイルス、コクサッキーウイルスＡおよびＢ、腸内細胞変性ヒトオーファン（ＥＣＨＯ）ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、サルエンテロウイルス、ネズミ脳脊髄炎（ＭＥ）ウイルス、ネズミポリオウイルス、ウシエンテロウイルス、ブタエンテロウイルス、カルジオウイルス属（Ｃａｒｄｉｏｖｉｒｕｓ）（脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）、メンゴウイルス）、ライノウイルス属（Ｒｈｉｎｏｖｉｕｓ）（少なくとも１１３個の亜型を含めたヒトライノウイルス；他のライノウイルス）、アプトウイルス属（Ａｐｔｈｏｖｉｒｕｓ）（口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）を含めたピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）；ブタ水疱疹ウイルス、サンミゲルアシカウイルス、ネコピコルナウイルスおよびノーウォークウイルスを含めたカルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）；アルファウイルス属（Ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）（東部ウマ脳炎ウイルス、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、チクングニアウイルス、オニョンニョンウイルス、ロスリバーウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス）、フラビウイルス属（Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）（蚊媒介性黄熱ウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルス、中央ヨーロッパマダニ媒介性ウイルス、極東マダニ媒介性ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、跳躍病ウイルス、ポワッサンウイルス、オムスク出血熱ウイルス）、ルビウイルス属（Ｒｕｂｉｖｉｒｕｓ）（風疹ウイルス）、ペスチウイルス属（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）（粘膜病ウイルス、ブタコレラウイルス、ボーダー病ウイルス）を含めたトガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）；ブニウイルス属（Ｂｕｎｙｖｉｒｕｓ）（ブニヤムウェラ（Ｂｕｎｙａｍｗｅｒａ）や関連ウイルス、カリフォルニア脳炎群ウイルス）、フレボウイルス属（Ｐｈｌｅｂｏｖｉｒｕｓ）（シシリア型サシチョウバエ熱ウイルス、リフト渓谷熱ウイルス）、ナイロウイルス属（Ｎａｉｒｏｖｉｒｕｓ）（クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス）、およびウークウイルス属（Ｕｕｋｕｖｉｒｕｓ）（ウークニエミ（Ｕｕｋｕｎｉｅｍｉ）や関連ウイルス）を含めたブニヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）；インフルエンザウイルス属（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）（Ａ型インフルエンザウイルス、多くのヒト亜型）；ブタインフルエンザウイルス、トリやウマインフルエンザウイルス；Ｂ型インフルエンザ（多くのヒト亜型）、およびインフルエンザ型（可能な別の属）を含めたオルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）；パラミクソウイルス属（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕ）（１型パラインフルエンザウイルス、センダイウイルス、赤血球吸着ウイルス、ニューカッスル病ウイルスのパラインフルエンザウイルス型、流行性耳下腺炎ウイルス）、モルビリウイルス属（Ｍｏｒｂｉｌｉｖｉｒｕｓ）（麻疹ウイルス、亜急性硬化性汎脳炎ウイルス、ジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）、ニューモウイルス属（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ）（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス肺炎ウイルス）を含めたパラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科）；ベシクロウイルス属（Ｖｅｓｉｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）（ＶＳＶ）、（チャンディプラウイルス、フランダース−ハートパークウイルス）、リッサウイルス属（Ｌｙｓｓａｖｉｒｕｓ）（狂犬病ウイルス）、魚ラブドウイルス、および２つの可能なラブドウイルス（マールブルグウイルスとエボラウイルス）を含めたラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭ）、タカリベウイルス群、およびラッサウイルスを含めたアレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）；感染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、肝炎ウイルス、ヒト腸内コロナウイルス、およびネコ感染性腹膜炎（ネココロナウイルス）を含めたコロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）のメンバーが含まれる。
【００６５】
脊椎動物における感染性因子である例示的なＤＮＡウイルスには、それだけには限定されないが、オルトポックスウイルス属（Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）（大痘瘡、小痘瘡、サル痘ワクシニア、牛痘、水牛痘、ウサギ痘、奇肢症）、レポリポックスウイルス属（Ｌｅｐｏｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）（粘液腫、線維腫）、トリポックスウイルス属（Ａｖｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）（鶏痘、他のトリポックスウイルス）、カプリポックスウイルス属（Ｃａｐｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）（ヒツジ痘、ヤギ痘）、ブタポックスウイルス属（Ｓｕｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）（豚痘）、パラポックスウイルス属（Ｐａｒａｐｏｘｖｉｒｕｓ）（伝染性膿疱性皮膚炎ウイルス、偽牛痘、ウシ丘疹性口内炎ウイルス）を含めたポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）；イリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（アフリカブタ発熱ウイルス、カエルウイルス２および３、魚のリンパ膿腫ウイルス）；アルファヘルペスウイルス（１および２型単純ヘルペス、水痘帯状疱疹、ウマ流産ウイルス、ウマヘルペスウイルス２および３、仮性狂犬病ウイルス、感染性ウシ角結膜炎ウイルス、感染性ウシ鼻気管炎ウイルス、ネコ鼻気管炎ウイルス、感染性喉頭気管炎ウイルス）、ベータヘルペスウイルス（ヒトサイトメガロウイルスおよびブタやサルのサイトメガロウイルス）；ガンマヘルペスウイルス（エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、マレック病ウイルス、ヘルペス・サイミリ（Ｈｅｒｐｅｓ  ｓａｉｍｉｒｉ）、ヘルペスウイルス・アテレス（ａｔｅｌｅｓ）、ヘルペスウイルス・シルビラグス（ｓｙｌｖｉｌａｇｕｓ）、モルモットヘルペスウイルス、リュッケ腫瘍ウイルス）を含めたヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）；マストアデノウイルス属（Ｍａｓｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）（ヒト亜群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、および分類されていないもの）；サルアデノウイルス（少なくとも２３個の血清型）、感染性イヌ肝炎、および畜牛、ブタ、ヒツジ、カエルや多くの他の種のアデノウイルス、アビアデノウイルス属（Ａｖｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）（トリアデノウイルス）；培養不可能アデノウイルスを含めたアデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、パピローマウイルス属（Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ）（ヒトパピローマウイルス、ウシパピローマウイルス、ショープウサギパピローマウイルス、および他の種の様々な病原性パピローマウイルス）、ポリオーマウイルス属（Ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓ）（ポリオーマウイルス、サル空砲化剤（ＳＶ−４０）、ウサギ空砲化剤（ＲＫＶ）、Ｋウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、および他の霊長類ポリオーマウイルス、例えばリンパ増殖性パピローマウイルス）を含めたパポウイルス科（Ｐａｐｏｖｉｒｉｄａｅ）；アデノ関連ウイルス属、パルボウイルス属（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）（ネコ汎白血球減少症ウイルス、ウシパルボウイルス、イヌパルボウイルス、アリューシャンミンク病ウイルスなど）を含めたパルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）が含まれる。最後に、ＤＮＡウイルスには、クールー病およびクロイツフェルト−ヤコブ病ウイルスならびに慢性感染性神経因性因子（ＣＨＩＮＡウイルス）などの、上記の科に当てはまらないウイ���スも含まれ得る。
【００６６】
核酸は、抗微生物剤と共に対象に投与し得る。本明細書中で使用する「抗微生物剤」とは、感染性微生物を死滅または阻害することができる、天然に存在する、合成、または半合成の化合物をいう。抗微生物剤の種類は、対象が感染している、または感染する危険性にある微生物の種類に依存する。抗微生物剤には、それだけには限定されないが、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤および抗寄生生物剤が含まれる。「抗感染剤」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生生物剤」、および「寄生生物駆除剤」などの語句は、当業者に十分に確立された意味を有し、標準の医学的教科書に定義されている。手短に述べると、抗細菌剤は細菌を死滅または阻害し、抗生物質および同様の機能を有する他の合成または天然の化合物が含まれる。抗生物質とは、微生物などの細胞によって二次代謝物として産生される低分子量の分子である。一般に、抗生物質は、微生物に特異的であり宿主細胞中に存在しない、１つまたは複数の細菌の機能または構造を妨害する。抗ウイルス剤は、天然源から単離するか、または合成することができ、ウイルスを死滅または阻害するために有用である。抗真菌剤は、表在性の真菌感染ならびに日和見性および原発性の全身性真菌感染を治療するために使用する。抗寄生生物剤は、寄生生物を死滅または阻害する。
【００６７】
抗細菌剤は、細菌を死滅させる、または細菌の成長もしくは機能を阻害する。抗細菌剤の大きなクラスは抗生物質である。広範囲の細菌の死滅または阻害に有効な抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他の種類の抗生物質は、主にグラム陽性またはグラム陰性のクラスの細菌に対して有効である。これらの種類の抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に対して有効であり、他の種類の細菌に対しては有効でない他の抗生物質は、限定域抗生物質と呼ばれる。抗細菌剤は、その主な作用機構に基づいて分類される場合がある。一般に、抗細菌剤は、細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク質合成阻害剤、核酸合成または機能阻害剤、および競合的阻害剤である。
【００６８】
抗ウイルス剤とは、ウイルスによる細胞の感染または細胞内でのウイルスの複製を防止する化合物である。ウイルス複製のプロセスは宿主細胞内のＤＮＡ複製に非常に密に関連しており、非特異的な抗ウイルス剤は多くの場合宿主に有毒となるため、抗ウイルス薬は抗細菌薬よりもはるかに少ない。ウイルス感染プロセス中には、抗ウイルス剤によって遮断または阻害することができるいくつかの段階が存在する。これらの段階には、ウイルスと宿主細胞との結合（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱外被（例えばアマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成翻訳（例えばインターフェロン）、ウイルスのＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えばヌクレオシド類似体）、新しいウイルスタンパク質の成熟（例えばプロテアーゼ阻害剤）、ウイルスの出芽および放出が含まれる。
【００６９】
ヌクレオチド類似体とは、ヌクレオチドに類似しているが、未完成または異常なデオキシリボースまたはリボース基を有する合成化合物である。ヌクレオチド類似体は、細胞内に入った後、リン酸化されて三リン酸形態を生じ、これは、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ内への取り込みに関して正常なヌクレオチドと競合する。ヌクレオチド類似体の三リン酸形態が成長中の核酸鎖内に取り込まれた後、これはウイルスポリメラーゼとの不可逆的な会合、したがって鎖の終結をもたらす。ヌクレオチド類似体には、それだけには限定されないが、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの治療に使用）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの治療に有用）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの治療に有用）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ならびにジドブジン（アジドチミジン）が含まれる。
【００７０】
抗真菌剤は感染性真菌の治療および予防に有用である。抗真菌剤は、その作用機構によって分類される場合がある。一部の抗真菌剤は、グルコース合成酵素を阻害することによって細胞壁阻害剤として機能する。これらには、それだけには限定されないが、バシウンギン／ＥＣＢが含まれる。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化することによって機能する。これらには、それだけには限定されないが、イミダゾール、例えばクロトリマゾール、セルタコンゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびボリコナコール、ならびにＦＫ４６３、アムホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジミシン、ＵＫ２９２、ブテナフィン、およびテルビナフィンが含まれる。他の抗真菌剤は、キチン（例えばキチナーゼ）の免疫抑制を崩壊させることによって機能する（５０１クリーム）。
【００７１】
免疫賦活性核酸は、単独で、または抗癌治療と組み合わせて、癌を治療するために使用し得る。この方法には、癌を治療するために、癌を有する、またはそれを生じる危険性にある対象に、有効量の本発明の免疫賦活性核酸を投与することを伴う。
【００７２】
「癌を有する対象」とは、検出可能な癌細胞を有する対象である。癌は、悪性または非悪性の癌であり得る。癌または腫瘍には、それだけには限定されないが、胆管癌；脳癌；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；黒色腫；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌；精巣癌；甲状腺癌；腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫が含まれる。一実施形態では、癌は、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平細胞癌、腎細胞癌、前立腺癌腫、膀胱細胞癌腫、または結腸癌が含まれる。
【００７３】
癌は、コンパニオン動物（すなわち猫および犬）における主要な死因の１つである。犬および猫で一般的に診断される悪性障害には、それだけには限定されないが、リンパ肉腫、骨肉腫、乳癌、肥満細胞腫、脳腫瘍、黒色腫、腺扁平上皮癌、カルチノイド肺腫瘍、気管支腺腫瘍、細気管支腺癌、線維腫、粘液軟骨腫、肺肉腫、神経肉腫、骨腫、乳頭腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、バーキットリンパ腫、小神経膠細胞腫、神経芽細胞腫、骨巨細胞腫、口腔新形成、線維肉腫、骨肉腫および横紋筋肉腫が含まれる。犬における他の新生物には、生殖器扁平細胞癌、感染性性病性腫瘍、精巣腫瘍、精上皮腫、セルトリ細胞腫瘍、血管外皮細胞腫、組織球腫、緑色腫（顆粒球性肉腫）、角膜乳頭腫、角膜扁平細胞癌、血管肉腫、胸膜中皮腫、基底細胞腫瘍、胸腺腫、胃腫瘍、副腎癌腫、口腔乳頭腫、血管内皮腫および嚢胞線腫が含まれる。猫において診断されるさらなる悪性疾患には、濾胞性リンパ腫、腸管リンパ肉腫、線維肉腫および肺扁平細胞癌が含まれる。これまで以上に人気のあるハウスペットであるフェレットは、膵島細胞腫、リンパ腫、肉腫、神経腫、膵島細胞腫瘍、胃ＭＡＬＴリンパ腫および胃腺癌を発生することが知られている。
【００７４】
また、本明細書中に記載した免疫賦活性核酸は、抗癌治療と併せて投与してもよい。抗癌治療には、癌医薬品、放射線照射および外科的処置が含まれる。本明細書中で使用する「癌医薬品」とは、癌を治療することを目的として対象に投与する薬剤をいう。癌を治療するための様々な種類の医薬品を本明細書中に記載する。本明細書の目的のために、癌医薬品は、化学療法剤、免疫治療剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生物学的応答調節物質として分類する。
【００７５】
モノクローナル抗体などの免疫治療剤と併せた免疫賦活性核酸は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の顕著な増強、ＮＫ細胞の活性化およびＩＦＮ−αレベルの増加を含めたいくつかの機構によって、長期生存を増加させることができる。ＡＤＣＣは、免疫賦活性核酸を、癌細胞などの細胞標的に特異的な抗体と組み合わせて使用して、行うことができる。免疫賦活性核酸を、抗体と併せて対象に投与した場合、対象の免疫系が誘発されて腫瘍細胞を死滅させる。ＡＤＣＣ手順において有用な抗体には、体内の細胞と相互作用する抗体が含まれる。細胞標的に特異的な多くのそのような抗体が当分野で記載されており、多くが市販されている。核酸は、モノクローナル抗体と組み合わせて使用した場合に、生物学的結果を達成するために必要な抗体の用量を減少させる役割を果たす。
【００７６】
本発明の一実施形態では、本明細書中に記載の免疫賦活性核酸および医薬組成物と併せて使用する抗癌剤は、抗血管形成剤（例えば、腫瘍が新しい血管を発生することを停止させる薬剤）である。抗血管形成剤の例には、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＴＩＥ−２阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、アンジオポエチン阻害剤、ＰＫＣβ阻害剤、ＣＯＸ−２（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤、インテグリン（α−ｖ／β−３）、ＭＭＰ−２（マトリックスメタロプロテイナーゼ２）阻害剤、およびＭＭＰ−９（マトリックスメタロプロテイナーゼ９）阻害剤が含まれる。
【００７７】
好ましい抗血管形成剤には、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、アキシチニブ（ＡＧ１３７３６）、ＳＵ１４８１３（Ｐｆｉｚｅｒ）、およびＡＧ１３９５８（Ｐｆｉｚｅｒ）が含まれる。
【００７８】
さらなる抗血管形成剤には、バタラニブ（ＣＧＰ７９７８７）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（商標））、ペガプタニブオクタナトリウム（Ｍａｃｕｇｅｎ（商標））、バンデタニブ（Ｚａｃｔｉｍａ（商標））、ＰＦ−０３３７２１０（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＳＵ１４８４３（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＡＺＤ２１７１（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（商標））、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ（商標）（ＡＥ９４１）、テトラチオモリブデータ（Ｃｏｐｒｅｘａ（商標））、ＡＭＧ７０６（Ａｍｇｅｎ）、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ（ＡＶＥ０００５）、ＣＥＰ７０５５（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＸＬ８８０（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、テラチニブ（ｔｅｌａｔｉｎｉｂ）（ＢＡＹ５７−９３５２）、およびＣＰ−８６８，５９６（Ｐｆｉｚｅｒ）が含まれる。
【００７９】
他の抗血管形成剤には、エンザスタウリン（ＬＹ３１７６１５）、ミドスタウリン（ＣＧＰ４１２５１）、ペリホシン（ＫＲＸ０４０１）、テプレノン（Ｓｅｌｂｅｘ（商標））およびＵＣＮ０１（協和発酵）が含まれる。
【００８０】
本明細書中に記載の免疫賦活性核酸および医薬組成物と併せて使用することができる抗血管形成剤の他の例には、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（商標））、パレコキシブ（Ｄｙｎａｓｔａｔ（商標））、デラコキシブ（ＳＣ５９０４６）、ルミラコキシブ（Ｐｒｅｉｇｅ（商標））、バルデコキシブ（Ｂｅｘｔｒａ（商標））、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ（商標））、イグラチモド（Ｃａｒｅｒａｍ（商標））、ＩＰ７５１（Ｉｎｖｅｄｕｓ）、ＳＣ−５８１２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）およびエトリコキシブ（Ａｒｃｏｘｉａ（商標））が含まれる。
【００８１】
他の抗血管形成剤には、エクシスリンド（Ａｐｔｏｓｙｎ（商標））、サルサレート（Ａｍｉｇｅｓｉｃ（商標））、ジフルニサル（Ｄｏｌｏｂｉｄ（商標））、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ（商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｕｄｉｓ（商標））、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（商標））、ピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ（商標））、ナプロキセン（Ａｌｅｖｅ（商標）、Ｎａｐｒｏｓｙｎ（商標））、ジクロフェナク（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（商標））、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ（商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（商標））、トルメチン（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（商標））、ケトロラック（Ｔｏｒａｄｏｌ（商標））、およびオキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（商標））が含まれる。
【００８２】
他の抗血管形成剤には、ＡＢＴ５１０（Ａｂｂｏｔｔ）、アプラタスタット（ＴＭＩ００５）、ＡＺＤ８９５５（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、インサイクリニド（Ｍｅｔａｓｔａｔ（商標））、およびＰＣＫ３１４５（Ｐｒｏｃｙｏｎ）が含まれる。
【００８３】
他の抗血管形成剤には、アシトレチン（Ｎｅｏｔｉｇａｓｏｎ（商標））、プリチデプシン（ａｐｌｉｄｉｎｅ（商標））、シレングチド（ＥＭＤ１２１９７４）、コンブレタスタチンＡ４（ＣＡ４Ｐ）、フェンレチニド（４ＨＰＲ）、ハロフギノン（Ｔｅｍｐｏｓｔａｔｉｎ（商標））、Ｐａｎｚｅｍ（商標）（２−メトキシエストラジオール）、ＰＦ−０３４４６９６２（Ｐｆｉｚｅｒ）、レビマスタット（ＢＭＳ２７５２９１）、カツマキソマブ（Ｒｅｍｏｖａｂ（商標））、レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（商標））、スクワラミン（ＥＶＩＺＯＮ（商標））、サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（商標））、Ｕｋｒａｉｎ（商標）（ＮＳＣ６３１５７０）、Ｖｉｔａｘｉｎ（商標）（ＭＥＤＩ５２２）、およびゾレドロン酸（Ｚｏｍｅｔａ（商標））が含まれる。
【００８４】
別の実施形態では、抗癌剤は、いわゆるシグナル伝達阻害剤である（例えば、制御分子が、細胞内の細胞の成長、分化、および生存の通信の基礎的プロセスを支配する手段を阻害する）。シグナル伝達阻害剤には、小分子、抗体、およびアンチセンス分子が含まれる。シグナル伝達阻害剤には、例えば、キナーゼ阻害剤（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤またはセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤）および細胞周期阻害剤が含まれる。より具体的には、シグナル伝達阻害剤には、例えば、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＥＧＦ阻害剤、ＥｒｂＢ−１（ＥＧＦＲ）、ＥｒｂＢ−２、ｐａｎ  ｅｒｂ、ＩＧＦ１Ｒ阻害剤、ＭＥＫ、ｃ−Ｋｉｔ阻害剤、ＦＬＴ−３阻害剤、Ｋ−Ｒａｓ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＳＴＡＴ阻害剤、Ｒａｆキナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、Ｐ７０Ｓ６キナーゼ阻害剤、ＷＮＴ経路の阻害剤およびいわゆる複数標的キナーゼ阻害剤が含まれる。
【００８５】
好ましいシグナル伝達阻害剤には、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標））、およびＰＤ３２５９０１（Ｐｆｉｚｅｒ）が含まれる。
【００８６】
本明細書中に記載の免疫賦活性核酸および医薬組成物と併せて使用し得るシグナル伝達阻害剤のさらなる例には、ＢＭＳ２１４６６２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ロナファルニブ（Ｓａｒａｓａｒ（商標））、ペリトレキソール（ＡＧ２０３７）、マツズマブ（ＥＭＤ７２００）、ニモツズマブ（ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈ−Ｒ３（商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標））、バンデタニブ（Ｚａｃｔｉｍａ（商標））、パゾパニブ（ＳＢ７８６０３４）、ＡＬＴ１１０（Ａｌｔｅｒｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＢＩＢＷ２９９２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、およびＣｅｒｖｅｎｅ（商標）（ＴＰ３８）が含まれる。
【００８７】
シグナル伝達阻害剤の他の例には、ＰＦ−２３４１０６６（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＦ−２９９８０４（Ｐｆｉｚｅｒ）、カネルチニブ（ＣＩ１０３３）、ペルツズマブ（Ｏｍｎｉｔａｒｇ（商標））、ラパチニブ（Ｔｙｃｅｒｂ（商標））、ペリチニブ（ＥＫＢ５６９）、ミルテフォシン（Ｍｉｌｔｅｆｏｓｉｎ（商標））、ＢＭＳ５９９６２６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ラプロイセル−Ｔ（Ｎｅｕｖｅｎｇｅ（商標））、ＮｅｕＶａｘ（商標）（Ｅ７５癌ワクチン）、Ｏｓｉｄｅｍ（商標）（ＩＤＭ１）、ムブリチニブ（ＴＡＫ−１６５）、ＣＰ−７２４，７１４（Ｐｆｉｚｅｒ）、およびパニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標））が含まれる。
【００８８】
シグナル伝達阻害剤の他の例には、ＡＲＲＹ１４２８８６（Ａｒｒａｙ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ）、エベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標））、ゾタロリムス（Ｅｎｄｅａｖｏｒ（商標））、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（商標））、ＡＰ２３５７３（ＡＲＩＡＤ）、およびＶＸ６８０（Ｖｅｒｔｅｘ）が含まれる。
【００８９】
さらに、他のシグナル伝達阻害剤には、ＸＬ６４７（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（商標））、ＬＥ−ＡＯＮ（ジョージタウン大学）、およびＧＩ−４０００（ＧｌｏｂｅＩｍｍｕｎｅ）が含まれる。
【００９０】
他のシグナル伝達阻害剤には、ＡＢＴ７５１（Ａｂｂｏｔｔ）、アルボシディブ（フラボピリドール）、ＢＭＳ３８７０３２（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ）、ＥＭ１４２１（Ｅｒｉｍｏｓ）、インジスラム（Ｅ７０７０）、セリシクリブ（ＣＹＣ２００）、ＢＩＯ１１２（Ｏｎｃ  Ｂｉｏ）、ＢＭＳ３８７０３２（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＰＤ０３３２９９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、およびＡＧ０２４３２２（Ｐｆｉｚｅｒ）が含まれる。
【００９１】
本発明は、古典的な抗新生物剤と一緒に用いる本明細書中に記載の免疫賦活性核酸の使用を企図する。古典的な抗新生物剤には、それだけには限定されないが、ホルモン剤、抗ホルモン剤、アンドロゲン作用剤、アンドロゲン拮抗剤および抗エストロゲン治療剤などのホルモン調節剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、遺伝子サイレンシング剤または遺伝子活性化剤、リボヌクレアーゼ、プロテオソーム剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、カンプトテシン誘導体、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ−１（ＰＡＲＰ−１）阻害剤、微小管阻害剤、抗生物質、植物由来紡錘体阻害剤、白金配位化合物、遺伝子治療剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、血管標的化剤（ＶＴＡ）、ならびにスタチンが含まれる。
【００９２】
本明細書中に記載の免疫賦活性核酸との組合せ療法で、任意選択で１つまたは複数の他の薬剤と共に使用する古典的な抗新生物剤の例には、それだけには限定されないが、糖質コルチコイド、例えば、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、およびプロゲスチン、例えば、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ）、ミフェプリストン（ＲＵ−４８６）、選択的エストロゲン受容体調節剤（タモキシフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、アフィモキシフェン、アルゾキシフェン、バゼドキシフェン、フィスペミフェン、オルメロキシフェン、オスペミフェン、テスミリフェン、トレミフェン、トリロスタン、ＣＨＦ４２２７（Ｃｈｅｉｓｉ）などのＳＥＲＭ）、選択的エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（フルベストラントなどのＳＥＲＤ）、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ）、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ）、アタメスタン、ファドロゾール、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ）、一般的に黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作用剤と呼ばれるゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）作用剤、例えば、ブセレリン（Ｓｕｐｒｅｆａｃｔ）、ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ）、ロイプロレリン（Ｌｕｐｒｏｎ）、トリプトレリン（Ｔｒｅｌｓｔａｒ）、アバレリックス（Ｐｌｅｎａｘｉｓ）、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ）、シプロテロン、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ）、メゲストロール、ニルタミド（Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ）、オサテロン、デュタステリド、エプリステリド、フィナステリド、ノコギリヤシ（Ｓｅｒｅｎｏａ  ｒｅｐｅｎｓ）、ＰＨＬ００８０１、アバレリックス、ゴセレリン、ロイプロレリン、トリプトレリン、ビカルタミド、タモキシフェン、エキセメスタン、アナストロゾール、ファドロゾール、フォルメスタン、およびレトロゾール、ならびにその組合せが含まれる。
【００９３】
本明細書中に記載の免疫賦活性核酸と組み合わせて使用する古典的な抗新生物剤の他の例には、それだけには限定されないが、スベロールアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｃ．／Ａｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、デプシペプチド（ＦＲ９０１２２８またはＦＫ２２８）、Ｇ２Ｍ−７７７、ＭＳ−２７５、ピバロイルオキシメチルブチレートおよびＰＸＤ−１０１；Ｏｎｃｏｎａｓｅ（ランピルナーゼ）、ＰＳ−３４１（ＭＬＮ−３４１）、Ｖｅｌｃａｄｅ（ボルテゾミブ）、ベロテカン、ＢＮ−８０９１５（Ｒｏｃｈｅ）、カンプトテシン、ジフロモテカン、エドテカリン、エキサテカン（Ｄａｉｉｃｈｉ）、ギマテカン、イリノテカンＨＣｌ（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）、ルルトテカン、Ｏｒａｔｈｅｃｉｎ（ルビテカン、Ｓｕｐｅｒｇｅｎ）、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、エドテカリン、トポテカン、アクラルビシン、アドリアマイシン、アモナフィド、アムルビシン、アンナマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エルサミツルシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、ガラルビシン、ヒドロキシカルバミド、ネモルビシン、ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（ミトキサントロン）、ピラルビシン、ピクサントロン、プロカルバジン、レベッカマイシン、ソブゾキサン、タフルポシド、バルルビシン、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（デクスラゾキサン）、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、シクロホスファミド、ＡＭＤ−４７３、アルトレタミン、ＡＰ−５２８０、アパジクオン、ブロスタリシン、ベンダムスチン、ブスルファン、カルボコン、カルムスチン、クロラムブシル、ダカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、グルフォスファミド、イホスファミド、ＫＷ−２１７０、ロムスチン、マフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、マイトマイシンＣ、ミトキサトロン、ニムスチン、ラニムスチン、テモゾロマイド、チオテパ、および白金配位アルキル化化合物、例えば、シスプラチン、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（カルボプラチン）、エプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（オキサリプラチン、Ｓａｎｏｆｉ）、ストレプトゾシン、サトルプラチン、ならびにその組合せが含まれる。
【００９４】
本発明はまた、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤（メトトレキサートおよびＮｅｕＴｒｅｘｉｎ（グルクロン酸トリメトレセート）など）、プリン拮抗剤（６−メルカプトプリンリボシド、メルカプトプリン、６−チオグアニン、クラドリビン、クロファラビン（Ｃｌｏｌａｒ）、フルダラビン、ネララビン、およびラルチトレキセドなど）、ピリミジン拮抗剤（５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）、Ａｌｉｍｔａ（プレメトレキセド二ナトリウム、ＬＹ２３１５１４、ＭＴＡ）、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（商標））、シトシンアラビノシド、Ｇｅｍｚａｒ（商標）（ゲムシタビン、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、テガフール（ＵＦＴ  ＯｒｚｅｌまたはＵｆｏｒａｌ；テガフール、ギメスタットおよびオトスタットのＴＳ−１組合せを含む）、ドキシフルリジン、カルモフル、シタラビン（オクホスファート、ホスフェート、ステアレート、持続放出およびリポソーム形態を含む）、エノシタビン、５−アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ）、デシタビン、およびエチニルシチジン）、他の代謝拮抗剤、例えば、エフロルニチン、ヒドロキシ尿素、ロイコボリン、ノラトレキセド（Ｔｈｙｍｉｔａｑ）、ｔｒｉａｐｉｎｅ、トリメトレキセート、Ｎ−（５−［Ｎ−（３，４−ジヒドロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］−２−テノイル）−Ｌ−グルタミン酸、ＡＧ−０１４６９９（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、ＡＢＴ−４７２（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＩＮＯ−１００１（Ｉｎｏｔｅｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＫＵ−０６８７（ＫｕＤＯＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＧＰＩ１８１８０（Ｇｕｉｌｆｏｒｄ  Ｐｈａｒｍ  Ｉｎｃ）、ならびにその組合せと一緒に用いる、本明細書中に記載の免疫賦活性核酸の化合物の使用も企図する。
【００９５】
本明細書中に記載の免疫賦活性核酸との組合せ療法で、任意選択で１つまたは複数の他の薬剤と共に使用する古典的な抗新生物性細胞毒性剤の他の例には、それだけには限定されないが、Ａｂｒａｘａｎｅ（Ａｂｒａｘｉｓ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．）、Ｂａｔａｂｕｌｉｎ（Ａｍｇｅｎ）、ＥＰＯ９０６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ネオカルジノスタチン（ジノスタチン）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）、オルタタキセル、パクリタキセル（Ｔａｘｏｐｒｅｘｉｎ、ＤＨＡ／パシルタキセルのコンジュゲートを含む）、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）、サトラプラチン、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ、アリトレチノイン、カンフォスファミド（Ｔｅｌｃｙｔａ（商標））、ＤＭＸＡＡ（Ａｎｔｉｓｏｍａ）、イバンドロン酸、Ｌ−アスパラギナーゼ、ペグアスパルガーゼ（Ｏｎｃａｓｐａｒ（商標））、エファプロキシラル（Ｅｆａｐｒｏｘｙｎ（商標）−放射線療法）、ベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標））、テスミリフェン（ＤＰＰＥ−細胞毒性剤の有効性を増強する）、Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ（商標）（Ｂｉｏｍｉｒａ）、トレチノイン（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（商標））、チラパザミン（Ｔｒｉｚａｏｎｅ（商標））、モテキサフィンガドリニウム（Ｘｃｙｔｒｉｎ（商標））、Ｃｏｔａｒａ（商標）（ｍＡｂ）、ＮＢＩ−３００１（Ｐｒｏｔｏｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ポリグルタミン酸−パクリタキセル（Ｘｙｏｔａｘ（商標））およびその組合せが含まれる。
【００９６】
本明細書中に記載の免疫賦活性核酸との組合せ療法で、任意選択で１つまたは複数の他の薬剤と共に使用する古典的な抗新生物剤のさらなる例には、それだけには限定されないが、Ａｄｖｅｘｉｎ（ＩＮＧ２０１）、ＴＮＦｅｒａｄｅ（ＧｅｎｅＶｅｃ、放射線療法に応答してＴＮＦαを発現する化合物）、ＲＢ９４（ベイラー医科大学）、Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（オブリマーセン、Ｇｅｎｔａ）、コンブレタスタチンＡ４Ｐ（ＣＡ４Ｐ）、Ｏｘｉ−４５０３、ＡＶＥ−８０６２、ＺＤ−６１２６、ＴＺＴ−１０２７、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、プロバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｃ．）、シンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｃ．）、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、セリバスタチン（Ｂａｙｃｏｌ、Ｂａｙｅｒ）、ロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロボスタチン、ナイアシン（Ａｄｖｉｃｏｒ、Ｋｏｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｃａｄｕｅｔ、Ｌｉｐｉｔｏｒ、トルセトラピブ、およびその組合せが含まれる。
【００９７】
本発明の別の実施形態は、ヒトに、一定量の本明細書中に記載の免疫賦活性核酸を、トラスツズマブ、タモキシフェン、ドセタキセル、パクリタキセル、カペシタビン、ゲムシタビン、ビノレルビン、エキセメスタン、レトロゾールおよびアナストロゾールからなる群から選択される１つまたは複数（好ましくは１〜３つ）の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、そのような治療を必要としているヒトにおいて乳癌を治療する方法に関する。
【００９８】
一実施形態では、本発明は、一定量の本明細書中に記載の免疫賦活性核酸を、１つまたは複数（好ましくは１〜３つ）の抗癌剤と組み合わせて投与することによる、そのような治療を必要としているヒトなどの哺乳動物において結腸直腸癌を治療する方法を提供する。具体的な抗癌剤の例には、アジュバント化学療法で典型的に用いるもの、例えば、ＦＯＬＦＯＸ、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）またはカペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、ロイコボリンおよびオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）の組合せが含まれる。具体的な抗癌剤のさらなる例には、転移性疾患の化学療法で典型的に用いるもの、例えば、ＦＯＬＦＯＸまたはベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）と組み合わせたＦＯＬＦＯＸ；ならびにＦＯＬＦＩＲＩ、５−ＦＵまたはカペシタビン、ロイコボリンおよびイリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）の組合せが含まれる。さらなる例には、１７−ＤＭＡＧ、ＡＢＸ−ＥＦＲ、ＡＭＧ−７０６、ＡＭＴ−２００３、ＡＮＸ−５１０（補因子）、ａｐｌｉｄｉｎｅ（プリチデプシン、Ａｐｌｉｄｉｎ）、アロプラチン、アキシチニブ（ＡＧ−１３７３６）、ＡＺＤ−０５３０、ＡＺＤ−２１７１、バチルス・カルメット−ゲラン（ＢＣＧ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、ＢＩＯ−１１７、ＢＩＯ−１４５、ＢＭＳ−１８４４７６、ＢＭＳ−２７５１８３、ＢＭＳ−５２８６６４、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、Ｃ−１３１１（Ｓｙｍａｄｅｘ）、カンツズマブメルタンシン、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、クロファラビン（Ｃｌｏｆａｒｅｘ）、ＣＭＤ−１９３、コンブレタスタチン、Ｃｏｔａｒａ、ＣＴ−２１０６、ＣＶ−２４７、デシタビン（Ｄａｃｏｇｅｎ）、Ｅ−７０７０、Ｅ−７８２０、エドテカリン、ＥＭＤ−２７３０６６、エンザスタウリン（ＬＹ−３１７６１５）エポチロンＢ（ＥＰＯ−９０６）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）、フラボピリドール、ＧＣＡＮ−１０１、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）、ｈｕＡ３３、ｈｕＣ２４２−ＤＭ４、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）、インジスラム、ＩＮＧ−１、イリノテカン（ＣＰＴ−１１、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）ＩＳＩＳ２５０３、イクサベピロン、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、マパツムマブ（ＨＧＳ−ＥＴＲ１）、ＭＢＴ−０２０６、ＭＥＤＩ−５２２（Ａｂｒｅｇｒｉｎ）、マイトマイシン、ＭＫ−０４５７（ＶＸ−６８０）、ＭＬＮ−８０５４、ＮＢ−１０１１、ＮＧＲ−ＴＮＦ、ＮＶ−１０２０、オブリマーセン（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ、Ｇ３１３９）、ＯｎｃｏＶｅｘ、ＯＮＹＸ０１５（ＣＩ−１０４２）、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）、パニツムマブ（ＡＢＸ−ＥＧＦ、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ）、ＰＤ−３２５９０１、ＰＦ−０３３７２１０、ＰＦ−２３４１０６６、ＲＡＤ−００１（エベロリムス）、ＲＡＶ−１２、レスベラトロール、Ｒｅｘｉｎ−Ｇ、Ｓ−１（ＴＳ−１）、セリシクリブ、ＳＮ−３８リポソーム、スチボグルコン酸ナトリウム（ＳＳＧ）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）、ＳＵ−１４８１３、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ）、テムシロリムス（ＣＣＩ７７９）、テトラチオモリブデート、ｔｈａｌｏｍｉｄｅ、ＴＬＫ−２８６（Ｔｅｌｃｙｔａ）、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）、トラベクテジン（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７）、ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ（ＳＡＨＡ、Ｚｏｌｉｎｚａ）、ＷＸ−ＵＫ１、およびＺＹＣ３００が含まれ、組合せ抗癌剤の量と一緒にした活性剤の量は、結腸直腸癌を治療するために有効である。
【００９９】
別の実施形態は、ヒトに、一定量の本明細書中に記載の免疫賦活性核酸を、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、インターフェロンα、インターロイキン−２、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、サリドマイド、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７）、Ｓｕｔｅｎｔ、ＡＧ−１３７３６、ＳＵ−１１２４８、Ｔａｒｃｅｖａ、Ｉｒｅｓｓａ、ラパチニブおよびＧｌｅｅｖｅｃからなる群から選択される１つまたは複数（好ましくは１〜３つ）の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、そのような治療を必要としているヒトにおいて腎細胞癌を治療する方法に関し、組合せ抗癌剤の量と一緒にした活性剤の量は、腎細胞癌を治療するために有効である。
【０１００】
別の実施形態は、ヒトに、一定量の本明細書中に記載の免疫賦活性核酸を、インターフェロンα、インターロイキン−２、テモゾマイド（テモダール）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）、パクリタキセル、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、カルムスチン（ＢＣＮＵとしても知られる）、シスプラチン、ビンブラスチン、タモキシフェン、ＰＤ−３２５，９０１、アキシチニブ、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、サリドマイド、ソラファニブ、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７）、Ｓｕｔｅｎｔ、ＣｐＧ−７９０９、ＡＧ−１３７３６、Ｉｒｅｓｓａ、ラパチニブおよびＧｌｅｅｖｅｃからなる群から選択される１つまたは複数（好ましくは１〜３つ）の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、そのような治療を必要としているヒトにおいて黒色腫を治療する方法に関し、組合せ抗癌剤の量と一緒にした活性剤の量は、黒色腫を治療するために有効である。
【０１０１】
特に興味深い本発明の別の実施形態は、ヒトに、一定量の本明細書中に記載の免疫賦活性核酸を、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）、パクリタキセル、プレメトレキセド二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ）、Ｔａｒｃｅｖａ、Ｉｒｅｓｓａ、ビノレルビン、イリノテカン、エトポシド、ビンブラスチン、およびＰａｒａｐｌａｔｉｎ（カルボプラチン）からなる群から選択される１つまたは複数（好ましくは１〜３つ）の抗癌剤と組み合わせて投与することを含む、そのような治療を必要としているヒトにおいて肺癌を治療する方法に関し、組合せ抗癌剤の量と一緒にした活性剤の量は、肺癌を治療するために有効である。
【０１０２】
癌ワクチンとは、癌細胞に対する内在性の免疫応答を刺激することを意図する医薬品である。現在生産されているワクチンは、主に液性免疫系（すなわち抗体依存性の免疫応答）を活性化する。現在開発中の他のワクチンは、腫瘍細胞を死滅させることができる、細胞毒性を有するＴリンパ球を含めた、細胞媒介性の免疫系を活性化させることに焦点を置いている。癌ワクチンは、一般に、抗原提示細胞（例えば、マクロファージおよび樹状細胞）ならびに／またはＴ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞などの他の免疫細胞の両方への、癌抗原の提示を増強させる。一部の例では、癌ワクチンは、上述のものなどのアジュバントと共に使用し得る。
【０１０３】
一部の癌細胞は抗原性であり、したがって、免疫系の標的とすることができる。免疫賦活性核酸と癌医薬品、特に癌免疫療法として分類されたものとの組合せ投与は、癌抗原に対する特異的免疫応答を刺激するために有用である。用語「癌抗原」および「腫瘍抗原」は、互換性があるように使用し、癌細胞によって発現に差異があり、したがって、癌細胞を標的化するために利用することができる抗原をいう。
【０１０４】
癌抗原とは、明らかに腫瘍に特異的な免疫応答を潜在的に刺激することができる、抗原である。これらの抗原の一部は正常細胞によってコードされているが、必ずしも発現はされない。これらの抗原は、正常細胞中で通常はサイレント（すなわち発現されない）もの、分化の特定の段階でのみ発現されるもの、ならびに胚性および胎児性抗原などの一時的に発現されるものとして特徴づけることができる。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば活性ｒａｓ癌遺伝子）、抑制遺伝子（例えば突然変異体ｐ５３）、および内部欠失または染色体転座から生じる発癌性融合タンパク質などの、突然変異細胞遺伝子によってコードされている。さらに他の癌抗原は、ＲＮＡおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に保有されるものなど、ウイルス遺伝子によってコードされ得る。「腫瘍関連」抗原は、腫瘍細胞および正常細胞のどちらにも存在するが、腫瘍細胞とは異なる量または異なる形態で存在する。そのような抗原の例は、腫瘍胎児性抗原（例えば癌胎児性抗原）、分化抗原（例えば、ＴおよびＴｎ抗原）、癌遺伝子産物（例えば、ＨＥＲ／ｎｅｕ）である。癌ワクチン中に存在するもの、または癌免疫療法を調製するために使用するものなどの癌抗原は、Ｃｏｈｅｎ，ＰＡ他（１９９４）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、５４（４）：１０５５〜５８に記載のように粗癌細胞抽出物から調製することによって、または、組換え技術もしくは既知の抗原の新規合成を用いて抗原を部分的に精製することによって、調製することができる。
【０１０５】
癌抗原は、特定の抗原の免疫原性部分の形態で使用するか、または一部の例では、全細胞もしくは腫瘍塊を抗原として使用することができる。そのような抗原は、組換えによってまたは当分野で知られている任意の他の手段によって、単離または調製することができる。
【０１０６】
他のワクチンは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで癌抗原に曝露され、抗原をプロセシングし、他の免疫系細胞への有効な抗原提示のために主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子との関連でその細胞表面で癌抗原を発現することができる、樹状細胞の形態をとる。樹状細胞は、その局所的環境中のリポ多糖（ＬＰＳ）などの微生物分子を検出する、その抗原提示およびそのパターン認識受容体の発現によって、先天性および後天性の免疫系を関連づける。
【０１０７】
開示した免疫賦活性核酸は、喘息を含めたアレルギーの治療に有用である。免疫賦活性核酸は、アレルギーを治療するために、単独で、またはアレルギー／喘息医薬品と組み合わせて使用することができる。この方法は、アレルギーまたは喘息状態を治療するために、アレルギーまたは喘息状態を有する、またはそれを生じる危険性にある対象に、有効量の本発明の免疫賦活性核酸を投与することを伴う。
【０１０８】
本明細書中で使用する「アレルギー」とは、物質（アレルゲン）に対する後天性の過敏症をいう。アレルギー状態には、湿疹、アレルギー性鼻炎または鼻感冒、枯草熱、喘息、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））および食品アレルギー、ならびに他のアトピー状態が含まれる。「アレルギーを有する対象」とは、アレルゲンに応答するアレルギー反応を有する、またはそれを生じる危険性にある対象である。「アレルゲン」とは、感受性のある対象においてアレルギーまたは喘息の応答を誘発することができる物質をいう。アレルゲンのリストは莫大であり、花粉、昆虫毒、動物鱗屑、粉塵、真菌胞子および薬物（例えばペニシリン）が含まれる場合がある。
【０１０９】
天然の動物および植物アレルゲンの例には、以下の属に特異的なタンパク質が含まれる：イヌ属（Ｃａｎｉｎｅ）（ケイネス・ファミリアリス（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ））；ヒョウヒダニ属（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ）（例えばコナニョウダニ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ））；ネコ属（Ｆｅｌｉｓ）（フェリス・ドメスティカス（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ））；ブタクサ属（Ａｍｂｒｏｓｉａ）（ブタクサ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ））；ロリウム属（Ｌｏｌｉｕｍ）（例えば、ホソムギ（Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ）またはネズミムギ（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））；スギ属（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ）（スギ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ））；アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）（アルテルナリア・アルテルナタ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ））；アルダー（Ａｌｄｅｒ）；ハンノキ属（Ａｌｎｕｓ）（ヨーロッパハンノキ（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏｓａ））；ベツラ属（Ｂｅｔｕｌａ）（ベツラ・ヴェルコサ（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ））；カシ属（Ｑｕｅｒｃｕｓ）（ホワイトオーク（Ｑｕｅｒｃｕａｌｂａ））；オリーブ属（Ｏｌｅａ）（オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ））；ヨモギ属（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ）（オウシュウヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ））；オオバコ属（Ｐｌａｎｔａｇｏ）（例えばヘラオオバコ（Ｐｌａｎｌａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ））；ヒカゲミズ属（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ）（例えば、パリエタリア・オフィチナリス（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）またはパリエタリア・ユダイカ（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａｊｕｄａｉｃａ））；チャバネゴキブリ属（Ｂｌａｔｔｅｌｌａ）（例えばチャバネゴキブリ（Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ））；アピス属（Ａｐｉｓ）（例えばドピス・ムルティフロレム（ｄｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））；イトスギ属（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ）（例えば、イタリアイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ）、アリゾナイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａ）およびモントレーイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ））；ジュニペルス属（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ）（例えば、ジュニペルス・サビノイド（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅ）、エンピツビャクシン（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、セイヨウネズ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）およびジュニペルス・アシェイ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ））；クロベ属（Ｔｈｕｙａ）（例えばコノテガシワ（Ｔｈｕｙ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ））；ヒノキ属（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ）（例えばヒノキ（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ））；ゴキブリ属（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ）（例えばワモンゴキブリ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ））；カモジグサ属（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ）（例えばヒメカモジグサ（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ））；ライムギ属（Ｓｅｃａｌｅ）（例えばライムギ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ））；コムギ属（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）（例えばコムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ））；カモガヤ属（Ｄａｃｔｙｌｉｓ）（例えばオーチャードグラス（Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ））；ウシノケグサ属（Ｆｅｓｔｕｃａ）（例えばヒロハウシノケグサ（Ｆｅｓｌｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ））；ポア属（Ｐｏａ）（例えば、ナガハグサ（Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）またはコイチゴツナギ（Ｐｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ））；アレナ属（Ａｒｅｎａ）（例えばエンバク（Ａｒｅｎａ  ｓａｔｉｖａ））；シラゲガヤ属（Ｈｏｌｃｕｓ）（例えばベルベットグラス（Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ））；ハルガヤ属（Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ）（例えばハルガヤ（Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ））；アルテナルム属（Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ）（例えばトールオートグラス（Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ））；コヌカグサ属（Ａｇｒｏｓｔｉｓ）（例えばコヌカグサ（Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ））；アワガエリ属（Ｐｈｌｅｕｍ）（例えばオオアワガエリ（Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ））；クサヨシ属（Ｐｈａｌａｒｉｓ）（例えばリードカナリーグラス（Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ））；スズメノヒエ属（Ｐａｓｐａｌｕｍ）（例えばバヒアグラス（Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ））；モロコシ属（Ｓｏｒｇｈｕｍ）（例えばセイバンモロコシ（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ））；ならびにスズメノチャヒキ属（Ｂｒｏｍｕｓ）（例えばスムースブロムグラス（Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ））。
【０１１０】
本明細書中で使用する「喘息」とは、炎症、気道の狭小化および吸入した因子に対する気道の反応の増加によって特徴づけられる、呼吸器系の障害をいう。喘息はしばしばアトピーまたはアレルギーの症状に関連しているが、排他的ではない。
【０１１１】
本明細書中で使用する「喘息／アレルギー医薬品」とは、症状を減少させる、喘息もしくはアレルギーの反応を阻害する、またはアレルギーもしくは喘息の反応の発生を予防する組成物である。喘息およびアレルギーを治療するための様々な種類の医薬品は、その内容の全体が本明細書中に参照により組み込まれている、「喘息を診断および管理するための指針（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｓｔｈｍａ）」、専門委員会報告書２（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｒｅｐｏｒｔ２）、ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、第９７／４０５１号（１９９７年７月１９日）に記載されている。ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎに記載の医薬品の要約を以下に提示する。
【０１１２】
ほとんどの実施形態では、喘息／アレルギー医薬品は、喘息およびアレルギーのどちらの治療にも、ある程度有用である。一部の喘息／アレルギー医薬品は、好ましくは、免疫賦活性核酸と組み合わせて使用して喘息を治療する。これらは喘息医薬品と呼ばれる。喘息医薬品には、それだけには限定されないが、ＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張剤／β−２作用剤、Ｋ＋チャネル開口剤、ＶＬＡ−４拮抗剤、ニューロキン拮抗剤、ＴＸＡ２合成阻害剤、キサンタニン、アラキドン酸拮抗剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、トロンボキシンＡ２受容体拮抗剤、トロンボキサンＡ２拮抗剤、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質の阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤が含まれる。
【０１１３】
他の喘息／アレルギー医薬品は、好ましくは、免疫賦活性核酸と組み合わせて使用してアレルギーを治療する。これらはアレルギー医薬品と呼ばれる。アレルギー医薬品には、それだけには限定されないが、抗ヒスタミン剤、ステロイド、免疫調節物質、およびプロスタグランジン誘発剤が含まれる。抗ヒスタミン剤とは、肥満細胞または好塩基球によって放出されるヒスタミンに対抗する化合物である。これらの化合物は当分野で周知であり、アレルギーの治療に一般的に使用されている。抗ヒスタミン剤には、それだけには限定されないが、ロラチジン、セチリジン、ブクリジン、セテリジン類似体、フェキソフェナジン、テルフェナジン、デスロラタジン、ノルアステミゾール、エピナスチン、エバスチン、エバスチニ（ｅｂａｓｔｉｎｉ）、アステミゾール、レボカバスチン、アゼラスチン、トラニラスト、テルフェナジン、ミゾラスチン、ベータタスチン、ＣＳ５６０、およびＨＳＲ１０  ６０９が含まれる。プロスタグランジン誘発剤とは、プロスタグランジン活性を誘発する化合物である。プロスタグランジンは、平滑筋の弛緩を調節することによって機能する。プロスタグランジン誘発剤には、それだけには限定されないが、Ｓ−５７５１が含まれる。
【０１１４】
ステロイドには、それだけには限定されないが、ベクロメタゾン、フルチカゾン、トラムシノロン、ブデソニド、コルチコステロイドおよびブデソニドが含まれる。免疫賦活性核酸およびステロイドの組合せは、若い対象（例えば小児）の治療に特に良好に適している。現在まで、小児におけるステロイドの使用は、一部のステロイド治療が成長遅延に関連しているという観察が報告されているために制限されてきた。したがって、本発明によれば、免疫賦活性核酸は、成長遅延ステロイドと組み合わせて使用することができ、それにより、「ステロイド減量効果（ｓｐａｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）」をもたらすことができる。２つの薬剤の組合せは、ステロイドの必要用量の低下をもたらすことができる。
【０１１５】
免疫調節物質には、それだけには限定されないが、抗炎症剤、ロイコトリエン拮抗剤、ＩＬ−４突然変異体タンパク質、可溶性ＩＬ−４受容体、免疫抑制剤（寛容化ペプチドワクチンなど）、抗ＩＬ−４抗体、ＩＬ−４拮抗剤、抗ＩＬ−５抗体、可溶性ＩＬ−１３受容体−Ｆｃ融合タンパク質、抗ＩＬ−９抗体、ＣＣＲ３拮抗剤、ＣＣＲ５拮抗剤、ＶＬＡ−４阻害剤、およびＩｇＥのダウンレギュレーターからなる群が含まれる。
【０１１６】
本発明の免疫賦活性核酸を使用して、１型ＩＦＮ、すなわち、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βを誘発することができる。この方法は、１型ＩＦＮを発現することができる細胞を有効量の本発明の免疫賦活性核酸と接触させて、細胞による１型ＩＦＮの発現を誘発させることを含む。最近、ヒトにおけるＩＦＮ−αの主要な産生細胞種が形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）であることが認められている。この種の細胞は、ＰＢＭＣ中で非常に低い頻度（０．２〜０．４％）で発生し、系列陰性（すなわち、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、またはＣＤ５６について染色されない）かつＣＤＩＩｃ陰性である一方で、ＣＤ４、ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）、およびクラスＩＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣクラスＩＩ）について陽性である表現型によって特徴づけられている。Ｇｒｏｕａｒｄ，Ｇ他（１９９７）、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、５、１８５：１１０１〜１１；Ｒｉｓｓｏａｎ，Ｍ−Ｃ他（１９９９）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８３：１１８３〜８６；Ｓｉｅｇａｌ，ＦＰ他（１９９９）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８４：１８３５〜３７；およびＣｅｌｉａ，Ｍ他（１９９９）、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、５：９１９〜２３を参照されたい。１型ＩＦＮを測定する方法は当業者に周知であり、これらには、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、バイオアッセイ、および蛍光活性化細胞分別（ＦＡＣＳ）が含まれる。この種のアッセイは、容易に入手可能な市販の試薬およびキットを用いて行うことができる。
【０１１７】
本発明の免疫賦活性核酸を使用して、ＮＫ細胞を活性化することができる。この方法は、ＮＫ細胞を有効量の本発明の免疫賦活性核酸と接触させてＮＫ細胞を活性化することを含む。ＮＫ細胞の活性化は、直接の活性化または間接的な活性化であり得る。間接的な活性化とは、サイトカイン、または後にＮＫ細胞の活性化を引き起こす他の因子の誘発をいう。ＮＫ細胞活性化は、溶解活性の測定、ＣＤ６９などの活性化マーカーの誘発の測定、または特定のサイトカインの誘発の測定を含めた様々な方法によって評価することができる。特定の腫瘍標的を自発的に死滅させるその特徴的な能力に加えて、ＮＫ細胞はＡＤＣＣに関与し、また、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の主要な産生細胞である。
【０１１８】
マウスＮＫ細胞のＮＫ感受性細胞標的のプロトタイプは、モロニーウイルスに感染したＡ系統マウスに由来する胸腺腫である、酵母人工染色体（ＹＡＣ）−Ｉである。ヒトＮＫ細胞では、標準の標的は、赤白血病系列に由来する細胞系であるＫ５６２である。マイクロタイタープレート中で、一定数の放射標識した標的（例えば５１Ｃｒで標識したＫ５６２）を、単独で（自発性）、洗剤と共に（最大）、または様々な数のエフェクター細胞と共に（実験）のいずれかでインキュベートする。エフェクターと標的細胞との比をＥ：Ｔ比と呼ぶ。濃縮された活性ＮＫ細胞は、典型的には１０：１未満のＥ：Ｔ比で有効であり、一方で、未分画のＰＢＭＣまたは脾細胞は、１００：１以上のＥ：Ｔ比を必要とする。
【０１１９】
また、免疫賦活性核酸は、全身性および／または粘膜の免疫応答を誘発させるためのアジュバントとしても有用である。本発明の免疫賦活性核酸を抗原に曝露した対象に送達して、抗原に対する増強した免疫応答を生じさせることができる。したがって、例えば、本明細書中に記載の免疫賦活性核酸は、ワクチンアジュバントとして有用である。
【０１２０】
免疫賦活性核酸は、非核酸アジュバントと組み合わせて投与し得る。非核酸アジュバントとは、液性および／または細胞性の免疫応答を刺激することができる、本明細書中に記載の免疫賦活性核酸以外の任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントには、例えば、デポー効果を生じるアジュバント、免疫賦活アジュバント、およびデポー効果を生じ、かつ免疫系を賦活するアジュバントが含まれる。本明細書中で使用する非核酸粘膜アジュバントとは、抗原と併せて粘膜表面に投与した場合に、対象において粘膜免疫応答を誘発することができる、免疫賦活性核酸以外のアジュバントである。
【０１２１】
本発明の免疫賦活性核酸は、医薬組成物として薬学的に許容できる担体中に配合し得る。免疫賦活性核酸は、対象に直接投与するか、または核酸送達複合体と併せて投与し得る。核酸送達複合体とは、標的化手段（例えば、標的細胞（例えばＢ細胞表面）とのより高い親和性結合および／または標的細胞による細胞取り込みの増加をもたらす分子）と会合した（例えば、それとイオン結合した、それと共有結合した、またはそれ内にカプセル封入された）、核酸分子をいう。核酸送達複合体の例には、ステロール（例えばコレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロソームもしくはリポソーム）、または標的特異的結合剤（例えば標的細胞特異的受容体によって認識されるリガンド）と会合した核酸が含まれる。好ましい複合体は、標的細胞による内部移行の前に顕著な脱カップリングが起こることを防止するために、ｉｎ  ｖｉｖｏで十分に安定であり得る。しかし、複合体は、核酸が機能的な形態で放出されるように、適切な条件下にいて細胞内で切断可能であることができる。
【０１２２】
免疫賦活性核酸および／または抗原および／または他の治療剤は、単独（例えば、生理食塩水もしくは緩衝液中）で、または当分野で知られている任意の送達ビヒクルを用いて投与し得る。例えば、以下の送達ビヒクルが記載されている：コクリエート、エマルソーム、免疫賦活複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、ミクロスフェア、ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）、ポリマー環、プロテオソーム、ビロソーム、ウイルス様粒子、および他の送達ビヒクル。
【０１２３】
対象に粘膜または局所的送達するための本明細書中に記載の免疫賦活性核酸の適切な用量は、典型的には、１回の投与あたり約０．１μｇ〜約１０ｍｇの範囲であり、これは、用途に応じて、１日１回、週１回、または月１回およびその間の任意の他の時間間隔で与えることができる。より典型的には、粘膜または局所的用量は、１回の投与あたり約１０μｇ〜約５ｍｇ、または約１００μｇ〜約１ｍｇの範囲の、数日間または数週間の間隔を空けた２〜４回の投与である。典型的には、免疫賦活剤の用量は、１回の投与あたり１μｇ〜１０ｍｇ、および約１０μｇ〜約１ｍｇの範囲であり、１日１回または週１回投与する。化合物を抗原と共に送達するが別の治療剤とは送達しない、対象において抗原に特異的な免疫応答を誘発することを目的とした、非経口送達のための本明細書中に記載の化合物の用量は、典型的には、ワクチンアジュバントまたは免疫賦活剤用途のための有効な粘膜用量よりも５〜１０，０００倍高い、または１０〜１，０００倍高い、または２０〜１００倍高い。免疫賦活性核酸を他の治療剤と組み合わせてもしくは特化した送達ビヒクル中で投与する場合に、先天性免疫応答を誘発するまたはＡＤＣＣを増加するまたは抗原に特異的な免疫応答を誘発することを目的とした、非経口送達のための本明細書中に記載の化合物の用量は、典型的には、１回の投与あたり約０．１μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、これは、用途に応じて、１日１回、週１回、または月１回およびその間の任意の他の時間間隔で与えることができる。より典型的には、これらの目的のための非経口用量は、１回の投与あたり約１０μｇ〜５ｍｇ、または約１００μｇ〜１ｍｇの範囲の、数日間または数週間の間隔を空けた２〜４回の投与である。しかし、一部の実施形態では、これらの目的のための非経口用量は、上述の用量よりも５〜１０，０００倍高い範囲で用い得る。
【０１２４】
本明細書中で使用する「有効量」とは、所望の生物学的効果を実現するために必要または十分な量をいう。例えば、感染を治療するための免疫賦活性核酸の有効量とは、感染を治療するために必要な量である。本明細書中に提供する教示と合わせて、様々な活性化合物から選択し、力価、相対的生体利用度、対象の体重、有害な副作用の重篤度および好ましい投与様式などの要素を量ることによって、実質的な毒性を引き起こさないが、それでも特定の対象を治療するために有効である、有効な予防的または治療的処置レジメンの計画を立てることができる。任意の特定の用途の有効量は、治療する疾患もしくは状態、投与する特定の免疫賦活性核酸、抗原、対象の大きさ、または疾患もしくは状態の重篤度などの要素に応じて変動する場合がある。当業者は、過度の実験を必要とせずに、特定の免疫賦活性核酸および／または抗原および／または他の治療剤の有効量を経験的に決定することができる。本明細書中に記載した任意の化合物について、治療上有効な量は、最初は動物モデルから決定することができる。また、治療上有効な用量は、ヒトで試験されているＣｐＧオリゴヌクレオチド、ならびに他の粘膜アジュバント、例えば、ワクチン接種目的、粘膜もしくは局所投与のためのＬＴおよび他の抗原などの、同様の薬理活性を示すことが知られている化合物の、ヒトデータから決定することもできる。非経口投与にはより高い用量が必要である。適用する用量は、投与する化合物の相対的生体利用度および力価に基づいて調節することができる。最大の有効性を達成するために、上述の方法および当分野で知られている他の方法に基づいて用量を調節することは、当分野の技術者の能力範囲内に十分ある。
【０１２５】
本発明の配合物は、薬学的に許容できる濃度の塩、緩衝剤、保存料、適合性のある担体、アジュバント、および任意選択で他の治療構成成分を通常含有し得る、薬学的に許容できる溶液中で投与し得る。治療で使用するためには、有効量の免疫賦活性核酸を、核酸を所望の表面に送達する任意の様式、例えば、粘膜、全身によって、対象に投与することができる。本発明の医薬組成物の投与は、当業者に知られている任意の手段によって達成し得る。好ましい投与経路には、それだけには限定されないが、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、気管内、吸入、眼球、舌下、経膣、および直腸が含まれる。経口投与には、化合物（すなわち、免疫賦活性核酸、ならびに任意選択の抗原および他の治療剤）は、活性化合物（複数可）を当分野で周知の薬学的に許容できる担体と合わせることによって、容易に配合することができる。そのような担体は、本発明の化合物を、治療する対象が経口摂取する錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして配合することを可能にする。経口使用のための医薬調製物を固体賦形剤として得ることができ、生じる混合物を任意選択で粉砕し、所望する場合は適切な補助剤を加えた後で、顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣錠の核が得られる。適切な賦形剤は、特に、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含めた糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望する場合は、崩壊剤、例えば、架橋結合したポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩を加えてもよい。任意選択で、経口製剤は、内部酸性条件を中和するために生理食塩水もしくは緩衝液中で配合するか、または、任意の医薬梳き剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃａｒｄｅｒ）を用いずに投与し得る。糖衣錠核に適切なコーティングを提供する。この目的のために、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を任意選択で含有し得る濃縮糖溶液を用い得る。活性化合物の用量の異なる組合せを同定または特徴づけるために、色素または顔料を錠剤または糖衣錠のコーティングに加え得る。
【０１２６】
経口使用することができる医薬調製物には、ゼラチンから作製された押し込み型カプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑化剤から作製された軟密封カプセルが含まれる。押し込み型カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに任意選択で安定化剤と混合した、活性成分を含有することができる。軟カプセルでは、活性化合物を、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体中に溶解または懸濁させ得る。さらに、安定化剤を加え得る。経口投与用に配合したミクロスフェアも使用し得る。そのようなミクロスフェアは、当分野で十分に定義されている。経口投与用のすべての配合物は、そのような投与に適した用量であるべきである。
【０１２７】
口腔投与には、組成物は、慣用の様式で配合した錠剤またはロゼンジの形態をとり得る。
【０１２８】
吸入による投与には、本発明による使用のための化合物は、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー提示の形態で、適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体を使用して、好都合に送達し得る。加圧エアロゾルの場合、単位用量は、計量された量を送達するための弁を提供することによって決定し得る。例えば、吸入器または注入器で使用するためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジを、化合物とラクトースもしくはデンプンなどの適切な粉末基材との散剤混合物を含有させて配合し得る。
【０１２９】
化合物は、それを全身送達することが望ましい場合は、例えばボーラス注射または持続注入による、注射による非経口投与用に配合し得る。注射用配合物は、単位剤形で、例えば、アンプルまたは複数用量容器中で、保存料を加えて提示し得る。組成物は、懸濁液、液剤または油性もしくは水性ビヒクル中の乳濁液としての形態をとってもよく、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの加工剤を含有し得る。
【０１３０】
非経口投与用の医薬配合物には、水溶性形態の活性化合物の水溶液が含まれる。さらに、活性化合物の懸濁液を適切な油性の注射用懸濁液として調製し得る。適切な親油性の溶媒またはビヒクルには、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。任意選択で、懸濁液は、高濃度の溶液の調製を可能にするために、適切な安定化剤または化合物の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。
【０１３１】
あるいは、活性化合物は、使用前に適切なビヒクル、例えば発熱物質を含まない滅菌水で構成するための、散剤形態であり得る。
【０１３２】
また、化合物は、例えば、カカオ脂または他のグリセリドなどの慣用の坐薬基剤を含有する、坐薬または保留浣腸などの直腸または経膣組成物中で配合してもよい。
【０１３３】
前述した配合物に加えて、化合物はまた、デポー調製物として配合してもよい。そのような長時間作用性配合物は、適切なポリマーもしくは疎水性物質（例えば許容される油中の乳濁液）またはイオン交換樹脂を用いて、あるいはやや溶けにくい誘導体、例えばやや溶けにくい塩として配合してもよい。
【０１３４】
また、医薬組成物は、適切な固体またはゲル相の担体または賦形剤も含み得る。そのような担体または賦形剤の例には、それだけには限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれる。
【０１３５】
適切な液体または固体の医薬調製物の形態は、例えば、吸入のための水溶液もしくは生理食塩水、ミクロカプセル封入、コクリエート封入、微小金粒子上のコーティング、リポソーム内に含有、噴霧化、エアロゾル、皮膚内に移植するためのペレット、または皮膚上に掻爬するための鋭利な物体上の乾燥物である。また、医薬組成物には、顆粒、散剤、錠剤、コーティング錠、マイクロカプセル、坐薬、シロップ、乳濁液、懸濁液、クリーム、液滴または活性化合物を遅延放出する調製物も含まれ、その調製では、賦形剤および添加剤ならびに／または崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、潤滑剤、香料、甘味料もしくは可溶化剤などの補助剤を上述のように慣用的に使用する。医薬組成物は、様々な薬物送達系での使用に適している。薬物送達方法の手短な総説には、本明細書中に参照により組み込まれているＬａｎｇｅｒ（１９９０）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７〜３３を参照されたい。
【０１３６】
免疫賦活性核酸ならびに任意選択の他の治療剤および／または抗原は、それ自体（ニート）で、または薬学的に許容できる塩の形態で投与し得る。医薬品中で使用する場合、塩は薬学的に許容できるべきであるが、非薬学的に許容できる塩を好都合に用いて、薬学的に許容できるその塩を調製し得る。そのような塩には、それだけには限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、またはベンゼンスルホン酸から調製した酸付加塩が含まれる。また、そのような塩は、ナトリウム、カリウムまたはカルシウムの塩基付加塩などの、アルカリ金属またはアルカリ土類の塩として調製することもできる。
【０１３７】
適切な緩衝剤には、酢酸と塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸と塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸と塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；およびリン酸と塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が含まれる。適切な保存料には、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）およびチメロサール（０．００４〜０．０２％）が含まれる。
【０１３８】
本発明の医薬組成物は、有効量の免疫賦活性核酸ならびに任意選択で抗原および／または他の治療剤を含有し、薬学的に許容できる担体中に含まれていてもよい。「薬学的に許容できる」物質とは、毒性、刺激、アレルギー応答などをなしに対象の組織と接触させて使用するために適切であり、合理的な損益比に見合っており、その意図する使用に有効である、健全な医学的判断の範囲内にある物質をいう。したがって、用語「薬学的に許容できる担体」とは、ヒトまたは他の脊椎動物に投与するために適切な、１つまたは複数の適合性のある固体または液体の充填剤、希釈剤またはカプセル封入物質を意味する。用語「担体」とは、対象への施用を適用にするために活性成分をそれと混合する、有機または無機の天然または合成の構成成分を示す。また、医薬組成物の構成成分は、有害な相互作用が存在しないような様式で、本発明の化合物と、および互いに混ぜ合わさることもできる。
【０１３９】
対象の治療では、化合物の活性、投与様式、免疫化の目的（すなわち、予防的または治療的）、障害の性質および重篤度、患者の年齢および体重に応じて、異なる用量が必要であり得る。
【０１４０】
所定の用量の投与は、個々の用量単位の形態の単一の投与によって、またはいくつかのより小さな用量単位で実行することができる。数週間または数カ月間隔の特定の間隔での用量の複数回投与が、抗原に特異的な応答を免疫追加するために通常である。
【０１４１】
他の送達系には、徐放性、遅延放出または持続放出の送達系が含まれることができる。そのような系により、化合物の投与を繰り返すことを回避することができ、対象および医師の利便性が増加する。多種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に知られている。これらには、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキシレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ酸無水物などのポリマーに基づいた系が含まれる。
【０１４２】
薬物を含有する前述のポリマーのマイクロカプセルは、例えば米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達系には、コレステロール、コレステロールエステルおよび脂肪酸などのステロールまたはモノ−、ジ−、およびトリ−グリセリドなどの中性脂肪を含めた脂質；ヒドロゲル放出系；シラスティック系；ペプチドに基づいた系；ワックスコーティング；慣用の結合剤および賦形剤を用いた圧縮錠剤；部分的に融着した移植片などである、非ポリマー系も含まれる。具体的な例には、それだけには限定されないが、（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号、第４，６７５，１８９号、および第５，７３６，１５２号に記載のものなどの、本発明の薬剤がマトリックス内の形態で含有されている侵食系；ならびに（ｂ）米国特許第３，８５４，４８０号、第５，１３３，９７４号および第５，４０７，６８６号に記載のものなどの、活性構成成分が制御された速度でポリマーから浸透する拡散系が含まれる。さらに、ポンプに基づいたハードウェア送達系を用いることができ、その一部は移植用に適応されている。
【０１４３】
本発明を、以下の実施例によってさらに例示するが、これらは限定的であると解釈されるべきでない。本明細書全体にわたって引用されているすべての参考文献（印刷物の参考文献、発行された特許、公開特許出願、および同時係属特許出願を含む）の内容は、その全体が明確に本明細書中に参照により組み込まれている。
【実施例】
【０１４４】
様々なオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）を調製し、その生物学的特性を以下の実施例で評価した。その完全長配列は以下のように表される：
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号２）；
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号３）；
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号４）；および
５’Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号５）。
これらの実施例中で評価したオリゴデオキシリボヌクレオチドのそれぞれについて、安定化した結合（＊）はホスホロチオエート結合であり、リン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様結合（＿）はリン酸ジエステル結合であり、３’および５’の表示は、それぞれオリゴデオキシリボヌクレオチドの３’および５’末端を指す。簡潔にするために、実施例および図では、試験した具体的なＯＤＮを指すために配列番号を使用するが、一般には、他の免疫賦活性オリゴヌクレオチドも、配列番号２、配列番号３などによって与えられる塩基配列が含まれる塩基配列を有し得る。
【０１４５】
（実施例１）
オリゴヌクレオチドに応答したヒトおよびマウスのＴＬＲ９のシグナル伝達
ＨＥＫ２９３細胞をヒトおよびマウスのＴＬＲ９構築体で形質移入して、ｈＴＬＲ９−ＮＦκＢ−２９３細胞およびｍＴＬＲ９−ＮＦκＢ−２９３細胞を生成した。細胞を、配列番号２、３、および４を有するＯＤＮと共に１６時間インキュベートした。細胞を溶解し、シグナルをルシフェラーゼの読取りによって決定した。
【０１４６】
結果を図１に示す。ＥＣ５０を、Ｓｉｇｍａ  Ｐｌｏｔ（Ｗｉｎｄｏｗｓ(登録商標)用ＳｉｇｍａＰｌｏｔ２００２バージョン８．０）を用いて計算した。３つのＯＤＮはすべてヒトＴＬＲ９を刺激した。
【０１４７】
（実施例２）
オリゴヌクレオチドに対するｐＤＣ、ＰＢＭＣ、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の応答性
ｐＤＣ、ＰＢＭＣ、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の、これらの細胞をＣｐＧオリゴヌクレオチドに曝露した後の活性化のレベルを図２〜図９に示す。上述のように、図では、評価した具体的なオリゴヌクレオチドを指すために配列番号を使用する（配列番号２、３、および４）。特定のデータ点を生じるために使用したオリゴヌクレオチドのモル濃度を、それぞれのグラフのＸ軸（μＭ）に沿って示す。
【０１４８】
図２および図３に実証するように、ＩＦＮ−α、ＣＤ８６およびＣＣＲ７の誘発によって表されるように、アッセイで試験したＣｐＧオリゴヌクレオチドはｐＤＣ細胞を活性化することができた。図４〜図７に示すように、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１β、ＩＬ２Ｒ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＭＩＰ−１α、ＴＮＦ−α、およびＭＩＰ−１βの誘発によって示されるように、アッセイで試験したＣｐＧオリゴヌクレオチドはＰＢＭＣを活性化することができた。図８に示すように、細胞毒性の増加によって評価されるように、アッセイで試験したＣｐＧオリゴヌクレオチドはＮＫ細胞を活性化することができた。図９に示すように、Ｂ細胞の増殖によって示されるように、アッセイで試験したＣｐＧオリゴヌクレオチドはＢ細胞を活性化することができた。
【０１４９】
ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２および３）は、ＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号４）と比較して、特により高い用量で、アッセイにおいて力価の増加を示した（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＩＬ−１β、ＩＬ２Ｒ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＴＮＦ−α）。また、ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮはＮＫ細胞活性化の増加も示した。ほぼ等濃度では、ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮへの曝露は、ＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮへの曝露よりも大きな細胞毒性をもたらした。
【０１５０】
（実施例３）
オリゴヌクレオチドに応答したヒトおよびマウスのＴＬＲ９のシグナル伝達
ＨＥＫ２９３細胞をヒトおよびマウスのＴＬＲ８構築体で形質移入して、それぞれｈＴＬＲ８−ＮＦκＢ−２９３細胞およびｍＴＬＲ８−ＮＦκＢ−２９３細胞を生成した。細胞を、ＯＤＮ（配列番号２、３、または４）またはＴＮＦ−αと共に１６時間インキュベートした。細胞を溶解し、シグナルをルシフェラーゼの読取りによって決定した。
【０１５１】
結果を図１０に示す。ＴＮＦ−αのみが、ヒトおよびネズミのＴＬＲ８を有意なレベルで刺激した。
【０１５２】
（実施例４）
初代マウス細胞およびｉｎ  ｖｉｖｏのアッセイ
脾細胞によるＢ細胞増殖およびサイトカイン誘発の、これらの細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣｐＧオリゴヌクレオチドに曝露した後のレベルを図１１および図１２に示す。上述のように、図では、評価した具体的なオリゴヌクレオチドを指すために配列番号を使用する（配列番号２、３、または４）。図１１および図１２には、脾細胞を、Ｃ−ＧモチーフがＧ−Ｃモチーフと入れ替わっている以外はＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号４）と類似のヌクレオチド配列を有するＯＤＮである陰性対照（配列番号５）に曝露したデータが含まれる。特定のデータ点を生じるために使用したオリゴヌクレオチドの（モル）濃度を、それぞれのグラフのＸ軸（μＭ）に沿って示す。
【０１５３】
図１１に示すように、ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２および３）は、特により高い濃度で、ＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号４）または陰性対照（配列番号５）のどちらよりも有意に大きなＢ細胞増殖を誘発した。図１２に示すように、アッセイで試験したＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−αの産生を誘発することができた。
【０１５４】
サイトカインレベルもマウスにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで評価した。雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（５匹／群）に、異なる用量（１００ｍｇ、２５０ｍｇもしくは５００ｍｇ）のＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２、３、もしくは４）または非ＣｐＧ対照（配列番号５）を皮下注射した。注射の３時間後にマウスを出血させ、単離した血漿をＩＰ−１０およびＩＬ−６についてＥＬＩＳＡによって試験した。
【０１５５】
図１３に示すように、ＣｐＧ  ＯＤＮは、有意なレベルのＩＰ−１０およびＩＬ−６を誘発し、ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮは、ＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮよりも有意に高いレベルのＩＰ−１０を産生させた。
【０１５６】
（実施例５）
ＣｐＧ  ＯＤＮのｉｎ  ｖｉｖｏ投与後の流入領域リンパ節（ＬＮ）およびＰＢＭＣの細胞活性化
Ｂ、Ｔ、ＮＫ、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、およびｐＤＣ細胞の活性化のレベルを、流入領域リンパ節および単離した血液で評価した。ＢＡＬＢ／ｃマウス（１０匹／群）の後足蹠に、示したように１０μｇ／５０μＬのＯＤＮを注射した。プラセボ対照群には５０μＬのＰＢＳを与えた。投与の２４時間後、血液および膝窩ＬＮを取り出し、群内でプールした。単離したＰＢＭＣ（フィコールによる）リンパ節細胞画分（磁気活性化細胞分別による）を、細胞マーカーの発現についてフローサイトメトリーによって分析した。
【０１５７】
流入領域ＬＮおよびＰＢＭＣにおける細胞活性化の結果を、平均蛍光強度／％発現としてそれぞれ表１および表２に示す。
【０１５８】
【表１】
2010536335.tif 000005
【０１５９】
【表２】
2010536335.tif 000006
【０１６０】
（実施例６）
マウス脾細胞におけるＣｐＧ  ＯＤＮによるＮＫ細胞活性の誘発
ＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞（３０×１０６個）を、示したように０μｇ／ｍＬ（培地単独）、１μｇ／ｍＬ、３μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬのＯＤＮと共に２４時間インキュベートした。ＮＫ活性は、ＹＡＣ−１標的細胞を用いた標準の５１Ｃｒ放出アッセイを使用して、様々なエフェクター：標的の比で評価した。
【０１６１】
データを図１４に示す。ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２および３）は、３つの異なる濃度における％溶解によって測定して、有意な量のＮＫ細胞活性を誘発した。
【０１６２】
（実施例７）
ＣｐＧ  ＯＤＮによる腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏ治療
ルイス肺癌（ＬＬＣ）の生存および腫瘍体積を評価した。雌のＣ５７Ｂｌ／６マウス（研究の開始時に約２０ｇまで；１０匹／群）をこの研究で使用した。腫瘍の誘発は、１×１０５個のＬＬＣ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ１６４２）を動物の背下部に皮下注射することによって達成した。ＯＤＮ（配列番号２〜５）を、腫瘍の周辺に、第１日目および第３日目、その後は週に２回、皮下注射（２００ｍｇ）によって投与した。動物を、腫瘍増殖および生存についてモニターした。腫瘍の大きさ（長さおよび幅）は、デジタルバーニアノギスを用いて測定した。腫瘍体積は以下の式を用いて計算した：腫瘍体積＝（０．４）（ａｂ２）［式中、ａ＝大きい方の直径であり、ｂ＝小さい方の直径である］。平均腫瘍体積の変化は、それぞれの動物群において５０％が死亡するまで評価した。結果を図１５に示す。マウスを腫瘍測定日に安楽死させ、グラフには含めていない。腫瘍誘発の１００日後、どちらのＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２および３）も、他のＯＤＮよりも高い％生存を誘発した。
【０１６３】
神経芽細胞腫の治療も評価した。雌のＡ／Ｊマウス（研究の開始時に約２０ｇまで；１０匹／群）を使用した。腫瘍の誘発は、１×１０６個の神経２ａ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＣＬ１３１）をマウスの上部左脇腹に皮下注射することによって達成した。ＯＤＮ（配列番号２〜５）を、腫瘍注射の１０日後から開始して、腫瘍の周辺に皮下注射（１００ｍｇ）することによって投与した。マウスは、毎日または３日毎に、１５日間治療し、腫瘍増殖および生存についてモニターした。結果を図１６に示す。
【０１６４】
（実施例８）
安全性を評価するためのモルモットにおける局所的反応源性
ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２もしくは３）またはＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号４）の局所的反応を、「スキニー」モルモットモデルで評価した。ヘアレスＩＡＦモルモットに、様々な用量（０．３ｍｇ、１．０ｍｇまたは３．０ｍｇ）のＣクラスまたはＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮを与えた。すべての注射は、モルモットの背側、肩甲骨の下かつ脊椎の外側に、固定体積で皮内（ＩＤ）投与した。対照動物には、固定体積のＰＢＳのＩＤ注射を与えた。モルモットを投薬後に一定間隔でモニターし（６時間時、２４時間時、およびその後２４時間毎）、浮腫を記録した。
【０１６５】
表３および表４は、それぞれＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２）およびＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号４）を受けている動物の、投薬後の様々な時点における浮腫の平均グレードを示す。表では、浮腫を測定するために以下のスケールを用いる：Ｏ−浮腫なし；Ｉ−非常に緩和な浮腫；かろうじて知覚可能；ＩＩ−緩和な浮腫；領域は端が持ち上がることによって明確に定義される；ＩＩＩ−中等度の浮腫；領域が約１ｍｍ持ち上がる；ＩＶ−重篤な浮腫；領域が＞１ｍｍ持ち上がり、曝露領域を越えて広がる。
【０１６６】
ＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号２；配列番号３のデータ示さず）は、一般に、ＩＤ注射後にＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号４）よりも低い度合の浮腫を示した。
【０１６７】
【表３】
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【０１６８】
【表４】
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【０１６９】
前述の記載した明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするために十分であるとみなされる。実施例は本発明の一態様の単一の例示であることを意図し、他の機能的に等価な実施形態が本発明の範囲内にあるため、本発明は、提供した実施例によって範囲が限定されないものとする。本明細書中に示し記載したものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内にある。本発明の利点および目的は、必ずしも本発明のそれぞれの実施形態によって包含されていない。
【０１７０】
本出願中に引用したすべての参考文献、特許および特許公開は、その全体が本明細書中に参照により組み込まれている。
【０１７１】
このように、本発明の少なくとも１つの実施形態のいくつかの態様を記載したので、様々な変更、改変、および改善が当業者に容易に想達可能であることを理解されたい。そのような変更、改変、および改善は、本開示の一部であることを意図し、本発明の精神および範囲内にあることを意図する。したがって、前述の説明および図面は例でしかない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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