(57)【要約】  （２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸を含む組成物および医薬製剤およびその使用法が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩、生理学的に許容できるシクロデキストリンおよび少なくとも１つの溶解性増強剤を含む、薬学的に許容できる水性製剤。
【請求項２】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩が、約０．１％から約５％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
シクロデキストリンが、アルファ−シクロデキストリン、ベータ−シクロデキストリン、ガンマ−シクロデキストリン、デルタ−シクロデキストリンおよびその誘導体からなる群から選ばれる、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
シクロデキストリンが、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン、ヒドロキシアルキルシクロデキストリン、アルキルシクロデキストリンおよびカルボキシアルキルシクロデキストリンからなる群から選ばれる、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
シクロデキストリンが、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキ−プロピルβ−シクロデキストリンからなる群から選ばれる、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
シクロデキストリンが、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンである、請求項５に記載の製剤。
【請求項７】
シクロデキストリンがＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）である、請求項６に記載の製剤。
【請求項８】
シクロデキストリンが約１％から約５０％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
シクロデキストリンが、約５％から約２０％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
シクロデキストリンが約１０％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項８に記載の製剤。
【請求項１１】
溶解性増強剤が生理学的に許容できる緩衝剤である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
緩衝剤の濃度が約０．０１Ｍから約０．２５Ｍである、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
緩衝剤がモノアルカリ金属リン酸塩／ジアルカリ金属リン酸塩緩衝剤である、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１４】
約５．０および約８．０の間のｐＨを有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１５】
等張化剤を更に含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１６】
１つ以上の生理学的に許容できる保存剤を更に含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１７】
薬学的に許容できる賦形剤を更に含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１８】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩、生理学的に許容できるシクロデキストリンおよび少なくとも１つの溶解性増強剤を含む組成物。
【請求項１９】
シクロデキストリンがスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載の医薬製剤の治療有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む、固形腫瘍癌を治療するための方法。
【請求項２１】
固形腫瘍癌が結腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、黒色腫および膵臓癌からなる群から選ばれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
固形腫瘍癌の治療のための医薬製品の製造における請求項１に記載の医薬製剤の使用。
【請求項２３】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩を含む組成物に、生理学的に許容できるシクロデキストリンを加えることを含む、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩の溶血活性を減らす方法。
【請求項２４】
シクロデキストリンがスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキ−プロピルβ−シクロデキストリンからなる群から選ばれる、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性薬剤（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸および特に（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩の非経口投与のための新規な医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
式（Ｉ）：
【０００３】
【化１】
2010502691.tif 000002
の構造を有する、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸は、特に抗癌剤として有利であることが示されている。（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の調製、物理的性質および有益な薬理学的性質は、例えば、参考によりその全体を本明細書に組み入れる米国特許第６，８６７，２１９号に記載されている。
【０００４】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸は、液体の非経口製剤として投与され得る。予備的な動物の毒性試験において、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸は、単一のリン酸緩衝製剤として１０ｍｇ／ｍＬ以上で注入される場合、ある程度の溶血を起こすことがわかった。顕著な溶血は貧血を起こし得るので、（２Ｒ）−
２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の溶血作用は、医薬組成物にとって望ましくない性質である。
【０００５】
薬物誘発性溶血を減らす能力のある（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸を含む製剤が必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６，８６７，２１９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
薬物誘発性溶血を減らす複数の取り組みが一定の薬物に対して有効であると報告されている。例えば、非経口製剤に対してより長い注入時間（即ち、遅い注入速度または活性薬物濃度の低下）は、活性薬物の溶血活性の低下をもたらす。しかし、より長い注入時間は、患者のコンプライアンスの低下という好ましくない結果となる。他の取り組みは、例えば、等張化剤、界面活性剤、コロイド浸透圧調節剤、キレート剤／膜安定化剤、蛋白質、ヒドロキシフリーラジカル捕獲剤またはシクロデキストリンなどの錯体形成剤の製剤への添加である。しかし、これらの他の取り組みを記載している報告は、主としてインビボ試験による確認のないインビトロの結果に限られていた。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
従って、本発明者らは、薬物誘発性溶血を減らし得る（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の改良された製剤を見出すべく集中的な試験を行った。試験した非経口添加剤の内、錯体形成剤として知られているシクロデキストリンだけが有効であることが示された。
【０００９】
シクロデキストリンは、インビトロで薬物誘発性溶血を減らすことが報告されているものの、このような低減はインビボ環境、特にＩＶ注入中における活性を必ずしも予測するものではない。シクロデキストリンは、少なくとも薬物の一部と包接錯体を形成し、その結果、赤血球と相互作用し得る遊離の薬物を減らすことにより溶血の保護をもたらすことが仮定された。この機構は、薬物の一部を錯体化された形に保ち得る、薬物溶液の顕著な希釈がないインビトロ試験（大部分の報告に記載されているように、溶液の０．９ｍｌ以上が赤血球懸濁物の０．１ｍｌと混合している。）に適用し得る。しかし、ＩＶ注入中、大半の薬物は、動的な血流に投与されると、大きな希釈のためにシクロデキストリンの空洞から急速かつ完全に解離する。このために、インビボの有効性が予測できない。
【００１０】
本発明は、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の医薬製剤へのシクロデキストリンの添加が、薬物の薬理学活性に影響せずに、インビトロおよびインビボの両方の条件で（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の薬物誘発性溶血を減らす発見に基づいている。
【００１１】
本発明はまた、本発明の医薬製剤の投与を含む治療の方法も提供する。
【００１２】
（発明の詳細な説明）
定義と略語
上記で用いられている通り、および本発明の記載を通して、次の略語および記号は、別に指示がない限り、次の意味を有すると理解されるものとする：
α            アルファ
β            ベータ
γ            ガンマ
δ            デルタ
ＩＶ          静脈内
ＰＢＳ        リン酸緩衝溶液
ｑｓ          十分な量、即ち、指示されている合計容量を達成するために十分な量
【００１３】
上記で用いられている通り、および本発明の記載を通して、次の用語は、別に指示がない限り、次の意味を有すると理解されるものとする：
【００１４】
本明細書で用いられる用語「活性成分」および「有効成分」は、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩を意味する。
【００１５】
シクロデキストリンは、ドーナツ形をした疎水性の中央空洞および疎水性の外部表面を含むオリゴ糖である。本明細書で用いられる用語「シクロデキストリン」は、シクロデキストリンまたはシクロデキストリン誘導体を意味する。
【００１６】
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）は、ＣｙＤｅｘ，ＬＬＣ．から入手できる
スルホブチルエーテルベータシクロデキストリンである。
【００１７】
用語「溶血」は、ヘモグロビンが、血流中に遊離されるような仕方での赤血球の変化または破壊を意味する。
【００１８】
用語「固形腫瘍癌」は、その医学的に許容される意味で用いられ、白血病などの血液の癌を含まない。
【００１９】
本発明は、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩の１つ、生理学的に許容できるシクロデキストリン（シクロデキストリンの組み合わせを含む。）および少なくとも１つの溶解性増強剤を含む薬学的に許容できる水性製剤に関し；製剤は一般に約４および約９の間、好適には約５および約８の間のｐＨを有する。
【００２０】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる１つの塩は、本発明の医薬製剤中に約０．１％から約５％（ｗ／ｖ）、例えば約０．２％から約３％（ｗ／ｖ）の割合で存在する。しかし、好適な製剤は、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩の１つを約０．５％から約２％（ｗ／ｖ）含む。
【００２１】
本発明を実施するために、例えばアルファ−シクロデキストリン、ベータ−シクロデキストリン、ガンマ−シクロデキストリンおよびデルタ−シクロデキストリンなどの任意の適したシクロデキストリンが使用され得、そのシクロデキストリンは、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン（例えば、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン）、ヒドロキシアルキルシクロデキストリン、（例えば、ヒドロキ−プロピルβ−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン）、アルキルシクロデキストリン（例えば、メチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、トリメチル−β−シクロデキストリン、ジエチル−β−シクロデキストリン）またはカルボキシアルキルシクロデキストリン（例えば、カルボメチル−β−シクロデキストリン）などの誘導体およびその組み合わせの形であり得る。スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンまたはヒドロキ−プロピルβ−シクロデキストリンを使用することが好適である。
【００２２】
上記シクロデキストリンは、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩の薬物誘発性溶血を特に減らしまたは予防することを可能にする。
【００２３】
一般に、シクロデキストリンは、製剤中に、約１％から約５０％（ｗ／ｖ）、好適には約５％から約２０％（ｗ／ｖ）、例えば１０％（ｗ／ｖ）の量で加えられる。シクロデキストリンは、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩によって生じる溶血を、実質的に減らす有効量で存在することが好適である。「実質的に減らす」は、シクロデキストリンが存在しない場合に活性成分によって生じる溶血の量に対して、活性成分の溶血を約３０％以上減らす量シクロデキストリンが、存在することを意味する。本発明の好適な態様において、シクロデキストリンは、シクロデキストリンが存在しない場合に活性成分によって生じる溶血の量に対して約５０％以上減らす量で存在する。活性成分の溶血を実質的に減らすために十分なシクロデキストリンの量は、製剤中の活性成分の濃度に依存する。
【００２４】
水における（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］−プロパン酸の限られた溶解性のために、医薬製剤は、少なくとも１つの溶解性増強剤を含む。本発明の溶解性増強剤は、水性製剤中の活性成分の溶解性を増強する１つの薬剤または複数の薬剤である。
【００２５】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸は、ｐＨ依存性の溶解性を有する酸性化合物である。従って、適した溶解性増強剤は、例えば、クエン酸、乳酸、ホウ酸、酢酸、リン酸、塩酸、硫酸およびリン酸一ナトリウムなどの酸／酸性薬剤；ならびに水酸化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタン、ジエチルアミン、トリエチルアミンおよび水酸化アンモニウムなどの塩基／塩基性薬剤などの活性成分を溶解する能力および／または溶液を生理学的に許容できる範囲に維持する能力のある薬学的に許容できるｐＨ調整剤および／または緩衝剤を含む。
【００２６】
好適には、溶解性増強剤は生理学的に許容できる緩衝剤である。一般に、緩衝剤は、活性成分を溶解する能力および製剤のｐＨを約４から９の間、好適には約５から約８の間に維持する能力の両方がある。本発明の好適な緩衝剤は、例えば、コハク酸／アルカリ金属コハク酸塩、クエン酸／アルカリ金属クエン酸、酒石酸／アルカリ金属酒石酸、乳酸／アルカリ金属乳酸塩、マレイン酸／アルカリ金属マレイン酸塩、酢酸／アルカリ金属酢酸塩、フマル酸／アルカリ金属フマル酸塩、メタンスルホン酸／アルカリ金属メタンスルホン酸塩、アルカリ金属硫酸塩、硫酸水素アルカリ金属塩、リン酸／リン酸モノアルカリ金属塩、リン酸二水素アルカリ金属塩／リン酸水素ジアルカリ金属塩、クエン酸トリアルカリ金属塩、リン酸アルカリ金属塩、炭酸アルカリ金属塩／炭酸水素アルカリ金属から選ばれる緩衝系である；上記塩のそれぞれのアルカリ金属は、例えば、ナトリウムまたはカリウムである。好適な緩衝剤は、リン酸モノアルカリ金属塩／リン酸ジアルカリ金属塩、例えばリン酸モノナトリウム塩／リン酸ジナトリウム塩である。
【００２７】
好適な緩衝溶液は、約０．０１から約０．３モル、より好適には約０．０５から約０．２モルのリン酸二水素アルカリ金属塩／リン酸水素ジアルカリ金属塩、例えばリン酸モノナトリウム塩／リン酸ジナトリウム塩の水性緩衝溶液である。
【００２８】
更なる溶解性増強剤は、薬学的に許容できる共溶媒（例えば、エタノール、プロピレングリコールなど）、界面活性剤（例えば、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０およびｐｏｌａｘａｍｅｒ）およびポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）などである。
【００２９】
シクロデキストリンはまた、水性製剤中の活性成分の溶解性を増加するために用いられ得る。しかし、活性成分の溶解性を増加するシクロデキストリンの能力はｐＨ依存性である。
【００３０】
活性成分、シクロデキストリン、溶解性増強剤（複数）および水に加えて、本発明の製剤は、塩化ナトリウム、塩化カルシウムなどの電解質、非還元糖およびマニトール、ソルビトール、キシリトールまたはグリセリンなどの糖アルコールなどの等張化剤を含み得る。
【００３１】
本発明による医薬製剤は、抗酸化剤（例えば、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウムおよびアスコルビン酸など。）を場合により含み得る。
【００３２】
本発明による製剤はまた、１つ以上の保存剤も含み得る。本発明を実施するために任意の適した保存剤が使用され得、例えば、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クレゾール、パラベン、フェノールおよびチメロサールを含むが、これらに限定されない。保存剤の量は、一般に約０．１％から約１％の量で存在する。
【００３３】
本発明の医薬製剤および組成物は、当業者に知られている通常の技術を用いて調製され得る。
【００３４】
本発明の医薬製剤は好適には、活性成分の治療有効量を含む。本明細書で用いられる「治療有効量」は、投与される医薬製剤中に存在する所望の薬理学的または治療的作用（複数）を引き起こすおよび／または治療されている疾患の１つ以上の症状の発症を防ぐまたはある程度緩和するのに十分である、投与されている医薬製剤中に存在する活性成分の量を意味する。有効量または投与量の決定において、哺乳動物の種、その大きさ、年齢および一般的健康；関与する具体的な疾患；疾患の関与の程度または重症度；個々の患者の反応；投与方法；投与される製剤の生物学的利用度特性；選ばれる投与計画；併用薬物の使用；および他の関連する事情（これらに限定されない）など、多数の因子が担当診断医師によって考慮される。
【００３５】
本発明の医薬製剤は、一般に哺乳動物（これに限らない）、例えばヒトを含む患者への静脈内投与（ＩＶボーラス注射およびＩＶ注入を含む。）、筋肉内投与および他の非経口経路で投与される。好適には、医薬製剤は、ＩＶ注入によって投与される。
【００３６】
組成物は、本発明の製剤を噴霧乾燥または凍結乾燥して溶解のための粉末を形成して調製され得る。組成物は、非経口製剤を形成するための水性液体を用いて再溶解され得る。（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩、生理学的に許容できるシクロデキストリンおよび少なくとも１つの溶解性増強剤を含むこのような組成物は、本発明の更なる態様である。
【００３７】
投与に先立って、医薬製剤および／または組成物は、当業者に知られている通常使用される静脈内液体によって希釈され得る。医薬製剤は、従って上記したよりもより濃縮された形態で調製され得、それは後に所望の濃度に希釈され得る。
【００３８】
もう１つの実施形態において、本発明は、本明細書に記載の医薬製剤を含む剤型に関する。それぞれの投与量は、所望の治療効果を生じるために計算された活性成分の量を含まなければならない。通常、医薬製剤は、組成物の重量で活性成分の約１０ｍｇから約４０００ｍｇを含む投与単位で投与され得、約１００ｍｇから約２０００ｍｇの範囲が好適である。
【００３９】
当業者にはまた、本発明の医薬製剤が他の治療剤および／または予防剤および／またはそれと医学的に不適合でない薬剤と投与され得ることも明白である。
【００４０】
本製剤のすべての成分は、薬学的に許容できなければならない。本明細書で使用する「薬学的に許容できる」成分は、適切でない有害な副作用（毒性、刺激およびアレルギー反応）なしにヒトおよび／または他の動物の使用に適しており、合理的な利益／危険比と釣り合いのとれたものである。
【００４１】
本発明は更に、医学における本発明の医薬製剤の使用に関する。
【００４２】
（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸は、固形腫瘍に対して有効な抗腫瘍剤である。従って、本発明は、このような治療を必要としている患者に本発明の製剤の治療有効量を投与することを含む、固形腫瘍癌の治療法を提供する。患者は、霊長類、ヒト、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギなどを含む。固形腫瘍癌は、結腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、黒色腫および膵臓癌を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
本発明の主題は、結腸癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、黒色腫および膵臓癌などの固形腫瘍癌の治療のための医薬品の製造における本発明の製剤の使用である。
【００４４】
本発明はまた、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩を含む組成物にシクロデキストリンを添加することを含む（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸またはその薬学的に許容できる塩の溶血活性を減らす方法も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
次の実施例は更に本発明を説明するが、これに限定しない。
インビトロ試験
【実施例１】
【００４６】
イヌの赤血球を用いた単一緩衝製剤のインビトロの溶血能の評価
次の試験は、０．１ＭｐＨ８リン酸塩緩衝賦形剤中の１０ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬの濃度における（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸溶液の溶血能を評価するために実施した。食塩水（０．９％ＮａＣｌ）を陰性対照として用い、溶血誘発物質として知られているサポニン（３％水溶液）を陽性対照として用いた。
【００４７】
イヌの全血を１：１比および９：１比で賦形剤中の活性成分の溶液および賦形剤単独と混合した。イヌの全血を１：１比および９：１比で陽性対照としての３％サポニン溶液および陰性対照としての食塩水（０．９％ＮａＣｌ）と同じく混合した。
【００４８】
混合後、チューブを３７℃で３０分間インキュベートし、ついで１０分間遠心分離した（３０００ｔ／分）。インビトロ溶血能の評価のために、上清中でヘモグロビン濃縮物をＵＶ可視光分光光度分析（Ｇｅｎｅｓｉｓ、ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により定量した。溶血率は、サポニン試料の結果に基づいて計算した。
【００４９】
実験の結果を表１に示す。活性成分の１０および２０ｍｇ／ｍＬ溶液はイヌの赤血球の溶血を誘発したが、賦形剤単独は誘発しなかった。これらの結果は、１０ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬの濃度の（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸によって誘発された溶血を示す。
【００５０】
【表１】
2010502691.tif 000003
【実施例２】
【００５１】
各種添加剤を含む製剤についてのイヌの赤球血におけるインビトロの溶血能の評価
実施例１に記載した通常のリン酸塩緩衝製剤と比較して、ある種の他の薬物について薬物誘発性溶血を減らすことが報告されている各種添加剤の溶血低下能を評価するために本試験を実施した。具体的には、次の実験は、イヌの全血を用いてインビトロで各種賦形剤中の（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の１０および２０ｍｇ／ｍＬの濃度における溶血能を評価した。試験した水性賦形剤溶液は、２％ショ糖溶液；１％ヒトアルブミン溶液；０．６％Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８溶液；１％マニトール溶液；１％マニトール、０．５％グリシンおよび０．６％ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８からなる溶液；０．５％グリシン溶液；および対照としてのリン酸塩緩衝溶液であった。
【００５２】
イヌの全血を１：１比および９：１比で各種賦形剤中の活性成分の溶液および各種賦形剤単独と混合した。イヌの全血を同じ割合で陽性対照として使用するサポニン溶液と同じく混合した。３７℃で４５分間インキュベート後、試料を遠心分離した。得られた上清をマイクロプレートリーダー（Ｄｙｎｅｘ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＲＸ  ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ４．０６）上で血漿ヘモグロビン吸収について分析した。
【００５３】
溶血率は、サポニン試料の結果に基づいて計算した。全血：同種の血漿比１：１および９：１で混合して得られた陰性対照値（固有血漿ヘモグロビン）よりもヘモグロビン濃度が、２倍以上大きい場合に誘発された溶血は顕著であると考えられた。
【００５４】
この実験の結果を表２に示す。これらの結果は、（２Ｒ）−２−［４−（７−ブロモ−２−キノリルオキシ）フェノキシ］プロパン酸の薬物誘発性溶血が他の薬物の薬物誘発性溶血を減らす先述した添加剤を用いて減らないことを示す。
【００５５】
【表２】
2010502691.tif 000004
【実施例３】
【００５６】
各種賦形剤中の製剤についてのイヌの赤血球におけるインビトロ溶血能の評価
通常のリン酸塩緩衝製剤と比較して、各種の非経口賦形剤の溶血低下能を評価するために本試験を実施した。
【００５７】
次の製剤を調製した。
Ａ）０．１ＭｐＨ８リン酸塩緩衝液中２０ｍｇ／ｍＬの活性成分；
Ｂ）０．１２Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液中２０ｍｇ／ｍＬの活性成分；および
Ｃ）０．１ＭｐＨ８リン酸塩緩衝液中２０ｍｇ／ｍＬの活性成分プラス１０ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ
【００５８】
食塩水（０．９％ＮａＣｌ）を陰性対照として用い、サポニン（３％水溶液）を陽性対照として用いた。
【００５９】
イヌの全血を１：１比および９：１比で賦形剤中の活性成分の溶液および賦形剤単独と混合した。イヌの全血を１：１比および９：１比で陽性対照としての３％サポニン溶液および陰性対照としての食塩水（０．９％ＮａＣｌ）と同じく混合した。
【００６０】
混合後、チューブを３７℃で３０分間インキュベートし、ついで１０分間遠心分離した（３０００ｔ／分）。インビトロの溶血能の評価のために、上清中でヘモグロビン濃縮物をＵＶ可視光分光光度分析（Ｇｅｎｅｓｉｓ、ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により定量した。溶血率は、サポニン試料の結果に基づいて計算した。
【００６１】
実験の結果を表３に示す。すべての３製剤は、イヌの赤血球のインビトロの溶血を誘発した。溶血の指標は、サポニン試料についての陽性対照値の率として現した。
【００６２】
【表３】
2010502691.tif 000005
【実施例４】
【００６３】
シクロデキストリンを含む製剤についてのイヌ赤血球におけるインビトロの溶血能の評価
１０％（ｗ／ｖ）のヒドロキ−プロピルベータシクロデキストリンを含む０．０５ＭｐＨ７リン酸緩衝液中の溶液として１０ｍｇ／ｍＬの活性成分を含む製剤の溶血低下能を評価するために次の試験を実施した。食塩水（０．９％ＮａＣｌ）を陰性対照として用い、サポニン（３％水溶液）を陽性対照として用いた。
【００６４】
イヌの全血を１：１比および９：１比で賦形剤中の活性成分の溶液および賦形剤単独と混合した。イヌの全血を１：１比および９：１比で陽性対照としての３％のサポニン溶液および陰性対照としての食塩水（０．９％ＮａＣｌ）と同じく混合した。
【００６５】
混合後、チューブを３７℃で３０分間インキュベートし、ついで１０分間遠心分離した（３０００ｔ／分）。インビトロの溶血能の評価のために、上清中でヘモグロビン濃縮物をＵＶ可視光分光光度分析（Ｇｅｎｅｓｉｓ、ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により定量した。
溶血率は、サポニン試料の結果に基づいて計算した。
【００６６】
この実験の結果を表４に示す。本発明の１０ｍｇ／ｍＬのシクロデキストリン製剤は、イヌの赤血球のインビトロの溶血を誘発しなかった。
【００６７】
【表４】
2010502691.tif 000006
【実施例５】
【００６８】
ヒトの血液および血漿を用いたシクロデキストリン製剤のインビトロ溶血性の評価
次の実験は、本発明のシクロデキストリン製剤のヒト血液中におけるインビトロ溶血能を評価した。
【００６９】
０．０５Ｍリン酸緩衝液中の１０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（ｗ／ｖ）の賦形剤中２ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬの濃度における
活性成分溶液を試験溶液として調製した。それぞれの溶液について、血液：試験溶液１：１および血液：賦形剤９：１の比で試験した。全血を陽性対照としての５％サポニンと混合した。すべてのチューブを３７℃で４５分間インキュベートし、ついで約１５００ｇ（１５−２００Ｃ）で５分間遠心分離した。得られた上清中をマイクロプレートリーダー（Ｄｙｎｅｘｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＲＸｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ４．０６）上で血漿ヘモグロビンの吸収について分析した。
【００７０】
溶血率は、サポニン試料の結果に基づいて計算した。溶血試験溶液値が、全血を同種の血漿と１：１および９：１対照で混合して得られる陰性対照値より２倍高い場合に溶血は顕著であると考えた。
【００７１】
結果：Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）賦形剤単独および活性成分１０ｍｇ／ｍＬを含む製剤を含むＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）は、ヒト全血の溶血を誘発しなかった。
【実施例６】
【００７２】
各種薬物濃度、緩衝液ｐＨならびにモル濃度およびシクロデキストリン濃度における製剤のインビトロの溶血評価
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の存在および非存在で、各種緩衝液ｐＨおよびモル濃度における、活性成分の溶解性データを表５に示す。活性成分の溶解性が低いｐＨ７の、０．０５Ｍ緩衝液含量において、１０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の添加は、活性成分の可溶化の２倍を超す増加を生じた。緩衝液ｐＨまたはモル濃度が増加するにしたがって、製剤中の活性成分の溶解性が増加した。しかし、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の添加は、低ｐＨまたは低モル濃度における溶解性の増強の程度と比べてより少ない程度を生じた。ｐＨ８０．１Ｍ緩衝液においてＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の溶解性増強はなかった。
【００７３】
【表５】
2010502691.tif 000007
【００７４】
緩衝液ｐＨ、モル濃度およびＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）濃度の活性成分の溶血保護への影響を試験するために２つの濃度においてインビトロの溶血評価を行った。溶血評価の方法は、実施例２に記載したのと同じであった。表６に製剤および２つの希釈物における溶血率を纏める。
【００７５】
【表６】
2010502691.tif 000008
【００７６】
９および１８ｍｇ／ｍＬの活性成分濃度を有する製剤は、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（製剤番号１および４）の非存在下で溶血を誘発した。
【００７７】
各種ｐＨおよび緩衝液モル濃度において、１０％のＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）を含む９ｍｇ／ｍＬの活性成分濃度の製剤は、有効な溶血保護を示した（製剤番号２および３）．
１８ｍｇ／ｍＬの活性成分濃度の製剤について、ｐＨ８においてＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の１０％で若干の溶血が観察された（製剤Ｎｏ．５）。しかし、同じ活性成分濃度、ｐＨおよびモル濃度の製剤についてＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の２０％で溶血は観察されなかった（製剤Ｎｏ．６）。
【００７８】
これらの結果は、十分なＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）濃度および薬物に対するＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）比が、溶血保護を示す上で重要であることを示している。試験の範囲内において、緩衝液のｐＨまたはモル濃度は活性成分の溶解性およびＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の可溶化作用に影響するが、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の溶血保護への影響は僅かにすぎない。
インビボ試験
【実施例７】
【００７９】
リン酸塩緩衝液製剤、３０分注入によるイヌにおけるインビボ試験
０．１Ｍリン酸塩緩衝液中の活性成分の溶液を１０ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬの濃度で雌雄ビーグル犬各１頭に３０分にわたる単回静脈内注入により投与し、それぞれ２５および５０ｍｇ／ｋｇの全体の曝露を得た。血漿濃度測定のための試料採取を１日につき次の間隔で行った。：注入の終了（０）、注入の終了後３０分、１時間、３時間、６時間および２４時間。
【００８０】
結果：目視による溶血が、０分、注入後３０分（全動物）、１時間（２５ｍｇ／ｋｇで処置された雄および５０ｍｇ／ｋｇで処置された両動物）、３時間（５０ｍｇ／ｋｇで処置された両動物）および６時間（５０ｍｇ／ｋｇで処置された雌）後に血漿試料に観察された。
【実施例８】
【００８１】
リン酸塩緩衝液製剤または本発明のシクロデキストリン製剤を用いたインビボ試験
０．１Ｍリン酸塩緩衝液中の活性成分の溶液を０、２．５、５および１０ｍｇ／ｍＬの濃度で雌雄ラット各１０頭に単回静脈内注入で１時間にわたり投与した。投与量は、０（対照）、１００、２００および４００ｍｇ／ｋｇであった。
【００８２】
結果：注入日に、４００ｍｇ／ｋｇの投与量において、１０頭の雄中６頭、１０頭の雌中８頭に変色尿（赤／褐色）が観察され、これは活性成分の溶血能による可能性が最も高いと思われた。
【００８３】
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）を含む製剤を用いて１００、２００、３００および３５０ｍｇ／ｋｇの投与量においてラットで行った試験において、３５０ｍｇ／ｋｇの投与量において変色（赤）尿が１日目に１２頭の雌の内３頭に、２日目に１２頭の雌の内１頭に認められた。この投与量は、ラットにおける最大の濃度（１０ｍｇ／ｍＬ）および投与の非常に高い容量（３５ｍＬ／ｋｇ）を用いて得られた。
【００８４】
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）を含む製剤を用いて１０、５０および７５ｍｇ／ｋｇ（１０ｍＬ／ｋｇの投与容量の７．５ｍｇ／ｍＬの最大濃度）の投与量においてイヌで実施した試験で溶血は観察されなかった。
【実施例９】
【００８５】
本発明のシクロデキストリン製剤を用いるイヌにおけるインビボ試験
１０％ヒドロキ−プロピルβ−シクロデキストリンを含む０．０５ＭｐＨの７リン酸緩衝液の水性溶液中の活性成分（１０ｍｇ／ｍＬ）の溶液を１時間に亘る単回静脈内注入により雌ビーグル犬に投与した。投与量は５０ｍｇ／ｋｇであった。試料採取を１日につき次の間隔で行った。：注入の終了（０）、注入の終了後３０分、１時間、３時間、６時間および２４時間。
【００８６】
結果：血液採取において生体外溶血は認められなかった。
【実施例１０】
【００８７】
下記は、本発明の医薬製剤の実施例である：
物質                                                      量
活性成分                                            ８．００ｍｇ
スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン        １００ｍｇ
リン酸一ナトリウム二水和物                          ２．９２ｍｇ
第二リン酸ナトリウム十二水和物                      １０．１ｍｇ
水                                                  十分な量から１ｍｌ
【００８８】
物質                                                      量
活性成分                                            １０．０ｍｇ
スルホブチルエーテルベータシクロデキストリン        １００ｍｇ
リン酸一ナトリウム二水和物                          ２．５ｍｇ
第二リン酸ナトリウム無水物                          ３．９ｍｇ
水                                                  十分な量から１ｍｌ
【国際調査報告】
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2010502691.tif 000011
2010502691.tif 000012
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