(57)【要約】本明細書は、水利尿ポリペプチドおよびナトリウム利尿ポリペプチドを提供する。例えば、本明細書は、水利尿作用および／またはナトリウム利尿作用を有するポリペプチドを提供する。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、水利尿作用およびナトリウム利尿作用を有し得るが、その一方で、血圧を低下させる能力を欠いている。本明細書はまた、哺乳動物体内における水利尿作用および／またはナトリウム利尿作用を誘発するための方法および材料を提供する。2010502231.tif 000003
2010502231.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、
（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、
（ｂ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、
（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列と
を含む、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチド。
【請求項２】
ナトリウム利尿作用を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
血管拡張作用を欠いている、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
配列番号１に記載の配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
配列番号２に記載の配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
配列番号３に記載の配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】
配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項８】
実質的に純粋なポリペプチドである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項９】
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、
（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、
（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、
（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列と
を含む、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチド。
【請求項１０】
ナトリウム利尿作用を含む、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
配列番号１に記載の配列を含む、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号７に記載の配列を含む、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
配列番号３に記載の配列を含む、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含む、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
実質的に純粋なポリペプチドである、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
アミノ末端からカルボキシ末端の順で、
（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、
（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列と
を含む、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチド。
【請求項１７】
ナトリウム利尿作用を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
血管拡張作用を欠いている、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号１に記載の配列を欠いている、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
配列番号２に記載の配列を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号３に記載の配列を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含む、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
実質的に純粋なポリペプチドである、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸。
【請求項２５】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドをコードする核酸を含む、ベクター。
【請求項２６】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドをコードする核酸を含む、宿主細胞。
【請求項２７】
真核生物宿主細胞である、請求項２６に記載の宿主細胞。 
【請求項２８】
薬学的に許容される担体と、請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドとを含む、薬学的組成物。
【請求項２９】
請求項１または１６に記載のポリペプチドを哺乳動物に投与するステップを含む、血圧を低下させることなく哺乳動物体内における水利尿作用およびナトリウム利尿作用を増加させるための方法。
【請求項３０】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドを哺乳動物に投与するステップを含む、心血管または腎臓の症状を有する哺乳動物を処置するための方法。
【請求項３１】
前記哺乳動物が、心血管疾患を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記哺乳動物が、うっ血性心不全を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記哺乳動物が、心筋梗塞、冠動脈疾患、動脈疾患、腎不全、癌、またはナトリウムおよび水貯留状態を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドを含むコーティングを含む、ステント。
【請求項３５】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドを含むコーティングを含む、透析チューブ。
【請求項３６】
請求項１、９、または１６に記載のポリペプチドを含む、微粒子またはナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００６年９月８日に出願した米国仮出願第６０／８２５，０２８号の恩典を主張する。
【０００２】
１．技術分野
本明細書は、水利尿ポリペプチドおよびナトリウム利尿ポリペプチドに関する。例えば、本明細書は、水利尿作用およびナトリウム利尿作用を有する一方で、血管組織を拡張する能力を欠いているポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００３】
２．背景情報
ナトリウム利尿ポリペプチドファミリーのメンバーは、体液の恒常性を調節するホルモンである。心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）は、増加した血管内の容量に応答して、心房性細胞から分泌される。一旦ＡＮＰが循環血液中に入ると、主に腎臓、血管組織、および副腎に影響が及び、その作用は腎臓によるナトリウムおよび水の排出と、血管内の容量および血圧の低下をもたらす。ＢＮＰもまた心筋細胞由来であり、ＡＮＰ同様、ヒト血漿において循環する。ＢＮＰは、ナトリウム利尿性、レンニン阻害性、血管拡張性、および拡張機能性を有する。ＢＮＰの主な循環型および貯蔵型は、リング構造を有するアミノ酸３２個のポリペプチドである。ＢＮＰの生理作用は、グアニル酸シクラーゼ結合の受容体であるナトリウム利尿ペプチド受容体Ａ（ＮＰＲ−Ａ）によって媒介される。ＢＮＰのクリアランスは、ＢＰＮを循環から取り除くＮＰＲ−Ｃ受容体によって促進される。ＢＮＰはまた、中性エンドペプチダーゼによる酵素的切断によって分解される。Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）は、内皮細胞由来であり、血管拡張および増殖阻害ポリペプチドとして機能する。マンバ（Ｄｅｎｄｒｏａｓｐｉｓ）ナトリウム利尿ペプチド（ＤＮＰ）は、構造上、ＡＮＰ、ＢＮＰ、およびＣＮＰと類似しており、ヒガシグリーンマンバ（Ｄｅｎｄｏａｓｐｉｓ  ａｎｇｕｓｔｉｃｅｐｓ）やグリーンマンバ蛇の毒液から単離される。
【発明の概要】
【０００４】
概要
本明細書は、水利尿ポリペプチドおよびナトリウム利尿ポリペプチドに関する。例えば、本明細書は、水利尿作用およびナトリウム利尿作用を有するポリペプチドを提供する。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、水利尿作用およびナトリウム利尿作用を有し得るが、その一方で、血管組織を拡張する能力を欠いている。
【０００５】
概して、本明細書の一局面は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【０００６】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする単離された核酸を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【０００７】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする核酸を含むか、または本質的にこれから成るベクターを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【０００８】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。宿主細胞は、真核生物宿主細胞であり得る。
【０００９】
別の態様において、本明細書は、薬学的に許容される担体と、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドとを含む、薬学的組成物を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１０】
別の態様において、本明細書は、血圧を低下させることなく哺乳動物体内における水利尿作用およびナトリウム利尿作用を増加させるための方法を特徴とし、該方法は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを哺乳動物に投与するステップを含み、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１１】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含むコーティングを含むステントを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１２】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含むコーティングを含む透析チューブを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１３】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含む微粒子またはナノ粒子を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１４】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１５】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする単離された核酸を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１６】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする核酸を含むか、または本質的にこれから成るベクターを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１７】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１８】
別の態様において、本明細書は、薬学的に許容される担体と、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドとを含む、薬学的組成物を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００１９】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含むコーティングを含むステントを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２０】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含むコーティングを含む透析チューブを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２１】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含む微粒子またはナノ粒子を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２２】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２３】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする単離された核酸を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２４】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする核酸を含むか、または本質的にこれから成るベクターを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２５】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２６】
別の態様において、本明細書は、薬学的に許容される担体と、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドとを含む、薬学的組成物を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２７】
別の態様において、本明細書は、血圧を低下させることなく哺乳動物体内における水利尿作用およびナトリウム利尿作用を増加させるための方法を特徴とし、該方法は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを哺乳動物に投与するステップを含み、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２８】
別の態様において、本明細書は、血圧を低下させることなく哺乳動物体内における水利尿作用およびナトリウム利尿作用を増加させるための方法を特徴とし、該方法は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを哺乳動物に投与するステップを含み、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００２９】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含むコーティングを含むステントを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００３０】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含むコーティングを含む透析チューブを特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００３１】
別の態様において、本明細書は、アミノ酸残基４５個未満の長さのポリペプチドを含む微粒子またはナノ粒子を特徴とし、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００３２】
別の態様において、本明細書は、心血管または腎臓の症状を有する哺乳動物を処置するための方法を特徴とする。前記方法は、哺乳動物にポリペプチドを投与するステップを含み得る。哺乳動物は、心血管疾患を有し得る。哺乳動物は、うっ血性心不全を有し得る。哺乳動物は、心筋梗塞、冠動脈疾患、動脈疾患、腎不全、癌、またはナトリウムおよび水貯留状態を有し得る。
【００３３】
いくつかの場合において、ポリペプチドは、アミノ酸残基４５個未満の長さであることが可能であり、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号２に記載の配列、もしくは８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、もしくは３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含むか、または本質的にこれらから成る。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００３４】
いくつかの場合において、ポリペプチドは、アミノ酸残基４５個未満の長さであることが可能であり、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号１に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）配列番号７に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号７に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列と、配列番号７に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００３５】
いくつかの場合において、ポリペプチドは、アミノ酸残基４５個未満の長さであることが可能であり、該ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシ末端の順で、（ａ）配列番号２に記載の配列、または８個以下のミスマッチを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）配列番号３に記載の配列、または３個以下のミスマッチを有する配列番号３に記載の配列とを含む。前記ポリペプチドは、ナトリウム利尿作用を含み得る。前記ポリペプチドは、血管拡張作用を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号１に記載の配列を欠き得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号３に記載の配列を含み得る。前記ポリペプチドは、配列番号２に記載の配列と、配列番号３に記載の配列とを含み得る。前記ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。
【００３６】
別途定義されない限り、本明細書中において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が関係する当業者によって広く理解されているものと同一の意味を有する。本発明の実施においては、本明細書中に記載の方法および材料に類似のまたは同等のものを使用することができるが、適切な方法および材料を下記に記載する。本明細書中において言及される全ての出版物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。不一致が生じた場合、定義を含む本願明細書が優先する。また、材料、方法、および実施例は説明のみを目的とし、限定を意図するものではない。
【００３７】
本発明の一つまたは複数の態様の詳細が、添付の図面および下記の説明に記載される。本発明の他の特徴、目的、および有利な点は、本発明の明細書および図面、ならびに特許請求の範囲により明白となる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】アミノ酸残基３３個の長さである、ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドの概略図である（配列番号４）。配列番号４の最初の５個のアミノ酸残基は、ヒト成熟ＡＮＰのアミノ酸残基１１から１５位に対応し、配列番号１と表される。配列番号４のアミノ酸残基６から２７位は、１５、１６、および１７位におけるアミノ酸残基が、アルギニン、グルタミン酸、およびアラニンに変化していることを除いて、ヒト成熟ＣＮＰのアミノ酸残基１から２２位に対応する。配列番号４のアミノ酸残基６から２７位は、配列番号２と表される。配列番号４のアミノ酸残基２８から３３位は、ヒト成熟ＢＮＰのアミノ酸残基２７から３２位に対応し、配列番号３と表される。
【図２】アミノ酸残基３３個の長さである、ＡＢＣ−ＮＰ１ポリペプチドの概略図である（配列番号６）。配列番号６の最初の５個のアミノ酸残基は、ヒト成熟ＡＮＰのアミノ酸残基１１から１５位に対応し、配列番号１と表される。配列番号６のアミノ酸残基６から２７位は、ヒト成熟ＣＮＰのアミノ酸残基１から２２位に対応し、配列番号７と表される。配列番号６のアミノ酸残基２８から３３位は、ヒト成熟ＢＮＰのアミノ酸残基２７から３２位に対応し、配列番号３と表される。
【図３】アミノ酸残基２８個の長さである、ＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドの概略図である（配列番号８）。配列番号８のアミノ酸残基１から２２位は、１５、１６、および１７位におけるアミノ酸残基が、アルギニン、グルタミン酸、およびアラニンに変化していることを除いて、ヒト成熟ＣＮＰのアミノ酸残基１から２２位に対応する。配列番号８のアミノ酸残基１から２２位は、配列番号２と表される。配列番号８のアミノ酸残基２３から２８位は、ヒト成熟ＢＮＰのアミノ酸残基２７から３２位に対応し、配列番号３と表される。
【図４】ＡＢＣ−ＮＰ、ＢＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ、またはＢＣ−ＮＰ２（静脈内ボーラスとして２５μｇ／ｋｇ投与される）により処置されるイヌに対する尿中ナトリウム排泄率を表示する、４つの棒グラフを含む。ベースラインは投与前であり、一方、示される時間は投与後である。
【図５】ＡＢＣ−ＮＰ、ＢＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ、またはＢＣ−ＮＰ２（静脈内ボーラスとして２５μｇ／ｋｇ投与される）により処置されるイヌに対する尿流率を表示する、４つの棒グラフを含む。ベースラインは投与前であり、一方、示される時間は投与後である。
【図６】ＡＢＣ−ＮＰ、ＢＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ、またはＢＣ−ＮＰ２（静脈内ボーラスとして２５μｇ／ｋｇ投与される）により処置されるイヌに対する平均動脈圧レベルを表示する、４つの棒グラフを含む。ベースラインは投与前であり、一方、示される時間は投与後である。
【図７】ＡＢＣ−ＮＰ、ＢＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ、またはＢＣ−ＮＰ２（静脈内ボーラスとして２５μｇ／ｋｇ投与される）により処置されるイヌに対する血漿バソプレシンレベルを表示する、４つの棒グラフを含む。ベースラインは投与前であり、一方、示される時間は投与後である。
【図８】ＡＢＣ−ＮＰ、ＢＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ、またはＢＣ−ＮＰ２（静脈内ボーラスとして２５μｇ／ｋｇ投与される）により処置されるイヌに対する腎血流量を表示する、４つの棒グラフを含む。ベースラインは投与前であり、一方、示される時間は投与後である。
【図９】未処置のヒト心臓線維芽細胞、およびＡＮＰ（１０−６Ｍ）、ＢＮＰ（１０−６Ｍ）、ＣＮＰ（１０−６Ｍ）、ＡＢＣ−ＮＰ（１０−１１Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−６Ｍ）、またはＡＢＣ−ＮＰ＋ＢＮＰ（各１０−６Ｍ）により１０分間処置されたヒト心臓線維芽細胞における、ｃＧＭＰレベル（ｐｍｏｌ／ｍＬ）を表示する、棒グラフである。
【図１０】未処置のヒト心臓線維芽細胞、およびＡＮＰ（１０−６Ｍ）、ＢＮＰ（１０−６Ｍ）、ＣＮＰ（１０−６Ｍ）、ＡＢＣ−ＮＰ１（１０−１１Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−６Ｍ）、ＡＢＣ−ＮＰ１＋ＢＮＰ（各１０−６Ｍ）により１０分間処置されたヒト心臓線維芽細胞における、ｃＧＭＰレベル（ｐｍｏｌ／ｍＬ）を表示する、棒グラフである。
【図１１】未処置のヒト心臓線維芽細胞、およびＡＮＰ（１０−６Ｍ）、ＢＮＰ（１０−６Ｍ）、ＣＮＰ（１０−６Ｍ）、またはＢＣ−ＮＰ２（１０−１１Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−６Ｍ）により１０分間処置されたヒト心臓線維芽細胞における、ｃＧＭＰレベル（ｐｍｏｌ／ｍＬ）を表示する、棒グラフである。
【図１２】配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＡＢＣ−ＮＰポリペプチドをコードし得る核酸配列（配列番号５）を含む。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
詳細な説明
本明細書は、水利尿ポリペプチドおよびナトリウム利尿ポリペプチドに関する。例えば、本明細書は、水利尿作用および／またはナトリウム利尿作用を有するポリペプチドを提供する。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、 水利尿作用およびナトリウム利尿作用を有し得る一方で、血圧を低下させる能力を欠いている。本明細書はまた、哺乳動物体内における水利尿作用および／またはナトリウム利尿作用を誘発するための方法および材料を提供する。
【００４０】
本明細書中において提供されるポリペプチドは、いかなる配列をも有することができ、かついかなる長さをも有することができる。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号１、配列番号２、および配列番号３に記載の配列を含み得る。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、（ａ）４個以下（例えば、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）１０個以下（例えば、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号２に記載の配列と、（ｃ）５個以下（例えば、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号３に記載の配列とに対して整列する、アミノ酸配列を含み得る。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号１の最初のアルギニン残基または最後のイソロイシン残基が欠失しているか、または異なるアミノ酸残基によって置換されていることを除いて、配列番号１に記載の配列を含み得る。
【００４１】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、（ａ）配列番号１に記載されているか、または４個以下（例えば、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号１に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第１のアミノ酸配列と、（ｂ）配列番号２に記載されているか、または１０個以下（例えば、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号２に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第２のアミノ酸配列と、（ａ）配列番号３に記載されているか、または５個以下（例えば、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号３に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第３のアミノ酸配列とを含み得る。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号４に記載の配列を含み得るか、またはこれから成り得る。
【００４２】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号１、配列番号７、および配列番号３に記載の配列を含み得る。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、（ａ）４個以下（例えば、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号１に記載の配列と、（ｂ）１０個以下（例えば、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号７に記載の配列と、（ｃ）５個以下（例えば、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号３に記載の配列とに対して整列する、アミノ酸配列を含み得る。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号１の最初のアルギニン残基または最後のイソロイシン残基が欠失しているか、または異なるアミノ酸残基によって置換されていることを除いて、配列番号１に記載の配列を含み得る。
【００４３】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、（ａ）配列番号１に記載されているか、または４個以下（例えば、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号１に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第１のアミノ酸配列と、（ｂ）配列番号７に記載されているか、または１０個以下（例えば、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号７に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第２のアミノ酸配列と、（ａ）配列番号３に記載されているか、または５個以下（例えば、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号３に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第３のアミノ酸配列とを含み得る。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号６に記載の配列を含み得るか、またはこれから成り得る。
【００４４】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号２および配列番号３に記載の配列を含み得る。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、（ａ）１０個以下（例えば、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号２に記載の配列と、（ｂ）５個以下（例えば、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号３に記載の配列とに対して整列する、アミノ酸配列を含み得る。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号２の最初のグリシン残基が欠失しているか、または異なるアミノ酸残基によって置換されていることを除いて、配列番号２に記載の配列を含み得る。
【００４５】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、（ａ）配列番号２に記載されているか、または１０個以下（例えば、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸付加、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号２に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第１のアミノ酸配列と、（ｂ）配列番号３に記載されているか、または５個以下（例えば、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個）のアミノ酸欠失、置換、またはそれらの組み合わせを有する配列番号３に記載の配列に対して整列するかのいずれかである、第２のアミノ酸配列とを含み得る。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、配列番号８に記載の配列を含み得るか、またはこれから成り得る。
【００４６】
本明細書中において提供されるポリペプチドは、いかなる長さであってもよい。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドは、アミノ酸残基２５〜４５個（例えば、２６〜４４個、２７〜４３個、２８〜４２個、２９〜４１個、３０〜４０個、３１〜３９個、または３２〜３８個）の長さであり得る。アミノ酸残基２５個または４５個の長さのポリペプチドは、アミノ酸残基２５〜４５個の長さのポリペプチドであると理解されるものとする。
【００４７】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドであり得る。本明細書中においてポリペプチドに関して使用される「実質的に純粋」という用語は、ポリペプチドは、自然においては、それに関連する他のポリペプチド、脂質、炭水化物、および核酸を実質的に含まないことを意味する。それゆえ、実質的に純粋なポリペプチドとは、その自然環境から離された、少なくとも６０％純粋な、あらゆるポリペプチドであるか、またはあらゆる化学的に合成したポリペプチドである。実質的に純粋なポリペプチドは、少なくとも約６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または９９％純粋であり得る。通常、実質的に純粋なポリペプチドは、非還元性ポリアクリルアミドゲル上に単一の主要なバンドを生じる。
【００４８】
いくつかの態様において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、血管作用を欠き得る。血管作用は、血管（例えば、臓器房（organ chamber）内の頸動脈）のポリペプチドに対する応答性を測定することによって分析することができる。
【００４９】
本明細書中において提供されるポリペプチドは、ポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって、または化学合成によって取得することができる。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドをコードする発現ベクターを使用する、標準的な組換え技術を使用することができる。得られたポリペプチドは、次に、例えば、親和性クロマトグラフ法およびＨＰＬＣを使用して精製することができる。精製の程度は、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法、または高速液体クロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない、いかなる適切な方法によっても測定することができる。本明細書中において提供されるポリペプチドは、ポリペプチド精製することを可能とする（例えば、親和性マトリクス上に捕捉される）タグ配列を含むように設計、または操作することができる。例えば、ｃ−ｍｙｃ、血球凝集素、ポリヒスチジン、またはＦｌａｇ（商標）タグ（Ｋｏｄａｋ）等のタグを、ポリペプチドの精製を補助するために使用することができる。このようなタグは、カルボキシル末端またはアミノ末端のいずれかを含むポリペプチド内のあらゆる場所に挿入することができる。使用することのできる他の融合には、ポリペプチドの検出を補助する、アルカリ性ホスファターゼ等の酵素が含まれる。
【００５０】
本明細書中において提供されるポリペプチドは、Ｎ末端（例えば、ＡＮＰポリペプチドからのＮ末端配列）を含む第１の領域と、ＣＮＰポリペプチド等の成熟ナトリウム利尿ポリペプチドのリング構造を含む第２の領域と、Ｃ末端（例えば、ＢＮＰポリペプチドからのＣ末端配列）を含む第３の領域との、３つの領域を含むように産生され得る。ＢＮＰ、ＤＮＰ、ＡＮＰ、およびＣＮＰのＮ末端、リング構造、およびＣ末端は、他の文献で論じられている。例えば、米国特許出願第１０／５６１，０１４号を参照されたい。
【００５１】
本明細書中において提供されるポリペプチドは、心血管疾患、うっ血性心不全、心筋梗塞、冠動脈疾患、腎疾患、非虚血性腎疾患、非炎症性腎疾患、非線維性腎疾患、肝疾患、癌（例えば、腺癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、または乳癌）、肺高血圧症、血管系疾患、拡張機能障害、心機能異常、腎不全（例えば、造影剤起因性または虚血起因性腎不全）、またはこれらの組み合わせを処置するために使用することができる。例えば、ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドは、ヒトの冠動脈疾患の症候の重症度が軽減される条件下で、冠動脈疾患を有するヒトに投与することができる。
【００５２】
本明細書中において提供されるポリペプチドは、薬学的に許容される毒性のない賦形剤または担体と混合することによって、薬学的組成物として製剤することができる。このような組成物は、例えば、心臓、肝臓、血管、腎臓、または他のナトリウム貯留状態を処置するのに有効な量で、その必要がある対象に投与することができる。薬学的組成物は、 特に溶液または生理的緩衝水溶液中の懸濁の形態で、非経口投与のために、 特にタブレットまたはカプセルの形態で、経口投与のために、または、特に粉末、点鼻薬、またはエアロゾルの形態で、鼻腔内投与のために、調製することができる。他の投与経路のための組成物は、標準的な方法を使用して、要望に応じて調製することができる。
【００５３】
非経口投与のための製剤は、一般的な賦形剤として、滅菌水または生理食塩水、ポリエチレングリコール等のポリアルキレングリコール、植物由来の油脂、水素化ナフタレン等を含み得る。具体的には、生体適合性のある、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、インビボにおけるポリペプチドの放出を制御するための賦形剤の例である。他の適切な非経口送達システムには、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み式注入システム、およびリポソームが挙げられる。吸入投与のための製剤には、必要に応じて乳糖等の賦形剤が含まれてもよい。吸入製剤は、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸およびデオキシコール酸を含む水溶液であってもよく、または吸入製剤は、例えば、点鼻薬の形態での投与用に油性溶液であってもよい。必要に応じて、組成物は鼻腔内に塗布されるゲルとして製剤化され得る。また、非経口投与用の製剤は、口腔内投与のためのグリココール酸を含み得る。
【００５４】
経口投与のために、結合剤（例えば、あらかじめゼラチン化したトウモロコシでんぷん、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、賦形剤（例えば、乳糖、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモでんぷんまたはナトリウムスターチグリコール酸塩）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）等の薬学的に許容される賦形剤を使用する従来の手段によって、錠剤またはカプセルを調製することができる。錠剤は、当技術分野で既知の方法によってコーティングすることができる。また、経口投与のための調製は、組成物の制御された放出を可能にするように製剤化することができる。
【００５５】
点鼻剤は、液状または乾燥製品の形態とすることができる。噴霧される水性懸濁液または溶液は、ｐＨおよび／または張性を調節するために、担体または賦形剤を含むことができる。
【００５６】
いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、持続放出製剤として製剤化することができる。例えば、ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドは、制御放出製剤に製剤化することができる。いくつかの場合において、コーティング、外皮、または保護マトリックスは、本明細書中において提供されるポリペプチドの１つまたは複数を含むように製剤することができる。このようなコーティング、外皮、または保護マトリックスは、ステント、カテーテル、および腹膜透析チューブ等の留置器具をコーティングするために、使用することができる。いくつかの場合において、本明細書中において提供されるポリペプチドは、高分子物質、リポソーム、マイクロエマルジョン、微粒子、ナノ粒子、またはワックスに組み込むことができる。
【００５７】
ポリペプチドをコードする核酸
本明細書はまた、本明細書中において提供されるポリペプチドの１つまたは複数をコードする単離された核酸を提供する。核酸に関して本明細書中で使用される「単離された」という用語は、これが由来する生物体の天然のゲノムにおいて直接隣接（５’末端におけるものと、３’末端におけるもの）する双方の配列と直接隣接しない天然の核酸を指す。例えば、単離された核酸は、天然のゲノムにおいて通常組換えＤＮＡ分子と直接隣接して見られる核酸配列のうちの１つが、除去されたか欠如している、任意の長さの組換えＤＮＡ分子であり得るがこれに限定されない。それゆえ、単離された核酸は、他の配列から独立した別個の分子（例えば、ＰＣＲまたは制限エンドヌクレアーゼ処理によって産生されたｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ断片）として存在する組換えＤＮＡ、ならびにベクター、自己複製プラスミド、ウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）に組み込まれた、または原核生物または真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれた組換えＤＮＡを含むがこれらに限定されない。また、単離された核酸は、ハイブリッドまたは融合核酸配列の一部である組換えＤＮＡ分子を含み得る。
【００５８】
また、核酸に関して本明細書中で使用される「単離された」という用語は、非天然の核酸配列は自然界では見られず、かつ天然のゲノムにおいて直接隣接する配列を有していないため、あらゆる非天然の核酸を含む。例えば、人工的に作られた核酸等の非天然の核酸は、単離された核酸と見なされる。人工的に作られた核酸（例えば、配列番号４、６、または８に記載のアミノ酸配列を含むかそれから成るポリペプチドをコードする核酸）は、一般的な分子クローニング技術や化学核酸合成技術を使用して作製することができる。単離された非天然の核酸は、他の配列から独立していてもよく、またはベクター、自己複製プラスミド、ウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）、または原核生物または真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれてもよい。また、非天然の核酸は、ハイブリッドまたは融合核酸配列の一部である核酸分子を含むことができる。ｃＤＮＡライブラリやゲノムライブラリ、またはゲノムＤＮＡ制限消化物を含むゲルスライスなどにおける他の数百〜数百万の核酸の中に存在する核酸は、単離された核酸とは見なされない。
【００５９】
本明細書中において使用される「核酸」という用語は、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成（例えば、化学的に合成した）ＤＮＡ、および核酸類似体を含むＲＮＡとＤＮＡの双方を指す。核酸は、二本鎖または一本鎖であってもよく、一本鎖の場合、センス鎖またはアンチセンス鎖であってもよい。また、核酸は、円形または線形であってもよい。核酸類似体は、例えば、核酸の安定性、ハイブリダイゼーション、または溶解性を改善するために、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格の箇所において改変することができる。塩基部分における改変は、デオキシチミジンのデオキシウリジンへの、および５−メチル−２’−デオキシシチジンおよび５−ブロモ−２’−デオキシシチジンのデオキシシチジンへの改変を含む。糖部分における改変は、リボース糖の２’ヒドロキシルから、２’−Ｏ−メチルまたは２’−Ｏ−アリル糖形態への改変を含み得る。デオキシリボースリン酸骨格は、モルホリノ核酸を産するように改変することができ、各塩基部分はそこで六員環のモルホリノ環、またはペプチド核酸に結合し、そこでデオキシリン酸骨格は擬ペプチド骨格によって置換され、４つの塩基は保持される。例えば、ＳｕｍｍｅｒｔｏｎおよびＷｅｌｌｅｒ、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．，７：１８７−１９５（１９９７）、およびＨｙｒｕｐら、Ｂｉｏｏｒｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４：５−２３（１９９６）を参照されたい。また、デオキシリン酸骨格は、例えば、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート骨格、ホスホロアミダイト、またはアルキルホスホトリエステル骨格と置換することができる。
【００６０】
本明細書中において提供される核酸は、配列番号５に記載の配列を含むか、それから成ることができる。
【００６１】
通常、本明細書中において提供される単離された核酸は、少なくとも１０ヌクレオチドの長さ（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００、２００、３００、３５０、４００、またはそれ以上のヌクレオチドの長さ）である。全長未満の核酸分子は、例えば、診断目的のプライマーまたはプローブとして有用である。単離された核酸分子は、一般的な分子クローン技術および化学核酸合成技術を含むがこれらに限定されない標準的な技術によって産生することができる。例えば、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）を使用することができる。ＰＣＲとは、標的核酸が酵素的に増幅される手順または技術を指す。関心領域末端またはそれを越える部位からの配列情報は、通常、増幅されるテンプレートの逆鎖の配列と同一のオリゴヌクレオチドプライマーを設計するために採用される。ＰＣＲは、ＤＮＡならびにＲＮＡから特定の配列を増幅するために使用することができ、配列には、総ゲノムＤＮＡまたは総細胞ＲＮＡからの配列が含まれる。プライマーは通常、１５〜５０ヌクレオチドの長さであるが、１０ヌクレオチドから、数百ヌクレオチドの長さに至る範囲であってもよい。例えば、プライマーは、１２、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、または４５ヌクレオチドの長さであり得る。プライマーは、制限消化物から、従来の方法によって精製するか、または化学的に合成することができる。プライマーは、通常、増幅における効率を最大とするために一本鎖であるが、プライマーは、二本鎖であってもよい。二本鎖プライマーは、増幅で使用される前に、鎖を分離するためにまず変性される（例えば、熱で処理される）。一般的なＰＣＲ法については、例えばＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５に記載されている。ＲＮＡをテンプレートの供給源として使用する場合、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）鎖を合成するために逆転写酵素を使用することができる。他の文献において記載されるように単離された核酸を取得するために、リガーゼ連鎖反応法、鎖置換増幅法、自立配列複製法、または核酸配列に基づく増幅法もまた使用することができる（Ｌｅｗｉｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ，１２（９）：１（１９９２）、Ｇｕａｔｅｌｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：１８７４―１８７８（１９９０）、およびＷｅｉｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４：１２９２（１９９１））。
【００６２】
単離された核酸はまた、単一の核酸分子（例えば、ホスホルアミダイト技術を使用した３’〜５’方向の自動ＤＮＡ合成を使用して）として、または一連のオリゴヌクレオチドとして、化学的に合成することができる。例えば、長いオリゴヌクレオチド（例えば、＞１００ヌクレオチド）の１つまたは複数の対は、オリゴヌクレオチド対がアニールする時に二本鎖が形成されるように、各対が相補性の短いセグメント（例えば、約１５ヌクレオチド）を有する所望の配列を含むように合成することができる。オリゴヌクレオチドを伸長するために、ＤＮＡポリメラーゼが用いられ、結果としてオリゴヌクレオチド対毎に、単一の二本鎖の核酸分子が生じ、これらは次にベクターに連結される。
【００６３】
単離された核酸はまた、突然変異誘発によって取得することができる。例えば、配列番号１、２、３、４、６、７、または８に記載の配列を有する、ポリペプチドをコードする核酸配列は、例えば、オリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発および／またはＰＣＲによる部位特異的突然変異誘発等の標準的な方法を使用して突然変異させることができる。Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第８章、Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９２を参照されたい。このような突然変異には、付加、欠失、置換、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【００６４】
ベクターおよび宿主細胞
本明細書はまた、本明細書中において提供される核酸を含むベクターを提供する。本明細書中において使用される場合、「ベクター」は、プラスミド、ファージ、またはコスミド等のレプリコンであり、挿入されたセグメントの複製をもたらすために、そこに別のＤＮＡセグメントを挿入することができる。ベクターは、発現ベクターであり得る。「発現ベクター」とは、１つまたは複数の発現制御配列を含むベクターであり、また「発現制御配列」とは、別のＤＮＡ配列の転写および／または翻訳を制御および調節するＤＮＡ配列である。
【００６５】
本明細書中において提供される発現ベクターにおいて、核酸は、１つまたは複数の発現制御配列に機能的に連結することができる。本明細書中において使用される場合、「機能的に連結する」とは、発現制御配列が、対象となるコード配列の発現を効果的に制御することができるように、遺伝子構造に組み込まれることを意味する。発現制御配列の例としては、プロモーター、エンハンサー、転写終結領域が含まれる。プロモーターとは、転写開始点（概してＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の近傍）の通常１００ヌクレオチド上流内のＤＮＡ分子領域で構成される発現制御配列である。コード配列をプロモーターの制御下に置くため、ポリペプチドの翻訳の読み枠の翻訳開始部位を、プロモーターの１〜約５０ヌクレオチド下流に位置づけることが必要である場合がある。エンハンサーは、時間、部位、およびレベルに関する発現特異性を提供する。プロモーターと異なり、エンハンサーは、転写部位から種々の距離にあっても機能する。エンハンサーはまた、転写開始部位より下流に位置することができる。ＲＮＡポリメラーゼがコード配列をｍＲＮＡに転写することができ、それが次にコード配列によってコードされるポリペプチドに翻訳され得る場合、細胞内においてコード配列は発現制御配列に「機能的に連結され」、発現制御配列の「制御下に」あるとされる。
【００６６】
適切な発現ベクターには、プラスミド、および例えば、バクテリオファージ、バキュロウイルス、タバコモザイクウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス由来のウイルスベクターが含まれるがこれらに限定されない。多数のベクターおよび発現システムは、Ｎｏｖａｇｅｎ（ウィスコンシン州、Ｍａｄｉｓｏｎ）、Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ（カリフォルニア州、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（カリフォルニア州、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ）、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カリフォルニア州、Ｃａｒｌｓｂａｄ）などの企業から市販されている。
【００６７】
発現ベクターは、発現核酸配列のその後の操作（例えば、精製または局在化）を容易にするように設計されたタグ配列を含むことができる。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ポリヒスチジン、ｃ−ｍｙｃ、血球凝集素、またはＦｌａｇ（商標）タグ（Ｋｏｄａｋ、コネチカット州、Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ）配列等のタグ配列は、通常、コードされたポリペプチドとの融合物として発現する。このようなタグは、カルボキシル末端またはアミノ末端のいずれかを含むポリペプチド内の、いかなる場所にも挿入することができる。
【００６８】
本明細書はまた、本明細書中において提供される核酸分子および／または核酸ベクターを含む宿主細胞を提供する。「宿主細胞」という用語は、核酸分子またはベクターがその中に導入され得る、原核細胞および真核細胞を含むことを意図する。核酸を細胞に導入するために、いかなる方法も使用することができる。例えば、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、熱ショック、リポフェクション、マイクロインジェクション、およびウイルス媒介の核酸転写を、核酸を細胞に導入するために使用することができる。また、裸のＤＮＡは、他の文献で記載されるように、インビボにおいて細胞に直接送達することができる（米国特許第５，５８０，８５９号および第５，５８９，４６６号）。
【００６９】
ポリペプチドの検出
本明細書は、本明細書中において提供されるポリペプチドを検出するための方法および材料を提供する。このような方法および材料は、ポリペプチドを治療薬として受けている哺乳動物の体内のポリペプチドのレベルを監視するために使用することができる。本明細書中において提供されるポリペプチド（例えば、ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２ポリペプチド）は、例えば、１つまたは複数の抗体を使用して免疫学的に検出することができる。本明細書中において使用される「抗体」という用語は、本明細書中において提供されるポリペプチドのエピトープ決定基に結合することができる無傷分子ならびにその断片を含む。「エピトープ」という用語は、抗原上の抗原決定基を指し、そこに抗体のパラトープが結合する。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面群（grouping）から成り、通常、特異的な三次元構造の特性ならびに特異的な電荷特性を有する。エピトープは、概して少なくとも５つの隣接アミノ酸（連続エピトープ）を有するか、または代替的に、特定の構造（例えば、立体構造エピトープ）を規定する一組の非隣接アミノ酸であり得る。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化またはキメラ抗体、単鎖Ｆｖ抗体断片、Ｆａｂ断片、およびＦ（ａｂ）２断片を含む。ポリクローナル抗体とは、免疫動物の血清中に含まれる、抗体分子の異種集団である。モノクローナル抗体とは、抗体の特定のエピトープに対する同種集団である。
【００７０】
本明細書中において提供されるポリペプチド（例えば、ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２）に対して特異的な結合親和力を有する抗体断片は、既知の技術によって生成することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体分子のペプシン消化によって産生することができ、Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成することができる。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリを構築してもよい。例えば、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６：１２７５（１９８９）を参照されたい。一旦産生されると、抗体またはその断片は、ＥＬＩＳＡ法、放射免疫測定法、およびウエスタンブロット法を含む標準的な免疫測定法によって、本明細書中において提供されるポリペプチドの識別について試験される。Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１１章、Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら編、１９９２を参照されたい。
【００７１】
免疫アッセイにおいては、本明細書中において提供されるポリペプチドに対して特異的な結合親和力を有する抗体、またはこのような抗体に結合する二次抗体を、直接的または間接的に標識することができる。適切な標識化には、放射性核種（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、３２Ｐ、３３Ｐ、または１４Ｃ）、蛍光部分（例えば、フルオレセイン、ＦＩＴＣ、ＰｅｒＣＰ、ローダミン、またはＰＥ）、発光部分（例えば、カリフォルニア州Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏの、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｄｏｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって供給されるＱｄｏｔ（商標）ナノ粒子）、規定の波長の光を吸収する化合物、または酵素（例えば、アルカリ性ホスファターゼまたはホースラディッシュペルオキシダーゼ）が含まれるがこれらに限定されない。抗体は、ビオチンとの結合によって間接的に標識することができ、次に上述の分子によって標識したアビジンまたはストレプトアビジンを用いて検出することができる。標識を検出または定量化する方法は、標識の性質によって異なり、当技術分野において既知である。検出器の例として、Ｘ線フィルム、放射能測定器、シンチレーションカウンター、分光光度計、比色計、蛍光光度計、照度計、および濃度計が挙げられるが、これらに限定されない。当業者に既知のこれらのアプローチの組み合わせ（「多層」アッセイを含む）を、アッセイの感度を強化するために使用することができる。
【００７２】
本明細書中において提供されるポリペプチドを検出する免疫アッセイは、サンドイッチアッセイ、競合アッセイ（競合ＲＩＡ）、または架橋免疫アッセイを含む、種々の既知の形式で行われ得る。例えば、米国特許第５，２９６，３４７号、第４，２３３，４０２号、第４，０９８，８７６号、および第４，０３４，０７４号を参照されたい。本明細書中において提供されるポリペプチドを検出する方法は概して、生体試料と、本明細書中において提供されるポリペプチドに結合する抗体とを接触させるステップ、およびポリペプチドの抗体への結合を検出するステップを含む。例えば、本明細書中において提供されるポリペプチドに対して特異的な結合親和力を有する抗体は、当技術分野で既知のあらゆる種類の方法によって、固体基板に固定化することができ、次に生体試料に曝すことができる。ポリペプチドの固体基板上の抗体への結合は、表面プラズモン共鳴現象を活用することによって検出することができ、これは例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ装置（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ、スウェーデン、Ｒａｐｓｇａｔａｎ）などの適切な機器によって、定性的または定量的に検出することができる、結合時の表面プラズモン共鳴の強度の変化をもたらす。あるいは、抗体は、上述のように標識し、検出することができる。本明細書中において提供されるポリペプチドの既知量の使用による標準曲線を、ポリペプチドのレベルの定量化を助けるために生成することができる。
【００７３】
他の態様において、捕捉抗体が固体基板上に固定化される「サンドイッチ」アッセイは、本明細書中において提供されるポリペプチドの存在の有無、またはレベルを検出するために使用される。固体基板は、試料中の関心対象の任意のポリペプチドが固定化抗体に結合するように、生体試料と接触させることができる。抗体に結合したポリペプチドの存在の有無、またはレベルは、ポリペプチドに特異的な結合親和力を有する「検出」抗体を使用することによって測定することができる。いくつかの態様において、本明細書中において提供されるポリペプチドに加え、ＢＮＰに結合親和力を有する捕捉抗体を使用することができる。本態様においては、本明細書中において提供される特定のポリペプチドに対して特異的な結合親和力を有する検出抗体を使用することができる。サンドイッチアッセイにおいて、捕捉抗体は、検出抗体が結合するのと同一のエピトープ（または、ポリクローナル抗体の場合、エピトープの範囲）に結合してはならないということが理解される。それゆえ、モノクローナル抗体が捕捉抗体として使用される場合、検出抗体は、捕捉モノクローナル抗体が結合するエピトープとは完全に物理的に別個であるか、もしくは該エピトープに部分的にのみ重複するかのいずれかであるエピトープに結合する、別のモノクローナル抗体であってもよく、または検出抗体は、捕捉モノクローナル抗体が結合するエピトープ以外のエピトープ、もしくは捕捉モノクローナル抗体が結合するエピトープに追加的なエピトープに結合する、ポリクローナル抗体であってもよい。ポリクローナル抗体が捕捉抗体として使用される場合、検出抗体は、捕捉ポリクローナル抗体が結合するエピトープとは完全に物理的に別個であるか、もしくは該エピトープに部分的にのみ重複するかのいずれかであるエピトープに結合する、モノクローナル抗体であってもよく、または検出抗体は、捕捉ポリクローナル抗体が結合するエピトープ以外のエピトープ、もしくは捕捉ポリクローナル抗体が結合するエピトープに追加的なエピトープに結合する、ポリクローナル抗体であってもよい。サンドイッチアッセイは、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ、サンドイッチウエスタンブロットアッセイ、サンドイッチ免疫磁気検出アッセイとして実施することができる。
【００７４】
抗体（例えば、捕捉抗体）が結合することができる適切な固体基板としては、マイクロタイタープレート、試験管、ナイロンまたはニトロセルロース膜等の膜、およびビーズまたは粒子（例えば、アガロース、セルロース、ガラス、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、磁気または磁化ビーズまたは粒子）が含まれるがこれらに限定されない。磁気または磁化粒子は、自動免疫測定システムが使用される場合に特に有用である。
【００７５】
本明細書中において提供されるポリペプチドに対して特異的な結合親和力を有する抗体は、標準的な方法を通じて産生することができる。概して、ポリペプチドは、上述のとおり、組換え技術によって産生するか、生体試料（例えば、異種発現システム）から精製することができ、ウサギ、ニワトリ、マウス、モルモット、またはラットを含む宿主動物を免疫化するために使用することができる。例えば、配列番号４、６、または８に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド（または少なくともアミノ酸６個の長さであるその断片）を、動物を免疫化するために使用することができる。免疫反応を改善するために使用することができる種々のアジュバントは、宿主動物種によって異なり、フロイントアジュバント（完全および不完全）、水酸化アルミニウム等の鉱物ゲル、リゾレシチン、プルロニックポリオール、多価陰イオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニンおよびジニトロフェノールなどの界面活性物質を含む。モノクローナル抗体は、本明細書中において提供されるポリペプチドおよび標準的なハイブリドーマ技術を使用して調製することができる。具体的には、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって記載されるような、培養下における連続継代細胞系、ヒトＢ−ｃｅｌｌハイブリドーマ技術（Ｋｏｓｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，４：７２（１９８３）、Ｃｏｌｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２０２６（１９８３））、および、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７〜９６ページ（１９８３））によって抗体分子の産生を提供する、あらゆる技術によって取得することができる。こうした抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびそのあらゆるサブクラスを含むあらゆる免疫グロブリンクラスであり得る。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、インビトロおよびインビボにおいて培養することができる。
【００７６】
本明細書中において提供されるポリペプチドを検出するための代替的な技術としては、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）およびマトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）等の質量分析技術が含まれる。例えば、Ｇｅｖａｅｒｔら、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２２（９）：１６４５−５１（２００１）、Ｃｈａｕｒａｎｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，１０（２）：９１−１０３（１９９９）を参照されたい。このような用途に有用な質量分析計は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ）、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｒｏｎｉｃｓ（マサチューセッツ州、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ）、およびＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ（カリフォルニア州、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ）から入手が可能である。
【００７７】
本発明は、下記の実施例においてより詳細に説明されるが、これは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
【００７８】
実施例
実施例１：ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、およびＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドの生物学的作用
図１〜３に記載の配列を有するポリペプチドを設計および合成した。図１に記載のポリペプチドは、ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドと呼び、図２に記載のポリペプチドは、ＡＢＣ−ＮＰ１ポリペプチドと呼び、図３に記載のポリペプチドは、ＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドと呼ぶ。ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２の静脈内注入の生物学的作用を、健常なイヌで試験した。簡単に述べると、５頭の健常なイヌに、体重１ｋｇあたり２５μｇのＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２を、静脈内ボーラス投与により注入した。尿ナトリウム排泄量、尿流量、平均動脈圧、血漿バソプレシンレベル、および腎血流量を、他の文献に記載のとおりに測定した（Ｃｈｅｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｇｒ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８８：Ｒ１０９３−Ｒ１０９７（２００５）、および、Ｈａｂｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，２９：１３４９−１３５５（２００５））。結果を、静脈内ボーラス投与により体重１ｋｇあたり２５μｇのＢＮＰで処置されたイヌから得られた結果と比較した。
【００７９】
ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドの全身投与により、水利尿作用およびナトリウム利尿作用（図４および図５）が生じた。ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドの全身投与は、平均動脈圧に影響しなかった（図６）。ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドの全身投与は、血漿バソプレシンレベルを増加させなかった（図７）。血漿バソプレシンレベルは、ＢＮＰの投与後に増加した（図７）。ＡＢＣ−ＮＰとＢＮＰの双方は、心充満圧における同様の減少をもたらした。
【００８０】
これらの結果は、ＡＢＣ−ＮＰポリペプチドが、ＢＮＰと比較して、腎臓に対する明確な作用を有し、かつ全身の血圧に作用する能力に欠くということを実証している。
【００８１】
ＡＢＣ−ＮＰ１による処置は、平均動脈圧の減少、および腎血流量の増加を引き起こした（図６および８）。持続する水利尿および利尿腎臓作用は、ＡＢＣ−ＮＰ１で処置されたイヌでは認められなかったが、ＡＢＣ−ＮＰで処置されたイヌでは認められた（図４および５）。また、ＡＢＣ−ＮＰ１による処置は、血漿バソプレシンレベルを増加させる強い傾向を示した（図７）。これらの結果は、ＣＮＰのリングにおけるＲＥＡアミノ酸配列（図１）が、ＡＢＣ−ＮＰでは認められる血管拡張作用の欠如に関与することを実証している。
【００８２】
ＢＣ−ＮＰ２による処置は、平均動脈圧の減少、または腎血流量の増加を引き起こさなかった（図６および８）。それゆえ、ＡＢＣ−ＮＰと同様に、ＢＣ−ＮＰ２は、血管拡張作用を有しない。ＡＢＣ−ＮＰと比較して、ＢＣ−ＮＰ２は、約５０％の腎臓に対する作用しか有しなかった（図４および５）。これらの結果は、ＡＢＣ−ＮＰのＮ末端に存在するＡＮＰのアミノ酸残基５個が、ＡＢＣ−ＮＰの持続する水利尿作用および利尿作用に関係していることを実証している。
【００８３】
心臓線維芽細胞へのＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２の生物学的作用をインビトロにおいて試験した。簡単に述べると、８０〜９０％コンフルエントの心臓線維芽細胞を、２０ｍｍｏｌ／ＬのＮ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’［２−エタンスルホン酸］、０．１％ウシ血清アルブミン、および０．５ｍｍｏｌ／Ｌの３−イソブチル−１−メチルザンチン（Ｓｉｇｍａ）を含むハンクス液（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）内で培養した。処置された細胞は、１０分間、ＡＮＰ（１０−６Ｍ）、ＢＮＰ（１０−６Ｍ）、ＣＮＰ（１０−６Ｍ）、ＡＢＣ−ＮＰ（１０−１１Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−６Ｍ）、ＡＢＣ−ＮＰ１（１０−１１Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−６Ｍ）、またはＢＣ−ＮＰ２（１０−１１Ｍ、１０−８Ｍ、または１０−６Ｍ）を受けた。細胞を、６％ＴＣＡに溶解し、１０分間超音波処理した。試料は、４容量のエーテルで４回エーテル抽出し、乾燥させ、３００μＬのｃＧＭＰアッセイ緩衝液中で再構成した。試料は、競合ＲＩＡ  ｃＧＭＰキット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、マサチューセッツ州、Ｂｏｓｔｏｎ）を使用して分析した。簡単に述べると、試料および標準試料を、１００μＬの非ヒトｃＧＭＰポリクローナル抗体およびＩ１２５抗原と共に１８時間培養した。ｃＧＭＰアッセイ緩衝液を試料に添加し、それらを、２５００ｒｐｍで２０分間遠心分離器にかけた。遊離画分を吸引除去し、結合画分を計数し、濃度を決定した。試料は、希釈係数に対して補正し、値は、ｐｍｏｌ／ｍＬとして表した。ＡＮＰ、ＢＮＰ、またはＣＮＰとの交差反応はなく、ｃＡＭＰ、ＧＭＰ、ＧＤＰ、ＡＴＰ、およびＧＴＰとの反応性は＜０．００１％である。
【００８４】
ＡＢＣ−ＮＰ１による処置が、ヒト心臓線維芽細胞におけるｃＧＭＰを活性化した一方で、ＡＢＣ−ＮＰおよびＢＣ−ＮＰ２による処置は、活性化しなかった（図９〜１１）。これらの結果は、ＡＢＣ−ＮＰ１が、ヒト心臓線維芽細胞における生物学的作用を有する一方で、ＡＢＣ−ＮＰとＢＣ−ＮＰ２の双方が、ヒト心臓線維芽細胞においていかなる生物学的作用も有しないと考えられることを実証している。それゆえ、ＡＢＣ−ＮＰ１は、抗線維化作用を誘発する能力を有し得る一方で、ＡＢＣ−ＮＰまたはＡＢＣ−ＮＰ２では、その能力が存在しない可能性がある。
【００８５】
実施例２：動物モデルを使用した、ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、およびＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドの生物学的作用
ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、またはＢＣ−ＮＰ２注入の作用を、ナトリウム貯留の２つの大型動物モデル、すなわち、ＣＨＦのペーシングされたイヌモデル、ならびに肝硬変およびネフローゼを模倣しているナトリウム貯留のイヌモデルにおいて、さらに評価する。第１のモデルは、他の文献に記載される、ＣＨＦの高頻度ペーシングモデルである（Ｃｈｅｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１００：２４４３−２４４８（１９９９））。簡単に述べると、重症ＣＨＦのモデルを生成するために、イヌを１０日間２４０ｂｐｍでペーシングする。２４頭のイヌをペーシングし、６頭がＡＢＣ−ＮＰポリペプチドを受け、６頭がＡＢＣ−ＮＰ１ポリペプチドを受け、６頭がＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドを受け、６頭が（利尿の対照として）ラシックスを受ける。注入時に、急性の血行動態の試験を実施し、ベースライン時および注入時における群間およびイヌ間の比較を行う。第２のモデルは、他の文献に記載されている（Ｗｅｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２７３：Ｒ８３８−８４４（１９９７））、心充満圧の同時増加なしのナトリウム貯留および腹水のＴＩＶＣＣモデルである。ＡＢＣ−ＮＰ、ＡＢＣ−ＮＰ１、およびＢＣ−ＮＰ２ポリペプチドは、静脈内投与される１００ｐｍｏｌ．ｋｇ／分を上限とする漸増用量を使用して、ナトリウム貯留の各イヌモデルで試験した。
【００８６】
実施例３：左室リモデリングのリスクを有する患者の処置
左室リモデリングのリスクを有する患者（例えば、心筋梗塞患者）を、ＡＢＣ−ＮＰ１ポリペプチドの静脈内注入で処置する。注入前に、バイタルサインを測定し、神経ホルモンおよび腎機能を測定するために臨床試験を実施する。左室の大きさ、および機能を測定するために、ＭＲＩを行う。ＡＢＣ−ＮＰ１ポリペプチドの静脈内注入は、０．００１μｇ／ｋｇ／分から１μｇ／ｋｇ／分の用量で開始する。バイタルサインは、注入中２時間毎に評価する。注入は、７２時間継続し得る。７２時間後、注入が停止する前に採血し、神経ホルモンおよび腎機能を測定する。患者は、左室の大きさ、および機能を評価するための反復ＭＲＩのために、１ヶ月および６ヶ月後に再検査を受ける。
【００８７】
実施例４：心腎疾患の処置
急性非代償性心不全の状況において、利尿抵抗を伴う腎機能の悪化を発現している患者を、ＡＢＣ−ＮＰまたはＢＣ−ＮＰポリペプチドの静脈内注入によって、予防的に処置する。注入前に、バイタルサインを測定し、電解質、血清中クレアチニン、シスタチン、およびＢＮＰポリペプチドレベルを測定するために臨床検査を実施する。ベースライン尿排出量を測定し、尿電解質を評価する。ＡＢＣ−ＮＰまたはＢＣ−ＮＰポリペプチドの静脈内注射を開始する。バイタルサインおよび尿排出量を、注入中２時間毎、１２時間〜７２時間の注入期間にわたって評価する。注入の間、薬物レベル（例えば、ＡＢＣ−ＮＰまたはＢＣ−ＮＰポリペプチドレベル）、ＢＮＰポリペプチドレベル、血清中クレアチニン、シスタチン、および血漿および尿電解質を毎日評価する。
【００８８】
他の態様
本発明は、本発明を実施するための形態とあわせて記載されているが、上記の記述は、説明を意図するものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。他の局面、利点、および変更は、添付の特許請求の範囲内にあるものとする。
【図１】
2010502231.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
2010502231000001.app
【国際調査報告】
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