(57)【要約】  非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液若しくは細胞試料又はヒト体液若しくは細胞試料を獲得及び検査又は分析して少なくとも１つの感染症の存在を検出するための方法を提供する。試料は月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水であってよい。非静脈及び非動脈ヒト体液又は細胞試料の検査結果と比較するための対応する動脈又は静脈血試料の確証的検査を行ってよい。検査はスクリーニング検査又は確証的検査を含んでよい。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を分析して、少なくとも１つの感染症の存在を検出するための方法であって、
ドナーから十分な量の非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を得る工程、及び
前記十分な量の非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を感染症について検査する工程
を含む方法。
【請求項２】
前記ドナー由来の動脈又は静脈血試料の確証的検査を行う工程及び
確証的検査結果を前記非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料の検査結果と比較する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
検査結果を報告する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を、月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水のいずれか１つの検体から獲得する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症のいずれか１つを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記検査工程がスクリーニング検査又は確証的検査を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記検査工程が、ヒトにおける感染症の存在と関連する抗原又は抗体について分析する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ヒト由来の月経液試料を少なくとも１つの感染症の存在について直接検査するための方法であって、
予め採取した検体から十分な量の月経液試料を単離する工程、及び
前記月経液試料を感染症の存在について分析する工程
を含む方法。
【請求項９】
前記ドナー由来の動脈又は静脈血試料の確証的検査を行う工程及び
確証的検査結果を前記月経液試料の検査結果と比較する工程をさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症のいずれか１つを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記検査がスクリーニング検査又は確証的検査を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記分析工程が、前記月経液試料中に存在する感染症の存在と関連する抗原又は抗体の存在を決定する工程を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
ヒト体液又は細胞試料を少なくとも１つの感染症の存在について直接検査するための方法であって、
分析のために十分な量のヒト体液又は細胞試料を調製する工程、及び
前記ヒト体液又は細胞試料を感染症と関連する抗原又は抗体について分析する工程
を含む方法。
【請求項１４】
前記ドナー由来の動脈又は静脈血試料の確証的検査を行う工程及び
確証的検査結果を前記ヒト体液又は細胞試料の検査結果と比較する工程をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
前記ヒト体液又は細胞試料を、月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水のいずれか１つの検体から獲得する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症のいずれか１つを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記検査がスクリーニング検査又は確証的検査を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記検査が、感染症によって産生された抗原の存在及び量又はヒトにおける感染症の存在と関連するヒト抗体の存在及び量について分析する工程を含む、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
この出願は、発明の名称が「月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水、臍帯血又は他の試料の感染症検査」である2007年9月14日提出の米国仮特許出願第60/993,748号及び発明の名称が「月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水、臍帯血又は他の試料の感染症検査」である2008年9月9日提出の米国仮特許出願第 号の優先権を主張する。これらの出願の内容全体を参照によって本明細書に引用したものとする。
（発明の分野）
この発明は、一般的に感染症検査、詳細には、例えば、月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水のいずれか１つの検体から取得又は獲得した体液、組織及び／又は細胞若しくは細胞成分の感染症検査に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ウイルス、細菌及び他の病原体によって引き起こされる多くの異なるタイプのヒトの感染症がある。非限定例として、感染症としてＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ（Trypansoma cruzi）、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトが感染症にかかっているかを決定するためいくつかの検査が開発されている。
感染症検査は、ヒトから採取した検体中の感染病原体の存否を調べるために使われる多様な検査方法論を含む。静脈及び／又は動脈血試料の感染症検査の方法としては酵素結合免疫測定法の形態が信頼されている。例えば、検査方法は、酵素結合免疫測定法(EIA)及び酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)を組み入れることができる。EIA及びELISA検査を用いて、静脈及び／又は動脈血試料中に存在する抗原と抗体を検出及び定量化する。ほとんどの酵素結合免疫測定法の感度は高いため、この方法は感染症の存在について試料をスクリーニングするために使用される。
酵素結合免疫測定法を利用する多くの感染症検査は、マイクロウェル上に不活化感染病原体を被覆した固相及び検出プラットフォームを使用する。固相検査システムは、マイクロタイタープレート上のマイクロ滴定ウェルの表面上に被覆された不活化病原体の抗原上の赤血球抗体の付着に基づいた検出方法を使用する。この検査手順は不活化病原体の抗原で被覆したマイクロ滴定ウェル内で行われる赤血球付着検査のための２又は３工程固相であってよい。静脈又は動脈血検体から得た血清又は血漿試料を抗原被覆ウェルに加える。血清又は血漿試料を固定化抗原に結合する該抗原に特異的な抗体とインキュベートする。非結合抗体をウェルから洗い流して、被覆指標細胞の懸濁液と交換する。赤血球と抗原結合抗体との間に形成されたブリッジによって指標赤血球のウェル底への普通の移動が妨げられる場合、検査結果が陽性とみなされる。その結果、指標赤血球がマイクロ滴定ウェルの表面に付着する。抗原-抗体ブリッジが存在しない場合は、詳細に明らかにされている濃縮セルボタン(cell button)としてウェル底に指標赤血球をペレット化させ、検査結果は陰性とみなされる。複数相を含む検査では、相は段階的な試料インキュベーション、洗浄、及び結果の評価を表す。さらに、ウイルス、細胞についてであれ又は他の感染病原体についてであれ、多くの検査は比色指示薬を用いて検査結果を示すことができる。
【０００３】
感染症検査のために使われる検査とは無関係に、検査用の検体又は試料タイプが処方される。食品医薬品局(FDA)によって認可されている感染症スクリーニング検査は、認可された検査キットと共に使用すべき特有タイプの検体を処方する。これら検体は、静脈又は動脈穿刺から得られる血清、血漿、又は死体血清検体である。特定のキットは、唾液／口腔液又は尿試料を検査するためのキットの使用を明白に妨げる。
幹細胞業界の発展は、体液及び組織源由来の幹細胞の新源を同定した。例えば、月経液、羊水、及び臍帯血から幹細胞を収集してよい。感染症検査及びアッセイは、月経液、羊水試料、及び／又は臍帯血から得た月経液及び子宮内膜／月経細胞の感染症検査で使うためには利用できない。
月経液、子宮内膜／月経細胞及び臍帯血は、感染症検査に使用できる容易に入手可能な検体源である。羊水検体は、別のパラメーターを評価する別の一次検査で使用した以前に採取した羊水試料の副産物であろう。臍帯血は、容易に獲得されることが分かっている別の検体であり、検査に適した量の試料を与える。実際に、月経周期中に子宮内膜／月経液及び／又は細胞を獲得するプロセス、以前に採取した試料から羊水を獲得するプロセス、及び臍帯血を獲得するプロセスは、一般的に採取手法に付随するドナーへの危険をほとんど与えない。
月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水試料、及び／又は臍帯血検体は、各タイプの試料が感染症検査用の単一源として役立ちうることから有益である。単一源試料は、いかなる他の比較試料の分析も必要なく、その試料は間接試料の分析を要しない。該関節検査の例として、及び臍帯血業界の現在のプロトコル下では、臍帯血中の感染症の存否は、母親の静脈血試料の検査結果から間接的に決定される。臍帯血に関する母親の血液から感染症検査結果が関係づけられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、感染症又は感染症と関連するマーカー、例えば感染症抗原及び感染症に対する免疫反応で生じたヒト抗体などの存在について臍帯血、月経液、子宮内膜／月経細胞懸濁液、羊水、及び／又は他の体液、組織若しくは細胞を直接検査するための方法、プロセス、及びシステムを提供する。臍帯血、月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水、及び／又は他の体液、組織若しくは細胞試料の単一源検体の使用が、このような直接的感染症検査を提供する。
従って、現在、感染症のための月経液、子宮内膜／月経細胞懸濁液、羊水、及び／又は臍帯血の検体を検査するための方法とプロセスが要望されている。このように、これらのタイプの生体試料の感染症検査のための方法とプロセスが要望されている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
〔発明の概要〕
本発明は、月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水、及び／又は臍帯血の感染症検査のための方法とプロセスを提供する。
本発明は、月経中に得られる血液、体液、細胞、及び組織を獲得及び処理するための方法とプロセスを含み、かつ懸濁液中の月経液及び／又は子宮内膜／月経細胞内の感染症及び病原体の存在についての検査を包含する。例えば、本発明は、月経中に得られる血液、体液、及び組織を獲得及び処理し、かつ血液、体液、及び組織を検査又は分析して月経液及び／又は子宮内膜／月経細胞中のいずれの感染症及び感染病原体の存在をも決定するための方法とプロセスを含む。
本発明は、他の臨床又は研究評価の主目的のために採取した羊水サンプリングの副産物として得た羊水を処理するための方法とプロセス、並びにその羊水の試料中の感染症及び病原体の存在について検査する工程を包含する。例えば、本発明は、他の臨床又は研究評価の主目的のために採取した羊水試料の副産物として得た羊水試料を処理し、並びに血液、体液、及び／又は組織を検査又は分析して羊水中のいずれの感染症及び感染病原体の存在をも決定するための方法とプロセスを含む。
本発明は、出生時に得た臍帯血を処理するための方法とプロセスを含み、かつ臍帯血中の感染病原体／感染症の存在についての検査を包含する。例えば、本発明は、出生時に得た臍帯血を獲得及び処理するための方法とプロセス、並びに血液、体液及び／又は組織を検査又は分析して、臍帯血中のいずれの感染症及び感染病原体の存在をも決定するための方法とプロセスを含む。
【０００６】
ある実施形態では、本発明は、非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液（human fluid）又は細胞試料を分析して、少なくとも１つの感染症の存在を検出するための方法を提供する。本方法は、まず十分な量の非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を得る工程を含む。月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水のいずれか１つの検体から非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を獲得することできる。本方法は、十分な量の非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を少なくとも１つの感染症について検査する次工程を含む。
本発明は、ヒトから得た動脈又は静脈血試料の確証的検査（confirmatory testing）を行い、確証的検査結果を非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料の検査結果と比較する追加工程を提供する。
本発明は、非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料で検査する感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症のいずれか１つを含むことを提供する。他の感染症について生体試料を検査することができる。
本発明は、ヒトにおける少なくとも１つの感染症の存在と関連する抗原又は抗体の少なくとも１つの形態について生体試料を分析する工程を含みうる検査を提供する。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、ヒトから得た月経液試料を少なくとも１つの感染症の存在について直接検査するための方法を提供する。本方法は、予め採取した検体から十分な量の月経液試料を単離する工程を含む。本方法は、月経液試料を少なくとも１つ以上の感染症の存在について分析する工程を含む。
本発明は、月経液試料内で直接検査できる感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症のいずれか１つを含むことを提供する。
本発明は、月経液試料を分析する工程が、感染症と関連する抗原又はヒト体内における感染症の存在に対するヒトの免疫反応によって生じた抗体の少なくとも１つの形態の存在を決定する工程を含むことを提供する。
【０００８】
さらなる実施形態では、本発明は、ヒト体液又は細胞試料を少なくとも１つの感染症の存在について直接検査するための方法を提供する。本方法は、分析のために十分な量のヒト体液又は細胞試料を調製する工程を提供する。本方法は、感染症と関連する抗原又は抗体についてヒト体液又は細胞試料を分析する工程をも提供する。
本発明は、月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水の少なくとも１つの検体からヒト体液又は細胞試料を獲得できることを提供する。
【０００９】
本発明は、ヒト体液又は細胞試料内で検査する感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症のいずれか１つを含むことを提供する。
本発明は、本検査がスクリーニング検査又は確証的検査を含みうることを提供する。
本発明は、本検査が、感染症によって産生された抗原の存在及び／又は量或いはヒトにおける感染症の存在と関連するヒト抗体の存在及び／又は量についてヒト体液又は細胞試料を分析する工程を含みうることを提供する。
本発明は、スクリーニング検査結果を確証的検査結果と関係づける追加工程を提供する。スクリーニング検査結果は、非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料、月経液試料、並びにヒト体液又は細胞試料についての本発明の実施形態で得た検査結果を含みうる。非静脈及び非動脈ヒト体液又は細胞試料、月経液試料、並びにヒト体液又は細胞試料或いは対応する静脈又は動脈血試料の追加検査から確証的検査結果を得ることができる。
本発明は、感染症抗原又は感染症抗原に対する免疫反応によって生じたヒト抗体の存否を決定する工程を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】月経血、液、組織及び細胞を獲得及び処理するための方法の実施形態の概要を描写する流れ図を示す。
【図２】月経血、液、組織及び細胞を獲得及び処理するための方法の実施形態の概要を描写する流れ図を示す。
【図３】月経血、液、組織及び細胞を獲得及び処理し、感染症について検査するための別の実施形態を描写する流れ図を示す。
【図４】臍帯血を獲得及び処理し、感染症について検査するための本発明の方法の概要を描写する流れ図を示す。
【図５】羊水を獲得及び処理し、感染症について検査するための本発明の方法の概要を描写する流れ図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
〔本発明の実施形態の説明〕
図１〜５を参照して、月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水、及び／又は臍帯血の感染症検査方法及びプロセスを本発明に従って提供する。
月経液、子宮内膜／月経細胞、羊水試料、及び臍帯血又は他の体液若しくは組織の試料を得るための方法を提供する。本方法は、適量の試料を感染症検査方法で検査するさらなる工程を含む。問題の感染症についての検査に合う感染症検査方法を選択することができる。感染症検査方法が市販の検査であってよい。
非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を分析して、少なくとも１つの感染症の存在を検出するための方法を提供する。本方法は、まず十分な量の非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を得る工程を含む。月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水のいずれか１つの検体から非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料を獲得することができる。
本方法は、十分な量の非静脈及び非動脈ヒト体液又は細胞試料を感染症について検査する追加工程を含む。この検査工程は、ヒトにおける感染症の存在と関連する抗原又は抗体について生体試料を分析することに焦点をおいたものであってよい。感染症検査がスクリーニング検査又は確証的検査の性質を帯びていてよい。
【００１２】
本方法は、ヒトから得た動脈又は静脈血試料の確証的検査を行う工程と、確証的検査結果を非静脈及び非動脈ヒト体液又は細胞試料の検査結果と比較する工程をさらに含んでよい。検査結果は、患者、試料ドナー、医療提供者、及び／又は幹細胞貯蔵管理提供者に報告される。
ヒト由来の月経液試料を少なくとも１つの感染症の存在について直接検査するための方法を提供する。本方法は、予め採取した検体から十分な量の月経液試料を単離する工程を含む。本方法は、月経液試料を感染症の存在について分析する工程を含む。月経液試料の分析は、スクリーニング検査又は確証的検査を含んでよい。月経液試料を分析して、感染症と関連する抗原又は感染症の存在に対するヒトの免疫反応によって生じた抗体の存否を決定する。
ヒト体液又は細胞試料を少なくとも１つの感染症の存在について直接検査するための方法を提供する。本方法は、分析のために十分な量のヒト体液又は細胞試料を調製する工程を提供する。月経液、子宮内膜の月経細胞、臍帯血、又は羊水のいずれか１つの検体からヒト体液又は細胞試料を獲得することができる。本発明は、感染症と関連する抗原又は抗体についてヒト体液又は細胞試料を分析する工程をも提供する。分析は、スクリーニング検査又は確証的検査を含んでよい。この検査は、感染症によって産生された抗原の存在及び／又は量或いはヒトにおける感染症の存在と関連するヒト抗体の存在及び／又は量についてヒト体液又は細胞試料を分析することに焦点がおかれている。
本発明の方法は感染症検査を提供する。本発明を手段として検査される感染症としては、限定するものではないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス２型、ヒト免疫不全ウイルス１型、ヒト免疫不全ウイルス２型、ウエストナイルウイルス、クルーズトリパノソーマ、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症が挙げられる。本発明は、他の感染症について検査することができる。
【００１３】
（感染症検査のための体液又は細胞試料の源）
本発明は、感染症検査のための体液又は細胞試料のいくつかの源を提供する。試料源を非静脈又は非動脈穿刺ヒト体液又は細胞検体として特徴づけることができる。試料源をヒト体液又は細胞試料として特徴づけることもできる。特に、試料源は、月経中に採取される月経流でありうる月経液、羊水穿刺中に採取される羊水、又は出産中に採取される臍帯血を含む。最初に採取されるこれらの各試料源の検体を感染症について検査することができる。或いは、試料源を処理して、検査可能な濃縮量の血漿、血清、及び／又は細胞懸濁液を得てよい。感染症検査が必要な場合、細胞懸濁液の細胞を溶解させて、感染症検査に合う細胞成分を得ることができる。
【００１４】
（月経液）
ここで図１〜３を参照すると、本発明は、月経液検体を獲得するための方法を含む。月経液検体は、月経中に得られる月経の血液、体液、細胞、及び組織を含む。月経液から月経液検体を採取してから分析又は検査して、感染症と関連する少なくとも１つの感染症抗原の存在又は月経液中に存在する感染症に対する免疫反応によって産生されたヒト抗体の存在を決定することができる。
感染症検査に合う種々の異なった方法で月経液試料を採取することができる。ある実施形態では、2008年3月2日に出願され、発明の名称が「子宮内膜／月経細胞の獲得、単離、及び凍結保存」の米国特許出願第12/074,423号（その内容全体を参照によって本明細書に引用したものとする）に記載されているプロセス及び方法に従って月経流を採取することができる。感染症の存在について月経液試料を検査する工程を行うために十分な量の月経流試料が採取される限り、月経流試料を採取するための他のプロセス及び方法を使用してよい。
【００１５】
ある実施形態では、ドナーが獲得キットを用いて採取することができる。このキットは、パラフィルムで覆われたラック内に採取媒体を含む媒体管、少なくとも１つの採取装置と使用説明書(すなわち、図２に示すINSTEAD又は図３に示すDIVAカップ)、消毒洗浄パッド、小型プラスチックバッグ、小型バイオハザード・バッグ(検査室に戻す検体を入れるため)、パラフィルム、ナノクーラー(nanocooler)、及び採取フォームを含みうる。採取キットは使用前に室温のままであってよい。或いは、採取キットを使用前に約１℃〜約10℃の冷蔵温度で維持してよい。
月経流採取のために設計された採取カップに月経流試料を採取することができる。ドナーの月経期間の最も量が多い日（１日目か又は２日目でよい）に月経流の採取を行ってよい。使用前に採取カップを滅菌してよく、ドナーは、採取カップを膣に挿入するための製造業者の使用説明書に従うべきである。
採取カップを膣に挿入してよい。採取カップの挿入前に、膣周囲の通常領域を消毒洗浄パッドできれいにしてよい。約３時間までか又はそれ未満の時間、或いは感染症検査のために月経流試料のいくらかを割り当てるのに十分な量の月経流試料を採取するために必要ないずれの他の適量の時間でも膣内に採取カップを留めてよい。膣の内側に採取カップを配置した状態で適量の時間が経過した後、ドナーは次にカップを除去して月経流内容物を含む中身を、採取媒体を保持する50mlの採取管中に注いでよい。採取媒体は約10mlの等張液と抗凝固剤を含んでよい。例えば、限定するものではないが、等張液としてハンクス液(Hank's Balanced Salt Solution)を用い、抗凝固剤としてヘパリン(１ml当たり10単位)を使用しうる。他の採取媒体を用いてよく、限定するものではないが、米国特許出願第12/074,423号に記載の採取媒体が挙げられる。採取管を閉じて密封すべきである。
【００１６】
複数の月経流試料を、毎回新しい採取カップを用いて採取することができる。複数の月経流試料を採取する場合、採取媒体を含む１つの50mlの採取管に単一の採取カップ中の月経流の全試料を入れるべきである。月経流の試料ごとに１つの採取管を使用しなければならない。単一試料を採取しても複数試料を採取しても、採取の約24時間〜約72時間以内で検査室に試料が到着する限り、検査室への輸送前に室温(約15℃〜約25℃)で試料を維持してよい。或いは、かつ複数試料を採取する場合には、輸送前に全ての試料を採取するまで、試料を含む採取管を約１℃〜約10℃で冷蔵してよい。月経液のこれとは別の輸送及び取扱い方法とプロセスは、米国特許出願第12/074,423号に提供されており、本発明で使用することができる。月経流試料を含むパッケージは、輸送の間じゅう室温又は周囲温度(約15℃〜約25℃)で維持してよく、採取の24時間以内に検査室に到着すべきであり、検査室に到着したらすぐに冷蔵してよい。或いは、月経流試料を含むパッケージを輸送の間じゅう約１℃〜約10℃の温度で維持してよい。
【００１７】
スクリーニング又は比較感染症試験目的のため、ドナーから末梢血試料を採取してもよい。真空採血システムホルダー及び真空管とEDTA(エチレンジアミン四酢酸の二カリウム塩)で標準的静脈切開術に従って末梢血試料を採取することができる。以前に述べたように、末梢血試料も月経流試料と共に輸送してよい。
本発明は、月経流試料中のいずれの感染症及び感染病原体の存在をも分析及び決定する工程を含む。月経流試料が検査室に到着したらすぐに、採取管、又は複数の月経流試料を採取する場合には複数の採取管を、例えば、IPA又はCavicideで消毒し、各採取管を無菌条件下の生物学的に安全なキャビネットに移す。感染症検査用の移送管中に試料を分注するための準備において処理する間じゅう、各採取管を氷上に置くか又は約１℃〜約10℃の温度で維持してよい。
試料から一定分量の約５mlを除去して移送管、例えば６mlの移送管又は検査のために十分な量の試料を保持するのに適した他のサイズの管に入れることによって、月経流試料を処理することができる。代案として、また図３に示すように、月経流試料を約2000RPMで約４℃にて遠心分離してよい。遠心分離を室温で行ってもよい。遠心分離が完了したらすぐに、上清から10mlの試料を収集して移送管に入れてよい。
遠心分離しない月経流試料か又は遠心分離した月経流試料から得た上清のどちらかを含む移送管に標識を付けて、感染症検査の準備をすることができる。感染症検査を約７日未満の期間で行う場合、移送管を室温で維持してよい。或いは、感染症検査前の約７日まで約１℃〜約10℃で移送管を冷蔵してよい。現場から離れた感染症検査サービス提供者への輸送の間じゅう、約１℃〜約10℃の温度で移送管を維持いてよい。或いは、移送管を室温で輸送してよい。
【００１８】
さらなる実施形態では、図１及び２で一般的に概要を示す方法及びプロセスのような、或いは米国特許出願第12/074,423号に記載されているように、月経幹細胞採取の方法及びプロセスと関連して獲得及び処理した月経流試料検体から得られる上清の前処理試料を感染症検査のために得ることができる。
別の実施形態では、米国特許出願第12/074,423号の方法及びプロセスに従って得られる適量の後処理月経流試料を感染症検査のために得ることができる。
一定分量の月経流、遠心分離した月経流、前処理試料から又は後処理試料から得た上清を含む移送管を、問題の感染症マーカーについて検査することができる。例えば、感染症検査サービスを実施する検査室又はサービス提供者によって、現場から離れて検査が行われる場合、感染症検査用注文書のすべての項目に記入して、問題の感染症について検査する感染マーカーを注文することができる。或いは、月経流試料を含む移送管を月経流試料受入検査室で感染症について検査してよい。感染症検査前約７日までの間、移送管を約１℃〜約10℃の温度で冷蔵してよい。現地から離れた感染症検査サービス提供者への輸送の間じゅう移送管を約１℃〜約10℃の温度で維持してよい。或いは、移送管を室温で輸送してよい。
月経流試料を採取、輸送、調製、及び検査する代替形態が米国特許出願第12/074,423号で提供されており、本発明の感染症検査用の月経流試料を得るために使用してよい。
【００１９】
（臍帯血試料）
図４を参照すると、本発明は、出産中に臍帯血試料を得てから該臍帯血試料を分析又は検査して、臍帯血試料中のいずれの感染症抗原又は該感染病抗原に対する免疫反応の結果として生じたヒト抗体の存在をも決定するための方法及びプロセスを提供する。
いずれの様式の臍帯血採取方法を用いて出産時に臍帯血を得てもよい。ある実施形態では、臍帯血採取キット(臍帯血採取キットの中身：クリアトップの青色洗面器、母親用採血キット、DonorCareTMニードルガード、アルコール拭取り繊維、ヨードチンキ・スワブスティック(Swabstick)、CPD抗凝固剤と16ゲージ針を含むBaxter採血バッグ(250mL)、C-セクションアダプターキット(無菌)、接着剤裏張りと吸収タオル付きプラスチックジップバッグ)を製造業者の使用説明書に従って使用してよい。例えば、臍帯を二重クランプして臍帯をカットすることによって、経腟分娩の臍帯血採取を行うことができる。採血管類の回りに青色プラスチックのDonorCareTMニードルガードをクランプしてよい。赤ん坊の分娩後かつ胎盤娩出前に、約４〜６インチ(10cm〜15cm)の臍帯をアルコール拭取り繊維できれいにした後ヨードチンキスワブで消毒してよい。最大体積のため、臍帯上に留まるクランプの真上の挿入部位に針を挿入してよい。重力を利用して、できるだけ多くの血液をバッグに採取する。処理するためには少なくとも約80mL(35mLの抗凝固剤を含めて)の採取が必要である。採取が完了したとき、バッグは少なくとも１／３が満たされていればよい。採取が完了したとき、管類内の血液をバッグに絞り出してよい。バッグを数回穏やかに反転させて臍帯血とCPD抗凝固剤を混合してよい。多子出産では、赤ん坊ごとに個々の臍帯血キットを使用すべきである。
【００２０】
臍帯血試料の採取を帝王切開後に行う場合、分娩後に臍帯を二重クランプして針を臍帯静脈に挿入して臍帯血を採取するためにC-セクションアダプターキットを使用しうる。できるだけ多くの血液をバッグに採取することができる。処理するためには少なくとも約80mL(35mLの抗凝固剤を含めて)の採取が必要である。バッグを数回穏やかに反転させて臍帯血とCPD抗凝固剤を混合する。多子出産では、赤ん坊ごとに個々の臍帯血キットを使用すべきである。
胎盤が脱離したら、臍帯血を洗い流すことができる。胎盤に付着した臍帯静脈に針を挿入してよい。脱離した胎盤を持ち上げて臍帯血の採取を容易にすることができる。処理するためには少なくとも80mL(35mLの抗凝固剤を含めて)の採取が必要である。多子出産では、赤ん坊ごとに個々の臍帯血キットを使用すべきである。
ラベル付き臍帯血バッグを吸収タオルで包むことによって、採取した臍帯血試料の輸送の準備をすることができる。臍帯血バッグを大きいプラスチックジップバッグに入れて閉じる。大きいプラスチックジップバッグから接着剤裏張りを除去してから、輸送用の採血試料を保護するための容器の底にバッグを押しつけてよい。蓋を容器の上に置いて、テープで固定してよい。出産後２時間以内にAirNet又は別の適切な宅配便業者に連絡して輸送を取り計らってよい。臍帯血は、採取の少なくとも48時間以内に検査室に到着すべきである。
生物学的に安全なキャビネット内で処理するため、臍帯血バッグを検査室に移し、殺菌し、調製しなければならない。感染症検査のため臍帯血の試料を引き出すことができる。或いは、臍帯血試料から赤血球を除去した後に臍帯血試料を得てもよい。感染症検査のために使う臍帯血試料は、赤血球試料では約１mlの臍帯血であってよく、血漿試料では約３mlまでであってよい。
EDTAで被覆した無菌採血管に臍帯血の試料を移す。臍帯血又は臍帯血漿の試料を２つ以上の６ml管に移してよい。管はヘパリンのような抗凝固剤を含有してもしなくてもよい。
【００２１】
（羊水）
図５を参照すると、本発明は、他の臨床又は研究評価の主目的のために採取される羊水試料の副産物として羊水試料を得るため、並びに該羊水試料を分析又は検査して、羊水試料中のいずれの感染症抗原又は該感染症抗原に対する免疫反応によって生じたヒト抗体の存在をも決定するための方法及びプロセスを提供する。
本発明は、他の臨床又は研究評価の主目的のために採取した羊水試料の副産物として得た羊水試料を処理する工程を提供する。出生前診断のために使われる医療手順として羊水試料が採取され、発育中の胎児の周りの羊膜から少量が抽出される。胎児を取り囲む十分な液体がある場合に羊水穿刺を行うことができる。注射器及び超音波による誘導によって試料を除去することができる。妊娠の約13週ほどの早期に羊水穿刺を行ってよいが、妊娠の約15週〜約20週の間に採取してもよい。遺伝子検査のため羊水試料を羊水穿刺で採取する場合、EDTA、又は感染症検査に適した他の抗凝固剤で被覆した２〜６mlの採取管に約10mlの羊水を分注することができる。
【００２２】
（他の体液、組織及び細胞）
なおさらなる例として、本発明は、いずれの他のヒト体液、細胞又は組織をも獲得及び処理し、並びにヒト体液、細胞又は組織中のいずれの感染症及び感染病原体の存在をも分析及び決定するための方法及びプロセスを含む。例えば、胎性胎盤細胞及び母性胎盤細胞の細胞懸濁液を感染症について検査することができる。2008年3月13日に公開され、発明の名称が「母性胎盤細胞の獲得、単離及び凍結保存」の米国特許出願公開第２0080064098号及び2008年2月28日に公開され、発明の名称が「胎性胎盤細胞の獲得、単離及び凍結保存」の米国特許出願公開第２0080050814号に開示されている方法で胎盤試料を得ることができる。前述の公開米国特許出願に記載されているように、前処理若しくは後処理母性胎盤幹細胞試料又は胎性胎盤幹細胞試料を、感染症抗原の存在又はどちらかのタイプの胎盤幹細胞試料中に存在する該感染症抗原に対する免疫反応によって生じたヒト抗体の存在について検査することができる。
【００２３】
（感染症検査方法）
本発明の方法及びプロセスは、非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料並びにヒト体液又は細胞試料を分析又は検査して、いずれの感染症抗原の存在又は該感染症抗原に対する免疫反応によって生じたいずれのヒト抗体の存在をも決定するための工程をも提供する。非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液又は細胞試料並びにヒト体液又は細胞試料の源は、月経中に採取できる月経液、羊水穿刺中に採取される羊水、又は出産中に採取される臍帯血を含みうる。
本発明は、移送管中の非静脈及び非動脈穿刺ヒト体液若しくは細胞試料又はヒト体液若しくは細胞試料の試料を感染症について検査又は分析することを提供する。本発明によれば、月経流、遠心分離した月経流、前処理試料から得たか又は後処理試料から得た上清、臍帯血、臍帯血漿、羊水試料、前処理又は後処理母性胎盤幹細胞試料、又は胎性胎盤幹細胞試料のいずれか１つを含む移送管を、問題の感染症について分析又は検査する。
本発明は、月経流、遠心分離した月経流、前処理試料から得たか又は後処理試料から得た上清、臍帯血、臍帯血漿、羊水試料、前処理又は後処理母性胎盤幹細胞試料、又は胎性胎盤幹細胞試料のいずれか１つの感染症検査が、市販の検査方法、他のFDAに認可され、免許を受け、若しくは市販の感染症検査方法論、又は感染症の他の検査方法を使用しうることを提供する。感染症検査のための検体量は、市販の検査に必要な量に基づくか、又は別の要求に応じて決まるだろう。
【００２４】
いずれの感染症検査室で検査を実施してもよい。例えば、検査室又はサービス提供者によって現場から離れて検査を行うため、注文書のすべての項目に記入して、問題の感染症について検査するための感染マーカーを注文することができる。或いは、体液又は細胞試料を処理するために輸送した検査室で、月経流試料を含む移送管を感染症について検査することができる。感染症検査前の約７日までの間、検体を含む移送管約１℃〜約10℃の温度で冷蔵してよい。現場から離れた感染症検査サービス提供者への輸送の間じゅう、移送管を約１℃〜約10℃の温度で維持してよい。或いは、移送管を室温で輸送してよい。
非限定例として、検体について検査できる感染症として、限定するものではないが、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原、Ｂ型肝炎表面抗原、HIV-I/II、サイトメガロウイルス、HTLV I/II、ウエストナイルウイルス、梅毒、及び梅毒トレポネーマ感染症、並びにいずれもの他の感染症が挙げられる。
月経流、遠心分離した月経流、前処理試料から得たか又は後処理試料から得た上清、臍帯血、臍帯血漿、羊水試料、前処理又は後処理母性胎盤幹細胞試料、又は胎性胎盤幹細胞試料の検体を感染症検査方法論で分析して、少なくとも１つ以上の感染症抗原及び／又は相補的なヒト抗体の存在を検出する。
【００２５】
（Ｃ型肝炎）
Ｃ型肝炎ウイルスの感染症検査を用いて、Ｃ型肝炎ウイルス(HCV)の存在について検査することができる。HCVを検出するために使用する検査方法は、ヒト血清又は血漿中のＣ型肝炎ウイルスに対するヒト抗体(抗-HCV)の検出のためのELISAであってよい。この検査は、固相として組換えＣ型肝炎ウイルスコード化抗原で被覆したマイクロウェルを利用する。酵素基質を適用すると、比色分析の最終産物の発生によって抗原又は抗体の存在を検出することができる。市販の検査はOrtho ELISA検査システムである。この検査を利用して感染症について試料を検査することができる。他のHCV診断検査を利用して検体のHCVを検査してよい。
測定手順は、組換えＣ型肝炎ウイルス(rHCV)抗原の組合せ(抗原：C22-3、c200及びNS5)で被覆したマイクロウェル内で行われる三段階検査である。第１段階では、希釈した約10μlの検体を検査ウェル内で約60分間インキュベートする。３つの抗原のいずれにも反応性の抗体が存在する場合、複合体は形成されないだろう。次の洗浄工程では、未結合血清又は血漿タンパク質が除去される。第２段階では、西洋ワサビペルオキシダーゼと抱合した約200μlのマウスモノクロナール抗体をマイクロウェルに添加する。抱合体は抗原-抗体複合体のヒトIgG部分と特異的に結合する。抗原-抗体複合体が存在しなければ、次の洗浄工程で未結合抱合体が除去される。第３段階では、o-フェニレンジアミン(OPD)と過酸化水素で構成される約200μlの酵素検出系を検査ウェルに加える。結合抱合体が存在する場合、OPDが酸化され、結果として比色分析の最終産物となる。この反応では、ペルオキシダーゼが過酸化水素によって二価的に酸化されて中間化合物を形成し、これが順次、その後の水素イオン供与OPDとの相互作用によって、その初期状態に還元される。結果として生じる酸化型OPDは橙色を有する。次に約50μlの4N硫酸を加えて反応を終わらせる。色強度はウェル内の結合抱合体の量によって決まるので、色強度は検体中に存在する抗-HCVの濃度の関数である。マイクロウェル内の吸光度を測定するように設計されたマイクロウェルリーダー(光度計)で色強度を測定する。決められたカットオフ吸光度値に基づいて、色変化の吸光度値によって検査結果を解釈する。吸光度値がカットオフ未満の検体はＣ型肝炎ウイルスに非反応性又は陰性とみなされ、吸光度値がカットオフ吸光度値以上の検体はＣ型肝炎ウイルスに反応性又は陽性とみなされる。
【００２６】
（Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原）
Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原(組換え体)は、ヒト血清又は血漿内のＢ型肝炎ウイルスコア抗原に対する抗体(抗-HBc)の検出のための酵素結合免疫吸着測定法である。Ｂ型肝炎ウイルス(HBV)による感染後に種々の血清学的マーカーが現れる。最初に現れるマーカーは通常Ｂ型肝炎表面抗原(HBsAg)である。次にＢ型肝炎コア抗原に対する抗体(抗-HBc)が現れ、HBsAgのクリアランス後及び回復期になるまで検出可能なままである。HBV感染の進行をモニターするための補助として血清及び血漿中の抗-HBcの決定を利用しうる。抗-HBcは、HBVに感染した実質的に全ての個体で現れ、最近及び過去の感染の正確な血清学的マーカーである。市販の検査はOrtho ELISA検査システムである。この検査を利用して、検体を感染症について検査することができる。他の適切な検査を利用してＢ型肝炎について検査してよい。
Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原の検出のための酵素結合免疫吸着測定法は、組換え体由来Ｂ型肝炎コア抗原(HBc)で被覆したマイクロウェル内で行われる三段階検査であってよい。第１段階では、検体希釈剤を含む検査ウェルに約10μlの検体を直接入れて約60分間インキュベートする。抗-HBcが検体中に存在する場合、マイクロウェル表面上に抗原-抗体複合体が生成するだろう。抗-HBcが存在しなければ、複合体は生成せず、未結合血清又は血漿タンパク質が洗浄工程で除去される。第２段階では、約200μlの抗体抱合体を検査ウェルに添加して約60分間インキュベートする。この抗体抱合体はヒトIgG及びIgMに特異的なマウスモノクロナール抗体の混合物である。この抱合体は抗原-抗体複合体の抗体部分に特異的に結合する。抗原-抗体複合体が存在しなければ、未結合抱合体は洗浄によって除去される。第３段階では、o-フェニレンジアミン(OPD)と過酸化水素で構成される約200μlの酵素検出系を検査ウェルに添加して約60分間インキュベートする。結合抱合体が存在する場合、OPDが酸化され、結果として比色分析の最終産物となる。次に50μlの4N硫酸を加えて反応を終わらせる。色強度は結合抱合体の量によって決まるので、色強度は検体中に存在する抗-HBcの濃度の関数である。マイクロウェルリーダーで色強度を測定する。決められたカットオフ吸光度値に基づいて、色変化の吸光度値によって検査結果を解釈する。吸光度値がカットオフ未満の検体はＢ型肝炎ウイルスコア抗原に非反応性又は陰性とみなされる。吸光度値がカットオフ吸光度値以上の検体はＢ型肝炎ウイルスコア抗原に反応性又は陽性とみなされる。
【００２７】
別の考えられる検査は、Ｂ型肝炎表面抗原(HBsAG)に対する抗体(マウスモノクロナールペルオキシダーゼ抱合抗体)についての検査ELISA(酵素結合免疫吸着測定法)をヒト血清又は血漿内のＢ型肝炎表面抗原(HBsAG)の検出のために使用する。該検査をスクリーニング検査及び潜在的Ｂ型肝炎感染の診断の補助として利用しうる。この検査は、固相としてHBsAGに対する抗体で被覆したマイクロウェルを利用する。酵素基質を適用すると、着色された最終産物の発生によって抗原又は抗体の存在を検出することができる。市販の検査はOrtho Antibody to HBsAG ELISAである。他の適切な検査を利用してＢ型肝炎について検査してよい。
この検査は、HBsAGに対する抗体で被覆したマイクロウェル内で行われる二段階測定である。第１段階では、HBsAGに対する抗体で構成され、かつ青色の抱合希釈剤で希釈した作業抱合体を検査ウェルに添加する。次に検体を検査ウェルに加えてSOM(試料脱落モニタリング)解読を行う。特定長さの時間、プレートをインキュベートする。HBsAGが検体中に存在する場合、HBsAGはウェル上に被覆された抗体と結合し、同時に抱合体と結合して固定化抗体-HBsAG-抱合複合体を形成するだろう。HBsAGが存在しない場合、これらの複合体は形成されないだろう。未結合血清又は血漿タンパク質は次の洗浄工程で除去される。第２段階では、o-フェニレンジアミン(OPD)と過酸化水素で構成される酵素検出系を検査ウェルに添加する。結合抱合体が存在する場合、OPDが酸化され、結果として着色された最終産物となる。この反応では、ペルオキシダーゼが過酸化水素によって二価的に酸化されて中間化合物を形成し、これが順次、その後の水素イオン供与OPDとの相互作用によって、その初期状態に還元される。結果として生じる酸化型OPDは橙色を有する。次に硫酸を加えて反応を終わらせる。色強度はウェル内の結合抱合体の量によって決まる。従って、色強度は検体中に存在するHBsAGの濃度の関数である。マイクロウェルリーダーで490又は492nmにて色強度を測定する。決められたカットオフ吸光度値に基づいて、色変化の吸光度値によって検査結果を解釈する。吸光度値がカットオフ未満の検体はＢ型肝炎表面抗原に非反応性又は陰性とみなされる。吸光度値がカットオフ吸光度値以上の検体はＢ型肝炎表面抗原に反応性又は陽性とみなされる。
【００２８】
（ヒト免疫不全ウイルス１型／２型）
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)の検査は、ヒト免疫不全ウイルス１型及び／又は２型(HIV-1及びHIV-2)に対する抗体の検査のための合成ペプチド酵素免疫測定法(EIA)である。この検査は該ウイルス由来の４つのペプチドの混合物で被覆したマイクロウェルを使う。市販の検査はBio-Rad HIV-1/HIV-2 EIA検査キットである。この検査を利用して感染症について試料を検査することができる。他の適切な検査を利用してHIV-1/2について検査してよい。
ウェル内で吸着したペプチドとの相互作用によって、検体をHIV-1及びHIV-2抗体の存在について評価する。検査すべき検体を検体希釈剤で希釈し、各ウェルに添加し、該ウェルを含むプレートをインキュベートして洗浄する。HIV-1又はHIV-2のどちらかに対する抗体が存在する場合、それらは吸着抗原と結合し、洗浄によって除去されない。次に作業抱合体溶液、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗-ヒト免疫グロブリンをウェルに添加すると、該抱合体は、抗原-抗体複合体が存在すれば抗原-抗体複合体に結合する。未結合抱合体は洗浄工程で除去される。次に、作業色素原溶液をプレートに添加してインキュベートする。抗原被覆プレートに結合した抗体の量に比例して青色又は青緑色が発生する。酸を添加して酵素反応を停止させると、色が黄色に変わる。分光光度計を用いて、450nmに設定した波長でコントロール及び検体の吸光度を測定する。決められたカットオフ吸光度値に基づいて、色変化の吸光度値によって検査結果を解釈する。吸光度値がカットオフ未満の検体はヒト免疫不全ウイルスに非反応性又は陰性とみなされる。吸光度値がカットオフ吸光度値以上の検体はヒト免疫不全ウイルスに反応性又は陽性とみなされる。
【００２９】
（サイトメガロウイルス）
サイトメガロウイルス(CMV)は、ヘルペスウイルスのファミリーに属する共通のヒトウイルス病原体である。個体内のCMV抗体の存在は、該ウイルスによる以前の感染を示している。CMVの検査は、ヒト血清又は血漿中におけるサイトメガロウイルス(CMV)に対する抗体(IgGプラスIgM)の検出のための定量的固相赤血球付着検査システムである。市販の検査はImmuocorのCapture CMVである。他の適切な検査を利用してCMVについて検査してよい。
この測定手順は不活化CMVウイルスで被覆したマイクロ滴定ウェル内で行われる二工程固相赤血球付着検査である。血清又は血漿試料をウイルス皮膚ウェルに添加する。検体を５分間インキュベートすると、その間にCMVタンパク質に特異的な抗体が固定化ウイルスタンパク質に結合する。未結合免疫グロブリンをウェルから洗い流して抗-IgG-プラス抗-IgM被覆指標赤血球の懸濁液と交換する。遠心分離して、固定化ウイルスタンパク質に結合している抗体と指標赤血球を接触させる。陽性検査の場合、指標赤血球とウイルス結合抗体との間に抗-IgG及び抗-IgMブリッジが形成されるので、指標赤血球のウェル底への移動が妨げられる。結果として、マイクロ滴定ウェルの表面に指標赤血球が付着する。対照的に、ウイルス抗原-抗体相互作用がない場合(すなわち、陰性検査)、指標赤血球の移動中に指標赤血球の移動は妨げられず、詳細に明らかにされている濃縮セルボタンとしてウェル底にペレット化する。
【００３０】
（ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス(HTLV I/II)）
ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス(HTLV I/II)検査はHTLV-I及びHTLV-IIウイルスに対する抗体を検出する。HTLV-Iは成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫(ATL)と関連付けられており、またHTLV-Iは脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症(HAM/TSP)と関連する。HTLV I/IIの検査は、ヒト血清又は血漿内におけるヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型及び２型に対する抗体の定量的検出のためのin vitro酵素免疫測定法(EIA)である。市販の検査は、Inno-Lia HTLV I/IIである。他の適切な検査を用いてヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス(HTLV I/II)について検査してよい。
この測定法は、固相として、清浄剤可溶化かつ超音波処理したHTLVタンパク質で被覆したビーズを利用して、ヒト血清又は血漿由来のHTLVに抗体を結び付ける。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼと抱合した、ヒト免疫グロブリンに対するヤギ抗体をビーズとインキュベートする。最後に、過酸化水素を含有するo-フェニレンジアミン(OPD)基質溶液とビーズをインキュベートする。試料中に存在する抗体がビーズに結合すると、黄橙色が発生する。
検体希釈剤で検体を希釈して、清浄剤可溶化したHTLV-I及びHTLV-IIタンパク質(不活化)で被覆したポリスチレンビーズとインキュベートする。試料中に存在する特異的抗体がビーズ上のHTLV-I及びHTLV-II抗原に結合する。ビーズを洗浄して未結合物質を除去する。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼと抱合したヒトIgGに対するヤギ抗体(抗-ヒトIgG：HRPO)をビーズとインキュベートして固相上のヒトIgGに結合する。ビーズを洗浄して未結合抱合体を除去する。次に、過酸化水素を含むo-フェニレンジアミン(OPD)基質溶液とビーズをインキュベートする。OPD基質溶液とHRPOの反応が黄橙色を生じさせる。生じた色の強度は試料中に存在するHTLV-I及び／又はHTLV-IIの量に比例する。硫酸を加えて酵素反応を終わらせ、発生した色の強度を分光光度計で解読する。決められたカットオフ吸光度値に基づいて、色変化の吸光度値によって検査結果を解釈する。吸光度値がカットオフ未満の検体はヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルスに非反応性又は陰性とみなさる。吸光度値がカットオフ吸光度値以上の検体はヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルスに反応性又は陽性とみなされる。
【００３１】
（ウエストナイルウイルス）
ウエストナイルウイルス(WNV)は、軽度のインフルエンザ様症状から重度の神経変性に及ぶヒト疾患と関連する蚊媒介性フラビウイルスである。WNVの検査は市販のProcleix WNVアッセイであってよく、このアッセイは単一管で起こる３つの主工程：試料調製；転写媒介増幅(TMA)によるWNV RNA標的増幅；及びハイブリダイゼーション・プロテクション・アッセイによる増幅産物の検出を含む。他の適切な検査を利用してウエストナイルウイルスについて検査してよい。
試料調製中、標的捕獲の使用によって検体からRNAを単離する。検体を清浄剤で処理してウイルスエンベロープを可溶化し、タンパク質を変性させてウイルスゲノムRNAを放出する。WNVの高度に保存された領域に相補性のオリゴヌクレオチドをRNA又はDNA標的(検体中に存在する場合)にハイブリダイズして、磁場内で検体から分離する磁気微粒子上に捕獲する。洗浄工程を利用して反応管から外来性成分を除去する。標的捕獲システムを用いて磁気分離及び洗浄工程を行う。
２つの酵素を利用する転写ベース核酸増幅法であるTMAによって標的増幅が起こる。逆転写酵素を用いてDNAコピーを作製する。次にポリメラーゼがDNAコピー鋳型からRNAの複数のコピーを生成する。Procleix WNVアッセイはTMA法を利用してWNV RNAの領域を増幅する。
増幅産物に相補性である化学発光標識付き一本鎖核酸プローブを用いて、HPAによって検出を達成する。標識核酸プローブは増幅産物に特異的にハイブリダイズする。選択試薬は、未ハイブリダイズプローブ上の標識を不活化することによってハイブリダイズプローブと未ハイブリダイズプローブを区別する。検出工程中、ハイブリダイズプローブによって生じた化学発光シグナルを測定する。作業標的捕獲試薬を介して内部標準を各検体、コントロール、及びアッセイキャリブレーターに添加する。シグナルがカットオフ未満の場合、検体はWNVについて非反応性、又は陰性である。シグナルがカットオフを超える場合、検体はWNVについて反応性、又は陽性である。
【００３２】
（梅毒）
梅毒の病原体は微生物梅毒トレポネーマである。梅毒の検査は、ヒトによって梅毒トレポネーマに対して形成された抗体を検出する。この検査は非トレポネーマ脂質抗原と反応する。市販の検査は蛍光トレポネーマ抗体吸収(FTA-ABS)検査である。他の適切な検査を利用して梅毒について検査してよい。
FTA-ABS検査反応は梅毒の病原体に対する循環抗体を検出する。主反応は該微生物の表面及び内部構造に沿って抗原に付着する抗体を含む。この反応は検査のインキュベーション工程(同時に血清又は検体を吸着剤に１：５で希釈)中に起こり、微生物のスメアを覆う。吸着剤は、正常個体で見られる「グループトレポネーマ抗原」に特異的でない抗体を除去する物質を含む腐生Reiterトレポネーマ培養から調製されるが、疾患集団における毒性ウイルスに対する抗体をほとんど吸収しない。一次インキュベーション後にリンス期間が続き、全ての未結合血清抗体を除去する。次に二次反応及びインキュベーション期間が続く。二次反応で使う試薬は、スメアを覆う蛍光標識抗-ヒト抱合体である。次に抗原の表面を徹底的に洗い流して未結合抱合体を除去して適切な蛍光顕微鏡下で視察する。この検査手順の特異性と感度を確立するコントロール標準物質と比較して患者の血清の蛍光強度を記録する。蛍光強度を4+〜負(蛍光なし)の段階で格付けする。
【００３３】
（予備研究）
月経幹細胞採取及び保存のため月経液のドナーによって採取された２つの月経流検体について予備的な感染症研究を行った。問題の感染症について確立され、認可された感染症検査方法を使用した。第三者感染症検査施設が該方法を採用した。ドナーは、米国特許出願第12/074,423号で開示されている採取方法に従い、月経の血液、体液、細胞及び組織を含む月経流を採取した。ドナーは、感染症検査のための標準的な静脈切開術に従って血液の比較静脈検体をも提供した。
月経流試料は、パラフィルムで覆われたラック内の媒体管、少なくとも１つの採取装置と使用説明書(すなわち、DivaCup)、消毒洗浄パッド、小型プラスチックバッグ、検査室への検体の輸送用の小型バイオハザード・バッグ、パラフィルム、ナノクーラー、及び採取フォームを含む個々の獲得キットを用いてドナーから採取された。使用前に採取キットを約１℃〜約10℃の冷蔵温度で維持した。ドナーの月経周期の最も量が多い日の１日（通常は１日目及び／又は２日目である）に採取を行った。ドナーはDIVA採取カップを用いた。使用前に採取カップを滅菌し、ドナーは製造業者の使用説明書に従った。採取前に、ドナーは自分の手を洗い、月経流の採取中はできるだけ無菌手法を用いた。
３週間未満、採取カップを膣内に留めて感染症検査用の月経流試料を採取した。ドナーは採取カップを取り外して、採取された月経流検体を、無菌の50mlの円錐管内の約10mlの等張液(Hank's Balanced Salt Solution)と抗凝固剤(ヘパリン10単位／ml)中に注いだ。管の縁との接触を避けながら円錐管に月経流試料を注いだ。円錐管の上に円錐管のキャップを締めてからプラスチックパラフィルムで包んで月経流試料の漏出を防止した。円錐管を数回反転させて月経流試料と等張液及び抗凝固剤を混ぜ合わせた。
第２の試料について採取工程を繰り返した。第１の試料は第２の試料を採取するまで約２℃〜約８℃の温度で冷蔵した。月経流試料及び静脈試料を含む円錐管を小型プラスチックバッグに入れ、氷を含むサーマルボックスに入れた。輸送期間中は月経流試料及び静脈試料を約１℃〜約10℃の温度で維持した。採取の少なくとも約48時間以内に、月経流試料及び静脈試料を含むパッケージを輸送した。
検査室に検体が到着したら、各月経流試料を２つのEDTA被覆管に分けた。２つの管の各セットに標識を付け、ドナーから得た月経試料と静脈試料の感染症マーカー検査を注文するために注文書を記入した。注文した検査は、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎コア抗原、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１型及び２型、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルスI/II、サイトメガロウイルス及び梅毒についての市販の感染症検査を含んだ。
予備検査データの比較関係を示す月経検体の検査結果は以下のとおりである。
【００３４】
表１：感染症検査結果：静脈試料対月経試料−定性及び定量結果
2010539479.tif 000003
【００３５】
（末梢血試料と月経血試料の比較研究）
「M2」試料とも称する月経血(MB)試料と比較した末梢血(PB)試料の感染症マーカー検査を分析するために本発明の方法を用いて研究を行った。対のPB及びMB試料の34試料を検査した。月経流検体及び対応する末梢血試料を本発明に従って採取した。市販の感染症検査を用いて適量の月経流検体と末梢血検体を検査又は分析して、感染症の存在を決定した。
【００３６】
（比較研究のための感染症検査）
Ortho ELISA検査システム(Ortho (2006). Hepatitis B Virus Core Antigen (Recombinant). ELISA Test System. Raritan, N.J.)を用いてＢ型肝炎ウイルスコア抗原(抗-HBc)の存在について対の月経流検体と末梢血検体を検査又は分析した。この検査は、組換え体由来Ｂ型肝炎コア抗原(rHBcAg)で被覆したマイクロウェル内で行われる三段階検査の酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)を含んだ。第１段階では、月経流及び末梢血のそれぞれ十分な量の検体を、希釈剤を添加した検査ウェル内で別々にインキュベートした。第２段階中に、ヒトIgG及びIgMに特異的な抗体抱合体をウェルに添加した。第３段階では酵素検出系を添加した。酵素検出系は過酸化水素とo-フェニレンジアミンで構成された。検査プロトコルにより、２対の末梢血及び月経流試料がHBc抗原検査で陽性を示し、他の対の末梢血及び月経流試料はHBc抗原検査で陰性を示した。典型的データを表２に示す。
【００３７】
表２：Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原について対のPB/MBの検査の陽性及び陰性結果
2010539479.tif 000004
【００３８】
ABBOTT PRISM検査(Abbott Laboratories (2007). Abbott Prism HTLV-I/HTLV-II. Abbott Park, IL)を用いて、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型及び２型の存在について対の月経流検体及び末梢血検体を検査又は分析した。ABBOTT PRISMシステムは、化学発光免疫測定(ChLIA)を行うための自動免疫測定装置である。超音波処理及び清浄剤不活化したHTLV-I及びHTLV-II抗原で被覆した微粒子と共に各対の月経流及び末梢血検体を別々にインキュベートした。次に混合物から微粒子をろ過し、ビオチン化HTLV-I及びHTLV-IIタンパク質から成るプローブとインキュベートした。アクリジニウム標識した抗-ビオチン抱合体を微粒子に添加していずれの存在するプローブをも結合した。インキュベーション後、未結合抱合体を洗い流した。アルカリ性過酸化水素溶液を添加していずれの化学発光シグナルをも生じさせた。結果として生じた光子を数えた。放射されたいずれの光の量も試料中の抗-HTLV-I及び／又は抗-HTLV-IIの量に比例する。対の末梢血及び月経流試料の抗-HTLV-I及び／又は抗-HTLV-IIについての検査で陽性と出たものはなかった。典型的データを表３に示す。
【００３９】
表３：ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス１型及び２型について対のPB/MBの検査の陽性及び陰性結果
2010539479.tif 000005
【００４０】
ABBOTT PRISMシステムを用いて、対の月経流検体及び末梢血検体をＢ型肝炎表面抗原に対する抗体(マウスモノクロナールIgM)の存在について検査又は分析した。マウスモノクロナール抗-HBcで被覆した微粒子と共に各対の月経流及び末梢血検体を別々にインキュベートした。次に混合物から微粒子をろ過し、アクリジニウム標識したヤギポリクロナール抗-HBc抱合体とインキュベートした。このインキュベーション後、未結合抱合体を洗い流した。アルカリ性過酸化水素溶液を添加して化学発光シグナルを生じさせた。結果として生じた光子を数えた。放射された光の量は試料中のHBcAgの量に比例する。HBcAgについての検査で１つの月経流試料が陽性を示した。その対の末梢血試料はHBcAgについての検査で陰性を示した。全ての他の対の試料はHBcAgについての検査で陰性を示した。典型的データを表４に示す。
【００４１】
表４：Ｂ型肝炎表面抗原について対のPB/MBの検査の陽性及び陰性結果
2010539479.tif 000006
【００４２】
ORTHO ELISA検査システム(Ortho (2006). Hepatitis C Virus Encoded Antigen (Recombinant c22-2, c200, and NS5). ELISA Test System. Raritan, N.J.)を用いて、対の月経流検体及び末梢血検体をＣ型肝炎ウイルス(抗-HCV)の存在について検査又は分析した。３種の組換えＣ型肝炎ウイルス(rHCV)抗原：c22-2、c200、及びNS5の組合せで被覆したマイクロウェル内で三段階検査を行った。第１段階では、各対の月経流及び末梢血検体の希釈検体を検査ウェル内でインキュベートした。第２段階では、西洋ワサビペルオキシダーゼに抱合したマウスモノクロナール抗体をウェルに添加した。第３段階では酵素検出系を添加した。酵素検出系は過酸化水素とo-フェニレンジアミン(OPD)で構成された。最終産物をマイクロウェルリーダーで測定した。結合した抱合体の量は色強度に比例するので、検体中に存在する抗-HCVの濃度の関数である。１対の月経流検体及び末梢血検体がHCVの検査で陽性を示した。全ての他の対の試料は陰性を示した。典型的データを表５に示す。
【００４３】
表５：Ｃ型肝炎ウイルスについて対のPB/MBの検査の陽性及び陰性結果
2010539479.tif 000007
【００４４】
BIO-RAD HIV-1/HIV-2検査(Bio-Rad (2007). Human Immunodeficiency Virus Types 1 and 2 (Recombinant Synthetic Peptides). Redmond, WA)を用いて、対の月経流検体及び末梢血検体をヒト免疫不全ウイルス１型及び２型の存在について検査又は分析した。Bio-Rad検査は直接抗体サンドイッチ法の原理に基づいた酵素免疫測定法である。固相マイクロウェルストリッププレートを精製抗原：HIV-1から誘導したgp160及びp24組換えタンパク質；HIV-2膜貫通糖タンパク質、gp36の免疫優性領域を提示するペプチド；及び人工HIV-1グループＯ特異性エピトープを模倣する合成ポリペプチドで被覆した。対の月経流及び末梢血試料とコントロールを、この配合中に紫から青に色を変える色素を含む検体希釈剤と共にマイクロウェルに加えた。ウェルをインキュベートして洗浄した。緑色の抱合体溶液を加えてウェルをインキュベートした。抱合体はペルオキシダーゼ抱合抗原(HIV-1及びHIV-2膜貫通糖タンパク質の種々の免疫優性エピトープを模倣するペプチド、及びp24組換えタンパク質)を含む。次に作業TMB溶液を加えてインキュベートした。試料中に存在するHIV抗体の量に比例して青緑色が発生する。HIV-1又はHIV-2についての検査で陽性を示した対の試料はなかった。典型的データを表６に示す。
【００４５】
表６：ヒト免疫不全ウイルス１型及び２型について対のPB/MBの検査の陽性及び陰性結果
2010539479.tif 000008
【００４６】
OLYMPUS PK TPシステム(Olympus. Olympus PK TP System Microhemagglutination Test for Detection of Treponema pallidum Antibodies using the Olympus PK Instrument. Center Valley, PA)を用いて、対の月経流検体及び末梢血検体を梅毒トレポネーマについて検査又は分析した。このシステムは凝集及びパターン認識の原理に基づいている。各対の月経流及び末梢血検体を、正常ウサギ精巣抽出物を含む硫酸緩衝食塩水で構成された希釈剤で希釈してから、超音波処理したReiter T. phagedenis感作細胞の細胞成分を、病原性梅毒トレポネーマの成分で感作された固定化ニワトリ赤血球で構成された検査混合物に加えた。階段状マイクロウェル内で反応物を沈降させた。検体中の梅毒トレポネーマ抗体の存在下では赤血球凝集が起こる。OLYMPUS PK機器を用いて凝集及び非凝集パターンについてウェルを解読した。反応性検査は細胞の均一層であり；非反応性検査はクリアゾーンで囲まれた緻密な濃縮ボタンをもたらすだろう。梅毒トレポネーマの検査で陽性を示した対の月経流及び末梢血検体はなかった。典型的データを表７に示す。
【００４７】
表７：梅毒トレポネーマについて対のPB/MBの検査の陽性及び陰性結果
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【００４８】
BIO-RADシステム(Bio-Rad (2007). Antibody to Hepatitis B Surface Antigen (Mouse Monoclonal). Redmond, WA)を用いて、Ｂ型肝炎表面抗原に対する抗体(マウスモノクロナール)の存在について対の月経流検体及び末梢血検体を検査又は分析した。このシステムは、ヒト血清又は血漿中のＢ型肝炎表面抗原(HBsAG)の検出のための定性的酵素免疫測定法である。HBsAGに対するマウスモノクロナール抗体(抗-HBs)でマイクロウェルトリッププレートのウェルを被覆した。次に対の月経流及び末梢血検体と適切なコントロールをウェルに加えてインキュベートした。洗浄後に抱合体溶液(ペルオキシダーゼ-抱合マウスモノクロナール抗体(HBsAgに対する))を添加した。プレートに作業TMB溶液を添加してインキュベートした。試料中に存在するHBsAGの量に比例して青又は青緑色が発生する。
PROCLEIX ULTRIOシステムを用いてHIV-1識別アッセイを利用して、対の月経流検体及び末梢血検体を検査又は分析した。PROCLEIX ULTRIOアッセイは、HIV-1 RNA、HCV RNA、及びHBV DNAのための定性的in vitro核酸アッセイシステムである。このアッセイは、３種の全てのウイルス又は個々のウイルス：HIV-1、HCV、及びHBVの同時検出のために使用できる試薬を含む。このアッセイの第１工程は対の月経流及び末梢血検体の調製であり；標的捕獲を利用してウイルスRNA及びDNAを単離した。検体を清浄剤で処理してウイルエンベロープを可溶化し、タンパク質を変性させてウイルスゲノムRNA及び／又はDNAを放出した。HIV-1 RNA、HCV RNA、又はHBV DNA標的が存在する場合、HIV-1、HCV、及びHBVの高度に保存された領域に相補性のオリゴヌクレオチドをHIV-1 RNA、HCV RNA、又はHBV DNA標的にハイブリダイズさせた。ハイブリダイズした標的を次に磁気微粒子(磁場内で検体から分離する)上に捕獲させてから洗浄した。２つの酵素、MMLV逆転写酵素とT7 RNAポリメラーゼを利用する転写ベース核酸増幅法、TMAによって標的の増幅を行った。逆転写酵素を用いて標的配列のDNAコピーを生じさせた。このアッセイはTMA法を利用してHIV-1 RNA、HCV RNA、及び／又はHBV DNAの領域を増幅する。増幅産物に相補的な化学発光標識した一本鎖核酸プローブを用いてHPAによって検出を達成する。標識核酸プローブは増幅産物に特異的にハイブリダイズした。選択試薬は、ハイブリダイズしていないプローブ上の標識を不活化することによって、ハイブリダイズしたプローブとハイブリダイズしていないプローブを区別する。検出工程中、ハイブリダイズしたプローブによって生じた化学発光シグナルをルミノメーターで測定し、相対発光量(Relative Light Units)(RLU)として報告した。内部標準を含む作業標的捕獲試薬によって、各検査検体、コントロール(必要な場合)、又はアッセイキャリブレーター管に内部標準を添加した。この試薬中の内部標準は、検体プロセシング、増幅、及び検出工程をコントロールする。各管又はアッセイ反応における内部標準のシグナルは、異なる標識を有するプローブからの光の放射の差次的速度論によるHIV-1/HCV/HBVシグナルから区別される。光が急速に放射するプローブ(フラッシャーシグナル)を用いて内部標準特異的増幅産物が検出された。HIV-1/HCV/HBVに特異的な増幅産物は、相対的に遅い速度論で光が放射するプローブ(グロウアー(glower)シグナル)を用いて検出される。この二重速度論アッセイ(Dual Kinetic Assay)(DKA)は、フラッシャー及びグロウアー標識からのシグナル間で区別するために使用する方法である。HIV-1、HCV、及びHBVの同時検出のために使用する場合、このアッセイは内部標準と混合性HIV-1/HCV/HBVシグナルを区別するが、個々のHIV-1、HCV、及びHBVシグナルを区別しない。いずれかの感染症の検査で陽性を示した対の月経流又は末梢血試料はなかった。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態を示して説明したが、当業者には、より広い態様の本発明から逸脱することなく、多くの変更及び修正を行いうることが明白であろう。従って、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の精神及び範囲に入る全てのこのような変更及び修正を包含するものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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