(57)【要約】  本発明は薬物含有高分子微小球の製造方法及びその方法により、製造された薬物含有高分子微小球に関するものにして、具体的にはａ）高分子化合物、薬物及び水不溶性有機溶媒を含む分散相を分散溶媒に添加してＯ／Ｗ型又はＯ／Ｏ型乳剤を製造するか、又は薬物が溶解している水溶性液を高分子化合物が溶解している水不溶性有機溶媒に乳化させ、Ｗ／Ｏ型乳剤を造った後、これを再度分散溶媒に添加してＷ／Ｏ／Ｗ型乳剤を製造する工程；及びｂ）前記ａ）工程で製造された乳剤にアンモニア溶液を添加して前記水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に変換させる工程を含む薬物含有高分子微小球の製造方法及び前記方法により、製造された薬物含有高分子微小球に関するものである。前記本発明の方法によれば少量の水を用いて短時間内に簡単に目的とする薬物含有高分子微小球を製造できる。
2010502594.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）高分子化合物、薬物及び水不溶性有機溶媒を含む分散相を分散溶媒に添加して、Ｏ／Ｗ（オイル−イン−ウォーター）型もしくはＯ／Ｏ（オイル−イン−オイル）型乳剤を製造するか、又は薬物が溶解されている水性溶液を高分子化合物が溶解されている水不溶性有機溶媒中に乳化させて作られるＷ／Ｏ（ウォーター−イン−オイル）型乳剤を分散溶媒に添加してＷ／Ｏ／Ｗ（ウォーター−イン−オイル−イン−ウォーター）型乳剤を製造する工程；及び
ｂ）前記ａ）工程で製造された乳剤にアンモニア溶液を添加して、前記水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に変換させる工程を含む、薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項２】
前記ａ）工程の前記分散溶媒が、ポリビニルアルコール水性溶液又はこれの共溶媒のような水性分散溶媒であるか、又はスパン含有シリコンオイル、野菜油、トルエン及びキシレンからなる群より選ばれた非水性分散溶媒である、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項３】
前記ａ）工程の前記水不溶性有機溶媒が、水不溶性有機溶媒と１種以上の他の有機溶媒が混合された共溶媒である、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項４】
前記水不溶性有機溶媒は、カルボキシルエステル、カルボキシルアミド、アンハイドライド、リン酸エステル、およびホスホリックアンハイドライドからなる群より選ばれたいずれか一つのバックボーンを有する、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項５】
前記水不溶性有機溶媒は、メチルジクロロアセテート、メチルクロロアセテート、エチルクロロアセテート、エチルジクロロアセテート、メチルフルオロアセテート、メチルジフルオロアセテート、エチルフルロアセテート、エチルジフルオロアセテート、エチルアセテート、メチルアセテート、メチルホルマート、エチルホルマート、イソプロピルホルマート、およびプロピルホルマートからなる群より選ばれる、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項６】
前記水不溶性有機溶媒は、メチルジクロロアセテート、メチルクロロアセテート、エチルクロロアセテート及びエチルフルオロアセテートからなる群より選ばれる、請求項５記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項７】
前記ａ）工程の前記高分子化合物が、ポリ乳酸、ポリラクチド、ポリ乳酸−コ−グリコール酸、ポリラクチド−コ−グリコライド（ＰＬＧＡ）、ポリホスファージン、ポリイミノカーボネート、ポリホスホエステル、ポリアンハイドライド、ポリオルソエステル、乳酸とカプロラクトンの共重合体、ポリカプロラクトン、ポリハイドロキシバレレート、ポリハイドロキシブチレート、ポリアミノ酸、乳酸とアミノ酸の共重合体及びこれらの混合物からなる群より選ばれる、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項８】
前記ａ）工程の前記高分子化合物を薬物１重量部に対して１乃至５００重量部の量で混合する、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項９】
前記ａ）工程の前記乳剤に含有されている前記高分子化合物の濃度が３乃至３０％（ｗ／ｖ）である、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項１０】
前記ａ）工程の前記分散相又は前記Ｗ／Ｏ（ウォーター−イン−オイル）型乳剤と前記分散溶媒の容量比が１：１−１００である、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項１１】
前記ａ）工程で前記薬物が溶解されている前記水性溶液と、前記高分子化合物が溶解されている前記水不溶性有機溶媒の容量比が１：１−５０である、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項１２】
前記ｂ）工程の前記アンモニア溶液が前記水不溶性有機溶媒のモル数より多いモル数のアンモニアを含む、請求項１記載の薬物含有高分子微小球の製造方法。
【請求項１３】
請求項１乃至１２のいずれか１項記載の方法により製造された薬物含有高分子微小球。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬物含有高分子微小球の製造方法及びその方法により製造された薬物含有高分子微小球に関する。具体的には高分子化合物、薬物及び水不溶性有機溶媒を含む分散相を分散溶媒に添加して乳剤を製造する工程、及び製造された乳剤にアンモニア溶液を添加して前記水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に変換させる工程を含む、薬物含有高分子微小球の製造方法及びその方法により製造された薬物含有高分子微小球に関する。
【背景技術】
【０００２】
水液剤、懸濁剤及び乳剤のような従来の注射剤形等は筋肉や皮下投与後速かに体内で除去される為、慢性疾患治療時には頻繁な注射投与が必須的であった。このような問題点を解決する為に考案されたマイクロカプセル化（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）は、高分子化合物から成る微小球（ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ、以下の記載で微小球はナノ微小球（ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅ）を包含する)剤形に薬物を封入する製造工程と呼ばれる。微小球は普通μｍ単位の大きさを有することから、人体や動物に筋肉又は皮下注射で投与可能である。さらに、多様な薬物放出速度を有するように製造することができ、薬物送達期間を制御することができる。そのため、ただ一度の投与だけでも長時間にわたり有効な治療薬物濃度を保持することができ、治療に必要な薬物の総投与量を極小化することができ、患者の薬物治療順応度を向上させることができる。そのため現在有名な全世界の製薬会社では薬物含有高分子微小球製造に非常に大きな関心を示している。
【０００３】
マイクロカプセル化を介して高分子微小球を製造する際には、ポリ−ｄ，１−ラクチド−コ−グリコライド（ｐｏｌｙ−ｄ，１−ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ，ＰＬＧＡ）が高分子化合物として最も広く用いられる。ＰＬＧＡは生体内で加水分解され無毒性の乳酸（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）とグリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）に変換される生体適合性高分子化合物である。そのため、製薬産業界はＰＬＧＡを用いた医薬品剤形の開発に多大な努力を注いでいるものの、現在市販されているＰＬＧＡを使用して製造された微小球製品の例としては、リスペルダル（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ、登録商標）、コンスタ（Ｃｏｎｓｔａ、登録商標）、サンドスタチン  ＬＡＲ（Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ、登録商標）、ビビトロール（Ｖｉｖｉｔｒｏｌ、登録商標）、さらにルプロンデポト（Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ、登録商標）等が挙げられる。これらのそれぞれは、患者に１回注射投与されリスペリドン（ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ）、オクトレオチドアセテート（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）、ナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）、さらにルプロライドアセテート（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）の放出を２週間から４ヶ月までの範囲で調節する。
【０００４】
従来、このような薬物含有高分子微小球は、メチレンクロライド及びエチルアセテートのような有機溶媒を用いる溶媒蒸発法又は溶媒抽出法により製造されることができた。
【０００５】
先ず、溶媒蒸発法に対して簡単に説明する（米国特許 第６，４７１，９９６号、第５，９８５，３０９号及び第５，２７１，９４５号参照）。高分子化合物を溶解した有機溶媒に薬物を分散又は溶解後、水のような分散媒中に乳化させ、水中油型（Ｏ／Ｗ、オイル−イン−ウォーター）乳剤を製造する。次いで乳剤中の有機溶媒を分散媒中に拡散させ、空気／水界面を介して有機溶媒を蒸発させることにより、薬物含有高分子微小球を形成する。この時、有機溶媒の分散媒中への拡散を促進させる為に、減圧、温度上昇、過量の水を用いた有機溶媒抽出法を活用する。ＰＬＧＡ高分子化合物を溶解する為に、一般的に用いられる分散有機溶媒はメチレンクロライドである。このメチレンクロライドは多様な分子量とラクチド：グリコライド比を有するＰＬＧＡ共重合体を良く溶解することができ、水溶解度が１．３２重量％と低く、水と良く混合しない。そのためメチレンクロライドは水中油型の乳剤を造るに適した溶剤である。さらに、３９．８℃という低い沸点のため、乳剤液体滴から水に拡散した少量のメチレンクロライド分子が水と空気界面を介して良く蒸発される。このような過程が持続的に繰返されると、乳剤滴からメチレンクロライドが除去されることにより微小球が製造される。最後に、その低い沸点のため微小球中に存在する残留メチレンクロライドを乾燥して除去することが極めて容易である。溶媒蒸発法に基づいて乳剤滴を微小球に変化させる模式図を図１に示した。図１において、（Ａ）でＰＬＧＡ／薬物／メチレンクロライドで構成された分散相が水のような外側相中に水中油型の乳剤で存在し（水に溶解されているメチレンクロライドは△印で表現した）、メチレンクロライドが水中に拡散し、蒸発される過程が繰返されると乳剤滴は（Ｂ）で見られる通り微粒子に変換される。
【０００６】
このように、メチレンクロライドは強い揮発性を有し、水と良く混ざらず水より遥かに低い沸点を有する点で、乳剤を造る為の最適の有機溶媒であるにも拘らず、次のような問題点を有する：（ａ）実験的に確認された発癌物質である；（ｂ）大気のオゾン層を破壊し環境毒性を引起し、人体の皮膚癌発生を増加させる；（ｃ）米国保健福祉部所属の毒性物質及び疾病担当部署（Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｔｏｘｉｃ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ）で規定している最も危険な３８種の毒性有害物質中の一つに属する；（ｄ）水溶解度が約１．３２重量％と低く、極一部のみが水に溶解され蒸発されるので、用いられた総量のメチレンクロライドの内、乳剤滴に含まれているメチレンクロライドが完全に除去されるにはかなりの時間がかかる。例をあげれば、米国特許第６，８８４，４３５号では、乳剤からメチレンクロライドを除去する為に、一夜乳剤を撹拌し、微小球製造時間を短縮する為に反応槽（ｒｅａｃｔｏｒ）の温度を上昇させるか、又は減圧条件を導入したりする（米国特許第３，６９１，０９０号、第３，８９１，５７０号、第６，２７０，７００号及び第６，５７２，８９４号参照）。
【０００７】
一方、薬物含有高分子微小球の製造に使用される溶媒抽出法は、乳剤滴に含まれている有機溶媒を大量の可溶化溶媒を用いて効果的に抽出する方法である。有機溶媒が乳剤滴から抽出されると、溶解されていた高分子化合物が硬化され乳剤滴が微小球に転換される。一般的に用いられる可溶化溶媒は水であることから、有機溶媒の水溶解度の程度が、必要となる水の量に大きな影響を及ぼす。例えば、メチレンクロライドの場合、水溶解度が１，３２重量％である為、極めて大量の水が乳剤に含まれているメチレンクロライドを抽出するために必要となる。しかしながら、メチレンクロライドを含有する廃水が大量に生成され、このような廃水の処理がさらに問題となる。そのため溶媒抽出法においては、メチレンクロライドに比べて水溶解度が高いエチルアセテートが主に用いられる。エチルアセテートは水溶解度が８．７重量％であり、メチレンクロライドに比べて相対的に少ない量の水でも抽出が可能であって、さらに、非ハロゲン化有機溶媒であると言う長所を有する。しかしながら、エチルアセテートの沸点は７７℃であり、メチレンクロライドの沸点である３９．８℃より遥かに高い。すなわちエチルアセテートは、乾燥時に残留溶媒を除去するのが相対的に困難であるという短所を有する。さらに特定の分子量とラクチド：グリコライド比を有するＰＬＧＡ高分子化合物は、エチルアセテートに良く溶解されないという特性を示す。
【０００８】
そのため、米国特許第４，３８９，８４０号、第４，５３０，８４０号、第６，５４４，５５９号、第６，３６８，６３２号及び第６，５７２，８９４号は、溶媒蒸発法と溶媒抽出法を同時に活用する技術を開示する。つまり、この方法においては乳剤を造った後、一部の有機溶媒を蒸発過程を介して除去し、残存する有機溶媒を溶媒抽出法を利用して除去する。例えば、米国特許第４，３８９，８４０号は、薬物とＰＬＧＡ高分子化合物をメチレンクロライドに溶解させ、水に乳化させて水中油型乳剤を製造し、４０乃至６０重量％のメチレンクロライドを蒸発過程を介して除去し、残存するメチレンクロライドを多量の水で抽出することにより微小球を製造する方法を開示している。
【０００９】
しかしながら、これら既存の方法で使用されたすべての有機溶媒の水溶解度は十分に高くない為、極めて過量の水（有機溶媒の水溶解度×１０倍以上）を使用しなければならない。従って、この為に極めて大容量の反応槽が必要で、有機溶媒を含有する廃水が大量に生成され廃水処理の為の費用が増大する。さらに、微小球内に残存する有機溶媒を効果的に除去することが難しいと言う問題点を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６，４７１，９９６号
【特許文献２】米国特許第５，９８５，３０９号
【特許文献３】米国特許第５，２７１，９４５号
【特許文献４】米国特許第６，８８４，４３５号
【特許文献５】米国特許第３，６９１，０９０号
【特許文献６】米国特許第３，８９１，５７０号
【特許文献７】米国特許第６，２７０，７００号
【特許文献８】米国特許第６，５７２，８９４号
【特許文献９】米国特許第４，３８９，８４０号
【特許文献１０】米国特許第４，５３０，８４０号
【特許文献１１】米国特許第６，５４４，５５９号
【特許文献１２】米国特許第６，３６８，６３２号
【特許文献１３】米国特許第６，５７２，８９４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者等は前記問題点を解決し、簡単に薬物含有高分子微小球を製造できる方法の研究を重ね、水不溶性有機溶媒に高分子化合物と薬物を溶解させ、乳剤を造り、加アンモニア分解反応を介して水溶性溶媒に変化させ、乳剤滴を微小球に硬化させることにより、簡単に薬物含有高分子微小球を製造できることを見いだして本発明を完成した。
発明の詳細な説明
技術的課題
本発明の目的は既存の溶媒蒸発又は溶媒抽出工程を必要としない、薬物含有高分子微小球の製造方法及びその方法により製造された薬物含有高分子微小球を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
技術的解決方法
前記目的を達成する為に、本発明は、
ａ）  高分子化合物、薬物及び水不溶性有機溶媒を含む分散相を分散溶媒に添加してＯ／Ｗ（オイル−イン−ウォーター、ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）型又はＯ／Ｏ（オイル−イン−オイル、ｏｉｌ−ｉｎ−ｏｉｌ）型乳剤を製造するか、又は薬物が溶解している水性溶液を高分子化合物が溶解している水不溶性有機溶媒中に乳化させ、Ｗ／Ｏ（ウォーター−イン−オイル、ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ）型乳剤をつくり、これをさらに分散溶媒に添加してＷ／Ｏ／Ｗ（ウォーター−イン−オイル−イン−ウォーター、ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）型乳剤を製造する工程；及び
ｂ）  前記ａ）工程で製造された乳剤にアンモニア溶液を添加して前記水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に変換させる工程を含む、薬物含有高分子微小球の製造方法を提供する。
さらに、本発明は前記方法により製造された薬物含有高分子微小球を提供する。
【００１３】
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明にかかる製造方法は、乳剤へのアンモニア溶液添加による加アンモニア分解反応（ａｍｍｏｎｏｌｙｓｉｓ）を介して、乳剤中に存在する水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に変換させ、乳剤滴を微小球に硬化させ、目的とする薬物含有高分子微小球を得ることを特徴とする。
【００１４】
本発明にかかる高分子微小球の製法を工程別に分けて具体的に説明すれば次の通りである。
ａ）工程；乳剤を製造する工程
高分子化合物、薬物及び水不溶性有機溶媒を含む分散相を分散溶媒に添加してＯ／Ｗ型、又はＯ／Ｏ型乳剤を製造するか、又は薬物が溶解されている水性溶液を高分子化合物が溶解されている水不溶性有機溶媒に乳化させ、Ｗ／Ｏ型乳剤を造り、これをさらに分散溶媒に添加してＷ／Ｏ／Ｗ型乳剤を製造する。
【００１５】
本発明に用いられる分散溶媒は、乳化剤を含む水性分散溶媒又は非水性分散溶媒を含み、Ｏ／Ｗ型及びＷ／Ｏ／Ｗ型乳剤製造の際には水性分散溶媒が、Ｏ／Ｏ型乳剤製造の際には非水性分散溶媒が用いられる。水性分散溶媒としては親水性乳化剤、例えば、ポリビニルアルコール又はツイン（Ｔｗｅｅｎ）系列のような乳化剤を含有する水性溶液又はこれの共溶媒を用いることもできる。非水性分散溶媒としては親油性乳化剤、例えば、スパン（Ｓｐａｎ）系列のような乳化剤を含有するシリコンオイル、野菜油、トルエン又はキシレンを使用できる。前記分散媒に含有されている乳化剤の濃度は０．０５乃至１５％（ｗ／ｖ）であることができる。
【００１６】
本発明においては、水と混合しないが、アンモニアと反応して、分解されて水溶性溶媒に変換される任意の水不溶性有機溶媒が使用可能である。具体的には、カルボキシルエステル（ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、カルボキシルアミド（ｃａｒｂｏｘｉｌｉｃ  ａｍｉｄｅｓ）、アンハイドライド（ａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ）、燐酸エステル（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ｅｓｔｅｒｓ）、さらに、ホスホリックアンハイドライドからなる群より選ばれたいずれか一つのバックボーン（ｂａｃｋｂｏｎｅ）を有する水不溶性有機溶媒が好ましい。より具体的には、メチルジクロロアセテート（ｍｅｔｈｙｌ  ｄｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、メチルクロロアセテート（ｍｅｔｈｙｌ  ｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、エチルクロロアセテート（ｅｔｈｙｌ  ｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、エチルジクロロアセテート（ｅｔｈｙｌ  ｄｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、メチルフルオロアセテート（ｍｅｔｈｙｌ  ｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、メチルジフルオロアセテート（ｍｅｔｈｙｌ  ｄｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、エチルフルオロアセテート（ｅｔｈｙｌ  ｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、エチルジフルオロアセテート（ｅｔｈｙｌ  ｄｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、エチルアセテート（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、メチルアセテート（ｍｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、メチルホルマート（ｍｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｔｅ）、エチルホルマート（ｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｔｅ）、イソプロピルホルマート（ｉｓｏｐｒｏｐｈｙｌ  ｆｏｒｍａｔｅ）、プロピルホルマート（ｐｒｏｐｙｌ  ｆｏｒｍａｔｅ）からなる群より選ばれた水不溶性有機溶媒が好ましい。
【００１７】
前記水不溶性有機溶媒は、沸点が高いために一般的には従来の微小球製法では有機溶媒として用いられなかった。しかし本発明の高分子微小球製造方法では、水不溶性有機溶媒はアンモニアと反応して水溶性溶媒に変換されるので好ましく使用できる。具体的には本発明の実施例で用いられるメチルジクロロアセテートおよびメチルクロロアセテートは、既存の溶媒蒸発法又は溶媒抽出法に広く用いられるメチレンクロライド及びエチルアセテートより遥かに高い沸点（１４２．９℃、１２９．５℃)を有し、従来の微小球製法には有機溶媒として使用することができなかった。本発明ではメチルジクロロアセテートおよびメチルクロロアセテートはアンモニアと反応して、極めて短時間内で水に完全に溶解されるジクロロアセトアミドとメタノール又は、クロロアセトアミドとメタノールに変換されるので、好ましく用いられる。必要に応じて前記メチルジクロロアセテート、又はメチルクロロアセテートと１種以上の他の有機溶媒が混合された共溶媒を用いることにより、微小球に封入しようとする薬物の溶解度を調節するか又は乳剤滴の硬化速度を適宜制御することができる。
【００１８】
本発明に用いられる高分子化合物の代表的な例にはポリ乳酸、ポリラクチド、ポリ乳酸−コ−グリコール酸、ポリラクチド−コ−グリコライド（ＰＬＧＡ）、ポリホスファージン、ポリイミノカーボネート、ポリホスホエステル、ポリアンハイドライド、ポリオルソエステル、乳酸とカプロラクトンの共重合体、ポリカプロラクトン、ポリハイドロキシバレレート、ポリハイドロキシブチレート、ポリアミノ酸、乳酸とアミノ酸の共重合体及びこれらの混合物を挙げることができ、好ましくは、ポリラクチド−コ−グリコライド（ＰＬＧＡ）である。
【００１９】
本発明に用いられる薬物は、すべての親水性薬物と疎水性薬物である。薬物の例としてはプロゲステロン（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）、ハロペリドール（ｈａｌｏｐｅｒｉｄｏｌ）、チオチキセン（ｔｈｉｏｔｈｉｘｅｎｅ）、オランザピン（ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ）、クロザピン（ｃｌｏｚａｐｉｎｅ)、ブロムペリドール（ｂｒｏｍｐｅｒｉｄｏｌ）、ピモザイド（ｐｉｍｏｚｉｄｅ）、リスペリドン（ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ）、ジプラシドン（ｚｉｐｒａｓｉｄｏｎｅ）、ジアゼプマ（ｄｉａｚｅｐｍａ）、エチルロフラゼペート（ｅｔｈｙｌ  ｌｏｆｌａｚｅｐａｔｅ）、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）、ネモナプライド（ｎｅｍｏｎａｐｒｉｄｅ）、フルオキセチン（ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ）、セルトラリン（ｓｅｒｔｒａｌｉｎｅ）、ベノラファキシン（ｖｅｎｌａｆａｘｉｎｅ）、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎｅ）、ガランタミン（ｇａｌａｎｔａｍｉｎｅ）、リバスチグミン（ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ）、セレギリン（ｓｅｌｅｇｉｌｉｎｅ）、ロピニロール（ｒｏｐｉｎｉｒｏｌｅ）、ペルゴライド（ｐｅｒｇｏｌｉｄｅ）、トリヘキシフェニジル（ｔｒｉｈｅｘｙｐｈｅｎｉｄｙｌ）、ブロモクリプチン（ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉｎｅ）、ベンズトロピン（ｂｅｎｚｔｒｏｐｉｎｅ）、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、ノルダゼパム（ｎｏｒｄａｚｅｐａｍ）、エチゾラム（ｅｔｉｚｏｌａｍ）、ブロマゼパム（ｂｒｏｍａｚｅｐａｍ）、クロチアゼパム（ｃｌｏｔｉａｚｅｐａｍ）、メキサゾリウム（ｍｅｘａｚｏｌｕｍ）、ブスピロン（ｂｕｓｐｉｒｏｎｅ）、ゴセリレンアセテート（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ  ａｃｅｔａｔｅ）、ソマトロピン（ｓｏｍａｔｏｒｏｐｉｎ）、ルプロライドアセテート（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）、オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、セトロレリクス（ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）、サンドスタチンアセテート（ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ａｃｅｔａｔｅ）、ゴナドトロピン（ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）、フルコナゾール（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ミゾリビン（ｍｉｚｏｒｉｂｉｎｅ）、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、ナロキソン（ｎａｌｏｘｏｎｅ）、ナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）、クラトリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、トリチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、カルムシチン（ｃａｒｍｕｓｉｔｎｅ）、アナグレライド（ａｎａｇｒｅｌｉｄｅ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、アナストロゾル（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ラルチトレキシド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、レトロゾル（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、メフロキン（ｍｅｆｌｏｑｕｉｎｅ）、プリマキン（ｐｒｉｍａｑｕｉｎｅ）、オキシブチニン（ｏｘｙｂｕｔｙｎｉｎ）、トルトレロジン（ｔｏｌｔｒｅｒｏｄｉｎｅ）、アリルエストレノール（ａｌｌｙｌｅｓｔｒｅｎｏｌ）、ロボスタチン（ｌｏｖｏｓｔａｔｉｎ）、シムバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）、プロバスタチン（ｐｒｏｖａｓｔａｔｉｎ）、アトロバスタチン（ａｔｒｏｖａｓｔａｔｉｎ）、アレンドロネート（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）、サルカトニン（ｓａｌｃａｔｏｎｉｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、オキサドロルロン（ｏｘａｄｒｏｌｏｎｅ）、共役性エストロゲン（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ）、エストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エストラジオールバレレート（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｖａｌｅｒａｔｅ）、エストラジオールベンゾエート（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｂｅｎｚｏａｔｅ）、エチニルエストラジオール（ｅｔｈｉｎｙｌ  ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エトノゲストレル（ｅｔｏｎｏｇｅｓｔｒｅｌ）、レボノルゲストレル（ｌｅｖｏｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ）、チボロン（ｔｉｂｏｌｏｎｅ）、ノルエチステロン（ｎｏｒｅｔｈｉｓｔｅｒｏｎｅ）等を挙げることができ、好ましくは、リスペリドン又はプロゲステロンを用いることができる。
【００２０】
疎水性薬物での製造の場合には、高分子化合物と疎水性薬物を水不溶性有機溶媒に溶解した後、水性分散溶媒又は非水性分散溶媒に懸濁させ、Ｏ／Ｗ型又はＯ／Ｏ型乳剤を製造することができる。親水性薬物の場合には、先ず親水性薬物を水に溶解させ、薬物が溶解している水性溶液を、高分子化合物が溶解されている有機溶媒中に乳化させ、１次的にＷ／Ｏ型乳剤を造り、この乳剤を水性分散溶媒中に懸濁させ、２次的にＷ／Ｏ／Ｗ型乳剤を製造することができる。
【００２１】
前記高分子化合物は薬物１重量部に対して１乃至５００重量部、好ましくは、１乃至５０重量部の量で使用することができ、乳剤に含有されている高分子化合物の濃度は３乃至３０％（ｗ／ｖ）であることができる。
【００２２】
さらに、前記分散相又はＷ／Ｏ型乳剤と分散溶媒の容量比は１：１−１００、好ましくは、１：３−１５範囲であり得る。さらに、薬物が溶解されている水性溶液と高分子化合物が溶解されている水不溶性有機溶媒の容量比は１：１−５０、好ましくは、１：２−２０範囲であり得る。
【００２３】
ｂ）工程：水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に変換させる工程
前記ａ）工程で製造されたＯ／Ｗ型、Ｗ／Ｏ／Ｗ型又はＯ／Ｏ型乳剤に、アンモニア溶液を添加して加アンモニア分解反応を介して、前記水不溶性有機溶媒を水に完全に溶解される溶媒に変換させる。乳剤滴を微小球に硬化させることにより、目的とする薬物含有高分子微小球を製造する。この際、乳剤滴の速やかな硬化に因り乳剤滴粒子間の相互作用が抑制され、凝集することなく目的とする微小球が得られる。
【００２４】
本発明にかかる一つの実施態様として、薬物（リスペリドン）含有高分子微小球が生成される過程を図２に模式図として示した。図２において、（Ａ）でＰＬＧＡ／リスペリドン／メチレンジクロロアセテートから成る分散相が液体滴状態で外側相である水（□）中に乳化され、加アンモニア分解反応により（Ｂ）でメチレンジクロアセテートが、水と完全に混合するジクロロアセトアミド（下向き三角）とメタノール（上向き三角）に変換されることにより、目的とする微小球が生成される。本発明に用いられるアンモニア溶液は水不溶性有機溶媒のモル数より多いモル数のアンモニアを含有するのが最適である。
【００２５】
本発明にかかるさらなる一つの実施態様として、薬物（プロゲステロン）含有高分子微小球が生成される過程を図７に模式図として示した。図７において、ＰＬＧＡ／プロゲステロン／メチルクロロアセテートから成る分散相が液体滴状態で外側相である水中に乳化され、加アンモニア分解反応によりメチルクロロアセテートが水と完全に混合するクロロアセトアミドとメタノールに変換することにより、目的とする微小球が生成される。
【００２６】
本発明の方法により製造された高分子微小球は０．１乃至３５００μｍ、好ましくは、１０乃至３５０μｍの平均粒経を有し、必要に応じて多様な重量の薬物を含有することができる。
【００２７】
前記のように本発明の方法によれば、既存の溶媒蒸発又は溶媒抽出工程を必要とせず、少ない量の水を用いて廃水発生を最小化しながら、短時間内に簡単に薬物含有高分子微小球を製造することができる。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の方法によれば、既存の溶媒蒸発又は溶媒抽出工程を必要とせず、少ない量の水を用いて廃水発生を最小化しながら、短時間内に簡単に薬物含有高分子微小球を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は従来の溶媒蒸発法に基づいて乳剤滴が微小球に変換される過程を模式図として示したものである。
【図２】図２は本発明にかかる一つの実施態様において薬物（リスペリドン）含有高分子微小球が生成される過程を模式図として示したものである。
【図３】図３は本発明にかかる一つの実施態様を行う過程で生成されたジクロロアセトアミドの1Ｈ−ＮＭＲ及びエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）である。
【図４】図４は本発明にかかる一つの実施態様を行う過程で生成されたジクロロアセトアミドの1Ｈ−ＮＭＲ及びエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）である。
【図５】図５は本発明にかかる一つの実施態様を行う過程で、フェノールフタレイン存在下で生成されたメチルクロロアセテートが含有されたアンモニア溶液の吸光度を時間を変えて測定した曲線であり、                                                    ●：メチルクロロアセテートが存在しない場合、                                ○：メチルクロロアセテートが存在する場合である。
【図６】図６はそれぞれ本発明にかかる一つの実施態様を行う過程で生成されたクロロアセトアミドの1Ｈ−ＮＭＲ（図６Ａ）及びエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）（図６Ｂ）である。
【図７】図７は加アンモニア分解過程を介した微粒子の生成過程を説明する模式図を示したものである。
【図８】図８は本発明にかかる一つの実施態様において製造された薬物（リスペリドン）含有高分子微小球の熱重量分析曲線である。
【図９】図９は本発明にかかる一つの実施態様で製造された薬物（リスペリドン）含有高分子微小球の外部（図９Ａ）及び内部（図９Ｂ乃至９Ｄ）の形状を示す走査電子顕微鏡（ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）である。
【図１０】図１０は本発明にかかる一つの実施態様で製造されたＭＣＡ微小球中の薬物（プロゲステロン）封入率をＤＣＭ微小球の封入率と比較したグラフである。
【図１１】図１１は本発明にかかる一つの実施態様で製造された薬物（プロゲステロン）含有ＭＣＡ微小球の熱重量（図１１Ｂ）をＤＣＭ微小球の熱重量（図１１Ａ）と比較した曲線である。
【図１２】図１２は本発明にかかる一つの実施態様で製造された薬物（プロゲステロン）含有ＭＣＡ微小球の表面形状（図１２Ｂ）をＤＣＭ微小球の表面形状（図１２Ａ）と比較した走査電子顕微鏡写真である。
【図１３】図１３は本発明にかかる一つの実施態様で製造された薬物（プロゲステロン）含有ＭＣＡ微小球の内部形状（図１３Ｂ）を薬物（プロゲステロン）含有ＤＣＭ微小球（図１３Ａ）の内部形状と比較した走査電子顕微鏡の写真である。
【図１４】図１４は本発明にかかる一つの実施態様で製造された薬物（プロゲステロン）含有ＰＬＧＡ微小球の表面形状（図１４Ｂ）を薬物（プロゲステロン）を含有しないＰＬＧＡ微小球の表面形状（図１４Ａ）と比較した走査電子顕微鏡写真である。
【図１５】図１５は本発明にかかる一つの実施態様で製造された薬物（プロゲステロン）含有ＰＬＧＡ微小球の表面形状（図１５Ｂ）を薬物（プロゲステロン）を含有しないＰＬＧＡ微小球の表面形状（図１５Ａ）と比較した走査電子顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下、本発明を下記実施例に基づいてより詳細に説明する。ただし、下記実施例は本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらにより限定されるものではない。
【００３１】
＜実施例１＞
メチルジクロロアセテートを利用した加アンモニア分解反応
＜１−１＞メチルジクロロアセテートの加アンモニア分解反応
本発明者等は加アンモニア分解反応を介して、水不溶性有機溶媒の、水と完全に混合する溶媒への変換を確認するために、水不溶性有機溶媒としてメチルジクロロアセテートを用いて下記の通り実験を行った。
【００３２】
ポリビニルアルコール（８８％加水分解、分子量２５，０００）１％を含む水４０ｍｌに３ｍｌのメチルジクロロアセテートを加え、５５０ｒｐｍで撹拌し、乳剤を造った。３分間撹拌後、乳剤に３ｍｌのアンモニア水（濃度約３０％）を加えた。５分後、水に分散されたメチルジクロロアセテート滴粒子が完全に消え去り、乳剤が単一相（ｏｎｅ  ｐｈａｓｅ）の溶液に変わった。この結果は、メチルジクロロアセテートが加アンモニア分解反応を経てジクロロアセトアミドとメタノールに変換され、水と完全に混合されたことを示す（参考のため、ジクロロアセトアミドの水溶解度は７１ｇ／ｌである）。
【００３３】
＜１−２＞メチルジクロロアセテートの分解産物であるジクロロアセトアミドの分離
前記＜１−１＞で得た透明な溶液に過量のＮａＣｌを加えて、メチルジクロロアセテートの分解産物を塩析（ｓａｌｔｉｎｇ−ｏｕｔ）させた。ここにエチルアセテートを加えた。塩析された生成物をエチルアセテート相に移し、水層から分離した。ＭｇＳＯ4 無水物を加えてエチルアセテート内に存在する水を除去し、濾過した後、回転蒸発器（Ｅｙｅｌａ  Ｍｏｄｅｌ  Ｎ−１０００）を用いてエチルアセテートを蒸発除去した。残存物中に残っているエチルアセテートを無くす為に、ＣＨＣｌ3 で一度洗滌後、真空乾燥して白色の粉末を得た。
【００３４】
＜１−３＞ＮＭＲ及びＭＳ実験によるジクロロアセトアミドの同定
前記＜１−２＞で得た白色の粉末に対して下記の通り、ＮＭＲ及びＭＳ実験を行った；白色の粉末をアセトン−ｄ６に溶解し、ＮＭＲを利用して1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを観察して図３に示した。この際、テトラメチルシランに対して1Ｈケミカルシフトを測定した。図３に見られる通り、δＨ７．４６と７．０８で２個のアミドプロトンシグナルが観測された。さらに、２個の塩素基を有する炭素に結合するプロトンのシグナルはδＨ６．３０で表れた。さらに、Ｑ−ｔｏｆ（登録商標）２質量分析計を利用してエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）を観察して図４に示した。図４に見られる通り、ｍ／ｚ１４９．９３で［Ｍ＋Ｎａ+］ピークが、ｍ／ｚ１５１．９３で［Ｍ＋２＋Ｎａ+］ピークが、さらに、ｍ／ｚ１５３．９３で［Ｍ＋４＋Ｎａ+］ピークが表れた。２個の塩素基を有する化合物の場合、［Ｍ＋Ｎａ+］、［Ｍ＋２＋Ｎａ+］、［Ｍ＋４＋Ｎａ+］ピークの強度が理論的に１００、６５．３及び１０．６％であることを考慮すると、本実験の測定値は理論値と完全に一致した。前記1Ｈ−ＮＭＲ及びＥＳＩ−ＭＳ実験結果から、メチルジクロロアセテートが加アンモニア分解反応を介してジクロロアセトアミドに変換されることが確認できた。
【００３５】
前記の実験結果により、加アンモニア分解反応を介して水不溶性有機溶媒であるメチルジクロロアセテートが、水溶性有機溶媒であるジクロロアセトアミドとメタノールに変換されることが確認できた。
【００３６】
＜実施例２＞
メチルクロロアセテートを利用した加アンモニア分解反応
＜２−１＞メチルクロロアセテートの加アンモニア分解反応
本発明の発明者は加アンモニア分解反応を介して水不溶性有機溶媒を、水と完全に混合する溶媒に変換できることを確認する為に、水不溶性有機溶媒としてメチルクロロアセテート（水溶解度は２５℃で４６ｇ／ｌである）を用いて下記のような実験を行った。
【００３７】
水４０ｍｌに４ｍｌのメチルクロロアセテートを加え、ホットプレート撹拌機（４００ＨＰＳ／ＶＷＲ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ)を利用して３分間撹拌して乳剤を造った。次いで乳剤に４ｍｌのアンモニア水（濃度約３０％）を加えた。１０分経過後、水に分散されたメチルクロロアセテート滴粒子が完全に消え去り、乳剤が単一相の溶液に変換された。
【００３８】
さらに、水４０ｍｌにアンモニア水４ｍｌが添加された水溶液に、メタノリックフェノルフタレイン溶液１００μｌを添加して、メチルクロロアセテート４ｍｌを混合した。次いで前記混合液１ｍｌを採り、Ｕ−３０００ＵＶ／Ｖｉｓスペクトロメータ）（Ｓｈｉｍａｄｚｕ社、京都、日本）を利用して５５０ｎｍで吸光度を時間を変えて測定し、結果を図５に示した。図５に示した通り、メチルクロロアセテートが添加されない場合、吸光度の変化がなかった。しかしメチルクロロアセテートが添加された場合、吸光度が急激に減少した。
【００３９】
前記結果から、メチルクロロアセテートが加アンモニア分解反応を経て、クロロアセトアミドとメタノールに変換され水と完全に混合することがわかった。
【００４０】
＜２−２＞メチルクロロアセテートの分解産物であるクロロアセトアミドの分離
前記＜２−１＞で得た透明な溶液に過量のＮａＣｌを加えて塩析してクロロアセトアミドを沈殿させた。次いでこれにエチルアセテートを３０ｍｌずつ３回加えた。クロロアセトアミドをエチルアセテート相に移し、水層から分離した。ＭｇＳＯ4 無水物を加えてエチルアセテート中に存在する水を除去して、セライト（ｃｅｌｉｔｅ）を通して濾過した後、減圧下でエチルアセテートを蒸発させ白色の粉末を得た。
【００４１】
＜２−３＞ＮＭＲ及びＭＳ実験を介したクロロアセトアミドの同定
前記＜２−２＞で得た白色の粉末に対して下記の通り、ＮＭＲ及びＭＳ実験を行った；白色粉末を重水素化されたトリクロロメタン（ＣＤＣｌ3)に溶解した後、ＮＭＲを利用して1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを観察して結果を図６Ａに示した。この際、テトラメチルシランに対して1Ｈケミカルシフトを測定した。図６Ａで見られる通り、δＨ６．５５と６．０４において２個のアミドプロトンシグナルが観測された。さらに、１個の塩素基を有する炭素に結合するプロトンのシグナルはδＨ４．０５で表れた。
【００４２】
さらに、Ｑ−ｔｏｆ２質量分析計を利用してエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）を観察して、その結果を図６Ｂに示した。図６Ｂで見られる通り、ｍ／ｚ１１６．０１で［Ｍ＋Ｎａ＋］ピークが、さらに、ｍ／ｚ１１８．０１で［Ｍ＋２＋Ｎａ＋］ピークが表れた。前記２個のピークの比は３：１であり、37Ｃｌの存在量と一致する。
【００４３】
前記1Ｈ−ＮＭＲ及びＥＳＩ−ＭＳの実験結果から、メチルクロロアセテートが、加アンモニア分解反応を介してクロロアセトアミド（Ｃ2Ｈ4ＣｌＮＯ）に変換されたことを確認することができた。具体的に、加アンモニア分解反応を介して水不溶性有機溶媒であるメチルクロロアセテートが水溶性有機溶媒であるクロロアセトアミドとメタノールに変換されたことを確認できた（図７参照）。
【００４４】
＜実施例３＞
メチルジクロロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球
＜３−１＞メチルジクロロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球の製造
微小球形成のための高分子化合物としてラクチド：グリコライド比が７５：２５のポリ−ｄ，１−ラクチド−コ−グリコライド（ＣＨＣｌ3での固有粘度０．６７ｄＬ／ｇ；以後ＰＬＧＡと呼ばれる）を用いた。微小球に封入する疎水性薬物としてリスペリドン（中国ｃｈａｎｇｚｈｏｕ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入）を使用した。ＰＬＧＡ（２５０ｍｇ）を３ｍｌのメチルジクロロアセテートに完全に溶解した後、リスペリドン（１２５，１７５又は２２５ｍｇ）を入れて溶解した。ＰＬＧＡ、リスペリドン及びメチルジクロロアセテートで構成された分散相を４０ｍｌの１％ポリビニルアルコール（分子量＝２５，０００;８８％加水分解）水溶液に入れ乳化させた。この際、乳剤を造る為にマグネチック撹拌器を使用し、マグネチックバーの撹拌速度は５５０ｒｐｍに維持した。撹拌を開始して３分後、乳剤に３ｍｌのアンモニア水（アンモニア濃度約３０％）を加え、１５分間継続して撹拌した。形成された微小球懸濁液を４２５μmの大きさを有する篩を通した。次いで、濾過により微小球を採り１００ｍｌの０．１％ポリビニルアルコール水溶液中に分散させた。４５分経過後、微小球を濾過分離して、１００ｍｌの０．１％ポリビニルアルコール水溶液に再分散させた後、２時間撹拌した。濾過過程により取得した微小球を真空状態で一夜乾燥させた。乾燥後、微小球は優れた流動性を備えていることを確認した。これは乾燥過程中の微小球間の凝集現象が大きくなかったことを示す。さらに、微小球の収率が７６．４から８６．４％と観測された。本発明による方法により微小球が効果的に製造されたことがわかる。
【００４５】
＜３−２＞熱重量分析（ｔｈｅｒｍｏｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ）
ＰＬＧＡ２５０ｍｇとリスペリドン１２５ｍｇを用いて製造した微小球について、熱重量分析器ＴＧＡ２０５０（米国ＴＡインストルメンツ社製）を使用して熱重量を分析した。結果を図８に示した。この際、窒素ガスを使用し、温度を１分当たり１０℃ずつ増加させた時の、微小球の重量変化を測定した。図８に見られる通り、メチルジクロロアセテートの沸点である１４２．９℃においては急激な重量変化は観察されなかった。この結果は、微小球製造の際、メチルジクロロアセテートが、水溶解性のジクロロアセトアミドとメタノールに変化され、乳剤滴から効果的に除去され、微小球が形成されたことを示している。
【００４６】
＜３−３＞薬物のＨＰＬＣ薬物分析
シマズ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）ＨＰＬＣシステムを薬物分析に用いた。分析カラムとして長さ１５ｃｍのシメトリ（Ｓｙｍｍｅｔｒｙ）Ｃ１８カラム（５μｍ）を用いた。移動相として１０ｍＭアンモニウムアセテートとメタノールの混合溶液（６：４容量比）を用い、移動相流速を１ｍｌ／分に維持した。ＨＰＬＣカラムから流出される薬物を波長２６０ｎｍのＵＶで測定した。検体の薬物濃度は４種の薬物濃度を用いて作成した標準検量曲線を基に算出した。
【００４７】
＜３−４＞リスペリドンの封入率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）測定
リスペリドンを含有しているＰＬＧＡ微小球の一部を正確に秤量した後、４ｍｌのテトラヒドロフランに完全に溶解させた。ここに１６ｍｌのメタノールを加え、０．４５μｍのポアサイズを有するナイロンフィルターで濾過した。ＰＬＧＡ沈殿物を除去し、濾液を調製した。濾液の一部（２０μｌ）をＨＰＬＣに注入して薬物の濃度を測定した。下記数式１乃至３により、薬物の理論含有量（％）及び実際の含有量（％）を求め、その百分率を薬物の封入率（％）として定義した。
【００４８】
数式１：
理論含有量％＝１００×（使用された薬物量（ｍｇ））／（使用したＰＬＧＡ量（ｍｇ）＋使用した薬物量（ｍｇ））
数式２：
実際の含有量％＝１００×（ 微粒子中に存在する薬物量（ｍｇ））／（含有量測定の為に使用した微粒子量（ｍｇ））
数式３：
薬物封入率％＝１００×実際の含有量％／理論含有量％
【００４９】
ＰＬＧＡ２５０ｍｇとリスペリドン１２５ｍｇを使用した時、封入率は９７．０±２．１％であった。ＰＬＧＡの量は固定され、リスペリドンの使用量を１７５と２２５ｍｇに増加した時、それぞれの場合封入率は９４．５±２．０％及び９２．７±３．２％であった。このような結果は本発明の方法により微小球を製造する場合に、リスペリドンの大部分をＰＬＧＡ微小球内に封入し得ることを示す。
【００５０】
＜３−５＞微小球形状観察
本発明により製造された微小球の内部及び外部形状をＪＳＭ−５２００走査電子顕微鏡を用いて観察して、図９Ａ乃至９Ｄに示した。 図９Ａは微小球の外部形状を示しており、球状の形態で良く分散されていることがわかる。図９Ｂ乃至図９Ｄの切断された微小球の内部写真はリスペリドン含有量に関係なく類似した形状を示しており、マトリックス内に小さい空洞（ｃａｖｉｔｙ）が観察された。すなわち本発明によれば、微小球が凝集現象なしによく分散された状態で製造されることが示された。
【００５１】
＜比較例＞
溶媒蒸発法（ｓｏｌｖｅｎｔ  ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）を利用したＤＣＭ微小球の製造
本発明者等は従来の溶媒蒸発法を利用したＰＬＧＡ微小球と、本発明の方法で製造されたＰＬＧＡ微小球を比較する為に下記のような方法で微小球を製造した。ＰＬＧＡ（２５０ｍｇ）を４ｍｌのジクロロメタンに完全に溶解した後、プロゲステロン（６０，１００，１６０，２００又は２５０ｍｇ）を入れて溶解した。ＰＬＧＡ、プロゲステロン及びジクロロメタンで構成された分散相を４０ｍｌの０．５％ポリビニルアルコール水溶液に入れて乳化させた。この際、乳剤を造る為にマグネチック撹拌器を用い、マグネチックバーの撹拌速度は５５０ｒｐｍに維持した。５時間撹拌後形成された微小球懸濁液を４２５μｍのサイズを有する篩を通した。次いで、濾過により微小球を採り、真空状態で一夜乾燥させ、ＰＬＧＡ微小球を製造した。以下、前記過程により製造されたＰＬＧＡ微小球を“ＤＣＭ微小球”と称する。
【００５２】
＜実施例４＞
メチルクロロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球（以下“ＭＣＡ微小球”）
＜４−１＞メチルクロロアセテートを利用したＭＣＡ微小球の製造
微小球形成のための高分子化合物として実施例＜３−１＞で利用したＰＬＧＡを使用した。微小球に封入する疎水性薬物としてプロゲステロンを使用した。ＰＬＧＡ（２５０，３００又は３５０ｍｇ）を４ｍｌのメチルクロロアセテートに完全に溶解させた後、プロゲステロン（６０，１００，１６０，２００又は２５０ｍｇ）を入れて溶解した。ＰＬＧＡ、プロゲステロン及びメチルクロロアセテートで構成された分散相を４０ｍｌの０．５％ポリビニルアルコール水溶液に入れて乳化させた。この際、乳剤を造る為に、マグネチック撹拌器を使用し、マグネチックバーの撹拌速度は５５０ｒｐｍに維持した。撹拌開始３分後、乳剤に４ｍｌのアンモニア水（濃度２８％）を加え、１０分間撹拌した。次いで、４０ｍｌの水を加えて５分間追加撹拌した。次いで、形成された微小球懸濁液を４２５μｍのサイズを有する篩を通した。濾過により微小球を採り、８０ｍｌの０．１％ポリビニルアルコール水溶液に分散させた。２時間後、微小球を濾過分離して、真空状態で一夜乾燥させ、ＰＬＧＡ微小球を製造した。以下前記過程を介して製造されたＰＬＧＡ微小球を“ＭＣＡ微小球”と称する。
【００５３】
＜４−２＞プロゲステロン封入率の測定
プロゲステロンを含有している前記実施例＜４−１＞の微小球（“ＭＣＡ”微小球）のメディアン径（ｍｅｄｉａｎ  ｓｉｚｅ）をマスタサイザー２０００（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、英国）を利用して正確に測定し、４ｍｌのテトラヒドロフランに完全に溶解させた。ここに２４ｍｌのメタノールを加え、０．４５μｍのポアサイズを有するナイロンフィルタで濾過した。ＰＬＧＡ沈殿物を除去し、濾液を調製した。濾液の一部（２０μｌ）をＨＰＬＣに注入して、薬物の濃度を測定した。実施例＜３−４＞に記載された数式を利用して薬物封入率（％）を計算し、下記数式４を利用して微小球の生産率を計算した。その結果を表１に記載した。
【００５４】
数式４：
生産率＝１００×回収された微粒子重量／（使用したＰＬＧＡ量＋使用したプロゲステロン量）
【００５５】
【表１】
2010502594.tif 000003
【００５６】
一方、前記実施例＜４−１＞で製造された微小球である“ＭＣＡ微小球”（ＰＬＧＡ投与量が２５０ｍｇの場合に限る）と前記比較例で製造された微小球である“ＤＣＭ微小球”の投与されたプロゲステロンの量に伴う封入率を測定して図１０に記載した。図１０に示した通り、ＭＣＡ微小球ではプロゲステロンの量を多く投与する程、封入率は徐々に増加し、プロゲステロン投与量が２５０ｍｇの場合、封入率は７２．８±０．３％に達し、ＤＣＭ微小球では７５．２±３．８％乃至７８．６±３．１％の封入率を示した。従って、ＭＣＡ微小球での封入率は、プロゲステロンの量を多く投与する場合、ＤＣＭ微小球の封入率と殆ど一致した。
【００５７】
従って、メチルクロロアセテートを使用して、加アンモニア分解反応により製造されたＭＣＡ微小球は、プロゲステロン投与量が多い程封入率が優れ、有用な薬物含有高分子微小球に利用できることがわかった。
【００５８】
＜４−３＞熱重量分析
実施例＜４−１＞と同一な方法により製造されたプロゲステロン１２．４、２７．４、及び３６．４％のＭＣＡ微小球と、比較例と同一な方法により製造されたプロゲステロン１５．２、２９．４、及び３８．６％のＤＣＭ微小球を対象に熱重量分析器ＴＧＡ２０５０（米国ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）を用いて熱重量分析をした結果を、図１１に示した。この際、窒素ガスを使用し、温度を１分当たり１０℃ずつ増加させて、微小球等の重量変化を測定した。
【００５９】
図１１Ａに示した通り、ＤＣＭ微小球では１５０℃でジクロロメタンの蒸発により重量の０．５〜２．３％の損失があり、これは典型的な溶媒蒸発過程で起こる現象と一致する（Ｂｅｎｏｉｔ，Ｔ．Ｓ．；Ｃｏｕｒｔｅｉｌｌｅ，Ｆ．；Ｔｈｉｅｓ，Ｃ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１９８６，２９，９５−１０２）。しかし、図１１Ｂに示した通り、ＭＣＡ微小球では重量の１．６〜３．５％の損失があり、メチルクロロアセテートの沸点である１２９．５℃においては、急激な重量損失はなかった。この結果は、加アンモニア分解反応が効果的に乳剤滴から分散溶媒を除去したことを意味する。
【００６０】
＜４−５＞微小球形状観察
実施例＜４−１＞及び比較例と同一な方法により製造された微小球等の表面及び内部形状を、ＪＳＭ−５２００走査電子顕微鏡を用いて観察した。
実施例＜３−４＞に記載された数学式２によりプロゲステロンの実際の含有量が１５．２、２１．７、２９．４及び３８．６％であるＤＣＭ微小球の表面形状をそれぞれ図１２Ａのａ、ｂ、ｃ及びｄに図示した。図１２Ａに示した通り、ＤＣＭ微小球において、プロゲステロン含量が増加する程、プロゲステロン結晶体が形成され、微小球の表面が損傷されることを確認した。
【００６１】
さらに、プロゲステロンの実際の含有量が１２．４、１８．７、２７．４、及び３６．４％のＭＣＡ微小球の表面形状をそれぞれ図１２Ｂのａ、ｂ、ｃ及びｄに図示した。図１２Ｂに示した通り、プロゲステロン含量が増加する程かえって欠点がなくなり、球形の微小球が形成され、ＤＣＭ微小球で表れた結晶体（ｄｒｕｇ  ｃｒｙｓｔａｌ）形成が抑制されることを確認した。
【００６２】
さらに、プロゲステロンの実際の含有量が１５．２、２１．７、２９．４及び３８．６％のＤＣＭ微小球の内部形状をそれぞれ図１３Ａのａ、ｂ、ｃ及びｄに示した。図１３Ａに示した通り、ＤＣＭ微小球においては、プロゲステロン含量が増加する程プロゲステロンの結晶化が起こり、プロゲステロンとＰＬＧＡポリマー間の相分離を加速化させる。最終的には微小球の内部マトリックスが歪むことを確認した。
【００６３】
さらに、プロゲステロンの実際の含有量が１２．４、１８．７、２７．４、及び３６．４％のＭＣＡ微小球の表面形状をそれぞれ図１３Ｂのａ、ｂ、ｃ及びｄに示した。図１３Ｂに示した通り、マトリックス内に小さい空洞（ｃａｖｉｔｙ）が観察された。しかしＤＣＭ微小球と比較すると、プロゲステロン含量の増加に伴う変化は観察されなかった。
【００６４】
従って、プロゲステロン投与量が多い場合でも、ＭＣＡ微小球の表面及び内部形態は維持され、有用な薬物含有高分子微小球として利用できることが示された。
【００６５】
＜実施例５＞
エチルクロロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球
＜５−１＞エチルクロロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球の製造
微小球形成高分子化合物として、実施例＜３−１＞で利用したＰＬＧＡを使用した。微小球に封入する疎水性薬物としてプロゲステロンを使用した。２５０ｍｇのＰＬＧＡを４ｍｌのエチルクロロアセテートに完全に溶解した後、プロゲステロン（６０，１００，１６０，２００，又は２５０ｍｇ）を入れて再度溶解した。次いで、前記溶液を４０ｍｌの０．５％ポリビニルアルコール水溶液に入れ、５５０ｒｐｍで撹拌した。３分後、乳剤にアンモニア水（２８％）９ｍｌを入れ、６０分間追加撹拌した。次いで実施例＜４−１＞と同一な方法でＰＬＧＡ微小球を製造した。
【００６６】
＜５−２＞プロゲステロン封入率の測定
プロゲステロンが含まれている前記実施例＜５−１＞の微小球のメディアン径をマスタサイザー２０００（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、英国）を利用して正確に測定し、４ｍｌのテトラヒドロフランに完全に溶解させた。ここに２４ｍｌのメタノールを加え、０．４５μｍのポアサイズを有するナイロンフィルタで濾過した。ＰＬＧＡ沈殿物を除去し、濾液を調製した。濾液の一部（２０μｌ）をＨＰＬＣに注入して、薬物の濃度を測定した。実施例＜３−４＞に記載された数式を利用して薬物の封入率（％）を計算し、その結果を表２に記載した。
【００６７】
【表２】
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【００６８】
前記表２に記載された通り、エチルクロロアセテートを利用して、加アンモニア分解反応により製造されたＰＬＧＡ微小球のプロゲステロン封入率は８４．７７±０．７５乃至８７．９６±１．２２に達し、有用な薬物含有高分子微小球として利用できることが示された。
【００６９】
＜５−３＞微小球形状観察
実施例＜５−１＞と同一な方法で製造されたプロゲステロンの実際の含有量が４３．１％のＰＬＧＡ微小球の表面形状（図１４Ｂ）をＪＳＭ−５２００走査電子顕微鏡を用いて、プロゲステロンを含有しないＰＬＧＡ微小球（図１４Ａ）と比較観察した。
【００７０】
図１４に図示した通り、プロゲステロンを投与しても、ＰＬＧＡ微小球はその表面形態を維持し、有用な薬物含有高分子微小球として利用できることが示された。
【００７１】
＜実施例６＞
エチルフルオロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球
＜６−１＞エチルフルオロアセテートを利用したＰＬＧＡ微小球の製造
微粒子形成高分子化合物として実施例＜３−１＞で利用したＰＬＧＡを用いた。微小球に封入する疎水性薬物としてプロゲステロンを用いた。２５０ｍｇのＰＬＧＡを４ｍｌのエチルフルオロアセテート（Ｅｔｈｙｌ  ｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）に完全に溶解させ、プロゲステロン（６０，１００，１６０，２００，又は２５０ｍｇ）を入れて溶解した。実施例＜５−１＞と同一な方法でＰＬＧＡ微小球を製造した。
【００７２】
＜６−２＞プロゲステロン封入率の測定
プロゲステロンを含有している前記実施例＜６−１＞の微小球のメディアン径をマスタサイザー２０００（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、英国）を利用して正確に測定し、４ｍｌのテトラヒドロフランに完全に溶解させた。ここに２４ｍｌのメタノールを加え、０．４５μｍのポアサイズを有するナイロンフィルタで濾過した。ＰＬＧＡ沈殿物を除去し、濾液を調製した。濾液の一部（２０μｌ）をＨＰＬＣに注入して、薬物の濃度を測定し、実施例＜３−４＞に記載された数式を利用して薬物の封入率（％）を計算し、その結果を表３に記載した。
【００７３】
【表３】
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【００７４】
前記表３に記載された通り、エチルフルオロアセテートを利用して、加アンモニア分解反応により製造されたＰＬＧＡ微小球のプロゲステロン封入率は８１．１６±２．４０乃至８４．５６±２．０２に達し、有用な薬物含有高分子微小球として利用できることが示された。
【００７５】
＜６−３＞微小球形状観察
実施例＜６−１＞と同一な方法で製造されたプロゲステロンの実際の含有量が４２．３％のＰＬＧＡ微小球の表面形状（図１５Ｂ）をＪＳＭ−５２００走査電子顕微鏡を用いて、プロゲステロンを含有しないＰＬＧＡ微小球（図１５Ａ）と比較観察した。
【００７６】
図１５に示した通り、プロゲステロンを投与してもＰＬＧＡ微小球はその表面形態を維持し、有用な薬物含有高分子微小球として利用できることが示された。
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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