(57)【要約】  癌細胞の標的認識を伴う、微細藻類への活性且つ侵攻性である分子の導入方法。本発明は、まずプラスミド、及び／または特定の分子に対する耐性を有する遺伝子を発生させている微細藻類への活性分子の導入に関する。本発明の方法は、特にヒト医学または獣医学向けであることを企図する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗癌分子を含み、且つ抗癌分子への耐性を示す、シアノバクテリア、特にアースロスピラ・プラテンシスの培養物を調製する方法であって、（ｉ）無機塩及び十分なバイオマスをもたらす癌細胞のホモジネートを含む適切な培養培地中でシアノバクテリアを培養する工程、次いで（ｉｉ）前記培養培地に抗癌分子を添加する工程を含む方法。  
【請求項２】
適切な培養培地が、アルカリ媒体であることを特徴とする、請求項１に記載のシアノバクテリア、特にアースロスピラ・プラテンシスの培養物を調製する方法。
【請求項３】
癌細胞が、熱ショックに晒されていることを特徴とする、請求項１または２に記載のシアノバクテリア、特にアースロスピラ・プラテンシスの培養物を調製する方法。
【請求項４】
抗癌分子の添加が、前記培養培地中の抗癌分子の連続的な希釈によって達成され、結果として、これら抗癌分子への耐性を表す、任意の選択のシアノバクテリアの突然変異型を発現させることを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか一項に記載のシアノバクテリア、特にアースロスピラ・プラテンシスの培養物の調製方法。
【請求項５】
（ｉｉｉ）培養培地を、高周波で振動させた電磁場に暴露する工程を更に含む、請求項１乃至４のいずれか一項に記載のシアノバクテリア、特にアースロスピラ・プラテンシスの培養物の調製方法。
【請求項６】
人又は家畜への使用のための医薬組成物を調製するための、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の方法によって得られるシアノバクテリア、特にアースロスピラ・プラテンシスの培養物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法の副作用の相当な軽減を可能にする一方で、その最高の生物学的利用能を維持する分子のベクターを提案するための、微細藻類のための培養培地への活性分子の添加を可能にする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
通常の状況下では、細胞毒性分子、例えば、DNAシステムに関与する様々な分子の合成を妨げることによって作用する代謝拮抗物質、及びアルキル基を含む分子であるアルキル化剤、並びに微生物からの抽出物、例えばダウノルビシンは、癌細胞のアポトーシスをもたらす。残念ながら、これらの作用剤の全てが癌細胞に特異的であるわけではなく、いわゆる正常細胞、特に血液細胞系が相当に影響を受ける。
【０００３】
これらの選択されたベクターはシアノバクテリアである。
薬剤及び分子は、微細藻類に混合はされず、添加される。
分子は、本質的に抗癌剤であり、選択される抗癌剤の中では、タキソテール、キナーゼ阻害剤、フラボピリドール、ロスコビチン、エンドキサン、ドキソルビシン、またはリシンＡ等が挙げられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これらの活性分子は、その組成により、ベクターの細胞拡散における機能不全を誘発し、然るにこれらはそのまま使用することが不可能である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
選択された微細藻類の中でも、発明者は、フランスの公衆衛生審議会によって人及び動物の消費が認可されているスピルリナ（アルスロスピラ・プラテンシス）を本質的に使用する。
【０００６】
このシアノバクテリアは、単独で人体への既知の効果を有する。これはタンパク質含有率が非常に高く（65%）、ビタミン、ミネラル、多糖類、ペプチド類、及び色素類を含む。
【０００７】
更にまた、これらは特にイオン化もしくは化学的過程によって自然に分子を結合させることができるという重要な機能を有するが、抗癌分子に関しては、これら抗癌分子に対する耐性を示すシアノバクテリアの突然変異体の任意の選択を発現させていなければ、こうした侵攻性分子を誘導することも結合させることもできない。
【０００８】
本発明の主題は、熱ショックに晒されている腫瘍細胞のホモジネートを本質的に含むアルカリ培養培地中で微細藻類を培養する工程を含むことを特徴とする、シアノバクテリア、特にスピルリナ（アルスロスピラ・プラテンシス）における突然変異体の任意の選択の開発である。
【０００９】
微細藻類の培養は、有用なバイオマスが得られるまではモノクローナルに起こり、ヒト由来の腫瘍細胞は既存のウィルスの全て（HTV3 B型肝炎、C型肝炎、ヘルペス、巨大ウイルス等）に晒されている。
【００１０】
本発明の特段の主題は、幾つかの工程を含むことを特徴とする、抗癌分子の生理学的誘導並びに抗癌分子の添加及び内在化のための方法である。
【００１１】
特に、腫瘍細胞の存在下での微細藻類の培養後には、前記シアノバクテリアは、1000分の1乃至5の希釈物である、塩化ナトリウム及び抗癌分子の適当な培地中で再培養される。特定の抗癌分子のこの添加の方法は、溶液を含む適当な培養培地中での希釈率の低減によって開始され、よって組成（g/リットル）は下記の通りである：
・ NaOHCO3       15.6
・ K2HPO4         0.6
・ NaNO3          2.1
・ K2SO4           0.9
・ NaCl            1.6
・ MgSO4          8
・ HO2            0.2
・ CaCl2           0.04
・ FeSO4           7
・ EDTA          0.08
・ ZnSO4           7
・ CuSO4           5
・ NiSO4          0.047
・ 十分量の生理水。 
【００１２】
活性分子は、この溶液中に、例えば1/5000、1/2500、1/1250、1/625、1/300、1/100、1/50、1/10、及び1/5に希釈される。
【００１３】
抗癌分子との接触が徐々に減少するシアノバクテリアは、これら前記の分子を受容することから容易に確認されうる突然変異型、あるいは比較または単純な核型分析によって確認されうる耐性遺伝子の任意の選択を生じさせる。こうして、シアノバクテリアは、（ヒト医学または獣医学において）疾患の治療のために使用することのできる、有用な荷重を有する。投与量は、患者の体重及び疾患の重篤度の関数として調節可能である。
【００１４】
本発明は、本質的に、特定の突然変異型及び／または所与の抗有糸分裂薬に耐性の任意の遺伝子の、任意の選択の作製から始まる。これは、予め突然変異型の任意の選択を作製しておくことなしには、いわゆる侵攻性分子のいかなる導入もあり得ないためである。
【００１５】
微細藻類タンパク質は、腫瘍タンパク質を幾度か認識しており、これがターゲットとする癌細胞を特に認識することになる。これは抗体受容体効果を有する。抗有糸分裂薬がロードされたこれらの蛋白質は、血漿ピーク及び化学療法による副作用を避ける一方で別の細胞を攻撃することがなく（もしくは、非常に僅かであり）、（様々な細胞分裂に段階に対して作用することにより）癌細胞の破壊を引き起こす。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
【化１】
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【００１７】
活性の細胞毒性分子、例えばタキソテールのアミノ酸への導入の例。
【００１８】
アミノ酸への抗有糸分裂分子のこの導入を促進するためには、その後培養培地は、数kV.cm-1の高周波（1GHz）で振動させた電磁場の作用に晒される。これに次いで、蛋白質分子の所定の部分が共鳴し、且つ自由に回転するようになる（いわゆるδ緩和）。かくして化学結合の活性化エネルギーのレベルは適合性であり、巨大分子の結合は非常に促進される。  
【国際調査報告】
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