(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びｍは、明細書および請求項で定義されたとおりである）の新規ベンゾトリアゾール誘導体、ならびにその生理学的に許容しうる塩に関する。これらの化合物はＪＮＫおよびＣＤＫモジュレーターである。
2010502668.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化３３】
2010502668.tif 000058
［式中、
Ｒは、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、または
【化３４】
2010502668.tif 000059
から選択される基であり、
ここで、
各々のＲａは、独立に、Ｈ、低級アルキル、ＯＨ、またはヒドロキシ低級アルキルであり；
各々のＲｂは、独立に、Ｈ、低級アルキル、ハロ、ニトロ、またはハロ低級アルキルであり；
ｐは、１、２、３、または４であり；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ４Ｒ５、Ｃ（＝Ｏ）、またはＳ（Ｏ）ｘであり；
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、またはＮＨ２であり；
Ｒ３の各々は、独立に、ハロ、−ＮＯ２、低級アルキル、−ＣＮ、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７、
―Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＳＯ２−Ｒ１０であるか、またはＲ３の２個はアルキレンジオキシを形成し；
Ｒ４は、水素、低級アルキル、シアノ、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、
−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７；−ＮＲ７−ＳＯ２−Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１、または−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ６であり；
Ｒ５は、水素またはアルキルであるか；
あるいはＲ４およびＲ５は、一緒になって、アルキレンジオキシを形成し；
Ｒ６は、水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ１０は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ１１は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、または（ヘテロシクリル）アルキルであり；
Ｒ２およびＲ７は、各々独立に、水素または低級アルキルであり；
Ｒ８は、水素、低級アルキル、またはアシルであり；
Ｒ９は、水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキルであるか；
あるいはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によりＯＨ、オキソ、低級アルキル、低級アルコキシ、またはアシルで置換されている、少なくとも１個の窒素環原子を含むヘテロシクリルを形成し；
ｍおよびｘの各々は、独立に、０〜２の整数であり；
Ｙは、水素、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７または−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７であり；
ｙおよびｚの各々は、独立に、０または１であり；
ｎは０〜４の整数である］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｒ２が、水素またはメチルである、請求項１の化合物。
【請求項３】
ｍが０である、請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、水素、メチル、クロロ、またはフルオロである、請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｘが、ＣＲ４Ｒ５である、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ５が、水素またはメチルである、請求項５の化合物。
【請求項７】
ｚが１であり、Ｒ４が、−ＮＲ７−ＳＯ２−Ｒ１０である、請求項５の化合物。
【請求項８】
Ｒ７が、水素またはメチルであり、Ｒ１０が、メチル、エチル、または−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項７の化合物。
【請求項９】
ｚが１であり、Ｒ４が、水素、低級アルキル、シアノ、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、もしくは−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９であるか、またはＲ４およびＲ５が、一緒になって、アルキレンジオキシを形成している、請求項５の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７であり、ｎが０または１であり、Ｒ７が、水素またはメチルである、請求項９の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９である、請求項９の化合物。
【請求項１２】
ｎが０であり、Ｒ８が水素であり、Ｒ９が、水素、ピリミジン−２−イル、またはピリジン−２−イルである、請求項１１の化合物。
【請求項１３】
ｎが０であり、Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルを形成している、請求項１１の化合物。
【請求項１４】
Ｒ４が、水素、メチル、エチル、またはシアノである、請求項９の化合物。
【請求項１５】
Ｒ４およびＲ５が、一緒になって、エチレンジオキシを形成している、請求項９の化合物。
【請求項１６】
ｚが１であり、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１（ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ１１は、請求項１に定義したものである）である、請求項５の化合物。
【請求項１７】
ｎが０であり、Ｒ８が、水素またはメチルであり、Ｒ１１が、メチル、エチル、メトキシメチル、ヒドロキシメチル、（モルホリン−４−イル）メチル、または（４−メチル−ピペラジン−１−イル）メチルである、請求項１６の化合物。
【請求項１８】
ｚが１であり、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９である、請求項５の化合物。
【請求項１９】
ｎが０であり、Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリン−４−イル、ピロリジン−１−イル、または４−メチル−ピペラジン−１−イルを形成している、請求項１８の化合物。
【請求項２０】
ｎが０であり、Ｒ８が水素またはメチルであり、Ｒ９が、（２−アミノ−２−メチル）プロピル、（２−ヒドロキシ）エチル、テトラヒドロピラン−４−イル、シクロプロピル、またはエチルである、請求項１８の化合物。
【請求項２１】
ｚが１であり、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７である、請求項５の化合物。
【請求項２２】
ｎが０であり、Ｒ７が、水素またはメチルである、請求項２１の化合物。
【請求項２３】
Ｒ４およびＲ５が、水素であり、ｚが０であり、ｙが１であり、Ｙが、シクロペンチル環部分の３位のヒドロキシである、請求項５の化合物。
【請求項２４】
Ｒ４およびＲ５が、水素であり、ｚが１であり、ｙが１であり、Ｙが、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、またはシクロヘキシル環部分の２位の−ＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３基である、請求項５の化合物。
【請求項２５】
ｚが１であり、Ｘが、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、またはＳＯ２である、請求項１の化合物。
【請求項２６】
Ｒが、
【化３５】
2010502668.tif 000060
であり、ｚが１であり、Ｘが、ＯまたはＣＲ４Ｒ５である、請求項２の化合物。
【請求項２７】
Ｘが、Ｏである、請求項２６の化合物。
【請求項２８】
Ｘが、ＣＲ４Ｒ５である、請求項２６の化合物。
【請求項２９】
Ｒ４が、−ＯＨ、−ＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｒ９、または−ＮＲ７ＳＯ２Ｒ１０である、請求項２８の化合物。
【請求項３０】
式（Ｉａ）：
【化３６】
2010502668.tif 000061
の化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）：
【化３７】
2010502668.tif 000062
の化合物または式（ＩＩＩ）：
【化３８】
2010502668.tif 000063
の化合物を、ＲＮＨ２と反応させる工程を含む、製造方法（Ｒ、Ｒ１およびＲ３は、請求項１に定義したとおりであり、ＹはＣｌまたはＳＭｅであり、Ｚは、ＭｅＳＯ２またはＣｌである）。
【請求項３１】
請求項１〜２９のいずれか一項の化合物および薬学的に許容しうる賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３２】
治療用物質として使用するための、請求項１〜２９のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３３】
ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼが介在する障害の治療的および予防的処置用の医薬を製造するための、請求項１〜２９のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項３４】
ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼが介在する障害が、自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝障害、神経障害、または癌である、請求項３３記載の使用。
【請求項３５】
ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼが介在する障害が、関節リウマチ、喘息、２型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、または脳卒中である、請求項３４記載の使用。
【請求項３６】
先に定義した、特に新規化合物、中間体、医薬、使用および方法に関連する発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）およびサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の調節方法ならびにヘテロ環状化合物、より特定的にはベンゾトリアゾール誘導体でＪＮＫまたはＣＤＫを調節することにより緩和できる疾患または症状で苦しんでいる対象の処置方法に関する。本発明は、さらに、新規なヘテロ環状化合物およびその化合物を含む医薬組成物に関する。
【０００２】
ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）は、ｐ３８と共に、マイトジェン−活性化プロテインキナーゼファミリーの構成員であり、細胞外のシグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）である。１０個のスプライス変異体をコードする３個の異なる遺伝子（ｊｎｋ１、ｊｎｋ２およびｊｎｋ３）が同定されている（Y.T. Ip and R.J. Davis, Curr. Opin. Cell Biol. (1998) 10:205-19）。ＪＮＫ１およびＪＮＫ２は、広汎な組織で発現され、一方、ＪＮＫ３は主としてニューロンで、そしてさらに少ない程度で、心臓および精巣で発現される（D.D. Yang et al., Nature (1997) 389:865-70）。ＪＮＫファミリーのメンバーは、炎症性サイトカイン、例えば腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、ならびに環境ストレスにより活性化される。ＪＮＫの活性化には、Ｔｈｒ−１８３およびＴｙｒ−１８５の二重リン酸化を経由して、その上流のキナーゼ、ＭＫＫ４およびＭＫＫ７が介在する（B. Derijard et al., Cell (1994) 76:1025-37）。ＭＫＫ４およびＭＭＫ７は、外部刺激および細胞状況に依存して、ＭＥＫＫ１およびＭＥＫＫ４を含む様々な上流キナーゼで活性化することができることが示されている（D. Boyle at al., Arthritis Pheum (2003) 48:2450-24）。ＪＮＫシグナリングの特異性は、ＪＮＫ相互作用タンパク質と呼ばれている骨格タンパク質を用いる多成分のキナーゼカスケードを含有するＪＮＫ特異的シグナリング錯体を形成することにより達成される（J. Yasuda et al., Mol. Cell. Biol. (1999) 19:7245-54）。ＪＮＫは、転写因子、例えばｃ−Ｊｕｎ、アクチベータータンパク質−１（ＡＰ−１）ファミリーの成分、およびＡＴＦ２、ならびに非転写因子、例えばＩＲＳ−１およびＢｃｌ−２を含む、特異的な基質をリン酸化することにより、炎症、Ｔ細胞機能、アポトーシスおよび細胞生き残りにおいて重要な役割を果たすことが示されている（A.M. Manning and R.J. Davis, Nat. Rev. Drug Discov. (2003) 2:554-65）。ＪＮＫの過活性化は、自己免疫、炎症、代謝、神経疾患および癌における重要なメカニズムであると考えられる。
【０００３】
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の慢性的な炎症を特徴とする全身性の自己免疫疾患である。炎症プロセスにより引き起こされる関節の腫脹および痛みに加えて、大部分のＲＡ患者は、最終的には、衰弱性関節損傷および変形を発症する。細胞および動物モデルにおける説得力のある薬理学的および遺伝子的証拠のいくつかのラインは、ＲＡの病因において、活性化されたＪＮＫの関与および重要性を強く示唆している。第一に、ＪＮＫの異常な活性化は、ＲＡ患者からのヒト関節炎の関節（G. Schett et al., Arthritis Rheum (2000) 43:2501-12）および関節炎の動物モデルからの齧歯類関節炎の関節（Z. Han et al., J. Clin. Invest. (2001) 108:73-81）の両方で検出された。加えて、選択的ＪＮＫ阻害剤によるＪＮＫ活性化の阻害は、ヒト滑膜細胞、マクロファージおよびリンパ細胞での炎症性サイトカインおよびＭＭＰ産生を妨げた（Z. Hara et al., (2001) 上記）。重要なことには、アジュバント関節炎のラット（Z. Hara et al., (2001) 上記）またはコラーゲン誘起関節炎のマウス（P. Gaillard et al., J Med Chem. (2005) 14:4596-607）への選択的ＪＮＫ阻害剤の投与は、サイトカインおよびコラゲナーゼの発現を阻害することにより、関節を破壊から有効に守り、足の腫脹を有意に減少させた。さらに、ＪＮＫ２欠乏マウスは関節破壊から部分的に守られるが、受動的コラーゲン誘起関節炎モデルでの足腫脹および炎症に対してはほとんど効果を示さなかった。これらの研究は、マトリックスの劣化、炎症および足腫脹におけるそれらの役割に関して、ＪＮＫ２が機能的にＪＮＫ１と重複することを示している。したがって、ＪＮＫ１およびＪＮＫ２活性の双方を合わせて阻害することが、ＲＡの有効な治療に対して必要である（Z. Hara et al., Arthritis Rheum. (2002) 46:818-23）。
【０００４】
喘息は、細胞の炎症過程の存在および気道の構造的変化を伴う気管支の過応答性を特徴とする気道の慢性炎症性疾患である（B. Bradley et al., J. Allergy Clin. Immunol. (1991) 88:661-74）。この障害は、Ｔリンパ細胞、好酸球、肥満細胞、好中球および上皮細胞を含む、気道における多くの細胞タイプにより促進されることが示されている（J. Bousquet et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. (2000) 161:1720-45）。ＪＮＫは、選択的ＪＮＫ阻害剤を用いた喘息の細胞および動物モデルにおける最近のコンセプト証明研究に基づき、喘息に対する有望な治療ターゲットとして浮上している（K. Blease et al., Expert Opin. Emerg. Drugs (2003) 8:71-81）。ＪＮＫ阻害剤は、活性化されたヒト気道平滑細胞におけるＲＡＮＴＥＳ産生を有意に妨げることが示された（K. Kujime et al., J. Immunol. (2000) 164:3222-28）。より重要なことには、ＪＮＫ阻害剤は、慢性ラットおよびマウスモデルにおいて、細胞浸潤、炎症、過応答性、平滑筋増殖およびＩｇＥ産生を減少させるそれらの能力に対して良好な効能を示した（P. Nath et al., Eur. J. Pharmacol. (2005) 506:273-83; P. Eynott et al., Br. J. Pharmacol. (2003) 140:1373-80）。これらの所見は、アレルギー性炎症、過応答性に関連する気道リモデリング過程におけるＪＮＫの重要な役割を示唆している。したがって、ＪＮＫ活性の妨害は、喘息の処置に有益であると期待される。
【０００５】
２型糖尿病は、酸化性ストレスに関連する慢性の低レベル炎症および異常脂質代謝の結果としての、インスリン抵抗性およびインスリン分泌機能障害を特徴とする、最も深刻で、蔓延している代謝疾患である。ＪＮＫ活性は、肥満および糖尿病条件下に種々の糖尿病の標的組織において異常に上昇することが報告されている（J. Hirosumi et al., Nature (2002) 420:333-36; H. Kaneto, Expert. Opin. Ther. Targets (2005) 9:581-92）。炎症性サイトカインおよび酸化性ストレスによるＪＮＫ経路の活性化は、Ｓｅｒ３０７でのインスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）のリン酸化を経るインスリンシグナリングを負に制御し、したがって、インスリン抵抗性と耐糖能に寄与する（J. Hirosumi et al., Nature (2002) 上記；Y. Lee et al., J. Biol. Chem. (2003) 278: 2896-902；Y. Nakatani et al., J. Biol. Chem. (2004) 279:45803-09）。説得力のある遺伝的証拠は、遺伝的（ｏｂ／ｏｂ）肥満マウスまたは食事肥満マウスのいずれかと交差させたｊｎｋ−／−マウスを用いた的確な動物モデル研究からきた。ＪＮＫ１（ＪＮＫ１−／−）を欠損し、ＪＮＫ２機能（ｊｎｋ２−／−）を欠損していないと、肥満マウスを体重増加、定常状態での血糖値の増加、および血漿インスリン濃度の減少から保護した（J. Hirosumi et al., Nature (2002) 上記）。さらに、小分子ＪＮＫ阻害剤、ＣＣ１０５（B. Bennett et al., Curr. Opin. Pharmacol. (2003) 3:420-25）またはＪＮＫ相互作用タンパク質−１（ＪＩＰ−１）のＪＮＫ結合領域に由来するＪＮＫ阻害性ペプチドＩ（ＪＩＰ）（H. Kaneto et al., Nat. Med. (2004) 10:1128-32）のいずれかを投与することにより、有意により低い血糖およびより高い血漿インスリン濃度を含む、有益な効果が遺伝的糖尿病モデル（ｄｂ／ｄｂマウス）において認められた。より興味深いことに、他の最近の報告では（A. Jaeschke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2005) 102:6931-35）、ＪＮＫ２は、インスリン産生β細胞の自己免疫破壊により引き起こされる１型糖尿病において重要な役割を果たすことが明らかとなった。ＪＮＫ発現が不足した非肥満糖尿病マウスは、おそらくはＴｈ２表現型への偏った分極により、破壊的膵島炎の減少および糖尿病への疾患の進行がより少ないことを示した。総合すれば、これらの研究は、肥満／２型糖尿病の処置におけるＪＮＫ阻害剤の有効性を示した。
【０００６】
神経変性性疾患、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）および脳卒中は、シナプス損失、ニューロンの萎縮および死を特徴とする。ｃ−Ｊｕｎ活性化に導くＪＮＫ経路は、種々の刺激の誘起によって、単離された一次胚ニューロンおよび多重ニューロン細胞系のアポトーシスにおいて原因となる役割を果たすことが示されている（D. Bozyczko-Coyne et al., Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord. (2002) 1:31-49）。ＪＮＫの過活性化が、ＡＤ患者からのヒト脳（J. Pei et al., J. Alzheimers Dis. (2001) 3:41-48）または神経変性性疾患の動物モデル由来の齧歯類脳切片（M. Saporito et al., J. Neurochem. (2000) 75:1200-08）において観察された。例えば、ホスホ−ＪＮＫの増加が、ＡＤ患者からの解剖脳において検出された。β−アミロイドペプチド投与で誘起されるＡＤの齧歯類モデルにおけるＪＮＫ阻害性ペプチド（ＪＩＰ−１ペプチド）の投与は、シナプス可塑性の欠損を予防した。ＰＤ（ＭＰＴＰモデル)の動物モデルにおいて、ホスホ−ＭＫＫ４およびホスホ−ＪＮＫの増加が、神経細胞死に付随して認められた。ＪＮＫ阻害性ペプチド（ＪＩＰ−１ペプチド）のマウスの線条体へのアデノウイルス性遺伝子導入は、ＭＰＴＰ−介在ＪＮＫ、ｃ−Ｊｕｎおよびカスパーゼ活性化を阻害することにより行動欠陥を軽減し、したがって、黒質におけるニューロン細胞死を妨げる（X. Xia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2001) 98:10433-38）。加えて、グルタメート興奮毒性で誘起される虚血発作の動物モデルにおいて、ＪＮＫ３が欠損し、ＪＮＫ１またはＪＮＫ２が欠損していないマウスは、カイニン酸（グルタメート受容体アゴニスト）介在発作またはニューロン死に抵抗性であった（D. D. Yang et al., Nature (1997) 389:865-70）。これらのデータは、ＪＮＫ３が、虚血条件における重要な成分であるグルタメート興奮毒性の主原因であることを示唆している。総合すれば、データは、ＪＮＫがニューロン細胞死に関連する多数のＣＮＳ疾患の興味ある標的であることを示唆している。
【０００７】
制御されていない血管新生と共に、コントロールされていない細胞の成長、増殖および移動は、悪性腫瘍の形成をもたらす。ＪＮＫシグナル伝達経路は、アポトーシスにおいてのみ作用するものではなく、ＡＰ１活性化をもたらす持続的なＪＮＫ活性化は、最近、特異的な癌のタイプ、例えばグリア腫瘍およびＢＣＬ−ＡＢＬ変換Ｂリンパ芽球の細胞生き残りに寄与することに関係している（M. Antonyak et al., Oncogene (2002) 21:5038-46; P. Hess et al., Nat. Genet. (2002) 32:201-05）。グリア腫瘍の場合、ＪＮＫ／ＡＰ１活性の向上が、原発性脳腫瘍試料の大部分において見られた。形質転換Ｂリンパ芽球について、ＢＣＬ−ＡＢＬは、ＪＮＫ経路を活性化することが示されており、これは、次いで、抗アポトーシスｂｃｌ−２遺伝子の発現をアップレギュレートした。興味深いことに、処置難冶性のＡＭＬ患者において見られる多剤耐性および過増殖は、これらのＡＭＬ試料に存在する持続的なＪＮＫ活性に原因として結びついている（L. Cripe et al., Leukemia (2002) 16:799-812）。白血球細胞におけるＪＮＫの活性化は、多剤耐性の原因となるｍｄｒ１およびＭＲＰ１等の流出ポンプの誘起された発現をもたらす。また、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼπおよびγ−グルタミルシステインシンターゼを含む酸化性ストレスに応答する生き残り有益性を持つ遺伝子は、同じく、ＪＮＫ経路によりアップレギュレートされた。
したがって、ＪＮＫモジュレーターは、種々の疾患および／または症状の処置に有用である。
【０００８】
細胞増殖の制御におけるサイクリン依存性キナーゼ（”ｃｄｋ”）の役割は、十分に確立されている。抗増殖性治療剤としての、Ｃｄｋ４、Ｃｄｋ２およびＣｄｋ１における標的を阻害する化合物の使用を有効なものとする多くの文献が存在する。例えば、J. Lukas et al., Nature (1995) 79:573-82; J.R. Nevins, Science (1992) 258:424-29; I.K. Lim et al., Mol Carcinogen (1998) 23:25-35; S.W. Tam et al., Oncogene (1994) 9:2663-74; B. Driscoll et al., Am. J. Physiol. (1997) 273 (Lung Cell. Mol. Physiol.) L941-L949; およびJ. Sang et al., Chin. Sci. Bull. (1999) 44:541-44参照。細胞増殖の阻害剤は、異常な細胞成長を特徴とする疾患過程、例えば癌、ならびに例えば炎症(例えば、良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリポーシス、神経線維腫症、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、移植拒絶感染症）、ウイルス感染症（ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バーウイルスを含むが、これらに限定されない）、自己免疫疾患（例えば、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患）、神経変性性障害（アルツハイマー病を含むが、これに限定されない）、および神経変性性疾患（例えば、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜色素変性症、脊髄性筋萎縮症、および大脳変性）を含む他の細胞増殖性障害の処置に有用である可逆性細胞増殖抑制剤として作用する。
【０００９】
本発明の一つの態様は、式Ｉ：
【００１０】
【化１】
2010502668.tif 000003
【００１１】
（式中、
Ｒは、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、または
【００１２】
【化２】
2010502668.tif 000004
【００１３】
から選択される基であり、
ここで、
各々のＲａは、独立に、Ｈ、低級アルキル、ＯＨ、またはヒドロキシ低級アルキルであり；
各々のＲｂは、独立に、Ｈ、低級アルキル、ハロ、ニトロ、またはハロ低級アルキルであり；
ｐは、２、３、または４であり；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ４Ｒ５、Ｃ（＝Ｏ）、またはＳ（Ｏ）ｘであり；
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、またはＮＨ２であり；
Ｒ３の各々は、独立に、ハロ、−ＮＯ２、低級アルキル、−ＣＮ、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７、
―Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＳＯ２−Ｒ１０であるか、またはＲ３の２個はアルキレンジオキシを形成し；
Ｒ４は、水素、低級アルキル、シアノ、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、
−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７；−ＮＲ７−ＳＯ２−Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１、または−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ６であり；
Ｒ５は、水素またはアルキルであるか；
あるいはＲ４およびＲ５は、一緒になって、アルキレンジオキシを形成し；
Ｒ６は、水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ１０は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ１１は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、または（ヘテロシクリル）アルキルであり；
Ｒ２およびＲ７は、各々独立に、水素または低級アルキルであり；
Ｒ８は、水素、低級アルキル、またはアシルであり；
Ｒ９は、水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキルであるか；
あるいはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によりＯＨ、オキソ、低級アルキル、低級アルコキシ、またはアシルで置換されている、少なくとも１個の窒素環原子を含むヘテロシクリルを形成し；
ｍおよびｘの各々は、独立に、０〜２の整数であり；
Ｙは、水素、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７または−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７であり；
ｙおよびｚの各々は、独立に、０または１であり；
ｎは０〜４の整数である）
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００１４】
本発明は、また、医薬組成物、使用方法、および上記の化合物の製造方法を提供する。
【００１５】
本発明の化合物および組成物は、ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼが介在する障害、例えば自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝障害、神経障害、および癌の治療および／または予防に有用である。いくつかの実施態様において、本発明の化合物および組成物は、関節リウマチ、喘息、２型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、および／または脳卒中の治療および／または予防に有用である。
【００１６】
本発明の化合物および組成物は、一般に異常な細胞成長を特徴とする疾患過程であるＣＤＫ介在障害、例えば癌、ならびに例えば炎症(例えば、良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリポーシス、神経線維腫症、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、移植拒絶感染症）、ウイルス感染症（ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バーウイルスを含むが、これらに限定されない）、自己免疫疾患（例えば、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患）、神経変性性障害（アルツハイマー病を含むが、これに限定されない）、および神経変性性疾患（例えば、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜色素変性症、脊髄性筋萎縮症、および大脳変性）を含む他の細胞増殖性障害の治療および／または予防に有用である。
【００１７】
特に断りのない限り、明細書および特許請求の範囲を含む本出願で使用した以下の用語は、以下に示した定義を有する。明細書および添付の特許請求の範囲で使用した単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容から明らかに違うものとして示されない限り、複数の意味をも含むことに注意されたい。
【００１８】
「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を有する、炭素原子および水素原子のみからなる、一価直鎖または分岐飽和炭化水素基を意味する。
「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子のアルキル基、すなわち、Ｃ１〜Ｃ６アルキルを指す。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ヘキシル、オクチル、ドデシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。「分岐アルキル」は、少なくとも１個の分岐を有するアルキル部分、例えば、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを指す。同様に、「低級アルコキシ」は、式−ＯＲの基を指し、また、「アシル」は、式−Ｃ（Ｏ）Ｒの基を指し、ここで、Ｒは、低級アルキル基である。
【００１９】
「アルキレン」は、１〜６個の炭素原子の直鎖飽和二価炭化水素基、または３〜６個の炭素原子の分岐飽和二価炭化水素基、例えば、メチレン、エチレン、２，２−ジメチルエチレン、プロピレン、２−メチルプロピレン、ブチレン、ペンチレンなどを意味する。
【００２０】
「アルキレンジオキシ」は、式−Ｏ−Ｒ−Ｏ−の二価基を意味し、ここで、Ｒは、本明細書で定義したようなアルキル基である。
【００２１】
「アリール」は、単環、二環、または三環式芳香族環からなる一価環式芳香族炭化水素基を意味する。フェニルまたはナフチルが好ましい。アリール基は、本明細書で定義したように場合により置換されていてもよい。アリール基の例として、場合により置換されている、フェニル、ナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インデニル、ペンタレニル、アズレニル、オキシジフェニル、ビフェニル、メチレンジフェニル、アミノジフェニル、ジフェニルスルフィジル、ジフェニルスルホニル、ジフェニルイソプロピリデニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキシリル、ベンゾピラニル、ベンゾオキサジニル、ベンゾオキサジノニル、ベンゾピペラヂニル（benzopiperadinyl）、ベンゾピペラジニル（benzopiperazinyl）、ベンゾピロリジニル、ベンゾモルホリニル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニルなど（それらの部分的に水素化されている誘導体も含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
「シクロアルキル」は、単環または二環からなる一価飽和炭素環式基を意味する。シクロアルキルは、１個以上の置換基で場合により置換されていてもよく、ここでの各置換基は、特に断りない限り、独立して、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、アミノ、モノアルキルアミノ、またはジアルキルアミノである。好ましいシクロアルキルは、Ｃ３〜７モノ環状シクロアルキルである。シクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル（それらの部分的に不飽和な誘導体も含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
「シクロアルキルアルキル」は、式−Ｒａ−Ｒｂの基を意味し、ここで、Ｒａはアルキレンであり、Ｒｂは本明細書で定義したようなシクロアルキルである。
【００２４】
「ヘテロアルキル」は、１、２、または３個の水素原子が、−ＯＲａ、−ＮＲｂＲｃ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ（ここで、ｎは０〜２の整数である）からなる群より独立に選択される置換基で置き換えられているＣ４〜Ｃ７アルキルなどの本明細書で定義したようなアルキル基を意味し、ヘテロアルキル基の結合点は、炭素原子を介してであると理解され、ここで、Ｒａは、水素、アシル、アルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり；ＲｂおよびＲｃは、互いに独立に、水素、アシル、アルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり；ｎが０である場合、Ｒｄは、水素、アルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり；ｎが１である場合、Ｒｄは、アルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり；ｎが２である場合、Ｒｄは、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アミノ、アシルアミノ、モノアルキルアミノ、またはジアルキルアミノである。代表例として、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチルエチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、１−ヒドロキシメチルエチル、３−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−ヒドロキシ−１−メチルプロピル、２−アミノエチル、３−アミノプロピル、２−メチルスルホニルエチル、アミノスルホニルメチル、アミノスルホニルエチル、アミノスルホニルプロピル、メチルアミノスルホニルメチル、メチルアミノスルホニルエチル、メチルアミノスルホニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１、２、または３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子がＣである、少なくとも１個の芳香族環を有する５〜１２個の環原子の単環または二環式基を意味し、ヘテロアリール基の結合点は芳香族環上であると理解される。ヘテロアリール環は、本明細書で定義したように場合により置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例として、場合により置換されている、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピラジニル、チエニル、チオフェニル、フラニル、ピラニル、ピリジニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリミジル、ピリダジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾピラニル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、トリアゾリル、トリアジニル、キノキサリニル、プリニル、キナゾリニル、キノリジニル、ナフチリジニル、プテリジニル、カルバゾリル、アゼピニル、ジアゼピニル、アクリジニル（それらの部分的に水素化されている誘導体も含む）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
互換的に使用しうる、「ハロ」、「ハロゲン」および「ハロゲン化物」なる用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード置換基を指す。
【００２７】
「ハロアルキル」は、１個以上の水素が、同じまたは異なるハロゲンに置き換えられている本明細書で定義したようなアルキルを意味する。例示的なハロアルキルとして、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＣｌ３、ペルフルオロアルキル（例えば−ＣＦ３）が挙げられる。
【００２８】
「ヘテロシクリル」は、１、２、３または４個のヘテロ原子（窒素、酸素または硫黄から選択される）を取り込んだ、１〜３個の環からなる、一価飽和基を意味する。３〜８個の環原子を有する一環性ヘテロシクリルが好ましい。ヘテロシクリル環は、本明細書で定義したように場合により置換されていてもよい。ヘテロシクリル基の例として、場合により置換されている、ピペリジニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼピニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キヌクリジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、チアジアゾリリジニル、ベンゾチアゾリジニル、ベンゾアゾリリジニル、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、ジヒドロキノリニル、ジヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
「アリール」、「フェニル」、「ヘテロアリール」または「ヘテロシクリル」に関連して使用されている場合の「場合により置換されている」は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、オキソ（すなわち、＝Ｏ）、ハロアルキル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＲ７、−（ＣＨ２）ｍＳＯ２Ｒ７、Ｃ１−６アルコキシ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、シアノ、ニトロ、および−ＮＲ８Ｒ９（ここで、ｍ、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、本明細書で定義したとおりである）から選択される１個以上の置換基、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個の置換基で独立に場合により置換されている、アリール、フェニル、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルを意味する。
【００３０】
定義が上記のとおりである化学基に対する好ましい基は、実施例で具体的に例示されているものである。
【００３１】
「脱離基」は、合成有機化学で慣用的にそれに結び付けられている意味を有する基を意味し、すなわち、置換反応条件下で置換可能な原子または基を意味する。脱離基の例として、ハロゲン、アルカン−またはアリーレンスルホニルオキシ、例えばメタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、チオメチル、ベンゼンスルホニルオキシ、トシルオキシ、およびチエニルオキシ、ジハロホスフィノイルオキシ、場合により置換されているベンジルオキシ、イソプロピルオキシ、アシルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
「場合による」または「場合により」は、その後に記載されている事象または状況が起こってもよいが起こる必要はなく、またこの記載には、事象または状況が起こる場合と起こらない場合とが含まれることを意味する。
【００３３】
「疾患」および「疾患状態」は、任意の疾患、容態、症状、障害、または適応症を意味する。
【００３４】
「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」は、溶媒が、それと共に記載されている反応条件下で不活性であることを意味し、これには、例えば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、クロロホルム、塩化メチレンまたはジクロロメタン、ジクロロエタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ジオキサン、ピリジンが挙げられる。特に断りない限り、本発明の反応に使用する溶媒は不活性溶媒である。
【００３５】
「薬学的に許容しうる」は、一般的に安全で、無毒性で、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではなく、医薬組成物の調製において有用であることを意味し、獣医学的使用およびヒトの医薬的使用にも許容しうるものを含む。
【００３６】
化合物の「薬学的に許容しうる塩」は、本明細書で定義したように薬学的に許容しうる、親化合物の所望の薬理活性を有する塩を意味する。このような塩として、
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸とで形成される酸付加塩；または、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸などの有機酸とで形成される酸付加塩；あるいは、
親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオンにより置き換えられている場合に形成される塩；または、有機もしくは無機塩基と配位している場合に形成される塩が挙げられる。
許容しうる有機塩基として、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンが挙げられる。許容される無機塩基として、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムが挙げられる。
好ましい薬学的に許容しうる塩は、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、リン酸、酒石酸、クエン酸、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、およびマグネシウムから形成される塩である。
【００３７】
「保護基（protective group）」または「保護基（protecting group）」は、多官能性化合物中の１個の反応性部位を選択的にブロックする基を意味し、これにより、合成化学における慣用的にそれに関連する意味において、別の保護されていない反応性部位で化学反応を選択的に行なうことができる。本発明の特定の工程は、反応体に存在する反応性窒素原子および／または酸素原子をブロックするための保護基に頼っている。例えば、「アミノ保護基」および「窒素保護基」なる用語は、本明細書において互換的に使用され、合成手順中の望ましくない反応から窒素原子を保護することを目的とする有機基を意味する。例示的な窒素保護基として、トリフルオロアセチル、アセトアミド、ベンジル（Ｂｎ）、ベンジルオキシカルボニル（カルボベンジルオキシ、ＣＢＺ）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、除去し易さおよびそれ以降の反応に耐えられるかという点から、基を選択する方法を知っているであろう。
【００３８】
「対象」は、哺乳動物および非哺乳動物を意味する。哺乳動物は、ヒト；非ヒト霊長類、例えばチンパンジー、および他の類人猿およびサル種；家畜動物、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、およびブタ；家庭動物、例えばウサギ、イヌ、およびネコ；実験動物（齧歯類、例えばラット、マウス、モルモットを含む）などが含まれるがこれに限定されない、哺乳類綱の任意のメンバーを意味する。非哺乳動物の例として、鳥類などが挙げられるが、これらに限定されない。「対象」なる用語は、特定の年齢または性別を意図しない。
【００３９】
「治療有効量」は、疾患状態を処置するために対象に投与する場合に、疾患状態のためのこのような処置を行なうのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、処置する疾患状態、処置する疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、投与経路および投与形態、担当医師または獣医の判断、ならびに他の因子に応じて変動する。
【００４０】
変化するものを言及する際の「上で定義したもの」および「本明細書で定義したもの」なる用語は、広義な変化するものの定義、ならびに、存在する場合には、好ましい、より好ましい、および最も好ましい定義が、参照により組み入れられる。
【００４１】
疾患状態の「処置する」または「処置」には、
（ｉ）疾患状態を予防すること、すなわち、疾患状態にさらされているかまたはその素因がある可能性があるが、まだ疾患状態の症状を経験または呈していない対象において、疾患状態の臨床症状を発症させないこと、
（ｉｉ）疾患状態を抑止すること、すなわち、疾患状態またはその臨床症状の発症を停止させること、
（ｉｉｉ）疾患状態を寛解すること、すなわち、疾患状態またはその臨床症状の一時的または永久的後退を引き起こすこと
が含まれる。
【００４２】
化学反応に言及する際の「処理する」、「接触させる」、および「反応させる」なる用語は、２種以上の試薬を適切な条件下で添加または混合して、指定のおよび／または所望の生成物を製造することを意味する。指定のおよび／または所望の生成物を生成する反応は、最初に添加した２種の試薬の組合せから必ずしも直接的に得られる必要はなく、すなわち、指定のおよび／または所望の生成物の形成を最終的にもたらす、混合物中に生成される１種以上の中間体が存在していてもよい。
【００４３】
一般に、本出願で使用した命名法は、ＩＵＰＡＣ体系的命名法の作成のためのバイルシュタイン研究所のコンピューターシステムであるＡＵＴＯＮＯＭ（商標）ｖ．４．０に基づいている。本明細書で示される化学構造は、ＩＳＩＳ（登録商標）バージョン２．２を使用して作成した。本明細書の構造中の炭素原子、酸素原子、または窒素原子上に出現する全ての空結合価（open valency）は、水素原子の存在を示す。
【００４４】
キラル炭素が化学構造中に存在する場合はいつでも、そのキラル炭素に関連する全ての立体異性体が、その構造に包含されることが意図される。
【００４５】
本明細書で同定される全ての特許および刊行物の全体は、参照により本明細書に組み入れられる。
【００４６】
本発明の一つの態様は、式Ｉ：
【００４７】
【化３】
2010502668.tif 000005
【００４８】
（式中、
Ｒは、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、または
【００４９】
【化４】
2010502668.tif 000006
【００５０】
から選択される基であり、
ここで、
各々のＲａは、独立に、Ｈ、低級アルキル、ＯＨ、またはヒドロキシ低級アルキルであり；
各々のＲｂは、独立に、Ｈ、低級アルキル、ハロ、ニトロ、またはハロ低級アルキルであり；
ｐは、２、３、または４であり；
Ｘは、Ｏ、ＣＲ４Ｒ５、Ｃ（＝Ｏ）、またはＳ（Ｏ）ｘであり；
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、またはＮＨ２であり；
Ｒ３の各々は、独立に、ハロ、−ＮＯ２、低級アルキル、−ＣＮ、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７、
―Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＳＯ２−Ｒ１０であるか、またはＲ３の２個はアルキレンジオキシを形成し；
Ｒ４は、水素、低級アルキル、シアノ、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、
−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７；−ＮＲ７−ＳＯ２−Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１、または−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ６であり；
Ｒ５は、水素またはアルキルであるか；
あるいはＲ４およびＲ５は、一緒になって、アルキレンジオキシを形成し；
Ｒ６は、水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ１０は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ１１は、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、または（ヘテロシクリル）アルキルであり；
Ｒ２およびＲ７は、各々独立に、水素または低級アルキルであり；
Ｒ８は、水素、低級アルキル、またはアシルであり；
Ｒ９は、水素、低級アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキルであるか；
あるいはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によりＯＨ、オキソ、低級アルキル、低級アルコキシ、またはアシルで置換されている、少なくとも１個の窒素環原子を含むヘテロシクリルを形成し；
ｍおよびｘの各々は、独立に、０〜２の整数であり；
Ｙは、水素、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７または−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７であり；
ｙおよびｚの各々は、独立に、０または１であり；
ｎは０〜４の整数である）
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００５１】
いくつかの実施態様において、Ｒ２は、水素またはメチルである。
【００５２】
他の実施態様において、Ｒは、
【００５３】
【化５】
2010502668.tif 000007
【００５４】
であり、ここで、ｚは１であり、Ｘは、ＯまたはＣＲ４Ｒ５である。いくつかの実施態様において、Ｒ４は、ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ７−ＳＯ２Ｒ１０、または−ＯＲ７である。
【００５５】
さらに他の実施態様において、ｍは０である。
【００５６】
また他の実施態様において、Ｒ１は、水素、メチル、クロロ、またはフルオロである。
【００５７】
一つの実施態様において、Ｘは、ＣＲ４Ｒ５であり、ここで、Ｒ４およびＲ５は、本明細書で定義したものである。
【００５８】
他の実施態様において、Ｒ５は、水素またはメチルである。
【００５９】
さらにいくつかの実施態様において、ｚは１である。
【００６０】
さらにまた他の実施態様において、Ｒ４は、−ＮＲ７−ＳＯ２−Ｒ１０であり、ここで、Ｒ７およびＲ１０は、本明細書で定義したものである。
【００６１】
他の実施態様において、ｘは２であり、Ｒ７は、水素またはメチルであり、Ｒ１０は、メチル、エチル、または−Ｎ（ＣＨ３）２である。
【００６２】
さらにまた他の実施態様において、ｚは１であり、Ｒ４は、水素、低級アルキル、シアノ、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、または−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９であるか、あるいはＲ４およびＲ５は、一緒になって、アルキレンジオキシを形成し、ここで、ｎ、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、本明細書で定義したものである。
【００６３】
また他の実施態様において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７であり、ｎは０または１であり、Ｒ７は、水素またはメチルである。
【００６４】
さらに他の実施態様において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９であり、ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ９は、本明細書で定義したものである。これらの実施態様のうち、ｎが０であり、Ｒ８が水素である場合、Ｒ９は、水素、ピリミジン−２−イル、またはピリジン−２−イルである。これらの実施態様内のさらに他の実施態様において、ｎは０であり、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルを形成する。
【００６５】
また他の実施態様において、Ｒ４は、水素、メチル、エチル、またはシアノである。
【００６６】
他の実施態様において、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、エチレンジオキシを形成する。
【００６７】
さらに他の実施態様において、式Ｉの化合物は、ｚが１であり、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１（ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ１１は、本明細書で定義したものである）であるものを包含する。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、ｎは０であり、Ｒ８は、水素またはメチルであり、Ｒ１１は、メチル、エチル、メトキシメチル、ヒドロキシメチル、（モルホリン−４−イル）メチル、または（４−メチル−ピペラジン−１−イル）メチルである。
【００６８】
また他の実施態様において、ｚは１であり、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９であり、ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ９は、本明細書で定義したものである。これらの実施態様のうち、いくつか例において、ｎは０であり、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリン−４−イル、ピロリジン−１−イル、または４−メチル−ピペラジン−１−イルを形成する。さらに他の実施態様において、ｎは０であり、Ｒ８は水素またはメチルであり、Ｒ９は、（２−アミノ−２−メチル）プロピル、（２−ヒドロキシ）エチル、テトラヒドロピラン−４−イル、シクロプロピル、またはエチルである。
【００６９】
他の実施態様において、ｚは１であり、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７であり、ここで、ｎおよびＲ７は、本明細書で定義したものである。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、ｎは０であり、Ｒ７は、水素またはメチルである。
【００７０】
さらに他の実施態様において、Ｒ４およびＲ５は、水素であり、ｚは０であり、ｙは１であり、Ｙは、シクロペンチル環部分の３位のヒドロキシである。
【００７１】
また他の実施態様において、Ｒ４およびＲ５は、水素であり、ｚは１であり、ｙは１であり、Ｙは、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、またはシクロヘキシル環部分の２位の−ＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３基である。
【００７２】
式Ｉの化合物のいくつかの実施態様において、ｚは１であり、Ｘは、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、またはＳＯ２である。
【００７３】
式Ｉの化合物の他の実施態様において、ＸはＮＲ６であり、ここで、Ｒ６は、請求項１に定義したものである。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、Ｒ６は、水素、−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。
【００７４】
本明細書に記載の異なる基の組み合わせが、他の実施態様を形成してもよいことを理解されたい。このようにして、種々の異なる化合物が、本発明内で実施態様とされる。例えば、一つの実施態様において、Ｘは、ＣＲ４Ｒ５であり、ここで、Ｒ４およびＲ５は、本明細書で定義したものである。この実施態様のうち、いくつかの例において、Ｒ５は、水素またはメチルである。この実施態様のうちのさらに他の例において、ｚは１であり、Ｒ４は、−ＮＲ７−ＳＯ２−Ｒ１０であり、ここで、Ｒ７およびＲ１０は、本明細書で定義したものである。これらの例のうち、いくつかの例において、Ｒ７は、水素またはメチルであり、Ｒ１０は、メチル、エチル、または−Ｎ（ＣＨ３）２である。この実施態様のうちのまた他の例において、ｚは１であり、Ｒ４は、水素、低級アルキル、シアノ、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、または−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９であるか、あるいはＲ４およびＲ５は、一緒になって、アルキレンジオキシを形成し、ここで、ｎ、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、本明細書で定義したものである。これらの例のうち、いくつかの場合において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７であり、ｎは０または１であり、Ｒ７は、水素またはメチルである。これらの例のうちの他の場合において、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＮＲ８Ｒ９であり、ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ９は、本明細書で定義したものである。これらの場合のうち、特定の化合物のいくつかは、ｎが０であり、Ｒ８が水素であり、Ｒ９が、水素、ピリミジン−２−イル、またはピリジン−２−イルであるものを包含する。これらの場合のうちの他の特定の化合物は、ｎが０であり、Ｒ８およびＲ９が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルを形成しているものを包含する。さらに他の場合、Ｒ４は、水素、メチル、エチル、またはシアノである。この実施態様のうちのいくつかの例において、Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、エチレンジオキシを形成する。
【００７５】
さらに他の実施態様において、式Ｉの化合物は、ｚが１であり、Ｒ４が、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ８−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１（ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ１１は、本明細書で定義したものである）であるものを包含する。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、ｎは０であり、Ｒ８は、水素またはメチルであり、Ｒ１１は、メチル、エチル、メトキシメチル、ヒドロキシメチル、（モルホリン−４−イル）メチル、または（４−メチル−ピペラジン−１−イル）メチルである。
【００７６】
また他の実施態様において、ｚは１であり、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ８Ｒ９であり、ここで、ｎ、Ｒ８、およびＲ９は、本明細書で定義したものである。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、ｎは０であり、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリン−４−イル、ピロリジン−１−イル、または４−メチル−ピペラジン−１−イルを形成する。さらに他の例において、ｎは０であり、Ｒ８は水素またはメチルであり、Ｒ９は、（２−アミノ−２−メチル）プロピル、（２−ヒドロキシ）エチル、テトラヒドロピラン−４−イル、シクロプロピル、またはエチルである。
【００７７】
他の実施態様において、ｚは１であり、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ７であり、ここで、ｎおよびＲ７は、本明細書で定義したものである。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、ｎは０であり、Ｒ７は、水素またはメチルである。
【００７８】
さらに他の実施態様において、Ｒ４およびＲ５は、水素であり、ｚは０であり、ｙは１であり、Ｙは、シクロペンチル環部分の３位のヒドロキシである。
【００７９】
また他の実施態様において、Ｒ４およびＲ５は、水素であり、ｚは１であり、ｙは１であり、Ｙは、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、またはシクロヘキシル環部分の２位の−ＣＯ２ＣＨ２ＣＨ３基である。
【００８０】
式Ｉの化合物のいくつかの実施態様において、ｚは１であり、Ｘは、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）、またはＳＯ２である。
【００８１】
式Ｉの化合物の他の実施態様において、ＸはＮＲ６であり、ここで、Ｒ６は、請求項１に定義したものである。これらの実施態様のうち、いくつかの例において、Ｒ６は、水素、−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。
【００８２】
さらに他の実施態様において、式Ｉの化合物は、式ＩＡ：
【００８３】
【化６】
2010502668.tif 000008
【００８４】
のものまたはその薬学的に許容しうる塩である（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｙ、およびｚは本明細書で定義したものである）。
本発明の代表的化合物を下表１に示す。
【００８５】
【表１】
2010502668.tif 000009
2010502668.tif 000010
2010502668.tif 000011
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【００８６】
合成
本発明の化合物は、以下の実施例の部に示した例示的な例に記載の様々な方法により製造できる。これらの化合物の調製に使用する出発材料および試薬は、一般に、アルドリッチ・ケミカル社などの業者から入手できるか、または、Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis；Wiley & Sons:New York、1991、Vol 1-15；Rodd's Chemistry of Cabon Compounds、Elsevier Science Publishers、1989、Vol 1-5および追補；ならびにOrganic Reactions、Wiley & Sons:New York、1991、Vol 1-40などの文献に示される手順に従って、当業者に既知の方法により調製される。以下の合成反応スキームは、本発明の化合物を合成できるいくつかの方法の単なる例示であり、これらの合成反応スキームに様々な改変を行なうことができ、これは本出願に含まれる開示を参照すれば当業者には思い付くであろう。
【００８７】
合成反応スキームの出発材料および中間体は、所望であれば、慣用的な技術（ろ過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどが挙げられるが、これらに限定されない）を使用して単離精製できる。このような材料は、慣用的な手段（物理定数およびスペクトルデータなどが挙げられる）を使用して特徴づけることができる。
【００８８】
特に断りのない限り、本明細書に記載した反応は、好ましくは、不活性雰囲気下で、大気圧で、約−７８℃〜約２３０℃の範囲の反応温度、最も好ましく簡便には室温（または周囲温度）で、例えば約２０℃で行なう。
【００８９】
【化７】
2010502668.tif 000024
【００９０】
スキームＩにおいて、Ｒ１、ＲおよびＲ３ならびにｚは、上で定義したとおりであり、ＹはＣｌまたはＳＭｅであり、Ｚは、ＭｅＳＯ２またはＣｌである。工程Ａにおいて、置換された４−クロロピリミジンは、水素化ナトリウムのような塩基の存在下に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような極性非プロトン性溶媒中で、０℃〜約ＲＴの間の範囲の温度で、様々に置換された１Ｈ−ベンゾトリアゾールとＳＮＡｒ反応する。
【００９１】
工程Ｂにおいて、チオメチル基Ｙは、クロロホルムのような非プロトン性溶媒中での３−クロロ過安息香酸での酸化により、あるいはＮ−クロロコハク酸イミドでの塩素化により、脱離基に変換される。
【００９２】
工程Ｃにおいて、脱離基ＹまたはＺ（ＣｌまたはＭｅＳＯ２）は、１−メチル−２−ピロリドン等の極性非プロトン性溶媒中、約１００℃〜約１３０℃の間の範囲の温度で混合物を加熱することにより熱的に、あるいはテトラヒドロフラン等の極性非プロトン性溶媒中、ＲＴ〜６０℃の間の範囲の温度でトリエチルアミン等の塩基で処理することにより、一級アミンａで置換される。アミンａには、例えば、様々に置換されたシクロヘキシルアミンおよびシクロペンチルアミン等のシクロアルキルアミン；イソブチルアミン等のアルキルアミン；４−アミノ−１−ブタノール等のヒドロキシアルキルアミン；４−アミノテトラヒドロピラン、４−アミノ−１−ＢＯＣ−ピペリジン等のヘテロ環状アミンが含まれてよい。多数の様々に置換されたアルキル、シクロアルキルおよびヘテロ環状アミンａが市販されているか、あるいは当業者に周知の手法により容易に製造される。
次いで、生成物は、例えば、抽出、結晶化、分取用ＨＰＬＣ、フラッシュクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーなどにより、精製することができる。
【００９３】
一般式（ｉｖ）の化合物は、スキームＩＩに示されている変換を受けて、本発明の目的である化合物を与えることができる。
【００９４】
【化８】
2010502668.tif 000025
【００９５】
スキームＩＩにおいて、Ｒ３、Ｒ１１、Ｒ８およびＲ９は、上で定義したとおりである。Ｒａは、ＣＯＲ１１、ＣＨ２ＣＯＮＲ８Ｒ９，ＳＯ２Ｒ１１、またはＳＯ２ＮＲ８Ｒ９である。Ｒｂは、アルキル、ヘテロアルキル、（ヘテロ環状）アルキルである。ＲｃおよびＲｄは、独立に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、またはヘテロ環状である。ＲｅおよびＲｆは、独立に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、またはヘテロ環状である。Ｚは、ヘテロ環状である。ＲｇはＣＯＲ１１、ＳＯ２Ｒ１１またはＳＯ２ＮＲ５Ｒ８である。Ｒｈは、アルキルまたはアリールである。
【００９６】
工程Ｆ：ｂまたはｃ，ＮＭＰ、加熱またはｄ，ＮＭＰ、ＭＷまたはＮａＢＨ４、ｅ，ＭｅＯＨ。
工程Ｇ：ＮａＨ、ｆ，ＮＭＰ。
工程Ｈ：ＮａＯＨ、ＴＨＦ。
工程Ｉ：ｇ，ＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ、ＴＨＦ。
工程Ｊ：ＬＡＨ、ＴＨＦ。
工程Ｎ：１．ＩＢＸ、ＤＭＳＯ；２．ｈ，ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＡｃＯＨ、ＤＣＥ。
工程Ｋ：ＰＰｈ３、ＤＩＡＤ、ｉ，ＰｈＭｅ。
工程Ｌ：ｊ，Ｎ２Ｈ４、ＥｔＯＨ、加熱
工程Ｍ：１．ＨＣｌ、ＴＨＦ；２．ｋ，ＴＨＦ。
【００９７】
ＲｘがＮＨ２である場合、一般式（ｉｖ）の化合物は、１−メチル−２−ピロリジノン等の極性非プロトン性溶媒中、約ＲＴ〜７０℃の間の範囲の温度で、例えば無水酢酸等のアシル化剤ｂを用いて、工程Ｆに記載されているように、アシル化またはスルホニル化反応することができ；同じ条件下に、（ｉｖ）は、スルホニル化剤ｃとして、例えば無水メタンスルホン酸を用いてスルホニル化しうる。あるいは、（ｉｖ）は、１−メチル−２−ピロリジノン等の極性非プロトン性溶媒中、高温で、マイクロ波条件下に、ハロゲン化ヘテロアリールｄ、例えば２−フルオロピリジンを用いて、アリール化反応することができる。
【００９８】
アシル化剤およびスルホニル化剤ｂおよびｃは、例えば、アルキル無水物、環状無水物、塩化アシルおよび塩化ベンゾイル、アルキルスルホニル無水物、ならびに塩化アルキルスルホニルおよび塩化ベンゾイルスルホニルを含みうる。
【００９９】
一般式（ｖ）の生成物を得る別法は、メタノール等の極性プロトン性溶媒中、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、およびホルムアルデヒド等のアルデヒドｅを用いる、還元的アミノ化反応によるものであり、生成物は、続いて上記と同じ条件を用いるアシル化またはスルホニル化することができる。多数のアルキル、シクロアルキルおよびアリールアルデヒドｅは、市販されているか、または当業者に周知の手法により容易に製造される。
【０１００】
工程Ｇにおいて、一般式（ｖ）のアミン、アミドまたはスルホンアミドは、１−メチル−２−ピロリジノン等の極性非プロトン性溶媒中、水素化ナトリウム等の塩基およびヨウ化メチル等のアルキル化剤ｆを用いてアルキル化される。アルキル化剤ｆは、ハロゲン化アルキル、ハロゲン化ヘテロアルキルおよびハロゲン化（ヘテロ環状）アルキルを含みうる。
【０１０１】
ＲｘがＣＯＯＭｅまたはＣＯＯＥｔである場合、式（ｉｖ）のエステルは、工程Ｈに記載されているように、テトラヒドロフラン等の極性非プロトン性溶媒中、水酸化ナトリウム等の無機塩基の水溶液を用いて、対応するカルボン酸に加水分解することができる。続いて、カルボン酸（ｖｉ）は、工程Ｉに記載されているように、テトラヒドロフラン等の極性非プロトン性溶媒中、ＢＯＰ等のカップリング剤およびジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下に一級または二級アミンｇとカップリングさせて、一般式（ｖｉｉ）のアミドを得ることができる。アミンｇは、例えば、アルキルアミン、アルコキシアルキルアミン、ヒドロキシアルキルアミン、シクロアルキルアミンおよびヘテロ環状アミンを含みうる。
【０１０２】
ＲｘがＣＯＯＭｅまたはＣＯＯＥｔである場合、式（ｉｖ）のエステルは、工程Ｊに記載されているように、ＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中、約−７８℃〜約ＲＴの間の範囲の温度で、水素化リチウムアルミニウムで処理することにより、対応するアルコールに還元することができる。一般式（ｉｘ）のアルコールは、ＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒中、ｏ−ヨードキシ安息香酸等の酸化剤で処理することにより、対応するアルデヒドに酸化することができる。この方法で得られるアルデヒドは、続いて、１，２−ジクロロエタン等の非プロトン性溶媒中、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムおよび氷酢酸の存在下に、モルホリン等の一級または二級アミンｈで還元的アミノ化反応することができる（工程Ｎ）。アミンｈは、例えば、アルキルアミン、シクロアルキルアミンおよびヘテロ環状アミンを含みうる。あるいは、アルコール（ｉｘ）は、工程Ｋに記載されているように、トルエン等の非極性非プロトン性溶媒中、トリフェニルホスフィンおよびＤＩＡＤの存在下に、フタルイミド等のイミドｉで光延反応を受けることができる。イミンｉは、環状およびヘテロ環状イミンを含みうる。Ｚがフタルイミドである場合の一般式（ｖｉｉｉ）の化合物は、高温でエタノール等の極性プロトン性溶媒中、ヒドラジンで処理して、対応する一級アミンを与えることができ、これは、次いで、工程Ｌに記載されているようにトリエチルアミン等の塩基の存在下に、塩化アセチル等のアシル化剤またはスルホニル化剤で処理することにより、アシル化またはスルホニル化することができる。アシル化剤およびスルホニル化剤には、市販されているかまたは当業者に周知の手法により容易に製造されるかのいずれかである、塩化アシルおよび塩化アリール、塩化スルホニルおよび塩化ベンゼンスルホニルを包含しうる。
【０１０３】
ＲｘがＯ（ＣＨ２）２Ｏである場合、ケタール（ｉｖ）は、高温で、テトラヒドロフラン等の極性非プロトン性溶媒中、ＨＣｌの水溶液で処理することにより、対応するケトンに変換することができ；このようにして得られるケトンは、低温で、テトラヒドロフラン等の極性非プロトン性溶媒中、グリニャール反応体ｋとの付加反応を経て、工程Ｍに記載されているように、対応する三級アルコールを与えることができる。多数のアルキル−、シクロアルキル−およびアリール−グリニャール反応体ｋは、市販されているか、または当業者に既知の手法により容易に製造される。
【０１０４】
生成物は、次いで、例えば、抽出、結晶化、分取用ＨＰＬＣ、フラッシュクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーなどにより、精製することができる。
【０１０５】
用途
本発明の化合物は、ＣＤＫおよびＪＮＫモジュレーターであり、それ自体、広い範囲のＣＤＫおよびＪＮＫ介在障害の処置に有効であると期待される。例としてのＪＮＫ介在障害として、自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝障害、神経障害、または癌が挙げられるが、これらに限定されない。
したがって、本発明の化合物は、１以上のこのような障害を処置するために使用することができる。いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、関節リウマチ、喘息、２型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、または脳卒中等のＪＮＫ介在障害を処置するために使用することができる。例としてのＣＤＫ介在障害として、炎症(例えば、良性前立腺肥大、家族性腺腫、ポリポーシス、神経線維腫症、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、移植拒絶感染症）、ウイルス感染症（ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン−バーウイルスを含み、これらに限定されない）、自己免疫疾患（例えば、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患）、神経変性性障害（アルツハイマー病を含み、これに限定されない）、および神経変性性疾患（例えば、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜色素変性症、脊髄性筋萎縮症、および大脳変性）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
投与および医薬組成物
本発明は、少なくとも１種の本発明の化合物、または個々の異性体、異性体のラセミもしくは非ラセミ混合物、またはその薬学的に許容しうる塩もしくは溶媒和物を、少なくとも１種の薬学的に許容しうる担体ならびに場合により他の治療成分および／または予防成分と一緒に含む、医薬組成物を包含する。
【０１０７】
一般に、本発明の化合物は、治療有効量で、類似の有用性をもたらす薬剤について許容される任意の投与形態により投与される。適切な用量範囲は、典型的には、処置する疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康状態、使用する化合物の効力、投与経路および投与形態、投与が目指す適応症、ならびに担当医師の好みと経験などの数多くの因子に応じて、１日あたり１〜５００mg、好ましくは１日あたり１〜１００mg、最も好ましくは１日あたり１〜３０mgである。このような疾患を処置する当業者は、過度の実験を行なうことなく、個人の知識および本出願の開示を頼りにして、所与の疾患に対する本発明の化合物の治療有効量を確定することができる。
【０１０８】
本発明の化合物は、経口（口腔内および舌下を含む）、直腸、鼻腔、局所、肺内、膣内、または非経口（筋肉内、動脈内、髄腔内、皮下および静脈内を含む）投与に適した医薬製剤などの医薬製剤として、あるいは、吸入または注入による投与に適した形態の医薬製剤として投与してもよい。好ましい投与方法は、一般に、罹患度に応じて調整できる、簡便な１日用量計画を使用しての、経口である。
【０１０９】
本発明の化合物は、１種以上の慣用的な補助剤、担体、または希釈剤と一緒に、医薬組成物または単位用量の形態とすることができる。医薬組成物および単位用量形態は、追加の活性化合物または活性成分を含むかまたは含まない、慣用的な比率の慣用的な成分から構成されていてもよく、単位用量形態は、採用する目的の１日用量範囲に相応する任意の適切な有効量の活性成分を含みうる。医薬組成物は、錠剤もしくは充填カプセル剤、半固体剤、散剤、持続放出製剤などの固体として使用しても、または、液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、もしくは経口使用のための充填カプセル剤などの液体として使用してもよく；あるいは、直腸もしくは膣内投与のための坐剤の形態で使用してもよく；あるいは、非経口使用のための無菌注射溶液の形態で使用してもよい。したがって、錠剤１個あたり約１mgの活性成分、より広くは約０．０１〜約１００mgの活性成分を含む製剤が、適切な代表的な単位用量形態である。
【０１１０】
本発明の化合物は、多種多様な経口投与用の用量形態で製剤化してもよい。医薬組成物および用量形態は、本発明の化合物またはその薬学的に許容しうる塩を活性成分として含みうる。薬学的に許容しうる担体は、固体でも液体でもよい。固体形態の調製物として、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒剤が挙げられる。固体担体は、希釈剤、風味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても作用しうる１種以上の物質であってもよい。散剤では、担体は、一般に、微粉砕された活性成分との混合物である微粉砕された固体である。錠剤では、活性成分は、一般に、必要な結合能を有する担体と適切な比率で混合されており、所望の形状およびサイズに圧縮されている。散剤および錠剤は、好ましくは、活性化合物を約１〜約７０％含む。適切な担体として、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点蝋、ココアバターなどが挙げられるが、これらに限定されない。「調製物」なる用語は、担体を有するかまたは有さない活性成分がそれと関連する担体により周囲を囲まれているカプセル剤を与える、担体としてのカプセル化材料を有する活性化合物の製剤を包含することが意図されている。同様に、カシェ剤およびトローチ剤も包含される。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびトローチ剤は、経口投与に適した固体形態でありうる。
【０１１１】
経口投与に適した他の形態として、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水性液剤、水性懸濁剤などのような液体形態調製物、または、使用直前に液体形態調製物に変換されることが意図されている固体形態の調製物などが挙げられる。乳剤は、溶液中、例えばプロピレングリコール水溶液中で調製しても、または、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートもしくはアカシアなどの乳化剤を含んでいてもよい。水性液剤は、活性成分を水に溶かし、適切な着色剤、風味剤、安定化剤および粘稠化剤を加えることにより調製することができる。水性懸濁剤は、微粉砕活性成分を、天然もしくは合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび他の公知の懸濁化剤などの粘性物質と一緒に水に分散させることにより調製することができる。固体形態の調製物には、液剤、懸濁剤、および乳剤が包含され、活性成分に加えて、着色剤、風味剤、安定化剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでいてもよい。
【０１１２】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射による投与、例えば、ボーラス注射または連続注入による投与）用に製剤化することが可能であり、アンプル、予め充填してある注射器もしくは小容量輸液中の単位投与形態で供することができるか、または、保存剤を添加してある複数回服用のための容器で供することができる。その組成物は、懸濁剤、液剤、または、油性もしくは水性ビヒクル中の乳剤のような形態、例えば、水性ポリエチレングリコール中の液剤の形態を取ることができる。油性もしくは非水性の担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）および注射可能な有機エステル類（例えば、オレイン酸エチル）などを挙げることができ、製剤助剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤もしくは懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤を含んでいてもよい。あるいは、活性成分は、無菌の固体を無菌的に単離することにより得られるかまたは溶液から凍結乾燥により得られる、使用する前に適切なビヒクル（例えば、無菌で、発熱性物質を含まない水）で構成するための粉末形態であり得る。
【０１１３】
本発明の化合物は、表皮への局所投与用に、軟膏剤、クリーム剤もしくはローション剤または経皮貼付剤として製剤化してもよい。軟膏剤およびクリーム剤は、例えば、水性または油性の基剤を使用し、それに、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を添加して製剤化しうる。ローション剤は、水性または油性の基剤を使用して製剤化可能であり、一般に、１種以上の乳化剤、安定化剤、分散化剤、懸濁化剤、増粘剤、または着色剤を含む。口内に局所投与するのに好適な製剤としては、風味を付けた基剤（通常、ショ糖およびアカシアまたはトラガカント）中に活性薬物を含有するトローチ剤；ゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアカシアのような不活性基剤中に活性成分を含有するパステル剤；ならびに、適切な液体担体中に活性成分を含有する洗口液などが挙げられる。
【０１１４】
本発明の化合物は、坐剤として投与するために製剤化しうる。脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物などの低融点蝋を最初に融解させ、例えば攪拌することにより、活性成分を均質に分散させる。次いで、融解している均質な混合物を好都合な寸法の型に注ぎ入れ、冷却し、固化させる。
【０１１５】
本発明の化合物は、膣内投与用に製剤化しうる。活性成分に加えて、この技術分野において適切であることが知られている担体を含有する、ペッサリー剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡剤、またはスプレー剤。
【０１１６】
主題化合物は、鼻腔内投与用に製剤化しうる。液剤または懸濁剤を、慣用的な手段により、例えば、点滴器、ピペット、またはスプレーを用いて、鼻腔に直接適用する。製剤は、単一用量形態または複数の用量を含む形態で供しうる。点滴器またはピペットの後者の場合、これは、適切な所定容積の液剤または懸濁剤を、患者が投与することによって達成しうる。スプレー剤の場合は、これは、例えば、計量噴霧スプレーポンプを用いて達成しうる。
【０１１７】
本発明の化合物は、特に気道への、エアゾール投与（鼻腔内投与を含む）用に製剤化することができる。この化合物は、一般に、小さな粒径、例えば、５ミクロン以下の粒径を有する。このような粒径は、この技術分野において既知の手段により、例えば、微粒化により得ることができる。活性成分は、適切な噴射剤、例えばクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、もしくはジクロロテトラフルオロエタン、または二酸化炭素、あるいは他の適切なガスを用いた加圧パックに入れて供される。エアゾールは、好都合には、レシチンのような界面活性剤をも含有しうる。薬物の用量は、計量バルブで調節しうる。あるいは、活性成分は、乾燥粉末の形態で、例えば適切な粉末基剤（例えば、乳糖、デンプン、デンプン誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））中のその化合物の混合粉末の形態で供することができる。粉末状担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、単位投与形態で、例えば、カプセルもしくはカートリッジ（例えば、ゼラチンの）またはブリスターパックに入れて供することができ、そこから、吸入器を用いてその粉末を投与することができる。
【０１１８】
望ましい場合には、製剤は、活性成分の持続的放出投与または制御放出投与に適合させた腸溶性コーティングを施して調製することができる。例えば、本発明の化合物は、経皮薬物送達デバイスまたは皮下薬物送達デバイス内で製剤化することができる。これらの送達システムは、その化合物の持続的放出が必要な場合、および、患者による治療計画のコンプライアンスが重要である場合に有利である。経皮送達システムにおける化合物は、多くの場合、皮膚接着性固体支持体に付着させる。対象の化合物は、浸透増強剤、例えばＡｚｏｎｅ（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）と組み合わせることもできる。持続的放出送達システムを、手術または注射により、皮下層に皮下挿入する。皮下インプラントでは、その化合物を、脂溶性膜（例えばシリコーンゴム）または生分解性ポリマー（例えばポリ乳酸）中に封入している。
【０１１９】
医薬調製物は、単位用量形態にあることが好ましい。そのような形態において、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量へと分割されている。単位用量形態は、パッケージ調製物であることができ、そのパッケージは、パケット錠剤、カプセル剤および、バイアルまたはアンプル中の粉末剤のような調製物の個々の分量を含有する。また、単位用量形態は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、もしくはトローチ剤自体であってもよく、またはこれらのいずれかが適切な数でパッケージされた形態であることも可能である。
【０１２０】
その他の適切な医薬的担体およびそれらの製剤化は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載されている。本発明の化合物を含有している代表的な医薬製剤を、以下に記載する。
【０１２１】
本発明の化合物は、放射線療法等の公知の抗癌処置と、または細胞増殖抑制剤もしくは細胞傷害剤（例えば、ＤＮＡ相互作用剤、例えばシスプラチンまたはダウノルビシン；エトポシド等のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ＣＰＴ−１１またはトポテカン等のトポイソメラーゼＩ阻害剤；パクリタクセル（paclitaxel）、ドセタクセル（docetaxel）またはエポチロン（epothilones）等のチューブリン相互作用剤；タモキシフェン（tamoxifen）等のホルモン剤；５−フルオロウラシル等のチミジラエート（thymidilaate）合成阻害剤；およびメトトレキセート（methotrexate）等の抗代謝剤と組み合わせて使用しうる（組み合わせてまたは連続して投与される）。式Ｉの化合物は、また、ｐ５３転写促進のモジュレーターと組み合わせて有用でありうる。
【０１２２】
固定の用量で製剤化した場合、上記の組み合わせ製品は、上記の用量範囲内の本発明の化合物およびその許容用量範囲内の他の薬学的に活性な薬剤または処置法とを含む。例えば、初期のｃｄｋ１阻害剤オロムシン（olomucine）は、アポトーシスの誘起における周知の細胞傷害剤と相乗的に作用することが見出されている（J. Cell Sci. (1995) 108:2897-904）。式Ｉの化合物は、また、同時投与または組み合わせが不適当である場合には、公知の抗癌剤または細胞傷害剤と順次に投与しうる。本発明では、投与の順序に制限は無く：式Ｉの化合物は、公知の抗癌剤または細胞傷害剤の投与の前または後に投与しうる。例えば、ｃｄｋ阻害剤フラボピリドール（flavopiridol）の細胞毒性活性は、抗癌剤との投与順序に影響される（Cancer Res (1997) 57:3375）。
【０１２３】
本発明の化合物の薬理学的特性は、いくつかの薬理学的アッセイにより確認しうる。以下の例示の薬理学的アッセイは、本発明に係る化合物およびそれらの塩を用いて行われている。本発明の化合物は、１．０□Ｍ未満のＩＣ５０値およびＫｉ値でｃｄｋ４／サイクリンＤ活性を示した。さらに、本発明のいくつかの化合物の抗増殖有効性を、ヒト結腸腫瘍細胞系ＨＣＴ１１６において試験し、ＭＴＴアッセイから３０□Ｍ未満、好ましくは５□Ｍ未満のＩＣ９０値が報告された。
【０１２４】
本発明のさらなる目的、利点、および新規な特徴は、限定することを意図するものではない、以下の実施例の試験において、当業者に明らかになろう。
【０１２５】
実施例
略語のリスト
ＢＯＰ        ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムへキサフルオロホスファート
ＤＣＥ        １，２−ジクロロエタン
ＤＣＭ        ジクロロメタン／塩化メチレン
ＤＩＰＥＡ    ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ        Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＩＡＤ      アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
ＬＡＨ        水素化アルミニウムリチウム
ＩＢＸ        ｏ−ヨードキシ安息香酸
ｍ−ＣＰＢＡ  ３−クロロペルオキシ安息香酸
ＭｅＯＨ      メタノール
ＭｓＣｌ      塩化メタンスルホニル
ＭＷ          マイクロ波
ＮＣＳ        Ｎ−クロロスクシンイミド
ＮＭＰ        １−メチル−２−ピロリジノン
ＲＴ          室温
ＳＴＡＢＨ    トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム
ＴＥＡ        トリエチルアミン
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＬＣ        薄層クロマトグラフィー
【０１２６】
実施例１：２，４，５−トリクロロ−ピリミジンの合成
２，４，５−トリクロロ−ピリミジンの合成を、スキームＡに示した方法にしたがって実施した。
【０１２７】
【化９】
2010502668.tif 000026
【０１２８】
５−クロロウラシル（４．５ｇ、３０．８２mmol）をオキシ塩化リン（１００mL）に溶解して、五塩化リン（１９．２ｇ、９２．４６mmol）を加えた。反応混合物を一晩加熱還流した；次に、それを室温に冷却して、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を０℃に冷却して、アイスフレークを注意深く加えた。得られた混合物を１０分間撹拌した；次に、それを水とＤＣＭに分配した。有機相を分離して、３回水で洗浄した。水層を合わせて、２回ＤＣＭで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で蒸発させて、さらに精製しないで黄色の油状物として２，４，５−トリクロロ−ピリミジン６ｇ（９５％収率）を得た。
【０１２９】
実施例２：１−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの合成
１−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの合成を、スキームＢに示した方法にしたがって実施した。
【０１３０】
【化１０】
2010502668.tif 000027
【０１３１】
ＤＭＦ（１０mL）中のベンゾトリアゾール（２．１４ｇ、１８．０３mmol）の溶液を、０℃で、窒素雰囲気下、ＤＭＦ（２０mL）中のＮａＨ（鉱油中６０％、０．８５０ｇ、２１．３mmol）の溶液にゆっくり加えた。反応混合物を０℃で１５分間撹拌した；次に、ＤＭＦ（２０mL）中の２，４，５−トリクロロピリミジン（３ｇ、１６．３９mmol）の溶液を０℃でゆっくり加えた。反応混合物を一晩撹拌する間に室温に到達させた。溶媒を減圧下で蒸発させた；残留物をＥｔＯＡｃで取り、３×水で洗浄した。水層を合わせて、３回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で蒸発させて、粗油状物を得た。この物質をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、８／２）を通して精製して、１−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール１．５ｇ（３４％収率）を得た。
【０１３２】
以下の化合物を、適切なクロロピリミジンを使用して同様に調製した：
１−（２−クロロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール；
１−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール；および
１−（２−クロロ−５−メチル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール。
【０１３３】
実施例３：１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの合成
１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの合成を、スキームＣに示した方法にしたがって実施した。
【０１３４】
【化１１】
2010502668.tif 000028
【０１３５】
工程１：１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの合成
１Ｌ丸底フラスコを、水素化ナトリウム分散体（１０．０ｇ、２５０mmol、鉱油中６０％）およびＤＭＦ  ２００mLで満たし、得られたスラリーを氷浴で冷却した。ベンゾトリアゾール（１８．０２ｇ、１５１mmol）を１０−１２分の時間をかけて分割して加えた。反応混合物を、ガス発生が消滅するために１０分間撹拌した；次に、氷浴を除去して、４−クロロ−２−メチルチオピリミジン（２４．０７ｇ、１５０mmol）を加えた。得られた混合物を室温で１５分間撹拌して、次に、９０℃油浴に１．５時間入れた。熱浴を止めて、反応混合物を放置して撹拌しながら一晩ゆっくり冷却した。次に、反応混合物を水５００mLに注いで、２０分間撹拌して、次に濾過した。回収した固体を３分割の水およびヘキサン類／ＥｔＯＡｃ（１０：１〜５：１）の混合物の３分割で洗浄して、次に乾燥させて、オフホワイトの固体として１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２７．０５ｇ、７４％収率）、融点＝１８０．５−１８１．７℃；ＭＳ＝２４４（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１３６】
工程２：１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの合成
１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２７．０５ｇ、１１１mmol）を、２Ｌ丸底フラスコ中に、ＣＨＣｌ３  ６００mLに溶解／懸濁した。混合物を氷浴で冷却して、ｍ−ＣＰＢＡ（５８．０３ｇ、２５９mmol、ｃａ．７７％）を、１５℃以下の反応温度を維持しながらゆっくり分割して加えた。反応混合物をゆっくり室温に温めて、１６時間撹拌して、次に１時間還流した。それを冷却して、含水チオ硫酸ナトリウムで処理した；有機層を分離して、３分割の含水重炭酸ナトリウムで洗浄した。次に、それを硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、懸濁液の形成まで減圧下で濃縮して、それを濾過して、乾燥させて、白色の固体として１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２０．７８ｇ、６８％収率）、融点＝２０１．８−２０２．５℃；ＭＳ＝２７６（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１３７】
実施例４：Ｎ−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンの合成
Ｎ−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンの合成を、スキームＤに示した方法にしたがって実施した。
【０１３８】
【化１２】
2010502668.tif 000029
【０１３９】
ジオキサン／ＭｅＯＨ（４０mL／４０mL）中のトランス−１，４−ジアミノシクロヘキサン（１０．１０ｇ、８８mmol）の９０℃溶液に、ゆっくりジオキサン／ＭｅＯＨ（４０mL／４０mL）中の２−クロロピリミジン（３．１４ｇ、４５mmol）の溶液を加えた。反応混合物を一晩還流し、次に冷却して、形成した懸濁液を濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、別の懸濁液を形成して、それを再度濾過した。回収した液体をＥｔＯＡｃと含水ＮａＨＣＯ３に分配した。生成物が水層中に残り、３分割のＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した；溶媒を減圧下で蒸発させた。粗残留物をヘキサン類／ＣＨ２Ｃｌ２（１／１）から再結晶化して、乾燥させて、オフホワイトの固体としてＮ−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（１．２０ｇ、１４％収率）、融点＝１２６．９−１２８．４℃；ＭＳ＝１９３（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１４０】
実施例５：アミン類の合成
種々のアミン類の合成を、スキームＥに示した方法にしたがって実施した。
【０１４１】
【化１３】
2010502668.tif 000030
【０１４２】
工程１：メタンスルホン酸（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−プロピルエステルの合成
２−（Ｓ）−Boc−アミノ−プロパノール（１０ｇ、５７．１mmol、１．００当量）を、窒素雰囲気下でＤＣＭ（２００mL）に溶解した；そして、トリエチルアミン（７．４９ｇ、１０．３２mL、７４．２mmol、１．３０当量）を室温で加えた。反応混合物を０℃に冷却して、塩化メシル（７．３９ｇ、４．９９mL、６４．５mmol、１．１３当量）を窒素雰囲気下で加えた。得られた混合物を０℃で３時間撹拌し、次に、３回Ｈ２Ｏ（１００mL）で洗浄し、水相を合わせて、３回ＤＣＭ（５０mL）で抽出した。有機抽出物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、蒸発させて、白色の固体としてメタンスルホン酸（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−プロピルエステル（１４．１７ｇ、９８％収率）を提供した。1H NMR(400MHz、CDCl3)δ ppm 4.56-4.70(1 H、m), 4.17-4.27(1 H,m), 4.10-4.17(1 H,m), 3.89-4.02(1 H,m)、2.97-3.05(3 H,m), 1.38-1.47(9 H,m), 1.22(3 H,d,J=6.85Hz).
【０１４３】
同じ方法で、出発物質として２−（Ｒ）−boc−２−アミノ−プロパノール（収率＝１４．０９ｇ、９７％収率）を使用してメタンスルホン酸（Ｒ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−プロピルエステル（白色の固体）を調製した；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.55-4.67(1 H,m), 4.17-4.27(1 H,m), 4.11-4.17(1 H,m), 3.90-4.02(1 H,m), 3.02(3 H,s), 1.43(9 H,s), 1.22(3 H,d,J=6.85Hz).
【０１４４】
工程２：アミンＡの合成
メタンスルホン酸（Ｓ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−プロピルエステル（１．００ｇ、３．９４mmol、１当量）を、窒素雰囲気下で、ＤＭＦ（１６mL）に溶解し、次に、Ｋ２ＣＯ３（１．０９ｇ、７．８９mmol、２当量）および式ＲＲ’ＮＨの適切なアミン（３．９５mmol、１当量）を室温で加えた。反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。得られた混合物を濃縮して、粗固体を提供して、それを１：１  ｉＰｒＯＨ／ＣＨＣｌ３混合物で溶解し、２回Ｈ２Ｏ（１０mL）で洗浄した。水相を合わせ、３回１：１  ｉＰｒＯＨ／ＣＨＣｌ３混合物（２０mL）で抽出した。有機抽出物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、蒸発させて、所望の粗アミンを提供した。
【０１４５】
同様の反応を（Ｓ）−および（Ｒ）−ｂｏｃアミノメシル酸誘導体、ならびに対応する生成物を得るための以下のアミン類で実施した：スクシンイミド；２−ピロリジノン；５，５−ジメチルオキサゾリジン−２，４−ジオン；５−メチル−１Ｈ−テトラゾール；１，２，３−トリアゾール；１，２，４−トリアゾール；メチル−４−イミダゾールカルボキシラート；およびメチル−１，２，３−トリアゾール−３−カルボキシラート。
【０１４６】
粗混合物の１Ｈ  ＮＭＲを実行した。これらのｂｏｃアミノ誘導体を精製しないで次の工程で使用した。
【０１４７】
工程３：アミンＢの合成
（Ｓ）−ｂｏｃ−アミノ誘導体Ａ（３．５mmol、１当量）を、１，４−ジオキサン（５mL）中の４Ｎ  ＨＣｌの溶液に溶解した。反応混合物を１８時間、室温で撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、粗固体を提供して、それを次の工程でさらに精製しないで使用した。
【０１４８】
この手順を使用して、以下のアミン類を調製した：
３−（（Ｒ）−２−アミノ−プロピル）−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２，４−ジオン；
１−（（Ｒ）−２−アミノ−プロピル）−ピロリジン−２，５−ジオン；
（Ｒ）−１−メチル−２−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−エチルアミン；
（Ｒ）−１−メチル−２−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−エチルアミン；
１−（（Ｓ）−２−アミノ−プロピル）−ピロリジン−２，５−ジオン；
（Ｓ）−１−メチル−２−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−エチルアミン；
（Ｓ）−１−メチル−２−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−エチルアミン；および
（Ｒ）−１−メチル−２−（５−メチル−テトラゾール−１−イル）−エチルアミン。
【０１４９】
実施例６：（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミンの合成
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミンの合成を、スキームＦに示した方法にしたがって実施した。
【０１５０】
【化１４】
2010502668.tif 000031
【０１５１】
シクロヘキシルアミン（０．２１mL、１．８８mmol）を、室温、窒素雰囲気下で、分割してＴＨＦ（３０mL）中の１−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２５０mg、０．９４mmol）の溶液に加えた。得られた無色の溶液を室温で４時間撹拌した。次に、ＴＥＡ（２．８２mmol）を加えて、反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を水（５０mL）とＥｔＯＡｃ（５０mL）に分配した。有機層を分離し、２回水（５０mL）で、１回ブライン（５０mL）で洗浄して、次に、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で蒸発させて、オフホワイトの固体を得た。この粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（トルエン／ＥｔＯＡｃ、９８／２）を通して精製して、オフホワイトの固体として（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミン１６２mg（５３％収率）が得られた。ＭＳ：３２９．１４（Ｍ＋１）＋、３０１．１４（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０１５２】
以下の化合物を、同様の手順ならびに適切なアミンおよびピリミジン誘導体を使用して調製した：
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボニトリル；ＭＳ：３２０．１５（Ｍ＋１）＋、２９２．１８（（Ｍ＋１）＋−２８）；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−メチル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミン；ＭＳ：３０９．２３（Ｍ＋１）＋、２８１．２４（（Ｍ＋１）＋−２８）；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−フルオロ−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミン；ＭＳ：３１３．１７（Ｍ＋１）＋、２８５．２１（（Ｍ＋１）＋−２８）；
３−［（Ｒ）−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−プロピル］−５，５−ジメチル−オキサゾリジン−２，４−ジオン；ＭＳ：３８１．９４（Ｍ＋１）、３５３．９８（（Ｍ＋１）−２８）；
１−［（Ｒ）−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−プロピル］−ピロリジン−２，５−ジオン；ＭＳ：３５１．９６（Ｍ＋１）、３２４．０１（（Ｍ＋１）−２８）；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（（Ｒ）−１−メチル−２−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−エチル）−アミン；ＭＳ：３２１．９９（Ｍ＋１）、２９３．９８（（Ｍ＋１）−２８）；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（（Ｒ）−１−メチル−２−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−エチル）−アミン；ＭＳ：３２１．９９（Ｍ＋１）、２９３．９８（（Ｍ＋１）−２８）；
１−［（Ｓ）−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−プロピル］−ピロリジン−２，５−ジオン；ＭＳ：３５１．９６（Ｍ＋１）、３２４．１（（Ｍ＋１）−２８）；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（（Ｓ）−１−メチル−２−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−エチル）−アミン；ＭＳ：３２１．９９（Ｍ＋１）、２９３．９８（（Ｍ＋１）−２８）；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−［（Ｒ）−１−メチル−２−（５−メチル−テトラゾール−１−イル）−エチル］−アミン；ＭＳ：３３７．１６（Ｍ＋１）＋、３０９．１３（（Ｍ＋１）＋−２８）；および
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（（Ｓ）−１−メチル−２−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−エチル）−アミン；ＭＳ：３２２．１７（Ｍ＋１）、２９４．１５（（Ｍ＋１）−２８）。
【０１５３】
実施例７：トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノールの合成
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノールを、スキームＧに示した方法にしたがって実施した。
【０１５４】
【化１５】
2010502668.tif 000032
【０１５５】
ＮＭＰ  １５mL中の１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（１．５９ｇ、６mmol）の溶液に、トランス−４−アミノシクロヘキサン（３．１１ｇ、２７mmol）を加えて、得られた混合物を１２０℃で２時間撹拌した。次に、それを冷却し、水１００mLへ注ぎ、撹拌して、一晩そのまま放置した。得られた懸濁液を濾過し、回収した固体を水で洗浄して、ＣＨ２Ｃｌ２で溶解した；溶媒を減圧下で除去した。形成した固体残留物をＥｔＯＡｃで取り、濾過して、乾燥させて、白色の固体としてトランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノール（９１０mg、５１％収率）、融点＝２２４．８−２２８．１℃；ＭＳ＝３１１（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１５６】
以下の化合物を、同様の手順ならびに適切なアミン類を使用して調製した：
シス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノール（白色の固体）；融点＝２２０．０−２２１．０℃；ＭＳ＝３１１（Ｍ＋Ｈ）＋；
トランス−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノール（白色の結晶質固体）；融点＝１６６．９−１６９．３℃；ＭＳ＝３１１（Ｍ＋Ｈ）＋；
（１Ｒ、３Ｒ）−３−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロペンタノール（白色の固体）；融点＝１９４．５−１９６．５℃；ＭＳ＝２９７（Ｍ＋Ｈ）＋；
（１Ｓ、３Ｓ）−３−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロペンタノール（白色の固体）；融点＝１９４．１−１９５．９℃；ＭＳ＝２９７（Ｍ＋Ｈ）＋；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−エチル−シクロヘキシル）−アミン（白色の固体）；融点＝１９１．２−１９１．７℃；ＭＳ＝３２３（Ｍ＋Ｈ）＋；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−ピペリジン−４−イル−アミン（白色の固体；tert−ブチル４−アミノ−１−ピペリジンカルボキシラートを使用して得た、４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルの標準tert−ブチルカルバマート脱保護から得た）；融点＝２３０．１−２３３．９℃；ＭＳ＝２９６（Ｍ＋Ｈ）＋；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−メチル−シクロヘキシル）−アミン（白色の固体）；融点＝１９２．５−１９６．０℃；ＭＳ＝３０９（Ｍ＋Ｈ）＋；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（トランス−４−メトキシ−シクロヘキシル）−アミン（白色の固体）（Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  （１９８９）３２：３５５に記載の通りに４−メトキシ−シクロヘキサノールから得た、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  （１９７７）２０：２８９に記載の通りに４−メトキシ−シクロヘキサノンから得た、４−メトキシ−シクロヘキシルアミンをＪ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  （１９８５）５０：１１６０に記載の通りに４−メトキシ−シクロヘキサノンオキシムから得た）；融点＝１８４．０−１８６．９℃；ＭＳ＝３２５（Ｍ＋Ｈ）＋；
Ｎ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（白色の固体）（Ｎ−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンを調製４に記載の通りに調製した）；融点＝２８６．０−２８６．４℃；ＭＳ＝３８８（Ｍ＋Ｈ）＋；
Ｎ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンビス−メタンスルホン酸塩（これは、ＣＨ２Ｃｌ２  １００mL中のＮ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−ピリミジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンビス−メタン（１５０mg）およびＭｅＯＨの２０mLの溶液に、過剰量のメタンスルホン酸を加えて調製した。得られた混合物を濃縮して、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃから再結晶化した。固体を濾過して、乾燥させて、白色の固体としてメタンスルホン酸塩（２１４mg、９５％収率）；融点＝２８２．６−２８８．９℃；ＭＳ＝３８８（Ｍ＋Ｈ）＋を得た）。
【０１５７】
同様に、以下の化合物のメタンスルホン酸塩を調製した：
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］ｄｅｃ−８−イル）−アミン（白色の固体）；融点＝２０７．９−２０９．０℃；ＭＳ＝３５３（Ｍ＋Ｈ）＋；
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−アミン（白色の細針結晶）；融点＝２０２．０−２０２．４℃；ＭＳ＝２９７（Ｍ＋Ｈ）＋；および
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１λ６−チオピラン−４−イル）−アミン（白色の粉末）；融点＝２６８．５−２７０．２℃；ＭＳ＝３４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５８】
実施例８：（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミンの合成
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミンの合成を、スキームＨに示した方法にしたがって実施した。
【０１５９】
【化１６】
2010502668.tif 000033
【０１６０】
ＮＭＰ  ４mL中の１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（３７６mg、１．５mmol）の溶液に、Ｎ−クロロスクシンアミド（２５０mg、１．９mmol）および水０．５mLを加えた。混合物を、油浴に１３０℃で５−１０分間入れて、次に、シクロヘキシルアミン（４５０mg、５mmol）を加えて、反応混合物を油浴中、１３０℃で３０分間撹拌した。冷却した反応混合物を水（４０mL）とＥｔＯＡｃ（４０mL）に分配した。有機層を分離して、２回水（４０mL）で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を減圧下で除去した。粗残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃから再結晶化して、白色の短針結晶質固体（２５５mg、５６％収率）として（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキシル−アミンを得た。融点＝２０２．０−２０４．０℃；ＭＳ＝２９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６１】
実施例９：（１Ｓ、２Ｒ）−［２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノールの合成
（１Ｓ、２Ｒ）−［２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノールの合成を、スキームＩに示した方法にしたがって実施した。
【０１６２】
【化１７】
2010502668.tif 000034
【０１６３】
工程１：シス−（１Ｓ、２Ｒ）−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステルの合成
（１Ｓ、２Ｒ）−シス−２−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル臭化水素酸（０．４１ｇ、１．６２mmol）およびトリエチルアミン（０．３０mL、２．１６mmol）を、ＮＭＰ  ２mL中の１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．３０ｇ、１．０９mmol）の溶液に加えた。反応混合物を、４５分間、１２０℃で撹拌して、次に、酢酸エチル５０mLへ注いだ。有機層を分離し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した；溶媒を減圧下で蒸発させた。粗残留物をメタノールとジクロロメタンの溶液で粉砕した；次に、それを濾過して、乾燥させて、オフホワイトの固体としてシス−（１Ｓ、２Ｒ）−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（０．２２ｇ、５５％収率）；融点＝１０６．３−１０７．９℃；ＭＳ＝３６７（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１６４】
工程２：（１Ｓ、２Ｒ）−［２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノールの合成
水素化アルミニウムリチウム（ＴＨＦ中１．０Ｍ、０．５２mL、０．５２mmol）を、ＴＨＦ  ５mL中のシス−（１Ｓ、２Ｒ）−２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（０．１９ｇ、０．５２mmol）の−７８℃溶液に滴下した。反応混合物を２時間撹拌し、次に１０分間かけて室温に温めた。標準フィーザー処理（Fieser work-up）後（１：１：３  Ｈ２Ｏ、１５％  ＮａＯＨ、Ｈ２Ｏ）、反応混合物を室温で約１８時間撹拌した。酢酸エチルを加えて、混合物を濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、粗残留物をクロロホルムに溶解し、セライトパッドを介して濾過し、減圧下で濃縮して、乾燥させて、白色の固体として（１Ｓ、２Ｒ）−［２−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノール（０．０４ｇ、２４％収率）；融点＝２０６．１−２０７．８℃；ＭＳ＝３２５（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１６５】
トランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノールを、適切なアミノエステルを使用して、同様の方法で調製した；ＭＳ：３２５．１９（Ｍ＋１）＋、２９７．１７（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０１６６】
実施例１０：Ｎ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンの合成
Ｎ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンの合成を、スキームＪに示した方法にしたがって実施した。
【０１６７】
【化１８】
2010502668.tif 000035
【０１６８】
ＮＭＰ  ８０mL中の１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（１０．０７ｇ、３７mmol）の温溶液を、１０分間かけて添加漏斗を通して、ＮＭＰ  １００mL中のトランス−１，４−ジアミノシクロヘキサン（２５．５８ｇ、２２４mmol）の１１５℃溶液に滴下した。反応混合物を、１．５時間、油浴中、１１５−１２０℃で撹拌した；次に、それをゆっくり一晩室温に冷却した。反応混合物を水３００mLに注いで、４時間撹拌した；次に、それを２回ＥｔＯＡｃ（４００mL）で抽出した。合わせた有機抽出物を１回水（生成物が水溶性である）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した。溶媒を、生成物が晶出しはじめるまで、減圧下で蒸発させた。固体を濾過し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類で洗浄して、乾燥させて、標記化合物の第一クロップを得た。さらなるクロップを、同様の方法で母液から得て、オフホワイトの固体としてＮ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン総量６．４７ｇ（５７％収率）；融点＝２２３．５−２２７．８℃；ＭＳ＝３１０（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１６９】
実施例１１：Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−アセトアミドの合成
Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−アセトアミドの合成を、スキームＫに示した方法にしたがって実施した。
【０１７０】
【化１９】
2010502668.tif 000036
【０１７１】
ＮＭＰ  １．５mL中のＮ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（０．２２ｇ、０．７１mmol）の懸濁液に、無水酢酸（０．１３mL、１．３８mmol）を加えた。反応物を１時間撹拌した。酢酸エチルを懸濁液に加えて、得られた混合物を１０分間撹拌した。沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで粉砕して、乾燥させて、白色の固体としてＮ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−アセトアミド（０．１８ｇ、７４％収率）；融点＝２８６．６−２８７．６℃；ＭＳ＝３５２（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１７２】
以下の化合物を、適切なアシル化剤を使用して同様に調製した：
Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−アセトアミドメシラート（白色の固体）；融点＝２０２．２−２０６．６℃；ＭＳ＝３５２（Ｍ＋Ｈ）＋；
Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタンスルホンアミド（白色の固体）；融点＝２７９．２−２８０．０℃；ＭＳ＝３８８（Ｍ＋Ｈ）＋；
メタンスルホン酸（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−メタンスルホニルアミノ−シクロヘキシル）−アンモニウム（白色の固体、１６１mg、９０％収率）；融点＝２５２．３−２５６．６℃；ＭＳ＝３８８（Ｍ＋Ｈ）＋；
Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−プロピオンアミド（白色の固体）；融点＝２９３．０−２９４．３℃；ＭＳ＝３６６（Ｍ＋Ｈ）＋；
エタンスルホン酸［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−アミド（白色の固体）；融点＝２８２．１−２８７．３℃；ＭＳ＝４０２（Ｍ＋Ｈ）＋；
ジメチルスルファミン酸［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル−アミノ）−シクロヘキシル］アミド（白色の固体）；融点＝２４２．０−２４４．０℃；ＭＳ＝４１７（Ｍ＋Ｈ）＋；および
２−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−イル］−アセトアミド（オフホワイトの固体）；融点＝２４７．９−２４９．３℃；ＭＳ＝３５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７３】
実施例１２：Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの合成
Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの合成を、スキームＬに示した方法にしたがって実施した。
【０１７４】
【化２０】
2010502668.tif 000037
【０１７５】
工程１：（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−メチル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンの合成
Ｎ−４−ベンゾトリアゾール−１−イルピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（０．３０ｇ、０．９７mmol）、ホルムアルデヒド（０．５mL、水中３７％、０．８７mmol）およびメタノール（５mL）の懸濁液を、４時間、室温、窒素雰囲気下で撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（０．０６ｇ、１．５９mmol）を分割して加えて、懸濁液を１時間撹拌した。水酸化ナトリウム（１Ｍ、１０mL）の溶液を加えた。反応混合物を２５℃水浴中で冷却して、３０分間撹拌した。酢酸エチル（５０mL）を加えて、得られた混合物を５分間撹拌し、次に濾過した。濾液の有機層を廃棄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した；有機層を分離した；Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した；溶媒を減圧下で蒸発させた。粗固体を１５％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、固体として（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−メチル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（０．０５ｇ、１６％収率）を得た。ＭＳ＝３２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７６】
工程２：Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの合成
標記化合物を、（４−ベンゾトリアゾール−１−イルピリミジン−２−イル）−Ｎ’−メチル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミンから実施例１１に記載の通りに同様の方法でオフホワイトの粉末として得た。ＭＳ＝３６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７７】
Ｎ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（オフホワイトの固体）を、同様の方法で、塩化メタンスルホニルを使用して調製した；融点＝２４９．９−２５１．７℃；ＭＳ＝４０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７８】
実施例１３：Ｎ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン塩酸塩の合成
Ｎ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−Ｎ’−ピリジン−２−イル−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン塩酸塩を、スキームＭに示した方法にしたがって実施した。
【０１７９】
【化２１】
2010502668.tif 000038
【０１８０】
ＮＭＰ  １．５mL中のＮ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イルピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（０．２０ｇ、０．６５mmol）および２−フルオロピリジン（０．１１mL、１．２８mmol）の溶液を、マイクロ波反応器中、２３０℃で２０分間加熱した。ＮＭＰを蒸留により除去した。固体を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、エーテルで粉砕して、分取ＴＬＣにより精製した。この方法で得た遊離塩基を、エーテル中のＨＣｌを加えることにより対応する塩酸塩に変換して、黄色の固体として標記化合物（０．０４ｇ、１６％収率）；融点＝２０７．０−２１０．０℃を得た。ＭＳ＝３８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８１】
実施例１４：Ｎ−｛トランス−４−［（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−メチル−アミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの合成
Ｎ−｛トランス−４−［（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−メチル−アミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの合成を、スキームＮに示した方法にしたがって実施した。
【０１８２】
【化２２】
2010502668.tif 000039
【０１８３】
ＮＭＰ  ４mL中のＮ−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタンスルホンアミド（０．１３ｇ、０．３mmol）の溶液に、過剰量のＮａＨ（鉱油中で分散体）を加えた。直ちに、混合物が黄色に変色して、反応が現れて僅かに発熱する；次に、それを室温で１０−１５分間撹拌して、次に、ヨードメタン２滴を加えた。黄色が薄くなって、反応混合物を１５分間撹拌した。次に、それを水１００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ  １００mLで抽出した。有機層を分離して、２回水１００mLで洗浄した；次に、それをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類、１：１）により精製した。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類から再結晶化を行って、白色の固体として標記生成物（５１mg、３７％収率）；融点＝２０３．５−２０４．０℃；ＭＳ＝４１６（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１８４】
実施例１５：１−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ピロリジン−２，５−ジオンの合成
１−［トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ピロリジン−２，５−ジオンの合成を、スキームＯに示した方法にしたがって実施した。
【０１８５】
【化２３】
2010502668.tif 000040
【０１８６】
ＮＭＰ  ２mL中のＮ−（４−ベンゾトリアゾール−１−イルピリミジン−２−イル）−シクロヘキサン−トランス−１，４−ジアミン（０．２６ｇ、０．８mmol）および無水コハク酸（０．０９ｇ、０．９mmol）の溶液を、反応チューブに入れ、密閉して、次に１７時間、６０−６５℃に加熱した。冷却した反応混合物を濃縮して、無水酢酸８mLおよび酢酸ナトリウム（０．０９ｇ、１．１０mmol）で処理した。混合物を加熱し還流して、２１時間撹拌した。反応混合物を氷冷水へ注ぎ、１Ｍ水酸化ナトリウムで中和した。沈殿物を濾過して、分取ＴＬＣにより精製して、白色の固体として標記化合物（０．０７ｇ、２１％収率）を得た。融点＝２０５．０−２１０．０℃；ＭＳ＝３９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８７】
実施例１６：４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノンの合成
４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノンの合成を、スキームＰに示した方法にしたがって実施した。
【０１８８】
【化２４】
2010502668.tif 000041
【０１８９】
ＴＨＦ  ８０mL中の（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］ｄｅｃ−８−イル）−アミン（実施例２に記載の通りに同様の方法で調製した）（１．５３ｇ、４mmol）の懸濁液に、ＨＣｌの３Ｍ水溶液２５mLを加えた。反応混合物を室温で２０分間撹拌した。反応物を加熱し３０分間還流した。次に、それを冷却して、ＮａＨＣＯ３水溶液へ注いだ。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した。溶媒を、生成物が溶液に晶出し始めるまで、減圧下で蒸発させた；次に、それを濾過して、乾燥させて、白色の粉末として標記生成物（９４２mg、７０％収率）；融点＝２０４．９−２０６．５℃；ＭＳ＝３０９（Ｍ＋Ｈ）＋を得た。
【０１９０】
実施例１７：４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−１−メチル−シクロヘキサノールの合成
４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−１−メチル−シクロヘキサノールの合成を、スキームＱに示した方法にしたがって実施した。
【０１９１】
【化２５】
2010502668.tif 000042
【０１９２】
−７８℃で冷却した、ＴＨＦ  ８０mL中の４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサノン（７６４mg、２．５mmol）の溶液に、メチルマグネシウムクロリド（３．５mL、ＴＨＦ中３．０Ｍ、１０．５mmol）を滴下した。反応混合物は直ちに明黄色に変色した；次に、それを放置して室温に温めた。反応が完了しないので、それを−７８℃に再冷却して、さらなる分割量のＭｅＭｇＣｌ（３mL、９mmol）を加えた。得られた混合物を室温に温めて、次に、ＮＨ４Ｃｌの水溶液へ注いだ；それをＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した；溶媒を減圧下で蒸発させた。粗残留物をカラムクロマトグラフィー（１−５／９９−９５  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して：より低い極性のトランス−異性体（１３０mg、１６％収率、融点＝１９３．０−１９５．４℃；ＭＳ＝３２５（Ｍ＋Ｈ）＋）、および白色の結晶質固体として、より高い極性のシス−異性体（３６０mg、４５％収率、融点＝２０２．１−２０５．６℃；ＭＳ＝３２５（Ｍ＋Ｈ）＋）を得た。
【０１９３】
実施例１８：トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸の合成
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸の合成を、スキームＲに示した方法にしたがって実施した。
【０１９４】
【化２６】
2010502668.tif 000043
【０１９５】
工程１：４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステルの合成
トランス−４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（７２７mg、３．７６mmol）を、室温で、窒素雰囲気下、ＴＨＦ（５０mL）中の１−（２，５−ジクロロ−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（５００mg、１．８８mmol）の溶液に、続けてＴＥＡ（０．７９mL、５．６４mmol）を分割して加えた。得られた白色の懸濁液を、室温で一晩、次に、６０℃で２．５日間撹拌した。混合物を水（１００mL）とＥｔＯＡｃ（１００mL）に分配した。有機層を分離し、２回水（１００mL）で、そして１回ブライン（１００mL）で洗浄し、次に、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を減圧下で蒸発させて、オフホワイトの固体を得た。この粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（トルエン／ＥｔＯＡｃ、９０／１０）を通して精製して、オフホワイトの固体として４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル５３８mg（７４％収率）が得られた。ＭＳ：３８７．１０（Ｍ＋１）＋、３５９．１３（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０１９６】
以下の化合物を、適切なピリミジンを使用して同様に調製した：
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−フルオロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル；ＭＳ：３７１．１２（Ｍ＋１）＋、３４３．１４（（Ｍ＋１）＋−２８）；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−メチル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル；ＭＳ：３６７．２０（Ｍ＋１）＋、３３９．２３（（Ｍ＋１）＋−２８）；および
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル；ＭＳ：３５３．２１（Ｍ＋１）＋、３２５．１９（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０１９７】
工程２：トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸の合成
ＮａＯＨの水溶液（２Ｍ、１０mL）を、室温でＴＨＦ（１０mL）中の４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（４８２mg、１．２５mmol）の無色の溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した；次に、それを水（１５mL）で希釈して、ＨＣｌ（２Ｍ）を加えてｐＨ３まで酸性化した。形成した白色の沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄して、空気乾燥させて、白色の固体としてトランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸４３５mg（８５％収率）を得た。ＭＳ：３７３．１２（Ｍ＋１）＋、３４５．１５（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０１９８】
以下の化合物を、適切なピリミジンを使用して同様に調製した：
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸；ＭＳ：３３９．２１（Ｍ＋１）＋、３１１．２１（（Ｍ＋１）＋−２８）；および
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−フルオロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸；ＭＳ：３５７．１２（Ｍ＋１）＋、３２９．１５（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０１９９】
実施例１９：トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルアミドの合成
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルアミドの合成を、スキームＳに示した方法にしたがって実施した。
【０２００】
【化２７】
2010502668.tif 000044
【０２０１】
ＴＨＦ（６０mL）中のトランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸（７０mg、０．１７mmol）、エチルアミン（２１μL、０．２６mmol）、ＢＯＰ（１１４mg、０．２６mmol）およびＤＩＰＥＡ（５９μL、０．３４mmol）の混合物を、室温で２日間撹拌した。形成した白色の固体を濾過により除去して、濾液を水（２５mL）で希釈して、３回混合物イソプロパノール／クロロホルム（１／１、２０mL）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で蒸発させて、オフホワイトの残留物を得て、それをフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９８／２）を通して精製して、白色の固体としてトランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルアミド６８mg（定量的収率）が得られた。MS:400.17(M+1)+,372.17((M+1)+-28).  1H NMR(250MHz,CD3OD)δ ppm:8.55(1 H,s), 8.09-8.21(2 H,m), 7.69(1 H,dd,J=7.50Hz), 7.55(1 H,dd,J=7.50Hz), 3.71-3.88(1 H,m), 3.18(2 H,q,J=7.29Hz), 2.10-2.25(3 H,m), 1.82-1.95(2 H,m), 1.50-1.71(2 H,m), 1.26-1.48(2 H,m), 1.10(3 H,t,J=7.29Hz).
【０２０２】
以下の化合物を、適切なアミンおよびピリミジン誘導体を使用して同様に調製した：
トランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メタノン；1H NMR(400MHz,eOD)δ ppm 8.54-8.99(1 H,bd), 8.44(1 H,d,J=5.38Hz), 8.11(1 H,d,J=8.31Hz), 7.70(1 H,m), 7.55(1 H,m), 7.44(1 H,d,J=5.38Hz), 4.15-4.29(1 H,m), 3.70-4.10(2 H,m), 3.14-3.39(6 H,m), 2.90(3H,s), 2.83-2.94(1 H,m), 2.00-2.13(2 H,m), 1.80-1.99(4 H,m), 1.65-1.77(2 H,m);
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸シクロプロピルアミド；ＭＳ：３７８．２２（Ｍ＋１）＋、３５０．２２（（Ｍ＋１）＋−２８）；
トランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−ピロリジン−１−イル−メタノン；ＭＳ：３９１．２１（Ｍ＋１）＋；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；ＭＳ：３８２．１８（Ｍ＋１）＋；
シス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メタノン；ＭＳ：４２１．２３（Ｍ＋１）＋；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸（テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−アミド；ＭＳ：４２２．２４（Ｍ＋１）＋；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−メチル−アミド；ＭＳ：３９６．１２（Ｍ＋１）＋；
トランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−モルホリン−４−イル−メタノン；ＭＳ：４０８．２６（Ｍ＋１）＋；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸（２−アミノ−２−メチル−プロピル）−アミド；ＭＳ：４０９．２７（Ｍ＋１）＋；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルアミド；ＭＳ：３６６．１９（Ｍ＋１）＋、３３８．２３（（Ｍ＋１）＋−２８）；
トランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−フルオロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−モルホリン−４−イル−メタノン；ＭＳ：４２６．１５（Ｍ＋１）＋、３９８．１４（（Ｍ＋１）＋−２８）；
トランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−メチル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−モルホリン−４−イル−メタノン；ＭＳ：４２２．１８（Ｍ＋１）＋、３９４．１５（（Ｍ＋１）＋−２８）；
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−フルオロ−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルアミド；ＭＳ：３８４．１５（Ｍ＋１）＋、３５６．１７（（Ｍ＋１）＋−２８）；および
トランス−４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−５−メチル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルボン酸エチルアミド；ＭＳ：３８０．１８（Ｍ＋１）＋、３５２．２１（（Ｍ＋１）＋−２８）。
【０２０３】
実施例２０：トランス−（４−アミノメチル−シクロヘキシル）−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−アミンの合成
トランス−（４−アミノメチル−シクロヘキシル）−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−アミンの合成を、スキームＴに示した方法にしたがって実施した。
【０２０４】
【化２８】
2010502668.tif 000045
【０２０５】
工程１：トランス−２−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−イソインドール−１，３−ジオンの合成
トリフェニルホスフィン（９７２mg、１．２当量）を、トルエン（１００mL）中のトランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノールの溶液（１ｇ、１当量；実施例４に記載の通りに同様の方法で調製した）に加えて、次に、それに続けてＤＩＡＤ（０．７３mL、１．２当量）の滴下を行った。反応混合物を室温で１０分間撹拌して、次に、フタルイミド（５４５mg、１．２当量）を加えた。混合物を一晩室温で撹拌し、次に水を加えて、得られた混合物を３回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗残留物をＭｅＯＨで粉砕して、トランス−２−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−イソインドール−１，３−ジオン９７６mg（７０％収率）；ＭＳ＝４５４．４０（Ｍ＋１）＋を得た。
【０２０６】
トランス−４−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−モルホリン−３，５−ジオンを、適切なイミドを使用して同様に調製した；ＭＳ：４２２．３５（Ｍ＋１）＋。
【０２０７】
工程２：トランス−（４−アミノメチル−シクロヘキシル）−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−アミンの合成
ヒドラジン一水和物（０．２８mL、２．７当量）を、ＥｔＯＨ（６０mL）中のトランス−２−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−イソインドール−１，３−ジオン（９７６mg、１当量）の溶液に加えた。反応混合物を一晩７０℃で撹拌し、次に、第二の分割量のヒドラジン一水和物（０．２２mL、２．０当量）を加えて、混合物を還流で７時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物をイソプロパノールとクロロホルムの混合物に溶解して、それをＨＣｌ（１Ｍ）を加えてｐＨ３まで酸性化した。有機相を３回水で洗浄した。水相をＮａＯＨ（１Ｍ）を加えてｐＨ８−９に塩基性化して、それをイソプロパノールとクロロホルムの混合物で５回抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を減圧下で蒸発させた。この酸／塩基抽出手順を、フタラジノンを除去するために３回繰り返した。トランス−（４−アミノメチル−シクロヘキシル）−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−アミンを７１％純度（４５０mg、６５％収率）で得た。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.53-8.85(1 H,bd), 8.40(1 H,d,J=5.50Hz), 8.09(1 H,d,J=8.31Hz), 7.67(1 H,m), 7.53(1 H,m), 7.39(1 H,d,J=5.50Hz), 3.76-3.89(1 H,m), 2.60(2 H,d,J=6.60Hz), 2.11-2.28(2 H,m), 1.88-2.02(2 H,m), 1.08-1.54(5 H,m).
【０２０８】
実施例２１：トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−アセトアミドの合成
トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−アセトアミドの合成を、スキームＵに示した方法にしたがって実施した。
【０２０９】
【化２９】
2010502668.tif 000046
【０２１０】
ＴＥＡ（５２μL、０．３７mmol）を、窒素雰囲気下で、ＤＣＭ（３mL）中のトランス−（４−アミノメチル−シクロヘキシル）−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−アミン（６０mg、０．１８５mmol）の溶液に加えた。混合物を−７８℃に冷却して、塩化アセチル（１３．２μL、０．１８５mmol）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した；次に、それを水に注いで、３回イソプロパノールとクロロホルムの混合物で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗残留物を、分取ＴＬＣを通して精製して、トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−アセトアミド１０mgを得た。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.55 (1 H,d,J=8.19Hz), 8.41(1 H,d,J=5.14Hz), 8.12(1 H,d,J=8.19Hz), 7.57-7.67(1 H,m), 7.42-7.51(2 H,m), 7.16-7.24(0.3 H,m)、5.55-5.64(0.7 H,m), 5.18-5.43(1 H,m), 3.80-3.93(1 H,m), 3.11-3.25(2 H,m), 2.27(1 H,s), 2.19-2.35(2 H,m), 2.00(2 H,s), 1.85-1.95(2 H,m), 1.50-1.63(1 H,m), 1.11-1.37(4 H,m).
【０２１１】
トランス−Ｎ−Ｎ’−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−ジメチル−スルファモイルウレアを、アシル化剤としてジメチルスルファモイルクロリドを使用して同様の方法で調製した。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.52(1 H,d,J=8.19Hz), 8.34-8.42(1 H,bd), 8.11(1 H,d,J=8.19Hz), 7.60(1 H,m), 7.41-7.51(2 H,m), 3.75-3.89(1 H,m), 2.94(2 H,d,J=6.36Hz), 2.79(6 H,s), 2.20-2.33(2 H,m), 1.86-2.00(2 H,m), 1.48-1.62(1 H,m), 1.09-1.39(4 H,m).
【０２１２】
実施例２２：（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−モルホリン−４−イルメチル−シクロヘキシル）−アミンの合成
（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−モルホリン−４−イルメチル−シクロヘキシル）−アミンの合成を、スキームＶに示した方法にしたがって実施した。
【０２１３】
【化３０】
2010502668.tif 000047
【０２１４】
工程１：４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサン−カルバルデヒドの合成
ヨードキシ安息香酸（８３０mg、２．９６mmol）をＤＭＳＯ（１０mL）中のトランス−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−メタノール（６４０mg、１．９７mmol）の溶液に加えて、得られた混合物を室温で２３時間撹拌した。次に、さらなる分割量のｏ−ヨードキシ安息香酸（８３０mg、２．９６mmol）を加えた。数時間後、反応を停止した。水を加えて、得られた混合物を２０分間撹拌し、形成した固体を濾過して、濾液を３回ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を１回水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した；溶媒を減圧下で蒸発させた。形成した白色の固体を数回ＥｔＯＡｃで洗浄して、それをあらかじめ得られた固体と合わせて、粗残留物７８９mgを得た。この粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ  ２０％〜５０％の勾配で、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）を通して精製して、４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルバルデヒド４５２mg（７０％収率）を得た。
【０２１５】
工程２：（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−モルホリン−４−イルメチル−シクロヘキシル）−アミンの合成
ＤＣＥ（２mL）中の４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキサンカルバルデヒド（３９mg）、モルホリン（１４μL）および酢酸（２滴）の混合物を、室温で２時間撹拌した；次に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。得られた混合物を３時間、室温で撹拌した。水を加えた；有機層を分離して、３回水で洗浄した。水層をＤＣＭで再抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過した；溶媒を減圧下で蒸発させて、残留物を、分取ＴＬＣを通して精製して、（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−（４−モルホリン−４−イルメチル−シクロヘキシル）−アミン１３．２mgが得られた。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.56(1 H,d,J=8.31Hz), 8.36-8.46(1 H,bd)、8.12(1 H,d,J=8.31Hz), 7.55-7.69(1 H,m), 7.40-7.52(2 H,m), 5.22-5.64(1 H,m), 3.49-3.96(5 H,m), 2.12-2.56(6 H,m), 1.46-2.04(5 H,m), 1.03-1.46(4 H,m).
【０２１６】
以下の化合物を、適切なアミンを使用して同様に調製した：
トランス−４−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシルメチル］−ピペラジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ ppm 8.56(1 H,d,J=8.43Hz), 8.41(1 H,bd), 8.12(1 H,d,J=8.43Hz), 7.61(1 H,m), 7.43-7.51(2 H,m), 5.10-5.87(1 H,m), 3.81-3.94(1 H,m), 3.39-3.47(4 H,m), 2.33-2.42(3 H,m), 2.19-2.32(4 H,m), 1.87-2.02(2 H,m), 1.50-1.83(2 H,m), 1.45(9 H,s), 1.05-1.41(4 H,m);
および
トランス−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イル）−｛４−［（２−メトキシ−エチルアミノ）−メチル］−シクロヘキシル｝−アミン。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.56(1 H,d,J=8.31Hz), 8.38-8.45(1 H,m), 8.12(1 H,d,J=8.31Hz), 7.61(1 H,m), 7.42-7.50(2 H,m), 5.17-5.64(1 H,bd), 3.76-3.94(1 H,m), 3.47-3.54(2 H,m), 3.36(3 H,s), 2.75-2.82(2 H,m), 2.50-2.58(2 H,m), 2.18-2.35(1 H,m), 1.89-1.99(1 H,m), 1.60-1.83(4 H,m), 1.10-1.41(4 H,m).
【０２１７】
実施例２３：トランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセトアミドの合成
トランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセトアミドの合成を、スキームＷに示した方法にしたがって実施した。
【０２１８】
【化３１】
2010502668.tif 000048
【０２１９】
工程１：トランス−［４−（２−クロロ−アセチルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステルの合成
ＤＣＭ（１５mL）中のトランス−４−メチル−シクロヘキシルアミン（５２０mg、１．５mmol）の氷冷した溶液に、ピリジン（０．３６mL、４．５mmol）を加えて、続けて塩化クロロアセチル（１当量）を滴下した。混合物を放置して室温に温めて、３日かけて撹拌した。さらなる分割量のピリジン（１当量）と塩化クロロアセチル（１当量）を加えて、得られた混合物を一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で洗浄し、ＥｔＯＡｃ中に抽出して、再度水で洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮して、さらに精製しないでトランス−［４−（２−クロロ−アセチルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル４７８mgが得られた。
【０２２０】
工程２：トランス−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセチルアミノ］−シクロヘキシル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステルの合成
ＤＣＭ（１２mL）中のトランス−［４−（２−クロロ−アセチルアミノ）−シクロヘキシル］−カルバミン酸tert−ブチルエステル（３３０mg、１．１４mmol）の溶液を、室温でＤＣＭ（１mL）中のメチルピペラジン（０．１mL、０．９５mmol）の溶液に加えた。得られた混合物を一晩撹拌し、次に、ＤＣＭで希釈して、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で洗浄した。水相をＤＣＭ、次にＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮して、さらに精製しないでトランス−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセチルアミノ］−シクロヘキシル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステル１９９mgが得られた。
【０２２１】
工程３：トランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセトアミドの合成
ＨＣｌの水溶液（２Ｍ、１５mL）を、室温でＭｅＯＨ（１５mL）中のトランス−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセチルアミノ］−シクロヘキシル｝−カルバミン酸tert−ブチルエステル（１９９mg、０．５６mmol）の溶液に加えて、得られた混合物を一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、固体残留物を得た。Ｅｔ２Ｏをこの物質に加えて、得られた懸濁液を超音波処理した。エーテル相を静かに移し、粉末状の褐色の固体が残り、それを分取ＴＬＣにより精製した。得られた油状物を最少量のＭｅＯＨに溶解して、Ｅｔ２Ｏを加えた。固体が沈殿した；液体相を静かに移して、乾燥後、微細粉末としてトランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセトアミド７５mgを得た。
【０２２２】
同様の方法で、適切な出発物質を利用して、以下の化合物もまた調製した：
−  トランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−モルホリン−４−イル−アセトアミド；
−  トランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−メトキシ−アセトアミド；および
−  トランス−Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−ヒドロキシ−アセトアミド。
【０２２３】
実施例２４：トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−２−メトキシ−アセトアミドの合成
トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−２−メトキシ−アセトアミドの合成を、スキームＸに示した方法にしたがって実施した。
【０２２４】
【化３２】
2010502668.tif 000049
【０２２５】
１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（９９．１mg、０．３６mmol）で満たされた１０mLシール可能チューブに、ＮＭＰ（１mL）およびジイソプロピルエチルアミン（０．１９mL、１．０９mmol）を加えた。Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−メトキシ−アセトアミド（１００mg、０．３６mmol）で満たされた第二の５mLシール可能チューブに、ＮＭＰ（１mL）を加えた。両チューブを１２０℃で加熱して、固体の完全な溶解において、１−（２−メタンスルホニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾールの溶液を、カニューレを通して、Ｎ−（４−アミノ−シクロヘキシル）−２−メトキシ−アセトアミドの溶液を含有するチューブ中に移した。得られた混合物を、１．５時間、１２０℃で撹拌し、次に、室温に冷却して、水（１５mL）に注いだ。得られた混合物を一晩撹拌し、次に、ＤＣＭで希釈して、水で洗浄した。水層を分離して、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮して、油状物を得て、それを少量のＥｔＯＡｃに溶解して、固体を沈殿させるためにヘキサンを加えた。得られた混合物を、放置して１時間安定にして、その後、上澄み液を注意深く静かに移した。残りの固体を減圧下で乾燥させて、トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−２−メトキシ−アセトアミド８６mg（６３％収率）が得られた。ＭＳ＝３８１［Ｍ＋Ｈ］＋；融点＝２３３．５−２３５．４℃。
【０２２６】
同様の方法で、適切な出発物質を利用して、以下の化合物もまた調製した：
−  トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−２−ヒドロキシ−アセトアミド、ＭＳ＝３６８［Ｍ＋Ｈ］＋；
−  トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−２−モルホリン−４−イル−アセトアミド，ＭＳ＝４３７［Ｍ＋Ｈ］＋；および
−  トランス−Ｎ−［４−（４−ベンゾトリアゾール−１−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−シクロヘキシル］−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセトアミド、ＭＳ＝４５０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２７】
製剤
【０２２８】
種々の経路で送達される医薬調製物を、下記の表で示されるように製剤化した。表中で使用される「活性成分」または「活性化合物」は、１種以上の式Ｉの化合物を意味する。
【０２２９】
【表２】
2010502668.tif 000050
【０２３０】
成分を混合し、それぞれ約１００mgを含有するカプセルに分配し；１カプセルが１日用量のほぼ全てとなる。
【０２３１】
【表３】
2010502668.tif 000051
【０２３２】
成分を合わせ、メタノールのような溶媒を使用して造粒する。次いで、配合物を乾燥し、適切な錠剤成形機を用いて錠剤（活性化合物約２０mg含有）を形成する。
【０２３３】
【表４】
2010502668.tif 000052
【０２３４】
成分を混合して、経口投与用の懸濁剤を形成する。
【０２３５】
【表５】
2010502668.tif 000053
【０２３６】
活性成分を注射用の水の一部に溶解する。次に塩化ナトリウムの十分な量を撹拌しながら加えて、溶液を等張にする。注射用の水の残りで溶液を増量して、０．２μ膜フィルターを通して濾過し、滅菌条件下で包装する。
【０２３７】
【表６】
2010502668.tif 000054
【０２３８】
成分を、スチームバス上で一緒に溶融し混合し、全重量２．５ｇを含有する型に注ぐ。
【０２３９】
【表７】
2010502668.tif 000055
【０２４０】
水以外の全ての成分を合わせ、撹拌しながら約６０℃に加熱する。次に、十分な量の水を激しく撹拌しながら約６０℃で加え、成分を乳化し、次に、約１００ｇにするのに十分な量の水を加える。
【０２４１】
鼻腔スプレー製剤
約０．０２５〜０．５％の活性化合物を含むいくつかの水性懸濁剤を、鼻腔スプレー製剤として調製した。この製剤は、場合により、例えば、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロースなどの不活性成分を含む。塩酸を加えてｐＨを調整してもよい。鼻腔スプレー製剤は、典型的には１回の作動で約５０〜１００μlの製剤を送達する鼻腔スプレー計量ポンプにより送達してもよい。典型的な投与スケジュールでは、４〜１２時間毎に２〜４回噴霧する。
【０２４２】
実施例２８
キナーゼアッセイ
Ａ： ＩＣ５０測定
Ｃｄｋ４、Ｃｄｋ２およびＣｄｋ１活性の阻害を決定するために、キナーゼアッセイをＦｌａｓｈＰｌａｔｅ（商標）アッセイを用いて行った（ＮＥＮ（商標）−Life Science Products）。ＦｌａｓｈＰｌａｔｅアッセイは、組換えヒトサイクリンＢ−ＣＤＫ１、ヒトサイクリンＥ−ＣＤＫ２またはヒトサイクリンＤ１−ＣＤＫ４複合体を用いて行った。バキュロウイルスベクター中のＧＳＴ−サイクリンＥ（ＧＳＴ−ｃｙｃＥ）、ＣＤＫ２、ＧＳＴ−サイクリンＢ（ＧＳＴ−ｃｙｃＢ）、ＣＤＫ１，ＧＳＴ−ＣＤＫ４およびサイクリンＤ１（ｃｙｃＤ１）ｃＤＮＡクローンは、Baylor College of Medicine, Houston, TXのＷ．Ｈａｒｐｅｒ博士より提供された。タンパク質は、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）昆虫細胞中で共発現し、先に記述されたように、複合体をグルタチオンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）樹脂（Pharmacia, Piscataway, NJ）上で精製した（J.W. Harper et al., Cell (1993) 75:805-16）。網膜芽腫（Ｒｂ）タンパク質の６Ｘ−ヒスチジン標識不完全形態（アミノ酸３８６−９２８）を、ｃｙｃＤ１−ＣＤＫ４、ｃｙｃＢ−ＣＤＫ１およびｃｙｃＥ−ＣＤＫ２アッセイ用の基質として使用した（発現プラスミドは、英国、Welwyn Garden CityのRoche Research Centre, Department of Molecular VirologyのＶｅｒｏｎｉｃａ  Ｓｕｌｌｉｖａｎ博士により提供された）。Ｒｂタンパク質は、ＣＤＫ４、ＣＤＫ２およびＣＤＫ１によるリン酸化用の天然基質である（Herwig and Strauss Eur. J. Biochem. (1997) 246:581-601およびその中に引用の文献を参照のこと）。
【０２４３】
６２Ｋｄタンパク質の発現は、Ｍ１５大腸菌株中でＩＰＴＧ誘導プロモーターのコントロール下であった。細胞を超音波処理して溶解し、精製は、溶解物をｐＨ８．０で、１mMイミダゾールで前処理したＮｉキレート化アガロースカラムに結合させることにより行った。次いで、樹脂を、ｐＨ６．０まで徐々に低下するｐＨ緩衝液で数回洗浄し、５００mMイミダゾールで溶出した。溶出したタンパク質を、２０mM ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、３０％グリセリン、２００mM ＮａＣｌおよび１mM ＤＴＴに対して透析した。精製したＲｂ融合タンパク質ストックは、タンパク質濃度について定量し、等分し、−７０℃で保存した。
【０２４４】
本明細書中で報告した全ての３種のキナーゼアッセイのために、９６ウエルＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓを、１ウエルあたり１００μlを用いて、１０μg/mlにてＲｂタンパク質でコーティングした。プレートを、振盪器上で、４℃で一晩またはＲＴで３時間インキュベートした。非特異的リン酸化をコントロールするために、ウエルの一列を、１００μl／ウエルコーティング緩衝液（２０mM ＨＥＰＥＳ、０．２Ｍ ＮａＣｌ）でコーティングした。次いで、プレートを洗浄緩衝液（リン酸塩緩衝化食塩水中の０．０１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で２回洗浄した。試験される化合物（「試験化合物」）を、５ｘ最終濃度でウエルに加えた。反応は、４０μl反応ミックス（２５mM ＨＥＰＥＳ、２０mM ＭｇＣｌ２、０．００２％Ｔｗｅｅｎ２０、２mM ＤＴＴ、１μM ＡＴＰ、４nM ３３Ｐ−ＡＴＰ）および十分量の酵素を直ちに加えることにより開始すると、バックグラウンドに対して少なくとも１０倍以上であるカウントを与えた。プレートを、振盪器上で、ＲＴで３０分間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で４回洗浄し、密封し、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンター（Packard Instrument Co., Downers Grove, IL）でカウントした。ＣＤＫ活性の阻害の尺度である、Ｒｂリン酸化のパーセント阻害を、以下の式に従って決定した：
【０２４５】
【数１】
2010502668.tif 000056
【０２４６】
（ここで、「試験化合物」は、２回の試験での分あたりの平均カウントを指し、「非特異的」は、サイクリンＤ／Ｃｄｋ４等を加えなかった場合の分あたりの平均カウントを指し、「合計」は、化合物を加えなかった場合の分あたりの平均カウントを指す）。
【０２４７】
ＩＣ５０値は、記載の試験条件下にプロテインキナーゼで誘起された放射標識の組み込みを５０％減少させる試験化合物の濃度である。
【０２４８】
Ｂ．Ｋｉ測定
別法として、阻害活性は、Ｋｉを用いて測定しうる。上記の実施例２８（Ａ）で上記したタンパク質構築物を用いて、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２およびＣＤＫ４ ＨＴＲＦアッセイをセットアップした。これらは、９６ウエルフォーマットで行われ、３８４ウエルプレートフォーマットで読み取った。アッセイは、ＡＴＰについてそれらの各々のＫｍの３倍で実施した。
【０２４９】
ＣＤＫ４アッセイにおいて、試験化合物は、２５mM Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．０、６．２５mM ＭｇＣｌ２、１．５mM ＤＴＴ、１３５μM ＡＴＰ中でそれらの最終濃度の３倍に希釈した。ＤＭＳＯ濃度は、４．７６％より多くはなかった。２０マイクロリットルを９６ウエルプレートのウエルに加えた。キナーゼ反応は、２５mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、６．２５mM ＭｇＣｌ２、０．００３％Ｔｗｅｅｎ２０、０．３mg/ml ＢＳＡ、１．５mM ＤＴＴ中の０．１８５μM Ｒｂおよび２．２５μg/ml ＣＤＫ４を含有する溶液を４０μl／ウエル添加することにより開始した。ＣＤＫ４を含まないブランクウエルを含ませた。プレートを、振盪しながら、３７℃で３０分間インキュベートした。キナーゼ反応は、２５mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、２４mM ＥＤＴＡ、０．２mg/ml ＢＳＡ中の１．６μM抗ホスホ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７８０）抗体（Cell Signaling Inc.）を１５μl／ウエル添加することにより停止した。３７℃で３０分後、２５mM Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．０、０．５mg/ml ＢＳＡ中の３nM Ｌａｎｃｅ−Ｅｕ−Ｗ１０２４標識抗ウサギＩｇＧおよび６０mM アロフィコシアニン抱合抗Ｈｉｓ６（PerkinElmer Life Sciences）を１５μl／ウエル加えた。３７℃で１時間インキュベートしたのち、各ウエルの３５μlを、二通りに、３８４ウエルブラックプレートに移した。プレートを、ＶｉｅｗＬｕｘまたはＶｉｃｔｏｒ Ｖ リーダー（PerkinElmer Life Sciences）のいずれかを用いて、励起波長３４０nmならびに二重発光波長６１５nmおよび６６５nmを用いて読み取った。ＩＣ５０値（アッセイコントロール蛍光読取を５０％減少させる試験化合物の濃度）を、６１５nmでのユーロピウム読取に対して正規化した、６６５nmでの正味の読取からまず算出した。ＡＴＰ競合阻害剤については、Ｋｉ値は、以下の式：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋Ｓ／Ｋｍ）  （ここで、Ｓは基質濃度を指し、Ｋｍはミカエリス−メンテン定数を指す）
に従って算出した。
ＣＤＫ１およびＣＤＫ２アッセイは、試薬およびタンパク質濃度を少し変えた以外は同様に実施した：
【０２５０】
双方のアッセイ用の化合物および酵素緩衝液は、１０mM ＭｇＣｌ２を含んでいた。ＣＤＫ１およびＣＤＫ２について、各々の試薬ＡＴＰ濃度は、１６２μMおよび９０μMであった。試薬濃度が０．１５ng/μlのＣＤＫ１および試薬濃度が０．０６ng/μlのＣＤＫ２を使用した。検出試薬の試薬濃度は、３〜１２nM Ｅｕ−Ａｂおよび６０〜９０nM ＡＰＣ−抗Ｈｉｓ６の間に調整して、シグナル／バックグランド比を少なくとも１０／１とした。
【０２５１】
実施例２９
細胞をベースとするアッセイ（テトラゾリウム染料増殖アッセイ）（「ＭＴＴアッセイ」）
増殖を、ＤｅｎｉｚｏｔおよびＬａｎｇの手順に従って、テトラゾリウム染料アッセイにより評価した（F. Denizot and R. Lang, J. Immunol Meth (1986) 89:271-77）。使用した細胞系は、American Type Cell Culture Collection （ATCC; Rockville, MD）から得られた結腸直腸癌細胞系、ＨＣＴ１１６であった。細胞は、１０％ＦＣＳおよびＬ−グルタミンを補充したＭｃＣｏｙの５Ａ培地中で生育させた。
【０２５２】
細胞を適切な接種密度でプレートに加えて、９６ウエル組織培養プレート中でのアッセイの間、対数増殖するようにした。プレートを、５％ＣＯ２を含む加湿したインキュベーター中で、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、試験化合物を、１．２％ＤＭＳＯを含む適切な媒体中で最終濃度の４倍に連続的に希釈した。各希釈物の最終容量の４分の一を、細胞を含むプレートに、二通りに、加えた。培地中の１．２％ＤＭＳＯの同じ容量を、各ウエルのＤＭＳＯの最終濃度が０．３％となるように、「対照ウエル」の列に加えた。細胞を加えなかったウエルは、「ブランク」として機能した。阻害剤を加えなかったウエルは、「無阻害剤対照」として機能した。プレートをインキュベーターに戻し、設定した時点（それらの増殖曲線により決定される）で、プレートを以下に記載するようにして分析した。
【０２５３】
臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム（チアゾリルブルー；ＭＴＴ；Sigma）を各ウエルに加えて、１mg/mlの最終濃度とした。プレートをインキュベーターに、３７℃で２．５〜３時間戻した。ＭＴＴ含有培地を取り除き、得られたホルマザン代謝物を、ＲＴで１５分間振盪しながら、１００％エタノールに溶解した。吸光度の読み取りを、６５０nmを対照として、５７０nmの波長でマイクロタイタープレートリーダー（DynatechおよびMolecular Devices のプレートリーダーを互換的に用いた）中で行った。パーセント阻害（％ＩＮＨ）を、全てのウエルからブランクウェルの吸光度を差し引き、次いで各試験の二通りの平均吸光度（ＳＡＶＥ）の対照の平均（ＣＡＶＥ）との比を１．００から差し引いて、算出した。次いで、最終数字を１００倍した（％ＩＮＨ＝（１．００−ＳＡＶＥ／ＣＡＶＥ）ｘ１００）。細胞増殖の９０％阻害が得られる濃度（ＩＣ９０）は、濃度対パーセント阻害の対数プロットの直線回帰から決定した。
【０２５４】
American Tissue Culture Collection（ATCC）から購入したＳＷ１３５３細胞は、１０％ウシ胎仔血清（Invitrogen）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（Invitrogen）２mlを含有する１ウエルあたり３ｘ１０５細胞の密度で、６−ウエルプレート中でコンフルエンシーまで３７℃で生育した。次いで、細胞を無血清培地で、３７℃で２時間置いた。化合物ストック（１０mM）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で希釈し、１０００倍濃度溶液として３μlの容量で各ウエルに加え、混合し、細胞と共に３０分間予備インキュベートした。化合物ビヒクルＤＭＳＯを、全ての試料で０．３％の最終濃度に維持した。ＴＮＦ（Roche Biochem）を、成長培地中で作製した１０ｘ濃度溶液として、無血清培地３００μlの全容量中で１ng/mlの最終濃度で、１ウエルあたり３０μlの容量で加えた。次いで、細胞プレートを３７℃で２０分間インキュベートした。細胞培地を除去したのち、細胞溶解物を１２０μlの溶解緩衝液（Biosource）中に収集した。溶解物試料のタンパク質濃度は、製造者（Bio-Rad）の指示に従って、Ｌｏｗｒｙアッセイにより決定した。
【０２５５】
細胞溶解物試料（試料あたり全タンパク質１５μg）を、１０％ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Invitrogen）上にロードし、ニトロセルロース膜（Invitrogen）に移した。膜を、１ｘＴＢＳ中の５％ドライミルク中で、ＲＴで１時間ブロックした。試料中のリン酸化されたｃＪｕｎおよび全ｃＪｕｎの双方の濃度を決定するために、膜を、４℃で一晩、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（Roche Biochem）を含むＯｄｙｓｓｅｙブロック用緩衝液（Li-cor）中で、ウサギ抗−ｐ−ｃｊｕｎおよびマウス抗−全ｃＪｕｎ抗体（Cell Signaling）で同時に探査した。
【０２５６】
膜を、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む１ｘＰＢＳ中で３回洗浄した。二次抗体として、ＩＲＤｙｅ７００ヤギ抗−マウスＩｇＧ（Rockland）およびＩＲＤｙｅ８００ヤギ抗−ウサギＩｇＧ（Rockland）を、Ｏｄｙｓｓｅｙブロック用緩衝液中、１：６５００の希釈で使用した。膜ブロットをスキャンし、Ｏｄｙｓｓｅｙ Ｉｎｆｒａｒｅｄ Ｉｍａｇｅｒ（Li-cor Cat. No. 9201）を用いて定量した。
【０２５７】
ｐ−ｃ−Ｊｕｎ対全ｃ−Ｊｕｎの正規化した強度を、マイクロソフトエクセルのＸｌｆｉｔ３プログラムでのＩＣ５０算出に使用した。ＩＣ５０値は、阻害剤濃度対パーセント阻害のグラフから内挿した。
【０２５８】
実施例３０
インビトロＪＮＫアッセイ
ＪＮＫ活性は、ＧＳＴ−ＡＴＦ２（１９−９６）の［γ−３３Ｐ］ＡＴＰでのリン酸化により測定した。酵素反応は、２５mM Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．５、２mM ジチオトレイトール、１５０mM ＮａＣｌ、２０mM ＭｇＣｌ２、０．００１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、０．１％ ＢＳＡおよび１０％ＤＭＳＯを含有する緩衝液中で、ＡＴＰと基質のＫｍ濃度で、最終容量４０μlで行った。ヒトＪＮＫ２α２アッセイは、１nM酵素、１μM ＡＴＦ２、１μＣｉ［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む８μM ＡＴＰを含有していた。ヒトＪＮＫ１α１アッセイは、２nM酵素、１μM ＡＴＦ２、１μＣｉ［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む６μM ＡＴＰを含有していた。ヒトＪＮＫ３（Upstate Biotech #14-501M）アッセイは、２nM酵素、１μM ＡＴＦ２、１μＣｉ［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む４μM ＡＴＰを含有していた。酵素アッセイは、１０種の化合物濃度の存在下または不存在下に実施した。ＪＮＫおよび化合物は、１０分間予備インキュベートした。その後、酵素反応を、ＡＴＰと基質を加えることにより開始した。反応混合物は、３０℃で３０分間インキュベートした。インキュベーションの最後に、反応混合物２５μlを、１３５mM ＥＤＴＡを含有する１５０μlの１０％グルタチオンセファローススラリー（Amersham #27-4574-01）に移すことにより、反応を停止した。反応生成物をアフィニティー樹脂上に捕集し、濾過プレート（Millipore, MABVNOB50）上でリン酸塩緩衝塩水で６回洗浄して、遊離の放射性ヌクレオチドを除去した。次いで、３３ＰのＡＴＦ２への組み込みは、マイクロプレートシンチレーションカウンター（Packard Topcount）上で定量した。ＪＮＫに対する化合物の阻害能は、３−パラメーターモデル：％阻害＝最大／（１＋（ＩＣ５０／［阻害剤］）ｓｌｏｐｅ）に当てはめた１０種の濃度の阻害曲線からもたらされたＩＣ５０値により測定した。データは、パラメーター推定用のマイクロソフトエクセル上で分析した。
【０２５９】
【表８】
2010502668.tif 000057
【０２６０】
実施例３１
ラットのインビボＴＮＦα誘起ＩＬ−６産生アッセイ
チャールスリバーラボラトリーズから調達した雌のウィスター−ハムラットを、使用前に１週間馴化させ、９５〜１３０ｇのおよその体重を達成した。ラットに、０．５μgの組換えラットＴＮＦ−α（Biosource）の腹膜内チャレンジの３０分前に、経口強制経管投与、皮下注射または静脈内注射（尾静脈）により試験化合物を投与した。ＴＮＦ−αチャレンジの９０分後に、心臓穿刺により採血した。血漿を、リチウムヘパリン分離チューブ（ＢＤ microtainer）を用いて調製し、分析するまで、−８０℃に凍結した。ＩＬ−６濃度を、ラット特異的ＩＬ−６ＥＬＩＳＡキット（Biosource）を用いて決定した。パーセント阻害およびＥＤ５０値（ＴＮＦ−α産生が対照値の５０％であるときの、化合物の投与量として算出）を決定した。
【０２６１】
実施例３２
齧歯類コラーゲン誘起関節炎
ハーランラボラトリーズから調達した７〜８週齢の雌のルイスラットを、使用前に１週間馴化させ、１２０〜１４０ｇのおよその体重を達成した。検討の０日目に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；２〜３部位に合計０．１ml）中の１００μgウシＩＩ型コラーゲン（Chondrex）のエマルジョンで、ラットの背中のいくつかの部位に皮内的に（ｉ．ｄ．）抗原刺激した。関節炎の誘起は、一般に、刺激から１２〜１４日で認められるが；１００μgコラーゲン／ＩＦＡの追加免疫注射を、尾の基部または背部の別の部位におよそ７〜１０日間（ｉ．ｄ．合計０．１mlまで）与えて、疾患の誘起を同時発生させた。化合物の投与は、予防的（追加免疫時または１〜２日前に開始）または治療的（追加免疫後に始め、初期の疾患点数１〜２と同時に発生する−以下の臨床的採点法参照）であることができる。動物は、次の２１日間に亘って、疾患の発症および進行について評価した。
【０２６２】
ラットは、採点システム（下記）、各々の足についてのプレチスモメーターを用いる足容積測定、またはキャリパーでの足または関節厚さの測定を用いて評価した。ベースライン測定は、０日目に行い、実験の終了まで、週に３回まで、最初の徴候または腫脹時に再度始めた。採点は、各々の足について以下のようにして評価した：
【０２６３】
１＝足または１本の指の腫脹および／または発赤
２＝２以上の関節に腫脹
３＝２より多い関節を含んで足の全体の腫脹
４＝全部の足および指の重篤な関節炎
【０２６４】
各々のラットについての関節炎の指標を、個々の足の４つの点数を加えることにより評価し、最大点数は１６である。疾患の発症および進行を連続的に測定するために、後足の足体積を同様にプレチスモメーターを用いて決定した。
【０２６５】
検討の最後に、後足（および他の組織）を重量決定、組織学、細胞および／または分子分析のために収集した。さらに、心臓穿刺により採血し、血漿を、リチウムヘパリン分離チューブ（ＢＤmicrotainer）を用いて調製し、分析するまで、−８０℃に凍結した。血漿からのまたはホモジナイズした関節組織からの炎症性サイトカイン濃度（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１およびＩＬ−６）を、ラット特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ）を用いて決定した。疾患の防御または阻害の程度は、対照動物と比較した、臨床点数、足体積および組織学における変化の複合として決定した。
【０２６６】
実施例３３
ＴＮＦα誘起ヒト軟骨肉腫ＳＷ１３５３細胞中でのＩＬ−８産生アッセイ
ＳＷ１３５３細胞を、American Tissue Culture Collectionから購入し、５％ＣＯ２中３７℃の培養条件下に、１０％ウシ胎仔血清（Invitrogen）、アスコルビン酸（Sigma）およびペニシリン（Invitrogen）を含むＤＭＥＭ培地（Invitrogen）よりなる成長培地中で維持した。細胞を、化合物処理の４８時間前に、培地１００μl中、ウエルあたり１．０ｘ１０４細胞の密度でプレートに入れた。化合物処理の直前に、培地を１６０μlの新鮮培地で置き換えた。化合物ストック（１０mM）を成長培地中に希釈し、各ウエルに２０μlの容積で、１０ｘ濃度溶液として加え、混合し、細胞と共に３０分間予備インキュベートした。化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）は、全ての試料で１％の最終濃度に維持した。３０分後、細胞を、１０ng/mlのＴＮＦ−α（Roche Biochem）で活性化した。ＴＮＦ−αは、成長培地中で作製した１０ｘ濃度溶液として加え、１ウエルあたり２０μlの容量で加えた。細胞プレートを５時間培養した。細胞培地を収穫し、−２０℃で保存した。培地アリコートは、製造者（BD Bioscience）の指示に従って、ＩＬ−８の存在についてサンドイッチＥＬＩＳＡにより分析した。ＩＣ５０値は、マイクロソフトエクセルプログラムでのＸｌｆｉｔ３を用いて、ＩＬ−８産生が対照値の５０％に減少するときの、化合物の濃度として算出した。ある種の化合物は、このアッセイで０．１〜２０μMの範囲のＩＣ５０値を有していた。
【国際調査報告】
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