(57)【要約】本発明はシクロアストラゲノールモノグルコシドＣＭＧ（シクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシド）の製造方法であって、ａ．従来の方法で調製されたアストラガロサイドIV又はオウギエキスを原料として使用し、それに適切な溶媒を加え、原料液を調製するステップ；ｂ．加水分解酵素を加え、恒温で加水分解し、加水分解物を得るステップ；ｃ．加水分解物をマクロ多孔性吸着樹脂により単離するステップ；及びｄ．分離した産物を精製するステップ、を含む方法を提供する。本発明は、さらに本発明の方法で調製されたシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシド、心臓血管疾患の治療薬の調製におけるシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシドの使用及びシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシドを含む医薬組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップを含むことを特徴とするシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの製造方法：
ａ．アストラガロサイドＩＶ又は常法により調製したオウギエキスを原料として使用し、適当な溶媒を添加して、原料液を調製するステップ；
ｂ．加水分解酵素を添加し、一定温度で加水分解し、加水分解液を得るステップ；
ｃ．前記加水分解液をマクロ多孔性吸着樹脂により分離するステップ；及び
ｄ．分離した前記産物を精製するステップ。
【請求項２】
原料がアストラガロサイドＩＶである場合、溶液中のアストラガロサイドＩＶの濃度が０．０１〜１％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．０１〜０．５％Ｗ／Ｖ、より好ましくは０．０１〜０．１％Ｗ／Ｖであり、原料がオウギエキスである場合、エキス：溶液の比が１：２〜１：１０００Ｗ／Ｖ、好ましくは１：１５〜１：１０００Ｗ／Ｖであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
溶媒が、水、低級アルコール、及び含水低級アルコールから選択され、前記低級アルコールが好ましくは炭素数１〜３の一価アルコールであり、より好ましくはエタノール及びメタノールから選択され、さらに好ましくはエタノールであることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
原料液中のアルコール濃度が１〜３０％Ｖ／Ｖ、好ましくは５〜２０％Ｖ／Ｖであることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
加水分解酵素が、β−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ヘスペリニダーゼ、並びにこれらの酵素のうちの１つとセルラーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ及びアミラーゼから選択される１又は２種以上の酵素との混合物から選択され、好ましくはβ−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ又はキシラナーゼ、より好ましくはキシラナーゼであることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
原料がアストラガロサイドＩＶである場合、原料と酵素の比が１：１〜５０Ｗ：Ｗであり；原料がオウギエキスである場合，酵素と原料比が１：１００〜１０：１Ｗ：Ｗ、好ましくは１：５０〜１０：１Ｗ：Ｗであることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
加水分解が、４０〜５５℃の一定温度で、１２〜７２時間、好ましくは４８〜７２時間行われ、その溶液の適宜なＰＨ値が４〜７であることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
以下のステップを含む工程により分離を行うことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の方法：
加水分解液をスチレン骨格を有するマクロ多孔性吸着樹脂に供し、まず１〜２カラム体積の水、次に１〜２カラム体積の０．５〜２％のアルカリ性溶液、その次に１〜３カラム体積の２０〜４０％エタノール水溶液、最後に１〜３カラム体積の７０〜９５％のエタノールで溶出し、高濃度のエタノールで溶出した溶出液部分を回収し、その後減圧濃縮するステップであって、原料がエキスである場合、原料：樹脂の比が好ましくは１：２０〜４：１ｇ：ｍｌ、より好ましくは１：１０〜３：１ｇ：ｍｌであり；原料がアストラガロサイドＩＶである場合、原料：樹脂の比が０．１：１〜２０：１ｍｇ：ｍｌ、好ましくは２：１〜１０：１ｍｇ：ｍｌであるステップ。
【請求項９】
以下のステップを含む工程により精製を行うことを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の方法：
分離された産物を濾過し、低級アルコール又は含水低級アルコールに再溶解し、濾過し、濾過液を濃縮して結晶が析出するまで放置し、濾過して結晶を得た後、それを低級アルコール又は含水アルコールで再結晶を行い、９５％を超える純度のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを得るステップであって、前記低級アルコールが、好ましくは炭素数１〜５の一価アルコール及び多価アルコールから選択され、より好ましくはメタノール及びエタノールから選択されるステップ。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の方法で製造されるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β―Ｄ―グルコシド。
【請求項１１】
請求項１０に記載の治療有効量のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとを含む医薬用組成物であって、前記医薬的に許容されるアジュバントが、希釈剤、潤滑剤、粘着剤、崩壊剤、安定剤、及び溶媒からなる群より選択される医薬用組成物。
【請求項１２】
経口用固形製剤、経口用液体製剤、注射剤、フィルム剤、又はエアロゾルの形態であって、前記経口用固形製剤は、好ましくは通常の錠剤、分散性錠剤、腸溶性錠剤、顆粒剤、カプセル、滴下ピル若しくはプルビス、又は徐放性若しくは放出制御性製剤であり、該徐放性若しくは放出制御製剤は、好ましくは徐放性若しくは放出制御性錠剤、顆粒剤、又はカプセルであり、前記経口用液体製剤は、好ましくは経口用溶液又はエマルジョンであり、前記注射剤は、好ましくはバイアル注射剤、点滴液、又は注射用凍結乾燥粉末であることを特徴とする、請求項１１に記載の医薬用組成物。
【請求項１３】
バイアル注射剤である場合、注射用蒸留水の他に、適切な割合の、グルコース、塩化ナトリウム、ソルビトール及びリン酸塩から選択される医薬的に許容されるアジュバント；エタノール、グリセリン及びプロピレングリコールから選択される有機溶媒；又は注射用ＰＥＧ及びヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンから選択される共溶媒；をさらに含み；点滴液である場合、注射用蒸留水の他に、必要に応じて添加されるグルコース、塩化ナトリウム及び／又は等浸透圧液をさらに含み；注射用の凍結乾燥粉末である場合、好ましくは、マンニトール、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム、デキストラン、シュクロース、ラクトース、加水分解ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルシクロデキストリン、ポロキサマー及びポリエチレングリコールの１又は２以上の組合せからなる群から選択される、適切な割合の凍結乾燥支持剤を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の医薬用組成物。
【請求項１４】
注射用の凍結乾燥粉末におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとの重量比が、１：１０〜２００、好ましくは１：５０〜２００、より好ましくは１：１００〜１５０であることを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の医薬用組成物。
【請求項１５】
凍結乾燥支持剤が、マンニトール、ラクトース、又はマンニトール−ラクトース組成物であり、前記マンニトール−ラクトース組成物中、マンニトールとラクトースとの重量比が、１０：１〜１：１、好ましくは５：１〜１：１であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の医薬用組成物。
【請求項１６】
バイアル注射剤におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．０１％〜１％ｇ／１００ｍｌ、好ましくは０．０１〜０．２％ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の医薬用組成物。
【請求項１７】
点滴液におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．００１％〜０．１％ｇ／１００ｍｌ、好ましくは０．００２〜０．０５ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の医薬用組成物。
【請求項１８】
凍結乾燥支持剤が、デキストラン、ポリエチレングリコール−マンニトール、又はデキストラン−ポリエチレングリコール−マンニトール組成物であり、好ましくはポリエチレングリコール−マンニトール組成物であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の医薬用組成物。
【請求項１９】
ポリエチレングリコールが、ポリエチレングリコール２００−６００、好ましくはポリエチレングリコール４００であり、ポリエチレングリコール−マンニトール組成物におけるポリエチレングリコール：マンニトールの重量比が１：１〜１：１０、好ましくは１：１〜１：５であることを特徴とする請求項１８に記載の医薬用組成物。
【請求項２０】
凍結乾燥粉末注射剤が、以下のステップで製造されることを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の医薬用組成物：
ａ．所定量のサンプルを０．１〜０．５％の活性炭素で処理した溶媒に溶解するステップ；
ｂ．ステップａのサンプル溶液を０．１〜０．５％の活性炭素で処理した凍結乾燥支持剤溶液に混合しながら滴加するステップ；及び
ｃ．所定量まで水を添加し、メンブレン濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥するステップ。
【請求項２１】
ステップａの溶媒が、所定量の溶液の全量に対して１〜１０％のエタノール、プロパンジオール又はポリエチレングリコールであることを特徴とする、請求項２０に記載の医薬用組成物。
【請求項２２】
心臓血管疾患の治療薬の調製における、請求項１０に記載のシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医療技術の分野に属する。具体的には、シクロアストラゲノールモノグルコシド、即ちシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシドの製造方法、前記方法で製造されたシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシド、心臓血管疾患及び脳血管疾患を治療するための医薬品製造におけるシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシドの使用、及び治療有効量のシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシドを含む医薬用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロアストラゲノール（cycloastragenol）類化合物は、構造的にラノスタン四環トリテルペノイドに属し、オウギ植物（Astragalus plant）の代表的な成分分類群である。シクロアストラゲノールトリテルペノイドサポニン成分は、オウギ（Astragalus membranaceus Bge.）の一般的な伝統的中国薬剤の主要な生理活性成分であり、免疫調節、強心効果、心臓及び脳における抗虚血障害、肝臓保護、抗炎、抗ウイルス及び腎臓、膵島細胞の損傷を改善するなど多くの薬理作用を持っている。アストラガロサイド成分の薬理効果は確認され、総サポニン及びモノマーサポニンの工業的製造工程は比較的完成されている（特許文献１〜３）ものの、このタイプ化合物は、溶解性が極めて低く、生体利用効率が低いため製剤学の研究や薬品としての開発や一般化が遅れ、いまだに市場に出ている商品はない状態である。
【０００３】
シクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシド（cycloastragenol-6-O-β-D-glucoside、以下CMGと略す）（式１）の化学構造についてはIsao Kitagawaらが１９８３年に最初に報告し（非特許文献１）、アストラガロサイドIV（Astragaloside IV）の構造研究時にヘスペリジナーセでアストラガロサイドIVを加水分解してアグリコンを調製したときの副産物として得られたが、該化合物の薬理作用についてはまだ報告例がない。本発明者らの研究ではＣＭＧがアストラガロサイドIVと同じ心臓血管の薬理活性を持ち、その溶解性がアストラガロサイドIVや他の既知のシクロアストラゲノール類化合物より優れ、医薬品として開発するのにより適切であった。特許文献４及び５ではマイルドな酸でアストラガロサイドIVを加水分解してＣＭＧを調製する方法を記載しているが、この反応で得られた主産物がシクロアストラゲノール（５２％）でＣＭＧの収率（２１％）は低かった。またほかの副生成物も同時に存在するため純粋な産物を得るには必ずシリカゲールカラムクロマトグラフイ等の単離方法を用いて精製しなくてはいけないので、工業化の大量製造には適していなかった。
【０００４】
【化１】
2010538621.tif 000002
式１  ＣＭＧの構造
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】中国特許第１１７２６７７Ｃ号
【特許文献２】中国特許第１５４３９７６Ａ号
【特許文献３】中国特許第１１８９１７６Ｃ号
【特許文献４】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２０２７７
【特許文献５】中国特許第１８０９３６４Ａ号
【非特許文献１】Chem. Pharm. Bull. 31(2)、 698-708、1983
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、従来の調製方法の欠陥に対し、産業的な製造に適した製造技術を提供し、ＣＭＧの優れた溶解性と心臓血管疾患に対する顕著な効果に基づき、医薬用製剤を提供する。
【０００７】
本発明の課題の一つは、シクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシド（ＣＭＧ）を産業的に調製する方法を提供することである。かかる方法は、ＣＭＧを、毒害性有機溶媒や強酸、あるいは強アルカリ性試薬を使うことなく、酵素を調製する工業的な人工転換技術（industrial bionic conversion technology）と、高性能天然物精製技術とを組み合わせてＣＭＧを調製する。かかる方法の工程は簡便で、環境に優しいため、本発明の産物収率は安定しており、工業的な製造に適している。
【０００８】
本発明の別の課題としては、本発明の方法で製造されたＣＭＧ、有効量のＣＭＧと、１又は複数の薬学的に許容されるアジュバントとを含む医薬用組成物、及び心臓血管疾患及び脳血管疾患を治療するための医薬品製造におけるＣＭＧの使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、本発明の課題と共に詳細に記載される。
【００１０】
本発明のＣＭＧの調製方法は、以下の技術的解決策により実現される。具体的には、本発明は以下のステップを含むシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシド（ＣＭＧ）の製造方法を提供する。
ａ．アストラガロサイドIV又は常法により調製したオウギエキスを原料として使用し、適当な溶媒を添加して、原料液を調製するステップ；
ｂ．加水分解酵素を添加し、一定温度で加水分解し、加水分解液を得るステップ；
ｃ．前記加水分解液をマクロ多孔性吸着樹脂により分離するステップ；及び
ｄ．分離した前記産物を精製するステップ。
【００１１】
原料がアストラガロサイドIVである場合、溶液中のアストラガロサイドIVの濃度は好ましくは０．０１〜１％（Ｗ／Ｖ）、より好ましくは０．０１〜０．５％（Ｗ／Ｖ）、さらに好ましくは０．０１〜０．１％（Ｗ／Ｖ）であり、原料がオウギエキスである場合、エキス：溶液の比が１：２〜１：１０００（Ｗ／Ｖ）であり、好ましくは１：１５〜１：１０００（Ｗ／Ｖ）である。
上記溶媒は、水、低級アルコール、含水低級アルコールからなる群より選択される。前記低級アルコールは、好ましくは炭素数１〜３の一価アルコールから選択され、より好ましくはエタノール及びメタノールから選択され、さらに好ましくはエタノールである。原料が、アストラガロサイドIV、或いは水に溶けにくいエキスである場合には、可溶化するために原料に適切な濃度の低級アルコールを組み入れ、加水分解の効率を高める必要がある。本発明の医薬組成物中の低級アルコールの最終濃度は好ましくは１〜３０％（Ｖ／Ｖ）であるが、さらに好ましくは５〜２０％（Ｖ／Ｖ）である。
【００１２】
本発明の好ましい実施態様において、上記加水分解酵素は、β−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ヘスペリニダーゼ、並びにこれらの酵素のうちの１つとセルラーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ及びアミラーゼから選択される１又は２種以上の酵素との混合物から選択され、好ましくはβ−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ及びキシラナーゼからなる群より選択され、より好ましくはキシラナーゼである。上記キシラナーゼはエクソキシラナーゼを意味し、酵素活性は５０〜５００万Ｕ／ｇ（ｍｌ）である。
【００１３】
本発明の別の好ましい実施態様において、原料(substrate)がアストラガロサイドIVの場合、原料と酵素の比は１：１〜５０（Ｗ／Ｗ）であり、原料がオウギエキスである場合、酵素と原料の比は１：１００〜１０：１（Ｗ／Ｗ）であり、好ましくは１：５０〜１０：１（Ｗ／Ｗ）である。
【００１４】
本発明の別の好ましい実施態様において、加水分解は４０〜５５℃の一定温度で１２〜７２時間、好ましくは４８〜７２時間行われ、溶液の適切なＰＨ値は４〜７である。
【００１５】
本発明の別の好ましい実施態様において、上記の分離は、以下のステップを含む工程で行われる。
加水分解液をスチレン骨格を有するマクロ多孔性吸着樹脂に供し、まず１〜２カラム体積の水、次に１〜２カラム体積の０．５〜２％のアルカリ性溶液、その次に１〜３カラム体積の２０〜４０％エタノール水溶液、最後に１〜３カラム体積の７０〜９５％のエタノールで溶出し、高濃度のエタノールで溶出した溶出液部分を回収し、その後、白色沈殿物が視覚的に生じるよう、少量のエタノールを含む溶液、すなわちアルコールの臭いがしない溶液に減圧濃縮するステップであって、原料がエキスである場合、原料：樹脂の比が好ましくは１：２０〜４：１ｇ：ｍｌ、より好ましくは１：１０〜３：１ｇ：ｍｌであり；原料がアストラガロサイドIVである場合、原料：樹脂の比が好ましくは０．１：１〜２０：１ｍｇ：ｍｌ、より好ましくは２：１〜１０：１ｍｇ：ｍｌであるステップ。
【００１６】
本発明の別の好ましい実施態様において、上記の分離は、以下のステップを含む工程で行われる。
分離して得られた白色沈殿物を濾過し、低級アルコールに再溶解し、濾過し、濾過液を濃縮して少しの濁度が観察されるまで濃縮し、結晶が析出するステップ；濾過して結晶を得て、それを低級アルコール又は含水アルコールで再結晶化し、９５％を超える純度のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを得るステップ。ここで使用される低級アルコールは、好ましくは炭素数１〜５の一価アルコール及び多価アルコールから選択され、より好ましくはメタノール及びエタノールから選択される。
【００１７】
本発明ではまた、本発明の方法で調製されたシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド（ＣＭＧ）を提供する。本発明のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドは白色細針状結晶（メタノール又はエタノール−水）或いは無定形粉末である（他の溶媒）。
【００１８】
本発明は、治療有効量の本発明の方法で調製されたシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド（ＣＭＧ）と医薬的に許容されるアジュバントとを含む医薬用組成物を提供する。
【００１９】
上記の医薬的に許容されるアジュバントは、好ましくは、希釈剤、潤滑剤、粘着剤、崩壊剤、安定剤、及び溶媒からなる群より選択される。前記希釈剤としては、澱粉、マクロクリスタリンセルロース、スクロース、デキストリン、ラクトース、粉糖、グルコース、低分子デキストラン、カオリン、塩化ナトリウム、マンニトールなどが挙げられるがこれに限定されない。前記潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ホウ酸、塩化ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、DL-ロイシン、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリエチレングリコール４０００−６０００、ポロキサマーなどが挙げられるが、これに限定されない。前記粘着剤としては、水、エタノール、澱粉スラリー、シロップ、ゼラチン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、ガッチガム、ポリビニールピロリドンなどが挙げられるが、これに限定されない。前記崩壊剤としては、澱粉、カボキシルメチル澱粉ナトリウム、発泡混合物（即ち重炭酸ナトリウム、クエン酸、酒石酸、低置換ヒドロキシプロピルセルロース）、などが挙げられるが、これに限定されない。前記安定剤としては、アカシアガム、寒天、アルギン酸、グアーガム、トラガカントガム、アクリル酸エステル樹脂、セルロースエーテル、カーボキシメチルキチン等の多糖が挙げられるが、これに限定されない。前記溶媒としてはリンガー溶液、水、リン酸塩緩衝液、平衡塩類溶液等が挙げられるが、これに限定されない。
【００２０】
活性成分と補助成分との配合比率は製剤によって異なり、また、活性成分の用量は治療目的により異なり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである。
【００２１】
本発明の医薬用組成物は、経口用固形製剤、液体経口製剤、注射剤、フィルム剤、或いはエアロゾルなどの形態に調製できる。経口用固形製剤としては、通常の錠剤、分散性錠剤、腸溶性錠剤、顆粒剤、カプセル、滴下ピル又はプルビス、或いは徐放性若しくは放出制御性製剤が好ましい。前記徐放性製剤若しくは放出制御製剤は、徐放性若しくは放出制御性錠剤、顆粒剤、或いはカプセルが好ましい。前記経口用液体製剤としては、経口用溶液、或いはエマルジョンが好ましい。前記注射剤としては、バイアル注射剤、点滴液、或いは注射用凍結乾燥粉末が好ましい。
【００２２】
本発明の医薬用組成物がバイアル注射剤である場合、前記組成物は注射用蒸留水の他に、適切な割合の、グルコース、塩化ナトリウム、ソルビトール及びリン酸塩から選択される医薬用アジュバント；エタノール、グリセリン及びプロピレングリコールから選択される有機溶媒；或いは注射用PEG、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンから選択される共溶媒をさらに含むことが好ましい。本発明の医薬用組成物が点滴液である場合、前記組成物は注射用蒸留水の他に、必要に応じて添加されるグルコース、塩化ナトリウム及び／又は等浸透圧液をさらに含むことが好ましい。本発明の医薬用組成物が注射用凍結乾燥粉末である場合は、マンニトール、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム、デキストラン、シュクロース、ラクトース、加水分解ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルシクロデキストリン、ポロキサマー及びポリエチレングリコールの１又は２以上の組合せからなる群から選択される、適切な割合の凍結乾燥支持剤をさらに含むことが好ましい。
【００２３】
本発明の医薬用組成物中、前記注射用凍結乾燥粉末のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド（ＣＭＧ）と医薬的に許容されるアジュバントとの重量比は好ましくは１：１０〜２００であり、より好ましくは１：５０〜２００であり、さらに好ましくは１：１００〜１５０である。
【００２４】
前記凍結乾燥支持剤は、マンニトール或いはマンニトール−ラクトース組成物である。このマンニトール−ラクトースの組成物中マンニトールとラクトースの重量比は１０：１〜１：１（Ｗ：Ｗ）であり、好ましくは５：１〜１：１である。
【００２５】
前記凍結乾燥支持剤は、デキストラン、ＰＥＧ−マンニトール組成物或いはデキストラン−ＰＥＧ−マンニトール組成物であり、ＰＥＧ−マンニトール組成物が好ましい。ＰＥＧは好ましくはＰＥＧ２００−６００であり、より好ましくはＰＥＧ４００である。ＰＥＧ−マンニトール組成物のＰＥＧ：マンニトールの重量比は１：１〜１：１０であり、好ましくは１：１〜１：５である。
【００２６】
本発明は、本発明の方法で調製されるシクロアストラゲノール６−O−β−Ｄ−グルコシドの、心臓血管疾患及び脳血管疾患を治療するための医薬品製造における使用を提供する。
【００２７】
本発明で提供されるＣＭＧを調製する技術的解決策において、原料溶液の濃度、原料溶液と酵素の比はＣＭＧの収率にもっとも影響大きい因子として挙げられる。原料溶液の濃度が高すぎると酵素の活性に影響を与えるため、加水分解効率が低下する。原料溶液の濃度が低すぎる場合は、溶液量及び酵素の消費が増加し、処理時間が延長され、その結果、生産サイクルに影響する。一般的に、原料がオウギの生エキス（アストラガロサイドIVの含有量０．２〜８％）の場合、溶液の希釈係数を若干低くしてもよいが（エキス−溶液比：１：５〜１：３００Ｗ：Ｖ）、原料が精製されたエキスである場合（アストラガロサイドIVの含有量１〜５０％）は、溶液の希釈係数（エキス−溶液比）は１：４０〜１：１０００Ｗ：Ｖでなければならない。原料中のアストラガロサイドIVの含量が５０％を越える場合、溶液はアストラガロサイドIV溶液を調製する時の配合比に従って調製するのが好ましい。
【００２８】
本発明で提供されるＣＭＧ化合物の調製方法は、前もって高純度のアストラガロサイドIVを調製し、これを用いて所望の化合物を調製しなくても、直接生薬オウギ（herbal Astragali）から直接ＣＭＧを調製して行うことができる。したがって、本発明が提供するＣＭＧ化合物を調製する方法は、製造コストを削減し、その製造工程は簡便である。バイオ酵素加水分解プロセスを採用するため、技術プロセスを通して、有毒な有機溶媒を使う必要がなく、その結果、工業化の生産実施性が高く、産物の収率が高くなり(生薬から平均０．１％)、産物の品質が安定する。
【００２９】
本発明で提供するＣＭＧ化合物は、水溶解性がほかのシクロアストラガロサイド成分より高いため、注射剤に調製するのに適切である。注射剤は、迅速で安定した治療効果をもたらすため、特に重篤な患者、または薬物の経口投与が不可能な患者に投与されるなど臨床上で優れた面がある。
【００３０】
本発明のＣＭＧ化合物をバイアル注射剤に調製するに当たり、従来の調製方法に従って、直接ＣＭＧ化合物を注射用蒸留水に溶解し、また適切な割合のグルコース、塩化ナトリウム、ソルビトール、リン酸塩などを加えて調製することができる。しかし、高い濃度の大容量の注射剤に調製する場合は、エタノール、グリセロール、プロパンジオールなどの有機溶媒や注射用ＰＥＧ、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどの共溶媒を添加する必要がある。
【００３１】
本発明の医薬用組成物がバイアル注射剤である時、バイアル注射剤中のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの濃度は、好ましくは０．０１〜１％ｇ／１００ｍｌであり、より好ましくは０．０１％〜０．２％ｇ／１００ｍｌである。
【００３２】
ＣＭＧ化合物が点滴剤に調製される場合、所定量のＣＭＧ化合物を注射用蒸留水に溶解し、必要によりグルコース、塩化ナトリウム及び等張剤を加えることにより、従来の調製方法に従って様々な仕様の点滴剤を調製できる。
【００３３】
本発明の医薬用組成物が点滴剤である場合、該点滴剤中のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの濃度は、好ましくは０．００１〜０．１％ｇ／１００ｍｌであり、より好ましくは０．００２〜０．０５％ｇ／１００ｍｌである。
【００３４】
ＣＭＧ化合物を注射用凍結乾燥粉末に調製するに当たっては、必要により適切な割合の凍結乾燥支持剤を必要に応じて加えてもよい。かかる支持剤は、マンニトール、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム、デキストラン、シュクロース、ラクトース、加水分解ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、SBE-デキストリン、ポロキサマー、PEGなどの一種、二種、或いは二種以上の組合せからなる群から選択される。
【００３５】
適切な配合比の支持剤は、化合物の溶解性と、製品の外観と安定性も高めることができる。したがって、凍結乾燥支持剤の配合比と適切な凍結乾燥支持剤の選択は最終製品の品質に大きく関係する。本発明のＣＭＧ凍結乾燥粉末において、ＣＭＧと医薬的に許容されるアジュバントの重量比は１：１０〜２００であり、好ましくは１：５０〜２００、より好ましくは１：１００〜１５０である。
【００３６】
本発明の凍結乾燥支持剤としては、さらに好ましくはマンニトール又はマンニトール−ラクトース組成物であり、マンニトール−ラクトース組成物におけるマンニトールとラクトースの重量比は、１０：１〜１：１（Ｗ：Ｗ）であり、好ましくは５：１〜１：１である。
【００３７】
さらに好ましくは、本発明の凍結乾燥支持剤としては、デキストラン、ＰＥＧ−マンニトール或いはデキストラン−ＰＥＧ−マンニトール組成物が挙げられ、ＰＥＧ−マンニトール組成物が最も好ましい。ＰＥＧは、好ましくはＰＥＧ２００−６００であるが、ＰＥＧ４００が特に優れる。ＰＥＧ−マンニトール組成物において、ＰＥＧ：マンニトールの重量比は、１：１〜１：１０であり、好ましくは１：１〜１：５、より好ましくは１：１〜１：２である。
【００３８】
本発明で提供されるＣＭＧ凍結乾燥粉末は、当該技術における従来の技術により調製できる。しかし、ＣＭＧの水溶解性には限りがあり、様々な溶解条件に強く影響される。したがって、全ての製品のバッチ中の医薬的含有量を均一にし、凍結乾燥粉末の溶液濃度の要件を満たすために、製造工程、特に溶液調製の工程において適切な措置を採る必要がある。
【００３９】
本発明では以下のステップにより上記の問題を解決するに至った。
ａ．所定量のサンプルを０．１〜０．５％の活性炭素で処理した溶媒に溶解する。
ｂ．ａのサンプル溶液を０．１〜０．５％の活性炭素で処理した凍結乾燥支持剤の溶液に攪拌しながら滴下する。
ｃ．所定量まで水を加え、メンブレン濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥する。
【００４０】
前記凍結乾燥粉末を調製するステップにおいて、ステップａの溶媒は、好ましくはエタノール、プロパンジオール、又はＰＥＧが好ましく、その使用量は所定量の溶液の全量の1〜１０％であることが好ましい。
【００４１】
［実施例］
以下、当業者の本発明の理解を深めるため、実施例を挙げ、本発明を詳しく説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例１】
【００４２】
アストラガロサイドIV２ｇを薬用エタノール１５０ｍｌに加え、加熱して溶解した後、３０００ｍｌになるまで水を加えて希釈し、βーグリコシダーゼ３０ｇを加えて溶解した。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、４５℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性吸着樹脂を使用し吸着させ、２カラム体積の水、０．５％水酸化ナトリウム溶液、３０％のエタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％のエタノール溶液で溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで減圧濃縮したところ、白色沈澱が析出した。沈殿を濾過して再び９５％エタノールで溶解し、濾過し、溶液が混濁し始めるまで濃縮して結晶が析出するまで放置した。この結晶を濾過し、精製されたＣＭＧ（白色細針状粉末）を得た。
【実施例２】
【００４３】
オウギハーブ（herb Astragali）（２ｋｇ）の水抽出エキス５４０ｇを、エキス：薬液の比が１：１５Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ９０ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を６．０に調整し、４０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５００ｍｌのＡＢ−８型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％のエタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の８０％エタノールで溶出した。８０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。濃縮液を白色沈澱が析出するまで放置し、濾過して白色沈殿を得た。白色沈殿を９５％エタノールに再溶解し、濾過し、溶液が混濁し始めるまで濃縮して、結晶が析出するまで放置した。この結晶を濾過し、精製されたＣＭＧ（白色非晶質粉末）を得た。
【実施例３】
【００４４】
オウギハーブのアルコール抽出エキス３００ｇを、エキス：薬液の比が１：２０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、グルカナーゼ５０ｇ、β−グルコシダーゼ５０ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５．５に調整し、５０℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を４００ｍｌのＤ１０１マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、２カラム体積の水、２カラム体積の１％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％のエタノール溶液連続して溶出し、最後に２カラム体積の８０％のエタノールで溶出した。８０％のエタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。濃縮液を白色沈澱が析出するまで放置した。白色沈殿を濾過してメタノールに再溶解して、濾過し、溶液が混濁し始めるまで濃縮して、結晶が析出するまで放置した。この結晶を濾過し、エタノール−水で再結晶し、精製されたＣＭＧ（白色非晶質粉末）を得た。
【実施例４】
【００４５】
アストラガロサイドIV２ｇに４０００ｍｌの水を加え懸濁液とし、β−グルコシダーゼ４０ｇを加えて溶解した。溶液のＰＨ値を６．５に調整し、４５℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を４００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、２カラム体積の水、４０％のエタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％のエタノールで溶出した。７０％のエタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。濃縮液を白色沈澱が析出するまで放置し、濾過して白色沈殿を得た。メタノールで再溶解し、濾過し、溶液が混濁し始めるまで濃縮して、結晶が析出するまで放置した。結晶を濾過し、メタノール−水で再結晶し、精製されたＣＭＧ（白色細針状粉末）を得た。
【実施例５】
【００４６】
オウギ（２ｋｇ）の水抽出液（抽出率：３２％）を、エキス：薬液の比が１：１０Ｗ：Ｖになるまで濃縮し、β−グルコシダーゼ８０ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を６．５に調整し、４５℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を６００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％のエタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％のエタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。濃縮液を白色沈澱が析出するまで放置し、濾過して白色沈殿を得た。エタノールに再溶出し、濾過し、溶液が混濁し始めるまで濃縮して、結晶が析出するまで放置した。この結晶を濾過し、エタノール−水で再結晶化し、精製されたＣＭＧ（白色非晶質粉末）を得た。
【実施例６】
【００４７】
オウギ（２ｋｇ）を水抽出し、アルコール沈殿したエキス（抽出率：２３％）を、エキス：薬液の比が１：３０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、セルラーゼ５０ｇ、グルカナーゼ５０ｇ、β−グルコシダーゼ１３０ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、４５℃の一定温度で７２時間加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を４００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂カラムを通し、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出し、７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。白色沈澱が析出するまで放置した。濾過して得られた白色沈殿をエタノールに再溶出し、濾過し、溶液が混濁し始めるまで濃縮して、結晶が析出するまで放置した。この結晶を濾過し、エタノール−水で再結晶化し、精製されたＣＭＧ（白色非晶質粉末）を得た。
【実施例７】
【００４８】
オウギ（２ｋｇ）の水抽出液を（抽出率：２９％）、エキス：薬液の比が１：２５Ｗ：Ｖになるまで濃縮し、セルラーゼ５０ｇ、ペクチナーゼ１５ｇ、β−グルコシダーゼ８０ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、４０℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、２カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出し、７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮し、白色沈澱が析出するまで放置した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例８】
【００４９】
アストラガロサイドIV２ｇにエタノール３００ｍｌを加えて溶解し、１０００ｍｌになるまで水を加えて希釈し、β−グルコシダーゼ１０ｇを加えて溶解した。溶液のＰＨ値を５．５に調整し、４５℃の一定温度で７２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を２００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例９】
【００５０】
オウギエキス３０ｇに、エキス：薬液の比が１：３０Ｗ：Ｖになるまで水を配合し、β−グルコシダーゼ３０ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を６．０に調整し、４５℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を７００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出し、７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１０】
【００５１】
オウギエキス２０ｇを水で、エキス：薬液の比が１：４０Ｗ：Ｖになるまで希釈した。β−グルコシダーゼ２ｇ、キシラーゼ３ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、４０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を６００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に、２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１１】
【００５２】
オウギ（２ｋｇ）の水抽出液（抽出率：３２％）を、エキス：薬液の比が１：７Ｗ：Ｖになるまで濃縮し、β−グルコシダーゼ４０ｇ、グルコアミラーゼ１０ｇ、キシラナーゼ１４ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を７．０に調整し、４０℃の一定温度で７２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を８００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１２】
【００５３】
オウギ（２ｋｇ）の水抽出液（抽出率：３２％）を、エキス：薬液の比が１：１２Ｗ：Ｖになるまで濃縮し、β−グルコシダーゼ３２ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を5.5に調整し、４０℃の一定温度で７２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１３】
【００５４】
オウギエキス１５ｇを、エキス：薬液の比が１：６０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ１ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を４００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１４】
【００５５】
オウギエキス３０ｇを、エキス：薬液の比が１：８０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ３ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、５０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を２５０ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１５】
【００５６】
オウギ（２ｋｇ）のエタノールエキス（抽出率：２４％）を、エキス：薬液の比が１：２０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ９６ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を６．０に調整し、４５℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を２００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１６】
【００５７】
オウギエキス２００ｇを、エキス：薬液の比が１：９０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ５ｇ、アミラーゼ５ｇ、セルラーゼ２０ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．５に調整し、４０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を３００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１７】
【００５８】
オウギ（２ｋｇ）のエタノールエキス（抽出率：２０％）を、エキス：薬液の比が１：１００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ１０ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を６．０に調整し、４５℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を１０００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１８】
【００５９】
オウギエキス２００ｇを、エキス：薬液の比が１：１０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ４ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を６．０に調整し、５０℃の一定温度で３６時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例１９】
【００６０】
オウギエキス３０ｇを、エキス：薬液の比が１：２０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ１ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、４０℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５０ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２０】
【００６１】
オウギエキス５ｇを、エキス：薬液の比が１：１００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ５０ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．５に調整し、４５℃の一定温度で２４時間加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を１００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２１】
【００６２】
オウギエキス１ｇを、エキス：薬液の比が１：８０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ５ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．５に調整し、４５℃の一定温度で７２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を２０ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２２】
【００６３】
オウギエキス１ｇを、エキス：薬液の比が１：９０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ９ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５５℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を２０ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２３】
【００６４】
オウギエキス３ｇを、エキス：薬液の比が１：７０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ２１ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を４．０に調整し、５０℃の一定温度で３６時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を６０ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２４】
【００６５】
オウギエキス１ｇを、エキス：薬液の比が１：５０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ３ｇを加えて、溶解させる。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、４５℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を１０ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２５】
【００６６】
オウギエキス１００ｇを、エキス：薬液の比が１：１０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ１ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、４０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を５００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２６】
【００６７】
オウギエキス７０ｇを、エキス：薬液の比が１：３０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、β−グルコシダーゼ１ｇを加えて、溶解した。溶液のＰＨ値を５．５に調整し、５０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。濾液を３００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の０．５％水酸化ナトリウム溶液、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２７】
【００６８】
アストラガロサイドIV１ｇに薬用エタノール１２５ｍｌを加えて溶解し、１８００ｍｌの水に攪拌しながら加えた。エキソキシラナーゼ１０ｇ（酵素活性３００万Ｕ／ｇ）を２００ｍｌの水に溶解し、アストラガロサイドIV溶液に加えた後、反応液の全体量が２５００ｍｌになるまで水を加えた。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解し、溶液を濾過した。濾液を１００ｍｌのＤ１０１型マクロ多孔性樹脂を使用し吸着させ、１カラム体積の水、２カラム体積の４０％エタノール溶液で連続して溶出し、最後に２カラム体積の７０％エタノールで溶出した。７０％エタノールによる溶出液を回収し、アルコール臭がなくなるまで、減圧濃縮した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例２８】
【００６９】
アストラガロサイドIV０．６ｇを１８００ｍｌの水に分散し、アストラガロサイドIVの懸濁液を調製した。エキソキシラナーゼ３ｇ（酵素活性５００万Ｕ／ｇ）を１００ｍｌの水に溶解し、調製したアストラガロサイドIV溶液に加え、最終容量が２０００ｍｌになるまで水を加えた。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、４５℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例２７と同様に行った。
【実施例２９】
【００７０】
アストラガロサイドIV０．５ｇを１００ｍｌの薬用エタノールに溶解し、８００ｍｌの水に攪拌しながら加えた。エキソキシラナーゼ１０ｇ（酵素活性２００万Ｕ／ｇ）を１００ｍｌの水に溶解し、調製したアストラガロサイドIV溶液に加えた。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例２７と同様に行った。
【実施例３０】
【００７１】
アストラガロサイドIV０．５ｇを５０ｍｌの薬用エタノールに溶解し、４００ｍｌの水に攪拌しながら加えた。エキソキシラナーゼ４ｇ（酵素活性４００万Ｕ／ｇ）を５０ｍｌの水に溶解し、調製したアストラガロサイドIV溶液に加えた。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例２７と同様に行った。
【実施例３１】
【００７２】
アストラガロサイドIV０．２ｇを８００ｍｌの水に加えた。エキソキシラナーゼ８ｇ（酵素活性５０万Ｕ／ｇ）を２００ｍｌの水に溶解し、アストラガロサイドIV溶液に加えた。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例２７と同様に行った。
【実施例３２】
【００７３】
アストラガロサイドIV０．８ｇを３５０ｍｌの水に加えた。エキソキシラナーゼ２．４ｇ（酵素活性５００万Ｕ／ｇ）を５０ｍｌの水に溶解し、アストラガロサイドIV溶液に加えた。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例２７と同様に行った。
【実施例３３】
【００７４】
オウギエキス２５ｇを、エキス：薬液の比が１：２０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性３００万Ｕ／ｇ）１ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例３４】
【００７５】
オウギエキス３０ｇを、エキス：薬液の比が１：１０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性２００万Ｕ／ｇ）２ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５．０に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例３５】
【００７６】
オウギエキス１０ｇを、エキス：薬液の比が１：４０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性４００万Ｕ／ｇ）０．２５ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、４５℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例３６】
【００７７】
オウギエキス５ｇを、エキス：薬液の比が１：８０Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性５０万Ｕ／ｇ）５ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５に調整し、５０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例３７】
【００７８】
オウギエキス３ｇを、エキス：薬液の比が１：１００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性５００万Ｕ／ｇ）０．５ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例３８】
【００７９】
オウギエキス１ｇを、エキス：薬液の比が１：３００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性４００万Ｕ／ｇ）０．５ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５に調整し、５０℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例３９】
【００８０】
オウギエキス０．５ｇを、エキス：薬液の比が１：５００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性５００万Ｕ／ｇ）３ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５に調整し、４５℃の一定温度で１２時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例４０】
【００８１】
オウギエキス０．３ｇを、エキス：薬液の比が１：８００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性３００万Ｕ／ｇ）３ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を５に調整し、５０℃の一定温度で２４時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例４１】
【００８２】
オウギエキス０．５ｇを、エキス：薬液の比が１：１０００Ｗ：Ｖになるまで水で希釈し、エキソキシラナーゼ（酵素活性１００万Ｕ／ｇ）４ｇを加え、溶解した。溶液のＰＨ値を４．５に調整し、５０℃の一定温度で４８時間酵素的加水分解した後、溶液を濾過した。後の操作は実施例６と同様に行った。
【実施例４２】
【００８３】
ＣＭＧ１０ｇに、ラクトース：微結晶性セルロース＝５：１の混合物４０ｇ、ステアリン酸マグネシウム１％を加えた。７０％エタノールで造粒して、錠剤化し、規格：１０ｍｇ／錠で錠剤を１０００個得た。
【実施例４３】
【００８４】
ＣＭＧ０．８ｇ及びマンニトール８０ｇを注射用蒸留水２０００ｍｌに溶解し、発熱物質（ピロゲン）を取り除くために適量の活性炭素を加えた。サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥した。規格：２ｍｇ／バイアル、５ｍｇ／バイアル（ＣＭＧの含量で計算）。注射する前に１０〜２０ｍｌ注射用蒸留水、５％ブドウ糖注射液或いは塩化ナトリウム注射液に溶解し、点滴液に注入して静脈点滴注射する。
【実施例４４】
【００８５】
ＣＭＧ０．２ｇ、マンニトール２０ｇ及びラクトース５ｇを注射用加熱蒸留水５００ｍｌに加えて溶解し、１０００ｍｌになるまで水を加えた。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例４５】
【００８６】
ＣＭＧ１ｇ、マンニトール６０ｇ及びラクトース３０ｇを注射用加熱蒸留水２０００ｍｌに加えて溶解し、２５００ｍｌになるまで水を加えた。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例４６】
【００８７】
ＣＭＧ１ｇ、マンニトール５０ｇ及びラクトース１０ｇを注射用加熱蒸留水２５００ｍｌに加えて溶解し、４０００ｍｌになるまで水を加えた。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた。サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例４７】
【００８８】
ＣＭＧ１ｇ、マンニトール６０ｇ及びラクトース１０ｇを注射用加熱蒸留水２０００ｍｌに加えて溶解し、２５００ｍｌになるまで水を加えた。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた。サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例４８】
【００８９】
ＣＭＧ０．５ｇ、マンニトール５０ｇ及びラクトース５ｇを注射用加熱蒸留水２０００ｍｌに加えて溶解し、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた。サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例４９】
【００９０】
ＣＭＧ０．５ｇ、マンニトール１５ｇ及びラクトース５ｇを注射用加熱蒸留水１０００ｍｌに加えて溶解し、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた。サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例５０】
【００９１】
ＣＭＧ０．５ｇ及びラクトース２５ｇを注射用加熱蒸留水１０００ｍｌに加えて溶解し、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた。サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例５１】
【００９２】
ＣＭＧ０．４ｇ、マンニトール４０ｇ及びラクトース４０ｇを注射用加熱蒸留水１０００ｍｌに加えて溶解し、２０００ｍｌになるまで水を加えた。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた後、サンプル液を０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例５２】
【００９３】
ＣＭＧ１ｇ、マンニトール９０ｇ及びラクトース６０ｇを注射用加熱蒸留水２５００ｍｌに加えて溶解し、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えた。０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、凍結乾燥し、静脈点滴用とした。使用法は実施例４３と同じである。
【実施例５３】
【００９４】
ＣＭＧ０．６７ｇを０．３％の活性炭素で処理したエタノール８０ｇで加熱溶解した。５０ｇのデキストランを注射用蒸留水５００ｍｌに溶解し、０．３％の活性炭素を加えて処理した。上記調製したＣＭＧサンプルのエタノール溶液をデキストラン溶液に攪拌しながら加え、１０００ｍｌになるまで水を加えた。０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例５４】
【００９５】
ＣＭＧ０．６７ｇを０．４％の活性炭素で処理したエタノール１６ｇで加熱溶解し、分散し、活性炭素で処理した５０ｇのＰＥＧ４００に滴下した。このサンプル溶液を、２０ｇデキストラン４０とマンニトール５０ｇを含み、活性炭素で処理した８００ｍｌの水溶液に攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例５５】
【００９６】
ＣＭＧ０．６７ｇを０．３％の活性炭素で処理した５０ｇのＰＥＧ４００に加熱溶解した。このサンプル溶液を、マンニトール５０ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例５６】
【００９７】
ＣＭＧ０．６７ｇを０．３％の活性炭素で処理したプロパンジオール５０ｇに加熱溶解した。このサンプル溶液を、マンニトール５０ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例５７】
【００９８】
ＣＭＧ０．５ｇを０．３％の活性炭素で処理した５０ｇのＰＥＧ４００に加熱溶解した。このサンプル溶液を、マンニトール２５ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例５８】
【００９９】
ＣＭＧ０．５ｇを０．３％の活性炭素で処理した３０ｇのＰＥＧ４００に加熱溶解した。このサンプル溶液を、マンニトール６０ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例５９】
【０１００】
ＣＭＧ０．６ｇを０．３％の活性炭素で処理したエタノール６０ｇに加熱溶解した。このサンプル溶液を、活性炭素で処理した１０ｇのＰＥＧ４００に攪拌しながら滴下した。サンプル溶液を、マンニトール５０ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例６０】
【０１０１】
ＣＭＧ０．５ｇを０．３％の活性炭素で処理したエタノール６０ｇに加熱溶解し、かかるサンプル溶液を活性炭素で処理した１０ｇのＰＥＧ４００に攪拌しながら徐々に加えた。サンプル溶液を、マンニトール１５ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例６１】
【０１０２】
ＣＭＧ０．５ｇを０．３％の活性炭素で処理したエタノール６０ｇに加熱溶解し、かかるサンプル溶液を活性炭素で処理した１０ｇのＰＥＧ４００に攪拌しながら徐々に加えた。サンプル溶液を、マンニトール３０ｇを含み、活性炭素で処理した水溶液８００ｍｌに攪拌しながら加えた。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで水を加えた後、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥した。
【実施例６２】
【０１０３】
ＣＭＧ１０ｇにデキストリン１０ｇ及びラクトース３０ｇを加え、６０％のエタノールで造粒、乾燥した後カプセル化し、１０００個のカプセルを得た。
【実施例６３】
【０１０４】
ＣＭＧ１ｇ及びグルコース１２５ｇを２０００ｍｌの注射用加熱蒸留水に加えて溶解し、溶液全体量が２５００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、等張性を調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例６４】
【０１０５】
ＣＭＧ０．８ｇ及び塩化ナトリウム１８ｇに２０００ｍｌの注射用加熱蒸留水を加えて溶解し、溶液全体量が４０００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、等張性を調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例６５】
【０１０６】
ＣＭＧ０．６ｇ及びグルコース１０ｇに１５００ｍｌの注射用加熱蒸留水を加えて溶解し、反応液が２０００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、等張性を調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例６６】
【０１０７】
ＣＭＧ０．６ｇにプロパンジオール５０ｍｌを加えて溶解し、溶液全体量が１０００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、等張性を調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例６７】
【０１０８】
ＣＭＧ０．１ｇに５００ｍｌの注射用加熱蒸留水を加えて溶解し、溶液全体量が１０００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、等張性を調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例６８】
【０１０９】
ＣＭＧ０．４ｇをエタノール１００ｍｌに加えて溶解し、溶液全体量が５００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、等張性を調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で溶液を濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例６９】
【０１１０】
ＣＭＧ１ｇ、グルコース５０ｇ、ソルビトール１０ｇ、エタノール３００ｍｌを使用した。まず処方量のエタノールにＣＭＧを溶解し、２００ｍｌの注射用蒸留水を加えて希釈した。その後、処方量のグルコースとソルビトールを加えて溶解した。溶液全体量が１０００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例７０】
【０１１１】
ＣＭＧ１ｇ、グルコース５０ｇ、ソルビトール１０ｇ、プロパンジオール２００ｍｌを使用した。まず処方量のプロパンジオールにＣＭＧを溶解し、１００ｍｌの注射用蒸留水を加えて希釈した。その後、処方量のグルコースとソルビトールを加えて溶解した。溶液全体量が５００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例７１】
【０１１２】
ＣＭＧ１ｇをエタノール６０ｍｌに溶解し、溶液全体量が１００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加えた。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例７２】
【０１１３】
ＣＭＧ０．８ｇをエタノール３０ｍｌに溶解し、プロパンジオール２０ｍｌを加え、均一になるまで混合した。溶液全体量が１００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例７３】
【０１１４】
ＣＭＧ０．８ｇをエタノール６０ｍｌに溶解し、プロパンジオール３０ｍｌを加え、均一になるまで混合した。溶液全体量が２００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、バイアル注射剤を製造した。
【実施例７４】
【０１１５】
ＣＭＧ１ｇ及びグルコース１０００ｇを注射用加熱蒸留水３Ｌに加熱しながら溶解した。溶液全体量が２０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を６．５に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例７５】
【０１１６】
ＣＭＧ０．８ｇ及び塩化ナトリウム１８０ｇを注射用加熱蒸留水３Ｌに加えて溶解し、溶液全体量が２０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を７．０に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン。
【実施例７６】
【０１１７】
ＣＭＧ２ｇ及びグルコース１０００ｇを注射用加熱蒸留水５Ｌに加えて溶解し、溶液全体量が２０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を７．０に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加えて、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例７７】
【０１１８】
ＣＭＧ２ｇ及びグルコース５００ｇに注射用加熱蒸留水５Ｌを加えて溶解し、溶液全体量が１０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を７．０に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例７８】
【０１１９】
ＣＭＧ０．４ｇ及びグルコース１０００ｇに注射用加熱蒸留水５Ｌを加えて加熱しながら溶解し、溶液全体量が２０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を７．０に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例７９】
【０１２０】
ＣＭＧ０．８ｇ及びグルコース１０００ｇを注射用加熱蒸留水５Ｌに加えて加熱しながら溶解し、溶液全体量が１０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を６．０に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例８０】
【０１２１】
ＣＭＧ１ｇ及びグルコース１００ｇを注射用加熱蒸留水５００ｍｌに加えて加熱しながら溶解し、溶液全体量が２０００ｍｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を６．５に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例８１】
【０１２２】
ＣＭＧ０．１ｇ及びグルコース５００ｇを注射用加熱蒸留水５Ｌに加えて加熱しながら溶解し、溶液全体量が１０Ｌになるまで注射用蒸留水を加え、ＰＨ値を７．５に調節した。発熱物質を取り除くために適量の活性炭素を加え、０．２μｍの微孔性膜で濾過し、充填し、点滴液を製造した。規格：１００ｍｌ／ビン、２５０ｍｌ／ビン、５００ｍｌ／ビン。
【実施例８２】
【０１２３】
５ｇのＣＭＧ、５０ｇのＰＥＧ６０００及び９５％エタノール適量を使用した。処方量のＣＭＧを適量のエタノールに溶解した。サンプル溶液を水浴で加熱し、溶融したＰＥＧ６０００に加えた。サンプル溶液を５０℃保温下で１０℃の液体パラピールに滴下し、ピルに濃縮して、ピルを得た。
【実施例８３】
【０１２４】
ＣＭＧ５ｇ、ポロキサマー５０ｇ及び９５％エタノール適量を使用した。処方量のＣＭＧを適量のエタノールに溶解し、反応液を溶融したポロキサマーに加えた。反応液を攪拌し、温度を維持して冷却したジメチコンに滴下し、ピルを製造した。
【０１２５】
本発明者らの研究により、ＣＭＧがアストラガロサイドIVと同程度の薬理活性を有しつつ、溶解性は著しく改善し（アストラガロサイドIV：２〜４ｍｇ／１００ｍｌ；ＣＭＧ：４０〜５０ｍｇ／１００ｍｌ）、また、ＣＭＧは優れた経口吸収特性を有することから、医薬品として開発する可能性があることが明らかになった。
【実施例８４】
【０１２６】
摘出された心臓に対するＣＭＧの強心効果
方法：Ｗｉｓｔａｒラット（２５０〜２８０ｇ）をクロラールハイドレート（３６０ｍｇ／ｋｇ；腹腔内）で麻酔した。舌下静脈からヘパリンナトリウム（１ｍｇ）を与え、ヘパリン化した。胸腔を切開し、心臓を迅速に摘出し、冷却したKrebs-Henselei （Ｋ−Ｈ）溶液に浸漬させた。ランゲンドルフ装置内で９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２の混合物をバブリングしたＫ−Ｈ溶液で、大動脈を介して心臓に逆行的に７４水柱ｃｍで潅流した。心尖部に固定された縫合糸は、ポリグラフ（ＲＭ６３００、日本光電社製）及びデータ取得ワークステーション（ＭＰ１５０、BIOPAC System社製）、コンピューターランニングアクノレッジ(computer running Acknowldge (version 3.7.1) に接続された張力変換器に接続した。
【０１２７】
結果
１．ＣＭＧが心拍数（ＨＲ）に及ぼす影響
ＣＭＧ群とアストラガロサイドIV群の両方で心拍数が減少し、両者に有意差はなかった（表１）。
２．ＣＭＧが収縮性に及ぼす影響
ＣＭＧ群とアストラガロサイドIV群の両方で収縮性が増強し、両者に有意差はなかった（表２）。
【０１２８】
【表１】
2010538621.tif 000003
【０１２９】
【表２】
2010538621.tif 000004
【０１３０】
３．ＣＭＧが収縮性の変化率に及ぼす影響
ＣＭＧ群とアストラガロサイドIV群の両方で収縮性の変化率が増加したが、両者に有意差はなかった（表３）。
【０１３１】
【表３】
2010538621.tif 000005
【０１３２】
４．ＣＭＧが拡張力の変化率に及ぼす影響
ＣＭＧ群とアストラガロサイドIV群の両方で拡張力の変化率が増加したが、両者に有意差はなかった（表４）。
【０１３３】
【表４】
2010538621.tif 000006
【０１３４】
結論：ＣＭＧは、摘出されたラットの心臓において強心効果を示し、かつこの効果はアストラガロサイドIVと同程度であった。
【実施例８５】
【０１３５】
麻酔した胸切開犬の血行動態に与えるCMGの影響
1．実験目的
静脈投与時に麻酔して胸を切開した犬における、心臓機能の様々な指標に対するアストラガロサイドIVと比較したＣＭＧの影響を考察し、ＣＭＧのさらなる開発の根拠を提供することである。
【０１３６】
２．実験材料
２．１  薬剤と調製
（１）ＣＭＧ注射液：無色透明な液体、０．３５ｍｇ／ｍＬ−１、製造番号：０４１２３０。天津薬物研究院創新センターから提供。
（２）アストラガロサイドIV注射液：無色透明な液体、１．５ｍｇ／ｍＬ−１、製造番号：０４１３２３。天津薬物研究院創新センターから提供。
【０１３７】
２．２  実験動物
健康な雑種成犬を天津市郊区から購入した。
２．３  実験用機械
（１）ＲＭ−６３００型８チャネルポリグラフレコーダー（日本光電社製）
（２）ＭＦＶ−３２００型電磁血液流量計（日本光電社製）
（３）ＭＰ−１００データ取得ワークステーション（BIOPAC社製）
（４）ＳＣ−３型電動呼吸器（上海第四医療機器社製）
【０１３８】
３．実験方法
ペントバルビタール３０ｍｇ／ｋｇを動物に静脈注射して麻酔した。気管挿管し、SC―3型電気呼吸器に連結し、陽性気圧で人工呼吸を行った。第ＩＶ肋間腔から左開胸し、心膜クレイドルに心臓を吊るし、大動脈基部を単離して、血流計のプローブ（直径１２又は１４ｍｍ）を固定し、心拍出量（ＣＯ）として大動脈血流を測定した。左冠動脈の回旋枝を単離し、血流計のプローブ（直径２又は２．５mm）を固定し、冠血流量（ＣＢＦ）を測定した。心尖部を通してヘパリン生理食塩水を充填したＰＥカテーテルを左心室まで挿入し、左心室圧（ＬＶＰ）及び左心室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）を測定した。ＬＶＰの陽性ピークと陰性ピークの第一変化（first derivatives）を（＋ＬＶｄｐ/ｄｔ及び−ＬＶｄｐ/ｄｔ）をAknowledgeソフトウエアで計算した。大腿動脈を通して、ＰＥカテーテルで、最大血圧（ＳＢＰ）、最小血圧（ＤＢＰ）及び平均動脈圧（ＭＡＰ）を測定し、ＥＣＧIIは、ＡＣ−６０１ＧＥＣＧ増幅器で測定した。上記アナログ信号をデータ取得ワークステーション（ＭＰ１００、BIOPAC Systems）に入力し、Acknowledge（３．７．１バージョン）を使用したコンピュータに入力した。
【０１３９】
手術が終わってから各指標が安定するまで、投与前の各データを記録し、静脈点滴投与を始めた。実験動物は一群６匹ずつの５群に分け、実験群にはそれぞれＡＳＰ−ＩＩを０．５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇを投与し、通常コントロール群は溶媒を１ｍｌ／ｋｇ、陽性コントロール群にはアストラガロサイドIVを０．３ｍｇ／ｋｇをそれぞれ投与した。送達量は一匹あたり１５ｍｌ、送達速度は１ｍｌ／分であった。投薬を始めてから５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０、１２０分後に指標を記録した。実験が終わった後心臓を切除し、計量した。１００グラム（hectogram）あたりの心筋血流（ＣＦ）、冠抵抗（ＣＲ）、心係数（ＣＩ）、左心室１回仕事量（ＬＶＷ）及び全末梢血血管抵抗（ＴＰＲ）を以下の式に基づいて計算した。
ＣＦ＝ＣＢＦ×３００／心臓重量
ＣＲ＝ＭＡＰ／ＣＦ    
ＣＩ＝ＣＯ／０．１１×（体重）２／３
ＬＶＷ＝ＣＯ×（ＭＡＰ−５）×１．０５２×０．０１３６
ＴＰＲ＝ＭＡＰ×７９．９２／ＣＯ
データは
2010538621.tif 000007
で表し、ｔ検定で投薬前後の有意性を比較。対応のないｔ検定で２つの群の比較を行った。
【０１４０】
4．実験結果
４．１  ＣＭＧが血圧、心拍数に与える影響
ＣＭＧを０．１５、０．３、及び０．６ｍｇ／ｋｇ投与後１２０分以内のＳＢＰ、ＤＢＰ、ＭＡＰ及びＨＲには有意差はなかった。アストラガロサイドIV投与後の血圧は、投与前と比較して有意な変化はなかったのに対し、心拍数は少し減少した。
同じ用量（０．３ｍｇ／ｋｇ）のＡＳＰ−ＩＩとアストラガロサイドIVの間に有意な差はなかった。
【０１４１】
４．２  ＣＭＧが左心室機能に与える影響（表５、６）
麻酔し、開胸した犬において対照溶剤を投与後１２０分以内にはＬＶＰ、ＬＶＥＤＰ、ＬＶＷ、ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘに有意な変化はなかった。
ＬＶＰ：ＣＭＧを０．１５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇの用量での静脈投与後には、左心室圧力に有意な変化はなかった。
ＬＶＥＤＰ：ＣＭＧを０．１５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ投与後、ＬＶＥＤＰは用量依存的に低下し、ＬＶＥＤＰは、最大それぞれ１．１±０．４、１．５±０．８、２．１±０．５ｍｍＨｇ（ｐ＜０．０１）ずつ低下し、この効果は２ｈ以上持続した。
ＬＶＷ：ＣＭＧを０．１５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ投与後、左心室機能に有意な変化はなかった。
±ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘ：ＣＭＧを０．１５ｍｇ／ｋｇ投与後、１２０分以内に±ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘに有意な変化はなかった。ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘは、ＣＭＧをそれぞれ０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ投与後５〜１０分後に最大１２．０±５．０、２２．６±１１．８％（ｐ＜０．０１）上昇したが、−  ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘには有意な変化はなかった。
アストラガロサイドIVの投与後、ＬＶＳＰ、ＬＶＷ、−ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘ  には有意な変化はなく、＋ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘが著しく増加したが、ＬＶＥＤＰが著しく低下した。同じ用量（０．３ｍｇ／ｋｇ）のＣＭＧとアストラガロサイドIVに有意な差はなかった。
【０１４２】
４．３  ＣＭＧが心臓機能と全抹消血抵抗に及ぼす影響（表７）
生理食塩水を静脈内投与した麻酔し開胸した犬において、投与後１２０分以内にＣＯ、ＣＩとＴＰＲに有意な変化はなかった。
ＣＯ、ＣＩ：ＣＭＧを０．１５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ静脈内に投与後、１２０分以内にＣＯ、ＣＩに有意な変化はなかった。
ＴＰＲ：ＣＭＧを０．１５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ静脈内に投与後、１２０分以内に全抹消血抵抗に有意な変化はなかった。
【０１４３】
コントロール薬剤としてのアストラガロサイドIVはＣＯ、ＣＩ、ＴＰＲに顕著な効果がなかった。同じ用量のＣＭＧと比べても有意な変化はなかった。
【０１４４】
４．４  冠血流と冠抵抗に及ぼす影響（表8）
麻酔し開胸した犬において、生理食塩水投与後１２０分以内にＣＦ、ＣＲに有意な変化はなかった。
ＣＭＧを０．１５、０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ静脈内投与後でも１２０分以内にＣＦ、ＣＲに有意な変化はなかった。
アストラガロサイドIVの静脈内投与後にも１２０分以内にＣＦ、ＣＲに有意な変化はなかった。
【０１４５】
結論
ＣＭＧを０．１５ｍｇ／ｋｇを一回投与した後は、ＬＶＥＤＰ以外の各血液動態指標に有意な変化はなかった。０．３、０．６ｍｇ／ｋｇ投与群ではＬＶＥＤＰが顕著に低下し、＋ＬＶｄｐ／ｄｔｍａｘが増加したが、他の血液動態指標には有意な変化はなかった。
コントロール薬剤のアストラガロサイドIVはＬＶＥＤＰを顕著に低下させ、＋ＬＶｄｐ／ｄｔを上昇させたが、同じ用量のＣＭＧに比べて麻酔し開胸した犬の各指標に与える影響に有意差はなかった。
【０１４６】
CMGは麻酔した犬の各血液動態指標を有効に改善した。その効果は同じ用量のアストラガロサイドIVと同程度であった。
【０１４７】
【表５】
2010538621.tif 000008
2010538621.tif 000009
【０１４８】
【表６】
2010538621.tif 000010
2010538621.tif 000011
【０１４９】
【表７】
2010538621.tif 000012
2010538621.tif 000013
2010538621.tif 000014
【０１５０】
【表８】
2010538621.tif 000015
2010538621.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】平成21年7月9日(2009.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップを含むことを特徴とするシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの製造方法：
ａ．アストラガロサイドＩＶ又は常法により調製したオウギエキスを原料として使用し、適当な溶媒を添加して、原料液を調製するステップであって、
原料がアストラガロサイドＩＶである場合、溶液中のアストラガロサイドＩＶの濃度が０．０１〜１％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．０１〜０．５％Ｗ／Ｖ、より好ましくは０．０１〜０．１％Ｗ／Ｖであり、原料がオウギエキスである場合、エキス：溶液の比が１：２〜１：１０００Ｗ／Ｖ、好ましくは１：１５〜１：１０００Ｗ／Ｖであるステップ；
ｂ．加水分解酵素を添加し、一定温度で加水分解し、加水分解液を得るステップであって、該加水分解酵素が、β−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、並びにこれらの酵素のうちの１つとセルラーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ及びアミラーゼから選択される１又は２種以上の酵素との混合物から選択され、好ましくはβ−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ又はキシラナーゼ、より好ましくはキシラナーゼであり；原料がアストラガロサイドＩＶである場合、原料と酵素の比が１：１〜５０Ｗ：Ｗであり；原料がオウギエキスである場合，酵素と原料比が１：１００〜１０：１Ｗ：Ｗ、好ましくは１：５０〜１０：１Ｗ：Ｗであるステップ；
ｃ．前記加水分解液をマクロ多孔性吸着樹脂により分離するステップであって、原料がオウギエキスである場合、原料：樹脂の比が１：２０〜４：１ｇ：ｍｌ、好ましくは１：１０〜３：１ｇ：ｍｌであり；原料がアストラガロサイドＩＶである場合、原料：樹脂の比が０．１：１〜２０：１ｍｇ：ｍｌ、好ましくは２：１〜１０：１ｍｇ：ｍｌであるステップ；及び
ｄ．分離した前記産物を精製するステップ。
【請求項２】
溶媒が、水、低級アルコール、及び含水低級アルコールから選択され，前記低級アルコールが好ましくは炭素数１〜３の一価アルコールであり、より好ましくはエタノール及びメタノールから選択され、さらに好ましくはエタノールであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
原料液中のアルコール濃度が１〜３０％Ｖ／Ｖ、好ましくは５〜２０％Ｖ／Ｖであることを特徴とする請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
加水分解が、４０〜５５℃の一定温度で、１２〜７２時間、好ましくは４８〜７２時間行われ、その溶液の適宜なＰＨ値が４〜７であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
以下のステップを含む工程により分離を行うことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の方法：
加水分解液をスチレン骨格を有するマクロ多孔性吸着樹脂に供し、まず１〜２カラム体積の水、次に１〜２カラム体積の０．５〜２％のアルカリ性溶液、その次に１〜３カラム体積の２０〜４０％エタノール水溶液、最後に１〜３カラム体積の７０〜９５％のエタノールで溶出し、高濃度のエタノールで溶出した溶出液部分を回収し、その後減圧濃縮するステップ。
【請求項６】
以下のステップを含む工程により精製を行うことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法：
分離された産物を濾過し、低級アルコール又は含水低級アルコールに再溶解し、濾過し、濾過液を濃縮して結晶が析出するまで放置し、濾過して結晶を得た後、それを低級アルコール又は含水アルコールで再結晶を行い、９５％を超える純度のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを得るステップであって、前記低級アルコールが、好ましくは炭素数１〜５の一価アルコール及び多価アルコールから選択され、より好ましくはメタノール及びエタノールから選択されるステップ。
【請求項７】
治療有効量のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとを含む、シクロアストラゲノール−６−Ｏ−β―Ｄ―グルコシド注射剤であって、
バイアル注射剤、点滴液又は注射用凍結乾燥粉末であり、
注射用凍結乾燥粉末におけるシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントの重量比が１：１０〜２００であり；バイアル注射剤におけるシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、好ましくは０．０１％〜１％ｇ／１００ｍｌであり；点滴液におけるシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が好ましくは０．００１％〜０．１％ｇ／１００ｍｌである注射剤。
【請求項８】
バイアル注射剤である場合、注射用蒸留水の他に、適切な割合の、グルコース、塩化ナトリウム、ソルビトール及びリン酸塩から選択される医薬的に許容されるアジュバント；エタノール、グリセリン及びプロピレングリコールから選択される有機溶媒；又は注射用ＰＥＧ及びヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンから選択される共溶媒；をさらに含み；点滴液である場合、注射用蒸留水の他に、必要に応じて添加されるグルコース、塩化ナトリウム及び／又は等張剤をさらに含み；注射用の凍結乾燥粉末である場合、好ましくは、マンニトール、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム、デキストラン、シュクロース、ラクトース、加水分解ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルシクロデキストリン、ポロキサマー及びポリエチレングリコールの１又は２以上の組合せからなる群から選択される、適切な割合の凍結乾燥支持剤を含むことを特徴とする、請求項７に記載の注射剤。
【請求項９】
注射用の凍結乾燥粉末におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとの重量比が、１：５０〜２００、好ましくは１：１００〜１５０であることを特徴とする、請求項７又は８に記載の注射剤。
【請求項１０】
凍結乾燥支持剤が、マンニトール、ラクトース、又はマンニトール−ラクトース組成物であり、前記マンニトール−ラクトース組成物中、マンニトールとラクトースとの重量比が、１０：１〜１：１、好ましくは５：１〜１：１であることを特徴とする、請求項８又は９に記載の注射剤。
【請求項１１】
バイアル注射剤におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．０１〜０．２％ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項７〜１０のいずれかに記載の注射剤。
【請求項１２】
点滴液におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．００２〜０．０５ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項７〜１１のいずれか記載の注射剤。
【請求項１３】
凍結乾燥支持剤が、デキストラン、ポリエチレングリコール−マンニトール、又はデキストラン−ポリエチレングリコール−マンニトール組成物であり、好ましくはポリエチレングリコール−マンニトール組成物であることを特徴とする、請求項８〜１２のいずれか記載の注射剤。
【請求項１４】
ポリエチレングリコールが、ポリエチレングリコール２００−６００、好ましくはポリエチレングリコール４００であり、ポリエチレングリコール−マンニトール組成物におけるポリエチレングリコール：マンニトールの重量比が１：１〜１：１０、好ましくは１：１〜１：５であることを特徴とする請求項１３記載の注射剤。
【請求項１５】
凍結乾燥粉末注射剤が、以下のステップで製造されることを特徴とする、請求項７〜１４のいずれかに記載の注射剤：
ａ．所定量のサンプルを０．１〜０．５％の活性炭素で処理した溶媒に溶解するステップ；
ｂ．ステップａのサンプル溶液を０．１〜０．５％の活性炭素で処理した凍結乾燥支持剤溶液に混合しながら滴加するステップ；及び
ｃ．所定量まで水を添加し、メンブレン濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥するステップ。
【請求項１６】
ステップａの溶媒が、所定量の溶液の全体量に対して１〜１０％のエタノール、プロパンジオール又はポリエチレングリコールであることを特徴とする、請求項１５記載の注射剤。
【請求項１７】
心臓血管疾患の治療薬の調製における、シクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの使用。
【手続補正書】
【提出日】平成22年6月24日(2010.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップを含むことを特徴とするシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの製造方法：
ａ．アストラガロサイドＩＶ又は常法により調製したオウギエキスを原料として使用し、適当な溶媒を添加して、原料液を調製するステップであって、
原料がアストラガロサイドＩＶである場合、溶液中のアストラガロサイドＩＶの濃度が０．０１〜１％Ｗ／Ｖであり、原料がオウギエキスである場合、エキス：溶液の比が１：２〜１：１０００Ｗ：Ｖであるステップ；
ｂ．加水分解酵素を添加し、一定温度で加水分解し、加水分解液を得るステップであって、該加水分解酵素が、β−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、並びにこれらの酵素のうちの１つとセルラーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ及びアミラーゼから選択される１又は２種以上の酵素との混合物から選択され；原料がアストラガロサイドＩＶである場合、原料と酵素の比が１：１〜1：５０Ｗ：Ｗであり；原料がオウギエキスである場合，酵素と原料比が１：１００〜１０：１Ｗ：Ｗであるステップ；
ｃ．前記加水分解液をマクロ多孔性吸着樹脂により分離するステップであって、原料がオウギエキスである場合、原料：樹脂の比が１：２０〜４：１ｇ：ｍｌであり；原料がアストラガロサイドＩＶである場合、原料：樹脂の比が０．１：１〜２０：１ｍｇ：ｍｌであるステップ；及び
ｄ．分離した前記産物を精製するステップ。
【請求項２】
ステップａにおいて、原料がアストラガロサイドＩＶの場合、溶液中のアストラガロサイドＩＶの濃度が０．０１〜０．５％Ｗ／Ｖであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
溶液中のアストラガロサイドＩＶの濃度が、０．０１〜０．１％Ｗ／Ｖであることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ステップａにおいて、原料がオウギエキスである場合、エキス：溶液の比が１：１５〜１：１０００Ｗ：Ｖであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ステップｂにおいて、加水分解酵素がβ−グリコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、又はキシラナーゼであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
加水分解酵素がキシラナーゼであることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ステップｂにおいて、原料がオウギエキスである場合、酵素と原料との比が１：５０〜１０：１Ｗ：Ｗであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ステップｃにおいて、原料がオウギエキスである場合、原料：樹脂の比が１：１０〜３：１ｇ：ｍｌであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
ステップｃにおいて、原料がアストラガロサイドＩＶの場合、原料：樹脂の比が２：１〜１０：１ｍｇ：ｍｌであることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
溶媒が、水、低級アルコール、及び含水低級アルコールから選択されることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
低級アルコールが、炭素数１〜３の一価アルコールであることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
低級アルコールが、エタノール及びメタノールからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
低級アルコールがエタノールであることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
原料液中のアルコール濃度が１〜３０％Ｖ／Ｖであることを特徴とする請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
原料溶液中のアルコール濃度が、５〜２０％Ｖ／Ｖであることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
加水分解が、４０〜５５℃の一定温度で、１２〜７２時間行われ、その溶液の適宜なＰＨ値が４〜７であることを特徴とする請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
加水分解が、４８〜７２時間行われることを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
以下のステップを含む工程により分離を行うことを特徴とする請求項１〜１７のいずれかに記載の方法：
加水分解液をスチレン骨格を有するマクロ多孔性吸着樹脂に供し、まず１〜２カラム体積の水、次に１〜２カラム体積の０．５〜２％のアルカリ性溶液、その次に１〜３カラム体積の２０〜４０％エタノール水溶液、最後に１〜３カラム体積の７０〜９５％のエタノールで溶出し、高濃度のエタノールで溶出した溶出液部分を回収し、その後減圧濃縮するステップ。
【請求項１９】
以下のステップを含む工程により精製を行うことを特徴とする請求項１〜１８のいずれかに記載の方法：
分離された産物を濾過し、低級アルコール又は含水低級アルコールに再溶解し、濾過し、濾過液を濃縮して結晶が析出するまで放置し、濾過して結晶を得た後、それを低級アルコール又は含水アルコールで再結晶を行い、９５％を超える純度のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを得るステップ。
【請求項２０】
再結晶用の低級アルコールが、炭素数１〜５の一価アルコール及び多価アルコールからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
再結晶用の低級アルコールが、メタノール及びエタノールからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
治療有効量のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとを含む、シクロアストラゲノール−６−Ｏ−β―Ｄ―グルコシド注射剤であって、
バイアル注射剤、点滴液又は注射用凍結乾燥粉末であり、
注射用凍結乾燥粉末におけるシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントの重量比が１：１０〜1：２００である注射剤。
【請求項２３】
バイアル注射剤中のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．０１％〜１％ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項２２に記載の注射剤。
【請求項２４】
点滴液中のシクロアストラゲノール６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．００１％〜０．１％ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項２２に記載の注射剤。
【請求項２５】
医薬組成物がバイアル注射剤である場合、注射用蒸留水の他に、適切な割合の、グルコース、塩化ナトリウム、ソルビトール及びリン酸塩から選択される医薬的に許容されるアジュバント；エタノール、グリセリン及びプロパンジオールから選択される有機溶媒；又は注射用ＰＥＧ及びヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンから選択される共溶媒；をさらに含み；点滴液である場合、注射用蒸留水の他に、必要に応じて添加されるグルコース、塩化ナトリウム及び／又は等張剤をさらに含み；注射用の凍結乾燥粉末である場合、適切な割合の凍結乾燥支持剤をさらに含むことを特徴とする、請求項２２〜２４のいずれかに記載の注射剤。
【請求項２６】
凍結乾燥支持剤が、マンニトール、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム、デキストラン、シュクロース、ラクトース、加水分解ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルシクロデキストリン、ポロキサマー及びポリエチレングリコールの１、又は２以上の組合せからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２５に記載の注射剤。
【請求項２７】
凍結乾燥支持剤が、マンニトール、ラクトース、又はマンニトール−ラクトース組成物であり、該マンニトール−ラクトース組成物中のマンニトールとラクトースとの重量比が１０：１〜１：１であることを特徴とする、請求項２６に記載の注射剤。
【請求項２８】
マンニトール−ラクトース組成物中のマンニトールとラクトースとの重量比が５：１〜１：１であることを特徴とする、請求項２７に記載の注射剤。
【請求項２９】
注射用の凍結乾燥粉末におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとの重量比が、１：５０〜1：２００であることを特徴とする、請求項２２〜２８のいずれかに記載の注射剤。
【請求項３０】
注射用の凍結乾燥粉末におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドと医薬的に許容されるアジュバントとの重量比が、１：１００〜1：１５０であることを特徴とする、請求項２９に記載の注射剤。
【請求項３１】
バイアル注射剤におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．０１〜０．２％ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項２２〜３０のいずれかに記載の注射剤。
【請求項３２】
点滴液におけるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの濃度が、０．００２〜０．０５ｇ／１００ｍｌであることを特徴とする、請求項２２〜３１のいずれかに記載の注射剤。
【請求項３３】
凍結乾燥支持剤が、デキストラン、ポリエチレングリコール−マンニトール、又はデキストラン−ポリエチレングリコール−マンニトール組成物であることを特徴とする、請求項２５〜３２のいずれかに記載の注射剤。
【請求項３４】
凍結乾燥支持剤が、ポリエチレングリコール−マンニトール組成物であることを特徴とする、請求項３３に記載の注射剤。
【請求項３５】
ポリエチレングリコールが、ポリエチレングリコール２００−６００であり、ポリエチレングリコール−マンニトール組成物におけるポリエチレングリコール：マンニトールの重量比が１：１〜１：１０であることを特徴とする請求項３３又は３４に記載の注射剤。
【請求項３６】
ポリエチレングリコールが、ポリエチレングリコール４００であり、ポリエチレングリコール−マンニトール組成物におけるポリエチレングリコール：マンニトールの重量比が１：１〜１：５であることを特徴とする請求項３５に記載の注射剤。
【請求項３７】
凍結乾燥粉末注射剤が、以下のステップで調製されることを特徴とする、請求項２２〜３６のいずれかに記載の注射剤：
ａ．所定量のサンプルを０．１〜０．５％の活性炭素で処理した溶媒に溶解するステップ；
ｂ．ステップａのサンプル溶液を０．１〜０．５％の活性炭素で処理した凍結乾燥支持剤溶液に攪拌しながら滴加するステップ；及び
ｃ．所定量まで水を添加し、メンブレン濾過し、サブパッケージし、凍結乾燥するステップ。
【請求項３８】
ステップａの溶媒が、所定量の溶液の全体量に対して１〜１０％のエタノール、プロパンジオール又はポリエチレングリコールであることを特徴とする、請求項３７記載の注射剤。
【請求項３９】
心臓血管疾患の治療薬の調製における、シクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドの使用。
【国際調査報告】
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