(57)【要約】本発明は、少なくともMC1-R受容体阻害剤と、ビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤と、ケラチノサイトへのメラノソーム輸送阻害剤とを含む組合せに関する。また、本発明は、ホワイトニングおよび／または脱色用の色素消失組成物を製造するための化粧品および皮膚用品におけるそれらの使用にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのMC1-R受容体アンタゴニスト、少なくとも１つのビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤および少なくとも１つのケラチノサイトへのメラノソーム輸送阻害剤を含み、前記MC1-R受容体アンタゴニストがメラノスタチン（登録商標）５であることを特徴とする組合せ。
【請求項２】
ビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤がアスコルビン酸２-グルコシドであることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
ケラチノサイトへのメラノソーム輸送阻害剤がニコチンアミドであることを特徴とする、請求項１または２に記載の組合せ。
【請求項４】
化粧用または皮膚用に許容される担体中に請求項１〜３のいずれか１項に記載の組合せを含む、化粧用および／または皮膚用組成物。
【請求項５】
- ０．０１％〜５％のメラノソーム輸送阻害剤と、
- ０．０１％〜５％のビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤と、
- ０．１〜４０ppmのMC1-R受容体アンタゴニストと
を含むことを特徴とする、請求項４に記載の化粧用および／または皮膚用組成物。
【請求項６】
- ０．０１％〜５％のニコチンアミドと、
- ０．０１％〜５％のアスコルビン酸２-グルコシドと、
- ０．１〜４０ppmのメラノスタチン（登録商標）と
を含むことを特徴とする、請求項５に記載の化粧用および／または皮膚用組成物。
【請求項７】
皮膚および／または身体表面成長物の過色素沈着の出現の予防および／または治療のための請求項４〜６のいずれか１項に記載の組成物の化粧用の使用。
【請求項８】
皮膚および／または身体表面成長物の過色素沈着の出現の予防または治療において使用するための皮膚用組成物の製造のための請求項１〜３のいずれか１項に記載の組合せの使用。
【請求項９】
皮膚を白くするため、および／または肌の色を明るくするため、および／または肌の色を均一にするため、および／または肌の色を均質にするための請求項７または８に記載の使用。
【請求項１０】
- 特発性黒皮症、またはエストロプロゲステロンによる避妊の結果による黒皮症；
- 光線性ほくろとして知られる、そばかす、夏日斑または老人性色素沈着斑のような良性メラノサイトの活動亢進および増殖により引き起こされる限局性過色素沈着
- 偶発性過色素沈着または色素消失
から選択される、メラノサイトの活動亢進による局所的過色素沈着を予防または治療する目的のための請求項７または８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、メラニン形成阻害化合物の新規な組合せ、ならびにホワイトニングおよび／またはライトニング用の色素消失組成物を製造するための化粧品および皮膚用品におけるそれらの使用である。
【背景技術】
【０００２】
肌の白さが真の美的要求であるアジア諸国だけでなく、均質な肌の色が健康体のしるしである西洋の人々においても評価されているライトニング製品は、全くの社会現象である。皮膚用品および化粧品の分野では、色素沈着斑（夏日斑、そばかす、老人性の斑）の消失を促進するか、または肌の色を明るくすることを意図するライトニングもしくはホワイトニング用の色素消失製品を提案することにより、この要求に応じることができている。
【０００３】
皮膚および小胞の色素沈着は、皮膚および毛嚢の表面でのメラニンの露出の結果である。メラニン形成は、表皮の基底層に存在し、ケラチノサイトと接触するための枝を伸ばす樹枝状細胞であるメラノサイトにより、特に行われる。新しく合成されたメラニンは、メラノサイトの樹枝状突起からケラチノサイトへ輸送され、ケラチノサイトは最終的にメラニンを表皮の表面で曝露し、このことにより表皮が均一に着色される。
【０００４】
メラニンの合成（イオウに富み、オレンジ色を与えるフェオメラニン；茶色を与えるユーメラニン）は、メラノサイト特異的リソソーム様オルガネラであるメラノソーム内で、複雑な酵素過程により行われる。メラノソームの膜の内部表面に位置する３つの酵素：チロシナーゼ、TRP2（チロシナーゼ関連タンパク質２）およびTRP1（チロシナーゼ関連タンパク質１）は、メラニン形成に連続的に関連する。メラニン合成において前駆体であるチロシンは、ヒドロキシル化されてドーパ（ジヒドロキシフェニルアラニン）となり、そして酸化されてドパキノンとなる。これら２つの変換は、チロシナーゼの作用による。
【０００５】
この段階において、メラニン合成は、金髪または赤髪の人々に生じるフェオメラニン（オレンジがかった黄色のメラニン）、または色素の黒い人々に生じるユーメラニン（暗褐色のメラニン）に指向され得る。ユーメラニンは、ロイコドパクロム、次いでドパクロムを生じるドパキノンの重合に起因する。後者のドパクロムは、次に、TRP-2の作用によって、5,6-ジヒドロキシインドール（DHI）または5,6-ジヒドロキシインドール-2-カルボン酸（DHICA）のいずれかに変換される。このレベルでは、ユーメラニンの合成は、２つの経路によって行われ得る。DHIは、チロシナーゼまたはペルオキシダーゼの作用によって、酸化されてインドール-5,6-キノンとなり、一方、DHICAは、TRP-1の作用によって、5,6-ジヒドロインドール-2-カルボン酸となる。インドール-5,6-キノンおよび5,6-ジヒドロインドール-2-カルボン酸は、メラノクロム、次いでユーメラニンを形成するように重合される。
【０００６】
フェオメラニンの合成は、ドパキノンにグルタチオンまたはシステインが作用した後のイオウ化合物（システイニル-DOPA）の形成を伴う。システイニル-DOPAは、アラニルヒドロキシベンゾチアジンに変換され、次いでフェオメラニンに変換される。
【０００７】
メラノサイトおよびメラニン産生を調節する分子メカニズムは、あまり十分には解明されていない。Y. Yadaによる研究は、UVB型の太陽光輻射の影響により、ヒトケラチノサイトが、メラノサイトに対してパラクリン効果を発揮するエンドセリンペプチドホルモンを産生および分泌することを示している（Imokawa G.ら, J. Invest. Dermatol., 105: 32-37, 1995）。エンドセリンは、Gタンパク質共役膜受容体（ETR）を活性化して、メラノサイト増殖、ならびにチロシナーゼおよびETRをコードする遺伝子の転写を誘導する。同様に、UV輻射に反応して、ケラチノサイトおよびメラノサイトは、メラノサイト色素沈着活性を調節するαMSHペプチド（メラノコルチン刺激ホルモン）を分泌する。これを行うため、αMSHは、MC-R（メラノコルチン受容体）に結合して、cAMP／PKA変換（transduction）経路の活性化、またはセリン／スレオニンキナーゼPKCの活性化までも誘導し、結果として、チロシナーゼの新規合成およびユーメラニン合成が行われる。PKCβは、チロシナーゼの細胞質ドメインのリン酸化により、チロシナーゼを直接活性化するようである（Parkら, J. Biol. Chem., 268: 11742-11749, 1993）。αMSHもまた、メラノサイトの樹枝状突起形成を刺激することにより、ケラチノサイトへのメラニンの輸送を促進するようである（Huntら, J. Cell. Sci., 107: 205-211, 1994）。
【０００８】
明るい肌の色を得て、これを保ちたいという特定の個人または集団の願望に加えて、多くの人々について、斑点の形の限局性過色素沈着の予防および治療の問題もある。明るい肌の色の人々によく見られるそばかすの場合によくあるように、皮膚の限局性過色素沈着の原因は内因性であり得る。これはまた、UV輻射への曝露に起因し得る。色がより濃くなるそばかすの増加は、UV輻射の影響下において観察される。皮膚の過色素沈着斑の出現はまた、刺激を受ける箇所（虫刺され、遅い創傷治癒、湿疹など）において見受けられる。ホルモン性因子は、妊娠中（妊娠黒皮症）またはエストロプロゲステロンによる（oestroprogestative）避妊中に起こる特発性黒皮症のようなメラノサイトの活動亢進による局所的過色素沈着の原因である。同様に、良性メラノサイトの活動亢進および増殖による色素沈着斑は、高齢者によく見られる（老人性ほくろ）。
【０００９】
色素を消失する性質が知られる物質は、以下のメカニズム：
- メラニン形成が起こる表皮および／または小胞のメラノサイトの生存能力に対して、
- メラニン生合成の段階の１つを妨げること、またはメラニン形成に関連する酵素の１つを阻害すること、またはメラニン合成鎖の化学合成物の１つの構造的類似体として介在することによる、
- メラノサイトからケラチノサイトへのメラニン輸送を妨げることによる
の１つにより作用し得る。
【００１０】
最も広く用いられている物質は、ほとんどチロシナーゼ活性の阻害剤である。フェノール性誘導体が挙げられる。これらの誘導体は、チロシンまたはドーパに類似する化学構造を有し、チロシナーゼの基質として働く（競合阻害）。ヒドロキノンおよびその誘導体は、このファミリーのものである。しかしながら、これらの製品は、不可逆的な色素消失を起こし得る少なからぬ細胞毒性を示し、そして化粧品へのヒドロキノンの使用は、欧州規則（Dir．2000／6／BC）により禁止された。
【００１１】
様々な他の物質が、色素消失剤として提案されている。いくつかは、良好な局所許容性を示すが、効力も低い：ビタミンC、アルブチン（ヒドロキノン β-D-グルコノピラノシド）、メラノサイトからケラチノサイトへのメラノソームの輸送に作用するナイアシンアミド（Hakozaki T.ら, British Journal of Dermatology, 147: 20-31, 2002）、植物抽出物、特に、ケラチノサイトにより発現される受容体PAR-2（プロテアーゼ活性化受容体2）の活性を阻害する大豆抽出物（Paine C.ら, Journal of Investigative Dermatology, 116, 4: 587-595, 2001）。
【００１２】
メラニン合成に関連するメカニズムの複雑さのために、使用者の健康に申し分のない条件下で皮膚の色素沈着を制御することは困難となる（Briganti S.ら, Pigment Cell Res., 16: 101-110, 2003）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
それゆえ、内因性の原因の過色素沈着、または外因性の原因（UV、皮膚刺激、ホルモン）の過色素沈着に関わらず、皮膚および／または身体表面成長物の過色素沈着の出現を予防および／または治療し得る組成物の開発に努められてきた。また、毒性がなく、その作用が可逆的な組成物の開発も努められてきた。
【００１４】
特に、
- 妊娠黒皮症もしくは肝斑とも呼ばれる、妊娠中に生じる特発性黒皮症、またはエストロプロゲストロンによる避妊の結果による黒皮症；
- 光線性ほくろとして知られる、そばかす、夏日斑または老人性色素沈着斑のような良性メラノサイトの活動亢進および増殖により引き起こされる限局性過色素沈着；
-例えば、刺激を受ける箇所（虫刺され、遅い創傷治癒、湿疹など）における、おそらくは光感作もしくは創傷後治癒による、偶発性過色素沈着または色素消失、および白斑（vitiligo）のような白斑（leukoderma）の特定の形態、
のようなメラノサイトの活動亢進による局所的過色素沈着を予防または治療する点で良好な効力を得る努力がなされてきた。
【００１５】
また、皮膚を白くし、かつ／または肌の色を明るくし、かつ／または肌の色を均一にし、かつ／または肌の色を均質にする性質を有する組成物の開発も努められてきた。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、少なくとも３つの化合物：
- MC1-R受容体アンタゴニスト、
- ビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤、
- ケラチノサイトへのメラノソーム輸送阻害剤
を含む組合せに関する。
【発明の効果】
【００１７】
驚くことに、上記で定義された３つの化合物の組合せは、これら３つの活性成分の別々の作用よりも強い阻害を示すことがわかった。さらに、これは毒性効果がなく、３つの活性成分の組合せの作用は可逆的である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】UVBを照射された単層培養のヒトメラノサイトのモデルにおける製品MS-A、MS-NおよびMS-Melを含む活性成分の複合物のメラニン阻害活性の可逆性。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の目的において、用語「MC1-R受容体アンタゴニスト」とは、メラノサイトの膜上に存在するメラノトロピン細胞受容体（MC1-R）に結合し、MC1-Rに特異的なリガンドであるαMSH（メラノコルチン刺激ホルモン）の結合を妨げ、αMSHによるMC1-Rの活性化を阻害し得る化合物を意味することを意図する。２つの内因性MCRアンタゴニストが存在し、これらにはMC1-Rに強いアフィニティを有し、皮膚の色素沈着の調節に関連するアグーチ（Agouti）タンパク質が含まれる（Suzuki Iら, J. Invest Dermatol, 108: 838-842, 1997）。当業者に周知のMC1-R受容体アンタゴニストの中でも、欧州細胞生物学協会（Institut Europeen de Biologie cellulaire（IEB））により発見され、Unipex社により販売されるオリゴペプチドであるメラノスタチン（Melanostatine）（登録商標）５（INCI名：ノナペプチド−１）が特に挙げられる。このオリゴペプチドは、MC1-R受容体に対してアフィニティを有しており、メラニン色素の合成および過剰産生を減少させることにより、特異的かつ可逆的にメラニン形成を阻害する。さらに、この活性成分には毒性効果がない。商品名セピホワイト（Sepiwhite）MSH（登録商標）としてSEPPIC社から販売されるリポアミノ酸ウンデシレノイルフェニルアラニンも挙げられる。
【００２０】
本発明の目的において、用語「ビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤」とは、アスコルビン酸エステル、例えばアスコルビン酸２-グルコシド（INCI名：アスコルビルグルコシド）、２-O-アルファ-D-グルコピラノシル-６-O-ヘキサ−デカノイル-L-アスコルビン酸、アスコルビル６-パルミテート、またはアスコルビン酸２-フォスフェートのマグネシウム塩もしくはナトリウム塩から選択される化合物を意味することを意図する。好ましくはアスコルビン酸２-グルコシドが用いられ、これは特にDKSH社により商品名AA-2G（登録商標）として販売されている。
【００２１】
本発明の目的において、用語「メラノソーム輸送阻害剤」とは、ケラチノサイトへのメラノソームの輸送を阻害し得る化合物を意味することを意図する（Greatens Aら, Exp Dermatol, 14: 498-508, 2005; Hakozaki T.ら, Br. J Dermatol, 147: 20-31, 2002）。特に、この定義は、ニコチンアミド（INCI名：ナイアシンアミド）、またはビタミンB3の２つの形態の１つであり、MERCK社から販売されるビタミンPPのような化合物を意味することを意図する。
【００２２】
それゆえ、本発明は、３つの異なるメカニズムを介してメラニン形成に作用し、毒性効果のない少なくとも３つの活性成分から構成される組合せに関する。
【００２３】
メラニン形成のメカニズムの複雑さに鑑みて、これら３つの活性成分の組合せは、その３つの最良の効果よりもそれほど高くない効果を有するであろうことが予期された。驚くことに、これら３つの活性成分の組合せは、内因性のメラニン形成であろうとUV輻射のような外部因子により引き起こされるメラニン形成であろうと、予期された結果よりも非常に優れたメラニン形成阻害を示し、さらにこの阻害は完全に可逆的であったことがわかった。
【００２４】
本発明の主題はまた、化粧用または皮膚用に許容される担体中にこの組合せを含み、皮膚、体毛または頭髪に使用可能な化粧用および／または皮膚用の組成物である。
本発明の主題はまた、局所的過色素沈着を予防または治療し、および／または皮膚を白くし、および／または肌の色を明るくし、および／または肌の色を均一にし、および／または肌の色を均質にする目的のための、皮膚用組成物の調製のための、または化粧用組成物におけるこの組合せの使用である。
【００２５】
本発明の組成物において、３つの化合物は：
- ０．０１％〜５％のメラノソーム輸送阻害剤、特にニコチンアミド、
- ０．０１％〜５％のビタミンＣ誘導チロシナーゼ阻害剤、特にアスコルビン酸２-グルコシド、
- ０．１〜４０ppmのMC1-R受容体アンタゴニスト、特にメラノスタチン（登録商標）５、優先的に２〜４ppm
の範囲に優先的に含まれる量で存在する。
【００２６】
本発明による組成物は、皮膚への局所塗布に好適である。本発明の化粧用および／または皮膚用組成物は、予防または治療の目的で使用し得る。
本発明による組成物は、化粧品または皮膚用品においてデイケア（day care）またはメークアップの製剤に通常用いられるUVAまたはUVBスクリーンも含んでよい。
組成物は、皮膚を明るくする効果も有する、表皮剥脱性活性成分のようなさらなる活性成分も含むことができ、例えば、アルファ−およびベータ−ヒドロキシ酸が挙げられる。
【００２７】
本発明の組成物は、局所塗布に通常用いられるいずれのガレヌス（galenical）製剤の形態であり得、特に水性液剤、水性アルコール液剤または油性液剤の形態であり得る。それらは、油中水型もしくは水中油型の乳剤、多層乳剤、ナノ粒子もしくはリポソーム型の脂質小胞の分散剤、水性ゲル、油性ゲル、または液状、ペースト状もしくは固形の無水製品の形態であり得る。この化粧用および／または皮膚用組成物は、次のタイプの製剤：ローション、ゲル、クリーム、フォーム、軟膏、パッチ、マスク、スティック、シャンプー、コンディショナー、メークアップ製品から構成され得る。
【００２８】
周知の様式で、本発明の組成物は、例えば、親水性もしくは親油性ゲル化剤、乳化剤、防腐剤、酸化防止剤、充填剤、溶剤、香料、色素または染料のような、化粧品または皮膚用品の分野において通常の補助剤も含み得る。また、本発明の組合せと同じ相に存在するか、または複数の相を含む組成物の場合は該組成物の別の相に存在する、１つ以上の他の活性成分も含み得る。本発明の組成物に用い得る他の活性成分の中でも、グリセロールのような保湿成分、しわ防止剤のような老化防止成分、例えばアルファ-ヒドロキシ酸、７-ヒドロキシ-DHEAまたはレチノールが挙げられる。本発明の組成物に用い得る油としては、鉱油（液状ワセリン、パラフィン油）、植物油（アボカド油、大豆油）、動物性油（ラノリン）、シリコーン油（シクロメチコン）および合成油が挙げられる。本発明の組成物は、脂肪族アルコールまたはロウ（カルナウバロウ、ミツロウ）のような他の脂肪性物質も含み得る。
乳化剤としては、周知の様式において、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステル、グリセロールの脂肪酸エステルが挙げられる。
【実施例】
【００２９】
生物学的評価
メラニン形成についての評価は、任意にUVを照射したメラニン化した再構成された表皮に対してインビトロで行った。
さらに、本発明者らは、この組合せの使用が、例えば、太陽光照射に反応してメラノサイトにメラニンを産生させ得るメカニズムを完全に阻害する結果にはならないことを示した。このように、本発明者らは、単層培養のヒトメラノサイトのモデルに対して行われた研究により、その組成物の阻害効果の可逆性を立証した。
【００３０】
Ｉ−  単層培養の正常ヒトメラノサイトのモデルにおける本発明の組合せのメラニン阻害効果の可逆性の研究
この研究の目的は、単層培養の正常ヒトメラノサイトのモデルにおいて、製品MS-A、MS-NおよびMS-Melを含む複合物のメラニン阻害効果の可逆性を評価することであった。
【００３１】
Ｉ．１−試験された製品
製品AA-2G（登録商標）、ニコチンアミド（登録商標）およびメラノスタチン（登録商標）５を、それぞれMS-A、MS-NおよびMS-Melと呼ぶ。
Ｉ．２−試験系
正常ヒトメラノサイトは、４歳児の包皮から得た。試験を行うために、これらの細胞を、コンフルエントな単層が得られるまで培養した。
Ｉ．３−参照阻害剤
この研究に用いられる参照阻害剤は、250μＭのコウジ酸であった。
【００３２】
Ｉ．４−試験製品との細胞のインキュベーション
メラノサイトを、コウジ酸もしくは2.5ｘ10-4 ＭのMS-A、2.5ｘ10-4 ＭのMS-Nおよび10-4 ＭのMS-Melを含む試験活性成分の複合物の非存在下（対照）または存在下で、5％CO2の湿性雰囲気中、37℃で72時間インキュベートした。この最初のインキュベーション期間の終点において、参照製品および試験活性成分の複合物を、インキュベーション培地から除去し、細胞を培養培地のみの存在下にさらに72時間インキュベートした。そして、24時間ごとに、該細胞に0.05 J/cm2のUVB輻射を照射するか、または照射しなかった。
【００３３】
Ｉ．５−影響の評価
Ｉ．５．１−メラニンのアッセイ
インキュベーション期間の終点において、細胞内のメラニン量を、細胞溶解物における405 nmの分光光度測定により定量した。
Ｉ．５．２−タンパク質のアッセイ
インキュベーション期間の終点において、細胞溶解物に含まれるタンパク質を、ブラッドフォードの分光比色法により定量した。
【００３４】
Ｉ．６−結果
メラニン形成の有意な阻害（T72hにおいて-24.6%、p<0.05）を示した複合物の存在下の最初のインキュベーション期間の後に、UV照射がないか、またはUV照射後の場合において、培養培地から製品を除去したとき、細胞はメラニンを産生する能力を保持していた。具体的には、阻害は、UV照射がないか、またはUV照射後において、ここでは、それぞれ9.6%および8.3%だけである（図１）。
本研究により、製品MS-A、MS-NおよびMS-Melを含む色素消失複合物の使用が、メラニン形成に関連するメカニズムの完全かつ非特異的な阻害を導かなかったことを示すことができた。実際、製品をインキュベーション培地から除去したときに、この複合物の存在下に72時間置かれた細胞がメラニンを産生するその能力を保持していたので、そのメラニン阻害活性は完全に可逆的であった。
【００３５】
製剤
以下の実施例において、百分率は、重量パーセントである。
実施例１：ライトニングケアクリーム
アルラセル（Arlacel）（登録商標）１６５              5.00
ミツロウ                                            5.00
液状パラフィン油                                    5.00
セチルアルコール                                    3.00
AA-2G（登録商標）                                  2.00
ニコチンアミド                                      2.00
エマルジン（Emulgin）（登録商標）B２               2.00
セピゲル（Sepigel）（登録商標）３０５                1.60
メラノスタチン（登録商標）５                        0.40*
メチルパラベン                                      0.30
プロピルパラベン                                    0.20
スロメタミン                                        適量 pH = 6.2
脱イオン水                                          適量  計100
（* すなわち、クリーム中に4 ppm）
【００３６】
実施例２：ローション
グリセロール                                        3.00
AA-2G（登録商標）                                  2.00
ニコチンアミド                                      2.00
プルロニック（Pluronic）（登録商標）PE６４００       2.00
コスモシル（Cosmocil）CQ（登録商標）               0.50
メラノスタチン（登録商標）５                        0.40*
香料                                                0.20
スロメタミン                                        適量pH = 6.4
脱イオン水                                          適量  計100
（* すなわち、ローション中に4 ppm）
【００３７】
実施例３：「成熟皮膚」ケアクリーム
アルラセル（登録商標）１６５                        5.00
ミツロウ                                            5.00
液状パラフィン油                                    6.00
セチルアルコール                                    3.00
AA-2G（登録商標）                                  2.00
ニコチンアミド                                      2.00
ガツリン（Gatuline）（登録商標）RC                  2.00
エマルジン（登録商標）B２                           2.00
ニュートリン（Nuteline）（登録商標）C                2.00
セピゲル（登録商標）３０５                          1.80
CMグルカンP                                      1.00
メラノスタチン（登録商標）５                        0.40*
メチルパラベン                                      0.30
プロピルパラベン                                    0.20
α-ルパリン（Lupaline）（登録商標）                  0.10
スロメタミン                                        適量pH = 6.3
脱イオン水                                          適量  計100
（* すなわち、クリーム中に4 ppm）
【図１】
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【国際調査報告】
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