(57)【要約】本発明は、自己免疫疾患に罹患している、および／または罹り易い患者であって、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろう患者を特定するための組成物、システム、および方法を提供する。本発明は、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定方法、ならびに自己免疫疾患の治療においてこれらの使用を含む方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者の血液または骨髄由来の試料を提供する工程；
該試料中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４のレベルを解析する工程；
該解析に基づき、該患者が、参照試料と比べてＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルを有するか否かを判定する工程；ならびに
該判定によってＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルが示された場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろうと分類するか、または該判定によってＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルが示されなかった場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの処置に応答しないであろうと分類する工程、
を含む方法。
【請求項２】
さらに、前記試料中においてＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルを有する患者に、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを投与する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者の骨髄由来の試料を提供する工程；
該試料中のＴ細胞または幹細胞のレベルを解析する工程；
該解析に基づき、該患者が、参照試料と比べてＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルを有するか否かを判定する工程；ならびに
該判定によってＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルが示された場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろうと分類するか、または該判定によってＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルが示されなかった場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答しないであろうと分類する工程、
を含む方法。
【請求項４】
さらに、前記試料中においてＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルを示す患者に、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを投与する工程を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが、少なくとも１種類のさらなる治療用薬剤と組み合わせて投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用を阻害する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが小分子である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストがＡＭＤ３１００である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４を認識する抗体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記試料中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４のレベルを解析する工程が、該試料中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４のレベルを直接測定することにより行なわれる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記試料中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４のレベルを解析する工程が、間接的に行なわれるものであって、該試料中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４のレベルを直接測定することにより行なわれるものでない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記参照試料が、自己免疫障害の症状を示していない患者または自己免疫障害と診断されなかった患者から採取されたものである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記自己免疫疾患がＩ型糖尿病である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者を提供する工程；ならびに
ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを該患者に、該自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減、または発病の低減に充分な量で投与する工程、
を含む方法。
【請求項１５】
自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者の血液または骨髄由来の試料を提供する工程；
該試料中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４のレベルを解析する工程；
該解析に基づき、該患者が、参照試料と比べてＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルを有するか否かを判定する工程；
該判定によってＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルが示された場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろうと分類するか、または該判定によってＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４の上昇したレベルが示されなかった場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答しないであろうと分類する工程；ならびに
ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろうと判定された患者に、該自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減、または発病の低減に充分な量で投与する工程、
を含む方法。
【請求項１６】
自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者の骨髄由来の試料を提供する工程；
該試料中のＴ細胞または幹細胞のレベルを解析する工程；
該解析に基づき、該患者が、参照試料と比べてＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルを有するか否かを判定する工程；
該判定によってＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルが示された場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろうと分類するか、または該判定によってＴ細胞または幹細胞の上昇したレベルが示されなかった場合、該患者を、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答しないであろうと分類する工程；ならびに
ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろうと判定された患者に、該自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減、または発病の低減に充分な量で投与する工程、
を含む方法。
【請求項１７】
前記自己免疫疾患がＩ型糖尿病である、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが、少なくとも１種類のさらなる治療用薬剤と組み合わせて投与される、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト；および
該ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを、それを必要とする患者に投与するための使用説明書、を含むキット。
【請求項２０】
候補物質のライブラリー；
陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト；
陰性対象として供され得る物質、
を含むキット。
【請求項２１】
前記陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしての活性を有することが既に知られている物質を含む、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
前記陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが、自己免疫障害を治療することが既に知られているものであり得る、請求項２０に記載のキット。
【請求項２３】
前記陰性対象として供され得る物質が、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしての活性をもたないことが既に知られている物質であり得る、請求項２０に記載のキット。
【請求項２４】
前記陰性対象として供され得る物質が、自己免疫障害を治療しないことが既に知られているものであり得る、請求項２０に記載のキット。
【請求項２５】
患者から骨髄または血液の試料を採取するのに適した装置；
ＣＸＣＬ１２を認識する抗体；
該抗体に結合するＣＸＣＬ１２タンパク質；および
骨髄または血液の参照試料、
を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府支援
米国政府は、本発明の開発に利用された助成金援助を提供した。特に、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（契約番号第ＡＩ５０６３１号および第ＡＩ６９２０８号）は、本発明の開発を支援した。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
自己免疫は、生物体が自身の構成部分を（サブ分子レベルに至るまで）「自己」と認識できないことであり、典型的には、生物体自身の細胞および組織に対する免疫応答がもたらされる。かかる異常な免疫応答に起因する任意の疾患を自己免疫疾患と称する。顕著な例としては、Ｉ型真性糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、多発性硬化症、橋本甲状腺炎、グレーヴズ病、関節リウマチ（ＲＡ）、および乾癬が挙げられる。自己免疫疾患の症状は大きく異なり、特定の疾患に依存し得る。多くの場合、極めて非特異的な一群の症状が自己免疫疾患に付随して生じ、めまい、疲労感、全身倦怠感、および微熱が挙げられる。
【０００３】
当該技術分野において、糖尿病などの自己免疫障害の発症を抑止および／または遅延させるシステム、方法、および／または組成物の必要性が存在する。当該技術分野において、特定の治療に応答すると思われる患者を特定する方法の必要性が存在し、かかる患者を特定するための方法によって、副作用が最小限となり得、「個別化」療法に対する新しい道が開かれ得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の概要
本発明は、本明細書に記載されるように、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろう患者を特定するための組成物、システム、および方法を提供する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織および／または細胞中（例えば、骨髄、血液など）のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルおよび／または活性の上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織および／または細胞中（例えば、骨髄）のナイーブＴ細胞および／または幹細胞のレベルの上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、ＣＸＣＬ１２のレベルの上昇と関連している自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者の特定が、おそらく特定の治療剤（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト）に応答するであろう患者の特定が可能となるため望ましいという認識を包含する。一部の実施形態において、本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、ＡＭＤ３１００）がヒトの自己免疫障害（例えば、Ｉ型糖尿病）の治療および／または予防に使用され得るという認識を包含する。
【０００５】
一般に、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力（すなわち、「ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用」）に負の影響を及ぼす任意の物質である。本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、その調節効果を、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に対して上流、下流で、および／または直接発揮し得る。本発明によれば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、小分子、タンパク質（例えば、ペプチド、抗体など）、核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ｓｉＲＮＡなど）、脂質、糖質、ウイルスなどであり得る。
【０００６】
本発明は、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト、および新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定方法を提供する。一部の実施形態において、本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関してスクリーニングするためのインビトロ方法を提供する。例えば、一部の実施形態において、該方法は、一般的に、（１）試験物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４遺伝子）を提供する工程；（２）候補物質を提供する工程；ならびに（３）試験物質に対する候補物質の影響を測定および／または検出する工程を含む。例えば、一部の実施形態において、結合アッセイは、ＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＲ４タンパク質（そのホモログ、一部分、バリアント、変異型、および／または誘導体を含む）を、候補物質に曝露すること、ならびに候補物質の存在下でのＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合を検出することを含む。
【０００７】
一部の実施形態において、本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関してスクリーニングするためのインサイト（ｉｎ  ｃｙｔｏ）方法を提供する。例えば、かかる方法は、候補物質を細胞と接触させる工程を含み得る。次いで、該細胞は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性と関連している種々のパラメータに関してアッセイされ得る。例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性と関連しているパラメータとしては、限定されないが、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力が挙げられる。
【０００８】
一部の実施形態において、本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関してスクリーニングするためのインビボ方法を提供する。インビボアッセイでは、種々の動物モデル、例えば、特定の欠陥を有するように、および／または候補物質が生物体内の種々の細胞に到達できる、および／または影響を及ぼすことができる能力を測定するのに使用され得るマーカーを有するように操作されたトランスジェニック動物が使用される。かかるアッセイでは、１種類以上の候補物質が動物に投与され、候補物質で治療していない同類の動物と比較したときの、候補物質が１つ以上の特徴を改変する能力によって、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが同定される。かかる特徴は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）に関連する症状に関して本明細書に記載した任意のもの、および／または骨髄中へのＴ細胞および／または幹細胞の蓄積であり得る。限定されないが、一例を挙げると、糖尿病の治療に有用な新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定方法は、（１）糖尿病の症状を示すマウス（例えば、ＮＯＤマウス）を提供する工程、（２）候補物質を該マウスに投与する工程、（３）骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞および／または幹細胞の動員の増大についてアッセイする工程（例えば、治療をしたとき、またはしなかったときの骨髄中の細胞のパーセンテージおよび／または細胞の数の変化を測定することにより）を含み得る。
【０００９】
本明細書に記載の組成物、システム、および方法は、特定の組織中（例えば、骨髄、血液など）のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルの上昇と関連している自己免疫障害（例えば、糖尿病）に罹患しているか、または罹り易い患者の特定、および／またはかかる自己免疫障害の治療および／または診断に有用であり得る。本明細書に記載の組成物、システム、および方法は、特定の組織（例えば、骨髄）中のナイーブＴ細胞および／または幹細胞のレベルの上昇と関連している自己免疫障害（例えば、糖尿病）に罹患しているか、または罹り易い患者の特定、および／またはかかる自己免疫障害の治療および／または診断に有用であり得る。
【００１０】
したがって、一部の実施形態において、本発明は、（１）糖尿病などの自己免疫障害に罹患している、および／または罹り易い被験体を提供する工程、（２）特定の試験組織（例えば、骨髄および／または血液）中のＣＸＣＬ１２のレベルをアッセイする工程、（３）試験組織中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を有する患者を特定する工程、ならびに（４）このような患者に、自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に充分な治療量のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを投与する工程を含む方法を提供する。
【００１１】
あるいはまたさらに、特定の試験組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルは、試験被験体の血液中のＣＸＣＬ１２のレベルを測定することにより、間接的にアッセイされ得る。例えば、本発明は、血中のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルのアッセイを骨髄中のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルと相関させることができるという認識を包含する。あるいはまたさらに、血中レベルの上昇により血中のナイーブＴ細胞および／または幹細胞の蓄積がもたらされ得、それにより他のリンパ様器官（例えば、脾臓およびリンパ節）におけるそのレベルが低下し得る。
【００１２】
一部の実施形態において、特定の試験組織中のＣＸＣＬ１２のレベルは、細胞遊走アッセイを用いてインビトロでアッセイされ得る。細胞遊走アッセイはよく知られており、当業者が決定する任意の様式で設計および実施され得る。例えば、ＣＸＣＲ４をその表面上に発現する細胞が試料（例えば、被験体の骨髄、血液などに由来するもの）に曝露され得、試料に対する細胞の応答性（例えば、試料への遊走速度、遊走距離など）が、試料中のＣＸＣＬ１２レベルの尺度として供され得る。
【００１３】
本発明は、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を示す患者は、おそらくＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む治療に応答するであろうという認識を包含する。
【００１４】
本発明は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）に罹患している、および／または罹り易い患者の治療および／または診断方法を提供する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２レベルの上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、特定の組織中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇と関連している自己免疫障害は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストで治療され得るという認識を包含する。
【００１５】
本発明による組成物は、治療に有効な任意の量および任意の投与経路であって、限定はされないが、経口、全身静脈内注射、血液および／またはリンパ供給による局所投与、および／または罹患部位への直接投与を用いて投与され得る。
【００１６】
本発明による医薬組成物は、単独、または１種類以上の他の治療用薬剤との併用のいずれかで投与され得る。
【００１７】
一部の実施形態において、本発明による組成物は、自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、本発明による組成物は、従来の糖尿病治療であって、限定はされないが、インスリン投与と併用して投与され得る。別の例を挙げると、本発明による組成物は、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＴＮＦα受容体、鎮痛薬、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、および／または関節リウマチの治療に有用であり得る他の薬剤と併用して投与され得る。
【００１８】
本発明は、１種類以上の本発明による任意の組成物を備えたさまざまなキットを提供する。例えば、本発明は、本発明による組成物と使用のための使用説明書を備えたキットを提供する。キットは、多様な異なる組成物を備えたものであってもよい。キットは、いくつかの種類の任意のさらなる成分または試薬を任意の組合せで備え得る。種々のあらゆる組合せは、明示していないが、各々の組合せが本発明の範囲に含まれる。例えば、キットは、おそらくＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろう患者の特定および／またはスクリーニングに有用な物質を含み得る。かかるキットは、例えば、（ｉ）被験体からの骨髄および／または血液試料の採取に適した装置；（ｉｉ）ウエスタンブロッティングおよび／またはＥＬＩＳＡアッセイにおいてＣＸＣＬ１２を認識する抗体；（ｉｉｉ）ウエスタンブロッティングおよび／またはＥＬＩＳＡアッセイで陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２タンパク質；（ｉｖ）骨髄および／または血液の参照試料（例えば、非糖尿病個体由来の試料）を含み得る。
【００１９】
本出願では、種々の発行済特許、公開特許出願、学術論文、および他の刊行物に言及しているが、これらはすべて、参照としてその全体が本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、ＮＯＤマウスの骨髄中でのナイーブＴ細胞の蓄積を示す図である。（Ａ）ＢＡＬＢ／ｃ、前糖尿病、および糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞の頻度。骨髄（ＢＭ）、リンパ節（ＬＮ；頚部、縦隔部、補助（ａｕｘｉｌｉａｒｙ）、上腕、腸間膜、鼡径節を含む）、ならびに脾臓（ＳＰ）由来の細胞をＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲβ、およびＰＩに対して染色した。生細胞（ＰＩ−陰性）に関するＣＤ４対ＴＣＲβプロファイルを示す。数値は、ゲート領域内のＣＤ４＋ＴＣＲ＋細胞のパーセンテージを示す。ｐ＜０．００１は、ＢＡＬＢ／ｃマウスとＮＯＤマウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージの比較である。（Ｂ）ＢＡＬＢ／ｃ（ｎ＝２２）、前糖尿病（ｎ＝１９）、および糖尿病（ｎ＝１６）ＮＯＤマウスのＢＭ、ＬＮ、およびＳＰにおけるＣＤ４（白棒）およびＣＤ８（黒棒）Ｔ細胞の平均数。ｐ＜０．０１は、ＢＡＬＢ／ｃマウスと前糖尿病または糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中のＣＤ４またはＣＤ８  Ｔ細胞の比較である。（Ｃ）糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄における年齢（１６〜２７週）に含むＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージの漸増。ＣＤ４  Ｔ細胞を（Ａ）と同様にアッセイした。（Ｄ）同じ糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージと脾臓内のＣＤ４  Ｔ細胞数間の逆相関。ｒ２値＝０．６９である。（Ｃ）と（Ｄ）に示したデータは同じ群のマウスのものである。１つの点は１匹のマウスを示す。（Ｅ）４〜５週齢のＢＬＡＢ／ｃ（ｎ＝６）とＮＯＤ（ｎ＝８）マウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージの比較。ｐ＜０．００１。（Ｆ）６〜９週齢のＢＡＬＢ／ｃ（ｎ＝５）、ＥＡ１６（ｎ＝３）、およびＮＯＤ（ｎ＝８）マウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージの比較。ｐ＜０．００１は、ＮＯＤ（またはＥＡ１６）マウスに対するＢＡＬＢ／ｃの比較である。（Ｇ）骨髄Ｔ細胞の表現型。ＢＡＬＢ／ｃ、前糖尿病、および糖尿病ＮＯＤマウス由来の骨髄細胞を、ＴＣＲ；ＣＤ４；ＣＤ２５＋ＣＤ４５ＲＢもしくはＣＤ６２Ｌ；またはＴＣＲ、ＣＤ４、ＣＤ４４およびＣＤ４５ＲＢに対して染色した。少なくとも４つの独立した実験の代表的なプロットを示す（ＣＤ４＋ＴＣＲ＋細胞に対してゲート設定）。数値は、ゲート領域内の細胞のパーセンテージを示す。
【図２】図２は、ＮＯＤマウスの骨髄中へのＴ細胞蓄積が増殖ではなく、ホーミングによるものであることを示す図である。（Ａ）年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウスと前糖尿病ＮＯＤマウス（１５〜１６週齢）の骨髄におけるＣＤ４  Ｔ細胞増殖の定常状態レベルの比較。骨髄細胞を、ＴＣＲ、ＣＤ４、ＣＤ４４、およびＫｉ６７に対して染色した。代表的なＫｉ６７対ＣＤ４４  発現プロファイルをＴＣＲ＋ＣＤ４＋細胞に関して示す。数値は、Ｋｉ６７＋細胞のパーセンテージである。（Ｂ）ＢＡＬＢ／ｃマウスとＮＯＤマウスにおける骨髄およびリンパ節へのＴ細胞ホーミングの比較。ＢＡＬＢ／ｃまたはＮＯＤマウス由来のＣＦＳＥ標識Ｔ細胞をＢＡＬＢ／ｃおよびＮＯＤレシピエント（１２〜１６週齢）両方に静脈内注射し、導入２時間後に解析した。ホーミング指数は、骨髄またはリンパ節中のＣＦＳＥ陽性ドナーＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージを同じレシピエントの脾臓でのパーセンテージで除算することにより計算する。少なくとも４匹のマウス／群のＣＤ４  Ｔ細胞のホーミング指数の平均±ＳＤを示す。＊ｐ＜０．０１。
【図３】図３は、Ｔ細胞がＮＯＤマウスの骨髄に優先的にホーミングすることを示す図である。ＮＯＤマウス由来のＴ細胞をＣＳＦＥで標識し、前糖尿病ＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウスに静脈内注射し、４８時間後に解析した。ホーミング指数は、骨髄またはリンパ節中のＣＦＳＥ陽性ドナーＣＤ４  Ｔ細胞数のパーセンテージを同じレシピエントの脾臓でのパーセンテージで除算することにより計算する。少なくとも４匹のマウス／群のＣＤ４  Ｔ細胞のホーミング指数の平均±ＳＤを示す。＊ｐ＜０．０１。
【図４】図４は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇がＮＯＤマウスの骨髄中へのＴ細胞蓄積と相関することを示す図である。（Ａ）骨髄におけるケモカイン発現の解析。ＲＮＡをＢＡＬＢ／ｃ（ｎ＝５）および前糖尿病ＮＯＤ（ｎ＝６）マウスの骨髄から単離し、プールし、標識し、ＧＥＡｒｒａｙケモカインアレイフィルターとハイブリダイズさせるためのプローブとして使用した。このハイブリダイゼーションの代表的な化学発光画像を示す。１、ＣＣＬ１９；２、ＣＸＣＬ１２。（Ｂ）ＲＴ−ＰＣＲによるＣＸＣＬ１２転写物およびＣＣＬ１９転写物の定量。Ａと同じＲＮＡを、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ１９およびＧＡＰＤＨのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析に使用した。ＧＡＰＤＨに対するＣＸＣＬ１２とＣＣＬ１９の相対転写物レベルを示す。（Ｃ）４〜５週齢のＮＯＤマウス（ｎ＝８）と年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝６）での骨髄中のＣＸＣＬ１２転写物レベルの比較。（Ｄ）６〜９週齢のＢＡＬＢ／ｃ（ｎ＝５）、ＥＡ１６（ｎ＝３）、およびＮＯＤ（ｎ＝８）マウス間での骨髄中のＣＸＣＬ１２転写物レベルの比較。（Ｅ）ＢＡＬＢ／ｃマウスと前糖尿病ＮＯＤマウスの異なる器官でのＣＤ４  Ｔ細胞によるＣＸＣＲ４発現。ＢＡＬＢ／ｃマウスおよび前糖尿病ＮＯＤマウスのＢＭ、ＬＮおよびＳＰ由来の細胞を、ＴＣＲ、ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＢ、およびＣＸＣＲ４に対して染色した。代表的なＣＸＣＲ４対ＣＤ４５ＲＢプロファイルをＴＣＲ＋ＣＤ４＋細胞に関して示す。数値は、ゲート領域内の細胞のパーセンテージを示す。＊ｐ＜０．０５。
【図５】図５は、ＡＭＤ３１００がＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞蓄積を抑止することを示す図である。前糖尿病ＮＯＤマウス（１５〜１６週齢）をＰＢＳまたはＡＭＤ３１００（ＡＭＤ）で毎日８日間処置した。最後のＡＭＤ３１００注射の２時間後、マウスをフローサイトメトリーによって解析した。（Ａ）ＡＭＤ３１００（ｎ＝４）およびＰＢＳ（ｎ＝６）処置ＮＯＤマウスの骨髄中のＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のパーセンテージ（平均±ＳＤ）の比較。＊ｐ＜０．０５。（Ｂ）ＡＭＤ３１００（ｎ＝４）およびＰＢＳ（ｎ＝６）処置ＮＯＤマウスのＴＣＲ＋ＣＤ４＋細胞のＣＤ４４対ＣＤ４５ＲＢプロファイルの比較。数値は、ゲート領域内の細胞のパーセンテージを示す。ＣＤ４５ＲＢｈｉ  ＣＤ４４ｌｏナイーブＴ細胞のパーセンテージ（平均±ＳＥ）は、ＰＢＳ処置マウスでは４７．３±１０．９およびＡＭＤ３１００処置マウスでは２４．８±３．２である（ｐ＜０．０１）。
【図６】図６は、ＡＭＤ３１００処置はＮＫＴ細胞分布に影響を及ぼさないことを示す図である。前糖尿病ＮＯＤマウスにＰＢＳまたはＡＭＤ３１００のいずれかを８日間与えた。ＮＫＴ細胞を、抗ＴＣＲβおよびＰＢＳ５７リガンド負荷ＣＤ１ｄでの染色によってアッセイした。数値は、種々の器官におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを示す。
【図７】図７は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇によって、骨髄中でのＴｒｅｇと造血幹細胞の漸増／保持が促進されることを示す図である。（Ａ）年齢適合ＢＡＬＢ／ｃ（ｎ＝７）と前糖尿病ＮＯＤ（ｎ＝２０）マウス（１５週齢）での骨髄中のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋  Ｔｒｅｇのパーセンテージおよび数の比較。骨髄細胞をＴＣＲ、ＣＤ４およびＦｏｘｐ３に関してアッセイした。ＴｒｅｇはＴＣＲ＋Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋細胞であると確認された。Ｆｏｘｐ３＋細胞のパーセンテージ値をＣＤ４＋  Ｔ細胞の割合で示す。（Ｂ）脾臓および骨髄におけるＴｒｅｇの分布に対するＣＸＣＲ４欠損の効果。Ｃｘｃｒ４ｆ／ｆ  Ｌｃｋ−Ｃｒｅ（ＫＯ）マウスおよび同腹子Ｃｘｃｒ４＋／ｆ  Ｌｃｋ−Ｃｒｅ（ＷＴ）（８週齢）の脾臓および骨髄由来の細胞を、ＴＣＲ、ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３に関してアッセイした。ＴＣＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の数を、３マウス／群の脾臓と骨髄において比較する。（Ｃ）年齢適合ＢＡＬＢ／ｃ（ｎ＝５）、前糖尿病ＮＯＤ（ｎ＝５）およびＡＭＤ３１００処置（８日間）前糖尿病ＮＯＤマウス（ｎ＝４）間での造血幹細胞（Ｌｉｎ−Ｓｃａ１＋ｃ−Ｋｉｔ＋、ＬＳＫ）の数の比較。＊ｐ＜０．０５。
【図８】図８は、ＡＭＤ３１００処置により白血球浸潤と糖尿病の発現が抑止されることを示す図である。（Ａ）ＮＯＤマウスの膵臓切片の免疫組織学的染色。ＡＭＤ３１００を８日間与えた前糖尿病、糖尿病ＮＯＤマウス、または前糖尿病ＮＯＤマウスの膵臓を固定し、包埋した。並列組織切片をヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ、上パネル）、抗グルカゴン（中央パネル）、または抗インスリン（下パネル）抗体で染色した。ＡＭＤ３１００処置なしの前糖尿病ＮＯＤマウスの島内リンパ球浸潤に注目のこと。（Ｂ）ＰＢＳ（ｎ＝８）またはＡＭＤ３１００（ｎ＝６）を８日間、毎日与えた１５週齢の前糖尿病ＮＯＤマウスの膵臓切片における膵島周囲炎およびインスリン炎のパーセンテージ。＊ｐ＜０．０１。（Ｃ）および（Ｄ）ＡＭＤ３１００またはＰＢＳを３週間（Ｃ）または１４週間（Ｄ）与えた（１５〜１６週齢で開始）ＮＯＤマウスにおける糖尿病発生の比較。各群のマウスの数（ｎ）を示す。尿中グルコースレベルが５００ｍｇ／ｄｌに達した場合、マウスを糖尿病と記録する。ｐ＜０．０１。
【図９】図９は、ＣＦＡによりＮＯＤマウスにおいて糖尿病の発現が抑制されることを示す図である。ＮＯＤマウス（１５週齢）に、皮下注射によって単回ＣＦＡを与えた。尿中グルコースレベルを測定することにより、マウスを糖尿病についてモニタリングした。グルコースレベルが５００ｍｇ／ｄｌに達した場合、マウスを糖尿病と記録した。各群のマウスの数（ｎ）を示す。
【図１０】図１０は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇が、多様な機構によって、ＮＯＤマウスにおける糖尿病に寄与していると思われることを示す図である。（Ａ）および（Ｂ）ＣＦＡによるＮＯＤマウスの骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現およびＴ細胞蓄積の抑止。前糖尿病ＮＯＤマウスにＣＦＡの単回注射を与えた。ＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージとＣＸＣＬ１２発現を２週間後に測定した。（Ａ）年齢適合ＣＦＡ処置（ｎ＝５）と未処置（ｎ＝８）ＮＯＤマウスのＢＭ中のＣＤ４  Ｔ細胞の平均パーセンテージ（Ｂ）ＣＦＡ処置（ｎ＝５）と未処置（ｎ＝８）ＮＯＤマウスでのＢＭ中のＣＸＣＬ１２転写物レベルの比較。エラーバーは１標準偏差を示す。（Ｃ）年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝５）と前糖尿病ＮＯＤマウス（ｎ＝８）間での造血幹細胞（Ｌｉｎ−Ｓｃａ１＋ｃ−Ｋｉｔ＋、ＬＳＫ）のパーセンテージの比較。＊ｐ＜０．０５。（Ｄ）ＡＭＤ３１００またはＰＢＳを８日間、毎日注射後の前糖尿病ＮＯＤマウスにおける造血幹細胞のパーセンテージの比較。＊ｐ＝０．０６。（Ｅ）年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウスと前糖尿病ＮＯＤマウス（１５週齢）間での骨髄中のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋  Ｔｒｅｇのパーセンテージおよび数の比較。＊ｐ＜０．０５。（Ｆ）脾臓および骨髄におけるＴｒｅｇの分布に対するＣＸＣＲ４欠損の効果。Ｃｘｃｒ４ｆ／ｆ  Ｌｃｋ−ｃｒｅ（ＫＯ）マウスと同腹子Ｃｘｃｒ４＋／ｆ  Ｌｃｋ−ｃｒｅ（ＷＴ）マウス（１２週齢）の脾臓および骨髄由来の細胞を、ＴＣＲ、ＣＤ４、ＣＤ２５、およびＦｏｘｐ３に関してアッセイした。ＴＣＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋細胞の数を、３マウス／群の脾臓および骨髄において比較する。Ｐ値を示す。（Ｇ）および（Ｈ）ＡＭＤ３１００またはＰＢＳ処置ＮＯＤマウスのＢＭ、ＳＰ、およびＰＤＬＮ中のＦｏｘｐ３＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞のパーセンテージ（Ｇ）および数（Ｈ）の比較。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【図１１】図１１は、Ｆｏｘｐ３とＣＤ２５の染色プロファイルを示す図である。ＰＢＳまたはＡＭＤ３１００を毎日、８日間与えた前糖尿病ＮＯＤマウス（１５〜１６週齢）の骨髄（ＢＭ）、膵臓流入領域のリンパ節（ＰＤＬＮ）、および脾臓（ＳＰ）由来のＣＤ４＋  Ｔ細胞のＦｏｘｐ３対ＣＤ２５の染色プロファイルの例。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
定義
アミノ酸：  本明細書で使用されるとき、用語「アミノ酸」は、その広い意味において、ポリペプチド鎖内に組み込まれ得る任意の化合物および／または物質をいう。一部の実施形態において、アミノ酸は一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。一部の実施形態において、アミノ酸は天然に存在するアミノ酸である。一部の実施形態において、アミノ酸は合成アミノ酸である；一部の実施形態において、アミノ酸はｄ−アミノ酸である；一部の実施形態において、アミノ酸はｌ−アミノ酸である。「標準アミノ酸」または「天然アミノ酸」は、天然に存在するペプチドに一般に見られる２０種類の標準的なｌ−アミノ酸のうちのいずれかをいう。「非標準アミノ酸」は、合成により作製されたものであろうと、または天然供給源から得られたものであろうと関係なく、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸をいう。本明細書で使用されるとき、「非天然アミノ酸」は、化学的に作製または修飾されたアミノ酸であって、限定されないが、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）、および／または置換体を包含する。アミノ酸、例えば、ペプチド内のカルボキシ−および／またはアミノ−末端のアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、および／または該アミノ酸の活性に有害な影響を及ぼすことなくペプチドの循環半減期を変更させ得る他の化学基による置換によって修飾され得る。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与するものであってもよい。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と互換的に使用され、遊離アミノ酸および／またはペプチドのアミノ酸残基を指し得る。該用語が遊離アミノ酸を指すのか、ペプチドの残基を指すのかは、それが使用されている文脈から明らかであろう。
【００２２】
動物：  本明細書で使用されるとき、用語「動物」は動物界の任意のメンバーをいう。一部の実施形態において、「動物」は任意の発生段階のヒトをいう。一部の実施形態において、「動物」は任意の発生段階の非ヒト動物をいう。特定の実施形態において、非ヒト動物は哺乳動物（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類および／またはブタ）である。一部の実施形態において、動物としては、限定されないが、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類および／または蠕虫が挙げられる。一部の実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、および／またはクローンであり得る。
【００２３】
抗体：  本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、天然であれ、全部もしくは一部が合成により作製されたものであれ、任意の免疫グロブリンをいう。特異的結合能力を維持しているそのあらゆる誘導体もまた該用語に含まれる。該用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同またはほとんど相同な結合ドメインを有する任意のタンパク質を包含する。かかるタンパク質は、天然供給源に由来するものであってもよく、一部または全部が合成により作製されたものであってもよい。抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもよい。抗体は、任意の免疫グロブリンクラス、例えば、任意のヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥのメンバーであり得る。本明細書で使用されるとき、用語「抗体断片」または「抗体の特徴的部分」は、互換的に使用され、完全長より短い抗体の任意の誘導体をいう。一般に、抗体断片は、完全長抗体の特異的結合能力の少なくとも有意な一部分を保持している。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ二重特異性抗体、およびＦｄ断片が挙げられる。抗体断片は、任意の手段によって作製され得る。例えば、抗体断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的または化学的に作製され得る、および／または抗体の一部分の配列をコードする遺伝子から組換えにより産生され得る。あるいはまたさらに、抗体断片は、全部または一部が合成により作製され得る。抗体断片は、任意選択で、単鎖抗体断片を含み得る。あるいはまたさらに、抗体断片は、例えば、ジスルフィド結合によって互いに連結された多様な鎖を含み得る。抗体断片は、任意選択で、多分子複合体を含み得る。機能性抗体断片は、典型的には、少なくとも約５０個のアミノ酸を含み、より典型的には少なくとも約２００個のアミノ酸を含む。
【００２４】
ほぼ：  本明細書で使用されるとき、数値に関する用語「ほぼ」または「約」は、一般的に、特に記載のない限り、または文脈からそうでないことが明白でない限り（かかる数値が、可能な値の０％より小さい、または１００％より大きい場合を除く）、当該数値の前後５％、１０％、１５％、または２０％の範囲内に含まれる（大きいか、または小さい）数値を含むと解釈されたい。
【００２５】
自己免疫：  本明細書で使用されるとき、用語「自己免疫」は、生物体が自身の構成部分を（サブ分子レベルに至るまで）「自己」と認識できないことをいう。一般に、自己免疫により、生物体自身の細胞および組織に対する免疫応答がもたらされる。本明細書で使用されるとき、かかる異常な免疫応答に起因する任意の疾患を「自己免疫疾患」または「自己免疫障害」と称する。例示的な自己免疫障害としては、限定されないが、以下の表１および２に列挙したものが挙げられる。
【００２６】
特徴的部分：  本明細書で使用されるとき、物質の「特徴的部分」という語句は、広い意味において、関連するインタクトな物質と、ある程度の配列同一性および／または構造的同一性および／または少なくとも１つの機能的特徴を共有している。例えば、ポリヌクレオチドの「特徴的部分」は、１つの連続したヌクレオチド鎖を含むもの、または連続したヌクレオチド鎖の集合体であって、集合的にポリヌクレオチドの特徴となっている。一部の実施形態において、かかる連続した鎖は各々、一般的に、少なくとも２、５、１０、１５、２０またはそれ以上のヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、特徴的部分は、生物学的に活性な部分であり得る。
【００２７】
ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト：  本明細書で使用されるとき、用語「ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト」は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性、機能、安定性および／またはレベルに対し、直接および／または間接的に変更、影響、改変、阻害、および／または低減を行なう任意の物質をいう。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベル；ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性；ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の半減期；および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４とその天然結合パートナーとの相互作用（これらは、標準的な方法を用いて測定される）に対し、阻害、低減、減少および／または停止を行ない得る。ｍＲＮＡレベルは、標準的なＲＮアーゼ保護アッセイおよび／またはインサイチュハイブリダイゼーションアッセイを用いて測定され得る、および／またはタンパク質レベルは、標準的なウエスタンおよび／または免疫組織化学解析を用いて測定され得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４シグナル伝達に負の影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４媒介性生物学的効果に負の影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞およびＴｒｅｇの動員をもたらす任意の物質である。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合に対し、阻害、低減、減少および／または撤廃を行ない得る。したがって、一部のある実施形態では、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの非存在下において、その存在下よりも強い。別の言い方をすると、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合のＫｍを増大させる。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、無機系および／または有機系であり得る。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは：タンパク質、ペプチド、抗体、核酸、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ウイルス、小分子、プロテオグリカン、脂質および／または糖質のうちの１種類以上を含み得る。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、単量体、二量体、オリゴマーおよび／または複合体の形態であり得る。
【００２８】
糖尿病：  本明細書で使用されるとき、用語「糖尿病」は、身体自体の免疫系によって膵臓のランゲルハンス島内のβ細胞が攻撃される自己免疫障害をいう。場合によっては、β細胞は、インスリン産生が低減および／または消去されるのに充分な損傷および／または破壊を受ける。β細胞の損傷および／または破壊は、中枢Ｔ細胞と末梢Ｔ細胞の両方の耐容性における欠陥による。本明細書で使用されるとき、用語「糖尿病」は、一般的には「Ｉ型糖尿病」をいうが、膵臓内のβ細胞に対する自己免疫攻撃を特徴とする任意の病状をいう場合もあり得る。
【００２９】
遺伝子：  本明細書で使用されるとき、用語「遺伝子」は、当該技術分野で理解されている意味を有する。当業者には、用語「遺伝子」に、遺伝子調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）および／またはイントロン配列が包含され得ることが認識されよう。さらに、遺伝子の定義には、タンパク質をコードしているものではなく、ＲＮＡ分子（例えば、機能性ＲＮＡ分子（ｒＲＮＡおよび／またはｔＲＮＡなど））をコードしている核酸に対する言及が含まれることが認識されよう。
【００３０】
遺伝子産物または発現産物：  本明細書で使用されるとき、用語「遺伝子産物」または「発現産物」は、一般的に、遺伝子（プロセッシング前および／またはプロセッシング後のもの）から転写されたＲＮＡ、または遺伝子から転写されたＲＮＡにコードされたポリペプチド（修飾前および／または修飾後のもの）をいう。
【００３１】
相同性：  本明細書で使用されるとき、用語「相同性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、および／またはポリペプチド分子間の全長における関係性をいう。一部の実施形態において、ポリマー分子は、配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合、互いに「相同」であるとみなす。一部の実施形態において、ポリマー分子は、配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％類似している場合、互いに「相同」であるとみなす。
【００３２】
同一性：  本明細書で使用されるとき、用語「同一性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、および／またはポリペプチド分子間の全長における関係性をいう。２つの核酸配列の同一性パーセントの計算は、例えば、２つの配列を、最適な比較目的のためアラインメントすることにより行なわれ得る（例えば、最適なアラインメントのために、第１と第２の核酸配列の一方または両方にギャップが導入され得、比較目的のため同一でない配列は無視され得る）。特定の実施形態において、比較目的のためにアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第１の配列内のある位置が第２の配列内の対応する位置と同じヌクレオチドで占められているならば、両分子は、その位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数および各ギャップの長さ（これは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある）を考慮し、両配列が共有する同一の位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて行なわれ得る。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１−１７；参照として本明細書に組み込まれる）のアルゴリズムを用いて決定され得る。このアルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長さペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用する。あるいはまた、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを用いて決定され得る。
【００３３】
インビトロ：  本明細書で使用されるとき、用語「インビトロ」は、生物体（例えば、動物、植物および／または微生物）内ではなく、人工的な環境において、例えば、試験管または反応槽内、細胞培養物中などにおいて起こる事象をいう。
【００３４】
インビボ：  本明細書で使用されるとき、用語「インビボ」は、生物体（例えば、動物、植物および／または微生物）内で起こる事象をいう。
【００３５】
天然結合パートナー：  本明細書で使用されるとき、用語「天然結合パートナー」は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に結合する任意の物質をいう。一部の実施形態において、該物質は、直接結合するものであり、一部のある実施形態では、該物質は間接的に結合する。天然結合パートナーは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のいずれかに結合するタンパク質、核酸、脂質、糖質、プロテオグリカン、および／または小分子であり得る。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４と天然結合パートナーとの相互作用における変化は、該相互作用が生じる確率の増加および／または減少として、および／または細胞内でのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４／天然結合パートナー複合体の濃度の増大および／または低下として現れ得る。これにより、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性の増大および／または低下がもたらされ得る。本発明では、ＣＸＣＬ１２を、ＣＸＣＲ４の新規な天然結合パートナーと特定し、ＣＸＣＲ４を、ＣＸＣＬ１２の天然結合パートナーと特定する。当業者には、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４と相互作用する任意の物質が、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナーとみなされ得ることが認識されよう。
【００３６】
核酸：  本明細書で使用されるとき、用語「核酸」は、その広い意味において、オリゴヌクレオチド鎖内に組み込まれているか、または組み込まれ得る任意の化合物および／または物質をいう。一部の実施形態において、核酸は、オリゴヌクレオチド鎖内に、ホスホジエステル結合によって組み込まれているか、または組み込まれ得る化合物および／または物質である。一部の実施形態において、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）をいう。一部の実施形態において、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖をいう。本明細書で使用されるとき、用語「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用されることがあり得る。一部の実施形態において、「核酸」は、ＲＮＡならびに単鎖および／または二本鎖ＤＮＡおよび／またはｃＤＮＡを包含する。さらに、用語「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」および／または同類の用語は、核酸類縁体、すなわち、ホスホジエステル主鎖以外のものを有する類縁体を含む。例えば、当該技術分野で知られ、主鎖内にホスホジエステル結合ではなくペプチド結合を有するいわゆる「ペプチド核酸」は、本発明の範囲に含まれるとみなす。用語「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重した型である、および／または同じアミノ酸配列をコードするあらゆるヌクレオチド配列を含む。タンパク質および／またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列には、イントロンが含まれていてもよい。核酸は、天然供給源から精製されたもの、組換え発現系を用いて産生させ、任意選択で精製したもの、化学合成したものなどであり得る。適切である場合、例えば、化学合成された分子の場合、核酸は、ヌクレオシド類縁体（例えば、化学修飾された塩基または糖類、主鎖の修飾などを有する類縁体）を含み得る。核酸配列は、特に記載のない限り、５’から３’の方向に示している。用語「核酸セグメント」は、本明細書において、長鎖核酸配列の一部分である核酸配列をいうために用いる。多くの実施形態において、核酸セグメントは、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０またはそれ以上の残基を含む。一部の実施形態において、核酸は、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）；ヌクレオシド類縁体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、および２−チオシチジン）；化学修飾塩基；生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化された塩基）；介在塩基；修飾された���類（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、およびヘキソース）；および／または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’−Ｎ−ホスホロアミダイト結合）であるか、またはこれらを含む。一部の実施形態において、本発明は、特に、送達を助長または達成するための化学修飾がなされていない核酸（例えば、ポリヌクレオチドおよび残基、例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を意味する「非修飾核酸」に関する。
【００３７】
患者：  本明細書で使用されるとき、用語「患者」および「被験体」は、互換的に使用されることが可能であり、例えば、実験、診断、同定、スクリーニングおよび／または治療の目的で、本発明の組成物が投与され得る任意の生物体をいう。典型的な被験体としては、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、およびヒトなどの哺乳動物）が挙げられる。
【００３８】
試料：  本明細書で使用されるとき、用語「試料」は、任意の生物学的組織または流体をいう。一部の実施形態において、試料としては、限定されないが、骨髄；血液；血液細胞（例えば、白血球、赤血球など）；腹水；組織もしくは細針生検試料；細胞含有体液；浮遊核酸；痰；尿；脳脊髄液、腹腔内液；胸膜液；洗浄液（ｗａｓｈｉｎｇ／ｌａｖａｇｅ）（管内洗浄液もしくは気管支肺胞洗浄液など）；吸引物；擦過物；骨髄被検物；組織生検被検物；外科的被検物；他の体液、分泌物、および／または排泄物；および／またはこれらが由来する細胞が挙げられる。一部の実施形態において、試料は、患者から採取した細胞であるか、または該細胞を含む。該細胞は、例えば、血液、骨髄に由来するもの、および／または充実性器官（脳、脾臓、骨、心臓、血管、肺、腎臓、肝臓、下垂体、内分泌腺、リンパ節など）に由来する組織由来のもの、分散した一次細胞、腫瘍細胞などであり得る。生物学的試料には、組織学的な目的のための採取された凍結切片または固定切片などの組織切片も含まれ得る。一部の実施形態において、試料は、体液であってよく、限定されないが、血液、リンパ、腹水、婦人科系体液、尿などが挙げられる。試料は被験体から、任意の幅広い方法、例えば、生検（例えば、細針吸引または組織生検）、外科手術、体液（例えば、血液、リンパなど）の収集などによって採取され得る。用語「試料」は、かかる試料の処理によって得られる任意の物質を含む。得られる試料としては、例えば、試料から抽出された核酸もしくはタンパク質、または試料を、例えば、ｍＲＮＡの増幅もしくは逆転写、特定成分の単離および／または精製など手法に供することにより得られた核酸もしくはタンパク質が挙げられる。
【００３９】
類似性：  本明細書で使用されるとき、用語「類似性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、および／またはポリペプチド分子間の全長における関係性をいう。ポリマー分子同士の類似性パーセントの計算は、類似性パーセントでは、当該技術分野で理解されているように同類置換が考慮されること以外は、同一性パーセントの計算と同様にして行なわれ得る。
【００４０】
実質的に：  本明細書で使用されるとき、用語「実質的に」は、目的の特徴または性質が、完全またはほぼ完全な程度または度合で示されている定性的状態をいう。生物学の技術分野の当業者には、生物学的および化学的現象が、進行して完結する、および／または完結するまで、あるいは絶対的な結果が得られるか、または回避されるまで進行することは、たとえあったとしても稀であることは理解されよう。したがって、用語「実質的に」は、本明細書において、多くの生物学的および化学的現象に内在する完結性の欠如の可能性を含めるために使用する。
【００４１】
小分子：一般に、「小分子」は、当該技術分野において、大きさが約２０００ｇ／ｍｏｌより小さい有機分子であると理解されている。一部の実施形態において、小分子は約１５００ｇ／ｍｏｌより小さいか、または約１０００ｇ／ｍｏｌより小さい。一部の実施形態において、小分子は約８００ｇ／ｍｏｌより小さいか、または約５００ｇ／ｍｏｌより小さい。一部の実施形態において、小分子は非ポリマー系および／または非オリゴマー系である。一部の実施形態において、小分子は、タンパク質でも、ペプチドでもアミノ酸でもない。一部の実施形態において、小分子は、核酸でもヌクレオチドでもない。一部の実施形態において、小分子は、糖でも多糖でもない。
【００４２】
〜に罹患している：疾患、障害および／または病状「に罹患している」個体が、該疾患、障害および／または病状と診断されたか、またはその１つ以上の症状を示していることである。
【００４３】
〜に罹り易い：疾患、障害および／または病状「に罹り易い」個体が、該疾患、障害および／または病状と診断されていないこと、および／またはその症状を示さないことがあり得ることである。一部の実施形態において、疾患、障害および／または病状（例えば、糖尿病）に罹り易い個体は、以下：（１）該疾患、障害および／または病状の発現と関連している遺伝子変異；（２）該疾患、障害および／または病状の発現と関連している遺伝子多型（例えば、特定のヒト白血球抗原［ＨＬＡ］表現型）；（３）該疾患、障害および／または病状と関連しているタンパク質の発現および／または活性の増大および／または低下；（４）該疾患、障害および／または病状の発現と関連している習慣および／または生活様式（例えば、乳児期に母乳保育されなかった、幼児期のビタミンＤ欠乏症）；（５）該疾患、障害および／または病状の家族歴（例えば、親が糖尿病）；（６）感染（例えば、コクサッキーウイルスファミリーのウイルスまたは風疹ウイルスのいずれかによる感染）に反応；（７）特定の化学物質（例えば、Ｖａｃｏｒ（Ｎ−３−ピリジルメチル−Ｎ’−ｐ−ニトロフェニル尿素）、殺鼡薬（これは、臓のβ細胞を選択的に破壊する；またはＺＡＮＯＳＡＲ（登録商標）（ストレプトゾトシン）、抗生物質および抗腫瘍剤（膵臓癌の化学療法に使用されており、β細胞を死滅させ、インスリン産生の低下をもたらすもの）への曝露の１つ以上を特徴とする個体であり得る。一部の実施形態において、疾患、障害および／または病状に罹り易い個体は、該疾患、障害および／または病状が発現する。一部の実施形態において、疾患、障害および／または病状に罹り易い個体は、該疾患、障害および／または病状が発現しない。
【００４４】
試験物質：  本明細書で使用されるとき、語句「試験物質」は、本明細書に記載のシステム、方法、アッセイおよび／または組成物において使用され得る任意の物質をいう。「試験物質」は、以下：（１）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４、および／またはそのホモログ、一部分、バリアント、変異型および／または誘導体をコードする核酸；（２）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナー、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナーをコードする核酸、および／またはそのホモログ、一部分、バリアント、変異型および／または誘導体；および／または（３）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４、および／またはそのホモログ、一部分、バリアント、変異型および／または誘導体シグナル伝達に関連する１つ以上の物質を指し得る。一部の実施形態において、試験物質は、ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４結合部分を含むタンパク質またはペプチドである。一部の実施形態において、試験物質は、ＣＸＣＲ４のＣＸＣＬ１２結合部分を含むタンパク質またはペプチドである。一部の実施形態において、試験物質は、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、糖質、脂質、小分子、これらのいずれかのライブラリー、および／またはこれらの任意のもの組合せである。
【００４５】
治療有効量：  本明細書で使用されるとき、用語「治療有効量」は、疾患、障害および／または病状に罹患しているか、または罹り易い患者に投与されると、該疾患、障害および／または病状が治療および／または診断されるのに充分な治療用および／または診断用薬剤（例えば、ＡＭ３１００）の量を意味する。
【００４６】
治療用薬剤：  本明細書で使用されるとき、語句「治療用薬剤」は、被験体に投与される際、治療効果および／または診断効果を有する、および／または所望の生物学的および／または薬理学的効果を誘発する任意の薬剤をいう。
【００４７】
治療：  本明細書で使用されるとき、用語「治療」は、特定の疾患、障害および／または病状の１つ以上の症状または特徴の緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減、および／または発病の低減を一部または完全に行なうことをいう。例えば、自己免疫障害の「治療」は、（１）特定の治療用薬剤に対して応答性であり得る患者を特定すること；および（２）該治療用薬剤を該患者に投与することを指し得る。治療は、疾患、障害および／または病状の徴候を示していない被験体、および／または疾患、障害および／または病状の初期徴候しか示していない被験体に、該疾患、障害および／または病状と関連している病態の発現リスクを低下させる目的で施され得る。一部の実施形態において、治療は、（１）ＡＭＤ３１００処置に対して応答性であり得る患者を特定すること；および（２）ＡＭＤ３１００を該患者に投与することを含む。一部の実施形態において、治療は、本発明による組成物の１種類以上を治療有効量で、疾患、障害および／または病状に罹患している、および／または罹り易い被験体に投与することを含み得る。
【００４８】
本発明の特定の実施形態の詳細な説明
本発明は、本明細書に記載のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろう患者を特定する組成物、システム、および方法を提供する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織および／または細胞中（例えば、骨髄、血液など）のＣＸＣＬ１２レベルの上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織および／または細胞中（例えば、骨髄）のナイーブＴ細胞および／または幹細胞のレベルの上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、ＣＸＣＬ１２レベルの上昇と関連している自己免疫障害に罹患しているか、または罹り易い患者の特定が、特定の治療剤（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト）に応答するであろう患者の特定を可能にするため、望ましいという認識を包含する。本発明による方法が、必ずしも任意の特定の被験体が良好な応答を示すかどうかを完全に正確に予測するものではなく、特定の特徴を有する被験体が、かかる特徴を有しない被験体よりも良好な応答を示す可能性が高い、または可能性が低いことを示すことは認識されよう。本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの新規な使用を提供する。本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを、それを必要とする患者に投与する方法を提供する。
【００４９】
Ｔ細胞
リンパ球（例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞）は、骨髄中の多能性造血幹細胞から発生する。Ｔ細胞は、胸腺に遊走し（ここでは、発生が継続される）、その遊走は二次リンパ様器官（例えば、リンパ節、脾臓など）へと継続される（ここでは、抗原との相互作用に利用可能となる）。Ｔ細胞は、その細胞表面上にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が存在することにより、Ｂ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの他のリンパ球とは区別され得る。
【００５０】
Ｔ細胞は、ナイーブ細胞、記憶細胞、またはエフェクター細胞のいずれかとみなされ得る。ナイーブ細胞は、胸腺から遊走した後、まだ抗原に刺激されていない細胞である。記憶細胞は、自身に少なくとも１回抗原が提示されたが、次に同じ抗原に曝露されたら速やかに活性化され得る休止期に戻った細胞である。エフェクター細胞は、提示された抗原に応答して、標的細胞の溶解などの特殊な機能を果たし得る細胞である。
【００５１】
Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞を死滅させ、他の白血球の応答をを補助または抑止する。このような３つの機能は、異なる類型のＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞（すなわち、「ＣＤ８＋細胞」）、ヘルパーＴ細胞（すなわち、「ＣＤ４細胞」）、およびＴ調節細胞（Ｔｒｅｇ；すなわち、「ＣＤ４＋細胞」）によって実行される。細胞傷害性Ｔ細胞は、Ｂ細胞とともに免疫系の主要なエフェクター細胞である。ヘルパーＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞およびＢ細胞が抗原に対する応答を発現するのを補助する。また、これらは、自身のサイトカインの分泌によってエフェクター機能を示すことがあり得る。Ｔｒｅｇは、典型的には、他の白血球の応答を抑制する作用を行なう（「サプレッサーＴ細胞」）。Ｔｒｅｇは、ＦｏｘＰ３と称される細胞内分子の存在により、他の型のＴ細胞とは区別され得る。
【００５２】
自己免疫疾患
自己免疫は、生物体が自身の構成部分を（サブ分子レベルに至るまで）「自己」と認識できないことであり、生物体自身の組織、細胞、および分子に対する免疫応答がもたらされる。かかる異常な免疫応答に起因する任意の疾患を「自己免疫疾患」または「自己免疫障害」と称する。例示的な自己免疫障害としては、限定されないが、以下の表１に示す疾患が挙げられる。
【００５３】
【表１−１】
2010538275.tif 000002
【００５４】
【表１−２】
2010538275.tif 000003
【００５５】
【表１−３】
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【００５６】
【表１−４】
2010538275.tif 000005
当業者には、表１が、例示的であって包括的でない自己免疫障害および自己免疫性と思われる障害の一覧を示すことが認識されよう。生物体が自身の構成部分を「自己」と認識できず、該生物体自身の組織、細胞および分子に対する免疫応答がもたらされることを特徴とする任意の障害が自己免疫障害と分類され得る。
【００５７】
自己免疫疾患は、さまざまな要素によって引き起こされ得る。一部の実施形態において、自己免疫疾患は遺伝的素因によって起こり得る。一部の実施形態において、自己免疫疾患は、特定の外因性因子（例えば、ウイルス、細菌、化学薬品など）によって起こり得る。自己免疫の一部の形態は、通常はリンパ球に曝露されない領域（例えば、神経組織、目のレンズなど）に対する外傷の結果生じる。このような領域内の組織がリンパ球に曝露されると、その表面タンパク質が抗原として作用し、抗体の産生および細胞性免疫応答を誘発することがあり、これにより、次いで該組織の破壊が始まる。一部の実施形態において、自己免疫疾患は、被験体が、被験体自身の組織と抗原性が類似した（すなわち、交差反応性である）抗原に曝露された後に発現する。例えば、リウマチ熱では、連鎖球菌（これがリウマチ熱の原因である）の抗原が、ヒト心臓の一部分と交差反応性である。抗体は、細菌成分と心筋分子を識別することができない。その結果、いずれかの該抗原を有する細胞が破壊されることがあり得る。一部の実施形態において、自己免疫疾患（例えば、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチなど）は、主に細胞媒介性自己免疫応答の結果であることを特徴とし、主としてＴ細胞の活性によるものと思われる（Ｓｉｎｈａら，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：１３８０；参照として本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態において、自己免疫疾患（例えば、重症筋無力症、紅斑性狼瘡など）は、主に体液性免疫応答の結果であることを特徴とする。
【００５８】
Ｉ型糖尿病
Ｉ型糖尿病は、小児の５００名に１名が罹患しており、膵臓のランゲルハンス島のインスリン産生β細胞の減損によってインスリン欠乏がもたらされることを特徴とする。自分の身体の免疫系が膵臓のランゲルハンス島内のβ細胞を攻撃し、インスリン産生を低下させ、最終的に消去するのに充分破壊または損傷させる。現在、Ｉ型糖尿病に対して採用され得る予防的手段は知られていない。Ｉ型糖尿病をもたらすβ細胞減損の主な原因は、Ｔ細胞媒介性自己免疫攻撃である。
【００５９】
現在、Ｉ型糖尿病は、血液試験モニターを用いて血中グルコースレベルを注意深くモニタリングしながらのインスリン投与によってのみ治療され得る。Ｉ型糖尿病の治療は、無期限に継続しなければならず、定期的な血中グルコースレベルのモニタリングおよびインスリンの自己投与は、糖尿病患者にとって極めて不便である。さらに、多くの場合、患者にとって、任意の所与の時点で適切なインスリン投薬量を決定することは、該投薬量が患者の食物摂取量、活動レベルなどに応じて大きく異なり得るため、困難である。インスリンの投与レベルが不充分だと、血中グルコースレベルが上がり、これにより、ケトーシス、糖尿病性ケトアシドーシス、昏睡または死亡に至ることがあり得る。しかしながら、投与したインスリンが多すぎると、血中グルコースレベルが下がり、これにより、発作または意識消失の症状発現に至ることがある。
【００６０】
Ｉ型糖尿病の有効なマネージメントは、該疾患が、長期間にわたる健康への影響を有し得るが、これは経時的に悪化するため重要である。限定されないが、一例を挙げると、糖尿病のコントロールが不充分な個体は、多くの場合、切り傷、擦過傷、水疱などが小さくても治癒が遅い。かかる場合において、かかる損傷（気付いていない場合）が未治療のまま、または治癒しないと感染症となることがあり、切断に至ることがある。さらに、血中グルコースレベルの慢性的な上昇は血管の損傷をもたらし、糖尿病性網膜症（これは、失明に至ることがある）、糖尿病性神経障害（これは、糖尿病足に至ることがある）、または糖尿病性腎症（これは、腎不全に至ることがある、透析または腎臓移植によって治療可能）に至ることがある。また、糖尿病患者は歯肉疾患になりやすい。糖尿病患者は、多くの場合、加速性アテローム性動脈硬化（これは、冠動脈疾患（心臓発作に至る場合がある）に至ることがある）、脳卒中、末梢血管疾患、および糖尿病性筋壊死（すなわち、「筋肉疲労」）に罹り易い。実際、糖尿病を有する人は、糖尿病でない人よりも脳卒中になる可能性が２〜４倍高い。糖尿病は、妊娠を困難にし、吐き気、消化不良および鼓脹の原因となり得る。糖尿病を有する人は、糖尿病でない人よりも肺炎またはインフルエンザで死亡する可能性が高い。
【００６１】
したがって、糖尿病の発症を抑止および／または遅延させる組成物および方法は、これらによって、通常糖尿病に随伴する負の長期間にわたる健康への影響の発症が抑止および／または遅延され得るため望ましい。さらに、かかる組成物での治療前に、患者がこのような組成物に応答する可能性があり得るかどうかを特定することが望ましい。かかる特定によって「個別の」治療が可能となり、該組成物に応答性でない患者に対するこのような組成物の投与が回避され、したがって、有害な副作用の可能性が回避され得る。
【００６２】
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスは、Ｉ型糖尿病を発現する素因を有するものであり、ヒト疾患の機構、病因および介入の研究用モデルとして供されている（ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＢｌｕｅｓｔｏｎｅ，２００５，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：４４７）。ヒトの場合のように、ＮＯＤマウスにおけるＩ型糖尿病の発現は加齢依存性であり、異なる２つの段階：インスリン炎および糖尿病を経て進行する（ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＢｌｕｅｓｔｏｎｅ，２００５（上掲）；ならびにＡｎｄｒｅら，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９３：２２６０；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。３〜４週齢という早期段階で、単核性浸潤物が島を囲み始める（膵島周囲炎）。次の数週間で、この浸潤物が島に侵入し、インスリン炎となる。１２〜１４週齢までに、インスリン炎は「良性」から「攻撃性」にシフトし始める。β細胞が破壊されるにつれて、顕性糖尿病が現れる。多くの自然発生自己免疫疾患と同様、Ｉ型糖尿病の発現は可視的である。ＮＯＤマウスでは、インスリン炎は、すべてのマウスに起こる（完全な浸透度）が、糖尿病は雄よりも雌において、低年齢の方が高頻度に現れる。一般に、多様な要素およびプロセスにおける欠陥がＩ型糖尿病に寄与していると考えられている。
【００６３】
Ｉ型糖尿病の主な原因は、自己反応性Ｔ細胞によるβ細胞の破壊である。研究により、ＣＤ４＋  Ｔ細胞とＣＤ８＋  Ｔ細胞の両方が島破壊を直接媒介して該疾患に移行させている可能性があることが示されている。したがって、自己反応性Ｔ細胞の発生と活性化、およびその島への浸潤とβ細胞の破壊は、疾患発現に重要である。ＮＯＤマウスでは、新奇な主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ対立遺伝子（ＩＡｇ７）とプログラムされた細胞死経路の欠陥の組合せによって、自己反応性Ｔ細胞が胸腺での負の選択を逃れることが可能になると考えられている（ＤｅｌｏｖｉｔｃｈおよびＳｉｎｇｈ，１９９７，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，７：７２７；ならびにＫｉｓｈｉｍｏｔｏおよびＳｐｒｅｎｔ，２００１，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２：１０２５；ならびにＺｕｃｃｈｅｌｌｉら，２００５，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２２：３８５；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。末梢では、末梢耐容機構におけるさらなる欠陥により、自己反応性Ｔ細胞の活性化が抑制されない（Ｈｏｎｇら，２００１，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，７：１０５２；Ｓａｌｏｍｏｎら，２０００，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１２：４３１；およびＳｈａｒｉｆら，２００１，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，７：１０５７；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。自己反応性Ｔ細胞による島への浸潤およびβ細胞の破壊により、インスリン産生および血中グルコースレベル制御が低下し、最終的に糖尿病に至る。
【００６４】
自己反応性Ｔ細胞の発生と活性化はＮＯＤマウスにおいて広く研究されているが、Ｔ細胞輸送（島への浸潤など）の制御に関して分かっていることは比較的少ない。島内への自己反応性Ｔ細胞の輸送がβ細胞破壊の前提条件であるため、Ｔ細胞輸送における改変は、ＮＯＤマウスにおける疾患進行に影響を及ぼすと予測される。この予測と整合して、ケモカインＣＣＬ３、ＣＣＬ４、およびＣＸＣＬ１０の血清レベルは、疾患進行中、ＮＯＤマウスにおいて有意に上昇している（Ｈａｎｉｆｉ−Ｍｏｇｈａｄｄａｍら，２００６，Ｄｉａｂｅｔ．Ｍｅｄ．，２３：１５６；およびＳｈｉｇｉｈａｒａら，２００６，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，２６：６６；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。いくつかのケモカインおよびケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＬ１２、ストロマ細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）としても知られる）における多型が、ヒトＩ型真性糖尿病において見い出されている（Ｄｕｂｏｉｓ−Ｌａｆｏｒｇｕｅら，２００１，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５０：１２１１；Ｉｄｅら，２００３，Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６４：９７３；Ｋａｗａｓａｋｉら，２００４，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１０３７：７９；およびＹａｎｇら，２００４，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２６：１１４；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。ＮＯＤマウスでは、抗体でのＣＸＣＬ１２のブロックにより、Ｉ型糖尿病の発症が中程度に遅延される（Ｍａｔｉｎら，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０７：２２２；参照として本明細書に組み込まれる）。同様に、前糖尿病ＮＯＤマウスを、ＣＸＣＬ１２発現の既知の抑制因子であるＧ−ＣＳＦ（Ｐｅｔｉｔら，２００２，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３：６８７；およびＳｅｍｅｒａｄら，２００５，Ｂｌｏｏｄ，１０６：３０２０；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）で治療すると、Ｉ型糖尿病の発症が有意に遅延される（Ｋａｒｅｄら，２００５，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５４：７８；およびＨａｄａｙａら，２００５，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，２４：１２５；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。したがって、ＣＸＣＬ１２の阻害により、ＮＯＤマウスにおいて疾患進行が遅くなると思われる。しかしながら、疾患進行におけるケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ１２）の厳密な役割は充分に調査されていない。
【００６５】
Ｔ細胞に加え、複雑で多段階のＩ型糖尿病の発現から予測されるように、他の要素およびプロセスによっても疾患進行が調節される。実際、ほぼ２０のｉｄｄ遺伝子座が疾患進行と連鎖している。これらの遺伝子座の一部が、自己反応性Ｔ細胞の発生、活性化、輸送および機能を調節するであろうが、一部は、Ｔ細胞と独立して疾患進行を調節している可能性がある。例えば、疾患進行の経過中、島が破壊されるにつれて、正常な修復と再生の機構が活性化され、破壊されたβ細胞が置き換えられている可能性がある。最近の研究により、かかる修復／再生機構の存在を示す非常に説得力のある証拠がいくつか示された。Ｒｙｕらにより、有意な割合の糖尿病ＮＯＤマウスの疾患が、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）注射とＭＨＣクラスＩ適合膵細胞の反復養子移植の組合せによって治癒され得ることが示された（Ｒｙｕら，２００１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０８：６３；参照として本明細書に組み込まれる）。追跡研究により、糖尿病マウスは、島の再生によって治癒したことが示された（Ｋｏｄａｍａら，２００３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０２：１２２３；参照として本明細書に組み込まれる）が、ドナー膵細胞が島再生に寄与しているかどうかは議論の余地がある（Ｃｈｏｎｇら，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１１：１７７４；Ｎｉｓｈｉｏら，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１１：１７７５；Ｓｕｒｉら，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１１：１７７８；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。骨髄由来幹細胞が膵臓の再生を起こすと考えられるため（Ｈｅｓｓら，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２１：７６３；参照として本明細書に組み込まれる）、骨髄中の幹細胞動員を調節するケモカインが島再生を調節し、したがって糖尿病の発現を調節している可能性がある。しかしながら、ケモカインと、Ｔ細胞および幹細胞の輸送／動員と、Ｉ型糖尿病間の直接的な関連を裏付ける証拠はない。また、ＣＦＡはそれ自体、ＮＯＤマウスにおいて糖尿病を予防することができるが、その役割は依然として不明である。
【００６６】
Ｔ細胞と自己免疫疾患
したがって、本発明は、ＣＸＣＬ１２がＩ型糖尿病の発症に関与する機構の知得を包含する。以下の実施例の項に示すように、本発明は、ケモカインＣＸＣＬ１２の発現がＮＯＤマウスの骨髄において上昇しており、骨髄中にＴ細胞と造血幹細胞（ＨＳＣ）の両方の蓄積がもたらされるという認識を包含する。本発明は、ＣＸＣＬ１２発現が、糖尿病に罹患している、および／または罹り易い被験体のさまざまな組織のいずれか（例えば、骨髄）において上昇している可能性があるという認識を包含する。ＮＯＤマウスをＣＦＡで治療すると、骨髄においてＣＸＣＬ１２発現ならびにＴ細胞蓄積が抑止される。本発明は、ＣＸＣＬ１２活性をＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、ＡＭＤ３１００）で阻害すると、Ｔ細胞と幹細胞の両方が骨髄から末梢リンパ様組織に動員され、ＮＯＤマウスにおいてインスリン炎と糖尿病の発症が有意に遅延されるという認識を包含する。例えば、ＡＭＤ３１００（１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］−ビス−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン八塩酸塩二水和物；プレリキサホルおよび／またはＪＭ  ３１００としても知られている）は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストとしての機能を果たし得る大環状小分子である（Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，２００３，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，２：５８１；参照として本明細書に組み込まれる）。本発明は、ＣＸＣＬ１２発現レベルの上昇により、ＮＯＤマウスにおいてＩ型糖尿病が促進されるという認識を包含し、種々の細胞型およびプロセス（例えば、ケモカイン、Ｔ細胞、幹細胞、輸送および／または動員）すべてが疾患進行に寄与する一般的な機構を示す。本発明は、ＡＭＤ３１００がヒトのＩ型糖尿病の治療および／または予防に利用され得るという認識を包含する。
【００６７】
本明細書に記載した特定の実験はＩ型糖尿病に関するが、本発明によるシステム、方法および組成物は本明細書に記載の任意の自己免疫疾患にも関連し、適用可能である。したがって、本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４が自己免疫疾患に一般的に関与している可能性があるという認識を包含する。本発明は、ケモカインＣＸＣＬ１２の発現が、自己免疫疾患に罹患している、および／または罹り易い被験体のさまざまな組織および／または細胞型のいずれか（例えば、骨髄）において上昇している可能性があるという認識、およびかかる発現の上昇によって、該組織（例えば、骨髄）内にＴ細胞と造血幹細胞（ＨＳＣ）の両方の蓄積がもたらされ得るという認識を包含する。本発明は、ＣＸＣＬ１２活性をＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、ＡＭＤ３１００）で阻害すると、Ｔ細胞と幹細胞の両方が骨髄から末梢リンパ様組織に動員され、自己免疫疾患の発症が遅延され得るという認識を包含する。本発明は、ＣＸＣＬ１２発現および／または活性のレベルの上昇により、自己免疫疾患が促進され得るという認識を包含し、種々の細胞型およびプロセス（例えば、ケモカイン、Ｔ細胞、幹細胞、輸送および／または動員）すべてが疾患進行に寄与する一般的な機構を示す。本発明は、ＡＭＤ３１００がヒトの自己免疫疾患の治療および／または予防に利用され得るという認識を包含する。
【００６８】
ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト
ケモカインは、小分子サイトカインの一ファミリーである。タンパク質は、共有された構造的特徴（小型（すべて、ほぼ８〜１０ｋＤの大きさ）など）、および３次元形状の形成に重要な保存された位置内の４つのシステイン残基の存在に従ってケモカインと分類される。その名称は、近傍の応答性細胞において指向型化学走性を誘導するその能力に由来している（すなわち、これは、化学走性サイトカインである）。しかしながら、このタンパク質は、これまで、いくつかの他の名称（例えば、ＳＩＳサイトカインファミリー、ＳＩＧサイトカインファミリー、ＳＣＹサイトカインファミリー、血小板因子−４スーパーファミリーまたはインタークリン）で知られていた。一部のケモカインは炎症促進性と考えられており、免疫応答中に誘導され、免疫系の細胞を感染部位へと促し得るが、別の一部のものは恒常性であると考えられており、組織の維持または発生の通常のプロセスにおける細胞遊走の制御に関与している。例えば、一部の恒常性ケモカインは、リンパ球をリンパ節に指向させる。ケモカインはあらゆる脊椎動物、一部のウイルスおよび一部の細菌に見られるが、これまで他の無脊椎動物では報告されていない。ケモカインはその生物学的効果を、標的細胞の表面上に選択的に見られるＧプロテインＧタンパク質結合膜貫通型受容体（ケモカイン受容体と称される）との相互作用によって発揮する。
【００６９】
ＣＸＣＬ１２（正式には、「ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２」と表示される）は、ＳＤＦ−１（ストロマ細胞由来因子−１）としても知られており、ケモカインファミリーに属する小分子サイトカインである。これは、同じ遺伝子の選択的スプライシングによって２つの形態（すなわち、ＳＤＦ−１α／ＣＸＣＬ１２ａとＳＤＦ−１β／ＣＸＣＬ１２ｂ）で生成される（Ｄｅ  Ｌａ  Ｌｕｚ  Ｓｉｅｒｒａら，２００４，Ｂｌｏｏｄ，１０３：２４５２；参照として本明細書に組み込まれる）。ケモカインは、２つのジスルフィド結合を形成する４つの保存されたシステイン存在を特徴とする。ＣＸＣＬ１２は、ＣＸＣケモカイン群に属しており、その最初のシステインのペアが１つの介在アミノ酸で分離されている。ＣＸＣＬ１２は、リンパ球に対して化学走性であり、発生中、重要な細胞協調因子として関与している（Ｂｌｅｕｌら，１９９６，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８４：１１０１；Ａｒａら，２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１００：５３１９；Ａｓｋａｒｉら，２００３，Ｌａｎｃｅｔ、３６２：６９７；およびＭａら，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９５：９４４８；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。胚形成中、ＣＸＣＬ１２により、造血細胞遊走が胎児の肝臓から骨髄へと指向される。ＣＸＣＬ１２ノックアウトマウスは、出生前または出生後わずか１時間以内に死亡する。さらに、ＣＸＣＬ１２はまた、ニューロンの電気生理学的性質を改変させる。ＣＸＣＬ１２は、マウスの多くの組織（例えば、脳、胸腺、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、および骨髄）で発現されることが示された。
【００７０】
ＣＸＣケモカイン受容体は、ＣＸＣケモカインファミリーのサイトカインに特異的に結合して応答する膜内在性タンパク質である。現在、哺乳動物において７種類のＣＸＣケモカイン受容体が知られており、ＣＸＣＲ１〜ＣＸＣＲ７と命名されている。
【００７１】
ＣＸＣＬ１２に対する受容体はＣＸＣＲ４であり、これは、以前は「フーシン」と称されていた（Ｂｌｅｕｌら，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８２：８２９；参照として本明細書に組み込まれる）。ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４はともに、マウスとヒトとの間で高い配列同一性を示す（すなわち、それぞれ９９％および９０％）。ＣＸＣＲ４は、ＨＩＶ−１によって標的細胞内への進入を獲得するのに利用される。ＣＸＣＲ４は広く細胞内に分布し、ほとんどの未成熟および成熟造血細胞型（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好中球、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、およびマクロファージ）において発現される。また、ＣＸＣＲ４は、血管内皮細胞およびニューロン細胞上にも見られることがある。
【００７２】
一般に、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力（すなわち、「ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用」）に負の影響を及ぼす任意の物質である。特定の実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４シグナル伝達に負の影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４媒介性生物学的効果に負の影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＬ１２アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＬ１２のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の安定性に負の影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらす任意の物質である。
【００７３】
ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの活性
本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、その調節効果を、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に対して上流、下流で、および／または直接発揮し得る。
【００７４】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に直接結合して、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４がその天然結合パートナーと相互作用する能力に影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２に対するＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの結合により、ＣＸＣＬ１２とその天然結合パートナーとの相互作用（例えば、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用）がブロックされる。特定の実施形態において、ＣＸＣＲ４に対するＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの結合により、ＣＸＣＲ４とその天然結合パートナーとの相互作用（例えば、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用）がブロックされる。しかしながら、モジュレータは、必ずしも触媒部位および／または結合部位に直接結合する必要はなく、例えば、隣接部位（ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４ポリペプチド内の隣接部位など）に結合してもよい。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、その結合によってＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性が調節される限り、別の物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４と複合体形成されたタンパク質、脂質、糖質など）に結合してもよい。
【００７５】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、関連分子の１つ以上の部位（例えば、シグナル伝達に重要な部位および／または天然結合パートナーに対する結合部位）に結合するもの、および／または該部位に関して競合し得る。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４に対するＣＸＣＬ１２の結合を妨げるもの、および／または阻害する。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４のＣＸＣＬ１２結合領域に関して競合する。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４結合領域に関して競合する。
【００７６】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、Ｔ細胞内シグナル伝達に必要なドメインに結合する物質、および／または該ドメインをブロックする物質である。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の配列を含み、ドミナントネガティブ活性を有する短鎖ペプチドである。一部の実施形態において、かかるペプチドは、それ自体はＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性をブロックし得ないが、作用部位からＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４を移動させてＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性を間接的に調節し得る。
【００７７】
特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＲＮＡｉ誘導物質などのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アクチベータの活性および／または発現を改変することにより機能を果たし得る。ＲＮＡｉ誘導物質は、以下の表題「核酸のＣＸＣＲ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト」のセクションでさらに詳細に説明する。
【００７８】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４活性がブロックおよび／または低減され得るＣＸＣＲ４の二量体化ドメインを含み得る。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４の二量体化を阻害する物質（例えば、小分子、タンパク質など）を含み得る。ＣＸＣＲ４の二量体化は、典型的にはＣＸＣＲ４に対するＣＸＣＬ１２結合に依存性であり、Ｂａｂｃｏｃｋら，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：３３７８；およびＭｅｌｌａｄｏら，２００６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３２：１４１（これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）にさらに詳細に記載されている。
【００７９】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の発現、安定性、および／または細胞内レベルを調節する機能を果たす。例えば、Ｓｍｉｔｈらにより、分解のためにＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡを標的化するＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４発現のヌクレオチドインヒビターが報告されている（Ｓｍｉｔｈら，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６４：８６０４；参照として本明細書に組み込まれる）。小分子化合物であるアンペロプシンは、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の表面上のＣＸＣＲ４を、これに結合した後の誘導インターナリゼーションによって減少させる（Ｌｉｕら，２００４，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｓｃｉ．，１７：１５３；参照として本明細書に組み込まれる）。
【００８０】
あるいはまたさらに、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナーの転写および／または翻訳を減少させることにより、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルに影響を及ぼす。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、例えば、ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の安定性に直接影響を及ぼすことにより、ＲＮＡおよび／またはタンパク質の半減期に影響を及ぼし得る。特定の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ヌクレアーゼ、プロテアーゼ、および／またはプロテアソームに対するｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の利用可能性および／または感受性を高く、および／または低くする。
【００８１】
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナーをコードするｍＲＮＡのプロセッシングに影響を及ぼす。例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレｍＲＮＡスプライシング、５’末端形成（例えば、キャッピング）、３’末端プロセッシング（例えば、切断および／またはポリアデニル化）、核輸送、および／または翻訳機構との関連および／または細胞質内のリボソームのレベルで機能を果たし得る。
【００８２】
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナーの翻訳制御および／または翻訳後修飾に影響を及ぼす。例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、翻訳開始、伸長、終結および／または再循環のレベルで機能を果たし得る。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、二次、三次および／または四次構造へのタンパク質のフォールディング段階で機能を果たし得る。あるいはまたさらに、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、細胞内輸送（例えば、ＥＲからゴルジへの輸送、ゴルジ内輸送、ゴルジから原形質膜への輸送、および／または細胞からの分泌）のレベルで機能を果たし得る。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、翻訳後修飾（例えば、シグナル配列の切断、および／またはメチル基、リン酸部、グリカン部分、アセチル基などの物質の付加など）のレベルで機能を果たし得る。
【００８３】
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡのレベル、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質のレベル、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質の活性、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの半減期、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質の半減期、天然結合パートナーに対するＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡの結合、および／または天然結合パートナーに対するＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質の結合を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または約１００％減少させ得る。
【００８４】
本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、被験体内におけるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の分布を改変および／または崩壊させることにより機能を果たし得る。例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４を、特定の器官、組織、細胞、および／または亜細胞性部分に優先的に蓄積させ得る。一部の実施形態において、かかる分布の崩壊により、特定の器官、組織、細胞、および／または亜細胞性部分ではＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の過剰発現が、他の器官、組織、細胞、および／または亜細胞性部分ではＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の不充分な発現が有効にもたらされ得る。一部の実施形態において、かかるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４は、適正なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４遺伝子の発現の調節を担う因子（例えば、転写因子、スプライシング因子、核輸送因子、翻訳後プロセッシング因子など）に対して作用し得る。限定されないが、一例を挙げると、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、骨髄中へのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の蓄積を阻害することにより機能を果たし得る。
【００８５】
本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、上記の任意の活性を有し得る。本発明によれば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、小分子、タンパク質（例えば、ペプチド、抗体など）、核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ｓｉＲＮＡなど）、脂質、糖質、ウイルスなどであり得、これらについては、以下にさらに詳細に記載する。本発明は、後述するいずれかの方法に従って同定される新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを提供する。
【００８６】
小分子のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは小分子であり得る。特定の実施形態において、小分子は、大きさが約２０００ｇ／ｍｏｌより小さい。一部の実施形態において、小分子は約１５００ｇ／ｍｏｌより小さいか、または約１０００ｇ／ｍｏｌより小さい。一部の実施形態において、小分子は、約８００ｇ／ｍｏｌより小さいか、または約５００ｇ／ｍｏｌより小さい。
【００８７】
当業者には、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力に負の影響を及ぼす小分子はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストであることが認識されよう。ＣＸＣＲ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性に負の影響を及ぼす小分子はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。特定の実施形態において、被験体に投与される際、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらす小分子は、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。
【００８８】
一部の実施形態において、例示的な小分子のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしては、限定されないが、ＡＭＤ３１００（Ｒｕｂｉｎら，２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１００：１３５１３；参照として本明細書に組み込まれる）、ＫＲＨ−１６３６（Ｉｃｈｉｙａｍａら，２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１００：４１８５；参照として本明細書に組み込まれる）、ＫＲＨ−３９５５、ＫＲＨ−３１４０（Ｔａｎａｋａら，２００６，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｏｒａｌｌｙ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｅ  ＣＸＣＲ４  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，ＫＲＨ−３９５５  ａｎｄ  ＫＲＨ−３１４０：Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ａｎｔｉ−ＨＩＶ−１  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，”  １３ｔｈ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，２００６年２月；参照として本明細書に組み込まれる）、ＫＲＨ−２７３１（Ｍｕｒａｋａｍｉら，“ＫＲＨ−２７３１：Ａｎ  Ｏｒａｌｌｙ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｅ  ＣＸＣＲ４  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｉｓ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ＨＩＶ−１  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”  １１ｔｈ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，２００４年２月；参照として本明細書に組み込まれる）、ＡＭＤ３４６５（Ｈｕら，２００６，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１６９：４２４；参照として本明細書に組み込まれる）、Ｔ１３４（Ｇｏｔｏｈら，２０００，Ａｂｓｔｒ．Ｉｎｔｅｒｓｃｉ．Ｃｏｎｆ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｉｎｔｅｒｓｃｉ．Ｃｏｎｆ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４０：１８０；参照として本明細書に組み込まれる）、ＡＭＤ２７６３（Ｈｏｒｚｉｎｅｋら，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７６：６３４６；参照として本明細書に組み込まれる）、ＡＭＤ０７０（Ｓｃｈｏｌｓら，“Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ａｎｔｉ−ＨＩＶ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ＡＭＤ８８７、ａ  Ｎｏｖｅｌ  ＣＣＲ５  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ＣＸＣＲ４  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＡＭＤ０７０，”  １１ｔｈ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，２００４年２月；参照として本明細書に組み込まれる）、タンニン酸（Ｃｈｅｎら，２００３，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，９：３１１５；参照として本明細書に組み込まれる）および／またはＮＳＣ  ６５１０１６（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら，２００２，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，８：３９５５；参照として本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【００８９】
タンパク質のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストはタンパク質、例えば、ポリペプチド、ペプチド、抗体、糖タンパク質、リポタンパク質などであり得る。
【００９０】
特定の実施形態において、該ペプチドは、約５〜約１００、約１０〜約７５、約１５〜約５０、または約２０〜約２５個のアミノ酸の範囲の大きさである。一部の実施形態において、ペプチド配列は、タンパク質の配列に基づき得る。一部の実施形態において、ペプチド配列は、アミノ酸がランダムに配置され得る。
【００９１】
用語「ポリペプチド」と「ペプチド」は、本明細書において互換的に使用され、「ペプチド」は、典型的には、約１００個未満のアミノ酸長を有するポリペプチドをいう。ポリペプチドは、ｌ−アミノ酸、ｄ−アミノ酸または両方を含むものであり、当該技術分野で既知のさまざまなアミノ酸修飾または類縁体のいずれかを含んでいてもよい。有用な修飾としては、例えば、末端のアセチル化、アミド化、脂質化、リン酸化、グリコシル化、アシル化、ファルネシル化、硫酸化などが挙げられる。
【００９２】
当業者には、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力に負の影響を及ぼすタンパク質またはペプチドはいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストであることが認識されよう。ＣＸＣＲ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性に負の影響を及ぼすタンパク質またはペプチドはいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。特定の実施形態において、被験体に投与される際、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらすタンパク質またはペプチドは、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。
【００９３】
一部の実施形態において、例示的なタンパク質および／またはペプチドのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしては、限定されないが、Ｔ−２０（Ｎａｉｃｋｅｒら，２００４，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，５：６６０；参照として本明細書に組み込まれる）、Ｔ−２２（Ｏｗｅｎら，２００２，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．，６８：１４７；参照として本明細書に組み込まれる）、Ｔ−１４０（Ｔａｍａｍｕｒａら，２００３，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，５５０：７９；ならびにＴａｍａｍｕｒａおよびＦｕｊｉｉ，２００４，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｏｒｄ．，４：１０３；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）、ＴＥ−１４０１１（Ｔａｋｅｎａｇａら，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３２０：２２６；参照として本明細書に組み込まれる）、ＴＣ１４０１２（ＦｕｊｉｉおよびＴａｍａｍｕｒａ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，２：１１９８；参照として本明細書に組み込まれる）、ＴＮ１４００３（Ｔａｍａｍｕｒａら，２００４，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，５６９：９９；およびＬｉａｎｇら，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６４：４３０２；参照として本明細書に組み込まれる）、ＣＴＣＥ−９９０８（Ｋｉｍ，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ  Ｌｕｎｇ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＸＣＲ４  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ＣＴＣＥ−９９０８，”  Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．９６ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，２００５年４月；参照として本明細書に組み込まれる）、ＦＣ１３１（Ｆｕｊｉｉら，２００３，Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，４２：３２５１；参照として本明細書に組み込まれる）、ＴＥ１４０１１およびシクロペンタペプチド（Ｖａｂｅｎｏら，２００６，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，６７：３４６；参照として本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【００９４】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、抗体および／またはその特徴的部分であり得る。当業者には、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力に影響を及ぼす抗体はいずれも、本発明に従って使用され得ることが認識されよう。ＣＸＣＲ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性に負の影響を及ぼす抗体はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。一部の実施形態において、被験体に投与される際、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらす抗体は、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。
【００９５】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４が互いに相互作用する能力を阻害する抗体である。例えば、特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４結合に関与している界面で結合し、それによりＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４が互いに相互作用する能力を阻害する抗体である。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４結合に関与している界面で結合するのではなく、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の異なる領域に結合してＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４が互いに相互作用する能力を阻害する抗体である。
【００９６】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４が二量体化する能力を阻害する抗体である。例えば、特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４に、ＣＸＣＲ４二量体化に関与している界面で結合し、それにより二量体化を阻害する抗体である。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４に、二量体化に関与している界面で結合するのではなく、ＣＸＣＲ４の異なる領域に結合して二量体化を阻害する抗体である。
【００９７】
用語「抗体」は、任意の免疫グロブリン（天然であれ、全部もしくは一部が合成により作製されたものであれ）、ならびにその誘導体およびその特徴的部分をいう。抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもよい。抗体は、任意の免疫グロブリンクラス、例えば、任意のヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥのメンバーであり得る。
【００９８】
本明細書で使用されるとき、抗体断片（すなわち、抗体の特徴的部分）は、完全長より短い抗体の任意の誘導体をいう。一般に、抗体断片は、完全長抗体の特異的結合能力の少なくとも有意な一部分を保持している。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ二重特異性抗体、およびＦｄ断片が挙げられる。
【００９９】
抗体断片は、任意の手段によって作製され得る。例えば、抗体断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的または化学的に作製され得る、および／または抗体の一部分の配列をコードする遺伝子から組換えにより産生され得る。あるいはまたさらに、抗体断片は、全部または一部が合成により作製され得る。抗体断片は、任意選択で、単鎖抗体断片を含み得る。あるいはまたさらに、抗体断片は、例えば、ジスルフィド結合によって互いに連結された多様な鎖を含み得る。抗体断片は、任意選択で、多分子複合体を含み得る。機能性抗体断片は、典型的には、少なくとも約５０個のアミノ酸を含み、より典型的には少なくとも約２００個のアミノ酸を含む。
【０１００】
一部の実施形態において、抗体には、キメラ（例えば、「ヒト化」）および単鎖（組換え）抗体が包含され得る。一部の実施形態において、抗体は、エフェクター機能が低下したもの、および／または二重特異性分子を有し得る。一部の実施形態において、抗体には、Ｆａｂ発現ライブラリーで作製した断片が包含され得る。
【０１０１】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、ポリペプチドリンカーによって互いに共有結合で連結された可変軽鎖（ＶＬ）と可変重鎖（ＶＨ）のみからなる組換え抗体断片である。ＶＬまたはＶＨのいずれかにＮＨ２−末端ドメインが含まれ得る。ポリペプチドリンカーは、有意な立体障害なく該２つの可変ドメインが橋絡される限り、種々の長さおよび組成であり得る。典型的には、リンカーは、主としてグリシン残基とセリン残基の鎖で構成され、可溶性のためのグルタミン酸残基またはリシン残基がいくつか散在している。
【０１０２】
二重特異性抗体は二量体のｓｃＦｖである。二重特異性抗体は、典型的には、大部分のｓｃＦｖよりも短いペプチドリンカーを有し、多くの場合、二量体として会合する優先性を示す。
【０１０３】
Ｆｖ断片は、非共有結合性相互作用によって互いに保持された１つのＶＨと１つのＶＬドメインからなる抗体断片である。用語「ｄｓＦｖ」は、本明細書で使用されるとき、ＶＨ−ＶＬペアを安定化させるための作成された分子間ジスルフィド結合を有するＦｖをいう。
【０１０４】
Ｆ（ａｂ’）２断片は、本質的に、ｐＨ４．０〜４．５での酵素ペプシンによる消化によって免疫グロブリンから得られるものに相当する抗体断片である。該断片は、組換えにより産生させたものであってもよい。
【０１０５】
Ｆａｂ’断片は、本質的に、Ｆ（ａｂ’）２断片内の２つの重鎖片を連接しているジスルフィド結合の還元によって得られるものに相当する抗体断片である。Ｆａｂ’断片は、組換えにより産生させたものであってもよい。
【０１０６】
Ｆａｂ断片は、本質的に、酵素（例えば、パパイン）での免疫グロブリンの消化によって得られるものに相当する抗体断片である。Ｆａｂ断片は、組換えにより産生させたものであってもよい。Ｆａｂ断片の重鎖セグメントはＦｄ片である。
【０１０７】
核酸のＣＸＣＲ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、核酸（例えば、ＲＮＡｉ誘導剤、リボザイム、ｔＲＮＡ、アプタマーなど）であり得る。ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力に負の影響を及ぼす核酸はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。ＣＸＣＲ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性に負の影響を及ぼす核酸はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。特定の実施形態において、被験体に投与される際、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらす核酸は、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。
【０１０８】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、真核生物細胞内に少なくとも一部分が二本鎖であるＲＮＡ分子が存在すると、遺伝子発現の配列特異的阻害がもたらされるという進化的に保存されたプロセスである。ＲＮＡｉは、最初に、長鎖のｄｓＲＮＡ（典型的には、数百個のヌクレオチド）を細胞内に導入すると、該ｄｓＲＮＡの一方の鎖に相補領域を含むｍＲＮＡの分解がもたらされる現象として報告された（米国特許第６，５０６，５５９号；およびＦｉｒｅら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ，３９１：８０６；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。その後のショウジョウバエでの研究により、長鎖のｄｓＲＮＡは、ダイサー（Ｄｉｃｅｒ）と称される細胞内ＲＮアーゼＩＩＩ様酵素によって、２つのほぼ２１ヌクレオチド（ｎｔ）の鎖で構成（各末端に２ｎｔの３’突出端と５’−リン酸基および３’−ヒドロキシル基を有する１９塩基対の二本鎖で構成）された小分子ｄｓＲＮＡにプロセッシングされることが示された（例えば、国際公開第０１／７５１６４号；米国特許出願公開公報第２００２／００８６３５６号および同第２００３／０１０８９２３号；Ｚａｍｏｒｅら，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：２５；ならびにＥｌｂａｓｈｉｒら，２００１，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１５：１８８を参照のこと；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。
【０１０９】
このような構造を有する短鎖ｄｓＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと称され、２つの鎖の一方に実質的に相補領域を含む遺伝子の発現をサイレンシングする。この鎖は、「アンチセンス」または「ガイド」鎖と称され、他方の鎖は、多くの場合、「センス」鎖と称される。ｓｉＲＮＡは、Ａｒｇｏｎａｕｔｅタンパク質ファミリーのメンバーを含み、ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と称されるリボ核タンパク質複合体に組み込まれる。ｓｉＲＮＡとＲＩＳＣとの会合後、ヘリカーゼ活性によって二本鎖が巻戻され、交互の二本鎖からのガイド鎖と、このガイド鎖実質的に相補的な一部分を含む標的ｍＲＮＡの形成が可能となる。ＲＩＳＣ内に存在するＡｒｇｏｎａｕｔｅタンパク質と関連するエンドヌクレアーゼ活性は、標的ｍＲＮＡの「スライシング（ｓｌｉｃｉｎｇ）」を担い、次いで、細胞内機構によってさらに分解される。
【０１１０】
ＲＮＡｉの実用的適用に向かって相当進歩しており、哺乳動物細胞内へのｓｉＲＮＡの外因性導入によって、上記の機構により、配列特異的様式で標的遺伝子の発現が有効に低減され得ることが見い出された。典型的なｓｉＲＮＡの構造は、ガイド鎖とアンチセンス鎖で構成された１９ヌクレオチドの二本鎖部分を含む。各鎖は、２ｎｔの３’突出端を有する。典型的には、ｓｉＲＮＡのガイド鎖は、少なくとも１７〜１９個の連続するヌクレオチドにおいて、その標的遺伝子およびｍＲＮＡ転写物に完全に相補的であり、典型的には、ｓｉＲＮＡの２つの鎖は、その二本鎖部分において互いに完璧に相補的である。しかしながら、当業者には認識されるように、完璧な相補性は必要ではない。それどころか、多くの場合、ガイド鎖と標的ｍＲＮＡによって形成された二本鎖内には、１つ以上のミスマッチが特に一定の位置において、サイレンシング活性が有用なレベル未満に低下することなく許容される。例えば、標的ｍＲＮＡとガイド鎖（突出端は無視）間において、１、２、３個またはそれ以上のミスマッチが存在し得る。したがって、本明細書で使用されるとき、２つの核酸部分（ガイド鎖（突出端は無視）と、「実質的に相補的な」標的ｍＲＮＡ部分など）は完全に相補的であってもよく（すなわち、これらは互いにハイブリダイズして、各ヌクレオチドが相補塩基対のメンバーである二本鎖を形成する）、度合は低いがハイブリダイゼーションが起こるのには充分である相補性を有するものであってもよい。当業者には、ｓｉＲＮＡ二本鎖の２つの鎖が完全に相補的である必要はないことが認識されよう。典型的には、有効なｓｉＲＮＡのガイド鎖のヌクレオチドの少なくとも８０％、少なくとも９０％またはそれ以上が、少なくとも約１９個の連続するヌクレオチドにおいて標的ｍＲＮＡに相補的である。サイレンシングの有効性に対するミスマッチの効果およびミスマッチが最も容易に許容され得る位置が活発な研究領域である（例えば、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら，２００４，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２２：３２６を参照のこと；参照として本明細書に組み込まれる）。
【０１１１】
構造および標的遺伝子に対する相補性度合が適切な分子が、ある範囲の種々のサイレンシング効率を示すことは認識されよう。有効なｓｉＲＮＡ配列の選択を補助するために、さまざまなさらなる設計基準が開発されている。選択した標的遺伝子のサイレンシングに特に有効であると予測されるｓｉＲＮＡ配列を選択するために使用され得る数多くのソフトウェアプログラムが利用可能である（例えば、Ｙｕａｎら，２００４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，３２：Ｗ１３０；およびＳａｎｔｏｙｏら，２００５，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２１：１３７６；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。
【０１１２】
当業者には認識されるように、ＲＮＡｉは、１つ以上の点が上記のものと異なるさまざまな構造を有するＲＮＡ分子によって有効に媒介されことがあり得る。例えば、二本鎖の長さが異なっていてもよく（例えば、約１７〜２９ヌクレオチド）；突出端は存在している必要はなく、存在している場合、その長さおよび突出端のヌクレオチドの同一性は異なっていてもよい（しかし、最も一般的には、対称的なｄＴｄＴ突出端が合成ｓｉＲＮＡにおいて使用される）。
【０１１３】
低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）と称されるさらなる構造体は、ＲＮＡ干渉の媒介能を有する。ｓｈＲＮＡは、互いにハイブリダイズして二本鎖「幹部」を形成する２つの相補領域を含み、この２つの相補領域が単鎖ループによって連結されている単鎖のＲＮＡである。ｓｈＲＮＡは、ダイサーによって細胞内でプロセッシングされ、ガイド鎖とアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡ構造が形成される。ｓｈＲＮＡは、細胞に外因的に送達することができるが、より典型的には、ｓｈＲＮＡの転写のための鋳型に作動可能に連結されたプロモーターを含むプラスミドまたはベクターを細胞内に導入し、例えば、安定な細胞株またはトランスジェニック生物体を作成することにより、ｓｈＲＮＡの細胞内合成を行なわせる。
【０１１４】
標的ｍＲＮＡの配列選択的切断は、現在、最も広く使用されている細胞へのＲＮＡｉ誘導物質の外因性送達によって遺伝子サイレンシングを行なう手段であるが、低分子ＲＮＡ物質によって媒介される配列特異的サイレンシングのさらなる機構も知られている。例えば、ＲＮＡｉ誘導物質によって媒介される転写後遺伝子サイレンシングは、翻訳の抑制を含む機構によって行なわれ得る。内因的に発現される特定のＲＮＡ分子は、不完全な二本鎖部分を含み、この二本鎖が１つ以上のミスマッチおよび／または突出部によって分断されたヘアピン構造を形成する。このようなヘアピン構造は、細胞内プロセッシングを受け、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）として知られているといわれる単鎖ＲＮＡ種が生成し、これが、完璧ではない相補性で標的転写物にハイブリダイズし、翻訳の抑制を媒介する。ｍｉＲＮＡ前駆体の構造を模倣するように設計されたｓｉＲＮＡ様分子は、哺乳動物細胞に投与すると、標的遺伝子の翻訳の抑制をもたらすことが示されている。
【０１１５】
したがって、ＲＮＡｉ誘導物質が遺伝子発現を阻害する厳密な機構は、少なくとも一部において、ＲＮＡｉ誘導物質の二本鎖部分の構造、および／またはＲＮＡｉ誘導物質の一方の鎖と標的転写物で形成されるハイブリッドの構造に依存するようである。ＲＮＡｉの機構ならびにＲＮＡｉを媒介することが知られている種々のＲＮＡ分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびその前駆体）の構造は、広く概説されている（例えば、Ｄｙｋｘｈｈｏｒｎら，２００３，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，４：４５７；Ｈａｎｎｏｎら，２００４，Ｎａｔｕｒｅ，４３１：３７６１；およびＭｅｉｓｔｅｒら，２００４，Ｎａｔｕｒｅ，４３１：３４３を参照のこと；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。今後の開発により、ＲＮＡｉが行なわれ得るさらなる機構が明らかになること、およびさらなる有効な低分子ＲＮＡｉ誘導物質が明らかになることが期待される。現在わかっているか、今後見い出されるＲＮＡｉ誘導物質はいずれも、本発明の範囲に含まれる。
【０１１６】
本発明による方法に従って送達される、および／または本発明による組成物中に存在させるＲＮＡｉ誘導物質は、任意の真核生物遺伝子がサイレンシングされるように設計され得る。該遺伝子は、哺乳動物遺伝子、例えばヒト遺伝子であり得る。該遺伝子は、野生型遺伝子、変異型遺伝子、多型井遺伝子の対立遺伝子などであってもよい。特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２を標的化するＲＮＡｉ誘導物質である。以下の配列を使用し、本明細書に記載の指針に従って、ＣＸＣＬ１２を標的化するＲＮＡｉ誘導物質が設計され得る。
【０１１７】
ホモ・サピエンスＣＸＣＬ１２、転写物バリアント２、ｍＲＮＡ（ＧＩ  ７６５６３９３４）：
【０１１８】
【化１】
2010538275.tif 000006
【０１１９】
【化２】
2010538275.tif 000007
【０１２０】
【化３】
2010538275.tif 000008
ホモ・サピエンスＣＸＣＬ１２、転写物バリアント３、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ７６５６３９３２）：
【０１２１】
【化４】
2010538275.tif 000009
ホモ・サピエンスＣＸＣＬ１２、転写物バリアント１、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ７６５６３９３１）：
【０１２２】
【化５】
2010538275.tif 000010
【０１２３】
【化６】
2010538275.tif 000011
特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＲ４を標的化するＲＮＡｉ誘導物質である。以下の配列は、本明細書に記載の指針に従って、ＣＸＣＲ４を標的化するＲＮＡｉ誘導物質を設計するために使用され得る。
【０１２４】
ホモ・サピエンスＣＸＣＲ４、転写物バリアント２、ｍＲＮＡ（ＧＩ  ５６７９０９２８）：
【０１２５】
【化７】
2010538275.tif 000012
【０１２６】
【化８】
2010538275.tif 000013
ホモ・サピエンスＣＸＣＲ４、転写物バリアント１、ｍＲＮＡ（ＧＩ  ５６７９０９２６）：
【０１２７】
【化９】
2010538275.tif 000014
【０１２８】
【化１０】
2010538275.tif 000015
特定の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４を上方制御することが示された１つ以上の遺伝子を標的化するＲＮＡｉ誘導物質（例えば、ＨＩＦ−１α、ＨＩＦ−２α、Ｅｔｓ１、およびＮＦ−κＢ）である。例えば、Ｃｅｒａｄｉｎｉら，２００４，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１０：８５８；Ｌｉｕら，２００６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，５：１３２０；Ｍａｒｏｎｉら，２００７，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２８：２６７；およびＨｅｌｂｉｇら，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：２１６３１（これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０１２９】
以下の配列は、本明細書に記載の指針に従って、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４を上方制御することが示された遺伝子を標的化するＲＮＡｉ誘導物質を設計するために使用され得る。
【０１３０】
ホモ・サピエンス低酸素誘導性因子１、αサブユニット（ＨＩＦ１Ａ）、転写物バリアント１、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ３１０７７２１２）：
【０１３１】
【化１１】
2010538275.tif 000016
【０１３２】
【化１２】
2010538275.tif 000017
【０１３３】
【化１３】
2010538275.tif 000018
【０１３４】
【化１４】
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ホモ・サピエンス低酸素誘導性因子１、αサブユニット（ＨＩＦ１Ａ）、転写物バリアント２、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ３１０７７２１０）：
【０１３５】
【化１５】
2010538275.tif 000020
【０１３６】
【化１６】
2010538275.tif 000021
【０１３７】
【化１７】
2010538275.tif 000022
ホモ・サピエンス内皮ＰＡＳドメインタンパク質１（ＥＰＡＳ１）、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ４１３２７１５４）：
【０１３８】
【化１８】
2010538275.tif 000023
【０１３９】
【化１９】
2010538275.tif 000024
【０１４０】
【化２０】
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ホモ・サピエンスｖ−ｅｔｓ赤芽球症ウイルスＥ２６癌遺伝子ホモログ１（トリ）（ＥＴＳ１）、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ４１３９３５８０）：
【０１４１】
【化２１】
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【０１４２】
【化２２】
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【０１４３】
【化２３】
2010538275.tif 000028
Ｂ細胞１のκ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーのホモ・サピエンス核因子（ｐ１０５）（ＮＦ−κＢ１）、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ３４５７７１２１）：
【０１４４】
【化２４】
2010538275.tif 000029
【０１４５】
【化２５】
2010538275.tif 000030
【０１４６】
【化２６】
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【０１４７】
【化２７】
2010538275.tif 000032
Ｂ−細胞２のκ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーのホモ・サピエンス核因子（ｐ４９／ｐ１００）（ＮＦ−κＢ２）、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  １９９２３２２２）：
【０１４８】
【化２８】
2010538275.tif 000033
【０１４９】
【化２９】
2010538275.tif 000034
Ｂ−細胞２のκ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーエンハンサーのホモ・サピエンス核因子（ｐ４９／ｐ１００）（ＮＦ−κＢ２）、転写物バリアント２、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  １１７３２０５２６）：
【０１５０】
【化３０】
2010538275.tif 000035
【０１５１】
【化３１】
2010538275.tif 000036
【０１５２】
【化３２】
2010538275.tif 000037
ホモ・サピエンスｖ−ｒｅｌ細網内皮症ウイルス癌遺伝子ホモログＡ、Ｂ−細胞３のκ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーエンハンサーの核因子、ｐ６５（トリ）（ＲＥＬＡ）、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ４６４３０４９８）：
【０１５３】
【化３３】
2010538275.tif 000038
【０１５４】
【化３４】
2010538275.tif 000039
ホモ・サピエンスｖ−ｒｅｌ細網内皮症ウイルス癌遺伝子ホモログＢ、Ｂ−細胞３のκ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーエンハンサーの核因子（トリ）（ＲＥＬＢ）、ｍＲＮＡ、（ＧＩ  ３５４９３８７７）：
【０１５５】
【化３５】
2010538275.tif 000040
【０１５６】
【化３６】
2010538275.tif 000041
一部の実施形態において、リボザイムがＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストであり得る。標的ｍＲＮＡ転写物を触媒作用により切断するように設計された（ｉｓ  ｄｅｓｉｇｎｅｄ）リボザイムを使用し、標的ｍＲＮＡの翻訳および／または標的の発現が抑制され得る（例えば、国際公開第９０／１１３６４号；およびＳａｒｖｅｒら，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１２２２を参照のこと；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。本明細書に記載の任意のＲＮＡｉ誘導物質標的が、本発明によるリボザイム標的として使用され得る。
【０１５７】
一部の実施形態において、内因性標的遺伝子の発現は、標的遺伝子の調節領域（すなわち、標的遺伝子のプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なデオキシリボヌクレオチド配列を標的化し、三重らせん構造（これが、標的遺伝子の転写を妨げる）を形成させることにより低減させ得る（一般的に、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．６：５６９；Ｈｅｌｅｎｅら，１９９２，Ａｎｎ，Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７；およびＭａｈｅｒ，１９９２，Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４：８０７を参照のこと；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。本明細書に記載の任意のＲＮＡｉ誘導物質標的が、本発明による三重らせん構造の形成の標的として使用され得る。
【０１５８】
本発明による核酸のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、ＲＮＡｉ誘導剤、リボザイム、三重らせん誘導剤など、さらに詳細に後述）は、任意の利用可能な手法であって、限定はされないが、化学合成、酵素的合成、長鎖前駆体の酵素的または化学的切断などに従って調製され得る。ＲＮＡの合成方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（編）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  ［Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ］，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８４；およびＨｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．（編）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖ．２８８  （Ｃｌｉｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００５を参照のこと）。
【０１５９】
核酸ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを構成する核酸は、天然に存在するヌクレオシド、修飾ヌクレオシド、１つ以上のヌクレオシド間に炭化水素リンカー（例えば、アルキレン）もしくはポリエーテルリンカー（例えば、ＰＥＧリンカー）が挿入された天然に存在するヌクレオシド、１つ以上のヌクレオシド間に挿入された炭化水素もしくはＰＥＧリンカーを有する修飾ヌクレオシド、またはその組合せを含み得る。一部の実施形態において、核酸ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストのヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドは、炭化水素リンカーまたはポリエーテルリンカーで置き換えてもよいが、核酸ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの結合親和性、選択性、および／または他の機能的特徴は、該置換によって実質的に低下しないものとする。
【０１６０】
当業者には、本発明による核酸が、完全に、天然に存在する核酸に見られる型のヌクレオチドを含み得ること、またはそうではなく、１つ以上のヌクレオチド類縁体を含むもの、あるいは天然に存在する核酸とは異なる構造を有するものであり得ることは認識されよう。米国特許第６，４０３，７７９号；同第６，３９９，７５４号；同第６，２２５，４６０号；同第６，１２７，５３３号；同第６，０３１，０８６号；同第６，００５，０８７号；同第５，９７７，０８９号；および本明細書中の参考文献には、幅広い特定のヌクレオチド類縁体および使用され得る修飾が開示されている。Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．（編）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  （第１版）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ；ＩＳＢＮ：０８２４７０５６６１；第１版（２００１）および本明細書中の参考文献を参照のこと。例えば、２’修飾としては、ハロ、アルコキシおよびアリルオキシ基が挙げられる。一部の実施形態において、２’−ＯＨ基は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ１、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＣＮ（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである）から選択される基で置き換えられる。修飾された結合の例としては、ホスホロチオエートおよび５’−Ｎ−ホスホロアミダイト結合が挙げられる。
【０１６１】
さまざまな異なるヌクレオチド類縁体、修飾された主鎖、または天然に存在しないヌクレオシド間結合を含む核酸が、本発明に従って使用され得る。本発明による核酸は、天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）または修飾ヌクレオシドを含み得る。修飾ヌクレオチドの例としては、塩基修飾ヌクレオシド（例えば、アラシチジン、イノシン、イソグアノシン、ネブラリン、プソイドウリジン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、２−チオチミジン、３−デアザ−５−アザシチジン、２’−デオキシウリジン、３−ニトロピロール（ｎｉｔｏｒｐｙｒｒｏｌｅ）、４−メチルインドール、４−チオウリジン、４−チオチミジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、２−チオウリジン、５−ブロモシチジン、５−ヨードウリジン、イノシン、６−アザウリジン、６−クロロプリン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−アザアデノシン、８−アジドアデノシン、ベンズイミダゾール、Ｍ１−メチルアデノシン、ピロロ−ピリミジン、２−アミノ−６−クロロプリン、３−メチルアデノシン、５−プロピニルシチジン、５−プロピニルウリジン、５−ブロモウリジン、５−フルオロウリジン、５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、および２−チオシチジン）、化学的または生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）、修飾された糖類（例えば、２’−フルオロリボース、２’−アミノリボース、２’−アジドリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、Ｌ−鏡像異性のヌクレオシドアラビノース、およびヘキソース）、修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’−Ｎ−ホスホロアミダイト結合）、ならびにその組合せが挙げられる。核酸の化学合成用の天然および修飾ヌクレオチド単量体は、容易に入手可能である。場合によっては、かかる修飾を含む核酸は、天然に存在するヌクレオチドのみからなる核酸と比べて改善された性質を示すことがある。一部の実施形態において、本明細書に記載の核酸修飾は、ヌクレアーゼ（例えば、エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼなど）による消化を低減および／または抑制するために利用される。例えば、消化を低減させるため、一方または両方の鎖の３’末端にヌクレオチド類縁体を含めることにより、核酸の構造を安定化させ得る。
【０１６２】
修飾核酸は、分子の全長さにわたって均一に修飾されている必要はない。異なるヌクレオチド修飾および／または主鎖構造が、核酸内の種々の位置に存在していてもよい。当業者には、ヌクレオチド類縁体または他の修飾体（１つもしくは複数）が、核酸内の任意の位置に、該核酸の機能が実質的に影響を受けないように存在し得ることが認識されよう。修飾される領域は、一方または両方の鎖の５'末端および／または３’末端であり得る。例えば、両方の鎖のいずれかの５’および／または３’末端のほぼ１〜ほぼ５つの残基がヌクレオチド類縁体である、および／または主鎖修飾を有する修飾核酸が使用されている。修飾は、５’または３’末端の修飾であり得る。一方または両方の核酸鎖が、少なくとも５０％の非修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の非修飾ヌクレオチド、少なくとも９０％の非修飾ヌクレオチド、または１００％の非修飾ヌクレオチドを含み得る。
【０１６３】
本発明による核酸は、例えば、糖部分、ヌクレオシドまたはヌクレオシド間結合に対して、米国特許出願公開第２００３／０１７５９５０号、同第２００４／０１９２６２６号、同第２００４／００９２４７０号、同第２００５／００２０５２５号、および同第２００５／００３２７３３号（これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）に記載のものなどの修飾を含み得る。本発明は、本明細書に記載の修飾の任意の１つ以上を有する任意の核酸の使用を包含する。例えば、いくつかの末端コンジュゲート、例えば、コレステロールなどの脂質、リトコール酸、アルル（ａｌｕｒｉｃ）酸または長鎖アルキル分枝鎖は、細胞内取込みを改善することが報告されている。類縁体および修飾は、例えば、当該技術分野で既知の任意の適切なアッセイを用いて試験され得る。一部の実施形態において、本発明による核酸は、１つ以上の非天然ヌクレオシド結合をみ得る。一部の実施形態において、核酸の３’末端、５’末端または３’と５’の両末端の１つ以上の内部ヌクレオチドが逆転し、３’−３’結合または５’−５’結合などの結合になっている。
【０１６４】
一部の実施形態において、本発明による核酸は合成ではなく、その天然環境から単離された天然に存在する物質である。
【０１６５】
糖質のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、糖質を含み得る。ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力に負の影響を及ぼす糖質はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。ＣＸＣＲ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性に負の影響を及ぼす糖質はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。特定の実施形態において、被験体に投与される際、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらす糖質は、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。
【０１６６】
一部の実施形態において、糖質は、当該技術分野で既知であるような、単純な糖類（またはその誘導体）がグリコシド結合によって連結されて構成された多糖であり得る。かかる糖類としては、限定されないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セロビオース（ｃｅｌｌｂｉｏｓｅ）、マンノース、キシロース、アラビノース、グルクロン（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）酸、ガラクツロン（ｇａｌａｃｔｏｒｏｎｉｃ）酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミン（ｇａｌａｔｏｓａｍｉｎｅ）、およびノイラミン（ｎｅｕｒａｍｉｃ）酸が挙げられる。一部の実施形態において、糖質は、プルラン、セルロース、微晶質セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシセルロース、メチルセルロース、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギーナン、グリコン、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ−カルボキシルメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、ヘパリン、コンニャク、グルコマンナン、プスツラン（ｐｕｓｔｕｌａｎ）、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードラン、およびキサンタンの１種類以上であり得る。
【０１６７】
一部の実施形態において、糖質は、アミノ化、カルボキシル化、および／または硫酸化され得る。一部の実施形態において、親水性多糖類は、多数の側鎖疎水性基を導入することにより、疎水性となるように修飾してもよい。一部の実施形態において、疎水性の糖質としては、酢酸セルロース、酢酸プルラン、酢酸コンニャク、酢酸アミロース、および酢酸デキストランが挙げられる。
【０１６８】
脂質のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、１つ以上の脂肪酸基またはその塩を含み得る。ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力に負の影響を及ぼす脂質はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。ＣＸＣＲ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性に負の影響を及ぼす脂質はいずれも、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。特定の実施形態において、被験体に投与される際、骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞とＴｒｅｇの動員をもたらす脂質は、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストである。
【０１６９】
一部の実施形態において、脂肪酸基は、消化性で長鎖の（例えば、Ｃ８〜Ｃ５０）、置換または非置換の炭化水素を含み得る。一部の実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１０〜Ｃ２０脂肪酸またはその塩であり得る。一部の実施形態において、脂肪酸基はＣ１５〜Ｃ２０脂肪酸またはその塩であり得る。一部の実施形態において、脂肪酸基はＣ１５〜Ｃ２５脂肪酸またはその塩であり得る。一部の実施形態において、脂肪酸基は不飽和であり得る。一部の実施形態において、脂肪酸基は単不飽和であり得る。一部の実施形態において、脂肪酸基は多価不飽和であり得る。一部の実施形態において、不飽和脂肪酸基の二重結合はシス型配座であり得る。一部の実施形態において、不飽和脂肪酸の二重結合はトランス型配座であり得る。
【０１７０】
一部の実施形態において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、またはリグノセリン酸の１つ以上であり得る。一部の実施形態において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、α−リノール酸、γ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、またはエルカ酸の１つ以上であり得る。
【０１７１】
新規なＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定
本発明は、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定方法を提供する。一部の実施形態において、本発明による方法は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）の症状を改善および／または治療する物質を同定することによる、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関するスクリーニングを含む。一部の実施形態において、本発明による方法は、Ｔ細胞および／または造血幹細胞の輸送を改変させる物質を同定することによる、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関するスクリーニングを含む。一部の実施形態において、本発明による方法は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４がその天然結合パートナーと相互作用する能力に影響を及ぼす物質の同定を含む。一部の実施形態において、本発明による方法は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の発現および／またはレベルを調節する物質の同定を含む。
【０１７２】
本明細書で使用されるとき、語句「試験物質」は、（１）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４をコードする核酸、および／またはそのホモログ、一部分、バリアント、変異型および／または誘導体；および／または（２）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナー、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の天然結合パートナーをコードする核酸、および／またはそのホモログ、一部分、バリアント、変異型および／または誘導体をいう。一部の実施形態において、試験物質は、ＣＸＣＲ４のＣＸＣＬ１２結合部分を含むタンパク質またはペプチドである。一部の実施形態において、試験物質は、ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４結合部分を含むタンパク質またはペプチドである。
【０１７３】
試験物質の有効性は、種々の濃度の試験物質を用いて得られたデータから用量応答曲線を作成することにより評価され得る。さらに、対照アッセイを行ない、比較のためのベースラインが得られる。対照アッセイでは、アッセイは、試験物質の非存在下で行なわれ得る。
【０１７４】
一部の実施形態において、本発明によるＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性を、試験物質がない以外は同一の条件下で観察される活性と比べて少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約３０％、約４０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％約９０％、約９５％、約９８％、約９９％、またはそれ以上阻害および／または活性化し得る。
【０１７５】
もちろん、本発明によるスクリーニング方法はすべて、有効な候補が見つからない可能性があるが、それ自体、有用であることは理解されよう。本発明は、かかる候補を見い出す方法だけでなく、そのスクリーニング方法を提供する。
【０１７６】
試験物質は、天然供給源（動物、細菌、真菌、植物など）から単離されたものであってもよい、および／または海洋試料を、潜在的に有用なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの存在についてアッセイしてもよい。スクリーニング対象の試験物質は、化学的組成物または人造物質に由来するもの、および／またはこれらから合成されたものであってもよいことは理解されよう。
【０１７７】
合理的薬物設計
本明細書で使用されるとき、用語「候補物質」は、潜在的に自己免疫障害（例えば、糖尿病）を阻害し得る、および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとして作用し得る任意の物質をいう。候補物質は、タンパク質、抗体、核酸、小分子、糖質、脂質、ウイルス、および／またはその特徴的部分であり得る。最も有用な候補物質が、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ４、その結合パートナー、その上流エフェクター、および／またはその下流エフェクターと構造的に関連している物質（すなわち、模倣物）であると判明する場合があり得る。改善された化合物の開発を補助するためのリード化合物の使用は、「合理的薬物設計」として知られており、既知アンタゴニストとの比較だけでなく、標的物質の構造に関する予測も含む。
【０１７８】
一部の実施形態において、合理的薬物設計は、既知の生物学的に活性な候補物質の構造的類縁体を予測および／または作製するために使用され得る。かかる類縁体を創出することにより、天然物質よりも活性および／または安定であり得る、改変に対して異なる感受性を有し得る、および／または種々の他の分子の機能に影響を及ぼし得る薬物を構築することが可能になる。アプローチの一例では、既知の候補物質および／またはその特徴的部分の３次元構造が得られる。一部の実施形態において、これは、ｘ線結晶学、コンピュータモデル設計、および／またはこれらのアプローチの組合せによって行なわれ得る。
【０１７９】
一部の実施形態において、候補物質アンタゴニストの構造を確認するのに抗体が使用される。原理的に、このアプローチによって、その後の薬物設計の基本物質となり得るファーマコア（ｐｈａｒｍａｃｏｒｅ）が得られる。機能性の薬理学的に活性な抗体に対する抗イディオタイプ抗体を作製することにより、タンパク質結晶学を完全に迂回することが可能である。鏡像の鏡像として、抗イディオタイプの結合部位は、元の抗原の類縁体となることが予測され得る。次いで、抗イディオタイプを使用し、化学的および／または生物学的に作製されたペプチドバンクからペプチドが同定および／または単離され得る。選択されたペプチドは、次いでファーマコアとして供され得る。抗イディオタイプは、抗原として抗体を使用し、抗体を作製するための本明細書に記載の方法を用いて作製され得る。
【０１８０】
最初に同定されたＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに加え、本発明者らは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの構造の重要な一部分を模倣する他の立体的に類似した物質が製剤化され得ることを想定している。かかる物質（ペプチドモジュレータのペプチド模倣物が挙げられる）は、最初に同定されたＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストと同様にして使用され得る。
【０１８１】
ライブラリー
一部の実施形態において、候補物質のライブラリーが、本明細書に記載の方法、システム、および／または組成物に使用され得る。語句「候補物質のライブラリー」は、本明細書で使用されるとき、無作為および／または体系的に選択されたサブユニットおよび／またはメンバーからなる多様な種の物質の集合体をいう。候補物質のライブラリーのスクリーニングは、多数の関連する（および未関連の）化合物を、活性に関してスクリーニングするための迅速および／または効率的な方法である。コンビナトリアルアプローチは、活性である以外は望ましくない物質をモデル設計した第２世代、第３世代、および／または第４世代の物質の創出によって、潜在的薬物の迅速な進化に有用である。
【０１８２】
特定の実施形態において、コンビナトリアルライブラリー（「コンビナトリアル化学物質ライブラリー」としても知られている）、小分子ライブラリー、ペプチドおよび／またはペプチド模倣物、規定された化学物質、オリゴヌクレオチド、および／または天然産物ライブラリーが、活性に関してスクリーニングされる。一部の実施形態において、候補物質のライブラリーは、合成コンビナトリアルライブラリー（例えば、化学物質コンビナトリアルライブラリー）、細胞抽出物、体液（例えば、尿、血液、涙、汗、および／または唾液）、あるいは合成および／または天然物質の他の混合物（例えば、小分子および／または醗酵混合物のライブラリー）を含み得る。
【０１８３】
一部の実施形態において、候補物質のライブラリーは、例えば、タンパク質（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、および／またはアミノ酸）、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、アンチセンス核酸、リボザイム、および／またはペプチド核酸）、アプタマー、糖質（例えば、単糖および／または多糖）、小分子（例えば、有機小分子）および／またはその特徴的部分を含み得る。ライブラリーの各メンバーは単独であり得る、および／または混合物（例えば、「圧縮型（ｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄ）ライブラリー」）の一部であり得る。ライブラリーは、精製された化合物を含むものであってもよい、および／または「汚染された」（すなわち、相当な量の不純物を含む）ものであってもよい。
【０１８４】
一部の実施形態において、候補物質は、例えば、反応毎の物質の型のバッチで、最初のスクリーニングに使用され得る。続いて、アッセイ対象の活性の増強および／または低下を示すバッチの物質が、個々に試験され得る。
【０１８５】
一部の実施形態において、ライブラリーは、種々の市販の供給源から、有用な物質を「総当り」で同定する取り組みによって得られる。一部の実施形態において、市販のライブラリーは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，ＡｒＱｕｌｅ，Ｎｅｏｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｒｃｏ，Ｃｉｄｄｃｏ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ，Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｐａｎｌａｂｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｓｉｇｍａ，および／またはＴｒｉｐｏｓｅから入手される。コンビナトリアルライブラリー、特に、その構築および／または使用の包括的概説は、Ｄｏｌｌｅら（１９９９，Ｊ．ｏｆ  Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．１：２３５；参照として本明細書に組み込まれる）に示されている。コンビナトリアルペプチドライブラリープロトコル（Ｃａｂｉｌｌｙ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９８；参照として本明細書に組み込まれる）についても参照されたい。
【０１８６】
コンビナトリアルライブラリー、その作製および／または使用が記載されたさらなる参考文献としては、ＵＲＬ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｅｔｓｃｉ．ｏｒｇ／Ｓｃｉｅｎｃｅ／Ｃｏｍｂｉｃｈｅｍ／から入手可能なもの、例えば、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｒ．Ｐａｖｉａ，Ｓｐｈｉｎｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ａ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ（１９９５年７月出版）；Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ−ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｄｉｓｃｕｓｓｅｓ  ｒｏｌｅ  ｉｔｓ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｐｌａｙｓ  ｉｎ  ｍａｎａｇｉｎｇ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ（１９９５年７月出版）；Ｓｏｌｉｄ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｌｅａｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ＳＡＲ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ，Ａｄｎａｎ  Ｍ．Ｍ．ＭｊａｌｌｉおよびＢａｒｒｙ  Ｅ．Ｔｏｙｏｎａｇａ，Ｏｎｔｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（１９９５年７月出版）；Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｉｃ  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  Ｆｒｏｍ  ａ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｌｉｂｒａｒｙ．Ｓａｒｖａｊｉｔ  Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ，Ｂａｂｕ  Ｊ．Ｍａｖｕｎｋｅｌ，Ｒｏｂｉｎ  Ａｎｄｙ，Ｄｏｎａｌｄ  Ｊ．Ｋｙｌｅ＊，Ｓｃｉｏｓ  Ｎｏｖａ  Ｉｎｃ．（１９９５年７月出版）；Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｕｓｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ  Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｋｅｉｔｈ  Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｖｅ  Ｂｒｉａｎｔ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌｔｄ．（１９９５年７月出版）；Ａ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ−Ｃｒａｉｇ  Ｊａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｗｅｉｎｉｎｇｅｒ，Ｄａｙｌｉｇｈｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（１９９５年７月出版）；Ａｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｅｉｔｈ  Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ  Ｗｈｉｔｅ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌｔｄ．（１９９５年７月出版）；Ｎｏｖｅｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｒ．Ｓ．Ｐｅａｒｌｍａｎ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｆｏｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ，Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ（１９９６年６月／７月出版）；Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ  Ａｆｆｏｒｄｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ：Ａｎ  Ｏｐｉｎｉｏｎ，Ｙｖｏｎ��ｅ  Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（１９９６年６月／７月出版）；Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ：Ａ  Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，Ａｒｎｏ  Ｆ．Ｓｐａｔｏｌａ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ（１９９６年６月／７月出版）；Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ：Ｐｒｅｓｅｎｔ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ．Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｒ．Ｐａｖｉａ，Ｓｐｈｉｎｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ａ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ（１９９６年６月／７月出版）；Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｔｏ  Ｔｈｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｊ．Ｓｏｆｉａ，Ｔｒａｎｓｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．（１９９６年６月／７月出版）；Ｄａｔａ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｍａｒｙｊｏ  Ｚａｂｏｒｏｗｓｋｉ，Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｈｅｉｌａ  Ｈ．ＤｅＷｉｔｔ，Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ  （１９９５年１１月出版）；および／またはＴｈｅ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｎ  Ｒ＆Ｄ  ｉｎ  Ｂｉｏ−Ｂａｓｅｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｐ．Ｄｅｖｌｉｎ  （１９９６年３月出版）が挙げられる。
【０１８７】
大型ライブラリーの所望のメンバーを単離するための選択プロトコルは、当該技術分野で既知であり、ファージディスプレイ手法が典型である。かかる系は、多様なペプチド配列を糸状バクテリオファージの表面上にディスプレイさせるものであり、標的抗原に結合する特異的抗体断片のインビトロ選択および／または増幅のための抗体断片（およびそれをコードするヌクレオチド配列）のライブラリーを創出するのに有用であることが示されている。
【０１８８】
特定の実施形態において、択一的なライブラリー選択手法としては、上記のようにして、バクテリオファージプラークおよび／または溶原菌のコロニーとして直接スクリーニングされ得るバクテリオファージλ発現系（Ｈｕｓｅら，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５；Ｃａｔｏｎら，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８７；Ｍｕｌｌｉｎａｘら，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８７：８０９５；およびＰｅｒｓｓｏｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８８：２４３２；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）が挙げられ、有用である。このような発現系を用いて、ほぼ約１０６以上の規模のライブラリーの多数の異なるメンバーがスクリーニングされ得る。
【０１８９】
一部の実施形態において、系のスクリーニングは、例えば、ライブラリーメンバーの直接化学合成に依存する。方法の一例は、一組のピンおよび／またはロッド上でのペプチドの合成を含む（国際公開第８４／０３５６４号（参照として本明細書に組み込まれる）に記載のものなど）。ペプチドライブラリーを構成するビーズ上でのペプチド合成（この場合、ビーズが個々のライブラリーメンバーとなる）を含む類似した方法が、米国特許第４，６３１，２１１号に記載されており、関連する方法が、国際公開第９２／０００９１号に記載されている（これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。ビーズ系の方法の有意な改善は、各ライブラリーメンバーのアミノ酸配列の同定が容易になるように、新奇の識別体タグ（オリゴヌクレオチドなど）での各ビーズのタグ化を含む。このような改善されたビーズ系の方法は、国際公開第９３／０６１２１号（参照として本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１９０】
別の化学合成方法は、異なる各ライブラリーメンバー（例えば、新奇のペプチド配列）を、アレイ内の所定の異なる位置に配置する様式での、表面上でのペプチド（またはペプチド模倣物）のアレイの合成を含む。各ライブラリーメンバーの実体は、そのアレイ内の空間的位置によって決定される。所定の分子（例えば、受容体）と反応性のライブラリーメンバーとの結合相互作用が起こったアレイ内の位置が決定され、それにより、反応性のライブラリーメンバーの配列が空間的位置に基づいて同定される。このような方法は、米国特許第５，１４３，８５４号；国際公開第９０／１５０７０号および同９２／１００９２号；Ｆｏｄｏｒら，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７６７；ならびにＤｏｗｅｒら，１９９１，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６：２７１（これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１９１】
ポリペプチドまたはヌクレオチドのライブラリーを作製するための他のシステムは、ライブラリーメンバーのインビトロ合成のための無細胞の酵素的機構の使用を含む。一例の方法において、ＲＮＡ分子は、標的リガンドに対する選択とＰＣＲ増幅を交互に繰り返すことによって選択される（Ｔｕｅｒｋら，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：５０５；およびＥｌｌｉｎｇｔｏｎら，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。同様の手法を用いて、所定のヒト転写因子に結合するＤＮＡ配列が同定され得る（Ｔｈｉｅｓｅｎら，１９９０，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：３２０３；Ｂｅａｕｄｒｙら，１９９２  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：６３５；ならびに国際公開第９２／０５２５８号および同９２／１４８４３号；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。同様にして、インビトロ翻訳が、大型ライブラリーを作製するための方法として、ポリペプチドの合成に使用され得る。このような方法は、一般的に、安定化させたポリソーム複合体を含み、国際公開第８８／０８４５３号、同９０／０５７８５号、同９０／０７００３号、同９１／０２０７６号、同９１／０５０５８号、および同９２／０２５３６号（これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。ファージ系ではない択一的なディスプレイ系（国際公開第９５／２２６２５号および同９５／１１９２２号（これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）に開示されたものなど）は、選択のためのポリペプチドのディスプレイにポリソームを使用する。
【０１９２】
使用されているコンビナトリアルアプローチの一例は、固相支持体の各粒子（例えば、ビーズ）上に異なる構造体を含むライブラリーの合成、ライブラリーを可溶性候補物質との相互作用、候補物質と相互作用する支持体構造体（例えば、ビーズ）の特定、および特定された支持体構造体が有する構造の決定を含むストラテジーに基づく（Ｌａｍら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２；参照として本明細書に組み込まれる）。択一的またはさらなるアプローチは、支持体構造体からの候補物質の規定アリコートの逐次放出であり、続いて、溶液中で活性が測定され、候補物質が放出された支持体構造体が特定され、その構造の解明が、直接配列決定によって（Ｓａｌｍｏｎら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１１７０８；参照として本明細書に組み込まれる）、および／またはコードの読取りによって（Ｋｅｒｒら，１９９３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：２５２９；Ｎｉｋｏｌａｉｅｖら，１９９３，Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．６：１６１；およびＯｈｌｍｅｙｅｒら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１０９２２；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）行なわれる。
【０１９３】
一部の実施形態において、可溶性ランダムコンビナトリアルライブラリーは、Ｆｕｒｋａらによって最初に報告されたペプチドの等モル量混合物を得るための単純な原理を用いて合成され得る（１９８８，Ｘｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ブダペスト；１９８８，１４ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，プラハ；および１９９１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３７：４８７−４９３；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。反復スクリーニングのための可溶性ライブラリーの構築が報告されている（Ｈｏｕｇｈｔｅｎら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８４；参照として本明細書に組み込まれる）。Ｌａｍらにより、不溶性ランダムコンビナトリアルライブラリーを使用する新規で予想外に強力な手法が開示された。Ｌａｍは、固相支持体上で、各支持体が均一な分子構造の試験化合物を有するようにランダムコンビナトリアルライブラリーを合成し、事前に試験化合物を支持体から取り出さずに、固相結合プロトコルによってライブラリーのスクリーニングを行なった（Ｌａｍら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２；参照として本明細書に組み込まれる）。
【０１９４】
一部の実施形態において、「多様性ファイル（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｆｉｌｅ）」と称される空間的ライブラリーを使用し、新規な方法の特異性、信頼性および／または再現性が評価され得る。多様性ファイルには、アッセイにおいて非特異的検出がもたらされる可能性がある多くのクラスの化合物の代表的な多数の化合物（例えば、１０００個以上の小分子）が含まれている。多様性ファイル市販のものである、および／または市販の個々の物質から構築することができる。
【０１９５】
本発明は、候補物質のライブラリーのスクリーニングを提供する。かかるライブラリーは、本明細書において定義した試験物質に曝露され得、以下に詳細に記載し、実施される関連アッセイに曝露され得る。かかるライブラリーは、以下に詳細に記載した任意のインビトロ、インサイト、および／またはインビボアッセイに使用され得る。
【０１９６】
スクリーニング
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関するスクリーニングが使用される。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関するハイスループットスクリーニングが使用される。一部の実施形態において、かかるスクリーニングにより、本明細書に記載の試験物質に結合する物質が同定される。多数の候補物質を固相基材上に固定化する。候補物質を試験物質と接触させ、洗浄する。次いで、結合された試験物質を、当該技術分野で周知の方法によって検出する。
【０１９７】
本発明によるハイスループットアッセイでは、１日で数千個に至る候補物質をスクリーニングすることが可能である。マイクロタイタープレートの各ウェルを、選択した候補物質に対する個々のアッセイの実施に使用してもよく、あるいは、濃度および／またはインキュベーション時間の効果を観察する場合は、５〜１０個のウェルで１つの候補物質を試験してもよい。したがって、１つの標準的なマイクロタイタープレートでは、９６個のモジュレータをアッセイすることができる。１５３６ウェルプレートを使用した場合、１つのプレートで、約１００〜約１５００種類の異なる候補物質を容易にアッセイすることができる。１日につき多くのプレートでアッセイすることが可能である。本発明による集積型システムにより、約６，０００、２０，０００、５０，０００、または１００，０００種を超える異なる候補物質のアッセイスクリーニングが可能となる。
【０１９８】
固相反応では、対象の物質を固相成分に、直接、あるいは共有結合および／または非共有結合によって、例えば、タグによって間接的に結合させるのがよい。タグは、任意のさまざまな成分を含み得る。一般に、タグに結合する物質（タグ結合体）を固相支持体に固定すると、対象のタグ化分子が固相支持体に、タグおよび／またはタグ結合体の相互作用によって結合する。
【０１９９】
多くのタグおよび／またはタグ結合体が、文献に充分に記載された既知の分子相互作用に基づいて使用され得る。例えば、タグが天然結合体（例えば、ビオチン、プロテインＡ、および／またはプロテインＧ）を有する場合、これは、適切なタグ結合体（アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、免疫グロブリンのＦｃ領域など）とともに使用され得る。天然結合体を有する分子に対する抗体（ビオチンおよび／または適切なタグ結合体など）は、広く入手可能である（Ｓｉｇｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，１９９８カタログ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０２００】
同様に、任意のハプテン化合物および／または抗原性化合物が適切な抗体と組み合わせて、タグ／タグ結合体ペアを形成するのに使用され得る。数千種類の特異的抗体が市販されており、多くのさらなる抗体が、文献に記載されている。例えば、一般的な構成の一例では、タグが第１の抗体であり、タグ結合体が、第１の抗体を認識する第２の抗体である。抗体−抗原相互作用に加え、受容体−リガンド相互作用も、タグおよび／またはタグ結合体ペアとして適切であり、限定されないが、トランスフェリン、ｃ−ｋｉｔ、ｖｉｒａｌ  受容体リガンド、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、インターロイキン受容体、免疫グロブリン受容体および／または抗体、カドヘリンファミリー、インテグリンファミリー、セレクチンファミリーなどが挙げられる（例えば、Ｐｉｇｏｔｔら，Ｔｈｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ  Ｉ，１９９３を参照のこと；参照として本明細書に組み込まれる）。同様に、毒素および／または毒液；ウイルスエピトープ；ホルモン類（例えば、アヘン剤、ステロイド類など）；細胞内受容体（例えば、種々の低分子リガンドの効果を媒介するもの、例えば、ステロイド、甲状腺ホルモン、レチノイド、ビタミンＤ、および／またはペプチド）；薬物；レクチン；糖質；核酸（線状および／または環状ポリマー構造体）；タンパク質；リン脂質；および／または抗体が、種々の細胞受容体と相互作用し得る。
【０２０１】
合成ポリマー、例えば、ポリウレタン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリ尿素、ポリアミド、ポリエチレンイミン、ポリアリーレンスルフィド、ポリシロキサン、ポリイミド、および／またはポリ酢酸塩などで適切なタグおよび／またはタグ結合体を構成してもよい。当業者には自明であろうが、多くの他のタグ／タグ結合体ペアが本明細書に記載のアッセイ系に有用である。
【０２０２】
例えば、ペプチド、ポリエーテルなどの一般的なリンカーがタグとして供され得、約５〜約２００個のアミノ酸のポリ−Ｇｌｙ配列などのポリペプチド配列が挙げられる。かかるフレキシブルリンカーは、当業者に知られている。例えば、ポリ（エチレングリコール）リンカーは、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から入手可能である。このようなリンカーは、任意選択で、アミド結合、スルフヒドリル結合、および／またはヘテロ官能基結合を有する。
【０２０３】
タグ結合体は固相基材に、現在利用可能な任意のさまざまな方法を用いて固定させる。一般的に、固相基材は、その全部および／または一部分を、タグ結合体の一部分と反応性である表面に化学基を固定させる化学的試薬に曝露することにより、誘導体化および／または官能性付与する。例えば、長鎖部分への結合に適した基としては、アミン、ヒドロキシル基、チオール基、および／またはカルボキシル基が挙げられる。アミノアルキルシランおよび／またはヒドロキシアルキルシランは、さまざまな表面（ガラス表面など）に官能性付与するために使用され得る。かかる固相バイオポリマーアレイの構築は、文献に充分に記載されている（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９（例えばペプチドの固相合成が記載）；Ｇｅｙｓｅｎら，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈ．１０２：２５９（ピン上での固相成分の合成が記載）；Ｆｒａｎｋら，１９８８，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４４：６０３１（セルロースディスク上での種々のペプチド配列の合成が記載）；Ｆｏｄｏｒら，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：７６７；Ｓｈｅｌｄｏｎら，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９（４）：７１８；およびＫｏｚａｌら，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２：７５３（すべて、固相基材に固定したバイオポリマーのアレイが記載）を参照のこと；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。基材にタグ結合体を固定するための非化学的アプローチとしては、他の一般的な方法、例えば、加熱、ＵＶ照射による架橋などが挙げられる。
【０２０４】
インビトロアッセイ
インビトロアッセイは、多くの場合、迅速および／または多数において実行することができ、それにより、短時間に得られる情報量が多くなる。アッセイの実行には、さまざまな容器、例えば、試験管、プレート、皿、および／または他の表面（浸漬棒および／またはビーズなど）が使用され得る。
【０２０５】
本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関してスクリーニングするためのインビトロ方法を提供する。例えば、一部の実施形態において、該方法は、一般的に、（１）試験物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４遺伝子）を提供する工程；（２）候補物質を提供する工程；ならびに（３）試験物質に対する候補物質の影響を測定および／または検出する工程を含む。
【０２０６】
一般に、試験物質を準備したら、例えば、ライブラリーの形態の候補物質と直接および／または間接的に接触させる。次いで、試験物質に対する候補物質の影響が検出および／または測定される。その後、適当なアンタゴニストが、単離および／または解析され得る。ライブラリーのスクリーニングには、ハイスループットアッセイ（これは、当業者にわかる）が市販品として入手可能であり、本明細書において説明する。
【０２０７】
一部の実施形態において、インビトロアッセイは結合アッセイを含む。試験物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４および／またはそのホモログ、一部分、バリアント、変異型および／または誘導体）に対する候補物質の結合は、立体的相互作用、アロステリック相互作用、および／または電荷同士の相互作用により、本質的に、およびそれ自体が阻害性であってもよい。試験物質は、溶液中で遊離状態であってもよく、支持体固定してもよく、および／または細胞表面内および／または細胞表面上で発現させてもよい。試験物質および／または候補物質を標識し、それにより結合の検出を可能にしてもよい。試験物質は、多くの場合、標識された種であり、標識による結合の妨げ、および／または増強の可能性が低くなる。物質の一方を標識する競合的結合形式を行なってもよく、標識を結合させたものに対する標識なしのもの量を測定し、結合に対する効果が判定され得る。
【０２０８】
一部の実施形態において、結合アッセイは、ＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＲ４タンパク質（そのホモログ、一部分、バリアント、変異型、および／または誘導体を含む）を候補物質に曝露すること、ならびに候補物質の存在下でのＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合を検出することを含む。結合アッセイは、インビトロ（例えば、実質的に記載の成分のみを入れた試験管内；無細胞抽出物中；および／または実質的に精製された成分中）で行なわれ得る。あるいはまたさらに、アッセイは、インサイトおよび／またはインビボ（例えば、細胞、組織、器官および／または生物体内；さらに詳細に後述）で行なわれ得る。
【０２０９】
一部の実施形態において、候補物質は固定化せず、固相支持体上に固定化した試験物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質、そのホモログ、一部分、バリアント、変異型、および／または誘導体を含む）に結合する物質を同定するためのアッセイを用いて、試験物質と候補物質が互いに結合するかどうか、および／またはどの程度結合するかを調べる。あるいはまた、候補物質を固定化し、試験物質を固定化しないようにしてもよい。かかるアッセイを使用し、試験物質に結合できる候補物質が同定され得る。
【０２１０】
一部の実施形態では、試験物質を認識する抗体（例えば、α−ＣＸＣＬ１２および／またはα−ＣＸＣＲ４抗体）を、固相支持体（例えば、プロテインＡビーズ）に結合させる。抗体を対応する抗原と接触させ、これを、固定化した該抗体に結合させる。次いで、生成した複合体を候補物質（精製されタンパク質、細胞抽出物、コンビナトリアルライブラリーなど）と接触させる。抗体結合抗原が候補物質と相互作用する場合、候補物質が固相支持体に間接的に固定化される。固相支持体上の候補物質の存在は、当該技術分野で既知の任意の標準的な手法（例えば限定されないが、ウエスタンブロッティング）によってアッセイされ得る。この型のアッセイは、当該技術分野で「免疫沈降」アッセイとして知られている。
【０２１１】
一実施形態では、試験物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質、そのホモログ、一部分、バリアント、変異型、および／または誘導体を含む）を、アガロースビーズなどのビーズ上に固定化する。特定の一実施形態では、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質および／またはその特徴的部分を、ＧＳＴ−融合タンパク質として細菌、酵母、昆虫、および／または高等真核生物細胞株にて発現させる、および／または粗製細胞抽出物から、グルタチオン−アガロースビーズを用いて精製する。対照として、固定化したＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質に対するＧＳＴ−融合タンパク質ではない候補物質の結合を、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質の非存在下で調べる。次いで、固定化したＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質に対する候補物質の結合を調べる。この型のアッセイは、当該技術分野で「ＧＳＴプルダウン」アッセイとして知られている。あるいはまたさらに、候補物質を固定化し、候補物質を固定化しないようにしてもよい。
【０２１２】
成分、例えば、Ｎｉ−ＮＴＡアガロース−および／またはヒスチジン−タグ化成分の一方を固定化するのに異なるアフィニティ精製系を用いて、この型のアッセイ行なうことが可能である。
【０２１３】
候補物質に対する試験物質の結合は、当該技術分野で周知のさまざまな方法によって測定され得る。例えば、非固定化成分が標識され得る（例えば、放射性標識、エピトープタグ、および／または酵素−抗体コンジュゲートで）。あるいはまた、結合は免疫学的検出手法によって測定され得る。例えば、反応混合物をウエスタンブロッティングすると、ブロットに、非固定化成分を検出する抗体がプローブ結合され得る。あるいはまたさらに、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて結合をアッセイしてもよい。
【０２１４】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニング方法は、（１）候補物質を提供すること；（２）候補物質をＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＲ４と接触させること；ならびに（２）ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合の阻害を検出することを含む。
【０２１５】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニング方法は、（１）候補物質を提供すること；および（２）候補物質を、予め形成させたＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４複合体と接触させること；および（３）候補物質がＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４複合体に影響を及ぼしているかどうかを調べることを含む。
【０２１６】
インサイトアッセイ
一部の実施形態において、本発明は、候補物質を細胞と接触させる、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに関してスクリーニングする方法を提供する。細胞は、次いで、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性と関連している種々のパラメータについてアッセイされ得る。例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性と関連しているパラメータとしては、限定されないが、ＣＸＣＬ１２がＣＸＣＲ４に結合する能力が挙げられる。
【０２１７】
特定の実施形態において、細胞は、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合について直接アッセイされ得る。結合を評価するための免疫組織化学的手法、共焦点手法、および／または他の手法は、当業者によく知られている。種々の細胞株、例えば、この目的のために特別に操作された細胞が、かかるスクリーニングアッセイに使用され得る。スクリーニングアッセイに使用される細胞の例としては、Ｔ細胞および／または他のリンパ球が挙げられる。当業者には、本明細書に開示した発明において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性と相関するパラメータを測定するための幅広いインサイトアッセイが想定されることが理解され得よう。
【０２１８】
アッセイによっては、細胞および／または組織の培養物が必要とされ得る。細胞は、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４の結合に関して上記の任意のいくつかの異なる生理学的アッセイを用いて検査され得る。あるいはまた、分子解析であって、限定はされないが、タンパク質発現をモニタリングするため、および／またはタンパク質−タンパク質相互作用を試験するためのウエスタンブロッティング；ｍＲＮＡの発現をモニタリングするためのノザンブロッティング、ＲＮＡの識別的ディスプレイ、および／またはマイクロアレイ解析；リン酸化をモニタリングするためのキナーゼアッセイ；他の化学的修飾をモニタリングするための質量分析；などが行なわれ得る。
【０２１９】
本発明は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に結合し、したがってＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性を調節し得る物質を同定するための新規な方法を提供する。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に結合する物質を同定するインサイト法の一例は、ツーハイブリッド系アッセイである（Ｆｉｅｌｄｓら，１９９４，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １０：２８６；およびＣｏｌａｓら，１９９８，ＴＩＢＴＥＣＨ  １６：３５５；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。このアッセイでは、酵母細胞に、本発明による候補物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質および／またはその特徴的部分）と、転写因子（Ｇａｌ４および／またはＬｅｘＡなど）のＤＮＡ結合ドメインとからなる第１の融合タンパク質を発現させる。該細胞には、さらに、プロモーターが対応ＤＮＡ結合ドメインに対する結合部位を含むレポーター遺伝子を含める。該細胞を、活性化ドメイン（例えば、Ｇａｌ４および／または単純疱疹ウイルスＶＰ１６由来のもの）に融合させた候補物質からなる第２の融合タンパク質を発現するベクターで形質転換することにより、前者の候補物質が後者の候補物質と相互作用した場合は、レポーター遺伝子の発現が大きく増大し得る。そのため、このアッセイは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４と任意の数の候補物質との相互作用を調節する物質に関するスクリーニングに使用され得る。このようにして、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを迅速に同定することが可能になる。
【０２２０】
別のアッセイは、固相結合ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質ならびにその試験対象候補物質との相互作用に基づく。したがって、候補物質（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質および／またはその特徴的部分）には、検出可能なマーカー（放射性、蛍光性および／または発光性標識など）を含んでよい。さらに、候補物質を、間接的な検出を可能にする他の物質にカップリングさせてもよい（例えば、発色性基質を用いた酵素の使用により、および／または検出可能な抗体の結合により）。候補物質との相互作用の結果としてのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の配座の変化が、例えば、検出可能なマーカーの放射の変化によって検出され得る。あるいはまたさらに、固相結合タンパク質複合体を質量分析によって解析してもよい。
【０２２１】
一部の実施形態において、該スクリーニング方法は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性を、下流でのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の活性の細胞への効果をモニタリングすることによりアッセイし得る。かかる効果としては、限定されないが、遊走、接着などの多様な生物学的成果をもたらす多様なシグナル伝達経路の活性化、および／または転写の活性化が挙げられる。活性化される経路および／または誘発される成果は、ＣＸＣＲ４＋細胞型間で異なり得、これらはモニタリングおよびアッセイされ得る。一部の実施形態では、Ｇタンパク質シグナル伝達経路が活性化される。一部の実施形態では、Ｇタンパク質非依存性経路が活性化される。ＣＸＣＲ４のチロシンリン酸化により、ＪＡＫ（ＪＡＫ２およびＪＡＫ３）／ＳＴＡＴ経路の漸増と活性化がもたらされ、一方、ｐ３８とＥＲＫ活性化は、一部アレスチン−３に依存性であることが示されている。活性化後、ＧＲＫリン酸化により、アレスチン２／３の漸増、続いてインターナリゼーションがもたらされる。また、ＣＸＣＲ４は原形質膜でＡＩＰ４によってユビキチン化され、それにより、リソソームへの選別およびリソソーム内での分解がもたらされる。しかしながら、インターナリゼーションを受けた受容体の一部分はまた、原形質膜に戻って再利用され得る。
【０２２２】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルは、タンパク質および／またはｍＲＮＡのレベルの測定することにより測定される。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４タンパク質および／またはその特徴的部分のレベルは、イムノアッセイ、例えば、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ、および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４に選択的に結合する抗体を使用するＥＬＩＳＡなどを用いて測定される。ｍＲＮＡの測定には、増幅（例えば、ＰＣＲ、ＬＣＲを使用）および／またはハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノザンハイブリダイゼーション、ＲＮＡｓｅ保護、ドットブロッティング）が使用され得る。タンパク質および／またはｍＲＮＡのレベルは、直接および／または間接的に標識された検出薬剤、例えば、本明細書に記載のような蛍光および／または放射性標識された核酸、放射性および／または酵素的に標識された抗体などを用いて検出される。
【０２２３】
あるいはまたさらに、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４発現は、レポーター遺伝子系を用いて測定され得る。かかる系は、レポーター遺伝子（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ、細菌ルシフェラーゼ、Ｏ−ガラクトシダーゼ、および／またはアルカリホスファターゼなど）に作動可能に連結させたＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４遺伝子プロモーターを用いて作成され得る。さらに、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４は、第２のレポーター（赤色および／または緑色蛍光タンパク質など）に対する結合による間接的レポーターとして使用され得る（例えば、Ｍｉｓｔｉｌｉら，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：９６１を参照のこと；参照として本明細書に組み込まれる）。典型的には、レポーター構築物で細胞をトランスフェクトさせる。候補物質での処理後、レポーター遺伝子の転写、翻訳、および／または活性の量が、当業者にわかる標準的な手法に従って測定される。
【０２２４】
インビボアッセイ
インビボアッセイは、種々の動物モデルの使用、例えば、特定の欠陥を有するように、および／または候補物質が生物体内の種々の細胞に到達できる、および／または影響を及ぼすことができる能力を測定するのに使用され得るマーカーを有するように操作されたトランスジェニック動物の使用を含む。その大きさ、取扱い易さ、および／または生理学および／または遺伝子構成に関する情報のため、マウスは、インビボアッセイに使用されやすい。しかしながら、他の動物、例えば、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、アレチネズミ、ウッドチャック、ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、プタ、ウシ、ウマおよび／またはサル（チンパンジー、テナガザル、および／またはヒヒなど）も同様に好適である。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストのアッセイは、任意のこれらの種および／または本明細書に挙げていない他の有用な種に由来する動物モデルを用いて行なわれ得る。
【０２２５】
かかるアッセイでは、１種類以上の候補物質が動物に投与され、候補物質で治療していない同類の動物と比較したときの、候補物質が１つ以上の特徴を改変する能力によって、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが同定される。該特徴は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）に関連する症状に関して本明細書に記載した任意のもの、および／または骨髄中へのＴ細胞および／または幹細胞の蓄積であり得る。糖尿病の発症は、典型的には、中等度の糖尿および２５０ｍｇ／ｄｌより高い非空腹時血漿グルコースを特徴とする。糖尿病マウスは、低インシュリン血性（ｈｙｐｏｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉｃ）かつ過剰グルカゴン血性（ｈｙｐｅｒｇｌｕｃａｇｏｎｅｍｉｃ）であり、膵臓の島β細胞の選択的破壊を示す。あるいはまたさらに、糖尿病の発症は、極端な喉の渇き；頻尿；突然の視力変化；尿中糖分；果実のような甘いまたはワイン様の口臭；食欲増進；突然の体重減少；眠気；嗜眠；重苦しい呼吸；昏迷；意識消失；糖尿病性ケトアシドーシス（ＤＫＡ）；および／または高浸透圧性高血糖性非ケトン性昏睡（ＨＮＫＳ）を特徴とすることがあり得る。
【０２２６】
本発明は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）の治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらし得る候補物質に関してスクリーニングする方法を提供する。一部の実施形態において、候補物質は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む。このような動物の候補物質での治療は、動物への適切な形態の候補物質の投与を含む。投与は、臨床および／または非臨床目的で使用され得る任意の経路であって、限定はされないが、経口、経鼻、口腔内、および／または局所による。あるいはまたさらに、投与は、気管内滴注、気管支内滴注、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、吸入、および／または静脈内注射によるものであり得る。具体的に想定される経路は、全身静脈内注射、血液および／またはリンパ供給による局所投与、および／または罹患部位への直接投与である。
【０２２７】
したがって、一部の実施形態において、本発明は、候補物質が、哺乳動物の自己免疫障害（例えば、糖尿病）の治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらすのに有用であるかどうかを調べるためのスクリーニングシステム（方法および／または組成物を含む）を提供する。一部の実施形態において、候補物質が自己免疫障害と関連する症状を改善、安定化および／またはその発症の遅延をもたらす場合、候補物質は、自己免疫障害の治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらすと判定される。
【０２２８】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニングシステムは、本明細書に記載のＮＯＤマウス（すなわち、Ｉ型糖尿病のインビボモデル系）の使用を含み得る。ＮＯＤマウスとＩ型糖尿病を有するヒトは、例えば、２段階での疾患発現、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患、β細胞の破壊などの類似した表現型を示す。
【０２２９】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニングシステムは、ヒトＩ型真性糖尿病と似た自然発生的症候群を発現するＢｉｏＢｒｅｅｄｉｎｇ／Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒラットの使用を含み得る。顕著な特徴としては、６０日齢〜１２０日齢の間でのインスリン依存性ケトーシス傾向の糖尿病の突然の発症（Ｎａｋｏｏｄａら，１９７７，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２６：１００；参照として本明細書に組み込まれる）；事実上膵臓のβ細胞の完全な破壊を含むリンパ球性インスリン炎（Ｓｅｅｍａｙｅｒら，１９８２，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１０６：２３７；およびＬｏｇｏｔｈｅｔｏｐｏｕｌｏｓら，１９８４，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３３：３３；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）；ならびに同系交配ＢｉｏＢｒｅｅｄｉｎｇ／Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ（ＢＢ／Ｗｏｒ）動物の大部分における高血糖症の遺伝的素因および発生（Ｂｕｔｌｅｒら，１９８３，Ｃａｎ．Ｊ．Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｌ．，２５：７；参照として本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【０２３０】
後述するアッセイでは、ＮＯＤマウスモデルおよび／またはＩ型糖尿病のＢＢ／Ｗｏｒラットモデルを使用しているが、当業者には、このような任意のアッセイが、任意の自己免疫疾患の任意のインビボモデルを用いて行なわれ得ることが容易に認識されよう。
【０２３１】
具体的な実施形態において、本発明は、（１）糖尿病の症状を示すＮＯＤマウスおよび／またはＢＢ／Ｗｏｒラットを提供する工程、（２）候補物質を動物に投与する工程、（３）血中もしくは尿中グルコースレベルを使用することにより、糖尿病の症状に対する候補物質の効果（１つもしくは複数）を調べる工程、および／または（４）島（ｉｓｌｅｔ  ｏｆ）もしくは唾液腺内Ｔ細胞および／または白血球の浸潤の組織学解析工程を含む、糖尿病の治療に有用な新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定方法を提供する。
【０２３２】
具体的な実施形態において、本発明は、（１）糖尿病の症状を示すＮＯＤマウスおよび／またはＢＢ／Ｗｏｒラットを提供する工程、（２）候補物質を動物に投与する工程、ならびに（３）骨髄から末梢リンパ様器官へのナイーブＴ細胞および／または幹細胞の動員の増大についてアッセイする工程（例えば、治療ありか、またはなしの骨髄中の細胞のパーセンテージおよび／または細胞の数の変化を測定することにより）を含む、糖尿病の治療に有用な新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定方法を提供する。
【０２３３】
一部の実施形態において、本発明は、（１）糖尿病の症状を示すＮＯＤマウスおよび／またはＢＢ／Ｗｏｒラットを提供する工程、（２）候補物質を動物に投与する工程、ならびに（３）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質に対する候補物質の効果（１つもしくは複数）を調べる工程を含む、糖尿病の治療方法を提供する。
【０２３４】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニング方法は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４とその天然結合パートナーとのインビボ相互作用を調べることを含む。候補物質は、候補物質がＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４とその天然結合パートナーとの相互作用を調節する場合、候補物質は、自己免疫障害を治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらすと判定される。特定の実施形態において、候補物質がＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用を調節する場合、候補物質は、自己免疫障害を治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらすと判定される。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４とその天然結合パートナーとの相互作用は、本明細書およびＳａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）に記載の標準的な方法を用いて測定され得る。
【０２３５】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニング方法は、候補物質の存在下および／または非存在下で、細胞、組織、および／または哺乳動においてＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＲ４の下流のシグナル伝達カスケードの活性を測定することを含む。候補物質が下流シグナル伝達カスケードの活性を調節する場合、候補物質は、自己免疫障害を治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらすと判定される。
【０２３６】
一部の実施形態において、本発明によるスクリーニング方法は、候補物質の存在下および／または非存在下で、細胞、組織、および／または哺乳動においてＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルを測定することを含む。候補物質がＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルを低下させる場合、候補物質は、自己免疫障害を治療、安定化および／またはその発症の遅延をもたらすと判定される。ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４  ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルは、本明細書およびＳａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）に記載の標準的な方法を用いて測定され得る。
【０２３７】
インビボでの化合物の有効性の判定には、さまざまな異なる基準を伴い得る。毒性および／または用量応答の測定は動物において、インビトロおよび／またはインサイトアッセイよりも有意味な様式で行なわれ得る。
【０２３８】
用途
本明細書に記載の組成物、システム、および方法は、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇と関連している自己免疫障害（例えば、糖尿病）に罹患しているか、または罹り易い患者の特定、および／またはかかる自己免疫障害の治療および／または診断に有用であり得る。本発明による被験体および／または患者としては、限定されないが、ヒトおよび／または他の霊長類；哺乳動物、例えば、商業関連の哺乳動物（ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、および／またはイヌなど）；および／または鳥類、例えば、商業関連の鳥類（ニワトリ、アヒル、ガチョウ、および／またはシチメンチョウなど）が挙げられる。
【０２３９】
患者集団の特定方法
本発明は、本明細書に記載のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろう患者を特定する方法を提供する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２レベルの上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇と関連している自己免疫障害（例えば、糖尿病）に罹患しているか、または罹り易い患者の特定が、具体的な治療剤（例えば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト）に応答するであろう患者の特定が可能となるため望ましいという認識を包含する。
【０２４０】
したがって、一部の実施形態において、本発明は、（１）糖尿病などの自己免疫障害に罹患している、および／または罹り易い被験体を提供する工程、（２）被験体由来の特定の試験組織試料（例えば、骨髄および／または血液）の試料を提供する工程、（３）試験試料中のＣＸＣＬ１２のレベルをアッセイする工程、（４）試験試料中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を有する患者を特定する工程、ならびに（４）このような患者に、該自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に充分なレベルのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを投与する工程を含む方法を提供する。
【０２４１】
試験試料の取得
本発明によれば、試験試料は、当該技術分野で既知の任意の方法を用いて入手（例えば、被験体から採取）され得る。一部の実施形態において、試験試料としては、限定されないが、骨髄；血液；血液細胞（例えば、白血球、赤血球など）；腹水；組織もしくは細針生検試料；細胞含有体液；浮遊核酸；痰；尿；脳脊髄液、腹腔内液；胸膜液；洗浄液（管内洗浄液もしくは気管支肺胞洗浄液など）；吸引物；擦過物；骨髄被検物；組織生検被検物；外科的被検物；他の体液、分泌物、および／または排泄物；および／またはこれらが由来する細胞が挙げられる。一部の実施形態において、試料は、患者から採取した細胞であるか、または該細胞を含む。該細胞は、例えば、血液、骨髄に由来するもの、および／または充実性器官（脳、脾臓、骨、心臓、血管、肺、腎臓、肝臓、下垂体、内分泌腺、リンパ節など）に由来する組織由来のもの、分散した一次細胞、腫瘍細胞などであり得る。一部の実施形態において、試料は、体液であって、限定はされないが、血液、リンパ、腹水、婦人科系体液、尿などであり得る。試料は被験体から、任意の幅広い方法、例えば、生検（例えば、細針吸引または組織生検）、外科手術、体液（例えば、血液、リンパなど）の収集などによって採取され得る。用語「試料」は、かかる試料の処理によって得られる任意の物質を含む。得られる試料としては、例えば、試料から抽出された核酸もしくはタンパク質、または試料を、例えば、ｍＲＮＡの増幅もしくは逆転写、特定成分の単離および／または精製など手法に供することにより得られた核酸もしくはタンパク質が挙げられる。
【０２４２】
一部の実施形態において、試験試料は骨髄である。一部の実施形態において、骨髄試料は、被験体の寛骨（例えば、腸骨稜から）、胸骨または他の骨の髄腔から採取され得る。骨髄採取は、典型的には全身麻酔下で行なわれる。一部の実施形態において、骨髄は、試験被験体と、参照被験体（例えば、非糖尿病個体）（その後の試験骨髄試料の解析で陰性対象を提供し得る）から採取される。
【０２４３】
一部の実施形態において、試験試料は血液である。一部の実施形態において、血液は、被験体の静脈または動脈から、瀉血の技術分野で知られた標準的な手法を用いて直接採取される。一部の実施形態では、血液は、腕、後頭部、手首の側部、足、足首などの肘前領域に存在する静脈または動脈から採取され得る。一部の実施形態では、血液は、指先のわずかな穿刺により採取される。一部の実施形態において、血液は、後の解析までチューブ内で保存される。一部の実施形態では、血液は、培養チューブまたは凝固チューブ内で保存され得る。一部の実施形態では、血液は、以下：ゲル分離体、凝固活性化因子、ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウム、ＥＤＴＡ、酸クエン酸デキストロース、シュウ酸塩／フッ化物、または血液試料を保存するために使用される任意の他の添加剤の１種類以上を入れたチューブ内で、解析時まで保存され得る。
【０２４４】
一部の実施形態において、試験試料は、解析（例えば、ＣＸＣＬ１２レベルの測定）に供される前に１つ以上の処理工程に供される。一部の実施形態において、試験試料は、解析（例えば、ＣＸＣＬ１２レベルの測定）に供される前に１つ以上の処理工程に供されるのでななく、直接解析に供される。限定されないが、一例を挙げると、処理工程としては、遠心分離、濾過、特定の化学物質（例えば、塩、蛍光部分、緩衝剤、デタージェント、内部対照として使用される物質など）の添加、ｐＨの調整、試料の亜集団の単離（例えば、血液の遠心分離、続いて血漿の単離）、加熱または冷却などが挙げられる。
【０２４５】
一部の実施形態において、試験試料（未処理の試料および処理済み試料の両方を含む）は、解析に供される前に、ある期間保存される。特定の実施形態では、試験試料は、解析に供される前に凍結され得る。試験試料は、約４℃、約０℃、約−１０℃、約−２０℃、約−３０℃、約−４０℃、約−５０℃、約−６０℃、約−７０℃、約−８０℃、約−９０℃、約−１００℃の温度、またはそれより低温で凍結され得る。
【０２４６】
試験試料は患者から、当業者にわかる任意の方法を用いて採取され得る。当業者には、上記記載が、患者から試験試料を採取するための包括的な方法の列挙ではなく、患者から試験試料を採取するための例示的な方法を示すことが容易に認識されよう。
【０２４７】
試験試料の解析
特定の試験組織中（例えば、骨髄、血液など）のＣＸＣＬ１２のレベルのアッセイは、当業者にわかる任意の方法によって行なわれ得る。一部の実施形態において、特定の試験試料中のＣＸＣＬ１２タンパク質レベルは直接測定され、参照試料中のレベルと比較され得る。一部の実施形態では、特定の試験試料中のＣＸＣＬ１２タンパク質レベルは間接的に測定され、参照試料中のレベルと比較され得る。
【０２４８】
一部の実施形態において、イムノアッセイは、試験試料中のＣＸＣＬ１２のレベルを定量するため使用され得、多くのかかるイムノアッセイ手法が当該技術分野で既知である。例えば、ＣＸＣＬ１２を認識する抗体は、かかるイムノアッセイに使用され得る。本発明は特定のアッセイ手順に限定されず、したがって、均一系と不均一系の両方の手順を含むものとする。本発明に従って実施され得る例示的なイムノアッセイとしては、限定されないが、ウエスタンブロッティング、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、比濁阻害イムノアッセイ（ＮＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。かかる方法では、使用する抗体にインジケータ部分または標識基が結合され得、これは、当該方法の種々の用途の必要性（これは、多くの場合、アッセイ装置および適合するイムノアッセイ手順の利用可能性によって決定される）を満たすように選択される。上記の種々のイムノアッセイを行なうのに使用される一般的な手法は、当業者にはわかる。
【０２４９】
一部の実施形態において、フローサイトメトリー法は、試験試料中のＣＸＣＬ１２のレベルを定量するために使用され得る。フローサイトメトリーにより、蛍光色素標識されたタンパク質特異的抗体または非標識抗体を蛍光色素標識された二次抗体と組み合わせて使用し、細胞表面上のタンパク質ならびに細胞内タンパク質の同定が可能になる。上記のフローサイトメトリーアッセイを行なうのに使用される一般的な手法は、当業者にはわかる。
【０２５０】
一部の実施形態において、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは、２次元ゲル電気泳動および／または質量分析によって定量され得る。タンパク質の性質、配列、分子量ならびに電荷の測定は、１回の検出工程で行われ得る。質量分析は、当業者に知られた方法（ＭＡＬＤＩ、ＴＯＦ、またはこれらの組合せなど）により行なわれ得る。
【０２５１】
一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２  ＲＮＡレベルはＣＸＣＬ１２タンパク質レベルと相関性がある。一部の実施形態において、ＣＸＣＬ１２  ＲＮＡレベルはノザンブロッティングによって測定される。一部の実施形態では、ＣＸＣＬ１２  ＲＮＡレベルは定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析によって測定される。一部の実施形態では、ＣＸＣＬ１２  ＲＮＡレベルは、ｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドアレイ（マイクロアレイ（すなわち、「ＧｅｎｅＣｈｉｐｓ」）としても知られており、多数の遺伝子の発現を迅速かつ効率的に測定する方法が提供され得る）を用いて測定される。一部の実施形態では、ＣＸＣＬ１２  ＲＮＡレベルは、サイトカインマイクロアレイ発現解析によって測定され得る。一般に、ＣＸＣＬ１２  ＲＮＡレベルを測定する場合は、ＲＮＡ試料を試験被験体と参照被験体から採取し、２つの試料のＣＸＣＬ１２  ＲＮＡのレベルを互いに比較する（例えば、ノザンブロッティング、定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析、マイクロアレイチップなどにより）。
【０２５２】
一部の実施形態において、インビボ画像形成（例えば、免疫組織化学的染色）は、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルを定性的に測定するために使用され得る。免疫組織化学的染色では、組織試料を採取し、典型的には、高濃度のデタージェントおよび／またはタンパク質分解性加水分解（例えば、プロテアーゼＫもしくはペプシンなどの薬剤を使用）に供する。特定の実施形態において、試料細胞から核画分を単離し、核画分中のマーカーポリペプチドのレベルを検出することが望ましいことがあり得る。試験試料は、典型的には、例えば、ホルマリン、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、メタノールなどの試薬での処理によって固定する。次いで、試験試料を、該マーカーポリペプチドに対して結合特異性を有する抗体とともにインキュベートする。抗体は、その後の結合の検出のために標識にコンジュゲートさせてもよい。試験試料は、免疫複合体の形成に充分な期間インキュベートする。次いで、抗体の結合が、該抗体に標識がコンジュゲートされているおかげで検出される。抗体が非標識である場合、第２の標識抗体、例えば、抗マーカーポリペプチド抗体のアイソタイプに特異的な抗体が使用され得る。使用され得る標識の例としては、
放射性核種、蛍光、化学発光、および酵素標識が挙げられる。
【０２５３】
一部の実施形態において、特定の試験組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルは、異なる組織（例えば、血液）中のＣＸＣＬ１２のレベルを測定することにより、間接的にアッセイされ得る。一般的に、ある試験組織中のＣＸＣＬ１２のレベルは、異なる試験組織中のＣＸＣＬ１２のレベルと相関している。限定されないが、一例を挙げると、本発明は、血中のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルのアッセイを骨髄中のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルと相関させることができるという認識を包含する。あるいはまたさらに、血中レベルの上昇により血中のナイーブＴ細胞の蓄積および／または幹細胞がもたらされ得、それにより他のリンパ様器官（例えば、脾臓およびリンパ節）におけるそのレベルが低下し得る。
【０２５４】
例えば、上記のような方法では、血液が試験被験体と参照被験体から採取され得、２つの試料中のＣＸＣＬ１２  ＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルが互いに比較され得る。これは、医療専門家にとって骨髄試料よりも血液試料を採取する方がずっと容易で危険も少ないため、望ましいことがあり得る。
【０２５５】
一部の実施形態において、特定の試験組織中のＣＸＣＬ１２のレベルは、試験試料中のＣＸＣＬ１２活性のレベルをモニタリングすることにより、間接的にアッセイされ得る。例えば、特定の試験組織中のＣＸＣＬ１２のレベルは、細胞遊走アッセイを用いてインビトロで（ｕｓｉｎｇ）アッセイされ得る。細胞遊走アッセイはよく知られており、当業者が決定する任意の様式で設計および実施され得る。例えば、ＣＸＣＲ４をその表面上に発現する細胞が試料（例えば、被験体の骨髄、血液などに由来もの）に曝露され得、試料に対する細胞の応答性（例えば、試料への遊走速度、遊走距離など）が、試料中のＣＸＣＬ１２レベルの尺度として供され得る。
【０２５６】
一部の実施形態において、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは、参照試料中のＣＸＣＬ１２レベルと実質的に等しいレベルであり得る。一部の実施形態では、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは、参照試料よりも実質的に高いレベルであり得る。一部の実施形態では、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは参照試料よりも、ほぼ１０％、ほぼ２０％、ほぼ３０％、ほぼ４０％、ほぼ５０％、ほぼ６０％、ほぼ７０％、ほぼ８０％、ほぼ９０％、ほぼ１００％、ほぼ２００％、ほぼ３００％、ほぼ４００％、ほぼ５００％、ほぼ１０００％、ほぼ５０００％、またはそれ以上高いレベルであり得る。一部の実施形態では、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは、参照試料中のＣＸＣＬ１２レベルよりも１標準偏差高いレベルであり得る。一部の実施形態では、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは、参照試料中のＣＸＣＬ１２レベルよりも２標準偏差高いレベルであり得る。一部の実施形態では、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルは、参照試料中のＣＸＣＬ１２レベルよりも２標準偏差超高いレベルであり得る。一部の実施形態において、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルと参照試料中のＣＸＣＬ１２レベルの差は統計学的に有意であり得る。一部の実施形態では、試験試料中のＣＸＣＬ１２レベルと参照試料中のＣＸＣＬ１２レベルの差は、統計学的に有意でない差であり得る。
【０２５７】
一部の実施形態において、関係は、被験体に関するインジケータの値と被験体が良好な応答を示す尤度の値との間で判定される。評価の結果は、ＣＸＣＬ１２レベルの特定の値（例えば、特定の範囲内に含まれるＣＸＣＬ１２レベルの値）を有する被験体が、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに対して良好な応答を示す確率（０％〜１００％の範囲）で表示され得る。
【０２５８】
本発明は、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を示す患者は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む治療に応答するであろうという認識を包含する。一部の実施形態において、特定の組織（例えば、骨髄）中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を示す患者は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）の症状を示す患者であり得る。一部の実施形態では、特定の組織中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を示す患者は、自己免疫障害の症状を示さない患者であり得る。患者が自己免疫障害の症状を示すか否かに関係なく、いったん患者が特定の組織中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇を有すると特定されたら、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしての挙動を示す任意の物質（例えば、ＡＭＤ３１００および／または本明細書に記載のような任意の他のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト）が患者に投与され得る。一般に、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、自己免疫障害（例えば、糖尿病）の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に充分な量で投与される。
【０２５９】
一部の方法によれば、試料は、自己免疫障に罹患している、および／または罹り易い被験体から採取された。被験体がＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストに対して良好に応答するであろう尤度が評価され、被験体が、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療の開始もしくは継続に適した候補であるか、またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの臨床試験への登録もしくは残留に適した候補であるかどうかを判定する根拠として使用される。例えば、尤度が所定の値より大きいならば、被験体は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療の開始または継続に適した候補とみなされ得る。尤度が所定の値より小さいならば、被験体は、候補として適さないとみなされ得る。当業者には、被験体がＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に適した候補であるかどうかの判定には、さまざまな要素が考慮され得ることが認識されよう。例えば、他の治療に対する被験体の応答、または被験体が他の治療に応答する尤度を評価する試験の結果（例えば（ａｓ  ｍａｙ）、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストあるいは任意の利用可能な代替療法の副作用プロファイル）が考慮され得る。
【０２６０】
一部の実施形態において、上記の方法は、治療に対する追跡として使用され得、例えば、マーカーポリペプチドのレベルの定量により、治療対象の特定の自己免疫障害（例えば、糖尿病）に対して現在または以前に使用された治療の有効性、ならびに患者の予後に対するこれらの治療の効果が示され得る。
【０２６１】
治療方法
本発明は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）に罹患している、および／または罹り易い患者の治療および／または診断方法を提供する。本発明は、一部の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が、特定の組織中（例えば、骨髄、血液など）のＣＸＣＬ１２レベルの上昇と関連しているという認識を包含する。本発明は、特定の組織中のＣＸＣＬ１２のレベルの上昇と関連している自己免疫障害は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストで治療され得るという認識を包含する。
【０２６２】
したがって、一部の実施形態において、本発明は、（１）糖尿病などの自己免疫障害に罹患している、および／または罹り易い被験体を提供する工程、（２）該自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に充分なレベルのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを投与する工程を含む方法を提供する。
【０２６３】
本発明は、自己免疫障害に罹患しているが、自己免疫障害の症状を示していない患者の
特定方法を提供する。例えば、本発明者らは、ＣＸＣＲ１２レベルが４〜５週齢のＮＯＤマウスにおいて上昇しており、これは、ＮＯＤマウスにおける糖尿病の通常の発症よりずっと前であることを見い出した。したがって、本発明は、被験体が特定の自己免疫障害（例えば、糖尿病）を発現するか否かを予測する方法を提供する。
【０２６４】
したがって、一部の実施形態において、本発明は、（１）被験体を提供する工程、（２）糖尿病などの自己免疫障害に罹患している、および／または罹り易い被験体を特定するために、特定の組織中（例えば、骨髄、血液など）のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４のレベルを測定する工程、（３）該自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に充分なレベルのＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを投与する工程を含む方法を提供する。
【０２６５】
また、本明細書に記載の治療方法および／または診断方法はいずれも、自己免疫障害のための他の治療を併用したＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与を含むものであってもよい。併用療法は、以下のセクションにさらに詳細に記載する。
【０２６６】
投与
一部の実施形態において、治療有効量の本発明による組成物が被験体および／または生物体に、疾患、障害および／または病状（例えば、Ｉ型糖尿病などの自己免疫疾患）が診断される前、同時および／または後に送達される。一部の実施形態では、治療量の本発明による組成物が患者および／または生物体に、疾患、障害および／または病状の症状の発症の前、同時および／または後送達される。一部の実施形態において、本発明による組成物の量は、該疾患、障害および／または病状の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に充分な量である。
【０２６７】
本発明による組成物は、治療に有効な任意の量および任意の投与経路を用いて投与され得る。必要とされる厳密な量は、被験体の種、年齢および一般的な体調、感染の重症度、具体的な組成物、その投与様式、活性様式などに応じて被験体ごとに異なる。本発明による組成物は、典型的には、容易な投与および均一な投薬量のために単位投薬形態に製剤化される。しかしながら、本発明による組成物の１日の層使用量は、担当医師により妥当な医学的判断の範囲内で決定されることは理解されよう。任意の特定の被験体または生物体に対する具体的な治療有効用量レベルは、さまざまな要素、例えば、治療対象の障害および該障害の重症度；使用される具体的な活性成分の活性；使用される具体的な組成物；被験体の年齢、体重、一般健康状態、性別および食生活；使用される具体的な活性成分の投与期間、投与経路および排出速度；治療の持続期間；使用される具体的な活性成分と併用または同時使用される薬物；ならびに医学分野でよく知られた同様の要素に依存する。
【０２６８】
本発明による医薬組成物は、任意の経路によって投与され得る。一部の実施形態において、本発明による医薬組成物は、さまざまな経路、例えば、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、皮下、脳室内、経皮、皮内、経直腸、膣内、腹腔内、局所（散剤、軟膏、クリーム剤および／または滴剤などによる）、経皮、経粘膜、経鼻、口腔内、経腸、舌下；気管内滴注、気管支内滴注、および／または吸入によって；および／または経口スプレー剤、経鼻スプレー剤、および／またはエアロゾル剤として投与される。具体的に想定される経路は、全身静脈内注射、血液および／またはリンパ供給による局所投与、および／または罹患部位への直接投与である。一部の実施形態において、本発明による組成物は非経口投与される。一部の実施形態では、本発明による組成物は静脈内投与される。一部の実施形態では、本発明による組成物は経口投与される。
【０２６９】
一般に、最も適切な投与経路は、さまざまな要素、例えば、薬剤の性質（例えば、胃腸管環境内でのその安定性）、被験体の状態（例えば、被験体が経口投与に耐え得るかどうか）などに依存する。現在、肺および／または呼吸器系に直接治療用薬剤を送達するには、経口経路および／または経鼻スプレー剤および／またはエアロゾル剤による経路が最も一般的に使用されている。しかしながら、本発明は、薬物送達科学が進歩するであろうことを考慮し、任意の適切な経路による医薬組成物の送達を包含する。
【０２７０】
特定の実施形態において、治療用薬剤は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ（被験体体重／日）の範囲の量で、１日１回以上、所望の治療効果が得られるように投与され得る。所望の投薬量は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日おき、毎週、２週間おき、３週間おき、または４週間おきに送達され得る。特定の実施形態において、所望の投薬量は、反復投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、またはそれ以上の投与）を用いて送達され得る。
【０２７１】
本発明による治療用薬剤および医薬組成物は、併用療法に使用され得ることは認識されよう。一部の実施形態において、本発明は、本発明による組成物を含む「治療剤カクテル」を包含する。併用レジメンに使用される治療（治療剤または手順）の具体的な組合せには、所望の治療剤および／または手順の適合性、ならびに達成されるべき所望の治療効果が考慮される。使用される複数の治療剤は、同じ目的に対して所望の効果が得られることは認識されよう。例えば、ＡＭＤ３１００は、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用に負の影響を及ぼす別の薬剤とともに投与され得る。別の例を挙げると、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用に負の影響を及ぼす薬剤（例えば、ＡＭＤ３１００）は、自己免疫障害の治療に有用な別の薬剤（例えば、インスリン、シクロスポリン、抗ＣＤ３抗体など）とともに投与され得る。一部の実施形態において、使用される治療剤によって、異なる効果（例えば、任意の有害な副作用の抑制）が得られる。
【０２７２】
本発明による医薬組成物は、単独、または１種類以上の他の治療用薬剤との併用のいずれかで投与され得る。「〜と併用」は、薬剤が同時に投与されなければならないこと、および／または一緒に送達するために製剤化されなければならないことを含意することを意図するものではないが、このような送達方法は本発明の範囲に含まれる。さらに、併用される治療上活性な薬剤は、単一の組成物にて一緒に投与してもよく、異なる組成物にて別々に投与してもよいことは認識されよう。組成物は、１種類以上の他の所望の治療剤または医療処置と同時、その前または後に投与され得る。一般に、各薬剤は、当該薬剤に対して決定された用量および／または日程で投与される。一般に、併用して使用される薬剤は、それらが個々に使用されるレベルを超えないレベルで使用されることが予測される。一部の実施形態において、併用時のレベルは、個々に使用される場合よりも少ない。さらに、本発明は、医薬組成物を、そのバイオアベイラビリティの改善、代謝の低減および／または、排出の抑止、および／または体内分布の変更をもたらし得る薬剤と併用して送達することを包含する。
【０２７３】
併用レジメンに使用される治療（治療剤または手順）の具体的な組合せには、所望の治療剤および／または手順の適合性、ならびに達成されるべき所望の治療効果が考慮される。使用される複数の治療剤は、同じ障害に対して所望の効果を得ることができること（例えば、本発明による薬剤は、同じ障害を治療するために使用される別の治療用薬剤と同時に投与され得る）、および／または異なる効果（例えば、有害な副作用（あれば）の抑制）が得られるものであってもよいことは認識されよう。一部の実施形態において、本発明による組成物は、米国食品医薬品局によって承認された第２の治療用薬剤とともに投与される。
【０２７４】
一部の実施形態において、本発明による組成物は、自己免疫障害の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、炎症を抑止する種々の薬剤（例えば、ステロイド）は、自己免疫障害一般を治療するために使用され得る。一部の実施形態において、本発明による組成物は、自己免疫障害を治療するために、炎症を抑止する薬剤（例えば、ステロイド）と併用して投与され得る。
【０２７５】
具体的な実施形態において、本発明による組成物は、糖尿病の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、本発明による組成物は、従来の糖尿病治療（例えば限定されないが、インスリン投与）と併用して投与され得る。
【０２７６】
具体的な実施形態において、本発明による組成物は、関節リウマチの１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、本発明による組成物は、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＴＮＦα受容体、鎮痛薬、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、および／または関節リウマチの治療に有用な他の薬剤と併用して投与され得る。
【０２７７】
具体的な実施形態において、本発明による組成物は、クローン病の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、本発明による組成物は、抗ＴＮＦα受容体および／またはクローン病の治療に有用な他の薬剤と併用して投与され得る。
【０２７８】
具体的な実施形態において、本発明による組成物は、多発性硬化症の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、本発明による組成物は、インターフェロンβ−１ｂ、インターフェロンβ−１ａ、および／または多発性硬化症の治療に有用な他の薬剤と併用して投与され得る。
【０２７９】
具体的な実施形態において、本発明による組成物は、肉芽腫症および／または骨粗鬆症の１つ以上の症状または特徴の治療、緩和、改善、軽減、発症の遅延、進行の抑止、重症度の低減および／または発病の低減に有用な任意の治療用薬剤または治療レジメンと併用して投与され得る。例えば、本発明による組成物は、インターフェロンβ−１ｂおよび／または肉芽腫症および／または骨粗鬆症の治療に有用な他の薬剤と併用して投与され得る。
【０２８０】
当業者には、上記の例が限定を意図するものでないことが理解されよう。上記の例にて提示される原理は、自己免疫疾患の治療のための任意の併用療法剤に一般的に適用され得る。
【０２８１】
医薬組成物
本発明は、自己免疫障害（例えば、糖尿病）の治療に有用な新規な薬剤を提供する。一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の薬剤および１種類以上の薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物を提供する。かかる医薬組成物は、任意選択で、１種類以上の治療上活性なさらなる物質を含むものであってもよい。一部のある実施形態によれば、本発明による組成物を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与する方法が提供される。一部の実施形態において、本発明による組成物はヒトに投与される。本発明の解釈上、語句「活性成分」は、一般的に、自己免疫障害（例えば、糖尿病）の治療に有用な本発明による薬剤をいう。
【０２８２】
本明細書に示した医薬組成物の記載は、主に、ヒトへの投与に適した医薬組成物に関するが、当業者には、かかる組成物が、あらゆる種類の動物への投与に対して一般的に適していることが理解されよう。ヒトへの投与に適した医薬組成物を、該組成物が種々の動物への投与に適するように修飾することは充分理解されており、当業者である獣医薬理学者は、単なる通常の実験手法（必要であるならば）により、かかる修飾を設計および／または実施することができよう。本発明による医薬組成物の投与が想定される患者としては、限定されないが、ヒトおよび／または他の霊長類；哺乳動物、例えば、商業関連の哺乳動物（ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、および／またはイヌなど）；および／または鳥類、例えば、商業関連の鳥類（ニワトリ、アヒル、ガチョウ、および／またはシチメンチョウなど）が挙げられる。
【０２８３】
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、製薬技術分野において既知または今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を１種類以上の賦形剤および／または１種類以上の他の補助成分と合わせ、次いで、必要および／または望ましい場合は、生成物を所望の単回−または反復−用量単位に成形および／またはパッケージングする工程を含む。
【０２８４】
本発明による医薬組成物は、単位単回用量としてバルクで、および／または複数の単位単回用量として調製、パッケージングおよび／または販売され得る。本明細書で使用されるとき、「単位用量は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個々の量である。活性成分の量は、一般的に、被験体に投与され得る活性成分の投薬量、および／またはかかる投薬量の簡単な分数（例えば、かかる投薬量の１／２または１／３など）に相当する。
【０２８５】
本発明による医薬組成物における活性成分、薬学的に許容され得る賦形剤、および／または任意のさらなる成分の相対量は、治療される被験体の個人の特徴、体格、および／または状態に応じて、さらに、組成物が投与される経路に応じて異なる。一例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０２８６】
本発明による医薬製剤には、さらに薬学的に許容され得る賦形剤（本明細書で使用されるとき、該賦形剤としては、任意のあらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液状ビヒクル、分散もしくは懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存料、固形結合剤、滑沢剤などが挙げられる）が、所望の具体的な投薬形態に適するように含まれ得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２１版，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６）には、医薬組成物の製剤化に使用される種々の賦形剤およびその調製のための既知の手法が開示されている。慣用的な賦形剤はいずれも、物質またはその誘導体と非適合性である（望ましくない生物学的効果（あれば）をもたらすこと、あるいは医薬組成物の任意の他の成分と有害な様式で相互作用することなどにより）である場合を除き、その使用が本発明の範囲に含まれると想定する。
【０２８７】
一部の実施形態において、薬学的に許容され得る賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％純粋である。一部の実施形態において、賦形剤は、ヒトにおける使用および獣医学的使用に承認されたものである。一部の実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されたものである。一部の実施形態では、賦形剤は医薬等級である。一部の実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方および／または国際薬局方の基準を満たすものである。
【０２８８】
医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容され得る賦形剤としては、限定されないが、不活性希釈剤、分散剤および／または造粒剤、界面活性剤および／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存料、緩衝剤、滑沢剤、および／または油類が挙げられる。かかる賦形剤は、任意選択で、本発明による製剤に含有され得る。ココアバターおよび坐剤用ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、フレーバー剤および香料剤などの賦形剤は、製剤者の判断によって組成物中に存在させ得る。
【０２８９】
例示的な希釈剤としては、限定されないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微晶質セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉糖など、およびその組合せが挙げられる。
【０２９０】
例示的な造粒剤および／または分散薬剤としては、限定されないが、イモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、柑橘類果肉、寒天、ベントナイト、セルロースおよび木材製品、天然海綿、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニルピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）ナトリウム、メチルセルロース、アルファ化デンプン（ｓｔａｒｃｈ  １５００）、微晶質デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）、ラウリル硫酸ナトリウム、第４級アンモニウム化合物など、およびその組合せが挙げられる。
【０２９１】
例示的な界面活性剤および／または乳化剤としては、限定されないが、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドルックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、およびレシチン）、コロイド状クレイ（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］およびＶｅｅｇｕｍ［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、グリセリルモノステアレート、およびプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、およびカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［Ｔｗｅｅｎ  ２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［Ｔｗｅｅｎ  ６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［Ｔｗｅｅｎ  ８０］、ソルビタンモノパルミテート［Ｓｐａｎ  ４０］、ソルビタンモノステアレート［Ｓｐａｎ  ６０］、ソルビタントリステアレート［Ｓｐａｎ  ６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［Ｓｐａｎ  ８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［Ｍｙｒｊ  ４５］、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、およびＳｏｌｕｔｏｌ）、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［Ｂｒｉｊ  ３０］）、ポリ（ビニルピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウムなど．および／またはその組合せが挙げられる。
【０２９２】
例示的な結合剤としては、限定されないが、デンプン（例えば、コーンスターチおよびデンプンペースト）；ゼラチン；糖類（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然および合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイルランドゴケの抽出物、パンワー（ｐａｎｗａｒ）ゴム、インドゴム、イサポール（ｉｓａｐｏｌ）外皮の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微晶質セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニルピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）、およびカラマツアラボガラクタン）；アルギネート；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ワックス；水；アルコール；など；およびその組合せが挙げられる。
【０２９３】
例示的な保存料としては、抗酸化剤、キレート化剤、抗菌性保存料、抗真菌性保存料、アルコール性保存料、酸性保存料、および他の保存料が挙げられる。例示的な抗酸化剤としては、限定されないが、αトコフェロール、アスコルビン酸、アスコルビン酸パルミチン酸エステル（ａｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および亜硫酸ナトリウムが挙げられる。例示的なキレート化剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、およびエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的な抗菌性保存料としては、限定されないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、およびチメロサールが挙げられる。例示的な抗真菌性保存料としては、限定されないが、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、およびソルビン酸が挙げられる。例示的なアルコール性保存料としては、限定されないが、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール系化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸塩、およびフェニルエチルアルコールが挙げられる。例示的な酸性保存料としては、限定されないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、およびフィチン酸が挙げられる。他の保存料としては、限定されないが、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、Ｇｌｙｄａｎｔ  Ｐｌｕｓ、Ｐｈｅｎｏｎｉｐ、メチルパラベン、Ｇｅｒｍａｌｌ  １１５、Ｇｅｒｍａｂｅｎ  ＩＩ、Ｎｅｏｌｏｎｅ、Ｋａｔｈｏｎ、およびＥｕｘｙｌが挙げられる。特定の実施形態において、保存料は抗酸化剤である。他の実施形態において、保存料はキレート化剤である。
【０２９４】
例示的な緩衝剤としては、限定されないが、クエン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、リン酸緩衝溶液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化カルシウムリン酸塩、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張性生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコールなど、およびその組合せが挙げられる。
【０２９５】
例示的な滑沢剤としては、限定されないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、モルト、ベヘン酸グリセリル、水添植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムなど、およびその組合せが挙げられる。
【０２９６】
例示的な油類としては、限定されないが、アーモンド油、アプリコットカーネル油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、ブラックカラント種子油、ルリヂサ油、ジュニパータール油、カモミール油、キャノーラ油、キャラウェー油、カルナウバ蝋、ヒマシ油、シナモン油、ココアバター、ココナッツ油、タラ肝油、コーヒー油、コーン油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、月見草油、魚油、アマニ油、ゲラニオール、ウリ油、グレープシード油、ヘーゼルナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、リツェアクベバ油、マカダミアナッツ油、マロー油、マンゴーシード油、メドウフォームシード油、ミンク油ル、ニクズク油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、ヤシ油、パーム核油、杏仁油、ピーナッツ油、ケシ油、パンプキンシード油、ナタネ油、ヌカ油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サザンカ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、フレーバー（ｓａｖｏｕｒｙ）油、シーバックソーン油、ゴマ油、シアバター油、シリコーン油、大豆油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチベル油、胡桃油、および小麦胚芽油が挙げられる。例示的な油類としては、限定されないが、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコーン、セバシン酸ジエチル、ジメチコーン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、およびその組合せが挙げられる。
【０２９７】
経口および非経口投与のための液状投薬形態としては、限定されないが、薬学的に許容され得る乳剤、マイクロエマルジョン剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加え、液状投薬形態には、当該技術分野で一般に使用されている不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジル安息香酸塩、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油類（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルなど、ならびにその混合物が含まれ得る。不活性希釈剤の他に、経口用組成物に、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、フレーバー剤、ならびに香料剤などのアジュバントを含んでよい。非経口投与の特定の実施形態では、活性成分は、可溶化剤、例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、アルコール、油類、改質油類、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、およびその組合せと混合され得る。
【０２９８】
注射用調製物、例えば、滅菌された注射用水性または油性懸濁剤は、既知の技術に従って、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化され得る。滅菌注射用調製物は、無毒性の非経口に許容され得る希釈剤または溶媒中における滅菌された注射用液剤、懸濁剤または乳剤（例えば、１，３−ブタンジオール中における液剤）であり得る。とりわけ、使用され得る許容され得るビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液である。また、滅菌固定油は、溶媒または懸濁媒体として慣用的に使用されている。この目的には、任意の無刺激性の固定油（例えば、合成モノ−またはジグリセリド）が使用され得る。また、オレイン酸などの脂肪酸が注射用剤の調製に使用される。
【０２９９】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターに通す濾過によって、または滅菌水または他の滅菌注射用媒体中で溶解または分散し得る滅菌固形組成物の形態の滅菌用薬剤を使用前に組み込むことにより滅菌され得る。
【０３００】
薬物の効果を長引かせるため、多くの場合、皮下または筋肉内注射により薬物の吸収を低速化させることが望ましい。これは、水溶性が不充分な結晶質または非晶質物質の液状懸濁剤の使用によってなされ得る。このとき、薬物の吸収速度は溶解速度に依存し、この溶解速度は結晶の大きさおよび結晶質形態に依存し得る。あるいはまた、非経口投与形態の薬物の吸収遅延は、薬物を油性ビヒクル中に溶解または懸濁させることによりなされ得る。
【０３０１】
経直腸または経膣投与のための組成物は、典型的には座剤であり、これは、本発明による活性成分を、適当な非刺激性賦形剤（ココアバター、ポリエチレングリコール、または周囲温度で固体であるが、体温では液体となり、したがって直腸または膣腔内で融解して活性成分を放出する坐剤用ワックスなど）と混合することにより調製され得る。
【０３０２】
経口投与のための固形投薬形態としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が挙げられる。かかる固形投薬形態では、活性成分は、少なくとも１種類の不活性な薬学的に許容され得る賦形剤、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムおよび／または（ａ）充填剤もしくは増量剤（デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸など）、（ｂ）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシアなど）、（ｃ）湿潤剤（グリセロールなど）、（ｄ）崩壊剤（寒天、炭酸カルシウム、イモデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、および炭酸ナトリウムなど）、（ｅ）溶解遅延剤（パラフィンなど）、（ｆ）吸収促進剤（第４級アンモニウム化合物など）、（ｇ）湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなど）、（ｈ）吸湿剤（カオリンおよびベントナイト  クレイなど）、および／または（ｉ）滑沢剤（タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムなど）など、ならびにその混合物と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、投薬形態には緩衝剤が含まれ得る。
【０３０３】
同様の型の固形組成物が、例えばラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用し、軟質および硬質充填型ゼラチン製カプセル剤の充填物質として使用され得る。固形投薬形態である錠剤、糖衣剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤は、コーティングおよび殻（腸溶性コーティングなど、および医薬製剤技術分野でよく知られた他のコーティング）を有するように調製され得る。該投薬形態は、任意選択で不透明化剤を含むものであり得、活性成分のみを放出するか、または該成分を腸管の特定の部分に優先的に、任意選択で遅延様式で放出する組成物であり得る。使用され得る埋入用組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。同様の型の固形組成物が、例えばラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用し、軟質および硬質充填型ゼラチン製カプセル剤の充填物質として使用され得る。
【０３０４】
活性成分は、上記の１種類以上の賦形剤を用いてマイクロカプセルに封入された形態であり得る。固形投薬形態である錠剤、糖衣剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤は、コーティングおよび殻（腸溶性コーティング、放出制御コーティングなど、および医薬製剤技術分野でよく知られた他のコーティング）を有するように調製され得る。かかる固形投薬形態では、活性成分は、少なくとも１種類の不活性希釈剤（スクロース、ラクトースまたはデンプンなど）と混合され得る。かかる投薬形態には、通常行なわれているように、不活性希釈剤以外のさらなる物質、例えば、打錠用滑沢剤および他の打錠用助剤（ステアリン酸マグネシウムおよび微晶質セルロースなど）が含まれ得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、投薬形態には緩衝剤が含まれ得る。該投薬形態は、任意選択で不透明化剤を含むものであり得、活性成分のみを放出するか、または該成分を腸管の特定の部分に優先的に、任意選択で遅延様式で放出する組成物であり得る。使用され得る埋入用組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。
【０３０５】
本発明の組成物の局所および／または経皮投与のための投薬形態としては、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤および／またはパッチ剤が挙げられる。一般的に、活性成分は、滅菌条件下で、薬学的に許容され得る賦形剤および／または必要に応じて任意の必要な保存料および／または緩衝剤と混合される。さらに、本発明では経皮パッチ剤の使用を想定する。経皮パッチ剤は、多くの場合、身体への活性成分の送達制御もたらすという付加的な利点を有する。かかる投薬形態は、例えば、活性成分を適正な媒体に溶解および／または分散させることにより調製され得る。あるいはまたさらに、速度は、速度制御膜を設けること、および／または活性成分をポリマーマトリックスおよび／またはゲル中に分散させることのいずれかによって制御され得る。
【０３０６】
本明細書に記載の皮内用医薬組成物の送達における使用に好適なデバイスとしては、短針デバイスが挙げられる（米国特許第４，８８６，４９９号；同第５，１９０，５２１号；同第５，３２８，４８３号；同第５，５２７，２８８号；同第４，２７０，５３７号；同第５，０１５，２３５号；同第５，１４１，４９６号；および同第５，４１７，６６２号に記載のものなど）。皮内用組成物は、皮膚内への針の有効貫通長さを制限するデバイスによって投与され得る（国際公開第９９／３４８５０号に記載のものなど、およびその機能的同等物）。液体ジェット式注射器および／または角質層を貫通して真皮に噴出する針によって液状ワクチンを真皮に送達するジェット式注射デバイスが好適である。ジェット式注射デバイスは、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号；同第５，５９９，３０２号；同第５，３３４，１４４号；同第５，９９３，４１２号；同第５，６４９，９１２号；同第５，５６９，１８９号；同第５，７０４，９１１号；同第５，３８３，８５１号；同第５，８９３，３９７号；同第５，４６６，２２０号；同第５，３３９，１６３号；同第５，３１２，３３５号；同第５，５０３，６２７号；同第５，０６４，４１３号；同第５，５２０，６３９号；同第４，５９６，５５６号；同第４，７９０，８２４号；同第４，９４１，８８０号；同第４，９４０，４６０号；ならびに国際公開第９７／３７７０５号および同９７／１３５３７号に記載されている。皮膚の外層を通過して真皮への粉末形態のワクチンを加速させるための圧縮ガスを用いた高速弾動粉末／粒子送達デバイスが好適である。あるいはまたさらに、従来のマントゥー法の皮内投与での慣用的なシリンジが使用され得る。
【０３０７】
局所投与に適した製剤としては、限定されないが、液状および／または半液状調製物、例えば、リニメント剤、ローション剤、水中油型および／または油中水型乳剤、例えば、クリーム剤、軟膏および／またはペースト剤、および／または液剤および／または懸濁剤が挙げられる。局所投与が可能な製剤には、例えば約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分が含まれ得るが、活性成分の濃度は、溶媒中への活性成分の溶解限界程度まで高い場合もあり得る。局所投与のための製剤には、さらに、本明細書に記載の任意の賦形剤および／またはさらなる成分の１種類以上が含まれ得る。
【０３０８】
本発明による医薬組成物は、口腔を経由する肺内投与に適した製剤に調製、パッケージングおよび／または販売され得る。かかる製剤は、活性成分を含み、かつ約０．５μｍ〜約７μｍまたは約１μｍ〜約６μｍの範囲の直径を有する乾燥粒子で構成され得る。かかる組成物は、噴射剤流が粉末剤を分散させるように指向され得る乾燥粉末剤貯蔵部を備えたデバイスを用いて、および／または自己噴射性溶媒／粉末剤分散容器（密封容器内に低沸点噴射剤中に溶解および／または懸濁させた活性成分を含むデバイスなど）を用いて投与するための簡便な乾燥粉末剤の形態である。かかる粉末剤は、重量基準で少なくとも９８％が０．５μｍより大きい直径を有し、数量基準で少なくとも９５％が７μｍより小さい直径を有する粒子で構成されたものである。あるいはまた、重量基準で少なくとも９５％が１μｍより大きい直径を有し、数量基準で少なくとも９０％が６μｍより小さい直径を有する。乾燥粉末剤組成物には、固形微粉末希釈剤（糖など）が含まれ得、単位用量形態で簡便に提供される。
【０３０９】
低沸点噴射剤としては、一般的に、大気圧で６５°Ｆより低い沸点を有する液状噴射剤が挙げられる。一般的に、噴射剤が組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成し、活性成分が組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成するのがよい。噴射剤は、さらに、液状の非イオン系および／または固形のアニオン系界面活性剤および／または固形の希釈剤（これは、活性成分を含む粒子と同程度の粒径を有するのがよい）などのさらなる成分を含むものであってもよい。
【０３１０】
肺送達用に製剤化された本発明による医薬組成物は、活性成分を、液剤および／または懸濁剤の液滴の形態で提供し得る。かかる製剤は、活性成分を含む任意選択で滅菌された水性および／または希釈アルコール性の液剤および／または懸濁剤として調製、パッケージングおよび／または販売され得、任意の噴霧化および／または微小滴化デバイスを用いて簡便に投与され得る。かかる製剤には、さらに、１種類以上のさらなる成分であって、限定はされないが、フレーバー剤（サッカリンナトリウムなど）、揮発油、緩衝剤、界面活性剤および／または保存料（ヒドロキシ安息香酸メチルなど）が含まれ得る。この投与経路によってもたらされる液滴は、約０．１μｍ〜約２００μｍの範囲の平均直径を有し得る。
【０３１１】
肺送達に有用な本明細書に記載の製剤は、本発明による医薬組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含み、かつ約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒子を有する粗粉末剤である。かかる製剤は、鼻から吸う様式で、すなわち、鼻道を経由する容器から外鼻孔近傍への保持された粉末の急速吸入によって投与される。
【０３１２】
経鼻投与に適した製剤には、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）程度の少量から１００％（ｗ／ｗ）程度の多量の活性成分が含まれ得、本明細書に記載の任意の賦形剤および／またはさらなる成分の１種類以上が含まれ得る。本発明による医薬組成物は、口腔内投与に適した製剤に調製、パッケージングおよび／または販売され得る。かかる製剤は、例えば、慣用的な方法を用いて作製される錠剤および／またはロゼンジ剤の形態であり得、例えば０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分、残部が経口によって溶解可能なおよび／または分解可能な組成物、任意選択で、本明細書に記載の任意の賦形剤および／またはさらなる成分の１種類以上で構成され得る。あるいはまた、口腔内投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末剤および／またはエアロゾル化および／または微小滴化された液剤および／または懸濁剤で構成され得る。かかる粉末化、エアロゾル化および／またはエアロゾル化された製剤は、分散させた場合、約０．１μｍ〜約２００μｍの範囲の平均粒径および／または液滴径を有し得、さらに、本明細書に記載の任意の賦形剤および／またはさらなる成分の１種類以上が含まれ得る。
【０３１３】
本発明による医薬組成物は、眼科用投与に適した製剤に調製、パッケージングおよび／または販売され得る。かかる製剤は、例えば、例えば、活性成分／水性または油性液状賦形剤が０．１％／１．０％（ｗ／ｗ）の液剤および／または懸濁剤を含む点眼剤の形態であり得る。かかる点眼剤には、さらに、緩衝剤、塩、および／または本明細書に記載の任意の賦形剤および／またはさらなる成分の１種類以上が含まれ得る。他の眼科的（ｏｐｔｈａｌｍｉｃａｌｌｙ）投与が可能な有用な製剤としては、微晶質形態および／またはリポソーム調製物の形態の活性成分を含むものが挙げられる。点耳剤および／または点眼剤は、本発明の範囲に含まれると想定される。
【０３１４】
医薬用薬剤の製剤化および／または製造における一般的な考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２１版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５で見ることができる。
【０３１５】
キット
本発明は、１種類以上の本発明による任意の組成物を備えたさまざまなキットを提供する。例えば、本発明は、本発明による組成物と使用のための使用説明書を備えたキットを提供する。キットは、多様な異なる組成物を備えたものであってもよい。キットは、いくつかの種類の任意のさらなる成分または試薬を任意の組合せで備え得る。種々のあらゆる組合せは、明示していないが、各々の組合せが本発明の範囲に含まれる。
【０３１６】
特定の実施形態によれば、キットは、例えば、（ｉ）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト；（ｉｉ）ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストを、それを必要とする被験体に投与するための使用説明書を備え得る。
【０３１７】
特定の実施形態によれば、新規なＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストの同定および／またはスクリーニングに有用な物質を含むキットが提供され得る。かかるキットは、例えば、（ｉ）候補物質のライブラリー；（ｉｉ）陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト；（ｉｉｉ）陰性対象として供され得る物質を含み得る。一部の実施形態において、陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしての活性を有することが既に知られている物質を含み得る。一部の実施形態では、陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストは、特定の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が治療されることが既に知られているものであり得る。一部の実施形態において、陰性対象として供され得る物質は、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストとしての活性をもたないことが既に知られている物質であり得る。一部の実施形態では、陰性対象として供され得る物質は、特定の自己免疫障害（例えば、糖尿病）が治療されないことが既に知られているものであり得る。
【０３１８】
特定の実施形態によれば、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニストでの治療に応答するであろう患者の同定することおよび／またはスクリーニングに有用な物質を含むキットが提供され得る。かかるキットは、例えば、（ｉ）被験体からの骨髄および／または血液試料の採取に適した装置；（ｉｉ）ウエスタンブロッティングおよび／またはＥＬＩＳＡアッセイにおいてＣＸＣＬ１２を認識する抗体；（ｉｉｉ）ウエスタンブロッティングおよび／またはＥＬＩＳＡアッセイで陽性対照として供され得るＣＸＣＬ１２タンパク質；（ｉｖ）骨髄および／または血液の参照試料（例えば、非糖尿病個体由来の試料）を含み得る。
【０３１９】
キットには、典型的には、本発明による組成物の使用のための使用説明書を含める。使用説明書は、例えば、プロトコルを含むもの、および／または組成物の作製や、組成物をそれを必要とする被験体に投与するための条件などが記載され得る。キットは、一般的に、個々の成分および試薬の一部または全部が個々に収容され得るように１つ以上の容器または入れ物を含む。また、キットには、市販用に個々の容器を比較的コンパクトに寄せ集めて封入するための手段、例えばプラスチックボックスを含むものであり得、これには、使用説明書、パッケージング材料（例えば、発泡スチロールなど）が封入され得る。
【実施例】
【０３２０】
実施例１：
ＮＯＤマウスの骨髄におけるＣＸＣＬ１２発現の上昇によって、Ｔ細胞輸送および幹細胞動員が改変されることにより、糖尿病の発現が促進される
材料および方法
マウス
ＮＯＤマウスはＴａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓから入手した。すべての試験において雌ＮＯＤマウスを使用し、尿中グルコースレベルの確認を、およそ１２週齢から開始し、１週間に少なくとも２回行なうことにより糖尿病についてモニタリングした。マウスは、Ｄｉａｓｔｉｘ（Ｂａｙｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で測定の際、尿中グルコースレベルが５００ｍｇ／ｄｌに達したとき、糖尿病とみなした。糖尿病マウスはまた、多くの場合、多渇症、多尿症および体重減少を示した。未処置ＮＯＤ雌マウスのほぼ９５％が７ヶ月齢までに糖尿病となった。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＥＡ１６ＮＯＤマウスは、Ｄｉａｎｅ  Ｍａｔｈｉｓ博士およびＣｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｂｅｎｏｉｓｔ博士から入手した。Ｃｘｃｒ４ｆ／ｆ  Ｌｃｋ−Ｃｒｅマウスおよび同腹子Ｃｘｃｒ４＋／ｆ  Ｌｃｋ−Ｃｒｅは、混合型１２９／Ｃ５７ＢＬ／６背景であり、Ｃｘｃｒ４＋／ｆ  Ｌｃｋ−Ｃｒｅマウスと交配することにより作成した。マウスはすべて、特定の無菌施設で維持した。ＡＭＤ３１００処置のため、前糖尿病ＮＯＤマウスにＡＭＤ３１００（５ｍｇ／ｋｇ）を毎日、表示した期間、皮下投与した。Ｔ細胞分布の解析のため、マウスを最後のＡＭＤ３１００注射の２時間後に致死させた。
【０３２１】
抗体およびフローサイトメトリー
単独細胞懸濁液を、脾臓、リンパ節（例えば、浅頚、上腕、腋窩、鼡径、腸間膜、および膵臓流入領域のリンパ節）、ならびに骨髄（例えば、２本の大腿骨と２本の脛骨を、５％ウシ胎仔血清［ＦＣＳ］含有冷ＲＰＭＩ  １６４０培地で洗浄することによって採取）から調製した。染色用抗体は、抗Ｆｏｘｐ３、細胞系統マーカー（Ｌｉｎ）、ならびにｃ−ＫｉｔおよびＳｃａ−１（これらは、それぞれ、Ｅ−ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、およびＢｉｏｌｅｇｅｎｄから購入）以外はすべて、ＢＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。細胞を、０．１％ＢＳＡおよび０．１％ＮａＮ３を含有するＰＢＳ中２．５μｇ／ｍｌの抗ＦｃＲ抗体の存在下で染色し、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｅｒまたはＬＳＲ  ＩＩまたはＦＡＣＳＡｒｉａ（１つの試料あたり、１０，０００〜１，０００，０００個の生細胞を収集）にて解析した。解析は、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて行なった。ＬＳＫ細胞の解析のため、低レベルの細胞系統マーカー発現を有する全細胞の１０％を、Ｓｃａ−１対ｃ−Ｋｉｔ発現プロファイルのさらなる解析のためにゲート設定（ｇａｔｅ）した。Ｆｏｘｐ３およびＫｉ６７の細胞内染色は、製造業者の使用説明書に従って行なった。
【０３２２】
免疫組織化学検査
膵臓を１０％ホルマリン中に固定し、パラフィン中に包埋し、切片を作製した。パラフィン包埋組織切片をヘマトキシリンとエオシンで染色し、並列切片を、ポリクローナルモルモット抗インスリン（Ｚｙｍｅｄ）または抗グルカゴン抗体（Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．）で染色した後、ＡＢＣシステムＫｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とともにインキュベーションした。破壊性インスリン炎（インスリン染色の減少）について、膵臓のインスリン染色切片を、グルカゴンに対して染色された連続切片とマッチングさせた。インスリン炎を、インスリンに対して陽性に染色されたか否かに関係なく、島内の浸潤性リンパ球の存在と定義する。
【０３２３】
ケモカイン遺伝子発現
ＲＮＡを骨髄から、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＲＮＥａｓｙ  ＭｉｎｉＰｒｅｐキット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて単離した。ＲＮＡを、Ａｍｐｈｏ−Ｌａｂｅｌｉｎｇキット（Ｓｕｐｅｒａｒｒａｙ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）を用いて逆転写し、ｃＤＮＡをビオチン−１６−ｄＵＴＰ（Ｒｏｃｈｅ）で標識した。サイトカイン発現を、Ｏｌｉｇｏ  ＧＥＡｒｒａｙ（登録商標）Ｍｏｕｓｅ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ＆  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ（Ｓｕｐｅｒａｒｒａｙ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）を用いて評価した。ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ１９、ＧＡＰＤＨ、およびＨＰＲＴ転写物のリアルタイムＰＣＲを、プローブおよびマスター混合物キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を用いて行なった。
【０３２４】
Ｔ細胞のホーミング
Ｔ細胞を１２〜１６週齢のＮＯＤおよびＢＡＬＢ／ｃマウスのリンパ節と脾臓から、ＭＡＣＳを用いたネガティブ除去（陰性ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）によって精製し、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃおよびＢ２００に特異的なビオチン化抗体で、続いて、ストレプトアビジン−マイクロビーズで染色した。精製Ｔ細胞（＞９５％純度）を１．５μＭのＣＦＳＥで標識し、洗浄し、次いで、ＨＢＳＳ溶液中に懸濁させた。２０×１０６または５０×１０６個のＣＦＳＥ標識細胞を、ＮＯＤおよびＢＡＬＢ／ｃマウスに導入した。２時間後（５０×１０６細胞を導入したマウスの場合）、または４８時間後（２０×１０６細胞を導入したマウスの場合）、レシピエントを致死させ、ＣＤ４  Ｔ細胞の導入頻度を骨髄、リンパ節および脾臓において、ＣＦＳＥとＣＤ４のフローサイトメトリーアッセイによって測定した。個々のレシピエントマウス間の導入細胞数の差を補正するため、ホーミング指数（ＨＩ）を算出した：ＨＩ＝［ＢＭまたはＬＮ中の％ＣＦＳＥ＋  Ｔ細胞］／［  脾臓中の％ＣＦＳＥ＋  ＣＤ４  Ｔ細胞］。
【０３２５】
統計解析
有意性に関する統計学的解析は、両側スチューデントｔ検定またはカプラン・マイヤー積極限推定のいずれかで行なった。図１〜１２に示すエラーバーは１標準偏差である。
【０３２６】
略号のリスト
ＣＸＣＬ１２、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２；ＳＤＦ−１、ストロマ細胞由来因子−１；ＣＸＣＲ４、ＣＸＣケモカイン受容体４；ＣＦＡ、完全フロイントアジュバント；Ｇ−ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子；ＨＳＣ、造血幹細胞；ＴＩＤ、Ｉ型糖尿病。
【０３２７】
結果
ナイーブＴ細胞はＮＯＤマウスの骨髄中に蓄積される
Ｔ細胞恒常性の本試験において、種々の器官におけるナイーブＴ細胞と記憶Ｔ細胞の両方の分布を、ＮＯＤマウスと野生型マウス間で比較した。年齢適合ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６マウスと比較すると、前糖尿病ＮＯＤマウス（１５〜１６週齢、検出可能な尿中グルコースなし）は、骨髄において有意に高いパーセンテージのＣＤ４＋  Ｔ細胞（ほぼ３倍）を示したが、脾臓またはリンパ節（図１Ａ）では示されなかった。この増加は、糖尿病ＮＯＤマウス（２３週齢、尿中グルコース＞５００ｍｇ／ｄｌ）でさらに顕著であり、ＢＡＬＢ／ｃマウスの１５倍に達した（図１Ａ）。相応して、前糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞の数（０．８６±０．３８×１０６）は、ＢＡＬＢ／ｃの骨髄中（４１．６±１１．１×１０６）よりも３倍多かったが、どちらの骨髄も同様の数の細胞を有していた（４１．６±１１．１×１０６対６４．４±１３．３×１０６、ｐ＜０．０９）（図１Ｂ）。糖尿病ＮＯＤマウスでは、骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージが年齢とともに増加し（図１Ｃ）、この増加は脾臓内のＣＤ４  Ｔ細胞数の減少と相関していた（図１Ｄ）。また、ＣＤ８  Ｔ細胞のパーセンテージおよび数の同様の増加がＮＯＤマウスの骨髄において観察された（図１Ｂ）。
【０３２８】
ＮＯＤマウスの骨髄中へのＴ細胞蓄積における炎症または高血糖症の役割を調べるため、インスリン炎（炎症）が最小限である４〜５週齢のＮＯＤマウスを使用した。図１Ｅに示されるように、骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージは、ＮＯＤマウス（１．２±０．３％）において、年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウス（０．２±０．０３％）よりも有意に高かった。さらに、ＥＡ１６マウス（Ｉ−Ｅ分子の遺伝子組換え発現によって、膵臓の島内へのリンパ球浸潤が抑制されるであろうことにより、インスリン炎からのＮＯＤマウスのほぼ完全な保護が付与されるために、典型的には糖尿病を発現しない、（Ｌｅ  Ｍｅｕｒら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ，３１６：３８−４２；参照として本明細書に組み込まれる）では、骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージがＢＡＬＢ／ｃマウスと比べて有意に高く、通常のＮＯＤマウスと比べても有意に高かった（図１Ｆ）。また、前糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中のほとんどのＣＤ４  Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｌｏＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５−ナイーブＴ細胞であった（図１Ｇ）。ナイーブＴ細胞の割合は、ＮＯＤマウスが糖尿病となるにつれて増大した。総合すると、この結果は、ナイーブＴ細胞がＮＯＤマウスの骨髄中に蓄積されることを示す。
【０３２９】
ホーミングの増大により、ＮＯＤマウスの骨髄中へのＴ細胞の蓄積がもたらされる
ＮＯＤマウスの骨髄中へのＴ細胞蓄積が、骨髄の増殖によるものであるのかどうかを調べるため、骨髄中のＴ細胞を、細胞周期マーカーＫｉ６７に対して染色した。前糖尿病ＮＯＤマウスと年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウスの骨髄では、Ｋｉ６７＋増殖中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージに有意差は検出されなかったが（図２Ａ）、ＮＯＤマウスのリンパ節と脾臓では、有意に高い割合の増殖中のＴ細胞が検出された。ＢＡＬＢ／ｃマウスの場合のように、ＮＯＤマウスの骨髄中の増殖中のＣＤ４  Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｈｉエフェクターまたは記憶Ｔ細胞であった。したがって、ＮＯＤマウスの骨髄中でのＴ細胞の増殖は、この部位でのナイーブＴ細胞の蓄積の説明とはならないようである。
【０３３０】
骨髄中でのＴ細胞蓄積の漸増の役割を調べるため、全Ｔ細胞を、ＮＯＤおよびＢＡＬＢ／ｃマウスから精製し、ＣＦＳＥで標識し、ＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウスの両方に導入した。レシピエントにおけるＣＦＳＥ陽性ドナーＣＤ４  Ｔ細胞の分布を、導入２時間後にアッセイした。ＮＯＤまたはＢＡＬＢ／ｃのＴ細胞のいずれかを導入した場合、ＢＡＬＢ／ｃマウスとＮＯＤマウス間で、リンパ節中のＴ細胞分布に有意差は検出されず（図２Ｂ、右パネル）、これは、ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＮＯＤマウスに由来するＴ細胞は、同等の運動性を有することを示す。しかしながら、ＮＯＤの骨髄では、ＢＡＬＢ／ｃマウスよりも有意に多く導入されたＢＡＬＢ／ｃおよびＮＯＤ  Ｔ細胞が検出された（図２Ｂ、左パネル）。養子移植の４８時間後、ＮＯＤおよびＢＡＬＢ／ｃレシピエント間の骨髄中のＴ細胞分布の差は、さらに大きくなった（図３）。なんら１つの理論に拘束されることを望まないが、この漸増の増強は、ＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞の蓄積に寄与している可能性がある。この漸増の増強は骨髄中に限定されており、ドナーＴ細胞の供給源とは無関係であるため、ナイーブＴ細胞の優先的ホーミングを媒介している因子は、ＮＯＤマウスの骨髄中に存在していると思われる。
【０３３１】
ＣＸＣＬ１２発現の上昇により、ＮＯＤマウスにおいて、骨髄へのＴ細胞の漸増が促進される
本発明者らによって初めて観察されたＮＯＤマウスの骨髄へのＴ細胞の優先的ホーミングを媒介しているケモカインを特定するため、Ｍｏｕｓｅ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ＆  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ（Ｓｕｐｅｒａｒｒａｙ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）を使用し、骨髄中でのケモカイン転写をＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウス間で比較した。ＢＡＬＢ／ｃマウスと比較すると、ＮＯＤマウスの骨髄では、ケモカインＣＸＣＬ１２転写物とＣＣＬ１９転写物のみが上昇していた（図４Ａ）。定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析により、ＣＸＣＬ１２転写物は、ＢＡＬＢ／ｃマウスよりもＮＯＤの骨髄中で３〜５倍高いことが示された（図４Ｂ）が、ＣＣＬ１９転写物のレベルの差は確認されなかった。また、定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析により、ＣＸＣＬ１２転写物レベルは、４〜５週齢のＮＯＤマウスとＥＡ１６マウスの骨髄中で、そのそれぞれの年齢適合対照よりも有意に高く（図４Ｃおよび４Ｄ）、これらマウスの骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージの増加と相関している（図１Ｅおよび１Ｆ）ことが明らかになった。さらに、ＣＸＣＲ４（すなわち、ＣＸＣＬ１２の受容体）を発現したＮＯＤマウスの脾臓、リンパ節、および骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞の大部分は、ＣＤ４５ＲＢ＋ナイーブＴ細胞であり（図４Ｅ）、骨髄中でのナイーブＴ細胞の蓄積と整合していた。わずかに数パーセンテージのＣＤ４  Ｔ細胞が表面ＣＸＣＲ４に対して陽性に染色されていたが、ＮＯＤマウスおよびＣ５７ＢＬ／６マウス両方に由来するＣＤ４  Ｔ細胞はすべて、ＣＸＣＲ４の細胞内染色に関して陽性であった。ＢＡＬＢ／ｃマウスとＮＯＤマウス間でＣＸＣＲ４発現Ｔ細胞のパーセンテージに差はなかったため、この結果は、ＮＯＤの骨髄中でＣＸＣＲ４発現ナイーブＴ細胞のホーミングと蓄積を促しているのは、ＣＸＣＬ１２発現レベルの上昇であることを示している可能性がある。
【０３３２】
ＡＭＤ３１００は、ＣＸＣＲ４の小分子アンタゴニストである（Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，２００３（上掲）；参照として本明細書に組み込まれる）。本発明は、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用が、現在観察されているＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞蓄積に重要であれば、ＡＭＤ３１００でのＮＯＤマウスの処置によって、骨髄中へのＴ細胞蓄積が抑止されることが予測され得るという認識を包含する。したがって、前糖尿病ＮＯＤマウスに、ＡＭＤ３１００（５ｍｇ／ｋｇ）を毎日８日間与え、その骨髄中のＴ細胞の分布と表現型をアッセイした。ＡＭＤ３１００処置により、ＰＢＳを与えた前糖尿病ＮＯＤマウスと比較すると、前糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中ではＣＤ４とＣＤ８両方のＴ細胞の割合が有意に低下した（図５Ａ）。特に、ナイーブ表現型（ＣＤ４５ＲＢｈｉ  ＣＤ４４ｌｏ）を有するＣＤ４  Ｔ細胞の割合は、ＡＭＤ３１００処置ＮＯＤマウスにおいて優先的に低下した（図５Ｂ）。Ｔ細胞遊走の調節におけるＣＸＣＬ１２の既知機能を考慮すると（Ｍｏｓｅｒら，１９９８，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６：３２３；参照として本明細書に組み込まれる）、本発明は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇が、ＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞の蓄積の説明となり得るという認識を包含する。
【０３３３】
ＣＸＣＬ１２発現の上昇により、骨髄中での調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および造血幹細胞の漸増／保持が促進される
本発明者らは、ＣＸＣＬ１２発現の上昇によって、ＮＯＤマウスの骨髄中でＣＸＣＲ４を発現する他の細胞型／サブセットの漸増または保持が促進されるのだろうと予測する。ＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウス間で、骨髄中のＮＫＴ細胞、樹状細胞またはＢ細胞のパーセンテージまたは数に有意差は、検出されず、ＡＭＤ３１００処置後のＮＯＤマウスにおいて、これらの細胞型の分布にも変化は全く検出されなかったが（図６）、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋  Ｔｒｅｇの数は、ＢＡＬＢ／ｃマウスよりも前糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄において、かなり高かった（図７Ａ）。ＢＡＬＢ／ｃマウスと比べてＮＯＤマウスの骨髄中のＴｒｅｇであるＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージが低いことは、ＮＯＤ骨髄中にＴｒｅｇよりもナイーブＣＤ４  Ｔ細胞の方が多く蓄積していることを反映しているであろう。Ｔｒｅｇ輸送の調節におけるＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用の関与を調べるため、Ｃｒｅ媒介性組換えによってＴ細胞内でのＣＸＣＲ４発現が特異的に不活化されたマウス（Ｚｏｕら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：５９５−９；参照として本明細書に組み込まれる）を使用した。ＣＸＣＲ４の非存在下では、同腹子野生型マウスと比べ、骨髄中のＴｒｅｇの数は有意に減少していたが、脾臓中のＴｒｅｇの数は増大していた（図７Ｂ）。したがって、本発明は、骨髄へのＴｒｅｇ輸送が一部ＣＸＣＬ１２によって調節されていることを示す。
【０３３４】
ＣＸＣＬ１２は、成体マウスの骨髄中での造血幹細胞（ＨＳＣ）の保持に役割を果たしている（Ｋｕｃｉａら，２００５，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，２３：８７９−９４；およびＳｕｇｉｙａｍａら，２００６，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２５：９７７−８８；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。Ｌｉｎ−Ｓｃａ１＋ｃ−Ｋｉｔ＋  ＨＳＣｎ数は、年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウスよりも前糖尿病ＮＯＤマウスの骨髄中で有意に高かった（図７Ｃ）。８日間のＡＭＤ３１００処置後、ＮＯＤマウスの骨髄中のＨＳＣの数は有意に低下した。
【０３３５】
ＣＸＣＲ４機能を妨げることにより、ＮＯＤマウスにおいて糖尿病の発現が遅延される
Ｔ細胞および幹細胞輸送のＣＸＣＬ１２媒介性調節不全と糖尿病の発現との関係を調べるため、ＮＯＤマウスをＡＭＤ３１００で処置し、疾患の進行をモニタリングした。１５週齢の前糖尿病ＮＯＤマウスにＡＭＤ３１００を毎日８日間与え、膵臓を組織化学的アッセイによって検査した。図８Ａに示されるように、前糖尿病ＮＯＤマウスは、糖尿病ＮＯＤマウスよりも有意に多くのインスリン発現島を有した（２６．７±５．２／切片対１５．８±９．４／切片、ｐ＜０．０５）。年齢適合前糖尿病ＮＯＤマウス間では、ＡＭＤ３１００処置（毎日８日間）により、島内へのリンパ球浸潤が有意に低減された（インスリン炎；図８Ａおよび８Ｂ）。前糖尿病ＮＯＤマウス（１５〜１６週齢）にＡＭＤ３１００またはＰＢＳを毎日３週間与えると、ＰＢＳ処置ＮＯＤマウスは、尿中グルコースレベル（＞５００ｍｇ／ｄｌ）によって示されるように、１７〜２０週齢の間で急速に糖尿病を発現した（図８Ｃ）。対照的に、ＡＭＤ３１００処置マウスはいずれも、同期間中、該疾患を発現しなかった。しかしながら、ＡＭＤ３１００処置を終了してから２週間後、ＡＭＤ３１００処置マウスは糖尿病を発現し始め、その発生は、２６週齢までにＰＢＳ処置マウスと同じレベル（７０％）に達した。
【０３３６】
継続的なＡＭＤ３１００処置によって糖尿病の発現が抑止され得るかどうかを試験するため、前糖尿病ＮＯＤマウス（１５週齢）にＡＭＤ３１００を毎日１４週間与えた。ＰＢＳ処置ＮＯＤマウスは、１６週齢で糖尿病の徴候を示し始め、２９週齢までに、すべてのマウスが糖尿病を発現した（図８Ｄ）。対照的に、ＡＭＤ３１００処置マウスはいずれも、同期間中、該疾患を発現しなかった。したがって、本発明は、ＡＭＤ３１００処置によって、島内への白血球浸潤（インスリン炎）が抑止され、継続的な処置によって顕性糖尿病の発現が遅延されるという認識を包含する。
【０３３７】
ＣＸＣＬ１２発現の上昇およびＡＭＤ３１００処置は、多様な機構によってＮＯＤマウスの疾患の進行に影響を及ぼす
これまでに示した証拠は、骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現の上昇によってＴ細胞輸送の調節不全がもたらされ、これが、ＮＯＤマウスにおける糖尿病に寄与しているというモデルを裏付ける。ＡＭＤ３１００によるＴ細胞輸送の調節不全の抑止によって疾患進行が遅延される。このモデルのさらなる裏づけを示すため、骨髄でのＣＸＣＬ１２発現とＴ細胞蓄積に対する完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（これは、ＡＭＤ３１００とは異なるが、ＮＯＤマウスにおいて糖尿病を予防することが知られている（図９））の効果を調べた。ＮＯＤマウス（１１週齢）に単独ＣＦＡまたはＰＢＳを皮下注射により投与し、２週間後、骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージとＣＸＣＬ１２転写物レベルを調べた。ＣＦＡ処置によって、ＮＯＤマウスの骨髄中のＴ細胞蓄積ならびにＣＸＣＬ１２発現が有意に低減され（図１０Ａおよび１０Ｂ）、ＮＯＤマウスでの糖尿病の発現におけるＴ細胞輸送のＣＸＣＬ１２媒介性調節不全の役割が裏付けられた。
【０３３８】
ＣＸＣＬ１２は、ＮＯＤマウスでの島再生に関係している幹細胞（造血幹細胞（ＨＳＣ）など）の動員に関与している。なんら１つの理論に拘束されることを望まないが、ＣＸＣＬ１２の上昇は、幹細胞動員が調節不全となることによって、ＮＯＤマウスにおける糖尿病に寄与している可能性がある。骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現の上昇により、骨髄中でＨＳＣが保持されていると予測され得る。この予測と整合して、Ｌｉｎ−Ｓｃａ１＋ｃ−Ｋｉｔ＋（ＬＳＫ）ＨＳＣのパーセンテージは、ＮＯＤマウスにおいて年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウスよりも有意に高かった（図１０Ｃ）。さらに、ＡＭＤ３１００処置によって、ＮＯＤマウスの骨髄中のＨＳＣのパーセンテージが、ＰＢＳ処置ＮＯＤマウスと比べて低下した（図１０Ｄ）。この低下の有意性はボーダーライン（ｐ＝０．０６）であるが、ＡＭＤ３１００処置を８日間よりも長く続けると、より有意な結果がもたらされる可能性がある。
【０３３９】
Ｔ調節細胞（Ｔｒｅｇ）がＮＯＤマウスにおける糖尿病の抑制に有意な役割を果たしていることを示す証拠がある。ＣＸＣＬ１２発現の上昇がＴｒｅｇ輸送に影響を及ぼしているかどうかを調べるため、ＮＯＤマウスにおけるＴｒｅｇの分布、およびこの分布に対するＡＭＤ３１００処置の効果を調べた。８週齢および１２週齢の両方で、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋  Ｔｒｅｇの数は、ＢＡＬＢ／ｃマウスよりもＮＯＤマウスの骨髄中でかなり高かった（図１０Ｅ）。ＢＡＬＢ／ｃマウスと比べてＮＯＤマウスの骨髄中のＴｒｅｇであるＣＤ４  Ｔ細胞のパーセンテージが低いことは、ＮＯＤ骨髄中にＴｒｅｇよりもナイーブＣＤ４  Ｔ細胞の方が多く蓄積しているであろうことを反映している。ｃｒｅ媒介性組換えによるＴ細胞中のＣＸＣＲ４のみの条件付き除去により、同腹子野生型マウスと比べて、骨髄中のＴｒｅｇ数の減少、および付随した脾臓内でのＴｒｅｇ数の増加がもたらされた（図１０Ｆ）。この結果は、骨髄中へのＴｒｅｇ輸送が少なくとも一部ＣＸＣＬ１２によって調節されていることを示す。
【０３４０】
８日間のＡＭＤ３１００処置後、骨髄中のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞のパーセンテージは増大したが、Ｔｒｅｇの総数は減少した（図１０Ｇ、１０Ｈ、および１１）。なんら１つの理論に拘束されることを望まないが、この結果は、該処置によって骨髄からのナイーブ細胞とＴｒｅｇ細胞の両方の移出が促進され、ＴｒｅｇよりもナイーブＴ細胞の方が多く骨髄から移出することを反映している可能性がある。また、ＡＭＤ３１００処置後、Ｔｒｅｇのパーセンテージは、脾臓と膵臓流入領域のリンパ節（ＰＤＬＮ）の両方において有意に増大し、また、Ｔｒｅｇの数も脾臓において有意に増加した（図１０Ｇおよび１０Ｈ）。Ｔｒｅｇの数は、脾臓と比べて骨髄中の方が比較的少ないため（図１０Ｈ）、骨髄からのＴｒｅｇの動員は、脾臓内でのＴｒｅｇ数の増加の説明には充分でないと思われる。
【０３４１】
考察
ヒトおよびＮＯＤマウスの双方におけるＩ型糖尿病（ＴＩＤ）の発現は加齢依存性であるが、発症はさまざまであり、これは、多様な要素が疾患進行に寄与していることを示す。実際、ＮＯＤマウスでは、研究により、Ｔ細胞の発生、機能、恒常性および輸送に影響を及ぼす要素はすべて、疾患発現に影響することが示された（ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＢｌｕｅｓｔｏｎｅ，２００５（上掲）；ならびにＡｎｄｒｅら，１９９６（上掲）；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。本発明は、ＮＯＤマウスの骨髄中のＣＸＣＬ１２発現の上昇が疾患進行に寄与するという認識を包含する。本発明は、これが、Ｔ細胞輸送と幹細胞動員の改変によって起こり得るという認識を包含する。本発明は、多様なプロセスおよび介入（例えば、Ｔｒｅｇ、リンパ球の減少［恒常性］、輸送など）によってＮＯＤマウスにおける疾患進行を調節され得るという一般的な機構の認識を包含する。
【０３４２】
本発明では、ＣＸＣＬ１２転写物のレベルが、ＮＯＤマウスの骨髄中でＢＡＬＢ／ｃマウスと比べて有意に上昇したことが示されている（図４Ａおよび４Ｂ）。発現の上昇は、調べて３３種類のケモカインの中でＣＸＣＬ１２に特異的である。これは、４〜５週齢のＮＯＤマウスとＥＡ１６マウスのの骨髄中でも検出されたため、発現の上昇は、ＮＯＤマウスのインスリン炎および糖尿病と関連する炎症によって誘導されるのではない。そうではなく、この結果は、ＮＯＤマウスが骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現の上昇の素因を有することを示すが、原因機構はまだわかっていない。
【０３４３】
ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ−１としても知られている）は、ケモカインであり、ＣＸＣＲ４を発現する細胞の化学走性を特異的に刺激する（Ｎａｇａｓａｗａら，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ，３８２：６３５；Ｔａｃｈｉｂａｎａら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ，３９３：５９１；およびＺｏｕら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ，３９３：５９５；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。本発明の驚くべき知見により、本発明者らは、ＣＸＣＬ１２レベルの上昇が、ＮＯＤマウスの骨髄中でＣＸＣＲ４発現細胞の漸増と保持に対して有意な効果を有するであろうと予測する。幼若の前糖尿病ＮＯＤマウス、糖尿病ＮＯＤマウス、およびＥＡ１６マウスでの解析、ＣＸＣＲ４発現Ｔ細胞の表現型、ＡＭＤ３１００処置び効果、ならびに直接漸増アッセイに基づき、本発明者らは、初めて、ＣＸＣＬ１２発現の上昇によりＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞の漸増と蓄積がもたらされることを示した。第１に、ＣＸＣＬ１２発現の上昇は、幼若（４〜５週齢）、前糖尿病（１５〜１６週齢）ＮＯＤマウスおよびＥＡ１６マウスにおいて、骨髄ナイーブＴ細胞の割合と数の増大と一貫して相関している。第２に、ＣＦＡによってＣＸＣＬ１２発現が阻害されたと同時に、ＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞の蓄積が停止された。第３に、ＣＸＣＲ４機能を小分子アンタゴニストで阻害すると、ナイーブ骨髄中のＣＤ４  Ｔ細胞の蓄積が抑制された。第４に、養子移植されたＮＯＤおよびＢＡＬＢ／ｃ  Ｔ細胞は優先的にＮＯＤマウスの骨髄にホーミングしたが、ＢＡＬＢ／ｃマウスではそうではなく、観察されたナイーブＴ細胞の蓄積における漸増の直接的な役割を示す。第５に、ＣＸＣＲ４発現Ｔ細胞のほとんどがナイーブ表現型であり、そのＮＯＤマウスの骨髄中への蓄積と整合する。ＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウス間でＣＸＣＲ４発現Ｔ細胞の割合に差はないため、また、ＢＡＬＢ／ｃ  Ｔ細胞がＮＯＤ骨髄に優先的に漸増されるため、観察されたＮＯＤマウスの骨髄中へのナイーブＴ細胞の漸増と蓄積は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇のみによるものと思われる。
【０３４４】
また、本発明者らは、ＣＸＣＬ１２発現の上昇により、骨髄中でのＴｒｅｇと造血幹細胞の蓄積と保持ももたらされるという驚くべき知見を得た。少数割合のＴｒｅｇがＣＸＣＲ４を発現していた。Ｔ細胞においてＣＸＣＲ４のみを欠損させると、骨髄中でのＴｒｅｇ数の有意な減少と同時に脾臓内での増大がもたらされ、ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用が、Ｔｒｅｇ輸送を調節する要素の１つであることを示す。これと整合して、Ｔｒｅｇの数は、ＮＯＤマウスの骨髄中でＢＡＬＢ／ｃマウスよりも有意に上昇していた（図１０Ｅ）。ＡＭＤ３１００処置によるＣＸＣＲ４の阻害によって、骨髄中のＴｒｅｇ数の減少がもたらされた。さらに、ＣＸＣＬ１２はまた、ＨＳＣなどの幹細胞の動員を調節ことが知られている。ＣＸＣＬ１２発現の上昇により、ＮＯＤマウスの骨髄中でＨＳＣが保持されることが予測される。実際、Ｌｉｎ−Ｓｃａ１＋ｃ−Ｋｉｔ＋  ＨＳＣ  のパーセンテージは、ＮＯＤ骨髄中でのナイーブＴ細胞の蓄積にもかかわらず、ＮＯＤマウスにおいてＢＡＬＢ／ｃマウスよりも有意に高かった。ＡＭＤ３１００によるＣＸＣＲ４の阻害によって、骨髄からのＨＳＣの動員がもたらされ、先の結果と整合した。したがって、本発明は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇により、ＮＯＤマウスの骨髄中でのナイーブＴ細胞、Ｔｒｅｇ、およびＨＳＣの漸増と蓄積がもたらされるという認識を包含する。
【０３４５】
ＮＯＤマウスにおける骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現の上昇と糖尿病の発現の関係どのようなものであるかについて、本発明者らは、ＣＸＣＬ１２転写物がＥＡ１６マウスと幼若（４〜５週齢）ＮＯＤマウスの骨髄中で検出されたため、ＣＸＣＬ１２発現の上昇は、、ＮＯＤマウスにおけるインスリン炎または糖尿病と関連する炎症または高血糖症の影響ではないであろうことを示した。本発明は、ＮＯＤマウスが骨髄中でＣＸＣＬ１２の上昇を示す素因を有する可能性が高いという認識を包含する。逆に、ＥＡ１６マウスは、骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現の上昇およびＴ細胞の蓄積にもかかわらず糖尿病を発現しないため、ＣＸＣＬ１２発現の上昇単独では、自己反応性Ｔ細胞の非存在下で糖尿病が起こるのに不充分である。それでもなお、ＣＸＣＬ１２発現の上昇により、糖尿病の発現が促進されるであろう。ヒトでは、ＣＸＣＬ１２における多型がＴＩＤに対する感受性と連鎖している（Ｋａｒｅｄら，２００５（上掲）；ならびにＳｅｍｅｒａｄら，２００５（上掲）；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。エプスタイン‐バーウイルス形質転換リンパ芽球様細胞株における対立遺伝子特異的転写物定量を使用し、ある研究において、多型がＣＸＣＬ１２転写に対してシス作用効果を有するという証拠が報告された（Ｋｉｍｕｒａら，２００５，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１４：１５７９；参照として本明細書に組み込まれる）。しかしながら、特異的ＣＸＣＬ１２多型を有するＴＩＤ患者がＣＸＣＬ１２発現の上昇を有するかどうかは報告されていない。ＮＯＤマウスでは、抗体の投与によるＣＸＣＬ１２の中和によってインスリン炎が抑止され、糖尿病の発症が遅延される（Ｍａｔｉｎら，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０７：２２２；参照として本明細書に組み込まれる）。また、ＣＸＣＬ１２発現を阻害することがわかっているサイトカインＧ−ＣＳＦの投与によっても、ＮＯＤマウスにおけるインスリン炎および糖尿病が低減された（Ｈａｙａｄａら，２００５；Ｋａｒｅｄら，２００５（上掲）；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。したがって、本発明は、ＣＸＣＬ１２発現の上昇および細胞の輸送と動員に対するその関連効果が、ＮＯＤマウスの疾患発現および／または進行と正に相関するという認識を包含する。本発明者らは、さらに、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（これは、糖尿病の発現を抑止することがわかっている（Ｓａｄｅｌａｉｎら，１９９０，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３９：５８３−９；およびＭｃＩｎｅｒｎｅｙら，１９９１，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４０：７１５−２５；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）によってもまた、ＮＯＤマウスの骨髄中において、ＣＸＣＬ１２発現（Ｕｅｄａら  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９：４７−５８；参照として本明細書に組み込まれる）ならびにＴ細胞蓄積（図９および１０）が阻害されることを示した。最後に、前糖尿病ＮＯＤマウスをＡＭＤ３１００  で処置すると、骨髄中でのＴ細胞およびＨＳＣの蓄積が停止すると同時に、疾患発現が抑止される（図８）。しかしながら、ＥＡ１６マウスは、骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現の上昇およびＴ細胞の蓄積にもかかわらず糖��病を発現せず、これは、ＣＸＣＬ１２発現の上昇単独では、自己反応性Ｔ細胞の非存在下で糖尿病が起こるのに不充分であることを示す。なんら１つの理論に拘束されることを望まないが、ＣＸＣＬ１２発現の上昇は、疾患進行速度に影響を及ぼすことによりＩ型糖尿病に寄与している可能性がある。ＡＭＤ３１００は、骨髄中でのＣＸＣＬ１２発現には影響しないであろうため、疾患進行におけるＣＸＣＬ１２発現の上昇の寄与は、その細胞輸送と動員に対する生物学的効果によって生じるであろう。
【０３４６】
本発明者らは、ＣＸＣＬ１２発現の上昇がＮＯＤマウスにおける疾患進行を促進させる潜在的機構の認識を包含する。本発明者らは、ＣＸＣＬ１２発現の上昇によって骨髄へのナイーブＴ細胞のホーミングがもたらされることを示した。最近の研究により、糖尿病誘発性Ｔ細胞もまた、本明細書に示したＣＸＣＬ１２発現の上昇の結果、ＮＯＤマウスの骨髄に優先的にホーミングするであろうことが示され（Ｌｉら，２００７，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５６：２２５１−９；参照として本明細書に組み込まれる）。ＮＯＤマウスの骨髄中でのＴ細胞の蓄積により、末梢リンパ様器官でのリンパ球減少ならびに自己反応性Ｔ細胞の恒常的増殖および分化がもたらされ得（Ｋｉｎｇら，２００４，Ｃｅｌｌ，１１７：２６５−７７；参照として本明細書に組み込まれる；Ｊａｍｅｓｏｎ，２００２，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２：５４７−５６；Ｃｈｏら，２０００，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９２：５４９−５６；およびＧｏｌｄｒａｔｈら，２０００，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９２：５５７−６４；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）、これによって糖尿病の発現が促進されると考えられ得る。また、ＣＸＣＬ１２発現の上昇は、特に島への自己反応性Ｔ細胞の輸送に対する効果によってＮＯＤマウスの疾患進行を促進し得ると考えられ得る。研究により、関節リウマチの滑膜およびコラーゲン誘導性関節炎の炎症関節への自己反応性Ｔ細胞の漸増には、ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用が必要とされることが示された（Ｍａｔｔｈｙｓら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７：４６８６−９２；およびＤｅ  Ｋｌｅｒｃｋら，２００５，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．，７：Ｒ１２０８−２０；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。ウイルス誘導性ＴＩＤモデルでは、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）をブロックすると、自己反応性Ｔ細胞の増殖およびその膵臓内への遊走が妨げられることにより、糖尿病の発現が予防される（Ｃｈｒｉｓｔｅｎら，２００３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７１：６８３８−４５；参照として本明細書に組み込まれる）。本発明者らは、ＡＭＤ３１００によるＣＸＣＲ４の阻害によってインスリン炎が有意に低減されることを示した（図５Ｂ）。前糖尿病ＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウス間で、膵臓におけるＣＸＣＬ１２発現に差は検出されなかったが、リンパ球輸送の調節不全は、ＮＯＤにおけるＴＩＤの発現に対する寄与因子であろう。
【０３４７】
ＣＸＣＬ１２発現の上昇は、Ｔｒｅｇ輸送（これは、一部ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用によって調節される）に対する効果によってＮＯＤマウスの疾患進行を促進している可能性がある。多くの証拠により、Ｔｒｅｇが自己免疫の抑制に役割を果たしていることが示されている（Ｓａｋａｇｕｃｈｉら，２００５，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６：３４５−５２；参照として本明細書に組み込まれる）。ＮＯＤマウスでは、Ｆｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇの頻度と機能が年齢とともに低下することが報告された（Ｐｏｐら，２００５，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１：１３３３−４６；参照として本明細書に組み込まれる）。本試験では、ＮＯＤマウスの骨髄中に、年齢適合ＢＡＬＢ／ｃマウスよりも有意に多くのＴｒｅｇが見られた（図８Ｂ）。ＮＯＤマウスのＡＭＤ３１００処置後、Ｔｒｅｇの数は、骨髄では有意に減少したが、脾臓では有意に増加した（図１０）。しかしながら、骨髄中のＴｒｅｇの数は脾臓内での数の約１０分の１にすぎないため、骨髄からのＴｒｅｇ動員だけでは、ＡＭＤ３１００処置後の脾臓におけるＴｒｅｇ数の有意な増加の説明とはなり得ない。脾臓Ｔｒｅｇの由来先に関係なく、自己反応性Ｔ細胞に対するＴｒｅｇの比の閾値が自己反応性Ｔ細胞のＴｒｅｇ抑制に重要であるため（Ｓａｌｏｍｏｎら，２０００（上掲）；ならびにＴａｎｇら，２００３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７１：３３４８；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）、ＮＯＤマウスの骨髄または他の器官におけるＴｒｅｇの封鎖が、自己反応性Ｔ細胞に有利に作用しているのかもしれない。この解釈と整合して、ＮＯＤでは、ＢＡＬＢ／ｃマウスよりも高割合のＴ細胞が脾臓とＰＤＬＮで増殖したが、骨髄中では増殖しなかった。しかしながら、骨髄中でのＣＸＣＬ１２の上昇により、Ｔｒｅｇ輸送の改変によってＮＯＤマウスの疾患進行が促進される程度は未だ調べられていない。
【０３４８】
ＣＸＣＬ１２発現の上昇は、特に島への自己反応性Ｔ細胞の輸送に対する効果によってＮＯＤマウスの疾患進行を促進している可能性がある。本試験により、ＡＭＤ３１００処置によって、前糖尿病ＮＯＤマウスにおいて膵島周囲炎に影響を及ぼすことなくインスリン炎が有意に低減されることがわかり（図８Ａおよび８Ｂ）、これは、島内への自己反応性Ｔ細胞の浸潤にＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用が必要とされ得るが、膵臓内への遊走には必要とされ得ないことを示す。この所見は、関節リウマチの滑膜およびコラーゲン誘導性関節炎の炎症関節への自己反応性Ｔ細胞の漸増に、ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４相互作用が必要とされるという先の観察結果と整合する（Ｄｅ  Ｋｌｅｒｃｋら，２００５，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．，７：Ｒ１２０８；およびＭａｔｔｈｙｓら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６７：４６８６；これらはともに、参照として本明細書に組み込まれる）。なんら１つの理論に拘束されることを望まないが、ＡＭＤ３１００処置は、脾臓および膵臓流入領域のリンパ節中で増殖したＴ細胞の割合に有意に影響しなかったため、観察されたインスリン炎の阻害は、島内へのＴ細胞浸潤の抑止による可能性がある。しかしながら、８、１２および１６週齢のＮＯＤマウスとＢＡＬＢ／ｃマウス間で、膵臓内のＣＸＣＬ１２転写物のレベルに有意差は検出されなかった。
【０３４９】
また、ＣＸＣＬ１２発現の上昇によって、骨髄中での造血幹細胞（ＨＳＣ）の保持がもたらされる。骨髄由来幹細胞は膵臓の再生を起始させるようであるため（Ｈｅｓｓら，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２１：７６３−７０；参照として本明細書に組み込まれる）、ＨＳＣおよび場合によっては他の幹細胞／前駆細胞の封鎖が、その島再生に対する利用可能性が制限されることによって、ＮＯＤマウスの疾患進行に寄与している可能性があると考えられ得る。この考えの裏づけとして、ＣＸＣＬ１２の全身投与によって、一部においてＨＳＣが骨髄から末梢血に動員されるであろうことにより糖尿病が改善される（Ｙａｎｏら，２００７，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５６：２９４６−５７；参照として本明細書に組み込まれる）。同じ機構が、一部において、ＣＦＡ＋膵細胞（これは、有意な数のＨＳＣおよび場合によっては他の前駆細胞を含む（Ｇｅら，２００２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ．９９：２９８９−９４；参照として本明細書に組み込まれる））の養子移植の島の再生による糖尿病ＮＯＤマウスの治癒における有効性の説明となり得る（Ｃｈｏｎｇら，２００６（上掲）；Ｋｏｄａｍａら，２００３（上掲）；Ｎｉｓｈｉｏら，２００６（上掲）；およびＳｕｒｉら，２００６（上掲）；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。ＮＯＤマウスにおいて島再生に必要とされる前駆細胞の動員がＣＸＣＬ１２発現の上昇によって障害されるかどうかを調べるためには、さらなる研究が必要であるが、本所見により、既に、多様な細胞型および要素（例えば、Ｔｒｅｇ、リンパ球減少、リンパ球輸送など）が細胞輸送および／または動員によってＩ型糖尿病に寄与し得る考えられ得る一般的な機構が示されている。細胞輸送および／または動員の改変は個々のマウス間で異なっているであろうため、これが、ＮＯＤマウスにおける糖尿病の発症のばらつきの説明となる。
【０３５０】
ＡＭＤ３１００は、最初、ＨＩＶウイルスの共受容体であるＣＸＣＲ４に対するその拮抗作用によってＨＩＶ感染を治療するために開発された（Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，２００３（上掲）；参照として本明細書に組み込まれる）。現在、これは、非ホジキンリンパ腫または多発性骨髄腫を有する患者において、幹細胞の移植のために骨髄から末梢血にＨＳＣを動員させる薬剤として開発されている（Ｄｅｖｉｎｅら，２００４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２２：１０９５；参照として本明細書に組み込まれる）。本発明者らが本明細書において示したように、ＡＭＤ３１００を前糖尿病ＮＯＤマウスに投与すると、インスリン炎および糖尿病の発症が有意に遅延される。対照的に、最近の研究により、ＡＭＤ３１００処置によって、雌ＮＯＤマウスから亜致死線量で放射線照射した雄ＮＯＤマウスに膵細胞を養子移植して糖尿病を誘発させたモデルにおいて、糖尿病の発現が促進されることが報告された（Ａｂｏｕｍｒａｄら，２００７，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：４３２−９；参照として本明細書に組み込まれる）。導入モデルでは、導入されたＴ細胞が恒常的増殖を行ない、エフェクター機能を獲得した（Ｊａｍｅｓｏｎ，２００２，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２：５４７−５６；Ｃｈｏら，２０００，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９２：５４９−５６；およびＧｏｌｄｒａｔｈら，２０００，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９２：５５７−６４；これらはすべて、参照として本明細書に組み込まれる）。また、レシピエントマウスへの放射線照射により、非照射前糖尿病マウスでは活性でないさらなる要素およびプロセスが導入される。したがって、導入モデルにおける疾患誘導機構は、非操作雌ＮＯＤマウスのものとは有意に異なり得る。この２つの研究の相違の原因となっている厳密な機構はまだ調べられていないが、本発明者らによる知見は、ＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４発現の上昇を有する患者のＩ型糖尿病および／または任意の他の自己免疫疾患を予防および／または治療するための、ＡＭＤ３１００および／またはＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用に負の影響を及ぼす任意の他の薬剤の使用をさらに調査するための基礎を提供する。
【０３５１】
したがって、本発明は、ＮＯＤマウスの骨髄におけるＣＸＣＬ１２発現の上昇が、Ｔ細胞および造血幹細胞の輸送を改変することによってＴＩＤの発現を促進するであろうという認識を包含する。本発明者らによる知見は、ＣＸＣＬ１２およびＣＸＣＲ４の発現または機能のいずれかを調節することにより、ヒトのＴＩＤが予防および／または治療される可能性を初めて示す。本発明は、ＮＯＤマウスで行なった試験は、一般的にヒトでの治療に適用可能であり得るという認識を包含する。本発明は、ヒトのＴＩＤは、ＣＸＣＬ１２とＣＸＣＲ４との相互作用を調節すること、ＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の発現を調節すること、および／またはＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４の機能を調節することにより治療、予防、改善、遅延、および／または改善され得るという認識を包含する。
【０３５２】
均等物および範囲
当業者には、本明細書に示した本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物が認識され、または常套的な範囲内の実験手法を用いて確認することができよう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲に示されることが意図される。
【０３５３】
当業者には、本明細書に示した本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物が認識され、または常套的な範囲内の実験手法を用いて確認することができよう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲に示されることが意図される。
【０３５４】
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの冠詞は、そうでないと示されていない限り、あるいは文脈から明白でない限り、１つまたは１つより多くを意味することがあり得る。したがって、例えば、「ナノ粒子（ａ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）」に対する言及は、複数のかかるナノ粒子を包含し、「細胞（ｔｈｅ  ｃｅｌｌ）」に対する言及は、当業者にわかる１つ以上の細胞に対する言及を包含する、などである。１つの群の１つ以上のメンバー間に「または（もしくは）」を含む請求項または説明は、そうでないと示されていない限り、あるいは文脈から明白でない限り、該群のメンバーの１つ、１つより多く、または全部が所与の生成物またはプロセスに存在する、使用される、あるいは関連する場合を満たすとみなす。本発明は、該群の厳密に１つのメンバーが所与の生成物またはプロセスに存在する、使用される、あるいは関連する実施形態を包含する。本発明は、該群のメンバーの１つより多く、または全部が所与の生成物またはプロセスに存在する、使用される、あるいは関連する実施形態を包含する。さらに、本発明は、記載の請求項の１つ以上の１つ以上の限定、要素、節、記述用語などが別の請求項に導入されたあらゆる変形、組合せ、および並べ替えを包含することを理解されたい。例えば、別の請求項に従属している任意の請求項は、同じ基本請求項に従属している任意の他の請求項に見られる１つ以上の限定を含むように変形され得る。さらに、請求項に組成物が記載されている場合、特に記載のない限り、または矛盾もしくは不整合が生じ得ることが当業者に自明となり得ない限り、本明細書に開示された目的のいずれかのための該組成物の使用方法が包含されること、および本明細書に開示された作製方法または当該技術分野で既知の他の方法のいずれかによる該組成物の作製方法が包含されることを理解されたい。
【０３５５】
要素が、例えばマーカッシュ形式の群で一覧として示されている場合、該要素の各亜群も開示され、任意の要素が該群から除かれ得ることを理解されたい。一般に、本発明または本発明の態様が特定の要素、特徴などを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と示されている場合、本発明または本発明の態様の特定の実施形態は、かかる要素、特徴などからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）もの、または本質的にかかる要素、特徴などからなるであることを理解されたい。簡単にする目的のため、本明細書において具体的に示した実施形態は、文言どおりのものではない。用語「を含む」は、非限定的であるものとし、さらなる要素または工程を含むことが許容されることに注意のこと。
【０３５６】
範囲が示されている場合は両端を含む。さらに、特に記載のない限り、あるいは、文脈または当業者の理解から明白でない限り、範囲として示された値は、本発明の種々の異なる実施形態において、本文中に明示されていない限り、記載範囲内の任意の具体的な値または下位範囲を、その範囲の下限の単位の１０分の１までとり得ることを理解されたい。
【０３５７】
また、先行技術に含まれる本発明の具体的な実施形態はいずれも、任意の１つ以上の請求項から明白に除外され得ることを理解されたい。かかる実施形態は当業者にわかるとみなされるため、除外されることが本明細書に明示されていなくても、除外され得る。本発明の組成物の任意の具体的な実施形態（例えば、任意のＣＸＣＬ１２および／またはＣＸＣＲ４アンタゴニスト；特定の組織（例えば、骨髄または血流）中のＣＸＣＬ１２またはＣＸＣＲ４レベルの任意のアッセイ方法；任意の組織；任意の治療および／または診断方法；任意の治療適用；など）は、先行技術の存在に関連していようとしていなかろうと、なんらかの理由で任意の１つ以上の請求項から除外されることがあり得る。
【０３５８】
上記および本文全体を通して論考した刊行物は、本出願の出願日に開示されていることを示したにすぎない。本明細書に示したものはいずれも、本発明者らが、かかる開示を先行開示によって予測する権利を得たと是認であると解釈されないものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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