(57)【要約】本開示は、細胞（例えば、完全細胞）を保存および／もしくは安定化するための組成物、システムおよび方法に関する。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、キレート化剤、キレート化剤増強成分、および必要に応じて、塩基（例えば、プリン塩基もしくはピリミジン塩基）を含み得る。細胞安定化方法は、細胞と、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させる工程を包含し得る。細胞安定化システムは、細胞を含むサンプルを受容するのに適した容器、ならびに細胞および／もしくは高分子安定化組成物を含み得る。細胞は、周囲条件下で（例えば、冷却なしで）保存および／もしくは安定化され得る。細胞は、タンパク質、核酸、ならびに／または細胞保存および／もしくは安定化の別の生体分子マーカーを含み得る。
2010535013.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞および／もしくは高分子安定化組成物であって、該組成物は、
（ａ）エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、およびそれらの塩からなる群より選択されるキレート化剤；
（ｂ）グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムからなる群より選択される、少なくとも１種のキレート化剤増強成分；ならびに
（ｃ）プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される塩基、
を含む、組成物。
【請求項２】
前記キレート化剤の濃度は、約０．１ｍＭ〜約０．１Ｍである、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１種のキレート化剤増強成分の濃度は、約１ｍＭ〜約５Ｍである、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項４】
前記塩基の濃度は、約０．１ｍＭ〜約５Ｍである、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項５】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、水溶液として処方される、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１種のキレート化剤増強成分は、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム，および塩化リチウムからなる群より選択される、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項７】
前記少なくとも１種のキレート化剤増強成分は、約１Ｍの量で存在する、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項８】
二価金属キレート化剤が約１ｍＭの量で存在する、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項９】
前記塩基は、約２ｍＭの量で存在する、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１０】
緩衝液をさらに含む、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１１】
前記緩衝液は、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシアミノ）メタン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸），３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、２−［（２−アミノ−２−オキソエチル）アミノ］エタンスルホン酸、Ｎ−（２−アセトアミド）２−イミノ二酢酸、３−［（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチルグリシン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、請求項１０に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１２】
前記緩衝液は、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸、Ｎ−（２−ヒドロキシエチルピペラジン）−Ｎ’−（３−プロパンスルホン酸）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、２−（Ｎ−モルホリン）エタンスルホン酸、トリエタノールアミン緩衝液、イミダゾール、グリシン、エタノールアミン、３−（Ｎ−モルホリン）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、Ｎ−トリス［（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸、２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、請求項１０に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１３】
細胞をさらに含む、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１４】
前記細胞は、哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞、細菌細胞、ウイルス感染細胞、病的細胞、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される細胞を含む、請求項１３に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１５】
前記哺乳動物細胞は、赤血球、白血球、リンパ球、組織球、上皮細胞、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される細胞を含む、請求項１４に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１６】
核酸をさらに含む、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１７】
前記核酸は、リボ核酸、デオキシリボ核酸、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるポリ核酸を含む、請求項１６に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１８】
可塑剤をさらに含む、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項１９】
前記可塑剤は、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸トリブチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸トリオクチル、クエン酸アセチルトリオクチル、クエン酸トリヘキシル、クエン酸アセチルトリヘキシル、クエン酸ブチリルトリヘキシル、クエン酸トリメチル、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるクエン酸化アルコールを含む、請求項１８に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２０】
前記可塑剤は、クエン酸ブチリルトリヘキシルである、請求項１８に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２１】
前記クエン酸ブチリルトリヘキシルは、クエン酸ｎ−ブチリルトリ−ｎ−ヘキシルを含む、請求項２０に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２２】
前記可塑剤の濃度は、約０．１％（ｖ／ｖ）〜約１０％（ｖ／ｖ）である、請求項１８に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２３】
抗凝固剤をさらに含む、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２４】
前記抗凝固剤は、ヘパリン、ヘパリン塩、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される硫酸化グリコサミノグリカンを含む、請求項２３に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２５】
前記抗凝固剤は、ヘパリンアンモニウム、ヘパリンカルシウム、ヘパリンリチウム、ヘパリンカリウム、ヘパリンナトリウム、ヘパリン亜鉛リチウム、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されるヘパリン塩である、請求項２３に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２６】
前記抗凝固剤の濃度は、約２００ｍｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌである、請求項２３に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２７】
ヘパリナーゼをさらに含む、請求項１に記載の細胞および／もしくは高分子安定化組成物。
【請求項２８】
細胞を保存および／もしくは安定化するための方法であって、該方法は、
細胞と、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させる工程、
を包含し、該組成物は、
（ａ）エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、およびこれらの塩からなる群より選択される、キレート化剤；ならびに
（ｂ）グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムからなる群より選択される、少なくとも１種のキレート化剤増強成分
を含む、
方法。
【請求項２９】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される塩基をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞は、哺乳動物細胞、ウイルス感染細胞、病的細胞、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される細胞を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記哺乳動物細胞は、赤血球、白血球、リンパ球、組織球、上皮細胞、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される細胞を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記哺乳動物細胞はヒト細胞を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記キレート化剤の濃度は、約０．１ｍＭ〜約０．１Ｍである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１種のキレート化剤増強成分の濃度は、約０．１ｍＭ〜約０．５Ｍである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記塩基の濃度は、約０．１ｍＭ〜約５Ｍである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、水溶液として処方される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１種のキレート化剤増強成分は、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、および塩化リチウムからなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３８】
細胞内核酸を保存する工程をさらに包含し、ここで該核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡからなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記核酸は、真核生物ＲＮＡである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞は、ヒト被験体から得られる体液中に存在する、請求項２８に記載の方法。
【請求項４１】
細胞および／もしくは高分子組成物：体液の容積比は、約１：１０〜約１０：１である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞と、前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させる工程は、前記細胞を、前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物に添加する工程を包含する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記細胞と、前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させる工程は、前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物を、前記細胞に添加する工程を包含する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物ならびに前記体液は、一緒になって、前記細胞が該細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触した後、最大約５日間にわたって、実質的に凝集がないままである安定化体液組成物を形成する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記体液は、血液、血清、羊水、髄液、結膜液、唾液、膣液、糞便、精液、および汗からなる群より選択される物質を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記細胞はリンパ球である、請求項２８に記載の方法。
【請求項４７】
前記細胞は、前記細胞と、該細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させた後、少なくとも約３日間にわたって、細胞外マーカーのうちの少なくとも約８０％を保持している、請求項２８に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞外マーカーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞は、該細胞と、前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させた約５日後に、細胞外マーカーのうちの少なくとも約９５％を保持している、請求項２８に記載の方法。
【請求項５０】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、長鎖脂肪酸、長鎖脂肪エステル、長鎖脂肪アルコール、リチウム、ヘパリン、ヘパリナーゼ、クエン酸ブチルヘキシル、および／もしくはこれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種の化合物をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞と、フローサイトメーターとを接触させる工程をさらに包含する、請求項２９に記載の方法。
【請求項５２】
請求項５１に記載の方法。前記細胞と、フローサイトメーターとを接触させる工程は、細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させた後に、最大約２日間までに、最大約３日間までに、最大約４日間までに、最大約５日間までに、最大約６日間までに、もしくは最大約７日間までに起こる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
サンプル中の細胞を保存するためのシステムであって、該システムは、
該細胞を含むサンプルを受容しかつ入れるように構成されたサンプル容器；および
細胞および／もしくは高分子安定化組成物
を含み、該組成物は、
（ａ）エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、およびこれらの塩からなる群より選択される、キレート化剤；
（ｂ）グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムからなる群より選択される、少なくとも１種のキレート化剤増強成分；ならびに
（ｃ）プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される、塩基、
を含む、
システム。
【請求項５４】
ユーザー説明書をさらに含む、請求項５３に記載のシステム。
【請求項５５】
前記サンプル容器は、細胞および／もしくは高分子安定化組成物が入る、請求項５３に記載のシステム。
【請求項５６】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、固体、液体もしくはヒドロゲルをさらに含む、請求項５３に記載のシステム。
【請求項５７】
前記サンプル容器は、少なくとも１つの内表面および少なくとも１つの外表面を含む、請求項５３に記載のシステム。
【請求項５８】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、前記少なくとも１つの内表面上のコーティングである、請求項５３に記載のシステム。
【請求項５９】
システムであって、該システムは、
（ａ）保存された細胞；
（ｂ）細胞および／もしくは高分子安定化組成物であって、
（ｉ）エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、およびこれらの塩からなる群より選択される、キレート化剤；
（ｉｉ）グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムからなる群より選択される、少なくとも１種のキレート化剤増強成分；ならびに
（ｉｉｉ）プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される、塩基；
を含む組成物；ならびに
（ｃ）分析デバイス
を含む、システム。
【請求項６０】
前記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、可塑剤および抗凝固剤をさらに含む、請求項５９に記載のシステム。
【請求項６１】
前記分析デバイスは、顕微鏡、プレートリーダー、サイズ分画ゲル、サーモサイクラー、フローサイトメーター、自動化血液分析器、示差式細胞カウンター、セルソーター、ビーズ、アフィニティーマトリクス、分光計、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項５９に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２００７年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／８９４，７９５号、２００７年９月７日に出願された米国仮特許出願第６０／９７０，８８１号、および２００７年１０月２９日に出願された米国仮特許出願第６０／９８３，４６８号の利益を請求する。本願は、２００７年３月１４日に出願された米国特許出願第１１／６８６，１６９号の一部継続出願である。本願は、２００７年３月１４日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／６３９８２号の一部継続出願である。上述の出願の各々の内容は、本明細書中にその全体が参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本開示は、一般に、高分子および／もしくは生体分子の保存のための組成物、システム、および方法に関する。例えば、本開示の組成物、システム、および方法は、コンホメーション特異的様式および／もしくは配列特異的様式において、別の分子と相互作用し得る条件において、高分子および／もしくは生体分子を保存および／もしくは安定化するために使用され得る。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
高分子および生体分子は、いくつかの条件下で不安定であり得る。核酸分子は、例えば、ヌクレアーゼの存在下で分解され得る。同様に、タンパク質分子は、プロテアーゼの存在下で分解され得る。高分子および生体分子の分解は、時間とともに増大し得る。このような分子の特性（存在、濃度、配列、コンホメーション）の検出を含むアッセイの効力は、このような分解が起こる場合、低下し得るかまたは失われ得る。例えば、微量の生体分子の検出に依存する診断アッセイもしくは法医学的アッセイは、生体分子が分解した場合に、信頼性の高い結果を生むことができない可能性がある。
【０００４】
性行為感染症（ＳＴＤ）病院は、定期的に、淋病および梅毒としてこのような疾患に関してスクリーニングし、患者を処置する。淋菌のような感染性因子は、ＤＮＡサンプルを分析することによって検出され得る。遺伝的形質転換（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）試験（ＧＴＴ）（例えば、ＧｏｎｏｓｔａｔＴＭ（Ｓｉｅｒｒａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｎｏｒａ，Ｃａｌｉｆ．））は、非特許文献１に従って、男性の尿道、ならびに女性の子宮頚管および肛門から採取された標本中の淋菌ＤＮＡを検出するために使用され得る。ＷＬ  Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎらは、類似の結果を得た（非特許文献２）。しかし、感染性因子の存在について患者をすぐに試験することは、常に可能であるわけではない。例えば、病院の実験室は、多くの田舎の地域もしくは未開発地域においては容易に見いだされない。このような状況において、分析用の実験室に患者の試験標本を輸送することが必要であるが、その間に、目的の標本は、部分的にもしくは完全に分解してしまうかもしれない。
【０００５】
高分子および／もしくは生体分子の分解は、上記高分子もしくは生体分子の温度を低下させることによって、軽減し得る。しかし、この選択肢は、全ての状況において利用可能でない可能性があるかまたは、十分に長期間にわたって（例えば、サンプル収集の時から分析時まで）利用可能でない可能性がある。例えば、遠隔地でサンプルが収集される（例えば、患者から）場合、サンプルが、上記サンプルが分析される施設へ輸送されるのに十分長く、その標的分子を保存することは、困難もしくは不可能であり得る。さらに、冷却は、全てのサンプルに対して均一ではない可能性があるか、そして／または実験間で一定でない可能性がある。
【０００６】
高分子および／もしくは生体分子の分解は、１種以上のヌクレアーゼもしくはプロテアーゼを不活性化するに十分な温度へと、組成物を加熱することによって軽減され得る。しかし、限られた数のプロテアーゼおよびヌクレアーゼが、加熱によって不活性化されるに過ぎない。さらに、加熱は、標的分子を保存するのではなく、分解し得る。
【０００７】
疾患の診断は、収集と分析の間に維持される細胞の状態に依存し得る。しかし、高分子のように、細胞（例えば、完全細胞）は、その通常の環境の外では不安定であり得る。例えば、ヒトの身体から取り出された細胞（例えば、血球）は、取り出されてから数秒から数分以内に劣化し始める可能性がある（例えば、溶解、酸化、および／もしくは凝集し得る）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】ＨＷ  Ｊａｆｆｅら、Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．１４６：２７５−２７９（１９８２）
【非特許文献２】ＷＬ  Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎら、Ａｂｓｔｒ．Ａｎｎ．Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，ｐ．３１５（１９８３）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（要旨）
従って、細胞（例えば、完全細胞）を保存および／もしくは安定化するための組成物、システム、および方法の必要性が生じた。
【００１０】
本開示は、高分子および／もしくは生体分子（まとめて「高分子」）を保存および／もしくは安定化するための組成物、システム、および方法に関する。いくつかの実施形態によれば、高分子および／もしくは生体分子は、タンパク質および／もしくは核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）を含み得る。当業者によって認識されるように、核酸は、複数の供給源に由来する配列を含み得る。例えば、単一の核酸は、人口配列（例えば、プライマー結合部位）、ヒト配列（例えば、ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ（ＡＰＣ）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、乳癌１（ＢＲＣＡ１）、膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）、ｖ−ｅｔｓ赤芽球症ウイルスＥ２６癌遺伝子ホモログ（ＥＲＧ））、植物配列、微生物配列（例えば、抗生物質耐性遺伝子）、ウイルス配列（例えば、ＨＩＶプロテアーゼ）、および／もしくはこれらの組み合わせを含み得る。単一の核酸配列はまた、共通する供給源の通常でないかもしくは２つの配列の人工的融合物（例えば、ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合物）を含み得る。高分子は、上記高分子が、存在する場合に、少なくともサンプル収集の時からサンプル分析の時まで検出可能な形態で維持される限りにおいて、保存されるとみなされ得る。いくつかの実施形態において、本開示は、体液もしくは排出物（例えば、尿、血液、血清、羊水、髄液、結膜液、唾液、膣液、糞便、精液、および汗）中の高分子の保存および／もしくは安定化に関する。いくつかの実施形態において、核酸ハイブリダイゼーションにおける予測外の改善は、このような核酸試験法において（例えば、本開示の保存組成物、システム、もしくは方法が内場合に行われる同じ方法と比較して）観察され得る。
【００１１】
本開示は、細胞（例えば、完全細胞）ならびに／または高分子および／もしくは生体分子（まとめて、「高分子」）を、保存および／もしくは安定化するための組成物、システム、および方法に関する。例えば、本開示は、いくつかの実施形態によれば、細胞（例えば、完全細胞）を保存および／もしくは安定化するための組成物（「細胞安定化組成物」）に関する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、（ａ）キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、およびこれらの塩から選択されるキレート化剤）、（ｂ）少なくとも１種のキレート化剤増強成分（例えば、グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムからなる群より選択される、キレート化剤増強成分）、ならびに必要に応じて、（ｃ）プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される、塩基を含み得る。キレート化剤、キレート化剤増強成分、および／もしくは塩基の濃度は、任意の達成し得る濃度から各々選択され得る。例えば、キレート化剤の濃度は、約０．１ｍＭ〜約０．１Ｍであり得、キレート化剤増強成分の濃度は、約１ｍＭ〜約５Ｍであり得；そして／または塩基の濃度は、約０．１ｍＭ〜約５Ｍであり得る。いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、水溶液として処方され得る。いくつかの実施形態において、キレート化剤増強成分は、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、および塩化リチウムからなる群より選択され得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態によれば、塩化マンガン、サルコシル、ドデシル硫酸ナトリウム、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種の酵素不活性化成分を含んでいてもよいし、除いてもよい。いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、固体、液体、および／もしくはヒドロゲルを含み得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態において、溶媒（例えば、水および／もしくは有機溶媒）を含み得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態によれば、細胞（例えば、インタクトな細胞、完全細胞など）、タンパク質（例えば、細胞性タンパク質および／もしくは細胞非含有タンパク質（ｃｅｌｌ−ｆｒｅｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ））、ならびに／または核酸（例えば、細胞性および／もしくは無細胞性のＲＮＡ、ＤＮＡなど）を含み得る。
【００１３】
いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、可塑剤（例えば、クエン酸化アルコール）および／もしくは抗凝固剤（例えば、ヘパリン）を含み得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態において、室温（例えば、約２０℃）で保存したサンプル（例えば、血液サンプル）における凝集および／もしくは凝固を軽減および／もしくはブロックし得る。
【００１４】
細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態によれば、緩衝液を含み得る。例えば、緩衝液は、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシアミノ）メタン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、２−［（２−アミノ−２−オキソエチル）アミノ］エタンスルホン酸、Ｎ−（２−アセトアミド）２−イミノ二酢酸、３−［（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−プロパンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチルグリシン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸、Ｎ−（２−ヒドロキシエチルピペラジン）−Ｎ’−（３−プロパンスルホン酸）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、２−（Ｎ−モルホリン）エタンスルホン酸、トリエタノールアミン緩衝液、イミダゾール、グリシン、エタノールアミン、３−（Ｎ−モルホリン）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、Ｎ−トリス［（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸、２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される化合物を含み得る。
【００１５】
いくつかの実施形態によれば、本開示はまた、細胞を保存および／もしくは安定化するための方法（「細胞安定化方法」）に関する。細胞安定化方法は、例えば、高分子と、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させる工程を包含し得、上記組成物は、（ａ）キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ｅｔｂｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸  （ＢＡＰＴＡ）、およびこれらの塩からなる群より選択される、キレート化剤）、（ｂ）少なくとも１種のキレート化剤増強成分（例えば、グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムからなる群より選択される、キレート化剤増強成分）、ならびに（ｃ）塩基（例えば、プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される塩基）を含む。細胞は、いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞、細菌細胞、ウイルス感染細胞、病的細胞、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される細胞を含み得る。いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞は、赤血球、白血球、リンパ球、組織球、上皮細胞、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される細胞を含み得る。哺乳動物細胞は、いくつかの実施形態によれば、ヒト細胞を含み得る。高分子安定化組成物および／もしくは方法で保存および／もしくは安定化されるべき高分子は、いくつかの実施形態によれば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡからなる群より選択される核酸を含み得る。核酸は、例えば、原核生物および／もしくは真核生物のＤＮＡを含み得る。いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物ならびに／または細胞および／もしくは高分子安定化方法で、保存および／もしくは安定化されるべき細胞および／もしくは高分子は、ヒト被験体から得られた体液中に存在し得る。体液としては、例えば、血液、血清、羊水、髄液、結膜液、唾液、膣液、糞便、精液、および汗からなる群より選択される物質が挙げられ得る。
【００１６】
本開示はさらに、いくつかの実施形態において、細胞（例えば、完全細胞）（「細胞安定化システム」）および／もしくは高分子（「高分子安定化システム」）を保存および／もしくは安定化するためのシステムに関する。細胞および／もしくは高分子安定化システムは、細胞を含むサンプルを受容しかつ上記サンプルが入るように構成されかつ配置されたサンプル容器、ならびに細胞および／もしくは高分子安定化組成物（例えば、キレート化剤、少なくとも１種のキレート化剤増強成分、および塩基を含む）を含み得る。システムはまた、いくつかの実施形態において、ユーザー説明書を含み得る。上記サンプル容器は、いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物を含み得る。例えば、上記サンプル容器は、少なくとも１つの内表面および少なくとも１つの外表面を含み得、上記少なくとも１つの該表面には、細胞および／もしくは高分子安定化組成物がコーティングされている。サンプル容器は、いくつかの実施形態において、少なくとも１つの小胞、リポソーム、および／もしくはミセルを含み得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、小胞、リポソーム、および／もしくはミセルの内腔内に存在し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
本開示のいくつかの実施形態は、一部は以下の説明および添付の図面を参照することによって理解され得る。
【図１】図１は、本開示の実施形態に従って保存された尿中のＤＮＡ濃度の棒グラフである。
【図２】図２は、本開示の実施形態に従って保存された尿に関する８日間の連続データのグラフである。
【図３】図３は、本開示の実施形態に従って保存されていない正常尿および本開示の実施形態に従って保存された正常尿におけるＰＣＲ結果を含むグラフである。
【図４】図４は、本開示の実施形態に従って保存された血清に関する８日間の連続データのグラフである。
【図５】図５は、本開示の実施形態に従って保存された血清中のＤＮＡ濃度のグラフである。
【図６】図６は、本開示の一実施形態に従ってＤＮＡを保存するためのシステムの模式図である。
【図７】図７は、上記ＤＮＡが本開示の保存剤で処理され、一方は処理されていないＰＣＲアッセイにおけるシグナル応答の比較をグラフで示す。
【図８】図８は、種々の保存条件に供した血漿サンプルの分枝ＤＮＡアッセイのシグナル応答を増強する、本開示の試薬の効力を例示する。
【図９】図９は、血清サンプルおよび血漿サンプルの分枝ＤＮＡアッセイのシグナル応答を増強する、本開示の試薬の効力を例示する。
【図１０】図１０は、保護されていない血清中のＢ型肝炎配列ＭＤ０３／０６に関するＰＣＲ増幅アッセイのＰＣＲ吸光度に対するメトヘモグロビンの干渉を示すグラフである。
【図１１】図１１は、本開示の保存剤で処置した血清中のＢ型肝炎配列ＭＤ０３／０６に関するＰＣＲ増幅アッセイのＰＣＲ吸光度に対するメトヘモグロビンの干渉を減少させることにおける改善を示すグラフである。
【図１２Ａ】図１２Ａは、緩衝液（保護なし）、グアニジンのみ、ＥＧＴＡのみ、もしくはＥＧＴＡ＋グアニジンと接触させた血清中において、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマー、ならびにＢ型肝炎テンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅から得られた結果の代表を示すチャートである。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、緩衝液（保護なし）、ＥＤＴＡのみ、過塩素酸ナトリウムのみ、もしくはＥＤＴＡ＋過塩素酸ナトリウムと接触させた血清中において、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマー、ならびにＢ型肝炎テンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅から得られた結果の代表を示すチャートである。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、緩衝液（保護なし）、ＥＧＴＡのみ、過塩素酸ナトリウムのみ、もしくはＥＧＴＡ＋過塩素酸ナトリウムと接触させた血清中において、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマーならびにＢ型肝炎テンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅から得られた結果の代表を示すチャートである。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、緩衝液（保護なし）、ＥＤＴＡのみ、もしくはＥＤＴＡ＋チオシアン酸ナトリウムと接触させた血清中において、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマーならびにＢ型肝炎テンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅から得られた結果の代表を示すチャートである。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、緩衝液（保護なし）、ＥＧＴＡのみ、もしくはＥＧＴＡ＋チオシアン酸ナトリウムと接触させた血清中において、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマーならびにＢ型肝炎テンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅から得られた結果の代表を示すチャートである。
【図１２Ｆ】図１２Ｆは、緩衝液（保護なし）もしくはＢＡＰＴＡのみと接触させた血清中において、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマーならびにＢ型肝炎テンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅から得られた結果の代表を示すチャートである。
【図１３Ａ】図１３Ａは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１３Ｄ】図１３Ｄは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１３Ｅ】図１３Ｅは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１３Ｆ】図１３Ｆは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１３Ｇ】図１３Ｇは、室温で保存し、その後本開示の試薬中に含まれる特定の成分の個々の添加によって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対して保存効果がないことを示すグラフである。
【図１４Ａ】図１４Ａは、シトシンのみもしくはチオシアン酸ナトリウム＋ＥＤＴＡ＋シトシンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、グアニンのみもしくはチオシアン酸ナトリウム＋ＥＤＴＡ＋グアニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１４Ｃ】図１４Ｃは、チミンのみもしくはチオシアン酸ナトリウム＋ＥＤＴＡ＋チミンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１４Ｄ】図１４Ｄは、ウラシルのみもしくはチオシアン酸ナトリウム＋ＥＤＴＡ＋ウラシルと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１５Ａ】図１５Ａは、１Ｍ  アデニン、１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム、１Ｍ  ＥＤＴＡ、もしくは１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ＋１Ｍ  アデニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、１Ｍ  アデニン、１Ｍ  ＥＤＴＡ、２Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋１Ｍ  ＥＤＴＡ、もしくは２Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋１Ｍ  ＥＤＴＡ＋１Ｍ  アデニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示す。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、１Ｍ  アデニン、１Ｍ  グアニジン、１Ｍ  グアニジン＋０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ、２Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋１Ｍ  ＥＧＴＡ、もしくは１Ｍ  グアニジン・ＨＣｌ＋１Ｍ  ＥＧＴＡ＋２Ｍ  アデニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、１Ｍ  アデニン、１Ｍ  グアニジン、１Ｍ  グアニジン＋０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ、１Ｍ  塩化リチウム＋１Ｍ  ＢＡＰＴＡ、もしくは２Ｍ  グアニジンチオシアネート＋１Ｍ  ＢＡＰＴＡ＋２Ｍ  アデニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１５Ｅ】図１５Ｅは、１Ｍ  過塩素酸ナトリウム、１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋２Ｍ  ＥＤＴＡ、もしくは１Ｍ  過塩素酸ナトリウム＋１Ｍ  ＥＤＴＡと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１６Ａ】図１６Ａは、１Ｍ  グアニジン・ＨＣｌもしくは１Ｍ  グアニジン・ＨＣｌ＋０．０１Ｍ  ＢＡＰＴＡ＋４Ｍ  アデニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ、２Ｍ  チオシアン酸ナトリウム、１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋０．１Ｍ  ＥＤＴＡ＋１Ｍ  アデニン、もしくは２Ｍ  チオシアン酸ナトリウム＋０．１Ｍ  ＥＧＴＡ＋２Ｍ  アデニンと接触させた新鮮な尿中において、淋菌ＤＮＡテンプレートを使用する例示的ＰＣＲ増幅の結果を示すチャートである。
【図１７Ａ】図１７Ａは、試験組成物（例えば、本開示の例示的実施形態もしくはコントロール）と接触させ、フローサイトメトリー分析に供した細胞の経時的なＣＤ３パーセンテージのプロットである。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、試験組成物（例えば、本開示の例示的実施形態もしくはコントロール）と接触させ、フローサイトメトリー分析に供した細胞の経時的なＣＤ４パーセンテージのプロットである。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、試験組成物（例えば、本開示の例示的実施形態もしくはコントロール）と接触させ、フローサイトメトリー分析に供した細胞の啓示的なＣＤ３絶対数のプロットである。
【図１８】図１８は、試験組成物（例えば、本開示の例示的実施形態もしくはコントロール）と接触させたサンプルの経時的な総ＲＮＡ収量（曲線下の測定された面積）のプロットである。
【図１９Ａ】図１９Ａは、ＰＡＸｇｅｎｅＴＭ組成物と接触させたＲＮＡ含有サンプルの電気泳動図である。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、ＥＤＴＡ組成物と接触させたＲＮＡ含有サンプルの電気泳動図である。
【図１９Ｃ】図１９Ｃは、本開示の具体例の実施形態に従う組成物と接触させたＲＮＡ含有サンプルの電気泳動図である。
【図１９Ｄ】図１９Ｄは、本開示の具泰定の実施形態に従う組成物と接触させたＲＮＡ含有サンプルの電気泳動図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
（説明）
本開示は、細胞（例えば、完全細胞）ならびに／または高分子および／もしくは生体分子（「高分子」）の分解を遅らせるための組成物、システム、および方法に関する。
【００１９】
いくつかの実施形態によれば、組成物は、細胞を保存および／もしくは安定化し得る（「細胞および／もしくは高分子安定化組成物」）。細胞は、完全細胞を含み得る。完全細胞は、例えば、細胞表面物質（例えば、細胞表面タンパク質、細胞外マトリクス、細胞壁、および／もしくは外膜）を含み得る。保存および／もしくは安定化され得る細胞としては、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）、植物細胞、酵母細胞、細菌細胞、ウイルス感染細胞、病的細胞、およびこれらの組み合わせから選択される細胞を含み得る。哺乳動物細胞としては、赤血球、白血球、リンパ球、組織球、上皮細胞、幹細胞、およびこれらの組み合わせから選択される細胞が挙げられ得る。
【００２０】
細胞は、いくつかの実施形態において、生きたまま維持される場合、保存および／もしくは安定化され得る。いくつかの実施形態において、細胞は、インビボの細胞と（例えば、形態学的に、生理学的に、遺伝的に、および／もしくは生化学的に）同じ条件もしくは実質的に同じ条件において維持される場合に、保存および／もしくは安定化され得る。細胞は、いくつかの実施形態において、身体もしくは体液中に存在していたときと同じもしくは実質的に同じ条件（例えば、健康的もしくは病的な）で維持される場合に、保存および／もしくは安定化され得る。例えば、保存および／もしくは安定化は、細胞のエネルギー消費、存在する代謝産物（例えば、ピルベート）の量、存在する遊離ＡＴＰの量、転写および／もしくは翻訳の速度、ならびに／または１種以上のタンパク質および／もしくは核酸の存在（もしくは非存在）に関して評価され得る。
【００２１】
いくつかの実施形態によれば、高分子および／もしくは生体分子は、タンパク質および／もしくは核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）を含み得る。当業者によって認識されるように、核酸は、複数の供給源に由来する配列を含み得る。例えば、単一の核酸は、人工配列（例えば、プライマー結合部位）、ヒト配列（例えば、ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ（ＡＰＣ）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、乳癌１（ＢＲＣＡ１）、膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）、ｖ−ｅｔｓ赤芽球症ウイルスＥ２６癌遺伝子ホモログ（ＥＲＧ））、植物配列、微生物配列（例えば、抗生物質耐性遺伝子）、ウイルス配列（例えば、ＨＩＶプロテアーゼ）、および／もしくはこれらの組み合わせを含み得る。単一の核酸配列はまた、共通の供給源に由来する２つの配列の異常なもしくは人工融合物（例えば、ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合物）を含み得る。高分子は、上記高分子が、存在する場合は、少なくともサンプル収集の時からサンプル分析の時まで、検出可能な形態において維持される限りにおいて、保存されているとみなされ得る。いくつかの実施形態において、本開示は、体液もしくは排出物（例えば、尿、血液、血清、羊水、髄液、結膜液、唾液、膣液、糞便、精液、および汗）中の高分子の保存および／もしくは安定化に関する。いくつかの実施形態において、核酸ハイブリダイゼーションにおける予測外の改善は、このような核酸試験法において（例えば、本開示の保存組成物、システム、もしくは方法の非存在下で実施される同じ方法と比較して）、観察され得る。
【００２２】
分解は、目的の分子もしくは目的の分子の集まりを検出不能にする分子構造の任意の変化としてみなされ得る。例えば、タンパク質の分解としては、一次構造、二次構造、三次構造もしくは四次構造の任意の改変（例えば、ジスルフィド結合の還元、ペプチド結合の加水分解、または共有結合、イオン結合、疎水性結合、水素結合、もしくはファンデルワールス結合の他の切断）が挙げられ得る。核酸の分解としては、ハイブリダイゼーション状態（例えば、一本鎖、二本鎖、もしくは三本鎖）、らせん溝蔵（例えば、Ａ、Ｂ、もしくはＺ）、スーパーコイル、もしくは配列（例えば、ピリミジンダイマー化、脱アミノ化、酸化、脱プリン化（ｄｅｐｕｒｉｎａｔｉｏｎ）、または共有結合、イオン結合、疎水性結合、もしくは水素結合の任意の他の切断）の任意の改変が挙げられ得る。この分解の遅延は、長期間もしくは無期限の期間にわたって、所望の形態で上記高分子を保存することとみなされ得る。この遅延はまた、一定期間（例えば、サンプル収集の時からアッセイの時まで）にわたって、所望の形態において上記高分子を保存もしくは安定化するとみなされ得る。
【００２３】
本開示のいくつかの実施形態に従う組成物、システム、および方法は、生物学的流体および／もしくは排出物中の高分子の分解を軽減もしくは排除し得る。例えば、本開示の組成物、システム、および／もしくは方法は、いくつかの実施形態において、体液（例えば、尿）中の目的の核酸の酵素的破壊を排除し得る。保存および／もしくは安定化され得る核酸としては、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド、およびこれらの改変体の天然および／もしくは合成の形態が挙げられる。保存および／もしくは安定化され得る核酸としては、細胞内核酸および／もしくは細胞内核酸が挙げられ得る。保存および／もしくは安定化され得るＤＮＡとしては、例えば、ヒトＤＮＡ、哺乳動物ＤＮＡ、細菌ＤＮＡ、真菌ＤＮＡ、およびウイルスＤＮＡが挙げられ得る。保存および／もしくは安定化され得る細菌ＤＮＡとしては、例えば、淋菌ＤＮＡ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ＤＮＡ、およびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ＤＮＡが挙げられ得る。
【００２４】
保存および／もしくは安定化されるべき細胞および／もしくは高分子（および／もしくは生体分子）は、体液および／もしくは排出物、組織（例えば、生検組織）、および／もしくは物体（例えば、骨）中に含まれ得る。例えば、高分子は、食品粒子、土壌サンプル、法医学的サンプル（例えば、服、毛髮、指紋の物品）、ファブリック、細菌マトリクス、粘着物（ｓｌｉｍｅ）、環境的標本、および／もしくは細菌戦標本（ｂｉｏｗａｒｆａｒｅ  ｓｐｅｃｉｍｅｎ）中に含まれ得る。保存および／もしくは安定化されるべき高分子（および／もしくは生体分子）は、完全細胞中に含まれ得るか、そして／または完全細胞から精製され得る（例えば、完全にもしくは部分的に精製され得る）。
【００２５】
組成物、システム、および方法は、細胞および／もしくは高分子を（例えば、室温において）、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、および／もしくは少なくとも約４週間にわたって保存および／もしくは安定化し得る。組成物、システム、および方法は、細胞および／もしくは高分子を（例えば、室温において）、最大約１日間、最大約２日間、最大約３日間、最大約４日間、最大約５日間、最大約６日間、最大約１週間、最大約２週間、最大約３週間、および／もしくは最大約４週間にわたって、保存および／もしくは安定化し得る。組成物、システム、および方法は、いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子を、前述の期間にわたって冷却なしで保存および／／もしくは安定化し得る。例えば、保存および／もしくは安定化は、周囲温度および／もしくは上記組成物の温度が約７０℃、約６０℃、約５５℃、約５０℃、約４５℃、および／もしくは約４０℃を超えない場合に達成され得る。保存および／もしくは安定化は、周囲温度および／もしくは上記組成物の温度が約０℃〜約１０℃、約１０℃〜約２０℃、約１５℃〜約２５℃、約２０℃〜約３０℃、約１５℃〜約３５℃、および／もしくは約３０℃〜約４０℃である場合に達成され得る。温度範囲の選択は、いくつかの実施形態において、特定のサンプルについて予測されるおよび／もしくは所望される貯蔵条件に基づいて選択され得る。例えば、組成物、システム、および方法は、冷却が現実的でないそして／または利用不能であり、かつ日中の温度が５０℃に達する未開発国において収集される物質を、保存および／もしくは安定化するように適合され得る。同様に、組成物、システム、および方法は、輸送条件、貯蔵条件、および／もしくは周囲条件が２０℃未満の温度を含む場所で収集された物質を保存および／もしくは安定化するように適合され得る。
【００２６】
いかなる特定の作用機構にも限定されることなしに、本開示の組成物、システム、および方法は、目的の高分子および／もしくは生体分子を含む試験サンプル（例えば、体液）中に存在する１種以上の金属依存性酵素および／もしくは１種以上の金属非依存性酵素を不活性化し得る。例えば、二価金属キレート化剤は、上記金属依存性酵素（例えば、デオキシリボヌクレアーゼ）に利用可能なままである金属が、触媒作用（すなわち、核酸分解）を支援するに不十分である程度にまで、利用可能な金属（例えば、Ｍｇ２＋およびＣａ２＋）を結合し得る。繰り返すと、いかなる特定の作用機構にも限定されることなしに、キレート化剤増強成分は、体液中に見いだされる１種以上の金属非依存性酵素を不活性化し得る。例えば、金属非依存性酵素としては、ＤＮＡリガーゼ（例えば、Ｄ４  ＤＮＡリガーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７  ＤＮＡポリメラーゼ）、エキソヌクレアーゼ（例えば、エキソヌクレアーゼ２、l−エキソヌクレアーゼ）、キナーゼ（例えば、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ）、ホスファターゼ（例えば、ＢＡＰおよびＣＩＰホスファターゼ）、ヌクレアーゼ（例えば、ＢＬ３１ヌクレアーゼおよびＸＯヌクレアーゼ）、およびＲＮＡ改変酵素（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＲＮＡポリメラーゼ、ＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３  ＲＮＡポリメラーゼ、およびＴ４  ＲＮＡリガーゼ）が挙げられ得る。いかなる特定の作用機構にも限定されることなしに、プリン塩基および／もしくはピリミジン塩基は、核酸に結合し得、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡを分解する１種以上の酵素についての異性体標的として作用し得る。
【００２７】
本開示のいくつかの具体例の実施形態によれば、プリン塩基を有する細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触した標的核酸（例えば、淋菌ＤＮＡ）のＰＣＲ増幅からのその収量は、プリン塩基を有する細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させていない同じ標的核酸のＰＣＲ増幅からの収量よりも、少なくとも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、および／もしくは１０倍高い可能性がある。本開示のいくつかの具体例の実施形態によれば、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびプリン塩基を有する細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させた標的核酸（例えば、淋菌ＤＮＡ）のＰＣＲ増幅からの収量は、キレート化剤およびキレート化剤増強成分を有するが、プリン塩基を欠いている細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させた同じ標的核酸のＰＣＲ増幅からの収量よりも、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、および／もしくは１０倍高い可能性がある。例えば、ＥＤＴＡ（例えば、０．１Ｍ）、チオシアン酸ナトリウム（例えば、１Ｍ）、およびアデニンを有する細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させた標的核酸（例えば、淋菌ＤＮＡ）のＰＣＲ増幅からの収量は、ＥＤＴＡ（例えば、０．１Ｍ）およびチオシアン酸ナトリウム（例えば、１Ｍ）を有するが、アデニンを欠いている細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させた同じ標的核酸のＰＣＲ増幅からの収量よりも、約１０倍高い可能性がある。
【００２８】
（組成物）
高分子および／もしくは生体分子を保存および／もしくは安定化のための組成物（「高分子安定化組成物」）は、本開示のいくつかの実施形態によれば、キレート化剤、キレート化剤増強成分、プリン塩基、および／もしくはピリミジン塩基を含み得る。例えば、高分子安定化組成物は、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびプリン塩基を含み得る。細胞（例えば、完全細胞）を保存および／もしくは安定化するための組成物（「細胞および／もしくは高分子安定化組成物」）は、本開示のいくつかの実施形態によれば、キレート化剤、キレート化剤増強成分、プリン塩基、および／もしくはピリミジン塩基を含み得る。例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびプリン塩基を含み得る。
【００２９】
キレート化剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）および１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、および／もしくはその塩が挙げられ得る。キレート化剤は、含まれる場合、任意の所望の濃度において存在し得る。例えば、キレート化剤は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．００５Ｍ、少なくとも約０．０１Ｍ、少なくとも約０．０５Ｍ、および／もしくは少なくとも約０．１Ｍの濃度で含まれ得る。キレート化剤は、最大約０．１ｍＭ、最大約５ｍＭ、最大約０．０１Ｍ、最大約０．０５Ｍ、および／もしくは最大約０．１Ｍの濃度で含まれ得る。キレート化剤は、約０．１ｍＭ〜約０．１Ｍの濃度で含まれ得る。２種以上のキレート化剤が単一の組成物中に含まれる場合、各キレート化剤の濃度もしくは合わせたキレート化剤の総濃度は、提供された範囲のうちのいずれか内に入り得る。いくつかの実施形態において、キレート化剤としては、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、イミダゾール、イミノジアセテート（ＩＤＡ）、ビス（５−アミジノ−２−ベンゾイミダゾリル）メタン（ＢＡＢＩＭ）、および／もしくはこれらの塩が挙げられ得る。
【００３０】
キレート化剤増強成分は、例えば、塩化リチウム、グアニジン、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、およびこれらの組み合わせを含み得る。当業者が認識するように、グアニジンは、グアニン、プリン塩基、およびリボースを含む。キレート化剤増強成分は、含まれる場合、任意の所望の濃度で存在し得る。例えば、キレート化剤増強成分は、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約０．０５Ｍ、少なくとも約０．１Ｍ、少なくとも約０．５Ｍ、少なくとも約１Ｍ、少なくとも約１．５Ｍ、少なくとも約１．７５Ｍ、少なくとも約２Ｍ、少なくとも約３Ｍ、少なくとも約４Ｍ、および／もしくは少なくとも約５Ｍの濃度で含まれ得る。キレート化剤増強成分は、最大約１ｍＭ、最大約０．０５Ｍ、最大約０．１Ｍ、最大約０．５Ｍ、最大約１Ｍ、最大約１．５Ｍ、最大約１．７５Ｍ、および／もしくは最大約２Ｍの濃度で含まれ得る。キレート化剤増強成分は、前述の濃度のいずれかによって規定されるエンドポイントを有する範囲内の濃度で存在し得る。例えば、キレート化剤増強成分は、約１ｍＭ〜約０．５Ｍ、約０．１Ｍ〜約１．７５Ｍ、約０．１Ｍ〜約２．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約３．０Ｍ、約０．５Ｍ〜約３．０Ｍ、および／もしくは約０．１Ｍ〜約５．０Ｍの濃度で含まれ得る。
【００３１】
プリン塩基は、アデニン、グアニン、およびこれらの組み合わせを含み得る。プリン塩基はまた、アナログおよび／もしくは改変体（例えば、メチルアデニン、メチルグアニン、エチルアデニン、エチルグアニン）を含み得る。プリン塩基はまた、構造的に類似のアナログおよび／もしくは改変体（例えば、イノシン、カフェイン、尿酸、テオブロミン、テオフィリン、２−アミノプリン、６−アミノプリン、ヒポキサンチン（６−オキシプリン）、およびキサンチン（２，６−ジオキシプリン）を含み得る。プリン塩基は、塩（例えば、アデニンヘミスルフェート塩、アデニンヒドロクロリド）を含み得る。プリン塩基は、含まれる場合、任意の所望の濃度で存在し得る。例えば、プリン塩基は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約０．１Ｍ、少なくとも約０．２５Ｍ、少なくとも約０．５Ｍ、少なくとも約０．７５Ｍ、少なくとも約１Ｍ、少なくとも約１．５Ｍ、少なくとも約１．７５Ｍ、少なくとも約２Ｍ、少なくとも約２．５Ｍ、少なくとも約３Ｍ、少なくとも約４Ｍ、少なくとも約５Ｍ、少なくとも約６Ｍ、および／もしくは少なくとも約７Ｍの濃度で含まれ得る。プリン塩基は、最大約０．１ｍＭ、最大約１ｍＭ、最大約１０ｍＭ、最大約０．１Ｍ、最大約０．２５Ｍ、最大約０．５Ｍ、最大約０．７５Ｍ、最大約１Ｍ、最大約１．５Ｍ、最大約２Ｍ、最大約２．５Ｍ、最大約３Ｍ、最大約４Ｍ、最大約５Ｍ、最大約６Ｍ、および／もしくは最大約７Ｍまでの濃度で含まれ得る。プリン塩基は、含まれる場合、前述の濃度のうちのいずれかによって規定されるエンドポイントを有する範囲内の濃度で存在し得る。例えば、プリン塩基は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１０ｍＭ、約０．１Ｍ〜約１．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約２．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約５．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約１．７５Ｍ、約０．５Ｍ〜約２．０Ｍ、約０．７５Ｍ〜約３Ｍ、および／もしくは約０．１Ｍ〜約７Ｍの濃度で含まれ得る。
【００３２】
ピリミジン塩基は、例えば、シトシン、チミン、ウラシル、およびこれらの組み合わせを含み得る。ピリミジン塩基はまた、アナログおよび／もしくは改変体（例えば、メチルシトシン、メチルチミン、メチルウラシル、エチルシトシン、エチルチミン、エチルウラシル）を含み得る。ピリミジン塩基はまた、構造的に類似のアナログおよび／もしくは改変体（例えば、オロチン酸、チアミン、５−フルオロウラシル、６−アザウラシル、ピラジン、および／もしくはピリダジン）を含み得る。ピリミジン塩基は、塩（例えば、ピリミジン塩、２−ピペラジノピリミジン塩）を含み得る。ピリミジン塩基は、含まれる場合、任意の所望の濃度で存在し得る。例えば、ピリミジン塩基は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約０．１Ｍ、少なくとも約０．２５Ｍ、少なくとも約０．５Ｍ、少なくとも約０．７５Ｍ、少なくとも約１Ｍ、少なくとも約１．５Ｍ、少なくとも約１．７５Ｍ、少なくとも約２Ｍ、少なくとも約２．５Ｍ、少なくとも約３Ｍ、少なくとも約４Ｍ、少なくとも約５Ｍ、少なくとも約６Ｍ、および／もしくは少なくとも約７Ｍの濃度で含まれ得る。ピリミジン塩基は、最大約０．１ｍＭ、最大約１ｍＭ、最大約１０ｍＭ、最大約０．１Ｍ、最大約０．２５Ｍ、最大約０．５Ｍ、最大約０．７５Ｍ、最大約１Ｍ、最大約１．５Ｍ、最大約２Ｍ、最大約２．５Ｍ、最大約３Ｍ、最大約４Ｍ、最大約５Ｍ、最大約６Ｍ、および／もしくは最大約７Ｍまでの濃度で含まれ得る。ピリミジン塩基は、含まれる場合、前述の濃度のうちのいずれかによって規定されるエンドポイントを有する範囲内の濃度で存在し得る。例えば、ピリミジン塩基は、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１０ｍＭ、約０．１Ｍ〜約１．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約２．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約５．０Ｍ、約０．１Ｍ〜約１．７５Ｍ、約０．５Ｍ〜約２．０Ｍ、約０．７５Ｍ〜約３Ｍ、および／もしくは約０．１Ｍ〜約７Ｍの濃度で含まれ得る。
【００３３】
いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、およびこれらの塩から選択される二価金属キレート化剤の量；および塩化リチウム、グアニジン、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムから選択される少なくとも１種のキレート化剤増強成分の量を含み得る。二価金属キレート化剤の量は、一般に、約０．１ｍＭ〜約０．１Ｍの範囲において存在し得る。キレート化剤増強成分の量は、一般に、約１ｍＭ〜約５００ｍＭの範囲において存在し得る。組成物中のキレート化剤の量は、例えば、少なくとも約０．０１Ｍであり得る。組成物中のキレート化剤増強成分の量は、例えば、少なくとも約１Ｍであり得る。
【００３４】
いくつかの実施形態によれば、高分子安定化組成物は、一般に、約０〜５％モル濃度の範囲の量の、少なくとも１種の酵素不活性化成分（例えば、塩化マンガン、サルコシル、もしくはドデシル硫酸ナトリウム）を含み得る。いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、酵素不活性化成分を含んでいてもよいし、排除していてもよい。
【００３５】
いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、プリン塩基、ピリミジン塩基、もしくはプリン塩基とピリミジン塩基の両方を含み得る。例えば、組成物は、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびプリン塩基（例えば、アデニン）を含み得る。いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、（ａ）キレート化剤、（ｂ）キレート化剤増強成分、および（ｃ）プリン塩基および／もしくはピリミジン塩基のみを含み得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、他の実施形態において、１種以上の溶媒（例えば、水性および／もしくは有機性）、緩衝液、塩、界面活性剤、酸化剤、還元剤、および／もしくは他の試薬を含み得る。
【００３６】
いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、約４．５〜約８．５のｐＨを有し得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、上記保存および／もしくは安定化されるべきサンプル（例えば、体液）と合わせた際に、その混合物は、約４．５〜約８．５のｐＨを有するように、処方され得る。いくつかの実施形態において、適切な緩衝液は、Ｇｏｏｄ緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、トリス（ヒドロキシアミノ）メタン（トリス）、およびこれらの組み合わせから選択され得る。例えば、緩衝液としては、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、トリス、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）緩衝液、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）緩衝液、２−［（２−アミノ−２−オキソエチル）アミノ］エタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）緩衝液、Ｎ−（２−アセトアミド）２−イミノ二酢酸緩衝液（ＡＤＡ）、３−［（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−プロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）緩衝液、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）緩衝液、ビシン（Ｂｉｃｉｎｅ）（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチルグリシン）緩衝液、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ビス−トリス）緩衝液、３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）緩衝液、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）緩衝液、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）緩衝液、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチルピペラジン）−Ｎ’−（３−プロパンスルホン酸）（ＨＥＰＰＳ）緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＨＥＰＰＳＯ）緩衝液、２−（Ｎ−モルホリン）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液、トリエタノールアミン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液、エタノールアミン緩衝液、リン酸緩衝液、３−（Ｎ−モルホリン）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）緩衝液、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）緩衝液、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）緩衝液、Ｎ−トリス［（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）緩衝液、２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）緩衝液、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）緩衝液、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（トリシン）緩衝液、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール緩衝液、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール緩衝液、およびこれらの組み合わせが挙げられ得る。
【００３７】
組成物（例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物）は、いくつかの実施形態において、界面活性剤および／もしくは還元剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）は、いくつかの実施形態において、洗浄剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）を含み得る。洗浄剤としては、例えば、アニオン性洗浄剤、非イオン性洗浄剤、および／もしくはカチオン性洗浄剤が挙げられ得る。非イオン性洗浄剤としては、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、オクチル−フェノキシポリエトキシエタノール、ノニル−フェノキシポリエトキシエタノール、オクチルフルコピラノシド（ｏｃｔｙｌ  ｆｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）、ドデシルマルトピラノシド、ヘプチルチオグルコピラノシド、大きな（ｂｉｇ）ＣＨＡＰ洗浄剤、Ｇｅｎａｐｏｌ  Ｘ−８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ洗浄剤、アルキルフェノールのポリオキシエチレンエステル（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ）、ならびに／またはこれらの誘導体およびアナログが挙げられ得る。
【００３８】
本開示のいくつかの実施形態によれば、組成物（例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物）は、長鎖脂肪酸、長鎖脂肪エステル、長鎖脂肪アルコール、リチウム、ヘパリン、ヘパリナーゼ、ブチルヘキシルシトレート、および／もしくはこれらの組み合わせを含み得る。組成物を、本開示のいくつかの実施形態によれば、フローサイトメトリー法において試験した。組成物（例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物）は、いくつかの実施形態において、ヘパリンを排除し得る。例えば、ヘパリンの存在が望ましくない場合（例えば、ヘパリンが有害にＰＣＲをもたらし得る場合）、ヘパリンは省かれ得る。いくつかの場合において、ヘパリナーゼは、さらに、ヘパリンを除去するに十分な量で含まれ得る。
【００３９】
細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態によれば、固体、液体、もしくは気体（例えば、蒸気）として調製および／もしくは使用され得る。
【００４０】
いくつかの実施形態において、両方の完全細胞アッセイ（例えば、フローサイトメトリー）および分子アッセイ（例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、組織化学）に有用な安定化組成物を有することが望ましい可能性がある。いくつかの実施形態によれば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、（ａ）キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、およびこれらの塩から選択されるキレート化剤、（ｂ）少なくとも１種のキレート化剤増強成分（例えば、グアニジン、塩化リチウム、サリチル酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、およびチオシアン酸ナトリウムから選択されるキレート化剤増強成分）、（ｃ）塩基（例えば、プリン塩基およびピリミジン塩基からなる群より選択される塩基）、（ｄ）抗凝固剤（例えば、硫酸化グリコサミノグリカン）、および（ｅ）可塑剤（例えば、クエン酸化アルコール）を含み得る。例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、本明細書に記載されるキレート化剤、キレート化剤増強成分、および塩基を含み得る。いくつかの実施形態によれば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、１種以上の細胞（例えば、赤血球、白血球）を、ほとんどもしくは全く凝固も凝集もさせずに安定化し得る。このように安定化した細胞は、フローサイトメトリーによる分析に適切であり得る。塩基は、約０．０１ｍｇ／Ｌ〜約１ｍｇ／Ｌ、約０．０１ｍｇ／Ｌ〜約０．５ｍｇ／Ｌ、および／もしくは約０．２ｍｇ／Ｌ〜約０．５ｍｇ／Ｌの濃度で存在し得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態において、可塑剤をさらに含み得る。可塑剤は、約０．１％（ｖ／ｖ）〜約１０％（ｖ／ｖ）、約０．２％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、約０．５％（ｖ／ｖ）〜約２％（ｖ／ｖ）、および／もしくは約１％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）の濃度で存在し得る。可塑剤は、いくつかの実施形態において、クエン酸化アルコールを含み得る。クエン酸化アルコールの例としては、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸トリブチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸トリオクチル、クエン酸アセチルトリオクチル、クエン酸トリヘキシル、クエン酸アセチルトリヘキシル、クエン酸ブチリルトリヘキシル（例えば、クエン酸ｎ−ブチリルトリ−ｎ−ヘキシル）、クエン酸トリメチル、およびこれらの組み合わせが挙げられ得る。
【００４１】
細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態において、約２００ｍｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌ、約４００ｍｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌ、約５００ｍｇ／Ｌ〜約２ｇ／Ｌ、および／もしくは約１ｇ／Ｌ〜約３ｇ／Ｌの濃度で、抗凝固剤を含み得る。抗凝固剤は、いくつかの実施形態において、硫酸化グリコサミノグリカンが挙げられ得る。硫酸化グリコサミノグリカンの例は、ヘパリンおよび／もしくはヘパリン塩（例えば、ヘパリンアンモニウム、ヘパリンカルシウム、ヘパリンリチウム、ヘパリンカリウム、ヘパリンナトリウム、および／もしくはヘパリン亜鉛リチウム）が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００４２】
（システム）
本開示のシステムは、いくつかの実施形態によれば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物およびサンプル貯蔵容器を含み得る。例えば、システムは、保存および／もしくは安定化されるべき上記高分子および／もしくは生体分子を含むサンプルを受容するように構成しかつ配置された容器を含み得る。容器は、上記サンプルと、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触するように構成しかつ配置され得る。単純な例において、固体（例えば、錠剤、散剤、もしくはヒドロゲル）として処方される細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、小さなチューブの底に沈着させられ得る。上記チューブの中にサンプル（例えば、液体サンプル）を入れる際に、上記細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、サンプル環境と接触および混合し得る。上記サンプルは、細胞および／もしくは高分子安定化組成物と、上記サンプルが容器中に入れられると同時またはそのいくらか後に、接触（例えば、混合）され得る。
【００４３】
本開示のいくつかの実施形態において、システムは、脂質、界面活性剤、および／もしくは洗浄剤をさらに含む細胞および／もしくは高分子安定化組成物を含み得る。例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、ミセル、リポソーム、小胞、および／もしくは膜結合空間中に含まれ得る。
【００４４】
システムは、いくつかの実施形態によれば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物および使用のための説明書を含み得る。いくつかの実施形態において、システムは、細胞および／もしくは高分子安定化組成物、サンプル貯蔵容器、および使用のための説明書を含み得る。システムはまた、サンプル貯蔵容器およびその中身を含むように構成された輸送可能な容器を含み得る。
【００４５】
システムは、いくつかの実施形態によれば、保存された分子および／もしくは細胞を分析するための分析デバイスを含み得る。分析デバイスの例としては、顕微鏡、プレートリーダー、サイズ分画ゲル、サーモサイクラー、フローサイトメーター、自動化血液分析器、示差式細胞カウンター、セルソーター、ビーズ（例えば、磁性ビーズ）、アフィニティーマトリクス、および／もしくは分光計が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００４６】
（方法）
高分子および／もしくは生体分子を保存および／もしくは安定化するための方法（「高分子安定化方法」）は、本開示のいくつかの実施形態によれば、上記高分子と、高分子安定化組成物とを接触させる工程を包含し得る。例えば、高分子を含む体液は、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびプリン塩基（例えば、アデニン）を有する高分子安定化組成物と接触させられ得る。細胞を保存および／もしくは安定化するための方法（例えば、完全細胞）（「細胞安定化方法」）は、本開示のいくつかの実施形態によれば、上記細胞と、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させる工程を包含し得る。例えば、細胞を含む体液は、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびプリン塩基（例えば、アデニン）を有する細胞および／もしくは高分子安定化組成物と接触させられ得る。
【００４７】
本開示はまた、試験サンプルの分子アッセイのシグナル応答を改善するための方法に関し、上記方法は、上記試験サンプルと、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させて、保存および／もしくは安定化した試験サンプル（「保存された試験サンプル」）を生成する工程、目的の分子分析物を上記試験サンプルから単離および／もしくは精製する工程、ならびに分子アッセイを、上記単離および／精製された目的の分子分析物に対して行う工程を包含する。いかなる特定の作用機構にも限定されることなしに、核酸アッセイにおける改善されたシグナル応答は、本開示の細胞および／もしくは高分子安定化組成物の使用の結果として、増強されたハイブリダイゼーションに一部起因し得る。
【００４８】
本開示はさらに、核酸のハイブリダイゼーションを改善するための方法に関し、上記方法は、試験核酸と、細胞および／もしくは高分子安定化組成物とを接触させて、試験用駅を形成する工程、ならびに上記試験溶液と、標的核酸とを、試験核酸−標的核酸ハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触させる工程を包含する。
【００４９】
いくつかの実施形態によれば、方法は、上記細胞がフローサイトメトリーによる分析に供され得るように、細胞を十分に安定化および／もしくは保存する工程を包含し得る。例えば、方法は、上記細胞（例えば、上記細胞が位置する環境）が、フロー分析を干渉シエル凝集および／もしくは細片がないように、細胞を保存および／もしくは安定化する工程を包含し得る。保存および／もしくは安定化は、任意の利用可能な測定基準法もしくは測定基準法の組み合わせを使用して評価され得る。凝集および／もしくは細片の形成は、保存および／もしくは安定化測定基準法として使用され得る。外見（例えば、色）はまた、保存および／もしくは安定化測定基準法として使用され得る。
【００５０】
保存および／もしくは安定化測定基準法としては、例えば、経時的な１種以上のマーカー（例えば、細胞外マーカー）の存在が挙げられ得る。保存および／もしくは安定化マーカーは、１種以上のタンパク質、１種以上の炭水化物、１種以上の脂質、１種以上の核酸、および／もしくはこれらの組み合わせを含み得る。例えば、保存マーカーは、１種以上のリンパ球表面マーカーを含み得る。マーカーの例としては、例えば、Ｂ細胞マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、およびこれらの組み合わせ）、Ｔ細胞マーカー（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、およびこれらの組み合わせ）、ＮＫ細胞マーカー（例えば、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７、およびこれらの組み合わせ）、骨髄マーカー（例えば、ＣＤ１３、ＣＤ３３、ＣＤ３４、およびこれらの組み合わせ）、単球マーカー（例えば、ＣＤ１４）、および／もしくは凡白血球マーカー（例えば、ＣＤ４５）が挙げられ得る。いくつかの実施形態において、組成物（例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物）と接触した細胞（例えば、リンパ球）は、パーセンテージおよび／もしくは絶対数の点で、室温（例えば、約２０℃）において約４８時間、約７２時間、および／もしくは約９６時間で、約８０％より多く、約９０％より多く、約９５％より多く、および／または約９９％より多くの１種以上のマーカー（例えば、細胞表面マーカー）を保持し得る。例えば、組成物と接触したリンパ球は、室温において約９６時間（ｔ０は、上記細胞と上記組成物とが接触する時である）にわたって、少なくとも約８０％の１種以上のＴ細胞マーカー（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）を保持し得る。測定基準法の別の例は、保存および／もしくは安定化した細胞において検出されたおよび／もしくは保存および／もしくは安定化した細胞から回収された１種以上の核酸の量およびもしくは質であり得る。
【００５１】
いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物  対  サンプルの容積比および／もしくは重量比は、約１：１０〜約１０：１、約１：１０〜約１：１、および／もしくは約１：１０〜約１：５であり得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、サンプル１ｍＬおよび／もしくは１ｇあたり約１０μｇ〜約１０ｍｇの細胞および／もしくは高分子安定化組成物の割合でサンプルと合わされ得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態によれば、保存および／もしくは安定化されるべきサンプル（例えば、上記サンプルを含む容器）に添加され得る。保存および／もしくは安定化されるべきサンプルは、いくつかの実施形態において、細胞および／もしくは高分子安定化組成物（例えば、上記細胞および／もしくは高分子安定化組成物を含む容器）に添加され得る。いくつかの実施形態によれば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物、ならびに保存および／もしくは安定化されるべきサンプルは、互いに同時に添加され得る。例えば、両方ともが、別の空の混合容器に添加され得る。
【００５２】
当業者によって理解されるように、本開示の実施形態に従う細胞および／もしくは高分子および／もしくは生体分子を保存および／もしくは安定化するための他の等価なもしくは代替の組成物、システム、および方法は、その本質的な特徴から逸脱せずに想定され得る。例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、散剤、顆粒、錠剤、カプセル剤、脂質、シロップ剤、パスタ剤として処方され得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、任意の利用可能な方法によって、サンプル容器中に沈着させられ得る。例えば、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、高分子含有サンプルが導入される前にサンプル容器の内表面にコーティング（例えば、噴霧もしくは噴霧乾燥）され得る。細胞および／もしくは高分子安定化組成物はまた、固体もしくは液体の形態においてサンプル容器中に単純に配置され得る。あるいは、細胞および／もしくは高分子安定化組成物は、別個の容器に維持され得、そしてサンプルがサンプル容器中に入れられた後に、上記サンプルと接触させられ得る。また、範囲が提供される場合、開示されたエンドポイントは、特定の実施形態によって望まれるもしくは要求される場合、正確および／もしくは予測値として処理され得る。さらに、いくつかの実施形態において、範囲のエンドポイントを混合しかつ適合させることは、望ましい可能性がある。いくつかの実施形態において、用語「約」は、数値に適用される場合、その値±約１％、その値±約５％、その値±約１０％、その値±約２５％、および／もしくはその値±約５０％の数値をいう。上記数値が、ある範囲に対するエンドポイントとして提供される場合、用語「約」とは、いくつかの実施形態によれば、上記範囲の程度に依存して、多かれ少なかれ融通性を有し得る。例えば、上記範囲が一桁の大きさ（例えば、約１〜約１０）を網羅する場合、「約」は、少ない融通性を有し得る。しかし、数桁の大きさ（例えば、約０．１〜約１００）を網羅する範囲については、上記エンドポイントは、より大きな融通性を有し得る。いくつかの実施形態において、用語「最大（「ｕｐ  ｔｏ」）を含む濃度範囲（例えば、最大１ｍＭのＮａＣｌ）は、ゼロを上回る物質の任意の量に達する低いエンドポイント（例えば、任意の微量のＮａＣｌ）を含み得る。用語「最大」は、いくつかの実施形態において、上記特定の物質のいくらかのゼロでない量が存在することを企図および／もしくは必要とし得る。明らかな変化および改変とともに、これらの等価物および代替物は、本開示の範囲内に含まれることが意図される。本開示は、本開示の範囲の例示であるが、限定でないことが意図される。添付の特許請求の範囲は、本開示の範囲の例示であるが、限定でないことが同様に意図される。
【００５３】
本開示のいくつかの具体的実施形態は、少なくとも一部、以下の具体例の実施形態に言及することによって、理解され得る。これら実施例は、本開示のいくつかの実施形態のいくつかの（しかし必ずしも全てではない）局面を例示し、さらなるバリエーションは、当業者に本開示の利益をもたらすことが明らかである。
【実施例】
【００５４】
（実施例１）
図１は、本開示の一実施形態に従って保存および／もしくは安定化された尿中のＤＮＡ濃度の棒グラフである。尿標本のうちの１０タイプにおける形質転換対の数を、ＧＴＴを使用して試験紙、１時間毎に計数し、その後まとめた。標準的なＧｏｎｏｓｔａｔプロトコル（以下の実施例２を参照のこと）を使用し、使用した保存剤は、１Ｍ  グアニジンＨＣｌ／０．０１Ｍ  ＥＤＴＡであった。２００個のコロニーの数が、標本の全ての保存を示す。保存された尿中の淋菌形質転換体数は、その試験の４時間の間中、比較的一定であって、２００にほぼ等しいままであった。保存のレベルの有意差は、尿標本の異なるタイプの間では認められなかった。従って、試験した実施例組成物は、尿中ＤＮＡに対してほぼ完全な保護を提供した。
【００５５】
（実施例２）
図２は、本開示の一実施形態に従って保存および／もしくは安定化された尿に関する、８日間のＧＴＴ連続データのグラフである。１ｐｇの淋菌ＤＮＡを、９ｍＬの新鮮なヒト尿および１Ｍ  過塩素酸ナトリウムおよび０．０１Ｍ  ＥＧＴＡを含む水性高分子安定化組成物１ｍＬに添加した。３００μＬを。８日間にわたって２４時間間隔で、Ｇｏｎｏｓｔａｔ生物の菌叢上にスポットした。そのプレートは、ＢＢＬチョコレートＩＩ寒天を含んでおり、読み取りを行う前に、３７℃で２４時間にわたってインキュベートした。その８日間の試験期間全体にわたって観察されたコロニー数は、下は１８８個から上は１９７個の範囲に及んだ。従って、本開示の実施形態は、以前に提供されたものよりもかなり長期間にわたって、尿中のＤＮＡ濃度のグラフを保存および／もしくは安定化し得る。
【００５６】
（実施例３）
図３は、保存されていない正常尿と、本開示の一実施形態に従って保存された（保存および／もしくは安定化された）正常尿とにおけるＰＣＲ結果を比較するグラフである。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対するＭＯＭＰテンプレートを使用し、標準ＰＣＲプロトコルを使用して増幅した。上記ＭＯＭＰ標的の２００コピーを、１Ｍ  過塩素酸ナトリウムおよび０．０１Ｍ  ＢＡＰＴＡを含む９ｍＬの新鮮なヒト尿に添加した。ＰＣＲを合計８時間にわたって、各時間行った。保存されていない尿において、約３つのＰＣＲ吸光度が、ＤＮＡを上記尿に添加した後１時間で測定された。ＰＣＲ吸光度の数は、６時間までに０に近づいた。対照的に、保存および／もしくは安定化された標本において、３つより多いＰＣＲ吸光度が、その１時間の試験において測定された。しかし、約３つのＰＣＲ吸光度が、６時間までなお観察された。従って、本開示の実施形態は、十分なＤＮＡおよび核酸配列を保存および／もしくは安定化して、保存されていない尿の試験限界を十分に超えるＰＣＲ試験を可能にし得る。図に示される結果は、尿標本中のＤＮＡの全てのタイプにわたって一致している。
【００５７】
（実施例４）
本開示の試薬および方法は、他の体液および排出物（例えば、血清）を保存するために使用され得る。図４は、本開示の一実施形態に従って保存および／もしくは安定化した血清に関する８日間の連続データのグラフである。使用したプロトコルは、新鮮なヒト血清を使用した以外は、実施例３と類似であった。上記８日間の試験期間全体にわたって観察された形質転換体コロニー数は、上は１日目測定の１１０から下は７日目測定の約９２個までの範囲に及んだ。事実、この試験結果は、７日目と８日目の間の形質転換体コロニーの増加を実際に示した。従って、本開示のいくつかの実施形態は、以前に達成し得たものよりもかなり長期間にわたって血清中のＤＮＡを保存および／もしくは安定化し得る。
【００５８】
（実施例５）
図５は、本開示の一実施形態に従って保存および／もしくは安定化した血清中のＤＮＡ濃度のグラフである。上記血清を、１Ｍ  グアニジンＨＣｌ／０．０１Ｍ  ＥＤＴＡを含む高分子安定化組成物で保存および／もしくは安定化した。使用したプロトコルは、新鮮なヒト血清を使用し、研究時間を１０時間とした以外は、実施例３と類似であった。１２０個より多い形質転換体を、淋菌ＤＮＡを上記血清に添加した時に測定した。６時間の測定で、約１００個の形質転換体を計数した。しかし、１０時間までには、試験によって、保存された血清中の生物学的に活性なＤＮＡの濃度が、約１１０個の形質転換体コロニーに増大したことが示された。
【００５９】
（実施例６）
ＤＮＡを保存するための方法１０の例示的実施形態を、図６に模式的に示す。このプロトコルは、以下の表１に記載され、尿標本を使用するＰＣＲ、制限フラグメント長多型アッセイ（ＲＦＬＰ）、および核酸プローブのような試験法に適した多量のＤＮＡ／ＲＮＡを生成することが認められた。
【００６０】
【表１】
2010535013.tif 000003
（実施例７）
シミュレートした臨床標本におけるＤＮＡの保存
以下の実験において、シミュレートした臨床的尿標本を生成し、淋菌ＤＮＡの存在について試験した。以下の表２に列挙した化学物質を、以前に記載された濃度において、ＥＤＴＡと同様に、健康な成人に由来する尿標本に添加した。
【００６１】
淋菌の懸濁物を、各尿標本にすぐに添加した。上記添加した淋菌は、５％  ＣＯ２雰囲気中、３７℃でＧＣ寒天培地上において一晩増殖させた、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ，４９１９１という通常の株であった。上記Ｎ．Ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅコロニーを拾い上げ、ＧＣ緩衝液中に懸濁した。約１０個のコロニー形成単位（ｃｆｕ）／ｍＬを含む標本の１／１０容積を、尿に添加した。陽性コントロールとして、上記淋菌の懸濁液もまた、Ｈｅｐｅｓ緩衝液に添加した。
【００６２】
全てのシミュレートした臨床的標本および上記Ｈｅｐｅｓコントロールを、時間ゼロ（すなわち、上記化学物質および淋菌を添加した時）に試験した。上記標本およびコントロールも同様に、室温において６日間にわたる貯蔵の後に試験した。この６日間の期間を、患者標本の収集、郵送、および試験の間で予測される最大時間に近似するように選択した。
【００６３】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）およびサルコシルを含む尿サンプルを除いて、上記シミュレートした標本およびＨｅｐｅｓコントロールを、以下のように処理した：
１．１０ｍＬ量を、４０００ｒｐｍにおいて３０分間遠心分離した。
２．その上清をデカントし、そのペレットを、１ｍＬ  リン酸緩衝液中に懸濁した。
３．その懸濁液を、６０℃のウォーターバス中で１０分間加熱した。
４．冷却後、その懸濁液をＧＴＴにおいて使用した。
【００６４】
ＳＤＳ−ＥＤＴＡもしくはサルコシル−ＥＤＴＡを含む上記シミュレートした尿標本を、以下のように処理した：
１．約２  １／２容積（約２５ｍＬ）の９５％  エチルアルコールを、上記尿および高分子安定化組成物を含むチューブに添加した。その内容物を、チューブを数回転倒混和することによって混合した。
２．その混合物を、４０００ｒｐｍにおいて３０分間遠心分離した。
３．そのペレットを、１０ｍＬの７０％  アルコール中で懸濁し、遠心分離した。
４．次いで、そのペレットを１ｍＬ  リン酸緩衝液中で懸濁した。
５．その懸濁液を、６０℃のウォーターバス中で１０分間加熱した。
６．冷却後、その懸濁液をＧＴＴにおいて使用した。
【００６５】
その接種された尿を、試験前に、室温において６日間貯蔵した。上記Ｈｅｐｅｓ緩衝液コントロール中とほぼ同程度にまで、上記接種された尿において、淋菌ＤＮＡを６日間保存および／もしくは安定化した処方物（＋）、または淋菌ＤＮＡを保存および／もしくは安定化しなかった処方物（−）を示す。ＧｏｎｏｓｔａｔＴＭアッセイの結果は、半定量され得るが、その試験を、上記高分子安定化組成物の相対的効力をランク付けするために設計した。従って、表２に示される結果は、６日間の期間にわたって上記特定の化学物質が、Ｈｅｐｅｓ緩衝液中と同程度にまで尿中のＤＮＡを保存および／もしくは安定化したか否かを示す。
【００６６】
【表２】
2010535013.tif 000004
男性の尿標本で示した９２％感度は、文献中で報告した培養結果に匹敵する。さらに、女性の尿標本で示した８８％  感度は、以前に報告されたレベルを超えている。
【００６７】
本開示の好ましい実施形態は、淋菌ＤＮＡの保存に関するが、本開示が他のタイプのＤＮＡ（例えば、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅおよびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓのもの）を保存することにおける使用に適合可能であることは、当業者に容易に明らかである。本開示のいくつかの実施形態はまた、体液サンプル中に含まれるＲＮＡを保存および／もしくは安定化するために使用され得る。このような保存されたＲＮＡは、ウイルスセグメントおよびヒト遺伝子配列試験のＲＮＡ転写酵素および逆転写酵素アッセイのために使用され得る。
【００６８】
さらに、高分子安定化組成物は、体液（例えば、尿標本）に添加され得るが、尿標本はまた、保存／安定化の効力に対する有害性なしに、高分子安定化組成物に添加され得る。上記ＤＮＡの最適な保存は、単一の本開示の高分子安定化組成物を標本に添加することによって達成され得る。
【００６９】
（実施例８）
ペニシリナーゼ生成Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａのＰＣＲ検出
本開示の高分子安定化組成物のＰＣＲシグナル増強効果は、以下の実施例によって実証される。ＴＥＭをコードするプラスミドの４つの改変体を、ＰＰＮＧにおいて見いだされる。これらは、６．７ｋｂ（４．４Ｍｄａ）アジアタイプ、５．１ｋｂ（３．２Ｍｄａ）アフリカタイプ、４．９ｋｂ（３．０５−Ｍｄａ）トロントタイプおよび４．８ｋｂ（２．９−Ｍｄａ）リオタイプである。このＰＰＮＧについてのＰＣＲアッセイは、ＴＥＭ−１遺伝子がトランスポゾンＴｎ２の末端近くに位置するという事実を利用する；ＴＥＭ−１遺伝子における一方のプライマーおよびＴｎ２の末端の範囲を超え、全ての４つのプラスミドに共通する配列における他方のプライマーの使用によって、プラスミドにのみ由来しかつＴＥＭ−１をコードするプラスミドに由来しないＰＣＲ生成物を、得た（以下の表３）。このプロトコルと関連した条件を、上記ハイブリダイゼーション中に高分子安定化組成物を含むように改変し、上記処理したプローブを、標準ＰＣＲプロトコルによって７６１−ｂｐ増幅生成物と混合した。その結果を、Ａ４５０ｎｍで読み取った。
【００７０】
（材料および試薬）
ＢＢＬチョコレート１１寒天プレート
滅菌トリス緩衝液  １０ｍＭ  トリス（ｐＨ７．４），１ｍＭ  ＥＤＴＡ
０．５−ｍＬ  Ｇｅｎｅ  Ａｍｐ反応チューブ
滅菌使い捨てパスツールピペットチップ
耐エアロゾルチップ
ＰＣＲマスターミックス：
５０ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ
以下を各々５０μＭ：
デオキシリボヌクレオシドトリホスフェート；
２．５ＵのＴａｑポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）；
５％  グリセロール；
プライマーＰＰＮＧ−ＬおよびＰＮＧ−Ｒの各々を５０ｐｍｏｌ（１００μＬ反応あたり）
変性溶液
１Ｍ  Ｎａ  ５×デンハルト溶液
プレハイブリダイゼーション溶液
５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは、０．０１５Ｍ  ＮａＣｌ＋０．０１５Ｍ  クエン酸ナトリウムである）；
５×デンハルト溶液；
０．０５％  ＳＤＳ；
０．１％  ナトリウムＰｐｉ，および
１ｍＬあたり１００μｇの超音波処理サケ精子ＤＮＡ。
ハイブリダイゼーション溶液
デンハルト溶液を含まず、２００μＬの高分子安定化組成物１を含むことを除いてプレハイブリダイゼーション溶液と同じ。
１ｍＬ  ＤＮＡ／ＲＮＡ高分子安定化組成物（１Ｍ  グアニジンＨＣｌ／０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ）
アビジン−ＨＲＰペルオキシダーゼ複合体（Ｚｙｍｅｄ）
磁性微粒子（Ｓｅｒａｄｙｎｅ）。
【００７１】
【表３】
2010535013.tif 000005
（方法）
サンプル調製：２つのコロニーを、チョコレート寒天プレートから拾い上げた。コロニーを、ＰＣＲを設定する直前に、脱イオン水中に懸濁した。そのマスターミックスを、上記の方法に従って調製した。上記の新たに調製した細菌懸濁物の５μＬを、９５μＬのマスターミックスに添加した。そのＤＮＡを遊離させ、９４℃で３分および５５℃で３分の３サイクルを使用して、サーモサイクラー中で変性させた。そのＤＮＡを、以下の２工程プロファイルを使用することによってサーマルサイクラーで増幅させた：合計３０サイクルで、９５℃で２５秒変性および５５℃で２５秒アニーリング。時間を、上記２つの温度プラトーの間で設定して、上記２つの温度の間で可能な限り最速のアニーリングを可能にした。１５ｐｍｏｌの標識（アビジン−ＨＲＰ複合体）検出プローブＰＰＮＧ−Ｃを、３７℃で１時間にわたって上記高分子安定化組成物ありまたはなしで磁性微粒子に結合させた上記ハイブリダイゼーション溶液に添加した。次いで、上記コントロールプローブおよび処理プローブを、その増幅生成物に添加し、その反応を、Ａ４５０ｎｍにおいて比色的に検出した。本開示の高分子安定化組成物で処理したハイブリダイゼーションプローブから得られたシグナルは、ミス織りプローブより有意に高いことが見いだされた。
【００７２】
（実施例９）
本開示のいくつかの実施形態に従う組成物、システム、および方法は、核酸試験法（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ＬＣＸ、および遺伝的形質転換試験（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｅｓｔｉｎｇ）（ＧＴＴ）で得られるシグナルを増大させ得る。例えば、組成物、システム、および方法は、上記ＰＣＲのような核酸試験法におけるハイブリダイゼーションを増強し得る。図７は、ペニシリナーゼ生成Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａ（ＰＰＮＧ）ＤＮＡおよびＰＰＮＧ−Ｃプローブのハイブリダイゼーションに対して、本明細書に開示される高分子安定化組成物の具体例の実施形態から得られたハイブリダイゼーションにおける改善を例示する。そのＰＣＲプロトコルは、実施例１０に記載されるものと同じであった。
【００７３】
（実施例１０）
図８および図９は、核酸試験法（この場合、分枝ＤＮＡアッセイ（Ｃｈｉｒｏｎ））で得られた結果を改善することにおける本開示の組成物、システム、および方法の具体例の実施形態の効力をさらに例示する。図８で行った試験において、ｂＤＮＡアッセイを、上記高分子安定化組成物の保護効果を評価するために使用した。Ｃ型肝炎ウイルス由来のＤＮＡ配列を、血清および血漿に添加した。上記保護された血清および血漿を、９ｍＬの血清もしくは血漿および１ｍＬの高分子安定化組成物と混合した。以下の処方物を使用した：１）１Ｍ  グアニジンＨＣｌ／０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ、２）１Ｍ  過塩素酸ナトリウム／０．０１Ｍ  ＢＡＰＴＡ、３）１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム／０．０１Ｍ  ＥＧＴＡ、および４）１Ｍ塩化リチウム／０．０１Ｍ  ＥＧＴＡ。上記処方物を、４℃において７日間貯蔵した。ｂＤＮＡアッセイは、ハイブリダイゼーションに依存する；その標的配列が分解に対して保護されているのみならず、吸光度の倍加を超える結果が、その標的配列のハイブリダイゼーション／アニーリングの増強もまた示すということが吸光度の結果から明らかに認めら得る。
【００７４】
図９は、血清  対  血漿研究を示す。新鮮なヒト血漿の５０μＬサンプルおよび新鮮なヒト血清の１ｍＬサンプルを、１Ｍ  グアニジンＨＣｌ／０．０１Ｍ  ＥＤＴＡで保護し、これらサンプルを２０oＦで４８時間にわたって貯蔵した後に、上記ｂＤＮＡアッセイを上記サンプルに対して行った。結果を、保護しなかったサンプルと比較した。その標的配列が分解に対して保護されているのみならず、吸光度の倍加を超える結果が、その標的配列のハイブリダイゼーション／アニーリングの増強もまた示すということは、吸光度結果から明らかに認められ得る。
【００７５】
（実施例１１）
メトヘモグロビンのようなヘム化合物は、核酸のＰＣＲ増幅を干渉することが観察された。例えば、図１０は、実施例１０に従って行った一連のＰＣＲアッセイ（ここでそのテンプレート、新鮮なヒト血清を、漸増量のメトヘモグロビンとともに添加した）の結果を示す。示されるように、吸光度は、メトヘモグロビン濃度の関数として減少する。最高濃度において、吸光度（すなわち、増幅）は全く認められなかった。
【００７６】
本開示の高分子安定化組成物は、いくつかの実施形態によれば、血清に対して実施されるＰＣＲアッセイに際するヘム化合物（例えば、メトヘモグロビン）との干渉を除去し得る。図１１は、上記血清サンプルに、１Ｍ  チオシアン酸ナトリウムおよび０．１Ｍ  ＥＤＴＡを含む高分子安定化組成物を添加することによって得られた改善（すなわち、吸光度（Ａ４５０）によって測定される場合の増大した増幅）を例示する。コントロール（図１０）と同様に、血清サンプルに、漸増量のメトヘモグロビン（濃度１０ｄｌ／ｍＬまで）を添加した。一連のＰＣＲアッセイを４時間にわたって行った。
【００７７】
（実施例１２）
二価金属キレート化剤およびキレート化剤増強成分を含む例示的組成物は、血清中のＢ型肝炎配列を保護することに対して驚くべきかつ相乗的効果を有した。具体的には、Ｂ型肝炎テンプレートを、試験組成物（例えば、１Ｍ  過塩素酸ナトリウム／０．０１Ｍ  ＥＧＴＡ）と、室温において最大３６時間にわたって接触させた（２時間間隔でサンプリングした）。実施例１０に記載されるようなサンプルＰＣＲプロトコルを使用して、サンプルを、ＭＤ０３プライマーおよびＭＤ０６プライマーを使用するＰＣＲ増幅に供した。得られた結果の代表を、図１２Ａ〜図１２Ｆに提供する。まとめると、これらの図は、Ｂ型肝炎配列の保護および／もしくは増幅が、本開示の高分子安定化組成物の具体例の実施形態が、ＥＧＴＡもしくは過塩素酸ナトリウムを個々に添加することと比較して使用される場合に、増大することを示す。
【００７８】
（実施例１３）
図１３は、室温において貯蔵し、その後、本開示の試薬の成分（すなわち、二価金属キレート化剤０．０１Ｍ  ＢＡＰＴＡ（図１３Ａ）、０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ（図１３Ｂ）、０．０１Ｍ  ＥＧＴＡ（図１３Ｃ）；およびキレート化剤増強成分１Ｍ  過塩素酸ナトリウム（図１３Ｄ）、１Ｍ  サリチル酸（図１３Ｅ）、１Ｍ  グアニジンＨＣｌ（図１３Ｆ）、１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム（図１３Ｇ）、ならびに塩化リチウム（図１３Ｈ）を個々に添加することによって提供されるＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡに対する（比較的中程度の）保護効果を例示する。１０タイプの尿標本における形質転換体数を、ＧＴＴを使用して試験紙、時間毎に計数し、その後、まとめた。標準的Ｇｏｎｏｓｔａｔプロトコル（実施例２を参照のこと）を使用し、室温において貯蔵し、その後、ＰＣＲ検出に供した尿中の淋菌ＤＮＡを保護することにおいて、二価金属キレート化剤およびキレート化剤増強成分の組み合わせによって得られた相乗的効果を例示した。
【００７９】
（実施例１４）
プリン塩基もしくはピリミジン塩基（１Ｍ）を含む組成物を、チオシアン酸ナトリウム（１Ｍ）およびＥＤＴＡ（０．１Ｍ）ありまたはなしのいずれかで調製した。ヒト尿の新鮮なサンプルを回収し、１ｐｇの淋菌ＤＮＡを添加し、上記の組成物のうちの１つと合わせ、室温においてインキュベートした。８時間後にアリコートを取り出し、増幅可能な淋菌ＤＮＡの存在についてＰＣＲで試験した。そのＰＣＲプロトコルは、実施例１０に記載されるものと同じであった。図１４に図示されるように、チオシアン酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、およびプリン塩基もしくはピリミジン塩基を含む組成物は、プリン塩基もしくはピリミジン塩基単独を含む組成物より効率的に、尿中の淋菌ＤＮＡを安定化した。
【００８０】
（実施例１５）
チオシアン酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、および／もしくはアデニンを含む組成物を調製した。ヒト尿の新鮮なサンプルを回収し、１ｐｇの淋菌ＤＮＡを添加し、上記記載された組成物のうちの１つと合わせ、室温においてインキュベートした。８間後にアリコートを取り出し、増幅可能な淋菌ＤＮＡの存在についてＰＣＲで試験した。そのＰＣＲプロトコルは、実施例１０に記載されるものと同じであった。図１５Ａに図示されるように、チオシアン酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、およびアデニンを含む組成物は、一般に、全ての３つより少ない成分を含む組成物よりも効率的に、尿中の淋菌ＤＮＡを安定化した。認められた唯一の例外は、上記組成物が、チオシアン酸ナトリウムおよびＥＧＴＡを含む場合であった。
【００８１】
（実施例１６）
過塩素酸ナトリウム、塩化リチウム、グアニジンＨＣｌ、チオシアン酸グアニジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、および／もしくはアデニンを含む組成物を調製した。ヒト尿の新鮮なサンプルを回収し、１ｐｇの淋菌ＤＮＡを添加し、上記記載された組成物のうちの１つと合わせ、室温においてインキュベートした。８間後にアリコートを取り出し、増幅可能な淋菌ＤＮＡの存在についてＰＣＲで試験した。そのＰＣＲプロトコルは、実施例１０に記載されるものと同じであった。図１５Ｂに図示されるように、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびアデニンを含む組成物は、全ての３つより少ない成分を含む組成物よりも効率的に、尿中の淋菌ＤＮＡを安定化した。
【００８２】
（実施例１７）
チオシアン酸ナトリウム、グアニジンＨＣｌ、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、および／もしくはアデニンを含む組成物を調製した。ヒト尿の新鮮なサンプルを回収し、１ｐｇの淋菌ＤＮＡを添加し、上記記載された組成物のうちの１つと合わせ、室温においてインキュベートした。８間後にアリコートを取り出し、増幅可能な淋菌ＤＮＡの存在についてＰＣＲで試験した。そのＰＣＲプロトコルは、実施例１０に記載されるものと同じであった。図１６に図示されるように、キレート化剤、キレート化剤増強成分、およびアデニンを含む組成物は、これら成分のうちのただ１つを含む組成物よりも効率的に、尿中の淋菌ＤＮＡを安定化した。
【００８３】
（実施レセプター１８）
本開示の組成物は、いくつかの実施形態によれば、完全細胞を保存および／もしくは安定化し得る（「細胞および／もしくは高分子安定化組成物」）。具体例において、３００個の尿標本を、以下の条件のうちの１つ以上を有する患者から採取した：急性糸球体腎炎、急性腎盂腎炎、ネフローゼ症候群、急性尿細管壊死（ａｃｕｔｅ  ｔｕｂｕｌａｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ）、膀胱炎、尿路新形成、およびウイルス感染。
【００８４】
回収の１０分以内に、尿サンプルを、冷蔵するか（２〜８℃）、または１Ｍ  チオシアン酸ナトリウム、０．０１Ｍ  ＥＤＴＡ、および１Ｍ  アデニンを有する細胞および／もしくは高分子安定化組成物（ＣＳＣ）と合わせたかのいずれかであった（９ｍＬ  尿＋１ｍＬ  高分子安定化組成物）。冷蔵したサンプルを、回収の２時間以内に処理した。
【００８５】
表４に示されるように、細胞および／もしくは高分子安定化組成物を使用する、種々の完全細胞の保存および／もしくは安定化は、少なくとも冷却と同程度に良好であった。
【００８６】
【表４】
2010535013.tif 000006
（実施例１９）
最初のフローサイトメトリー実験の間に、０．０１Ｍ  ＥＤＴＡおよび１Ｍ  チオシアン酸ナトリウムからなる組成物と接触させたいくらかの赤血球は、１日目には良好な状態にあるようであったが、試験される特定の条件下では、３〜５日目に凝集を形成することが認められた。凝集した細胞を含むサンプルは、フローサイトメトリーによって分析するのはより困難であるとみなされ得る。従って、フロー分析のために細胞を安定化する改善された処方物が求められた。
【００８７】
（実施例２０）
処方物を調製した。いくつかの実施形態によれば、この処方物は、いくつかの条件下で観察され得る膨潤および凝集も生じることなく、赤血球集団および白血球集団の保存、ならびに白血球上の共存する表面抗原マーカーの保存の両方を可能にし得る。
【００８８】
組成物の例示的実施形態は、以下のとおりに調製され得る：
１．ヘパリンリチウムを、水を含む混合容器に添加する。透明になるまで混合する。
２．Ｇｅｎｅｌｏｃｋストック化学物質を混合容器に添加する。
３．アデニンを添加し、透明になるまで混合する。
４．界面活性剤（例えば、クエン酸ブチリルトリ−ｎ−ヘキシル（ｈｅｘａｌ））を添加する。１０分間混合する。
５．水を添加して、総容積を所望の最終体積にする。
６．１５分間混合する。
７．濾過（例えば、濾過滅菌）して、最終組成物を生成する。
【００８９】
いくつかの実施形態によれば、化学的性質における変化は、クエン酸リン酸緩衝系およびアデニンの濃度の増加の代わりにヘパリンリチウムを使用することを包含し得る。例えば、組成物は、以下を含み得る：
【００９０】
【表４−２】
2010535013.tif 000007
血液を１日目に採血し、保存剤−対−血液比１：７で、この組成物と合わせ、周囲温度（例えば、室温（ＲＴ））で３日間静置（ａｇｅｄ）した。この血液を、ベックマンコールター細胞分析器での示差的細胞分析に供した。この分析によって、白血球集団および赤血球集団の両方の優れた保存が示された。この血液は、新たに回収した血液の色とはわずかに変化して、桃色でかつ粘性であった。血液における肉眼的変化の証拠はなく、フロー分析に適していると予測される。
【００９１】
（実施例２１）
以下の細胞および／もしくは高分子安定化組成物を調製した：
【００９２】
【表４−３】
2010535013.tif 000008
【００９３】
【表４−４】
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新鮮な血液を、保存剤−対−血液比１：７において組成物１および組成物ＦＣの各々と合わせ、周囲温度（例えば、室温（ＲＴ））で３日間静置した。２４時間後、組成物Ｕ−１と合わせた血液は、凝集した。対照的に、組成物ＦＣと合わせた血液は、７２時間後に凝集を有さなかった。生存性を、トリパンブルーアッセイを使用して評価した。組成物ＦＣと合わせた血液からの白血球のうちの９９％超が、７２時間後、インタクトであった（保存されていた）。結果を表５に示される。
【００９４】
【表４−５】
2010535013.tif 000010
凝集：なし（−−）、軽度（＋）、大量（＋＋）
生存性：検出されない（−−）、わずかな生存細胞（−）；９９％＋生存性（＋＋）
（実施例２２）
細胞および／もしくは高分子安定化組成物を、キレート化剤増強成分（例えば、チオシアン酸ナトリウム）および脱イオン限外濾過（ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ  ｕｌｔｒａ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）（ＤＩＵＦ）水を混合容器に添加し、次いで、１０分間混合することによって、周囲温度および圧力において調製した。次に、予め溶解させたキレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）を上記混合容器に添加し、１０分間混合した。次いで、塩基（例えば、アデニン）を、上記容器に添加し、透明な溶液が得られるまで混合した。望ましい場合、緩衝液（例えば、リン酸塩緩衝液）をこの時点で添加した。最終的に、ＤＩＵＦ水を添加して、上記混合容器における容積を望ましい総容積になるまでにして、上記溶液を、１０分間混合した。その最終溶液を、得られた混合物を滅菌用器（例えば、Ｎａｌｇｅｎｅボトル）へと濾過滅菌することによって得た。フローサイトメトリーアッセイにおいて使用される細胞および／もしくは高分子安定化組成物のいくつかの具体例の処方を、表５に述べる。
【００９５】
【表５】
2010535013.tif 000011
（実施例２３）
細胞および／もしくは高分子安定化組成物を、ＵＳＰ精製水のアリコートを適切なサイズにした容器に添加し、キレート化剤増強成分（例えば、チオシアン酸ナトリウム）を添加し、次いで混合することによって周囲温度および圧力で調製した。次に、予め溶解させたキレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）を上記混合容器に添加し、混合した。最後に、ＵＳＰ精製水を添加して、上記混合容器における容積を望ましい総容積にし、上記溶液を混合した。その最終溶液（溶液Ａ）を、その得られた混合物を滅菌用器（例えば、Ｎａｌｇｅｎｅボトル）へと濾過滅菌することによって得た。
【００９６】
水を第２の容器に添加した。デキストロースを添加し、上記組成物を透明になるまで混合した。次に、クエン酸ナトリウムを添加し、上記組成物を透明になるまで混合した。次いで、クエン酸を添加し、上記組成物を再び透明になるまで混合した。一塩基性リン酸ナトリウムを添加し、上記組成物を透明になるまで混合した。次いで、アデニンを添加し、上記組成物を透明になるまで混合した。最後に、ＤＵＩＦ水を添加して、上記混合容器中の容積を望ましい総容積にし、そして上記溶液を混合した。その最終溶液（溶液Ｂ）を、その得られた混合物を滅菌容器（例えば、Ｎａｌｇｅｎｅボトル）へと濾過滅菌することによって得た。
【００９７】
溶液Ｂのアリコートを容器に添加し、続いて、溶液Ａのアリコートを添加した。その合わせた溶液を、周囲条件下で（例えば、１５分間）混合した。フローサイトメトリーアッセイにおいて使用される細胞および／もしくは高分子安定化組成物の具体例の処方は、表６に述べられる。
【００９８】
【表６】
2010535013.tif 000012
（実施例２４）
方法：フローサイトメトリーによる標準リンパ球免疫表現型タイプ分けを、絶対数較正のためのビーズとともに、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ  ＦａｃｓＣａｌｉｂｕｒで行った。ｌｙｓｅ／ｎｏ洗浄技術を使用して、全血を、一方のチューブにおいてＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ４５について染色し、別のチューブにおいてＣＤ１６＋５６、ＣＤ１９、およびＣＤ４５について染色した。前方散乱およびＣＤ４５に対してゲート制御することによって、リンパ球を同定し、１０，０００事象を計数した。各ＣＤ抗原が染色されているリンパ球のパーセンテージおよび各抗原について陽性のリンパ球絶対数を、０時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１４４時間、および１６０時間で報告した。コントロールチューブには、上記試験組成物の任意の希釈効果を説明するために、溶液中に、ＥＤＴＡ（標準的な紫色の頂部）およびヘパリン（標準的な緑色の頂部）、ならびにＥＤＴＡおよびヘパリンを含んでいた。上記安定化試験試薬を、実施例２２および実施例２３に従って調製した。各組成物のｐＨを、表７に示す。フローパラメーターを、表８に示す。
【００９９】
【表７】
2010535013.tif 000013
【０１００】
【表８】
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結果：上記リンパ球マーカーのパーセンテージおよび／もしくは絶対数を時間に対してプロットすることによって、種々の細胞および／もしくは高分子安定化組成物の有効性を、現在の常套手段的保存剤ＥＤＴＡおよびヘパリンと比較し得る。例えば、図１７Ａは、コントロールと比較して、処方物の時間に対してＣＤ３パーセンテージをプロットする。同様に、図１７Ｂは、コントロールと比較して、処方物の時間に対してＣＤ４パーセンテージをプロットする。上記ＣＤ３およびＣＤ４のパーセンテージは、ＥＤＴＡおよびヘパリンの両方の、推奨されかつ許容される安定性を長く超えた１６０時間をさらに超えて、安定なようである。さらに、ＣＤ３の絶対数（血液１ｍＬあたりのＣＤ３細胞数）を、９６時間を超えて安定である（図１７Ｃ）。
【０１０１】
（実施例２５）
ＲＮＡ方法：ＲＮＡを、ＰＡＸｇｅｎｅＴＭチューブ（これは、テトラデシルトリメチルアンモニウムシュウ酸および酒石酸を含み得る）から種々の時間点で、またはＱｉａｇｅｎ  ＲＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉキットを使用して、赤血球の低張性溶解後に単離した。次いで、上記単離したＲＮＡを定量し、そしてその質を、Ｐｉｃｏカートリッジ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用するＡｇｉｌｅｎｔ  ２１００  ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒを使用して評価した。
【０１０２】
ＲＮＡ結果：図１８に示されるように、４８時間までの時間で、Ｔ８およびＴ１０処理で保存したサンプルからのＲＮＡ収量は、ＰＡＸｇｅｎｅＴＭより多く、ＥＤＴＡコントロールとほぼ同じであった。７２時間では、ＰＡＸｇｅｎｅＴＭ、Ｔ８、Ｔ１０およびＥＤＴＡからのＲＮＡ収量は、全てほぼ同じであった。芽胞凝固（Ｓｐｏｒａｄｉｃ  ｃｌｏｔｔｉｎｇ）は、７２時間後にいくつかのチューブの分析を妨げた。得られたＲＮＡの量のみが、本開示に従う細胞および／もしくは高分子安定化組成物で多かったのみならず、Ｔ８およびＴ１０からのＲＮＡの質もまた、ＰＡＸｇｅｎｅＴＭ  ＲＮＡの質より優れており、ＥＤＴＡコントロールに等しかった。７２時間においてＰＡＸｇｅｎｅＴＭ、ＥＤＴＡ、Ｔ８、およびＴ１０と接触させたＲＮＡについての質データを、それぞれ、図１９Ａ、図１９Ｂ、図１９Ｃ、および図１９Ｄに示す。これら試験についてのＲＮＡ完全数（ＲＮＡ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｎｕｍｂｅｒ）（ＲＩＮ）は、６．２０（１９Ａ）、７．９０（１９Ｂ）、７．９０（１９Ｃ）、および７．４（１９Ｄ）であった。ＲＮＡの質を、線（ｔｒａｃｅ）の右半分にある２つのリボソームＲＮＡピークの存在によって評価し得る。より大きなリボソームピーク（最も右側）は、ＰＡＸｇｅｎｅＴＭチューブにおいて存在しない。このことは、顕著な分解を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１４Ａ】
2010535013.tif 000039
【図１４Ｂ】
2010535013.tif 000040
【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
2010535013.tif 000044
【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【国際調査報告】
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