(57)【要約】  本発明は、治療的組成物、製剤、方法およびデバイスを包含する、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連の状態若しくは病状を処置するための組成物および方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量の最低１種のアンタゴニストＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質を細胞、組織若しくは動物に接触若しくは投与することを含んでなる、最低１種のヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連の病状の処置方法であって、前記ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質がｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ若しくはｉｎ  ｓｉｔｕで前記ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３の最低１種の生物学的活性を阻害する、上記方法。
【請求項２】
前記ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３関連の病状が、間質性肺疾患、強皮症、肝線維症、腎線維症、サルコイドーシス、肥厚性瘢痕、ケロイド瘢痕、心線維症、加齢黄斑変性若しくはコラーゲン血管疾患の最低１種から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｉｇ由来タンパク質が、生物学的活性のヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはリガンドの最低１エピトープに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記エピトープが、配列番号４２、４３若しくは４４の１−１０、１０−２０、２０−３０、３０−４０、４０−５０、５０−６０、６０−７０、７０−８０、８０−９０、９０−１００、１００−１１０、１１０−１２０、１２０−１３０、１３０−１４０若しくは１４０−１４５の最低１種の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４アミノ酸よりなる群から選択される最低１〜３ないしアミノ酸配列全体を含んでなる、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質が、最低１０−９Ｍ、最低１０−１０Ｍ、最低１０−１１Ｍ、若しくは最低１０−１２Ｍ、若しくは最低１０−１３Ｍ、若しくは最低１０−１４Ｍから選択される最低１種の親和性でＩＬ−４若しくはＩＬ−１３またはＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体を結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質が抗体および抗体融合タンパク質若しくは受容体融合タンパク質から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記有効量が、前記細胞、組織、器官若しくは動物１キログラムあたり０．００１〜５０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記接触させること若しくは前記投与することが、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、気管支内、腹腔内（ｉｎｔｒａａｂｄｏｍｉｎａｌ）、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液包内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内若しくは経皮から選択される最低１様式による、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療的組成物、製剤、投与およびデバイスを包含する、最低１種のＩＬ−４またはＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連の病状を処置するための組成物および方法に関する。本出願は、２００６年１２月１５日に出願された第ＵＳ  ６０／８７０，１０５号明細書を引用することによりそっくりそのまま組み込む。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−４は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ならびに単球、内皮細胞および線維芽細胞を包含する多くの非リンパ系細胞に対する複数の生物学的影響をもつ、Ｔ細胞および肥満細胞由来の多面発現性サイトカインである。それはマウスＢ細胞によるＩｇＧ１およびＩｇＧならびにヒトＢ細胞によるＩｇＧ４およびＩｇＥの分泌を誘導する。ＩｇＥならびにおそらくＩｇＧ１およびＩｇＧ４のＩＬ４依存性産生はＩＬ４誘発性のアイソタイプスイッチングによる。ヒトにおいて、ＩＬ４はこの特性をＩＬ１３と共有する。ＩＬ４の三次元構造はＮＭＲおよびＸ線結晶学により決定されている。それは主に疎水性コアを伴う小型の球状構造を有する。二本鎖反平行βシートを含有する２個のオーバーハンド結合（ｏｖｅｒｈａｎｄ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）をもつ左巻き反平行束中にらせんが配置されている４本のαヘリックス束が該分子の大部分を構成する。該構造はＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＩＬ３に類似である。
【０００３】
インターロイキン１３（ＩＬ−１３）は活性化Ｔ細胞により分泌され、そしてＬＰＳで刺激した単球による炎症性サイトカイン（ＩＬ１、ＩＬ６、ＴＮＦ、ＩＬ８）の産生を阻害する。ヒトおよびマウスのＩＬ１３は、ヒトＢ細胞上のＣＤ２３発現を誘導し、抗Ｉｇ若しくはＣＤ４０抗体とともにＢ細胞増殖を促進し、ならびにＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＧ４の分泌を刺激する。ＩＬ１３はまた、ヒト単球の生存を延長しかつＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ２３の表面発現を増大させることも示された。該結晶構造は決定されていないが、しかし理論的分子モデルが構築されている。ＩＬ−４およびＩＬ−４若しくはＩＬ−１３の双方がそれらの生物学的機能に基づき治療上重要なタンパク質である。ＩＬ−４は自己免疫疾患を阻害することが可能であることが示され、ならびにＩＬ−４およびＩＬ−４若しくはＩＬ−１３双方が抗腫瘍免疫応答を高める可能性を示した。他方、双方のサイトカインはアレルギー性疾患の病因に関与するため、これらのサイトカインに対するアンタゴニストはアレルギーおよびアレルギー性喘息に対する治療上の利益を潜在的に提供しうる。
【０００４】
非ヒト、キメラ、ポリクローナル（例えば抗血清）および／若しくはモノクローナル抗体（Ｍａｂ）およびフラグメント（例えばそれらのタンパク質分解性消化産物）は、ある種の疾患を処置することを試みるためにいくつかの場合で開発されている潜在的治療薬である。しかしながら、非ヒトの部分を含んでなるこうした抗体はヒトに投与される場合に免疫応答を導き出す。こうした免疫応答は循環からの該抗体の免疫複合体媒介性の排除をもたらし得、そして反復投与を治療に不適にし、それにより患者に対する治療上の利益を低下させかつＩｇ由来タンパク質の再投与を制限する。例えば、非ヒトの部分を含んでなる抗体の反復投与は血清病および／若しくはアナフィラキシーにつながり得る。これらおよび他のこうした問題を回避するため、当該技術分野で公知のところのキメラ化および「ヒト化」を包含するこうした抗体およびそれらの部分の免疫原性を低下させるための多数のアプローチがとられた。これらのアプローチは低下された免疫原性を有するがしかし他のより少なく望ましい特性をもつ抗体を生じた。
【０００５】
従って、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連の病状を処置するための方法および組成物を提供する必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００６】
［発明の要約］
本発明は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連の病状の処置における使用のための、当該技術分野で既知であるものと組合せの、本明細書で記述かつ可能にされるところの、免疫グロブリン、受容体融合タンパク質、切断生成物ならびにそれらの他の指定される部分およびバリアントを包含する最低１種の単離された抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ヒトＩｇ由来タンパク質（Ｉｇ由来タンパク質）、ならびに、抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質の組成物、コードする若しくは相補的な核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、デバイス、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物を使用する最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３関連の線維症の病状を処置するための方法および組成物、ならびにそれらの作成および使用方法を提供する。
【０００７】
本発明は本明細書に記述されるいかなる発明もさらに提供し、そして本明細書に提供されるいかなる特定の記述、態様若しくは実施例にも制限されない。
【０００８】
［発明の詳細な記述］
本発明は、当該記述分野で既知かつ／若しくは本明細書に記述されるところの、治療的有効量で投与される場合に、細胞、組織、器官、動物若しくは患者における、および／または限定されるものでないが関連疾患若しくは処置条件の前、後、若しくは間を挙げることができる多くの異なる条件で必要とされるところの、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連の状態若しくは疾患の最低１徴候若しくは症状を調節のため、処置若しくは低下するための方法若しくは組成物中の最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、指定される部分若しくはバリアントをさらに提供する。本発明により処置し得る線維症関連状態の制限しない例は、間質性肺疾患、強皮症、肝線維症、腎線維症、サルコイドーシス、肥厚性瘢痕、ケロイド瘢痕、心線維症、加齢黄斑変性若しくはコラーゲン血管疾患を包含する。
【０００９】
本発明はまた、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ヒトＩｇ由来タンパク質の線維症関連状態を調節する有効量を細胞、組織、器官若しくは動物と接触若しくはそれらに投与することを含んでなる、前記細胞、組織、器官若しくは動物におけるＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連状態の最低１種の処置方法も提供し、場合によっては前記動物は霊長類であってよく、場合によってはサル若しくはヒトであってもよい。該方法は、さらに、前記有効量が前記細胞、組織、器官若しくは動物１キログラムあたり０．００１〜１００ｍｇである場合を包含することができる。こうした方法は、さらに、前記接触すること若しくは前記投与することが、静脈内、筋肉内、ボーラス、腹腔内、皮下、呼吸、吸入、鼻、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内、皮下若しくは経皮から選択される最低１様式による場合を包含し得る。
【００１０】
本発明はまた、水性希釈剤中に最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ヒトＩｇ由来タンパク質、ならびに滅菌水、無菌緩衝水から選択される最低１種、またはフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウおよびチメロサールよりなる群から選択される最低１種の保存剤若しくはそれらの混合物を含んでなり、場合によっては、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ヒトＩｇ由来タンパク質の濃度は約０．１ｍｇ／ｍｌないし約１００ｍｇ／ｍｌであり、最低１種の等張剤若しくは最低１種の生理学的に許容できる緩衝液をさらに含んでなる、最低１種の製剤も包含する。
【００１１】
本発明はまた、第一の容器中に凍結乾燥された形態で最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ヒトＩｇ由来タンパク質を含む少なくとも一つの製剤、ならびに滅菌水、無菌緩衝水の最低１種、または水性希釈剤中にフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウおよびチメロサールよりなる群から選択される最低１種の保存剤若しくはそれらの混合物を含んでなる任意の第二の容器を含んでなり、ここで、さらに、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ヒトＩｇ由来タンパク質の濃度が約０．１ｍｇ／ｍｌないし約５００ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成されており、等張剤をさらに含んでなるか、あるいは生理学的に許容できる緩衝剤をさらに含んでなる、製剤も包含する。
【００１２】
本発明はさらに、必要とする患者に本発明の製剤を投与することを含んでなる、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３媒介性症状の最低１種の処置方法を提供する。
【００１３】
こうしたＩｇ由来タンパク質は、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３のその受容体の最低１種への結合を阻害する抗体および受容体融合タンパク質を場合によっては包含し得、ならびに以下の基準の３、４、５、６若しくは７のような３若しくはそれ以上を含んでなる。
【００１４】
基準
１．最低１種のヒト野生型（ｗｔ）組換え若しくは精製されたＩＬ−４若しくはＩＬ−１３、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体、ならびに／または、限定されるものでないが配列番号４２、４３若しくは４４の１−１０、１０−２０、２０−３０、３０−４０、４０−５０、５０−６０、６０−７０、７０−８０、８０−９０、９０−１００、１００−１１０、１１０−１２０、１２０−１３０、１３０−１４０および／若しくは１４−１４５の最低１種を挙げることができる１〜１４５アミノ酸のような、限定されるものでないがＩｌｅ４８、Ｖａｌ４８、Ｇｌｎ９０、Ｇｌｕ９０、Ｌｅｕ９５、Ｉｌｅ９５、Ｌｅｕ９６、Ｉｌｅ９６、Ｌｅｕ９９、Ｉｌｅ９９、Ｐｈｅ１０３、Ｔｙｒ１０３、Ａｓｎ１３０および／若しくはＧｌｎ１３０の最低１種を挙げることができる他の指定されるＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ムテインに結合する（ＥＬＩＳＡで）。
２．組換えｗｔヒトＩＬ１３またはＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体への結合に特異的であるがしかし構造的に関連するサイトカイン、ヒトＧＭ−ＣＳＦに特異的でない（ＥＬＩＳＡで）。
３．好ましくはヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体または適当な動物のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体とのヒト組換えｗｔヒトＩＬ１３相互作用をＮＤ５０≦１０ｎＭで阻害する。
４．ヒト腫瘍ＴＦ−１細胞のヒト野生型ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３依存性の増殖を陰性対照以上に阻害する。
５．ヒトＩＬ１３  ｗｔ若しくは特定の変異体について≦０．５ｎＭ（ＢＩＡｃｏｒｅにより測定されるところの）の見かけのＫｄを有する。
６．新鮮ヒトＢ細胞中のヒトＩＬ１３ｗｔ組換えヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３依存性ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩｇＥ産生を阻害し、陰性対照以上の阻害、ならびにＢ９アッセイ。７．Ｂ９アッセイおよび／若しくはＥＬＩＳＡで測定され得るところの組換えＩＬ−４若しくはＩＬ−１３に対するものに類似の効力で天然のｗｔヒトＩＬ１３と交差反応する。
【００１５】
本発明はさらに、治療および診断用途のためを包含するこうした抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質の組成物、製剤、方法、デバイスおよび用途を提供する。
【００１６】
本発明はさらに、その受容体の１種若しくはそれ以上へのＩＬ−４若しくはＩＬ−１３結合を阻害することによる最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連状態を処置
するのに適するＩｇ由来タンパク質を提供する。
【００１７】
本発明は、単離された、組換えおよび／若しくは合成ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント、ならびに最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質をコードする最低１種のポリヌクレオチドを含んでなる組成物およびコーディング核酸分子を提供する。本発明のこうしたＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、特定の完全長Ｉｇ由来タンパク質の配列、それらのドメイン、フラグメントおよび指定されるバリアント、ならびに治療的組成物、方法およびデバイスを包含する前記核酸およびＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの作成および使用方法を含んでなる。
【００１８】
本明細書で使用されるところの「抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質」、「抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質部分」、「抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質フラグメント」、「抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質バリアント」「ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、」「ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質部分」または「ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質フラグメント」および／あるいは「ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質バリアント」などは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／若しくは好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質の活性、結合、またはＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質受容体の活性若しくは結合を減少、遮断、阻害、廃止若しくは妨害し、ならびに、上の基準の最低３〜７個をさらに含んでなる。
【００１９】
例えば、本発明の適するＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、指定される部分若しくはバリアントは、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくは受容体を結合し得、そして、抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、それらの抗原結合フラグメント、およびＩＬ−４若しくはＩＬ−１３に特異的に結合するそれらの指定される部分、バリアント若しくはドメインを包含する。適するＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、指定される部分若しくはバリアントはまた、例えば本明細書に記述されるか若しくは当該技術分野で既知のところの、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質のＲＮＡ、ＤＮＡ若しくはタンパク質合成、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質の放出、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくは受容体シグナル伝達、膜ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質切断、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３関連活性、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質産生および／または合成も減少遮断、廃止、妨害、予防および／若しくは阻害し得る。
【００２０】
本発明の方法および組成物で有用な抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質（抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質ともまた命名される）は、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質への高親和性結合、および場合によってはかつ好ましくは低毒性を有することを特徴とする。とりわけ、可変領域、定常領域および枠組みのような個々の成分が、個々にかつ／若しくは集合的に、場合によってはかつ好ましくは低免疫原性を有する、本発明のＩｇ由来タンパク質、指定されるフラグメント若しくはバリアントが、本発明で有用である。本発明で使用し得るＩｇ由来タンパク質は、場合によっては、症状の良好ないし優れた軽減および低毒性を伴い延長された期間患者を処置するそれらの能力を特徴とする。低免疫原性および／若しくは高親和性ならびに他の適する特性が達成される治療結果に寄与し得る。「低免疫原性」は、処置される患者の約７５％未満、若しくは好ましくは約５０％未満で有意のＨＡＨＡ、ＨＡＣＡ若しくはＨＡＭＡ応答を生じること、および／または処置される患者で低力価を生じる（二重抗原エンザイムイムノアッセイで測定される約３００未満、好ましくは約１００未満）ことと本明細書で定義する（Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｌａｎｃｅｔ  ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）（上の
参考文献のそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる））。
【００２１】
利用性
本発明の単離された核酸は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３状態を調節、処置、軽減する、その発生を予防するのを助ける、若しくはその症状を低下させることを細胞、組織、器官若しくは動物（哺乳動物およびヒトを包含する）で遂げるために使用し得る、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、そのフラグメント若しくは指定されるバリアントの製造に使用し得る。
【００２２】
こうした方法は、症状、効果若しくは機構のこうした調節、処置、軽減、予防若しくは低下の必要な細胞、組織、器官、動物若しくは患者に最低１種の抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを含んでなる組成物若しくは製薬学的組成物の有効量を投与することを含み得る。有効量は、本明細書に記述されるか若しくは関連技術分野で既知のところの既知の方法を使用して行われかつ決定されるところの、単一若しくは複数投与あたり約０．００１ないし５００ｍｇ／ｋｇの、または単一若しくは複数投与あたり０．０１〜５０００μｇ／ｍｌ血清濃度の血清濃度、あるいはその中のいずれかの有効範囲若しくは値を達成するための量を含み得る。
【００２３】
引用
本明細書で引用される全部の刊行物若しくは特許は、それらが本発明の時点での従来技術を示すためにかつ／若しくは本発明の記述および使用可能性を提供するために、引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる。刊行物は、いかなる学術的若しくは特許刊行物、または全部の録音・録画、電子若しくは印刷形式を包含するいずれかの媒体形式で利用可能ないかなる他の情報も指す。以下の参考文献は引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる：Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆
Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州ニューヨーク（１９８７−２００６）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８９）；ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ、Ｉｇ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎら編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク（１９９４−２００６）；Ｃｏｌｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州ニューヨーク（１９９７−２００６）。
【００２４】
本発明のＩｇ由来タンパク質
「Ｉｇ由来タンパク質」という用語は、Ｉｇ由来タンパク質模倣物を包含するか、あるいは一本鎖Ｉｇ由来タンパク質およびそれらのフラグメントを包含する、抗体またはその指定されるフラグメント若しくは部分の構造および／若しくは機能を模倣するＩｇ由来タンパク質の部分を含んでなる、Ｉｇ由来タンパク質、それらの消化フラグメント、指定される部分およびバリアントを包含することを意図しており、ならびに、治療的タンパク質、抗体、ならびにそれらの消化フラグメント、指定される部分およびバリアントに対する模倣物を含有するタンパク質を包含することもまた意図しており、該タンパク質は、該Ｉｇ由来タンパク質、部分若しくはバリアントが由来する抗体の最低１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を場合によっては置き換える最低１個の機能的ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質リガンド結合領域（ＬＢＲ）を含んでなる。一態様において、Ｉｇ由来タンパク質は、最低１種の生物学的に活性の標的（例えば、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３またはＩ
Ｌ−４若しくはＩＬ−１３受容体）を特異的に結合する最低１個のＣＤＲ若しくは標的結合領域を含んでなり、ならびに、さらに、配列番号１〜４１の最低１種の最低１０ないし３８４〜５００アミノ酸、または、２００４年６月１７日に出願され２００５年１月２０日に公開された第ＰＣＴ  ＷＯ  ０５／０５６０４号明細書（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）の図１〜４１に記述されるところの最低１個の置換、挿入若しくは欠失を場合によってはさらに含んでなる、表１に記述されるところの対応するＨ若しくはＬ鎖アミノ酸配列の最低１領域の少なくとも一部分を含んでなる。こうしたＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  ＩｇＧ由来タンパク質、指定される部分若しくはバリアントは、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質抗体若しくは受容体またはリガンドタンパク質あるいはフラグメント若しくはアナログのような最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質アンタゴニストの構造および／若しくは機能を模倣するものを包含する。機能的フラグメントは、ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはそれらのフラグメントに結合する抗原結合フラグメントを包含する。例えば、限定されるものでないがＦａｂ（例えばパパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えばペプシン消化および部分還元による）ならびにＦ（ａｂ’）２（例えばペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えばプラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えばペプシン若しくはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えばペプシン消化、部分還元および再凝集による）、Ｆｖ若しくはｓｃＦｖ（例えば分子生物学技術による）フラグメントを挙げることができる、ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはそれらのフラグメントに結合することが可能なＩｇ由来タンパク質フラグメントが本発明により包含される（例えばＣｏｌｌｉｇａｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、上記を参照されたい）。
【００２５】
こうしたフラグメントは、当該技術分野で既知かつ／若しくは本明細書に記述されるところの酵素的切断、合成若しくは組換え技術により製造し得る。Ｉｇ由来タンパク質は、１個若しくはそれ以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入されたＩｇ由来タンパク質遺伝子を使用して多様な切断型でもまた製造し得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２Ｈ鎖部分をコードするキメラ遺伝子を、Ｈ鎖のＣＨ１ドメインおよび／若しくはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を包含するように設計し得る。Ｉｇ由来タンパク質の多様な部分を慣習的技術により化学的に一緒に結合し得るか、若しくは遺伝子工学技術を使用して連続した１タンパク質として製造し得る。例えば、ヒトＩｇ由来タンパク質鎖の可変および定常領域をコードする核酸を発現させて連続した１タンパク質を製造し得る。例えば、断片化についてＣｏｌｌｉｇａｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、上記、セクション２．８および２．１０、ならびに一本鎖Ｉｇ由来タンパク質に関してＬａｄｎｅｒら、米国特許第４，９４６，７７８号明細書およびＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３−４２６（１９８８）（それらの刊行物のそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００２６】
本明細書で使用されるところの「ヒトＩｇ由来タンパク質」という用語は、該タンパク質の実質的にすべての部分（例えばＣＤＲ、ＬＢＲ、枠組み、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えばＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））が、ただ小さな配列の変化若しくは変動を伴い実質的に非免疫原性であるＩｇ由来タンパク質を指す。こうした変化若しくは変動は、場合によってはかつ好ましくは、改変されないヒトＩｇ由来タンパク質に関してヒトでの免疫原性を保持若しくは低下する。従って、ヒトＩｇ由来タンパク質はキメラ若しくはヒト化Ｉｇと異なる。機能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（例えばＨ鎖および／若しくはＬ鎖）遺伝子を発現することが可能である非ヒトの動物または原核生物若しくは真核生物細胞によりヒトＩｇ由来タンパク質を産生させ得る。さらに、ヒトＩｇ由来タンパク質が一本鎖Ｉｇ由来タンパク質である場合、それは天然のヒトＩｇ由来タンパク質中に見出されないリンカーペプチドを含み得る。例えば、Ｆｖは、Ｈ鎖の可変領域およびＬ鎖の可変領域を結合する２ないし約８個のグリシン若しくは他のアミノ酸残基のようなリンカーペプチドを含み得る。こうしたリンカーペプチドはヒト起源のものである
とみなされる。最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質リガンド若しくはその受容体を含んでなるＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質を、単離されたおよび／またはＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質あるいは（合成ペプチドのような合成分子を包含する）それらの部分のような適切なリガンドに対し設計し得る。こうしたＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質の製造は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質またはその部分のリガンド結合領域若しくは配列を同定かつ特徴付けるための既知技術を使用して実施する。
【００２７】
ｐ４０サブユニットに特異的であるヒトＩｇ由来タンパク質は、単離されたＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質または（合成ペプチドのような合成分子を包含する）それらの部分のような適切な免疫原性抗原に対し生じさせ得る。免疫原性抗原の製造およびモノクローナルＩｇ由来タンパク質製造は、いずれかの適する技術を使用して実施し得る。多様な方法が記述されている（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７（１９７５）およびＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９（１９７６）；Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ２６６：５５０−５５２（１９７７）；Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら、米国特許第４，１７２，１２４号明細書；Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．とＤ．Ｌａｎｅ、１９８８、Ｉｇ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．２（例えばＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ
２７、９４年夏）、Ａｕｓｕｂｅｌ  Ｆ．Ｍ．ら編（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：ニューヨーク州ニューヨーク）、第１１章（１９９１−２００６）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい）。一般に、ハイブリドーマは、適する不死細胞株（例えば、限定されるものでないが、Ｓｐ２／０、Ｓｐ２／０−ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、＞２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２  ＳＡ３、Ｓｐ２  ＭＡＩ、Ｓｐ２  ＳＳ１、Ｓｐ２  ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ  １４４、ＡＣＴ  ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ−１、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ−５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ  １４４、ＮＡＭＡＩＷＡ、ＮＥＵＲＯ  ２Ａなどを挙げることができる骨髄腫細胞株、若しくはヘテロミエローマ、それらの融合生成物、またはそれら由来のいずれかの細胞若しくは融合細胞、あるいは当該技術分野で既知のところのいずれかの他の適する細胞株、例えばｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍなど（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい）を、限定されるものでないが単離若しくはクローン化された脾細胞、あるいは組換え若しくは内因性のウイルス、細菌、藻類、原核生物、両生類、昆虫、は虫類、魚類、哺乳動物、げっ歯類、ウマ、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、ヤギ、ヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、霊長類、真核生物のゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ若しくはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖若しくは三本鎖、ハイブリダイズされたなど、またはそれらのいずれかの組合せのような内因性若しくは異種いずれかの核酸としてＨ若しくはＬ鎖定常若しくは可変または枠組みまたはＣＤＲ配列を発現するいずれかの他の細胞を挙げることができるＩｇ由来タンパク質産生細胞と融合することにより製造する。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、およびＣｏｌｌｉｇａｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、上記、第２章（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００２８】
Ｉｇ由来タンパク質産生細胞は、目的の抗原で免疫したヒト若しくは他の適する動物の末梢血または好ましくは脾若しくはリンパ節から得ることができる。いずれの他の適する宿主細胞もまた、本発明のＩｇ由来タンパク質、その指定されるフラグメント若しくはバリアントをコードする異種若しくは内因性核酸を発現するのに使用し得る。融合細胞（ハイブリドーマ）若しくは組換え細胞を、選択的培養条件若しくは他の適する既知の方法を
使用して単離し得、そして限界希釈若しくは細胞分取または他の既知の方法によりクローン化し得る。所望の特異性をもつＩｇ由来タンパク質を産生する細胞を適するアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）により検出し得る。
【００２９】
限定されるものでないが、ペプチド若しくはタンパク質ライブラリー（例えば、限定されるものでないがバクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡなどのディスプレイライブラリー；例えばＣａｍｂｒｉｄｇｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、英国ケンブリッジシャー；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ、独国マルティンスライト／プラネック；Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ、英国スコットランド・アバディーン；ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ、スウェーデン・ルント；Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．、Ｅｎｚｏｎ、Ａｆｆｙｍａｘ／Ｂｉｏｓｉｔｅ；Ｘｏｍａ、カリフォルニア州バークレー；Ｉｘｓｙｓから入手可能なところの）から組換え抗体を選択する方法を挙げることができる、必須の特異性の抗体の他の適する製造若しくは単離方法を使用し得る。例えば、当該技術分野で既知かつ／若しくは本明細書に記述されるところのヒト抗体のレパートリーを産生することが可能である、欧州特許第ＥＰ  ３６８，６８４号、第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号；第ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５号；第ＰＣＴ／ＧＢ９２／００２２４０号；第ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８８３号；第ＰＣＴ／ＧＢ９３／００６０５号；米国特許第ＵＳ  ０８／３５０２６０号（５／１２／９４）；第ＰＣＴ／ＧＢ９４／０１４２２号；第ＰＣＴ／ＧＢ９４／０２６６２号；第ＰＣＴ／ＧＢ９７／０１８３５号；（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；第ＷＯ９０／１４４４３号；第ＷＯ９０／１４４２４号；第ＷＯ９０／１４４３０号；第ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２３４号；第ＷＯ９２／１８６１９号；第ＷＯ９６／０７７５４号；（Ｓｃｒｉｐｐｓ）；第ＷＯ９６／１３５８３号、第ＷＯ９７／０８３２０号（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）；第ＷＯ９５／１６０２７号（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ）；第ＷＯ８８／０６６３０号；第ＷＯ９０／３８０９号（Ｄｙａｘ）；米国特許第ＵＳ  ４，７０４，６９２号（Ｅｎｚｏｎ）；第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２９８９号（Ａｆｆｙｍａｘ）；第ＷＯ８９／０６２８３号；欧州特許第ＥＰ  ３７１  ９９８号；同第ＥＰ  ５５０  ４００号；（Ｘｏｍａ）；同第ＥＰ  ２２９  ０４６号；第ＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４９号明細書（Ｉｘｓｙｓ）；または化学量論的に生成されたペプチド若しくはタンパク質−米国特許第ＵＳ
５７２３３２３号、同第５７６３１９２号、同第５８１４４７６号、同第５８１７４８３号、同第５８２４５１４号、同第５９７６８６２号、第ＷＯ  ８６／０５８０３号、欧州特許第ＥＰ  ５９０  ６８９号明細書（Ｉｘｓｙｓ、現在Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＭＥ）（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）、あるいはトランスジェニック動物の免疫化に頼るもの（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１−９０７（１９９７）；Ｓａｎｄｈｕら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５−１１８（１９９６）；Ｅｒｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４−１６１（１９９８）（それぞれ引用することによりそっくりそのまま組み込まれる）ならびに関連する特許および特許出願）を参照されたい。こうした技術は、限定されるものでないが、リボソームディスプレイ（Ｈａｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：４９３７−４９４２（１９９７年５月）；Ｈａｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：１４１３０−１４１３５（１９９８年１１月））；単一細胞抗体産生技術（例えば選択リンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｔｈｏｄ）（「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号明細書、Ｗｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７−８９２（１９８７）；Ｂａｂｃｏｏｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８（１９９６））；ゲル微小液滴およびフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：３３３−３３７（１９９０）；Ｏｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、マサチューセッツ州ケンブリッジ；Ｇｒａｙら、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１８２：１５５−１６３（１９９５）；Ｋｅｎｎｙら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１３：７８７−７９０（１９９５））；Ｂ細胞選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓら、Ｍｏｌｅｃ
．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ  １９：１２５−１３４（１９９４）；Ｊｏｎａｋら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｖｏｌ．５、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｂ．Ｖ．、オランダ・アムステルダム（１９８８））（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を挙げることができる。
【００３０】
非ヒトのＩｇ由来タンパク質のヒト化方法もまた使用することができ、そして当該技術分野で公知である。一般に、ヒト化抗体は非ヒトである供給源からそれに導入された１個若しくはそれ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトのアミノ酸残基はしばしば「輸入」残基と称され、それらは典型的に「輸入」可変ドメインから採られる。ヒト化は、本質的に、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類ＣＤＲ（１種若しくは複数）配列を用いることによりＷｉｎｔｅｒらの方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる））に従って実施し得る。従って、こうした「ヒト化」Ｉｇ由来タンパク質は、実質的に無傷のヒト可変ドメイン未満が非ヒトの種からの対応する配列により置換されているキメラＩｇ由来タンパク質（Ｃａｂｉｌｌｙら、上記）である。実務において、ヒト化Ｉｇ由来タンパク質は、典型的に、数個のＣＤＲ残基およびおそらく数個のＦＲ残基がげっ歯類Ｉｇ由来タンパク質中の類似の部位からの残基により置換されているヒトＩｇ由来タンパク質である。
【００３１】
ヒト化Ｉｇ由来タンパク質の作成において使用されるべきＬおよびＨ双方のヒト可変ドメインの選択を使用して抗原性を低下させ得る。いわゆる「ベストフィット」法に従い、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列を既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対しスクリーニングする。げっ歯類のものに最も近いヒト配列をその後ヒト化抗体のヒト枠組み（ＦＲ）として受け入れる（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；ＣｈｏｔｈｉａとＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる））。別の方法は、特定のサブグループのＬ若しくはＨ鎖の全部のヒトＩｇ由来タンパク質のコンセンサス配列由来の特定の１枠組みを使用する。同一枠組みを数種の異なるヒト化Ｉｇ由来タンパク質に使用し得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる））。
【００３２】
Ｉｇ由来タンパク質は、場合によっては、抗原に対する高親和性および他の好都合な生物学的特性の保持を伴ってもまたヒト化し得る。好ましい一方法に従いこの最終目標を達成するため、ヒト化Ｉｇ由来タンパク質を、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列および多様な概念的ヒト化生成物の解析の過程により製造する。三次元の免疫グロブリンモデルは一般に入手可能でありかつ当業者になじみがある。選択された候補免疫グロブリン配列のありそうな三次元コンホメーション構造を具体的に説明しかつ表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査は候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の解析、すなわちその抗原を結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の解析を可能にする。こうして、標的抗原（１種若しくは複数）に対する増大された親和性のような所望の抗体の特徴が達成されるように、コンセンサスおよび輸入配列からＦＲ残基を選択かつ組合せ得る。一般に、ＣＤＲ残基は抗原結合に直接かつ最も実質的に影響することに関与する。
【００３３】
ヒトモノクローナルＩｇ由来タンパク質はハイブリドーマ法により作成し得る。ヒトモ
ノクローナルＩｇ由来タンパク質の製造のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株が、例えばＫｏｚｂｏｒ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）により記述されている。
【００３４】
あるいは、ファージディスプレイ技術および上で提示されたところのを使用して、免疫化されていないドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトＩｇ由来タンパク質および抗体フラグメントを製造し得る。この技術の制限しない一例に従い、抗体Ｖドメイン遺伝子をＭ１３若しくはｆｄのような糸状バクテリオファージのメジャー若しくはマイナーいずれかのコートタンパク質中にインフレームでクローン化し、そしてファージ粒子の表面上に機能的抗体フラグメントとして表示させる。該糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するため、該抗体の機能的特性に基づく選択はそれらの特性を表す抗体をコードする遺伝子の選択もまたもたらす。従って該ファージはＢ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは多様な形式で実施し得；それらの総説については、例えばＪｏｈｎｓｏｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４（１９９３）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。Ｖ遺伝子セグメントの数種の供給源をファージディスプレイに使用し得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４（１９９１）は、免疫したマウスの脾由来のＶ遺伝子の小型ランダムコンビナトリアルライブラリーから多彩な抗オキサゾロンＩｇ由来タンパク質を単離した。免疫していないヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築し得、そして多彩な抗原（自己抗原を包含する）に対するＩｇ由来タンパク質を、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１）若しくはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５（１９９３）（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）により記述される技術に本質的に従って単離し得る。
【００３５】
自然免疫応答において抗体遺伝子は突然変異を高率で蓄積する（体細胞突然変異）。誘導される変化のいくつかはより高い親和性を賦与することができ、そして、高親和性表面免疫グロブリンを表示するＢ細胞がその後の抗原攻撃の間に優先的に複製かつ分化される。この天然の過程は「鎖シャッフリング」（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９（１９９２））として知られる技術を使用することにより模倣し得る。この方法にで、ファージディスプレイにより得られる「一次」ヒトＩｇ由来タンパク質の親和性は、免疫されないドナーから得られるＶドメイン遺伝子の天然に存在するバリアントのレパートリー（レパートリー）でＨおよびＬ鎖Ｖ領域遺伝子を順次置き換えることにより改良し得る。この技術はｎＭ範囲の親和性をもつＩｇ由来タンパク質および抗体フラグメントの製造を可能にする。非常に大型のファージ抗体レパートリーを作成するための一戦略はＷａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５（１９９３）により記述されている。遺伝子シャッフリングは、げっ歯類Ｉｇ由来タンパク質からヒトＩｇ由来タンパク質を派生させるのにもまた使用し得、ここでヒト抗体は出発げっ歯類抗体に類似の親和性および特異性を有する。「エピトープ刷り込み（ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）」ともまた称されるこの方法により、ファージディスプレイ技術により得られるげっ歯類Ｉｇ由来タンパク質のＨ若しくはＬ鎖Ｖドメイン遺伝子がヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、げっ歯類−ヒトキメラを創製する。抗原での選択は機能的抗原結合部位を回復することが可能なヒト可変の単離をもたらす（すなわちエピトープがパートナーの選択を支配する（刷り込む））。残存するげっ歯類Ｖドメインを置き換えるために該過程を反復する場合にヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日
に公開された第ＰＣＴ  ＷＯ  ９３／０６２１３号明細書を参照されたい）。ＣＤＲ移植によるげっ歯類Ｉｇ由来タンパク質の伝統的なヒト化と異なり、この技術は、げっ歯類起源の枠組み若しくはＣＤＲ残基を有しない完全にヒトのＩｇ由来タンパク質を提供する。
【００３６】
最低２種の異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル、好ましくはヒト若しくはヒト化Ｉｇ由来タンパク質である二特異性Ｉｇ由来タンパク質もまた使用し得る。本場合に、結合特異性の一方は最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質に対し、他方はいずれかの他の抗原に対してである。例えば、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質および最低１種の神経栄養因子または２種の異なる型のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ポリペプチドを特異的に結合する二特異性Ｉｇ由来タンパク質は、本発明の範囲内にある。
【００３７】
二特異性Ｉｇ由来タンパク質の作成方法は当該技術分野で既知である。伝統的に、二特異性Ｉｇ由来タンパク質の組換え製造は、２種のＨ鎖が異なる特異性を有する２種の免疫グロブリンＨ鎖−Ｌ鎖対の共発現に基づく（ＭｉｌｓｔｅｉｎとＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリンＨおよびＬ鎖の無作為の取り合わせのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、それらの１種のみが正しい二特異性構造を有する。アフィニティークロマトグラフィー段階により通常行われる正しい分子の精製はむしろ厄介であり、そして生成物収量は低い。類似の手順が、１９９３年５月１３日に公開された第ＷＯ  ９３／０８８２９号明細書およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）に開示されている。
【００３８】
異なるかつより好ましいアプローチにより、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）をもつ抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合する。該融合は、好ましくは、ヒンジ、第二のＨ鎖定常領域（ＣＨ２）および第三のＨ鎖定常領域（ＣＨ３）の少なくとも部分を含んでなる免疫グロブリンＨ鎖定常ドメインとである。融合の少なくとも一方に存在するＨ鎖結合に必要な部位を含有する第一のＨ鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリンＨ鎖融合および所望の場合は免疫グロブリンＬ鎖をコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、そして適する宿主生物体にコトランスフェクトする。これは、該構築に使用される３ポリペプチド鎖の等しくない比が最適の収量を提供する態様において、該３ポリペプチドフラグメントの相互比率の調節において大きな柔軟性を提供する。しかしながら、等しい比の最低２ポリペプチド鎖の製造が高収量で生じる場合、若しくは該比がとりわけ重要でない場合は、１個の発現ベクターに２若しくは全３ポリペプチド鎖のコーディング配列を挿入することが可能である。このアプローチの好ましい一態様において、二特異性Ｉｇ由来タンパク質は、一方のアームの第一の結合特異性をもつハイブリッド免疫グロブリンＨ鎖、および他方のアームのハイブリッド免疫グロブリンＨ鎖−Ｌ鎖対（第二の結合特異性を提供する）から構成される。この非対称構造は、二特異性分子の半分のみでの免疫グロブリンＬ鎖の存在が容易な分離方法を提供するため、不要な免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二特異性化合物の分離を容易にする。二特異性Ｉｇ由来タンパク質の製造のさらなる詳細については、例えばＳｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）を参照されたい。
【００３９】
ヘテロ複合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）Ｉｇ由来タンパク質もまた本発明の範囲内にある。ヘテロ複合体Ｉｇ由来タンパク質は２種の共有結合されたＩｇ由来タンパク質から構成される。こうしたＩｇ由来タンパク質が、例えば免疫系細胞の標的を不要な細胞に向けるため（米国特許第４，６７６，９８０号明細書）およびＨＩＶ感染症の処置のため（第ＷＯ  ９１／００３６０号；第ＷＯ  ９２／００３７３号；および第ＥＰ  ０
３０８９号明細書）に提案されている。ヘテロ複合体Ｉｇ由来タンパク質はいずれかの便宜的架橋法を使用して作成し得る。適する架橋剤は当該技術分野で公知であり、そして多数の架橋技術と一緒に米国特許第４，６７６，９８０号明細書に開示されている。
【００４０】
好ましい一態様において、本発明の最低１種の抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、細胞株、混合細胞株、不死化細胞若しくは不死化細胞のクローン集団により産生される。不死化ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３産生細胞は、適する方法、例えばヒトＩｇ由来タンパク質産生細胞およびヘテロミエローマの融合、若しくはエプスタイン・バーウイルスへの感染を介する活性化ヒトＢ細胞の不死化（Ｎｉｅｄｂａｌａら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１７（３）：２９９−３０４（１９９８）；Ｚａｎｅｌｌａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１５６（２）：２０５−２１５（１９９２）；Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎら、Ｈｕｍ  Ｉｇ  ｄｅｒｉｖｅｄ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、２（１）２６−３２（１９９１））を使用して製造し得る。好ましくは、ヒト抗ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質またはフラグメント若しくは指定される部分若しくはバリアントは、本明細書に記述されかつ／若しくは当該技術分野で既知のところのヒトＩｇ由来タンパク質のレパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えばマウス、ラット、ハムスター、非ヒトの霊長類など）の免疫化により生成される。ヒト抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質を産生する細胞をこうした動物から単離し得、そして本明細書に記述される方法のような適する方法を使用して不死化し得る。
【００４１】
ヒト抗原に結合するヒトＩｇ由来タンパク質のレパートリーを産生し得るトランスジェニックマウスを既知の方法により製造し得る（例えば、限定されるものでないが、Ｌｏｎｂｅｒｇらに交付された米国特許第：５，７７０，４２８号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６２５，８２５号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号および同第５，７８９，６５０号；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら  第ＷＯ  ９８／５０４３３号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら  第ＷＯ  ９８／２４８９３号、Ｌｏｎｂｅｒｇら  第ＷＯ  ９８／２４８８４号、Ｌｏｎｂｅｒｇら  第ＷＯ  ９７／１３８５２号、Ｌｏｎｂｅｒｇら  第ＷＯ  ９４／２５５８５号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅら  第ＷＯ  ９６／３４０９６号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅら  第ＥＰ  ０４６３  １５１  Ｂ１号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅら  第ＥＰ  ０７１０  ７１９  Ａ１号、Ｓｕｒａｎｉら  米国特許第５，５４５，８０７号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら  第ＷＯ  ９０／０４０３６号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら  第ＥＰ  ０４３８  ４７４  Ｂ１号、Ｌｏｎｂｅｒｇら  第ＥＰ  ０８１４  ２５９  Ａ２号、Ｌｏｎｂｅｒｇら  第ＧＢ  ２  ２７２  ４４０  Ａ号明細書、Ｌｏｎｂｅｒｇら  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９−５９１（１９９４）、Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
７：１３−２１（１９９４）、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）、Ｔａｙｌｏｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０（２３）：６２８７−６２９５（１９９２）、Ｔｕａｉｌｌｏｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０（８）３７２０−３７２４（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３（１）：６５−９３（１９９５）およびＦｉｓｈｗａｌｄら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４（７）：８４５−８５１（１９９６）（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる））。一般に、これらのマウスは、機能的に再配列されるか若しくは機能的再配列を受け得る最低１種のヒト免疫グロブリン遺伝子座からのＤＮＡを含んでなる最低１種の導入遺伝子を含んでなる。こうしたマウス中の内因性免疫グロブリン遺伝子座は、内因性遺伝子によりコードされるＩｇ由来タンパク質を産生する該動物の能力を排除するように破壊若しくは欠失し得る。
【００４２】
本明細書で使用されるところの「機能的に再配列される」という用語は、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えを受けておりそれにより１免疫グロブリン鎖（例えばＨ鎖、Ｌ鎖）若しくはそのいずれかの部分をコードする免疫グロブリン遺伝子を生じる免疫グロブリン遺伝子座からのＤＮＡの１セグメントを指す。機能的に再配列された免疫グロブリン遺伝子は、例えばヌクレオチド配列決定、遺伝子セグメント間のコーディング結合部にアニーリングし得るプローブを使用するハイブリダイゼーション（例えばサザンブロッティング、ノーザンブロッティング）、若しくは遺伝子セグメント間のコーディング結合部にアニーリングし得るプライマーを用いる免疫グロブリン遺伝子の酵素的増幅（例えばポリメラーゼ連鎖反応）のような適する方法を使用して直接若しくは間接的に同定し得る。細胞が、特定の１可変領域を含んでなるＩｇ由来タンパク質を産生するか、若しくは特定の配列（例えば最低１種のＣＤＲ配列）を含んでなる可変領域を産生するかどうかもまた、適する方法を使用して決定し得る。一例において、ｍＲＮＡをＩｇ由来タンパク質産生細胞（例えばハイブリドーマ若しくは組換え細胞または他の適する供給源）から単離し得、そしてＩｇ由来タンパク質またはその指定される部分若しくはバリアントをコードするｃＤＮＡを製造するのに使用し得る。該ｃＤＮＡをクローン化しかつ配列決定し得るか、または、目的の可変領域の一部分（例えばＣＤＲ、コーディング結合部）に特異的にアニーリングする第一のプライマーおよび可変領域以外の配列（例えばＣＨ１、ＶＨ）に特異的にアニーリングする第二のプライマーを使用して（例えばポリメラーゼ連鎖反応若しくは他の既知かつ適する方法により）増幅し得る。
【００４３】
類似のタンパク質若しくはフラグメントへの特異的結合についてＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをスクリーニングすることは、ペプチドディスプレイライブラリーを使用して便宜的に達成し得る。本方法は、所望の機能若しくは構造を有する個々のメンバーについてのペプチドの大型の集合物のスクリーニングを必要とする。ペプチドディスプレイライブラリーのＩｇ由来タンパク質スクリーニングは当該技術分野で公知である。表示されるペプチド配列は、長さ３から５０００若しくはそれ以上までのアミノ酸、頻繁に５〜１００アミノ酸長から、およびしばしば約８から２５アミノ酸長までであり得る。ペプチドライブラリーを生成するための直接化学合成法に加え、数種の組換えＤＮＡ法が記述されている。１つの型は、バクテリオファージ若しくは細胞の表面上でのペプチド配列の表示を必要とする。各バクテリオファージ若しくは細胞は、特定の表示されるペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含有する。こうした方法は、ＰＣＴ特許公開第９１／１７２７１号、同第９１／１８９８０号、同第９１／１９８１８号および同第９３／０８２７８号明細書に記述されている。ペプチドのライブラリーを生成するための他の系はｉｎ  ｖｉｔｒｏ化学合成および組換え法の双方の局面を有する。ＰＣＴ特許公開第９２／０５２５８号、同第９２／１４８４３号および同第９６／１９２５６号明細書を参照されたい。米国特許第５，６５８，７５４号；および同第５，６４３，７６８号明細書もまた参照されたい。ペプチドディスプレイライブラリー、ベクター、およびスクリーニングキットは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州カールズバッド）およびＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｇ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（英国ケンブリッジシャー）のような供給元から商業的に入手可能である。例えば、Ｅｎｚｏｎに譲渡された米国特許第４７０４６９２号、同第４９３９６６６号、同第４９４６７７８号、同第５２６０２０３号、同第５４５５０３０号、同第５５１８８８９号、同第５５３４６２１号、同第５６５６７３０号、同第５７６３７３３号、同第５７６７２６０号、同第５８５６４５６号；Ｄｙａｘに譲渡された同第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６９８号、同第５８３７５００号、Ａｆｆｙｍａｘに譲渡された同第５４２７９０８号、同第５５８０７１７号；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｇ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓに譲渡された同第５８８５７９３号；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈに譲渡された同第５７５０３７３号、Ｘｏｍａに譲渡された同第５６１８９２０号、同第５５９５８９８号、同第５５７６１９５号、同第５６９８４３５号、同第５６９３４９３号、同第５６９８４１７号明細書、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、上
記；Ａｕｓｕｂｅｌ、上記；若しくはＳａｍｂｒｏｏｋ、上記（上の特許および特許公開のそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００４４】
本発明のＩｇ由来タンパク質、指定される部分およびバリアントは、それらの乳中でこうしたＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを産生するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどのようなトランスジェニック動物すなわち哺乳動物を提供するように、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードする核酸を使用してもまた製造し得る。こうした動物は既知の方法を使用して提供し得る。例えば、限定されるものでないが米国特許第５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号；同第５，９９４，６１６号；同第５，５６５，３６２号；同第５，３０４，４８９号明細書など（それらのそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００４５】
本発明のＩｇ由来タンパク質、指定される部分およびバリアントは、植物部分若しくはそれらから培養された細胞中でこうしたＩｇ由来タンパク質、指定される部分若しくはバリアントを産生するトランスジェニック植物および培養植物細胞（限定されるものでないがタバコおよびトウモロコシを挙げることができる）を提供するように、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードする核酸を使用して付加的に製造し得る。制限しない一例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉が、例えば誘導可能なプロモーターを使用して、大量の組換えタンパク質を提供するのに成功裏に使用されている。例えばＣｒａｍｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）およびその中に引用される参考文献を参照されたい。また、トランスジェニックトウモロコシが、他の組換え系で産生若しくは天然の供給源から精製されたものに同等な生物学的活性を伴い商業生産レベルで哺乳動物タンパク質を発現させるのに使用されている。例えばＨｏｏｄら、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）およびその中に引用される参考文献を参照されたい。一本鎖Ｉｇ由来タンパク質（ｓｃＦｖ）のようなＩｇ由来タンパク質フラグメントを包含するＩｇ由来タンパク質が、タバコ種子およびバレイショ塊茎を包含するトランスジェニック植物種子からもまた大量に産生されている。例えばＣｏｎｒａｄら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびその中に引用される参考文献を参照されたい。従って、本発明のＩｇ由来タンパク質、指定される部分およびバリアントは既知の方法に従ってトランスジェニック植物を使用してもまた産生し得る。例えばＦｉｓｃｈｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．、１９９９）、Ｍａら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびそれらの中で引用される参考文献もまた参照されたい。上の参考文献のそれぞれは引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる。
【００４６】
本発明のＩｇ由来タンパク質は広範な親和性（ＫＤ）でヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはフラグメントを結合し得る。好ましい一態様において、本発明の最低１種のヒト抗体は、場合によってはヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはフラグメントを高親和性で結合し得る。例えば、ヒト抗体は、約１０−９Ｍに等しいか若しくはそれ未満のＫＤ、あるいはより好ましくは約０．１０〜９．９９（またはその中のいずれかの範囲若しくは値）×１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３、１０−１４、１０−１５またはその中のいずれかの範囲若しくは値に等しいか若しくはそれ未満のＫＤで、ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しく
はフラグメントを結合し得る。
【００４７】
抗原に対するＩｇ由来タンパク質のアフィニティー若しくはアビディティーは、いずれかの適する方法を使用して実験的に測定し得る。（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：ニューヨーク州ニューヨーク（１９８４）中Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙら、“Ｉｇ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：ニューヨーク州ニューヨーク（１９９２）；およびその中に記述される方法を参照されたい）。特定の１Ｉｇ由来タンパク質と抗原の相互作用の測定されるアフィニティーは、異なる条件（例えば塩濃度、ｐＨ）下で測定される場合に変動し得る。従って、アフィニティーおよび他の抗原結合パラメータ（例えばＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくはＩｇ由来タンパク質および抗原の標準化溶液、ならびに本明細書に記述される緩衝液のような標準化緩衝液を用いて行う。
【００４８】
核酸分子
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、指定されるフラグメント、バリアント若しくはそれらのコンセンサス配列の最低１種の連続するアミノ酸の最低９０〜１００％をコードするヌクレオチド配列のような本明細書に提供される情報、またはこれらの配列の最低１種を含んでなる寄託されたベクターを使用して、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードする本発明の核酸分子を、本明細書に記述されるか若しくは当該技術分野で既知のところの方法を使用して得ることができる。
【００４９】
本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ若しくはいずれかの他の形態のようなＲＮＡの形態、または、限定されるものでないがクローニングにより得られるか若しくは合成で製造されるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを挙げることができるＤＮＡの形態、あるいはそれらのいずれかの組合せにあり得る。ＤＮＡは三本鎖、二本鎖若しくは一本鎖、またはそれらのいずれかの組合せであり得る。ＤＮＡ若しくはＲＮＡの最低１本の鎖のいずれの部分も、センス鎖としてもまた知られるコーディング鎖であり得るか、または、それはアンチセンス鎖ともまた称される非コーディング鎖であり得る。
【００５０】
本発明の単離された核酸分子は、限定されるものでないが最低１種のＨ鎖若しくはＬ鎖のそれぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／若しくはＣＤＲ３のような最低１個のＣＤＲの最低１個の指定される部分を挙げることができる、場合によっては１個若しくはそれ以上のイントロンを含むオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含んでなる核酸分子；ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのコーディング配列を含んでなる核酸分子；ならびに、上述されたものと実質的に異なるヌクレオチド配列を含んでなるがしかし遺伝暗号の縮重により本明細書に記述されかつ／若しくは当該技術分野で既知のところの最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質をなおコードする核酸分子を包含し得る。もちろん遺伝暗号は当該技術分野で公知である。従って、本発明の特定のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードするこうした縮重核酸バリアントを生成させることは当業者に慣例であろう。例えばＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照されたく、そしてこうした核酸バリアントは本発明に包含される。
【００５１】
本明細書に示されるとおり、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードする核酸を含んでなる本発明の核酸分子は、限定されるものでないが、Ｉｇ由来タンパク質フラグメントのアミノ酸配列を独力でコードするもの；Ｉｇ由来タンパク質全体若しくはその一部分のコーディング配列；Ｉｇ由来
タンパク質、フラグメント若しくは部分のコーディング配列、ならびに、限定されるものでないが、転写、スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを包含するｍＲＮＡプロセシングにおいてある役割（例えばｍＲＮＡのリボソーム結合および安定性）を演じる転写され翻訳されない配列のような非コーディング５’および３’配列を挙げることができる付加的な非コーディング配列と一緒になった最低１種のイントロンのような前述の付加的なコーディング配列を伴う若しくは伴わない、最低１種のシグナルリーダー若しくは融合ペプチドのコーディング配列のような付加的な配列；付加的な機能性を提供するもののような付加的なアミノ酸をコードする付加的なコーディング配列を挙げることができる。従って、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードする配列は、融合されたＩｇ由来タンパク質、またはＩｇ由来タンパク質フラグメント若しくは部分を含んでなる指定される部分若しくはバリアントの精製を容易にするペプチドをコードする配列のようなマーカー配列に融合させ得る。
【００５２】
本明細書に記述されるところのポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は、本明細書のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質をコードするポリヌクレオチドに選択的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸を提供する。従って、本態様のポリヌクレオチドはこうしたポリヌクレオチドを含んでなる核酸を単離、検出かつ／若しくは定量するために使用し得る。例えば、本発明のポリヌクレオチドを使用して、寄託されたライブラリー中の部分的若しくは完全長のクローンを同定、単離若しくは増幅し得る。いくつかの態様において、該ポリヌクレオチドはヒト若しくは哺乳動物核酸ライブラリーから単離されたゲノム若しくはｃＤＮＡ配列、またはそうでなければそれからのｃＤＮＡに相補的である。
【００５３】
好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは最低８０％完全長の配列、好ましくは最低８５％若しくは９０％完全長の配列、およびより好ましくは最低９５％完全長の配列を含んでなる。該ｃＤＮＡライブラリーは稀な配列の表示を増大させるよう正規化し得る。低若しくは中程度の緊縮性のハイブリダイゼーション条件は、典型的にしかし独占的にでなく相補配列に関して低下された配列の同一性を有する配列とともに使用する。中程度および高緊縮性の条件は場合によってはより大きな同一性の配列に使用し得る。低緊縮性条件は約７０％の配列の同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能にし、そしてオルソロガス若しくはパラロガス配列を同定するのに使用し得る。
【００５４】
場合によっては、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記述されるポリヌクレオチドによりコードされるＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの少なくとも一部分をコードすることができる。本発明のポリヌクレオチドは、本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードするポリヌクレオチドへの選択的ハイブリダイゼーションに使用し得る核酸配列を包含する。例えばＡｕｓｕｂｅｌ、上記；Ｃｏｌｌｉｇａｎ、上記（それぞれ引用することより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００５５】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該技術分野で公知のところの（ａ）組換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、若しくはそれらの組合せを使用して作成し得る。
【００５６】
核酸は便宜的に本発明のポリヌクレオチドに加えて配列を含み得る。例えば、１個若しくはそれ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んでなるマルチクローニング部位をポリヌクレオチドの単離で補助するように核酸に挿入し得る。また、翻訳可能な配列を本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離で補助するために挿入し得る。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は本発明のタンパク質を精製するための便宜的手段を提供する。本発
明の核酸（コーディング配列を除外する）は、場合によっては本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／若しくは発現のためのベクター、アダプター若しくはリンカーである。
【００５７】
付加的な配列を、クローニングおよび／若しくは発現においてそれらの機能を最適化するため、ポリヌクレオチドの単離で補助するため、または細胞へのポリヌクレオチドの導入を向上させるためにこうしたクローニングおよび／若しくは発現配列に付加し得る。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は当該技術分野で公知である。（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、上記；若しくはＳａｍｂｒｏｏｋ、上記を参照されたい）
【００５８】
核酸の組換え構築方法
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ若しくはそれらのいずれかの組合せのような本発明の単離された核酸組成物は、当業者に既知のいずれかの数のクローニング方法論を使用して生物学的供給源から得ることができる。いくつかの態様において、緊縮性条件下で本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを使用して、ｃＤＮＡ若しくはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望の配列を同定する。ＲＮＡの単離ならびにｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は当業者に公知である。（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、上記；若しくはＳａｍｂｒｏｏｋ、上記を参照されたい）
【００５９】
核酸のスクリーニングおよび単離方法
ｃＤＮＡ若しくはゲノムライブラリーは、本明細書に開示されるもののような本発明のポリヌクレオチドの配列に基づくプローブを使用してスクリーニングし得る。プローブを使用して、同一若しくは異なる生物体中でゲノムＤＮＡ若しくはｃＤＮＡ配列とハイブリダイズして相同な遺伝子を単離し得る。当業者は、多様な程度のハイブリダイゼーションの緊縮性を該アッセイで使用し得ることを認識することができ；そしてハイブリダイゼーション若しくは洗浄媒体いずれも緊縮性であり得る。ハイブリダイゼーションの条件がより緊縮性になる際に、二重鎖形成が起こるためにプローブと標的の間のより大きな程度の相補性が存在しなければならない。緊縮性の程度は、温度、イオン強度、ｐＨ、およびホルムアミドのような部分的変性溶媒の存在の１種若しくはそれ以上により制御し得る。例えば、ハイブリダイゼーションの緊縮性は、例えば０％ないし５０％の範囲内のホルムアミドの濃度の操作により反応体溶液の極性を変えることにより便宜的に変動させる。検出可能な結合に必要とされる相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒体および／若しくは洗浄媒体の緊縮性に従って変動することができる。相補性の程度は、至適には１００％、若しくは９０〜１００％、またはその中のいずれかの範囲若しくは値であることができる。しかしながら、プローブおよびプライマー中の小さな配列の変動が、ハイブリダイゼーションおよび／若しくは洗浄媒体の緊縮性を低下させることにより補償され得ることが理解されるべきである。
【００６０】
ＲＮＡ若しくはＤＮＡの増幅方法は当該技術分野で公知であり、そして、本明細書に提示される教示および手引きに基づき、過度の実験を伴わずに本発明により使用し得る。
【００６１】
ＤＮＡ若しくはＲＮＡの既知の増幅方法は、限定されるものでないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関係する増幅方法（例えば、Ｍｕｌｌｉｓらへの米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８００，１５９号、同第４，９６５，１８８号；Ｔａｂｏｒらへの同第４，７９５，６９９号および同第４，９２１，７９４号；Ｉｎｎｉｓへの同第５，１４２，０３３号；Ｗｉｌｓｏｎらへの同第５，１２２，４６４号；Ｉｎｎｉｓへの同第５，０９１，３１０号；Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎらへの同第５，０６６，５８４号；Ｇｅｌｆａｎｄらへの同第４，８８９，８１８号；Ｓｉｌｖｅｒらへの同第４，９９４，３７０号；Ｂｉｓｗａｓへの同第４，７６６，０６７号；Ｒｉ
ｎｇｏｌｄへの同第４，６５６，１３４号明細書を参照されたい）、ならびに二本鎖ＤＮＡ合成の鋳型として標的配列に対するアンチセンスＲＮＡを使用するＲＮＡ媒介性増幅（Ｍａｌｅｋらへの米国特許第５，１３０，２３８号明細書、商標ＮＡＳＢＡをもつ）（これらの参考文献の内容全体は引用することにより本明細書に組み込まれる）を挙げることができる。（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、上記；若しくはＳａｍｂｒｏｏｋ、上記を参照されたい。）
【００６２】
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を使用して、本発明のポリヌクレオチドおよび関連する遺伝子の配列をゲノムＤＮＡ若しくはｃＤＮＡライブラリーから直接増幅し得る。ＰＣＲおよび他のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅方法は、例えば、発現されるべきタンパク質をコードする核酸配列をクローン化するため、サンプル中の所望のｍＲＮＡの存在を検出するためのプローブとして使用するための核酸を作成するため、核酸配列決定のため、若しくは他の目的上もまた有用であり得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅方法により当業者を指図するのに十分な技術の例は、Ｂｅｒｇｅｒ、上記、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、上記およびＡｕｓｕｂｅｌ、上記、ならびにＭｕｌｌｉｓら、米国特許第４，６８３，２０２号明細書（１９８７）；およびＩｎｎｉｓら、ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）に見出される。ゲノムＰＣＲ増幅のための商業的に入手可能なキットが当該技術分野で既知である。例えばＡｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣゲノムＰＣＲキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照されたい。Ｔ４遺伝子３２タンパク質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を、長いＰＣＲ産物の収量を向上させるために使用し得る。
【００６３】
核酸の合成構築方法
本発明の単離された核酸は既知の方法による直接化学合成によってもまた製造し得る（例えばＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照されたい）。化学合成は一般に一本鎖オリゴヌクレオチドを生じ、それを相補配列とのハイブリダイゼーションにより、若しくは鋳型として該一本鎖を使用するＤＮＡポリメラーゼでの重合により二本鎖ＤＮＡに転化し得る。当業者は、ＤＮＡの化学合成は約１００若しくはそれ以上の塩基の配列に制限され得る一方で、より長い配列をより短い配列の連結により得ることができることを認識するであろう。
【００６４】
組換え発現カセット
本発明は本発明の核酸を含んでなる組換え発現カセットをさらに提供する。本発明の核酸配列、例えば本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードするｃＤＮＡ若しくはゲノム配列を使用して、最低１種の所望の宿主細胞に導入し得る組換え発現カセットを構築し得る。組換え発現カセットは、典型的に、意図している宿主細胞中でのポリヌクレオチドの転写を指図することができる転写開始制御配列に作動可能に連結されている本発明のポリヌクレオチドを含むことができる。異種および非異種（すなわち内因性）双方のプロモーターを本発明の核酸の発現を指図するのに使用し得る。
【００６５】
いくつかの態様において、プロモーター、エンハンサー若しくは他の要素としてはたらく単離された核酸を、本発明のポリヌクレオチドの発現を上方若しくは下方制御するように非異種の形態の本発明のポリヌクレオチドの適切な位置（上流、下流若しくはイントロン中）に導入し得る。例えば、内因性プロモーターは突然変異、欠失および／若しくは置換によりｉｎ  ｖｉｖｏ若しくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで変えることができる。
【００６６】
本発明のポリヌクレオチドは所望のとおりセンス若しくはアンチセンスいずれの向きでも発現させ得る。センス若しくはアンチセンスいずれの向きの遺伝子発現の制御も観察可能な特徴に直接の影響を有し得ることが認識されるであろう。
【００６７】
別の抑制方法はセンス抑制である。センスの向きに構成された核酸の導入は、標的遺伝子の転写を阻害するための有効な手段であることが示されている。
【００６８】
本発明のポリヌクレオチド上のペンダント基としての多様な架橋剤、アルキル化剤およびラジカル生成種を、核酸を結合、標識、検出および／若しくは切断するのに使用し得る。Ｋｎｏｒｒｅら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  ６７：７８５−７８９（１９８５）；Ｖｌａｓｓｏｖら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４０６５−４０７６（１９８６）；ＩｖｅｒｓｏｎとＤｅｒｖａｎ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：１２４１−１２４３（１９８７）；Ｍｅｙｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：８５１７−８５１９（１９８９）；Ｌｅｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７：３１９７−３２０３（１９８８）；Ｈｏｍｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２：２４３５−２４３７（１９９０）；ＷｅｂｂとＭａｔｔｅｕｃｃｉ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０８：２７６４−２７６５（１９８６）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：７６６１−７６７４（１９８６）；Ｆｅｔｅｒｉｔｚら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：４０００（１９９１）。核酸を結合、検出、標識および／若しくは切断するための多様な化合物が当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第５，５４３，５０７号；同第５，６７２，５９３号；同第５，４８４，９０８号；同第５，２５６，６４８号；および同第５，６８１９４１号明細書（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００６９】
ベクターおよび宿主細胞
本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を包含するベクター、該組換えベクターで遺伝子的に工作されている宿主細胞、および当該技術分野で公知であるのところの組換え技術による最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの製造にも関する。例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、上記；Ａｕｓｕｂｅｌら、上記（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００７０】
ポリヌクレオチドは、場合によっては宿主中での増殖のための選択可能なマーカーを含有するベクターに結合し得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿のような沈殿物中で、若しくは荷電した脂質との複合体中で導入される。ベクターがウイルスである場合、適切なパッケージング細胞株を使用してそれをｉｎ  ｖｉｔｒｏでパッケージングし得、そしてその後宿主細胞中に形質導入し得る。
【００７１】
ＤＮＡ挿入断片は適切なプロモーターに効果的に連結すべきである。発現構築物は、転写開始、終止のための部位、および転写された領域中に翻訳のためのリボソーム結合部位をさらに含有することができる。該構築物により発現される成熟転写物のコーディング部分は、好ましくは翻訳されるべきｍＲＮＡの初めの翻訳開始および終わりに適切に配置された終止コドン（例えばＵＡＡ、ＵＧＡ若しくはＵＡＧ）を包含することができ、ＵＡＡおよびＵＡＧが哺乳動物若しくは真核生物細胞発現に好ましい。
【００７２】
発現ベクターは、好ましくは、しかし場合によっては最低１種の選択可能なマーカーを包含することができる。こうしたマーカーは、限定されるものでないが、真核生物細胞培養物のためのメトトレキサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３４，６６５号；同第４，６５６，１３４号；同第４，９５６，２８８号；同第５，１４９，６３６号；同第５，１７９，０１７号明細書、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸若しくはグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号明細書）耐性、ならびに大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および他の細菌若しくは原
核生物中で培養するためのテトラサイクリン若しくはアンピシリン耐性遺伝子（上の特許はここに引用することによりそっくりそのまま組み込まれる）を挙げることができる。上述された宿主細胞に適切な培地および培養条件は当該技術分野で既知である。適するベクターは当業者に容易に明らかであろう。ベクター構築物の宿主細胞中への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、陽イオン性脂質媒介性トランスフェクション、電気穿孔法、形質導入、感染若しくは他の既知の方法により遂げることができる。こうした方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、上記、第１〜４章および第１６〜１８章；Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、第１、９、１３、１５、１６章のような当該技術分野で記述されている。
【００７３】
本発明の最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、融合タンパク質のような改変された形態で発現させ得、そして分泌シグナルのみならずしかしまた付加的な異種機能領域も包含し得る。例えば、付加的なアミノ酸、とりわけ荷電したアミノ酸の一領域を、宿主細胞中、精製の間、若しくはその後の取扱および貯蔵の間の安定性および難分解性を向上させるために、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのＮ末端に付加し得る。また、精製を容易にするために、本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントにペプチド部分を付加し得る。こうした領域はＩｇ由来タンパク質若しくはその最低１種のフラグメントの最終調製前に除去し得る。こうした方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、上記、第１７．２９〜１７．４２章および第１８．１〜１８．７４章；Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、第１６、１７および１８章のような多くの標準的実験室手引書に記述されている。
【００７４】
当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系を知っている。
【００７５】
あるいは、本発明の核酸は、本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードする内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞で（操作により）スイッチを入れることにより宿主細胞中で発現させ得る。こうした方法は、例えば米国特許第５，５８０，７３４号、同第５，６４１，６７０号、同第５，７３３，７４６号および同第５，７３３，７６１号明細書（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）に記述されるとおり当該技術分野で公知である。
【００７６】
Ｉｇ由来タンパク質、それらの指定される部分若しくはバリアントの製造に有用な細胞培養物を具体的に説明するのは哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系はしばしば細胞の単層の形態にあることができるとは言え、哺乳動物細胞懸濁液若しくはバイオリアクターもまた使用し得る。無傷のグリコシル化タンパク質を発現することが可能な多数の適する宿主細胞株が当該技術分野で開発されており、そして、ＣＯＳ−１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０）およびＢＳＣ−１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６）細胞株、Ｃｏｓ−７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐ  Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、２９３細胞、ＨｅＬａ細胞などを包含し、これらは例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、バージニア州マナサスから容易に入手可能である。好ましい宿主細胞は骨髄腫およびリンパ腫細胞のようなリンパ系起源の細胞を包含する。とりわけ好ましい宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１８５１）である。とりわけ好ましい一態様において、組換え細胞はＰ３Ｘ６３Ａｂ８．６５３若しくはＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞である。
【００７７】
これらの細胞の発現ベクターは、限定されるものでないが複製起点；プロモーター（例
えば後期若しくは初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号；同第５，３８５，８３９号明細書）、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１αプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号明細書）、最低１種のヒト免疫グロブリンプロモーター；エンハンサー、および／若しくはリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０ラージＴ抗原ポリＡ付加部位）のようなプロセシング情報部位、ならびに転写終止配列を挙げることができる発現制御配列の１種若しくはそれ以上を包含し得る。例えばＡｕｓｕｂｅｌら、上記；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記を参照されたい。本発明の核酸若しくはタンパク質の製造に有用な他の細胞は、例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎの細胞株およびハイブリドーマのカタログ（Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ）（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）または他の既知の若しくは商業的供給源から既知かつ／若しくは入手可能である。
【００７８】
真核生物宿主細胞を使用する場合、ポリアデニル化若しくは転写終止配列が典型的にベクターに組み込まれる。終止配列の一例はウシ成長ホルモン遺伝子からのポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列もまた包含し得る。スプライシング配列の一例は、ＳＶ４０からのＶＰ１イントロン（Ｓｐｒａｇｕｅら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））である。加えて、宿主細胞中での複製を制御する遺伝子配列を当該技術分野で既知のとおりベクターに組み込み得る。
【００７９】
Ｉｇ由来タンパク質またはその指定される部分若しくはバリアントの精製
ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、限定されるものでないがプロテインＡ精製、硫酸アンモニウム若しくはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオン若しくは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを挙げることができる公知の方法により組換え細胞培養物から回収かつ精製し得る。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）もまた精製に使用し得る。例えばＣｏｌｌｉｇａｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、若しくはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州ニューヨーク（１９９７−２００６）、例えば第１、４、６、８、９、１０章（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【００８０】
本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、天然に精製される産物、化学合成手順の生成物、ならびに組換え技術により例えば酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を包含する真核生物宿主から製造される生成物を包含する。組換え製造手順で使用される宿主に依存して、本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントはグリコシル化され得るか、若しくはグリコシル化されないことができ、グリコシル化が好ましい。こうした方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、上記、第１７．３７〜１７．４２節；Ａｕｓｕｂｅｌ、上記、第１０、１２、１３、１６、１８および２０章、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、上記、第１２〜１４章（全部は引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）のような多くの標準的実験室手引書に記述されている。
【００８１】
ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質、フラグメントおよび／若しくはバリアント
本発明の単離されたＩｇ由来タンパク質は、本明細書により完全に論考されるところの本発明のポリヌクレオチドのいずれか１種によりコードされるＩｇ由来タンパク質または
指定される部分若しくはバリアント、あるいはいずれかの単離若しくは製造されたＩｇ由来タンパク質またはその指定される部分若しくはバリアントを含んでなる。
【００８２】
好ましくは、ヒトＩｇ由来タンパク質または抗原結合フラグメントはヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはフラグメントを結合し、そしてそれにより該タンパク質の生物学的活性を実質的に中和する。最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはフラグメントの最低１種の生物学的活性を部分的に若しくは好ましくは実質的に中和するＩｇ由来タンパク質またはその指定される部分若しくはバリアントは、該タンパク質若しくはフラグメントを結合し得、そしてそれにより、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体へのＩＬ−４若しくはＩＬ−１３の結合、または他のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３依存性若しくは媒介性の機構により媒介される活性を阻害する。本明細書で使用されるところの「Ｉｇ由来タンパク質を中和すること」という用語は、ヒトｐ４０若しくはｐ１９タンパク質若しくはフラグメント関連の依存性の活性をアッセイに依存して約２０〜１２０％、好ましくは最低約６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％若しくはそれ以上阻害し得るＩｇ由来タンパク質を指す。ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３関連の依存性の活性を阻害する抗ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの能力は、好ましくは、本明細書に記述されかつ／若しくは当該技術分野で既知のところの最低１種の適するＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質若しくはタンパク質アッセイにより評価される。本発明のヒトＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、いずれかのクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤなど）若しくはサブクラス（例えばＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４など）またはアイソタイプのものであり得、そしてκ若しくはλ  Ｌ鎖を含み得る。一態様において、ヒトＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、ＩｇＧ  Ｈ鎖若しくは定義されるフラグメント、例えばアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４の最低１種を含んでなる。この型のＩｇ由来タンパク質は、本明細書に記述されかつ／若しくは当該技術分野で既知のところの最低１種のヒトＬ鎖（例えばＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＭ（例えばγ１、γ２、γ３、γ４）導入遺伝子を含んでなるトランスジェニックマウス若しくは他のトランスジェニックの非ヒトの哺乳動物を使用することにより製造し得る。別の態様において、抗ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質またはその指定される部分若しくはバリアントはＩｇＧ１  Ｈ鎖およびＩｇＧ１  Ｌ鎖を含んでなる。
【００８３】
本発明の最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分若しくはそれらのいずれかの組合せに特異的な最低１種の指定されるエピトープを結合する。該最低１種のエピトープは、前記タンパク質の最低一部分を含んでなる最低１種のＩｇ由来タンパク質結合領域を含み得、そのエピトープは好ましくは前記タンパク質の最低１種の細胞外、可溶性、親水性、外的若しくは細胞質部分から構成される。制限しない例として、（ａ）ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３の最低１サブユニットよりなる群から選択されるアミノ酸配列全体に対する最低１〜３個を含んでなる最低１エピトープで特異的に結合する。該最低１個の特異的エピトープは、限定されるものでないが配列番号４２、４３若しくは４４の１−１０、１０−２０、２０−３０、３０−４０、４０−５０、５０−６０、６０−７０、７０−８０、８０−９０、９０−１００、１００−１１０、１１０−１２０、１２０−１３０、１３０−１４０、１４０−１４５の最低１種の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４アミノ酸を挙げることができるヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３のサブユニットの最低１アミノ酸のいずれかの組合せを含み得る。
【００８４】
一般に、本発明のヒトＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントは、最低１個のヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）若しくは最低１個のＨ鎖可変領域のバリアント、ならびに最低１個のヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）若しくは最低１個のＬ鎖可変領域のバリアントを含んでなる抗原結合領域を含んでなることができる。制限しない一例として、Ｉｇ由来タンパク質または抗原結合部分若しくはバリアントはＨ鎖ＣＤＲ３および／若しくはＬ鎖ＣＤＲ３の最低１個を含み得る。特定の一態様において、Ｉｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントは、対応するＣＤＲ１、２および／若しくは３のアミノ酸配列を有する最低１個のＨ鎖ＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／若しくはＣＤＲ３）の少なくとも一部分を含んでなる抗原結合領域を有し得る。別の特定の態様において、Ｉｇ由来タンパク質または抗原結合部分若しくはバリアントは、対応するＣＤＲ１、２および／若しくは３のアミノ酸配列を有する最低１個のＬ鎖ＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／若しくはＣＤＲ３）の最低１部分を含んでなる抗原結合領域を有し得る。こうしたＩｇ由来タンパク質は、慣習的技術を使用してＩｇ由来タンパク質の多様な部分（例えばＣＤＲ、枠組み）を化学的に一緒に結合することにより、組換えＤＮＡ技術の慣習的技術を使用してＩｇ由来タンパク質をコードするある（すなわち１種若しくはそれ以上の）核酸分子を製造かつ発現することにより、またはいずれかの他の適する方法により製造し得る。
【００８５】
抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質は、定義されるアミノ酸配列を有するＨ若しくはＬ鎖可変領域の最低１種を含み得る。例えば、好ましい一態様において、抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質は最低１種のＨ鎖可変領域および／若しくは最低１種のＬ鎖可変領域の最低１種を含んでなる。ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはフラグメントに結合しかつ定義されるＨ若しくはＬ鎖可変領域を含んでなるヒトＩｇ由来タンパク質は、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．ら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ、１（５）：８６３−８６８（１９９８））のような適する方法、または当該技術分野で既知かつ／若しくは本明細書に記述されるところのトランスジェニック動物を使用する方法を使用して製造し得る。例えば、機能的に再配列されたヒト免疫グロブリンＨ鎖導入遺伝子、および機能的再配列を受け得るヒト免疫グロブリンＬ鎖遺伝子座からのＤＮＡを含んでなる導入遺伝子を含んでなるトランスジェニックマウスを、ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはそれらのフラグメントで免疫化してＩｇ由来タンパク質の産生を導き出し得る。所望の場合は、Ｉｇ由来タンパク質産生細胞を単離し得、そしてハイブリドーマ若しくは他の不死化Ｉｇ由来タンパク質産生細胞を本明細書に記述されかつ／若しくは当該技術分野で既知のとおり製造し得る。あるいは、Ｉｇ由来タンパク質、指定される部分若しくはバリアントは、コードする核酸若しくはその部分を使用して適する宿主細胞中で発現させ得る。
【００８６】
本発明はまた、本明細書に記述されるアミノ酸配列と実質的に同一である配列中のアミノ酸を含んでなるＩｇ由来タンパク質、抗原結合フラグメント、免疫グロブリン鎖およびＣＤＲにも関する。好ましくは、こうしたＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメント、およびこうした鎖若しくはＣＤＲを含んでなるＩｇ由来タンパク質は、高親和性（例えば約１０−９Ｍ未満若しくはそれに等しいＫＤ）でヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質若しくはフラグメントを結合し得る。本明細書に記述される配列と実質的に同一であるアミノ酸配列は、保存的アミノ酸置換ならびにアミノ酸の欠失および／若しくは挿入を含んでなる配列を包含する。保存的アミノ酸置換は、第一のアミノ酸の特性に類似である化学および／若しくは物理特性（例えば電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第二のアミノ酸による第一のアミノ酸の置換を指す。保存的置換は以下の群すなわちリシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリ
プトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ内の別のものによる１アミノ酸の置換を包含する。
【００８７】
アミノ酸記号
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを構成するアミノ酸はしばしば略記される。アミノ酸の呼称は、当該技術分野で十分に理解されるところのその一文字記号、その三文字記号、名称、若しくは３ヌクレオチコドン（１種若しくは複数）によりアミノ酸を呼称することにより示し得る（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ、第３版、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９９４を参照されたい）。
【００８８】
【表１】
2010513301.tif 000002
【００８９】
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、本明細書に明記されるところの天然の突然変異若しくは人的操作のいずれかからの１個若しくはそれ以上のアミノ酸置換、欠失若しくは付加を包含し得る。
【００９０】
もちろん、当業者が行うとみられるアミノ酸置換の数は上述されたものを包含する多くの因子に依存する。一般的に言って、いずれかの所定のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ポリペプチドのアミノ酸置換、挿入若しくは欠失の数は、本明細書に明記されるところの１〜３０またはその中のいずれかの範囲若しくは値のような４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１を超えないことができる。
【００９１】
機能に不可欠である本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント中のアミノ酸は、部位特異的突然変異誘発若しくはアラニンスキャニング突然変異誘発（例えばＡｕｓｕｂｅｌ、上記、第８、１５章；ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍとＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））のような当該技術分野で既知の方法により同定し得る。後者の処置は分子中のすべての残基で単一アラニン突然変異を導入する。生じる変異体分子をその後限定されるものでないが最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３中和活性を挙げることができる生物学的活性について試験する。Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの結合に重要である部位は、結晶化、核磁気共鳴若しくは光親和性標識（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ  Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２（１９９２））のような構造解析によってもまた同定し得る。
【００９２】
本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント、あるいはそれらの指定されるバリアントは、本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントからのいずれかの数の連続するアミノ酸残基を含み得、その数は、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント中の連続する残基の数の１０〜１００％からよりなる整数の群から選択される。場合によっては、連続するアミノ酸のこの下位配列は、長さが最低約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０若しくはそれ以上のアミノ酸、またはその中のいずれかの範囲若しくは値である。さらに、こうした下位配列の数は、最低２、３、４若しくは５のような１から２０までよりなる群から選択されるいずれかの整数であり得る。
【００９３】
当業者が認識するであろうとおり、本発明は、本発明の最低１種の生物学的に活性のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを包含する。生物学的に活性のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、天然の（非合成の）、内因性の若しくは関連したおよび既知のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの比活性の最低２０％、３０％若しくは４０％、および好ましくは最低５０％、６０％若しくは７０％、ならびに最も好ましくは最低８０％、９０％若しくは９５％〜１０００％の比活性を有する。酵素活性および基質特異性の尺度のアッセイおよび定量方法は当業者に公知である。
【００９４】
別の局面において、本発明は、有機部分の共有結合により修飾されている本明細書に記述されるところのヒトＩｇ由来タンパク質および抗原結合フラグメントに関する。こうした修飾は、改良された薬物動態特性（例えば増大されたｉｎ  ｖｉｖｏ血清半減期）をもつＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントを生じ得る。該有機部分は、直鎖状若しくは分枝状の親水ポリマー基、脂肪酸基若しくは脂肪酸エステル基であり得る。特定の態様において、親水ポリマー基は約８００ないし約１２０，０００ダルトンの分子量を有し得、そしてポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマー若しくはポリビニルピロリドンであり得、また、脂肪酸若しくは脂肪酸エステル基は約８から約４０個までの炭素原子を含み得る。
【００９５】
本発明の修飾Ｉｇ由来タンパク質および抗原結合フラグメントは、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントに直接若しくは間接的に共有結合されている１個若しくはそれ以上の有機部分を含み得る。本発明のＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントに結合されている各有機部分は、独立に親水ポリマー基、脂肪酸基若しくは脂肪酸エステル基であり得る。本明細書で使用されるところの「脂肪酸」という用語は
モノカルボン酸およびジカルボン酸を包含する。該用語が本明細書で使用されるところの「親水ポリマー基」は、オクタン中でよりも水中でより溶解性である有機ポリマーを指す。例えばポリリシンはオクタン中でよりも水中でより溶解性である。従って、ポリリシンの共有結合により修飾されたＩｇ由来タンパク質が本発明により包含される。本発明のＩｇ由来タンパク質を修飾するのに適する親水ポリマーは直鎖状若しくは分枝状であり得、そして例えばポリアルカングリコール（例えばＰＥＧ、モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、炭水化物（例えばデキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など）、親水性アミノ酸のポリマー（例えばポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸など）、ポリアルカンオキシド（例えばポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど）およびポリビニルピロリドンを包含する。好ましくは、本発明のＩｇ由来タンパク質を修飾する親水ポリマーは、別個の分子実体として約８００ないし約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えばＰＥＧ５０００およびＰＥＧ２０，０００（ここで下付き数字はポリマーの平均分子量（ダルトン）である）を使用し得る。
【００９６】
親水ポリマー基は１ないし約６個のアルキル、脂肪酸若しくは脂肪酸エステル基で置換し得る。脂肪酸若しくは脂肪酸エステル基で置換されている親水ポリマーは適する方法を使用することにより製造し得る。例えば、アミン基を含んでなるポリマーを脂肪酸若しくは脂肪酸エステルのカルボキシレートに結合し得、そして脂肪酸若しくは脂肪酸エステル上の活性化カルボキシレート（例えばＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールで活性化された）をポリマー上のヒドロキシル基に結合し得る。
【００９７】
本発明のＩｇ由来タンパク質を修飾するのに適する脂肪酸および脂肪酸エステルは、飽和であり得るかまたは１個若しくはそれ以上の不飽和単位を含有し得る。本発明のＩｇ由来タンパク質を修飾するのに適する脂肪酸は、例えばｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ４０）、ｃｉｓ−Δ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレエート）、全ｃｉｓ−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸などを包含する。適する脂肪酸エステルは直鎖状若しくは分枝状低級アルキル基を含んでなるジカルボン酸のモノエステルを包含する。該低級アルキル基は１から約１２まで、好ましくは１ないし約６個の炭素原子を含み得る。
【００９８】
修飾ヒトＩｇ由来タンパク質および抗原結合フラグメントは、１種若しくはそれ以上の修飾剤との反応によるような適する方法を使用して製造し得る。該用語が本明細書で使用されるところの「修飾剤」は、活性化基を含んでなる適する有機基（例えば親水ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性化基」は、適切な条件下で第二の化学基と反応してそれにより修飾剤と該第二の化学基の間に共有結合を形成し得る化学部分すなわち官能基である。例えば、アミン反応性の活性化基は、トシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）などのような求電子基を包含する。チオールと反応し得る活性化基は、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などを包含する。アルデヒド官能基はアミン若しくはヒドラジドを含有する分子に結合させ得、また、アジド基は三価のリン基と反応してホスホルアミデート若しくはホスホルイミド結合を形成し得る。分子中への活性化基の適する導入方法は当該技術分野で既知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：カリフォルニア州サンディエゴ（１９９６）を参照されたい）。活性化基は、有機基（例えば親水ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接、または、リンカー部分、例えば１個若
しくはそれ以上の炭素原子が酸素、窒素若しくはイオウのようなヘテロ原子により置換され得る二価のＣ１−Ｃ１２基により結合し得る。適するリンカー部分は、例えばテトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−、−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−を包含する。リンカー部分を含んでなる修飾剤は、例えば、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えばモノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）を１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下に脂肪酸と反応させて遊離アミンと脂肪酸のカルボキシレートの間でアミド結合を形成することにより製造し得る。Ｂｏｃ保護基は、一級アミンを露出させるためのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での処理により生成物から除去することができ、一級アミンは別のカルボキシレートに記述されるとおり結合させ得るか、若しくは無水マレイン酸と反応させ得そして生じる生成物を環化させて脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生じさせ得る。（例えばＴｈｏｍｐｓｏｎら、第ＷＯ  ９２／１６２２１号明細書（その教示全体は引用することにより本明細書に組み込まれる）を参照されたい。）
【００９９】
本発明の修飾Ｉｇ由来タンパク質は、ヒトＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントを修飾剤と反応させることにより製造し得る。例えば、アミン反応性の修飾剤、例えばＰＥＧのＮＨＳエステルを使用することにより有機部分を部位非特異的様式でＩｇ由来タンパク質に結合し得る。修飾ヒトＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントは、Ｉｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば鎖内ジスルフィド結合）を還元することによってもまた製造し得る。還元されたＩｇ由来タンパク質若しくは抗原結合フラグメントをその後チオール反応性の修飾剤と反応させて本発明の修飾Ｉｇ由来タンパク質を製造し得る。本発明のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの特定の部位に結合されている有機部分を含んでなる修飾ヒトＩｇ由来タンパク質および抗原結合フラグメントは、逆タンパク質分解（Ｆｉｓｃｈら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２４（１）：５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、５６（４）：４５６−４６３（１９９７））のような適する方法、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：カリフォルニア州サンディエゴ（１９９６）に記述される方法を使用して製造し得る。
【０１００】
ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物
本発明はまた、天然に存在しない組成物、混合物若しくは形態で提供される、本明細書に記述されかつ／若しくは当該技術分野で既知のところの最低１、最低２、最低３、最低４、最低５、最低６種若しくはそれ以上のＬＩ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質またはそれらの指定される部分若しくはバリアントを含んでなる、最低１種のＬＩ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物も提供する。こうした組成物は、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質のアミノ酸配列の最低１若しくは２種の完全長、Ｃおよび／若しくはＮ末端欠失バリアント、ドメイン、フラグメント若しくは指定される部分、またはそれらの指定されるフラグメント、ドメイン若しくはバリアントを含んでなる天然に存在しない組成物を含んでなる。こうした組成物のパーセンテージは、当該技術分野で既知若しくは本明細書に記述されるところの液体若しくは乾燥溶液（ｄｒｙ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、混合物、懸濁液、乳液またはコロイドとしての重量、容量、濃度、モル濃度若しくは重量モル濃度でである。
【０１０１】
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若し
くはバリアントの組成物は、限定されるものでないが希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどを挙げることができるいずれかの適する補助物質の最低１種をさらに含み得る。製薬学的に許容できる補助物質が好ましい。こうした無菌溶液の制限しない例および製造方法は、限定されるものでないが、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（ペンシルバニア州イーストン）１９９０を挙げることができる当該技術分野で公知である。当該技術分野で公知若しくは本明細書に記述されるところのＩＬ−４若しくはＩＬ−１３組成物の投与様式、溶解性および／若しくは安定性に適する製薬学的に許容できる担体を慣例に選択し得る。
【０１０２】
本組成物で有用な製薬学的賦形剤および添加物は、限定されるものでないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質ならびに炭水化物（例えば、単糖、二、三、四およびオリゴ糖を包含する糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖などのような誘導体化糖；ならびに多糖若しくは糖ポリマー）を挙げることができ、それらは単独で若しくは組合せで存在し得、単独若しくは組合せで１〜９９．９９重量若しくは容量％を含んでなる。例示的タンパク質賦形剤は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のような血清アルブミン、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどを包含する。緩衝能力においてもまた機能し得る代表的なアミノ酸／Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの成分は、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどを包含する。１種の好ましいアミノ酸はグリシンである。
【０１０３】
本発明での使用に適する炭水化物賦形剤は、例えば、果糖、麦芽糖、ガラクトース、ブドウ糖、Ｄ−マンノース、ソルボースなどのような単糖；乳糖、ショ糖、トレハロース、セロビオースなどのような二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどのような多糖；およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルチトール）、ミオイノシトールなどのようなアルジトールを包含する。本発明での使用に好ましい炭水化物賦形剤はマンニトール、トレハロースおよびラフィノースである。
【０１０４】
ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質組成物は緩衝剤すなわちｐＨ調節剤もまた包含し得；典型的には緩衝剤は有機酸若しくは塩基から調製される塩である。代表的な緩衝剤は、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸若しくはフタル酸の塩のような有機酸の塩；トリス、塩酸トロメタミン若しくはリン酸緩衝液を包含する。本組成物での使用に好ましい緩衝剤はクエン酸塩のような有機酸塩である。
【０１０５】
加えて、本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー糖）、デキストレート（ｄｅｘｔｒａｔｅ）（例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン）、ポリエチレングリコールのようなポリマー性賦形剤／添加物、香味料、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば「ＴＷＥＥＮ  ２０」および「ＴＷＥＥＮ  ８０」のようなポリソルベート）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）ならびにキレート剤（例えばＥＤＴＡ）を包含し得る。
【０１０６】
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３組成物での使用に適するこれらならびに付加的な既知の製薬学的賦形剤および／若しくは添加物は、例えば「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第１９版、Ｗｉ
ｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ、（１９９５）および「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」、第５２版、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ、ニュージャージー州モントベール（１９９８）（それらの開示は引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）に列挙されるとおり当該技術分野で既知である。好ましい担体若しくは賦形剤物質は炭水化物（例えば単糖類およびアルジトール）ならびに緩衝剤（例えばクエン酸塩）若しくはポリマー剤である。
【０１０７】
さらなる治療的成分を含んでなるＩｇ由来タンパク質組成物
該組成物は、場合によっては、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸（ＧＩ）管薬、ホルモン薬、液体若しくは電解質バランスのための薬物、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、眼、耳若しくは鼻の薬物、局所薬、栄養薬などの最低１種から選択される最低１種の化合物若しくはタンパク質の有効量をさらに含み得る。本明細書に提示されるそれぞれの製剤、適応症、投薬および投与を包含するこうした薬物は当該技術分野で公知である（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ、第２１版、Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ  Ｃｏｒｐ．、ペンシルバニア州スプリングハウス、２００１；Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓ  Ｄｒｕｇ  Ｇｕｉｄｅ  ２００１、Ｓｈａｎｎｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎ、Ｓｔａｎｇ編、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ．、ニュージャージー州アッパーサドルリバー；Ｐｈａｒｍｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｗｅｌｌｓら編、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、コネチカット州スタンフォード（それぞれ引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい）。
【０１０８】
抗感染薬は、殺アメーバ薬、または最低１種の抗原虫薬、駆虫薬、抗真菌薬、抗マラリア薬、抗結核薬若しくは最低１種の抗らい薬、アミノグリコシド、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、スルホンアミド、フルオロキノロン、抗ウイルス薬、マクロライド抗感染薬、雑多な抗感染薬から選択される最低１種であり得る。ＣＶ薬は、変力薬、抗不整脈薬、抗狭心症薬、降圧薬、抗高脂血症薬、雑多な心血管薬から選択される最低１種であり得る。ＣＮＳ薬は、非麻薬性鎮痛薬から選択される最低１種、または解熱薬、非ステロイド性抗炎症薬、麻薬性若しくは最低１種のオピオイド鎮痛薬、鎮痛睡眠薬、抗痙攣薬、抗うつ薬、抗不安薬、抗精神病薬、中枢神経系刺激薬、抗パーキンソン病薬、雑多な中枢神経系薬から選択される最低１種であり得る。ＡＮＳ薬は、コリン作動薬（副交感神経刺激薬）、抗コリン薬、アドレナリン作動薬（交感神経刺激薬）、アドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）、骨格筋弛緩薬、神経筋遮断薬から選択される最低１種であり得る。気道薬は、抗ヒスタミン薬、気管支拡張薬、去痰薬若しくは最低１種の鎮咳薬、雑多な呼吸器官用薬から選択される最低１種であり得る。ＧＩ管薬は、制酸剤若しくは最低１種の吸着剤若しくは最低１種の抗鼓腸薬、消化酵素若しくは最低１種の胆石溶解剤、止瀉薬、緩下剤、制吐剤、抗潰瘍薬から選択される最低１種であり得る。ホルモン薬は、コルチコステロイド、アンドロゲン若しくは最低１種の蛋白同化ステロイド、エストロゲン若しくは最低１種のプロゲスチン、ゴナドトロピン、抗糖尿病薬若しくは最低１種のグルカゴン、甲状腺ホルモン、甲状腺ホルモンアンタゴニスト、下垂体ホルモン、副甲状腺様薬物から選択される最低１種であり得る。液体および電解質バランスのための薬物は、利尿薬、電解質若しくは最低１種の補充液（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、酸性化薬若しくは最低１種のアルカリ性化薬から選択される最低１種であり得る。血液製剤は造血剤、抗凝固薬、血液誘導体、血栓溶解酵素から選択される最低１種であり得る。抗腫瘍薬は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗生物質性抗腫瘍薬、ホルモンバランスを変える抗腫瘍薬、雑多な抗腫瘍薬から選択される最低１種であり得る。免疫調節薬は、免疫抑制薬、ワクチン若しくは最低１種の類毒素、抗毒素若しくは最低１種の抗蛇毒、免疫血清、生物学的応答調節剤から選択される最低１種であり得る。眼、耳および鼻の薬物は、眼の抗感染薬、眼の抗炎症薬、縮瞳薬、散瞳薬、眼血管収縮薬、雑多な眼科用薬、耳用薬、鼻用薬から選択される最低１種であり得る。局所薬は、局所抗感染薬、抗疥癬薬若しく
は最低１種の殺シラミ薬、局所コルチコステロイドから選択される最低１種であり得る。栄養薬はビタミン、ミネラル若しくは熱素から選択される最低１種であり得る。例えばＮｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、上記の内容を参照されたい。
【０１０９】
最低１種の殺アメーバ薬若しくは抗原虫薬は、アトバクオン、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、メトロニダゾール、塩酸メトロニダゾール、イセチオン酸ペンタミジンから選択される最低１種であり得る。最低１種の駆虫薬はメベンダゾール、パモ酸ピランテル、チアベンダゾールから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗真菌薬は、アムホテリシンＢ、アムホテリシンＢ硫酸コレステリル複合体、アムホテリシンＢ脂質複合体、アムホテリシンＢリポソーム製剤、フルコナゾール、フルシトシン、グリセオフルビン微粒子（ｍｉｃｒｏｓｉｚｅ）、グリセオフルビン超微粒子（ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏｓｉｚｅ）、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ナイスタチン、塩酸テルビナフィンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗マラリア薬は、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、ドキシサイクリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、リン酸プリマキン、ピリメタミン、スルファドキシンを伴うピリメタミンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗結核薬若しくは抗らい薬は、クロファジミン、シクロセリン、ダプソン、塩酸エタンブトール、イソニアジド、ピラジナミド、リファブチン、リファンピン、リファペンチン、硫酸ストレプトマイシンから選択される最低１種であり得る。最低１種のアミノグリコシドは、硫酸アミカシン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸ネオマイシン、硫酸ストレプトマイシン、硫酸トブラマイシンから選択される最低１種であり得る。最低１種のペニシリンは、アモキシシリン／クラブラン酸カリウム、アモキシシリン三水和物、アンピシリン、アンピシリンナトリウム、アンピシリン三水和物、アンピシリンナトリウム／スルバクタムナトリウム、クロキサシリンナトリウム、ジクロキサシリンナトリウム、メズロシリンナトリウム、ナフシリンナトリウム、オキサシリンナトリウム、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＧナトリウム、ペニシリンＶカリウム、ピペラシリンナトリウム、ピペラシリンナトリウム／タゾバクタムナトリウム、チカルシリン二ナトリウム、チカルシリン二ナトリウム／クラブラン酸カリウムから選択される最低１種であり得る。最低１種のセファロスポリンは、セファクロル、セファドロキシル、セファゾリンナトリウム、セフジニル、塩酸セフェピム、セフィキシム、セフメタゾールナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォテタン二ナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフポドキシムプロキセチル、セフプロジル、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシムナトリウム、セフトリアキソンナトリウム、セフロキシムアキセチル、セフロキシムナトリウム、塩酸セファレキシン、セファレキシン一水和物、セフラジン、ロラカルベフの最低１種から選択される最低１種であり得る。最低１種のテトラサイクリンは、塩酸デメクロサイクリン、ドキシサイクリンカルシウム、ドキシサイクリンヒクラート（ｈｙｃｌａｔｅ）、塩酸ドキシサイクリン、ドキシサイクリン一水和物、塩酸ミノサイクリン、塩酸テトラサイクリンから選択される最低１種であり得る。最低１種のスルホンアミドは、コトリモキサゾール（ｃｏ−ｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソキサゾール、アセチルスルフイソキサゾールから選択される最低１種であり得る。最低１種のフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、メシル酸トロバフロキサシンから選択される最低１種であり得る。最低１種のフルオロキノロンは、メシル酸アラトロフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、レボフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、メシル酸トロバフロキサシンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗ウイルス薬は、硫酸アバカビル、アシクロビルナトリウム、塩酸アマンタジン、アンプレナビル、シドフォビル、メシル酸デラビルジン、ジダノシン、エファビレンズ、ファムシクロビル、フォミビルセンナトリウム、ホスカルネットナトリウム、ガンシクロビル、
硫酸インジナビル、ラミブジン、ラミブジン／ジドブジン、メシル酸ネルフィナビル、ネビラピン、リン酸オセルタミビル、リバビリン、塩酸リマンタジン、リトナビル、サキナビル、メシル酸サキナビル、スタブジン、塩酸バラシクロビル、ザルシタビン、ザナミビル、ジドブジンから選択される最低１種であり得る。最低１種のマクロライン抗感染薬は、アジトロマイシン、クラリスロマイシン、ジリトロマイシン、エリスロマイシン塩基、エリスロマイシンエストレート、エチルコハク酸エリスロマイシン、ラクトビオン酸エリスロマイシン、ステアリン酸エリスロマイシンから選択される最低１種であり得る。最低１種の雑多な抗感染薬は、アズトレオナム、バシトラシン、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、塩酸クリンダマイシン、塩酸パルミチン酸クリンダマイシン、リン酸クリンダマイシン、イミペネムおよびシラスタチンナトリウム、メロペネム、ニトロフラントイン大結晶（ｍａｃｒｏｃｒｙｓｔａｌ）、ニトロフラントイン微結晶、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、塩酸スペクチノマイシン、トリメトプリム、塩酸バンコマイシンから選択される最低１種であり得る。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．２４〜２１４を参照されたい。）
【０１１０】
最低１種の変力薬は、乳酸アムリノン、ジゴキシン、乳酸ミルリノンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗不整脈薬は、アデノシン、塩酸アミオダロン、硫酸アトロピン、トシル酸ブレチリウム、塩酸ジルチアゼム、ジソピラミド、リン酸ジソピラミド、塩酸エスモロール、酢酸フレカイニド、フマル酸イブチリド、塩酸リドカイン、塩酸メキシレチン、塩酸モリシジン、フェニトイン、フェニトインナトリウム、塩酸プロカインアミド、塩酸プロパフェノン、塩酸プロプラノロール、硫酸水素キニジン、グルコン酸キニジン、ポリガラクツロン酸キニジン、硫酸キニジン、ソタロール、塩酸トカイニド、塩酸ベラパミルから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗狭心症薬は、ベシル酸アムロジピン、亜硝酸アミル、塩酸ベプリジル、塩酸ジルチアゼム、硝酸イソソルビド、一硝酸イソソルビド、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニトログリセリン、塩酸プロプラノロール、ベラパミル、塩酸ベラパミルから選択される最低１種であり得る。最低１種の降圧薬は、塩酸アセブトロール、ベシル酸アムロジピン、アテノロール、塩酸ベナゼプリル、塩酸ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、カンデサルタンシレキセチル、カプトプリル、塩酸カルテオロール、カルベジロール、クロニジン、塩酸クロニジン、ジアゾキシド、塩酸ジルチアゼム、メシル酸ドキサゾシン、エナラプリラート、マレイン酸エナラプリル、メシル酸エプロサルタン、フェロジピン、メシル酸フェノルドパム、ホシノプリルナトリウム、酢酸グアナベンズ、硫酸グアナドレル、塩酸グアンファシン、塩酸ヒドララジン、イルベサルタン、イスラジピン、塩酸ラベタロール、リシノプリル、ロサルタンカリウム、メチルドパ、メチルドペート（ｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｔｅ）塩酸塩、コハク酸メトプロロール、酒石酸メトプロロール、ミノキシジル、塩酸モエキシプリル、ナドロール、塩酸ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、ニトロプルシドナトリウム、硫酸ペンブトロール、ペリンドプリルエルブミン、メシル酸フェントラミン、ピンドロール、塩酸プラゾシン、塩酸プロプラノロール、塩酸キナプリル、ラミプリル、テルミサルタン、塩酸テラゾシン、マレイン酸チモロール、トランドラプリル、バルサルタン、塩酸ベラパミルから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗高脂血症薬は、アトルバスタチンカルシウム、セリバスタチンナトリウム、コレスチラミン、塩酸コレスチポール、フェノフィブラート（微粒子化）、フルバスタチンナトリウム、ゲムフィブロジル、ロバスタチン、ナイアシン、プラバスタチンナトリウム、シンバスタチンから選択される最低１種であり得る。最低１種の雑多なＣＶ薬は、アブシキシマブ、アルプロスタジル、塩酸アルブタミン、シロスタゾール、重硫酸クロピドグレル、ジピリダモール、エプチフィバチド、塩酸ミドドリン、ペントキシフィリン、塩酸チクロピジン、塩酸チロフィバンから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．２１５〜３３６を参照されたい。）
【０１１１】
最低１種の非麻薬性鎮痛薬若しくは解熱薬は、アセトアミノフェン、アスピリン、コリ
ンマグネシウムトリサリチル酸、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウムから選択される最低１種であり得る。最低１種の非ステロイド性抗炎症薬は、セレコキシブ、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、インドメタシンナトリウム三水和物、ケトプロフェン、ケトロラクトロメタミン、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、スリンダクから選択される最低１種であり得る。最低１種の麻薬性若しくはオピオイド鎮痛薬は、塩酸アルフェンタニル、塩酸ブプレノルフィン、酒石酸ブトルファノール、リン酸コデイン、硫酸コデイン、クエン酸フェンタニル、フェンタニル経皮系、フェンタニル経粘膜、塩酸ヒドロモルホン、塩酸メペリジン、塩酸メサドン、塩酸モルヒネ、硫酸モルヒネ、酒石酸モルヒネ、塩酸ナルブフィン、塩酸オキシコドン、ペクチン酸オキシコドン、塩酸オキシモルホン、塩酸ペンタゾシン、塩酸ペンタゾシンおよび塩酸ナロキソン、乳酸ペンタゾシン、塩酸プロポキシフェン、ナプシル酸プロポキシフェン、塩酸レミフェンタニル、クエン酸スフェンタニル、塩酸トラマドールから選択される最低１種であり得る。最低１種の鎮静睡眠薬は、抱水クロラール、エスタゾラム、塩酸フルラゼパム、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、テマゼパム、トリアゾラム、ザレプロン、酒石酸ゾルピデムから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗痙攣薬は、アセタゾラミドナトリウム、カルバマゼピン、クロナゼパム、クロラゼプ酸二カリウム、ジアゼパム、ジバルプロエクスナトリウム、エトスクシムド、ホスフェニトインナトリウム、ギャバペンチン、ラモトリジン、硫酸マグネシウム、フェノバルビタール、フェノバルビタールナトリウム、フェニトイン、フェニトインナトリウム、フェニトインナトリウム（徐放性（ｅｘｔｅｎｄｅｄ））、プリミドン、塩酸タイアガビン、トピラメート、バルプロ酸ナトリウム、バルプロ酸から選択される最低１種であり得る。最低１種の抗うつ薬は、塩酸アミトリプチリン、パモ酸アミトリプチリン、アモキサピン、塩酸ブプロピオン、臭化水素酸シタロプラム、塩酸クロミプラミン、塩酸デシプラミン、塩酸ドキセピン、塩酸フルオキセチン、塩酸イミプラミン、パモ酸イミプラミン、ミルタザピン、塩酸ネファゾドン、塩酸ノルトリプチリン、塩酸パロキセチン、硫酸フェネルジン、塩酸セルトラリン、硫酸トラニルシプロミン、マレイン酸トリミプラミン、塩酸ベンラファキシンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗不安薬は、アルプラゾラム、塩酸ブスピロン、クロルジアセポキシド、塩酸クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸二カリウム、ジアゼパム、塩酸ドキセピン、エンボン酸ヒドロキシジン、塩酸ヒドロキシジン、パモ酸ヒドロキシジン、ロラゼパム、メフロバメート、塩酸ミダゾラム、オキサゼパムから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗精神病薬は、塩酸クロルプロマジン、クロザピン、デカン酸フルフェナジン、エナント酸フルエフェナジン、塩酸フルフェナジン、ハロペリドール、デカン酸ハロペリドール、乳酸ハロペリドール、塩酸ロキサピン、コハク酸ロキサピン、ベシル酸メソリダジン、塩酸モリンドン、オランザピン、ペルフェナジン、ピモジド、プロクロルペラジン、フマル酸ケチアピン、リスペリドン、塩酸チオリダジン、チオチキセン、塩酸チオチキセン、塩酸トリフルオペラジンから選択される最低１種であり得る。最低１種の中枢神経系刺激薬は、硫酸アンフェタミン、カフェイン、硫酸デキストロアンフェタミン、塩酸ドキサプラム、塩酸メタンフェタミン、塩酸メチルフェニデート、モダフィニル、ペモリン、塩酸フェンテルミンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗パーキンソン病薬は、塩酸アマンタジン、メシル酸ベンズトロピン、塩酸ビペリデン、乳酸ビペリデン、メシル酸ブロモクリプチン、カルビドパ−レボドパ、エンタカポン、レボドパ、メシル酸ペルゴリド、塩酸プラミペキソール、塩酸ロピニロール、塩酸セレギリン、トルカポン、塩酸トリヘキシフェニジルから選択される最低１種であり得る。最低１種の雑多な中枢神経系薬は、塩酸ブプロピオン、塩酸ドネペジル、ドロペリドール、マレイン酸フルボキサミン、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、塩酸ナラトリプタン、ニコチンポラクリレックス、ニコチン経皮系、プロポフォール、安息香酸リザトリプタン、塩酸シブトラミン一水和物、コハク酸スマトリプタン、塩酸タクリン、ゾルミトリプタンから選択される最低１種であり得る。（例え
ば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．３３７〜５３０を参照されたい。）
【０１１２】
最低１種のコリン作動薬（例えば副交感神経刺激薬）は、塩化ベタネコール、塩化エドロホニウム、臭化ネオスチグミン、メチル硫酸ネオスチグミン、サリチル酸フィゾスチグミン、臭化ピリドスチグミンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗コリン作動薬は、硫酸アトロピン、塩酸ジシクロミン、グリコピロール酸、ヒヨスチアミン、硫酸ヒヨスチアミン、臭化プロパンテリン、スコポラミン、ブチル臭化スコポラミン、臭化水素酸スコポラミンから選択される最低１種であり得る。最低１種のアドレナリン作動薬（交感神経刺激薬）は、塩酸ドブタミン、塩酸ドーパミン、酒石酸水素メタラミノール、酒石酸水素ノルエピネフリン、塩酸フェニレフリン、塩酸プソイドエフェドリン、硫酸プソイドエフェドリンから選択される最低１種であり得る。最低１種のアドレナリン遮断薬（交感神経遮断薬）は、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、酒石酸エルゴタミン、マレイン酸メチセルギド、塩酸プロプラノロールから選択される最低１種であり得る。最低１種の骨格筋弛緩薬は、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、塩酸シクロベンザプリン、ダントロレンナトリウム、メトカルバモール、塩酸チザニジンから選択される最低１種であり得る。最低１種の神経筋遮断薬は、ベシル酸アトラクリウム、ベシル酸シサトラクリウム、塩化ドキサクリウム、塩化ミバクリウム、臭化パンクロニウム、臭化ピペクロニウム、臭化ラパクロニウム、臭化ロクロニウム、塩化スクシニルコリン、塩化ツボクラリン、臭化ベクロニウムから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．５３１〜８４を参照されたい。）
【０１１３】
最低１種の抗ヒスタミン薬は、マレイン酸ブロムフェニラミン、塩酸セチリジン、マレイン酸クロルフェニラミン、フマル酸クレマスチン、塩酸シプロヘプタジン、塩酸ジフェンヒドラミン、塩酸フェキソフェナジン、ロラタジン、塩酸プロメタジン、テオクル酸プロメタジン、塩酸トリプロリジンから選択される最低１種であり得る。最低１種の気管支拡張薬は、アルブテロール、硫酸アルブテロール、アミノフィリン、硫酸アトロピン、硫酸エフェドリン、エピネフリン、酒石酸水素エピネフリン、塩酸エピネフリン、臭化イプラトロピウム、イソプロテレノール、塩酸イソプロテレノール、硫酸イソプロテレノール、塩酸レバルブテロール、硫酸メタプロテレノール、オキシトリフィリン、酢酸ピルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、硫酸テルブタリン、テオフィリンから選択される最低１種であり得る。最低１種の去痰薬若しくは鎮咳薬は、ベンゾナテート、リン酸コデイン、硫酸コデイン、臭化水素酸デキストラメトルファン、塩酸ジフェンヒドラミン、グアイフェネシン、塩酸ヒドロモルホンから選択される最低１種であり得る。最低１種の雑多な呼吸器官用薬は、アセチルシステイン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベラクタント、ブデソニド、カルファクタント、クロモリンナトリウム、ドルナーゼα、エポプロステノールナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、ネドクロミルナトリウム、パリビズマブ、トリアムシノロンアセトニド、ザフィルルカスト、ジロートンから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．５８５〜６４２を参照されたい。）
【０１１４】
最低１種の制酸剤、吸着剤若しくは抗鼓腸薬は、炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、マガルドラート、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、ジメチコン、炭酸水素ナトリウムから選択される最低１種であり得る。最低１種の消化酵素若しくは胆石溶解剤は、パンクレアチン、パンクレリパーゼ、ウルソジオールから選択される最低１種であり得る。最低１種の止瀉薬は、アタパルジャイト、次サリチル酸ビスマス、カルシウムポリカルボフィル、塩酸ジフェノキシレート若しくは硫酸アトロピン、ロペラミド、酢酸オクトレオチド、アヘンチンキ、アヘンチンキ（カンファー入り（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅｄ））から選択される最低１種であり得る。最低１種の緩下剤は、ビサコジル、カルシウムポリカルボフィル、カスカラサグラダ、カスカラサグラダ芳香流エキス、カ
スカラサグラダ流エキス、ヒマシ油、ドキュセートカルシウム、ドキュセートナトリウム、グリセリン、ラクツロース、クエン酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メチルセルロース、鉱物油、ポリエチレングリコール若しくは電解質溶液、オオバコ、センナ、リン酸ナトリウムから選択される最低１種であり得る。最低１種の制吐剤は、塩酸クロルプロマジン、ジメンヒドリナート、メシル酸ドラセトロン、ドロナビノール、塩酸グラニセトロン、塩酸メクリジン、塩酸メトクロプロアミド、塩酸オンダンセトロン、ペルフェナジン、プロクロルペラジン、エジシル酸プロクロルペラジン、マレイン酸プロクロルペラジン、塩酸プロメタジン、スコポラミン、マレイン酸チエチルペラジン、塩酸トリメトベンズアミドから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗潰瘍薬は、シメチジン、塩酸シメチジン、ファモチジン、ランソプラゾール、ミソプロストール、ニザチジン、オメプラゾール、ラベプラゾールナトリウム、ランチジンクエン酸ビスマス、塩酸ラニチジン、スクラルファートから選択される最低１種であり得る。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．６４３〜９５を参照されたい。）
【０１１５】
最低１種のコルチコステロイドは、ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾン若しくはリン酸ベタメタゾンナトリウム、リン酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸コルチゾン、デキサメサゾン、酢酸デキサメサゾン、リン酸デキサメサゾンナトリウム、酢酸フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、シピオン酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、テブト酸プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、酢酸トリアムシノロンから選択される最低１種であり得る。最低１種のアンドロゲン若しくは蛋白同化ステロイドは、ダナゾール、フルオキシメステロン、メチルテストステロン、デカン酸ナンドロロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、テストステロン、シピオン酸テストステロン、エナント酸テストステロン、プロピオン酸テストステロン、テストステロン経皮系から選択される最低１種であり得る。最低１種のエストロゲン若しくはプロゲスチンは、エステル化エストロゲン、エストラジオール、シピオン酸エストラジオール、エストラジオール／ノルエチンドロン酢酸塩経皮系、吉草酸エストラジオール、エストロゲン（抱合）、エストロピペート、エチニルエストラジオール、エチニルエストラジオールおよびデソゲストレル、エチニルエストラジオールおよび酢酸エチノジオール、エチニルエストラジオールおよびデソゲストレル、エチニルエストラジオールおよび酢酸エチノジオール、エチニルエストラジオールおよびレボノルゲストレル、エチニルエストラジオールおよびノルエチンドロン、エチニルエストラジオールおよび酢酸ノルエチンドロン、エチニルエストラジオールおよびノルゲスチメート、エチニルエストラジオールおよびノルゲストレル、エチニルエストラジオールおよびノルエチンドロンならびに酢酸およびフマル酸鉄、レボノルゲストレル、酢酸メドロキシプロゲステロン、メストラノールおよびノルエチンドロン、ノルエチンドロン、酢酸ノルエチンドロン、ノルゲストレル、プロゲステロンから選択される最低１種であり得る。最低１種のゴナドロプトロピンは、酢酸ガニレリックス、酢酸ゴナドレリン、酢酸ヒストレリン、メノトロピンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗糖尿病薬若しくはグルカオンは、アカルボース、クロルプロパミド、グリメピリド、グリピジド、グルカゴン、グリブリド、インスリン、塩酸メトフォルミン、ミグリトール、塩酸ピオグリタゾン、レパグリニド、マレイン酸ロシグリタゾン、トログリタゾンから選択される最低１種であり得る。最低１種の甲状腺ホルモンは、レボチロキシンナトリウム、リオチロニンナトリウム、リオトリックス、甲状腺製剤（ｔｈｙｒｏｉｄ）から選択される最低１種であり得る。最低１種の甲状腺ホルモンアンタゴニストは、メチマゾール、ヨウ化カリウム、ヨウ化カリウム（飽和溶液）、プロピルチオウラシル、放射活性ヨウ素（ヨウ化ナトリウム１３１Ｉ）、濃ヨウ素溶液（ｓｔｒｏｎｇ  ｉｏｄｉｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏ��）から選択される最低１種であり得る。最低１種の下垂体ホルモンは、コ
ルチコトロピン、コシントロピン、酢酸デスモフレシン、酢酸リュープロリド、持続性コルチコトロピン、ソマトレム、ソマトロピン、バソプレシンから選択される最低１種であり得る。最低１種の副甲状腺様薬物は、カルシフェジオール、カルシトニン（ヒト）、カルシトニン（サケ）、カルシトリオール、ジヒドロタキステロール、エチドロン酸ナトリウムから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．６９６〜７９６を参照されたい。）
【０１１６】
最低１種の利尿薬は、アセタゾラミド、アセタゾラミドナトリウム、塩酸アミロリド、ブメタニド、クロルタリドン、エタクリン酸ナトリウム、エタクリン酸、フロセミド、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、マンニトール、メトラゾン、スピロノラクトン、トルセミド、トリアムテレン、尿素から選択される最低１種であり得る。最低１種の電解質若しくは補充液は、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオナートカルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、リン酸カルシウム（第二）、リン酸カルシウム（第三）、デキストラン（高分子量）、デキストラン（低分子量）、ヘタスターチ、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸カリウム、炭酸水素カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、リンゲル液、リンゲル液（乳酸加）、塩化ナトリウムから選択される最低１種であり得る。最低１種の酸性化剤若しくはアルカリ性化剤は、炭酸水素ナトリウム、乳酸ナトリウム、トロメタミンから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．７９７〜８３３を参照されたい。）
【０１１７】
最低１種の造血剤は、フマル酸鉄、グルコン酸鉄、硫酸鉄、硫酸鉄（乾燥）、鉄デキストラン、鉄ソルビトール、多糖−鉄複合体、グルコン酸第二鉄ナトリウム複合体から選択される最低１種であり得る。最低１種の抗凝固薬は、アルデパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム、ダナパロイドナトリウム、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンカルシウム、ヘパリンナトリウム、ワルファリンナトリウムから選択される最低１種であり得る。最低１種の血液誘導体は、アルブミン５％、アルブミン２５％、抗血友病因子、抗阻害剤血液凝固薬（ａｎｔｉ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏａｇｕｌａｎｔ）複合体、アンチトロンビンＩＩＩ（ヒト）、第ＩＸ因子（ヒト）、第ＩＸ因子複合体、血漿タンパク質画分から選択される最低１種であり得る。最低１種の血栓溶解酵素は、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、レテプラーゼ（組換え）、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．８３４〜６６を参照されたい。）
【０１１８】
最低１種のアルキル化剤は、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、イホスファミド、ロムスチン、塩酸メクロレタミン、メルファラン、塩酸メルファラン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、チオテパから選択される最低１種であり得る。最低１種の代謝拮抗薬は、カペシタビン、クラドリビン、シタラビン、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、チオグアニンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗生物質性抗腫瘍薬は、硫酸ブレオマイシン、ダクチノマイシン、クエン酸ダウノルビシンリポソーム製剤、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム製剤、塩酸エピルビシン、塩酸イダルビシン、マイトマイシン、ペントスタチン、プリカマイシン、バルルビシンから選択される最低１種であり得る。ホルモンバランスを変える最低１種の抗腫瘍薬は、アナストロゾール、ビカルタミド、リン酸エストラムスチンナトリウム、エキセメスタン、フルタミド、酢酸ゴセレリン、レトロゾール、酢酸リュープロリド、酢酸メゲストロール、ニルタミド、クエン酸タモキシフェン、テストラクトン、クエン酸トレミフェンから選択される最低１種であり得る。最低１種の雑多な抗腫瘍薬は、アスパラギナーゼ、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）（生菌、膀胱内）、ダカルバジン、ドセタキセル、エトポ
シド、リン酸エトポシド、塩酸ゲムシタビン、塩酸イリノテカン、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、パクリタキセル、ペグアスパラガーゼ、ポルフィマーナトリウム、塩酸プロカルバジン、リツキシマブ、テニポシド、塩酸トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、酒石酸ビノレルビンから選択される最低１種であり得る。（例えばＮｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．８６７〜９６３を参照されたい。）
【０１１９】
最低１種の免疫抑制薬は、アザチオプリン、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ、リンパ球免疫グロブリン、ムロモマブ−ＣＤ３、ミコフェノール酸モフェチル、塩酸ミコフェノール酸モフェチル、シロリムス、タクロリムスから選択される最低１種であり得る。最低１種のワクチン若しくは類毒素は、ＢＣＧワクチン、コレラワクチン、ジフテリアおよび破傷風類毒素（吸着）、ジフテリアおよび破傷風類毒素ならびに無細胞百日咳ワクチン吸着、ジフテリアおよび破傷風類毒素ならびに全細胞百日咳ワクチン、血友病ｂ複合ワクチン、Ａ型肝炎ワクチン（不活化）、Ｂ型肝炎ワクチン（組換え）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９〜２０００年三価ＡおよびＢ型（精製表面抗原）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９〜２０００年三価ＡおよびＢ型（サブビリオン若しくは精製サブビリオン）、インフルエンザウイルスワクチン１９９９〜２０００年三価ＡおよびＢ型（全ビリオン）、日本脳炎ウイルスワクチン（不活化）、ライム病ワクチン（組換えＯｓｐＡ）、麻疹および流行性耳下腺炎および風疹ウイルスワクチン（生）、麻疹および流行性耳下腺炎および風疹ウイルスワクチン（生、弱毒化）、麻疹ウイルスワクチン（生、弱毒化）、髄膜炎菌多糖ワクチン、流行性耳下腺炎ウイルスワクチン（生）、ペストワクチン、肺炎球菌ワクチン（多価）、ポリオウイルスワクチン（不活化）、ポリオウイルスワクチン（生、経口、三価）、狂犬病ワクチン（吸着）、狂犬病ワクチン（ヒト二倍体細胞）、風疹および流行性耳下腺炎ウイルスワクチン（生）、風疹ウイルスワクチン（生、弱毒化）、破傷風類毒素（吸着）、破傷風類毒素（液体）、腸チフスワクチン（経口）、腸チフスワクチン（非経口）、腸チフスＶｉ多糖ワクチン、水痘ウイルスワクチン、黄熱病ワクチンから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗毒素若しくは抗蛇毒は、クロゴケグモ抗蛇毒、マムシ科（Ｃｒｏｔａｌｉｄａｅ）抗蛇毒（多価）、ジフテリア抗毒素（ウマ）、アメリカサンゴヘビ（Ｍｉｃｒｕｒｕｓ  ｆｕｌｖｉｕｓ）抗蛇毒から選択される最低１種であり得る）。最低１種の免疫血清は、サイトメガロウイルス免疫グロブリン（静脈内）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（ヒト）、免疫グロブリン筋肉内、免疫グロブリン静脈内、狂犬病免疫グロブリン（ヒト）、ＲＳウイルス免疫グロブリン静脈内（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン（ヒト）、Ｒｈ０（Ｄ）免疫グロブリン静脈内（ヒト）、破傷風免疫グロブリン（ヒト）、水痘・帯状ヘルペス免疫グロブリンから選択される最低１種であり得る。最低１種の生物学的応答調節物質は、アルデスロイキン、エポエチンα、フィルグラスチム、注射用酢酸グラチラマー、インターフェロンアルファコン−１、インターフェロンα−２ａ（組換え）、インターフェロンα−２ｂ（組換え）、インターフェロンβ−１ａ、インターフェロンβ−１ｂ（組換え）、インターフェロンγ−１ｂ、塩酸レバミソール、オプレルベキン、サルグラモスチムから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．９６４〜１０４０を参照されたい。）
【０１２０】
最低１種の眼の抗感染薬は、バシトラシン、クロラムフェニコール、塩酸シプロフロキサシン、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、オフロキサシン０．３％、硫酸ポリミキシンＢ、スルファセタミドナトリウム１０％、スルファセタミドナトリウム１５％、スルファセタミドナトリウム３０％、トブラマイシン、ビダラビンから選択され得る。最低１種の眼の抗炎症薬は、デキサメサゾン、リン酸デキサメサゾンナトリウム、ジクロフェナクナトリウム０．１％、フルオロメトロン、フルルビプロフェンナトリウム、ケトロラクトロメタミン、酢酸プレドニゾロン（懸濁液）リン酸プレドニゾロンナトリウム（溶液）から選択される最低１種であり得る。最低１種の縮瞳薬は、塩化アセチルコリン、カル
バコール（眼内）、カルバコール（局所）、ヨウ化エコチオファート、ピロカルピン、塩酸ピロカルピン、硝酸ピロカルピンから選択される最低１種であり得る。最低１種の散瞳薬は、硫酸アトロピン、塩酸シクロペントラート、塩酸エピネフリン、ホウ酸エピネフリル、臭化水素酸ホマトロピン、塩酸フェニレフリン、臭化水素酸スコポラミン、トロピカミドから選択される最低１種であり得る。最低１種の眼血管収縮薬は、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリンから選択される最低１種であり得る。最低１種の雑多な眼科用薬は、塩酸アプラクロニジン、塩酸ベタキソロール、酒石酸ブリモニジン、塩酸カルテオロール、塩酸ジピベフリン、塩酸ドルゾラミド、フマル酸エメダスチン、フルオレセインナトリウム、フマル酸ケトチフェン、ラタノプロスト、塩酸レボブノロール、塩酸メチプラノロール、塩化ナトリウム（高張）、マレイン酸チモロールから選択される最低１種であり得る。最低１種の耳用薬は、ホウ酸、過酸化カルバミド、クロラムフェニコール、オレイン酸トリエタノールアミンポリペプチド縮合物（ｔｒｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｅａｔｅ−ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅ）から選択される最低１種であり得る。最低１種の鼻用薬は、プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、硫酸エフェドリン、塩酸エピネフリン、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸フェニレフリン、塩酸テトラヒドロゾリン、トリアムシノロンアセトニド、塩酸キシロメタゾリンから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．１０４１−９７を参照されたい。）
【０１２１】
最低１種の局所抗感染薬は、アシクロビル、アムホテリシンＢ、アゼライン酸クリーム、バシトラシン、硝酸ブトコナゾール、リン酸クリンダマイシン、クロトリマゾール、硝酸エコナゾール、エリスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、ケトコナゾール、酢酸マフェ二ド、メトロニダゾール（局所）、硝酸ミコナゾール、ムピロシン、塩酸ナフチフィン、硫酸ネオマイシン、ニトロフラゾン、ナイスタチン、スルファジアジン銀、塩酸テルビナフィン、テルコナゾール、塩酸テトラサイクリン、チオコナゾール、トルナフテートから選択される最低１種であり得る。最低１種の抗疥癬薬若しくは殺シラミ薬は、クロタミトン、リンダン、ペルメトリン、ピレトリンから選択される最低１種であり得る。最低１種の局所コルチコステロイドは、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメサゾン、リン酸デキサメサゾンナトリウム、酢酸ジフロラゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルランドレノリド、プロピオン酸フルチカゾン、ハルシオニド、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フロ酸モメタゾン、トリアムシノロンアセトニドから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．１０９８〜１１３６を参照されたい。）
【０１２２】
最低１種のビタミン若しくはミネラルは、ビタミンＡ、ビタミンＢ群、シアノコバラミン、葉酸、ヒドロキソコバラミン、ロイコボリンカルシウム、ナイアシン、ナイアシンアミド、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、塩酸チアミン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、ビタミンＤアナログ、ドキセルカルシフェロール、パリカルシトール、ビタミンＥ、ビタミンＫアナログ、フィトナジオン、フッ化ナトリウム、フッ化ナトリウム（局所）、微量元素、クロム、銅、ヨウ素、マンガン、セレン、亜鉛から選択される最低１種であり得る。最低１種の熱素は、アミノ酸輸液（結晶）、ブドウ糖中アミノ酸輸液、電解質を含むアミノ酸輸液、ブドウ糖中電解質を含むアミノ酸輸液、肝不全のためのアミノ酸輸液、高代謝性侵襲のためのアミノ酸輸液、腎不全のためのアミノ酸輸液、ブドウ糖、脂肪乳剤、中鎖トリグリセリドから選択される最低１種であり得る。（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ  ２００１  Ｄｒｕｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋのｐｐ．１１３７〜６３を参照されたい。）
【０１２３】
製剤
上に示されたとおり、本発明は、製薬学的に許容できる製剤中に最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを含んでなる、製薬学的若しくは家畜の使用に適する生理的食塩水若しくは選ばれた塩を含む好ましくはリン酸緩衝液である安定な製剤、ならびに、保存剤を含有する保存される溶液および製剤ならびに多回使用の保存される製剤を提供する。保存される製剤は、水性希釈剤中に、最低１種の既知の若しくは最低１種のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールよりなる群から場合によっては選択される保存剤、またはそれらの混合物を含有する。限定されるものでないが０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９またはその中のいずれかの範囲若しくは値を挙げることができる０．００１〜５％またはその中のいずれかの範囲若しくは値のような当該技術分野で既知のところのいかなる適する濃度若しくは混合物も使用し得る。制限しない例は、保存剤なし、０．１〜２％ｍ−クレゾール（例えば０．２、０．３．０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば０．５、０．９、１．１．、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン（１種若しくは複数）（例えば０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などを包含する。
【０１２４】
上に示されたとおり、本発明は、包装資材、ならびに場合によっては水性希釈剤中の処方された緩衝剤および／若しくは保存剤とともに最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３
Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの溶液を含んでなる最低１本のバイアルを含んでなる製品を提供し、前記包装資材は、こうした溶液を１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間若しくはそれ以上にわたり保持し得ることを示すラベルを含んでなる。本発明はさらに、包装資材、凍結乾燥した最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを含んでなる第一のバイアル、および処方された緩衝剤若しくは保存剤の水性希釈剤を含んでなる第二のバイアルを含んでなる製品を含んでなり、前記包装資材は、該最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを水性希釈剤中で再構成して２４時間若しくはそれ以上にわたり保持し得る溶液を形成することを患者に指図するラベルを含んでなる。
【０１２５】
本発明で使用される最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、本明細書に記述されるか若しくは当該技術分野で既知であるとおり、哺乳動物細胞若しくはトランスジェニックの調製物からを包含する組換え手段により製造し得るか、または他の生物学的供給源から精製し得る。
【０１２６】
本発明の生成物中の最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質また
は指定される部分若しくはバリアントの範囲は、再構成に際して生じる量、すなわち湿潤／乾燥系での場合は約１．０μｇ／ｍｌから約１０００ｍｇ／ｍｌまでの濃度を包含するとは言え、より低いおよびより高い濃度が操作可能であり、そして意図される送達ベヒクルに依存し、例えば、溶液製剤は、経皮貼付剤、肺、経粘膜、または浸透圧若しくはマイクロポンプ法と異なることができる。
【０１２７】
好ましくは、水性希釈剤は製薬学的に許容できる保存剤を場合によってはさらに含んでなる。好ましい保存剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール若しくはそれらの混合物よりなる群から選択されるものを包含する。製剤中で使用される保存剤の濃度は抗菌効果を生じるのに十分な濃度である。こうした濃度は選択した保存剤に依存し、そして当業者により容易に決定される。
【０１２８】
他の賦形剤、例えば等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、保存増強剤を場合によってはかつ好ましくは希釈剤に添加し得る。グリセリンのような等張剤は一般に既知濃度で使用する。生理学的に耐えられる緩衝剤を、好ましくは改良されたｐＨ制御を提供するために添加する。製剤は、約ｐＨ４から約ｐＨ１０までのような広範囲のｐＨ、および約ｐＨ５から約ｐＨ９までの好ましい範囲、および約６．０ないし約８．０の最も好ましい範囲を包括し得る。好ましくは本発明の製剤は約６．８と約７．８の間のｐＨを有する。好ましい緩衝剤はリン酸緩衝液、最も好ましくはリン酸ナトリウム、とりわけリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）を包含する。
【０１２９】
Ｔｗｅｅｎ  ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ  ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のような製薬学的に許容できる可溶化剤、あるいはポリソルベート２０若しくは８０またはポロキサマー１８４若しくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ(R)ポリル（ｐｏｌｙｌ）、他のブロックコポリマーのような非イオン性界面活性剤、ならびにＥＤＴＡおよびＥＧＴＡのようなキレート剤のような他の添加物を、凝集を低下させるために該製剤若しくは組成物に場合によっては添加し得る。これらの添加物は、ポンプ若しくはプラスチック容器を使用して製剤を投与する場合にとりわけ有用である。製薬学的に許容できる界面活性剤の存在はタンパク質が凝集する傾向を緩和する。
【０１３０】
本発明の製剤は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント、ならびにフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールよりなる群から選択される保存剤若しくはそれらの混合物を水性希釈剤中で混合することを含んでなる方法により製造し得る。最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントおよび保存剤を水性希釈剤中で混合することは、慣習的溶解および混合手順を使用して実施する。適する製剤を製造するため、例えば、緩衝溶液中の測定された量の最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを、所望の濃度のタンパク質および保存剤を提供するのに十分な量の緩衝溶液中で所望の保存剤と組み合わせる。この方法の変形が当業者により認識されるであろう。例えば、成分を添加する順序、付加的な添加物を使用するかどうか、製剤を製造する温度およびｐＨは全部、使用される濃度および投与手段について最適化しうる因子である。
【０１３１】
特許請求される製剤は、澄明な溶液として、あるいは、水性希釈剤中に水、保存剤ならびに／または賦形剤、好ましくはリン酸緩衝液および／若しくは生理的食塩水ならびに選ばれた塩を含有する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥した最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのバイアルを含んでなる２本のバイアルとして、患者に提供し得る。単一の溶液バイアル若しくは再構成を必要とする２本のバイアルのいずれも複数回再使用し得、かつ、単一若しくは複数周期の患者処置に十分であり得、そして従って現在利用可能よりも便宜的な処置レジメンを提供し得る。
【０１３２】
本特許請求される製品は、即座ないし２４時間若しくはそれ以上にわたり投与に有用である。従って現在特許請求される製品は患者に大きな利点を提供する。本発明の製剤は、場合によっては約２から約４０℃までの温度で安全に保存し得かつタンパク質の生物学的活性を長期間保持し得、従って、６、１２、１８、２４、３６、４８、７２若しくは９６時間またはそれ以上にわたり該溶液を保持かつ／若しくは使用し得ることを示す包装ラベルを可能にする。保存される希釈剤を使用する場合、こうしたラベルは１〜１２か月、半年、１年半および／若しくは２年までの使用を包含し得る。
【０１３３】
本発明の最低１種のＬＩ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの溶液は、最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを水性希釈剤中で混合することを含んでなる方法により製造し得る。混合することは慣習的溶解および混合手順を使用して実施する。適する希釈剤を製造するため、例えば、水若しくは緩衝液中の測定された量の最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを、所望の濃度のタンパク質および場合によっては保存剤若しくは希釈剤を提供するのに十分な量で組み合わせる。この方法の変形が当業者により認識されるであろう。例えば、成分を添加する順序、付加的な添加物を使用するかどうか、製剤を製造する温度およびｐＨは全部、使用される濃度および投与手段について最適化しうる因子である。
【０１３４】
特許請求される製品は、澄明な溶液として、あるいは、水性希釈剤を含有する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥した最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのバイアルを含んでなる２本のバイアルとして、患者に提供し得る。単一の溶液バイアル若しくは再構成を必要とする２本のバイアルのいずれも複数回再使用し得、かつ、単一若しくは複数周期の患者処置に十分であり得、そして従って現在利用可能よりも便宜的な処置レジメンを提供する。
【０１３５】
特許請求される製品は、澄明な溶液、あるいは、水性希釈剤を含有する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥した最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのバイアルを含んでなる２本のバイアルを薬局、診察室若しくは他のこうした施設（ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）および施設（ｆａｃｉｌｉｔｙ）に提供することにより患者に間接的に提供し得る。この場合の澄明な溶液は大きさが１リットルまで若しくはより大きくさえあり得、最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの溶液のより小さい部分をより小さいバイアルへの移動のため薬局若しくは診察室により１回若しくは複数回取り出し得かつそれらの顧客および／若しくは患者に提供し得る大型のリザーバを提供する。
【０１３６】
これらの単一バイアル系を含んでなる認識されるデバイスは、例えばＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（ニュージャージー州フランクリンレイクス、ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）、Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（スイス・ブルクドルフ、ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；Ｂｉｏｊｅｃｔ、オレゴン州ポートランド（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗｅ
ｓｔｏｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ（英国ピータースボロ、ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ）、Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ  Ｃｏｒｐ（ミネソタ州ミネアポリス、ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）により作成若しくは開発されたところの、ＢＤ  Ｐｅｎ、ＢＤ  Ａｕｔｏｊｅｃｔｏｒ(R)、Ｈｕｍａｊｅｃｔ(R)、ＮｏｖｏＰｅｎ(R)、Ｂ−Ｄ(R)Ｐｅｎ、ＡｕｔｏＰｅｎ(R)、およびＯｐｔｉＰｅｎ(R)、ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎ(R)、Ｇｅｎｏｔｒｏｎｏｒｍ  Ｐｅｎ(R)、Ｈｕｍａｔｒｏ  Ｐｅｎ(R)、Ｒｅｃｏ−Ｐｅｎ(R)、Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ｐｅｎ(R)、Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ(R)、Ｉｊｅｃｔ(R)、Ｊ−ｔｉｐ  Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒ(R)、Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ(R)、Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ(R)のような溶液の送達のためのペン型注入器デバイスを包含する。二本のバイアルの系を含んでなる認識されるデバイスは、ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ(R)のような、再構成した溶液の送達のために、凍結乾燥した薬物をカートリッジ中で再構成するためのペン型注入器デバイスを包含する。
【０１３７】
現在特許請求される製品は包装資材を包含する。包装資材は、規制当局により必要とされる情報に加え該製品を使用し得る条件を提供する。本発明の包装資材は、２本のバイアルすなわち湿潤／乾燥製品について、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを水性希釈剤中で再構成して溶液を形成しかつ該溶液を２〜２４時間若しくはそれ以上にわたり使用するための患者に対する説明書を提供する。単一バイアルの溶液製品について、ラベルはこうした溶液を２〜２４時間若しくはそれ以上にわたり使用し得ることを示す。現在特許請求される製品はヒトの製薬学的製品の使用に有用である。
【０１３８】
本発明の製剤は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントおよび選択された緩衝液、好ましくは生理的食塩水若しくは選ばれた塩を含有するリン酸緩衝液を混合することを含んでなる方法により製造し得る。最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントおよび緩衝剤を水性希釈剤中で混合することは、慣習的な溶解および混合手順を使用して実施する。適する製剤を製造するため、例えば、水若しくは緩衝液中の測定された量の最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを、所望の濃度のタンパク質および緩衝剤を提供するのに十分な量の水中の所望の緩衝剤と組み合わせる。この方法の変形が当業者により認識されるであろう。例えば、成分を添加する順序、付加的な添加物を使用するかどうか、製剤を製造する温度およびｐＨは全部、使用される濃度および投与手段について最適化し得る因子である。
【０１３９】
特許請求される安定なすなわち保存される製剤は、澄明な溶液として、あるいは、水性希釈剤中に保存剤若しくは緩衝液および賦形剤を含有する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥した最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのバイアルを含んでなる２本のバイアルとして、患者に提供し得る。単一の溶液バイアル若しくは再構成を必要とする２本のバイアルのいずれも複数回再使用し得、かつ、単一若しくは複数周期の患者処置に十分であり得、そして従って現在利用可能よりも便宜的な処置レジメンを提供する。
【０１４０】
本明細書に記述される安定なすなわち保存される製剤若しくは溶液のいずれか中の最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、当該技術分野で公知のところの、ＳＣ若しくはＩＭ注入；経皮、肺、経粘膜、植込物、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプまたは当業者により認識される他の手段を包含する多様な送達方法を介して本発明により患者に投与し得る。
【０１４１】
治療的応用
本発明はまた、限定されるものでないが間質性肺疾患、強皮症、肝線維症、腎線維症、
サルコイドーシス、肥厚性瘢痕、ケロイド瘢痕、心線維症、加齢黄斑変性若しくはコラーゲン血管疾患などの最低１種を挙げることができる、細胞、組織、器官、動物若しくは患者における最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症関連状態若しくは病状の調節若しくは処置方法も提供する。例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、第１２〜１７版、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ、ニュージャージー州ローウェー（１９７２、１９７７、１９８２、１９８７、１９９２、１９９９）、Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｗｅｌｌｓら編、第２版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ、コネチカット州スタンフォード（１９９８、２０００）（それぞれ引用することによりそっくりそのまま組み込まれる）を参照されたい。
【０１４２】
大多数の創傷は修復により治癒し、形成される新たな組織が元の組織と構造的および化学的に似ていない（瘢痕組織）ことを意味している。組織修復の早期段階で、ほとんど必ず関与する一過程は組織傷害の領域での一過性結合組織の形成である。この過程は線維芽細胞による新たな細胞外コラーゲンマトリックスの形成により開始する。この新たな細胞外コラーゲンマトリックスがその後、最終の治癒過程の間に結合組織の支持体となる。最終治癒は、大部分の組織において結合組織を含有する瘢痕形成である。例えば皮膚および骨のような再生特性を有する組織中では、最終治癒は元の組織の再生を包含する。この再生組織はいくつかの瘢痕の特徴、例えば治癒された骨折の肥厚もまた頻繁に有する。
【０１４３】
創傷治癒の段階は通常炎症（通常１〜３日）、移動（通常１〜６日）、増殖（通常３〜２４日）および成熟（通常１〜１２か月）を包含する。治癒過程は、多様な細胞型の移動、増殖および分化、ならびにマトリックス成分の合成を必要とする、複雑ならびに十分に調整される生理学的過程である。治癒過程は以下の３期に分離しうる。
【０１４４】
ｉ）止血および炎症  血小板が循環系の外側に存在しかつトロンビンおよびコラーゲンに曝露される場合に、それらは活性化されたようになりかつそれらは凝集する。従って、血小板は、凝集しかつ一過性の栓を形成することにより修復過程を開始して止血を確保しかつ細菌からの侵入を予防する。活性化された血小板は凝固系を開始し、そして血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）および表皮増殖因子（ＥＧＦ）およびトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）のような増殖因子を放出する。創傷領域に侵入する最初の細胞は好中球、次いでマクロファージにより活性化される単球である。
【０１４５】
好中球の主要な役割は、汚染する細菌を創傷から一掃若しくはそれに対し創傷を防御していること、ならびに死細胞および血小板を除去することにより創傷の治癒を向上させることのようである。好中球の浸潤は最初の約４８時間以内に終わるが、但し細菌汚染が創傷中に存在しない。過剰の好中球は、血液に運ばれる単球の循環プールから動員される組織マクロファージにより食作用される。マクロファージは、それらが病原性生物体の食作用および組織破片の除去の原因でもまたあるために効率的な創傷治癒に不可欠であると考えられる。さらに、それらは治癒過程の後の事象に関与する多数の因子を放出する。マクロファージはコラーゲンの産生を開始する線維芽細胞を誘引する。
【０１４６】
ｉｉ）肉芽組織形成および再上皮化  創傷後４８時間以内に線維芽細胞が創傷縁で増殖しかつ結合組織から創傷空間に移動することを開始する。線維芽細胞はコラーゲンおよびグリコサミノグリカンを産生し、ならびにとりわけ創傷での低酸素分圧は内皮細胞の増殖を刺激する。内皮細胞は新たな毛細管ネットワークの形成を生じさせる。
【０１４７】
コラゲナーゼおよびプラスミノーゲンアクチベーターがケラチノサイトから分泌される。創傷が破壊されずかつ酸素および栄養素を十分に与えられて残される場合、ケラチノサイトは創傷の上を移動することができる。ケラチノサイトは生存可能組織の上を移動するとのみ考えられ、そして従ってケラチノサイトは死組織および創傷の表面の下の領域に移
動する。創傷領域は収縮によりさらに減少される。
【０１４８】
ｉｉｉ）皮膚リモデリング  再上皮化が完了するや否や組織のリモデリングが開始する。数年間持続するこの期は創傷された組織に強度を復帰させる。
【０１４９】
上述された治癒過程の全部はかなりの時間がかかる。治癒の速度は創傷の無感染、個体の全身的健康状態、異物の存在などにより影響される。感染、組織解離、脱水、全身性に不良な健康状態および栄養不良のようないくつかの病理学的条件が、例えば虚血性潰瘍のような慢性潰瘍の形成につながり得る。少なくとも表層的治癒が起こるまで、創傷は継続的若しくは新たな感染の危険にさらされたままである。従って、創傷が迅速に治癒し得るほど該危険は迅速に除去される。従って、創傷治癒の速度に影響し得る若しくは創傷の治癒に好都合に影響し得るいかなる処置も非常に価値がある。さらに、ほぼ全部の組織修復過程が早期の結合組織形成を包含するため、これおよびその後の過程の刺激が組織治癒を向上させるために企図される。
【０１５０】
本状況で「臨床的治癒」という用語は、組織中断を視覚的に観察し得ずかつ軽度の発赤若しくは不連続的に腫脹した組織のような炎症の別個の徴候のみが存在する状況を示すのに使用する。加えて、器官が弛緩している若しくは触れられない場合は疼痛の訴えが存在しない。
【０１５１】
上で挙げられたとおり、本発明は、創傷治癒剤、すなわち皮膚若しくは粘膜創傷の治癒を加速、刺激若しくは促進する剤としてのエナメル基質、エナメル基質誘導体および／若しくはエナメル基質タンパク質の使用に関する。従って、重要な一使用はまた組織再生および／若しくは修復剤としての使用でもある。さらに、創傷治癒効果により、エナメル基質、エナメル基質誘導体および／若しくはエナメル基質タンパク質は鎮痛効果を有する。
【０１５２】
こうした方法は、場合によっては、こうした調節、処置若しくは治療の必要な細胞、組織、器官、動物若しくは患者に最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを含んでなる最低１種の組成物若しくは製薬学的組成物の有効量を投与することを含み得る。
【０１５３】
治療的処置。本発明のいずれの方法も、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを含んでなる組成物若しくは製薬学的組成物の有効量をこうした調節、処置若しくは治療の必要な細胞、組織、器官、動物若しくは患者に投与することを含んでなる、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３線維症媒介性の障害の処置方法を含み得る。
【０１５４】
典型的には、病理学的状態の処置は、組成物に含有されるの比活性に依存して、合計で平均して用量あたり患者１キログラムあたり最低約０．０１から５００ミリグラムまでの最低１種のＩＬ−若しくはＩＬ−１３Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント、および好ましくは単回若しくは複数回投与あたり患者１キログラムあたり最低約０．１から１００ミリグラムまでのＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの範囲になる最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ関連タンパク質組成物の有効量若しくは投薬量を投与することにより遂げられる。あるいは、有効血清濃度は単回若しくは複数回投与あたり０．１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を含み得る。適する投薬量は医学実務者に既知であり、そしてもちろん特定の疾患状態、投与されている組成物の比活性および処置を受ける特定の患者に依存することができる。いくつかの例において、所望の治療量を達成するために、反復投与、すなわち所望の毎日の用量若しくは効果が達成されるまで個々の投与を反復する特定のモニター若しくは計測された用量の反復個別投与を提供することが必要であり得る。
【０１５５】
好ましい用量は、場合によっては、投与あたり０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／若しくは１００ｍｇ／ｋｇまたはそのいずれかの範囲、値若しくは画分を、あるいは、単回若しくは複数回投与あたり０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５．、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００および／若しくは５０００μｇ／ｍｌの血清濃度またはそのいずれかの範囲、値若しくは画分の血清濃度を達成するように包含し得る。
【０１５６】
あるいは、投与される投薬量は、特定の剤の薬動力学的特徴ならびにその投与様式および経路；受領者の齢、健康状態および重量；症状の性質および程度、付随する処置の種類、処置の頻度、ならびに所望の効果のような既知の因子に依存して変動し得る。通常、有効成分の投薬量は体重１キログラムあたり約０．１ないし１００ミリグラムであり得る。投与あたり若しくは除放性の形態で１キログラムあたり通常０．１ないし５０、および好ましくは０．１ないし１０ミリグラムが所望の結果を得るのに有効である。
【０１５７】
制限しない一例として、ヒト若しくは動物の処置は、単一、注入、若しくは反復用量を使用して、第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９若しくは４０日の最低１つ、または、あるいは若しくは付加的に、第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１若しくは５２週の最低１つ、または、あるいは若しくは付加的に１、２、３、４、５、６、、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０年の最低１つ、あるいはそれらのいずれかの組合せに、本発明の最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの一時若しくは定期的投薬量として１日あたり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０
、６０、７０、８０、９０若しくは１００ｍｇ／ｋｇのような０．１ないし１００ｍｇ／ｋｇを提供し得る。
【０１５８】
内的投与に適する投薬形態物（組成物）は、一般に単位若しくは容器あたり約０．１ミリグラムから約５００ミリグラムまでの有効成分を含有する。これらの製薬学的組成物中で、有効成分は通常、組成物の総重量に基づき約０．５〜９９．９９９重量％の量で存在することができる。
【０１５９】
非経口投与のためには、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを、製薬学的に許容できる非経口ベヒクルとともに溶液、懸濁剤、乳剤若しくは凍結乾燥粉末として処方し得るかまたは個別に提供し得る。こうしたベヒクルの例は水、生理的食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶液および１〜１０％ヒト血清アルブミンである。リポソーム、および不揮発性油のような非水性ベヒクルもまた使用しうる。ベヒクル若しくは凍結乾燥粉末は、等張性（例えば塩化ナトリウム、マンニトール）ならびに化学的安定性（例えば緩衝剤および保存剤）を維持する添加物を含有しうる。該製剤は既知の若しくは適する技術により滅菌する。
【０１６０】
適する製薬学的担体は、この分野の標準的参照教科書、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａ．Ｏｓｏｌの最新版に記述されている。
【０１６１】
代替投与
製薬学的有効量の本発明の最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを投与するのに、多くの既知のおよび開発されたの様式を本発明により使用し得る。肺投与を以下の記述で使用する一方、他の投与様式を適する結果を伴い、本発明に従って使用し得る。
【０１６２】
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質は、吸入またはこの中に（ｈｅｒｅ  ｗｉｔｈｉｎ）記述されるか若しくは当該技術分野で既知の他の様式による投与に適する多様なデバイスおよび方法のいずれかを使用して、担体中で溶液、乳剤、コロイド若しくは懸濁剤としてまたは粉末として送達し得る。
【０１６３】
非経口製剤および投与
非経口投与のための製剤は、共通の賦形剤として滅菌水若しくは生理的食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレンなどを含有し得る。注入のための水性若しくは油性懸濁剤は、既知の方法に従って適切な乳化剤若しくは湿潤剤および懸濁化剤を使用することにより製造し得る。注入のための剤は、水性溶液または溶媒中の無菌の注入可能な溶液若しくは懸濁液のような非毒性の経口で投与可能でない希釈剤であり得る。使用可能なベヒクル若しくは溶媒として、水、リンゲル液、等張食塩水などが許容され；通常の溶媒若しくは懸濁化溶媒として無菌の不揮発性油を使用し得る。これらの目的上、天然のまたは合成若しくは半合成の脂肪油若しくは脂肪酸；天然のまたは合成若しくは半合成のモノ若しくはジ若しくはトリグリセリドを包含するいかなる種類の不揮発性油および脂肪酸も使用し得る。非経口投与は当該技術分野で既知であり、そして、限定されるものでないが慣習的注入手段、米国特許第５，８５１，１９８号明細書に記述されるところのガス加圧式無針注入デバイス、および米国特許第５，８３９，４４６号明細書（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）に記述されるところのレーザー穿孔器デバイスを挙げることができる。
【０１６４】
代替送達
本発明はさらに、最低１種のＬＩ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または
指定される部分若しくはバリアントの非経口、皮下、筋肉内、静脈内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻内若しくは経皮手段による投与に関する。抗ＬＩ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分またはバリアントの組成物は、非経口（皮下、筋肉内若しくは静脈内）投与のためとりわけ液体の溶液若しくは懸濁液の形態で；膣若しくは直腸投与での使用のためとりわけクリーム剤および坐剤のような半固形の形態で；頬側若しくは舌下投与のためとりわけ錠剤若しくはカプセル剤の形態で；あるいはとりわけ粉末、点鼻薬若しくはエアゾルまたはある種の剤の形態で鼻内で；あるいは、皮膚構造を改変するか若しくは経皮貼付剤中の薬物濃度を増大させるかのいずれかのためのジメチルスルホキシドのような化学的増強剤を含む（“Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ”；Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．編中Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒら、ｐｐ．５９−９０（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．ニューヨーク  １９９４（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）））か、あるいはタンパク質およびペプチドを含有する製剤の皮膚上への塗布（第ＷＯ  ９８／５３８４７号明細書）または電気穿孔のような一過性の輸送経路を創製するか若しくはイオントフォレーシスのような皮膚を通る荷電した薬物の移動性を増大させるための電場の適用、あるいはソノフォレーシスのような超音波の適用（米国特許第４，３０９，９８９号および同第４，７６７，４０２号明細書）（上の刊行物および特許は引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）を可能にする酸化剤を含む、とりわけゲル剤、軟膏剤、ローション剤、懸濁剤若しくは貼付剤送達系の形態で経皮での使用のため製造し得る。
【０１６５】
肺／鼻投与
肺投与のため、好ましくは最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物は、肺の下部気道若しくは洞（ｓｉｎｕｓｅｓ）に達するために有効な粒子径で送達される。本発明により、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントは、吸入による治療薬の投与のための当該技術分野で既知の多様な吸入若しくは鼻デバイスのいずれかにより送達し得る。患者の副鼻腔洞（ｓｉｎｕｓ  ｃａｖｉｔｙ）若しくは肺胞中でエアゾル化製剤を沈着させることが可能なこれらのデバイスは、定量噴霧式吸入器、ネブライザー、乾燥粉末発生デバイス、噴霧器などを包含する。Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの肺若しくは鼻投与を指図するのに適する他のデバイスもまた当該技術分野で既知である。全部のこうしたデバイスは、エアゾル中のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの分注のための投与に適する製剤の使用し得る。こうしたエアゾルは溶液（水性および非水性双方）若しくは固体粒子のいずれからも構成し得る。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ(R)定量噴霧式吸入器のような定量噴霧式吸入器は典型的に噴射剤ガスを使用し、そして吸気の間の起動を必要とする（例えば第ＷＯ  ９４／１６９７０号、同第ＷＯ  ９８／３５８８８号明細書を参照されたい）。Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより市販されているデバイス、ＴｕｒｂｕｈａｌｅｒＴＭ（Ａｓｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ(R)（Ｇｌａｘｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ(R)（Ｇｌａｘｏ）、ＳｐｉｒｏｓＴＭ吸入器（Ｄｕｒａ）のような乾燥粉末吸入器およびＳｐｉｎｈａｌｅｒ(R)粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）は混合粉末の呼吸起動を使用する（米国特許第ＵＳ  ４６６８２１８号  Ａｓｔｒａ、欧州特許第ＥＰ  ２３７５０７号  Ａｓｔｒａ、第ＷＯ  ９７／２５０８６号  Ｇｌａｘｏ、第ＷＯ  ９４／０８５５２号  Ｄｕｒａ、米国特許第ＵＳ  ５４５８１３５号  Ｉｎｈａｌｅ、第ＷＯ  ９４／０６４９８号  Ｆｉｓｏｎｓ（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる））。ＡＥＲｘＴＭ  Ａｒａｄｉｇｍ、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ(R)ネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）およびＡｃｏｒｎ  ＩＩ(R)ネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第ＵＳ  ５４０４８７１号  Ａｒａｄｉｇｍ、第ＷＯ  ９７／２２３７６号明細書）（上の参考文献は引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）のようなネブライザーは溶液からエアゾルを生じさせる一方、定量噴霧式吸入器、乾燥粉末吸入器などは小粒子エアゾルを生成させる。商業的に入手可能な吸
入デバイスのこれらの特定の例は本発明の実務に適する特定のデバイスの代表例であることを意図しており、そして本発明の範囲を制限するとして意図していない。好ましくは、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを含んでなる組成物は乾燥粉末吸入器若しくは噴霧器により送達される。本発明の最低１種のＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを投与するための吸入デバイスのいくつかの望ましい特徴が存在する。例えば、吸入デバイスによる送達は有利に信頼でき、再現可能かつ正確である。吸入デバイスは、場合によっては、良好な呼吸可能性のため小乾燥粒子、例えば約１０μｍ未満、好ましくは約１〜５μｍを送達し得る。
【０１６６】
ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物のスプレー剤としての投与
ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質を包含するスプレー剤は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの懸濁液若しくは溶液に加圧下にノズルを通させることにより生じさせ得る。ノズルの大きさおよび構成、適用される圧ならびに液体フィード速度は、所望の出力および粒子径を達成するように選ぶことができる。例えばキャピラリー若しくはノズルフィードとともにの電場により電気スプレーを生じさせ得る。有利には、噴霧器により送達される最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍないし約５μｍ、および最も好ましくは約２μｍないし約３μｍの範囲の粒子径を有する。
【０１６７】
噴霧器を用いる使用に適する最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の製剤は、典型的に、例えば．１、．２．、．３、．４、．５、．６、．７、．８、．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００ｍｇ／ｍｌ若しくはｍｇ／ｇｍを挙げることができる、溶液１ｍｌあたり約０．１ｍｇないし約１００ｍｇ若しくはｍｇ／ｇｍまたはその中のいずれかの範囲若しくは値の最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の濃度で水性溶液中にＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質を包含する。該製剤は賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存剤、界面活性剤および好ましくは亜鉛のような剤を包含し得る。該製剤はまた、緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質若しくは炭水化物のような、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の安定化のための賦形剤若しくは剤も包含し得る。Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の処方において有用なバルクタンパク質はアルブミン、プロタミンなどを包含する。Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の処方において有用な典型的な炭水化物は、ショ糖、マンニトール、乳糖、トレハロース、ブドウ糖などを包含する。Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の製剤はまた、エアゾルの形成における溶液の霧化により引き起こされるＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の表面誘発性凝集を低下若しくは予防し得る界面活性剤も包含し得る。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコールならびにポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルのような多様な慣習的界面活性剤を使用し得る。量は一般に製剤の０．００１と１４重量％の間の範囲にわたることができる。本発明の目的上とりわけ好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのようなタンパク質の製剤について当該
技術分野で既知の付加的な剤もまた製剤中に包含し得る。
【０１６８】
ネブライザーによるＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物の投与
Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質は、ジェットネブライザー若しくは超音波ネブライザーのようなネブライザーにより投与し得る。典型的には、ジェットネブライザー中では圧縮空気供給源を使用してオリフィスを通して高速空気ジェットを創製する。気体がノズルを超えて膨脹する際に低圧領域が創製され、それが液体リザーバに接続された毛細管を通してＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の溶液を引き出す。毛細管からの液体流はそれが管を出る際に不安定な糸状体および液滴に剪断されてエアゾルを創製する。ある範囲の構成、流速およびバッフル型を使用して所定のジェットネブライザーから所望の性能の特徴を達成し得る。超音波ネブライザーにおいては、高周波電気エネルギーを使用して、典型的には圧電トランスを使用して振動性の力学的エネルギーを創製する。このエネルギーが、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の製剤に直接若しくはカップリング液を通してのいずれかで伝播されて、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質を包含するエアゾルを創製する。有利には、ネブライザーにより送達されるＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍないし約５μｍ、および最も好ましくは約２μｍないし約３μｍの範囲の粒子径を有する。
【０１６９】
ジェット若しくは超音波いずれかのネブライザーを用いる使用に適する最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの製剤は、典型的には溶液１ｍｌあたり約０．１ｍｇないし約１００ｍｇの最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントタンパク質の濃度を包含する。該製剤は賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存剤、界面活性剤、および好ましくは亜鉛のような剤を包含し得る。該製剤はまた、緩衝剤、還元剤、バルクタンパク質若しくは炭水化物のような、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の安定化のための賦形剤若しくは剤も包含し得る。最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の処方において有用なバルクタンパク質はアルブミン、プロタミンなどを包含する。最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの処方において有用な典型的な炭水化物は、ショ糖、マンニトール、乳糖、トレハロース、ブドウ糖などを包含する。最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント製剤は、エアゾルの形成において溶液の霧化により引き起こされる最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの表面誘発性凝集を低下若しくは予防し得る界面活性剤もまた包含し得る。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコールならびにポリオキシエチレンソルビタル脂肪酸エステルのような多様な慣習的界面活性剤を使用し得る。量は一般に製剤の０．００１と４重量％の間の範囲にわたることができる。本発明の目的上とりわけ好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントタンパク質のようなタンパク質の製剤について当該技術分野で既知の付加的な剤もまた製剤中に包含し得る。
【０１７０】
定量噴霧式吸入器によるＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物の投与
定量噴霧式吸入器（ＭＤＩ）中では、噴射剤、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３
Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントおよびいずれかの賦形剤
若しくは他の添加物が、液化圧縮ガスを包含する混合物としてキャニスター中に含有される。計量バルブの起動が、好ましくは約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍないし約５μｍ、および最も好ましくは約２μｍないし約３μｍの大きさ範囲の粒子を含有するエアゾルとして該混合物を放出する。所望のエアゾル粒子径は、ジェットミル粉砕、噴霧乾燥、臨界点凝縮などを包含する当業者に既知の多様な方法により製造されるＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアント組成物タンパク質の製剤を使用することにより得ることができる。好ましい定量噴霧式吸入器は、３Ｍ若しくはＧｌａｘｏにより製造されかつハイドロフルオロカーボン噴射剤を使用するものを包含する。
【０１７１】
定量噴霧式吸入器デバイスを用いる使用のための最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの製剤は、一般に、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを例えば界面活性剤の助けを借りて噴射剤中に懸濁した非水性媒体中の懸濁液として含有する微粉を包含することができる。噴射剤は、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）などを包含するクロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン若しくは炭化水素のような本目的上使用されるいずれの慣習的物質でもあり得る。好ましくは噴射剤はヒドロフルオロカーボンである。界面活性剤は、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを噴射剤中の懸濁液として安定化させる、有効成分を化学的分解に対し保護する、などのために選ぶことができる。適する界面活性剤はソルビタントリオレエート、ダイズレシチン、オレイン酸などを包含する。いくつかの場合には、エタノールのような溶媒を使用する溶液エアゾルが好ましい。タンパク質のようなタンパク質の製剤について当該技術分野で既知の付加的な剤もまた該製剤に包含し得る。
【０１７２】
当業者は、本発明の方法を、本明細書に記述されないデバイスを介する最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの組成物の肺投与により達成し得ることを認識するであろう。
【０１７３】
経口製剤および投与
経口のための製剤は、腸壁の浸透性を人工的に増大させるための補助物質（例えばレゾルシノール、ならびにポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルのような非イオン性界面活性剤）の共投与、ならびに酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば膵トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロリン酸（ＤＦＦ）およびトラシロール）の共投与に頼る。経口投与のための固体型投薬形態物の有効構成成分は、ショ糖、乳糖、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギン酸塩、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成若しくは半合成のポリマーおよびグリセリドを包含する最低１種の添加物と混合し得る。これらの投薬形態物は他の型（１種若しくは複数）の添加物、例えば不活性希釈剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、パラベン、ソルビン酸、アスコルビン酸、α−トコフェロールのような保存剤、システインのような抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、着香料、香料などもまた含有し得る。
【０１７４】
錠剤および丸剤は腸溶コーティング製剤にさらに加工し得る。経口投与のための液体製剤は医学的使用に許容できる乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤および溶液製剤を包含する。これらの製剤は前記技術分野で通常使用される不活性希釈剤、例えば水を含有しうる。リポソームもまたインスリンおよびヘパリンの薬物送達系として記述されている（米国特許第４，２３９，７５４号明細書）。より最近、混合アミノ酸の人工的ポリマー（プロテイノイド）のミクロスフェアが医薬品を送達するために使用されている（米国特許第４，９２５，６７３号明細書）。さらに、米国特許第５，８７９，６８１号および同第５，５，８７１，７５３号明細書に記述される担体化合物が、生物学的有効成分を経口で送達するために使用されるが当該技術分野で既知である。
【０１７５】
粘膜製剤および投与
粘膜表面を通る吸収のため、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを投与する組成物および方法は、乳剤粒子の粘膜付着を達成することにより粘膜表面を通る吸収を促進する複数のサブミクロン粒子、粘膜付着性巨大分子、生物活性ペプチドおよび水性連続層を含んでなる乳剤を包含する（米国特許第５，５１４，６７０号明細書）。本発明の乳剤の適用に適する粘膜表面は、角膜、結膜、頬側、舌下、鼻、膣、肺、胃、腸および直腸の投与経路を包含し得る。膣若しくは直腸投与のための製剤例えば坐剤は、賦形剤として例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、カカオバターなどを含有し得る。鼻内投与のための製剤は固体であり得、そして賦形剤として例えば乳糖を含有し得るか、または点鼻薬の水性若しくは油性溶液であり得る。頬側投与のためには、賦形剤は糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、糊化済デンプンなどを包含する（米国特許第５，８４９，６９５号明細書）。
【０１７６】
経皮製剤および投与
経皮投与のためには、最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを、リポソームまたはポリマーナノ粒子、微小粒子、マイクロカプセル若しくはミクロスフェア（別の方法で述べられない限り集合的に微小粒子と称される）のような送達デバイス中に被包化する。ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそれらのコポリマーのようなポリヒドロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物ならびにポリホスファゼンのような合成ポリマー、ならびにコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質、アルギン酸塩ならびに他の多糖のような天然のポリマー、ならびにそれらの組合せから作成される微小粒子を包含する多数の適するデバイスが既知である（米国特許第５，８１４，５９９号明細書）。
【０１７７】
長時間投与および製剤
本発明の化合物を単一投与から長時間にわたり、例えば１週ないし１年間被験体に送達することがときに望ましいことがあり得る。多様な徐放、デポー若しくは植込投薬形態物を利用し得る。例えば、投薬形態物は、体液中で低い程度の溶解性を有する化合物の製薬学的に許容できる非毒性の塩、例えば（ａ）リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノ若しくはジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などのような多塩基性酸との酸付加塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどのような多価金属陽イオン、または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレンジアミン若しくはエチレンジアミンから形成される有機陽イオンとの塩；あるいは（ａ）および（ｂ）の組合せ、例えば亜鉛タンニン酸塩を含有し得る。加えて、本発明の化合物、若しくは好ましくはたった今記述されたもののような比較的不溶性の塩を、注入に適する例えばゴマ油とともにゲル例えばモノステアリン酸アルミニウムゲル中で処方し得る。とりわけ好ましい塩は、亜鉛塩、亜鉛タンニン酸塩、パモ酸塩などである。注入のための別の型の徐放デポー製剤は、例えば米国特許第３，７７３，９１９号明細書に記述されるところのポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマーのようなゆっくりと分解する非毒性の非抗原性ポリマー中に被包化されるために分散された化合物若しくは塩を含有することができる。該化合物、若しくは好ましくは上述されたもののような比較的不溶性の塩は、とりわけ動物での使用のためコレステロールマトリックスのシラスティックペレット中でもまた処方し得る
。付加的な徐放、デポー若しくは植込製剤、例えば気体若しくは液体リポソームが文献で既知である（米国特許第５，７７０，２２２号明細書、および“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ”、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９７８）。
【０１７８】
本発明を全般的に記述したので、それは、具体的説明として提供されかつ制限するとして意図していない以下の実施例を参照してより容易に理解されるであろう。
【実施例】
【０１７９】
実施例１
哺乳動物細胞中での抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３免疫グロブリン由来タンパク質の生成、クローニングおよび発現
抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質は、ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３で免疫されている、ヒト抗体を発現するマウス若しくはトランスジェニックマウスのような既知の方法を使用して生成し、そしてそれのためにＢ細胞を単離し、クローン化し、そして例えば当該技術分野で既知かつ本明細書に記述されるところの既知の方法およびアッセイ（例えば、当該技術分野で既知のところのようなＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３アッセイアッセイに対する記述および参考文献（引用することにより本明細書にそっくりそのまま組み込まれる）について、ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅのＩＬ−４若しくはＩＬ−１３を参照されたい）を使用して、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３に対する特異性および阻害活性について選択する。
【０１８０】
本発明の抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質のようなＩＬ−４若しくはＩＬ−１３特異的抗体若しくは融合タンパク質を発現するクローンを、それらが最低１種のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３を中和若しくは阻害するように選択し、そしてそれらは当該技術分野で既知の方法を使用して、以下の基準の最低３〜７個に合致する。
【０１８１】
基準
１．最低１種のヒト野生型（ｗｔ）組換え若しくは精製されたＩＬ−４若しくはＩＬ−１３、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体タンパク質、ならびに／または、限定されるものでないが配列番号４２、４３若しくは４４の１−１０、１０−２０、２０−３０、３０−４０、４０−５０、５０−６０、６０−７０、７０−８０、８０−９０、９０−１００、１００−１１０、１１０−１２０、１２０−１３０、１３０−１４０および／若しくは１４−１４５の最低１種を挙げることができる１〜１４５アミノ酸のような限定されるものでないがＩｌｅ４８、Ｖａｌ４８、Ｇｌｎ９０、Ｇｌｕ９０、Ｌｅｕ９５、Ｉｌｅ９５、Ｌｅｕ９６、Ｉｌｅ９６、Ｌｅｕ９９、Ｉｌｅ９９、Ｐｈｅ１０３、Ｔｙｒ１０３、Ａｓｎ１３０および／若しくはＧｌｎ１３０の最低１種を挙げることができる他の指定されるＩＬ−４若しくはＩＬ−１３ムテインに結合する（ＥＬＩＳＡで）。
２．組換えｗｔヒトＩＬ１３またはＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体への結合に特異的であるがしかし構造的に関連するサイトカイン、ヒトＧＭ−ＣＳＦへの結合に特異的でない（ＥＬＩＳＡで）。
３．好ましくはヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体または適する動物ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３受容体とのヒト組換えｗｔヒトＩＬ１３相互作用をＮＤ５０≦１０ｎＭで阻害する。
４．ヒト腫瘍ＴＦ−１細胞のヒト野生型ヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３依存性の増殖を陰性対照以上に阻害する。
５．ヒトＩＬ１３  ｗｔ若しくは特異的変異体について≦０．５ｎＭ（ＢＩＡｃｏｒｅにより測定されるところの）の見かけのＫｄを有する。
６．新鮮ヒトＢ細胞中のヒトＩＬ１３ｗｔ組換えヒトＩＬ−４若しくはＩＬ−１３依存性ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩｇＥ産生を阻害し、陰性対照以上の阻害、ならびにＢ９アッセイ。７．Ｂ９アッセイおよび／若しくはＥＬＩＳＡで測定され得るところの組換えＩＬ−４若しくはＩＬ−１３に対するものに類似の効力で天然のｗｔヒトＩＬ１３と交差反応する。
【０１８２】
Ｈ鎖、Ｌ鎖ＣＤＲ、可変領域、若しくは可変および定常領域をクローン化しかつ適切な発現ベクターに入れる。典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介する最低１個のプロモーター領域、Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントのコーディング配列、ならびに転写の終止および転写物のポリアデニル化に必要とされるシグナルを含有する。付加的なエレメントは、エンハンサー、コザック配列、ならびにＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位により隣接される介在配列を包含する。高度に効率的な転写は、ＳＶ４０からの初期および後期プロモーター、レトロウイルス例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩからの末端反復配列（ＬＴＲＳ）、ならびにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターで達成し得る。しかしながら細胞エレメントもまた使用し得る（例えばヒトアクチンプロモーター）。本発明の実施における使用に適する発現ベクターは、例えばｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮ若しくはｐＬＮＣＸ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ  Ｌａｂｓ、カリフォルニア州パロアルト）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）若しくはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、スウェーデン・ウプサラ）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ  ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ  ３７１４６）ならびにｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ  ６７１０９）のようなベクターを包含する。使用し得る哺乳動物宿主細胞は、ヒトＨｅｌａ  ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ  １、Ｃｏｓ  ７およびＣＶ  １、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を包含する。
【０１８３】
あるいは、遺伝子は染色体中に組込まれた遺伝子を含有する安定細胞株中で発現させ得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン若しくはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーとのコトランスフェクションは、トランスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０１８４】
トランスフェクトされた遺伝子は、大量のコードされるＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントを発現させるためにまた増幅もし得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、数百若しくは数千コピーさえの目的の遺伝子を保有する細胞株を開発するのに有用である。別の有用な選択マーカーは酵素グルタミン合成酵素（ＧＳ）（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６９−１７５（１９９２））である。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そして最高の耐性を伴う細胞を選択する。これらの細胞株は染色体中に組込まれた増幅された遺伝子（１種若しくは複数）を含有する。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞がＩｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの製造にしばしば使用される。
【０１８５】
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモーター（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））およびＣＭＶ−エンハンサーの１フラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含有する。例えば制限酵素切断部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７ｌ８を含むマルチクローニング部位が目的の遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターは、３’イントロンに加えラットプレプロインスリン遺伝子のポリアデニル化および終止シグナルを含有する。
【０１８６】
ＣＨＯ細胞でのクローニングおよび発現
ベクターｐＣ４をＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントの発現に使用する。プラスミドｐＣ４はプラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体である。該プラスミドはＳＶ４０初期プロモーターの制御下にマウスＤＨＦＲ遺伝子を含有する。これらのプラスミドでトランスフェクトされるジヒドロ葉酸活性を欠くチャイニーズハムスター卵巣若しくは他の細胞は、化学療法剤メトトレキサートを補充した選択培地（例えばα−ＭＥＭ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、メリーランド州ゲイタースバーク）中で細胞を増殖させることにより選択し得る。メトトレキサート（ＭＴＸ）に耐性の細胞中でのＤＨＦＲ遺伝子の増幅は十分に報告されている（例えば、Ｆ．Ｗ．Ａｌｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ．ＨａｍｌｉｎとＣ．Ｍａ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０９７：１０７−１４３（１９９０）；およびＭ．Ｊ．ＰａｇｅとＭ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：６４−６８（１９９１）を参照されたい）。増大する濃度のＭＴＸ中で増殖させた細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として標的酵素ＤＨＦＲを過剰産生することにより該薬物に対する耐性を発生する。第二の遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子に連結される場合、それは通常共増幅かつ過剰発現される。１，０００コピー以上の増幅された遺伝子（１種若しくは複数）を保有する細胞株を開発するのにこのアプローチを使用し得ることが当該技術分野で既知である。その後、メトトレキサートを取り去る場合に、宿主細胞の１個若しくはそれ以上の染色体に組込まれた増幅された遺伝子を含有する細胞株が得られる。
【０１８７】
プラスミドｐＣ４は、目的の遺伝子を発現させるためにラウス肉腫ウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）の強力なプロモーター（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））およびヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の前初期遺伝子のエンハンサーから単離された１フラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ
４１：５２１−５３０（１９８５））を含有する。該プロモーターの下流に、遺伝子の組込みを可能にするＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７ｌ８制限酵素切断部位がある。これらのクローニング部位の後に該プラスミドは３’イントロンおよびラットプレプロインスリン遺伝子のポリアデニル化部位を含有する。他の高効率プロモーター、例えばヒトｂ−アクチンプロモーター、ＳＶ４０初期若しくは後期プロモーターまたは他のレトロウイルス例えばＨＩＶおよびＨＴＬＶＩからの末端反復配列もまた発現に使用し得る。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系ならびに類似の系を、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３を哺乳動物細胞中で調節された方法で発現させるのに使用し得る（Ｍ．ＧｏｓｓｅｎとＨ．Ｂｕｊａｒｄ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化のため、例えばヒト成長ホルモン若しくはグロビン遺伝子からの他のシグナルを同様に使用し得る。染色体中に組込まれた目的の遺伝子を保有する安定細胞株は、ｇｐｔ、Ｇ４１８若しくはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーとのコトランスフェクションに際してもまた選択し得る。初めに１種以上の選択可能なマーカー、例えばＧ４１８およびメトトレキサートを使用することが有利である。
【０１８８】
プラスミドｐＣ４を制限酵素で消化し、そしてその後当該技術分野で既知の手順により仔ウシ腸ホスファターゼを使用して脱リン酸化する。ベクターをその後１％アガロースゲルから単離する。
【０１８９】
本発明のＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質のＨＣおよびＬＣ可変領域に対応する完全なＩＬ−４若しくはＩＬ−１３  Ｉｇ由来タンパク質または指定される部分若しくはバリアントをコードするＤＮＡ配列を既知の方法の段階に従って使用する。適するヒト定常領域（すなわちＨＣおよびＬＣ領域）をコードする単離された核酸もまた（
例えばベクターｐ１３５１中で提供されるように）本構築物中で使用する。
【０１９０】
単離された可変および定常領域をコードするＤＮＡならびに脱リン酸化したベクターをその後Ｔ４  ＤＮＡリガーゼを用いて連結する。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＨＢ１０１若しくはＸＬ−１  Ｂｌｕｅ細胞をその後形質転換し、そして例えば制限酵素分析を使用してプラスミドｐＣ４に挿入されたフラグメントを含有する細菌を同定する。
【０１９１】
活性のＤＨＦＲ遺伝子を欠くチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を、リポフェクションを使用して０．５μｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏとコトランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、支配的選択可能マーカー、すなわちＧ４１８を包含する抗生物質の一群に対する耐性を賦与する酵素をコードするＴｎ５からのｎｅｏ遺伝子を含有する。１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したα−ＭＥＭに細胞を播種する。２日後に細胞をトリプシン処理し、そして１０、２５若しくは５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したα−ＭＥＭ中でハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、独国）に播種する。約１０〜１４日後に単一クローンをトリプシン処理し、そしてその後多様な濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して６ウェルペトリ皿若しくは１０ｍｌフラスコに播種する。最高濃度のメトトレキサートで増殖するクローンをその後なおより高濃度のメトトレキサート（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含有する新たな６ウェルプレートに移す。１００〜２００ｍＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで同一の手順を反復する。所望の遺伝子産物の発現を例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット若しくは逆相ＨＰＬＣ分析により分析する。
【０１９２】
完全にヒトの抗ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質Ｉｇ由来タンパク質をさらに特徴付けする。生成されるＩｇ由来タンパク質の数種は１×１０９と９×１０１２の間の親和性定数を有することが期待される。これらの完全にヒトのモノクローナルＩｇ由来タンパク質のこうした高親和性は、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３タンパク質依存性の疾患、病状若しくは関連状態における治療的応用にそれらを適するようにする。
【０１９３】
実施例３
線維症およびＩＬ−１３若しくはＩＬ４
肺生検中のＩＬ−１３の検出
肺生検サンプルはミシガン大学のＣｏｒｙ  Ｈｏｇａｂｏａｍ博士を含むＭＴＡにより提供された。肺腫瘍のＵＩＰおよび正常縁からの肺生検サンプルを、完全プロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（Ｒｏｃｈｅ）を含有するＰＢＳ中で均質化した。ＩＬ−１３レベルは製造元のプロトコルに従いｌｕｍｉｎｅｘにより測定した。総タンパク質はＢＣＡアッセイを使用して各肺生検サンプル中で測定した。ＩＬ−１３レベルを各患者サンプル中のタンパク質のミリグラムに対し正規化した。
【０１９４】
線維芽細胞単離および精製：
細胞株はミシガン大学のＣｏｒｙ  Ｈｏｇａｂｏａｍ博士により提供された。初代線維芽細胞株の全部を以前に記述された（２１）とおり単離した。肺線維芽細胞をＵＩＰ患者（ｎ＝４）から採取した肺生検から単離し、そしてこれらを「線維性線維芽細胞」と称する。線維芽細胞はまた肺腫瘍切除（ｎ＝５）の間に採取した肺組織からも単離し、そしてこれらのサンプルは組織学的分析により非線維性であることを確認した。これらの非線維性組織由来線維芽細胞は「非線維性線維芽細胞」と称する。
【０１９５】
線維芽細胞遺伝子発現
ヒト肺線維芽細胞を１００，０００細胞／ウェルで２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔｅｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク）にプレーティングしかつ８時間付着させた。細胞をその後ＰＢＳで洗浄しかつ無血清培地（ｌ−グルタミン、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含むＤＭＥＭ）中一夜培養した。細胞をその後、ＴＧＦβ−１（１若しくは１０ｎｇ／ｍＬ）、ＰＤＧＦ−ＡＢ（２０若しくは２００ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−４（１若しくは１０ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ−１３（１若しくは１０ｎｇ／ｍＬ）の存在若しくは非存在下に２４時間培養した。ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＩＬ−４およびＩＬ−１３はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。上清を除去し、そしてＲＮＡをその後、製造元の説明書に従ってＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓミニキット（ＱＩＡＧＥＮ、カリフォルニア州バレンシア）を使用して単離し、そしてＲＮＡをＴａｑＭａｎ(R)逆転写試薬（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。前線維性（ｐｒｏｆｉｂｒｏｔｉｃ）遺伝子発現を、Ｔａｑｍａｎ(R)Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲマスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および予め開発されたＴａｑｍａｎ(R)遺伝子発現アッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造元の説明書に従って使用するリアルタイムＰＣＲにより測定した。
【０１９６】
量的遺伝子発現は比較ＣＴ法を使用して計算し、ここでＣＴ値は遺伝子発現が最初に検出される閾値周期番号として決定される。目的の遺伝子の遺伝子発現の倍数変化を最初にハウスキーピング遺伝子１８Ｓに対し正規化してΔＣＴ値を生じた。線維性および前線維性線維芽細胞の間の発現の倍数変化は、ΔＣＴ（ｎｏｎ−ｆｉｂｒｏｔｉｃ）−ΔＣＴ（ｆｉｂｒｏｔｉｃ）＝ΔΔＣＴとして計算し、ここで非線維性遺伝子発現がキャリブレーターとしてはたらいた。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激による遺伝子発現の倍数変化はΔΔＣＴ＝ΔＣＴ（ｕｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ）−ΔＣＴ（ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ）により計算され、ここで未刺激サンプルがキャリブレーターとしてはたらいた。計算２−ΔΔＣＴはその場合、キャリブレーターと比較した場合の最終倍数変化の相対値を示す。
【０１９７】
非線維性およびＵＩＰ患者からの肺生検中のＩＬ−１３タンパク質レベル。
ＩＬ−１３はＵＩＰ患者で上方制御されることが示されている（９）。われわれは、非線維性肺組織から得た生検と比較して、肺線維症を伴う患者からの肺生検中のタンパク質レベルのＩＬ−１３の増大されたレベルを検出した。（＊＜０．０５、Ｗｅｌｃｈの補正を伴うＳｔｕｄｅｎｔの対応のないｔ検定）。
【０１９８】
非線維性肺部位から単離された線維芽細胞に比較してのＵＩＰ線維芽細胞中の線維症と関連する多様な遺伝子の発現の増加。
記号：
αＳＭＡ：α−平滑筋アクチン
ＰＣＯＬ１：プロコラーゲンＩ
ＰＣＯＬ３：プロコラーゲンＩＩＩ
ＣＴＧＦ：結合組織増殖因子
ＴＧＦβ−１：トランスフォーミング増殖因子−１
ＴＧＦβＲ１：ＴＧＦβ受容体タイプＩ
ＴＧＦβＲ２：ＴＧＦβ受容体タイプＩＩ
ＩＬ１３Ｒα１：インターロイキン−１３受容体α１サブユニット
ＩＬ１３Ｒα２：インターロイキン−１３受容体α２サブユニット
前線維性遺伝子発現の基礎発現が非線維性（ｎ＝４）線維芽細胞に比較してＵＩＰ線維芽細胞（ｎ＝３）で異なったかどうかを確認するため、遺伝子発現を患者の双方のコホートからの未刺激細胞間で比較した。データはＵＩＰ線維芽細胞が分析した遺伝子の全部でより多い基礎線維性遺伝子発現を有することを示した。
【０１９９】
αＳＭＡ発現に対するＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の影響
筋線維芽細胞は非線維性組織が相対的に非存在である（４）。筋線維芽細胞は、収縮性表現型をこれらの細胞に与え創傷を閉鎖することを供する平滑筋アクチン線維を含有する。α−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）遺伝子発現は従って筋線維芽細胞のマーカーである。ＴＧＦβ１はαＳＭＡ発現を誘導することが以前に示された原型の前線維性増殖因子である（２２）。ここで、われわれは、非線維性および線維性線維芽細胞中でαＳＭＡを誘導するＴＧＦβ１を観察し、誘導の大きさは線維性線維芽細胞中でより大きかった。ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４は線維性線維芽細胞中でのみαＳＭＡ発現の中程度の増加を誘導したのみであった。
【０２００】
プロコラーゲンＩ（Ａ）およびプロコラーゲンＩＩＩ（Ｂ）遺伝子発現に対するＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４の影響。
コラーゲン沈着は線維症に重要な特質である。２種の遺伝子プロコラーゲンＩおよびプロコラーゲンＩＩＩがＵＩＰと関連していることが以前に示されている。プロコラーゲンＩおよびＩＩＩは肺でおよび全身での双方のＵＩＰサンプル中で上昇されていることが示された（２３）（２４）（２５）。ここで提示されるデータはＩＬ−１３およびＩＬ−４がＵＩＰ線維芽細胞中でプロコラーゲンＩおよびプロコラーゲンＩＩＩ双方を誘導することを示す。さらに、遺伝子誘導の程度は線維性線維芽細胞中でＴＧＦβ１およびＰＤＧＦ−ＡＢ双方に匹敵する。ＩＬ−４もまた非線維性線維芽細胞中でプロコラーゲンＩＩＩの中程度の増加を誘導した。
【０２０１】
ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のＴＧＦβ１遺伝子発現
ＴＧＦβ１の前線維性の役割が示唆されている。ＴＧＦβ１は、ＴＧＦβ１がさらなるＴＧＦβ１産生を誘導するためにオートクリン生成ループもまた有する（２６、２７）。この現象は非線維性および線維性双方の線維芽細胞中でここでもまた観察された。生成されるデータは、ＩＬ−１３およびＩＬ−４もまたＴＧＦβ１遺伝子発現を高め得ることを示した。ＴＧＦβ１でと同様、ＰＤＧＦおよび双方のタイプ２サイトカインによるＴＧＦβ１遺伝子誘導の程度は線維性線維芽細胞中でより大きかった。
【０２０２】
ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のＣＴＧＦ遺伝子発現
結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）はコラーゲン産生を包含するＴＧＦβ１の効果の多くを媒介することが示されている（２８）（２９）（３０）。ＴＧＦβ１は線維性および非線維性双方の線維芽細胞でＣＴＧＦ遺伝子発現の増大を誘導した。さらに、低用量ＰＤＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）ならびにＩＬ−１３およびＩＬ−４はＵＩＰ線維芽細胞中でＣＴＧＦ遺伝子発現の増大を誘導した。
【０２０３】
ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のＴＧＦβＲＩ（Ａ）およびＴＧＦβＲＩＩ（Ｂ）遺伝子発現
ＴＧＦβ１遺伝子発現を高めることと同様に、ＴＧＦβ１およびＰＤＧＦはＵＩＰ線維芽細胞中の双方のＴＧＦβ受容体サブユニットの増大を誘導した。ＴＧＦβ受容体は強皮症の線維芽細胞中で上昇されることが見出されている（３１、３２）。生成されるデータは、ＩＬ−１３およびＩＬ−４が線維症細胞中のＴＧＦβ受容体サブユニットの双方の増大を誘導したこともまた示し、ＩＬ−４がＴＧＦβＲＩＩの最大の遺伝子誘導を媒介した。
【０２０４】
ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のＩＬ１３Ｒα１（Ａ）およびＩＬ１３Ｒα２（Ｂ）遺伝子発現
文献にすでに報告されかつ本報告に記述されるとおり、ＩＬ−１３はＵＩＰ患者の肺で高められたレベルで見出される。ＩＬ−１３はｉｎ  ｖｉｔｒｏでおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルの間で前線維性である。ＩＬ−１３はコラーゲン生成および線維芽細胞の増殖を誘導する（１２−１４）。さらに、ＩＬ−１３活性の阻害は多様なマウス肺線維症モデルで
有益であることが示されている（１７−２０）。ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−４およびＩＬ−１３はＵＩＰ線維芽細胞中でＩＬ１３Ｒα１発現の上方制御を誘導する。全４種のメディエーターがＩＬ１３Ｒα２発現の上方制御を誘導し、それによりこれらの細胞をＩＬ−１３媒介性応答に対しより感受性にした。また、ＩＬ１３Ｒα２によるシグナル伝達は最近、ＴＧＦβ１の誘導により前線維性であることが示された（１５）。
【０２０５】
ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のＣＤ４４遺伝子発現
線維芽細胞由来のヒアルロナンは、肺線維症の動物モデルを使用して線維症と相関することが以前に示されている（３３）。線維芽細胞から遊離されるヒアルロナンは前炎症性であり、従って線維性応答を潜在的に悪化する。ヒアルロナンはＣＤ４４に結合する。ここで、われわれは、これらの細胞がヒアルロナンにより媒介される下流の事象に対し応答性亢進でありうることを示す、全部のメディエーターがＵＩＰ線維芽細胞中のＣＤ４４遺伝子発現の上方制御を誘導することを示した。
【０２０６】
ＴＧＦβ１，ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のフィブロネクチン遺伝子発現
フィブロネクチンは細胞外マトリックスの一成分である。ここで示される証拠は、全部のメディエーターがＵＩＰ線維芽細胞中のフィブロネクチン遺伝子発現の上方制御を直接誘導し、それは肺線維症と関連する過剰の細胞外マトリックス沈着に追加しうることを示唆する。
【０２０７】
ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４誘発性のＰＤＧＦＲＡ（Ａ）およびＰＤＧＦＲＢ（Ｂ）遺伝子発現
ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）は線維芽細胞の増殖を促進することが示されている増殖因子である。さらに、ＰＤＧＦ受容体シグナル伝達の阻害はｉｎ  ｖｉｖｏで線維症を制限することが最近示された（３４）。本研究で、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４はＵＩＰの線維芽細胞中で双方のＰＤＧＦ受容体鎖の増大を誘導した。これは、試験したメディエーターの全部が、増殖のようなＰＤＧＦ誘発性の下流の事象に対するＵＩＰの線維芽細胞の感受性を高めうることを示す。
【０２０８】
利点
これはＩＬ−４およびＩＬ−１３双方に対するＵＩＰの線維芽細胞の前線維性の機能的応答性の最初の既知の報告された記述である。本研究は、線維症の潜在的治療薬の役割を評価する場合に非線維性線維芽細胞および線維性線維芽細胞を比較することの重要性もまた強調する。ＩＬ−４および／若しくはＩＬ−１３の阻害は有益であることが線維症の多様な動物モデルで示されている。機構的に、動物モデルでの線維症の阻害は低下された線維芽細胞増殖およびコラーゲン産生に帰されている。しかしながら本研究は、線維症の部位からの線維芽細胞を非線維性組織由来細胞と比較することによりトランスレーショナル医学のアプローチをより利用する。また、本研究は、ＩＬ−４若しくはＩＬ−１３いずれかでのｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激後に増強される多数の遺伝子を解明する。全体として、本発明は、ＩＬ−４および／若しくはＩＬ−１３を標的とすることが肺線維症を伴う患者でどのくらい有益でありうるかを記述する。これら２種のタイプ２サイトカインのいずれかでの刺激後に多数の遺伝子が誘導されるためである。さらに、前線維性メディエーターの数種の遺伝子上方制御の程度は古典的前線維性メディエーターＴＧＦβ１およびＰＤＧＦにより誘導されるものに匹敵した。また、線維症組織で見出される原型の増殖因子の２種ＴＧＦβ１およびＰＤＧＦはＩＬ−１３受容体サブユニットの上方制御を誘導し、ＩＬ−１３に対するＵＩＰの線維芽細胞の応答性が線維症の組織環境でさらに高められることができることを示す。最後にさらに、ＩＬ−４およびＩＬ−１３により直接調節される遺伝子の数により、これらの遺伝子（例えばＩＬ１３Ｒα２、プロコラーゲンＩおよびＩＩＩ）は、治療への応答を暗示するとしてＩＬ−４およびＩＬ−１３を阻害する治療で処置されている患者の臨床生体マーカーとしてはたらきうる。全体として、本発明は、ＩＬ−４お
よび／若しくはＩＬ−１３を標的とすることが間質性肺疾患を伴う患者でどのくらい有益でありうるかを記述する。多数の遺伝子がこれらのタイプ２サイトカインでの刺激後に誘導されるためである。さらに、ＩＬ−４および／若しくはＩＬ−１３を標的とすることは、限定されるものでないが間質性肺疾患、強皮症（局所性およびびまん性）、肝線維症、腎線維症、サルコイドーシス、肥厚性瘢痕、ケロイド瘢痕、心線維症、加齢黄斑変性、コラーゲン血管疾患および他の関連疾患を挙げることができる線維性の病状を伴う多数の他の疾患で有益でありうる。
【０２０９】
参考文献
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１９．  Ｂｅｌｐｅｒｉｏ  ＪＡ，Ｄｙ  Ｍ，Ｂｕｒｄｉｃｋ  ＭＤ，Ｘｕｅ  ＹＹ，Ｌｉ  Ｋ，Ｅｌｉａｓ  ＪＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１３  ａｎｄ  Ｃ１０  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２００２；２７（４）：４１９−２７．
２０．  Ｋｏｌｏｄｓｉｃｋ  ＪＥ，Ｔｏｅｗｓ  ＧＢ，Ｊａｋｕｂｚｉｃｋ  Ｃ，Ｈｏｇａｂｏａｍ  Ｃ，Ｍｏｏｒｅ  ＴＡ，ＭｃＫｅｎｚｉｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ＩＬ−１３−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ，ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＩＬ−４−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ，ｍｉｃｅ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４；１７２（７）：４０６８−７６．
２１．  Ｈｏｇａｂｏａｍ  ＣＭ，Ｂｏｎｅ−Ｌａｒｓｏｎ  ＣＬ，Ｌｉｐｉｎｓｋｉ  Ｓ，Ｌｕｋａｃｓ  ＮＷ，Ｃｈｅｎｓｕｅ  ＳＷ，Ｓｔｒｉｅｔｅｒ  ＲＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｎｇ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｔｈ１−  ａｎｄ  Ｔｈ２−ｔｙｐｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｇｒａｎｕｌｏｍａ  ｍｏｄｅｌｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１６３（４）：２１９３−２０１．
２２．  Ｄｅｓｍｏｕｌｉｅｒｅ  Ａ，Ｇａｂｂｉａｎｉ  Ｇ．Ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｅｘｐ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １９９５；３（２）：１３４−９．
２３．  Ｌｏｗ  ＲＢ，Ｇｉａｎｃｏｌａ  ＭＳ，Ｋｉｎｇ  ＴＥ，Ｊｒ．，Ｃｈａｐｉｔｉｓ  Ｊ，Ｖａｃｅｋ  Ｐ，Ｄａｖｉｓ  ＧＳ．Ｓｅｒｕｍ  ａｎｄ  ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ  ｏｆ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １９９２；１４６（３）：７０１−６．
２４．  Ｂｅｎｓａｄｏｕｎ  ＥＳ，Ｂｕｒｋｅ  ＡＫ，Ｈｏｇｇ  ＪＣ，Ｒｏｂｅｒｔｓ  ＣＲ．Ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １９９６；１５４（６  Ｐｔ  １）：１８１９−２８．
２５．  Ｓｔｒｉｅｔｅｒ  ＲＭ，Ｓｔａｒｋｏ  ＫＭ，Ｅｎｅｌｏｗ  ＲＩ，Ｎｏｔｈ
Ｉ，Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ  ＶＧ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ  １ｂ  ｏｎ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｍ
Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００４；１７０（２）：１３３−４０．
２６．  Ａｓａｎｏ  Ｙ，Ｉｈｎ  Ｈ，Ｙａｍａｎｅ  Ｋ，Ｊｉｎｎｉｎ  Ｍ，Ｔａｍａｋｉ  Ｋ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｌｐｈａｖｂｅｔａ５  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｃ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｒｍａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ａｍ  Ｊ
Ｐａｔｈｏｌ  ２００６；１６８（２）：４９９−５１０．
２７．  Ａｓａｎｏ  Ｙ，Ｉｈｎ  Ｈ，Ｙａｍａｎｅ  Ｋ，Ｊｉｎｎｉｎ  Ｍ，Ｍｉｍｕｒａ  Ｙ，Ｔａｍａｋｉ  Ｋ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｌｐｈａ（ｖ）ｂｅｔａ３  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５；１７５（１１）：７７０８−１８．
２８．  Ｄｕｎｃａｎ  ＭＲ，Ｆｒａｚｉｅｒ  ＫＳ，Ａｂｒａｍｓｏｎ  Ｓ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｓ，Ｋｌａｐｐｅｒ  Ｈ，Ｈｕａｎｇ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｏｌｌａｇｅｎ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃＡＭＰ．Ｆａｓｅｂ
Ｊ  １９９９；１３（１３）：１７７４−８６．
２９．  Ｉｇａｒａｓｈｉ  Ａ，Ｏｋｏｃｈｉ  Ｈ，Ｂｒａｄｈａｍ  ＤＭ，Ｇｒｏｔｅｎｄｏｒｓｔ  ＧＲ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ
ｓｋｉｎ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ａｎｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｗｏｕｎｄ  ｒｅｐａｉｒ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  １９９３；４（６）：６３７−４５．
３０．  Ｏｅｍａｒ  ＢＳ，Ｌｕｓｃｈｅｒ  ＴＦ．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．Ｆｒｉｅｎｄ  ｏｒ  ｆｏｅ？  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  １９９７；１７（８）：１４８３−９．
３１．  Ｋｕｂｏ  Ｍ，Ｉｈｎ  Ｈ，Ｙａｍａｎｅ  Ｋ，Ｔａｍａｋｉ  Ｋ．Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒ−ｂｅｔａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｄｅｒｍａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｏｆ  ｓｋｉｎ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ
ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２００２；２９（１２）：２５５８−６４．
３２．  Ｋａｗａｋａｍｉ  Ｔ，Ｉｈｎ  Ｈ，Ｘｕ  Ｗ，Ｓｍｉｔｈ  Ｅ，ＬｅＲｏｙ  Ｃ，Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋａ  Ｍ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｂｙ  ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｏ  ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９８；１１０（１）：４７−５１．
３３．  Ｚｈａｏ  ＨＷ，Ｌｕ  ＣＪ，Ｙｕ  ＲＪ，Ｈｏｕ  ＸＭ．Ａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｂｙ  ｌｕｎｇ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ：ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ？  Ｒｅｓｐｉｒｏｌｏｇｙ  １９９９；４（２）：１３１−８．
３４．  Ａｏｎｏ  Ｙ，Ｎｉｓｈｉｏｋａ  Ｙ，Ｉｎａｙａｍａ  Ｍ，Ｕｇａｉ  Ｍ，Ｋｉｓｈｉ  Ｊ，Ｕｅｈａｒａ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍａｔｉｎｉｂ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｆｉｂｒｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ  ｉｎ  ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ
Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００５；１７１（１１）：１２７９−８５．
【０２１０】
本発明は前述の記述および実施例にとりわけ記述されたところと別の方法で実施し得ることが明らかであろう。
【０２１１】
本発明の多数の改変および変形が上の教示に照らして可能であり、そして従って付随する請求の範囲の範囲内にある。
【０２１２】
【表２】
2010513301.tif 000003
【配列表】
2010513301000001.app
【国際調査報告】
2010513301.tif 000004
2010513301.tif 000005
2010513301.tif 000006