(57)【要約】本発明は、睡眠関連障害の治療に適した化合物としての候補化合物をスクリーニングするためにＢＲＳ−３を用いる方法に関する。本発明の逆アゴニストおよびアンタゴニストは、睡眠を促進するための、および不眠症等の、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。本発明のアゴニストおよび部分アゴニストは、覚醒状態を促進するための、およびナルコレプシー等に関連する過剰な眠気などの過剰な眠気を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。本発明は、さらに、睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害または認識障害などのＧＡＢＡ関連神経学的障害のための医薬剤としての候補化合物をスクリーニングするためにＢＲＳ−３を用いる方法に関する。
2010515882.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ）候補化合物を宿主細胞、またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで、該ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）該受容体の機能性を阻害する該候補化合物の能力を決定する工程；
を含み、
ここで、該ＧＰＣＲの機能性を阻害する該候補化合物の能力は、該候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す、方法。
【請求項２】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって、請求項１に記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）所望により、工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物を合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物を哺乳動物に投与する工程；および
（ｅ）該化合物が、該哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、または抗精神病活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を示し、抗痙攣活性を示し、抗偏頭痛活性を示し、抗鬱病活性を示し、または抗精神病活性を示す該候補化合物の能力は、該候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す、方法。
【請求項３】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記受容体の逆アゴニストを同定する工程を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記受容体のアンタゴニストを同定する工程を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
さらに、医薬として前記逆アゴニストもしくはアンタゴニストを処方する工程を含む、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ’）宿主細胞、またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜を、候補化合物の存在下または不在下において、所望により標識された該ＧＰＣＲに対する公知のリガンドとを接触させる工程であって、ここで、該ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ’）該公知のリガンドおよび該ＧＰＣＲの間の複合体を検出する工程；
（ｃ’）該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下においてより少ない該複合体が形成されるか否かを決定する工程；
（ｄ’）所望により、その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を合成する工程；
（ｅ’）その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を哺乳動物に投与する工程；ならびに
（ｆ’）該化合物が、該哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、または抗精神病活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を示し、抗痙攣活性を示し、抗偏頭痛活性を示し、抗鬱病活性を示し、または抗精神病活性を示す該候補化合物の能力は、該候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す、方法。
【請求項８】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記睡眠障害が断片化された睡眠構造を含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記睡眠障害が、精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記睡眠障害が不眠症であり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害が不眠症、全般性不安障害、パニック発作、癲癇、偏頭痛、大鬱病障害、および統合失調症よりなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記宿主細胞がメラニン保有細胞である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ＧＰＣＲが配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記ＧＰＣＲが配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記ＧＰＣＲが配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であって、ここで、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法に従って同定される化合物。
【請求項１９】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物であって、ここで、該化合物が請求項１〜１７のいずれかに記載の方法に従って同定される医薬組成物。
【請求項２０】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を混合することを含む医薬組成物を調製する方法であって、ここで、該化合物を請求項１〜１７のいずれかに記載の方法に従って同定する、方法。
【請求項２１】
治療上有効量の哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または該逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬上許容される組成物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、睡眠を促進する方法、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療する方法、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療する方法。
【請求項２２】
前記睡眠障害が断片化された睡眠構造を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
睡眠を促進する前記方法、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療する前記方法が、睡眠の定着を促進することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
睡眠を促進する前記方法、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療する前記方法が、デルタ力を増加させることを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記睡眠障害が、精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記睡眠障害が不眠症であり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害が不眠症、全般性不安障害、パニック発作、癲癇、偏頭痛、大鬱病障害、および統合失調症よりなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストがＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである、請求項２１〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２１〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
睡眠を促進するための、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するための、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するための医薬の製造用の哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストの使用。
【請求項３０】
前記睡眠障害が断片化された睡眠構造を含む、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記睡眠を促進すること、または前記睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防することもしくは治療することが睡眠の定着を促進することを含む、請求項２９に記載の使用。
【請求項３２】
前記睡眠を促進すること、または前記睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防することもしくは治療することがデルタ力を増加させることを含む、請求項２９に記載の使用。
【請求項３３】
前記睡眠障害が精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項２９に記載の使用。
【請求項３４】
前記睡眠障害が不眠症であり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害が不眠症、全般性不安障害、パニック発作、癲癇、偏頭痛、大鬱病障害、および統合失調症よりなる群から選択される、請求項２９に記載の使用。
【請求項３５】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストがＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである、請求項２９〜３４のいずれかに記載の使用。
【請求項３６】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３がヒトＢＲＳ−３である、請求項２９〜３５のいずれかに記載の使用。
【請求項３７】
睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または該逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３８】
前記睡眠障害が断片化された睡眠構造を含む、請求項３７に記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項３９】
前記睡眠を促進すること、または前記睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防することもしくは治療することが睡眠の定着を促進することを含む、請求項３７に記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項４０】
前記睡眠を促進すること、または前記睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防することもしくは治療することがデルタ力を増加させることを含む、請求項３７に記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項４１】
前記睡眠障害が精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項３７に記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項４２】
前記睡眠障害が不眠症であり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害が不眠症、全般性不安障害、パニック発作、癲癇、偏頭痛、大鬱病障害、および統合失調症よりなる群から選択される、請求項３７に記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項４３】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストがＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである、請求項３７〜４２のいずれかに記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項４４】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３がヒトＢＲＳ−３である、請求項３７〜４３のいずれかに記載の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または医薬組成物。
【請求項４５】
覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ）候補化合物を宿主細胞、またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで、該ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）該受容体の機能性を刺激する該候補化合物の能力を決定する工程；
を含み、
ここで、該受容体の機能性を刺激する該候補化合物の能力は、該候補化合物が覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択される選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す、方法。
【請求項４６】
覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって、請求項４５に記載の方法の工程を含み、さらに：
（ｃ）所望により、工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物を合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物を哺乳動物に投与する工程；および
（ｅ）該化合物が該哺乳動物において覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該哺乳動物において、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を示す該候補化合物の能力は、該候補化合物が覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す、方法。
【請求項４７】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記受容体のアゴニストを同定する工程を含む、請求項４５〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
前記受容体の部分アゴニストを同定する工程を含む、請求項の４５〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
さらに、前記アゴニストまたは部分アゴニストを医薬として処方する工程を含む、請求項４８または請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ’）候補化合物の存在下または不在下で、宿主細胞またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜を、所望により標識された該ＧＰＣＲに対する公知のリガンドとを接触させる工程であって、ここで、該ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ’）該公知のリガンドおよび該ＧＰＣＲの間の複合体を検出する工程；
（ｃ’）該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下においてより少ない該複合体が形成されるか否かを決定する工程；
（ｄ’）所望により、その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を合成する工程；
（ｅ’）その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を哺乳動物に投与する工程；ならびに
（ｆ’）該化合物が、該哺乳動物において覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、該哺乳動物において、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を示す該候補化合物の能力は、該候補化合物が、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す、方法。
【請求項５２】
前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記過剰な眠気が睡眠障害に関連している、請求項４５〜５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記睡眠障害が睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記睡眠障害がナルコレプシーであり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害がナルコレプシー、認知症およびアルツハイマー型の認知症よりなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記過剰な眠気が神経学的障害に関連する、請求項４５〜５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記過剰な眠気が精神病性障害に関連する、請求項４５〜５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項４５〜５７のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項４５〜５７のいずれかに記載の方法。
【請求項６０】
前記宿主細胞がメラニン保有細胞である、請求項４５〜５７のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
前記ＧＰＣＲが配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項４５〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６２】
前記ＧＰＣＲが、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む、請求項４５〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６３】
前記ＧＰＣＲが、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む、請求項４５〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
覚醒状態を促進するための、または過剰な眠気を予防もしくは治療するために適した化合物であって、請求項４５〜６３のいずれかに記載の方法に従って同定される、化合物。
【請求項６５】
覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物であって、該化合物が請求項４５〜６３のいずれかに記載の方法に従って同定される、医薬組成物。
【請求項６６】
覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を混合することを含む医薬組成物を調製する方法であって、該化合物を請求項４５〜６３のいずれかに記載の方法に従って同定する、方法。
【請求項６７】
治療上有効量の哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬上許容される組成物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、覚醒状態を促進する方法、または過剰な眠気を予防もしくは治療する方法、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療する方法。
【請求項６８】
前記過剰な眠気が睡眠障害に関連する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記睡眠障害が睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記睡眠障害がナルコレプシーであり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害がナルコレプシー、認知症およびアルツハイマー型の認知症よりなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記過剰な眠気が神経学的障害に関連する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
前記過剰な眠気が精神病性障害に関連する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストがＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである、請求項６７〜７２のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項６７〜７３のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
覚醒状態を促進するための、または過剰な眠気を予防もしくは治療するための、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するための医薬の製造用の哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストの使用。
【請求項７６】
前記過剰な眠気が睡眠障害に関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項７７】
前記睡眠障害が睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項７６に記載の使用。
【請求項７８】
前記睡眠障害がナルコレプシーであり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害がナルコレプシー、認知症およびアルツハイマー型の認知症よりなる群から選択される、請求項７６に記載の使用。
【請求項７９】
前記過剰な眠気が神経学的障害に関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項８０】
前記過剰な眠気が精神病性障害に関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項８１】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストがＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである、請求項７５〜８０のいずれかに記載の使用。
【請求項８２】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３がヒトＢＲＳ−３である、請求項７５〜８１のいずれかに記載の使用。
【請求項８３】
覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項８４】
前記過剰な眠気が睡眠障害に関連する、請求項８３に記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項８５】
前記睡眠障害が睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される、請求項８４に記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項８６】
前記睡眠障害がナルコレプシーであり、または前記ＧＡＢＡ関連神経学的障害がナルコレプシー、認知症およびアルツハイマー型の認知症よりなる群から選択される、請求項８４に記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項８７】
前記過剰な眠気が神経学的障害に関連する、請求項８３に記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項８８】
前記過剰な眠気が精神病性障害に関連する、請求項８３に記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項８９】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストがＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである、請求項８３〜８８のいずれかに記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項９０】
前記哺乳動物ＢＲＳ−３がヒトＢＲＳ−３である、請求項８３〜８９のいずれかに記載のアゴニストまたは部分アゴニスト、または医薬組成物。
【請求項９１】
睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害用の医薬剤のための候補化合物をスクリーニングする方法であって、構成要素：
（ａ）宿主細胞、またはＧタンパク質共役受容体を含む宿主細胞の膜を提供する工程であって、該Ｇタンパク質共役受容体が配列番号２に対して少なくとも約７５％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約８５％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、または少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、工程；および
（ｂ）該Ｇタンパク質共役受容体に対する候補化合物をスクリーニングする工程；
を含む方法。
【請求項９２】
前記Ｇタンパク質共役受容体のアゴニストを同定する工程を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記Ｇタンパク質共役受容体の部分アゴニストを同定する工程を含む、請求項９１または請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記Ｇタンパク質共役受容体の逆アゴニストを同定する工程を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９５】
前記Ｇタンパク質共役受容体のアンタゴニストを同定する工程を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９６】
前記スクリーニングする工程が、前記アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストもしくはアンタゴニストが睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、抗精神病活性を有し、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定することを含む、請求項９２〜９５のいずれかに記載の方法。
【請求項９７】
さらに、前記アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストもしくはアンタゴニストを医薬として処方する工程を含む、請求項９２〜９６のいずれかに記載の方法。
【請求項９８】
前記Ｇタンパク質共役受容体が配列番号２に対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９１〜９７のいずれかに記載の方法。
【請求項９９】
前記Ｇタンパク質共役受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項９１〜９８のいずれかに記載の方法。
【請求項１００】
睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害用の医薬剤としての候補化合物をスクリーニングするためのＧタンパク質共役受容体の使用であって、該Ｇタンパク質共役受容体は配列番号２に対して少なくとも約７５％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約８５％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、または少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、使用。
【請求項１０１】
前記スクリーニングが前記Ｇタンパク質共役受容体アゴニストのためのものである、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０２】
前記スクリーニングが前記Ｇタンパク質共役受容体の部分アゴニストのためのものである、請求項１００または請求項１０１に記載の使用。
【請求項１０３】
前記スクリーニングが前記Ｇタンパク質共役受容体の逆アゴニストのためのものである、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０４】
前記スクリーニングが前記Ｇタンパク質共役受容体のアンタゴニストのためである、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０５】
前記Ｇタンパク質共役受容体が配列番号２に対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００〜１０４のいずれかに記載の使用。
【請求項１０６】
前記Ｇタンパク質共役受容体が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１００〜１０５のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を用いて、睡眠関連障害の治療に適した化合物としての候補化合物をスクリーニングする方法に関する。本発明の逆アゴニストおよびアンタゴニストは睡眠を促進するための、および不眠症などの睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。本発明のアゴニストおよび部分アゴニストは、覚醒状態を促進するための、およびナルコレプシーなどに関連する過剰な眠気など、過剰な眠気を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。本発明は、さらに、ＧＰＣＲを用いて、睡眠障害、不安障害、痙攣性障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害、または認識障害などのＧＡＢＡ関連神経学的障害のための医薬剤としての候補化合物をスクリーニングする方法に関する。本発明の化合物は、睡眠促進、覚醒状態促進、不安解消、抗痙攣、抗鬱、抗精神病、および認識増強活性を有する化合物を含む。
【背景技術】
【０００２】
以下の議論は本発明の理解を促進することを意図するが、本発明に対する先行技術であることを意図せず、またはそれを容認するものでもない。
【０００３】
Ａ．睡眠障害
睡眠は３つの状態：覚醒状態、ノンレム（ＮＲＥＭ）睡眠、およびレム（ＲＥＭ）睡眠によってヒトにおいて特徴付けられる基本的な生理学的リズムの一部である。睡眠障害は通常の睡眠のパターンまたは挙動の乱れである。
【０００４】
用語「不眠症」とは、対象による不適切な睡眠または非休養睡眠の認識をいう。問題は、例えば、以下：睡眠の開始、睡眠の維持または早朝の目覚めの１以上で起こり得る。不眠症は、ロサンゼルス地域において調査された成人集団の３２％で報告されている、たびたび起こる病状である（非特許文献１）。Ａｌａｃｈｕａ  Ｃｆｏｕｎｔｙ，フロリダの調査された集団の全体で４５％は、睡眠に至る、または眠ったままであるというトラブルを報告した（非特許文献２）。
【０００５】
過剰な日中の眠気（睡眠過剰）は発作性睡眠の基本的な特徴である。睡眠過剰は多数の神経学的障害（多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、パーキンソン病）、精神病性障害（鬱病、統合失調症）および他の障害（閉塞性睡眠時無呼吸、夜勤睡眠障害、薬物誘導鎮静）とも関連付けられている。
【０００６】
睡眠障害は一般的であって、かなりの無力および社会的かつ経済的コスト（例えば、道路交通事故、低い仕事効率）をもたらす可能性がある。例えば、非特許文献３；非特許文献４；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｌｅｅｐ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＩＣＳＤ−Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｌｅｅｐ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ｒｅｖｉｓｅｄ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｃｏｄｉｎｇ  ｍａｎｕａｌ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｌｅｅｐ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００１．参照。
【０００７】
Ｂ．ボンベシン受容体サブタイプ−３（ＢＲＳ−３）
ボンベシンはカエルの皮膚から単離された１４アミノ酸ペプチドである。ボンベシン受容体サブタイプ−３ＢＲＳ−３  Ｇタンパク質共役受容体（ＢＲＳ−３；例えば、ヒトＢＲＳ−３、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＡＡＡ３５６０４およびその対立遺伝子；例えば、マウスＢＲＳ−３、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿０３３８９６およびその対立遺伝子；例えば、ラットＢＲＳ−３、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＡＦ５１０９８４およびその対立遺伝子）は、胃−放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ；例えば、ヒトＧＲＰ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００５３０５）およびニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ；例えば、ヒトＮＭＢ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００２５０２）に対して約５０％相同性を呈し、それらは一緒になって、ボンベシン様受容体群を形成する。ＢＲＳ−３は視床下部および子宮を含めた組織で選択的に発現される。ＢＲＳ−３の活性化は細胞内イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）の増大した蓄積をもたらし、これはＢＲＳ−３がＧｑに共役されることと一致する。最近の研究においては、ＢＲＳ−３ノックアウトマウスは肥満、糖尿病、および高血圧を発症した［Ｏｈｋｉ−Ｈａｍａｚａｋｉら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９７）３９０：１６５−１６９］。
【０００８】
Ｃ．ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）
ＧＡＢＡ（ガンマ−アミノ酪酸）は脳における主な阻害性伝達物質である。グルタミン酸デカルボキシラーゼ６７（ＧＡＤ６７）はＧＡＢＡ作動性ニューロンについてのマーカーである。ガンマ−アミノ酪酸Ａ型（ＧＡＢＡＡ）受容体は、哺乳動物脳における主な阻害性ニューロン受容体である。ＧＡＢＡによるそれらの活性化は固有のイオンチャネルを開き、塩化物が細胞に流入することを可能とし、引き続いて過剰分極を伴う。ＧＡＢＡＡ受容体は、最も一般的には、化学量論の２つのαサブユニット、２つのβサブユニットおよび１つのγサブユニットを有するα、βおよびγサブユニットから構成されるペンタマー構造である。哺乳動物においては、α１−６、β１−３およびγ１−３を含めたいくつかのＧＡＢＡＡ受容体サブユニットアイソフォームがクローン化されている。ＧＡＢＡＡ受容体のサブユニット組成はその薬理学的特性を決定する。ベンゾジアゼピン、例えば、ジアゼパムなどは、ＧＡＢＡＡ受容体上の特異的部位に結合し、ＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに増強させることによって、それらの治療効果を生じる。ベンゾジアゼピン結合部位に結合する他の化合物、例えば、ＦＧ７１４２（Ｎ−メチル−β−カルボリン−３−カルボキサミド）およびα５１Ａ（３−（５−メチルイソオキサゾール３−イル）−６−［（１−メチル−１，２，３−トリアゾール４−イル）メチル−オキシ］−１，２，４−トリアゾロ［３，４−α］フタラジン）はＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリック的に低下させることができる。
【０００９】
ＧＡＢＡは哺乳動物における睡眠、不安、痙攣、鬱病、精神病、認識などの状態の調節において役割を果たす。
【００１０】
Ｄａ  Ｓｅｔｔｉｍｏら、Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００７）１４：２６８０−２７０１；Ｍｏｈｌｅｒ，Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ（２００６）３２６：５０５−５１６；Ｃｒｅｓｔａｎｉら、Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００１）５９：４４２−４４５；Ｎｕｔｔ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｓｌｅｅｐ  Ｍｅｄ（２００６）１５：Ｓ７−Ｓ１１；Ｌｉｐｐａら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（２００５）１０２：７３８０−７３８５；ＭｃＫｅｒｍａｎら、Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２０００）３：５８７−９２；Ｌｏｗら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２９０：１３１−１３４；Ｃｒｅｓｔａｎｉら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（２００２）９９：８９８０−８９８５；Ｄａｗｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ（２００６）３１６：１３３５−１３４５；Ｃｏｌｌｉｎｓｏｎら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００２）２２：５５７２−５５８０；Ｃａｌａｂｒｅｓｉら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ（２００７）２８：１８８−１９５；Ｓａｎａｃｏｒａら、ＣＮＳ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ（２００７）６：１２７−１４０）。
【００１１】
Ｄ．視床下部
視床下部背内側核（ＤＭＨ）は、各々、睡眠および覚醒状態の促進に関与する、腹側外側視索前（ＶＬＰＯ）および外側視床下部領域（ＬＨ）への入力の最大源の１つである（Ｃｈｏｕら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００２）２２：９７７−９９０；Ｃｈｏｕら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００３）２３：１０６９１−１０７０２；Ｓａｐｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ（２００５）４３７：１２５７−１２６３；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ（１９９６）３７６：１４３−１７３；Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ（２００６）４９４：８４５−８６１）。特に、ＤＭＨニューロンは睡眠促進核ＶＬＰＯに突出する主な阻害性神経伝達物質ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を含有し、他方、グルタメート−チロトロピン−放出ホルモンニューロンは、オレキシンニューロンを含めて、覚醒促進ＬＨに向けて突出する（Ｃｈｏｕら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｓｉ（２００３）２３：１０６９１−１０７０２）。
【００１２】
ＶＬＰＯ  ＧＡＢＡ作動性ニューロンは、ＬＨにおいて覚醒促進オレキシンニューロンの刺激性を直接的に制御する（Ｇｏｎｇら、Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ（２００４）５５６：９３５−９４６）。ＬＨにおけるオレキシンニューロンは、マウス、イヌおよびヒトにおいて覚醒状態を促進する際に臨界的な役割を果たす（Ｃｈｅｍｅｌｌｉら、Ｃｅｌｌ（１９９９）９８：４３７−４５１；Ｈｕｎｇｓら、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ（２００１）１１：５３１−５３９；Ｌｉｎら、（１９９９）９８：３６５−３７６；Ｐｅｙｒｏｎら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ（２０００）６：９９１−９９７）。
【００１３】
Ｅ．Ｇタンパク質共役受容体
多数の受容体クラスがヒトに存在するが、これまで、ほとんどの豊富な治療的関連性は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＯＣＲ）クラスによって表されている。ヒトゲノム内にはほぼ３０，０００〜４０，０００の遺伝子があると見積もられており、これらのうち、ほぼ２％はＧＰＣＲをコードすると見積もられている。
【００１４】
ＧＰＣＲは医薬製品の開発のための重要な領域を表し：１００の公知のＧＰＣＲのうちほぼ２０から、全ての処方医薬のほぼ６０％が開発されている。例えば、１９９９年においては、トップ１００のブランド名処方薬物のうち、以下の薬物がＧＰＣＲと相互作用する（薬物に関連して治療される主な病気および／または障害は括弧に入れて示される）。
【００１５】
Ｃｌａｒｔｉｎ（登録商標）（アレルギー）    Ｐｒｏｚａｃ（登録商標）（鬱病）    Ｖａｓｏｔｅｃ（登録商標）（高血圧）    Ｐａｘｉｌ（登録商標）（鬱病）    Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標）（鬱病）    Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標）（精神病性障害）    Ｃｏｚａａｒ（登録商標）（高血圧）    Ｉｍｉｔｒｅｘ（登録商標）（偏頭痛）    Ｚａｎｔａｃ（登録商標）（反射）    Ｐｒｏｐｕｌｓｉｄ（登録商標）（反射病）    Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ（登録商標）（統合失調症）    Ｓｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標）（喘息）    Ｐｅｐｃｉｄ（登録商標）（反射）    Ｇａｓｔｅｒ（登録商標）（潰瘍）    Ａｔｒｏｖｅｎｔ（登録商標）（気管支痙攣）    Ｅｆｆｅｘｏｒ（登録商標）（鬱病）    Ｄｅｐａｋｏｔｅ（登録商標）（癲癇）    Ｃａｒｄｕｒａ（登録商標）（前立腺肥大）    Ａｌｌｅｇｒａ（登録商標）（アレルギー）    Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）（前立腺癌）    Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）（前立腺癌）    Ｄｉｐｒｉｖａｎ（登録商標）（麻酔）    ＢｕＳｐａｒ（登録商標）（不安）    Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）（気管支痙攣）    Ｈｙｔｒｉｎ（登録商標）（高血圧）    Ｗｅｌｌｂｕｔｒｉｎ（登録商標）（鬱病）    Ｚｙｒｔｅｃ（登録商標）（鼻炎）    Ｐｌａｖｉｘ（登録商標）（ＭＩ／発作）    Ｔｏｐｒｏｌ−ＸＬ（登録商標）（高血圧）    Ｔｅｎｏｒｍｉｎ（登録商標）（狭心症）    Ｘａｌａｔａｎ（登録商標）（緑内障）    Ｓｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）（喘息）    Ｄｉｏｖａｎ（登録商標）（高血圧）    Ｈａｒｎａｌ（登録商標）（前立腺過形成）
（Ｍｅｄ  Ａｄ  Ｎｅｗｓ  １９９９  Ｄａｔａ）
ＧＰＣＲは、その各々が膜に渡る、７つのアルファへリックスを形成する２２〜２４の間の疎水性アミノ酸の７つの配列を有する共通の構造的モチーフを共有する（各スパンは番号、すなわち、膜貫通１（ＴＭ１）、膜貫通２（ＴＭ２）などによって確認される）。膜貫通へリックスは、細胞膜の外部、または「細胞外」側の、膜貫通２および膜貫通３、膜貫通４および膜貫通５、および膜貫通６および膜貫通７の間のアミノ酸のストランドによって連結される（これらを、各々、「細胞外」領域１、２および３（ＥＣ−１、ＥＣ−２およびＥＣ−３）という）。膜貫通へリックスは、細胞膜の内部の、または「細胞内」側の膜貫通１および膜貫通２、膜貫通３および膜貫通４、および膜貫通５および膜貫通６の間のアミノ酸のストランドによっても連結される（これらを、各々、「細胞内」領域１、２および３（ＩＣ−１、ＩＣ−２およびＩＣ−３）という）。受容体の「カルボキシ」（「Ｃ」）末端は細胞内の細胞内空間に存在し、および受容体の「アミノ」（「Ｎ」）末端は細胞外部の細胞外空間に存在する。
【００１６】
一般に、リガンドが受容体と結合する場合（しばしば、受容体の「活性化」という）、細胞内領域および細胞内「Ｇタンパク質」の間の共役を容易にする受容体の立体配座の変化がある。ＧＰＣＲはＧタンパク質に関して「混乱しており」、すなわち、ＧＰＣＲは１を超えるＧタンパク質と相互作用できることが報告されている。Ｋｅｎａｋｉｎ，ＬＩｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８８）４３：１０９５−１１０１参照。他のＧタンパク質が存在するが、現在、Ｇｑ、Ｇｓ、Ｇｉ、ＧｚおよびＧｏが、同定されているＧタンパク質である。Ｇタンパク質とのリガンド活性化ＧＰＣＲの共役は、（「シグナル変換」といわれる）シグナリングカスケードプロセスを開始する。通常の条件下では、シグナル変換は、結局は、細胞の活性化または細胞の阻害をもたらす。理論に拘束されるつもりはないが、受容体のＩＣ−３ループならびにカルボキシ末端はＧタンパク質と相互作用すると考えられる。
【００１７】
Ｇ共役ＧＰＣＲは細胞内ｃＡＭＰレベルを増加させる。Ｇｉ、Ｇｏ、またはＧｚに共役したＧＰＣＲは細胞内ｃＡＭＰレベルを減少させる。Ｇｑ共役ＧＰＣＲは細胞内ＩＰ３およびＣａ２＋レベルを増加させる。
【００１８】
また、いくつかのクラスのＧＰＣＲを、Ｇ１５またはＧ１６などのホスホリパ−ゼＣ経路［Ｏｆｆｅｒｍａｎｎｓ＆Ｓｉｍｏｎ，Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ（１９９５）２７０：１５１７５−８０］、または同一経路、例えば、ホスホリパ−ゼＣ［Ｍｉｌｌｉｇａｎ＆Ｒｅｅｓ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９９）２０：１１８−２４］に非常に多数の異なるＧＰＣＲを共役するように設計されたキメラＧタンパク質に共役するように見える混然としたＧタンパク質もある。ホスホリパーゼＣ経路に共役したＧＰＣＲは細胞内ＩＰ３およびＣａ２＋レベルを増加させる。
【００１９】
生理学的条件下で、ＧＰＣＲは２つの異なる立体配座：「不活性な」状態および「活性ナ」状態の間で平衡して細胞膜に存在する。不活性な状態の受容体は、細胞内シグナリング変換経路に連結して、生物学的応答をもたらすシグナル変換を開始することができない。受容体の立体配座を活性な状態に変化させることにより、（Ｇ−タンパク質を介する）変換経路への連結を可能にし、生物学的応答を生じる。
【００２０】
受容体は、リガンド、または薬物などの化合物によって活性状態に安定化され得る。限定されないが、受容体のアミノ酸配列に対する修飾を含めた最近の発見は、活性状態の立体配座の受容体を促進し、安定化させるためのリガンドまたは薬物以外の手段を提供する。これらの手段は、受容体へのリガンド結合の効果をシミュレートすることによって、活性状態にある受容体を効果的に安定化させる。そのようなリガンド非依存性手段による安定化は「構成的受容体活性化」と呼ばれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｂｉｘｌｅｒら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ（１９７９）１３６：１２５７−１２６２
【非特許文献２】Ｋａｒａｃａｎら、Ｓｏｃ  Ｓｃｉ  Ｍｅｄ（１９７６）１０：２３９−２４４
【非特許文献３】Ｓｚａｂａｄｉ，Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００６）６１：７６１−７６６
【非特許文献４】Ｈａｒｒｉｓ，Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃａｒｅ  Ｃｌｉｎ（２００５）１１：５６７−５８６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
ヒトＢＲＳ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は配列番号１に与えられ；該コードされたヒトＢＲＳ−３ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号２に与えられる。
【００２３】
出願人らは、予期せぬことに、視床下部背内側核（ＤＭＨ）において、ＢＲＳ−３ニューロンの大部分はＧＡＢＡ作動性ニューロンであることを見出した。本発明は、睡眠関連障害の治療に適した化合物としての候補化合物をスクリーニングするためのＢＲＳ−３に関連する方法をその特徴とする。本発明は、睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害、および認識障害などのＧＡＢＡ関連神経学的障害のための医薬剤としての候補化合物をスクリーニングするためのＢＲＳ−３に関連する方法をその特徴とする。本発明の逆アゴニストおよびアンタゴニストは、睡眠を促進するための、および限定されないが、不眠症などを含めた睡眠を促進することによって緩和される障害の予防もしくは治療のための治療剤として有用である。本発明の逆アゴニストおよびアンタゴニストは、不眠症などの睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、汎発性不安障害またはパニック発作などの不安障害、癲癇、偏頭痛などの痙攣障害、大鬱病性障害などの鬱病性障害、統合失調症などの精神病性障害のための治療剤として有用である。本発明のアゴニストおよび部分アゴニストは、覚醒状態を促進するための、およびナルコレプシーなどに関連する過剰な眠気などの過剰な眠気を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。本発明のアゴニストおよび部分アゴニストは、ナルコレプシーなどの睡眠状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認知症、またはアルツハイマー型の認知症などの認識障害のための治療剤として有用である。
【００２４】
第１の態様において、本発明は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ）候補化合物を宿主細胞、またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで、ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）受容体の機能性を阻害する候補化合物の能力を決定する工程；
を含み、
ここで、ＧＰＣＲの機能性を阻害する候補化合物の能力は、候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法をその特徴とする。
【００２５】
ある実施形態において、該方法は睡眠を促進するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、不安障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、痙攣障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、偏頭痛を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、鬱病障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。
【００２６】
本発明は、加えて、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって、この第１の態様の工程（ａ）および（ｂ）を含み、さらに：
（ｃ）所望により、工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物を合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物を哺乳動物に投与する工程；および
（ｅ）化合物が、哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、または抗精神病活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を示し、抗痙攣活性を示し、抗偏頭痛活性を示し、抗鬱病活性を示し、または抗精神病活性を示す候補化合物の能力は、候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法をその特徴とする。
【００２７】
ある実施形態において、該方法は睡眠を促進するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、不安障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該化合物は、痙攣障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、偏頭痛を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、鬱病障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。
【００２８】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は実験室動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はげっ歯類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はラットである。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はマウスである。
【００２９】
いくつかの実施形態において、哺乳動物において化合物が睡眠を促進するか否かの該決定は睡眠ポリグラフィを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、該方法はＧＰＣＲの逆アゴニストを同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、逆アゴニストを医薬として処方する工程を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、該方法はＧＰＣＲのアンタゴニストを同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、医薬として該アンタゴニストを処方する工程を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、該接触は、ＧＰＣＲの公知のリガンドの存在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は、内因性ヒトＢＲＳ−３の公知のリガンドの存在下での接触を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、該接触は、ＧＰＣＲの公知のアゴニストの存在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲの公知のアゴニストは内因性ヒトＢＲＳ−３の公知のアゴニストである。ＧＰＣＲの公知のアゴニストの存在下での接触を含む該接触に関するいくつかの実施形態において、候補化合物は、公知のアゴニストがＧＰＣＲに接触するのに先立って、ＧＰＣＲと接触する。ＧＰＣＲの公知のアゴニストの存在下での接触を含む該接触に関するいくつかの実施形態において、候補化合物は、公知のアゴニストがＧＰＣＲと接触するに先立って、数分までの間、ＧＰＣＲと接触する。ＧＰＣＲの公知のアゴニストの存在下での接触を含む該接触に関するいくつかの実施形態において、候補化合物は、公知のアゴニストがＧＰＣＲと接触するのに先立って、約５分まで、約１０分まで、または約３０分までの間、ＧＰＣＲと接触する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、該接触はＧＰＣＲの公知のアゴニストの存在下での接触を含み、ここで、ＧＰＣＲの公知のアゴニストは表Ｄから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、該接触はＧＰＣＲの公知のアゴニストの存在下での接触を含み、ここで、ＧＰＣＲの公知のアゴニストは化合物Ｄ２８、化合物Ｄ３０、化合物Ｄ３１または化合物Ｄ３４である。
【００３５】
いくつかの実施形態において、該接触は、ＧＰＣＲの公知のリガンドの不在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は内因性ヒトＢＲＳ−３の公知のリガンドの不在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は、ＧＰＣＲの公知のアゴニストの不在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は、内因性ヒトＢＲＳ−３の公知のアゴニストの不在下での接触を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、該方法は第２のメッセンジャーを検出することを含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、該決定は、環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋よりなる群から選択される第２のメッセンジャーのレベルの測定を含むプロセスによるものである。いくつかの実施形態において、該第２のメッセンジャーはＩＰ３である。いくつかの実施形態において、細胞内ＩＰ３のレベルは減少する。いくつかの実施形態において、該第２のメッセンジャーはＣａ２＋である。いくつかの実施形態において、細胞内Ｃａ２＋のレベルは減少する。
【００３８】
いくつかの実施形態において、該決定は、メラニン保有細胞アッセイの使用を含むプロセスによるものである。いくつかの実施形態において、メラニン保有細胞は、色素分散を受ける。いくつかの実施形態において、候補化合物はアゴニスト誘導色素分散を阻害する。いくつかの実施形態において、候補化合物は構成的に（例えば、アゴニスト非依存性）誘導された色素分散を阻害する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、該決定は、ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合の測定を含むプロセスによる。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合は減少する。
【００４０】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、候補化合物によって引き起こされたＧＰＣＲの変調を、ＧＰＣＲをＧＰＣＲの公知のモジュレータに接触させることによって引き起こされたＧＰＣＲの第２の変調と比較する工程を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、ベースライン細胞内応答は、候補化合物の不在下でのベースライン応答と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％だけ候補化合物の存在下において阻害される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、ベースライン細胞内応答（例えば、公知アゴニストの不在下での応答）は、逆アゴニストの不在下でのベースライン応答と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％だけ逆アゴニストの存在下において阻害される。
【００４３】
いくつかの実施形態において、ベースライン細胞内応答（例えば、公知のアゴニストの存在下での応答）は、アンタゴニストの不在下でのベースライン応答と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％だけアンタゴニストの存在下において阻害される。
【００４４】
また、本発明は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、あるいは睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ’）宿主細胞、またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜を、候補化合物の存在下または不在下において、所望により標識された該ＧＰＣＲに対する公知のリガンドとを接触させる工程であって、ここで、ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ’）該公知のリガンドおよび該ＧＰＣＲの間の複合体を検出する工程；
（ｃ’）該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下においてより少ない該複合体が形成されるか否かを決定する工程；
（ｄ’）所望により、その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を合成する工程；
（ｅ’）その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を哺乳動物に投与する工程；ならびに
（ｆ’）化合物が、哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、または抗精神病活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を示し、抗痙攣活性を示し、抗偏頭痛活性を示し、抗鬱病活性を示し、または抗精神病活性を示す候補化合物の能力は、候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法に関する。
【００４５】
ある実施形態において、該方法は睡眠を促進するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、不安障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、痙攣障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、偏頭痛を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、鬱病障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は実験室動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はげっ歯類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はラットである。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はマウスである。
【００４７】
いくつかの実施形態において、化合物が哺乳動物において睡眠を促進するか否かの該決定は睡眠ポリグラフィを含む。
【００４８】
いくつかの実施形態において、該所望により標識された公知のリガンドが放射性標識されている。
【００４９】
いくつかの実施形態において、公知のリガンドは表Ｄから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、公知のリガンドが化合物Ｄ２８、化合物Ｄ３０、化合物Ｄ３１、または化合物Ｄ３４である。いくつかの実施形態において、公知のリガンドは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、公知のリガンドは化合物Ｅ２１または化合物Ｅ２２である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下においてより少ない該複合体が形成されるか否かの決定は、該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下において、少なくとも約１０％少ない、少なくとも約２０％少ない、少なくとも約３０％少ない、少なくとも約４０％少ない、少なくとも約５０％少ない、少なくとも約６０％少ない、少なくとも約７０％少ない、少なくとも約７５％少ない、少なくとも約８０％少ない、少なくとも約８５％少ない、少なくとも約９０％少ない、または少なくとも約９５％少ない該複合体が形成されるか否かを決定することを含む。
【００５１】
いくつかの実施形態において、該方法は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療する、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を単離するためのものである。
【００５２】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造（ｓｌｅｅｐ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ）を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症（ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｓｏｍｎｉａ）、睡眠状態誤認（ｓｌｅｅｐ  ｓｔａｔｅ  ｍｉｓｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ）、特発性不眠症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｉｎｓｏｍｎｉａ）、閉塞性睡眠時無呼吸症候群（ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｓｌｅｅｐ  ａｐｎｅａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、中枢性肺胞低換気症候群（ｃｅｎｔｒａｌ  ａｌｖｅｏｌａｒ  ｈｙｐｏｖｅｎｔｉｌａｔｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、周期的四肢運動障害（ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｌｉｍｂ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害（ｈｙｐｎｏｔｉｃ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｌｅｅｐ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、毒物誘発性睡眠障害（ｔｏｘｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群（ｔｉｍｅ  ｚｏｎｅ  ｃｈａｎｇｅ  （ｊｅｔ  ｌａｇ）  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、交代勤務睡眠障害（ｓｈｉｆｔ  ｗｏｒｋ  ｓｌｅｅｐ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、不規則睡眠覚醒パターン（ｉｒｒｅｇｕｌａｒ  ｓｌｅｅｐ−ｗａｋｅ  ｐａｔｔｅｒｎ）、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｐｈａｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、および非２４時間睡眠覚醒障害（ｎｏｎ−２４  ｈｏｕｒ  ｓｌｅｅｐ−ｗａｋｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）よりなる群から選択される。
【００５４】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は真核生物細胞である。
【００５７】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳動物宿主細胞はＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−７細胞、ＭＣＢ３９０１細胞、２９３細胞または２９３Ｔ細胞である。
【００５８】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は酵母細胞である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、宿主細胞はメラニン保有細胞である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＰＣＲはＲＴ−ＰＣＲである。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ヒトＤＮＡはＢＲＳ−３を発現する組織または細胞型に由来するヒトｃＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ヒトｃＤＮＡは視床下部に由来する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体は、内因性ＢＲＳ−３  Ｇタンパク質共役受容体である。
【００６６】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは組換体である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は組換え宿主細胞である。
【００６８】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは内因性である。いくつかの実施形態において、内因性であるＧＰＣＲは内因性哺乳動物ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、内因性哺乳動物ＧＰＣＲであるＧＰＣＲは内因性哺乳動物ＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは非内因性である。
【００６９】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは哺乳動物ＢＲＳ−３である。
【００７０】
いくつかの実施形態において、該宿主細胞は、ＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。
【００７１】
いくつかの実施形態において、該決定は、ＧＰＣＲを含む膜で行われる。
【００７２】
いくつかの実施形態において、候補化合物は小分子である。
【００７３】
いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、候補化合物は抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、候補化合物は抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、候補化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、候補化合物はペプトイドではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は脂質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は非内因性である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、真核生物または原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は哺乳動物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲの機能性を阻害、または刺激することが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストであることが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲの部分アゴニストであることが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストであることが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲのアンタゴニストであることが知られていない化合物である。
【００７４】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の合成を含む。いくつかの実施形態において、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【００７５】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに：所望により、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の構造を決定する工程；および、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、あるいは工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の名称または構造を提供することを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【００７６】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに：所望により、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の構造を決定する工程；所望により、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、あるいは工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の名称または構造を提供する工程；次いで、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または工程（ｃ’）において、その存在下でより少ない該複合体が形成される化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を生成または合成することを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を阻害する化合物、または睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【００７７】
第２の態様において、本発明は、第１の態様の方法に従って同定可能な、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物をその特徴とする。
【００７８】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、第１の実施形態の方法に従って同定される。
【００７９】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。
【００８０】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【００８１】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【００８２】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【００８３】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストは哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストであるＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。
【００８４】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は小分子である。
【００８５】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はペプトイドではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は非内因性である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【００８６】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞において行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞において行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞において行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、上記モジュレータは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイ��おいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、経口的に活性である。
【００８８】
第３の態様において、本発明は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物をその特徴とする。
【００８９】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【００９０】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、第２の態様に従う。
【００９１】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【００９４】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、小分子である。
【００９６】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ペプトイドでない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、脂質でない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、非内因性である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【００９７】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００μＭ未満、または約１０μＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳで結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞において行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞において行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイに��いて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【００９８】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、経口的に活性である。
【００９９】
第４の態様において、本発明は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を混合することを含む、医薬組成物を調製する方法をその特徴とする。
【０１００】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、第２の態様に従う。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストは哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストであるＧＰＣＲの逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、小分子である。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片でない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、脂質である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ペプトイドでない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、脂質ではない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、非内因性である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質でない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物が天然で生産する物質でない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、真核生物が天然で生産する物質でない。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質でない。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞において行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つアゴニストまたはアンタゴニストである。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、経口的に活性である。
【０１１２】
第５の態様において、本発明は、治療上有効量の哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または該逆アゴニストもしくはアンタゴニストを含む医薬上許容される組成物、および医薬上許容される担体を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含み、睡眠を促進する、あるいは睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療する方法をその特徴とする。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは第２の態様に従う。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、睡眠の促進、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の予防もしくは治療は、睡眠の強化を促進することを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、睡眠の促進、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の予防もしくは治療は、デルタ力を増加させることを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは小分子である。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは脂質である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはペプトイドでない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは脂質でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは非内因性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、原核生物が天然で生産する物質でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおい���３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは化合物Ｅ２１である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは化合物Ｅ２２である。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは化合物Ｅ２１である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは化合物Ｅ２２である。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは経口的に活性である。
【０１２８】
第６の態様において、本発明は、睡眠を促進するための、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するための医薬の製造のための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストの使用をその特徴とする。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するための、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するための医薬の製造のための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストの使用は、哺乳動物において、睡眠を促進するための、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するための医薬の製造のための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストの使用である。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは第２の態様に従う。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、睡眠の促進、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の予防もしくは治療は、睡眠の定着（ｓｌｅｅｐ  ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｉｏｎ）を促進することを含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、睡眠の促進、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の予防もしくは治療は、デルタ力（ｄｅｌｔａ  ｐｏｗｅｒ）を増加させることを含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは小分子である。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは脂質である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはペプトイドでない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは脂質でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは非内因性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、原核生物または真核生物が天然で生産する物質でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、真核生物が天然で生産する物質でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにお���て３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは化合物Ｅ２１である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは化合物Ｅ２２である。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物のＢＲＳ−３のアンタゴニストは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは化合物Ｅ２１である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは化合物Ｅ２２である。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、経口的に活性である。
【０１４５】
第７の態様において、本発明は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物をその特徴とする。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物は、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物である。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物は、哺乳動物において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または逆アゴニストもしくはアンタゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物である。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは第２の態様に従う。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、睡眠の促進、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の予防もしくは治療は、睡眠の定着を促進することを含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、睡眠の促進、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の予防もしくは治療は、デルタ力を増大することを含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、睡眠障害は不眠症である。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調症は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症および残遺型統合失調症から選択される。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、小分子である。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ポリペプチドであり、ただし、該ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、脂質である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストはペプトイドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、脂質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、非内因性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞で行われる色素分散アッセイにのいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにお���て３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、化合物Ｅ２１である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、化合物Ｅ２２である。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは化合物Ｅ２１である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストは化合物Ｅ２２である。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、経口的に活性である。
【０１６３】
第８の態様において、本発明は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ）候補化合物を宿主細胞、またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜と接触させる工程であって、ここで、ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；ならびに
（ｂ）受容体の機能性を刺激する候補化合物の能力を決定する工程；
を含み、
ここで、ＧＰＣＲの機能性を刺激する候補化合物の能力は、候補化合物が、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法をその特徴とする。
【０１６４】
ある実施形態において、該方法は覚醒状態を促進するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、過剰な眠気を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。
【０１６５】
本発明は、加えて、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって、この第８の態様の工程（ａ）および（ｂ）を含み、さらに：
（ｃ）所望により、工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物を合成する工程；
（ｄ）工程（ｂ）におけるＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物を哺乳動物に投与する工程；および
（ｅ）化合物が哺乳動物において覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、哺乳動物において、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を示す候補化合物の能力は、候補化合物が覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法をその特徴とする。
【０１６６】
ある実施形態において、該方法は覚醒状態を促進するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、過剰な眠気を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は実験室動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はげっ歯類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はラットである。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はマウスである。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、化合物が哺乳動物において覚醒状態を促進するか否かの該決定は睡眠ポリグラフィを含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、該方法はＧＰＣＲのアゴニストを同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、該アゴニストを医薬として処方する工程を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、該方法はＧＰＣＲの部分アゴニストを同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、該部分アゴニストを医薬として処方する工程を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、該接触は、ＧＰＣＲの公知のリガンドの不在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は、内因性ヒトＢＲＳ−３の公知のリガンドの不在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は、ＧＰＣＲの公知のアゴニストの不在下での接触を含む。いくつかの実施形態において、該接触は、内因性ヒトＢＲＳ−３の公知のアゴニストの不在下での接触を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、該方法は第２のメッセンジャーを検出することを含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、該決定は、環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアセチルグリセロール（ＤＡＧ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣａ２＋よりなる群から選択される第２のメッセンジャーのレベルの測定を含むプロセスによる。いくつかの実施形態において、該第２のメッセンジャーはＩＰ３である。いくつかの実施形態において、細胞内ＩＰ３のレベルは増加する。いくつかの実施形態において、該第２のメッセンジャーはＣａ２＋である。いくつかの実施形態において、細胞内Ｃａ２＋のレベルは増加する。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、該決定は、メラニン保有細胞アッセイの使用を含むプロセスによる。いくつかの実施形態において、メラニン保有細胞は色素分散を受ける。いくつかの実施形態において、候補化合物は色素分散を刺激する。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、該決定は、ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合の測定を含むプロセスによる。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲを含む膜へのＧＴＰγＳ結合が増加される。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、候補化合物によって引き起こされたＧＰＣＲの変調を、ＧＰＣＲをＧＰＣＲの公知のモジュレータに接触させることによって引き起こされたＧＰＣＲの第２の変調と比較する工程を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、ベースライン細胞内応答は、候補化合物の不在下でのベースライン応答と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、または少なくとも約５００％だけ候補化合物の存在下において刺激される。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、ベースライン細胞内応答は、アゴニストまたは部分アゴニストの不在下でのベースライン応答と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、または少なくとも約５００％だけアゴニストまたは部分アゴニストの存在下において刺激される。
【０１７９】
また、本発明は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ’）候補化合物の存在下または不在下で、宿主細胞またはＧＰＣＲを発現する宿主細胞の膜を、所望により標識された該ＧＰＣＲに対する公知のリガンドとを接触させる工程であって、ここで、ＧＰＣＲは：
（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｉｉｉ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｉｖ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｖｉｉ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、工程；
（ｂ’）該公知のリガンドおよび該ＧＰＣＲの間の複合体を検出する工程；
（ｃ’）該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下においてより少ない該複合体が形成されるか否かを決定する工程；
（ｄ’）所望により、その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を合成する工程；
（ｅ’）その存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物を哺乳動物に投与する工程；ならびに
（ｆ’）化合物が、哺乳動物において覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、哺乳動物において、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を示す候補化合物の能力は、候補化合物が、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法に関する。
【０１８０】
ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、過剰な眠気を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。ある実施形態において、該方法は、認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法である。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態において非ヒト哺乳動物は実験室動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はげっ歯類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はラットである。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はマウスである。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、該方法は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を単離するためのものである。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、化合物が哺乳動物において覚醒状態を促進するか否かの該決定は睡眠ポリグラフィを含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、該所望により標識された公知のリガンドは放射性標識されている。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、公知のリガンドは表Ｄから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、公知のリガンドは、化合物Ｄ２８、化合物Ｄ３０、化合物Ｄ３１、または化合物Ｄ３４である。いくつかの実施形態において、公知のリガンドは表Ｅから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、公知のリガンドは化合物Ｅ２１または化合物Ｅ２２である。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下においてより少ない該複合体が形成されるか否かの該決定は、該候補化合物の不在下よりも該候補化合物の存在下において、少なくとも約１０％少ない、少なくとも約２０％少ない、少なくとも約３０％少ない、少なくとも約４０％少ない、少なくとも約５０％少ない、少なくとも約６０％少ない、少なくとも約７０％少ない、少なくとも約７５％少ない、少なくとも約８０％少ない、少なくとも約８５％少ない、少なくとも約９０％少ない、または少なくとも約９５％少ない該複合体が形成されるか否かを決定することを含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰（ｐｏｓｔｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｓｏｍｎｉａ）、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は鬱病および統合失調症から選択される。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症、またはアルツハイマー型の認知症である。いくつかの実施形態において、健忘症障害は全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は真核生物細胞である。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞はＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−７細胞、ＭＣＢ３９０１細胞、２９３細胞または２９３Ｔ細胞である。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は酵母細胞である。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、宿主細胞はメラニン保有細胞である。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、ＰＣＲはＲＴ−ＰＣＲである。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、ヒトＤＮＡは、ＢＲＳ−３を発現する組織または細胞型に由来するヒトｃＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ヒトｃＤＮＡは視床下部に由来する。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いるヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体は、内因性ＢＲＳ−３  Ｇタンパク質共役受容体である。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは組換え体である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は組換え宿主細胞である。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは内因性である。いくつかの実施形態において、内因性であるＧＰＣＲは内因性哺乳動物ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、内因性哺乳動物ＧＰＣＲであるＧＰＣＲは内因性哺乳動物ＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは非内因性である。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは哺乳動物ＢＲＳ−３である。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、該宿主細胞はＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、該決定は、ＧＰＣＲを含む膜で行われる。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、候補化合物は小分子である。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、候補化合物は、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体または抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、候補化合物は抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、候補化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、候補化合物はペプトイドではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は脂質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は非内因性である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲの機能性を阻害し、または刺激することが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストであることが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲの部分アゴニストであることが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲの逆アゴニストであることが知られていない化合物である。いくつかの実施形態において、候補化合物は、ＧＰＣＲのアンタゴニストであることが知られていない化合物である。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）において形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を合成することを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２１４】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに：所望により、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の構造を決定する工程；ならびに、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、あるいは工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の名称または構造を提供することを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、該方法は、さらに：所望により、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）において形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の構造を決定する工程；所望により、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、あるいは工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下で、より少ない該複合体が工程（ｃ’）で形成される化合物、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物の名称または構造を提供する工程；ならびに、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、またはその存在下でより少ない該複合体が工程（ｃ’）において形成される化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を生産または合成することを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｂ）においてＧＰＣＲの機能性を刺激する化合物、または覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２１６】
第９の態様において、本発明は、第８の態様の方法に従って同定可能な、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物をその特徴とする。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、第８の態様の方法に従って同定される。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される群から選択される。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は、鬱病および統合失調症から選択される。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、健忘症障害は、全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＧＰＣＲのアゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はＧＰＣＲの部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲのアゴニストまたは部分アゴニストは、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストであるＧＰＣＲのアゴニストまたは部分アゴニストは、ＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は小分子である。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はペプトイドではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は非内因性である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであある。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択された値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ���満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は経口的に活性である。
【０２３１】
第１０の態様において、本発明は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物をその特徴とする。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、第９の態様に従う。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は鬱病および統合失調症から選択される。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症、またはアルツハイマー型の認知症である。いくつかの実施形態において、健忘症障害は全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は小分子である。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はペプトイドではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質でない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は非内因性である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞、またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、経口的に活性である。
【０２４６】
第１１の態様において、本発明は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物、および医薬上許容される担体を混合することを含む、医薬組成物を調製する方法をその特徴とする。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、第９の実施形態に従う。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される群から選択される。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は鬱病および統合失調症から選択される。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症、またはアルツハイマー型の認知症である。いくつかの実施形態において、健忘症障害は全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は小分子である。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではないものとする。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物はペプトイドではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は脂質でない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は非内因性である。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞に行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未���、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに適した化合物は、経口的に活性である。
【０２６１】
第１２の態様において、本発明は、治療上有効量の哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬上許容される組成物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、覚醒状態を促進する方法、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療する方法をその特徴とする。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストはＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは第９の態様に従う。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される群から選択される。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は鬱病および統合失調症から選択される。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症、またはアルツハイマー型の認知症である。いくつかの実施形態において、健忘症障害は全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは小分子である。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは脂質である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはペプトイドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは脂質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは非内因性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、原核生物または真核生物が天然に生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは原核生物が天然に生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、真核生物が天然に生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラノーマ保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、該アッセイにおいて約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未���、該アッセイにおいて２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおいてＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは表Ｄから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、化合物Ｄ２８、化合物Ｄ３０、化合物Ｄ３１、または化合物Ｄ３４である。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは経口的に活性である。
【０２７８】
第１３の態様において、本発明は、覚醒状態を促進するための、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するための医薬の製造のための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストの使用をその特徴とする。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するための、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するための医薬の製造のための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストの使用は、哺乳動物において、覚醒状態を促進するための、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するための医薬の製造のための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストの使用である。
【０２８０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストは、配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストは、ＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは第９の態様に従う。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０２８５】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０２８７】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される群から選択される。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は鬱病および統合失調症から選択される。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、健忘症障害は全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは小分子である。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは脂質である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはペプトイドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは脂質でない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは非内因性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０���Ｍ未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは表Ｄから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、化合物Ｄ２８、化合物Ｄ３０、化合物Ｄ３１、または化合物Ｄ３４である。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは経口的に活性である。
【０２９６】
第１４の態様において、本発明は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物をその特徴とする。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物である。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物は、哺乳動物において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニスト、または該アゴニストまたは部分アゴニストおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物である。
【０３００】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストは配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはヒトＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストはＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは第９の態様に従う。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連する。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害は、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害に関連し、ここで、睡眠障害はナルコレプシーである。
【０３０５】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連する。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害に関連し、ここで、神経学的障害は多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィ、およびパーキンソン病よりなる群から選択される群から選択される。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連する。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、過剰な眠気は精神医学的障害に関連し、ここで、精神医学的障害は鬱病および統合失調症から選択される。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症、またはアルツハイマー型の認知症である。いくつかの実施形態において、健忘症障害は全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは小分子である。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドであり、但し、ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは脂質である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはポリペプチドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストはペプトイドではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは脂質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは非内因性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、原核生物または真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、原核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、真核生物が天然で生産する物質ではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、哺乳動物が天然で生産する物質ではない。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、該アッセイにおいて１０μＭ未満、該アッセイにおいて９μＭ未満、該アッセイにおいて８μＭ未満、該アッセイにおいて７μＭ未満、該アッセイにおいて６μＭ未満、該アッセイにおいて５μＭ未満、該アッセイにおいて４μＭ未満、該アッセイにおいて３μＭ未満、該アッセイにおいて２μＭ未満、該アッセイにおいて１μＭ未満、該アッセイにおいて９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて２０ｎ���未満、該アッセイにおいて１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストまたはである。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、表Ｄから選択される化合物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは、化合物Ｄ２８、化合物Ｄ３０、化合物Ｄ３１、または化合物Ｄ３４である。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストは経口的に活性である。
【０３１５】
第１５の態様において、本発明は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害用の医薬剤について、候補化合物をスクリーニングする方法をその特徴とし、該方法は：
（ａ）Ｇタンパク質共役受容体を含む宿主細胞または宿主細胞の膜を提供する工程であって、該Ｇタンパク質共役受容体は配列番号２に対して少なくとも約７５％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約８５％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、または少なくとも約９５％の同一性を有する、工程；および
（ｂ）該Ｇタンパク質共役受容体に対する候補化合物をスクリーニングする工程；
を含む。
【０３１６】
ある実施形態において、該方法はＧタンパク質共役受容体のアゴニストを同定する工程を含む。
【０３１７】
ある実施形態において、該方法はＧタンパク質共役受容体の部分アゴニストを同定する工程を含む。
【０３１８】
ある実施形態において、該方法はＧタンパク質共役受容体の逆アゴニストを同定する工程を含む。
【０３１９】
ある実施形態において、該方法はＧタンパク質共役受容体のアンタゴニストを同定する工程を含む。
【０３２０】
ある実施形態において、該スクリーニングは、該アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニスト、またはアンタゴニストが睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、抗精神活性を有し、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定することを含む。
【０３２１】
ある実施形態において、該スクリーニングは：
（ｉ）該アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストもしくはアンタゴニストを哺乳動物に投与する工程；および
（ｉｉ）該アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニスト、またはアンタゴニストが睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、抗精神活性を有し、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を有するか否かを決定する工程；
を含む。
【０３２２】
ある実施形態において、該哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。
【０３２３】
ある実施形態において、該方法は、さらに、該アゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストもしくはアンタゴニストを医薬として処方する工程を含む。
【０３２４】
ある実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２に対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２５】
ある実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０３２６】
第１６の態様において、本発明は、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害用の医薬剤としての候補化合物をスクリーニングするためのＧタンパク質共役受容体の使用をその特徴とし、ここで、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２に対して少なくとも約７５％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約８５％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、または少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３２７】
ある実施形態において、該スクリーニングは、Ｇタンパク質共役受容体のアゴニストのためである。
【０３２８】
ある実施形態において、該スクリーニングは、Ｇタンパク質共役受容体の部分アゴニストのためである。
【０３２９】
ある実施形態において、該スクリーニングは、Ｇタンパク質共役受容体の逆アゴニストのためである。
【０３３０】
ある実施形態において、該スクリーニングは、Ｇタンパク質共役受容体のアンタゴニストのためである。
【０３３１】
ある実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２に対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０３３２】
ある実施形態において、Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０３３３】
出願人は、本発明の実施形態のいずれかからの任意の１以上の候補化合物を排除する権利を留保する。出願人は、本発明の実施形態のいずれかからの任意の１以上のモジュレータを排除する権利を留保する。その例として、限定されないが、出願人は、本発明の実施形態のいずれかから任意の１以上の逆アゴニストもしくはアンタゴニストを排除する権利も留保する。さらなる例として、限定されないが、出願人は、本発明の実施形態のいずれかから任意の１以上のアゴニストまたは部分アゴニストを排除する権利を留保する。出願人は、本発明の実施形態のいずれかから任意のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを排除する権利を留保する。出願人は、加えて、本発明の実施形態のいずれかから任意の睡眠障害を排除する権利を留保する。出願人は、加えて、本発明の実施形態のいずれかから任意の神経学的障害を排除する権利を留保する。出願人は、加えて、本発明の実施形態のいずれかから任意の精神医学的障害を排除する権利を留保する。出願人は、加えて、本発明の実施形態のいずれかから任意のＧＡＢＡ関連神経学的障害を排除する権利を留保する。また、本発明の睡眠障害は個々に、または任意の組合せにて実施形態に含めることができることも明らかに意図される。本発明の神経学的障害は個々にまたは任意の組合せでも実施形態に含めることができることが明らかに意図される。また、本発明の精神医学的障害は、個々に、または任意の組合せでも、実施形態に含むことができることが明らかに意図される。また、本発明のＧＡＢＡ関連神経学的障害は、個々に、または任意の組合せでも、実施形態に含めることができると明らかに意図される。
【０３３４】
さら技巧を凝らすことなく、当業者であれば、これまでの記載を用いて本発明を最大限実施することができると考えられる。これまでの詳細な記載は、理解の明瞭性のためだけに掲げており、本発明の範囲内の修飾が当業者に明らかになるように、不要な限定が理解されるべきではない。
【０３３５】
本出願を通じて、種々の刊行物、特許および公開された特許出願が引用される。本出願で引用されたこれらの刊行物、特許および公開された特許出願の開示は、本明細書において参照によりその全体が本開示に組み込まれる。刊行物、特許、または公開された特許出願の出願人による本明細書での引用は、該刊行物、特許、または公開された特許出願を先行技術として自認するものではない。
【０３３６】
本出願は、示された日付に合衆国特許および商標局に合衆国急行便を介して出願された以下の仮特許出願からの優先権の利益を主張する：２００７年１月５日に出願された米国仮特許出願番号６０／８７８，７９６。該仮特許出願の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０３３７】
【図１】説明のためであって、限定されないが、図１は、ＢＲＳ−３に無関係の内因性の構成的に活性なＧｓ共役ＧＰＣＲのＧｓα融合タンパク質構築体である「標的受容体」に対する候補化合物の一次スクリーニングの結果を示す。「化合物Ａ」についての結果をウエルＡ２に供する。「化合物Ｂ」についての結果をウエルＧ９に供する（実施例６参照）。
【図２】ＢＲＳ−３は、細胞内ＩＰ３蓄積を増加させるための検出可能な構成的活性を呈する（実施例１０参照）。
【図３】ＢＲＳ−３における［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）のアゴニスト活性の特徴付け。［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）は表Ｄにおける化合物Ｄ３４に対応する。Ａ．ＦＬＩＰＲアッセイを用いるＢＲＳ−３における［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）のアゴニスト活性の特徴付け。Ｂ．メラニン保有細胞アッセイを用いるＢＲＳ−３における［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）のアゴニスト活性の特徴付け。Ｃ．ＩＰ３蓄積アッセイを用いるＢＲＳ−３における［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）のアゴニスト活性の特徴付け（実施例１１参照）。
【図４】ラットにおける視床下部背内側核（ＤＭＨ）でのＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７の発現を示す代表的な光顕微鏡写真画像はパネルＡ〜Ｃとして供される（実施例１４参照）。
【図５Ａ】ラットにおける視床下部背内側核（ＤＭＨ）でのＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７の発現の代表的なグラフ表示、ここで、図５Ｂは図５Ａの一部の拡大である（実施例１４参照）。
【図５Ｂ】ラットにおける視床下部背内側核（ＤＭＨ）でのＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７の発現の代表的なグラフ表示、ここで、図５Ｂは図５Ａの一部の拡大である（実施例１４参照）。
【図６】ＢＲＳ−３の共発現、およびＢＲＳ−３の検出可能な発現を呈する視床下部のサブ領域内のニューロンによる多数の神経伝達物質またはマーカーのインサイチュハイブリダイゼーション分析の結果（実施例１４参照）。
【発明を実施するための形態】
【０３３８】
定義
アゴニストは、ＧＰＣＲへの結合により、ＧＰＣＲを活性化して、ＧＰＣＲによって媒介される細胞内応答を誘導する剤（例えば、リガンド、候補化合物）を意味する。
【０３３９】
本明細書で用いるアミノ酸の略語を表Ｂに記載する：
【０３４０】
【表Ｂ−１】
2010515882.tif 000003
【０３４１】
【表Ｂ−２】
2010515882.tif 000004
アンタゴニストは、アゴニストまたは部分アゴニストとほぼ同一部位においてＧＰＣＲに結合し、好ましくは競合的に結合するが、ＧＰＣＲの活性形態によって開始される細胞内応答を活性化せず、それにより、アゴニストまたは部分アゴニストによる細胞内応答を阻害することができる剤（例えば、リガンド、候補化合物）を意味する。アンタゴニストは、典型的には、アゴニストまたは部分アゴニストの不在下においてベースライン細胞内応答を減少させない。
【０３４２】
抗体は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含むことがここで意図されている。本発明の抗体は当該分野で公知のいずれの適当な方法によっても調製することができる。
【０３４３】
不安障害は過剰な不安に関連する障害を含むことが理解されるべきである。不安障害は、必ずしも限定されないが、次の用語はＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，「ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）」（Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ），２０００）において定義されるように、パニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫神経症障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害を含む。
【０３４４】
ＧＰＣＲポリペプチドまたはアミノ酸配列の生物学的に活性な断片は、天然に生じるＧＰＣＲの構造的および生化学的機能を有するポリペプチドまたはアミノ酸配列の断片を意味する。ある実施形態において、生物学的に活性な断片はＧタンパク質に共役される。ある実施形態において、生物学的に活性な断片はリガンドに結合する。
【０３４５】
候補化合物は、スクリーニング技術で使用することができ、本明細書においては、試験化合物と互換可能に用いる分子（例えば、限定されないが、化学化合物）を意味する。
【０３４６】
脱力発作は、通常、情緒によって誘発される筋緊張の突然の喪失のエピソ−ドをいう。
【０３４７】
コドンは、リン酸基に共役した、一般には、ヌクレオシド［アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、シジチン（Ｃ）、ウリジン（Ｕ）およびチミジン（Ｔ）］を含み、翻訳された場合、アミノ酸をコードする３つのヌクレオチド（またはヌクレオチドと同等物）の群を意味する。
【０３４８】
認識障害は、支配的な特徴としての機能の従前のレベルと比較して、認識の有意な損傷を有する障害を含むと理解されるべきである。認識障害は、必ずしも限定されないが、ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，「ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）」（Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ），２０００）において用語が定義されているように、（必ずしも限定されないが、全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱および特定されない精神錯乱を含めた）精神錯乱、（必ずしも限定されないが、アルツハイマー型の認知症、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症、および特定されない認知症を含めた）認知症、（必ずしも限定されないが、全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害、および特定されない健忘症障害を含めた）健忘症障害、および特定されない認識障害を含むと理解されるべきである。
【０３４９】
組成物は、少なくとも１つの成分を含む物質を意味する。
【０３５０】
化合物効率または効率は、例えば、候補化合物の存在下または不在下におけるｃＡＭＰレベルの測定によって、１以上のＧＰＣＲ機能を阻害または刺激する化合物の能力を意味する。化合物効率を測定する例示的な手段は、本特許書類の実施例セクションに開示されている。
【０３５１】
構成的に活性な受容体は、そのリガンドまたはその化学的同等体への受容体の結合を介する以外の手段によって活性状態において安定化された受容体を意味する。
【０３５２】
構成的に活性化された受容体は、構成的に活性であるようにまたはより構成的に活性であるように修飾されている内因性受容体を意味する。
【０３５３】
構成的受容体活性化は、そのリガンドまたはその化学的同等体への結合の不在下における受容体の活性化を意味する。
【０３５４】
接触または接触させることは、インビトロ系におけるか、またはインビボ系におけるかを問わず、一緒に少なくとも２つの部位をブリッジングすることを意味する。
【０３５５】
痙攣障害は、対象の障害を含むと理解され、ここで、対象は痙攣、例えば、癲癇発作による痙攣を罹っている。痙攣障害は、必ずしも限定されないが、癲癇および非癲癇発作、例えば、痙攣剤の対象への投与による痙攣を含む。
【０３５６】
鬱病障害は、用語がＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，「ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）」（Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ），２０００）で定義されているように、限定されないが、大鬱病障害、気分変調性障害、および特定されない鬱病障害を含む。
【０３５７】
直接同定する、または直接同定されたとは、句「候補化合物」または「試験化合物」との関係において、Ｇタンパク質共役受容体に対する公知のリガンド（例えば、公知のアゴニスト）の不在下におけるＧタンパク質共役受容体に対する化合物のスクリーニングを意味する。
【０３５８】
睡眠異常症とは、睡眠を開始または維持する障害をいう。
【０３５９】
内因性は、哺乳類が天然に生産する物質を意味する。内因性は、用語「受容体」に関連して、例えば、限定されないが、哺乳動物（例えば、限定されないが、ヒト）によって天然で生産されるものを意味する。内因性は、遺伝子の対立遺伝子変種、ならびにそのようにコードされた対立遺伝子ポリペプチド変種を含む。本明細書で用いるように、「内因性ＧＰＣＲ」および「天然ＧＰＣＲ」は互換可能に用いられる。対照的に、用語、非内因性は、この文脈では、哺乳動物（例えば、限定されないが、ヒト）によって天然で生産されないものを意味する。
【０３６０】
発現ベクターは、発現ベクターについての適当な宿主細胞組換え体において、クローン化ＤＮＡの転写、および転写されたｍＲＮＡの翻訳に必要なＤＮＡ配列を意味する。適当に構築された発現ベクターは、宿主細胞における自律複製のための複製起点、選択マーカー、限定された数の有用な静電酵素部位、高コピー数に対する潜在能力、および活性なプロモータを含有する。転写されるべきクローン化ＤＮＡは、発現ベクター内の構成的に、または条件的に活性なプロモータに作動可能に連結されている。
【０３６１】
Ｇタンパク質共役受容体融合タンパク質およびＧＰＣＲ融合タンパク質は、本明細書で開示された発明との関係では、各々、少なくとも１つのＧタンパク質、最も好ましくは、そのようなＧタンパク質のアルファ（α）サブユニット（これはＧＴＰに結合するサブユニットである）に融合した、内因性の構成的に活性なＧＰＣＲまたは非内因性の構成的に活性化されたＧＰＣＲを含む非内因性タンパク質を意味し、該Ｇタンパク質は、好ましくは、内因性ＧＰＣＲと天然で共役するＧタンパク質と同一タイプである。好ましい形態において、Ｇタンパク質は、ＧＰＣＲのＣ末端に直接融合することができるか、あるいは該２つの間にスペーサがあり得る。
【０３６２】
宿主細胞は、その中に一体化されたベクターを有することができる細胞を意味する。この関係では、ベクターは、典型的には、適当なプロモータ配列と作動可能に連結してＧＰＣＲまたはＧＰＣＲ融合タンパク質をコードする核酸を含み、ＧＰＣＲまたはＧＰＣＲ融合タンパク質の発現が起こるのを可能にする。
【０３６３】
睡眠過剰とは、過剰な日中の睡魔（ＥＤＳ）をいう。
【０３６４】
本明細書で用いる予防もしくは治療を必要とするとは、対象または動物が必要とする、または治療から利益をうけるであろう介護士（例えば、ヒトの場合には医師、看護師、看護従業者など；非ヒト哺乳動物を含めた動物の場合には獣医）によってなされた判断をいう。この判断は、介護士の専門的知識の領域にある種々の因子に基づいてなされるが、本発明の化合物によって治療可能な状態の結果として、対象または動物が病気である、または病気となるだろう知識を含む。
【０３６５】
阻害する、または阻害しているは、用語「嘔吐」に対する関係において、嘔吐が、化合物に不在下とは反対に、化合物の存在下で嘔吐が減少し、または妨げられることを意味する。
【０３６６】
不眠症とは、対象による不適切なまたは非休息的睡眠の認識をいう。
【０３６７】
逆アゴニストは、ＧＰＣＲに結合し、かつアゴニストまたは部分アゴニストの不在下において観察される正常な基礎レベル活性未満の受容体の活性な形態によって開始されるベースライン細胞内応答を阻害する剤（例えば、リガンド、候補化合物）を意味する。
【０３６８】
リガンドは本明細書で用いるように、ＧＰＣＲに特異的に結合する分子を意味する。内因性リガンドは、天然ＧＰＣＲに結合する内因性分子である。ＧＰＣＲのリガンドは、限定されないが、ＧＰＣＲのアゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストもしくはアンタゴニストであってよい。
【０３６９】
偏頭痛は、いくつかの場合においては、光の閃光、盲点、または腕または脚中のうずきなどの感覚的警告サイン（オーラ）が先行する、またはそれに伴うつらい頭痛をいう。偏頭痛には、また、しばしば、他の兆候、ならびに嘔吐、吐気、および光および音の極端な感受性などの兆候が伴う。
【０３７０】
本明細書で用いるように、変調する、または修飾するは、特定の活性、機能または分子の量、質、または効果の増大または減少をいうことを意味する。
【０３７１】
モジュレータは、先に定義したアゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストおよびアンタゴニストを含むように定義される。
【０３７２】
ナルコレプシーとは、過剰な日中の睡魔（ＥＤＳ）、乱れた夜の睡眠、異常なレム（ＲＥＭ）睡眠および、しばしば、脱力発作によって特徴付けられる睡眠障害をいう。
【０３７３】
錯眠とは、睡眠に関連する挙動の乱れをいう。
【０３７４】
部分アゴニストは、完全アゴニストが行うよりも程度が低いにかかわらず、ＧＰＣＲへの結合によって、ＧＰＣＲを活性化して、ＧＰＣＲによって変調される細胞内応答を誘導する剤（例えば、リガンド、候補化合物）を意味する。
【０３７５】
医薬組成物は、少なくとも１つの有効成分を含む組成物を意味し、それにより、組成物は哺乳動物（例えば、限定されないがヒト）における特定の有効な結果について調査することができる。当業者であれば、有効成分が、例えば、当業者の必要性に基づいて所望の有効な結果を有するか否かを決定するのに適当な技術を理解し、認識するであろう。
【０３７６】
ポリヌクレオチドは、一本鎖または二重型のいずれかの１を超える分子のＲＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド配列をいう。本発明のポリヌクレオチドは、合成、組み換え、エキソビボ世代、またはその組合せを含めた、いずれかの公知の方法によって、ならびに当該分野で公知の精製方法を利用して調製することができる。
【０３７７】
ポリペプチドとは、ポリマーの長さに関係することなくアミノ酸のポリマーをいう。かくして、ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質はポリペプチドの定義内に含まれる。この用語は、ポリペプチドの発現後修飾を特定または排除しない。例えば、グリコシル基、アセチル基、リン酸基、脂質基などの共有結合を含むポリペプチドは、用語ポリペプチドによって明らかに含まれる。
【０３７８】
プライマーは、本明細書においては、標的ヌクレオチド配列に対して相補的であって、標的ヌクレオチド配列にハイブリダイズするのに用いられる特定のオリゴヌクレオチド配列を示すように用いる。プライマーは、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、または逆転写酵素によって触媒されるヌクレオチド重合の開始点として機能する。
【０３７９】
睡眠の促進とは、睡眠の持続および／または質の増加をいう。
【０３８０】
覚醒状態の促進とは、覚醒状態の持続の増加をいう。
【０３８１】
精神病性障害は、ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，「ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）」（Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ），２０００）において用語が定義されているように、必ずしも限定されないが、統合失調症、統合失調障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害を含む。
【０３８２】
受容体機能性とは、限定されないが、遺伝子転写の調節、イオンの流入または流出の調節、触媒反応の実行、および／または第２のメッセンジャー応答の誘導などのＧタンパク質を介する活性の変調を含めた、細胞において刺激を受け取り、および効果を変調する受容体の正常な操作をいう。
【０３８３】
統合失調症は、用語がＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，「ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ（登録商標）」（Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ），２０００）で定義されているように、必ずしも限定されないが、サブタイプ妄想型統合失調症、解体型統合失調症、緊張性統合失調症、未分化統合失調症、および残遺型統合失調症を含むことが理解される。
【０３８４】
第２のメッセンジャーは、受容体活性化の結果として生じる細胞内応答を意味する。第２のメッセンジャーは、例えば、イノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）、ジアセチルグリセロール（ＤＡＧ）、環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）、環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）、ＭＡＰキナーゼ活性、ＭＡＰＫ／ＥＲＫキナーゼキナーゼ１（ＭＥＫＫ１）活性、およびＣＡ２＋を含むことができる。第２のメッセンジャー応答は、受容体活性化の決定のために測定することができる。加えて、第２のメッセンジャー応答は、例えば、受容体の逆アゴニスト、部分アゴニスト、アゴニスト、およびアンタゴニストとしての候補化合物の同定のために測定することができる。
【０３８５】
選択的ＢＲＳ−３モジュレータとは、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ）またはニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ）などの、１以上の密接に関連する受容体に渡るＢＲＳ−３受容体に対する選択性を有するＢＲＳ−３のモジュレータをいう。
【０３８６】
睡眠障害とは、通常の睡眠のパターンまたは挙動の乱れをいう。睡眠障害は、必ずしも限定されないが、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｌｅｅｐ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＩＣＳＤ−睡眠障害の国際分類、改訂版：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｃｏｄｉｎｇ  ｍａｎｕａｌ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｌｅｅｐ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００１に記載された睡眠障害を含むと理解されるべきである。
【０３８７】
小分子は、ペプチド、ペプチド模倣薬、アミノ酸、アミノ酸類縁体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類縁体、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、有機化合物または無機化合物（すなわち、ヘテロ有機化合物または有機金属化合物を含む）、およびその塩、エステルおよび他の医薬上許容される形態を含めた、モル当たり約１０，０００グラム未満の分子量を有する化合物を意味すると解釈されるべきである。ある好ましい実施形態において、小分子は、モル当たり約５，０００グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物である。ある好ましい実施形態において、小分子は、モル当たり約１，０００グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物である。ある好ましい実施形態において、小分子は、モル当たり約５，０００グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物である。
【０３８８】
刺激する、または刺激している、は、用語「応答」との関係では、化合物の不在下とは反対に、化合物の存在下において応答が増加することを意味する。
【０３８９】
対象は、本明細書で用いるように、好ましくは、限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、非ヒト哺乳動物、およびヒトを含めた哺乳動物をいい、より好ましくは、マウスまたはラット、最も好ましくはヒトをいう。
【０３９０】
治療上有効量とは、本明細書で用いるように、以下：
（１）病気の予防；例えば、病気、状態または障害の素因があり得るが、未だ、病気の病理学または兆候学を経験し、または呈していない対象において病気、状態または障害を予防すること、
（２）病気の阻害；例えば、病気、状態または障害の病理学または兆候学を経験している、または呈している対象において病気、状態または障害を阻害すること（すなわち、病理学および／または兆候学の更なる進展の阻止）、および
（３）病気の緩和；例えば、病気、状態または障害の病理学または兆候学を経験している、または呈している対象における病気、状態または障害を緩和すること（すなわち、病理学および／または兆候学の逆行）
の１以上を含む研究者、獣医、医師または他の臨床家によって求められている組織、系、動物、対象またはヒトにおいて生物学的または医学的応答を誘導する活性な化合物または医薬剤の量をいう。
【０３９１】
変種は、該用語が本明細書で用いられるように、各々、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるが、１以上の必須の特性を保有できるポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。ポリヌクレオチドの典型的な変種は、別の参照ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列が異なる。変種のヌクレオチド配列の変化は、参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を改変させてもさせなくてもよい。ポリペプチドの典型的な変種は、別の参照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。変種および参照ポリペプチドは、いずれかの組合せにて、１以上の置換、付加、欠失によってアミノ酸配列が異なってよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変種は対立遺伝子変種などの天然に生じるものであってよく、あるいはそれは、天然で生じることが知られていない変種であってよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に生じない変種は、突然変異誘発技術によって、または直接的合成によって作製することができる。
Ａ．導入
以下のセクションの順序はプレゼンテーション効率について記載され、開示または以下の請求の範囲に対する限定として意図されず、またそのように解釈されない。
Ｂ．受容体の表現
１．目的とするＧＰＣＲポリペプチド
本発明のＧＰＣＲは：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２〜３９９；
（ｃ）特異的プライマー配列番号３および配列番号４を用いてヒトＤＮＡ試料に対するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｄ）ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列における１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；
（ｇ）配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列；および
（ｈ）（ａ）〜（ｇ）のいずれか１つの生物学的に活性な断片；
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことができる。
【０３９２】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲは、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体のアミノ酸配列を含む。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体は、内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体は、内因性哺乳動物Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体は、非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。
【０３９５】
いくつかの実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体は、内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体は、配列番号２を有する内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンであるＧタンパク質共役受容体は、非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。
【０３９６】
いくつかの実施形態において、ヒトＤＮＡは、ＢＲＳ−３を発現する組織または細胞型に由来するヒトｃＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ヒトｃＤＮＡは視床下部に由来する。
【０３９７】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは組換え体である。いくつかの実施形態において、組み換えＧＰＣＲは哺乳動物ＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、組み換えＧＰＣＲはヒトＢＲＳ−３である。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは内因性である。
【０３９９】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは非内因性である。
【０４００】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは哺乳動物ＢＲＳ−３である。
【０４０１】
いくつかの実施形態において、内因性である本発明のＧＰＣＲは哺乳動物ＢＲＳ−３である。
【０４０２】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは構成的に活性である。いくつかの実施形態において、構成的に活性である本発明のＧＰＣＲは内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、構成的に活性である本発明のＧＰＣＲは非内因性ＧＰＣＲである。いくつかの実施形態において、構成的に活性である本発明のＧＰＣＲは哺乳動物ＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３は配列番号２またはその対立遺伝子である。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、本発明の内因性ＧＰＣＲは構成的に活性である。いくつかの実施形態において、本発明の非内因性ＧＰＣＲは構成的に活性である。いくつかの実施形態において、本発明の哺乳動物ＢＲＳ−３は構成的に活性である。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３は配列番号２またはその対立遺伝子である。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、本発明のＧＰＣＲは構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、本発明の内因性ＧＰＣＲは構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、本発明の非内因性ＧＰＣＲは構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、本発明の哺乳動物ＢＲＳ−３は構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３は構成的に活性なＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、ヒトＢＲＳ−３は配列番号２またはその対立遺伝子である。
【０４０５】
いくつかの実施形態において、対象の方法で用いることができるＧタンパク質共役受容体は配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンである。いくつかの実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンは内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンは、配列番号２を有する内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンは非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、構成的活性は、細胞内ＩＰ３を増加させるためである。いくつかの実施形態において、構成的活性は、メラニン保有細胞に色素分散を受けさせるためである。ある実施形態において、配列番号２を有する受容体の構成的に活性なバージョンは、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）が、それに対して、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満の、ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはメラニン保有細胞アッセイにおいて、またはＩＰ３アッセイにおいて、該受容体におけるＥＣ５０値を有するアゴニストであるＧタンパク質共役受容体である。
【０４０６】
説明のために、限定されないが、Ｎ末端メチオニン残渣またはＮ末端シグナルペプチドの欠失は、本発明で用いることができる生物学的に活性な断片を提供すると考えられる。いくつかの実施形態において、本発明の生物学的に活性な断片は、構成的活性の検出可能なレベルを呈する断片である。いくつかの実施形態において、構成的活性は、細胞内ＩＰ３を増加させるためである。いくつかの実施形態において、構成的活性は、メラニン保有細胞に色素分配を受けさせるためである。ある実施形態において、本発明の生物学的に活性な断片は、それに対して、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）が、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満の、ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはメラニン保有細胞アッセイにおいて、またはＩＰ３アッセイにおいて、該受容体におけるＥＣ５０値を有するアゴニストであるＧタンパク質共役受容体である。ある実施形態において、本発明の生物学的に活性な断片は、抗体を哺乳動物ＢＲＳ−３に特異的に結合させる断片である。ＢＲＳ−３に対する抗体は、商業的に入手可能であり；例えば、ヒトＢＲＳ−３に対する抗体はＡｔｒａｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）から、およびＡＢＲ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ（Ｇｏｌｄｅｎ，ＣＯ）から入手可能である。
【０４０７】
配列番号２のヒトＢＲＳ−３の対立遺伝子変種は、本発明の範囲内にあると考えられる。
【０４０８】
配列番号２のヒトＢＲＳ−３の哺乳動物オルソログである変種は、本発明の範囲内にあると考えられる。説明のために、限定されないが、マウスＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿０３３８９６）、ラットＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＡＦ５１０９８４）、チンパンジ−ＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＸＰ＿００１１３７５４１）、アカゲザルＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００１０２８０７４）、イヌＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＸＰ＿８５４７６９）、ヒツジＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００１００９２１５）、ウシＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＸＰ＿５８４２１１）、およびモルモットＢＲＳ−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号Ｐ３５３７１）は、本発明の範囲内であると考えられる。
【０４０９】
ある実施形態において、対象の方法で用いることができる変種Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２のアミノ酸配列において１個または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性哺乳動物Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性ヒトＧタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、構成的活性は細胞内ＩＰ３を増加させるためである。いくつかの実施形態において、構成的活性は、メラニン保有細胞に色素分散を受けさせるためである。いくつかの実施形態において、配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有する該Ｇタンパク質共役受容体は、それに対して、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）が約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満のＦＬＩＰＲアッセイにおいて、メラニン保有細胞アッセイにおいて、またはＩＰ３アッセイにおいて、該受容体におけるＥＣ５０値を有するアゴニストであるＧタンパク質共役受容体である。
【０４１０】
ある実施形態において、本発明の方法で用いることができる変種Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２のアミノ酸配列における１０以下の保存的アミノ酸置換および／または３以下の非保存的アミノ酸置換によって配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有するＧタンパク質共役受容体である。ある実施形態において、アルギニン、リシンおよびヒスチジンは相互に対して保存的に置換可能であり；グルタミン酸およびアスパラギン酸は相互に対して保存的に置換可能であり；グルタミンおよびアスパラギンは相互に対して保存的に置換可能であり；ロイシン、イソロイシンおよびバリンは相互に対して保存的に置換可能であり；フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは相互に対して保存的に置換可能であり；またグリシン、アラニン、セリン、スレオニンおよびメチオニンは相互に対して保存的に置換可能である。アミノ酸置換、アミノ酸欠失およびアミノ酸付加は任意の位置（例えば、ＣまたはＮ末端、または内部位置）におけるものであってよい。いくつかの実施形態において、変種は内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性哺乳動物Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性ヒトＧタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、構成的活性は細胞内ＩＰ３を増加させるためである。いくつかの実施形態において、構成的活性はメラニン保有細胞に色素分配を受けさせるためである。ある実施形態において、配列番号２から誘導されたアミノ酸配列を有する該Ｇタンパク質共役受容体は、それに対して、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）が約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満のＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはメラニン保有細胞アッセイにおいて、またはＩＰ３アッセイにおいて、該受容体におけるＥＣ５０値を有するアゴニストであるＧタンパク質共役受容体である。
【０４１１】
配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する変種Ｇタンパク質共役受容体は、本発明の範囲内にあると考えられる。いくつかの実施形態において、変種は内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性哺乳動物Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性ヒトＧタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、構成的活性は細胞内ＩＰ３を増加させるためのものである。いくつかの実施形態において、構成的活性はメラニン保有細胞に色素分配を受けさせるためである。ある実施形態において、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体は、それに対して、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）が、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満のＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはメラニン保有細胞アッセイにおいて、またはＩＰ３アッセイにおいて、該受容体におけるＥＣ５０値を有するアゴニストであるＧタンパク質共役受容体である。ある実施形態において、配列番号２に対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するＧタンパク質共役受容体は、哺乳動物ＢＲＳ−３に抗体を特異的に結合させるＧタンパク質共役受容体である。ＢＲＳ−３に対する抗体は、商業的に入手可能であり；例えば、ヒトＢＲＳ−３に対する抗体はＡｔｌａｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）から、およびＡＢＲ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ（Ｇｏｌｄｅｎ，ＣＯ）から入手可能である。パーセント同一性は公知のコンピュータプログラムを用いて慣用的に決定することができる。
【０４１２】
ある実施形態において、本発明の方法で用いることができる変種Ｇタンパク質共役受容体は、配列番号２に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。例えば、配列番号２に対して９５％「同一性」を有する変種Ｇタンパク質共役受容体とは、変種のアミノ酸配列が、配列番号２の各１００アミノ酸当たり５までのアミノ酸改変を含むことができる以外は、配列番号２のアミノ酸１〜３９９と同一であることを意味する。かくして、例えば、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を得るためには、配列中のアミノ酸残基の５％（１００のうち５）までを、配列番号２のアミノ酸１〜３９９と比較して、別のアミノ酸で挿入し、欠失し、または置換することができる。これらの改変は、アミノまたはカルボキシ末端において、あるいは配列中の残基のうちいずれかに左右されて散在するそれらの末端位置間の任意の箇所、または配列内の１以上の連続基において起こり得る。
【０４１３】
いくつかの実施形態において、本発明の方法で用いることができる変種Ｇタンパク質共役受容体は、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性哺乳動物Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は内因性ヒトＧタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は非内因性Ｇタンパク質共役受容体である。いくつかの実施形態において、変種は、構成的活性の検出可能なレベルを呈する。いくつかの実施形態において、構成的活性は、細胞内ＩＰ３を増加させるためである。いくつかの実施形態において、構成的活性はメラニン保有細胞に色素分散を受けさせるためである。ある実施形態において、ストリンジェントな条件下で配列番号１の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役受容体は、それに対して、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）が、約１０μＭ未満、約５μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満のＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはメラニン保有細胞アッセイにおいて、またはＩＰ３アッセイにおいて、該受容体におけるＥＣ５０値を有するアゴニストであるＧタンパク質共役受容体である。ハイブリダイゼーション技術は当業者によく知られている。いくつかの実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルトの溶液１０％デキストラン硫酸、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃における一晩のインキュベ−ション；続いての、約５０℃、約５５℃、約６０℃、または約６５℃における０．１×ＳＳＣまたは０．２×ＳＳＣ中でのフィルタの洗浄を含む。いくつかの実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルトの溶液、１０％デキストラン硫酸および２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃における一晩のインキュベ−ション；続いての、約５０℃、約５５℃、約６０℃、または約６５℃における、０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、または０．２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中でのフィルタの洗浄を含む。
【０４１４】
ａ．配列の同一性
ある実施形態において、パーセント同一性は、当該分野でよく知られている基本ローカルアラインメント検索ツール（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（「ＢＬＡＳＴ」）を用いて評価する［例えば、その各々の開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｈｕｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９０）８７：２２６４−２２６８；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９９０）２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９３）３：２６６−２７２；ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ（１９９７）２５：３３８９−３４０２参照］。ＢＬＡＳＴプログラムは、ユーザによって供されるデフォルトパラメータ、または修飾パラメータで用いることができる。好ましくは、パラメータはデフォルトパラメータである。
【０４１５】
ある実施形態において、グローバル配列アラインメントとも言われる、クエリ配列（例えば、配列番号２のアミノ酸配列）および検索すべき配列の間の最良な全体の一致を決定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら［Ｃｏｍｐ  Ａｐｐ  Ｂｉｏｓｃｉ（１９９０）６：２３７−２４５；その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる］のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを用いて決定することができる。配列アラインメントにおいて、クエリ配列および検索された配列は共にアミノ酸配列である。該グローバル配列アラインメントの結果はパーセント同一性で表される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸アラインメントで用いる好ましいパラメータは：マトリックス＝ＰＡＭ  ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、ミスマッチペナルティ＝１、ジョイニングペナルティ＝２０、ランダム化グループ＝２５、長さ＝０、カットオフスコア＝１、ウインドウサイズ＝配列長さ、ギャップペナルティ＝５、ギャップサイズペナルティ＝０．０５、ウインドウサイズ＝２４７、または検索されたアミノ酸配列の長さのいずれかの短い方である。
【０４１６】
検索された配列が、内部欠失のためではなく、ＮまたはＣ末端欠失のためクエリ配列よりも短いとき、パーセント同一性において、結果は手動で修正する必要がある。なぜならば、ＦＡＳＴＤＢプログラムは、グローバルパーセント同一性を計算する場合に、検索された配列のＮおよびＣ末端切形を説明しないからである。クエリ配列に対するＮおよびＣ末端において切形された検索された配列については、パーセント同一性は、クエリ配列の合計残基のパーセントとしての、対応する検索された配列残基と一致／整列しない、検索された配列のＮおよびＣ末端にあるクエリ配列の残基の数を計算することによって修正される。残基が一致／整列したか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列アラインメントの結果によって決定される。このパーセンテージは、次いで、特定のパラメータを用いる前記ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算されたパーセント同一性から差し引いて、最終のパーセント同一性スコアに到達させる。この最終のパーセント同一性スコアは、本発明の目的に用いるものである。クエリ配列と一致／整列しない、検索された配列のＮおよびＣ末端に対する残基のみが、パーセント同一性スコアを手動で調整する目的で考えられる。すなわち、検索された配列の最も遠いＮまたはＣ末端残基の外側にあるクエリアミノ酸残基のみである。
【０４１７】
例えば、９０アミノ酸残基検索配列を１００残基クエリ配列と整列させて、パーセント同一性を決定する。欠失は、検索配列のＮ末端で起こり、従って、ＦＡＳＴＤＢアラインメントはＮ末端における最初の残基と一致／整列しない。１０の不対残基は、配列の１０％（一致しないＮおよびＣ末端における残基の数／クエリ配列における残基の合計数）を表わし、従って、１０％はＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから差し引かれる。残りの９０残基が完全に一致すれば、最終のパーセント同一性は９０％となろう。
【０４１８】
別の例において、９０残基検索配列は１００残基クエリ配列と比較される。このときの欠失は内部であり、従って、クエリと一致／整列しない、検索配列のＮまたはＣ末端には残基が存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって計算されるパーセント同一性は手動で修正されない。再度、クエリ配列と一致／整列しない、ＦＡＳＴＤＢに提示された、対象の配列のＮおよびＣ末端の外側の残基位置のみが手動で修正される。他の修正は、本発明の目的のためになされる。
【０４１９】
ｂ．融合タンパク質
ある実施形態において、目的とするポリペプチドは、融合タンパク質であり、例えば、親和性タグドメインまたはレポータードメインを含有することができる。適当な親和性タグは、別の部位、通常は別のポリペプチド、最も通常には抗体に特異的に結合することができるいずれのアミノ酸配列も含む。適当な親和性タグは、例えば、当該分野で知られているように、エピトープタグ、例えば、（血球凝集素インフルエンザウイルスからの）Ｖ５タグ、ＦＬＡＧタグ、ＨＡタグ、ｍｙｃタグなどを含む。適当な親和性タグは、当該分野で知られているように、結合基質が知られているドメイン、例えば、ＨＩＳ，ＧＳＴおよびＭＢＰタグ、および特異的結合パートナー、例えば、抗体、特にモノクローナル抗体が入手可能である他のタンパク質からのドメインも含む。適当な親和性タグは、特異的に結合し、かつ適当な結合パートナー、例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ受容体を用いて検出することができる、ＩｇＧ  Ｆｃ領域などのいずれのタンパク質−タンパク質相互作用ドメインも含む。そのような融合タンパク質は、欠失した、または代替アミノ酸で置換されたそのＮ末端メチオニン残基を有するＧＰＣＲとインフレームで融合した異種Ｎ末端ドメイン（例えば、エピトープタグ）を含有することができると明らかに意図される。
【０４２０】
適当なレポータードメインは、ポリペプチドの存在を報告することができる任意のドメインも含む。親和性タグを用いて、例えば、タグに特異的に結合する標識された抗体を用いてポリペプチドの存在を報告してもよいが、発光レポータードメインはより通常に用いられる。適当な発光レポータードメインは（例えば、ホタル、ウミホタル属（Ｖａｒｇｕｌａ）、ウミシイタケ（Ｒｅｎｉｌｌａ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）またはレミラ・ミューレリ（Ｒｅｎｉｌｌａ  ｍｕｅｌｌｅｒｉ）からの）ルシフェラーゼ、またはその発光変種を含む。他の適当なレポータードメインは（例えば、クラゲ、サンゴ、およびエクオリア（Ａｅｑｕｏｒｉａ）、ウミシイタケ（Ｒｅｎｉｌｌａ）、Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ、Ｓｔｙｌａｔｕｌａ種からのものなどの他の腔腸動物からの）蛍光タンパク質、またはその発光変種を含む。これらのレポータータンパク質の発光変種は当該分野で非常によく知られており、天然レポータータンパク質と比較して、より明るく、よりぼやけたものであってよく、あるいは異なる励起および／または発光スペクトルを有してもよい。例えば、いくつかの変種は、当該分野で知られているように、それらがもはや緑色には見えず、青色、シアン色、黄色、増強された黄赤色（各々、ＢＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰ  ｅＹＥＰおよびＲＦＰと呼ばれる）に見えてよく、または他の発光スペクトルを有してもよいように改変される。他の適当なレポータードメインは、β−ガラクトシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、クロラムフェニコ−ルアセチルトランスフェラーゼ、および分泌された胚アルカリ性ホスファタ−ゼなどの生化学的変化または色の変化を通じてポリペプチドの存在を報告することができるドメインを含む。
【０４２１】
また、当該分野で知られているように、親和性タグまたはレポータードメインは、目的とするポリペプチド中のいずれの位置に存在してもよい。しかしながら、ほとんどの実施形態においては、それらが目的とするポリペプチドのＣまたはＮ末端に存在する。
【０４２２】
２．目的とするＧＰＣＲポリペプチドをコードする核酸
核酸を操作するための遺伝子暗号および組換え技術は公知であり、目的とするＧＰＣＲポリペプチドのアミノ酸配列は先に記載されているので、目的とするＧＰＣＲポリペプチドをコードする核酸の設計および生産は、十分に当業者の技量内である。ある実施形態において、標準的な組換えＤＮＡ技術（Ａｕｓｕｂｅｌ，ら、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）方法が用いられる。例えば、ＧＰＣＲコード配列は、本明細書に記載される必要がない種々の組換え方法のいずれか１つ、またはその組合せを用いて、ＧＰＣＲコード配列のライブラリーから単離することができる。タンパク質をコードする核酸配列中のヌクレオチドの引き続いての置換、欠失、および／または付加もまた、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いてなすこともできる。
【０４２３】
例えば、部位特異的突然変異誘発およびサブクローニングを用いて、目的とするポリペプチドをコードするポリヌクレオチド中の核酸残基を導入／欠失／置換することができる。他の実施形態において、ＰＣＲを用いてもよい。目的とするポリペプチドをコードする核酸は全体がオリゴヌクレオチドから化学合成によって作製することもできる（例えば、Ｃｅｌｌｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）２９７：１０１６−８）。
【０４２４】
いくつかの実施形態において、目的とするポリペプチドをコードする核酸のコドンは、特定の種、特に哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ハムスター、非ヒト霊長類またはヒト種の細胞での発現について最適化される。いくつかの実施形態において、目的とするポリペプチドをコードする核酸のコドンは、特定の種、特に両生類種の細胞での発現について最適化される。
【０４２５】
ａ．ベクター
本発明は、さらに、対象の核酸を含む（「構築体」とも言われる）ベクターを提供する。本発明の多くの実施形態において、対象の核酸配列は、配列が、例えば、プロモータを含めた発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主において発現されるであろう。対象の核酸は、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの集積部分として、宿主細胞において複製することができる発現ベクターに配置される。通常、発現ベクターは選択マーカー、例えば、テトラサイクリンまたはネオマイシンを含有して、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にする（例えば、本明細書において参照により組み込まれる米国特許第４，７０４，３６２号参照）。単一および二重発現カセットベクターを含めたベクターは当該分野でよく知られている（Ａｕｓｕｂｅｌ，ら、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）。適当なベクターはウイルスベクター、プラスミド、コスミド、人工染色体（ヒト人工染色体、細菌人工染色体、酵母人工染色体など）、ミニ染色体などを含む。レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルスベクターを用いてもよい。
【０４２６】
種々の発現ベクターが、細胞中の目的とするポリペプチドを生産する目的で当業者も入手可能であり、（例えば、Ｉｎｖｉｔｇｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡから）商業的に入手可能な発現ベクターを含む。商業的に入手可能な発現ベクターは、非限定例として、ＣＭＶプロモータベースのベクターを含む。１つの適当な発現ベクターはｐＣＭＶである。発現ベクターはアデノウイルスであってよい。例示的なアデノウイルスベクターは、Ｑｂｉｏｇｅｎｅ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からＡｄＥａｓｙ（商標）として購入することができる［その各々の開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｅ  ＴＣら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９８）９５：２５０９−２５１４；および米国特許第５，９２２，５７６号］。他の適当な発現ベクターは当業者に容易に明らかであろう。
【０４２７】
対象の核酸は、通常、目的とする対象のポリペプチドをコードする単一のオープンリーディングフレームを含み、ある実施形態においては、目的とするポリペプチドの発現のための宿主細胞は真核生物細胞、例えば、ヒト細胞などの哺乳動物細胞であってよいので、オープンリーディングフレームはイントロンによって中断されていてもよい。対象の核酸は、典型的には、対象の核酸に加えて、ＲＮＡ安定性、翻訳効率などを指令することができる３’および５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含有することができる転写ユニットの一部である。対象の核酸は、対象の核酸に加えて、目的とするポリペプチドの転写および発現を指令する核酸プロモータ、および転写ターミネータを含有する発現カセットの一部であってもよい。
【０４２８】
真核生物プロモータは、ウイルスプロモータおよび真核生物遺伝子に由来するプロモータを含めた、真核生物宿主生物において機能的であるいずれのプロモータでもあり得る。例示的な真核生物プロモータは、限定されないが、以下：マウスメタロチオネインＩ遺伝子配列のプロモータ（Ｈａｒｍｅｒら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．１：２７３−２８８，１９８２）；ヘルペスウイルスのＴＫプロモータ（ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｃｅｌｌ  ３１：３５５−３６５，１９８２）；ＳＶ４０初期プロモータ（Ｂｅｎｏｉｓｔら、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）２９０：３０４−３１０，１９８１）；酵母ｇａｌｌ遺伝子配列プロモータ（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９：６９７１−６９７５，１９８２）Ｓｉｌｖｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌｏ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８１：５９５１−５９ＳＳ，１９８４）、ＣＭＶプロモータ、ＥＦ−１プロモータ、エクジソン応答性プロモータ、テトラサイクリン応答性プロモータなどを含む。ウイルスプロモータは特に注目すべきものであろう。というのはそれらが一般に特に強いプロモータだからである。ある実施形態において、標的病原体のプロモータであるプロモータを用いる。本発明で用いるプロモータは、それらが導入されている細胞型（および／または動物）においてそれらが機能的であるように選択される。ある実施形態において、プロモータは、ＣＭＶプロモータである。
【０４２９】
ある実施形態において、対象のベクターは選択マーカーの発現を提供することもできる。適当なベクターおよび選択マーカーは当該分野でよく知られており、Ａｕｓｕｂｅｌ，ら（Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５）およびＳａｍｂｒｏｏｋ，ら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｒｐｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）において議論されている。種々の異なる遺伝子が選択マーカーとして使用されてきたが、対象のベクターにおいて選択マーカーとして使用される特定の遺伝子は、主として、便宜のために選択される。公知の選択マーカー遺伝子は：チミジンキナーゼ遺伝子、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＣＡＤ、アデノシンデアミナーゼ遺伝子、アスパラギンシンターゼ遺伝子、抗生物質耐性遺伝子、例えば、ｔｅｔｒ、ａｍｐｒ、Ｃｍｒまたはｃａｔ、ｋａｎｒまたはｎｅｏｒ（アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子）、ヒグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺伝子などを含む。
【０４３０】
前記したように、目的とするポリペプチドは、アフィニティドメインおよび／またはレポータードメインを含有する融合タンパク質であってよい。例えば、ＧＰＣＲのＣまたはＮ末端において、レポーターまたはタグおよびＧＰＣＲの間の融合を作製する方法は十分に当業者の技量内であり（例えば、ＭｃＬｅａｎら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９  ５６：１１８２−９１；Ｒａｍｓａｙら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００１，３１５−３２３）、これ以上は記載しない。そのような融合タンパク質は、欠失、または代替アミノ酸で置換されたそのＮ末端メチオニン残基を有していたＧＰＣＲとインフレーム融合した異種Ｎ末端ドメイン（例えば、エピトープタグ）を含有してもよいことは明示的に考えられる。目的とするポリペプチドは、まず、天然ポリペプチドから作製することができ、次いで、前記したような、適当なレポーター／タグに作動可能に連結することができる。
【０４３１】
対象の核酸は、制限部位、多重クローニング部位、プライマー結合部位、結紮可能な端部、組換え部位などを含有して、通常、目的とするポリペプチドをコードする核酸の構築を容易にすることもできる。
【０４３２】
ｂ．宿主細胞
本発明は、さらに、対象の核酸を含むベクターを含む宿主細胞を提供する。適当な宿主細胞は、原核生物、例えば、細菌細胞（例えば、大腸菌）、ならびに真核生物細胞、例えば、動物細胞（例えば、昆虫、哺乳動物、魚類、両生類、鳥類、または爬虫類細胞）、植物細胞（例えば、トウモロコシ、またはシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）細胞）、または真菌（例えば、酵母細胞、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞）を含む。ある実施形態において、目的とするポリペプチドをコードする核酸の発現に適したいずれの細胞も宿主細胞として用いることができる。通常、動物宿主細胞系が用いられ、その例は以下の通りである：サル腎臓細胞（ＣＯＳ細胞）、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶＩ細胞（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５  １）；ヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ−２９３［「２９３」］，Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ＨＥＫ−２９３Ｔ［「２９３Ｔ」］細胞；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４２１６，（１９８０）；シリアンゴールデンハムスター細胞ＭＣＢ３９０１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９５９５）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶＩ  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト頚癌腫細胞（ＨｅＬａ，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４２２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（ｈｅｐ  Ｇ２，ＨＢ８０６５）；マウス乳癌（ＭＭＴ  ０６０５６２，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ：３８３：４４−６８（１９８２））；ＮＩＨ／３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５８）；およびマウスＬ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１）。
【０４３３】
ある実施形態において、メラニン保有細胞が用いられる。メラニン保有細胞は下等脊椎動物で見出される皮膚細胞である。関連物質および方法は、米国特許第５，４６２，８５６号および米国特許第６，０５１，３８６号の開示に従うだろう。これらの特許の開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４３４】
ある実施形態において、酵母細胞が用いられる。
【０４３５】
さらなる細胞系は当業者に明らかとなり、広く種々の細胞系がＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２０１１０−２２０９から入手可能である。
Ｃ．候補化合物のスクリーニング
１．一般的ＧＰＣＲスクリーニングアッセイ技術
Ｇタンパク質受容体は、活性になるとＧタンパク質（例えば、Ｇｑ，Ｇｓ，Ｇｉ，Ｇｚ，Ｇｏ）に結合し、ＧＴＰのＧタンパク質への結合を刺激する。次いで、Ｇタンパク質はＧＴＰａｓｅとして作用し、ＧＴＰをゆっくりとＧＤＰまで加水分解し、それにより、受容体は、通常の条件下では、脱活性化されるようになる。しかしながら、活性化された受容体は継続的にＧＤＰをＧＴＰに交換する。ＧＴＰの非加水分解可能類縁体である［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを用いて、活性化された受容体を発現する膜への増強された結合をモニタリングすることができる。［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを用いて、リガンドの不在下および存在下での膜へのＧタンパク質共役をモニタリングすることができる。とりわけ、当業者によく知られ、かつ入手可能なこのモニタリングの例は、１９９５年にＴｒａｙｎｏｒおよびＮａｈｏｒｓｋｉによって報告された。このアッセイ系の好ましい使用は、候補化合物の初期スクリーニングのためである。なぜならば、該系が、受容体の細胞内ドメインと相互作用する特定のＧタンパク質にかかわらず、全てのＧタンパク質共役受容体に一般的に適応可能だからである。
【０４３６】
２．特異的なＧＰＣＲスクリーニングアッセイ技術
「一般的」Ｇタンパク質共役レポーターアッセイ（すなわち、アゴニストまたは逆アゴニストである化合物を選択するためのアッセイ）を用いて候補化合物を同定すると、いくつかの実施形態において、化合物が受容体部位において相互作用したことを確認するためのさらなるスクリーニングが好ましい。例えば、「一般的」アッセイによって同定された化合物はレポーターに結合しなくてもよいが、代わりに、単に、細胞内ドメインからのＧタンパク質に「共役解除」してもよい。
【０４３７】
ａ．Ｇｓ、ＧｚおよびＧｉ
Ｇｓは酵素アデニリルシクラーゼを刺激する。ＧＩ（およびＧｚおよびＧｏ）は、他方、アデニリルシクラーゼを阻害する。アデニリルシクラーゼは、ＡＴＰのｃＡＭＰへの変換を触媒し；かくして、Ｇｓタンパク質を共役させる活性化されたＧＰＣＲは、ｃＡＭＰの増大した細胞レベルと関連付けられる。他方、Ｇｉ（またはＧｚ、Ｇｏ）タンパク質を共役させる活性化されたＧＰＣＲは、ｃＡＭＰの減少した細胞レベルと関連付けられる。一般に、「Ｉｎｄｉｒｅｃｔ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｓｙｎａｐｔｉｃ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ，」Ｃｈｐｔ．８，Ｆｒｏｍ  Ｎｅｕｒｏｎ  Ｔｏ  Ｂｒａｉｎ（３ｒｄ  Ｅｄ．）Ｎｉｃｈｏｌｓ，Ｊ．Ｇ．ら、ｅｄｓ。Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（１９９２）参照。かくして、ｃＡＭＰを検出するアッセイを利用して、候補化合物が、例えば、受容体に対する逆アゴニストであるかを決定することができる（すなわち、そのような化合物はｃＡＭＰのレベルを減少させるであろう）。ｃＡＭＰを測定するための当該分野で公知の種々のアプロ−チを利用することができ；いくつかの実施形態において、好ましいアプロ−チは、ＥＬＩＳＡベースのフォーマットでの抗ｃＡＭＰ抗体の使用に依拠する。利用することができる別のタイプのアッセイは、全細胞第２メッセンジャーレポーター系アッセイである。遺伝子上のプロモータは、特定の遺伝子がコードするタンパク質の発現を駆動する。環状ＡＭＰは、次いで、ｃＡＭＰ応答エレメントと呼ばれる特異的部位においてプロモータに結合し、遺伝子の発現を駆動する、ｃＡＭＰ応答性ＤＮＡ結合タンパク質または転写因子（ＣＲＥＢ）の結合を促進することによって遺伝子発現を駆動する。レポーター遺伝子、例えば、β−ガラクトシダーゼまたはルシフェラーゼの前に多数のｃＡＭＰ応答エレメントを含有するプロモータを有するレポーター系を構築することができる。かくして、活性化されたＧｓ連結レポーターは、次いで、遺伝子を活性化させ、レポータータンパク質の発現を活性化させるｃＡＭＰの蓄積を引き起こす。β−ガラクトシダーゼまたはルシフェラーゼなどのレポータータンパク質は、次いで、標準的な生化学的アッセイ（Ｃｈｅｍら、１９９５）を用いて検出することができる。
【０４３８】
ｂ．ＧｏおよびＧｑ
ＧｑおよびＧｏは酵素ホスホリパーゼＣの活性化と関連しており、該酵素は、今度は、リン脂質ＰＩＰ２を加水分解し、２つの細胞内メッセンジャー：ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）およびイノシトール１，４，５−三リン酸（ＩＰ３）を放出する。ＩＰ３の増大した蓄積は、ＧｑおよびＧｏ関連受容体の活性化に関連付けられる。一般に、「Ｉｎｄｒｅｃｔ  ｔＭｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｓｙｎａｐｔｉｃ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ，Ｃｈｐｔ．８，Ｆｒｏｍｍ  Ｎｅｕｒｏｎ  Ｔｏ  Ｂｒａｉｎ（３ｒｄ  Ｅｄ．）Ｎｉｃｈｏｌｓ，Ｊ．Ｇ．ら、ｅｄｓ．Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（１９９２）参照。ＩＰ３蓄積を検出するアッセイを利用して、候補化合物が、例えば、ＧｑまたはＧｏ関連受容体に対する逆アゴニストであるかを決定することができる（すなわち、そのような化合物はＩＰ３のレベルを減少させるであろう）。Ｇｑ関連受容体もまた、Ｇｑ依存性ホスホリパーゼＣが、ＡＰ１エレメントを含有する遺伝子の活性化を引き起こす点で、ＡＰ１レポーターアッセイを用いて調べることができ；かくして、活性化されたＧｑ関連レポーターは、そのような遺伝子の発現の増加を証明し、それにより、逆アゴニストは、そのような発現の減少の証拠となり、アゴニストはそのような発現の増加の証明となろう。そのような検出のための商業的に入手可能なアッセイは入手可能である。
【０４３９】
３．ＧＰＣＲ融合タンパク質
逆アゴニストまたはアゴニストの直接同定用の候補化合物のスクリーニングで用いられる、内因性の構成的に活性なＧＰＣＲまたは非内因性の構成的に活性化されたＧＰＣＲの使用は、定義により、受容体がそれに結合した内因性リガンドの不在下でさえ活性である点で、興味深いスクリーニングチャレンジを提供する。かくして、例えば、化合物が逆アゴニストまたはアゴニストであり得るか、またはそのような受容体に対して影響を有しないか否かの理解を可能にする分別を目的とし、例えば、候補化合物の存在下における非内因性受容体およびその化合物の不在下における非内因性受容体を識別するために、いくつかの実施形態においては、そのような分別を高めることができるアプローチを利用するのが好ましい。いくつかの実施形態において、好ましいアプローチは、ＧＰＣＲ融合タンパク質の使用である。
【０４４０】
一般に、前記したアッセイ技術（ならびに当業者に知られた他の技術）を用いて、非内因性ＧＰＣＲが構成的に活性化されたと判断されると、内因性ＧＰＣＲと共役する主要なＧタンパク質を決定することが可能である。Ｇタンパク質のＧＰＣＲへの共役は評価することができるシグナリング経路を提供する。いくつかの実施形態において、哺乳動物またはメラニン保有細胞発現系を用いてスクリーニングを行うのが好ましい。というのはそのような系はそこに内因性Ｇタンパク質を有すると期待されるからである。かくして、定義により、そのような系においては、非内因性の構成的に活性化されたＧＰＣＲは連続的にシグナルを発するであろう。いくつかの実施形態において、このシグナルは、例えば、受容体に対する逆アゴニストの不在下において、特に、スクリーニングとの関係では、それが逆アゴニストと接触した場合に、受容体との間をより容易に分別するのが可能であろう。
【０４４１】
ＧＰＣＲ融合タンパク質は、ＧＰＣＲとのＧタンパク質共役の効率を高めることが意図されている。ＧＰＣＲ融合タンパク質は、内因性の構成的に活性なＧＰＣＲまたは非内因性の構成的に活性化されたＧＰＣＲいずれかでのスクリーニングに好ましいだろう。なぜならば、そのようなアプロ−チは、そのようなスクリーニング技術において生じるシグナルを増加させるからである。これは、重要な「ノイズに対するシグナル」比率を促進するのに重要であり；そのような重要な比率は、本明細書に開示された候補化合物のスクリーニングに好ましい。
【０４４２】
ＧＰＣＲ融合タンパク質の発現で有用な構築体の構築は、当業者が有する視界内にある。商業的に入手可能な発現ベクターおよび系は、調査者の特定のニーズに適合し得る種々のアプロ−チを提供する。そのようなＧＰＣＲ融合タンパク質構築体の構築における重要な基準は、限定されないが、ＧＰＣＲ配列およびＧタンパク質配列が、共に、インフレームにあること（好ましくは、内因性ＧＰＣＲについての配列はＧタンパク質配列の上流にある）、およびＧＰＣＲの「停止」コドンが、ＧＰＣＲの発現に際して、Ｇタンパク質もまた発現させることができるように、欠失または置換されていることを含む。ＧＰＣＲはＧタンパク質に直接連結させることができ、あるいは２つの間にスペーサ残基が有り得る（好ましくは、約１２以下であれば、この数字は当業者によって容易に確認することができる）。便宜性に基づき、スペーサを用いるのが好ましい。いくつかの実施形態において、非内因性ＧＰＣＲに共役するＧタンパク質は、ＧＰＣＲ融合タンパク質構築体の作製に先立って同定されているのが好ましい。同定されているＧタンパク質は少数であるにすぎないので、Ｇタンパク質の配列を含む構築体（すなわち、ユニバーサルＧタンパク質構築体、以下の実施例４（ａ）参照）がその中へのＧＰＣＲ配列の挿入のために利用できるのが好ましく；これは、異なる配列を有する種々の異なるＧＰＣＲの大規模なスクリーニングに関してさらなる効率を提供する。
【０４４３】
前記したように、Ｇｉ、ＧｚおよびＧｏに共役する活性化されたＧＰＣＲは、これらのタイプのＧＰＣＲ挑戦に基づくｃＡＭＰ作製アッセイの形成を阻害すると期待される［すなわち、ｃＡＭＰシグナルは、活性化に際し減少し、かくして、例えば、（このシグナルをさらに減少させだあろう）アゴニストチャレンジの直接同定を行う。本明細書に開示されているように、これらのタイプの受容体では、活力のあるシクラーゼベースのアッセイを確立する努力において、ＧＰＣＲの内因性Ｇタンパク質に基づかないＧＰＣＲ融合タンパク質を作り出すことが可能であることは確認されている。かくして、例えば、内因性Ｇｉ共役受容体は、Ｇｓタンパク質に融合することができ−そのような融合構築体は、発現に際して、シクラーゼベースのアッセイを確立できるように、「天然」Ｇｉタンパク質よりはむしろ、例えば、Ｇｓと共役するように内因性ＧＰＣＲを「駆動する」または「強いる」。かくして、Ｇｉ，ＧｚおよびＧｏ共役受容体では、いくつかの実施形態において、ＧＰＣＲ融合タンパク質を用い、アッセイがアデニリルシクラーゼ活性の検出に基づく場合、融合構築体はＧｓ（または酵素アデニリルシクラーゼの形成を刺激する同等のＧタンパク質）によって確立されるのが好ましい。
【０４４４】
【表Ｃ】
2010515882.tif 000005
同等に効果的なのは、Ｇｓ、Ｇｉ、ＧｚまたはＧｏタンパク質と融合したＧｑタンパク質を利用するＧタンパク質融合構築体である。いくつかの実施形態において、好ましい融合構築体は、Ｃｑタンパク質で達成することができ、ここで、Ｇ−タンパク質α−サブユニット（「Ｇαｑ」）の最初の６つのアミノ酸は欠失されており、ＧαｑのＣ末端における最後の５つのアミノ酸は目的とするＧタンパク質のＧαの対応するアミノ酸で置き換えられている。例えば、融合構築体は、Ｇｉタンパク質と融合したＧｑ（６アミノ酸欠失）を有することができ、その結果、「Ｇｑ／Ｇｉ融合構築体」がもたらされる。この融合構築体は、第２のメッセンジャー、例えば、イノシトール三リン酸またはジアシルグリセロールがｃＡＭＰ生産の代わりに測定できるように、内因性Ｇｉ共役受容体をその非内因性Ｇタンパク質、Ｇｑに共役させる。
【０４４５】
４．標的Ｇｉ共役ＧＰＣＲの、シグナル増強体Ｇｓ共役ＧＰＣＲとの同時トランスフェクション（ｃＡＭＰベースのアッセイ）
Ｇｉ共役受容体はアデニリルシクラーゼを阻害することが知られており、従って、ｃＡＭＰ生産のレベルを減少させ、これはｃＡＭＰレベルの評価を興味深くすることができる。ある実施形態において、活性化に際して優先的にＧｉに共役する受容体の活性化の指標としてｃＡＭＰの生産の減少を測定する際に効果的な技術は、シグナル増強体、例えば、活性化に際してＧｓと優先的に共役する非内因性の構成的に活性化された受容体（例えば、ＴＳＨＲ−Ａ６２３１；後記参照）をＧｉ連結ＧＰＣＲで同時トランスフェクトすることによって達成することができる。明らかなように、Ｇｓ共役受容体の活性化は、ｃＡＭＰの生産の増加に基づいて決定することができる。Ｇｉ共役受容体の活性化は、ｃＡＭＰの生産の減少に導く。かくして、同時トランスフェクションアプロ−チは、これらの「反対」効果を有利に開発することを意図する。例えば、非内因性の構成的に活性化されたＧｓ共役受容体（「シグナル増強体」）の発現ベクター単独での同時トランスフェクションは、ベースラインｃＡＭＰシグナルを提供する（すなわち、Ｇｉ共役受容体はｃＡＭＰレベルを減少させるが、この「減少」は、構成的に活性化されたＧｓ共役シグナル増強体によって確立されたｃＡＭＰレベルの実質的増加に相対的であろう）。次いで、シグナル増強体を「標的受容体」で同時トランスフェクトすることによって、Ｇｉ共役標的受容体の逆アゴニストは測定されたｃＡＭＰシグナルを増強させ、他方、Ｇｉ共役標的受容体のアゴニストはこのシグナルを減少させるであろう。
【０４４６】
このアプロ−チを用いて直接同定される候補化合物を独立して評価して、これらはシグナル増強受容体を標的としないことを確実にする必要がある（これは、同時トランスフェクトされた受容体に対するスクリーニングに先立って、またはその後に行うことができる）。
Ｄ．例示的なＢＲＳ−３アゴニスト
本発明の方法で有用な例示的なＢＲＳ−３アゴニストは、表Ｄで供される化合物を含む。表Ｄにおける化合物は、加えて、ＢＲＳ−３の例示的なリガンドである。
【０４４７】
ＢＲＳ−３アゴニストの例はＷｅｂｅｒら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００３）４６：１９１８−１９３０に記載されており、その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０４４８】
ＢＲＳ−３アゴニストの例はＭａｎｔｅｙら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ（２００４）３１０：１１６１−１１６９に記載されており、その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０４４９】
ＢＲＳ−３アゴニストの例はＢｏｙｌｅら、Ｊ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉ（２００５）１１：１３６−１４１に記載されており、その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０４５０】
ＢＲＳ−３アゴニストの例はＬａｍｍｅｒｉｃｈら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００３）１３８：１４３１−１４４０に記載されており、その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０４５１】
ＢＲＳ−３アゴニストの例は、Ｇｏｎｚａｌｅｚら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ（２００７  Ｎｏｖ  １５）に記載されており、その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０４５２】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アゴニストは、表Ｄから選択される化合物である。
【０４５３】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アゴニストは、化合物Ｄ１、化合物Ｄ２、化合物Ｄ３、化合物Ｄ４、化合物Ｄ５、化合物Ｄ６、化合物Ｄ７、化合物Ｄ８、化合物Ｄ９、化合物Ｄ１０、化合物Ｄ１１、化合物Ｄ１２、化合物Ｄ１３、化合物Ｄ１４、化合物Ｄ１５、化合物Ｄ１６、化合物Ｄ１７、化合物Ｄ１８、化合物Ｄ１９、化合物Ｄ２０、化合物Ｄ２１、化合物Ｄ２２、化合物Ｄ２３、化合物Ｄ２４、化合物Ｄ２５、化合物Ｄ２６、化合物Ｄ２７から選択される化合物であり；これらの化合物はＷｅｂｅｒら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００３）４６：１９１８−１９３０に見出すことができ、選択的ＢＲＳ−３アゴニストとして記載される。
【０４５４】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アゴニストは、化合物Ｄ２８、化合物Ｄ２９、化合物Ｄ３０から選択される化合物であり；これらの化合物はＭａｎｔｅｙら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ（２００４）３１０：１１６１−１１６９に見出すことができ、選択的ＢＲＳ−３として記載されている。
【０４５５】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アゴニストは化合物Ｄ３１、化合物Ｄ３２、化合物Ｄ３３から選択される化合物であり、これらの化合物は、Ｂｏｙｌｅら、Ｊ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉ（２００５）１１：１３６−１４１に見出すことができ、選択的ＢＲＳ−３アゴニストとして記載されている。
【０４５６】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アゴニストは化合物Ｄ３４であり；この化合物はＭａｎｔｅｙら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９７）２７２：２６０６２−２６０７１に見出すことができ、ＧＲＰ−ＲおよびＮＭＢ−Ｒを超えてＢＲＳ−３に対して非選択的なＢＲＳ−３アゴニストとして記載されている。
【０４５７】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アゴニストは化合物Ｄ３５であり；この化合物は、Ｍａｎｔｅｙら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９７）２７２：２６０６２−２６０７１に言い出すことができ、ＢＲＳ−３アゴニストとして記載されている。
【０４５８】
【表Ｄ−１】
2010515882.tif 000006
【０４５９】
【表Ｄ−２】
2010515882.tif 000007
表Ｄ中の化合物は個々に、または本発明の任意の実施形態における任意の組合せにて用いることができることが明示的に考えられる。また、表Ｄ中の化合物は個々に、または本発明の任意の実施形態からの任意の組合せにて排除することができることが明示的に考えられる。
【０４６０】
加えて表Ｄに列挙されたものを含めた本発明の化合物は、その医薬上許容される塩、水和物、溶媒和物、幾何異性体、互変異性体、および光学異性体も含む。例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ６６：１−１９；ａｎｄ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ（１９９９）Ｂｒｉｔａｉｎ、ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ（その各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）参照。
Ｅ．例示的なＢＲＳ−３アンタゴニスト
本発明の方法で有用な例示的なＢＲＳ−３アンタゴニストは、表Ｅで供される化合物を含む。表Ｅ中の化合物は、加えて、ＢＲＳ−３の例示的なリガンドである。
【０４６１】
ＢＲＳ−３アンタゴニストの例は、Ｒｙａｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９８）２７３：１３６１３−１３６２４（その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）に記載されている。
【０４６２】
ＢＲＳ−３アンタゴニストの例は、国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５１６９（ＷＯ２００５／０５６５３２として公開）（その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）に記載されている。ＢＲＳ−３アンタゴニストとして国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５１６９に開示されているのは、式（Ｉ）：
【０４６３】
【化１】
2010515882.tif 000008
（式中、
ＲはアリールＣ１−６−アルキル、ヘテロアリールＣ１−６−アルキル、アリールオキシ−Ｃ１−６−アルキルまたはヘテロアリールオキシ−Ｃ１−６−アルキルであり；およびＲは、所望により、独立して、Ｃ１−６−アルコキシ、Ｃ１−６−アルキル、メチレンジオキシ、アリール、ハロゲンおよびハロＣ１−６−アルキルの１以上で置換されており；
Ｒ’は、Ｃ１−６−ジアルキルアミン、Ｃ１−６−アルキルアミン、Ｃ４−７−環状アルキルアミンまたはＣ３−８−シクロアルキルアミンであり；およびＲ’は、所望により、独立して、Ｃ１−６−アルコキシの１以上で置換されており；および
Ｙは水素、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシまたはハロゲンである）
の化合物である。
【０４６４】
国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５１６９に開示されたＢＲＳ−３アンタゴニストの特別な例は、式（Ｉ）による以下の化合物（本明細書において群Ａ１と称する）を含む：Ｎ−［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−２−フェノキシ−アセトアミド；２−ベンゾ［１，３］ジオキソ−５−イル−Ｎ−［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アセトアミド；２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−２−カルボン酸［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アミド；Ｎ−［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−２−（３−メトキシ−フェニル）−アセトアミド；２−フェノキシ−Ｎ−｛１−［４−（ピロリジン−１−スルホニル）−ベンジル］−１Ｈ−インダゾール−３−イル｝−プロピオンアミド；２−（４−クロロ−フェノキシ−Ｎ−［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アセトアミド；Ｎ−［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−アセトアミド；Ｎ−［１−（４−ジプロピルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−２−フェノキシ−アセトアミド；Ｎ−［１−（４−ジプロピルスルファモイルベンジル）−１Ｈ−インダゾール３−イル］−２−フェノキシ−プロピオンアミド；２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−２−カルボン酸［１−（４−ジプロピルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アミド；２−（４−クロロ−フェノキシ）Ｎ−［１−（４−ジプロピルスルファモイル−ベンジル）１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アセトアミド；２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−Ｎ−［１−（４−ジプロピルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アセトアミド；Ｎ−［１−（４−ジプロピルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール３−イル］−２−（４−メトキシ−フェニル）−アセトアミド；Ｎ−［１−（４−ジプロピルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−２−（３−メトキシ−フェニル）−アセトアミド；２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−２−カルボン酸［１−（４−ジブロピルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アミド；２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］−ジオキシン−２−カルボン酸［１−（４−エチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アミド；２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−２−カルボン酸［１−（４−ジメチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アミド；２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−Ｎ−［１−（４−ジメチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］アセトアミド；Ｎ−［（１，４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−２−フェノキシ−プロピオンアミド；および２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−２−カルボン酸［１−（４−ジエチルスルファモイル−ベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］−アミド。
【０４６５】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アンタゴニストは表Ｅから選択される化合物である。
【０４６６】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アンタゴニストは化合物Ｅ１および化合物Ｅ２から選択される化合物であり；これらの化合物はＲｙａｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９８）２７３：１３６１３−１３６２４に見出すことができ、ＢＲＳ−３アンタゴニストとして記載されている。
【０４６７】
ある実施形態において、ＢＲＳ−３アンタゴニストは化合物Ｅ１、化合物Ｅ２、化合物Ｅ３、化合物Ｅ４、化合物Ｅ５、化合物Ｅ６、化合物Ｅ７、化合物Ｅ８、化合物Ｅ９、化合物Ｅ１０、化合物Ｅ１１、化合物Ｅ１２、化合物Ｅ１３、化合物Ｅ１４、化合物Ｅ１５、化合物Ｅ１６、化合物Ｅ１７、化合物Ｅ１８、化合物Ｅ１９、化合物Ｅ２０、化合物Ｅ２１、化合物Ｅ２２から選択される化合物であり；これらの化合物は国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５１６９（ＷＯ２００５／０５６５３２として公開）に見出すことができ、それらはＢＲＳ−３アンタゴニストとして開示されている。
【０４６８】
【表Ｅ】
2010515882.tif 000009
表Ｅ中の化合物は個々に、または本発明の任意の実施形態における任意の組合せで用いることができることが明示的に考えられる。また、表Ｅ中の化合物は個々に、または本発明の任意の実施形態からの任意の組合せにて排除することができることが明示的に考えられる。
【０４６９】
加えて、表Ｅに列挙されたものを加えた本発明の化合物は、その医薬上許容される塩、水和物、溶媒和物、幾何異性鎖体、互変異性体、光学異性体を含む。例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ６６：１−１９；ａｎｄ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ（１９９９）Ｂｒｉｔａｉｎ、ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ（その各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）参照。
Ｆ．医学的化学
候補化合物
当該分野で公知のいずれの分子も、本発明のＧＰＣＲの活性を変調する（増加させる、または減少させる）その能力に次いで試験することができる。活性を変調する化合物を同定するには、候補化合物は、受容体を発現する細胞に直接供することができる。
【０４７０】
本発明のこの実施形態は、受容体の量、またはその活性を変調する、例えば、阻害、拮抗、または作用する分子について化学ライブラリーをスクリーニングするのによく適している。化学ライブラリーはペプチドライブラリー、ペプチド模倣薬ライブラリー、化学的に合成されたライブラリー、組換え体、例えば、ファージディスプレイライブラリー、およびインビトロ翻訳ベースのライブラリー、他の非ペプチド合成有機ライブラリーなどであり得る。本発明のこの実施形態は、限定されないが、血漿および組織抽出物を含めた生物学的物質を含む内因性候補化合物をスクリーニングし、および生物学的活性を有することが知られた内因性化合物のライブラリーをスクリーニングするのによく適している。
【０４７１】
いくつかの実施形態において、候補化合物の直接的同定は、組合せ化学技術を介して生じた化合物と組合せて行われ、それにより、数千の化合物がランダムにそのような分析のために調製される。候補化合物は、化学ライブラリーのメンバーであってよい。これは、任意の便宜な数の対象メンバー、例えば、数十〜数百〜千〜数百万の適当な化合物、ペプチド、ペプトイドおよび他のオリゴマー化合物（環状または線状）、および鋳型ベースのより小さな分子、例えば、ベンゾジアゼピン、ヒダントイン、ビアリール、カルボン酸および多環化合物（例えば、ナフタレン、フェノチアジン、アクリジン、ステロイドなど）、炭水化物およびアミノ酸誘導体、ジヒドロピリジン、ベンゾヒドリルおよび複素環（例えば、トリジン、インドール、チアゾリジンなど）を含むことができる。述べた数および列挙した化合物のタイプは説明的であり、限定的なものではない。好ましい化学ライブラリーは、低分子量の化学化合物、および潜在的な治療剤を含む。
【０４７２】
例示的な化学ライブラリーはいくつかの源（ＡｒＱｕｌｅ、Ｔｒｉｐｏｓ／ＰａｎＬａｂｓ、ＣｈｅｍＤｅｓｉｇｎ、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）から商業的に入手可能である。いくつかの場合において、これらの化学ライブラリーは、メンバー化合物が結合し、かくして、効果的なモジュレータである分子の直接的および即時の同定を可能にする基質上のライブラリーの各メンバーの同一性をコードする組合せ戦略を用いて生じさせる。かくして、多くの組合せアプローチにおいて、化合物のプレート上の位置はその化合物の組成を特定する。また、１つの例において、単一プレート位置は、目的とする相互作用を含むウエルへの投与によってスクリーニングすることができる１〜２０の化学物質を有することができる。かくして、変調が検出されると、相互作用する対のより小さなプールを変調活性についてアッセイすることができる。そのような方法によって、多くの候補分子をスクリーニングすることができる。
【０４７３】
用いるのに適した多くの多様性ライブラリーは当該分野で知られており、本発明に従って試験すべき化合物を提供するのに用いることができる。別法として、ライブラリーは、標準的方法を用いて構築することができる。さらに、より一般的な構造的に拘束された有機多様性（例えば、ナノ粒子）ライブラリーを用いることもできる。その例として、ベンゾジアゼピンライブラリー（例えば、Ｂｕｎｉｎら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：４７０８−４７１２参照）を用いてもよい。
【０４７４】
本発明の別の実施形態において、組合せ化学を用いて、本発明のＧＰＣＲのモジュレータを同定することができる。組合せ化学は、その多くが構造的に類似していてもよい、数千の化合物のうち数百を含有するライブラリーを作り出すことができる。高スループットのスクリーニングプログラムは、公知の標的に対する親和性についてこれらの膨大なライブラリーをスクリーニングすることができるが、新しいアプローチが開発されており、これはより小さな寸法のライブラリーを達成するが、最大の化学的多様性を提供する（例えば、Ｍａｔｔｅｒ、１９９７、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０：１２１９−１２２９参照）。
【０４７５】
組合せ化学の１つの方法である親和性フィンガープリンティングは、従前には、タンパク質の規定されたパネル用の結合親和性について小さな分子の個々のライブラリーを試験するのに用いられてきた。該スクリーニングによって得られたフィンガープリントを用いて、目的とする他のタンパク質または受容体（本発明においては、本発明の受容体）について対象のライブラリーメンバーの親和性を予測する。フィンガープリントを、目的とするタンパク質と反応することが知られた他の化合物から得られたフィンガープリントと比較して、ライブラリー化合物が同様に反応するだろうか否かを予測する。例えば、複合体またはタンパク質成分との相互作用についてライブラリー中の各リガンドを試験するよりはむしろその活性を有することが知られた他の化合物と同様なフィンガープリントを有するリガンドのみを試験することができる（例えば、Ｋａｕｖａｒら、Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ．８：２５−２８；ａｎｄ  Ｋａｕｖａｒ、Ｔａｘｉｃ−Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｐａｔｔｅｒｎ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ａｇｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｄ．Ｋｕｒｔｚ．Ｌ．Ｓｔａｎｋｅｒ  ａｎｄ  Ｊ．Ｈ．Ｓｋｅｒｒｉｔｔ．Ｅｄｉｔｏｒｓ、１９９５、ＡＯＡＣ：Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＤＣ．，３０５−３１２参照）。
【０４７６】
いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、候補化合物はポリペプチドでない。いくつかの実施形態において、候補化合物はペプトイドでない。いくつかの好ましい実施形態において、候補化合物は小分子である。いくつかの実施形態において、候補化合物は抗体またはその抗原結合断片でない。
【０４７７】
モジュレータとして同定された候補化合物
一般に、そのようなスクリーニングの結果は、特有のコア構造を有する化合物であり；その後、これらの化合物を好ましいコア構造の付近のさらなる化学的修飾に付して、その医学的特性をさらに増強させることができる。そのような技術は当業者に知られており、この特許書類においては詳細に取り組まない。
【０４７８】
ある実施形態において、本発明のモジュレータは経口的に活性である。当業者に入手可能な多数の計算アプローチが、薬物の経口バイオアベイラビリティの予測のための開発されてきた（Ｏｏｍｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ（２００２）１５８７：１１８−２５；Ｃｌａｒｋ＆Ｇｒｏｏｔｅｎｈｕｉｓ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ（２００２）５：３８２−９０；Ｃｈｅｎｇら、Ｊ  Ｃｏｍｐｕｔ  Ｃｈｅｍ（２００２）２３：１７２−８３；Ｎｏｒｉｎｄｅｒ＆Ｈａｅｂｅｒｌｅｉｎ、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２００２）５４：２９１−３１３；Ｍａｔｔｅｒら、Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ（２００１）４：４５３−７５；Ｐｏｄｌｏｇａｒ＆Ｍｕｅｇｇｅ，Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００１）１：２５７−７５（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。さらに、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）が、多数のグループによって成功裏に用いられて、非ヒト霊長類およびヒト身体を含めた、薬物の経口投与に続いての哺乳動物身体中での、経口バイオアベイラビリティの評価を含めた薬物分布の直接的測定が得られている（Ｎｏｄａら、Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  （２００３）４４：１０５−８；Ｇｕｌｙａｓら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ（２００２）２９：１０３１−８；Ｋａｎｅｒｖａら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９９）１４５：７６−８１（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。いくつかの実施形態において、本発明のモジュレータは経口的に活性である。
【０４７９】
ある実施形態において、経口的に活性である本発明のモジュレータは血液脳関門を通過することができる。当業者に入手可能な多数の計算アプローチが、血液脳関門の透過の予測のために開発されている（Ｏｏｍｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ（２００２）１５８７：１１８−２５；Ｃｌａｒｋ＆Ｇｒｏｏｔｅｎｈｕｉｓ、Ｃｕｒｒ  ＯｐｉｎＤｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ（２００２）５：３８２−９０；Ｃｈｅｎｇら、Ｊ  Ｃｏｍｐｕｔ  Ｃｈｅｍ（２００２）２３：１７２−８３；Ｎｏｒｉｎｄｅｒ＆Ｈａｅｂｅｒｌｅｉｎ、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２００２）５４：２９１−３１３；Ｍａｔｔｅｒら、Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ（２００１）４：４５３−７５；Ｐｏｄｌｏｇａｒ＆Ｍｕｅｇｇｅ，Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００１）１：２５７−７５（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。多数のインビトロ方法が、薬物の血液脳関門透過性を予測するのに開発されている（Ｌｏｈｍａｎｎら、Ｊ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ（２００２）１０：２６３−７６；Ｈａｎｓｅｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ（２００２）２７：９４５−５８；Ｏｔｉｓら、Ｊ  Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００１）４５：７１−７；Ｄｅｈｏｕｃｋら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ（１９９０）５４：１７９８−８０１（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。さらに、多数の戦略が、血液脳関門を通っての薬物送達を増強させるのに開発されている（Ｓｃｈｅｒｍａｎｎ，Ｖａｓｃｕｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００２）３８：３４９−５４；Ｐａｒｄｒｉｇｅ，Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ（２００２）５９：３５−４０；Ｐａｒｄｒｉｇｅ，Ｎｅｕｒｏｎ（２００２）３６：５５５−８（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。最後に、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）は多数のグループによって首尾よく用いられ、非ヒト霊長類およびヒト身体を含めた、哺乳動物身体において、脳内のそれを含めた薬物分布の直接的測定が得られている（Ｎｏｄａら、Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ（２００３）４４：１０５−８；Ｇｕｌｙａｓら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ（２００２）２９：１０３１−８；Ｋａｎｅｒｖａら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９９）１４５：７６−８１（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。
【０４８０】
いくつかの実施形態において、該モジュレータはＢＲＳ−３受容体に対して選択的であり、ここで、ＢＲＳ−３受容体に対して選択的なモジュレータは、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ；例えば、ヒトＧＲＰ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００５３０５）またはニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ；例えば、ヒトＮＭＢ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００２５０２）などの、１以上の密接に関連する受容体よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するモジュレータを言うと理解される。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍のＧＲＰ−ＲまたはＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、少なくとも約１００倍の、ＧＲＰ−ＲおよびＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍の、ＧＲＰ−ＲまたはＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍のＧＲＰ−ＲおよびＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの好ましい実施形態において、ＢＲＳ−３はヒトＢＲＳ−３である。
【０４８１】
いくつかの実施形態において、モジュレータは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００μＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１００μＭの間隔から選択される値未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、モジュレータは、該アッセイにおいて約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、該モジュレータは、該アッセイにおいて約１０μＭ未満、該アッセイにおいて約９μＭ未満、該アッセイにおいて約８μＭ未満、該アッセイにおいて約７μＭ未満、該アッセイにおいて約６μＭ未満、該アッセイにおいて約５μＭ未満、該アッセイにおいて約４μＭ未満、該アッセイにおいて約３μＭ未満、該アッセイにおいて約２μＭ未満、該アッセイにおいて約１μＭ未満、該アッセイにおいて約９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約１０ｎＭ未満のＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイに���けるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＩＣ５０を持つ逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。
【０４８２】
本発明の１つの態様において、ＢＲＳ−３逆アゴニストもしくはアンタゴニストは選択的ＢＲＳ−３逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、選択的ＢＲＳ−３逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、少なくとも約１０倍、より好ましくは少なくとも約１００倍の、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ；例えば、ヒトＧＲＰ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００５３０５）またはニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ；例えば、ヒトＮＭＢ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００２５０２）よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有する。本発明の１つの態様において、ＢＲＳ−３逆アゴニストもしくはアンタゴニストは選択的ＢＲＳ−３逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、ここで、選択的ＢＲＳ−３逆アゴニストもしくはアンタゴニストは、少なくとも約１０倍、より好ましくは少なくとも約１００倍の、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ）およびニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ）よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有する。
【０４８３】
いくつかの実施形態において、モジュレータは、ヒトＢＲＳ−３において、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１μＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞からの膜で行われるＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞で行われる色素分散アッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞で行われるＦＬＩＰＲアッセイにおいて、またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞もしくはＣＨＯ細胞もしくはＨｅＬａ細胞で行われるＩＰ３アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞またはトランスフェクトされたメラニン保有細胞またはトランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞またはトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞は、配列番号２のアミノ酸配列を有する組換えＢＲＳ−３受容体を発現する。いくつかの実施形態において、モジュレータは、該アッセイにおいて、約１０μＭ未満、約１μＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、該モジュレータは、該アッセイにおいて約１０μＭ未満、該アッセイにおいて約９μＭ未満、該アッセイにおいて約８μＭ未満、該アッセイにおいて約７μＭ未満、該アッセイにおいて約６μＭ未満、該アッセイにおいて約５μＭ未満、該アッセイにおいて約４μＭ未満、該アッセイにおいて約３μＭ未満、該アッセイにおいて約２μＭ未満、該アッセイにおいて約１μＭ未満、該アッセイにおいて約９００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約８００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約７００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約６００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約５００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約４００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約３００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約２００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約１００ｎＭ未満、該アッセイにおいて約９０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約８０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約７０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約６０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約５０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約４０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約３０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約２０ｎＭ未満、該アッセイにおいて約１０ｎＭ未満のＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１０μＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴ��ストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、約１０ｎＭ〜１００ｎＭの間隔から選択される値未満の該アッセイにおけるＥＣ５０を持つアゴニストまたは部分アゴニストである。
【０４８４】
本発明の１つの態様において、ＢＲＳ−３アゴニストまたは部分アゴニストは選択的ＢＲＳ−３アゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、選択的ＢＲＳ−３アゴニストまたは部分アゴニストは、少なくとも約１０倍、より好ましくは少なくとも約１００倍の、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ）またはニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ）よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有する。本発明の１つの態様において、ＢＲＳ−３アゴニストまたは部分アゴニストは選択的ＢＲＳ−３アゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、選択的ＢＲＳ−３アゴニストまたは部分アゴニストは、少なくとも約１０倍、より好ましくは少なくとも約１００倍の、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ）およびニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ）よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有する。
Ｇ．指標および処置方法
睡眠構造
睡眠構造とは、睡眠のいくつかの段階への組織化、および時間に渡ってのそれらの段階の分布をいう。睡眠は２つの生理学的な状態：ノンレム（ＮＲＥＭ）およびレム（ＲＥＭ）睡眠を含む。ＮＲＥＭは４つの段階よりなり、その各々は、より深い睡眠を示すより遅いパターンを伴う次第に遅くなる脳波パターンによって特徴付けられる。いわゆるデルタ睡眠、ＮＲＥＭ睡眠の段階３および４は最も深く、かつ最もリフレッシュするタイプの睡眠である。睡眠障害を持つ多くの患者は、段階３および４の回復睡眠を適切に達成することができない。臨床期間において、患者の睡眠パターンは断片化されたものとして記載され、患者が段階１および２の間で交互に大きな時間を消費し（半覚醒状態）、覚醒しており、かつ深い睡眠は非常に短い時間であることを意味する。本明細書で用いるように、用語「断片化された睡眠構造」は、睡眠障害患者などの個体が、限定された外部刺激によって覚醒している状態に容易に目覚めることができる睡眠のより軽い期間であるＮＲＥＭ睡眠段階１および２においてその睡眠時間の大部分を消費することを意味する。その結果、頻繁な短時間の軽い睡眠を経る個々のサイクルは、睡眠時間を通じて頻繁な覚醒によって中断される。多くの睡眠障害は、断片化された睡眠構造によって特徴付けられる。例えば、睡眠不満を持つ多くの老齢の患者は、長い期間の深いリフレッシング睡眠（ＮＲＥＭ段階３および４）を達成する困難を有し、代わりに、その睡眠時間の大部分をＮＲＥＭ睡眠段階１および２において消費する。
【０４８５】
断片化された睡眠構造とは対照的に、本明細書で用いられるように、「睡眠の定着」は、ＮＲＥＭ睡眠期間、特に、段階３および４の数およびそれらの睡眠期間の長さが増大し、他方、覚醒期間の数および長さが減少する状態を意味する。本質的には、睡眠障害患者の構造は、夜の間、増大した睡眠期間およびより少ない覚醒を伴う睡眠状態に強化され、より長い時間が、より少数の振動段階１および２睡眠を伴う遅い波睡眠（段階３および４）において消費される。本発明の化合物は、従前に断片化された睡眠を持つ患者が、今や、より長いより一貫する期間の間で回復的なデルタ波睡眠を達成することができるように、睡眠パターンを強化する際に効果的であり得る。
【０４８６】
睡眠が段階１から後の段階に移動するにつれ、心拍および血圧は低下し、代謝速度およびグルコース消費は降下し、筋肉は緩和される。正常な睡眠構造においては、ＮＲＥＭ睡眠は合計睡眠時間の約７５％を占め；段階１は合計睡眠時間の５〜１０％を占め、段階２は約４５〜５０％を占め、段階３はほぼ１２％を占め、および段階４は１３〜１５％を占める。睡眠開始から約９０分後に、ＮＲＥＭ睡眠が夜の最初のＲＥＭ睡眠エピソードに取って代わる。ＲＥＭは合計睡眠時間のほぼ２０％を占める。ＮＲＥＭ睡眠とは対照的に、ＲＥＭ睡眠は高い鼓動、呼吸、および血圧、ならびに活性な覚醒状態で見られるものと同様の他の生理学的パターンによって特徴付けられる。よって、ＲＥＭ睡眠は「逆説睡眠」としても知られている。睡眠の開始はＮＲＥＭ睡眠の間に起こり、健康な若い成人では、１０〜２０分を要する。ＲＥＭ相と一緒になってＮＲＥＭ睡眠の４つの段階は、通常４または５回の睡眠の持続を通じて反復される１つの完全な睡眠周期を形成する。睡眠のサイクル特性は規則的であって、信頼性があり；ＲＥＭ期間は夜の間に約９０分ごとに起こる。しかしながら、第１のＲＥＭ期間は最も短い傾向があり、しばしば、１０分未満継続し、他方、より遅いＲＥＭ期間は最大で４０分継続し得る。年齢と共に、睡眠維持ならびに睡眠の質を損なう睡眠構造の変化のため、就寝と睡眠開始との間の時間は増大し、夜間睡眠の合計量は減少する。ＮＲＥＭ（特に、段階３および４）およびＲＥＭ睡眠の双方は低下する。しかしながら、最も軽い睡眠である段階１のＮＲＥＭ睡眠は年齢とともに増加する。
【０４８７】
本明細書で用いるように、用語「デルタ力」は、ＮＲＥＭ睡眠の間の０．５〜３．５Ｈｚ範囲における脳波図（ＥＧＧ）活性の持続の尺度を意味し、より深いよりリフレッシュする睡眠の尺度であると考えられる。デルタ力は、プロセスＳと呼ばれる理論的プロセスの尺度であると仮定されており、個人が与えられた睡眠期間の間に経験する睡眠の量に反比例すると考えられる。睡眠はホメオスタシス機構によって制御され；従って、睡眠が減ると睡眠への駆動は大きくなる。プロセスＳは覚醒期間を通じて構築され、デルタ力睡眠の間に最も効果的に解除されると考えられる。デルタ力は、睡眠期間に先立ってのプロセスＳの大きさの尺度である。より長く覚醒したままであると、プロセスＳはより大きくなり、または睡眠するよう駆動し、かくして、ＮＲＥＭ睡眠の間のデルタ力はより大きくなる。しかしながら、睡眠障害を持つ個人は、デルタ波睡眠を達成および維持するのが困難であり、かくして、睡眠の間のこの構築を解除する限定された能力を持つプロセスＳの大きな構築を有する。
【０４８８】
睡眠障害の主観的および客観的決定
睡眠（例えば、非回復または回復睡眠）の開始、持続または質が損なわれているか、または改良されているかを決定するための多数の方法がある。１つの方法は患者の主観的決定であり、例えば、覚醒に際して眠気を感じ、または休息する。他の方法は、睡眠の間の他者による患者の観察、例えば、どれくらい長く睡眠に陥るのに必要か、夜の間に患者が何回目覚めるか、睡眠の間に患者がどのように落ち着きがないかの観察を含む。別の方法は、睡眠ポリグラフィを用いて睡眠の段階を客観的に測定することである。
【０４８９】
睡眠ポリグラフィは、睡眠の間の多数の電気生理学的パラメータのモニタリングであり、一般に、脳波図（ＥＧＧ）活性、眼電図（ＥＯＧ）活性および筋電図（ＥＭＧ）活性の測定、ならびに睡眠構造を記録する目的の測定を含む。これらの結果は、観察と一緒になって、睡眠潜時（寝るまでに必要な時間の量）のみならず、睡眠継続（睡眠および覚醒状態の全体のバランス）および睡眠の定着（デルタ波または回復睡眠で消費される睡眠時間のパーセント）を測定することができ、これは、睡眠の質の指標であり得る。
【０４９０】
睡眠ポリグラフィによって測定することができる５つの区別される睡眠段階がある：レム（ＲＥＭ）睡眠および４つの段階のノンレム（ＮＲＥＭ）睡眠（段階１、２、３および４）。段階１のＮＲＥＭ睡眠は覚醒状態から睡眠への移行であり、健康な成人においては睡眠消費時間の約５％を占める。特異的ＥＥＧ波形（睡眠紡錘波およびＫ複合体）によって特徴付けられる段階２のＮＲＥＭ睡眠は、睡眠消費時間の約５０％を占める。段階３および４のＮＲＥＭ睡眠（合わせて、徐波睡眠およびデルタ波睡眠としても知られている）は、睡眠の最も深いレベルであり、睡眠時間の約１０〜２０％を占める。その間に鮮明な夢の大部分が起こるＲＥＭ睡眠は合計睡眠の約２０〜２５％を占める。
【０４９１】
これらの睡眠段階は夜に渡って特徴的な時間的構成を有する。ＮＲＥＭ段階３および４は、夜の１／３〜１／２で起こる傾向があり、睡眠剥奪に対する応答の持続が増加する。ＲＥＭ睡眠は夜を通じて周期的に起こる。約８０〜１００分毎のＮＲＥＭ睡眠が交互に起こる。ＲＥＭ睡眠期間は朝に向けて持続が増大する。ヒトの睡眠もまたライフスパンに渡って特徴的に変化する。子供時代および初期青春期における多量の徐波睡眠を伴った相対的安定の後、睡眠の持続および深さは成人の年齢の範囲に渡って劣化する。この劣化は増大した覚醒状態、および段階１睡眠および減少した段階３および４の睡眠によって繁栄されている。
【０４９２】
睡眠障害
本発明の化合物はＢＲＳ−３受容体のモジュレータであって、睡眠障害の治療で有用である。本発明の逆アゴニストおよびアンタゴニストは睡眠を促進するのに有用であり、以下：睡眠開始潜時（睡眠誘導の尺度）の低下、夜間覚醒状態の数の低下、およびＲＥＭ睡眠への影響なくしての、デルタ波睡眠の時間の量（睡眠の質の増強および睡眠の定着の尺の）の遅延の１以上を促進するのに有用である。本発明の逆アゴニストおよびアンタゴニストは睡眠を促進するための、および限定されないが、不眠症などを含めた、睡眠を促進することによって緩和される障害を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。本発明のアゴニストおよび部分アゴニストは、過剰な眠気によって特徴付けられる睡眠障害の治療で有用である。本発明のアゴニストおよび部分アゴニストは、覚醒状態を促進するための、およびナルコレプシーを伴う過剰な眠気等などの過剰な眠気を予防もしくは治療するための治療剤として有用である。従って、本発明の態様は、睡眠障害の治療のための本発明の化合物の治療的使用に関する。
Ｈ．医薬組成物
本発明の化合物は、当該分野でよく知られた技術を用いて医薬組成物に処方することができる。
【０４９３】
本発明は、治療上有効量の本発明のモジュレータまたはリガンドを、治療（または予防）を必要とする対象に投与することによる治療（および予防）の方法を提供する（また、例えば、２００２年８月２９日にＷＯ０２／０６６０５として公開されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＩＢ０２／０１４６１参照（各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる））。１つの態様において、モジュレータまたはリガンドは小分子である。１つの態様において、モジュレータは逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。１つの態様において、モジュレータは逆アゴニストである。１つの実施形態において、モジュレータはアンタゴニストである。１つの態様において、モジュレータは実質的に精製される。１つの実施形態において、対象は、限定されないが、ウシ、ブタ、ウマ、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含めた哺乳動物であり、好ましくは、ヒトである。
【０４９４】
本発明のモジュレータは単独で、あるいは当業者によく知られた技術を用いて適当な担体または賦形剤と混合される医薬組成物にて、非ヒト哺乳動物（後記実施例参照）および／またはヒトに投与することができる。適当な医薬上許容される担体は、当業者に入手可能である；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８０参照。
【０４９５】
次いで、医薬組成物は治療上有効用量で供される。治療上有効用量とは、説明のため、かつ限定されないが、かつ本明細書に記載された方法によって決定された、障害の兆候または生理学的状態の予防または緩和をもたらすのに十分なモジュレータの量をいう。ある実施形態において、治療上有効用量とは、睡眠の促進をもたらすのに十分な哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストの量をいう。ある実施形態において、治療上有効用量とは、覚醒状態の促進をもたらすのに十分な哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストの量をいう。
【０４９６】
本発明のモジュレータは、単独で、または他の医薬的または生理学的に許容される化合物と組合せて供することができることが明示的に考えられる。ある実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストおよびアンタゴニストは、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の治療のために、単独で、または他の医薬上または生理学上許容される化合物と組合せて供することができる。いくつかの実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストおよび部分アゴニストは、単独で、あるいは過剰な眠気の治療上の他の医薬上または生理学上許容される化合物と組合せて供することができる。ある実施形態において、過剰な眠気は睡眠障害と関連している。ある実施形態において、過剰な眠気は神経学的障害と関連している。ある実施形態において、該医薬上または生理学上許容される化合物は、ＧＡＢＡ受容体に結合する化合物である。ある実施形態において、該医薬上または生理学上許容される化合物は、ＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する化合物である。ある実施形態において、該医薬上または生理学上許容される化合物は、ＧＡＢＡＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する化合物である。ある実施形態において、ＧＡＢＡＡ受容体などのＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する該化合物は、ＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに増強させる。ある実施形態において、ＧＡＢＡＡ受容体などのＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する該化合物は、ＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに低下させる。ＧＡＢＡＡ受容体などのＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合し、かつＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに増強させ、または低下させる化合物は当該分野で公知である（例えば、Ｄａ  Ｓｅｔｔｉｍｏら、Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００７）１４：２６８０−２７０１参照）。
【０４９７】
本発明のモジュレータは、単独で、または他の医薬上または生理学上許容される化合物と組合せて供することができることが明示的に考えられる。ある実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストおよびアンタゴニストは、単独で、あるいは睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害（例えば、不眠症）、不安障害（例えば、全般性不安障害またはパニック発作）、痙攣障害（例えば、癲癇）、偏頭痛、鬱病障害（例えば、大鬱病障害）、または精神病性障害（例えば、統合失調症）であるＧＡＢＡ関連神経学的障害の治療用の他の医薬上または生理学上許容される化合物と組合せて供することができる。ある実施形態において、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストおよび部分アゴニストは、単独で、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害（例えば、ナルコレプシー）または認識障害（例えば、認知症またはアルツハイマー型の認知症）であるＧＡＢＡ関連神経学的障害の治療用の他の医薬上または生理学上許容される化合物と組合せて供することができる。ある実施形態において、該医薬上または生理学上許容される化合物は、ＧＡＢＡ受容体に結合する化合物である。ある実施形態において、該医薬上または生理学上許容される化合物は、ＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する化合物である。ある実施形態において、該医薬上または生理学上許容される化合物は、ＧＡＢＡＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する化合物である。ある実施形態において、ＧＡＢＡＡ受容体などのＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する該化合物は、ＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに増強させる。ある実施形態において、ＧＡＢＡＡ受容体などのＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合する該化合物は、ＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに低下させる。ＧＡＢＡＡ受容体などのＧＡＢＡ受容体上のベンゾジアゼピン結合部位に結合し、かつＧＡＢＡ誘発塩化物フラックスをアロステリックに増強させ、または低下させる化合物は当該分野で知られている（例えば、Ｄａ  Ｓｅｔｔｉｍｏら、Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（２００７）１４：２６８０−２７０１参照）。
【０４９８】
本発明の化合物は、単独の活性な医薬剤（すなわち、単一療法）として投与することができるが、本発明の化合物は、本明細書に記載された病気／疾患／障害の治療用の他の剤と組合せることもできる（すなわち、組合せ療法）。従って、本発明の別の態様は、本明細書に記載された１以上のさらなる医薬剤と組合せた、治療上有効量の本発明のアンタゴニストまたは逆アゴニストを（例えば、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに）治療を必要とする対象に投与することを含む治療方法を含む。本発明のさらなる態様は、本明細書に記載された１以上のさらなる医薬剤と組合せて、治療上有効量の本発明のアゴニストまたは部分アゴニストを、治療を必要とする対象に投与することを含む（例えば、覚醒状態を促進するための、または過剰な眠気を予防もしくは治療するための）治療方法を含む。
【０４９９】
本発明の化合物と他の医薬剤との組合せ療法の範囲は、前記または後記にて本明細書に列挙されたものに限定されず、主として、対象における本発明の病気、疾患または障害の治療に有用な任意の医薬剤または医薬組成物との任意の組合せでも含むことが理解されるであろう。
【０５００】
投与の経路
投与の適当な経路は、当該分野で公知の方法を用いる、経口、鼻、直腸、経粘膜、経皮、または腸投与、筋肉内、皮下、筋内注射を含めた非経口送達、ならびに鞘内、直接的心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、肺内（吸入）または眼内注射を含む。他の適当な投与経路はエアロゾルおよびデポ処方である。本発明の医薬の徐放処方、特にデポ剤は明らかに考えられる。ある実施形態において、投与の経路は経口である。
【０５０１】
組成物／処方
本発明に従って用いる医薬上または生理学上許容される組成物および医薬は、賦形剤および補助剤を含む１以上の生理学上許容される担体を用いて慣用的な手法で処方することができる。適当な処方は選択された投与経路に依存する。
【０５０２】
本明細書に記載されたある種の医薬は医薬上または生理学上許容される担体、および本発明の少なくとも１つのモジュレータを含む。注射のためには、本発明の剤は水性溶液中で、好ましくは、ハンクスの溶液、リンゲル液、あるいはリン酸または炭酸水素塩緩衝剤などの生理食塩水緩衝剤などの生理学的に相溶性のある緩衝剤中で処方することができる。経粘膜投与では、浸透すべきバリアに適した浸透剤処方を用いる。そのような浸透剤は一般に当該分野で知られている。
【０５０３】
経口的に摂取することができる医薬上または生理学上許容される製剤は、ゼラチンで作成されたプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチン、およびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で作成された柔軟な密封されたカプセルを含む。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどの充填剤、澱粉などの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および、所望により、安定化剤と混合された有効成分を含有することができる。ソフトカプセルにおいては、活性化合物を脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適当な液体に浸透させ、または懸濁させることができる。加えて、安定剤を加えてもよい、経口投与用の全ての処方はそのような投与に適した用量とする必要がある。
【０５０４】
バッカル投与では、組成物は慣用的な手法で処方された錠剤またはロゼンジの形態をとることができる。
【０５０５】
吸入による投与では、本発明に従って使用される化合物は、便利には、適当なガス状プロペラント、例えば、二酸化炭素を使用して、ネブライザ用の圧縮パックからのエアロゾルスプレー提示の形態で送達される。圧縮エアロゾルの場合には、投与単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することによって決定することができる。吸入器またはインサフレータで用いられる、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物、およびラクトースまたは澱粉などの適当な粉末基剤の粉末混合物を含有して処方することができる。
【０５０６】
化合物は、注射による、例えば、ボーラス注射または連続的注入による非経口投与用に処方することができる。注射用の処方は、保存剤を加えた、例えば、アンプルまたは多用量容器中の単位用量で供することができる。組成物は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとることができ、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散剤などの処方剤を含有することができる。
【０５０７】
非経口投与用の医薬上または生理学上許容される処方は、水溶性形態の活性化合物の水性溶液を含む。水性懸濁液は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有することができる。所望により、懸濁液は、適当な安定剤、または化合物の溶解性を増加させる剤を含有して高濃度溶液の調製を可能にすることもできる。
【０５０８】
別法として、有効成分は、使用前に、滅菌パイロジェン非含有水などの適当なビヒクルによる構成のための粉末または凍結乾燥形態であってもよい。
【０５０９】
先に記載した処方に加えて、化合物は、デポ処方として処方することもできる。そのような長期作用処方は、（例えば、皮下または筋肉内の）移植によって、または筋肉内注射によって投与してもよい。かくして、例えば、化合物は（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）適当なポリマーまたは疎水性物質、またはイオン交換樹脂で、あるいは貧溶解性誘導体として、例えば、貧溶解性塩として処方してもよい。
【０５１０】
特定の実施形態において、化合物は制御された放出系を介して送達することができる。１つの実施形態において、ポンプを使用してもよい（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１−２４０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０  Ｓｕｒｇｅｒｙ８８：５０７−５１６，Ｓａｑｕｄｅｋら、１９８９，Ｎ  Ｅｎｇｌ．Ｊ  Ｍｅｄ．３２１：５４７−５７９）。別の実施形態において、ポリマー物質を用いることができる（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ，ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ，１９７４；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｃ  Ｂｉｏｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ，ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１；Ｌｅｖｙら、１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０−１９２，Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｎ．２５：３５１−３５６  Ｈｏｗａｒｄら、１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：８５８−８６３）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７−１５３３）によってレビュー中で議論されている。
【０５１１】
加えて、化合物は、治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスなどの徐放系を用いて送達してもよい。種々の徐放物質が確立されており、当業者によってよく知られている。徐放カプセルは、それらの化学的性質に依存して、化合物を数週間から１００日を超えるまでの間化合物を放出する。
【０５１２】
治療試薬の化学的性質および生物学的安定性に依存して、モジュレータ安定化のためのさらなる戦略を使用することができる。
【０５１３】
医薬上または生理学上許容される組成物は、適当な固体またはゲル相担体または賦形剤を含むこともできる。そのような担体または賦形剤の例は、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーを含む。
【０５１４】
効果的な用量
本発明で用いるのに適した医薬上または生理学上許容される組成物は、有効成分がその意図した目的を達成するのに効果的な量で含有された組成物を含む。より具体的には、治療上有効量は、治療すべき対象の現存する兆候の発達を予防し、またはそれを緩和するのに効果的な量を意味する。効果的な量の決定は、特に、本明細書で供した詳細な開示に徴して、十分に、当業者の能力内である。
【０５１５】
本発明の方法で用いるいずれの化合物についても、治療上有効量は、細胞培養アッセイから最初に見積もることができる。例えば、用量が、インビトロアッセイにおいてＢＲＳ−３を含む細胞中のＩＰ３の細胞内レベルを増加させ、または減少させることが示された濃度、または範囲を含む循環濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて処方することができる。そのような情報を用いて、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。
【０５１６】
治療上有効量とは、患者において兆候の緩和をもたらす化合物の量をいう。そのような化合物の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（試験集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（試験集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための細胞培養または実験動物における標準的な医薬的手順によって決定することができる。毒性および治療効果の用量比率は治療指標であって、ＬＤ５０およびＥＤ５０の間の比率として表すことができる。高い治療指標を呈する化合物が好ましい。
【０５１７】
これらの細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータは、ヒトで用いるための一定範囲の用量を処方するのに用いることができる。そのような化合物の用量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性を伴わないＥＤ５０を含む一定範囲の循環濃度内にある。用量は、使用される投与形態および利用される投与経路に依存してこの範囲内で変化し得る。正確な処方、投与の経路、および用量は、患者の状態に鑑みて主治医によって選択することができる（例えば、ｆｉｎｇｌら、１９７５，「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」における、Ｃｈ．１参照）。
【０５１８】
投与の量および間隔は、特定の状況に応じて、本発明の障害を予防もしくは治療するのに十分な活性化合物の血漿レベルを提供するために主観的に調整することができる。これらの効果を達成するのに必要な用量は、対象の特徴および投与の経路に依存するであろう。
【０５１９】
投与間隔は、最少有効濃度についての値を用いて決定することもできる。化合物は、時間の１０〜９０％の間、好ましくは３０〜９９％の間、最も好ましくは５０〜９０％の間、最少有効濃度を超えて血漿レベルを維持する養生法を用いて投与する必要がある。局所投与または選択的摂取の場合には、薬物の有効な局所濃度は、血漿濃度に関連しなくてもよい。
【０５２０】
投与される組成物の量は、もちろん、治療すべき対象、対象の体重、病気の重症度、投与の様式、および処方する医師の判断に依存するであろう。
【０５２１】
所望の結果を達成するために毎日または定期的に投与することができる本発明のモジュレータの量についての好ましい用量範囲は０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。他の好ましい用量範囲は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重である。他の好ましい用量範囲は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。他の好ましい用量範囲は０．１〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、これらの日用量は、１日の流れの間に少量ずつ周期的に送達または投与することができる。これらの用量範囲は好ましい範囲にすぎず、本発明を限定する意図はないことを注記する。該所望の効果は、限定されないが、睡眠の促進、または覚醒状態の促進、または睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、精神病性障害または認識障害に対する治療的有効性を含む。該所望の結果は、限定されないが、対象における体重の減少、対象における脂肪症の減少、対象における体脂肪率の減少、および肥満またはそれに関連する状態の予防もしくは治療を含む。
Ｉ．治療の方法
本発明は、本発明モジュレータを、それを必要とする対象に投与することを含む、限定されないが、睡眠または覚醒状態を促進する方法、および睡眠障害を予防もしくは治療する方法を含めた方法にとりわけ向けられる。
【０５２２】
いくつかの実施形態において、モジュレータは、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは睡眠の定着を促進するのに用いるための逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。モジュレータはデルタ力を増加させるのに用いるための逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠障害は断片化された睡眠構造を含む。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は、精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。睡眠を促進することによって緩和される該睡眠障害は、個々に、または任意の組合せにて、本発明の実施形態に含まれ得ることが明示的に考えられる。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は不眠症である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は交代勤務睡眠障害である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害はタイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群である。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は、閉塞性睡眠時無呼吸症候群である。いくつかの実施形態において、モジュレータは、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに用いるための、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストであり、但し、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は閉塞性睡眠時無呼吸症候群ではないものとする。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに用いるためのモジュレータは哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに用いるためのモジュレータは、哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストである。
【０５２３】
いくつかの実施形態において、モジュレータは、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害、または精神病性障害であるＧＡＢＡ関連神経学的障害を治療するのに用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は精神生理学的不眠症、睡眠状態誤認、特発性不眠症、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は不眠症である。いくつかの実施形態において、ＧＡＢＡ関連神経学的障害、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害は閉塞性睡眠時無呼吸症候群ではない。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作、広場恐怖症、広場恐怖症を伴わないパニック障害、広場恐怖症を伴うパニック障害、パニック障害の履歴のない広場症候群、特異的恐怖症、社会的恐怖症、強迫神経症障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、全身病状による不安、物質誘発性不安障害、分離不安障害、性嫌悪障害、および特定されない不安障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。いくつかの実施形態において、不安障害はパニック発作である。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇および非癲癇性発作よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、痙攣障害は癲癇である。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害、気分変調性障害および特定されない鬱病障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、鬱病障害は大鬱病障害である。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症、統合失調性障害、統合失調性感情障害、妄想障害、短期精神病性障害、二人組精神病、全身病状による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害、および特定されない精神病性障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神病性障害は統合失調症である。いくつかの実施形態において、統合失調性は共有型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症、未分化統合失調症、および残遺型統合失調症から選択される。いくつかの実施形態において、モジュレータは哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは哺乳動物ＢＲＳ−３のアンタゴニストである。
【０５２４】
いくつかの実施形態において、モジュレータは、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、睡眠障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、睡眠状態誤認、ナルコレプシー、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷性睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性閉塞性睡眠時無呼吸、中枢性肺胞低換気症候群、周期的四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される睡眠障害と関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態においては、モジュレータは、ナルコレプシーに関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。過剰な眠気との関連性を有する該睡眠障害は、個々に、または任意の組み合わせにて、本発明の実施形態に含まれ得ることが明示的に考えられる、いくつかの実施形態において、モジュレータは、交代勤務睡眠障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態においてモジュレータは、閉塞性睡眠時無呼吸症候群に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、覚醒状態を促進するのに、または睡眠障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストであり、但し、睡眠障害は閉塞性睡眠時無呼吸症候群ではないものとする。いくつかの実施形態において、モジュレータは、神経学的障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、多発性硬化症、筋緊張性ジストロフィおよびパーキンソー病よりなる群から選択される神経学的障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、精神医学的障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは、鬱病および統合失調症よりなる群から選択される精神医学的障害に関連する過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストである、いくつかの実施形態において、モジュレータは、過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのアゴニストまたは部分アゴニストであり、ここで、過剰な眠気は睡眠過剰である、いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのモジュレータは、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに用いるためのモジュレータは、哺乳動物ＢＲＳ−３の部分アゴニストである。
【０５２５】
いくつかの実施形態において、モジュレータは、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、または認識障害であるＧＡＢＡ関連神経学的障害を治療するのに用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストである。いくつかの実施形態において、覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害は、睡眠障害誤認、再発性睡眠過剰、特発性睡眠過剰、心的外傷後睡眠過剰、閉塞性睡眠時無呼吸症候群、中枢性睡眠時無呼吸症候群、中枢性肺胞低換気症候群、周期性四肢運動障害、不穏下肢症候群、睡眠薬依存性睡眠障害、毒物誘発性睡眠障害、タイムゾーン変化（時差ぼけ）症候群、交代勤務睡眠障害、不規則睡眠覚醒パターン、睡眠相後退症候群、睡眠相前進症候群、および非２４時間睡眠覚醒障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＧＡＢＡ関連神経学的障害、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害はナルコレプシーである。いくつかの実施形態において、ＧＡＢＡ関連神経学的障害、または覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害は閉塞性睡眠時無呼吸症候群ではない。いくつかの実施形態において、ＧＡＢＡ関連神経学的障害は認識障害である。いくつかの実施形態において、認識障害は精神錯乱、認知症、健忘症障害、および特定されない認識障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、精神錯乱は全身病状による精神錯乱、物質誘発性精神錯乱、複数の病因による精神錯乱、および特定されない精神錯乱よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認知症はアルツハイマー型、血管認知症、他の全身病状による認知症、物質誘発性持続性認知症、複数の病因による認知症および特定されない認知症からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、健忘症障害は、全身病状による健忘症障害、物質誘発性持続性健忘症障害および特定されない健忘症障害よりなる群から選択される。いくつかの実施形態において、認識障害は、認知症である。いくつかの実施形態において、認識障害はアルツハイマー型の認知症である。いくつかの実施対応において、モジュレータは哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストである。いくつかの実施形態において、モジュレータは哺乳動物ＢＲＳ−３の部分アゴニストである。
【０５２６】
本出願に記載されたＧＡＢＡ関連神経学的障害の各々、ならびに該ＧＡＢＡ関連神経学的障害の各組合せは、本発明の範囲内にある別の実施形態であることが明らかに意図される。本出願に記載された睡眠障害の各々、ならびに該睡眠障害の各組合せは、本発明の範囲内の別の実施形態であることが明らかに意図される。本出願に記載された睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の各々、ならびに睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害の各組合せは本発明の範囲内の別の実施形態であることが明らかに意図される。本出願に記載された不安障害の各々の、ならびに該不安障害の各組合せは、本発明の範囲内の別の実施形態であることが明示的に考えられる。本出願に記載された痙攣障害の各々、ならびに該痙攣障害の各組合せは、本発明の範囲内にある別の実施形態であることが明示的に考えられる。本出願に記載された鬱病障害の各々、ならびに該鬱病障害の各組合せは、本発明の範囲内の別の実施形態であることが明らかに意図されれる。本出願に記載された精神医学的障害の各々、ならびに該精神医学的障害の各組合せは、本発明の範囲内にある別の実施形態であることが明らかに意図される。本出願に記載された統合失調症サブタイプの各々、ならびに該統合失調症サブタイプの各組合せは、本発明の範囲内の別の実施形態であることが明らかに意図される。本明細書に記載された覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害の各々、ならびに覚醒状態を促進することによって緩和される該睡眠障害は、本発明の範囲内の別の実施形態であることが明らかに意図される。本出願に記載された認識障害の各々、ならびに該認識障害の各組合せは、本発明の範囲内の別の実施形態であることが明らかに意図される。
【０５２７】
いくつかの実施形態において、モジュレータは経口的に活性である。いくつかの実施形態において、該経口的に活性なモジュレータは、さらに、血液脳関門を通過することができる。いくつかの実施形態において、モジュレータは医薬組成物で対象に投与される。いくつかの実施形態において、モジュレータは医薬組成物で対象に供される。いくつかの実施形態において、モジュレータは、経口的に摂取される医薬組成物で対象に供される。いくつかの実施形態において、対象は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態において、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、マウス、ラット、非ヒト霊長類、またはヒトである。ある好ましい実施形態において、対象または哺乳動物はヒトである。
【０５２８】
Ｊ．他の用途
哺乳動物ＢＲＳ−３受容体などの本発明のＧＰＣＲの受容体機能を変調する（すなわち、増加させ、減少させ、またはブロックする）剤は、候補化合物をＧＰＣＲと接触させ、受容体機能に対する候補化合物の効果を決定することによって同定することができる。ヒトＢＲＳ−３受容体などの哺乳動物ＢＲＳ−３受容体の機能を変調する化合物の選択性は、ＢＲＳ−３に対するその効果を１以上の他のＧタンパク質共役受容体に対するその効果と比較することによって評価することができる。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍の、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ；例えば、ヒトＧＲＰ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号．ＮＰ＿００５３０５）またはニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ；例えば、ヒトＮＭＢ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号．ＮＰ＿００２５０２）よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍の、ＧＲＰ−ＲおよびＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的逆アゴニストもしくはアンタゴニストである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍の、ＧＲＰ−ＲまたはＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的モジュレータは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍の、ＧＲＰ−ＲおよびＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的アゴニストまたは部分アゴニストである。ＢＲＳ−３機能を変調する化合物の同定に続き、そのようの候補化合物は、さらに、限定されないが、インビボモデルを含めた他のアッセイで試験して、それらの活性を確認し、または定量することができる。説明として、限定されないが、対象の発明では、医薬剤として用いるための哺乳動物ＢＲＳ−３  ＧＰＣＲのモジュレータとしての化合物の同定を明らかに意図する。ＢＲＳ−３受容体機能のモジュレータは、例えば、正常または異常なＢＲＳ−３機能が関与する病気および生理学的状態の治療で治療的に有用である。
【０５２９】
哺乳動物ＢＲＳ−３受容体などの本発明のＧＰＣＲのリガンドである剤は、候補化合物をＧＰＣＲと接触させ、次いで、候補化合物が受容体に結合するか否かを決定することによって同定することができる。ヒト−ＢＲＳ−３の受容体などのＢＲＳ−３受容体に結合する化合物の選択性は、ＢＲＳ−３受容体へのその結合を、１以上の他のＧタンパク質共役受容体へのその結合と比較することによって評価することができる。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的リガンドは、少なくとも約１０倍、または少なくとも約１００倍の、胃放出ペプチド受容体（ＧＲＰ−Ｒ；例えば、ヒトＧＲＰ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００５３０５）またはニューロメジンＢ受容体（ＮＭＢ−Ｒ；例えば、ヒトＮＭＢ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＮＰ＿００２５０２）よりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的リガンドである。ある実施形態において、ＢＲＳ−３選択的リガンドは、少なくとも約１０倍、少なくとも約１００倍の、ＧＲＰ−ＲおよびＮＭＢ−Ｒよりも大きなＢＲＳ−３に対する選択性を有するＢＲＳ−３選択的リガンドである。ＢＲＳ−３受容体機能のモジュレータであるリガンドは、正常または異常なＢＲＳ−３機能が関与する病気、障害および生理学的状態の治療で治療的に有用である。
【０５３０】
他の実施形態において、例えば、睡眠を促進するのに、または覚醒状態を促進するのに適し、または例えば、睡眠障害用の医薬剤として有用な剤は、候補化合物をＢＲＳ−３受容体と接触させ、次いで、ＢＲＳ−３受容体発現に対する候補化合物の効果を決定することによって同定される。いくつかの実施形態において、該剤は細胞においてＢＲＳ−３受容体の発現を低下させる。いくつかの実施形態において、該剤は、ニューロン細胞においてＢＲＳ−３の受容体の発現を低下させる。いくつかの実施形態において、該剤は、ヒトニューロン細胞においてＢＲＳ−３受容体の発現を低下させる。いくつかの実施形態において、ＢＲＳ−３受容体は、細胞またはニューロン細胞によって内因的に発現される。いくつかの実施形態において、ＢＲＳ−３受容体発現のレベルは、抗ＢＲＳ−３受容体抗体を用いて測定される。いくつかの実施形態において、ＢＲＳ−３受容体発現のレベルは、免疫組織化学またはフローサイトメトリーまたはウエスタンブロットによって抗ＢＲＳ−３受容体抗体を用いて測定される。抗ＢＲＳ−３抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであり得ることが明らかに意図される。ＢＲＳ−３に対する抗体は商業的に入手可能であり；例えば、ヒトＢＲＳ−３に対する抗体はＡｔｒａｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）から、およびＡＢＲ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ（Ｇｏｌｄｅｎ，ＣＯ）から入手可能である。いくつかの実施形態において、ＢＲＳ−３受容体発現のレベルは、ＢＲＳ−３受容体に特異的な放射性標識リガンドを用いて測定される（後記参照）。いくつかの実施形態において、ＢＲＳ−３受容体発現のレベルはインサイチュハイブリダイゼーションまたはノーザンブロッドまたはＲＰ−ＰＣＲによって測定される。
【０５３１】
また、本発明は、睡眠を促進するのに、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ”）ＢＲＳ−３受容体を含む複数の細胞を候補化合物と接触させ、または接触させない工程；
（ｂ”）候補化合物と接触した細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベル、および候補化合物と接触していない細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルを測定する工程；ならびに
（ｃ”）候補化合物と接触した細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルを、候補化合物と接触していない細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルと比較する工程；
を含み、
ここで、候補化合物と接触していない細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルと比較した、候補化合物と接触した細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルの減少は、候補化合物が、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法に関する。
【０５３２】
本発明は、加えて、睡眠を促進するのに、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、あるいは睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって、前記工程（ａ”）〜（ｃ”）を含み、さらに：
（ｄ”）所望により、工程（ｃ”）において、その存在でＢＲＳ−３受容体の発現のレベルが減少される化合物を合成する工程；
（ｅ”）工程（ｃ”）において、その存在下でＢＲＳ−３受容体の発現のレベルが減少する化合物を哺乳動物に投与する工程；ならびに
（ｆ”）化合物が、哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を有し、抗痙攣活性を有し、抗偏頭痛活性を有し、抗鬱病活性を有し、または抗精神病活性を有するか否かを判断する工程；
を含み、
ここで、哺乳動物において、睡眠を促進し、抗不安活性を示し、抗痙攣活性を示し、抗偏頭痛活性を示し、抗鬱病活性を示し、または抗精神病活性を示す候補化合物の能力は、候補化合物が睡眠を促進するのに、睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するのに、または睡眠を促進することによって促進される睡眠障害、不安障害、痙攣障害、偏頭痛、鬱病障害および精神病性障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連精神医学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法をその特徴とする。
【０５３３】
いくつかの実施形態において、哺乳動物は非哺乳動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は実験室動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は、非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はげっ歯類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はラットである。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はマウスである。
【０５３４】
いくつかの実施形態において、化合物が哺乳動物において睡眠を促進するか否かの決定は睡眠ポリグラフィを含む。
【０５３５】
いくつかの実施形態において、候補化合物が細胞においてＢＲＳ−３受容体の発現を減少する剤であるか否かを決定する該方法は、インビトロ方法である。
【０５３６】
いくつかの実施形態において、工程（ａ”）における候補化合物と接触したまたは接触していない該複数の細胞は、該細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルが工程（ｂ”）において測定される前に、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３６時間、または少なくとも約４８時間培養される。
【０５３７】
本発明は、細胞（例えば、ニューロン細胞）においてＢＲＳ−３発現を減少させる該化合物、該化合物を含む組成物（例えば、医薬組成物）、および（例えば、睡眠を促進するために、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するために）該組成物を用いる方法に関し、ここで、該化合物は小分子である。本発明は、細胞（例えば、ニューロン細）においてＢＲＳ−３発現を減少させる該化合物、該化合物を含む組成物（例えば、医薬組成物）、および（例えば、睡眠を促進するために、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するために）該組成物を用いる方法に関し、ここで、化合物はアンチセンス核酸（例えば、アンチセンスＲＮＡ）である。本発明は細胞（例えば、ニューロン細胞）においてＢＲＳ−３発現を減少させる該化合物、該化合物を含む組成物（例えば、医薬組成物）、および（例えば、睡眠を促進するために、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するために）該組成物を用いる方法に関し、ここで、化合物は、標準的な手法に従ってＢＲＳ−３受容体をコードする遺伝子のヌクレオチド配列に由来するヌクレオチド配列を含む小干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）または短ヘアピンＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子である。当業者に知れているように、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡは一般に、標的遺伝子の発現を変調することができる（例えば、Ｈｕｌｍｌｕｎｄ  ＪＴ，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（２００３）１００２：２４４−２５１；ａｎｄ  Ｄｅｖｒｏｅら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ（２００４）４：３１９−３２７（その各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）を参照）。
【０５３８】
また、本発明は、覚醒状態を促進するのに、または過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、あるいは覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物を同定するための方法であって：
（ａ’’’）ＢＲＳ−３受容体を含む複数の細胞を候補化合物と接触させ、または接触させない工程、
（ｂ’’’）候補化合物と接触した細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルおよび候補化合物と接触していない細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルを測定する工程；ならびに
（ｃ’’’）候補化合物と接触した細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルを候補化合物と接触していない細胞におけるＢＲＳ−３の発現のレベルと比較する工程；
を含み、
ここで、候補化防物と接触していない細胞のＢＲＳ−３受容体の発現のレベルと比較した、候補化合物と接触した細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルの増加は、候補化合物が覚醒状態を促進するのに、あるいは過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、あるいは覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法に関する。
【０５３９】
本発明は、加えて、覚醒状態を促進するのに、あるいは過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、あるいは覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適しているか否かを同定するための方法であって、前記工程（ａ’’’）〜（ｃ’’’）を含み、さらに；
（ｄ’’’）所望により、工程（ｃ’’’）において、その存在下でＢＲＳ−３受容体の発現のレベルが増加される化合物を合成する工程；
（ｅ’’’）工程（ｃ’’’）において、その存在下でＢＲＳ−３受容体の発現のレベルが増加する化合物を哺乳動物に投与する工程；および
（ｆ’’’）化合物が、哺乳動物において、覚醒状態を促進するか、または、認識増強活性を有するか否かを決定する工程；
を含み、
ここで、哺乳動物において、覚醒状態を促進するか、または認識増強活性を示す候補化合物の能力が、候補化合物が覚醒状態を促進するのに、あるいは過剰な眠気を予防もしくは治療するのに、あるいは覚醒状態を促進することによって緩和される睡眠障害、および認識障害よりなる群から選択されるＧＡＢＡ関連神経学的障害を予防もしくは治療するのに適した化合物であることを示す方法をその特徴とする。
【０５４０】
いくつかの実施形態において、哺乳動物は非哺乳動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は実験室動物である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は、非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物は、げっ歯類である。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はラットである。いくつかの実施形態において、非ヒト哺乳動物はマウスである。
【０５４１】
いくつかの実施形態において、化合物が哺乳動物において覚醒状態を促進するか否かの該決定は睡眠ポリグラフィを含む。
【０５４２】
いくつかの実施形態において、候補化合物が細胞においてＢＲＳ−３受容体の発現を増加させる剤であるか否かを同定する該方法は、インビトロ法である。
【０５４３】
いくつかの実施形態において、工程（ａ’’’）における候補化合物と接触したまたは接触していない該複数の細胞は、該細胞におけるＢＲＳ−３受容体の発現のレベルが（ｂ’’’）において測定される前に、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３６時間、または少なくとも約４８時間培養される。
【０５４４】
本発明は、細胞（例えば、、ニューロン細胞）においてＢＲＳ−３発現を増加させる該化合物、該化合物を含む組成物（例えば、医薬組成物）、および（例えば、睡眠を促進するために、または睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害を予防もしくは治療するために）該組成物を用いる方法に関し、ここで、化合物は小分子である。
【０５４５】
また、本発明は、ヒトを含めた、組織試料におけるＢＲＳ−３を局在化および定量するための、およびＢＲＳ−３の公知のリガンドなどの放射線同位体標識化合物の結合の阻害に関する方法においてＢＲＳ−３リガンドを同定するための、インビトロおよびインビボ双方で、放射線イメージングのみならずアッセイにおいても有用である哺乳動物ＢＲＳ−３などの本発明のＧＰＣＲのモジュレータまたはリガンドとして同定される本発明の化合物の放射線同位体標識バージョンにも関する。そのような放射線同位体標識化合物を含むＢＲＳ−３などの哺乳動物ＢＲＳ−３などの本発明のＧＰＣＲに関する新規なアッセイを開発するのは本発明のさらなる目的である。説明として、かつ限定されないが、放射線イメージングによって可視化された正常な範囲を超えて増大した脳ＢＲＳ−３は、不眠症などの睡眠の促進によって緩和される睡眠障害に対する、全般性不安障害およびパニック発作などの不安障害に対する、癲癇などの痙攣障害に対する、偏頭痛に対する、大鬱病障害などの鬱病障害に対する、または統合失調症などの精神病性障害に対する危険性がある対象を同定すると考えられる。また、説明として、限定されないが、放射線イメージングによって可視化される正常な範囲を下回る減少した脳ＢＲＳ−３は、睡眠過剰、ナルコレプシーなどの覚醒状態の促進によって緩和される睡眠障害に対する、または認知症およびアルツハイマー型認知症などの認識障害に対する危険性がある対象を同定する。いくつかの実施形態において、脳ＢＲＳ−３は視床下部ＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
【０５４６】
また、本発明は、哺乳動物ＢＲＳ−３受容体のモジュレータまたはリガンドである放射性化合物を、該放射線イメージングを必要とする哺乳動物に投与することを含む放射線イメージング方法に関する。１つの態様において、哺乳動物ＢＲＳ−３受容体のリガンドは、哺乳動物ＢＲＳ−３受容体のモジュレータではない。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトでない。いくつかの実施形態において、放射線イメージング方法は、哺乳動物が、不眠症などの睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害に対する、またはそれに向けて進行している、全般性不安障害およびパニック発作などの不安障害に対する、癲癇などの痙攣障害に対する、偏頭痛に対する、大鬱病障害などの鬱病障害に対する、または統合失調症などの精神病性障害に対する危険性があるか否かを同定するためのものであり、ここで、正常な範囲を超える哺乳動物における脳ＢＲＳ−３のレベルは、哺乳動物が不眠症などの睡眠の促進によって緩和される睡眠障害に対する、またはそれに向けて進行している、全般性不安障害およびパニック発作などの不安障害に対する、癲癇などの痙攣障害に対する、偏頭痛に対する、大鬱病障害などの鬱病障害に対する、または統合失調症などの精神病性障害に対する危険性があることを示す。いくつかの実施形態において、放射線イメージング方法は、不眠症などの睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、全般性不安障害およびパニック発作などの不安障害、癲癇などの痙攣障害、偏頭痛、大鬱病障害などの鬱病障害、または統合失調症などの精神病性障害を、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストで、細胞においてＢＲＳ−３発現を減少させる化合物で、または逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または細胞においてＢＲＳ−３を減少させる化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物で予防もしくは治療する哺乳動物を同定するためのものであり、ここで、正常な範囲を超える哺乳動物における脳ＢＲＳ−３のレベルは、不眠症などの睡眠を促進することによって緩和される睡眠障害、全般性不安障害およびパニック発作などの不安障害、癲癇などの痙攣障害、偏頭痛、大鬱病障害などの鬱病障害、または統合失調症などの精神病性障害を、哺乳動物ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストで、または細胞においてＢＲＳ−３発現を減少させる化合物、または逆アゴニストもしくはアンタゴニスト、または細胞においてＢＲＳ−３発現を減少させる化合物、医薬上許容される担体を含む、医薬組成物で予防もしくは治療する哺乳動物を同定する。いくつかの実施形態において、放射線イメージング方法は、哺乳動物が、ナルコレプシーなどの睡眠障害に関連する過剰な眠気などの過剰な眠気に対する危険性がある、またはそれに向けて進行する、または、認知症およびアルツハイマー型などの認識障害に対する危険性がある、またはそれに向けて進行するか否かを同定するためのものであり、ここで、正常な範囲を下回る哺乳動物における脳ＢＲＳ−３のレベルは、哺乳動物が、ナルコレプシーなどの睡眠障害に関連する過剰な眠気などの過剰な眠気に対する危険性がある、またはそれに向けて進行する、または、認知症およびアルツハイマー型などの認識障害に対する危険性がある、またはそれに向けて進行することを示す。いくつかの実施形態において、放射線イメージング方法は、ナルコレプシーなどの睡眠障害に関連する過剰な眠気などの過剰な眠気、または認知症およびアルツハイマー型の認知症などの認識障害を、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストで、または細胞においてＢＲＳ−３発現を増加させる化合物で、アゴニストまたは部分アゴニストまたは細胞におけるＢＲＳ−３発現を増加させる化合物、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物で予防もしくは治療する必要がある哺乳動物を同定するためのものであり、ここで、正常な範囲を下回る哺乳動物における脳ＢＲＳ−３のレベルは、ナルコレプシーなどの睡眠障害に関連する過剰な眠気などの過剰な眠気、または認知症およびアルツハイマー型の認知症などの認識障害を、哺乳動物ＢＲＳ−３のアゴニストもしくは部分アゴニストで、または細胞においてＢＲＳ−３発現を増加させる化合物で、またはアゴニストまたは部分アゴニスト、または細胞においてＢＲＳ−３発現を増加させる化合物、および医学上許容される担体を含む医薬組成物で予防もしくは治療する必要がある哺乳動物を同定する。いくつかの実施形態において、脳ＢＲＳ−３は視床下部ＢＲＳ−３である。いくつかの実施形態において、視床下部ＢＲＳ−３は視床下部背内側核（ＤＭＨ）ＢＲＳ−３である。
【０５４７】
本発明は、ヒトＢＲＳ−３などの哺乳動物ＢＲＳ−３などの本発明のＧＰＣＲのモジュレータまたはリガンドとして同定される本発明の放射線同位体標識バージョンを含む。
【０５４８】
また、本発明は、ヒトＢＲＳ−３などの哺乳動物ＢＲＳ−３などの本発明のＧＰＣＲに結合したリガンドを検出するのに有用な試験リガンドの放射線同位体標識バージョンに関する。いくつかの実施形態において、本発明では、ヒトＢＲＳ−３などの哺乳動物ＢＲＳ−３などの本発明のＧＰＣＲに結合したリガンドを検出するのに有用な該放射性標識試験リガンドのライブラリーが明らか意図される。ある実施形態において、該ライブラリーは少なくとも約１０、少なくとも約１０２、少なくとも約１０３、少なくとも約１０５、または少なくとも約１０６の該放射性標識試験リガンドを含む。本発明のさらなる目的は、そのような放射性同位体標識試験リガンドを含む、ヒトＢＲＳ−３などの哺乳動物ＢＲＳ−３などの本発明のＧＰＣＲに関する新規なアッセイを開発することである。
【０５４９】
いくつかの実施形態において、化合物の放射性同位体標識バージョンは１以上の原子が典型的には天然で見出される、（すなわち天然で生じる）原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられているまたは置換されているという事実を除いて該化合物と同一である。本発明の化合物に組み込まれ得る適当な放射性核種は、限定されないが、２Ｈ（ジューテリウム）、３Ｈ（トリチウム）１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉを含む。本発明の放射性標識化合物に包含される放射性核種は、その放射性標識化合物の具体的適応に依存するであろう。例えば、インビトロＢＲＳ−３受容体標識および競合アッセイでは、３Ｈ、１４Ｃ、８２Ｂｒ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓを組み込むる化合物が一般には最も有用であろう。放射線イメージング適用では、１１Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒまたは７７Ｂｒが一般には最も有用であろう。いくつかの実施形態において、放射性核種は３Ｈ、１１Ｃ、１８Ｆ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓおよび８２Ｂｒよりなる群から選択される。
【０５５０】
放射性同位体を有機化合物に組み込ませるための合成方法は、本発明の化合物に適用可能であり、当該分野でよく知られている。例えば、活性レベルのトリチウムを標的分子に組み込むこれらの合成方法は以下の通りである。
【０５５１】
Ａ．トリチウムガスでの接触還元−この手法は、通常、高特異的活性産物を生じ、ハロゲン化前駆体または不飽和前駆体を必要とする。
【０５５２】
Ｂ．ホウ水素化ナトリウム［３Ｈ］での還元−この手法はかなり安価であって、アルデヒド、ケトン、ラクトン、エステルなどの還元可能な官能基を含有する前駆体を必要とする。
【０５５３】
Ｃ．水素化アルミニウムリチウム［３Ｈ］での還元−この手法はせいぜい理論的な特異的活性を産物に与える。また、アルデヒド、ケトン、ラクトン、エステルなどの還元可能な官能基を含有する前駆体も必要とする。
【０５５４】
Ｄ．トリチウムガス暴露標識−この手法は、適当な触媒の存在下において、交換可能なプロトンを含有する前駆体をトリチウムガスに曝露することを含む。
【０５５５】
Ｅ．ヨウ化メチル［３Ｈ］を用いるＮ−メチル化−この手法は、通常、適当な前駆体を高特異的活性ヨウ化メチル［３Ｈ］で処理することによって、Ｏ−メチルまたはＮ−メチル［３Ｈ］産物を調製するのに使用される。この方法は、一般に、例えば、約７０〜９０Ｃｉ／ミリモルなどのより高い特異的活性を可能にする。
【０５５６】
活性レベルの１２５Ｉを標的分子に組み込む合成方法は以下を含む：
Ａ．Ｓａｎｄｍｅｙｅｒなどの反応−この手法は、アリールまたはヘテロアリールアミンをテトラフルオロボレート塩などのジアゾニウム塩に、続いてＮａ１２５Ｉを用いて１２５Ｉ標識化合物に変換する。表示の手法はＺｈｕ，Ｄ．−Ｇ．および共同研究者によってＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，６７，９４３−９４８において報告されている。
【０５５７】
Ｂ．フェノールのオルト１２５ヨウ素化−この手法はＣｏｌｌｉｅｒ，Ｔ．Ｌ．および共同研究者によってＪ．Ｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｏｍｐｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．１９９９，４２，Ｓ２６４−Ｓ２６６において報告されているように、フェノールのオルト位置において１２５Ｉの取込を可能とする。
【０５５８】
Ｃ．１２５Ｉでの臭化アリールおよびヘテロアリール交換−この方法は、一般には、２工程プロセスである。最初の工程において、トリアルキルスズハライドまたはヘキサアルキルジスズ（例えば、（ＣＨ３）３ＳｎＳｎ（ＣＨ３）３）の存在下、例えば、Ｐｄ触媒反応（すなわちＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４）を用いて、またはアリールまたはヘテロアリールリチウムを通じて、臭化アリールまたは臭化ヘテロアリールを対応するトリアルキルスズ中間体に変換する。表示の手法は、Ｂａｓ，Ｍ．−Ｄ．および共同研究者によってＪ．Ｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｏｍｐｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２００１，４４，Ｓ２８０−Ｓ２８２において報告されている。
【０５５９】
いくつかの実施形態において、化合物の放射性同位体標識バージョンは、放射線核種を含む１以上の置換基の付加を除いて、化合物と同一である。いくつかのさらなる実施形態において、化合物は小分子である。いくつかのさらなる実施形態において、化合物はポリペプチドである。いくつかの実施形態において、化合物は抗体またはその抗原結合断片である。いくつかのさらなる実施形態において、該抗体はモノクローナルである。適当な該放射線核種は、限定されないが、２Ｈ（ジューテリウム）、３Ｈ（トリチウム）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉを含む。本発明の放射性標識化合物に組み込まれる放射性核種は、その放射性標識化合物の具体的適用に依存するであろう。例えば、インビトロＢＲＳ−３受容体標識および競合アッセイでは、３Ｈ、１４Ｃ、８２Ｂｒ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓを組み込む化合物は、一般には最も有用であろう。放射線イメージング適用のためには、１１Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒまたは７７Ｂｒは、一般には最も有用である。いくつかの実施形態において、放射性核種は、３Ｈ、１１Ｃ、１８Ｆ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓおよび８２Ｂｒよりなる群から選択される。
【０５６０】
放射性核種を含む１以上の置換基を付加させる方法は当業者の技量内であり、限定されないが、酵素方法（Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｃ  ＪＪ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ（１９６９）１１３：２９９−３０５；Ｔｈｏｒｅｌｌ  ＪＩ  ａｎｄ  Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ＢＧ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（１９６９）２５１：３６３−９；その各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）による、および／またはＣｈｌｏｒａｍｉｎｅ−Ｔ／Ｉｏｄｏｇｅｎ／Ｉｏｄｏｂｅａｄ方法（Ｈｕｎｔｅｒ  ＷＭ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ  ＦＣ，Ｎａｔｕｒｅ（１９６２）１９４：４９５−６；Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ  ＦＣら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ（１９６３）８９：１１４−２３；その各々の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）による、放射性同位体ヨウ素の付加を含む。
【０５６１】
開示されたレポーターおよび方法の他の使用は、とりわけ、本特許書類のレビューに基づいて当業者に明らかとなるであろう。
【実施例】
【０５６２】
以下の実施例は本発明の明瞭化の目的のために掲げるのであり、限定するものではない。具体的な核酸およびアミノ酸配列を本明細書で開示するが、当業者は、以下に報告される同一または実質的に同様の結果を呈しつつ、これらの配列に対して重要でない修飾を施す能力が備わっている。そのような修飾されたアプローチは本開示の範囲内にあると考えられる。さらに技巧を凝らすことなく、当業者であればこれまでの記載を用い、本発明をその最大限まで実施できると信じる。以下の詳細な実施例は単に説明的なものであり、これまでの開示を断じて限定するものではないと解釈されるべきである。当業者であれば該手法から適当な変形を直ちに認識するであろう。
【０５６３】
本発明の主題に関連する、当業者によく知られた組換えＤＮＡ技術は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；米国特許第６，３９９，３７３号；および２００２年８月１９日にＷＯ０２／０６６５０５として公開されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＩＢ０２／０１４６１に見出すことができる。
【０５６４】
（実施例１）
内因性ヒトＢＲＳ−３の全長クローニング
内因性ヒトＢＲＳ−３をコードするポリヌクレオチドはＢＲＳ−３特異的プライマー：５’−ＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＴＣＡＡＡＧＧＣＡ−３’（配列番号３；ＥｃｏＲＩ部位に対してセンス、開始コドンとしてのＡＴＧ）および５’−ＣＡＴＧＧＡＴＣＣＴＴＧＡＡＡＡＧＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＴＣＣ−３’（配列番号４；ＢａｍＨＩ部位に対してアンチセンス、停止コドンとしてのＣＴＡ）
を用い、およびヒト子宮ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を鋳型として用いるＲＴ−ＰＣＲによってクローン化した。ＴａｑＰｌｕｓ  Ｐｒｅｃｅｓｉｏｎ（商標）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、２５回反復される工程２〜工程４を含む以下のサイクルによる増幅で用いた。
９４℃、３分；９４℃、１分；５６℃、１分；７２℃、１分２０秒；７２℃；１０分
予測されたサイズの１．２３Ｋｂ  ＰＣＲ断片を単離し、ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩで消化し、ｐＣＭＶ発現ベクターにクローン化し、Ｔ７  ＤＮＡ配列キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて配列決定した。核酸配列については配列番号１および推定アミノ酸配列については配列番号２参照。
【０５６５】
（実施例２）
受容体発現
種々の細胞がタンパク質の発現のために当該分野で入手可能であるが、哺乳動物細胞またはメラニン保有細胞を利用するのが最も好ましい。このための主な理由は実施者に予測され、すなわち、例えば、ＧＰＣＲの発現のための酵母細胞の利用は、可能であれば、プロトコルに、非哺乳動物細胞を導入し、これは、受容体共役、遺伝的メカニズムおよび哺乳動物系について進化した分泌経路を含まなくてもよく（事実酵母の場合には、含まず）、かくして、潜在的使用が可能であれば、非哺乳動物細胞で得られた結果は、哺乳動物細胞またはメラニン保有細胞から得られたものほど好ましくはない。哺乳動物細胞の内、ＣＨＯ、ＣＯＳ−７、ＭＣＢ３９０１、２９３、２９３ＴおよびＨｅＬａ細胞が特に好ましいが、利用される特異的哺乳動物細胞は、当業者の必要に応じて予測することができる。実施例９を含めた、メラニン保有細胞に関する後記参照。
【０５６６】
ａ．一過性トランスフェクション
第１日に１０ｃｍ皿当たり４×１０６の２９３細胞を平板培養する。第２日に、２つの反応チューブを調製し（各チューブについての以下の割合は平板当りのものである）：チーブＡは、０．５ｍｌの無血清ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）中４μｇのＤＮＡ（例えば、ｐＣＭＶベクター；ＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むｐＣＭＶベクターなど）を混合することによって調製し；チューブＢは０．５ｍｌの無血清ＤＭＥＭ中２４μｌのリポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を混合することによって調製する。チューブＡおよびＢを逆にして（数回）混合し、続いて、室温にて３０〜４５分間インキュベートする。この混合物を「トランスフェクション混合物」という。平板培養した２９３細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、続いて、５ｍｌの無血清ＤＭＥＭを加える。１ｍｌのトランスフェクション混合物を細胞に加え、続いて、３７℃／５％ＣＯ２で４時間インキュベートする。トランスフェクション混合物を吸引によって取り出し、続いて、１０ｍｌのＤＭＥＭ／１０％胎児ウシ血清を加える。細胞を３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートする。４８時間のインキュベーションの後に細胞を収穫し、分析で使用する。
【０５６７】
ｂ．安定な細胞系
約１２×１０６個の２９３細胞を１５ｃｍの組織培養プレート上で平板培養する。１０％の胎児ウシ血清および１％のピルビン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質を含有するＤＭＥ高グルコース培地中で成長させる。２９３細胞の平板培養から２４時間後に（または約８０％の密集度まで）、細胞を１２μｇのＤＮＡ（例えば、本発明のＧＰＣＲをコードするポリヌクレオチドを含むｐＣＭＶ−ｎｅｏｒベクター）を用いてトランスフェクトする。１２μｇのＤＮＡを、６０μｌのリポフェクタミン、および血清を含まない２ｍｌのＤＭＥ高グルコース培地と合わせる。培地をプレートから吸引し、細胞を、血清を含まない培地で１回洗浄する。ＤＮＡ、リポフェクタミン、および培地混合物を、血清を含まない１０ｍｌの培地と共にプレートに加える。４〜５時間の３７℃でのインキュベーションに続き、培地を吸引し、血清を含有する２５ｍｌの培地を加える。トランスフェクションから２４時間後に培地を再度吸引し、血清を含む新鮮な培地を加える。トランスフェクションから４８時間後に培地を吸引し、血清を含み、ゲネチシン（Ｇ４１８薬物）を含有する培地を最終濃度５００μｇ／ｍｌで加える。トランスフェクトされた細胞は、ここで、Ｇ４１８耐性遺伝子を含有する陽性にトランスフェクトされた細胞についての選択を受ける。選択が起こるにつれ、培地を４〜５日毎に交換する。選択の間、細胞を成長させて、安定なプールを作り出し、安定なクローナル選択のために分ける。
【０５６８】
（実施例３）
ＧＰＣＲ活性化の決定のためのアッセイ（例えば、スクリーニングアッセイ）
目的とするＧＰＣＲ、または「標的」ＧＰＣＲの活性化を評価するために、種々のアプローチが利用できる。以下のものは説明的であり；当業者には、当業者の要求に優先的に利点がある技術を決定する能力が備わっている。
【０５６９】
１．膜結合アッセイ：［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイ
Ｇタンパク質共役受容体がその活性状態にある場合、リガンド結合または構成的活性化のいずれかの結果として、受容体はＧタンパク質に共役し、ＧＤＰの放出、および、引き続いてのＧＴＰのＧタンパク質への結合を刺激する。Ｇタンパク質受容体複合体のアルファサブユニットはＧＴＰａｓｅとして作用し、ＧＴＰをＧＤＰにゆっくりと加水分解し、その時点で、受容体は正常に脱活性化される。活性化された受容体は、継続してＧＤＰをＧＴＰに交換する。非加水分解可能ＧＴＰ類縁体である［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを利用して、活性化された受容体を発現する膜への［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの増強された結合を示すことができる。活性化を測定するのに［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を用いる利点は、（ａ）全てのＧタンパク質共役受容体に包括的に適用でき；（ｂ）膜表面において近位にあり、細胞内カスケードに影響する分子をあまり拾い上げないようにすることである。
【０５７０】
アッセイは、関連受容体を発現する膜への［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合を刺激するＧタンパク質共役受容体の能力を利用する。従って、アッセイを利用してＧＰＣＲのモジュレータとしての候補化合物をスクリーニングすることができる。アッセイは包括的であって、全てのＧタンパク質共役受容体において薬物発見への適用を有する。
【０５７１】
［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイを、２０ｎＭ  ＨＥＰＥＳ、および１〜約２０ｍＭの間のＭｇＣｌ２（２０ｍＭが好ましいが、この量は結果の最適化のために調整することができる）、ｐＨ７．４、約０．３〜約１．２ｎＭの間の［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを含む結合緩衝液（１．２が好ましいが、この量は結果の最適化のために調整することができる）、および１２．５〜７５μｇの膜タンパク質（例えば、本発明のＧＰＣＲ発現する２９３細胞；この量は最適化のために調整することができる）、および１０μＭのＧＤＰ（この量は最適化のために変化させることができる）中で１時間インキュベートする。次いで、小麦胚芽アグルチニンビーズ（２５μｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ）を加え、混合物を室温でさらに３０分間インキュベートする。次いで、チューブを室温にて１５００×ｇで５分間遠心分離し、次いで、シンチレーションカウンタでカウントする。
【０５７２】
２．アデニリルシクラーゼ
細胞ベースのアッセイのために設計されたＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（商標）Ａｄｅｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＳＭＰ００４Ａ）を修飾して、粗製原型質膜で用いることができる。Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（フラッシュプレート）ウエルは、ｃＡＭＰを認識する特異的抗体も含有するシンチラントコーティングを含有することができる。ウエルで生じたｃＡＭＰは、放射性ｃＡＭＰトレーサーのｃＡＭＰ抗体への結合についての直接的競合によって定量することができる。以下は、受容体を発現する全細胞におけるｃＡＭＰレベルの変化の測定のための簡単なプロトコルとして働く。
【０５７３】
トランスフェクトされた細胞を、一過性トランスフェクションからほぼ２４〜４８時間後に収穫する。培地を注意深く吸引し、捨てる。１０ｍｌのＰＢＳを各皿の細胞にゆっくりと加え、続いて、注意深く吸引する。１ｍｌのＳｉｇｍａ細胞解離緩衝液および３ｍｌのＰＢＳを各プレートに加える。細胞をプレートからピペットで取り、細胞懸濁液を５０ｍｌの円錐形遠心管に集める。次いで、細胞を室温にて１，１００ｒｐｍにおいて５分間遠心分離する。細胞ペレットを、注意深く、適当な容量のＰＢＳ（約３ｍｌ／プレート）に再懸濁させる。次いで、血球計を用いて細胞をカウントし、さらなるＰＢＳを加えて、適当な数の細胞を得る（最終容量は約５０μｌ／ウエル）。
【０５７４】
ｃＡＭＰ標準、および（１μＣｉのトレーサー［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（５０μｌ）〜１１ｍｌの検出緩衝液を含有する）検出緩衝液を調製し、製造業者の指示に従って維持する。スクリーニングのためにアッセイ緩衝液を新たに調製し、該緩衝液は、５０μｌの刺激緩衝液、３ｕｌの試験化合物（１２μＭ最終アッセイ濃度）および５０μｌの細胞を含有する。アッセイ緩衝液を利用するまで氷上に貯蔵する。例えば、９６ウエルプレート中で好ましく行われたアッセイは、５０μｌのｃＡＭＰ標準を適当なウエルに加え、続いて、５０ｕｌのＰＢＳをウエルＨ−１１およびＨ−１２に加えることによって開始する。５０μｌのシンチレーション緩衝液を全てのウエルに加える。ＤＭＳＯ（または選択された候補化合物）を、３μｌの化合物溶液を分注できるピンツールを用いて適当なウエルに加え、最終アッセイ濃度２０μＭの試験化合物および１００μｌ合計アッセイ用量である。次いで、細胞をウエルに加え、室温で６０分間インキュベートする。次いで、トレーサーｃＡＭＰを含有する１００μｌの検出ミックスをウエルに加える。次いで、プレートをさらに２時間インキュベートし、続いて、Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンタでカウントする。次いで、ｃＡＭＰ／ウエルの値を、各アッセイプレート内に含まれる標準ｃＡＭＰ曲線から外挿する。
【０５７５】
３．Ｇｉ共役標的ＧＰＣＲのための細胞ベースのｃＡＭＰアッセイ
甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）は、活性化に際してｃＡＭＰの蓄積を引き起こすＧｓ共役ＧＰＣＲである。ＴＳＨＲは、アミノ酸残基６２３を突然変異させる（すなわち、アラニン残基をイソロイシン残基に変化させる）ことによって構成的に活性化される。Ｇｉ共役受容体は、アデニリルシクラーゼを阻害し、従って、ｃＡＭＰ生産のレベルを減少させると予測され、これは、ｃＡＭＰレベルチャレンジの評価を行うことができる。Ｇｉ共役受容体の活性化の指標としてのｃＡＭＰの生産の減少を測定するための効果的な技術は、「シグナル増強剤」として、最も好ましくは非内因性の構成的に活性化されたＴＳＨＲ（ＴＳＨＲ−Ａ６２３Ｉ）（または内因性の構成的に活性なＧｓ共役受容体）を、Ｇｉ共役標的ＧＰＣＲで同時トランスフェクトして、ｃＡＭＰのベースラインレベルを確立することによって達成することができる。Ｇｉ共役受容体は、シグナル増強剤で同時トランスフェクトし、スクリーニングのために用いることができるこの物質である。そのようなアプローチを利用してｃＡＭＰアッセイを用いる場合に、効果的にシグナルを生成することができる。いくつかの実施形態において、このアプローチは、好ましくは、Ｇｉ共役受容体に対する候補化合物の同定で用いる。Ｇｉ共役ＧＰＣＲについては、このアプローチを用いる場合、標的ＧＰＣＲの逆アゴニストは、ｃＡＭＰシグナルを増加させ、アゴニストはｃＡＭＰシグナルを減少させることを注記する。
【０５７６】
第１日において、１０ｃｍ皿当たり４×１０６個の２９３細胞を平板培養する。第２日に、２つの反応チューブを調製し（各チューブについての以下の割合はプレート値である）：チューブＡは、０．５ｍｌの無血清ＤＭＥＭ（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）中、合計４μｇのＤＮＡ（例えば、ｐＣＭＶベクター；突然変異されたＴＳＨＲ（ＴＳＨＲ−Ａ６２３Ｉ）を含むｐＣＭＶベクター；ＴＳＨＲ−Ａ６２３Ｉおよび標的ＧＰＣＲ等）につき、哺乳動物細胞にトランスフェクトされた各受容体の２μｇのＤＮＡを混合することによって調製し；チューブＢは、０．５ｍｌの無血清ＤＭＥＭ中、２４μｌのリポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を混合することによって調製する。次いで、チューブＡおよびＢを逆にして（数回）混合し、続いて、室温にて３０〜４５分間インキュベートする。混合物を「トランスフェクション混合物」という。平板培養した２９３細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、続いて、５ｍｌの無血清ＤＭＥＭを加える。次いで、１．０ｍｌのトランスフェクション混合物を細胞に加え、続いて、３７℃／５％ＣＯ２にて４時間インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合物を吸引によって除去し、続いて、１０ｍｌのＤＭＥＭ／１０％胎児ウシ血清を加える。次いで、細胞を３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートする。ほぼ２４〜４８時間のインキュベーションの後、次いで、細胞を収穫し、分析のために利用する。
【０５７７】
Ｆｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（商標）Ａｄｅｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｃｌｅａｒ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＳＭＰ００４Ａ）を、細胞ベースのアッセイのために設計するが、当業者の要望に応じて、修飾して粗製原形質膜で使用することができる。フラッシュプレートウエルは、ｃＡＭＰを認識する特異的抗体も含有するシンチラントコーティングを含有する。ウエルで生じたｃＡＭＰは、放射性ｃＡＭＰトレーサーのｃＡＭＰ抗体への結合についての直接的競合によって定量することができる。以下は、受容体を発現する全細胞におけるｃＡＭＰレベルの変化の測定のための簡単なプロトコルとして働く。
【０５７８】
トランスフェクトされた細胞は、一過性トランスフェクションからほぼ２４時間〜４８時間後に収穫される。培地を注意深く吸引し、捨てる。１０ｍｌのＰＢＳを各皿の細胞にゆっくりと加え、続いて、注意深く吸引する。１ｍｌのＳｉｇｍａ細胞解離緩衝液および３ｍｌのＰＢＳを各プレートに加える。細胞をプレートからピペットで取り、細胞懸濁液を５０ｍｌの円錐形遠心管に集める。次いで、細胞を室温にて１，１００ｒｐｍにおいて５分間遠心分離する。細胞ピペットを、注意深く、適当な容量のＰＢＳ（約３ｍｌ／プレート）に再懸濁させる。次いで、血球計を用いて細胞をカウントし、さらなるＰＢＳを加えて、適当な数の細胞を得る（最終容量は約５０μｌ／ウエル）。
【０５７９】
ｃＡＭＰ標準、および（１μＣｉのトレーサー［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（５０μｌ）〜１１ｍｌの検出緩衝液を含む）検出緩衝液を調製し、製造業者の指示に従って維持する。スクリーニングのためにアッセイ緩衝液を新たに調製する必要があり、該緩衝液は、５０μｌの刺激緩衝液、３μｌの試験化合物（１２μＭの最終アッセイ濃度）および５０μｌの細胞を含有し、アッセイ緩衝液は利用するまで氷上で貯蔵することができる。アッセイは、５０μｌのｃＡＭＰ標準を適当なウエルに加え、続いて、５０μｌのＰＢＳをウエルＨ−１１およびＨ１２に加えることによって開始することができる。５０μｌの刺激緩衝液を全てのウエルに加える。選択された化合物（例えば、ＴＳＨ）を、３μｌの化合物溶液を分注することができるピンツールを用いて適当なウエルに加え、最終アッセイ濃度は、１２μＭの試験化合物および１００μｌの合計アッセイ容量である。次いで、細胞をウエルに加え、室温にて６０分間インキュベートする。次いで、トレーサーｃＡＭＰを含有する１００μｌの検出ミックスをウエルに加える。次いで、プレートをさらに２時間インキュベートし、続いて、Ｗａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａシンチレーションカウンタでカウントする。次いで、ｃＡＭＰ／ウエルの値を、各アッセイプレートに含まれる標準ｃＡＭＰ曲線から外挿する。
【０５８０】
４．レポーターベースのアッセイ
ａ．ＣＲＥ−ＬＵＣレポーターアッセイ（Ｇｓ関連受容体）
２９３および２９３Ｔ細胞を、ウエル当たり２×１０４細胞の密度で９６ウエルプレートにて平板培養し、製造業者の指示に従って、翌日、リポフェクタミン試薬（ＢＲＬ）を用いてトランスフェクトする。ＤＮＡ／脂質混合物を、以下のように、各６ウエルトランスフェクションについて調製し：１００μｌのＤＭＥＭ中の２６０ｎｇのプラスミドＤＮＡを、１００μｌのＤＭＥＭ中の２μｌの脂質と穏やかに混合する（２６０ｎｇのプラスミドＤＮＡは２００ｎｇの８×ＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミド、内因性受容体または非内因性受容体を含む５０ｎｇのｐＣＭＶ、またはｐＣＭＶ単独、および１０ｎｇのＣＭＶ−ＳＥＡＰよりなる（分泌されたアルカリ性ホスファターゼ発現プラスミド；アルカリ性ホスファターゼ活性をトランスフェクトされた細胞の培地中で測定し、試料間のトランスフェクション効率の変動について制御する））。８×ＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミドは以下の通りに調製した：ベクターＳＲＩＦ−β−ｇａｌは、Ｐβｇａｌ−Ｂａｓｉｃベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中のＢｇｌＶ−ｈｉｎｄＩＩＩ部位においてラットソマトスタチンプロモータ（−７１／＋５１）をクローニングすることによって得た。ｃＡＭＰ応答エレメントの８コピーは、アデノウイルス鋳型ＡｄｐＣＦ１２６ＣＣＲＥ８（Ｓｕｚｕｋｉら、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ（１９９６）７：１８８３−１８９３（その開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）参照）からＰＣＲによって得、Ｋｐｎ−ＢｂＩＶ部位においてＳＲＩＦ−β−ｇａｌベクターにクローン化し、その結果、８×ＣＲＥ−β−ｇａｌレポーターベクターが得られる。８×ＣＲＥ−Ｌｕｃレポータープラスミドは、８×ＣＲＥ−β−ｇａｌレポーターベクター中のベータ−ガラクトシダーゼ遺伝子を、ＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩ部位において、ｐＧＬ３ベーシックベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）から得られたルシフェラーゼ遺伝子で置き換えることによって生じた。室温での３０分のインキュベーションに続き、ＤＮＡ／脂質混合物を４００μｌのＤＭＥＭで希釈し、１００μｌの希釈された混合物を各ウエルに加える。１０％ＦＣＳを含む１００μｌのＤＭＥＭを、細胞培養インキュベータ中での４時間後のインキュベーション後に各ウエルに加える。翌日、トランスフェクトされた細胞を２００μｌ／ウエルの、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭと交換する。８時間後に、ウエルをＰＢＳで一回洗浄した後に、１００μｌ／ウエルのフェノールレッドを含まないＤＭＥＭに変更する。ルシフェラーゼ活性は、製造業者の指示に従い、ＬｕｃＬｉｔｅ（商標）レポーター遺伝子アッセイキット（Ｐａｃｋａｒｄ）を用いて翌日に測定し、１４５０ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（商標）シンチレーションおよび発光カウンタ（Ｗａｌｌａｃ）で読む。
【０５８１】
ｂ．ＡＰ１レポーターアッセイ（Ｇｑ関連受容体）
Ｇｑ刺激を検出するための方法は、それらのプロモータ中にＡＰ１エレメントを含有する遺伝子の活性化を引き起こすためのＧｑ依存性ホスホリパーゼＣの公知の特性に依存する。Ｐａｔｈｄｅｔｅｃｔ（商標）ＡＰ−１  ｃｉｓ−Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ＃２１９０７３）を、リン酸カルシウム沈澱の成分が４１０ｎｇ  ｐＡＰ１−Ｌｕｃ、８０ｎｇ  ｐＣＭＶ受容体発現ベクター、および２０ｎｇ  ＣＭＶ−ＳＥＡＰであった以外は、ＣＲＥＢレポーターアッセイに関して前記したプロトコルに従って利用することができる（分泌されたアルカリ性ホスファターゼ発現プラスミド；アルカリ性ホスファターゼ活性を、トランスフェクトされた細胞の培地中で測定し、試料間のトランスフェクション効率の変動について制御する）。
【０５８２】
ｃ．ＳＲＦ−ＬＵＣレポーターアッセイ（Ｇｑ関連受容体）
Ｇｑ刺激を検出するための１つの方法は、それらのプロモータ中の血清応答因子を含有する遺伝子の活性化を引き起こすためのＧｑ依存性ホスホリパーゼＣの公知の特性に依存する。Ｐａｔｈｄｅｔｅｃｔ（商標）ＳＲＦ−Ｌｕｃ−Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を利用して、例えば、ＣＯＳ７細胞においてＧｑ共役活性についてアッセイすることができる。細胞は、製造業者の指示に従い、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ（商標）Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ＃２００２８５）を用い、系のプラスミド成分、および内因性または非内因性ＧＰＣＲをコードする示された発現プラスミドでトランスフェクトする。簡単に述べれば、４１０ｎｇ  ＳＲＦ−Ｌｕｃ，８０ｎｇ  ｐＣＭＶ受容体発現プラスミド、および２０ｎｇ  ＣＭＶ−ＳＥＡＰを、製造業者の指示に従い、リン酸カルシウム沈澱中で合わせる。沈殿の半分を、無血清培地中の細胞上で２４時間保持された、９６ウエルプレート中の３ウエルに同等に分配する。最後の５時間、細胞を、例えば、１μＭの試験化合物と共にインキュベートする。次いで、細胞を溶解させ、製造業者の指示に従い、Ｌｕｃｌｉｔｅ（商標）Ｋｉｔ（Ｐａｃｋａｒｄ，Ｃａｔ．＃６０１６９１１）および「Ｔｒｉｌｕｘ  １４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ」液体シンチレーションおよび発光カウンタ（Ｗａｌｌａｃ）を用いてルシフェラーゼ活性についてアッセイする。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）２．０ａ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）を用いて分析することができる。
【０５８３】
ｄ．細胞内ＩＰ３蓄積アッセイ（Ｇｑ関連受容体）
第１日に、受容体（内因性または非内因性）を含む細胞を２４ウエルプレート上で、通常、１×１０３細胞／ウエル（しかしながら、この数字は最適化することができる）で平板培養することができる。第２日に、まず、５０μｌ無血清ＤＭＥＭウエル中０．２５μｇのＤＮＡ、および５０μｌの無血清ＤＭＥＭ／ウエル中２μｌのリポフェクタミンを混合することによってトランスフェクトすることができる。溶液をゆっくりと混合し、室温にて１５〜３０分間インキュベートする。細胞を０．５ｍｌ  ＰＢＳで洗浄し、４００μｌの無血清培地をトランスフェクション培地と混合し、細胞に加える。次いで、細胞を３７℃／５％ＣＯ２にて３〜４時間インキュベートし、次いで、トランスフェクション培地を除去し、１ｍｌ／ウエルの正規の成長培地で置き換える。第３日に、細胞を３Ｈ−ミオ−イノシトールで標識する。簡単に述べると、培地を取り出し、細胞を０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄する。次いで、０．５ｍｌのイノシトール不含／無血清培地（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）を０．２５μＣｉの３Ｈ−ミオ−イノシトール／ウエルと共に加え、細胞を３７℃／５％ＣＯ２にて１６〜１８時間インキュベートする。第４日に、細胞を０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、イノシトール不含／無血清培地１０μＭパルギリン  １０ｍＭ塩化リチウムまたは０．４ｍＬのアッセイ培地を含有し、所望により、５０μｌの試験化合物を最終濃度の１０μＭまで含有する０．４５ｍｌのアッセイ培地を加える。次いで、細胞を３７℃で３０分間インキュベートする。次いで、細胞を０．５ｍｌ  ＰＢＳで洗浄し、２００μｌの新鮮な／氷冷停止溶液（１Ｍ  ＫＯＨ；１８ｍＭホウ酸Ｎａ；３．８ｍＭ  ＥＤＴＡ）を加える／ウエル。溶液を５〜１０分間、または細胞が溶解するまで氷上に維持し、次いで、２００μｌの新鮮な／氷冷中和ゾルによって中和する（７．５％ＨＣＬ）。次いで、溶解物を１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移し、１ｍｌのクロロホルム／メタノール（１：２）を加える／チューブ。溶液を１５秒間ボルテックスし、上相をＢｉｏｒａｄ  ＡＧ１−Ｘ８（商標）アニオン交換樹脂（１００〜２００メッシュ）に適用する。まず、該樹脂を１：１．２５Ｗ／Ｖにて水で洗浄し、０．９ｍｌの上相をカラムに負荷する。該カラムを１０ｍｌの５ｍＭミオ−イノシトールおよび１０ｍｌの５ｍＭホウ酸Ｎａ／６０ｍＭのギ酸Ｎａで洗浄する。イノシトールトリスフォスフェートを、２ｍｌの０．１Ｍギ酸／１Ｍギ酸アンモニウムと共に１０ｍｌのシンチレーションカクテルを含有するシンチレーションバイアルに溶出する。１０ｍｌの０．１Ｍギ酸／３Ｍギ酸アンモニウムで洗浄することによってカラムを再生し、ｄｄＨ２Ｏで２回すすぎ、水中４℃で貯蔵する。
【０５８４】
（実施例４）
融合タンパク質の調製
ａ．ＧＰＣＲ：Ｇ融合構築体
ＧＰＣＲ−Ｇタンパク質融合構築体の設計は以下の通り達成することができる：ラットＧタンパク質Ｇｓα（長い形態；Ｉｔｏｈ，Ｈ．ら、８３  ＰＮＡＳ  ３７７６（１９８６））の５’および３’末端の双方は、その上にＨｉｎｄＩＩＩ（５’−ＡＡＧＣＴＴ−３’）配列を含むように作製される。（フランキングＨｉｎｄＩＩＩ配列を含む）正しい配列の確認の後、そのベクターのＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を用いるサブクローニングによって、全配列をｐｃＤＮＡ３．１（−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｖ７９５−２０）に往復させる。Ｇｓα配列についての正しい向きは、ｐｃＤＮＡ３．１（−）へのサブクローニング後に決定される。次いで、ＨｉｎｄＩＩＩ配列においてラットＧｓα遺伝子を含有する修飾されたｐｃＤＮＡ３．１（−）を確認し；このベクターは、現在、「ユニバーサル」Ｇｓαタンパク質ベクターとして入手可能である。ｐｃＤＮＡ３．１（−）ベクターは、ＨｉｎｄＩＩＩ部位の上流に種々のよく知られた制限部位を含有し、かくして、有利には、Ｇｓタンパク質の上流に、例えば、内因性の構成的に活性なＧＰＣＲのコード配列を挿入する能力を提供する。この同一アプローチを用いて、他の「ユニバーサル」Ｇタンパク質ベクターを作り出すことができ、もちろん、当業者に知られた他の商業的に入手可能なまたは所有権が存在するベクターを利用することができ、重要な基準は、ＧＰＣＲについての配列が、Ｇタンパク質の配列の上流にあり、かつそれに対してインフレームにあることである。
【０５８５】
ａ．Ｇｑ（６アミノ酸欠失）／Ｇｉ融合構築体
Ｇｑ（ｄｅｌ）／Ｇｉ融合構築体はキメラＧタンパク質であり、それにより、Ｇｑタンパク質α−サブユニット（「Ｇαｑ」）の最初の６つのアミノ酸を欠失させ、ＧαｑのＣ末端の最後の５つのアミノ酸をＧαｉサブユニットの対応するアミノ酸で置き換える。Ｇｑ（ｄｅｌ）／Ｇｉ融合構築体は内因性（例えば）Ｇｉ共役受容体を、その非内因性Ｇタンパク質、（Ｇｑ（ｄｅｌ）／Ｇｉの形態の）Ｇｑに共役させ、従って、第２のメッセンジャー、例えば、トリフォスフェートまたはジアシルグリセロールまたはＣａ２＋は、ｃＡＭＰ生産の代わりに測定することができる。
【０５８６】
（実施例５）
［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアッセイ
１．膜調製物
いくつかの実施形態において、標的ＧＰＣＲを含み、かつ例えば、逆アゴニスト、アゴニストまたはアンタゴニストしての候補化合物の同定で用いられる膜は好ましくは以下の通り調製される：
ａ．材料
「膜掻き取り緩衝液」は２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４を含み；「膜洗浄緩衝液」は２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４を含み；「結合緩衝液」は２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４を含む。
【０５８７】
ｂ．手法
全ての材料は手法を通じて氷上に保持される。まず、培地を細胞の密集した単層から吸引し、続いて、１０ｍｌの冷ＰＢＳですすぎ、続いて、吸引する。その後、５ｍｌの膜掻き取り緩衝液を加えて、細胞を掻き取り；これに続いて、細胞抽出物を５０ｍｌ遠心管に移す（２０，０００ｒｐｍにおいて、４℃で１７分間遠心分離する）。その後、上清を吸引し、ペレットを３０ｍｌの膜洗浄緩衝液に再懸濁させ、続いて、２０，０００ｒｐｍにおいて４℃で１７分間遠心分離する。次いで、上清を吸引し、ペレットを結合緩衝液に再懸濁させる。次いで、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（商標）ホモジナイザを用いてこれを均質化する。（１５〜２０秒間、全ての材料が懸濁液中に入るまでバーストする）。これを、本明細書においては、「膜タンパク質」という。
【０５８８】
２．ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）タンパク質アッセイ
均質化に続いて、膜タンパク質濃度を、ブラッドフォードタンパク質アッセイを用いて決定する（タンパク質を約１．５ｍｇ／ｍｌまで希釈し、アリコートし、後で用いるために凍結する（−８０℃）ことができる；凍結するとき、使用のプロトコルは以下の通りである：アッセイの日に、凍結した膜タンパク質を室温で解凍し、続いて、ボルテックスし、次いで、Ｐｏｌｙｔｒｏｎで約１２×１，０００ｒｐｍにて約５〜１０秒間均質化する；複数の調製のためには、ホモジナイザは異なる調製物の均質化の間に徹底的に清浄化する必要がある）。
【０５８９】
ａ．材料
（前記した）結合緩衝液；ブラッドフォード染料試薬；ブラッドフォードタンパク質標準は、製造業者の指示（Ｂｉｏｒａｄ，ｃａｔ．ｎｏ．５００−０００６）に従って利用する。
【０５９０】
ｂ．手法
二連チューブを調製し、１つは膜を含み、および１つは対照「ブランク」としてのものである。各々は８００μｌの結合緩衝液を含有した。その後、１０μｌのブラッドフォードタンパク質標準（１ｍｇ／ｍｌ）を各チューブに加え、１０μｌの膜タンパク質を、次いで、丁度１つのチューブ（ブランクではない）に加える。その後、２００μｌのブラッドフォード染料試薬を各チューブに加え、続いて、各々をボルテックスする。５分後、チューブを再度ボルテックスし、その中の材料をキュベットに移す。次いで、波長５９５ｎｍにおいて、ＣＥＣＩＬ３０４１分光光度計を用いてキュベットを読む。
【０５９１】
３．同定アッセイ
ａ．材料
ＧＤＰ緩衝液は３７．５ｍｌの結合緩衝液および２ｍｇ  ＧＤＰ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｇ−７１２７）よりなり、続いて、結合緩衝液の一連の希釈により、０．２μＭ  ＧＤＰを得る（各ウエル中のＧＤＰの最終濃度は０．１μＭ  ＧＤＰであった）；候補化合物を含む各ウエルは、１００μｌ  ＧＤＰ緩衝液（最終濃度０．１μＭ  ＧＤＰ）、結合緩衝液中の５０μｌの膜タンパク質、および結合緩衝液中の５０μｌ［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．６ｎＭ）（１０ｍｌ結合緩衝液当り２．５μｌ［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ）よりなる２００μｌの最終容量を有する。
【０５９２】
ｂ．手法
候補化合物は、好ましくは、９６ウエルプレートフォーマットを用いてスクリーニングする（これらは−８０℃で凍結することができる）。膜タンパク質（対照としての、標的ＧＰＣＲを排除する発現ベクターを含む膜）を懸濁液中に入るまで軽く均質化する。次いで、前記したブラッドフォードタンパク質アッセイを用いてタンパク質濃度を決定する。次いで、膜タンパク質（および対照）を結合緩衝液中で０．２５ｍｇ／ｍｌまで希釈する（最終アッセイ濃度、１２．５μｇ／ウエル）。その後、１００μｌ  ＧＤＰ緩衝液をＷａｌｌａｃ  Ｓｅｉｎｔｉｓｔｒｉｐ（商標）（Ｗａｌｌａｃ）の各ウエルに加える。次いで、５ｕｌのピンツールを用いて、５μｌの候補化合物をそのようなウエルに移す（すなわち、２００μｌの合計アッセイ容量中の５μｌは、候補化合物の最終スクリーニング濃度が１０μＭとなるように１：４０の比率である）。再度、汚染を回避するために、各移動工程の後に、ピンツールを、水（１×）エタノール（１×）および水（２×）を含む３つの貯蔵庫中ですすぐ必要があり、各すすぎの後に過剰の液体をツールから振盪する必要があり、紙およびキムワイプで乾燥する。その後、５０μｌの膜タンパク質を各ウエルに加え（標的ＧＰＣＲを含まない膜を含む対照ウエルも利用した）室温にて５〜１０分間プレ−インキュベートした。その後、結合緩衝液中の５０μｌの［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（０．６ｎＭ）を各ウエルに加え、続いて、室温にて撹拌器上で６０分間インキュベートする（再度、本実施例においては、プレートをホイルで被覆した）。次いで、４０００ＲＰＭにおいてプレートを２２℃にて１５分間スピンすることによってアッセイを停止する。次いで、プレートを８チャネルマニフォールドで吸引し、プレートカバーで密閉する。次いで、（製造業者の指示に従い）設定「Ｐｒｏｔ．＃３７」を用いてプレートをＷａｌｌａｃ  １４５０で読む。
【０５９３】
（実施例６）
環状ＡＭＰアッセイ
例えば、逆アゴニスト、アゴニスト、またはアンタゴニストとしての候補化合物を同定するための別のアッセイアプローチは、シクラーゼベースのアッセイを利用することによって達成される。候補化合物をそのように同定することに加えて、このアッセイアプローチは、前記実施例５に記載された［３５Ｓ］ＧＴＰγＳアプローチからの結果の確認を提供するための独立したアプローチとして利用することができる。
【０５９４】
修飾されたＦｌａｓｈ  Ｐｌａｔｅ（商標）Ａｄｅｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅキット（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｅｃｌｅａｒ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＳＭＰ００４Ａ）を、好ましくは、以下のプロトコルに従って、標的ＧＰＣＲのモジュレータとしての候補化合物の同定で利用する。
【０５９５】
標的ＧＰＣＲでトランスフェクトされた細胞を、トランスフェクションからほぼ３日後に収穫する。２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４および１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有する緩衝液中での懸濁した細胞の均質化によって膜を調製する。Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（商標）を用いて、均質化を氷上でほぼ１０秒間行う。得られたホモジネートを４９，０００×ｇにおいて４℃にて１５分間遠心する。次いで、得られたペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４および０．１ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する緩衝液に再懸濁させ、１０秒間均質化し、続いて、４９，０００×ｇにおいて４℃にて１５分間遠心分離する。次いで、利用するまで、得られたペレットを−８０℃で貯蔵する。直接同定スクリーニングの日に、膜ペレットを室温にてゆっくりと解凍し、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４および１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有する緩衝液に再懸濁させて、０．６０ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度を得る（再懸濁させた膜を用いるまで氷上に置く）。
【０５９６】
ｃＡＭＰ標準、および２μＣｉのトレーサー（［１２５Ｉ］ｃＡＭＰ（１００μｌ）〜１１ｍｌの検出緩衝液）を含む検出緩衝液を調製し、製造業者の指示に従って維持する。スクリーニングのためにアッセイ緩衝液を新たに調製し、該緩衝液は２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ。ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２０ｍＭホスホクレアチン（Ｓｉｇｍａ）、０．１単位／ｍｌのクレアチンホスホキナーゼ（Ｓｉｇｍａ）、５０μＭ  ＧＴＰ（Ｓｉｇｍａ）、０．２ｍＭ  ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ）を含有する；次いで、アッセイ緩衝液を利用するまで氷上で貯蔵する。
【０５９７】
候補化合物を、好ましくは、４０μｌの膜タンパク質（３０μｇ／ウエル）および５０μｌのアッセイ緩衝液と共に、例えば、９６ウエルプレートウエル（３μｌ／ウエル；１２μＭ最終アッセイ濃度）に加える。次いで、この混合物を、軽く振盪しつつ、室温で３０分間インキュベートした。
【０５９８】
インキュベーションに続き、１００μｌの検出緩衝液を各ウエルに加え、続いて、２〜２４時間インキュベートする。次いで、（製造業者の指示に従い）「Ｐｒｏｔ．＃３１」を用いてプレートをＷａｌｌａｃ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（商標）プレートリーダーでカウントする。
【０５９９】
例として、限定されないが、得られた説明的スクリーニングアッセイプレート（９６ウエルフォーマット）を図１に示す。各棒線は各ウエルで異なる化合物についての結果を表わし、「標的ＧＰＣＲ」は、ＢＲＳ−３受容体と関連しない内因性の構成的に活性なＧｓ共役ＧＰＣＲのＧｓα融合タンパク質構築体である。図１に示された結果は、各プレートの平均結果（「ｍ」）に基づく標準偏差も提供し、一次スクリーニングからの「リード」としての逆アゴニストの選択のための平均＋２つの任意の優先性は、少なくとも平均プレート応答から２標準偏差を差し引いたものだけパーセント応答を低下させる候補化合物の選択を含む。逆に、一次スクリーニングからの「リード」としてのアゴニストの選択のための任意の優先性は、少なくとも平均プレート応答＋２標準偏差だけパーセント応答を増加させる候補化合物を選択することを含む。これらの選択プロセスに基づいて、以下のウエル中の候補化合物は、各々、ウエルＡ２およびＧ９中の該内因性ＧＰＣＲに対して推定逆アゴニスト（化合物Ａ）およびアゴニスト（化合物Ｂ）として直接同定した。図１参照。明瞭性のために：これらの化合物は、このＧＰＣＲに対する内因性リガンドのいずれの知識なくしても直接同定されていることを注記する。化合物結合親和性ではなく、受容体機能に基づくアッセイ技術に焦点を当てることによって、この受容体（化合物Ａ）の機能的活性を低下させ、ならびに受容体（化合物Ｂ）の機能的活性を増加させることができる化合物を確認することが可能である。
【０６００】
（実施例７）
細胞内カルシウム濃度の測定のための蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）アッセイ
各クローン系からの標的受容体（実験）およびｐＣＭＶ（陰性対照）の安定にトランスフェクトされた細胞を、翌日のアッセイのために、完全培養基（１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ）にて、５．５×１０４細胞／ウエルで、ポリ−Ｄ−リシン予備処理９６ウエルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，＃３５６６４０）に撒く。Ｆｌｕｏ４−ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ，＃Ｆ１４２０２）インキュベーション緩衝液ストックを調製するために、１ｍｇ  Ｆｌｕｏ４−ＡＭを４６７μｌのＤＭＳＯおよび４６７μｌプロオロン酸（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ，＃Ｐ３０００）に溶解させて、１ｍＭのストック溶液を得、これは−２０℃で１ヶ月間貯蔵することができる。Ｆｌｕｏ４−ＡＭは蛍光カルシウム指示染料である。
【０６０１】
候補化合物を洗浄緩衝液（１×ＨＢＳＳ／２．５ｍＭプロベニシド／ｐＨ７．４の２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）中で調製する。
【０６０２】
アッセイの時点において、培養基をウエルから取り出し、細胞にｐＨ７．４の１００μｌの４μＭ  Ｆｌｕｏ４−ＡＭ／２．５ｍＭプロベニシド（Ｓｉｇｍａ，＃Ｐ８７６１）／２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／完全培地を負荷する。３７℃／５％ＣＯ２におけるインキュベーションを６０分間進行させる。
【０６０３】
１時間のインキュベーションの後、Ｆｌｕｏ４−ＡＭインキュベーション緩衝液を除去し、細胞を１００μｌの洗浄緩衝液で２回洗浄する。各ウエルに１００μｌの洗浄緩衝液が残る。プレートを３７℃／５％ＣＯ２のインキュベータに６０分間で戻す。
【０６０４】
ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｄ）は、３０秒目に５０μｌの候補化合物を加え、さらに１５０秒間に候補化合物によって誘導された細胞内カルシウム濃度（［Ｃａ２＋］）の一過的な変化を記録するようにプログラムされている。合計蛍光変化カウントを用いて、ＦＬＩＰＲソフトウエアを用いてアゴニスト活性を決定する。機器ソフトウエアは経口の読みを正規化して、ゼロにおける同等な初期の読みを与える。
【０６０５】
説明として、かつ限定されないが、当業者であれば、公知のアゴニストとの引き続いての接触によって誘導された細胞内（［Ｃａ２＋］）の一過的増加を阻害するその能力を評価することによって、候補化合物を受容体のアゴニストとしてスクリーニングすることができるのを認識するであろう。
【０６０６】
いくつかの実施形態において、標的受容体を含む細胞は、さらに、Ｇα１５、Ｇα１６、またはＧｑ（ｄｅｌ）ＧｉキメラＧタンパク質を含む。
【０６０７】
これまでのは、安定にトランスフェクトされた細胞を用いてアゴニスト活性についてのＦＬＩＰＲアッセイを提供しているが、当業者であれば、例えば、アンタゴニスト活性を特徴づけるためにアッセイを容易に修飾できるであろう。当業者であれば、別法として、一過的にトランスフェクトされた細胞を用いることができるであろうことを容易に認識するであろう。
【０６０８】
（実施例８）
ＭＡＰキナーゼアッセイ
ＭＡＰキナーゼ（マイトジェン活性化キナーゼ）をモニタリングして、受容体の活性化を評価することができる。ＭＡＰキナーゼはいくつかのアプローチによって検出することができる。１つのアプローチはリン酸化状態、未リン酸化（不活性）またはリン酸化（活性）いずれかの評価に基づく。リン酸化されたタンパク質はＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてより遅い移動度を有し、従って、ウエスタンブロッティングを用いて未刺激タンパク質と比較することができる。別法として、リン酸化されたタンパク質に対して特異的な抗体が入手でき（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）、これを用いて、リン酸化されたキナーゼの増加を検出することができる。いずれかの方法において、細胞を試験化合物で刺激し、次いで、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液で抽出する。可溶性画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに適用し、タンパク質を電気泳動によってニトロセルロースまたはＩｍｍｏｂｉｌｉｎに移動させる。免疫反応性ビーズは、標準的なウエスタンブロッティング技術によって検出される。目に見える、または化学発光シグナルをフィルムに記録し、デンシトメトリーによって定量する。
【０６０９】
別のアプローチは、リン酸化アッセイを介するＭＡＰキナーゼ活性の評価に基づく。細胞を試験化合物で刺激し、可溶性抽出物を調製する。抽出物をガンマ−３２Ｐ−ＡＴＰ、ＡＴＰ再生系、およびインスリン、またはＰＨＡＳ−Ｉによって調節されるリン酸化された熱および酸安定化タンパク質などのＭＡＰキナーゼに対する特異的基質と共に３０℃にて１０分間インキュベートする。反応をＨ３ＰＯ４の添加によって停止させ、試料を氷に移す。アリコートを、リン酸化されたタンパク質を保持するＷｈａｔｍａｎ  Ｐ８１クロマトグラフィ紙にスポットする。クロマトグラフィ紙を洗浄し、液体シンチレーションカウンタで３２Ｐについてカウントする。別法として、細胞抽出物を、ガンマ−３２Ｐ−ＡＴＰ、ＡＴＰ再生系、およびストレプトアビジンによってフィルタ支持体に結合したビオチニル化ミエリン塩基性タンパク質と共にインキュベートする。ミエリン塩基性タンパク質は活性化されたＭＡＰキナーゼに対する基質である。リン酸化反応を３０℃にて１０分間行う。次いで、抽出物を、リン酸化されたミエリン塩基性タンパク質を保持するフィルタを通して吸引することができる。フィルタを洗浄し、液体シンチレーションカウンティングによって３２Ｐについてカウントする。
【０６１０】
（実施例９）
メラノーマ保有細胞技術
メラノーマ保有細胞は下等脊椎動物で見出される皮膚細胞である。それはメラノソームといわれる色素沈着オルガネラを含有する。メラニン保有細胞は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）活性化に際して微小管ネットワークに沿ってこれらのメラノソームを再分布させることができる。この色素移動の結果は、細胞の見掛けの明化または暗化である。メラニン保有細胞において、Ｇｉ共役受容体の活性化に由来する細胞内ｃＡＭＰれべるの減少は、メラノソームを細胞の中心へ移動させ、その結果、色の劇的な明化がもたらされる。次いで、ｃＡＭＰレベルが上昇すると、Ｇｓ共役受容体の活性化に続き、メラノソームは再分散され、細胞は再度暗色に見える。Ｇｑ共役受容体の活性化に由来するジアシルグリセロールレベルの増加もまた、この再分散を誘導することができる。加えて、該技術は、ある種の受容体チロシンキナーゼの研究にも適する。メラニン保有細胞の応答は受容体活性化から数分以内に起こり、その結果、単純で頑強な色変化がもたらされる。該応答は慣用的な吸光度マイクロプレートリーダーまたは現代のビデオイメージング系を用いて容易に検出することができる。他の皮膚細胞とは異なり、メラニン保有細胞は神経堤に由来し、シグナリングタンパク質の完全相補体を発現するように見える。特に、細胞は極端に広い範囲のＧタンパク質を発現し、ほとんど全てのＧＰＣＲを機能的に発現させることが可能である。
【０６１１】
メラニン保有細胞を利用して、ＧＰＣＲに対する、天然リガンドを含めた化合物を同定することができる。この方法は、特異的刺激に応答してその色素を分散または凝集させ、次いで、ＧＣＰＲをコードする外因性クローンを発現することができる色素細胞系の試験細胞を導入することによって行うことができる。刺激体、例えば、メラトニンは色素沈着の初期状態を設定し、ここで、該色素は、ＧＰＣＲの活性化が色素分散を誘導するとき試験細胞内で凝集する。しかしながら、細胞を刺激体で刺激して、色素沈着の初期状態を設定し、ここで、ＧＰＣＲの活性化が色素凝集を誘導するとき、該色素は分散する。次いで、試験細胞を化合物と接触させ、細胞中の色素沈着が色素沈着の初期状態から変化したか否かを決定する。限定されないが、ＧＰＣＲに共役するリガンドを含めた候補化合物による色素細胞の分散は、ペトリ皿上で暗く見え、他方、色素細胞の凝集は明るく見える。
【０６１２】
材料および方法は、米国特許第５，４６２，８５６号および米国特許第６，０５１，３８１号の開示に従うことができる。これらの特許の開示は、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０６１３】
細胞を、例えば、９６ウエルプレート中で平板培養する（プレート当たり１つの受容体）。トランスフェクションから４８時間後に、各プレート上の細胞の半分を１０ｎＭメラトニンで処理する。メラトニンはメラニン保有細胞中の内因性Ｇｉ共役受容体を活性化し、該細胞の色素を凝集させるようにする。細胞の残りの半分は無血清培地０．７×Ｌ−１５（Ｇｉｂｃｏ）に移す。１時間後、無血清培地中の細胞は色素分散状態のままであり、他方、メラトニン処理細胞は色素凝集状態にある。この時点において、細胞を用量応答の試験／候補化合物で処理する。平板培養したＧＰＣＲが試験／候補化合物に結合するならば、メラニン保有細胞は、該化合物に応答して色変化を受けると予測されるだろう。受容体がＧｓまたはＧｑ共役受容体のいずれかであれば、メラトニン凝集メラニン保有細胞は色素分散を受けるだろう。対照的に、受容体がＧｉ共役受容体であれば、色素分散細胞は用量依存性色素凝集を受けると予測されるだろう。
【０６１４】
（実施例１０）
ＰＲＳ−３受容体は細胞内ＩＰ３蓄積を増加させる。
【０６１５】
ＣＯＳ−７細胞を、内因性ヒトＢＲＳ−３をコードするｃＤＮＡを含有するｐＣＭＶ発現ベクターで、またはｐＣＭＶベクター単独で一過的にトランスフェクトした。細胞内ＩＰ３蓄積を合計イノシトールリン酸の蓄積として読んだ。
【０６１６】
ＣＯＳ−７細胞を９６ウエルプレート中のウエル当たり１０，０００細胞で平板培養し、一晩付着させた。次いで、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１１６６８−０２７）を用い、ＣＯＳ−７細胞を、０．５または１．３ｎｇ／ウエルのＢＲＳ−３／ｐＣＭＶで、または１３ｎｇ／ウエルの空のｐＣＭＶで三回トランスフェクトした。約１５時間後、トランスフェクトされたＣＯＳ−７細胞を完全培地（１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、および１．５ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウムを含有するＤＭＥＭ）に戻し、細胞培養を３７℃にて約８時間継続した。
【０６１７】
ＣＯＳ−７細胞を、本明細書に記載するように、トランスフェクションから約２４時間後にＩＰ３アッセイで用いた。完全培地を、１．５ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウムおよび４μＣｉ／ｍｌ［３Ｈ］ミオ−イノシトール（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を補足した１００μｌのイノシトール不含培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｇｉｂｃｏ処方０２−５０９２ＥＡ；イノシトール、炭酸水素ナトリウムおよびピルビン酸ナトリウムを含まず、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルタミン、フェノールレッド、およびピリドキシンＨＣｌを含有するＤＭＥＭ）と交換し、細胞を３７℃にて約１５時間インキュベートした。次いで、培地を吸引によって除去し、ＩＰ３培地（１０μＭパルギリンおよび１０ｍＭ塩化リチウムを補足した前記イノシトール不含培地）で置き換え、細胞を３７℃で３時間インキュベートした。（ＢＲＳ−３アゴニストとしての試験化合物をスクリーニングするためには、試験化合物をこの３時間のインキュベーションに含むであろう）。インキュベーションに続き、培地を吸引によって除去し、氷冷０．１Ｍギ酸を含有する緩衝液で置き換えた。次いで、プレートを−８０℃で一晩凍結して、ドライアイス上での最初の３０分のインキュベーションに続いて完全な細胞溶解を達成した。
【０６１８】
完全な細胞溶解に続いて、アッセイプレートを３７℃のオーブン中で解凍した。次いで、解凍した内容物を、樹脂（Ｂｉｏｒａｄ，ＡＧ１−Ｘ８  １００〜２００メッシュ、ギ酸塩形態）を予め負荷した９６ウエルフィルタプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ）に移した。真空マニフォールドを用いてプレートを濾過し、樹脂を水で複数回洗浄した。次いで、溶出緩衝液を適用し（２００μｌ，１．０Ｍギ酸アンモニウム／０．１Ｍギ酸）、得られた溶出物を真空下で９６ウエル収集プレートに収集した。溶出物（２００μｌ）のアリコートを、４ｍｌのシンチレーション流体を含有するシンチレーションバイアルに移し、シンチレーションカウンタ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ  ｏｒ  Ｈｉ−Ｓａｆｅ  ３）でカウントした。
【０６１９】
ＢＲＳ−３は検出可能なレベルの構成的活性を呈し、ＣＯＳ−７細胞中のＩＰ３蓄積を増加させることが判明した。図２参照。同様な結果が、２９３細胞を用いて得られた（示さず）。
【０６２０】
（実施例１１）
ＢＲＳ−３における［Ｄ−ＴＹＲ６，βＡＬＡ１１，ＰＨＥ１３，ＮＬＥ１４］ボンベシン（６−１４）のアゴニスト活性
［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）のアゴニスト活性をＢＲＳ−３において特徴付けた。［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）は表Ｄ中の化合物Ｄ３４に対応する。
【０６２１】
Ａ．ＦＬＩＰＲアッセイ
ＨｅＬａ細胞を、ヒトＢＲＳ−３をコードするプラスミドＤＮＡで安定にトランスフェクトし、蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）アッセイで用いた。図３Ａに示した代表的なアッセイにおいて、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）は、ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、約０．２６ｎＭのＢＲＳ−３におけるＥＣ５０を有することが判明した。
【０６２２】
Ｂ．メラニン保有細胞アッセイ
メラニン保有細胞を、ヒトＢＲＳ−３をコードするプラスミドＤＮＡで一過的にトランスフェクトし、分散アッセイで用いた。図３Ｂで示した代表的なアッセイにおいて、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）は、メラニン保有細胞分散アッセイにおいて、約０．２６ｎＭのＢＲＳ−３におけるＥＣ５０を有することが判明した。
【０６２３】
Ｃ．ＩＰ３アッセイ
ＨｅＬａ細胞を、ヒトＢＲＳ−３をコードするプラスミドＤＮＡで安定にトランスフェクトし、ＩＰ３蓄積アッセイで用いた。図３Ｃに示した代表的なアッセイにおいて、［Ｄ−Ｔｙｒ６，βＡｌａ１１，Ｐｈｅ１３，Ｎｌｅ１４］ボンベシン（６−１４）は、ＩＰ３蓄積アッセイにおいて、約０．１３ｎＭのＢＲＳ−３におけるＥＣ５０を有することが判明した。
【０６２４】
（実施例１２）
本発明の化合物による睡眠の促進を示すためのラット睡眠ポリグラフィプロトコル
ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的な睡眠ポリグラフィプロトコルを用いて（例えば、睡眠促進剤となるべき）睡眠を促進するのに適した化合物であることを示すことができる。
【０６２５】
動物：雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２２５−３５０ｇ）（Ｈａｒｌａｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を単独で収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由に近付けさせて、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて湿度（３０〜７０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設中に維持する。ラットを外科的処置の前に動物施設に少なくとも３日間収容させる。
【０６２６】
手法：
ラットをケタミン／キシラジン混合物で麻酔し、ＥＥＧ（脳波図）および筋電図（ＥＭＧ）記録のために外科的に調製する。外科的回復から２〜３週間後に、ラットを少なくとも３日間ポリプロピレ試験ケージに慣らす。試験日に、ラットを試験槽に入れ、一晩慣らす。翌日の午前１０時に、ラットに試験化合物（ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストなどの、ＢＲＳ−３の活性を阻害する化合物）を投与し、記録装置と接続して、試験槽に戻して３時間置く。
【０６２７】
データ解析
ＥＥＧおよびＥＭＧデータをデジタル化し、３時間の試験時間に渡って１０秒のエポックに貯蔵する。次いで、これらのデータを視覚的にスコアリングし、各１０秒のエポックをノンＲＥＭ睡眠、ＲＥＭ睡眠、または覚醒エピソードいずれかとして特徴付ける。３時間に渡る合計睡眠時間を、ビヒクル投与または試験化合物いずれかの後に各ラットについて計算する。次いで、睡眠のパーセント増加を各ラットについて導き出す。睡眠の持続を増加させる化合物は、睡眠を促進するのに適した化合物である。睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の目覚めの回数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することのないデルタ波睡眠での時間量の延長の１以上を促進する化合物は、睡眠を促進するのに適した化合物である。睡眠の定着を促進する化合物は、睡眠を促進するのに適した化合物である。
【０６２８】
試験時間の持続は３時間よりも長くても短くてもよく、化合物投与の時間が午前１０時以外でもよいことが明らかに意図される。また、睡眠ポリグラフィをラット以外の哺乳動物で行ってもよいことが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はヒトである。
【０６２９】
（実施例１３）
本発明の化合物による覚醒状態の促進を示すためのラット睡眠ポリグラフィプロトコル
ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的な睡眠ポリグラフィを用いて覚醒状態を促進するのに適した化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示すことができる。
【０６３０】
動物：雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２２５−３５０ｇ）（Ｈａｒｌａｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を単独で収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由に近付けさせ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（３０〜７０％）および温度（２０〜２２℃）で制御施設中に維持した。ラットを、外科的処置前に、少なくとも３日間動物施設に慣れさせる。
【０６３１】
手法：
ラットをケタミン／キシラジン混合物で麻酔し、ＥＥＧおよびＥＭＧ記録のために外科的に調製する。外科的回復から２〜３週間後に、ラットを少なくとも３日間、ポリプロピレン試験ケージに慣れさせる。試験日に、ラットを試験槽に入れ、一晩慣れさせる。翌日の午前１０時に、ラットに、試験化合物（例えば、ＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストなどのＢＲＳ−３の活性を刺激する化合物）を投与し、記録装置に接続して、試験槽に戻して３時間置く。
【０６３２】
データ解析
ＥＥＧ（脳波図）およびＥＭＧ（筋電図）データをデジタル化し、３時間の試験時間に渡って１０秒のエポックに貯蔵する。次いで、これらのデータを視覚的にスコアリングし、各１０秒のエポックをノンＲＥＭ睡眠、ＲＥＭ睡眠、または覚醒エピソードいずれかとして特徴付ける。３時間に渡る合計覚醒時間を、ビヒクル投与または試験化合物いずれかの後に各ラットについて計算する。次いで、覚醒状態のパーセント増加を各ラットについて導き出す。
【０６３３】
試験時間の持続は３時間よりも長くても短くてもよく、および化合物投与の時刻は午前１０時以外であってもよいことが明らかに意図される。また、睡眠ポリグラフィはラット以外の哺乳動物で行ってもよいことが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はヒトである。
【０６３４】
（実施例１４）
ラット視床下部背内側核（ＤＭＨ）および他のサブ領域におけるＧＡＢＡ作動性ニューロンに対するＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７マーカーの共発現の分析
ラット視床下部背内側核（ＤＭＨ）および他のサブ領域におけるＧＡＢＡ作動性ニューロンに対するＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７マーカーの共発現は、ＧＡＧＡ作動性ニューロンに対するマーカーであるＧＡＤ６７に対するジゴキシゲニン（Ｄｉｇ）標識アンチセンスプローブと組合せて、ＢＲＳ−３に対する放射性標識アンチセンスプローブを用いてインサイチュハイブリダイゼーションによって調査した。ラットＢＲＳ−３  ｃＤＮＡ配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号ＡＦ５１０９８４参照）のコード領域の５’−末端４５０ヌクレオチドに対応する４５０塩基対ｃＤＮＡ断片に対応するラットＢＲＳ−３プローブをｐＢＳベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）に挿入した。ラットＧＡＤ６７  ｃＤＮＡ配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセション番号Ｍ７６１７７参照）のコード領域に由来する１３００塩基対ｃＤＮＡ断片に対応するラットＧＡＤ６７プローブをｐＢＳベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に挿入した。インサイチュハイブリダイゼーションは実質的に後に記載するように行った。
【０６３５】
明サイクルの開始から１〜２位時間後に、迅速な断頭によってラットを殺した。脳を摘出し、イソペンタン中で凍結し（−４０℃）、−８０℃で貯蔵した。視床下部からの連続の１２μｍセクションをクリオスタットで調製し、解凍し、スーパーフロスト＋スライドに設置し、処理まで−８０℃で貯蔵した。
【０６３６】
センスおよびアンチセンス３３Ｐ放射性標識プローブは、ＲＮａｓｉｎ（４０ユニット）、ＤＴＴ（２ｍＭ）、ＡＴＰ、ＣＴＰおよびＧＴＰ（０．３３ｍＭ）、［α−３３Ｐ］−ＵＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，５０μＣｉ，ＮＥＧ３０７  Ｈ００１ＭＣ）、および適当なポリメラーゼ（Ｔ７  ５０ユニットまたはＴ３  ２０ユニット）を含有する転写緩衝液中の線状化プラスミドをインキュベートすることによってインビトロ転写によって作製した。プローブをＤＮａｓｅ処理し、エタノール沈殿によって精製し、２×ハイブリダイゼーション緩衝液（８×ＳＥＴ、２×デンハルト、０．４％ＳＤＳ、２００ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、５００ｕｇ／ｍｌ  ｔＲＮＡ、５００ｕｇ／ｍｌポリＡ、５００ｕｇ／ｍｌポリＣ）に再懸濁させた。
【０６３７】
アンチセンスジゴキシゲニン標識プローブは、ＲＮａｓｉｎ（４０ユニット）、ＤＴＴ（２ｍＭ）、ジゴキシゲニン標識ＵＴＰ（ｒＮＴＰジゴキシゲニンＲＮＡ標識ミックス、Ｒｏｃｈｅ  ＃１２７７０７３）を含有するヌクレオチドミックス、および適当なポリメラーゼ（Ｔ７  ５０ユニットまたはＴ３  ２０ユニット）を含有する転写緩衝液中で線状化プラスミドをインキュベートすることによってインビトロ転写によって作製した。プローブをＤＮａｓｅ処理し、ｃｅｎｔｒｉｃｅｐカラム（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，＃  ＣＳ−９０１）を通して清浄化した。
【０６３８】
組織セクションをフリーザから除去し、１５分間風乾した。セクションを、引き続いて、リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）中の４％パラホルムアルデヒド中で室温にて３０分間固定し、１×ＰＢＳ中で３回すすぎ、０．１Ｍトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ｐＨ８．０中で２分間、次いで、０．２５％無水酢酸を含有する同緩衝液中で軽くアセチル化した。次いで、スライドを１×ＰＢＳ中で５分間すすぎ、次いで、等級化アルコール濃度を通して脱水し、風乾した。放射性標識プローブを２×ハイブリダイゼーション緩衝液中に希釈して、スライド当り１６×１０６ｃｐｍの近似濃度を得た。サケ精子を２０ｕｇ／スライドの最終濃度で加え、ジゴキシゲニン標識プローブを５００ｎｇ／スライドの最終濃度まで加えた。デキストラン硫酸／ホルムアミド（２０％）を加えて、２×ハイブリダイゼーション緩衝液とで１：１の比率を得た。希釈されたプローブをスライドに乗せ、カバーガラスをかけ、１×ＰＢＳで湿潤化したプラスチックトレイ中で５５℃にて１６〜１８時間インキュベートした。カバーガラスを１ｍＭ  ＤＴＴ／４×ＳＳＣ（６００ｍＭ塩化ナトリウムおよび６０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．２）で浮かせ、引き続いて、セクションを４×ＳＳＣ中１０分間で１回洗浄し、３７℃の水浴中でリボヌクレアーゼＡ（２００ｕｇ／ｍｌ）中６０分間インキュベートし、続いて、２×、１×、および０．５×ＳＳＣ中で各々５分間すすいだ。セクションを０．１×ＳＳＣの最終ストリンジェンシーまで６５℃にて１時間洗浄し、次いで、０．１×ＳＳＣ中で２回洗浄し、次いで、ＴＮ（１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）中で５分間洗浄した。次いで、セクションを０．５％カゼイン／ＴＮブロッキング溶液中に３０分間入れ、次いで、０．５％カゼイン／ＴＮ溶液中に１：３００希釈した抗ジゴキシゲニンＡＰ抗体（Ｒｏｃｈｅ，＃１０９３２７４）と共に２時間インキュベートした。次いで、セクションをＴＮ中で、各々３回２分間洗浄し、次いで、ＴＮＭ（１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ９．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）中で各々３回５分間洗浄した。最後の洗浄後に、セクションを、ＴＮＭ中の発色反応（０．２ｍｇ／ｍｌレバミソール、３．４ｕｌ／ｍｌ  ＮＢＴ（Ｒｏｃｈｅ  ＃１３８３２１３）、３．５ｕｌ／ｍｌ  ＢＣＩＰ（Ｒｏｃｈｅ  ＃１３８３２２１））中でインキュベートし、２０〜３０分間、０．２２ｕ滅菌濾過し、ＴＥ中で３０分間反応を停止させた。０．１Ｍグリシンおよび０．５％トリトン−Ｘ１００中で１０分間セクションをインキュベートすることによって抗体をストリップし、水中で洗浄した。セクションを２．５％グルタルアルデヒド中で１〜２時間固定し、水で洗浄し、次いで、風乾した。一旦セクションを乾燥し、それらをＸ線感受性フィルム（Ｂｉｏ−Ｍａｘ，Ｋｏｄａｋ，Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に２〜７日間暴露し、写真エマルジョン（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，＃１７５３７）からのゲル形態である（Ｉｌｆｏｒｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｋ．５Ｄエマルジョン）中に浸漬し、乾燥し、曝露のレベルに応じて、乾燥剤を含むスライドボックス中で４℃にて４〜８週間貯蔵した。製造業者の推奨（Ｋｏｄａｋ  Ｄ１９）に従った浸漬されたスライドの発色の後、セクションを水中でしっかりと洗浄し、風乾し、次いで、カバーガラスを載せて顕微鏡調査した。
【０６３９】
ＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７  ｍＲＮＡ含有細胞の分布の画像は、Ｓｔｅｒｅｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ（登録商標）ｖ６．５５．２ソフトウエア（Ｍｉｃｒｏｂｒｉｇｈｔｆｉｅｌｄ，ＶＴ）を用いるビデオカメラ（ＮＴＳＣ  ７５０ＣＥ）に接続されたＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５１顕微鏡を用いて得た。非放射性リボプローブを紫色沈殿として明るい視野で可視化し、銀粒分布によって放射性プローブを暗い視野下で可視化した。プローブの各対について、３つの異なるセクションの左側および右側で分析を独立して行った。
【０６４０】
ラットにおける視床下部背内側核（ＤＭＨ）でのＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７の発現を示す代表的な光学顕微鏡画像を図４中のパネルＡ〜Ｃとして示す。ＢＲＳ−３のみを発現するニューロン（白色矢印）、ＧＡＤ６７のみを発現するニューロン（塗りつぶした矢じり）、およびＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７を共発現するニューロン（黒色矢印）の存在が認められる。
【０６４１】
ラット中の視床下部背内側核（ＤＭＨ）におけるＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７の発現の代表的なグラフ表示を図５に示し、ここで、図５Ｂは図５Ａの部分の拡大である。ＢＲＳ−３のみを発現するニューロンは十字（ｘ）として示され、ＢＲＳ−３およびＧＡＤ６７を共発現するニューロンは丸印（●）として示される。ＧＡＤ６７のみを発現するニューロンは示さない。組織スライスの位置は、Ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ，Ｐａｘｉｎｏｓ  ａｎｄ  Ｗａｔｓｏｎ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９８，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏに従って、ブレグマ（Ｂｒｅｇｍａ）に対する座標を用いて示す。
【０６４２】
ＢＲＳ−３の共発現のインサイチュハイブリダイゼーション分析の結果、およびＢＲＳ−３の検出可能な発現を呈する視床下部のサブ領域内のニューロンによる神経伝達物質またはマーカーの数を図６に示す。結果は、以下の視床下部サブ領域について示される：内側視索前核（ＭＰＯ）、腹部内側視索前核（ＶＭＰＯ）、視索上核（ＳＯ）、弓状核（Ａｒｃ）、弓状核後部（Ａｒｃ後部）、視床下部傍室核（ＰＶＨ）、視床下部背内側核（ＤＭＨ）、視床下部側領域（ＬＨ）、内側扁桃体（ＭｅＡ）、および扁桃体中心（ＣｅＡ）。結果は腹側両面視束前核（ＶＬＰＯ）について示していない。というのは、ＢＲＳ−３の発現はこのサブ領域で検出できなかったからである。以下の神経伝達物質またはマーカーは、ＢＲＳ−３との共発現で検索された：コカインアンフェタミン調節転写体（ＣＡＲＴ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６７（ＧＡＤ６７）、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、オキシトシン（ＯＴ）、バソプレッシン（ＡＶＰ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）、プロラクチン放出ペプチド（ＰｒＲＰ）、ヒスチジンデカルボキシラーゼ（ＨＤＣ）、メラニン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）、およびハイポクレチン／オレキシンペプチド（Ｈｃｒｔ）。黒色ボックスは、共発現が見出されなかったことを示す。灰色のボックスは、神経伝達物質またはマーカーが視床下部サブ領域において正常に見出されないか、あるいは分析が行われなかったかのいずれかを示す。図６においては、結果は、示された神経伝達物質またはマーカーの共発現を有するその中のＢＲＳ−３発現ニューロンのパーセンテージとして示された視床下部サブ領域について示される。驚くべきことに、ＧＡＢＡ作動性ニューロンに対するマーカー、ＧＡＤ６７とのＢＲＳ−３の顕著な共発現が見出された（図６）。
【０６４３】
視床下部背内側核（ＤＭＨ）の場合においては、例えば、その中のＢＲＳ−３発現ニューロンの約８４％はＧＡＢＡ作動性ニューロン（ＧＡＤ６７を発現するニューロン）であることが判明した（図６）。
【０６４４】
（実施例１５）
ＢＲＳ−３モジュレータ（例えば、逆アゴニスト、アンタゴニスト、アゴニスト、または部分アゴニスト）活性についての酵母レポーターアッセイ
酵母細胞ベースのアッセイは文献において従前に記載されている（例えば、Ｍｉｒｅｔら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（２００２）２７７：６８８１−６８８７；Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ（１９９９）９：２４１３−２４１８；Ｋｉｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２５０：１２１−１２３；ＷＯ９９／１４３４４；ＷＯ００／１２７０４；および米国特許第６，１００，０４２号参照）。簡単に述べると、内因性酵母Ｇ−アルファ（ＧＰＡ１）が欠失され、複数の技術を用いて構築されたＧタンパク質キメラで置き換えられているように酵母細胞を作製した。加えて、内因性酵母アルファ−細胞ＧＰＣＲ、Ｓｔｅ３は、選択された哺乳動物ＧＰＣＲの相同発現を可能とするために欠失されている。酵母においては、真核生物細胞において保存されたフェロモンシグナリング変換経路（例えば、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ経路）のエレメントはＦｕｓ１の発現を駆動する。β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）をＦｕｓ１プロモータ（Ｆｕｓ１ｐ）の制御下に置くことによって、システムが開発されており、それにより、受容体の活性化は酵素読み取りに導く。
【０６４５】
酵母細胞は、Ａｇａｔｅｐらによって記載された酢酸リチウム方法の適合によって形質転換される（Ａｇａｔｅｐら、１９９８，Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｌｉｔｈｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ／ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｃａｒｒｉｅｒ  ＤＮＡ／ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ（ＬｉＡｃ／ｓｓ−ＤＮＡ／ＰＥＧ）ｐｒｏｔｏｃｏｌ．    Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｔｉｐｓ  Ｏｎｌｉｎｅ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｊｏｕｒｎａｌｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）。簡単に述べれば、酵母細胞を酵母トリプトンプレート（ＹＴ）上で一晩成長させる。キャリア一本鎖ＤＮＡ（１０μｇ）、２μｇの２つのＦｕｓ１ｐ−ＬａｃＺ受容体プラスミドの各々（１つはＵＲＡ選択マーカーを持ち、１つはＴＲＰを持つ）、２μｇの、酵母発現ベクター（２μｇ複製起点）中のＢＲＳ−３（例えば、ヒト受容体）、および酢酸リチウム／ポリエチレングリコール／ＴＥ緩衝液をエッペンドルフチューブにピペットで入れる。受容体を含有する／レポーター対照を含有しない酵母発現プラスミドはＬＥＵマーカーを有する。酵母細胞をこの混合物に接種し、反応は３０℃にて６０分間進行する。次いで、酵母細胞を４２℃にて１５分間熱ショックを与える。次いで、細胞を洗浄し、選択プレート上に広げる。選択プレートは合成規定酵母培地からＬＥＵ、ＵＲＡおよびＴＲＰ（ＳＤ−ＬＵＴ）を除いたものである。３０℃にて２〜３日間インキュベートした後、次いで、選択プレート上で成長するコロニーをＬａｃＺアッセイで試験する。
【０６４６】
β−ガラクトシダーゼについての蛍光酵素アッセイを行うために、対象のＢＲＳ−３受容体を運ぶ酵母細胞を、液体ＳＤ−ＬＵＴ培地中で不飽和濃度まで一晩成長させる（すなわち、細胞は依然として分裂しており、静止相にはいまだ到達していない）。それらを新鮮な培地中で最適なアッセイ濃度まで希釈し、９０μｌの酵母細胞を９６ウエル黒色ポリスチレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に加える。ＤＭＳＯに溶解させ、かつ１０％ＤＭＳＯ溶液中で１０倍濃度まで希釈した試験化合物をプレートに加え、プレートを３０℃に４時間置く。４時間後、β−ガラクトシダーゼに対する基質を各ウエルに加える。これらの実験においては、フルオレセインジ（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）を用い（ＦＤＧ）、フルオレセインを放出する酵素に対する基質であり、蛍光読み取りを行う。５００μＭ  ＦＤＧ／２．５％  Ｔｒｉｔｏｎ×１００のウエル当たり２０μｌを加える（細胞を透過性にするには潜在が必要である）。細胞と基質との６０分間のインキュベーションの後、１Ｍ炭酸ナトリウムのウエル当たり２０μｌを加えて、反応を停止させ、蛍光シグナルを増強させる。次いで、プレートを４８５／５３５ｎｍにおいて蛍光光度計で読む。
【０６４７】
空のベクターで形質転換された酵母細胞における場合を凌ぐＢＲＳ−３形質転換酵母細胞における蛍光シグナルの減少は、試験化合物が、ＢＲＳ−３受容体機能性を阻害する化合物（例えば、ＢＲＳ−３の逆アゴニストもしくはアンタゴニストである化合物）であることを示す。ある実施形態において、本発明の化合物は、バックグラウンドシグナル（ビヒクル単独の存在下で得られるシグナル）のそれを下回る蛍光シグナルの減少を与える。
【０６４８】
空のベクターで形質転換された酵母細胞における場合を凌ぐＢＲＳ−３−形質転換酵母細胞における蛍光シグナルの増加は、試験化合物が、ＢＲＳ−３受容体機能性を刺激する化合物（例えば、ＢＲＳ−３のアゴニストまたは部分アゴニストである化合物）であることを示す。ある実施形態において、本発明の化合物は、バックグラウンドシグナル（ビヒクル単独の存在下で得られたシグナル）のそれを超える蛍光シグナルの増加を与える。
【０６４９】
（実施例１６）
受容体結合アッセイ
試験化合物は、本発明のＧタンパク質共役受容体のリガンドであることが知られている化合物および該受容体の間の複合体の形成を低下させるその能力について評価することができる。ある実施形態において、公知のリガンドは放射性標識される。放射性標識された公知のリガンドをスクリーニングアッセイで用いて、化合物を同定／評価することができる。一般的な項目において、新たに合成された、または同定された化合物（すなわち、試験化合物）は、放射性標識された公知のリガンドおよび受容体の間の複合体の形成を低下させるその能力によって、放射性標識された公知のリガンドの受容体への結合を低下させるその能力について評価することができる。
【０６５０】
他の態様において、試験化合物を放射性標識し、対象のＧＰＣＲを含む細胞へ、または対象のＧＰＣＲを含む膜へ結合するその能力を評価することによって本発明の対象のＧＰＣＲのリガンドであることを示すことができる。
【０６５１】
試験化合物の不在下における放射性標識された公知のリガンドの特異的結合のレベル未満の試験化合物の存在下における放射性標識された公知のリガンドの特異的結合のレベルは、該放射性標識された公知のリガンドおよび該受容体の間のより少ない複合体が、試験化合物の不在下よりも試験化合物の存在下において該受容体が形成されることを示す。
【０６５２】
本発明のＧタンパク質共役受容体のリガンドであることが公知の化合物および該受容体の間の複合体を検出するためのアッセイプロトコル
Ａ．受容体の調製
２９３細胞を、６０ｕｌのリポフェクタミン（１５ｃｍ皿当たり）を用い、本発明のＧタンパク質共役受容体をコードするポリヌクレオチドを含む１０ｕｇ発現ベクターで一過的にトランスフェクトする。一過的にトランスフェクトされた細胞を、培地を変化させつつ、皿中で２４時間成長させ（７５％密集度）、１０ｍｌ／皿のＨｅｐｅｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ＋１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で除去する。次いで、細胞をＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ遠心分離機で１７，０００ｒｐｍにて２０分間遠心する（ＪＡ−２５．５０ロータ）。引き続いて、ペレットを２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ＋１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４に再懸濁させ、５０ｍｌ  Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザで均質化し、再度遠心分離する。上清を除去した後、結合アッセイで用いるまでペレットを−８０℃で貯蔵する。アッセイで用いる場合、膜を氷上で２０分間解凍し、次いで、１０ｍＬのインキュベーション緩衝液（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ＋１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）を加える。次いで、膜をボルテックスし、粗製膜ペレットを再懸濁させ、設定６において、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ  ＰＴ−３１００  Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザで１５秒間均質化する。膜タンパク質の濃度は、ＢＲＬブラッドフォードタンパク質アッセイを用いて決定する。
【０６５３】
Ｂ．結合アッセイ
全結合については、合計容量５０ｕｌの（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＤＴＡ；５〜５０ｕｇタンパク質を含有するアッセイ緩衝液に希釈された）適切に希釈された膜を９６ウエルポリプロピレンマイクロタイタプレートに加え、続いて、１００ｕｌのアッセイ緩衝液および５０ｕｌの放射性標識された公知のリガンドを加える。非特異的結合では、５０ｕｌのアッセイ緩衝液を１００ｕｌの代わりに加え、放射性標識されていないさらなる５０ｕｌの１０ｕＭの該公知のリガンドを加え、その後、５０ｕｌの該放射性標識された公知のリガンドを加える。次いで、プレートを室温で６０〜１２０分インキュベートする。結合反応を、Ｂｒａｎｄｅｌｌの９６ウエルプレートハーベスタと共にＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＧＦ／Ｃ  Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ濾過プレートを通す濾過アッセイプレートによって停止させ、続いて、０．９％ＮａＣｌを含有する冷５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ７．４で洗浄する。次いで、濾過プレートの底を密閉し、５０ｕｌのＯｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘを各ウエルに加え、プレートの頂部を密閉し、プレートをＴｒｉｌｕｘ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａからシンチレーションカウンタでカウントする。該放射性標識された公知のリガンドおよび該受容体の間のより少ない複合体が、試験化合物の存在下で形成されるか否かを決定するために、１００ｕｌのアッセイ緩衝液を加える代わりに、１００ｕｌの適切に希釈された該試験化合物を適当なウエルに加え、続いて、５０ｕｌの該放射性標識された公知のリガンドを加える。
【０６５４】
（実施例１７）
ペンチレンテトラゾール誘導発作からの保護
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて抗痙攣活性を有する化合物であること（例えば、抗痙攣剤であること）を示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて抗痙攣活性を有する化合物であること（例えば、抗痙攣剤であること）を示すことができる。本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて抗偏頭痛活性を有する化合物であること（例えば、抗偏頭痛剤であること）を示すことができる。薬物（例えば、試験化合物またはジアゼパム）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内、または静脈内投与することができることが明らかに意図される。以下のプロトコルは、マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。
【０６５５】
プロトコルＩ
動物：実験の開始において体重が２０〜２２ｇの雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）は、対照雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）と共に、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入する。マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスを少なくとも３日間、試験前に、動物施設に慣れさせる。
【０６５６】
手法：
ペンチレンテトラゾール（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）を実験（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独およびＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム）および対照（対照マウス単独および対照マウス＋ジアゼパム）群のマウスに１２５ｍｇ／ｋｇで皮下投与する。生存するマウスの数を、ペンチレンテトラゾールの投与から３０分および６０分後に各群について記録する。
【０６５７】
薬物投与：ジアゼパムを、ペンチレンテトラゾールの投与の６０分前に投与する。ジアゼパムを、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０６５８】
データ解析
データは、死滅から保護されたマウスのパーセンテージとして各群について示される。対照マウス単独群における死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較したＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群における死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、抗痙攣活性を有する化合物であること（例えば、抗痙攣剤であること）を示す。対照マウス＋ジアゼパム群における死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較したＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群において死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が抗痙攣活性を有する化合物であること（例えば、抗痙攣剤であること）を示す。対照マウス単独群における死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較したＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群における死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、抗偏頭痛活性を有する化合物であること（例えば、抗偏頭痛剤であること）を示す。対照マウス＋ジアゼパム群において死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較したＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群における死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、抗偏頭痛活性を有する化合物であること（例えば、抗偏頭痛剤であること）を示す。
【０６５９】
プロトコルＩＩ
動物：実験の開始において体重が２０〜２２ｇである雄性ＣＦ１マウスはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入する。マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０で明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスを少なくとも３日間、試験前に動物施設に慣れさせる。
【０６６０】
手法：
ペンチレンテトラゾール（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）を実験（試験化合物単独および試験化合物＋ジアゼパム）および対照（ビヒクル対照およびジアゼパム対照）群におけるマウスに１２５ｍｇ／ｋｇにて皮下投与する。生存するマウスの数を、ペンチレンテトラゾールの投与から３０分および６０分後に各群について記録する。
【０６６１】
薬物投与：全ての薬物およびビヒクルを、ペンチレンテトラゾールの投与の６０分前に投与する。薬物（例えば、試験化合物およびジアゼパム）を、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該試験化合物はＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物であると明らかに意図される。
【０６６２】
データ解析
データは、死滅から保護されたマウスのパーセンテージとして各群について示される。ビヒクル対照群における死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較した試験化合物単独実験群において死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群において投与された化合物が抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示す。ジアゼパム対照群において死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較した試験化合物＋ジアゼパム実験群において死滅から保護されたマウスのパーセンテージは、実験群で投与された化合物が抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示す。ビヒクル対象群において死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較した試験化合物単独実験群において死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群で投与された化合物が抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示す。ジアゼパム対照群において死滅から保護されたマウスのパーセンテージと比較した試験化合物＋ジアゼパム実験群において死滅から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群で投与された化合物が抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物が、抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物が、抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０６６３】
（実施例１８）
電気ショック誘導発作からの保護
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて、抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３における逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示すことができる。本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３における逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示すことができる。薬物（例えば、試験化合物またはジアゼパム）は例えば、経口、腹腔内、脳室内、または静脈内投与することができることが明らかに意図される。以下のプロトコルは、別法として、マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。
【０６６４】
プロトコルＩ
動物：実験の開始において体重か２０〜２２ｇである雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）は、対照雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）と共に、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入する。マウスをケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０で明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスを、少なくとも３日間、試験前に動物施設に慣れさせる。
【０６６５】
手法：
電気ショックは、Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ  ＥＣＴ，Ｕｎｉｔ  ７８０１発作装置（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｉｔａｌｙ）、および０．９％生理食塩水に浸漬させた角膜電極を用い、実験（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独およびＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム）および対照（対照マウス単独および対照マウス＋ジアゼパム）群におけるマウスに投与される。マウスは３０ｍＡのショックを０．３秒間受ける。
【０６６６】
薬物投与：ジアゼパムを、電気ショックの投与の６０分前に投与する。ジアゼパムを、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０６６７】
データ解析
データは、発作の後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージとして各群について示される。対照マウス単独群における該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較したＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージが、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニストを有する化合物が抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示す。対照マウス単独群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示す。
【０６６８】
プロトコルＩＩ
動物：実験の開始において体重が２０〜２２ｇである雄性ＣＦ１マウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から購入する。該マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６．３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスは、試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０６６９】
手法：
Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ  ＥＣＴ，Ｕｎｉｔ  ７８０１発作装置Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｉｔａｌｙ）および０．９％生理食塩水に浸漬させた角膜電極を用い、電気ショックを実験（試験化合物単独および試験化合物＋ジアゼパム）および対照（ビヒクル対照およびジアゼパム対照）群におけるマウスに投与する。マウスは３０ｍＡのショックを０．３秒間受ける。
【０６７０】
薬物投与：全ての薬物およびビヒクルは電気ショックの投与の６０分前に投与する。薬物（例えば、試験化合物およびジアゼパム）は、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該試験化合物はＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物であることが明らかに意図される。
【０６７１】
データ解析
データは、発作の後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージとして各群について示される。ビヒクル対照群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、試験化合物単独群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群において投与された化合物が抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示す。ジアゼパム対照群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、試験化合物＋ジアゼパム群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群において投与された化合物が抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示す。ビヒクル対照群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、試験化合物単独群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群において投与された化合物が抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛活性である）ことを示す。ジアゼパム対照群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのパーセンテージと比較して、試験化合物＋ジアゼパム群において該後足伸筋成分から保護されたマウスのより大きなパーセンテージは、実験群において投与された化合物が抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物が、抗痙攣活性を有する化合物である（例えば、抗痙攣剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物は、抗偏頭痛活性を有する化合物である（例えば、抗偏頭痛剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０６７２】
（実施例１９）
ポルソルト（Ｐｏｒｓｏｌｔ）強制水泳試験
本モデルで測定された効果は、薬物の抗鬱病活性と相関付けられている。このモデルのパラダイムは、効果的な抗鬱病化合物が、マウスまたはラットに、ビヒクルのみを与えられたマウスまたはラットよりも水を満たしたシリンダから逃げようとより大きな試みをさせるようにすることである。
【０６７３】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて抗鬱病活性を有する化合物である（例えば、抗鬱病剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて抗鬱病活性を有する化合物である（例えば、抗鬱病剤である）ことを示すことができる。試験化合物は、例えば、経口、腹腔内、脳室内または静脈内投与することができることが明らかに意図される。以下のプロトコルは、別法として、マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。以下のプロトコルは、別法として、ラット以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。
【０６７４】
プロトコルＩ
動物：本実験で用いた動物は、実験の開始において体重が２０〜２２ｇである、非ナイーブ雄Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）および対照非ナイーブ雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）である（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）。マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスは、試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０６７５】
手法：
試験装置は６つの透明なＰｌｅｘｉｇｌａｓシリンダ２０ｃｍ（高さ）×１０ｃｍ（幅）よりなる。シリンダには２５℃の水で９ｃｍまで満たす。各マウスを５〜１０分間の訓練セッションのためにシリンダに入れる。マウスを５分間の試験セッションのために２４時間後に戻す。試験セッションを後のスコアリングのためにビデオテープに記録する。
【０６７６】
データ解析
スコアリングは、Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃに書かれ、かつＤＯＳで実行される時間サンプリングコンピュータプログラムを用いて各群についてなされる。５秒毎に、マウスを３つの挙動：不動、温和な水泳、または登りのうちの１つを示すものとして評点をつける。次いで、これらのサンプリングスコアを試験セッションのパーセンテージに変換する。対照マウス群におけるマウスによってなされる、水で満たされたシリンダから逃避する試みと比較した、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス群においてマウスによってなされる、水で満たされたシリンダから逃避するより大きな試みは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が抗鬱病活性を有する化合物である（例えば、抗鬱病剤である）ことを示す。
【０６７７】
プロトコルＩＩ
動物：本実験で用いた動物は、体重が２８０〜３５０ｇの間の非ナイーブ雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（ＳＡＳＣＯ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ）である。該ラットをケージ当たり２匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。ラットを、試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れされる。
【０６７８】
手法：
試験装置は６つの透明なＰｌｅｘｉｇｌａｓシリンダ４０ｃｍ（高さ）×１９ｃｍ（幅）よりなる。シリンダに２５℃の水を１８ｃｍまで満たす。各ラットを１５分間の訓練セッションのためにシリンダに入れる。ビヒクルまたは試験化合物いずれかの亜慢性または急性投与に続いて、実験（試験化合物）および対照（ビヒクル）群におけるラットを、５分間の試験セッションのために２４時間後に戻す。試験セッションを後のスコアリングのためにビデオテープに記録する。
【０６７９】
薬物投与：亜急性投与は、訓練および試験の間の２４時間の期間に薬物を３回投与することよりなる。該薬物は試験セッションの２４時間、５時間および１時間前に投与する。急性投与は、試験セッションの１時間前に薬物を１回投与することよりなる。試験化合物を、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該試験化合物は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物であることが明らかに意図される。
【０６８０】
データ解析
スコアリングは、Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃに書かれ、かつＤＯＳで実行される時間サンプリングコンピュータプログラムを用いて各群においてなされる。５秒毎に、ラットを３つの挙動：不動、温和な水泳または登りのうちの１つを示すものとして評点が与えられる。次いで、これらのサンプリングスコアを試験セッションのパーセンテージに変換する。ビヒクル対照群においてラットにおいてなされる、水で満たされたシリンダから逃避する試みと比較して、試験化合物群においてラットによってなされる、水で満たされたシリンダから逃避するより大きな試みは、実験群において投与される化合物が抗鬱病活性を有する化合物（例えば、抗鬱病剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物は、抗鬱病活性を有する化合物である（例えば、抗鬱病剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０６８１】
（実施例２０）
高架式十字迷路
高架式十字迷路モデルは、開いた高架空間のマウスおよびラットの生来の恐怖を利用する。試験装置は、２つの開いたアームおよび２つの閉じたアームよりなる高架式十字迷路である。マウスまたはラットは、開いたアーム上よりも迷路の閉じたアーム上でより長い時間を消費するように自然に選択されるが、効果的な抗不安化合物を試験の前にマウスまたはラットに投与すると、マウスまたはラットが開いたアームで消費する時間の量は増加する。
【０６８２】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて、抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて、抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示すことができる。薬物（例えば試験化合物またはジアゼパム）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内、または静脈内投与できることが明らかに意図される。以下のプロトコルは、マウス以外の哺乳動物を用いて、別法として行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。以下のプロトコルはラット以外の哺乳動物を用いて別法として行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。
【０６８３】
プロトコルＩ
動物：本実験で用いる動物は、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入された、実験の開始において体重が２０〜２２ｇである、雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）および対照雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）である。該マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）に維持する。マウスは、試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０６８４】
手法：
実験（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独およびＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム）および対照（対照マウス単独および対照マウス＋ジアゼパム）群におけるマウスを、薬物の投与から３０分後に試験する。マウスを、開いたアームの１つに面する迷路の中心に置く。マウスの移動を、コンピュータにインターフェース接続したフォトセルを用いて５分間の試験セッションに渡って追跡する。コンピュータは、各アームへの進入の数および各アームで消費された時間を測定する。
【０６８５】
薬物投与：ジアゼパムを試験セッションの３０分前に投与する。ジアゼパムを、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０６８６】
データ解析
対照マウス単独群におけるマウスによって開いたアームで消費された時間のパーセンテージと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群におけるマウスによって開いたアームで消費された時間のより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群におけるマウスによって開いたアームで消費された時間のパーセンテージと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群におけるマウスによって開いたアームで消費された時間のより大きなパーセンテージは、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示す。
【０６８７】
プロトコルＩＩ
動物：本実験で用いた動物は、２８０〜３５０ｇの体重の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，ＵＫ）である。該ラットはケージ当たり２匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。ラットは、試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０６８８】
手法：
実験（試験化合物単独および試験化合物＋ジアゼパム）および対照（ビヒクル対照およびジアゼパム対照）群におけるラットを薬物の投与から３０分後に試験する。ラットを開いたアームの１つに面する迷路の中心に置く。ラットの移動を、コンピュータとインターフェース接続されたフォトセルを用いて５分間の試験セッションに渡って追跡する。コンピュータは、各アームへの進入の数および各アームで消費された時間を測定する。
【０６８９】
薬物投与：全ての薬物およびビヒクルを試験セッションの３０分前に投与する。薬物（例えば、試験化合物およびジアゼパム）を、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該試験化合物は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物であることが明らかに意図される。
【０６９０】
データ解析
ビヒクル対照群においてラットによって開いたアームで消費された時間のパーセンテージと比較して、試験化合物単独群においてラットによって開いたアームで消費された時間のより大きなパーセンテージは、実験群で投与された化合物が抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示す。ジアゼパム対照群におけるラットによって開いたアームで消費された時間のパーセンテージと比較して、試験化合物＋ジアゼパム群におけるラットによって消費された時間のより大きなパーセンテージは、実験群で投与された化合物が抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物は、抗不安活性を有する化合物である（例えば、抗不安剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０６９１】
（実施例２１）
空間的水迷路
空間的水迷路は、空間的学習および記憶の試験として広く用いられてきた。マウスまたはラットを、泳ぐことによって水から、該水のちょうど水面下に潜ったプラットフォームへ逃避するように訓練する。プラットフォームは動物の目に見えないので、タンクの領域における目に見える迷路の手がかりを利用してプラットフォームを突き止める必要がある。空間的水迷路による試験は、本質的には、Ｃｏｌｌｉｎｓｏｎら（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００２）２２：５５７２−５５８０）およびＤａｗｓｏｎら（Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ（２００６）３１６：１３３５−１３４５）によって記載されているように行う。
【０６９２】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、認識増強発生を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する本発明の化合物、例えばＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用いて、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示すことができる。薬物（例えば、試験化合物またはジアゼパムまたはα５ＩＡ）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内または静脈内投与することができることが明らかに意図される。以下のプロトコルは、別法として、マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。以下のプロトコルは。別法として。ラット以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。
【０６９３】
プロトコルＩ
動物：本実験で用いた動物はＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入された、実験の開始において体重が２０〜２２ｇである、雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）および対照雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）である。該マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、自由に１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスは、試験の前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０６９４】
手法：
実験（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独およびＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム、およびＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋α５ＩＡ（３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）−６−［（１−メチル−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル−オキシ］−１，２，４−トリアゾロ［３，４−α］フタラジン；Ｄａｗｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ（２００６）３１６：１３３５−１３４５））および対照（対照マウス単独および対照マウス＋ジアゼパムおよび対照マウス＋α５ＩＡ）群におけるマウスには、薬物の投与から３０分後に、最初のトライアルで毎日試験する。動物には１０日間毎日４つのトライアルを受けさせる。
【０６９５】
薬物投与：ジアゼパムまたはα５ＩＡはトライアル１の３０分前に投与する。ジアゼパムまたはα５ＩＡを、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０６９６】
データ解析
節約率は、トライアル１潜伏性からトライアル２潜伏性を差し引くことによって得られる。ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群についての節約率と比較した、対象マウス単独群についてのより大きな節約率は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群についての節約率と比較して、対照マウス＋ジアゼパム群についてのより大きな節約率は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋α５ＩＡ群についての節約率と比較して、対照マウス＋α５ＩＡ群についてのより大きな節約率は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３におけるアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。
【０６９７】
プロトコルＩＩ
動物：本実験で用いた動物は体重が２８０〜３５０ｇである雄性フーデットリスター系ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，ＵＫ  Ｌｔｄ）である。該ラットは、ケージ当たり２匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗周期（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に収容する。ラットは、試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０６９８】
手法：
実験（試験化合物単独および試験化合物＋ジアゼパムおよび試験化合物＋α５ＩＡ）および対照（ビヒクル対象およびジアゼパム対照およびα５ＩＡ対照）群におけるラットは、薬物の投与から３０分後に最初のトライアルで毎日試験する。動物には１０日間毎日４つのトライアルを受けさせる。
【０６９９】
薬物投与：全ての薬物およびビヒクルをトライアル１の３０分前に投与する。薬物（例えば、試験化合物およびジアゼパムおよびα５ＩＡ）を、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該試験化合物は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物であることが明らかに意図される。
【０７００】
データ解析
トライアル１潜在性からトライアル２潜在性を差し引きすることによって節約率を得る。ビヒクル対照群についての節約率と比較して、試験化合物単独群についてのより大きな節約率は、実験群で投与した化合物が認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ジアゼパム対照群についての節約率と比較して、試験化合物＋ジアゼパム群についてのより大きな節約率は、実験群で投与した化合物が認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。α５ＩＡ対照群についての節約率と比較して、試験化合物＋α５ＩＡ群についてのより大きな節約率は、実験群で投与された化合物が認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物は、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０７０１】
（実施例２２）
本発明の化合物によって睡眠を促進するまたは覚醒状態を促進する活性を示すためのラット睡眠ポリグラフィプロトコル
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、睡眠を促進する活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の睡眠ポリグラフィプロトコルを用い、睡眠を促進するのに適した化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示すことができる。
【０７０２】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、覚醒状態を促進する活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の睡眠ポリグラフィプロトコルを用い、覚醒状態を促進するのに適した化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示すことができる。
【０７０３】
薬物（例えば、試験化合物またはジアゼパム）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内または静脈内投与することができることが明らかに意図さられる。以下のプロトコルは、別法として、ラット以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。
【０７０４】
動物：雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２２５〜３５０ｇ）（Ｈａｒｌａｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）は単独で収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（３０〜７０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。ラットは、外科的処置の前に、少なくとも３日間、動物施設に慣らさせる。
【０７０５】
手法：
ラットをケタミン／キシラジン混合物で麻酔し、ＥＥＧ（脳波図）および筋電図（ＥＭＧ記録のために外科的に調製する。外科的処置の回復から２〜３週間後に、ラットを少なくとも３日間、ポリプロピレン試験ケージに慣れさせる。試験の日に、ラットを試験槽に入れ一晩慣れさせる。翌日の午前１０時に、ラットに試験化合物＋ジアゼパムまたはジアゼパム単独を投与し、記録装置に接続して、３時間の間、試験槽に戻す。
【０７０６】
薬物投与：薬物（例えば、試験化合物およびジアゼパム）を、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０７０７】
データ解析
ＥＥＧおよびＥＭＧデータをデジタル化し、３時間の試験時間に渡って１０秒のエポックで貯蔵する。次いで、これらのデータを視覚的にスコアリングし、各１０秒のエポックをノンＲＥＭ睡眠、ＲＥＭ睡眠、または覚醒エピソードのいずれかとして特徴付ける。３時間の時間に渡っての合計睡眠時間を、ビヒクル投与または試験化合物のいずれかの後に各ラットについて計算した。次いで、睡眠のパーセント増加を各ラットについて誘導する。
【０７０８】
ジアゼパム対照と比較して睡眠の持続を増加させる化合物は、睡眠を促進するのに適した化合物である。ジアゼパム対照と比較して、睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の覚醒の数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することないデルタ波睡眠の時間の量の延長の１以上を促進する化合物は、睡眠を促進するのに適した化合物である。ジアゼパム対照と比較して、睡眠の定着を促進する化合物は、睡眠を促進するのに適した化合物である。
【０７０９】
ジアゼパム対照と比較して、睡眠の持続を減少する化合物は、覚醒状態を促進するのに適した化合物である。ジアゼパム対照と比較して、睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の覚醒の数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することのないデルタ波睡眠の時間の増加の延長の１以上を抑制する化合物は、覚醒状態を促進するのに適した化合物である。ジアゼパム対照と比較して、睡眠の定着を抑制する化合物は、覚醒状態を促進するのに適した化合物である。
【０７１０】
試験期間の持続は３時間よりも長くても短くてもよく、化合物投与の時間は午前１０時以外であってもよいことが明らかに意図される。また、睡眠ポリグラフィはラット以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物は非ヒト哺乳動物である。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はマウスである。ある実施形態において、ラット以外の哺乳動物はヒトである。
【０７１１】
（実施例２３）
本発明の化合物によって睡眠を促進する、または覚醒状態を促進する活性を示すためのマウス睡眠ポリグラフィプロトコル
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、睡眠を促進する活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の睡眠ポリグラフィプロトコルを用い、睡眠促進活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示すことができる。
【０７１２】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、覚醒状態を促進する活性を有する化合物である（例えば、覚醒促進剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は、以下の睡眠ポリグラフィプロトコルを用い、覚醒状態促進活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示すことができる。
【０７１３】
薬物（例えば、ジアゼパム）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内または静脈内投与することができることが明らかに意図される。以下のプロトコルは、別法として。マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。また、試験期間の持続は３時間よりも長くても短くてもよく、化合物投与の時間は午前１０時以外であってもよいことが明らかに意図さられる。
【０７１４】
動物：本実験で用いた動物は、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入された、実験の開始において体重が２０〜２２ｇである雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）および対照雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）である。該マウスは、ケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水へ自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスを、外科的処置の前に、動物施設に少なくとも３日間、慣れさせる。
【０７１５】
手法：
マウスをケタミン／キシラジン混合物で麻酔し、ＥＥＧ（脳波図）および筋電図（ＥＭＧ）記録のために外科的に調製する。外科的処置の回復から２〜３週間後に、マウスをポリプロピレン試験ケージに少なくとも３日間、慣れさせる。試験の日に、マウスを試験槽に入れ、一晩慣れさせる。翌日午前１０時に、マウスにジアゼパムまたはビヒクルを投与し、記録装置に接続して、試験槽に３時間戻す。
【０７１６】
薬物投与：ジアゼパムを、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０７１７】
データ解析
ＥＥＧおよびＥＭＧデータをデジタル化し、３時間の試験期間に渡って１０秒のエポックに貯蔵する。次いで、これらのデータを視覚的にスコアリングし、各１０秒のエポックをノンＲＥＭ睡眠、ＲＥＭ睡眠、または覚醒エピソードのいずれかとして特徴付ける。３時間の期間に渡っての合計睡眠時間を、ビヒクル投与または試験化合物のいずれかの後に各ラットについて計算した。次いで、睡眠のパーセント増加を各マウスについて誘導する。
【０７１８】
対照単独マウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト単独マウスにおける睡眠の持続の増加は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が睡眠促進活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示す。対照単独マウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト単独マウスで観察された、睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の覚醒の数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することのないデルタ波睡眠の時間の量の延長の１以上の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、睡眠促進活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示す。対照単独マウスと比較したＢＲＳ−３ノックアウト単独マウスで観察された睡眠の定着の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、睡眠促成活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示す。
【０７１９】
対照＋ジアゼパムマウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト＋ジアゼパムマウスにおける睡眠の持続の増加は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、睡眠促進活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示す。対照＋ジアゼパムマウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト＋ジアゼパムマウスについて観察された、睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の覚醒の数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することのないデルタ波睡眠の時間の量の延長の１以上の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、睡眠促進活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示す。対照＋ジアゼパムマウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト＋ジアゼパムマウスで観察された睡眠の定着の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、睡眠促進活性を有する化合物である（例えば、睡眠促進剤である）ことを示す。
【０７２０】
対照単独マウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト単独マウスにおける睡眠の持続の増加は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が、覚醒状態促進活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示す。対照単独マウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト単独マウスで観察された、睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の覚醒の数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することのないデルタ波睡眠の時間の増加の延長の１以上の促進は、ＢＲＳ−３の受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニストを有する化合物が、覚醒状態促進活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示す。対照単独マウスと比較した、ＢＲＳ−３ノックアウト単独マウスで観察された睡眠の定着の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニストを有する化合物が、覚醒状態促進活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示す。
【０７２１】
対照＋ジアゼパムマウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト＋ジアゼパムマウスにおける睡眠の持続の増加は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が、覚醒状態促進活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示す。対照＋ジアゼパムマウスと比較して、ＢＲＳ−３ノックアウト＋ジアゼパムマウスにおいて観察された、睡眠開始潜伏期間の低下、夜間の覚醒の数の低下、およびＲＥＭ睡眠に影響することのないデルタ波睡眠の時間の量の延長の１以上の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が、覚醒状態促進活性を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示す。対照＋ジアゼパムマウスと比較した、ＢＲＳ−３ノックアウト＋ジアゼパムマウスで観察された睡眠の定着の促進は、ＢＲＳ−３受容体の活性を有する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が覚醒状態促進状態を有する化合物である（例えば、覚醒状態促進剤である）ことを示す。
【０７２２】
（実施例２４）
プレパルス阻害
統合失調症の兆候の１つは新規な感覚または認識刺激を濾過し、それを処理する能力の減少である。これは、プレパルス阻害（ＰＰＩ）と呼ばれるパラダイムを用いることによって動物およびヒトの双方で示すことができる。強い突然の刺激が示されると、驚愕応答を誘導し、これは、動物の尻ごみを測定することによって動物においてモニタリングすることができる。驚愕刺激に弱いプレパルスが先行するとき、驚愕応答は阻害される。統合失調症患者は弱いまたは欠乏したＰＰＩを示し、これは、阻害性機能または感覚運動ゲーティングの欠如を反映する。動物におけるプレパルス阻害は、薬物をスクリーニングして統合失調症を治療するためのモデルとして用いられてきた。弱いＰＰＩの表現型が化合物によって動物モデルにおいて逆行できるならば、それは、該化合物を用いて統合失調症を治療できることを示す。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊなどのマウスのある種の緊張は、天然では貧弱なＰＰＩを呈する（Ｏｕａｇａｚｚａｌら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００１）１５６：２７３−２８３）。
【０７２３】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調症剤である）ことを示すことができる。本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示すことができる（例えば、Ｏｕａｇａｚｚａｌら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００１）１５６：２７３−２８３参照）。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調症剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示すことができる。薬物（例えば、試験化合物またはジアゼパムマウス）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内または静脈内投与できることが明らかに意図される。以下のプロトコルは別法として、マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。
【０７２４】
プロトコル
動物：本実験で用いた動物は、実験の開始において体重が２０〜２２ｇであるナイーブ雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊｍマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）および対照ナイーブ雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）である（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）。該マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御設備に維持する。マウスを、試験の前に、少なくとも３日間動物施設に慣れさせる。
【０７２５】
手法：
試験は、各々が、全ての音響刺激を生じる高周波数拡声器（シリンダ上方２８ｃｍ）を備えた通気した音減衰キュービクル中のＰｌｅｘｉｇｌａｓプラットフォームに設けられた５．１ｃｍ（外径）Ｐｌｅｘｉｇｌａｓシリンダよりなる驚愕デバイス（ＳＲＬＡＢ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で行う。各槽の背景ノイズは７０ｄＢである。シリンダ内の運動は、Ｐｌｅｘｉｇｌａｓ基部に取り付けられた圧電加速度計によって検出し、変換し、コンピュータによってデジタル化し、保存する。刺激開始で始め、１ミリ秒の持続の６５回の読みを記録して、動物の驚愕振幅を得る。
【０７２６】
群（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群、対照マウス単独群、対照マウス＋ジアゼパムマウス群、対照マウス＋試験化合物群、対照マウス＋試験化合物＋ジアゼパム群）当たり１２匹のナイーブマウスを試験する。各セッションは５分の順化期間で開始し、続いて５連続１１０ｄＢトライアルを行う。これらのトライアルは分析には含めない。次いで、６つの異なるトライアルタイプを提示する：驚愕パルス（ＳＴ１１０，１１０ｄＢ／４０ｍｓ）、単独で与える低プレパルス刺激（Ｐ７４，７４ｄＢ／２０ｍｓ）、単独で与える高プレパルス刺激（Ｐ９０，９０ｄＢ／２０ｍｓ）、驚愕パルスの開始の１００ｍｓ前に与えられるＰ７４またはＰ９０（各々、ＰＰ７４およびＰＰ９０）、バックグラウンドノイズのみを示して（ＮＳＴ）、シリンダ中のベースライン運動を測定する最後のトライアル。全てのトライアルは１０回適用し、ランダムの順序で与え（Ｐ７４およびＰ９０はただ５回与える）、平均トライアル間隔（ＩＴＩ）は１５秒（１０〜２０秒）である。
【０７２７】
薬物投与：薬物（試験化合物、ジアゼパム、試験化合物＋ジアゼパム）を、試験セッションの３０分前に投与する。試験化合物およびジアゼパムを、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該化合物は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物であることが明らかに意図される。
【０７２８】
データ解析
対照マウス単独群と比較した、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調症剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群と比較してＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調症剤である）ことを示す。対照マウス単独群と比較して、対照マウス＋試験化合物群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、実験群で投与された化合物が抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調症剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群と比較して、対照マウス＋試験化合物＋ジアゼパム群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、実験群で投与された化合物が、抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調症剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物が、抗統合失調症活性を有する化合物である（例えば、抗統合失調剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０７２９】
対照マウス単独群と比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物は、抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群と比較して、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物が、抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示す。対照マウス単独群と比較して、対照マウス＋試験化合物におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、実験群において投与された化合物が抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示す。対照マウス＋ジアゼパム群と比較して、対照マウス＋試験化合物＋ジアゼパム群におけるより大きなパーセンテージのプレパルス阻害は、実験群で投与された化合物が、抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を阻害する化合物、例えば、ＢＲＳ−３において逆アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する化合物である該試験化合物は、抗精神病活性を有する化合物である（例えば、抗精神病剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【０７３０】
（実施例２５）
物体認識作業
ラットにおけるＥｎｎａｃｅｕｒおよびＤｅｌａｃｏｕｒによって元来開発された物体認識作業（Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３１，４７−５９，１９８８）は、その環境において新規な物体を探索するげっ歯類の生来の傾向に依拠し、これを用い、動物が従前に遭遇した物体を思い出すか否かを決定することができる。従前に遭遇した（親しんだ）物体についての記憶は、新規な物体を探索するのに消費された時間と比較したこの物体を探索するのに消費された相対的時間によって測定することができる。新規な物体は、親しんだものよりも通常は余計に探索される。従って、動物が物体を思い出すと、該物体は新規な物体よりもあまり探索されないはずである。親しんだ物体が忘れられたとき、それは新規な物体と同程度に多く探索されるであろう。記憶は、試料の提示と新規な物体が提示された試験セッションとの間の保持間隔を調整することによって変調することができる。化合物の認識増強特性を評価するには、２４時間保持間隔を用いることができる。この条件下では、対照マウスは、新規な物体に対して優先性を示さず、他方、認識増強化合物を注射したマウスは、新規な物体を探索するより時間を消費するであろう。より短い保持間隔を用いて、認識処理を損なう場合がある化合物を調べることができる（例えば、Ｎｉｌｓｓｏｎら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（２００７）１４９：１２３−１３０参照）。
【０７３１】
本発明の化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示すことができる。ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する本発明の化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は、以下の例示的なプロトコルを用い、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示すことができる。薬物（例えば、試験化合物またはジアゼパムまたはα５ＩＡ）は、例えば、経口、腹腔内、脳室内、または静脈内投与することができることが明らかに意図される。以下のプロトコルは別法として、マウス以外の哺乳動物を用いて行うことができることが明らかに意図される。ある実施形態において、マウス以外の哺乳動物はラットである。
【０７３２】
プロトコルＩ
動物：本実験で用いた動物はＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入した、実験の開始において体重が２０〜２２ｇである雄性Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｂｒｓ３ｔｍ１Ｊｆｂ／Ｊマウス（ＢＲＳ−３ノックアウトマウス；ストック番号００４３６６）および対照雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号０００６６４）である。該マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗でサイクル（午前６．３０に明かりをつける）にて湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスを試験前に動物施設に少なくとも３日間慣れさせる。
【０７３３】
手法：
試験領域は、基部におけるプラスチックインサート下に置かれた磁気ストリップを備えた暗い灰色のマット仕上げのＡＢＳプラスチック（６５×４５×４５（Ｈ）ｃｍ）のオープンフィールドである。物体は、赤色プラスチック（Ｌｅｇｏ）または灰色の金属複製品のいずれかで作製された小さなピラミッド（長さ９．５ｃｍ、高さ５．７ｃｍ）である。全ての物体は、オープンフィールドに取り付けるためのその基部上に薄い磁気ストリップを有する。該領域は、試験フロアレベルでほぼ２５ｌｕｘの天井光によって照明される。ＣＣＤビデオカメラをオープンフィールドの上方に置き、隣接する部屋のモニターおよびＶＣＲに接続る。マウスが親しんだ（Ｆ）および新規な（Ｎ）物体を探索するのに消費した回数および時間の長さを実験者が手動で記録する。
【０７３４】
群：ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム、ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋α５ＩＡ、対照マウス単独、対照マウス＋ジアゼパムおよび対照マウス＋α５ＩＡ。
【０７３５】
薬物投与：薬物（例えば、ジアゼパムおよびα５ＩＡ）を、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。
【０７３６】
プレ暴露：最初の日に動物は５分間の慣れセッションの間にオープンフィールドを探索する。
【０７３７】
訓練日：翌日、２つの同一の物体を、オープンフィールドの反対のコーナー（壁から１０ｃｍ）にさらなる５分間のセッションの間に提示する。
【０７３８】
訓練直後に、マウスに薬物またはビヒクルを注射する。マウスは試験のために、例えば、１時間、４時間、１２時間または２４時間後に戻す。
【０７３９】
試験：先に提示された物体の１つを新しい物体で置き換え、動物に、再度、これらの２つの物体をさらなる５分間のセッションの間に探索させる。群内では、新しい物体が置かれたコーナーを動物間で交互にする。物体を７０％エタノールで徹底的に洗浄して、動物が匂いの手がかりを用いるのを防ぐ。
【０７４０】
スコアリング基準：基本的な測定は、新規および親しんだ物体の探索時間（秒）である。探索は、１ｃｍ以下の距離において鼻を物体に触れさせ、または鼻を物体に向けるものと考えられる。新しい（Ｎ）および親しんだ（Ｆ）物体に対する２回の探索間の差を、識別指標（ｄ＝Ｎ−Ｆ）として採用する。認識スコアが探索の全レベルの差によって偏らないことを示すために、別の識別指標を用いることができる（Ｄ＝Ｎ−Ｆ／Ｎ＋Ｆ）。
【０７４１】
ＢＲＳ−３ノックアウトマウス単独群についての識別指標と比較して、対照マウス単独群についてのより大きな識別指標は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋ジアゼパム群についての認識指標と比較して、対照マウス＋ジアゼパム群についてのより大きな識別指標は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３ノックアウトマウス＋α５ＩＡ群についての識別指標と比較して、対照マウス＋α５ＩＡ群についてのより大きな識別指標は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物が、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。
【０７４２】
プロトコルＩＩ
動物：本実験で用いた動物は、実験の開始において体重が２０〜２２ｇである雄製Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスである（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）。該マウスはケージ当たり４匹収容し、食物（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓ．，Ｏｒａｎｇｅ，ＣＡ，Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ８６０４）および水に自由にアクセスさせつつ、１２時間：１２時間の明／暗サイクル（午前６：３０に明かりをつける）にて、湿度（４０〜６０％）および温度（２０〜２２℃）制御施設に維持する。マウスは試験前に、少なくとも３日間、動物施設に慣れさせる。
【０７４３】
手法：
試験領域は、基部におけるプラスチックインサート下におかれた磁気ストリップを備えた暗い灰色のマット仕上げのＡＢＳ（６５×４５×４５（Ｈ）ｃｍ）のオープンフィールドである。物体は、赤色プラスチック（Ｌｅｇｏ）または灰色金属複製品のいずれかで作製された小さなピラミッド（長さは９．５ｃｍ、高さは５．７ｃｍ）である。全ての物体は、オープンフィールドに取り付けられたその基部上に薄い磁気ストリップを有する。該領域を、試験フロアレベルでほぼ２５ｌｕｘの天井光によって照明する。ＣＣＤビデオカメラをオープンフィールドの上方に置き、隣の部屋のモニターおよびＶＣＲに接続る。マウスが親しんだ（Ｆ）および新規な（Ｎ）物体を探索するのに消費した回数および時間の長さを実験者が手動で記録する。
【０７４４】
群：試験化合物、試験化合物＋ジアゼパム、試験化合物＋α５ＩＡ、ビヒクル対照、ジアゼパム対照、α５ＩＡ対照。
【０７４５】
薬物投与：薬物（例えば、試験化合物およびジアゼパムおよびα５ＩＡ）を例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇで投与する。該試験化合物は、ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物であることが明らかに意図される。
【０７４６】
プレ暴露：最初の日に動物はオープンフィールドを５分間の慣れセッションの間に探索する。
【０７４７】
訓練の日：翌日、２つの同一の物体をオープンフィールドの反対コーナー（壁から１０ｃｍ）にさらなる５分間のセッションの間に提示する。
【０７４８】
訓練の直後に、マウスに薬物またはビヒクルを注射する。マウスを、試験のために、例えば、１時間、４時間、１２時間または２４時間戻す。
【０７４９】
試験：従前に提示された物体の１つを新しい物体で置き換え、動物に、再度これらの２つの物体をさらなる５分間のセッションの間、探索させる。群内で、新しい物体が置かれたコーナーを動物間で交互にする。物体を７０％エタノールで徹底的に洗浄して、動物が匂いの手がかりを用いるのを防ぐ。
【０７５０】
スコアリング基準：基本的な測定は、新規および親しんだ物体の探索時間（秒）である。探索は、１ｃｍ以下の距離において鼻を物体に触れさせ、または鼻を物体に向けるものと考えられる。新しい（Ｎ）および親しんだ（Ｆ）物体に対する２回の探索間の差を、識別指標（ｄ＝Ｎ−Ｆ）として採用する。認識スコアが探索の全レベルの差によって偏らないことを示すために、別の識別指標を用いることができる（Ｄ＝Ｎ−Ｆ／Ｎ＋Ｆ）。
【０７５１】
ビヒクル対照群についての識別指標と比較して、試験化合物単独群についてのより大きな識別指標は、実験群で投与された化合物が、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ジアゼパム対照群についての識別指標と比較して、試験化合物＋ジアゼパム群についてのより大きな識別指標は、実験群で投与された化合物が認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。α５ＩＡ対照群につての識別指標と比較して、試験化合物＋α５ＩＡ群につてのより大きな識別指標は、実験群で投与された化合物が認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示す。ＢＲＳ−３受容体の活性を刺激する化合物、例えば、ＢＲＳ−３においてアゴニスト活性または部分アゴニスト活性を有する化合物は、試験化合物が、認識増強活性を有する化合物である（例えば、認識増強剤である）ことを示すことができることが明らかに意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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