(57)【要約】  本発明は、血清アルブミンと結合することができるアミノ酸配列、このようなアミノ酸配列を含む又は本質的にこのようなアミノ酸配列から成る化合物、タンパク質及びポリペプチド、このようなアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸、このようなアミノ酸配列、タンパク質及びポリペプチドを含む組成物、特に薬学的組成物、並びにこのようなアミノ酸配列、タンパク質及びポリペプチドの使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類における血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、該霊長類において、血清アルブミンの天然血清半減期の少なくとも５０％の血清半減期を示すように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合する、アミノ酸配列。
【請求項２】
前記アミノ酸配列が、霊長類における血清アルブミンの天然血清半減期の少なくとも６０％の血清半減期を示す、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３】
前記アミノ酸配列が、霊長類における血清アルブミンの天然血清半減期の少なくとも８０％の血清半減期を示す、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項４】
前記アミノ酸配列が、霊長類における血清アルブミンの天然血清半減期の少なくとも９０％の血清半減期を示す、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項５】
アミノ酸配列が、少なくとも４日の血清半減期を示す、請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項６】
アミノ酸配列が、少なくとも７日の血清半減期を示す、請求項５に記載のアミノ酸配列。
【請求項７】
アミノ酸配列が、少なくとも９日の血清半減期を示す、請求項５又は６に記載のアミノ酸配列。
【請求項８】
血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、該血清アルブミン分子とＦｃＲｎとの結合が（有意に）低減又は阻害されないように、血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、請求項１〜７のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項９】
血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、該血清アルブミン分子の半減期が（有意に）低減されないように、血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、請求項１〜８のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１０】
血清アルブミンとＦｃＲｎとの結合に関与しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができる、請求項１〜９のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１１】
血清アルブミンのドメインＩＩＩ部分を形成しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１２】
免疫グロブリン配列又はその断片である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１３】
免疫グロブリン可変ドメイン配列又はその断片である、請求項１２に記載のアミノ酸配列。
【請求項１４】
ＶＨ配列、ＶＬ配列若しくはＶＨＨ配列、又はその断片である、請求項１３に記載のアミノ酸配列。
【請求項１５】
前記免疫グロブリン配列が、ドメイン抗体、「ｄＡｂ」、単一ドメイン抗体若しくはナノボディ、又はそのいずれか１つの断片である、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１６】
完全にヒト配列、ヒト化配列、ラクダ配列、ラクダ化ヒト配列又はヒト化ラクダ配列である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１７】
前記アミノ酸配列が、４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とを含み、
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から成る群から、及び／又は配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列から成る群から、若しくは配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列の１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から、及び／又は配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、
ｃ１）ＣＤＲ３は、配列番号４２のＣＤＲ３配列から成る群から選択されるアミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ３配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列、及び配列番号４２のＣＤＲ３配列との、３、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」を有するアミノ酸配列であるか、或いは代替的には
ｃ２）ＣＤＲ３は、配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ３配列から成る群から、及び／又は配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ３配列の１つとの２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１８】
（単一）ドメイン抗体又はナノボディである、請求項１７に記載のアミノ酸配列。
【請求項１９】
配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有する、請求項１７又は１８に記載のアミノ酸配列。
【請求項２０】
ＰＭＰ６Ａ６（ＡＬＢ１、配列番号５２）及びそのヒト化変異型、好ましくはＡＬＢ３（配列番号５７）、ＡＬＢ４（配列番号５８）、ＡＬＢ５（配列番号５９）、ＡＬＢ６（配列番号６０）、ＡＬＢ７（配列番号６１）、ＡＬＢ８（配列番号６２）、ＡＬＢ９（配列番号６３）又はＡＬＢ１０（配列番号６４）から成る群から選択される、請求項１９に記載のアミノ酸配列。
【請求項２１】
ＡＬＢ８（配列番号６２）である、請求項２０に記載のアミノ酸配列。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含む化合物。
【請求項２３】
前記化合物が、少なくとも１つの治療的部分をさらに含む、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記治療的部分が小分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又はペプチドから成る群の少なくとも１つから選択される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
融合タンパク質又は構築物である、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
前記融合タンパク質又は構築物において、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列が、前記少なくとも１つの治療的部分と直接連結するか、又はリンカー若しくはスペーサを介して該少なくとも１つの治療的部分と連結する、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
前記治療的部分が免疫グロブリン配列又はその断片を含む、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２８】
前記治療的部分が（単一）ドメイン抗体又はナノボディを含む、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
ナノボディである少なくとも１つの請求項１〜２１のいずれか一項に記載ののアミノ酸配列と、少なくとも１つのさらなるナノボディとを含む、多価で多重特異的なナノボディ構築物。
【請求項３０】
ナノボディである請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列が、前記少なくとも１つのさらなるナノボディと直接連結するか、又はリンカー若しくはスペーサを介して少なくとも１つのさらなるナノボディと連結する、請求項２９に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物。
【請求項３１】
ナノボディである請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列がリンカー若しくはスペーサを介して少なくとも１つのさらなるナノボディと連結し、該リンカーがアミノ酸配列である、請求項３０に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物。
【請求項３２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物をコードするヌクレオチド配列又は核酸。
【請求項３３】
請求項３２に記載のヌクレオチド配列又は核酸を含有し、及び／又は請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列、若しくは請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物を発現する（又は発現することができる）宿主又は宿主細胞。
【請求項３４】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物の製造方法であって、請求項３３に記載の宿主細胞が請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物を製造又は発現するような条件下で、該宿主細胞を培養又は維持することを含み、任意でこのように製造した、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物を単離することをさらに含む、製造方法。
【請求項３５】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物から成る群から選択される１以上を含む薬学的組成物であって、霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の間隔で該霊長類に投与するのに好適である、薬学的組成物。
【請求項３６】
少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含む、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物のいずれかの、霊長類への投与用薬物の製造のための使用であって、該薬物を該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の間隔（複数可）で投与する、投与用薬物の製造のための使用。
【請求項３８】
前記霊長類がヒトである、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記薬物が少なくとも７日間隔（複数可）で投与される、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物のいずれか１つをそれを必要とする霊長類に投与することを含む治療方法であって、該投与を前記霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の頻度で行う、治療方法。
【請求項４１】
前記霊長類がヒトである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記薬物が少なくとも７日間隔（複数可）で投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
治療剤の血清半減期を延長又は増大させる方法であって、該治療剤を、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の化合物、又は請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の多価で多重特異的なナノボディ構築物のいずれかと接触させることであって、前記治療剤が前記アミノ酸配列、前記化合物、又は前記多価で多重特異的なナノボディ構築物と結合するか又はそうでなければ会合するように、接触させることを含む、治療剤の血清半減期を延長又は増大させる方法。
【請求項４４】
前記治療剤が生物学的治療剤である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記生物学的治療剤がペプチド又はポリペプチドであり、前記治療剤を接触させる工程が、該ペプチド又は該ポリペプチドを前記アミノ酸配列、前記化合物、又は前記多価で多重特異的なナノボディ構築物と連結させることによって融合タンパク質を調製することを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記治療剤が前記アミノ酸配列、前記化合物、又は前記多価で多重特異的なナノボディ構築物と結合するか、又はそうでなければ会合した後、霊長類に該治療剤を投与することをさらに含む、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記霊長類における前記治療剤の血清半減期が、治療剤自体の半減期の少なくとも１．５倍である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記霊長類における前記治療剤の血清半減期が、治療剤自体の半減期に比べて少なくとも１時間増大する、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血清アルブミンと結合することができるアミノ酸配列、このようなアミノ酸配列を含む又は本質的にこのようなアミノ酸配列から成る化合物、タンパク質並びにポリペプチド、このようなアミノ酸配列、タンパク質並びにポリペプチドをコードする核酸、このようなアミノ酸配列、タンパク質並びにポリペプチドを含む組成物、特に薬学的組成物、及びこのようなアミノ酸配列、タンパク質及びポリペプチドの使用に関する。詳細には、本発明のアミノ酸配列及び化合物が、霊長類における血清アルブミン分子と結合又はそうでなければ会合する場合、当該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の血清半減期を示すように、本発明のアミノ酸配列及び化合物は血清アルブミンと結合又はそうでなければ会合する。
【０００２】
本発明の他の態様、実施態様、利点及び用途は、本明細書中のさらなる記載によって明らかになる。
【背景技術】
【０００３】
ヒト血清アルブミンと結合することができるアミノ酸配列、および治療的に関連があるタンパク質及びポリペプチドの半減期を増大するためのポリペプチド構築物におけるその使用は、当該技術分野で既知である。
【０００４】
例えば、特許文献１、特許文献２及び特許文献３は、半減期を増大するために治療用タンパク質及び他の治療用化合物並びに実態物と融合することができる血清アルブミン結合ペプチド部分を記載している。しかし、これらのペプチド部分は、治療剤に使用するのにはあまり好ましくない細菌起源又は合成起源のものである。
【０００５】
Ablynx N. V.による特許文献４は、上記タンパク質の半減期を増大するために他のタンパク質（例えば所望の標的に指向性を有する１つ又は複数の他のNanobodies（登録商標）（ナノボディーズ））と連結することができる血清アルブミン（特にヒト血清アルブミン）に指向性を有するNanobodies（登録商標）（ナノボディーズ）を記載している。
【０００６】
「ブランベル受容体」とも呼ばれる新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、循環中のアルブミンの寿命を延長することに関与する（非特許文献１）。ＦｃＲｎ受容体は、３つの細胞外ドメインを有する４３ｋＤのα鎖と非共有結合したβ２−ミクログロブリンから成る可溶性軽鎖と、膜貫通領域と、約５０アミノ酸の細胞質尾部とで構成される膜内在性糖タンパク質である。細胞質尾部は、受容体の内部移行に関わるジヌクレオチドモチーフを基にしたエンドサイトーシスシグナルを含有する。α鎖は、タンパク質の非典型的なＭＨＣ  Ｉファミリーのメンバーである。α鎖とβ２ｍとの結び付きはＦｃＲｎの正確なフォールディング、及びエンドソーム並びに細胞表面への伝達ための小胞体からの退去に重要である。
【０００７】
ＦｃＲｎの全体構造は、クラスＩの分子の全体構造に類似している。ＭＨＣＩ分子中のペプチド収容溝に酷似した２つの逆並行αへリックスで覆われた８つの逆並行の単一のβシートを形成するβ鎖から構成されているプラットフォームに、α−１、α−２領域は類似している。Ｐｒｏ１６２の存在によって導入されたヘリックスの破壊によるα−１へリックスの全体的な再配置、及びα−２へリックスのＣ末端位置の屈曲のために、ＦｃＲｎへリックスは互いにかなり接近し、ペプチドとの結合を塞いでいる。またＦｃＲｎの側鎖Ａｒｇ１６４は、ペプチドのＮ末端とＭＨＣポケットとの潜在的な相互作用を塞いている。さらに、塩架橋及びα−１へリックスとα−２へリックスとの疎水性相互作用も、溝の閉塞に寄与する。
【０００８】
したがって、ＦｃＲｎは抗原提示に関与せず、ペプチド収容溝は空である。
【０００９】
ＦｃＲｎはＩｇＧと結合し、母体循環血液から胎児循環血液へと胎盤の合胞体栄養細胞を通してＩｇＧを輸送させ、大人における分解からＩｇＧを保護する。ホメオスタシスの他に、ＦｃＲｎは、組織中でＩｇＧのトランスサイトーシスを制御する。ＦｃＲｎは、上皮細胞、内皮細胞及び肝細胞に局在している。
【００１０】
Chaudhury et al.（上記非特許文献１）によれば、アルブミンはＦｃＲｎと結合し、ＩｇＧとの三分子複合体を形成する。アルブミン及びＩｇＧの両者は協同性はなく、ＦｃＲｎ上の異なる部位と結合する。ヒトＦｃＲｎとセファロース−ＨＳＡ及びセファロース−ｈＩｇＧとの結合はｐＨ依存的であり、最高がｐＨ５．０であり、最低がｐＨ７．０〜ｐＨ８である。ＦｃＲｎが、ＩｇＧと結合するのと同じくｐＨ依存的にアルブミンと結合するという報告は、アルブミンとＦｃＲｎの相互作用とそれによる分解からの保護作用がＩｇＧとの作用と同一であり、ＦｃＲｎとの同様のｐＨ感受性相互作用によって媒介されることを示唆する。個々のＨＳＡドメインと固定化された可溶性ｈＦｃＲｎとの結合能を測定するのにＳＰＲを使用して、Chaudhuryは、ＦｃＲｎ及びアルブミンが、ｐＨ依存的にＩｇＧ結合部位とは異なる部位でアルブミンのＤ−ＩＩＩドメインを介して相互作用することを示した（非特許文献２、非特許文献３）。
【００１１】
当該技術分野で既知のアルブミン結合剤の主な欠点は、霊長類におけるｉｎ  ｖｉｖｏで制限される半減期である。マウスでは、血清アルブミンの天然半減期は約２日であり、様々な血清アルブミン結合剤が同程度の半減期（即ち約２日）を示すことが分かっている。しかし、霊長類（即ちアカゲザル及びカニクイザル等のマカク属）において既知の血清アルブミン結合剤を試験している範囲では、血清半減期は約３日を示す。例えば、非特許文献４の中でDomantis Ltd.のDr. Lucy Holtは、いわゆる「ＡｌｂｕｄＡｂ'ｓ（商標）」（ＡｌｂｕｄＡｂはDomantis Ltd.（Cambridge, UK）の商標である）のデータに言及している。言い換えれば、霊長類における半減期データが当該技術分野で知られている血清アルブミン結合剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏで霊長類において短い血清半減期を示すという点で不十分である。これらの半減期は、これらの動物における血清アルブミンの天然半減期よりもかなり短い（例えば２５％）。
【００１２】
治療剤、特に生物学的製剤（即ちペプチド又はポリペプチド薬剤、ポリヌクレオチド等）の多くは、ｉｎ  ｖｉｖｏで不十分な血清半減期が問題である。このことは、治療効果を得るに必要な血清レベルを維持するために、このような治療剤を高頻度及び／又は高用量で投与すること、或いは徐放製剤の使用を必要とする。薬剤の頻繁な全身投与は、多大な負の副作用を伴う。例えば、頻繁な（例えば毎日の）全身注射は、患者にとってかなりの不快感を与え、投与関連感染の危険性が高く、特に治療剤を静脈投与する際に入院又は病院に頻繁に通院することが必要になる。さらに長期間の治療中、血管の反復穿刺によって組織の瘢痕及び血管病変が引き起こされるという多大な副作用につながる危険性もある。同様の課題が、全ての治療剤の頻繁な全身投与（例えば糖尿病患者へのインスリンの投与、又は多発性硬化症を患っている患者におけるインターフェロン薬剤の投与）に関して知られている。全てのこれらの因子によって、患者のコンプライアンスが下がり、健康システムに対するコストが増大する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ９１／０１７４３
【特許文献２】ＷＯ０１／４５７４６
【特許文献３】ＷＯ０２／０７６４８９
【特許文献４】ＷＯ０４／０４１８６５
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Chaudhury et al., The Journal of Experimental Medicine, vol. 3, no. 197, 315-322（2003）
【非特許文献２】Chaudhury、ＰｈＤ論文  http://www.andersonlab.com/biosketchCC.htm
【非特許文献３】Chaudhury et al. Biochemistry, ASAP Article 10.1021/bi052628y S0006-2960（05）02628-0 （ウェブ公開日：２００６年３月２２日）
【非特許文献４】Lucy Holt,２００６年６月１日のＩＢＣカンファレンス"Antibodies and Beyond"において２００６年６月１日に行われたプレゼンテーション"Tailoring Human Domain Antibodies for Best Practices"
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、霊長類、特にヒトにおける治療剤の血清半減期を増大する手段に対する要請がある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、アミノ酸配列が霊長類において血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、当該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％（例えば約５０％〜７０％）、好ましくは少なくとも６０％（例えば約６０％〜８０％）若しくは好ましくは少なくとも７０％（例えば約７０％〜９０％）、より好ましくは少なくとも約８０％（例えば約８０％〜９０％）又は好ましくは少なくとも約９０％の血清半減期を示すように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合するアミノ酸配列（及び本明細書で規定されるそのアミノ酸配列を含む化合物）を提供することによってこの要請を解決する。霊長類におけるｉｎ  ｖｉｖｏ半減期のこの有意な増大によって、本発明のアミノ酸配列がそれに付着した治療剤の血清半減期を延長するのに理想的な候補物になる。このことから本発明のアミノ酸配列と治療剤の結合体の長い血清半減期によって、投与頻度の減少及び／又は投与量の低減が可能になり、治療される患者にかなりの利点をもたらす。
【００１７】
一態様において本発明は、アミノ酸配列がヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合する場合、アミノ酸配列がヒト血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％（例えば約５０％〜７０％）、好ましくは少なくとも６０％（例えば約６０％〜８０％）若しくは好ましくは少なくとも７０％（例えば約７０％〜９０％）、より好ましくは少なくとも約８０％（例えば約８０％〜９０％）又は好ましくは少なくとも約９０％のヒトにおける血清半減期を示すように、ヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合するアミノ酸配列を提供する。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミンと結合するのが好ましい。ヒトでは、血清アルブミンの半減期は約１９日である（Peters T（1996） All About Albumin. Academic Press, San Diego）。
【００１８】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、化合物中に存在するアミノ酸配列のヒトにおける半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒトにおける半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００１９】
一特定の態様において、このようなアミノ酸配列は、少なくとも１種のさらなる霊長類由来の血清アルブミン、及び特にマカク属（例えば特にカニクイザル（マカク・ファシクラリス（Macaca fascicularis））及び／又はアカゲザル（マカク・ムラット（Macaca mulatta）））及びヒヒ（パピオ・ウルジヌス（Papio ursinus））のサルから成る群から選択される少なくとも１種の霊長類由来の血清アルブミンと交差反応性であるのが好ましい。好ましくは、このような交差反応性アミノ酸配列は、上記霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％（例えば約５０％〜７０％）、好ましくは少なくとも６０％（例えば約６０％〜８０％）若しくは好ましくは少なくとも７０％（例えば約７０％〜９０％）、より好ましくは少なくとも約８０％（例えば約８０％〜９０％）又は好ましくは少なくとも約９０％の上記霊長類における血清半減期を示す。またこのような本発明のアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）で上記霊長類由来の血清アルブミンと結合するのが好ましい。
【００２０】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、上記化合物中に存在するアミノ酸配列のヒト及び／又は上記少なくとも１種の霊長類のそれぞれにおける半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒト及び／又は当該種の霊長類における半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００２１】
別の態様において、本発明は、アミノ酸配列がヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合する場合、アミノ酸配列が、少なくとも約９日（例えば約９日〜１４日）、好ましくは少なくとも約１０日（例えば約１０日〜１５日）又は少なくとも１１日（例えば約１１日〜１６日）、より好ましくは少なくとも約１２日（例えば約１２日〜１８日以上）、又は１４日超（例えば約１４日〜１９日）のヒトにおける血清半減期を示すようにヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合するアミノ酸配列を提供する。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミンと結合するのが好ましい。
【００２２】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、化合物中に存在するアミノ酸配列のヒトにおける半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒトにおける半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００２３】
一特定の態様において、このようなアミノ酸配列は、少なくとも１種のさらなる霊長類由来の血清アルブミン、及び特にマカク属（例えばアカゲザル又はカニクイザル）及びヒヒのサルから成る群から選択される少なくとも１種の霊長類由来の血清アルブミンと交差反応性であるのが好ましい。好ましくは、このような交差反応性アミノ酸配列は、上記霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％（例えば約５０％〜７０％）、好ましくは少なくとも６０％（例えば約６０％〜８０％）若しくは好ましくは少なくとも７０％（例えば約７０％〜９０％）、より好ましくは少なくとも約８０％（例えば約８０％〜９０％）又は好ましくは少なくとも約９０％の上記霊長類における血清アルブミンの天然半減期を示す。またこのような本発明のアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）で上記霊長類由来の血清アルブミンと結合するのが好ましい。
【００２４】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、上記化合物中に存在するアミノ酸配列のヒト及び／又は上記少なくとも１種の霊長類のそれぞれにおける半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒト及び／又は当該種の霊長類における半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００２５】
別の態様において、本発明は、少なくとも１種の霊長類由来の血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合するアミノ酸配列に関し、その霊長類における血清アルブミンの半減期が１０日〜１５日のような、少なくとも約１０日、例えば約１１日〜１３日（これは、例えばマカク種のサル（例えばカニクイザル又はアカゲザル）で予想されている。例えば、アカゲザルでは、予想される血清アルブミンの半減期は約１１日〜１３日、詳細には約１１日〜１２日である。但し、次の段落のコメント参照）である場合、少なくとも約５日（例えば約５日〜９日）、好ましくは少なくとも約６日（例えば約６日〜１０日）若しくは少なくとも７日（例えば約７日〜１１日）、より好ましくは少なくとも約８日（例えば約８日〜１２日）又は９日超（例えば約９日〜１２日以上）の上記霊長類における血清半減期を本発明のアミノ酸配列は有する。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）で上記種の霊長類由来の血清アルブミンと結合するのが好ましい。１つの特に好ましい態様では、このようなアミノ酸配列はヒト血清アルブミンと交差反応性であり、より好ましくは本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミンと結合する。
【００２６】
アカゲザルにおける血清アルブミンの半減期に関して、科学文献中で本明細書で推測される１１日〜１３日よりも短い半減期（value）に言及されることもあり、これは本明細書で言及される全ての割合の算出についての開始点として使用されることを留意すべきである（アカゲザル以外の種の霊長類及びヒトについてのものを含む）。幾つかの参考文献では、血清アルブミンの半減期が６日と短い可能性があることさえも示唆されている。本明細書に開示のデータに基づいて、これらの従来技術の参考文献が正しい場合は、本明細書で言及される割合を調整するべきであることは当業者には明らかである。例えば、実際にアカゲザルの血清アルブミンの半減期が約６日である場合、本明細書に開示のアミノ酸配列及び化合物は、アカゲザルの血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約８０％（例えば約８０％〜１２０％）、好ましくは少なくとも９０％（例えば約９０％〜１１０％）、より好ましくは少なくとも１００％（例えば１００％〜１３０％）、若しくは好ましくは少なくとも１３０％（例えば約１３０％〜１５０％）、より好ましくは少なくとも約１５０％（例えば約１５０％〜１７０％）、又は好ましくは少なくとも約１７０％のアカゲザルにおける血清半減期を示す可能性があり、最大でアカゲザルの血清アルブミンの天然半減期の２００％以上になり得る。同様にこのような例では、本明細書に開示のアミノ酸配列及び化合物は、（本明細書に開示のアミノ酸配列が他の種の霊長類由来の血清アルブミンと交差反応性である場合）当該種の霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約８０％（例えば約８０％〜１２０％）、好ましくは少なくとも９０％（例えば約９０％〜１１０％）、より好ましくは少なくとも１００％（例えば１００％〜１３０％）、若しくは好ましくは少なくとも１３０％（例えば約１３０％〜１５０％）、より好ましくは少なくとも約１５０％（例えば約１５０％〜１７０％）、又は好ましくは少なくとも約１７０％である、当該種の霊長類における半減期を有する可能性があり、最大で当該種の霊長類における血清アルブミンの天然半減期の２００％以上になり得る。特にこのような例では、本明細書に開示のアミノ酸配列及び化合物は、ヒト血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約８０％（例えば約８０％〜１２０％）、好ましくは少なくとも９０％（例えば約９０％〜１１０％）、より好ましくは少なくとも１００％（例えば１００％〜１３０％）、若しくは好ましくは少なくとも１３０％（例えば約１３０％〜１５０％）、より好ましくは少なくとも約１５０％（例えば約１５０％〜１７０％）、又は好ましくは少なくとも約１７０％である、ヒトにおける半減期を有する可能性があり、最大でヒト血清アルブミンの天然半減期の２００％以上になり得る。
【００２７】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、化合物中に存在するアミノ酸配列の上記少なくとも１種の霊長類における半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じである当該種の霊長類における半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００２８】
別の態様において、本発明は、少なくとも１種の霊長類由来の血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合し、霊長類における血清アルブミンの半減期が少なくとも約１３日、例えば１３日〜１８日である場合（例えばヒヒの場合では血清アルブミンの半減期は少なくとも約１３日、通常約１６日〜１８日である）、少なくとも約７日（例えば約７日〜１３日）、好ましくは少なくとも約８日（例えば約８日〜１５日）若しくは少なくとも９日（例えば約９日〜１６日）、より好ましくは少なくとも約１０日（例えば約１０日〜１６日以上）又は１３日超（例えば１３日〜１８日）の上記霊長類における血清半減期を有する、アミノ酸配列に関する。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）で上記種の霊長類由来の血清アルブミンと結合するのが好ましい。１つの特に好ましい態様では、このようなアミノ酸配列はヒト血清アルブミンと交差反応性であり、より好ましくは本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミンと結合する。
【００２９】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、化合物中に存在するアミノ酸配列の上記少なくとも１種の霊長類における半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じである当該種の霊長類における半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００３０】
好ましい実施態様において、本発明はアミノ酸配列であって、
ａ）アミノ酸配列がヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合する場合、アミノ酸配列が少なくとも約９日（例えば約９日〜１４日）、好ましくは少なくとも約１０日（例えば約１０日〜１５日）若しくは少なくとも１１日（例えば約１１日〜１６日）、より好ましくは少なくとも約１２日（例えば約１２日〜１８日以上）又は１４日超（例えば約１４日〜１９日）のヒトにおける血清半減期を示すようにヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合し、且つ
ｂ）マカク属の種から選択される少なくとも１つの霊長類由来の血清アルブミン（特にカニクイザル及び／又はアカゲザル由来の血清アルブミン）と交差反応性であり、且つ
ｃ）少なくとも約５日（例えば約５日〜９日）、好ましくは少なくとも約６日（例えば約６日〜１０日）若しくは少なくとも７日（例えば約７日〜１１日）、より好ましくは少なくとも約８日（例えば約８日〜１２日）又は９日超（例えば約９日〜１２日以上）の上記霊長類における血清半減期を有する、アミノ酸配列を提供する。
【００３１】
好ましくはこのようなアミノ酸配列は、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミン及び／又は上記種の霊長類由来の血清アルブミンと結合する。
【００３２】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、化合物中に存在するアミノ酸配列のヒト及び／又は上記少なくとも１種の霊長類のそれぞれにおける半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒト及び／又は当該種の霊長類における半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００３３】
別の好ましい実施態様において、本発明はアミノ酸配列であって、
ａ）アミノ酸配列がヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合する場合、アミノ酸配列が少なくとも約９日（例えば約９日〜１４日）、好ましくは少なくとも約１０日（例えば約１０日〜１５日）若しくは少なくとも１１日（例えば約１１日〜１６日）、より好ましくは少なくとも約１２日（例えば約１２日〜１８日以上）又は１４日超（例えば約１４日〜１９日）のヒトにおける血清半減期を示すようにヒト血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合し、且つ
ｂ）ヒヒ由来の血清アルブミンと交差反応性であり、且つ
ｃ）少なくとも約７日（例えば約７日〜１３日）、好ましくは少なくとも約８日（例えば約８日〜１５日）若しくは少なくとも９日（例えば約９日〜１６日）、より好ましくは少なくとも約１０日（例えば約１０日〜１６日以上）又は１３日超（例えば約１３日〜１８日）のヒヒにおける血清半減期を有する、アミノ酸配列を提供する。
【００３４】
好ましくは、本明細書で規定されるような解離定数（ＫＤ）及び／又は結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミン及び／又はヒヒ由来の血清アルブミンと結合する。
【００３５】
本発明は、このようなアミノ酸配列を含み、上記化合物中に存在するアミノ酸配列のヒト及び／又は上記少なくとも１種の霊長類のそれぞれにおける半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒト及び／又は当該種の霊長類における半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００３６】
好ましくはまた、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列を含む、化合物、構築物、融合タンパク質等の半減期が、本明細書で（即ち同じ霊長類で）与えられる本発明のアミノ酸配列の半減期の好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じである。
【００３７】
本発明の特定の実施態様において、本発明のアミノ酸配列（又はこれを含む化合物）は、アミノ酸配列又はポリペプチド構築物が血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、当該血清アルブミン分子とＦｃＲｎとの結合を（有意に）低減又は阻害しないように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる。
【００３８】
さらなる実施態様において、本発明のアミノ酸配列（又はこれを含む化合物）は、アミノ酸配列又はポリペプチド構築物が血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、血清アルブミン分子の半減期を（有意に）低減しないように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる。
【００３９】
さらなる実施態様において、本発明のアミノ酸配列（又はこれを含む化合物）は、血清アルブミンとＦｃＲｎとの結合に関与しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができ、より具体的には血清アルブミンのドメインＩＩＩ部分を形成しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができる。
【００４０】
本発明の一実施態様において、アミノ酸配列は、免疫グロブリン配列又はその断片、より具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列又はその断片（例えばＶＨ配列、ＶＬ配列若しくはＶＨＨ配列又はその断片）である。本発明のアミノ酸配列は、ドメイン抗体、「ｄＡｂ」、単一ドメイン抗体若しくはナノボディ、又はそれらのいずれか１つの断片であり得る。本発明のアミノ酸配列は、完全なヒト、ヒト化、ラクダ、ラクダ化ヒト又はヒト化ラクダ配列であってもよく、より具体的には４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とを含んでもよく、ここで
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から成る群から、及び／又は配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列の１つと、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、及び／又は
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列から成る群から、若しくは配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列の１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から、及び／又は配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、及び／又は
ｃ１）ＣＤＲ３は、配列番号４２のＣＤＲ３配列から成る群から選択されるアミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ３配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列、及び配列番号４２のＣＤＲ３配列との、３、２若しくは１つだけ「アミノ酸差異」を有するアミノ酸配列であるか、或いは代替的には
ｃ２）ＣＤＲ３は、配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ３配列から成る群から、及び／又は配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ１配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択される、アミノ酸配列である。
【００４１】
より具体的には、本発明のアミノ酸配列は（単一）ドメイン抗体又はナノボディである。
【００４２】
本発明は、配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列、より具体的にはＰＭＰ６Ａ６（ＡＬＢ１、配列番号５２）及びそのヒト化変異型（クローンＡＬＢ３（配列番号５７）、ＡＬＢ４（配列番号５８）、ＡＬＢ５（配列番号５９）、ＡＬＢ６（配列番号６０）、ＡＬＢ７（配列番号６１）、ＡＬＢ８（配列番号６２）、ＡＬＢ９（配列番号６３）、及びＡＬＢ１０（配列番号６４）、最も具体的にはＡＬＢ８（配列番号６２）を含むが、これらに限定されない）、から成る群から選択されるアミノ酸配列にも関する。
【００４３】
一実施態様において、本発明は、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列を含む化合物（本明細書で「本発明の化合物」とも称される）であって、任意で、少なくとも１つの治療的部分（therapeutic  moiety）（小分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又はペプチドから成る群の少なくとも１つから選択される治療的部分を含む）をさらに含んでいてもよい、化合物に関する。本発明の化合物は、霊長類における血清アルブミンの天然半減期の５０％以上（例えば約５０％〜７０％）、好ましくは少なくとも６０％（例えば約６０％〜８０％）若しくは好ましくは少なくとも７０％（例えば約７０％〜９０％）、より好ましくは少なくとも約８０％（例えば約８０％〜９０％）、又は好ましくは少なくとも約９０％に対応する頻度で、或いは代替的には少なくとも４日（例えば約４日〜１２日以上）、好ましくは少なくとも７日（例えば約７日〜１５日以上）、より好ましくは少なくとも９日（例えば約９日〜１７日以上）、例えば少なくとも１５日（例えば約１５日〜１９日以上、特にヒトへの投与に対して）、又は少なくとも１７日（例えば約１７日〜１９日以上、特にヒトへの投与に対して）の間隔で当該霊長類に投与するのに好適であり、このような投与は、当業者にとって明らかなようにとりわけ使用する化合物及び／又は治療される疾患に応じた化合物によって治療される患者の血清中の所望の化合物レベルを、特に維持させる。臨床医又は内科医は、本発明の化合物が本明細書で言及される頻度で投与される場合、治療する患者における所望の血清レベルを達成及び／又は維持するために、所望の血清レベルを選択し、当該患者に投与する用量及び／又は量を選択することができる。例えば、このような用量は、所望の血清レベルの１倍〜１０倍、例えば所望の血清レベルの２倍〜４倍の範囲であり得る（所望の血清レベルは、対応する投与用量を提供するようにそれ自体既知の方法で計算し直す）。
【００４４】
本発明の化合物は、上述の頻度で投与するのに（例えば好適な使用のための取扱説明書と共に）、意図する単位用量として製剤化しても、及び／又はパッケージングしてもよく、このような単位用量及びパッケージング製品は本発明のさらなる態様を形成する。本発明の別の態様は、このような単位用量又はパッケージング製品を提供する際の（即ち化合物を好適に製剤化及び／又はパッケージングすることによる）本発明の化合物の使用に関する。
【００４５】
特定の実施態様において、本発明の化合物は融合タンパク質又は構築物である。当該融合タンパク質又は構築物では、本発明のアミノ酸配列は、少なくとも１つの治療的部分と直接連結し得るか、又はリンカー若しくはスペーサを介して少なくとも１つの治療的部分と連結する。特定の実施態様は、免疫グロブリン配列又はその断片を含む治療的部分、より具体的には（単一）ドメイン抗体又はナノボディに関する。
【００４６】
本発明は、ナノボディである少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、少なくとも１つのさらなるナノボディとを含む、多価で多重特異的なナノボディ構築物にも関する。ナノボディは、少なくとも１つのさらなるナノボディと直接連結するか、又はリンカー若しくはスペーサを介して少なくとも１つのさらなるナノボディ、好ましくはアミノ酸配列リンカー若しくはスペーサを介して少なくとも１つのさらなるナノボディと連結する。
【００４７】
さらに本発明は、本発明のアミノ酸配列又は本発明の化合物のアミノ酸配列、又は本発明の多価で多重特異的なナノボディをコードするヌクレオチド配列若しくは核酸に関する。本発明は、本発明のヌクレオチド配列若しくは核酸を含有し、及び／又は本発明のアミノ酸配列、若しくは本発明の化合物のアミノ酸配列、若しくは本発明の多価で多重特異的なナノボディを発現する（又は発現することができる）宿主又は宿主細胞も提供する。
【００４８】
さらに本発明は、本発明のアミノ酸配列、化合物、又は多価で多重特異的なナノボディを製造する方法であって、本発明の宿主細胞が上記産物を生成又は発現するような条件下で、当該宿主細胞を培養又は維持することを含む、本発明のアミノ酸配列、化合物、又は多価で多重特異的なナノボディを製造する方法に関し、そして、任意でさらにこのように生成された当該産物を含む。
【００４９】
一実施態様において本発明は、本発明のアミノ酸配列、化合物又は多価で多重特異的なナノボディから成る群から選択されるものの１つ又は複数を含む薬学的組成物であって、霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％の間隔で当該霊長類に投与するのに好適である、薬学的組成物に関する。薬学的組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含み得る。
【００５０】
本発明は、本発明のアミノ酸配列、化合物又は多価で多重特異的なナノボディを包含する医学的使用及び治療方法であって、上記薬物が上記霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％の間隔で投与するのに好適であり、当該方法が当該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％の頻度での投与を含むことを特徴とする、医学的使用及び治療方法も包含する。
【００５１】
本発明は、治療剤の血清半減期を延長又は増大させる方法にも関する。この方法は、治療剤が、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と結合するか、又はそうでなければ会合するように、上述の本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物（多価で多重特異的なナノボディを含む）のいずれかに治療剤を接触させることを含む。幾つかの実施態様では、治療剤は生物学的治療剤、好ましくはペプチド又はポリペプチドであり、この場合治療剤を接触させる工程は、ペプチド又はポリペプチドを本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と連結することによって融合タンパク質を調製することを含み得る。
【００５２】
これらの方法は、治療剤が本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と結合するか、又はそうでなければ会合した後に治療剤を霊長類に投与することをさらに含み得る。このような方法では、霊長類における治療剤の血清半減期は、治療剤自体の半減期の少なくとも１．５倍であるか、又は治療剤自体の半減期に比べて少なくとも１時間増大する。幾つかの好ましい実施態様では、霊長類における治療剤の血清半減期は、対応する治療的部分自体の半減期よりも少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍又は２０倍超大きい。他の好ましい実施態様では、霊長類における治療剤の血清半減期は、対応する治療的部分自体の半減期に比べて、２時間超、６時間超又は１２時間超増大する。
【００５３】
好ましくは、霊長類における治療剤の血清半減期は、治療剤が本発明の化合物について本明細書で規定されるような（即ちヒト及び／又は少なくとも１種の霊長類における）半減期を有するように増大する。
【００５４】
別の態様において、本発明は、治療剤の好適な投与の際に所望の治療レベルが達成されるように、当該治療剤の所望の治療レベルが長期間維持されるような治療剤の改良方法に関する。
【００５５】
この方法は、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と結合するか、又はそうでなければ会合するように、上述の本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物（多価で多重特異的なナノボディを含む）のいずれかに治療剤を接触させることを含む。幾つかの実施態様では、治療剤は生物学的治療剤、好ましくはペプチド又はポリペプチドである。この場合治療剤を接触させる工程は、ペプチド又はポリペプチドを本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と連結することによって融合タンパク質を調製することを含み得る。
【００５６】
これらの方法は、治療剤が本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と結合するか、又はそうでなければ会合した後に、治療剤を霊長類に投与することを含むことができ、その投与により所望の治療レベルが達成される。このような方法では、このような投与の際に上記治療剤の所望の治療レベルが維持される時間は、治療剤自体の半減期の少なくとも１．５倍であるか、又は治療剤自体の半減期に比べて少なくとも１時間増大する。幾つかの好ましい実施態様では、このような投与の際に上記治療剤の所望の治療レベルが維持される時間は、対応する治療的部分自体の半減期よりも少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍又は２０倍超大きい。他の好ましい実施態様では、このような投与の際に当該治療剤の所望の治療レベルが維持される時間は、対応する治療的部分自体の半減期に比べて、２時間超、６時間超又は１２時間超増大する。
【００５７】
好ましくは、このような投与の際に上記治療剤の所望の治療レベルが維持される時間は、本発明の化合物に対して本明細書で規定されるような頻度で治療剤を投与することができるように増大する。
【００５８】
別の態様において本発明は、治療剤単独に比べて低用量で（即ち本質的に同じ投与頻度で）、上記化合物又は構築物中の治療剤を投与することができるように、患者の血清における当該化合物又は構築物中の治療剤のレベルを増大及び／又は拡大する薬物の製造のための（本明細書で規定の）本発明の化合物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
一態様において本発明は、アミノ酸配列、具体的には免疫グロブリン配列、より具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供することによってこの目的を達成する。当該アミノ酸配列は、アミノ酸配列又はポリペプチド構築物が霊長類における血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、当該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％及び最も好ましくは少なくとも約９０％を示すように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、
【００６０】
霊長類への投与後の本発明のアミノ酸配列の血清半減期は、当該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は少なくとも１００％であり得る。
【００６１】
「上記霊長類における血清アルブミンの天然血清半減期」は、以下で規定されるような、生理学的条件下で健常な個体中の血清アルブミンが有する血清半減期を意味する。例えば、ヒトにおける血清アルブミンの天然血清半減期は１９日である。より小さい霊長類は血清アルブミンの天然半減期がより短い（例えば８日〜１９日の範囲内である）ことが知られている。具体的な血清アルブミンの半減期は、少なくとも４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、又は１９日以上であり得る。   
【００６２】
このことから、例えばヒト個体において、本発明のアミノ酸配列は、１９日の少なくとも約５０％（即ち７．６日）の血清アルブミンに関する血清半減期を示すということになる。より小さい霊長類では、これらの種での血清アルブミンの天然半減期に応じて、血清半減期は数日短くなり得る。
【００６３】
本明細書において、用語「霊長類」は、サル種とエイプ種との両方を表し、マカク属（例えば具体的にカニクイザル（マカク・ファシクラリス）及び／又はアカゲザル（マカク・ムラット））及びヒヒ（パピオ・ウルジヌス））由来のサル等のサル種、並びにマーモセット（カリスリクス（Callithrix：マーモセット）属由来の種)、リスザル（サイミリ（Saimiri：リスザル）属由来の種）及びタマリン（サグイヌス（Saguinus：タマリン）属由来の種）、並びにチンパンジー（ナミチンパンジー（Pan troglodytes））等のエイプ種を含み、またヒトも含む。ヒトは本発明で好ましい霊長類である。したがって、例えば以下の実施例部分からも分かるように、アカゲザルにおいてＡＬＢ−８（配列番号６２、本発明のアミノ酸配列）を含有するナノボディ構築物の半減期は約１０日であり、これはこの種において予測される血清アルブミンの天然血清半減期（約１１日）の約９０％である。
【００６４】
アミノ酸配列又は化合物の半減期は一般的に、例えば自然機構による配列若しくは化合物の分解及び／又は配列若しくは化合物の排除（clearance）若しくは隔離（sequestration）のために、ｉｎ  ｖｉｖｏでポリペプチドの血清濃度が５０％まで低減するのにかかる時間と定義することができる。関連種の霊長類における本発明のアミノ酸配列（及びこれを含む化合物）の半減期は、それ自体が既知のいずれかの方法（例えば薬物動態解析）で求めることができる。好適な技法は当業者にとって明らかであり、例えば一般的に治療するのに好適な用量のアミノ酸配列又は化合物を霊長類に好適に投与する工程と、一定の間隔で血液サンプル又は他のサンプルを当該霊長類から採取する工程と、当該血液サンプル中の本発明のアミノ酸配列又は化合物のレベル又は濃度を求める工程と、このようにして得られたデータ（のプロット）から、本発明のアミノ酸配列又は化合物のレベル又は濃度が投与時の最初のレベルに比べて５０％低減するまでの時間を算出する工程とを伴い得る。例えば、以下の実施例部分、及び標準的なハンドブック（例えばKenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists及びPeters et alにおけるPharmacokinete analysis: A Practical Approach（1996））を参照する。"Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition（1982）も参照する。
【００６５】
ＷＯ０４／００３０１９の６頁及び７頁、並びに本明細書で言及されるさらなる参考文献で記載されるように、半減期は、ｔ１／２−α、ｔ１／２−β及び曲線下面積（ＡＵＣ）等のパラメータを利用して表すことができる。本明細書において、「半減期の増大」は、これらのパラメータのいずれか１つ、例えばこれらのパラメータのいずれか２つ、又は本質的に３つ全てのパラメータの増大を表す。「半減期の増大」は特にｔ１／２−βの増大を表し、ｔ１／２−α及び／又はＡＵＣのいずれか又は両方は増大しても或いは増大しなくてもよい。
【００６６】
別の態様において本発明は、血清アルブミン（好ましくはヒト血清アルブミン）に指向性を有し、且つ少なくとも約４日、好ましくは少なくとも約７日、より好ましくは少なくとも約９日のカニクイザルにおける半減期を有する、アミノ酸配列、及び具体的には免疫グロブリン配列、及びより具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供する。
【００６７】
さらなる態様において本発明は、血清アルブミン（好ましくはヒト血清アルブミン）に指向性を有する、アミノ酸配列、及び具体的には免疫グロブリン配列、及びより具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供する。
【００６８】
さらに別の態様において本発明は、血清アルブミン（好ましくはヒト血清アルブミン）に指向性を有し、且つ少なくとも約７日、好ましくは少なくとも約１５日、より好ましくは少なくとも約１７日のヒトにおける半減期を有する、アミノ酸配列、及び具体的には免疫グロブリン配列、及びより具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供する。本発明は、本発明の化合物中に存在する本発明のアミノ酸配列の半減期の少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（例えば９５％以上）又はそれと本質的に同じであるヒトにおける半減期を有する本発明の化合物にも関する。より具体的には本発明は、少なくとも約７日、好ましくは少なくとも約１５日、より好ましくは少なくとも約１７日のヒトにおける半減期を有する本発明の化合物にも関する。
【００６９】
本発明は、本発明のアミノ酸配列を含む化合物、具体的には本発明のアミノ酸配列に加えて、少なくとも１つの治療的部分を含む化合物も提供する。本発明の化合物は、本発明のアミノ酸配列と同程度の霊長類における血清半減期、より好ましくは少なくとも本発明のアミノ酸配列の血清半減期である半減期、及びより好ましくは本発明のアミノ酸配列の半減期よりも高い霊長類における半減期を示すことを特徴とする。
【００７０】
一態様において本発明は、アミノ酸配列又はポリペプチド構築物が血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、当該血清アルブミン分子とＦｃＲｎとの結合が（有意に）（即ちアミノ酸配列又はポリペプチド構築物が結合しない場合の当該血清アルブミン分子とＦｃＲｎとの結合に比べて）低減又は阻害しないように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、アミノ酸配列、具体的には免疫グロブリン配列、より具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供することによってこの目的を達成する。本発明のこの態様では、「有意に低減又は阻害しない」は、（好適なアッセイ（例えばＳＰＲ）を使用して測定される）血清アルブミンとＦｃＲｎとの結合親和性が、５０％を超えて低減しない、好ましくは３０％を超えて低減しない、さらにより好ましくは１０％を超えて低減しない、例えば５％を超えて低減しない、又は本質的に全く低減しないことを意味する。本発明のこの態様では、「有意に低減又は阻害しない」は、血清アルブミン分子の半減期が（下記で規定されるように）有意に低減しないことも意味（又は付加的に意味）し得る。
【００７１】
本明細書において、結合に言及する場合、好ましくはこのような結合は、通常当業者に理解されるような特異的な結合である。
【００７２】
本明細書に記載のアミノ酸配列が一価の免疫グロブリン配列（例えば、一価のナノボディ）である場合、当該一価の免疫グロブリン配列は、１０-5〜１０-12モル／Ｌ以下、好ましくは１０-7〜１０-12モル／Ｌ以下、より好ましくは１０-8〜１０-12モル／Ｌの解離定数（ＫＤ）で、及び／又は少なくとも１０7Ｍ-1、好ましくは１０8Ｍ-1、より好ましくは少なくとも１０9Ｍ-1、例えば少なくとも１０12Ｍ-1の結合親和性（ＫＡ）でヒト血清アルブミンと結合するのが好ましい。１０4モル／Ｌよりも大きい任意のＫＤ値（もしくは、１０4Ｍ-1よりも低い任意のＫＡ値）は一般的に非特異的結合を示すと考えられる。好ましくは、本発明の一価の免疫グロブリン配列は、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満、例えば５００ｐＭ未満の親和性で所望の抗原と結合する。抗原結合タンパク質と抗原又は抗原決定基との特異的結合は、それ自体が既知の任意の好適な方法（例えばスキャッチャード解析及び／又は競合結合アッセイ（例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）及びサンドイッチ競合アッセイ））、及び当該技術分野でそれ自体が既知の様々なその変更方法で求めることができる。
【００７３】
別の態様において本発明は、アミノ酸配列又はポリペプチド構築物が血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、血清アルブミン分子の半減期が（有意に）（即ちアミノ酸配列又はポリペプチド構築物が結合しない場合の血清アルブミン分子の半減期に比べて）低減しないように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、アミノ酸配列、及び具体的には免疫グロブリン配列、及びより具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供する。本発明のこの態様では、「有意に低減しない」は、（それ自体が既知の好適な技法を使用して測定される）血清アルブミン分子の半減期が５０％を超えて低減しない、好ましくは３０％を超えて低減しない、さらにより好ましくは１０％を超えて低減しない、例えば５％を超えて低減しない、又は本質的に全く低減しないことを意味する。
【００７４】
別の態様では本発明は、血清アルブミンとＦｃＲｎとの結合に関与しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができる、アミノ酸配列、及び具体的には免疫グロブリン配列、及びより具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供する。より具体的には、本発明のこの態様は、血清アルブミンのドメインＩＩＩ部分を形成しない、血清アルブミン上のアミノ酸配列と結合することができるアミノ酸配列を提供する。例えばこれに限定されないが、本発明のこの態様は、ドメインＩ及び／又はドメインＩＩの部分を形成する、血清アルブミン上のアミノ酸配列と結合することができるアミノ酸配列を提供する。
【００７５】
本発明のアミノ酸配列は、好ましくは（単一）ドメイン抗体であるか、又は（単一）ドメイン抗体として使用するのに好適であり、このようなものは、重鎖可変ドメイン配列（ＶＨ配列）又は軽鎖可変ドメイン配列（ＶＬ配列）である可能性があり、及び好ましくはＶＨ配列である。例えばこのアミノ酸配列は、いわゆる「ｄＡｂ」であり得る。
【００７６】
しかし、特に好ましい実施形態によれば、本発明のアミノ酸配列はナノボディである。ナノボディのさらなる記載及び定義、並びに本明細書に使用されるさらなる用語の幾つか（例えば用語「に指向性を有する」等（これに限定されない））に対して、Ablynx N.V.による同時係属中の特許出願（例えばAblynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"（これは本願と同じ優先権及び同じ国際出願日を有する））、及び本明細書で言及されるさらなる従来技術を参照する。
【００７７】
このように、本発明のアミノ酸配列は、（Ablynx N.V.による同時係属中の特許出願でもまた規定されているように）「ＫＥＲＥ」クラスに、「ＧＬＥＷ」クラスに、又は「１０３−Ｐ，Ｒ，Ｓ」クラスに属するナノボディであり得る。
【００７８】
好ましくは、本発明のアミノ酸配列は、（Ablynx N.V.による同時係属中の特許出願でもまた規定されているように）ヒト化ナノボディである。
【００７９】
本明細書に開示のアミノ酸配列は、タンパク質、化合物（小分子を含むが、これらに限定されない）又は他の治療用実体物(entities)等の治療的部分(therapeutic  moieties)の半減期を増大させるために、融合パートナーとして有利に使用することができる。
【００８０】
したがって別の態様において本発明は、本明細書に開示のアミノ酸配列を含むか、又は本質的にこれから成るタンパク質又はポリペプチドを提供する。具体的に本発明は、任意に１つ又は複数の好適なリンカー又はスペーサを介して、少なくとも１つの治療的部分と連結する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列を含むか、又はこれから成るタンパク質又はポリペプチド構築物を提供する。例えばこのようなタンパク質又はポリペプチド構築物は、本明細書にさらに記載されるように、融合タンパク質（限定されない）であり得る。
【００８１】
本発明はさらに、タンパク質又はポリペプチド構築物又は融合タンパク質と構築物との治療的使用に、及びこのようなタンパク質又はポリペプチド構築物又は融合タンパク質を含む薬学的組成物に関する。
【００８２】
幾つかの実施形態において、少なくとも１つの治療的部分は、治療タンパク質、ポリペプチド、化合物、因子又は他の実体物を含むか、又は本質的にこれから成る。好ましい実施形態では、治療的部分は所望の抗原又は標的に指向性を有し、所望の抗原と結合することができる（及び具体的には所望の抗原と特異的に結合することができる）、及び／又は所望の標的と相互作用することができる。別の実施形態では、少なくとも１つの治療的部分は治療タンパク質又はポリペプチドを含むか、又は本質的にこれから成る。さらなる実施形態では、少なくとも１つの治療的部分は、免疫グロブリン若しくは免疫グロブリン配列（免疫グロブリン断片を含むが、これに限定されない）、例えば抗体若しくは抗体断片（ＳｃＦｖ断片を含むが、これに限定されない）を含むか、又は本質的にこれから成る。さらに別の実施形態では、少なくとも１つの治療的部分は、抗体可変ドメイン（例えば重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメイン）を含むか、又は本質的にこれから成る。
【００８３】
好ましい実施形態において、少なくとも１つの治療的部分は、少なくとも１つのドメイン抗体又は単一のドメイン抗体「ｄＡｂ」又はナノボディ（登録商標）を含むか、又は本質的にこれから成る。この実施形態によれば、得られた構築物又は融合タンパク質が、少なくとも２つのドメイン抗体、単一のドメイン抗体「ｄＡｂ」又はナノボディ（登録商標）（又はその組合せ）（その内の１つは（本明細書で規定のように）血清アルブミンに指向性を有する）を含む、多価構築物（本明細書で記載のような）及び好ましくは多重特異的な構築物（これも本明細書で記載のような）であるように、本発明のアミノ酸配列はドメイン抗体又は単一のドメイン抗体「ｄＡｂ」又はナノボディでもあることが好ましい。
【００８４】
特定の実施形態において、少なくとも１つの治療的部分は、少なくとも１つの一価のナノボディ（登録商標）又は二価、多価、二重特異的な若しくは多重特異的なナノボディ（登録商標）構築物を含むか、又は本質的にこれから成る。この実施形態によれば、得られた構築物又は融合タンパク質が、少なくとも２つのナノボディ（その内の１つは（本明細書で規定のように）血清アルブミンに指向性を有する）を含む、多価ナノボディ構築物（本明細書で記載のような）及び好ましくは多重特異的なナノボディ構築物（これも本明細書で記載のような）であるように、本発明のアミノ酸配列はナノボディであることも好ましい。
【００８５】
本明細書の一実施形態によれば、ヒト血清アルブミンに対するナノボディはヒト化ナノボディである。
【００８６】
また、本発明のアミノ酸配列、タンパク質、ポリペプチド又は構築物が薬学的使用又は診断的使用を意図する場合、上述のものはヒト血清アルブミンに指向性を有するのが好ましい。１つの好ましいが非限定的な実施形態によれば、アミノ酸配列、タンパク質、ポリペプチド又は構築物は、マウスの血清アルブミンに対する親和性（実施例部分で記載されるように決定した）よりもヒト血清アルブミンに対する高い親和性を示す。
【００８７】
１つの好ましいが非限定的な実施形態によれば、本発明のアミノ酸配列は、クローンＰＭＰ６Ａ６（ＡＬＢ−１）と同一のヒト血清アルブミン上エピトープを指向する。
【００８８】
具体的ではあるが、非限定的な実施形態によれば、本発明のアミノ酸配列は、４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るヒト血清アルブミンと結合することができる免疫グロブリン配列（及び好ましくはナノボディ）であり、ここで
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から成る群から、及び／又は配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、及び／又は
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列から成る群から、若しくは配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列の１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から、及び／又は配列番号２２〜配列番号２９のＣＤＲ２配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、及び／又は
ｃ１）ＣＤＲ３は、配列番号４２のＣＤＲ３配列から成る群から選択されるアミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ３配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列、及び配列番号４２のＣＤＲ３配列との、３、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」を有するアミノ酸配列であるか、或いは代替的には
ｃ２）ＣＤＲ３は、配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ３配列から成る群から、及び／又は配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ１配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、
フレームワーク配列は、任意の好適なフレームワーク配列（例えば（単一）ドメイン抗体、及び特にナノボディのフレームワーク配列）であり得る。
【００８９】
上記のアミノ酸配列において、
（１）任意のアミノ酸置換が、（本明細書で規定のような）保存的アミノ酸置換であるのが好ましく、及び／又は
（２）上記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列に比べて、アミノ酸置換だけを含有し、アミノ酸欠失又はアミノ酸挿入を含有しないのが好ましい。
【００９０】
本発明のナノボディにおけるＣＤＲ配列の幾つかの好ましい組合せ、及び本発明のナノボディにおけるＣＤＲとフレームワーク配列との幾つかの好ましい組合せは、以下の表１から見ることができる。
【００９１】
以下の表２は、幾つかの好ましい本発明のナノボディを挙げている。以下の表３は、幾つかの好ましい本発明のヒト化ナノボディを挙げている。
【００９２】
【表１】
2010502208.tif 000002
【００９３】
【表２】
2010502208.tif 000003
【００９４】
【表３】
2010502208.tif 000004
【００９５】
したがって別の態様において、本発明のアミノ酸配列は、配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するナノボディである。
【００９６】
したがって別の態様において、本発明のアミノ酸配列は、配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するナノボディであり、ここで
このようなナノボディに存在するＣＤＲ１配列は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から、又はこのようなＣＤＲ１配列との１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ２配列は、配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ１配列から、又はこのようなＣＤＲ２配列との１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ１配列は、配列番号２３〜配列番号４２のＣＤＲ１配列から、又はこのようなＣＤＲ３配列との１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から選択される。
【００９７】
別の態様において、本発明のアミノ酸配列は、配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するナノボディであり、ここで
このようなナノボディに存在するＣＤＲ１配列は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ２配列は、配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ１配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ１配列は、配列番号２３〜配列番号４２のＣＤＲ１配列からから選択される。
【００９８】
本発明に使用するのに特に好ましいナノボディ群の１つは、クローンＰＭＰ６Ａ６（ＡＬＢ１、配列番号５２）及びそのヒト化変異型（クローンＡＬＢ３（配列番号５７）、ＡＬＢ４（配列番号５８）、ＡＬＢ５（配列番号５９）、ＡＬＢ６（配列番号６０）、ＡＬＢ７（配列番号６１）、ＡＬＢ８（配列番号６２）、ＡＬＢ９（配列番号６３）、及びＡＬＢ１０（配列番号６４）を含むが、これらに限定されない）を含み、その中でもＡＬＢ８（配列番号６２）が特に好ましい。
【００９９】
したがって１つの好ましい態様において本発明は、配列番号５２及び配列番号５７〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列に関する。
【０１００】
別の好ましい態様において、本発明のアミノ酸配列は、４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るヒト血清アルブミンと結合することができる免疫グロブリン配列（及び好ましくはナノボディ）であり、ここで
ａ）ＣＤＲ１は、以下の配列を含む、以下の配列である、又は本質的に以下の配列から成る。
・アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ、又は
・アミノ酸配列ＳＦＧＭＳと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は
・アミノ酸配列ＳＦＧＭＳとの、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列
及び／又は
ｂ）ＣＤＲ２は、以下の配列を含む、以下の配列である、又は本質的に以下の配列から成る。
・アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ、又は
・アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は
・アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧとの、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列
及び／又は
ｃ）ＣＤＲ３は、以下の配列を含む、以下の配列である、又は本質的に以下の配列から成る。
・アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ、又は
・アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は
・アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲとの、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列
【０１０１】
具体的には本発明は、このようなナノボディに関するものであり、ここで、
・ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＦＧＭＳを含むか又はこれであり、及び／又は
・ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧを含むか又はこれであり、及び／又は
・ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含むか又はこれである、
【０１０２】
より具体的には本発明は、このようなナノボディに関するものであり、ここで、
・ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＦＧＭＳを含むか又はこれであり、ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲを含むか又はこれであり、及び／又は
・ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＦＧＭＳを含むか又はこれであり、ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧを含むか又はこれであり、及び／又は
・ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧを含むか又はこれであり、ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲを含むか又はこれである。
【０１０３】
さらにより具体的には本発明は、このようなナノボディに関するものであり、ここで、、ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＦＧＭＳを含むか又はこれであり、ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧを含むか又はこれであり、ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲを含むか又はこれである。
【０１０４】
これらのアミノ酸配列は、配列番号５２及び配列番号５７〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するのがさらに好ましい。
【０１０５】
さらにまた、これらのアミノ酸配列は、Ablynx N. V.による同時係属中の出願で記載されているようにヒト化されるのが好ましい。幾つかの好ましいヒト化置換は、配列番号５２の非ヒト化配列を配列番号５７〜配列番号６４の対応するヒト化配列と比較することによって当業者にとって明らかである。
【０１０６】
アミノ酸配列が免疫グロブリン可変ドメイン配列等の免疫グロブリン配列である場合、このような配列の好適な（即ち本明細書で言及される目的に好適な）断片を使用してもよい。例えば、アミノ酸配列がナノボディである場合、このような断片は本質的にＷＯ０４／０４１８６５に記載され得る。
【０１０７】
本発明は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含むか、又は本質的にはこれから成るタンパク質若しくはポリペプチド、又はその好適な断片にも関する。
【０１０８】
本明細書で言及されるように、本明細書に記載のアミノ酸配列は、タンパク質、化合物（小分子を含むが、これらに限定されない）又は他の治療実体物等の治療的部分の半減期を増大させるために、融合パートナーとして有利に使用することができる。したがって、本発明の一実施形態は、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、少なくとも１つの治療的部分とを含む構築物又は融合タンパク質に関する。このような構築物又は融合タンパク質は、治療的部分自体に比べて、半減期が増大するのが好ましい。概して、このような融合タンパク質及び構築物は、上記で言及された従来技術に記載されるように（調製及び使用）することができるが、従来技術で記載された半減期増大部分の代わりに本発明のアミノ酸配列を使用する。
【０１０９】
概して、本明細書に記載の構築物又は融合タンパク質は、対応する治療的部分自体の半減期より少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、例えば少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍又は２０倍超大きい半減期を有するのが好ましい。
【０１１０】
また好ましくは、任意のこのような融合タンパク質又は構築物は、対応する治療的部分自体の半減期と比べて、１時間を超えて、好ましくは２時間を超えて、より好ましくは６時間を超えて、例えば１２時間を超えて半減期が増大する。
【０１１１】
また好ましくは、任意の融合タンパク質又は構築物は、１時間を超える、好ましくは２時間を超える、より好ましくは６時間を超える、例えば１２時間を超える半減期、及び例えば約１日、２日、１週間、２週間又は３週間、並びに好ましくは２ヶ月以内の半減期を有するが、２ヶ月以内は別段必須という訳でもない。
【０１１２】
また上記で言及されたように、本発明のアミノ酸配列がナノボディである場合、他の免疫グロブリン配列（例えばドメイン抗体、単一のドメイン抗体「ｄＡｂ」又はナノボディ）の半減期を増大するのに、本発明のアミノ酸配列を使用することができる。
【０１１３】
したがって、本発明の一実施形態は、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、少なくとも１つの免疫グロブリン配列（例えばドメイン抗体、単一のドメイン抗体「ｄＡｂ」又はナノボディ）とを含む構築物又は融合タンパク質に関する。免疫グロブリン配列は、所望の標的（好ましくは治療標的である）、及び／又は治療目的、予防目的及び／又は診断目的に有用又は好適な別の免疫グロブリン配列に指向性を有するのが好ましい。
【０１１４】
したがって別の態様において、本発明は、少なくとも１つの本明細書に記載のナノボディと、少なくとも１つの他のナノボディとを含む多重特異的な（及び特には二重特異的な）ナノボディ構築物であって、当該少なくとも１つの他のナノボディは、所望の標的（好ましくは治療標的である）、及び／又は治療目的、予防目的及び／又は診断目的に有用又は好適な別のナノボディに指向性を有するのが好ましい、多重特異的な（及び具体的には二重特異的な）ナノボディ構築物に関する。
【０１１５】
１つ又は複数のナノボディを含有する多価で多重特異的なポリペプチド、及びその調製の概要について、Conrath et al., J. Biol. Chem., Vol. 276, 10. 7346-7350, 2001、Muyldermans, Reviews in Molecular Biotechnology 74（2001）, 277-302、並びに例えばＷＯ９６／３４１０３及びＷＯ９９／２３２２１も参照する。幾つかの特定の本発明の多価及び／又は多重特異的なポリペプチドの他の幾つかの例は、Ablynx N. V.による同時係属中の出願に見出すことができる。特に、半減期を増大させるために血清タンパク質に対する少なくとも１つのナノボディを含む多価で多重特異的な構築物、これをコードする核酸、これを含む組成物、上述の調製、上述の使用の概要について、上述のAblynx N.V.による国際出願のＷＯ０４／０４１８６５を参照する。概して本明細書に記載のアミノ酸配列は、その明細書に記載の半減期増大ナノボディと同じように使用することができる。
【０１１６】
１つの非限定的な実施形態において、上記の他のナノボディは、単量体及び／又は多量体（即ち三量体）形態で腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に指向性を有する。このようなナノボディ構築物の例の幾つかは、Ablynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"（これは本願と同じ優先権及び同じ国際出願日を有する）に見出すことができる。
【０１１７】
本発明は、本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質及び構築物をコードするヌクレオチド配列又は核酸にも関する。上述のヌクレオチド配列又は核酸およびそれ自体が既知の遺伝的構築物の１つ又は複数の因子を含む遺伝的構築物を、本発明はさらに含む。遺伝的構築物は、プラスミド又はベクターの形態であり得る。また概して、このような構築物は、本明細書に記載されるAblynx N.V.による同時係属中の特許出願（例えばＷＯ０４／０４１８６２）又はAblynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"に記載されるようなものであり得る。
【０１１８】
本発明は、このようなヌクレオチド配列若しくは核酸を含有し、及び／又は本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質及び構築物を発現する（又は発現することができる）宿主又は宿主細胞にも関する。また概して、このような宿主細胞は、すでに記載のAblynx N.V.による同時係属中の特許出願（例えばＷＯ０４／０４１８６２）又はAblynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"に記載されるようなものであり得る。
【０１１９】
本発明は、本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物を調製する方法に関するものであって、本明細書に記載の宿主細胞が、本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物を製造又は発現するような条件下で、当該宿主細胞を培養又は維持することを含み、任意で、このように製造した、アミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物を単離することをさらに含む方法である。また概して、このような方法は、すでに記載のAblynx N.V.による同時係属中の特許出願（例えばＷＯ０４／０４１８６２）又はAblynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"に記載されるように行い得る。
【０１２０】
本発明は、少なくとも１つの本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と、任意で少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤とを含む薬学的組成物にも関する。概して、このような製剤、担体、賦形剤及び希釈剤は、すでに記載のAblynx N.V.による同時係属中の特許出願（例えばＷＯ０４／０４１８６２）又はAblynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"に記載されるようなものであり得る。
【０１２１】
しかし、本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物が増大した半減期を有するので、これらを循環血液に投与するのが好ましい。このように、アミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物を循環血液に投入することが可能な任意の好適な方法（例えば注射又は点滴によって静脈内に）、又はアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物を循環血液に投入することが可能な任意の他の好適な方法（経口投与、皮膚を介した投与、経粘膜投与、鼻内投与、肺を介した投与等を含む）でこれらを投与することができる。好適な投与方法及び投与経路は、例えばまたＷＯ０４／０４１８６２又はAblynx N.V.による同時係属中の国際出願、表題"Improved NanobodiesTM against Tumor Necrosis Factor-alpha"の教示から当業者にとって明らかである。
【０１２２】
したがって別の態様において、本発明は、本明細書に記載の化合物、融合タンパク質又は構築物を使用することによって予防又は治療することができる少なくとも１つの疾患又は障害を予防及び／又は治療する方法に関するものであって、それが必要な患者に薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物、及び／又はこれを含む薬学的組成物を投与することを含む方法である。本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物の使用によって予防又は治療することができる疾患及び障害は概して、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物に存在する治療的部分の使用によって予防又は治療することができる疾患及び障害と同じである。
【０１２３】
治療する患者は任意の霊長類であり得るが、特にヒトである。当業者にとって明らかなように、特に治療する患者は本明細書で言及される疾患及び障害を患っているか又はこれらの危険性があるヒトである。
【０１２４】
より具体的には本発明は、治療する方法であって、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物の投与頻度が、上記霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％及び最も好ましくは少なくとも９０％である、治療する方法に関する。
【０１２５】
本発明の範囲内にある特定の霊長類への投与頻度は、上記に規定の当該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は少なくとも１００％である。
【０１２６】
言い換えれば、本発明の範囲内にある特定の投与頻度は、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、又は１９日毎である.
【０１２７】
限定されることなく、特に上記で言及される投与頻度は、任意で上記の所望の血清レベルを確立することを目的とする１回又は複数回の（初回）用量の投与後に、アミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物で治療した患者の血清中で所望のレベルのアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物を維持するのに適する。当業者にとって明らかなように所望の血清レベルは、とりわけ使用されるアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物、及び／又は治療される疾患に応じて変わり得る。臨床医又は内科医は、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物が本明細書で言及される頻度で投与される場合、治療する患者において所望の血清レベルを達成及び／又は維持するために、所望の血清レベルを選択し、当該患者に投与する用量（複数可）及び／又は量（複数可）を選択することができる。
【０１２８】
本発明に関して、用語「予防及び／又は治療」は、疾患を予防及び／又は治療することだけでなく、概して疾患の発症を防ぐこと、疾患の進行を遅らせる又は逆行させること、疾患関連の１つ又は複数の症状の発症を防ぐ又は遅らせること、疾患関連の１つ又は複数の症状を軽減及び／又は緩和すること、疾患及び／又は疾患関連の任意の症状の重症度及び／又は期間を軽減すること、疾患及び／又は疾患関連の任意の症状の重症度のさらなる増大を防ぐこと、及び／又は疾患によって引き起こされる任意の生理学的損傷を防ぐ、軽減する、又は逆行させること、並びに概して治療する患者に有益である任意の薬理作用も含む。
【０１２９】
治療する患者は任意の霊長類であり得るが、特にヒトである。当業者にとって明らかなように、特に治療する患者は本明細書で言及される治療的部分によって治療可能な疾患及び障害を患っているか又はこれらの危険性があるヒトである。
【０１３０】
別の実施形態において本発明は、免疫療法、及び特に受動免疫療法のための方法であって、本明細書で言及される疾患及び障害を患っている又はこれらの危険性がある患者に、薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物、及び／又はこれを含む薬学的組成物を投与することを含む、免疫療法、及び特に受動免疫療法のための方法に関する。
【０１３１】
本発明は、治療剤の血清半減期を延長又は増大する方法にも関する。これらの方法では治療剤は、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と結合するか、又はそうでなければ会合するように、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物（多価で多重特異的なナノボディを含む）のいずれかと接触する。
【０１３２】
治療剤及びアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物は、当業者に既知の様々な方法で結合するか、又はそうでなければ会合することができる。生物学的治療剤（例えばペプチド又はポリペプチド）の場合、治療剤は、当該技術分野で既知の方法に従って、アミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と融合することができる。治療剤は、分子又は配列と直接融合するか、又はスペーサ若しくはリンカーを使用して融合することができる。好ましい実施形態では、スペーサ又はリンカーはアミノ酸から構成されるが、当該技術分野で既知のように他の非アミノ酸スペーサ又はリンカーを使用することができる。したがって、治療剤を接触させる工程は、ペプチド又はポリペプチドを本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物（多価で多重特異的なナノボディを含む）と連結することによって融合タンパク質を調製することを含み得る。
【０１３３】
治療剤は、本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物によって直接結合することもできる。１つの例としては、多価で多重特異的なナノボディは、血清アルブミンと結合する少なくとも１つの可変ドメインと、治療剤と結合する少なくとも１つの可変ドメインとを含み得る。
【０１３４】
治療剤の血清半減期を延長又は増大する方法は、治療剤が本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物と結合するか、又はそうでなければ会合した後に、治療剤を霊長類に投与することをさらに含み得る。このような方法では本明細書の他で記載されるように、治療剤の半減期は有意な量だけ延長又は増大する。
【０１３５】
アミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物、及び／又はこれを含む組成物は、予防又は治療する疾患又は障害を予防及び／又は治療するのに好適な治療レジームに従って投与する。一般的に臨床医は、予防又は治療する疾患又は障害、治療する疾患の重症度及び／又はその症状の重症度、使用される特定の本発明のナノボディ又はポリペプチド、使用される特定の投与経路及び薬学的製剤又は組成物、患者の年齢、性別、体重、食事、全身状態等の因子、並びに臨床医に既知の同様の因子に応じて好適な治療計画を決定することができる。
【０１３６】
一般的に、治療計画は、１つ又は複数の薬学的に有効な量又は用量中での１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物、或いはこれを含む１つ又は複数の組成物の投与を含む。臨床医は、ここでもまた上記で言及される因子に基づき、投与する具体的な量（複数可）又は用量を決定することができる。
【０１３７】
一般的に、本明細書で言及される疾患及び障害の予防及び／又は治療のために、治療する特定の疾患又は障害、使用する特定のアミノ酸配列、化合物、融合タンパク質又は構築物の効能及び／又は半減期、使用する特定の投与経路及び特定の薬学製剤又は組成物に応じて、本発明のナノボディ及びポリペプチドは一般的に、単回の１日用量又は１日の間に複数回に分割された用量として連続して（例えば点滴によって）、１日当たり体重１ｋｇ当たり１ｇ〜０．０１μｇ、好ましくは１日当たり体重１ｋｇ当たり０．１ｇ〜０．１μｇ（例えば１日当たり体重１ｋｇ当たり約１μｇ、１０μｇ、１００μｇ又は１０００μｇ）の量で投与する。一般的に臨床医は、本明細書で言及される因子に応じて、好適な１日の用量を決定することができる。特定の場合では、臨床医は、例えば上記で言及された因子及びその専門的な判断に基づき、これらの量から逸脱するように選択してもよいことも明らかである。一般的に、親和性／親和力、効率、生体内分布、半減期、及び当業者にとって既知の同様の因子の差異を考慮して、本質的に同じ経路を介して投与される同じ標的に対する同程度の従来の抗体又は抗体断片に対して通常投与される量から、投与量に対する幾つかの指針を得ることができる。
【０１３８】
通常上記の方法において、本発明の単一ナノボディ又はポリペプチドを使用する。しかし、２つ以上の本発明のナノボディ及び／又はポリペプチドを組合せて使用することは本発明の範囲内である。
【０１３９】
本発明のナノボディ及びポリペプチドは、１つ又は複数のさらなる薬学的に有効な化合物又は方針と組合せて、即ち複合治療計画として使用してもよく、相乗効果があってもなくてもよい。また臨床医は、上記で言及された因子及びその専門的な判断に基づき、このようなさらなる化合物又は方針、並びに好適な複合治療計画を選択することができる。
【０１４０】
特に本発明のナノボディ及びポリペプチドは、本発明の融合タンパク質又は構築物によって予防又は治療することができる疾患及び障害の予防及び／又は治療に使用する、或いは治療することができる、他の薬学的に有効な化合物又は方針と組合せて使用してもよく、その結果として相乗効果が得られても得られなくてもよい。
【０１４１】
臨床医にとって明らかなように、本発明に従って使用される治療計画の有効性は、関連の疾患又は障害に関してそれ自体が既知の任意の方法で求め得るか、及び／又はその方法に従い得る。臨床医は、必要に応じて及び／又は臨機応変に、所望の治療効果を達成するように、不要な副作用を回避、制限又は低減するように、及び／又は一方で所望の治療効果を達成すること、並びにその一方で不要な副作用を回避、制限又は低減することの間での適切な均衡を達成するように、特定の治療計画を変えるか、又は変更することもできる。
【０１４２】
概して、所望の治療効果が達成されるまで、及び／又は所望の治療効果が維持される間、治療計画に従う。またこれは、臨床医が決定することができる。
【０１４３】
これより、以下の非限定的な実施例部分及び添付の図面によって本発明をさらに説明する。
【図面の簡単な説明】
【０１４４】
【図１】３匹のアカゲザルの血漿中のナノボディ構築物濃度（μｇ／ｍｌ）対時間（日数）のグラフであり、０日、１日、２日、４日、８日及び１１日でアカゲザルに２ｍｇ／ｋｇの構築物を投与した後のナノボディ構築物の薬物動態を示す。
【図２】２匹のヒヒの血漿中のナノボディ構築物濃度（μｇ／ｍｌ）対時間（日数）のグラフであり、０日、１日、２日、４日、８日、１１日及び１４日でヒヒに２ｍｇ／ｋｇの構築物を投与した後のナノボディ構築物の薬物動態を示す。
【実施例】
【０１４５】
実施例１
血清アルブミン特異的なナノボディの同定
ヒト血清アルブミンを免疫付与したラマからアルブミン特異的なナノボディを同定した。ヒト、アカゲザル及びマウスのアルブミンを使用したＥＬＩＳＡによって、個々のナノボディのスクリーニングを行い、様々な種の血清アルブミンで交差反応するナノボディパネルを得た。
【０１４６】
実施例２
Ｂｉａｃｏｒｅ分析
Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００機器における表面プラズモン共鳴によって、ナノボディと血清アルブミンとの結合を特徴付けた。反応単位の増加が２５０に達するまで、アミン結合を介して、様々な種由来の血清アルブミンをＣＭ５センサーチップ表面に共有結合させた。残存反応基を不活性化した。或る濃度（２０倍希釈）でナノボディ結合を評価した。４５μｌ／分の流速で４分間、それぞれのナノボディをインジェクトし、チップ結合抗原に結合させた。同じ流速でナノボディを含まない結合緩衝液をチップ上に送り、結合ナノボディを４時間自然解離させた。様々なナノボディに対して得られるセンサーグラムから、Ｋoff値を算出した。試験したナノボディをＫoff値に従ってランク付けした。以下の表４を参照されたい。
【０１４７】
【表４】
2010502208.tif 000005
【０１４８】
追跡実験において、一連の様々な濃度を使用したことを除いて上記のように、結合を分析した。４５μｌ／分の流速で４分間、それぞれの濃度をインジェクトし、チップ結合抗原に結合させた。同じ流速で分析物を含まない結合緩衝液をチップ上に送り、結合ナノボディを解離させた。１５分後、再生溶液（２５ｍＭのＮａＯＨ）のインジェクションによって、残存結合分析物を取り除いた。
【０１４９】
様々な濃度のそれぞれの分析物に対して得られたセンサーグラムから、平衡に達した際に安定状態の親和性によって、ＫＤ値を算出した。
【０１５０】
結果を表５に要約する。ＡＬＢ１及びＡＬＢ２の両方で交差反応性が観察される。最も高い親和性は、ヒト及びアカゲザルのＴＮＦαにおけるＡＬＢ２の場合に観察される。しかし、ヒト／アカゲザル対マウスの血清アルブミンに関する親和性の差異は、ＡＬＢ２の場合により顕著である一方で（４００倍）、ＡＬＢ１の場合では１２倍の差異が観察される。
【０１５１】
【表５】
2010502208.tif 000006
【０１５２】
実施例３
アカゲザルにおける半減期
ヒト化抗ヒト血清アルブミンナノボディＡＬＢ−８（配列番号６２）を含む三価の二重特異的なナノボディ構築物の薬物動態特性をアカゲザルで研究した。０日目に、３匹のサルの中に２ｍｇ／ｋｇの構築物を与えた。投与時、並びに（以下の設定で）投与後１日目、２日目、４日目、８日目、１１日目及び１４日目に、サルから血漿サンプルを採取し、解析して、薬物動態プロファイルを求めた。全てのサルでのＰＫプロファイルは、約１０日の算出半減期で類似していた。この算出半減期は、アカゲザルにおけるアルブミンの推定半減期の範囲内にある。
【０１５３】
順応のために研究の４週間前に、３匹のアカゲザルを順応した。０日目に、留置カテーテル及び注入ポンプを使用して、右腕又は左腕の橈側皮静脈に静脈内注入によって、２ｍｇ／ｋｇの構築物をサルに与えた。５分にわたって緩徐ボーラスとして２ｍｌ／ｋｇの容量で１回分を投与した。それぞれの投与サイクル中に、以下の時点で血液サンプルを採取した。
【０１５４】
注入前：
緩徐ボーラス開始の４０分前
注入開始後：
緩徐ボーラス開始の５分後及び３０分後
緩徐ボーラス開始の１時間後、２時間後、４時間後、及び８時間後
投与後１日目、２日目、４日目、８日目、及び１１日目
【０１５５】
それぞれのサンプリング時点でそれぞれの動物から約８００μＬのＮａ−ヘパリン血漿を得るために、左腕又は右腕の橈側皮静脈から（適用には使用しなかった）又は左前肢若しくは右前肢の大伏在静脈から全血２ｍｌを取り出した。
【０１５６】
ＰＫ分析のために、４℃のＰＢＳ  ＯＮ中に１００μｌ／ウェルで９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレートに２μｇ／ｍｌのＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ（Pierce）を被覆した。室温で２時間２００μｌ／ウェルを利用して、ＰＢＳ、１％カゼインでプレートを遮断した。ＰＢＳ、０．２％カゼイン中、０．４μｇ／ｍｌでビオチニル化抗原をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。血漿サンプルを非被覆プレート中で希釈し、室温で１５分間インキュベートした。それから、それぞれ希釈した血漿サンプル１００μｌを予め調製したウェルに移した後、室温で２時間インキュベートした。２０００倍希釈したポリクローナルウサギ抗ナノボディ抗体（様々なナノボディをウサギに免疫付与することによって、Dabio（Germany）で特注される）を使用して、結合構築物を検出した後、抗ウサギＩｇＧアルカリホスファターゼ抗体（２０００倍希釈、Sigma、Ａ１９０２）及び基質として２ｍｇ／ｍｌのｐＮＰＰ（パラニトロフェニルホスフェート）を添加した。吸光は４０５ｎｍで測定する。
【０１５７】
適切な濃度のアカゲザル血漿中で希釈した構築物の標準曲線と比較することによって、血漿サンプル中の構築物濃度を求めた。結果を図１に示す。このデータから、一般的に全てのサルは、消失半減期が約１０日である薬物動態プロファイルを示し、これはアカゲザルにおけるアルブミンの推定半減期の範囲内である：ナノボディ構築物の算出された消失半減期（ｔ１／２サイクルＩ［ｄ］）は８．０日〜１２．５日であった。
【０１５８】
実施例４
ヒヒにおける半減期
本質的に実施例３でアカゲザル研究に関して記載されたのと同じ方法でヒヒにおいて、実施例３で使用した構築物の薬物動態特性を試験した。０日目に、２匹のヒヒに２ｍｇ／ｋｇの構築物を与えた。投与時、並びに（以下の設定で）投与後１日目、２日目、４日目、８日目、１１日目及び１４日目に、ヒヒから血漿サンプルを採取し、解析して、構築物の薬物動態挙動を求めた。ヒヒでの構築物の薬物動態プロファイルは、アカゲザルのプロファイルと類似しており、ＰＫデータから算出された約１０日の平均半減期を特徴とした。
【０１５９】
本研究に２匹の雄の未成熟ヒヒを使用した。この動物を秤量すると、約１０ｋｇ〜１５ｋｇであり、使用前少なくとも６週間は無病であった。処理を可能にするために、約１ｍｇ／ｋｇの塩酸ケタミンでヒヒを屠殺した。０日目に、留置カテーテル及び注入ポンプを使用して、右腕又は左腕の橈側皮静脈に静脈内注入によって、２ｍｇ／ｋｇの構築物をヒヒに与えた。５分にわたって２ｍｌ／ｋｇの容量の緩徐ボーラスとして１回分を投与した。それぞれの構築物投与サイクル中に、以下の時点で血液サンプルを採取した。
【０１６０】
注入前：
緩徐ボーラス開始の４０分前
注入開始後：
緩徐ボーラス開始の５分後及び３０分後
緩徐ボーラス開始の１時間後、２時間後、４時間後、及び８時間後
投与後１日目、２日目、４日目、８日目、及び１１日目
【０１６１】
それぞれのサンプリング時点でそれぞれの動物から約８００μＬのＮａ−ヘパリン血漿を得るために、左腕又は右腕の橈側皮静脈（適用には使用しなかった）から又は左前肢若しくは右前肢の大伏在静脈から全血２ｍｌを取り出した。
【０１６２】
４℃のＰＢＳ  ＯＮ中に１００μｌ／ウェルで９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレートに２μｇ／ｍｌのＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ（Pierce）を被覆した。室温で２時間２００μｌ／ウェルを利用して、ＰＢＳ、１％カゼインでプレートを遮断した。ＰＢＳ、０．２％カゼインでビオチニル化抗原をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。血漿サンプルを非被覆プレート中で希釈し、室温で１５分間インキュベートした。それから、それぞれ希釈した血漿サンプル１００μｌを予め調製したウェルに移した後、室温で２時間インキュベートした。
【０１６３】
２０００倍希釈したポリクローナルウサギ抗ナノボディ抗体（上記のような）を使用して、結合構築物を検出した後、抗ウサギＩｇＧアルカリホスファターゼ抗体（２０００倍希釈、Sigma、Ａ１９０２）及び基質として２ｍｇ／ｍｌのｐＮＰＰを添加した。吸光は４０５ｎｍで測定する。適切な濃度のサル血漿中で希釈した構築物の標準曲線と比較することによって、血漿サンプル中の構築物濃度を求めた。
【０１６４】
図２は、ヒヒにおける構築物の薬物動態のグラフ図を示す。算出された構築物の消失半減期は約１１日であり、概してアカゲザルで観察されたＰＫと同程度である。構築物中のＡＬＢ００８構成要素は、ＢＩＡｃｏｒｅで求められるように、ヒヒアルブミンに対して３６ｎＭの親和性を有し、結果としてナノボディ（商標）の消失半減期が、１時間未満からおよそアルブミンの半減期（ヒヒにおいて１６日〜１８日と報告される（Cohen, Biochemistry 64, 1956））にまで延長する。
【０１６５】
用いている用語及び表現は、説明のために使用されており、限定するものではなく、このような用語及び表現の使用が、図示及び説明される特徴の任意の均等物又はその一部を排除するようには意図されず、様々な修正が本発明の範囲内で可能であることが認識される。
【０１６６】
本明細書で記載された全ての参考文献は、参照によって、特に本明細書の上記で言及される教示に対して援用される。
【図１】
2010502208.tif 000007
【図２】
2010502208.tif 000008
【配列表】
2010502208000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成21年5月27日(2009.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類における血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、該霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の血清半減期を示すように血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合する、アミノ酸配列。
【請求項２】
前記アミノ酸配列が、霊長類における血清アルブミンの天然血清半減期の少なくとも８０％の血清半減期を示す、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３】
前記アミノ酸配列が、少なくとも４日の血清半減期を示す、請求項１又は２に記載のアミノ酸配列。
【請求項４】
前記アミノ酸配列が、少なくとも９日の血清半減期を示す、請求項１又は２に記載のアミノ酸配列。
【請求項５】
血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、該血清アルブミン分子とＦｃＲｎとの結合が（有意に）低減又は阻害されないように、血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項６】
血清アルブミン分子と結合するか、又はそうでなければ会合する場合、該血清アルブミン分子の半減期が（有意に）低減されないように、血清アルブミンと結合するか、又はそうでなければ会合することができる、請求項１〜５のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項７】
血清アルブミンとＦｃＲｎとの結合に関与しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項８】
血清アルブミンのドメインＩＩＩ部分を形成しない、血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができる、請求項１〜７のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項９】
免疫グロブリン可変ドメイン配列又はその断片である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１０】
前記免疫グロブリン可変ドメイン配列が、ドメイン抗体、「ｄＡｂ」、単一ドメイン抗体若しくはナノボディ、又はそのいずれか１つの断片である、請求項９に記載のアミノ酸配列。
【請求項１１】
ＰＭＰ６Ａ６（ＡＬＢ１、配列番号５２）及びそのヒト化変異型、好ましくはＡＬＢ３（配列番号５７）、ＡＬＢ４（配列番号５８）、ＡＬＢ５（配列番号５９）、ＡＬＢ６（配列番号６０）、ＡＬＢ７（配列番号６１）、ＡＬＢ８（配列番号６２）、ＡＬＢ９（配列番号６３）又はＡＬＢ１０（配列番号６４）から成る群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％の配列同一性（本明細書で規定される）を有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアミノ酸配列。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含む化合物。
【請求項１３】
前記化合物が少なくとも１つの治療的部分をさらに含む、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、または請求項１２若しくは１３のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列又は核酸。
【請求項１５】
請求項１４に記載のヌクレオチド配列又は核酸を含有し、及び／又は請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、または請求項１２若しくは１３のいずれか一項に記載の化合物のアミノ酸配列を発現する又は発現することができる宿主又は宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項１２若しくは１３のいずれか一項記載の化合物から成る群から選択される１以上を含む薬学的組成物であって、霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の間隔でその霊長類に投与するのに好適である、薬学的組成物。
【請求項１７】
薬物を霊長類における血清アルブミンの天然半減期の少なくとも５０％の間隔で投与する、該霊長類への投与用薬物の製造のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項１２又は１３のいずれか一項記載の化合物のいずれかの使用。
【請求項１８】
前記薬物が少なくとも７日間隔で投与される、請求項１７に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
具体的ではあるが、非限定的な実施形態によれば、本発明のアミノ酸配列は、４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るヒト血清アルブミンと結合することができる免疫グロブリン配列（及び好ましくはナノボディ）であり、ここで
ａ）ＣＤＲ１は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から成る群から、及び／又は配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、及び／又は
ｂ）ＣＤＲ２は、配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ２配列から成る群から、若しくは配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ２配列の１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から、及び／又は配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ２配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、及び／又は
ｃ１）ＣＤＲ３は、配列番号４２のＣＤＲ３配列から成る群から選択されるアミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ３配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列、及び配列番号４２のＣＤＲ３配列との、３、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」を有するアミノ酸配列であるか、或いは代替的には
ｃ２）ＣＤＲ３は、配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ３配列から成る群から、及び／又は配列番号３６〜配列番号４１のＣＤＲ１配列の１つとの、２若しくは１だけ「アミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であり、
フレームワーク配列は、任意の好適なフレームワーク配列（例えば（単一）ドメイン抗体、及び特にナノボディのフレームワーク配列）であり得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
したがって別の態様において、本発明のアミノ酸配列は、配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するナノボディであり、ここで
このようなナノボディに存在するＣＤＲ１配列は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から、又はこのようなＣＤＲ１配列との１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ２配列は、配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ２配列から、又はこのようなＣＤＲ２配列との１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ３配列は、配列番号３６〜配列番号４２のＣＤＲ３配列から、又はこのようなＣＤＲ３配列との１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
別の態様において、本発明のアミノ酸配列は、配列番号５０〜配列番号６４のアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定される）を有するナノボディであり、ここで
このようなナノボディに存在するＣＤＲ１配列は、配列番号８〜配列番号１４のＣＤＲ１配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ２配列は、配列番号２２〜配列番号２８のＣＤＲ２配列から選択され、
このようなナノボディに存在するＣＤＲ３配列は、配列番号３６〜配列番号４２のＣＤＲ３配列からから選択される。
【国際調査報告】
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2010502208.tif 000010
2010502208.tif 000011
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