(57)【要約】  本発明は、３置換または4置換イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンに、これらを使用する方法に、ならびにこれらを製造する方法に関する。本発明の化合物は、イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンである。３，５，７イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンの最初の一般的合成が、本明細書において開示される。本発明は、特に医薬分野においてる用途を発見した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式I
【化１】
2010539155.tif 000066
を有する化合物、ならびにその塩、水和物および立体異性体、
ここで
Ａは、ＣＨまたはＮまたはＯであり、
Ｒ３は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、または
＝Ｏ、または
（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル−Ｃ＝Ｏ基、ここで該アルキルは１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
であり、
Ｒ４は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
＝Ｏ、または
Ｏ＝ＣＣＦ３、または
エステル基、たとえばＯ−アシル基、または天然のもしくは非天然のアミノ酸から誘導されたアミノアシル基、またはアセチル基、またはニコチニル基によって置換されたＣ１〜Ｃ６のアルキル基、であり、
またはＡ、Ｒ３およびＲ４は一緒になってＣ５〜Ｃ７のシクロアルキル基を作り、該シクロアルキル基は１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、好ましくはピペラジン基を作る、
Ｂは、ＯまたはＳまたはＮＨであり、
Ｒ１は
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は分枝していてもよく、および／または１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよい、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキルアリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
であり、
Ｒ２は
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、各アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を形成する、または
ビアリール基、各アリール環が、１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または各アリール環が、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり、
またはＢおよびＲ２は一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、その中の該シクロアルキル基は、１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい。
【請求項２】
式Iにおいて、ＡがＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式Iにおいて、ＣがＣＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
式Iにおいて、ＡがＯである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
式Iにおいて、Ｒ１がエチル基またはメチル基またはシクロペンチル基またはフェニル基またはベンジル基またはメチルピリジル基または
【化２】
2010539155.tif 000067
である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
式Iにおいて、Ｂ−Ｒ２が以下の基
【化３】
2010539155.tif 000068
から選ばれる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
式Iにおいて、Ｒ４−Ａ−Ｒ３が、以下の基
【化４】
2010539155.tif 000069
から選ばれる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
式Iにおいて、Ｒ５がＨである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
以下の式
【化５】
2010539155.tif 000070
【化６】
2010539155.tif 000071
【化７】
2010539155.tif 000072
【化８】
2010539155.tif 000073
【化９】
2010539155.tif 000074
【化１０】
2010539155.tif 000075
【化１１】
2010539155.tif 000076
【化１２】
2010539155.tif 000077
【化１３】
2010539155.tif 000078
を有する、請求項１、２および５〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
以下の式ＩＩ
【化１４】
2010539155.tif 000079
の化合物、
ここで、
ＢはＯまたはＳまたはＮＨであり、
Ｒ１は
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は分枝していてもよく、および／または１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキルアリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
であり、
Ｒ２は
アリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、ここで各アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
ビアリール基、各アリール環は１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作り、または各アリール環が１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり
または、ＢおよびＲ２が一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該シクロアルキル基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、
であり、
ＸはＣｌまたはＢｒまたはＩまたはＮＨ２である。
【請求項１１】
式ＩＩにおいて、ＸがＩ、好ましくは以下の式Ｖ
【化１５】
2010539155.tif 000080
の化合物である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項２に記載の化合物を製造する為の方法であって、式ＩＩ
【化１６】
2010539155.tif 000081
の化合物の反応工程を含み、ここでＢ、Ｒ２、Ｒ１およびＲ５が、請求項１４に記載の化合物について定義されたとおりである、前記方法。
【請求項１３】
該反応工程が、ＸがＣｌ、ＢｒまたはＩである式ＩＩの化合物と、以下の式ＩＩＩ
【化１７】
2010539155.tif 000082
の化合物
（ここでＡ、Ｒ３およびＲ４は式ＩＩについて定義されたとおりである）とを、
Ｐｄ（ＯＡｃ）２、Ｐｄ２ｄｂａ３またはＣｕＩから選ばれる触媒の存在下において、塩基性条件下で、任意的にリガンドＢｉｎａｐまたはエチレングリコールから選ばれるリガンドの存在下において、カップリングさせる工程である、請求項１２の方法。
【請求項１４】
該反応工程が、ＸがＮＨ２である式ＩＩの化合物と、以下の式ＩＶ
【化１８】
2010539155.tif 000083
の化合物
（ここでＹはＩ、ＢｒまたはＣｌであり且つＲ６はＲ３またはＲ４である）とをカップリングさせて、
以下の式Ｖ
【化１９】
2010539155.tif 000084
の化合物を得る工程であり、
Ｒ３およびＲ４がＨと異なる場合、式Ｖの化合物と以下の式ＶＩ
【化２０】
2010539155.tif 000085
の化合物
（ここでＹはＩ、ＢｒまたはＣｌであり且つ、Ｒ６がＲ４である場合にＲ７はＲ３でありまたはＲ６がＲ３である場合にＲ７はＲ４である）
とをカップリングさせる工程が任意的に続き、該カップリング工程は、Ｐｄ（ＯＡｃ）２、Ｐｄ２ｄｂａ３またはＣｕＩから選ばれる触媒の存在下において、塩基性条件下で、任意的にリガンドＢｉｎａｐの存在下において、実施される、
請求項１２の方法。
【請求項１５】
各出現ＸおよびＹがＩである、請求項１２〜１４のいずれか１項の方法。
【請求項１６】
医薬としての使用の為の、請求項１〜９のいずれか１項に記載のまたは請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法により得られた化合物。
【請求項１７】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のまたは請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法により得られた少なくとも１つの化合物、および医薬的に許容できる少なくとも１つの添加剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
細胞の異常増殖に起因する疾患の処置の為の医薬の製造において、請求項１〜９のいずれか１項に記載のまたは請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法により得られた少なくとも１つの化合物を使用する方法。
【請求項１９】
該疾患が、慢性リンパ性白血病または慢性骨髄性白血病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
該疾患が腫瘍である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
該疾患が神経変性疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病および卒中、である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
該疾患がウィルス性疾患である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
疼痛の処置の為の医薬の製造において、請求項１〜９のいずれか１項に記載のまたは請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法により得られた少なくとも１つの化合物を使用する方法。
【請求項２４】
該疾患が、腎臓疾患、例えばメサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、崩壊性腎糸球体症（collapsing glomerulopathy）、増殖性ループス腎炎、多発性嚢胞腎、糖尿病性ネフロパシー、及び急性腎損傷、シスプラチンにより誘発される腎毒性、である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
該疾患が、炎症、例えば胸膜炎、関節炎、緑内障、である請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
該疾患が２型糖尿病である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
該少なくとも１つの化合物が、以下の式の化合物からなる群において選ばれるものである、請求項１８〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【化２１】
2010539155.tif 000086
【化２２】
2010539155.tif 000087
【化２３】
2010539155.tif 000088
【化２４】
2010539155.tif 000089
【化２５】
2010539155.tif 000090
【化２６】
2010539155.tif 000091
【化２７】
2010539155.tif 000092
【化２８】
2010539155.tif 000093
【化２９】
2010539155.tif 000094
【化３０】
2010539155.tif 000095
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３置換または４置換イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンに、これらを使用する方法に、ならびにこれらを製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）は、細胞分裂、アポトーシス、転写、神経機能、およびエキソサイトーシスの調節における調節因子という重要な役割を演じる。
【０００３】
ヒト腫瘍におけるＣＤＫのたびたびの調節解除、ならびにアルツハイマー病、パーキンソン病およびニーマンピック病、虚血および卒中への、およびさらに様々な腎臓疾患、たとえばメサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、崩壊性腎糸球体症（collapsing glomerulopathy）、増殖性ループス腎炎、多発性嚢胞腎（ＰＫＤ）、糖尿病性ネフロパシーおよび急性腎損傷、シスプラチン起因性腎臓毒性への、炎症、たとえば胸膜炎、関節炎、緑内障への、２型糖尿病への、ウイルス（ＨＳＶ、ＨＣＭＶ、ＨＰＶ、ＨＩＶ）感染への、単細胞寄生虫病、たとえばプラスモジウム、リーシュマニアによるもの、等々へのＣＤＫ５の関与は、化学的ＣＤＫ阻害因子の活発な探求を刺激した。
【０００４】
確認された多数の阻害剤の中で、初期の化合物のうちの１であるロスコビチンは、比較的強力かつ選択的であるようである。
【０００５】
ロスコビチンは以下の式を有するプリンである。
【化１】
2010539155.tif 000002
【０００６】
その細胞増殖阻害活性および神経保護的活性の故に、このプリンは現在、癌、腎臓疾患、様々な神経変性疾患および炎症をそれぞれ治療するための可能性のある薬剤と考えられている。
【０００７】
その上、タンパク質キナーゼの薬理学的阻害因子の選択性は重要な問題であり、そしてロスコビチンは他の阻害剤（すでに商業化された阻害剤Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）を含む）と比較して相対的に選択的なＣＤＫ阻害剤である。
【０００８】
しかし、ロスコビチンはピリドキサールキナーゼと相互作用をする。
【０００９】
ロスコビチンおよびその誘導体の、ピリドキサールキナーゼとの相互作用の研究は非特許文献１に報告されている。
【００１０】
ピリドキサールキナーゼは、ＡＴＰおよびＺｎ２＋の存在下において、ピリドキサール、ピリドキサミンおよびピリドキシンのリン酸化を触媒する。これは、ピリドキサール５'−ホスフェート、すなわちビタミンＢ６の活性形（１４０を超える酵素の補因子）の合成における必須の段階を構成する。すなわち、ピリドキサールキナーゼ系との相互作用は、好ましくない副作用をもたらす可能性が高い。
【００１１】
したがって、そのような相互作用は、一方においてビタミンＢ６の活性形の合成に有害であり、ならびに／または、他方において、このタイプのＣＤＫ阻害因子により処置される患者におけるロスコビチンおよびその誘導体の利用可能性（availability）に有害である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｔａｎｇら、Ｊ．Ｂｏｉｌ．Ｃｈｅｍ、２００５年９月２日、第２８０巻、第３５号、３１２２０〜３１２２９ページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって、本発明の目的は、ＣＤＫ阻害因子特性を有するが、ピリドキサールキナーゼとの相互作用をより低度に有するかまたは当該相互作用を有さないロスコビチン誘導体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
この目的のために、本発明は、以下の式Ｉ
【化２】
2010539155.tif 000003
の化合物であって、
該式において、
Ａは、ＣＨまたはＮまたはＯであり、
Ｒ３は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、または
＝Ｏ、または
（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル−Ｃ＝Ｏ基、その中の該アルキル基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
であり、
Ｒ４は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該アルキル基は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該基は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
＝Ｏ、または
Ｏ＝ＣＣＦ３、または
エステル基、たとえばＯ−アシル基、または天然のもしくは非天然のアミノ酸から誘導されたアミノ基、またはアセチル基、またはニコチニル基によって置換されたＣ１〜Ｃ６のアルキル基、
であり、
またはＡ、Ｒ３およびＲ４は一緒になってＣ５〜Ｃ７のシクロアルキル基を作り、該シクロアルキル基は１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、好ましくはピペラジン基を作り、
Ｂは、ＯまたはＳまたはＮＨまたはハロゲン原子であり、
Ｒ１は
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は分枝しててもよく、および／または１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキルアリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
であり、
Ｒ２は
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、ここで各アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
ビアリール基、各アリール環は、１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または各アリール環が、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり、
またはＢおよびＲ２は一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、その中の該シクロアルキル基は、１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、
である
前記化合物、ならびにその塩、水和物、および立体異性体を提案する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は、ＣＤＫ阻害因子特性を有するが、ピリドキサールキナーゼとの相互作用をより低度に有するかまたは当該相互作用を有さないロスコビチン誘導体を提供する。
【００１６】
本明細書で使用されるときに、語「ビアリール」は、単結合によって結合された２つのアリール環を表し、および「カルボン酸基」の語は、−ＣＯＯＨ基を表す。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の化合物およびロスコビチンとピリドキサールキナーゼとの相互作用を測定するために、それぞれ５００μＭまたは１００μＭの、（Ｒ）−ロスコビチン、または式Iｃの化合物または式Iｄの化合物を用いて実施された銀染色の結果を示す図である。
【図２】ＰＤＸＫおよびＣＤＫ５キナーゼに対する、５００μＭおよび１００μＭの濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iｃの化合物および式Iｄの化合物の効果を示すための、図１に対応するイムノブロットを示す図である。
【図３】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の細胞生存率に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物の効果を示す図である。
【図４】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の任意蛍光単位（ａ．ｆ．ｕ．）で測定されたカスパーゼ活性（ＤＥＶＤアーゼ）に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物の効果を示す図である。
【図５】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のＭＴＳ還元に対する、様々な濃度の、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。
【図６】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の、任意蛍光単位（ａ．ｆ．ｕ．）で表現された、カスパーゼ活性（ＤＥＶＤアーゼ活性）に対する、様々な濃度の、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。
【図７】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の網膜芽細胞腫タンパク質リン酸化に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図８】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の網膜芽細胞腫全タンパク質に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図９】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のＲＮＡポリメラーゼIIのセリン２部位（Ｓｅｒ２）のリン酸化に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１０】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のＲＮＡポリメラーゼII全タンパク質に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１１】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のタンパク質ホスファターゼ１−アルファのスレオニン３２０部位（Ｔｈｒ３２０）のリン酸化に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１２】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の骨髄性細胞白血病−１（Ｍｃｌ−１）生存因子に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１３】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のｐ５３全タンパク質レベルに対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１４】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のｐ２７全タンパク質レベルに対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１５】神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のポリ（ＡＤＲ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）開裂に対する、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【図１６】図５〜１４のローディング対照としての、神経芽細胞腫ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のアクチン全タンパク質への、様々な濃度における、（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物、式Iｂの化合物および式Iｃの化合物の効果を示す図である。この図１６で、上部目盛りは（Ｒ）−ロスコビチン、式Iａの化合物および式Iｂの化合物に適用され、下部目盛りは式Iｃの化合物に適用される。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の第一の好まれる実施態様では、式Iにおいて、ＡはＮである。
【００１９】
本発明の第二の好まれる実施態様では、式Iにおいて、ＡはＣＨである。
【００２０】
本発明の第三の好まれる実施態様では、式Iにおいて、ＡはＯである。
【００２１】
本発明の好まれる実施態様のそれぞれでは、式Iにおいて、好ましくはＲ１基は、エチル、またはメチル、またはイソプロピル、またはメチルシクロプロピル、またはシクロペンチル、フェニル基、またはベンジル基、またはメチルピリジル基、または
【化３】
2010539155.tif 000004
【００２２】
本発明の好まれる実施態様のそれぞれでは、式Iにおいて、好まれるＢ−Ｒ２基は、以下の表１に特定されたもののうちの１つである。
【表１】
2010539155.tif 000005
【００２３】
さらに、本発明の好まれる実施態様のそれぞれでは、式Iにおいて、好ましくはＲ４−Ａ−Ｒ３の置換基は、以下の表２に特定された基のうちの１つである。
【表２】
2010539155.tif 000006
【００２４】
さらに、本発明の好まれる実施態様のそれぞれでは、好ましくはＲ４−Ａ−Ｒ３はエステル官能基である。
【００２５】
実際に、これらのエステルは中程度または低度のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を示すけれども、それらはｉｎ  ｖｉｖｏでは本発明の式Iの生理活性化合物のプロドラッグとして作用する。
【００２６】
本発明の式Iの化合物のエステルである、そのようなプロドラッグにおいて、好まれるＲ４−Ａ−Ｒ３基は以下の表３に特定されたものである。
【表３】
2010539155.tif 000007
【００２７】
本発明の好まれる化合物は、以下の式Iａを有する化合物である。
【化４】
2010539155.tif 000008
【００２８】
この化合物は絶対配置（Ｒ）を有し、そして本明細書以下において「ペルハリジン（ペラリジン、ｐｅｒｈａｒｉｄｉｎｅ）Ａ」とも呼ばれる。
【００２９】
しかし、以下の式Iｂを有するペルハリジンＡの（Ｓ）異性体も好まれる。
【化５】
2010539155.tif 000009
【００３０】
この化合物は本明細書以下において「ペルハリジンＢ」とも呼ばれる。
【００３１】
本発明の他の好まれる化合物は、以下の式を有する。
【化６】
2010539155.tif 000010
【００３２】
この化合物は本明細書以下において「ペルハリジンＣ」とも呼ばれる。
【００３３】
本発明のさらに他の好まれる化合物は、以下の式Iｄを有する。
【化７】
2010539155.tif 000011
【００３４】
この化合物は本明細書以下において「ペルハリジンＤ」とも呼ばれる。
【００３５】
しかし、以下の式Iｅを有する本発明の化合物も好まれる。
【化８】
2010539155.tif 000012
【００３６】
以下の式Iｆを有する本発明の化合物も、好まれる化合物である。
【化９】
2010539155.tif 000013
【００３７】
以下の式Iｇを有する本発明の化合物も好まれる。
【化１０】
2010539155.tif 000014
【００３８】
さらにその上、以下の式Iｈを有する本発明の化合物も好まれる。
【化１１】
2010539155.tif 000015
【００３９】
前掲の本発明の化合物のそれぞれすべての立体異性体、水和物、および塩もまた本発明の範囲内である。
【００４０】
言及されるとおり、式Iａ〜Iｇの化合物において、ＡはＮである。
【００４１】
しかし、本発明の他の好まれる化合物は、ＡがＣＨでありまたはＡがＯであるところの式Iａ〜Iｇのこれら化合物に対応するそれらである。
【００４２】
本発明の化合物は、当業者に周知の任意の適切な方法によって製造されることができる。
【００４３】
しかし、一方において、ＡがＮであるときは、これらの化合物は、２，６，９−三置換プリンの合成の伝統的方法によっては調製されることができない。
【００４４】
この伝統的方法は、たとえばロスコビチンを得るために、２位が塩素で置換されたプリンがアミノ−アルコールの存在下において１４５℃〜１７０℃からなる温度で加熱される工程を含む。
【００４５】
しかし、この方法を、対応する３，５，７−三置換イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンに適用した場合、反応は起きなかった。
【００４６】
温度を上げた場合、減成生成物のみが得られた。
【００４７】
他方において、デアザプリン（deazapurine）を調製する伝統的方法を適用することも適切でないことが発見された。
【００４８】
実際に、Ｆｒａｎｃｉｓ，ＪＥおよびＭｏｓｋａｌ，ＭＡによってＣａｎ  Ｊ  Ｃｈｅｍ、１９９２年、第７０巻、１２８８〜１２９５ページに記載されたこの伝統的方法は、最初に塩化ホスホリルを試薬として用いた２級アミドとアミノシアノイミダゾールとの反応によるアミジンの形成を含む。第二の工程で、ＮａＨを塩基として用いて、該アミジンはイミダゾピリジンへと環化される。この方法は、７位に非置換アミノ基を有する誘導体を与えるのみなので、本発明の目的化合物を調製するためには適用されることができなかった。さらに、置換基がヒドロキシ基を有するとき、これらの基はヘテロ環の形成の間、保護されなければならない。Ｋｏｃｈ，Ｍによって国際公開第２００６／０２７３６６号パンフレットに記載された別の合成においては、５位に導入されることができる置換基の性質がニトロソ基から形成されたものに制限され、かつ同方法により、非置換７−アミノ基のみが記載されている。
【００４９】
従来技術の方法の欠点を改善するために、本発明は独創的かつ万能的な方法を提案する。同方法では以下の式IIの化合物が使用され、
【化１２】
2010539155.tif 000016
ここで、
ＢはＯまたはＳまたはＮＨまたはハロゲン原子であり、
Ｒ１は
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は分枝されていてもよく、および／または１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよいＣ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキルアリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
であり、
Ｒ２は
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、各アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
ビアリール基、各アリール環は１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作り、または各アリール環が１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり
または、ＢおよびＲ２が一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該シクロアルキル基が１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、
であり、
ＸはＣｌまたはＢｒまたはＩまたはＮＨ２である。
【００５０】
式IIのこれら化合物も、本発明の範囲内である。
【００５１】
好まれる式IIの化合物は、ＸがＩであるものである。
【００５２】
このようにして、本発明は以下の式Iの化合物、ならびにその塩、水和物および立体異性体を製造する為の方法も提供し、
【化１３】
2010539155.tif 000017
該式において、
Ａは、Ｎであり、
Ｒ３は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、または
＝Ｏ、または
（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル−Ｃ＝Ｏ基、該アルキルは１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
であり、
Ｒ４は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
＝Ｏ、または
Ｏ＝ＣＣＦ３、または
エステル基、たとえばＯ−アシル基、または天然もしくは非天然のアミノ酸から誘導されたアミノアシル基、またはアセチル基、またはニコチニル基によって置換されたＣ１〜Ｃ６のアルキル基、
であり、
またはＡ、Ｒ３およびＲ４は一緒になってＣ５〜Ｃ７のシクロアルキル基を形成し、該シクロアルキル基が１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、好ましくはピペラジン基を形成し、
Ｂは、ＯまたはＳまたはＮＨまたはハロゲン原子であり、
Ｒ１は
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は、１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキルアリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
であり、
Ｒ２は
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミノ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、各アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
ビアリール基、各アリール環は、１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作り、または各アリール環が、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり、
またはＢおよびＲ２は一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、その中の該シクロアルキル基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、
である。
該方法は、以下の式II
【化１４】
2010539155.tif 000018
（該式において、Ｂ、Ｒ２、Ｒ１およびＲ５は、式Iの化合物について上で定義された通りであり、ならびにＸはＢｒ、Ｃｌ、ＩまたはＮＨ２である。）
の化合物の反応工程を含む。
【００５３】
本発明の方法の第一の実施態様では、この反応工程は、ＸがＣｌ、ＢｒまたはＩであるところの式IIの化合物を、以下の式III
【化１５】
2010539155.tif 000019
（該式中、Ａ、Ｒ３およびＲ４は式Iについて定義された通りである。）
の化合物と、Ｐｄ（ＯＡｃ）２、Ｐｄ２ｄｂａ３とも呼ばれるトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムまたはＣｕＩから選択された触媒の存在下において、および任意的にリガンド、たとえばＢｉｎａｐとも呼ばれる２，２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１−ビナフチルまたはエチレングリコールまたはジケトンの存在下においてカップリングさせる工程である。
【００５４】
本発明の方法の第二の実施態様では、この反応工程は、ＸがＮＨ２であるところの式IIの化合物を、以下の式IV
【化１６】
2010539155.tif 000020
（該式中、ＹはＩ、ＢｒまたはＣｌであり、およびＲ６はＲ３またはＲ４である。）
の化合物とカップリングさせて、以下の式V
【化１７】
2010539155.tif 000021
の化合物を得る工程であって、
かつ、Ｒ３およびＲ４がＨと異なるときは、引き続いて式Vの化合物を、以下の式VI
【化１８】
2010539155.tif 000022
（該式中、ＹはＩ、ＢｒまたはＣｌであり、およびＲ６がＲ４であるときはＲ７はＲ３であり、またはＲ６がＲ３であるときはＲ７はＲ４である。）
の化合物とカップリングさせる工程が続き、
当該カップリング工程は塩基性条件において実施される。
【００５５】
本発明の方法のすべての実施態様では、ＸおよびＹがそれぞれ現われるときは、好ましくはこれらはＩまたはＢｒ、より好ましくはＩである。
【００５６】
本発明は、医薬として使用するための、本発明に従うまたは本発明の方法によって得られた化合物も提案する。
【００５７】
本発明の他の目的は、本発明のまたは本発明の方法によって得られた少なくとも１の化合物、および少なくとも１の医薬的に許容される添加剤を含む医薬組成物である。
【００５８】
本発明のさらなる目的は、本発明のまたは本発明の方法によって得られた少なくとも１の化合物を、本来的に腫瘍性か、あるいは非腫瘍性の細胞の異常増殖に起因する疾患を処置するための医薬の製造において使用する方法である。
【００５９】
本発明に従う当該使用方法の１の実施態様では、当該疾患は腫瘍、たとえば固形腫瘍（solid tumor）、転移性腫瘍もしくは非転移性腫瘍、または白血病である。
【００６０】
他の実施態様では、当該疾患はＣＤＫ５および／またはＣＤＫ１の異常活性が関与する神経変性疾患である。
【００６１】
より特には、当該神経変性疾患はパーキンソン病である。
【００６２】
しかし、当該神経変性疾患はアルツハイマー病および関連したタウパシーでもありうる。
【００６３】
さらに他の実施態様では、当該疾患はウイルス性疾患、たとえばＨＩＶ、ヘルペス、サイトメガロウイルス等々である。
【００６４】
また、本発明は、本発明のまたは本発明の方法によって得られた少なくとも１の化合物を疾痛の処置のための薬剤の製造において使用する方法を包含する。
【００６５】
さらにその上、本発明のまたは本発明の方法によって得られた少なくとも１の化合物は、腎疾患、たとえばメサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、崩壊性腎糸球体症、増殖性ループス腎炎、多発性嚢胞腎、糖尿病性ネフロパシー、急性腎損傷およびシスプラチン起因性腎臓毒性、の医薬の製造においてまたは処置方法において有利に使用される。
【００６６】
しかし、本発明の少なくとも１の化合物または本発明の方法によって得られた少なくとも１の化合物は、炎症、たとえば胸膜炎、関節炎、嚢胞性線維症または緑内障の医薬の製造においておよび／または処置方法においても関心が持たれる。
【００６７】
最後に、本発明の化合物は、２型糖尿病の場合に膵臓によるインスリン産生を高めることにも関心が持たれる。
【００６８】
本発明の少なくとも１の化合物の使用のすべての実施態様および変形では、好ましくは当該少なくとも１の化合物は以下の式Iａを有する。
【化１９】
2010539155.tif 000023
【００６９】
より好ましくは、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｂの化合物である。
【化２０】
2010539155.tif 000024
【００７０】
しかし、他の好まれる変形では、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｃの化合物である。
【化２１】
2010539155.tif 000025
【００７１】
しかし、本発明の少なくとも１の化合物の使用の他の好まれる変形では、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｄの化合物である。
【化２２】
2010539155.tif 000026
【００７２】
本発明の少なくとも１の化合物の使用の他の変形では、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｅの化合物である。
【化２３】
2010539155.tif 000027
【００７３】
しかし、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｆの化合物でもありうる。
【化２４】
2010539155.tif 000028
【００７４】
しかし、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｇの化合物でもありうる。
【化２５】
2010539155.tif 000029
【００７５】
さらにその上、当該少なくとも１の化合物は以下の式Iｈの化合物でもありうる。
【化２６】
2010539155.tif 000030
【００７６】
式Iａ〜Iｈの化合物の塩、水和物および立体異性体が、該少なくとも１の化合物として使用されることもできる。
【００７７】
以下に続く記載を読めば、本発明はより良く理解されかつそのさらなる特徴および利点が明らかになるであろうところ、該記載は実施例を参照して、および図を参照してなされており、該実施例は例示に過ぎなくかつ本発明の範囲を限定するものではなく、また図は「図面の簡単な説明」において説明されている。
【００７８】
本発明の化合物はロスコビチンの構造に近い構造を有するが、本発明の化合物はデアザプリンである。
【００７９】
より正確には、本発明の化合物は、以下の式I：
【化２７】
2010539155.tif 000031
を有し、
ここで
Ａは、ＣＨまたはＮまたはＯであり、
Ｒ３は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、または
＝Ｏ、または
（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル−Ｃ＝Ｏ基、その中の該アルキルは１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
であり、
Ｒ４は
Ｈ、または
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはアミノ基および／またはアルキルオキシ基および／またはケトン基によって置換されていてもよい、または
＝Ｏ、または
Ｏ＝ＣＣＦ３、または
エステル基、たとえばＯ−アシル基、または天然のもしくは非天然のアミノ酸から誘導されたアミノアシル基、またはアセチル基、またはニコチニル基によって置換されたＣ１〜Ｃ６のアルキル基、
であり、
またはＡ、Ｒ３およびＲ４は一緒になってＣ５〜Ｃ７のシクロアルキル基を形成し、該シクロアルキル基が１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、好ましくはピペラジン基を形成し、
Ｂは、ＯまたはＳまたはＮＨまたはハロゲン原子であり、
Ｒ１は
Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
Ｃ３〜Ｃ６のシクロアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基によって置換されていてもよい、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよい、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキルアリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
であり、
Ｒ２は
アリール基であって、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、各アリール環は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
ビアリール基、各アリール環は、１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または各アリール環が、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり
またはＢおよびＲ２は一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、その中の該シクロアルキル基は、１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、
である
前記化合物、ならびにその塩、水和物および立体異性体である。
【００８０】
式Iにおける好ましい置換基Ａ、ＢおよびＲ１〜Ｒ６、ならびにその式Ｉの好ましい化合物は、以前に明確にされた。
【００８１】
ロスコビチンと、式Iの化合物との間の本質的な差異は、ロスコビチンのコア中の７位の窒素が、式Iの化合物では炭素により置換されているということである。
【００８２】
別なように言及されると、ロスコビチンのコア中のピリミジン環は、本発明の化合物においてピリジン環により置換されている。
【００８３】
この違いは、本発明の化合物の重要な特徴であり、これは本発明の化合物に、それらの独特な特性を与える：それらは、図１において示されるとおり、先行技術のプリンタイプの化合物よりも、ピリドキサールキナーゼとのより弱い相互作用を有する。
【００８４】
実際に、本発明の化合物とピリドキサールキナーゼとの相互作用は、以下の方法（銀染色アッセイ）により決定された：
１００μMのロスコビチン、または１００μMの式1ｄの化合物、または１００μMの式Iｅの化合物を備えた１０００μｇのブタ脳ライセート（１０μｇ／μｌでのライセート１００μｌ）が、アガロースビーズ上にロードされ、そしてビーズバッファー（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ｐＨ  ７．４、５ｍＭのＮａＦ、２５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＮＰ−４０、１０μｇ／ｍｌのロイペプチン、アプロチニンおよび大豆トリプシンインヒビター、ならびに１００μＭのベンズアミジン）により洗浄された。
【００８５】
これらの試験の結果が図１において示される。
【００８６】
図１において見られるとおり、本発明の化合物は、ＣＤＫ５についての競合効果を示し、これは、それらが実際にその酵素との相互作用を有することを実証する。
【００８７】
ロスコビチンは、第２の標的ＥｒＫ２およびＰＤＸＫについての競合効果を示した。対照的に、本発明の化合物は、ピリドキサールキナーゼおよびＥｒＫ２についての競合効果を示さずまたはほとんど示さなかった。これは、これらのタンパク質が、本発明の化合物についての標的でないか非常に弱い標的であることを実証する。
【００８８】
別なふうに言うと、本発明の化合物は、ロスコビチンと比較して、ＣＤＫについての増大した特異性を示す。
【００８９】
加えて、該プリン誘導体と比べて、それらがＣＤＫ９（転写におけるその重要な役割の故に抑制されるべきでないキナーゼ）に対していくぶんより弱く抑制的であることに気づいた。
【００９０】
さらに、本発明者らは、式Ｉにおいて、Ｂ−Ｒ２がＮＨ２と異なるとき、または短い鎖長を有するとき、および好ましくは少なくとも１つのアリール基を有するとき、細胞生存率に対する式Ｉの化合物の効果が、ＣＤＫに対するそれらの効果におけるあまり大きくない差異にもかかわらず、増大されることを発見した。さらに、それらの選択性（ＣＤＫ９に対する減少された効果）におけるわずかな差異は、より少ない非特異的効果が、それらのプリンカウンターパートと比較して、これらの分子から予測されるることを示唆する。
【００９１】
このように、本発明の化合物は、３置換または４置換のイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、すなわち１−デアザプリン、である。
【００９２】
本発明の化合物は、ロスコビチンと比較して、種々のＣＤＫおよび細胞株に対するそれらの効果について試験された。
【００９３】
これらの試験およびそれらの結果は、本明細書以下において、「結果」と表題が付けられたセクションにおいて報告される。
【００９４】
さらに、ＡがＮである本発明のそれら化合物について、本発明者らは、それらの製造についての特に適切な方法を発見した。
【００９５】
この方法は、以下の式ＩＩを有する中間体化合物に基づき：
【化２８】
2010539155.tif 000032
ここで
ＢはＯまたはＳまたはＮＨであり、
Ｒ１は、
Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基により置換されていてもよい、または
Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基により置換されていてもよい、または
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３アルキルオキシ基により置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
Ｃ１〜Ｃ５アルキルアリール基、該アリール基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３アルキル基および／またはＣ１〜Ｃ３アルキルオキシ基により置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、
Ｒ２は
アリール基、該基は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
メチルビアリール基、各アリール環は１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい、または
メチルアリール基、該アリール環は、１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基によって置換されていてもよく、および／または１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作る、または
ビアリール基、各アリール環は１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、それによって２−ピリジル基または３−ピリジル基または４−ピリジル基または２−チエニル基または３−チエニル基を作り、または各アリール環が１以上のハロゲン原子および／またはヒドロキシ基および／またはＣ１〜Ｃ３のアルキルオキシ基および／またはＣＦ３基および／またはカルボン酸基および／またはカルボン酸エステル基および／またはアミン基によって置換されていてもよい、
であり
または、ＢおよびＲ２が一緒になって非芳香族環を形成し、
Ｒ５は
ハロゲン原子、または
水素原子、または
Ｃ１〜Ｃ５のアルキル基、該基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、または
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基、該シクロアルキル基は１以上のヒドロキシ基および／またはアミン基および／またはハロゲン原子および／またはカルボン酸基によって置換されていてもよい、
であり、
ＸはＣｌまたはＢｒまたはＩまたはＮＨ２である。
【００９６】
これらの中間体化合物もまたは、本発明の範囲内である。
【００９７】
式ＩＩのこれらの化合物へのアクセスが、以下のスキーム１に描かれている。
【化２９】
2010539155.tif 000033
【００９８】
３つの経路が、式ＩＩの前駆物質を調製するために用いられた：
経路ａ＝G. Cristalli and al, "Nucleosides and nucleotides", 1985, 4, 625-639において記載されたとおりに得られた５，７−ジクロロイミダゾピリジン  １が、塩基性条件下においてＲ１Ｘ（X＝BrまたはI）と反応させられて２を与え、これはさらにブタノール中で、ターシャリーアルキルアミン（例えばＮＥｔ３又はＮＢｕ３）を塩基として用いて、９０〜１００℃で、Ｒ２ＢＨと反応させられて、ＩＩａ  Ｘ＝Ｃｌ、を与えた。
経路ｂ＝既知の手順に従い、１についてと同様の条件下において調製された３のアルキル化が４をもたらし、これはテトラブチルアンモニウムナイトレートと反応させられて、ジニトロ化合物５を与えた。５とＲ２ＢＨとの、熱いブタノール中又は２０〜３０℃でのＤＭＦ中の反応が６を与え、これがＦｅ、ＨＣｌを用いて、ＩＩｂ  Ｘ＝ＮＨ２へと還元された；  ＩＩｂ  Ｘ＝ＮＨ２。ＩＩｂは、ＩＩｃ  Ｘ＝Ｂｒへと、又はＸ＝Ｉの場合、ＩＩｄ  へと転化されることができた。ＩＩｂのＩＩｄへの該転化は、ＣＨ２Ｉ２及び有機ナイトライト（organic nitrite）、例えばｔｅｒｔ−ブチルナイトライト又はイソペンチルナイトライト、中で加熱して、達成された。
経路ｃ＝第３の経路は、第２の経路に密接に関連する。アルキル化工程、すなわちＲ１基の導入がより早期に実施される。
【００９９】
式Ｉの化合物の製造の方法は、式ＩＩの化合物を使用する。
【０１００】
第１の実施態様において、該方法は、ＸがＣｌ、Ｂｒ又はＩ、好ましくはＩ、であるところの式ＩＩの化合物を使用する。
【０１０１】
この方法は、式ＩＩの化合物と、以下の式ＩＩＩ
【化３０】
2010539155.tif 000034
の求核試薬とのカップリングさせて、式Ｉの化合物を与える工程を含む。
【０１０２】
該カップリング手順は、塩基性条件下において、金属触媒、例えばＰｄ（ＯＡｃ）２、Ｐｄ２ｄｂａ３又はＣｕＩ、を用いる。
【０１０３】
該塩基は、カーボネート、例えばＣｓ２ＣＯ３、金属アルコラート、例えばｔｅｒｔ−ブチルＯＫ又はｔｅｒｔ−ブチルＯＮａ、でありうる。
【０１０４】
該金属触媒は、多くの場合において、添加されたリガンド、例えば（±）Ｂｉｎａｐ、Ｘａｎｔｐｈｏｓ、又はエチレングリコール又はジケトン、と一緒に用いられる。ジケトンリガンドの例は、Shafir et al in J. Amer. Chem. Soc. 2006, 126, 8742-8743及びShafir, J. Amer. Chem. Soc 2007, 129, 3490-3491により記載されている。
【０１０５】
しかし、第２の実施態様において、本発明の方法は、ＸがＮＨ２である式Ｉを使用する。
【０１０６】
この第２の実施態様において、１以上のカップリング工程が、求める置換基Ｒ３及びＲ４の性質によって実施される。
【０１０７】
すなわち、ＸがＮＨ２であるところの式ＩＩの求核化合物は、以下の式Ｖ
【化３１】
2010539155.tif 000035
の化合物を得る為に、
以下の式ＩＶ
【化３２】
2010539155.tif 000036
（ここで、ＹはＩ、Ｂｒ又はＣｌであり、且つＲ６はＲ３又はＲ４である）
を有する求電子剤とカップリングされる。
【０１０８】
最も好ましくは、ＹはＩである。
【０１０９】
次に、Ｒ３及びＲ４がＨと異なる場合、式Ｖの化合物は、以下の式VI
【化３３】
2010539155.tif 000037
の化合物とカップリングされ、
ここでＹはＢｒ又はＣｌ又はＩであり、最も好ましくはＩであり、及び、もし式ＶにおいてＲ６がＲ４であるならばＲ７はＲ３であり、またはもし式Ｖの化合物においてＲ６がＲ３であるならば、Ｒ７はＲ４である。
【０１１０】
これらのカップリング工程は、本発明の方法の第１の実施態様に関するように、塩基性条件下において実施される。
【０１１１】
より好ましくは、それぞれの出現において、Ｘ及びＹはＩ又はＢｒであり、そして最も好ましくはＩである。
【０１１２】
本発明は、好ましい実施態様により、今記載されるであろう。
【実施例１】
【０１１３】
実施例１：ペルハリジンＢ（式Ｉｂの化合物）の調製
【０１１４】
５，７−ジクロロ−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ２
ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の５，７−ジクロロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（５ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液が、氷浴中で冷却され、そしてＫ２ＣＯ３（１４．６ｇ、１０６．２ｍｍｏｌ）及び２−ブロモプロパン（１２．４７ｍＬ、１３２．８ｍｍｏｌ）により処理された。該混合物は、１８℃へと暖まることが許容され、そして一晩攪拌された。該ＤＭＳＯが、真空内で除去された。残留物と水（１００ｍＬ）との混合物が、ＡｃＯＥｔ（３ｘ３００ｍＬ）により抽出された。該抽出物が一緒にされ、ブライン（３００ｍＬ）により洗浄され、乾かされ（Ｎａ２ＳＯ４）、そして濃厚にされた。該残留物の、シリカゲル上での、トルエン−ＡｃＯＥｔ−ＣＨ２Ｃｌ２  ３：１：１によるクロマトグラフィーは、５，７−ジクロロ−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンを与えた（収率：５７％）。
2010539155.tif 000038
【０１１５】
７−ベンジルアミノ−５−クロロ−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン    ＩＩａ
１０ｍＬのＤＭＦ中の２（１．８７ｇ、８．１ｍｍｏｌ）とベンジルアミン（１．４ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）と１．５ｍｌのＥｔ３Ｎとの混合物が、室温で一晩、Ｎ２雰囲気下で攪拌された。ＤＭＦが、真空中で除去された。水（１５０ｍＬ）が添加され、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ１００ｍＬ）により抽出された。有機相が乾かされ（Ｎａ２ＳＯ４）、そして濃厚にされた。残留物の、シリカゲル上での、トルエン−ＡｃＯＥｔ  ３：２によるクロマトグラフィーが３を与えた（８２％）。３ａもまた、ｎ−ブタノール中における２、ベンジルアミン及びトリエチルアミンの混合物を９０℃で1時間加熱して調製されることができた。真空中で濃厚にした後、３ａは、７５％の収率でカラムクロマトグラフィーにより分離された。
2010539155.tif 000039
【０１１６】
ペルハリジンＢ：（Ｓ）−７−ベンジルアミノ−５−［（２−ブチル−１オール）アミノ］−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  Ｉｂ
７−ベンジルアミノ−５−クロロ−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、３ａ、の（５４０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）の懸濁物へ、（Ｓ）−（＋）−２−アミノ−１−ブタノールを有するトルエン（２０ｍＬ）中において、ポタシュームｔｅｒｔ−ブトキシド（２８２ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を用いて、還流するトルエン（２０ｍＬ）中における、パラジウムアセテート（４ｍｏｌ％）、及びＢＩＮＡＰ（４ｍｏｌ％）の存在下における。反応混合物は、Ｎ２下で５時間加熱された。冷却後、水（１０ｍＬ）が添加され、そして、ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｘ１０ｍＬ）により抽出された。有機相が乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）そして濃厚にされた。該残留物の、シリカゲル上でのＡｃＯＥｔ−１％  ＭｅＯＨによるクロマトグラフィーはＩｂ（４２％）を与えた。
2010539155.tif 000040
【実施例２】
【０１１７】
実施例２：ペルハリジンＡ（式Ｉａの化合物）の調製
本発明の方法の第１の実施態様により、ペルハリジンＡの合成が、３ａから、（Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−ブタノールが最後の工程で用いられたこと以外は、ペルハリジンＢについて記載されたとおりに、実施された。収率：３８％。
【実施例３】
【０１１８】
実施例３：ペルハリジンＤ（式Ｉｄの化合物）の調製
実施例２において詳述された同じ手順に従った。
この産物は、３ａについて記載されたとおりに、５０ｍＬのｎ−ブタノール中において、４−（２−ピリジル）ベンジルアミン  トリフルオロアセテート（０．１５ｍｏｌ）、トリエチルアミン５ｍＬ及び５，７−ジクロロ−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ２（０．１ｍｏｌ）の混合物を加熱して、調製された。
【０１１９】
５−クロロ−３−イソ−プロピル−７−［４−（２−ピリジル）−ベンジルアミノ］−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｂ
2010539155.tif 000041
【０１２０】
ペルハリジン  Ｄ：  （Ｓ）−７−［４−（２−ピリジル）−ベンジルアミノ］−５−［（２）−ブチル−１オール）アミノ］−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  Ｉｄ
収率：３５％。
2010539155.tif 000042
【実施例４】
【０１２１】
実施例４：ペルハリジンＣ（式Ｉｃの化合物）の調製
ペルハリジンＣの合成が、ＩＩｂから、（Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−ブタノールが最後の工程で用いられたこと以外はペルハリジンＤについて記載されたとおりに、実施された。収率：４７％。
【実施例５】
【０１２２】
実施例５：７−ニトロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンからのペルハリジンの調製
３−イソ−プロピル−７−ニトロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ４
７−ニトロ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ３のアルキル化が、２の合成についてと同じ条件において実施された。収率７６％。
2010539155.tif 000043
【０１２３】
３−イソ−プロピル−５，７−ジニトロ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ５
１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の２２．６３ｇのテトラブチルアンモニウムナイトレートの溶液、０℃、に、１０．３３ｍＬのトリフルオロ酢酸無水物が添加された。０℃での２０分の攪拌後、この溶液が、０℃に維持された１３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の３−イソプロピル−７−ニトロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ３  （１０．２１、０．０４９ｍｏｌ）へと添加された。０℃で２時間の攪拌後、該溶液が、ＮａＨＣＯ３の冷たい（５℃）飽和溶液中に、注がれる。有機相は、Ｈ２Ｏにより１回洗浄され、真空で、乾燥されそして濃厚にされた。収率９７％。
2010539155.tif 000044
【０１２４】
７−ベンジルアミノ−３−イソ−プロピル−５−ニトロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ６ａ
ＤＭＦ中５，７−ジニトロ−３−イソ−プロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、５、の溶液に、ＮＥｔ３及びベンジルアミンが添加された。２０℃での６時間の攪拌後、１５ｍＬのＥｔ２Ｏが添加され、そして沈殿した固体がろ過され、そしてＥｔ２Ｏにより洗浄された。
2010539155.tif 000045
ビアリール誘導体が、同じ方法により調製された。
【０１２５】
３−イソ−プロピル−５−ニトロ−７−[４−（２−ピリジル）−ベンジルアミノ]−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ６ｂ
2010539155.tif 000046
【０１２６】
５−アミノ−３−イソ−プロピル−７−ベンジルアミノ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｂ
３０ｍＬのＥｔＯＨ中の５．５ｇのＦｅの懸濁物に、２ｍＬの１２ＮのＨＣｌがゆっくりと添加された。該混合物が、７５℃で１時間攪拌された。６５℃で冷却後、１２ｍＬの２５％ＮＨ４Ｃｌ溶液が添加された。該混合物が５分攪拌され、そして６ａ（０．０２ｍｏｌ、５ｍＬのＥｔＯＨ中）が添加された。該混合物が７５℃で２時間加熱される。室温への冷却後、５ｇのセライトが添加され、該混合物がセライト上でろ過され、そして、残存する固形物がエタノールにより数回洗浄された。あわせられたろ液が濃厚にされ、そして、ＣＨ２Ｃｌ２及び１０％Ｎａ２ＣＯ３により抽出された。該有機相の濃厚化は、該アミンＩＩｂの結晶化をもたらした。収率：９８％。
2010539155.tif 000047
【０１２７】
５−アミノ−３−イソ−プロピル−７−[４−(２−ピリジル)−ベンジルアミノ]−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｃ
収率：９５％。
2010539155.tif 000048
【０１２８】
５−ベンジルアミノ−３−イソ−プロピル−７−ヨード−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｄ
化合物ＩＩｂが、以下のスキームに記載された手順により調製された。
【化３４】
2010539155.tif 000049
【０１２９】
第１の工程において、化合物２の合成において記載されたとおりの７−クロロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンのアルキル化が、７−クロロ−３−イソプロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ７をもたらす。テトラブチルアンモニウムナイトレート及びトリフルオロ酢酸無水物の混合物によるニトロ化が次に、５の合成において記載されたとおりに実施され、７−クロロ−３−イソプロピル−５−ニトロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ８を与える。該ニトロ基の還元が、ＩＩｂの合成において用いられた手順に従い、５−アミノ−７−クロロ−３−イソプロピル−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ９をもたらした。以下の工程において、そのときの該アミン  ９が、７−クロロ−５−ヨード−３−イソプロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  １０へと、ＣＨ２Ｉ２及びアルキルナイトライト（ｔｅｒｔ−ブチルナイトライト又はイソ−アミルナイトライト）を用いて転化された。見事に、ＩＩａの調製において記載されたとおり、誘導体ＩＩｄが１０から得られた。
【０１３０】
前に明確にされたように、Ｒ１により異なる一般式Ｖの化合物が、同じ手順により調製されることができた。
【化３５】
2010539155.tif 000050
【０１３１】
７−クロロ−３−イソプロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ７
2010539155.tif 000051
【０１３２】
７−クロロ−３−イソプロピル−５−ニトロイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ８
2010539155.tif 000052
【０１３３】
５−アミノ−７−クロロ−３−イソプロピル−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ９
2010539155.tif 000053
【０１３４】
７−クロロ−５−ヨード−３−イソプロピルイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  １０
2010539155.tif 000054
【０１３５】
ＩＩｄの調製
６０℃での１００ｍＬのＣＨ２Ｉ２中の０．１ｍｏｌの５−アミノ−３−イソ−プロピル−７−ベンジルアミノ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｂの攪拌された懸濁物に、０．２ｍｏｌイソペンチルナイトライトがゆっくりと添加された。６０℃での１時間の攪拌後、ジヨードメタンが、真空で蒸留された（０．１ｍｍ）。残留物が、ＣＨ２Ｃｌ２と飽和ＮａＨＣＯ３との混合物により溶解された。該有機相が分離され、そしてＨ２Ｏにより洗浄され、乾かされ、濃厚にされて、ＩＩｄを与えた。
収率：９５％
2010539155.tif 000055
【０１３６】
ビアリール誘導体ＩＩｅが、同じ方法により調製された。
３−イソ−プロピル−７−ヨード−５−［４−（２−ピリジル）−ベンジルアミノ］−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｅ
収率：９５％
2010539155.tif 000056
【０１３７】
３−イソ−プロピル−５−（４−Ｎ−アセチルシクロヘキシルアミン）−７−（ベンジルアミノ）−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン    Ｉｈ
Ｋ３ＰＯ４（９００ｍｇ、０．０２２ｍｏｌ）、ＣｕＩ（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、の混合物に、４ｍＬの１−ブタノール、０．５ｍＬのエチレングリコール、（０．０１０ｍｏｌ）  ５−ベンジルアミノ−３−イソ−プロピル−７−ヨード−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン  ＩＩｄ及びトランス−４−Ｎ−アセチルアミノシクロヘキシルアミン（０．０１０ｍｏｌ）が添加された。該フラスコが、窒素を流され、閉じられ、そして９０℃で１８時間加熱された。室温への冷却後、残留物が、ＣＨ２Ｃｌ２とＨ２Ｏとの混合物により溶解された。該有機相が乾かされ、そして濃厚にされた。カラムクロマトグラフィーが、３−イソ−プロピル−５−Ｎ−アセチルシクロヘキシルアミノ−７−［４−（２−ピリジル）−ベンジルアミノ］−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンを与えた。
収率９４％。
2010539155.tif 000057
同様に、ペルハリジンＡ、Ｂ、Ｃ及びＤが、ヨード誘導体ＩＩｄ又はＩＩｅから、７９％〜９５％の収率で得られた。
【実施例６】
【０１３８】
実施例６：３−イソ−プロピル−５−（１，３−ジヒドロキシプロピルアミノ）−７−［４−（２−ピリジル）−ベンジルアミノ］−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン。Ｉｉ、ペルハリジン  Ｅ。
【化３６】
2010539155.tif 000058
2010539155.tif 000059
【０１３９】
実施例１〜６において得られた化合物が、種々のキナーゼ及び細胞株に対するそれらの効果を決定する為に試験された。
【０１４０】
以下の材料及び方法が用いられた。
【０１４１】
バッファー
【０１４２】
バッファーＡ：１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、５０μｇヘパリン／ｍＬ。
【０１４３】
バッファーＣ：６０ｍＭのβグリセロホスフェート、１５ｍＭのｐ−ニトロフェニルホスフェート、２５ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．２）、５ｍＭのＥＧＴＡ、１５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのナトリウムバナデート、１ｍＭのフェニルホスフェート。
【０１４４】
キナーゼ調製物及びアッセイ
【０１４５】
キナーゼ活性が、バッファーＡ又はＣ中で、３０℃で、１５μＭの最終ＡＴＰ濃度でアッセイされた。ブランク値が差し引かれ、そして、活性が、最大の活性の％で、すなわちインヒビターの不在下において、表された。対照が、ジメチルスルホキシドの適切な希釈により実施された。
【０１４６】
ＣＤＫ１／サイクリンＢ（Ｍ期ヒトデ卵母細胞、天然型）及びＣＤＫ５／ｐ２５（ヒト、組み換え型）が、以前に記載されたとおりに（Leclerc s. et al., J Biol Chem 2001; 276:251-60.）調製された。キナーゼ活性が、バッファーＣ中で、１ｍｇヒストンＨ１／ｍｌにより、１５μＭの［γ−３３Ｐ］ＡＴＰの存在下において（３，０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；  １０ｍＣｉ／ｍｌ）、３０μｌの最終体積において、アッセイされた。３０℃での３０分のインキュベーション後、２５μｌの上清アリコートが、Ｗｈａｔｍａｎ  Ｐ８１ホスホセルロースペーパーの２．５ｘ３ｃｍ片上にスポットされ、そして２０秒後、該フィルターが５回（それぞれの回について少なくとも５分間）、１０ｍｌリン酸／水１リットルの溶液中で洗浄された。該湿ったフィルターが、１ｍｌのＡＣＳ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）シンチレーション流体の存在下において計数された。
【０１４７】
ＣＤＫ２／サイクリンＡ（ヒト、組換え型、昆虫細胞中で発現される）が、ＣＤＫ１／サイクリンＢについて記載されたとおりにアッセイされた。
【０１４８】
ＣＤＫ９／サイクリンＴ（ヒト、組換え型、昆虫細胞中で発現される）が、ｐＲＢ断片（アミノ酸７７３〜９２８）を基質として用いた以外は、ＣＤＫ１／サイクリンＢについて記載されたとおりにアッセイされた。
【０１４９】
ＧＳＫ−３α／β（ブタの脳、天然型、アフィニティ精製された）が、バッファーＡにおいて行われたこと及びＧＳＫ−３特異的基質を用いたこと以外は、ＣＤＫ１について記載されたとおりにアッセイされた（ＧＳ−１：
2010539155.tif 000060
）（Ｓｐは、リン酸化セリンを表す）（Bach S. et al. J Biol Chem 2005;280:31208-19）。
【０１５０】
ＣＫ１δ／ε（ブタの脳、天然型、アフィニティ精製された）が、ＣＫ１特異的ペプチド基質
2010539155.tif 000061
を用いたこと以外は、ＣＤＫ１について記載されたとおりにアッセイされた（Reinhardt J. et al. Protein Expr & Purif 2007;54:101-9）。
【０１５１】
細胞生物学
【０１５２】
抗体及び化学物質
ＡｃＤＥＶＤａｆｃ及びＱ−ＶＤ−ＯＰｈが、ＭＰｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（Ｖａｎｎｅｓ、フランス）から購入された。ＭＴＳ試薬を含むＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  ９６（商標）及びＣｙｔｏ  Ｔｏｘ  ９６（商標）キットが、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州、米国）から購入された。プロテアーゼインヒビターカクテルが、Ｒｏｃｈｅ（Ｐｅｎｚｂｅｒｇ、ドイツ）から購入された。他に言及されない限り、記載されていない試薬はＳｉｇｍａからのものであった。
【０１５３】
アクチンに対するモノクローナル抗体が、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ウィスコンシン州、米国）から購入された。レチノブラストーマタンパク質（Ｒｂ）に対するモノクローナル抗体が、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（サンディエゴ、カルフォルニア州、米国）から購入された。ホスホ−Ｓｅｒ２４９／Ｔｈｒ２５２−Ｒｂに対するポリクローナル抗体が、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、カリフォルニア州、米国）により提供された。ホスホ−Ｔｈｒ３２０−タンパク質ホスファターゼ  １α（ＰＰ１α）に対するポリクローナル抗体及びカスパーゼ−９に対するモノクローナル抗体が、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ（Ｄａｎｖｅｒｓ、マサチューセッツ州、米国）から購入された。ＲＮＡポリメラーゼＩＩ及びホスホ−Ｓｅｒ２−ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対するポリクローナル抗体が、Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、カリフォルニア州、米国）により供給された。Ｍｃｌ−１に対するポリクローナル抗体が、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、カリフォルニア州、米国）から入手された。
【０１５４】
細胞株及び培養条件
ＳＨ−ＳＹ５Ｙヒト神経芽細胞腫細胞が、ＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｅｒｇｙ  Ｐｏｎｔｏｉｓｅ、フランス）中で増殖された。ＨＥＫ２９３ヒト胎児由来腎臓細胞株が、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＭＥＭ培地中で増殖された。ヒト包皮初代線維芽細胞（Ｄｒ．Ｇｉｌｌｅｓ  Ｐｏｎｚｉｏより快く提供された）が、２ｍＭのＬ−グルタミン及び２０ｍＭのＨＥＰＥＳを補われたＤＭＥＭ中で増殖された。全ての培地は、Ｌｏｎｚａからの抗生物質（ペニシリン−ストレプトマイシン）及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからの１０体積％のＦＣＳを補われた。細胞は、３７℃で、５％ＣＯ２とともに培養された。薬剤処理が、指数関数的に増殖する培養物に対して、指示された時間及び濃度で、実施された。対照実験は、ＤＭＳＯの適切な希釈を用いて実施された。ＭＤＣＫ細胞株が、化合物ＰＫＤを試験する為に用いられた。
【０１５５】
細胞死及び細胞生存評価
細胞生存が、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）の還元を測定することにより決定された。細胞死は、細胞溶解の際に放出されるラクテートデヒドロゲナーゼ活性（ＬＤＨ）の水準を測定することにより決定された。両方の手順は、以前に詳細に記載された（Ribas J. et al. Oncogene 2006; 25:6304-18）。
【０１５６】
カスパーゼアッセイ
カスパーゼ活性が、該培養培地へのＡｃＤＥＶＤａｆｃ合成基質の直接の添加、界面活性剤溶解、及び３７℃でのインキュベーション後に、該ＡｃＤＥＶＤａｆｃ合成基質から放出された蛍光を決定することにより測定された。この方法は、９６マルチウェルプレートフォーマットのために工夫される。それは、カスパーゼ活性化の動的決定及び複数の薬剤の特徴付けを同時に許す（Ribas J. et al. Oncogene 2006; 25:6304-18）。
【０１５７】
電気泳動及びウェスタンブロッティング
細胞が３０分間、４℃で、ホモジナイゼーションバッファー［60 mM  β−グリセロホスフェート、15ｍＭのｐ−ニトロフェニルホスフェート、２５ｍＭのMOPS (pH 7.2)、15 mMの EGTA、15 mMのMgCl2、1 mMのジチオトレイトール、1 mMのナトリウムバナデート、1 mMのNaF、1 mMのフェニルホスフェート、0.1 %のNonidet P-40及びプロテインインヒビターカクテル］中に再懸濁されそして溶解され、そして超音波処理された。遠心（４℃で、１５分間の１４０００ｒｐｍ）後、タンパク質濃度が、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）により、上清中において決定された。
【０１５８】
細胞全体の抽出物が、１００ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、１ｍＭのＥＤＴＡ、２％のＳＤＳ及びプロテアーゼインヒビターカクテルを含むバッファー中に調製された。５分間の加熱変性に続き、タンパク質が、１０％又は７％のＮｕＰＡＧＥ  ｐｒｅ−ｃａｓｔ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ又はＴｒｉｓ−Ａｃｅｔａｔｅ  ポリアクリルアミドミニゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で、ＭＯＰＳ  ＳＤＳ（シトクロムＣ、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ及びホスホ−Ｓｅｒ２−ＲＮＡポリメラーゼＩＩウェスタンブロット以外の全て）、ＭＥＳ  ＳＤＳ（シトクロムＣ）、又はＴｒｉｓ−Ａｃｅｔａｔｅ  ＳＤＳ（ＲＮＡポリメラーゼＩＩ及びホスホ−Ｓｅｒ２−ＲＮＡポリメラーゼＩＩ）のランニングバッファーと一緒に、タンパク質サイズによって、分離された。タンパク質は、０．４５μｍニトロセルロースフィルター（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｅｌｌ）に移された。これらが、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水−Ｔｗｅｅｎ−２０中の５％低脂肪乳により、ブロックされ、抗体（抗アクチン：    １：２０００）と一緒に１時間、又は４℃で一晩（シトクロムＣ：    １：５００）、Ｒｂ（１：５００）、ホスホ−Ｒｂ（１：５００）、ホスホ−Ｔｈｒ３２０−ＰＰ１α（１：１０００）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（１：５００）、ホスホ−Ｓｅｒ２−ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（１：５００）、Ｍｃｌ−１（１：５００）、カスパーゼ−９（１：１０００）と一緒に、インキュベートされ、そして、Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）により分析された。
【０１５９】
生物学的試験の結果
本発明の化合物の効果
【０１６０】
精製されたキナーゼに対する効果
ペルハリジンＡ及びＢ（Ｓ及びＲ異性体）並びにそれらの前駆体が、種々の、分離され、精製された疾病関連タンパク質キナーゼに対して試験された。（Ｒ）−ロスコビチンが並行して試験され、そして、参照化合物として用いられた。結果が、以下の表４及び５において、μＭで表されたＩＣ５０として提供される。
【０１６１】
2010539155.tif 000062
【０１６２】
表４に提示された結果は、ペルハリジンの合成を許すために合成された種々の中間体を示す。例Ｉｂはロスコビチンに最も近いホモログであり、そして、それらの生物学的効果が比較される。これは、化合物Ｉｂが、分離されたキナーゼに対して、ロスコビチンと非常に類似の効果を示すが、細胞増殖に対する改善された有効性を示すことを、示す。
【０１６３】
ペルハリジンＥ、化合物Ｉｉ、に関して、それは０．３４μＭのＣＤＫ５についてのＩＣ５０、及び０．２８μＭのＣＫ１に対するＩＣ５０を示す。
【０１６４】
該化合物は、方法の項で記載されたとおり、該キナーゼアッセイにおいて種々の濃度で試験された。ＩＣ５０値は、示された用量応答曲線から計算され、そして、以下の表５におてμＭで報告された。
【０１６５】
2010539155.tif 000063
【０１６６】
（Ｒ）−ペルハリジン（式Ｉａの化合物）のように、その（Ｓ）−異性体（式Ｉｂの化合物）、並びに式Ｉｃ及びＩｄの化合物が、ＣＤＫに対する有効性を示し、これは（Ｒ）−ロスコビチンのそれらと同様であることを表５は示す。しかしながら、ＣＤＫ９及びＤＹＲＫ１Ａは、（Ｒ）−ロスコビチンに対するよりも、これらのデアザプリンに対していくぶんより少なく感受性であるとみえる。
【０１６７】
細胞生存に対するペルハリジンの効果
ペルハリジンＡ及びＢ（Ｒ及びＳ異性体）並びにそれらの前駆物質、並びに式Ｉｃ及びＩｄの化合物が、種々の細胞株に対して試験された（ＭＴＳアッセイによる生存水準のアッセイ）。（Ｒ）−ロスコビチンが並行して試験されそして、参照化合物として用いられた。結果は、図３及び５並びに表４において並びに以下の表６において、μＭで表されたＩＣ５０値として提供される。
【０１６８】
2010539155.tif 000064
【０１６９】
これらの化合物の効果は以下についても評価された。
【０１７０】
細胞生存（結果は図３及び５において示される）
カスパーゼ活性化（結果は図４及び６において示される）
ＣＤＫ２／ＣＤＫ４部位でのレチノブラストーマタンパク質ホスホリル化（結果は図６及び７において示される）
図６から、化合物Ｉｃは、細胞中で、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度でＣＤＫ２／４を抑制する一方で、式Ｉａの化合物及び式Ｉｂの化合物は、（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の効果を有することが結論付けられることができ、そして、図８から、（Ｒ）−ロスコビチン及び式Ｉａ、Ｉｂ及びＩｃの化合物により、全体のＲｂは本質的に一定であることが結論付けられることができる。
【０１７１】
ＲＮＡポリメラーゼＩＩ  Ｓｅｒ２ホスホリル化、ＣＤＫ９／サイクリン  Ｔホスホリル化部位。
結果が図９及び１０において示される。
図９から、式Ｉｃの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度で、細胞中においてＣＤＫ９を抑制する一方で、式Ｉａの化合物及び式Ｉｂの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の有効性を有することが結論付けられることができ、そして図１０から、全ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩは、式Ｉａの、式Ｉｂの及び式Ｉｃの化合物によるのと同様に、（Ｒ）−ロスコビチンにより、本質的に一定のままであることが結論付けられることができる。
【０１７２】
Ｔｈｒ３２０（ＣＤＫ１／サイクリンホスホリル化部位）上のプロテインホスファターゼ１−αホスホリル化
結果が図１１において示される。
図１１から、式Ｉｃの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度で、細胞中においてＣＤＫ１／サイクリンＢを抑制する一方で、式Ｉａの及び式Ｉｂ化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の有効性を有することが結論付けられうる。
【０１７３】
生存因子Ｍｃｌ−１の下方制御
結果が図１２において示される。
図１２から、式Ｉｃの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度で、細胞中において生存因子Ｍｃｌ−１を下方制御する一方で、式Ｉａの及び式Ｉｂの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の効力を有することが結論付けられうる。
【０１７４】
ｐ５３全体タンパク質発現
結果が図１３において示される。
図１３から、式Ｉｃの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度で、細胞中においてｐ５３全体タンパク質発現を誘発する一方で、式Ｉａの及び式Ｉｂの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の有効性を有することが結論付けられうる。
【０１７５】
ｐ２７全体タンパク質下方制御
結果が図１４において示される。
図１４から、式Ｉｃの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度で、細胞中においてｐ２７全体タンパク質を下方制御する一方で、式Ｉａの及び式Ｉｂの化合物が（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の有効性を有することが結論付けられうる。
【０１７６】
ＰＡＲＰ開裂
結果が図１５において示される。
図１５から、式Ｉｃの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンよりも低い濃度で、細胞中においてＰＡＲＰ開裂を誘発し、一方で式Ｉａの及び式Ｉｂの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンの１つと同様の効力を有することが結論付けられうる。
【０１７７】
アクチン全体タンパク質水準が、全ての化合物についてローディング対照（loading control）として用いられた。結果が図１６において示され、ゲル中における等しいローディングを実証する。
要約すると、これらの結果は、以下を示す。
［１］式Ｉａの化合物及び式Ｉｂの化合物が、（Ｒ）−ロスコビチンにより示される抗増殖活性と同様の抗増殖活性を示す。（Ｓ）異性体（式Ｉｂの化合物）は、ロスコビチンの（Ｓ）異性体について報告されるように、いくぶんより有効でない。
［２］対照的に、そして非常に驚くべきことに、式Ｉｃ及びＩｄの化合物は、それらがキナーゼに対するかなり類似の効果を有するという事実にも関わらず、（Ｒ）−ロスコビチンと比較して、非常に増大した抗増殖活性を示す（２０〜１００倍）。予想外に、（Ｒ）−ロスコビチンと対照的に、該（Ｓ）異性体は、該（Ｒ）異性体よりも活性である（表６）。
［３］これらの効果及び能力の順序が、ＣＤＫ抑制のマーカーに関与する分子アクター（molecular actor）（ＣＤＫ２／ＣＤＫ４：レチノブラストーマタンパク質ホスホリル化；ＣＤＫ１：プロテインホスファターゼ１α  Ｔｈｒ３２０ホスホリル化；ＣＤＫ９：ＲＮＡポリメラーゼＩＩ  Ｓｅｒ２ホスホリル化、ｐ２７下方制御）及びアポトーシス細胞死が分析されたとき（ｐ５３発現、生存因子Ｍｃｌ−１の下方制御、カスパーゼ活性化、ＰＡＲＰ開裂）に、確認される（図４〜９）。
【０１７８】
これらの化合物はすなわち、それらのＣＤＫ標的に対する見たところ同様の効果にもかかわらず、細胞死及び細胞増殖停止の誘発に対するそれらの効果において、ロスコビチンを超えて、非常に有利である。これらの結果は、第２の標的、例えばピリドキサールキナーゼ、との減少された相互作用に関連するとみえる（図１）。
【０１７９】
ロスコビチン及び類似体の、Ｂ２−ＣＬＬリンパ球に対する及び代表的ＣＤＫのキナーゼ活性に対する効果。（Ｒ）−ロスコビチン及びペルハリジンのいくつかが、患者から得られた分離されたＢ２−ＣＬＬリンパ球に対して種々の濃度で試験された。細胞生存率が、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２／Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）の還元を測定することにより決定された。細胞死は、細胞溶解に際して放出されたラクテートデヒドロゲナーゼ活性（ＬＤＨ）の水準を測定することにより決定された。両方の手順は、以前に、Ribas J, Boix J. Cell differentiation, caspase inhibition, and macromolecular synthesis blockage, but not BCL-2 or BCL-XL proteins, protect SH- SY5Y cells from apoptosis triggered by two CDK inhibitory drugs. Exp. Cell Res. 2004; 295, 9-24、において詳細に記載された。
【０１８０】
同じ化合物が、ＬＬＣ  Ｂ細胞に対して試験された。ＩＣ５０値（用量応答曲線から計算された）が、以下の表にμＭで報告される。
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【０１８１】
ＰＫＤにおけるペルハリジンの利益を評価する為に、本発明の化合物は、ＭＤＣＫ細胞に対しても試験された。ペルハリジンＤ及びＥが、ロスコビチンよりも５０〜７０倍より強力であると分かった。
【０１８２】
さらに、化合物Ｉｉも試験された。それは、特に、ＣＤＫ５及びＣＫ１に対する、０．３５及び０．２８μＭのＩＣ５０を有する強力なキナーゼインヒビターであるとみえる。
【０１８３】
すなわち、本発明の化合物又は本発明の方法により得られた化合物は、それらの独特な生物学的特性により、上記実施例において示されるとおり、医薬の製造における使用にとって、大きな利点を有する。
【０１８４】
実際に、それらは、ロスコビチンと少なくとも同一の生物学的効果、そしてロスコビチンよりも優れた生物学的効果さえを有するだけでなく、それらはピリドキサールキナーゼとの少ない相互作用を有し又はピリドキサールキナーゼとの相互作用を有さない。
【０１８５】
別の言い方では、それらは、医薬組成物中の活性成分として用いられうる。それらの使用方法は、細胞（腫瘍性又は腫瘍性でない）の異常増殖が関与する疾患の処置の為の医薬の製造にとって、大きな利点を有する。そのような疾患は、特には、腫瘍、又は白血病、又は、種々の腎臓病において観察される非腫瘍性だが異常な増殖である。しかし、ＣＤＫ５に対するそれらの効果及び分化した細胞、特に神経細胞、に対するそれらの抗アポトーシス特性に起因して、それらは、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病又はパーキンソン病、の処置において、又は卒中、虚血及び疼痛の処置においても用いられうる。さらに、それらは、ＣＤＫ２及びＣＤＫ９に対するそれらの効果に起因して、ウィルス性疾患を処置する為の医薬の製造の為にも用いられうる。
【０１８６】
さらに、それらは、それらのＣＤＫ５、及びアポトーシスに対する効果の故に、腎臓疾患、特には例えばメサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、崩壊性腎糸球体症（collapsing glomerulopathy）、増殖性ループス腎炎、多発性嚢胞腎（ＰＫＤ）、糖尿病性ネフロパシー、及び急性腎損傷、の医薬の製造及び当該疾患の処置の方法において、並びに、炎症、胸膜炎、関節炎及び緑内障を処置する為に用いられうる。それらは、ＣＤＫ５に対するそれらの効果、そして結果として膵臓細胞においてインスリン分泌を増すそれらの能力を考えると、ＩＩ型糖尿病の処置においても用いられうる。
【０１８７】
本発明の化合物又は本発明の方法により得られた化合物は、医薬の製造の為に、又は特定の疾患を処置する為に、単独で、又は本発明の２以上の化合物の混合物として、又は処置されるべき特定の疾患に対して効果を有すると知られている従来技術の他の化合物と一緒にでさえ、用いられうる。
【０１８８】
式Ｉａ〜Ｉｉの化合物は特に、上記言及された疾患の処置において適している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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