(57)【要約】本発明は、一般式（Ｉ）の化合物またはそれらの塩類、水和物、溶媒和物、ラセミ体、もしくは光学異性体を含むアンブリセンタンの誘導体および代謝産物に関し、ここでR1は-Hまたは-OCH3であり;R2は-H、低級アルキル（例えばC1〜C4アルキル）またはグリコシジルであり；R3およびR4は独立して-CH3、-C(O)Hまたは-CH2OR6であり、ここでR6は-Hまたは１〜２０個の炭素原子を有するヒドロカルビル基である。一部の態様において、式（Ｉ）の化合物はＥＴＡ受容体に選択的な親和性を示し、エンドセリン受容体拮抗剤として役立つ。一部の態様において、化合物は、例えば前臨床または臨床試験において解明された、シトクロムＰ４５０またはウリジン二リン酸グルクロノシルトランスフェラーゼ酵素の酵素作用により生成するアンブリセンタンの代謝産物に一致する。2010535210.tif 000053【選択図】図１
2010535210.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
純粋または単離された形の、アンブリセンタンのヒト臨床試験での代謝産物。
【請求項２】
第Ｉ相代謝経路によるアンブリセンタンの代謝の産物である、請求項１に記載のヒト臨床試験での代謝産物。
【請求項３】
第ＩＩ相代謝経路によるアンブリセンタンの代謝の産物である、請求項１に記載のヒト臨床試験での代謝産物。
【請求項４】
純粋または単離された形の、アンブリセンタンの前臨床ＡＤＭＥ代謝産物。
【請求項５】
インビボでのシトクロムＰ４５０のアンブリセンタンへの酵素作用により生成される代謝産物。
【請求項６】
インビボでのウリジン二リン酸グルクロノシルトランスフェラーゼのアンブリセンタンへの酵素作用により生成される代謝産物。
【請求項７】
一般式（Ｉ）の化合物
【化１】
2010535210.tif 000035
ならびにそれらの医薬的に許容できる塩類、水和物、溶媒和物、光学異性体、およびラセミ体から選択される、単離された形の化合物または化合物類であって、
R1が-OHまたは-OCH3であり;
R2が-H、低級アルキルまたはグリコシジルであり;ならびに
R3およびR4が独立して-CH3、-C(O)Hまたは-CH2OR6であり;ここでR6は-Hまたは1〜20個の炭素原子を有するヒドロカルビル基であり;
化合物がアンブリセンタンではない化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物であって、
R1が-OHまたは-OCH3であり;
R2が-Hまたはグリコシジルであり;ならびに
R3およびR4が独立して-CH3または-CH2OHである化合物。
【請求項９】
R2が-Hまたはグルクロニジルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
R1が-OHであり、R3が-CH2OHであり、またはR4が-CH2OHである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
化合物が式（ＩＩＩ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物
【化２】
2010535210.tif 000036
。
【請求項１２】
化合物が式（ＩＶ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩
【化３】
2010535210.tif 000037
。
【請求項１３】
化合物が式（Ｖ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩
【化４】
2010535210.tif 000038
。
【請求項１４】
化合物が式（ＶＩ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩
【化５】
2010535210.tif 000039
。
【請求項１５】
化合物が式（ＶＩＩ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩
【化６】
2010535210.tif 000040
。
【請求項１６】
化合物が式（ＶＩＩＩ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩
【化７】
2010535210.tif 000041
。
【請求項１７】
化合物が式（ＩＸ）の化合物から選択される、請求項７に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩
【化８】
2010535210.tif 000042
。
【請求項１８】
光学活性な化合物を含む、請求項７に記載の化合物。
【請求項１９】
不斉炭素に関してＳ配置を有する、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
重水素化された化合物を含む、請求項７に記載の化合物。
【請求項２１】
トリチウム化された化合物を含む、請求項７に記載の化合物。
【請求項２２】
化合物が１３Ｃで標識されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項２３】
化合物が１４Ｃで標識されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項２４】
化合物が実質的に純粋である、請求項７に記載の化合物。
【請求項２５】
化合物の純度が５０％またはそれより大きい、請求項７に記載の化合物。
【請求項２６】
化合物の純度が少なくとも９０％である、請求項７に記載の化合物。
【請求項２７】
式（ＩＩ）の化合物
【化９】
2010535210.tif 000043
ならびにそれらの医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、単離された形の光学活性な化合物であって、
R1が-OHまたは-OCH3であり;
R2が-Hまたはグルクロニジルであり;
R3-およびR4が独立して-CH3または-CH2OHであり;ならびに、さらに
光学活性な化合物がアンブリセンタンではない化合物。
【請求項２８】
R2がグルクロニジルである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
R1が-OHである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３０】
R3およびR4の少なくとも一方が-CH2OHである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３１】
R3およびR4が-CH2OHである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３２】
次の式の化合物
【化１０】
2010535210.tif 000044
、ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３３】
次の式の化合物
【化１１】
2010535210.tif 000045
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３４】
次の式の化合物
【化１２】
2010535210.tif 000046
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３５】
次の式の化合物
【化１３】
2010535210.tif 000047
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３６】
次の式の化合物
【化１４】
2010535210.tif 000048
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３７】
次の式の化合物
【化１５】
2010535210.tif 000049
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３８】
次の式の化合物
【化１６】
2010535210.tif 000050
ならびにその医薬的に許容できる塩類、水和物、および溶媒和物から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３９】
インビボの方法であって、アンブリセンタンを哺乳類に投与し、その後その哺乳類の組織または体液中のアンブリセンタンの代謝産物のレベルまたは濃度を検出および／または測定することを含み、その代謝産物がその医薬的に許容できる塩類、ラセミ体、および光学異性体を含む式（Ｉ）の化合物または化合物類を含み
【化１７】
2010535210.tif 000051
R1が-OHまたは-OCH3であり、
R2が-Hまたはグルクロニジルであり;ならびに
R3およびR4が独立して-CH3または-CH2OHである方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法であって、体液が血漿、胆汁、尿、および便からなるグループから選択される方法。
【請求項４１】
R2がグルクロニジルである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
R1が-OHである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
R3またはR4が-CH2OHである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
請求項３９に記載の方法であって、哺乳類に投与されたトリチウム化された、または１４Ｃ標識されたアンブリセンタン分子からの核崩壊産物を検出することを含む方法。
【請求項４５】
１３Ｃで高められた（１３Ｃ  ｅｎｈａｎｃｅｄ）アンブリセンタンを哺乳類に投与することを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４６】
代謝産物が不斉炭素に関してＳ配置を有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
医薬的に許容できるキャリヤーおよび０．１重量％〜９０重量％の有効物質を含む医薬剤形であって、有効物質が一般式（Ｉ）の化合物
【化１８】
2010535210.tif 000052
ならびにそれらの医薬的に許容できる塩類、水和物、溶媒和物、光学異性体、およびラセミ体から選択される少なくとも１種類の化合物を含み、
R1が-OHまたは-OCH3であり;
R2が-H、低級アルキルまたはグリコシジルであり;ならびに
R3およびR4が独立して-CH3、-C(O)Hまたは-CH2OR6であり;ここでR6は-Hまたは1〜20個の炭素原子を有するヒドロカルビル基であり;
化合物がアンブリセンタンではない化合物、
である上記剤形。
【請求項４８】
請求項４７に記載の医薬剤形であって、
R1が-OHまたは-OCH3であり、
R2が-Hまたはグルクロニジルであり;ならびに
R3-およびR4が独立して-CH3または-CH2OHである剤形。
【請求項４９】
R2がグルクロニジルである、請求項４８に記載の剤形。
【請求項５０】
R1が-OHであり、R3が-CH2OHであり、またはR4が-CH2OHである、請求項４８に記載の剤形。
【請求項５１】
化合物が光学活性な異性体である、請求項４８に記載の剤形。
【請求項５２】
エンドセリン受容体拮抗剤に関する臨床適応である疾患状態を示す対象哺乳類を処置する方法であって、哺乳類に請求項４７〜５１のいずれかに記載の剤形を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  本教示は、選択的エンドセリン受容体拮抗剤（ＥＲＡ）であるアンブリセンタンの代謝産物および誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  エンドセリン類は、血管系における内皮細胞、肺、腎臓、胃腸細胞、およびマクロファージにより合成され放出されるペプチドのファミリーである。エンドセリンファミリーは、３種類の２１−α−アミノ酸イソペプチド類（ＥＴ−１、ＥＴ−２、およびＥＴ−３）からなる。エンドセリン−１（ＥＴ−１）は、主要な心血管イソペプチドとして同定された。
【０００３】
[0003]  ＥＴ−１は、自己分泌および傍分泌の方式で、タイプＡ（ＥＴＡ）およびタイプＢ（ＥＴＢ）エンドセリン受容体サブタイプを介して作用する。ＥＴＡ受容体は血管平滑筋細胞上に位置し、それらの活性化は血管収縮および有糸分裂誘発を仲介する。ＥＴＢ受容体は主に内皮細胞上に位置しており、そこでそれらは内皮細胞の一酸化窒素の合成の活性化および受容体を介したエンドサイトーシスによるＥＴ−１のクリアランス（ｃｌｅａｒａｎｃｅ）を介して血管拡張を刺激する。しかし、一部のＥＴＢ受容体は平滑筋細胞上にも位置しており、そこでそれらは血管収縮および細胞増殖を仲介している。ＥＴＡ受容体の活性化は、心筋細胞の肥大および腎臓における線維芽細胞の増殖に関する強力な刺激でもある。
【０００４】
[0004]  ヒトの血管において、ＥＴ受容体の集団の８５％はＥＴＡ受容体からなり、これはこの受容体単独の拮抗が主要な療法上の利益になる可能性があることを示唆している。さらに、ＥＴＡの選択的な拮抗は、ＥＴ−１により内皮細胞上のＥＴＢ受容体を介して誘導される自然な血管拡張およびクリアランス反応を保つことにより好都合であると考えられる。
【０００５】
[0005]  これらの動物モデルからの結果に基づいて、肺高血圧、全身性高血圧、慢性腎臓病、および血管形成後の再狭窄を含め、ＥＲＡに関するいくつかの可能性のある臨床適応が存在する。
【０００６】
[0006]  アンブリセンタンは(S)-2-[(4,6-ジメチルピリミジン-2-イル)オキシ]-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロピオン酸である。それは経口で有効な、非スルホンアミドの、プロパン酸クラスのエンドセリン受容体拮抗剤（ＥＲＡ）であり、それはエンドセリンタイプＡ（ＥＴＡ）受容体に選択的である。そのＳ／Ｒラセミ混合物が、例えばRiechers et al.、米国特許第7,109,205号において記述されており、その開示を援用する。ヒトの心室組織においてアンブリセンタンを用いて実施された研究は、ＥＴＡ受容体への高い親和性（低いＫｉ）およびＥＴＢ受容体と比較して１０００倍よりも大きいＥＴＡ選択性を示した。ＥＴＡ受容体の選択的な阻害は、ホスホリパーゼＣに仲介される血管収縮およびプロテインキナーゼＣに仲介される細胞増殖を阻害し、一方でエンドセリンタイプＢ（ＥＴＢ）受容体と関係する一酸化窒素およびプロスタサイクリンの産生、環状ＧＭＰおよび環状ＡＭＰに仲介される血管拡張、ならびにエンドセリン−１（ＥＴ−１）のクリアランスを保つ。
【０００７】
[0007]  アンブリセンタンはヒトにおける臨床試験の対象であった。
[0008]  Ｍｙｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．の２００３年１２月４日のニュース公開
【０００８】
【化１】
2010535210.tif 000003
【０００９】
は、ＰＡＨにおけるアンブリセンタンの第ＩＩ相試験の完了および第ＩＩＩ相試験の開始を公示した。公開は、第ＩＩＩ相試験が１日１回投与されるアンブリセンタンの２．５ｍｇ、５．０ｍｇおよび１０．０ｍｇの経口投与量を評価するであろうと述べた。
【００１０】
[0009]  Ｍｙｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．の２００４年１月８日のニュース公開
【００１１】
【化２】
2010535210.tif 000004
【００１２】
は、ＰＡＨの処置に関するアンブリセンタンの第ＩＩＩ相臨床試験における患者の登録を公示した。ニュース公開によると、第ＩＩ相試験は、試験した４種類のアンブリセンタン投与量のグループ全てにおいて主要有効性エンドポイント（６ＭＷＤにより測定した運動能力）で統計的に有意であり臨床的に意味のある増大を示した。
【００１３】
[0010]  Ｍｙｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．の２００４年２月１６日のニュース公開
【００１４】
【化３】
2010535210.tif 000005
【００１５】
は、ＰＡＨにおけるアンブリセンタンの第ＩＩ相試験の詳細な結果についての、米国胸部学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）（ＡＴＳ）２００４年国際会議において近く行われる発表を公示した。(Rubin (2004) ”アンブリセンタンは肺動脈高血圧において運動能力および臨床での測定値を向上させる”、ＡＴＳ  ２００４年５月２１〜２６日。)
[0011]  Ｍｙｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．の２００４年５月２４日のニュース公開
【００１６】
【化４】
2010535210.tif 000006
【００１７】
は、第ＩＩ相試験において見られた６ＭＷＤ、ＢＤＩおよびＷＨＯ機能分類における向上を報告した。さらに、ニュース公開はアンブリセンタンが１日１回の投与に適していることについて言及した。
【００１８】
[0012]  Ｍｙｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．の２００５年２月１０日のニュース公開
【００１９】
【化５】
2010535210.tif 000007
【００２０】
は、ＰＡＨの患者におけるアンブリセンタンの効果を記述した２本の要約がＳａｎ  ＤｉｅｇｏでのＡＴＳ２００５における発表のために選ばれたことを公示した。(Galiee (2005)”肺動脈高血圧におけるアンブリセンタンの長期安全性および有効性、一年間の追跡検査”、ＡＴＳ  ２００５年５月２３日；Frost (2005)”アンブリセンタンはＷＨＯクラスＩＩおよびＩＩＩのＰＡＨ患者に関して６ＭＷＤを比較できるほどに向上させる” ＡＴＳ  ２００５年５月２２日。)。
【００２１】
[0013]  Ｍｙｏｇｅｎ，  Ｉｎｃ．の２００５年５月１９日のニュース公開
【００２２】
【化６】
2010535210.tif 000008
【００２３】
は、以前に肝臓機能検査（ＬＦＴ）の異常、特に高い血清アミノトランスフェラーゼ濃度によりボセンタンまたはシタックスセンタン療法を中断したＰＡＨの患者においてアンブリセンタンを評価するための臨床試験の開始を報告した。
【００２４】
[0014]  Rubin et al. (2005) Future Cardiol. 1(4):1-8は、１２週間のアンブリセンタン処置の後に全ての患者に関してベースラインから平均で３６メートル増加する平均６ＭＷＤの向上を報告した。
【００２５】
[0015]  Galiee et al. (2005) J. Am. Coll. Cardiol. 46(3):529-535は、ＰＡＨの患者におけるアンブリセンタンの有効性および安全性を検査する無作為抽出した用量範囲探索試験の結果を報告した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】米国特許第7,109,205号
【非特許文献】
【００２７】
【非特許文献１】Rubin et al. (2005) Future Cardiol. 1(4):1-8
【非特許文献２】Galiee et al. (2005) J. Am. Coll. Cardiol. 46(3):529-535
【発明の概要】
【００２８】
[0016]  アンブリセンタンの代謝産物は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、および犬において同定および決定されている。１観点において、その代謝産物は式（Ｉ）を有する化合物であり、
【００２９】
【化７】
2010535210.tif 000009
【００３０】
ここで、R1は-OHまたは-OCH3であり、R2は-Hまたはグルクロニジル（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｙｌ）であり、R3およびR4は独立して-CH3または-CH2OHである。さらに、代謝産物は構造においてアンブリセンタンと異なっており、R1、R2、R3、およびR4の少なくとも１個はアンブリセンタンにおけるそれと異なっている。従って、様々な態様において、R1は-OHであり、R2はグルクロニジルであり、R3は-CH2OHであり、またはR4は-CH2OHである。代謝産物に加え、合成化合物は式（Ｉ）の化合物およびそれらの医薬的に許容できる塩類、溶媒和物、水和物、ラセミ体、および光学異性体を含む。様々な態様において、代謝産物は、試験動物の体組織または体液中で同定されてそれらから単離または分離された、単離された形で提供される。様々な態様において、化合物は合成により、固体または結晶の形で、および／または５０％もしくはそれより大きい純度、好ましくは９０％もしくはそれより大きい純度の組成物で提供される。様々な態様において、化合物は、ヒドロカルビルエーテル類、低級アルキルエステル類、合成中間体、および同様のものを含む上記の代謝産物構造の誘導体も含む。
【００３１】
[0017]  アンブリセンタンの光学活性な代謝産物は、不斉炭素の周りでＳ配置を有し、（ＩＩ）により表され、R1〜R4に関して上記と同じ定義を有する。
【００３２】
【化８】
2010535210.tif 000010
【００３３】
[0018]  様々な態様において、アンブリセンタンの代謝産物には、O-脱メチルアンブリセンタン、4-ヒドロキシル化アンブリセンタン、ならびに4,6-ジヒドロキシル化アンブリセンタン、さらにアンブリセンタンのグルクロニド類ならびにグルクロニド類のO-脱メチルおよびヒドロキシル化誘導体が含まれる。様々な位置で脱メチルまたはヒドロキシル化されていることにより構造においてアンブリセンタンと異なる代謝産物は、いわゆる第Ｉ相代謝経路の産物であり、一方でグルクロニドエステルを含むアンブリセンタンの代謝産物は、いわゆる第ＩＩ相代謝経路の産物である。
【００３４】
[0019]  疾患状態の処置に有用な剤形には、化合物から選択される有効物質および対象への投与に適したキャリヤーが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
[0020]  
【図１】図１は（光学活性な形での）アンブリセンタン分子の概観を示し、代謝の主な部位を示す。  [0021]
【図２】図２は、ヒトを含む様々な哺乳類において同定されたいくつかのアンブリセンタン代謝産物の構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
[0022]  用語”アンブリセンタン”は、本明細書において(S)-2-[(4,6-ジメチルピリミジン-2-イル)オキシ]-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロピオン酸を指すために用いられる。場合により、誘導体として記述される本発明の様々な化合物に対するそれの関係を示すためだけに、それはアンブリセンタン”親”化合物として言及される（例えば”脱メチル”アンブリセンタンはメチルが除去された誘導体である）。アンブリセンタンの構造は、R1が-OCH3、R2が-H、R3が-CH3、およびR4が-CH3である構造ＩＩに一致する。アンブリセンタンのプロピオン酸バックボーン上のα炭素は不斉である。
【００３７】
[0023]  様々な態様において、本発明は一般式（Ｉ）の化合物を、単離された形、
【００３８】
【化９】
2010535210.tif 000011
【００３９】
またはそれらの医薬的に許容できる塩類、水和物、溶媒和物、ラセミ体、もしくは光学異性体で提供する。化合物は光学活性な形（不斉α炭素に関してＳまたはＲ配置）で、ラセミ（Ｓ／Ｒ）形で、またはいずれかの組み合わせで存在することができる。様々な態様において、化合物はＥＴＡ受容体への選択的親和性を有するエンドセリン受容体拮抗剤として役立つ。一部の態様において、化合物の構造は、ヒト以外における前臨床試験の間に生成された代謝産物に、および／またはヒトにおける臨床試験の間に生成された代謝産物に一致する。前臨床の代謝産物および臨床期の代謝産物は、様々な組織、体液、および排出媒体（ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｍｅｄｉａ）中で見つかり、同定された。
【００４０】
[0024]  式（Ｉ）において、R1は-OHまたは-OCH3であり;R2は-H、低級アルキル(例えばC1〜C4アルキル)またはグリコシジルであり;R3およびR4は独立して-CH3、-C(O)Hまたは-CH2OR6であり、ここでR6は-Hまたは１〜２０個の炭素原子を有するヒドロカルビル基である。例えば、R6が-H以外である場合、それはヒドロキシルの保護基として働き、それは合成に、および／または同定もしくはクロマトグラフィーでの分離および製造を容易にするのに有用である。R6の限定的でない例には、メチルおよびベンジルが含まれる。さらに説明すると、R3またはR4のいずれかが-C(O)Hである場合、化合物はアルコール基-CH2OHを製造するための合成中間体として役立つ。R1、R2、R3、およびR4の少なくとも１個は、アンブリセンタン親化合物に関して誘導体化を示す。すなわち、本明細書で記述される新規化合物はアンブリセンタンそれ自体を含まない。従って、様々な態様において、R1は-OHであり、R2はグルクロニジルであり、R3は-CH2OHであり、またはR4は-CH2OHである。
【００４１】
[0025]  様々な観点において、グリコシジル基R2はグルコシジル（すなわちグルコースに由来する）またはグルクロニジル（すなわちグルクロン酸に由来する）のどちらかであり、ここでグルコシジル基上のヒドロキシルは場合により（例えばアセチル基-C(O)CH3で）アシル化されており、グリコシジル基上のカルボキシルは場合により例えばC1〜C4アルコール類でエステル化されている。下記でさらに論じるように、様々な態様において、化合物はアンブリセンタンのインビボでの代謝の産物に、または本明細書で記述される代謝産物の合成において有用である合成中間体に一致する。
【００４２】
[0026]  アンブリセンタンの光学活性な代謝産物は、不斉炭素の周りでＳ配置を有し、式（ＩＩ）により表され、R1〜R4に関して同じ定義を有する。
【００４３】
【化１０】
2010535210.tif 000012
【００４４】
特定の態様において、R1は-OCH3または-OHであり;R2は-Hまたはグルクロニジルであり;R3およびR4は独立して-CH3または-CH2OHである。様々な態様において、R1、R2、R3、およびR4の少なくとも１個はアンブリセンタンにおけるそれと異なっている。従って、様々な態様において、R2はグルクロニジルであり、R1は-OHであり、R3は-CH2OHであり、またはR4は-CH2OHである。光学活性な代謝産物は、不斉な出発物質のアンブリセンタンへの酵素の作用の結果として生じると考えられている。代謝産物には、式（ＩＩ）の化合物の塩類も含まれる。様々な態様において、式（ＩＩ）の光学活性な化合物は単離された形で提供される。
【００４５】
[0027]  様々な態様において、医薬的に許容できるキャリヤーおよび０．１重量％〜９０重量％の有効物質を含む医薬剤形が提供され、ここで有効物質は一般式（Ｉ）の化合物
【００４６】
【化１１】
2010535210.tif 000013
【００４７】
およびそれらの医薬的に許容できる塩類、水和物、溶媒和物、光学異性体、およびラセミ体から選択される少なくとも１種類の化合物を含み、ここで
R1は-OHまたは-OCH3であり; 
R2は-H、低級アルキルまたはグリコシジルであり;ならびに
R3およびR4は独立して-CH3、-C(O)Hまたは-CH2OR6であり;ここでR6は-Hまたは１〜２０個の炭素原子を有するヒドロカルビル基であり;
ここで化合物はアンブリセンタンではない。
【００４８】
[0028]  １観点において、本発明はアンブリセンタンのヒト臨床試験での代謝産物を、例えば純粋な、または単離された形で提供する。”ヒト臨床試験での代謝産物”は、本明細書で記述されるそれらを含む投与およびモニタリングに関する臨床プロトコルに従うアンブリセンタンの摂取または適用の後に、ヒトの対象の体内で形成されたアンブリセンタンの代謝産物を意味する。様々な態様において、その用語はインビボで形成された分子種を、その種が個々の臨床試験において検出されたかどうか、またはさらに分析されたかどうかに関わらず含む。一部の代謝産物は特定の個人に特有であり、異なる遺伝的構成ならびに代謝に関わるシトクロムＰ４５０およびＵＧＴ酵素を含む様々な酵素の存在および活性を反映していることも熟慮されるべきである。ヒト臨床試験での代謝産物は、ヒトの体の中で形成される全てのその代謝産物を含む。
【００４９】
[0029]  ヒトにおける臨床試験は多くの形をとる。例えば、安全性、認容性、薬物動態、および薬力学を、健康な対象において評価する。１、５、１０、１５、２０、５０、および１００ｍｇの経口用量において、１回量の薬物動態を測定する。動態および力学は、48時間の間隔に渡って評価される。加えて、絶食状態において、および標準化された高脂肪の食事の後の両方で５０ｍｇの用量を与えられた対象において、動態パラメーターへの食物の影響を試験する。１日１回１０日間投与される５、７．５、および１０ｍｇの経口用量において、多回量の薬物動態を試験する。２４時間の間隔に渡って血液および尿を集める。
【００５０】
[0030]  他の臨床試験には、アンブリセンタンと他の薬物の間の薬物動態的相互作用の可能性を評価する交叉試験が含まれる。１態様において、アンブリセンタン単独の１回量の薬物動態を、他の薬物の投与の７日後に投与されたアンブリセンタンの１回量の薬物動態と比較する。
【００５１】
[0031]  他の臨床試験は、肺動脈高血圧（ＰＡＨ）を有する患者におけるアンブリセンタンの作用を調べる。対象は１、２．５、５、または１０ｍｇの用量を、１日１回１２週間の間与えられる。試験の間、定期的に肝機能試験を実施する。
【００５２】
[0032]  別の観点において、本発明はアンブリセンタンの前臨床ＡＤＭＥ代謝産物を提供する。”前臨床ＡＤＭＥ代謝産物”は、ヒト以外の対象における前臨床試験の間にインビボまたはインビトロで形成されたアンブリセンタンの代謝産物を意味する。その試験は、ヒトにおける臨床試験の前に、提案された薬物製品の吸収、分布、代謝、および排出（ＡＤＭＥ）を特性づけるために実施される。その試験の限定的でない記述を、下記の実施例１〜６で提供する。
【００５３】
[0033]  式（Ｉ）および（ＩＩ）により表される化合物のいくつかは、哺乳類においてアンブリセンタンからいわゆる第Ｉ相または第ＩＩ相代謝経路によるその薬物の代謝の結果として得られることが分かっている。第Ｉ相および第ＩＩ相経路のような名称は代謝の分野において慣習的であり、薬物の承認を支援するための第Ｉ相および第ＩＩ相ヒト臨床試験という表現と混同すべきではない。アンブリセンタン分子における説明的な代謝の部位および方式を図１に示す。
【００５４】
[0034]  様々な観点において、代謝は酸化反応により特徴づけられる。例えば、様々なアルキルまたはアリール基がヒドロキシル化され、および／またはアルコキシ基が脱アルキルされる。これらは第Ｉ相代謝経路である。第Ｉ相代謝経路による代謝は、大部分が肝臓においてシトクロムＰ４５０酵素の仲介の下で行われる。調べられた全てのシトクロムＰ４５０酵素は基本的にアンブリセンタンを代謝することができるが、アンブリセンタンの代謝に関わる主なＰ４５０酵素はシトクロムＰ４５０  ３Ａ４、３Ａ５、および２Ｃ１９である。アンブリセンタンの代謝産物には、インビボまたはインビトロでＰ４５０酵素または他の酸化酵素のアンブリセンタンへの触媒作用により生成する化合物が含まれる。
【００５５】
[0035]  アンブリセンタンの代謝産物には、いわゆる第ＩＩ相代謝経路の働きによるアンブリセンタンの生合成反応により生成される化合物が含まれる。例えば、アンブリセンタンの重要な代謝反応はアシルグルクロニド類の生合成であり、下記および図２において示されるＡ、Ｅ、およびＦのようなその代謝産物を形成する。それはラット、イヌ、およびヒトの肝細胞においてアンブリセンタンの代謝に関わっていることが分かった。
【００５６】
[0036]  アシルグルクロニド類の生合成における第１段階は、β-D-グルクロニドの形成である。次いでこの1-O-アシル-β-D-グルクロニドは、炭水化物部分のC-2、C-3、およびC-4の位置へのアシル基の移動による分子内転位を経る可能性がある。それは雑誌Chirality, volume 7, pages 1-9 (1995)においてHayballにより報告されている。
【００５７】
[0037]  イヌおよびヒトの肝細胞では、グルクロン酸抱合（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄａｔｉｏｎ）が主な代謝経路である。ラットの肝細胞では、かなりの量の酸化生成物（例えば代謝産物Ｂ）も観察された。これらの所見は、イヌおよびラットにおけるインビボの結果と一致している。概して、ウリジン二リン酸グルクロノシルトランスフェラーゼ酵素ＵＧＴ１Ａ９Ｓ、ＵＧＴ１Ａ３Ｓ、およびＵＧＴ２Ｂ７Ｓが、代謝に関わる酵素として同定された。アンブリセンタンの代謝産物には、インビボまたはインビトロでのＵＧＴ酵素のアンブリセンタンへの触媒作用により形成される化合物が含まれる。
【００５８】
[0038]  代謝産物の例には、代謝産物Ａ〜Ｇと名づけられた化合物が含まれる。これらの化合物を、図２において光学活性な形で、親アンブリセンタンにおけるように不斉炭素に関してＳ配置で示す。対応する構造を下記で式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）においてラセミ形で示す。
【００５９】
代謝産物Ａはアンブリセンタングルクロニドである（R2はグルクロニジルであり、R1は-OCH3であり、R3およびR4は両方-CH3である)。ラセミ形で、化合物は式（ＩＩＩ）により表される：
【００６０】
【化１２】
2010535210.tif 000014
【００６１】
。
代謝産物Ｂは4-ヒドロキシメチルアンブリセンタンである(R1は-OCH3であり、R2はHであり、R3およびR4の一方は-CH2OHであり、R3およびR4の他方は-CH3である）。ラセミ形で、化合物は式（ＩＶ）およびそれらの塩類により表される：
【００６２】
【化１３】
2010535210.tif 000015
【００６３】
。
代謝産物ＣはO-脱メチルアンブリセンタンである(R1は-OHである）。ラセミ形で、化合物は式（Ｖ）およびそれらの塩類により表される：
【００６４】
【化１４】
2010535210.tif 000016
【００６５】
。
代謝産物Ｄは4,6-ジヒドロキシメチルアンブリセンタンである(R3およびR4は両方-CH2OHである）。ラセミ形で、化合物は式（ＶＩ）およびそれらの塩類により表される：
【００６６】
【化１５】
2010535210.tif 000017
【００６７】
。
代謝産物Ｅは4,6-ジヒドロキシメチルアンブリセンタングルクロニドである(R3およびR4は両方-CH2OHであり、R2はグルクロニジルである）。ラセミ形で、化合物は式（ＶＩＩ）およびそれらの塩類により表される：
【００６８】
【化１６】
2010535210.tif 000018
【００６９】
。
代謝産物Ｆは4-ヒドロキシメチルアンブリセンタングルクロニドである(R3およびR4の一方はCH2OHであり−他方は-CH3であり−R2はグルクロニジルである）。ラセミ形で、化合物は式（ＶＩＩＩ）およびそれらの塩類により表される：
【００７０】
【化１７】
2010535210.tif 000019
【００７１】
。
代謝産物ＧはO-脱メチル4-ヒドロキシメチルアンブリセンタンである(R1は-OHであり、R3は-CH2OHである）。ラセミ形で、化合物は式（ＩＸ）およびそれらの塩類により表される：
【００７２】
【化１８】
2010535210.tif 000020
【００７３】
。
[0039]  様々な態様において、アンブリセンタンの代謝産物−代謝産物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧを含む−ならびに上記の式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）を有する化合物は、体組織および体液から単離され、および／または合成により製造される。様々なクロマトグラフィーによる分離プロセス−例えばガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、および薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）−を組織および流体試料に対して実施し、核磁気共鳴または質量スペクトル分析によるようなさらなる分析のための試験試料を提供することができる。その試料において、代謝産物はそれ以外のあらゆる代謝産物の存在を本質的に欠いた組成物の中に含まれる。その場合、試料中の代謝産物の存在は、物理的方法、例えば放射性同位体からの核崩壊の測定により、屈折率の測定により、水素炎イオン化により、質量分析におけるようなイオン化および磁場中での偏向、および同様のものにより定量することができる。
【００７４】
[0040]  様々な態様において、化合物および代謝産物は、かなりの程度の純度を有する結晶または溶液の形で提供される。比較的純粋な形の、例えば８０％以上、９０％以上、９５％以上、および９９％以上の純度の化合物を製造するために、有機合成経路が利用可能である。再結晶および他の精製法を実施して本質的に１００％純粋な化合物を提供することができる。その合成法および精製技法は当分野で既知であり、下記の実施例において限定的でない方式で説明する。
【００７５】
[0041]  様々な態様において、化合物は実質的に純粋な形で提供される。実質的に純粋とは、化合物がＦＤＡの承認に十分なだけ純粋であり、本質的に汚染物質もしくは他の物質を含まず、またはあるいは不純のレベルが安全性、有効性、安定性、および他の望ましい特性に関して化合物の特性に不都合な、もしくは許容できない影響を及ぼさないことを意味する。
【００７６】
[0042]  本発明の方法には、アンブリセンタンまたはアンブリセンタンの代謝産物を哺乳類に投与し、哺乳類の組織または体液中におけるその代謝産物の１種類のレベルまたは濃度を測定することにより代謝産物を検出することが含まれる。体液には血漿、胆汁、尿、および便が含まれるがそれらに限定されず、一方組織には肝臓のマイクロソーム、肝細胞、および灌流した肝臓が含まれるがそれらに限定されない。様々な態様において、代謝産物は組織または体液中での代謝産物の検出または定量を助けるために様々な同位体で標識される。従って、代謝産物は、それらの核崩壊産物からの種を検出または同定するために１４Ｃまたはトリチウム（３Ｈ）で標識された代謝産物、ならびに化合物の核磁気共鳴および／または質量スペクトル分析を容易にするために１３Ｃまたは重水素（２Ｈ）で標識された代謝産物を含む。本明細書において用いられる重水素化された（ｄｅｕｔｅｒａｔｅｄ）は重水素（２Ｈ）で置換されていることを意味し、トリチウム化された（ｔｒｉｔｉａｔｅｄ）はトリチウム（３Ｈ）で置換されていることを意味する。
【００７７】
[0043]  様々な態様において、化合物はＥＴＡおよびＥＴＢ受容体に対する拮抗的な結合を示し、ＥＴＡ受容体に選択的である。一部の態様において、それらはＥＴＡに親和性を示し、それはＥＴＢへの親和性よりも少なくとも約５０倍、好ましくは約１００倍より大きくまたはそれに等しく感受性が高い。様々な態様において、ＥＴＡへの選択性は、例えその代謝産物に関するＫｉおよびＩＣ５０の値が親アンブリセンタンよりもほぼ１桁ほど高い傾向にあるとしても保たれている。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞において保温時間３０分間で、アンブリセンタン親化合物に関する結果と比較すると、代謝産物ＢおよびＣは親物質のアンブリセンタンよりもＥＴＡ受容体に３５〜６４倍弱い親和性を、ＥＴＢ受容体に１１〜８４倍弱い親和性を示し、一方で代謝産物ＢおよびＣのＥＴＡ受容体への親和性はＥＴＢ受容体への親和性の約１００倍である。
【００７８】
[0044]  様々な態様において、代謝産物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧならびにそれらの塩類、光学異性体、ラセミ体、互変異性体、および同位体標識された変種（１４Ｃ、１３Ｃ、トリチウム、および重水素で置換された変種を含む）を含む本発明の化合物は、ヒトまたは他の哺乳類への投与のために適切な剤形の中に配合される。一部の態様において、例えば、一般に行われる療法または親化合物を用いた療法と比較して、本発明の化合物は都合のよい毒物学的プロフィールを示す可能性がある。
【００７９】
[0045]  選択的エンドセリン受容体拮抗剤として、様々な態様において、本発明の化合物は、肺高血圧、全身性高血圧、慢性腎臓病、および血管形成の後の再狭窄のような病気を処置するために用いられる。従って、それらは好ましい態様において、アンブリセンタンのような選択的エンドセリン受容体拮抗剤を含むＥＲＡが必要とされる疾患状態を有する対象に投与される。あるいは、または加えて、非薬理学的作用、例えば副作用、毒性、代謝、摂取、生物学的利用能、および排出の経路を研究するために、それらは疾患状態を有しない対象または試験動物に投与される。
【００８０】
[0046]  様々な態様において、化合物は、経口、直腸、鼻腔内、肺内（例えば吸入により）、または非経口（例えば皮内、経皮、皮下、筋肉内または静脈内）経路を含むあらゆる適切な経路により投与される。一部の態様において経口投与が好まれ、投薬は食物と共に、または食物無しで、すなわち絶食状態または非絶食状態において与えることができる。剤形の限定的でない例には、素錠またはコーチング錠、カプセル、粉末、顆粒、坐剤、溶液、軟膏、クリーム、およびスプレー剤が含まれる。
【００８１】
[0047]  経口投与に適した本発明の配合物は、それぞれが予め決められた量の有効成分を含む別個の単位、例えばカプセル、カシェ剤もしくは錠剤として；粉末もしくは顆粒として；水性の液体もしくは非水性の液体中における溶液もしくは懸濁液として；または水中油液体乳濁液もしくは油中水液体乳濁液として製造される。有効成分は、巨丸剤、舐剤または糊剤として与えられてもよい。
【００８２】
[0048]  錠剤は、場合により１種類以上の副成分と共に圧縮または成形することにより作ることができる。圧縮された錠剤は、場合により結合剤、潤滑剤、不活性な希釈剤、保存剤、界面活性剤または分散剤と混合した、粉末または顆粒のような自由に流動する形の有効成分を、適切な機械の中で圧縮することにより製造することができる。成形された錠剤は、不活性な液体の希釈剤で湿らせた、粉末にした有効成分の混合物を、適切な機械の中で成型することにより作ることができる。錠剤は場合によりコートされて、または刻み目を付けられていてよく、場合によりそれからの有効成分の遅い、または制御された放出をもたらすように配合されている。１態様において、腸溶コーチングの使用により薬剤の酸加水分解が予防される。
【００８３】
[0049]  腸溶コーチングは、消化管、通常は上部消化管、特に胃および食道の一部がこの発明の化合物にさらされるのを避けるために本発明の化合物を保護する手段である。このように、胃の粘膜組織は本発明の化合物に、悪心のような有害な作用をもたらす程度でさらされることに対して保護され；あるいは、本発明の化合物は、消化管、通常は上部消化管の１個以上の部分に存在する条件から保護される。
【００８４】
[0050]  口中の局所投与に適した配合物には、有効成分を香味のある基剤、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカントの中に含むロゼンジ；有効成分を不活性な基材、例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアの中に含む香錠；ならびに有効成分を適切な液体のキャリヤーの中に含む口内洗浄剤が含まれる。
【００８５】
[0051]  直腸内投与のための配合物は、例えばカカオ脂またはサリチレートを含む適切な基剤を用いた坐剤として与えられてよい。
[0052]  有効成分を単独で投与することは可能だが、それらを医薬配合物として与えるのが好ましい可能性がある。獣医学での使用のための、およびヒトでの使用のための本発明の配合物は両方とも、上記で定めた少なくとも１種類の有効成分を、１種類以上の許容できるキャリヤーおよび場合により他の療法成分と一緒に含む。キャリヤー（類）は、配合物の他の成分と適合可能であり、それを与えられる者にとって生理的に無害であるという意味で”許容できる”ものでなければならない。
【００８６】
[0053]  様々な態様において、化合物はキャリヤーシステムの中に配合される。そのシステムは既知であり、結合剤、増量剤、保存剤、崩壊剤、流動調整剤、可塑剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、潤滑剤、溶剤、放出遅延剤（腸溶コーチングを含む）、抗酸化剤、および噴射ガスを含む。特にヒトへの投与のために配合される場合、有効物質は好ましくは少なくとも１種類の医薬的に許容できるキャリヤーと組み合わせられる。そのキャリヤーは既知であり、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、およびＮ−ビニルピロリドンポリマー類が含まれるがそれらに限定されない。投与形は療法上有効量の化合物を含み、それは剤形の０．１重量％から約９０重量％までを構成する。
【００８７】
[0054]  この発明の化合物は一般に用いられるキャリヤーおよび賦形剤を用いて配合され、それは通常の慣行に従って選択されるであろう。錠剤は賦形剤、滑沢剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、増量剤、結合剤、および同様のものを含むであろう。水性配合物は無菌の形で製造され、経口投与以外による送達を意図する場合、通常は等張性であろう。全ての配合物は、場合により賦形剤、例えば”Handbook of Pharmaceutical Excipients”(1986)において述べられている賦形剤を含むであろう。賦形剤には、アスコルビン酸および他の抗酸化剤、キレート剤、例えばＥＤＴＡ、炭水化物、例えばデキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸および同様のものが含まれる。
【００８８】
[0055]  配合物には、前述の投与経路に適した配合物が含まれる。配合物は単位剤形で与えられるのが好都合である可能性があり、薬剤学の分野で周知のいずれの方法により製造されてもよい。技法および配合物は一般にRemington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.、ペンシルバニア州イーストン)中で見付けられる。その方法には、有効成分を１種類以上の副成分を構成するキャリヤーと合わせる工程が含まれる。通常、配合物は有効成分を液体のキャリヤーまたは細かく分かれた固体のキャリヤーまたは両方と均一かつ密接に合わせ、次いで必要ならば製品を形造ることにより製造される。
【００８９】
[0056]  代謝産物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧは、マウス、ラット、ウサギ、イヌおよびヒトの様々な組織および体液中で検出されている。代謝産物の間の生合成関係を示し、それらの種において代謝産物の存在が重要であることを示す所見の要約を、説明のために図１に示す。
【００９０】
[0057]  他の態様において、代謝の際にアンブリセンタンの切断産物が形成される。マウス、ラット、ウサギ、およびイヌにおいて観察される切断産物は、既知の化合物4,6-ジメチル-2-ヒドロキシピリミジンである。
【実施例】
【００９１】
実施例１−アンブリセンタン代謝産物のインビトロでのＥＴＡおよびＥＴＢ受容体結合
[0058]  アンブリセンタンの２種類の代謝産物、代謝産物Ｂ（ヒドロキシル化誘導体）および代謝産物Ｃ（O-脱メチル誘導体）のインビトロでの結合活性を、ＣＨＯ細胞において発現させたヒトＥＴＡおよびＥＴＢ受容体に対して評価する。試験化合物をメタノール：Cremophor EL（登録商標）１００：１中において１０−２Ｍで溶解し、脱イオン水中で１０−１０〜１０−６Ｍの濃度に希釈する。代謝産物Ｂまたは代謝産物Ｃの存在下で膜を予め２分間保温した後、ＥＴＡおよびＥＴＢ受容体に関してそれぞれ［１２５Ｉ］標識ＥＴ−１または［１２５Ｉ］標識ＥＴ−３の添加により結合反応を開始する。それぞれの受容体への特異的な放射性リガンドの結合を、全ての結合と過剰な標識されていないＥＴ−１の存在下で測定した非特異的な結合の間の差として計算する。Ｋｉの値を、試験化合物の３種類の濃度で実施した実験からの非線形曲線フィッティングにより決定する。放射性リガンドの結合の５０％阻害に必要な濃度（ＩＣ５０）を、パーセント置換（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）に基づく非線形回帰により決定し、ＩＣ５０の値に基づいてＫｉを計算する。これらの試験は、アンブリセンタンの定常状態条件下よりもむしろ３０分間の保温時間で実施した。結果を表１に示す。
【００９２】
表１
ＥＴＡおよびＥＴＢ受容体に関する、アンブリセンタンならびにその代謝産物ＢおよびＣのＫｉの値
【００９３】
【表１】
2010535210.tif 000021
【００９４】
実施例２−肝臓のマイクロソームおよび肝細胞におけるインビトロでの代謝
[0059]  アンブリセンタンのインビトロでの代謝を、ラット、イヌ、およびヒトの肝臓のマイクロソームおよび肝細胞において調べる。
【００９５】
[0060]  第Ｉ相代謝を標的としたラット、イヌ、およびヒトの肝臓のマイクロソームの試験では、アンブリセンタンのヒドロキシル化された代謝産物（代謝産物Ｂ）が観察される。しかし、アンブリセンタン親化合物のこの代謝産物へのターンオーバーは低く（３〜４％）、これは第Ｉ相代謝がアンブリセンタンの代謝に最小限に寄与していることを示している。
【００９６】
[0061]  イヌおよびヒトの肝細胞では、第ＩＩ相代謝が好まれる経路であり、２５％および２１％の放射性標識したアンブリセンタンがこの経路により２４時間の期間をかけて代謝される。同定された主な代謝産物はアンブリセンタン親化合物のアシルグルクロニド（代謝産物Ａ）であり、ごく微量（＜１％）のヒドロキシル化された代謝産物が検出された。第ＩＩ相代謝はラットの肝細胞ではより低い程度で起こっており、１５％が２４時間の期間をかけて代謝されており、かなりの量の第Ｉ相のヒドロキシル化された代謝産物（代謝産物Ｂ）も形成されている。
【００９７】
[0062]  単一のＣＹＰイソ酵素またはウリジン二リン酸グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）イソ酵素を発現するマイクロソームを用いる反応フェノタイピング（Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）を用いて、インビトロでアンブリセンタンを代謝するのに十分であるそれらの酵素を同定する。これらの実験の結果は、アンブリセンタンがいくつかのＵＧＴイソ酵素（ＵＧＴ１Ａ９Ｓ、ＵＧＴ２Ｂ７Ｓ、およびＵＧＴ１Ａ３Ｓ）によりグルクロン酸抱合され、いくつかのＣＹＰイソ酵素（ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｃ１９、およびＣＹＰ３Ａ５）により酸化的に代謝されることを示している。
【００９８】
実施例３−ラットにおける肝臓潅流試験
[0063]  オスのウィスターラットにおけるアンブリセンタンの代謝経路を、分離された潅流されたラット肝臓モデルを用いて調べる。［１４Ｃ］標識したアンブリセンタンを放射性標識した薬物として、０．０５８および０．０５２ｍｇ／ｇ肝臓、０．１８６および０．１９９ｍｇ／ｇ肝臓、ならびに０．６１６および０．５５６ｍｇ／ｇ肝臓の潅流用量（ｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｄｏｓｅｓ）（それぞれ３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇの用量に対応する）で用いる。肝臓をそれぞれの用量グループの２匹の動物から取り出し、再循環システムにおいて６時間潅流し、潅流培地および胆汁の代謝産物パターンを測定する。
【００９９】
[0064]  投与の６時間後に、潅流液中の総放射能のレベルは３ｍｇ／ｋｇ用量および１０ｍｇ／ｋｇ用量に関して５５％、３０ｍｇ／ｋｇ用量に関して４５％減少する。同じ期間の間の胆汁中の総放射能の蓄積排出（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ）は２５％（３ｍｇ／ｋｇ用量）、３０％（１０ｍｇ／ｋｇ用量）、および３１％（３０ｍｇ／ｋｇ用量）である。
【０１００】
[0065]  様々な態様において、代謝産物はＨＰＬＣ法により分離され、それらの構造は液体クロマトグラフィー／質量分析の技法により決定された。代謝産物は、C-酸化（第Ｉ相代謝経路）の、およびグルクロン酸との抱合（第ＩＩ相代謝経路）の化合物を含む。C-酸化反応の飽和は起こらなかった。代謝産物のパターンは潅流液および胆汁において類似しており、次のものであると同定される４個のピークがある：１）変化していない親化合物、２）親グルクロニド（代謝産物Ａ）、３）親化合物のヒドロキシル化誘導体（代謝産物Ｂ）、およびヒドロキシル化された代謝産物のグルクロニド（代謝産物Ｆ）。親化合物は、試験した全ての用量において潅流液での、ならびに１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇにおいて胆汁での主なピークである。３ｍｇ／ｋｇ用量において、親グルクロニドが胆汁での主なピークである。加えて、微量のさらに２種類の代謝産物が胆汁中で検出される。これらの代謝産物は、メチル基の酸化的切断により、およびピリミジン環のメチル基の１個のヒドロキシル化により、およびグルクロン酸との抱合により形成される。
【０１０１】
実施例４−アンブリセンタンのインビボでの代謝
[0066]  マウス、ラット、ウサギ、およびイヌにおけるインビボでの肝代謝の試験は、血漿、尿および便中では変化していない親化合物が主であることを示している。全ての動物種で同定される代謝産物には、アンブリセンタン親化合物のアシルグルクロニド（代謝産物Ａ）、O-脱メチル誘導体（代謝産物Ｃ）、ヒドロキシル化誘導体（代謝産物Ｂ）、ジヒドロキシル化誘導体（代謝産物Ｄ）、および4,6-ジメチル-2-ヒドロキシピリジンが含まれる。これらの５種類の代謝産物の内の３種類はヒトのインビトロでの試験（マイクロソームおよび肝細胞）で観察されており、試験した４種類の動物種で観察されずヒトのインビトロでの試験で観察された代謝産物は無かった。
【０１０２】
実施例５−インビボでの排出
[0067]  肝細胞膜を越える能動輸送の後、アンブリセンタンは胆細管の中に分泌され、胆汁を経由して便の中に排出される。
【０１０３】
[0068]  アンブリセンタンおよびその代謝産物の排出を、ラットにおいてアンブリセンタンの１回の１０ｍｇ／ｋｇの用量の静脈内投与の後に、およびイヌにおいてアンブリセンタンの１回の３ｍｇ／ｋｇの経口投与量の投与の後に評価する。両方の試験において、排出の主な経路は便を経由する。ラットの試験における放射性標識された化合物の回収率は、便中で平均８８％、および尿中で９％である。イヌの試験における放射性標識された化合物の回収率は、便中で平均９０％、および尿中で８％であった。両方の動物モデルにおいて、放射性標識された化合物の大部分は投与後の最初の２４時間の内に排出される。
【０１０４】
[0069]  イヌの試験では、変化していない物質が便および尿中で主であった。親化合物のグルクロニド（代謝産物Ａ）が便中での主な代謝産物である。尿中での主な代謝産物は、アンブリセンタンの切断産物（4,6-ジメチル-2ヒドロキシピリミジン）である。
【０１０５】
実施例６−胆汁中排出
[0070]  アンブリセンタンおよびその代謝産物の胆汁中排出および腸肝循環を、麻酔したオスのラットにおいて、放射性標識されたアンブリセンタンの十二指腸内投与の後に評価する。胆汁および尿を、２４時間の期間をかけて集める。投与の２４時間以内に、総放射能の９４．８％が胆汁から、および１．５％が尿から回収される。胆汁における高い回収率は、吸収がほぼ完全に腸において起こっていることを示す。腸肝循環を評価するため、第１セットのラット（ドナーラット）から集めた胆汁（０〜１２時間の期間）を第２セットのラット（アクセプターラット）に十二指腸内投与し、２４時間の期間をかけて再び胆汁および尿を集める。胆汁の投与の後、総放射能の７６．５〜９４％がアクセプターラットの胆汁中で回収され、これはアンブリセンタンおよびその代謝産物の高い腸肝循環を示している。ドナーおよびアクセプターラットからの胆汁中の代謝産物パターンは類似している。
【０１０６】
[0071]  放射性標識されたアンブリセンタン（１０ｍｇ／ｋｇ）をイヌに十二指腸内投与して、胆汁中排出の程度を評価し、胆汁中のアンブリセンタン代謝産物を同定する。投与の８時間後に、オスおよびメスにおいて胆汁の中にそれぞれ総放射能の５４％および４７％が排出される。この内で、アンブリセンタン親グルクロニド（1-O-アシルグルクロニド）（代謝産物Ａ）が主な代謝産物であり、総放射能の７７％〜８１％である。
【０１０７】
[0072]  アシルグルクロニド親化合物（代謝産物Ａ）は胆汁中における主な代謝種であるが、便中では親化合物が主な代謝種である。これは、アシルグルクロニド親化合物のアシルグルクロニド結合が便中で切断され、アンブリセンタン親化合物が解放されることを示唆している。この酵素的切断はおそらく腸のマイクロフローラによるものである。それに対し、ラットにおける胆汁中排出およびＡＤＭＥの試験は、アンブリセンタン親化合物が胆汁（９５％）および便（約８０％）の両方における主な代謝種であることを示している。
【０１０８】
実施例７〜１９−化合物の合成
[0073]  別途記載しない限り、反応は周囲温度および圧力で、混合は乾燥窒素の雰囲気の下で磁気撹拌により行う。有機性抽出物を合わせて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで濾過し、濾液を減圧下でロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。
【０１０９】
[0074]  分光データは構造および名称と矛盾していない。実施例の一部において、説明に役立つデータを示す。実施例７〜１９は、アルファ（２−）炭素において完全なＳ配置を有するアンブリセンタンを用いて出発することにより製造される、様々な光学活性な化合物の合成を提供する。ラセミ化合物およびＲ−化合物は、それぞれラセミ(S/R)-2-[(4,6-ジメチルピリミジン-2-イル)オキシ]-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロピオン酸および(R)-2-[(4,6-ジメチルピリミジン-2-イル)オキシ]-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロピオン酸を用いて開始して、類似して製造される。下記の実施例に関するアンブリセンタン化合物の出発物質は、既知の手順に従って、例えば3-メトキシ-3,3,-ジフェニル-2-ヒドロキシプロパン酸中間体（またはそのメチルエステル）のラセミ分割とそれに続く光学活性なアンブリセンタンへのエーテル化により、またはラセミ2-[(4,6-ジメチルピリミジン-2-イル)オキシ]-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロピオン酸の、適切な鏡像異性的に純粋な塩基を用いて実施される古典的なラセミ体分離により合成される。アンブリセンタンおよび関連化合物の合成は、文献、例えばRiechers et al., Journal of Medicinal Chemistry, vol. 39, pp. 2123-2138 (1996); Drugs of the Future 2005, 30(8), 765-770; Jansen et al., Organic Process R&D (2001) 5, 16-22;およびRiechers et al. WO 1996/11914 published 25 April 1996において報告されており、その開示は背景情報として有用であり、それを援用する。
【０１１０】
実施例７
(2S,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-(4,6-ジメチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノイルオキシ)-6-(メトキシカルボニル)テトラヒドロ-2H-ピラン-3,4,5-トリイル  トリアセテート。
【０１１１】
【化１９】
2010535210.tif 000022
【０１１２】
[0075]  (S)-2-(4,6-ジメチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパン酸(以下”アンブリセンタン”, 1.9 g, 5.0 mmol)および炭酸カリウム(0.83 g, 6.0 mmol)のアセトニトリル(30 mL)中における混合物を、0.5時間撹拌する。(2R,3R,4S,5S,6S)-2-ブロモ-6-(メトキシカルボニル)テトラヒドロ-2H-ピラン-3,4,5-トリイル  トリアセテート(2.0 g, 5.0 mmol)を反応混合物に添加し、反応物を12時間撹拌する。得られた混合物をロータリーエバポレーター中で減圧下において蒸発させて乾燥させる。得られた残留物に水(20 mL)を添加し、混合物を0.5時間撹拌すると沈殿が生じる。粗生成物を濾過により分離し、得られた固体を水(2 X 20 mL)で洗浄する。粗生成物をメタノール−水(2:1)からの再結晶により精製すると、表題化合物(1.7 g, 49%)が白色固体として得られる。MS m/z 695.2 (M+. + 1)。
【０１１３】
実施例８−代謝産物Ａ
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-((S)-2-(4,6-ジメチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノイルオキシ)-3,4,5-トリヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-カルボン酸。
【０１１４】
【化２０】
2010535210.tif 000023
【０１１５】
[0076]  実施例７の化合物(1.0 g, 1.44 mmol)をメタノール(87 mL)に溶解し、次いでトリエチルアミン(25 mL)を添加する。水(25 mL)を反応溶液にゆっくりと添加し、反応物を0.5時間長く撹拌する。完了した反応物から減圧下で揮発性物質を蒸発させる。得られた混合物を、2N HClを用いて0〜5℃でpH約2に調節し、次いで酢酸エチル(2 X 15 mL)で抽出する。粗生成物の収量は600 mgである。粗生成物の一部(200 mg)を分取HPLCにより精製すると、表題化合物(80 mg, 30%)が得られる。MS m/z 555.1 (M+. + 1); 1H NMR (CDCl3, 200 MHz) δ 5.32 (C-6ピラン H, d, J5,6 = 7.4 Hz); [α]20D = -52.95°(c = 1, CH3OH)。
【０１１６】
実施例９
(S)-メチル  2-(4,6-ジメチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノエート。
【０１１７】
【化２１】
2010535210.tif 000024
【０１１８】
[0077]  (S)-アンブリセンタン(15.0 g, 40.0 mmol)および炭酸カリウム(8.28 g, 60.0 mmol)のアセトン(100 mL)中における混合物を、0.5時間撹拌する。ヨウ化メチル(3 mL, 47.0 mmol)をゆっくりと滴加し、次いで反応混合物を3時間撹拌する。得られた混合物を減圧下で濃縮して乾燥させる。残留物を水(100 mL)と混合し、酢酸エチル(4 X 100 mL)で抽出する。表題化合物の収量は15.0 g (96%)である。MS m/z 392.9 (M+. + 1)。
【０１１９】
実施例１０
(S)-メチル  2-(4-ホルミル-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノエート。
【０１２０】
【化２２】
2010535210.tif 000025
【０１２１】
[0078]  二酸化セレン(8.5 g, 76 mmol)を、ジオキサン(238 mL)および水40 mL)の溶液に、55〜60℃において溶解する。二酸化セレンの溶液に、実施例９の化合物(20 g, 51 mmol)を添加し、次いで反応混合物を10時間加熱還流する。反応混合物を室温に冷却し、エーテル(200 mL)で希釈し、濾過する。濾液をロータリーエバポレーター上で減圧下において濃縮し、次いで酢酸エチル(2 X 100 mL)で抽出すると、粗製の表題化合物が得られる。MS m/z 406.9 (M+. + 1)。
【０１２２】
実施例１１
(S)-メチル  2-(4-(ヒドロキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノエート。
【０１２３】
【化２３】
2010535210.tif 000026
【０１２４】
[0079]  実施例１０からの粗製の化合物(76 mmol)のメタノール(170 mL)中における溶液に、水素化ホウ素ナトリウム(1.93 g, 51 mmol)を一部ずつ添加し、反応物を3時間撹拌する。氷水(50 mL)で反応を停止し、メタノールをロータリーエバポレーター上で減圧下において除去する。残留した水相を酢酸エチル(2 X 100 mL)で抽出すると粗生成物(25 g)が得られる。この粗生成物を、シリカゲル上で酢酸エチル／ヘキサンを用いて溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製すると、表題化合物(1.8 g, 8.6%)が得られる。MS m/z 409.1 (M+. + 1)。
【０１２５】
実施例１２−代謝産物Ｂ
(S)-2-(4-(ヒドロキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパン酸。
【０１２６】
【化２４】
2010535210.tif 000027
【０１２７】
[0080]  実施例１１の化合物(0.8 g, 1.96 mmol)のメタノール(10 mL)中における溶液に、水酸化ナトリウム(0.392 g, 9.8 mmol)の水(5 mL)中における溶液を添加し、得られた混合物を2時間還流する。反応物を室温に冷却し、メタノールをロータリーエバポレーター上で減圧下において除去する。残留した水相をエーテル(2 X 10 mL)で洗浄し、次いで水相のpHを2N硫酸を用いて2〜3に調節し、酢酸エチル(2 X 20 mL)で抽出すると表題化合物(0.6 g, 80%)が得られる。MS m/z 395.1 (M+. + 1); [α]20D = +141.09°(c = 1, CH3OH)。
【０１２８】
実施例１３
(S)-メチル  2-(4-(ベンジルオキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノエート。
【０１２９】
【化２５】
2010535210.tif 000028
【０１３０】
[0081]  水素化リチウム(0.235 g, 29.4 mmol)のテトラヒドロフランおよびジメチルホルムアミド(30 mL: 10 mL)中における0℃の混合物に、実施例１１の化合物(3.0 g, 7.3 mmol)を添加し、混合物を0.5時間撹拌する。次いでベンジルブロミド(1.257 g, 7.3 mmol)を添加し、反応物を室温で12時間撹拌する。反応物を氷水(100 mL)に注入し、停止した混合物を酢酸エチル(2 X 100 mL)で抽出する。濃縮すると粗生成物が得られ、それをシリカゲル上で酢酸エチル−ヘキサン(1:9)を用いて溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製すると表題化合物(2.5 g, 69%)が得られる。MS m/z 499.0 (M+. + 1)。
【０１３１】
実施例１４
(S)-2-(4-(ベンジルオキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパン酸。
【０１３２】
【化２６】
2010535210.tif 000029
【０１３３】
[0082]  実施例１３の化合物(1.17 g, 2.34 mmol)のメタノール(20 mL)中における溶液に、水酸化カリウム(0.987 g, 23.4 mmol)の水(10 mL)中における溶液を添加し、反応物を還流下で5時間撹拌する。反応物を室温に冷却し、メタノールをロータリーエバポレーター上で減圧下において除去する。水性の残留物を酢酸エチル(2 X 25 mL)で洗浄し、次いで2N HClを用いてpHを2〜3に調節する。水相をエーテル(2 X 50 mL)で抽出すると、表題化合物(0.997 g, 88%)が得られる。
【０１３４】
実施例１５
(2S,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-(4-(ベンジルオキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノイルオキシ)-6-(メトキシカルボニル)テトラヒドロ-2H-ピラン-3,4,5-トリイル  トリアセテート。
【０１３５】
【化２７】
2010535210.tif 000030
【０１３６】
[0083]  実施例１４の化合物(0.997 g, 2.05 mmol)のアセトニトリル(20 mL)中における溶液に、炭酸カリウム(0.284 g, 2.05 mmol)を添加し、反応混合物を0.5時間撹拌する。(2R,3R,4S,5S,6S)-2-ブロモ-6-(メトキシカルボニル)テトラヒドロ-2H-ピラン-3,4,5-トリイル  トリアセテート(0.817 g, 2.05 mmol)を反応混合物に添加し、反応物を12時間撹拌する。反応混合物を濾過し、濾液をロータリーエバポレーター上で減圧下において濃縮すると粗生成物が得られる。粗生成物をシリカゲル上で酢酸エチル−ヘキサン(2:8)を用いて溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製すると表題化合物(1.0 g, 60%)が得られる。MS m/z 801.1 (M+. + 1); 1H NMR (CDCl3, 200 MHz) δ 5.65 (C-6 ピラン H, d, J5,6= 8 Hz)。
【０１３７】
実施例１６
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-((S)-2-(4-(ベンジルオキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノイルオキシ)-3,4,5-トリヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-カルボン酸
【０１３８】
【化２８】
2010535210.tif 000031
【０１３９】
[0084]  実施例１５の化合物を用いて出発し、実施例２に類似した手順で表題化合物を得る。MS m/z 683.5 (M+. + Na); 1H NMR (CDCl3, 200 MHz) δ 5.32 (C-6 ピラン H, d, J5,6 = 8 Hz)。
【０１４０】
実施例１７
(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((S)-2-(4-(ヒドロキシメチル)-6-メチルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノイルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-カルボン酸。
【０１４１】
【化２９】
2010535210.tif 000032
【０１４２】
[0085]  実施例１６の化合物を用いて出発し、表題化合物を、炭素上10％パラジウムを用いて、水素の雰囲気の下で水素化分解することにより脱ベンジレートする（ｄｅｂｅｎｚｙｌａｔｅｄ）。表題化合物を分取HPLCにより精製する。MS m/z 570.9 (M+. + 1); 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 5.35 (C-6 ピラン H, d, J5,6= 8.5 Hz)。
【０１４３】
実施例１８−代謝産物Ｄ
(S)-2-(4,6-ビス(ヒドロキシメチル)ピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパン酸。
【０１４４】
【化３０】
2010535210.tif 000033
【０１４５】
[0086]  表題化合物を、実施例９の化合物を用いて出発し、実施例１０の手順において過剰な二酸化セレンを用いてジアルデヒド中間体である(S)-2-(4,6-ジホルミルピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパン酸を製造すること以外は実施例９、１０、１１および１２の手順を用いて製造する。
【０１４６】
実施例１９−代謝産物Ｅ
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-((S)-2-(4,6-ビス(ヒドロキシメチル)ピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノイルオキシ)-3,4,5-トリヒドロキシテトラヒドロ-2H-ピラン-2-カルボン酸。
【０１４７】
【化３１】
2010535210.tif 000034
【０１４８】
[0087]  表題化合物を、実施例１８の製造において中間体として得られる(S)-メチル  2-(4,6-ビスヒドロキシメチル)ピリミジン-2-イルオキシ)-3-メトキシ-3,3-ジフェニルプロパノエートから出発して、実施例１３、１４、１５、１６および１７の手順を用いて製造する。
【図１】
2010535210.tif 000054
【図２】
2010535210.tif 000055
【国際調査報告】
2010535210.tif 000056
2010535210.tif 000057
2010535210.tif 000058
2010535210.tif 000059
2010535210.tif 000060
2010535210.tif 000061