(57)【要約】  本発明はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤の前駆体である構造式（Ｉ）：2010513484.tif 000048のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを提供する。これらの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製阻害剤の前駆体であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用として有用である。これらはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤の前駆体として、ＨＣＶ複製阻害剤の前駆体として、及び／又はＣ型肝炎感染の治療用として特に有用である。本発明はこのようなヌクレオシド環状ホスホロアミデートを単独で含有する医薬組成物又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染に対して活性な他の物質と共に含有する医薬組成物についても記載する。本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデート（Ｉ）によるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法も開示する。
2010513484.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉの化合物
【化３２】
2010513484.tif 000040
［式中、
Ｂは
【化３３】
2010513484.tif 000041
であり、アスタリスクは他の化合物との結合点を表し；
ｎは０、１又は２であり；
Ｒ１は水素、メチル又はフルオロメチルであり；
Ｒ２はフルオロ又はＯＲ３であり；
Ｒ３は水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【化３４】
2010513484.tif 000042
のアミノアシル残基から構成される群から選択され；
Ｒ４は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニル又はベンジルであり；ここでアルキルはフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドール−３−イルから構成される群から選択される１個の置換基で置換されていてもよく；並びにフェニル及びベンジルはハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシから構成される群から独立して選択される１から２個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ５は水素又はメチルであり；
あるいはＲ４とＲ５はそれらが結合している炭素原子と一緒になって３から６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジル又はアダマンチルであり；ここでアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−８アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；並びにフェニル及びベンジルはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキル又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−８アルキルカルボニル、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニル、又は［（ジ−Ｃ１−８アルキルアミノ）−Ｃ１−８アルコキシ］カルボニルであり；並びに
Ｒ１０は水素、Ｃ１−８アルキル又はＣ１−８アルキルカルボニルである。］
又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】
化合物が式Ｉ−Ａ：
【化３５】
2010513484.tif 000043
の化合物である請求項１の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項３】
化合物が式Ｉ−Ｂ１：
【化３６】
2010513484.tif 000044
の化合物である請求項１の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ６が水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジル又はアダマンチルであり；ここでアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；並びにフェニル及びベンジルはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ９が水素、Ｃ１−８アルキルカルボニル又はＣ１−８アルキルオキシカルボニルである請求項２の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項５】
Ｒ１がメチル又はフルオロメチルであり、並びにＲ２がヒドロキシである請求項１から４のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項６】
Ｒ１がメチルである請求項５の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項７】
Ｒ１がメチル又はフルオロメチルであり、並びにＲ２がフルオロである請求項１から４のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項８】
Ｒ５が水素であり、並びにＲ４が水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、イソブチル、２−メチル−１−プロピル、ヒドロキシメチル、フルオロメチル、メルカプトメチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、１−ヒドロキシエチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、２−メチルチオエチル、４−アミノ−１−ブチル、３−アミノ−１−プロピル、３−グアニジノ−１−プロピル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル及び１Ｈ−インドール−３−イルメチルから構成される群から選択される請求項１から４のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項９】
Ｒ６が各々フッ素、ヒドロキシ及びＣ１−６アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいＣ１−８アルキル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシルメチル、２−シクロヘキシルエチル又は３−シクロヘキシル−ｎ−プロピルである請求項１から４のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１０】
Ｒ６がエチル、ブチル又はヘプチルである請求項９の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１１】
Ｒ４がメチルであり、Ｒ５が水素であり、並びにＲ６がエチル、ブチル又はヘプチルである請求項１から４のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１２】
式ＩＩ：
【化３７】
2010513484.tif 000045
［式中、
Ｒ４はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ６はＣ１−８アルキル、Ｃ１−６アルコキシで置換されたＣ１−８アルキル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシルメチル、２−シクロヘキシルエチル又は３−シクロヘキシル−ｎ−プロピルであり；並びに
Ｒ９はＨ、Ｃ１−８アルキルカルボニル又は［（ジ−Ｃ１−４アルキルアミノ）−Ｃ１−４アルコキシ］カルボニルである。］
の化合物である請求項１の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１３】
式ＩＩＩ−Ａ：
【化３８】
2010513484.tif 000046
の化合物である請求項１の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１４】
式ＩＩＩ−Ｂ：
【化３９】
2010513484.tif 000047
の化合物である請求項１３の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１５】
ｎ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−アミノピリジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝プロパノエート；
エチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−アミノピリジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝プロパノエート；
ｎ−ヘプチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−アミノピリジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝プロパノエート；
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
ｎ−ブチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
エチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝ブタノエート；
エチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−ロイシネート；
エチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−ノルバリネート；
シクロペンチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
エチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
ｎ−ヘプチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
シクロヘキシルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
イソペンチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
３−メトキシプロピルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
２−エチルブチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
２−プロピルペンチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
２−（ヘキシルオキシ）エチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
シクロヘプチルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
３−シクロヘキシルプロピルＮ−［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］−Ｌ−アラニネート；
エチル（２Ｓ）−２−（｛（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシド−６−［２−オキソ−４−［（２−プロピルペンタノイル）アミノ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル］テトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル｝アミノ）ブタノエート；
エチルＮ−｛（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシド−６−［２−オキソ−４−［（２−プロピルペンタノイル）アミノ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル］テトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル｝−Ｌ−アラニネート；
ｎ−ヘプチルＮ−｛（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−６−［４−［（１−メチレン−２−プロピルペンチル）アミノ］−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル］−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル｝−Ｌ−アラニネート；
ｎ−ヘプチルＮ−｛（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−［４−（｛［３−（ジメチルアミノ）プロポキシ］カルボニル｝アミノ）−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル］−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル｝−Ｌ−アラニネート；
から構成される群から選択される請求項１の化合物及び該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩、及び医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
【請求項１７】
哺乳動物におけるＣ型肝炎感染の治療用としての請求項１から１５のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩の使用。
【請求項１８】
哺乳動物におけるＣ型肝炎感染の治療用医薬の製造における請求項１から１５のいずれか一項の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヌクレオシド環状ホスホロアミデート、その合成及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤の前駆体としてのその使用に関する。本発明の化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製阻害剤の前駆体であるため、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。これらはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤の前駆体として、ＨＣＶ複製阻害剤の前駆体として、及び／又はＣ型肝炎感染の治療用として特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は肝硬変や肝細胞癌等の慢性肝疾患につながる重要な健康上の問題であり、感染者は相当数に及び、世界人口の２から１５％と推定される。米国疾病対策センター（Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）によると、米国だけで４５０万人が感染していると推定される。世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）によると、全世界の感染者数は２億人を上回り、毎年少なくとも３から４００万人が感染している。感染者の約２０％からはウイルスが消えるが、残りの感染者は終生ＨＣＶを保有し続ける。慢性感染者の１０から２０％は肝臓を破壊する肝硬変又は癌を最終的に発症する。このウイルス性疾患は汚染した血液及び血液製剤、汚染した注射針により非経口感染するか又は性感染し、感染母体又はキャリヤー母体からその子孫へと垂直感染する。ＨＣＶ感染の現行治療法は組換えインターフェロンαの単独使用又はヌクレオシドアナログリバビリンとの併用による免疫療法に限られており、臨床効果も限られている。更に、ＨＣＶのワクチンは確立されていない。従って、慢性ＨＣＶ感染を有効に抑制する改良型治療剤が緊急に必要とされている。ＨＣＶ感染治療の最新技術はその開示内容全体を参照により本明細書に組み込む以下の刊行物に記載されており、これらの刊行物を参照されたい：Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，“Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｉｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，１１：７９−９６（２０００）；Ｈ．Ｒｏｓｅｎら，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）；Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）；Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）；Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）；Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）；及びＣ．Ｃｒａｂｂ，“Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）。
【０００３】
ＨＣＶ治療のアプローチとしては他にウイルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼ、及びＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害やワクチンの開発等の各種のアプローチが取られている。
【０００４】
ＨＣＶビリオンはエンベロープをもつプラス鎖ＲＮＡウイルスであり、約３，０１０アミノ酸のポリプロテインをコードする約９６００塩基の単一オリゴリボヌクレオチドゲノム配列からなる。ＨＣＶ遺伝子の蛋白産物は構造蛋白質Ｃ、Ｅ１及びＥ２と、非構造蛋白質ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ及びＮＳ４Ｂ、並びにＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂから構成される。非構造（ＮＳ）蛋白質はウイルス複製の触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼはＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂをポリプロテイン鎖から遊離させる。ＨＣＶ  ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶの複製サイクルにおいて鋳型として機能する１本鎖ウイルスＲＮＡから２本鎖ＲＮＡを合成するために必要である。従って、ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶ複製複合体の必須成分であるとみなされる［Ｋ．Ｉｓｈｉら，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ，”Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ  ２９：１２２７−１２３５（１９９９）及びＶ．Ｌｏｈｍａｎｎら，“Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ，”Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）参照］。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は２本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成を防止するので、ＨＣＶ特異的抗ウイルス治療の開発の魅力的なアプローチとなる。
【０００５】
ＨＣＶ感染の治療用として有望なＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤の開発についてはＭ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら，“Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ．１２：１２６９−１２８０（２００３）及びＰ．Ｈｏｆｆｍａｎｎら，“Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２），”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ．”１３：１７０７−１７２３（２００３）に記載されている。ＨＣＶポリメラーゼに対するプリンリボヌクレオシドの活性はＡ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐら．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｐｕｒｉｎｅ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＣＶ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４）により報告されている。ＨＣＶ治療用治療アプローチとしてＨＣＶポリメラーゼ阻害剤としての構造的に多様なヌクレオシド誘導体が引き続き必要とされている。
【０００６】
本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の強力な阻害剤の前駆体であることが今般判明した。前記ホスホロアミデートはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である対応するヌクレオシド５’−三リン酸誘導体に変換されるそのヌクレオシド５’−リン酸（ヌクレオチド）誘導体にインビボ変換される。本発明のヌクレオシドホスホロアミデートはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染を治療するために有用である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，“Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｉｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，１１：７９−９６（２０００）
【非特許文献２】Ｈ．Ｒｏｓｅｎら，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）
【非特許文献３】Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）
【非特許文献４】Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）
【非特許文献５】Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）
【非特許文献６】Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）
【非特許文献７】Ｃ．Ｃｒａｂｂ，“Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）
【非特許文献８】Ｋ．Ｉｓｈｉら，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ，”Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ  ２９：１２２７−１２３５（１９９９）
【非特許文献９】Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎら，“Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ，”Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）
【非特許文献１０】Ｍ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら，“Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ．１２：１２６９−１２８０（２００３）
【非特許文献１１】Ｐ．Ｈｏｆｆｍａｎｎら，“Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２），”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ．”１３：１７０７−１７２３（２００３）
【非特許文献１２】Ａ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐら．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｐｕｒｉｎｅ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＣＶ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤の前駆体、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤の前駆体として有用なヌクレオシド環状ホスホロアミデートを提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製阻害剤の前駆体、特にＣ型肝炎ウイルス複製阻害剤の前駆体として有用なヌクレオシド環状ホスホロアミデートを提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用なヌクレオシド環状ホスホロアミデートを提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は医薬的に許容可能なキャリヤーと共に本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含有する医薬組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤の前駆体、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤の前駆体として使用するための本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含有する医薬組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製阻害剤の前駆体、特にＨＣＶ複製阻害剤の前駆体として使用するための本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含有する医薬組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に使用するための本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含有する医薬組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の物質と共に本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含有する医薬組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法、特にＨＣＶ複製の阻害方法を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法、特にＨＣＶ感染の治療方法を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して活性な他の物質と併用するＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法、特にＨＣＶに対して活性な他の物質と併用するＨＣＶ感染の治療方法を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害用及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用医薬、特にＨＣＶ複製の阻害用及び／又はＨＣＶ感染の治療用医薬として使用するためのヌクレオシド環状ホスホロアミデート及びその医薬組成物を提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害用及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用医薬、特にＨＣＶ複製の阻害用及び／又はＨＣＶ感染の治療用医薬の製造における本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデート及びその医薬組成物の使用を提供することである。
【００２２】
以上及び他の目的は以下の詳細な記載から容易に理解されよう。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は指定立体化学配置の構造式Ｉ：
【００２４】
【化１】
2010513484.tif 000003
［式中、
Ｂは
【００２５】
【化２】
2010513484.tif 000004
であり、上記式中、アスタリスクは化合物の残余との結合点を表し；
ｎは０、１又は２であり；
Ｒ１は水素、メチル又はフルオロメチルであり；
Ｒ２はフルオロ又はＯＲ３であり；
Ｒ３は水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式：
【００２６】
【化３】
2010513484.tif 000005
のアミノアシル残基から構成される群から選択され；
Ｒ４は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニル又はベンジルであり；ここでアルキルはフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドール−３−イルから構成される群から選択される１個の置換基で置換されていてもよく；並びにフェニル及びベンジルはハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシから構成される群から独立して選択される１から２個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ５は水素又はメチルであり；
あるいはＲ４とＲ５はそれらが結合している炭素原子と一緒になって３から６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジル又はアダマンチルであり；ここでアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−８アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；並びにフェニル及びベンジルはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキル又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−８アルキルカルボニル、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニル、又は［（ジ−Ｃ１−８アルキルアミノ）−Ｃ１−８アルコキシ］カルボニルであり；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−８アルキル又はＣ１−８アルキルカルボニルである。］の化合物と該化合物の医薬的に許容可能な塩に関する。
【発明の効果】
【００２７】
式Ｉの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤の前駆体として有用である。これらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害剤の前駆体でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用である。
【００２８】
その作用メカニズムに関して限定するものではないが、本発明の環状ホスホロアミデートは対応するヌクレオシド５’−一リン酸の前駆体として作用する。内在キナーゼ酵素は５’−一リン酸をＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤であるその５’−三リン酸誘導体に変換する。従って、前記環状ホスホロアミデートはヌクレオシド自体よりも効率的な標的細胞透過を実現し、代謝分解しにくく、肝臓等の特定組織に標的送達することができ、その結果、治療指数を高め、抗ウイルス薬の総用量を低減できると考えられる。
【００２９】
上記化合物を単独で含有する医薬組成物又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の物質と共に含有する医薬組成物と、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法も本発明に含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は上記発明の概要の欄に記載したような構造式Ｉの化合物に関する。式Ｉの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤の前駆体として有用である。これらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製阻害剤の前駆体でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。
【００３１】
本発明の第１の実施形態は式Ｉ−Ａ：
【００３２】
【化４】
2010513484.tif 000006
［式中、全可変項は当初に定義した通り（即ち発明の概要の欄に定義した通り）である。］の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００３３】
本発明の第２の実施形態は式Ｉ−Ｂ１：
【００３４】
【化５】
2010513484.tif 000007
（式中、全可変項は当初に定義した通りである。）の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００３５】
本発明の第３の実施形態は式Ｉ−Ｂ２：
【００３６】
【化６】
2010513484.tif 000008
（式中、全可変項は当初に定義した通りである。）の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００３７】
本発明の第４の実施形態は、
Ｒ６が水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジル又はアダマンチルであり、ここでアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、並びにフェニル及びベンジルはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ９が水素、Ｃ１−８アルキルカルボニル又はＣ１−８アルキルオキシカルボニルであり；
他の全可変項が当初に定義した通りである式Ｉもしくは式Ｉ−Ａもしくは式Ｉ−Ｂ１もしくは式Ｉ−Ｂ２の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００３８】
本発明の化合物の第５の実施形態において、Ｒ１はメチル又はフルオロメチルであり、Ｒ２はヒドロキシであり、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。この実施形態の１分類において、Ｒ１はメチルである。
【００３９】
本発明の化合物の第６の実施形態において、Ｒ１はメチル又はフルオロメチルであり、Ｒ２はフルオロであり、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。この実施形態の１分類において、Ｒ１はメチルである。
【００４０】
本発明の化合物の第７の実施形態において、Ｒ５は水素であり、Ｒ４は水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、イソブチル、２−メチル−１−プロピル、ヒドロキシメチル、フルオロメチル、メルカプトメチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、１−ヒドロキシエチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、２−メチルチオエチル、４−アミノ−１−ブチル、３−アミノ−１−プロピル、３−グアニジノ−１−プロピル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル及び１Ｈ−インドール−３−イルメチルから構成される群から選択され、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。この実施形態の１分類において、Ｒ４はメチル又はベンジルである。この分類のサブ分類において、Ｒ４はメチルである。
【００４１】
本発明の化合物の第８の実施形態において、Ｒ６は各々フッ素、ヒドロキシ及びＣ１−６アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されたＣ１−８アルキル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシルメチル、２−シクロヘキシルエチル又は３−シクロヘキシル−ｎ−プロピルであり、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。この実施形態の１分類において、Ｒ６はエチル、ブチル又はヘプチルである。
【００４２】
本発明の化合物の第９の実施形態において、Ｒ６は各々フッ素、ヒドロキシ及びＣ１−４アルコキシから独立して選択される１から３個の置換基で置換されたＣ１−８アルキル、シクロヘキシル又はシクロペンチルであり、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。この実施形態の１分類において、Ｒ６はエチル、ブチル又はヘプチルである。
【００４３】
本発明の化合物の第１０の実施形態において、Ｒ４はメチルであり、Ｒ５は水素であり、Ｒ６はエチル、ブチル又はヘプチルであり、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。
【００４４】
本発明の化合物の第１１の実施形態において、Ｒ９は水素であり、他の全可変項は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。
【００４５】
本発明の第１２の実施形態は式ＩＩ：
【００４６】
【化７】
2010513484.tif 000009
［式中、
Ｒ４はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ６はＣ１−８アルキル、Ｃ１−６アルコキシで置換されたＣ１−８アルキル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロヘキシルメチル、２−シクロヘキシルエチル又は３−シクロヘキシル−ｎ−プロピルであり；
Ｒ９はＨ、Ｃ１−８アルキルカルボニル又は［（ジ−Ｃ１−４アルキルアミノ）−Ｃ１−４アルコキシ］カルボニルである。］の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００４７】
本発明の第１３の実施形態は式ＩＩＩ−Ａ：
【００４８】
【化８】
2010513484.tif 000010
（式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。）の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００４９】
本発明の第１４の実施形態は式ＩＩＩ−Ｂ：
【００５０】
【化９】
2010513484.tif 000011
（式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は当初に定義した通りであるか又は上記実施形態のいずれか１種に定義した通りである。）の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００５１】
本発明の第１５の実施形態は実施例１から２３に記載する化合物と該化合物の医薬的に許容可能な塩から構成される群から選択される式Ｉの化合物である。１サブ実施形態において、化合物は実施例１から１４に記載する化合物と該化合物の医薬的に許容可能な塩から構成される群から選択される。
【００５２】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤の前駆体として有用な構造式Ｉの本発明の化合物の非限定的な具体例は以下の化合物：
【００５３】
【化１０】
2010513484.tif 000012
と該化合物の医薬的に許容可能な塩である。
【００５４】
本発明の一実施形態において、本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートはプラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤、プラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製阻害剤の前駆体として、及び／又はプラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用として有用である。この実施形態の１分類において、プラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスはフラビウイルス科ウイルス又はピコルナウイルス科ウイルスである。この分類の１サブ分類において、ピコルナウイルス科ウイルスはライノウイルス、ポリオウイルス又はＡ型肝炎ウイルスである。この分類の第２のサブ分類において、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、バンジ（Ｂａｎｚｉ）ウイルス及びウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）から構成される群から選択される。このサブ分類の１サブ分類において、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルスである。
【００５５】
本発明の別の態様は各処置を必要とする哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法として、治療有効量の構造式Ｉの化合物を前記哺乳動物に投与する段階を含む方法に関する。
【００５６】
本発明のこの態様の一実施形態において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼはプラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼである。この実施形態の１分類において、プラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼはフラビウイルス科ウイルスポリメラーゼ又はピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼである。この分類の１サブ分類において、ピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼはライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼ又はＡ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。この分類の第２のサブ分類において、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱病ウイルスポリメラーゼ、デングウイルスポリメラーゼ、西ナイルウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、バンジウイルスポリメラーゼ及びウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼから構成される群から選択される。このサブ分類の１サブ分類において、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
【００５７】
本発明のこの態様の第２の実施形態において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製はプラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製である。この実施形態の１分類において、プラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製はフラビウイルス科ウイルス複製又はピコルナウイルス科ウイルス複製である。この分類の１サブ分類において、ピコルナウイルス科ウイルス複製はライノウイルス複製、ポリオウイルス複製又はＡ型肝炎ウイルス複製である。この分類の第２のサブ分類において、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製，黄熱病ウイルス複製、デングウイルス複製、西ナイルウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、バンジウイルス複製及びウシウイルス性下痢ウイルス複製から構成される群から選択される。このサブ分類の１サブ分類において、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製である。
【００５８】
本発明のこの態様の第３の実施形態において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染はプラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ウイルス感染である。この実施形態の１分類において、プラスセンス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染はフラビウイルス科ウイルス感染又はピコルナウイルス科ウイルス感染である。この分類の１サブ分類において、ピコルナウイルス科ウイルス感染はライノウイルス感染、ポリオウイルス感染又はＡ型肝炎ウイルス感染である。この分類の第２のサブ分類において、フラビウイルス科ウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、デングウイルス感染、西ナイルウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、バンジウイルス感染及びウシウイルス性下痢ウイルス感染から構成される群から選択される。このサブ分類の１サブ分類において、フラビウイルス科ウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染である。
【００５９】
本明細書を通して以下の用語は以下に指定する意味である。
上記アルキル基は直鎖又は分岐構造の指定長のアルキル基を意味する。このようなアルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル等である。
【００６０】
「ナフチル」なる用語は１−ナフチル（α−ナフチル）と２−ナフチル（β−ナフチル）の両者を意味する。
【００６１】
「アダマンチル」なる用語は１−アダマンチルと２−アダマンチルの両者を意味する。
【００６２】
「置換されていてもよいベンジル」なる用語はフェニル部分が置換されていてもよい−ＣＨ２−フェニルを意味する。
【００６３】
「アルケニル」なる用語は総炭素原子数２から２０又はこの範囲内の任意数の直鎖又は分岐鎖アルケン（例えばエテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、オレイル等）を意味する。
【００６４】
「シクロアルキル」なる用語は総炭素原子数３から８又はこの範囲内の任意数の環状アルカン環（例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチル）を意味する。
【００６５】
「アルコキシ」なる用語は指定炭素原子数（例えばＣ１−４アルコキシ）又はこの範囲内の任意数の直鎖又は分岐鎖アルコキシド［例えばメトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシ等］を意味する。
【００６６】
「アルキルチオ」なる用語は指定炭素原子数（例えばＣ１−４アルキルチオ）又はこの範囲内の任意数の直鎖又は分岐鎖アルキルスルフィド［例えばメチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオ等］を意味する。
【００６７】
「アルキルアミノ」なる用語は指定炭素原子数（例えばＣ１−４アルキルアミノ）又はこの範囲内の任意数の直鎖又は分岐鎖アルキルアミン［例えばメチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ等］を意味する。
【００６８】
「アルキルスルホニル」なる用語は指定炭素原子数（例えばＣ１−６アルキルスルホニル）又はこの範囲内の任意数の直鎖又は分岐鎖アルキルスルホン［例えばメチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニル等］を意味する。
【００６９】
「アルキルオキシカルボニル」なる用語は指定炭素原子数（例えばＣ１−８アルキルオキシカルボニル）又はこの範囲内の任意数の本発明の化合物に存在するカルボン酸又はカルバミン酸基の直鎖又は分岐鎖エステル［例えばメチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル又はブチルオキシカルボニル］を意味する。
【００７０】
「アルキルカルボニル」なる用語は指定炭素原子数（例えばＣ１−８アルキルカルボニル）又はこの範囲内の任意数の直鎖又は分岐鎖アルキルアシル基［例えばメチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル又はブチルオキシカルボニル］を意味する。
【００７１】
「ハロゲン」なる用語はハロゲン原子であるフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を意味する。
【００７２】
結合の末端のアスタリスク（「＊」）は他の化合物との結合点を表す。
【００７３】
「ホスホリル」なる用語は−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２を意味する。
【００７４】
「ジホスホリル」なる用語は構造：
【００７５】
【化１１】
2010513484.tif 000013
をもつ基を意味する。
【００７６】
「トリホスホリル」なる用語は構造：
【００７７】
【化１２】
2010513484.tif 000014
をもつ基を意味する。
【００７８】
Ｒ３がアミノアシル残基である実施形態において、式：
【００７９】
【化１３】
2010513484.tif 000015
中、Ｒ７が水素以外の置換基であるとき、アミノアシル残基は不斉中心を含み、個々のＲ及びＳ立体異性体とＲＳジアステレオ異性体混合物を含むものとする。一実施形態において、不斉炭素の立体配置はＳ−アミノ酸の立体配置に対応し、即ち、式：
【００８０】
【化１４】
2010513484.tif 000016
に示すような天然α−アミノ酸立体配置に対応する。
【００８１】
「置換」なる用語は指定置換基による多重度の置換を含むものとする。複数の置換基部分を明細書又は特許請求の範囲に記載する場合には、置換化合物は明細書又は特許請求の範囲に記載する置換基部分の１種以上を独立して１個又は複数個使用して置換することができる。
【００８２】
「５’−三リン酸」なる用語は下記一般構造式ＩＶ：
【００８３】
【化１５】
2010513484.tif 000017
（式中、Ｂ、Ｒ１及びＲ２は上記に定義した通りである。）をもつ本発明のヌクレオシド化合物の５’−ヒドロキシル基の三リン酸エステル誘導体を意味する。この定義の所定態様において、この用語は式ＩＶ−Ａ及びＩＶ−Ｂ：
【００８４】
【化１６】
2010513484.tif 000018
の誘導体の一方又は両方を意味する。
【００８５】
「医薬組成物」等における「組成物」なる用語は活性成分とキャリヤーを構成する不活性成分を含有する製剤と、成分の任意２種類以上の配合、錯化もしくは凝集、成分の１種類以上の解離、又は成分の１種類以上の他の型の反応もしくは相互作用により直接又は間接的に得られる任意製剤を含むものとする。従って、本発明の医薬組成物は本発明の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを混合することにより製造される任意組成物を含む。
【００８６】
化合物「の投与」及び「を投与する」なる用語は必要とする個体に本発明の化合物又は本発明の化合物のプロドラッグを提供することを意味するものとする。
【００８７】
本発明の別の態様はＨＣＶ感染を治療するために有用な１種類以上の物質と本発明の化合物の併用によるＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法、ＨＣＶ複製の阻害方法又はＨＣＶ感染の治療方法に関する。ＨＣＶに対して活性なこのような物質としては限定されないが、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、ニタゾキサニド、チモシンα−１，インターフェロン−β，インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの併用剤、ペグインターフェロン−αとリバビリンの併用剤、インターフェロン−αとレボビリンの併用剤、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの併用剤が挙げられる。インターフェロン−αとしては限定されないが、組換えインターフェロン−α２ａ（例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから市販されているＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（登録商標））、インターフェロン−α２ｂ（例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから市販されているＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ｂ（ＰｅｇＩｎｔｒｏｎ（登録商標））、組換えコンセンサスインターフェロン（例えばインターフェロンαｃｏｎ−１）、及び精製インターフェロン−α製剤が挙げられる。Ａｍｇｅｎ社からも商品名Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）として組換えコンセンサスインターフェロンが市販されている。レボビリンはリバビリンのＬエナンチオマーであり、リバビリンと類似の免疫調節活性を示している。ビラミジンは国際公開第０１／６０３７９号（譲受人ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）パンフレットに開示されているリバビリンの類似体である。本発明のこの方法によると、併用剤の個々の成分を治療期間中の異なる時点で別々に投与してもよいし、併用剤を２回以上に分ける又は１回で同時に投与してもよい。従って、本発明はこのような同時又は交互投与の全レジメンを含むものとし、「投与する」なる用語は相応に解釈すべきである。当然のことながら、ＨＣＶ感染の治療に有用な他の物質と本発明の化合物の併用の範囲は原則として任意のＨＣＶ感染治療用医薬組成物との任意併用を含む。本発明の化合物又は該化合物の医薬的に許容可能な塩をＨＣＶに対して活性な第２の治療剤と併用する場合には、各化合物の用量は化合物を単独で使用する場合の用量と同一でもよいし、異なる量でもよい。
【００８８】
ＨＣＶ感染の治療には、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤である物質と本発明の化合物を併用投与してもよい。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは必須ウイルス酵素であり、ＨＣＶ複製阻害の優れたターゲットであると記載されている。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の基質型及び非基質型両者の阻害剤は国際公開第９８／２２４９６号パンフレット、国際公開第９８／４６６３０号パンフレット、国際公開第９９／０７７３３号パンフレット、国際公開第９９／０７７３４号パンフレット、国際公開第９９／３８８８８号パンフレット、国際公開第９９／５０２３０号パンフレット、国際公開第９９／６４４４２号パンフレット、国際公開第００／０９５４３号パンフレット、国際公開第００／５９９２９号パンフレット、英国特許第２３３７２６２号明細書、国際公開第０２／１８３６９号パンフレット、国際公開第０２／０８２４４号パンフレット、国際公開第０２／４８１１６号パンフレット、国際公開第０２／４８１７２号パンフレット、国際公開第０５／０３７２１４及び米国特許第６，３２３，１８０号明細書に開示されている。ＨＣＶ複製阻害剤の開発とＨＣＶ感染治療のターゲットとしてのＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼはＢ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）に記載されている。本発明の化合物と併用可能な特定ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤としてはＢＩＬＮ２０６１、ＶＸ−９５０、ＳＣＨ６、ＳＣＨ７及びＳＣＨ−５０３０３４が挙げられる。
【００８９】
リバビリン、レボビリン及びビラミジンは細胞内酵素イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介してグアニンヌクレオチドの細胞内プールを調節することによりその抗ＨＣＶ効果を発揮すると思われる。ＩＭＰＤＨは新規グアニンヌクレオチド生合成における生合成経路の律速酵素である。リバビリンは容易に細胞内リン酸化され、一リン酸誘導体はＩＭＰＤＨの阻害剤である。従って、ＩＭＰＤＨの阻害はＨＣＶ複製阻害剤の発見に有用な別のターゲットである。従って、本発明の化合物は国際公開第９７／４１２１１号及び０１／００６２２号（譲受人Ｖｅｒｔｅｘ）パンフレットに開示されているＶＸ−４９７等のＩＭＰＤＨ阻害剤；国際公開第００／２５７８０号（譲受人Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）パンフレットに開示されているような別のＩＭＰＤＨ阻害剤；又はミコフェノール酸モフェチル［Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎ，４４（Ｓｕｐｐｌ．）：１６５（１９９３）参照］と併用投与してもよい。
【００９０】
ＨＣＶ感染の治療には、抗ウイルス剤アマンタジン（１−アミノアダマンタン）と本発明の化合物を併用投与してもよい［この薬剤の包括的記載についてはＪ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓ．１２：１−３６（１９８３）参照］。
【００９１】
ＨＣＶ感染の治療には、各々その開示内容全体を参照により本明細書に組み込むＲ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ’ｋｕｒｕら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：１７５４−１７５９（１９９７）；Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３６：７６１１−７６１４（１９９５）；米国特許第３，４８０，６１３号（１９６９年１１月２５日）明細書；米国特許第６，７７７，３９５号（２００４年８月１７日）明細書；米国特許第６，９１４，０５４号（２００５年７月５日）明細書；国際公開第０１／９０１２１号（２００１年１１月２９日）パンフレット；国際公開第０１／９２２８２号（２００１年１２月６日）パンフレット；国際公開第０２／３２９２０号（２００２年４月２５日）パンフレット；国際公開第０２／０５７２８７号（２００２年７月２５日）パンフレット；国際公開第０２／０５７４２５号（２００２年７月２５日）パンフレット；国際公開第０４／００２４２２号（２００４年１月８日）パンフレット；国際公開第０４／００２９９９号（２００４年１月８日）パンフレット；国際公開第０４／００３０００号（２００４年１月８日）パンフレット；国際公開第０４／００２４２２号（２００４年１月８日）パンフレット；米国特許出願公開第２００５／０１０７３１２号明細書；米国特許出願公開第２００５／００９０４６３号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１４７４６４号明細書；及び米国特許出願公開第２００４／００６３６５８号明細書に開示されている抗ウイルス２’−Ｃ−分岐型リボヌクレオシドと本発明の化合物を併用してもよい。このような２’−Ｃ−分岐型リボヌクレオシドとしては限定されないが、２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−Ｃ−メチルウリジン、２’−Ｃ−メチルアデノシン、２’−Ｃ−メチルグアノシン及び９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン；フラノースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルの対応するアミノ酸エステル（例えば３’−Ｏ−（Ｌ−バリル）−２’−Ｃ−メチルシチジン二塩酸塩、別称バロピシタビン二塩酸塩ないしＮＭ−２８３及び３’−Ｏ−（Ｌ−バリル）−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジン）、並びにその５’リン酸誘導体の置換された対応する環状１，３−プロパンジオールエステルが挙げられる。
【００９２】
ＨＣＶ感染の治療には、米国特許第６，８６４，２４４号（２００５年３月８日）明細書；国際公開第０２／５１４２５号（２００２年７月４日）パンフレット，譲受人Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏｒｐ．；国際公開第０１／７９２４６号、国際公開第０２／３２９２０号及び国際公開第０２／４８１６５号（２００２年６月２０日）パンフレット，譲受人Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ，Ｌｔｄ．；国際公開第０１／６８６６３号（２００１年９月２０日）パンフレット，譲受人ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；国際公開第９９／４３６９１号（１９９９年９月２日）パンフレット；国際公開第０２／１８４０４号（２００２年３月７日）パンフレット，譲受人Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ；米国特許出願公開第２００２／００１９３６３号（２００２年２月１４日）明細書；国際公開第０２／１００４１５号（２００２年１２月１９日）パンフレット；国際公開第０３／０２６５８９号（２００３年４月３日）パンフレット；国際公開第０３／０２６６７５号（２００３年４月３日）パンフレット；国際公開第０３／０９３２９０号（２００３年１１月１３日）パンフレット：米国特許出願公開第２００３／０２３６２１６号（２００３年１２月２５日）明細書；米国特許出願公開第２００４／０００６００７号（２００４年１月８日）明細書；国際公開第０４／０１１４７８号（２００４年２月５日）パンフレット；国際公開第０４／０１３３００号（２００４年２月１２日）パンフレット；米国特許出願公開第２００４／００６３６５８号（２００４年４月１日）明細書；並びに国際公開第０４／０２８４８１号（２００４年４月８日）パンフレットに開示されているもの等の抗ＨＣＶ特性をもつ他のヌクレオシドと本発明の化合物を併用してもよい。
【００９３】
一実施形態において、本発明のヌクレオシド誘導体と併用可能なヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は以下の化合物から選択される：４’−アジドシチジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；並びに該化合物の医薬的に許容可能な塩及びプロドラッグ。
【００９４】
ＨＣＶ感染の治療には、各々その開示内容全体を参照により本明細書に組み込む国際公開第０１／７７０９１号（２００１年１０月１８日）パンフレット、譲受人Ｔｕｌａｒｉｋ，Ｉｎｃ．；国際公開第０１／４７８８３号（２００１年７月５日）パンフレット、譲受人Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ，Ｉｎｃ．；国際公開第０２／０４４２５号（２００２年１月１７日）パンフレット、譲受人Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；国際公開第０２／０６２４６号（２００２年１月２４日）パンフレット、譲受人Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  ｄｉ  Ｒｉｃｅｒｃｈｅ  ｄｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅ  Ｐ．Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｓ．Ｐ．Ａ．；国際公開第０２／２０４９７号（２００２年３月３日）パンフレット；国際公開第２００５／０１６９２７号（特にＪＴＫ００３）パンフレット、譲受人Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ，Ｉｎｃ．に開示されているもの；及びＨＣＶ−７９６（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）等のＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤と本発明の化合物を併用してもよい。
【００９５】
一実施形態において、本発明のヌクレオシド誘導体と併用可能な非ヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は以下の化合物から選択される：１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸メチル；（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸；１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド；３−クロロ−１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；Ｎ’−（１１−カルボキシ−１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾキサゾシン−７−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタン−１，２−ジアミニウムビス（トリフルオロアセテート）；１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾキサゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−７−オキ���−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−（１−メチルピペリジン−４−イル）−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド；１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；６−アリル−１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１３−シクロヘキシル−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロフロ［３’，２’：６，７］［１，４］ジアゾシノ［１，８−α］インドール−１０−カルボン酸；１５−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，６］ベンゾジアゾニン−１２−カルボン酸；１５−シクロヘキシル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾニン−１２−カルボン酸；１３−シクロヘキシル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−インドロ［１，２−ｄ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０−カルボン酸；及び該化合物の医薬的に許容可能な塩。
【００９６】
「医薬的に許容可能」とはキャリヤー、希釈剤又は賦形剤が製剤の他の成分と適合可能でなければならず且つそのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
【００９７】
医薬的に許容可能なキャリヤーと共に本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含有する医薬組成物も本発明に含まれる。本発明の別の例は上記化合物のいずれかと医薬的に許容可能なキャリヤーを配合することにより製造される医薬組成物である。本発明の別の例は上記化合物のいずれかと医薬的に許容可能なキャリヤーを配合する段階を含む医薬組成物の製造方法である。
【００９８】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するために有用な医薬組成物として、有効量の本発明の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する組成物も本発明に含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療に有用な医薬組成物と、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法及びＲＮＡ依存性ウイルス複製、特にＨＣＶ複製の治療方法も本発明に含まれる。更に、本発明はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な治療有効量の別の物質と共に治療有効量の本発明の化合物を含有する医薬組成物にも関する。ＨＣＶに対して活性な物質としては限定されないが、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの併用剤、ペグインターフェロン−αとリバビリンの併用剤、インターフェロン−αとレボビリンの併用剤、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの併用剤が挙げられる。インターフェロン−αとしては限定されないが、組換えインターフェロン−α２ａ（例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから市販されているＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、インターフェロン−α２ｂ（例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから市販されているＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、コンセンサスインターフェロン及び精製インターフェロン−α製剤が挙げられる。リバビリンとＨＣＶに対するその活性については、Ｊ．Ｏ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒａｙｂｕｃｋ，“Ｉｎｏｓｉｎｅ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，”Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２０１−２１０（２０００）参照。
【００９９】
本発明の別の態様はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害用医薬、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用医薬の製造におけるヌクレオシド環状ホスホロアミデート及びその医薬組成物の使用を提供する。本発明の更に別の態様はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害用医薬、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用医薬として使用するためのヌクレオシド環状ホスホロアミデート及びその医薬組成物を提供する。
【０１００】
本発明の医薬組成物は構造式Ｉの化合物又は医薬的に許容可能なその塩を活性成分として含み、更に医薬的に許容可能なキャリヤーと他の治療成分を含むことができる。
【０１０１】
前記組成物としては、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内及び静脈内を含む）、眼球（眼科薬）、肺（鼻腔又は口腔吸入）、又は鼻腔内投与に適した組成物が挙げられるが、任意所定症例に最適な経路は治療する病態の種類及び重篤度と活性成分の種類によって異なる。組成物は単位用量形態にすると簡便であり、製薬分野で周知の任意方法により製造することができる。
【０１０２】
実際の使用では、構造式Ｉの化合物を活性成分として慣用医薬配合技術により医薬キャリヤーと混和することができる。キャリヤーは例えば経口又は非経口（静脈内を含む）等の投与に所望される製剤形態に応じて多種多様の形態とすることができる。経口剤形用組成物を製造するには、通常の医薬媒体の任意のものを使用することができ、例えば、懸濁液剤、エリキシル剤及び溶液剤等の経口液体製剤の場合には、水、グリコール、油類、アルコール類、香味剤、防腐剤、着色剤等を使用することができ；あるいは、例えば散剤、ハード及びソフトカプセル剤並びに錠剤等の経口固体製剤の場合には、澱粉、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のキャリヤーを使用することができ、固体経口製剤のほうが液体製剤よりも好ましい。
【０１０３】
投与し易いという理由から、錠剤とカプセル剤が最も有利な経口用量単位形態であり、その場合には当然固体医薬キャリヤーが使用される。所望により、標準水性又は非水性技術により錠剤にコーティングしてもよい。このような組成物及び製剤は少なくとも０．１％の活性成分を含有すべきである。これらの組成物中の活性化合物の百分率は当然のことながら変動させることができ、用量単位の重量の約２％から約６０％にすると適切である。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は有効用量が得られるように選択される。活性化合物は例えば滴剤やスプレー等として鼻腔内投与することもできる。
【０１０４】
錠剤、ピル、カプセル等には更に結合剤（例えばトラガカントガム、アラビアガム、コーンスターチ又はゼラチン）、賦形剤（例えばリン酸２カルシウム）、崩壊剤（例えばコーンスターチ、ジャガイモ澱粉、アルギン酸）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム）、及び甘味剤（例えばスクロース、ラクトース又はサッカリン）を添加してもよい。用量単位形態がカプセルである場合には、上記種の材料に加えて脂肪油等の液体キャリヤーを添加してもよい。
【０１０５】
コーティングとして又は用量単位の物理的形状を変えるために他の各種材料を使用してもよい。例えば、錠剤はシェラック、糖又は両者でコーティングしてもよい。シロップ又はエリキシル剤には活性成分以外に、甘味剤としてスクロース、防腐剤としてメチル及びプロピルパラベン、色素並びにフレーバー（例えばチェリー又はオレンジフレーバー）を添加してもよい。
【０１０６】
構造式Ｉの化合物は非経口投与してもよい。ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と適切に混合した水中でこれらの活性化合物の溶液又は懸濁液を製造することができる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びその油中混合物中で分散液を製造することもできる。通常の保存及び使用条件では、微生物の増殖を防ぐためにこれらの製剤に防腐剤を添加する。
【０１０７】
注射用に適した剤形としては滅菌水溶液又は分散液と、注射用滅菌水溶液又は分散液の即席調製用滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合も、剤形は無菌でなければならず、容易に注射針を通過できる程度まで流動性でなければならない。剤形は製造及び保存条件下で安定でなければならず、細菌や真菌等の微生物の汚染作用から保護しなれけばならない。キャリヤーは例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、適切なその混合物及び植物油を含む溶媒又は分散媒とすることができる。
【０１０８】
哺乳動物、特にヒトに有効用量の本発明の化合物を提供するのに適した任意投与経路を利用することができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼球、肺、鼻腔等の経路を利用できる。剤形としては錠剤、トローチ、分散液、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアゾール等が挙げられる。構造式Ｉの化合物は経口投与することが好ましい。
【０１０９】
ヒトに経口投与する場合、用量範囲は０．０１から１０００ｍｇ／ｋｇ体重を複数回に分けて投与する。一実施形態において、用量範囲は０．１から１００ｍｇ／ｋｇ体重を複数回に分けて投与する。別の実施形態において、用量範囲は０．５から２０ｍｇ／ｋｇ体重を複数回に分けて投与する。経口投与では、治療する患者の症状に用量を合わせるように活性成分１．０から１０００ｍｇ、特に活性成分１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００及び１０００ｍｇを含有する錠剤又はカプセルとして組成物を提供することが好ましい。
【０１１０】
使用する活性成分の有効用量は使用する特定化合物、治療方法、治療する病態及び治療する病態の重篤度により変えることができる。このような用量は当業者が容易に確認することができる。最適治療応答が得られるようにこの用量レジメンを調節することができる。
【０１１１】
本発明の化合物は１個以上の不斉中心を含み、従って、ラセミ化合物及びラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオ異性体混合物及び個々のジアステレオ異性体として存在することができる。Ｒ５が水素であり、構造式Ｉでリン原子に結合したアミノアシル残基におけるＲ４が式：
【０１１２】
【化１７】
2010513484.tif 000019
中、水素以外の置換基であるとき、アミノ酸残基は不斉中心を含み、個々のＲ及びＳ立体異性体とＲＳ立体異性体混合物を含むものとする。一実施形態において、不斉炭素の立体配置はＳ−アミノ酸の立体配置に対応し、即ち、式：
【０１１３】
【化１８】
2010513484.tif 000020
に示すような天然α−アミノ酸立体配置に対応する。
【０１１４】
構造式Ｉの化合物における四置換リンは別の不斉中心を構成し、本発明の化合物はこのリン原子に両方の立体化学配置を含むものとする。
【０１１５】
本発明は下記構造式：
【０１１６】
【化１９】
2010513484.tif 000021
に示すような５員フラノース環のβ−Ｄ立体化学配置をもつヌクレオシド環状ホスホロアミデート、即ち５員フラノース環のＣ−１及びＣ−４位の置換基がβ立体化学配置（太線で示す「上向き」方向）をもつヌクレオシド環状ホスホロアミデートを含むものとする。
【０１１７】
本明細書に記載する化合物にはオレフィン二重結合を含むものもあり、特に指定しない限り、Ｅ及びＺ幾何異性体を含むものとする。
【０１１８】
本明細書に記載する化合物にはケト−エノール互変異性体等の互変異性体として存在するものもある。個々の互変異性体とその混合物も構造式Ｉの化合物に含まれる。本発明の化合物に含まれるケト−エノール互変異性体の例を以下に示す。
【０１１９】
【化２０】
2010513484.tif 000022
【０１２０】
構造式Ｉの化合物は例えば適切な溶媒（例えばメタノール又は酢酸エチル又はその混合物）から分別結晶や、光学活性固定相を使用するキラルクロマトグラフィーによりその個々のジアステレオ異性体に分離することができる。
【０１２１】
あるいは、光学的に純粋な出発材料又は既知配置の試薬を使用して立体特異的合成により構造式Ｉの化合物の任意立体異性体を得ることもできる。
【０１２２】
本発明の化合物は医薬的に許容可能な塩として投与することができる。「医薬的に許容可能な塩」なる用語は無機又は有機塩基と無機又は有機酸を含む医薬的に許容可能な非毒性塩基又は酸から製造される塩を意味する。「医薬的に許容可能な塩」なる用語に含まれる塩基性化合物の塩とは遊離塩基を適切な有機又は無機酸と反応させることにより一般に製造される本発明の化合物の非毒性塩を意味する。本発明の塩基性化合物の代表的な塩としては限定されないが、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、硼酸塩、臭化物、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、蓚酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、琥珀酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド及び吉草酸塩が挙げられる。更に、本発明の化合物が酸性部分をもつ場合には、適切な該化合物の医薬的に許容可能な塩としては限定されないが、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、三価鉄、二価鉄、リチウム、マグネシウム、三価マンガン、二価マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等の無機塩基から誘導される塩が挙げられる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム及びナトリウム塩が特に好ましい。医薬的に許容可能な非毒性有機塩基から誘導される塩としては第一、第二、及び第三アミン、環状アミン、並びに塩基性イオン交換樹脂（例えばアルギニン、ペタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等）の塩が挙げられる。
【０１２３】
更に、本発明の化合物にカルボン酸（−ＣＯＯＨ）又はヒドロキシル基が存在する場合には、カルボン酸誘導体の医薬的に許容可能なプロドラッグエステル（例えばメチル、エチル又はピバロイルオキシメチルエステル）又はリボースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルのプロドラッグアシル誘導体（例えばＯ−アセチル、Ｏ−ピバロイル、Ｏ−ベンゾイル及びＯ−アミノアシル）を使用することができる。徐放又はプロドラッグ製剤として使用するように生体利用性、組織分布、溶解度及び加水分解特徴を改変するために当分野で公知のエステル及びアシル基が含まれる。予想される誘導体は必要な化合物に容易にインビボ変換可能である。従って、本発明の治療方法において、「投与する」及び「投与」なる用語は具体的に開示する化合物又は具体的に開示しないとしても、ヒト患者を含む哺乳動物に投与後に特定化合物にインビボ変換する化合物で指定ウイルス感染症を治療することを意味する。適切なプロドラッグ誘導体の従来の選択及び製造法は例えばその開示内容全体を参照により本明細書に組み込む“Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，”Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【０１２４】
本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートの製造
Ｃ．Ｐｉｅｒｒａら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２４：７６７（２００５）又はＪ．Ａ．Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｉら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６４：７４７（１９９９）により文献に記載されているように２’−Ｃ−メチルシチジンを製造した。２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジンはＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４８：５５０４−５５０８（２００５）に記載されているように製造する。リン酸化反応用のアリールホスホロクロリデートはその開示内容全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，４５５，５１３号明細書に記載の方法に従って製造した。本発明のアリールホスホロアミデートを生成するためのリン酸化反応は米国特許第６，４５５，５１３号明細書とＣ．ＭｃＧｕｉｇａｎら．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３６：１０４８（１９９３）に記載の方法に従って実施した。例えば、ｐ−クロロフェノールをオキシ塩化リンと反応させた後、各種アミノ酸塩とカップリングして４−クロロフェノキシホスホロクロリデートを得た後、ｔ−ブチルマグネシウムクロリド等の適切な塩基の存在下でヌクレオシドとカップリングした（Ｍ．Ｕｃｈｉｙａｍａら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５８：３７３（１９９３）及びスキーム１参照）。得られた中間体をＤＭＳＯ等の適切な溶媒に溶解し、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドで処理し、ｐ−クロロフェノールの置換により環化を行った。
【０１２５】
一般手順：
全溶媒は市販品とし、それ以上精製せずに使用した。反応はオーブン乾燥（１１０℃）したガラス容器で窒素雰囲気下に実施した。有機抽出層を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥し、（乾燥剤の濾過後に）ロータリーエバポレーターを減圧下に運転して濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーは公開手順（Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４３：２９２３（１９７８））に従ってシリカゲル又はプレパックカラムを利用する市販フラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｂｉｏｔａｇｅ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ  Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ  ＩＩ）で実施した。
【０１２６】
試薬は通常通りに商業的供給業者から直接入手（及び供給状態で使用）するか又は科学文献に報告されているかもしくは当業者に公知の日常的合成段階を使用して容易に製造可能である。
【０１２７】
１Ｈ及び３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ  ＡＭシリーズ分光計を（報告されている。）周波数３００から６００ＭＨｚで運転して記録した。交換不能なプロトン（及び検出される場合には交換可能なプロトン）の化学シフト（δ）をテトラメチルシランに対する百万分率（ｐｐｍ）で記録し、残留溶媒ピークを基準として使用して測定する。シグナルは多重度（ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｑ，四重線；ｍ，多重線；ｂ，広幅，及びその組み合わせ）；ヘルツ（Ｈｚ）で表したカップリング定数；プロトン数の順に表示する。質量分析（ＭＳ）データはＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＡＰＩ  １００又はＷａｔｅｒｓ  ＭｉｃｒｏＭａｓｓ  ＺＱを負（ＥＳ−）又は正（ＥＳ＋）イオン化モードで運転して取得し、親イオンのみの質量対電荷（ｍ／ｚ）比として結果を報告する。分取規模のＨＰＬＣ分離は２４８７デュアル吸光度検出器を取付けたＷａｔｅｒｓ  ２５２５ポンプ、ＵＶ１０００吸収モジュールを取付けたＴＳＰ  Ｓｐｅｃｔｒａ  ｓｙｓｔｅｍ  Ｐ４０００、又は２５２５ポンプモジュールとＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤ検出器と２５２５採取モジュールを組込んだＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓシステムで実施した。１０から４０ｍＬ／分の流速を使用していずれも０．１％トリフルオロ酢酸又はギ酸を加えた水とＭｅＣＮの直線勾配で化合物を溶出させた。Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８カラム（７μＭ，１９×３００ｍｍ）を固定相として使用した。
【０１２８】
実施例、スキーム及び表では以下の略語を使用する：
ａｑ．：水溶液；Ａｒ：アリール；ａｔｍ：気圧；ＣＣｌ４：四塩化炭素；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ｅｑ．：当量；ＥＳ：エレクトロスプレー（ＭＳ）；Ｅｔ３Ｎ：トリエチルアミン；ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル；ｈ：時間；Ｍｅ：メチル；ＭｅＣＮ：アセトニトリル；ＭｅＯＨ：メタノール；ｍｉｎ：分；ＭＳ：質量スペクトル；ＮＭＲ：核磁気共鳴；Ｎ，Ｎ−ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；ＰＥ：石油エーテル；Ｐｙ：ピリジン；ｑｕａｎｔ．：定量的；ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高性能液体クロマトグラフィー；ＲＴ：室温；ｓｅｃ：秒；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；及びＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
【実施例】
【０１２９】
以下、実施例により本発明の化合物の製造に使用する条件を例証する。これらの実施例は如何なる点でも本発明の範囲を限定するものではなく、そのように解釈すべきではない。本発明のこれら及び他の化合物を製造するために以下の製造手順の条件及び工程の公知変形を使用できることはヌクレオシド及びヌクレオチド合成の当業者に容易に理解されよう。全温度は特に指定しない限り、摂氏である。
【０１３０】
【化２１】
2010513484.tif 000023
【０１３１】
（実施例１）
ステップ１：ｎ−ブチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニネート
【０１３２】
【化２２】
2010513484.tif 000024
【０１３３】
ＤＣＭ（０．１６Ｍ）中の４−クロロフェニルジクロロジホスフェートに（２Ｓ）−１−ブトキシ−１−オキソプロパン−２−アミニウムクロリド（１．０ｅｑ）を加え、−７８℃まで冷却後、Ｅｔ３Ｎ（２．０ｅｑ．）を原液で加え、反応混合物を室温まで一晩昇温した。全揮発分を除去し、得られた白色固体をＥｔ２Ｏで洗浄し、濾過し、減圧蒸発させ、ジアステレオマーの１：１混合物として無色油状物を得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：９．５  ａｎｄ  ９．３ｐｐｍ。
【０１３４】
ステップ２：ｎ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］−メトキシ｝（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］アミノ｝プロパノエート
【０１３５】
【化２３】
2010513484.tif 000025
【０１３６】
（トルエンから２回蒸発させた）２’−Ｃ−メチルシチジンをＴＨＦ（０．０９７Ｍ）で希釈した。得られたスラリーを−７８℃まで冷却後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．０ｅｑ．）を加えた。混合物をすぐに０℃まで昇温し、３０分間撹拌し、再び−７８℃まで冷却後、ｎ−ブチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニネート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．０ｅｑ．）を滴下した。反応混合物を室温まで一晩昇温し、水の添加によりクエンチした。水相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、有機相を合わせてブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９０／１０→８０／２０）により精製し、得られたオフホワイト固体をＤＭＳＯに再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製した。純化合物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥し、ＴＦＡ塩状の標記化合物を１．０７：１＊混合物（１回目の溶出：２回目の溶出）として得た。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０５  ａｎｄ  ８．０４＊（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＊＝７．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．３８（ｍ，２Ｈ），７．３４−７．２５（ｍ，２Ｈ），６．１０＊  ａｎｄ  ６．０８（ｄ，，Ｊ＊＝７．９６  ａｎｄ  Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ），６．０２＊  ａｎｄ  ６．０１（ｓ，１Ｈ），４．６７−４．５３（ｍ，１Ｈ），４．５３−４．３７（ｍ，１Ｈ），４．２５−４．０８（ｍ，３Ｈ），４．０７−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．８４＊  ａｎｄ  ３．８１（ｄ，Ｊ＝４．６４Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＊＝４．６４Ｈｚ，１Ｈ），１．７１−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．３５（ｍ，５Ｈ），１．２２（ｓ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ  ＣＤ３ＯＤ）δ：５．１６，５．０９＊ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ５７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３８】
ステップ３：ｎ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−アミノピリジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝プロパノエート
【０１３９】
【化２４】
2010513484.tif 000026
【０１４０】
（ジアステレオマーの１．１：１混合物としての）ｎ−ブチル（２Ｓ）−２−｛［｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メトキシ｝（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］アミノ｝プロパノエートＴＦＡ塩を無水ＤＭＳＯ（０．０１８Ｍ）で希釈後、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３．０ｅｑ．）を加え、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌの添加により反応混合物をクエンチした。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製した。純化合物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥し、白色粉末状の標記化合物をＴＦＡ塩として得た。
【０１４１】
１回目の溶出：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．２８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ），６．１２−５．９４（ｍ，３Ｈ），５．８７（ｔ，Ｊ＝１１．３９Ｈｚ，１Ｈ），４．６７−４．４５（ｍ，２Ｈ），４．４３−４．１９（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．０３（ｍ，３Ｈ），３．９５−３．８１（ｍ，１Ｈ），１．６５−１．５２（ｍ，２Ｈ），１．４３−１．３４（ｍ，２Ｈ），１．３２（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，３Ｈ），１．０９（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．３０Ｈｚ，３Ｈ），３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．５８ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４２】
２回目の溶出：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ），６．１３−５．９４（ｍ，４Ｈ），４．６９−４．５５（ｍ，１Ｈ），４．５３−４．３７（ｍ，１Ｈ），４．１９−４．１１（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．５２Ｈｚ，２Ｈ），３．８８−３．７３（ｍ，１Ｈ），１．６４−１．５２（ｍ，２Ｈ），１．４４−１．３２（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，３Ｈ），１．１３（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．１９Ｈｚ，３Ｈ），３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：６．６３ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４３】
（実施例２）
ステップ１：エチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニネート
【０１４４】
【化２５】
2010513484.tif 000027
【０１４５】
実施例１のステップ１に記載した手順に従い、パラクロロフェニルジクロロジホスフェートのＤＣＭ（０．１６Ｍ）溶液をＬ−アラニンエチルエステル塩酸塩（１．０ｅｑ．）とＥｔ３Ｎ（２．０ｅｑ．）で処理し、無色油状物状の標記化合物をジアステレオマーの１：１混合物として得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ９．４３  ａｎｄ  ９．１１ｐｐｍ。
【０１４６】
ステップ２：エチル（２Ｓ）−２−｛［｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メトキシ｝（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］アミノ｝プロパノエート
【０１４７】
【化２６】
2010513484.tif 000028
【０１４８】
実施例１のステップ２に記載した手順に従い、（トルエンから２回蒸発させた）２’−Ｃ−メチルシチジンのＴＨＦ（０．０９７Ｍ）希釈液を−７８℃まで冷却後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．２ｅｑ．）を加えた後、エチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニネート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．０ｅｑ．）を加えた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９０／１０→８０／２０）により精製し、得られたオフホワイト固体をＤＭＳＯに再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製した。純化合物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥し、ＴＦＡ塩としての白色粉末状の標記化合物を１：１．１＊混合物（１回目の溶出：２回目の溶出）として得た。
【０１４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．０３  ａｎｄ  ８．０２＊（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＊＝７．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．２０（ｍ，２Ｈ），６．１２−６．０４（ｍ，１Ｈ），６．０２  ａｎｄ  ６．０１＊（ｓ，１Ｈ），４．６７−４．５３（ｍ，１Ｈ），４．５３−４．３７（ｍ，１Ｈ），４．２５−４．１１（ｍ，３Ｈ），４．０６−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．８３＊  ａｎｄ  ３．８０（ｄ，Ｊ＊＝４．２０Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＝４．２２Ｈｚ，１Ｈ），１．４４−１．３５（ｍ，３Ｈ），１．３２−１．２４（ｍ，３Ｈ），１．２１（ｍ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．２０，５．１０＊ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ５４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５０】
ステップ３：エチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ．７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−アミノピリジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝プロパノエート
【０１５１】
【化２７】
2010513484.tif 000029
【０１５２】
実施例１のステップ３に記載した手順に従い、（１回目の溶出：２回目の溶出のジアステレオマーの１．１：１混合物としての）エチル（２Ｓ）−２−｛［｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メトキシ｝（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］アミノ｝プロパノエートＴＦＡ塩を無水ＤＭＳＯ（０．０１８Ｍ）で希釈後、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３．０ｅｑ．）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌの添加により反応混合物をクエンチした。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製した。純化合物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥し、白色粉末状の標記化合物をＴＦＡ塩として得た。
【０１５３】
１回目の溶出：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９０（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ），６．１９−６．０８（ｍ，２Ｈ），４．７０−４．５１（ｍ，２Ｈ），４．４０−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．１６Ｈｚ，２Ｈ），４．１９−４．０９（ｍ，１Ｈ），４．０３−３．８９（ｍ，１Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝６．９７Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．３５ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
２回目の溶出：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．８９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），６．１９−６．０９（ｍ，２Ｈ），４．７２−４．５６（ｍ，２Ｈ），４．４０−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，２Ｈ），４．１９−４．１２（ｍ，１Ｈ），４．０３−３．９２（ｍ，１Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．２４ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
（実施例３）
ステップ１：ｎ−ヘプチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニネート
【０１５６】
【化２８】
2010513484.tif 000030
【０１５７】
実施例１のステップ１に記載した手順に従い、パラクロロフェニルジクロロジホスフェートのＤＣＭ（０．０９８Ｍ）溶液をＬ−アラニンｎ−ヘプチルエステル塩酸塩（１．０ｅｑ．）とＥｔ３Ｎ（２．０ｅｑ．）で処理し、無色油状物状の標記化合物をジアステレオマーの１：１混合物として得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ９．５  ａｎｄ  ９．２。
【０１５８】
ステップ２：ｎ−ヘプチル（２Ｓ）−２−｛［｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メトキシ｝−（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］アミノ｝プロパノエート
【０１５９】
【化２９】
2010513484.tif 000031
【０１６０】
実施例１のステップ２に記載した手順に従い、（トルエンから２回蒸発させた）２’−Ｃ−メチルシチジンのＴＨＦ（０．０９７Ｍ）希釈液を−７８℃まで冷却後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．２ｅｑ．）を加えた後、ｎ−ヘプチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニネート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液，２．０ｅｑ．）を加えた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配９０／１０→８０／２０）により精製し、得られたオフホワイト固体をＤＭＳＯに再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製した。純化合物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥し、ＴＦＡ塩としての白色粉末状の標記化合物を１．１＊：１混合物（１回目の溶出：２回目の溶出）として得た。
【０１６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．９９  ａｎｄ  ７．９６＊（ｄ，Ｊ＝８．０９Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＊＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２９−７．２３（ｍ，２Ｈ），６．０６  ａｎｄ  ６．０４＊（ｄ，Ｊ＝８．０９Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＊＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ），５．９９＊  ａｎｄ  ５．９８（ｓ，１Ｈ），４．６１−４．５１（ｍ，１Ｈ），４．４８−４．３７（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．０５（ｍ，３Ｈ），４．０１−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．７９＊  ａｎｄ  ３．７８（ｄ，Ｊ＊＝９．１Ｈｚ  ａｎｄ  Ｊ＝９．０９Ｈｚ，１Ｈ），１．６５−１．５９（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．３０（ｍ，１１Ｈ），１．１８  ａｎｄ  １．１７＊（ｓ，３Ｈ），０．９２−０．８９（ｔ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ，３Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨ検出されず，３１Ｐ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＣＤ３ＯＤ）：δ４．０３＊  ａｎｄ  ３．９８；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ６１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６２】
ステップ３：ｎ−ヘプチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−アミノピリジン−１（２Ｈ）−イル）−１−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，２，３］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝プロパノエート
【０１６３】
【化３０】
2010513484.tif 000032
【０１６４】
実施例１のステップ３に記載した手順に従い、（ジアステレオマーの１．１：１混合物としての）ｎ−ヘプチル（２Ｓ）−２−｛［｛［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−３，４−ジヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル］メトキシ｝（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］アミノ｝プロパノエートＴＦＡ塩を無水ＤＭＳＯ（０．０１８Ｍ）で希釈後、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．０ｅｑ．）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌの添加により反応混合物をクエンチした。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製した。純化合物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥し、白色粉末状の標記化合物をＴＦＡ塩として得た。
【０１６５】
１回目の溶出：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．８０（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ），６．１３−６．１２（ｂｓ，２Ｈ），４．６７−４．６３（ｍ，１Ｈ），４．５２−４．４６（ｍ，２Ｈ），４．２２−４．１４（ｍ，３Ｈ），３．９８−３．９１（ｍ，１Ｈ），１．７２−１．６５（ｑｔ，Ｊ＝６．８２Ｈｚ，２Ｈ），１．４５−１．４３（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．３９−１．３３（ｍ，８Ｈ），１．２６（ｂｓ，３Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ＝６．５２Ｈｚ，３Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨ検出されず，３１Ｐ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ：５．２５；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６６】
２回目の溶出：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．８５（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），６．１２−６．１０（ｍ，２Ｈ），４．６３−４．６０（ｍ，２Ｈ），４．３４−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．１２（ｍ，３Ｈ），３．９９−３．９１（ｍ，１Ｈ），１．６８（ｑｔ，Ｊ＝６．８２Ｈｚ，２Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．３８−１．３１（ｍ，８Ｈ），１．２７（ｂｓ，３Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ＝６．８２Ｈｚ，３Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨ検出されず，３１Ｐ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＣＤ３ＯＤ）δ７．１６，ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６７】
（実施例４から１９）
実施例１から３に詳述した方法に従い、表１に示す実施例４から１９を製造した。
【０１６８】
【表１】
2010513484.tif 000033
2010513484.tif 000034
2010513484.tif 000035
【０１６９】
（実施例２０）
エチル（２Ｓ）−２−（｛（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシド−６−［２−オキソ−４−［（２−プロピルペンタノイル）アミノ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル］テトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル｝アミノ）ブタノエート
【０１７０】
【化３１】
2010513484.tif 000036
【０１７１】
実施例６に記載した手順に従って製造したエチル（２Ｓ）−２−｛［（４ａＲ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−６−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−７−ヒドロキシ−７−メチル−２−オキシドテトラヒドロ−４Ｈ−フロ［３，２−ｄ］［１，３，２］ジオキサホスフィニン−２−イル］アミノ｝ブタノエートをＴＨＦ：ＤＭＦ溶液（５：２，０．０３Ｍ）で希釈した。Ｅｔ３Ｎ（４．０ｅｑ．）とＤＭＡＰ（０．２ｅｑ．）を加えた後、混合物を０℃まで冷却し、２−プロピルペンタノイルクロリド（２．５ｅｑ．）を滴下した。混合物をすぐに０℃まで昇温し、２時間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌ（ａｑ）を加えてｐＨを６にすることにより反応混合物をクエンチした後、溶媒を減圧除去した。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ．移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡ）により精製し、白色粉末状の標記化合物を得た（３６％）。
【０１７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９５（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝７．４４Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｓ，１Ｈ），５．９５（ｄｄ，Ｊ＝１３．１５Ｈｚ，Ｊ＝１０．１４Ｈｚ，１Ｈ），４．６８−４．５８（ｍ，１Ｈ），４．５２−４．３７（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．１２（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｑ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，２Ｈ），３．７２−３．５９（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．５６（ｍ，１Ｈ），１．７０−１．４６（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．２１（ｍ，６Ｈ），１．１９（ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，３Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），０．８９−０．８（ｍ，６Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：５．７８ｐｐｍ；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ５５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７３】
（実施例２１から２３）
実施例２０に記載した方法に従い、表２に示す実施例２１から２３を製造した。
【０１７４】
【表２】
2010513484.tif 000037
【０１７５】
（生物学的アッセイ）
ＨＣＶ複製の阻害を測定するために使用したアッセイについて以下に記載する。
【０１７６】
Ａ．ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害アッセイ：
本発明の化合物がサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞中でＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの複製に作用する能力を評価する。アッセイの詳細を以下に記載する。このレプリコンアッセイはＶ．Ｌｏｈｍａｎｎ，Ｆ．Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ−Ｏ．Ｋｏｃｈ，Ｕ．Ｈｅｒｉａｎ，Ｌ．Ｔｈｅｉｌｍａｎｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｕｂ−ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ａ  Ｈｅｐａｔｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１１０（１９９９）に記載されているアッセイの変法である。
【０１７７】
プロトコール：
アッセイはｉｎ  ｓｉｔｕリボヌクレアーゼ保護シンチレーション近接型プレートアッセイ（ＳＰＡ）とする。９６ウェルＣｙｔｏｓｔａｒプレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で０．８ｍｇ／ｍＬ  Ｇ４１８を添加した培地１００から２００μＬに細胞１０，０００から４０，０００個を撒く。０から１８時間の時点で１％ＤＭＳＯ中１００μＭまでの各種濃度の化合物を細胞に添加した後、２４から９６時間培養する。細胞を固定し（２０分，１０％ホルマリン）、透過性を高め（２０分，０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウイルスゲノムに含まれる（プラス）鎖ＮＳ５Ｂ（又は他の遺伝子）に相補的な１本鎖３３Ｐ  ＲＮＡプローブとハイブリダイズさせる（一晩，５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、６５℃まで加熱し、Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔでカウントする。複製の阻害を毎分カウント（ｃｐｍ）の減少として読取る。
【０１７８】
サブゲノムレプリコンを含むものを選択したヒトＨｕＨ−７肝癌細胞はＨＣＶ５’非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択マーカー、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）、及びＨＣＶ非構造蛋白質ＮＳ３からＮＳ５Ｂとそれに続く３’ＮＴＲから構成される細胞質ＲＮＡを保持する。
【０１７９】
複製アッセイで試験した代表的化合物は１００マイクロモル未満のＥＣ５０を示す。例えば、実施例１から２３の標記化合物を上記レプリコンアッセイで試験した処、下表３に示すようなＥＣ５０であることが判明した。
【０１８０】
【表３】
2010513484.tif 000038
【０１８１】
Ｂ．細胞内代謝アッセイ：
その１
本発明の化合物がヒト肝癌細胞株に侵入して対応するヌクレオシド５’−一リン酸、二リン酸及び三リン酸に細胞内で変換する能力についても評価することができる。
【０１８２】
本発明の化合物の細胞内代謝試験にはＨｕＨ−７とＨＢＩ１０Ａの２種類の細胞株を使用する。ＨｕＨ−７はヒト肝癌細胞株であり、ＨＢＩ１０ＡはＨＣＶバイシストロン性レプリコンを保持するＨｕＨ−７細胞から誘導されたクローン株を意味する。ＨｕＨ−７細胞は化合物添加時に細胞が８０％コンフルエントになるように６０ｍｍ培養皿当たり細胞１．５×１０６個の密度で１０％胎仔ウシ血清を加えた完全ダルベッコ改変イーグル培地に撒き、ＨＢＩ１０Ａ細胞はＧ４１８（０．８ｍｇ／ｍＬ）を加えた同一培地に撒く。トリチウム標識化合物を細胞培養培地中２μＭで３又は２３時間インキュベートした。細胞を採取し、リン酸緩衝食塩水で洗浄し、カウントする。次に細胞を７０％メタノール，２０ｍＭ  ＥＤＴＡ，２０ｍＭ  ＥＧＴＡで抽出し、遠心する。溶解液を乾燥し、インラインβ−ＲＡＭシンチレーション検出器（ＩＮ／ＵＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に接続したＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍシステムでイオン対逆相（Ｃ−１８）ＨＰＬＣを使用して放射性標識ヌクレオチドを分析する。ＨＰＬＣ移動相は（ａ）１０ｍＭリン酸カリウム＋２ｍＭ水酸化テトラブチルアンモニウムと（ｂ）１０ｍＭリン酸カリウムと２ｍＭ水酸化テトラブチルアンモニウムを加えた５０％メタノールから構成する。ピーク同定は保持時間を標準に比較することにより行う。活性はＨｕＨ−７又はＨＢＩ１０Ａ細胞１０６個中に検出されたヌクレオチドのピコモルとして表す。
【０１８３】
その２
本発明の化合物が細胞（ヒト肝癌細胞株，肝細胞）に侵入して三リン酸に細胞内で変換する能力について評価した。本方法では各種の細胞株と化合物を利用した。化合物を細胞と共にインキュベーション後に、サンプルを抽出し、ＨＰＬＣにより定量する。
【０１８４】
細胞は以下のプロトコールに従って作製する。
懸濁細胞：低温保存細胞については、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｅｄｉｓｏｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）による低温保存細胞操作プロトコールに従った。
【０１８５】
新鮮細胞作製については、Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ  ２００５，３５（１０３５−５４）；Ｇｉｕｌｉａｎｏ  Ｃらに発表されているプロトコールに従った。
【０１８６】
細胞を適切な細胞密度（一般に細胞１０６個／ｍＬ；単一ドナー又は１０人のドナープール）まで肝細胞基礎培地（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，ＣＣ−３１９９）に再懸濁し、０．２ｍＬ／ウェルを滅菌９６ウェル丸底アッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７８８）に移した。
【０１８７】
化合物をＤＭＳＯに１０００倍希釈倍率で加え、温和なスワールにより混合し、Ｄｕｂｎｏｆｆ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｈａｋｉｎｇ  Ｉｎｃｕｂａｔｏｒでカルボゲン下に３７℃でインキュベートした。細胞懸濁液のアリコートを各時点で採取し、４℃で２０秒間遠心した。接着細胞株では、約１日前に６ウェル組織培養処理プレートで適切な培地に細胞を撒き、３７℃／５％ＣＯ２下にインキュベートした。播種から２４時間後に、化合物の１０００倍希釈液で細胞を処理し、適当な時間、３７℃／５％ＣＯ２下にインキュベートした。いずれの場合も、吸引によりインキュベーション培地を除去した後、細胞を冷７０％  ＭｅＯＨ，２０ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２０ｍＭ  ＥＧＴＡで抽出し、遠心した。溶解液を窒素下に乾燥し、固相抽出により精製し、分析時まで−２０℃で保存した。
【０１８８】
エレクトロスプレーインターフェース（ＥＳＩ）を取付けたＡＰＩ  ４０００質量分析計に接続したＡｇｉｌａｎｔ  １１００  ＨＰＬＣでＺＩＣ−ＨＩＬＩＣ  ＳｅＱｕａｎｔカラム（１００×２．１ｍｍ，５μｍ）を使用して乾燥溶解液を分析した。質量分析計は負イオンエレクトロスプレーモードで運転した。ＨＰＬＣ移動相は溶離液Ａ：水＋０．１％ギ酸、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸から構成した。ピーク同定は保持時間を標準に比較することにより行った。活性は濃度曲線の下の面積（ＡＵＣ，μＭ×ｈ）として表した。
【０１８９】
代表的化合物をヒト肝細胞と共に２時間インキュベートした処、高濃度のヌクレオシド三リン酸を形成することが判明した（表４）。
【０１９０】
【表４】
2010513484.tif 000039
【０１９１】
本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートの細胞毒性と抗ウイルス特異性も以下のカウンタースクリーニングで評価することができる。
【０１９２】
Ｃ．カウンタースクリーニング：
本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートがヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイで測定する。
【０１９３】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼα及びβの阻害：
反応条件：
反応容量５０μｌ。
【０１９４】
反応緩衝液成分：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５
ウシ血清アルブミン２００μｇ／ｍＬ
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  β−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ，ｄＧ，ｄＣ，ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０１９５】
酵素と鋳型：
ギャップを含む魚精子ＤＮＡ鋳型０．０５ｍｇ／ｍＬ
ＤＮＡポリメラーゼα又はβ０．０１Ｕ／μＬ。
【０１９６】
ギャップを含む魚精子ＤＮＡ鋳型の作製：
１Ｍ  ＭｇＣｌ２５μＬを活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ  ７００７６）５００μＬに加える；
３７℃まで昇温し、６５Ｕ／μＬエキソヌクレアーゼＩＩＩ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ１８０１３−０１１）３０μＬを加える；
５分間３７℃でインキュベートする；
６５℃まで１０分間加熱することにより反応を終了する；
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５で平衡化したＢｉｏ−ｓｐｉｎ  ６クロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ７３２−６００２）に５０から１００μＬアリコートをロードする；
１，０００×ｇで４分間遠心により溶出させる；
溶出液をプールし、２６０ｎｍの吸光度を測定して濃度を決定する。
【０１９７】
ＤＮＡ鋳型は適当な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５で希釈し、酵素は２ｍＭ  β−メルカプトエタノールと１００ｍＭ  ＫＣｌを加えた適当な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで希釈する。鋳型と酵素をマイクロ遠心管又は９６ウェルプレートにピペットで添加する。夫々酵素希釈用緩衝液と試験化合物溶媒を使用して酵素を含まないブランク反応液と試験化合物を含まない対照反応液も調製する。上記成分からなる反応緩衝液で反応を開始する。反応液を１時間３７℃でインキュベートする。０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ２０μＬを添加することにより反応液をクエンチする。クエンチした反応液５０μＬをＷｈａｔｍａｎ  ＤＥ８１フィルターディスクにスポットし、風乾する。洗浄液１ｍＬが＜１００ｃｐｍになるまでフィルターディスクを０．３Ｍギ酸アンモニウム（ｐＨ８）１５０ｍＬで反復洗浄する。ディスクを無水エタノール１５０ｍＬで２回洗浄し、無水エーテル１５０ｍＬで１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション液５ｍＬ中でカウントする。
【０１９８】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］×１００に従って阻害百分率を計算する。
【０１９９】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８），２ｍＭ  β−メルカプトエタノール，５０ｍＭ  ＫＣｌ，１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，及び０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含有する緩衝液中に０．５ｎｇ／μＬ酵素；１０μＭ  ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ，及びＴＴＰ；２μＣｉ／反応液［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰ，並びに０．４μｇ／μＬ活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入）を添加した反応液中でヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害能を測定することができる。１時間３７℃で反応を進行させ、０．５Ｍ  ＥＤＴＡを終濃度１４２ｍＭまで添加することによりクエンチする。アニオン交換フィルター結合とシンチレーションカウントにより生成物形成を定量する。５０μＭまでの化合物を試験する。
【０２００】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］×１００に従って阻害百分率を計算する。
【０２０１】
本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートがＨＩＶ感染性とＨＩＶ蔓延を阻害する能力を以下のアッセイで測定することができる。
【０２０２】
ｃ．ＨＩＶ感染性アッセイ
低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現について選択したＣＸＣＲ４とＣＣＲ５の両者を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異体でアッセイを実施することができる。細胞に４８時間感染させ、組込まれたＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を化学発光基質（Ｇａｌａｃｔｏｌｉｇｈｔ  Ｐｌｕｓ，Ｔｒｏｐｉｘ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）で定量する。１００μＭから出発して２倍系列希釈で阻害剤の力価を（２回ずつ）測定し、各濃度の阻害百分率を対照感染と比較計算する。
【０２０３】
ｄ．ＨＩＶ蔓延の阻害
その開示内容全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，４１３，９９９号（１９９５年５月９日）明細書と、Ｊ．Ｐ．Ｖａｃｃａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：４０９６−４１００（１９９４）に記載の方法により本発明の化合物がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の蔓延を阻害する能力を測定することができる。
【０２０４】
更に、以下のアッセイに記載するようなＭＴＳ細胞アッセイでサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞毒性について本発明のヌクレオシド環状ホスホロアミデートをスクリーニングする。ＨｕＨ−７細胞株はＨ．Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４２：３８５８（１９８２）に記載されている。
【０２０５】
ｅ．細胞毒性アッセイ：
懸濁培養には細胞約１．５×１０５個／ｍＬの濃度で３日間インキュベートし、接着培養には５．０×１０４個／ｍＬで３日間インキュベートすることにより適当な培地で細胞培養液を調製することができる。細胞培養液９９μＬを９６ウェル組織培養処理プレートのウェルに移し、試験化合物を１００倍終濃度でＤＭＳＯに溶かした溶液１μＬを加える。プレートを３７℃で５％ＣＯ２下に指定時間インキュベートする。インキュベーション時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ試薬（ＭＴＳ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）２０μＬを各ウェルに加え、プレートを３７℃で５％ＣＯ２下に更に３時間までインキュベートする。プレートを振盪して十分に混合し、プレートリーダーを使用して４９０ｎｍの吸光度を読取る。ＭＴＳ試薬添加の直前に既知細胞数から懸濁培養細胞の標準曲線を作成する。代謝活性細胞はＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは４９０ｎｍで吸収する。化合物の存在下の４９０ｎｍの吸光度と化合物を加えない細胞中の吸光度を比較する。
【０２０６】
参考文献：Ｃｏｒｙ，Ａ．Ｈ．ら，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ／ｆｏｒｍａｚａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｓｓａｙｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．３：２０７（１９９１）。
【０２０７】
他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対する本発明の化合物の活性を測定するために以下のアッセイを使用することができる。
【０２０８】
ａ．ライノウイルスに対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（細胞変性効果阻害アッセイ）：
アッセイ条件はＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの論文“Ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ，”Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：７９７−８０１（１９７１）に記載されている。
【０２０９】
ウイルス：
ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に記載されているようなＫＢ細胞及び培地（０．１％ＮａＨＣＯ３，抗生物質不含）と共に２型ライノウイルス（ＲＶ−２）ＨＧＰ株を使用する。ウイルスはＡＴＣＣから入手し、軽度急性発熱性上気道疾患の成人男子の咽頭スワブに由来する。９型ライノウイルス（ＲＶ−９）２１１株と１４型ライノウイルス（ＲＶ−１４）Ｔｏｗ株もＲｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤに所在のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手する。ＲＶ−９はヒト咽頭うがい液に由来し、ＲＶ−１４は上気道疾患の若年成人の咽頭スワブに由来する。これらの両者ウイルスはヒト子宮頸部上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（Ｄｒ．Ｆｒｅｄ  Ｈａｙｄｅｎ，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  ＶＡ）と併用する。５％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）と０．１％ＮａＨＣＯ３を添加したＭＥＭ（イーグル最少必須培地）を増殖培地として使用する。全３種のウイルス型の抗ウイルス試験培地は５％ＦＢＳ，０．１％ＮａＨＣＯ３，ゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬ，及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を添加したＭＥＭとした。
【０２１０】
本発明の化合物をアッセイするために使用した最高濃度は２０００μｇ／ｍＬである。試験化合物の約５分後にウイルスをアッセイプレートに添加した。適正な対照も試験する。アッセイプレートを加湿空気と５％ＣＯ２下に３７℃でインキュベートする。形態変化の顕微鏡試験により対照細胞における細胞毒性をモニターする。ウイルスＣＰＥデータと毒性対照データの回帰分析により、ＥＤ５０（５０％有効用量）とＣＣ５０（５０％細胞毒性濃度）を求める。式：ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０により選択性指数（ＳＩ）を計算する。
【０２１１】
ｂ．デング、バンジ及び黄熱病に対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は上記ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に記載されている。
【０２１２】
ウイルス：
２型デングウイルスニューギニア株を疾病対策センターから入手する。２種類のアフリカミドリザル腎細胞株を使用してウイルス（ベロ）を培養し、抗ウイルス試験（ＭＡ−１０４）を実施する。感染マウス脳から作製された黄熱病ウイルス１７Ｄ株と南アフリカの熱病少年の血清から単離されたバンジウイルスＨ３３６株の両株をＡＴＣＣから入手する。ベロ細胞をこれらのウイルスの両者と共にアッセイに使用する。
【０２１３】
細胞及び培地：
ＭＡ−１０４細胞（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）とベロ細胞（ＡＴＣＣ）は５％ＦＢＳと０．１％ＮａＨＣＯ３を添加した抗生物質不含培地１９９で使用する。
【０２１４】
デング、黄熱病及びバンジウイルスのアッセイ培地は２％ＦＢＳ，０．１８％ＮａＨＣＯ３及びゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬを添加したＭＥＭとする。
【０２１５】
ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に従って上記ライノウイルス抗ウイルス試験と同様に本発明の化合物の抗ウイルス試験を実施することができる。５から６日後にこれらのウイルスの各々で十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取値が得られる。
【０２１６】
ｃ．西ナイルウイルスに対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は上記ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に記載されている。カラス脳に由来する西ナイルウイルスニューヨーク株を疾病対策センターから入手する。ベロ細胞を上記のように増殖させ、使用する。試験培地は１％ＦＢＳ，０．１％ＮａＨＣＯ３及びゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬを添加したＭＥＭとする。
【０２１７】
ライノウイルス活性をアッセイするために使用したと同様のＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの方法に従って本発明の化合物の抗ウイルス試験を実施することができる。５から６日後に十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取値が得られる。
【０２１８】
ｄ．ライノ、黄熱病、デング、バンジ及び西ナイルウイルスに対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（ニュートラルレッド取込みアッセイ）
上記ＣＰＥ阻害アッセイの実施後に、“Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ：Ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔ，”Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：３５−３８（１９７６）に記載されている別の細胞変性検出法を使用することができる。モデルＥＬ３０９マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用してアッセイプレートを読取る。上記のようにＥＤ５０とＣＤ５０を計算する。
【０２１９】
（医薬製剤の実施例）
本発明の化合物の経口組成物の一特定実施形態として、総量５８０から５９０ｍｇとするに十分な微粉状ラクトースと実施例１の化合物５０ｍｇを配合し、Ｏサイズハードゼラチンカプセルに充填することができる。
【０２２０】
以上、特定実施形態に関して本発明を記載及び例証したが、当業者に自明の通り、発明の精神と範囲を逸脱せずに種々の変更、変形及び置換が可能である。例えば、治療するヒトの応答はＨＣＶ感染の重篤度により異なるので、上記のような好適用量以外の有効用量も適用可能である。同様に、観察される薬理応答は選択する特定活性化合物又は医薬キャリヤーの有無や、製剤の型及び使用する投与方法により変動する場合があり、予想される結果のこのような変動又は相違は本発明の目的と実施に従って予測される。従って、本発明は以下の特許請求の範囲のみに限定され、特許請求の範囲は妥当な範囲で広義に解釈すべきである。
【国際調査報告】
2010513484.tif 000049
2010513484.tif 000050