(57)【要約】  本発明は、浸透増強剤としてのハイドロフォビンポリペプチドの使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
浸透増強剤としてのハイドロフォビンの使用。
【請求項２】
界面を通過する浸透が促進される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
有効成分の浸透が促進される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
エフェクター分子の浸透が促進される、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
少なくとも１種のさらなる浸透増強剤と組み合わせた、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記少なくとも１種のさらなる浸透増強剤が、以下の群：DMSO、SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、ジメチルホルムアミド、N-メチルホルムアミド、一価アルコールまたは多価アルコール、例えばエタノール、1,2-プロパンジオールまたはベンジルアルコール、8〜10個の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪アルコール、例えばラウリルアルコールまたはセチルアルコール、炭化水素、例えば鉱油、アルカン、エステル、アゾン、例えば1-ドデシルアザシクロヘプタン-2-オン、プロピレングリコール、キトサン、飽和および不飽和脂肪酸、例えばステアリン酸またはオレイン酸、24個までの炭素原子を有する脂肪酸エステルまたは24個までの炭素原子を有するジカルボン酸ジエステル、例えば酢酸、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸およびパルミチン酸のメチルエステル、エチルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、sec-ブチルエステル、イソブチルエステル、tert-ブチルエステルまたはモノグリセリン酸エステル、リン酸誘導体、例えばレシチン、テルペン、尿素ならびにその誘導体およびエーテル、例えばジメチルイソソルビドおよびジエチレングリコールモノエチルエーテル、胆汁塩、ポリオキシエチレン、EDTA、ネロリドール、リモネン酸化物ならびにリン脂質より選択される、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
局所投与における有効成分の改善された吸収のための組成物の製造のための、ハイドロフォビンの使用。
【請求項８】
作物保護組成物での、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
好ましくは軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤およびパスタ剤からなる群より選択される、半固体医薬剤形での、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
メンブレン、マトリックスまたはプラスターでの、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
皮膚科学製剤での、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
化粧用製剤での、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
毛髪化粧用、皮膚化粧用または歯科化粧用製剤での、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
局所投与における有効成分の改善された吸収のための組成物の製造方法であって、ハイドロフォビンを有機もしくは無機媒体中の固形物に、溶液に、または懸濁液に導入し、少なくとも１種の有効成分を含む製剤とする、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、浸透増強剤としてのハイドロフォビンポリペプチドの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、浸透増強剤は、例えば、化粧用組成物もしくは医薬組成物の、作物保護組成物の、またはコーティング組成物の構成成分としてなど、様々な分野において、いっそう際立った重要性を達成している。
【０００３】
経皮浸透増強剤は、WO93/002669から公知である。該文献は、経皮治療系における有効成分含有接着性マトリックスにおける、極性および非極性の浸透増強剤の組合せを記載している。特定されている極性の浸透増強剤は多価アルコールであり、特定されている非極性の浸透増強剤は脂肪酸エステルである。記載されている経皮治療系において、浸透増強剤は、水に不溶の、またはやや溶けにくいステロイドホルモンである有効成分の浸透率における増大をもたらす。
【０００４】
経皮治療系において、角質層のバリア機能は、閉塞効果によって、または上記で述べたものもしくはジメチルスルホキシド(DMSO)などの浸透増強剤によって一時的に損なわれ、したがって、皮膚を通した低分子量物質の浸透が可能になる。
【０００５】
治療用製剤において用いられるさらなる浸透増強剤は、例えば、一価アルコールまたは多価アルコール、例えば、エタノール、1,2-プロパンジオール、またはベンジルアルコール、8〜10個の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪アルコール、例えばラウリルアルコールまたはセチルアルコール、炭化水素、例えば鉱油、アルカン、エステル、アゾン、例えば1-ドデシルアザシクロヘプタン-2-オン、プロピレングリコール、キトサン、飽和および不飽和脂肪酸、例えばステアリン酸またはオレイン酸、24個までの炭素原子を有する脂肪酸エステルまたは24個までの炭素原子を有するジカルボン酸ジエステル、例えば酢酸、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、およびパルミチン酸のメチルエステル、エチルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、sec-ブチルエステル、イソブチルエステル、tert-ブチルエステル、およびモノグリセリン酸エステル、リン酸誘導体、例えばレシチン、テルペン、尿素ならびにその誘導体およびエーテル、例えばジメチルイソソルビドおよびジエチレングリコールモノエチルエーテル、胆汁塩、ポリエトキシエチレン、EDTA、ネロリドール、リモネン酸化物、またはリン脂質である。
【０００６】
さらなる公知の浸透増強剤は、SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、ジメチルホルムアミド、およびN-メチルホルムアミドである。
【０００７】
作物保護分野においても、浸透増強剤は、確実に作物保護組成物を容易に吸収させるために用いられる。
【０００８】
ハイドロフォビンは、スエヒロタケ(Schizophyllum commune)などの糸状菌において存在する、アミノ酸約100個〜150個の小型タンパク質である。これらは、通常、システイン単位を8個有する。ハイドロフォビンは天然の供給源から単離することができるが、例えば、WO2006/082251またはWO2006/131564によって開示されているように、遺伝子操作法によっても得ることができる。
【０００９】
ハイドロフォビンは、例えば、気中菌糸、胞子、子実体などの様々な真菌構造の表面上に、水不溶性の形態で広がる。ハイドロフォビンに対する遺伝子は、子嚢菌類、不完全菌類、および担子菌から単離することができる。スエヒロタケ、ヒトヨタケ(Coprinus cinereus)、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)など、いくつかの真菌は1つを超えるハイドロフォビン遺伝子を含んでいる。様々なハイドロフォビンが、真菌の発達の様々な段階において明らかに関与している。ハイドロフォビンはここで、おそらく様々な機能を担っている(van Wetterら、2000年、Mol.Microbiol.、36巻、201〜210頁;Kershawら、1998年、Fungal Genet.Biol、1998年、23巻、18〜33頁)。
【００１０】
ハイドロフォビンに関する生物学的機能として、気中菌糸を生成するための水の表面張力の低減の他に、胞子の疎水化も報告されている(Wostenら、1999年、Curr.Biol.、19巻、1985〜88頁;Bellら、1992年、Genes Dev.、6巻、2382〜2394頁)。さらに、ハイドロフォビンは、地衣類の子実体におけるガスチャンネルを裏打ちするのに貢献し、真菌の病原体による植物表面の認識システムにおける構成成分として貢献している(Lugonesら、1999年、Mycol.Res.、103巻、635〜640頁;HamerおよびTalbot、1998年、Curr.Opinion Microbiol.、第1巻、693〜697頁)。
【００１１】
様々な応用に対するハイドロフォビンの使用が、先行技術において提唱されている。
【００１２】
WO96/41882は、疎水性表面の親水化のための、親水性基質の耐水性を改善するための、水中油型エマルジョンおよび油中水型エマルジョンを生成するための、乳化剤、増粘剤、界面活性化物質としてのハイドロフォビンの使用を提唱している。さらに、軟膏剤またはクリーム剤の生成など製薬上の応用、および皮膚保護、または毛髪シャンプーまたは毛髪リンスの保護などの化粧上の応用も提唱されている。
【００１３】
EP1 252 516は、例えば、窓、レンズ、生物センサー、医療機器、容器、枠組みまたは自動車ボディなどの様々な基質の、30℃〜80℃の温度のハイドロフォビンを含む溶液でのコーティングを開示している。
【００１４】
さらに、例えば、デマルシファイアー(WO2006/103251)、蒸発抑制剤(WO2006/128877)、またはソイリングインヒビター(soiling inhibitor)(WO2006/103215)としての使用が提唱されている。
【００１５】
US20030217419A1は、治療材料の処理のための化粧用製剤のための、スエヒロタケ由来のハイドロフォビンSC3の使用を記載している。ここでは、シャンプーでの数回の洗浄に耐える化粧用沈着物が形成される。
【００１６】
ハイドロフォビンの浸透増強剤としての使用は、今までにまだ知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】WO93/002669
【特許文献２】WO2006/082251
【特許文献３】WO2006/131564
【特許文献４】WO96/41882
【特許文献５】EP1 252 516
【特許文献６】WO2006/103251
【特許文献７】WO2006/128877
【特許文献８】WO2006/103215
【特許文献９】US20030217419A1
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】van Wetterら、2000年、Mol.Microbiol.、36巻、201〜210頁
【非特許文献２】Kershawら、1998年、Fungal Genet.Biol、1998年、23巻、18〜33頁
【非特許文献３】Wostenら、1999年、Curr.Biol.、19巻、1985〜88頁
【非特許文献４】Bellら、1992年、Genes Dev.、6巻、2382〜2394頁
【非特許文献５】Lugonesら、1999年、Mycol.Res.、103巻、635〜640頁
【非特許文献６】HamerおよびTalbot、1998年、Curr.Opinion Microbiol.、第1巻、693〜697頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
ハイドロフォビンの新規な使用を提供するのが、本発明の目的であった。
【００２０】
さらに、それに対して今までは界面が不浸透性またはわずかに浸透性であった有効成分が界面を浸透するのを可能にし、またはこれを改善する目的を達成するのが目的であった。
【００２１】
さらなる１つの目的は、投与時の有効成分の濃度を低めることであった。
【００２２】
本発明の１つの目的は、特に皮膚または粘膜の刺激を起こさずに、有効成分の改善された吸収を確実にする浸透増強剤としてハイドロフォビンを含む、化粧用組成物および/または医薬組成物を提供することでもあった。
【００２３】
本発明のさらなる１つの目的は、特に処置する植物に対する損傷または環境的な損傷を起こさずに、有効成分の改善された吸収を確実にする浸透増強剤としてハイドロフォビンを含む、作物保護組成物を提供することであった。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
ハイドロフォビンを浸透増強剤として用いることにより、目的が達成される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】抗酸化能力に対するタンパク質の影響を示す。
【図２】抗酸化能力に対するHタンパク質Bおよびケルセチンの組合せの影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明の文脈の範囲内で、「浸透増強剤」および「浸透促進剤」の語は同義である。
【００２７】
本発明に関して、以下を詳しく述べることができる:
本発明の文脈の範囲内において、浸透は界面を通過する物質の浸透である。
【００２８】
本発明の文脈の範囲内において、界面はある相から隣接する相への移行部である。
【００２９】
本発明の文脈の範囲内において、相は、その中ではあらゆるその物理的パラメータの急激な変化が起きない領域である。したがって、ある相から隣接する相への移行の間、したがって直径数分子にすぎない層の内部で、密度、電気的性質、磁気性質、屈折率、化学組成、結晶構造からなる群より選択される少なくとも1つの物理的または化学的性質が変化する。
【００３０】
本発明の一変形において、界面を通過する浸透の増強とは、化学的、生物学的、および物理学的性質が同一であり、ならびに同一の化学的、生物学的、および物理学的条件または必要条件下での対照と比べて、より大量の有効成分が同時間内に界面を浸透し、または同量の有効成分がより短い時間内に界面を浸透することを意味する。
【００３１】
本発明の一変形において、浸透の増強もしくは浸透の増大、または界面を通過する有効成分の浸透の増大は、それに対して今までは界面が不透過性またはわずかに透過性であった有効成分に対して界面の浸透が促進され、または改善されることを意味する。これは、化学的、生物学的、および物理学的性質が同一であり、ならびに同一の化学的、生物学的、および物理学的条件または必要条件下の対照と比べたものであり、より大量の有効成分が同時間内に界面を浸透し、または同量の有効成分がより短い時間内に界面を浸透する。
【００３２】
浸透増強剤は、それにより別の物質の界面を通過する浸透が増強される物質である。
【００３３】
本発明の文脈の範囲内において、「ハイドロフォビン」または「(複数の)ハイドロフォビン」の語は、下記、一般構造式(I)のポリペプチドを意味すると理解されたい:
Xn-C1-X1〜50-C2-X0〜5-C3-X1〜100-C4-X1〜100-C5-X1〜50-C6-X0〜5-C7-X1〜50-C8-Xm      (I)
[式中、Xは、天然に存在する20種のアミノ酸(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)のいずれかであってよい。ここでは、基Xは、各場合において同一でもよく、または異なっていてもよい。ここでは、Xの添字は、各場合において、各々の部分の配列Xにおけるアミノ酸の数であり、Cは、システイン、アラニン、セリン、グリシン、メチオニン、またはスレオニンであり、Cと命名された基の少なくとも4個はシステインであり、添字nおよびmは、互いに独立に、0と500の間の、好ましくは15と300の間の自然数である]。
【００３４】
式(I)によるポリペプチドは、室温において、ガラス表面をコーティングした後、各場合において、非コーティングのガラス表面との同一サイズの水滴の接触角に比べて、少なくとも8°、10°、20°、好ましくは少なくとも25°、特に好ましくは30°の、水滴の接触角における増大をもたらすという性質によっても特徴付けられる。
【００３５】
C1からC8と命名されるアミノ酸は、好ましくはシステインであるが、これらは同様の空間充填の他のアミノ酸によって、好ましくはアラニン、セリン、スレオニン、メチオニン、またはグリシンによって置換されていてもよい。しかし、位置C1からC8の少なくとも4個、好ましくは少なくとも5個、特に好ましくは少なくとも6個、とりわけ少なくとも7個は、システインから構成されるべきである。本発明によるタンパク質において、システインは還元型で存在してもよく、または互いにジスルフィド架橋を形成してもよい。特に好ましいのは、C-C架橋の分子内形成、特に、少なくとも1個、好ましくは2個、特に好ましくは3個、非常に特に好ましくは4個の分子内C-C架橋を有するものである。上記に記載した、同様の空間充填のアミノ酸によるシステインの置換の場合には、このようなC位置は、互いに分子内ジスルフィド架橋を形成することができる対において交換されると有利である。
【００３６】
Xと呼ぶ位置において、システイン、セリン、アラニン、グリシン、メチオニン、またはスレオニンをやはり用いる場合、一般式における個々のC位置の番号付けは、それに従って変化することができる。
【００３７】
本発明を実施するために、一般式(II)のハイドロフォビンを用いるのが好ましい:
Xn-C1-X3〜25-C2-X0〜2-C3-X5〜50-C4-X2〜35-C5-X2〜15-C6-X0〜2-C7-X3〜35-C8-Xm      (II)
[式中、X、C、ならびにXおよびCの添字は上記の意味を有し、添字nおよびmは、0と350の間の、好ましくは15と300の間の数であり、タンパク質は、接触角における上記に記載した変化によってさらに特徴付けられ、さらにCと命名された基の少なくとも6個はシステインである]。特に好ましくは、基Cはすべてシステインである。
【００３８】
一般式(III)のハイドロフォビンを用いるのが特に好ましい:
Xn-C1-X5〜9-C2-C3-X11〜39-C4-X2〜23-C5-X5〜9-C6-C7-X6〜18-C8-Xm      (III)
[式中、X、C、およびXの添字は上記の意味を有し、添字nおよびmは、0と200の間の数であり、タンパク質は、接触角における上記に記載した変化によってさらに特徴付けられ、Cと命名された基の少なくとも6個はシステインである]。特に好ましくは、基Cはすべてシステインである。
【００３９】
基XnおよびXmは、天然にやはりハイドロフォビンに連結しているペプチド配列であってよい。しかし、一方または両方の基が、天然ではハイドロフォビンに連結していないペプチド配列であるのも可能である。これらは、ハイドロフォビンにおいて天然に存在するペプチド配列が、ハイドロフォビンにおいて天然に存在しないペプチド配列によって伸長されるこれらの基Xnおよび/またはXmを意味するとも理解されたい。
【００４０】
Xnおよび/またはXmが、天然にはハイドロフォビンに連結していないペプチド配列である場合、このような配列は一般的に、少なくとも20アミノ酸長、好ましくは少なくとも35アミノ酸長である。これらは、例えば、アミノ酸20個〜500個の、好ましくは30個〜400個の、特に好ましくは35個〜100個の配列であってよい。
【００４１】
天然にはハイドロフォビンに連結していないこのような基は、以下、融合パートナーとも呼ばれる。これは、タンパク質が、天然においてこの形態では一緒に存在しない少なくとも1つのハイドロフォビン部分および1つの融合パートナー部分からなることができることを表すことが意図される。融合パートナーおよびハイドロフォビン部分からなる融合ハイドロフォビンは、例えば、WO2006/082251(2頁18行目〜5頁25行目)、WO2006/082253(2頁20行目〜6頁13行目)、およびWO2006/131564(2頁17行目〜6頁26行目)において開示されている。
【００４２】
融合パートナー部分は、多数のタンパク質から選択することができる。たった1個の融合パートナーがハイドロフォビン部分に連結しているのは可能であり、または2つもしくはそれを超える融合パートナーが、例えば、ハイドロフォビン部分のアミノ末端(Xn)上およびカルボキシ末端(Xm)上でハイドロフォビン部分に連結していることが可能である。しかし、例えば、2つの融合パートナーが、本発明によるタンパク質の1つの位置(XnまたはXm)に連結しているのも可能である。
【００４３】
特に適切な融合パートナーは、微生物、特に大腸菌(E.coli)または枯草菌(Bacillus subtilis)において天然に存在するタンパク質である。このような融合パートナーの例は、配列yaad(WO2006/082251における配列番号16)、yaae(WO2006/082251における配列番号18)、ユビキチン、およびチオレドキシンである。また、特定した配列の、部分のみ、例えば70〜99％、好ましくは5〜50％、特に好ましくは10〜40％を含むこれらの特定の配列のフラグメントもしくは誘導体、または個々のアミノ酸もしくはヌクレオチドが特定の配列に比べて改変されているこれらの特定の配列のフラグメントまたは誘導体が非常に適切であり、各場合におけるパーセント値はアミノ酸の数を意味する。
【００４４】
さらに好ましい一実施形態において、融合ハイドロフォビンは、特定の融合パートナーの他に、基XnもしくはXmの1つとして、またはこのような基の末端の構成成分として、いわゆるアフィニティードメイン(アフィニティータグ/アフィニティーテイル)も有する。原理的に公知の様式において、これらは、ある種の相補的な基と相互作用することができ、タンパク質のより容易な後処理および精製に役立つことができるアンカー基である。このようなアフィニティードメインの例は、(His)k、(Arg)k、(Asp)k、(Phe)k、または(Cys)k基を含み、kは一般に、1〜10までの自然数である。(His)k基であり得るのが好ましく、kは4〜6である。ここで基Xnおよび/またはXmはもっぱらこのようなタイプのアフィニティードメインからなることができ、または、ハイドロフォビンに天然に連結し、または天然に連結していない基XnもしくはXmは、末端に配列されたアフィニティードメインによって伸長される。
【００４５】
本発明に従って用いられるハイドロフォビンは、構造式(I)、(II)、および(III)によるハイドロフォビン、ならびに融合ハイドロフォビンでもある。
【００４６】
本発明に従って用いられるハイドロフォビンは、例えば、グリコシル化によって、アセチル化によって、または化学的架橋によって、例えば、グルタールジアルデヒドで、そのポリペプチド配列が修飾されていてもよい。
【００４７】
本発明に従って用いられるハイドロフォビンまたはその誘導体の一性質は、表面をタンパク質でコーティングした場合の表面の性質における変化である。表面の性質における変化は、実験的に、例えば、表面をタンパク質でコーティングする前および後の水滴の接触角を測定し、2つの測定値間の差を測定することによって決定することができる。
【００４８】
接触角の測定の実施は、原理的に当業者には公知である。測定は室温、および5μlの水滴、および基板として小ガラスプレートの使用を意味する。例として好適な、接触角を測定する方法に対する正確な実験条件を、実験のセクションにおいて示す。実験のセクションにおいて特定する条件下で、本発明に従って用いられる融合タンパク質は、各場合において、非コーティングのガラス表面との同一サイズの水滴の接触角を比べて、接触角を、少なくとも20°、好ましくは少なくとも25°、特に好ましくは少なくとも30°、40°、45°、特に50°増大させる性質を有する。
【００４９】
本発明を実施するのに特に好ましいハイドロフォビンは、dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basf1、basf2タイプのハイドロフォビンである。これらのハイドロフォビンは、その配列も含めて、例えば、WO2006/82251において開示されている。別段の記載がなければ、以下に示す配列は、WO2006/82251において開示されている配列を意味する。配列番号を有する全体の表は、WO2006/82251の20頁(1行目〜5行目)に見ることができる。
【００５０】
本発明に従って特に適切なものは、ポリペプチド配列を括弧内に示した、融合タンパク質yaad-Xa-dewA-his(配列番号20)、yaad-Xa-rodA-his(配列番号22)、またはyaad-Xa-basf1-his(配列番号24)およびまたこれらをコードする核酸配列、特に配列番号19、21、23による配列である。特に好ましくは、yaad-Xa-dewA-his(配列番号20)を用いることができる。特に好ましい実施形態は、また、アミノ酸すべての、少なくとも1個、10個までの範囲、好ましくは5個、特に好ましくは5％のアミノ酸の交換、挿入、または欠失の結果として、配列番号20、22、または24において示されるポリペプチド配列から出発して生じるタンパク質であって、出発タンパク質の生物学的性質を少なくとも50％まで依然として有するタンパク質である。タンパク質の生物学的性質は、ここでは、少なくとも20°、好ましくは少なくとも25°、特に好ましくは少なくとも30°、40°、45°、特に50°の接触角におけるすでに記載した変化を意味するものと理解されたい。
【００５１】
本発明を実施するのに特に適する誘導体は、yaad融合パートナーを短縮することによる、yaad-Xa-dewA-his(配列番号20)、yaad-Xa-rodA-his(配列番号22)、またはyaad-Xa-basf1-his(配列番号24)に由来する誘導体である。アミノ酸294個を有する完全なyaad融合パートナー(配列番号16)の代わりに、短縮したyaad基を有利に用いることができる。しかし、短縮した基は、少なくとも20個、好ましくは少なくとも35個のアミノ酸を含む。例えば、20個〜293個、好ましくは25個〜250個、特に好ましくは35個〜150個、例えば35個〜100個のアミノ酸を有する短縮した基を用いることができる。このようなタンパク質の一例はyaad40-Xa-dewA-his(WO2007/014897における配列番号26)であり、これはアミノ酸40個に短縮されたyaad基を有する。
【００５２】
ハイドロフォビンと融合パートナーまたは(複数の)融合パートナーとの間の切断部位を、融合パートナーを切断するのに、および非誘導体化形態における純粋なハイドロフォビンを放出するのに用いることができる(例えば、メチオニン上のBrCN切断、第Xa因子切断、エンテロキナーゼ切断、トロンビン切断、TEV切断など)。
【００５３】
本発明に従って浸透増強剤として用いられるハイドロフォビンは、例えばMerrifieldによる固相合成など、ペプチド合成の公知の方法によって化学的に調製することができる。
【００５４】
天然に存在するハイドロフォビンは、適切な方法によって天然の供給源から単離することができる。例として、Wostenら、Eur.J Cell Bio.、63巻、122〜129頁(1994年)またはWO96/41882(23頁15行目〜24頁8行目)を参照することができる。
【００５５】
タラロミセス・サーモフィルス(Talaromyces thermophilus)から融合パートナーなしでハイドロフォビンを遺伝子操作生成する方法は、US2006/0040349(段落[0071]〜[0090])に記載されている。
【００５６】
融合タンパク質の調製は、好ましくは、遺伝子操作法によって行うことができ、融合パートナーをコードする核酸配列、およびハイドロフォビン部分をコードする核酸配列、特にDNA配列を組み合わせて、所望のタンパク質が宿主生物において組み合わされた核酸配列の遺伝子発現によって産生されるようにする。このような生成方法の1つは、例えば、WO2006/082251(6頁21行目〜12頁37行目)、またはWO2006/082253(5頁33行目〜11頁13行目)に開示されている。融合パートナーにより、ハイドロフォビンの生成がかなり容易になる。融合ハイドロフォビンは、遺伝子操作法において、融合パートナーなしのハイドロフォビンよりもかなり収率よく生成される。
【００５７】
宿主生物から遺伝子操作法によって生成された融合ハイドロフォビンを、原理的に公知の様式において後処理し、公知のクロマトグラフィー法によって精製することができる。
【００５８】
好ましい一実施形態において、WO2006/082253、11/12頁(11頁15行目〜11頁33行目)に開示されている単純化した後処理および精製方法を用いることができる。
【００５９】
これに対して、発酵させた細胞を、最初に発酵ブロスから分離し、破壊し、細胞残渣を封入体から分離する。後者を遠心分離によって有利に行うことができる。最後に、融合ハイドロフォビンを放出するために、封入体を、原理的に公知の様式で、酸、塩基、および/または界面活性剤によって破壊することができる。本発明に従って用いられる融合ハイドロフォビンを有する封入体は、一般的に、0.1m NaOHを用いて約1時間以内にすでに完全に溶解することができる。
【００６０】
得られた溶液は、適切な場合には所望のpHを確立した後に、本発明を実施するためにさらなる精製なしで用いることができる。しかし、融合ハイドロフォビンを、溶液から固体として単離することもできる。好ましくは、単離をWO2006/082253(11頁35行目〜12頁21行目)に記載されているようにスプレー造粒またはスプレー乾燥によって行うことができる。細胞残渣の残りの他に、単純化した後処理および精製方法によって得られた生成物は、一般に、約80〜90重量％のタンパク質を含んでいる。融合ハイドロフォビンの量は、融合構築物および発酵条件に応じて、タンパク質全量に対して、一般に30〜80重量％である。
【００６１】
融合ハイドロフォビンを含む、単離された生成物は固体として貯蔵することができ、各場合において使用に望ましい媒体中に溶解することができる。
【００６２】
融合ハイドロフォビンは、本発明を実施するための「純粋な」ハイドロフォビンとして、融合パートナーを切断および分離して除いた後、それ自体、またはその他として用いることができる。切断を、封入体の単離および封入体の溶解後に実施すると有利である。
【００６３】
本発明に従って、ハイドロフォビンを浸透増強剤として用いる。
【００６４】
一実施形態において、ハイドロフォビンを少なくとも1つのさらなる浸透増強剤と組み合わせて用い、少なくとも1つのさらなる浸透増強剤は、DMSO、SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、ジメチルホルムアミド、N-メチルホルムアミド、一価アルコールまたは多価アルコール、例えばエタノール、1,2-プロパンジオールまたはベンジルアルコール、8〜10個の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪アルコール、例えばラウリルアルコールまたはセチルアルコール、炭化水素、例えば鉱油、アルカン、エステル、アゾン、例えば1-ドデシルアザシクロヘプタン-2-オン、プロピレングリコール、キトサン、飽和および不飽和脂肪酸、例えばステアリン酸またはオレイン酸、24個までの炭素原子を有する脂肪酸エステルまたは24個までの炭素原子を有するジカルボン酸ジエステル、例えば酢酸、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸およびパルミチン酸のメチルエステル、エチルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、sec-ブチルエステル、イソブチルエステル、tert-ブチルエステルまたはモノグリセリン酸エステル、リン酸誘導体、例えばレシチン、テルペン、尿素ならびにその誘導体およびエーテル、例えばジメチルイソソルビドおよびジエチレングリコールモノエチルエーテル、胆汁塩、ポリエトキシエチレン、EDTA、ネロリドール、リモネン酸化物またはリン脂質の群より選択される。
【００６５】
さらに特に好ましい一実施形態において、ハイドロフォビンを、DMSOまたはポリグリコールと組み合わせて、浸透増強剤として用いる。
【００６６】
本発明のさらなる一実施形態において、ハイドロフォビンを、皮の手入れおよび皮の加工において、少なくとも1つのさらなる浸透増強剤を組み合わせて浸透増強剤として用いる。
【００６７】
さらに特に好ましい一実施形態において、ハイドロフォビンを、皮の手入れおよび皮の加工において、少なくとも1つのさらなる浸透増強剤を組み合わせて、酸および塩基(例えば、カルボン酸もしくはアンモニア)、緩衝系、ポリマー、無機粒子(例えば、SiO2もしくはケイ酸塩)、着色剤(例えば、染料)、香料、または殺生物剤に対する浸透増強剤として用いる。
【００６８】
本発明のさらなる一実施形態において、界面を通過する浸透が増強される。
【００６９】
さらなる一実施形態において、有効成分の浸透が、それにより促進される。
【００７０】
本発明の一実施形態において、有効成分は、製薬学的または生物学的効果を有するすべての物質を意味すると理解されたい。したがって、有効成分は、製薬学的に活性な化合物、治療上有効な化合物、および生物学的に活性な化合物、化粧上活性な化合物、真珠タンパク質など(販売目的の)化粧上の要求を支持する物質からなる群より選択される化合物であり、質的および/または量的に影響を及ぼす、すなわち生物における生化学的および/または生理学的プロセスを促進し、またはすべて可能にし、または阻害する。
【００７１】
さらに、少量の有効成分は大きな製薬学的、化学的、生物学的、または生理学的効果を発生する。
【００７２】
ここで、少量とは、有効成分が界面を浸透した後に到達する、生物の質量に対して考慮されるものとする。
【００７３】
これは、[1ppt(1:1012)〜10％(1:10)]、[1ppb(1:109)〜1％(1:100)]、[1ppt(1:1012)〜1ppb(1:109]、[1ppt(1:1012〜1:1000)]、[1ppb(1:109〜1:1000)]、[1ppt(1:1012)〜1ppm(1:106)]、[1ppb(1:109〜1ppm(1:106)]、[1ppm(1:106〜1:1000)]、[(1:1000)〜1％(1:100)]の間隔からなる群より選択される生物の質量に対する界面を通過して浸透する有効成分の質量の商を生じる。
【００７４】
本発明の一変形において、生物は、原生生物、細菌、真菌、植物、または動物の界からの特定の個体、ならびにまた細胞および細胞組織などのそれらの部分からなる群より選択される。
【００７５】
本発明のさらなる一変形において、生物は、例えば、皮を生成するための皮革など、死亡した生物またはその部分である。
【００７６】
浸透増強剤としてハイドロフォビンを用いることによる有効成分の浸透の増強は、対照に比べて、0.5、0.6、0.7、0.9、または1％であってよい。2、3、4、5、6、7、8、9、または10％の浸透の増強が有利であり、11、12、13、14、または15％の浸透の増強が特に有利であり、16、17、18、19、もしくは20％またはそれを超える％の浸透の増強が極めて特に有利である。
【００７７】
本発明は、局所投与における有効成分の改善された吸収のための、組成物の製造のためのハイドロフォビンの使用をさらに提供する。
【００７８】
浸透増強剤としてのハイドロフォビンの本発明による使用のためのさらなる利用分野は、皮膚科学製剤の生成である。
【００７９】
一実施形態において、このように、ハイドロフォビンを、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、およびパスタ剤からなる群より選択される半固体医薬剤形または化粧用製剤を生成するための方法において用いる。
【００８０】
半固体医薬剤形は、例えば「Arzneiformelehre[Pharmacology]」、Ursula Schoffling著、第4版、Deutsche Apotheker Verlag、2003年、353頁〜392頁において記載されている通りに調製される。
【００８１】
その中に記載されている補助剤の他に、製剤は、0.000001〜10重量％、0.0001〜10重量％、0.001〜10重量％、0.01〜10重量％、0.1〜10重量％、および1〜10重量％からなる群より選択される割合のハイドロフォビンを含み、0.000001〜10重量％、0.0001〜10重量％、0.001〜10重量％、0.01〜10重量％、0.1〜10重量％、および1〜10重量％からなる群より選択される割合の有効成分も含む。
【００８２】
浸透増強剤としてのハイドロフォビンの本発明による使用のためのさらなる利用分野は、皮膚および粘膜のある種の疾患のための治療用または予防上の使用のための薬剤の生成である。したがって、適用の分野は、とりわけ以下の通りである:
・  ウイルス疾患(例えば、ヘルペス、コクサッキー、水痘帯状疱疹、サイトメガロウイルスなど)
・  細菌疾患(例えば、TB、梅毒など)
・  真菌疾患(例えば、カンジダ、クリプトコッカス、ヒストプラズマ症、アスペルギルス、ムコール感染症など)
・  腫瘍疾患(例えば、メラノーマ、腺腫など)
・  自己免疫疾患(例えば、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、全身性エリテマトーデスなど)
・  日焼け
・  寄生体の攻撃(例えば、マダニ、コダニ、ノミなど)
・  昆虫の接触(例えば、ハマダラカなどの吸血昆虫など)。
【００８３】
本発明の一実施形態において、先に記載した適用のための製剤は、例えば、「Arzneiformelehre[Pharmacology]」、Ursula Schoffling著、第4版、Deutsche Apotheker Verlag、2003年、336頁〜352頁において記載されている空気分散物の形態である。
【００８４】
本発明の一実施形態において、上記で特定した適用のための製剤は、例えば、「Arzneiformelehre[Pharmacology]」、Ursula Schoffling著、第4版、Deutsche Apotheker Verlag、2003年、468頁〜471頁に記載されている、ナノ粒子、ナノサスペンジョン、リポソーム、マイクロエマルジョン、および生体接着性製剤の剤形からなる群より選択される放出系の剤形である。
【００８５】
その中に記載されている補助剤の他に、製剤は、0.000001〜10重量％、0.0001〜10重量％、0.001〜10重量％、0.01〜10重量％、0.1〜10重量％、および1〜10重量％からなる群より選択される割合のハイドロフォビンを含み、0.000001〜10重量％、0.0001〜10重量％、0.001〜10重量％、0.01〜10重量％、0.1〜10重量％、および1〜10重量％からなる群より選択される割合の有効成分も含む。
【００８６】
浸透増強剤としてのハイドロフォビンの本発明による使用のための適用のさらなる分野は、例えば、経皮治療システムTTSからなる群より選択されるものなど、有効成分を含むメンブレン、マトリックス、またはプラスターの生成である。
【００８７】
これらは、例えば、「Arzneiformelehre[Pharmacology]」、Ursula Schoffling著、第4版、Deutsche Apotheker Verlag、2003年、462頁〜468頁に記載されている通りに調製される。
【００８８】
その中に記載されている補助剤の他に、製剤は、0.000001〜30重量％、0.0001〜30重量％、0.001〜30重量％、0.01〜30重量％、0.1〜30重量％、および1〜30重量％からなる群より選択される割合のハイドロフォビンを含み、0.000001〜30重量％、0.0001〜30重量％、0.001〜30重量％、0.01〜30重量％、0.1〜30重量％、1〜30重量％、および0.1〜50重量％、1〜50重量％からなる群より選択される割合の有効成分も含む。
【００８９】
浸透増強剤としてのハイドロフォビンの本発明による使用のためのさらなる一実施形態は、化粧用製剤の生成である。
【００９０】
一変形において、これらは毛髪化粧用、皮膚化粧用、または歯科化粧用製剤である。
【００９１】
本発明に従って特定される製剤または組成物において、本発明の一実施形態において、エフェクター分子を有効成分として用いることができる。
【００９２】
エフェクター分子は、本明細書中で下記において、ある種の予測可能な効果を有する分子を意味すると理解される。これらは、酵素などのタンパク質様分子、または染料、光防護剤、ビタミン、および脂肪酸などの非タンパク質性分子、または金属イオンを含む化合物のいずれかであってよい。
【００９３】
タンパク質様エフェクター分子の中で、酵素、ペプチド、および抗体が好ましい。
【００９４】
酵素の中で、以下のものがエフェクター分子として好ましい:オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、チロシナーゼ、金属結合性酵素、ラクトペルオキシダーゼ、リソザイム、アミログリコシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、フォトリアーゼ、カタラーゼ。
【００９５】
非常に適切なタンパク質様エフェクター分子は、また、植物および動物の供給源からのタンパク質加水分解物、例えば、海洋起源のタンパク質の加水分解物、または絹の加水分解物である。
【００９６】
特に良く適するものは、アンチエイジングに用いられる、規定されているペプチド、例えば、マトリキシル(Matrixyl)(INCI名:グリセリン-水-ブチレングリコール-カルボマー-ポリソルベート20-パルミトイルペンタペプチド-4)、アルギレリン(Argireline)(INCI名:アクア、アセチル-ヘキサペプチド-3)、リジン(Rigin)(INCI名:水(および)-グリセリン(および)ステアレス-20(および)パルミトイルテトラペプチド-7)、アイリス(Eyeliss)(INCI名:水-グリセリン-ヘスピリジンメチルカルコン-ステアレス-20-ジペプチド-2-パルミトイル-テトラペプチド-7)、レグ-エイジ(Regu-Age)(INCI名:オキシドレダクターゼ-大豆ペプチド-加水分解米ぬか抽出物)、およびメラノスタチン(Melanostatin)-5(INCI名:アクア-デキストラン-ノナペプチド-1)である。
【００９７】
非タンパク質様エフェクター分子の中で、染料、例えば、半永久性の染料、または酸化染料が好ましい。適切な染料は、すべて、本発明による分子のための、慣例的な毛髪染料である。適切な染料は当業者であれば、「Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika[Fundamentals and Formulations of Cosmetics]」、Huthig Verlag、Heidelberg、1989年、ISBN 3-7785-1491-1などの化粧用のハンドブックから知っている。
【００９８】
さらに、エフェクター分子として抗酸化剤が好ましい。抗酸化剤は、フリーラジカルスカベンジャーとも呼ばれ、いわゆるフリーラジカルを中和することができる。これらは、多数の代謝プロセスおよびエネルギー生成において生理的に形成される攻撃的な化合物である。これらは、身体による防御反応にとって重要であるが、遺伝物質(DNA)、細胞膜、および生体タンパク質に対する損傷ももたらし得る。この損傷は、未熟な組織の加齢、組織の死滅、および癌をもたらし得る。抗酸化剤には、カロテノイド、アスコルビン酸(ビタミンC、E300)、およびまたL-アスコルビン酸ナトリウム(E301)、およびL-アスコルビン酸カルシウム(E302)、アスコルビルパルミテート(E304)、ブチルヒドロキシアニソール(E320)、ブチルヒドロキシトルエン(E321)、EDTAカルシウム二ナトリウム(E385)、没食子酸およびまた没食子酸プロピル(E310)、没食子酸オクチル(E311)、および没食子酸ドデシル(没食子酸ラウリル)(E312)、イソアスコルビン酸(E315)およびまたイソアスコルビン酸ナトリウム(E316)、レシチン(E322)、乳酸(E270)、多リン酸塩、例えば、二リン酸塩(E450)、三リン酸塩(E451)、およびポリリン酸塩(E452)、二酸化硫黄(E220)、およびまた亜硫酸ナトリウム(E221)、亜硫酸水素ナトリウム(E222)、二亜硫酸ナトリウム(E223)、亜硫酸カリウム(E224)、亜硫酸カルシウム(E226)、重亜硫酸カルシウム(E227)、および重亜硫酸カリウム(E228)、セレニウム、トコフェロール(ビタミンE、E306)、およびまたα-トコフェロール(E307)、γ-トコフェロール(E308)、およびΔ-トコフェロール(E309)、スズII  スズII  スズII  スズII塩化物(E512)、クエン酸(E330)、およびまたクエン酸ナトリウム(E331)、およびクエン酸カリウム(E332)、L-グルタチオン、L-システイン、ポリフェノール、フラボノイド、植物エストロゲン、グルタチオン、ならびに抗酸化酵素であるスーパーオキシドジスムターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、およびカタラーゼが含まれる。
【００９９】
本発明によると、抗酸化剤として、少なくとも1つの化合物が前述の抗酸化剤の群より選択される。
【０１００】
さらに適切なエフェクター分子はカロテノイドである。本発明によると、カロテノイドは以下の化合物を意味すると理解されたい:個々に、または混合物として、β-カロテン、リコピン、ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、カンタキサンチン、ビキシン、β-Apo-4-カロテナール、β-Apo-8-カロテナール、β-Apo-8-カロテン酸エステル。用いるのが好ましいカロテノイドは、β-カロテン、リコピン、ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、シトラナキサンチン、およびカンタキサンチンである。
【０１０１】
本発明の文脈の範囲内において、レチノイドは、ビタミンAアルコール(レチノール)およびその誘導体、例えば、ビタミンAアルデヒド(レチナール)、ビタミンA酸(レチノイン酸)、およびビタミンAエステル(例えば、酢酸レチニル、プロピオン酸レチニル、およびパルミチン酸レチニル)を意味する。レチノイン酸との用語は、ここでは、オールトランスレチノイン酸およびまた13-シスレチノイン酸の両方を含む。レチノールおよびレチナールとの用語は、好ましくはオールトランス化合物を含む。本発明による懸濁液に用いるのに好ましいレチノイドは、以下レチノールと呼ぶ、オールトランスレチノールである。
【０１０２】
さらに好ましいエフェクター分子は、ビタミン、特にビタミンA、およびそのエステルである。
【０１０３】
ビタミンは、動物およびヒト生物において合成されず、または不十分量しか合成されない、不可欠な有機化合物である。この定義に基づいて、13の構成要素または構成要素の群が、ビタミンとして分類されている。脂溶性ビタミンには、ビタミンA(レチノール)、ビタミンD(カルシフェロール)、ビタミンE(トコフェロール、トコトリエノール)、およびビタミンK(フィロキノン)が含まれる。水溶性ビタミンには、ビタミンB1(チアミン)、ビタミンB2(リボフラビン)、ビタミンB6(ピリドキサール群)、ビタミンB12(コバラミン)、ビタミンC(L-アスコルビン酸)、パントテン酸、ビオチン、葉酸、およびナイアシンが含まれる。
【０１０４】
A、C、E、およびF群からの、ビタミン、プロビタミン、およびビタミン前駆体、特に、3,4-ジデヒドロレチノール、β-カロテン(ビタミンAのプロビタミン)、アスコルビン酸(ビタミンC)、およびパルミチン酸エステル、アスコルビン酸のグルコシドまたはホスフェート、トコフェロール、特にa-トコフェロール、およびそのエステル、例えば、アセテート、ニコチネート、ホスフェート、およびスクシネート、またビタミンF(必須脂肪酸、特にリノール酸、リノレン酸、およびアラキドン酸を意味すると理解される)。
【０１０５】
ビタミンEは、抗酸化作用および非抗酸化作用を有する、(現在)8種類の脂溶性物質の群に対する総称である。ビタミンEは、動物細胞のすべての膜の構成成分であるが、植物およびシアノバクテリアなどの光合成的に活性な生物によってのみ形成される。8種類の既知のビタミンE形態のうち4種類がトコフェロール(α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、およびδ-トコフェロール)である。他の、今までに既知の4種類の形態のビタミンEは、トコトリエノール(α-トコトリエノール、β-トコトリエノール、γ-トコトリエノール、およびδ-トコトリエノール)と呼ばれている。さらに、α-トコフェリルアセテートなどのこれらの物質の誘導体も、有利であり得る。
【０１０６】
ビタミンA、およびその誘導体、およびプロビタミンは、有利には、特定の皮膚平滑化効果を示す。
【０１０７】
本発明に従って用いるのが好ましい、ビタミンB群の、ビタミン、プロビタミン、もしくはビタミン前駆体、またはそれらの誘導体、および2-フラノンの誘導体には、とりわけ以下が含まれる:
ビタミンB1、慣用名チアミン、化学名3-[(4'-アミノ-2'-メチル-5'-ピリミジニル)メチル]-5-(2-ヒドロキシエチル)-4-メチルチアゾリウムクロリド。 
ビタミンB2、慣用名リボフラビン、化学名7,8-ジメチル-10-(1-D-リビチル)-ベンゾ[g]プテリジン-2,4(3H,10H)-ジオン。遊離型において、リボフラビンは乳清などにおいて存在し、他のリボフラビン誘導体は細菌および酵母から単離することができる。本発明に同様に適するリボフラビンの立体異性体はリキソフラビンであり、これは魚粉または肝臓から単離することができ、D-リビチルの代わりにD-アラビチル基を保有する。 
ビタミンB3。この名称は、化合物ニコチン酸およびニコチンアミド(ナイアシンアミド)に対して用いられることが多い。本発明によると、ニコチンアミドが好ましい。 
ビタミンB5(パントテン酸およびパンテノール)。パンテノールを用いるのが好ましい。本発明に従って用いることができるパンテノールの誘導体は、特に、パンテノールのエステルおよびエーテル、ならびにカチオン性に誘導体化されたパンテノールである。本発明のさらに好ましい一実施形態において、2-フラノンの誘導体も、パントテン酸またはパンテノールの他にやはり用いることができる。特に好ましい誘導体は、市販の物質でもある、慣用名パントラクトン(Merck)である、ジヒドロ-3ヒドロキシ-4,4-ジメチル-2(3H)-フラノン、4ヒドロキシメチル-γ-ブチロラクトン(Merck)、3,3-ジメチル-2-ヒドロキシ-g-ブチロラクトン(Aldrich)、および2,5-ジヒドロ-5-メトキシ-2-フラノン(Merck)であり、立体異性体もすべて、明確に含まれる。 
ビタミンB6は均一ではない物質を意味することが理解されるが、慣用名ピリドキシン、ピリドキサミン、およびピリドキサールで知られている、5-ヒドロキシメチル-2-メチルピリジン-3-オールの誘導体である。 
ビタミンB7(ビオチン)、ビタミンHまたは「皮膚ビタミン」とも呼ばれる。ビオチンは、(3aS,4S,6aR)-2-オキソヘキサヒドロチエノール[3,4-d]イミダゾール-4-吉草酸である。
【０１０８】
パンテノール、パントラクトン、ニコチンアミド、およびビオチンは、本発明によると極めて特に好ましい。
【０１０９】
本発明に従い、適切な誘導体(塩、エステル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチド、および脂質)を用いることができる。
【０１１０】
この群からの親油性の、油溶性の抗酸化剤として、トコフェロールおよびその誘導体、没食子酸エステル、フラボノイドおよびカロテノイド、ならびにまたブチルヒドロキシトルエン/アニソールが好ましい。好ましい水溶性抗酸化剤は、アミノ酸、例えば、チロシンおよびシステインおよびそれらの誘導体、ならびにタンニン、特に植物起源のタンニンである。
【０１１１】
トリテルペン、特にトリテルペン酸、例えば、ウルソル酸、ロズマリン酸、ベツリン酸、ボスウェル酸、およびブリオノール酸。
【０１１２】
さらに好ましいエフェクター分子は、好ましくは低用量のフルーツ酸(α-ヒドロキシ酸)、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、グリコール酸などである。
【０１１３】
本発明に従い、前述した群のフルーツ酸からの少なくとも1つの化合物が、エフェクター分子として選択される。
【０１１４】
これらは0.1％〜35％、好ましくは0.1％〜10％、特に1％〜10％、1％〜5％の濃度で存在することができる。
【０１１５】
さらに好ましいエフェクター分子は、尿素およびその誘導体である。これらは、0.1％〜25％、好ましくは0.1％〜10％、特に1％〜10％、1％〜5％の濃度で存在することができる。
【０１１６】
本発明の一実施形態において、エフェクター分子は、ハイドロフォビンポリペプチド配列に連結している。
【０１１７】
エフェクター分子は、ハイドロフォビンポリペプチド配列に連結している。エフェクター分子とハイドロフォビンポリペプチド配列との間の結合は、共有性であってよく、またはイオン性もしくはファンデルワールス相互作用に基づいてもよい。
【０１１８】
共有性の連結が好ましい。これは、例えば、ハイドロフォビンポリペプチド配列の側鎖を介して、特にアミノ官能基、またはカルボキシレート官能基、またはチオール官能基を介して生じることができる。1つもしくは複数のリジン基のアミノ官能基、システイン基の1つもしくは複数のチオール基、またはハイドロフォビンポリペプチドのN末端もしくはC末端官能基を介して連結が好ましい。エフェクター分子の、ハイドロフォビンポリペプチド配列との連結は直接、すなわちエフェクター分子およびハイドロフォビンポリペプチド配列においてすでに存在する2つの化学官能基の共有結合として起こることができ、例えばハイドロフォビンポリペプチド配列のアミノ官能基が、エフェクター分子のカルボキシレート官能基で酸アミドに連結する。しかし、連結は、いわゆるリンカー、すなわち、ハイドロフォビンポリペプチド配列の1官能基との結合中に入り、エフェクター分子の別の官能基と連結する少なくとも2官能性の分子によってもよい。
【０１１９】
エフェクター分子が同様にポリペプチド配列からなる場合は、エフェクター分子とハイドロフォビンポリペプチド配列との連結は、いわゆる融合タンパク質、すなわち、2つの部分の配列、すなわちエフェクター分子とハイドロフォビンポリペプチド配列とからなる連続のポリペプチド配列によって起こることができる。
【０１２０】
エフェクター分子とハイドロフォビンポリペプチド配列の間に組み入れられる、いわゆるスペーサーエレメントも可能であり、例えば、プロテアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、ホスファターゼ、ヒドロラーゼに対する潜在的な切断部位を有するポリペプチド配列、またはいわゆるHisタグ、すなわちオリゴヒスチジン基などの融合タンパク質の簡便な精製を可能にするポリペプチド配列が挙げられる。
【０１２１】
非タンパク質様エフェクター分子の場合におけるハイドロフォビンポリペプチド配列との連結は、エフェクター分子の化学官能基との共有結合中に入る、ハイドロフォビンポリペプチド上の官能化可能基(側鎖)を介して起こるのが好ましい。
【０１２２】
ここでは、例えば、場合により活性化後、エフェクター分子のカルボキシル官能基と、対応するアミド結合、チオエステル結合、またはエステル結合中に入ることができる、ハイドロフォビンポリペプチドのアミノ官能基、チオール官能基、またはヒドロキシ官能基による結合連結が好ましい。
【０１２３】
ハイドロフォビンポリペプチド配列の、エフェクター分子とのさらに好ましい連結は、誂えられたリンカーの使用である。このようなリンカーは2つまたはそれを超える、それによってハイドロフォビンポリペプチド配列と1つまたは複数のエフェクター分子とを連結することができるいわゆるアンカー基を有する。例えば、ハイドロフォビンペプチドのアンカー基は、それによってリンカーがハイドロフォビンポリペプチドのシステイン基とのジスルフィド結合中に入ることができるチオール官能基であってよい。エフェクター分子に対するアンカー基は、それによってリンカーがエフェクター分子のヒドロキシル官能基とのエステル結合中に入ることができる、例えばカルボキシル官能基であってよい。
【０１２４】
このような誂えられたリンカーの使用により、所望のエフェクター分子に対する連結の正確な一致が可能になる。さらに、それによって複数のエフェクター分子を、規定された様式においてハイドロフォビンポリペプチド配列と連結することが可能である。
【０１２５】
用いられるリンカーは、連結される官能性によって支配されている。適切なものは、例えば、スルフヒドリル反応性基によってハイドロフォビンポリペプチドに連結する分子、例えば、マレイミド、ピドリジルジスルフィド(pydridyldisulfides)、α-ハロアセチル、ビニルスルホン、および以下によってエフェクター分子に連結する分子である:
・  スルフヒドリル反応性基(例えば、マレイミド、ピドリジルジスルフィド、α-ハロアセチル、ビニルスルホン)、アミン反応性基(例えば、スクシンイミジルエステル、カルボジイミド、ヒドロキシメチルホスフィン、イミドエステル、PFPエステルなど)
・  糖および酸化された糖反応性基(例えば、ヒドラジドなど)
・  カルボキシ反応性基(例えば、カルボジイミドなど)
・  ヒドロキシル反応性基(例えば、イソシアネートなど)
・  チミン反応性基(例えば、ソラレンなど)
・  非選択性基(例えば、アリールアジドなど)
・  光で活性化され得る基(例えば、ペルフルオロフェニルアジドなど)
・  金属錯化基(例えば、EDTA、ヘキサヒス、フェリチン)
・  抗体および抗体フラグメント(例えば、単鎖抗体、抗体のF(ab)フラグメント、触媒抗体)。
【０１２６】
あるいは、例えば、カルボジイミド、グルタールジアルデヒド、または当業者に公知の他の架橋剤によって、有効成分/効果物質とケラチン結合ドメインの間に直接的な連結を行うことができる。
【０１２７】
リンカーは、安定的でも、熱切断性でも、光切断性でも、またはそうでなければ酵素的に切断可能でも(特に、リパーゼ、エステラーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、ヒドロラーゼなどによって)よい。対応する化学構造は、当業者に公知であり、分子の部分間に組み込まれている。
【０１２８】
本発明による分子において用いることができる酵素的に切断可能なリンカーの例は、例えば、その内容の全文が本明細書に明確に参照される、WO98/01406(3頁30行目〜23頁9行目)に特定されている。
【０１２９】
ハイドロフォビンを浸透増強剤として含む本発明による製剤は、ヒトの化粧品における、特に、皮膚ケアおよび毛髪ケア、歯科用ケア、動物ケア、皮革ケアおよび皮革加工において、比較的広い分野の適用がある。
【０１３０】
製剤を、皮膚用、爪用、歯科用、および毛髪用化粧品に用いるのが好ましい。これらは、皮膚ケア、爪ケア、歯科ケア、および毛髪ケア、または皮膚保護、爪保護、歯科保護、および毛髪保護エフェクター物質の高濃度および長い作用時間を可能にする。
【０１３１】
毛髪化粧用、歯科化粧用、または皮膚化粧用の製剤を生成するのに適する補助剤および添加剤は当業者には公知であり、「Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika[Fundamentals and Formulations of Cosmetics]」、Huthig Verlag、Heidelberg、1989年、ISBN 3-7785-1491-1などの化粧用ハンドブックに見ることができる。
【０１３２】
さらなる実施形態によると、この毛髪化粧用、または皮膚化粧用、または歯科化粧用の製剤は、皮膚もしくは毛髪もしくは歯のケアまたは保護に貢献し、エマルジョン、分散液、懸濁液、水性界面活性製剤、ミルク、ローション、クリーム、バーム、軟膏、ゲル、顆粒、粉末、例えばリップスティックなどのスティック製剤、泡沫、エアロゾル、またはスプレーの形態である。このような製剤は、局所用製剤に非常に適している。適切なエマルジョンは、水中油型エマルジョン(O/W型)、および油中水型エマルジョン(W/O型)、またはマイクロエマルジョンである。
【０１３３】
原則として、毛髪化粧用の、歯科化粧用の、または皮膚化粧用の製剤は、皮膚(局所)、歯、または毛髪に対する適用に用いられる。局所用製剤は、ここでは有効成分を、微細分布で、好ましくは皮膚によって吸収され得る形態で、皮膚に対して適用するのに適する製剤を意味すると理解されたい。これに適するものは、例えば、水性および水-アルコール性の溶液、スプレー、泡沫、泡沫エアロゾル、軟膏、水性ゲル、O/WまたはW/O型のエマルジョン、マイクロエマルジョン、または化粧用スティック製剤である。
【０１３４】
本発明による化粧用組成物の好ましい一実施形態によると、組成物は担体を含む。好ましい担体は、水、気体、水ベースの液体、油、ゲル、エマルジョンもしくはマイクロエマルジョン、分散物、またはこれらの混合物である。特定の担体は、良好な皮膚適合性を示す。水性ゲル、エマルジョン、またはマイクロエマルジョンが、局所製剤に特に有利である。
【０１３５】
用いることができる乳化剤は、非イオン性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、または陰イオン性乳化剤である。乳化剤は、本発明による組成物中に、組成物に基づき0.1〜10重量％、好ましくは1〜5重量％の量で存在することができる。
【０１３６】
用いることができる非イオン性界面活性剤は、例えば、以下の群の少なくとも1つからの界面活性剤である:
エチレンオキシド2〜30モルおよび/またはプロピレンオキシド0〜5モルの、炭素原子8〜22個を有する直鎖脂肪アルコール上への、炭素原子12〜22個を有する脂肪酸上への、およびアルキル基中に炭素原子を8〜15個有するアルキルフェノール上への付加生成物、
エチレンオキシド1〜30モルの、グリセロール上への付加生成物のC12/18-脂肪酸モノエステルおよびジエステル、
炭素原子6〜22個を有する飽和および不飽和脂肪酸の、グリセロールモノエステルおよびジエステル、ならびにソルビタンモノエステルおよびジエステル、ならびにそれらのエチレンオキシド付加生成物、
アルキル基中に炭素原子8〜22個を有するアルキルモノグリコシドおよびオリゴグリコシド、ならびにそれらのエトキシ化類似体、
エチレンオキシド15〜60モルの、ヒマシ油および/または水添ヒマシ油上への付加生成物、
ポリオールエステル、特にポリグリセロールエステル、例えば、ポリグリセロールポリリシノレエート(polyricinoleate)、ポリグリセロールポリ-12-ヒドロキシステアレート、またはポリグリセロールジメレート(dimerate)。これらのクラスの物質の2つ以上からの化合物の混合物も同様に適している、
エチレンオキシド2〜15モルの、ヒマシ油および/または水添ヒマシ油上への付加生成物、
直鎖、分枝、不飽和、または飽和のC6/22脂肪酸、リシノール酸、および12-ヒドロキシステアリン酸ならびにグリセロール、ポリグリセロール、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、糖アルコール(例えば、ソルビトール)、アルキルグルコシド(例えば、メチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド)、ならびにポリグルコシド(例えば、セルロース)に基づく部分エステル、
モノ-、ジ-、およびトリアルキルリン酸、ならびにモノ-、ジ-、および/またはトリ-PEGアルキルリン酸、ならびにこれらの塩、
羊毛脂アルコール、
ポリシロキサン-ポリアルキル-ポリエーテルコポリマー、または対応する誘導体、
DE-C1165574におけるような、ペンタエリスリトール、脂肪酸、クエン酸、および脂肪アルコールの混合エステル、ならびに/または炭素原子6〜22個を有する脂肪酸の混合エステル、メチルグルコース、およびポリオール、好ましくはグリセロール、またはポリグリセロール、ならびに、
ポリアルキレングリコール、
ベタイン。
【０１３７】
さらに、双性イオン性界面活性剤を乳化剤として用いることができる。双性イオン性界面活性剤は、少なくとも1つの第4級アンモニウム基、および少なくとも1つのカルボキシレート基、または1つのスルホネート基を分子中に保有する界面活性化合物を意味するために用いられる用語である。特に適切な双性イオン性界面活性剤は、いわゆるベタイン、例えば、N-アルキル-N,N-ジメチルアンモニウムグリシネート、例えば、ココアルキルジメチルアンモニウムグリシネート、N-アシルアミノプロピル-N,Nジメチルアンモニウムグリシネート、例えば、ココアシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、および2-アルキル-3-カルボキシルメチル-3-ヒドロキシエチルイミダゾリン(各場合ともアルキル基またはアシル基中に炭素原子8〜18個を有する)、ならびにココアシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートである。CTFA名コカミドプロピルベタインで知られている脂肪酸アミド誘導体が特に好ましい。
【０１３８】
同様に適切な乳化剤は、両性界面活性剤である。両性界面活性剤は、分子中にC8,18-アルキル基または-アシル基とは別に、少なくとも1つの遊離アミノ基および少なくとも1つの-COOHまたは-SO3H基を含み、内部塩を形成することができる界面活性化合物を意味するものと理解される。適切な両性界面活性剤の例は、各場合ともアルキル基中に炭素原子約8〜18個を有するN-アルキルグリシン、N-アルキルプロピオン酸、N-アルキルアミノ酪酸、N-アルキルイミノジプロピオン酸、N-ヒドロキシエチル-N-アルキルアミドプロピルグリシン、N-アルキルタウリン、N-アルキルサルコシン、2-アルキルアミノプロピオン酸、およびアルキルアミノ酢酸である。
【０１３９】
特に好ましい両性界面活性剤は、N-ココアルキルアミノプロピオネート、ココアシルアミノエチルアミノプロピオネート、およびC12/18-アシルサルコシンである。両性乳化剤の他に、第4級乳化剤も適切であり、エステルクアット(esterquat)型のものでは、好ましくはメチル-第4級化ジ脂肪酸トリエタノールアミンエステル塩が特に好ましい。さらに、用いることができる陰イオン性乳化剤は、アルキルエーテル硫酸塩、モノグリセリド硫酸塩、脂肪酸硫酸塩、スルホスクシネート、および/またはエーテルカルボン酸である。
【０１４０】
適切な油体は、炭素原子6〜18個、好ましくは8〜10個を有する脂肪アルコールに基づくゲルベアルコール、直鎖C6〜C22脂肪酸の直鎖C6〜C22脂肪アルコールとのエステル、分枝C6〜C13カルボン酸の直鎖C6〜C22脂肪アルコールとのエステル、直鎖C6〜C22脂肪酸の分枝アルコール(特に2-エチルヘキサノール)とのエステル、直鎖および/または分枝脂肪酸の多価アルコール(例えば、プロピレングリコール、ダイマージオール、もしくはトリマートリオール)および/またはゲルベアルコールとのエステル、C6〜C10脂肪酸に基づくトリグリセリド、C6〜C18脂肪酸に基づく液体モノ-/ジ-、トリグリセリド混合物、C6〜C22脂肪アルコールおよび/またはゲルベアルコールの芳香族カルボン酸、特に安息香酸とのエステル、C2〜C12ジカルボン酸の、炭素原子1〜22個を有する直鎖もしくは分枝アルコール、または炭素原子2〜10個およびヒドロキシル基2〜6個を有するポリオールとのエステル、植物油、分枝第1級アルコール、置換されているシクロヘキサン、直鎖C6〜C22脂肪アルコールカーボネート、ゲルベカーボネート、安息香酸の直鎖および/または分枝C6〜C22アルコールとのエステル(例えば、Finsolv(登録商標)TN)、ジアルキルエーテル、エポキシ化した脂肪酸エステルのポリオールとの開環生成物、シリコーン油、および/または脂肪族もしくはナフテン酸炭化水素である。用いることができる油体は、室温で液体、またはそうでなければ樹脂様であってよい、シリコーン化合物、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、環状シリコーン、およびアミノ-、脂肪酸-、アルコール-、ポリエーテル-、エポキシ-、フッ素-、アルキル-、および/またはグリコシド修飾されているシリコーン化合物でもある。油体は、本発明による組成物中に、組成物に基づき、1〜90重量％、好ましくは5〜80重量％、特に10〜50重量％の量で存在することができる。
【０１４１】
消臭剤用の適切なエフェクター分子(ii)は、特に、香油、シクロデキストリン、イオン交換体、リシノール酸亜鉛、抗微生物/静菌性化合物(例えば、DCMX、Irgasan DP300、TCC)である。
【０１４２】
以下のものが制汗剤に適切である:タンニン、および亜鉛/アルミニウム塩。
【０１４３】
記載した補助剤の他に、製剤は、0.000001〜10重量％、0.0001〜10重量％、0.001〜10重量％、0.01〜10重量％、0.1〜10重量％、および1〜10重量％からなる群より選択される割合のハイドロフォビンを含む。
【０１４４】
本発明の一実施形態において、ハイドロフォビンを、作物保護組成物における浸透増強剤として用いる。
【０１４５】
本発明は、ハイドロフォビンを含む作物保護組成物を調製するための方法、およびハイドロフォビンを含む作物保護組成物もさらに提供する。
【０１４６】
記載した補助剤の他に、作物保護組成物は、0.000001〜10重量％、0.0001〜10重量％、0.001〜10重量％、0.01〜10重量％、0.1〜10重量％、および1〜10重量％からなる群より選択される割合のハイドロフォビンを含む。
【０１４７】
有効成分および/または効果物質の含量は、広い範囲にわたって変化してよい。特に、両性のポリマー組成物は、組成物の総重量に基づき、少なくとも5重量％の量、例えば、5〜50重量％の量、特に5〜20重量％の量の有効成分を含むいわゆる有効成分原液の調製を可能にする。
【０１４８】
有利には、本発明による水性の有効成分組成物は、溶媒不含、または低溶媒性であるように配合することができ、すなわち、水性の有効成分組成物中の有機溶媒の割合は、組成物の総重量に基づき10重量％以下、特に5重量％以下、特に1重量％以下であることが多い。
【０１４９】
多数の異なる有効成分および効果物質を、本発明による水性組成物中に製剤化することができる。本発明の特定の一実施形態は、作物保護のための有効成分、すなわち、除草剤、殺真菌剤、殺線虫剤、ダニ駆除剤、殺虫剤、およびまた植物の成長を調節する有効成分の製剤化に関する。
【０１５０】
本発明による水性の有効成分組成物として製剤化することができる殺真菌性有効成分の例には、以下のものが含まれる:
・  アシルアラニン、例えば、ベナラキシル、メタラキシル、オフレース、オキサジキシル、
・  アミン誘導体、例えば、アルジモルフ、ドダイン、ドデモルフ、フェンプロピモルフ、フェンプロピジン、グアザチン、イミノクタジン、スピロキサミン、トリデモルフ、
・  アニリノピリミジン、例えば、ピリメタニル、メパニピリム、またはシロジニル(cyrodinyl)、
・  抗生物質、例えば、シクロヘキシミド、グリセオフルビン、カスガマイシン、ナタマイシン、ポリオキシン、およびストレプトマイシン、
・  アゾール、例えば、ビテルタノール、ブロモコナゾール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、ジニトロコナゾール、エポキシコナゾール、フェンブコナゾール、フルキコナゾール、フルシラゾール、フルトリアホール、ヘキサコナゾール、イマザリル、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロクロラズ、プロチオコナゾール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、トリフルミゾール、トリチコナゾール、
・  2-メトキシベンゾフェノン、EP-A 897904において、一般式Iによって記載されているもの、例えばメトラフェノン、
・  ジカルボキシイミド、例えば、イプロジオン、ミクロゾリン、プロシミドン、ビンクロゾリン、
・  ジチオカルバメート、例えば、フェルバム、ナバム、マネブ、マンコゼブ、メタム、メチラム、プロピネブ、ポリカルバメート、チラム、ジラム、ジネブ、
・  複素環化合物、例えば、アニラジン、ベノミル、ボスカリド、カルベンダジム、カルボキシン、オキシカルボキシン、シアゾファミド、ダゾメット、ジチアノン、ファモキサドン、フェナミドン、フェナリモル、フベリダゾール、フルトラニル、フラメトピル、イソプロチオラン、メプロニル、ヌアリモル、ピコベザミド(picobezamid)、プロベナゾール、プロキナジド、ピリフェノックス、ピロキロン、キノキシフェン、シルチオファム、チアベンダゾール、チフルザミド、チオファネート-メチル、チアジニル、トリシクラゾール、トリホリン、
・  ニトロフェニル誘導体、例えば、ビナパクリル、ジノカップ、ジノブトン、ニトロフタル-イソプロピル、
・  フェニルピロール、例えば、フェンピクロニル、およびフルジオキソニル、
・  未分類の殺真菌剤、例えば、アシベンゾラル-S-メチル、ベンチアバリカルブ、カルプロパミド、クロロタロニル、シフルフェナミド、シモキサニル、ジクロメジン、ジクロシメット、ジエトフェンカルブ、エジフェンホス、エタボキサム、フェンヘキサミド、酢酸フェンチン、フェノキサニル、フェリムゾン、フルアジナム、ホセチル、ホセチルアルミニウム、イプロバリカルブ、ヘキサクロロベンゼン、メトラフェノン、ペンシクロン、プロパモカルブ、フタライド、トロクロホス-メチル(toloclofos-methyl)、キントゼン、ゾキサミド、
・  WO03/075663において一般式Iによって記載されているストロビルリン、例えば、アゾキシストロビン、ジモキシストロビン、フルオキサストロビン、クレソキシム-メチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、およびトリフロキシストロビン、
・  スルフェン酸誘導体、例えば、カプタホル、カプタン、ジクロフルアニド、ホルペット、トリフルアニド、
・  シンナミドおよび類似体、例えば、ジメトモルフ、フルメトベル、フルモルプ、
・  例えば、WO98/46608、WO99/41255、またはWO03/004465(各場合において、WO03/00465における、1頁8行目〜11頁45行目の一般式Iによる、また表1〜44および表Aと組み合わせて式IAに示した化合物によって)に記載されている、6-アリール-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
・  アミド殺真菌剤、例えば、シクロフェナミド(cyclofenamid)、およびまた(Z)-N-[α-(シクロプロピルメトキシイミノ)-2,3-ジフルオロ-6-(ジフルオロメトキシ)ベンジル]-2-フェニルアセトアミド。
【０１５１】
本発明による水性の有効成分組成物として製剤化することができる除草剤の例には以下のものが含まれる:
・  1,3,4-チアジアゾール、例えば、ブチダゾール、およびシプラゾール、
・  アミド、例えば、アリドクロール、ベンゾイルプロペチル、ブロモブチド、クロルチアミド、ジメピペレート、ジメテナミド、ジフェナミド、エトベンザニド、フラムプロプメチル、ホサミン、イソキサベン、メタザクロル、アラクロル、アセトクロル、メトラクロル、モナリド、ナプタラム、プロナミド、プロパニル、
・  アミノリン酸、例えば、ビラナホス、ブミナホス、グルホシネートアンモニウム、グリホセート、スルホセート、
・  アミトロールなどのアミノトリアゾール、アニロホスなどのアニリド、メフェナセット、
・  アリールオキシアルカン酸、例えば、2,4-D、2,4-DB、クロメプロップ、ジクロルプロップ、ジクロルプロップ-P、フェノプロップ、フルロキシピル、MCPA、MCPB、メコプロップ、メコプロップ-P、ナプロパミド、ナプロパニリド(napropanilide)、トリクロピル、
・  安息香酸、例えば、クロラムベン、ジカンバ、
・  ベンゾチアジアジノン、例えば、ベンタゾン、
・  漂白剤、例えば、クロマゾン、ジフルフェニカン、フルオロクロリドン、フルポキサム、フルリドン、ピラゾレート、スルコトリオン、
・  カルバメート、例えば、カルベタミド、クロルブファム、クロルプロファム、デスメジファム、フェンメジファム、ベルノレート、
・  キノリン酸、例えば、キンクロラック、キンメラック、
・  ジクロロプロピオン酸、例えば、ダラポン、
・  ジヒドロベンゾフラン、例えば、エトフメセート、
・  ジヒドロフラン-3-オン、例えば、フルルタモン、
・  ジニトロアニリン、例えば、ベネフィン、ブトラリン、ジニトラミン、エタルフルラリン、フルクロラリン、イソプロパリン、ニトラリン、オリザリン、ペンジメタリン、プロジアミン、プロフルラリン、トリフルラリン、ジニトロフェノール、例えばブロモフェノキシム、ジノセブ、ジノセブ酢酸塩、ジノテルブ、DNOC、ミノテルブ酢酸塩、
【０１５２】
・  ジフェニルエーテル、例えば、アシフルオルフェンナトリウム、アクロニフェン、ビフェノックス、クロルニトロフェン、ジフェノクスロン、エトキシフェン、フルオロジフェン、フルオログリコフェン-エチル、ホメサフェン、フリルオキシフェン、ラクトフェン、ニトロフェン、ニトロフルオルフェン、オキシフルオルフェン、
・  ジピリジル、例えば、シペルクアト、ジフェンゾクアトメチルスルフェート、ジクアト、パラクアトジクロリド、
・  イミダゾール、例えば、イソカルバミド、
・  イミダゾリノン、例えば、イマザメタピル、イマザピル、イマザキン、イマゼタベンズメチル(imazethabenz-methyl)、イマゼタピル、イマザピック、イマザモックス、
・  オキサジアゾール、例えば、メタゾール、オキサジアルギル、オキサジアゾン、
・  オキシラン、例えば、トリジファン、
・  フェノール、例えば、ブロモキシニル、イオキシニル、
・  フェノキシフェノキシプロピオン酸エステル、例えば、クロジナホップ、シハロホップ-ブチル、ジクロホップ-メチル、フェノキサプロップ-エチル、フェノキサプロップ-p-エチル、フェンチアプロペチル(fenthiapropethyl)、フルアジホップ-ブチル、フルアジホップ-p-ブチル、ハロキシホップ-エトキシエチル、ハロキシホップ-メチル、ハロキシホップ-p-メチル、イソキサピリホップ、プロパキザホップ、キザロホップ-エチル、キザロホップ-p-エチル、キザロホップ-テフリル、
・  フェニル酢酸、例えば、クロルフェナック、
・  フェニルプロピオン酸、例えば、クロロフェンプロップ-メチル、
・  ppi有効成分、例えば、ベンゾフェナップ、シニドン-エチル、フルミクロラック-ペンチル、フルミオキサジン、フルミプロピン、フルプロパシル、ピラゾキシフェン、スルフェントラゾン、チジアジミン、
・  ピラゾール、例えば、ニピラクロフェン、
・  ピリダジン、例えば、クロリダゾン、マレイン酸ヒドラジド、ノルフルラゾン、ピリデート、
・  ピリジンカルボン酸、例えば、クロピラリド、ジチオピル、ピクロラム、チアゾピル、
・  ピリミジルエーテル、例えば、ピリチオバック酸、ピリチオバック-ナトリウム、KIH-2023、KIH-6127、
・  スルホンアミド、例えば、フルメツラム、メトスラム、
・  トリアゾールカルボキサミド、例えば、トリアゾフェナミド、
・  ウラシル、例えば、ブロマシル、レナシル、テルバシル、
【０１５３】
・  さらに、ベナゾリン、ベンフレセート、ベンスリド、ベンゾフルオル(benzofluor)、ベンタゾン、ブタミホス、カフェンストロール、クロルタール-ジメチル、シンメチリン、ジクロベニル、エンドタール、フルオルベントラニル、メフルイジド、ペルフルイドン、ピペロホス、トプラメゾン、およびプロヘキサンジオン(prohexanedione)-カルシウム、
・  スルホニル尿素、例えば、アミドスルフロン、アジムスルフロン、ベンスルフロン-メチル、クロリムロン-エチル、クロルスルフロン、シノスルフロン、シクロスルファムロン、エタメツルフロン-メチル、フラザスルフロン、ハロスルフロン-メチル、イマゾスルフロン、メツルフロン-メチル、ニコスルフロン、プリミスルフロン、プロスルフロン、ピラゾスルフロン-エチル、リムスルフロン、スルホメツロン-メチル、チフェンスルフロン-メチル、トリアスルフロン、トリベヌロン-メチル、トリフルスルフロン-メチル、トリトスルフロン、
・  シクロヘキセノン型の作物保護有効成分、例えば、アロキシジム、クレトジム、クロプロキシジム、シクロキシジム、セトキシジム、およびトラルコキシジム。極めて特に好ましいシクロヘキセノン型の除草有効成分は、テプラロキシジム(AGROW、243巻、95年11月3日、21頁、カロキシジムを参照されたい)、および2-(1-[2-{4-クロロフェノキシ}プロピル-オキシイミノ]ブチル)-3-ヒドロキシ-5-(2H-テトラヒドロチオピラン-3-イル)-2-シクロヘキセン-1-オン、およびスルホニル尿素型の、N-(((4-メトキシ-6-[トリフルオロメチル]-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ)-カルボニル)-2-(トリフルオロメチル)ベンゼンスルホンアミドである。
【０１５４】
本発明による水性の有効成分組成物として製剤化することができる殺虫剤の例は以下のものを含む:
・  有機リン酸塩、例えば、アセフェート、アジンホス-メチル、クロルピリホス、クロルフェンビンホス、ジアジノン、ジクロルボス、ジメチルビンホス、ジオキサベンゾホス、ジクロトホス、ジメトエート、ジスルホトン、エチオン、EPN、フェニトロチオン、フェンチオン、イソキサチオン、マラチオン、メタミドホス、メチダチオン、メチル-パラチオン、メビンホス、モノクロトホス、オキシデメトン-メチル、パラオキソン、パラチオン、フェントエート、ホサロン、ホスメット、ホスファミドン、ホレート、ホキシム、ピリミホス-メチル、プロフェノホス、プロチオホス、プリミホス(primiphos)-エチル、ピラクロホス、ピリダフェンチオン、スルプロホス、トリアゾホス、トリクロルホン、テトラクロルビンホス、バミドチオン、
・  カルバメート、例えば、アラニカルブ、ベンフラカルブ、ベンジオカルブ、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、フェノキシカルブ、フラチオカルブ、インドキサカルブ、メチオカルブ、メソミル、オキサミル、ピリミカルブ、プロポクスル、チオジカルブ、トリアザメート、
・  ピレスロイド、例えば、ビフェントリン、シフルトリン、シクロプロトリン、シペルメトリン、デルタメトリン、エスフェンバレレート、エトフェンプロックス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、シハロトリン、λ-シハロトリン、ペルメトリン、シラフルオフェン、τ-フルバリネート、テフルトリン、トラロメトリン、α-シペルメトリン、ζ-シペルメトリン、ペルメトリン、
・  節足動物成長調節剤:(a)キチン合成阻害剤、例えば、ベンゾイル尿素、例えば、クロルフルアズロン、ジフルベンズロン、フルシクロクスロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン、テフルベンズロン、トリフルムロン、ブプロフェジン、ジオフェノラン、ヘキシチアゾクス、エトキサゾール、クロフェンタジン、(b)エクジソン拮抗剤、例えば、ハロフェノジド、メトキシフェノジド、テブフェノジド、(c)幼若ホルモン様物質、例えば、ピリプロキシフェン、メトプレン、フェノキシカルブ、(d)脂質生合成阻害剤、例えば、スピロジクロフェン、
・  ネオニコチノイド、例えば、フロニカミド、クロチアニジン、ジノテフラン、イミダクロプリド、チアメトキサム、ニテンピラム、ニチアジン、アセタミプリド、チアクロプリド、
・  さらなる未分類の殺虫剤、例えば、アバメクチン、アセキノシル、アセタミプリド、アミトラズ、アザディラクチン、ベンスルタップ、ビフェナゼート、カルタップ、クロルフェナピル、クロルジメホルム、シロマジン、ジアフェンチウロン、ジネトフラン(dinetofuran)、ジオフェノラン、エマメクチン、エンドスルファン、エチプロール、フェナザキン、フィプロニル、ホルメタネート、塩酸ホルメタネート、γ-HCHヒドラメチルノン、イミダクロプリド、インドキサカルブ、イソプロカルブ、メトルカルブ、ピリダベン、ピメトロジン、スピノサド、テブフェンピラド、チアメトキサム、チオシクラム、XMC、およびキシリルカルブ、ならびに
・  EP-A 462 456において一般式Iによって記載されている、N-フェニルセミカルバゾン、特に一般式IVの化合物:
【化１】
2010539125.tif 000002
【０１５５】
[式中、R11およびR12は、互いに独立に、水素、ハロゲン、CN、C1〜C4-アルキル、C1〜C4-アルコキシ、C1〜C4-ハロアルキル、またはC1〜C4-ハロアルコキシであり、R13は、C1〜C4-アルコキシ、C1〜C4-ハロアルキル、またはC1〜C4-ハロアルコキシである]例えば、R1が3-CF3であり、R2が4-CNであり、R3が4-OCF3である、化合物IV。
【０１５６】
用いることができる成長調節剤は、例えば、クロルメクアト(chlormequat)クロリド、メピクアト(mepiquat)クロリド、プロヘキサジオン-カルシウム、またはジベレリンの群からのものである。これらには、例えば、ジベレリンGA1、GA3、GA4、GA5、およびGA7など、および対応するexo-16,17-ジヒドロジベレリン、およびまたそれらの誘導体、例えば、C1〜C4カルボン酸とのエステルが含まれる。本発明によると、exo-16,17-ジヒドロ-GA5 13-アセテートが好ましい。
【０１５７】
本発明の好ましい一実施形態は、殺真菌剤の、特にストロビルリン、アゾール、および6-アリールトリアゾロ[1,5a]ピリミジンの水性の有効成分組成物の調製のための、ハイドロフォビンの本発明による使用に関し、例えば、WO98/46608、WO99/41255、またはWO03/004465に記載されている通りである。各場合において一般式I(1頁8行目〜11頁45行目、またWO03/00465における表1〜44および表Aと組み合わせて式IAに記されている化合物)、特に一般式Vの有効成分について記載されている通りである:
【化２】
2010539125.tif 000003
【０１５８】
[式中、
Rxは、基NR14R15、または任意によりハロゲン、OH、C1〜C4-アルコキシ、フェニルもしくはC3〜C6-シクロアルキル、C2〜C6-アルケニル、C3〜C6-シクロアルキル、C3〜C6-シクロアルケニル、フェニルもしくはナフチルによって置換されている直鎖もしくは分枝C1〜C8-アルキルであって、この場合最後に言及した4つの基は、ハロゲン、OH、C1〜C4-アルキル、C1〜C4-ハロアルコキシ、C1〜C4-アルコキシ、およびC1〜C4-ハロアルキルより選択される1、2、3、または4個の置換基を有することができ;
R14、R15は、互いに独立に、水素、C1〜C8-アルキル、C1〜C8-ハロアルキル、C3〜C10-シクロアルキル、C3〜C6-ハロシクロアルキル、C2〜C8-アルケニル、C4〜C10-アルカジエニル、C2〜C8-ハロアルケニル、C3〜C6-シクロアルケニル、C2〜C8-ハロシクロアルケニル、C2〜C8-アルキニル、C2〜C8-ハロアルキニルまたはC3〜C6-シクロアルキニルであり、
R14およびR15は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、5員〜8員の複素環であり、この複素環はNによって結合し、環のメンバーとしてO、N、およびSの群からの1、2、または3個のさらなるヘテロ原子を含むことができ、および/またはハロゲン、C1〜C6-アルキル、C1〜C6-ハロアルキル、C2〜C6-アルケニル、C2〜C6-ハロアルケニル、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C6-ハロアルコキシ、C3〜C6-アルケニルオキシ、C3〜C6-ハロアルケニルオキシ、(exo)-C1〜C6-アルキレン、およびオキシ-C1〜C3-アルキレンオキシからなる群からの1つまたは複数の置換基を保有することができ、
Lは、ハロゲン、シアノ、C1〜C6-アルキル、C1〜C4-ハロアルキル、C1〜C6-アルコキシ、C1〜C4-ハロアルコキシ、およびC1〜C6-アルコキシカルボニルから選択され、
L1は、ハロゲン、C1〜C6-アルキル、またはC1〜C6-ハロアルキル、特にフッ素または塩素であり、
Xは、ハロゲン、C1〜C4-アルキル、シアノ、C1〜C4-アルコキシ、またはC1〜C4-ハロアルキルであり、好ましくはハロゲンまたはメチル、特に塩素である]。
【０１５９】
式Vの化合物の例は、
5-クロロ-7-(4-メチルピペリジン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(4-メチルピペラジン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(モルホリン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(ピペリジン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(モルホリン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(イソプロピルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(シクロペンチルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(2,2,2-トリフルオロエチルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(3,3-ジメチルブタン-2-イルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(シクロヘキシルメチル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(シクロヘキシル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
【０１６０】
5-クロロ-7-(2-メチルブタン-3-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(3-メチルプロパン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(4-メチルシクロヘキサン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(ヘキサン-3-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(2-メチルブタン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(3-メチルブタン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-クロロ-7-(1-メチルプロパン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(4-メチルピペリジン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(4-メチルピペラジン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(モルホリン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(ピペリジン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(モルホリン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(イソプロピルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
【０１６１】
5-メチル-7-(シクロペンチルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(2,2,2-トリフルオロエチルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(3,3-ジメチルブタン-2-イルアミノ)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(シクロヘキシルメチル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(シクロヘキシル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(2-メチルブタン-3-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(3-メチルプロパン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(4-メチルシクロヘキサン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(ヘキサン-3-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(2-メチルブタン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン、
5-メチル-7-(3-メチルブタン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジンおよび
5-メチル-7-(1-メチルプロパン-1-イル)-6-(2,4,6-トリフルオロフェニル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン
である。
【０１６２】
本発明のさらに好ましい一実施形態は、殺虫剤、特に、クロルフェナピルなどのアリールピロールの;ビフェントリン、シフルトリン、シクロプロトリン、シペルメトリン、デルタメトリン、エスフェンバレレート、エトフェンプロックス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、シハロトリン、λ-シハロトリン、ペルメトリン、シラフルオフェン、τ-フルバリネート、テフルトリン、トラロメトリン、α-シペルメトリン、ζ-シペルメトリン、およびペルメトリンなどのピレトロイドの、ネオニコチノイドの、ならびに式IVのセミカルバゾンの、フィプロニルの水性の有効成分組成物の製造のための浸透増強剤としてのハイドロフォビンの使用に関する。
【０１６３】
本発明の一実施形態において、浸透増強剤としてのハイドロフォビンの使用により、達成すべき望ましい効果に必要とされる有効成分の濃度における、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、好ましくは11％、12％、13％、14％、15％、16％、18％、20％、特に好ましくは22％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、特に60％、70％、80％、90％の低減がもたらされる。
【０１６４】
本発明の一実施形態において、最初にリン酸緩衝溶液を処置すべき表面または界面に適用する。濃度0.01〜0.2重量％のハイドロフォビンを、pH7.5の50mM NaH2PO4中に溶解する。
【０１６５】
ハイドロフォビン溶液とインキュベート後、少なくとも1つの有効成分を含む製剤の適用を行う。
【０１６６】
本発明は、局所投与における有効成分の改善された吸収のための方法をさらに提供し、ハイドロフォビンを、
(a)有効成分の前に、
または
(b)有効成分と同時に
投与する。
【０１６７】
本発明は、局所投与における有効成分の改善された吸収のための組成物の製造のための方法をさらに提供し、この場合、固体の形態の、溶液中の、または有機媒体もしくは無機媒体中の分散物中のハイドロフォビンを、少なくとも1つの有効成分を含む製剤中に導入する。
【実施例】
【０１６８】
実施例1a
背景にあるのは、細胞を、浸透増強剤としてハイドロフォビン(A(WO2007/14897からの配列番号20)またはB(WO2007/14897からの配列番号26))の影響下、抗酸化効果のある参照物質とインキュベートすると抗酸化力の増大がもたらされるという考察である。浸透増強剤なしで参照物質と培養した培養物の他に、用いた対照は、非処理の培養物およびビヒクル処理した培養物であった。
【０１６９】
投与量について検討するために、用いることができる濃度を試験した後、細胞毒性アッセイ(ここではMTT変換による)によって主な実験を開始した。これらの予備実験の目的で、ビタミンC、酢酸トコフェロール、およびケルセチンの抗酸化能力に対するタンパク質の影響を測定するために、また経済的な使用に関して、0.001％の濃度を選択した。用いた参照物質はビタミンE(酢酸α-トコフェロール)、ビタミンC(リン酸アスコルビン酸Mg)、およびケルセチンであった。用いた試験細胞は、これらは評価方法において良好なシグナル強度を生成したことから、正常皮膚結合組織細胞(線維芽細胞)であった。
【０１７０】
溶液の抗酸化特性を確認するために、NHDF(正常ヒト皮膚線維芽細胞)培養物を、48ウェルの培養容器に接種し、培養表面が完全に覆われるまで培養した。次いで、これらのランダムな培養物で調査を行った。最初に、培養物を、試験溶液で24時間処理した。次いで媒体(試験溶液を含む)を除去し、培養物をバッファーで洗浄し、蛍光色素(DCFH)とインキュベートした。次いで、あらゆる非吸収の色素を除去するために、試料を数回洗浄し、細胞を無色のアッセイ媒体で処理した。細胞を含むプレートを蛍光リーダー中に入れ、ストレスなしの導入段階で測定を開始した。H2O2を加えた結果、次いで、細胞内のフリーラジカルが繰り返し誘発され、これが色素と反応して蛍光の誘導体がもたらされた。しかし、フリーラジカルを、抗酸化剤によって前もってクエンチすると、蛍光の誘導体の形成は妨げられ、または低減される。
【０１７１】
したがって、蛍光が低いことは抗酸化能力が高いことを示している。これらの実験を、3回の独立した操作において各場合6回の反復において行った。
【０１７２】
調査の結果を、次いで、グラフとして表している。
【０１７３】
135分の全操作時間にわたって、明瞭にする目的で、90分後毎にインスタント写真を撮影した(完全な画像を添付文書に示す)。ここでy軸は、細胞における酸化ストレスを、フリーラジカルが細胞内色素DCFHと反応した場合に放出される蛍光として表している。これは、棒が低いのは酸化ストレスが低く、したがって添加の結果として細胞の抗酸化能力が高いことを象徴することを意味する。蛍光の値はすべて、測定終了後培養物のタンパク質含量で補正した(クーマシー染色で確認した)。これは、(色素の量の変化による)蛍光における変動も引き起こす、細胞数における変動を補うものである。したがって細胞数に対して補正したデータを示す。酢酸トコフェロールは、それ自体、実施した調査において用いた細胞株に抗酸化力を有しない。
【０１７４】
それにもかかわらず、3回中2回の実験において、ハイドロフォビンA/酢酸トコフェロール、およびハイドロフォビンB/酢酸トコフェロールの組合せの場合に、酸化ストレスの低減が観察される。これは、該タンパク質の弱い陽性作用として解釈することができる。3回中2回の実験において、ハイドロフォビンは、それ自体、酢酸トコフェロールを含む組合せにおける酸化ストレスの低減を部分的に担うことができるにすぎない酸化ストレスのわずかな低減をもたらす。3回目の実験において、この効果が最も明瞭である。該タンパク質は、それ自体、この実験における酸化ストレスの低減を示さないが、該タンパク質および酢酸トコフェロールの組合せは低下を示す(図1)。
【０１７５】
実施例1b
抗酸化力を有するさらなる物質として、実施例1a)における実験条件、材料、および方法のもとで、酸化ストレスの低減に対するその効果において、ケルセチンを試験した。
【０１７６】
結果(図2)は、ハイドロフォビンタンパク質Bと組み合わせたケルセチンの効果が増強されたことを示している(Hタンパク質B 0.05％、ケルセチン0.0006％との組合せ)。
【０１７７】
実施例2
ハイドロフォビン処置毛髪による、毛髪染料における色素の吸収および結合の改善。 
この試験において、Kerling International Haarfabrik GmbHからのヨーロッパ人の天然ブロンド毛髪を用いた。 
毛髪染料の場合において、標準的な市販の製剤(ステージ1)を試験した。
【０１７８】
試験変形1
0.01〜0.2重量％の濃度のハイドロフォビンAまたはBの調製。溶媒は、pH7.5の50mM NaH2PO4である。溶解の割合を増すために、マグネチックスターラーを用いて室温で1時間溶解する。さらに、ハイドロフォビンを含まない比較懸濁液を調製する。 
毛髪を32℃で1時間インキュベートし、引き続き飲料水ですすぎ、乾燥する。 
毛髪染料の適用は、製造元の指示に従う。 
Penatenベビーシャンプー溶液(1％)で繰り返し洗浄し(1分泡立て、1分すすぎ、室温乾燥)、乾燥状態において引き続き評価する。
【０１７９】
試験変形2
0.01〜0.2重量％の濃度のハイドロフォビンAまたはBの調製。溶媒は、pH7.5の50mM NaH2PO4である。溶解の割合を増すために、これをマグネチックスターラーを用いて室温で1時間溶解する。さらに、ハイドロフォビンを含まない比較懸濁液を調製する。 
毛髪を32℃で1時間インキュベートし、引き続きヘアドライヤーを用いて50℃で直接乾燥する。 
毛髪を飲料水ですすぎ、室温で乾燥する。 
毛髪染料の適用は、製造元の指示に従う。 
Penatenベビーシャンプー溶液(1％)で繰り返し洗浄し(1分泡立て、1分すすぎ、室温乾燥)、乾燥状態において引き続き評価する。
【０１８０】
特に、第1の試験変形の場合、毛髪をハイドロフォビンAおよびBで処理した場合、結合および色素の吸収の増大を観察するのが可能であった。
【０１８１】
実施例3
ハイドロフォビンでの処理の結果としての乳酸の皮膚浸透の改善
ハイドロフォビン溶液の調製
1.900rpmのマグネチックスターラーで45分間激しく撹拌することによる、ハイドロフォビンのMillipore水溶液中のハイドロフォビンAおよびBの1％強度の溶液の調製
2.即時使用ハイドロフォビン溶液1mlの調製
→800μl Millipore水
+100μl 10倍バッファー(500mM Tris、10mM CaCl2、pH8)
+100μlハイドロフォビン溶液
これは、50mM Tris 1mM CaCl2およびpH8中0.1％強度のハイドロフォビン溶液に相当する。
【０１８２】
実験手順:
1.凍結し、除毛したブタ皮膚(漂白なし)を室温で解凍した。 
2.約2cm×2cmを測定した適用範囲に印をつける
3.以下の溶液を適用する(ストリッピング(stripping))
→対照(溶液なし)
100μl 0.1％ H*A
100μl 0.1％ H*B
4.溶液を室温で1.5時間インキュベート
5.存在するあらゆるバッファー塩を除去するために、適用範囲をすべて、2×500μlのMillipore水ですすぎ、ペーパータオルでたたいた。 
6.各場合において、15％強度の乳酸100μlを適用範囲すべてに適用
7.溶液を室温で10分間インキュベート
8.ペーパータオルを用いて過剰の乳酸を除去
9.各々の適用範囲上のブタ皮膚のpHの測定。測定を3回実施し、平均値を用いた。pH測定後に存在する水気を、ペーパータオルを用いてたたいて除いた。Courage & Khazakaからの皮膚用pHメーターPH905を用いた。 
10.Courage & KhazakaからのCorneofix粘着ストリップを用いて、最上部の疎性の細胞層を除去。 
11.pHを再測定。 
12.全体で、Corneofix粘着ストリップを3回用い、その後pHを測定した。
【表１】
2010539125.tif 000004
【０１８３】
結果:
ハイドロフォビン、特にハイドロフォビンB(H*B)で、またハイドロフォビンA(H*A)でもコーティングし、引き続き乳酸処理をすると、ハイドロフォビンなしの対照よりも、皮膚の下層(ストリッピング後)における皮膚のpHの低下がもたらされたことが分かる。
【０１８４】
この結果は、ハイドロフォビンは、乳酸の皮膚中への改善された浸透をもたらし、したがってハイドロフォビンはこの物質に対する浸透増強剤として作用することを明瞭に示している。
【図１】
2010539125.tif 000005
【図２】
2010539125.tif 000006
【国際調査報告】
2010539125.tif 000007
2010539125.tif 000008
2010539125.tif 000009
2010539125.tif 000010
2010539125.tif 000011
2010539125.tif 000012