(57)【要約】  ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは、その他のクローニングされたＳＲＩＦ受容体とは対照的にＳＳＴＲ２に選択性であり、クローニングされたヒト受容体ＳＳＴＲ２に高い親和性で結合するが、受容体を活性化せず、多くの有用な機能がある。ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４またはＳＳＴＲ５に有意な親和性で結合しないため、ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストの投与は、起こり得る望ましくない副作用を回避する。ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは受容体機能を阻害するため、ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストを治療的に用いてＳＳＴＲ２の媒介する特定の生理学的作用を阻害することができる。放射性ヨウ素等をこれらのＳＳＴＲ２選択的ＳＲＩＦアンタゴニストに組み込むことにより、薬剤スクリーニング法において有用な標識された化合物が提供される。あるいは、治療で使用するために、高放射性部分をそのＮ末端に結合するか、複合体化するかまたはキレート化することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞へのインターナライズを引き起こすことなくＳＲＩＦ受容体ＳＳＴＲ２に選択的に結合する環状ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）ペプチドアンタゴニストであって、
該ペプチドは、アミノ酸配列（シクロ３−１４）Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｄ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５を含み、
ここで、Ｘａａ１はｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ２は、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｐｈｅ（Ｂ）、ＮａｌまたはＴｙｒであり（式中、Ａは、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｍｅ、ＮＯ２、ＯＭｅまたはＮ−ホルミルであり、Ｂは、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ３、ＮＯ２またはＯＣＨ３である）、Ｄ−Ｘａａ３は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｐｅｎ、Ｄ−ＨＣｙｓまたはＳＨ側鎖を有する別のＤ−異性体αアミノ酸であり、Ｘａａ４、Ｘａａ５およびＸａａ６は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ７が、Ａｐｈ（Ｑ１）、Ｔｙｒ（Ｘ）、Ａｌａ（チエニル）またはＴｒｐ（Ａ）であり、（式中、Ｑ１は、Ｃｂｍ、ＯＨ−Ｃｂｍ、ＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＥｔ−Ｃｂｍ、Ｃｂｍ−Ｅｔ（ＯＥｔ）２またはＨｏｒであり、Ｘは、Ｈまたはハロゲンである）、Ｘａａ８は、Ｄ−Ｔｒｐ（Ａ）、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ（Ｂ）、Ｄ−Ｐｈｅ（Ｂ）、Ｌ−ＢｚｌＨｉｓ、Ｄ−ＢｚｌＨｉｓ、Ｌ−（ＤＮＰ）Ｈｉｓ、Ｄ−（ＤＮＰ）Ｈｉｓ、Ｌ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、Ｘａａ９は、Ｌｙｓ、ＮαＭｅＬｙｓ、ｈＬｙｓ、ＮαＭｅｈＬｙｓ、ＯｒｎまたはＮαＭｅＯｒｎであり、Ｘａａ１０は、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＶａｌであり、Ｘａａ１１、Ｘａａ１２およびＸａａ１３は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ１４は、Ｃｙｓ、Ｐｅｎ、ｈＣｙｓまたはＳＨ側鎖を有する別のＬ−異性体αアミノ酸であり、Ｘａａ１５は、２Ｎａｌ、Ｄ−２Ｎａｌ、Ａｐｈ（Ｑ２）、Ｄ−Ａｐｈ（Ｑ２）、（Ｒ１）Ｃｈａ、（Ｒ１）Ｄ−Ｃｈａ、（Ｒ１）Ｌｅｕ、（Ｒ１）Ｄ−Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｒｐまたはｄｅｓ−Ｘａａである（式中、Ｒ１はＨまたはＣαＭｅであり、Ｑ２は、Ｃｂｍ、ＯＨ−Ｃｂｍ、ＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＣＨ３−ＣｂｍまたはＯＥｔ−Ｃｂｍである）、環状ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）ペプチドアンタゴニスト。
【請求項２】
Ｘａａ７が、Ａｐｈ（Ｑ１）、Ａｌａ（チエニル）またはＴｒｐ（Ａ）であり、Ｄ−Ｘａａ３が、Ｄ−Ｃｙｓである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
Ｘａａ７が、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）、Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、ＴｙｒまたはＩＴｙｒである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
Ｘａａ８が、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｄ−Ｔｒｐ（Ａ）およびＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）からなる群より選択され、Ａが、５Ｆ、５Ｃｌ、５Ｂｒ、５Ｍｅ、５ＯＭｅ、６Ｆ、６Ｃｌまたは６Ｂｒである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
Ｘａａ７が、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）であり、Ｘａａ８が、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、Ｘａａ１５が、２ＮａｌまたはＤ−Ｔｙｒである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】
Ｘａａ２が、Ｃｐａであり、Ｘａａ７が、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）であり、Ｘａａ８が、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、Ｘａａ９が、Ｌｙｓであり、Ｘａａ１５が、２ＮａｌまたはＤ−Ｔｙｒである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】
Ｘａａ２が、４Ｃｌ（Ｐｈｅ）または４ＮＯ２（Ｐｈｅ）である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項８】
Ｘａａ２が、４Ｃｌ（Ｐｈｅ）または４ＮＯ２（Ｐｈｅ）であり、Ｘａａ７が、Ｔｙｒ（Ｘ）であり、Ｘａａ８が、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）またはＤ−Ｔｒｐであり、Ｘａａ１５が、２ＮａｌまたはＤ−Ｔｙｒである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項９】
Ｎ末端に、キレート剤、錯化剤、コンジュゲート剤または標識である部分Ｚも存在する、請求項１〜８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１０】
Ｚが、ＤＯＴＡ系キレート剤、ＤＴＰＡ系キレート剤、ＮＯＴＡ系キレート剤、カルボニル化合物、２ヒドラジノニコチンアミド、Ｎ４−キレート剤、デスフェリオキサミン、およびＮｘＳｙ−キレート剤からなる群より選択され、前記部分Ｚが任意選択によりリンカーＬによりＸａａ２に結合している、請求項９に記載のペプチド。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のペプチドと少なくとも１種類の製薬上許容される担体の混合物を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
ＳＲＩＦ受容体ＳＳＴＲ２に選択的に結合する環状ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）類似体ペプチドであって、
該ペプチドは、アミノ酸配列（シクロ３−１４）Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｃｙｓ−Ｘａａ１５−ＮＨ２を含み、
ここで、Ｘａａ１は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ２は、クロロＰｈｅまたはニトロＰｈｅであり、Ｘａａ４、Ｘａａ５およびＸａａ６は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ７は、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）、ＴｙｒまたはＩＴｙｒであり、Ｘａａ８は、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）またはＤ−Ｔｒｐであり、Ｘａａ９は、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ｈＬｙｓ、ＮαＭｅＬｙｓまたはＮαＭｅＯｒｎであり、Ｘａａ１０は、Ｔｈｒであり、Ｘａａ１１、Ｘａａ１２およびＸａａ１３は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ１５は、２ＮａｌまたはＤ−Ｔｙｒである、環状ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）類似体ペプチド。
【請求項１３】
Ｃ末端がアミド化された、以下のアミノ酸配列のいずれか１つを有する請求項１２に記載のペプチド。
【化１】
2010506943.tif 000011
【請求項１４】
ＤＯＴＡ系キレート剤、ＤＴＰＡ系キレート剤、ＮＯＴＡ系キレート剤、カルボニル化合物、２ヒドラジノニコチンアミド、Ｎ４−キレート剤、デスフェリオキサミン、およびＮｘＳｙ−キレート剤からなる群より選択される部分（Ｚ）が、Ｘａａ２に結合している、請求項１２または１３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５】
Ｘａａ２が、４Ｃｌ（Ｐｈｅ）または４ＮＯ２（Ｐｈｅ）であり、ＤＯＴＡキレート剤が４Ｃｌ（Ｐｈｅ）または４ＮＯ２（Ｐｈｅ）に共有結合している、請求項１４に記載のペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００６年１０月１６日出願の米国特許仮出願第６０／８２９，６３７号の優先権を主張するものであり、その開示内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）により交付された助成金番号第ＤＫ−５９９５３号に基づいて政府の支援によってなされた。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、ソマトスタチンに関連するペプチド、およびこのようなペプチドを用いる哺乳類の薬品治療のための方法に関する。より具体的には、本発明は、短縮された受容体選択的ソマトスタチンペプチドアンタゴニスト、およびそれに受容体選択性を付与するこのようなペプチドにおけるアミノ酸置換および／または付加の包含、このようなペプチドを含有する医薬組成物、放射性核種と複合体形成したかまたはコンジュゲートしたこのようなペプチド、このようなペプチド、特にキレート剤に結合しているかまたはそうでなければ標識されているペプチドを用いる、新生物（腫瘍）性および非新生物（非腫瘍）性哺乳類疾患の診断および治療的療法の方法、ならびにまた、このようなペプチドを用いるより効果的な薬剤についてのスクリーニングの方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
環状テトラデカペプチドソマトスタチン−１４（ＳＲＩＦ）は、もともと視床下部から単離され、下垂体前葉からの成長ホルモン（ＧＨ）放出の生理学的阻害剤として特徴付けされたものである。Ｇｕｉｌｌｅｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．がこれを特徴付けし、米国特許第３，９０４，５９４号に記載した。このテトラデカペプチドは、２つのシステイニルアミノ酸残基の３位および１４位のスルフヒドリル基相互間に架橋または環化結合を有する。ＳＲＩＦは、複数の細胞内プロセスに影響を及ぼし、特定の腫瘍の増殖を阻害することも知られている。アミノ酸配列：（シクロ３−１４）Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−ＯＨを有する類似体［Ｄ−Ｔｒｐ８］−ＳＲＩＦが、米国特許第４，３７２，８８４号に開示され、ＳＲＩＦよりもＧＨの放出を阻害する能力が何倍も高いことが述べられている。
【０００５】
ＳＲＩＦは、膜結合した構造上類似した受容体のファミリーと相互作用することにより、その生物学的効果を誘導する。５種類のＳＲＩＦ受容体がクローニングされ、ＳＳＴＲ１〜５と称されている。５種類の受容体は全て高い親和性でＳＲＩＦおよびＳＲＩＦ−２８に結合する。ＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ５の選択的アゴニストが同定され、これらの受容体の異なる機能を明らかにするために用いられている。これらの２種類の受容体は、末梢組織において優勢なサブタイプであると考えられている。ＳＳＴＲ２は、成長ホルモンであるグルカゴンおよび胃酸分泌の阻害を媒介すると考えられている。米国特許第５，８４６，９３４号には、ＳＳＴＲ２に対して何らかの特異性を有すると述べられている類似体が記載されている。アゴニストであるオクトレオチドは、ＳＳＴＲ２に対して何らかの特異性を示す（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９５：１０８３６参照）。対照的に、ＳＳＴＲ５は、主にインスリンおよびアミラーゼ放出の制御に関与していると思われる。国際公開公報第９７／１１９６号には、ＳＳＴＲ５に対して何らかの特異性を有すると述べられている類似体が記載されている。ＳＳＴＲ３は、胃平滑筋収縮の阻害を媒介する。米国特許第６，５７９，９６７号には、ＳＳＴＲ３に特異的なソマトスタチン類似体が開示されている（その開示内容は参照することにより本明細書に組み込まれる）。ＳＳＴＲ４は、その他のＳＲＩＦ受容体を実質的に排除して、下垂体、肺、胃腸管、腎臓、および特定の腫瘍に見出される；それはＳＲＩＦによる結合によって活性化されると考えられている。米国特許出願公開第２００２／０１３７６７６号には、ＳＳＴＲ１かまたはＳＳＴＲ４のいずれかに特異的なソマトスタチン受容体選択的リガンドを用いる内皮細胞の処置のための方法が開示されている。米国特許第５，７５０，４９９号および同第７，０１９，１０９号には、ＳＳＴＲ１に選択的なソマトスタチンペプチド類似体が開示されている（その開示内容は、参照することにより本明細書に組み込まれる）。米国特許出願公開第２００５／０２４５４３８号には、ＳＳＴＲ４に特異的な受容体選択的ソマトスタチンペプチド類似体が開示されている。これらの総合的な知見から、異なる受容体サブタイプは体内のＳＲＩＦの別個の機能を媒介することが示される。
【０００６】
ソマトスタチン受容体は、病理学的状態、特に胃腸管の神経内分泌腫瘍に発現される。ソマトスタチン標的組織を起源とする大部分のヒト腫瘍はそのソマトスタチン受容体を保存している。それは、成長ホルモン産生腺腫およびＴＳＨ産生腺腫において初めて観察された。内分泌不活性腺腫の約半分がソマトスタチン受容体を示す。カルチノイドの９０パーセントおよび膵島細胞癌の過半数が、それらの転移も含めて、通常高い密度のソマトスタチン受容体を有する。しかし、結腸直腸癌のわずか１０パーセントしかソマトスタチン受容体を含まず、膵外分泌癌はソマトスタチン受容体を全く含まない。腫瘍におけるソマトスタチン受容体は、インビトロ結合法を用いるかまたはインビボイメージング技法を用いて同定することができる。後者は患者において腫瘍およびその転移の正確な局在化を可能にする。胃腸膵腫瘍のソマトスタチン受容体は機能的であるので、それらの同定を用いて、患者において過剰なホルモン放出を阻害するための類似体の治療効力を評価することができる。
【０００７】
ＳＳＴＲ２に強く結合するが、同時に、その他の４種類の受容体との結合に対する性質は最小限度しか示さないソマトスタチンペプチドアンタゴニストを有すると役立つ。従って、本研究は、ＳＳＴＲ２に対して高選択性であるが、細胞の中へインターナライズされない、このようなソマトスタチンペプチドアンタゴニストに対して継続されている。
【発明の概要】
【０００８】
その他のクローニングされたＳＲＩＦ受容体と対照的に、ＳＳＴＲ２に対して選択的なＳＲＩＦのペプチド類似体を作り出すために効果的な特定の修飾が今や見出された。高度にＳＳＴＲ２選択性で、ソマトスタチンのアンタゴニストであり、ＳＳＴＲ２受容体を有する細胞にインターナライズされないが、匹敵する受容体選択的ソマトスタチンペプチドアゴニストよりも驚くほど大量に取り込まれる、ソマトスタチンペプチド類似体のクラスが見出された。得られたペプチドは、受容体を活性化させることなく、クローニングされたＳＳＴＲ２に選択的に結合し、これらのペプチド類似体は、ヨウ素化したかまたあるいは放射性標識した場合、その望ましい生物学的特性を保持する。従って、これらの新規なペプチドは、受容体ＳＳＴＲ２の組織的局在および細胞発現を判定する際に、ならびに従来ＳＲＩＦの投与の特徴であった特定の付随する副作用をもたらすことなく、特定の薬理学的機能を調節する際に有用である。これらのＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは、放射性標識した場合、ＳＰＥＣＴまたはＰＥＴを用いる、インビトロまたはインビボのいずれかで、これらの受容体を発現している腫瘍を位置づける、すなわち限局化するためのシンチグラフィーに用いることができる。当分野で周知のその他の標識、例えば蛍光標識を代わりに用いてもよい。当分野で公知の適当なキレート化した放射性核種がそれらに含まれる場合、これらの類似体は、このような腫瘍の治療における放射性核種治療に適した放射性医薬品として役立ち得る。
【０００９】
本発明のＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは、１２５Ｉ−［Ｔｙｒ１１］ＳＲＩＦおよび１２５Ｉ−［Ｌｅｕ８，Ｄ−Ｔｒｐ２２，Ｔｙｒ２５］ＳＲＩＦ−２８による、クローニングされたヒト受容体ＳＳＴＲ２への結合を阻害するが、それらはＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４またはＳＳＴＲ５へは強く結合しない。従って、非標識アンタゴニストを投与して、この受容体の機能を治療上阻止することができるかもしれない。ＤＯＴＡまたはＤＴＰＡのようなキレート剤により、例えば、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６８Ｇａまたは９０Ｙが結合する（または診断もしくは治療目的に有用な部分を結合させる目的で、別の錯化剤／コンジュゲート剤がＮ末端に結合する）これらのＳＲＩＦアンタゴニストは、ＳＳＴＲ１、３、４または５に有意に結合しないが、強力かつ飽和的にＳＳＴＲ２に結合し続ける。
【００１０】
好ましいＳＲＩＦアンタゴニストは、選択的にＳＳＴＲ２に結合するだけでなく、それに高い親和性で結合する。選択的結合とは、それらが４つ全てのその他の受容体に関してその約１００分の１またはそれ未満の、ＳＳＴＲ２のＫＤまたはＩＣ５０を示すことを意味する。好ましい類似体は、任意のその他のＳＲＩＦ受容体よりも少なくとも約２００倍ＳＳＴＲ２に選択性が高く、より好ましくは少なくとも約５００倍も選択性が高い。
【００１１】
これらのＳＲＩＦ類似体はまた、容易に標識され、従って薬物スクリーニング、イメージング、診断および放射性核種療法において効果的に用いることができる。例えば、検出可能な標識を有するこれらの類似体は、体内でこのような受容体を局在化させる際や、腫瘍、特に神経内分泌腫瘍の位置を診断する際に有用である。放射性核種治療薬として、それらはＳＳＴＲ２受容体を発現している腫瘍に対抗する際に特に有用であると考えられている。さらに、それらは副作用なく、すなわち、複数のＳＲＩＦ受容体の相互作用の結果として、隣接する組織の実質的な部分を破壊することなく、腫瘍との対抗を達成することができる。
【００１２】
特定の一態様では、本発明は、細胞へのインターナライズを引き起こすことなく、ＳＲＩＦ受容体ＳＳＴＲ２に選択的に結合する環状ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）ペプチドアンタゴニストを提供し、そのペプチドは、アミノ酸配列（シクロ３−１４）Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｄ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５を含み、ここで、Ｘａａ１は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ２は、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｐｈｅ（Ｂ）、ＮａｌまたはＴｙｒであり（式中、Ａは、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｍｅ、ＮＯ２、ＯＭｅまたはＮ−ホルミルであり、Ｂは、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ３、ＮＯ２またはＯＣＨ３である）、Ｄ−Ｘａａ３は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｐｅｎ、Ｄ−ＨＣｙｓまたはＳＨ側鎖を有する別のＤ−異性体αアミノ酸であり、Ｘａａ４、Ｘａａ５およびＸａａ６は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ７は、ＡＰｈ（Ｑ１）、Ｔｙｒ（Ｘ）、Ａｌａ（チエニル）またはＴｒｐ（Ａ）であり（式中、Ｑ１は、Ｃｂｍ、ＯＨ−Ｃｂｍ、ＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＥｔ−Ｃｂｍ、Ｃｂｍ−Ｅｔ（ＯＥｔ）２またはＨｏｒであり、Ｘは、Ｈまたはハロゲンである）、Ｘａａ８は、Ｄ−Ｔｒｐ（Ａ）、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ（Ｂ）、Ｄ−Ｐｈｅ（Ｂ）、Ｌ−ＢｚｌＨｉｓ、Ｄ−ＢｚｌＨｉｓ、Ｌ−（ＤＮＰ）Ｈｉｓ、Ｄ−（ＤＮＰ）Ｈｉｓ、Ｌ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、Ｘａａ９は、Ｌｙｓ、ＮαＭｅＬｙｓ、ｈＬｙｓ、ＮαＭｅｈＬｙｓ、ＯｒｎまたはＮαＭｅＯｒｎであり、Ｘａａ１０は、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＶａｌであり、Ｘａａ１１、Ｘａａ１２およびＸａａ１３は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ１４は、Ｃｙｓ、Ｐｅｎ、ｈＣｙｓまたはＳＨ側鎖を有する別のＬ−異性体αアミノ酸であり、Ｘａａ１５は、２Ｎａｌ、Ｄ−２Ｎａｌ、Ａｐｈ（Ｑ２）、Ｄ−Ａｐｈ（Ｑ２）、（Ｒ１）Ｃｈａ、（Ｒ１）Ｄ−Ｃｈａ、（Ｒ１）Ｌｅｕ、（Ｒ１）Ｄ−Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｒｐまたはｄｅｓ−Ｘａａである（式中、Ｒ１はＨまたはＣαＭｅであり、Ｑ２は、Ｃｂｍ、ＯＨ−Ｃｂｍ、ＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＣＨ３−ＣｂｍまたはＯＥｔ−Ｃｂｍである）。キレート剤含有部分は、当分野で公知のようにＮ末端で結合されてよい。あるいは、キレート剤含有部分は、ペプチドのＮ末端でのその対応物と複合体化（例えばビオチン−アビジン系）してもよい。
【００１３】
さらに特定の態様では、本発明は、ＳＲＩＦ受容体ＳＳＴＲ２に選択的に結合する環状ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）類似体ペプチドを提供し、そのペプチドは、アミノ酸配列シクロ（３−１４）Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｃｙｓ−Ｘａａ１５−ＮＨ２を含み、ここで、Ｘａａ１は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ２は、クロロＰｈｅまたはニトロＰｈｅであり、Ｘａａ４、Ｘａａ５およびＸａａ６は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ７は、Ａｐｈ（Ｈｏｒ）、ＴｙｒまたはＩＴｙｒであり、Ｘａａ８は、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）またはＤ−Ｔｒｐであり、Ｘａａ９は、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ｈＬｙｓ、ＮαＭｅＬｙｓまたはＮαＭｅＯｒｎであり、Ｘａａ１０は、Ｔｈｒであり、Ｘａａ１１、Ｘａａ１２およびＸａａ１３は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ１５は、２ＮａｌまたはＤ−Ｔｙｒである。
【００１４】
さらなる特定の態様では、本発明は、ＳＳＴＲ２を発現する、ヒトの身体中の組織を外部からイメージングする方法を提供し、その方法は（ｉ）その他のクローニングされたＳＲＩＦ受容体と対照的にＳＳＴＲ２に対して選択的であり、クローニングされたヒト受容体ＳＳＴＲ２に高い親和性で結合するが、その受容体を活性化させないＳＲＩＦペプチドアンタゴニストを含む組成物を、外部イメージングに十分な量でヒトに投与することと（ここで、前記ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは検出可能な標識を有する）、（ｉｉ）ヒトを外部イメージングに供することとを含む。
【００１５】
なおさらなる特定の態様では、本発明は、ＳＳＴＲ２を発現する、ヒトの身体中の新生物性組織を照射する方法を提供し、その方法は（ｉ）その他のクローニングされたＳＲＩＦ受容体と対照的にＳＳＴＲ２に対して選択的であり、クローニングされたヒト受容体ＳＳＴＲ２に高い親和性で結合するが、その受容体を活性化させないＳＲＩＦペプチドアンタゴニストを含む組成物を、新生物性組織を照射するために十分な量でヒトに投与することと（ここで、前記ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストは放射性標識を有する）、（ｉｉ）ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストを新生物性組織に結合させることとを含む。
【００１６】
別の特定の態様では、本発明は、ヒトの身体において、健康な状態または非新生物性の慢性炎症状態の場合に、大量のＳＳＴＲ２を含まない組織においてＳＳＴＲ２を有する腫瘍およびその転移を検出する方法を提供し、その方法は、身体中で前記腫瘍の検出および局在性を半定量的に可能にするために、（ｉ）請求項１に記載のペプチドを含む組成物を、外部イメージングに十分な量で前記ヒトに投与することと（ここで、前記ペプチドは（ａ）適したキレート剤を介して結合されている放射性金属同位体または（ｂ）常磁性金属原子で標識されているか、あるいは放射性ハロゲン同位体で標識されている）、その後（ｉｉ）放射性スキャンによるかまたは磁気共鳴イメージングにより、前記ヒトを外部イメージングに供して、バックグラウンド活性に関してその身体中の標的部位を判別することとを含む。
【００１７】
本発明は、選択的結合に必要であると決定されるリガンド特性パターンに基づくファーマコフォアモデルを用いる、ＳＳＴＲ２に高選択性のリガンドについてのスクリーニングの方法をさらに提供する。このような方法は、ＳＳＴＲ２受容体、本発明に係るリガンド、および候補アンタゴニストを用いて競合的結合アッセイを行うことと、ここで、前記リガンドは適した検出可能な標識を有する、候補アンタゴニストの標識リガンドを置換する能力を判定することと、およびＳＲＩＦに関連する活性をアンタゴナイズするその能力について前記候補アンタゴニストを試験することとを含んでもよい。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
標準的な３文字の略語は、αアミノ酸残基を同定するものであり、そのアミノ酸残基が異性体を有する場合、別に明示的に示されていない限り、Ｌ型アミノ酸である（例えばＳｅｒ＝Ｌ−セリン）。ＬまたはＤとは、特定のαアミノ酸のＤ異性体およびＬ異性体のいずれかを意味する。本明細書の下文においてペプチド中の位置への言及がなされる場合、それは天然の(native)１４残基のソマトスタチン（ＳＲＩＦ）ペプチドの対応する位置への言及を意味する。
【００１９】
ＳＲＩＦ受容体ＳＳＴＲ２に対して選択的親和性を有するＳＲＩＦペプチドアンタゴニストが提供される。ＳＲＩＦペプチドアンタゴニストはＳＳＴＲ２に対しても高親和性、すなわち約１０ナノモルまたはそれ未満のＫＤに等しい高親和性を有することが好ましい。これらのペプチドは、環部分がたった６残基に短縮され、Ｎ末端に１つの残基があり、好ましくはＣ末端にも１つの残基が付加されている、ＳＲＩＦの短縮された環状類似体を包含する。言い換えれば、１位、４位、５位、６位、１１位、１２位および１３位の残基が１４残基の天然のＳＲＩＦから除去されて、ヘプタペプチドを作り出し、好ましくは、１つの残基（すなわち残基１５）もＣ末端に付加されて、オクタペプチドが作り出される。
【００２０】
ＳＳＴＲ２に対して所望の特異性を示す代表的なペプチドアンタゴニストの例は、天然の哺乳類ＳＲＩＦの１４残基配列に一致する付番方式に基づく、１、４〜６および１１〜１３位の残基が削除されていることが好ましい、次のアミノ酸配列によりもたらされる。（シクロ３−１４）Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｄ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４−Ｘａａ１５〔ここで、Ｘａａ１は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ２は、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｐｈｅ（Ｂ）、ＮａｌまたはＴｙｒであり（式中、Ａが、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、Ｍｅ、ＮＯ２、ＯＭｅまたはＮ−ホルミルであり、Ｂが、Ｈ、ハロゲン、ＣＨ３、ＮＯ２またはＯＣＨ３である）、Ｄ−Ｘａａ３は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｐｅｎ、Ｄ−ＨＣｙｓまたはＳＨ側鎖を有する別のＤ異性体αアミノ酸であり、Ｘａａ４、Ｘａａ５およびＸａａ６は、ｄｅｓ−Ｘａａであり、Ｘａａ７は、Ａｐｈ（Ｑ１）、Ａｌａ（チエニル）、Ｔｙｒ（Ｘ）またはＴｒｐ（Ａ）であり（式中、Ｑ１は、Ｃｂｍ、ＯＨ−Ｃｂｍ、ＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＥｔ−Ｃｂｍ、Ｃｂｍ−Ｅｔ（ＯＥｔ）２またはＨｏｒであり、Ｘが、Ｈまたはハロゲンである）、Ｘａａ８は、Ｄ−Ｔｒｐ（Ａ）、Ｔｒｐ（Ａ）、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ（Ｂ）、Ｄ−Ｐｈｅ（Ｂ）、Ｌ−ＢｚｌＨｉｓ、Ｄ−ＢｚｌＨｉｓ、Ｌ−（ＤＮＰ）Ｈｉｓ、Ｄ−（ＤＮＰ）Ｈｉｓ、Ｌ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）、Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、Ｘａａ９は、Ｌｙｓ、ＮαＭｅＬｙｓ、ｈＬｙｓ、ＮαＭｅｈＬｙｓ、ＯｒｎまたはＮαＭｅＯｒｎであり、Ｘａａ１０は、Ｔｈｒ、ＳｅｒまたはＶａｌであり、Ｘａａ１１、Ｘａａ１２およびＸａａ１３は、ｄｅｓ−Ｘａａであり；Ｘａａ１４は、Ｃｙｓ、Ｐｅｎ、ｈＣｙｓまたはＳＨ側鎖を有する別のＬ−異性体αアミノ酸であり、Ｘａａ１５は、２Ｎａｌ、Ｄ−２Ｎａｌ、Ａｐｈ（Ｑ２）、Ｄ−Ａｐｈ（Ｑ２）、（Ｒ１）Ｃｈａ、（Ｒ１）Ｄ−Ｃｈａ、（Ｒ１）Ｌｅｕ、（Ｒ１）Ｄ−Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｒｐまたはｄｅｓ−Ｘａａであり（式中、Ｒ１はＨまたはＣαＭｅであり、かつＱ２は、Ｃｂｍ、ＯＨ−Ｃｂｍ、ＣＨ３−Ｃｂｍ、ＯＣＨ３−ＣｂｍまたはＯＥｔ−Ｃｂｍである）〕。２位のＴｙｒは、放射ヨウ素標識されてもよいし、あるいは、錯化剤、コンジュゲート剤またはキレート化剤を直接に、または放射性核種を結合させることのできるリンカーを介して、これらのペプチド類似体のいずれかのＮ末端残基のαアミノ基に結合させてもよい。例えば、大環状キレート化剤、例えばＤＯＴＡなどは、それをＸａａ２に直接、あるいは間接的にリンカー、例えば、ＧＡＢＡ（γアミノ酪酸、例えば、米国特許第６，０２２，５２３号参照）またはβＡｌａなどを用いて連結させることにより、Ｎ末端に付加することができる。
【００２１】
ＳＲＩＦ類似体の１種類の好ましい態様は、アミノ酸配列：（シクロ３−１４）Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｄ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｃｙｓを含む（ここで、Ｘａａ２が、置換されたＰｈｅであり、Ｄ−Ｘａａ３が、Ｄ−Ｃｙｓであり、Ｘａａ７が、Ａｐｈ（Ｑ１）、ＴｙｒまたはＩＴｙｒであり、Ｘａａ８が、Ｄ−ＴｒｐまたはＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）である）。残りのＸａａ基が、指定されていない場合は、いつでも上文に定義されるとおりであることは、当然理解される。
【００２２】
一般に、本出願の目的のため、具体例以外の説明文中でのＴｒｐおよびＤ−Ｔｒｐへの言及には、非置換の残基、ならびに、水素の単一の置換がＴｒｐの５位かまたは６位のいずれかで行われ、このような置換基がクロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、ニトロおよびメトキシから選択され、クロロ、フルオロおよびブロモが好ましい、またはインドールＮの水素をホルミルで置換していることが好ましい残基も含まれることは当然理解される。Ｎａｌとは、β炭素原子においてナフチルにより置換されているアラニンの異性体を意味し、ナフタレンへの結合は、環の２位、または任意選択により１位であることが好ましい。Ａｐｈとは、アミノフェニルアラニンを意味し、そのアミノ基はフェニル環の４位に結合することが好ましいが、２位または３位のいずれかでの結合は一般に同等である。Ａｐｈ（Ｃｂｍ）とは、４−ウレイド−フェニルアラニンを意味する。Ａｐｈ（ＯＨ−Ｃｂｍ）とは、４−（３−ヒドロキシ）−ウレイド−フェニルアラニンを意味する。Ａｐｈ（ＣＨ３−Ｃｂｍ）とは、４−（３−メチル）−ウレイド−フェニルアラニンを意味する。Ａｐｈ（ＯＣＨ３−Ｃｂｍ）とは、４−（３−メトキシ）−ウレイド−フェニルアラニンを意味する。Ａｐｈ［（ＥｔＯ）２Ｅｔ−Ｃｂｍ］は、４−｛３−［２−（２−エトキシ−エトキシ）−エチル］｝−ウレイド−フェニルアラニンを意味する。ＩＴｙｒとは、ヨウ素化Ｌ−チロシン、例えば３−ヨード−Ｔｙｒを意味する。Ｃｐａとは、クロロ−Ｐｈｅ、好ましくは４ＣｌＰｈｅを意味する。Ａｐｈ（Ｈｏｒ）とは、４−［（２，６−ジオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミジン−４−カルボニル）−アミノ］−フェニルアラニンを意味する。ＳＲＩＦとは、１４残基の環状ペプチドソマトスタチンを意味する。Ｃｈａとは、シクロヘキシルアラニンを意味し、Ｐｅｎとは、ペニシラミン（β−メルカプトバリン）を意味する。ｈＬｙｓまたはｈＣｙｓとは、側鎖に追加のＣＨ２基を１つ含むα−アミノ酸を意味する。
【００２３】
Ｃ末端は、通常アミド化されているが、同等の、例えばＧｌｙ−ＯＨを用いてもよい。Ｎ末端は、結合親和性に有意に悪影響を及ぼすことなく様々な方法で修飾することができ、これらの環状ペプチドにおける修飾のすべては、全体的な本発明のペプチドの一部に含められると考えられる。例えば、様々な付加が行われてよく、好ましくは、錯化剤またはコンジュゲート剤（Ｚ）の形態でＮ末端アミノ酸に様々な付加を行い、次に、錯化剤またはコンジュゲート剤を用いて所望の部分をペプチドに結合させるため、または標識を提供するために用いることができる。一般に、そのような部分Ｚは、ＤＯＴＡ系キレート剤およびＤＴＰＡ系キレート剤、ＮＯＴＡ系キレート剤、カルボニル化合物、２−ヒドラジノニコチンアミド（ＨＹＮＩＣ）、Ｎ４−キレート剤、デスフェリオキサミン、ＮｘＳｙ−キレート剤（全て任意選択により、放射性同位元素との複合体を形成）、ハロゲン化のためのチロシン（Ｔｙｒ）、蛍光染料およびビオチンからなる群より選択され得る。Ｃｐａはまた、トリチウム標識の前駆体として役立ち得る。例えば、キレート剤、例えばＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＨＹＮＩＣおよびＰ２Ｓ２−ＣＯＯＨなどを結合させてよい。好ましいキレート剤としては、ｐ−ＮＨ２−Ｂｚ−ＤＯＴＡ（２−ｐ−アミノベンジル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）、およびＤＯＴＡ−ｐ−ＮＨ２−アニリド［１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸モノ（ｐ−アミノアニリド）］が挙げられる。あるいは、キレート化剤は、所望であれば適したリンカー（Ｌ）を介して、Ｎ末端に共有結合させることができる。適したリンカーＬとしては、チロシン、リジン、ジアミノ酪酸、ジアミノプロピオン酸、ポリエチレングリコール、脂肪酸およびそれらの誘導体、β−アラニン、５−アミノ吉草酸、サルコシン、およびグルセロン酸（ｇｌｕｃｅｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）が挙げられる。ＴｙｒがＮ末端に現れる場合、それは放射ヨウ素標識されるか、または別の方法で標識されてもよい。大きな部分を含むＮ末端残基も、所望であれば選択性を失うことなくアシル化され得るので、約２０アミノ酸までしか有さないアシル基も、Ｎ末端に存在し得る。
【００２４】
本発明の類似体ペプチドのＳＳＴＲ２との結合の選択性は、下文により詳細に説明される５種類の異なるクローニングされたヒトＳＲＩＦ受容体とのそれらの相互作用を試験することにより実証された。一般に、受容体を発現する組換え細胞は、当分野で公知のように、適したバッファー中で粗タンパク質ホモジネートを調製するために洗浄され、ホモジナイズされる。典型的なアッセイでは、細胞ホモジネートからある量のタンパク質を、適当なｐＨの、少量の適当なアッセイバッファーの中に入れる。候補物質、例えば有力なＳＲＩＦアゴニストおよびアンタゴニストを、この混合物に便宜な濃度で加え、候補物質と受容体ポリペプチドとの間の相互作用をモニターする。本発明のペプチドはＳＳＴＲ２だけにかなり強く結合し、それらの結合は高親和性を示す。
【００２５】
受容体結合アッセイをクローニングされたＳＲＩＦ受容体で行い、競合アッセイを用いて、結合部位の５０％から測定される標的リガンドの飽和濃度を置換するために必要な競合的リガンドの濃度を示すＩＣ５０値を生成する。
【００２６】
本発明の一態様によれば、手術中にヒトの身体中の悪性腫瘍を健康な状態で大量のＳＳＴＲ２を含まない組織において検出する方法は、（ｉ）ガンマ検出プローブによる検出に十分な量で、例えば９９ｍＴｃ、１６１Ｔｂ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、１２３Ｉまたは１２５Ｉを用いる放射活性によって標識されているＳＳＴＲ２−選択的ペプチドを含む組成物をこのようなヒトに投与することと、（ｉｉ）活性物質を結合させ、前記腫瘍に取り込ませた後であって放射能の血液クリアランス後に、ガンマ検出プローブを用いることにより身体の該当部分でこのようなヒトを放射性検出法に供することとを含む。
【００２７】
本発明のＳＲＩＦアンタゴニストは、ＳＳＴＲ２に対して高選択性であり、それらは、部分的にしかＳＳＴＲ２に対して特異的でなかった以前のＳＲＩＦペプチドアゴニストよりも大量に取り込まれる。より重要なことには、ＳＲＩＦアンタゴニストは、その成功が、腫瘍により取り込まれる放射線の量によって直接決まる、放射線療法を用いてＳＳＴＲ２を発現するがんに対抗する際に有用であると考えられ、従って、それらは腫瘍の放射線療法に関して既知のアゴニストよりも効果的であると期待されている。当然、それらはまた、身体全体にわたる、ＳＳＴＲ２を発現している細胞および組織の分布を判別するためのシンチグラフィーにおいて特に有用であり、放射性スキャンまたは磁気共鳴による外部イメージングの使用により身体内の半定量的検出が可能になると考えられている。それらはＳＳＴＲ２に媒介される特定の薬理学的効果を選択的に阻害する際にさらに有用であり、過去２０年の間にＳＲＩＦの多くの効果が判別されている。
【００２８】
より具体的には、これらの放射性アンタゴニストは、健康な状態でＳＳＴＲ２をあまり含まない組織における、ヒトの身体中の悪性腫瘍の治療的処置に特に有用であると考えられている。このようなＳＳＴＲ２選択的ペプチドアンタゴニストは、シンチグラフィーのため、あるいは腫瘍に対抗するかまたは制御するために効果的な量を含む組成物を投与される。放射性アンタゴニストは、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、７１Ａｓ、９０Ｙ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９９ｍＴｃ、１６９Ｅｒ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ｇａ、１２７Ｔｅ、１９５Ｐｔ、２１１Ａｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１２４Ｉおよび１３１Ｉからなる群より選択される同位体で標識されてもよい。
【００２９】
標識された本発明のＳＲＩＦ類似体は、ＳＳＴＲ２に高親和性で結合し、非常に効果的なアンタゴニストであり得る、新規で効果的なペプチドおよび非ペプチド薬剤をスクリーニングするための薬物スクリーニングアッセイにおいても有用であると考えられる。受容体ＳＳＴＲ２に対して選択的な本発明のリガンドを使って、組換えによって産生された受容体に関するベースライン活性を得ることができる。ＳＳＴＲ２、標識されたリガンドおよび候補を用いる競合的結合アッセイを次に実行してその相対的結合親和性を判定する。あるいは、受容体機能の阻害剤または変更因子、すなわちアンタゴニストの予想される候補を、試験混合物に直接組み込んでこのような候補の受容体への影響を試験することができる。候補物質の存在下または不在下で受容体活性の程度を比較することにより、次に受容体の正常な機能への候補物質の影響に関する情報を得ることができ、従って既知のＳＳＴＲ２選択性類似体と比較してアゴニストかまたはアンタゴニストのいずれかとしてのその機能を決定する。以下の実施例に記載される環状ＳＲＩＦペプチドはアンタゴニストであり、それらはＳＳＴＲ２の正常な機能を媒介するために用いることができる。
【００３０】
本発明のペプチドは、古典的な溶相合成により合成することができるが、アミド化されたペプチドは、当分野で周知のように、メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂またはＢＨＡ樹脂でのような固相技法により合成することが好ましい。遊離カルボキシルＣ末端を有するペプチドは、米国特許第７，０１９，１０９号に教示されるように合成されることが好ましい。アミド化されたＣ末端を有するペプチドは、米国特許第５，８７４，２２７号に教示されるように合成することができる。固相合成は、これらの米国特許（その開示内容が参照することにより本明細書に組み込まれる）のいずれかに述べられている方法で、Ｃ末端を起点とする鎖に段階的にアミノ酸を付加する方法で行われる。当分野で周知の側鎖保護基は、好ましくは、特に反応性の側鎖を有する任意のアミノ酸の一部として含められ、かつ、このようなアミノ酸が樹脂の上に構築されている鎖に結合する、Ｔｒｐなどのその他の場合には任意選択により用いてもよい。このような合成により、完全に保護された中間体ペプチド樹脂が得られる。一般に、保護基は切り離され、ペプチドは酸化されてＣｙｓ側鎖間のジスルフィド結合を生成するよりも前に樹脂支持体から切断される。
【００３１】
本発明のＳＲＩＦ類似体は、一般に体重１キログラムあたり１００マイクログラム未満のレベルで効果的である。長期の作用のためには、体重１キログラムあたり約０．１〜約２．５ミリグラムの投薬量レベルを使用することが望ましい。これらの類似体は水溶性であり、従って比較的濃縮された投与用溶液として調製することができる。
【００３２】
以下の実施例は、本発明の様々な特徴を具体化する多数のＳＲＩＦペプチドアンタゴニストの規定を説明する。各々のペプチドにおいて、３位および１４位のシステイン残基は、環化ジスルフィド結合により結合されている。
【実施例１】
【００３３】
構造：
【化１】
2010506943.tif 000002
を有するソマトスタチン類似体ＤＯＴＡ−ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，Ｔｙｒ７，Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）８］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＮＨ２を合成する。ＢＯＣ戦略を用いる固相方法論を用いて、一般に‘２７７号特許の実施例２に記載されるように、ＭＢＨＡ樹脂上で段階的な方法でオクタペプチドを合成する。以前の刊行物にＪｉａｎｇにより記載されるように、Ｂｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）−ＯＨを予め作製し、８位に結合させた。
【００３４】
ペプチドを樹脂から切断し、同時にＨＦにより側鎖保護基（ＬｙｓからのＦｍｏｃ以外）を除去した後、メタノール中ヨウ素１０パーセント溶液を、得られる溶液が橙色のままであるまで添加することによりペプチドを酸化させて７５％酢酸溶液中にジスルフィド架橋を作製し、次に４０分間攪拌し、アスコルビン酸でクエンチした。粗ペプチドを、１００ｍｌ／分の流速にて、ベースライン％Ｂ（溶出剤Ａ＝０．１％ＴＦＡ、溶出剤Ｂ＝６０％ＣＨ３ＣＮ、４０％Ａ）から１分あたり１％Ｂ増加する直線勾配を用いる分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。次に、Ｎ末端にキレート剤として、ＤＭＦ（１ｍｌ）中ＤＯＴＡ−ＮＨＳ．３ＴＦＡ．ＨＰＦ６（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ，Ｄａｌｌａｓ，ＴＸ）（１９８ｍｇ、約２０μＭ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３６μｌ、約２２μＭ）を添加することにより、ＤＯＴＡを、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、３．５ｍｌ）中の精製されたペプチド（３２ｍｇ、約２０μＭ）に結合させた。混合物を、室温にて一晩攪拌した。反応の進行を分析ＨＰＬＣにより追跡し、ＭＳ分析は所望の生成物を示し、純粋なＤＯＴＡ−ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，Ｔｙｒ７，Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）８，Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）９］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＮＨ２が得られた。反応の完了後、Ｌｙｓ９側鎖からのＦｍｏｃ保護基の除去は、ＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液４ｍｌを添加し、３０分間待つことにより達成した。ＤＯＴＡ−ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，Ｔｙｒ７，Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）８］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＮＨ２を、上記と同じ条件を用いる分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより脱塩した。最終の環状ＤＯＴＡ−ペプチド−コンジュゲート体の純度を分析ＣＺＥにより決定した。純度は９４％であった。
【００３５】
ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１５８３．７２Ｄａを示し、計算された質量の１５８３．６２Ｄａに非常に好ましく比較される。このペプチドを、以降１番ペプチドと呼ぶ。
【実施例２】
【００３６】
実施例１に記載される初期合成を、２つの点を変更して反復する；オクタペプチド樹脂：ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）７，Ｄ−Ｔｒｐ８，Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）９］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＭＢＨＡ樹脂を得るために４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）およびＤ−Ｔｒｐが７位および８位に用いられる。
【００３７】
ペプチドを樹脂からアミドとして切断し、同時にアミノ酸の側鎖からＨＦにより保護基（ＬｙｓからのＦｍｏｃ以外）を除去した後、メタノール中ヨウ素１０パーセント溶液を、得られる溶液が橙色のままであるまで添加することによりペプチドを酸化させて７５％酢酸溶液中にジスルフィド架橋を作製し、次に４０分間攪拌し、アスコルビン酸でクエンチした。粗ペプチドを、１００ｍｌ／分の流速にて、ベースライン％Ｂ（溶出剤Ａ＝０．１％ＴＦＡ、溶出剤Ｂ＝６０％ＣＨ３ＣＮ、４０％Ａ）から１分あたり１％Ｂ増加する直線勾配を用いる分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、３．５ｍｌ）中の精製されたペプチド（３４ｍｇ、約２４μＭ）に、ＤＭＦ（１５０μｌ）中ＤＯＴＡ−ＮＨＳ．３ＴＦＡ．ＨＰＦ６（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ，Ｄａｌｌａｓ，ＴＸ）（２４ｍｇ、約２４．２μＭ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（４０μｌ、約２４．２μＭ）を加えた。混合物を室温にて一晩攪拌した。反応の進行を分析ＨＰＬＣにより追跡し、反応の完了後、１ｍｌのピペリジンを反応混合物に添加してＬｙｓ９側鎖から３０分間Ｆｍｏｃ保護基を除去すると、結果として式
【化２】
2010506943.tif 000003
を有する、ＤＯＴＡ−ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）７，Ｄ−Ｔｒｐ８］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＮＨ２となった。
【００３８】
このペプチドを、上記と同じ条件を用いる分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより脱塩した。最終の環状ＤＯＴＡ−ペプチド−コンジュゲート体の純度を分析ＣＺＥにより決定し、約９８％の純度であった。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１６０６．５０Ｄａを示し、１６０６．６４Ｄａの計算値に好ましく比較される。このペプチドを２番ペプチドと呼ぶ。
【実施例３】
【００３９】
Ｃ末端の２Ｎａｌを削除し、４Ａｐｈ（Ｈｏｒ）をＴｙｒ７の代わりに用いて、実施例１に記載される合成を反復する。Ｇ．Ｊｉａｎｇ、Ｊ．Ｓｔａｌｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）による以前の刊行物「ＧｎＲＨ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：Ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｎｇ  ａｃｔｉｎｇ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ  ｕｒｅａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｔ  ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ５  ａｎｄ  ６」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４（３）：４５３−４６７に記載されるように、Ｂｏｃ−４Ａｐｈ（Ｈｏｒ）−ＯＨを予め作製した。ペプチドの切断、脱保護、環化および精製は、実施例１と同じように行う。精製された環状ペプチドは、式
【化３】
2010506943.tif 000004
を有する。ＣＺＥでの純度は約９８％である。このペプチドを３番ペプチドと呼ぶ。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１５２５．６８Ｄａを示し、１５２５．５８Ｄａの計算値に好ましく比較される。
【実施例４】
【００４０】
実施例１に記載される合成を、１つの点を変更して反復し、Ｎ末端のｐＣｌ−Ｐｈｅの代わりに、ｐＮＯ２−Ｐｈｅを用いる。ペプチドの切断、脱保護、環化および精製は、実施例１と同じように行う。精製された環状ペプチドは、式
【化４】
2010506943.tif 000005
を有する。ＣＺＥでの純度は約９８％である。このペプチドを４番ペプチドと呼ぶ。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１５９４．１７Ｄａを示し、１５９４．６５Ｄａの計算値に好ましく比較される。
【実施例５】
【００４１】
実施例１に記載される初期合成を、１つの点を変更して反復する。Ａｐｈ（Ｈｏｒ）を７位のＴｙｒの代わりに用いてオクタペプチド樹脂：ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，４Ａｐｈ（Ｈｏｒ）７，Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）８，Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）９］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＭＢＨＡ樹脂を得る。次に、実施例２に記載されるように反応を行い、結果として
【化５】
2010506943.tif 000006
を有するＤＯＴＡ−ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［Ｃｐａ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，４Ａｐｈ（Ｈｏｒ）７，Ｄ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）８］−ＳＲＩＦ−２Ｎａｌ−ＮＨ２を得る。
【００４２】
最終の環状ＤＯＴＡ−ペプチド−複合体の純度を、分析ＣＺＥにより純度約９８％であると決定した。このペプチドを５番ペプチドと呼ぶ。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１７２２．５６Ｄａを示し、１７２２．６５Ｄａの計算値に好ましく比較される。
【実施例６】
【００４３】
実施例５に記載される合成を反復し、Ｃ末端でＤ−Ｔｙｒを２Ｎａｌの代わりに用いる。ペプチドの切断、脱保護、環化および精製は、実施例１と同じように行う。精製された環状ペプチドは、式
【化６】
2010506943.tif 000007
を有する。ＣＺＥでの純度は約９８％である。それを６番ペプチドと呼ぶ。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１６８８．８３Ｄａを示し、１６８８．６４Ｄａの計算値に好ましく比較される。
【実施例７】
【００４４】
実施例４に記載される合成を反復し、Ｃ末端でＤ−Ｔｙｒを２Ｎａｌの代わりに用いる。ペプチドの切断、脱保護、環化および精製は、実施例１と同じように行う。精製された環状ペプチドは、式
【化７】
2010506943.tif 000008
を有する。ＣＺＥでの純度は約９８％である。このペプチドを７番ペプチドと呼ぶ。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１５６０．６３Ｄａを示し、１５６０．８３Ｄａの計算値に好ましく比較される。
【実施例８】
【００４５】
実施例７に記載される合成を、２つの点を変更して反復する；ＩＴｙｒを７位に用い、Ｄ−Ｔｒｐを８位に用いてオクタペプチド樹脂：ｄｅｓ−ＡＡ１，４，５，６，１１，１２，１３［ｐＮＯ２−Ｐｈｅ２，Ｄ−Ｃｙｓ３，ＩＴｙｒ７，Ｄ−Ｔｒｐ８，Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）９］−ＳＲＩＦ−Ｄ−Ｔｙｒ−ＭＢＨＡ樹脂を得る。
【００４６】
ペプチドを樹脂からアミドとして切断し、一般に実施例２に記載される反応を実行した後、式
【化８】
2010506943.tif 000009
を有するペプチドを得る。最終の環状ＤＯＴＡ−ペプチド−複合体の純度を分析ＣＺＥにより純度約９８％であると決定した。それを８番ペプチドと呼ぶ。ＭＳ分析による［Ｍ＋Ｈ］＋質量は１６６７．７４Ｄａを示し、１６６７．５２Ｄａの計算値に好ましく比較される。
【００４７】
インビトロ生物検定：様々なソマトスタチン類似体の効果を、ＣＨＯ−Ｋ１細胞およびＣＣＬ３９細胞で発現され単離されクローニングされた受容体に結合する能力についてインビトロで試験する。ＣＨＯ−Ｋ１細胞をハムＦ−１２培地で増殖させ、ＣＣＬ３９細胞を、５％ＣＯ２を含有する３７℃の加湿空気中、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地／ハムＦ−１２（１：１）混合培地で増殖させた。
【００４８】
複数のソマトスタチン受容体サブタイプをコードする遺伝子の分子クローニングにより、哺乳類細胞におけるこれらの受容体の個別発現およびそれらの各薬理学的プロフィールの特性決定が可能になる。ＳＳＴＲ１からＳＳＴＲ５まで名付けられた、５種類のこのような受容体サブタイプは、クローニングされ、報告され、Ｒａｙｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４３，８３８−８４４（１９９３）およびＲａｙｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４４，３８５−３９２（１９９３）に記載されている。これらの参照文献には、特定のＳＲＩＦ類似体が５種類の受容体の中の１以上に選択的に結合するかどうか、またそれらがこのような受容体の種類に高いまたは低い親和性で結合するかどうかを決定するために用いることのできる結合アッセイが記載されている。これらの受容体の種類は、現在、一般にそれらの薬理学的プロフィールに関して特性決定されているので、このような結合研究の結果の知識は、体内でのこれらの受容体の特有の分布パターンの知識とともに、各々の受容体サブタイプが、別個であるが重複するＳＲＩＦの生理学的効果を媒介し得ることを示す。結果として、例えば受容体ＳＳＴＲ２に選択的に結合する化合物を用いて、その他のＳＲＩＦ受容体により媒介されるＳＲＩＦの別の生理学的機能の結果もたらされる望ましくない効果を潜在的に有することなく、ＳＲＩＦの特定の生理学的機能を調節することができる。
【００４９】
細胞を２回洗浄し、氷冷した０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）の中に残さず入れ、遠心分離により回収し、同じバッファー中でロータ／ステータ／システムを用いてホモジナイズする。４℃にて５分間、１２０ｇでの遠心分離後、上清を回収し、再び４℃にて３０分間、４８，０００ｇで遠心する。得られるペレットを氷冷Ｔｒｉｓバッファー中で再懸濁し、ミクロチューブの中に移し、４℃にて１５分間、２０，０００ｇで遠心する。上清の回収後、膜ペレットを−８０℃にて保存する。
【００５０】
受容体オートラジオグラフィーを、２０μｍ厚さの膜ペレットのクリオスタット切片上で行い、顕微鏡スライドにマウントし、次に−２０℃にて保存する。試験した化合物の各々について、５種類すべての受容体に強い親和性で結合する一般的なソマトスタチンリガンド放射性リガンド１２５Ｉ−［Ｌｅｕ８，Ｄ−Ｔｒｐ２２，Ｔｙｒ２５］−ソマトスタチン２８を用いて完全な置換実験を行う。０．１〜１０００ｎＭの範囲の漸増濃度の非標識ペプチドを使用する。非標識のソマトスタチン−２８を、対照として、同じ漸増濃度を用いて平行して実行する。当分野で公知のコンピュータ支援画像処理システムを用いるデータの定量化の後、ＩＣ５０値を算出する。１００ｎＭの濃度で、１番ペプチドは、ＳＲＩＦ−２８放射性リガンドとＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４およびＳＳＴＲ５の結合に最小の効果を有した。対照的に、それはＳＳＴＲ２に選択的に結合し、約１．８ｎＭのＩＣ５０値で、放射性リガンドとヒトＳＳＴＲ２の結合を置換した。
【００５１】
特定のＳＲＩＦ類似体が、１２５Ｉ−［Ｌｅｕ８，Ｄ−Ｔｒｐ２２，Ｔｙｒ２４］ＳＲＩＦ−２８と様々なクローニングされたヒトＳＲＩＦ受容体の放射性リガンド結合を阻害する可能性を次の表に示す（ＩＣ５０値はナノモル濃度で表す）。括弧内の数字は、特定の結合試験が行われた回数を示す。
【表１】
2010506943.tif 000010
【００５２】
さらに、試験され、上の表に報告された全てのペプチドは、細胞内への有意なインターナライズを示さなかったが、オクトレオチドに誘導されるインターナライズをアンタゴナイズした。１番および４〜８番ペプチドは、インビボで非常に良好な結合特性および優れた腫瘍標的化特性、すなわち４時間および２４時間でのｓｓｔ２腫瘍への大量の取込み、および優れた腎臓に対する腫瘍比を示した。従って腫瘍取込みは過剰な冷ペプチドにより阻害することができる。
【００５３】
本発明のペプチドは、ＳＳＴＲ２と結合するためのより選択的なリガンドを提供するだけでなく、標識されたペプチド、例えば、放射性標識された形の１番ペプチドを用いることにより、さらにより効果的なアンタゴニストについての薬物スクリーニングが促進される。当分野で周知のように、受容体ポリペプチドＳＳＴＲ２を組換え宿主から直接用いるスクリーニングアッセイを用いて、望むようなソマトスタチンの特定の態様を阻害または模倣する際に有用な薬剤を同定すると同時に、その他の受容体の活性化または阻害から生じ得るこのホルモンの望ましくない態様を排除することができる。この点において、スクリーニング目的に放射ヨウ素標識された類似体が望ましい場合、ＴｙｒをＤＯＴＡの代わりにＮ末端に付加することができ、または、ＴｙｒをＣｐａの代わりに２位に用いることができ、あるいは、適した放射性リガンドをＤＯＴＡキレート剤により結合させることができる。候補化合物を用いる競合結合アッセイは、高い結合親和性を探すために、まずこの方法でＳＳＴＲ２を用いて実行し、次に、複数のＳＲＩＦ受容体をスクリーニングすることにより、所望される際、この受容体だけへの選択的結合があるかどうか確認することができ得る。本発明の非放射性標識ペプチドは、肺、胃腸管および腎臓を含む、ＳＳＴＲ２を発現することの分かっている全ての器官の疾病を治療するために用いてもよい。
【００５４】
上に示されるように、ＳＲＩＦ類似体のＮ末端への付加は選択的結合に悪影響を及ぼさないと思われるので、これらの化合物が、その物質を腫瘍またはアポトーシスを望むその他の組織へ運ぶ目的で放射性核種と複合体化され得ることは明らかである。例えば、適したキレート化剤、例えばＤＯＴＡまたはＤＴＰＡまたはその他のものを用いて、上文に示されるようにＳＲＩＦ類似体を高放射性金属と複合体化することができる。放射性金属原子をキレート化するために適したキレート化剤の一部の例は、テトラデンテートキレート化剤またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル１，２−ジアミンテトラ−酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール−０，０’−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ−酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシベンジル）−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミンヘキサ−酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ−酢酸（ＤＯＴＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロ−テトラデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ−酢酸（ＴＥＴＡ）、置換ＤＴＰＡ、置換ＥＤＴＡに由来する群である。その他のキレート剤、ならびに放射性薬剤は、ＷＯ９５／２２３４１号およびＷＯ０４／０８２７２２号および米国特許公報第２００４／０２４２８４２号および同第２００５／００７０４７０号に開示される（この開示内容は参照することにより本明細書に組み込まれる）。好ましいキレート剤は、ＥＤＴＡおよびＤＯＴＡに由来する。一部の適した塩は、１１１Ｉｎ−オキシネートおよび９９ｍＴｃ−酒石酸塩であり、それらはペプチドアンタゴニストに対して有害でない条件下で一般に簡単な方法で形成させることができ、９９ｍＴｃ（ＣＯ）３は、Ｔｙｒまたは適したトリデンテート（ｔｒｉｄｅｎｄｅｔｅ）キレート剤を介して結合させることができる。
【００５５】
所望であれば、ＳＲＩＦアンタゴニストの溶解度は、親水性の化合物、例えばヒドロオロト酸（Ｈｏｒ）等を用いるＮ末端アミノ基のアシル化により、あるいは適したイソシアネート、例えばメチルイソシアネートまたはイソプロピルイソシアネートなどとの反応によってＮ末端に尿素部分を作り出すことにより、改善することができる。ＳＲＩＦアンタゴニストの作用の持続時間を増大させる当分野で公知のその他の薬剤をＮ末端に結合させることもできる。
【００５６】
これらのＳＲＩＦアンタゴニストまたはその無毒の塩は、薬学的または獣医学的に許容される担体を組み合わせて医薬組成物を形成し、ヒトおよびその他の哺乳類を含む動物に、静脈内に、皮下に、筋肉内に、経皮的に、例えば鼻腔内に、脳脊髄内にまたは経口的に投与することができる。組織中の悪性のヒト腫瘍を、その転移を含めて、検出するために用いるよう設計されるこのような医薬組成物には、製薬上許容される担体材料および任意選択で製薬上許容されるアジュバントに加えて、活性物質として標識されたペプチドアンタゴニストを、ガンマ検出プローブによる検出のための、あるいは腫瘍に対抗するかまたは腫瘍を制御するための、外部イメージングに十分な量で含んでよい。ペプチドアンタゴニストは、少なくとも約９０％純粋であるべきであり、好ましくは少なくとも約９８％の純度を有するべきである。しかし、ヒト以外の哺乳類には低い純度でも効果的であり、十分に用いることができる。この純度は、意図されるペプチドが、存在する全ての同種のペプチドおよびペプチド断片のうちの、述べられた重量％を構成することを意味する。ヒトへの投与は、特定の腫瘍およびがんに対抗するため、またはＳＳＴＲ２受容体が制御機能に影響を及ぼすその他の状態を媒介する（例えば、チロシンホスファターゼと結合してこの酵素の刺激を行ってＳＲＩＦの抗増殖性の作用を媒介する）ため、医師の指示のもとに行うべきである。必要な投薬量は、処置される特定の状態、状態の重篤度および所望の処置持続時間によって変動する。
【００５７】
腫瘍は数種類のペプチド受容体を発現する場合があることが最近判別された（Ｒｅｕｂｉ，Ｊ．Ｃ；  Ｗａｓｅｒ，Ｂ．Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｖｅｒａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｕｍｏｕｒｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｕｌｔｉｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｕｍｏｕｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００３，３０，７８１−７９３．）。このような複数のペプチド受容体の群には、ｓｓｔ２受容体、ならびにボンベシン受容体、ＣＣＫ受容体、ＶＩＰ受容体、ＧＬＰ−１受容体、ニューロテンシン受容体、セクレチン受容体、ニューロメジンＢ受容体およびＣＲＦ受容体などが含まれ得る。そのような場合には、ＳＳＴＲ２アンタゴニストを、１以上の放射性標識したアンタゴニストと組み合わせてカクテルとしてこれらの様々な受容体へ投与することにより、このような腫瘍のインビボターゲッティングが非常に大幅に改善されるはずである。
【００５８】
このようなペプチドアンタゴニストは、薬学的または獣医学的に許容される無毒の塩、例えば、酸付加塩または金属錯体など、例えば、亜鉛、鉄、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウムまたは同類のものとの金属錯体の形態で投与される場合が多い。このような無毒の塩の例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、タンニン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩等であるである。
【００５９】
また、これらのＳＲＩＦアンタゴニストは長期間、例えば、単回投与から１週間から１年間にわたって送達されることが望ましい可能性があり、当分野で周知の遅延放出、デポーまたは移植投薬形態を用いてもよい。例えば、投薬形態は、体液中で低い程度の溶解度を有する化合物の製薬上許容される無毒の塩、例えば、多塩基酸を含む酸付加塩；多価金属陽イオンを含む塩、または２種類の塩の組合せを含んでよい。比較的不溶性の塩も、ゲル、例えば、ステアリン酸アルミニウムゲル中に製剤してよい。適した、注射用の遅延放出デポー製剤にも、徐々に分解する、無毒または非抗原性ポリマー、例えばポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマー（例えば米国特許第３，７７３，９１９号に記載）中に分散または封入されたＳＲＩＦアンタゴニストまたはその塩を含めてよい。
【００６０】
治療上有効な量のペプチドアンタゴニストは、医師の指導の下に投与されるべきであり、医薬組成物は通常該ペプチドを従来の薬学的または獣医学的に許容される担体をともに含む。治療上有効な量は、所望の効果を達成するために算出された所定量であると考えられる。必要とされる投薬量は、特定の処置とともに、かつ所望の処置の持続時間とともに変動する。しかし、１日体重１キログラムあたり約１０マイクログラム〜約１ミリグラムの間の投薬量が治療的処置に用いられると予測される。既に記載されるように、このような化合物をデポーまたは持続性の形態で投与することが特に有利であり得る。治療上有効な量は、一般に、生理学的に許容される組成物中で、末梢に、例えば静脈内に投与される場合に、その血漿濃度が約０．１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌ、好ましくは約１μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌ、より好ましくは少なくとも約２μｇ／ｍｌ、そして通常５〜１０μｇ／ｍｌを達成するために十分なＳＲＩＦアンタゴニストの量である。これらの量において、それらは望ましく胃液分泌に作用するために用いられ得る。
【００６１】
組成物をイメージングまたは治療的処置に用いる場合、放射性標識した化合物の乏しい有効期間および／または放射性核種の短い半減期のため、使用者が臨床病院または研究室において放射性核種の標識反応を行うことが必要とされるかもしれない。このような場合には、様々な反応成分を、いわゆる「キット」の形態で提供することができる。所望の反応を行うために必要な操作は、使用者が、通常自由に使うことのできる施設を利用して、キットから放射性標識された組成物を調製することができるように、できるだけで簡単であるべきでる。したがって、組織において悪性腫瘍およびその転移を検出および限局化するための、放射性医薬組成物を調製するためのキットは、（ｉ）ＳＳＴＲ２選択的ペプチド、不活性の製薬上許容される担体および／または随意のアジュバントを含む製剤と、（ｉｉ）放射性金属同位体の塩またはキレートの溶液と、（ｉｉｉ）キットの中に存在する成分を反応させるための処方の使用説明書とを含んでもよい。
【００６２】
好ましくは、そのようなキットの成分として用いられるペプチドアンタゴニストは、上文に定義されるキレート化剤との反応により誘導体化されている。結果として得られるペプチドコンジュゲート体は、堅く結合している放射性核種の便宜（ｆａｃｉｌｉｔｙ）を単純な方法で提供する。ペプチドを修飾するために適したキレート化剤は、上文に詳細に記載されている。Ｎを含有するジ−もしくはポリ酢酸またはそれらの誘導体、例えば、上に言及される化合物は、様々な金属放射性核種、例えば１１１Ｉｎおよび１１３ｍＩｎをペプチド分子に結合させるために著しく適していることが分かった。使用者に提供される予定のキットは、上に定義されるその他の成分も、使用説明書とともに含んでよいが、限定された有効期間を有する放射性核種の塩またはキレートの溶液は、使用者に別々に提供されてもよい。
【００６３】
例えば、９９ｍＴｃ、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅで標識した放射性医薬組成物を調製するためのキットは、上記（ｉ）および（ｉｉ）で定義された成分に加えて、還元剤および所望であればキレート剤と、（ｉｉｉ）使用説明書とを、キットの成分を過テクネチウム酸塩溶液の形態の９９ｍＴｃに、または過レニウム酸塩溶液の形態の１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅに反応させるための処方とともに、含んでもよい。所望であれば、キットの様々な成分を、適合性であるという条件で、組み合わせてもよい。キットは、過テクネチウム酸塩または過レニウム酸塩、例えば亜ジチオン酸塩を還元するための還元剤、金属還元剤または複合体安定化還元剤、例えばＳｎＣｌ２、Ｓｎ（ＩＩ）−酒石酸塩、Ｓｎ（ＩＩ）−ホスホン酸塩、Ｓｎ（ＩＩ）−ピロ−リン酸塩、またはＳｎ（ＩＩ）−グルコヘプトン酸塩を含むべきである。過テクネチウム酸塩または過レニウム酸塩溶液は、適したベンダーから容易に入手することができる。放射性核種がキット自体の中にある場合は、ペプチドとの複合体形成反応は、単に中性溶媒中の成分を合わせ、それらを反応させることにより生成することができる。その目的のため、上文に記載されるように、放射性核種は、比較的弱いキレート剤に結合したキレートの形態でペプチドと反応させてよい。
【００６４】
キットが上文に定義される誘導体化されたペプチドを含み、９９ｍＴｃ、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅで標識された放射性医薬組成物の調製が意図される場合、該放射性核種は、過テクネチウム酸塩もしくは過レニウム酸塩溶液の形態で別々に添加されることが好ましい。その場合、キットは、適した還元剤および、所望の場合、キレート剤を含み、前者は過テクネチウム酸塩または過レニウム酸塩を還元するためのものである。還元剤として、例えば、亜ジチオン酸塩または金属還元剤を用いてよい。成分は、任意選択により、適合性であるという条件で、組み合わせてもよい。組み合わせた成分が好ましくは凍結乾燥されている、そのような単一成分キットは、使用者により、放射性核種溶液を用いて反応させられることに、素晴らしく適している。金属還元剤、例えば、Ｓｎ（ＩＩ）、Ｃｅ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩ）、Ｃｕ（Ｉ）、Ｔｉ（ＩＩＩ）またはＳｂ（ＩＩＩ）、Ｓｎ（ＩＩ）が使用されてよい。上記のキットのペプチド構成物は、溶液として、例えば生理食塩水溶液の形態で、または一部のバッファー溶液中として供給されてよいが、乾燥状態で、例えば、凍結乾燥した状態で存在することが好ましい。無菌であるべきである注射液のための成分として用いる場合、その中で構成物が乾燥状態である場合、使用者は好ましくは溶媒として滅菌生理食塩水溶液を使用するべきである。所望であれば、上記の構成物は、従来法で、適した安定剤、例えば、アスコルビン酸、ゲンチジン酸またはこれらの酸の塩で安定化させてよい。
【００６５】
本発明は、本発明者らの現在知る最良の方法をなす、その好ましい実施形態に関して説明されてきたが、当業者に明らかである様々な変更および修正が、ここに添付される特許請求の範囲に記載される本発明の範囲から逸脱することなく行われ得ることは当然理解されるべきである。特許請求の範囲はペプチド配列に関して様々に本発明を規定するが、それが、その完全な同等物であり、最も頻繁に投与されることが周知であるその無毒の塩を含むことを意図することは当然理解されるべきである。
【００６６】
本明細書の上文に記載される全ての特許および公開特許出願の開示内容は、参照することにより明示的に本明細書に組み込まれる。本明細書において、全ての温度は℃であり、全ての比は容積による。液体材料のパーセンテージも容積による。
【００６７】
本発明の様々な特徴は、以下の特許請求の範囲において強調される。
【国際調査報告】
2010506943.tif 000012
2010506943.tif 000013
2010506943.tif 000014
2010506943.tif 000015
2010506943.tif 000016