(57)【要約】  本発明は、少なくとも1種類の固体の活性成分、少なくとも1種類の疎水性保護コロイド、および少なくとも1種類の食用油を含む油性組成物に関する。活性成分はカロテノイドであることが好ましい。好ましい保護コロイドはプロラミンである。本発明の組成物は製造することが容易で、良好な生体利用能および色素収率を有しており、動物の飼料、食品および栄養補助食品に対する添加物、ならびに医薬品および化粧品の薬剤として使用される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも1種類の固体の活性成分、少なくとも1種類の疎水性保護コロイドおよび少なくとも1種類の食用油を含む油性製剤。
【請求項２】
活性成分がカロテノイドである、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
活性成分がアスタキサンチンである、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
疎水性保護コロイドがプロラミンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５】
プロラミンが、ゼイン、グリアジン、ゼイン、カファリン、セカリン、ホルデインおよびオリシンから選択される、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
活性成分と疎水性保護コロイドの比が、重量比で5:1〜1:10の範囲である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７】
固体の活性成分を、少なくとも1種類の疎水性保護コロイドの存在下において、少なくとも1種類の食用油中で粉砕する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の製剤を製造するための方法。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の製剤を製造するための方法であって、
a)   固体の活性成分および疎水性保護コロイドを極性溶媒中に分散させ、
b1)  溶媒を除去するか、または
b2)  活性成分を疎水性保護コロイドとともに凝結させて、凝結した固体を取得し、かつ
c)    b1)またはb2)に記載のように取得した固体を油中に分散させる、
前記方法。
【請求項９】
水と水混和性アルコールとの混合物を溶媒として使用する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
動物の飼料、ヒトの食品もしくは栄養補助食品に対する添加物、または医薬品もしくは化粧品組成物としての、請求項１〜６のいずれか１項に記載の油性製剤の使用。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の油性製剤を含む、動物の飼料、ヒトの食品または栄養補助食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油性製剤、その製造方法、ならびに動物の飼料およびヒトの食品に対する添加物としてのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
カロテノイドの製剤は、水に対するわずかな溶解性および化学的な不安定性のために、特に難しい課題である。それ故、一方で安定であり、他方で良好な生体利用能を示すカロテノイド製剤を提供しようとしたり、あるいは使用時における所望の色収率（カラーイールド又は染着率）を提供しようとする数多くの試みがなされている。粉末形態のカロテノイドの取得と使用者による液体製剤の調製が不要になるので、液体のカロテノイド製剤は特に関心を持たれている。
【０００３】
ナノメーター範囲の粒径を有するカロテノイドの一次粒子（primary particle）の製造は、適切な生体利用能および色収率を達成するために不可欠である。かかる粒子を製造するために、特に2つの方法が開示されている。
【０００４】
（１）例えば欧州特許出願公開第410 236号明細書に記載されているような、乳化／沈殿工程（微粒子化）。欧州特許出願公開第065 193号明細書によると、微細に分割された粉末形態のカロテノイド製品は、昇温しながら、かつ適切であれば加圧しながら揮発性で水混和性の有機溶媒にカロテノイドを溶解し、保護コロイドの水溶液と混合することによってカロテノイドを沈殿させ、次いで濃縮した後、噴霧乾燥することによって製造される。欧州特許出願公開第1 213 013号明細書は、カゼインまたはゼラチンのような親水コロイドの存在下におけるカロテノイドの水性分散液の製造を記載している。この場合において、pHを親水コロイドの等電点に調節することによって、活性成分を親水コロイドとともに凝結させ、次いでその凝結物質を分離および乾燥する。結果として得られた粉末形態の生成物を分散することにより、油性懸濁液を与える。水に非混和性の溶媒を用いる類似の方法が、欧州特許出願公開第937 412号明細書に記載されている。
【０００５】
（２）例えば国際公開第91/06292号パンフレットおよび国際公開第94/19411号パンフレットに記載されているような、特に粉砕することによるサイズ減少工程。カロテノイドの粉砕は、水性または油性媒質中でコロイドミルを用いて実施され、これによりナノメーター範囲の粒径を達成する。
【０００６】
国際公開第96/23429号パンフレットは、アスタキサンチンを粉砕し、該粉砕の間または後に油を加えることによる、2 μm未満の粒径を有する油性のアスタキサンチン懸濁液の製造を記載している。保護コロイドまたは乳化剤の使用は開示されていない。当該粒子は、凝集体形成を起こしやすいことが指摘されている。よって、凝固点未満で懸濁液を保存することによる、さらなる安定化が考えられている。
【０００７】
国際公開第03/102116号パンフレットは、カロテノイドの油性溶液を記載している。これらの油性溶液は、脂溶性の分散剤の存在下においてN-メチルピロリドンのような有機溶媒中でカロテノイドを溶解し、その溶媒を除去することによって製造される。結果として得られた粉末は、その後、油（例えば魚油）中に低濃度で溶解される。
【０００８】
国際公開第2006/125591号パンフレットは、油性のカロテノイド組成物の製造を記載している。この場合において、カロテノイドは油相に分散されており、該分散液はカロテノイドを溶解するために短時間加熱され、結果として得られた溶液は、その油性溶液より低温のさらなる油と混合することによって冷却される。当該油性組成物は少量のカロテノイドしか含まず、換言すれば、所望の効果を達成するためには大量の組成物を用いなければならない。当該方法はしたがって経済的ではない。
【０００９】
国際公開第96/13178号パンフレットは、本質的にリコピンが不溶性の液体媒質中でリコピンを粉砕することによる、安定なリコピン濃縮液の製造を記載している。使用された液体媒質は、グリセロール、プロピレングリコールまたはエタノールである。
【００１０】
先行技術の方法に共通しているのは、それらの方法では不満足な安定性もしくは生体利用能を有する生成物となるか、またはその製造方法が複雑であるかのいずれかである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】欧州特許出願公開第410 236号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第065 193号明細書
【特許文献３】欧州特許出願公開第1 213 013号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第937 412号明細書
【特許文献５】国際公開第91/06292号パンフレット
【特許文献６】国際公開第94/19411号パンフレット
【特許文献７】国際公開第96/23429号パンフレット
【特許文献８】国際公開第03/102116号パンフレット
【特許文献９】国際公開第2006/125591号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第96/13178号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって本発明は、容易に製造でき、それにもかかわらずその安定性および生体利用能が公知の製品に匹敵する製品とすることができる、液体のカロテノイド製剤を提供しようという目的に基づくものであった。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
驚くべきことに、本目的は、食用油中に分散または溶解した、固体の活性成分および疎水性保護コロイドを含む油性製剤によって達成されることを見出した。
【００１４】
したがって、本発明は、少なくとも1種類の活性成分、少なくとも1種類の疎水性保護コロイドおよび少なくとも1種類の食用油を含む、分散液（懸濁液）の形態の油性製剤に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
食用油中に分散することができる固体の活性成分が、活性成分として好ましい。活性成分は通常50 nm〜10 μm、好ましくは100 nm〜5 μm、特に好ましくは100 nm〜3 μm、150 nm〜2 μm、特に200 nm〜1 μmの範囲の粒径を有する。
【００１６】
活性成分はカロテノイドであることが好ましい。これに関しては、天然の供給源から、または合成によって得ることができる公知の代表的な物質を用いることが可能である。前記物質の例は、β−カロテン、リコピン、ルテイン、アスタキサンチン、アスタキサンチン誘導体（例えば、アスタキサンチンジメチルジコハク酸エステル（astaxanthin dimethyl disuccinate）またはアスタキサンチンジパルミチン酸エステル（astaxanthin dipalmitate））、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、カンタキサンチン、エキネノン、ビキシン、β−アポ-4-カロテナール、β−アポ-8-カロテナール、β−アポ-4-カロテン酸エステルであり、これらは単独であっても、または混合物としてでもよい。アスタキサンチン、アスタキサンチン誘導体（例えば、アスタキサンチンジメチルジコハク酸エステルまたはアスタキサンチンジパルミチン酸エステル）、β−カロテン、β−アポ-8-カロテナール、β−アポ-8'-カロテン酸エチル、カンタキサンチン、シトラナキサンチン、エキネノン、ルテイン、リコピンおよびゼアキサンチンが好ましい。アスタキサンチン、アスタキサンチン誘導体（例えば、アスタキサンチンジメチルジコハク酸エステルまたはアスタキサンチンジパルミチン酸エステル）およびカンタキサンチンが特に好ましく、アスタキサンチンがとりわけ好ましい。
【００１７】
本発明の製剤は、疎水性保護コロイドを追加的に含む。疎水性保護コロイドは、水に不溶性であり、水中に分散することができず、かつ膨潤できない保護コロイドを意味する。しかしながら、前記疎水性保護コロイドは、少なくとも40重量％のエタノールまたはイソプロパノールを含有する、水性エタノールまたは水性イソプロパノールに可溶性である。もし0.5重量％を超えるハイドロコロイドが、少なくとも40重量％のアルコールを含有する水性エタノールまたは水性イソプロパノール中に溶解するのであれば、その保護コロイドは可溶性とみなされる。その保護コロイドは、Phenyl-、Octyl-またはButyl-Sepharoseに対して親和性を有する。
【００１８】
疎水性保護コロイドの好ましい群はプロラミン類である。これらは穀物種に存在するタンパク質である。好適なプロラミン類の例は、ゼイン (トウモロコシ由来)、グリアジン (コムギおよびエンバク由来)、セカリン (ライムギ由来)、ホルデイン (オオムギ由来)、オリシン（orycin） (イネ由来)およびカファリン（kafarin） (アワ、ソルガム由来)である。
【００１９】
とりわけ発酵によって生産され、かつ／または改変されるか、あるいは合成によって調製されるタンパク質もまた、好適な疎水性保護コロイドである。
【００２０】
食用油は、合成油または鉱物、植物もしくは動物由来の食用油であってよい。食用油の例は、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油、大豆油、ピーナッツ油、中鎖植物脂肪酸のエステル、オレオステアリン（oleostearin）、流動パラフィン、ステアリン酸グリセリル、ミリスチン酸イソプロピル、アジピン酸ジイソプロピル、2-エチルヘキサン酸セチルステアリル、水素付加されたポリイソブテン、カプリル酸／カブリン酸トリグリセリド、パーム油、パーム核油、ラノリンおよびPUFA (エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)およびα−リノレン酸のような多価不飽和脂肪酸)である。
【００２１】
好ましい食用油は、サンフラワー油、パーム油、パーム核油、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油、大豆油、ピーナッツ油、中鎖トリグリセリドエステル (いわゆるMCTオイル)、サバ、スプラットもしくはサーモンオイルなどの魚油のような、30℃で液体の油である。家畜栄養のために特に好ましいのは、魚油、トウモロコシ油、サンフラワー油、大豆油およびピーナッツ油である。食品／薬物向けに有利な油は、家畜栄養について記載された上記の油に加えて、中鎖トリグリセリドエステルである。
【００２２】
本発明の製剤中に存在する活性成分の量は、油性製剤の全重量に対して通常0.1〜50重量％、好ましくは0.2 〜30重量％、特に1.0〜15重量％の範囲である。
【００２３】
疎水性保護コロイドの量は、製剤の全重量に対して通常1〜75重量％、好ましくは2 〜70重量％、特に5〜65重量％の範囲である。
【００２４】
活性成分と疎水性保護コロイドの比は、重量比で通常5:1〜1:10、好ましくは3:1〜1:5の範囲である。
【００２５】
食用油の量は、油性製剤の全重量に対して通常20〜98.9重量％、好ましくは30〜98重量％、特に好ましくは40〜97重量％の範囲であり、特に50〜95重量％の範囲である。
【００２６】
酸化的分解に対する活性成分の安定性を増すために、α−トコフェロール、t-ブチルヒドロキシトルエン、t-ブチルヒドロキシアニソール、アスコルビン酸またはエトキシキンのような安定剤を加えることが有利である。
【００２７】
本発明の製剤は、増粘剤、硬化油脂（hard fat）、キレート剤（例えばクエン酸、フィチン酸またはリン酸のアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩）および／または乳化剤のような補助的物質を追加的に含みうる。乳化剤の例は、パルミチン酸アスコルビル、ポリグリセロール-3-ポリリシノレート(PGPR 90)のようなポリグリセロールと脂肪酸のエステル、ソルビタンモノステアレート(span 60)、PEG(20)ソルビトールモノオレアートのようなソルビタンと脂肪酸のエステル、プロピレングリコールと脂肪酸のエステルまたはレシチンのようなリン脂質である。
【００２８】
多くの方法によって本発明の製剤を製造することができる。第一の方法において、活性成分は油を用いて粉砕される。疎水性保護コロイドは、全量もしくは一部が最初から存在することもできるが、粉砕中に該疎水性保護コロイドを加えることもできる。疎水性保護コロイドを粉末形態または溶液として加えることができる。疎水性保護コロイドを溶液として加える場合、都合良く使用される溶媒は、1価または多価アルコール（適切であれば、水と混合された該アルコール）、もしくはカルボン酸エステル、またはそれらの混合物である。好適な溶媒の例は、イソプロパノール／水 (8:2)、プロピレングリコール、エチレングリコール、トリエチレングリコールまたは乳酸エチルである。粉砕は、活性成分の結晶および疎水性保護コロイドの平均粒径が5 μm未満、好ましくは1 μm未満に達するまで続けられる。粉砕装置として、例えばコロイドミル、KDLタイプなどのDynomillのようなボールミルなどの当業者に公知の通常の装置を用いることができる。
【００２９】
少量の水もしくはアルカノール、またはそれらの混合物を、粉砕されるべき混合物に都合良く加えうる。好適なアルカノールは、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノールなどである。通常、10重量％以下の水、アルカノールまたはそれらの混合物を、粉砕されるべき混合物に加える。
【００３０】
別の方法において、固体の活性成分および疎水性保護コロイドを極性溶媒中に溶解する。使用される極性溶媒は特に、アルコール、エーテル、エステル、ケトンおよびアセテートのような、炭素、水素および酸素のみを含む、水混和性で、熱に安定な揮発性溶媒である。都合よく使用される溶媒は、水と少なくとも10％混和する、200℃未満の沸点を有し、かつ／または10個未満の炭素原子を有する溶媒である。メタノール、エタノール、n-プロパノール、イソプロパノール、1,2-ブタンジオール-1-メチルエーテル、1,2-プロパンジオール-n-プロピルエーテル、テトラヒドロフランまたはアセトンを使用することが特に好ましい。これらの溶媒と水との混合物を使用することもでき、この場合、溶媒の量は少なくとも40重量％である。かかる混合物の例は、エタノールまたはイソプロパノールと水との混合物である。
【００３１】
室温から、使用される溶媒の沸点程度までの範囲の温度で、まず活性成分および疎水性保護コロイドをその溶媒中に分散させることによって、該二成分を溶媒中に溶解する。次いで、その分散液をより高い温度に加熱されているさらなる溶媒と混合し、それにより前記成分を溶解する。さらなる溶媒の温度は通常150〜250℃の範囲であり、使用される温度において設定される圧力下で操作する。その後直ちに（0.1〜30秒以内に）、得られた溶液を水と混合することにより、溶媒−水混合物中における活性成分粒子の分散液となる。活性成分粒子の粒径は、通常50 nm〜800 nmの範囲である。追加される水の量は、使用される溶媒の量に対して通常1〜10倍である。追加される水のpHが、使用される保護コロイドの等電点に対して少なくとも2 pH単位異なるように、追加される水のpHを調整する。例えば、ゼインを使用する場合、pH値を少なくとも9、特には少なくとも10に調整する。
【００３２】
さらなる加工処理には2つの選択肢がある。上記の結果として得られた活性成分分散液から慣用の方法で溶媒を除去するか、または活性成分／保護コロイド粒子が凝結するように該粒子を処理する。これは、活性成分分散液のpHを保護コロイドの等電点に調整することによって実施される。活性成分−疎水性保護コロイドの凝集体である凝結した粒子を、その後、例えば濾過、遠心分離または噴霧乾燥などの慣用の方法で単離し、かつ適切であれば乾燥する。得られた粉末形態の生成物を所望の食用油中に溶解することによって、液体製剤を取得する。
【００３３】
上記の方法の詳細およびその方法のさらなる別法は、欧州特許第1 213 013号明細書および欧州特許第1 219 292号明細書に記載されており、その開示内容の全体が本発明に含まれるものとする。
【００３４】
脂肪または油を加えることにより、使用前に本発明の製剤をそれぞれの使用濃度に希釈することができる。例えば、30〜80℃のような温度に昇温して撹拌することによって、希釈を実施することができる。
【００３５】
本発明の製剤は、動物の飼料およびヒトの食料品に対する添加物、または配合飼料として、医薬品および化粧品を製造するための組成物、あるいはヒトおよび動物向けの栄養補助食品を製造するための組成物として、とりわけ好適である。本発明の懸濁液を、例えば押出時に飼料ペレットの中に混合することによって、または飼料ペレットに対して散布もしくは噴霧することによって、飼料に対する家畜栄養の添加物として好ましく使用することができる。飼料に対する添加物としての使用は、例えばいわゆるペレット化後の散布（post-pelleting application）として、特に本発明の製剤の直接噴霧によって実施される。飼料ペレットに、減圧下で本発明の製剤を添加することが好ましい。
【００３６】
ヒトの食品向けの典型的な使用分野は、例えば飲料、ヨーグルト、牛乳もしくはミルクアイス、およびブラマンジェ（blancmange）粉末のような酪農製品、卵製品、ベーキングミックスならびに菓子類に対するビタミン添加および着色である。化粧品向けでは、例えば装飾用パーソナルケア組成物のために、例えばクリーム、ローションの形態で、口紅またはメーキャップとして本発明の油性懸濁液を使用することができる。
【００３７】
本発明はさらに、本発明の製剤を含む、栄養補助食品、動物の飼料、ヒトの食品、医薬品および化粧品に関する。好適なものは動物の飼料であり、とりわけ本発明の製剤を添加した飼料ペレットである。
【００３８】
栄養補助食品および医薬品はとりわけ、本発明の製剤を含む錠剤、コーティング錠（coated tablet）、ならびに好ましくは、ハードおよびソフトゼラチンのカプセルを意味する。
【実施例】
【００３９】
以下の実施例は、本発明の技術的範囲を限定することなく本発明を例証するものである。
【００４０】
（実施例１）
油性アスタキサンチン分散液の製造
欧州特許第065 193号明細書に記載された種類の装置内で製造を実施した。40 g の結晶アスタキサンチン、60 gのゼイン、2 gのパルミチン酸アスコルビルおよび4 gのエトキシキンを、30℃の加熱可能な受器中において、600 gのイソプロパノール／水混合物 (60:40) 中に室温で懸濁した。その後、活性成分の懸濁液を87.8℃に加熱し、流速3.0 kg/hに設定された温度290℃のさらなるイソプロパノール／水混合物 (60:40)と、流速2.14 kg/hで連続的に混合した。混合温度を170℃、圧力を54.8 barに設定した。得られた溶液を、その後直ちに（1秒未満）、1 M NaOHでpH 11に調整した16 643 gの蒸留水と混合することによって、コロイド状の活性成分の分散液を得た。
【００４１】
活性成分粒子は、E 1/1が110において、イソプロパノール／水混合物中で150 nmの粒径を示す。
【００４２】
その後、アスタキサンチン／ゼイン粒子を凝結させるために、1 M HClを用いて分散液のpHをpH 5.1に調整した。凝結した粒子を乾燥し、9.5重量％のアスタキサンチン分散液が得られるように、大豆油中に分散した。この分散液の活性成分含有量は、6月経過後も変化しないままであった。油で希釈することにより、この油性分散液を飼料ペレットに直接散布することができる。
【００４３】
（実施例２）（比較例）
親水性保護コロイドを用いるアスタキサンチン製剤の製造
83.5 gの結晶アスタキサンチンおよび20 gのα−トコフェロールを、実施例１で記載した方法と同様に、30℃の加熱可能な受器中において、626 gのイソプロパノール／水共沸混合物中に室温で懸濁した。その後、活性成分懸濁液を90℃に加熱し、流速2.6 kg/hに設定された温度220℃のさらなるイソプロパノール／水共沸混合物と、流速2.1 kg/hで連続的に混合して、アスタキサンチンを混合温度165℃、圧力55 barで溶解した。この活性成分溶液を、その後直ちに、1 M NaOHでpH 9.5に調整した11 010 gの蒸留水中に83.5 gのダイズタンパク質および177 gのラクトースを含む溶液の水相と、流速32.5 kg/hで混合した。
【００４４】
上記の混合によって得られる活性成分粒子は、E 1/1が124において、イソプロパノール／水混合物中で107 nmの粒径を示した。
【００４５】
その後、分散液を薄膜エバポレーター中で約23.7重量％の乾燥割合まで濃縮し、最終的に噴霧乾燥した。乾燥粉末は23重量％のアスタキサンチン含有割合を有した。水中に再び分散したこの乾燥粉末は317 nmの粒径を有し、E 1/1は101を示した。「E 1/1」は、1 cmキュベット中における、20重量％の乾燥粉末の0.5重量％分散液の吸収極大における比吸光度である。
【００４６】
得られたアスタキサンチン粉末は油中で均一に分散させることができなかった。この粉末を飼料ペレットに散布できるようにするためには、該粉末をまず水に溶解し、その後その水溶液を油中に乳化することが必要である。
【００４７】
（実施例３）
粉砕によるアスタキサンチンの油性製剤の製造
50 gのアスタキサンチン (5重量％)、40 gのα−トコフェロール (4重量％) および5 gのパルミチン酸アスコルビル (0.5重量％) を755 gのサンフラワー油 (75.5重量％) と混合した。この混合物を粉砕し、最初の15分間に、150 gのゼイン (15重量％) をゆっくりと加えた。粉砕時間：64〜74℃、流速60〜80 g/minで4時間 (Dynomillミルの条件: 0.05 mmの粉砕スリット、2986 rpm、直径0.3 mmのZrO2安定化ビーズを470 ml)。アスタキサンチン−ゼイン凝集体について、D 4,3 = 9.5 μm の粒径をフラウンホーファー回折（Fraunhofer diffraction）により測定した。アスタキサンチンの一次粒子はかなり小さく、透過型電子顕微鏡によって決定したアスタキサンチン結晶のサイズは200〜600 nmであった。
【国際調査報告】
2010515446.tif 000002
2010515446.tif 000003
2010515446.tif 000004
2010515446.tif 000005
2010515446.tif 000006
2010515446.tif 000007