(57)【要約】【解決課題】本発明はアスコルビン酸誘導体である3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸、その製造方法並びに係る中間体及びその誘導体の化粧品における利用に関する。【解決手段】この誘導体はビタミンＣ前駆体として、2-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-2G)より優れた生理効果と安定性を有し、化粧品、医薬品、食品、飼料等の分野に使用でき、特に美白剤として化粧品に使用できる。その製造方法は、先ず、アスコルビン酸の5,6-位ヒドロキシを保護し、続いてそれを1-ハロアシル化糖にカップリングさせ、中間体である3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸を得る。中間体はイソプロピリデンやアシルを脱離させて目的物を得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉに示す構造を有するアスコルビン酸誘導体。 
【化１】
2010539105.tif 000012
ただし、Sugarはオリゴ糖、又はその生物に受入可能な塩又はエステルを示す。 
【請求項２】
前記オリゴ糖はジオース、トリオース又はテトラオースであることを特徴とした、請求項１に記載のアスコルビン酸誘導体。 
【請求項３】
前記オリゴ糖はマルトース、イソマルトース、ラクトース、ゲンチオビオース、メリビオース、セロビオース、キトビオース又はN-アセチルラクトサミンであることを特徴とする請求項２に記載のアスコルビン酸誘導体。
【請求項４】
次の手順を含んだ、請求項１に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。 
A）1-ハロアシル化糖の製造について、糖を原料とし、原料糖の全てのヒドロキシ基をアシル化し、ハロゲン化して1-ハロアシル化糖を得る。 
B）中間体の製造について、アルカリの存在下、1-ハロアシル化糖と5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸を縮合し、中間体である3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸を得る。 
C）保護基の脱離について、B）で得られた中間体をそれぞれに酸性とアルカリ性の条件下で加水分解し、保護基であるイソプロピリデンとアシルを脱離させて3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸を得る。 
【請求項５】
前記原料糖はマルトース、イソマルトース、ラクトース、ゲンチオビオース、メリビオース、セロビオース、キトビオース又はN-アセチルラクトサミンであることを特徴とする請求項４に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。 
【請求項６】
手順A）でアセチル化し、ブロム化して1-アセトブロモグルコースを得ることを特徴とする請求項４に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。 
【請求項７】
酸の触媒作用で、L-アスコルビン酸とアセトンを縮合反応して手順B）に記載する5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸を得ることを特徴とする請求項４に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。 
【請求項８】
手順B）において、反応温度は0〜100℃で、溶媒はメタノール、乙醇、イソプロピルアルコール、アセトン又はDMFで、使用されるアルカリは炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム又は炭酸水素カリウム、又はピリジン又はトリエチルアミンであることを特徴とする請求項４に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。
【請求項９】
手順C）において、酸の触媒作用でイソプロピリデンを脱離させ、反応温度は0〜100℃で、使用される酸は塩酸、硫酸、リン酸、Pトルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸又はプロピオン酸で、使用される溶媒は水、又はメタノール、エタノール、アセトン又はこれらの水溶液であることを特徴とする請求項４に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。 
【請求項１０】
手順C）において、アルカリ性の条件下、アシルを加水分解することによって脱離させ、反応温度は0℃〜100℃で、使用されるアルカリは水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム又は炭酸水素ナトリウム、又はナトリウムメトキシド又はナトリウムエトキシドで、使用される溶媒は水、メタノール、エタノール又はこれらの水溶液であることを特徴とする請求項３に記載のアスコルビン酸誘導体の製造方法。 
【請求項１１】
請求項１に記載のアスコルビン酸誘導体の中間体である3-O-(アシルグリコシル)- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸の製造。 
【請求項１２】
請求項1に記載のアスコルビン酸誘導体を含有することを特徴とする化粧品。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アスコルビン酸誘導体、その製造方法並びに係る中間体及びその誘導体の化粧品における利用に関する。より詳しくは、3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸、その製造方法並びに係る中間体及びその誘導体の化粧品における利用に関する。 
【背景技術】
【０００２】
L-アスコルビン酸すなわちビタミンＣ(通称ＶＣ)は、人間又は動物の体内で様々な生理活動に関わっているが、アスコルビン酸の合成に必要な酵素がないため人間又は動物の体内でビタミンＣを合成することができず、食物から供給されなければならないので、人間又は動物にとって必要不可欠な栄養素として健康の維持及び動物の成長過程においてかけがえのない重要な役割を果している。アスコルビン酸は臨床上では主に壊血病の治療、伝染病対策、外傷や骨折の治癒促進に使用され、また、補助薬物として治療や保健薬品に使用されている。L-アスコルビン酸に欠けると壊血病の原因になり、毛細血管破裂、皮膚虚弱化、歯肉の出血や緩み、骨格が脆弱で折れやすい等の症状が発生する。臨床上の利用のほか、ビタミンＣ自身の化学構造上の特性と生理活性から、酸味剤、還元剤/抗酸化剤、漂白剤、安定剤等として、化粧品、食品、医薬品、飼料に使用できる。例えば、化粧品用還元剤、紫外線吸収剤、メラニン抑制剤に利用することができる。実際の動物飼育において、ビタミンＣには合成コラーゲンがあるため、養殖の魚やエビの壊血病や黒死病を防止し、幼体の生存率を向上させ、魚骨格の異常出血やびらんの防止効果、家畜や鳥の免疫力を高める効果等がある。 
【０００３】
しかし水溶性ビタミンとしてのビタミンＣは水溶液の中で非常に不安定で、熱又は空気中の酸素その他酸化剤で分解酸化されることによって破壊されやすい。特に光、微量重金属元素（Fe2+、Cu2+等）、蛍光物質等によってその酸化が促進され、生成されるデヒドロアスコルビン酸は速く、不逆的に更に酸化又は分解されグロン酸又はその他酸化物になり、ビタミンＣ活性が失われる。中性ｐＨ、熱、光、重金属に暴露されると速く劣化されるのでその利用に大きな制限がある。従って、アスコルビン酸の安定性向上は、国内および国外の研究者にとって課題となっている。アスコルビン酸の不安定性という欠点を克服しながら、アスコルビン酸としての生理機能をより一層発揮できる新規なアスコルビン酸誘導体を見出すために、1970年代以来、アスコルビン酸の各種誘導体の研究が行われている。 
【０００４】
アスコルビン酸誘導体は、アスコルビン酸の塩類誘導体、エステル類誘導体、糖類誘導体に分けられる。アスコルビン酸の糖類誘導体は重要なアスコルビン酸誘導体であり、各種アスコルビン酸糖類誘導体は、現在国内及び国外の多くの文献に報告されている。アスコルビン酸の2-、3-、5-及び6-位ヒドロキシ基が生物化学合成又は有機合成等の方法で化学修飾され、多種のアスコルビン酸誘導体が合成されている。これらのアスコルビン酸誘導体は、通常のアスコルビン酸が酸化されやすいという欠点を克服しながら、人体及び動物によりよく摂取できるのである。 
【０００５】
6-O-α-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-6G)は、最初に発見されたアスコルビン酸誘導体である。1971年に、Suzuki等はアスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)が産生するα-グルコシダーゼ(α-glucosidase)を利用してマルトースのグルコシル基をアスコルビン酸に転移したが、グルコシル基の詳細位置は近年になってようやく解明された。AA-6Gは、アスコルビン酸より比較的に強い安定性と、還元性を有する。 
【０００６】
また、食品品質改良剤や紫外線吸収剤に利用できる5-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-5G)もある。臨床上では、ウィルス性疾患、細菌性疾患、悪性腫瘍等の感染性疾患の予防や治療に使用され、化粧品業界では、肌修復剤や美白剤に利用される。 
【０００７】
2-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-2G)は、林原生物化学研究所と岡山大学薬学部が共同で発見されたもので、このビタミンＣ誘導体を大量に合成する手法も確立されている。この化合物は、2-位の位置がグルコースで覆われているので酸化反応の発生はしない。水溶液中で特に安定で、自身として直接還元性がない。AA-2Gは細胞に入る時に細胞膜のα-グルコピラノシドに加水分解される。一方、生成されたビタミンＣが体内に運ばれ、体内で多種の生理機能を発揮する。AA-2Gは生物転化法で合成することができ、安全かつ無毒なので安定剤、品質改良剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、化学・医薬用原料として食品、飲料、医薬工業に使用できる。現在、AA-2Gの製造方法は生物転移による方法しかなく、使用される酵素類は、α-グルコピラノシド、α-シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、α-ジアスターゼをはじめとするグリコシル基転移酵素である。 
【０００８】
AA-2Gに対する研究が進むについて、サントリー株式会社はそのβ-異性体である2-O-β-D-グルコピラノシルアスコルビン酸について研究し、化学合成法により得ることができた（J. Agric. Food Chem. 2004, 52, 2092-2096）。 
【０００９】
AA-2Gを元に、その分子に対して更なる化学修飾を行い、別種の誘導体である6-O-アシル-2-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸が得られる。これらのものは膜透過性を向上させ、アスコルビン酸誘導体を有効に機能させることができる。これらの誘導体としては、6-ブチリル-AA-2G，6-ヘキサノイル-AA-2G，6-カプリリル-AA-2G，6-デカノイル-AA-2G，6-ラウロイル-AA-2G，6-ミリストイル-AA-2G，6-ヘキサデカノイル-AA-2G和6-オクタデカノイル-AA-2Gがある。また、アシル鎖が長いほど、その分子の熱安定性が強く、酸素自由基を除去する効果も強いことが研究で明らかになり、これらの誘導体が他の誘導体より酸素自由基の除去力がある。 
【００１０】
前記各種アスコルビン酸糖類誘導体の構造式は次の通りである。 
【００１１】
【化１】
2010539105.tif 000002
ただし、Xはα-型グルコピラノシド、Yはβ-型グルコピラノシドを示す。前記化合物HOOHOOYOHO XOOHOOHOHO HOOOXO はビタミンＣの誘導体として、ビタミンＣより一定のビタミンＣ活性を維持することができ、かつ安定性も向上している。 
【００１２】
3-O位のアスコルビン酸糖類誘導体に関する研究は現在わずかなものに止まっており、しかも誘導体の糖は単糖に限られている。既知のアスコルビン酸糖類誘導体に比べその安定性に顕著な改善がみられず、生理活性について優位性がない。それ以外の3-O-糖置換アスコルビン酸誘導体に関する報告はまだ目にしていない。 
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、新規なアスコルビン酸誘導体、具体的にいうとよりよい安定性、より長い半減期、より有効な活性のあるアスコルビン酸誘導体である3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸を提供することである。 
【００１４】
本発明のもう一つの目的は、ある3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の合成方法を提供することである。 
【００１５】
本発明はまた、3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸を製造するための中間体である3-O-(アセチルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸を提供している。 
【００１６】
本発明のもう一つの目的は、3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の化粧品における利用を提供することである。 
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本明細書の用語である「ビタミンＣ前駆体」とは、自身としてわずかなビタミンＣ活性しか示さないか又はビタミンＣ活性を全く示さないが、人間又は動物の体内又は体表で分解してビタミンＣを生成できる化合物、及びこれらの化合物を組み合わせたものをいう。
【００１８】
本発明に使用される技術的方法は次の通りである。 
【００１９】
式Ｉに示す構造を有するアスコルビン酸誘導体で、 
【００２０】
【化２】
2010539105.tif 000003
ただし、Sugarはオリゴ糖、又はその生物に受け入れ可能な塩又はエステルである。 OOOHOHOHOSugar 糖は、化学構造上では多価ヒドロキシアルデヒド、多価ヒドロキシケトン及びこれらの縮重合物並びにその誘導体を含む多価アルコールのアルデヒド誘導体又はケトン誘導体である。前記オリゴ糖は、2〜10個単糖分子を縮合し、加水分解後に単糖分子を得ることができる。最も通常のオリゴ糖はマルトース、イソマルトース、ラクトース、ゲンチオビオース、メリビオース、セロビオース、キトビオース、N-アセチルラクトサミン等のジオースで、2分子単糖を脱水縮合して得られる。また、マルトトリオース、トリグリセリド、アクラボス等のトリオース又はテトラオース（3分子又は4分子単糖を脱水縮合して得られる）、又はその他オリゴ糖を使用することもできる。 
【００２１】
前記アスコルビン酸誘導体である3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸はビタミンＣ前駆体として、2-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-2G)より優れた生理作用があり、しかも2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)よりよい安定性があり、
特に水溶液又は組み合わせ配合物では、AA-2Gの様なビタミンＣ前駆体と同様に、化粧品、医薬部外品、医薬品、食品、飼料等の分野に利用することができる。 
【００２２】
B16F10マウスメラノーマを細胞利用して3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸、2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)のメラニン沈着抑制効果（美白効果）の評価を行った。アルブチンとコウジ酸を陽性対照としてMTT試験を元に、5.0mM、2.5mM、1.0mMの高、中、低3濃度にしてそれぞれのB16F10マウスメラノーマ細胞系チロシナーゼ活性及びメラニン含有量（DOPA染色法）への影響を検討するとともに、各見本のメラニン合成への影響について比較を行った。試験の方法は次の通りである。 
【００２３】
A．MTT試験 細胞培養を通じて、各見本のB16F10マウスメラノーマ細胞増殖への影響について考察する。 
【００２４】
B．チロシナーゼ活性測定試験 細胞培養を通じて、各見本のメラニン形成のために重要な物質であるチロシナーゼ活性への影響について考察する。 
【００２５】
C．メラニン含有量の影響 DOPA染色法を通じて、各見本の体系内メラニン含有量への影響について定性分析を行う。 
【００２６】
D．メラニン含有量の定量分析。 
【００２７】
試験の結果、次のことが明らかになった。 
【００２８】
1)．2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)(ビタミンＣ誘導体1)は、コウジ酸と同様に、濃度＞5.0mMでB16F10細胞増殖に対し顕著な抑制作用があり、濃度＜5.0mMでB16F10細胞増殖に対し明らかな影響がない。3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸はアルブチンと同様に、濃度＜10.0mMでB16F10細胞増殖に対し顕著な抑制作用があり、濃度＜10.0mMでB16F10細胞増殖に対し明らかな影響がない。 
【００２９】
2)．3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸(ビタミンＣ誘導体2)は、5.0mM、2.5mM、1.0mMの高、中、低3濃度でチロシナーゼ活性に対し明らかな抑制作用があり、アルブチンの3濃度群との有意差がなく、コウジ酸の高濃度群との有意差がない。ただ、中・低濃度群のチロシナーゼ活性抑制作用がコウジ酸より弱い。同一濃度群の間、3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸とコウジ酸やアルブチンのメラニン合成抑制活性について有意差がない。 
【００３０】
3)．2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)は、チロシナーゼ活性に対しある程度の抑制作用があるが、3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸より明らかに弱く、メラニン合成抑制作用も比較的悪い。 
【００３１】
3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸の安定性について検討した。試験の結果、2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)より優れた安定性を有し、特に水溶液又は配合物での安定性が高いことが分かった。3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸と2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)の2種類のビタミンＣの安定性比較試験において、2種類の物質をそれぞれ10%、5%、1.0%の水溶液にして，それぞれ0℃、25℃、45℃において3ヶ月保温した後、含有量分析(HPLC，高速液体クロマトグラフ法)を行った結果、0℃において2種類のアスコルビン酸誘導体の含有量殆ど変化せず、色は無色であることに対して、25℃や45℃条件下の2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)とも明らかに黄色に変わり、含有量も低下した。また、3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸はかなり優れた安定性を示しており、溶液は相変わらず無色で、含有量の変化が少なかった。3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸試験の結果は表1の通りである。 
【００３２】
【表１】
2010539105.tif 000004
【００３３】
式Ｉに示す構造を有するアスコルビン酸誘導体は、3-O-ラクトース-L-アスコルビン酸と同一の基本構造や同様な性質を有する。3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸は、ビタミンＣ前駆体として、2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)より優れた生理作用とよい安定性を有する。 
【００３４】
3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸は新規なビタミンＣ前駆体として、前記メラニン沈着抑制効果（美白効果）など、2-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-2G)より優れた性能を示しているので、3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸を化粧品に使用することができる。 
【００３５】
3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸は既知の美白剤と同様で、各種組み合わせ物を形成して日焼け止め製品、光老化対策化粧品、シワ対策化粧品など各種化粧品又はスキンケア用品に使用することができる。また、肌の弾力性の維持及び紫外線による肌の損傷抑制に非常に効果がある。製品配合上の必要に応じて、水及び/又は各種有機溶媒に3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸を使用し、さらに界面活性剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、柔軟剤、芳香剤及び/又は香料などの各種助剤を添加して液体製品や軟膏状製品等にすることができる。 
【００３６】
本発明はまた、ある3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の合成方法を提供している。つまり、アスコルビン酸の5,6位ヒドロキシ基を保護し、それを1-ハロアシル化糖にカップリングさせた後、イソプロピリデンとアシルを脱離させて産物を得る。その方法は次の通りである。 
【００３７】
式Ｉに示す構造を有するアスコルビン酸誘導体の製造方法は、次の手順を含む。 
【００３８】
A）1-ハロアシル化糖製造について、糖を原料とし、原料糖の全てのヒドロキシ基をアシル化し、ハロゲン化して1-ハロアシル化糖を得る。 
【００３９】
B）中間体の製造について、アルカリの存在下、1-ハロアシル化糖と5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸を縮合し、中間体である3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸を得る。 
【００４０】
C）保護基の脱離について、B）で得られた中間体をそれぞれに酸性とアルカリ性の条件
下で加水分解し、保護基であるイソプロピリデンとアシルを脱離させて3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸を得る。 
【００４１】
次に本発明の方法について詳細を記述する。本方法の反応過程を詳細は次の通りである。
【００４２】
【化３】
2010539105.tif 000005
【００４３】
1-ハロアシル化糖（3）の製造について、糖（2）を原料とし、全てのヒドロキシ基をアシル化し、さらにハロゲン化して得られる。原料糖（2）はオリゴ糖で、マルトース、イソマルトース、ラクトース、ゲンチオビオース、メリビオース、セロビオース、キトビオース、N-アセチルラクトサミン等のジオースを使用することができ、又はマルトトリオース、トリグリセリド、アクラボス等のトリオースやテトラオース、又はその他オリゴ糖を使用することができる。ハロゲンとしてはフッ素、塩素、よう素を使用し、アシル化するための保護基としてはアセチル、プロピノイル、ベンゾイル、ベンジルなど通常の官能基を使用することができる。一例として、原料糖（2）のヒドロキシ基をすべてアセチル化し、ブロム化して1-アセトブロモグルコース（3）を製造することができる（Martors M.B.，Preparation of acetorome-sugars，Nature，1950，165，369 ）。 
【００４４】
手順B）に記載する5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸（7）は、既存の技術方法で製造することができる。一例として、L-アスコルビン酸（6）を原料とし、酸の触媒作用でL-アスコルビン酸とアセトンを縮合反応して5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコル
ビン酸（7）が得られる（Chen H Lee， Paul A Seib， et a1．Chemical synethesis of several phosphoric esters of L-ascorbic acid，Carbohydr Res，1978．67 (1)，127-135）。その反応過程を下式に示す。
【００４５】
【化４】
2010539105.tif 000006
【００４６】
5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸（7）の2-、3-位のヒドロキシ基が露出し、3-ヒドロキシ基がある程度の酸性を示し、アルカリの存在下、1-ハロアシル化糖にカップリングさせてグルコシドを形成し、中間体である3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4）を得ることができる。反応温度は0〜100℃で、溶媒はメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、DMFを使用できる。反応で生成された酸をアルカリで吸収し、そのアルカリは、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機アルカリ、又はピリジン、トリエチルアミン等の有機アルカリを使用できる。本発明のルートと中間体を使用したところ、反応産物が意外にも単一で、3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸ばかりで、2-O-産物の存在がないため、純化せずに直接手順C）の保護基脱離を行うことができる。 
【００４７】
中間体である3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4）はそれぞれ酸性とアルカリ条件下で加水分解し、保護基であるイソプロピリデンとアシルを脱離させて3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸（1）を得る。まず酸の触媒作用でイソプロピリデンを脱離させて3-O-(アシルグリコシル)-L-アスコルビン酸（5）を得て、続いてアルカリ性条件下で加水分解し、3-O-(アシルグリコシル)-L-アスコルビン酸の保護基であるアシルを脱離させて目的物を得ることができる。又は保護基脱離の順序を変え、まず中間体をアルカリ性条件下で加水分解してアシルを脱離させ、続いて酸の触媒作用でイソプロピリデンを脱離させて目的物を得ることもできる。 
【００４８】
3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4）又は3-O-グリコシル- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（8）は、酸の触媒作用でイソプロピリデンを脱離させることができる。使用される酸は、塩酸、硫酸，リン酸、Pトルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸等とし、使用される溶媒は、メタノール，エタノール、アセトン又はこれらの水溶液、又は水とする。反応温度は0-100℃である。 
【００４９】
保護基であるアシルの脱離について、3-O-(アシルグリコシル)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4）又は3-O-(アシルグリコシル)-L-アスコルビン酸（5）をアルカリ性条件下で加水分解することができる。使用されるアルカリは水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム等の水溶液、又はナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等の金属アルコラートとし、溶媒は水、アルコール又はアルコールの水溶液、例えばメタノール、エタノール又はこれらの水溶液を使用して3-O-(アシルグリコシル)-L-アスコルビン酸などの原料を溶解する。反応温度は0℃-100℃で、塩酸、硫酸又はカチオン交換樹脂を使用して反応溶液の中和を行う。塩酸又は硫酸を使用した場合、生成された塩を除去する必要があるが、カチ
オン交換樹脂を使用した場合にナトリウムとカリウムの塩が吸着するので脱塩処理はいらない。 
【００５０】
前記処理を行うことによって3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸含有の有機溶液又は水溶液を得ることができる。溶液は凍結乾燥又は減圧蒸留処理を行って溶媒を除去した後、目的化合物を得ることができる。 
【００５１】
本発明の方法で得られた3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸は、ビタミンＣ前駆体として、2-O-α-D-グルコピラノシルアスコルビン酸(AA-2G)のようなその他アスコルビン酸糖類誘導体より優れた生理作用を有し、また、2-O-α-D-グルコピラノシル-L-アスコルビン酸(AA-2G)のようなその他アスコルビン酸糖類誘導体よりよい安定性を有する。また、その他アスコルビン酸誘導体に比べ、強酸性でないため肌への刺激が少ないことと、安定していて効果が長いため体内や対外でビタミンＣを緩やかに放出するという優位性がある。3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸は、化粧品、医薬品、食品、飼料等の分野に使用でき、特に美白剤として化粧品に使用できる。 
【００５２】
本発明の3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の化学合成方法は、使用される原料糖によって各種3-O-グリコシル置換アスコルビン酸誘導体を製造することができ、しかもこの製造方法に使用される原料は入手しやしく、方法は簡単で、収率は高い。 
【発明を実施するための形態】
【００５３】
以下に実施例を通じて本発明作の詳細を記述する。ただし本発明の保護範囲は記述される実施例に限らない。 
【００５４】
実施方法の詳細は次の通りである。 
【００５５】
[実施例１]
1-ブロモヘプタ-O-アセチルグリコシル（3a）の製造 
温度計と滴下ロウトを装着した三口フラスコに無水酢酸180mLを入れ、氷晶浴で0℃まで冷却し，過塩素酸0.6mLを緩やかに滴下し、内部温度を0〜5℃に管理し、添加した後氷晶浴を撤去する。室温において無水ラクトース50.0gを数回に分けて添加し、内部温度を33℃に管理する。添加した後の反応液を10℃まで冷却し、赤リン7.5gを投入し、撹拌し分散した後に臭素14.5mLを反応液に滴下し、内部温度を20℃以下に管理し、臭素滴下した後に氷水10.0mLを緩やかに滴下し、反応液温度を15℃以下に管理し、滴下した後、室温において2.0h撹拌し、氷水に移し、クロロホルムで数回ほど抽出し、有機相を合併し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、黄色油状の濃縮物を無水エーテル75.0mLに溶かし、冷蔵庫に一晩保管し、析出した大量の白色結晶体を吸引ろ過し、乾燥して白色粉末状固体81.0gを得る。そのm.p.は123.0-124.5℃で収率は81.0%である。 
【００５６】
5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸（7）の製造 
乾燥した1L容量の三口フラスコにアスコルビン酸91.0g、アセトン450mlを添加し、氷晶浴で-5℃まで冷却した後、濃硫酸200.0gを緩やかに滴下し、内部温度を0〜5℃に維持して約2.5h滴下した後、続いて5.0min撹拌し、氷水浴を撤去し、室温まで自然昇温し、続いて45min反応し、無色から薄黄色に変わった反応液を吸引ろ過し、少量のアセトンでスラッジをpHが中性になるまで数回ほど洗浄し、スラッジを（50℃）1-2hで真空乾燥して白色粉末状固体89.5gを得る。そのm.p.は215-217℃で収率は80.2%である。 
【００５７】
[実施例３]
3-O-(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコ
ルビン酸（4a）の製造
乾燥した1L容量の丸底フラスコに1-ブロモヘプタ-O-アセチルグリコシル(3a) 79.0g、5,6-O-イソプロピリデン-L-アスコルビン酸(7)28.1g、アセトン500mlを添加し、撹拌し分散した後、炭酸カリウム28.0g及びTEBAC1.0gを添加し、50℃まで加熱して一晩放置し、吸引ろ過して溶媒を回収し、薄黄色油状物を得るのでこれを酢酸エチル200mLに溶かし、飽和食塩水20mlで数回ほど洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して酢酸エチルを回収し、残留物をオイルポンプで抽出し、1h真空乾燥して薄黄色泡状固体57.0gを得る。その融点は52.5〜54.0℃で収率は60.2%である。 
1HNMR (CDCl3, 400M) δ: 1.21 (6H, -CH3), 2.03 -2.21(21H, -CH3), 3.98 (2H, -CH2-), 4.32(2H, -CH2-), 4.37(2H, -CH2-), 4.45(1H, -CH-), 4.47 (1H, -CH-), 4.49 (1H, -CH-), 4.50(1H, -CH-), 4.52 (1H, -CH-)，4.54(1H, -CH-), 4.61 (1H, -CH-), 4.65 (1H, -CH-), 4.68(1H, -CH-), 5.91 (1H, -CH-)，5.58(1H,-CH-), 5.73 (1H, -CH-); 
MS (ESI, m/z) : [M-H]-：834.2 
【００５８】
[実施例４]
3-O-(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（5a）の製造 
500mL容量の丸底フラスコに3-O-(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4a）31.0g、氷醋酸180mL、水180mLを添加し、撹拌溶解し、油浴で昇温し、油温を50〜60℃に維持し、1.5h撹拌し、原料が無いことをTLC測定により確認した後に溶媒を回収し、残留物を酢酸エチル250mLに溶かし、飽和食塩水で数回ほど洗浄し、有機相用無水硫酸ナトリウムで乾燥・濃縮し、薄黄色油状物を得るのでこれを室温下で1.0h真空乾燥し、黄色泡状固体25.0gを得るのでこれをカラムクロマトグラフィー法で白色泡状物22.1gを得る。その収率は70.0%である。 
1HNMR (CDCl3, 400M) δ: 2.11-2.40 (21H, -CH3), 3.68 (2H, -CH2-), 4.31(2H, -CH2-), 4.43(2H, -CH2-), 4.48(1H, -CH-), 4.53 (1H, -CH-), 4.55 (1H, -CH-), 4.61(1H, -CH-), 4.64 (1H, -CH-)，4.68(1H, -CH-), 4.71 (1H, -CH-), 4.75 (1H, -CH-), 4.89(1H,-CH-), 5.22 (1H, -CH-)，5.38(1H, -CH-), 5.46 (1H, -CH-); 
MS (ESI, m/z) : [M-H]-：794.2 
【００５９】
[実施例５]
3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（1a）の製造 
3-O -(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（5a）25.0gを室温下でメタノール250mLに溶かし、10%の炭酸カリウム水溶液250mLを緩やかに添加し、1.5h撹拌し、カチオン樹脂を入れてpH6.0〜7.0に調整し、吸引ろ過してろ過液を濃縮させて薄黄色固体を得るのでこれを再結晶して白色又は類白色固体6.1gを得る。その収率は70.2％である。1HNMR (D2O, 400M) δ: 3.59 (2H, -CH2-), 4.07(2H, -CH2-), 4.19(2H, -CH2-), 4.23(1H, -CH-), 4.27 (1H, -CH-), 4.29 (1H, -CH-), 4.35(1H, -CH-), 4.36 (1H, -CH-)，4.41(1H, -CH-), 4.43 (1H, -CH-), 4.45 (1H, -CH-), 4.95(1H, -CH-), 4.98 (1H, d, -CH-)，5.08(1H, -CH-), 5.33 (1H, -CH 
MS (ESI, m/z) : [M-H]-：500.1 
【００６０】
[実施例６］
実施例5で得られた3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（1a）を美白クリームに使用する場合、ポリオキシエチレン（25）ラノリンアルコールエーテル1.5重量部とモノステアリン酸グリセリン2.5重量部を乳化系とし、ヘキサデカノール・オクタデカノール4重量部、ホワイトミネラルオイル5重量部、カプリル酸・カプリン酸トリグリセリド5重量部を主油相としてO/W美白クリームの軟膏基剤を製造し、軟膏剤のポスト乳化（45℃左右）時に3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸1〜3重量部を添加して目的物を得る。 
【００６１】
［実施例７］〜［実施例１３］ 
実施例7〜13は、それぞれの糖類を原料とし、本発明の方法でそれぞれのグリコシル含
有の3-O -グリコシル-L-アスコルビン酸を製造する。 
【００６２】
1-アセトブロモグルコース（3b-3h）の製造は、実施例1の製造方法を参照する。 
【００６３】
3-O -(アセチルグリコシル)- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4b-4h）の製造は、実施例3の製造方法を参照する。 
【００６４】
3-O -(アセチルグリコシル)-L-アスコルビン酸（5b-5h）の製造は、実施例4の製造方法を参照する。 
【００６５】
3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸（1b-1h）の製造は、実施例5の製造方法を参照する。 
得られた目的物及び中間体のモル収率は次の表2に示す。
【００６６】
【表２】
2010539105.tif 000007
2010539105.tif 000008
【００６７】
得られた各種3-O -グリコシル-L-アスコルビン酸を美白活性物として、実施例6の方法で、3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸の代わりに美白クリームに使用する。 
【００６８】
[実施例１４］
各種細胞を1x104/穴の密度で96穴板に接種し、37℃及び5%CO2において24時間培養し、上澄液を除去し、各穴に一定の見本濃度の培地200uLを添加する。各種見本には高・中・低3濃度があり、各種濃度には4つの複合穴があり、対照群には直接培地200uLを添加し、続いて72時間培養し、各穴に5g/LのMTT溶液20uLを添加し、37℃及び5%CO2で4時間培養し、上澄液を除去する。各穴にDMSO150uLを添加し、10min振とうし、エライサの波長490nm(参考波長620nm)において各穴の吸光度を測定する。細胞増殖率=(選別対象物各濃度平均吸光度)/(対照群平均吸光度)x100%で、試験の結果を表3に示す。 
【００６９】
【表３】
2010539105.tif 000009
データの集計はSPSS11.0ソフトウェアを使用し、一元配置分散分析(ANOVA)の結果、ブランク対象群メラニン細胞増殖率は100%であった。ただし、*はp<0.05、**はp<0.01を示し、p値は観察結果が有効で母集団として典型性があると推定した誤り確率である。 
【００７０】
[実施例１５］
B16F10細胞を5x103/穴の密度で96穴板に接種し、37℃及び5%CO2において24時間培養し、上澄液を除去し、各穴に一定濃度の選別対象培地100uLを添加する。ブランク対照群には培地のみを添加し、各群とも4回繰り返し、1日ごとに培地を1回交換し、続いて6日培養した後、Ca2+やMg2+無含有のPBSで1回洗浄した後、各穴に0.5%Triton-X溶液100uLを添加し、超音波で30min振とう後、各穴に10mM/LのL-ドーパミン溶液50uLを添加し、37℃において3時間放置し、エライサ490nm波長(参照波長620nm)において各穴の吸光度を測定する。チロシナーゼ活性阻害率=選別対象群平均吸光度/対照群平均吸光度x100%で、試験の結果は表4に示す。 
【００７１】
【表４】
2010539105.tif 000010
データの集計はSPSS11.0ソフトウェアを使用し、一元配置分散分析(ANOVA)の結果、ブランク対照群メラニン細胞増殖率は100%であった。ただし*はp<0.05、**はp<0.01を示す。 
【００７２】
[実施例１６]
MTT試験の結果を元に、2x104/穴の密度で6穴板に接種し、37℃及び5%CO2において24時間培養し、上澄液を除去し、各穴に各濃度含有の選別対象培地6.0mLを添加する。ブラン
ク対照群には培地のみを添加し、各群とも4回繰り返し、1日ごとに培地を1回交換し、続いて6日培養した後、PBSで2回洗浄し、4%のパラホルムアルデヒドで15min固定し、PBSで洗浄し、0.5%のL-ドーパミンで37℃において0.5h培養し、顕微鏡で写真を撮る(10x10)。 
【００７３】
写真の比較で見えるように、ビタミンＣ誘導体2はブランク対照群より染色度が顕著に低下している。このことから、ビタミンＣ誘導体2はチロシナーゼの活性を顕著に抑制し、メラニンの生成を低減できることが分かる。 
【００７４】
[実施例１７]
B16F10細胞を径60mmのシャーレに接種し、37℃及び5%CO2において24時間培養し、上澄液を除去し、各濃度の各種見本培地をそれぞれに添加する。対照群には培地のみを添加し、各群とも3回繰り返し、1日ごとに培地を1回交換し、続いて6日培養した後、0.25%パンクレアチン/EDTAの消化で細胞を収穫し、PBSで2回洗浄し、各群ごとに細胞数をカウントし、0.2mLの二重蒸留水で細胞を1min浮遊状態にした後、エタノール500uLとエチルエーテル500uLの混合物を添加して室温下15min放置し、遠心分離機に置き、3000回転/minで5min遠心分離した後、二重蒸留水4mLを添加してNaOHを0.2mol/Lに希釈させ、分光光度計を使用して475nm(参照波長18620nm)付近の吸光度を測定する。メラニン含有量=[(選別対象吸光度/細胞数の平均値)]x100%で、試験の結果は表5に示す。
【００７５】
【表５】
2010539105.tif 000011
データの集計はSPSS11.0ソフトウェアを使用し、一元配置分散分析(ANOVA)の結果、ブランク対照群メラニン含有量は100%であった。ただし*はp<0.05、**はp<0.01を示す。 
【００７６】
[実施例１８]
3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（1a）の製造 
500mL容量の丸底フラスコに3-O -(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4a）11.0g、氷醋酸90mL、水90mLを入れ、撹拌、溶解、昇温し、油浴温度を50〜60℃に維持し、1.5h撹拌し、原料が無いことをTLC測定により確認した後に溶媒を回収し、残留物をメタノール100mLを溶かし、10%の炭酸カリウム水溶液100mLを緩やかに添加し、40min撹拌し、カチオン樹脂を入れてpH6.0〜7.0に調整し、吸引ろ過してろ過液を濃縮させて薄黄色固体を得るのでこれを再結晶して白色固体2.3gを得る。その収率は35.2％である。 
【００７７】
[実施例１９]
3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（1a）の製造 
3 -O -(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4a）11.0gを室温下でメタノール250mLに溶かし、25%の炭酸カリウム水溶液100mLを緩や
かに添加し、1.5h撹拌し、カチオン樹脂を入れてpH6.0〜7.0まで調整し、吸引ろ過してろ過液を濃縮させて薄黄色油状物を得るのでこれに氷醋酸80mL及び水80mLを入れ、撹拌、溶解し、油浴を昇温させて油温を50〜60℃に維持し、1.5h撹拌し、原料が無いことをTLC測定により確認した後に溶媒を回収し、黄色油状物を得るのでこれを室温下で1.0h真空乾燥し、黄色泡状固体を得るのでこれを再結晶して薄黄色固体1.95gを得る。その収率は29.6%である。 
【００７８】
[実施例２０]
3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（1a）の製造 
ナトリウムメトキシド（50%）5.0gを室温下でメタノール250mLに溶かし、溶解するまで撹拌し、3-O -(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（5a）25.0gを添加し、2.0h撹拌した後、カチオン樹脂を入れてpH6.0〜7.0に調整し、吸引ろ過してろ過液を濃縮させて白色固体10.9gを得る。その収率は69.6%である。 
【００７９】
実施例21〜24は、3-O-(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-(5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸（4a）の製造に関するものである。 
【００８０】
[実施例２１]
実施例3の製造方法を参照し、アルカリとして炭酸ナトリウムを使用して薄黄色固体を得る。 
【００８１】
[実施例２２]
実施例3の製造方法を参照するが、相違点としては使用される溶媒はメタノールで、使用されるアルカリはピリジンである。 
【００８２】
[実施例２３]
実施例3の製造方法を参照するが、相違点としては使用される溶媒はエタノールで、使用されるアルカリはトリエチルアミンである。 
【００８３】
[実施例２４]
実施例3の製造方法を参照するが、相違点としては使用される溶媒はDMFで、使用されるアルカリは炭酸水素ナトリウムである。 
【００８４】
実施例25〜28は、3-O-(ヘプタ-O-アセチル-D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（5a）の製造に関するものである。 
【００８５】
[実施例２５]
実施例4の製造方法を参照するが、相違点としては使用される酸は塩酸で、使用される溶媒はメタノールである。 
【００８６】
[実施例２６]
実施例4の製造方法を参照するが、相違点としては使用される酸は酢酸で、使用される溶媒はメタノール水溶液である。 
【００８７】
[実施例２７]
実施例4の製造方法を参照するが、相違点としては使用される酸は酢酸で、使用される溶媒はエタノール水溶液である。 
【００８８】
[実施例２８]
実施例4の製造方法を参照するが、相違点としては使用される酸はリン酸で、使用され
る溶媒はアセトン水溶液である。 
【００８９】
[実施例２９]
3-O-(D-ラクトース)-L-アスコルビン酸（1a）の製造 
実施例5の製造方法を参照するが、相違点としては使用されるアルカリはナトリウムエトキシドで、所用溶媒は無水エタノールである。 
【００９０】
[実施例３０]
本発明の方法でマルトトリオース含有の3-O -グリコシル-L-アスコルビン酸を製造する。ただし、 
1-アセトブロモグルコースの製造は、実施例1の製造方法を参照する。 
【００９１】
3-O -(アセチルグリコシル)- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸の製造は、実施例3の製造方法を参照する。 
【００９２】
3-O -(アセチルグリコシル)-L-アスコルビン酸の製造は、実施例4の製造方法を参照する。 
【００９３】
3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の製造は、実施例5の製造方法を参照する。 
【００９４】
[実施例３１]
本発明の方法でトリグリセリド含有の3-O -グリコシル-L-アスコルビン酸を製造する。ただし、1-アセトブロモグルコースの製造は、実施例1の製造方法を参照する。 
【００９５】
3-O -(アセチルグリコシル)- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸の製造は、実施例3の製造方法を参照する。 
【００９６】
3-O -(アセチルグリコシル)-L-アスコルビン酸の製造は、実施例4の製造方法を参照する。 
【００９７】
3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の製造は、実施例5の製造方法を参照する。 
【００９８】
[実施例３２]
本発明の方法でアクラボス含有の3-O -グリコシル-L-アスコルビン酸を製造する。ただし、 
1-アセトブロモグルコースの製造は、実施例1の製造方法を参照する。 
3-O -(アセチルグリコシル)- (5,6-O-イソプロピリデン)-L-アスコルビン酸の製造は、実施例3の製造方法を参照する。 
【００９９】
3-O -(アセチルグリコシル)-L-アスコルビン酸の製造は、実施例4の製造方法を参照する。 
【０１００】
3-O-グリコシル-L-アスコルビン酸の製造は、実施例5の製造方法を参照する。 
【国際調査報告】
2010539105.tif 000013
2010539105.tif 000014
2010539105.tif 000015
2010539105.tif 000016
2010539105.tif 000017
2010539105.tif 000018