(57)【要約】  本発明は、16SリボソームRNAに対する選択的抗生物質活性を有する、パロマミンベースの式Iの化合物に関する。さらに本発明は、医薬を調製するための前記化合物の使用、薬剤調製物、および前記化合物を調製する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I
【化１】
2010517951.tif 000023
［前記式中、X、YおよびZはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、-S-、置換または非置換-CH2-、あるいはR1および/またはR2への直接結合を表し；
R1およびR2はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、炭素環を表し、あるいはYR1およびZR2はともに、置換または非置換シクロアルキル、あるいは対応するヘテロ環状環を形成し、
ただしR1およびR2は両方ともHではなく、
R3およびR4はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、アミノまたはヒドロキシルを表し、
R5およびR6はそれぞれの場合において、個々独立に、水素またはグリコシル基を表す］
の化合物、ならびに生理学的に共存可能な酸の塩基または塩の形態にある、それらのジアステレオ異性体またはエナンチオマー。
【請求項２】
R1およびR2がそれぞれの場合において、お互い個々独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、アルキニル、アルキリデン、C3-C12シクロアルキル、C3-C20アリール、好ましくはアラリキル、C3-C20ヘテロアリールあるいはC3-C20ヘテロ環基を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
YR1がNH2ではない、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ZR2がOHではない、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
R1および/またはR2が、ペプチド核酸部分を含まない、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
R1が、好ましくは置換または非置換(C1-C5アルキル)アリール基を含み、R2はHである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
R2が直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C7 アルキル、C2-C7アルケニル、アルキニル、またはアルキリデン、C3-C7シクロアルキル、C3-C7アリール、好ましくはアラリキル、C3-C7ヘテロアリールあるいはC3-C7ヘテロ環であり、R1は水素である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
R3がヒドロキシルである、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
R4はアミノである、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
R5が水素である、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
R5が単糖または多糖からなる群から選択され、好ましくは、単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは二糖であり、特に好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1→3)- β-D-リボフラノシル部分である、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
R6が水素である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
R6が単糖または多糖からなる群から選択され、好ましくは、単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは単糖であり、特に好ましくは3-アミノ-3-デオキシ-α-D-グルコピラノシル部分である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
R6は2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル- (1→3)-β-D-リボフラノシル部分である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
R5が3-アミノ-3- デオキシ-α-D-グルコピラノシル部分である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
YR1およびZR2がともに、置換または非置換シクロアルキル、あるいは対応するヘテロ環状環を形成する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
YR1およびZR2がともに、6員の4',6'-シクロアルキル、または置換4',6'-シクロアルキル環を形成する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
YおよびZが酸素である、好ましくはX、YおよびZが酸素である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
式II
【化２】
2010517951.tif 000024
［前記式中、X、YおよびZはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、-S-、置換または非置換-CH2-を表し；
R7は水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、あるいは炭素環を表し、
R8は水素、前記化合物が安定であればOH、NH2、NRaRb、SH、SRa、ORa、あるいは直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキル、好ましくはC1-C4アルキルを表し、ここでRaおよびRbはお互いに個々独立に、C1-C8アルキル、好ましくはC1-C4アルキルを表し；
R3は水素、アミノまたはヒドロキシル、好ましくはアミノまたはヒドロキシルを表し;
R4は水素、アミノまたはヒドロキシル、好ましくはアミノまたはヒドロキシルを表し;
R5は単糖または多糖、好ましくは単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは二糖であり、特に好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1→3)-β-D-リボフラノシル部分であり；
R6は水素、単糖または多糖、好ましくは単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは単糖であり、特に好ましくは3-アミノ-3-デオキシ-α-D-グルコピラノシル部分である］
である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
X、YおよびZが全て酸素である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
R7が、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキル、C3-C8シクロアルキル、C5-C20アリール、C5-C20ヘテロアリール、好ましくはC5-C12ヘテロアリールを表す、請求項１９または２０に記載の化合物。
【請求項２２】
R7が、直鎖状、置換または非置換C1-C8アルキル、好ましくは直鎖置換C1-C3アルキル、より好ましくはアリール置換C1-C3アルキル；置換または非置換C3-C8シクロアルキル、C5-C12アリール、C5-C12ヘテロアリール、好ましくは置換C5-C12ヘテロアリールを表す、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
R7が、C5-C12アリール、またはヘテロアリール、好ましくは(C1-C7アルキル)アリール基を表す、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
R7がアリール置換エチル基である、請求項１９から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
R7が、ハロゲン、好ましくは塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素、より好ましくはフッ素を含む、請求項１９から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
R8が水素、ハロゲン、あるいは直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキルからなる群、好ましくはC1-C4アルキル、最も好ましくは水素から選択される、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２７】
R5またはR6が水素である、請求項１９まから２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２８】
R6が2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L- イドピラノシル-(1->3)-β-D-リボフラノシル部分である、請求項１９から２７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２９】
R1および/またはR2が、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、またはシクロアルキルを表し、ここで1個以上の炭素分子は、互いに個々独立に酸素、硫黄、または窒素原子により置換される、請求項１から２８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
X、YおよびZが酸素である、請求項１９から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
4',6'-O-ベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-メトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-メトキシベンジリデンパロモマイシン テトラアセタート、
4',6'-O-o-メトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-ニトロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-ニトロベンジリデンパロモマイシン トリアセタート、
4',6'-O-p-クロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,5-ジクロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-シアノベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-フェニルベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-フルオロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,4,5-トリメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-クロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-o-ニトロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-トリフルオロメチルベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-ジメチルアミノベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-1-ナフチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-ナフチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-フラニリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-チオフェニリデンパロモマイシン、および
4',6'-O-エチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(2-フェニル)-エチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(3-フェニル)-プロピリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(3-フェニル)-プロペニリデンパロモマイシン、
4',6'-O-シクロヘキシルメチリデンパロモマイシン、
4'-O-ベンジルパロモマイシン、
6'-O-ベンジルパロモマイシン、
4'-p-クロロベンジル パロモマイシン、
4'-p-(トリフルオロメチル)ベンジルパロモマイシン、
4'-ベンジルオキシメチルパロモマイシン、および 
4'-p-メトキシベンジルパロモマイシン
からなる群より選択される、請求項１から３０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
医薬を調製するための、一つ以上の請求項１から３１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３３】
微生物、好ましくは微生物感染を治療および/または防止する医薬を調製するための、一つ以上の請求項１から３１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３４】
トリパノソーマ症を治療および/または防止する医薬を調製するための、一つ以上の請求項１から３１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３５】
リーシュマニア症を治療および/または防止する医薬を調製するための、一つ以上の請求項１から３１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
活性物質として、一つ以上の請求項１から３１のいずれか一項に記載の化合物、あるいは薬剤として許容可能なその誘導体またはプロドラッグを、任意に伝統的な賦形剤および/または担体と組み合わせて含む、薬剤組成物。
【請求項３７】
a)式III
【化３】
2010517951.tif 000025
［前記式中、VおよびWはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、および-S-を表し；
R3およびR4はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、アミノまたはヒドロキシルを表し；
R5およびR6はそれぞれの場合において、個々独立に、水素またはグリコシル基を表す］の化合物を提供する工程；
b) 一個以上、好ましくは全てのアミノ基を保護する工程；
c) 任意に、一個以上、好ましくは全てのヒドロキシル基を保護する工程；
d1) 選択的に、任意に保護される4'-および/または6'-ヒドロキシル基を、式IのYR1および/またはZR2-基または式IIの環系に変換する工程；あるいは、
d2) 選択的に保護される4'-および/または6'-ヒドロキシル基を脱保護化し、選択的に脱保護化される4'-および/または6'-ヒドロキシル基を、式IのYR1および/またはZR2-基または式IIの環系に変換する工程；
e) 一個以上のアミノ基を脱保護化する工程；
f) 一個以上のヒドロキシル基を脱保護化する工程；
のうち一つ以上の工程を含む方法であって、
工程b)およびc)、ならびにe)およびf)の順序は逆であってよく、工程b)およびc)、ならびにe)およびf)の順序が好ましい、
請求項１から３１のいずれか一項に記載の化合物の調製法。
【請求項３８】
アミノ基が、アジド、カルバモイルまたはN-アクリルアミノ基に変換されることにより保護される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
アミノ基が、ジアゾ転移によってアジド基に変換されることにより保護される、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
ヒドロキシル基が、エーテル、好ましくはアルキルおよび/またはシリルエーテル、ならびに/あるいはエステル、好ましくはスルフォネートまたはアセタールに変換されることにより保護される、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
ヒドロキシル基が、好ましくは塩基および/または触媒の存在下で、アシル転移剤、好ましくは酢酸無水物で変換されることにより、アセトキシ基として保護される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
アセトキシ基が、塩基性または酸性触媒性加水分解、または他の加溶媒分解により、あるいはジイソブチルアルミニウム水素化物、LiAlH4またはLiBH4のような、水素化物ドナーで還元することにより、脱保護化される、請求項３７から４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
式IIIの4',6'-アセタールを、適切な有機および/または無機酸の存在下、必要であれば適切な溶媒の存在下で、式IIIの化合物とR7CHOまたはR7CH(ORa)(ORb)［前記式中、RaおよびRbはアルキル基、好ましくはメチルである］を反応させることにより調製する、請求項３７から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
式IIIの4',6'-アセタールを、適切な塩基の存在下、必要であれば適切な溶媒の存在下で、式IIIのヒドロキシ化合物と
【化４】
2010517951.tif 000026
または
【化５】
2010517951.tif 000027
［前記式中、Xは離脱基、好ましくはハロゲン原子、より好ましくは臭素である］を反応させることにより調製する、請求項３７から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
アジド基が、
還元的水素化、
ヒドリド剤(hydride reagent)、好ましくはリチウムアルミニウムヒドリドとの反応、
好ましくは塩基の存在下におけるジチオールとの反応による、電子遷移、
ホスフィン剤、好ましくはトリメチルホスフィンとのスタウディンガー反応
からなる群から選択される方法により脱保護化される、請求項３７から４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
4'-および6'-ヒドロキシ基が選択的に脱保護化される、請求項２７から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記4'-および6'-ヒドロキシ基がベンジリデンアセタールとして保護される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記4',6'-ベンジリデンアセタールが、触媒的水素化、バーチ還元および酸触媒加水分解からなる群から選択される方法により脱保護化される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
適切なヒドリド剤、好ましくは適切なルイス酸の存在下におけるボラン-ジメチルスルフィド複合体との反応により、より妨げられるエーテル誘導体を生じる、前記4',6'-アセタールの位置選択的還元性切断を含む、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
適切な酸の存在下における適切なヒドリド剤、好ましくはシアノホウ水素化ナトリウムとの反応により、より妨げられないエーテル誘導体を生じる、前記4',6'-アセタールの位置選択的還元性切断を含む、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
ヒドロキシ基は、ベンジルオキシ基として保護され、ベンジル部分は好ましくは置換または非置換アリールメチルまたはヘテロアリールメチルである、請求項３７から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
ベンジルオキシ基が、p-メトキシベンジルオキシ基である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
p-メトキシベンジルオキシ基が、適切な試薬、好ましくはジクロロジシアノキノンでの酸化的切断により脱保護化される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
第一6'-ヒドロキシ基が、エーテル、好ましくはアルキルまたはシリルエーテル、あるいはエステル、好ましくはスルフォネートまたはアセタールとして選択的に保護される、請求項３７から５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
第一6'-ヒドロキシ基がモノメトキシトリチルオキシ基である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
4'-ヒドロキシ基が、適切な塩基の存在下における、エーテル、好ましくは適切なアルコキシ転移剤、好ましくはアルキルハロゲン化物との反応により、保護される、請求項３７から５２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、16SリボソームRNAに対する選択的抗生物質活性を有する、パロマミン(paromamine)ベースの式Iの化合物に関する。さらに本発明は、医薬を調製するための前記化合物の使用、薬剤調製物、および前記化合物を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミノグリコシド抗生物質(AGA)は、広範囲の微生物に対して有効な、臨床的に有効な薬剤である。AGAの臨床上の使用は、毒性（不可逆的な聴神経障害、および可逆的な腎臓毒性）により、ならびにAGAに対する病原体の抵抗性により制限されている。2-デオキシストレプタミン由来AGAに共通しているのは、ネアミン(neamine)型の擬似二糖コアである。それは、アミノデオキシグルコピラノース（環I）にグリコシド結合で連結される2-デオキシストレプタミン（環II）からなる。付加的なグリコシル部分は、2-デオキシストレプタミンの水酸基に結合しており、パロモマイシン(paromomycin)(1a)およびカナマイシン(kanamycin)(1b)のような、4,5- または4,6-置換デオキシストレプタミン由来アミノグリコシドとして分類される種々の化合物を生じさせる。
【化１】
2010517951.tif 000002
【０００３】
AGAは、リボソームRNA(rRNA)の特異的部位に結合することを介して、タンパク合成の忠実性に影響する(Magnet et al., Chem. Rev. 2005, 705, 477; Jana et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006, 70, 140; Vicens et al., Chembiochem 2003, 4, 1018; Ogle et al., Trends Biochem Sci 2003, 28, 259)。数十年にわたるリボソーム薬剤の使用にもかかわらず、選択性、すなわち原核生物と真核生物との間のリボソームの区別を支配する構造的特徴、およびこれらの化合物の毒性は十分に理解されていない。遺伝学的研究(Hobbie et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2006, 50, 1489; Hobbie et al., C. Antimicrob. Agents Chemother. 2005, 49, 5112; Boettger et al., EMBO reports 2001 , 2, 318)およびリボソームサブユニットと複合体を形成するAGAの結晶構造(Carter et al. Nature 2000, 407, 340; Francois et al. Nucleic Acids Res 2005, 33, 5677; and above mentioned references)が、AGAのrRNA標的との相互作用を理解することに貢献している。
【０００４】
上記研究により、2-デオキシストレプタミン由来AGAアミノデオキシグルコピラノシル環Iが、2-デオキシストレプタミンが4,5- または4,6-二置換であるのに関わらず、同じようにrRNAに結合することが示された。複数のAGAの結晶構造によれば、環Iは、A1408, A1492およびA1493、ならびに塩基対C1409-G1491により形成される突起部分の間に入る。環Iは、G1491上に積み重なり、C(6')-OHからA1408のN(1)へ、およびC(5')-OHのからA1408のN(6)へH結合により特徴づけられるA1408との擬似塩基対を形成する。さらに環Iは、外に反転した2個のアデニン1492および1493のリン酸基との2つの非特異的相互作用を示し、C(3')-OHはA1492のO2Pと水素結合を形成し、C(4')-OHはA1493のO2Pと水素結合を形成する。
【０００５】
ネアミンベースの誘導体は、微生物アミノグリコシド抵抗性を低下させ、抗HIV薬剤として使用するために現在調査されている。
【０００６】
米国特許出願2006/0211634 A1号によれば、アミノグリコシド抗生物質に対する微生物抵抗性を拮抗または阻害することができるアミノグリコシド-6'-N-アセチルトランスフェラーゼを阻害するためのネアミンベースの化合物が使用される。これらの化合物は、コエンザイムAのように、6'位における巨大な置換基により特徴づけられる。それらは、抗生物質としての使用を示唆してはいない。
【０００７】
WO 2005/060573号によれば、ネアミン部分に接合するペプチド核酸部分を含む核酸分子の活性を制御するための組成物が存在する。この文献は、これらの組成物に対して抗生物質活性を開示してはいない。
【０００８】
Feng et al. (Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 6859-6862)は、アミノグリコシド-6'-N-アセチルトランスフェラーゼを研究するためのプローブとして二基質インヒビター(AAC(6')インヒビター)をもたらす、コエンザイムAとのネアミンベースのアミノグリコシドの部位および化学選択的6'-N-誘導体化を開示する。同一の著者(Feng et al., J. Med. Chem 2006,4,5273-5281)は、6'位における長いポリペプチド置換体を有する5ネアミンをベースとする、第二世代のAAC(6')インヒビターを記載する。
【０００９】
Riguet et al. (Tetrahedron 60, 2004: 8053-8064)には、HIV TAR RNAを標的とするリンカー単位に結合するヘテロ環置換体を有するネアミンベースの誘導体を調製するための手段が教唆される。後に同一の著者(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15 (2005) 4651-4655)により、HIV TAR RNAを標的とするネアミンベースのダイマーおよびトリマーが教唆される。
【００１０】
その高い毒性および顕著な抗生物質抵抗性のレベルにより、ネアミンベースのアミノグリコシドは現在使用が制限されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許出願2006/0211634 A1号
【特許文献２】WO 2005/060573号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Magnet et al., Chem. Rev. 2005, 705, 477
【非特許文献２】Jana et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006, 70, 140
【非特許文献３】Vicens et al., Chembiochem 2003, 4, 1018
【非特許文献４】Ogle et al., Trends Biochem Sci 2003, 28, 259
【非特許文献５】Hobbie et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2006, 50, 1489
【非特許文献６】Hobbie et al., C. Antimicrob. Agents Chemother. 2005, 49, 5112
【非特許文献７】Boettger et al., EMBO reports 2001 , 2, 318
【非特許文献８】Carter et al., Nature 2000, 407, 340
【非特許文献９】Francois et al., Nucleic Acids Res 2005, 33, 5677
【非特許文献１０】Feng et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 6859-6862
【非特許文献１１】Feng et al., J. Med. Chem 2006, 4,5273-5281
【非特許文献１２】Riguet et al., Tetrahedron 60, 2004: 8053-8064
【非特許文献１３】Riguet et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15 (2005) 4651-4655
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本願の目的は、一般的な微生物抵抗性因子により修飾されず、微生物、特に微生物16SリボソームRNAを標的とする、新規かつ改善抗生物質化合物を提供することであり、すなわち、前記化合物は、真核生物の細胞質および/またはミトコンドリアリボソームを全く標的としない、または実質的に低い程度で標的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
パロマミンベースの特異的な化合物が選択的に微生物16S RNAを標的とすることが発見された。
【００１５】
第一の態様において、本発明は、式I
【化２】
2010517951.tif 000003
［前記式中、X、YおよびZはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、-S-、置換または非置換-CH2-、あるいはR1および/またはR2への直接結合を表し；
R1およびR2はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、炭素環を表し、あるいはYR1およびZR2はともに、置換または非置換シクロアルキル、または対応するヘテロ環状環を形成し、
R3およびR4はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、アミノまたはヒドロキシを表し、
R5およびR6はそれぞれの場合において、個々独立に、水素またはグリコシル基を表す］
の化合物、ならびに生理学的に共存可能な酸の塩基または塩の形態にある、それらのジアステレオマーまたはエナンチオマー
に関する。
【００１６】
本発明の文脈において、直鎖状または分枝状、置換または非置換のような先行する語は、それに続く語のそれぞれが、前記先行語により修飾されると解釈されるものである。例えば、「直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、炭素環」の語の範囲は、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル；直鎖状または分枝状、置換または非置換アルケニル；直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキニル；直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキリデン；ならびに、直鎖状または分枝状、置換または非置換炭素環を含有する。例えば、「C2-C12アルケニル、アルキニル、アルキリデン」の語は、2個から12個の炭素およびアルケニル、アルキニル、またはアルキリデン官能性を有する化合物の群を示す。
【００１７】
本発明の化合物は安定であり、微生物分解に抵抗性である。しかし、前記化合物の複数の好ましい実施態様は、他のものより微生物要因に対してより抵抗性であることが示された。
【００１８】
本発明の好ましい実施態様において、式Iの化合物は、R1および/またはR2が、好ましくはR1およびR2が水素であるものである。前記化合物は、ANT4'-OH、APH2"-OH/AAC6'-NH、AAC3-NH、ANT2"-OH、AAC6'-NHからなる群から選択される抵抗因子に対して、部分（R1および/またはR2≠ H）あるいは完全（R1およびR2≠ H）抵抗性のいずれかを示す(Magnet et al., Chem. Rev. 2005)。
【００１９】
より好ましい実施態様において、式Iの化合物は、YR1およびZR2がともに、置換または非置換シクロアルキル、あるいは対応するヘテロ環状環を形成するものである。最も好ましい前記シクロアルキルは、アルキリデン、好ましくは（ベンジリデンのような）アリールアルキリデン、最も好ましくはアリール環中で置換されるアリールアルキリデンである。
【００２０】
本発明の別の好ましい実施態様において、式Iの化合物は、R3および/またはR4が、好ましくはR3およびR4が水素である、すなわちそれらがアミノまたはヒドロキシルではないものである。前記化合物は、抵抗要因（R3がHならば）APH3'および（R4がHならば）AAC2'のうち一つまたは両方に対する抵抗性を示す。
【００２１】
最も好ましい実施態様において、式Iの化合物は、R1および/またはR2が水素ではなく、R3および/またはR4が水素ではないものである。
【００２２】
本発明の好ましい実施態様において、R1およびR2はそれぞれの場合において、お互い個々独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、アルキニル、アルキリデン、C3-C12シクロアルキル、C3-C20アリール、好ましくはアリールアルキル、C3-C20ヘテロアリールまたはC3-C20ヘテロ環基を表す。より好ましくは、R1およびR2はそれぞれの場合において、お互い個々独立に、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキル、C2-C8アルケニル、アルキニル、またはアルキリデン、C1-C12シクロアルキル、C5-C12シクロアリール、C5-C12ヘテロアリールまたはC5-C12ヘテロ環状基を表す。最も好ましくは、R1およびR2はそれぞれの場合において、お互い個々独立に、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C4アルキル、C2-C6アルケニル、アルキニル、またはアルキリデン、C5-C6シクロアルキル、C5-C6ヘテロアリールまたはC5-C6ヘテロ環状基を表す。
【００２３】
好ましい実施態様において、YR1はNH2ではない。別の好ましい実施態様において、ZR2はOHではない。
【００２４】
R1および/またはR2が、ペプチド核酸部分を含まないこともまた好ましい。
【００２５】
R1および/またはR2におけるサイズの増加および立体阻害が、選択性を減少させ、および/または毒性を増大させる可能性がある。一般的に、より小さいR1および/またはR2置換基が上の理由から好ましい。
【００２６】
好ましくは、R1は、アリール部分において置換または非置換であるアルキルアリール基、好ましくは置換または非置換(C1-C5アルキル)アリール基を含み、好ましくはそれらであり、R2はHである。
【００２７】
別の好ましい実施態様において、R2は直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C7 アルキル、C2-C7アルケニル、アルキニル、またはアルキリデン、C3-C7シクロアルキル、C3-C7アリール、好ましくはアラリキル、C3-C7ヘテロアリールあるいはC3-C7ヘテロ環であり、R1は水素である。
【００２８】
別の好ましい実施態様において、R3はヒドロキシルである。
【００２９】
別の好ましい実施態様において、R4はアミノである。
【００３０】
別の好ましい実施態様において、R5は水素である。
【００３１】
本発明の好ましい実施態様において、R5は単糖または多糖からなる群から選択される。
好ましくは、R5は単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは二糖であり、特に好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1→3)-β-D-リボフラノシル部分である。
【００３２】
好ましくは、R6は水素である。
【００３３】
別の好ましい実施態様において、R6は単糖または多糖からなる群から選択され、好ましくは、単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは単糖であり、特に好ましくは3-アミノ-3-デオキシ-α-D-グルコピラノシル部分である。
【００３４】
別の好ましい実施態様において、R6は2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル- (1→3)-β-D-リボフラノシル部分である。
【００３５】
別のより好ましい実施態様において、YR1およびZR2はともに、置換または非置換シクロアルキル、あるいは対応するヘテロ環状環を形成する。好ましくは、YR1およびZR2により形成される環、ならびに式Iの環Iは、5員または6員環であり、より好ましくは6員環である。
【００３６】
最も好ましくは、YR1およびZR2はともに、6員の4',6'-シクロアルキル、または置換4',6'-シクロアルキル環を形成する。
【００３７】
別の好ましい実施態様において、YおよびZ、好ましくはX、YおよびZは酸素である。
【００３８】
より好ましい実施態様において、上記式Iの化合物は、以下の式II
【化３】
2010517951.tif 000004
［前記式中、X、YおよびZはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、-S-、置換または非置換-CH2-を表し；
R7は水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、あるいは炭素環を表し、
R8は水素、前記化合物が安定であればOH、NH2、NRaRb、SH、SRa、ORa、あるいは直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキル、好ましくはC1-C4アルキルを表し、ここでRaおよびRbはお互いに個々独立に、C1-C8アルキル、好ましくはC1-C4アルキルを表し；
R3は水素、アミノまたはヒドロキシル、好ましくはアミノまたはヒドロキシルを表し;
R4は水素、アミノまたはヒドロキシル、好ましくはアミノまたはヒドロキシルを表し;
R5は水素、単糖または多糖、好ましくは単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは二糖であり、特に好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1→3)-β-D-リボフラノシル部分であり；
R6は水素、単糖または多糖、好ましくは単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは単糖であり、特に好ましくは3-アミノ-3-デオキシ-α-D-グルコピラノシル部分である］
の化合物である。
【００３９】
式IIにおいて、X、YおよびZは好ましくは全て酸素である。
【００４０】
式IIの好ましい実施態様において、R7は、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキル、C3-C8シクロアルキル、C5-C20アリール、C5-C20ヘテロアリール、好ましくはC5-C12ヘテロアリールを表す。
【００４１】
式IIのより好ましい実施態様において、R7は、直鎖状、置換または非置換C1-C8アルキル、好ましくは直鎖置換C1-C3アルキル、より好ましくはアリール置換C1-C3アルキル；置換または非置換C3-C8シクロアルキル、C5-C12アリール、C5-C12ヘテロアリール、好ましくは置換C5-C12ヘテロアリールを表す。
【００４２】
別のより好ましい実施態様において、R7は、C5-C12アリール、またはヘテロアリール、好ましくは(C1-C7アルキル)アリール基を表す。
【００４３】
式IIのより好ましい実施態様において、R7は、アリール置換エチル基である。
【００４４】
別の好ましい実施態様において、式IまたはIIの本発明の化合物は、1個以上のハロゲン、好ましくは1個のハロゲン、好ましくは塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素、より好ましくはフッ素を含む。式IIの化合物のために、R7がハロゲン、好ましくは塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素、より好ましくはフッ素を含むことが好ましい。
【００４５】
式IIの化合物のために、R8が水素、ハロゲン、あるいは直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキルからなる群、好ましくはC1-C4アルキル、最も好ましくは水素から選択される。
【００４６】
式IIの化合物のために、R5またはR6は好ましくは水素である。
【００４７】
式IIの化合物のために、R6は好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1->3)-β-D-リボフラノシル部分である。
【００４８】
式Iおよび/またはIIの化合物に関する本発明のさらに好ましい実施態様において、R1および/またはR2、好ましくはその両方は、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、またはシクロアルキルを表し、ここで1個以上の炭素分子は、互いに個々独立に酸素、硫黄、または窒素原子により置換される。
【００４９】
最も好ましい実施態様において、本発明のパロマミンベースの化合物は、
4',6'-O-ベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-メトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-メトキシベンジリデンパロモマイシン テトラアセタート、
4',6'-O-o-メトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-ニトロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-ニトロベンジリデンパロモマイシン トリアセタート、
4',6'-O-p-クロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,5-ジクロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-シアノベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-フェニルベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-フルオロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,4,5-トリメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-クロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-o-ニトロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-トリフルオロメチルベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-ジメチルアミノベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-1-ナフチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-ナフチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-フラニリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-チオフェニリデンパロモマイシン、および
4',6'-O-エチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(2-フェニル)-エチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(3-フェニル)-プロピリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(3-フェニル)-プロペニリデンパロモマイシン、
4',6'-O-シクロヘキシルメチリデンパロモマイシン、
4'-O-ベンジルパロモマイシン、
6'-O-ベンジルパロモマイシン、
4'-p-クロロベンジル パロモマイシン、
4'-p-(トリフルオロメチル)ベンジルパロモマイシン、
4'-ベンジルオキシメチルパロモマイシン、および 
4'-p-メトキシベンジルパロモマイシン
からなる群より選択される。
【００５０】
定義
本明細書で開示される全ての化合物において、用語が構造と不一致である事例で、化合物は構造により規定されると理解されるべきである。
【００５１】
本発明は、ラセミ化合物、ラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオアイソマー混合物、および個々のジアステレオアイソマー(diastereoisomer)として存在してよい1個以上の非対称炭素原子を含む、本明細書で開示される全ての化合物を含有する。これらの化合物のそのような異性体は、明確に本発明に含有される。各立体中心炭素は、RまたはS配置にあっても、配置の組み合わせであってもよい。本発明の化合物のパロマミンコアの立体中心構造は、式１、IおよびIIに示されるものに固定されると理解される。
【００５２】
本明細書で開示される一般式IおよびIIの化合物のいくつかは、一つ以上の互変異性変化形態(tautomeric form)に存在することが可能である。本発明は、そのような互変異性変化の全てを含有する。
【００５３】
本明細書で使用される全ての用語は、当業者に既知である通常の意味により理解されるべきである。
【００５４】
本明細書で「ヘテロ原子」の語は、O、N、SおよびPのような、そして好ましくはそれらである、炭素および水素以外の原子を意味すると理解されるべきである。
【００５５】
アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン等の語は、構造的に可能な、炭素含有鎖の直鎖状ならびに分枝状形態を包含すると理解されるべきである。これらの炭素原子において、1個以上の炭素原子を任意のヘテロ原子、好ましくはO、SまたはNにより交換することができる。Nが置換されていなければ、それはNHである。ヘテロ原子は、直鎖状または分枝状炭素鎖内の末端または中間炭素原子のいずれかと置換してよい。そのような基を、オキソのような本明細書で記載されるように置換し、アルコキシカルボニル、アクリル、アミド、およびチオオキソのような、しかしそれらに限定されない記述に結果として至る可能性がある。
【００５６】
「炭素環」の語は、3個から20個、好ましくは3個から12個の炭素原子、好ましくは5個または6個の炭素原子を含む脂肪族炭水化物ラジカルを意味すると理解されるべきである。炭素環は、3個から10個の炭素原子を含む炭水化物環を含有する。これらの炭素環は、芳香族系、または非芳香族系のいずれかであってよい。非芳香族環系は、モノまたはポリ不飽和であってよい。好ましい炭素環は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプタニル、シクロヘプテニル、フェニル、インダニル、インデニル、ベンゾシクロブタニル、ジヒドロナフチル、テトラヒドロナフチル、ナフチル、デカヒドロナフチル、ベンゾシクロヘプタニルおよびベンゾシクロヘプテニルを含有するが、それに限定されない。シクロブタニルおよびシクロブチルのようなシクロアルキルに対するある語は、相互に交換可能に使用される。
【００５７】
「シクロアルキル」の語は、3個から12個の炭素原子を有する脂肪族炭化水素含有環を意味すると理解されるべきである。これらの非芳香族環系は、モノまたはポリ不飽和であってよく、すなわちこの語はシクロアルケニルおよびシクロアルキニルを包含する。シクロアルキルは、ヘテロ原子、好ましくはO、SまたはNを含んでよく、置換されていても置換されていなくてもよい。好ましく、かつ非限定的なシクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプタニル、シクロヘプテニル、ベンゾシクロブタニル、ベンゾシクロヘプタニルおよびベンゾシクロヘプテニルを包含する。
【００５８】
「ヘテロ環」の語は、安定な非芳香族、好ましくは3員から20員、より好ましくは3員から12員、最も好ましくは5員または6員の単環または多環、好ましくは8員から12員の二環、ヘテロ原子含有環状ラジカルであって、飽和または不飽和であってよいものを指す。各ヘテロ環は、炭素原子ならびに、1個以上、好ましくは窒素、酸素および硫黄から選択される1個から4個のヘテロ原子からなる。ヘテロ環状基は、間のいずれかの原子により完全な分子構造の残り部分と結合して、安定構造となってよい。例示的なヘテロ環は、ピロリジニル、ピロリニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、ジオキサラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、1-オキソ-λ4-チオモルホリニル、13-オキサ-11-アザ-トリシクロ[7.3.1.0- 2,7]トリデシ-2,4,6-トリエン、テトラヒドロピラニル、2-オキソ-2H-ピラニル、テトラヒドロフラニル、1,3-ジオキソラノン、1,3-ジオキサノン、1,4-ジオキサニル、8-オキサ-3-アザ-ビシクロ[3.2.1]オクタニル、2-オキサ-5-アザ-ビシクロ[2.2.1]ヘプタニル、2-チア-5-アザ-ビシクロ[2.2.1]ヘプタニル、ピペリジノニル、テトラヒドロ-ピリミドニル、ペンタメチレンスルフィド、ペンタメチレンスルホキシド、ペンタメチレンスルホン、テトラメチレンスルフィド、テトラメチレンスルホキシドおよびテトラメチレンスルホンを含むがそれに限定されない。
【００５９】
本明細書で「アリール」の語は、芳香族炭素環または本明細書で定義されるヘテロアリールを意味すると理解されるべきである。他に特定されなければ各アリールおよびヘテロアリールは、部分的にまたは完全に水素化されるその誘導体を含む。例えば、キノリニルはデカヒドロキノリニルおよびテトラヒドロキノリニルを含んでよく；ナフチルは、テトラヒドロナフチルのような、その水素化誘導体を含んでよい。本明細書に記載される、他の部分的にまたは完全に水素化されるアリールおよびヘテロアリール化合物の誘導体は、当業者に明白である。その語は、アラリキルおよびアルキルアリールを包含することが自然であり、その両方は、本発明の化合物を実行するための好ましい実施態様である。例えばアリールの語は、フェニル、インダニル、インデニル、ジヒドロナフチル、テトラヒドロナフチル、ナフチルおよびデカヒドロナフチル
【００６０】
「ヘテロアリール」の語は、芳香族C3-C20、好ましくは5員から8員のモノキシリル酸、または好ましくはN, OおよびSのような1個から4個のヘテロ原子を含有する8員から12員の二環状間を意味すると理解されるべきである。例示的なヘテロアリールは、アジリジニル、チエニル、フラニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、ピロリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラニル、キノキサリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、インダゾリル、トリアゾリル、ピラゾロ[3,4-b]ピリミジニル、プリニル、ピロロ[2,3- b]ピリジニル、ピラゾール[3,4-b]ピリジニル、ツベルシジニル、オキサゾ[4,5-b]ピリジニル and イミダゾ[4,5-b]ピリジニルを含む。
【００６１】
アリールオキシまたはヘテロアリールアミンのような、上記環状部分のアナログである語は、各群に連結して上記定義される、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ環を意味すると理解されるべきである。
【００６２】
ここで「窒素」および「硫黄」の語は、窒素および硫黄の酸化形態のいずれか、ならびに結果生じる化合物が安定である限りは、塩基性窒素のいずれかの四級化形態を含む。例えば、S-C1-6アルキルラジカルは、-S(O)-C1-6アルキルおよび-S(O)2-C1-6 アルキルを含むと理解されるべきである。
【００６３】
本発明の化合物は、当業者に理解されるように、「化学的に安定」であると考えられるもののみである。例えば、「ぶらさげ原子価(dangling valency)」または「カルバニオン(carbanion)」を有する化合物は、本願で開示される発明では考えられない化合物ではない。
【００６４】
上述の化合物は、強力で抗菌性の、特に抗細菌性の16S RNA特異的活性を示し、その活性は、真核生物で活性を本質的に欠くため、すなわち真核生物細胞質および/またはミトコンドリアRNAと相互作用しないために、毒性を欠く医薬を調製するために特に有用とする。
【００６５】
上記の高い選択性活性のために、本発明の別の態様は、医薬を調製するための一つ以上の本発明の化合物の使用に関する。
【００６６】
好ましい実施態様において、本発明は、微生物、好ましくは微生物感染を治療および/または防止する医薬を調製するために、一つ以上の本発明の化合物を使用する。
【００６７】
さらに好ましい実施態様において、本発明は、リーシュマニア症を治療および/または防止する医薬を調製するための一つ以上の本発明の化合物の使用に関する。
【００６８】
さらに好ましい実施態様において、本発明は、トリパノソーマ症を治療および/または防止する医薬を調製するための一つ以上の本発明の化合物の使用に関する。
【００６９】
本発明のさらなる態様は、活性物質として、一つ以上の本発明の化合物、あるいは薬剤として許容可能なその誘導体またはプロドラッグを、任意に伝統的な賦形剤および/または担体と組み合わせて含む、薬剤組成物に関する。
【００７０】
医学的用途および薬剤組成物
本発明は、式IおよびIIの化合物の薬剤として許容可能な誘導体を含有する。「薬剤として許容可能な誘導体」とは、患者に投与する際に、（直接または間接的に）本発明の化合物、あるいはその薬学的活性代謝物または薬学的活性残留物を提供することができる、薬剤として許容可能ないずれかの塩、またはエステル、あるいは他のいずれかの化合物を指す。薬学的活性代謝物は、酵素的または化学的に代謝されることができる、本発明の化合物のいずれかの化合物を意味すると理解されるべきである。これは例えば、式IおよびIIの、ヒドロキシル化または酸化誘導体化合物を含有する。好ましい実施態様は、水和物である式IおよびIIの化合物の薬剤として許容可能な誘導体に関する。
【００７１】
薬学的に許容可能な塩は、薬学的に許容可能な無機または有機酸および塩基に由来するものを含有する。適切な酸の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン-p-硫酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-硫酸およびベンゼンスルホン酸を含有する。オキサロ酸のような他の酸は、それ自体薬学的に許容可能ではないが、化合物およびその薬学的に許容可能な酸付加塩を取得する際の中間体として有用である塩を調整する際に使用されてよい。適切な塩基に由来する塩は、アルカリ金属（例えばナトリウム）、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）、アンモニア、ならびにN-(C1-C4アルカリ)4+塩を含有する。
【００７２】
さらに本発明の範囲はまた、式IおよびIIの化合物のプロドラッグも含有する。プロドラッグは、単純な化学変換に基づき、改変して本発明の化合物を生産させる化合物を含有する。単純な化学変換は、加水分解、酸化および還元を含有する。特に、プロドラッグが患者に投与される場合、プロドラッグを本明細書で開示される化合物に変換し、それにより所望の薬理学的効果を付与してよい。
【００７３】
本発明の化合物により、微生物リボソームの選択的阻害が示される。これらの薬剤は、真核生物16S RNAヌクレオチド位置を有する遺伝学的改変リボソームでの試験において示されるように、真核生物ミトコンドリアまたは細胞質16SリボソームRNAを標的としないために、真核生物リボソームには影響を及ぼさない。
【００７４】
そして、さらなる態様において、本発明は医薬を調製するための本発明の1つ以上の化合物の使用に関する。好ましくは、本発明の化合物は、微生物感染の治療および/または防止のための医薬を調製するために使用される。
【００７５】
上記の点において、本発明はまた、活性物質として、本発明の1つ以上の化合物、あるいはその薬剤として許容可能な誘導体またはプロドラッグを、任意に伝統的な賦形剤および/または担体と組み合わせて含む、薬剤組成物にも関する。
【００７６】
使用の方法
治療および予防用に、本発明の化合物を、慣用的ないずれかの方法で、慣用的ないずれかの投与形態で投与してよい。投与の経路は、静脈内、筋肉内、皮下、滑液嚢内、輸液により、舌下、経皮、経口、局所、または噴霧によるものを含むが、それに限定されない。好ましい投与方法は、経口および静脈内である。
【００７７】
前記化合物を、単独で、あるいは、ある実施態様においてインヒビターの安定性を向上させ、それを含む薬剤組成物の投与を容易にし、溶解または分散を上昇させ、阻害活性を向上させ、併用療法を提供するなど、他の活性成分を含む、アジュバントと組み合わせて投与してよい。有利には、そのような組み合わせ治療は、慣用的治療法の低い投与量を利用し、そして単独療法としてそれらの薬剤が使用される際に上昇する毒性の可能性および副作用を回避する。上述の化合物を、物理的に慣用的治療学または他のアジュバントと組み合わせて単一の薬剤組成物としてよい。これに関して、Cappola et al.、米国特許出願番号09/902,822号、PCT/US 01/21860号および米国仮出願番号60/313,527号が参照されてよく、そのそれぞれが全体的に本明細書で参照されて取り込まれる。有利には、前記化合物をその後単一投与形態で一緒に投与してよい。複数の実施態様において、そのような化合物の組み合わせを含む薬剤組成物は、少なくとも5%、しかしより好ましくは少なくとも20%、の式(2)または(3)(重量/重量)の化合物、あるいはそれらの組み合わせを含む。本発明の化合物の最適なパーセンテージ(重量/重量)は変動してよく、当業者の予測範囲内にある。あるいは、前記化合物を別々（順次または並行してのいずれか）に投与してよい。分離投与により、投与レジームにおいてより柔軟性を持たせることができる。
【００７８】
上述のとおり、本明細書に記載される化合物の投与形態は、当業者に知られ、薬剤として許容可能な担体およびアジュバントを含む。これらの担体およびアジュバントは、例えばイオン交換物、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、バッファー物質、水、塩または電気分解物、ならびにセルロースベースの物質を含む。好ましい投与形態は、錠剤、カプセル、カプレット、液体、溶液、懸濁物、エマルション、トローチ、シロップ、再構成可能な粉末(reconstitutable powder)、錠剤、坐薬、および経皮パッチを含む。そのような投与形態を調製する方法は既知である（例えば、H. C. Ansel and N. G. Popovish, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5th ed., Lea and Febiger (1990)参照）。投与レベルおよび必要量は、当業者に十分に認識され、特定の患者に適した、利用可能な方法および技術から通常の知識を有するものにより選択されてよい。複数の実施態様において、投与レベルは、70kgの患者に対して約1-100mg/投与の範囲である。1日あたりの投与が十分であってよいが、1日あたり5投与まで与えられてよい。経口投与に対して、2000 mg/日までが必要であってよい。これに関してまた、米国仮出願番号339,249号も参照されてよい。当業者は、より低い、またはより高い投与量が、特定の因子に依存して必要とされ手よいことを理解するであろう。例えば、特定の投与および治療レジメンは、患者の健康全般のプロフィール、患者の疾患の重篤度および経緯、またはそれに対する体内動態、ならびに治療する医師の判断のような因子に依存するであろう。
【００７９】
例えば、本発明の化合物を、パロモマイシン(paromomycin )および他のパロマミン(paromamine )化合物と同様に投与することができる。それらを、腸感染の治療において経口的に、あるいは内臓に非経口的に、および皮膚リーシュマニア症に局所的に投与してよい。
【００８０】
好ましくは、本発明の化合物を、硫酸塩として投与してよい。腸アメーバ症の場合、大人と子供の両方に対する経口投与は、体重1kgあたり、5mgから70mg、好ましくは15mgから50mg、より好ましくは25mgから35mgの本発明の化合物を、毎日、5日から10日間、食事と一緒に3回投与で投与されてよい。肝性昏睡(hepatic coma)の場合、経口投与量は、5日から6日間、通常の間隔で分割した投与量の4gである。
【００８１】
本発明の化合物を、パロモマイシンを配合するのと同様に（例えばHumatin(登録商標), Parke-Davis）、カプセルに配合してよい。各カプセルは、100mgから500gm、好ましくは150mgから300mg、より好ましくは200mgから250mgの本発明の化合物を含んでよい。例えば、本発明の化合物のためのカプセルにおける非医療成分は、カプセル殻：D&CイエローNo. 10, FD&CブルーNo. 1 , FD&CレッドNo. 3, FD&CイエローNo. 6、ゼラチンおよび二酸化チタン Bottles of 100である(Martindale: the complete drug reference, 34th Edition, 2005, Pharmaceutical Press, p 612.も参照)。
【００８２】
本発明の化合物は、微生物、特に細菌リボソームに選択的であり真核生物リボソームを保護し、それゆえ深刻な副作用がないため、本発明の化合物はパロモマイシンよりも高い投与量で糖してよいことは強調される。
【００８３】
本発明の化合物の調製方法
本発明の化合物を、当業者、特に有機およびグリコシド化学の当業者によく知られた標準方法により調製することができる。それらの調製のための一般スキームおよび特異的例を、例示のみを意味し制限することを決して意味しないとみなされる以下の例で提供する。
【００８４】
以下で、本発明を実行する最良の方法とも考えられる、好ましい本発明の化合物の調製法が提供される。
【００８５】
さらなる態様において、本発明は、
a)式III
【化４】
2010517951.tif 000005
［前記式中、VおよびWはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、および-S-を表し；
R3およびR4はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、アミノまたはヒドロキシルを表し；
R5およびR6はそれぞれの場合において、個々独立に、水素またはグリコシル基を表す］の化合物を提供する工程；
b) 一個以上、好ましくは全てのアミノ基を保護する工程；
c) 任意に、一個以上、好ましくは全てのヒドロキシル基を保護する工程；
d1) 選択的に、任意に保護される4'-および/または6'-ヒドロキシル基を、式IのYR1および/またはZR2-基または式IIの環系に変換する工程；あるいは、
d2) 選択的に保護される4'-および/または6'-ヒドロキシル基を脱保護化し、選択的に脱保護化される4'-および/または6'-ヒドロキシル基を、式IのYR1および/またはZR2-基または式IIの環系に変換する工程；
e) 一個以上のアミノ基を脱保護化する工程；
f) 一個以上のヒドロキシル基を脱保護化する工程；
のうち一つ以上の工程を含む方法であって、
工程b)およびc)、ならびにe)およびf)の順序は逆であってよく、工程b)およびc)、ならびにe)およびf)の順序が好ましい、本発明の化合物の調製法に関する。
【００８６】
工程c)の任意性に関して、本発明の複数の化合物、例えば式IIの化合物を調製するために、1個以上のヒドロキシル基を保護する必要がなくてもよい。これは特に、ジオキサン、ジオキサン誘導体、または他の（ベンジリデンのような）アリールアルキリデン部分を導入して、式IIの化合物を生成する場合に当てはまる。その場合、工程d1)で導入される部分はすでに保護基として機能していてよい。
【００８７】
Vおよび/またはWが二価硫黄原子である場合、式IのR1および/またはR2-基が、ハロゲン誘導体、またはスルフォネートのような適切な求電子剤と野反応により導入される。あるいは、同一の結果に至るYR1および/またはZR2を、直接または間接的に、VHおよびWHがお互いに独立にヒドロキシ基を表す、任意に保護される式IIIの化合物から導入してよい。
式IIの環系を、R7CHOまたはR7CH(ORa)(ORb)
［前記式中、RaおよびRbは、適切な有機および/または無機酸の存在下にあるアルキル基、好ましくはメチルであり、必要であれば、適切な溶媒中にある］
とアセタール形成により、あるいは
【化５】
2010517951.tif 000006
または
【化６】
2010517951.tif 000007
［前記式中、Xは、塩基の存在下にあり、必要であれば、適切な溶媒中にある、離脱基、好ましくはハロゲン原子、より好ましくは臭素である］
との反応により導入されてよい。
【００８８】
アミノおよび/またはヒドロキシル基の保護及び脱保護化工程を、当業者に慣用的に利用可能であり、本発明の化合物に不利益ではない、いずれかの適切な反応により達成することができる。
【００８９】
好ましくは、アミノ基は、アジド、カルバモイルまたはN-アクリルアミノ基に変換されることにより保護される。より好ましくは、アミノ基は、ジアゾ転移(diazo transfer)によってアジド基に変換されることにより保護される。
【００９０】
好ましくは、ヒドロキシル基は、エーテル、好ましくはアルキルおよび/またはシリルエーテル、ならびに/あるいはエステル、好ましくはスルフォネートまたはアセタールに変換されることにより保護される。より好ましいヒドロキシル基は、好ましくは塩基および/または触媒の存在下で、アシル転移剤、好ましくは酢酸無水物で変換されることにより、アセトキシ基として保護される。
【００９１】
アセトキシ基に対して、それらは、塩基性または酸性触媒性加水分解、または他の加溶媒分解により、あるいはジイソブチルアルミニウム水素化物、LiAlH4またはLiBH4のような、水素化物ドナーで還元することにより、脱保護化することが好ましい。
【００９２】
別の好ましい実施態様において、式IIIの4',6'-アセタールを、適切な有機および/または無機酸の存在下、必要であれば適切な溶媒の存在下で、式IIIの化合物とR7CHOまたはR7CH(ORa)(ORb)［前記式中、RaおよびRbはアルキル基、好ましくはメチルである］を反応させることにより調製する。
【００９３】
別の好ましい実施態様において、式IIIの4',6'-アセタールを、適切な塩基の存在下、必要であれば適切な溶媒の存在下で、式IIIのヒドロキシ化合物と
【化７】
2010517951.tif 000008
または
【化８】
2010517951.tif 000009
［前記式中、Xは離脱基、好ましくはハロゲン原子、より好ましくは臭素である］を反応させることにより調製する。
【００９４】
アジド基は、好ましくは
例えばPd, Pd(OH)2, RhまたはPtのような、適切な触媒の存在下での好ましくは、水素による還元的水素化；
水素及びホウ化ニッケルによる；
ヒドリド剤(hydride reagent)、好ましくはホウ素ヒドリドまたはアルミニウムヒドリドとの反応、
好ましくは、塩基の存在下における硫化水素、チオール、またはジチオールとの反応による、電子遷移、
アルコールの存在下におけるZnまたはNa、あるいはNa-アマルガムのような金属還元、
ホスフィン剤、好ましくはトリメチルホスフィン(スタウディンガー反応(Staudinger reaction))とそれに続く加水分解での処理
からなる群から選択される方法により脱保護化される(Staudinger and Meyer, Helv. Chim. Acta 1919, 2, 635; Golobov et al., Tetrahedron, 1981, 37, 437; and Scriven et al., Chem. Rev., 1988, 88, 297; and as described in S. D. Burke and R. L. Danheiser, ed. Oxidizing and Reducing Agents", J. Wiley, Chichester, 1999参照)。
【００９５】
好ましい実施態様において、本発明は、4'-および6'-ヒドロキシ基が選択的に脱保護化されている方法に関する。
【００９６】
好ましい実施態様において、4'-および6'-ヒドロキシ基はベンジリデンアセタールとして保護される。前記4',6'-ベンジリデンアセタールは、好ましくは、触媒的水素化、バーチ還元(Birch reduction)および酸触媒加水分解からなる群から選択される方法により脱保護化される。
【００９７】
好ましい実施態様において、本発明の方法は、適切なヒドリド剤、好ましくは適切なルイス酸の存在下におけるボラン-ジメチルスルフィド複合体との反応により、より妨げられるエーテル誘導体を生じる、前記4',6'-アセタールの位置選択的還元性切断を含む。
【００９８】
別の好ましい実施態様において、本発明の方法は、適切な酸の存在下における適切なヒドリド剤、好ましくはシアノホウ水素化ナトリウムとの反応により、より妨げられないエーテル誘導体を生じる、前記4',6'-アセタールの位置選択的還元性切断を含む。
【００９９】
別の好ましい実施態様において、式IIIの化合物におけるヒドロキシ基は、ベンジルオキシ基として保護され、ベンジル部分は好ましくは置換または非置換アリールメチルまたはヘテロアリールメチルである。最も好ましいベンジルオキシ基は、p-メトキシベンジルオキシ基であり、好ましくは式IIIの化合物と、p-メトキシベンジルハロゲン化物のような適切なp-メトキシベンジル転移剤とを、適切な塩基または酸の存在下で反応させることにより導入される。好ましい実施態様において、p-メトキシベンジルオキシ基は、適切な試薬、好ましくはジクロロジシアノキノンでの酸化的切断により脱保護化される。
【０１００】
より好ましい実施態様において、本発明の方法は、式IIIの第一6'-ヒドロキシ基が、エーテル、好ましくはアルキルまたはシリルエーテル、あるいはエステル、好ましくはスルフォネートまたはアセタールとして選択的に保護されることを必要とする。第一6'-ヒドロキシ基が、モノメトキシトリチルオキシ基、好ましくは式IIIの化合物に、モノメトキシトリチルハロゲン化物のような適切なモノメトキシトリチル転移剤とを、適切な塩基の存在下で反応させることにより導入される。
【０１０１】
最後に、しかし重要なことに、4'-ヒドロキシ基は、適切な塩基の存在下における、エーテル、好ましくは適切なアルコキシ転移剤、好ましくはアルキルハロゲン化物との反応により、保護される。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】実施例３によるrRNAオペロンrrnBの削除のための戦略を示す。白矢印は、rRNA遺伝子を表し、PおよびTはそれぞれプロモーターおよびターミネーターを示す。黒矢印は、rrnBの上流および下流のオープンリーディングフレーム(open reading frame)を示す。斜線長方形は、抗生物質耐性カセット、縞矢印はSacB遺伝子を表す。点線は、置換ベクター(A)と染色体標的部位(B)との置換におけるホモログ配列の間の、可能性のある交差部位を示す。rrnB 5'-隣接領域(C)へのプラスミド導入に続き、ホモログである3'-隣接配列の間の第二の交差事象により、染色体繰り返しを解消し、rrnBの削除に至る(D)。
【図２】実施例３によるM.スメグマティス(M. smegmatis)ArrnA ArrnB attB::prrnBの生成のための逐次的な戦略を示す。染色体rrnBの削除に続き、機能的rrnBオペロンを有する相補ベクターを、染色体attB部位に導入する。それに続くrrnAの削除により、M.スメグマティスArrnA ArrnB attB::prrnB株にいたり、その株ではリボソームRNAは、もっぱら前記プラスミドから転写される。
【発明を実施するための形態】
【０１０３】
以下において、本発明の主題は、本発明の範囲を限定するものとして考えられることを意図しない、特定の実施態様をより詳細に参照して、記載されるであろう。
【０１０４】
本当にこのリストが必要であろうか。略語のほとんどは、専門家が実際に使用している。出願人はすでに必要でないものは省略している。
【０１０５】
略号表
ax=軸上の、c=濃度、DDQ=ジクロロジシアノキノン、dec.=分解、eq=赤道の、equ.=同等物、ESI=エレクトロスプレーオン化、FC=フラッシュクロマトグラフィー、HR=高解像度、HSQC=異核一量子コヒーレンス(heteronuclear single quantum coherence)、MMTr=モノメトキシトリチル、-(X A) MS=分子ふるい(molecular sieves)、PMB=4-メトキシベンジル、Tf=トリフルオロメタンスルホニル、Ts=4-トルエンスルホニル
【実施例】
【０１０６】
実施例１
材料と方法
溶媒を新たに蒸留した： THFをNaおよびベンゾフェノンから、CH2Cb、MeOH、ピリジン、Et3NをCaH2から。他に言及されない限り、反応を窒素下で実行した。Qual. TLC: プレコートされたシリカゲルガラスプレート(Merck silica gel 60 F254)；「モンスタン(mostain) (400 mlの10% H2SO4 soln., 20 gの(NH4)6Mo7O24.6H2O, 0.4 g of Ce(SO4)2)」と加熱することにより検出。フラッシュクロマトグラフィー：シリカゲルMerck 60 (0.063-0.20)、M.p.非補正。旋光度：1-dm cell at 25°, 589 nm。FT- IRスペクトル：ATR, 吸収(cm-1)。1H- and 13C-NMRスペクトル: 外部標準としてのTMSに対するケミカルシフト(chemical shifts) δ(ppm rel.)、ならびに、カップリング定数(Hz)。HR-ES-MSまたはHR-MALDI-MS：ゲンシチン酸 (= 2,5-ジヒドロキシ安息香酸(2,5-dihydroxybenzoic acid)、DHB)マトリックス中。.
【０１０７】
アセタールの合成
スキーム１
【化９】
2010517951.tif 000010
i) TfN3, CuSO4, tBuOK, H2O/tBuOH/CH2Cl2 1/2/1 , 23°C, 18h; 
ii) Ac2O, DMAP, Pyr, Ar, 23°, 18h; 
iii) NaOMe, MeOH, 23°, 12h; 
iv) R7=PhCHO, HCO2H, -5°-0°, Ar, 24h, 85%; 
v) R7CH(OMe)2, TsOKH2O, DMF, N2, 23°-65°; 
vi) 0.1 M aq. NaOH, THF中の1 M PMe3, THF, N2, 65°.
【０１０８】
【化１０】
2010517951.tif 000011
【０１０９】
化合物2、3、4.1を、Helv Chim Acta 2005, 88, 2967の記載により合成した。
【０１１０】
アセタール4.2-4.12（スキーム1）の形成のための典型的手順
N2下で、DMF中の2の溶液を、DMF中のR7CHOの対応するジメチルアセタール(5 equ.)およびTsOH-H2O (0.5 equ.)の溶液と処理し、25°Cまたは65°Cで撹拌した。混合物をAcOEtで希釈し、0.1 M aq. NaOHで洗浄した。水層を、AcOEtで２回抽出した。混合有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (ヘキサン/AcOEt 8:2, CHCl3/AcOEt 1 :1 → CHCl3/AcOEt/CH3OH 6:6:0.25)により、4.2-4.12が与えられた。
【０１１１】
1,3,2',2"',6"'-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-4',6'-O-p-メトキシベンジリデンパロモマイシン(4.2)
71 mgの2の反応により4.2が57 mg与えられる(69%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.46. [α]29D = +112.5 (c = 0.29, CH3OH). HR-Maldi-MS: 902.2569 (22, [M + K]+, C31H41KN15O15+; calc. 902.2544); 887.2817 (39, [M + Na + H]+, C31H42N15NaO15+; calc. 887.2883); 886.2783 (100, [M + Na]+, C31H41N15NaO15+; calc. 886.2799). Anal. calc. for C31H41N15O15.CH3OH (895.79): C 42.91 , H 5.06, N 23.45; found: C 43.31 , H 5.00, N 23.14。
【０１１２】
1,3,2',2"',6"'-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4',6'-O-m-メトキシベンジリデンパロモマイシン(4.3)
101 mgの2の反応により4.3が47 mg与えられる(40%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.45. [α]29D = +98.2 (c = 0.17, CH3OH). HR-Maldi-MS: 863.2932 (33, [M]+, C31H41N15O15+; calc. 863.2907); 862.2849 (88, [M - H]+, C31H40N15O15+; calc. 862.2834). Anal. calc. for C31H41N15O15-CH3CO2CH2CH3 (951.85): C 44.16, H 5.19, N 22.07; found: C 43.83, H 5.32, N 21.71。
【０１１３】
1,3,2',2"',6"'-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-o-メトキシベンジリデンパロモマイシン (4.4)
99 mgの2の反応により4.4が76 mg与えられる(66%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.40. [α]29D = +120.6 (c = 0.28, CH3OH). HR-Maldi-MS: 887.2812 (33, [M + Na + H]+, C31H43N15NaO15+; calc. 887.2883); 886.2784 (100, [M + Na]+, C31H42N15NaO15+; calc. 886.2799). Anal. calc. for C31H41N15O15-CH3OH (895.79): C 42.91, H 5.06, N 23.45; found: C 43.01 , H 5.23, N 23.37。
【０１１４】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4',6'-O-2,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン (4.5)
119 mgの2の反応により4.5が104 mg与えられる(73%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.54. [α]29D = +105.0 (c = 0.295, CH3OH). HR-Maldi-MS: 917.2917 (40, [M + Na + H]+, C32H44N15NaO16+; calc. 917.2988); 916.2887 (100, [M + Na]+, C32H43N15NaO16+; calc. 916.2904). Anal. calc. for C32H43N15O16-CH3OH (925.82): C 42.81, H 5.12, N 22.69; found: C 42.93, H 5.34, N 22.34。
【０１１５】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-4',6'-O-p-ニトロベンジリデンパロモマイシン (4.6)
49 mgの2の反応により4.6が104 mg与えられる(35%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.36. HR-Maldi-MS: 878.2619 (39, [M]+, C30H38N16O16+; calc. 878.2652); 877.2570 (100, [M - H]+, C30H37N16O16+; calc. 877.2573)。
【０１１６】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4',6'-O-m-ニトロベンジリデンパロモマイシン (4.7)
100 mgの2の反応により4.7が29 mg与えられる(26%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.36. HR-Maldi-MS: 878.2604 ) (44, [M]+, C30H38N16O16+; calc. 878.2652); 877.2561 (100, [M - H]+, C30H37N16O16+; calc. 877.2573)。
【０１１７】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4',6'-O-p- クロロベンジリデンパロモマイシン (4.8)
28 mgの2の反応により4.8が10 mg与えられる(31%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:1) 0.48。
【０１１８】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4',6'-O-3,5- ジクロロベンジリデンパロモマイシン (4.9)
80 mgの2の反応により4.9が22 mg与えられる(23%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.39。
【０１１９】
1,3,2',2'",6"'-ペンタデアミノ-,3,2',2'",6"'ペンタアジド-4',6'-O-p- シアノベンジリデンパロモマイシン (4.10)
115 mgの2の反応により4.10が43 mg与えられる(33%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.31. HR-Maldi-MS: ") 858.2722 (39, [M]+, C31H38N16O14+; calc. 858.2753); 857.2675 (100, [M - H]+, C31H37N16O14+; calc. 857.2681 )。
【０１２０】
1,3,2',2'",6"'-ペンタデアンモ-1,3,2',2'",6"'-ペンタアジド-4',6'-O-p- フェニルベンジリデンパロモマイシン (4.11)
80 mgの2の反応により4.11が66 mg与えられる(68%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.42. [α]29D = +102.6 (c = 0.29, CH3OH). HR-Maldi-MS: 908.3058 (100, [M - H]+, C36H42N15O14+; calc. 908.3041); 909.3147 (40, [M]+, C36H43N15O14+; calc. 909.3114). Anal. calc. for C36H43N15O14-CH3OH (941.34): C 47.18, H 5.03, N 22.31; found: C 47.26, H 5.11, N 0 22.39。
【０１２１】
1,3,2',2'",6"'-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'ペンタアジド-4',6'-O-p- フルオロベンジリデンパロモマイシン (4.12)
175 mgの2の反応により4.12が139 mg与えられる(69%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.34. HR-Maldi-MS: 890.2335 (28, [M + K]+, C30H38FKN15O14+; calc. 890.2344); 875.2620 (38, [M + Na + H]+, C30H39FN15NaO14+; calc. 875.2683); 874.2582 (100, [M + Na]+, C30H38FN15NaO14+; calc. 874.2599). Anal. calc. for C30H38FN15O14-CH3OH (883.7551): C 42.13, H 4.79, N 23.77; found: C 42.39, H 4.79, N 23.77。
【０１２２】
アジド基の脱保護化のための典型的手順
N2下で、DMF中の4.1- 4.12の溶液を、0.1 M aq. NaOH (2 equ.)およびTHF中の1 M PMe3 (6 equ.)と処理し、60°Cで撹拌した。乾燥およびFC (THF, THF/MeOH, MeOH, MeOH/25% aq. NH3 49:1 → MeOH/25% aq. NH3 4:1 )により、5.1-5.12が与えられた。
【０１２３】
4',6'-O-ベンジリデンパロモマイシン (5.1).
110 mgの4.1の反応により5.1が73 mg与えられる(79%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.30. [α]25D = +43.2 (c = 0.25, H2O). IR (ATR): 3355w, 3290w, 2909w, 1589tv, 1455w, 1378w, 1334w, 1023s, 978s, 927m. 1H-NMR (500 MHz, D2O, assignment based on DQF COSY and a HSQC spectrum): 7.57-7.55 (m, 2 arom. H); 7.50-7.48 (m, 3 arom. H); 5.58 (s, PhCH); 5.55 (d, J = 3.8, H-C(1')); 5.40 (d, J = 2.3, H-C(1")); 5.04 (d, J = 1.7, H-C(1'")); 4.44 (dd, J = 6.6, 5.0, H-C(3")); 4.35-4.31 (m, 2 H, H-C(2"), Ha-C(6')); 4.18-4.13 (m, 2H, H- C(4"), H-C(5"')); 4.10-4.04 (m, 2 H, H-C(3'"), H-C(5')); 3.94-3.87 (m, 2 H, H3- C(5"), H-C(3')); 3.91 (t, J = 10.5, Hb-C(6')); 3.77-3.73 (m, 2 H, H-C(4'), H-C(5)); 3.74 (dd, J = 10.0, 5.2, Hb-C(5")); 3.71-3.70 (m, 1 H, H-C(4'")); 3.54 (t, J = 9.3, H- C(4)); 3.40 (t, J = 9.7, H-C(6); 3.28 (dd, J = 13.6, 7.9, Ha-C(6'")); 3.21 (dd, J = 13.5, 3.9, Hb-C(6"')); 3.13 (m, 1 H, H-C(2'")); 3.04-3.00 (m, 1 H, H-C(3)); 2.99 (dd, J = 10.0, 3.9, H-C(2')); 2.94-2.89 (m, 1 H, H-C(I)); 2.07 (dt, J = 13.0, 4.1 , Heq-C(2)); 1.34 (q, J = 12.5, Hax-C(2)). 13C-NMR (126 MHz, D2O, assignment based on a HSQC spectrum): 138.79 (s); 132.61 (of), 131.43 (2d); 128.91 (2d); 111.35 (d, C(1 ")); 104.52 (d, PhCH); 101.83 (d, C(V)); 101.18 (d, C(1 '")); 86.96 (d, C(5)); 84.46 (d, C(4)); 83.89 (d, C(4")); 83.52 (d, C(4')); 78.88 (d, C(6)); 78.06 (d, C(3")); 76.05 (d, C(2")); 74.61 (d, C(5"')); 72.73 (d, C(3'")); 72.56 (d, C(3'), 71.11 (d, C(4"')); 70.72 (t, C(6')); 66.32 (d, C(5')); 63.38 (t, C(5")); 58.55 (d, C(2")); 54.87 (d, C(2'")); 53.02 (d, C(I )); 52.24 (d, C(3)); 43.41 (t, C(6"')); 36.81 (f, C(2)). HR-Maldi-MS: 726.3117 (31 , [M + Na]+, C30H49N5NaO14+; calc. 726.3174); 705.3347 (37, [M + 2 H]+, C30H51N5O14+; calc. 705.3433); 704.3336 (100, [M + H]+, C30H50N5O14+; calc. 704.3349). Anal. calc. for C30H49N5O14 (703.74): C 51.20, H 7.02, N 9.95;. found: C 51.30, H 7.15, N 9.98.
【０１２４】
4',6'-O-p-メトキシベンジリデンパロモマイシン (5.2)
17 mgの4.2の反応により5.2が11 mg与えられる(76%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.36. IR (ATR): 3355w (br.), 29Uw, 1614w, 1518w, 1461 w, 1378w, 1302w, 1250w, 1101s, 1024s, 937m. HR-Maidi-MS: 735.3475 (36, [M + 2 H]+, C31H53N5O15+; calc. 735.3538); 734.3442 (100, [M + H]+, C31H52N5O15+; calc. 734.3454)。
【０１２５】
4',6'-O-m-メトキシベンジリデンパロモマイシンテトラアセタート (5.3).
26 mgの4.3の反応により5.3が18 mg与えられる(81%)。白色固体。生成物は、20% aq. AcOH (23 mg)中で撹拌することにより四酢酸塩に変換される。
【０１２６】
4',6'-O-o-メトキシベンジリデンパロモマイシン (5.4)
18 mgの4.4の反応により5.4が21 mg与えられる。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.31. [α]25D = +51.3 (c = 0.15, H2O). IR (ATR): 3148w (br.), 1606w, 1526w, 1498w, 1463w, 1386w, 1287w, 1250w, 1095s, 1047s. HR-Maldi-MS: 757.3328 (25, [M + Na + H]+, C31H52N5NaO15+; calc. 757.3358); 756.3291 (67, [M + Na]+, C31H51N5NaO15+; calc. 756.3279); 735.3470 (36, [M + 2 H]+, C31H53N5O15+; calc. 735.3538); 734.3442 (100, [M + H]+, C31H52N5O15+; calc. 734.3454); 442.15.17 (32, [M - ring III - ring IV+ 2 H]+, C20H32N3O8+; calc. 442.2189)。
【０１２７】
4',6'-O-2,5-ジメトキシベンジイイデネパロモマイシン (5.5)
25 mgの4.5の反応により5.5が21 mg与えられる(98%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.29. IR (ATR): 3287 w, 2913 w, 1593w, 1503m, 1464m, 1425w, 1386w, 1280w, 1221 w, 1104s, 1019s. HR-Maldi-MS: 786.3382 (26, [M + Na]+, C32H53N5NaO16+; calc. 786.3385); 765.3571 (37, [M + 2 H]+, C32H55N5O16+; calc. 765.3644); 764.3545 (100, [M + H]+, C32H54N5O16+; calc. 764.3560)。
【０１２８】
4',6'-O-p-ニトロベンジリデンパロモマイシン (5.6)
14 mgの4.6の反応により5.6が6 mg与えられる(50%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.24. [α]25D = +168.1 (c = 0.01 , H2O). IR (ATR): 3172w (br.), 2900w, 1611w, 1521 w, 1349w, 1130s, 1099s, 995s. HR-Maldi-MS: 750.2943 (38, [M + 2 H]+, C30H50N6O16+; calc. 750.3283); 749.3196 (100, [M + H]+, C30H49N6O16+; calc. 749.3205)。
【０１２９】
4',6'-O-m-ニトロベンジリデンパロモマイシントリアセタート (5.7)
10%aq. AcOH中で撹拌し、乾燥させた。後、16 mgの4.7の反応により5.7が11 mg与えられる(61%)。黄色がかった固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.31. IR (ATR): 3095m (br.), 1528m, 1406m, 1349m, 1100s, 1045s, 1014s, 937m. HR-Maldi-MS: 750.3211 (36, [M + 2 H]+, C30H50N6O16+; calc. 750.3283); 749.3187 (100, [M + H]+, C30H49N6O16+; calc. 749.3200)。
【０１３０】
4',6'-O-p-クロロベンジリデンパロモマイシン (5.8)
17 mgの4.8の反応により5.8が12.5 mg与えられる(83%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.36. IR (ATR): 3037w (br.), 1738W, 1603w 1524w, 1493w, 1454w, 1406w, 1375w, 1081 s, 1049s, 1018s. HR-Maldi-MS: 738.2972 (95, [M + H]+, C30H49ClN5O14+; calc. 750.3283)。
【０１３１】
4',6'-O-3,5-ジクロロベンジリデンパロモマイシン (5.9)
25 mgの4.9の反応により5.9が19 mg与えられる(89%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.29. IR (ATR): 3188w (br.), 2900w, 1597w, 1573w 1526w, 1429w, 1369w, 1101s, 1029s. HR-Maldi-MS: 772.2556 (100, [M + H]+, C30H48Cl2N5O14+; calc. 772.2575)。
【０１３２】
4',6'-O-p-シアノベンジリデンパロモマイシン (5.10)
10 mgの4.10の反応により5.10が9 mg与えられる。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.27. IR (ATR): 3200w (br.), 1619w, 1526w, 1417w, 1094s, 996s. HR-Maldi-MS: 730.3322 (36, [M + 2 H]+, C31H50N6O14+; calc. 730.3385); 729.3288 (100, [M + H]+, C31H49N6O14+; calc. 729.3307)。
【０１３３】
4',6'-O-p-フェニルベンジリデンパロモマイシン (5.11)
20 mgの4.11の反応により5.11が16 mg与えられる(93%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.31. [α]25D = +42.3 (c = 0.14, H2O). IR (ATR): 3356w, 3284w, 2903w, 1599w, 1532w, 1489w, 1451w, 1375w, 1110S, 1074S, 1026S. HR-Maldi-MS: 803.3565 (41 , [M + Na + H]+, C36H54N5NaO14+; calc. 803.3565); 802.3462 (100, [M + Na]+, C36H53N5NaO14+; calc. 802.3481 ); 780.3616 (48, [M + H]+, C36H54N5O14+; calc. 780.3667)。
【０１３４】
4',6'-O-p-フルオロベンジリデンパロモマイシン (5.12)
60 mgの4.12の反応により5.11が51 mg与えられる。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.33. IR (ATR): 3285w, 2875w, 1606w, 1514w, 1457w, 1376w, 1300w, 1224w, 1047S, 1014S, 935m. 1H- NMR (500 MHz, D2O, assignment based on DQF COSY and a HSQC spectrum): 7.54-7.50 (m, 2 arom. H); 7.19-7.13 (m, 2 arom. H); 5.71 (s, PhCH); 5.51 (of, J = 3.9, H-C(I')); 5.35 (d, J = 2.3, H-C(I")); 5.05 (d, J = 1.8, H-C(I"')); 4.46 {dd, J = 6.6, 4.9, H-C(3")); 4.32 (dd, J = 4.9, 2.3, H-C(2")); 4.27 (dd, J = 10.2, 4.8, Ha-C(6')); 4.18- 4.11 (m, 2 H, H-C(4"), H-C(5'")); 4.07 (t, J = 3.2, H-C(3'")); 4.03-3.96 (m, H-C(5')); 3.88-3.82 (m, 3 H, Ha-C(5"), H-C(3'), Hb-C(6')); 3.73-3.63 (m, 4 H, Hb-C(5"), H- C(5), H-C(4'"), H-C(4')); 3.51 (t, J = 9.4, H-C(4)); 3.44 (t, J = 10.0, H-C(6); 3.32- 3.21 (m, 2 H, Ha-C(6'"), Hb-C(6'")); 3.18 (t, J = 1.8, H-C(2'")); 3.01 (dd, J = 9.8, 3.9, H-C(2')); 3.00-2.93 (m, 2 H, H-C(3), H-C(I)); 2.08 (dt, J = 12.9, 4.1 , Heq-C(2)); 1.37 (Q, J = 12.5, Hax-C(2)). 13C-NMR (126 MHz, D2O, assignment based on a HSQC spectrum): 165.87 (of, 1J(C1F) = 245.7); 135.04 (cf, J = 2.9, Cpara); 131.09 (cf, 3J(C1F) = 8.7, 2 Cmeta); 118.18 (d, 2J(C1F) = 21.9, 2 Cortho); 111 -64 (of, C(V)); 103.83 (d, PhCH); 101.61 (cf, C(T)); 100.55 (d, C(1"')); 86.95 (cf, C(5)); 84.34 (cf, C(4)); 83.91 (of, C(4")); 83.38 (cf, C(4')); 78.06 (d, C(3")); 77.90 (cf, C(6)); 76.02 (d, C(T)); 73.97 (cf, C(5'")); 72.30 (d, C(T')); 72.20 (d, C(3"), 70.90 (cf, C(4'")); 70.67 (t, C(6')); 66.33 (d, C(5')); 63.37 (t, C(5")); 58.42 (d, C(Z)); 54.61 (cf, C(Z")); 53.12 (cf, C(I )); 52.15 (d, C(3)); 43.35 (t, C(6'")); 35.95 (f, C(2)). HR-Maldi-MS: 744.3074 (32, [M + Na]+, C30H48FN5NaO14+; calc. 744.3079); 723.3262 (34, [M + 2 H]+, C30H50FN5O14+; calc. 723.3338); 722.3242 (100, [M + H]+, C30H49FN5O14+; calc. 722.3255)。
【０１３５】
スキーム２
【化１１】
2010517951.tif 000012
i) TfN3, CuSO4, tBuOK, H2O/tBuOH/CH2Cl2 1/2/1 , 23°C, 18h; 
ii) PhCHO, HCO2H, -5°- 0°, Ar, 24h; 
iii) Ac2O, DMAP, Pyr, Ar, 23°, 12h, 42% from 1 ; 
iv) TsOH. H2O, MeOH, 61 %; 
v) R7CHO, FeCl3, N2, 23°; 
vi) R7CHO; TsOH.H2O, toluene, N2, 灌流; 
vii) NaOMe, MeOH; 
viii) 0.1 M aq. NaOH, THF中の1 M PMe3, THF, N2, 65°. 
.18 .19 .20 .21 .22
【０１３６】
【化１２】
2010517951.tif 000013
【０１３７】
化合物6を、Helv Chim Acta 2005, 88, 2967の記載により合成した。
【０１３８】
6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2'",6'''-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-パロモマイシン (7)
MeOH (1 ml)中の6(23 mg, 0.021 mmol)の溶液を、TsOH. H2O (2 mg, 0.011 mmol)で処理し、25℃で5時間撹拌した。混合物をAcOEt(10 ml)で希釈し、H2O (8 ml)で洗浄した。水層を、AcOEt(2 x 10 ml)で２回抽出した。混合有機層を、ブライン(20 ml)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (シクロヘキサン/AcOEt 8:2 → シクロヘキサン/AcOEt 3:7)により、7 (13 mg, 61%)が与えられた。白色固体。Rf (CHCb/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.57。
【０１３９】
アセタール4.13-4.27の形成のための典型的手順
方法A：N2下で、アルデヒド中の7の溶液を、FeCbと処理し、23°Cで2から24時間撹拌した。混合物をAcOEtで希釈し、セリット(Celite)で濾過し、0.1 M aq. NaOHで洗浄した。水層を、AcOEtで２回抽出した。混合有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (ヘキサンまたはシクロヘキサン/AcOEt 8:2 → 6:4)により、8.15、8.19、8.21- 8.27が与えられた。
【０１４０】
方法B：N2下で、トルエン中の7の溶液を、5オングストローム分子ふるい、TsOH-H2O (0.5 equ.)、トルエン中のアルデヒドの溶液(5 equ.)と処理し、灌流下で2から24時間撹拌した。混合物をAcOEtで希釈し、セリット(Celite)で濾過し、0.1 M aq. NaOHで洗浄した。水層を、AcOEtで２回抽出した。混合有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (ヘキサンまたはシクロヘキサン/AcOEt 8:2 → 6:4)により、8.13-8.14、8.16- 8.18、8.20が与えられた。
【０１４１】
6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-4',6'-O-3,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン (8.13)
方法B：70 mgの7の反応により8.13が58 mg与えられる(72%)。白色固体。Rf (ヘキサン/AcOEt 1:1) 0.34. HR-Maldi-MS (3-HPA): 1184.3294 (43, [M + K]+, C44H55KN15O22+; calc. 1184.3283); 1169.3562 (54, [M + Na + H]+, C44H56N15NaO22+; calc. 1169.3622); 1168.3568 (100, [M + Na]+, C44H55N15NaO22+; calc. 1168.3544)。
【０１４２】
6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'-ペンタアジド-4',6'-O-3,4,5-トリメトキシベンジウデネパロモマイシン (8.14)
方法B：61 mgの7の反応により8.14が50 mg与えられる(70%)。白色固体。Rf (ヘキサン/AcOEt 1:1) 0.34. M.p. 95°(softens)-110°. [α]25D = +92.5 (c = 0.23, CHCl3). HR-Maldi-MS (3-HPA): 1215.3367 (31 , [M + K + H]+, C45H58KN15O23+; calc. 1215.3467); 1214.3355 (57, [M + K]+, C45H57KN15O23+; calc. 1214.3389); 1199.3654 (56, [M + Na + H]+, C45H58N15NaO23+; calc. 1199.3728); 1198.3634 (100, [M + Na]+, C45H57N15NaO23+; calc. 1198.3649). Anal. calc. for C45H57N15O23 (1176.03): C 45.96, H 4.89, N 17.87; found: C 45.87, H 5.03, N 17.83。
【０１４３】
6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアンモ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-m-クロロベンジリデンパロモマイシン (8.15)
方法A：153 mgの7の反応により8.15が104 mg与えられる(61%)。白色固体。M.p. 76°(softens)- 95°. Rf (ヘキサン/AcOEt 1 :1 ) 0.60. [α]25D = +99.4 (c = 0.20, CHCl3). HR-Maldi-MS (3- HPA): 1158.2693 (35, [M + K]+, C42H5°ClKN15O20+; calc. 111158.2682); 1144.2897 (44, [M + Na + 2 H]+, C42H52ClN15NaO20+; calc. 1144.3099); 1143.2983 (46, [M + Na + H]+, C42H51ClN15NaO20+; calc. 1143.3021); 1142.2934 (100, [M + Na]+, C42H5°ClN15NaO20+; calc. 1142.2943)。
【０１４４】
6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'-ペンタアジド-4',6'-O-o-ニトロベンジリデンパロモマイシン (8.16)
方法B：91 mgの7の反応により8.16が30 mg与えられる(29%)。
【０１４５】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'-ペンタアジド-4',6'-O-p-トリフルオロメチルベンジリデンパロモマイシン (8.17)
方法B：89 mgの7の反応により8.17が75 mg与えられる(73%)。白色固体。M.p. 71°(softens)-115°. Rf(ヘキサン/AcOEt 1 :1) 0.58. M.p. 71-105°. [α]25D = +98.2 (c = 0.15, CHCl3). HR-Maldi-MS (3-HPA): 1192.2894 (50, [M + K]+, C43H50F3KN15O20+; calc. 1192.2946); 1177.3200 (52, [M + Na + H]+, C43H51F3N15NaO20+; calc. 1177.3285); 1176.3182 (100, [M + Na]+, C43H50F3N15NaO20+; calc. 1176.3201 ). Anal. calc. for C43H50F3N15O200.5CH3CO2CH2CH3 (1197.99): C 45.12, H 4.54, N 17.54; found: C 44.90, H 4.63, N 17.29。
【０１４６】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'-ペンタアジド-4',6'-O-p-ジメチルアミノベンジリデンパロモマイシン (8.18)
方法B：38 mgの7の反応により8.18が75 mg与えられる(42%)。黄色がかった固体。Rf (シクロヘキサン/AcOEt 1:1 ) 0.48. HR-Maldi-MS (3-HPA): 1168.3509 (48, [M + K + H]+, C44H57KN16O20+; calc. 1168.3572); 1167.3484 (86, [M + K]+, C44H56KN16O20+; calc. 1167.3494); 1152.3798 (47, [M + Na + H]+, C44H57N16NaO20+; calc. 1152.3833); 1151.3769 (89, [M + Na]+, C44H56N16NaO20+; calc. 1151.3754); 1143.4066 (100, [M - CH3 + Na + 7 H]+, C43H60N16NaO20+; calc. 1143.4067); 1130.3905 (46, [M + 2 H]+, C44H58N16O20+; calc. 1130.4013); 1129.3858 (95, [M + H]+, C44H57N16O20+; calc. 1129.3935)。
【０１４７】
6,3',2",5",3"',4'"-Ηexa-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'- ペンタアジド-4',6'-O-1-ナフチリデンパロモマイシン (8.19)
方法A：195 mgの7の反応により8.19が157 mg与えられる(71%)。白色固体。Rf (ヘキサン/AcOEt 1 :1 ) 0.55. M.p. 77°(softens)-115°. [α]25D = +115.5 (c = 0.21 , CHCl3). HR-Maldi-MS (3-HPA): 1175.3224 (46, [M + K + H]+, C46H54KN15O20+; calc. 1175.3307); 1174.3203 (82, [M + K]+, C46H53KN15O20+; calc. 1174.3228); 1159.3523 (56, [M + Na + H]+, C46H54N15NaO20+; calc. 1159.3567); 1158.3489 (100, [M + Na]+, C46H53N15NaO20+; 0 calc. 1158.3489). Anal. calc. for C46H53N15O20.0.2CH3CO2CH2CH3 (1153.62): C 48.72, H 4.77, N 18.21 ; found: C 48.76, H 4.89, N 17.77。
【０１４８】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"- ペンタアジド-4',6'-O-2-ナフチリデンパロモマイシン (8.20)
方法B：80 mgの7の反応により8.20が60 mg与えられる(66%)。Rf (ヘキサン/AcOEt 1 :1 ) 0.64。
【０１４９】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'- ペンタアジド-4',6'-O-2-フラニリデンパロモマイシン (8.21)
方法A：146 mgの7の反応により8.21が91 mg与えられる(58%)。薄いオレンジ色の固体。Rf (ヘキサン/AcOEt 1:1) 0.60. M.p. 98°(softens)-105°. [α]25D = +117.2 (c = 0.11 , CHCl3). HR-Maldi-MS (3- HPA): 1115.2929 (40, [M + K + H]+, C40H50KN15O21+; calc. 1115.2943); 1 114.2916 (75, [M + K]+, C40H49KN15O2I+; calc. 1114.2865); 1099.3154 (50, [M + Na + H]+, C40H50N15NaO21+; calc. 1099.3203); 1098.3129 (100, [M + Na]+, C40H49N15NaO21+; calc. 1098.3125). Anal. calc. for C40H49N15O21 (1075.91 ): C 44.65, H 4.59, N 19.53; found: C 44.74, H 4.59, N 19.05。
【０１５０】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"- ペンタアジド-4',6'-O-2-チオフェニリデンパロモマイシン (8.22)
方法A：80 mgの7の反応により8.22が37 mg与えられる(42%)。白色固体。HR-Maldi-MS (3-HPA): 1130.2660 (52, [M + K]+, C40H49KN15O20S+; calc. 1130.2636); 1115.2904 (50, [M + Na + H]+, C40H50N15NaO20S+; calc. 1115.2975); 1114.2864 (100, [M + Na]+, C40H49N15NaO20S+; calc. 1114.2897). Anal. calc. for C40H49N15O20S (1091.98): C 44.00, H 4.52, N 19.24; found: C 43.86, H 4.61 , N 19.23。
【０１５１】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"- ペンタアジド-4',6'-O -エチリデンパロモマイシン (8.23)
方法A：21 mgの7の反応により8.23が18 mg与えられる(84%)。白色固体。Rf (ヘキサン/AcOEt 1 :1) 0.48. HR-Maldi- MS (3-HPA): 1047.3167 (46, [M + Na + H]+, C37H50N15NaO20+; calc. 1047.3254); 1046.3153 (100, [M + Na]+, C37H49N15NaO20+; calc. 1046.3176)。
【０１５２】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"- ペンタアジド-4',6'-O-(2-フェニル)-エチリデンパロモマイシン (8.24)
方法A：116 mgの7の反応により8.24が97 mg与えられる(76%)。白色固体。M.p. 90°(softens)- 96°. Rf (ヘキサン/AcOEt 1 :1 ) 0.46. [α]25D = +90.0 (c = 0.105, CHCl3). HR-Maldi-MS (3-HPA): 1138.3234 (39, [M + K]+, C43H53KN15O20+; calc. 1138.3228); 1123.3511 (53, [M + Na + H]+, C43H54N15NaO20+; calc. 1123.3567); 1122.3475 (100, [M + Na]+, C43H53N15NaO20+; calc. 1122.3489)。
【０１５３】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"- ペンタアジド-4',6'-O-(3-フェニル)-プロピリデンパロモマイシン (8.25)
方法A：177 mgの7の反応により8.25が189 mg与えられる(96%)。白色固体。Rf (ヘキサン/AcOEt 1 :1) 0.50. M.p. 66°(softens)-86°. [α]25D = +108.7 (c = 0.24, CHCl3). HR-Maldi-MS (3- HPA): 1153.3457 (27, [M + K + H]+, C44H56KN15O20+; calc. 1153.3463); 1152.3403 (49, [M + K]+, C44H55KN15O20+; calc. 1152.3385); 1137.3650 (54, [M + Na + H]+, C44H56N15NaO20+; calc. 1 137.3724); 1136.3619 (100, [M + Na]+, C44H55N15NaO20+; calc. 1 136.3640)。
【０１５４】
6,3',2",5",3"',4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"- ペンタアジド-4',6'-O-(3-フェニル)-プロペニリデンパロモマイシン (8.26)
方法A：75 mgの7の反応により8.26が37 mg与えられる(44%)。
【０１５５】
6,3',2",5",3'",4'"-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-シクロヘキシルメチリデンパロモマイシン (8.27)
方法A：157 mgの7の反応により8.27が83 mg与えられる(49%)。白色固体。
【０１５６】
4.13-4.27の形成のための典型的手順
CH2Cl2/MeOH 1/4中の8.13-8.27の溶液を、NaOMe (12equ.)と処理し、25°Cで撹拌した。混合物をAmberlite IR-120(hT)で急冷し、濾過し、乾燥させた。FC (CHCl3/AcOEt 1:1 → CHCb/AcOEt/MeOH)により、4.13-4.27が与えられた。
【０１５７】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-4',6'-O-3,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン (4.13)
19 mgの8.13の反応により4.13が26 mg与えられる(98%)。白色固体。Rf (CHC3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.21。
【０１５８】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-3,4,5-トリメトキシベンジリデンパロモマイシン (4.14)
47 mgの8.14の反応により4.13が30 mg与えられる(81%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.22。
【０１５９】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-m- クロロベンジリデンパロモマイシン (4.15)
70 mgの8.15の反応により4.15が54 mg与えられる(quant.)。白色固体。White solid. Rf (CHC3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.45。
【０１６０】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-4',6'-O-o-ニトロベンジリデンパロモマイシン (4.16)
54 mgの8.16の反応により4.16が26 mg与えられる(62%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.51。
【０１６１】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-p-トリフルオロメチルベンジリデンパロモマイシン (4.17)
57 mgの8.17の反応により4.17が42 mg与えられる(94%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/MeOH 3:3:0.5) 0.44. HR-Maldi- 0 MS (3-HPA): 924.2549 (100, [M + Na]+, C31H38F3N15NaO14+; calc. 924.2567)。
【０１６２】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"'-ペンタアジド-4',6'-O-p-ジメチルアミノベンジリデンパロモマイシン (4.18)
39 mgの8.18の反応により4.18が22 mg与えられる(73%)。白色固体。Rf (CΗCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.21。
【０１６３】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-1-ナフチリデンパロモマイシン (4.19)
107 mgの8.19の反応により4.19が75 mg与えられる(90%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.52。
【０１６４】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-2-ナフチリデンパロモマイシン (4.20)
60 mgの8.20の反応により4.20が30 mg与えられる(65%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.50. ESI-MS: 906.0 (100, [M + Na]+, C34H41N15NaO14+; calc. 906.3). Anal. calc. for C34H41N15O14 (883.79): C 46.21 , H 4.68, N 23.77; found: C 46.44, H 4.54, N 23.37。
【０１６５】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-2-フラニリデンパロモマイシン (4.21)
73 mgの8.21の反応により4.21が48 mg与えられる(86%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.38。
【０１６６】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6"'-ペンタアジド-4',6'-O-2-チオフェニリデンパロモマイシン (4.22)
60 mgの8.22の反応により4.22が37 mg与えられる(80%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.40。
【０１６７】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-エチリデンパロモマイシン (4.23)
29 mgの8.23の反応により4.23が20 mg与えられる(92%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.24。
【０１６８】
1,3,2',2"',6"'-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-(2-フェニル)-エチリデンパロモマイシン (4.24)
79 mgの8.24の反応により4.24が55 mg与えられる(90%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.46。
【０１６９】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"''ペンタアジド-4',6'-O-(3-フェニル)-プロピリデンパロモマイシン (4.25)
127 mgの8.25の反応により4.25が75 mg与えられる(76%)。白色固体。Rf (CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.45。
【０１７０】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-(3-フェニル)-プロペニリデンパロモマイシン (4.26)
41 mgの8.26の反応により4.26が24 mg与えられる(76%)。白色固体。Rf(CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.48。
【０１７１】
1,3,2',2"',6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2"',6'"-ペンタアジド-4',6'-O-シクロヘキシルメチリデンパロモマイシン (4.27)
46 mgの8.27の反応により4.27が26 mg与えられる(74%)。白色固体。Rf(CHCl3/AcOEt/CH3OH 3:3:0.5) 0.37。
【０１７２】
最終脱保護化のための典型的手順
N2下で、THF中の4.13-4.27の溶液を、0.1 M aq. NaOH (2 equ.)およびTHF中の1 M PMe3(6 equ.)と処理し、60°Cで撹拌した。乾燥およびFC (THF, THF/MeOH, MeOH, MeOH/25% aq. NH3 49:1 → MeOH/25% aq. NH3 4:1 )により、5.13-5.27が与えられた。
【０１７３】
4',6'-O-3,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン (5.13)
24 mgの4.13の反応により5.13が19 mg与えられる(92%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.34. IR (ATR): 3179w (br.), 2896w, 1597m, 1463w, 1431w, 1384w, 1338w, 1304w, 1200w, 1150s, 1087s, 1047s. HR-Maldi-MS: 765.3554 (36, [M + 2 H]+, C32H55N5O16+; calc. 765.3644); 764.3546 (100, [M + H]+, C32H54N5O16+; calc. 764.3560)。
【０１７４】
4',6'-O-3,4,5-トリメトキシベンジリデンパロモマイシン (5.14)
30 mgの4.14の反応により5.14が21 mg与えられる(82%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.19. IR (ATR): 3352W, 3289w, 3182w (br.), 2918w, 1593w, 1506w, 1462w, 1421 w, 1380w 1330w, 1236 w, 1122s, 1026s, 994s. HR-Maldi-MS: 795.3686 (40, [M + 2 H]+, C33H57N5O17+; calc. 795.3749); 794.3651 (100, [M + H]+, C33H56N5O17+; calc. 794.3651)。
【０１７５】
4',6'-O-m-クロロベンジリデンパロモマイシン (5.15)
52 mgの4.15の反応により5.15が46 mg与えられる。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.33. HR-Maldi-MS: 740.2943 (43, [M + 3 H]+, C30H51ClN5O14+; calc. 740.3121); 739.2982 (38, [M + 2 H]+, C30H5°ClN5O14+; calc. 739.3043); 738.2945 (100, [M + H]+, C30H49ClN5O14+; calc. 738.2959)。
【０１７６】
4',6'-O-o-ニトロベンジリデンパロモマイシン (5.16)
20 mgの4.16の反応により5.16が17 mg与えられる(quant.)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.22. IR (ATR): 3179w (br.), 2895w, 1610w, 1528m, 1452w, 1349s, 1099s, 1048s, 1028s. HR-Maldi-MS: 771.2961 (31 , [M + Na]+, C30H48N6NaO16+; calc. 771.3024); 750.3213 (46, [M + 2 H]+, C30H50N6O16+; calc. 750.3283); 749.3186 (100, [M + H]+, C30H49N6O16+; calc. 749.3205)。
【０１７７】
4',6'-O-p-トリフルオロメチルベンジリデンパロモマイシン (5.17)
31 mgの4.17の反応により5.17が26 mg与えられる(98%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.32. IR (ATR): 3354w (br.), 2921 w, 1583w, 1444w, 1378w, 1325s, 1122s, 1083s, 1066s, 1017s, 927m. HR-Maldi-MS: 773.3235 (36, [M + 2 H]+, C31H50F3N5O14+; calc. 773.3306); 772.3210 (100, [M + H]+, C31H49F3N5O14+; calc. 772.3223). 19F NMR: - 60.85。
【０１７８】
4',6'-O-p-ジメチルアミノベンジリデンパロモマイシン (5.18)
16 mgの4.18の反応により5.18が13.5 mg与えられる(99%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.27. IR (ATR): 3172w (br.), 2899w, 1615w, 1528w, 1454w, 1378w, 1360w, 1100s, 1048s, 996s. HR-Maldi-MS: 748.3811 (38, [M+ 2 H]+, C32H56N6O14+; calc. 748.3855); 747.3774 (100, [M + H]+, C32H55N6O14+; calc. 747.3771)。
【０１７９】
4',6'-O-1-ナフチリデンパロモマイシン (5.19)
49 mgの4.19の反応により5.19が39 mg与えられる(93%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.32. IR (ATR): 3345w (br.), 2888w, 1599w, 1532w, 1509Iv1 1460w, 1392w, 1339w, 1272w, 1246w, 1104s, 1054s, 1028s, 996s, 972s, 920s. HR-Maldi-MS: 755.3519 (40, [M + 2 H]+, C34H53N5O14+; calc. 755.3589); 754.3495 (100, [M + H]+, C34H52N5O11+; calc. 754.3511)。
【０１８０】
4',6'-O-2-ナフチリデンパロモマイシン (5.20)
19 mgの4.20の反応により5.20が12 mg与えられる(74%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.36. IR (ATR): 3180w (br.), 2895w, 1600w, 1530w, 1467w, 1374w, 1346w, 1048s, 1026s HR-Maldi-MS: 776.3309 (56, [M + Na]+, C34H51N5NaO14+; calc. 776.3330); 755.3538 (36, [M + 2 H]+, C34H53N5O14+; calc. 755.3589); 754.3509 (100, [M + H]+, C34H52N5O14+; calc. 754.3511); 594.2633 (41 , [M - ring IV + 2 H]+, C28H40N3O11+; calc. 594.2663); 462.2238 (63, [M - ring III - ring IV + 2 H]+, C23H32N3O7+; calc. 462.2240)。
【０１８１】
4',6'-O-2-フラニリデンパロモマイシン (5.21)
49 mgの4.21の反応により5.21が39 mg与えられる(94%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.21. IR (ATR): 3356w (br.), 2877W, 1664w, 1589w, 1506w, 1460w, 1460w, 1397w, 1359w, 1341 w, 1135s, 1106s, 1026s, 994s, 918s. HR-Maldi-MS: 716.2997 (31 , [M + Na]+, C28H47N5NaO15+; calc. 716.2966); 695.3146 (34, [M + 2 H]+, C28H49N5O15+; calc. 695.3225); 694.3128 (100, [M + H]+, C28H48N5O15+; calc. 694.3141)。
【０１８２】
4',6'-O-2-チオフェニリデンパロモマイシン (5.22)
42 mgの4.22の反応により5.22が29 mg与えられる(82%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.37. IR (ATR): 3353w, 3287w, 3174w (br.), 2909w, 1595w, 1543w, 1445w, 1377w, 1332w, 1243w, 1100S, 1053s, 1023s, 974s, 926s. HR-Maldi-MS: 733.2763 (33, [M + Na + H]+, C28H48N5NaO14S+; calc. 733.2816); 732.2730 (100, [M + Na]+, C28H47N5NaO14S+; calc. 732.2738)。
【０１８３】
4',6'-O-エチリデンパロモマイシン (5.23)
18 mgの4.23の反応により5.23が15 mg与えられる(90%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.27. IR (ATR): 3286w (br.), 2888w, 1664w, 1571 w, 1472w, 1392w, 1341 w, 1102s, 1017s, 995s, 937w, 907 w. HR-Maldi-MS: 665.3048 (31 , [M + Na + H]+, C25H48N5NaO14+; calc. 665.3095); 664.3018 (100, [M + Na]+, C25H47N5NaO14+; calc. 664.3012)。
【０１８４】
4',6'-O-(2-フェニル)-エチリデンパロモマイシン (5.24)
52 mgの4.24の反応により5.24が39 mg与えられる(89%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1) 0.33. HR-Maldi-MS: 741.3349 (37, [M + Na + H]+, C31H52N5NaO14+; calc. 741.3408); 740.3312 (100, [M + Na]+, C31H51N5NaO14+; calc. 740.3330)。
【０１８５】
4',6'-O-(3-フェニル)-プロピリデンパロモマイシン (5.25)
52 mgの4.25の反応により5.25が35 mg与えられる(79%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.27. IR (ATR): 3356w (br.), 2870w, 1740w, 1594w, 1495w, 1454w, 1386w, 1119s, 1016s, 931s. 1H- NMR (500 MHz, D2O, assignment based on a HSQC spectrum): 7.40-7.37 (m, 2 arom. H); 7.33-7.27 (m, 3 arom. H); 5.47 (d, J = 3.8, H-C(I')); 5.37 (d, J = 2.5, H- C(T)); 5.00 (d, J = 1.8, H-C(I'")); 4.68 (f, J = 5.3, PhCH2CH2CH); 4.46 (dd, J = 6.6, 5.0, H-C(3")); 4.31 (dd, J = 4.9, 2.5, H-C(2")); 4.18-4.13 (m, 2 H, Ha-C(6'), H- C(4")); 4.07-4.04 (m, 2 H, H-C(5'"), H-C(3'")); 3.90-3.85 (m, 2 H, Ha-C(5"), H- C(5')); 3.78-3.65 (m, 4 H, H-C(3'), H-C(5), Hb-C(5"), H-C(4"')); 3.62 {t, J = 10.5, Hb-C(6')); 3.47 (t, J = 9.3, H-C(4)); 3.42 {t, J = 9.6, H-C(4')); 3.40 (f, J = 9.7, H-C(6); 3.17 (dd, J = 13.5, 8.5, Ha-C(6'")); 3.09-3.06 (m, 2 H, Hb-C(6'"), H-C(2'")); 2.93 (ddd, J = 12.2, 9.5, 4.1, H-C(3)); 2.86 (dd, J = 10.0, 3.8, H-C(2')); 2.82-2.75 (m, 2 H, H-C(I ), PhCH2CH2); 2.03-1.95 (m, 3 H, Heq-C(2), PhCH2CH2); 1.25 (Q1 J = 12.4, Hax-C(2)). HR-Maldi-MS: 755.3505 (38, [M + Na + H]+, C32H54N5NaO14+; calc. 755.3565); 754.3467 (100, [M + Na]+, C32H53N5NaO14+; calc. 754.3481); 732.3642 (38, [M + H]+, C32H54N5O14+; calc. 732.3667)。
【０１８６】
4',6'-O-(3-フェニル)-プロペニリデンパロモマイシン (5.26)
24 mgの4.26の反応により5.26が19 mg与えられる(92%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH3 4:1 ) 0.34. IR (ATR): 3353w, 3288 w, 2915 w, 1593w, 1493w, 1451w, 1377w, 1336w, 1135s, 1115s, 1054s, 1022s, 994s, 970s. HR-Maldi-MS: 731.3519 (37, [M + 2 H]+, C32H53N5O14+; calc. 731.3589); 730.3492 (100, [M + H]+, C32H52N5O14+; calc. 730.3511)。
【０１８７】
4',6'-O-シクロヘキシルメチリデンパロモマイシン (5.27)
26mgの4.27の反応により5.27が16 mg与えられる(73%)。白色固体。Rf (MeOH/25% aq. NH34:1 ) 0.25. IR (ATR): 3127m, 3029m, 2847 w, 1753w, MMw, 1613w, 1514w, 1441w, 1399m, 1101s, 996s. HR-Maldi-MS: 711.3859 (34, [M + 2 H]+, C30H57N5O14+; calc. 711.3902); 710.3822 (100, [M + H]+, C30H56N5OH+; calc. 710.3824)。
【０１８８】
4'-および6'-O-エーテル誘導体の合成
【化１３】
2010517951.tif 000014
i) THF中の2M BH3 Me2S、CH2Cl2中の1 M Bu2BOTf、CH2Cl2, -5°, 61%; 
ii) 0.02N MeONa, MeOH, 26°; 86%; 
iii) 0.1 M aq. NaOH, THF中の1 M PMe3、THF, 50°; 79%.
【０１８９】
6,3',2'',5'',3"'4"'-ヘキサ-O-アセチル-1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"' ペンタアジド-4'-O-ベンジルパロモマイシン (9)
N2下で、乾燥CH2Cl2 (25 ml, 上で乾燥CaH2)中の6 (1.8 g, 1.66 mmol)の溶液を-5°Cに冷却し、THF中の2M BH3-Me2S (8.3 ml, 16.6 mmol)およびCH2Cl2中の1M Bu2BOTf (0.83 ml, 0.83 mmol)と処理し、5時間撹拌した。sat. NaHCO3 soln.で希釈した後、前記層を分離した。有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (AcOEt/シクロヘキサン 9:11)により、9 (1.1 g, 61%)が与えられた。Rf (AcOEt/シクロヘキサン1 :1 ) 0.41. M. p. 82-86 °C. [α]25D = +98.2 (c = 0.13, MeOH). IR (ATR): 2940w, 2872 w, 2100s, 1740s, 1492w, 1453w, 1430w, 1371m, 1215s, 1027s. HR-ESI-MS: 1110.3489 (100, [M + Na]+, C42H53N15NaO20+; calc. 1110.3469). Anal, calc. for C42H53N15O20 (1087.97): C 46.37, H 4.91 , N 19.31 , O 29.41 ; found: C 46.27, H 4.82, N 19.02, 0 29.38。
【０１９０】
1,3',2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4'-O-ベンジルパロモマイシン (10)
N2下で、MeOH (2 ml)中の0.02N MeONa中における9 (100 mg, 0.09 mmol)の溶液を26°Cで12時間撹拌し、Amberlite-IR 120 (H+ form)で中和した。濾過、乾燥、およびFC (CHCb/AcOEt/MeOH 10:17.5:2)により、10 (65 mg, 86%)が与えられた。白色固体。Rf (CHCb/AcOEt/MeOH 4:9:1 ) 0.45. M.p. 98 °C. [α]25D = +106.1 (c = 0.14, MeOH). IR (KBr): 3418s, 2928m, 2107s, 1633m, 1497w, 1454m, 1384m, 1332m, 1261s, 1114m, 1068m, 1029s, 939 w, 749w. HR-ESI-MS: 858.2835 (100, [M + Na]+, C30H4IN15NaO14+; calc. 858.2855). Anal. calc. for C3oH4iN15O14.0.3AcOEt (862.17): C 43.46, H 5.07, N 24.37; found: C 43.13, H 5.03, N 24.47。
【０１９１】
4'-O-ベンジルパロモマイシン (11)
THF (3 ml)中の10 (30 mg, 0.04 mmol)の溶液を、0.1 M aq. NaOH (1 ml)およびTHF中の1 M PMe3と処理し、50°Cで2時間撹拌した。乾燥、およびFC(MeOH/25% aq. NH3 4:3)により、11 (20 mg, 79%)が与えられた。白色固体。Rf (CHCl3/MeOH/25%aq. NH3 1 :3:4) 0.55. [α]25D = +36.3 (c = 0.11 , H2O). IR (KBr): 3418s, 2925m, 2852w, 1631m, 1537w, 1452w, 1397w, 1384m, 1298 w, 1123s, 1051s, 947w. HR-ESI-MS: 728.3269 (100, [M + Na]+, C30H51N5NaO14+; calc. 728.3330); 706.3493 (100, [M + H]+, C30H52N5O14+; calc. 706.3511)。
【０１９２】
スキーム４
【化１４】
2010517951.tif 000015
i) NaH, p-MeOBnCl, Bu4NI, THF, 0-26°, 48%; 
ii) NaCNBH3, Et2O中の0.7M HCl、4 オングストローム MS, THF, 0°, 33%; 
iii) DDQ, CH2Cl2/H2O/i-PrOH 20:1 :1 , 0-26°, 59%; 
iv) 0.1 M aq. NaOH THF中の1 M PMe3 , THF, 50°, 85%.
【０１９３】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4',6'-O-ベンジリデン- 6,3',2",5",3'",4'"-ヘキサキス-O-(4-メトキシベンジル)パロモマイシン (12)
アルゴン下で、THF (20 ml)中の4.1 (810 mg, 0.97 mmol)の溶液を、NaH (637 mg、油中50- 60%懸濁物、ca 13.3 mmol)、p-MeOBnCl (0.90 ml, 6.66 mmol)、およびBu4NI (110 mg)と処理し、0°Cで4時間、および26°Cで20時間撹拌し、0°Cに冷却し、H2Oで部分ごとに希釈した。乾燥後、水層をAcOEt (3 x 20 ml)で抽出した。混合有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (AcOEt/シクロヘキサン 1 :4)により、12 (722 mg, 48%)が与えられた。白色固体。Rf (AcOEt/シクロヘキサン 1 :1 ) 0.46. M.p. 54.6-56.4 °C (softens at 46 °C). [α]25D = +75.8 (c = 0.40, CHCl3). IR (CHCi3): 3021 w, 3006w, 2937w, 2839w, 2867w, 2106s, 1612m, 1586 w, 1514s, 1465w, 1442w, 1368w, 1302w, 1250s, 1174m, 1091m, 1035m, 847w, 823w. HR-ESI-MS: (100, [M + Na]+, C78H87N15NaO20+; calc. 1576.6149). Anal. calc. or C78H87N15O20 (1554.61 ): C 60.26, H 5.64, N 13.51 ; found: C 60.23, H 5.81 , N 13.31。
【０１９４】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-6'-O-ベンジル- 6,3',2",5",3'",4'"-ヘキサキス-O-(4-メトキシベンジル)パロモマイシン (13)
N2下で、THF (15 ml)中の12 (677 mg, 0.44 mmol)の溶液を、4オングストローム分子ふるいで処理し、1時間撹拌し、0°Cに冷却し、0°CでNaCNBH3 (443 mg, 7.05 mmol)と処理し、その後1時間Et2O(14 ml, 9.80 mmol)中の0.7M HClと一滴ずつ処理し（溶液のpHを示すためにメチルオレンジを添加した）、4時間撹拌した。飽和NaHCO3溶液との中和および乾燥後、水層をAcOEt (3 x 25 ml)で抽出した。混合有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (AcOEt/シクロヘキサン 3:7)により、13 (219 mg, 33%)が与えられた。白色固体。Rf (AcOEt/シクロヘキサン1 :1) 0.42. M.p. 52-55 °C. [α]25D = +66.9 (c = 0.37, CHCl3). IR (CHCl3): 3673w, 3020s, 2937w, 2839w, 2106s, 1612m, 1583w, 1514m, 1465w, 1438w, 1366w, 1302w, 1250m, 1174w, 1118w, 1072w, 1035m, 901 w. HR-ESI-MS: 1578.6274 (100, [M + Na]+, C78H89N15NaO20+; calc. 1578.6306); 1529.6556 (84, [M - N2 + 2H]+, C78H91N13NaO20+; calc. 1529.6503); 1528.6536 (94, [M - N2 + H]+, C78H90N13NaO20+; calc. 1528.6425). Anal. calc. for C78H89N15O20 (1556.65): C 60.18, H 5.76, N 13.50; found: C 60.05, H 5.64, N 13.47。
【０１９５】
1,3,2',2'",6'"-ペンタデアンモ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-6'-O-ベンジルパロモマイシン (14)
N2下で、CH2Cl2/H2O/i-PrOH 20:1:1 (7 ml)中の13 (107 mg, 0.07 mmol)の溶液を、0°CでDDQ (103 mg, 0.45 mmol)と処理し、2時間撹拌し、26°Cで24時間撹拌した。混合物の色が、無色から緑色、その後明るいオレンジ色に変化した。飽和NaHCO3溶液との中和および乾燥後、水層をAcOEt (3 x 25 ml)で抽出した。混合有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、乾燥させた。FC (CHCls/AcOEt/MeOH 10:17.5:2)により、14 (34 mg, 59%)が与えられた。白色固体。Rf (CHCls/AcOEt/MeOH 4:9:1) 0.68. M.p. 89.1-92.9 °C. [α]25D = +97.2 (c = 0.12, MeOH). IR (KBr): 3434s, 2929w, 2107s, 1635w, 1500w, 1401w, 1384m, 1331w, 1262m, 1140m, 1077m, 1036m, 743w. HR-ESI-MS: 858.2836 (100, [M + Na]+, C30H41N15NaO14+; calc. 858.2855). Anal. calc. for C30H41N15O14-CH3OH (867.78): C 42.91 , H 5.23, N 24.21 ; found: C 42.73, H 4.96, N 24.25。
【０１９６】
6'-O-ベンジルパロモマイシン (15)
THF (3 ml)中の14 (25 mg, 0.03 mmol)の溶液を、0.1 M aq. NaOH (1 ml)およびTHF (0.22 ml, 0.22 mmol)中の1 M PMe3と処理し、50°Cに2時間加熱した。乾燥およびFC (MeOH/25% aq. NH3 4:3)により、15 (18 mg, 85%)が与えられた。白色固体。Rf (CHCls/MeOH/25% aq. NH3 1 :4:3) 0.56. M.p. 165°C (dec). [α]25D = +28/1 (c = 0 08' H2°)- IR (KBr): 3420s, 2925m, 1633m, 1595m, 1491w. 1454w, 1397w, 1384m, 1252w, 1151m, 1092m, 1026s, 1051s, 741 w. HR-ESI-MS: 728.3269 (100, [M + Na]+, C30H5IN5NaO14+; calc. 728.3330); 706.3493 (100, [M + H]+, C30H52N5O14+; calc. 706.3511). Anal. calc. for C30H51N5O14.6 AcOH.3 H2O (1120.1 I f: C 45.04, H 7.29, N 6.25; found: C 44.85, H 6.72, N 6.68。
【０１９７】
スキーム５
【化１５】
2010517951.tif 000016
【化１６】
2010517951.tif 000017
i) a) TsOH.H2O, CH2Cl2, CH3OH, N2, 25°, 79%; 
b) MMTrCl, NaH, DMF, N2, 25°, 65%; 
ii) R2Cl, NaH, DMF, N2, 25°; 
iii) DDQ, CH2Cl2/H2O/MeOH 20:1 :0.4, 25°; 
iv) 0.1 M aq. NaOH, THF中の1 M PMe3, THF, N2, 65°.
【０１９８】
エーテル16、17a-d（スキーム５）の形成のための典型的手順
(GP 1)：N2下で、DMF (c=0.1)中のアルコール(1 equ.)溶液を、NaH（ヒドロキシル基あたり1.5 equ.、油中50-60%懸濁物）と処理し、その後塩化（または臭化）アルキル（ヒドロキシル基あたり1.5 equ.）およびBu4NI (0.1 equ.)により処理し、25°Cで4から24時間撹拌し、H2OおよびEt2Oで希釈した。相の分離後、水層をEt2O (3x)で抽出した。混合有機層を、乾燥し(MgSO4)、乾燥させた。FC。
【０１９９】
1,3,2',2''',6'''-ペンタデアミノ-1,3,2',2''',6'''-ペンタアジド-6,3',2'',5'',3"',4'''-ヘキサ-O- p-メトキシベンジル-4'-ヒドロキシ-6'-O-モノメトキシトリチルパロモマイシン (16)
N2下で、MeOH / CH2Cl2 (10:1 , 5.5 ml)中の12 (400 mg, 0.256 mmol)溶液を、TsOH H2O (49 mg, 0.3 mmol)と処理し、25°Cで3時間撹拌し、1 N NaOHで希釈した。相の分離後、水層をCH2Cl2 (3 x 5 ml)で抽出した。混合有機層を、乾燥し(MgSO4)、乾燥させた。FCにより、白色個体1,3,2',2'",6"'-ペンタデアミノ-1,3,2',2'",6"'-ペンタアジド-6',4'-ジヒドロキシ-6,3',2",5",3'",4'"-ヘキサ-O-p-メトキシベンジルパロモマイシン(296 mg, 79%)、Rf (AcOEt/シクロヘキサン1:1 ) 0.37が与えられ、GP 1により反応させた。反応により、16 (1.319 mg, 65%)が与えられた。Rf (AcOEt/シクロヘキサン3:7) 0.58。白色個体、m.p. 60-65°C. [α]25D = +96.4 (c = 0.12, CHCl3). IR (ATR): 2927w, 2103s, 1611m, 1581w, 1513s, 1460w, 1362 w, 1303w, 1249s, 1173m, 1033s. HR-Maldi-MS: 1776.6813 (92, [M + K]+, C91H99N15KO2I+; calc. 1776.6777); 1760.7034 (82, [M + Na]+, C91 H99N15NaO2I+; calc. 1760.7038). Anal. calc. for C91H99N15O21 (1738.85): C 62.86, H 5.74, N 12.08; found: C 63.25, H 6.06, N 11.55。
【０２００】
1,3,2',2''',6'''-ペンタデアミノ-1,3,2',2''',6'"-ペンタアジド-6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O- p-メトキシベンジル-4'-O-p-クロロベンジル-6'-O-モノメトキシトリチルルパロモマイシン (17a)
(GP 1) 16の反応により、17a (518 mg, 96%)が与えられた。Rf (AcOEt/シクロヘキサン3:7) 0.54。白色個体、m.p. 66-71°C. [α]25D = +94.1 (c = 0.08, ChCl3). IR (atr): 2932w, 2099s, 1611m, 1585w, 1512s, 1462w, 1359w, 1301w, 1245s, 1173m, 1110m, 1068m, 1031s. HRMaldi-MS: 1900.6892 (57, [M + K]+, C98H104ClN15KO21+; calc. 1900.6857); 1884.7151 (84, [M + Na]+, C98H104N15ClNaO2-I+; calc. 1884.7117). Anal. calc. for C100H109N15O21 1.5 H2O (1890.44): C 62.26, H 5.71 , N 11.11 ; found: C 62.39, H 5.83, N 10.73。
【０２０１】
1,3,2',2''',6'''-ペンタデアミノ-1,3,2',2''',6'''-ペンタアジド-6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O- p-メトキシベンジル-4'-O-p-(トリフルオロメチル)ベンジル-6'-O- モノメトキシトリチルパロモマイシン (17b)
(GP 1) 16の反応により、17b (441 mg, 85%)が与えられた。Rf (AcOEt/シクロヘキサン3:7 x2) 0.54。白色個体、m.p. 60-76°C. [α]25D = +70.3 (c = 0.26, ChCl3). IR (ATR): 2934w, 2100s, 1611m, 1586w, 1512s, 1463w, 1362w, 1325m, 1302m, 1245s, 1173m, 1111m, 1065s, 1030s. HR-Maldi-MS: 1934.7083 (84, [M + K]+, C99H104F3N15KO21+; calc. 1934.7120); 1918.7333 (80, [M + Na]+, C99H104N15F3NaO21+; calc. 1918.7381 ). Anal. calc. for C99H104N15O21F3 (1896.97): C 62.68, H 5.53, N 11.08; found: C 62.42, H 5.62, N 10.66。
【０２０２】
1,3,2',2''',6'''-ペンタデアミノ-1,3,2',2''',6'''-ペンタアジド-6,3',2'',5'',3''',4"'-ヘキサ-O-p-メトキシベンジル-4'-O-プロピルフェニル-6'-O-モノメトキシトリチルパロモマイシン (17c)
(GP 1) 16の反応により、17c (459 mg, 86%)が与えられた。Rf (AcOEt/シクロヘキサン3:7) 0.6。白色個体、m.p. 63-78°C. [α]25D = +56.9 (c = 0.65, CHCl3). IR (ATR): 2933w, 2099s, 1672w, 1611m, 1585w, 1512s, 1454w, 1363w, 1301 w, 1245s, 1174m, 1029s. HR-Maldi-MS: 1894.7513 (72, [M + K]+, C100H109N15KO21+; calc. 1894.7560); 1878.7773 (82, [M + Na]+, C91H99N15NaO21+; calc. 1878.7820). Anal. calc. for C100H109N15O21 (1857.02): C 64.68, H 5.92, N 11.31 ; found: C 65.08, H 5.71 , N 10.86。
【０２０３】
1,3,2',2''',6'''-ペンタデアミノ-1,3,2',2''',6'''-ペンタアジド-6,3',2'',5'',3''',4'''-ヘキサ-O- 5 p-メトキシベンジル-O-ベンジルオキシメチル-6'-O-モノメトキシトリチルルパロモマイシン (17d)
(GP 1) 16の反応により、17d (442 mg, 83%)が与えられた。Rf (AcOEt/シクロヘキサン3:7) 0.54。白色個体、m.p. 52-55°C. IR (ATR): 2933w, 2001s, 1611m, 1585w, 1513s, 1463 w, 1361w, 1301m, 1247s, 1174m, 1111m, 1068m, 1033s. HR-Maldi-MS: 1896.7326 (16, [M + Na]+, C99H107N15KO22+; calc. 1896.7352); 1880.7566 (22, [M + Na]+, C99H107N15NaO22+; calc. 1880.7613); 1866.7181 (65, [M - CH3O + K]+, C98H105N15KO21+; calc. 1866.7247); 1850.7403 (89, [M - CH3O + Na]+, C98H105N15NaO21+; calc. 1850.7507)。
【０２０４】
化合物19a-dを得るための保護誘導体の非保護化のための一般手順
(GP 2)：N2下で、CH2Cl2/MeOH/H2O 20:1 :0.4 (c=0.02)中の保護誘導体17 (1 equiv.)の溶液を、25°Cで12から24時間撹拌し、1N NaOHで中和し、AcOEtで希釈した。相の分離後、水層をEt2O (3x)で抽出した。混合有機層を、乾燥し(MgSO4)、乾燥させた。FC。THF/0.1 M NaOH 4:1 (c = 0.03)中のアジド化合物(1 equiv.)の溶液を、THF (アジド基あたり1.2 equiv.)中の1 M PMe3と処理し、50°Cで4から8時間撹拌した。乾燥後、FC。
【０２０５】
4'-p-クロロベンジルパロモマイシン (19a)
(GP 2) 17aの反応により、アジド中間体18a (120 mg, 54%)が白色固体として得られた。Rf (MeOH/CHCb/AcOEt 0.5:2:2) 0.29。最終化合物19a (47 mg, 86%)。Rf (MeOH/NH3aq. 8:2) 0.27。白色個体、m.p. 145°C (decomp.). [α]25D = +60.3 (c = 0.27, H2O). IR (atr): 3358m, 2915m, 1590w, 1454w, 1366w, 1088s, 1014s. HR-Maldi-MS: 762.2921 (100, [M + Na]+, C30H50lN5NaO14+; calc. 762.2940); 740.3110 (86, [M + H]+, C30H51ClN5O14+; calc. 740.3121)。
【０２０６】
4'-p-(トリフルオロメチル)ベンジルパロモマイシン (19b)
(GP 2) 17bの反応により、アジド中間体18b (130 mg, 80%)が白色固体として得られた。Rf (MeOH/CHCls/AcOEt 0.5:2:2) 0.26。最終化合物19b (84 mg, 87%)。Rf (MeOH/NH3aq. 8:2) 0.30。白色個体、m.p. 148°C (dec), [α]25D = +65.4 (c = 0.16, H2O). IR (ATR): 3156m, 2921m, 1551m, 1403m, 1326s, 1107s, 1064s, 1016s. HR-Maldi-MS: 796.3201 (72, [M + Na]+, C31H50F3N5NaO14+; calc. 796.3204); 774.3366 (100, [M + H]+, C31H51F3N5O14+; calc. 774.3385)。
【０２０７】
4'-p-(3-フェニルプロピル)パロモマイシン (19c)
(GP 2) 17cの反応により、アジド中間体18c (105 mg, 74%)が白色固体として得られた。Rf (MeOH/CHCls/AcOEt 0.5:2:2) 0.40。最終化合物19c (64 mg, 92%)。Rf (CHCls/MeOH/NHsaq. 1 :3:2) 0.47。白色個体、m.p. 179°C (dec), [α]25D = +63.0 (c = 0.12, H2O). IR (ATR): 3191w, 2920w, 1572w, 1495w, 1454w, 1381w, 1339w, 1015s. HR-Maldi-MS: 756.3648 (37, [M + Na]+, C32H55N5NaO14+; calc. 756.3643); 734.3805 (100, [M + H]+, C32H56N5O14+; calc. 734.3824)。
【０２０８】
4'-ベンジルオキシメチルパロモマイシン (19d)
(GP 2) 17dの反応により、アジド中間体18d (70 mg, 72%)が白色固体として得られた。Rf (MeOH/CHCl3/AcOEt 0.5:2:2) 0.31。最終化合物19d (36 mg, 72%)。Rf (CHCl3/MeOH/NH3aq. 1 :3:2) 0.36。白色個体、m.p. 143°C (decomp.). [α]25D = +48.9 (c = 0.24, H2O). IR (ATR): 3031m, 1622w, 1525W, 1429m, 1043s. HR-Maldi-MS: 758.3428 (20, [M + Na]+, C31H53N5NaO15+; calc. 758.3436); 736.3598 (100, [M + H]+, C31H54N5O15+; calc. 736.3616)。
【０２０９】
スキーム６
【化１７】
2010517951.tif 000018
i) 1 M BH3 THF, CH2Cl2中の1 M Bu2BOTf , -5°, 59%; 
ii) 0.1 M aq. NaOH, THF中の1 M PMe3, THF, 50°; 74%.
【０２１０】
1,3,2',2''',6'"-ペンタデアンモ-1,3,2',2'",6'"-ペンタアジド-4'-O-p-メトキシベンジルパロモマイシン (18e)
N2下で、-5°Cに冷却した4.2 (204 mg, 0.236 mmol)を、1 M BH3 THF (2.36 ml)およびCH2Cl2 (0.236 ml)中の1M Bu2BOTfと処理し、-5°Cから0°Cで50分間撹拌した。完了後、Et3N (0.1 ml)およびMeOH (0.1 ml)を添加した。反応混合物をMeOHで3回、共乾燥させた。FCにより、18e (120 mg, 59%)が得られた。Rf (AcOEt/CHCl-j/MeOH 2:2:0.25) 0.55。白色固体、m.p. 65-68°C. [α]25D = +99.3 (c = 1.63, MeOH). IR (ATR): 3374m, 2942w, 2874w, 2102s, 1770w, 1631w, 1612w, 1514w, 1453w, 1369w, 1331w, 1248m, 1143w, 1101m, 1075m, 1027s. HR-Maldi-MS: 888.2942 (100, [M + Na]+, C3iH43N15NaO15+; calc. 888.2961 ); 456.0339 (91 , [M + H]2+ + Na, C15.5H22N7.5NaO7.52+; calc. 456.1468)。
【０２１１】
4'-p-メトキシベンジルパロモマイシン (19e)
THF (2 ml)中の18e (60 mg, 0.058 mmol)の溶液を、0.1 M NaOH溶液(0.5 ml)、およびTHF (0.346 ml)中の1 M PMe3で処理し、50°Cで4時間撹拌した。乾燥後、FCおよび10% AcOHとの共乾燥により、19eが酢酸塩(44 mg, 74%)として得られた。Rf (MeOH/CHCl3/NH3aq.1:3:2) 0.33。白色固体、m.p. 190°C (dec). [α]25D = +48.93 (c = 0.32, H2O). IR (ATR): 3115m(br), 2874w, 1609w, 1513m, 1405m, 1333w, 1248w, 1050S, 1031 S. HR-Maldi-MS: 736.3597 (100, [M + H]+, C31H54N5O15+; calc. 736.3616)。
【０２１２】
実施例２：生物学的アッセイ
以下において、微生物16SリボソームRNAを選択的に標的とし、真核生物細胞質および/またはミトコンドリアリボソームを標的としない、または実質的に低い程度で標的とする、上記実施例１に例示される本発明の化合物の活性を測定するために使用される生物学的アッセイが、以下に記載される。
【０２１３】
組換えM.セメクマリス(M. smeqmatis)株
突然変異の導入/および選択のために使用される株は、単一の機能性染色体rRNAオペロンを有するマイコバクテリウム・セメクマリス(Mycobacterium smegmatis)の遺伝的変換誘導株(Sander et al. Mol. Microbiol. 1996, 22: 841-848)であった。この株は、M.セメクマリスrrn-と呼ばれ、各突然変異を有するrRNA遺伝子を有するプラスミドを使用して、rRNA遺伝子の突然変異の選択を可能にする。
【０２１４】
プラスミドが有するrRNA遺伝子は、完全rRNAオペロン(Prammananan et al. Antimicrob. Agents Chemother. 1999, 43: 447-453)、または約1.0 kbの非機能性rRNA遺伝子フラグメント(Pfister et al. Antimicrob. Agents Chemother. 2003, 47: 1496-1502)のいずれかをコードする。in vitroのPCR遺伝子変異導入を使用して、変異導入rRNA遺伝子フラグメントを作成する。部分的rRNA遺伝子フラグメントの場合、変異導入rRNA遺伝子フラグメントをpMV261またはpMV361ベクターにクローニングし(Sander et al. Mol. Microbiol. 2002, 46: 1295-1304; Pfister et al. Antimicrob. Agents Chemother. 2003, 47: 1496-1502)、導入した遺伝子変異を有する約1.0 kbの部分的rRNA遺伝子フラグメントを有するベクターを生じる。完全rRNAオペロンを有するプラスミドの場合、PCRで取得される変異導入rRNA遺伝子フラグメントを、適切な制限酵素部位を使用して、pMV361 rRNAまたはpMV261 rRNAベクターにクローニングした。pMV361 rRNAまたはpMV261 rRNAベクターは、M.セメクマリス由来の完全コピーのrRNAオペロン(Sander et al. Mol. Microbiol. 1997, 26: 469-480)を有していた。rRNAをコードするプラスミドに対する変異の導入を、シークエンス解析により確認した。
【０２１５】
M.セメクマリスの単一rRNA対立遺伝子誘導株、すなわちM.セメクマリスrrn-を、プラスミドの形質転換のために使用した。前記株を、エレクトロコンピテントセルとし、標準技術および先行文献(Sander et al. Mol. Microbiol. 1997, 26: 469-484)の記載により、形質転換した。一次選択に続き、プラスミドがコードするrRNA遺伝子突然変異を、RecA介在相同組換え(Prammananan et al. Antimicrob. Agents Chemother. 1999, 43: 447-453)により、単一の染色体rRNAオペロンに転移させた。遺伝子変換による単一の機能性染色体rRNAオペロンへのrRNA遺伝子変異の導入を、配列を決定することにより確認した。
【０２１６】
前記技術の別の態様において、単一の機能性染色体rRNAオペロンを不活性化し、リボソームRNAの合成を、プラスミドがコードする変異rRNA遺伝子オペロンのみで行わせた。
【０２１７】
以下では、全ての内在性遺伝子を削除し、機能性リボソームRNAをプラスミドがコードするrRNAオペロンにより生産させる株を生産する方法を示す。
【０２１８】
ポジティブ選択マーカー、例えばaph、およびネガティブ選択マーカー、例えばsacBを、マーカーのない削除遺伝子変異導入に使用する。簡単には、sacB遺伝子を、マイコバクテリアの発現ベクターpMV361にクローニングし、pMS32aを得る。pMS32aでは、sacBはhsp60プロモーターの下流に位置する。hsp60p-sacB構築物を有するpMS32aの制限酵素フラグメントをクローニングベクターpGEM-7 (Promega)に転移させ、rrnAおよびrrnBの両方を置換するベクターの構築におけるバックボーンとして使用する、プラスミドpZ130を得る。各rrnオペロンの5'および3'領域に隣接する染色体DNA配列をPCRで取得し、pZ130にクローニングした。さらなる変更の後、rrn置換ベクターを取得した。例として、rrnB置換ベクターの作成を本明細書に記載し、rrnBを不活性化するための戦略を図１に示す。
【０２１９】
相補のために、機能性rrnBオペロンを統合用ベクター(integration-proficient vector)にクローニングした。
図２に概略下戦略の後、M.セメクマリスの誘導株、すなわちΔrrnA ΔrrnB attB::prrnB株を取得し、ここで内在性染色体rRNAオペロンは両方とも、16S、23S、および5S rRNA遺伝子(rrs、rrl、およびrif、図１参照).全体にわたる遺伝子削除により不活性化されている。この株は、染色体rRNA遺伝子を完全に欠いており、rRNAはプラスミドDNAのみから転写されている。
【０２２０】
そのような株は、本発明のアッセイ法において、天然に存在する微生物細胞自身のリボソーム活性に干渉することがなく、また、少なくとも部分的にヘテロである、導入されるミトコンドリアまたは細胞質微生物リボソームに干渉することがないために、特に有用である。
【０２２１】
リボソーム薬剤感受性を、Pfister et al. 2003および2005 (上記参照)に詳細に記載されているように、最小阻害濃度を決定することにより試験する。
【０２２２】
機能性rRNAオペロンに各遺伝子変異を有する組換え体を、コロニー精製し、最小阻害濃度(MIC)を決定して、リボソーム薬剤感受性を決定する。単一コロニー由来の培養物を、0.05% Tween 80で補充したLB培地中で増殖させ、マイクロリットルプレートフォーマットにおけるMIC試験のために使用した。出発培養物は、600 nmで光学濃度0.025である200 μlの微生物細胞を含み、各薬剤を2倍希釈で添加した。MICを、24世代に相当する、37°Cにおける72時間の培養後に培養物の増殖が完全に阻害される薬剤濃度として規定した。
【０２２３】
真核細胞コード部位から、原核細胞コード部位を区別する、キーとなるヌクレオチドは、16S rRNAの位置1408（微生物リボソーム：A、真核細胞細胞質リボソーム：G）、および1491（微生物リボソーム：G、真核細胞細胞質リボソーム：A、真核細胞ミトコンドリアリボソーム：C）である。
【０２２４】
以下の表１の結果により示されるように、本発明の化合物は、高度に微生物リボソームRNAに選択的である。それゆえ、それらは、哺乳類、特に人における微生物感染の抗生物質治療に高度に有効であり、哺乳類のミトコンドリアおよび細胞質RNAに損傷を与えないために、はるかに低い投与量であらねばならない、現在の非選択的抗生物質よりも、高い濃度で投与することができる。
【０２２５】
表１  最小阻害濃度(mg/ml)を調査することにより決定される、コード部位のキーとなるヌクレオチドを有する、微生物および変異リボソームに対する選択された化合物と比較物の活性
【表１】
2010517951.tif 000019
【０２２６】
実施例３：抗生物質抵抗性
本発明で選択された化合物を、スタフィロコッチ(Staphylococci)、エンテロコッチ(Enterococci)および大腸菌(Escherichia coli)の臨床的に単離物に対して、ならびに規定される抵抗性決定要因について試験し、当業者によく知られた抗生物質と比較した。標準MICアッセイ、すなわち、in vitroで微生物の増殖を阻害するために必要な最小薬剤濃度を決定することにより、測定した。
【０２２７】
結果により、
1. 選択された化合物は、標準アミノグリコシドに対する抵抗性を有する臨床的単離物に対して活性である
2. 選択された化合物は、規定されるアミノグリコシド抵抗性決定要因、例えば、ANT4'、AAC6'、APH2"、AAC3、ANT2"により修飾されていない
ことが示される。
【０２２８】
結果を以下の表２に概観し、ここで番号はMIC値(μg/ml)に相当する。
【０２２９】
表２  規定される抵抗性決定要因を有する臨床的微生物単離物および株に対する、比較化合物の最小阻害濃度(mg/l)
【表２−１】
2010517951.tif 000020
【０２３０】
表２続き  規定される抵抗性決定要因を有する臨床的微生物単離物および株に対する、選択された化合物の最小阻害濃度(mg/l)
【表２−２】
2010517951.tif 000021
【表２−３】
2010517951.tif 000022
【図１】
2010517951.tif 000028
【図２】
2010517951.tif 000029
【手続補正書】
【提出日】平成21年9月29日(2009.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I
【化１】
2010517951.tif 000030
［前記式中、X、YおよびZはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、-S-、置換または非置換-CH2-、あるいはR1および/またはR2への直接結合を表し；
R1およびR2はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、炭素環を表すか、あるいはYR1およびZR2はともに、置換または非置換シクロアルキル、あるいは対応するヘテロ環状環を形成するが、ただしR1およびR2は両方ともHではなく、
R3およびR4はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、アミノまたはヒドロキシルを表し、
R5はグリコシル基を表し、
R6は水素を表す］
の化合物、ならびにそれらの塩基あるいは生理学的に共存可能な酸の塩の形態にある、それらのジアステレオ異性体またはエナンチオマー。
【請求項２】
R1およびR2がそれぞれの場合において、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、アルキニル、またはアルキリデン、C3-C12シクロアルキル、C3-C20アリール、好ましくはアラリキル、C3-C20ヘテロアリールあるいはC3-C20ヘテロ環状基を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
YおよびZが酸素である、好ましくはX、YおよびZが酸素である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
YR1がNH2ではない、および/またはZR2がOHではない、好ましくはYR1およびZR2がともに、置換または非置換シクロアルキル、あるいは対応するヘテロ環状環を形成し、より好ましくはYR1およびZR2がともに、6員の4',6'-シクロアルキルまたは置換4',6'-シクロアルキル環を形成する、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
R1が、置換または非置換(C1-C5アルキル)アリール基を含み、好ましくは置換または非置換(C1-C5アルキル)アリール基であり、R2はHである、ならびに/あるいはR2が直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C7アルキル、C2-C7アルケニル、アルキニル、またはアルキリデン、C3-C7シクロアルキル、C3-C7アリール、好ましくはアラリキル、C3-C7ヘテロアリールあるいはC3-C7ヘテロ環であり、R1は水素である、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
R3がヒドロキシルであり、および/またはR4がアミノである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
R5が単糖または多糖からなる群から選択され、好ましくは、単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは二糖であり、特に好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1→3)-β-D-リボフラノシル部分または3-アミノ-3-デオキシ-α-D-グルコピラノシル部分である、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
式II
【化２】
2010517951.tif 000031
［前記式中、X、YおよびZはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、-S-、置換または非置換-CH2-を表し、好ましくはX、YおよびZは全て酸素であり；
R7は水素、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキリデン、あるいは炭素環を表し、
R8は水素、前記化合物が安定であればOH、NH2、NRaRb、SH、SRa、ORa、あるいは直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキル、好ましくはC1-C4アルキルを表し、ここでRaおよびRbはお互いに個々独立に、C1-C8アルキル、好ましくはC1-C4アルキルを表し；
R3は水素、アミノまたはヒドロキシル、好ましくはアミノまたはヒドロキシルを表し;
R4は水素、アミノまたはヒドロキシル、好ましくはアミノまたはヒドロキシルを表し;
R5は単糖または多糖、好ましくは単糖、二糖、または三糖であり、より好ましくは単糖または二糖であり、最も好ましくは二糖であり、特に好ましくは2,6-ジアミノ-2,6-ジデオキシ-β-L-イドピラノシル-(1→3)-β-D-リボフラノシル部分であり；
R6は水素である］
である、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
R7が、水素、直鎖状または分枝状、好ましくは直鎖状、置換または非置換C1-C8アルキル、好ましくは直鎖置換C1-C3アルキル、より好ましくはアリール置換C1-C3アルキル、最も好ましくはアリール置換エチル基；置換または非置換C3-C8シクロアルキル、C5-C20アリール、好ましくはC5-C12アリール、C5-C20ヘテロアリール、好ましくはC5-C12ヘテロアリール、より好ましくは置換C5-C12ヘテロアリール、最も好ましくは(C1-C7アルキル)アリール基を表し；
ここでR7は好ましくは、ハロゲン、好ましくは塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素、より好ましくはフッ素を含む、
請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
R8が水素、ハロゲン、あるいは直鎖状または分枝状、置換または非置換C1-C8アルキルからなる群から選択され、好ましくはC1-C4アルキル、最も好ましくは水素である、請求項８または９に記載の化合物。
【請求項１１】
R1およびR2が、直鎖状または分枝状、置換または非置換アルキル、またはシクロアルキルを表し、ここで1個以上の炭素原子は、互いに個々独立に酸素、硫黄、または窒素により置換される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
4',6'-O-ベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-メトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-メトキシベンジリデンパロモマイシンテトラアセテート、
4',6'-O-o-メトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-ニトロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-ニトロベンジリデンパロモマイシントリアセテート、
4',6'-O-p-クロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,5-ジクロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-シアノベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-フェニルベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-フルオロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,5-ジメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-3,4,5-トリメトキシベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-m-クロロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-o-ニトロベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-トリフルオロメチルベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-p-ジメチルアミノベンジリデンパロモマイシン、
4',6'-O-1-ナフチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-ナフチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-フラニリデンパロモマイシン、
4',6'-O-2-チオフェニリデンパロモマイシン、および
4',6'-O-エチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(2-フェニル)エチリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(3-フェニル)プロピリデンパロモマイシン、
4',6'-O-(3-フェニル)プロペニリデンパロモマイシン、
4',6'-O-シクロヘキシルメチリデンパロモマイシン、
4'-O-ベンジルパロモマイシン、
6'-O-ベンジルパロモマイシン、
4'-p-クロロベンジルパロモマイシン、
4'-p-(トリフルオロメチル)ベンジルパロモマイシン、
4'-ベンジルオキシメチルパロモマイシン、および 
4'-p-メトキシベンジルパロモマイシン
からなる群より選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
微生物感染、好ましくは細菌感染、トリパノソーマ症、またはリーシュマニア症を治療および/または防止する医薬を調製するための、請求項１から１２のいずれかに記載の一つ以上の化合物の使用。
【請求項１４】
活性物質として、一つ以上の請求項１から１２のいずれかに記載の一つ以上の化合物、あるいは薬剤として許容可能なその誘導体またはプロドラッグを、任意に慣用的な賦形剤および/または担体と組み合わせて含む、薬剤組成物。
【請求項１５】
a)式III
【化３】
2010517951.tif 000032
［前記式中、VおよびWはそれぞれの場合において、個々独立に、-O-、-NH-、および-S-を表し；
R3およびR4はそれぞれの場合において、個々独立に、水素、アミノまたはヒドロキシルを表し；
R5およびR6はそれぞれの場合において、個々独立に、水素またはグリコシル基を表す］の化合物を提供する工程；
b) 一個以上、好ましくは全てのアミノ基を保護する工程；
c) 任意に、一個以上、好ましくは全てのヒドロキシ基を保護する工程；
d1) 前記任意に保護される4'-および/または6'-ヒドロキシ基を、式IのYR1および/またはZR2-基あるいは式IIの環系に、選択的に変換する工程；あるいは、
d2) 前記保護される4'-および/または6'-ヒドロキシ基を選択的に脱保護化し、前記脱保護化される4'-および/または6'-ヒドロキシ基を、式IのYR1および/またはZR2-基あるいは式IIの環系に選択的に変換する工程；
e) 一個以上のアミノ基を脱保護化する工程；
f) 一個以上のヒドロキシ基を脱保護化する工程；
のうち一つ以上の工程を含む方法であって、
工程b)およびc)、ならびにe)およびf)の順序は逆であってよく、工程b)およびc)、ならびにe)およびf)の順序が好ましい、
請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物の調製法。
【国際調査報告】
2010517951.tif 000033