(57)【要約】さまざまな用途において有用な、可視光により活性化されたポリマーの美容用充填製剤を提供する。いくつかの態様において、光活性化ポリマー組成物は、ＨＡなどの従来のポリマー材料を、ＰＥＧまたはＰＥＯＤＡなどの修飾された、架橋可能なポリマーと一緒に含み、ＩＰＬデバイスなどの可視光源への曝露の際にその場でポリマーマトリックス内での架橋形成を可能にする。製剤は、ゲル化中に形成可能なより安定化された組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
表皮下の組織空間を充填する方法であって、官能化モノマーまたは官能化ポリマーを含む溶液を前記空間に導入すること、前記溶液がさらに可視光の光開始剤、および任意にプロトン受容体、充填剤またはこれらの両方を含むこと、そして可視光を前記空間の表面にある皮膚表面に適用し、前記モノマー、前記ポリマーまたはこれらの両方を含むネットワークを形成することを含む、前記方法。
【請求項２】
光開始剤がエオシンＹである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
プロトン受容体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
プロトン受容体がトリエチルアミンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
モノマーがＰＥＯＤＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
充填剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
充填剤がヒアルロン酸である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ヒアルロン酸が架橋している、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
可視光をＩＰＬデバイスにより提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
デバイスを皮膚から約１ｃｍ上に設置する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
デバイスを皮膚の上に設置する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ポリマー、ネットワークまたはこれらの両方および可視光の光開始剤、および任意にプロトン受容体、充填剤またはこれらの両方を含む、組織空間に成形可能な組成物。
【請求項１３】
光開始剤がエオシンＹである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
プロトン受容体を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
プロトン受容体がトリエチルアミンである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ポリマーまたはネットワークがＰＥＯＤＡを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１７】
充填剤を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
充填剤がヒアルロン酸である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
ヒアルロン酸が架橋している、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
組織増大のための組成物であって、
（ａ）修飾ヒアルロン酸、
（ｂ）ＰＥＯＤＡ、
（ｃ）ＰＥＯＤＡの重合反応促進剤
を含む、前記組成物。
【請求項２１】
ＰＥＯＤＡが約３４００の分子量を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
反応促進剤がＮ−ビニルピロリジノンである、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項２３】
修飾ヒアルロン酸がＲｅｓｔｙｌａｎｅＴＭである、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項２４】
開始剤をさらに含む、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項２５】
開始剤がエオシンＹである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
共開始剤をさらに含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
共開始剤が第三級アミンである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
共開始剤がトリエチルアミンである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
ＰＥＯＤＡ対ヒアルロン酸重量比が約２：１〜１０：１である、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項３０】
ＰＥＯＤＡ対ヒアルロン酸重量比が１０：１、５：１または２：１である、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項３１】
軟組織部位を増大させる方法であって、
軟組織部位にＰＥＯＤＡモノマー、修飾ヒアルロン酸および反応促進剤を含む組成物を投与すること、および
組織部位に光を適用し、ＰＥＯＤＡモノマーの重合を誘導すること、
を含む、前記方法。
【請求項３２】
光を外部から適用する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
外部操作により軟組織部位を成形することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
組成物を皮下注射により投与する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＥＯＤＡが約３４００の分子量を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
修飾ヒアルロン酸がＲｅｓｔｙｌａｎｅＴＭである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
軟組織部位が唇、首、眼窩溝、胸、頬および鼻からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年８月１日に出願された米国仮出願第６０／９５３，３７５号の利益を主張し、これらの内容の全体は本明細書に参照として組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
架橋していてもよいヒアルロン酸（ＨＡ）およびコラーゲンは、外科および皮膚科の分野で組織を再形成／再構成するために充填剤として使用される生体材料である。軟組織増大のための美容用充填剤の市場は、近年増加し、適用部位で保持されるより長持ちする材料を作り出す必要がある。医師もまた、最終結果のコントロールの改善および患者の満足を最大限に高めるためのその後の修正が可能であることを望んでいる。
【０００３】
ヒドロゲルは、現在入手できる充填剤よりも長く美的修正を維持する皮膚充填剤を作り出す可能性を秘めている。用語「ヒドロゲル」は、水を含有するが水に溶解しない広い分類のポリマー材料を示す。一般的にヒドロゲルは、架橋およびネットワーク化したポリマー鎖である。ポリマー鎖あたり２または３以上の架橋がある場合、大量の溶媒を吸収することができるネットワークを形成する。ヒドロゲルは、それらの栄養素および老廃物輸送を可能とする組織のような水分含量から、組織工学の分野において特に関心を寄せられている。
ポリマーを形成するおよびポリマーを架橋する多くの方法がある。かかる方法の１つは、反応種をモノマー溶液中で作り出す光反応性試薬および光誘起性反応に関与し、ここで、モノマーは重合して鎖を形成し、モノマー、ポリマーおよび鎖は順次ネットワークを形成する。
【０００４】
現在使用されている美容用充填剤は一般的に、コラーゲンまたはヒアルロン酸などの生体ポリマー由来である。これらの化合物が本来生体性物質であることから、架橋されていても、分解に対して敏感である傾向がある。したがって、かかる材料によって達成された向上／修正の美的持続は、時間的に限られており、受容者は、高い頻度で、所望の効果を維持するために、追加の高額な繰り返しの注入／処置を受けることが必要となる。従来の美容用充填剤の別の欠点は、例えば、ヒトの頬骨または顎の操作における、注入後に、所望のおよび／または修正した姿を維持するための適応性(malleability)および輪郭形成性(contourability)の欠如である。したがって、これらの種類のおよび他の類似の手段のために、患者に全身麻酔下でプラスチックのインプラントを挿入するという、より侵襲的アプローチが使用される。したがって、美容用再構成分野において、輪郭形成可能で(contourable)より長持ちする改善されたポリマー充填剤の必要性が引き続き存在する。
【０００５】
合成ポリマーは、高度に制御可能な物理および分解特性を有し、特異性のあるインプラントを作り出すのに好適である。ポリ（エチレングリコール）、ＰＥＧは、頻繁に使用される生体適合性合成ポリマーの一例である。ＰＥＧおよび他の合成ポリマーは、架橋を可能とし、ヒドロゲルを形成するために、官能基と反応するように修飾することができる。
【０００６】
ＰＥＧ誘導体、ポリ（エチレンオキシド）ジアクリラート（ＰＥＯＤＡ）は、溶液として体内に注入することができ、重合し、架橋された不溶性ゲル［非特許文献１〜５］を形成することができる。遊離基の形成により光重合を誘導するために、さまざまな光開始剤が使用されている。とくに、Hubbellおよび彼の同僚は以前、アルゴンイオンレーザー（５１４ｎｍ、７０ｍＷ／ｃｍ２、２秒曝露；American Laser, Salt Lake City）を用いて、エオシンＹ／トリエチルアミンを使用してＰＥＯＤＡヒドロゲルを作り出した［非特許文献６］。エオシンＹは、その吸収域が可視青色光であるため、経皮光開始剤としてふさわしい候補である［非特許文献７、８］。可視光の利点は、ＵＶと比較して、より長い可視波長が皮膚により深く浸透することができることにある。さらに、高線量のＵＶ光は、紅斑および異なる種類の皮膚癌の原因に関係があるとされている［非特許文献９］。したがって、可視光源を使用した光重合は、提案された美容用途に好適であろう。しかしながら、ヒト皮膚における、エオシンＹを開始剤として使用した、可視光を用いたＰＥＯＤＡ光重合の実行可能性は、未だ証明されていない。
【０００７】
超短パルス光（ＩＰＬ）デバイスは、皮膚科の診療室における光による若返り(photorejuvenation)手段および光脱毛(photoepilation)手段のための一般的な可視光源である［非特許文献１０〜１３］。しかしながら、ＩＰＬデバイスによるエオシンＹ光開始の適合性は、証明されていない。
美容用として有用な製剤の分野におけるこれらのおよび他の不足が、本発明によって充足される。
【０００８】
以下の参考文献は、それらの全体が参照によって本明細書にとくに組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Elisseeff J, Anseth K, Sims D, McIntosh W, Randolph M, Langer R: Transdermal photo polymerization for minimally invasive implantation. Proc Natl Acad Sci U S A 1999;96:3104-3107.
【非特許文献２】Williams CG, Kim TK, Taboas A, Malik A, Manson P, Elisseeff J: In vitro chondrogenesis of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in a photopolymerizing hydrogel. Tissue Eng 2003;9:679-688.
【非特許文献３】Elisseeff J: Injectable cartilage tissue engineering. Expert Opin Biol Ther 2004;4:1849-1859.
【非特許文献４】Elisseeff J, Anseth K, Sims D, McIntosh W, Randolph M, Yaremchuk M, Langer R: Transdermal photo polymerization of poly(ethylene oxide)-based injectable hydrogels for tissue-engineered cartilage. Plast Reconstr Surg 1999;104:1014-1022.
【非特許文献５】Nguyen KT, West JL: Photopolymerizable hydrogels for tissue engineering applications. Biomaterials 2002;23:4307-4314.
【非特許文献６】Hill-West JL, Chowdhury SM, Slepian MJ, Hubbell JA: Inhibition of thrombosis and intimal thickening by in situ photopolymerization of thin hydrogel barriers. Proc Natl Acad Sci USA 1994;91:5967-5971.
【非特許文献７】Nakayama Y, Matsuda T: Photocurable surgical tissue adhesive glues composed of photo reactive gelatin and poly(ethylene glycol) diacrylate. Blamed Mater Res 1999;48:511-521.
【非特許文献８】Valdesaguilera O, Pathak C, Shi J, Watson D, Neckers D: Photopolymerization studies using visible light photoinitiators. Macro 1992;25:541-547.
【非特許文献９】Levine JA, Sorace M, Spencer J, Siegel DM: The indoor UV tanning industry: a review of skin cancer risk, health benefit claims, and regulation. J Am Acad Dermatol 2005;53:1038-1044.
【非特許文献１０】Marayiannis KB, Vlachos SP, Savva MP, Kontoes PP: Efficacy of long- and short pulse alexandrite lasers compared with an intense pulsed light source for epilation: a study on 532 sites in 389 patients. J Cosmet Laser Ther 2003;5:140-145.
【非特許文献１１】Negishi K, Kushikata N, Takeuchi K, Tezuka Y, Wakamatsu S: Photorejuvenation by intense pulsed light with objective measurement of skin color in Japanese patients. Dermatol Surg 2006;32:1380-1387.
【非特許文献１２】Goldman MP, Weiss RA, Weiss MA: Intense pulsed light as a nonablative approach to photoaging. Dermatol Surg 2005;31:1179-1187; discussion 1187.
【非特許文献１３】Sadick NS, Weiss R, Kilmer S, Bitter P: Photorejuvenation with intense pulsed light: results of a multi-center study. J Drugs Dermatol 2004;3:41-49.
【発明の概要】
【００１０】
一つには、本開示は、架橋可能なポリマー材料またはその官能誘導体を含む、可視光によって活性化される新規の美容用充填剤を提供する。ポリマーおよび誘導体化されたポリマー材料は、光への曝露の際にポリマー材料の重合、連結および架橋を促進する修飾反応基を含むものとしてさらに記載され得る。可視光への曝露によって、美容用製剤において、液状の合成ポリマー充填剤は、半固体またはゲル形状を呈し、所望の輪郭形成および操作を受けやすく、その場で、所望の、固体および／または半固体の重合形状をもたらす。さらに、誘導体化モノマーおよびポリマーの使用により、生分解により耐性のあるより安定したポリマーおよびネットワークを提供する。
【００１１】
実質的に、光によって活性化された誘導体化反応基を含むために修飾されてもよいあらゆるポリマー材料を、本願の美容用充填剤の製剤に使用してもよい。例として、限定なく、特定の態様において、ポリマーは、合成反応物質を含むことができ、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体を含む。いくつかの態様において、ポリマー誘導体は、ポリ（エチレンオキシド）ジアクリラート（ＰＥＯＤＡ）またはポリ（エチレングリコール）ジアクリラート（ＰＥＧＤＡ）を含む。
別の面において、本発明は、in vivoでインプラントを形成する方法を提供する。特定の態様において、該方法は、液体誘導体化モノマー材料をホストの所望の部位内に投与すること、ゲル化を誘導し、前記液体誘導体化モノマー材料を光に曝露することによってポリマー材料を形成すること、および前記ゲル化されたおよびゲル状のポリマー材料を所望の構成に輪郭形成し、インプラントを提供することを含む。
【００１２】
特定の用途において、液体誘導体化ポリマー材料は、ＰＥＯＤＡ／Ｒｅｓｔｙｌｅｎｅ（登録商標）（市販の充填剤、米国特許第５，８２７，９３７号）溶液の組合せを含む。いくつかの態様において、ＰＥＯＤＡ／Ｒｅｓｔｙｌｅｎｅ（登録商標）溶液は、１０％ＰＥＯＤＡ、１５％ＰＥＯＤＡ、２０％ＰＥＯＤＡ、２５％ＰＥＯＤＡ、３０％ＰＥＯＤＡ、３５％ＰＥＯＤＡ、４０％ＰＥＯＤＡ、４５％ＰＥＯＤＡ、５０％ＰＥＯＤＡ、６０％ＰＥＯＤＡ、７０％ＰＥＯＤＡまたは８０％ＰＥＯＤＡまでさえも含む。
【００１３】
いくつかの態様において、光開始剤は、本方法または本方法の試薬に含まれる。いくつかの態様において、光開始剤は、可視の青色光の範囲において吸収極大のものなどの、可視光に応答するものであろう。かかる可視の青色光の範囲において吸収極大を有する光開始剤の例は、エオシンＹである。
本方法における特別な用途において、１０％ＰＥＯＤＡまたは２０％ＰＥＯＤＡ溶液が、２００ｍＭのトリエチルアミンおよび５０μＬ／ｍ１のエオシンＹ開始剤と組み合わせて使用されるであろう。
【００１４】
本方法のいくつかの態様において、使用される照明手段は、超短パルス光（ＩＰＬ）源である。本方法のいくつかの態様において、エオシンＹ／トリエチルアミンおよびＩＰＬ光源の組合せが、組織充填剤またはインプラントを提供するために使用される。いくつかの態様において、照明手段は光が皮膚に浸透するものである、すなわち、照明手段は、皮膚より上または皮膚の上に設置し、可視光を皮膚表面に適用する。
本開示の組成物は、細胞、またはカプセル化細胞、組織および／または操作された細胞および組織をさらに含んでもよい。
【００１５】
本発明は、多数の異なる組合せおよび濃度／量の合成ポリマー、生分解可能なポリマー、光開始剤、プロトン受容体、可視光源およびパルス強度および投与計画を包含することを想定し、処置する特定の対象、達成が求められる美容用インプラント／美容用充填剤の特定の種類および位置、行われる特異的用途に好適な美容用充填剤の粘度および特異的物理特性ならびに美容および医療技術分野における当業者に既知の種類の臨床手段に関連する他の変数に依存して変化することが予想される。
【００１６】
本材料／方法の１つの利点は、in vivoにおける充填剤およびインプラントの滞留／寿命の増加である。別の利点は、特定の対象および／または組織部位においてその場で輪郭形成され得るインプラントまたは充填剤を提供するための非侵襲性方法の改善である。また別の利点は、皮膚表面に適用することができる可視光の使用である。
【００１７】
特定の面において、（ａ）修飾ヒアルロン酸、（ｂ）ＰＥＯＤＡ、および（ｃ）ＰＥＯＤＡの重合の反応促進剤を含む組織増大に好適な組成物を提供する。好ましくは、ＰＥＯＤＡは、２０００、２５００または３０００を超える分子量（例えば重量平均分子量）を有し、多くの用途において、約３４００の分子量（例えば重量平均分子量）が特に好ましい。好適な反応促進剤は、例えばＮ−ビニルピロリジノンを含んでもよい。特に好ましい修飾ヒアルロン酸は、ＲｅｓｔｙｌａｎｅＴＭである。かかる好ましい組成物はまた、開始剤、例えばエオシンＹ、ならびに例えば第三級アミンといったアミンなどの共開始剤（すなわち、少なくとも２つの異種の開始剤を有する組成物）を好適に含んでもよい。トリエチルアミンまたは他のトリ（Ｃ１〜Ｃ１６アルキル）アミンなどのトリアルキルアミンが、好ましい共開始剤であり得る。かかる組成物において、ＰＥＯＤＡ対修飾ヒアルロン酸の重量比は、好適には比較的広範囲であり得、好ましくは、ＰＥＯＤＡが修飾ヒアルロン酸成分に対して過重、例えばＰＥＯＤＡ：修飾ヒアルロン酸の重量比が約２：１〜１０：１である。特に好適なＰＥＯＤＡ：修飾ヒアルロン酸の重量比は、１０：１、５：１および２：１を含む。
【００１８】
さらに特に好ましい面において、軟組織部位を増大させるために、（ａ）軟組織部位にＰＥＯＤＡモノマー、修飾ヒアルロン酸および反応促進剤を含む組成物を投与すること、および（ｂ）組織部位に光を適用し、ＰＥＯＤＡモノマーの重合を誘導することを含む方法を提供する。軟組織部位は好適には、哺乳動物、特にヒトなどの霊長類のもの、例えばかかる対象の首、眼窩溝、胸、頬および／または鼻である。好適には、光は、外部から対象に適用してもよい。好ましくは、かかる方法はまた、外部操作により軟組織部位を成形することを含んでもよい。組成物を、軟組織部位に皮下注射などの多数の好適な手段のいずれによって投与してもよい。好ましくは、ＰＥＯＤＡは、２０００、２５００または３０００を超える分子量（例えば重量平均分子量）を有し、多くの用途において、約３４００の分子量（例えば重量平均分子量）が特に好ましい。好適な反応促進剤は、例えばＮ−ビニルピロリジノンを含んでもよい。特に好ましい修飾ヒアルロン酸は、ＲｅｓｔｙｌａｎｅＴＭである。
本発明のほかの面を、以下に開示する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１Ａ】マウスの皮下空間において光を使用して架橋したＰＥＧを有するＨＡベースの充填剤が、１４０日にわたる研究においてより大きな容量を保持したことを示す図である。
【図１Ｂ】２８日後の特異的比較により、２つの基の間の差異をより明確に示す図である。
【００２０】
詳細な説明
本発明は、一つには、可視光源による光活性化の際成形用ゲルまたはゲル様組成物を形成する美容用および医療用ポリマーベースの充填剤に関する。ポリマーは、天然に存在するか、または合成であってもよい。
関心のある製品の重要な点は、侵襲的外科的介入または全身麻酔なく、カスタムの、輪郭形成された充填剤またはインプラントをその場で形成することが可能であるという利点である。一般的に、関心のある製品を、皮膚の下（すなわち、表皮の下）に導入し、重合を、皮膚表面、すなわち、身体の外側または皮膚の外側から、あるいは表皮に適用される可視光に曝露することにより誘導する。
【００２１】
本発明は、美容用充填剤材料、特にポリマーインプラント可能な材料の限られた寿命の問題に取り組む。いくつかの態様において、ＰＥＯＤＡなどの本発明のポリマーベースの製剤により作られたインプラントおよび／または他の形状のin vivo寿命は、従来のインプラント材料と比較して５０％以上、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％など、または１００％までさえ増加する。
【００２２】
本発明は、可視光源による活性化の際に不溶性の架橋されたおよび架橋するネットワークを形成する能力のあるポリマー成分を含む従来のポリマー材料を使用した美容用および医療用矯正および／または向上手段を提供するその場での重合技術を提供する。
例えば、本開示は、ＰＥＧ、またはその誘導体、例えばＰＥＯＤＡを単独で、または架橋されていてもよい別のポリマー、例えばＨＡと一緒に含む美容用充填剤を提供し、エオシンＹなどの光開始剤の存在下で、任意に、トリエチルアミンなどのプロトン受容体の存在下で可視光活性化してその場で不水溶性の、架橋ポリマー製剤を形成する美容用充填剤を提供する。
【００２３】
生体表面とは、皮膚表面、細胞、組織、器官などの生体材料または生命体の外部の（例えば組織または器官に対して）曝露された部分のことであり、そこに、関心のある光によって活性化された架橋可能なモノマー製剤を含む製剤を曝露することができまたは適用し、前記製剤を誘導し、美容用途および／または矯正用途のために前記表面上にその場でゲルを形成する。
【００２４】
生物学的に適合したポリマーとは、生体表面に適用する組成物としての役割を果たすために官能化されたポリマーのことである。ポリマーは、天然に存在するポリマーまたはホストに有毒ではないものである。ポリマーは、すべてのモノマーが同じであるホモポリマーまたは２または３種類以上のモノマーを含有するヘテロポリマーであってもよい。用語「生体適合性ポリマー」、「生体適合性架橋ポリマーマトリックス」および「生体適合性」は、本発明のポリマーに関連して使用するとき、当該技術分野において認められており、「生物学的に適合したポリマー」を含み、互いに同等であると考えられる。例えば、生体適合性ポリマーは、天然に存在するポリマーを含むか、あるいは、合成することができ、ホスト（例えば、動物またはヒト）に有毒ではなく、毒性濃度のまたはホストに有毒であるモノマーまたはオリゴマーサブユニットまたは他の副生成物に分解する速度で分解しない（ポリマーが分解する場合）またはそれらを生成しないポリマーである。
【００２５】
本発明のある態様において、生分解は一般的に、生物におけるポリマーの、例えば、事実上無毒であることが知られ得るそのモノマーサブユニットへの分解を伴う。かかる分解から得られるオリゴマー中間生成物は、異なる毒性を有し得るが、または生分解は、ポリマーのモノマーサブユニット以外の分子を生じさせる酸化または他の生化学反応を伴ってもよい。結果として、ある態様において、患者へのインプラントまたは注入などのin vivo使用を意図する生分解可能なポリマーの毒性は、１または２以上の毒性分析の後に決定してもよい。あらゆる対象組成物が、生体適合性があると判断されるために１００％の純度である必要はない。実際、対象組成物が上記に示した生体適合性であれば足りる。したがって、対象組成物は、例えば、本明細書中に記載のポリマーおよび他の材料および賦形剤を含む、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％またはそれ以下の生体適合性ポリマーを含むポリマーを含んでもよく、全体的に生体適合性であり、およびごくわずかに毒性であるかまたは毒性ではない。
【００２６】
ポリマーまたは他の材料が生体適合性であるか否かを決定するために、毒性分析を行う必要があり得る。かかるアッセイは、当該技術分野において周知である。かかるアッセイの一例は、ＨｅＬａ、２９３、ＣＨＯなどの生細胞を用いて行ってもよい。ポリマーサンプルは、当該技術分野において既知の、例えば、化学的手段または酵素的手段を使用して、部分的にまたは完全に分解される。一定分量の処置したサンプルの生成物を、細胞を事前に播種した培養皿に置く。サンプルの生成物を、細胞と共にインキュベートする。アッセイを、％相対成長対分解されたサンプルの濃度として示してもよい。非分解のポリマー、モノマー、ネットワークなども、試験することができる。
【００２７】
加えて、本発明のモノマー、ポリマー、ポリマーマトリックスおよび製剤をまた、関心のある材料が、皮下インプラント部位に、有意水準の例えば刺激または炎症を引き起こさないことを確認するために、ラットにおける皮下インプラントなどの周知のin vivo試験により評価してもよい。
【００２８】
「活性剤」および「生物活性剤」は、本明細書において互換的に用いられる表現であって、所望の薬理学的または生理学的効果を誘導する化学的または生体的化合物のことであり、ここで、効果は、予防または治療であり得る。用語はまた、本明細書において特に記載したそれらの活性剤の薬学的に許容し得る、薬理学的に活性な誘導体を包含し、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝産物、類似体などを含むが、これらに限定されない。用語「活性剤」、「薬理学的に活性な剤」および「薬剤」が使用されるとき、本発明は、活性剤自体、ならびに薬学的に許容し得る、薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、プロドラッグ、代謝産物、類似体などを含むと理解される。活性剤は、天然に存在するまたは形質転換など操作された、ウィルスまたは細胞などの生命体であり得る。
【００２９】
本明細書において架橋（した・された）とは、共有結合の形状から生じる、分子間結合、任意に、分子内結合を含有する組成物のことをいう。２つの架橋可能な成分間の共有結合は直接でもよく、その場合、一成分における原子が他の成分における原子と直接結合し、あるいは、間接でもよく、すなわち、例えば、結合基を通じてである。架橋ゲルまたはポリマーマトリックスはまた、共有結合に加えて、水素結合および静電気（イオン）結合などの分子間および／または分子内非共有結合を含んでもよい。
【００３０】
官能化とは、別の分子、ポリマーまたは官能基（例えば、アミン、エステルまたはカルボキシル基）と反応して、共有結合を形成する能力のある新たな１つの反応またはより多くの反応基（例えば、アミン、エステルまたはイミド基）を生じるまたは導入するための既存の分子セグメントの修飾のことである。例えば、カルボン酸基は、カルボキシル官能基のヒドロキシル基中の水素と置き換わっているイミド基の形で新たな反応官能基を提供するために、既知の手段を使用したカルボジイミドおよびイミド試薬との反応により官能化させることができる。
【００３１】
ゲルとは、液体および固体との間の物質の状態のことであり、一般的に液状媒質内で膨張したポリマーネットワークと定義される。典型的には、ゲルは、固体および液体両方を含有する二相コロイド分散であり、固体の量は、「ゾル」といわれる二相コロイド分散よりも多い。そのようなものとして、「ゲル」は、液体の特性のいくつか（すなわち、形に弾力性があり、変形可能である）および固体の特性のいくつか（すなわち、形が、二次元的な表面上に三次元を維持するのに十分な程度離散している）を有する。「ゲル時間」ともいう「ゲル化時間」とは、組成物が適度の圧力下で流動性を有しなくなるのにかかる時間のことである。これは一般的に、弾性係数Ｇ’が粘性係数Ｇ”と等しいかまたはそれを超える物理的状態に達すること、すなわち、ｔａｎ（Ａ）が１となるとき（従来のレオロジー的手法を使用して決定されるように）を示す。
【００３２】
「成形用」ゲルは、光への曝露前または曝露中に形に適合するものであり、特定の形をとり、保持するために輪郭形成または成形することができるものである。したがって、空間への点滴注入または投与およびゲル化を触媒するための照明の後、関心のある組成物を、例えば、成形手段、例えば外科的抑制物または平面または曲面、指、手のひら、指関節などの他の道具または器具を使用して、外部操作により成形することができる。
【００３３】
ヒドロゲルは、弾性ゲルを形成するために水を吸収することができる水膨張性ポリマーマトリックスである。ヒドロゲルは、架橋されて、水膨張した、不溶性ポリマーネットワークを形成する親水性ポリマーからなる。架橋は、例えば、光誘導反応など、多くの物理または化学機構により開始することができる。
【００３４】
「マトリックス」は、共有結合または非共有結合架橋により結びついた巨大分子の三次元ネットワークである。水性環境内への設置の際、乾燥ヒドロゲルは、ポリマーまたはネットワークにおける粘度、ゲル状態および／または架橋度が許す範囲で膨張する。マトリックスは、ネットワークであり得る。
【００３５】
光重合は、光開始剤およびポリマー溶液（「プレゲル」またはモノマー溶液と称する）を開始剤に特化した光源に曝露することにより、ポリマー鎖を共有結合架橋する方法である。活性化の際、光開始剤は、ポリマー鎖における特定の官能基と反応し、官能基を結合してヒドロゲルを形成する。反応は一般的に迅速であり（３〜５分）、室温または体温で行うことができる。光誘導ゲル化は、骨格形成の空間的および時間的制御を可能とし、注入後およびin vivoゲル化中の成形操作を可能にする。細胞および生物活性要因を、ヒドロゲル骨格に、これらをゲル化前にポリマー溶液中にまたはポリマー溶液と共に単に混合することによって、組み込むことができる。
【００３６】
関心のあるヒドロゲルは、細胞、組織および器官の修復を促進する一方、瘢痕形成を妨げる、半浸透するネットワークであり得る。関心のあるヒドロゲルを、重合および結合を容易にする反応基を含有させるために誘導体化する。関心のあるヒドロゲルはまた、生体表面、人工表面および／または第二のポリマーまたはネットワークと反応する反応基または官能基を持つことができる。後者の形の反応性はまた、関心のあるゲルを関心のある部位でおよび関心のある部位に固定することができる。関心のあるヒドロゲルはまた、ゲル状ヒドロゲルがより長い期間保持または滞在することが可能な粘度を有するよう構成することができる。粘度は、使用されるモノマーおよびポリマーにより、架橋度により、ヒドロゲル内に捕らえられた水のレベルにより、およびタンパク質、脂質、サッカリドなどの生体ポリマーなどの組み入れられた増粘剤により制御することができる。かかる増粘剤の例は、架橋されているかされていないＨＡである。
【００３７】
ポリマーは、ホモポリマー、ブロックコポリマー、ヘテロポリマー、ランダムコポリマー、グラフトコポリマーなどを含む繰り返しモノマー単位から構成される分子を示すために使用される。「ポリマー」はまた、直鎖ポリマーならびに分枝ポリマーを含み、分枝ポリマーは、高度に分枝した、樹枝状、コームバースト(comb-burst)および星形ポリマーを含む。
【００３８】
モノマーは、ポリマーにおける基本的な繰り返し単位である。モノマーは、それ自体、モノマーであってもよく、または少なくとも２つの同じまたは異なるモノマーのダイマーまたはオリゴマーであってもよく、各ダイマーまたはオリゴマーは繰り返され、ポリマーとなる。マクロマー、高分子モノマー、は一般的に、分子がモノマーとして作用するのを可能にする反応基を、しばしば末端に有するポリマーまたはオリゴマーである。
【００３９】
重合開始剤とは、例えば、遊離基の発生によりモノマーまたはマクロマーの重合を開始することができるあらゆる物質のことである。重合開始剤はしばしば、酸化剤である。例示的な重合開始剤は、例えば、可視光などの電磁放射に曝露することにより活性化されるものである。
【００４０】
本発明のあるモノマーサブユニットは、特定の幾何学的または立体異性体形状で存在してもよい。さらに、本発明のポリマーおよび他の組成物はまた、光学活性であってもよい。本発明は、本発明の範囲に含まれる、ｃｉｓ−異性体およびｔｒａｎｓ−異性体、Ｒ−鏡像異性体およびＳ−鏡像異性体、ジアステレオマー、（ｄ）−異性体、（１）−異性体、それらのラセミ混合物、およびそれらの他の混合物を含むすべてのこのような化合物を意図する。さらなる不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基に存在してもよい。すべてのかかる異性体、ならびにそれらの混合物は、本発明に含まれることが意図される。
【００４１】
用語「置換された」、「官能基」および「反応基」は、関心のあるモノマー、ポリマーおよびネットワークにある、すべての許容される有機化合物の置換基を含むことを意図する。広い面において、許容される置換基は、有機化合物の非環式および環式、分枝および非分枝、炭素環および複素環、芳香族および非芳香族の置換基を含む。具体的な置換基は、当該技術分野において既知の、例えば、カルボキシ基、アミン基、アミド基、ヒドロキシル基などを含む。許容される置換基は、適切な有機化合物に応じて１または２以上であり、また同じであってもまたは異なっていてもよい。本発明の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基および／またはヘテロ原子の価数を満たす本明細書中に記載された有機化合物のあらゆる許容される置換基であってもよい。本発明は、有機化合物の許容される置換基によっていかなる方法によっても限定されることを意図しない。
【００４２】
官能基またはポリマーまたはネットワークの形成を仲介する能力のある部分を、当該技術分野において既知の実施方法で、天然に存在する分子または合成分子に添加することができる。官能基は、本明細書中に教示したさまざまな基および化学要素を含み、アクリル酸塩、メタクリル酸塩、ジメタクリル酸塩、オリゴアクリル酸塩、オリゴメタクリル酸塩、エタクリル酸塩、イタコン酸塩またはアクリルアミドなどのアルケニル部分を含む。さらに、官能基は、アルデヒドを含む。他の官能基は、エチレン的に(ethylenically)不飽和なモノマーは、例えば、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸ブチル、アクリル酸エチル、アクリル酸ブチル、アクリル酸ヘキシル、アクリル酸ｎ−オクチル、メタクリル酸ラウリル、メタクリル酸２−エチルヘキシル、アクリル酸ノニル、メタクリル酸ベンジルなどのアクリル酸またはメタクリル酸のアルキルエステル、アクリル酸２−ヒドロキシエチル、メタクリル酸２−ヒドロキシエチルおよびメタクリル酸２−ヒドロキシプロピルなどの同じ酸のヒドロキシアルキルエステル、アクリロニトリル、メタクリロニトリルおよびメタクリルアミドなどの同じ酸の亜硝酸塩およびアミド、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、塩化ビニリデン、塩化ビニル、およびスチレン、ｔ−ブチルスチレンおよびビニルトルエンなどのビニル芳香族化合物、マレイン酸ジアルキル、イタコン酸ジアルキル、メチレンマロン酸ジアルキル、イソプレンおよびブタジエンを含んでもよい。カルボン酸基を含む好適なエチレン的に不飽和なモノマーは、アクリル酸、メタクリル酸、エタクリル酸、イタコン酸、マレイン酸、フマル酸などのアクリルモノマー、イタコン酸モノメチル、イタコン酸モノエチルおよびイタコン酸モノブチルを含むイタコン酸モノアルキル、マレイン酸モノメチル、マレイン酸モノエチルおよびマレイン酸モノブチルを含むマレイン酸モノアルキル、シトラコン酸およびスチレンカルボン酸を含む。好適なポリエチレン的に(polyetheylenically)不飽和なモノマーは、ブタジエン、イソプレン、メタクリル酸アリル、ジアクリル酸ブタンジオールおよびジアクリル酸ヘキサンジオールなどのアルキルジオールのジアクリル酸塩、ジビニルベンゼンなどを含む。
【００４３】
置換または〜と置換されたは、かかる置換が置換された原子および置換基の許容される価数に従い、置換が、例えば、転位、環化、離脱または他の反応などによる変換を自然発生的に受けない安定した化合物をもたらす潜在的な条件を含むということが理解されよう。
【００４４】
本発明の目的のために、化学元素を、the Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed., 1986-87に従い、同定する。
【００４５】
いくつかの態様において、本開示は、コラーゲンまたはヒアルロン酸などの生体ポリマーが一般に由来の美容用充填剤を含む組成物を対象にする。いくつかの態様において、ポリマーは一般的に結合し、所望の粘度および物理特性を生み出す。それらの開始分子は、細胞外マトリックスの天然の成分である。他の好適なポリマーは、グルコサミノグリカン、ムコ多糖類、コラーゲンまたはプロテオグリカン成分など、例えば、ヒアルロン酸、ヘパリン硫酸、グルコサミン、デルマタン、ケラチン、ヘパリン、ヒアルロナン、アグリカンなどの天然に存在するものも含む。一般的に、あらゆる生物学的に適合したポリマーを、関心のあるポリマーとして使用することができる。
【００４６】
関心のあるポリマーとしての役割を果たす好適な親水性ポリマーは、合成ポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、部分的にまたは完全に加水分解したポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（エチルオキサゾリン）、ポリ（エチレンオキシド）−コ−ポリ（プロピレンオキシド）ブロックコポリマー（ポロキサマーおよびメロキサポール）、ポロキサミン、カルボキシメチルセルロース、およびヒドロキシエチルセルロースおよびメチルヒドロキシプロピルセルロースなどのヒドロキシアルキル化セルロース、および天然のポリマー、例えば、ＦｉｃｏｌｌＴＭ、ポリスクロース、デキストラン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸またはアルギン酸塩などの多糖類または炭水化物、およびゼラチン、コラーゲン、アルブミンまたはオボアルブミンなどのポリペプチドまたはタンパク質、あるいはこれらのコポリマーまたはブレンドを含む。本明細書で用いられるように、「セルロース」は、上述した種類のセルロースおよび誘導体を含み、「デキストラン」は、デキストランおよびその類似の誘導体を含む。
【００４７】
いくつかの態様において、生物学的に適合したポリマーのモノマー単位を、生体ポリマーのモノマーに位置する１または２以上のチオ、カルボン酸またはアルコール部分を通じて官能化してもよい。例えば、コンドロイチン硫酸の場合、カルボニル基を、例えば、カルボジイミド化学（carbodiimide chemistry）を使ってイミド基で誘導体化することができる。アルコール基を、例えば、the Mitsunobu reaction, Procter et al., Tetra. Lett. 47(29)5151-5154, 2006を使って誘導体化することができる。
【００４８】
非常に粘性のある液体またはチキソトロピックであり、構造のゆっくりとした発展により時間とともにゲルを形成する多糖類もまた、有用である。例えば、整髪用ジェルのような堅さを有する注入可能なゲルを形成することができるヒアルロン酸を利用してもよい。修飾ヒアルロン酸誘導体は特に有用である。本明細書で用いられるように、用語「修飾ヒアルロン酸」とは、化学修飾したヒアルロン酸のことである。修飾ヒアルロン酸は、結合および生分解の速度および程度を調節するために、予め選択した化学修飾により設計および合成してもよい。例えば、修飾ヒアルロン酸は、ポリマーをより疎水性におよびゲル形成させるために、プロピオン酸またはベンジル酸などの比較的疎水性な基によりエステル化するために設計および合成してもよく、あるいは静電気的自己集合を促進するためにアミンとグラフトする。したがって、注入可能であって、圧力下で流動するが、圧力下ではないときにゲル様構造を維持する修飾ヒアルロン酸を合成してもよい。ヒアルロン酸およびヒアルロン誘導体は、Genzyme, Cambridge, MA.およびFidia, Italyから入手可能である。
【００４９】
上述したポリマーの合成方法は、当業者に知られている。例えばConcise Encyclopedia of Polymer Science and Polymer Amines and Ammonium Salts, E. Goethals, ed. (Pergamen Press, Elmsford, N.Y. 1980)を参照。ポリ（アクリル酸）などの多くのポリマーが、市販されている。天然に存在するポリマーは、当該技術分野において知られているように、生体源から単離することができ、あるいは市販されている。天然に存在するおよび合成ポリマーは、当該技術分野で利用可能であり、例えば、March, "Advanced Organic Chemistry," 4th Edition, 1992, Wiley-Interscience Publication, New Yorkに記載された化学反応を使用して修飾してもよい。
【００５０】
数々の化学的選択がポリマーを修飾するために利用可能であり、該ポリマーは後でラジカル重合が行われてもよい。例えば、無水メタクリル酸、塩化メタクリロイルおよびメタクリル酸グリシジルを、メタクリレート基をポリマー鎖の１または２以上のモノマーに加えるために使用してもよい。メタクリル酸グリシジルを、例えば、反応の効率のために使用してもよい。さらに、修飾試薬を、細胞毒性副生成物の欠如を最適化するために、選択してもよい。
【００５１】
さまざまな光解離性化合物が、関心のある光開始剤として使用するために、利用可能であり、ジスルフィド、ベンゾインおよびベンジルを含むが、これらに限定されない。例示の光開始剤の非限定のリストは、ベンゾフェノン、トリメチルベンゾフェノン、チオキサントン、２−クロロチオキサントン、９，１０−アントラキノン、ｂｉｓ−４，４−ジメチルアミノベンゾフェノン、ベンゾインエーテル、ベンジルケタール、α−ジアルコキシアセトフェノン、α−ヒドロキシアルキルフェノン、α−アミノアルキルフェノン、アシルホスフィンオキシド、ベンゾフェノン／アミン、チオキサントン／アミン、チタノセン、２，２−ジメトキシアセトフェノン、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−メチル−１−［４−（メチルチオ）フェニル］−２−（４−モルホリニル）−１−プロパノン、２−ヒドロキシ−１−［４−（ヒドロキシエトキシ）フェニル］−２−メチル−ｌ−プロパノン、α−ヒドロキシ−ケトンおよびベンジルジメチル−ケタール、例えばIrgacure 651および184、およびDarocur 1173、Ciba Chemicalsにより市販、Rose Bengal、カンファーキノン、エリトロシン、およびそれらの混合物などを含む。
【００５２】
プレゲルであるモノマー溶液は、ゲル化される重合可能な成分全体、所望の重合および／またはネットワークの程度、所望の重合および／またはネットワーク速度などをベースに、設計的選択として、光開始剤を、一定量、例えば、０．０５〜約１．５重量％、０．１〜１．０重量％または０．０８〜０．５重量％含むことができる。
モノマー溶液は、光開始剤を含有することができ、光開始剤は、モノマーと使用前に混合することができ、あるいは別々に適用することができる。
任意に、プロトン受容体を含んでもよい。好適なかかるプロトン受容体は、当該技術分野において既知である。かかる好適なプロトン受容体の一例は、トリエチルアミンなどの第三級アミンなどのアミンである。
【００５３】
照明手段は、使用する光開始剤を活性化するのに好適で、身体の外側から光開始剤を活性化することができる光源であり得る。熱開始剤を使用することができるので、赤外線源が使用され、紫外線活性化開始剤を使用することができるので、好適な紫外線源が使用されるが、好ましい光源は、白色光源である。したがって、エオシンＹなどの好適な光開始剤が使用され、開始剤および光源の最大吸収が調整される。本明細書で上述したとおり、１つのかかる可視光源は、ＩＰＬデバイスである。一般的に使用される市販のＩＰＬは、キセノンフラッシュランプを備える。他の好適な光源が、身体に、部位に必要に応じて、あるいは皮膚表面の上から、電磁放射に適用することなどにより、体内で、部位で、皮膚の表面下などでゲル化が生じる限り、使用することができる。電磁放射を、ゲル化をすることができる強度、回数および持続期間で適用する。光源は、皮膚表面の上または皮膚表面上に直接に据えることができる。
【００５４】
関心のあるモノマー溶液はまた、医薬技術分野において知られた、保存剤、充填剤、賦形剤または希釈剤などの不活性材料、小分子または生体などの薬理学的に活性な分子または剤、細胞などのあらゆるさまざまな他の材料を含有することができる。したがって、好適な不活性または生物活性剤を、モノマー溶液に添加することができる。後者の場合、活性剤は、部位で局所的にまたは関心のある重合したまたはネットワーク化した構造の付近において薬理学的作用を発揮してもよく、あるいは隣接する組織空間を通って移動するために、形成した骨格、マトリックスまたはネットワークから放出し得、またはより低い局所的効果のために循環系に入ってもよい。
【００５５】
上述の通り、関心のある官能化モノマーはまた、皮膚科用、整形外科用、美容用などの充填剤、貼付剤など、例えば市販のものと組み合わせて使用することができる。例は、架橋されたＨＡを含むＲｅｓｔｙｌａｎｅＴＭ、ＨＡを含むＪｕｖｅｄｅｒｍ（Ａｌｌｅｒｇａｎ）、コラーゲンを含むＺｙｄｅｒｍ、コラーゲン中にミクロスフェアを含むＲａｄｉｅｓｓｅＴＭなどを含む。したがって、関心のあるモノマー溶液を、例えば成形用で、輪郭形成可能であり、長い滞留時間を有する組成物を提供するために、既知の充填剤と混合することができる。
【００５６】
例証として、本発明のポリマーマトリックス組成物を、皮膚表面のすぐ下のさまざまな内腔および空隙をブロックまたは充填するために使用することができる。したがって、本発明は、ヒト患者などのホストにおける組織増大の方法に関し、ここで、前記関心のあるモノマー溶液を、増大の必要がある組織部位でまたは組織部位内にモノマーを注入するなど当該技術分野において既知の方法を使って、関心のある部位で導入し、適用したらすぐに、身体の表面をモノマー溶液の重合をもたらす可視光に曝露する。注入可能なモノマー、および注射器などの送達手段、ならびに任意に光源、光開始剤およびプロトン受容体、を含有するキットもまた、提供する。
【００５７】
「増大」は、関心のあるポリマーまたはネットワークを提供する、増大させる、あるいはかかる組織と置き換えることにより、欠損、特に組織の損失または不存在による欠損、の修復、防止または緩和を意味する。増大はまた、天然の構造または特性の補充、すなわち、例えば、そのサイズを増加させるための既存の身体部分、例えば唇、鼻、胸、耳、生殖器官の一部、眉、顎、頬などへの追加の構築を含むことを意味する。本発明は、主に軟組織増大のために設計されている一方、本発明の注入可能な組成物が、組織へ適用することができ、例えば石化または骨形成を促進するための材料と組み合わせて使用することができることから、硬組織増大が包含される。したがって、組織増大は、顔および首などにおける線、溝、しわ、軽度の顔面陥没、口唇裂、表面しわなどの充填；手および足、指およびつま先を含む老化または疾患による軽度の奇形の修正；話す能力を回復させるための声帯または声門の増大；睡眠線および表情線の皮膚の充填；老化により失われた皮膚および皮下組織の交換；唇の増大；目の周りのしわおよび眼窩溝の充填；胸の増大；顎の増大；頬および／または鼻の増大；例えば、過剰な脂肪吸引または他の外傷による軟組織、皮膚または皮下におけるへこみの充填；座瘡または外傷性瘢痕および皺の充填；鼻唇線、鼻眉間線および口腔下線の充填などを含むことができる。
【００５８】
関心のあるモノマー溶液は、使用温度で、細い手術用針（例えば、少なくとも２２、少なくとも２７またはより細いゲージを有する針）などの送達手段を通じて迅速な押出しに好適な粘度を有するものである。したがって、「注入可能な」溶液とは、典型的な注入圧力を用いることにより、手術用針などの好適な送達デバイス、他の手術用器具または内視鏡的または経皮的解剖手段において使用される機材などの他の送達手段を通じた流動を可能とする質感および粘度を有するものである。したがって、関心のあるモノマー溶液とは、カテーテル、カニューレ、針、注射器、管状器具などの好適な適用装置などの、当該技術分野において既知のものを通じて注入可能なものである。
【００５９】
モノマー溶液の粘度は、意図する使用に合うための設計選択によりさまざまである。例えば、表面部位または少ない容積の組織空間への適用のために、粘度のより低いモノマー溶液を、溶液の流動性を確保するために使用することができる。より大きな組織空間またはより深い部位などの他の部位において、より粘度の高いモノマー溶液を、光開始剤および光への曝露前または曝露中の部位でのモノマー溶液の保持を容易にするために使用することができる。
【００６０】
本発明は、本発明の方法を行うことが可能なキットを提供する。かかるキットは、直ちに入手可能な材料および試薬から作製することができ、医薬および医療技術分野において既知のさまざまな態様が供給される。例えば、かかるキットは、少なくとも１回の処置に十分な量の、光活性化可能なモノマー溶液、任意に、滅菌緩衝液または水、方法を行うのに必要なまたは助けになる他の試薬、および説明書を含むことができる。説明書は、ユーザーが本発明の方法を行うことができるよう、試薬の濃度または、使用する試薬の量、試薬などの安定条件などの少なくとも１つの方法のパラメータを説明する具体的な表現を含む。一態様において、キットは、しばしば予め滅菌された関心のあるモノマーを設置する送達手段を含む。かかる送達手段は、例証として、限定することなく、小さい注射器（例えば、２２〜２７ゲージ）、大きい注射器（例えば、１３〜１９ゲージ）または内視鏡的または経皮的椎間板切除手段において使用される機材を含むことができる。送達手段は、予め滅菌し、プラスチックラッパーなどの滅菌収容手段に包むことができる。試薬は、使用の容易性および安定性を改善するために、溶液中に、懸濁液として、または実質乾燥粉末として、例えば、凍結乾燥形状で、独立してまたは成分の混合物として提供することができる。分解可能な試薬を提供する際、当該技術分野において既知の、例えば、低温保管、安定化剤（例えば、グリセロールまたは還元剤）の添加などの条件を、試薬の安定性を最大にするために選択する。不安定な試薬は、キットのより安定した成分と共にまたは別々に提供することができる。試薬および説明書は、試薬を中で固定するための容器手段に設置および運搬することができ、それにより、例えば、内容物のための支持および保護を提供する、単位の積み重ね能を提供する、絶縁性を提供する、輸送形状を提供する。
【００６１】
試薬は、当該技術分野において既知の、医薬技術分野において許容しうるやり方で、方法を実施して、in vivo使用に好適な試薬を使用して、製造、キット製作、保管などをする。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacyの最新版参照。
【００６２】
本発明は、ここまで概して記載されたが、単にある面および態様の説明の目的のために含まれ、発明を限定することを意図しない、以下の例を参照に、より容易に理解されよう。
【００６３】
例１−ＰＥＧおよびＨＡを含む皮膚充填剤
本例は、修飾された架橋可能なポリマーをＨＡと共に含む、光によって活性化された注入可能な美容用充填剤を提供することに関する本発明の有効性を実証する。
ＨＡ充填剤（Ｒｅｓｔｙｌａｎｅ（登録商標））中さまざまな濃度のＰＥＧを試験した。青色色素を、インプラントおよびその分解をより良く視覚化するためにＰＥＧに組み込んだ。ＰＥＧが存在しない場合、ＨＡは緩衝液に素早く溶解した。より多くのＰＥＧを充填剤に添加するにつれ、形（および組み込まれた色素）はより長く維持された。
【００６４】
ＰＥＧ−ＨＡの好適な得られた濃度を、in vivo研究に形を変え、架橋されたポリマーの市販の皮膚充填剤との組込みにより、充填剤の寿命が延びることを実証した。図１にまとめて表わしたデータが、ＨＡ（Ｒｅｓｔｙｌａｎｅ）およびＰＥＧの組合せを含む皮膚光充填剤の保持が改善され、ＨＡ（Ｒｅｓｔｙｌａｎｅ（登録商標））のみと比較してほぼ１００％であることを実証した。
【００６５】
例２−ＰＥＯＤＡおよびＨＡを含む美容用充填剤
本例は、ＨＡおよびＰＥＯＤＡを含む美容用充填剤組成物を提供することに関する本発明の有効性を実証する。
種々のポリマー濃度および組成物を含む多数のポリマーの組合せをテストした。それらの要因は、粘度、架橋密度などのモノマー特性およびそれに続くヒドロゲルの膨張および機械的特性に影響を与え得る。
【００６６】
マクロマー溶液：ＰＥＯＤＡ／ＨＡ（Ｒｅｓｔｙｌｅｎｅ（登録商標））マクロマー溶液を、Ｒｅｓｔｙｌｅｎｅ（登録商標）中２００ｍＭのトリエチルアミン（Sigma Aldrich）、５０ｐｌ／ｍＬのエオシンＹ（Sigma Aldrich）、Ｎ−ビニルピロリドン（Sigma Aldrich）、およびＰＥＯＤＡ（SunBio、Seoul、South Korea、分子量：３４００ｇ／ｍｏｌ）を混合することにより調製した。３種類の異なる濃度のＰＥＯＤＡを使用した：４および１０％ＰＥＯＤＡおよび２０％４−ａｒｍ  ＰＥＯＤＡ。
そして、マクロマー溶液を、７８歳女性の死体の皮膚の下に注入し、３種類の異なる条件下でＩＰＬ曝露（パルスあたりの強度、−５Ｊ／ｃｍ２）により光重合した。
【００６７】
皮下型：およそ１００ｐＬのマクロマー溶液を型に入れ、皮膚の下に設置した。ＩＰＬ光を当て、マクロマー溶液の重合に必要なＩＰＬパルス数を数え、記録した（表１）。
皮膚ポケット：皮膚の下に、平滑な表面を有する制約された空間が作られ、およそ５００ｐＬのマクロマー溶液を、型なしでポケット内に設置した。ＩＰＬ光を当て、マクロマー溶液の重合に必要なＩＰＬパルス数を数え、記録した（表１）。
皮内注入：マクロマー溶液を皮膚の下に注入した。
マクロマー溶液の固体化が、異なるＩＰＬパルスの適用後に観察された。重合が、部位の切除に続いて確認された。
【００６８】
皮膚から離されたＩＰＬ光源の距離が、重合に効果があり、マクロマー溶液は、ＩＰＬ源が死体の皮膚表面からおよそ３ｃｍより遠く離された場合は、重合しなかった。したがって、ＩＰＬ光源は、皮膚から約１ｃｍに保ち、マクロマー溶液の光重合に必要なエネルギー量を決定した（表１）。結果は、ＰＥＯＤＡ／Ｒｅｓｔｙｌｅｎｅ（登録商標）マクロマー溶液が確かにエオシンＹ開始剤およびＩＰＬ光源を使用して皮膚内および皮内空間で重合することができることを示した。
【００６９】
【表１】
2010535071.tif 000002
【００７０】
本明細書で言及された全ての特許および刊行物は、各独立した特許および刊行物が具体的および個別に参照として組み込まれると指示されるのと同様に、同一の程度において、本明細書に参照として組み込まれる。
【図１Ａ】
2010535071.tif 000003
【図１Ｂ】
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【国際調査報告】
2010535071.tif 000005