(57)【要約】  角膜細胞に対する親和性を有するポリマーであって、角膜細胞成長の基質として使用することができ、それ故、角膜バンデージで、特に、少なくとも角膜に接する表面が上記ポリマーで構成されるコンタクトレンズの形態で使用するのに適するポリマーが開示される。角膜細胞に対する親和性のある基質は、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであり、ユニットＡは、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され、ユニットＢは、アリールオキシ、アルコキシまたはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレート、および（アルキル）アクリル酸から誘導される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
角膜細胞に対する親和性を有する基質としての、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーの使用であって、
前記ユニットＡが、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され；
前記ユニットＢが、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレート、および（アルキル）アクリル酸ポリマーから誘導される、
ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーの使用。
【請求項２】
角膜バンデージの調製における、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記コポリマーが、一般式（Ｄ）を有するユニットＡを含む、請求項１または２に記載の使用：
【化１】
2010506644.tif 000006
ここで、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7は独立に、水素、低級アルキル基、フェニル基または置換されたフェニル基であり；
Ｒ5はＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨＲ−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、（ＣＨ2）eであり、ただしｅ＝２〜６であり、Ｒa、Ｒb、Ｒc、Ｒdは低級アルキル基であり、Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは同一であっても異なっていてもよい。
【請求項４】
前記コポリマーが、一般式（Ｅ）を有するユニットＢを含む、請求項１、２または３に記載の使用：
【化２】
2010506644.tif 000007
ここで、Ｒ1はＨ、低級アルキル基、フェニル基または置換されたフェニル基であり；
Ｒ2はＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、（ＣＨ2）eであり、ただし、ｅ＝２〜６であり、Ｒa、Ｒb、Ｒc、Ｒdは低級アルキル基であり、Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは同一であっても異なっていてもよく；
ｓは０または１であり；
ｓが０であるとき、Ｒ3は水素であり；
ｓが１であるとき、Ｒ3は水素または低級アルキル基、フェニル基もしくは置換されたフェニル基である。
【請求項５】
前記コポリマーが、下記構造を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用：
−（Ａ）p−（Ｂ）q−
ここで、ｐ＋ｑ＝１００であり、０＜ｐであり、ｑ＜１００である。
【請求項６】
ｐ：ｑの比が１０〜７０：９０〜３０の範囲内にある、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記ユニットＢにおいて、ｓが１であり、Ｒ3が水素である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記ユニットＢにおいて、ｓが１であり、Ｒ3が低級アルキル基である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記ユニットＢにおいて、ｓが０であり、Ｒ3が水素である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記コポリマーのユニットＡが、２−（ジエチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＥＡＥＭＡ）、２−（ジエチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＥＡＥＡ）、２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、もしくは２−（ジメチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＭＡＥＡ）、またはこれらの混合物から誘導される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記コポリマーのユニットＢが、ヒドロキシルエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ヒドロキシルブチルメタクリレート（ＨＢＭＡ）、ヒドロキシルエチルアクリレート（ＨＥＡ）、ヒドロキシルプロピルアクリレート（ＨＰＡ）、ヒドロキシルブチルアクリレート（ＨＢＡ）、もしくはメタクリル酸（ＭＡＡ）、またはこれらの混合物から誘導される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記コポリマーのユニットＡが、２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）から誘導され、ユニットＢが、メタクリル酸（ＭＡＡ）から誘導される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記コポリマーのユニットＡが、２−（ジエチルアミノ）エチルメタクリレートまたは２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＥＡＥＭＡまたはＤＭＡＥＭＡ）から誘導され、Ｂがヒドロキシル（エチルまたはプロピル）メタクリレート（ＨＥＭＡまたはＨＰＭＡ）から誘導される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記コポリマーのＡが、２−（ジエチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＥＡＥＡ）から誘導され、およびＢが２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）から誘導される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
少なくとも表面が、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーを含むポリマー材料を含む角膜バンデージであって、
前記ユニットＡが、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され、
前記ユニットＢが、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレート、および（アルキル）アクリル酸から誘導される、
角膜バンデージ。
【請求項１６】
前記コポリマーから形成された、または前記コポリマーでコートされた繊維を含む、請求項１５に記載の角膜バンデージ。
【請求項１７】
前記コポリマーの表面層を有するポリマーコンタクトレンズを含む、請求項１５に記載の角膜バンデージ。
【請求項１８】
少なくとも表面層がユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであるバンデージ支持体を含む角膜バンデージであって、
前記ユニットＡは、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され、
前記ユニットＢは、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレートまたは（アルキル）アクリル酸から誘導され、
角膜細胞に対する親和性を有する表面を提供する角膜バンデージ。
【請求項１９】
前記バンデージ支持体が繊維状支持体である、請求項１８に記載の角膜バンデージ。
【請求項２０】
前記バンデージ支持体がコンタクトレンズである、請求項１８に記載の角膜バンデージ。
【請求項２１】
前記支持体が、前記コポリマーでコートされた、または前記コポリマーを刷り込まれた、請求項１８に記載の角膜バンデージ。
【請求項２２】
角膜治療のための角膜バンデージを調製する方法であって、
少なくとも表面層が、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであるコンタクトレンズを提供して、角膜細胞に対する親和性を有する表面を提供することと、
ここで、前記ユニットＡは、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され、前記ユニットＢは、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレートまたは（アルキル）アクリル酸から誘導される；
前記コンタクトレンズのコートされた前記表面上で前記角膜細胞を成長させて、角膜治療に適した角膜細胞集団を得ることと、
を含む方法。
【請求項２３】
予め形成されたコンタクトレンズを提供することと、該コンタクトレンズ上にコポリマー層を形成させること、とを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記コンタクトレンズが、前記コポリマーでコートされた、または前記コポリマーを刷り込まれた、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記角膜細胞が、角膜上皮細胞、結膜扁平上皮細胞および結膜杯細胞から選択される、請求項２２、２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
角膜治療の方法であって、
少なくとも表面が、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであるコンタクトレンズを提供して、角膜細胞に対する親和性を有する表面を提供することと、
ここで、前記ユニットＡは、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され、前記ユニットＢは、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレートまたは（アルキル）アクリル酸から誘導される；
前記コンタクトレンズのコートされた前記表面上で前記角膜細胞を成長させて、角膜治療に適した角膜細胞集団を得ることと、
前記コンタクトレンズを角膜に角膜バンデージとして適用することと、
を含む方法。
【請求項２７】
予め形成されたコンタクトレンズを提供することと、該コンタクトレンズ上にコポリマー層を形成させること、とを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記コンタクトレンズが、前記コポリマーでコートされた、または前記コポリマーを刷り込まれた、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記角膜細胞が、角膜上皮細胞、結膜扁平上皮細胞および結膜杯細胞から選択される、請求項２６、２７または２８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、角膜バンデージ、および角膜細胞に対する親和性を有し、それ故角膜バンデージでの使用に適したアクリレートコポリマーに関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ他によるＬａｎｃｅｔ第３４９巻、９０５７号、１９９７年４月５日、９９０〜９９３頁における論文「Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄａｍａｇｅｄ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ」は、ソフトコンタクトレンズ上に乗せた培養上皮細胞のシートを使用する、損傷した角膜表面の治療について開示している。
【０００３】
「Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、第１１巻、１１／１２号、２００５年、１７１０〜１７１７頁中の、Ｘｉａｏｊｉｅ  Ｈｕ他による「Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｎｅａｒｌｙ  Ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ  Ｓｔｒｏｍａ」と題する論文は、ポリグリコール酸繊維を角膜細胞を支持する足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）として使用することを開示している。細胞の足場となる構造物は、損傷した角膜に埋め込まれて、角膜表面の修復および再成長を促進することができた。
【０００４】
国際公開第２００６／０１６１６３号（Ａｓａｈｉ）は、（ジアルキルアミノ）アクリレートモノマー、アルコキシアクリレートモノマー、および他の非イオン性モノマーから誘導された特定ポリアクリレートターポリマーが、血液から白血球を除去するための繊維フィルターパッドを調製するために有用であることを開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の一つの目的は、角膜細胞に結合する性質を有し、それ故、角膜バンデージに使用するための基質材料として適切なコポリマーを提供することである。
【０００６】
本発明の別の目的は、角膜治療のため角膜細胞を供給する媒体（ｖｅｈｉｃｌｅ）として使用される角膜バンデージを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、角膜細胞に対する親和性を有するポリマーであって、角膜細胞の成長のための基質（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）として使用することができ、それ故角膜バンデージにおいて、特に、少なくとも角膜に接する表面が当該ポリマーで構成されるコンタクトレンズの形態で使用するのに適するようなポリマーを提供する。
【０００８】
角膜細胞に対する親和性を有する基質は、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであって、上記ユニットＡが、アミノアルキル（アルキル）アクリレート類から誘導され、ユニットＢが、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレート類、および（アルキル）アクリル酸類から誘導される、コポリマーである。
【０００９】
一態様において、本発明は、１種以上のバンデージ構成成分を含み、かつ少なくとも表面が、上で定義したユニットＡおよびユニットＢを有する活性コポリマーを含む角膜バンデージを提供する。
【００１０】
一形態において、角膜バンデージは、活性コポリマーから形成された、または活性コポリマーでグラフトもしくはコートされた繊維またはフィルムを含み得る。別の形態において、角膜バンデージは、別のポリマーの構造、例えば、活性ポリマーでグラフトまたはコートされた繊維またはコンタクトレンズ形状を含んでもよい。
【００１１】
さらなる態様において、本発明は、少なくとも表面層がユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであるコンタクトレンズを提供して、角膜細胞に対する親和性を有する表面を提供すること、並びに、コンタクトレンズのコートされた上記表面上で角膜細胞を成長させて、角膜治療に適した角膜細胞集団を得ることを含む、角膜治療のための角膜バンデージを調製する方法を提供する。
【００１２】
他の態様において、本発明は、少なくとも表面がユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含むコポリマーであるコンタクトレンズを提供して、角膜細胞に対する親和性を有する表面を提供すること、コンタクトレンズのコートされた上記表面上で角膜細胞を成長させて、角膜治療に適した角膜細胞集団を得ること、および角膜に角膜バンデージとしてコンタクトレンズを適用することを含む、角膜治療の方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明は、角膜細胞成長のための基質としての、角膜細胞に対する親和性を有するポリマーを含む角膜バンデージに関する。
【００１４】
角膜治療に適切な細胞は角膜上皮細胞、結膜扁平上皮細胞および結膜杯細胞から選択され得る。
【００１５】
角膜バンデージは、少なくとも角膜接触表面に角膜細胞に対する親和性を有するポリマー層を有する、コンタクトレンズ、またはコンタクトレンズ形状を有するポリマー構造物であることが好ましい。
【００１６】
角膜細胞に対する親和性を有する基質として使用されるコポリマーは、ユニット−（Ａ）−およびユニット−（Ｂ）−を含み、
ユニットＡは、アミノアルキル（アルキル）アクリレートから誘導され；
ユニットＢは、アリールオキシ、アルコキシもしくはヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレート、および（アルキル）アクリル酸から誘導される。
【００１７】
従って、ユニットＡは、一般式（Ｄ）を有していてよく、
【００１８】
【化１】
2010506644.tif 000002
【００１９】
ここで、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7は独立に、水素、低級アルキル基、フェニル基または置換フェニル基であり；
Ｒ5は、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨＲ−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、（ＣＨ2）eであり、ただしｅ＝２〜６、およびＲa、Ｒb、Ｒc、Ｒdは低級アルキル基であり、およびＲa、Ｒb、ＲcおよびＲdは同一であっても異なっていてもよい；ならびに、
ユニットＢは一般式（Ｅ）を有していてよく、
【００２０】
【化２】
2010506644.tif 000003
【００２１】
ここで、Ｒ1は、Ｈ、低級アルキル基、フェニル基または置換フェニル基であり；
Ｒ2は、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−ＣＨＲa、ＣＨＲa−ＣＨ2、ＣＨＲa−ＣＨＲb、ＣＨＲa−ＣＲbＲc、ＣＲaＲb−ＣＨＲc、ＣＲaＲb−ＣＲcＲd、（ＣＨ2）eであり、ただしｅ＝２〜６、およびＲa、Ｒb、Ｒc、Ｒdは低級アルキル基であり、Ｒa、Ｒb、ＲcおよびＲdは同一であっても異なっていてもよく；
ｓは、０または１であり；ｓが０であるとき、Ｒ3は水素であり、ｓが１であるとき、Ｒ3は、水素または低級アルキル基、フェニル基もしくは置換フェニル基である。
【００２２】
コポリマーは、以下の一般構造：
−（Ａ）p−（Ｂ）q−
を有することが好ましく、ここで、ｐ＋ｑ＝１００であり、０＜ｐであり、ｑ＜１００であり、典型的には１０＜ｐであり、ｑ＜９０である。
【００２３】
コポリマーの或る好適な群において、ユニットＢにおけるｓは１であり、Ｒ3は水素である。
【００２４】
コポリマーの別の好適な群において、ユニットＢにおけるｓは１であり、Ｒ3は低級アルキル基である。
【００２５】
コポリマーのさらに別の好適な群において、ユニットＢにおけるｓは０であり、Ｒ3は水素である。
【００２６】
特に断らない限り、本明細書において「アルキル」基と称するものは低級アルキル基（即ち、炭素数が１〜６）を意味し、分岐状でも直鎖状でもよい。「置換フェニル」という基は、典型的には、１つ以上の低級アルキル基により置換されていても、置換されていなくてもよいフェニル基を指す。
【００２７】
コポリマーは、典型的には、以下の一般構造：
−（Ａ）p−（Ｂ）q−
を有し、ここで、ｐ＋ｑ＝１００であり、ユニットＡおよびユニットＢのランダム配列であることが好ましい。例えば、使用され得るｐ：ｑ比は、９０：１０、１０：９０、７０：３０、３０：７０および５０：５０である。ｐ：ｑ比が１０〜７０：９０〜３０の範囲であると特に効果的であることが見出されている。
【００２８】
ユニットＡのための上記モノマー類のなかで、適切なアミノアルキル（アルキル）アクリレートとしては、ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレート類、特に２−（ジエチルアミノ）エチルメタクリレート、２−（ジエチルアミノ）エチルアクリレート、２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、２−（ジメチルアミノ）エチルアクリレート、３−（ジエチルアミノ）プロピルメタクリレート、３−（ジエチルアミノ）プロピルアクリレート、３−（ジメチルアミノ）プロピルメタクリレートおよび３−（ジメチルアミノ）プロピルアクリレートが挙げられる。
【００２９】
ユニットＡのための上記モノマー類のなかで、２−（ジエチルアミノ）エチルメタクリレート、２−（ジエチルアミノ）エチルアクリレート、２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、および２−（ジメチルアミノ）エチルアクリレートが、入手可能性、重合における取り扱いの容易さ、および基質の性能の観点から好ましく利用される。
【００３０】
ユニットＢが誘導され得る適切なモノマー類としては、アリールオキシまたはアルコキシ（アルキル）アクリレート類、特にアルコキシ（メタ）アクリレートおよびアルキル（メタ）アクリレートが挙げられる。
【００３１】
適切なアリール／アルコキシ（メタ）アクリレート類としては、２−メトキシエチルメタクリレート、２−メトキシエチルアクリレート、２−エトキシエチルメタクリレート、２−エトキシエチルアクリレート、２−フェノキシエチルメタクリレート、および２−フェノキシエチルアクリレートが挙げられる。
【００３２】
上記モノマー類のなかで、２−メトキシエチルメタクリレートが、入手可能性、重合における取り扱いの容易さ、および基質の性能の観点から好ましく利用される。
【００３３】
ユニットＢが誘導され得る他の適切なモノマーとしては、ヒドロキシアルキル（アルキル）アクリレート類、特にヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート類が挙げられる。
【００３４】
入手可能性、重合における取り扱いの容易さ、および基質の性能の観点から好ましいヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート類としては、ヒドロキシルエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ヒドロキシルブチルメタクリレート（ＨＢＭＡ）、ヒドロキシルエチルアクリレート（ＨＥＡ）、ヒドロキシルプロピルアクリレート（ＨＰＡ）、およびヒドロキシルブチルアクリレート（ＨＢＡ）が挙げられる。
【００３５】
ユニットＢが誘導され得るさらなる適切なモノマー類としては、（アルキル）アクリル酸、特にメタクリル酸およびアクリル酸が挙げられる。入手可能性、重合における取り扱いの容易さ、および基質の性能の観点から、メタクリル酸を利用することが好ましい。
【００３６】
適切なコポリマーの好ましい群において、ユニットＡは２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）から誘導され、およびユニットＢはメタクリル酸（ＭＡＡ）から誘導される。
【００３７】
適切なコポリマーの別の好ましい群において、ユニットＡは２−（ジエチルアミノ）エチルメタクリレートまたは２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＥＡＥＭＡまたはＤＭＡＥＭＡ）から誘導され、ユニットＢはヒドロキシル（エチルまたはプロピル）メタクリレート（ＨＥＭＡまたはＨＰＭＡ）から誘導される。
【００３８】
適切なコポリマーのさらなる好ましい群において、ユニットＡは２−（ジエチルアミノ）エチルアクリレート（ＤＥＡＥＡ）から誘導され、ユニットＢは２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ）から誘導される。
【００３９】
本発明で好ましく使用されるユニットＡおよびＢを含むコポリマーは、ポリアクリレートの調製に従来から使用されている、通常ランダムコポリマーを生じるフリーラジカル共重合技法を使用して調製することができる。
【００４０】
角膜細胞への結合におけるコポリマーの効率は、結合アッセイにより検出または確認することができる。
【００４１】
角膜バンデージで使用するために、上記のコンタクトレンズ構造に加えて、コポリマーを、バンデージとして使用するためのフィルムに成形してもよい。あるいは、コポリマーを、繊維に成形して、または繊維状支持体上にコートして、バンデージとして使用するためのパッドを形成してもよい。
【実施例】
【００４２】
１．ポリマーの調製
ＡＩＢＮ、モノマーおよび溶媒の混合物を、窒素で２時間パージして酸素を除去した。重合は、窒素下に１夜放置して行った。反応後、生成物を非極性溶媒の滴下による添加により沈殿させ、固体を生じさせた。ポリマーを、再溶解および再沈殿させ、捕集して、真空下に４０℃で４時間乾燥させた。ポリマーを、ＧＰＣ、ＤＣＳおよび他の技法により特徴づけた。
【００４３】
この手順を使用して、表１に記載したコポリマーが調製された。
【００４４】
【表１】
2010506644.tif 000004
【００４５】
２．角膜細胞に結合するための親和性
ポリマーを、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中に２％ｗ／ｖで溶解させた。これらの溶液を、Ｐ６７０８  Ｓｐｉｎｃｏａｔｅｒ（Ｓｐｅｅｄｌｉｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳ）を使用して、直径２２ｍｍのガラスのスライドカバー上にスピンコートした。コーティングに続いて、スライドカバーを４５℃で１夜真空下で乾燥させ、ＵＶ照射に１５分間曝すことにより滅菌した。スライドカバーは、下記プロトコルによる細胞培養の前に滅菌した。
【００４６】
１．直径２２ｍｍのスライドカバーの片面を、実施例１、４、５および６のコポリマーのコーティング剤でコートした。各タイプのポリマーの対して１２枚のスライドカバーを準備した。
【００４７】
２．スライドカバー（各６サンプル）を１２ウェルのプレートに入れて、ウェルを、抗生物質（１０％ペニシリン／ストレプトマイシンおよびファンギゾン）と一緒に、ヒト角膜上皮細胞ライン（ＨＣＥＣ）培地「ＥｐｉＬｉｆｅ」で満たし、滅菌するために室温で２４時間放置した。次に、培地を除去して、スライドカバーをＰＢＳで１回洗浄し、ウェルを抗生物質（１％ペニシリン／ストレプトマイシンおよびファンギゾン）を添加した１ｍｌのＥｐｉＬｉｆｅで満たした。
【００４８】
各ウェル中の最終容積が２ｍｌになるように、角膜上皮細胞をウェル中に播いた（１２００００細胞／ウェル）。プレートをインキュベータ中に３７℃で２４時間置いた。
【００４９】
対照は、１２ウェルプレートの、フィブロネクチン（ＨＣＥＣを成長させるためにフラスコをコートするのに一般的に使用される）でコートした３ウェル中と、および組織培養プラスチックがコートされていない他の３ウェル中とに、細胞を播くことにより準備した。
【００５０】
１２時間後に、培地を除去してスライドカバーをＰＢＳで３回洗浄した。
【００５１】
細胞を１ｍｌの４％ホルムアルデヒドを加えて１０分間室温で放置することにより固定した。次に、ホルムアルデヒドを除去して、スライドカバーをＰＢＳで３回洗浄した。細胞を約５５０μｌのＤＡＰＩ（１：２５０）／ウェルで染色して１０分間放置した。ＤＡＰＩを除去してポリマーをＰＢＳで３回洗浄した。
【００５２】
３．分析：
蛍光顕微鏡を使用して細胞を計数し、データを分析した。画像が得られた場合は、ＩＭＳＴＡＲソフトウェアを使用して角膜細胞を計数した。
【００５３】
１枚のスライドカバーの９区域を、ＩＭＳＴＡＲ（ＩＭＳＴＡＲ．Ｓ．Ａ．）のパスファインダ（自動画像キャプチャ）を使用してスキャンし、Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（ＨＣＳ）プラットホームを使用して分析を実施し、細胞数および表面被覆率を算定して、次に被覆率のパーセンテージを評価した。
【００５４】
【表２】
2010506644.tif 000005
【００５５】
スライドカバーの１区画（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｑｕａｒｅ）当たりの核数：９区画の平均（細胞数）である。
平均核面積は細胞面積に等しくない。細胞面積は不明である。
［Ｉ．Ｓ．Ｕ］：積分系単位。この特別の場合には、１Ｉ．Ｓ．Ｕ＝５．８５μｍ2である。
標準偏差（核被覆率（％））
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明に有用と示されたコポリマーは、角膜バンデージ構造中に組み込まれて、角膜細胞に対する親和性を有する基質を提供することができる。それにより、バンデージは、Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ他によるＬａｎｃｅｔ中の、およびＸｉａｏｊｉｅ  Ｈｕ他による「Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」中の上記の論文に記載されたような、角膜治療で使用するために、バンデージに適用された細胞の貯蔵所（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）を維持することができる。治療に十分な細胞集団を確保するために、バンデージの使用前に、基質上で角膜細胞を増殖させることが好ましい。
【００５７】
Ｘｉａｏｊｉｅ  Ｈｕ他により記載されたように、活性コポリマーを、繊維に成形して、角膜細胞を支持する足場に二次加工してもよい。あるいは、別のポリマーの繊維上に上述の活性ポリマーをコートすることにより、適切な足場を作成してもよい。
【００５８】
別の代替アプローチでは、活性コポリマーを、角膜バンデージとして使用するために、フィルムまたはレンズ形状に成形してもよい。
【００５９】
活性コポリマーは、例えば、コンタクトレンズに適したポリマー（例えば、適切な透明性および酸素透過性を有する）から作製された予め形成されたコンタクトレンズ構造の上に、グラフト重合によりまたはコートすることにより、層として提供されることがより好ましい。層は連続的であっても不連続的であってもよい。例えば、バンデージは、活性ポリマーの溶液中にレンズ構造をディップコートすることにより、または、活性ポリマーのインクジェット散布を利用して、調製してもよい。上記コーティングを、適切な細胞集団をレンズ上に保持する基質として使用したソフトレンズ上でまたはその存在下で、細胞は成長する。次にこれを患者の目に入れると、細胞がソフトレンズから損傷した角膜上へ移動する。
【国際調査報告】
2010506644.tif 000008
2010506644.tif 000009