(57)【要約】本発明は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物（例えば、タンパク質含有組成物）を投与することによって個体における血管形成を阻害する方法を提供する。この組成物は、血管形成を阻害するのに有効であって、ただしある実施形態では個体において有意な細胞毒性を誘発するには不十分な量である。本明細書に記載される方法は、血管形成関連疾患、例えば、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、関節リウマチ、乾癬およびガンを処置するために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における血管形成を阻害する方法であって、該個体に対して、キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含し、該組成物は血管形成を阻害するのに有効な量であって、かつ該組成物の量は、該個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない、方法。
【請求項２】
個体における非腫瘍性血管形成関連疾患を処置する方法であって、該個体に対して、キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含し、該組成物は該非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である、方法。
【請求項３】
前記非腫瘍性血管形成関連疾患が眼の疾患である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記眼の疾患が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、または血管新生緑内障である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記非腫瘍性血管形成関連疾患が循環器疾患である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記循環器疾患が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記非腫瘍性血管形成関連疾患が関節リウマチまたは乾癬である、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物の量が、前記個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
個体におけるガンを処置する方法であって、該個体に対して、キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含し、該組成物はガンを処置するのに有効な量であって、かつ該組成物の量は、該個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない、方法。
【請求項１０】
前記組成物中の前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量が前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の対応するＭＴＤの約１５％未満である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ガンが固形腫瘍である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ガンが、転移性の固形腫瘍である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載の方法であって、前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体が式（ＩＩ）：
【化７】
2010502603.tif 000010
の化合物であり、
Ｂ１がメトキシ基またはメチルチオ基であり；
Ｂ２がメトキシ基またはメチルチオ基であり；
ｎが０〜８の整数であり；
ＹがＣＨ２基であるか、またはｎが１である場合は、式ＮＨの基であり得る、
方法。
【請求項１４】
ＹがＣＨ２である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ｎが１であり、かつＹがＮＨである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
Ｂ１およびＢ２が両方ともメチルチオ基である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物がＩＤＮ５４０４である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物がＩＤＮ５６７６である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物中の前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量が約１５ｍｇ／ｍ２未満である、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、週に１回投与される、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が、約３ヶ月を超えて中断なしに投与される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物が実質的に界面活性剤を含まない、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記キャリアタンパク質がアルブミンである、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記アルブミン対コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の比が約１８：１未満である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、前記キャリアタンパク質および前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含むナノ粒子を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記キャリアタンパク質がアルブミンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記アルブミン対前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の比が約１８：１未満である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ナノ粒子が、２００ｎｍ以下の平均直径を有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物が、実質的に界面活性剤を含まない、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記組成物がＮａｂ−５４０４である、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記個体がヒトである、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、血管形成を阻害し、血管形成関連疾患を処置する方法に関する。詳細には、本出願は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物の有効量を投与することによって、血管形成を阻害し、血管形成関連疾患を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管形成は、新しい血管が形成される、高度に調節された生物学的な過程である。血管形成が制御されないことで、多くの疾患がもたらされる。このような疾患の１つは、加齢性黄斑変性症（「ＡＭＤ」）であって、黄斑および網膜色素上皮のような眼の種々の構造への新しい血管の浸潤によって特徴付けられる。血管形成が関与する別の疾患は、関節リウマチであって、関節の滑膜裏層の血管は、血管形成を受ける。新規な血管網を形成するのに加えて、内皮細胞は、因子および反応性酸素種を放出して、これがパンヌス増殖および軟骨の破壊をもたらす。未制御の血管形成はまた、糖尿病性網膜症、乾癬、再狭窄および血管新生緑内障などの疾患を伴う。
【０００３】
さらに、血管形成はまた、腫瘍形成および転移にも関与する。例えば、直径が約２ミリメートルより大きくなる腫瘍は、それ自体の血管供給を得なければならず、新しい毛細血管の増殖を誘導することによって血管供給を得ることが示されている。これらの新規な血管が、腫瘍中に組み込まれた後、それらは、腫瘍増殖に必須の栄養および成長因子をもたらして、腫瘍細胞の転移を容易にする。
【０００４】
血管形成を特異的に標的する抗血管形成剤が、血管形成関連の疾患を処置するために開発されている。例えば、特許文献１；特許文献２；ならびに特許文献３および特許文献４を参照のこと。さらに、確立された脈管構造を標的する薬剤（いわゆる、「血管標的薬剤（Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ）」またはＶＴＡ）も開発されている。これらの薬剤は、内皮細胞の微小管細胞骨格を選択的に不安定化すること、最終的に血管の閉塞および血流の遮断をもたらす細胞の形状における顕著な変化を生じることによって機能すると考えられる。例えば、特許文献５を参照のこと。
【０００５】
チオコルヒチン二量体は、以前に記載されている疎水性化合物である。例えば、特許文献６を参照のこと。これらの化合物は、二重の作用機序を有し、すなわち、この化合物は、抗微小管活性およびトポイソメラーゼＩ阻害性活性の両方を有する。Ｒａｓｐａｇｌｉｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５，６９（１）：１１３〜２１。チオコルヒチン二量体Ｎａｂ−５４０５およびＮａｂ−５６７６のナノ粒子アルブミン結合処方物が、ガンを処置するための細胞毒性化学療法剤として開発されている。例えば、Ｂｅｒｎａｃｋｉら、Ｐｒｏｃ．Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，第４６巻，２００５＃２３９０およびＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００６１６７号を参照のこと。Ｎａｂ−５４０４は、２４ｍｇ／ｋｇ（ｑｄ×５）で静脈内投与される場合、完全な腫瘍退縮を誘導し得、Ａ１２１卵巣腫瘍異種移植片では治癒させることが見出された。
【０００６】
本明細書に言及される全ての刊行物、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第６，９１９，３０９号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００６／０００９４１２号明細書
【特許文献３】国際公開第０４／０２７０２７号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０５／１１７８７６号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０５／１１３５３２号パンフレット
【特許文献６】米国特許第６，６２７，７７４号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は一局面では、個体における血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物を投与することを包含する方法を提供し、この組成物は血管形成を阻害するのに有効な量であって、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体における血管形成を阻害する方法であって、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物の有効量を投与することを包含する方法が提供され、この組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）の量（すなわち、１投与あたりの量）は、体表面積１ｍ２あたりおよそ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物の有効量を投与することを包含する方法が提供され、この組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）の量は、ほぼ０．０５、０．０８、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５または０．６ｍｇ／ｋｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、この組成物は、少なくともほぼ３週毎に１回、２週毎に１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかで投与される。ある実施形態では、この組成物は、（中断の有無はあるが）、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月またはより長い月数のいずれか投与される。ある実施形態では、この組成物は、静脈内、眼内、動脈内、口腔内、局所または吸入の経路のいずれかを介して投与される。
【０００９】
本明細書に記載される方法で用いられる組成物は、キャリアタンパク質などの生体適合性ポリマーをさらに含んでもよい。例えば、ある実施形態では、個体における血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、この組成物は血管形成を阻害するのに有効な量であって、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体における血管形成を阻害する方法であって、この個体に対して、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物の有効量を投与することを包含する方法が提供され、この組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）の量は、体表面積１ｍ２あたりおよそ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物の有効量を投与することを包含する方法が提供され、この組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）の量は、ほぼ０．０５、０．０８、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５または０．６ｍｇ／ｋｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、このキャリアタンパク質含有組成物は、実質的に界面活性剤を含まない（例えば、含まない）。ある実施形態では、この組成物は、少なくともほぼ３週毎に１回、２週毎に１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかで投与される。ある実施形態では、この組成物は、（中断の有無はあるが）、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月またはより長い月数のいずれか投与される。ある実施形態では、この組成物は、静脈内、眼内、動脈内、口腔内、局所または吸入の経路のいずれかを介して投与される。
【００１０】
本明細書に記載される方法で用いられる組成物は、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）を含んでもよい。例えば、ある実施形態では、個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含むナノ粒子を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、この組成物は血管形成を阻害するのに有効な量であって、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体における血管形成を阻害する方法であって、この個体に対して、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含むナノ粒子を含む組成物の有効量を投与することを包含する方法が提供され、この組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）の量は、体表面積１ｍ２あたりおよそ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含むナノ粒子を含む組成物の有効量を投与することを包含する方法が提供され、この組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）の量は、ほぼ０．０５、０．０８、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５または０．６ｍｇ／ｋｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、この組成物は、少なくともほぼ３週毎に１回、２週ごとに１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかで投与される。ある実施形態では、この組成物は、（中断の有無はあるが）、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上の月数のいずれか投与される。ある実施形態では、この組成物は、静脈内、眼内、動脈内、口腔内、局所または吸入の経路のいずれかを介して投与される。
【００１１】
ある実施形態では、組成物中の粒子は、約２００ｎｍ以下の平均直径を有する。ある実施形態では、この粒子含有組成物は、実質的には界面活性剤を含まない（例えば、含まない）。ある実施形態では、組成物中のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体に対するキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）の重量比は約１８：１以下、例えば、約９：１以下である。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）でコーティングされる。ある実施形態では、この組成物中の粒子は、約２００ｎｍ以下の平均直径を有し、この組成物は、実質的には界面活性剤を含まない（例えば、含まない）。ある実施形態では、この組成物中の粒子（特にナノ粒子）は、約２００ｎｍ以下の平均直径を有し、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、タンパク質（例えば、アルブミン）でコーティングされる。上記の特徴の他の組み合わせも考慮される。ある実施形態では、この粒子組成物は、Ｎａｂ−５４０４である。他のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む粒子組成物も、上記の特徴の１つ以上を備え得る。
【００１２】
本明細書に記載されるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、コルヒチン、チオコルヒチンまたはその誘導体の２つ（同じまたは異なる）のサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、少なくとも１つのチオコルヒチンサブユニットを含む。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、２つのチオコルヒチンサブユニットを含む。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、式（Ｉ）の化合物：
【００１３】
【化１】
2010502603.tif 000002
を含み、
ここで、各々のサブユニットにおけるＢは、メトキシ基またはメチルチオ基であり、Ｂ２はＲ３と一緒になる場合、メトキシ、ヒドロキシル、またはメチレンジオキシであり、Ｒ３はＲ２と一緒になる場合、メトキシ、ヒドロキシル、またはメチレンジオキシであり、かつＸは連結基である。ある実施形態では、Ｘは、少なくとも１つの炭素原子を含む。
【００１４】
ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、式（ＩＩ）の化合物：
【００１５】
【化２】
2010502603.tif 000003
であって、
ここで、Ｂ１は、メトキシ基またはメチルチオ基であり、Ｂ２はメトキシ基、またはメチルチオ基であり、ｎは０〜８の整数であり、ＹはＣＨ２基であるか、またはｎが１である場合は、式ＮＨの基であってもよい。ある実施形態では、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７または８のいずれか（例えば、それからなる群より選択される）である。ある実施形態ではｎは１である。いくつかの実施形態では、ｎは１であり、ＹはＮＨである。ある実施形態ではｎは２である。
【００１６】
ある実施形態では、Ｂ１およびＢ２は両方ともメトキシ基である。ある実施形態では、Ｂ１およびＢ２は両方ともメチルチオ基である。ある実施形態では、Ｂ１がメトキシ基であり、かつＢ２はメチルチオ基である。ある実施形態では、Ｂ１はメチルチオ基であり、かつＢ２がメトキシ基である。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、ＩＤＮ５４０４、ＩＤＮ５６７６、ＩＤＮ５８００およびＩＤＮ５８０１のいずれか（ある実施形態では、それからなる群より選択される）である。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体はＩＤＮ５４０４である。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体はＩＤＮ５６７６である。
【００１７】
ある実施形態では、個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対して、アルブミンならびにＩＤＮ５４０４、ＩＤＮ５６７６、ＩＤＮ５８００およびＩＤＮ５８０１のいずれかを含むナノ粒子を含む組成物（本明細書において以降では、それぞれ、「Ｎａｂ−５４０４」、「Ｎａｂ−５６７６」、「Ｎａｂ−５８００」、および「Ｎａｂ−５８０１」と命名される）を投与することを包含する。ある実施形態では個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対して、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）を投与することを包含する方法が提供され、ここでＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）は、血管形成を阻害するのに有効な量であって、かつＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体における血管形成を阻害する方法であって、この個体に対して、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）の有効量を投与することを包含する方法が提供され、このＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）の量は、体表面積１ｍ２あたりおよそ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ｍｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、個体において血管形成を阻害する方法であって、この個体に対してＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）の有効量を投与することを包含する方法が提供され、このＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１のいずれか）の量は、ほぼ０．０５、０．０８、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５または０．６ｍｇ／ｋｇ未満のいずれかである。ある実施形態では、この組成物は、少なくともほぼ３週毎に１回、２週ごとに１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかで投与される。ある実施形態では、この組成物は、（中断の有無はあるが）、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上の月数のいずれか投与される。ある実施形態では、この組成物は、静脈内、眼内、動脈内、口腔内、局所または吸入の経路のいずれかを介して投与される。
【００１８】
本明細書に記載される方法は一般には、血管形成関連の疾患の処置に有用である。ある実施形態では、この血管形成関連疾患は、非腫瘍性血管形成関連疾患であって、これには、例えば、眼の疾患（例えば、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、または血管新生緑内障）、循環器疾患（例えば、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症）、皮膚疾患（例えば、乾癬）および関節炎（例えば、関節リウマチ）が挙げられる。
【００１９】
例えば、ある実施形態では、個体における非腫瘍性血管形成関連疾患を処置する方法であって、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、この組成物は非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、この組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体における非腫瘍性血管形成関連疾患を処置する方法であって、この個体に対して、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、この組成物は、個体において非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である。いくつかの実施形態では、この組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体における非腫瘍性血管形成関連疾患を処置する方法であって、この個体に対して、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む粒子（例えば、ナノ粒子）を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、ここで、この組成物は、非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、この組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。ある実施形態では、個体において非腫瘍性血管形成関連疾患を処置する方法であって、この個体に対して、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１）を投与することを包含する方法が提供され、ここでＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１）は、非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１）の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。
【００２０】
ある実施形態では、この血管形成関連疾患は、腫瘍関連疾患であって、これにはガンおよび良性腫瘍が挙げられる。本明細書に記載の方法によって処置され得るガンとしては限定はしないが、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、神経膠腫、神経芽肉腫および多発性骨髄腫が挙げられる。ある実施形態では、ガンとは固形腫瘍（例えば、転移性固形腫瘍）である。例えば、ガンを処置する方法はさらに下に記載される。
【００２１】
例えば、ある実施形態では、個体におけるガンを処置する方法であって、この個体に対してコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、この組成物はガンを処置するのに有効な量であり、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体におけるガンを処置する方法であって、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、この組成物は、ガンを処置するのに有効な量であり、かつこの組成物におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の対応する最大耐量（ｍａｘｉｍｕｍ  ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ｄｏｓｅ）（「ＭＴＤ」）の少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１１％、１２％、１３％、１４％または１５％未満のいずれかである。ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法であって、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物をこの個体に対して投与することを包含する方法が提供され、ここで、この組成物は、ガンを処置するのに有効な量であり、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法であって、この個体に対して、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、ここで、この組成物は、このガンを処置するのに有効な量であって、かつこの組成物におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の対応するＭＴＤの少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１１％、１２％、１３％、１４％または１５％未満のいずれかである。ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法であって、個体に対してキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む粒子（例えば、ナノ粒子）を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、ここで、この組成物は、ガンを処置するのに有効な量であり、この組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法であって、この個体に対して、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）を含む粒子（例えば、ナノ粒子）を含む組成物を投与することを包含する方法が提供され、ここで、この組成物におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の対応するＭＴＤの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１１％、１２％、１３％、１４％または１５％未満のいずれかである。ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法であって、個体に対してＮａｂ−５４０４（またはＮ��ｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、およびＮａｂ−５８０１）を投与することを包含する方法が提供され、ここでＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、もしくはＮａｂ−５８０１）は、ガンを処置するのに有効な量であり、かつＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、もしくはＮａｂ−５８０１）の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法であって、この個体に対して、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、もしくはＮａｂ−５８０１）を投与することを包含する方法が提供され、ここでＮａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、もしくはＮａｂ−５８０１）は、ガンを処置するのに有効な量であり、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、もしくはＮａｂ−５８０１）の量は、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６、Ｎａｂ−５８００、もしくはＮａｂ−５８０１）の対応するＭＴＤの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１１％、１２％、１３％、１４％または１５％未満のいずれかである。
【００２２】
本明細書に記載の方法に有用である、薬学的組成物、単位用量、キットおよび製品も提供される。
【００２３】
本明細書に記載される種々の実施形態の１つ、いくつか、または全ての特性を組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成してもよいことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１Ａは、ＭＸ−１乳癌細胞を用いる微小管形成に対するＮａｂ−５４０４の影響を示す。図１Ｂは、ＭＸ−１乳癌細胞を用いる微小管形成に対するＮａｂ−５６７６の影響を示す。
【図２】図２Ａ〜Cは、コントロールのビヒクル（ＰＢＳ、２Ａ）、０．６μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（２Ｂ）およびμｇ／ｍｌ（Ｎａｂ−５６７６）での処置後のＭＸ−１細胞における染色された微小管網目状構造の顕微鏡写真を示す。
【図３】図３は、微小血管／小管形成によって評価した、Ｎａｂ−５４０４、Ｎａｂ−５６７６およびＣＡ４Ｐの抗血管形成活性を示す。細胞を１日目に種々の化合物とインキュベートして、１２日目に染色した。図３Ａ〜Dは、コントロールのビヒクル（３Ｃ）、０．０１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（３Ａ）、０．０１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（３Ｂ）および０．０１μｇ／ｍｌのＣＡ４Ｐ（３Ｄ）での処置後の小管形成の顕微鏡写真を示す。
【図４】０．０〜１００μｇ／ｍｌの濃度範囲にまたがるＮａｂ−５４０４、Ｎａｂ−５６７６およびＣＡ４Ｐで処置された細胞についての小管の長さの比較を示す。
【図５】図５は、微小血管／小管の形成または破壊によって評価した、Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の抗血管形成活性を示す。細胞を、８日目に種々の化合物とインキュベートして、１１日目に染色した。図５Ａ〜Cは、コントロールのビヒクル（５Ａ）、０．０１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（５Ｂ）および０．０１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（５Ｃ）での処置後の小管形成の顕微鏡写真を示す。図５Ｄは、０．０〜１００μｇ／ｍｌの濃度範囲にまたがるＮａｂ−５４０４、およびＮａｂ−５６７６で処置された細胞についての小管の長さの比較を示す。
【図６】図６は、微小血管／小管の形成または破壊によって評価した、Ｎａｂ−５４０４の抗血管形成活性を示す。細胞を１１日目に種々の濃度の化合物とインキュベートして、１２日目に染色した。図６Ａ〜６Fは、コントロールのビヒクル（６Ａ）、０．００１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（６Ｂ）、０．０１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（６Ｃ）、０．１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（６Ｄ）、１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（６Ｅ）および１０．０μｇ／ｍｌのＮａｂ−５４０４（６Ｆ）での処置後の小管形成および破壊の顕微鏡写真を示す。
【図７】図７は、微小血管／小管の形成または破壊によって評価した、Ｎａｂ−５６７６の抗血管形成活性を示す。細胞を、１１日目に種々の濃度の化合物とインキュベートして、１２日目に染色した。図７Ａ〜７Fは、コントロールのビヒクル（７Ａ）、０．００１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（７Ｂ）、０．０１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（７Ｃ）、０．１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（７Ｄ）、１μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（７Ｅ）および１０．０μｇ／ｍｌのＮａｂ−５６７６（７Ｆ）での処置後の小管形成および破壊の顕微鏡写真を示す。
【図８】図８は、微小血管／小管の形成または破壊によって評価した、ＣＡ４Ｐの抗血管形成活性を示す。細胞を、１１日目に種々の濃度の化合物とインキュベートして、１２日目に染色した。図８Ａ〜８Cは、各々０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌおよび１．０μｇ／ｍｌのＣＡ４Ｐでの処置後の小管形成および破壊の顕微鏡写真を示す。
【図９】微小血管または小管の形成または破壊によって評価した、Ｎａｂ−５４０４、Ｎａｂ−５６７６およびＣＡ４Ｐの抗血管形成活性の比較を示す。細胞を、１１日目に化合物とインキュベートして、１２日目に染色した。この図は、０．０〜１０μｇ／ｍｌの濃度範囲におよぶ各々の濃度で処置した細胞についての小管の長さを示す。
【図１０】図１０は、２サイクルの低用量／高用量スケジュールを用いる、異種移植片マウスモデルにおけるＨＴ−２９腫瘍増殖に対するＮａｂ−５４０４の影響を示す。第一のサイクルの用量は、１．７、２．５または３．４ｍｇ／ｋｇ（０〜１４日）であって；第二のサイクルの用量は、２０、３０または４０ｍｇ／ｋｇ（１５〜３０日）であった。図１０Ａは、０〜４０日目の平均腫瘍容積（ｎ＝１０）を示す。図１０Ｂは、０〜４０日におよぶマウスの平均の体重減少パーセントを示す。
【図１１】図１１は、２サイクルの低用量／高用量スケジュールを用いる、異種移植片マウスモデルにおけるＨＴ−２９腫瘍増殖に対するＮａｂ−５６７６の影響を示す。第一のサイクルの用量は、１．７、２．５または３．４ｍｇ／ｋｇ（０〜１４日）であって；第二のサイクルの用量は、２０、３０または４０ｍｇ／ｋｇ（１５〜３０日）であった。図１１Ａは、０〜４０日目の平均腫瘍容積（ｎ＝１０）を示す。図１１Ｂは、０〜４０日におよぶマウスの平均の体重減少パーセントを示す。
【図１２】図１２は、異種移植片マウスモデルにおけるＨＴ−２９腫瘍増殖に対するＣＡ４Ｐの影響を示す。ＨＴ−２９腫瘍は、９００ｍｍ３の容積に達した後に１００ｍｇ／ｋｇで処置した。図１２Ａは、２８日目〜４１日目の平均腫瘍容積（ｎ＝１０）を示す；四角＝ビヒクルコントロール、ひし形＝ＣＡ４Ｐ処置。図１２Ｂは、２８日〜４１日におよぶマウスの平均の体重減少パーセントを示す；四角＝ビヒクルコントロール、ひし形＝ＣＡ４Ｐ処置。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明は、チオコルヒチン二量体を含む組成物、詳細には、チオコルヒチン二量体のアルブミン含有ナノ粒子処方物、さらに詳細には、ＩＤＮ−５４０４のアルブミン含有ナノ粒子処方物（「Ｎａｂ−５４０４」）およびＩＤＮ−５６７６のアルブミン含有ナノ粒子処方物（「Ｎａｂ−５６７６」）が、インビトロにおける微小血管形成の阻害および樹立された微小血管の破壊に有効であるという本発明者らの観察に部分的には基づく。Ｔｒｉｅｕら、第９７回、ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．３８２３。これらの活性についてのＩＣ５０値は、組成物のインビトロ細胞毒性活性に必要な値よりも有意に低い。本発明者らは、チオコルヒチン二量体を含む組成物、詳細にはチオコルヒチン二量体のアルブミン含有ナノ粒子処方物（例えば、Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６）が、この組成物の対応する最大耐量（ＭＴＤ）よりも有意に低い用量で、インビボにおいて腫瘍増殖を阻害するのに有効であるということをさらに観察した。これらの観察によって、チオコルヒチン二量体またはそのアナログを含む組成物（例えば、コルヒチン二量体）が、その細胞毒性効果とは独立して抗血管形成活性および血管標的活性を保有するということが示唆される。有効量および非細胞毒性量で投与されるとき、この組成物は、新しい血管の増殖を選択的に標的して、標的組織において有意な細胞死を生じることなしに血流をブロックし得る。
【００２６】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の有効かつ非細胞毒性の量（すなわち、有意な細胞毒性を誘導するのには不十分な量）が、化合物の細胞毒性効果を最小化するために非腫瘍性の抗血管形成関連疾患を処置するために所望される。有効かつ非細胞毒性という量はまた、ガンを処置するために有利である。細胞毒性剤での伝統的な化学療法は代表的には、この薬剤の細胞毒性効果を最大にするためにこの薬剤の最大耐量と同じかまたはそれに近い用量で行われる。しかし、この高用量のスケジュールには、正常なホストの細胞の回復を可能にするために長期の処置なしの期間を要する。その間に、腫瘍細胞はまた、処置なしの期間中、増殖を再開し得る。これによって、薬物耐性の腫瘍細胞が発現するというリスクが増大し得る。コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の非細胞毒性の用量（すなわち、量）によって、処置サイクルにおける有意な中断なしに処置して、これによって薬物耐性が発現するリスクを低下させることが可能になる。さらに、非細胞毒性用量によって、明らかな全身の毒性（例えば、体重減少）および薬物によって誘発される副作用を発症する可能性が最小限になる。
【００２７】
従って、本発明は、一局面では、個体において血管形成を阻害する（樹立された血管新生を標的することを含む）方法であって、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する方法を提供し、この組成物は、血管形成を阻害するのに有効な量であり、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。ある実施形態では、この方法は、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物をこの個体に投与することを包含し、この組成物は、血管形成を阻害するのに有効な量であって、かつこの組成物の量は、この個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。
【００２８】
別の局面では、本発明は、個体において非腫瘍性血管形成関連疾患を処置する方法であって、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する方法を提供し、この組成物は、非腫瘍性血管形成関連疾患を治療するのに有効な量である。ある実施形態では、この方法は、個体に対して、キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含し、この組成物は、非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である。
【００２９】
別の局面では、この方法は、個体において腫瘍関連疾患を処置する方法であって、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する方法を提供し、この組成物は、腫瘍関連疾患を処置するのに有効な量であり、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。ある実施形態では、この方法は、この個体に対してキャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含し、この組成物は、ガンを処置するのに有効な量であって、かつこの組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘導するのには不十分である。
【００３０】
また、本明細書に記載される方法に有用である、薬学的組成物、単位投薬量、キット、および製品も提供される。
【００３１】
「組成物（単数）（ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」または「組成物（複数）（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）」という一般的な言及には、本発明の組成物を含み、かつそれに適用可能である。本発明はまた、本明細書に記載される成分を含む薬学的組成物を提供する。
【００３２】
「個体」という用語は、ヒトを含む哺乳動物である。個体としては限定はしないが、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類または霊長類が挙げられる。ある実施形態では、この個体はヒトである。ある実施形態では、個体とは、血管形成または血管形成関連の疾患（単数または複数）を研究するための実験動物モデルである。
【００３３】
本開示は、エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む、本明細書に言及される化合物の全ての立体異性体を含む。立体化学が構造中で明確に示されない限り、開示される構造は、全ての可能な立体化学改変体を包含するものとする。この開示は、開示された任意のキラル化合物の全てのエナンチオマーを、実質的に純粋な左旋性または右旋性の形態のいずれかで、またはラセミ混合物で、または任意の比のエナンチオマーで包含する。この開示は、上の式で言及される化合物の任意のジアステレオマーを、実質的に純粋なジアステレオマー型で、および全ての比の混合物の形態で包含する。この開示はまた、本明細書に言及される化合物の全ての溶媒和化合物を含み、これには、本明細書に言及される化合物の全ての水和物を含む。この開示はまた、全ての多形体を含み、これには、本明細書に言及される化合物の結晶型および非結晶型を包含する。この開示はまた、本明細書に言及される化合物の全ての塩、詳細には薬学的に受容可能な塩を包含する。本明細書に開示される化合物の代謝物およびプロドラッグもこの開示に包含される。本明細書に開示される化合物の全ての使用において、この開示はまた、記載される化合物の任意のまたは全ての立体化学、エナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和化合物、水和物、多形性、結晶、非結晶、塩、薬学的に受容可能な塩、代謝物およびプロドラッグのバリエーションの使用を包含する。
【００３４】
本明細書に記載される本発明の局面および実施形態は、局面および実施形態「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および／または「本質的に〜なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」を包含することが理解される。
【００３５】
血管形成を阻害する方法
本発明は一局面では、コルヒチンまたはチオコルヒチンを含む組成物（例えば、キャリアタンパク質含有組成物）を投与することによって個体における血管形成を阻害する方法を提供する。この組成物は、血管形成を阻害するのに有効である量である。しかし、投与される組成物の量は、個体において有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない。
【００３６】
本明細書で用いられる「血管形成」とは、組織または器官において新しい血管を発生させる過程をいう。血管形成は代表的には、内皮細胞および白血球によって放出される酵素による血管の基底膜の侵食で開始する。内皮細胞は、血管の管腔を裏打ちしており、次に基底膜を通じて突出する。血管形成の刺激は、侵食された基底膜を通じて内皮細胞が遊走するように誘導する。遊走する細胞は、親の血管から「芽（ｓｐｒｏｕｔ）」を出し、この内皮細胞はここで有糸分裂および増殖を受ける。内皮の出芽はお互いと一緒になって、ループ状毛細血管を形成して、新しい血管を作製する。
【００３７】
「血管形成の阻害」とは、例えば、眼の組織、心血管の組織、皮膚組織、関節組織および腫瘍組織を含む、個体における１つ以上の組織において血管形成を軽減、邪魔または抑制することをいう。血管形成の阻害は、血管形成の過程の１つ以上の段階に影響することによって、例えば、活性化された内皮細胞の遊走および生存を低減させること、親血管からの細胞の「出芽（ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ）」を妨げること、および／または新しい血管の形成を妨げることによって達成され得る。微小血管密度の変化も、「血管形成の阻害」という用語内に包含される。「血管形成の阻害」という用語はまた、樹立された脈管構造を破壊することを包含する。「樹立された脈管構造を破壊する」とは、血管形成によって形成された既存の脈管構造を閉塞させるか、溶解させるか、そうでなければ影響する能力をいう。脈管構造の破壊は、可逆的であっても、または不可逆的であっても、部分的であってもまたは完全であってもよい。
【００３８】
従って、本明細書で提供される方法は、以下の局面の１つ以上を包含する：内皮細胞遊走を阻害（例えば、軽減、邪魔または妨げる）こと、親血管からの内皮細胞の「出芽」を阻害（例えば、軽減、邪魔または妨げる）こと、新しい血管の形成を阻害（例えば、軽減、邪魔または妨げる）こと、および血管新生によって形成された樹立された脈管構造を標的（例えば、閉塞、崩壊または破壊する）こと。ある実施形態では、個体における血管形成を阻害（例えば、軽減、邪魔または妨げる）方法が提供される。ある実施形態では、樹立された脈管構造を破壊（例えば、閉塞、溶解、そうでなければ影響を及ぼす）方法が提供される。ある実施形態では、個体の組織における微小血管の密度を低減させる方法が提供される。
【００３９】
「有効量」とは、個体に対する単回または複数回の投与の際に、その個体に所望の効果をもたらす組成物の量または用量をいう。例えば、この組成物は、個体における１つ以上の組織において血管形成（例えば、血管形成の１つ以上の局面）を軽減、邪魔または妨げるのにこの組成物の量が十分な場合に、「血管形成を阻害するのに有効な量」である。処置の文脈で用いられる「有効な量」という用語は、特定の障害、状態または疾患を処置する、例えばその症状のうちの１つ以上を寛解、緩和、低減および／または遅延するのに十分な化合物または組成物の量をさす。有効な量は、インビトロおよび／またはインビボで決定され得る。血管形成を阻害するための組成物の有効な量を決定する方法は当該分野で公知である。
【００４０】
ある実施形態では、この組成物の量は、眼の組織において血管形成を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、心血管系の組織において血管形成を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、皮膚組織で血管形成を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、関節組織において血管形成を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、腫瘍組織で血管形成を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、新しい血管形成を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、親血管から内皮細胞の「出芽」を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、内皮細胞の遊走を阻害するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、樹立された脈管構造を破壊するのに有効である。ある実施形態では、この組成物の量は、血管形成（例えば、血管形成の任意の１つ以上の局面）を、少なくとも約５％、１０％、２０％、４０％、５０％またはそれ以上のいずれかまで阻害するのに有効である。
【００４１】
組成物は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体が個体において有意な細胞死を生じることを可能にするのにこの組成物の量が不十分である場合、「有意な細胞毒性を誘発するには不十分な量」（「非細胞毒性量」とも呼ばれる））である。細胞毒性は、以下の１つ以上によって測定され得る。例えば、非細胞毒性量は、インビトロの細胞生存度アッセイに基づいて決定され得る。この非細胞毒性量は、インビトロの細胞生存度アッセイにおいて約５０％以上の細胞死を生じるには不十分な量であり得る。ある実施形態では、この組成物の量は、インビトロの細胞生存度アッセイにおいて約４０％以上、３０％以上、２０％以上、１０％以上、５％以上、４％以上、３％以上、２％以上、または１％以上のいずれかの細胞死を生じるには不十分である。ある実施形態では、この組成物の量は、インビトロの細胞生存度アッセイにおいて任意の測定可能な細胞死を生じるには不十分である。インビトロの細胞生存度アッセイに適切な細胞としては限定はしないが、腫瘍細胞（例えば、ＭＸ−１乳癌細胞株、ＨｅｐＧ２肝細胞腫細胞株およびＨＴ−２９結腸癌細胞株）および正常細胞（例えば、一次ラット肝細胞腫）が挙げられる。非細胞毒性量はまた、薬物毒性のインビボアッセイに基づいて決定してもよい。例えば、非細胞毒性量は、インビトロの細胞毒性アッセイにおいて試験集団の約５０％以上を殺傷するには不十分な量であり得る。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、インビトロの細胞毒性アッセイにおいて試験集団の約４０％以上、３０％以上、２０％以上、１０％以上、５％以上、４％以上、３％以上、２％以上、または１％以上のいずれかの細胞死を生じるには不十分である。ある実施形態では、この組成物の量は、インビトロの薬物毒性アッセイにおいて試験集団において死滅を生じさせるには不十分である。非細胞毒性量はまた、個体において明らかな全身の毒性（例えば、体重減少）を誘発するのに必要なコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量に基づいて決定され得る、すなわち、この薬物の量は、明らかな全身毒性を誘発しない場合に非細胞毒性である。例えば、ある実施形態では、非細胞毒性量とは、約１５％未満（例えば、約１０％、８％、５％以下のいずれか未満を含む）の体重減少を誘発する量である。
【００４２】
ある実施形態では、各々の投与でのこの組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、体表面積１ｍ２あたりおよそ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５ｍｇ未満のいずれかである。例えば、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、体表面積１ｍ２あたり、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約１５ｍｇ／ｍ２、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約１０ｍｇ／ｍ２、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約８ｍｇ／ｍ２、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約４ｍｇ／ｍ２、および約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約２ｍｇ／ｍ２に及んでもよい。ある実施形態では、各々の投与でのこの組成物中におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、約０．０５、０．０８、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５または０．６ｍｇ／ｋｇ未満のいずれかである。例えば、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、および約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇに及んでもよい。
【００４３】
ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、中断の有無はあるが、長期の投与期間（例えば、６ヶ月以上）にわたって薬物耐性を誘発しない量である。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、個体において有意な副作用（例えば、代表的には化学療法に伴う副作用）を誘発しない量である。代表的には、化学療法に伴う副作用としては、例えば、脱水、下痢、悪心、嘔吐、失明または錯乱および貧血が挙げられる。
【００４４】
組成物の投薬頻度としては、限定はしないが、少なくともほぼ３週毎に１回、２週毎に１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかが挙げられる。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は、約１週未満、例えば、ほぼ６、５、４、３、２または１日未満のいずれかである。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は一定である。例えば、投与は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、または毎週行ってもよい。ある実施形態では、この投与は、毎日２回、毎日３回、またはより高頻度で行ってもよい。
【００４５】
組成物の投与は、長期間にわたって、例えば、約１ヶ月〜約３年まで延長されてもよい。例えば、投薬レジメンは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０および３６ヶ月のいずれかの期間にわたって延長されてもよい。ある実施形態では、投薬レジメンには中断はない。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は、約１週以下である。
【００４６】
本明細書に記載される組成物は、限定はしないが、静脈内、腹腔内、眼内、動脈内、肺内、口腔、膀胱内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、くも膜下腔内、経皮、経胸膜内、動脈内、局所、吸入（例えば、スプレーのミスト）、経粘膜（例えば、鼻粘膜を介して）、皮下、経皮、胃腸管、関節内、嚢内、脳室内、直腸（すなわち、坐剤を介して）、膣（すなわち、ペッサリーを介して）、頭蓋内、尿道内、肝臓内、および腫瘍内を包含する当該分野の任意の経路を介して個体に投与されてもよい。ある実施形態では、この組成物は、全身に投与される。ある実施形態では、この組成物は、局所に投与される。ある実施形態では、この組成物は、静脈内、眼内、動脈内、口腔、局所または吸入の任意の経路を解して投与される。
【００４７】
この方法が、眼の組織における血管形成の阻害に関する場合、この組成物は、眼または眼の組織に直接投与されてもよい。この組成物は、点眼のように、眼に局所的に投与されてもよい。この組成物はまた、眼に対して、または眼に関連する組織に対して注射によって投与されてもよい。この組成物は、眼内注射、眼の周囲の注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡叢内注射、房内（ｉｎｔｒａｃａｍｅｒａｌ）注射、結膜下注射、テノン嚢下（ｓｕｂ−Ｔｅｎｏｎ）注射、球後注射、球周囲注射、または後強膜近傍の送達を介して投与されてもよい。この組成物は、例えば、硝子体、眼房水、強膜、結膜、強膜と結膜との間の領域、網膜脈絡膜組織、網膜黄斑、または個体の眼の中かもしくはその近傍の他の領域に対して投与されてもよい。網膜薬物送達のための例示的な眼の周囲の経路の説明に関しては、Ｐｅｒｉｏｃｕｌａｒ  ｒｏｕｔｅｓ  ｆｏｒ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｒａｇｈａｖａら（２００４），Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．１（１）：９９〜１１４を参照のこと。この組成物はまた、インプラントとして個体に投与されてもよい。好ましいインプラントは、ある期間にわたってこの化合物を徐々に放出する、生体適合および／または生物分解性の徐放性放出処方物である。薬物送達のための眼のインプラントは当該分野で周知である。例えば、米国特許第５，５０１，８５６号、同第５，４７６，５１１号、および同第６，３３１，３１３号を参照のこと。この組成物はまた、限定はしないが、米国特許第４，４５４，１５１号、ならびに米国特許出願公開第２００３／０１８１５３１号および同第２００４／００５８３１３号に記載されるイオン泳動方法を包含する、イオン泳動を用いて個体に投与されてもよい。
【００４８】
血管形成関連疾患を処置する方法
本明細書に記載される方法は一般には、血管形成関連疾患の処置のために有用である。「血管形成関連疾患」とは、血管形成が疾患の一局面である疾患または障害をいう。この血管形成関連疾患は、異常な血管形成によって生じ得る。ある実施形態では、この血管形成関連疾患は、血管形成によって少なくとも一部は媒介される。ある実施形態では、血管形成は、血管形成関連疾患の発達に必須である。血管形成関連疾患は、当該分野で公知であって、これには例えば、非腫瘍性血管形成関連疾患、例えば、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、関節リウマチ、および本明細書に記載される他の疾患が挙げられる。ある実施形態では、この血管形成関連疾患は、ガンまたは良性腫瘍などの、腫瘍関連疾患である。
【００４９】
本明細書において用いる場合、「処置」とは、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のためには、有益または所望される臨床結果としては限定はしないが、以下のうちいずれか１つ以上が挙げられる：１つ以上の症状の軽減、疾患の程度の退縮、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患の広がりの予防または遅延、疾患の発症または再発の予防または遅延、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善、および寛解（部分的または全体のいずれか）。「処置」とはまた、血管形成関連疾患の病理的な帰結の軽減も包含する。本発明の方法は、処置のこれらの局面のいずれか１つ以上を考慮する。
【００５０】
非腫瘍性の血管形成関連疾患の処置
本明細書に記載される方法は、非腫瘍性の血管形成関連疾患の処置に有用である。
【００５１】
ある実施形態では、この方法は、眼の組織における、例えば、角膜、網膜、網膜黄斑および脈絡膜における、非腫瘍性の血管形成関連疾患の処置のために有用である。この方法は一般に、盲目（ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ）、失明（ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｖｉｓｉｏｎ）（例えば、視力または視野の喪失）、および／または種々の眼の疾患から生じる他の結果を防ぐために有用である。ある実施形態では、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を含む黄斑変性症を処置するための方法が提供される。ＡＭＤは臨床的には、網膜黄斑と呼ばれる網膜の領域における光受容細胞に対する損傷の結果として生じる、中心視野の進行性の喪失によって特徴づけられる。ＡＭＤは広義には２つの臨床的な状態に分類されている：滲出型（ｗｅｔ  ｆｏｒｍ）および非滲出型（ｄｒｙ  ｆｏｒｍ）であって、ここで非滲出型は全症例の８０〜９０％を構成する。この非滲出型は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）とブランチ（Ｂｒｕｎｃｈ）膜との間に局在して堆積する網膜黄斑ドルーゼの存在によって、および過剰な光受容器萎縮を有するＲＰＥ細胞死によって特徴づけられる地図状委縮によって臨床的には特徴づけられる。滲出型ＡＭＤは重篤な失明のほぼ９０％を占めており、黄斑の領域における新血管新生およびこれらの新しい血管の漏出を伴う。血液および体液の蓄積は、網膜剥離を続いて、急速な光受容器変性および視覚喪失を生じ得る。ＡＭＤの滲出型には、非滲出型が先行して非滲出型から生じることが一般に認められている。
【００５２】
本明細書に提供される方法は、滲出型の黄斑変性の処置または阻害に特に有用である。眼の組織における血管形成の阻害はまた、非滲出型の黄斑変性から滲出型の黄斑変性への移行を予防または遅らせる。従って、本発明はまた、非滲出型の黄斑変性の処置のための方法を提供する。本発明はまた、限定はしないが、光受容体細胞の喪失、視覚（例えば、視力および視野を含む）の喪失および網膜剥離を含む黄斑変性の１つ以上の局面または症状を処置または予防する方法を包含する。他の関連の局面、例えば、光受容体変性、ＲＰＥ変性、網膜変性、脈絡網膜の変性、（網膜）錐体変性、網膜機能不全、網膜損傷、ブランチ（Ｂｒｕｎｃｈ）膜への傷害、ＲＰＥ機能の喪失、正常な黄斑の細胞および／または細胞外基質の組織構造の完全性の喪失、網膜における細胞の機能の喪失、ならびに光受容体のジストロフィーも包含される。
【００５３】
本明細書に記載の方法によって処置され得る他の非腫瘍性血管形成関連の眼の疾患としては、限定はしないが、網膜の新血管新生、角膜の新血管新生（例えば、トラコーマ、感染、炎症、移植または外傷によって生じる）、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜浮腫、糖尿病性網膜黄斑浮腫、虚血性網膜症、高血圧性網膜症、閉塞性網膜症、未熟児網膜症、外傷に続く新血管新生、感染に続く新血管新生、移植に続く新血管新生、網膜剥離または網膜変性に続く新血管新生、血管新生緑内障、前房および／または前房隅角の新血管新生、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、網膜下血管新生、水晶体後部線維増殖症、眼のヒストプラズマ症症候群、近視性変性、網膜色素線条、ブドウ膜炎、ルベオーシス、水晶体後（部）線維増殖症、眼のヒストプラズマ症および特発性中心性漿液性網脈絡膜症が挙げられる。ある実施形態では、この眼の疾患は、糖尿病性網膜症である。ある実施形態では、眼の疾患は、血管新生緑内障である。
【００５４】
ある実施形態では、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、アテロームおよび血管腫などの循環器疾患（心血管系疾患）を含む血管系の疾患を処置する方法が提供される。アテローム性動脈硬化症は、慢性の血管損傷の形態であって、ここでは動脈壁における正常な血管平滑筋（ＶＳＭＣ）のうちある程度がその性質を変えて、アテローム斑における毛細血管の高密度の網状構造を発達させる。これらの脆弱な毛細血管が出血を生じ得、これが血液凝固をもたらし、結果として心筋への血流の低下および心発作を伴う。再狭窄は代表的には、冠動脈バイパス手術、血管内膜切除および心移植後に、詳細には、心バルーン血管形成、アテレクトミー（アテローム切除術）、レーザー切断または血管内ステント後に生じる。これは、微小血管の広範な増殖に関与する。心血管組織における血管形成の阻害によって、本明細書に提供される方法は、これらの循環器疾患を処置するために有用である。
【００５５】
ある実施形態では、この方法は、関節リウマチ（関節における血管は、血管形成を受けて、軟骨に進入して破壊する広範に血管新生された組織を形成する）の処置のために有用である。関節炎組織における血管形成の阻害によって、本明細書に提供される方法は、関節リウマチを処置するために有用である。血友病の関節を処置するための方法も提供される。
【００５６】
ある実施形態では、この方法は、限定はしないが、乾癬、強皮症、感染（例えば、猫引っかき病、細菌性潰瘍など）の結果としての新血管新生、および他の皮膚障害を含む血管形成関連皮膚疾患を処置するために有用である。ある実施形態では、この方法は乾癬を処置するために有用である。乾癬は、慢性皮膚疾患であって、世界中の集団の約３％で生じている。電子顕微鏡を含む組織学的研究によって、皮膚の血管形成における変更は、乾癬の顕著な特徴であることが確立されている。従って、皮膚組織における血管形成の阻害は、乾癬を処置するために有用である。
【００５７】
本発明の方法によって処置され得る他の血管形成関連疾患としては限定はしないが、オスラー・ウェーバー症候群、遺伝性出血性毛細管拡張症、プラーク新血管新生、末梢血管拡張、血管線維腫、血管腫、創傷肉芽形成、子宮内膜症などが挙げられる。さらに、本発明は、鼻ポリープ、特に嚢胞性線維症患者の処置に有用である。
【００５８】
血管形成関連疾患を処置する以外に、本明細書に記載される方法はまた、血管形成に関連する正常な生理学的状態の発現を調節または予防するために有用であり得る。例えば、本発明の方法は、排卵に関連する新血管新生、胚の移植、胎盤形成などを減弱するために用いられ得、従って、受胎調節の目的に有用である。
【００５９】
本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される種々の疾患を処置する方法である。ある実施形態では、個体において非腫瘍性の血管形成関連の疾患を処置する方法が提供され、この方法は、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物（例えば、キャリアタンパク質を含む組成物）を投与することを包含し、この組成物は、非腫瘍性の血管形成関連疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、個体において、血管形成関連の眼の疾患（例えば、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、または血管新生緑内障を含む）を処置する方法が提供され、この方法は、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物（例えば、キャリアタンパク質を含む組成物）を投与することを包含し、ここで、この組成物は、眼の疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、循環器疾患（心血管系疾患）（例えば、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症）を処置する方法が提供され、この方法は、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物（例えば、キャリアタンパク質を含む組成物）を投与することを包含し、ここでこの組成物は、循環器疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、血管形成関連の皮膚疾患（例えば、乾癬）を処置する方法が提供され、この方法は、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物（例えば、キャリアタンパク質を含む組成物）を投与することを包含し、この組成物は、この皮膚疾患を処置するのに有効な量である。ある実施形態では、関節炎（例えば、関節リウマチ）を処置する方法が提供され、この方法は、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物（例えば、キャリアタンパク質を含む組成物）を投与することを包含し、この組成物は、関節炎を処置するのに有効な量である。
【００６０】
ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体組成物は、少なくともほぼ３週毎に１回、２週毎に１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかで投与される。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は、約１週未満、例えば、約６、５、４、３、２または１日未満のいずれかである。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は一定である。例えば、この投与は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、または毎週行われてもよい。ある実施形態では、この投与は、毎日２回、毎日３回、またはより高頻度で行われてもよい。この組成物の投与は、約１ヶ月から約３年など、長期間にわたって（中断の有無はあるが）延長されてもよい。例えば、投薬レジメンは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０および３６ヶ月のいずれかの期間にわたって延長されてもよい（中断の有無はある）。ある実施形態では、投薬スケジュールに中断はない。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は、約１ヶ月以下である。
【００６１】
血管形成を阻害することによって腫瘍関連疾患を処置する方法
本明細書に記載される方法はまた、腫瘍組織における血管形成の阻害に、ならびにガンおよび良性腫瘍などの腫瘍関連疾患を処置するために有用である。
【００６２】
血管形成を阻害すること（例えば、新しい血管形成を阻害することによる、または樹立された血管を標的することによる）で、腫瘍に対して十分な栄養および酸素が供給されることを妨げて、所定のサイズを超える増殖を抑制する。血管形成は、原発性の腫瘍増殖および転移の両方に関与するので、本明細書に提供される方法は、腫瘍の腫瘍性の増殖を原発性の部位で阻害すること、および腫瘍の転移を二次的な部位で妨げることの両方を可能にする。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、新しい血管の形成を阻害する。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体組成物は、樹立された腫瘍脈管構造を破壊する。例えば、この組成物は、選択性の閉塞、溶解に有効であってもよく、そうでなければ、可逆的もしくは不可逆的、部分的もしくは完全いずれであっても、腫瘍脈管構造に影響する（時には腫瘍脈管構造を増殖する）。
【００６３】
本発明は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物の有効量を投与することによって、腫瘍関連疾患を処置する方法を提供し、この組成物の量は、有意な細胞毒性を誘発する程、十分ではない（「非細胞毒性用量」とも呼ばれる）。細胞毒性剤での伝統的な化学療法は代表的には、この薬剤の細胞毒性効果を最大にするためにこの薬剤の最大耐量と同じかまたは近い用量で行う。しかし、この高用量スケジュールには、正常なホストの細胞の回復を可能にするために長期の処置なし期間を要する。この間に、腫瘍細胞はまた、処置なし期間中に増殖を再開し得る。これによって、薬物耐性の腫瘍細胞が発現するというリスクが増大し得る。コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の非細胞毒性の用量によって、処置サイクルにおける有意な中断なしにガンを処置することが可能になり、これによって薬物耐性が発現するリスクが低下する。
【００６４】
一例を挙げるために、ガンを処置する方法をさらに本明細書に記載する。この説明は一般には、良性腫瘍を含む全ての腫瘍関連疾患にあてはまることが理解される。
【００６５】
ある実施形態では、個体においてガンを処置する方法が提供され、この方法は、この個体に対して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含し、この組成物は、ガンを処置するのに有効な量であり、かつ１投与あたりのこの組成物中のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、同じもしくは類似の投薬スケジュール、または伝統的な投薬スケジュールに従う、同じ（または類似の）処方物中の同じ（または類似の）コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体についての対応するＭＴＤの約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％。１３％、１４％または１５％未満のいずれかである。ある実施形態では、１投与あたりのこの組成物中のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量は、対応するＭＴＤの約１％〜約１５％であって、これには、例えば、この対応するＭＴＤの約１％〜約１２％、約１％〜約１０％、約１％〜約８％、約１％〜約５％、約１％〜約３％のいずれかを含む。コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体についてのＭＴＤは公知であるか、または当業者によって容易に決定され得る。例えば、毎週のスケジュールに従うＮａｂ−５４０４についてのＭＴＤは、体表面積あたり約９０〜１００ｍｇ／ｍ２である。
【００６６】
ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体組成物は、少なくともほぼ３週毎に１回、２週毎に１回、１週に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、または毎日のいずれかで投与される。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は、約１週未満、例えば、約６、５、４、３、２または１日未満のいずれかである。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は一定である。例えば、この投与は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、または毎週行われてもよい。ある実施形態では、この投与は、毎日２回、毎日３回、またはより高頻度で行われてもよい。この組成物の投与は、約１ヶ月から約３年など、長期間にわたって（中断の有無はあるが）延長されてもよい。例えば、投薬レジメンは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０および３６ヶ月のいずれかの期間にわたって延長されてもよい（中断の有無はある）。ある実施形態では、投薬スケジュールに中断はない。ある実施形態では、各々の投与の間の間隔は、約１ヶ月以下である。
【００６７】
本発明の方法によって処置され得るガンとしては限定はしないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられる。このようなガンのさらに詳細な例としては、限定はしないが、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｏｒ  ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（胃腸の癌を含む）、膵臓癌、グリア芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、子宮内膜または子宮の癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、頭頸部癌、Ｂ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性のＮＨＬ、中悪性度広汎性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度非開裂小細胞ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症（ｐｈａｋｏｍａｔｏｓｅｓ）に関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連する）、およびメーグス症候群が挙げられる。本明細書に記載される方法は、扁平細胞癌のような過度の血管形成に関与するガンを処置するために特に有用である。
【００６８】
ある実施形態では、原発性腫瘍を処置する方法が提供される。ある実施形態では、転移性ガン（すなわち、原発性腫瘍から転移されているガン）を処置する方法が提供される。ある実施形態では、進行した段階のガンを処置する方法が提供される。ある実施形態では、乳癌（ＨＥＲ２陽性であっても、またはＨＥＲ２陰性であってもよい）を処置する方法が提供され、このガンとしては、進行性乳癌、ＩＶ期乳癌、局所進行性乳癌および転移性乳癌が挙げられる。ある実施形態では、このガンは肺癌であって、これには、例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ、例えば、進行性ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ、例えば、進行性ＳＣＬＣ）、および肺における進行性の固形悪性腫瘍が挙げられる。ある実施形態では、ガンは卵巣癌、頭頸部癌、胃の悪性腫瘍、黒色腫（転移性黒色腫を含む）、結腸直腸癌、膵臓癌および固形腫瘍（例えば、進行性の固形腫瘍）である。ある実施形態では、このガンは、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎臓細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、神経膠腫、グリア芽細胞腫、神経芽細胞腫、および多発性骨髄腫のうちのいずれか（ある実施形態では、それらからなる群より選択される）である。ある実施形態では、このガンは固形腫瘍である。
【００６９】
本明細書に記載される方法は、アジュバント設定で行ってもよい。「アジュバント設定（ａｄｊｕｖａｎｔ  ｓｅｔｔｉｎｇ）」とは、臨床設定であって、個体が、ガンの病歴を有し、一般には（必須ではないが）、手術（例えば、外科的切除）、放射線療法および化学療法を含むがこれに限定されない治療に応答性である臨床設定をいう。しかし、そのガンの既往のせいで、これらの個体は、疾患の発症のリスクにあると考えられる。「アジュバント設定」における処置または投与とは、処置の引き続く方式をいう。リスクの程度（すなわち、アジュバント設定における個体が「高リスク」または「低リスク」とみなされるとき）は、いくつかの要因、最も通常には最初に処置されるときの疾患の程度に依存する。本明細書に提供される方法は、ネオアジュバント設定で行われてもよく、すなわち、この方法は、一次治療／根治治療の前に行ってもよい。ある実施形態では、この個体は、以前に処置されている。ある実施形態では、この個体は、以前には処置されていない。ある実施形態では、この処置は、第一選択の治療である。
【００７０】
本明細書に記載される方法は、ガン処置の他の方法と組み合わせて（例えば、治療設定と組み合わせて）用いられてもよい。例えば、ある実施形態では、この方法は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を投与することを包含する第一の治療と、第二の治療とを包含する。ある実施形態では、この二次治療は化学療法である。ある実施形態では、この二次治療は放射線療法である。ある実施形態では、この二次治療は、手術である。この第一および第二の治療は、同時または連続（すなわち、第一の治療が第二の治療の前かまたは後に行われる）のいずれで行ってもよい。ある実施形態では、この方法は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物と、第二の化学療法剤とを個体に対して同時投与すること（同時または連続を含む）を包含し、この組成物は、個体において血管形成を阻害するのに有効であって、この組成物は、個体において細胞毒性を誘発するには不十分な量である。ある実施形態では、この第二の化学療法剤は細胞毒性剤である。
【００７１】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体
本明細書で記載される方法は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物の投与を包含する。本明細書で用いられる「コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体」とは、コルヒチン、チオコルヒチン、またはその誘導体の２つの（同じまたは異なる）サブユニットを含む化合物をいう。コルヒチンもしくはチオコルヒチンの「誘導体」としては、限定はしないが、コルヒチンもしくはチオコルヒチンに構造的に類似である化合物、またはコルヒチンもしくはチオコルヒチンと同じ一般的な化学クラスの化合物が挙げられる。一般には、コルヒチンまたはチオコルヒチンの誘導体またはアナログは、コルヒチンまたはチオコルヒチンの同様の生物学的、薬理学的、化学的、および／または物理的な特性（例えば、機能を含む）を保持する。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、少なくとも１つのチオコルヒチンサブユニットを含む。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、２つのチオコルヒチンサブユニット（本明細書において、以降では、「チオコルヒチン二量体」という）を含む。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、２つのチオコルヒチンサブユニット（本明細書において、以降では、「コルヒチン二量体」という）を含む。
【００７２】
ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、式（Ｉ）：
【００７３】
【化３】
2010502603.tif 000004
の化合物であって、
ここで、各々のサブユニットのＢは、メトキシまたはメチルチオ基であり、Ｒ２は、Ｒ３と一緒になる場合、メトキシ、ヒドロキシル、またはメチレンジオキシであり、Ｒ３は、Ｒ２と一緒になる場合、メトキシ、ヒドロキシル、またはメチレンジオキシであり、Ｘは連結基である。
【００７４】
広汎な種々の架橋基を用いて、連結基Ｘを導入してもよい。当業者は、二量体のコルヒチンまたはチオコルヒチンの単量体成分は、単一の反応性アミノ基を有すると理解される；任意の他の反応性（求核性）基が中間体に存在する場合、それらは、当該分野で周知の基を用いて容易に保護され得る。保護基の例については、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ、Ｔ．Ｗ．およびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９（その内容が、その全体が参照によって本明細書に援用される）を参照のこと。従って、アミン官能基と反応性の広範な種々の架橋基が使用されてもよい。
【００７５】
ある実施形態では、連結基Ｘは、少なくとも１つの炭素原子を含む。例えば、市販の（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）試薬塩化マロニル、Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−Ｃｌを用いて、Ｘ基が−ＣＨ２−であるコルヒチン二量体を形成してもよい。同様に、種々の長さの他のジアシル塩化物を用いて、所望の長さのＸ基を形成してもよい。例えば、式（ＩＩ）では、ｎ＝８およびＹがＣＨ２である場合、市販の（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）試薬ドデカンジオイル二塩化物、Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）１０−Ｃ（Ｏ）−Ｃｌを用いて、Ｘ基が−（ＣＨ２）１０−である二量体を合成してもよい。ＹがＮＨでありｎ＝１である基については、試薬３−イソシアナトプロパノイル塩化物（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｃｏｌｌ．第６巻、７１５頁（１９８８）；第５９巻、１９５頁（１９７９））を用いて、Ｘが−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−である場合、連結基Ｘを合成してもよい。他の周知の架橋試薬を用いて、Ｘリンカーを生成してもよい。当業者は、Ｗｏｎｇ，Ｓｈａｎ  Ｓ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ  Ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９１、詳細には、アミノ基反応剤に関する、第２章、セクションＩＶ（Ｂ）、第３３〜３８頁に；アミノ基反応剤架橋剤に関する、第４章、セクションＩＩ、第７５〜１０３頁に、ならびにアミノ含有化合物を架橋するために適切な試薬および手順についての架橋試薬のための手順および分析に関する、第７章、２０９〜２２０頁に関する。上述のＷｏｎｇの引用文献の全内容、および詳細には列挙される特定のセクションは、参照によって本明細書に援用される。
【００７６】
ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、式（ＩＩ）の化合物：
【００７７】
【化４】
2010502603.tif 000005
であって、
ここでＢ１は、メトキシ基またはメチルチオ基であり、Ｂ２はメトキシ基、またはメチルチオ基であり、ｎは０〜８の整数であり、ＹはＣＨ２基であるか、またはｎが１である場合は、式ＮＨの基であってもよい。
【００７８】
ある実施形態では、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７または８のいずれか（ある実施形態では、それからなる群より選択される）である。ある実施形態ではｎは１である。ある実施形態では、ｎは１であり、ＹはＮＨである。ある実施形態ではｎは２である。
【００７９】
ある実施形態では、Ｂ１およびＢ２は両方ともメトキシ基である。ある実施形態では、Ｂ１およびＢ２は両方ともメチルチオ基である。ある実施形態では、Ｂ１はメトキシ基であり、かつＢ２がメチルチオ基である。ある実施形態では、Ｂ１はメチルチオ基であり、かつＢ２がメトキシ基である。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、ＩＤＮ５４０４、ＩＤＮ５６７６、ＩＤＮ５８００およびＩＤＮ５８０１のいずれか（ある実施形態では、それからなる群より選択される）である。
【００８０】
ある実施形態では、この化合物は、チオコルヒチン二量体ＩＤＮ５４０４である。ＩＤＮ５４０４は、式（ＩＩＩ）：
【００８１】
【化５】
2010502603.tif 000006
の化合物である。
【００８２】
ある実施形態では、この化合物は、チオコルヒチン二量体ＩＤＮ５６７６である。ＩＤＮ５６７６は、式（ＩＶ）：
【００８３】
【化６】
2010502603.tif 000007
の化合物である。
【００８４】
生体適合性ポリマーおよびキャリアタンパク質
ある実施形態では、本明細書に記載されるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体組成物はさらに、キャリアタンパク質などの生体適合性ポリマーを含む。
【００８５】
本明細書において用いる場合、「生体適合性」という用語は、その物質が導入される生物学的な系に対して、感知できるほど有害な方式で変更も影響もしない物質をいう。生体適合性のポリマーとしては、天然に存在するかまたは合成の生体適合性の物質、例えば、タンパク質、ポリヌクレオチド、ポリサッカライド（例えば、デンプン、セルロース、デキストラン、アルギン酸塩、キトサン、ペクチン、ヒアルロン酸など）、および脂質が挙げられる。適切な生体適合性ポリマーとしては例えば、天然に存在するかまたは合成のタンパク質、例えば、アルブミン、インスリン、ヘモグロビン、リゾチーム、免疫グロブリン、α−２−マクログロブリン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、カゼインなど、ならびにそれらの任意の２つ以上の組み合わせが挙げられる。合成のポリマーとしては、例えば、ポリアルキレングリコール（例えば、直鎖または分枝鎖）、ポリビニルアルコール、ポリアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクリル酸、ポリエチルオキサゾリン、ポリアクリルアミド、ポリイソプロピルアクリルアミド、ポリビニルピロリドン、ポリラクチド／グリコリドなど、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００８６】
「タンパク質」という用語は、任意の長さ（全長またはフラグメントを含む）のアミノ酸のポリペプチドもしくはポリマーであって、直鎖であっても、分枝であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、および／または非アミノ酸で中断されてもよいアミノ酸のポリペプチドもしくはポリマーをいう。この用語はまた、天然に、または介入によって修飾されているアミノ酸ポリマーを包含する；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾。この用語内にはまた、例えば、アミノ酸の１つ以上のアナログ（例えば、天然でないアミノ酸などを含む）を含むポリペプチド、ならびに当該分野で公知の他の修飾も包含される。本明細書に記載されるタンパク質は、天然に存在してもよく、すなわち、天然の供給源（例えば、血液）から得られても、もしくは誘導されても、または合成されてもよい（例えば、化学的に合成されるか、または組み換えＤＮＡ技術によって合成される）。
【００８７】
適切なキャリアタンパク質の例としては、血液または血漿で通常見出されるタンパク質が挙げられ、このタンパク質としては限定はしないが、アルブミン、ＩｇＡを含む免疫グロブリン、リポタンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、α酸糖タンパク質、β−２−マクログロブリン、サイログロブリン、トランスフェリン、フィブロネクチン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子などが挙げられる。ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、非血液タンパク質、例えば、カゼイン、α−ラクトアルブミンおよびβラクトグロブリンである。キャリアタンパク質は、天然に由来してもよいし、または合成的に調製されてもいずれでもよい。ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、アルブミン、例えば、血清アルブミンである。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、Ｍｒ６５Ｋという高溶解性の球状タンパク質であって、５８５アミノ酸からなる。ＨＳＡは、血漿中で最も豊富なタンパク質であって、ヒト血漿の膠質浸透圧の７０〜８０％を占める。ＨＳＡのアミノ酸配列は、全部で１７のジスルフィド架橋、１つの遊離のチオール（Ｃｙｓ３４）、および単一のトリプトファン（Ｔｒｐ２１４）を含む。ＨＳＡ溶液の静脈内使用は、乏血性（循環血液量減少性）ショックの予防および処置について（例えば、Ｔｕｌｌｉｓ，ＪＡＭＡ，２３７，３５５〜３６０，４６０〜４６３，（１９９７））およびＨｏｕｓｅｒら、Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，１５０，８１１〜８１６（１９８０）を参照のこと）、および新生児高ビリルビン血症の処置において交換輸血と組み合わせて（Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，６，８５〜１２０，（１９８０）を参照のこと）指示されている。ウシ血清アルブミンなどの他のアルブミンも考慮される。このような非ヒトアルブミンの使用は、例えば、獣医学の動物（家庭用ペットおよび畜産動物を含む）などの非ヒト動物において、これらの組成物の使用の状況で適切であり得る。
【００８８】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、複数の疎水性結合部位（脂肪酸について全部で８つ、ＨＳＡの内因性リガンド）を有し、多様なセットの薬物、特に中性および負に荷電された疎水性化合物に結合する（Ｇｏｏｄｍａｎら、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６））。２つの高親和性結合部位が、ＨＳＡのサブドメインＩＩＡおよびＩＩＩＡにおいて提唱されており、これは、極めて細長い疎水性のポケットであって、表面近くに荷電したリジンおよびアルギニン残基を有し、これが極性リガンドの特徴について付着ポイントとして機能する（例えば、Ｆｅｈｓｋｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３０，６８７〜９２（１９８１）、Ｖｏｒｕｍ，Ｄａｎ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．，４６，３７９〜９９（１９９９）、Ｋｒａｇｈ−Ｈａｎｓｅｎ，Ｄａｎ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．，１４４１，１３１〜４０（１９９０）、Ｃｕｒｒｙら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，５，８２７〜３５（１９９８），Ｓｕｇｉｏら、Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｅｎｇ．，１２，４３９〜４６（１９９９），Ｈｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３５８，２０９〜１５（１９９２）、およびＣａｒｔｅｒら、Ａｄｖ．Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｃｈｅｍ．，４５，１５３〜２０３（１９９４）を参照のこと）。
【００８９】
例として、キャリアタンパク質をさらに下に記載する。この説明は一般に生体適合性ポリマーにあてはまることが理解される。
【００９０】
組成物中のキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）は一般に、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体のキャリアとして機能し、すなわち組成物中のキャリアタンパク質は、キャリアタンパク質を含まない組成物に比較して、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を水性媒体中により容易に懸濁可能にさせるか、または懸濁の維持を補助する。これによって、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を安定化するための毒性溶媒の使用が回避され得、それによって、それらの毒性溶媒によって生じる１つ以上の副作用が減少し得る。ある実施形態では、この組成物は、界面活性剤を実質的に含まず、すなわち、この組成物中の界面活性剤の量は、この組成物が個体に投与されるとき、その個体において１つ以上の影響を生じるには不十分である。ある実施形態では、この組成物は界面活性剤を含まない。
【００９１】
ある実施形態では、キャリアタンパク質は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体に会合され、すなわち、この組成物は、キャリアタンパク質会合したコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む。「会合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）」または「会合した、会合された（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」とは本明細書において一般的な意味で用いて、水性組成物におけるコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の挙動および／または特性に影響するキャリアタンパク質をいう。例えば、このキャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、このキャリアタンパク質が、キャリアタンパク質なしの組成物に比較して、水性媒体中でコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体をさらに容易に懸濁可能にさせる場合、「会合した」状態であるとみなされる。別の例では、このキャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、このキャリアタンパク質が水性懸濁液中でコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を安定化させる場合、会合されている。例えば、キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、本明細書にさらに記載される、粒子またはナノ粒子中に存在してもよい。
【００９２】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、長期間にわたって、例えば、少なくとも約０．１、０．２、０．２５、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、２４、３６、４８、６０または７２時間のいずれかにわたって、水性媒体中に（例えば、可視の沈澱も沈降もなく）懸濁されたままである場合、水性懸濁液中で「安定である」。この懸濁液は一般には、ただし必須ではないが、個体（例えば、ヒト）に対する投与に適切である。懸濁液の安定性は一般には（ただし必須ではないが）貯蔵温度（例えば、室温（例えば、２０〜２５℃）または冷蔵条件（例えば、４℃））で向上される。例えば、懸濁液は、懸濁物の調製の約１５分後に裸眼で、または１０００倍の光学顕微鏡で見た場合、可視の凝結も粒子凝集も示さない場合、貯蔵温度で安定である。安定性は、約４０℃より高い温度のような、加速された試験条件下で評価してもよい。
【００９３】
この組成物中のキャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、種々の方式で会合されてもよい。例えば、ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体と混合される。ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体をカプセル化または封入する。ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体に結合される（例えば、非供給結合される）。ある実施形態では、この組成物は、上記の局面のうち１つ以上を示し得る。
【００９４】
ある実施形態では、この組成物は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体およびキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）を含む（種々の実施態様では、本質的にそれからなる）粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）を含む。ある実施形態では、このコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体は、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）でコーティングされる。ある実施形態では、この組成物は、ほぼ９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００および１００ｎｍ以下のいずれかなどの、ナノ粒子（すなわち、約１０００ナノメートル（ｎｍ）以下の平均（ａｖｅｒａｇｅまたはｍｅａｎ）直径を有する粒子）を含む。ある実施態様では、この組成物中のナノ粒子の平均直径は、約２００ｎｍ以下である。ある実施形態では、この組成物中のナノ粒子の平均直径は、約２０〜約４００ｎｍである。ある実施形態では、このナノ粒子の平均直径は、約４０〜約２００ｎｍである。ある実施形態では、このナノ粒子は無菌濾過可能である。
【００９５】
本明細書に記載される粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）は、乾燥処方物（例えば、凍結乾燥組成物）で存在してもよいし、または生体適合性媒体中に懸濁されてもよい。適切な生体適合性媒体としては限定はしないが、水、緩衝化水性媒体、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、必要に応じて緩衝化されたアミノ酸の溶液、必要に応じて緩衝化されたタンパク質の溶液、必要に応じて緩衝化された糖の溶液、必要に応じて緩衝化されたビタミンの溶液、必要に応じて緩衝化された合成ポリマー溶液、脂質含有エマルジョンなどが挙げられる。
【００９６】
本明細書に記載される組成物中のキャリアタンパク質の量は、組成物中の薬剤および他の成分に依存して変化する。ある実施形態では、この組成物は、例えば、安定なコロイド状懸濁液（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子の安定な懸濁液）の形態で、水性懸濁液中にコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を安定化するのに十分な量でキャリアタンパク質を含む。ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、水性媒体中のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の沈降速度を減じる量である。粒子含有組成物については、キャリアタンパク質の量はまた、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の粒子のサイズおよび密度に依存する。
【００９７】
ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、水性媒体中でコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を特定の濃度で安定化するのに十分な量で存在する。例えば、組成物中のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の濃度は、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｍｌであって、これには、例えば、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２〜約８ｍｇ／ｍｌ、約４〜約６ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌのいずれかを包含する。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の濃度は、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌのいずれかである。ある実施形態では、このキャリアタンパク質は、界面活性剤の使用を回避する量で存在し、その結果この組成物は界面活性剤を含まないかまたは実質的に含まない。
【００９８】
ある実施形態では、この組成物は、液体型であり、約０．１％〜約５０％（ｗ／ｖ）（例えば、約０．５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、約４０％（ｗ／ｖ）、または約５０％（ｗ／ｖ））のキャリアタンパク質を含む。ある実施形態では、この組成物は、液体型で、約０．５％〜約５％（ｗ／ｖ）のキャリアタンパク質を含む。
【００９９】
ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体に対するキャリアタンパク質、例えば、アルブミンの重量比は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の十分な量が細胞に結合するか、または細胞によって輸送されるような比である。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体に対するキャリアタンパク質、例えば、アルブミンの重量比（ｗ／ｗ）は、約０．０１：１〜約１００：１、約０．０２：１〜約５０：１、約０．０５：１〜約２０：１、約０．１：１〜約２０：１、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１２：１、約４：１〜約１０：１、約５：１〜約９：１、または約９：１である。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体に対するキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）の重量比（ｗ／ｗ）は、およそ１８：１以下、１５：１以下、１４：１以下、１３：１以下、１２：１以下、１１：１以下、１０：１以下、９：１以下、８：１以下、７：１以下、６：１以下、５：１以下、４：１以下、および３：１以下のいずれかである。
【０１００】
ある実施形態では、この組成物は、チオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）およびアルブミンを含む（種々の実施形態では、本質的にそれからなる）粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）を含む。この粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）は、約１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１ミクロン以下という平均（ａｖｅｒａｇｅまたはｍｅａｎ）直径を有してもよい。ある実施形態では、この粒子は、ナノ粒子、すなわち、約１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の粒子である。例えば、このナノ粒子は、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００および１００ｎｍのいずれか以下であってもよい。ある実施形態では、このナノ粒子の平均直径は、約２００ｎｍ以下である。ある実施形態では、このナノ粒子の平均直径は、約２０〜約４００ｎｍである。ある実施形態では、このナノ粒子の平均直径は、約４０〜約２００ｎｍである。ある実施形態では、この粒子は滅菌濾過可能である。
【０１０１】
ある実施形態では、このチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）は、アルブミンでコーティングされる。ある実施形態では、チオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）に対するアルブミンの重量比（ｗ／ｗ）は、約０．０１：１〜約１００：１、約０．０２：１〜約５０：１、約０．０５：１〜約２０：１、約０．１：１〜約２０：１、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１２：１、約４：１〜約１０：１、約５：１〜約９：１、および約９：１のいずれかである。ある実施形態では、チオコルヒチン二量体に対するアルブミンの重量比は、およそ１８：１以下、１５：１以下、１４：１以下、１３：１以下、１２：１以下、１１：１以下、１０：１以下、９：１以下、８：１以下、７：１以下、６：１以下、５：１以下、４：１以下、および３：１以下のいずれかである。
【０１０２】
ある実施形態では、チオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）およびアルブミンを含む粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）は、水性媒体（例えば、アルブミン含有水性媒体）に懸濁される。例えば、この組成物は、チオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）含有粒子（例えば、マイクロ粒子またはナノ粒子）のコロイド状懸濁液であってもよい。ある実施形態では、この組成物は、チオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）含有粒子の水性懸濁液に再構成され得る乾燥組成物（例えば、凍結乾燥組成物）である。ある実施形態では、この組成物中のチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）の濃度は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｍｌであって、これには、例えば、約０．１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２〜約８ｍｇ／ｍｌ、約４〜約６ｍｇ／ｍｌ、および約５ｍｇ／ｍｌのいずれかを包含する。ある実施形態では、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６の濃度は、少なくとも約１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌのいずれかである。
【０１０３】
ある実施形態では、この組成物は、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６のナノ粒子処方物（本明細書において以降では、Ｎａｂ−５４０４またはＮａｂ−５６７６という）を含む。Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６は、ヒト血清アルブミンによって安定化された、それぞれＩＤＮ５４０４およびＩＤＮ５６７６のナノ粒子処方物である。これらのナノ粒子処方物は、米国特許第５，９１６，５９６号および米国特許出願公開第２００５／０００４００２号に記載の方法によって生成され得る。適切な水性媒体、例えば、０．９％塩化ナトリウム注射液または５％デキストロース注射液に分散させる場合、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６）は、チオコルヒチン二量体の安定なコロイド状懸濁液を形成する。コロイド状懸濁液中の粒子のサイズ（すなわち、平均直径）は、２０ｎｍ〜８ミクロンにおよんでもよく、好ましい範囲は約２０〜４００ｎｍである。ＨＳＡは水中で自由に溶解するので、Ｎａｂ−５４０４（またはＮａｂ−５６７６）は、例えば、約２ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌを含む、希（０．１ｍｇ／ｍｌのＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）〜濃（２０ｍｇ／ｍｌのＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６）におよぶ広範な濃度で再構成され得る。ある実施形態では、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６の濃度は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９および２０ｍｇ／ｍｌのいずれかである。
【０１０４】
薬学的組成物、単位用量およびキット
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む薬学的組成物も本明細書で提供される。この薬学的組成物は、例えば、全身または局所の投与を含む、本明細書で記載される種々の投与方式で適切であり得る。薬学的組成物は、点眼、注射溶液の形態でも、または吸入に適切な形態（口または鼻のいずれかを通じて）、または経口投与であってもよい。本明細書に記載される薬学的組成物は、単位投薬量であっても、または複数回の剤形でパッケージングされてもよい。ある実施形態では、この組成物は、ヒトへの投与に適切である。ある実施形態では、この組成物は、獣医学の状況、家庭内のペットおよび畜産動物においてのように、哺乳動物に対する投与に適切である。この組成物には広範な種々の適切な処方物がある（例えば、米国特許第５，９１６，５９６号および同第６，０９６，３３１号を参照のこと）。
【０１０５】
ある実施形態では、この薬学的組成物は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、および眼内注射に適切な薬学的に受容可能なキャリアを含む。ある実施形態では、この薬学的組成物は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質および眼への局所適用に適切な薬学的に受容可能なキャリアを含む。ある実施形態では、薬学的組成物は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、および動脈内注射に適切な薬学的に受容可能なキャリアを含む。
【０１０６】
この薬学的組成物は一般に、無菌および実質的に等張性の組成物として処方される。注射のためには、この薬学的組成物は、溶液の形態中に、例えば、生理学的に適合する緩衝液、例えば、ハンクス液またはリンゲル液中にあってもよい。この薬学的組成物はまた、固体型であってもよく、使用の直前に再溶解または再懸濁されてもよい。凍結乾燥組成物も含まれる。
【０１０７】
経口投与については、薬学的組成物は、薬学的に受容可能な賦形剤、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、滑石またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）を用いて従来の方法によって調製された例えば、錠剤またはカプセルの形態をとってもよい。経口投与のための液体調製物は、例えば、溶液、シロップもしくは懸濁液の形態をとってもよく、またはそれらは、使用前に水または他の適切なビヒクルとの構成のための乾燥産物として与えられてもよい。このような液体調製物は、薬学的に受容可能な添加物、例えば、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アチオンド（ａｔｉｏｎｄ）オイル、油状エステル、エチルアルコール、または分画植物油）；および防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）を用いて従来の手段によって調製され得る。この調製物はまた、緩衝塩、香味料、着色料、および甘味料を必要に応じて含んでもよい。
【０１０８】
本発明は、ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、および眼への投与に適切な薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を提供する。このような薬学的なキャリアは、無菌液、例えば水およびオイルであってもよく、オイルとしては、石油、動物、植物または合成に由来する油、例えば、ピーナツ油、ダイズ油、鉱油、などの油が挙げられる。生理食塩水溶液および水性のデキストロース、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびグリセロール溶液も、特に注射溶液のための液体キャリアとして使用されてもよい。適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、コメ、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、グリセロール、プロピレン、水などが挙げられる。薬学的組成物は、必要に応じて、また、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝化剤を含んでもよい。この組成物の成分は、徐放性の分子を得るためにポリマーまたはフィブリン接着剤中に包み込まれてもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、軟膏、ゲル、または他の固体もしくは半固体の組成物などの形態をとってもよい。この組成物は代表的には、４．５〜８．０の範囲のｐＨを有する。この組成物はまた、眼の眼房水および眼の組織と適合する浸透価を有するように処方されなければならない。このような浸透価は一般には、水１キログラムあたり約２００〜約４００ミリオスモル（「ｍＯｓｍ／ｋｇ」）の範囲であるが、好ましくは約３００ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【０１０９】
ある実施形態では、この組成物は、静脈内、腹腔内、または硝子体内の注射に適した薬学的組成物として慣用的な手順に従って処方される。代表的には、注射用組成物は、無菌の等張性水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、この組成物はまた、安定化剤および注射部位への疼痛を緩和するリグノカインなどの局所麻酔薬を含んでもよい。一般には、この成分は、別々に、または単位剤形で一緒に混合されるかのいずれかで、例えば、乾燥された凍結乾燥粉末または水なしの濃縮物として、密閉してシールされた容器、例えば、アンプルまたは子袋（ｓａｃｈｅｔｔｅ）（活性剤の量を示す）中で供給される。この組成物がインフュージョンによって投与される場合、この組成物は、滅菌の薬学的等級の水または生理食塩水を含むインフュージョンボトルで分注されてもよい。この組成物が注射によって投与される場合、注射または生理食塩水のための滅菌水のアンプルは、この成分が投与前に混合され得るように提供され得る。
【０１１０】
この組成物はさらに、さらなる成分、例えば、防腐剤、緩衝液、等張化剤、抗酸化剤および安定化剤、非イオン性湿潤剤または清澄剤、増粘剤などを含んでもよい。
【０１１１】
溶液中での使用に適切な防腐剤としては、ポリクオタニウム−１、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム、ソルビン酸、塩化ベンゼトニウムなどが挙げられる。代表的には（ただし必須ではないか）このような防腐剤は、０．００１％〜１．０重量％のレベルで使用される。
【０１１２】
適切な緩衝液は、ホウ酸、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウム、ホウ酸ナトリウムおよびホウ酸カリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどを、ｐＨを約ｐＨ６〜ｐＨ８、好ましくはｐＨ７〜ｐＨ７．５に維持するのに十分な量で含む。
【０１１３】
適切な等張化剤は、眼科溶液の塩化ナトリウム当量が０．９±０．２％の範囲であるように、デキストラン４０、デキストラン７０、デキストロース、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなどである。
【０１１４】
適切な抗酸化剤および安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、チオ尿素などが挙げられる。適切な湿潤剤および清澄剤としては、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポリオキサマー２８２およびチロキサポールが挙げられる。適切な増粘剤としては、デキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ペトロラタム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどが挙げられる。
【０１１５】
単純な水溶液の粘度よりも大きい粘度を有する局所組成物を得るための粘度増強剤の使用は、標的組織による活性な化合物の眼の吸収を増大するか、または眼での保持時間を延長するために所望され得る。このような粘度上昇剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、または当業者に公知の他の薬剤が挙げられる。このような薬剤は代表的には、０．０１重量％〜２重量％のレベルで使用される。
【０１１６】
本明細書に記載される組成物はまた、組成物生物の特性を改善するために他の薬剤、賦形剤、または安定化剤を含んでもよい。例えば、ナノ粒子の負のゼータ電位を増大することによって安定性を増大するために、特定の負に荷電された成分を追加してもよい。このような負に荷電された成分としては限定はしないが、グリココール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、タウロコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、リトコール酸、ウルソデオキシコール酸、デヒドロコール酸などからなる胆汁酸の胆汁酸塩；以下のホスファチジルコリンを含むレシチン（卵黄）ベースのリン脂質を含むリン脂質が挙げられる：パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、パルミトイルリノールオイルホスファチジルコリン、ステアロイルリノールオイルホスファチジルコリン、ステアロイルオレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルアラキドイルホスファチジルコリンおよびジパルミトイルホスファチジルコリン。他のリン脂質としては、Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素化ソイホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、および他の関連の化合物が挙げられる。負に荷電した界面活性剤または乳化剤、例えば、コレステリル硫酸ナトリウムなども、添加物として適切である。
【０１１７】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の組成物の単位剤形、例えば、約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ（例えば、約０．２ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約１５ｍｇを含む）のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む単位投薬量も提供される。「単位剤形」という用語は、個体にとって単位投薬量として適切な物理的に別個の単位であって、各々の単位が、適切な薬学的なキャリア、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、所望の治療効果を生じるように計算された活性物質の所定の量を含む単位をいう。これらの単位剤形は、単一または複数の単位投薬量に適切なパッケージに保管されてもよく、そしてまたさらに滅菌されてシールされてもよい。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体および眼内注射に適切なキャリアタンパク質の単位剤形が提供される。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体および眼への局所適用に適切なキャリアタンパク質の単位剤形が提供される。ある実施形態では、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体および動脈内注射に適切なキャリアタンパク質の単位剤形が提供される。
【０１１８】
また、本明細書に記載される組成物を適切なパッケージに含む製品も提供される。本明細書に記載される組成物（例えば、眼科組成物）に適切なパッケージは当該分野で公知であって、これには、例えば、バイアル（例えば、密閉バイアル）、容器、アンプル、ボトル、ジャー、可塑性のパッケージ（例えば、密閉されたマイラー・バッグまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。これらの製品はさらに滅菌および／または密閉されてもよい。
【０１１９】
本発明はまた、本明細書に記載される組成物（あるいは単位剤形および／または製品）を含むキットを提供し、これはさらに本明細書に記載される使用などの、この組成物を用いる方法に対する指示（単数または複数）を備えてもよい。本明細書に記載されるキットはさらに、他の緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、シリンジおよび本明細書に記載の任意の方法を行うための指示を含む添付文書を含む、商業的および使用者の観点から所望される他の材料を備えてもよい。例えば、ある実施形態では、このキットは、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、眼内注射に適切な薬学的に受容可能なキャリア、および以下の１つ以上を備える：緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、シリンジおよび眼内注射を行うための指示を含む添付文書。ある実施形態では、この薬学的組成物は、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、眼内注射に適切な薬学的に受容可能なキャリア、および以下の１つ以上を備える：緩衝液、希釈液、フィルター、ニードル、シリンジおよび動脈内注射を行うための指示を含む添付文書。
【０１２０】
前述の発明は、理解を明確にする目的で図示および例によってある程度詳細に記載してきたが、特定のわずかな変化および改変が行われることが当業者には明白である。従って、この説明および実施例は、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１２１】
（実施例１）
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６のインビトロ細胞毒性活性
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の細胞毒性活性は、インビトロにおいて、ＭＸ−１乳癌、ＨｅｐＧ２肝細胞腫、ＨＴ−２９結腸癌の細胞株および正常な初代ラット肝細胞を用いて評価した。細胞を、ある範囲の漸増濃度にわたって３７℃で７２時間、Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６に曝した。生存度は、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｂｌｕｅ細胞生存度アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて分析した。ＩＣ５０は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて単相指数関数的減衰式（ｏｎｅ−ｐｈａｓｅ  ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｄｅｃａｙ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）で計算した。
【０１２２】
Ｎａｂ−５４０４は、ＨｅｐＧ２肝細胞腫細胞および初代ラット肝細胞に対して細胞毒性活性を示し、ＩＣ５０はそれぞれ１６および９μｇ／ｍｌであった。Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の両方ともＭＸ−１細胞に対して中程度に細胞毒性であって、ＩＣ５０はそれぞれ４３および５４μｇ／ｍｌであった。ＨＴ−２９細胞に対するＮａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の活性は低く、ＩＣ５０はそれぞれ１１０および１４９μｇ／ｍｌであった。Ｎａｂ−５６７６は、ＨｅｐＧ２細胞または初代ラット肝細胞において細胞毒性活性をほとんどまたは全く示さなかった。結果を表１にまとめる。
【０１２３】
【表１】
2010502603.tif 000008
（実施例２）
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の抗微小管活性
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の微小管脱重合活性は、ＭＸ−１乳癌細胞株を用いて試験した。ＭＸ−１細胞を、カバースリップ上に播種して、Ｎａｂ−５４０４またはＮａｂ−５６７６を用いて、０．０１〜１００μｇ／ｍｌの濃度範囲にまたがって３７℃で２時間処置した。インキュベーション後、その細胞を固定して、チューブリンおよびアクチンについて染色した。チューブリンは、モノクローナルの抗チューブリン抗体で染色し、アクチンはフルオレセイン標識ファロイジンで染色した。この微小管網目状構造を可視化して、ＩｍａｇｅＰｒｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＭｅｄｉａＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ  ＭＤ）を用いて分析した。微小管脱重合活性に対するＮａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の活性についてのＩＣ５０は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて計算した。
【０１２４】
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の両方とも強力な微小管脱重合活性を示し、算出されたＩＣ５０はそれぞれ、０．０６μｇ／ｍｌおよび０．１２μｇ／ｍｌであった（図１Ａおよび図１Ｂ）。試験した最低濃度０．６μｇ／ｍｌでさえ、微小管網目状構造は、Ｎａｂ−５４０４またはＮａｂ−５６７６とのインキュベーションの２時間後に完全に破壊された（図２Ａ〜図２Ｃ）。対照的に、アクチンの束は、どの薬物濃度でもＮａｂ−５４０４またはＮａｂ−５６７６によって影響されなかった。
【０１２５】
（実施例３）
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の抗血管形成活性
血管形成に対するＮａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の影響を研究するため、この化合物を、ＴＣＳ  Ｃｅｌｌ  Ｗｏｒｋｓ  ＡｎｇｉｏＫｉｔモデル（ＴＣＳ  ＣｅｌｌＷｏｒｋｓ  Ｌｔｄ．，Ｂｏｔｏｌｐｈ  Ｃｌａｙｄｏｎ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ  ＵＫ）を用いて微小血管形成アッセイで評価した。このＡｎｇｉｏＫｉｔモデルは、他のヒト細胞と同時培養したヒト内皮細胞を用いる。この内皮細胞は最初に、培養マトリックス内で小さい島を形成し、次に増殖をはじめ、次いで遊走期に入り、この間それらは、マトリックスから移動して、糸状の小管構造を形成する。これらは徐々に一緒になって、小管の網目状構造を形成し、これが毛細血管床を密接に模倣する（９〜１１日目）。この小管は、フォン・ヴィレブランド因子、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１）およびＩＣＡＭ−２について陽性に染色する。
【０１２６】
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６に加えて、公知の血管標的剤、コンブレスタチン４−リン酸塩（ＣＡ４Ｐ）を、インビトロの抗血管形成活性について試験した。ＴＣＳ  ＣｅｌｌＷｏｒｋｓ  ＡｎｇｉｏＫｉｔモデルを、製造業者の指示に従って用いた。上記で概説したとおり、ヒト内皮細胞を、２４ウェルプレート中でヒト線維芽細胞とともに同時培養して、ある範囲の濃度（０．０１〜１００μｇ／ｍｌ）にまたがってＮａｂ−５４０４、Ｎａｂ−５６７６またはＣＡ４Ｐに曝した。インキュベーションの１１または１２日後、小管を、細胞を固定すること、およびＣＤ３１に対するモノクローナル抗体、二次抗体結合体および着色基質を用いて染色することによって可視化した。小管の長さを、ＩｍａｇｅＰｒｏソフトウェアを用いて分析して、各々の化合物のＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて算出した。
【０１２７】
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の両方とも小管の形成を阻害し、樹立された小管を崩壊させ、このことは抗血管形成活性を示している。第一の実験では、細胞を、１日目に組成物で処置して、小管形成の阻害の分析のために１２日目に染色した。第二の実験では、この細胞を８日目に処置して、１１日目に染色したが、第三の実験では、細胞を１１日目に処置して、１２日目に染色して、樹立された小管の破壊の分析を可能にした。
【０１２８】
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の両方とも新しい微小血管の形成を阻害できた（図３および図４）。第二の実験ではＮａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の両方とも小管の形成を阻害、および／または樹立された小管を破壊できた（図５）。Ｎａｂ−５４０４は、樹立された小管を破壊するのにＮａｂ−５６７６よりも強力であった（図６、７、および図９）。Ｎａｂ−５４０４のＩＣ５０は、０．００２μｇ／ｍｌであると計算され、０．０２μｇ／ｍｌのＩＣ５０であるＮａｂ−５６７６よりも１０倍強力であった。Ｎａｂ−５４０４は、樹立された小管を破壊するのにＣＡ４Ｐ（ＩＣ５０＝０．００３μｇ／ｍｌ）と同じく有効であった（図６、図８および図９）。
【０１２９】
（実施例４）
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の抗腫瘍活性
Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の抗腫瘍活性は、異種移植片マウスモデルで評価した。この化合物を、インビトロで２つのサイクル（第一が低投薬量スケジュール、続いて第二の高投薬量スケジュール）で、樹立されたＨＴ−２９結腸細胞腫瘍に対して試験した。イリノテカンを、この研究での陽性コントロールとして用いた。マウス（ｎ＝１０）を、８つの群に分けて、Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６のマウスにこの化合物を静脈内注射で与えた。第一のサイクルは、０〜１４日の間、４用量について３日毎にＮａｂ−５４０４またはＮａｂ−５６７６の投与からなり、続いて、第二のサイクルで、これは、１５〜３０日の間、４用量について３日毎にＮａｂ−５４０４またはＮａｂ−５６７６の投与からなった。イリノテカンは、４用量について３日ごとに６０ｍｇ／ｋｇの用量での静脈内注射で投与した。個々の群は、表２に示しており、ここで第一のサイクルとは、０〜１４日目をいい、第二のサイクルとは１５〜３０日をいう。
【０１３０】
【表２】
2010502603.tif 000009
図１０および図１１に示されるとおり、さらに低用量では、Ｎａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の両方とも、Ｎａｂ−５４０４の３．４、２．５および１．７ｍｇ／ｋｇについては０．０２、０．００７、０．００１というｐ値で、Ｎａｂ−５６７６の３．４、２．５および１．７ｍｇ／ｋｇについては０．０４、０．００３、および０．０００４というｐ値で、腫瘍増殖を有意に阻害した。低用量でのＮａｂ−５４０４およびＮａｂ−５６７６の抗腫瘍活性によって、これらの化合物が抗血管形成活性を有することが示唆される。さらに高用量では、Ｎａｂ−５６７６に比較してＮａｂ−５４０４での処置後に有意に大きい腫瘍退縮があった。体重減少データに基づいて、このモデルでのＮａｂ−５４０４のＭＴＤは有意な腫瘍退縮を伴い約３０ｍｇ／ｋｇであった。
【０１３１】
コンブレスタチン４−リン酸塩（ＣＡ４Ｐ）も別の実験でＨＴ−２９腫瘍保有マウスに投与した。マウス（ｎ＝１０）は、ビヒクルまたはＣＡ４Ｐのいずれかを４用量について毎日のスケジュールで１００ｍｇ／ｋｇという報告されたＭＴＤで用いて、腫瘍が一旦９００ｍｍ３に達したとき処置した。ＣＡ４Ｐは、コントロールのビヒクルと相違なく、この腫瘍モデルで不活性であることが見出された（図１２）。
【０１３２】
前述の本発明は、明確な理解という目的のために図および実施例によってある程度詳細に記載してきたが、特定のわずかな変化および改変が行われることが当業者には明らかである。従って、詳細な説明および実施例は、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【図１】
2010502603.tif 000011
【図２Ａ】
2010502603.tif 000012
【図２Ｂ】
2010502603.tif 000013
【図２Ｃ】
2010502603.tif 000014
【図３】
2010502603.tif 000015
【図４】
2010502603.tif 000016
【図５】
2010502603.tif 000017
【図６】
2010502603.tif 000018
【図７】
2010502603.tif 000019
【図８】
2010502603.tif 000020
【図９】
2010502603.tif 000021
【図１０】
2010502603.tif 000022
【図１１】
2010502603.tif 000023
【図１２】
2010502603.tif 000024
【手続補正書】
【提出日】平成21年8月25日(2009.8.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む、個体における血管形成を阻害するための組成物であって、該組成物は、血管形成を阻害するのに有効だが、該個体において有意な細胞毒性を誘発するのには十分ではない量で投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む、個体における非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するための組成物であって、該組成物は該非腫瘍性血管形成関連疾患を処置するのに有効な量で投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項３】
前記非腫瘍性血管形成関連疾患が眼の疾患である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記眼の疾患が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、または血管新生緑内障である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記非腫瘍性血管形成関連疾患が循環器疾患である、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記循環器疾患が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記非腫瘍性血管形成関連疾患が関節リウマチまたは乾癬である、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、前記個体において有意な細胞毒性を誘発するには十分ではない量で投与されることを特徴とする、請求項２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
キャリアタンパク質およびコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む、個体におけるガンを処置するための組成物であって、該組成物はガンを処置するのに有効だが、該個体において有意な細胞毒性を誘発するのには十分ではない量で投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
前記組成物中の前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量が前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の対応するＭＴＤの約１５％未満である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ガンが固形腫瘍である、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ガンが、転移性の固形腫瘍である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物であって、前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体が式（ＩＩ）：
【化７】
2010502603.tif 000025
の化合物であり、
Ｂ１がメトキシ基またはメチルチオ基であり；
Ｂ２がメトキシ基またはメチルチオ基であり；
ｎが０〜８の整数であり；
ＹがＣＨ２基であるか、またはｎが１である場合は、式ＮＨの基であり得る、
組成物。
【請求項１４】
ＹがＣＨ２である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ｎが１であり、かつＹがＮＨである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｂ１およびＢ２が両方ともメチルチオ基である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記化合物がＩＤＮ５４０４である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
前記化合物がＩＤＮ５６７６である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物中の前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の量が約１５ｍｇ／ｍ２未満である、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、週に１回投与されることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、約３ヶ月を超えて中断なしに投与されることを特徴とする、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が実質的に界面活性剤を含まない、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記キャリアタンパク質がアルブミンである、請求項１〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記アルブミン対コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の比が約１８：１未満である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、前記キャリアタンパク質および前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含むナノ粒子を含む、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前記キャリアタンパク質がアルブミンである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記アルブミン対前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体の比が約１８：１未満である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ナノ粒子が、２００ｎｍ以下の平均直径を有する、請求項２５〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、実質的に界面活性剤を含まない、請求項２５〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物がＮａｂ−５４０４である、請求項１〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
前記個体がヒトである、請求項１〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
血管形成を阻害するのに有効な量のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む組成物を含有する単位剤形であって、該組成物の量は、該個体において有意な細胞毒性を誘発するのには十分ではない、単位剤形。
【請求項３３】
キャリアタンパク質をさらに含む、請求項３２に記載の単位剤形。
【請求項３４】
被験体に約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２のコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を送達するのに十分な量で、コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む、請求項３２または３３に記載の単位剤形。
【請求項３５】
約０．０５ｍｇ〜約２００ｍｇのコルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含む、請求項３２〜３４のいずれかに記載の単位剤形。
【請求項３６】
請求項３２〜３５のいずれかに記載の単位剤形であって、前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体が式（ＩＩ）：
【化７ａ】
2010502603.tif 000026
の化合物であり、
Ｂ１がメトキシ基またはメチルチオ基であり；
Ｂ２がメトキシ基またはメチルチオ基であり；
ｎが０〜８の整数であり；
ＹがＣＨ２基であるか、またはｎが１である場合は、式ＮＨの基であり得る、
単位剤形。
【請求項３７】
前記化合物が、ＩＤＮ５４０４またはＩＤＮ５６７６である、請求項３６に記載の単位剤形。
【請求項３８】
前記キャリアタンパク質が、アルブミンである、請求項３３〜３５のいずれかに記載の単位剤形。
【請求項３９】
前記組成物が、前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含むナノ粒子を含有する、請求項３２〜３８のいずれかに記載の単位剤形。
【請求項４０】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、目への送達または動脈内注射に適切な薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項４１】
前記薬学的に受容可能なキャリアが、眼内注射に適する、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記薬学的に受容可能なキャリアが、眼への局所適用に適する、請求項４０または４１に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
前記キャリアタンパク質が、アルブミンである、請求項４０〜４２のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
前記組成物が、前記コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体を含むナノ粒子を含有する、請求項４０〜４３のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、ならびに非腫瘍性血管形成関連疾患を有する個体において血管形成を阻害するために組成物を使用するための指示を含む、キット。
【請求項４６】
コルヒチンまたはチオコルヒチン二量体、キャリアタンパク質、ならびに血管形成を阻害するのに有効だが、個体において有意な細胞毒性を誘発するのには十分ではない量の組成物を投与することによって該個体において血管形成を阻害するために該組成物を使用するための指示を含む、キット。
【国際調査報告】
2010502603.tif 000027
2010502603.tif 000028
2010502603.tif 000029
2010502603.tif 000030
2010502603.tif 000031