(57)【要約】本発明は、少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬、例えばヌクレオチド類似体、例えばゲムシタビン、または有糸分裂阻害剤、例えばドセタキセルを、2-アミノアリールチアゾールおよび2-アミノアリールオキサゾールから選択されるチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与する段階を含む、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌ならびに進行胆道癌を含む固形癌を治療するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要とする患者において、式Iの2-アミノアリールチアゾールまたは2-アミノアリールオキサゾールおよび少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬、より特定的には、ヌクレオチド類似体および/または有糸分裂阻害剤などの代謝拮抗薬から選択される薬剤を投与する段階を含む、固形癌を治療するための方法：
2010515708.tif 000028
式中、式Iにおける置換基Z、A、B、B’、QおよびR1〜R6は以下のように規定される：
Zは酸素または硫黄であり；
AおよびB’は以下のうちの1つであり：
i)(R7)N(CH2)n、式中nは0または1である；
ii)O(CH2)n、式中nは0または1である；
iii)S(CH2)n、式中nは0または1である；
iv)(CH2)n、式中nは0、1または2である；
v)C(O)(CH2)n、式中nは0または1である；
またはAおよびB’がそれぞれ窒素である場合、一緒になり以下式の二価ラジカルを形成してもよく：
-(CH2)s-X1-(CH2)t-(a)
式中、sおよびtはそれぞれ独立して1または2であり、X1はO、S、NR10、N[C(=O)R10]または(CH2)nであり、ここで、nは0または1であり、ここで式(a)中の各水素はハロまたはC1〜4アルキルで置換されてもよい；
Bは以下のうちの1つであり：
i)(R7)N
ii)酸素
iii)S(O)n、式中nは0、1または2である
iv)CH(R7)(R8)
v)C=δ、式中δは酸素、硫黄、NHまたはN-CNである
vi)C(R7)=C(R8)
vii)N=C(R7)
R7およびR8はそれぞれ独立して、水素、C1〜4アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、C3〜7シクロアルキル、C1〜4ハロアルキル、C1〜4アルコキシ、C1〜4ヒドロキシアルキル、C1〜4アルキルアミノであり；
R1およびR2は以下から選択され：
i)水素、ハロゲン(F、Cl、BrもしくはIから選択される)、または
ii)1〜10の炭素原子(例えば、2〜4または1〜5または1、2、3、4もしくは5つの炭素原子)を含み、1つまたは複数のヘテロ原子、例えばハロゲン((F、Cl、BrもしくはIから選択される)、酸素、および窒素(後者は任意で、ペンダント塩基性窒素官能基(pendant basic nitrogen functionality)の形態である)；ならびに、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル；ならびにCO-R、COO-R、CONH-R、SO2-R、およびSO2NH-R、式中、Rは1〜10の炭素原子を含み、任意で少なくとも1つのヘテロ原子、特にハロゲン((F、Cl、BrもしくはIから選択される)、酸素、および窒素、後者は任意で、ペンダント塩基性窒素官能基の形態である、で置換されてもよい直鎖または分枝アルキル基である；ならびに、ペンダント塩基性窒素官能基で置換されてもよいシクロアルキルまたはアリール1またはヘテロアリール1基、で置換されてもよい、直鎖、分枝またはシクロアルキル基として規定されるアルキル1基、または
iii)以下などの1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを、いずれか1つの環位で有するフェニルまたはその置換された変形体（substituted variant）として規定されるアリール1基
−ハロゲン(I、F、ClまたはBrから選択される)；
−アルキル1基；
−ペンダント塩基性窒素官能基により置換されてもよいシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基；
−トリフルオロメチル、O-アルキル1、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、NH-アルキル1、N(アルキル1)(アルキル1)、およびアミノ、後者の窒素置換基は任意で塩基性窒素官能基(basic nitrogen functionality)の形態である；
−NHCO-RまたはNHCOO-RまたはNHCONH-RまたはNHSO2-RまたはNHSO2NH-RまたはCO-RまたはCOO-RまたはCONH-RまたはSO2-RまたはSO2NH-RまたはC(NOH)NH2、C(N)NH2、ここで、Rは水素、アルキル1、アリールまたはヘテロアリールに対応する；または
iv)ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、チエニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピロリル、フラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾールキノリニル基として規定され、さらにいずれか1つの環位に、以下1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有してもよいヘテロアリール1基：
−ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)；
−アルキル1基；
−ペンダント塩基性窒素官能基により置換されてもよいシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基；
−トリフルオロメチル、O-アルキル1、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、NH-アルキル1、N(アルキル1)(アルキル1)、およびアミノ、後者の窒素置換基は任意で塩基性窒素官能基の形態である；
−NHCO-RまたはNHCOO-RまたはNHCONH-RまたはNHSO2-RまたはNHSO2NH-RまたはCO-RまたはCOO-RまたはCONH-RまたはSO2-RまたはSO2NH-R、ここで、Rは水素、アルキル1に対応する；または
v)O-アリール1、またはNH-アリール1、またはO-ヘテロアリール1またはNH-ヘテロアリール1基
vi)トリフルオロメチル、O-アルキル1、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、NH-アルキル1、N(アルキル1)(アルキル1)、およびアミノ、後者の窒素置換基は任意で塩基性窒素官能基の形態である、または
vi)NHCO-RまたはNHCOO-RまたはNHCONH-RまたはNHSO2-RまたはNHSO2NH-RまたはCO-RまたはCOO-RまたはCONH-RまたはSO2-RまたはSO2NH-R、ここで、Rは水素、アルキル1、アリール1またはヘテロアリール1に対応する；
R3、R4、R5およびR6はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)、1〜10の炭素原子を含み、ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)、酸素、および窒素などの1つまたは複数のヘテロ原子、後者は任意でペンダント塩基性窒素官能基の形態である；ならびにトリフルオロメチル、C1〜6アルキルオキシ、アミノ、C1〜6アルキルアミノ、ジ(C1〜6アルキル)アミノ、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、およびCO-R、COO-R、CONH-R、SO2-R、およびSO2NH-R、ここでRは水素、アルキル1、アリールまたはヘテロアリールに対応する、により置換されてもよい直鎖または分枝アルキル基から選択され；
ならびに式中、Qは以下から選択される：
上記で規定される、
i)アルキル1
ii)アリール1
iii)ヘテロアリール1。
【請求項２】
非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、前立腺癌、食道癌、ならびに進行胆道癌を治療するための、請求項1記載の方法。
【請求項３】
抗悪性腫瘍薬が、癌を治療するための市販の薬剤から選択される、請求項1または2のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
抗悪性腫瘍薬が、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびエトポシドを含む有糸分裂阻害剤から選択される、請求項3記載の方法。
【請求項５】
抗悪性腫瘍薬が、ドセタキセル(CAS番号114977-28-5、タキソテール(商標))である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
抗悪性腫瘍薬が、プリン類似体、例えば、チオ-6-グアニン、ペントスタチン、ピリミジン類似体、例えば、シトシンアラビノシド、フルオロ-5-ウラシル(5FU)、フルオロウリジン-デスオキシリボース、カペシタビンまたはゲムシタビン、ならびにアデニン類似体、例えばフルダラビンを含む代謝拮抗薬から選択される、請求項3記載の方法。
【請求項７】
抗悪性腫瘍薬がゲムシタビン(CAS番号95058-81-4、ジェムザール(商標))である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
抗悪性腫瘍薬がトポイソメラーゼI阻害剤、例えばイリノテカンから選択される、請求項3記載の方法。
【請求項９】
2-アミノアリールチアゾールまたは2-アミノアリールオキサゾールが式IIを有する、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法：
2010515708.tif 000029
【請求項１０】
2-アミノアリールチアゾールが4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド(マシチニブ-AB1010)である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、前立腺癌、食道癌ならびに進行胆道癌を含むが、それらに限定されない固形癌を治療するために、請求項1記載の式Iの化合物から選択された阻害剤、とりわけ請求項10記載の化合物、および請求項4〜8のいずれか一項記載の少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬を同時または連続投与するための薬学的組成物。
【請求項１２】
非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、前立腺癌、食道癌ならびに進行胆道癌を含むが、それらに限定されない固形癌を治療するために、同時、個別または連続投与するための薬剤を調製するための、請求項1記載の式Iの化合物、とりわけ請求項10記載の化合物、および請求項4〜8のいずれか一項記載の少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬の使用。
【請求項１３】
切除不能な膵臓腺癌に苦しむ患者、特にゲムシタビン単独+放射線療法プロトコルに対し耐性がある患者の治療のための請求項12記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬、例えばヌクレオチド類似体、例えばゲムシタビン、または有糸分裂阻害剤、例えばドセタキセルを、2-アミノアリールチアゾールおよび2-アミノアリールオキサゾールから選択されるチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与する段階を含む、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、前立腺癌ならびに進行胆道癌を含む固形癌を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
膵臓癌は西欧諸国において癌に関連した死亡の主な死因の第4位〜5位である。診断された患者に対する予後は悪く、5年全生存率は5%未満、12か月生存率は10%であり、生存期間中央値は腫瘍の発見後約3〜5ヶ月である。この良くない結果の主な理由は、特異的な症状の欠如、膵臓のアクセスできない位置、および転移性疾患の初期発生のために、初期に膵臓癌を診断することができないことである。今まで、現在の放射線および化学療法レジメンでは、膵臓癌患者の長期生存に有意の改善が達成されず、この疾患の進行期に対しより効果的な新規併用療法を開発する重要性が強調されている。
【０００３】
膵臓癌の原因はまだ、よく理解されていないが、疾患の原因における成長因子の役割に対し、ますます注意が向けられている。EGF、PDGFおよびVEGFなどの多くの成長因子およびその受容体が膵臓癌の進行中に過剰発現され、この疾患における受容体チロシンキナーゼの選択的阻害剤の評価の重要性が示唆される。
【０００４】
ゲムシタビン(2’,2’,-ドフルオロ-2’,-デオキシシチジン)は、リボヌクレオチドリダクターゼの阻害およびDNAへの取り込みに対するdCTPとの競合により、DNA合成を阻害するジェムザール(GEMZAR)(商標)として市販されているデオキシシチジンのヌクレオシド類似体である。これが現在、膵臓癌などのいくつかの癌に対する基準治療であり、放射線治療と結びつけられる。しかしながら、ゲムシタビン単独の治療プロトコルは患者の生存率にほとんど影響しない。
【０００５】
このように、今日の時点では、膵臓癌に対する治療法はない。
【０００６】
多くの癌で観察されているゲムシタビン耐性と相乗的に作用するかまたはそれを消失させる化合物を見出すために多くの研究が実施されている。多くの努力にもかかわらず、これまでに得られたデータから、ゲムシタビンに対する膵臓癌耐性におけるBcl2遺伝子ファミリーの関連が示唆されるが、治療プロトコルの著しい改善には至っていない。また、有効な併用療法を見出すいくつかの試みが説明されているが、成功していない。例えば、血管新生阻害化合物がゲムシタビンと同時投与されているが、生存率の改善は今までのところ観察されていない。
【０００７】
AB1010(マシチニブ)はAB Scienceにより開発された新規チロシンキナーゼ阻害剤であり、c-KitおよびPDGFRβ受容体を標的とする2-アミノアリールチアゾール誘導体の一部であり、WO 2004/014903（特許文献１）の対象である。AB1010は現在、臨床試験において、多くの悪性腫瘍において評価されているが、これまでのところ、結果は非常に有望である。
【０００８】
本明細書で報告した前臨床データから明確に、AB1010はゲムシタビンに対する膵腫瘍細胞系の耐性を逆転させることが示される。これらの結果から、AB1010が、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌ならびに進行胆道癌を含むいくつかの癌に対するゲムシタビン治療患者における併用療法として大きな可能性を有することが示される。本発明者らはまた、AB1010がドセタキセルなどの有糸分裂阻害剤の作用を増感させることを見出した。本明細書において以下で規定される、C-KIT/PDGF-R阻害剤である2-アミノアリールチアゾールの正確な作用機序はまだ完全には解明されていないが、本発明者らは、これらのチロシンキナーゼ阻害剤が、従来のゲムシタビンまたはドセタキセル治療に抵抗力を有する癌細胞に関連するFAK経路を遮断できることを発見した。FAK経路の遮断により、腫瘍細胞が細胞移動を妨害するそれらの接着特性を失うので、化学療法薬の感作が説明される。いずれの場合においても、この発見はまた、上記化合物により治療された癌細胞は転移する傾向が低くなることを意味する。
【０００９】
このように、本発明者らは本明細書で初めて、少なくとも1つの代謝拮抗薬、例えばゲムシタビンまたはドセタキセル、ならびに2-アミノアリールチアゾールおよび2-アミノアリールオキサゾールから選択されたチロシンキナーゼ阻害剤を用い、標準化学療法に対し、耐性を逆転させ、ならびに癌細胞を感作させることができる、固形癌の併用治療を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】WO 2004/014903
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【発明を実施するための形態】
【００１２】
説明
本発明は一般に固形癌治療の分野に関する。本発明は、治療の必要な患者において、2-アミノアリールチアゾールまたは2-アミノアリールオキサゾール(それぞれ、WO 2004/014903およびWO 2005/040139、参照により本明細書に組み入れられる)および少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬、より特定的には、ヌクレオチド類似体および/または有糸分裂阻害剤などの代謝拮抗薬から選択される少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬を投与する段階を含む、固形癌を治療するための新規方法を提供する。
【００１３】
固形癌のなかで、本発明はより詳細には、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、前立腺癌、食道癌、ならびに進行胆道癌の治療に関する。
【００１４】
「抗悪性腫瘍薬」により、本明細書では、癌の治療のための市販の薬剤、例えば、参照により組み入れられるActualite Pharmaceutiques n°302(1992年10月)38〜39ページ、41〜43ページで示された化合物を示す。より詳細には、例えば、チューブリン脱重合を阻害することにより有糸分裂を阻害することが当技術分野において公知の化合物である有糸分裂阻害剤から選択される代謝拮抗薬を示す。これらの代謝拮抗薬としては、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびエトポシドが挙げられる。
【００１５】
例えば、以下で示すドセタキセル(CAS番号114977-28-5、Taxotere(商標))が、多くの腫瘍、とりわけ転移性乳癌、肺癌および前立腺癌に対し有効である：
2010515708.tif 000002
【００１６】
別の代謝拮抗薬は、以下を含むがそれらに限定されないヌクレオチド類似体である：プリン類似体、例えば、チオ-6-グアニン、ペントスタチン、ピリミジン類似体、例えばシトシンアラビノシド、フルオロ-5-ウラシル(5FU)、フルオロウリジン-デスオキシリボース(desoxyribose)、カペシタビンまたはゲムシタビン、ならびにアデニン類似体、例えばフルダラビン。本明細で規定されるように、代謝拮抗薬は2-クロロ-2’-デスオキシアデノシン(2-CDA)、クラドリビン、メルクインデックス(第12版)♯2397を含まない。
【００１７】
例えば、代謝拮抗薬はゲムシタビンCAS番号95058-81-4(4-アミノ-1-[3,3-ジフルオロ-4-ヒドロキシ-5-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン-2-イル]-1H-ピリミジン-2-オン)である：
2010515708.tif 000003
ゲムシタビンはDNA複製中にシチジンに取って代わり、癌細胞のアポトーシスが得られる。様々な癌腫：非小細胞肺癌、膵臓癌、および乳癌において使用され、食道癌において使用するために研究されている。
【００１８】
好ましい第1の態様では、上記2-アミノアリールチアゾールまたは2-アミノアリールオキサゾール(以後、AB化合物と呼ぶ)は式Iの化合物であり、これは物質の遊離塩基形態または薬学的に許容されるその塩のいずれかを示してもよい：
2010515708.tif 000004
式中、式Iにおける置換基Z、A、B、B’、QおよびR1〜R6は以下のように規定される：
Zは酸素または硫黄である。
AおよびB’は以下のうちの1つであり：
i)(R7)N(CH2)n、式中nは0または1である；
ii)O(CH2)n、式中nは0または1である；
iii)S(CH2)n、式中nは0または1である；
iv)(CH2)n、式中nは0、1または2である；
v)C(O)(CH2)n、式中nは0または1である；
またはAおよびB’がそれぞれ窒素である場合、一緒になり以下式の二価ラジカルを形成してもよく：
-(CH2)s-X1-(CH2)t-(a)
式中、sおよびtはそれぞれ独立して1または2であり、X1はO、S、NR10、N[C(=O)R10]または(CH2)nであり、ここで、nは0または1であり、ここで式(a)中の各水素はハロまたはC1〜4アルキルで置換されてもよい。
【００１９】
Bは以下のうちの1つである：
i)(R7)N
ii)酸素
iii)S(O)n、式中nは0、1または2である
iv)CH(R7)(R8)
v)C=δ、式中δは酸素、硫黄、NHまたはN-CNである
vi)C(R7)=C(R8)
vii)N=C(R7)
【００２０】
R7およびR8はそれぞれ独立して、水素、C1〜4アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、C3〜7シクロアルキル、C1〜4ハロアルキル、C1〜4アルコキシ、C1〜4ヒドロキシアルキル、C1〜4アルキルアミノである。
【００２１】
R1およびR2は以下から選択される：
i)水素、ハロゲン(F、Cl、BrもしくはIから選択される)、または
ii)1〜10の炭素原子(例えば、2〜4または1〜5または1、2、3、4もしくは5つの炭素原子)を含み、1つまたは複数のヘテロ原子、例えばハロゲン(F、Cl、BrもしくはIから選択される)、酸素、および窒素(後者は任意で、ペンダント塩基性窒素官能基(pendant basic nitrogen functionality)の形態である)；ならびに、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル；ならびにCO-R、COO-R、CONH-R、SO2-R、およびSO2NH-R、式中、Rは1〜10の炭素原子を含み、少なくとも1つのヘテロ原子、特にハロゲン((F、Cl、BrもしくはIから選択される)、酸素、および窒素、後者は任意で、ペンダント塩基性窒素官能基の形態である、で置換されてもよい直鎖または分枝アルキル基である；ならびに、ペンダント塩基性窒素官能基で置換されてもよいシクロアルキルまたはアリール1またはヘテロアリール1基、で置換されてもよい、直鎖、分枝またはシクロアルキル基として規定されるアルキル1基、または
iii)以下などの1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを、いずれか1つの環位で有するフェニルまたはその置換変形として規定されるアリール1基
−ハロゲン(I、F、ClまたはBrから選択される)；または
iii)以下などの1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを、いずれか1つの環位で有するフェニルまたはその置換変異体として規定されるアリール1基
−ハロゲン(I、F、ClまたはBrから選択される)；
−アルキル1基；
−ペンダント塩基性窒素官能基により置換されてもよいシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基；
−トリフルオロメチル、O-アルキル1、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、NH-アルキル1、N(アルキル1)(アルキル1)、およびアミノ、後者の窒素置換基は任意で塩基性窒素官能基(basic nitrogen functionality)の形態である；
−NHCO-RまたはNHCOO-RまたはNHCONH-RまたはNHSO2-RまたはNHSO2NH-RまたはCO-RまたはCOO-RまたはCONH-RまたはSO2-RまたはSO2NH-RまたはC(NOH)NH2、C(N)NH2、ここで、Rは水素、アルキル1、アリールまたはヘテロアリールに対応する、
または
iv)ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、チエニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピロリル、フラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾールキノリニル基として規定され、さらにいずれか1つの環位に、以下1つまたは複数の置換基の任意の組み合わせを有してもよいヘテロアリール1基
−ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)；
−アルキル1基；
−ペンダント塩基性窒素官能基により置換されてもよいシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基、
−トリフルオロメチル、O-アルキル1、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、NH-アルキル1、N(アルキル1)(アルキル1)、およびアミノ、後者の窒素置換基は任意で塩基性窒素官能基の形態である；
−NHCO-RまたはNHCOO-RまたはNHCONH-RまたはNHSO2-RまたはNHSO2NH-RまたはCO-RまたはCOO-RまたはCONH-RまたはSO2-RまたはSO2NH-R、ここで、Rは水素、アルキル1に対応する、または
v)O-アリール1、またはNH-アリール1、またはO-ヘテロアリール1またはNH-ヘテロアリール1基
vi)トリフルオロメチル、O-アルキル1、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、NH-アルキル1、N(アルキル1)(アルキル1)、およびアミノ、後者の窒素置換基は任意で塩基性窒素官能基の形態である、または
vi)NHCO-RまたはNHCOO-RまたはNHCONH-RまたはNHSO2-RまたはNHSO2NH-RまたはCO-RまたはCOO-RまたはCONH-RまたはSO2-RまたはSO2NH-R、ここで、Rは水素、アルキル1、アリール1またはヘテロアリール1に対応する。
【００２２】
R3、R4、R5およびR6はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)、1〜10の炭素原子を含み、ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)、酸素、および窒素などの1つまたは複数のヘテロ原子、後者は任意でペンダント塩基性窒素官能基の形態である；ならびにトリフルオロメチル、C1〜6アルキルオキシ、アミノ、C1〜6アルキルアミノ、ジ(C1〜6アルキル)アミノ、カルボキシル、シアノ、ニトロ、ホルミル、ヒドロキシ、およびCO-R、COO-R、CONH-R、SO2-R、およびSO2NH-R、ここでRは水素、アルキル1、アリールまたはヘテロアリールに対応する、により置換されてもよい直鎖または分枝アルキル基から選択される。
【００２３】
および式中、Qは以下から選択される：
上記で規定される、
i)アルキル1
ii)アリール1
iii)ヘテロアリール1。
【００２４】
特に記載がなければ、本明細書で使用する以下の用語は以下のように規定される。
【００２５】
本明細書で使用されるように、「アリール基」という用語は、炭素および水素原子を含む単環または多環式芳香族ラジカルを意味する。適したアリール基の例としては、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、およびナフチル、ならびにベンゾ縮合炭素環部分、例えば、5,6,7,8-テトラヒドロナフチルが挙げられるが、それらに限定されない。アリール基は非置換とすることができ、または1つもしくは複数の置換基で置換することができる。
【００２６】
1つの態様では、アリール基は単環であり、この場合、環は6つの炭素原子を含み、本明細書では、「(C6)アリール」と呼ばれる。
【００２７】
本明細書で使用されるように、「アルキル基」という用語は、1〜10の炭素原子を有する飽和直鎖または分枝非環状炭化水素である。代表的な飽和直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、n-プロピル、n-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチル、n-ノニルおよびn-デシルが挙げられ；一方、飽和分枝アルキルとしては、イソプロピル、sec-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、イソペンチル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、4-メチルペンチル、2-メチルヘキシル、3-メチルヘキシル、4-メチルヘキシル、5-メチルヘキシル、2,3-ジメチルブチル、2,3-ジメチルペンチル、2,4-ジメチルペンチル、2,3-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルヘキシル、2,5-ジメチルヘキシル、2,2-ジメチルペンチル、2,2-ジメチルヘキシル、3,3-ジメチルペンチル、3,3-ジメチルヘキシル、4,4-ジメチルヘキシル、2-エチルペンチル、3-エチルペンチル、2-エチルヘキシル、3-エチルヘキシル、4-エチルヘキシル、2-メチル-2-エチルペンチル、2-メチル-3-エチルペンチル、2-メチル-4-エチルペンチル、2-メチル-2-エチルヘキシル、2-メチル-3-エチルヘキシル、2-メチル-4-エチルヘキシル、2,2-ジエチルペンチル、3,3-ジエチルヘキシル、2,2-ジエチルヘキシル、3,3-ジエチルヘキシル、などが挙げられる。本発明の化合物に含まれるアルキル基は、1つまたは複数の置換基により置換されてもよい。
【００２８】
本明細書で使用されるように、「アルコキシ」という用語は、酸素原子により別の部分に結合されたアルキル基を示す。アルコキシ基の例としては、メトキシ、イソプロポキシ、エトキシ、tert-ブトキシなどが挙げられる。アルコキシ基は1つまたは複数の置換基により置換されてもよい。
【００２９】
本明細書で使用されるように、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子環員および1つまたは複数のヘテロ原子環員(例えば、酸素、硫黄または窒素など)を含む単環または多環ヘテロ芳香環を意味する。典型的には、ヘテロアリール基は1〜約5のヘテロ原子環員および1〜約14の炭素原子環員を有する。代表的なヘテロアリール基としては、ピリジル、1-オキソ-ピリジル、フラニル、ベンゾ[1,3]ジオキソリル、ベンゾ[1,4]ジオキシニル(dioxinyl)、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアジアゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフリル、インドリジニル、イミダゾピリジル、テトラゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾキサジアゾリル、インドリル、テトラヒドロインドリル、アザインドリル、イミダゾピリジル、キナゾリニル、プリニル、ピロロ[2,3]ピリミジニル、ピラゾロ[3,4]ピリミジニル、イミダゾ[1,2-a]ピリジル、およびベンゾ(b)チエニルが挙げられる。ヘテロ原子は当業者に公知の保護基で置換してもよく、例えば、窒素上の水素をtert-ブトキシカルボニル基で置換してもよい。ヘテロアリール基は1つまたは複数の置換基で置換してもよい。さらに、窒素または硫黄ヘテロ原子環員は酸化されてもよい。1つの態様では、ヘテロ芳香環は5〜8員単環ヘテロアリール環から選択される。別の基へのヘテロ芳香環またはヘテロアリール環の結合点は、ヘテロ芳香環またはヘテロアリール環の炭素原子またはヘテロ原子のいずれかであってもよい。
【００３０】
本明細書で使用されるように、「複素環」という用語は、ヘテロシクロアルキル基およびヘテロアリール基をまとめて示す。
【００３１】
本明細書で使用されるように、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、O、NまたはSから選択された少なくとも1つのヘテロ原子を有し、2〜11の炭素原子を有し、飽和かまたは不飽和とすることができるが芳香族ではない、単環または多環基を意味する。ヘテロシクロアルキル基の例としては以下が挙げられる(が、それらに限定されない)：ピペリジニル、ピペラジニル、2-オキソピペラジニル、2-オキソピペリジニル、2-オキソピロリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリンジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオピラニルスルホン、テトラヒドロチオピラニルスルホキシド、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルスルホキシド、チオモルホリニルスルホン、1,3-ジオキソラン、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル-2-オン、テトラヒドロチエニル、およびテトラヒドロ-1,1-ジオキソチエニル。典型的には、単環ヘテロシクロアルキル基は3〜7員を有する。好ましい3〜7員単環ヘテロシクロアルキル基は、5または6環原子を有するものである。ヘテロ原子は当業者に公知の保護基で置換されてもよく、例えば、窒素上の水素はtert-ブトキシカルボニル基により置換されてもよい。さらに、ヘテロシクロアルキル基は1つまたは複数の置換基で置換されてもよい。さらに、複素環の別の基への結合点は複素環の炭素原子かまたはヘテロ原子のいずれかとしてもよい。そのような置換複素環基の安定な異性体のみがこの規定で企図される。
【００３２】
本明細書で使用されるように、「置換基」または「置換された」という用語は、化合物または基上の水素ラジカルが、保護されていない形態で、または保護基を用いて保護された場合、反応条件に実質的に安定である任意の所望の基により置換されることを意味する。好ましい置換基の例は、本明細書で開示した例示的な化合物および態様において見出されるもの、ならびにハロゲン(クロロ、ヨード、ブロモ、またはフルオロ)；アルキル；アルケニル；アルキニル；ヒドロキシ；アルコキシ；ニトロ；チオール；チオエーテル；イミン；シアノ；アミド；ホスホナト；ホスフィン；カルボキシル；チオカルボニル；スルホニル；スルホンアミド；ケトン；アルデヒド；エステル；酸素(-O)；ハロアルキル(例えば、トリフルオロメチル)；単環または縮合または非縮合多環であってもよいシクロアルキル(例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシル)、または単環または縮合または非縮合多環であってもよいヘテロシクロアルキル(例えば、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、またはチアジニル)、単環または縮合または非縮合多環アリールまたはヘテロアリール(例えば、フェニル、ナフチル、ピロリル、インドリル、フラニル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、アクリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチオフェニル、またはベンゾフラニル)；アミノ(第1級、第2級または第3級)；CO2CH3；CONH2；OCH2CONH2；NH2；SO2NH2；OCHF2；CF3；OCF3であり；そのような部分はまた、縮合環構造または架橋、例えば、-OCH2O-で置換されてもよい。これらの置換基は、さらに、そのような基から選択される置換基で置換されてもよい。ある態様では、「置換基」という用語または形容詞「置換された」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、ハロアルキル、-C(O)NR11R12、-NR13C(O)R14、ハロ、-OR13、シアノ、ニトロ、ハロアルコキシ、-C(O)R13、-NR11R12、-SR13、-C(O)OR13、-OC(O)R13、-NR13C(O)NR11R12、-OC(O)NR11R12、-NR13C(O)OR14、-S(O)rR13、-NR13S(O)rR14、-OS(O)rR14、S(O)rNR11R12、-O、-S、および-N-R13からなる群より選択される置換基を示し、ここでrは1または2であり；R11およびR12は、各事象に対し、独立して、H、置換されてもよいアルキル、置換されてもよいアルケニル、置換されてもよいアルキニル、置換されてもよいシクロアルキル、置換されてもよいシクロアルケニル、置換されてもよいヘテロシクロアルキル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいアラルキル、または置換されてもよいヘテロアルキルであり；または、R1およびR12はそれらが結合している水素と一緒になり、置換されてもよいヘテロシクロアルキルまたは置換されてもよいヘテロアリールとなり；ならびに、R13およびR14は各事象に対し、独立して、H、置換されてもよいアルキル、置換されてもよいアルケニル、置換されてもよいアルキニル、置換されてもよいシクロアルキル、置換されてもよいシクロアルケニ��、置換されてもよいヘテロシクロアルキル、置換されてもよいアリール、置換されてもよいヘテロアリール、置換されてもよいアラルキル、または置換されてもよいヘテロアルキルである。
【００３３】
「シクロアルキル」という用語は、3〜10の炭素原子を有する飽和環状ラジカルを意味する。代表的なシクロアルキルとしては、シクロプロピル、1-メチルシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、およびシクロデシルが挙げられる。シクロアルキル基は1つまたは複数の置換基で置換されてもよい。
【００３４】
「ハロゲン」という用語は-F、-Cl、-Brまたは-Iを意味する。
【００３５】
式Iの特定の化合物の中で、本発明は以下式IIの化合物に関する：
2010515708.tif 000005
Zは酸素または硫黄である。
アリール1、ヘテロアリール1、R1、R2およびR3は上記意味を有する。
上記式の好ましい化合物の例を以下で示す：
001：N-{3-[5-(4-シアノ-フェニル)-オキサゾール-2-イルアミノ]-4-メチル-フェニル}-3-トリフルオロメチル-ベンズアミド
2010515708.tif 000006
002：4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド(マシチニブ-AB1010)
2010515708.tif 000007
【００３６】
式Iの特定の化合物の中で、本発明は以下式IIIの化合物に関する：
2010515708.tif 000008
Zは酸素または硫黄である。
アリール1、ヘテロアリール1、R1、R2およびR3は上記意味を有する。
上記式の好ましい化合物の例を以下で示す：
003：N-(3-クロロ-フェニル)-4-メチル-3-(5-ピリジン-4-イル-オキサゾール-2-イルアミノ)-ベンズアミド
2010515708.tif 000009
004：4-メチル-N-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-フェニル]-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-ベンズアミド
2010515708.tif 000010
【００３７】
式Iの特定の化合物の中で、本発明は以下式IVの化合物に関する：
2010515708.tif 000011
式中、
WはC=OまたはSO2である。
Zは酸素または硫黄である。
Lは上記で規定したアルキル1、アリール1、またはヘテロアリール1から選択される。
R1、R2、R3、R4、R5およびR6は上記意味を有する。
R9は、水素、1〜10の炭素原子を含み、ハロゲン(F、Cl、BrまたはIから選択される)、酸素、および窒素、後者はペンダント塩基性窒素官能基の形態である、などの1つまたは複数のヘテロ原子で置換されてもよい直鎖または分枝アルキル基；C1〜6アルキルオキシ、アミノ、ヒドロキシルから選択される。
【００３８】
上記式の好ましい化合物の例を以下で示す：
005：N-[4-メチル-3-(5-ピリジン-4-イル-オキサゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-C-フェニル-メタンスルホンアミド
2010515708.tif 000012
006：N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-C-フェニル-メタンスルホンアミド
2010515708.tif 000013
【００３９】
本発明の化合物は本発明者らの前の出願WO 2004/014903およびWO 2005/040139において記載されている一般プロトコルを使用して調製してもよい。
【００４０】
さらに別の態様では、本発明は上記方法を企図し、ここで、AB化合物は2-(3-アミノ)アリールアミノ-4-アリール-チアゾール、例えば、本明細書において説明で組み入れられる出願人が出願したWO 2004/014903のもの、とりわけ式Vの化合物から選択され：
2010515708.tif 000014
式中、
XはRまたはNRR’であり、ここで、RおよびR’は独立して、水素、少なくとも1つのヘテロ原子、例えば、F、I、ClおよびBrから選択されたハロゲンなどにより置換されてもよく、任意でペンダント塩基性窒素官能性を有する、アリール、ヘテロアリール、アルキル、またはシクロアルキル基；または、少なくとも1つのヘテロ原子、例えば、O、N、F、I、ClおよびBrから選択されたハロゲンなどにより置換されてもよく、または任意でペンダント塩基性窒素官能性を有する、アリール、ヘテロアリール、アルキル、またはシクロアルキル基により置換された、アリール、ヘテロアリール、アルキル、またはシクロアルキル基から選択され、
R2は水素、ハロゲンまたは1〜10の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチルまたはアルコキシであり；
R3は水素、ハロゲンまたは1〜10の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチルまたはアルコキシであり；
R4は水素、ハロゲンまたは1〜10の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチルまたはアルコキシであり；
R5は水素、ハロゲンまたは1〜10の炭素原子を含む直鎖もしくは分枝アルキル基、トリフルオロメチルまたはアルコキシであり；
R6は以下のうちの1つである：
(i)1つまたは複数の置換基、例えば、ハロゲン、1〜10の炭素原子を有するアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシの任意の組み合わせを、任意の1つの環位で有する、フェニルまたはその置換変形体；
(ii)さらに、1つまたは複数の置換基、例えば、ハロゲン、1〜10の炭素原子を有するアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシの任意の組み合わせを有してもよい、2、3、または4-ピリジル基などのヘテロアリール基；
(iii)さらに、1つまたは複数の置換基、例えば、ハロゲン、1〜10の炭素原子を有するアルキル基、トリフルオロメチル、およびアルコキシの任意の組み合わせを有してもよい、5員環芳香族複素環基、例えば、2-チエニル、3-チエニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリル。
(iv)H、I、F、ClまたはBrから選択されるハロゲン；NH2、NO2またはSO2-R、式中、Rは、1つまたは複数基、例えば1〜10炭素原子を含み、少なくとも1つのヘテロ原子、特に、O、N、I、Cl、BrおよびFから選択されたハロゲンで置換されてもよく、および/または、ペンダント塩基性窒素官能基を有する、直鎖または分枝アルキル基である。基Xの例としては、以下で示した構造a〜mが挙げられ、式中、波線または矢印は、上記式Vのコア構造への結合点に対応する：
2010515708.tif 000015
【００４１】
基a〜fの中で、基dが好ましい。また、g〜mでは、矢印は、フェニル基を介したコア構造への結合点を含んでもよい。
【００４２】
さらに別の態様では、本発明は、阻害剤が式I、II、III、IVまたはVの化合物から選択される、上記方法を含む。
【００４３】
本発明はまた、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌ならびに進行胆道癌を含むが、それらに限定されない固形癌を治療するための、上記で規定した少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬と組み合わせた上記で規定した化合物の使用に関する。
【００４４】
本発明はまた、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、食道癌ならびに進行胆道癌を含むが、それらに限定されない固形癌を治療するために、上記で規定した式I、II、III、IVまたはVの化合物から選択された阻害剤および上記で規定された少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬を同時または連続投与するための製品または薬学的組成物に関する。
【００４５】
本発明はまた、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌および卵巣癌、食道癌ならびに進行胆道癌を含むが、それらに限定されない固形癌を治療するために、同時、個別または連続投与するための薬剤を調製するための、上記で規定した式I、II、III、IVまたはVの化合物から選択された阻害剤および上記で規定された少なくとも1つの抗悪性腫瘍薬の使用に関する。
【００４６】
上記発明は、特に、切除不能な膵臓腺癌に苦しむ患者、特にゲムシタビン単独+放射線療法プロトコルに対し耐性があるものの治療を企図する。
【００４７】
より詳細には、式Iの化合物は4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル-チアゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-ベンズアミド(マシチニブ-AB1010)である
2010515708.tif 000016
【００４８】
上記態様では、併用製品は、式I、II、III、IVまたはVの化合物の化合物が少なくとも1つの前記抗悪性腫瘍薬の前に投与されるように設計または指定することができる。
【００４９】
本明細書で使用される薬学的組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、くも膜下腔内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、舌下、または直腸手段を含むが、それらに限定されないあらゆる経路により投与してもよい。
【００５０】
活性成分の他に、これらの薬学的組成物は、活性化合物の薬学的に使用できる調製物へのプロセシングを促進する賦形剤および補助剤を含む、好適な薬学的に許容される担体を含んでもよい。製剤および投与のための技術に関する更なる詳細は、Remington’s Pharmaceutical Sciences最新版(Maack Publishing Co., Easton, Pa.)において見出すことができる。
【００５１】
経口投与のための薬学的組成物は、経口投与のために適している製剤中で当技術分野において周知の薬学的に許容される担体を用いて製剤化することができる。そのような担体により、薬学的組成物を、患者により摂取されるように、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、などとして製剤化させることができる。
【００５２】
より特定的には、本発明は経口投与を対象とした薬学的組成物に関する。本発明で使用するのに適した薬学的組成物としては、マスト細胞を枯渇させるための化合物、例えばc-kit阻害剤、またはマスト細胞脱顆粒を阻害する化合物が所期の目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物が挙げられる。有効用量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。治療的有効用量は、症状または状態を寛解させる活性成分の量を示す。治療的有効性および毒性は、細胞培養または動物実験における標準の薬学手順、例えば、ED50(集団の50%において治療的に有効な用量)およびLD50(集団の50%に対し致死的な用量)により決定してもよい。毒性効果の治療効果に対する用量比は治療指数であり、比LD50/ED50として表すことができる。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。
【００５３】
例えば、上記患者は、患者の体重により、毎日または毎週、上記式I、II、III、IVまたはVのAB化合物40mg〜800mg、例えば40mg、100mg、200mg、または実に400mgもしくは800mgの投与を受けることができる。この後、少なくとも1つの抗悪性腫瘍化合物が投与される。
【００５４】
この点については、例えば、1週間に1度、1000mg/m2を30分にわたり(最高7週までの間)、ゲムシタビンを静脈内注入により投与することができる。その後のサイクルは、1週間に1度、4週あたり連続する3週間の間、注入することから構成されるべきである。
【００５５】
さらに、上記併用療法は、白金を用いた治療法の完了後、少なくとも6ヶ月で再発した進行卵巣癌を患う患者の治療のためにカルボプラチンの投与をさらに含んでもよい。乳癌では、上記併用療法は、パクリタキセルの投与をさらに含んでもよい。非小細胞肺癌では、手術不可能な、局所進行性(IIIAまたはIIIB期)、または転移(IV期)非小細胞肺癌を患う患者の一次治療のためにシスプラチンをさらに投与してもよい。
【００５６】
また、上記で規定した式I、II、III、IVまたはVのAB化合物の投与に続き、ドセタキセルを例えば、75mg/m2/日で投与することができる。
【００５７】
実施例1：AB化合物の活性
c-kitチロシンキナーゼ活性を阻害する際のAB化合物の作用は、ELISAアッセイ法において、バキュロウイルスで発現されたc-kitの精製細胞内可溶性ドメイン(567〜976)を用いて、チロシン基を含むペプチド標的のリン酸化を測定することで証明されている。AB化合物は酵素活性を強く阻害し、IC50は0.1μM未満であった。AB化合物の特異的な抗増殖性活性は、膜近傍の変異を有するc-kitチロシンキナーゼ阻害剤の特異活性を試験するのに適した哺乳類細胞系の選択において示された。
【００５８】
AB化合物は強力で、選択的なc-kit阻害剤であり、インビトロで、1μM未満のIC50で、PDGF-Rも阻害する。
（表１）
2010515708.tif 000017
【００５９】
AB化合物はc-kitのJM変異を発現する細胞の増殖を阻害し、IC50は0.1μM未満である。非特異的細胞毒性が存在しないことが、IL-3の存在下でのヒトT-リンパ球集団の増殖、およびのBa/F3細胞系の増殖により証明されている。AB化合物がアポトーシスを誘導することができることは、JM△27変異c-kitを発現するヒトマスト細胞系において証明された。この実験では、48時間後、0.1μM AB1010が対照細胞(10%の細胞がアポトーシスを起こす)に対し約50%のアポトーシスを誘導した。さらに、JM△27を発現する別の細胞系(Ba/F3-誘導)を試験し、アポトーシスは約85%のレベルまで誘導された。
【００６０】
実施例2：ゲムシタビンと併用した、膵臓癌を治療するためのAB化合物の使用
2.1  薬物および化学
2.1.1  マシチニブ
1.名称：AB1010
2.分子式：C28H30N6OS.CH4O3S
3.供給者：Archemis
4.バッチ番号：RAN0328
5.説明：白色粉末として受理
6.保存溶液：DMSOにおいて20mM
7.貯蔵状態：光から保護された粉末として+4℃
DMSOに溶解した溶液として-80℃
【００６１】
2.1.2  細胞毒性薬
ゲムシタビン(2’,2’,-ドフルオロ-2’,-デオキシシチジン)はEli Lillyからのものであり、DNA合成を阻害するデオキシシチジンのヌクレオシド類似体である。他の薬剤はSigma Aldrich Corporationから購入し、微小管毒(パクリタキセルまたはタキソールおよびドセタキセルまたはタキソテール)、トポイソメラーゼI阻害剤(イリノテカンまたはCPT-11)である。
【００６２】
2.2細胞培養
膵臓、結腸および前立腺癌細胞系(Dr. Juan Iovanna、INSERM U624、フランスマルセイユからの寛大な贈り物)、乳癌および卵巣癌細胞系(Dr. Patrice Dubreuil、UMR 599 INSERM、フランスマルセイユからの寛大な贈り物)および肺癌細胞系(Pr. Christian Auclair、UMR 8113 CNRSからの寛大な贈り物)を100U/mLのペニシリンおよび100μg/mLのストレプトマイシン、ならびに10%v/v熱不活性化胎児子ウシ血清（AbCys Lot S02823S1800）が補充されたL-グルタミンを含むRPMI1640培地中で単層として、標準培養条件下(5%のCO2、95%の空気を含む加湿チャンバ内、37℃)で、培養させた。増殖アッセイ中、細胞は全て1%FCSを含む培地で増殖させた。
【００６３】
2.3実験設計
比色定量による細胞増殖および生存率アッセイ(Roche cat No1644807から購入した試薬WST-1)
細胞を1度洗浄し、RPMI 1%FCSに再懸濁させた。1.104/50μlの細胞を96ウエルプレートの1ウエル毎に播種した。
【００６４】
薬物希釈物を、AB1010またはゲムシタビンのRPMI 1中における連続希釈により、96ウエルにおいて調製し、獲得した。
【００６５】
50μlの2倍濃縮薬物溶液を添加し、最終体積100μlとすることにより処理を開始した。
【００６６】
AB1010およびゲムシタビンの併用による処理では、細胞を最初に、AB1010を0、2、5および10μMの濃度で含むRPMI 1%FCS培地中に再懸濁させた。1.104/50μlの細胞を96ウエルプレートの1ウエル毎に播種し、プレートをインキュベータo/n内に入れ、その後、細胞毒性薬で処理した。細胞毒性薬処理は、2X薬物希釈液(および、個々のAB1010薬物濃度を含む)50μlを添加して最終体積100μlとすることにより開始した。AB1010最終濃度は0、2、５および10μMのままであった。48〜72時間37℃でインキュベートした後、WST-1試薬の1/2希釈液10μlをウエルに添加し、プレートをさらに4時間、インキュベータに戻した。試料の吸光度を490nmでEL800ユニバーサルマイクロプレートリーダー(Bio-Tek Instruments Inc.)を用いて測定した。
【００６７】
細胞のないバックグラウンド対照をELISAリーダーのためのブランクとして使用した。アッセイ法の陽性対照は、薬物処理無しで得られた細胞増殖に対応する(100%増殖)。
【００６８】
各試料について二組実施し、吸光度値をエクセルファイルに移し、二組の平均および標準偏差を計算し、処理無しで得られた増殖のパーセンテージとして表した。
【００６９】
2.3-結果：
癌治療のための併用療法においてAB1010を使用する利益を評価するために、本発明者らは腫瘍細胞系が関係する前臨床試験を実施した。プロジェクトは、インビトロ増殖アッセイ法を用いて、AB1010が腫瘍細胞系を細胞毒性薬に対して感作させる能力を試験することにあった。本発明者らは、最初に、細胞毒性薬ゲムシタビン(膵臓癌における標準治療)に対し強い耐性を示す膵腫瘍細胞系について研究した。
【００７０】
3.1  AB1010は膵臓癌細胞系をゲムシタビンに対して感作させる
膵臓細胞系に関するゲムシタビンのIC50濃度を決定するために、細胞を1%FCS中で増殖させ、異なる用量の薬物に暴露させた。図1はMia Paca-2およびPanc-1のゲムシタビンに対する感度の損失を示す(Girouxら、2006により前に記載されている通り)が、Capan-2およびBxPC-3感受性細胞系の増殖がIC50=2〜20nMで有効に阻害される。
【００７１】
AB1010と関連させて使用するゲムシタビンのIC50濃度を決定するために、1%FCS中で増殖させた膵臓細胞系をAB1010で約12〜16時間前処理し、その後異なる用量のゲムシタビンに暴露させた。図2から、AB1010前処理(5および10μM)により膵腫瘍細胞系のゲムシタビンへの耐性が逆転されるが、他の細胞系の感受性は変わらないままである(表1)ことが明確に示される。
【００７２】
（表１）AB1010はMiaPaca-2およびPanc-1をゲムシタビンに対して感作させる
2010515708.tif 000018
【００７３】
AB1010の感作効果は、ゲムシタビン-感受性Capan-2およびBxPC-3細胞系では、おそらくこれらの細胞に対するゲムシタビンの強力な抗増殖効果のために、観察されなかった。さらに、薬物治療の順序が重要であるが、これは、AB1010に暴露する前に最初にゲムシタビンで前処理した細胞では、ゲムシタビンのIC50の減少は得られなかったからである。この観察結果から、AB1010による前処理により、ゲムシタビンによるさらなる処理に対し、より感受性が高くなるなるように細胞が変化する可能性があることが示唆される。
【００７４】
3.2  AB1010は様々な癌細胞型をゲムシタビンに対して感作させる
AB1010の、他の腫瘍型をゲムシタビンに対して感作させる能力を評価するために、本発明者らは前立腺、肺、卵巣および直腸腫瘍細胞系に対し同様の研究を実施した。これらの研究の結果を以下表にまとめて示す。
【００７５】
（表２）AB1010は前立腺DU145、およびC4-2細胞系をゲムシタビンに対して感作させる
2010515708.tif 000019
【００７６】
（表３）AB1010は肺A549およびH1299細胞系をゲムシタビンに対して感作させる
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【００７７】
（表４）AB1010は直腸HRT-18、および結腸Caco-2およびSW-480細胞系をゲムシタビンに対して感作させる
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【００７８】
（表５）AB1010は卵巣OVCAR-3細胞系をゲムシタビンに対して感作させる
2010515708.tif 000022
【００７９】
本発明者らは、AB1010が、1つ(結腸HT-29)を除く、前立腺(表2)、非小細胞肺(表3)、結腸直腸(表4)および卵巣細胞系(表5)を含む、全ての耐性癌細胞系のゲムシタビンへの感受性を様々な程度まで回復させることを見出した。細胞がゲムシタビンに対し感受性を示す場合、AB1010は、ゲムシタビン単独の場合に比べ、より低い用量のゲムシタビンで100%に近い阻害を誘導することにより、ゲムシタビンの細胞毒性効果を依然として増強するとしても、ゲムシタビンのIC50を低下させない(図3)。
【００８０】
3.3  AB1010は癌細胞系を標準化学療法に対して感作させる
3.3.1   AB1010は乳腺腫および卵巣腫瘍細胞系をタキサンに対して感作させる
本発明者らは次に、AB1010が卵巣腫瘍および乳腺腫細胞系を有糸分裂阻害剤、ドセタキセルまたはパクリタキセル(病理学では基準の化学療法)の作用に対して感作させる能力を試験した。結果を表6および7においてまとめて示す。
【００８１】
（表６）AB1010は乳腺腫細胞系をドセタキセルに対して感作させる
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【００８２】
驚いたことに、試験した乳癌細胞系のほとんどがドセタキセルに対し耐性を示す。本発明者らは、これらの耐性細胞系11のうち6に対し、AB1010による良好な感作を観察する。
【００８３】
（表７）AB1010は卵巣腫瘍細胞系をパクリタキセルに対して感作させる
2010515708.tif 000024
【００８４】
試験した5つの卵巣細胞系のうち3つが、標準化学療法薬パクリタキセルに対し強い感受性を示す。興味深いことに、AB1010は耐性腫瘍細胞系のパクリタキセルへの感受性を回復させる。
【００８５】
3.3.2  AB1010は結腸腫瘍細胞系をイリノテカン(CPT-11)に対して感作させる
本発明者らは次に、AB1010が直腸結腸腫瘍細胞系をトポイソメラーゼI阻害剤(CPT-11)(病理学では基準の化学療法)の作用に対して感作させる能力を試験した。結果を表8においてまとめて示す。
【００８６】
（表８）AB1010は結腸および直腸細胞系をイリノテカンに対して感作させる
2010515708.tif 000025
【００８７】
本発明者らは、ほとんどの耐性細胞系HRT-18に対し、AB1010による良好な感作を観察する。
【００８８】
3.4  STI571ではなくAB1010が膵臓Mia Paca-2癌細胞系をゲムシタビンに対して感作させる
MiaPaca-2腫瘍細胞系のゲムシタビンへの応答に関するAB1010およびSTI-571の前処理を比較して、前に記載したのと同じ型の実験を実施した。図4に示されるように、STI571で細胞を前処理してもMiaPaca-2はゲムシタビンに対して感作されない。表9は、MiaPaca-2細胞系に対し個別に、または組み合わせて使用した薬物のIC50をまとめて示す。
【００８９】
（表９）ゲムシタビン(Gem)に対するMiaPaca-2の感作に関するAB1010およびSTI571の比較
2010515708.tif 000026
【００９０】
ゲムシタビンに対する感作効果は、STI571による前処理では同じ結果が得られないので(10μMにおいてさえ)、AB1010に特異的であると考えられる。
【００９１】
3.5  AB1010はSRC-FAKシグナル伝達経路の阻害により癌細胞系を感作させることができる
この過程においてAB1010の標的を識別するために、本発明者らは膵臓細胞系においてRT-PCRによりRTKの発現を分析した(データは示さず)。本発明者らは、検出可能な量のc-Kitを見出さず、これにより、c-Kitは主な標的ではないことが示唆される。PDGFRβはBxPC3、MiaPaca-2において発現され、Panc-1においてより低い程度まで発現されたが、EGFRは全ての細胞系において高く発現された(データは示さず)。そのため、AB1010の主標的の発現とAB1010+ゲムシタビンの併用治療に対する応答との間には明確な相関はない。
【００９２】
膵腫瘍細胞系は、ゲムシタビンへの耐性の原因となる高レベルの非受容体型チロシンキナーゼFAKを発現すると記載されている。実際、siRNAを用いてFAK発現をブロックすると、インビトロおよびインビボでゲムシタビン誘導細胞毒性が増強されることが示されている(Duxburyら、2003、2004)。本発明者らは現在、AB1010が部分的にFAK活性をブロックすることができることを示す予備データを有している(図3)。これらのデータは、本発明者らのためにInvitrogen Companyが実施したAB1010のSelectScreenキナーゼプロファイリングにおいて得られた結果により支持される。このスクリーンでは、1μMで使用したAB1010の阻害活性を205の精製キナーゼのパネル上で試験し、FAKキナーゼ活性の21%阻害が示された。抗PYまたは抗ホスホFAK抗体のいずれかを使用することにより、本発明者らはウエスタンブロットアッセイ法により、FAKキナーゼの活性化状態を研究した。本発明者らは、AB1010が部分的にFAK自己活性化を阻害することを確認した(図3B)。これらのデータから、AB1010がFAKキナーゼの阻害により、膵腫瘍細胞系をゲムシタビンに対して感作させる可能性があることが示唆される。
【００９３】
前立腺、結腸および卵巣癌を含む別の腫瘍型において上昇したFAK発現が報告されているので、本発明者らは、FAKの阻害による細胞毒性薬に対するAB1010感作の一般機序を提案する。
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【００９４】
2.4-考察
この研究は、c-Kit/PDGFRα&βの選択的阻害剤、AB1010が、細胞毒性剤ゲムシタビンに対する耐性膵腫瘍細胞系の感受性を回復させることができることをインビトロで示す最初の報告である。AB1010によるゲムシタビンに対する耐性癌細胞系の系統的感作は非常に顕著である。さらに、乳癌および卵巣癌細胞系に対するタキサンならびに結腸直腸癌細胞系に対するトポイソメラーゼI阻害剤イリノテカンなどの標準化学療法に対する感作が、相乗効果がそれほど強くなくても観察された。FAKキナーゼに関する本発明者のデータに基づき、本発明者らは、本発明者らの実験において観察できるように、AB1010は、部分的に、接着特性の損失に至るFAK-SRCシグナル伝達経路をブロックすることにより細胞系を感作させることができると考える。
【００９５】
本発明者らは、本研究が限られた数の細胞系に対して実施され、必ずしもインビボでの腫瘍の複雑さを反映しないことを自覚している。それにもかかわらず、AB1010+ゲムシタビンの併用を受けた膵臓癌患者に対し実施した進行中の第II相臨床試験のインビボ結果は、このアプローチの正当性を立証すると考えられる。
【００９６】
本発明者らのインビトロおよびインビボ結果から、膵臓、前立腺、非小細胞肺癌、乳癌および卵巣癌などの癌の治療に対し、AB1010がゲムシタビンならびに標準化学療法との併用療法において大きな可能性を有することが示唆される。AB1010は、一次治療後に再発し、通常、化学療法耐性腫瘍と考えられる癌の場合に特に強力である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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