(57)【要約】本発明は、一般式(I)によって表される新規ベンズアミド誘導体、その調製、該誘導体を含有する薬学的組成物、および医薬としての、特に5-HT4刺激薬としての、その使用を開示するものであり、一般式(I)の各置換基の定義は明細書における定義と同一である。2010538974.tif 000076
2010538974.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000064
式中、
R1はアルキルであり;
R2は
2010538974.tif 000065
であり;
nは1〜5の整数である。
【請求項２】
R1が、メチル、エチル、またはイソプロピルである、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
nが1〜3の整数である、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
式(IA)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000066
式中、R1、R2、nは請求項1における定義と同一である。
【請求項５】
式(IB)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000067
式中、R1、R2、nは請求項1における定義と同一である。
【請求項６】
塩が、塩酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、酢酸、およびトリフルオロ酢酸からなる群より選択される酸と形成されるものである、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
以下を含む、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩：
2010538974.tif 000068
。
【請求項８】
請求項1記載の式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000069
アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000070
得られたN-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000071
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程;
2010538974.tif 000072
トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【請求項９】
請求項1記載の式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000073
トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程;
2010538974.tif 000074
エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000075
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【請求項１０】
治療有効量の請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病、および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１２】
5-HT4受容体が媒介する哺乳動物の疾患の処置用の医薬の調製における、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１３】
胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病、および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、請求項10記載の組成物の使用。
【請求項１４】
5-HT4受容体が媒介する哺乳動物の疾患の処置用の医薬の調製における、請求項10記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、新規ベンズアミド誘導体、その調製およびそれを含有する薬学的組成物、ならびに医薬としての、特に5-HT4受容体活性アゴニストとしてのそのような誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
5-HTは、中枢神経系と末梢系との両方において全身に広く分布する神経伝達物質である。5-HT受容体の少なくとも7つのサブタイプが同定されており、5-HTとこれらの異なる受容体との相互作用は種々の生理機能に関連している。したがって、5-HT受容体サブタイプの研究に相当な関心が持たれている。
【０００３】
5-HT4受容体アゴニストが、胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病および無呼吸症候群などの種々の疾患の処置に有用であることが報告されている。
【０００４】
5-HT4受容体アゴニストは、ベンズアミド、ベンズイミダゾールおよびインドールアルキルアミン誘導体を含む3つの種類を含む。1つのクラスとして、ベンズアミド誘導体は、神経伝達物質セロトニンによって調節される神経細胞系に対するその効果を理由として、いくつかの顕著な薬理作用を有する。セロトニンの役割、したがってベンズアミド誘導体の薬理作用は、種々の疾患状態に広く関係している。したがって、研究の焦点は、人体におけるセロトニンの産生部位および貯蔵部位ならびにセロトニン受容体の位置に、これらの部位と各種の疾患状況または疾患状態との関係を決定する目的で置かれている。
【０００５】
臨床で一般的に使用されているシサプリドおよびモサプリドは新規ベンズアミド薬である。
2010538974.tif 000003
【０００６】
ベンズアミド薬は、主に腸管筋上のシナプス前およびシナプス後神経細胞5-HT4受容体を刺激することで、アセチルコリンの放出を促進し、コリン作動薬の役割を強化し、胃腸平滑筋の運動および収縮を強化する。大用量では、これらの薬物は5-HT3受容体アンタゴニストとして有効な中心的制吐薬であり得る。通常用量では、これらの薬物は胃腸運動の促進を通じて嘔吐を制御する。これらの薬物は、食道平滑筋の緊張を改善しかつ食道の蠕動運動を促進し、幽門洞と十二指腸との協調を改善し、胃内容排出を促進し、小腸運動の機能を促進および強化し、近位結腸の内容排出を増加させることができる。それらは消化管全体の平滑筋運動を促進する胃腸全体の動力薬であると考えられ、逆流性食道炎、機能性消化不良、胃不全麻痺、術後胃腸麻痺、機能性便秘、および偽性閉塞に罹患している患者において主に使用されている。しかし、シサプリドは軽度に拮抗性の5-HT3および抗D2受容体活性を示し、それは心臓の有害反応を引き起こしかつQ-T間隔を延長することがある。重度の心臓発作、心電図が示す長期のQ-T間隔、低血中カリウムおよび低マグネシウムを有する患者にはこの薬物が禁止されている。肝損傷および腎損傷を有する人々、授乳中の女性、および子どもにはこの薬物の使用は推奨されない。ジアゼパム、アルコール、アセノクマロール、シメチジン、ラニチジンの吸収を増加させる能力が理由で、抗コリン薬は、胃腸蠕動を促進するというシサプリドの効果に拮抗することがある。これらの薬物間の相互作用に留意すべきである。例えば、下痢が生じる際には投与量を減少させるべきであり、抗凝固療法においては凝固時間のモニタリングに注意を払うべきである。モサプリドはD2受容体アンタゴニストではなく5-HT4受容体アゴニストの選択的胃腸薬である。それはQ-T間隔の延長を引き起こすことがなく、また倦怠感、眩暈、水様便、軽度の腹痛などを主に含む有害反応を減少させる可能性がある。それはシサプリドに比べて一般的に使用され、同等の有効性を示す。ベンズイミダゾール薬としてのプルカロプリド(Prucalopride)は、5-HT4受容体に対して高い選択性および特異性を有する。それはコリン作動性神経伝達物質の放出を増加させ、蠕動反射を刺激し、結腸収縮を強化し、胃内容排出を加速し、消化管運動を促進する。それは便秘患者の症状を有効に軽減することができ、便秘、弱い胃腸蠕動および偽性腸閉塞の処置に主に使用される。
【０００７】
国際公開公報第2005068461号（特許文献1）では、5-HT4受容体アゴニストとしての一連のベンズアミド誘導体、特に下記式を有する化合物が開示されている。
2010538974.tif 000004
【０００８】
ATI-7505は、胃不全麻痺、胃食道逆流および関連する疾患状態を含む各種胃腸状態の安全かつ有効な処置のための、立体異性のエステル化シサプリド類似体である。ATI-7505は、胃食道逆流疾患の処置または予防に有用であり、また下痢、腹部疝痛、血圧および心拍数の増加などを含むシサプリドの副作用を大きく減少させることもできる。
【０００９】
さらに、この特許に記載の化合物および薬学的組成物は、嘔吐ならびに消化不良、胃食道逆流、便秘、術後腸梗塞および偽性腸閉塞などの他の疾患の処置にも使用可能である。処置の途中に、それらはシサプリドの副作用を減少させることもできる。
【００１０】
5-HT4受容体のリガンドとしてATI-7505を、この受容体が媒介する疾患状態の処置に使用することができる。この受容体は中枢神経系のいくつかの領域に位置しており、この受容体の調節はCNSの所望の調節を実現する可能性がある。
【００１１】
ATI-7505のエステル部分は該化合物の処置能力に影響を与えず、その代わりにそれは血清および/または血漿のESTによる該化合物の分解を容易にする。したがって、それはシサプリドが引き起こす副作用に関連する細胞色素P450の薬物解毒系を回避し、かつ副作用の発症を減少させることができる。
【００１２】
優れた5-HT4受容体アゴニストは、他の受容体に対する親和性をほとんど示さずに5-HT4受容体に非常に結合し、かつ大きいアゴニスト活性を有するはずである。それは十分に胃腸吸収され、安定に代謝され、かつ望ましい薬物動態特性を有するはずである。中枢神経系内の受容体を標的化する場合、それは血液脳関門を通過可能なはずである。末梢神経系受容体を選択的に標的化する場合、それは血液脳関門によって遮断されるはずである。同時に、それは無毒でありかつ非常に少ない副作用を有するはずである。さらに、この薬物の理想的な候補は、安定で非吸湿性の、調製が容易な物理的形態で存在するはずである。
【００１３】
本発明は、現行の5-HT4受容体アゴニストに比べて有効であり、安全であり、かつ少ない副作用を有する、一連のベンズアミド誘導体を包含する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開公報第2005068461号
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩に関する: 
2010538974.tif 000005
式中、
R1はアルキル、好ましくはメチル、エチルまたはイソプロピルであり;
R2は水素、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群より選択され、好ましくは水素、アルキルまたはヘテロシクロアルキルであり、より好ましくは
2010538974.tif 000006
であり;
nは1〜5、好ましくは1〜3の整数である。
【００１６】
さらに、本発明は、式(IA)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む。
2010538974.tif 000007
【００１７】
さらに、本発明は式(IB)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む。
2010538974.tif 000008
【００１８】
別の局面では、本発明は式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩に関し、式(I)を有する化合物は薬学的に許容される遊離形態または酸付加塩の形態で存在し、該塩は本発明に係る化合物と塩酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、酢酸およびトリフルオロ酢酸からなる群より選択される酸とから形成されるそれである。
【００１９】
具体的には、本発明に係る式(I)を有する化合物は以下を含むがそれに限定されない。
2010538974.tif 000009
【００２０】
本発明は、式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法に関する:
2010538974.tif 000010
アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000011
N-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000012
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程;
2010538974.tif 000013
トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはベンズアミド誘導体をアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【００２１】
さらに、本発明は、式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法に関する:
2010538974.tif 000014
トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程;
2010538974.tif 000015
エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000016
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【００２２】
さらに、本発明は治療有効量の式(I)を有する化合物またはその塩、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物に関する。
【００２３】
さらに、本発明はまた、胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２４】
さらに、本発明は胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、本発明に係る薬学的組成物の使用に関する。
【００２５】
特記なき限り、本明細書および特許請求の範囲において使用する以下の用語は、以下で論じる意味を有する。
【００２６】
「アルキル」とは、1〜20個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の基を含む飽和脂肪族炭化水素基を意味する。メチル、エチル、プロピル、2-プロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチルなどの1〜10個の炭素原子を有するアルキル基が好ましい。メチル、エチル、プロピル、2-プロピル、n-ブチル、イソブチルまたはtert-ブチルなどの1〜4個の炭素原子を有する低級アルキル基がより好ましい。アルキル基は置換されていても置換されていなくてもよい。アルキル基が置換されている場合、置換基はシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルより独立して選択される1つまたは複数の基であることが好ましい。
【００２７】
「シクロアルキル」とは、3〜8員の単環式環、5員/6員もしくは6員/6員の縮合二環式環または多環式縮合環(「縮合」環系とは、系内の各環が系内の他の環と隣接する一対の炭素原子を共有することを意味する)を有する全炭素環基を意味し、1つまたは複数の環が1つまたは複数の二重結合を含有し得る一方、いずれの環も完全共役π電子系を有さない。シクロアルキル基の例としてはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキサジエニル、アダマンチル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニルなどがある。
【００２８】
「ヘテロシクロアルキル」とは5〜9個の環原子を有する単環式環基または縮合環基を意味し、1個または2個の環原子はN、O、またはS(O)n(nは0〜2の整数である)より選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はCである。環はやはり1つまたは複数の二重結合を有し得る一方、完全共役π電子系を有さない。非置換ヘテロシクロアルキル基としてはピロリジニル、ピペリジル、ピペラジル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニルなどが挙げられるがそれに限定されない。一態様では、ヘテロシクロアルキル基は置換されているかまたは置換されていない。アルキニル基は置換されていても置換されていなくてもよい。アルキニル基が置換されている場合、置換基はシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルより独立して選択される1つまたは複数の基であることが好ましい。
【００２９】
「任意の」または「任意で」とは、続いて記述される事象または環境が生じ得るが必ずしも生じないことがあることを意味し、その記述は、その事象または環境が生じ得るかまたは生じないことがある状況を含む。例えば、「アルキル基で任意で置換されるアリール基」とは、アルキル基が存在し得るが必ずしも存在しないことがあることを意味し、その記述は、アリール基がアルキル基で置換されている状況、およびアリール基がアルキル基で置換されていない状況を含む。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明化合物の合成方法
本発明の目的を実現するために、本発明は以下の技術的解決策を適用する。
【００３１】
式(I)を有する化合物またはその塩を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000017
メタノール中の出発原料ベンジルグリシジルエーテルとモノ-(2-アミノエチル)サルフェートとをアルカリ性条件下で反応させることで2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンを得る工程; 2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンとジ-tert-ブチルジカーボネートとをアルカリ性条件下、室温で反応させることでN-tert-ブトキシカルボニル保護2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンを得る工程; メタノール中の保護2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンを水素化によって還元することでN-保護2-(ヒドロキシメチル)モルホリンを得る工程; N-保護2-(ヒドロキシメチル)モルホリンとp-トルエンスルホニルクロリドおよびトリエチルアミンとを室温で反応させることでN-保護2-(p-トルエンスルホニルオキシメチル)モルホリンを得る工程; N,N-ジメチルホルムアミド中のN-保護2-(p-トルエンスルホニルオキシメチル)モルホリンとアジ化ナトリウムとを油浴中で反応させることでN-保護アジドメチルモルホリンを得る工程; ジクロロメタン中のN-保護アジドメチル-モルホリンとトリフルオロ酢酸とを反応させて保護基を除去することでアジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートを得る工程; アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程; N-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程; N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程; トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはベンズアミド誘導体をアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【００３２】
あるいは、トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程; エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程; N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはN-置換アミノメチル-モルホリンをアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。式中、
R1はアルキルであり;
R2は水素、アルキル、シクロアルキル、および複素環アルキルからなる群より選択され;
nは1〜5の整数である。
【００３３】
本発明は、治療有効量の化合物またはその塩、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物に関する。本発明はまた、5-HT4受容体アゴニストとしての医薬の調製における、式(I)を有する化合物またはその塩の使用に関する。言い換えれば、本発明はまた、治療有効量の上記化合物を含む組成物、および5-HT4受容体アゴニストとしての医薬の調製における該化合物の使用を提供する。
【００３４】
具体的な実施方法
以下の実施例は本発明を例示する役割を果たすものであるが、本発明の範囲を限定するものと考えるべきではない。
【００３５】
実施例
化合物の構造はNMRおよびMSによって確認した。NMR化学シフト(δ)は百万分率(ppm)で示した。NMRはBruker AVANCE-400分光計上で行った。適切な溶媒は重水素化メタノール(CD3OD)および重水素化クロロホルム(CDCl3)とし、テトラメチルシラン(TMS)を内部標準とし、化学シフトは10-6(ppm)単位で示した。
【００３６】
MSはFINNIGAN LCQAd (ESI)質量分析計(Therm, Finnigan LCQ advantage MAX)によって決定した。
【００３７】
キナーゼ平均阻害率およびIC50はNovoStar ELIASA(ドイツBMG Co.)によって決定した。
【００３８】
薄層シリカゲルはYantai Huanghai HSGF254またはQingdao GF254シリカゲルプレートとした。
【００３９】
カラムクロマトグラフィーは担体としてYantai Huanghai 200〜300メッシュシリカゲルを一般に使用した。
【００４０】
CD3OD: 重水素化メタノール;
CDCl3: 重水素化クロロホルム。
【００４１】
実施例1
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000018
2010538974.tif 000019
モノ-(2-アミノ-エチル)サルフェート(35.2g、250mmol)を水酸化ナトリウム水溶液(40%)160mLに攪拌しながら溶解させ、この混合物に(R)ベンジルグリシジルエーテル1a(8.2g、50mmol)のメタノール溶液を加えた。反応混合物を50℃で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を水100mLおよび濃塩酸100mLで希釈し、ジクロロメタン(200mlx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(200mL)および飽和食塩水(200mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン1b(5.08g、収率49%)を黄色液体として得た。
2010538974.tif 000020
【００４２】
(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン1b(2.07g、10mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、この混合物に炭酸カリウム(1.38g、10mmol)およびジ-tert-ブチル-ジカーボネート(3.27g、15mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液(20mL)を加え、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1c(1.967g、収率64%)を無色透明液体として得た。
2010538974.tif 000021
【００４３】
(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1c(1.02g、3.32mmol)および活性炭担持パラジウム0.45gを反応フラスコに加えた。反応フラスコを水素で3回掃流した。エタノール10mLを水素雰囲気下で加えた。反応混合物を70℃で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1d(0.428g、収率59%)を無色油状物として得た。
2010538974.tif 000022
【００４４】
(R)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1d(0.217g、1mmol)をジクロロメタン10mLに氷水浴中で攪拌しながら溶解させ、p-トルエンスルホニルクロリド(0.324g、1.7mmol)およびトリエチルアミン(0.252g、2.5mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)を加え、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1e(0.203g、収率55%)を無色粘稠液体として得た。
2010538974.tif 000023
【００４５】
(R)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1e(0.186g、0.501mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド10mLに攪拌しながら溶解させ、アジ化ナトリウム(90mg、1.002mmol)を加えた。反応混合物を90℃に加熱し、3時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)を加え、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1f(0.101g、収率83.4%)を白雪状固体として得た。
2010538974.tif 000024
【００４６】
(R)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1f(0.65g、2.681mmol)をジクロロメタン30mLに攪拌しながら溶解させ、トリフルオロ酢酸3mLを加えた。反応混合物を40分間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濃縮して標記化合物(R)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート1g(0.318g)を得て、これを次の工程に直接使用した。
2010538974.tif 000025
【００４７】
(R)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート1g(0.381g、2.68mmol)をアセトニトリル50mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(1.11g、8.04mmol)を加えた。5分間攪拌後、5-ブロモ-ペンタン酸エチルエステル(673mg、3.217mmol)を加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を水(10mL)で反応停止させ、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1h(676mg、収率93.3%)を淡黄色透明油状物として得た。
2010538974.tif 000026
【００４８】
(R)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1h(338mg、1.25mmol)をエタノール50mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム40.0mgを加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を減圧濾過し、濃縮して標記化合物(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1i(0.18g)を淡黄色油状物として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 259.8 [M+1].
【００４９】
4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.158g、0.737mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1i(0.18g、0.737mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.14g、0.737mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル1j(0.2g、収率63.5%)を白色固体として得た。
MS m/z (ESI): 442.3 [M+1].
【００５０】
(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル1j(0.207g、0.468mmol)をトルエン30mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.357g、2.81mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.16g、0.702mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に酢酸エチル40mLを加え、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート1(57mg、収率23.6%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000027
【００５１】
実施例2
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000028
(R)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート1g(0.803g、1.88mmol)をアセトニトリル40mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(0.78g、5.64mmol)を加えた。5分間攪拌後、6-ブロモ-ヘキサン酸エチルエステル(0.503g、2.258mmol)を加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濃縮し、ジクロロメタン300mLを残渣に加え、得られた混合物を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2a(404mg、収率75.5%)を淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000029
【００５２】
(R)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2a(1.3g、4.572mmol)をエタノール50mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム0.13gを加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下で2.5時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2bを得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 259.8 [M+1].
【００５３】
4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.277g、1.37mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2b(0.294g、1.14mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.437g、2.28mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。ジクロロメタン400mLを加えた。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル2c(0.119g、収率23.6%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000030
【００５４】
(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル2c(0.119g、0.269mmol)をトルエン40mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.171g、1.347mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(92mg、0.404mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を水40mLで希釈し、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート2(13mg、収率10%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000031
【００５５】
実施例3
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000032
4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.295g、1.37mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2b(0.294g、1.14mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.437g、2.28mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物をジクロロメタン400mLで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル3a(0.191g、収率36.8%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000033
【００５６】
(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル3a(0.191g、0.419mmol)をトルエン40mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.266g、2.095mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(143mg、0.628mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物をジクロロメタン300mLで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート3(20mg、収率9.13%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000034
【００５７】
実施例4
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000035
モノ-(2-アミノ-エチル)サルフェート(35.2g、250mmol)を水酸化ナトリウム水溶液(40%)60mLに攪拌しながら溶解させた。(S)-ベンジルグリシジルエーテル4a(8.2g、50mmol)のメタノール溶液を上記水酸化ナトリウム溶液に加えた。50℃で1時間反応後、水酸化ナトリウム水溶液(40%)100mLを加えた。反応混合物を50〜55℃で16時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を水100mLで希釈し、濃塩酸100mLを滴下した。混合物をジクロロメタン(500mLx4)で抽出した。一緒にした有機相を水(300mL)および飽和食塩水(300mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン4b(5.08g、収率49%)を黄色液体として得た。
2010538974.tif 000036
【００５８】
(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン4b(2.07g、10mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(1.38g、10mmol)およびジ-tert-ブチルジカーボネート(3.27g、15mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)で反応停止させ、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4c(1.967g、収率64%)を無色透明液体として得た。
2010538974.tif 000037
【００５９】
(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4c(5.27g、17.2mmol)をエタノール200mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム0.527gおよび1N塩酸2滴を加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下70℃で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)で反応停止させ、酢酸エチル(200mLx4)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4d(3.646g、収率97.7%)を無色または淡黄色液体として得た。
2010538974.tif 000038
【００６０】
氷水浴中、(S)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4d(0.217g、1mmol)をジクロロメタン10mLに攪拌しながら溶解させ、p-トルエンスルホニルクロリド(0.324g、1.7mmol)およびトリエチルアミン(0.252g、2.5mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)で反応停止させ、ジクロロメタン(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4e(0.203g、収率55%)を無色粘稠液体として得た。
2010538974.tif 000039
【００６１】
(S)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4e(0.186g、0.501mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド10mLに攪拌しながら溶解させ、アジ化ナトリウム(90mg、1.002mmol)を加えた。反応混合物を90℃に加熱し、3時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(20mL)で反応停止させ、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4f(0.101g、収率83.4%)を無色油状物として得た。
2010538974.tif 000040
【００６２】
(S)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4f(91mg、0.376mmol)をジクロロメタン5mLに攪拌しながら溶解させ、トリフルオロ酢酸0.5mLを加えた。反応混合物を10分間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濃縮して標記化合物(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4gを得て、これを次の工程に直接使用した。
2010538974.tif 000041
【００６３】
(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4g(2.96g、11.56mmol)をアセトニトリル50mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(4.79g、34.68mmol)を加えた。10分間攪拌後、6-ブロモ-ヘキサン酸エチルエステル(2.84g、12.72mmol)を加えた。反応混合物を1.5〜2時間加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)で反応停止させ、ジクロロメタン(300mLx4)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4h(2.914g、収率88.8%)を無色または淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000042
【００６４】
(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4h(87mg、0.306mmol)をエタノール10mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム9.0mgを加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4iを得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 259.8 [M+1].
【００６５】
4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.484g、2.4mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4i(0.516g、2.0mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.767g、4.0mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、ジクロロメタン(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル4j(153mg、収率17.3%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000043
【００６６】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル4j(0.125g、0.283mmol)をトルエン30mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.18g、1.415mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(97mg、0.424mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を減圧濃縮してトルエンを除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート4(35mg、収率23.6%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000044
【００６７】
実施例5
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000045
(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4g(0.64g、2.5mmol)および炭酸カリウム(1.037g、7.5mmol)をアセトニトリル30mLに攪拌しながら溶解させ、5-ブロモ-ペンタン酸エチルエステル(0.575g、2.75mmol)を加えた。反応混合物を3時間加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)で反応停止させ、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5a(0.532g、収率78.8%)を淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000046
【００６８】
(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5a(532mg、1.97mmol)および活性炭担持パラジウム53mgを反応フラスコに加え、反応混合物を水素で3回掃流し、メタノール20mLを攪拌しながら加えた。反応混合物を水素雰囲気下で4時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5bを淡黄色液体として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 245.2 [M+1].
【００６９】
(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5b(0.241g、1.0mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.242g、1.2mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.383g、2.0mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル5c(162mg、収率45%)を白色固体として得た。
MS m/z (ESI): 428.3 [M+1].
【００７０】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル5c(0.16g、0.37mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.235g、1.85mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.127g、0.555mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート5(32mg、収率17%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000047
【００７１】
実施例6
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート
2010538974.tif 000048
(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4g(0.64g、2.5mmol)および炭酸カリウム(1.037g、7.5mmol)をアセトニトリル30mLに攪拌しながら溶解させ、4-ブロモ-酪酸エチルエステル(0.585g、3.0mmol)を加えた。反応混合物を3時間加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)で反応停止させ、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6a(0.461g、収率72%)を淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000049
【００７２】
(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6a(442mg、1.73mmol)および活性炭担持パラジウム45mgを反応フラスコに加え、反応混合物を水素で3回掃流し、メタノール20mLを攪拌しながら加えた。反応混合物を水素雰囲気下で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6bを淡黄色液体として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 231.2 [M+1].
【００７３】
(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6b(0.199g、0.865mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.209g、1.038mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.332g、1.73mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル6c(0.25g、収率69.8%)を無色透明粘稠固体として得た。
MS m/z (ESI): 414.2 [M+1].
【００７４】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル6c(0.25g、0.605mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.384g、3.025mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.207g、0.908mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート6(40mg、収率13.4%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000050
【００７５】
実施例7
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000051
(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5b(0.242g、1.0mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.259g、1.2mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.383g、2.0mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル7a(0.276g、収率62.7%)を白色粘稠液体として得た。
MS m/z (ESI): 442.2 [M+1].
【００７６】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル7a(0.22g、0.5mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.318g、2.5mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.171g、0.75mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート7(30mg、収率11.5%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000052
実施例8
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート
2010538974.tif 000053
(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6b(0.199g、0.865mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.209g、1.038mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.332g、1.73mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル8a(0.25g、収率69.8%)を無色透明粘稠固体として得た。
MS m/z (ESI): 414.2 [M+1].
【００７７】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル8a(0.235g、0.55mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.35g、2.75mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.188g、0.825mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート8(51mg、収率18.3%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000054
【００７８】
実施例9
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000055
(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4h(2.84g、10.0mmol)をトルエン140mLに攪拌しながら溶解させ、チタン酸テトラエチル(2.28g、10mmol)および1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(5.08g、40mmol)を加えた。反応混合物を90℃に終夜加熱し、生成物が形成されるまで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。出発原料の一部が依然として残存した。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(400mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(200mL)および飽和食塩水(200mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-(アジドメチル)モルホリン)-ヘキサノエート9a(3.252g、収率89%)を淡黄色油状物として得た。
2010538974.tif 000056
【００７９】
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-(アジドメチル)モルホリン)-ヘキサノエート9a(1.802g、4.93mmol)をイソプロピルアルコール100mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム(0.18g、0.493mmol)を加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下、室温で終夜反応させ、出発原料の実質的な消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濾過して活性炭担持パラジウムを除去し、溶媒を蒸発させて標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-アミノメチル-モルホリン)ヘキサノエート9bの粗生成物(2.178g)を淡黄色液体として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 340.4 [M+1].
【００８０】
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-アミノメチル-モルホリン)ヘキサノエート9b(1.67g、4.93mmol)をジクロロメタン100mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(1.17g、5.42mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(1.89g、9.86mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLで反応停止させ、ジクロロメタン(400mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(300mL)および飽和食塩水(300mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をn-ヘキサン/酢酸エチルから再結晶して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート9(2.47g、収率93.4%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000057
【００８１】
実施例10
(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサン酸
2010538974.tif 000058
(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4i(3.27g、12.68mmol)をジクロロメタン100mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(3.01g、13.95mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(6.08g、31.7mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLで反応停止させ、ジクロロメタン(500mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(300mL)および飽和食塩水(300mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸エチルエステル10a(3.36g、収率58%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000059
【００８２】
(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸エチルエステル10a(0.11g、0.24mmol)をメタノール10mLに攪拌しながら溶解させ、水酸化ナトリウム溶液(15%)3mLを加えた。反応混合物を室温で30分間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を氷酢酸でpH3〜3.5に調整し、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリノ)-ヘキサン酸10(40mg、収率36%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000060
【００８３】
実施例11
(S)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)メチル)モルホリノ)-ヘキサン酸
2010538974.tif 000061
(S)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸エチルエステル3a(0.11g、0.24mmol)をメタノール10mLに攪拌しながら溶解させ、水酸化ナトリウム溶液(15%)3mLを加えた。反応混合物を室温で30分間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を氷酢酸でpH3〜3.5に調整し、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸11(40mg、収率36%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000062
【００８４】
薬理学的アッセイ:
5-HT4受容体アゴニスト結合アッセイ
目的: 5-HT4受容体に対する本発明化合物の結合率を決定すること
材料: ラット線条体組織
試料: 正の対照であるモサプリド、ATI-7505、ならびに実施例1、3、7および9
試薬: [3H]-GR113808 (Amersham, TRK944-10UCI, 370kBq, 5μCi, 60-85Ci/mmol, 20μCi/ml)), GR113808 (Sigma, G5918)
【００８５】
アッセイプロトコール
1. 組織試料の調製
a) ラットを殺した。線条体組織を15倍体積のトリス-HCL緩衝液(50mM、pH7.4、4℃)に入れ、均質化し、48,000rpm、4℃で10分間遠心分離した。
b) 得られた沈殿をトリス-HCL緩衝液に再懸濁させた。
c) タンパク質濃度を決定した。タンパク質濃度を30mg/mlに調整した。ホモジネートをアリコートにし、-80℃で貯蔵した。
d) 線条体組織試料は使用前に1mg/mlに希釈すべきである。
【００８６】
2. [3H]-GR113808同位体原液の希釈
[3H]-GR113808原液の濃度は0.23〜0.33μMと算出される。[3H]-GR113808のアッセイ希釈標準液の濃度は0.16nMとする。貯蔵液を10x希釈するプロセスは、トリス-HCL緩衝液(50mM、pH7.4)1.8mlに原液10μlを加えるというものである。
【００８７】
3. 10x試験化合物(勾配濃度)溶液の調製
試験化合物をトリス-HCL緩衝液に最初に溶解させて25mMの濃度にした後、該化合物を希釈倍率5での段階勾配濃度に希釈して10x試験溶液を作製した(5-7、5-6、5-5、5-4、5-3、5-2、5-1、50、5、52mM)。
【００８８】
4. 競合結合アッセイ
氷上にアッセイ管を置き、各溶液を加えた(全反応を三つ組で行った; 単位:μl; 反応管の全体積は200μlである)。
【００８９】
5. 結果
アッセイ結果を表1に示した。
試験化合物の結果に基づけば、本発明化合物は5-HT4受容体に結合することができる。
【００９０】
（表１）5-HT4アゴニスト化合物の結合率の結果
2010538974.tif 000063
【手続補正書】
【提出日】平成22年4月26日(2010.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000077
式中、
R1はアルキルであり;
R2は
2010538974.tif 000078
であり;
nは1〜5の整数である。
【請求項２】
R1が、メチル、エチル、またはイソプロピルである、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
nが1〜3の整数である、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
式(IA)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000079
式中、R1、R2、nは請求項1における定義と同一である。
【請求項５】
式(IB)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000080
式中、R1、R2、nは請求項1における定義と同一である。
【請求項６】
塩が、塩酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、酢酸、およびトリフルオロ酢酸からなる群より選択される酸と形成されるものである、請求項1または2記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
以下を含む、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩：
2010538974.tif 000081
。
【請求項８】
請求項1記載の式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000082
アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000083
得られたN-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000084
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程;
2010538974.tif 000085
トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【請求項９】
請求項1記載の式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000086
トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程;
2010538974.tif 000087
エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000088
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【請求項１０】
治療有効量の請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病、および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１２】
5-HT4受容体アゴニストとしての医薬の調製における請求項1記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１３】
胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病、および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、請求項10記載の組成物の使用。
【請求項１４】
5-HT4受容体アゴニストとしての医薬の調製における請求項10記載の組成物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、新規ベンズアミド誘導体、その調製およびそれを含有する薬学的組成物、ならびに医薬としての、特に5-HT4受容体活性アゴニストとしてのそのような誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
5-HTは、中枢神経系と末梢系との両方において全身に広く分布する神経伝達物質である。5-HT受容体の少なくとも7つのサブタイプが同定されており、5-HTとこれらの異なる受容体との相互作用は種々の生理機能に関連している。したがって、5-HT受容体サブタイプの研究に相当な関心が持たれている。
【０００３】
5-HT4受容体アゴニストが、胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病および無呼吸症候群などの種々の疾患の処置に有用であることが報告されている。
【０００４】
5-HT4受容体アゴニストは、ベンズアミド、ベンズイミダゾールおよびインドールアルキルアミン誘導体を含む3つの種類を含む。1つのクラスとして、ベンズアミド誘導体は、神経伝達物質セロトニンによって調節される神経細胞系に対するその効果を理由として、いくつかの顕著な薬理作用を有する。セロトニンの役割、したがってベンズアミド誘導体の薬理作用は、種々の疾患状態に広く関係している。したがって、研究の焦点は、人体におけるセロトニンの産生部位および貯蔵部位ならびにセロトニン受容体の位置に、これらの部位と各種の疾患状況または疾患状態との関係を決定する目的で置かれている。
【０００５】
臨床で一般的に使用されているシサプリドおよびモサプリドは新規ベンズアミド薬である。
2010538974.tif 000089
【０００６】
ベンズアミド薬は、主に腸管筋上のシナプス前およびシナプス後神経細胞5-HT4受容体を刺激することで、アセチルコリンの放出を促進し、コリン作動薬の役割を強化し、胃腸平滑筋の運動および収縮を強化する。大用量では、これらの薬物は5-HT3受容体アンタゴニストとして有効な中心的制吐薬であり得る。通常用量では、これらの薬物は胃腸運動の促進を通じて嘔吐を制御する。これらの薬物は、食道平滑筋の緊張を改善しかつ食道の蠕動運動を促進し、幽門洞と十二指腸との協調を改善し、胃内容排出を促進し、小腸運動の機能を促進および強化し、近位結腸の内容排出を増加させることができる。それらは消化管全体の平滑筋運動を促進する胃腸全体の動力薬であると考えられ、逆流性食道炎、機能性消化不良、胃不全麻痺、術後胃腸麻痺、機能性便秘、および偽性閉塞に罹患している患者において主に使用されている。しかし、シサプリドは軽度に拮抗性の5-HT3および抗D2受容体活性を示し、それは心臓の有害反応を引き起こしかつQ-T間隔を延長することがある。重度の心臓発作、心電図が示す長期のQ-T間隔、低血中カリウムおよび低マグネシウムを有する患者にはこの薬物が禁止されている。肝損傷および腎損傷を有する人々、授乳中の女性、および子どもにはこの薬物の使用は推奨されない。ジアゼパム、アルコール、アセノクマロール、シメチジン、ラニチジンの吸収を増加させる能力が理由で、抗コリン薬は、胃腸蠕動を促進するというシサプリドの効果に拮抗することがある。これらの薬物間の相互作用に留意すべきである。例えば、下痢が生じる際には投与量を減少させるべきであり、抗凝固療法においては凝固時間のモニタリングに注意を払うべきである。モサプリドはD2受容体アンタゴニストではなく5-HT4受容体アゴニストの選択的胃腸薬である。それはQ-T間隔の延長を引き起こすことがなく、また倦怠感、眩暈、水様便、軽度の腹痛などを主に含む有害反応を減少させる可能性がある。それはシサプリドに比べて一般的に使用され、同等の有効性を示す。ベンズイミダゾール薬としてのプルカロプリド(Prucalopride)は、5-HT4受容体に対して高い選択性および特異性を有する。それはコリン作動性神経伝達物質の放出を増加させ、蠕動反射を刺激し、結腸収縮を強化し、胃内容排出を加速し、消化管運動を促進する。それは便秘患者の症状を有効に軽減することができ、便秘、弱い胃腸蠕動および偽性腸閉塞の処置に主に使用される。
【０００７】
国際公開公報第2005068461号（特許文献1）では、5-HT4受容体アゴニストとしての一連のベンズアミド誘導体、特に下記式を有する化合物が開示されている。
2010538974.tif 000090
【０００８】
ATI-7505は、胃不全麻痺、胃食道逆流および関連する疾患状態を含む各種胃腸状態の安全かつ有効な処置のための、立体異性のエステル化シサプリド類似体である。ATI-7505は、胃食道逆流疾患の処置または予防に有用であり、また下痢、腹部疝痛、血圧および心拍数の増加などを含むシサプリドの副作用を大きく減少させることもできる。
【０００９】
さらに、この特許に記載の化合物および薬学的組成物は、嘔吐ならびに消化不良、胃食道逆流、便秘、術後腸梗塞および偽性腸閉塞などの他の疾患の処置にも使用可能である。処置の途中に、それらはシサプリドの副作用を減少させることもできる。
【００１０】
5-HT4受容体のリガンドとしてATI-7505を、この受容体が媒介する疾患状態の処置に使用することができる。この受容体は中枢神経系のいくつかの領域に位置しており、この受容体の調節はCNSの所望の調節を実現する可能性がある。
【００１１】
ATI-7505のエステル部分は該化合物の処置能力に影響を与えず、その代わりにそれは血清および/または血漿のESTによる該化合物の分解を容易にする。したがって、それはシサプリドが引き起こす副作用に関連する細胞色素P450の薬物解毒系を回避し、かつ副作用の発症を減少させることができる。
【００１２】
優れた5-HT4受容体アゴニストは、他の受容体に対する親和性をほとんど示さずに5-HT4受容体に非常に結合し、かつ大きいアゴニスト活性を有するはずである。それは十分に胃腸吸収され、安定に代謝され、かつ望ましい薬物動態特性を有するはずである。中枢神経系内の受容体を標的化する場合、それは血液脳関門を通過可能なはずである。末梢神経系受容体を選択的に標的化する場合、それは血液脳関門によって遮断されるはずである。同時に、それは無毒でありかつ非常に少ない副作用を有するはずである。さらに、この薬物の理想的な候補は、安定で非吸湿性の、調製が容易な物理的形態で存在するはずである。
【００１３】
本発明は、現行の5-HT4受容体アゴニストに比べて有効であり、安全であり、かつ少ない副作用を有する、一連のベンズアミド誘導体を包含する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開公報第2005068461号
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩に関する: 
2010538974.tif 000091
式中、
R1はアルキル、好ましくはメチル、エチルまたはイソプロピルであり;
R2は水素、アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群より選択され、好ましくは水素、アルキルまたはヘテロシクロアルキルであり、より好ましくは
2010538974.tif 000092
であり;
nは1〜5、好ましくは1〜3の整数である。
【００１６】
さらに、本発明は、式(IA)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む。
2010538974.tif 000093
【００１７】
さらに、本発明は式(IB)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む。
2010538974.tif 000094
【００１８】
別の局面では、本発明は式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩に関し、式(I)を有する化合物は薬学的に許容される遊離形態または酸付加塩の形態で存在し、該塩は本発明に係る化合物と塩酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、酢酸およびトリフルオロ酢酸からなる群より選択される酸とから形成されるそれである。
【００１９】
具体的には、本発明に係る式(I)を有する化合物は以下を含むがそれに限定されない。
2010538974.tif 000095
【００２０】
本発明は、式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法に関する:
2010538974.tif 000096
アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000097
N-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000098
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程;
2010538974.tif 000099
トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはベンズアミド誘導体をアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【００２１】
さらに、本発明は、式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法に関する:
2010538974.tif 000100
トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程;
2010538974.tif 000101
エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000102
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【００２２】
さらに、本発明は治療有効量の式(I)を有する化合物またはその塩、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物に関する。
【００２３】
さらに、本発明はまた、胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２４】
さらに、本発明は胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、本発明に係る薬学的組成物の使用に関する。
【００２５】
特記なき限り、本明細書および特許請求の範囲において使用する以下の用語は、以下で論じる意味を有する。
【００２６】
「アルキル」とは、1〜20個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の基を含む飽和脂肪族炭化水素基を意味する。メチル、エチル、プロピル、2-プロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチルなどの1〜10個の炭素原子を有するアルキル基が好ましい。メチル、エチル、プロピル、2-プロピル、n-ブチル、イソブチルまたはtert-ブチルなどの1〜4個の炭素原子を有する低級アルキル基がより好ましい。アルキル基は置換されていても置換されていなくてもよい。アルキル基が置換されている場合、置換基はシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルより独立して選択される1つまたは複数の基であることが好ましい。
【００２７】
「シクロアルキル」とは、3〜8員の単環式環、5員/6員もしくは6員/6員の縮合二環式環または多環式縮合環(「縮合」環系とは、系内の各環が系内の他の環と隣接する一対の炭素原子を共有することを意味する)を有する全炭素環基を意味し、1つまたは複数の環が1つまたは複数の二重結合を含有し得る一方、いずれの環も完全共役π電子系を有さない。シクロアルキル基の例としてはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキサジエニル、アダマンチル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニルなどがある。
【００２８】
「ヘテロシクロアルキル」とは5〜9個の環原子を有する単環式環基または縮合環基を意味し、1個または2個の環原子はN、O、またはS(O)n(nは0〜2の整数である)より選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はCである。環はやはり1つまたは複数の二重結合を有し得る一方、完全共役π電子系を有さない。非置換ヘテロシクロアルキル基としてはピロリジニル、ピペリジル、ピペラジル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニルなどが挙げられるがそれに限定されない。一態様では、ヘテロシクロアルキル基は置換されているかまたは置換されていない。アルキニル基は置換されていても置換されていなくてもよい。アルキニル基が置換されている場合、置換基はシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルより独立して選択される1つまたは複数の基であることが好ましい。
【００２９】
「任意の」または「任意で」とは、続いて記述される事象または環境が生じ得るが必ずしも生じないことがあることを意味し、その記述は、その事象または環境が生じ得るかまたは生じないことがある状況を含む。例えば、「アルキル基で任意で置換されるアリール基」とは、アルキル基が存在し得るが必ずしも存在しないことがあることを意味し、その記述は、アリール基がアルキル基で置換されている状況、およびアリール基がアルキル基で置換されていない状況を含む。
[請求項101]
式(I)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000103
式中、
R1はアルキルであり;
R2は
2010538974.tif 000104
であり;
nは1〜5の整数である。
[請求項102]
R1が、メチル、エチル、またはイソプロピルである、請求項101記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[請求項103]
nが1〜3の整数である、請求項101または102記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[請求項104]
式(IA)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項101または102記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000105
式中、R1、R2、nは請求項101における定義と同一である。
[請求項105]
式(IB)を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、請求項101または102記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000106
式中、R1、R2、nは請求項101における定義と同一である。
[請求項106]
塩が、塩酸、メタンスルホン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、酢酸、およびトリフルオロ酢酸からなる群より選択される酸と形成されるものである、請求項101または102記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[請求項107]
以下を含む、請求項101記載の化合物または薬学的に許容されるその塩:
2010538974.tif 000107
。
[請求項108]
請求項101記載の式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000108
アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000109
得られたN-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000110
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程;
2010538974.tif 000111
トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
[請求項109]
請求項101記載の式(I)を有する化合物を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000112
トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程;
2010538974.tif 000113
エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程;
2010538974.tif 000114
N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチル-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
[請求項110]
治療有効量の請求項101〜107のいずれか一項記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
[請求項111]
胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病、および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、請求項101記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
[請求項112]
5-HT4受容体が媒介する哺乳動物の疾患の処置用の医薬の調製における、請求項101記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。
[請求項113]
胃食道逆流疾患、胃腸疾患、胃運動障害、非潰瘍性消化不良、機能性消化不良、過敏性腸症候群、便秘、消化障害、食道炎、胃食道疾患、悪心、術後腸梗塞、中枢神経系疾患、アルツハイマー病、認知障害、嘔吐、片頭痛、神経疾患、疼痛、循環器疾患、心不全、不整脈、偽性腸閉塞、胃不全麻痺、糖尿病、および無呼吸症候群からなる群より選択される疾患の処置用の医薬の調製における、請求項110記載の組成物の使用。
[請求項114]
5-HT4受容体が媒介する哺乳動物の疾患の処置用の医薬の調製における、請求項110記載の組成物の使用。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明化合物の合成方法
本発明の目的を実現するために、本発明は以下の技術的解決策を適用する。
【００３１】
式(I)を有する化合物またはその塩を調製するための方法であって、以下の工程を含む方法:
2010538974.tif 000115
メタノール中の出発原料ベンジルグリシジルエーテルとモノ-(2-アミノエチル)サルフェートとをアルカリ性条件下で反応させることで2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンを得る工程; 2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンとジ-tert-ブチルジカーボネートとをアルカリ性条件下、室温で反応させることでN-tert-ブトキシカルボニル保護2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンを得る工程; メタノール中の保護2-(ベンジルオキシメチル)モルホリンを水素化によって還元することでN-保護2-(ヒドロキシメチル)モルホリンを得る工程; N-保護2-(ヒドロキシメチル)モルホリンとp-トルエンスルホニルクロリドおよびトリエチルアミンとを室温で反応させることでN-保護2-(p-トルエンスルホニルオキシメチル)モルホリンを得る工程; N,N-ジメチルホルムアミド中のN-保護2-(p-トルエンスルホニルオキシメチル)モルホリンとアジ化ナトリウムとを油浴中で反応させることでN-保護アジドメチルモルホリンを得る工程; ジクロロメタン中のN-保護アジドメチル-モルホリンとトリフルオロ酢酸とを反応させて保護基を除去することでアジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートを得る工程; アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテートとBr-CH2-(CH2)n-CH2-C(O)OEtとをアルカリ性条件下でカップリングすることでN-置換アジドメチル-モルホリンを得る工程; N-置換アジドメチル-モルホリンを水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程; N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させることでベンズアミド誘導体を得る工程; トルエン中のベンズアミド誘導体とR2-OHとをエステル交換反応によって反応させるか、またはベンズアミド誘導体をアルカリ性条件下で加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。
【００３２】
あるいは、トルエン中のN-置換アジドメチル-モルホリンとR2-OHとをエステル交換反応によって反応させることでエステル交換反応生成物を得る工程; エステル交換反応生成物を水素化によって還元することでN-置換アミノメチル-モルホリンを得る工程; N-置換アミノメチル-モルホリンと置換安息香酸とを室温で縮合試薬1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩の存在下で反応させるか、またはN-置換アミノメチル-モルホリンをアルカリ性条件下でさらに加水分解することで、式(I)を有する化合物を得る工程。式中、
R1はアルキルであり;
R2は水素、アルキル、シクロアルキル、および複素環アルキルからなる群より選択され;
nは1〜5の整数である。
【００３３】
本発明は、治療有効量の化合物またはその塩、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物に関する。本発明はまた、5-HT4受容体アゴニストとしての医薬の調製における、式(I)を有する化合物またはその塩の使用に関する。言い換えれば、本発明はまた、治療有効量の上記化合物を含む組成物、および5-HT4受容体アゴニストとしての医薬の調製における該化合物の使用を提供する。
【００３４】
具体的な実施方法
以下の実施例は本発明を例示する役割を果たすものであるが、本発明の範囲を限定するものと考えるべきではない。
【００３５】
実施例
化合物の構造はNMRおよびMSによって確認した。NMR化学シフト(δ)は百万分率(ppm)で示した。NMRはBruker AVANCE-400分光計上で行った。適切な溶媒は重水素化メタノール(CD3OD)および重水素化クロロホルム(CDCl3)とし、テトラメチルシラン(TMS)を内部標準とし、化学シフトは10-6(ppm)単位で示した。
【００３６】
MSはFINNIGAN LCQAd (ESI)質量分析計(Therm, Finnigan LCQ advantage MAX)によって決定した。
【００３７】
キナーゼ平均阻害率およびIC50はNovoStar ELIASA(ドイツBMG Co.)によって決定した。
【００３８】
薄層シリカゲルはYantai Huanghai HSGF254またはQingdao GF254シリカゲルプレートとした。
【００３９】
カラムクロマトグラフィーは担体としてYantai Huanghai 200〜300メッシュシリカゲルを一般に使用した。
【００４０】
CD3OD: 重水素化メタノール;
CDCl3: 重水素化クロロホルム。
【００４１】
実施例1
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000116
2010538974.tif 000117
モノ-(2-アミノ-エチル)サルフェート(35.2g、250mmol)を水酸化ナトリウム水溶液(40%)160mLに攪拌しながら溶解させ、この混合物に(R)ベンジルグリシジルエーテル1a(8.2g、50mmol)のメタノール溶液を加えた。反応混合物を50℃で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を水100mLおよび濃塩酸100mLで希釈し、ジクロロメタン(200mlx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(200mL)および飽和食塩水(200mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン1b(5.08g、収率49%)を黄色液体として得た。
2010538974.tif 000118
【００４２】
(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン1b(2.07g、10mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、この混合物に炭酸カリウム(1.38g、10mmol)およびジ-tert-ブチル-ジカーボネート(3.27g、15mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液(20mL)を加え、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1c(1.967g、収率64%)を無色透明液体として得た。
2010538974.tif 000119
【００４３】
(R)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1c(1.02g、3.32mmol)および活性炭担持パラジウム0.45gを反応フラスコに加えた。反応フラスコを水素で3回掃流した。エタノール10mLを水素雰囲気下で加えた。反応混合物を70℃で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1d(0.428g、収率59%)を無色油状物として得た。
2010538974.tif 000120
【００４４】
(R)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1d(0.217g、1mmol)をジクロロメタン10mLに氷水浴中で攪拌しながら溶解させ、p-トルエンスルホニルクロリド(0.324g、1.7mmol)およびトリエチルアミン(0.252g、2.5mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)を加え、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1e(0.203g、収率55%)を無色粘稠液体として得た。
2010538974.tif 000121
【００４５】
(R)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1e(0.186g、0.501mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド10mLに攪拌しながら溶解させ、アジ化ナトリウム(90mg、1.002mmol)を加えた。反応混合物を90℃に加熱し、3時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)を加え、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1f(0.101g、収率83.4%)を白雪状固体として得た。
2010538974.tif 000122
【００４６】
(R)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル1f(0.65g、2.681mmol)をジクロロメタン30mLに攪拌しながら溶解させ、トリフルオロ酢酸3mLを加えた。反応混合物を40分間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濃縮して標記化合物(R)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート1g(0.318g)を得て、これを次の工程に直接使用した。
2010538974.tif 000123
【００４７】
(R)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート1g(0.381g、2.68mmol)をアセトニトリル50mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(1.11g、8.04mmol)を加えた。5分間攪拌後、5-ブロモ-ペンタン酸エチルエステル(673mg、3.217mmol)を加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を水(10mL)で反応停止させ、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1h(676mg、収率93.3%)を淡黄色透明油状物として得た。
2010538974.tif 000124
【００４８】
(R)-5-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1h(338mg、1.25mmol)をエタノール50mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム40.0mgを加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を減圧濾過し、濃縮して標記化合物(S)-5-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1i(0.18g)を淡黄色油状物として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 259.8 [M+1].
【００４９】
4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.158g、0.737mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(S)-5-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル1i(0.18g、0.737mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.14g、0.737mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル1j(0.2g、収率63.5%)を白色固体として得た。
MS m/z (ESI): 442.3 [M+1].
【００５０】
(S)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル1j(0.207g、0.468mmol)をトルエン30mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.357g、2.81mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.16g、0.702mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物に酢酸エチル40mLを加え、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート1(57mg、収率23.6%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000125
【００５１】
実施例2
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000126
(R)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート1g(0.803g、1.88mmol)をアセトニトリル40mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(0.78g、5.64mmol)を加えた。5分間攪拌後、6-ブロモ-ヘキサン酸エチルエステル(0.503g、2.258mmol)を加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濃縮し、ジクロロメタン300mLを残渣に加え、得られた混合物を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2a(404mg、収率75.5%)を淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000127
【００５２】
(R)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2a(1.3g、4.572mmol)をエタノール50mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム0.13gを加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下で2.5時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2bを得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 259.8 [M+1].
【００５３】
4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.277g、1.37mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2b(0.294g、1.14mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.437g、2.28mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。ジクロロメタン400mLを加えた。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル2c(0.119g、収率23.6%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000128
【００５４】
(S)-6-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル2c(0.119g、0.269mmol)をトルエン40mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.171g、1.347mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(92mg、0.404mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を水40mLで希釈し、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート2(13mg、収率10%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000129
【００５５】
実施例3
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000130
4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.295g、1.37mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(S)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル2b(0.294g、1.14mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.437g、2.28mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物をジクロロメタン400mLで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル3a(0.191g、収率36.8%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000131
【００５６】
(S)-6-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル3a(0.191g、0.419mmol)をトルエン40mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.266g、2.095mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(143mg、0.628mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物をジクロロメタン300mLで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)および飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート3(20mg、収率9.13%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000132
【００５７】
実施例4
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000133
モノ-(2-アミノ-エチル)サルフェート(35.2g、250mmol)を水酸化ナトリウム水溶液(40%)60mLに攪拌しながら溶解させた。(S)-ベンジルグリシジルエーテル4a(8.2g、50mmol)のメタノール溶液を上記水酸化ナトリウム溶液に加えた。50℃で1時間反応後、水酸化ナトリウム水溶液(40%)100mLを加えた。反応混合物を50〜55℃で16時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を水100mLで希釈し、濃塩酸100mLを滴下した。混合物をジクロロメタン(500mLx4)で抽出した。一緒にした有機相を水(300mL)および飽和食塩水(300mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン4b(5.08g、収率49%)を黄色液体として得た。
2010538974.tif 000134
【００５８】
(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン4b(2.07g、10mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(1.38g、10mmol)およびジ-tert-ブチルジカーボネート(3.27g、15mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)で反応停止させ、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4c(1.967g、収率64%)を無色透明液体として得た。
2010538974.tif 000135
【００５９】
(S)-2-ベンジルオキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4c(5.27g、17.2mmol)をエタノール200mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム0.527gおよび1N塩酸2滴を加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下70℃で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)で反応停止させ、酢酸エチル(200mLx4)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4d(3.646g、収率97.7%)を無色または淡黄色液体として得た。
2010538974.tif 000136
【００６０】
氷水浴中、(S)-2-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4d(0.217g、1mmol)をジクロロメタン10mLに攪拌しながら溶解させ、p-トルエンスルホニルクロリド(0.324g、1.7mmol)およびトリエチルアミン(0.252g、2.5mmol)を加えた。反応混合物を室温で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)で反応停止させ、ジクロロメタン(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(50mL)および飽和食塩水(50mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4e(0.203g、収率55%)を無色粘稠液体として得た。
2010538974.tif 000137
【００６１】
(S)-2-(トルエン-4-スルホニルオキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4e(0.186g、0.501mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド10mLに攪拌しながら溶解させ、アジ化ナトリウム(90mg、1.002mmol)を加えた。反応混合物を90℃に加熱し、3時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(20mL)で反応停止させ、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4f(0.101g、収率83.4%)を無色油状物として得た。
2010538974.tif 000138
【００６２】
(S)-2-アジドメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル4f(91mg、0.376mmol)をジクロロメタン5mLに攪拌しながら溶解させ、トリフルオロ酢酸0.5mLを加えた。反応混合物を10分間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濃縮して標記化合物(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4gを得て、これを次の工程に直接使用した。
2010538974.tif 000139
【００６３】
(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4g(2.96g、11.56mmol)をアセトニトリル50mLに攪拌しながら溶解させ、炭酸カリウム(4.79g、34.68mmol)を加えた。10分間攪拌後、6-ブロモ-ヘキサン酸エチルエステル(2.84g、12.72mmol)を加えた。反応混合物を1.5〜2時間加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)で反応停止させ、ジクロロメタン(300mLx4)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4h(2.914g、収率88.8%)を無色または淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000140
【００６４】
(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4h(87mg、0.306mmol)をエタノール10mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム9.0mgを加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4iを得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 259.8 [M+1].
【００６５】
4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.484g、2.4mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4i(0.516g、2.0mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.767g、4.0mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、ジクロロメタン(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル4j(153mg、収率17.3%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000141
【００６６】
(R)-6-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ヘキサン酸エチルエステル4j(0.125g、0.283mmol)をトルエン30mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.18g、1.415mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(97mg、0.424mmol)を室温で加えた。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を減圧濃縮してトルエンを除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート4(35mg、収率23.6%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000142
【００６７】
実施例5
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000143
(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4g(0.64g、2.5mmol)および炭酸カリウム(1.037g、7.5mmol)をアセトニトリル30mLに攪拌しながら溶解させ、5-ブロモ-ペンタン酸エチルエステル(0.575g、2.75mmol)を加えた。反応混合物を3時間加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)で反応停止させ、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-5-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5a(0.532g、収率78.8%)を淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000144
【００６８】
(S)-5-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5a(532mg、1.97mmol)および活性炭担持パラジウム53mgを反応フラスコに加え、反応混合物を水素で3回掃流し、メタノール20mLを攪拌しながら加えた。反応混合物を水素雰囲気下で4時間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。得られた混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(R)-5-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5bを淡黄色液体として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 245.2 [M+1].
【００６９】
(R)-5-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5b(0.241g、1.0mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.242g、1.2mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.383g、2.0mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル5c(162mg、収率45%)を白色固体として得た。
MS m/z (ESI): 428.3 [M+1].
【００７０】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル5c(0.16g、0.37mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.235g、1.85mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.127g、0.555mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(200mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート5(32mg、収率17%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000145
【００７１】
実施例6
(R)-キヌクリジン-3-イル 4-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート
2010538974.tif 000146
(S)-2-アジドメチル-モルホリントリフルオロアセテート4g(0.64g、2.5mmol)および炭酸カリウム(1.037g、7.5mmol)をアセトニトリル30mLに攪拌しながら溶解させ、4-ブロモ-酪酸エチルエステル(0.585g、3.0mmol)を加えた。反応混合物を3時間加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)で反応停止させ、酢酸エチル(50mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(100mL)および飽和食塩水(100mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-4-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6a(0.461g、収率72%)を淡黄色透明液体として得た。
2010538974.tif 000147
【００７２】
(S)-4-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6a(442mg、1.73mmol)および活性炭担持パラジウム45mgを反応フラスコに加え、反応混合物を水素で3回掃流し、メタノール20mLを攪拌しながら加えた。反応混合物を水素雰囲気下で終夜反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濾過し、濃縮して標記化合物(R)-4-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6bを淡黄色液体として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 231.2 [M+1].
【００７３】
(R)-4-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6b(0.199g、0.865mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-安息香酸(0.209g、1.038mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.332g、1.73mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-4-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル6c(0.25g、収率69.8%)を無色透明粘稠固体として得た。
MS m/z (ESI): 414.2 [M+1].
【００７４】
(R)-4-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル6c(0.25g、0.605mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.384g、3.025mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.207g、0.908mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 4-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート6(40mg、収率13.4%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000148
【００７５】
実施例7
(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート
2010538974.tif 000149
(R)-5-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ペンタン酸エチルエステル5b(0.242g、1.0mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.259g、1.2mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.383g、2.0mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル7a(0.276g、収率62.7%)を白色粘稠液体として得た。
MS m/z (ESI): 442.2 [M+1].
【００７６】
(R)-5-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-ペンタン酸エチルエステル7a(0.22g、0.5mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.318g、2.5mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.171g、0.75mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 5-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ペンタノエート7(30mg、収率11.5%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000150
実施例8
(R)-キヌクリジン-3-イル 4-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート
2010538974.tif 000151
(R)-4-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-酪酸エチルエステル6b(0.199g、0.865mmol)をジクロロメタン20mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(0.209g、1.038mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(0.332g、1.73mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(200mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-4-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル8a(0.25g、収率69.8%)を無色透明粘稠固体として得た。
MS m/z (ESI): 414.2 [M+1].
【００７７】
(R)-4-{2-[(4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリン-4-イル}-酪酸エチルエステル8a(0.235g、0.55mmol)をトルエン20mLに攪拌しながら溶解させ、1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(0.35g、2.75mmol)を加えた。チタン酸テトラエチル(0.188g、0.825mmol)を室温で滴下した。反応混合物を終夜加熱還流させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。反応混合物を濃縮してトルエンを除去し、ジクロロメタン(50mL)および飽和炭酸水素ナトリウム溶液(50mL)を加え、ジクロロメタン(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 4-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ブタノエート8(51mg、収率18.3%)を淡黄色固体として得た。
2010538974.tif 000152
【００７８】
実施例9
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート
2010538974.tif 000153
(S)-6-(2-アジドメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4h(2.84g、10.0mmol)をトルエン140mLに攪拌しながら溶解させ、チタン酸テトラエチル(2.28g、10mmol)および1-アザ-ビシクロ[2.2.2]オクタン-3-オール(5.08g、40mmol)を加えた。反応混合物を90℃に終夜加熱し、生成物が形成されるまで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。出発原料の一部が依然として残存した。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLを加え、酢酸エチル(400mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(200mL)および飽和食塩水(200mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-(アジドメチル)モルホリン)-ヘキサノエート9a(3.252g、収率89%)を淡黄色油状物として得た。
2010538974.tif 000154
【００７９】
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((S)-2-(アジドメチル)モルホリン)-ヘキサノエート9a(1.802g、4.93mmol)をイソプロピルアルコール100mLに攪拌しながら溶解させ、活性炭担持パラジウム(0.18g、0.493mmol)を加えた。反応混合物を水素で3回掃流し、水素雰囲気下、室温で終夜反応させ、出発原料の実質的な消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を濾過して活性炭担持パラジウムを除去し、溶媒を蒸発させて標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-アミノメチル-モルホリン)ヘキサノエート9bの粗生成物(2.178g)を淡黄色液体として得て、これを次の工程で直接使用した。
MS m/z (ESI): 340.4 [M+1].
【００８０】
(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-アミノメチル-モルホリン)ヘキサノエート9b(1.67g、4.93mmol)をジクロロメタン100mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(1.17g、5.42mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(1.89g、9.86mmol)を加えた。反応混合物を室温で3時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLで反応停止させ、ジクロロメタン(400mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(300mL)および飽和食塩水(300mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をn-ヘキサン/酢酸エチルから再結晶して標記化合物(R)-キヌクリジン-3-イル 6-((R)-2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサノエート9(2.47g、収率93.4%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000155
【００８１】
実施例10
(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシベンズアミド)メチル)モルホリノ)ヘキサン酸
2010538974.tif 000156
(R)-6-(2-アミノメチル-モルホリン-4-イル)-ヘキサン酸エチルエステル4i(3.27g、12.68mmol)をジクロロメタン100mLに攪拌しながら溶解させ、4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-安息香酸(3.01g、13.95mmol)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミド塩酸塩(6.08g、31.7mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間攪拌し、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液100mLで反応停止させ、ジクロロメタン(500mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を水(300mL)および飽和食塩水(300mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸エチルエステル10a(3.36g、収率58%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000157
【００８２】
(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸エチルエステル10a(0.11g、0.24mmol)をメタノール10mLに攪拌しながら溶解させ、水酸化ナトリウム溶液(15%)3mLを加えた。反応混合物を室温で30分間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を氷酢酸でpH3〜3.5に調整し、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(R)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル]-モルホリノ)-ヘキサン酸10(40mg、収率36%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000158
【００８３】
実施例11
(S)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)メチル)モルホリノ)-ヘキサン酸
2010538974.tif 000159
(S)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸エチルエステル3a(0.11g、0.24mmol)をメタノール10mLに攪拌しながら溶解させ、水酸化ナトリウム溶液(15%)3mLを加えた。反応混合物を室温で30分間反応させ、出発原料の消失まで薄層クロマトグラフィーでモニタリングした。混合物を氷酢酸でpH3〜3.5に調整し、酢酸エチル(100mLx3)で抽出した。一緒にした有機相を飽和食塩水(100mL)で洗浄し、濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して標記化合物(S)-6-(2-((4-アミノ-5-クロロ-2-エトキシ-ベンゾイルアミノ)-メチル)-モルホリノ)-ヘキサン酸11(40mg、収率36%)を白色固体として得た。
2010538974.tif 000160
【００８４】
薬理学的アッセイ:
5-HT4受容体アゴニスト結合アッセイ
目的: 5-HT4受容体に対する本発明化合物の結合率を決定すること
材料: ラット線条体組織
試料: 正の対照であるモサプリド、ATI-7505、ならびに実施例1、3、7および9
試薬: [3H]-GR113808 (Amersham, TRK944-10UCI, 370kBq, 5μCi, 60-85Ci/mmol, 20μCi/ml)), GR113808 (Sigma, G5918)
【００８５】
アッセイプロトコール
1. 組織試料の調製
a) ラットを殺した。線条体組織を15倍体積のトリス-HCL緩衝液(50mM、pH7.4、4℃)に入れ、均質化し、48,000rpm、4℃で10分間遠心分離した。
b) 得られた沈殿をトリス-HCL緩衝液に再懸濁させた。
c) タンパク質濃度を決定した。タンパク質濃度を30mg/mlに調整した。ホモジネートをアリコートにし、-80℃で貯蔵した。
d) 線条体組織試料は使用前に1mg/mlに希釈すべきである。
【００８６】
2. [3H]-GR113808同位体原液の希釈
[3H]-GR113808原液の濃度は0.23〜0.33μMと算出される。[3H]-GR113808のアッセイ希釈標準液の濃度は0.16nMとする。貯蔵液を10x希釈するプロセスは、トリス-HCL緩衝液(50mM、pH7.4)1.8mlに原液10μlを加えるというものである。
【００８７】
3. 10x試験化合物(勾配濃度)溶液の調製
試験化合物をトリス-HCL緩衝液に最初に溶解させて25mMの濃度にした後、該化合物を希釈倍率5での段階勾配濃度に希釈して10x試験溶液を作製した(5-7、5-6、5-5、5-4、5-3、5-2、5-1、50、5、52mM)。
【００８８】
4. 競合結合アッセイ
氷上にアッセイ管を置き、各溶液を加えた(全反応を三つ組で行った; 単位:μl; 反応管の全体積は200μlである)。
【００８９】
5. 結果
アッセイ結果を表1に示した。
試験化合物の結果に基づけば、本発明化合物は5-HT4受容体に結合することができる。
【００９０】
（表１）5-HT4アゴニスト化合物の結合率の結果
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【国際調査報告】
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