(57)【要約】  本発明は、皮膚の老化の徴候を予防及び/又は治療するための活性成分として、任意に少なくとも1種のポリフェノール化合物と組み合わせたグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用に関する。本発明は、活性成分として、グルコサミンと松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物との組合せを含んでなる経口及び/又は非経口投与用組成物にも関する。【選択図】図１
2010506893.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するため及び/又は皮膚の堅さを維持及び/又は修復するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用。
【請求項２】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失が年代的老化によって誘発されることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項３】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失がホルモン性老化によって誘発されることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項４】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失が外因性老化、特に光老化によって誘発されるることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項５】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失が減量、特に痩身ダイエットの過程で観察される減量によって誘発されることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項６】
セルライトによって誘発される皮膚の痛み若しくは締め付けを予防し、及び/又は前記痛み若しくは締め付けと闘うためであることを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７】
セルライトと関係がある視覚的局面を予防及び/又は治療するためであることを特徴とする請求項1〜6のいずれか1項に記載の使用。
【請求項８】
前記グルコサミンが、コラーゲン合成のアクチベーターとして及び/又は表皮のホメオスタシスの回復を促進するための薬剤として及び/又はMMP3の発現を抑制するための薬剤として及び/又は線維芽細胞の収縮性を促進するため及び/又は特にビメンチン、デコリン、フィブロモジュリン、バイグリカン及びヒアルロンシンターゼから選択される皮膚マーカーの発現を刺激するための薬剤として作用することを特徴とする請求項1〜7のいずれか1項に記載の使用。
【請求項９】
閉経期によって誘発される皮膚障害、特に皮膚の堅さの損失を予防及び/又は治療するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用。
【請求項１０】
前記グルコサミンをポリフェノール化合物と併用することを特徴とする請求項1〜9のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１１】
前記ポリフェノール化合物が、緑茶、ブドウ、例えばVitis vinifera、松、特に松樹皮、リンゴ、ブルーベリー、ホップ、グアバ、ココア及び木、例えばクリ、オーク、セイヨウトチノキ及びハシバミのエキスから選択される植物エキス由来であることを特徴とする請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
前記ポリフェノール化合物がプロアントシアニジン、フラボノイド、リグナン、リグニン、スチルベン及びクマリンの形態であることを特徴とする請求項10又は11に記載の使用。
【請求項１３】
前記ポリフェノール化合物が、モノマー又はオリゴマーの形態の、カテキン、エピカテキン、ガラクトカテキン及びエピガラクトカテキンから成る群より選択されるカテキンポリフェノールであることを特徴とする請求項12に記載の使用。
【請求項１４】
前記オリゴマーが2〜14個のカテキン単位を含むことを特徴とする請求項13に記載の使用。
【請求項１５】
皮膚の生体力学的性質を維持及び/又は修復するため及び/又はセルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するための活性薬の混合物としての、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口使用。
【請求項１６】
皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性、密度及び/又は弾力性を維持及び/又は修復するためであることを特徴とする請求項15に記載の使用。
【請求項１７】
年代的老化によって誘発される皮膚障害を予防し、及び/又は前記皮膚障害と闘うためであることを特徴とする請求項15又は16に記載の使用。
【請求項１８】
外因性老化、特に光老化によって誘発される皮膚障害を予防し、及び/又は前記皮膚障害と闘うためであることを特徴とする請求項15又は16に記載の使用。
【請求項１９】
減量、特に痩身ダイエットの過程で観察される減量によって誘発される皮膚障害を予防し、及び/又は前記皮膚障害と闘うためであることを特徴とする請求項15又は16に記載の使用。
【請求項２０】
瘢痕形成を促進するための活性薬の混合物としての、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口及び/又は非経口使用。
【請求項２１】
前記グルコサミンが、塩の形態、アセチル化形態及び/又はポリマー形態であることを特徴とする請求項1〜20のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２２】
前記グルコサミンが、グルコサミン硫酸塩、グルコサミン塩化カリウム硫酸塩、グルコサミン塩化ナトリウム硫酸塩及びグルコサミン塩酸塩から選択される塩の形態であることを特徴とする請求項1〜21のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２３】
表皮のホメオスタシスの回復を促進するため及び/又は真皮のマトリックス構成成分の分解を制限するため及び/又はMMP3の発現レベルを低減するため及び/又は線維芽細胞の細胞骨格を刺激するため及び/又は線維芽細胞の収縮特性を改善するため及び/又は特にビメンチン、デコリン、フィブロモジュリン、バイグリカン及びヒアルロンシンターゼから選択される皮膚マーカーの発現を高めるため、かつこのようにしてセルライト及び関連する視覚的局面をも減らし、及び/又は皮膚の堅さを維持及び/又は修復するための美容方法であって、任意にポリフェノール化合物と組み合わせてグルコサミンを含有する組成物の経口及び/又は非経口投与を含んでなる方法。
【請求項２４】
グルコサミンと、松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物との組合せを含んでなる経口投与用組成物。
【請求項２５】
前記グルコサミンが、請求項21及び22のいずれか1項の定義どおりである、請求項24に記載の組成物。
【請求項２６】
前記松樹皮由来のポリフェノール化合物が、前記ポリフェノール組成物の総質量に対して、5質量%〜25質量%、好ましくは10質量%〜20質量%の範囲であり得るフェノールトリマー含量を有する、請求項24及び25のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記松樹皮由来のポリフェノール組成物が、前記ポリフェノール化合物の総質量に対して、5質量%〜25質量%、好ましくは10質量%〜20質量%の範囲であり得るポリフェノールダイマー含量を有する、請求項24〜26のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記松樹皮由来のポリフェノール化合物が、該ポリフェノール化合物の総質量に対して、2質量%〜15質量%、例えば5質量%〜10質量%の、フェルル酸、p-クマル酸、コーヒー酸及びプロトカテク酸型のフェノール酸を有する、請求項24〜27のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記グルコサミンが、前記組成物の総質量に対して、0.0001質量%〜80質量%、好ましくは1質量%〜50質量%、なおさらに好ましくは10質量%〜20質量%の範囲の含量で存在する、請求項24〜28のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ポリフェノール化合物が、前記組成物の総質量に対して、0.0001質量%〜50質量%、好ましくは0.05質量%〜10質量%、なおさらに好ましくは0.5質量%〜2質量%の範囲の含量で存在する、請求項24〜29のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３１】
少なくとも1種のアンチエイジング栄養活性薬、少なくとも1種の光保護栄養活性薬、少なくとも1種の閉経期栄養活性薬及び/又は少なくとも1種の痩身栄養活性薬をも含むことを特徴とする請求項24〜30のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３２】
軟カプセル剤、フープケースドゲルカプセル剤、ゲル剤、乾燥若しくは液状エマルション、錠剤、希釈用の散剤又は経口薬瓶或いは機能性食品の形態であることを特徴とする請求項24〜31のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３３】
同時、個別又は逐次使用のためのキット又は組合せ製品として、第1組成物中のグルコサミンと、第2組成物中の松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物とを含んでなる栄養補助食品又は機能性食品。
【請求項３４】
前記グルコサミンが請求項21及び22のいずれか1項の定義どおりでり、かつ前記ポリフェノール化合物が請求項25〜27のいずれか1項の定義どおりである、請求項33に記載の栄養補助食品又は機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、スキンケアを意図した栄養補助食品又は機能性食品の分野に関する。
【０００２】
ヒトの皮膚は、三区画、すなわち表層区画である表皮、真皮及び深層区画である皮下組織で構成される。深層区画は、脂肪の蓄積と貯蔵で特化される1つの型の細胞、すなわち脂肪細胞で基本的に構成される。
ヒトの天然表皮は、主に3つの型の細胞、すなわち大部分を形成するケラチノサイトと、メラノサイト及びランゲルハンス細胞で構成される。これらの各細胞型は、その本来備わっている機能によって、皮膚が果たす基本的役割に寄与する。
真皮は、表皮に固形支持体を与える。真皮はそのフィーダー要素でもある。真皮は主に線維芽細胞と細胞外マトリックスで構成され、細胞外マトリックス自体は、主にコラーゲン、エラスチン及び基底細胞として知られる物質で構成され、これらの成分は線維芽細胞によって合成される。
真皮内では白血球、肥満細胞又は組織マクロファージも見つかる。真皮は血管及び神経線維とも絡み合っている。正常な皮膚、すなわち病原も瘢痕もない皮膚では、線維芽細胞は静止性状態、すなわち非増殖性状態にある。
真皮の堅さはコラーゲン線維によって与えられる。コラーゲン線維は、一緒にシールされた原線維で構成されるので、10種より多くの異なるタイプの構造を形成する。真皮の堅さは、全方向に一緒に緊密に充填されたコラーゲン線維の絡み合いに大きく起因する。コラーゲン線維は、皮膚及び/又は粘膜の弾性と緊張度に寄与する。
コラーゲン線維は絶えず置換されているが、この置換は年齢と共に減少するので、真皮の薄化という結果になる。この真皮の薄化は、例えば、コルチコイドホルモンの過分泌、一定の病的状態、そうでなければビタミン欠乏症(壊血病のビタミンCの場合)等の病因でもある。また、紫外線、喫煙又は何らかの処置(例えば、グルココルチコイド、ビタミンD及び誘導体)等の外因子も皮膚及び皮膚のコラーゲンレベルに影響を及ぼすことも認められている。
種々の因子がコラーゲンの分解をもたらし、皮膚及び/又は粘膜の構造及び/又は堅さに関して予想される全ての結果を伴う。
コラーゲン線維は高度に耐性であるが、コラゲナーゼとして知られる特定酵素に感受性である。コラーゲン線維の分解の結果、たるんだ皮膚及びしわくちゃの皮膚という外観をもたらす。滑らかかつ張りのある皮膚の外観を好む人は、このような状況と常に闘おうとしている。
コラゲナーゼは、メタロプロテイナーゼ(MMP)として知られる酵素ファミリーに属し、該メタロプロテイナーゼ自体、活性部位内に、3つのシステイン残基に配位結合した亜鉛原子とメチオニンを有し、かつ細胞外マトリックス及び基底層の巨大分子成分を中性pH(コラーゲン、エラスチン等)で分解するタンパク質分解酵素ファミリー(エンドプロテアーゼ又はエンドペプチダーゼ)のメンバーである。これらの酵素は、生物界で非常に広く散在しているが、器官の成長や組織の置換などの正常な生理的状況では弱く発現する。
ヒトにおけるこれら酵素の過剰発現とその活性化は多くのプロセス、時には病的プロセスに関係し、マトリックスの破壊と再構築に関与する。これが細胞外マトリックスの抑制されない吸収につながるか、或いは逆に線維症の状態が始まることとなる。
メタロプロテイナーゼファミリーは、その構造と基質特異性に関する類似点に基づいて良く定義された数群で構成される。これらの群のうち、原線維コラーゲンの分解を意図したコラゲナーゼ(MMP-1又は間質性コラゲナーゼ、MMP-8又は好中球コラゲナーゼ、MMP-13又はコラゲナーゼ3)、IV型コラーゲン又はいずれの形態の変性コラーゲンをも分解するゼラチナーゼ(MMP-2又はゼラチナーゼA(72kDa)、MMP-9又はゼラチナーゼB(92kDa))が挙げられる。
ストロメリシン(Stromelysin)(MMP-3)としては、糖タンパク質(フィブロネクチン、ラミニン)、プロテオグリカン等、そうでなければ膜メタロプロテイナーゼのような細胞外マトリックスのタンパク質に適用される広範な活性を有する。膜メタロプロテイナーゼは、上記メタロプロテイナーゼの抗コラゲナーゼ役割を持たない。
さらに、小ロイシンリッチプロテオグリカン(small leucine-rich proteoglycan)(SLRP)ファミリーに属する当該プロテオグリカンのような一定のプロテオグリカンは、老化という負の効果及び皮膚の力学的特性の低下を阻止する点で有利な標的を構成する。これらのSLRPは実際に、原線維形成及び原線維周囲空間の水和に直接関与する。SLRPは特にTGF-β等の特定の成長因子のバイオアベイラビリティーを高めるのに寄与し：SLRPのうち、デコリン、ルミカン、フィブロモジュリン及びバイグリカンが挙げられる。さらに、一定の免疫組織化学的観察は、老化した皮膚におけるバイグリカンの蓄積の減少を実証する。同様に、ルミカン及びフィブロモジュリンの顕著な減少が障害性コラーゲン原線維形成を誘発し、原線維構築の妨害をも引き起こす。結果としてSLRPファミリーのプロテオグリカンは、皮膚構造の構築組織化、ひいては皮膚の堅さの調節において根源的な役割を果たす。
最後に、SLRPは、MMPの作用に感受性であるのみならず、アグリカナーゼ又はADAMTS(A Disintegrin And Metalloprotease with Thrombospondin type I repeat)のタンパク質分解作用にも感受性である。この新しいメタロプロテイナーゼファミリーの特定メンバー、特にADAMTS1及びADAMTS4が皮膚内で同定され、かつADAMTS4はデコリンを分解することが分かっている。
紫外線、特にA型又はB型紫外線への長時間の曝露はコラゲナーゼ、特にMMP-1の発現を刺激する作用がある。これが光誘発型皮膚老化の構成要素の1つである。
さらに、閉経期では、真皮に関する主な変化は、コラーゲンのレベル及び真皮厚の低減である。この結果、閉経期の女性では皮膚及び/又は粘膜の薄化となる。次に、女性は、「しわくちゃな皮膚」又はタイトな皮膚感覚を経験し、かつ表面の細線及びしわの強調が観察される。触診すると皮膚は粗い感じがする。最後に、皮膚は柔軟性の低下を示す。
最後に、過体重の個体、さらに特に体重増加中の個体では、肥満細胞の量が急増する傾向がある(増量する脂質の貯蔵)。そして、膨張した脂肪小葉が少しずつ、相互に平行かつ皮膚の表面に垂直な結合梁柱の形成をもたらすようになる。真皮上の脂肪細胞に及ぼされた強い圧力が急速に皮膚の表面を変形させる。皮膚の用語では、この「セルライト（cellulite）」現象は、所々に「オレンジの皮」の徴候を与える、ぜい肉のついた外観によって反映される。最後に、臨床の観点から、セルライトは皮下及び表層組織のテクスチャーの変化によって反映され、特に以下のことで特徴づけられる。
−全体的に、より厚い皮膚、
−より一貫性の皮膚、
−より敏感であり、かつセルライトの進行段階によっては、触診すると有痛性の皮膚、及び/又は
−皮膚の深層の接着と粘着の損失のため動きにくい皮膚組織。
従って、女性は垂直構造を示す結合梁柱のある微細な皮膚を有し、他方、男性では斜めかつ十文字構造を有することから、この現象は女性でよく見える。
多くの場合、過体重及び肥満によって悪化するセルライトは、特に臀部及び下肢周辺にある(「乗馬ズボン大腿部」又は「ズアーブパンツ(zouave pants)」セルライト)。
真皮レベルでは、脂肪組織の肥大は、張力を受けて置かれている線維ネットワークを伴い、在住細胞の機能障害につながる。実際、この肥大は、毛管の圧縮によって、該現象が自己維持するような程度まで細胞交換及び静脈とリンパの循環を妨害する。結局、線維が退化し、皮膚がその基本構造を失う。
生物学的観点から、線維芽細胞が正常な組織張力を受けると、線維芽細胞は、皮膚の支持組織の補強に寄与する必須分子であるコラーゲン、エラスチン及びグリコサミノグリカンを活発に合成する。同様に、脂質で過負荷状態の脂肪細胞も真皮に張力を及ぼし、線維形成が起こるまで、コラーゲンの過剰産生ということになる。これは、臨床用語では、より一貫性かつピンと張った皮膚によって反映される。
他方、減量中、特に痩身(slimming)ダイエット中では、脂肪細胞の急速な脱蓄積が支持組織上の下皮によって及ぼされる張力のかなりの低下につながる。結果として、真皮がもはや張力下ではなくなるので、結合組織が徐々にその粘着力を失い、コラーゲンへの線維芽細胞の付着の低減、ネオコラーゲンの量の減少、エラスチン線維の膨張、プロテオグリカンの解重合などをもたらす。その結果、細胞外マトリックスの線維との相互作用が少ない線維芽細胞は、もはやその環境から活性を受けず、かつ真皮の必須巨大細胞の合成を制御するシグナルを修復しない。さらに、もはやその原線維環境からシグナルを受けていない線維芽細胞は、線維構造の分解に帰する酵素であるマトリックスメタロプロテアゼ(MMP)を分泌する。この顕著な線維芽細胞代謝の遅速化、さらにMMPによる線維の分解も結果として皮膚の粘弾性又は生体力学的特性の障害によって反映される(堅さ、緊張度、弾性の損失など)。
【０００３】
上記の内容を読めば、組織、特に皮膚組織及び/又は粘膜組織の構造におけるコラーゲンとグリコサミノグリカンの重要さ、並びに前記組織の低下と闘い、ひいては老化（それが時間生物学的であれ、又は光誘発型老化であれ）、及びその結果、特に真皮の薄化及び/又はコラーゲン線維の分解と闘う際にコラーゲンとグリコサミノグリカンが重要であり、光誘発型老化は、皮膚の堅さの損失、特にたるんだ皮膚という外観をもたらすことが分かる。本発明の目的は、正にこれと闘うことである。
本発明は、さらに詳しくは、皮膚の老化の徴候、最も特に皮膚の粘弾性又は生体力学的特性の障害、特に皮膚の堅さの損失と関係がある皮膚の徴候の、経口及び/又は非経口投与による予防及び/又は治療、並びにセルライトの予防及び/又は治療にも焦点を当てる。
文献では、セルライトと闘うために開示されたアプローチは、例えばホスホジエステラーゼを阻害するか又はβ-アドレノレセプターを活性化することによって、脂肪分解を刺激することにあることが分かる。
グルコサミンの経口投与は主に関節症の治療で、特に栄養補助食品の形態で知られている。
文献「グルコサミン、アミノ酸、ミネラル、及び抗酸化剤を含有する経口栄養補助食品の皮膚の老化に及ぼす効果：予備研究」(H. MURAD and Michael TABIBIAN, Journal of Dermatological Treatment (2001)12, 47-51)は、複数成分、すなわちアセチル化D-グルコサミン、グルコサミン硫酸塩、L-プロリン、L-リジン、ケルセチン亜鉛、銅、マンガン及びブドウ種子エキスを含有する製品を用いて経口治療したボランティア群に関する研究を報告している。結果は、治療後に観察されるしわの数の減少に対して効果を示すようである。
さらに、アセチルグルコサミンの局所使用はスキンコンディショナーとして知られる。アセチルグルコサミンは、皮膚の外観を改善するための特定クリーム、特に保湿クリーム中の成分でもある。
文献EP 1 075 836は、活性薬としてN-アセチルグルコサミンを含むスキンケア組成物を開示している。
文献JP 2004-083432は、グルコサミン、その誘導体又はその塩を含む、しわ及び皮膚の老化を改善するためのエラスターゼインヒビターを開示している。
最後に、文献JP 2004-083434は、グルコサミン、その誘導体又はその塩を含む、コラーゲンの合成を促進するための薬剤を開示している。
【０００４】
本発明の主題は、セルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するため及び/又は皮膚の堅さを維持及び/又は修復（restore）するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用である。
本発明の主題は、皮膚の老化の徴候、特に皮膚の萎縮及び/又はコラーゲン合成の低下及び/又はMMP3の過剰発現と関係がある皮膚障害を予防及び/又は治療するための経口及び/又は非経口投与用医薬組成物の調製のためのグルコサミンの使用でもある。
皮膚の老化の徴候と闘うための局所治療が知られている。しかし、推奨されている局所活性薬は、その弱い皮膚浸透のため、真皮レベルで常に作用するわけではない。さらに、局所製品は、定義により、治療すべき領域上で局所的に作用するが、その領域に該製品が均等に分布されないこともあり、また慎重かつ反復適用が必要である。場合によっては、局所製品が皮膚の副作用の原因となることもあり、不快なことさえある。
対照的に、経口及び/又は非経口投与は、皮膚全体、及び皮膚の深層(真皮、皮下組織)に包括的に作用するという利点を有する。そして、実際には、血流によってグルコサミン及び/又はその代謝物が真皮マトリックス内に分布される。
本発明の文脈では、用語「非経口投与」は、筋肉内注射、静脈内注射、そうでなければ全身パッチによる投与を意味するものと解釈される。他言すれば、この定義は、活性薬が血流を通る限り、経口(又は胃腸)以外の他の全ての投与方法を包含するものとする。
全身パッチによる投与が非経口投与として好ましい。排他的に局所作用のあるパッチは、本発明から除外される。
従って、経口投与又はパッチによる投与は、迅速かつ比較的制限のない投与という利点をも有する。
【０００５】
対照的に、局所投与は、その弱い皮膚浸透のため、真皮レベルで常に活性薬の全ての特性を利用できるわけではない。
さらに、局所製品は、定義により、治療すべき領域上で局所的に作用するが、その領域に該製品が均等に分布されないこともあり、また慎重かつ反復適用が必要である。特定の場合、局所製品が皮膚の副作用の原因となることがあり、不快なことさえある。
発明者らは、さらに詳細には、グルコサミンと、少なくとも1種のポリフェノール化合物、特に松樹皮由来のポリフェノール化合物との組合せの経口投与が皮膚に有益な活性を有することをも発見した。発明者らは、さらに詳細には、この組合せは、経口投与すると、特に皮膚の生体力学的特性の維持及び/又は修復に有利であることをも観察した。なおさらに詳細には、この組合せは、皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性及び/又は弾力性を維持及び/又は修復し、及び/又はセルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療することができる。
ポリフェノール化合物は、特にその強い抗酸化能力で知られ、かつ化粧品で一般に使用されている。経口投与によるポリフェノール化合物の心臓血管疾患の予防での役割も開示されている。
特に商品名Pycnogenol(登録商標)で販売されている海洋性松樹皮エキスの化粧品での使用が文献F. Schonlau, “The cosmeceutical pycnogenol(登録商標)”, Journal of applied cosmetology, Vol. 20, No. 4, 2002, pages 241-246に記載されている。
【０００６】
このように、本発明の文脈では、グルコサミンを少なくとも1種のポリフェノール化合物と併用することができる。
従って、本発明は、皮膚の生体力学的特性を維持及び/又は修復するため及び/又はセルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するための活性薬の混合物としての、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口使用にも関する。
本発明は、瘢痕形成（cicatrization）を促進するための活性薬の混合物としての、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口及び/又は非経口使用にも関する。
本発明は、皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性、密度及び/又は弾力性の損失と関係がある皮膚の老化の徴候を予防及び/又は治療するための経口及び/又は非経口投与用組成物の調製のための、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの使用にも関する。
本発明は、グルコサミンと松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物との組合せを含んでなる経口投与用組成物にも関する。
本発明は、同時、個別又は逐次使用のためのキット又は組合せ製品として、第1組成物中のグルコサミンと、第2組成物中の松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物とを含んでなる栄養補助食品又は機能性食品にも関する。
【０００７】
本発明の文脈では、「皮膚の粘弾性又は生体力学的特性」という表現は、皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性、密度及び/又は弾力性という特性を意味するものとする。
「皮膚の老化の徴候」という表現は、老化に起因する皮膚の外観のいずれの変化をも意味し（老化が時間生物学的及び/又は外因性、特に光誘発性及び/又はホルモン性であれ）、特にしわ及び微細線、しわくちゃな皮膚、たるんだ皮膚、薄化皮膚、光り輝かないくすんだ皮膚、皮膚の弾性及び/又はトーンの欠如を意味するが、変化した外観によっては体系的に反映されない皮膚のいずれの内的変化をも意味し、例えば、紫外線への曝露後の皮膚、特にコラーゲン線維に対する内的損傷をも意味するものとする。
この用語は、「年代的老化及び/又は外因性老化及び/又はホルモン性老化によって誘発される皮膚障害」という用語と同等であるとみなされる。
「痩身ダイエット（slimming diet）及び/又は減量ダイエット（weight-loss diet）によって誘発される皮膚障害」という表現は、皮膚の外観の全ての変化、例えば、減量後に多かれ少なかれ表れ得るたるんだ皮膚の外観を意味するものとする。
本発明の文脈では、「セルライトによって誘発される皮膚障害」という表現は、皮膚の外観の全ての変化、例えば、大腿部、腕又は腹部などの過重量の領域に多かれ少なかれ局在化し得る脂肪結節又は「オレンジの皮」のみならず、触診時の痛みをも意味するが、「セルライトと関係がある視覚的局面（visual aspect）」という表現は、皮膚の外観の全ての変化、例えば脂肪結節又は「オレンジの皮」のみを包含するものとする。
本発明の目的では、用語「パッチ」又は「経皮装置」又は「経皮送達システム」は、経皮経路によって活性物質の活動的又は受動的放出を可能にする、すなわち皮膚を通じて活性物質を体循環に移すことができるいずれのシステムをも意味するものとする。
本発明の文脈では、「美容的経口及び/又は非経口使用」という表現は、経口及び/又は非経口投与される製品の使用を包含し、例えば経口投与の場合について後述するような栄養補助食品又は機能性食品の形態のこれらの製品は、審美的又は快適さの観点から、そうでなければ美容目的のため、例えば皮膚を保護し、皮膚を良い状態で維持し、皮膚の外見を改変し、特に皮膚を装飾する目的で、皮膚に効果を及ぼすものと解釈される。
【０００８】
〔グルコサミン〕
グルコサミンは、グルコース主成分とアミン官能で構成される、特に海起源のアミノ糖である。グルコサミンは低分子量の単糖であり、かつ下記式(1)又は(2)の白色の水溶性結晶の形態である。
【０００９】
【化１】
2010506893.tif 000003
【００１０】
グルコサミンは、ちょうどセルロースと同程度に天然に豊富に存在する生分解性の天然複合糖であるキチンから得られる。
キチンは、カニ、シュリンプ又はロブスター等の甲殻類の殻(外骨格)の主成分である。従って、キチンはグルコサミン単位で構成される海産ポリマーである。キチンには、全グルコサミンの60%超えがアセチル化形態で存在する。
キチンの化学式は以下のとおりである。
【００１１】
【化２】
2010506893.tif 000004
【００１２】
グルコサミン塩酸塩を得るために使用できる別起源のキチンがある。これは真菌、不完全菌類(Deuteromycetes)網、モノリアル(Monoliales)目、モニリア(Moniliaceae)科、アスペルギルス(Aspergillus)属、ニガー(niger)種のクロコウジカビ(A. niger)の発酵によって生産されるバイモマスから得られるキチンである。
商業的には、種々の塩形態：硫酸塩、塩化カリウム硫酸塩(2 KCl)、塩化ナトリウム硫酸塩(2 NaCl)、塩酸塩(HCl)、アセチル化そうでなければポリマー化(N-アセチルグルコサミン)の形態でグルコサミンを提供することができる。塩の性質は多くの場合、使用する製造方法によって決まる。しかし、最も広く使用かつ研究されている形態、グルコサミン硫酸塩及びグルコサミン塩酸塩が最も解決できる塩に相当する。
従って、本発明の文脈では、用語「グルコサミン」は、その全ての塩化、アセチル化及び/又はポリマー化形態を含むものと解釈すべきである。グルコサミンの塩化形態のうち、グルコサミン硫酸塩（glucosamine sulfate）、グルコサミン塩化カリウム硫酸塩（glucosamine sulfate potassium chloride）、グルコサミン塩化ナトリウム硫酸塩（glucosamine sulfate sodium chloride）及びグルコサミン塩酸塩（glucosamine hydrochloride）が挙げられる。
【００１３】
説明の目的のため、製造方法の例を以下に述べる。
例えば、シュリンプの殻(キチンに富む)から硫酸化形態のグルコサミンを調製できる。  この製造方法では、第1工程は、真空下、95℃で行われる塩酸の存在下での酸加水分解を含む。加水分解条件は出発原料によって決まる。
さらにこの製造方法では、引き続き反応媒体を活性炭で脱色し、ついでに吸収性有機不純物を保持する。
真空下で漸次濃縮後、加水分解後に得られたグルコサミン塩酸塩が冷却下数時間でゆっくり結晶化する。ろ過後、結晶をアルコールで洗浄する。
最後に、この製造方法の最終工程は、グルコサミン塩酸塩を水相中で硫酸カリウムにて中和することを含む。引き続き混合物をエバポレートして得た溶媒を真空下60℃で数時間乾燥させる。
シュリンプ由来のキチンの代わりに上記真菌由来のキチンを使用すると、前記キチンも加水分解を受けてグルコサミンを生成する。
【００１４】
本発明の組成物は、好ましくは1日の用量が50mg〜3g/日、好ましくは200〜2000mg/日、なおさらに好ましくは250〜1500mg/日の範囲でグルコサミン化合物を与える。
好ましくは、グルコサミンは本発明の組成物中、該組成物の総質量に対して、0.0001質量%〜80質量%、好ましくは1質量%〜50質量%、なおさらに好ましくは10質量%〜20質量%の範囲の含量で存在する。
以下の実施例1で説明するように、発明者らは、グルコサミンがコラーゲン合成を刺激し、かつCD44ヒアルロン酸受容体の発現をも刺激することを実証した。
特に、この観点では、線維芽細胞代謝アクチベーター又はコラーゲン合成アクチベーターとして及び表皮のホメオスタシスを回復するためのプロモーターとしてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用も本発明の一部である。
さらに、実施例2は真皮マトリックス構成成分の分解に対するグルコサミン硫酸塩の活性を実証し、すなわち、グルコサミンはMMP3の発現レベルを低減する。
結果として、特に、本発明は、MMP3の発現を抑制するための薬剤としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用にも向けられる。
さらに、実施例3は、線維芽細胞の細胞骨格に及ぼすグルコサミンの刺激作用を実証し、すなわち、グルコサミンは、皮膚の堅さに影響を及ぼす因子である、線維芽細胞の収縮特性を改善することができる。
本発明は、線維芽細胞の収縮性を促進するための薬剤としての美容的経口及び/又は非経口使用にも向けられる。
最後に、実施例4は、皮膚の堅さと関係がある真皮の皮膚マーカーの発現に及ぼすグルコサミン硫酸塩の作用を示す。
本発明は、特にビメンチン、デコリン、フィブロモジュリン、バイグリカン及びヒアルロンシンターゼから選択される皮膚マーカーの発現を刺激するための薬剤としての美容的経口及び/又は非経口使用にも向けられる。
これらの全ての試験は、特に、グルコサミンが細胞代謝及び皮膚の生化学的性質に作用することができ、かつおそらく皮膚の堅さにも作用し得ることを強調する。
【００１５】
従って、本発明は、表皮のホメオスタシスの回復を促進するため及び/又は真皮のマトリックス構成成分の分解を制限するため及び/又はMMP3の発現レベルを低減するため及び/又は線維芽細胞の細胞骨格を刺激するため及び/又は線維芽細胞の収縮特性を改善するため及び/又は特にビメンチン、デコリン、フィブロモジュリン、バイグリカン及びヒアルロンシンターゼから選択される皮膚マーカーの発現を高めるため、かつこのようにしてセルライト及び関連する視覚的局面をも減らし、及び/又は皮膚の堅さを維持及び/又は修復するための美容方法にも関する。前記方法は、任意にポリフェノール化合物と組み合わせてグルコサミンを含有する組成物の経口及び/又は非経口投与を含む。
1つの特定の実施形態によれば、本発明は、さらに詳細には、セルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するため及び/又はグルコサミノグルカンとプロテオグリカン、さらに詳細には小ロイシンリッチグロテオグリカン(SLRP)を合成及び/又は保護するという作用を通じて皮膚の堅さを維持及び/又は修復するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用に関する。
本発明は、皮膚の生化学的性質を維持及び/又は修復するため、特に皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性、密度及び/又は弾力性を維持及び/又は修復するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用にも関する。
皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性及び/又は弾力性の損失と関係があるこれらの障害は、特に閉経前又は閉経後の女性の成熟皮膚の特に年代的老化、外因性老化、特に光老化(photoageing)、又はホルモン性老化によって誘発され得る。
従って、経口及び/又は非経口によるグルコサミンの使用は、閉経によって誘発される皮膚障害、特に皮膚の堅さの損失の予防及び/又は治療にも有利に適し得る。
グルコサミンの経口及び/又は非経口使用は、上記皮膚障害、すなわち皮膚の生化学的性質についての損失、特に痩身及び減量ダイエット中に観察されるような、減量によって誘発される皮膚の堅さの損失、例えば支持組織のたるみ、並びに皮膚の緊張度及び弾性の損失と関係がある皮膚障害の予防及び/又は治療にも特に好適である。
従って、本発明は、皮膚障害、特に減量によって誘発される皮膚の堅さの損失を予防し、及び/又は前記損失と闘うためのグルコサミンの美容的使用にも関する。
この減量は、上述したように、痩身ダイエット中に観察され得る。従って、グルコサミンを経口及び/又は非経口摂取すると、特に過体重の女性及び痩身ダイエット中の女性は、皮膚の緊張度及び皮膚のたるんだ外観の改善を得ることができる。
このように、グルコサミンの経口及び/又は非経口使用は、この痩身又は減量ダイエットという状況下で組織のうっ血を和らげるための助けになり得る。
最後に、グルコサミンの経口及び/又は非経口使用は、上述したように、セルライトによって誘発される皮膚障害を予防し、及び/又は前記障害と闘うため、特に脂肪の結節及び「オレンジの皮の皮膚」のようなセルライトと関係がある視覚的局面の予防及び/又は治療に適する。これは、それほどでもないか又は非常に進行段階のセルライトのある女性では、グルコサミンの経口及び/又は非経口摂取が、特に大腿部上のセルライトのある皮膚で観察されるオレンジの皮の外観(脂肪の結節)を改善させるが、特に腕及び腹部上で一般に観察されるたるんだ皮膚の外観を低減し、或いは予防さえも可能である。グルコサミンを経口摂取すると、セルライトのある皮膚の触診時の痛みを軽減することもできる。
従って、本発明は、セルライトによって誘発される皮膚の痛み又は締め付け（pinching）を予防し、及び/又は前記皮膚の痛み及び締め付けと闘うための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用に及ぶ。
従って、本発明は、脂肪の結節及び「オレンジの皮の外観」のようなセルライトに関係がある視覚的局面を予防及び/又は治療するためのグルコサミンの美容的使用にも及ぶ。
さらに、本発明は、瘢痕形成を促進するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用に及ぶ。
最後に、本発明は、皮膚の老化の徴候を予防及び/又は治療するため、特に皮膚の生化学的性質を維持及び/又は修復するため、さらに詳細には皮膚の萎縮及び/又はコラーゲン合成の低下及び/又はMMP3の過剰発現と関係がある皮膚障害を予防及び/又は治療するための経口及び/又は非経口投与用組成物の調製のためのグルコサミンの使用に関する。
本発明の一実施形態によれば、少なくとも1種のポリフェノール化合物とグルコサミンを併用することができる。
【００１６】
〔ポリフェノール化合物〕
ポリフェノール化合物は、植物界で非常に広範囲に及ぶ化合物の大きいファミリー群を作る。従って、ポリフェノール化合物は、特に植物の根から果実で見られる。ポリフェノールの分類のうち、特にフラボノイド、プロアントシアニジン、リグナン、リグニン、スチルベン及びクマリンが挙げられる。そして、本発明の文脈で使用するポリフェノール化合物は、単離形態又は後述するいずれの形態でもよい。
本発明の文脈では、ポリフェノール化合物は特に緑茶、ブドウ(例えばVitis vinifera)、松、特に松樹皮、リンゴ、ブルーベリー、ホップ、グアバ、ココア及び木、例えばクリ、オーク、セイヨウトチノキ、ハシバミのエキスから選択される植物エキス由来でよい。
従って、本発明の文脈では、用語「ポリフェノール化合物」は、これらのポリフェノール化合物に富む植物エキス自体にも及ぶ。
フラボノイドがポリフェノールの主群を代表する。
カテキンポリフェノールとしては、フラボノイドの亜群を構成し、フラバノン、フラボン及びアントシアニン、及びフラボノールをも含む。
本発明の第1主題としての組成物中及び本発明の第2主題としての栄養補助食品中に存在するポリフェノール化合物は松樹皮由来である。
このような松樹皮由来のポリフェノール化合物は、ポリフェノール含量の総質量に対して、有利には5質量%〜25質量%、好ましくは10質量%〜20質量%の範囲であり得るフェノールトリマー含量を有する。同様に、該ポリフェノール化合物は、ポリフェノール化合物の総質量に対して、有利には5質量%〜25質量%、好ましくは10質量%〜20質量%の範囲であり得るポリフェノールダイマー含量を有する。
松樹皮由来のポリフェノール化合物は、ポリフェノール化合物の総質量に対して、有利には2質量%〜15質量%、例えば5質量%〜10質量%の、フェルル酸(ferrulic acid)、p-クマル酸、コーヒー酸（caffeic acid）及びプロトカテク酸(protocatechic acid)型のフェノール酸を含む。
そこで、本発明の実施に特に有利なポリフェノールは、以下の特性を有し得る。
【００１７】
2010506893.tif 000005
(1) フェルル酸+p-クマル酸+プロトカテク酸+コーヒー酸
【００１８】
従って、第1及び第2の目的に関する本発明の1つの変形実施形態によれば、松樹皮由来のポリフェノール化合物は海洋性松樹皮エキスに由来する。該海洋性松エキスは、特に論文「多様な臨床薬理学による生薬French Maritime Pine Bark Extract (PYCNOGENOL(登録商標))の精査」, P. ROHDEWALD, International Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, Vol. 40-No 4/2002(158-168)に記載されている。
本発明の1つの好ましい実施形態によれば、特に本発明の第3の主題の実施の文脈では、ポリフェノール化合物は後で定義するとおりのカテキンポリフェノールであり、かつ1つの最も特に好ましい実施形態によれば、ポリフェノール化合物は松樹皮由来のポリフェノール化合物である。
カテキンポリフェノール亜群は、通常ココア、茶、ブドウのつるとその誘導体、松(Pinus maritima)、カシュー(cachou)又は特定果実などの植物から単離され、かつ異なる重合度を有する化合物の集団を含む。
カテキン又はカテコールとしても知られる基本単位は、3,5,7,3',4'-ペンタヒドロキシ-2,3-ジヒドロ-2-フェニルクロメン(シス又はトランス形でありうる)であり；エピカテキンはその異性体であり、かつシス又はトランス形でも存在しうる。
カテキンポリフェノールは同様に、基本単位(モノマー)及びオリゴマー(又はプロアントシアニドール)又はポリマー(タンニン)の種々のイソ型を包含する。
さらに詳細には、本発明で役に立つカテキンポリフェノールは、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン及びエピガロカテキン、並びにその塩、そのエステル及び/又はモノマー若しくはオリゴマーの形態のその誘導体から成る群より選択される。
オリゴマーを使用する場合、オリゴマーは、有利には2〜14、特に2〜10個の基本単位を含む。
好ましくは、オリゴマーの重合度は5以下である。
一般にプロアントシアニドール又はプロシアニドールとして知られ、アントシアニン前駆体又はオリゴマープロアントシアニン(OPC)としても知られる化合物を特に使用する。これらのオリゴマーの一部は経口吸収後に分解してモノマーを放出する。
これらのポリフェノールを糖、例えばグルコース、ガラクトース、ラムノース又はガラクツロン酸と結合することができる。「本発明の使用のカテキンポリフェノール」という表現は、特に本文では、モノマーと、上述したように2〜14個の単位を含む種々のオリゴマーとの全ての比率の混合物を意味するものとする。
プロシアニドール又はオリゴマープロアントシアニジンのファミリーの広範なダイマー、及び本発明の文脈で特に有利なその使用のうち、プロシアンニジンB1、プロシアンニジンB2、プロシアンニジンB3そうでなければプロシアンニジンB6又はB7が挙げられる。
プロシアンニジンB1、B2及びB3は特にカカオ、リンゴ、ブルーベリー、セイヨウトチノキ、ホップ、グアバ及びハシバミの植物エキス中に存在する。従って、特に本発明の第3の主題の実施の文脈、すなわち、皮膚の生化学的性質を維持及び/又は修復するための活性薬の混合物としてのグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的使用では、松樹皮エキスに加え、これらの植物エキスの使用が好ましい。
【００１９】
本発明の組成物は、好ましくは1〜1000mg/日、好ましくは10〜150mg/日、なおさらに好ましくは30〜100mg/日の範囲の1日の用量でポリフェノール化合物を与える。
本発明の組成物は、好ましくは該組成物の総質量に対して、0.0001質量%〜50質量%、好ましくは0.05質量%〜10質量%、なおさらに好ましくは0.5質量%〜2質量%の範囲の含量でポリフェノール化合物を含む。
本発明の主題である活性薬の混合物としてのグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口及び/又は非経口使用は、皮膚の生化学的性質を維持及び/又は修復することを可能にする。
グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せは、特に皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性、密度及び弾力性を維持及び/又は修復するためである。
本発明の組合せによって予防でき、及び/又は本発明の組合せが闘うことができる皮膚障害は、年代的老化及び外因性老化、特に光老化によって誘発され得る。
本発明は、減量によって誘発される皮膚障害を予防し、及び/又は前記皮膚障害と闘うための活性薬の混合物としてのグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の美容的経口及び/又は非経口使用にも関する。この減量は、上述したように、痩身ダイエット中に観察され得る。
グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せは、特にセルライトに苦しむ女性が皮膚の緊張度の改善に加え、脂肪の結節を取り除くことをも可能にする。
従って、特に大腿部の皮膚上で観察されるオレンジの皮の外観が軽減又は予防さえされ、同様に、特に痩身ダイエットの過程の個体で腕及び腹部で一般的に観察されるたるんだ皮膚の外観が軽減され又は予防さえされる。
従って、このグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せは、この痩身又は減量ダイエットの文脈で組織のうっ血を和らげるのを助け得る。
さらに、この組合せは、セルライトの視覚的局面、例えば脂肪の結節及び「オレンジの皮」の外観と闘うことができる。従って、本発明は、セルライトと関係がある視覚的局面、例えば脂肪の結節及び「オレンジの皮」の外観を予防及び/又は治療するための、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口及び/又は非経口使用にも及ぶ。
最後に、本発明は、瘢痕形成を促進するための活性薬の混合物としてのグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口及び/又は非経口使用に関する。
さらに、本発明の主題は、皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性及び/又は弾力性の損失と関係がある皮膚の老化の徴候を予防及び/又は治療するための経口投与用組成物の調製のためのグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの使用でもある。
本発明の主題は、セルライトによって誘発される触診時の痛みを軽減するための経口及び/又は非経口投与用組成物の調製のためのグルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの使用でもある。
【００２０】
以下の実施例6及び7で説明するように、発明者らは、グルコサミンと松樹皮由来のポリフェノール化合物とを含有する組成物が、一方で、細胞の代謝の活性化の上昇及び線維芽細胞の細胞骨格上を標的とする作用によって、有利に真皮マトリックスに作用することができ、かつ他方で、皮膚の生化学的性質、特に皮膚の堅さと関係がある真皮の皮膚マーカーの発現に作用できることを実証した。
結果として、グルコサミンと松樹皮由来のポリフェノール化合物とを含有する組成物は、皮膚、特に閉経前又は閉経後の女性の成熟皮膚の伸張性、緊張度、堅さ、柔軟性及び/又は弾力性の損失(光老化によっても誘発される)と関係がある障害の予防及び/又は治療に特に好適である。
従って、この組成物は、閉経によって誘発される皮膚障害の予防及び/又は治療にも適する。
従って、本発明は、閉経によって誘発される皮膚障害の予防及び/又は治療のための、本発明のグルコサミンと松樹皮由来のポリフェノール化合物とを含有する組成物の美容的使用にも関する。
グルコサミンと松樹皮由来のポリフェノール化合物とを含有する組成物は、上記皮膚障害、すなわち、痩身及び/又は減量ダイエット中に観察されるような減量によって誘発される皮膚の生化学的性質についての損失と関係がある、例えば支持組織のたるみ、皮膚の緊張度及び弾性の損失、並びに脂肪の結節の視感度の増加の予防及び/又は治療にも特に好適である。
さらに、グルコサミンと松樹皮由来のポリフェノール化合物とを含有する組成物は、上述したようなセルライトに関係がある視覚的局面、例えば脂肪の結節及び「オレンジの皮」の外観の予防及び/又は治療に好適である。
最後に、本組成物は、瘢痕形成を促進するために好適である。この特性は、特に発明者らによる、ビメンチンの有意な増加に及ぼす実施例1の栄養補助食品の有利な作用の観察から得られる。
【００２１】
本発明の組成物は、美容組成物、皮膚科学組成物又は医薬組成物でよい。
本発明の目的では、美容組成物は、審美的及び快適な観点から、そうでなければ美的目的のため、例えば、皮膚を保護し、皮膚を良い状態で維持し、皮膚の外観を改変し、特に皮膚を装飾するという観点で、皮膚に作用を及ぼすことができる組成物を表す。美容組成物は、栄養製品の形態でよい。
本発明の組成物は、経口投与及び/又は非経口投与されるかに左右されるが、関連する投与方法で常用されるいずれのガレヌス形態(galenical form)でもよい。
経口投与の場合、栄養補助食品又は機能性食品のタイプの製剤、そうでなければ医薬組成物のタイプの製剤で本発明の組成物を使用し得る。
該組成物は、特に軟カプセル剤又はゼラチンカプセル剤、フープケースド(hoop-cased)ゼラチンカプセル剤、ゲル剤、乾燥若しくは液状エマルション、錠剤、希釈用の散剤又は経口薬瓶（oral phial）の形態でよく、或いは当業者に既知のいずれの他の形態でもよい。
本発明は、任意に適切な製剤用賦形剤、例えば色素、甘味料、充填剤、結合剤、保存剤などを含有し得る。
1つの好ましい実施形態によれば、機能性食品、例えば食物バー、強化食品、例えば油、マーガリン、圧縮粉末、又は線維を製造する目的で、そうでなければ飲料中のエマルションの形態で活性成分を食物マトリックス中に組み入れることができる。
本組成物は、EC Directive 2002/46に記載されているような、欧州にて栄養補助食品で許可されている抗酸化剤、ビタミン又はミネラルを含んでもよい。
非経口投与の場合、本発明の組成物は、注射溶液又はパッチ又は経皮送達システムの形態でよい。
本発明の1つの有利な実施形態によれば、グルコサミンを単独で使用し、或いは任意に少なくとも1種のポリフェノール化合物と併用してよい組成物は、少なくとも1種のアンチエイジング栄養活性薬、少なくとも1種の光保護栄養活性薬、少なくとも1種の閉経期栄養活性薬及び/又は少なくとも1種の痩身栄養活性薬をも含む。
アンチエイジング栄養活性薬のうち、特に食物性抗酸化剤、フリーラジカル補足特性のある栄養素及び内因性抗酸化酵素の補因子：ビタミンA、C、E、カロテノイド、例えばリコピン、キサントフィル、イソフラボン、特定ミネラル、例えば亜鉛、銅、マグネシウム又はセレン、リポ酸、補酵素Q10、スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)或いはタウリンが挙げられる。アンチエイジング活性薬のうち、特に植物起源、アロエベラ、天然又は加水分解した海産コラーゲンの脂質、Ω-3脂肪酸、Ω-6脂肪酸(例えばγ-リノレン酸)に富む植物油又は海産油などから抽出される不鹸化フラクションが挙げられる。
光保護栄養活性薬のうち、特に以下のものが挙げられる：抗酸化剤及びフリーラジカルスカベンジャー：ビタミンA、C及びE、カロテノイド、キサントフィル、特定ミネラル、例えば亜鉛、銅、マグネシウム又はセレン、補酵素Q10、スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)、及びプロバイオティクス。
以下の水分補給そうでなけれな免疫調節特性を有する栄養成分も挙げられる：プロバイオティクス、ポリポディウム・ロイコトモス(Polypodium leucotomos)のエキス、Ω-3脂肪酸、Ω-6脂肪酸、例えばγ-リノレン酸に富む植物油又は海産油。
【００２２】
本発明の文脈では、グルコサミンを松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物と併用する場合、この組合せを含む組成物は、追加として、前記松樹皮由来のポリフェノール化合物以外のポリフェノール化合物を含んでもよい。
閉経期の臨床徴候(例えば、ホットフラッシュ等)に活性な栄養活性薬のうち、特にイソフラボン、リグナン、DHEA、ヤムイモのエキス、セージのエキス、ホップのエキス、カルシウム、マグネシウム、タンパク質加水分解産物、及びΩ-3脂肪酸に富む植物油又は海産油。
痩身分野で使用する栄養成分のうち、特に以下のものが挙げられる：緑茶、特に抽出形態、白茶、黒茶、灰茶(grey tea)、ルイボス(赤茶としても知られる)、メイト(mate)、普通のセイヨウトチノキ、コラ、カフェイン、テオブロミン、シネフリン、ブロメライン、マオウ、ダイダイ(Citrus aurantium)、カルシウム、フーディア(hoodia)、ガルシニア(garcinia)、キトサン、植物繊維(サボテン、リンゴ、パイナップル等)、ウイキョウ、クロフサスグリ、セイヨウナツユキソウ及びクロハツカダイコン(black radish)。
緑茶エキスは、そのフラボノイド、さらに詳細には特に抗酸化特性に関係するカテキン及びエピガロカテキン(EGCG)の天然含量のため特に有利である。
1つの特定実施形態によれば、本発明は、グルコサミンと、松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物と、緑茶エキスとの組合せを含んでなる経口投与用組成物に関する。1つのなおさらに特定の実施形態によれば、この同一組成物は、例えば炭酸カルシウム、海起源のカルシウム、乳酸カルシウム又はクエン酸カルシウムの形態でカルシウムをも含む。
別の実施形態では、本発明は、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物との組合せ、かつ任意にカルシウムを含んでもよい組合せの、皮膚の生化学的性質を維持及び/又は修復するため及び/又はセルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するための活性薬の混合物としての美容的経口及び/又は非経口使用にも関する。
これらの2つの実施形態では、緑茶は、該組成物中に50mg〜3g、特に300〜800mgの範囲の含量で存在し、この組成物は好ましくは1日1用量の割合で投与される。
さらにこれらの2つの実施形態では、カルシウムは、該組成物中に300mg〜2g、好ましくは300mg〜1gの範囲の含量で存在し、好ましくは1日1用量の割合で投与される。
同時、個別又は逐次使用のためのキット又は組合せ製品として、第1組成物中のグルコサミンと、第2組成物中の松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物とを含んでなる本発明の栄養補助食品は、これらの2つの組成物が例えば上述した形態から選択される同一形態又は異なる形態であるように調合され得る。このようなキットは、特に1つの同じ包装で提供され、或いは2つの別個の包装、すなわち各組成物について1つで提供され得る。
以下の実施例で本発明を説明する。
【００２３】
実施例１：コラーゲン合成及びCD44-in vitro発現に対するグルコサミンの作用の皮膚外植片モデル
この研究の目的は、皮膚の老化の主な徴候である皮膚萎縮の病因に関与する可能性がある表皮マーカー(CD44)、及びコラーゲン合成に対するグルコサミン(硫酸化形態)の作用を実証することだった。
このため、ヒト皮膚をin vivo(50〜60歳の個体)に近い代謝条件下で生かしておくことができる培養方法を用いた。水溶液のグルコサミンを培養基に血漿中濃度(5μM)で添加することによって、経口及び/又は非経口投与をシミュレートすることができる。
上皮レベルで、表皮ヒアルロン酸受容体を調査した(抗-CD44抗体)。真皮レベルで、線維芽細胞によるコラーゲン新合成を(化学分析で)評価した。
【００２４】
〔材料と方法〕
・ヒト皮膚を生かしておく
閉経期の女性(50〜60歳の女性個体から8人の異なるドナー)から形成外科(乳房又は腹部形成術)後に皮膚断片を得た。培養ウェル上に懸濁しているインサート内に皮膚断片を置く。ウェルの底に培養基を加え、多孔質膜(12μm)を用いて2つの区画間を緩徐に拡散させて培養基を通す。
D0からD10まで、皮膚断片の培養基にグルコサミンを毎日添加した。CD44分析のため、一連の皮膚サンプルをD4に採取した。コラーゲン合成を分析するため、D10に2番目の一連の皮膚サンプルを採取した。
・分析
（上皮内のヒアルロン酸受容体(CD44)の免疫組織化学的実証）
上皮内で、80-95kDの膜貫通糖タンパク質、CD44(H-CAM、Novocastra、1/300に希釈)、ヒアルロン酸受容体を実証することができる。CSAキット(DAKO)を用いて免疫検出を行い、AEC(3-アミノ-9-エチルカルバゾール)を用いて赤色で可視化した。
半定量スコアは免疫標識の強度を特定することを可能にした(スコア0〜4、負〜強)。スコアを用いて以下のようにトポグラフィーをも特定した：
・スコア0：無標識、
・スコア1：基底層の標識、
・スコア2：基底層と上皮の1/3の標識、
・スコア3：基底層と粘膜層の2/3の標識、
・スコア4：上皮全体の標識。
（コラーゲンの生化学的分析）
皮膚断片を生かして10日後、ペプシンを含有する0.5Mの酢酸溶液中+4℃で一晩、皮膚断片を酵素消化させる。この方法は、新しく合成されたコラーゲンの回収を可能にする。ポッター(Potter)を用いて粉砕後、分光比色分析法を用いて540nmでコラーゲンの量(μg/ml)を調べた：酸に溶けるコラーゲンは、色素シリウス(Sirius)レッド(Sircol Collagen Assay, Interchim)の特異的結合後に検出される。
種々の結果を比較するため、コラーゲンの量をサンプルの全タンパク質の量に関係づける。分光光度法で562nmにてタンパク質濃度アッセイを行った(BCAアッセイ、Pierce)。最終結果をコラーゲン(μg)/タンパク質(mg)で表す。
【００２５】
〔結果〕
・上皮内のヒアルロン酸受容体(CD44)の免疫組織化学的実証
結果を下表1に示す。グルコサミンの存在下では、CD44標識の強度の有意な増加が記録され、コントロール皮膚の2.7に対して3.4のスコアである(p=0.02)。
表1：上皮ヒアルロン酸受容体、CD44の免疫組織化学分析(標識トポグラフィー及び強度についての半定量平均スコア)
【００２６】
2010506893.tif 000006
*:コントロール皮膚と比較して統計的に有意な差異(対応スチューデントの検定、p<0.05)
【００２７】
・コラーゲンの生化学分析
コラーゲン合成は、コントロール皮膚（合成率は177.5μg/ml）と比較してグルコサミンの存在下では282μg/mlと有意に増加する(p=0.031)。
〔結論〕
この試験条件下では、5μMで投与されたグルコサミンは、i)真皮の線維芽細胞によるコラーゲン合成及び2)CD44ヒアルロン酸受容体の発現をも有意に刺激する。従って、グルコサミンは、線維芽細胞代謝アクチベーター及び表皮のホメオスタシスの回復を促進するための薬剤であると思われる。これらのパラメーターは一般的に加齢によって損なわれる。
【００２８】
実施例２：グルコサミンの抗分解活性の評価
この試験の目的は、真皮の巨大分子の分解に対する活性(抗-MMP活性)及び巨大分子の収縮特性(細胞骨格の作用)に及ぼすグルコサミン硫酸塩の作用を評価することである。三次元コラーゲンゲルの退縮速度を測定することによって、線維芽細胞の力学的性質に及ぼす作用を評価する。
〔材料と方法〕
（線維芽細胞培養）
正常な若いドナー由来の皮膚外植片からの成長で収穫されたヒト線維芽細胞を日常的に10%のウシ胎児血清(FCS)、アスコルビン酸(50μg/ml)、ペニシリン-ストレプトマイシン(100U/ml)を含有するDMEM（この報告では、以後DMEM-FCSと称する）内で培養する。サブコンフルエントな培養をトリプシン処理し、かつ皿を1つを3つに分割することによって、培養でヒト線維芽細胞を増幅させる。継代14まで培養を使用する。培養を定期的にマイコプラズマの非存在について試験する。
（溶液の調製と滅菌）
グルコサミン硫酸塩を(C6H14N05)2S04・2KCl(グルコサミン・SO4 力価：74%)の形態(ブランドBioiberica、コードF0379、バッチ4/0001)で与える。13.6mg/蒸留水(ml)の原液をAcrodiscによるろ過で滅菌し、-20℃で保存する。
【００２９】
2.1.  細胞毒性
線維芽細胞を24-ウェルのマルチウェル中にDMEM-FCS内25又は50×103細胞/ウェルにて接種する。付着の6時間後、試験すべき活性薬の漸次希釈20μlを培養に添加する。接触の24時間後、培地と活性薬を再び満たす。培養の48時間後、培地を除去し、細胞層を生理食塩水で2回すすぐ。「Gemini」蛍光光度計でビスベンズイミド試薬を用いて蛍光定量法によりDNAを測定することによって細胞数を決定する。培養を三通り調製し、各培養について二通り測定を行う。コントロール培養は溶媒のみを受ける。
（グルコサミン硫酸塩）
グルコサミン硫酸塩の毒性を0.5、1、5、10、20及び40×血漿中濃度、すなわち3.4、6.8、34、68、136及び272μg/培養基(ml)で試験する。
【００３０】
2010506893.tif 000007
x = 血漿中濃度
【００３１】
血漿中濃度の40倍に相当する濃度でさえ、グルコサミン硫酸塩では細胞毒性作用は観察されない。34μg/mlの濃度で細胞数の増加が観察され(p=0.04、スチューデントの検定)、線維芽細胞の増殖速度に対するわずかな刺激作用を示唆している。
2.2.  MMPの活性に対するグルコサミン硫酸塩の作用(プラスチック上の単層内のヒト真皮線維芽細胞のmRNAモデル)
1.  全RNAの培養の調製と精製
線維芽細胞を2×105細胞/6cmの皿の割合でDMEM-FCSに接種する。付着の18時間後、培養基を以下の成分を含有するDMEM-FCSで再び満たす。
a)グルコサミン硫酸塩のみ
−[血漿中濃度]        2×(n=2)
5×(n＝2)
10×(n＝2)
−コントロール          (n=3)
2.  RT-PCRによる基準RNA(28S及びGAPDH)と特異的メッセンジャーRNAの測定
特異的mRNA測定を行うために使用する予定の溶液中に存在するRNAの総量を28SリボソームRNAを測定することによって決定する。RNA溶液を等分し、RT-PCRで特異的mRNAを分析するまで-80℃で凍結させる。mRNAの結果を28Sの単位当たりの任意の単位(AU)で表す。2又は3種の別個の培養について三通りの測定を行う。
・MMP3：プロテオグリカン並びにMMP1の他の細胞外マトリックス構成成分及びアクチベーターの分解の原因であるストロメライシン1
【００３２】
2010506893.tif 000008
【００３３】
MMPS mRNAのレベルの有意な減少がグルコサミン硫酸塩で誘導される(p<0.005)。
結論：グルコサミンは、MMP3の発現レベルを減らす。これは、真皮マトリックス構成成分、特にプロテオグリカン及びグリコサミノグリカンの分解に対する活性を示している。これらの結果は、グルコサミンが真皮の巨大分子（その損傷は、皮膚の堅さの損失、或いはセルライトによって誘発される皮膚障害の悪化に寄与する）を保護できる薬剤であることを実証する。
【００３４】
実施例３：線維芽細胞の収縮特性に及ぼすグルコサミン硫酸塩の作用
精製した天然コラーゲンの無菌溶液を線維芽細胞、DMEM-FCS培地及び試験生成物の懸濁液と細菌培養皿内で混合する。混合物を37℃にすると、コラーゲンの重合及び三次元コラーゲンゲルの形成となり、線維芽細胞をトラップし、かつ培養基内で浮遊する。細胞がコラーゲン繊維に付着し、かつ線維芽細胞の細胞骨格の収縮特性下で、ゲルは徐々に退縮する。このゲルは一般に「退縮性コラーゲンゲル(Retracting Collagen Gel)」又はRCGと称する。論文（Charles A. Lambert et al.“インターロイキン-1ループは、三次元コラーゲンゲル内の応力緩和によりヒト皮膚線維芽細胞内で誘発されるが、マトリックスメタロプロテイナーゼ1の上方制御に関与しない(An Interleukin-1 loop is induced in human skin fibroblasts upon stress relaxation in a three-dimensional collagen gel but is not involved in the up-regulation of Matrix Metalloproteinase 1)”, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 273, No. 36, pp. 23143-23149, 1998）は、このようなコラーゲンゲルの使用について述べている。
a-  25,000の線維芽細胞を含有する第1系列のゲルを調製した。三通りの血漿中濃度でグルコサミンを試験した。コントロール培養は溶媒のみを受けた。ゲル径の測定は、コントロールについて18時間で21mmの直径の減少及びグルコサミンでは同時間で23mmの直径の減少を示す。このわずかな差異は、培養50時間まで、時間の関数として減少する。
b-  これらの結果は、発明者らに、該プロセスを低速にするため線維芽細胞の数をわずかに減らしして(20,000)、血漿中濃度の2倍、5倍及び10倍のグルコサミン硫酸塩のみで同タイプの実験を再び行うことを促した。46時間で19mmというゲルの直径の減少が観察されるので、退縮の速度は実際に遅くなる。この場合もやはり、試験した3種のグルコサミン濃度でわずかに大きい退縮(46時間で22mm)が観察される。
結論：図1は、グルコサミン硫酸塩の存在下で観察される線維芽細胞の退縮、ひいては収縮特性の刺激を示す。これらの結果は線維芽細胞の細胞骨格及び代謝の刺激に対するグルコサミンの活性を示し、結果として、グルコサミンは皮膚の堅さに対し、かつセルライトによって誘発される皮膚障害にもポジティブに作用できる薬剤であることを実証する。
【００３５】
実施例４：皮膚の堅さと関係がある真皮の皮膚マーカーの発現に及ぼすグルコサミン硫酸塩の作用
1.  プロトコル
制限的ランダム化モノセントリック二重盲検試験対プラシーボ。50〜56歳の15人の女性に8週間、栄養補助食品として、プラシーボ(n=7)又はグルコサミン硫酸塩(n=8)（250mgのグルコサミンに等価）(GLU)を与えた。
補給の開始前(T0)に、直径3mmの皮膚バイオプシー(腕の内面)を採り、8週間で終了した(T8)。
皮膚サンプルに含まれる全RNAを抽出し、Ambion Ribo Pureキットを用いて精製した。   以前に開示されている通りにRT-PCRで特異的真皮マーカーの分析を行った(Nusgens et al, JID, 116: 853-859, 2001)。28S rRNAの量に関する任意の単位で全結果を表す。
T0では、プラシーボ群とGLUT群の間で、各mRNAの値の均一性を検証した(ANOVA試験及びTukey多重比較試験)。
次に、各ボランティアについてT8及びT0におけるmRNAの個々の発現を比較することによって、補給(プラシーボ又はGLU)の効果を分析した。そしてT8-T0比を計算した。2群の各比の平均をスチューデントの検定を用いて対のサンプルについて比較した。
2.  結果
下表2は、プラシーボ群とGLU群の補給前(T0)と補給8週間後(T8)のmRNAレベルの個々の平均を要約する。
【００３６】
表2
2010506893.tif 000009
【００３７】
プラシーボによって得られた結果は有意でないが、グルコサミンによって得られた結果は有意であることが分かる。
3.  結論
グルコサミン(GLU)は以下の成分の発現を有意に高める。
−細胞骨格の構成成分であるビメンチン。
−SLP(小ロイシンリッチタンパク質)ファミリーに属するデコリン、フィブロモジュリン及びバイグリカン。これらのマーカーは皮膚の構造の構築組織化に関与する。
−ヒアルロン酸の合成に関与するヒアルロンシンターゼ。ヒアルロン酸の水分補給特性は当業者に既知である。
プラシーボはこれらの種々のマーカーに何ら作用しない。
これらの結果は、グルコサミンが真皮の構造的巨大分子をコードする特異的遺伝子の発現に有益な作用を及ぼすことを示す。この作用は、皮膚の堅さを維持及び/又は修復するため並びに真皮構築の有害な変化によって特徴づけられるセルライトを予防及び/又は治療するために特に有益であることが分かる。
【００３８】
実施例５：栄養補助食品A1を摂取することによって誘発される標的mRNAの定量化に関する探索臨床試験
（栄養補助食品A1の処方）
栄養補助食品A1は、好ましくは痩身ダイエット中及び減量後に皮膚の堅さの損失に直面している個体のために意図される。緑茶とカルシウムは、それぞれ痩身ダイエットのアジュバントとして又は脂質代謝に関与するアジュバントとして承認されている成分である。
−ガレヌス形態(Galenic form)：サシェ剤(sachet)
−用量：              1サシェ剤/日
【００３９】
表3：栄養補助食品A1の処方
【００４０】
2010506893.tif 000010
* グルコサミン硫酸塩等価
【００４１】
（臨床試験の目的）
栄養補助食品A1を2ヶ月間摂取後、皮膚の生化学的性質の変化と関係があり得る皮膚のバイオマーカーに及ぼす栄養補助食品A1の作用をプラシーボに対して評価すること。
（方法論）
−50歳を超えるが、ホルモン補充療法を受けておらず、かつ腕の内面上の皮膚の堅さの欠如を示している、2年より長い閉経期の16人の女性(栄養補助食品A1の群が7/プラシーボ群が9)に関する2ヶ月の研究。
−全mRNAの抽出のためT0とT2月で腕から3mmのバイオプシーを採る。
−皮膚の生化学的性質の変化と関係があり得るタンパク質をコードする特異的mRNAを以下のプロトコルに従って定量化する。
（RT-PCRの目的のためのmRNAの調製）
2つのバイオプシーを合わせて液体窒素(Mikro Dismenbrator S, B. Braun Biotech International)内で粉砕してから塩化セシウム勾配超遠心分離で全RNAを抽出かつ精製した。260nmでOD(光学密度)を測定することによって(ナノドロップ)、精製されたRNAの量を評価し、かつOD260/OD280比を計算することによって、抽出されたRNAの品質を検証した。また、BioAnalyzer(Agilent)を利用して、抽出されたRNAの完全性をも検証した。RNAの原液を調製して、1.25ng/μlに近い濃度を得た。
（皮膚のバイオマーカーの量の評価）
該RNA濃度を28SリボソームRNAの量に対して標準化した。既知濃度の、かつ探求しているRNAと同時に共転写及び共増幅されるであろう合成RNAから成る内部標準を各反応管に添加することによって、RT-PCR法を定量的に行った。各ボランティアのT0及びT2に対応するサンプルを同系列内で分析し、同じポリアクリルアミドゲル上に載せ、かつ移動した。各群のT0とT2における値を比較することによって、対のサンプルについてスチューデントの片側検定を利用して統計解析を行った。比率T2/T0=1.00は、2つの値が比較できることを示す。比率T2/T0>1.00は、試験した転写の増加を反映する。逆に、比率T2/T0<1.00は試験したmRNAの発現の減少を反映する。
（標的mRNAの結果/定量化）
【００４２】
表4：栄養補助食品A1(対プラシーボ)摂取後の標的遺伝子発現
【００４３】
2010506893.tif 000011
VIM：ビメンチン；BMP1」骨形態形成タンパク質1；DEC：デコリン；LUM：ルミカン；FIBMOD：フィブロモジュリン；ACTIN：アクチン。
【００４４】
−栄養補助食品A1の摂取後、ビメンチンをコードするmRNAの濃度は有意に増加するが(p=0.025)、プラシーボでは有意な差異がない。ビメンチンは、真皮の細胞の細胞骨格の一部を構成するタンパク質である。2ヶ月間の栄養補助食品A1の摂取は、細胞骨格を構成する別のタンパク質であるアクチンをコードするmRNAの統計的に有意な増加をもたらす(p=0.0005)。プラシーボはいずれのマーカーにも作用しない。
用語「細胞骨格」は、細胞の全ての動き、例えば、オルガネラの細胞内輸送又は細胞の形状の維持に関与する動的細胞外繊維のネットワークを意味する。細胞骨格の要素は年齢と共に減少し、細胞の合成的代謝の遅速化を誘発する。
間充組織起源の細胞、例えば線維芽細胞及び上皮細胞では、ビメンチンが中間径フィラメントの主要構造化合物である。この細胞骨格ネットワークは、力学的細胞機能に直接関与する。特にビメンチンの低発現は瘢痕形成プロセスに影響を及ぼす。ビメンチン欠失細胞は、特に弱い力学的安定性並びに低い運動性及び低い収縮特性をも示す。さらに、ビメンチンは、限局性複合体の空間的組織化、アクチン依存性ミクロフィラメントの組織化及び細胞外マトリックスとの相互作用にも関係する。これらの相互作用、例えば細胞の移動、増殖及び収縮の制御に対する作用、そうでなければ代謝表現型の制御に対する作用を有する当該相互作用のいくつかは皮膚の老化によって直接影響を受ける。
アクチンは、細胞骨格内で細胞の力学的機能に関与するアクトミオシン張力繊維及び皮質アクチンポリマーの形成に関係する細胞骨格タンパク質である。
従って、アクチン及びビメンチンをコードするmRNAの増加は、栄養補助食品A1が線維芽細胞の細胞骨格に好ましく作用することを示している。それは細胞の活性増加の徴候である。
−栄養補助食品A1の摂取後、デコリン遺伝子は有意に(p=0.02)過剰発現されるが、プラシーボの摂取後にはこの遺伝子の発現は変化しない。小ロイシンリッチプロテオグリカン(SLRP)ファミリーに属するデコリンは、小さいグリコシル化タンパク質(プロテオグリカン)である。デコリンは、全真皮内に存在するが、表皮には存在しない。デコリンは線維芽細胞によって合成かつ分泌される。さらに、該栄養補助食品を摂取した後、他の小ロイシンリッチプロテオグリカン(SLRP)をコードする遺伝子、特にルミカン(p=0.004)の遺伝子及びフィブロモジュリン(p=0.03)の遺伝子の有意な増加にも気づく。これらのマーカーは、皮膚の構造の構築組織化に関与する。
最後に、栄養補助食品A1の摂取は、BMP-1(骨形態形成タンパク質)をコードするmRNAの発現の統計的に有意な増加をもたらすが(p=0.03)、この効果はプラシーボでは見られない。BMP-1は、プロコラーゲンI及びIIを切断することによって、コラーゲン原繊維内で組み立てることができる成熟モノマーを形成する酵素である。BMP-1酵素とADAMTS-2の複合作用によって、プロコラーゲンプロペプチドが分解され、引き続きそれらが自己重合して、力学的により強いコラーゲン繊維及び繊維束を形成する。これらの繊維の大きさ及びその規則性は、デコリン、ルミカン及びフィブロモジュリンによって制御される。さらに、BMP-1酵素は、プロバイグリカンからバイグリカンへの変換に直接関与する。
SLRP及びBMP-1についての結果は、栄養補助食品A1がコラーゲン繊維の構造に及ぼす安定化作用を有するので、真皮の細胞外マトリックスの品質の改善に寄与するようであることを示す。
これらの2つの結果、一方でビメンチンとアクチンの研究によって明らかにされた細胞骨格に及ぼす作用、並びに、他方でデコリンとBMP-1の研究によって明らかにされたコラーゲン繊維に及ぼす作用のため、栄養補助食品A1は真皮に対して全体的かつ補足的作用を示す。
【００４５】
実施例６：痩身ダイエット後である過体重女性の皮膚特性に及ぼす栄養補助食品A1の作用を評価することを目的とする臨床試験
（栄養補助食品A1の処方）
栄養補助食品A1は、好ましくは痩身ダイエット後及び減量後に皮膚の堅さの損失に直面している個体のために意図される。緑茶とカルシウムは、それぞれ痩身ダイエットのアジュバントとして又は脂質代謝に関与するアジュバントとして承認されている成分である。
−ガレヌス形態：サシェ剤
−用量：1サシェ剤/日
（臨床試験の目的）
この試験の最も重要な目的は、臨床スコアによって得られたデータ及びボランティアの自己評価に基づき、女性の痩身ダイエットの過程の皮膚特性に及ぼす栄養補助食品A1の作用を評価することである。
（方法論）
・臨床期
−栄養士によって、私立診療所で、痩身ダイエットという状況でモニターされている25〜45歳の40人の女性(プラシーボ：n=19、A1：n=21)についての3ヶ月の研究。
−T0及びT3月で皮膚科学者が臨床スコアを評価する。この臨床スコアは、弛緩、萎縮、しわくちゃの外観及び下垂症についてのスコアの合計の結果であり、0(無し)〜6(多量)の尺度で評価する。このスコアは皮膚の緊張度を反映する。
−各患者について、T0及びT3月で0(無し)〜9(非常に大きい)の尺度で自己評価を行った。
（結果）
臨床スコア：3ヶ月後、臨床スコアの低減は、A1群でプラシーボ群より統計的に大きい(p=0.04)。臨床スコアはT0では類似していることに留意すべきである。この結果は、栄養補助食品A1の摂取後の皮膚の生化学的性質の改善を支持する。
自己評価：ボランティアが行った採点は、A1を12週間摂取した後、統計的に有意な変化を示す。
−触診時(p=0.04)及び観察後(p=0.001)の大腿部上のオレンジの皮の外観の減少。
−腕(p=0.04)及び腹部(p=0.04)上のたるんだ皮膚の外観の減少。
−大腿部の締め付けに応じる痛みの軽減。
これらの2つの結果は、皮膚の性質に及ぼす栄養補助食品A1の有利な効果、すなわち皮膚の緊張度の改善及び脂肪結節の除去を示し、セルライトの特有の徴候を改善する。
【００４６】
実施例７：皮膚の生化学的性質と関係がある真皮の皮膚マーカーの発現に及ぼすグルコサミン硫酸塩＋ポリフェノール(海洋性松樹皮エキス)の作用
1.  プロトコル
制限的ランダム化モノセントリック二重盲検試験対プラシーボ。50〜65歳の15人の女性に8週間、栄養補助食品として、プラシーボ(n=7)又はグルコサミン硫酸塩(250mgのグルコサミンに等価)と海洋性松樹皮エキス(30mg；n=8、GLU 02)を与えた。
補給の開始前(T0)に、直径3mmの皮膚バイオプシー(腕の内面)を採り、8週間で終了した(T8)。
皮膚サンプルに含まれる全RNAを抽出し、Ambion Ribo Pureキットを用いて精製した。   以前に開示されている通りにRT-PCRで特異的真皮マーカーの分析を行った(Nusgens et al, JID, 116: 853-859, 2001)。28S rRNAの量に関する任意の単位で全結果を表す。
T0では、プラシーボ群とGLUT群の間で、各mRNAの値の均一性を検証した(ANOVA試験及びTukey多重比較試験)。
次に、各ボランティアについてT8及びT0におけるmRNAの個々の発現を比較することによって、補給(プラシーボ又はGLU 02)の効果を分析した。そしてT8/T0比を計算した。2群の各比の平均をスチューデントの検定を用いて対のサンプルについて比較した。
2.  結果
下表5は、プラシーボ群とGLU 02群の補給前(T0)と補給8週間後(T8)のmRNAレベルの個々の平均を要約する。
【００４７】
表5
2010506893.tif 000012
【００４８】
プラシーボで得られた結果は有意でないが、グルコサミン＋ポリフェノールの組合せで得られた結果は有意であることが分かる。
3.  結論
グルコサミン＋ポリフェノールの組合せは以下の成分の発現を有意に増やす。
−真皮構築の主要構成成分であるコラーゲンI型及びIII型、
−細胞骨格の構成成分であるビメンチン及びアクチン、
−全てSLRP(小ロイシンリッチタンパク質)ファミリーのメンバーであるデコリン、フィブロモジュリン、ルミカン及びバイグリカン。これらのマーカーは皮膚の構造の構築組織化に関与する。
プラシーボはこれらの種々のマーカーに何ら作用を及ぼさない。
これらの結果は、グルコサミンと海洋性松樹皮から抽出したポリフェノールとの組合せが、真皮の構造巨大分子をコードする特異的遺伝子の発現に有利な作用を及ぼすことを示す。この作用は、皮膚の堅さを維持及び/又は修復するため並びにセルライト（真皮構築の有害な変化によって特徴づけられる現象）を予防及び/又は治療するためといった皮膚の生化学的性質を維持及び/又は修復するために特に有利であることが分かる。
【００４９】
実施例８：ゲルカプセル形態(魚類ゼラチン)
2010506893.tif 000013
【００５０】
実施例９：飲料形態
2010506893.tif 000014
【００５１】
実施例１０：希釈用散剤形態(サシェ剤)
2010506893.tif 000015
【００５２】
薬量は1日当たり2サシェ剤である。
【００５３】
実施例１１：カプセル形態(魚類ゼラチン)
2010506893.tif 000016
【００５４】
薬量は1日当たり2〜4のゲルカプセル剤である。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】グルコサミン硫酸塩の存在下で観察される線維芽細胞の退縮を示す。
【図１】
2010506893.tif 000017
【手続補正書】
【提出日】平成21年4月21日(2009.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するため及び/又は皮膚の堅さを維持及び/又は修復するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用。
【請求項２】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失が年代的老化によって誘発されることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項３】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失がホルモン性老化によって誘発されることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項４】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失が外因性老化によって誘発されるることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項５】
皮膚の堅さを修復するためであり、皮膚の堅さの損失が減量によって誘発されることを特徴とする請求項1に記載の使用。
【請求項６】
セルライトによって誘発される皮膚の痛み若しくは締め付けを予防し、及び/又は前記痛み若しくは締め付けと闘うためであることを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７】
セルライトと関係がある視覚的局面を予防及び/又は治療するためであることを特徴とする請求項1〜6のいずれか1項に記載の使用。
【請求項８】
前記グルコサミンが、コラーゲン合成のアクチベーターとして及び/又は表皮のホメオスタシスの回復を促進するための薬剤として及び/又はMMP3の発現を抑制するための薬剤として及び/又は線維芽細胞の収縮性を促進するため及び/又は皮膚マーカーの発現を刺激するための薬剤として作用することを特徴とする請求項1〜7のいずれか1項に記載の使用。
【請求項９】
閉経期によって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するための活性薬としてのグルコサミンの美容的経口及び/又は非経口使用。
【請求項１０】
前記グルコサミンをポリフェノール化合物と併用することを特徴とする請求項1〜9のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１１】
前記ポリフェノール化合物が、緑茶、ブドウ、松、及び木のエキスから選択される植物エキス由来であることを特徴とする請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
前記ポリフェノール化合物がプロアントシアニジン、フラボノイド、リグナン、リグニン、スチルベン及びクマリンの形態であることを特徴とする請求項10又は11に記載の使用。
【請求項１３】
前記ポリフェノール化合物が、モノマー又はオリゴマーの形態の、カテキン、エピカテキン、ガラクトカテキン及びエピガラクトカテキンから成る群より選択されるカテキンポリフェノールであることを特徴とする請求項12に記載の使用。
【請求項１４】
皮膚の生体力学的性質を維持及び/又は修復するため及び/又はセルライトによって誘発される皮膚障害を予防及び/又は治療するための活性薬の混合物としての、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口使用。
【請求項１５】
瘢痕形成を促進するための活性薬の混合物としての、グルコサミンと少なくとも1種のポリフェノール化合物の組合せの美容的経口及び/又は非経口使用。
【請求項１６】
前記グルコサミンが、塩の形態、アセチル化形態及び/又はポリマー形態であることを特徴とする請求項1〜15のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１７】
前記グルコサミンが、グルコサミン硫酸塩、グルコサミン塩化カリウム硫酸塩、グルコサミン塩化ナトリウム硫酸塩及びグルコサミン塩酸塩から選択される塩の形態であることを特徴とする請求項1〜16のいずれか1項に記載の使用。
【請求項１８】
表皮のホメオスタシスの回復を促進するため及び/又は真皮のマトリックス構成成分の分解を制限するため及び/又はMMP3の発現レベルを低減するため及び/又は線維芽細胞の細胞骨格を刺激するため及び/又は線維芽細胞の収縮特性を改善するため及び/又は皮膚マーカーの発現を高めるため、かつこのようにしてセルライト及び関連する視覚的局面をも減らし、及び/又は皮膚の堅さを維持及び/又は修復するための美容方法であって、任意にポリフェノール化合物と組み合わせてグルコサミンを含有する組成物の経口及び/又は非経口投与を含んでなる方法。
【請求項１９】
グルコサミンと、松樹皮由来の少なくとも1種のポリフェノール化合物との組合せを含んでなる経口投与用組成物。
【請求項２０】
前記グルコサミンが、請求項16及び17のいずれか1項の定義どおりである、請求項19に記載の組成物。
【請求項２１】
前記松樹皮由来のポリフェノール化合物が、前記ポリフェノール組成物の総質量に対して、5質量%〜25質量%の範囲であり得るフェノールトリマー含量を有する、請求項19及び20のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記松樹皮由来のポリフェノール組成物が、前記ポリフェノール化合物の総質量に対して、5質量%〜25質量%の範囲であり得るポリフェノールダイマー含量を有する、請求項19〜21のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記松樹皮由来のポリフェノール化合物が、該ポリフェノール化合物の総質量に対して、2質量%〜15質量%の、フェルル酸、p-クマル酸、コーヒー酸及びプロトカテク酸型のフェノール酸を有する、請求項19〜22のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記グルコサミンが、前記組成物の総質量に対して、0.0001質量%〜80質量%の範囲の含量で存在する、請求項19〜23のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項２５】
少なくとも1種のアンチエイジング栄養活性薬、少なくとも1種の光保護栄養活性薬、少なくとも1種の閉経期栄養活性薬及び/又は少なくとも1種の痩身栄養活性薬をも含むことを特徴とする請求項19〜24のいずれか1項に記載の組成物。
【国際調査報告】
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