(57)【要約】本発明はトランスジェニック動物並びに遺伝子機能の特性化に関する組成物及び方法に関する。特に本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３遺伝子における破壊を含むトランスジェニックマウスを提供する。そのようなインビボ試験及び特性化により、神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常のような遺伝子の破壊に関連する疾患又は機能不全の予防、緩解又は補正において有用な治療薬及び／又は治療法の価値ある識別及び発見が可能となる。
2010515428.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を同定する方法であって、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を含むゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；および
（ｃ）該測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物の生理学的特徴と比較する工程
を含み、
ここで、該野生型動物の生理学的特徴と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じる表現型と同定される、方法。
【請求項２】
前記非ヒトトランスジェニック動物が、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊についてヘテロ接合性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
性別一致野生型同腹仔と比較した場合、前記非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型が、以下：神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常の少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の増大である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記神経障害が、ホームケージ活動性試験中の異常な概日リズムである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の増大である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の減損である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏または感覚障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記眼の異常が網膜の異常である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
前記眼の異常が、視覚問題または失明と関係する、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
前記網膜の異常が、網膜色素変性症と関係する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記網膜の異常が、網膜変性症または網膜の形成異常を特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記網膜の異常が、網膜の形成異常、未熟児網膜症を含む様々な網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼球の血管新生性疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜動脈閉塞もしくは閉鎖；網膜血管系の二次的萎縮を引き起こす網膜変性症、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在性夜盲症、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー‐ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク質血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症またはマンノシドーシスと一致する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記眼の異常が白内障である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
前記白内障が、全身性疾患（例えば、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症またはコンラーディ症候群）と一致する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記発達異常が、胚性致死または生存能低下を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１８】
前記心臓血管、内皮または血管形成の障害が、動脈疾患（例えば、真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞などの心筋梗塞、心臓肥大および鬱血性心不全などの心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病およびレイノー現象；動脈瘤ならびに動脈再狭窄）；静脈およびリンパの障害（例えば、血栓静脈炎、リンパ管炎およびリンパ浮腫）；末梢血管疾患；癌（例えば、血管腫瘍、例えば、血管腫（毛細管および海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫）；腫瘍血管新生；外傷（例えば、創傷、熱傷および他の組織の傷害）、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全などの腎疾患または骨粗鬆症である、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫障害が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（強皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーまたはギラン・バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；肝胆疾患（例えば、感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎および他の非肝向性のウイルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎）；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症およびホイップル病；水疱性疾患、多形性紅斑および接触性皮膚炎を含む自己免疫性または免疫媒介性の皮膚疾患、乾癬；アレルギー性疾患（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症および蕁麻疹）；肺の免疫学的疾患（例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎）；または移植片拒絶および移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項３に記載の方法。
【請求項２０】
前記骨代謝の異常または障害が、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
【請求項２１】
前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を含むゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離細胞。
【請求項２３】
マウス細胞である、請求項２２に記載の単離細胞。
【請求項２４】
前記マウス細胞が胚性幹細胞である、請求項２３に記載の単離細胞。
【請求項２５】
前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の表現型：神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常の少なくとも１つを示す、請求項２２に記載の単離細胞。
【請求項２６】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法であって、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、ここで、野生型動物の生理学的特徴と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じる表現型と同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｅ）試験薬剤が、非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊と関連する同定された表現型を調節するか否かを判定する工程
を含む、方法。
【請求項２７】
前記遺伝子破壊と関連する表現型が、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の増大である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
神経障害が、ホームケージ活動性試験中の異常な概日リズムである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の増大である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の減損である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏または感覚障害である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記眼の異常が網膜の異常である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
前記眼の異常が、視覚問題または失明と関係する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
前記網膜の異常が、網膜色素変性症と関係する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記網膜の異常が、網膜変性症または網膜の形成異常を特徴とする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記網膜の異常が、網膜の形成異常、未熟児網膜症を含む様々な網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼球の血管新生性疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜動脈閉塞もしくは閉鎖；網膜血管系の二次的萎縮を引き起こす網膜変性症、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在性夜盲症、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク質血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症またはマンノシドーシスと一致する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記眼の異常が白内障である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４０】
前記白内障が、全身性疾患（例えば、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症またはコンラーディ症候群）と一致する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記発達異常が、胚性致死または生存能低下を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
前記心臓血管、内皮または血管形成の障害が、動脈疾患（例えば、真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞などの心筋梗塞、心臓肥大および鬱血性心不全などの心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病およびレイノー現象；動脈瘤ならびに動脈再狭窄）；静脈およびリンパの障害（例えば、血栓静脈炎、リンパ管炎およびリンパ浮腫）；末梢血管疾患；癌（例えば、血管腫瘍、例えば、血管腫（毛細管および海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫）；腫瘍血管新生；外傷（例えば、創傷、熱傷および他の組織の傷害）、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全などの腎疾患または骨粗鬆症である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４３】
前記免疫障害が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（強皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーまたはギラン・バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；肝胆疾患（例えば、感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎および他の非肝向性のウイルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎）；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症およびホイップル病；水疱性疾患、多形性紅斑および接触性皮膚炎を含む自己免疫性または免疫媒介性の皮膚疾患、乾癬；アレルギー性疾患（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症および蕁麻疹）；肺の免疫学的疾患（例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎）；または移植片拒絶および移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４４】
前記骨代謝の異常または障害が、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４５】
前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、請求項２６に記載の方法。
【請求項４６】
請求項２６に記載の方法によって同定される薬剤。
【請求項４７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項４６に記載の薬剤。
【請求項４８】
前記アゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項４７に記載の薬剤。
【請求項４９】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項４７に記載の薬剤。
【請求項５０】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって示される生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、ここで、野生型動物によって示される生理学的特徴と異なる非ヒトトランスジェニック動物によって示される生理学的特徴は、遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴と同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｅ）遺伝子破壊と関連する生理学的特徴が調節されているか否かを判定する工程
を含む、方法。
【請求項５１】
前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
請求項５０に記載の方法によって同定される薬剤。
【請求項５３】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項５２に記載の薬剤。
【請求項５４】
前記アゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項５３に記載の薬剤。
【請求項５５】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項５３に記載の薬剤。
【請求項５６】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する行動を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物によって示される行動を観察する工程；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別一致野生型動物の行動と比較する工程であって、ここで、野生型動物によって示される観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物によって示される観察された行動は、遺伝子の破壊に関連する行動と同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｅ）薬剤が、遺伝子破壊と関連する行動を調節するか否かを判定する工程
を含む、方法。
【請求項５７】
前記行動が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の増大である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記行動が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記行動が、ホームケージ活動性試験中の異常な概日リズムである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記行動が、反転スクリーン試験中の運動協調性の増大である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
前記行動が、反転スクリーン試験中の運動協調性の減損である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
前記行動が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏または感覚障害である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
請求項５６に記載の方法によって同定される薬剤。
【請求項６４】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項６３に記載の薬剤。
【請求項６５】
前記アゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項６４に記載の薬剤。
【請求項６６】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項６４に記載の薬剤。
【請求項６７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を寛解または調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は：
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）前記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｃ）前記試験薬剤が、非ヒトトランスジェニック動物において、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を寛解または調節するか否かを判定する工程
を含む、方法。
【請求項６８】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の増大である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記神経障害が、ホームケージ活動性試験中の異常な概日リズムである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の増大である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の減損である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏または感覚障害である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
前記眼の異常が網膜の異常である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
前記眼の異常が、視覚問題または失明と関係する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
前記網膜の異常が、網膜色素変性症と関係する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記網膜の異常が、網膜変性症または網膜の形成異常を特徴とする、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
前記網膜の異常が、網膜の形成異常、未熟児網膜症を含む様々な網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼球の血管新生性疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜動脈閉塞もしくは閉鎖；網膜血管系の二次的萎縮を引き起こす網膜変性症、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在性夜盲症、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク質血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症またはマンノシドーシスと一致する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
前記眼の異常が白内障である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８０】
前記白内障が、全身性疾患（例えば、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症またはコンラーディ症候群）である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記発達異常が、胚性致死または生存能低下を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項８２】
前記心臓血管、内皮または血管形成の障害が、動脈疾患（例えば、真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞などの心筋梗塞、心臓肥大および鬱血性心不全などの心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病およびレイノー現象；動脈瘤ならびに動脈再狭窄）；静脈およびリンパの障害（例えば、血栓静脈炎、リンパ管炎およびリンパ浮腫）；末梢血管疾患；癌（例えば、血管腫瘍、例えば、血管腫（毛細管および海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫）；腫瘍血管新生；外傷（例えば、創傷、熱傷および他の組織の傷害）、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全などの腎疾患または骨粗鬆症である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８３】
前記免疫障害が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（強皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーまたはギラン・バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；肝胆疾患（例えば、感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎および他の非肝向性のウイルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎）；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症およびホイップル病；水疱性疾患、多形性紅斑および接触性皮膚炎を含む自己免疫性または免疫媒介性の皮膚疾患、乾癬；アレルギー性疾患（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症および蕁麻疹）；肺の免疫学的疾患（例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎）；または移植片拒絶および移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８４】
前記骨代謝の異常または障害が、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８５】
前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項８６】
請求項６７に記載の方法によって同定される薬剤。
【請求項８７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項８６に記載の薬剤。
【請求項８８】
前記アゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項８７に記載の薬剤。
【請求項８９】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項８７に記載の薬剤。
【請求項９０】
請求項６７に記載の方法によって同定される治療薬。
【請求項９１】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は：
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現している宿主細胞を試験薬剤と接触させる工程；および
（ｂ）試験薬剤が、宿主細胞によるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節するか否かを判定する工程
を含む、方法。
【請求項９２】
請求項９１に記載の方法によって同定される薬剤。
【請求項９３】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項９２に記載の薬剤。
【請求項９４】
前記アゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項９３に記載の薬剤。
【請求項９５】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項９３に記載の薬剤。
【請求項９６】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態に影響を及ぼし得る治療薬を評価する方法であって、該方法は：
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、ここで、野生型動物の生理学的特徴と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じる状態と同定される、工程；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｅ）該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する同定された状態に対して試験薬剤の作用を評価する工程
を含む、方法。
【請求項９７】
前記状態が、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
請求項９６に記載の方法によって同定される治療薬。
【請求項９９】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである、請求項９８に記載の治療薬。
【請求項１００】
前記アゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項９９に記載の治療薬。
【請求項１０１】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項９９に記載の治療薬。
【請求項１０２】
請求項９８に記載の治療剤を含む医薬組成物。
【請求項１０３】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；または胚性致死を処置または予防または寛解する方法であって、該方法は、該障害をすでに有し得るか、または該障害を有する傾向にあり得るか、または該障害を予防すべき状態であり得る、そのような処置が必要な被験体に対して、治療有効量の請求項９０に記載の治療薬、またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それによって前記障害を効果的に処置または予防または寛解する、方法。
【請求項１０４】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の増大である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記神経障害が、オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記神経障害が、ホームケージ活動性試験中の異常な概日リズムである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の増大である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０８】
前記神経障害が、反転スクリーン試験中の運動協調性の減損である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０９】
前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏または感覚障害である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
前記眼の異常が網膜の異常である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１１】
前記眼の異常が、視覚問題または失明と関係する、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１２】
前記網膜の異常が、網膜色素変性症と関係する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記網膜の異常が、網膜変性症または網膜の形成異常を特徴とする、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１４】
前記網膜の異常が、網膜の形成異常、未熟児網膜症を含む様々な網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼球の血管新生性疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を含む）、角膜および他の組織の移植、網膜動脈閉塞もしくは閉鎖；網膜血管系の二次的萎縮を引き起こす網膜変性症、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在性夜盲症、コロイデレミア、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎・骨端異形成症、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク質血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症またはマンノシドーシスと一致する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１５】
前記眼の異常が白内障である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記白内障が、全身性疾患（例えば、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症またはコンラーディ症候群）である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記発達異常が、胚性致死または生存能低下を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１８】
前記心臓血管、内皮または血管形成の障害が、動脈疾患（例えば、真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；急性心筋梗塞などの心筋梗塞、心臓肥大および鬱血性心不全などの心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病およびレイノー現象；動脈瘤ならびに動脈再狭窄）；静脈およびリンパの障害（例えば、血栓静脈炎、リンパ管炎およびリンパ浮腫）；末梢血管疾患；癌（例えば、血管腫瘍、例えば、血管腫（毛細管および海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫）；腫瘍血管新生；外傷（例えば、創傷、熱傷および他の組織の傷害）、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；急性腎不全などの腎疾患または骨粗鬆症である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１９】
前記免疫障害が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（強皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢および末梢神経系の脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシーまたはギラン・バレー症候群および慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー）；肝胆疾患（例えば、感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎および他の非肝向性のウイルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎および硬化性胆管炎）；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症およびホイップル病；水疱性疾患、多形性紅斑および接触性皮膚炎を含む自己免疫性または免疫媒介性の皮膚疾患、乾癬；アレルギー性疾患（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症および蕁麻疹）；肺の免疫学的疾患（例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺炎）；または移植片拒絶および移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２０】
前記骨代謝の異常または障害が、関節炎、骨粗鬆症または大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２１】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法であって、該方法は、該表現型をすでに有し得るか、または該表現型を有する傾向にあり得るか、または該表現型を予防すべき状態にあり得る被験体に、有効量の請求項４６に記載の薬剤またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより該表現型を効果的に調節する、方法。
【請求項１２２】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する方法であって、該方法は、該生理学的特徴をすでに示し得るか、または該生理学的特徴を示す傾向にあり得るか、または該生理学的特徴を予防すべき状態であり得る被験体に、有効量の請求項５２に記載の薬剤またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより該生理学的特徴を効果的に調節する、方法。
【請求項１２３】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する挙動を調節する方法であって、該方法は、該挙動をすでに示し得るか、または該挙動を示す傾向にあり得るか、または示された挙動が予防される被験体に、有効量の請求項６３に記載の薬剤またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより該挙動を効果的に調節する、方法。
【請求項１２４】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する方法であって、該方法は、前記ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９もしくはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現している宿主細胞に、有効量の請求項９２に記載の薬剤またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それによって該ポリペプチドの発現を効果的に調節する、方法。
【請求項１２５】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊が関連する状態を調節する方法であって、該方法は、該状態を有し得るか、または該状態を有する傾向にあり得るか、または該状態を予防すべき状態であり得る被験体に対して、治療有効量の請求項９８に記載の治療薬、またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それによって該状態を効果的に調節する、方法。
【請求項１２６】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態または表現型を模倣する薬剤の同定方法であって、該方法は；
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、ここで、性別一致野生型動物の生理学的特徴と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じる状態または表現型と同定される、工程；
（ｄ）該性別一致野生型動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｅ）該試験薬剤が該非ヒトトランスジェニック動物において初期に観察される状態または表現型を模倣するか否かを判定する工程
を含む、方法。
【請求項１２７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊と関連する状態または表現型が、耐糖能の向上である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊と関連する状態または表現型が、インスリン感度の増大である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２９】
請求項１２６に記載の方法によって同定される薬剤。
【請求項１３０】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアンタゴニストである、請求項１２９に記載の薬剤。
【請求項１３１】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項１３０に記載の薬剤。
【請求項１３２】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊と関連する状態または表現型を模倣する方法であって、該方法は、該状態または表現型を模倣すべき状態であり得る被験体に、有効量の請求項１２９に記載の薬剤、またはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９もしくはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより該状態または表現型を効果的に模倣する、方法。
【請求項１３３】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊と関連する状態または表現型が、耐糖能の向上である、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊と関連する状態または表現型が、インスリン感度の増大である、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３５】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態に影響を及ぼし得る治療薬を評価する方法であって、該方法は：
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヒト遺伝子のオルソログである遺伝子の破壊を有するゲノムを有する非ヒトトランスジェニック動物を提供する工程；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定する工程；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物の生理学的特徴と比較する工程であって、ここで、性別一致野生型動物の生理学的特徴と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じる状態または表現型と同定される、工程；
（ｄ）（ｃ）の該性別一致野生型動物に試験薬剤を投与する工程；および
（ｅ）試験薬剤の非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する状態または表現型を模倣する能力を評価する工程
を含む、方法。
【請求項１３６】
請求項１３５に記載の方法によって同定される治療薬。
【請求項１３７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアンタゴニストである、請求項１３６に記載の薬剤。
【請求項１３８】
前記アンタゴニストが抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、請求項１３７に記載の治療薬。
【請求項１３９】
請求項１３６に記載の治療剤を含む医薬組成物。
【請求項１４０】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊と関連する状態または表現型を模倣する方法であって、該方法は、該状態または表現型を模倣すべき状態であり得る被験体に、治療有効量の請求項１３６に記載の治療剤、またはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９もしくはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより該状態または表現型を効果的に模倣する、方法。
【請求項１４１】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を寛解または調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害または発達異常を有し得る被験体に、請求項９０に記載の治療薬またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより該障害を寛解または調節する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は組成物、例えばトランスジェニック及びノックアウト動物及び疾患又は障害の診断及び治療のためにそのような組成物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細胞外蛋白はとりわけ多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を果たしている。多くの個々の細胞の消長、例えば増殖、遊走、分化又は他の細胞との相互作用は典型的には他の細胞及び／又は直属の環境から受領される情報により統括されている。この情報はしばしば、分泌ポリペプチド（例えばマイトジェン因子、生存因子、細胞毒性因子、分化因子、神経ペプチド及びホルモン）により伝達され、これはその後多様な細胞受容体又は膜結合蛋白により受領され、解釈される。これ等の分泌ポリペプチド又はシグナリング分子は通常は細胞分泌経路を通過して細胞外環境におけるその作用部位に到達する。
【０００３】
分泌蛋白は医薬品、診断薬、バイオセンサー及びバイオリアクターを含む種々の産業上の用途を有している。血栓溶解剤、インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、コロニー刺激因子及び種々の他のサイトカインのような現在入手可能な蛋白薬剤の大部分は分泌蛋白である。膜蛋白であるそれらの受容体もまた治療薬又は診断薬としての潜在性を有する。産業界及び学術界の両方で新規な天然の分泌蛋白を同定するための努力がなされている。多くの努力は新規な分泌蛋白に関するコーディング配列を同定するための哺乳類組み換えＤＮＡライブラリのスクリーニングに着目している。スクリーニングの方法及び手法の例は文献に記載されている［例えば、非特許文献１；特許文献１参照］。
【０００４】
膜結合蛋白及び受容体はとりわけ多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を果たし得る。多くの個々の細胞の消長、例えば増殖、遊走、分化又は他の細胞との相互作用は典型的には他の細胞及び／又は直属の環境から受領される情報により統括されている。この情報はしばしば、分泌ポリペプチド（例えばマイトジェン因子、生存因子、細胞毒性因子、分化因子、神経ペプチド及びホルモン）により伝達され、これはその後多様な細胞受容体又は膜結合蛋白により受領され、解釈される。このような膜結合蛋白及び細胞受容体は、限定されないが、サイトカイン受容体、受容体キナーゼ、受容体ホスファターゼ、細胞−細胞相互作用に関与する受容体、及び、細胞接着分子、例えばセレクチン及びインテグリンを包含する。例えば、細胞の成育及び分化を調節するシグナルの伝達は一つには種々の細胞蛋白のホスホリル化により調節される。その過程を触媒する酵素である蛋白チロシンキナーゼは成長因子受容体としても機能できる。例としては線維芽細胞成長因子受容体及び神経成長因子受容体が挙げられる。
【０００５】
膜結合蛋白及び受容体分子は医薬品及び診断薬を含む種々の産業上の用途を有している。例えば受容体免疫接着は受容体−リガンド相互作用をブロックするための治療薬として使用できる。膜結合蛋白は、関連する受容体／リガンド相互作用の潜在的なペプチド又は小分子の阻害剤のスクリーニングの為にも使用できる。
【０００６】
産業界及び学術界の両方で新規な天然の受容体又は膜結合蛋白を同定するための努力がなされている。多くの努力は新規な受容体又は膜結合蛋白に関するコーディング配列を同定するための哺乳類組み換えＤＮＡライブラリのスクリーニングに着目している。
【０００７】
生物学及び疾患の過程における分泌及び膜結合の蛋白の重要性を鑑みれば、インビボの研究及び特性化は疾患又は機能不全の予防、緩解又は補正において有用な治療薬及び／又は治療法の価値ある識別及び道程を可能とし得る。この点に関し、遺伝子操作されたマウスは、免疫学、癌、神経生物学、心臓血管生物学、肥満及び他の多くを包含するヒトの疾患に関連する生物学的過程の機能的分析のための価値ある道具であることがわかっている。遺伝子ノックアウトは高度に特異的なアンタゴニストの活性をインビボで予測することにより薬剤作用の生物学的機序をモデル化しているものとして捉えることができる。ノックアウトマウスは薬剤の活性をモデル化していることがわかっており；特定の薬剤標的蛋白に関して欠損性であるマウスの表現型は相当する拮抗薬剤によって生じるヒト臨床表現型を模倣することができる。遺伝子ノックアウトは標的の作用機序、標的の主要な生理学的役割、及び、標的の抑制から生じると考えられる機序に基づいた副作用を哺乳類において発見可能とする。この型の例はアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）［非特許文献２］及びシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ１）遺伝子［非特許文献３］が欠損しているマウスを包含する。逆に、マウスにおいて遺伝子をノックアウトすることは相当する標的へのアゴニスト薬剤の投与後にヒトにおいて観察されるものとは逆の表現型作用を有する場合がある。その例としては突然変異の結果が赤血球生産不全であるエリスロポエチンノックアウト［非特許文献４］及び突然変異体マウスが活動亢進及び応答性亢進を示すＧＡＢＡ（Ａ）−Ｒ−β３ノックアウト［非特許文献５］が挙げられる。これ等の表現型は共にヒトにおけるエリスロポエチン及びベンゾジアゼピン投与の作用とは逆である。マウス遺伝子学を用いて有効化された標的の意外な例はＡＣＣ２遺伝子である。ヒトＡＣＣ２遺伝子は数年前に同定されているが、薬剤開発の標的としてのＡＣＣ２への関心はノックアウトマウスを用いたＡＣＣ２機能分析後の最近になってようやく喚起された。ＡＣＣ２突然変異マウスはその野生型同腹仔よりも大食であるが、より多くの脂肪を燃焼し、その脂肪細胞中への脂肪の貯留は低値であり、このことは、この酵素を肥満治療における化学的アンタゴニストに関する推定標的としている［非特許文献６］。
【０００８】
本出願においては、突然変異した遺伝子の破壊が、ＣＮＳ／神経学的撹乱又は障害、例えば不安；眼の異常；及び関連の疾患；心臓血管、内皮又は血管形成の障害、例えばアテローム性動脈硬化症；異常な代謝の障害、例えば糖尿病及び上昇した血清中のトリグリセリド及びコレステロールのレベルに伴う脂質代謝障害；免疫学的及び炎症性の障害；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害、例えば関節炎、骨粗鬆症及び大理石骨病；又は発達疾患、例えば胚性致死を包含する種々の疾患状態又は機能不全に関連する表現型の観察事項をもたらしている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第５，５３６，６３７号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：７１０８−７１１３（１９９６）
【非特許文献２】Ｅｓｔｈｅｒ，Ｃ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７４：９５３−９６５（１９９６）
【非特許文献３】Ｌａｎｇｅｎｂａｃｈ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８３：４８３−４９２（１９９５）
【非特許文献４】Ｗｕ，Ｃ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．，８３：５９−６７（１９９６）
【非特許文献５】ＤｅＬｏｒｅｙ，Ｔ．Ｍ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１８：８５０５−８５１４（１９９８）
【非特許文献６】Ａｂｕ−Ｅｌｈｅｉｇａ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９１：２６１３−２６１６（２００１）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
Ａ．実施形態
本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。
【００１２】
１つの局面において、単離された核酸分子は、（ａ）本明細書に開示する完全長のアミノ酸配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを欠いたアミノ酸配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しない膜貫通蛋白の細胞外ドメイン、又は、本明細書に開示した完全長アミノ酸配列の何れかの他の特に定義されるフラグメントを有するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は、（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補体に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、及び、或いは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００１３】
別の局面において、単離された核酸分子は、（ａ）本明細書に開示する完全長のポリペプチドｃＤＮＡのコーディング配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを欠いたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのコーディング配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しない膜貫通ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの細胞外ドメインのコーディング配列、又は、本明細書に開示する完全長アミノ酸配列の何れかの他の特に定義されるフラグメントのコーディング配列を含むＤＮＡ分子、又は、（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補体に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、及び、或いは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００１４】
更に別の局面において、本発明は、（ａ）本明細書に開示するＡＴＣＣにより寄託されたヒト蛋白ｃＤＮＡの何れかによりコードされる同様の成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は、（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補体に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、或いは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、及び、或いは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子に関する。
【００１５】
本発明の別の局面は、膜貫通ドメイン欠失又は膜貫通ドメイン不活性化されているか、又は、そのようなコードしているヌクレオチド配列に相補的なＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供し、ここでそのようなポリペプチドの膜貫通ドメインが本明細書において開示される。従って、本明細書に記載するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの可溶性細胞外ドメインも意図される。
【００１６】
本発明は更に、例えば、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３抗体に対する結合部位を含むポリペプチドを場合によりコードしてよいＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのフラグメントをコードするためのハイブリダイゼーションプローブとして、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブとして使用してよい、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３ポリペプチドコーディング配列又はその相補体のフラグメントを提供する。このような核酸フラグメントは通常は、約１０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１５ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約２０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約３０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約４０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約５０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約６０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約７０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約８０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約９０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１１０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１２０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１３０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１４０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１５０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１６０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１７０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１８０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約１９０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約２００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約２５０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約３００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約３５０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約４００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約４５０ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約５００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約６００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約７００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約８００ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約９００ヌクレオチド長又はそれ以上、及び、或いは約１０００ヌクレオチド長又はそれ以上であり、ここで、この文脈において、「約」という用語は言及したヌクレオチド配列長±その言及した長さの１０％を意味する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドコードヌクレオチド配列の新規なフラグメントは、多くのよく知られた配列アライメントプログラムの何れかを用いてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドコードヌクレオチド配列を他の既知ヌクレオチド配列とアラインすること、及び、どのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドコードヌクレオチド配列フラグメントが新規であるかを決定することにより日常的に決定してよい。このような，ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドコードヌクレオチド配列の全てを本明細書においては意図する。同様に意図されるものはこのようなヌクレオチド分子フラグメントによりコードされるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドフラグメント、好ましくは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２���９、またはＰＲＯ１７８３抗体に対する結合部位を含む抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３ポリペプチドフラグメントである。
【００１７】
本発明は上記の通り同定された単離された核酸配列の何れかによりコードされる単離されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを提供する。
【００１８】
特定の局面において、本発明は本明細書に開示する完全長のアミノ酸配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを欠いたアミノ酸配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しない膜貫通蛋白の細胞外ドメイン、又は、本明細書に開示した完全長アミノ酸配列の何れかの他の特に定義されるフラグメントを有するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、及び、或いは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに関する。
【００１９】
更に別の局面において、本発明は本明細書に開示するＡＴＣＣにより寄託されたヒト蛋白ｃＤＮＡの何れかによりコードされるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、或いは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、及び、或いは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに関する。
【００２０】
１つの局面において、本発明は約１０アミノ酸長又はそれ以上、或いは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長又はそれ以上のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリペプチドに関する。場合により、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリペプチドはネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列と比較して１つ又はそれより多くない保存的アミノ酸置換を有し、或いは、ネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列と比較して２、３、４、５、６、７、８、９又は１０より多くない保存的アミノ酸置換を有する。
【００２１】
特定の局面において、本発明はＮ末端シグナル配列及び／又は開始メチオニンを有しない単離されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを提供し、前記したとおりそのようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる。これ等を製造するためのプロセスも本明細書に記載し、その場合、そのようなプロセスはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現に適する条件下に適切なコードしている核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養すること、及び、細胞培養物からＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを回収することを含む。
【００２２】
本発明の別の局面は膜貫通ドメイン欠失又は膜貫通ドメイン不活性化されている単離されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを提供する。これ等を製造するプロセスも本明細書に記載し、その場合、そのようなプロセスはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現に適する条件下に適切なコードしている核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養すること、及び、細胞培養物からＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを回収することを含む。
【００２３】
本発明は本明細書において定義されるネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト及びアンタゴニストを提供する。特に、アゴニスト又はアンタゴニストは抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体又は小分子である。
【００２４】
本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを候補分子と接触させること、及び、該ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドにより媒介される生物学的活性をモニタリングすることを含む、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対するアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法を提供する。好ましくは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドはネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドである。
【００２５】
本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、又は、本明細書に記載する、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３のアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を担体と組み合わせて含む組成物を提供する。場合により、担体は製薬上許容しうる担体である。
【００２６】
本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３抗体に対して応答する状態の治療において有用な医薬の製造のための抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３ポリペプチド又は上記したそのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体の使用を提供する。
【００２７】
本発明は本明細書に記載したポリペプチドの何れかをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。何れかのそのようなベクターを含む宿主細胞も提供される。例えば、宿主細胞はＣＨＯ細胞、Ｅ・コリ又は酵母であってよい。本明細書に記載したポリペプチドの何れかを製造するためのプロセスも更に提供され、それは所望のポリペプチドの発現の為に適する条件下において宿主細胞を培養すること及び細胞培養物から所望のポリペプチドを回収することを含む。
【００２８】
本発明は異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合させた本明細書に記載したポリペプチドの何れかを含むキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例はエピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合させた本明細書に記載したポリペプチドの何れかを含む。
【００２９】
本発明は前述又は後述のポリペプチドのいずれかに、好ましくは特異的に結合する抗体を提供する。場合により、抗体はモノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント又は一本鎖抗体である。
【００３０】
本発明はゲノム及びｃＤＮＡのヌクレオチド配列を単離するために、関連する遺伝子の発現を測定又は検出するために、又は、アンチセンスプローブとして有用な、オリゴヌクレオチドプローブを提供し、ここでこれ等のプローブは前述又は後述のヌクレオチド配列の何れかから誘導してよい。好ましいプローブ長は前述の通りである。
【００３１】
本発明はまた、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定すること；及び、
（ｃ）測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること、
を含み、ここで野生型動物の生理学的特徴とは異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じた表現型として同定される上記方法を提供する。１つの局面において、非ヒトトランスジェニック動物は哺乳類である。別の局面において、哺乳類はげっ歯類である。更に別の局面において、哺乳類はラット又はマウスである。１つの局面において、非ヒトトランスジェニック動物は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である。別の局面において、性別一致野生型同腹仔と比較した場合の非ヒトトランスジェニック動物により示される表現型は以下のもの、即ち：神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常の少なくとも１つである。
【００３２】
更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の増強された運動共調である。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の減損した運動共調である。更に別の局面において、神経障害は抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である。このような神経障害は「不安障害」と定義されるカテゴリーを包含し、これは例えば限定しないが軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【００３３】
別の局面において、眼の異常は網膜の異常である。更に別の局面において、眼の異常は網膜の視覚問題又は失明と関係している。別の局面において、網膜の異常は色素性網膜炎と関係しているか、又は網膜の異常は網膜変性又は網膜の形成異常を特徴としている。
【００３４】
更に別の局面において、網膜の異常は網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している。
【００３５】
更に別の局面において、眼の異常は白内障である。又更に別の局面において、白内障は全身疾患、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群である。
【００３６】
更に別の局面において、発達異常は胚性致死又は生存性低下を含む。
【００３７】
更に又別の局面において、心臓血管、内皮又は血管形成障害は動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である。
【００３８】
更に別の局面において、免疫不全は全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である。
【００３９】
更に別の局面において、骨代謝異常又は障害は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００４０】
別の局面において、非ヒトトランスジェニック動物は、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す。
【００４１】
本発明は又、自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物から誘導した単離細胞を提供する。１つの局面において、単離細胞はマウス細胞である。別の局面において、マウス細胞は胚性幹細胞である。更に別の局面において、単離細胞は性別一致野生型同腹仔と比較した場合に以下の表現型、即ち：神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常の少なくとも１つを示す非ヒトトランスジェニック動物から誘導される。本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する薬剤を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定すること；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで野生型動物の生理学的特徴とは異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じた表現型として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊に関連する同定された表現型を調節するかどうか決定すること；
を含む上記方法を提供する。
【００４２】
１つの局面において、遺伝子の破壊に関連する表現型は神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を含む。
【００４３】
更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の増強された運動共調である。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の減損した運動共調である。更に別の局面において、神経障害は抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である。このような神経障害は「不安障害」と定義されるカテゴリーを包含し、これは例えば限定しないが軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【００４４】
更に別の局面において、眼の異常は網膜の異常である。更に別の局面において、眼の異常は網膜の視覚問題又は失明と関係している。別の局面において、網膜の異常は色素性網膜炎と関係しているか、又は網膜の異常は網膜変性又は網膜の形成異常を特徴としている。
【００４５】
更に別の局面において、網膜の異常は網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している。
【００４６】
更に別の局面において、眼の異常は白内障である。又更に別の局面において、白内障は全身疾患、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群である。
【００４７】
更に別の局面において、発達異常は胚性致死又は生存性低下を含む。
【００４８】
更に又別の局面において、心臓血管、内皮又は血管形成障害は動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である。
【００４９】
更に別の局面において、免疫不全は全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である。
【００５０】
更に別の局面において、骨代謝異常又は障害は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００５１】
別の局面において、非ヒトトランスジェニック動物は、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す。
【００５２】
本発明は又遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する薬剤を提供する。１つの局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００５３】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特性を調節する薬剤を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物により示される生理学的特徴を測定すること；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで野生型動物により示される生理学的特徴とは異なる非ヒトトランスジェニック動物により示される生理学的特徴は遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴が調節されているかどうか決定すること；を含む上記方法を提供する。
【００５４】
１つの局面において、非ヒトトランスジェニック動物は性別一致野生型同腹仔と比較して以下の生理学的特性の少なくとも１つを示す。
【００５５】
別の局面において、非ヒトトランスジェニック動物は、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す。
【００５６】
本発明はまた遺伝子の破壊に関連する生理学的特性を調節する薬剤を提供する。１つの局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００５７】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する挙動を調節する薬剤を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物により示される挙動を観察すること；
（ｃ）（ｂ）の観察された挙動を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで野生型動物により示された観察された挙動とは異なる非ヒトトランスジェニック動物により示された観察された挙動は遺伝子の破壊に関連する挙動として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）薬剤が遺伝子の破壊に関連する挙動を調節するかどうか決定すること；
を含む上記方法を提供する。
【００５８】
１つの局面において、観察される挙動はオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である。更に別の局面において、観察される挙動はオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である。更に別の局面において、観察される挙動はホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである。更に別の局面において、観察される挙動は反転スクリーン試験中の増強された運動共調である。更に別の局面において、観察される挙動は反転スクリーン試験中の減損した運動共調である。更に別の局面において、観察される挙動は抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害を包含する。このような障害は「不安障害」と定義されるカテゴリーを包含し、これは例えば限定しないが軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【００５９】
本発明は又、遺伝子の破壊に関連する挙動を調節する薬剤を提供する。１つの局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００６０】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節する薬剤を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）試験薬剤を該非ヒトトランスジェニック動物に投与すること；及び、
（ｃ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節するかどうか決定すること；を含む上記方法を提供する。
【００６１】
更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の増強された運動共調である。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の減損した運動共調である。更に別の局面において、神経障害は抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である。このような神経障害は「不安障害」と定義されるカテゴリーを包含し、これは例えば限定しないが軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【００６２】
別の局面において、眼の異常は網膜の異常である。更に別の局面において、眼の異常は網膜の視覚問題又は失明と関係している。別の局面において、網膜の異常は色素性網膜炎と関係しているか、又は網膜の異常は網膜変性又は網膜の形成異常を特徴としている。
【００６３】
更に別の局面において、網膜の異常は網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している。
【００６４】
更に別の局面において、眼の異常は白内障である。又更に別の局面において、白内障は全身疾患、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群である。
【００６５】
更に別の局面において、発達異常は胚性致死又は生存性低下を含む。
【００６６】
更に又別の局面において、心臓血管、内皮又は血管形成障害は動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である。
【００６７】
更に別の局面において、免疫不全は全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である。
【００６８】
更に別の局面において、骨代謝異常又は障害は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００６９】
別の局面において、非ヒトトランスジェニック動物は、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す。
【００７０】
本発明は又、遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節する薬剤を提供する。１つの局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００７１】
本発明は又、神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常の治療のための治療薬を提供する。
【００７２】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させること；及び、
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞による，ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節するかどうか決定すること；
を含む上記方法を提供する。
【００７３】
本発明は又ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する薬剤を提供する。１つの局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００７４】
本発明はまた、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態に影響することができる治療薬を評価する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定すること；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで野生型動物の生理学的特徴とは異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じた状態として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊に関連する同定された状態に対する試験薬剤の作用を評価すること；
を含む上記方法を提供する。
【００７５】
１つの局面において、状態は神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常である。
【００７６】
本発明は又、遺伝子の破壊に関連する状態に影響することができる治療薬を提供する。１つの局面において、薬剤は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００７７】
本発明は又、遺伝子の破壊に関連する状態に影響することができる治療薬を含む医薬組成物を提供する。
【００７８】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；又は胚性致死を治療又は予防又は緩解する方法であって、方法が既に疾患を有し得る者、又は疾患を有する傾向にあり得る者、又は疾患を予防すべきであり得る者であるそのような治療を必要とする被験体に治療薬、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの治療有効量を投与することにより、該障害又は疾患を効果的に治療又は予防又は緩解することを含む上記方法を提供する。
【００７９】
更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の増強された運動共調である。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の減損した運動共調である。更に別の局面において、神経障害は抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である。このような神経障害は「不安障害」と定義されるカテゴリーを包含し、これは例えば限定しないが軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【００８０】
別の局面において、眼の異常は網膜の異常である。更に別の局面において、眼の異常は網膜の視覚問題又は失明と関係している。別の局面において、網膜の異常は色素性網膜炎と関係しているか、又は網膜の異常は網膜変性又は網膜の形成異常を特徴としている。
【００８１】
更に別の局面において、網膜の異常は網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している。
【００８２】
更に別の局面において、眼の異常は白内障である。又更に別の局面において、白内障は全身疾患、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群である。
【００８３】
更に別の局面において、発達異常は胚性致死又は生存性低下を含む。
【００８４】
更に又別の局面において、心臓血管、内皮又は血管形成障害は動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である。
【００８５】
更に別の局面において、免疫不全は全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である。
【００８６】
更に別の局面において、骨代謝異常又は障害は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００８７】
別の局面において、治療薬はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００８８】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節する薬剤を同定する方法であって、方法が下記工程：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を準備すること（ここで該培養物の各々の細胞はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含んでいる）；
（ｂ）試験薬剤を該細胞培養物に投与すること；及び、
（ｃ）試験薬剤が該培養物における神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節するかどうか決定すること；
を含む上記方法を提供する。更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である。更に別の局面において、神経障害はホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである。
【００８９】
更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の増強された運動共調である。更に別の局面において、神経障害は反転スクリーン試験中の減損した運動共調である。更に別の局面において、神経障害は抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である。このような神経障害は「不安障害」と定義されるカテゴリーを包含し、これは例えば限定しないが軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【００９０】
別の局面において、眼の異常は網膜の異常である。更に別の局面において、眼の異常は視覚問題又は失明と関係している。別の局面において、網膜の異常は色素性網膜炎と関係しているか、又は網膜の異常は網膜変性又は網膜の形成異常を特徴としている。
【００９１】
更に別の局面において、網膜の異常は網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している。
【００９２】
更に別の局面において、眼の異常は白内障である。又更に別の局面において、白内障は全身疾患、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群である。
【００９３】
更に別の局面において、発達異常は胚性致死又は生存性低下を含む。
【００９４】
更に又別の局面において、心臓血管、内皮又は血管形成障害は動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である。
【００９５】
更に別の局面において、免疫不全は全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である。
【００９６】
更に別の局面において、骨代謝異常又は障害は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００９７】
本発明は又、上記培養物において遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節する薬剤を提供する。１つの局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、薬剤はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に別の局面において、アゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。更に別の局面において、アンタゴニストの薬剤は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である。
【００９８】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法であって、方法が既に表現型を有し得る被験体、又は表現型を有する傾向にあり得る被験体、又は表現型を予防すべきであり得る被験体に、該表現型を調節するものとして同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、表現型を効果的に調節することを含む上記方法を提供する。
【００９９】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する方法であって、方法が既に生理学的特徴を示し得る被験体、又は生理学的特徴を示す傾向にあり得る被験体、又は生理学的特徴を予防すべきであり得る被験体に、該生理学的特徴を調節するものとして同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、生理学的特徴を効果的に調節することを含む上記方法を提供する。
【０１００】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する挙動を調節する方法であって、方法が既に挙動を示し得る被験体、又は挙動を示す傾向にあり得る被験体、又は示された挙動を予防すべきであり得る被験体に、該挙動を調節するものとして同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、挙動を効果的に調節することを含む上記方法を提供する。
【０１０１】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する方法であって、方法が該ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現する宿主細胞に、該発現を調節するものとして同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む上記方法を提供する。
【０１０２】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態を調節する方法であって、方法が既に状態を有し得る被験体、又は状態を有する傾向にあり得る被験体、又は状態を予防すべきであり得る被験体に、該状態を調節するものとして同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの治療有効量を投与することにより、状態を効果的に調節することを含む上記方法を提供する。
【０１０３】
本発明は又、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；又は胚性致死を治療又は予防又は緩解する方法であって、方法が非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物、ただし該培養物の各々の細胞はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含んでいるものに対して、該障害を治療又は予防又は緩解するものとして同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該障害を効果的に治療又は予防又は緩解することを含む上記方法を提供する。
【０１０４】
本発明はまた、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を寛解または調節する薬剤を同定する方法であって、その方法は、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害または発達異常を有し得る被験体に、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を寛解または調節するとして同定された治療薬またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより障害を寛解または調節する方法、を提供する。
【０１０５】
Ｂ．別の実施形態
更に別の実施形態において、本発明は本出願に係る潜在的請求項の以下のセットを指向している。
【０１０６】
（１）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を同定する方法であって、該方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定すること；及び、
（ｃ）該測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること、
を含み、ここで該野生型動物の該生理学的特徴とは異なる該非ヒトトランスジェニック動物の該生理学的特徴が、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じた表現型として同定される、方法。
（２）  前記非ヒトトランスジェニック動物が、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である、１記載の方法。
（３）  性別一致野生型同腹仔と比較した場合の前記非ヒトトランスジェニック動物により示される表現型が、以下：神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常の少なくとも１つである、１記載の方法。
（４）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である、３記載の方法。
（５）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である、３記載の方法。
（６）  前記神経障害がホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである、３記載の方法。
（７）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の増強された運動共調である、３記載の方法。
（８）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の減損した運動共調である、３記載の方法。
（９）  前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である、３記載の方法。
（１０）  前記眼の異常が網膜の異常である、３記載の方法。
（１１）  前記眼の異常が視覚問題又は失明と関係している、３記載の方法。
（１２）  前記網膜の異常が色素性網膜炎と関係している、１０記載の方法。
（１３）  前記網膜の異常が網膜変性又は網膜の形成異常を特徴とする、１０記載の方法。
（１４）  前記網膜の異常が、網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病（Ａｌｂｅｒｓ−Ｓｃｈｎｏｂｅｒｇ
ｄｉｓｅａｓｅ）、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している、１０記載の方法。
（１５）  前記眼の異常が白内障である、３記載の方法。
（１６）  前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群のような全身疾患と関係している、１５記載の方法。
（１７）  前記発達異常が胚性致死又は生存性低下を含む、３記載の方法。
（１８）  前記心臓血管、内皮又は血管形成障害が、動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である、３記載の方法。
（１９）  前記免疫不全が、全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である、３記載の方法。
（２０）  前記骨代謝異常又は障害が、関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、３記載の方法。
（２１）  前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、１に記載の方法。
（２２）  自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物から誘導した、単離細胞。
（２３）  マウス細胞である、２２記載の単離細胞。
（２４）  前記マウス細胞が胚性幹細胞である２３記載の単離細胞。
（２５）  性別一致野生型同腹仔と比較した場合に前記非ヒトトランスジェニック動物が以下の表現型：神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常の少なくとも１つを示す、２２記載の単離細胞。
（２６）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定すること；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで該野生型動物の生理学的特徴とは異なる該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じた表現型として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）該試験薬剤が該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊に関連する同定された表現型を調節するかどうか決定すること；
を含む、方法。
（２７）  前記遺伝子の破壊に関連する表現型が、神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を含む、２６記載の方法。
（２８）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である、２７記載の方法。
（２９）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である、２７記載の方法。
（３０）  前記神経障害がホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである、２７記載の方法。
（３１）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の増強された運動共調である、２７記載の方法。
（３２）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の減損した運動共調である、２７記載の方法。
（３３）  前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である、２７記載の方法。（３４）  前記眼の異常が網膜の異常である、２７記載の方法。
（３５）  前記眼の異常が視覚問題又は失明と関係している、２７記載の方法。
（３６）  前記網膜の異常が色素性網膜炎と関係している、３４記載の方法。
（３７）  前記網膜の異常が網膜変性又は網膜の形成異常を特徴とする、３４記載の方法。
（３８）  前記網膜の異常が、網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している、３４記載の方法。
（３９）  前記眼の異常が白内障である、２７記載の方法。
（４０）  前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群のような全身疾患と関係している、３９記載の方法。
（４１）  前記発達異常が胚性致死又は生存性低下を含む、２７記載の方法。
（４２）  前記心臓血管、内皮又は血管形成障害が、動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である、２７記載の方法。
（４３）  前記免疫不全が、全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である、２７記載の方法。
（４４）  前記骨代謝異常又は障害が、関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、２７記載の方法。
（４５）  前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、２６記載の方法。
（４６）  ２６記載の方法により同定された、薬剤。
（４７）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである、４６記載の薬剤。
（４８）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、４７記載の薬剤。
（４９）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、４７記載の薬剤。
（５０）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特性を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物により示される生理学的特徴を測定すること；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで該野生型動物により示される生理学的特徴とは異なる該非ヒトトランスジェニック動物により示される生理学的特徴が、遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴が調節されているかどうか決定すること；を含む、方法。
（５１）  前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、５０記載の方法。
（５２）  ５０記載の方法により同定された、薬剤。
（５３）抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである、５２記載の薬剤。
（５４）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、５３記載の薬剤。
（５５）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、５３記載の薬剤。
（５６）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する挙動を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は、下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物により示される挙動を観察すること；
（ｃ）（ｂ）の観察された挙動を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで該野生型動物により示された観察された挙動とは異なる該非ヒトトランスジェニック動物により示された観察された挙動は、遺伝子の破壊に関連する挙動として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）該薬剤が遺伝子の破壊に関連する挙動を調節するかどうか決定すること；
を含む、方法。
（５７）  前記挙動がオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である、５６記載の方法。
（５８）  前記挙動がオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である、５６記載の方法。
（５９）  前記挙動がホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである、５６記載の方法。
（６０）  前記挙動が反転スクリーン試験中の増強された運動共調である、５６記載の方法。
（６１）  前記挙動が反転スクリーン試験中の減損した運動共調である、５６記載の方法。
（６２）  前記挙動が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である、５６記載の方法。
（６３）  ５６記載の方法により同定された、薬剤。
（６４）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストであ、る６３記載の薬剤。
（６５）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、６４記載の薬剤。
（６６）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、６４記載の薬剤。
（６７）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は、下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）試験薬剤を該非ヒトトランスジェニック動物に投与すること；及び、
（ｃ）該試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物における神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節するかどうか決定すること；
を含む、方法。
（６８）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である、６７記載の方法。
（６９）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である、６７記載の方法。
（７０）  前記神経障害がホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである、６７記載の方法。
（７１）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の増強された運動共調である、６７記載の方法。
（７２）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の減損した運動共調である、６７記載の方法。
（７３）  前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である、６７記載の方法。
（７４）  前記眼の異常が網膜の異常である、６７記載の方法。
（７５）  前記眼の異常が視覚問題又は失明と関係している、６７記載の方法。
（７６）  前記網膜の異常が色素性網膜炎と関係している、７４記載の方法。
（７７）  前記網膜の異常が網膜変性又は網膜の形成異常を特徴とする、７４記載の方法。
（７８）  前記網膜の異常が、網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している、７４記載の方法。
（７９）  前記眼の異常が白内障である、６７記載の方法。
（８０）  前記白内障がヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群のような全身疾患である、７９記載の方法。
（８１）  前記発達異常が胚性致死又は生存性低下を含む、６７記載の方法。
（８２）  前記心臓血管、内皮又は血管形成障害が、動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である、６７記載の方法。
（８３）  前記免疫不全が、全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である、６７記載の方法。
（８４）  前記骨代謝異常又は障害が、関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、６７記載の方法。
（８５）  前記非ヒトトランスジェニック動物が、性別一致野生型同腹仔と比較して、以下の生理学的特徴：オープンフィールド活動性試験中の不安様応答の低減；概日試験中の新しい環境に対する異常な馴化応答（ホームケージ活動性試験中の歩行回数の中央値の増加）；尾部懸垂試験中の不動時間の中央値の減少を伴う、うつ様応答の低減；血糖値の上昇；耐糖能障害；骨梁体積および骨梁厚の増加；総体脂肪質量パーセントおよび総体脂肪パーセントの減少；皮膚線維芽細胞増殖速度の低下；ならびに収縮期血圧の上昇の少なくとも１つを示す、６７記載の方法。
（８６）  ６７記載の方法により同定された、薬剤。
（８７）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである、８６記載の薬剤。
（８８）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、８７記載の薬剤。
（８９）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、８７記載の薬剤。
（９０）  ６７記載の方法により同定された、治療薬。
（９１）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、該方法が下記工程：
（ａ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させること；及び、
（ｂ）該試験薬剤が、宿主細胞によるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節するかどうか決定すること；
を含む、方法。
（９２）  ９１記載の方法により同定された、薬剤。
（９３）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである、９２記載の薬剤。
（９４）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、９３記載の薬剤。
（９５）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、９３記載の薬剤。
（９６）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態に影響することができる治療薬を評価する方法であって、該方法が下記工程：
（ａ）自身のゲノムがＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物を準備すること；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定すること；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的特徴を性別一致野生型動物のものと比較すること（ただしここで該野生型動物の生理学的特徴とは異なる該非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊から生じた状態として同定される）；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与すること；及び、
（ｅ）該非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子の破壊に関連する同定された状態に対する、該試験薬剤の作用を評価すること；
を含む、方法。
（９７）  前記状態が、神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を含む、９６記載の方法。
（９８）  ９６記載の方法により同定された、治療薬。
（９９）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである、９８記載の治療薬。
（１００）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、９９記載の治療薬。
（１０１）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、９９記載の治療薬。
（１０２）  ９８記載の治療薬を含む、医薬組成物。
（１０３）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；又は胚性致死を治療又は予防又は緩解する方法であって、該方法は、既に疾患を有し得る者、又は疾患を有する傾向にあり得る者、又は疾患を予防すべきであり得る者であるそのような治療を必要とする被験体に、９４記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの治療有効量を投与することにより、該障害を効果的に治療又は予防又は緩解することを含む、方法。
（１０４）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である、１０３記載の方法。
（１０５）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である、１０３記載の方法。
（１０６）  前記神経障害がホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである、１０３記載の方法。
（１０７）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の増強された運動共調である、１０３記載の方法。
（１０８）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の減損した運動共調である、１０３記載の方法。
（１０９）  前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である、１０３記載の方法。
（１１０）  前記眼の異常が網膜の異常である、１０３記載の方法。
（１１１）  前記眼の異常が視覚問題又は失明と関係している、１０３記載の方法。
（１１２）  前記網膜の異常が色素性網膜炎と関係している、１１０記載の方法。
（１１３）  前記網膜の異常が網膜変性又は網膜の形成異常を特徴とする、１１０記載の方法。
（１１４）  前記網膜の異常が、網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している、１１０記載の方法。
（１１５）  前記眼の異常が白内障である、１０３記載の方法。
（１１６）  前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群のような全身疾患である、１１５記載の方法。
（１１７）  前記発達異常が胚性致死又は生存性低下を含む、１０３記載の方法。
（１１８）  前記心臓血管、内皮又は血管形成障害が、動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である１０３記載の方法。
（１１９）  免疫不全が全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である、１０３記載の方法。
（１２０）  前記骨代謝異常又は障害が、関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、１０３記載の方法。
（１２１）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節する薬剤を同定する方法であって、該方法が下記工程：
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を準備すること（ここで該培養物の各々の細胞は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含んでいる）；
（ｂ）試験薬剤を該細胞培養物に投与すること；及び、
（ｃ）該試験薬剤が該細胞培養物における神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；眼の異常；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；脂質代謝障害；又は発達異常を緩解又は調節するかどうか決定すること；
を含む、方法。
（１２２）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の増大した不安様応答である、１２１記載の方法。
（１２３）  前記神経障害がオープンフィールド活動性試験中の低減した不安様応答である、１２１記載の方法。
（１２４）  前記神経障害がホームケージ活動性試験中の異常な日周期リズムである、１２１記載の方法。
（１２５）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の増強された運動共調である、１２１記載の方法。
（１２６）  前記神経障害が反転スクリーン試験中の減損した運動共調である、１２１記載の方法。
（１２７）  前記神経障害が、抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である、１２１記載の方法。
（１２８）  前記眼の異常が網膜の異常である、１２１記載の方法。
（１２９）  前記眼の異常が視覚問題又は失明と関係している、１２１記載の方法。
（１３０）  前記網膜の異常が色素性網膜炎と関係している、１２８記載の方法。
（１３１）  前記網膜の異常が網膜変性又は網膜の形成異常を特徴とする、１２８記載の方法。
（１３２）  前記網膜の異常が網膜の形成異常、種々の網膜症、例えば未熟児網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡膜血管新生、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼の血管新生性疾患、血管再狭窄、動脈静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺肥大（グレーブス病を包含する）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスと関係している、１２８記載の方法。
（１３３）  前記眼の異常が白内障である、１２１記載の方法。
（１３４）  前記白内障が、ヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群のような全身疾患である、１３３記載の方法。
（１３５）  前記発達異常が胚性致死又は生存性低下を含む、１２１記載の方法。
（１３６）  前記心臓血管、内皮又は血管形成障害が、動脈疾患、例えば真性糖尿病；乳頭浮腫；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫；腫瘍血管形成；外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕；虚血再灌流傷害；関節リウマチ；脳血管疾患；腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症である１２１記載の方法。
（１３７）  免疫不全が全身エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身硬化症（硬皮症）；特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー；肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎；クローン病）；グルテン感受性腸症及びホイップル病；自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病である、１２１記載の方法。
（１３８）  前記骨代謝異常又は障害が、関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、１２１記載の方法。
（１３９）  １２１記載の方法により同定された、薬剤。
（１４０）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである、１３９記載の薬剤。
（１４１）  前記アゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、１４０記載の薬剤。
（１４２）  前記アンタゴニストが、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体である、１４０記載の薬剤。
（１４３）  １２１記載の方法により同定された、治療薬。
（１４４）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を調節する方法であって、該方法が、既に表現型を有し得る被験体、又は表現型を有する傾向にあり得る被験体、又は表現型を予防すべきであり得る被験体に、４６記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該表現型を効果的に調節することを含む、方法。
（１４５）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を調節する方法であって、該方法は、既に生理学的特徴を示し得る被験体、又は生理学的特徴を示す傾向にあり得る被験体、又は生理学的特徴を予防すべきであり得る被験体に、５２記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該生理学的特徴を効果的に調節することを含む、方法。
（１４６）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する挙動を調節する方法であって、該方法は、既に挙動を示し得る被験体、又は挙動を示す傾向にあり得る被験体、又は示された挙動を予防すべきであり得る被験体に、６３記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該挙動を効果的に調節することを含む、方法。
（１４７）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現を調節する方法であって、該方法は、該ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現する宿主細胞に、９２記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む、方法。
（１４８）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する状態を調節する方法であって、該方法は、既に状態を有し得る被験体、又は状態を有する傾向にあり得る被験体、又は状態を予防すべきであり得る被験体に、９８記載の治療薬、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該状態を効果的に調節することを含む、方法。
（１４９）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；免疫不全；腫瘍学的障害；骨代謝異常又は障害；又は胚性致死を治療又は予防又は緩解する方法であって、該方法は、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物に対して、１３９記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量を投与することにより、該障害を効果的に治療又は予防又は緩解することを含み、ここで該培養物の各々の細胞はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含んでいる、方法。
（１５０）  ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連する、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害；または発達異常を寛解または調節する薬剤を同定する方法であって、該方法は、神経障害；心臓血管、内皮もしくは血管形成の障害；眼の異常；免疫障害；腫瘍学的障害；骨代謝の異常もしくは障害；脂質代謝障害または発達異常を有し得る被験体に、９０記載の治療薬またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを投与する工程を含み、それにより障害を寛解または調節する、方法。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】図１は、ネイティブ配列ＰＲＯ１１０５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号１）を示し、ここで、配列番号１は、本明細書中で「ＤＮＡ５９６１２−１４６６」（ＵＮＱ５４８）と称されるクローンである。
【図２】図２は、図１に示される配列番号１のコード配列から得られるアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【図３】図３は、ネイティブ配列ＰＲＯ１２７９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号３）を示し、ここで、配列番号３は、本明細書中で「ＤＮＡ６５４０５−１５４７」（ＵＮＱ６４９）と称されるクローンである。
【図４】図４は、図３に示される配列番号３のコード配列から得られるアミノ酸配列（配列番号４）を示す。
【図５】図５は、ネイティブ配列ＰＲＯ１７８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号５）を示し、ここで、配列番号５は、本明細書中で「ＤＮＡ７１１８２」（ＵＮＱ８４５）と称されるクローンである。
【図６】図６は、図５に示される配列番号５のコード配列から得られるアミノ酸配列（配列番号６）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０８】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
１．定義
「ＰＲＯポリペプチド」及び「ＰＲＯ」という用語は本明細書においては、そして数の表記が直後に来る場合は、種々のポリペプチドを指すものとし、ここで完全な表記（即ちＰＲＯ／数）は本明細書に記載する特定のポリペプチド配列を指す。「数」という用語が本明細書において使用される実際の数の表記として提示される場合の「ＰＲＯ／数ポリペプチド」及び「ＰＲＯ／数」という用語は、ネイティブの配列のポリペプチド及びポリペプチドの変異体（これは本明細書において更に定義する）を包含する。本明細書に記載するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは種々の原料から、例えばヒト組織型から、又は他の原料から単離してよく、又は、組み換え又は合成の方法により製造してよい。「ＰＲＯポリペプチド」という用語は本明細書に開示した各々の個々のＰＲＯ／数ポリペプチドを指す。「ＰＲＯポリペプチド」に言及する本明細書中の全ての開示は、ポリペプチドを個別に、並びに、総括して指すものとする。例えば、その製造、精製、誘導、それに対する抗体の形成、その投与、それを含有する組成物、それを伴う疾患の治療に関する説明等は本発明のポリペプチドの各々個々に関するものである。「ＰＲＯポリペプチド」という用語はまた本明細書に開示したＰＲＯ／数ポリペプチドの変異体を包含する。
【０１０９】
「ネイティブ配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド」とは自然界より誘導される相当するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。そのようなネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは自然界から単離することができ、又は、組み換え又は合成手段により製造できる。「ネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド」という用語は特に特定のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド（例えば細胞外ドメイン配列）の天然に存在するトランケーションされた、又は分泌された形態、ポリペプチドの天然に存在する変異体型（例えばオルタナティブスプライシングされた形態）及び天然に存在する対立遺伝子変異体を包含する。本発明は添付図面に示す完全長のアミノ酸配列を含む成熟又は完全長のネイティブ配列ポリペプチドである本明細書に開示されたネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを提供する。開始及び終止コドンは図面中では太字で示し、下線を付した。しかしながら、添付図面において開示したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは図面中アミノ酸位置１として本明細書において表記したメチオニン残基で開始するように示されているが、図面中のアミノ酸位置１よりも上流又は下流に位置する他のメチオニン残基もＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのための開始アミノ酸残基として使用してよい。
【０１１０】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」とは膜貫通及び細胞質ドメインを本質的に伴わないＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの形態を指す。通常は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのＥＣＤはそのような膜貫通及び／又は細胞質ドメイン１％未満を有し、好ましくはそのようなドメイン０．５％未満を有する。本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに関して同定される何れの膜貫通ドメインも疎水性ドメインのこのような型を同定するために当該分野で日常的に使用されている基準に従って同定される。膜貫通ドメインの厳密な境界は変動してよいが、最もあり得るのは本明細書において最初に同定されたドメインの何れかの末端において約５アミノ酸を超えないものである。従って場合により、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの細胞外ドメインは実施例又は明細書において同定される膜貫通ドメイン／細胞外ドメインの境界の何れかの側において約５以下のアミノ酸を含んでよく、付随シグナルペプチドを有するか有しないそのようなポリペプチド及びそれらをコードする核酸は本発明により意図される。
【０１１１】
本明細書に開示した種々のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの「シグナルペプチド」の大まかな位置は本明細書及び／又は添付図面に示す通りである。しかしながら、シグナルペプチドのＣ末端境界は変動してよいが、最もあり得るのは本明細書において最初に同定されたシグナルペプチドＣ末端境界の何れかの側において約５アミノ酸を超えないものであり、ここでシグナルペプチドのＣ末端境界を、アミノ酸配列エレメントのそのような型を同定するために当該分野で日常的に使用されている基準に従って同定してよい（例えばＮｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：１−６（１９９７）及びｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６）参照）。更に又、場合により分泌ポリペプチドからのシグナル配列の切断は完全に均一ではなく、１つより多い分泌種をもたらす。シグナルペプチドが本明細書において同定されたシグナルペプチドＣ末端境界の何れかの側の５以下のアミノ酸内において切断されているこれ等の成熟ポリペプチド及びそれらをコードするポリヌクレオチドは本発明により意図される。
【０１１２】
「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド変異体」とはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、好ましくは、完全長のネイティブの配列の、本明細書に開示するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に定義するシグナルペプチドを欠いたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するものとして本明細書において定義される活性なＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しないＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの細胞外ドメイン、又は、本明細書に開示する完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列の何れかの他のフラグメント（例えば完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに関する完全なコーディング配列の一部分のみを示す核酸によりコードされるもの）を意味する。そのようなＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド変異体は例えば完全長のネイティブのアミノ酸配列のＮ又はＣ末端においてアミノ酸残基１つ以上が付加又は欠失しているＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを包含する。通常は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド変異体は、本明細書に開示する完全長のネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを欠いたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しないＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの細胞外ドメイン、又は、本明細書に開示する完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列の何れかの他の特に定義されたフラグメントに対して約８０％又はそれ以上のアミノ酸配列同一性を有するか、或いは、約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％又はそれ以上のアミノ酸配列同一性を有する。通常はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリペプチドは約１０アミノ酸長又はそれ以上、或いは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長又はそれ以上である。場合により、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリペプチドはネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列と比較して１つより多くない保存的アミノ酸置換を有するか、又は、ネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列と比較して２、３、４、５、６、７、８、９又は１０より多くない保存的アミノ酸置換を有する。
【０１１３】
本明細書において同定されるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列に関して「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」とは、最大パーセント配列同一性を達成するために必要に応じて配列をアラインし、ギャップを導入した後に、如何なる保存的置換も配列同一性の部分とはみなさない場合に、特定のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアライメントは当業者の知る種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような市販のコンピュータソフトウエアを用いて達成することができる。当業者は比較すべき配列の完全長に渡り最大アライメントを達成するために必要な何れかのアルゴリズムを含むアライメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら本明細書の目的のためには、％アミノ酸同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて発生させ、ここでＡＬＩＧＮ−２プログラムに関する完全なソースコードは以下の表１に示す。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．により作成され、そして以下の表１に示すソースコードは合衆国著作権局Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９において合衆国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下にユーザードキュメンテーションと共に保存されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手するか、又は、以下の表１に示すソースコードからコンパイルしてよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄ上で使用するためにコンパイルしなければならない。全ての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ−２プログラムにより設定され、変更されない。
【０１１４】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２を使用する状況において、あるアミノ酸配列Ａのあるアミノ酸配列Ｂに対する％アミノ酸配列同一性（これは代替としてあるアミノ酸配列Ｂに対する特定の％アミノ酸配列同一性を有する又は含むあるアミノ酸配列Ａと表現できる）は下記式：
１００×分数Ｘ／Ｙ
［式中、ＸはＡ及びＢのアライメントをプログラムする配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により同一マッチと採点されたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である］により計算される。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合は、Ｂに対するＡの％アミノ酸配列同一性はＡに対するＢの％アミノ酸配列同一性と等しくならない。この方法を用いた％アミノ酸配列同一性計算の例として、表２及び３は「ＰＲＯ」と表記したアミノ酸配列に対する「比較蛋白」と表記したアミノ酸配列の％アミノ酸配列同一性をどのように計算するかを示しており、ここで「ＰＲＯ」は目的の仮説的ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列を示し、「比較蛋白」は目的の「ＰＲＯ」ポリペプチドを比較する相手であるポリペプチドのアミノ酸配列を示し、そして「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」は各々異なる仮説的アミノ酸残基を示す。特段の記載が無い限り、本明細書で使用する全ての％アミノ酸配列同一性の値はＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを用いて直前のパラグラフにおいて記載した通りに得られる。
【０１１５】
「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリヌクレオチド」又は「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体核酸配列」とは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、好ましくは本明細書に定義する活性なＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードし、そして、本明細書に開示する完全長のネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを欠いた完全長のネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しないＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの細胞外ドメイン、又は、本明細書に開示する完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列の何れかの他のフラグメント（例えば完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに関する完全なコーディング配列の一部分のみを示す核酸によりコードされるもの）に対して少なくとも約８０％の核酸配列同一性を有する核酸分子を意味する。通常は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリヌクレオチドは本明細書に開示する完全長のネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを欠いた完全長のネイティブの配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列、本明細書に開示するシグナルペプチドを有するか有しないＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの細胞外ドメイン、又は、本明細書に開示する完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド配列の何れかの他のフラグメントをコードする核酸配列に対して、約８０％又はそれ以上の核酸配列同一性を有するか、或いは、約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％又はそれ以上の核酸配列同一性を有する。変異体はネイティブヌクレオチド配列を包含しない。
【０１１６】
通常はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリヌクレオチドは約５ヌクレオチド長又はそれ以上、或いは約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０又は１０００ヌクレオチド長又はそれ以上であり、ここで、この文脈において、「約」という用語は言及したヌクレオチド配列長±その言及した長さの１０％を意味する。
【０１１７】
本明細書において同定されるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３コード核酸配列に関して「パーセント（％）核酸配列同一性」とは、最大パーセント配列同一性を達成するために必要に応じて配列をアラインし、ギャップを導入した後に、目的のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３核酸配列におけるヌクレオチドと同一である候補配列におけるヌクレオチドのパーセンテージとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアライメントは当業者の知る種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような市販のコンピュータソフトウエアを用いて達成することができる。しかしながら本明細書の目的のためには、％核酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて発生させ、ここでＡＬＩＧＮ−２プログラムに関する完全なソースコードは以下の表１に示す。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．により作成され、そして以下の表１に示すソースコードは合衆国著作権局Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９において合衆国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下にユーザードキュメンテーションと共に保存されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ
Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手するか、又は、以下の表１に示すソースコードからコンパイルしてよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄ上で使用するためにコンパイルしなければならない。全ての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ−２プログラムにより設定され、変更されない。
【０１１８】
核酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２を使用する状況において、ある核酸配列Ｃのある核酸配列Ｄに対する％核酸配列同一性（これは代替としてある核酸配列Ｄに対する特定の％核酸配列同一性を有する又は含むある核酸配列Ｃと表現できる）は下記式：
１００×分数Ｗ／Ｚ
［式中、ＷはＣ及びＤのアライメントをプログラムする配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により同一マッチと採点されたヌクレオチドの数であり、ＺはＤにおけるヌクレオチドの総数である］により計算される。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと等しくない場合は、Ｄに対するＣの％核酸配列同一性はＣに対するＤの％核酸配列同一性と等しくならない。％核酸配列同一性計算の例として、表４及び５は「ＰＲＯ−ＤＮＡ」と表記した核酸配列に対する「比較ＤＮＡ」と表記した核酸配列の％核酸配列同一性をどのように計算するかを示しており、ここで「ＰＲＯ−ＤＮＡ」は目的の仮説的ＰＲＯ−コード核酸配列を示し、「比較ＤＮＡ」は目的の「ＰＲＯ−ＤＮＡ」核酸分子を比較する相手である核酸分子のヌクレオチド配列を示し、そして「Ｎ」、「Ｌ」及び「Ｖ」は各々異なる仮説的ヌクレオチドを示す。特段の記載が無い限り、本明細書で使用する全ての％核酸配列同一性の値はＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを用いて直前のパラグラフにおいて記載した通りに得られる。
【０１１９】
本発明は又ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする核酸分子であり、そして、本明細書において定義した完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション及び洗浄の条件の下にハイブリダイズすることができるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリヌクレオチドを提供する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ポリヌクレオチドによりコードされるものであってよい。
【０１２０】
「完全長コーディング領域」という用語は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする核酸に言及して使用する場合は、本発明の完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列を指す（これは添付図面において開始〜終止コドンに示される場合が多い）。「完全長コーディング領域」という用語は、ＡＴＣＣ寄託核酸に言及して使用する場合は、ＡＴＣＣに寄託されたベクター内に挿入されるｃＤＮＡのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドコード部分を指す（これは添付図面において開始〜終止コドンに示される場合が多い）。
【０１２１】
「単離された」とは、本明細書において開示する種々のポリペプチドを説明するために用いる場合は、その天然の環境の成分中から同定及び分離及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。その天然の環境の夾雑成分は、ポリペプチドの診断又は治療上の使用を典型的に妨害する物質であり、酵素、ホルモン及び他の蛋白性又は非蛋白性の溶質を包含してよい。本発明は（１）スピニングカップシーケネーターを用いてＮ末端又は内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、又は、（２）クーマシーブルー又は好ましくは銀染色を用いた非還元又は還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均質性となるように、ポリペプチドが精製されることを可能とする。単離されたポリペプチドは組み換え細胞内のインサイチュのポリペプチドを包含するが、その理由はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの天然の環境の成分の少なくとも１つが存在しないためである。しかしながら通常は単離されたポリペプチドは少なくとも１つの精製工程により製造される。
【０１２２】
「単離された」ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドコード核酸又は他のポリペプチドコード核酸はポリペプチドコード核酸の天然の原料において通常それが付随している夾雑核酸分子少なくとも１つから識別され、分離される核酸分子である。単離されたポリペプチドコード核酸分子は自然界にそれが存在する形態又は状態以外のものである。従って単離されたポリペプチドコード核酸分子は天然の細胞内にそれが存在する場合の特定のポリペプチドコード核酸分子とは区別される。しかしながら、単離されたポリペプチドコード核酸分子は、例えば核酸分子が天然の細胞の場合とは異なる染色体位置にある場合に通常ポリペプチドを発現する細胞に含有されるポリペプチドコード核酸分子を包含する。
【０１２３】
「制御配列」という用語は特定の宿主生物中の作動可能に連結したコーディング配列の発現の為に必要なＤＮＡ配列を指す。例えば原核生物に適する制御配列はプロモーター、場合によりオペレーター配列及びリボソーム結合部位を包含する。真核生物の細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することがわかっている。
【０１２４】
核酸はそれが別の核酸配列との機能的関連性の内部におかれる場合に「作動可能に連結」されている。例えばプレ配列又は分泌リーダーに関わるＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレ蛋白として発現される場合にはポリペプチドに関するＤＮＡに作動可能に連結しており；プロモーター又はエンハンサーはそれが配列の転写に影響する場合にはコーディング配列に作動可能に連結しており；又は、リボソーム結合部位はそれが翻訳を促進するように位置付けられている場合にコーディング配列に作動可能に連結している。一般的に「作動可能に連結した」とは、連結されるＤＮＡ配列が隣接しており、そして、分泌リーダーの場合は隣接し、そして読み込み期にある。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は好都合な制限部位におけるライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを従来の慣行に従って使用する。
【０１２５】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」とは当業者が容易に決定できるものであり、一般的にプローブ長、洗浄温度及び塩濃度に依存した実験的計算である。一般的により長いプローブほど適切なアニーリングのためにはより高温を必要とし、より短いプローブほどより低温を必要とする。ハイブリダイゼーションは一般的には、相補鎖が環境中にその融点より低温で存在する場合は変性したＤＮＡが再アニーリングする能力に依存している。プローブとハイブリダイズ可能な配列との間の所望の相同性の程度が高いほど、使用できる相対温度は高くなる。その結果、より高い相対温度は反応条件をよりストリンジェントとする傾向があり、より低い温度はその傾向が小さい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーに関する追加的な詳細及び説明については、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（１９９５）を参照のこと。
【０１２６】
「ストリンジェントな条件」又は「高ストリンジェンシー条件」とは、本明細書において定義する場合は、（１）低いイオン強度及び高い洗浄温度、例えば０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを５０℃において使用するか；（２）ハイブリダイゼーションの間は変性剤、例えばホルムアミド、例えば５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミド＋０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．５＋７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを４２℃で用いるか；又は（３）５０％ホルミアミド、５ｘＳＳＣ（０．７５ＭＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５ｘＤｅｎｈａｒｄｔ溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ及び１０％デキストランスルフェートを４２℃で使用し、そして洗浄は４２℃において０．２ｘＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）及び５０％ホルムアミド中５５℃、その後５５℃におけるＥＤＴＡ含有０．１ｘＳＳＣよりなる高ストリンジェンシー洗浄条件を用いるものとして特定してよい。
【０１２７】
「中等度にストリンジェントな条件」とは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９による説明として特定してよく、そして、上記したものより低ストリンジェントな洗浄溶液及びハイブリダイゼーションの条件（例えば温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）の使用を包含する。中等度にストリンジェントな条件の例は、２０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸３ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘＤｅｎｈａｒｄｔ溶液、１０％デキストランスルフェート及び２０ｍｇ／ｍｌ変性攪拌サケ精子ＤＮＡを含む溶液中３７℃での一夜のインキュベーション及びその後の約３７〜５０℃における１ｘＳＳＣ中フィルターの洗浄である。プローブ長等のようなファクターを適合させるために必要に応じて温度、イオン強度等を調節する方法は当業者の知る通りである。
【０１２８】
「エピトープタグ付けされた」という用語は本明細書においては、「タグポリペプチド」に融合されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを含むキメラポリペプチドを指す。タグポリペプチドは対応する抗体が作成できるエピトープを提供するために十分な残基を有し、かつ、融合相手のポリペプチドの活性を妨害しないように十分短い。タグポリペプチドは好ましくは抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないほど高度にユニークなものである。適当なタグポリペプチドは一般的に少なくとも６アミノ酸残基、そして通常は約８〜５０アミノ酸残基（好ましくは約１０〜２０アミノ酸残基）を有する。
【０１２９】
「活性な」又は「活性」とは本明細書の目的のためにはネイティブ又は天然に存在するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの生物学的及び／又は免疫学的活性を保持しているＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの形態を指し、ここで、「生物学的」活性とは、ネイティブ又は天然に存在するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドにより保有される抗原性エピトープに対する抗体の生産を誘導する能力以外のネイティブ又は天然に存在するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドにより誘発される生物学的機能（抑制性又は促進性の何れか）を指し、そして、「免疫学的」活性とは、ネイティブ又は天然に存在するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドにより保有される抗原性エピトープに対する抗体の生産を誘導する能力を指す。
【０１３０】
「アンタゴニスト」という用語は［特段の記載が無い限り］最も広範な意味において使用され、そして本明細書に開示するネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの生物学的活性を部分的又は完全にブロック、抑制又は中和する何れかの分子を包含する。同様に、「アゴニスト」という用語は［特段の記載が無い限り］最も広範な意味において使用され、そして本明細書に開示するネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの生物学的活性を模倣する何れかの分子を包含する。適当なアゴニスト又はアンタゴニスト分子は特にネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小型有機分子等のアゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体フラグメント、フラグメント又はアミノ酸配列変異体を包含する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定するための方法はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを候補アゴニスト又はアンタゴニスト分子に接触させること、及び、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに通常付随している１つ以上の生物学的活性における検出可能な変化を測定することを含んでよい。
【０１３１】
「治療する」又は「治療」又は「緩解」とは治療的な施療及び予防的又は予防的な手段の両方を指し、ここで目的は標的の病的状態又は障害を予防するか緩徐化（低減）することである。治療を必要とする被験体は既に疾患を有するか、又は、疾患に罹患し易いか、又は疾患を予防すべきものであってよい。
【０１３２】
「長期」投与とは長期間に渡り初期の治療効果（活性）を維持するために短期の様式とは逆の持続的な様式における薬剤の投与を指す。「間歇的」投与は中断無く連続的に行われるのではなく、むしろ周期的な性質を有する治療である。
【０１３３】
「哺乳類」とは治療の目的のためには、哺乳類に分類される何れかの動物、例えばヒト、げっ歯類、例えばラット又はマウス、家畜及び牧場動物及び動物園、競技用又は愛玩用の動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ等を指す。好ましくは、哺乳類はヒトである。
【０１３４】
別の治療薬１つ以上と「組み合わせた」投与は同時（併用）及び何れかの順序の連続投与を包含する。
【０１３５】
「担体」とは本明細書においては、使用する用量及び濃度において曝露対象となる細胞又は哺乳類に対して非毒性である製薬上許容しうる担体、賦形剤又は安定化剤を包含する。生理学的に許容される担体は水性のｐＨ緩衝溶液である場合が多い。生理学的に許容される担体の例は緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；蛋白、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；単糖類、２糖類及び他の炭水化物、例えばグルコース、マンノース又はデキストリン；キレート形成剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトール及びソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；及び／又はノニオン系界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭを包含する。
【０１３６】
「固相」とは本発明の抗体が接着できる非水性のマトリックスを意味する。本明細書において包含される固相の例はガラス（例えば制御細孔ガラス）、多糖類（例えばアガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンから部分的又は完全に形成されているものを包含する。文脈に応じて、固相は試験プレートのウエルを包含でき；他の場合は精製カラムである（例えばアフィニティークロマトグラフィーカラム）。この用語は又、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されているもののような個々の粒子の不連続の固相を包含する。
【０１３７】
「リポソーム」とは哺乳類への薬剤（例えばＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド又はそれに対する抗体）の送達の為に有用な脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤の種々の型よりなる小型小胞である。リポソームの成分は生物学的膜の脂質の配置と同様に、二層の形成において共通して配置される。
【０１３８】
「小分子」とは約５００ダルトン未満の分子量を有するものとして本明細書においては定義する。
【０１３９】
本明細書に開示するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合オリゴペプチド、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子又はこれ等のアゴニスト又はアンタゴニストの「有効量」とは、特に記載した目的を実施するために十分な量である。「有効量」は記載した目的との関係において実験的、そして日常的に決定してよい。
【０１４０】
「治療有効量」という用語は、被験体又は哺乳類における疾患又は障害を「治療する」為に有効な抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子又は他の薬剤の量を指す。癌の場合は、薬剤の治療有効量は癌細胞の数を低減するか；腫瘍サイズを低減するか；末梢臓器への癌細胞の浸潤を抑制（即ちある程度まで緩徐化、好ましくは停止）するか；腫瘍の転移を抑制（即ちある程度まで緩徐化、好ましくは停止）するか；腫瘍の生育をある程度まで抑制するか；及び／又は癌に関わる症状１つ以上をある程度まで軽減し得る。「治療する」の本明細書における定義を参照のこと。薬剤が既存の癌細胞の成育を予防及び／又は殺傷する限り、それは細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性であってよい。
【０１４１】
「心臓血管、内皮及び血管形成の障害」、「心臓血管、内皮及び血管形成の機能不全」、「心臓血管、内皮又は血管形成の障害」及び「心臓血管、内皮又は血管形成の機能不全」という表現は互換的に使用され、一つには血管に影響する全身性の障害、例えば真性糖尿病、並びに、動脈、毛細管、静脈及び／又はリンパのような脈管自体の疾患を指す。これには血管形成及び／又は心臓血管形成を刺激する適応症、及び、血管形成及び／又は心臓血管形成を抑制するものが包含される。このような障害は、例えば動脈疾患、例えばアテローム性動脈硬化症、高血圧、炎症性血管炎、レイノー病及びレイノー現象、動脈瘤及び動脈再狭窄、静脈及びリンパの障害、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎及びリンパ浮腫、及び他の血管障害、例えば末梢血管疾患、癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫（毛細管及び海綿状）、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫及びリンパ管肉腫、腫瘍血管形成、外傷、例えば創傷、熱傷及び他の傷害組織、移植物固定、瘢痕、虚血再灌流傷害、関節リウマチ、脳血管疾患、腎疾患、例えば急性腎不全又は骨粗鬆症を包含する。これ等にはまたアンギナ、心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心臓肥大及び心不全、例えばＣＨＦが包含される。
【０１４２】
「肥大」とは本明細書においては、腫瘍形成の関与しない天然の成長とは無関係の臓器又は構造の嵩の増大として定義される。臓器又は組織の肥大は個々の細胞の嵩の増大（真の肥大）又は組織を構成している細胞の数の増大（過形成）の何れか、又は両方によるものである。心臓のような特定の臓器は出生後短期間で分裂する能力を失う。従って、「心臓肥大」とは成人において同時細胞分裂を伴わない心筋細胞のサイズ及び収縮性蛋白含有量の増大を特徴とする心臓の嵩の増大として定義される。肥大を刺激する原因となるストレスの特徴（例えば心筋梗塞の場合のような増大した前負荷、増大した後負荷、筋細胞の消失、又は収縮性の一次的減圧）が応答の性質を決定する場合に重要な役割を果たしていると考えられる。心臓肥大の早期の段階は通常は筋原線維の大きさ及びミトコンドリアの増大により、並びに、ミトコンドリア及び核の膨大により形態学的には特徴付けられる。この段階において、筋細胞は正常よりも大型となるが、細胞の組織は大半は温存されている。心臓肥大のより進行した段階においては特定の細胞内小器官、例えばミトコンドリアのサイズ又は数の優先的な増大が生じ、そして、新しい収縮エレメントが不規則に細胞の局所的領域に付加される。長時間持続する肥大に関与した細胞は細胞組織のより顕著な破壊を呈し、例えば高度に小葉化した膜を伴った顕著に膨大した核が隣接する筋原線維を排除し、正常なＺ線の表示の崩壊をもたらす。「心臓肥大」という用語は伏在する心臓障害とは無関係に心筋の構造的損傷の種々の程度を特徴とするこの状態の進行の全ての段階を包含するために使用される。従って、用語は又、上昇した血圧、大動脈の狭窄又は心筋梗塞のような心臓肥大の発生に寄与する生理学的状態を包含する。
【０１４３】
「心不全」とは代謝している組織の条件に対して必要とされる速度では心臓が血液を送液しない心臓機能の異常を指す。心不全は虚血性、先天性、リューマチ性又は特発性の形態を含む多くの要因により誘発され得る。
【０１４４】
「鬱血性心不全」（ＣＨＦ）は進行した病的状態であり、ここでは心臓が末梢組織に対し酸素付加された血液を送達するために十分な心拍出量（経時的に心臓により送液される血液の容量）を供給することがますます不可能になる。ＣＨＦが進行するに従い、構造的及び血行力学的な損傷が生じる。これ等の損傷は多様に顕在化するが、１つの特徴的症状は心室の肥大である。ＣＨＦは多くの種々の心臓障害の共通した最終結果である。
【０１４５】
「心筋梗塞」は一般的に冠動脈のアテローム性動脈硬化症から生じ、混合型の冠動脈血栓を伴う場合が多い。これは２つの主要な型、即ち、心筋の壊死に心室壁の全厚みが関与している経壁梗塞、及び、壊死に心内膜下、壁内心筋、又は両方が関与しており、心室壁から心外膜に至る全行程への伸長を伴わない心内膜下（非経壁）梗塞に分類される。心筋梗塞は血行力学的作用の変化及び心臓の損傷部及び健常部における構造の改変の両方をもたらすことがわかっている。即ち、例えば、心筋梗塞は心臓の最大心拍出量及び一回拍出量を低下させる。更に又、心筋梗塞に付随しているものは間質において生じるＤＮＡ合成の刺激並びに罹患していない心臓の領域におけるコラーゲンの形成の増大である。
【０１４６】
例えば増大した総末梢抵抗に起因する長期間の高血圧に付された心臓に対して与えられる増大したストレス又は緊張の結果として、心臓肥大には「高血圧」が長く関わっている。慢性的な圧力の過剰負荷の結果として肥大した心室の特徴は減損した拡張期の機能である。Ｆｏｕａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，４：１５００−１５０６（１９８４）；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，５：８６９−８７４（１９８５）。長期の左心室の弛緩は、正常又は過剰な収縮期機能にも関わらず、早期の本態性高血圧において検出されている。Ｈａｒｔｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，６：３２９−３３８（１９８４）。しかしながら、血圧のレベルと心臓肥大の間には緊密な平行性は無い。抗高血圧療法に応答した左心室機能の改善がヒトにおいて報告されているが、利尿剤（ヒドロクロロチアジド）、β−ブロッカー（プロプラノロール）又はカルシウムチャンネルブロッカー（ジルチアゼム）で多様に治療されている患者は拡張期機能の改善を伴わない左心室肥大の病態逆転を示している。Ｉｎｏｕｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，５３：１５８３−７（１９８４）。
【０１４７】
心臓肥大に伴う別の複合的心臓疾患は「肥大性心筋症」である。この状態は非常に多様な形態学的、機能的及び臨床的な側面により特徴付けられ（Ｍａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３１６：７８０−７８９（１９８７）；Ｓｐｉｒｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２０：７４９−７５５（１９８９）；Ｌｏｕｉｅ  ａｎｄ  Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｐｒｏｇ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．，３６：２７５−３０８（１９９４）；Ｗｉｇｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９２：１６８０−１６９２（１９９５））、その不均質性はそれが全世代の患者に及んでいるという事実により強調されている。Ｓｐｉｒｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３６：７７５−７８５（１９９７）。肥大性心筋症の原因もまた多様であり、殆ど解明されていない。一般的に筋節性の蛋白をコードする遺伝子における突然変異が肥大性心筋症に関連している。最近のデータによれば、β−ミオシンの重鎖の突然変異が家族性の肥大性心筋症の症例の約３０〜４０パーセントを占めることが示唆されている。Ｗａｔｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２６：１１０８−１１１４（１９９２）；Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９１：５３２−５４０（１９９５）；Ｍａｒｉａｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９２：１３３６−１３４７（１９９５）；Ｔｈｉｅｒｆｅｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，７７：７０１−７１２（１９９４）；Ｗａｔｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎ．，１１：４３４−４３７（１９９５）。β−ミオシン重鎖以外に、遺伝子突然変異の他の位置には心臓トロポニンＴ、アルファトポミオシン、心臓ミオシン結合蛋白Ｃ、必須ミオシン軽鎖及び調節ミオシン軽鎖が包含される。Ｍａｌｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｔｋｉｎｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，１２：２９５−３０２（１９９７）を参照のこと。
【０１４８】
弁上部「大動脈狭窄症」は上行大動脈の狭窄を特徴とするが、他の動脈、例えば肺動脈も罹患する場合がある遺伝性の血管障害である。未治療の大動脈狭窄は心筋の肥大及び最終的には心不全及び死亡の原因となる上昇した心内圧力をもたらす場合がある。この障害の病因は完全には解明されていないが、内側平滑筋の肥大及び恐らくは過形成がこの障害の顕著な側面である。エラスチン遺伝子の分子変異体が大動脈狭窄の発症及び病因に関与していると報告されている。１９９７年７月２２日発行の米国特許第５，６５０，２８２号。
【０１４９】
「弁膜逆流」は心臓の弁の障害をもたらす心臓疾患の結果として生じる。種々の疾患、例えばリューマチ熱は弁のオリフィスの収縮又は引き離しをもたらす場合があるが、他の疾患は心内膜炎、心内膜又は房室オリフィスの内膜の炎症及び心臓手術の原因となる場合がある。弁狭窄部の狭小化および弁の閉鎖欠陥のような欠陥は心臓腔中の血液の蓄積又は弁を通過する血液の逆流をもたらす。是正しない場合、長期の弁の狭窄又は不全により心臓肥大及び関連する心筋の損傷がもたらされ、それにより最終的には弁の交換が必要となる場合がある。
【０１５０】
「免疫関連疾患」という用語は哺乳類の免疫系の要素が哺乳類における罹患に対し、誘発、媒介又は他の態様で寄与する疾患を意味する。同様に包含されるものは免疫応答の刺激又は介入が疾患の進行に対して緩解作用を有する疾患である。この用語に包含されるものは免疫媒介炎症性疾患、非免疫媒介炎症性疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、新生物形成等である。
【０１５１】
「Ｔ細胞媒介疾患」という用語はＴ細胞が哺乳類における罹患を直接又は間接的に媒介するか、他の態様において寄与する疾患を意味する。Ｔ細胞媒介疾患は細胞媒介作用、リンホカイン媒介作用等に関連し得、そしてＢ細胞が例えばＴ細胞の分泌したリンホカインにより刺激される場合にはＢ細胞関連作用にも関連している。
【０１５２】
免疫関連及び一部は免疫又はＴ細胞媒介性である炎症性の疾患は、全身エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身硬化症（硬皮症）、特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）、甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、真性糖尿病、免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパシー又はギラン−バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、肝胆疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型及び他の非肝向性のウィルスによる肝炎）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎及び硬化性胆管炎、炎症性腸疾患（潰瘍性結腸炎、クローン病）、グルテン感受性腸症及びホイップル病、自己免疫性又は免疫媒介性の皮膚疾患、例えば水疱性疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹、肺の免疫学的疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎、又は移植関連疾患、例えば移植片拒絶及び移植片対宿主病を包含する。感染性疾患はウィルス疾患、例えばＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染）、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ型肝炎、ヘルペス等、細菌感染症、カビ感染症、原虫感染症及び寄生虫感染症を包含する。
【０１５３】
「自己免疫疾患」とは本明細書においては個体の自身の組織又は臓器又は同時分離物から生じるかそれを指向する疾患又は障害又はその顕在化又はそれより生じる状態である。これ等の自己免疫及び炎症性の障害の多くにおいて、多くの臨床上及び研究用のマーカーが存在し得、例えば限定しないが、高ガンマグロブリン血症、自己抗体高値、抗原−抗体複合体組織付着、コルチコステロイド又は免疫抑制剤治療の奏功、及び罹患組織におけるリンパ様細胞の凝集が挙げられる。Ｂ細胞媒介自己免疫疾患の何れの一理論にも制約されないが、Ｂ細胞は自己抗体生産、免疫複合体形成、樹状及びＴ細胞の活性化、サイトカイン合成、直接のケモカイン放出及び異所性のリンパ球新生のための病巣の提供を含む多くの機構的経路を介してヒトの自己免疫疾患において病原性作用を呈すると考えられる。これ等の経路の各々が自己免疫疾患の病理において多用な程度で関与していると考えられる。
【０１５４】
「自己免疫疾患」は臓器特異的疾患であり得る（即ち、免疫応答が内分泌系、造血系、皮膚、心肺系、胃腸肝臓系、腎臓系、甲状腺、耳、神経筋系、中枢神経系のような臓器系に特異的に指向される）か、又は、複数の臓器系を罹患させることができる全身性の疾患（例えば全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ、多発性筋炎等）であり得る。好ましいそのような疾患は自己免疫リウマチ学的障害（例えば慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、硬皮症、ＳＬＲ及びループス腎炎のような狼瘡、多発性筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群及び乾癬性関節炎）、自己免疫性の胃腸及び肝臓の障害（例えば炎症性腸疾患（例えば潰瘍性結腸炎及びクローン病）、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎及びセリアック病）、血管炎（例えばＡＮＣＡ関連血管炎、例えばチャーグ−ストラウス血管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症及び多発性動脈炎）、自己免疫性神経障害（例えば多発性硬化症、眼球クローヌス筋クローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病及び自己免疫性多発ニューロパシー）、腎障害（例えば糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群及びバージャー病）、自己免疫性皮膚障害（例えば乾癬、蕁麻疹、膨疹、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡及び皮膚エリテマトーデス）、血液学的障害（例えば血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後の紫斑病及び自己免疫性溶血性貧血）、アテローム性動脈硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫性聴覚疾患（例えば内耳疾患及び聴覚消失）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植及び自己免疫内分泌障害（例えば糖尿病関連自己免疫性疾患、例えばインスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）、アジソン病及び自己免疫性甲状腺疾患（例えばグレーブス病及び甲状腺炎））を包含する。より好ましいこのような疾患は例えば関節リウマチ、潰瘍性結腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、狼瘡、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎及び糸球体腎炎を包含する。
【０１５５】
場合により上記したものを包含する本明細書において定義する他の自己免疫疾患の特定の例は限定しないが、関節炎（急性及び慢性、関節リウマチ、例えば若年性発症型の関節リウマチ及びリューマチ様滑膜炎の段階、痛風又は痛風性関節炎、急性免疫学的関節炎、慢性炎症性関節炎、変性関節炎、ＩＩ型コラーゲン誘導関節炎、感染性関節炎、ライム関節炎、増殖性関節炎、乾癬性関節炎、スティル病、椎骨関節炎、骨関節炎、慢性進行性関節炎、変形性関節炎、原発性慢性多発性関節炎、反応性関節炎、閉経期関節炎、エストロゲン枯渇関節炎及び強直性脊椎炎／リウマチ様脊椎炎）、自己免疫性リンパ増殖性疾患、炎症性増殖亢進性皮膚疾患、乾癬、例えばプラーク乾癬、液状乾癬、膿疱性乾癬及び爪の乾癬、アトピー、例えばアトピー性疾患、例えば花粉症及びジョブ症候群、皮膚炎、例えば接触性皮膚炎、慢性接触性皮膚炎、剥脱性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、膨疹、疱疹状皮膚炎、貨幣状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、非特異的皮膚炎、一次刺激性接触性皮膚炎及びアトピー性皮膚炎、Ｘ連鎖高ＩｇＭ症候群、アレルギー性眼内炎症性疾患、蕁麻疹、例えば慢性アレルギー性蕁麻疹及び慢性特発性蕁麻疹、例えば慢性自己免疫性蕁麻疹、筋炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、毒性皮膚表皮壊死症、硬皮症（全身硬皮症を含む）、硬化症、例えば全身硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）例えば脊髄視覚ＭＳ、一次性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）及び回帰性弛張性ＭＳ（ＲＲＭＳ）、進行性全身硬化症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、播種性硬化症、失調性硬化症、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えばクローン病、自己免疫媒介胃腸疾患、胃腸炎症、結腸炎、例えば潰瘍性結腸炎、結腸潰瘍、微視的結腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、結腸ポリポーシス、壊死性腸炎及び経壁結腸炎、及び自己免疫性炎症性腸疾患）、腸炎症、壊疽性膿皮症、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、呼吸窮迫症候群、例えば成人又は急性の呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、ブドウ膜の全体又は部分の炎症、虹彩炎、脈絡膜炎、自己免疫性血液学的障害、移植片対宿主病、血管性水腫、例えば遺伝性の血管性水腫、髄膜炎の場合等の脳神経損傷、妊娠性ヘルペス、妊娠性類天疱瘡、陰嚢掻痒、自己免疫性早発性卵巣不全、自己免疫状態による突然難聴、ＩｇＥ媒介疾患、例えばアナフィラキシー及びアレルギー性及びアトピー性の鼻炎、脳炎、例えばラスムッセン脳炎及び辺縁及び／又は脳幹の脳炎、ブドウ膜炎、例えば前部ブドウ膜炎、急性前部ブドウ膜炎、肉芽腫性ブドウ膜炎、非肉芽腫性ブドウ膜炎、水晶体起因性ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は自己免疫性ブドウ膜炎、腎症の症候群を伴うか伴わない糸球体腎炎（ＧＮ）、例えば慢性又は急性の糸球体腎炎、例えば一次性ＧＮ、免疫媒介ＧＮ、膜性ＧＮ（膜性腎症）、特発性膜性ＧＮ又は特発性膜性腎症、膜性又は膜増殖性のＧＮ（ＭＰＧＮ）、例えばＩ型及びＩＩ型、及び急速進行性ＧＮ（ＲＰＧＮ）、増殖性腎炎、自己免疫性多内分泌腺不全、亀頭炎、例えば形質細胞亀頭炎、亀頭包皮炎、遠心性環状紅斑、色素異常性固定性紅斑、多形性紅斑、環状肉芽腫、光沢苔癬、硬化性萎縮性苔癬、慢性単純性苔癬、棘状性苔癬、扁平苔癬、葉状魚鱗癬、表皮剥離性角質増殖症、前悪性角化症、壊疽性膿皮症、アレルギー性の状態及び応答、食物アレルギー、薬剤アレルギー、昆虫アレルギー、稀少なアレルギー性障害、例えば肥満細胞症、アレルギー性反応、湿疹、例えばアレルギー性又はアトピー性湿疹、皮脂欠乏性湿疹、発汗障害性湿疹及び水疱性掌蹠湿疹、喘息、例えば細気管支喘息、気管支喘息、及び自己免疫性喘息、Ｔ細胞の浸潤の関与する状態及び慢性の炎症応答、外来性抗原、例えば妊娠中の胎児Ａ−Ｂ−Ｏ血液群に対する免疫反応、慢性肺炎症性疾患、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全、狼瘡、例えばループス腎炎、ループス脳炎、小児ループス、非腎性ループス、腎外ループス、円板状ループス及び円板状エリテマトーデス、脱毛性ループス、ＳＬＥ、例えば皮膚ＳＬＥ又は亜急性皮膚ＳＬＥ、新生児ループス症候群（ＮＬＥ）及び播種性エリテマトーデス、若年発症（Ｉ型）真性糖尿病、例えば小児ＩＤＤＭ、成人発症真性糖尿病（ＩＩ型）、自己免疫性糖尿病、特発性尿崩症、糖尿病性網膜炎、糖尿病性腎症、糖尿病性結腸炎、糖尿病性大動脈障害、サイトカイン及びＴリンパ球により媒介される急性又は遅発型の過敏症に関連する免疫応答、結核、サルコイドーシス、肉芽腫症、例えばリンパ腫様肉芽腫症、ヴェーゲナー肉芽腫症、顆粒球減少症、血管炎類、例えば血管炎、大型血管の血管炎（例えばリウマチ性多発性筋炎及び巨細胞性（高安）動脈炎）、中型血管の血管炎（川崎病及び結節性多発性動脈炎／結節性動脈周囲炎）、微視的多発性血管炎、免疫血管炎、ＣＮＳ血管炎、皮膚血管炎、過敏症血管炎、壊死性血管炎、例えば全身性壊死性血管炎及びＡＮＣＡ関連血管炎、例えばチャーグ‐ストラウス血管炎又は症候群（ＣＳＳ）及びＡＮＣＡ関連の小型血管の血管炎、側頭動脈炎、再生不良性貧血、自己免疫性再生不良性貧血、クームズ陽性貧血、ダイアモンド‐ブラックファン貧血、溶血性貧血又は免疫溶血性貧血、例えば自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、悪性貧血（悪性の貧血）、アジソン病、先天性低形成貧血又は形成不良（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠損、Ａ型血友病、自己免疫性好中球減少症、血球減少症、例えば汎血球減少症、白血球減少症、白血球漏出が関与する疾患、ＣＮＳ炎症性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、多臓器傷害症候群、例えば敗血症、外傷又は出血に二次的なもの、抗原−抗体複合体媒介疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、神経中膜炎、アレルギー性神経炎、ベーチェット病／症候群、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンス−ジョンソン症候群、類天疱瘡、例えば水疱性類天疱瘡及び皮膚類天疱瘡、天疱瘡（例えば尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、粘膜天疱瘡−膜類天疱瘡及び紅斑性天疱瘡）、自己免疫性多発性内分泌腺症、ライター病又は症候群、自己免疫性状態に起因する熱傷害、子癇前症、免疫複合体障害、例えば免疫複合体腎炎、抗体媒介腎炎、神経炎症性障害、多発性ニューロパシー、慢性ニューロパシー、例えばＩｇＭ多発性ニューロパシー又はＩｇＭ媒介ニューロパシー、血小板減少症（例えば心筋梗塞患者により発症）、例えば血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、輸血後の紫斑病（ＰＴＰ）ヘパリン誘導血小板減少症及び自己免疫性又は免疫媒介性の血小板減少症、例えば特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、例えば慢性又は急性のＩＴＰ、強膜炎、例えば特発性角膜強膜炎、上強膜炎、精巣及び卵巣の自己免疫性疾患、例えば自己免疫性精巣炎及び卵巣炎、一次性甲状腺機能低下症、上皮小体機能低下症、自己免疫性内分泌疾患、例えば甲状腺炎、例えば自己免疫性甲状腺炎、橋本病、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）又は亜急性甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、特発性甲状腺機能低下症、グレーブス病、多腺症候群、例えば自己免疫性多腺症候群、例えばＩ型（又は多腺性内分泌障害症候群）、新生物随伴症候群、例えば神経学的新生物随伴症候群、例えばランバート−イートン筋無力症候群又はイートン−ランバート症候群、スティッフマン症候群、スティッフパーソン症候群、脳脊髄炎、例えばアレルギー性脳脊髄炎又はアレルギー性の脳脊髄炎および実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、重症筋無力症、例えば胸腺腫関連重症筋無力症、小脳変性、神経筋緊張症、眼球クローヌス又は眼球クローヌス筋クローヌス症候群（ＯＭＳ）及び感覚神経障害、多病巣性運動神経障害、シーハン症候群、自己免疫性肝炎、慢性肝炎、ルポイド肝炎、巨細胞性肝炎、慢性活動性肝炎又は自己免疫性慢性活動性肝炎、肺炎、例えばリンパ様間質性肺炎（ＬＩＰ）、閉塞性細気管支炎（非移植）ｖｓＮＳＩＰ、ギラン‐バレー症候群、バージャー病（ＩｇＡ腎症）、特発性ＩｇＡ腎症、線状ＩｇＡ皮膚症、急性熱性好中球性皮膚症、角層下膿疱症、一過性棘細胞離開性皮膚症、硬変、例えば原発性胆汁性肝硬変及び肺硬変、自己免疫性腸症候群、セリアック病、セリアックスプルー（グルテン性腸症）、難治性スプルー、特発性スプルー、クリオグロブリン血症、例えば混合型クリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ルーゲーリック病）、冠動脈疾患、自己免疫性耳疾患、例えば自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性聴覚消失、多発性軟骨炎、例えば難治性又は回帰後又は回帰性の多発性軟骨炎、肺胞蛋白症、コーガン症候群／非梅毒性間質性角膜炎、ベル麻痺、スウィート病／症候群、しゅさ自己免疫症、帯状疱疹関連疼痛、アミロイド症、非癌性リンパ球増加症、原発性リンパ球増加症、例えばモノクローナルＢ細胞リンパ球増加症（例えば良性のモノクローナル高ガンマグロブリン血症及び重大性不明のモノクローナル高ガンマグロブリン血症、ＭＧＵＳ）、末梢ニューロパシー、新生物随伴症候群、チャンネル症、例えば癲癇、偏頭痛、不整脈、筋肉障害、聴覚消失、視力消失、周期的片麻痺及びＣＮＳのチャンネル症、自閉症、炎症性筋障害、巣状又は分節性又は巣状分節性の糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、内分泌性眼症、ブドウ膜網膜炎、脈絡網膜炎、自己免疫性血液学的障害、線維筋肉痛、多発性内分泌不全、シュミット症候群、副腎炎、胃萎縮、初老期痴呆、脱髄性疾患、例えば自己免疫性脱髄性疾患及び慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、ドレスラー症候群、円形脱毛症、完全脱毛症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レイノー現象、食道運動不全、強指症及び毛細血管拡張症）、例えば抗精子抗体による男性及び女性の自己免疫性不妊、混合型結合組織疾患、シャーガス病、リューマチ熱、再発性流産、農夫肺、多形性紅斑、心術後症候群、クッシング症候群、鳥飼育者肺、アレルギー性肉芽腫性血管炎、良性リンパ球性血管炎、アルポート症候群、肺胞炎、例えばアレルギー性肺胞炎及び線維形成性肺胞炎、間質性肺疾患、輸血反応、らい病、マラリア、寄生虫疾患、例えばリーシュマニア症、トリパノソーマ症（ｋｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、住血吸虫症、回虫症、アスペルギルス症、サンプター症候群、キャプラン症候群、デング熱、心内膜炎、心内膜心筋線維症、播種性間質性肺線維症、間質性肺線維症、線維形成性縦隔炎、肺線維症、特発性肺線維症、嚢胞性線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シャルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、例えば慢性毛様体炎、異虹彩色性毛様体炎、虹彩毛様体炎（急性又は慢性）又はフックス毛様体炎、ヘノッホ‐シェーンライン紫斑病、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）感染症、ＳＣＩＤ、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、エコーウィルス感染症、敗血症（全身炎症性応答症候群（ＳＩＲＳ））、内毒素血症、膵臓炎、サイロニン中毒、パルボウィルス感染症、風疹ウィルス感染症、ワクチン接種後症候群、先天性風疹感染症、エプスタイン・バーウィルス感染症、おたふくかぜ、エバンス症候群、自己免疫性性腺機能不全、シドナム舞踏病、後連鎖球菌性腎炎、閉塞性血栓性血管炎、甲状腺中毒症、脊髄ろう、脈絡膜炎、巨細胞性多発性筋痛、慢性過敏性肺炎、結膜炎、例えば春季カタル、乾性角結膜炎及び流行性角結膜炎、特発性腎炎症候群、最小変化腎症、良性家族性及び虚血再灌流性の傷害、移植臓器再灌流、網膜自己免疫、関節の炎症、気管支炎、慢性閉塞性気道／肺疾患、珪肺症、アフタ、アフタ性口内炎、動脈硬化性障害（脳血管不全）、例えば動脈硬化性の脳症及び動脈硬化性の網膜症、精液形成欠如、自己免疫性溶血、ベック病、クリオグロブリン症、デュプュイトラン拘縮、水晶体過敏性眼内炎、アレルギー性腸炎、らい性結節性紅斑、特発性顔面神経麻痺、慢性疲労症候群、リューマチ熱、ハマン−リッチ病、脊髄末梢神経聴覚消失、発作性ヘモグロビン尿症、性機能低下症、限局性回腸炎、白血球減少症、感染性単核細胞症、横断脊髄炎、原発性特発性粘液水腫、ネフローゼ、癒着性眼炎、肉芽腫性精巣炎、膵臓炎、急性多発性神経根炎、壊疽性膿皮症、ド・ケルヴァン甲状腺炎、
後天性脾臓萎縮、非悪性胸腺腫、リンパ小節胸腺炎、白斑、毒性ショック症候群、食物中毒、Ｔ細胞浸潤の関与する状態、白血球接着不全、サイトカイン及びＴリンパ球により媒介される急性又は遅発型の過敏症に関連する免疫応答、白血球漏出の関与する疾患、多臓器傷害症候群、抗原−抗体複合体媒介疾患、抗糸球体基底膜疾患、自己免疫性多発性内分泌腺症、卵巣炎、原発性粘液水腫、自己免疫性萎縮性胃炎、交感性眼炎、リウマチ病、混合型結合組織病、ネフローゼ症候群、インスリン炎、多内分泌腺不全、自己免疫性多腺症候群、例えばＩ型多腺症候群、成人発症性特発性上皮小体機能低下症（ＡＯＩＨ）、心筋症、例えば拡張性心筋症、後天性表皮水疱症（ＥＢＡ）、ヘモクロマトーシス、心筋炎、ネフローゼ症候群、原発性硬化性胆管炎、化膿性又は非化膿性の静脈洞炎、急性又は慢性の静脈洞炎、篩骨洞、前頭洞、上顎洞又は蝶形骨洞の洞炎、アレルギー性洞炎、好酸球関連障害、例えば好酸球増加症、肺浸潤性好酸球増加症、好酸球増加症−筋痛症候群、レフラー症候群、慢性好酸球性肺炎、局所的肺好酸球増加症、気管支肺アスペルギルス症、アスペルギルス腫又は好酸球含有肉芽腫、アナフィラキシー、脊椎関節症、セロネガティブ脊椎関節症、多内分泌腺自己免疫疾患、硬化性胆管炎、強膜、上強膜、慢性の粘膜皮膚カンジダ症、バートン症候群、幼児の一過性低ガンマグロブリン血症、ヴィスコット‐オールドリッチ症候群、毛細血管拡張性運動失調症候群、血管拡張、コラーゲン疾患に関連する自己免疫性障害、リューマチ、例えば慢性関節リウマチ、リンパ節炎、血圧応答の低下、血管機能不全、組織傷害、心臓血管虚血、痛覚過敏、腎虚血、大脳虚血及び血管形成に伴う疾患、アレルギー性過敏障害、糸球体腎炎、再灌流傷害、虚血性再灌流障害、心筋又は他の組織の再灌流傷害、リンパ腫性気管気管支炎、炎症性皮膚病、急性の炎症性要素を有する皮膚病、多臓器不全、水疱性疾患、腎皮質壊死、急性化膿性髄膜炎又は他の中枢神経系の炎症性障害、眼及び眼窩の炎症性障害、顆粒球輸血関連症候群、サイトカイン誘導毒性、睡眠発作、急性重篤炎症、慢性難治性炎症、腎盂炎、動脈内膜過形成、消化性潰瘍、心弁膜炎および子宮内膜症を包含する。
【０１５６】
「不安関連障害」という表現は不安、気分及び薬物乱用の障害を指し、例えば限定しないが抑鬱症、全般性不安障害、注意欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、分裂病、認知障害、痛覚過敏又は感覚障害である。このような障害は軽度から中等度の不安、全般的医学的状態による不安障害、特段に特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴ったパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、外傷後のストレス障害、社会恐怖症、社会不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、一極性障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、特段に特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱病、気分障害、物質誘導性気分障害、認知機能の増強、認知機能の消失とそれに伴った例えばアルツハイマー病、卒中、又は、脳の外傷、疾患又は傷害に起因する発作、例えば癲癇、学習障害／学習不能症、脳性まひを包含する。更に又、不安障害は人格障害、例えば限定されないが以下の型、即ち、偏執性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己陶酔性、強迫性、分裂様及び分裂型に当てはまる。
【０１５７】
「脂質代謝障害」という用語はコレステロール及びトリグリセリドの異常な臨床化学水準を差し、その場合、これ等の脂質の上昇した水準がアテローム性動脈硬化症の指標となる。更に又、異常な血清中脂質水準は種々の心臓血管病、例えば高血圧、卒中、冠動脈疾患、糖尿病及び／又は肥満の指標となる。
【０１５８】
「眼の異常」という用語はアテローム性動脈硬化症又は種々の眼科学的異常に関連する眼の潜在的障害を指す。そのような障害は限定しないが以下のもの、即ち、網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉鎖又は閉塞；網膜血管系の二次的萎縮をもたらす網膜変性、色素性網膜炎、黄斑ジストロフィー、シュタルガルト病、先天性停在夜盲症、コロイデレミア、回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離障害、ヴァーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ−マインザー症候群、シニアローケン症候群、バルデー−ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレーム症候群、コケーン症候群、先天性脊骨端形成異常、フリン−エアード症候群、フリートライヒ運動失調、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルベルス−シェーンベルク病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルヒ症候群、アラジール症候群、筋緊張性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮、ピエール・マリエ症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン−コルンツヴァイク症候群、無β‐リポ蛋白血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖体沈着症、ホモシスチン尿症又はマンノシドーシスを包含する。白内障もまた眼の異常と考えられ、そしてヒトダウン症候群、ハレルマン−ストレフ症候群、ロウ症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、上皮小体機能低下症又はコンラーディ症候群のような全身疾患と関連している。他の眼の発達異常は無虹彩、前部及び発育不全症候群を包含する。白内障は眼内感染又は炎症（ブドウ膜炎）の結果として生じる場合もある。
【０１５９】
抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３結合有機分子の「生育抑制量」とはインビトロ又はインビボのいずれかで細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞の生育を抑制することができる量である。新生物細胞生育を抑制する目的のための抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子の「生育抑制量」は実験的に、そして日常的に決定してよい。
【０１６０】
抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合オリゴペプチド又はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子の「細胞毒性量」とはインビトロ又はインビボのいずれかで細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞の破壊をもたらすことができる量である。新生物細胞生育を抑制する目的のための抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子の「細胞毒性量」は実験的に、そして日常的に決定してよい。
【０１６１】
「抗体」という用語は最も広範な意味において使用され、そして特に、例えば単一の抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニストおよび中和抗体を包含する）、多エピトープ性の特異性を有する抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体組成物、ポリクローナル抗体、一本鎖抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、及び、所望の生物学的又は免疫学的活性を示す限り抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体のフラグメント（後述）を包含する。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は本明細書においては抗体と互換的に使用する。
【０１６２】
「単離された抗体」とは、その天然の環境の成分中から同定及び分離及び／又は回収されているものを意味する。その天然の環境の夾雑成分は、抗体の診断又は治療上の使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン及び他の蛋白性又は非蛋白性の溶質を包含してよい。本発明は（１）Ｌｏｗｒｙ法により測定した場合に抗体の９５重量％超まで、最も好ましくは９９重量％超まで、（２）スピニングカップシーケネーターを用いてＮ末端又は内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、又は、（３）クーマシーブルー又は好ましくは銀染色を用いた還元又は非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均質性となるように、抗体が精製されることを可能とする。単離された抗体は組み換え細胞内のインサイチュの抗体を包含するが、その理由は抗体の天然の環境の成分少なくとも１つが存在しないためである。しかしながら通常は単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により製造される。
【０１６３】
基本的な４鎖抗体単位は２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖よりなるヘテロ４量体の糖蛋白である（ＩｇＭ抗体はＪ鎖と呼ばれる追加的ポリペプチドと共に基本的なヘテロ４量体単位５つよりなり、従って、１０抗原結合部位を含有するのに対し、分泌ＩｇＡ抗体は重合してＪ鎖と共に基本的４鎖単位２〜５つを含む多価の組立物を形成することができる）。ＩｇＧの場合は、４鎖単位は一般的に約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖はジスルフィド共有結合１つによりＨ鎖に連結されているのに対し、２つのＨ鎖はＨ鎖のアイソタイプに応じてジスルフィド結合１つ以上により相互に連結されている。各Ｈ及びＬ鎖はまた規則的な間隔で鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖はＮ末端において可変ドメイン（ＶＨ）とその後の３つの定常ドメイン（ＣＨ）を各α及びγ鎖について、そして４つのＣＨドメインをμ及びεアイソタイプについて有している。各Ｌ鎖はＮ末端において可変ドメイン（ＶＬ）とその後の定常ドメイン（ＣＬ）をそのもう一端において有している。ＶＬはＶＨとアラインされ、そしてＣＬは重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）とアラインされる。特定のアミノ酸残基が軽鎖及び重鎖の可変ドメインの間の界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬの対形成により単一の抗原結合部位が形成される。種々のクラスの抗体の構造及び特性については、例えばＢａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｄａｎｉｅｌ
Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，  Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ  （ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐ．７１，  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照のこと。
【０１６４】
何れかの脊椎動物種に由来するＬ鎖をその定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ及びラムダと称される２つの明確に異なった型の１つに割り付けることができる。その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に基づいて、免疫グロブリンは異なるクラス又はアイソタイプに割り付けることができる。免疫グロブリンには５クラス、即ちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、それぞれα、δ、ε、γ及びμと表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは更に、ＣＨ配列および機能の比較的小さい相違に基づいてサブクラスに分類され、例えばヒトは以下のサブクラス、即ち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。
【０１６５】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントは抗体の間で配列が広範に異なっているという事実を指す。Ｖドメインは抗原の結合を媒介し、そして、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を決定する。しかしながら、可変性は可変ドメインの１１０アミノ酸スパンに渡って均一に分布していない。むしろ、Ｖ領域は各々が９〜１２アミノ酸長の「超可変領域」と称される究極的な可変性のより短い領域によって分離された１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的不変のストレッチよりなる。ネイティブの重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、βシート構造を連結する、そして一部の場合においてはその部分を形成するループを形成する３つの超可変領域により連結されたβシート配置を大半が採用している４つのＦＲを含む。各鎖の超可変領域はＦＲにより近接して保持され、そして、他の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）参照）。定常ドメインは抗原に対する抗体の結合に直接関与していないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞内細胞毒性（ＡＤＣＣ）への抗体の参加を示す。
【０１６６】
「超可変領域」という用語は本明細書においては、抗原結合の原因となる抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般的に「相補性決定領域」即ち「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基（例えばＶＬ内の概ね残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７（Ｌ３）及びＶＨ内の概ね１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）及び９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ
Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））及び／又は「超可変ループ」に由来する残基（例えばＶＬ内の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）及び９１〜９６（Ｌ３）及びＶＨ内の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）及び９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７））からなる。
【０１６７】
「モノクローナル抗体」という用語は本明細書においては、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、即ち、集団を構成する個々の抗体は僅かな量において存在しえる可能な天然に存在する突然変異を除き同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に指向されている。更に又、さまざまな決定基（エピトープ）に対して指向されたさまざまな抗体を包含するポリクローナル抗体調製品とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対して指向されている。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は他の抗体の混在を伴うことなく合成される点において好都合である。修飾語の「モノクローナル」とは何れかの特定の方法による抗体の製造を必要とするものとみなしてはならない。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ方法により製造するか、又は、細菌、真核生物又は植物の細胞において組み換えＤＮＡ法を用いて作成してもよい（例えば米国特許第４，８１６，５６７号参照）。「モノクローナル抗体」は例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載の手法を用いてファージ抗体ライブラリから単離してもよい。
【０１６８】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分は特定の種から誘導されるか又は特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の相当する配列と同一又は相同であるが、鎖の残余部分は別の種から誘導されるか又は別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の相当する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びに、所望の生物学的活性を示す限りにおいてそのような抗体のフラグメントを含む（米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）参照）。本明細書における目的のキメラ抗体は非ヒト霊長類（例えば旧世界ザル、類人猿）から誘導された可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体を包含する。
【０１６９】
「未損傷の」抗体とは、抗原結合部位並びにＣＬ及び少なくとも重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインはネイティブの配列の定常ドメイン（例えばヒトネイティブ配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であってよい。好ましくは未損傷の抗体は１つ以上のエフェクター機能を有する。
【０１７０】
「抗体フラグメント」は未損傷の抗体の一部分、好ましくは未損傷の抗体の抗原結合又は可変の領域を含む。抗体フラグメントの例はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］参照）；一本鎖抗体分子；及び抗体フラグメントから形成された多重特異性の抗体を包含する。
【０１７１】
抗体のパパイン消化により「Ｆａｂ」フラグメントと称される２つの同一の抗原結合フラグメント、及び、容易に結晶化する能力を反映した表記である残余の「Ｆｃ」フラグメントが形成される。ＦａｂフラグメントはＨ鎖の可変領域（ＶＨ）に沿った全Ｌ鎖及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）よりなる。各Ｆａｂフラグメントは抗原結合に関しては１価であり、即ち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により単一の大型のＦ（ａｂ’）２フラグメントが生じ、これは２価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合したＦａｂフラグメントに概ね相当し、そしてなお抗原に交差結合することができる。Ｆａｂ’フラグメントは抗体のヒンジ領域に由来するシステインを１つ以上包含するＣＨ１ドメインのカルボキシ末端の追加的な数残基を有することによりＦａｂフラグメントとは異なっている。Ｆａｂ’−ＳＨは本明細書においては定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を担持しているＦａｂ’に対する表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは当初は間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として製造された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【０１７２】
Ｆｃフラグメントはジスルフィドで共に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能はＦｃ領域における配列により決定され、この領域は細胞の特定の型に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される部分でもある。
【０１７３】
「Ｆｖ」は完全な抗原認識及び結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは堅固な非共有結合の会合型としての１つの重鎖及び１つの軽鎖の可変領域ドメインの２量体よりなる。これ等の２ドメインの折り畳みにより、６つの超可変ループ（３ループは各々Ｈ及びＬ鎖由来）が生じ、これ等は抗原結合のためのアミノ酸残基を与え、そして抗体に抗原結合特異性をもたらす。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な僅か３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、全結合部位よりも低親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有している。
【０１７４】
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略記される「一本鎖Ｆｖ」は、連結されて単一のポリペプチド鎖となっているＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは更に、抗原結合の為の望ましい構造をｓＦｖが形成できるようにするＶＨ及びＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーを含む。ｓＦｖに関する考察はＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  １９９９，後出を参照のこと。
【０１７５】
「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間の対形成が達成されることにより２価のフラグメント、即ち２つの抗原結合部位を有するフラグメントが生じるようにＶＨとＶＬの間により短いリンカー（約５〜１０残基）と共にｓＦｖフラグメント（前パラグラフ参照）を形成することにより製造される小型抗体フラグメントを指す。２重特異性のダイアボディは２つの「クロスオーバー」ｓＦｖフラグメントのヘテロ２量体であり、この場合、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインは異なるポリペプチド鎖上に存在する。ダイアボディは例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）により詳細に記載されている。
【０１７６】
非ヒト（例えばげっ歯類）抗体の「ヒト化」型は非ヒト抗体から誘導された最小の配列を含有するキメラ抗体である。大部分に関しては、ヒト化抗体はレシピエントの超可変領域に由来する残基が、所望の抗体の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域に由来する残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の場合においては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が相当する非ヒト残基により置き換えられる。更に又、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体に存在しない残基を含んでよい。これらの修飾は抗体の性能を更に精密化するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、そして典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、その場合、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、そしてＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものとなる。ヒト化抗体は場合によりまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分を含むことになる。更に詳細な説明は、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
【０１７７】
「種依存性抗体」、例えば哺乳類非ヒトＩｇＥ抗体は、第１の哺乳類動物種由来の抗原に対して、第２の哺乳類動物種由来のその抗原の相同体に対するよりも、より強力な結合親和性を有する抗体である。通常は、種依存性の抗体はヒト抗原に対して「特異的に結合する」（即ち、約１ｘ１０−７Ｍ以下、好ましくは約１ｘ１０−８Ｍ以下、そして最も好ましくは約１ｘ１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値を有する）が、第２の非ヒト哺乳類種由来の抗原の相同体に対しては、ヒト抗原に対するその結合親和性よりも、少なくとも約５０倍、又は少なくとも約５００倍、又は少なくとも約１０００倍弱い結合親和性を有する。種依存性抗体は上記した抗体の種々の型の何れかであることができるが、好ましくはヒト化又はヒト抗体である。
【０１７８】
「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合オリゴペプチド」とは本明細書に記載したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに好ましくは特異的に結合するオリゴペプチドである。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合オリゴペプチドは知られたオリゴペプチド合成方法を用いて化学合成するか、又は、組み換え技術を用いて製造及び精製してよい。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合オリゴペプチドは通常は約５アミノ酸長又はそれ以上、或いは約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００アミノ酸長又はそれ以上、又はそれより長く、ここでこのようなオリゴペプチドは本明細書に記載したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに好ましくは特異的に結合することができる。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合オリゴペプチドはよく知られた手法を用いて予定外の実験を行うことなく同定してよい。この点に関し、ポリペプチド標的に特異的に結合することができるオリゴペプチドを得るためにオリゴペプチドライブラリをスクリーニングするための手法は当該分野で良く知られている（例えば米国特許第５，５５６，７６２号、第５，７５０，３７３号、第４，７０８，８７１号、第４，８３３，０９２号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５７１，６８９号、第５，６６３，１４３号；ＰＣＴ公開ＷＯ８４／０３５０６及びＷＯ８４／０３５６４；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，８１：３９９８−４００２（１９８４）；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，８２：１７８−１８２（１９８５）；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，１３０−１４９（１９８６）；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１０２：２５９−２７４（１９８７）；Ｓｃｈｏｏｆｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４０：６１１−６１６（１９８８），Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８７：６３７８；Ｌｏｗｍａｎ，Ｈ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：１０８３２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１；Ｋａｎｇ，Ａ���Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：８３６３及びＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８参照）。
【０１７９】
「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子」とは本明細書に記載するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに好ましくは特異的に結合する本明細書に定義するオリゴペプチド又は抗体以外の有機分子である。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子は知られた方法を用いて同定及び化学合成してよい（例えばＰＣＴ公開ＷＯ００／００８２３及びＷＯ００／３９５８５参照）。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３結合有機分子は通常は約２０００ダルトン未満の大きさであるか、或いは、約１５００、７５０、５００、２５０又は２００ダルトン未満の大きさであり、ここで本明細書に記載するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに好ましくは特異的に結合することができるこのような有機分子はよく知られた手法を用いて予定外の実験を行うことなく同定してよい。この点に関し、ポリペプチド標的に結合できる分子を得るために有機分子ライブラリをスクリーニングする手法は当該分野で良く知られている（例えばＰＣＴ公開ＷＯ００／００８２３及びＷＯ００／３９５８５参照）。
【０１８０】
目的の抗原、例えば腫瘍関連ポリペプチド抗原標的に「結合する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、好ましくは、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子が抗原を発現している細胞又は組織をターゲティングする場合の診断薬及び／又は治療薬として有用であり、そして他の蛋白とは有意な交差反応を起こさないような十分な親和性で抗原に結合するものである。「非標的」蛋白への抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合の程度は、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）分析又は放射免疫沈降（ＲＩＡ）により測定した場合に、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子のその特定の標的蛋白への結合の約１０％未満である。標的分子への抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合に関しては、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープに対して「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「特異的である」という用語は、非特異的な相互作用とは測定可能な相違がある結合を意味する。特異的結合は例えば、一般的には結合活性を有しない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することにより測定することができる。例えば特異的結合は、標的と同様の対照分子、例えば過剰量の非標識標的との競合により決定できる。この場合、プローブへの標識標的の結合が過剰な未標識標的により競合的に抑制された場合に、特異的結合が示されている。本明細書において使用される特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープに対して「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「特異的である」という用語は、例えば、少なくとも約１０−４Ｍ、又は、少なくとも約１０−５Ｍ、又は、少なくとも約１０−６Ｍ、又は、少なくとも約１０−７Ｍ、又は、少なくとも約１０−８Ｍ、又は、少なくとも約１０−９Ｍ、又は、少なくとも約１０−１０Ｍ、又は、少なくとも約１０−１１Ｍ、又は、少なくとも約１０−１２Ｍ以上の標的に対するＫｄを有する分子により示される。「特異的結合」という用語は、分子が何れかの他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープに結合する場合の結合を指す。
【０１８１】
「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３」を発現する腫瘍細胞の成育を「抑制する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子又は「成長抑制性の」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は適切なＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現又は過剰発現する癌細胞の測定可能な成育抑制をもたらすものである。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは癌細胞の表面上に発現された膜貫通ポリペプチドであってよく、又は、癌細胞により生産及び分泌されるポリペプチドであってよい。好ましい成長抑制性の抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、適切な対照と比較して２０％又はそれより高値、好ましくは約２０％〜約５０％、更に好ましくは５０％又はそれより高値（例えば約５０％〜約１００％）でＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−発現腫瘍細胞の成育を抑制し、ここで対照は典型的には試験すべき抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子で治療されない腫瘍細胞である。成長抑制は、細胞培養物中、約０．１〜３０μｇ／ｍｌ又は約０．５ｎＭ〜２００ｎＭの抗体濃度において測定することができ、ここで成長抑制は抗体への腫瘍細胞の曝露から１〜１０日後に決定される。インビボの腫瘍細胞の成長抑制は種々の方法で決定できる。抗体は約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重において抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を投与した場合に抗体の初回投与から約５日〜３ヶ月以内、好ましくは約５〜３０日以内に腫瘍の大きさ又は腫瘍細胞の増殖の低減がもたらされる場合にインビボで成長抑制性となる。
【０１８２】
「アポトーシスを誘導する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡのフラグメント化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞の断片化、及び／又は、膜小胞（アポトーシス体と称する）の形成により判断されるプログラムされた細胞死を誘導するものである。細胞は通常は，ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを過剰発現するものである。好ましくは、細胞は腫瘍細胞、例えば前立腺、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、肺、腎臓、結腸、膀胱の細胞である。アポトーシスに関連する細胞事象を評価するために種々の方法が使用できる。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）転座は、アネキシン結合により測定でき；ＤＮＡフラグメント化はＤＮＡラダー化を介して評価でき；そして、ＤＮＡフラグメント化に伴う核／クロマチン縮合は低二倍体細胞の何れかの増大により評価できる。好ましくは、アポトーシスを誘導する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子はアネキシン結合試験において未投与の細胞と相対比較してアネキシン結合の約２〜５０倍、好ましくは約５〜５０倍、そして最も好ましくは約１０〜５０倍の誘導をもたらすものである。
【０１８３】
抗体の「エフェクター機能」は抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列のＦｃ領域又はアミノ酸配列変異体のＦｃ領域）に起因する生物学的活性を指し、そして、抗体アイソタイプと共に変動する。抗体エフェクター機能の例はＣ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）；貪食作用；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化を包含する。
【０１８４】
「抗体依存性細胞媒介細胞毒性」即ち「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞毒性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合している分泌Ｉｇにより、これ等の細胞毒性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、そしてその後、細胞毒素により標的細胞を殺傷することができるようになるという細胞毒性の形態を指す。抗体は細胞毒性細胞を「武装」させ、そしてそのような殺傷のために絶対に必要なものである。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲの発現はＲａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページの表３に総括されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を試験するためには、米国特許第５，５００，３６２号又は第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロのＡＤＣＣ試験を実施してよい。このような試験のための有用なエフェクター細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を包含する。代替又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は例えばＣｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいてインビボで試験してよい。
【０１８５】
「Ｆｃ受容体」即ち「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。好ましいＦｃＲはネイティブ配列のヒトＦｃＲである。更に又、好ましいＦｃＲはＩｇＧ抗体に結合するもの（γ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体を包含し、これ等の受容体のアレル変異体及びオルタナティブスプライス型も包含される。ＦｃγＲＩＩ受容体はＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体」）を包含し、これ等はその細胞質ドメインにおいて主に異なっている同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡはその細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有している。抑制受容体ＦｃγＲＩＩＢはその細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有している（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）の考察Ｍ参照）。ＦｃＲはＲａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）において考察されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは本明細書においては用語「ＦｃＲ」に包含される。用語は又胎児への母体ＩｇＧの移行の原因となる新生児受容体、ＦｃＲｎも包含する（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
【０１８６】
「ヒトエフェクター細胞」は１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を示す白血球である。好ましくは、細胞は少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、そしてＡＤＣＣエフェクター機能を示す。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞毒性Ｔ細胞及び好中球を包含し；ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は天然の原料から、例えば血液から単離される。
【０１８７】
「補体依存性細胞毒性」即ち「ＣＤＣ」は補体の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的な補体経路の活性化は同種抗原に結合している（適切なサブクラスの）抗体への補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）の結合により開始される。補体活性化を試験するためには、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載されているもののようなＣＤＣ試験を実施してよい。
【０１８８】
「癌」及び「癌性の」という用語は典型的には未調節の細胞の成長を特徴とする哺乳類における生理学的状態を指すか、それを説明するものである。癌の例は限定しないが癌腫、リンパ種、芽腫、肉腫及び白血病を包含する。このような癌のより特定的な例は、扁平上皮癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌を包含する）、膵臓癌、神経膠芽細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌種及び種々の型の頭部及び頚部の癌並びにＢ細胞リンパ腫（例えば低等級／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中等級／濾胞性ＮＨＬ；中等級の播種性ＮＨＬ；高等級免疫芽球性ＮＨＬ；高等級リンパ芽球性ＮＨＬ；高等級小型非分割細胞ＮＨＬ；バルキー疾患ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びヴァルデンストレームマクログロブリン血症）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後のリンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を包含する。好ましくは、癌はＩＧＦ受容体を発現する腫瘍、より好ましくは乳癌、肺癌、結腸直腸癌又は前立腺癌、そして最も好ましくは乳癌又は前立腺癌を含む。
【０１８９】
「化学療法剤」とは癌の治療において有用な化合物である。化学療法剤の例はアルキル化剤、例えばチオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、イムプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ及びウレドパ；エチレンイミン及びメチラメラミン、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロールメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（例えば合成類似体トポテカン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（例えばアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（例えば合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；窒素マスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムブシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムヌスチン；抗生物質、例えばエネジン抗生物質（例えばカリケミシン、特にカリケミシンガンマ１Ｉ及びカリケミシンオメガＩ１（例えばＡｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）参照）；ジネマイシン、例えばジネマイシンＡ；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラミシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連の色素蛋白エネジン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（例えばモルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、マイコフェノール酸、ノガラマイシ、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモファー、シタラビン、ジデオキシウリジン���ドキシフリジン、エノシタビン、フロクスイジン；アンドロゲン類、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補給物、例えばフロリニック酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルニチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド、例えばマイタンシン及びアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭクレモフォー非含有、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチン酸；カペシタビン；及び上記の何れかの製薬上許容しうる塩、酸又は誘導体を包含する。
【０１９０】
この定義に同様に包含されるものは、腫瘍に対するホルモンの作用を調節又は抑制する作用を有する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（例えばＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェン）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びＦＡＲＥＳＴＯＮトレミフェン；副腎におけるエストロゲン生産を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）メゲストロールアセテート、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール；及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に例えばＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ及びＨ−Ｒａｓのような異常な細胞増殖に関与するとされるシグナリング経路における遺伝子の発現を抑制するもの；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；及び上記の何れかの製薬上許容しうる塩、酸又は誘導体である。
【０１９１】
「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語はある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。本発明の１つの局面において、細胞増殖性障害は癌である。
【０１９２】
「腫瘍」とは本明細書においては、悪性良性に関わらず全ての新生物細胞の成長及び増殖、及び全ての前癌及び癌性の細胞及び組織を指す。
【０１９３】
「細胞死を誘導する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は生存細胞を非生存性とするものである。細胞はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現するもの、好ましくは同様の組織型の正常細胞と比較してＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは癌細胞表面に発現される膜貫通ポリペプチドであってよく、又は、癌細胞により生産され分泌されるポリペプチドであってよい。好ましくは、細胞は癌細胞、例えば乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓又は膀胱の細胞である。インビトロの細胞死は抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）により誘導された細胞死を識別するために補体及び免疫エフェクター細胞の非存在下において決定してよい。即ち、細胞死に関する試験は熱不活性化血清を用いながら（即ち補体非存在下において）、そして免疫エフェクター細胞の非存在下において実施してよい。抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子が細胞死を誘導することができるかどうかを決定するためには、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１７：１−１１（１９９５）参照）又は７ＡＡＤの取り込みにより評価される膜一体性の消失を未投与細胞と相対比較しながら試験することができる。好ましい細胞死誘導性の抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子はＢＴ４７４細胞におけるＰＩ取り込み試験においてＰＩ取り込みを誘導するものである。
【０１９４】
本明細書においては、「免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）」という用語は免疫グロブリンの定常ドメインのエフェクター機能に非相同蛋白の結合特異性（「接着」）を組み合わせる抗体様分子を表す。構造的には、免疫接着は抗体の抗原認識結合部位以外（即ち「非相同」）の所望の結合特異性を有するアミノ酸配列及び免疫グロブリン定常ドメイン配列の融合を含む。免疫接着分子の接着部分は典型的には、受容体又はリガンドの結合部位を少なくとも含む隣接するアミノ酸配列である。免疫接着における免疫グロブリン定常ドメイン配列は何れかの免疫グロブリン、例えばＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３又はＩｇＧ−４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を包含する）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭから得てよい。
【０１９５】
「標識」という用語は本明細書においては、「標識された」抗体を作成するために抗体に直接又は間接的にコンジュゲートされた検出可能な化合物又は組成物を指す。標識はそれ自体が検出可能である（例えば放射性同位体標識又は蛍光標識）か、又は、酵素標識の場合は、検出され得る基質化合物又は組成物の化学的改変を触媒してよい。
【０１９６】
「複製予防剤」とは、アポトーシス、血管形成抑制、細胞増加、腫瘍殺傷、有糸分裂抑制、細胞周期進行遮断、細胞成長の停止、腫瘍への結合、細胞メディエーターとしての作用等の機序に関わらず、細胞の複製、機能及び／又は成長が抑制又は予防されるか、又は細胞が破壊される薬剤である。そのような薬剤は化学療法剤、細胞毒性剤、サイトカイン、成長抑制剤、又は抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン化合物、例えばタモキシフェン、抗プロゲステロン、例えばオナプリストン（ＥＰ６１６８１２参照）；又は抗アンドロゲン、例えばフルタミド、並びにアロミダーゼ阻害剤、又はホルモン剤、例えばアンドロゲンを包含する。
【０１９７】
「細胞毒性剤」という用語は本明細書においては細胞の機能を抑制又は予防及び／又は細胞の破壊を誘発する物質を指す。用語は放射性同位体（例えばＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、例えばメトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他のインターカレーション剤、酵素及びそのフラグメント、例えば核溶解酵素、抗生物質及び毒素、例えば細菌、カビ、植物又は動物起源の小分子毒素又は酵素活性毒素、及びこれ等のフラグメント及び／又は変異体、及び、後述する種々の抗腫瘍又は抗癌剤を包含することを意図している。他の細胞毒性剤は後に記載する。腫瘍殺傷剤は腫瘍細胞の破壊をもたらす。
【０１９８】
本明細書においてアンタゴニストと組み合わせて使用するための特定の腫瘍型に対する好ましい細胞毒性剤は以下の通りである。
１．前立腺癌：アンドロゲン、ドセタキセル、パクリタキセル、エストラムスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメイン（例えばＥｒｂＢ２の概ね残基２２〜概ね残基５８４の領域における残基の何れかの１つ以上）の領域に結合する２Ｃ４のようなＥｒｂＢ２ドメインに対する抗体（ＷＯ０１／００２４５；ハイブリドーマＡＴＣＣＨＢ−１２６９７）、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ抗血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭＯＳＩ−７７４（エルロチニブ）（Ｇｅｎｅｎｅｔｅｃｈ  ａｎｄ
ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又は他の表皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲＴＫＩ）。
２．胃癌：５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ＸＥＬＯＤＡＴＭカペシタビン、メトトレキセート、エトポシド、シスプラチン／カルボプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン及びＣＰＴ−１１（カンプトテシン−１１；イリノテカン、合衆国商標：ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））。
３．膵臓癌：ゲムシタビン、５ＦＵ、ＸＥＬＯＤＡＴＭカペシタビン、ＣＰＴ−１１、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭエルロチニブ及び他のＥＧＦＲＴＫＩ。
４．結腸直腸癌：５ＦＵ、ＸＥＬＯＤＡＴＭカペシタビン、ＣＰＴ−１１、オキサリプラチン、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ抗ＶＥＧＦ、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭエルロチニブ及び他のＥＧＦＲＴＫＩ及びＥＧＦＲに結合し受容体活性化及び腫瘍へのシグナリングを開始するＥＧＦの能力をブロックするＥＲＢＩＴＵＸＴＭ（旧称ＩＭＣ−Ｃ２２５）ヒト：マウス−キメラ化モノクローナル抗体。
５．腎臓癌：ＩＬ−２、インターフェロンアルファ、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ抗ＶＥＧＦ、ＭＥＧＡＣＥＴＭ（メゲストロールアセテート）プロゲスチン、ビンブラスチン、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭエルロチニブ及び他のＥＧＦＲＴＫＩ。
【０１９９】
「成長抑制剤」とは本明細書においては細胞、特に、インビトロ又はインビボのＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−発現癌細胞の成長を抑制する化合物又は組成物を指す。即ち、成長抑制剤はＳ期におけるＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−発現細胞の比率を有意に低減するものであってよい。成長抑制剤の例は細胞周期の進行をブロックする（Ｓ期以外の位置において）薬剤、例えばＧ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤を包含する。伝統的なＭ期ブロッカーはビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド及びブレオマイシンを包含する。Ｇ１を停止させる薬剤、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニソン、デカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル及びａｒａ−ＣはＳ期停止にまでスピルオーバーする。更に詳細な情報はＴｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ａｎｄ  Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １，“Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，  ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ”，  Ｍｕｒａｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，（ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）の特に１３ページに記載されている。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は共にイチイの木から誘導された抗癌剤である。ヨーロッパイチイから誘導されたドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）はパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルはチューブリン２量体からの微小管の組立を促進し、そして、細胞の有糸分裂の抑制をもたらす脱重合の予防により微小管を安定化させる。
【０２００】
「ドキソルビシン」はアントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンの完全な化学名は（８Ｓ−シス）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキサピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオンである。
【０２０１】
「サイトカイン」という用語はある細胞集団により放出され、細胞間メディエーターとして他の細胞に作用する蛋白に関する総称である。このようなサイトカインの例はリンホカイン、モノカイン及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに属するものとしては、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖蛋白ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトーゲン；腫瘍壊死因子−α及び−β；ミューラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えばＮＧＦ−β；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β；インスリン様成長因子−Ｉ及び−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン−α、−β及び−γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ−α又はＴＮＦ−β；及び他のポリペプチド因子、例えばＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）が挙げられる。本明細書においては、サイトカインという用語は天然原料由来又は組み換え細胞培養物由来の蛋白、及び、ネイティブ配列のサイトカインの生物学的活性同等物を包含する。
【０２０２】
「パッケージインサート」という用語は治療用製品の市販用パッケージ内に慣用的に包含される説明書を指すのに用いられ、そのような治療用製品の使用に関する適応症、使用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を含んでいる。
【０２０３】
「遺伝子」という用語は（ａ）本明細書に開示したＤＮＡ配列の少なくとも１つを含有する遺伝子；（ｂ）本明細書に開示するＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列をコードする何れかのＤＮＡ配列、及び／又は、（ｃ）本明細書に開示するコーディング配列の補体にハイブリダイズする何れかのＤＮＡ配列を指す。好ましくは、用語はコーディング並びに非コーディング領域を包含し、好ましくは正常な遺伝子発現に必要な全ての配列を包含する。
【０２０４】
「遺伝子ターゲティング」という用語はゲノムＤＮＡフラグメントが哺乳類細胞内に導入され、そしてそのフラグメントが内因性の相同配列を特定して組み換えを起こす場合に生じる相同組み換えの型を指す。相同組み換えによる遺伝子ターゲティングは特定のデザインの外因性ＤＮＡで特定のゲノム配列を置き換えるために組み換えＤＮＡ技術を使用する。
【０２０５】
「相同組み換え」という用語は相同ヌクレオチド配列の部位における２つのＤＮＡ分子又は染色分体の間のＤＮＡフラグメントの交換を指す。
【０２０６】
「標的遺伝子」（或いは「標的遺伝子配列」又は「標的ＤＮＡ配列」とも称する）という用語は、相同組み換えにより修飾すべき何れかの核酸分子、ポリヌクレオチド又は遺伝子を指す。標的配列は未損傷の遺伝子、エクソン又はイントロン、調節配列又は遺伝子間の何れかの領域を包含する。標的遺伝子は個々のゲノムＤＮＡにおける特定の遺伝子又は遺伝子座の一部分を含んでよい。
【０２０７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子の「破壊」はゲノムＤＮＡフラグメントが内因性の相同配列を特定して組み換えを起こす場合に生じ、その場合、破壊とはネイティブの遺伝子又はその一部分の欠失であるか、又は、ネイティブの遺伝子の突然変異であるか、又は、破壊はネイティブの遺伝子の機能的不活性化である。或いは、配列の破壊は遺伝子トラップベクターを用いた非特異的な挿入性の不活性化により生じてもよい（即ちランダムに挿入されたトランスジーンを含有し、発現する非ヒトトランスジェニック動物；例えば２００２年８月２０日に発行された米国特許第６，４３６，７０７号参照）。これ等の配列の破壊又は修飾はＤＮＡ配列の挿入、ミスセンス、フレームシフト、欠失又は置換又は置き換え、又はそれらの何れかの組合せを包含してよい。挿入は動物、植物、カビ、昆虫、原生動物又はウィルス起源のものであってよい全遺伝子の挿入を包含する。破壊は、例えば正常な遺伝子産物を、その生産を部分的又は完全に抑制することにより、又は、正常な遺伝子産物の活性を増強することにより、改変することができる。好ましくは、破壊はヌル破壊であり、その場合、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子の有意な発現はない。
【０２０８】
「ネイティブの発現」という用語は野生型マウスにおいて存在する発現水準におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子によりコードされる完全長ポリペプチドの発現を指す。即ち、内因性ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子の「ネイティブの発現が無い」破壊とは哺乳類の単一の細胞、選択された細胞又は全ての細胞の内因性ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子によりコードされるポリペプチドの少なくとも一部分の発現の部分的又は完全な低減を指す。
【０２０９】
「ノックアウト」という用語は、破壊によりネイティブの遺伝子の機能的不活性化；ネイティブ遺伝子又はその一部分の欠失；又はネイティブの遺伝子の突然変異がもたらされるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子の破壊を指す。
【０２１０】
「ノックイン」という用語は特定のヒトＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３コード遺伝子又はその変異体の何れかをコードするヒトｃＤＮＡによるマウスオーソログ（又は他のマウス遺伝子）の置き換えを指す（即ち破壊はネイティブのマウス遺伝子のネイティブのヒト遺伝子による置き換えをもたらす）。
【０２１１】
「コンストラクト」又は「ターゲティングコンストラクト」という用語は標的組織、細胞系統又は動物内に転移されるべき人工的に組み立てられたＤＮＡセグメントを指す。典型的には、ターゲティングコンストラクトは特定の目的の遺伝子又は核酸配列、マーカー遺伝子及び適切な対照配列を包含することになる。本明細書においては、ターゲティングコンストラクトはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ターゲティングコンストラクトを含む。「ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ターゲティングコンストラクト」は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子の少なくとも一部分に相同なＤＮＡ配列を包含し、そして、宿主細胞内で、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子における破壊を生じさせることができる。
【０２１２】
「トランスジェニック細胞」という用語は、そのゲノム内に、遺伝子ターゲティングの方法により完全に又は部分的に破壊、修飾、改変又は置き換えられているＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子を含有する細胞を指す。
【０２１３】
「トランスジェニック動物」という用語は本明細書に記載した方法又は当該分野で良く知られている他の方法により破壊又は他の態様で修飾又は突然変異されている特定の遺伝子をそのゲノム内に含有する動物を指す。好ましくは非ヒトトランスジェニック動物は哺乳類である。より好ましくは哺乳類はげっ歯類、例えばラット又はマウスである。更に又、「トランスジェニック動物」はヘテロ接合の動物（即ち１つの欠損対立遺伝子及び１つの野生型対立遺伝子）又はホモ接合の動物（即ち２つの欠損対立遺伝子）であってよい。胚は動物の定義内に属するとみなす。動物を準備することは子宮内に胚又は胎児を準備することを包含し、交配によるか、他の態様によるか、そして胚が在胎期満了するかどうかは問わない。
【０２１４】
本明細書においては、「選択マーカー」及び「位置選択マーカー」という用語は、ある遺伝子を担持している細胞のみを特定の条件下に生存及び／又は成長させることができるような、ある産物をコードする遺伝子を指す。例えば、導入されたネオマイシン耐性（Ｎｅｏｒ）遺伝子を発現する植物及び動物細胞は化合物Ｇ４１８に耐性である。Ｎｅｏｒ遺伝子マーカーを担持しない細胞はＧ４１８により殺傷される。他の陽性選択マーカーは当業者の知る、又は推測できるものである。
【０２１５】
「調節する」又は「調節」という用語は本明細書においては、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子の機能、発現、活性又はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子に関連する表現型の減少、抑制、低減、軽減、増大又は増強を指す。
【０２１６】
「軽減する」又は「軽減」という用語は本明細書においては、状態、疾患、障害又は表現型、例えば異常又は症状の減少、低減又は排除を指す。
【０２１７】
「異常」という用語はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の関与が示唆される何れかの疾患、障害、状態又は表現型を指し、病的状態及び挙動観察事例を包含する。
【０２１８】
【表１−１】
2010515428.tif 000003
【０２１９】
【表１−２】
2010515428.tif 000004
【０２２０】
【表１−３】
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【０２２１】
【表１−４】
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【０２２２】
【表１−５】
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【０２２３】
【表１−６】
2010515428.tif 000008
【０２２４】
【表１−７】
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【０２２５】
【表１−８】
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【０２２６】
【表１−９】
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【０２２７】
【表１−１０】
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【０２２８】
【表１−１１】
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【０２２９】
【表１−１２】
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【０２３０】
【表１−１３】
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【０２３１】
【表１−１４】
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【０２３２】
【表１−１５】
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【０２３３】
【表１−１６】
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【０２３４】
【表１−１７】
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【０２３５】
【表１−１８】
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【０２３６】
【表１−１９】
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【０２３７】
【表１−２０】
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【０２３８】
【表１−２１】
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【０２３９】
【表１−２２】
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【０２４０】
【表１−２３】
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【０２４１】
【表１−２４】
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【０２４２】
【表１−２５】
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【０２４３】
【表１−２６】
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【０２４４】
【表１−２７】
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【０２４５】
【表１−２８】
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【０２４６】
【表１−２９】
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【０２４７】
【表１−３０】
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【０２４８】
【表１−３１】
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【０２４９】
【表２】
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％アミノ酸配列同一性＝ＡＬＩＧＮ−２により測定した場合の２ポリペプチド配列の間の同一的にマッチするアミノ酸残基の数）÷（ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸残基の総数）＝
５÷１５＝３３．３％
【０２５０】
【表３】
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％アミノ酸配列同一性＝ＡＬＩＧＮ−２により測定した場合の２ポリペプチド配列の間の同一的にマッチするアミノ酸残基の数）÷（ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸残基の総数）＝
５÷１０＝５０％
【０２５１】
【表４】
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％核酸配列同一性＝ＡＬＩＧＮ−２により測定した場合の２核酸配列の間の同一的にマッチするヌクレオチドの数）÷（ＰＲＯ−ＤＮＡ核酸配列のヌクレオチドの総数）＝
６÷１４＝４２．９％
【０２５２】
【表５】
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％核酸配列同一性＝ＡＬＩＧＮ−２により測定した場合の２核酸配列の間の同一的にマッチするヌクレオチドの数）÷（ＰＲＯ−ＤＮＡ核酸配列のヌクレオチドの総数）＝
４÷１２＝３３．３％。
【０２５３】
ＩＩ．組成物及び本発明の方法
Ａ．完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド
本発明は本出願においてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと称するポリペプチドをコードする新規に同定され単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に、種々のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするｃＤＮＡが後述する実施例において更に詳細に開示する通り同定され、単離された。別個の発現ラウンドにおいて生産される蛋白に異なるＰＲＯ番号を付与してよいが、ＵＮＱ番号は何れかの所定のＤＮＡ及びコードされる蛋白に対してユニークのものであり、変化することは無い。しかしながら、簡便のため、本明細書においては、本明細書に開示する完全長のネイティブの核酸分子によりコードされる蛋白並びにＰＲＯの前記した定義に包含される全ての他のネイティブの相同体及び変異体は、その起源又は製造様式に関わらず、「ＰＲＯ／数」と称する。
【０２５４】
後述する実施例に開示する通り、種々のｃＤＮＡクローンがＡＴＣＣに寄託されている。当業者はこれ等のクローンの実際のヌクレオチド配列を当該分野の日常的方法を用いた寄託クローンの配列決定により容易に決定することができる。予測されるアミノ酸配列は日常的技術を用いてヌクレオチド配列から決定できる。本明細書に記載するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド及びコードする核酸に関しては、出願人はその時点で使用可能な配列の情報を用いて最も同定可能であるリーディングフレームであると考えられるものを同定している。
【０２５５】
Ｂ．ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド変異体
本明細書に記載した完全長のネイティブ配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに加えて、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体が製造可能であることが意図される。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ＤＮＡ内に適切なヌクレオチドの変化を導入することにより、及び／又は、所望のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの合成により、製造できる。アミノ酸の変化はグリコシル化部位の数又は位置を変化させたり、又は、膜アンカリング特性を改変させたりするなどの、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの翻訳後の過程を改変する場合があることは当業者の知る通りである。
【０２５６】
ネイティブ完全長配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド又は本明細書に記載したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの種々のドメインの変異は、例えば米国特許第５，３６４，９３４号に記載されている保存的及び非保存的突然変異に関する手法及び指針の何れかを用いて形成することができる。変異はネイティブ配列ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと比較した場合にＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアミノ酸配列の変化をもたらすＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするコドン１つ以上の置換、欠失又は挿入であってよい。場合により、変異はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのドメイン１つ以上における何れかの他のアミノ酸による少なくとも１つのアミノ酸の置換によるものである。所望の活性に悪影響を与えることなくどのアミノ酸残基を挿入、置換又は欠失させてよいかを決定する場合の指針はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの配列を相同既知蛋白分子のものと比較すること、及び、高相同性の領域で起こるアミノ酸配列変化の数を最小限にすることにより、発見してよい。アミノ酸置換はあるアミノ酸を同様の構造的及び／又は化学的特性を有するアミノ酸と置き換えること、例えばロイシンをセリンで置き換えること、即ち保存的なアミノ酸の置き換えの結果であることができる。挿入及び欠失は場合により約１〜５アミノ酸の範囲であってよい。許容される変異は配列におけるアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に行うこと、及び、得られた変異体に完全長又は成熟ネイティブ配列により示される活性があるかどうか試験することにより決定してよい。
【０２５７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドフラグメントが本明細書において提供される。そのようなフラグメントは例えば完全長のネイティブの蛋白と比較した場合にＮ末端又はＣ末端でトランケーションされているか、又は、内部残基を欠いていてよい。特定のフラグメントはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの所望の生物学的活性の為に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。
【０２５８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３フラグメントは多くの従来の手法の何れかにより製造してよい。所望のペプチドフラグメントは化学合成してよい。代替法においては、酵素消化により、例えば特定のアミノ酸残基により定義される部位において蛋白を切断することがわかっている酵素で蛋白を処理することにより、又は、適当な制限酵素でＤＮＡを消化し、そして所望のフラグメントを単離することにより、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３フラグメントを形成する。更に別の適当な手法では、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により所望のポリペプチドフラグメントをコードするＤＮＡフラグメントを単離して増幅する。ＤＮＡフラグメントの所望の末端を定義するオリゴヌクレオチドをＰＣＲにおける５’及び３’プライマーとして使用する。好ましくは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドフラグメントは本明細書に開示するネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと、少なくとも１つの生物学的及び／又は免疫学的活性を共有する。
【０２５９】
目的の保存的置換は好ましい置換という見出しの下に表６に示す通りである。このような置換が生物学的活性における変化をもたらす場合、より実質的な変化、表６において例示される置換と称される置換、又はアミノ酸クラスに言及しながら後述において更に説明するものが好ましく導入され、生成物がスクリーニングされる。
【０２６０】
【表６−１】
2010515428.tif 000038
【０２６１】
【表６−２】
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ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの機能又は免疫学的同一性における実質的な修飾は（ａ）例えばシート又は螺旋状のコンホーメーションとしての置換域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷又は疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対するその作用において有意に異なる置換を選択することにより達成される。天然に存在する残基は共通の側鎖の特性に基づいて群分けされ：アミノ酸はその側鎖の特性における同様性（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．，ｐｐ．７３−７５，Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７５））に従って以下の通り、即ち：
（１）非極性；Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）未荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
となるように群分けしてよい。
或いは、天然に存在する残基は共通の側鎖の特性に基づいて以下の通り、即ち：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ：
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ：
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖の方向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
となるように群分けしてよい。
【０２６２】
非保存的置換はこれ等のクラスの１つのメンバーを他のクラスと交換することを包含する。そのような置換された残基はまた保存的置換部位内に、又はより好ましくは残余（非保存）の部位に導入されてよい。
【０２６３】
変異はオリゴヌクレオチド媒介（部位指向性）突然変異誘発、アラニンスキャニング及びＰＣＲ突然変異誘発のような当該分野で知られた方法を用いて行うことができる。部位指向性突然変異誘発［Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：４３３１（１９８６）；Ｚｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１０：６４８７（１９８７）］、カセット突然変異誘発［Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，３４：３１５（１９８５）］、制限選択突然変異誘発［Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ  ＳｅｒＡ，３１７：４１５（１９８６）］又は他の知られた手法をクローニングされたＤＮＡに対して実施することによりＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３変異体ＤＮＡを製造することができる。
【０２６４】
スキャニングアミノ酸分析もまた隣接する配列に沿ってアミノ酸１つ以上を同定するために使用できる。好ましいスキャニングアミノ酸には比較的小型の中性のアミノ酸が包含される。このようなアミノ酸はアラニン、グリシン、セリン及びシステインを包含する。アラニンは典型的には、それがベータ炭素を超えた側鎖を排除し、変異体の主鎖のコンホーメーションを改変する可能性が低いため、この群の中では好ましいスキャニングアミノ酸である［Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）］。アラニンはまた典型的には、それが最も一般的なアミノ酸であることから好ましい。更に又それは頻繁に埋没及び曝露の位置の両方において存在する［Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：１（１９７６）］。アラニン置換が十分な量の変異体をもたらさない場合は、同配体アミノ酸を使用できる。
【０２６５】
Ｃ．ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの修飾
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの共有結合修飾は本発明の範囲に包含される。共有結合修飾の１つの型はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの選択された側鎖又はＮ又はＣ末端の残基と反応することができる有機誘導体形成剤とＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのターゲティングされたアミノ酸残基を反応させることを包含する。二官能性剤を用いた誘導体化は、例えば抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を精製するための方法において使用する水不溶性支持体マトリックス又は表面にＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを交差結合するため、又はその逆のために有用である。一般的に使用される交差結合剤は例えば１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４−アジドサリチル酸とのエステル、ホモ２官能性イミドエステル、例えばジスクシンイミジルエステル、例えば３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）、２官能性マレイミド、例えばビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタン及びメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートのような物質を包含する。
【０２６６】
他の修飾にはグルタミニル及びアスパルギニル残基からそれぞれ相当するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のホスホリル化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化［Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３）］、Ｎ末端アミンのアセチル化及び何れかのＣ末端カルボキシル基のアミド化が包含される。
【０２６７】
本発明の範囲に包含されるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの共有結合修飾の別の型はポリペプチドのネイティブのグリコシル化パターンを改変することを含む。「ネイティブのグリコシル化パターンを改変すること」とは、本明細書の目的のためには、ネイティブ配列ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド内に存在する炭水化物部分１つ以上を欠失させること（伏在するグリコシル化部位を除去することによるか、又は、化学的及び／又は酵素的手段によりグリコシル化を欠失させることによる）及び／又はネイティブ配列ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド内に存在しないグリコシル化部位１つ以上を付加させることを意味する。更に又、この文言には存在する種々の炭化水素部分の性質及び比率の変化を含む、ネイティブ蛋白のグリコシル化の定性的変化を包含する。
【０２６８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加はアミノ酸配列を改変することにより達成してよい。改変は、例えばネイティブ配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３へのセリン又はスレオニン残基１つ以上の付加又は置換により行ってよい（Ｏ連結グリコシル化部位の場合）。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３アミノ酸配列は場合により、特に、所望のアミノ酸に翻訳されることになるコドンが形成されるように予め選択された塩基においてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡを突然変異することにより、ＤＮＡレベルの変化を介して改変してよい。
【０２６９】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド上の炭水化物部分の数を増大させる別の手段はポリペプチドへのグリコシドの化学的又は酵素的なカップリングによるものである。そのような方法は当該分野において、例えば、１９８７年９月１１日公開のＷＯ８７／０５３３０及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【０２７０】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、又は、グリコシル化のための標的として機能するアミノ酸残基についてコードしているコドンの突然変異的置換により達成してよい。化学的脱グリコシル化手法は当該分野で知られており、そして例えばＨａｋｉｍｕｄｄｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２（１９８７）及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１（１９８１）に記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断はＴｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０（１９８７）に記載されている種々のエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用によって達成できる。
【０２７１】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの共有結合修飾の別の型は米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号又は第４，１７９，３３７号に記載されている態様における種々の非蛋白性の重合体、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキレンの１つへのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの連結を含む。
【０２７２】
本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドはまた別の非相同ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを含むキメラ分子を形成するための態様において修飾してもよい。
【０２７３】
このようなキメラ分子は抗タグ抗体が選択的に結合できる相手であるエピトープを与えるタグポリペプチドとのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの融合を含む。エピトープタグは一般的に、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に位置させる。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのこのようなエピトープタグ付形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出できる。又、エピトープタグを準備することで、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは、抗タグ抗体又はエピトープタグに結合するアフィニティーマトリックスの別の型を用いたアフィニティー精製により容易に精製できるようになる。種々のタグポリペプチド及びその対応する抗体が当該分野で良く知られている。例としては、ポリヒスチジン（ｐｏｌｙ−ｈｉｓ）又はポリヒスチジン−グリシン（ｐｏｌｙ−ｈｉｓ−ｇｌｙ）タグ；インフルエンザＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５［Ｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，８：２１５９−２１６５（１９８８）］；ｃ−ｍｙｃタグ及びそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体［Ｅｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５：３６１０−３６１６（１９８５）］；及び単純疱疹ウィルス糖蛋白Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体［Ｐａｂｏｒｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，３（６）：５４７−５５３（１９９０）］が包含される。他のタグポリペプチドはＦｌａｇ−ペプチド［Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：１２０４−１２１０（１９８８）］；ＫＴ３エピトープペプチド［Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５５：１９２−１９４（１９９２）］；α−チューブリンエピトープペプチド［Ｓｋｉｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１５１６３−１５１６６（１９９１）］；及びＴ７遺伝子１０蛋白ペプチドタグ［Ｌｕｔｚ−Ｆｒｅｙｅｒｍｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３９３−６３９７（１９９０）］を包含する。
【０２７４】
キメラ分子は免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定の領域とのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの融合を含んでよい。キメラ分子の２価の形態（「イムノアドヘシン」とも称する）については、このような融合はＩｇＧ分子のＦｃ領域に対するものであり得る。Ｉｇ融合は好ましくはＩｇ分子内の可変領域少なくとも１つの代替としてのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの可溶性（膜貫通ドメイン欠失又は不活性化）形態の置換を包含する。本発明の特に好ましい局面においては、免疫グロブリン融合はＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３；又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を包含する。免疫グロブリン融合の作成については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５，４２８，１３０号も参照のこと。
【０２７５】
Ｄ．ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの製造
以下の説明は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３核酸を含有するベクターで形質転換又はトランスフェクトした細胞を培養することによるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの製造に主に関するものである。当然ながら当該分野で良く知られている代替法を用いてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを製造してもよいことを意図している。例えばＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の配列又はその部分は固相法を用いた直接ペプチド合成により製造してよい［例えばＳｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９６９）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５４（１９６３）を参照］。インビトロの蛋白合成を手動の手法又は自動により実施してよい。自動合成は例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて製造元の説明書により行ってよい。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの種々の部分を別個に化学合成し、そして化学的又は酵素的な方法を用いて組み合わせることにより完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを製造してよい。
【０２７６】
１．ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡの単離
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ｍＲＮＡを保有し、そしてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製したｃＤＮＡライブラリから得てよい。従ってヒトＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−ＤＮＡは実施例に記載するようなヒト組織から調製したｃＤＮＡライブラリから好都合に得ることができる。ＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−コード遺伝子もまた、ゲノムライブラリから、又は、知られた合成操作法（例えば自動核酸合成）により得てよい。
【０２７７】
ライブラリは目的の遺伝子又はそれによりコードされる蛋白を同定するように設計されたプローブ（例えばＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対する抗体又は少なくとも約２０〜８０塩基のオリゴヌクレオチド）を用いてスクリーニングできる。選択されたプローブを用いたｃＤＮＡ又はゲノムライブラリのスクリーニングはＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に記載されているもののような標準的な操作法を用いて実施してよい。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３をコードする遺伝子を単離するための代替手段はＰＣＲ法を使用することである［Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，上出；Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ  ｅｔ
ａｌ．，ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５）］。
【０２７８】
後述する実施例はｃＤＮＡライブラリをスクリーニングするための手法を説明するものである。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は擬陽性を最小限とするために十分な長さのものであり、そして十分明白なもので無ければならない。オリゴヌクレオチドは好ましくは、スクリーニングされるライブラリのＤＮＡへのハイブリダイゼーション時にそれが検出できるように標識される。標識方法は当該分野で良く知られており、３２Ｐ標識ＡＴＰのような放射性標識、ビオチニル化又は酵素標識の使用を包含する。ハイブリダイゼーション条件、例えば中ストリンジェンシー及び高ストリンジェンシーは上出のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．に記載されている。
【０２７９】
このようなライブラリスクリーニング法において同定された配列は、ＧｅｎＢａｎｋのような公的データベース又は他の私的配列データベースに寄託され入手可能である他の既知配列と比較し、アラインすることができる。分子の所定領域内又は完全長配列に渡る配列同一性（アミノ酸又はヌクレオチドレベルの何れか）は当該分野で知られた方法を用いて、そして、本明細書に記載する通り、決定することができる。
【０２８０】
蛋白コーディング配列を有する核酸は、本明細書において初めて開示された推定アミノ酸配列を用いて、そして、必要に応じて、上出のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．に記載されている従来のプライマー伸長操作法を用いて、選択されたｃＤＮＡ又はゲノムライブラリをスクリーニングすることにより前駆体を検出すること、及び、ｃＤＮＡに逆転写されていないｍＲＮＡの中間体をプロセシングすることにより得てよい。
【０２８１】
２．宿主細胞の選択及び形質転換
宿主細胞はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの生産に関して本明細書に記載した発現又はクローニングベクターを用いてトランスフェクト又は形質転換し、そしてプロモーターの誘導、形質転換体の選択又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅の為に適切であるように変性された従来の栄養培地中で培養する。培地、温度、ｐＨ等のような培養条件は予定外の実験を要することなく当業者が選択できる。一般的に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコル及び実際の手法はＭａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ
Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ，ｅｄ．（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）及び上出Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．に記載されている。
【０２８２】
真核生物細胞トランスフェクション及び原核生物細胞トランスフェクションの方法は、当業者に知られており、例えばＣａＣｌ２、ＣａＰＯ４、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションである。使用する宿主細胞に応じて、形質転換はその細胞に適切な標準的手法を用いて実施する。上出のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，に記載されているもののような塩化カルシウムを使用するカルシウム処理、又は、エレクトロポレーションが原核生物に対して一般的に使用される。Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２３：３１５（１９８３）及び１９８９年６月２９日公開のＷＯ８９／０５８５９記載のような、特定の植物細胞の形質転換の為にアグロバクテリウム・ツメファシエンス感染が使用される。細胞壁を有しない哺乳類細胞に対してはＧｒａｈａｍ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６−４５７（１９７８）のリン酸カルシウム沈降法を使用できる。哺乳類細胞宿主系トランスフェクションの一般的側面は米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。酵母への形質転換は典型的には、Ｖａｎ  Ｓｏｌｉｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔ．１３０：９４６（１９７７）及びＨｓｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），７６：３８２９（１９７９）の方法に従って実施する。しかしながら、細胞にＤＮＡを導入する別の方法、例えば核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、未損傷細胞との細菌プロトプラスト融合又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチンも使用してよい。哺乳類細胞を形質転換するための種々の手法についてはＫｅｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５：５２７−５３７（１９９０）及びＭａｎｓｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：３４８−３５２（１９８８）を参照のこと。
【０２８３】
本明細書におけるベクター内のＤＮＡをクローニング又は発現するための適当な宿主細胞は原核生物、酵母又はより高等の真核生物の細胞を包含する。適当な原核生物は限定しないが、真正細菌目、例えばグラム陰性又はグラム陽性の生物、例えば腸内細菌科、例えばＥ・コリを包含する。種々のＥ・コリ菌株が公的に入手でき、例えばＥ・コリＫ１２菌株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）；Ｅ・コリＸ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）；Ｅ・コリ菌株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）及びＫ５７７２（ＡＴＣＣ５３，６３５）が挙げられる。他の適当な原核生物宿主細胞は腸内細菌科、例えばエシェリシア属、例えばＥ・コリ、エンテロバクター、エルウイニア、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ、例えばサルモネラ・チフィムリウム、セラチア、例えばセラチア・マルセサンス、及び、シゲラ並びにバチルス類、例えばＢ・サブチルス及びＢ・リシェニフォルミス（例えば１９８９年４月１２日公開のＤＤ２６６，７１０に開示されているＢ・リシェニフォルミス４１Ｐ）、シュードモナス、例えばＰ・アエルギノーサ及びストレプトマイセスを包含する。これ等の例は説明であって限定するものではない。菌株Ｗ３１１０は組み換えＤＮＡ産物の醗酵のための一般的な宿主菌株であることから１つの特に好ましい宿主又は親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量の蛋白分解酵素を分泌する。例えば菌株Ｗ３１１０は宿主に内因性である蛋白をコードする遺伝子における遺伝子突然変異を起こすように修飾してよく、そのような宿主の例には、完全な遺伝子型ｔｏｎＡを有するＥ・コリＷ３１１０菌株１Ａ２；完全な遺伝子型ｔｏｎＡｐｔｒ３を有するＥ・コリＷ３１１０菌株９Ｅ４；完全な遺伝子型ｔｏｎＡｐｔｒ３ｐｈｏＡＥ１５（ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９ｄｅｇＰｏｍｐＴｋａｎｒ．を有するＥ・コリＷ３１１０菌株２７Ｃ７（ＡＴＣＣ５５，２４４）；完全な遺伝子型ｔｏｎＡｐｔｒ３ｐｈｏＡＥ１５（ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９ｄｅｇＰｏｍｐＴｒｂｓ７ｉｌｖＧｋａｎｒ．を有するＥ・コリＷ３１１０菌株３７Ｄ６；非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠失突然変異を有する菌株３７Ｄ６であるＥ・コリＷ３１１０菌株４０Ｂ４；及び、１９９０年８月７日に発行された米国特許第４，９４６，７８３号に開示されている突然変異体のペリプラズムプロテアーゼを有するＥ・コリ菌株が包含される。或いは、クローニングのインビトロの方法、例えばＰＣＲ又は他の核酸ポリメラーゼ反応が適当である。
【０２８４】
原核生物のほかに、真核生物の微生物、例えば線維状カビ又は酵母がＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−コードベクターのための適当なクローニング又は発現宿主である。サッカロマイセス・セレビシアエは一般的に使用されている下等な真核生物の宿主微生物である。他のものにはスキゾサッカロマイセス・ポンベ（Ｂｅａｃｈ  ａｎｄ  Ｎｕｒｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ，２９０：１４０［１９８１］；１９８５年５月２日公開のＥＰ１３９，３８３）；クルイベロマイセス宿主（米国特許第４，９４３，５２９号；Ｆｌｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９６８−９７５（１９９１））、例えばＫ・ラクチス（ＭＷ９８−８Ｃ，ＣＢＳ６８３、ＣＢＳ４５７４；Ｌｏｕｖｅｎｃｏｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５４（２）：７３７−７４２［１９８３］）、Ｋ・フラジリス（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ・ブルガリクス（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ・ウイケラミ（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ・ワルチ（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ・ドロソフィラルム（ＡＴＣＣ３６，９０６；Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：１３５（１９９０））、Ｋ・サーモトレランス及びＫ・マルキシアヌス；ヤロウイア（ＥＰ４０２，２２６）；ピシア・パストリス（ＥＰ１８３，０７０；Ｓｒｅｅｋｒｉｓｈｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｓｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２８：２６５−２７８［１９８８］）；カンジダ；トリコデルマ・リエシア（ＥＰ２４４，２３４）；ニューロスポラ・クラッサ（Ｃａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：５２５９−５２６３［１９７９］）；シュワニオマイセス、例えばシュワニオマイセス・オシデンタリス（１９９０年１０月３１日公開のＥＰ３９４，５３８）；及び線維状カビ、例えばニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム（１９９１年１月１０日公開のＷＯ９１／００３５７）及びアスペルギルス宿主、例えばＡ・ニズランス（Ｂａｌｌａｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１２：２８４−２８９［１９８３］；Ｔｉｌｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２６：２０５−２２１［１９８３］；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：１４７０−１４７４［１９８４］）及びＡ・ナイジャー（Ｋｅｌｌｙ  ａｎｄ  Ｈｙｎｅｓ，ＥＭＢＯＪ．，４：４７５−４７９［１９８５］）が包含される。メチル向性の酵母が本発明において適しており、そして限定しないが、ハンセヌラ、カンジダ、クロエケラ、ピシア、サッカロマイセス、トルロプシス及びロドトルラよりなる属から選択されるメタノール上で生育できる酵母を包含する。このクラスの酵母の例となる特定の種のリストはＣ．Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｓ，２６９（１９８２）に記載されている。
【０２８５】
グリコシル化されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現のための適当な宿主細胞は多細胞生物から誘導される。無脊椎動物の細胞の例は、昆虫細胞、例えばショウジョウバエＳ２及びヨトウＳｆ９並びに植物細胞を包含する。有用な哺乳類宿主細胞系統の例はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）及びＣＯＳ細胞を包含する。より特定した例は、ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣＣＲＬ１６５１）；ヒト胚性腎系統（２９３又は懸濁培地中の生育の為にサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトーリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１（１９８０））；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２，ＨＢ８０６５）；及びマウス乳癌（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣＣＣＬ５１）を包含する。適切な宿主細胞の選択は当業者の知る通りである。
【０２８６】
３．複製可能なベクターの選択及び使用
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする核酸（例えばｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ）をクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、又は、発現の為に、複製可能なベクター内に挿入してよい。種々のベクターが公的に入手可能である。ベクターは例えばプラスミド、コスミド、ウィルス粒子、又はファージの形態であってよい。適切な核酸配列を種々の操作法でベクター内に挿入してよい。一般的に、ＤＮＡは当該分野で知られた手法を用いて適切な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入する。ベクター成分は一般的に限定しないが１つ以上のシグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終止配列を包含する。これ等の成分１つ以上を含有する適当なベクターの構築は当業者に知られた標準的なライゲーション手法を用いる。
【０２８７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは組み換えにより、直接のみならず、シグナル配列又は成熟蛋白又はポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有する他のポリペプチドであってよい非相同ポリペプチドとの融合ポリペプチドとして製造してよい。一般的に、シグナル配列はベクターの成分であってよく、又は、それはベクターに挿入されたＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−コードＤＮＡの部分であってよい。シグナル配列は例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物のシグナル配列であってよい。酵母の分泌のためには、シグナル配列は例えば酵母インベルターゼリーダー、アルファ因子リーダー（サッカロマイセス及びクルイベロマイセスのα−因子リーダーを包含、後者は米国特許第５，０１０，１８２号に記載）又は酸ホスファターゼリーダー、Ｃ・アルビカンスグルコアミラーゼリーダー（１９９０年４月４日公開のＥＰ３６２，１７９）又は１９９０年１１月１５日公開のＷＯ９０／１３６４６に記載のシグナルであってよい。哺乳類細胞発現においては、同じか関連する種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列のような哺乳類シグナル配列を用いて蛋白の分泌を誘導してよく、ウィルスの分泌リーダーも使用される。
【０２８８】
発現及びクローニングベクターは両方とも１つ以上の選択された宿主細胞においてベクターを複製可能とする核酸配列を含有する。そのような配列は種々の細菌、酵母及びウィルスに関してよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製起点が大部分のグラム陰性細菌に適しており、２μプラスミド起点は酵母に適しており、そして種々のウィルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウィルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ）は哺乳類細胞オにおけるクローニングベクターの為に有用である。
【０２８９】
発現及びクローニングベクターは典型的には選択可能なマーカーとも称される選択遺伝子を含有する。典型的な選択遺伝子は（ａ）抗生物質又は他の毒素、例えばアンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート又はテトラサイクリンに対する耐性を付与し、（ｂ）栄養要求性の欠損を補償し、又は（ｃ）複合培地から得られない重要な栄養を供給する蛋白をコードしており、例えばバチルスのためのＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子である。
【０２９０】
哺乳類細胞のための適当な選択可能なマーカーの例は、ＤＨＦＲ又はチミジンキナーゼのような、ＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−コード核酸の取り込み能力を有する細胞の同定を可能にするものである。野生型ＤＨＦＲを使用する場合の適切な宿主細胞はＵｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０）に記載の通り製造及び増殖させたＤＨＦＲ活性欠損のＣＨＯ細胞である。酵母で使用するための適当な選択遺伝子は酵母プラスミドＹＲｐ７中に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７：１４１（１９７９）；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０：１５７（１９８０）］。ｔｒｐ１遺伝子はトリプトファン中で生育する能力を欠いた酵母の突然変異株、例えばＡＴＣＣ４４０７６又はＰＥＰ４−１のための選択マーカーを与える［Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７）］。
【０２９１】
発現及びクローニングベクターは通常はｍＲＮＡ合成を誘導するためにＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−コード核酸配列に作動可能に連結したプロモーターを含有する。種々の潜在的宿主細胞により認識されるプロモーターはよく知られている。原核生物の宿主で使用するのに適するプロモーターはβ−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系［Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６１５（１９７８）；Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４（１９７９）］、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系［Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，８：４０５７（１９８０）；ＥＰ３６，７７６］及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター［ｄｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１−２５（１９８３）］を包含する。細菌系における使用のためのプロモーターもまたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡに作動可能に連結したＳｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ（Ｓ．Ｄ．）配列を含有する。
【０２９２】
酵母宿主と共に使用するための適当なプロモーター配列の例は３−ホスホグリセレートキナーゼ［Ｈｉｔｚｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５５：２０７３（１９８０）］又は他の糖分解酵素［Ｈｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇ．，７：１４９（１９６８）；Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：４９００（１９７８）］、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルベートデカルボキシラーゼ、ホスホフラクトキナーゼ、グルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ、３−ホスホグリセレートムターゼ、ピルベートキナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ及びグルコキナーゼのためのプロモーターを包含する。
【０２９３】
生育条件により制御される転写の追加的利点を有する誘導プロモーターである他の酵母プロモーターはアルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロームＣ、酸ホスファターゼ、窒素代謝に関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ及びマルトース及びガラクトースの利用を担う酵素のプロモーター領域である。酵母発現において使用するための適当なベクター及びプロモーターはＥＰ７３，６５７においても記載されている。
【０２９４】
哺乳類宿主細胞中におけるベクターからのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の転写は例えばポリオーマウィルス、鶏痘ウィルス（１９８９年７月５日公開のＵＫ２，２１１，５０４）、アデノウィルス（例えばアデノウィルス２）、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス及びシミアンウィルス４０（ＳＶ４０）のようなウィルスのゲノムから、非相同哺乳類プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーターから、そして、熱ショックプロモーターから得られたプロモーターにより制御されるが、このようなプロモーターは宿主細胞系と適合しなければならない。
【０２９５】
より高等な真核生物によるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写はベクター中にエンハンサー配列を挿入することにより増大させてよい。エンハンサーは通常は約１０〜３００ｂｐのＤＮＡのシス作用性エレメントであり、これはプロモーターに対してその転写を増大させるように作用する。哺乳類遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）。しかしながら典型的には、真核生物細胞ウィルス由来のエンハンサーを使用することになる。例としては複製起点の後期側上のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００−２７０）、サイトメガロウィルス早期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側上のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが包含される。エンハンサーはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３コーディング配列に対して５’又は３’の位置においてベクター内にスプライスしてよいが、好ましくはプロモーターから５’側の部位に位置する。
【０２９６】
真核生物宿主細胞（酵母、カビ、昆虫、植物、動物、ヒト又は他の多細胞生物由来の有核細胞）中で使用する発現ベクターはまた転写の終止のため、及びｍＲＮＡの安定化のために必要な配列を含有する。そのような配列は真核生物又はウィルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’側、場合によっては３’側の未翻訳の領域から一般的に得られる。これ等の領域はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの未翻訳部分内のポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。
【０２９７】
組み換え脊椎動物細胞培養物中のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの合成に適合させるために適するさらに別の方法、ベクター及び宿主細胞はＧｅｔｈｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２９３：６２０−６２５（１９８１）；Ｍａｎｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：４０−４６（１９７９）；ＥＰ１１７，０６０；及びＥＰ１１７，０５８に記載されている。
【０２９８】
４．遺伝子の増幅／発現の検出
遺伝子の増幅及び／又は発現は例えばｍＲＮＡの転写を定量するための従来のサザンブロッティング、ノーザンブロッティング［Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５２０１−５２０５（１９８０）］、ドットブロッティング（ＤＮＡ分析）、又はインサイチュハイブリダイゼーションにより、適切な標識プローブを用いて、本明細書において提供される配列に基づいて、直接試料中で測定してよい。或いは、ＤＮＡデュプレックス、ＲＮＡデュプレックス及びＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドデュプレックス又はＤＮＡ−蛋白デュプレックスを包含する特定のデュプレックスを認識できる抗体を使用してよい。そして抗体を標識し、表面上のデュプレックスの形成によりデュプレックスに結合した抗体の存在が検出できるようにデュプレックスが表面に結合した状態で試験を実施してよい。
【０２９９】
或いは遺伝子発現を細胞又は組織の切片の免疫組織化学的染色のような免疫学的方法及び細胞培養物又は体液の試験により測定することにより、遺伝子産物の発現を直接定量してよい。免疫学的染色及び／又は試料液体の試験の為に有用な抗体はモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体の何れかであってよく、そして何れかの哺乳類において製造してよい。好都合には、抗体はネイティブ配列ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対して、又は、本発明において提供されるＤＮＡ配列に基づいた合成ペプチドに対して、又は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３に融合され、そして特定の抗体エピトープをコードする外因性配列に対して作成してよい。
【０３００】
５．ポリペプチドの精製
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの形態は培地から、又は宿主細胞溶解物から回収してよい。膜結合の場合は、適当な洗浄液（例えばＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００）を用いるか、酵素的切断により、膜から遊離させることができる。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの発現に使用される細胞は種々の物理的又は化学的手段、例えば凍結解凍の反復、超音波処理、機械的破壊又は細胞溶解剤等により破壊することができる。
【０３０１】
組み換え細胞の蛋白又はポリペプチドからＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを精製することが望ましい場合がある。以下の操作法、即ち、イオン交換カラム上の分画；エタノール沈降；逆相ＨＰＬＣ；シリカ上又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥ上のクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈降法；例えばＳｅｐｈａｄｅｘＧ−７５を用いたゲル濾過；ＩｇＧのような夾雑物を除去するためのプロテインＡセファロースカラム；及びＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのエピトープタグ付型を結合させるための金属キレートカラムが適当な精製の操作法の例である。蛋白精製の種々の方法を使用してよく、そしてそのような方法は当該分野で知られており、そして例えばＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載されている。選択される精製工程は、例えば使用される製造プロセスの性質及び製造される特定のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに依存する。
【０３０２】
Ｅ．ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの使用
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（又はその相補体）はハイブリダイゼーションプローブとしての使用を包含する分子生物学において、染色体及び遺伝子のマッピングにおいて、及びアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生成において、種々の用途を有している。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３核酸はまた本明細書に記載する組み換え手法によるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの製造の為に有用である。
【０３０３】
完全長ネイティブ配列のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子又はその部分は完全長ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ｃＤＮＡを単離するため、又は本明細書に開示したネイティブＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３配列に対して所望の配列同一性を有する更に別のｃＤＮＡ（例えばＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの天然に存在する変異体又は他の種に由来するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするもの）を単離するためのｃＤＮＡライブラリのためのハイブリダイゼーションプローブとして使用してよい。場合により、プローブの長さは約２０〜約５０塩基となる。ハイブリダイゼーションプローブは完全長ネイティブヌクレオチド配列の少なくとも部分的に新規な領域から誘導してよく、ここでそのような領域は予定外の実験をすることなく、又は、ネイティブ配列ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３のプロモーター、エンハンサーエレメント及びイントロンを包含するゲノム配列から決定してよい。例示すれば、スクリーニング方法は約４０塩基の選択されたプローブを合成するために既知のＤＮＡ配列を用いてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子のコーディング領域を単離することを包含する。ハイブリダイゼーションプローブは種々の標識、例えば放射性核種、例えば３２Ｐ又は３５Ｓ、又は酵素標識、例えばアビジン／ビオチンカップリング系を介してプローブにカップリングされたアルカリホスファターゼにより標識してよい。本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子のものと相補的な配列を有する標識されたプローブを用いてヒトｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡのライブラリをスクリーニングすることによりそのようなライブラリのどのメンバーにプローブがハイブリダイズするかを決定することができる。ハイブリダイゼーションの手法は後述する実施例において更に詳細に説明する。
【０３０４】
本出願に開示する何れかのＥＳＴ配列を本明細書に開示する方法を用いてプローブとして同様に使用してよい。
【０３０５】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３核酸の他の有用なフラグメントは標的のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ｍＲＮＡ（センス）又はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ＤＮＡ（アンチセンス）配列への結合が可能な一本鎖核酸配列（ＲＮＡ又はＤＮＡの何れか）を含むアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを包含する。本発明によればアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ＤＮＡのコーディング領域のフラグメントを含む。そのようなフラグメントは一般的に、少なくとも約１４ヌクレオチド、好ましくは約１４〜３０ヌクレオチドを含む。所定の蛋白をコードするｃＤＮＡ配列に基づいてアンチセンス又はセンスのオリゴヌクレオチドを誘導する能力は例えばＳｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：２６５９，１９８８）及びｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｒｏｌ  ｅｔ  ａｌ．（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８，１９８８）に記載されている。
【０３０６】
標的核酸配列へのアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの結合により、増強されたデュプレックス分解、転写又は翻訳の早期の終了を含む幾つかの手段の１つによる、又は他の手段による、標的配列の転写又は翻訳をブロックするデュプレックスの形成がもたらされる。即ちアンチセンスオリゴヌクレオチドはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の発現をブロックするために使用してよい。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは更に修飾された糖ホスホジエステル骨格（又は他の糖連結部、例えばＷＯ９１／０６６２９に記載のもの）を有するオリゴヌクレオチドを含み、その場合、そのような糖連結部は内因性ヌクレアーゼに対して抵抗性である。抵抗性の糖連結物を有するそのようなオリゴヌクレオチドはインビボで安定である（即ち酵素による分解に抵抗することができる）が、標的ヌクレオチド配列に結合することができる配列特異性は保持している。
【０３０７】
センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの他の例はＷＯ９０／１００４８記載のような有機部分又はポリ−（Ｌ−リジン）のような標的核酸配列に対するオリゴヌクレオチドの親和性を増大させる他の部分に共有結合したオリゴヌクレオチドを包含する。エリプチシンのような更に別のインターカレーション剤及びアルキル化剤又は金属錯体をセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させることにより標的核酸配列に対するアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの結合特異性を修飾することができる。
【０３０８】
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは何れかの遺伝子導入法、例えばＣａＰＯ４媒介ＤＮＡトランスフェクション、エレクトロポレーションにより、又は、エプスタイン・バーウィルスのような遺伝子導入ベクターを使用することにより標的核酸配列を含有する細胞内に導入してよい。好ましい操作法においては、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを適当なレトロウィルスベクターに挿入する。標的核酸配列を含有する細胞を組み換えレトロウィルスベクターにインビボ又はエクスビボのいずれかで接触させる。適当なレトロウィルスベクターは限定しないが、マウスレトロウィルスＭ−ＭｕＬＶ、Ｎ２（Ｍ−ＭｕＬＶから誘導されたレトロウィルス）から誘導されたもの、又は、ＤＣＴ５Ａ、ＤＣＴ５Ｂ及びＤＣＴ５Ｃと表記されるダブルコピーを包含する（ＷＯ９０／１３６４１参照）。
【０３０９】
センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドはまたＷＯ９１／０４７５３に記載の通りリガンド結合分子とのコンジュゲートの形成により標的ヌクレオチド配列を含有する細胞内に導入してよい。適当なリガンド結合分子は限定しないが細胞表面受容体、成長因子、他のサイトカイン又は細胞表面受容体に結合する他のリガンドを包含する。好ましくは、リガンド結合分子のコンジュゲーションはリガンド結合分子がその相当する分子又は受容体に結合する能力を大きく妨害したり、細胞内へのセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド又はそのコンジュゲート型の進入をブロックしたりすることはない。
【０３１０】
或いは、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドはＷＯ９０／１０４４８に記載の通りオリゴヌクレオチド−脂質複合体の形成により標的核酸配列を含有する細胞内に導入してよい。センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド−脂質複合体は好ましくは内因性リパーゼにより細胞内で解離される。
【０３１１】
アンチセンス又はセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子は一般的に少なくとも約５塩基長、約１０塩基長、約１５塩基長、約２０塩基長、約２５塩基長、約３０塩基長、約３５塩基長、約４０塩基長、約４５塩基長、約５０塩基長、約５５塩基長、約６０塩基長、約６５塩基長、約７０塩基長、約７５塩基長、約８０塩基長、約８５塩基長、約９０塩基長、約９５塩基長、約１００塩基長又はそれより長い。
【０３１２】
プローブは又緊密に関連するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３コーディング配列の同定のための配列のプールを作成するためのＰＣＲ法において使用してよい。
【０３１３】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列はまたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子をマッピングするため、及び遺伝的疾患を有する個体の遺伝子的分析のためのハイブリダイゼーションプローブを構築するために使用できる。本明細書において提供されるヌクレオチド配列は既知の手法、例えばインサイチュハイブリダイゼーション、既知染色体マーカーに対するリンケージ分析及びライブラリを用いたハイブリダイゼーションスクリーニングを用いて染色体及び染色体の特定の領域にマッピングしてよい。
【０３１４】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３に関するコーディング配列が別の蛋白に結合する蛋白をコードする場合（例えばＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３が受容体である場合）は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは結合の相互作用に関与する他の蛋白又は分子を同定するための試験において使用できる。そのような方法により、受容体／リガンド結合相互作用の抑制を同定できる。そのような結合相互作用に関与する蛋白はまた、結合相互作用のペプチド又は小分子の阻害剤又はアゴニストを得るためのスクリーニングにおいて使用できる。又、受容体ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３は相関するリガンドを単離するために使用できる。スクリーニング試験はネイティブのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド又はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対する受容体の生物学的活性を模倣する鉛化合物を発見するために設計できる。そのようなスクリーニング試験は化学物質ライブラリの高スループットのスクリーニングに適した試験を包含し、小分子薬剤候補の同定の為に特に適するものとなっている。意図される小分子は合成の有機又は無機の化合物を包含する。試験は種々のフォーマット、例えば蛋白−蛋白結合試験、生化学的スクリーニング試験、免疫試験及び細胞系試験において実施でき、これ等は当該分野で良く特徴付けられている。
【０３１５】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする核酸又はその修飾された形態はまた、治療上有用な試薬の開発及びスクリーニングにおいて有用となるトランスジェニック動物又は「ノックアウト」動物のいずれかを作成するためにも使用できる。トランスジェニック動物（例えばマウス又はラット）はトランスジーンを含有する細胞を有する動物であり、そのトランスジーンは出生前、例えば胚の段階において動物又は動物の先祖に導入されている。トランスジーンはトランスジェニック動物の発生の元となる細胞のゲノム内に組み込まれるＤＮＡである。本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡを発現する細胞を含有するトランスジェニック動物を形成するために使用される確立された手法及びゲノム配列に従ってＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用できるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするｃＤＮＡを提供する。当該分野で知られた何れかの手法を用いて標的遺伝子トランスジーンを動物に導入することによりトランスジェニック動物の始祖体を作成してよい。そのような手法は限定しないが前核マイクロインジェクション（米国特許第４，８７３，１９１号、第４，７３６，８６６号及び第４，８７０，００９号）；生殖細胞系統へのレトロウィルス媒介遺伝子導入（Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｕｔｔｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：６１４８−６１５２（１９８５））；胚性幹細胞における遺伝子ターゲティング（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，５６：３１３−３２１（１９８９））；遺伝子トラップベクターを用いた非特異的挿入不活性化（米国特許第６，４３６，７０７号）；胚のエレクトロポレーション（Ｌｏ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：１８０３−１８１４（１９８３））；及び精子媒介遺伝子導入（Ｌａｖｉｔｒａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，５７：７１７−７２３（１９８９）；等を包含する。典型的には、特定の細胞は組織特異的エンハンサーを用いてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３トランスジーン取り込みの為にターゲティングされる。胚の段階において動物の生殖細胞系統に導入されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするトランスジーンのコピーを包含するトランスジェニック動物は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡの増大した発現の作用を調べるために使用できる。そのような動物は、例えば過剰発現に関連する病的状態からの保護を付与すると考えられる試薬を得るための供試動物として使用できる。本発明のこの側面によれば、試薬を動物に投与し、そして病的状態の発生率がトランスジーンを担持する未投与の動物と比較して低減していれば、病的状態に対する潜在的治療介入があったことを示す。或いは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする内因性遺伝子と動物の胚性幹細胞内に導入されたＰＲＯ１１０��、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする改変されたゲノムＤＮＡとの間の相同組み換えの結果としてのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３蛋白をコードする欠損又は改変された遺伝子を有するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３「ノックアウト」動物を構築するためにＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの非ヒト相同体を用いルことができる。好ましくは、ノックアウト動物は哺乳類である。より好ましくは、哺乳類はげっ歯類、例えばラット又はマウスである。例えば、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするｃＤＮＡは確立された手法に従ってＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用できる。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡの一部分は、欠失させるか、又は、他の遺伝子、例えば組み込みをモニタリングするために使用できる選択可能なマーカーをコードする遺伝子と置き換えることができる。典型的には、未改変フランキングＤＮＡ（５’及び３’末端の両方）の数キロ塩基をベクター内に含める［相同組み換えベクターの説明については例えばＴｈｏｍａｓ  ａｎｄ  Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ，５１：５０３（１９８７）参照］。ベクターは胚性幹細胞系統内に導入（例えばエレクトロポレーションによる）し、そして導入されたＤＮＡが内因性ＤＮＡと相同組み換えを起こしている細胞を選択する［例えばＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，６９：９１５（１９９２）参照］。次に選択された細胞を動物（例えばマウス又はラット）の胚盤胞内に注入し、凝集キメラを形成する［例えばＢｒａｄｌｅｙ，Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ａｎｄ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，ｅｄ．（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７）ｐｐ．１１３−１５２参照］。次にキメラ胚を適当な擬似妊娠雌性里親動物内に移植し、胚を妊娠期間満了させ、「ノックアウト」動物を作成することができる。相同組み換えされたＤＮＡをその生殖細胞に保有する子孫を標準的な手法で同定し、動物の全細胞が相同組み換えＤＮＡを含有する動物を育種するために使用することができる。ノックアウト動物は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の非存在に起因する、特定の病的状態に対するそれらの防御能力に関して、そして、病的状態のそれらの発症に関して、特徴付けることができる。
【０３１６】
更に又、ノックアウトマウスは遺伝子の機能及び薬剤標的に関する薬学的利用性の発見において、並びに、所定の標的に関連する潜在的な標的上の副作用の測定において、高度な情報源となる。遺伝子の機能及び生理学的特徴はマウスとヒトとの間で十分保存されているが、その理由はそれらが共に哺乳類であり、同様の数の遺伝子を含有しており、それらが種間で高度に保存されているためである。例えばマウス染色体１６上の遺伝子の９８％がヒトオーソログを有することが最近十分に裏付けられた（Ｍｕｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：１６６１−７１（２００２））。
【０３１７】
肺性幹（ＥＳ）細胞における遺伝子ターゲティングはヒト疾患に関連する多くの遺伝子におけるヌル突然変異を有するマウスの構築を可能にしているが、遺伝子疾患の全てがヌル突然変異に起因するわけではない。マウスの遺伝子座を破壊し、突然変異を有するヒト対応物を導入する遺伝子の置き換え（ノックイン）のための方法を確立することによりヒト疾患の価値あるマウスモデルを設計できる。その後、ヒト蛋白をターゲティングするインビボの薬剤試験を実施できる（Ｋｉｔａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２２：７４２−４７（１９９６））。
【０３１８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする核酸は又遺伝子療法において使用してよい。遺伝子療法用途においては、例えば欠損遺伝子の置き換えの為に治療上有効な遺伝子産物のインビボ合成を達成するために細胞内に遺伝子を導入する。「遺伝子療法」とは単回の投与により持続する作用が達成される従来の遺伝子療法及び治療上有効なＤＮＡ又はｍＲＮＡの一回又は反復投与を行う遺伝子治療薬の投与の両方を包含する。アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡはインビボで特定の遺伝子の発現をブロックするための治療薬として使用できる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞内に移入されてそこで細胞膜によるその限定された取り込みにより生じるその低値の細胞内濃度にも関わらず阻害剤として作用することができることが既に明らかになっている（Ｚａｍｅｃｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：４１４３−４１４６［１９８６］）。オリゴヌクレオチドは例えばその負荷電ホスホジエステル基を未荷電の基で置換することにより、その取り込みが増強されるように修飾できる。
【０３１９】
生存細胞に核酸を導入するために使用できる種々の手法が存在する。手法は核酸を培養細胞中にインビトロで、又は意図する宿主の細胞内にインビボで転移させるかにより、変動する。インビトロの哺乳類細胞への核酸の転移に適する手法はリポソームの使用、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、リン酸カルシウム沈降法等を包含する。現時点で好ましいインビボの遺伝子導入の手法はウィルス（典型的にはレトロウィルス）ベクターによるトランスフェクション及びウィルス外皮蛋白−リポソーム媒介トランスフェクションを包含する（Ｄｚａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｉｌｏｇｙ  １１，２０５−２１０［１９９３］）。一部の状況においては、核酸原料に対し、標的細胞をターゲティングする薬剤、例えば細胞表面膜蛋白又は標的細胞に対して特異的な抗体、標的細胞上の受容体に対するリガンド等を提供することが望ましい。リポソームを使用する場合は、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜蛋白に結合する蛋白をターゲティングのため及び／又は取り込みを促進するために使用してよく、そのようなものとしては例えば特定の細胞型に対して向性のキャプシド蛋白又はそのフラグメント、サイクリングにおいて内在化を起こす蛋白に対する抗体、細胞内局在化をターゲティングして細胞内半減期を増大させる蛋白が挙げられる。受容体媒介エンドサイトーシスの手法は例えばＷｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２，４４２９−４４３２（１９８７）；及びＷａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７，３４１０−３４１４（１９９０）に記載されている。遺伝子の作成及び遺伝子療法のプロトコルについての考察は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６，８０８−８１３（１９９２）を参照のこと。
【０３２０】
本明細書に記載したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドはまた蛋白電気泳動目的のための分子量マーカーとして使用してよく、そして、単離された核酸配列はこれ等のマーカーを組み換え発現するために使用してよい。
【０３２１】
本明細書に記載したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド又はそのフラグメントをコードする核酸分子は染色体の同定の為に有用である。この点に関し、実際の配列データに基づいた染色体マーカー試薬で現在使用できるものは比較的少ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性がなお存在している。本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３核酸分子各々は染色体マーカーとして使用できる。
【０３２２】
本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド及び核酸分子はまた、本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドが他のものと比較してある組織において、好ましくは同じ組織型の正常組織と比較して疾患組織において、示差的に発現される場合に、組織タイピングの為に診断的に使用してよい。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３核酸分子はＰＣＲ、ノーザン分析、サザン分析及びウエスタン分析のためのプローブの形成の為に使用される。
【０３２３】
本明細書に記載したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは又治療薬として使用してよい。本発明のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは薬学的に有用な組成物を製造するための既知の方法に従って製剤することができ、これによりそのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３製品は製薬上許容しうる担体ベヒクルとの混合物中に組み合わせられる。治療用製剤は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態において、任意の生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と共に所望の純度を有する活性成分を混合することにより保存用に製造される。許容される担体、賦形剤又は安定化剤は使用される用量及び濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、そして、緩衝物質、例えばリン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；蛋白、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン、アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；単糖類、２糖類及び他の炭水化物、例えばグルコース、マンノース又はデキストロース；キレート形成剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトール又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；及び／又はノニオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ又はＰＥＧを包含する。
【０３２４】
インビボ投与の為に使用される製剤は滅菌されていなければならない。これは凍結乾燥及び再構成の前後に滅菌濾過膜を通して濾過することにより容易に達成される。
【０３２５】
本明細書においては治療用組成物は一般的に滅菌取出し口を有する容器、例えば皮下注射用の針で穿刺可能である蓋を有する静脈用溶液バッグ又はバイアル内に投入する。
【０３２６】
投与経路は既知の方法によるものであり、例えば静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内又は患部内の経路により注射又は注入を行うか、局所投与を行うか、又は、除放性の系による。
【０３２７】
本発明の医薬組成物の用量及び所望の薬剤濃度は意図される特定の使用に応じて変動する。適切な用量又は投与経路の決定は通常の医師の技量の範囲内で十分に行える。動物実験はヒトの治療のための有効な用量の決定のための信頼できる指針を与える。有効用量の種間のスケーリングはＭｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ
ｕｓｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ”，Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−９６に記載されている原則に従って実施できる。
【０３２８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド又はそのアゴニスト又はアンタゴニストのインビボ投与を用いる場合は、通常の用量は投与経路に応じて一日当たり約１０ｎｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ哺乳類体重以上、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。特定の用量及び送達方法に関する指針は文献に記載されており；例えば米国特許第４，６５７，７６０号；第５，２０６，３４４号；又は第５，２２５，２１２号に記載されている。異なる治療用化合物及び異なる障害に対しては異なる製剤が有効であることが予想され、ある臓器又は組織をターゲティングする投与は、例えば別の臓器又は組織の場合とは異なる態様の送達を必要とする場合がある。
【０３２９】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの投与を必要とする何れかの疾患又は障害の治療の為に適する放出特性を有する製剤においてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの除放性投与が望まれる場合は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのマイクロカプセル化が意図される。除放性放出のための組み換え蛋白のマイクロカプセル化はヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン（ｒｈＩＦＮ）、インターロイキン−２及びＭＮｒｇｐ１２０を用いて良好に行われている。Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：７９５−７９９（１９９６）；Ｙａｓｕｄａ，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．，２７：１２２１−１２２３（１９９３）；Ｈｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：７５５−７５８（１９９０）；Ｃｌｅｌａｎｄ，“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ”，  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，  ｅｄｓ，（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５），ｐｐ．４３９−４６２；ＷＯ９７／０３６９２，ＷＯ９６／４００７２，ＷＯ９６／０７３９９；及び米国特許第５，６５４，０１０号。
【０３３０】
これ等の蛋白の除放性製剤は生体適合性及び広範な生体分解性を有することからポリ乳酸グリコール酸（ＰＬＧＡ）重合体を用いて開発されている。ＰＬＧＡの分解生成物である乳酸及びグリコール酸はヒト身体内で迅速に浄化される。更に又、この重合体の分解性はその分子量及び組成に応じて数ヶ月〜数年に調節できる。Ｌｅｗｉｓ，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｅｒ”，Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌａｎｇｅｒ（Ｅｄｓ．），Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０），ｐｐ．１−４１。
【０３３１】
本発明はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを模倣（アゴニスト）又はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの作用を予防（アンタゴニスト）するものを同定するための化合物のスクリーニング方法を包含する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を自身のゲノムが含んでいる非ヒトトランスジェニック動物による所見に基づいて陰性表現型が観察される場合に特に治療上価値あるものとなる。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの作用を予防するアンタゴニストは非ヒトトランスジェニックノックアウト動物による観察に基づいて陽性表現型が観察される場合に特に治療上価値あるものとなる。アンタゴニスト薬剤候補を得るためのスクリーニング試験は、本明細書において同定される遺伝子によりコードされるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと結合又は複合体形成するか、又は、他の態様においてコードされたポリペプチドの他の細胞蛋白との相互作用を妨害する化合物を同定するために設計される。そのようなスクリーニング試験は化学物質ライブラリの高スループットのスクリーニングに適した試験を包含し、小分子薬剤候補の同定の為に特に適するものとなっている。
【０３３２】
試験は種々のフォーマット、例えば蛋白−蛋白結合試験、生化学的スクリーニング試験、免疫試験及び細胞系試験において実施でき、これ等は当該分野で良く特徴付けられている。
【０３３３】
アンタゴニストに関する全試験は、それらが、薬剤候補を本発明において同定される核酸によりコードされるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと、これら２成分が相互作用できるような条件下において十分な時間に渡り、接触させることを要する点において、共通である。
【０３３４】
結合試験においては、相互作用は結合であり、そして形成される複合体を単離するか、又は反応混合物中で検出することができる。本発明において同定される遺伝子によりコードされるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド又は薬剤候補を固相上、例えばマイクロタイタープレート上に、共有結合又は非共有結合により固定化する。非共有結合は一般的にＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの溶液で固対表面をコーティングし、そして乾燥することにより達成される。或いは、固定化すべきＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えばモノクローナル抗体を用いて固体表面にそれをアンカリングすることができる。試験は検出可能な標識で標識されていてよい非固定化成分を固定化成分、例えばアンカリングされた成分を含有するコーティングされた表面に添加することにより行う。反応終了後、非反応成分を例えば洗浄により除去し、そして固体表面にアンカリングした複合体を検出する。元来非固定化の成分が検出可能な標識を担持する場合は、表面に固定化された標識の検出は複合体形成が起こったことを示す。元来非固定化の成分が標識を担持していない場合は、複合体形成は、例えば固定化された複合体に特異的に結合する標識された抗体を使用することにより検出できる。
【０３３５】
候補化合物が本発明において同定される遺伝子によりコードされる特定のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと相互作用するが結合しない場合、そのポリペプチドとの相互作用は蛋白−蛋白相互作用を検出するためのよく知られた方法により試験することができる。そのような試験は伝統的な方法、例えば交差結合、同時免疫沈降及び勾配又はクロマトグラフィーカラムを介した同時精製を包含する。更に又、蛋白−蛋白相互作用はＣｈｅｖｒａｙ  ａｎｄ  Ｎａｔｈａｎｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５７８９−５７９３（１９９１）により開示されている通り、Ｆｉｅｌｄｓ等により記載された酵母系の遺伝子系（Ｆｉｅｌｄｓ  ａｎｄ  Ｓｏｎｇ、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４０：２４５−２４６（１９８９）；Ｃｈｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：９５７８−９５８２（１９９１））を用いてモニタリングできる。多くの転写活性化物質、例えば酵母ＧＡＬ４は、２つの物理的に個別のモジュラードメイン、即ち１つはＤＮＡ結合ドメインに対して作用するもの、もう１つは転写活性化ドメインとして機能するものよりなる。上記文献に記載された酵母発現系（一般的に「ツーハイブリッド系」と称される）はこの性質を利用しており、そして、２つのハイブリッド蛋白を使用し、その１つにおいては標的蛋白がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合しており、もう１つにおいては候補の活性化蛋白が活性化ドメインに融合している。ＧＡＬ４活性化プロモーターの制御下のＧＡＬ１−ｌａｃＺレポーター遺伝子の発現は蛋白−蛋白相互作用を介したＧＡＬ４活性の再構成に依存している。相互作用ポリペプチドを含有するコロニーはβ−ガラクトシダーゼに対する発色基質を用いて検出する。ツーハイブリッド手法を用いて２つの特定の蛋白の間の蛋白−蛋白相互作用を同定するための完全なキット（ＭＡＴＣＨＭＡＫＥＲＴＭ）はＣｌｏｎｔｅｃｈから市販されている。この系はまた特定の蛋白相互作用に関与する蛋白ドメインをマッピングするため、並びに、これ等の相互作用に必須であるアミノ酸残基を限定するためにも応用できる。
【０３３６】
本発明において同定されるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子と他の細胞内又は細胞外の成分との相互作用を妨害する化合物の試験は以下の通り行い、即ち、通常は遺伝子産物と細胞内又は細部外成分を含有する反応混合物を、２生成物の相互作用と結合を可能にする条件下及び時間に渡り調製する。候補化合物が結合を抑制する能力を試験するためには反応を被験化合物の非存在下及び存在下において実施する。更に、プラセボを第３の反応混合物に添加し、陽性対照として使用する。被験化合物と混合物中に存在する細胞内又は細胞外成分の間の結合（複合体形成）は上記した通りモニタリングする。対照反応においては複合体が形成されるが被験化合物を含有する反応混合物では形成しないことは、被験化合物が被験化合物とその反応相手の相互作用を妨害することを示す。
【０３３７】
アンタゴニストを試験するためには、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを特定の活性に関してスクリーニングすべき化合物と共に細胞に添加し、そして、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの存在下における目的の活性を抑制する化合物の能力は、その化合物がＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対するアンタゴニストであることを示している。或いは、アンタゴニストはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと膜結合ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド受容体又は組み換え受容体に対する潜在的アンタゴニストを競合的阻害試験のための適切な条件下に組み合わせることにより検出してよい。受容体に結合しているＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド分子の数を用いて潜在的アンタゴニストの有効性を測定することができるように、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを例えば放射能により標識することができる。受容体をコードする遺伝子は、当業者の知る多くの方法、例えばリガンドパニング及びＦＡＣＳソーティングにより同定できる。Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎ．，１（２）：Ｃｈａｐｔｅｒ５（１９９１）。好ましくは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに応答する細胞からポリアデニル化ＲＮＡを調製し、そしてこのＲＮＡから作成したｃＤＮＡライブラリを幾つかのプールに分割し、ＣＯＳ細胞又はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに応答しない他の細胞をトランスフェクトするために使用する発現クローニングが使用される。スライドガラス上に生育したトランスフェクトした細胞を標識されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに曝露する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドはヨウ素化又は部位特異的蛋白キナーゼに対する認識部位を含ませることを包含する種々の手段により標識できる。固定化及びインキュベーションの後、スライドをオートラジオグラフ分析に付す。陽性のプールを同定し、サブプールを作成し、相互作用的なサブプール化及び再スクリーニングの過程を用いながら再トランスフェクトし、最終的に推定受容体をコードする単一のクローンを得る。
【０３３８】
受容体の同定のための代替法として、標識されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを受容体分子を発現する細胞膜又は抽出調製物に光親和性連結させることができる。交差結合した物質をＰＡＧＥで分割し、Ｘ線フィルムに曝露する。受容体を含有する標識された複合体を切り出し、ペプチドフラグメントに分割し、そして蛋白マイクロ配列決定に付すことができる。マイクロ配列決定から得られたアミノ酸配列を用いて、ｃＤＮＡライブラリをスクリーニングするための変性オリゴヌクレオチドプローブのセットを設計することにより、推定受容体をコードする遺伝子を同定する。
【０３３９】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対するアンタゴニストの作用を試験する際の別の方法はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３アンタゴニストを野生型マウスに投与することにより既知のノックアウト表現型を模倣することである。即ち、先ず目的のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子をノックアウトし、そしてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子のノックアウト又は破壊の結果として生じた表現型を観察する。その後、野生型マウスにＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対するアンタゴニストを投与することによりＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対するアンタゴニストの有効性を試験することができる。有効なアンタゴニストはノックアウト動物で最初に観察された表現型の作用を模倣すると予測される。
【０３４０】
同様に、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストの作用は、既知陰性ノックアウト表現型を軽減するために非ヒトトランスジェニックマウスにＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３アゴニストを投与することにより試験することができる。即ち、先ず目的のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子をノックアウトし、そしてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３遺伝子のノックアウト又は破壊の結果として生じた表現型を観察する。その後、非ヒトトランスジェニックマウスにＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストを投与することによりＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアゴニストの有効性を試験することができる。有効なアゴニストはノックアウト動物で最初に観察された陰性の表現型の作用を軽減すると予測される。
【０３４１】
アンタゴニストに関する別の試験では、受容体を発現する哺乳類細胞又は膜の調製品を候補化合物の存在下に標識ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと共にインキュベートする。次にこの相互作用を増強又はブロックする化合物の能力を測定する。
【０３４２】
潜在的アンタゴニストのより特定の例は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドとの免疫グロブリンの融合物に結合するオリゴヌクレオチド、そして特に、抗体、例えば限定しないが、ポリ及びモノクローナル抗体及び抗体フラグメント、一本鎖抗体、抗イデオタイプ抗体、及び、そのような抗体又はフラグメントのキメラ又はヒト化型、並びにヒト抗体及び抗体フラグメントを包含する。或いは潜在的アンタゴニストは緊密に関連する蛋白、例えば受容体を認識するが作用をもたらさないため、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの作用を競合的に阻害するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの突然変異した形態であってよい。
【０３４３】
別の潜在的ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドアンタゴニストは、例えばアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子が標的ｍＲＮＡにハイブリダイズし、蛋白翻訳を予防することによりｍＲＮＡの翻訳を直接ブロックする作用を示す、アンチセンス技術を用いて製造されたアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ構築物である。アンチセンス技術は三重螺旋形成又はアンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡを介して遺伝子発現を制御するために使用でき、これ等の方法は両方ともＤＮＡ又はＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づいている。例えば、本発明の成熟ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の５’コーディング部分を用いて約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは転写に関与する遺伝子の領域に相補であるように設計（三重螺旋−Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：４５６（１９８８）；Ｄｅｒｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：１３６０（１９９１））することによりＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの転写及び生産を予防することができる。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲＮＡにハイブリダイズし、そしてｍＲＮＡ分子のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドへの翻訳をブロックする（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９８８））。上記したオリゴヌクレオチドは、アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡがインビボで発現され、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの生産を抑制するように、細胞に送達することもできる。アンチセンスＤＮＡを使用する場合は、例えば標的遺伝子ヌクレオチド配列の約−１０〜＋１０位の間の翻訳開始部位から誘導されたオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。
【０３４４】
潜在的アンタゴニストはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの活性部位、受容体結合部位又は成長因子又は他の関連する結合部位に結合することによりＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの正常な生物学的活性をブロックする小分子を包含する。小分子の例は限定しないが小型のペプチド又はペプチド様分子、好ましくは可溶性ペプチド及び合成の非ペプチジル有機又は無機化合物を包含する。
【０３４５】
リボザイムはＲＮＡの特異的切断を触媒することができる酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは相補標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイズとその後のエンドヌクレアーゼ的切断により作用する。潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は既知の手法により同定できる。更に詳細な説明については例えばＲｏｓｓｉ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４：４６９−４７１（１９９４）及びＰＣＴ公開ＷＯ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開）を参照のこと。
【０３４６】
転写を抑制するために使用される三重螺旋形成における核酸分子は一本鎖でありデオキシヌクレオチドよりなるものでなければならない。これ等のオリゴヌクレオチドの塩基の組成は、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎの塩基対形成の規則を介して三重螺旋形成を促進するように設計され、それには一般的に二重らせんの一方の鎖の上にプリン又はピリミジンのかなりの大きさのストレッチが必要である。更に詳細な説明は上出のＰＣＴ公開ＷＯ９７／３３５５１を参照のこと。
【０３４７】
これ等の小分子は上記したスクリーニング試験の何れかの１つ以上により、及び／又は、当業者に良く知られている他のスクリーニング手法により、同定することができる。
【０３４８】
本明細書に開示した分子の診断及び治療上の使用はまた後に開示及び説明する正の機能の試験のヒットに基づいてもよい。
【０３４９】
Ｆ．抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体
本発明は本発明において治療薬及び／又は診断薬として使用してよい抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を提供する。例示される抗体はポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性及びヘテロコンジュゲート抗体を包含する。
【０３５０】
１．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は好ましくは関連する抗原及びアジュバントの多数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射により動物中で形成させる。関連する抗原は（特に合成ペプチドを使用する場合）免疫化すべき種において免疫原となる蛋白にコンジュゲートすることが有用である。例えば抗原は二官能性又は誘導体形成性の物質、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又は、Ｒ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ただしＲ及びＲ１は異なるアルキル基である）を用いて、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン又はダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートできる。
【０３５１】
例えば１００μｇ又は５μｇの蛋白又はコンジュゲート（それぞれウサギ又はマウスの場合）を３容量のフロイント完全アジュバントと混合し、溶液を複数部位に皮内注射することにより、抗原、免疫原性コンジュゲート又は誘導体に対して動物を免疫化する。一ヵ月後、複数部位への皮下注射によりフロイント完全アジュバント中ペプチド又はコンジュゲートの元の量の１／５〜１／１０を用いて動物をブーストする。７〜１４日後、動物から採血し、血清の抗体力価を試験する。力価が平衡に達するまで動物をブーストする。コンジュゲートは蛋白融合物として組み換え細胞培養物中に作成することもできる。更に又、ミョウバンのような凝集剤を適宜使用して免疫応答を増強する。
【０３５２】
２．モノクローナル抗体
モノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によりはじめて記載されたハイブリドーマ法を用いて作成してよく、又は、組み換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）により作成してもよい。
【０３５３】
ハイブリドーマ法においては、マウス又は他の適切な宿主動物、例えばハムスターを上記した通り免疫化することにより、免疫化に使用する蛋白に特異的に結合する抗体を生産する又は生産可能であるリンパ球を発生させる。或いはリンパ球はインビトロで免疫化してよい。免疫化の後、リンパ球を単離し、次に適当な融合剤、例えばポリエチレングリコールを用いてミエローマ細胞系統に融合することによりハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０３５４】
このように製造されたハイブリドーマ細胞を適当な培地中に播種して成育させるが、その培地は好ましくは未融合の親ミエローマ細胞（融合相手とも称する）の生育又は生存を抑制する物質１つ以上を含有するものである。例えば親ミエローマ細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠失している場合は、ハイブリドーマに対する選択培地は典型的にはヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成育を予防する。
【０３５５】
好ましい融合相手のミエローマ細胞は効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高水準生産を支援し、そして未融合親細胞に対抗して選択する選択培地に対して感受性であるものである。好ましいミエローマ細胞系統は、マウスミエローマ系統、例えばＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡより入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍より誘導されるもの、及び、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡより入手可能なＳＰ−２及び誘導体、例えばＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒトミエローマ及びマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞系統もまたヒトモノクローナル抗体の生産に関して記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；及びＢｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０３５６】
ハイブリドーマ細胞を成育させる培地は抗原に対して指向されたモノクローナル抗体の生産に関して試験する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により生産されるモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈降により、又は、インビトロの結合試験、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ）により、測定する。
【０３５７】
モノクローナル抗体の結合親和性は例えばＭｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）に記載のスカッチャード分析により測定できる。
【０３５８】
所望の特異性、親和性及び／又は活性の抗体を生産するハイブリドーマ細胞が同定された後、限界希釈法によりクローンをサブクローニングし、標準的な方法により生育させる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ
ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的のための適当な培地は例えばＤ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地を包含する。更に又、ハイブリドーマ細胞は例えばマウスへの細胞の腹腔内注射により、動物における腹水腫瘍としてインビボで生育させてよい。
【０３５９】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は従来の抗体精製操作法、例えばアフィニティークロマトグラフィー（例えばプロテインＡ又はプロテインＧ−セファロースを使用）又はイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析等により、培地、腹水又は血清から適宜分離する。
【０３６０】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは従来の操作法を用いて（例えばマウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡの好ましい原料となる。単離後、ＤＮＡを発現ベクター内に入れ、これを次に他の態様では抗体蛋白を生産しないＥ・コリ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はミエローマ細胞のような宿主細胞にトランスフェクトすることにより組み換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成を行う。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組み換え発現に関する考察はＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−１８８（１９９２）を包含する。
【０３６１】
モノクローナル抗体又は抗体フラグメントはＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の手法を用いて作成した抗体ファージライブラリから単離できる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）はファージライブラリを用いたそれぞれマウス及びヒトの抗体の単離を記載している。その後の出版物は鎖シャフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の生産（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））並びに極めて大型のファージライブラリを構築するための方策としてのコンビナトリアル感染及びインビボ組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））を記載している。即ち、これ等の手法はモノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ手法の実行可能な代替法である。
【０３６２】
抗体をコードするＤＮＡは例えば相同マウス配列に対してヒト重鎖及び軽鎖定常ドメイン（ＣＨ及びＣＬ）配列を置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、又は、非免疫グロブリンポリペプチド（非相同ポリペプチド）に対するコーディング配列の全て又は部分に免疫グロブリンコーディング配列を融合することにより、キメラ又は融合抗体のポリペプチドが生産されるように修飾してよい。非免疫グロブリンポリペプチド配列は抗体の定常ドメインに対して置換するか、又は、それらは抗体の１つの抗原複合化部位の可変ドメインに対して置換することにより、抗原に対する特異性を有する１つの抗原複合化部位及び異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原複合化部位を含むキメラ２価抗体を生成する。
【０３６３】
３．ヒト及びヒト化抗体
本発明の抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体は更にヒト化抗体又はヒト抗体を含み得る。非ヒト（例えばマウス）抗体のヒト化型は非ヒト免疫グロブリンから誘導された最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はそのフラグメント（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を包含し、これにおいては、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギのような非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基で置き換えられている。一部の場合においては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が相当する非ヒト残基により置き換えられている。ヒト化抗体は又レシピエント抗体及び移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列の何れにも存在しない残基を含んでよい。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、そして典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、これにおいてはＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、そしてＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は場合により更に免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む［Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）］。
【０３６４】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は当該分野で良く知られている。一般的にヒト化抗体は非ヒトである原料からそれに導入されたアミノ酸残基１つ以上を有する。これ等の非ヒトアミノ酸残基はしばしば「移入」残基と称され、これ等は典型的には「移入」可変ドメインに由来する。ヒト化は本質的にはげっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列とヒト抗体の相当する配列を置換することにより、Ｗｉｎｔｅｒ等の方法に従って実施することができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従って実施することができる。従ってそのような「ヒト化」抗体は、未損傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が非ヒト種の相当する配列により置換されているキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際、ヒト化抗体は典型的には、一部のＣＤＲ残基及び恐らくは一部のＦＲ残基がげっ歯類抗体における類似の部位に由来する残基により置換されているヒト抗体である。
【０３６５】
ヒト化抗体の作成において使用すべき軽鎖及び重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は抗原性及び抗体がヒトの治療上の使用を意図している場合はＨＡＭＡ応答（ヒト抗マウス抗体）を低減するために極めて重要である。いわゆる「ベストフィット」法に従えば、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列を既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングする。げっ歯類のものに最も近似しているヒトＶドメイン配列を同定し、そして、その内部にあるヒトフレームワーク領域（ＦＲ）をヒト化抗体として許容する（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７））。別の方法は軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全ヒト抗体のコンセンサス配列から誘導した特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークを数種の異なるヒト化抗体に対して使用してよい（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３））。
【０３６６】
抗原に対する高い結合親和性及び他の望ましい生物学的特性を保持しながら抗体をヒト化させることが更に重要である。この目標を達成するためには、好ましい方法によれば、親配列及び種々の概念的ヒト化産物の分析の過程により、親及びヒト化配列の三次元モデルを用いながら、ヒト化抗体を製造する。三次元の免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、当業者のよく知るものである。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元コンホーメーション構造を説明してディスプレイするコンピュータプログラムが使用できる。これらのディスプレイを精査することにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定される役割の分析、即ち候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響する残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基を選択肢、レシピエント及びインポート配列から、標的抗原に対する増大した親和性のような所望の抗体特性が達成されるように組み合わせることができる。一般的に超可変領域残基は、抗原結合への影響においては直接、そして最も大きく関与している。
【０３６７】
種々の形態のヒト化抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体が意図される。例えばヒト化抗体は抗体フラグメント、例えばＦａｂであってよく、これは場合によりイムノコンジュゲートを形成するために細胞毒性剤１つ以上にコンジュゲートされる。或いは、ヒト化抗体は未損傷の抗体、例えば未損傷のＩｇＧ１抗体であってよい。
【０３６８】
ヒト化の代替として、ヒト抗体を形成することができる。例えば免疫化により内因性免疫グロブリン生産の非存在下においてヒト抗体の完全なレパートリーを作成することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を作成することが現在可能である。例えばキメラ及び生殖細胞系統の突然変異体マウスにおける抗体重鎖連関領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性の欠失が内因性抗体生産の完全な抑制をもたらすことが報告されている。ヒト生殖細胞系統免疫グロブリン遺伝子アレイのそのような生殖細胞系統突然変異体マウスへの転移は抗原攻撃時のヒト抗体の生産をもたらすことになる。例えばＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，５９１，６６９号（全てＧｅｎＰｈａｒｍ）；第５，５４５，８０７号；及びＷＯ９７／１７８５２を参照のこと。
【０３６９】
或いは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３［１９９０］）を用いることにより未免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体及び抗体フラグメントをインビトロで製造することができる。この手法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を糸状バクテリオファージ、例えばＭ１３又はｆｄの主要な又は副次的な外皮蛋白遺伝子の何れかにインフレームにクローニングし、ファージ粒子の表面上の機能的抗体フラグメントとしてディスプレイさせる。糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有しているため、抗体の機能的特性に基づいた選択もまたこれ等の特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。即ち、ファージはＢ細胞の特性の一部を模倣する。ファージディスプレイは例えばＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ３：５６４−５７１（１９９３）において考察されている種々のフォーマットで実施できる。Ｖ遺伝子セグメントの幾つかの原料をファージディスプレイの為に使用できる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は免疫化マウスの脾臓から誘導されたＶ遺伝子の小型の無作為のコンビナトリアルなライブラリから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離している。本質的にＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）又はＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ，１２：７２５−７３４（１９９３）により記載された手法に従って、未免疫化ヒトドナーのＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、そして抗原の多様なアレイ（自己抗原を包含）に対する抗体を単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び第５，５７３，９０５号も参照のこと。
【０３７０】
上記した通り、ヒト抗体は又、インビトロの活性化Ｂ細胞により形成してもよい（米国特許第５，５６７，６１０号及び第５，２２９，２７５号参照）。
【０３７１】
４．抗体フラグメント
特定の状況において、全抗体よりも抗体フラグメントを使用するほうが有利である。より小さいサイズのフラグメントは急速なクリアランスを可能にし、そして固形腫瘍への向上した接触をもたらすと考えられる。
【０３７２】
抗体フラグメントの製造のためには種々の手法が開発されている。伝統的には、これ等のフラグメントは未損傷の抗体の蛋白分解的消化を介して誘導されている（例えばＭｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１１９２）；及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）。しかしながら、これ等のフラグメントは現在組み換え宿主細胞により直接製造することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体フラグメントは全てＥ・コリにおいて発現させ、これより分泌させることができ、これにより、これ等のフラグメントの大量を効率的に生産できる。抗体フラグメントは上記した抗体ファージライブラリから単離できる。或いは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを直接Ｅ・コリから回収し、化学的にカップリングしてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２）。別の方法によれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは組み換え宿主細胞培養物から直接単離できる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボ半減期の延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体フラグメントの生産のための他の手法は当業者の知る通りである。選択された抗体は一重鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。Ｆｖ及びｓＦｖは定常領域を欠いた未損傷の複合化部位を有する限定的種であり；即ち、それらはインビボ使用時の低下した非特異的結合の為に適している。ｓＦｖ融合蛋白を構築することによりｓＦｖのアミノ又はカルボキシ末端の何れかにエフェクター蛋白を融合させてよい。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，上出を参照のこと。抗体フラグメントは又例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載の「線状抗体」であってもよい。そのような線状抗体フラグメントは単一特異性又は二重特異性であってよい。
【０３７３】
５．二重特異性抗体
二重特異性抗体は少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示される二重特異性抗体は本明細書に記載するＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３蛋白の２つの異なるエピトープに結合してよい。他のそのような抗体はＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の結合部位を他の蛋白に対する結合部位と組み合わせてよい。或いは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３アームを白血球上のトリガリング分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えばＣＤ３）又はＩｇＧに対するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組み合わせることにより、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３発現細胞に対して細胞防御機序を集中及び局在化させてよい。二重特異性抗体はまたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを発現する細胞に細胞毒性剤を局在化させるために使用してよい。これ等の抗体はＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−結合アーム及び細胞毒性剤（例えばサポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテン）に結合するアームを保有している。二重特異性抗体は完全長抗体又は抗体フラグメント（例えばＦ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として製造できる。
【０３７４】
ＷＯ９６／１６６７３は二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗−ＦｃγＲＩＩＩ抗体を記載しており、そして米国特許第５，８３７，２３４号は二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗−ＦｃγＲＩ抗体を開示している。二重特異性抗ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体はＷＯ９８／０２４６３に示されている。米国特許第５，８２１，３７７号は二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗−ＣＤ３抗体を教示している。
【０３７５】
二重特異性抗体を作成するための方法は当該分野で知られている。完全長に重篤異性抗体の伝統的製造は２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、その場合、２つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の無作為の取合せのため、これ等のハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、そのうち僅か１種のみが正しい二重特異性構造を有する。通常はアフィニティークロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は面倒であり、そして生成物収率は低値である。同様の操作法がＷＯ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯＪ，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０３７６】
異なる方法によれば、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原複合化部位）を免疫グロブリンの定常ドメイン配列に融合させる。好ましくは、融合は少なくとも一部のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含むＩｇ重鎖定常ドメインと行う。融合の少なくとも１つにおいて存在する軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが望ましい。免疫グロブリン重鎖融合物及び所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し安定な宿主細胞に同時トランスフェクトする。これにより、構築において使用した３種のポリペプチド鎖の等しくない比率が所望の二重特異性抗体の最適な収率をもたらす場合の３種のポリペプチドフラグメントの相互の割合を調節する場合に大きい柔軟性をもたらす。しかしながら、等しい比率における少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率をもたらす場合、又は、比率が所望の鎖の組合せの収率に有意に影響しない場合は、単一の発現ベクター内に２つ又は３つ全てのポリペプチド鎖に関するコーディング配列を挿入することが可能である。
【０３７７】
本発明は一方のアームにおける第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖及び他方のアームにおけるハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性をもたらす）よりなる二重特異性抗体を提供する。この非対称の構造は、二重特異性分子の半片方にのみ免疫グロブリン軽鎖が存在することは分離の効率的方法となるため、望ましくない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にすることがわかっている。この方法はＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体の形成の更に詳細な説明は例えばＳｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０３７８】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別の方法によれば、抗体分子対の間の界面を操作することにより組み換え細胞培養から回収されるヘテロ２量体の割合を最大限にすることができる。好ましい界面はＣＨ３ドメインの少なくとも部分を含む。この方法においては、第１の抗体分子の界面に由来する小型アミノ酸側鎖１つ以上をより大きい鎖（例えばチロシン又はトリプトファン）で置き換える。大型のアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えばアラニン又はスレオニン）と置き換えることにより第２の抗体分子の界面上には同一又は同様のサイズと大型の側鎖との差を補償する「空洞」が第２の抗体分子の界面上に形成される。これはホモ２量体のような他の望ましくない最終生成物を超えてヘテロ２量体の収率を増大させるための機序を与える。
【０３７９】
二重特異性抗体は交差結合又は「ヘテロコンジュゲート」抗体を包含する。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の一方をアビジンに、そして他方をビオチンにカップリングすることができる。このような抗体は例えば望ましくない細胞に免疫系細胞をターゲティングすること（米国特許第４，６７６，９８０号）及びＨＩＶ感染の治療のため（ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３及びＥＰ０３０８９）に提案されている。ヘテロコンジュゲート抗体は何れかの好都合な交差結合法を用いて作成してよい。適当な交差結合剤は当該分野で良く知られており、そして多くの交差結合の手法と共に米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０３８０】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を形成するための手法もまた文献に記載されている。例えば二重特異性抗体はキメラ連結を用いて製造できる。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１（１９８５）はＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成するために未損傷の抗体を蛋白分解的に切断する操作法を記載している。これ等のフラグメントをジチオール複合体形成剤、亜ヒ酸ナトリウムの存在下に還元することにより、隣接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィドの形成を予防する。次に形成されたＦａｂ’フラグメントをチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換する。Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは次にメルカプトエチルアミンで還元することによりＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合することにより二重特異性抗体を形成する。生成した二重特異性抗体は酵素の選択的固定化のための試薬として使用できる。
【０３８１】
最近の進歩により、化学的にカップリングすることにより二重特異性抗体を形成できるＥ・コリからのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接の回収が容易になった。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の製造を記載している。各Ｆａｂ’フラグメントを別個にＥ・コリから分泌させ、インビトロの指向性化学カップリングに付すことにより、二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体はＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及び正常ヒトＴ細胞に結合することができ、同時にヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞毒性リンパ球の溶解活性をトリガーすることができる。組み換え細胞培養物より直接二重特異性抗体フラグメントを作成して単離する種々の手法も報告されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを用いて製造されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎ蛋白由来のロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により２種の異なる抗体のＦａｂ’部分に連結している。抗体のホモ２量体をヒンジ領域で還元することによりモノマーを形成し、次に、再酸化して抗体ヘテロ２量体を形成している。この方法は又抗体ホモ２量体の製造の為にも利用できる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載の「ダイアボディー」手法は二重特異性抗体フラグメントを作成するための代替機序を与えている。フラグメントは同じ鎖の２ドメイン間の対形成を可能とするには短すぎるリンカーによりＶＬに連結されたＶＨを含む。従って、１つのフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインが別のフラグメントの相補ＶＬ及びＶＨドメインに強制的に対形成させられ、これにより２つの抗原結合部位が形成される。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）２量体の使用により二重特異性抗体フラグメントを作成するための別の方策も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０３８２】
２価より多価の抗体も意図される。例えば３重特異性抗体を作成できる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０３８３】
６．ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体もまた本発明の範囲内に包含される。ヘテロコンジュゲート抗体は２つの共有結合した抗体よりなる。このような抗体は例えば望ましくない細胞に免疫系細胞をターゲティングすること［米国特許第４，６７６，９８０号］及びＨＩＶ感染の治療のため［ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３及びＥＰ０３０８９］に提案されている。抗体は交差結合剤を用いる方法を包含する合成蛋白化学における既知の方法を用いてインビトロで製造してよいことを意図している。例えば、イムノトキシンは、ジスルフィド交換反応を用いて、又は、チオエーテル結合の形成により構築してよい。この目的のための適当な試薬の例はイミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデート及び例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示されているものを包含する。
【０３８４】
７．多価抗体
多価抗体は抗体が結合する相手の抗原を発現する細胞により、２価抗体より急速に内在化（及び／又は異化）される場合がある。本発明の抗体は３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（ＩｇＭクラス以外である）（例えば４価抗体）であることができ、これは抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組み換え発現により容易に製造できる。多価抗体は２量化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい２量化ドメインはＦｃ領域又はヒンジ領域を含む（又はそれよりなる）。この設定においては、抗体はＦｃ領域及びＦｃ領域に対してアミノ末端側に３つ以上の抗原結合部位を含むことになる。好ましい多価抗体は本発明においては、３〜約８個、好ましくは４個の抗原結合部位を含む（又はそれよりなる）。多価抗体は少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含み、ここでポリペプチド鎖は２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含んでよく、式中ＶＤ１は第１の可変ドメイン、ＶＤ２は第２の可変ドメイン、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１およびＸ２はアミノ酸又はポリペプチドを示し、ｎは０又は１である。例えば、ポリペプチド鎖はＶＨ−ＣＨ１−フレキシブルリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；又はＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含んでよい。本発明の多価抗体は好ましくは更に少なくとも２つ（好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含む。本発明の多価抗体は例えば約２〜約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでよい。本明細書において意図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは軽鎖可変ドメインを含み、そして場合により更にＣＬドメインを含む。
【０３８５】
８．エフェクター機能操作
抗体の抗原依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を増強するために、エフェクター機能に関して本発明の抗体を修飾することが望ましい場合がある。これは１つ以上アミノ酸置換を抗体のＦｃ領域に導入することにより達成してよい。代替又は追加として、システイン残基をＦｃ領域に導入することにより、この領域における鎖間のジスルフィド結合の形成を可能としてよい。このように形成されたホモ２量体抗体は向上した内在化能力及び／又は増大した補体媒介細胞殺傷及び抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有する場合がある。Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）及びＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。増強した抗腫瘍活性を有するホモ２量体抗体はまたＷｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載のヘテロ２官能性交差リンカーを用いて製造してもよい。或いは、二重にＦｃ領域を有するため増強した補体溶解及びＡＤＣＣ能力を有する抗体を製作することもできる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。抗体の血清中半減期を延長するためには、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載の通り抗体（特に抗体フラグメント）中にサルベージ受容体結合エピトープを取り込んでよい。本明細書においては、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語はＩｇＧ分子のインビボの血清中半減期を延長する原因となるＩｇＧ分子（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０３８６】
９．イムノコンジュゲート
本発明はまた細胞毒性剤、例えば化学療法剤、成長抑制剤、毒素（例えば細菌、カビ、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素又はそのフラグメント）又は放射性同位体（例えば放射性コンジュゲート）にコンジュゲートした抗体を含む免疫コンジュゲートに関する。
【０３８７】
このような免疫コンジュゲートの形成において有用な化学療法剤は上記の通りである。使用できる酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントはジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・アエルギノーサ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  Ｆｏｒｄｉｉ蛋白、ジアンシン蛋白、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ蛋白（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンを包含する。種々の放射性核種が放射性コンジュゲート抗体の製造のために使用できる。例は２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅを包含する。抗体及び細胞毒性剤のコンジュゲートは種々の２官能性蛋白カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトリエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を用いて作成される。例えば、リシンイムノトキシンはＶｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載の通り製造できる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は抗体への放射性核種のコンジュゲーションのための例示されるキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。
【０３８８】
抗体及び１つ以上の小分子毒素、例えばカリケアマイシン、マイタンシノイド、トリコテセン及びＣＣ１０６５及び毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体のコンジュゲートもまた本発明において意図している。
【０３８９】
マイタンシン及びマイタンシノイド
本発明はマイタンシノイド分子１つ以上にコンジュゲートした抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体（完全長又はフラグメント）を提供する。
【０３９０】
マイタンシノイドはチュブリン重合を抑制することにより機能する有糸分裂抑制剤である。マイタンシンは東アフリカの潅木であるＭａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａから最初に単離された（米国特許第３，８９６，１１１号）。その後、特定の微生物もまたマイタンシノイド、例えばマイタンシノール及びＣ−３マイタンシノールエステルを生産することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成のマイタンシノール及びその誘導体及び類似体は例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，１３７，２３０号；第４，２４８，８７０号；第４，２５６，７４６号；第４，２６０，６０８号；第４，２６５，８１４号；第４，２９４，７５７号；第４，３０７，０１６号；第４，３０８，２６８号；第４，３０８，２６９号；第４，３０９，４２８号；第４，３１３，９４６号；第４，３１５，９２９号；第４，３１７，８２１号；第４，３２２，３４８号；第４，３３１，５９８号；第４，３６１，６５０号；第４，３６４，８６６号；第４，４２４，２１９号；第４，４５０，２５４号；第４，３６２，６６３号；および第４，３７１，５３３号に開示されている。
【０３９１】
マイタンシノイド−抗体コンジュゲート
その治療指数を向上させる試みにおいて、マイタンシン及びマイタンシノイドは腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体にコンジュゲートされている。マイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲート及びその治療用途は例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，２０８，０２０号、第５，４１６，０６４号及び欧州特許ＥＰ０４２５２３５Ｂ１に開示されている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３（１９９６）はヒト結腸直腸癌に対して指向されたモノクローナル抗体Ｃ２４２に連結したＤＭ１と指名されたマイタンシノイドを含む免疫コンジュゲートを記載している。コンジュゲートは培養された結腸癌細胞に対しては高度に細胞毒性であることがわかり、そしてインビボの腫瘍生育試験において抗腫瘍活性を示している。Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）はヒト結腸癌細胞系統上の抗原に結合するマウス抗体Ａ７に、又は、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ癌遺伝子に結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１にジスルフィドリンカーを介してマイタンシノイドをコンジュゲートしている免疫コンジュゲートを記載している。ＴＡ．１−マイタンシノイドコンジュゲートの細胞毒性は細胞当たり３ｘ１０５ＨＥＲ−２表面抗原を発現するヒト乳癌細胞系統ＳＫ−ＢＲ−３に対してインビトロで試験されている。薬剤コンジュゲートは遊離のマイタンシノイド薬剤と同様の細胞毒性の程度を達成しており、これは抗体分子当たりのマイタンシノイド分子の数を増大させることにより増大させることができた。Ａ７−マイタンシノイドコンジュゲートはマウスにおいて低い全身細胞毒性を示した。
【０３９２】
抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体−マイタンシノイドコンジュゲート（免疫コンジュゲート）
抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体マイタンシノイドコンジュゲートは抗体又はマイタンシノイド分子の何れかの生物学的活性を有意に低下させること無くマイタンシノイド分子に抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を化学的に連結することにより製造する。抗体分子当たり平均３〜４個のマイタンシノイド分子をコンジュゲートすると抗体の機能又は溶解性に悪影響を及ぼすことなく標的細胞の細胞毒性を増強する場合に有効であることがわかっているが、１分子毒素／抗体であっても抗体単独の使用よりも細胞毒性を増強できることが期待される。マイタンシノイドは当該分野でよく知られており、そして既知の手法により合成するか、又は、天然原料から単離することができる。適当なマイタンシノイドは例えば米国特許第５，２０８，０２０号に、そして、上記した他の特許又は非特許の公開物に開示されている。好ましいマイタンシノイドはマイタンシノール及び芳香環において、又は、マインタンシノール分子の他の位置において修飾されているマインタンシノール類似体、例えば種々のマインタンシノールエステルである。
【０３９３】
抗体−マイタンシノイドコンジュゲートを作成するための当該分野で知られた連結基は多数存在し、例えば米国特許第５，２０８，０２０号又は欧州特許ＥＰ０４２５２３５Ｂ１及びＣｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）に開示されているもの等が挙げられる。連結基は上記特許に開示されている通りジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光不安定性基、ペプチダーゼ不安定性基、又はエステラーゼ不安定性基を包含するが、ジスルフィド及びチオエーテル基が好ましい。
【０３９４】
抗体とマイタンシノイドのコンジュゲートは種々の２官能性蛋白カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を用いて作成してよい。特に好ましいカップリング剤は、ジスルフィド結合を与えるためのＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７３，７２３−７３７（１９７８））及びＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）を包含する。
【０３９５】
リンカーは連結部の型に応じて種々の位置においてマイタンシノイド分子に結合してよい。例えば、エステル結合は従来のカップリング手法を用いてヒドロキシル基との反応により形成してよい。反応はヒドロキシル基を有するＣ３位、ヒロドキシメチルで修飾されたＣ１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ１５位及びヒドロキシル基を有するＣ２０位において起こってよい。連結はマイタンシノール又はマイタンシノール類似体のＣ３位において形成される。
【０３９６】
カリケアマイシン
目的の免疫コンジュゲートの別のものはカリケアマイシン分子１つ以上にコンジュゲートした抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリーはピコモル未満の濃度にいおいて２本鎖ＤＮＡ切断をもたらすことができる。カリケアマイシンファミリーのコンジュゲートの製造に関しては米国特許第５，７１２，３７４号、第５，７１４，５８６号、第５，７３９，１１６号、第５，７６７，２８５号、第５，７７０，７０１号、第５，７７０，７１０号、第５，７７３，００１号、第５，８７７，２９６号を参照のこと（全てＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）。使用してよいカリケアマイシンの構造的類似体は例えばγ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧ及びθＩｌ（Ｈｉｍｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５３：３３３６−３３４２（１９９３）、Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８（１９９８）及び上記したＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄへの米国特許）であるが、これらに限定されない。抗体をコンジュゲートできる別の抗腫瘍剤は抗葉酸エステルであるＱＦＡである。カリケアマイシン及びＱＦＡは両方とも細胞内作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。従って、抗体媒介内在を介したこれらの薬剤の細胞内取り込みはその細胞毒性作用を大きく増大させる。
【０３９７】
他の細胞毒性剤
本発明の抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体にコンジュゲートできる他の抗腫瘍剤はＢＣＮＵ、ストレプトゾシン、ビンクリスチン及び５−フルオロウラシル、米国特許第５，０５３，３９４号、第５，７７０，７１０に号記載の総称ＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として知られる薬剤ファミリー、並びに、エスペラマイシン（米国特許第５，８７７，２９６号）を包含する。
【０３９８】
使用できる酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・アエルギノーサ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  Ｆｏｒｄｉｉ蛋白、ジアンシン蛋白、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ蛋白（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンを包含する。例えば１９９３年１０月２８日に公開されたＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
【０３９９】
本発明は更に抗体と核溶解活性を有する化合物との間に形成される免疫コンジュゲートを意図している（例えばリボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）。
【０４００】
腫瘍の選択的破壊のためには、抗体は高度に放射性の原子を含んでよい。種々の放射性同位体が放射性コンジュゲート抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体の製造のために使用される。例示されるものはＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体を包含する。検出のためにコンジュゲートを使用する場合は、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ＭＲＩとしても知られている）のためのスピン標識、例えばヨウ素−１２３、更にヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
【０４０１】
放射標識又は他の標識を既知の方法でコンジュゲートに取り込ませてよい。例えば、水素の代わりにフッ素−１９を含む適当なアミノ酸前駆体を用いて、ペプチドを生合成するか、又はアミノ酸化学合成法により合成してよい。ｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１のような標識をペプチド内のシステイン残基を介して結合することができる。イットリウム−９０はリジン残基を介して結合できる。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７）を用いてヨウ素−１２３を取り込むことができる。Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９）は他の方法を詳細に説明している。
【０４０２】
抗体と細胞毒性剤のコンジュゲートは種々の２官能性の蛋白カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトリエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を用いて作成してよい。例えば、リシンイムノトキシンはＶｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載の通り製造できる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は抗体への放射性核種のコンジュゲーションのための例示されるキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。リンカーは細胞内での細胞毒性剤の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってよい。例えば酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してよい。
【０４０３】
或いは、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体及び細胞毒性剤を含む融合蛋白は例えば組み換え手法又はペプチド合成により作成してよい。ＤＮＡの長さは相互に隣接するかコンジュゲートの所望の特性を損なわないリンカーペプチドをコードする領域により分離されているコンジュゲートの２つの部分をコードするそれぞれの領域を含んでよい。
【０４０４】
本発明によれば、抗体は、抗体−受容体コンジュゲートを患者に投与し、その後浄化剤を用いて循環系より未結合コンジュゲートを除去し、そして次に細胞毒性剤（例えば放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートした「リガンド」（例えばアビジン）を投与する腫瘍の予備ターゲティングにおいて利用するための「受容体」（例えばストレプトアビジン）にコンジュゲートしてよい。
【０４０５】
１０．免疫リポソーム
本明細書に開示した抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体はまた免疫リポソームとして製剤してよい。「リポソーム」は哺乳類における薬剤の送達のために有用な脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤の種々の型よりなる小型の小胞である。リポソームの成分は一般的には生物学的な膜の脂質の配置と同様に二層形態に配置している。抗体を含有するリポソームは例えばＥｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号；及び１９９７年１０月２３日に公開されたＷＯ９７／３８７３１に記載されているような当該分野で知られた方法により製造される。長期の循環時間を有するリポソームは米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０４０６】
特に有用なリポソームはホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて逆相蒸発法により形成することができる。リポソームを所定の孔径のフィルターを通して押し出すことにより、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントはジスルフィド相互交換反応によりＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載の通りリポソームにコンジュゲートできる。化学療法剤を場合によりリポソーム内に含有させる。Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８１（１９）：１４８４（１９８９）を参照のこと。
【０４０７】
１１．抗体の医薬組成物
本発明により同定されるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド並びに前述したスクリーニング試験により同定される他の分子に特異的に結合する抗体を医薬組成物の形態において種々の障害の治療のために投与できる。
【０４０８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドが細胞内にあり、全抗体を阻害剤として使用する場合は、内在化抗体が好ましい。しかしながら、リポフェクション又はリポソームはまた抗体又は抗体フラグメントを細胞に送達するためにも使用できる。抗体フラグメントを用いる場合は、標的蛋白の結合ドメインに特異的に結合する最も小さい阻害性フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域の配列に基づいて、標的蛋白配列に結合する能力を保持しているペプチド分子を設計できる。そのようなペプチドは化学合成及び／又は組み換えＤＮＡ技術による製造が可能である。例えばＭａｒａｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３（１９９３）を参照のこと。本発明の製剤は又、治療すべき特定の適応症のために必要に応じて１つより多い活性化合物、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない補足的な活性を有するものを含有してよい。代替として、又は追加的に、組成物はその機能を増強する薬剤、例えば細胞毒性剤、サイトカイン、化学療法剤又は成長抑制剤を含んでよい。このような分子は意図する目的のために有効である量における組み合わせにおいて適宜存在する。
【０４０９】
活性成分はまた例えばコアセルベーション法によるか、又は、界面重合により製造されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマクロエマルジョン中に捕獲させてもよい。このような手法は上出のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに開示されている。
【０４１０】
インビボ投与のために使用されるべき製剤は滅菌されていなければならない。これは滅菌濾過メンブレンを通過する濾過により容易に達成される。
【０４１１】
持続放出製剤を製造してよい。持続放出製剤の適当な例は抗体を含有する固体疎水性重合体の半透過性マトリックスを包含し、そのようなマトリックスは形状付与された物品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸及びγエチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドよりなる注射可能な微小球）及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を包含する。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸のような重合体は１００日間にわたる分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲルはより短い時間に蛋白を放出する。カプセル化抗体が身体内に長時間残存する場合、それらは、３７℃の水分への曝露の結果として、変性するか凝集し、生物学的活性を消失するか、又は、免疫原性が変化する可能性がある。合理的な方策は関与する機序に応じて安定化のために考案することができる。例えば、凝集の機序がチオ−ジスルフィド交換を介した分子間Ｓ−Ｓ結合の形成であることが発見されれば、スルフィドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加物の使用、及び、特定の重合体マトリックス組成物の開発により安定化を達成してよい。
【０４１２】
Ｇ．抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体の使用
本発明の抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体は神経障害；心臓血管、内皮又は血管形成の障害；免疫不全；腫瘍学的障害；胚発生の障害又は致死性又は代謝異常に関する種々の治療上及び／又は診断上の有用性を有する。例えば、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体は抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３に関する診断試験、例えば特定の細胞、組織又は血清におけるその発現（及び一部の場合は示差的発現）を検出することにおいて使用してよい。当該分野で知られた種々の診断試験の手法、例えば競合的結合試験、直接又は間接のサンドイッチ試験及び不均質又は均質な相の何れかにおいて行う免疫沈降試験を使用してよい［Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８７）ｐｐ．１４７−１５８］。診断試験において使用される抗体は検出可能な部分で標識できる。検出可能な部分は直接又は間接的に検出可能なシグナルを生成することができるものでなければならない。例えば検出可能な部分は放射性同位体、例えば３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ、蛍光又はケミルミネセント化合物、例えばフルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン、又は酵素、例えばアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ又はセイヨウワサビパーオキシダーゼであってよい。検出可能な部分に抗体をコンジュゲートするための当該分野で知られた何れかの知られた方法、例えばＨｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１４４：９４５（１９６２）；Ｄａｖｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３：１０１４（１９７４）；Ｐａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，４０：２１９（１９８１）；及びＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，３０：４０７（１９８２）に記載のものを使用してよい。
【０４１３】
抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体は又組み換え細胞培養物又は天然原料からのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアフィニティー精製の為にも有用である。この過程においてはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに対する抗体を当該分野で良く知られている方法を用いてセファデックス樹脂又は濾紙のような適当な支持体上に固定化する。次に固定化された抗体を精製すべきＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを含有する試料と接触させ、その後、固定化抗体に結合しているＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを除き試料中の実質的に全ての物質を除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に抗体からＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを遊離させる別の適当な溶媒で支持体を洗浄する。
【０４１４】
以下の実施例は説明のみを目的としており、本発明の範囲を如何なる面でも限定する意図はない。
【０４１５】
本明細書において引用した全ての特許及び文献の参考資料は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０４１６】
実施例において言及される市販の試薬は、他に指示がない限り、製造者の指示書に従って使用した。以下の実施例において、また本明細書を通して、ＡＴＣＣアクセッション番号によって同定される細胞の起源は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡである。
【０４１７】
（実施例１：新規のポリペプチドおよびそれらをコードするｃＤＮＡを同定するための細胞外ドメインホモロジースクリーニング）
Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ公的データベースからの約９５０個の既知の分泌タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースを検索するために使用した。ＥＳＴデータベースは、公的データベース（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆ、ＧｅｎＢａｎｋ）および企業のデータベース（例えば、ＬＩＦＥＳＥＱＴＭ，Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を含んだ。検索は、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して、ＥＣＤタンパク質配列の、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施された。既知のタンパク質をコードしなかった、ＢＬＡＳＴスコアが７０（またはいくつかの場合においては９０）またはそれ以上の比較結果を、クラスター化し、そしてプログラム「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。
【０４１８】
この細胞外ドメインホモロジースクリーニングを使用して、コンセンサスＤＮＡ配列を、ｐｈｒａｐを使用して他の同定されているＥＳＴ配列に対して構築した。さらに、得られたコンセンサスＤＮＡ配列を、しばしば（必ずしもそうではないが）ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ−２およびｐｈｒａｐの繰り返しサイクルを使用して、伸長することにより、上に記載したＥＳＴ配列の起源を使用してできる限りコンセンサス配列を伸長した。
【０４１９】
上に記載したように得られたコンセンサス配列に基づいて、次いでオリゴヌクレオチドを、目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリをＰＣＲによって同定するためおよびＰＲＯポリペプチドについての完全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するために合成し、使用した。順方向および逆方向ＰＣＲプライマーは、一般に２０〜３０ヌクレオチドの範囲であり、約１００〜１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物が得られるように設計されることが多い。プローブ配列は、代表的には４０〜５５ｂｐ長である。いくつかの場合において、コンセンサス配列が約ｌ〜１．５ｋｂｐより大きいとき、さらなるオリゴヌクレオチドを合成する。完全長クローンについていくつかのライブラリをスクリーニングするために、ライブラリ由来のＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙのように、ＰＣＲプライマー対を用いてＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。次いで、陽性のライブラリを使用して、プローブオリゴヌクレオチドおよびプライマー対の一方を用いて目的の遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０４２０】
ｃＤＮＡクローンを単離するために使用したｃＤＮＡライブラリを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡの試薬などの市販の試薬を使用して標準的な方法によって構築した。ｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴをプライマーとし、ＳａｌＩヘミキナーゼ処理された（ｈｅｍｉｋｉｎａｓｅｄ）アダプターに平滑末端で連結し、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動によって適切にサイズ分離し、適当なクローニングベクター（例えば、ｐＲＫＢまたはｐＲＫＤ）；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１２７８−１２８０（１９９１）を参照のこと）に所定の方向で独特のＸｈｏＩ部位およびＮｏｔＩ部位においてクローニングした。
【０４２１】
（実施例２：アミラーゼスクリーニングによるｃＤＮＡクローンの単離）  （１．オリゴｄＴをプライマーとするｃＤＮＡライブラリの調製）
ｍＲＮＡを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（Ｆａｓｔ  Ｔｒａｃｋ２）の試薬およびプロトコルを使用して目的のヒト組織から単離した。このＲＮＡを使用し、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ（Ｓｕｐｅｒ  Ｓｃｒｉｐｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）の試薬およびプロトコルを使用して、ベクターｐＲＫ５Ｄに、オリゴｄＴをプライマーとするｃＤＮＡライブラリを生成した。この手順において、二本鎖ｃＤＮＡのうち、１０００ｂｐより大きいものを分離し、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩリンカー付加されたｃＤＮＡを、ＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断されたベクターにクローニングした。ｐＲＫ５Ｄは、ＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ  ｃＤＮＡクローニング部位の前に、ｓｐ６転写開始部位、ＳｆｉＩ制限酵素部位の順でそれらを有するクローニングベクターである。
【０４２２】
（２．ランダムプライマーをプライマーとするｃＤＮＡライブラリの調製）
１次ｃＤＮＡクローンの５’末端を優先的に表すために、２次ｃＤＮＡライブラリを構築した。Ｓｐ６ＲＮＡを１次ライブラリ（上記）から生成し、このＲＮＡを使用し、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓｕｐｅｒ  Ｓｃｒｉｐｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ，上を参照のこと）の試薬およびプロトコルを使用して、ランダムプライマーをプライマーとするｃＤＮＡライブラリをベクターｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０に構築した。この手順において、二本鎖ｃＤＮＡを、５００〜１０００ｂｐに分離し、ＮｏｔＩアダプターに平滑末端でリンカー付加し、ＳｆｉＩで切断し、そしてＳｆｉＩ／ＮｏｔＩで切断されたベクターにクローニングした。ｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０は、ｃＤＮＡクローニング部位およびマウスアミラーゼ配列の前に酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター（分泌シグナルなしの成熟配列）、続いて、クローニング部位の後に酵母アルコールデヒドロゲナーゼターミネーターを有するクローニングベクターである。このようにして、アミラーゼ配列とインフレームで融合されたこのベクターにクローニングされたｃＤＮＡは、適切にトランスフェクトされた酵母コロニーからアミラーゼを分泌するようになる。
【０４２３】
（３．形質転換および検出）
上の段落２に記載したライブラリ由来のＤＮＡを氷上で冷やし、エレクトロコンピテントＤＨ１０Ｂ細菌（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，２０ｍｌ）に加えた。次いで細菌およびベクター混合物を、製造者によって推奨されているように電気穿孔処理した。続いて、ＳＯＣ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１ｍｌ）を加えて、混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、形質転換体をアンピシリンを含む標準的な１５０ｍｍＬＢプレート２０枚に播き、１６時間インキュベートした（３７℃）。陽性のコロニーをプレートから拾い、そのＤＮＡを標準的なプロトコル、例えば、ＣｓＣｌ勾配を使用して細菌のペレットから単離した。次いで、精製されたＤＮＡを以下の酵母プロトコルに用いた。
【０４２４】
酵母法は、３つのカテゴリーに分けられる：（１）プラスミド／ｃＤＮＡ結合ベクターによる酵母の形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出および単離；ならびに（３）酵母コロニーからの直接の挿入断片のＰＣＲ増幅ならびに配列決定およびさらなる解析のためのそのＤＮＡの精製。
【０４２５】
使用した酵母株は、ＨＤ５６−５Ａ（ＡＴＣＣ−９０７８５）であった。この株は、以下の遺伝子型：ＭＡＴアルファ、ｕｒａ３−５２、ｌｅｕ２−３、ｌｅｕ２−１１２、ｈｉｓ３−１１、ｈｉｓ３−１５、ＭＡＬ＋、ＳＵＣ＋、ＧＡＬ＋を有する。好ましくは、翻訳後経路を欠く酵母変異体が、使用され得る。このような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２において転座不全（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ）対立遺伝子を有し得、切断されたｓｅｃ７１が最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常な作用を干渉するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチドおよび／またはリガンドを含む）、この翻訳後経路に関連する他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐまたはＳＳＡ１ｐ−４ｐ）またはこれらのタンパク質の複合体形成物もまた、好ましくは、アミラーゼを発現する酵母と組み合わせて使用され得る。
【０４２６】
形質転換は、Ｇｉｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２０：１４２５（１９９２）によって概説されているプロトコルに基づいて行われた。次いで、形質転換された細胞を寒天からＹＥＰＤ複合培地ブロス（１００ｍｌ）に接種し、３０℃で一晩生育した。ＹＥＰＤブロスを、Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．２０７（１９９４）に記載されているように調製した。次いで、一晩培養したものを、新鮮ＹＥＰＤブロス（５００ｍｌ）に約２×１０６細胞／ｍｌ（およそＯＤ６００＝０．１）に希釈し、１×１０７細胞／ｍｌ（およそＯＤ６００＝０．４〜０．５）まで再び生育した。
【０４２７】
次いで、細胞を回収し、形質転換に向けて調製し、ＧＳ３ローター瓶に移し、Ｓｏｒｖａｌ  ＧＳ３ローターにて５，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、上清を廃棄し、次いで、滅菌水に再懸濁し、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＳ−６ＫＲ遠心機において、５０ｍｌファルコンチューブにて３，５００ｒｐｍで再度遠心分離した。その上清を廃棄し、続いて細胞をＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ７．５，１００ｍＭ  Ｌｉ２ＯＯＣＣＨ３）で洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）に再懸濁した。
【０４２８】
微量遠心チューブ内で、調製した細胞（１００μｌ）と、新たに変性された一本鎖サケ精巣ＤＮＡ（Ｌｏｆｓｔｒａｎｄ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と形質転換ＤＮＡ（１μｇ、１０μｌ未満の体積）とを混合することによって形質転換を起こした。混合物をボルテックスにより手短に混合し、次いで、４０％ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ，４０％ポリエチレングリコール−４０００，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１００ｍＭ  Ｌｉ２ＯＯＣＣＨ３，ｐＨ７．５）を加えた。この混合物を穏やかに混合し、３０分間、撹拌しながら３０℃でインキュベートした。次いで、細胞を１５分間、４２℃の熱ショックにかけ、反応容器を１２，０００ｒｐｍで５〜１０秒間微量遠心し、デカントし、そしてＴＥ（５００μｌ，１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ７．５）に再懸濁した後、再度遠心分離した。次いで、細胞をＴＥ（１ｍｌ）に希釈し、アリコート（２００μｌ）を、１５０ｍｍ増殖プレート（ＶＷＲ）に予め調製された選択培地に播いた。
【０４２９】
あるいは、多数の少量反応の代わりに、形質転換を、単一の大規模反応を使用して実施し、ここで試薬の量は、それに合うようにスケールアップした。
【０４３０】
使用した選択培地は、Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．２０８−２１０（１９９４）に記載されているように調製されたウラシルを欠く合成完全デキストロース寒天（ＳＣＤ−Ｕｒａ）であった。形質転換体を、３０℃にて２〜３日間生育した。
【０４３１】
アミラーゼを分泌するコロニーの検出を、選択増殖培地中に赤デンプン（ｒｅｄ  ｓｔａｒｃｈ）を含ませることによって行った。Ｂｉｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７２：１７６−１７９（１９８８）によって報告されている手順により、デンプンを赤色色素（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｒｅｄ−１２０，Ｓｉｇｍａ）に結合させた。結合したデンプンを、最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）でＳＣＤ−Ｕｒａ寒天プレートに取り込ませ、リン酸カリウムを用いてｐＨ７．０（５０〜１００ｍＭの最終濃度）まで緩衝した。
【０４３２】
十分に分離し、同定可能な単一のコロニーを得るために、陽性のコロニーを拾い、新鮮選択培地（１５０ｍｍプレート上）に画線した。アミラーゼ分泌が陽性の十分に分離した単一のコロニーを、緩衝ＳＣＤ−Ｕｒａ寒天に赤デンプンを直接取り込むことによって検出した。陽性のコロニーを、デンプンを分解して、陽性のコロニーの周辺に直接可視化されるクリアなハローを生じる能力によって判定した。
【０４３３】
（４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離）
陽性のコロニーを単離したら、その一部をつま楊枝で拾い、９６ウェルプレート内の滅菌水（３０μｌ）に希釈した。このとき、陽性のコロニーを、凍結して次の解析のために保存するか、またはすぐに増幅した。細胞のアリコート（５μｌ）を、２５μｌ容量中、以下：０．５μｌのＫｌｅｎｔａｑ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）；４．０μｌの１０ｍＭ  ｄＮＴＰ’ｓ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ−Ｃｅｔｕｓ）；２．５μｌのＫｅｎｔａｑ緩衝液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）；０．２５μｌの順方向オリゴ１；０．２５μｌの逆方向オリゴ２；１２．５μｌの蒸留水を含むＰＣＲ反応用の鋳型として使用した。
【０４３４】
順方向オリゴヌクレオチド１の配列は：
５’−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＴＡＡＡＴＡＧＡＣＣＴＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＣＴ−３’  （配列番号７）であった。
【０４３５】
逆方向オリゴヌクレオチド２の配列は：
５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＣＣＡＴＴ−３’  （配列番号８）であった。
【０４３６】
次いで、ＰＣＲを以下のとおりに行った：
ａ．変性          ９２℃、５分
ｂ．変性          ９２℃、３０秒
アニーリング  ５９℃、３０秒
伸長          ７２℃、６０秒を３サイクル
ｃ．変性          ９２℃、３０秒
アニーリング  ５７℃、３０秒
伸長          ７２℃、６０秒を３サイクル
ｄ．変性          ９２℃，３０秒
アニーリング  ５５℃，３０秒
伸長          ７２℃，６０秒を２５サイクル
ｅ．４℃保持。
【０４３７】
オリゴヌクレオチドの下線を引いた領域を、それぞれ、ＡＤＨプロモーター領域およびアミラーゼ領域にアニーリングさせ、挿入断片が存在しないとき、ベクターｐＳＳＴ−ＡＭＹ．０から３０７ｂｐの領域を増幅した。代表的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列決定プライマー用のアニーリング部位を含んでいた。従って、空のベクターからのＰＣＲ反応の総産物は、３４３ｂｐであった。しかしながら、シグナル配列融合ｃＤＮＡは、かなり長いヌクレオチド配列を生じた。
【０４３８】
ＰＣＲの後、反応物（５μｌ）のアリコートを、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，前出に記載されているようなＴｒｉｓ−ホウ酸塩−ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝液系を使用した１％アガロースゲルのアガロースゲル電気泳動にかけた。４００ｂｐより長い単一の強力なＰＣＲ産物を生じたクローンを、９６Ｑｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製カラム（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）で精製後、ＤＮＡ配列決定によってさらに解析した。
【０４３９】
実施例３：シグナルアルゴリズム解析を使用したｃＤＮＡクローンの単離
様々なポリペプチドをコードする核酸配列を、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって開発された、ＥＳＴに基づく企業のシグナル配列探索アルゴリズムを適用することによって同定するだけでなく、クラスター化し、公的データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および／または民間データベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）からＥＳＴフラグメントを構築した。シグナル配列アルゴリズムは、目的の配列または配列フラグメントの５’−末端の第１および必要に応じて第２のメチオニンコドン（ＡＴＧ）周辺のＤＮＡヌクレオチドの特徴に基づいて、分泌シグナルスコアを計算する。１番目のＡＴＧの後のヌクレオチドは、いかなる終止コドンも有しない少なくとも３５個の明確なアミノ酸をコードしなければならない。１番目のＡＴＧが必要なアミノ酸を有する場合、２番目のＡＴＧは、試験されない。どちらも必要条件を満たさない場合、候補配列はスコア付けされない。ＥＳＴ配列が確実なシグナル配列を含むか否かを判定するために、ＡＴＧコドンの周辺のＤＮＡ配列および対応するアミノ酸配列を、分泌シグナルに関連することが知られている７つのセンサー（評価パラメータ）のセットを使用してスコア付けする。アルゴリズムの使用により、数多くのポリペプチドをコードする核酸配列が同定された。
【０４４０】
上記の実施例１〜３に記載の技術を用いて、本明細書中に開示されるようなＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする数多くの完全長ｃＤＮＡクローンを同定した。さらに、ＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡ７１１８２の配列をＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ ０１２２０６から同定した。次いで、これらのｃＤＮＡを、以下の表７に示すように、ブダペスト条約に従ってＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託した。
【０４４１】
【表７】
2010515428.tif 000040
特許手続を目的とする微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の規定および（ブダペスト条約）に基づく規則に基づいて、これらの寄託を行った。これは、寄託日から３０年間、寄託物の生存可能な培養物の維持を保証するものである。寄託物は、ブダペスト条約の規定に基づいてＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの合意に従い、ＡＴＣＣから入手可能であり、これは、どれが最初であろうとも、関連の米国特許の発行時または任意の米国または外国の特許出願の公開時に、寄託培養物の子孫が永久かつ無制限に入手可能であることを保証し、米国特許法第１２２条およびそれに従う特許庁長官規則（特に参照番号８８６ＯＧ６３８の３７ＣＦＲ第１．１４条を含む）に従って権利を有すると米国商標特許庁長官が決定した者に子孫を入手可能とすることを保証するものである。
【０４４２】
本出願の譲受人は、適当な条件下で培養されていたときに、寄託された材料の培養物が、死滅または損失または破壊された場合、通知時に、その材料が迅速に同一の別のものに置き換えられることに同意している。寄託された材料の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。
【０４４３】
実施例４：ヒトＰＲＯ１１０５ポリペプチド［ＵＮＱ５４８］をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記実施例３に記載のシグナル配列アルゴリズムの使用によって、ＩｎｃｙｔｅデータベースからＥＳＴクラスター配列の同定が可能となった。次いで、このＥＳＴクラスター配列を、公的ＥＳＴデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）および企業のＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（Ｌｉｆｅｓｅｑ（登録商標），Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を含む種々の発現配列タグ（ＥＳＴ）データベースと比較することにより、存在する相同性を同定した。相同性検索を、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｈｕｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０（１９９６））を使用して行った。既知のタンパク質をコードしなかった、ＢＬＡＳＴスコアが７０（またはいくつかの場合においては９０）以上であった比較結果をクラスター化し、プログラム「ｐｈｒａｐ」（Ｐｈｉｌ  Ｇｒｅｅｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）を用いてコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。そこから得られたコンセンサス配列を、本明細書中でＤＮＡ５６４３０と命名する。
【０４４４】
ＤＮＡ５６４３０配列とＩｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号１８５３０４７内に包含されるＥＳＴ配列との間で観察された配列相同性に鑑みて、そのＩｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン１８５３０４７を購入し、そのｃＤＮＡ挿入断片を得て、配列決定した。この挿入断片が、完全長タンパク質をコードしていることが見出された。このｃＤＮＡ挿入断片の配列を図１に示し、それを、本明細書中でＤＮＡ５９６１２−１４６６と命名する。
【０４４５】
ＤＮＡ５９６１２−１４６６のヌクレオチド配列全体を図１（配列番号１）に示す。クローンＤＮＡ５９６１２−１４６６は、ヌクレオチド２８−３０位の明らかな翻訳開始部位を有し、配列番号１のヌクレオチド５６８−５７０位の終止コドンで終結する単一のオープンリーディングフレームを含んでいる（図１）。予測されるポリペプチド前駆体は、１８０アミノ酸長である（図２；配列番号２）。図２に示される完全長ＰＲＯ１１０５タンパク質は、推定分子量が約２０，０４０ダルトン、ｐＩが約８．３５である。クローンＤＮＡ５９６１２−１４６６は、１９９８年６月９日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ番号２０９９４７が割り当てられている。寄託されたクローンは、実際の核酸配列を含んでおり、本明細書中に提供される配列は、公知の配列決定技術に基づくものであることを理解されたい。
【０４４６】
図２を解析すると、シグナルペプチドは配列番号２のアミノ酸約１−１９であり、膜貫通ドメインは配列番号２のアミノ酸８０−９９および１４５−１６２に示されている。当業者は、これら領域の全て、任意の組み合わせ、または個々の選択によりポリペプチドを生成し得ることを理解されたい。また、本明細書中に提供される情報に基づいて、対応ヌクレオチドを常套的に同定および調製し得ることを理解されたい。
【０４４７】
実施例５：ヒトＰＲＯ１２７９ポリペプチド［ＵＮＱ６４９］をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、上記実施例１に記載したように他のＥＳＴ配列に関してｐｈｒａｐを使用して構築した。このコンセンサス配列を、本明細書中でＤＮＡ３０８５６と命名する。ＤＮＡ３０８５６コンセンサス配列に基づいて、１）目的の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲによって同定するため、および２）ＰＲＯ１２７９についての完全長コード配列のクローンを単離するためのプローブとして使用するためにオリゴヌクレオチドを合成した。
【０４４８】
ＰＣＲプライマー（順方向および逆方向）を合成した：
順方向ＰＣＲプライマー（３０８５６．ｆ１）  ５’−ＧＧＣＴＧＣＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＧＴＣＡＴＣＧＧＧ−３’  （配列番号：９）
順方向ＰＣＲプライマー（３０８５６．ｆ１１）  ５’−ＣＴＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＣＡＧ−３’  （配列番号：１０）
順方向ＰＣＲプライマー（３０８５６．ｆ１２）  ５’−ＣＣＴＣＴＧＧＴＣＴＧＴＡＡＣＣＡＧ−３’  （配列番号：１１）
逆方向ＰＣＲプライマー（３０８５６．ｒ１）  ５’−ＴＣＴＧＴＧＡＴＧＴＴＧＣＣＧＧＧＧＴＡＧＧＣＧ−３’  （配列番号：１２）
逆方向ＰＣＲプライマー（３０８５６．ｒ１１）  ５’−ＣＧＴＧＴＡＧＡＣＡＣＣＡＧＧＣＴＴＴＣＧＧＧＴＧ−３’  （配列番号：１３）
逆方向ＰＣＲプライマー（３０８５６．ｒ１２）  ５’−ＣＣＣＴＴＧＡＴＧＡＴＣＣＴＧＧＴＣ−３’  （配列番号：１４）
さらに、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブを、以下のヌクレオチド配列を有するコンセンサスＤＮＡ３０８５６配列から構築した：
ハイブリダイゼーションプローブ（３０８５６．ｐ１）
５’−ＡＧＧＣＣＡＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＣＴＴＧＣＴＣＴＧＧＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＴ−３’  （配列番号：１５）
ハイブリダイゼーションプローブ（３０８５６．ｐ１１）
５’−ＧＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＧＧＴＴＣＧＡＧＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＡＣＴＣ−３’  （配列番号：１６）。
【０４４９】
完全長クローンの起源についていくつかのライブラリーをスクリーニングするために、そのライブラリー由来のＤＮＡを、上記で同定されたＰＣＲプライマー対を用いたＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。次いで、陽性のライブラリーを使用し、プローブオリゴヌクレオチドおよびＰＣＲプライマーの一方を使用して、ＰＲＯ１２７９遺伝子をコードするクローンを単離した。ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのＲＮＡをヒト肺腫瘍組織から単離した。
【０４５０】
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１２７９に対する完全長ＤＮＡ配列（本明細書中でＤＮＡ６５４０５−１５４７と命名［図３、配列番号３］；およびＰＲＯ１２７９に対する誘導タンパク質配列を得た。
【０４５１】
ＤＮＡ６５４０５−１５４７のヌクレオチド配列全体を図３に示す（配列番号３）。クローンＤＮＡ６５４０５−１５４７は、ヌクレオチド１０６−１０８位の明らかな翻訳開始部位を有し、ヌクレオチド８５６−８５８位の終止コドンで終結する単一のオープンリーディングフレームを含んでいる（図３）。予測されるポリペプチド前駆体は、２５０アミノ酸長である（図４）。図４に示される完全長ＰＲＯ１２７９タンパク質は、推定分子量が約２７，４６６ダルトン、ｐＩが約８．８７である。図４に示される完全長ＰＲＯ１２７９配列（配列番号：４）の解析により、以下：アミノ酸約１〜アミノ酸約１８のシグナルペプチド、アミノ酸約５８〜アミノ酸約６３のセリンプロテアーゼ、トリプシンファミリー、ヒスチジン活性部位、アミノ酸約９９〜アミノ酸約１０２、アミノ酸約１６５〜アミノ酸約１６８、アミノ酸約１８１〜アミノ酸約１８４およびアミノ酸約２１０〜アミノ酸約２１３の潜在的Ｎ−グリコシル化部位、アミノ酸約１４５〜アミノ酸約１４８のグリコサミノグリカン付加部位、アミノ酸約１９７〜アミノ酸約２０９およびアミノ酸約４７〜アミノ酸約６４のクリングルドメインタンパク質に存在するアミノ酸配列ブロック、アミノ酸約１９９〜アミノ酸約２０９、アミノ酸約４７〜アミノ酸約６３およびアミノ酸約２２０〜アミノ酸約２４３のセリンプロテアーゼ、トリプシンファミリー、ヒスチジンタンパク質に相同性を有するアミノ酸配列ブロック、ならびにアミノ酸約２２２〜アミノ酸約２４９およびアミノ酸約１８９〜アミノ酸約２２２のアップルドメインタンパク質に相同性を有するアミノ酸配列ブロックの存在が明らかになる。クローンＤＮＡ６５４０５−１５４７は１９９８年１１月１７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３４７６が割り当てられている。
【０４５２】
図４に示される完全長配列（配列番号４）のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント解析を使用したＤａｙｈｏｆｆデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１２７９アミノ酸配列と以下のＤａｙｈｏｆｆ配列：Ｉ５６５５９、Ｓ５５０６６、ＫＬＫ７＿ＲＡＴ、ＫＬＫ１＿ＲＡＴ、ＫＬＫＢ＿ＲＡＴ、ＫＬＫ３＿ＭＯＵＳＥ、ＫＬＫ８＿ＲＡＴ、ＡＦ０１３９８８＿１、Ｄ７８２０３＿１およびＨＳＵ６２８０１＿１との間に有意な相同性が明らかになった。
【０４５３】
さらに、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴクローン番号２７２３６４６を購入し、クローンの挿入断片を配列決定し、それにより図３に示されるＤＮＡ６５４０５−１５４７配列（配列番号３）を得ることにより、ＤＮＡ６５４０５−１５４７を得た。
【０４５４】
実施例６：ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３遺伝子破壊を含むマウスの作製および解析
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの役割を調べるため、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３遺伝子の破壊を、相同組換えまたはレトロウイルス挿入技術によって行った。具体的には、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９またはＰＲＯ１７８３遺伝子が破壊されたトランスジェニックマウス（すなわち、ノックアウトマウス）を、遺伝子ターゲティングまたは遺伝子トラッピングのいずれかによって作製した。サザンブロット解析で変異を確認することにより、５’末端と３’末端の両方における正確なターゲティングを確認した。挿入部位に隣接するエキソンにアニーリングするプライマーを使用したＲＴ−ＰＣＲによって裏付けられるように、遺伝子特異的な遺伝子型解析もゲノムＰＣＲによって行うことにより、内在性の天然の転写物が失われていることを確認した。ターゲティングベクターを１２９系統のＥＳ細胞に電気穿孔し、標的クローンを同定した。標的クローンを宿主胚盤胞に微量注入することにより、キメラを作製した。キメラをＣ５７動物と交雑し、Ｆ１ヘテロ接合体を作製した。ヘテロ接合体を交雑受精することにより、Ｆ２野生型、ヘテロ接合性およびホモ接合性コホートを作製し、表現型解析に使用した。まれに、Ｆ１ヘテロ接合体が十分に作製されない場合に、そのＦ１へテロ接合体を野生型Ｃ５７マウスと交雑することにより、十分なヘテロ接合体を得て、表現型の解析用のコホートと交雑した。すべての表現型解析を生後１２〜１６週で実施した。
【０４５５】
表現型結果の全体的な概要：
６．１  ＤＮＡ５９６１２−１４６６（ＵＮＱ５４８）遺伝子破壊を含むマウスの作製および解析
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１１０５ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ５９６１２−１４６６と命名）（ＵＮＱ５４８）を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報を以下に示す：変異マウス遺伝子は、以下に対応する：参照ヌクレオチド：ＮＭ＿０２９７４８アクセッション：ＮＭ＿０２９７４８ＮＩＤ：ｇｉ２２２６７４５３ ｒｅｆ ＮＭ＿０２９７４８．１ムス・ムスクルスＲＩＫＥＮｃＤＮＡ ２５１０００６Ｄ１６遺伝子（２５１０００６Ｄ１６Ｒｉｋ）；参照タンパク質：Ｑ８Ｒ１Ｅ７アクセッション：Ｑ８Ｒ１Ｅ７ＮＩＤ：ムス・ムスクルス（マウス）。ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２５１０００６Ｄ１６遺伝子（ＰＰ１０６５にわずかに類似）；参照ヒト遺伝子配列：ＮＭ＿０１９１１８アクセッション：ＮＭ＿０１９１１８ ＮＩＤ：ｇｉ ２１３６１８１３ ｒｅｆ ＮＭ＿０１９１１８．２ホモサピエンス仮説タンパク質ＲＰ４−６２２Ｌ５（ＲＰ４−６２２Ｌ５）；ヒトタンパク質配列は、次の参照に対応する：Ｑ８ＷＹ９８アクセッション：Ｑ８ＷＹ９８ＮＩＤ：ホモサピエンス（ヒト）。ＰＰ１０６５（仮説タンパク質ＲＰ４−６２２Ｌ５に類似）。
【０４５６】
目的の遺伝子は、ヒトＣｌｏｒｆ９１（１番染色体オープンリーディングフレーム９１）のオルソログであるＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２５１０００６Ｄ１６遺伝子である。別名としては、２５１０００６Ｄ１６Ｒｉｋ、１５００００２Ｄ１１Ｒｉｋ；４９３３４０７Ｄ０５Ｒｉｋ、ＡＡＳＬ５４８；ＰＲＯ１１０５；ＦＬＪ９０７７９；ＲＰ４−６２２Ｌ５；ｄＪ６２２Ｌ５．７；ＲＰ４−６２２Ｌ５．３が挙げられる。
【０４５７】
Ｃｌｏｒｆ９１は、シグナルペプチドおよび２つの膜貫通セグメントを含む、仮説内在性原形質膜タンパク質である（Ｃｌａｒｋら、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．：１３：２２６５−７０（２００３））。
【０４５８】
ターゲティングされたか遺伝子トラップされた変異を、系統１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来の胚性幹（ＥＳ）細胞で行った。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配してＦ１ヘテロ接合性動物を作製する。これらの子孫を交雑受精してＦ２野生型子孫、ヘテロ接合性変異子孫、およびホモ接合性変異子孫を作製する。まれに、例えば、Ｆ１マウスがキメラからほとんど得られない場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑することにより、交雑受精用のさらなるヘテロ接合性動物を得て、Ｆ２マウスを作製する。この世代のマウスに対してレベルＩ表現型解析を行う。
【０４５９】
野生型          ヘテロ          ホモ          合計
実測値    １２            ２６            ２２          ６０
予測値    １５            ３０            １５          ６０
カイ二乗値＝０．２９  有意性＝  ０．８６５０２２３（ｈｏｍ／ｎ）＝０．２６  平均同腹仔数＝７
変異型：相同組換え（標準）
説明：この遺伝子は５個のエキソンからなり、エキソン１に開始コドンを有する（ＮＣＢＩアクセッションＮＭ＿０２９７４８．１）。エキソン４および５をターゲティングした。
１．野生型発現パネル：ＲＴ−ＰＣＲによって試験された、胚性幹（ＥＳ）細胞および１３のすべての成体組織サンプル（骨格筋以外）において、標的遺伝子の発現を検出した。
２．ＱＣ発現：標的遺伝子の破壊をサザンハイブリダイゼーション解析によって確認した。
【０４６０】
６．１．１．  表現型解析（破壊遺伝子：ＤＮＡ５９６１２−１４６６（ＵＮＱ５４８）
（ａ）全体的な表現型の概要：
ヒト１番染色体オープンリーディングフレーム９１（Ｃ１ｏｒｆ９１）のオルソログをコードする遺伝子の変異により、（−／−）マウスにおいて総体脂肪質量および％総体脂肪の減少がもたらされた。さらに、変異（−／−）マウスは、骨梁の体積および骨梁厚の増加も示した。遺伝子破壊をサザンブロットによって確認した。
（ｂ）骨代謝および全身診断学
骨代謝の分野において、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症および大理石骨病の処置のため、ならびに骨の治癒を促進する標的を同定するために標的を本明細書中で同定した。試験は：
大腿骨および椎骨における骨塩密度を測定するためのＤＥＸＡ
骨梁と皮質骨の両方についての骨塩密度を非常に高い解像度および非常に高い感度で測定するためのマイクロＣＴ
を含んだ。
【０４６１】
Ｄｅｘａ解析−試験の説明：
手順：４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合性マウスおよび８匹のホモ接合性マウスのコホートをこのアッセイで試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ）をうまく使用して、骨の変化を同定した。麻酔動物を試験し、骨塩量（ＢＭＣ）、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容量測定による骨塩密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿骨ＢＭＤおよび椎骨ＢＭＤを測定した。
【０４６２】
Ａｖｅｒｔｉｎ（１．２５％２，２，２，−トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重）をマウスに腹腔内注射することにより麻酔し、体長および体重を測定し、次いで、マウスをＤＥＸＡスキャンのためにＰＩＸＩｍｕｓＴＭデンシトメーター（Ｌｕｎａｒ  Ｉｎｃ．）のプラットフォーム上に腹臥位にした。Ｌｕｎａｒ  ＰＩＸＩｍｕｓソフトウェアを使用して、目的の領域（ＲＯＩ）［すなわち、全身、椎骨および両大腿骨］の骨塩密度（ＢＭＤ）および脂肪組成（％脂肪）および総組織質量（ＴＴＭ）を測定した。
【０４６３】
骨マイクロＣＴ解析：
手順：マイクロＣＴを使用して、非常に感度の高いＢＭＤの測定も行った。１つの椎骨および１つの大腿骨を、４匹の野生型マウスおよび８匹のヘテロ接合性マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨骨梁体積、骨梁厚、結合性密度ならびに大腿骨中軸の骨の総面積および皮質厚の測定を行った。μＣＴ４０スキャンにより、骨質量および構造についての詳細な情報が得られた。複数の骨をサンプルホルダーに置き、自動的にスキャンした。装置ソフトウェアを使用して、解析用の目的の領域を選択した。骨梁パラメータを、１６マイクロメートルの解像度で第５腰部椎骨（ＬＶ５）において解析し、皮質骨パラメータを、２０マイクロメートルの解像度で大腿骨中軸において解析した。
【０４６４】
結果：
マイクロＣＴ：（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、平均骨梁体積および平均骨梁厚の増加を示した。
【０４６５】
雄（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔と比較して、平均骨梁体積および平均骨梁厚の増加を示した。これらの結果から、ノックアウト変異表現型が、大理石骨病のような骨の異常に関連し得ることが示唆される。大理石骨病は、骨の異常な肥厚および硬化ならびに骨の異常な脆弱性を特徴とする状態である。そのため、ＰＲＯ１１０５ポリペプチドまたはそのアゴニストは、大理石骨病の処置に有益であり得る。骨塩量、ならびに全身の骨塩密度および大腿骨の骨塩密度の増加に関連する表現型から、これらの効果を模倣する薬剤（例えばＰＲＯ１１０５ポリペプチドのアンタゴニスト）が骨の治癒に有用であり得ることが示唆される。
【０４６６】
結果：
ＤＥＸＡ：（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、平均総体脂肪パーセントおよび総脂肪質量の減少を示した。その差異は雄マウスの中でより顕著であった。
【０４６７】
変異（−／−）マウスは、組織るいそう疾患を示す総体脂肪および脂肪質量の消耗を示した。（−／−）マウスにおける体重および体長測定値の減少は、成長遅延表現型を実証する。従って、ＰＲＯ１１０５ポリペプチドのアンタゴニスト（またはインヒビター）は、この負の表現型を模倣すると予想され得る。ＰＲＯ１１０５ポリペプチドまたはそのアゴニストは、正常な脂肪代謝の維持に有用であり、成長関連代謝に関連し得る。
【０４６８】
（ｃ）血液化学／耐糖能
代謝の分野において、糖尿病の処置のための標的を同定し得る。血液化学表現型解析は、血糖測定を含む。マウスにおける血液化学試験を実施するために、ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（ｍｆｒ：Ｒｏｃｈｅ）を使用した。代謝の分野において、糖尿病の処置のための標的を同定し得る。血液化学表現型解析は、インスリン感度およびグルコース代謝の変化を測定する耐糖能試験を含む。異常な耐糖能試験結果は、以下の障害または状態：１型および２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患および／または肥満症を示唆し得るが、これらに限定されない。
【０４６９】
手順：２匹の野生型および４匹のホモ接合性マウスのコホートをこのアッセイに使用した。耐糖能試験は、哺乳動物におけるグルコースホメオスタシス障害を定義するための標準的な試験である。Ｌｉｆｅｓｃａｎ血糖測定器を使用して耐糖能試験を行った。２０％溶液として送達される２ｇ／ｋｇのＤ−グルコースを動物にＩＰ注射し、血糖値を注射の０、３０、６０および９０分後に測定した。
【０４７０】
結果：
経口耐糖能：（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、耐糖能障害を示した。
【０４７１】
これらの研究により、（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較した場合、３回すべて試験間隔において、正常な空腹時グルコースの存在下、耐糖能の低下または障害を示すことが示唆された。従って、ノックアウト変異マウスは、グルコースホメオスタシス障害の表現型パターンを示し、それゆえ、ＰＲＯ１１０５ポリペプチド（もしくはそのアゴニスト）またはそのコード遺伝子は、グルコースホメオスタシス障害および／または糖尿病を含む様々な循環器疾患に関連した状態の処置に有用であり得る。
【０４７２】
６．２．  ＤＮＡ６５４０５−１５４７（ＵＮＱ６４９）遺伝子破壊を含むマウスの作作製および解析
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１２７９ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ６５４０５−１５４７と命名）（ＵＮＱ６４９）を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報を以下に示す：変異マウス遺伝子は、以下に対応する：参照ヌクレオチド：ＮＭ＿０１９９７４アクセッション：ＮＭ＿０１９９７４ＮＩＤ：ｇｉ９９１０２９７ ｒｅｆ ＮＭ＿０１９９７４．１ムス・ムスクルスＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２３１００１５Ｉ０８遺伝子（２３１００１５Ｉ０８Ｒｉｋ）；参照タンパク質：Ｑ９ＱＹＮ３アクセッション：Ｑ９ＱＹＮ３ＮＩＤ：ムス・ムスクルス（マウス）。Ｈｉｐｐｏｓｔａｓｉｎ前立腺型（生体雄舌ｃＤＮＡ、ＲＩＫＥＮ完全長高含有ライブラリー、クローン：２３１００１５Ｉ０８産物：プロテアーゼ、セリン、２０、完全挿入断片配列）（生体雄舌ｃＤＮＡ、ＲＩＫＥＮ完全長高含有ライブラリー、クローン：２３１００４０Ｆ０７産物：プロテアーゼ、セリン、２０、完全挿入断片配列）；参照ヒト遺伝子配列：ＮＭ＿１４４９４７アクセッション：ＮＭ＿１４４９４７ＮＩＤ：ｇｉ ２１６１８３５６ ｒｅｆ ＮＭ＿１４４９４７．１ホモサピエンスカリクレイン１１（ＫＬＫ１１）、転写物バリアント２；ヒトタンパク質配列は、次の参照に対応する：Ｑ９ＵＢＸ７アクセッション：Ｑ９ＵＢＸ７ＮＩＤ：ホモサピエンス（ヒト）。カリクレイン１１前駆体（ＥＣ ３．４．２１．−）（Ｈｉｐｐｏｓｔａｓｉｎ）（トリプシン様プロテアーゼ）。
【０４７３】
目的の遺伝子は、ヒトＫＬＫ１１のオルソログであるマウスＫｌｋ１１（カリクレイン１１）である。別名としては、ＴＬＳＰ、ＰＲＳＳ２０、２３１００１５Ｉ０８ＲｉｋおよびＭＧＣ３３０６０が挙げられる。
【０４７４】
ＫＬＫ１１は、主に脳および前立腺で発現する分泌セリンプロテアーゼである。このプロテアーゼは、卵巣癌、前立腺癌および神経内分泌癌においてアップレギュレートされ、前立腺癌および卵巣癌の診断およびモニタリングのためのバイオマーカーとして臨床的価値を有し得る（Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １３９９：２２５−８（１９９８）；Ｍｉｔｓｕｉら、ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １４９４：２０６−１０（２０００）；Ｙｏｕｓｅｆら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ６３：８８−９６（２０００）；Ｂｏｒｇｏｎｏら、Ｍｏｌ ＣａｎｃｅｒＲｅｓ ２：２５７−８０（２００４）；Ｓｔａｖｒｏｐｏｕｌｏｕら、Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ３５７：１９０−５（２００５））。
【０４７５】
ターゲティングされたか遺伝子トラップされた変異を、系統１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来の胚性幹（ＥＳ）細胞で行った。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配してＦ１ヘテロ接合性動物を作製する。これらの子孫を交雑受精してＦ２野生型子孫、ヘテロ接合性変異子孫、およびホモ接合性変異子孫を作製する。まれに、例えば、Ｆ１マウスがキメラからほとんど得られない場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑することにより、交雑受精用のさらなるヘテロ接合性動物を得て、Ｆ２マウスを作製する。この世代のマウスに対してレベルＩ表現型解析を行う。
【０４７６】
野生型          ヘテロ          ホモ            合計
実測値    １９            ２４            １６            ５９
予測値    １４．７５      ２９．５        １４．７５      ５９
カイ二乗値＝０．４  有意性＝０．８１８７３０８（ｈｏｍ／ｎ）＝０．２４  平均同腹仔数＝９
変異情報
変異型：相同組換え（標準）
説明：この遺伝子は６個のエキソンからなり、エキソン２に開始コドンを有する（ＮＣＢＩアクセッションＮＭ＿０１９９７４．１）。エキソン２〜５をターゲティングした。
【０４７７】
１．野生型発現パネル：ＲＴ−ＰＣＲによって試験された１３のすべての成体組織サンプル（骨格筋および骨以外）において、標的遺伝子の発現を検出した。
【０４７８】
２．ＱＣ発現：標的遺伝子の破壊をサザンハイブリダイゼーション解析によって確認した。
【０４７９】
６．２．１  表現型解析（破壊遺伝子：ＤＮＡ６５４０５−１５４７（ＵＮＱ６４９）
（ａ）全体的な表現型の概要：
ヒトカリクレイン１１（ＫＬＫ１１）のオルソログをコードする遺伝子の変異により、（−／−）マウスにおいて収縮期血圧の上昇がもたらされた。雄（−／−）マウスは、不安様応答の低減を示した。遺伝子破壊をサザンブロットによって確認した。
（ｂ）表現型解析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、本明細書中では抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏および感覚障害を含む神経性障害および精神医学的障害の処置のためのインビボにおいて有効な標的の同定についての解析に注目した。神経障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含む。その「不安障害」としては、以下：軽度から中程度の不安、全般的病状による不安障害、別段特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖症、特定恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ型またはＩＩ型、別段特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱性障害、気分障害、物質誘導性気分障害が挙げられるが、これらに限定されない。さらに不安障害は、人格障害にあてはまることがあり、その人格障害としては、以下のタイプ：妄想性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己愛性、強迫性、分裂性および統合失調性が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４８０】
手順：
行動スクリーニングを、４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合性マウスおよび８匹のホモ接合性マウスのコホートにおいて実施した。生存能低下のために、より早期の試験が必要とならない限り、すべての行動試験は、１２〜１６週齢の間に実施した。これらの試験は不安、活動レベルおよび探索を測定するためのオープンフィールドを含んだ。
【０４８１】
オープンフィールド試験：
公知の薬物のいくつかの標的は、オープンフィールド試験において表現型を示した。これらとしては、セロトニン（ｓｅｒａｔｏｎｉｎ）トランスポーター、ドーパミントランスポーター（Ｇｉｒｏｓら、Ｎａｔｕｒｅ．１９９６  Ｆｅｂ  １５；３７９（６５６６）：６０６−１２）およびＧＡＢＡレセプター（Ｈｏｍａｎｉｃｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９９７  Ａｐｒ  １５；９４（８）：４１４３−８）のノックアウトを含む。自動化オープンフィールドアッセイを、感情状態に関連する変化および学習に関する探索パターンに対応するようにカスタマイズした。まず、フィールド（４０ｘ４０ｃｍ）をマウスに対して比較的大きくなるように選択することによって、探索に関連する自発運動の変化を選別するように設計した。さらに４つの穴を床に設け、探索に特に関連する活動である鼻の突っ込みを可能にした。この試験に関連する感情状態を高めるためのいくつかの因子も設けた。オープンフィールド試験は、マウスが試験される最初の実験的手順であり、得られた測定値は、室を使用した被験体の最初の経験であった。さらに、オープンフィールドを明るく照らした。これらの因子のすべてによって、新しい開放性空間に関連する天然の不安を高める。次いで、探索活動のパターンおよび程度、特に中心−全移動距離比は、不安または抑鬱症に対する罹りやすさに関する変化を識別することができる。３つの異なったレベルでの赤外線ビームを用いた大きな領域（４０ｃｍｘ４０ｃｍ、ＡｃｃｕＳｃａｎ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＶｅｒｓａＭａｘ動物活動モニタリングシステム）を用いて、直立、穴への突っ込みおよび自発運動を記録した。動物を中心に置き、その活動を２０分間測定した。この試験からのデータを４分間隔で５回分析した。全移動距離（ｃｍ）、垂直移動回数（直立）、穴突っ込み回数および中心−全移動距離比を記録した。
【０４８２】
マウスが新しい環境に対して正常な馴化応答を示す傾向を、５回の間隔にわたるその水平自発運動の変化すべてを測定することにより評価する。この計算された長時間の活動の変化の勾配を、正規化された、絶対移動距離よりもむしろ全移動距離を使用して決定する。勾配を、５回の間隔のそれぞれにおける正規化された活動による回帰直線から決定する。正常な馴化を、負の勾配値によって表す。
【０４８３】
結果：
雄（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、中心にいる時間の合計の中央値の増加を示したことから、変異体における不安様応答の低減が示唆される。
【０４８４】
注目すべき差を、オープンフィールド活動性試験中で観察した。雄（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔と比較して、中心領域にいる時間の合計の中央値の増加を示した。これは、変異体における不安様応答の低減を示唆する。従って、ノックアウトマウスは、抑鬱症、全般性不安障害、認知障害、痛覚過敏ならびに感覚障害および／または双極性障害と一致する表現型を示した。従って、ＰＲＯ１２７９ポリペプチドおよびそのアゴニストは、抑鬱性障害に関連する症状の処置または緩和に有用であり得る。
【０４８５】
（ｃ）心臓学／診断−血圧
説明：
Ｖｉｓｉｔｅｃｈ  ＢＰ−２０００血圧分析システムによる４日間の非侵襲性テールカフ法によって収縮期血圧を測定する。血圧を、４日間にわたって１日１０回測定する。次いで、４日間の値を平均して、マウスの意識下収縮期血圧を得る。
【０４８６】
結果：
血圧：（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、収縮期血圧（１ＳＤ低い）の低下を示した。
【０４８７】
６．３．  ＤＮＡ７１１８２（ＵＮＱ８４５）遺伝子破壊を含むマウスの作製および解析
これらのノックアウト実験において、ＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードする遺伝子（ＤＮＡ７１１８２と命名）（ＵＮＱ８４５）を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報を以下に示す：変異マウス遺伝子は、以下に対応する：参照ヌクレオチド：ＮＭ＿１３４２４８アクセッション：ＮＭ＿１３４２４８ＮＩＤ：１９５２７４０９ムス・ムスクルス  ムス・ムスクルスＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有１（Ｔｉｍｄ１）；参照タンパク質：Ｑ８ＶＩＭ２アクセッション：Ｑ８ＶＩＭ２ＮＩＤ：ムス・ムスクルス（マウス）。ＴＩＭ１；参照ヒト遺伝子配列：ＮＭ＿０１２２０６アクセッション：ＮＭ＿０１２２０６ ＮＩＤ：ｇｉ ６９１２４０７ ｒｅｆ ＮＭ＿０１２２０６．１ホモサピエンスＡ型肝炎ウイルス細胞レセプター１（ＨＡＶＣＲ１）；ヒトタンパク質配列は次の参照に対応する：Ｏ４３６５６アクセッション：Ｏ４３６５６ＮＩＤ：ホモサピエンス（ヒト）。Ａ型肝炎ウイルス細胞レセプター１。
【０４８８】
目的の遺伝子は、ヒトＨＡＶＣＲ１のオーソログである、マウスＨａｖｃｒ１（Ａ型肝炎ウイルス細胞レセプター１）である。別名としては、ＡＩ５０３７８７、ＫＩＭ１、ＴＩＭ１、ＨＡＶＣＲ、ＫＩＭ−１、ＴＩＭ−１、ＴＩＭＤ１およびＨＡＶＣＲ−１が挙げられる。
【０４８９】
ＨＡＶＣＲ１は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）およびＴＩＭＤ４（Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有４）のレセプターとして機能するＴ細胞のサブセット上で主に発現する内在性原形質膜タンパク質、つまり抗原提示細胞上で発現する内在性原形質膜タンパク質である。ＨＡＶＣＲ１はＴ細胞活性において共刺激の役割を果たし、アトピー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎と関連する（Ｍｅｙｅｒｓら、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６：４５５−６４（２００５）；ＭｃＩｎｔｉｒｅら、Ｎａｔｕｒｅ ４２５：５７６（２００３）；Ｕｍｅｔｓｕら、ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ ６：４４７−５４（２００５）；ｄｅ Ｓｏｕｚａら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０２：１７１１３−８（２００５））。
【０４９０】
ターゲティングされたか遺伝子トラップされた変異を、系統１２９ＳｖＥｖＢｒｄ由来の胚性幹（ＥＳ）細胞で行った。キメラマウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスと交配してＦ１ヘテロ接合性動物を作製する。これらの子孫を交雑受精してＦ２野生型子孫、ヘテロ接合性変異子孫、およびホモ接合性変異子孫を作製する。まれに、例えば、Ｆ１マウスがキメラからほとんど得られない場合、Ｆ１ヘテロ接合性マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑することにより、交雑受精用のさらなるヘテロ接合性動物を得て、Ｆ２マウスを作製する。この世代のマウスに対してレベルＩ表現型解析を行う。
【０４９１】
野生型          ヘテロ          ホモ          合計
実測値    １３            ４４            １３          ７０
予測値    １７．５        ３５            １７．５      ７０
カイ二乗値＝１．８７  有意性＝０．３９２５８５８７（ｈｏｍ／ｎ）＝０．２４  平均同腹仔数＝８
変異情報
変異型：相同組換え（標準）
説明：この遺伝子は８個のエキソンからなり、エキソン２に開始コドンを有する（ＮＣＢＩアクセッションＢＣ０５３４００．１）。エキソン２および３をターゲティングした。
【０４９２】
１．野生型発現パネル：ＲＴ−ＰＣＲによって試験された胚性幹（ＥＳ）細胞および１３のすべての成体組織サンプル（脳、骨格筋、心臓および脂肪以外）において、標的遺伝子の発現を検出した。
【０４９３】
２．ＱＣ発現：標的遺伝子の破壊をサザンハイブリダイゼーション解析によって確認した。
【０４９４】
６．３．１．  表現型解析（破壊遺伝子：ＤＮＡ７１１８２（ＵＮＱ８４５）
（ａ）全体的な表現型の概要：
ヒトＡ型肝炎ウイルス細胞レセプター１（ＨＡＶＣＲ１）のオルソログをコードする遺伝子の変異により、尾部懸垂試験においてうつ様応答が低減し、新しい環境に対して異常な馴化応答を示す雄（−／−）マウスがもたらされた。雌（−／−）マウスは、皮膚線維芽細胞の増殖速度の低下を示した。遺伝子破壊をサザンブロットによって確認した。
【０４９５】
（ｂ）成体皮膚細胞の増殖：
手順：１６週齢の動物（２匹の野生型および４匹のホモ接合体マウス）から皮膚細胞を単離した。これらを初代線維芽細胞培養物中で成長させ、厳格に規制したプロトコルで線維芽細胞の増殖速度を測定した。このアッセイが高増殖表現型および低増殖表現型を検出する能力は、ｐ５３およびＫｕ８０を使用して証明されている。Ｂｒｄｕ取り込みを使用して増殖を測定した。
【０４９６】
詳細には、これらの研究では、皮膚線維芽細胞増殖アッセイを使用した。標準化培養物中での細胞数の増加を、相対増殖能の基準として使用した。初代線維芽細胞を、野生型マウスおよび変異マウスから採取した皮膚生検から確立した。５万個の細胞の２連または３連の培養物をプレートし、６日間成長させた。培養終了後、培養物中に存在する細胞数を、電子粒子計数器を使用して決定した。
【０４９７】
結果：
皮膚増殖：雌（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較した場合、平均皮膚線維芽細胞増殖速度の低下を示した。
【０４９８】
従って、ホモ接合体変異マウスは、低増殖表現型を示した。これらの観察結果によって示唆されるように、ＰＲＯ１７８３ポリペプチドのアンタゴニストまたはインヒビターは、この低増殖性の表現型を模倣し、腫瘍抑制因子として機能し、異常な細胞増殖の低下に有用であり得る。
【０４９９】
（ｃ）表現型解析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、本明細書中では抑鬱症、全般性不安障害、注意欠陥多動性障害、強迫性障害、精神分裂病、認知障害、痛覚過敏および感覚障害を含む神経性障害および精神医学的障害の処置のためのインビボにおいて有効な標的の同定についての解析に注目した。神経障害は、「不安障害」として定義されるカテゴリーを含む。その「不安障害」としては、以下：軽度から中程度の不安、全般的病状による不安障害、別段特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を伴うパニック障害、広場恐怖症を伴わないパニック障害、心的外傷後ストレス障害、社会恐怖症、特定恐怖症、物質誘導性不安障害、急性アルコール離脱、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ型またはＩＩ型、別段特定されない双極性障害、循環病、抑鬱性障害、大鬱性障害、気分障害、物質誘導性気分障害が挙げられるが、これらに限定されない。さらに不安障害は、人格障害にあてはまることがあり、その人格障害としては、以下のタイプ：妄想性、反社会性、回避行動、境界性人格障害、依存性、演技性、自己愛性、強迫性、分裂性および統合失調性が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５００】
手順：
行動スクリーニングを、４匹の野生型マウス、４匹のヘテロ接合性変マウスおよび８匹のホモ接合性マウスのコホートにおいて実施した。生存能低下のために、より早期の試験が必要とならない限り、すべての行動試験は、１２〜１６週齢の間に実施した。これらの試験は不安、活動レベルおよび探索を測定するためのオープンフィールドを含んだ。
【０５０１】
機能観察バッテリー（ＦＯＢ）試験−尾部懸垂試験：
ＦＯＢは、全身感覚および運動欠陥を測定するために動物に適用される一連の状態である。全身の神経機能を評価するＩｒｗｉｎ神経性スクリーニングからの試験のサブセットを使用する。一般に、短期間、触覚、嗅覚および視覚の刺激を動物に適用することにより、それらの正常に検知および応答する能力を測定する。これらの簡単な試験は約１０分を要し、マウスは試験後、ホームケージに戻される。
【０５０２】
尾部懸垂試験：
尾部懸垂試験は、げっ歯類におけるうつ様行動についてのモデルとして開発された手順である。この特定の設定では、マウスを６分間尾で吊り下げ、それに応答してマウスは、その位置から逃れるためにもがく。一定の時間が経過した後は、このマウスのもがきは減少し、これはある種の無力さのパラダイムを学習したと解釈される。無効データ（すなわち、試験中に尾を登った）を有する動物は、解析から除外する。
【０５０３】
結果：
尾部懸垂２：雌（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、不動時間の中央値の減少を示したことから、変異体における抑鬱様応答の低下が示唆される。
【０５０４】
まとめると、尾部懸垂試験から、不安の増大に関連する表現型（軽度から中程度の不安、全般的病状による不安、および／もしくは双極性障害；多動性障害；感覚障害；強迫性障害、精神分裂病または妄想性人格障害に関連し得るもの）が明らかになった。従って、ＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたはそのアゴニストは、そのような神経性障害の処置に有用であり得る。
【０５０５】
概日性試験の説明：
雌マウスを、試験の１日目の午後４時に４８．２ｃｍｘ２６．５ｃｍのホームケージ内に個々に収容し、飼料および水を随意与える。動物を、１２時間の明／暗サイクル（午前７時に点灯し、午後７時に消灯する）に曝露する。システムソフトウエアが、動物の動きによって引き起こされる光線遮断回数を記録し、光線中断回数は自動的に移動回数で割り算される。活動を、３日間の試験中に１時間間隔で６０回記録する。得られたデータを、３日間の試験期間にわたって各時間で記録した活動レベル（概日リズム）の中央値および各明／暗サイクル中の総活動（自発活動）の中央値によって示す。
【０５０６】
結果：
概日性：雌（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、１時間の馴化期間の間に歩行回数の中央値の増加を示した。
【０５０７】
従って（−／−）マウスは、その性別一致（＋／＋）同腹仔および歴史的平均と比較して、過度に活発な行動パターンまたは新しい環境に対して異常な馴化応答をもたらす、ホームケージ活動性試験中の歩行回数の増加を示した。
【０５０８】
実施例７：ハイブリダイゼーションプローブとしてのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の使用
下記の方法は、ハイブリダイゼーションプローブとしてのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３をコードするヌクレオチド配列の使用を記載したものである。
【０５０９】
本明細書に開示した完全長または成熟ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのコード配列を含むＤＮＡを、ヒト組織ｃＤＮＡライブラリまたはヒト組織ゲノムライブラリにおいて相同なＤＮＡ（例えば、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの天然に存在するバリアントをコードするものなど）をスクリーニングするためのプローブとして使用する。
【０５１０】
いずれかのライブラリＤＮＡを含むフィルターのハイブリダイゼーションおよび洗浄は、下記の高ストリンジェンシー条件下で行なう。放射能標識されたＰＲＯ１１０５−、ＰＲＯ１２７９−、またはＰＲＯ１７８３−由来プローブのフィルターへのハイブリダイゼーションは、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、２×デンハルト溶液および１０％硫酸デキストランの溶液中、４２℃で２０時間行なわれる。フィルターの洗浄は、０．１×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳの水溶液中、４２℃で行なう。
【０５１１】
次いで、完全長の天然配列ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡと所望の配列同一性を有するＤＮＡを、当該技術分野で知られた標準的は手法を用いて同定し得る。
【０５１２】
実施例９：大腸菌におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の発現
この実施例は、大腸菌内での組換え発現によるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの非グリコシル化形態の調製を示す。
【０５１３】
最初に、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、選択したＰＣＲプライマーを用いて増幅する。プライマーは、選択した発現ベクター上の制限酵素部位に対応する制限酵素部位を含む必要がある。さまざまな発現ベクターを使用し得る。好適なベクターの一例は、アンピリシンおよびテトラサイクリン耐性遺伝子を含むｐＢＲ３２２（大腸菌由来；Ｂｏｌｉｖａｒら，Ｇｅｎｅ．２：９５（１９７７）を参照）である。ベクターを制限酵素で消化し、脱ホスホリル化する。ＰＣＲ増幅された配列を、次いで、ベクター内にライゲートする。ベクターは、好ましくは、抗生物質耐性遺伝子、ｔｒｐプロモーター、ポリｈｉｓリーダー（最初の６つのＳＴＩＩコドン、ポリｈｉｓ配列およびエンテロキナーゼ切断部位を含む）、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３コード領域、λ転写ターミネータ、ならびにａｒｇＵ遺伝子をコードする配列を含む。
【０５１４】
次いで、ライゲーション混合物を用い、選択した大腸菌系統をＳａｍｂｒｏｏｋら（前掲）に記載の方法を用いて形質転換する。形質転換体を、ＬＢプレート上でのその生育能力によって同定し、次いで抗生物質耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを、制限解析によって単離し、ＤＮＡ配列決定によって確認し得る。
【０５１５】
選択されたクローンは、液体培養培地（例えば、抗生物質を加えたＬＢブイヨンなど）中で一晩培養し得る。一晩培養物は、続いて大規模培養物にイノキュレートするために使用され得る。次いで、細胞を所望の光学密度まで培養し、この間に発現プロモーターが作動する。
【０５１６】
細胞をさらに数時間培養した後、細胞を、遠心分離によって回収し得る。遠心分離によって得られた細胞ペレットを、当該技術分野で知られた種々の薬剤を用いて可溶化し得、可溶化されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３タンパク質を、次いで、金属キレートカラムを用い、タンパク質の強固な結合を可能にする条件下で精製し得る。
【０５１７】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３は大腸菌においてポリ−Ｈｉｓタグ化された形態で、下記の手順を用いて発現させ得る。最初に、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３をコードするＤＮＡを、選択したＰＣＲプライマーを用いて増幅する。プライマーは、選択した発現ベクター上の制限酵素部位に対応する制限酵素部位、ならびに効率的で信頼性のある翻訳の開始、金属キレートカラム上での速やかな精製およびエンテロキナーゼによるタンパク質分解的除去をもたらすのに有用な他の配列を含む。次いで、ＰＣＲ増幅されたポリ−Ｈｉｓタグ化配列を発現ベクター内にライゲートし、これを用いて菌株５２（Ｗ３１１０ｆｕｈＡ（ｔｏｎＡ）ｌｏｎ  ｇａｌＥ  ｒｐｏＨｔｓ（ｈｔｐＲｔｓ）ｃｌｐＰ（ｌａＩｑ）系の大腸菌宿主を形質転換する。形質転換体を、まず、５０ｍｇ／ｍｌのカルベニシリンを含有するＬＢ中にて３０℃で、振とうさせながら３〜５のＯ．Ｄ．６００が達成されるまで培養する。次いで、培養物をＣＲＡＰ培地（３．５７ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．７１ｇのクエン酸ナトリウム・２Ｈ２Ｏ、１．０７ｇのＫＣｌ、５．３６ｇのＤｉｆｃｏ製酵母抽出物、５．３６ｇのＳｈｅｆｆｉｅｌｄ  ｈｙｃａｓｅ  ＳＦ（５００ｍＬの水中）、ならびに１１０ｍＭのＭＰＯＳ、ｐＨ７．３、０．５５％（ｗ／ｖ）のグルコースおよび７ｍＭのＭｇＳＯ４を混合することにより調製）中で５０〜１００倍に希釈し、およそ２０〜３０時間３０℃で、振とうさせながら培養する。試料を取り出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析によって発現を確認し、バルク培養物を遠心分離して細胞をペレット化する。細胞ペレットは、精製およびリフォールディングまで凍結しておく。
【０５１８】
０．５〜１Ｌの発酵物からの大腸菌ペースト（６〜１０ｇのペレット）を１０容量（ｗ／ｖ）で７Ｍグアニジン、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）バッファー中に再懸濁する。固形亜硫酸ナトリウムおよび四チオン酸ナトリウムを、それぞれ、終濃度が０．１Ｍおよび０．０２Ｍとなるように添加し、溶液を一晩４℃で攪拌する。この工程により、すべてのシステイン残基がスルフィトリル化（ｓｕｌｆｉｔｏｌｉｚａｔｉｏｎ）によってブロックされた変性タンパク質がもたらされる。この溶液を４０，０００ｒｐｍで、Ｂｅｃｋｍａｎ超遠心分離機にて３０分間遠心分離する。上清みを３〜５容量の金属キレートカラムバッファー（６Ｍグアニジン、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４）で希釈し、０．２２ミクロンフィルターに通して濾過して清澄化する。清澄化された抽出物を、金属キレートカラムバッファー中で平衡化した５ｍｌ容Ｑｉａｇｅｎ  Ｎｉ−ＮＴＡ金属キレートカラム上に負荷する。カラムを５０ｍＭイミダゾール（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｕｔｒｏｌグレード）を含有するさらなるバッファー（ｐＨ７．４）で洗浄する。タンパク質を、２５０ｍＭイミダゾールを含有するバッファーで溶出する。所望のタンパク質を含む画分をプールし、４℃で保存する。タンパク質濃度を、そのアミノ酸配列に基づいて計算された消衰係数を用い、２８０ｎｍにおけるその吸光度によって推定する。
【０５１９】
タンパク質を、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．６）、０．３Ｍ  ＮａＣｌ、２．５Ｍの尿素、５ｍＭのシステイン、２０ｍＭのグリシンおよび１ｍＭ  ＥＤＴＡからなる新たに調製したリフォールディングバッファー中に試料をゆっくり希釈することによりリフォールディングさせる。リフォールディング容量は、最終タンパク質濃度が５０〜１００マイクログラム／ｍｌとなるように選択される。リフォールディング溶液は、１２〜３６時間４℃で穏やかに攪拌する。リフォールディング反応を、終濃度０．４％（およそ３のｐＨ）までＴＦＡを添加することによってクエンチする。タンパク質のさらなる精製の前に、溶液を０．２２ミクロンフィルターに通して濾過し、アセトニトリルを２〜１０％の終濃度まで添加する。リフォールディングさせたタンパク質をＰｏｒｏｓ  Ｒ１／Ｈ逆相カラム上で、０．１％ＴＦＡの移動相バッファーを用い、１０〜８０％のアセトニトリルの勾配での溶出を伴ってクロマトグラフィー処理する。Ａ２８０吸光度を有する画分のアリコートをＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で解析し、均質なリフォールディングタンパク質を含む画分をプールする。一般的に、大部分のタンパク質が適正にリフォールディングされた種は、その疎水性内部が最も緻密であり、逆相樹脂との相互作用から遮断されるため、最低濃度のアセトニトリルで溶出される。凝集した種は、通常、より高いアセトニトリル濃度で溶出される。ミスフォールド形態のタンパク質を所望の形態から分離することに加え、逆相工程ではまた、内毒素を試料から除去する。
【０５２０】
フォールドされた所望のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを含む画分をプールし、アセトニトリルを、溶液に指向した穏やかな窒素流を用いて除去する。透析によって、または構築バッファー中で平衡化したＧ２５  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）樹脂を用いたゲル濾過によって、０．１４Ｍの塩化ナトリウムおよび４％マンニトールを含む２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ６．８）中にタンパク質を構築し、滅菌濾過する。
【０５２１】
実施例１０：哺乳動物細胞におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の発現
この実施例は、哺乳動物細胞内での組換え発現によるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの潜在的にグリコシル化された形態の調製を示す。
【０５２２】
ベクターｐＲＫ５（ＥＰ３０７，２４７（１９８９年３月１５日公開）を参照のこと）を発現ベクターとして使用する。任意選択で、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ＤＮＡをｐＲＫ５内に、選択した制限酵素を用いてライゲートし、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前掲）に記載のものなどのライゲーション方法を用いてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ＤＮＡの挿入を可能にする。得られたベクターをｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２７９、またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１７８３とよぶ。
【０５２３】
選択される宿主細胞は２９３細胞であり得る。ヒト２９３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １５７３）を組織培養プレート内で、ウシ胎仔血清ならびに任意選択で栄養成分および／または抗生物質を補給したＤＭＥＭなどの培地中でコンフルエンスまで培養する。約１０μｇのｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２７９、またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１７８３をＶＡ  ＲＮＡ遺伝子［Ｔｈｉｍｍａｐｐａｙａら，Ｃｅｌｌ，３１：５４３（１９８２）］をコードするＤＮＡ約１μｇと混合し、５００μｌの１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．２２７Ｍ  ＣａＣｌ２中に溶解する。この混合物に、５００μｌの５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３５）、２８０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．５ｍＭ  ＮａＰＯ４を滴下し、２５℃で１０分間、沈殿物を形成させる。沈殿物を懸濁して２９３細胞に添加し、３７℃で約４時間沈降させる。培養培地を吸引除去し、２ｍｌの２０％グリセロール含有ＰＢＳを３０秒間添加する。次いで、２９３細胞を血清無含有培地で洗浄し、新鮮培地を添加し、細胞を約５日間インキュベートする。
【０５２４】
トランスフェクションのおよそ２４時間後、培養培地を除去し、培養培地（単独）または２００μＣｉ／ｍｌの３５Ｓ−システインおよび２００μＣｉ／ｍｌの３５Ｓ−メチオニンを含有する培養培地と交換する。１２時間のインキュベーション後、ならし培地を回収し、スピンフィルターにて濃縮し、１５％ＳＤＳゲル上に負荷する。加工処理したゲルは、乾燥させ、選択した時間フィルムに露光し、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの存在を顕現させ得る。トランスフェクト細胞を含む培養物は、さらなるインキュベーション（血清無含有培地中）に供してもよく、培地を、選択したバイオアッセイにおいて試験する。
【０５２５】
択一的な手法において、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を、Ｓｏｍｐａｒｙｒａｃら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１２：７５７５（１９８１）に記載された硫酸デキストラン法を用い、一過的に２９３細胞内に導入してもよい。２９３細胞をスピナーフラスコ内で最大密度まで培養し、７００μｇのｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２７９、またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１７８３を添加する。該細胞を、まず、スピナーフラスコから遠心分離によって濃縮し、ＰＢＳで洗浄する。ＤＮＡ−デキストラン沈殿物を、細胞ペレット上で４時間インキュベートする。細胞を２０％グリセロールで９０秒間処理し、組織培養培地で洗浄し、組織培養培地、５μｇ／ｍｌウシインスリンおよび０．１μｇ／ｍｌウシトランスフェリンを入れたスピナーフラスコ内に再導入する。約４日後、ならし培地を遠心分離し、濾過して細胞および残屑を除去する。発現されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を含む試料を、次いで、選択した任意の方法、例えば、透析および／またはカラムクロマトグラフィーなどによって濃縮および精製し得る。
【０５２６】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３は、ＣＨＯ細胞において発現させ得る。ｐＲＫ５−ＰＲＯ１１０５、ｐＲＫ５−ＰＲＯ１２７９、またはｐＲＫ５−ＰＲＯ１７８３をＣＨＯ細胞内に、ＣａＰＯ４またはＤＥＡＥ−デキストランなどの既知の試薬を用いてトランスフェクトし得る。上記のように、細胞培養物をインキュベートすることができ、培地は培養培地（単独）または３５Ｓ−メチオニンなどの放射能標識を含有する培地と交換することができる。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの存在を調べた後、培養培地を血清無含有培地と交換してもよい。好ましくは、培養物を約６日間インキュベートし、次いで、ならし培地を回収する。発現されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を含有する培地を、次いで、選択した任意の方法によって濃縮および精製し得る。
【０５２７】
また、エピトープタグ化したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を宿主ＣＨＯ細胞において発現させてもよい。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を、ｐＲＫ５ベクターにサブクローニングし得る。サブクローン挿入物はＰＣＲに供し、インフレームで、選択したエピトープタグ（例えば、ポリ−Ｈｉｓタグなど）とともにバキュロウイルス発現ベクター内に融合させ得る。ポリ−Ｈｉｓタグ化ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３挿入物を、次いで、安定なクローンの選択のためのＤＨＦＲ選択マーカーを含有するＳＶ４０駆動ベクター内にサブクローニングし得る。最後に、ＣＨＯ細胞にＳＶ４０駆動ベクターをトランスフェクトさせ得る（上記のようにして）。標識化は、上記のように、発現を確認するために行ない得る。発現されたポリ−Ｈｉｓタグ化ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を含有する培養培地を、次いで、選択した任意の方法、例えば、Ｎｉ２＋キレートアフィニティクロマトグラフィーなどによって濃縮および精製し得る。
【０５２８】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３はまた、ＣＨＯおよび／またはＣＯＳ細胞において一過性発現手順によって、あるいはＣＨＯ細胞において別の安定な発現手順によって発現させ得る。
【０５２９】
ＣＨＯ細胞における安定な発現は、下記の手順を用いて行なわれる。タンパク質はＩｇＧ構築物（イムノアドヘシン）として発現させ、それぞれのタンパク質の可溶性形態のコード配列（例えば、細胞外ドメイン）を、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ２ドメインを含有するＩｇＧ１定常領域配列と融合させる、および／またはポリ−Ｈｉｓタグ化された形態である。
【０５３０】
ＰＣＲ増幅後、それぞれのＤＮＡを、ＣＨＯ発現ベクター内に、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔ  ３．１６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９７）に記載のような標準的は手法を用いてサブクローニングする。ＣＨＯ発現ベクターは、ｃＤＮＡの簡便なシャトリングが可能となるように目的のＤＮＡの５’および３’側に適合性の制限部位を有するように構築する。ＣＨＯ細胞における発現に使用されるベクターは、Ｌｕｃａｓら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４：９（１７７４−１７７９（１９９６）に記載されているとおりであり、対象のｃＤＮＡおよびジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）の発現を駆動するためのＳＶ４０初期プロモーター／エンハンサーを使用する。ＤＨＦＲ発現により、トランスフェクション後のプラスミドの安定な維持のための選択が可能になる。
【０５３１】
１２マイクログラムの所望のプラスミドＤＮＡを、およそ１０００００００個のＣＨＯ細胞内に、市販のトランスフェクション試薬Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（登録商標）（Ｑｉａｇｅｎ）、Ｄｏｓｐｅｒ（登録商標）またはＦｕｇｅｎｅ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて導入する。細胞を、Ｌｕｃａｓら（前掲）に記載のようにして培養する。およそ３×１０７細胞を、下記のようなさらなる培養および生成のために、アンプル内で凍結させる。
【０５３２】
プラスミドＤＮＡの入ったアンプルを、水浴内への配置によって解凍し、ボルテックスによって混合する。内容物を、１０ｍＬの培地を入れた遠心分離チューブ内にピペッティングし、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離する。上清みを吸引し、細胞を１０ｍＬの選択培地（５％の０．２μｍ透析濾過ウシ胎児血清含有０．２μｍ濾過ＰＳ２０）中に再懸濁する。次いで、細胞のアリコートを、９０ｍＬの選択培地を入れた１００ｍＬ容量のスピナー内に採取する。１〜２日後、細胞を、１５０ｍＬの選択培養培地で満たした２５０ｍＬ容量のスピナー内に移し、３７℃でインキュベートする。さらに２〜３日後、２５０ｍＬ、５００ｍＬおよび２０００ｍＬ容量のスピナーに３×１０５細胞／ｍＬを播種する。細胞培地を新たな培地と、遠心分離および生産培地中への再懸濁によって交換する。任意の適当なＣＨＯ培地を使用し得るが、米国特許第５，１２２，４６９号（１９９２年６月１６日発行）に記載の生産培地を実際に使用することができる。３Ｌ容量の生産用スピナーに１．２×１０６細胞／ｍＬで播種する。第０日目、細胞数  ｐＨを測定する（ｉｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ）。第１日目、スピナーから試料を採取し、濾過空気でのスパージングを開始する。第２日目、スピナーから試料を採取し、温度を３３℃にシフトし、３０ｍＬの５００ｇ／Ｌグルコースおよび０．６ｍＬの１０％消泡剤（例えば、３５％ポリジメチルシロキサンエマルジョン、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６５医薬グレードＥｍｕｌｓｉｏｎ）を採用する。作製全体を通して、ｐＨは、７．２前後に維持されるように必要に応じて調整する。１０日後、またはバイアビリティが７０％未満に低下したときまで、細胞培養物を、遠心分離および０．２２μｍフィルターに通す濾過によって回収する。濾液は、４℃で保存するか、または直接、精製用カラム上に負荷するかのいずれかとした。
【０５３３】
ポリ−Ｈｉｓタグ化構築物に関して、タンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製する。精製前、イミダゾールをならし培地に５ｍＭの濃度まで添加する。ならし培地を、２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）０．３Ｍ  ＮａＣｌおよび５ｍＭイミダゾール含有バッファー中で平衡化した６ｍｌ容量のＮｉ−ＮＴＡカラム上に、４〜５ｍｌ／分の流速で４℃にてポンピングする。負荷後、カラムをさらなる平衡化バッファーで洗浄し、タンパク質を、０．２５Ｍイミダゾールを含有する平衡化バッファーで溶出させる。高度に精製されたタンパク質を、続いて、２５ｍｌ容量のＧ２５  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カラムを用い、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、０．１４Ｍ  ＮａＣｌおよび４％マンニトール（ｐＨ６．８）を含有する保存バッファー中にて脱塩し、−８０℃で保存する。
【０５３４】
イムノアドヘシン（Ｆｃ含有）構築物をならし培地から、以下のようにして精製する。ならし培地を、２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．８）中で平衡化しておいた５ｍｌ容量のタンパク質Ａカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上にポンピングする。負荷後、１００ｍＭクエン酸（ｐＨ３．５）で溶出する前に、カラムを平衡化バッファーで徹底的に洗浄する。溶出させたタンパク質は、１ｍｌずつの画分を、２７５μＬの１Ｍ  Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ９）を入れたチューブ内に収集することにより直ちに中和する。高度に精製されたタンパク質を、続いて、ポリ−Ｈｉｓタグ化タンパク質について上記の保存バッファー中にて脱塩する。均質性を、ＳＤＳポリアクリルアミドゲルおよびエドマン分解によるＮ末端アミノ酸配列決定によって評価する。
【０５３５】
実施例１１：酵母におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の発現
下記の方法は、酵母におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の組換え発現を記載したものである。
【０５３６】
まず、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターからのＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の細胞内での産生または分泌のための酵母発現ベクターを構築する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３およびプロモーターをコードするＤＮＡを、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の細胞内発現を指向させるために選択したプラスミド内の適当な制限酵素部位に挿入する。分泌のため、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３をコードするＤＮＡは、選択したプラスミドに、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーター、天然ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３シグナルペプチドもしくは他の哺乳動物用シグナルペプチド、または例えば、酵母のα因子もしくはインベルターゼ分泌シグナル／リーダー配列、およびＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の発現のためのリンカー配列（必要であれば）をコードするＤＮＡとともにクローニングし得る。
【０５３７】
次いで、酵母細胞（例えば、酵母系統ＡＢ１１０など）を上記の発現プラスミドで形質転換し、選択した発酵培地中で培養し得る。形質転換された酵母の上清みを、１０％トリクロロ酢酸を用いた沈殿によって解析し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した後、ゲルをクマシーブルー染色で染色し得る。
【０５３８】
続いて、組換えＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を、酵母細胞を発酵培地から遠心分離によって除去し、次いで、選択したカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することにより単離および精製し得る。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を含む濃縮物を、選択したカラムクロマトグラフィー樹脂を用いてさらに精製し得る。
【０５３９】
実施例１２：バキュロウイルス感染昆虫細胞におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の発現
下記の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞におけるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の組換え発現を記載したものである。
【０５４０】
ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３をコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクター内に含有されるエピトープタグの上流と融合させる。かかるエピトープタグとしては、ポリ−Ｈｉｓタグおよび免疫グロブリンタグ（ＩｇＧのＦｃ領域など）が挙げられる。さまざまなプラスミド、例えば、市販のプラスミド（例えば、ｐＶＬ１３９３（Ｎｏｖａｇｅｎ）など）から誘導されるプラスミドを使用し得る。簡単には、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３をコードする配列またはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３のコード配列の所望の部分、例えば、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列、またはタンパク質が細胞外のものである場合はその成熟タンパク質をコードする配列などを、５’および３’領域に相補的なプライマーを用いたＰＣＲによって増幅する。５’プライマーは、（選択した）フランキング制限酵素部位を組み込んでいてよい。次いで、産物を、選択した制限酵素で消化し、発現ベクター内にサブクローニングする。
【０５４１】
組換えバキュロウイルスを、上記のプラスミドおよびＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）ウイルスＤＮＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）をＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｍｇｉｐｅｒｄａ（「Ｓｆ９」）細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １７１１）内に、リポフェクチン（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬから市販）を用いてコトランスフェクトすることにより作製する。２８℃で４〜５日間のインキュベーション後、放出されたウイルスを回収し、さらなる増幅に用いる。ウイルス感染およびタンパク質発現は、Ｏ’Ｒｅｉｌｌｅｙら，Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｏｘｆｏｒｄ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）に記載のように行なう。
【０５４２】
発現されたポリ−Ｈｉｓタグ化ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３は、次いで、例えば、Ｎｉ２＋キレートアフィニティクロマトグラフィーによって以下のようにして精製し得る。抽出物は、組換えウイルス感染Ｓｆ９細胞から、Ｒｕｐｅｒｔら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：１７５−１７９（１９９３）に記載のように調製する。簡単には、Ｓｆ９細胞を洗浄し、音波破砕バッファー（２５ｍＬ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．９；１２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２；０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ；１０％グリセロール；０．１％ＮＰ−４０；０．４Ｍ  ＫＣｌ）中に再懸濁し、氷上で２０秒間、２回音波破砕する。音波破砕物を遠心分離によって清澄化し、上清みを、負荷バッファー（５０ｍＭリン酸塩、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ７．８）中で５０倍に希釈し、０．４５μｍフィルターに通して濾過する。Ｎｉ２＋ＮＴＡアガロースカラム（Ｑｉａｇｅｎから市販）を５ｍＬ容量の床を用いて調製し、２５ｍＬの水で洗浄し、２５ｍＬの負荷バッファーで平衡化する。濾過した細胞抽出物をカラム上に０．５ｍＬ／分で負荷する。カラムをベースラインＡ２８０まで負荷バッファーで洗浄し、この時点で、画分収集を開始する。次に、カラムを二次洗浄バッファー（５０ｍＭリン酸塩；３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ６．０）で洗浄し、これにより、非特異的結合タンパク質を溶出する。再度Ａ２８０ベースラインに達した後、カラムを二次洗浄バッファー中０〜５００ｍＭイミダゾールの勾配で展開させる。１ｍＬずつの画分を収集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色またはＮｉ２＋−ＮＴＡコンジュゲートアルカリホスファターゼ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いたウエスタンブロットによって解析する。溶出されたＨｉｓ１０タグ化ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３を含有する画分をプールし、負荷バッファーに対して透析する。
【０５４３】
あるいはまた、ＩｇＧタグ化（またはＦｃタグ化）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の精製が、既知のクロマトグラフィー手法、例えば、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇカラムクロマトグラフィーなどを用いて行なわれ得る。
【０５４４】
実施例１３：インサイチューハイブリダイゼーション
インサイチューハイブリダイゼーションは、細胞または組織の調製物内の核酸配列の検出および位置特定のための強力で多用途の手法である。これは、例えば、遺伝子の発現部位を同定するため、転写の組織分布を解析するため、ウイルス感染を同定および位置特定するため、特定のｍＲＮＡ合成における変化を追跡するため、ならびに染色体マッピングを補助するために有用であり得る。
【０５４５】
インサイチューハイブリダイゼーションを、ＬｕおよびＧｉｌｌｅｔｔ，Ｃｅｌｌ  Ｖｉｓｉｏｎ  １：１６９−１７６（１９９４）の最適化された型のプロトコルに従い、ＰＣＲ生成３３Ｐ標識リボプローブを用いて行なった。簡単には、ホルマリン固定し、パラフィン包埋したヒト組織を切片化し、脱パラフィン化し、プロテイナーゼＫ（２０ｇ／ｍｌ）中で１５分間３７℃にてタンパク質除去し、ＬｕおよびＧｉｌｌｅｔｔ（前掲）に記載のようにインサイチューハイブリダイゼーション用にさらに加工処理した。［３３Ｐ］ＵＴＰ標識アンチセンスリボプローブをＰＣＲ産物から作製し、５５℃で一晩ハイブリダイズさせた。スライドをＫｏｄａｋ  ＮＴＢ２核トラック乳剤中に浸漬し、４週間露光した。
【０５４６】
３３Ｐリボプローブ合成
６．０μｌ（１２５ｍＣｉ）の３３Ｐ−ＵＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＢＦ  １００２、ＳＡ＜２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を高速真空乾燥した。乾燥３３Ｐ−ＵＴＰを入れた各チューブに、以下の成分を加えた：
２．０μｌの５×転写バッファー
１．０μｌのＤＴＴ（１００ｍＭ）
２．０μｌのＮＴＰミックス（２．５ｍＭ：１０μ；各々１０ｍＭのＧＴＰ、ＣＴＰおよびＡＴＰ＋１０μｌのＨ２Ｏ）
１．０μｌのＵＴＰ（５０μＭ）
１．０μｌのＲｎａｓｉｎ
１．０μｌのＤＮＡ鋳型（１μｇ）
１．０μｌのＨ２Ｏ
１．０μｌのＲＮＡポリメラーゼ（ＰＣＲ産物用、Ｔ３＝ＡＳ、Ｔ７＝Ｓ、通常）。
【０５４７】
チューブを３７℃で１時間インキュベートした。１．０μｌのＲＱ１  ＤＮアーゼを添加した後、３７℃で１５分間インキュベーションを行なった。９０μｌのＴＥ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．６／１ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．０）を添加し、混合物をＤＥ８１紙上にピペッティングした。残った溶液をＭｉｃｒｏｃｏｎ−５０限外濾過ユニット内に負荷し、プログラム１０を用いてスピンした（６分間）。濾過ユニットを第２のチューブ上に反転し、プログラム２を用いてスピンした（３分間）。最終の回収スピン後、１００μｌのＴＥを添加した。１μｌの最終産物をＤＥ８１紙上にピペッティングし、６ｍｌのＢｉｏｆｌｕｏｒ  ＩＩ中で計数した。
【０５４８】
プローブをＴＢＥ／尿素ゲル上で泳動させた。１〜３μｌのプローブまたは５μｌのＲＮＡ  Ｍｒｋ  ＩＩＩを３μｌの負荷バッファーに添加した。９５℃のヒートブロック上で３分間加熱後、プローブを直接、氷上に置いた。ゲルのウェルをフラッシュ洗浄し、試料を負荷し、１８０〜２５０ボルトで４５分間泳動させた。ゲルをサランラップでラップし、増感紙を有するＸＡＲフィルムに、−７０℃のフリーザー内で１時間から一晩露光した。
【０５４９】
３３Ｐ−ハイブリダイゼーション
Ａ．凍結切片の前処理
スライドをフリーザーから取り出し、アルミニウムトレイ上に置き、室温で５分間解凍した。トレイを５５℃のインキュベーター内に５分間配置し、結露を低減させた。スライドを、ヒュームフード内で氷上の４％パラホルムアルデヒド中に１０分間固定し、０．５×ＳＳＣ中で５分間、室温にて洗浄した（２５ｍｌ  ２０×ＳＳＣ＋９７５ｍｌ  ＳＱ  Ｈ２Ｏ）。０．５μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ中、１０分間３７℃でのタンパク質除去（２５０ｍｌの予備加温ＲＮアーゼ無含有ＲＮアーゼバッファー中、１２．５μｌの１０ｍｇ／ｍｌストック）後、切片を０．５×ＳＳＣ中で１０分間、室温にて洗浄した。切片を、７０％、９５％、１００％エタノール中で各々２分間脱水した。
【０５５０】
Ｂ．パラフィン包埋切片の前処理
スライドを脱パラフィン処理し、ＳＱ  Ｈ２Ｏ中に入れ、２×ＳＳＣ中で２回、室温で各回５分間リンス処理した。切片を、２０μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ（２５０ｍｌのＲＮアーゼ無含有ＲＮアーゼバッファー中１０ｍｇ／ｍｌで５００μｌ；３７℃、１５分間）（ヒト胚）、または８×プロテイナーゼＫ（２５０ｍｌのＲｎアーゼバッファー中１００μｌ、３７℃、３０分間）（ホルマリン組織）中でタンパク質除去処理した。続いて、０．５×ＳＳＣ中でのリンス処理および脱水を、上記のようにして行なった。
【０５５１】
Ｃ．プレハイブリダイゼーション
スライドを、Ｂｏｘバッファー（４×ＳＳＣ、５０％ホルムアミド）を飽和させた濾紙を内側に貼り付けたプラスチックボックス内に並べた。
【０５５２】
Ｄ．ハイブリダイゼーション
スライド１．０×１０６ｃｐｍのプローブおよび１．０μｌのｔＲＮＡ（５０ｍｇ／ｍｌストック）を９５℃で３分間加熱した。スライドを氷上で冷却し、スライド１枚あたり４８μｌのハイブリダイゼーションバッファーを添加した。ボルテックスした後、５０μｌの３３Ｐミックスを、スライド上の５０μｌのプレハイブリダイゼーション液に添加した。スライドを一晩５５℃でインキュベートした。
【０５５３】
Ｅ．洗浄
洗浄は、室温で、２×ＳＳＣ、ＥＤＴＡを用いて１０分間を２回行なった（４００ｍｌの２０×ＳＳＣ＋１６ｍｌの０．２５Ｍ  ＥＤＴＡ、Ｖｆ＝４Ｌ）後、ＲＮアーゼＡ処理を３７℃で３０分間行なった（２５０ｍｌのＲｎアーゼバッファー中１０ｍｇ／ｍｌ＝２０μｇ／ｍで５００μｌ）。スライドを室温で２×ＳＳＣ、ＥＤＴＡにて１０分間、２回洗浄した。ストリンジェンシー洗浄条件は、以下の通り：５５℃で２時間、０．１×ＳＳＣ、ＥＤＴＡ（２０ｍｌの２０×ＳＳＣ＋１６ｍｌ  ＥＤＴＡ、Ｖｆ＝４Ｌ）とした。
【０５５４】
Ｆ．オリゴヌクレオチド
インサイチュー解析を、本明細書に開示したさまざまなＤＮＡ配列において行なった。これらの解析に用いたオリゴヌクレオチドは、添付の図面に示した核酸（またはその相補配列）に相補的となるように得た。
【０５５５】
実施例１４：ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３に結合する抗体の調製
この実施例は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３に特異的に結合し得るモノクローナル抗体の調製を示す。
【０５５６】
モノクローナル抗体を作製するための手法は当該技術分野で知られており、例えば、Ｇｏｄｉｎｇ（前掲）に記載されている。使用され得る免疫原としては、精製されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを含有する融合タンパク質、および組換えＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを細胞表面上に発現する細胞が挙げられる。免疫原の選択は、当業者が必要以上に実験を行なうことなく行ない得る。
【０５５７】
Ｂａｌｂ／ｃなどのマウスを、完全フロイントアジュバント中で乳化させたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３免疫原で免疫処置し、１〜１００マイクログラムの量で皮下または腹腔内注射する。あるいはまた、免疫原を、ＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）中に乳化させ、動物の後肢支脚皿に注射する。次いで、免疫処置されたマウスを１０〜１２日後、選択したアジュバント中に乳化させたさらなる免疫原で追加免疫刺激する。その後、数週間、マウスにさらなる免疫処置注射により追加免疫刺激してもよい。血清試料を、定期的にマウスから後眼窩採血によって採取し、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３抗体を検出するＥＬＩＳＡアッセイにおいて試験し得る。
【０５５８】
適当な抗体力価が検出された後、抗体について「陽性」の動物に、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３の最終の静脈内注射が注射され得る。３〜４日後、マウスを犠牲死させ、脾臓細胞を回収する。次いで、脾臓細胞を、選択したマウス骨髄腫細胞株（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ  １５９７から入手可能なＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１など）と融合させる（３５％ポリエチレングリコールを使用）。融合によりハイブリドーマ細胞を作製し、次いで、これを、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッドおよび脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害するＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン）培地を入れた９６ウェル組織培養プレート内にプレーティングし得る。
【０５５９】
ハイブリドーマ細胞は、ＥＬＩＳＡにおいてＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３に対する反応性についてスクリーニングする。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３に対する所望のモノクローナル抗体を分泌する「陽性」ハイブリドーマ細胞の決定は、当該技術分野の技量の範囲内である。
【０５６０】
陽性ハイブリドーマ細胞を同系Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射し、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３モノクローナル抗体を含有する腹水を生成し得る。あるいはまた、ハイブリドーマ細胞を組織培養フラスコまたはローラーボトル内で培養してもよい。腹水内に産生されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈殿の後ゲル排除クロマトグラフィーを用いて行ない得る。あるいはまた、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇに対する抗体の結合に基づくアフィニティクロマトグラフィーを使用し得る。
【０５６１】
実施例１５：特異的抗体を用いたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの精製
天然または組換えＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを、タンパク質精製の分野におけるさまざまな標準的な手法によって精製し得る。例えば、ｐｒｏ−ＰＲＯ１１０５、ｐｒｏ−ＰＲＯ１２７９、またはｐｒｏ−ＰＲＯ１７８３ポリペプチド、成熟ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたはｐｒｅ−ＰＲＯ１１０５、ｐｒｅ−ＰＲＯ１２７９、またはｐｒｅ−ＰＲＯ１７８３ポリペプチドを、対象のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに特異的な抗体を用いたイムノアフィニティクロマトグラフィーによって精製する。一般に、イムノアフィニティカラムは、抗ＰＲＯ１１０５、抗ＰＲＯ１２７９、または抗ＰＲＯ１７８３ポリペプチド抗体を活性化したクロマトグラフィー樹脂に共有結合によってカップリングさせることにより構成されている。
【０５６２】
ポリクローナル免疫グロブリンを、免疫血清から、硫酸アンモニウムでの沈殿、または固定化したタンパク質Ａ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）上での精製のいずれかによって調製する。同様に、モノクローナル抗体を、マウス腹水から、硫酸アンモニウム沈殿または固定化したタンパク質Ａ上でのクロマトグラフィーによって調製する。部分精製された免疫グロブリンを、ＣｎＢｒ活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）などのクロマトグラフィー樹脂に共有結合させる。抗体を樹脂にカップリングさせ、樹脂をブロックし、誘導体樹脂を、製造業者の使用説明書に従って洗浄する。
【０５６３】
かかるイムノアフィニティカラムは、可溶性形態のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを含む細胞由来の画分を調製することにより、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの精製に利用する。この調製物を、デタージェントの添加による分画遠心分離により得られた完全体細胞または亜細胞画分の可溶化によって、または当該技術分野でよく知られた他の方法によって誘導する。あるいはまた、シグナル配列を含む可溶性ポリペプチドを、有用な量で、該細胞を培養している培地中に分泌し得る。
【０５６４】
可溶性ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド含有調製物をイムノアフィニティカラムに通し、カラムを、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの優先的吸収を可能にする条件下（例えば、デタージェントの存在下の高イオン強度バッファー）で洗浄する。次いで、カラムを、抗体／ＰＲＯ１１０５、抗体／ＰＲＯ１２７９、または抗体／ＰＲＯ１７８３ポリペプチド結合を破壊する条件下（例えば、低ｐＨバッファー（例えば、およそｐＨ２〜３など）または高濃度のカオトロピック薬剤（例えば、尿素またはチオシアネートイオンなど））で溶出させ、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを収集する。
【０５６５】
実施例１６：薬物スクリーニング
本発明は、さまざまな薬物スクリーニング手法のいずれかにおいて、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたはその結合断片を用いることによる化合物のスクリーニングに特に有用である。かかる試験に使用されるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたは断片は、溶液中で遊離、固相支持体に固定、細胞表面上に担持、または細胞内に局在のいずれかであり得る。薬物スクリーニング方法の一例では、組換え核酸で安定に形質転換された、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたは断片を発現する真核生物または原核生物の宿主細胞を用いる。薬物は、競合的結合アッセイで、かかる形質転換細胞に対してスクリーニングする。かかる細胞は、バイアブルな状態または固定された形態のいずれかで、標準的な結合アッセイに使用できる。例えば、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたは断片と試験対象の薬剤との複合体の形成を測定できる。あるいはまた、試験される薬剤によって引き起こされるＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドとその標的細胞または標的受容体との複合体形成の減少を検査できる。
【０５６６】
したがって、本発明は、薬物またはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド関連の疾患または障害に影響を及ぼし得る任意の他の薬剤のスクリーニング方法を提供する。このような方法は、かかる薬剤をＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたはその断片と接触させること、および（Ｉ）該薬剤とＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドもしくは断片との複合体の存在について、または（ｉｉ）ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドもしくは断片を細胞との複合体の存在について、当該技術分野でよく知られた方法によってアッセイすることを含む。かかる競合的結合アッセイでは、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３または断片を、典型的には標識する。適当なインキュベーション後、遊離ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたは断片を、結合された形態で存在するものから分離し、遊離または非複合体形成標識の量を、その特定の薬剤がＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに結合する能力またはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド／細胞複合体に干渉する能力の尺度とする。
【０５６７】
薬物スクリーニングのための別の手法は、ポリペプチドに対して適当な結合親和性を有する化合物のハイスループットスクリーニングを提供し、ＷＯ８４／０３５６４（１９８４年９月１３日に公開）に詳細に記載されている。簡単に述べると、多数の異なる小ペプチド試験化合物を、プラスチックピンまたはいずれかの他の表面などの固相基材上で合成する。ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに適用し、ペプチド試験化合物をＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと反応させ、洗浄する。結合されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドは、当該技術分野でよく知られた方法によって検出する。また、精製したＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドを、前述の薬物スクリーニング手法における使用のために、直接プレート上にコートしてもよい。また、非中和抗体を用いてペプチドを捕捉し、固相支持体上に固定化してもよい。
【０５６８】
本発明ではまた、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドに結合できる中和抗体が、試験化合物と、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドまたはその断片に対する結合に関して特異的に競合する競合的薬物スクリーニングアッセイの使用が想定される。このようにして、該抗体は、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドと１つ以上の抗原性決定基とを共有する任意のペプチドの存在を検出するために使用できる。
【０５６９】
実施例１７：合理的な薬物設計
合理的な薬物設計の目的は、目的の生物学的に活性なポリペプチド（すなわち、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド）または該ポリペプチドと相互作用する小分子、例えば、アゴニスト、アンタゴニストもしくはインヒビターの構造的類縁体を作製することである。これらの例のいずれかを用い、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドのより活性または安定な形態である薬物またはＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの機能をインビボで増強もしくは干渉する薬物を創出し得る（Ｈｏｄｇｓｏｎ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１９−２１（１９９１）を参照）。
【０５７０】
アプローチの一例において、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド−インヒビター複合体の３次元構造を、ｘ線結晶学、コンピュータモデル設計または、最も典型的には、この２つのアプローチの組合せによって決定する。該分子の構造を解明するため、および活性部位（１つまたは複数）を決定するためには、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの形状および電荷の両方が確認されなければならない。頻度は低いが、ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドの構造に関する有用な情報を、相同タンパク質の構造に基づいたモデル設計によって得ることができる。両方の場合において、関連する構造的情報は、類縁ＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチド様分子を設計するため、または効率的なインヒビターを同定するために使用する。合理的な薬物設計の有用な例としては、ＢｒａｘｔｏｎおよびＷｅｌｌｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１：７７９６−７８０１（１９９２）に示されたような改善された活性もしくは安定性を有する分子、またはＡｔｈａｕｄａら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１３：７４２−７４６（１９９３）に示されたような天然ペプチドのインヒビター、アゴニストもしくはアンタゴニストとして作用する分子が挙げられ得る。
【０５７１】
また、上記のようにして機能アッセイによって選択された標的特異的抗体を単離し、次いで、その結晶構造を解明することも可能である。このアプローチは、原理的には、その後の薬物設計の基礎となり得るファーマコアをもたらす。タンパク質結晶学は、機能性の薬理学的に活性な抗体に対する抗イデオタイプ抗体（抗ｉｄ）を作製することにより、全く回避することが可能である。鏡像の鏡像として、抗ｉｄの結合部位は、元の受容体の類縁体であることが予測され得る。次いで、抗ｉｄを、化学的または生物学的に作製されたペプチドのバンクからペプチドを同定および単離するために使用できる。次いで、単離されたペプチドは、ファーマコアとしての役目を果たし得る。
【０５７２】
本発明のおかげで、Ｘ線結晶学などの解析的研究を行なうのに充分な量のＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドが利用可能となり得る。また、本明細書に提供されたＰＲＯ１１０５、ＰＲＯ１２７９、またはＰＲＯ１７８３ポリペプチドアミノ酸配列の知得により、ｘ線結晶学の代わり、またはこれに加えてにコンピュータモデル設計手法が使用されるものに対する手引きが提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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