(57)【要約】本発明は、真菌性皮膚疾患の光治療用医薬組成物であって、前記医薬組成物は光増感剤及びエンハンサーを含み、光増感剤がカチオン性光増感剤であり、前記エンハンサーが、ｉ）酸、及びｉｉ）金属キレート剤から選択される。このような組成物は、分生子及び菌糸をいずれも排除することができる。本発明は、前記医薬組成物の製造方法にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
光増感剤及びエンハンサーを含む、真菌性皮膚疾患の光治療用医薬組成物であって、前記光増感剤がカチオン性光増感剤であり、前記エンハンサーが、ｉ）酸、及びｉｉ）金属キレート剤から選択される医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物がｘのｐＨを有し、３．５＜ｘ＜６、好ましくは４．５＜ｘ＜５．７である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物が、１０ｍＭ以下、更に好ましくは６ｍＭ以下、最も好ましくは２ｍＭ以下のイオン強度を有する、請求項１又は２記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記カチオン性増感剤が、大員環ポルフィリンを含む光増感剤であり、大員環ポルフィリンが少なくとも１個の四級化窒素原子を含む、前記請求項のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記大員環ポルフィリンが、３個の四級化窒素を含む、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記光増感剤が５，１０，１５−トリス（４−メチルピリジニウム）−２０−フェニル［２１Ｈ，２３Ｈ］−ポルフィントリクロライドである、請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記真菌性皮膚疾患が、白癬及び爪甲真菌症からなる群から選択される、前記請求項のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物が局所用医薬組成物である、前記請求項のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項９】
真菌感染症治療用医薬組成物の製造方法であって、前記医薬組成物がカチオン性光増感剤を含み、前記製造が、ｉ）酸、及びｉｉ）金属キレート剤から選択されるエンハンサーを含むことを必要とする、前記製造方法。
【請求項１０】
ｘのｐＨを有する医薬組成物が製造され、３．５＜ｘ＜６、好ましくは４．５＜ｘ＜５．７である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
２ｍＭ以下、好ましくは０．４ｍＭ以下のイオン強度を有する医薬組成物が製造される、請求項９又は１０記載の方法。
【請求項１２】
大員環ポルフィリンを含み、前記大員環ポルフィリンが少なくとも１個の四級化窒素原子を含む光増感剤が用いられる、請求項９〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
前記大員環ポルフィリンが３個の四級化窒素を含む、請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
前記光増感剤が５，１０，１５−トリス（４−メチルピリジニウム）−２０−フェニル［２１Ｈ，２３Ｈ］−ポルフィントリクロライドである、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記真菌性皮膚疾患が、白癬及び爪甲真菌症からなる群から選択される、請求項９〜１４のいずれか記載の方法。
【請求項１６】
前記医薬組成物が局所用医薬組成物である、請求項９〜１５のいずれか記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真菌性皮膚疾患の光治療用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
白癬、特に爪の感染のような真菌性皮膚疾患を治療するためのいくつかの医薬組成物、例えば、Ｌａｍｉｓｉｌ（登録商標）（テルビナフィン）が当該技術分野において公知である。それは、中程度の効果のみを示し、感染の再発は一般的である。これは皮膚糸状菌（真菌）の胞子（分生子）により引き起こされ、胞子はこの治療によって明らかに死滅しないと信じられている。この問題を克服するため、光治療を用いる努力がなされ、活性化酸素種（一重項酸素）が皮膚糸状菌の種々の段階を不活性化する場合、活性化酸素種はそれほど区別されないので、より効果的なアプローチを可能にするだろう。しかし、ＰＤＴは紅色白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ）のような皮膚糸状菌に対して効果的であることが示されるが、これらの皮膚糸状菌はＬａｍｉｓｉｌ（登録商標）のような局所薬剤を投与する場合には生存すると思われる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、皮膚糸状菌の胞子（分生子）及び菌糸を不活性化することのできる医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の医薬組成物は、前記医薬組成物が光増感剤及びエンハンサーを含み、前記光増感剤がカチオン性光増感剤であり、前記エンハンサーが、ｉ）酸、及びｉｉ）金属キレート剤から選択される医薬組成物によって特徴づけられる。
【０００５】
意外にも、皮膚糸状菌を不活性化するためのカチオン性光増感剤の有効性は、このようなエンハンサーの医薬組成物中の取り込みにより、胞子まで広がり得る。更に、医薬組成物は、薬学的に許容される担体又は賦形剤を含んでもよい。本発明の意味においては、カチオン性光増感剤は、四級化窒素原子を有する光増感剤であり、好ましくは、少なくとも２個、好ましくは３個以上の四級化窒素原子を含む光増感剤である。増感剤の全体の電荷が正である限り、１個以上の負電荷を有する側鎖の存在は排除されない（１個以上の負の対イオンが存在する）。酸は、有機又は無機のいずれの酸であってもよく、炭酸が含まれる。医薬組成物は、純度に関して医薬組成物の要求を満たす組成物であり、医薬品グレードの成分を含む。好ましくはｉ）及びｉｉ）の両方のクラスの１種以上のエンハンサーが存在してもよい。金属キレート剤は、好ましくは、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋とキレート化し得る金属キレート化合物である。適切な具体例は、酸及びキレート剤の両方として作用し得るＥＤＴＡ又はＮａＥＤＴＡである。「金属キレート化合物」なる用語は、例えば、クラウン・エーテル、ゼオライト、イオン交換体、タンパク質（カルモジュリン）及び沈殿剤（負電荷の対イオン等）を含む、金属イオンと結合し得るあらゆる化合物を包含する。Ｃａ２＋の結合は、特に有利であると考えられる。一般に、エンハンサーが酸である場合、医薬組成物のｐＨは３以上であるが、７未満、特に６未満であろう。使用前に水性媒体中に医薬組成物を、例えば溶解することによって導入する場合、前記ｐＨは、得られる医薬組成物を使用のために準備する場合のｐＨである。治療すべき皮膚を、光治療（ＰＤＴ）による治療の直前にカルシウムイオンを除去するための処置、例えば、高濃度のＥＤＴＡ−溶液又は十分量の脱塩又は蒸留水の使用に供してもよい。キレート剤を用いる場合、次に、例えば脱塩又は蒸留水を再び用いて過剰量の薬剤を洗い流してもよい。本発明は、カチオン性光増感剤による光治療を用いた真菌性皮膚疾患の治療をも含み、好ましい実施態様によれば、例えば、前述した、又は本出願の他の場所に記載したように、カルシウムを封鎖する工程を含む。カルシウムを封鎖する工程は、ＰＤＴの前又は間に実施されるであろう。
【０００６】
好ましい実施態様によれば、医薬組成物はｘのｐＨを有し、ここで、３．５＜ｘ＜６であり、好ましくは４．５＜ｘ＜５．７である。
【０００７】
特に皮膚に接触した後に、ｐＨをこの範囲に維持するために、酸は、好ましくは医薬組成物を前記範囲に緩衝させることのできる、弱酸である。弱酸は、好ましくはｘについて前述した範囲のｐＫａを有する。
【０００８】
好ましい実施態様によれば、医薬組成物は、１０ｍＭ以下、更に好ましくは６ｍＭ以下、最も好ましくは２ｍＭ以下のイオン強度を有する。
【０００９】
低イオン強度は、菌糸の処置における本発明の医薬組成物中の光増感剤の有効性において好ましい結果を有することがわかった。
【００１０】
好ましい実施態様によれば、カチオン性光増感剤は、大員環ポルフィリンを含む光増感剤であり、この大員環ポリフィリンは、少なくとも１個の四級化窒素原子を含む。更に好ましくは、３個の四級化窒素原子を有する。一般に最も好ましくは、５，１０，１５−トリス（４−メチルピリジニウム）−２０−フェニル［２１Ｈ，２３Ｈ］−ポルフィントリクロライド（シルセンス（Ｓｙｌｓｅｎｓ）Ｂ）である。
【００１１】
本発明の医薬組成物の用途の重要な分野は、真菌性皮膚疾患が、白癬及び爪甲真菌症からなる群から選択されるものである。
【００１２】
重要な実施態様によれば、医薬組成物は局所用医薬組成物である。
【００１３】
このような局所用組成物は、治療すべき皮膚の部分（爪を含む）に容易に塗布することができる。局所用組成物は、好ましくはゲル、軟膏、クリーム、又は他の粘性のある組成物、特にそれらの水性形態である。用語、局所用組成物にはスプレー、特に、皮膚への塗布を可能にする、エタノール又は水のような揮発性溶媒を含むものも含まれる。揮発性溶媒を含まない非粘性の組成物は、それらが確実に塗布することが困難であるので、一般に好ましくない。治療すべき部位に噴霧又はすり込むことができる、水をベースとする局所性医薬組成物が最も好ましい。
【００１４】
本発明は、真菌感染症治療用医薬組成物の製造のためのエンハンサーの使用であって、前記医薬組成物がカチオン性光増感剤を含み、前記エンハンサーが、ｉ）酸、及びｉｉ）金属キレート剤からなる群から選択される使用にも関する。
【００１５】
好ましい実施態様は、医薬組成物について前述したような利点を有する、従属請求項に詳細に記載されている。
【００１６】
これから、本発明を以下の実験及び図面を参照して説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ｐＨ３．５及びｐＨ７．４におけるシルセンスＢの抗真菌効果を示す。
【図２ａ】同様に、シルセンスＢの抗真菌効果を示す。
【図２ｂ】同様に、シルセンスＢの抗真菌効果を示す。
【図２ｃ】同様に、シルセンスＢの抗真菌効果を示す。
【図３】イオン強度の効果を示す。
【図４】ｐＨの関数として測定した、Ｔ．ｒｕｂｒｕｍ小分生子（黒のひし形）及び菌糸体（黒四角）のゼータ電位を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定
直径が２５ｍｍでありポアサイズが２μｍのポリカーボネート膜フィルター（Ｗｈａｔｍａｎ，Ｂｒｅｄａ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を、５ｍＬの麦芽エキス寒天（ＭＥＡ）を満たした３ｃｍの培養皿（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ａｌｐｈｅｎ  ａａｎ  ｄｅｎ  Ｒｉｊｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の中心部分に置いた。次いで、１ｃｍの直径のヒトの角質層の円形の断片を膜フィルター上に置き、７０％エタノールに浸したはけを用いて両方を静かにこすった。Ｔｒｉｃｈｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍから分離した小分生子懸濁液（Ｃｅｎｔｒａａｌ  Ｂｕｒｅａｕ  ｖｏｏｒ  Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ，Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから得、「ポルフィリン増感剤を用いた、皮膚糸状菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  Ｒｕｂｒｕｍ及びその小分生子の光治療」、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ＰｈｏｔｏＢｉｏｌｏｇｙ，８０，１９７−２０２において、Ｓｍｉｊｓ  Ｇ．Ｍ．Ｔ．ら（２００４）に開示されたように製造したＣＢＳ  ｎｒ．３０４．６０）を１０００ＣＦＵ／ｍＬに希釈し、１５μＬをヒトＳＣの円形シート上に接種した。胞子接種光治療（ＰＤＴ）を適用した後、皿を、２８℃のインキュベータ中に１７時間置いた。
【００１９】
胞子接種の１７時間後に、接種された胞子を含むＳＣを有する膜フィルターを、ＭＥＡ皿から、１０３５μＬのインキュベーション培地で満たした３ｃｍの培養皿に移した。インキュベーション培地は、ｐＨが調整された１ｍＬの蒸留水（３．５、４．５、５．２又は７．４）及び３５μＬのシルセンスＢ原液（Ｂｕｃｈｅｍ，Ａｐｅｌｄｏｏｒｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｄｅｒｌａｎｄ）を含む。接種した胞子とインキュベーション培地との接触を最適化するために、２時間のインキュベーション時間の間、ＳＣを有する膜フィルターをひっくり返した。連続的な振盪条件下でインキュベーションを実施した。照射時間の直前に、ＳＣを有する膜フィルターを裏返した（表面のＳＣは、今はランプに面している）。全てのケースにおいて、照射時間は、３０ｍＷ／ｃｍ２の赤色光照射を用いて１時間であった。これは１０８Ｊ／ｃｍ２の照射量に相当する。照射した後、ＳＣを有する膜フィルターを新鮮なＭＥＭ皿に移し、２８℃のインキュベータ中に置き、真菌の増殖を数週間追跡調査した。暗コントロールを含む、すなわち、ヒトの皮膚上の接種された小分性子を溶媒及び／又は暗所における光増感剤で処理したことを除き、同じ手段を実施した。明コントロールにおいては、小分生子を光の存在下に溶媒（のみ）で処理した。処理の効果は、胞子接種後８日に検出される新規の増殖完全な不活性化の相対頻度として表わした。これを、Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  ２５（Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、顕微鏡的に評価した。ＰＤＴの後に、胞子及び菌糸の完全が活性化が得られる場合に、８日後に、目視によって再増殖を観察することができない。処置の効果を数ヶ月の間追跡調査した。各実験は全ての条件の４〜６回の再現を含み、実験を少なくとも３回繰り返した。
【００２０】
結果を表１に示す。
【００２１】
図１は、ｐＨ３．５及び７．４についての、この実験の結果を示す（胞子接種８日後の抗真菌効果（ＦＥ））。酸性のｐＨにおいては、カチオン性光増感剤は有意に活性であった。
【００２２】
メソ−テトラ（Ｎ−メチル−４−ピリジル）ポルフィリンテトラクロライドを用いて同じ実験を実施し、シルセンスＢよりも少ない程度であるにもかかわらず、酸性のｐＨで向上した活性を示した（結果は示さず）。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
インキュベーション：調整されたｐＨを有する水媒体中で２時間
照射：１時間、３０ｍＷ／ｃｍ２（赤色光）
１抗真菌効果は、胞子接種の８日目に測定した。
２μＭにおける最小発育阻止濃度（所定の試験環境下）
３暗毒性は同じ範囲内である。
４真菌の増殖自体又は発芽過程は、このｐＨでは遅い（明及び暗コントロールにおいて少ない数のＣＦＵ）。
【００２５】
生体外でのモデル、種々の濃度のシルセンスＢ及び種々のｐＨ（水性媒体）を用いた胞子接種１７時間後のＴ．ｒｕｂｒｕｍのＰＤＴ。数字は、抗真菌効果の相対的頻度を示す１。区分（ｂｒａｃｋｅｔｓ）の間の数字は、実施した試験の番号を示す。これらの結果から、最も低いＭＩＣはｐＨ５．２で検出され、このｐＨにおける照射により、増感剤が抗真菌剤として最適に効果的であることが明らかである。
【００２６】
シルセンスＢを用いた実験を、長時間及び多くの試料について、より広範囲に繰り返した。特に、Ｔ．ｒｕｂｒｕｍに対するシルセンスＢの光力学的効果を、以下に示すインキュベーションｐＨ値で、ヒトＳＣにおける胞子接種後１７（図２ａ）、４８（図２ｂ）及び７２時間（図２Ｃ）で試験した：黒ひし形：ｐＨ３．５、黒四角：ｐＨ５．２及び黒三角ｐＨ７．４．ＰＤＴの適用は、調整した、指示されたｐＨの蒸留水中で２時間のインキュベーション、次いで１時間の照射（３０ｍＷ／ｃｍ２、赤色光）により、生体外モデルを用いて実施した。得られた値は、５種の異なる実験の平均値及び標準誤差（ＳＥＭ）である。１７時間の段階について、暗コントロールは８〜１２ｃｆｕを示した。４８時間及び７２時間の段階について、暗コントロールは８０μＭ以下のシルセンスＢで８〜１２ｃｆｕ、より高い濃度について５〜８ｃｆｕを示した。明コントロールは、全ての段階で８〜１２ｃｆｕを示した。
【００２７】
イオン強度
図３を参照されたい。Ｔ．ｒｕｂｒｕｍに対するシルセンスＢの光力学的効果を、１７（黒丸）、４８（黒三角）及び７２時間（黒四角）で、種々のモル濃度のｐＨ５．２のクエン酸／クエン酸ナトリウムバッファーを用いて試験した。ＰＤＴの適用は、種々のモル濃度のｐＨ５．２のクエン酸／クエン酸ナトリウムバッファー中での２時間のインキュベーション、次いで、１時間の照射（３０ｍＷ／ｃｍ２、赤色光）により、生体外モデルを用いて実施した。シルセンスＢの濃度は、胞子接種１７時間後におけるＰＤＴ適用について１０μＭ、胞子接種４８時間後における適用について８０μＭ、及び胞子接種７２時間後における適用について１６０μＭに固定した。得られる値は、３種の実験についての平均値及びそれらのＳＥＭである。
【００２８】
明及び暗コントロールは、いずれも全ての増殖段階について８〜１２ｃｆｕを示した。
【００２９】
前記実験において、デューテロポルフィリンモノメチルエーテル（ＤＰｍｍｅ）、アニオン性ポルフィリンをコントロールとして用いた。負電荷であり、このポリフィリンは、観察されたｐＨ効果を示さなかった。更に、観察されるｐＨ効果が、異なるｐＨ値におけるシルセンスＢの種々の効果のためでないことを示すために実験が実施された。特に、１Ｏ２の生産は、用いられたｐＨの範囲の全体で実質的に一定であった。更に、ゼータ電位（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ２０００／３０００，Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｗｏｒｃｓ，ＵＫを用いて）を測定するために実施された実験は、これらが３．５を超えるｐＨにおいて負に帯電し（図４）、それ故カチオン性光増感剤に結合することを示した。皮膚は約５．５のｐＨを中心とする等電範囲を有するので、皮膚はこのｐＨより下で負電荷が小さく、それ故、カチオン性光増感剤と結合しそうにない。ｐＨ５．２において５ｍＭ  ＣａＣｌ２の存在下、光力学的効果を測定するために、カルシウムイオンの効果を調べた。これは、懸濁液中で増殖する真菌に対してシルセンスＢを結合させない。同じ効果は、１６０μＭでシルセンスＢ（１６０μＭ）と真菌に対する結合について競合し、シルセンスＢの新規を不活性化する効果を低下させる、正に帯電した色素、Ａｌｃｉａｎ  Ｂｌｕｅを用いて達成することができる。従って、自然に存在するカルシウムが処置により緩衝されるのを防止するために、特にＥＤＴＡのようなキレート化合物を用いることにより、測定が実施される場合、ＰＤＴは、増殖する真菌を不活性化（死滅）するためにさえ用いられ得る
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2010502595.tif 000011
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