(57)【要約】  生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための多価ヘテロ二官能性ポリマーが、本明細書中で説明される。ポリマーは、それに結合された複数の予備配置されたヘテロ二官能性リガンドを含み；かつ各ヘテロ二官能性リガンドは生物学的標的に結合可能な第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基とを含む。ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマー、生物学的標的およびエフェクター鋳型とで三元複合体を形成するようにポリマー上に予備配置される。本明細書中に記載のポリマー、方法および組成物は、新しい治療剤および種々の非治療用途において有用な作用物質の設計および生成のためのアプローチを提供する。
2010521526.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的活性を示す生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるかまたは前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型と、に結合するための多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、
前記ポリマーに結合されており、（ａ）前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基、および（ｂ）前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を有する、複数のヘテロ二官能性リガンドを含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記ポリマーと、生物学的標的と、エフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、前記ポリマー上に予備配置（pre-arranged）される、多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が共通の原子に結合され、かつ
前記共通の原子は直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が、直接にまたは任意のリンカーを介して互いに結合され、かつ
前記第１の官能基または前記第２の官能基のいずれかは、直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７】
前記第１の官能基が多価生物学的標的に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８】
前記第１の官能基が細菌毒素に結合する、請求項７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項９】
前記毒素が、シガ毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素、およびコレラ毒素からなる群から選択される、請求項８に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１０】
前記第１の官能基がトリサッカライドである、請求項９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１１】
前記トリサッカライドがＰｋ−トリサッカライドである、請求項１０に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１２】
前記第１の官能基がウイルス粒子に結合する、請求項７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１３】
前記第１の官能基が血球凝集素およびノイラミニダーゼからなる群から選択される受容体に結合する、請求項１２に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１４】
前記第１の官能基がノイラミン酸誘導体である、請求項１３に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１５】
前記第１の官能基がウイルスレクチンに結合する、請求項１２に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１６】
前記第１の官能基が癌細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１７】
前記第１の官能基がインテグリンに結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１８】
前記第１の官能基がＢ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１９】
前記第１の官能基が、２,６-結合シアル酸を有するオリゴ糖である、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２０】
前記第１の官能基が、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有するペプチドまたはその機能誘導体もしくは合成模倣体である、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２１】
アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有する前記ペプチドがシクロペプチドである、請求項２０に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２２】
前記第１の官能基が自己免疫疾患に関与する抗体に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２３】
前記第２の官能基がＳＡＰに結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２４】
前記第２の官能基が環状ピルビン酸ケタールである、請求項２３に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２５】
前記第２の官能基が抗体に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２６】
前記第２の官能基がスルホンアミドである、請求項２５に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２７】
前記第２の官能基がスルファチアゾールである、請求項２５に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２８】
前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２９】
生物学的活性を示す生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるかまたは前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、式：
【化１】
2010521526.tif 000021
で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、式中、
「Ｘ」は前記多価ポリマーの高分子骨格を示し；
「ＭＯ」はヘテロ二官能性リガンドを示し、ここで「Ｍ」は前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し、かつ「Ｏ」は前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示し；
「Ｙ」は「ＭＯ」を高分子骨格またはその内部に結合する任意のリンカーを示し；かつ
「ｎ」は意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドが前記ポリマー内に存在するように選択される整数を示す、多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３０】
前記ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型上の受容体の数と同じかまたはそれより大きくなるように、「ｎ」が選択される、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３１】
前記第１の官能基が多価生物学的標的に結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３２】
前記第１の官能基が細菌毒素に結合する、請求項３１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３３】
前記毒素が、シガ毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素およびコレラ毒素からなる群から選択される、請求項３２に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３４】
前記第１の官能基がトリサッカライドである、請求項３３に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３５】
前記トリサッカライドがＰｋ−トリサッカライドである、請求項３４に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３６】
前記第１の官能基がウイルス粒子に結合する、請求項３１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３７】
前記第１の官能基が血球凝集素およびノイラミニダーゼからなる群から選択される受容体に結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３８】
前記第１の官能基がノイラミン酸誘導体である、請求項３７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３９】
前記第１の官能基がウイルスレクチンに結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４０】
前記第１の官能基が癌細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４１】
前記第１の官能基がインテグリンに結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４２】
前記第１の官能基がＢ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質に結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４３】
前記第１の官能基が２,６-結合シアル酸を有するオリゴ糖である、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４４】
前記第１の官能基が、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有するペプチドまたはその機能誘導体もしくは合成模倣体である、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４５】
アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有する前記ペプチドがシクロペプチドである、請求項４４に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４６】
前記第１の官能基が自己免疫疾患に関与する抗体に結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４７】
前記第２の官能基がＳＡＰに結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４８】
前記第２の官能基が環状ピルビン酸ケタールである、請求項４７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４９】
前記第２の官能基が抗体に結合する、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５０】
前記第２の官能基がスルホンアミドである、請求項４９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５１】
前記第２の官能基がスルファチアゾールである、請求項４９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５２】
前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択される、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５３】
「Ｍ」が、前記高分子骨格またはその内部に結合される、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５４】
「Ｍ」が、前記高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５５】
「Ｏ」が、前記高分子骨格またはその内部に結合される、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５６】
「Ｏ」が、前記高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される、請求項５５に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５７】
「Ｍ」および「Ｏ」が互いにリンカーにより結合される、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５８】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５９】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６０】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項２９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６１】
生物学的活性を示す生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるかまたは前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型と、に結合するための、式：
【化２】
2010521526.tif 000022
で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、式中、
「Ｘ」は、前記多価ポリマーの高分子骨格を示し；
「Ｍ−Ｎ−Ｏ」は、ヘテロ二官能性リガンドを示し、ここで「Ｍ」は前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し、かつ「Ｏ」は前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示し、かつ「Ｎ」は「Ｍ」および「Ｎ」に結合するリンカーを示し；
「Ｙ」は、前記ヘテロ二官能性リガンドを高分子骨格またはその内部に結合する任意のリンカーを示し；かつ
「ｎ」は、意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドが前記ポリマー内に存在するように選択される整数を示す、多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６２】
前記ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型上の受容体の数と同じであるように、「ｎ」が選択される、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６３】
前記第１の官能基が多価生物学的標的に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６４】
前記第１の官能基が細菌毒素に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６５】
前記毒素が、シガ毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素、およびコレラ毒素からなる群から選択される、請求項６４に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６６】
前記第１の官能基がトリサッカライドである、請求項６５に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６７】
前記トリサッカライドがＰｋ−トリサッカライドである、請求項６６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６８】
前記第１の官能基がウイルス粒子に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６９】
前記第１の官能基が血球凝集素およびノイラミニダーゼからなる群から選択される受容体に結合する、請求項６８に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７０】
前記第１の官能基がノイラミン酸誘導体である、請求項６８に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７１】
前記第１の官能基がウイルスレクチンに結合する、請求項６８に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７２】
前記第１の官能基が癌細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７３】
前記第１の官能基がインテグリンに結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７４】
前記第１の官能基がＢ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７５】
前記第１の官能基が２,６-結合シアル酸を有するオリゴ糖である、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７６】
前記第１の官能基が、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有するペプチドまたはその機能誘導体もしくは合成模倣体である、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７７】
アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有する前記ペプチドがシクロペプチドである、請求項７６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７８】
前記第１の官能基が自己免疫疾患に関与する抗体に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７９】
前記第２の官能基がＳＡＰに結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８０】
前記第２の官能基が環状ピルビン酸ケタールである、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８１】
前記第２の官能基が抗体に結合する、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８２】
前記第２の官能基がスルホンアミドである、請求項８１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８３】
前記第２の官能基がスルファチアゾールである、請求項８１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８４】
前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択される、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８５】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８６】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８７】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項６１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８８】
生体系における生物学的標的の生物学的活性に作用するための方法であって、
生物学的活性を示す前記生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるエフェクター鋳型とに結合するための、予備配置された複数のヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーを、前記生体系に導入するステップを含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、（ａ）前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基、および（ｂ）前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記ポリマー、前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型の間で三元複合体を形成するように前記ポリマー上に予備配置される、方法。
【請求項８９】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項８８に記載の方法。
【請求項９２】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が共通の原子に結合され、かつ
前記共通の原子は直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９３】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が互いに直接に結合され、かつ
前記第１の官能基または前記第２の官能基のいずれかは、直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９４】
生体系における生物学的標的の存在を検出するための方法であって、
生物学的活性を示す前記生物学的標的と、前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、予備配置された複数のヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーを、前記生体系に導入するステップを含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、（ａ）前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基、および（ｂ）前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記ポリマーと、前記生物学的標的と、前記エフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、前記ポリマー上に予備配置される、方法。
【請求項９５】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ビタミン、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が共通の原子に結合され、かつ
前記共通の原子は直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が互いに直接に結合され、かつ
前記第１の官能基または前記第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項９４に記載の方法。
【請求項１００】
生体系における生物学的標的の生物学的活性に作用するための医薬組成物であって、
（ａ）生物学的活性を示す前記生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるエフェクター鋳型とに結合するための、複数の予備配置されたヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基および前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記ポリマーと、前記生物学的標的と、前記エフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、前記ポリマー上に予備配置される、多価ヘテロ二官能性ポリマー、ならびに
（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤
を含有する、医薬組成物。
【請求項１０１】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ビタミン、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０２】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０３】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０４】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が共通の原子に結合され、かつ
前記共通の原子は直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が互いに直接に結合され、かつ
前記第１の官能基または前記第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項１００に記載の医薬組成物。
【請求項１０６】
多価ヘテロ二官能性ポリマー上に複数のヘテロ二官能性リガンドを予備配置するための方法であって、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、三元複合体を形成するための、生物学的標的に結合するための第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合するための第２の官能基とを含み、
前記方法は、（ａ）前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型の分子表現を、分子モデリングおよび画像化ソフトウェアを用いて整列するステップと、（ｂ）前記エフェクター鋳型上での２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離を測定するステップと、（ｃ）前記生物学的鋳型上での２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離を測定するステップと、（ｄ）前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型に結合されたときの、前記第１の官能基と前記直近の第２の官能基とを隔てる平均距離を測定するステップと、を含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記三元複合体の形成を媒介するように設計された前記ポリマー内での前記第１の官能基と前記直近の第２の官能基とを隔てる前記距離が、前記三元複合体内での前記生物学的標的と前記エフェクター鋳型の間に立体的衝突を導入することなく分子モデリングツールを用いて最小化されるように、前記多価ヘテロ二官能性ポリマー上に予備配置される、方法。
【請求項１０７】
前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型の前記結合部位のトポロジーが、類似または同一である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型に結合される場合、
前記第１の官能基と前記直近の第２の官能基とを隔てる前記平均距離が、前記第１の官能基を前記第２の官能基に結合させる１つ以上のリンカーの長さを変化させることにより最適化される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０９】
前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型に結合される場合、
前記第１の官能基と前記直近の第２の官能基とを隔てる前記平均距離が、前記第１の官能基を前記第２の官能基に結合させる任意のリンカーの長さに等しいかまたはそれより短い、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１１０】
前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型に結合される場合、
前記第１の官能基と前記直近の第２の官能基とを隔てる前記距離が、前記第１の官能基および前記第２の官能基に結合するリンカーの長さを変化させることにより変化する、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１１１】
ヘテロ二官能性リガンドが、
（ａ）前記ヘテロ二官能性リガンドの１つの結合点を近接するヘテロ二官能性リガンドの結合点から隔てる平均距離と、前記ヘテロ二官能性リガンドを前記ポリマーまたはその内部に結合させる任意のリンカーの２倍の長さと、前記第１の官能基を前記第２の官能基に結合させる任意のリンカーの長さとの和が、前記エフェクター鋳型上での２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離あるいは前記生物学的鋳型上での２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離の長い方よりも長く、かつ
（ｂ）前記第１の官能基を前記第２の官能基に結合させる前記リンカーの長さが、１つのヘテロ二官能性リガンドの結合点を近接するヘテロ二官能性リガンドの結合点から隔てる平均距離と、前記第１の官能基を前記第２の官能基に結合させる前記リンカーの長さと、前記ヘテロ二官能性リガンドを前記ポリマーまたはその内部に結合させる前記リンカーの２倍の長さとの和よりも短いように、
前記多価ヘテロ二官能性ポリマー上に予備配置される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１１２】
治療用途が、癌、細菌感染、ウイルス感染、寄生虫感染、真菌感染、自己免疫疾患、遺伝性および後天性代謝疾患、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される疾患の治療である、前記治療用途における請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマーの使用。
【請求項１１３】
非治療用途が、診断、地下水中での細菌毒素の検出、血中の抗体の検出、癌細胞の検出、および腫瘍の造影からなる群から選択される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマーの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００７年３月２３日に出願された米国仮特許出願第６０／８９６，８７８号明細書の優先権を主張するものであり、その全てが本明細書中に援用される。
【０００２】
本発明は、新規の多価ポリマーを有するヘテロ二官能性リガンド、それを合成するための方法、その組成物、ならびにその治療および非治療用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
異なる生物学的要素の間の特異的相互作用は多数の生物学的プロセスの中核を成し、それは限定されないが、細胞間コミュニケーション、環境に対する細胞応答、細胞分化、細胞増殖、細胞遊走、シグナル伝達、代謝プロセス、アポトーシスおよび免疫応答を含む。多くの場合、これらの重要なプロセスおよび応答は、特異的リガンドと特異的標的との相互作用を介して媒介される。これらのリガンドおよび標的は、限定はされないが、タンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、炭水化物、脂質、および細胞を含みうる。
【０００４】
様々なリガンドとそれらの標的との間の相互作用の重要性は、これらの相互作用の機能停止またはこれらの相互作用の調節の機能停止により引き起こされる多数の障害により強調される。これらの特異的相互作用についてのより深い理解が得られると、治療および非治療用途の双方のための、それらの制御および利用が可能となると考えられる。
【０００５】
最近、多数の研究において、様々な生物学的要素（biological entiies）と相互作用し、かつ感染性および非感染性疾患の治療を支援することが可能な新規クラスのリガンドの設計および合成が注目されている。この新規クラスのリガンドは、ホモおよびヘテロ二官能性リガンドを含む。これらのリガンドは、標的化された生体細胞または分子に結合して三元複合体を形成し、標的化された細胞または分子の除去が促進されるように、内因性タンパク質または抗体にも結合する。かかる二官能性リガンドは、細菌およびウイルス粒子やウイルス感染細胞だけでなく、不要な細胞、タンパク質、抗体、および種々の消耗性疾患に関与する他の生体分子を除去するための新規のアプローチを提供する。この超分子のタンパク質凝集体は、治療および非治療用途の双方のための刺激的な機会を提供する。
【０００６】
これまで既知の二官能性リガンドは、典型的にはそれらの各標的に結合するための少なくとも２つの官能基を有する。ホモ二官能性リガンドでは、２つの結合用官能基は類似または同一であり、互いに直接にまたはリンカーを介して結合され、かつ同様の標的の凝集を促進する（Ｐｅｐｙｓ、Ｍ．Ｂ．国際公開第０３／０１３５０８号パンフレット；Ｂｕｎｄｌｅら、米国特許出願公開第２００７／００４２９３６号明細書）。
【０００７】
ヘテロ二官能性リガンドにおいては、２つの結合用官能基は互いに異なっており、互いに直接にまたはリンカーを介して結合され、かつ異なる標的の特異的な凝集を促進する（Ｓｈｏｋａｔ  Ｋ．Ｍ．およびＳｃｈｕｌｔｚ  Ｐ．Ｇ．、１９９１年  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：１８６１−１８６２頁；Ｐｅｐｙｓ  Ｍ．Ｂ．、国際公開第０３／０１３５０８号パンフレット；Ｍｕｌｌｉｓ  Ｋ．Ｂ．、米国特許出願第１０／１７８，０４６号明細書および米国特許出願第１０／６９６，７７０号明細書；Ｌｉｕ  Ｊ．ら、２００５年  Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．１２７：２０４４−２０４５頁）。Ｌｉｕらは、コレラ毒素および先天性免疫系の内因性タンパク質であるヒト血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）の双方に結合するヘテロ二官能性リガンドを開示している。ＳＡＰは、肝臓を介する三元複合体の循環からの除去を誘導する。コレラ毒素の阻害は、三元複合体中ではヘテロ二官能性リガンドおよび毒素のみの二元複合体中に見られる場合よりも、３桁大きいことが見出された。Ｓｏｌｏｍｏｎらによる報告によると（２００５年  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ７：４３６９−４３７２頁）、ヘテロ二官能性リガンドがＳＡＰとの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）シガ様毒素の特異的凝集を媒介する場合、三元複合体の形成に起因する阻害の増大は、ヘテロ二官能性リガンド中でも見られる。
【０００８】
しかしながら、現在既知のホモおよびヘテロ二官能性リガンドは、多数の重大な欠点や制限を有する。第１に、現在既知のリガンドの多数は、投与後速やかに分解される。この急速な分解は、これらのリガンドの潜在的な治療効果を著しく損なう。第２に、ホモおよびヘテロ二官能性リガンドの多くの結合は、エントロピーコストによって損なわれうる。多くの場合、現在既知の二官能性リガンドは、標的に結合していない状態において相当高レベルの柔軟性を有し、かつ標的へ結合すると、この柔軟性が大幅に低下する。柔軟性の低下はエネルギー的に好ましくなく、結合効率の大きな妨げとなりうる。第３に、ヘテロ二官能性リガンドは、結合価を利用することがない。現在、多くの試験によって、結合価が、重要な生物学的プロセスでの特異的相互作用の重要な特徴でありうることが示されている。事実、現在では多数の重要な生物学的プロセスは、複数のリガンドと標的受容体の多重結合部位との同時相互作用に起因すると考えられている。第４に、三元複合体を形成するためのヘテロ二官能性リガンドの使用は、標的の一方の濃度に応じて制限されうる。これは治療用途におけるこれらのリガンドの使用を損なう。第５に、リガンド上の結合用官能基は、標的に対して強力な結合を示す官能基のみに制限されうる。
【０００９】
最近では、これらの課題の一部を解決するために、様々なリガンドが高分子鎖上に共有結合されている。２つの異なる結合用官能基が高分子鎖上の様々な位置に個別かつ独立に固定される高分子リガンドの例が公知である（図１を参照）（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  Ｖ．Ｍ．ら、２００６年、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２７：３６６３−３６７４頁；Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  Ｖ．Ｍ．ら、国際公開第２００７／０１６５５６号パンフレット；Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ、Ｇ．ら、国際公開第９８／４６２７０号パンフレット；Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇら、米国特許第２００３／０１２５２６２号明細書）。しかし、これらのポリマーもまた、多数の深刻な欠点や制限を有する。まず第１に、高分子リガンドの各受容体に対する結合力は、他の受容体が存在するか否かによって影響を受けない。現在既知の高分子リガンドが２つの異なる生物学的受容体を互いに引き付けうる一方、２つの異なるリガンドをポリマー上に独立に固定することにより、リガンドは確定した超分子複合体の形成に起因してエントロピーの節約を利用することができない。これは、これらのポリマーの治療的および非治療的有用性にとっての大きな妨げとなりうる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、効率的使用により三元複合体のインビトロおよびインビボでの形成を可能にし、一方で上記課題の一部を解決する多価ポリマーを必要としている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の広範な態様によると、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型と、に結合するための、多価ヘテロ二官能性ポリマーが提供される。ここでポリマーは、それに結合される複数の予備配置されたヘテロ二官能性リガンドを含む。ヘテロ二官能性リガンドは、生物学的標的に結合可能な第１の官能基およびエフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を含む。ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマーと生物学的標的とエフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、ポリマーに予備配置される。第１の官能基および第２の官能基は、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。生物学的標的は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。エフェクター鋳型は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。ポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択されうる。一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は共通の原子に結合され、ここで共通の原子は直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。他の実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は直接にまたは任意のリンカーを介して互いに結合され、かつ第１の官能基または第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。
【００１２】
本発明の別の広範な態様によると、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、下記式で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーが提供される。
【化１】
2010521526.tif 000003
【００１３】
式中、「Ｘ」は多価ポリマーの高分子骨格を示し；「ＭＯ」はヘテロ二官能性リガンドを示す。ここで「Ｍ」は、生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し；「Ｏ」は、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示す。「Ｙ」は、「ＭＯ」を、高分子骨格またはその内部に結合させる任意のリンカーを示し；「ｎ」は、意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドを、ポリマー内に存在させるように選択される整数を示す。
【００１４】
一実施形態では、「ｎ」は、ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、生物学的標的およびエフェクター鋳型上の受容体の数（いずれかより大きい方）と同じかまたはそれより大きいように選択される。
【００１５】
ポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択されうる。
【００１６】
一実施形態では、「Ｍ」は、高分子骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、「Ｍ」は、高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される。一実施形態では、「Ｏ」は、高分子骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、「Ｏ」は、高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される。一実施形態では、「Ｍ」および「Ｏ」は、リンカーにより互いに結合される。
【００１７】
本発明の別の広範な態様によると、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、下記式で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーが提供される。
【化２】
2010521526.tif 000004
【００１８】
式中、「Ｘ」は、多価ポリマーの高分子骨格を示し；「Ｍ−Ｎ−Ｏ」は、ヘテロ二官能性リガンドを示す。「Ｍ」は、生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し；「Ｏ」は、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示す。「Ｎ」は、「Ｍ」および「Ｎ」に結合するリンカーを示す。「Ｙ」は、ヘテロ二官能性リガンドを、高分子骨格またはその内部に結合させる任意のリンカーを示し；「ｎ」は、意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドを、ポリマー内に存在させるように選択される整数を示す。
【００１９】
一実施形態では、「ｎ」は、ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、生物学的標的およびエフェクター鋳型上受容体の数（いずれかより大きい方）と同じであるように選択される。
【００２０】
ポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択されうる。
【００２１】
本発明の他の広範な態様によると、生体系における生物学的標的の生物学的活性に作用するための方法が提供される。この方法は、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるエフェクター鋳型とに結合するための、予備配置された複数のヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーを、生体系に導入するステップを含む。
【００２２】
ヘテロ二官能性リガンドは、生物学的標的に結合可能な第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基とを含む。ここで、ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマーと、生物学的標的と、エフェクター鋳型とで、三元複合体を形成するようにポリマー上に予め配置される。
【００２３】
第１の官能基および第２の官能基は、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００２４】
生物学的標的は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００２５】
エフェクター鋳型は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００２６】
一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は共通の原子に結合され、ここで共通の原子は直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は直接にまたは任意のリンカーを介して互いに結合され、かつ第１の官能基または第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。
【００２７】
本発明の他の広範な態様によると、生体系における生物学的標的の存在を検出するための方法が提供される。この方法は、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、予備配置された複数のヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーを、生体系に導入するステップを含む。
【００２８】
ヘテロ二官能性リガンドは、生物学的標的に結合可能な第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基とを含む。ここで、ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマーと、生物学的標的と、エフェクター鋳型とで、三元複合体を形成するようにポリマー上に予備配置される。
【００２９】
第１の官能基および第２の官能基は、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ビタミン、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００３０】
生物学的標的は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００３１】
エフェクター鋳型は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００３２】
一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は共通の原子に結合され、ここで共通の原子は直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は直接にまたは任意のリンカーを介して互いに結合され、かつ第１の官能基または第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。
【００３３】
本発明の他の広範な態様によると、生体系における生物学的標的の生物学的活性に作用するための医薬組成物が提供される。この医薬組成物は、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるエフェクター鋳型とに結合するための、予備配置された複数のヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーと；薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む。
【００３４】
ヘテロ二官能性リガンドは生物学的標的に結合可能な第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基とを含む。ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマーと、生物学的標的と、エフェクター鋳型とで、三元複合体を形成するようにポリマー上に予備配置される。
【００３５】
第１の官能基および第２の官能基は、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ビタミン、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００３６】
生物学的標的は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００３７】
エフェクター鋳型は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００３８】
一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は共通の原子に結合され、ここで共通の原子は直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は直接に互いに結合され、かつ第１の官能基または第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。
【００３９】
本発明の別の広範な態様によると、多価ヘテロ二官能性ポリマー上に、複数のヘテロ二官能性リガンドを、予備配置するための方法が提供される。ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマー上の異なる結合点で結合される。かつ、ヘテロ二官能性リガンドは、三元複合体を形成するように、生物学的標的に結合するための第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合するための第２の官能基を含む。
【００４０】
この方法は、生物学的標的およびエフェクター鋳型の分子表現を、分子モデリングまたは画像化ソフトウェアを用いて整列させるステップと；エフェクター鋳型上の、２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離を測定するステップと；生物学的鋳型上の、２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離を測定するステップと；生物学的標的およびエフェクター鋳型に結合される場合に、第１の官能基と直近の第２の官能基とを隔てる平均距離を測定するステップと、を含む。
【００４１】
ヘテロ二官能性リガンドは、第１の官能基と第２の官能基との平均間隔が、三元複合体内で生物学的標的とエフェクター鋳型とが立体的に衝突することなく最小化されるように、多価ヘテロ二官能性ポリマー上に予備配置される。
【００４２】
一実施形態では、生物学的標的およびエフェクター鋳型の結合部位のトポロジーは、類似または同一である。
【００４３】
一実施形態では、第１の官能基と直近の第２の官能基との間隔は、生物学的標的およびエフェクター鋳型に結合される場合、第１の官能基を第２の官能基に結合させる１つ以上のリンカーの長さを変化させることにより最適化される。
一実施形態では、第１の官能基と直近の第２の官能基との平均間隔は、生物学的標的およびエフェクター鋳型に結合される場合、第１の官能基を第２の官能基に結合させる任意のリンカーの長さに等しいかまたはそれよりも短い。
一実施形態では、第１の官能基と直近の第２の官能基との平均間隔は、生物学的標的およびエフェクター鋳型に結合される場合、第１の官能基および第２の官能基に結合されるリンカーの長さを変化させることにより最適化される。
【００４４】
一実施形態では、ヘテロ二官能性リガンドは、「１つのヘテロ二官能性リガンドの結合点を近接するヘテロ二官能性リガンドの結合点から隔てる平均距離」と「ヘテロ二官能性リガンドをポリマーまたはその内部に結合させる任意のリンカーの２倍の長さ」と「第１の官能基を第２の官能基に結合させる任意のリンカーの長さ」との和が、以下の２条件の両方を満たすように多価ヘテロ二官能性ポリマー上に予備配置される。
エフェクター鋳型上の２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離、あるいは生物学的鋳型上の２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離の、いずれか長い方よりも長いこと。
第１の官能基を第２の官能基に結合させるリンカーの長さが、「１つのヘテロ二官能性リガンドの結合点を近接リガンドの結合点から隔てる平均距離」と「第１の官能基を第２の官能基に結合させるリンカーの長さ」と「ヘテロ二官能性リガンドをポリマーまたはその内部に結合させるリンカーの２倍の長さ」との和よりも短いこと。
【００４５】
本発明の他の広範な態様によると、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの、治療用途への使用についての提供がなされる。治療用途とは、癌、細菌感染、ウイルス感染、寄生虫感染、真菌感染、自己免疫疾患、遺伝性および後天性代謝疾患、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される疾患の治療である。
【００４６】
本発明の別の広範な態様によると、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの、非治療用途への使用についての提供がなされる。非治療用途とは、診断、地下水中の細菌毒素の検出、血中の抗体の検出、癌細胞の検出、および腫瘍の造影からなる群から選択される。
【００４７】
本発明は、その構成および動作方法の双方に関し、以下の説明や様々な実施形態の添付の図面（同様の数字がいくつかの図面全体で用いられる）の参照により最もよく理解されうる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】先行技術のポリマーの略図である。
【図２】本発明において、生物学的標的とエフェクター鋳型と多価ポリマーとで、三元複合体を形成する略図である。
【図３】本発明の多価ポリマーの一実施形態の略図であり、各ヘテロ二官能性リガンドは第１の官能基および第２の官能基を含む。この実施形態では、各官能基は共通の原子にリンカーを介して結合される。
【図４】本発明の多価ポリマーの一実施形態の略図であり、各ヘテロ二官能性リガンドは第１の官能基および第２の官能基を含む。この実施形態では、各官能基は、任意のリンカーを介し、共通の原子の使用を伴わずに他方に結合される。
【図５Ａ】本発明の一実施形態における多価ポリマーの設計の原理の一部を図示する略図である。本発明の多価ポリマーは、利用可能な構造情報に基づく分子モデリングまたはタンパク質の相同性モデリングを用いて設計されうる。構築物の分子寸法は、生物学的標的およびエフェクター鋳型の結合部位の分子寸法に一致するように最適化される。
【図５Ｂ】本発明の一実施形態における多価ポリマーの設計の原理の一部を図示する略図である。本発明の多価ポリマーは、利用可能な構造情報に基づく分子モデリングまたはタンパク質の相同性モデリングを用いて設計されうる。構築物の分子寸法は、生物学的標的およびエフェクター鋳型の結合部位の分子寸法に一致するように最適化される。
【図６Ａ】ヘテロ二官能性ポリマーによるＳｔｘ１の阻害を測定するために用いられるＥＬＩＳＡ阻害プロトコルを、概略的に説明する。Ｃ１６アグリコン（１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体）に結合された合成Ｐｋ−トリサッカライドの構造の略図である。
【図６Ｂ】ヘテロ二官能性ポリマーによるＳｔｘ１の阻害を測定するために用いられるＥＬＩＳＡ阻害プロトコルを概略的に説明する。ＥＬＩＳＡ阻害アッセイについて記載する。ウェルは、Ｃ１６アグリコン（１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体）に結合された合成Ｐｋ−トリサッカライドでコートされた。次いで、阻害剤が、ＳＡＰ（２０μｇ／ｍＬ）の存在下および不在下で、Ｓｔｘ１（４ｎｇ／ｍＬ）とともに同時インキュベートされた。プレートに結合された毒素は、ウサギ抗Ｓｔｘ１ポリクローナル血清、次いでヤギ抗ウサギ西洋わさびペルオキシダーゼ二次抗体を用いて検出された。次いで、テトラメチルベンジジン基質で発色させた。
【図７】先行技術のポリマーＰＰＭおよび本発明のポリマーＰＰＩの構造を図示する略図である。
【図８】先行技術のポリマーＰＰＭおよび本発明のポリマーＰＰＩによる、血清アミロイドＰ（２０ｍｇ／ｍＬ）の存在下または不在下の、Ｐｋ−１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体ＥＬＩＳＡプレート（１０μｇ／ｍＬで一晩コート）への結合の、シガ毒素１型（Ｓｔｘ１、４ｎｇ／ｍＬ）によるＣａ２＋依存性の阻害を比較する。  シリーズ１：ＳＡＰの存在下でのＰＰＭ。シリーズ２：ＳＡＰの不在下でのＰＰＭ。シリーズ３：ＳＡＰの存在下でのＰＰＩ。シリーズ４：ＳＡＰの不在下でのＰＰＩ。  図示するように、ＰＰＭの活性は、ＳＡＰの存在による作用を受けない。さらに、ＰＰＩの阻害活性は、ＳＡＰの存在下ではＳＡＰの不在下よりも６０００倍高い。
【図９】本発明のポリマーＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２による、血清アミロイドＰ（２０μｇ／ｍＬ）の存在下における、Ｐｋ−１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体ＥＬＩＳＡプレート（１０μｇ／ｍＬで一晩コート）への結合の、シガ毒素１型（Ｓｔｘ１、４ｎｇ／ｍＬ）によるＣａ２＋依存性の阻害を比較する。  白四角（シリーズ１）は、ＳＡＰの存在下で、ＨＰＭＡ−Ｂ１を用いて収集されたデータに対応する。黒四角（シリーズ２）は、ＳＡＰの存在下で、ＨＰＭＡ−Ｂ２を用いて収集されたデータに対応する。ＨＰＭＡ−Ｂ２は、ＨＰＭＡ−Ｂ１（１２．８μｇ／ｍＬ）よりも極めて小さいＩＣ５０値（０．０６５μｇ／ｍＬ）を有する。このことは、ポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの予備配置における最適化の重要性を示す。
【図１０】Ｖｅｒｏ細胞毒性中和アッセイの結果を示す。（約２．９１ｎｇ／ｍＬのＬＤ１００での）Ｓｔｘ１を、５％ＣＯ２／９５％大気の雰囲気中、ウシ胎仔血清が補充されたＭｅｄｉｕｍ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）内での連続希釈された阻害剤およびＳＡＰ（１０μｇ／ｍＬ）との混合物中のコンフルエントな細胞培養物に添加した。  シリーズ１：本発明の多価ヘテロ二官能性リガンドＥＰＩ−１５６の存在下で行われたＶｅｒｏ細胞毒性中和アッセイの結果。シリーズ２：先行技術分野において公知の、ＥＰＩ−１５６の一価類似体であるＢＡＩＴ２の存在下で行われたＶｅｒｏ細胞毒性中和アッセイの結果。シリーズ３：先行技術分野において公知の、半径方向に対称なデンドリマーを有するホモ十量体Ｐｋ−トリサッカライドＤＡＩＳＹ１／８の存在下で行われたＶｅｒｙ細胞毒性中和アッセイの結果。
【図１１】ＢＡＩＴ２、ＥＰＩ−１５６およびＥＰＩ−１５３の分子構造の略図である。ここでＥＰＩ−１５６は、ヨード化を可能にするチロシン残基の付加を伴う修飾形態で示される。
【図１２】Ｓｔｘ１や、先行技術および本発明の種々の阻害ポリマーの投与後に、マウスの生存を測定するマウス中毒モデルから得られたデータを示す。ＨｕＳＡＰマウスは、致死用量（ＬＤ５０）のＳｔｘ１を、尾静脈を介して静脈内に注射され、４時間ごとにシガトキセミア（ｓｈｉｇａｔｏｘｅｍｉａ）の徴候について観察された。シガトキセミアの徴候を示すマウスは安楽死された。  シリーズ１は、ＤＡＩＳＹ１／８（先行技術のＰｋを有するデンドリマー）の投与（投与量５００μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ２は、ＥＰＩ−１５６（本発明のポリマー）投与（投与量５０μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ３は、ＥＰＩ−１５３（ＥＰＩ−１５６の不活性なトランケート型リガンド類似体）の投与（投与量５０μｇ／マウス）と、ＨｕＳＡＰの投与（投与量６００μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ４は、ＥＰＩ−１５６の投与（投与量５０μｇ／マウス）、およびＨｕＳＡＰの投与（投与量６００μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ５は、ＢＡＩＴ２の投与（投与量２ｍｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。  確認され得るとおり、本発明のポリマーＥＰ−１５６単独の静脈内投与は、トランスジェニックマウスにおいて発現されるＳｔｘ１と、ＥＰ−１５６と、ＨｕＳＡＰとで三元複合体を形成し、マウスをＳｔｘ１の毒性効果から十分保護する。
【図１３Ａ】ヒトＳＡＰを発現するトランスジェニックマウス（ＨｕＳＡＰマウス）への静脈内注射の４時間後に測定された、放射性標識ＥＰＩ−１５６（ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ）およびシガ毒素（Ｓｔｘ１−１２５Ｉ）の器官分布を示す。  図１３Ａでは、ＨｕＳＡＰマウスは、尾静脈注射を介して、９００ｎｇのＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ（１．１４×１０７ＣＰＭ／μｇ）を受けた。黒バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５ＩとＨｕＳＡＰとの混合物の器官分布を示す。白バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５ＩとＨｕＳＡＰとＳｔｘ１との混合物の器官分布を示す。図１３Ａから、ヘテロ二官能性高分子リガンドが肝臓に誘導されることが認められうる。
【図１３Ｂ】ヒトＳＡＰを発現するトランスジェニックマウス（ＨｕＳＡＰマウス）への静脈内注射の４時間後に測定された、放射性標識ＥＰＩ−１５６（ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ）およびシガ毒素（Ｓｔｘ１−１２５Ｉ）の器官分布を示す。  図１３Ｂでは、マウスは、尾静脈注射を介して、２０ｎｇ／ｇのＳｔｘ１−１２５Ｉ（４．８１×１０６ＣＰＭ／μｇ）を受けた。黒バーは、Ｓｔｘ１とＨｕＳＡＰとの混合物の器官分布を示す。白バーは、Ｓｔｘ１とＨｕＳＡＰと非標識ＥＰＩ−１５６との混合物の器官分布を示す。図１３Ｂからは、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの不在下で、腎臓および肺に誘導されることが認められるのに対して；本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの存在下で、毒素Ｓｔｘ１が肝臓に誘導されることが認められた。これはこれらのポリマーの保護作用を説明しうると思われる。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、多価ヘテロ二官能性ポリマーの発見、それを合成するための方法、その組成物、ならびにその治療および非治療用途に関する。
【００５０】
本発明の多価ポリマーの主な特徴は、それに結合された複数のヘテロ二官能性リガンドの存在である。各ヘテロ二官能性リガンドは、２つの異なる結合官能基を含む（図２を参照）。ヘテロ二官能性リガンド上の各結合官能基は、各々が異なる生物学的要素に結合しうるように予備配置される。これは、ポリマー上の異なる位置に結合された２つの独立した単官能性（ｕｎｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）官能基を与える先行技術の高分子リガンドとは異なる（図１を参照）。
【００５１】
驚くべきことに、発明者らは、本発明の多価ポリマー上にヘテロ二官能性リガンドの２つの結合官能基を予備配置することで、ポリマー上の異なる位置に結合された２つの独立した単官能性基を有する公知のポリマーの使用によっては再現できない、安定性を有する三元複合体（図１を参照）の形成を可能にすることを見出している。理論に拘束されないが、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの使用を通じて、標的受容体と数個の一価リガンドの複製体とで複合体を形成したときに失われた結合エントロピーの一部を回復させることにより、多価結合効果（multivalency effect）および超高分子効果（supermolecula effect）の双方の効果が作用する。これらの多価ポリマーは、多価結合効果および超高分子効果が互いに補完し、かつ結合自由エネルギーにおける実質的利得を見込みうることから特に有利である。これは、ポリマーの１つの生物学的要素への結合が、別の生物学的要素への結合の強化に繋がる点で特に有利でありうる。
【００５２】
図２に示されるように、本発明の多価ポリマー１は、多価ポリマー１に任意のリンカー３を介して結合された複数のヘテロ二官能性リガンド２を含む。各ヘテロ二官能性リガンド２は、三元複合体８が形成されうるように、生物学的標的５に結合可能な第１の官能基４と、エフェクター鋳型７に結合可能な第２の官能基６とを含む。理論に拘束されないが、多価ポリマー１の生物学的標的５およびエフェクター鋳型７への結合による三元複合体８の形成することで、一方の生物学的要素を他方の生物学的要素によって検出すること、阻害すること、除去すること、および／または分解することを促進する。
【００５３】
図３および図４に示されるように、ヘテロ二官能性リガンドは、第１の官能基４および第２の官能基６を、種々の形態で提示しうる。以下に考察するように、形態の選択は、意図される用途および機能に依存することになる。図３に示される一実施形態では、ヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６は、それぞれリンカー９Ａおよび９Ｂを介して共通の原子９に結合される。共通の原子９は、任意のリンカー３を介して多価ポリマー１に結合されうる。当然ながら当業者に理解されるように、共通の原子９は、リンカー３を用いることなく、多価ポリマー１に直接結合されてもよい（図示せず）。
【００５４】
図４に示される別の実施形態では、第１の官能基４および第２の官能基６は共通の原子９を用いずに任意のリンカー９Ｃを介して互いに結合され、かつ第１の官能基４または第２の官能基６のいずれかは、任意のリンカー３を介して多価ポリマー１に結合されうる。当然ながら当業者に理解されるように、得られる第１の官能基４と第２の官能基６との複合体は、リンカー３を用いることなく多価ポリマー１に直接結合されてもよい（図示せず）。
【００５５】
上記考察のように、多価ポリマー１上への、ヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６の予備配置は、高い結合効率を得るために重要である。ポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの２つの官能基の予備配置は、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７に依存することになる。
【００５６】
一実施形態では、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７は、相対位置およびそれらの結合部位の配置の観点では、酷似しているかまたはトポロジー的に同一である。この類似性を利用して、本発明のポリマーに結合されるヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６を予備配置することが可能である。これらの類似性を利用すると、三元複合体の形成が最大となるように本発明のポリマーを設計することができる。
【００５７】
当業者は、第１の官能基４および第２の官能基６の予備配置を最適化させて、適切に三元複合体を形成するためには、上記任意のリンカーの長さを変化させるとともに、ポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの近接結合点を隔てる平均距離を変化させることが必要であることを理解するであろう。リンカーの長さおよびヘテロ二官能性リガンドの近接結合点を隔てる平均距離は、当該技術分野で公知の化学合成技術を用いて容易に変更可能である。当業者はまた、得られるポリマーの生物学的活性を、多種多様なアッセイを用いて測定することができ、そのアイデンティティが、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７のアイデンティティに依存することになることを理解するであろう。
【００５８】
別の実施形態では、生物学的標的５および／またはエフェクター鋳型７における構造データが利用可能である場合には、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７の既知または予測される構造および／または結合部位を調べることにより、第１の官能基４および第２の官能基６を適切に予備配置することができる。前記構造は、当該技術分野で公知の多種多様な分子モデリングツールを用いて予測可能である。
【００５９】
図５Ａに示されるように、生物学的標的５および／またはエフェクター鋳型７における既知の構造データを考慮して本発明の多価ポリマーを設計する場合、少なくとも以下の３つの距離、すなわち「エフェクター鋳型７上の２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離１０」、「生物学的標的５上の２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離１１」、ならびに「第１の官能基４および直近の第２の官能基６がそれらの各結合部位に結合されるときのそれらを隔てる平均距離１２」が考慮されるべきである。好ましくは、距離１２が最小になるように、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７を配置する。当然ながら当業者に理解されるように、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７の配置は、当該技術分野で公知の分子モデリングまたは画像化ソフトウェアを用いて調整されうる。距離１２は、得られる三元複合体で生物学的標的５とエフェクター鋳型７とが衝突しないように、最小であるべきである。当業者に理解されるように、すべての３つの距離は、当該技術分野で現在公知の様々な分子モデリングまたは画像化ソフトウェアを用いて測定されうる。
【００６０】
一実施形態では、生物学的鋳型５およびエフェクター鋳型７における構造データが利用可能な場合、距離１０、距離１１および距離１２は、ヘテロ二官能性リガンドを多価ポリマー１上に予備配置し、安定な三元複合体の形成を促進するための一般的指針として用いられうる。第１の官能基４および第２の官能基６を互いに関連させた空間的な配置手法の決定においては、「リンカー９Ａおよびリンカー９Ｂの長さの和」または「リンカー９Ｃの長さ」が、距離１２の長さ以上であるべきである。また、多価ポリマー１の設計には、「一方のヘテロ二官能性リガンドを、もう一方のヘテロ二官能性リガンドから隔てる距離１３」および「リンカー３の長さ」が必要とされる（図５Ｂを参照）。好ましくは、「距離１３と、リンカー３の２倍の長さと、リンカー９Ａの２倍の長さとの和」は、距離１０または距離１１（いずれかより長い方）よりも長い必要がある。一実施形態では、「距離１３とリンカー３の２倍の長さとリンカー９Ｃの長さとの和」は、距離１０または距離１１（いずれかより長い方）よりも長い必要がある。
【００６１】
構造データが利用可能な場合、他の情報も用いつつ、ヘテロ二官能性リガンド内での２つの官能基の設計および予備配置を補助することが可能である。好ましくは、リンカー９Ａおよびリンカー９Ｂの長さの和は、「距離１３の長さと、リンカー９Ａの２倍の長さと、リンカー３の２倍の長さとの和」よりも短い必要がある。さらに、リンカー９Ａおよび９Ｂの長さの和は、「距離１３の長さと、リンカー９Ｂの２倍の長さと、リンカー３の２倍の長さとの和」よりも短い必要がある。別の実施形態では、リンカー９Ｃの長さは、「距離１３の長さと、リンカー９Ｃの長さと、リンカー３の２倍の長さとの和」よりも短い必要がある。
【００６２】
上記の様々な平均距離を測定する場合、２つの官能基および／またはリガンドに結合する任意の断片またはリンカーが、拡張された高次構造（extended conformation）であると仮定することが好ましい。その基準点は、各官能基および／または各リガンドの質量中心である。当業者が理解するように、柔軟な分子の拡張された高次構造（extended conformation）とは、２つの基準点の距離が最大と考えられる距離となる構造である。上記考察のように、これらの距離は分子モデルの使用を通じて評価でき、そこでは適切な共有結合の長さおよび角度が考慮されうる。
【００６３】
さらに、共重合反応および予備形成されるポリマーの修飾に用いられる反応は、本質的にランダムである。そのため、距離１３は、ヘテロ二官能性リガンドのポリマーへの取り込みの速度を介する、統計学的意味での平均としてのみ評価されうる。例えば、「リガンド」対「繰り返し単位」の比率が１：２０である場合、距離１３は「２０の繰り返し単位からなる高分子鎖の両末端間の長さ」に等しいと仮定される。
【００６４】
ヘテロ二官能性リガンド２を予備配置するための既知の構造データを用いる場合、拡張された高次構造内に、柔軟なポリマー分子を見出す確率が一般に極めて低いことから、一般に、上記の４つの異なる制限が必要とされる。距離１０、距離１１および距離１２での結合官能基を見出す確率を高めるためには、十分な長さ以上のリンカーが必要とされる。そのため、ヘテロ二官能性多価リガンドの構造のさらなる最適化が、安定な三元複合体の形成を促進するために必要とされることが多い。上記のように、リンカーの長さおよびヘテロ二官能性リガンドの近接結合点を隔てる距離は、安定な三元複合体を形成する確率を高めるために容易に最適化されうる。最適化は、当該技術分野で公知の多種多様な技術を用いてなされうる（例えば、限定は意図されないが、Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、２００２年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５：３２８４−３２９４頁；Ｍａｍｍｅｎ  Ｍ．ら、１９９８年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６３：３１６８−３１７５頁；Ｇａｒｇａｎｏ  Ｊ．Ｍ．ら、２００１年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２３：１２９０９−１２９１０頁）。
【００６５】
上記の４つの制限において、距離１３は、少なくとも０でない正の値を有する必要がある。しかし、上記考察および図４に示されるように、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよび／またはリンカー９Ｃの長さは０でありうる。発明者らは、下記に示されるように、第１の官能基４および第２の官能基６が、エントロピー効率の良い結合部分を生成しながら、リンカーを用いずに互いに結合されうることを見出している。
【００６６】
一実施形態では、本発明の多価ポリマー１は以下のように示されうる。
【化３】
2010521526.tif 000005
【００６７】
特定の実施形態では、本発明の多価ポリマー１は、下記構造により表すことができる。
【化４】
2010521526.tif 000006
【００６８】
式中、「Ｘ」は多価ポリマー１の高分子骨格を示す。「Ｍ」は第１の官能基４を示す。「Ｏ」は第２の官能基６を示す。「Ｎ」は共通の原子９、任意のリンカー、または上記考察のように「Ｍ」および「Ｏ」に直接結合するように用いられうる結合のいずれかを示す。「Ｙ」は任意のリンカー３を示す。かつ「ｎ」は意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドがポリマー内に存在するように選択される整数を示す。好ましくは、「ｎ」の値は標的受容体内での結合部位の数と同じであるべきである。
【００６９】
第１の官能基および第２の官能基
生物学的標的５およびエフェクター鋳型７のアイデンティティ、ひいては第１の官能基４および第２の官能基６のアイデンティティは、意図される用途に応じて大きく変化しうる。一実施形態では、生物学的標的５は疾患を媒介する要素である一方、エフェクター鋳型７は生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の検出を可能にする要素である。
【００７０】
「生物学的活性」という用語は、生物学的標的５により発揮される任意の有害な活性を示す。理論に拘束されないが、エフェクター鋳型７に結合可能な第２の官能基６は、得られる三元複合体８の肝臓などの特定の器官への局在化；限定はされないが、補体媒介性の細胞毒性を惹起可能な抗体でありうるエフェクター鋳型７と、生物学的標的５との会合の促進；限定はされないが、生物学的標的５を中和可能な細胞でありうるエフェクター鋳型７と、生物学的標的５との会合の促進；を含む種々の機序を介して、生物学的標的５が示す生物学的活性に作用しうる。一部の実施形態では、ヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６は、同じ細胞上の複数の複製体として存在する２つの異なる膜結合タンパク質受容体である生物学的標的５およびエフェクター７を認識し、かつそれらに結合する。他の実施形態では、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７は、別々の細胞上の受容体である。
【００７１】
「検出する」という用語は、特定の生物学的標的が、生物内または環境内に存在するか否かを判定するための多価ヘテロ二官能性ポリマー１の使用用途を示す。これは診断の分野で特に有利である場合がある。これらについて後にさらに考察する。
【００７２】
多くの場合、入手可能な文献から、第１の官能基４および第２の官能基６の双方のアイデンティティは既知である。もしそれらのアイデンティティが意図される用途において知られていない場合、有効な第１および第２の官能基は既知の化合物のライブラリーのスクリーニングにより同定されうるか、またはそれらは受容体における任意の利用可能な構造データに基づいて合理的に設計されうる。
【００７３】
第１の官能基４および第２の官能基６は、限定はされないが、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、０〜約２０のモノサッカライドを有するオリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、ビタミン、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体を含みうる群から選択されうる。
【００７４】
生物学的標的５は、限定はされないが、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体を含みうる群から選択されうる。
【００７５】
エフェクター鋳型７は、限定はされないが、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体を含みうる群から選択されうる。
【００７６】
一実施形態では、エフェクター鋳型７が抗体である場合、第２の官能基６は、限定はされないが、高免疫原性、低分子量および／または低毒性を含みうる特性を用いて選択される任意のハプテンでありうる。
【００７７】
一実施形態では、１つ以上のヘテロ二官能性リガンド２の複製体を含む多価ポリマー１が提供される。第１の官能基４は多価生物学的標的に結合する。多価生物学的標的は、多重結合部位を与え、かつ２つ以上のリガンドに同時に結合しうるものを含む。「多価生物学的標的」という用語はまた、細胞表面上の構造モチーフ、例えば一群の類似の細胞表面受容体を包含するように意図される。
【００７８】
一実施形態では、エフェクター鋳型は血清アミロイドＰ成分である。別の実施形態では、エフェクター鋳型は自然または適応免疫系の分子または細胞成分である。
【００７９】
一実施形態では、第１の官能基４は、細菌毒素である生物学的標的５に結合する。細菌毒素の例として、限定はされないが、シガ毒素またはシガ様毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素およびコレラ毒素が挙げられる。一部の態様では、シガ毒素は、Ｏ１５７：Ｈ７大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）血清型などの腸管出血性大腸菌により産生される。一部の態様では、第１の官能基４はトリサッカライドである。他の実施形態では、第１の官能基４は、生物学的標的であるグラム陽性細菌に結合する。
【００８０】
一実施形態では、第１の官能基４は、生物学的標的であるインフルエンザウイルスなどのウイルス粒子に結合する。一部の態様では、第１の官能基４はウイルスの赤血球凝集素ノイラミニダーゼ（ＨＮ）に結合する。一実施形態では、第１の官能基４は、ノイラミン酸誘導体である。別の実施形態では、第１の官能基４はウイルスレクチンに結合する。
【００８１】
他の生物学的標的および対応する第１の官能基として、限定はされないが、マンノース基と相互作用可能な、ＦｉｍＨアドヘシン表面基を有する房状の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；グルコサミンＮ−アセチル（ＧｌｃＮａｃ）基に結合可能な、肺炎球菌表面アドヘシンＡ（ＰｓａＡ）の表面基を有する肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；ノイラミン酸（ＮｅｕＡｃ）およびラクト−Ｎ−ネオテトラオーゼ（ｎｅｏｔｅｔｒａｏｓｅ）基に結合可能な、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｐｂＡ）基；プラスミン（プラスミノーゲン）基に結合可能な、α−エノラーゼ基；およびＧｌｃＮＡＣ、ＮｅｕＡｃ、およびラクトースに結合可能な、線毛アドヘシン表面基を有する緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられる。
【００８２】
一実施形態では、第１の官能基４は、癌細胞の細胞表面受容体である生物学的標的５に結合する。一部の態様では、その細胞表面受容体は正常細胞内にも存在するが、癌細胞内で発現上昇される。一部の態様では、生物学的標的５は癌細胞の葉酸塩受容体である。
【００８３】
一実施形態では、第１の官能基４は、インテグリンである生物学的標的５に結合する。一実施形態では、インテグリンはインテグリンαｖβ３である。
【００８４】
一実施形態では、第１の官能基４は、Ｂ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質である生物学的標的５に結合する。
【００８５】
一実施形態では、第１の官能基４は、抗リン脂質抗体症候群に関連した免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を提示するＢ細胞に結合可能な、カルジオリピンなどのリン脂質である。
【００８６】
一実施形態では、第１の官能基４は、２,６-結合シアル酸を有するオリゴ糖である。
【００８７】
一実施形態では、第１の官能基４は、大部分の神経膠腫内に見出される腫瘍表面マーカーに特異的に結合可能な、巨大なイスラエルサソリ（Ｉｓｒａｅｌｉ  ｓｃｏｒｐｉｏｎ）の毒に由来するペプチドであるクロロトキシンである（Ｄｅｓｈａｎｅ  Ｊ．ら、２００３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８（６）：４１３５−４１４４頁）。
【００８８】
一実施形態では、第１の官能基４は、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有するペプチド（ＲＧＤ）、またはその機能誘導体もしくは合成模倣体である。一態様では、ＲＧＤはシクロペプチドである。
【００８９】
一実施形態では、第１の官能基４は、自己免疫疾患に関与する抗体である生物学的標的５に結合する。一態様では、抗体はギラン・バレー症候群を媒介する。
【００９０】
一実施形態では、第２の官能基６は、血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）であるエフェクター鋳型７に結合する。
【００９１】
別の実施形態では、エフェクター鋳型７は自然または適応免疫系の分子または細胞成分である。
【００９２】
一実施形態では、エフェクター鋳型７は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー細胞である。一実施形態では、第２の官能基６は、抗体であるエフェクター鋳型７に結合するハプテンである。一部の態様では、抗体は、第２の官能基６を有する化合物に対して予め免疫された患者において産生される。一部の態様では、第２の官能基６はスルホンアミドである。別の実施形態では、第２の官能基６はスルファチアゾールである。
【００９３】
リンカー
上記考察のように、任意のリンカー３は、ヘテロ二官能性リガンド２を多価ポリマー１に共有結合させる。任意のリンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃも存在しうる。リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃの長さおよび化学組成は、意図される用途や、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７の性質に応じて異なる。リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃの化学組成はまた、生物学的標的５および／またはエフェクター鋳型７の結合部位の周囲の環境に応じて大きく異なる。意図される用途に応じて、疎水性、親水性または両親媒性リンカーを用いることは有利でありうる。
【００９４】
リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃは、多種多様な異なる基からなってもよく、そのアイデンティティは意図される用途に依存する。これらの基は、限定はされないが、複数のメチレン基から有するアルキレン鎖を含み、ここで各メチレン基は、「二価の基」と置換されてもよい。適切な「二価の基」は、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＲＲ’−、カルバメート、尿素、およびチオ尿素部分を含む（式中、ｎは０、１、または２であり；ＲはＨまたはアルキルであり；Ｒ’はＨ、アルキル、または非水素置換基と置換されたアルキルである）。さらに、リンカーは、エチレングリコール単位を有する基を含んでいてもよい。さらにリンカーは、場合により、１つ以上のメチレン基を１,４-フェニレン基と置換された基を含みうる。
【００９５】
当然ながら、当業者は、上記していない多数の他の基を用いて、リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃを、それらが安定な三元複合体の形成を補助するのに必要とされる特性を有するようにすることができることを理解するであろう。これらの基は、本発明の範囲内に含まれるものとして見なされる。
【００９６】
高分子骨格
多価ヘテロ二官能性ポリマー１の高分子骨格は、意図される用途に応じて多数の異なる形態をとりうる。本発明において使用可能なポリマーは、骨格内に非環状、環状および／またはアリーレン構造を有するものを含む。ポリマー骨格またはその内部に、ヘテロ二官能性リガンドが結合される。
【００９７】
適切なポリマーの更なる例として、ポリアクリルアミド、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースなどの高分子炭水化物；ならびにポリカルボフィル、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリ（メチルメタクリレート）アクリル酸／ブチルアクリレート共重合体、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］（ＨＰＭＡ）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、およびポリ（リンゴ酸）などのアクリル酸に基づくポリマーが挙げられる。限定はされないが、デキストラン、デキストリン、アガロース、アミロース、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカンおよびキトサンを含む天然ポリマーも用いられうる。当然ながら、当業者は、複数のヘテロ二官能性リガンドに共有結合可能な任意の薬学的に許容可能なポリマーを用いて、本発明の多価ポリマーの合成が可能であることを理解するであろう。これらのポリマーは、本発明の範囲内に含まれるものとして見なされる。
【００９８】
ポリマーは、ヘテロ二官能性リガンドに結合された末端二重結合などの重合可能な基を有する単量体を、重合することにより調製されうる。ヘテロ二官能性単量体と非官能化された単量体との共重合体も利用可能である。さらには、ポリマーの溶解度または安定性などの物理的または生物学的特性を、制御および／または改善する非官能化された単量体の作製および利用も、また可能である。ポリマーを調製するための方法も限定はされないが、開環メタセシス重合（ＲＯＭＰ）を含む。
【００９９】
ポリマーにおけるヘテロ二官能性リガンドの含有率は、官能化単量体と非官能化単量体との比率や、単量体の性質および反応性に依存する。一部の態様ではポリマーは、１つのヘテロ二官能性リガンド当たり、１０〜２０の繰り返し単位を有する。他の態様では、ポリマーは、１つのヘテロ二官能性リガンド当たり、２０以上の繰り返し単位を有する。
【０１００】
「結合点」または「結合される」という用語は、ヘテロ二官能性リガンドのポリマーへの結合に適用される場合、広義に解釈される。上記考察のように、ヘテロ二官能性リガンドは、任意のリンカーを介してポリマーに結合されうるか、または直接にポリマーに結合されうる。結合様式は、ヘテロ二官能性リガンドの性質、ポリマーの性質、および意図される用途に依存する。一実施形態では、結合は共有結合である。
【０１０１】
投与および医薬組成物
一般に、本発明のポリマーは、類似の有用性を発揮する作用物質における認められた投与方法のいずれかにより、治療有効量で投与されうる。ポリマーの実際の投与量は、ポリマーの薬動動態、治療されるべき疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、用いられるポリマーの効力、投与の経路および形態、ならびに他の要素などの極めて多数の要素に依存する。薬剤は、１日に２回以上、好ましくは１日に１回または２回投与されうる。これらの要素のすべては主治医の能力の範囲内にある。
【０１０２】
一般に、本発明のポリマーは、以下の経路、すなわち全身（例えば経皮、鼻腔内または坐剤による）、非経口（例えば筋肉内、静脈内または皮下）、髄腔内、または経口投与のうちのいずれか１つにより医薬組成物として投与される。組成物は、タブレット、ピル、カプセル、半固体、粉末、持続放出製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアロゾル、または任意の他の適切な形態の組成物となりうる。
【０１０３】
製剤の選択は、薬剤投与の方法および薬剤物質のバイオアベイラビリティなどの様々な要素に依存する。吸入を介する送達においては、ポリマーは、溶液、懸濁液、エアロゾル推進剤または乾燥粉末として調合され、かつ投与に適するディスペンサーに充填されうる。薬剤吸入装置には、ネブライザー吸入器、定量吸入器（ＭＤＩ）および乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）といったいくつかのタイプがある。
【０１０４】
本組成物は、一般には本発明のポリマーと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤との組み合わせからなる。許容可能な賦形剤は、非毒性であり、投与を補助し、かつポリマーの治療効果に悪影響を及ぼさない。かかる賦形剤は、一般に当業者が使用可能な任意の固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合には、気体賦形剤でありうる。
【０１０５】
固体医薬賦形剤の例には、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどが含まれる。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、ならびに石油、動物、植物または合成由来のオイルを含む様々なオイル、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などから選択されうる。特に注射可能な溶液用の好ましい液体担体は、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコールを含む。
【０１０６】
圧縮ガスを用いて、エアロゾル形態での本発明のポリマーの分散が可能である。この目的に適する不活性気体として、窒素、二酸化炭素などが挙げられる。他の適切な医薬賦形剤およびそれらの製剤については、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ編、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、第ｌ８版、ｌ９９０年）に記載されている。
【０１０７】
治療および非治療用途
上記考察のように、第１の官能基４および第２の官能基６のアイデンティティは、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７のアイデンティティに応じて大きく変化しうる。本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーは、治療および非治療用途の双方に用いられうる。
【０１０８】
本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマー１には、多数の異なる有望な治療用途が存在する。下記に列挙されるのは、有望な治療用途のうちのほんの数例であって、限定することを意図されていない。
【０１０９】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、シガ毒素またはシガ様毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素、およびコレラ毒素を含みうる細菌毒素を除去することが可能である。
【０１１０】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、インフルエンザウイルスを含みうるウイルス粒子を除去することが可能である。
【０１１１】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、房状の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、コリン結合タンパク質Ａ基、α−エノラーゼ基、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を除去することが可能である。
【０１１２】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、癌細胞を標的化することが可能である。
【０１１３】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、インテグリンを標的化することが可能である。一実施形態では、インテグリンはインテグリンαｖβ３である。
【０１１４】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、Ｂ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質を標的化することが可能である。
【０１１５】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、抗リン脂質抗体症候群に関連したＩｇＧを提示するＢ細胞に結合可能なカルジオリピンを含みうるリン脂質を標的化することが可能である。
【０１１６】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、神経膠腫を標的化することが可能である。
【０１１７】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、ギラン・バレー症候群を含みうる自己免疫疾患に関与する抗体を除去することが可能である。
【０１１８】
一実施形態では、有効量の本発明のポリマーを投与するステップを含む、標的化免疫療法の方法が提供される。ここで、第２の官能基６がハプテンであれば、前記ポリマーの投与により既存の抗体による免疫認識が惹起する。一部の態様では、治療の開始に先立ち、第２の官能基６を提示する化合物の投与により、抗体が患者の体内で産生される。
【０１１９】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１は、遺伝性および後天性代謝疾患の治療に用いられうる。
【０１２０】
本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーはまた、様々な非治療用途にも用いられうる。これらのポリマーの使用は診断の分野で有利でありうる。一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、地下水中のＳｔｘ１の存在を検出することが可能である。別の実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、血中の抗体の存在を検出することが可能である。これは、限定はされないが、癌を含みうる多数の疾患の診断において有利でありうる。一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１は、腫瘍の造影において用いられうる。当然ながら当業者に理解されるように、これらの非治療用途は、特定の三元複合体の形成が最適化されるように、ヘテロ二官能性リガンド２上で第１の官能基４および第２の官能基６を選択し、かつ予備配置することによって実現可能である。
【実施例】
【０１２１】
材料、方法および実施例
以下の材料および方法を以下の実施例において用いた。これらの材料および方法は、あくまでも例示目的であり、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されない。当業者は、いくつかの変更および置換が本発明の範囲に影響を与えることなくなされうることを理解するであろう。より詳細には、これらは以下に列挙する特定の技術および反応条件における変更および置換を含む。
【０１２２】
一般的方法
旋光性を、周囲温度で１０ｃｍのセル内のＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ２４１偏光計上で測定した。分析ＴＬＣを、蛍光の消光および／またはエタノール溶液中の１０％Ｈ２ＳＯ４でのチャージ（charging）、その後の１８０℃での加熱による検出とともに、シリカゲル６０−Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ）上で行った。カラムクロマトグラフィーを、シリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ、４０〜６０μｍ）上で行い、かつ市販品の溶媒を用いた。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、ＣＤＣｌ３（δＨ７．２４ｐｐｍでの残存ＣＨＣｌ３を基準）またはＤ２Ｏ（δＨ２．２２５ｐｐｍでの外部アセトンを基準）中、４００、５００または６００ＭＨｚ（Ｖａｒｉａｎ）で測定した。Ｊ値はＨｚで与えられる。すべての市販品の試薬を用いることができる。
【０１２３】
本発明がより十分に理解されるように、以下の実施例が示される。これらの実施例は、あくまでも例示目的であり、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されない。さらに、これらの実施例は、本発明の等価物および変形物を除外するように意図されておらず、それは当業者にとって明らかである。
【０１２４】
実施例１
化合物３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-［４-Ｏ-（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−β−Ｄ−グルコピラノシド（１）の合成
【化５】
2010521526.tif 000007
【０１２５】
既知のラクトースイミデート（ｌａｃｔｏｓｅ  ｉｍｉｄａｔｅ）ドナーを、三フッ化ホウ素エーテラートの存在下で、モノアリル化ヘキサ（エチレングリコール）とカップリングさせ、ラクトシド５を７１％の収率で得た。Ｚｅｍｐｌｅｎ条件下で、ラクトシド５を脱アセチル化して、ヘプタオール６を９０％の収率で得た。次いで、ヘプタオール６を、α−（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼを用いて、酵素的にガラクトシル化し、標的化合物１を７５％の収率で得た。
【０１２６】
３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシド（５）。
ラクトース六酢酸トリクロロアセトイミダートドナー（１．８ｇ、２．３ｍモル、α：βが９：１の混合物）、モノアリルヘキサ（エチレングリコール）（０．６４ｇ、２．０ｍモル）、および活性化された４Åのモレキュラーシーブス（１．５ｇ）を、乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）中で１時間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、ＢＦ３Ｅｔ２Ｏ（０．３ｍＬ）を滴下添加した。ＴＬＣで反応の完了を確認した後、Ｅｔ３Ｎで中和し、セライトを通して濾過し、濃縮した。シリカゲルでの残留物のクロマトグラフィーにより、表題化合物５を得た（１．３ｇ、７１％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．８９（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１．０Ｈｚ，３．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２３（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３およびアリル）、５．０８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ８．０Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，Ｈ−２’）、４．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３．５Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ８．０Ｈｚ，９．５Ｈｚ，Ｈ−２）、４．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１’およびＨ−６ａ）、４．０７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂおよびＨ−６ａ’）、４．００（ｍ，２Ｈ，アリル）、３．８４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．７７（ｔ，１Ｈ，Ｊ９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ’）、３．５７〜３．６５（ｍ，１５Ｈ）、２．１３（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．１０（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０１（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、１．９４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ９６３．３６８１４（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４１Ｈ６４Ｏ２４Ｎａ＋の要求値９６３．３６７９８）。
【０１２７】
３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシド（６）。
ラクトシド５（１．３ｇ、１．４ｍモル）を乾燥ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＮａ（３ｍＬ、０．５Ｍ溶液）を添加した。混合物を一晩撹拌し、次いでＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  Ｈ＋で中和し、濾過し、濃縮し、表題化合物６を得た（０．８ｇ、９０％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９５（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３３（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２６（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０６（ｍ，３Ｈ，アリル）、３．９７（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｍ，１Ｈ）、３．５８〜３．８４（ｍ，３１Ｈ）、３．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ６６９．２９３８９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２７Ｈ５０Ｏ１７Ｎａ＋の要求値６６９．２９４０２）。
【０１２８】
３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノシド（１）。
ラクトシド６（０．１１ｇ、０．１７ｍモル）を、Ｈ２Ｏ  ４ｍＬ、ＨＥＰＥＳ緩衝液［１．２５ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ８］、ＤＴＴ溶液（１００ｍＭ、０．３２ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（６３μｌ）の混合液中に溶解した。得られた混合物に、ＵＤＰ−Ｇｌｃ（０．１３ｇ）、次いでα−（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（０．６２５ｍＬ）を添加した。反応物を３７℃で一晩インキュベートし、次いでＣ１８担体でクロマトグラフィーを行い、表題化合物１を得た（０．１ｇ、７５％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９５（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．６Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ８．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．３５（ｍ，１Ｈ）、３．５６〜４．０７（ｍ，４２Ｈ）、３．３３（ｔ，１Ｈ，Ｊ８．４Ｈｚ，Ｈ−２’）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ８３１．３４６４９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３３Ｈ６０Ｏ２２Ｎａ＋の要求値８３１．３４６８５）。
【０１２９】
実施例２
２５-［（シス）-２-ヒドロキシカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-２４-（Ｒ,Ｓ）-ヒドロキシ-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ−オキサ-ペンタデコサ（ｐｅｎｔａｄｅｃｏｓ）-１-エン（２）の合成
【化６】
2010521526.tif 000008
【０１３０】
メタノール（４．５ｍＬ）中の２５-［（シス）-２-ジメチルアミノカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-２４-（Ｒ,Ｓ）-ヒドロキシ-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタデコサ-１-エン（１２５ｍｇ、０．２１４ｍモル）の溶液に、４Ｍ水性ＮａＯＨ（２６８μＬ）を添加した。反応混合物を８０℃で一晩撹拌した。翌日、さらに４ＭのＮａＯＨ（１３４μＬ）を添加し、混合物を８０℃で一晩放置した。翌日、ＮＭＲおよびＴＬＣにより、アミドの加水分解が完了したことを確認そた。混合物をメタノールで希釈し、Ｄｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂で脱イオン化し、濾過し、濃縮した。乾燥残留物を水中に溶解し、凍結乾燥し、生成物をシロップとして得た（９７ｍｇ；８４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：５．９９〜５．９２（ｍ，１Ｈ，ＨＣ＝ＣＨ２）、５．３６〜５．２６（ｍ，２Ｈ，ＨＣ＝ＣＨ２）、４．１８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ４．７Ｈｚ，Ｊ１１．４Ｈｚ，Ｈ−４ｅ，Ｈ−６ｅ）、４．０７（ｄ，２Ｈ，Ｊ５．９Ｈｚ，ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、３．９４〜３．９２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）、３．７４〜３．６５（ｍ，２６Ｈ，Ｈ−５，ＯＣＨ２）、３．７０〜３．６０（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４ａ，Ｈ−６ａ，ＯＣＨ２）、１．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＨＲＭＳ、計算値Ｃ２４Ｈ４４Ｏ１３Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ）：ｍ／ｚ  ５６３．２６７４１，実測値：ｍ／ｚ  ５６３．２６７７６。
【０１３１】
実施例３
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-カルボキシル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ（ｐｅｎｔａｃｏｓ）-１-エン（３）の合成
【化７】
2010521526.tif 000009
【０１３２】
既知のラクトシド７（Ｓｏｌｏｍｏｎら（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００５年、７、４３６９−４３７２頁））を、Ｚｅｍｐｌｅｎ条件下で脱アセチル化し、配糖体８を９８％の収率で得た。配糖体８を、α-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼを用いて、酵素的にガラクトシル化し、トリサッカライド９を７８％の収率で得た。基本的条件下でのトリサッカライド９のアミド基の加水分解により、標的化合物１０を９６％の収率で得た。
【０１３３】
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-ジメチルアミノカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン（８）。
化合物７（０．３３ｇ、０．３ｍモル）（Ｓｏｌｏｍｏｎら（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００５年、７、４３６９−４３７２頁））を、乾燥ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＮａ（０．５Ｍ溶液１ｍＬ）を添加した。室温で一晩撹拌後、混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（Ｈ＋）樹脂で中和し、濾過し、濃縮し、真空下で乾燥し、表題化合物８を得た（０．２４ｇ、９８％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、４．０７（ｍ，３Ｈ，アリル）、３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６１〜３．８２（ｍ，３９Ｈ，ＯＭｅ）、３．５３（ｍ，４Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２６（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、３．００（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、１．５２（ｍ，３Ｈ，Ｃ−Ｍｅ）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ９１４．４２０９７（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３８Ｈ６９ＮＯ２２Ｎａ＋の要求値９１４．４２０３５）。
【０１３４】
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-ジメチルアミノカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン（９）。
ラクトシド８（０．２４ｇ、０．２７ｍモル）を、Ｈ２Ｏ  ８ｍＬ、ＨＥＰＥＳ緩衝液［２．５ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ８］、ＤＴＴ溶液（１００ｍＭ、０．６３ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（１２５μＬ）の混合液中に溶解した。混合物にＵＤＰ−Ｇｌｃ（０．２５ｇ）、次いでα−（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（１．２５ｍＬ）を添加した。反応物を３７℃で一晩インキュベートし、次いでＣ１８担体でクロマトグラフィーを行い、表題化合物９を得た（０．２２ｇ、７８％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．６Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ６．０Ｈｚ，Ｈ−５’’）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．４９〜４．０８（ｍ，５７Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２６（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、３．００（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、１．５２（ｍ，３Ｈ，Ｃ−Ｍｅ）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  １０７６．４７３４３（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４４Ｈ７９ＮＯ２７Ｎａ＋の要求値１０７６．４７３１７）。
【０１３５】
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-カルボキシル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン（３）。
表題化合物９（０．１５ｇ、０．１４ｍモル）およびＮａＯＨ（５当量）の溶液を、８０℃で３日間撹拌し、反応の進行をＮＭＲにより追跡し、混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  Ｈ＋樹脂で中和し、濾過し、濃縮し、表題化合物３を得た（０．１４ｇ、９６％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９５（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ６．０Ｈｚ，Ｈ−５’’）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．５５〜４．０９（ｍ，５７Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、１．５０（ｍ，３Ｈ，Ｃ−Ｍｅ）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  １０４９．４２５９３（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４２Ｈ７４Ｏ２８Ｎａ＋の要求値１０４９．４２５８８）。
【０１３６】
実施例４
４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（４）の合成
【化８】
2010521526.tif 000010
【０１３７】
既知の化合物１０を、触媒ＣＳＡの存在下で、ベンズアルデヒドジメチルアセタールで処理し、ベンジリデン１１を７２％の収率で得た。ベンジリデン１１の一級ヒドロキシルを、ピリジン中の塩化トシルを用いて選択的にトシル化し、トリオール１２を５６％の収率で得た。その後、トシル基をアジドで置換し、化合物１３を７８％の収率で得た。化合物１３の水素化で得られたアミンとｐ−ニトロフェニル４−ペンテニルカーボネートとのカップリングし、ベンジリデン保護基を８０％酢酸で脱離させ、カルバメート１４を得た。ジサッカライド１４を、α-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ-４'-Ｇａｌ-エピメラーゼを用いて、酵素的にガラクトシル化し、所望のトリサッカライド４を得た。
【０１３８】
４-Ｏ-（４,６-Ｏ-ベンジリデン-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（１１）。
ヘキサオール１０（２．１９ｇ、４．２５ｍモル）を、乾燥アセトニトリル（２４ｍＬ）およびベンズアルデヒドジメチルアセタール（１．９５ｍＬ、３当量）の混合液中に溶解し、次いでカンファースルホン酸（触媒量）を添加した。ＴＬＣで反応の完了を確認した後、トリエチルアミンで中和し、溶媒を蒸発させた。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）、表題化合物１１を得た（１．５９ｇ、７２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．３５〜７．４９（ｍ，５Ｈ，芳香族陽子）、５．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．４Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４７（ｓ，１Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ）、４．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ’）、４．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３４．８Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．６Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．９３〜４．００（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−６ｂ’）、３．７３〜３．８２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−６ｂ，Ｈ−２’）、３．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．６９（ｔ，１Ｈ，Ｊ８．４Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’９．６Ｈｚ，Ｊ３’，４’３．６Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．４７（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ５’）、１．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５３７．１５７５０（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２３Ｈ３０Ｏ１３Ｎａ＋の要求値５３７．１５７８６）。
【０１３９】
４-Ｏ-（４,６-Ｏ-ベンジリデン-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-６-Ｏ-トシル-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（１２）。
化合物１１（１．ｇ、１．９ｍモル）を、乾燥ピリジン（８ｍＬ）中に溶解した。混合物を０℃に冷却後、塩化トシル（０．３ｇ）、次いで４-ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）を添加した。３時間後、さらに塩化トシル（０．２５ｇ）を添加した。冷蔵庫（＋５℃）内で１６時間放置した後、反応物をメタノールでクエンチした。溶媒を蒸発後、残留物に対してシリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）、表題化合物１２を得た（０．７３３ｇ、５６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．３２〜７．８０（ｍ，９Ｈ，芳香族陽子）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．５Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｓ，１Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ）、４．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３．５Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’８．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．２６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−６ａ’）、４．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、４．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ４．５Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２．０Ｈｚ，１２．５Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’）、３．９７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３およびＨ−５）、３．７４（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２’およびＣＯＯＭｅ）、３．６６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４およびＨ−３’）、３．５６（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．４４（ｓ，３Ｈ，ＭｅＰｈ）、１．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ６９１．１６６８９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３０Ｈ３６Ｏ１５ＳＮａ＋の要求値６９１．１６６７１）。
【０１４０】
６-アジド-４-Ｏ-（４,６-Ｏ-ベンジリデン-β-Ｄ−ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ−グルコピラノース（１３）。
トリオール１２（０．７２１ｇ、１．０７８ｍモル）を、乾燥ＤＭＦ（７ｍＬ）中に溶解し、ナトリウムアジド（０．２１８ｇ、３．３５ｍモル）を添加した。反応混合物を、６０℃で１８時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＤＣＭで除去し、濾過し、２回トルエンと共蒸発させた。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：アセトン＝１：１）、表題化合物１３を得た（０．４２４ｇ、７８％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．３７〜７．４９（ｍ，５Ｈ，芳香族陽子）、５．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｓ，１Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ）、４．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’８．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１．５Ｈｚ，１３．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ’）、４．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２およびＨ−４’）、４．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２．０Ｈｚ，１３．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’）、３．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５．０Ｈｚ，８．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，９．７Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．６３〜３．７０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−３’，Ｈ−４，Ｈ−６ａ，Ｈ−６ｂ）、３．５７（ｂｄ，１Ｈ，Ｈ−５’）、１．７１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５６２．１６４４５（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ１２Ｎａ＋の要求値５６２．１６４３５）。
【０１４１】
４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（１４）。
アジド１３（０．２８４ｇ、０．５２６ｍモル）を、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）中のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２００ｍｇ）を用い、触媒作用により２４時間かけて水素化した。触媒を濾過により除去し、溶媒を蒸発させ、残留物を乾燥した。次いで、得られたアミンを乾燥アセトニトリル（６ｍＬ）中に溶解し、ｐ-ニトロフェニル４-ペンテニルカーボネート（０．１６ｇ）を添加した。反応の完了後、溶媒を蒸発させ、８０％ＡｃＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解した。混合物を８０℃で２時間撹拌し、次いで濃縮し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１〜６：１）、表題化合物１４を得た（７０ｍｇ、２５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９１（ｍ，１Ｈ，ペンテニルのＨｄ）、５．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０２〜５．１１（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｅ）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．５Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１０（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨａ）、３．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．７４〜３．８３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ａ’およびＨ−６ｂ’）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ４．０Ｈｚ，８．０Ｈｚ）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４およびＨ−５’）、３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ａおよびＨ−２’）、３．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、２．１５（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｃ）、１．７４（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｂ）、１．６６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
【０１４２】
４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（４）。
カルバメート１４（６０．８ｍｇ、０．１１６ｍモル）を、Ｈ２Ｏ  １．３４ｍＬ、ＨＥＰＥＳ緩衝液［０．３９６ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ８］、ＤＴＴ溶液（１００ｍＭ、０．１ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（１０μＬ）の混合液中に溶解した。この混合物にＵＤＰ−Ｇｌｃ（０．１１２ｇ、１．５８当量）、次いでα-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（０．１９８ｍＬ）を添加した。反応物を３７℃で２１時間インキュベートし、次いで超遠心し、ＤＯＷＥＸ（Ｈ＋）で処理し、Ｃ−１８  ＨＰＬＣ上でクロマトグラフィーを行い（水：ＭｅＯＨ：０．１％ＴＦＡ、２５〜３０％ＭｅＯＨで溶出）、表題化合物４を得た（６３．３ｍｇ、８０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．８８（ｍ，１Ｈ，ペンテニルのＨｄ）、５．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．００〜５．０９（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｅ）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ４．０Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’８．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．３７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３およびＨ−４’’）、４．３０（ｔ，１Ｈ，Ｊ４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０８（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨａ）、４．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’）、３．６５〜３．９２（ｍ，１０Ｈ，Ｈ−２’’，Ｈ−３’’，Ｈ−３’，Ｈ−６ａ）、３．５３〜３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５およびＨ−２’）、３．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ７．５Ｈｚ，１０．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．１２（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｃ）、１．７１（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｂ）、１．７０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ７０８．２３２０６（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２７Ｈ４３ＮＯ１９Ｎａ＋の要求値７０８．２３２１５）。
【０１４３】
実施例５
２つの独立の単官能性リガンドを有する先行技術のポリマーＰＰＭの調製
【化９】
2010521526.tif 000011
【０１４４】
上で示したスキーム５は、ラジカル重合を介する単官能性リガンド１および２の取り込みを図示する。化合物１（３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ−ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノシド）は、シガ様毒素を標的にし、化合物２はＳＡＰを標的にする。
【０１４５】
脱気水（１ｍＬ）中のアクリルアミド（１７．１ｍｇ、０．２５ｍモル）、単量体１（８１ｍｇ、０．１ｍモル）および単量体２（５４ｍｇ、０．１ｍモル）の混合溶液に、水（１０μＬ）中の過硫酸ナトリウム（１ｍｇ）の溶液を添加した。溶液をアルゴンでパージし、ＴＥＭＥＤ（１２μＬ）を添加した。混合物を１６時間インキュベートし、次いで透析し、凍結乾燥し、１３ｍｇのＰＰＭを得た。ＮＭＲデータ（図示せず）は各リガンドの取り込みが約４．９％であることを示した。
【０１４６】
実施例６
２つの官能基が共通の原子にリンカーを介して結合された複数のヘテロ二官能性リガンドを有する多価ポリマーＰＰＩの調製
以下に示すスキーム６は、ラジカル重合を介したヘテロ二官能性リガンドの取り込みを図示する。化合物３（２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-カルボキシル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン）はトリサッカライド部分を介してシガ毒素を標的にし、グリセロールの環状ピルビン酸塩を含む部分はＳＡＰを標的にする。
【化１０】
2010521526.tif 000012
【０１４７】
脱気水（１ｍＬ）中のアクリルアミド（３４．２ｍｇ、０．５ｍモル）および単量体３（１０３ｍｇ、０．１ｍモル）の溶液に、水（１０μＬ）中の過硫酸ナトリウム（１ｍｇ）の溶液を添加した。溶液をアルゴンでパージし、ＴＥＭＥＤ（１２μＬ）を添加した。混合物を１６時間インキュベートし、次いで透析し、凍結乾燥し、２４ｍｇのＰＰＩを得た。ＮＭＲデータ（図示せず）は糖単量体の取り込みが約２．６％であることを示した。
【０１４８】
実施例７
２つの官能基が共通の原子またはリンカーを用いずに互いに結合された複数のヘテロ二官能性リガンドを有する多価ポリマーＥＰＩ−１５６の調製
以下に示すスキーム７は、ラジカル重合を介したヘテロ二官能性リガンドの取り込みを図示する。化合物４（４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ−グルコピラノース）はトリサッカライド部分を介してシガ毒素を標的にし、グリセロールの環状ピルビン酸塩を含む部分はＳＡＰを標的にする。
【化１１】
2010521526.tif 000013
【０１４９】
脱気水（１ｍＬ）中のアクリルアミド（３４．２ｍｇ、０．５ｍモル）および単量体４（６６ｍｇ、０．０９６ｍモル）の溶液に、水（１０μＬ）中の過硫酸ナトリウム（１ｍｇ）の溶液を添加した。溶液をアルゴンでパージし、ＴＥＭＥＤ（１２μＬ）を添加した。混合物を１６時間インキュベートし、次いで透析し、凍結乾燥し、２６ｍｇのＥＰＩ−１５６を得た。ＮＭＲデータ（図示せず）は糖単量体の取り込みが約４％であることを示す。
【０１５０】
実施例８
６-Ｏ-（２,５-ジニトラ（ｄｉｎｉｔｒａ）-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノース（２３）の合成
【化１２】
2010521526.tif 000014
【０１５１】
３-Ｏ-アセチル-４,６-Ｏ-ベンジリデン-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１５）。
ＭｅＣＮ（３０ｍＬ）中の乾燥１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（４．６２ｇ、１５．１ｍモル）の溶液に、ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）２（２．２７ｍＬ、１当量）、次いでＣＳＡ（１００ｍｇ）を添加した。３０分後、Ｐｙ−Ａｃ２Ｏ（１：１  ｖ／ｖ、１０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。反応物をＭｅＯＨの添加によりクエンチし、濃縮し、トルエンとともに２回共蒸発させた。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：酢酸エチル（３０〜４０％））、表題生成物を得た（３．１９ｇ、５４％）。
［α］Ｄ＋２３°（ｃ１．２，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．５〜７．３５（ｍ，５Ｈ，芳香族）、５．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｓ，１Ｈ，ＣＨＰｈ）、５．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３３．４Ｈｚ，Ｊ３，４８．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ５．１Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．５Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ｂ，５５．２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、３．７７〜３．７０（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，ＣＨ３）、２．１２６（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、１．７６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１６９．７９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４８（Ｃ＝Ｏ）、１３６．８０（Ｃ芳香族）、１２９．１７（ＣＨ芳香族）、１２８．２８（ＣＨ芳香族）、１２６．１４（ＣＨ芳香族）、１０４．０３（Ｃピルビン酸塩）、１０１．５９（ＣＨベンジリデン）、９８．８４（Ｃ−１）、７７．６８、７７．１５、７３．０７、６８．８４（Ｃ−６）、６２．３４、５２．６９（ＯＣＨ３）、２２．３９（ＣＨ３）、２０．９８（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１９．１３１３６（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ１９Ｈ２４Ｏ９Ｎａ＋の要求値４１９．１３１２５）。計算値Ｃ１９Ｈ２４Ｏ９：Ｃ、５７．８６％；Ｈ、５．６２％。実測値：Ｃ、５７．８４％；Ｈ、５．５９％。
【０１５２】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-ベンジル-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１６）。
乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のベンジリデン誘導体１５（１．６ｇ、４ｍモル）およびモレキュラーシーブス（４Å、１ｇ）の懸濁液に、ＮａＣＮＢＨ３（３．８ｇ、６０ｍモル）、次いでＨＣｌ−エーテル溶液（２Ｍ、約１０ｍＬ）を、気体の発生が停止するまで添加した。混合物を、飽和水性ＮａＨＣＯ３により中和し、セライトを通して濾過し、濃縮し、次いでＤＣＭで除去し、水で洗浄し、濃縮した。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）、表題化合物１６を得た（１．１６ｇ、７３％）。
［α］Ｄ＋１３°（ｃ０．９，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．２８〜７．２５（ｍ，５Ｈ，芳香族）、５．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３〜Ｊ３，４＝３．４Ｈｚ，Ｈ−３）、４．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ１２．２Ｈｚ，ＣＨ２）、４．５８（ｄ，１Ｈ，ＣＨ２）、４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．７９〜３．７５（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６ａ，ＣＨ３）、３．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ３．８Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．４Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．７８（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、２．１１（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．７２（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４２（Ｃ＝Ｏ）、１３７．７４（Ｃ芳香族）、１２８．４３（ＣＨ芳香族）、１２７．７７（ＣＨ芳香族）、１０４．８７（Ｃピルビン酸塩）、９８．０７（Ｃ−１）、７４．８２、７４．５１、７３．６７（ＣＨ２−Ｂｎ）、７０．２２、６９．６２（Ｃ−６）、６９．２３、５２．６８（ＯＣＨ３）、２１．６９（ＣＨ３）、２０．８８（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１７．１１５８０（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ１９Ｈ２２Ｏ９Ｎａ＋の要求値４１７．１１５６０）。計算値Ｃ１９Ｈ２２Ｏ９：Ｃ、５７．５７％；Ｈ、６．１０％。実測値：Ｃ、５７．４２％；Ｈ、６．０１％。
【０１５３】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-６-Ｏ-ベンジル-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１７）
テトラ-Ｏ-アセチル-ガラクトピラノーストリクロロアセトイミダート（３．８３ｇ、７．７７ｍモル）と、グリコシル受容体１６（２．７７ｇ、７ｍモル）とを組み合わせ、乾燥し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中に溶解し、次いでモレキュラーシーブス（４Å、１ｇ）を添加した。３０分後、ＴＭＳＯＴｆ（１００μＬ）を添加した。１時間後、混合物をＰｙでクエンチし、濃縮した。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）、表題化合物１７を得た（２．６６ｇ、５２％）。
［α］Ｄ＋４°（ｃ２．６，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．４０〜７．３０（ｍ，５Ｈ，芳香族）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３２．２Ｈｚ，Ｊ３，４２．７Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’１．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’７．９Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、４．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ１２．２Ｈｚ，Ｂｎ）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｂｎ）、４．４３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１３〜４．０９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、３．８７〜３．７８（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−５’）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．６７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ２．２Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．９Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ３．４Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．１６、２．０８、２．０３、１．９７、１．９２（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、１．７３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３５（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２９（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４２（Ｃ＝Ｏ）、１６９．１１（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０６（Ｃ＝Ｏ）、１３７．８２（Ｃ芳香族）、１２８．５４（ＣＨ芳香族）、１２７．９６（ＣＨ芳香族）、１０５．３８（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０２．１３（Ｃ−１’）、９８．０８（Ｃ−１）、７６．１０、７４．０９、７３．６０（ＣＨ２−Ｐｈ）、７０．８８、７０．６９、７０．４３、６８．９０、６８．８１、６８．３３（Ｃ−６’）、６６．８７、６１．０３（Ｃ−６）、５２．６５（ＯＣＨ３）、２１．２６（ＣＨ３）、２０．８８（ＣＨ３）、２０．６９（ＣＨ３）、２０．６５（ＣＨ３）、２０．６２（ＣＨ３）、２０．５７（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ７４９．２２６６５（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３３Ｈ４２Ｏ１８Ｎａ＋の要求値７４９．２２６３４）。解析計算値Ｃ３３Ｈ４２Ｏ１８：Ｃ、５４．５４％；Ｈ、５．８３％。実測値：Ｃ、５４．２３％；Ｈ、５．７３％。
【０１５４】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１８）。
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物１７（１．６ｇ、２．２ｍモル）の溶液に、１滴の水およびＰｄ（ＯＨ）２（３０ｍｇ）を添加した。Ｈ２大気下での撹拌の２時間後、混合物を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ膜フィルタを通して濾過し、濃縮し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：アセトン＝１：１）、表題化合物１８を得た（１．０ｇ、７１％）。
［α］Ｄ＋８°（ｃ１．２，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３〜Ｊ３，４２．３Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’０．９Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’８．０Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．６４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１４〜４．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、３．９３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ４’，５’０．９Ｈｚ，Ｊ５’，６ａ’〜Ｊ５’，６ｂ’６．７Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．８５〜３．８２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６ａ）、３．７６６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ３．８Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．１６、２．０９、２．０６、２．０３、１．９８（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、１．７４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．３２（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０８（Ｃ＝Ｏ）、１０５．４７（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０２．２５（Ｃ−１’）、９７．７８（Ｃ−１）、７６．４９、７４．４０、７０．９３、７０．８４．７０．３６、６９．０５、６８．９８、６６．８９、６１．８０（Ｃ−６’）、６１．０５（Ｃ−６）、５２．６９（ＯＣＨ３）、２１．２７（ＣＨ３）、２０．８６（ＣＨ３）、２０．６８（ＣＨ３）、２０．６４（ＣＨ３）、２０．５５（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ６５９．１７９２０（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２６Ｈ３６Ｏ１８Ｎａ＋の要求値６５９．１７９３９）。計算値Ｃ２６Ｈ３６Ｏ１８：Ｃ、４９．０６％；Ｈ、５．７０％。実測値：Ｃ、４９．１２％；Ｈ、５．７０％。
【０１５５】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-（４-ニトロフェニル）-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ−グルコピラノシド（１９）。
乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物１８（１ｇ、１．５７ｍモル）およびクロロぎ酸４−ニトロフェニル（３８０ｍｇ、１．２当量）の溶液に、Ｐｙ（約０．２ｍＬ）を添加した。５分後に、ＴＬＣ（ヘキサン：アセトン＝１：１）によって、反応の完了を確認した。水（０．２ｍＬ）を添加し、混合物を濃縮し、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１においてシリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、表題化合物１９を得た（１．２ｇ、９５％）。
［α］Ｄ＋０．７°（ｃ１，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ８．３１〜８．２８（ｍ，２Ｈ，芳香族）、７．４２〜７．３９（ｍ，２Ｈ，芳香族）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３１．６Ｈｚ，Ｊ３，４２．５Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’１．１Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’８．０Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ａ，５２．３Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．７Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ｂ，５５．７Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６’ａ，５６．５Ｈｚ，Ｊ６’ａ，６’ｂ１１．３Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．９３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ４’，５’１．１Ｈｚ，Ｊ５’，６ａ’〜Ｊ５’，６ｂ’６．６Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．７８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４，ＣＨ３）、２．１７、２．１２、２．０７、２．０５、１．９８（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、１．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３５（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２１（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０５（Ｃ＝Ｏ）、１６９．３８（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０３（Ｃ＝Ｏ）、１５５．３３（ＰｈのＣ−Ｏ）、１５２．２８（炭酸塩のＣ＝Ｏ）、１４５．５３（ＰｈのＣ−ＮＯ２）、１２５．３６（ＰｈのＣＨ）、１２１．７１（ＰｈのＣＨ）、１０５．６７（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０１．６６（Ｃ−１’）、９７．６５（Ｃ−１）、７７．２６、７４．２２、７１．００、７０．８２．６９．７１、６８．８９、６７．７６（Ｃ−６）、６６．８５、６６．５７、６１．１８（Ｃ−６’）、５２．７９（ＯＣＨ３）、２１．２０（ＣＨ３）、２０．８４（ＣＨ３）、２０．６９（ＣＨ３）、２０．６７（ＣＨ３）、２０．６４（ＣＨ３）、２０．５４（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ８２４．１８５７３（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３３Ｈ３９ＮＯ２２Ｎａ＋の要求値８２４．１８５５９）。計算値Ｃ３３Ｈ３９ＮＯ２２：Ｃ、４９．４４％；Ｈ、４．９０％；Ｎ、１．７５％。実測値：Ｃ、４９．６４％；Ｈ、４．８８％；Ｎ、２．０７％。
【０１５６】
２-（ペンタ-４-エニルオキシカルバモイル（ｅｎｙｌｏｘｙｃａｒｂａｍｏｙｌ））-エチルアミン（２０）。
乾燥ＤＣＭ（７ｍＬ）中のペンタ-４-エノール-１（０．９７ｇ、１１．２６ｍモル）およびクロロぎ酸４-ニトロフェニル（２．３ｇ）の溶液に、Ｐｙ（０．９２ｍＬ）を徐々に添加した。３０分後、得られた混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１,２-ジアミノエタン（２ｍＬ）の溶液に添加した。２０分後、混合物を塩水で洗浄し、ＤＣＭ画分を濃縮した。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１：１〜０：１）、生成物７を淡黄色シロップとして得た（１．１１ｇ；５７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．８８〜５．７４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．１５〜４．９０（ｍ，３Ｈ，ＮＨ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．０６（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｏ）、３．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．０Ｈｚ，ＣＨ２ＮＨＣＯ）、２．８１（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨ２）、２．１６〜２．０６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、１．７６〜１．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１５６．９０（Ｃ＝Ｏ）、１３７．５９（ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．１２（ＣＨ＝ＣＨ２）、６４．２９（ＣＨ２Ｏ）、４２．８９（ＣＨ２Ｎ）、４１．３４（ＣＨ２Ｎ）、２９．９８（ＣＨ２）、２８．２４（ＣＨ２）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  １７３．１２８４９（［Ｍ＋Ｈ］＋、Ｃ８Ｈ１７Ｎ２Ｏ２＋の要求値１７３．１２８４５）。
【０１５７】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-（２,５-ジニトラ-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-α-Ｄ-グルコピラノース（２１）。
ＤＣＭ中の化合物２０（２５０ｍｇ）の溶液に、化合物１９（８８４ｍｇ、１．１ｍモル）の溶液、次いでＥｔ３Ｎ（３００μＬ）を添加した。沸点より低温に維持しつつ時々加熱して１時間後、ＴＬＣ（ヘキサン：アセトン＝１：１）で反応の完了を確認した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：アセトン＝１：１）、表記化合物２１を得た（５５０ｍｇ、６０％）。
［α］Ｄ＋０．８°（ｃ１，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．８４〜５．７６（ｍ，１Ｈ，−ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３１．４Ｈｚ，Ｊ３，４２．３Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’０．９Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．２３（ブロード  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、５．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’８．２Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０８〜４．９７（ｍ，４Ｈ，Ｈ−３’，ＮＨ，−ＣＨ＝ＣＨ２）、４．６３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．２２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ａ，５２．０Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．６Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．１８〜４．０９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、４．０７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、３．９５（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ４’，５’１．０Ｈｚ，Ｊ５’，６ａ’〜Ｊ５’，６ｂ’＝７．３Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．６４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．３２（ブロード  ｓ，４Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、２．１７、２．１０、２．０８、２．０３、１．９８（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、２．１４〜２．１０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７４〜１．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２８（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．２５（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０１（Ｃ＝Ｏ）、１５７．０３（Ｃ＝Ｏ）、１５６．２７（Ｃ＝Ｏ）、１３７．５３（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．２０（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１０５．６４（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０２．３７（Ｃ−１’）、９７．７１（Ｃ−１）、７７．３２、７３．９３、７０．８８、７０．７９、６９．８４，６８．８９、６７．２１、６６．８７、６４．５０（ＣＨ２）、６４．１２（ＣＨ２）、６１．９９（ＣＨ２）、５２．６９（ＯＣＨ３）、４１．３１（ＣＨ２）、４１．０６（ＣＨ２）、３０．００（ＣＨ２）、２８．１９（ＣＨ２）、２１．１５（ＣＨ３）、２０．８６（ＣＨ３）、２０．７０（ＣＨ３）、２０．６６（ＣＨ３）、２０．５５（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ８５７．２７９２９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３５Ｈ５０Ｎ２Ｏ２１Ｎａ＋の要求値８５７．２７９８３）。計算値Ｃ３５Ｈ５０Ｎ２Ｏ２１：Ｃ、５０．３６％；Ｈ、６．０４％、Ｎ、３．３６％。実測値：Ｃ、５０．３７％；Ｈ、６．１５％；Ｎ、３．３５％。
【０１５８】
６-Ｏ-（２,５-ジニトラ-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-α-Ｄ-グルコピラノース（２２）。
保護誘導体２１（０．５３ｇ、０．６３ｍモル）を、乾燥ＭｅＯＨ（３．５ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＨ中のＮａＯＭｅ（１Ｍ、０．６４ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮し、得られた固体を水（３ｍＬ）中に溶解した。１時間後、メチルエステルの加水分解が完了した。溶液を酢酸で中和し、濃縮し、次のステップで直接用いた。少量の試料を、１％ＡｃＯＨを含有する水−ＭｅＯＨ中、Ｃ−１８担体でのＨＰＬＣクロマトグラフィーにより精製した。
［α］Ｄ＋１９°（ｃ１，Ｈ２Ｏ）。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：５．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．１０〜５．０１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４１〜４．３４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ）、４．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ５．３Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．０８〜４．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，ＯＣＨ２）、３．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．４Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．８３〜３．７４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、３．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’９．９Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．５５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２４（ｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．１２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．６４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１８１．２８（Ｃ＝Ｏ）、１５９．２３（Ｃ＝Ｏ）、１５８．４１（Ｃ＝Ｏ）、１３８．８５（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．２６（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１０７．３６（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０５．１５（Ｃ−１’）、９６．７４（Ｃ−１）、７８．５３、７５．６１、７５．３７、７２．８４、７１．０４、６９．５４、６８．８７、６８．５２、６５．２９（ＣＨ２）、６４．３４（ＣＨ２）、６１．３３（ＣＨ２）、４０．５６（ＣＨ２）、４０．３５（ＣＨ２）、２９．６６（ＣＨ２）、２７．７５（ＣＨ２）、２１．７６（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ６０９．２１３６５（［Ｍ］−）、Ｃ２４Ｈ３７Ｎ２Ｏ１６−の要求値６０９．２１３７６）。計算値Ｃ２４Ｈ３８Ｎ２Ｏ１６：Ｃ、４７．２１％；Ｈ、６．２７％；Ｎ、４．５９％。実測値：Ｃ、４６．６７％；Ｈ、６．２３％；Ｎ、４．５７％。
【０１５９】
６-Ｏ-（２,５-ジニトラ-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース（２３）。
脱保護されたラクトース誘導体２２を、ＨＥＰＥＳ緩衝液［２ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、水（７．１４ｍＬ）］中に溶解後、アルカリホスファターゼ（５４μＬ）およびＵＤＰ−グルコース（０．５８ｇ；１．５当量）を添加した。α-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（０．７ｍＬ）を反応混合物に添加し、それを３７℃でインキュベートした。１８時間後、ＮＭＲで反応が完了したことを確認した。反応混合物を濃縮した。残留物をメタノールで処理し、固体沈殿物を濾過・除去し、メタノールですすいだ。組み合わせたメタノール溶液画分を濃縮し、それに対してシリカゲル上でクロマトグラフィーを行った（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（ＡｃＯＨの４％）＝６：４〜４：５）。生成物を水中に溶解し、０．２μｍの膜を通して濾過し、凍結乾燥し、白色粉末２３を得た（３９４ｍｇ；８０％）。
［α］Ｄ＋６１°（ｃ１，Ｈ２Ｏ）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．１０〜５．０２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’４．１Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．７Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４２〜４．３６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．３１（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、４．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５．６ｂ５．４Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．０７（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．５Ｈｚ，ＯＣＨ２）、４．０４〜４．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−４’’，Ｈ−５）、３．９４〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−３’’）、３．８６〜３．６８（ｍ，７Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−２’’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、３．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’１０．３Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．２４（ｂｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．１４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．７３（ｍ，５Ｈ，ＣＨ２，ＣＨ３）、１．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１７４．５３（Ｃ＝Ｏ）、１５９．８５（Ｃ＝Ｏ）、１５９．００（Ｃ＝Ｏ）、１３９．４４（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．８４（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１０６．７１（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０６．１０（Ｃ−１’’）、１０１．１３（Ｃ−１’）、９７．８２（Ｃ−１）、７９．４４、７７．８９、７６．３８、７６．１０、７３．０１、７１．６２、７０．０６、６９．８７、６９．６０、６９．３０、６５．９０（ＣＨ２）、６４．９９（ＣＨ２）、６１．３９（ＣＨ２）、６１．１２（ＣＨ２）、４１．１５（ＣＨ２）、４０．９６（ＣＨ２）、３０．２６（ＣＨ２）、２８．３６（ＣＨ２）、２１．８５（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ７９５．２６４３８（［Ｍ＋Ｎａ］＋）、Ｃ３０Ｈ４８Ｎ２Ｏ２１Ｎａ＋の要求値７９５．２６４１８。計算値Ｃ３０Ｈ４７Ｎ２Ｏ２１：Ｃ、４５．３４％；Ｈ、５．９６％；Ｎ、３．５３％。実測値：Ｃ、４５．３８％；Ｈ、６．１１％；Ｎ、３．８０％。
【０１６０】
実施例９
化合物２３とアクリルアミド（ＥＰＩ−２９）との共重合体の合成
【化１３】
2010521526.tif 000015
【０１６１】
トリス緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ９；７．３２ｍＬ）中の、化合物２３（４７１ｍｇ；０．６１ｍモル）およびアクリルアミド（２６４ｍｇ；３．７ｍモル）の溶液を、アルゴンでパージし、次いでトリス緩衝液（７４．３μＬ）中の過硫酸アンモニウム（７．４３ｍｇ）の溶液を添加し、アルゴンでパージした。ＴＥＭＥＤ（３７．１５μＬ）を反応混合物に添加し、それを短時間ボルテックスし、次いで室温で一晩放置した。混合物をエタノール（４０ｍＬ）で希釈した。沈殿物を採取し、エタノールで洗浄し、水で除去し、脱イオン水（２Ｌ）に対して４回透析した。ポリマーの透析溶液を０．２μｍの膜を通して濾過し、凍結乾燥し、生成物ＥＰＩ−２９を白色粉末として得た（３９０ｍｇ）。ＮＭＲは、リガンドの取り込みが５モル％であることを示した。
【０１６２】
実施例１０
メタクリレート単量体｛２-｛１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ−ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース｝-６-イルオキシカルボニルアミノ｝-カルバミン酸５-［２-（２-メチル-アクリロイルアミノ）-エチルスルファニル］-ペンチルエステル（２５）の合成
【化１４】
2010521526.tif 000016
【０１６３】
｛２-｛１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノース｝-６-イルオキシカルボニルアミノ｝-エチル］-カルバミン酸５-（２-アミノ-エチルスルファニル）-ペンチルエステル（２４）。
化合物２３（９１ｍｇ、０．１０７ｍモル）を、石英チューブ内の脱気水（３ｍＬ）中に溶解し、アルゴンでパージし、次いでシステアミン塩酸塩（２４４ｍｇ、２．１４ｍモル）を混合溶液に添加し、混合物をアルゴンでパージした。それに対し、ＵＶランプを冷却するための短い中断を有する１５分サイクル（５回）にわたり、アルゴン下、ＵＶ光（Ｒａｙ−Ｐｅｎ）で照射した。反応の生成物を、０．１％ＴＦＡを有する水−メタノールを用い、逆相シリカゲルＣ１８上で精製した。濃縮および凍結乾燥後、生成物２４を白色泡として得た（９４ｍｇ、１００％）。
［δ］Ｄ＋４４０（ｃ１．１２，水）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ５．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’３．９４Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４２〜４．３７（ｍ，３Ｈ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．９Ｈｚ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３４．０Ｈｚ，Ｈ−３）、４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ５．６Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１２〜４．００（ｍ，５Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−４’’，ＯＣＨ２）、３．９６〜３．６８（ｍ，９Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−５’，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−２’’，Ｈ−３’’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、３．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２７〜３．２０（ｍ，６Ｈ，ＮＣＨ２）、２．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．７Ｈｚ，ＳＣＨ２）、２．６１（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．３，ＳＣＨ２）、１．５５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．５４〜１．５２（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）、１．５０〜１．４８（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１７４．２７（Ｃ＝Ｏ）、１５９．８６（Ｃ＝Ｏ）、１５８．９９（Ｃ＝Ｏ）、１０６．５４（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０６．０９（Ｃ−１’’）、１０１．１３（Ｃ−１’）、９７．８８（Ｃ−１）、７９．４３、７７．７１、７６．３９、７６．１６、７３．０３、７１．６３、７０．０７、６９．８８、６９．６２、６９．５９、６９．３５、６６．３４（ＣＨ２）、６５．００（ＣＨ２）、６１．４１（ＣＨ２）、６１．１５（ＣＨ２）、４１．１８（ＣＨ２）、４１．１７（ＣＨ２）、３９．２７（ＣＨ２）、３１．４５（ＣＨ２）、２９．０６（ＣＨ２）、２９．０１（ＣＨ２）、２８．６９（ＣＨ２）、２５．１４（ＣＨ２）、２１．８５（ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  ８７２．２９４６０［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３２Ｈ５５Ｎ３Ｏ２１ＳＮａ＋の要求値８７２．２９４１０。
【０１６４】
｛２-｛１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノース｝-６-イルオキシカルボニルアミノ｝-カルバミン酸５-［２-（２-メチル-アクリロイルアミノ）-エチルスルファニル］-ペンチルエステル（２５）。
システアミン付加体２４（３８ｍｇ、０．４４ｍモル）を、水（３ｍＬ）中に溶解し、Ｎ-メタクリルオキシスクシンイミド（３０ｍｇ、０．１６ｍモル）、次いで乾燥重炭酸ナトリウムをｐＨ８に達するまで添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで５Ｍ酢酸で酸化した。１％酢酸を有する水−メタノールを用いて逆相シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、凍結乾燥後、純粋生成物２５を白色泡として得た（２８ｍｇ、６９％）。
［α］Ｄ＋４３．７°（ｃ１．２４，水）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ５．７１ｍ（ｓ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ２）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．８Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４６（ｓ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ２）、４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’’３．９Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．７Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４２〜４．３６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．３０〜４．２１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−６ｂ）、４．１０〜４．００（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−４’’）、３．９４〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−３’’）、３．８６〜３．７６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−２’’，Ｈ−６ａ’’）、３．７４〜３．６７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−６ｂ’’）、３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’３’７．９Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．４７（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，ＮＣＨ２）、３．２４（ｂｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．７Ｈｚ，ＳＣＨ２）、２．６１（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．１Ｈｚ，ＳＣＨ２）、１．９３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．６６〜１．５８（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）、１．５０〜１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１７４．５９（Ｃ＝Ｏ）、１５９．７８（Ｃ＝Ｏ）、１５８．９１（Ｃ＝Ｏ）、１３９．８８（Ｈ２Ｃ＝ＣＣＨ３）、１２１．９６（Ｈ２Ｃ＝ＣＣＨ３）、１０６．７６（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０６．６（Ｃ−１’’）、１０１．０８（Ｃ−１’）、９７．７４（Ｃ−１）、７９．４２、７７．８４、７６．３２、７６．０５、７２．９７、７１．５７、７０．０１、６９．８２、６９．５８、６９．５４，６９．２２、６６．３３（ＣＨ２）、６６．３２（ＣＨ２）、６４．９５（ＣＨ２）、６１．３９（ＣＨ２）、６１．３４（ＣＨ２）、６１．１２（ＣＨ２）、６１．０７（ＣＨ２）、４１．１１（ＣＨ２）、３９．８２（ＣＨ２）、３１．８５（ＣＨ２）、３１．１６（ＣＨ２）、２９．１７（ＣＨ２）、２８．６２（ＣＨ２）、２５．１５（ＣＨ２）、２１．８５（ＣＨ３）、１８．５３、１８．５１（ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  ９１６．３２２６１［Ｍ−Ｈ］、Ｃ３６Ｈ５８Ｎ３Ｏ２２Ｓの要求値９１６．３２３８２。
【０１６５】
実施例１１
化合物２５とＨＰＭＡ（ＨＰＭＡ−Ｂ２）との共重合体の合成
【化１５】
2010521526.tif 000017
【０１６６】
化合物２５（２７ｍｇ、０．０３ｍモル）およびＨＰＭＡ単量体（７２ｍｇ、０．５ｍモル）を、脱気した酢酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ４）中に溶解した。溶液に対して真空下で超音波処理し、次いでアルゴンで飽和させた。過硫酸アンモニウムの溶液（酢酸塩緩衝液２０μＬ中２ｍｇ）を混合物に添加し、それに対して真空下で超音波処理し、アルゴンで飽和させた。最後に、システアミン溶液（酢酸塩緩衝液２８μＬ中０．１４ｍｇ）を反応混合物に添加し、数秒間ボルテックス後、それを５０℃で一晩インキュベートした。２１時間後、溶液をアセトン（８ｍＬ）で処理した。沈殿物を分離し、次いで水中に溶解し、脱イオン水に対して透析し、次いで０．４５μｍの膜を通して濾過し、凍結乾燥し、生成物を白色粉末（２５ｍｇ）として得た。Ｄ２Ｏ中での１Ｈ-ＮＭＲは、リガンドのＨＰＭＡ−Ｂ２ポリマーへの取り込みが５モル％であることを示した。
【０１６７】
実施例１２
【化１６】
2010521526.tif 000018
【０１６８】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-ベンジル-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ−ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース（２６）。
酢酸塩１７（０．９７３ｇ；１．３４ｍモル）を、乾燥メタノール（２．５ｍＬ）中に溶解し、０．５Ｍ  ＮａＯＭｅ（２．８ｍＬ）を添加した。室温で１時間後、混合物をＤｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂で処理し、濾過し、濃縮し、白色泡を得た。生成物（０．７６４ｇ）を、水（１５ｍＬ）中に溶解し、ＨＥＰＥＳ緩衝液（４．５８ｍＬ）、次いでＤＴＴ溶液（１．１４ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（１１４μＬ）を添加した。次いで、ＵＤＰ−Ｇｌｃ（１．２３ｇ）、次いで融合酵素（１．５ｍＬ）を混合物に添加した。反応物を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、混合物を水で希釈し、Ｄｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂で酸化し、濾過し、上清を濃縮した。乾燥メタノール（２５ｍＬ）中の残留物の懸濁液に塩化アセチル（０．２５ｍＬ）を添加し、混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いでピリジンで中和した。固体残留物を濾過・除去し、メタノールですすぎ、濾過物を濃縮し、アセチル化した（ピリジン１０ｍＬ、無水酢酸１０ｍＬ、４８時間）。数摘のメタノールを混合物に添加し、過剰な試薬をクエンチし、混合物を濃縮し、トルエンと共蒸発させた。粗生成物をヘキサン−アセトン（７：３〜２：１）を用いてシリカゲルカラム上で精製し、純粋表題生成物を白色泡として得た（０．８１４ｇ；６０％）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．３９〜７．２９（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．３Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４＝２．６Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．１９、（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’３．７Ｈｚ，Ｈ−２’’）、５．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｊ２’，３’１１．８Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．９Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１２．２Ｈｚ，ＣＨ２）、４．５４〜４．４９（ｍ，３Ｈ，Ｊ５’’，６ａ’’８．４Ｈｚ，Ｈ−１’，Ｈ−５’’，ＣＨ２）、４．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５’，６’６．５Ｈｚ，Ｊ６ａ’，６ｂ’１１．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ａ’’，６ｂ’’１０．９Ｈｚ，Ｈ−６ａ’’）、４．１１〜４．０６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ｂ’’）、４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．８９〜３．８３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５’）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５’）、３．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ６ａ）、３．６３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．９２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  １０３７．３１１２２［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４５Ｈ５８Ｏ２６Ｎａ＋の要求値１０３７．３１０８５。
【０１６９】
３-Ｏ-アセチル-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース（２７）。
化合物２６（０．８０４ｇ；０．７９ｍモル）を、メタノール（５ｍＬ）中に溶解し、炭素に担持された１０％パラジウムの存在下で水素化した。２時間後、混合物をメタノールで希釈した。触媒を濾過・除去し、メタノールですすいだ。濾過物を濃縮し、純粋生成物を白色固体として得た（０．７３ｇ；１００％）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ５．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．１Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４２．４Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．２２〜５．１７（ｍ，２Ｈ，Ｊ１’，２’７．９Ｈｚ，Ｊ２’，３’１０．８Ｈｚ，Ｊ１’’，２’’３．８Ｈｚ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）、５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．８Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．６７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’’）、４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５’６ａ’６．５Ｈｚ，Ｊ６ａ’，６ｂ’１１．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ’）、４．３５〜４．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１９〜４．０５（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、４．８９〜４．７８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’）、４．７７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、４．６８〜４．６２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  ９４７．２６３４６［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３８Ｈ５２Ｏ２６Ｎａ＋要求値９４７．２６３９０。
【０１７０】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｏ-（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（２８）。
脱ベンジル化生成物２７（０．７１４ｇ；０．７７２ｍモル）およびクロロぎ酸ｐ-ニトロフェニル（０．２４ｍｇ；１．１６ｍモル）を、乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解し、ピリジン（０．１９ｍＬ；２．３ｍモル）を混合物に滴下添加した。１時間後、混合物をＤＣＭで希釈し、塩水で洗浄し、濃縮し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ヘキサン−アセトン＝２：１〜１：１）、純粋生成物２８を白色泡として得た（８２ｍｇ；９７％）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ８．３０（ｄ，２Ｈ，Ｊ３．１Ｈｚ，Ｃ６Ｈ４）、７．４０（ｄ，２Ｈ，Ｃ６Ｈ４）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．３Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．２Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．５４（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４２．１Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．２３〜５．１８（ｍ，２Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｊ２’，３’１０．７Ｈｚ，Ｊ１’’，２’’３．７Ｈｚ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）、５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．８Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．７２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５６〜４．５２（ｍ，２Ｈ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．３Ｈｚ，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．４２〜４．３４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ａ’’）、４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ８．４Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１２〜４．０６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ｂ’’）、３．８４〜３．７９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５’）、３．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  １１１２．２７０１５［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４５Ｈ５５ＮＯ３０Ｎａ＋の要求値１１１２．２７０１１。
【０１７１】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-６-Ｏ-［３-（２-メタクリロイルアミノ）プロピル］カルバモイル-α-Ｄ-グルコピラノース（２９）。
化合物２８（０．３９ｇ；０．３６ｍモル）およびＮ-（３-アミノプロピル）メタクリルアミノ塩酸塩（８３ｍｇ；０．４７ｍモル）を乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）中に溶解し、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を添加した。混合物を、ＴＬＣが反応の完了を示すまで室温で４時間撹拌した。混合物を濃縮し、それに対してヘキサン−アセトン＝１１：９を溶媒として、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、表題化合物２９を白色泡として得た（０．３７７ｇ；９６％）。少量の試料を水−メタノール中でＨＰＬＣ  Ｃ−８カラムを用いてさらに精製した（生成物を５０％メタノール中に負荷し、６０％メタノールでカラムから溶出した）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ６．５１〜６．４７（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．７３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．３Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．２Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４２．１Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｊ３’’，４’’３．３Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、５．３１〜５．２９（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、５．２２〜５．１８（ｍ，２Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｊ２’，３’１０．７Ｈｚ，Ｊ１’’，２’’３．７Ｈｚ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）、５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．９Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５６〜４．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’’）、４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５’，６ａ’６．３Ｈｚ，Ｊ６ａ’，６ｂ’１１．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ’）、４．３３〜４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ２．３Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．８Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．１８〜４．１４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−６ａ’’）、４．１２〜４．０７（ｍ，２Ｈ，Ｊ５’，６ｂ’６．９Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ｂ’’）、４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．９４〜３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５’）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．７２〜３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．４１〜３．３２（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２）、３．２８〜３．２０（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（２ｓ，６Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．９７（ｂｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７２〜１．６５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  １１１５．３５４０９［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４６Ｈ６４Ｎ２Ｏ２８Ｎａ＋の要求値１１１５．３５３７８。
【０１７２】
４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-６-Ｏ-［３-（２-メタクリロイルアミノ）プロピル］カルバモイル-α-Ｄ-グルコピラノース（３０）。
オクタ酢酸塩２９（９０ｍｇ；０．０８３ｍモル）を、乾燥メタノール（３ｍＬ）中に溶解し、１Ｍナトリウムメトキシド（１６５μＬ；２当量）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をＤ２Ｏ中に溶解した。溶液をＣＯ２で中和し、凍結乾燥し、生成物３０を白色泡として得た（６０ｍｇ、９８％）。
ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ５．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４４（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’３．９Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．７Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４１〜４．３５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．２５〜４．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、４．１８〜４．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．０５〜４．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−４’’）、３．９５〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−３’’）、３．８５〜３．６８（ｍ，７Ｈ，Ｊ２’，３’１０．２Ｈｚ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−６ａ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−２’’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、３．５９（ｄｄ，Ｈ−２’）、３．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．９Ｈｚ，ＮＣＨ２）、３．１９（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．７Ｈｚ，ＮＣＨ２）、１．９３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７８〜１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．６３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ７８７．２３５８６（［Ｍ−Ｈ＋２Ｎａ］＋）；計算値Ｃ２９Ｈ４５Ｎ２Ｏ２０Ｎａ２：７８７．２３５５６。
【０１７３】
実施例１３
化合物３０とＨＰＭＡ（ＨＰＭＡ−Ｂ１）との共重合体の合成
【化１７】
2010521526.tif 000019
【０１７４】
単量体３０（３９ｍｇ、０．０４ｍモル）およびＨＰＭＡ単量体（１０１ｍｇ；０．７ｍモル）を、脱気水（１ｍＬ）中に溶解し、アルゴンでパージした。過硫酸アンモニウム溶液（脱気水１０μＬ中１ｍｇ）、次いでＴＥＭＥＤ（１μＬ）を混合物に添加した。反応混合物を５０℃で一晩インキュベートした。翌日、それを脱イオン水に対して透析し、水を５回交換し、次いでＭｉｌｉｐｏｒｅ膜（０．４５μｍ）を通して濾過し、凍結乾燥し、ポリマーを白色泡（８５ｍｇ）として得た。
【０１７５】
実施例１４
ヘテロ二官能性ポリマーＰＰＭ、ＰＰＩおよびＥＰＩ−１５６による、シガ毒素１（Ｓｔｘ１）の阻害
固相競合的阻害アッセイにおいて、ＰＰＭ、ＰＰＩおよびＥＰＩ−１５６の、シガ毒素１型（Ｓｔｘ１）に対する阻害活性について、内因性タンパク質である血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）の存在下または不在下でアッセイした（図６および７を参照）。ポリスチレン製ＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）、ＮＵＮＣ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）を、リン酸塩緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）中、１６-メルカプトヘキサデカニル配糖体（Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、１９９８年  Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．３０７（３−４）：３６１−３６９頁）としての１０μｇ／Ｍｌの合成Ｐｋ−トリサッカライドでコートし、４℃で一晩インキュベートした。すべてのインキュベーション容量は１００μＬ／ウェルであった。０．０５％Ｔｗｅｅｎおよび２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２（ＨＢＳＴＣａ）を補充したＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび０．８５％ＮａＣＬ、ｐＨ７．２）を、各インキュベーション間での３回のプレートの洗浄に用いた。コーティングステップ後、ＨＢＳＴＣａに０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充し、すべてのインキュベーションで希釈剤として用いた。阻害剤を、シガ毒素１型（４ｎｇ／ｍＬ）および血清アミロイドＰ成分（２０ｍｇ／ｍＬ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）またはＨＢＳＴＣａ＋０．１％ＢＳＡ（ＳＡＰ陰性の形式用）と予備混合し、次いで室温で２時間のインキュベーションの間に混合物をウェルに添加した。毒素を、抗Ｓｔｘ１ハイブリドーマ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １７９４）由来のマウス腹水の１／１０００の希釈物、次いでヤギ抗マウスＩｇＧ西洋わさびペルオキシダーゼ二次抗体（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）の１／２０００の希釈物を用いて検出した。テトラメチルベンジジン（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）で１０分間発色させ、反応を１Ｍリン酸で停止させ、吸光度を４５０ｎｍの波長で測定した。
【０１７６】
阻害試験では、ポリマー足場上での２つの異なる官能基の予備配置が極めて重要であることが示された。「予備組織化された（ｐｒｅ−ｏｒｇａｎｉｚｅｄ）」ポリマーＰＰＩが、ＳＡＰの存在下で、Ｓｔｘ１に対する阻害活性において大幅な増大（６０００倍）を示した。一方、「ランダム」ポリマーＰＰＭでは、結合用官能基の取り込み度合いが実質的に高まるにもかかわらず、ＳＡＰ依存性の活性がほとんど欠如している（図８および表１を参照）。この結果は、向かい合う複合体の誘導が活性の促進にとっての必要条件である一方、（例えばポリマーＰＰＭにより）単にＳｔｘ１の直近にもたらされるＳＡＰが阻害に影響を及ぼすには不十分であることを示唆する。
【０１７７】
【表１】
2010521526.tif 000020
【０１７８】
リガンド４が結合しているポリマーの種類により、ＳＡＰ依存性の阻害力がさらに改善されることを示す。したがって、ポリマーＥＰＩ−１５６は、優れた阻害活性を示したが（ＩＣ５０（ＳＡＰを伴う場合）＝２〜４μｇ／Ｌ）、活性がＰｋ−トリサッカライド単位に基づいて計算される場合、すべての予め報告されたＰｋを有するポリマーより優れるだけでなく、デンドリマー型Ｓｔｘ拮抗剤であるＰｋ−ＳＴＡＲＦＩＳＨの阻害力よりも優れる（Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、２０００年、Ｎａｔｕｒｅ  ４０３：６６９−６７２頁）。阻害へのＳＡＰの関与の必要性は、ＳＡＰの不在下ではＥＰＩ−１５６における活性がほとんど検出されなかったという事実により強調される。
【０１７９】
実施例１５
ヘテロ二官能性ポリマーＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２によるシガ毒素１（Ｓｔｘ１）の阻害
上記実施例１４と同様に、固相拮抗的阻害アッセイにおいて、ＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２のシガ毒素１型（Ｓｔｘ１）に対する阻害活性について、内因性タンパク質である血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）の存在下または不在下でアッセイした。これらの阻害試験によると、ポリマー足場上での２つの異なる官能基の予備配置および予備配置の最適化が極めて重要であることが再び示された。ＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２は、ヘテロ二官能性リガンドを高分子骨格に結合させるリンカーの長さが異なる。図９に示されるように、ＨＰＭＡ−Ｂ２はＨＰＭＡ−Ｂ１（１２．８μｇ／ｍＬ）よりも大幅に小さいＩＣ５０値（０．０６５μｇ／ｍＬ）を有し、これはポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの予備配置の最適化が重要であることを示す。
【０１８０】
実施例１６
Ｖｅｒｏ細胞の細胞毒性アッセイにおけるＥＰＩ−１５６のインビトロでの有効性
ＢＡＩＴ２、ＥＰＩ−１５６およびＥＰＩ−１５３をそれぞれ、二重蒸留した脱イオン水中に溶解した。精製したＳｔｘ１およびＳｔｘ２のストック溶液のそれぞれを、未補充ＭＥＭ中で、４００ｎｇ／ｍｌおよび２ｍｇ／ｍｌの濃度に調製した。各ポリマー溶液の未補充ＭＥＭ中の連続希釈物を、９６ウェルマイクロタイタープレートを用いて調製した。次いで、Ｓｔｘ１またはＳｔｘ２ストック溶液５ｍＬを、希釈プレート内の適切な列の各ウェル（８０ｍＬの最終容量）に添加した。希釈プレートの各ウェル内の溶液を完全に混合し、マイクロタイタープレートを３７℃で１時間インキュベート後、各ウェルから２０ｍＬを、コンフルエントなＶｅｒｏ細胞単層およびウシ胎仔血清を補充したＭＥＭ２００ｍＬを有する９６ウェルマイクロタイタープレートの対応するウェルに移した。Ｖｅｒｏ細胞のマイクロタイタープレートを、５％ＣＯ２／９５％大気の雰囲気下、３７℃のインキュベーター内でさらに４８時間インキュベートした。次いで、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  Ｇ．Ｄ．ら、１９９１年  Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６４：１１６０−１１６７頁に記載のように、Ｖｅｒｏ細胞単層をメタノールで固定し、細胞毒性を測定した。
【０１８１】
Ｖｅｒｏ細胞毒性アッセイの結果を図１０に示す。ヘテロ二官能性ＢＡＩＴ２は、ＳＡＰの存在下で十価リガンドＤＡＩＳＹ−１／８と同等の活性を示す。さらに、高分子足場上に存在する場合、ＢＡＩＴ２の活性が少なくとも３倍に増幅され、ＥＰＩ−１５６にとって前例のないレベルの１ｎｇ／ｍＬに達した。ヨウ素１２５での放射性標識はその活性を実質的に変化させなかった。ラクトース類似体ＥＰＩ−１５３は、３ｍｇ／ｍＬでＶｅｒｏ細胞の保護を全く示さなかった（データは示さず）。
【０１８２】
実施例１７
ＨｕＳＡＰトランスジェニックマウスにおける、ＥＰＩ−１５６のインビボでの有効性
先行技術である化合物ＢＡＩＴ２（Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、２００８年、Ａｎｇｅｗ．ＣｈｅｍｉｅＩｎｔｌ．Ｅｄ．４７：６７２−６７６頁）およびそのポリマー類似体（ＥＰＩ−１５６）について、インビボで試験した。不活性なラクトース二糖配列を有することからＳｔｘ１と相互作用しないポリマーＥＰＩ−１５３（図１１を参照）を、ネガティブコントロールとして用いた。一方、ＤＡＩＳＹ−１／８、十価  Ｐｋ−デンドリマーがシガ様毒素、Ｓｔｘ１およびＳｔｘ２に対する保護をインビボで示すことが以前に報告されているので（Ｍｕｌｖｅｙ  Ｇ．Ｌ．、２００３年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃ．Ｄｉｓ．１８７：６４０−６４９頁）、それをポジティブコントロールとして用いた。
【０１８３】
マウス中毒モデル（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  Ｇ．Ｄ．ら、２００６年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１９３：１２２０−１１２４頁）では、Ｓｔｘ１や先行技術および本発明の様々な阻害ポリマーの投与後にマウスの生存が測定される。ＨｕＳＡＰマウスに、Ｓｔｘ１（２０ｎｇ／ｇ）を、尾静脈を介して静脈内注射した。それらにおけるシガトキセミアの徴候について、４時間ごとに監視した。シガトキセミアの徴候を示すマウスを安楽死させた。
【０１８４】
図１２で見られるように、シリーズ１は、０．５ｍｇ／マウスでのＤＡＩＳＹ１／８の投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ２は、５０μｇ／マウスでのＥＰＩ−１５６の投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ３は、０．６ｍｇ／マウスでのＥＰＩ−１５３および６００μｇ／マウスでのＨｕＳＡＰの投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ４は、５０μｇ／マウスでのＥＰＩ−１５６および６００μｇ／マウスでのＨｕＳＡＰの投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ５は、４ｍｇ／マウスでのＢＡＩＴ２の投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。
【０１８５】
すべてのＨｕＳＡＰトランスジェニックマウスは、わずか５０μｇ／マウスでのＥＰＩ−１５６と同時投与される場合、致死性の２０ｎｇ／ｇのＳｔｘ１の注射から救われた。すべての他の試験化合物の中でもＤＡＩＳＹ−１／８単独はマウス数匹における徴候の発現を遅延させることによっていくらか有効であり、そこでは１０倍多い量のＤＡＩＳＹ−１／８が必要であることが示された。一価リガンドＢＡＩＴ２は５０倍高い濃度であっても効果を示さなかった。
【０１８６】
実施例１８
標識ＥＰＩ−１５６の器官局在化
これらの試験においては、ＥＰＩ−１５６をチロシン残基の付加により修飾し、ヨード化を可能にした（図１１を参照）。放射性標識ＥＰＩ−１５６（ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ）およびシガ毒素（Ｓｔｘ１−１２５Ｉ）の器官局在化を、ヒトＳＡＰを発現するトランスジェニックマウス（ＨｕＳＡＰマウス）への静脈内注射後に測定した（Ｚｈａｏ  Ｘ．ら、１９９２年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１１：７３６−７３８頁）。ＨｕＳＡＰマウスは、９００ｎｇのＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ（１．１４×１０７ＣＰＭ／μｇ）を静脈内の尾静脈注射を介して受け、それらを４時間後に安楽死させた。安楽死後、異なる器官内で放射活性を計数した。
【０１８７】
図１３Ａはこのアッセイからの結果を示す。黒バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５ＩおよびＨｕＳＡＰの混合物の器官分布を示す。一方、白バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ、ＨｕＳＡＰおよびＳｔｘ１の混合物の器官分布を示す。図１３Ａからは、ヘテロ二官能性高分子リガンドが肝臓に誘導されることが認められうる。事実、ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉの９５％超は、特に肝臓内に局在化された。Ｓｔｘ１の同時注射による、４時間後に肝臓内に見出されるポリマーの増加量はごくわずかであった。
【０１８８】
図１３Ｂでは、マウスは、２０ｎｇ／ｇのＳｔｘ１−１２５Ｉ（４．８１×１０６ＣＰＭ／μｇ）を、尾静脈注射を介して受けた。黒バーは、Ｓｔｘ１およびＨｕＳＡＰの混合物の器官分布を示す。一方、白バーは、Ｓｔｘ１、ＨｕＳＡＰおよび非標識ＥＰＩ−１５６の混合物の器官分布を示す。図１３Ｂから、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの不在下では毒素Ｓｔｘ１の腎臓および肺への誘導が認められたが、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの存在下では毒素Ｓｔｘ１が、腎臓および肺に誘導されずに肝臓に誘導されることが認められうる。
【０１８９】
１２５Ｉ−標識Ｓｔｘ１がヒトＨｕＳＡＰにおけるトランスジェニックマウスに注射される場合、１０％の放射活性が肝臓内で見出された（図１３Ｂを参照）。毒素の大部分が、肺および腎臓だけでなく、脳（５％）にも局在化された。ヘテロ二官能性ポリマーＥＰＩ−１５６の同時注射により、これらの重要器官由来の毒素のほぼ７０％が肝臓に移された（図１３Ｂを参照）。
【０１９０】
ヘテロ二官能性ポリマーＥＰＩ−１５６が注射による、毒素の器官分布を変更する能力は、マウス中毒モデルにおいてＥＰＩ−１５６で処理されたマウスの生存率が１００％であることを説明しうる（図１２を参照）。
【図１】
2010521526.tif 000023
【図２】
2010521526.tif 000024
【図３】
2010521526.tif 000025
【図４】
2010521526.tif 000026
【図５Ａ】
2010521526.tif 000027
【図５Ｂ】
2010521526.tif 000028
【図６Ａ】
2010521526.tif 000029
【図６Ｂ】
2010521526.tif 000030
【図７】
2010521526.tif 000031
【図８】
2010521526.tif 000032
【図９】
2010521526.tif 000033
【図１０】
2010521526.tif 000034
【図１１】
2010521526.tif 000035
【図１２】
2010521526.tif 000036
【図１３Ａ】
2010521526.tif 000037
【図１３Ｂ】
2010521526.tif 000038
【手続補正書】
【提出日】平成21年11月26日(2009.11.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】明細書
【発明の名称】多価ヘテロ二官能性ポリマーおよびその使用方法
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００７年３月２３日に出願された米国仮特許出願第６０／８９６，８７８号明細書の優先権を主張するものであり、その全てが本明細書中に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、新規の多価ポリマーを有するヘテロ二官能性リガンド、それを合成するための方法、その組成物、ならびにその治療および非治療用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
異なる生物学的要素の間の特異的相互作用は多数の生物学的プロセスの中核を成し、それは限定されないが、細胞間コミュニケーション、環境に対する細胞応答、細胞分化、細胞増殖、細胞遊走、シグナル伝達、代謝プロセス、アポトーシスおよび免疫応答を含む。多くの場合、これらの重要なプロセスおよび応答は、特異的リガンドと特異的標的との相互作用を介して媒介される。これらのリガンドおよび標的は、限定はされないが、タンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、炭水化物、脂質、および細胞を含みうる。
【０００４】
様々なリガンドとそれらの標的との間の相互作用の重要性は、これらの相互作用の機能停止またはこれらの相互作用の調節の機能停止により引き起こされる多数の障害により強調される。これらの特異的相互作用についてのより深い理解が得られると、治療および非治療用途の双方のための、それらの制御および利用が可能となると考えられる。
【０００５】
最近、多数の研究において、様々な生物学的要素（biological entiies）と相互作用し、かつ感染性および非感染性疾患の治療を支援することが可能な新規クラスのリガンドの設計および合成が注目されている。この新規クラスのリガンドは、ホモおよびヘテロ二官能性リガンドを含む。これらのリガンドは、標的化された生体細胞または分子に結合して三元複合体を形成し、標的化された細胞または分子の除去が促進されるように、内因性タンパク質または抗体にも結合する。かかる二官能性リガンドは、細菌およびウイルス粒子やウイルス感染細胞だけでなく、不要な細胞、タンパク質、抗体、および種々の消耗性疾患に関与する他の生体分子を除去するための新規のアプローチを提供する。この超分子のタンパク質凝集体は、治療および非治療用途の双方のための刺激的な機会を提供する。
【０００６】
これまで既知の二官能性リガンドは、典型的にはそれらの各標的に結合するための少なくとも２つの官能基を有する。ホモ二官能性リガンドでは、２つの結合用官能基は類似または同一であり、互いに直接にまたはリンカーを介して結合され、かつ同様の標的の凝集を促進する（Ｐｅｐｙｓ、Ｍ．Ｂ．国際公開第０３／０１３５０８号パンフレット；Ｂｕｎｄｌｅら、米国特許出願公開第２００７／００４２９３６号明細書）。
【０００７】
ヘテロ二官能性リガンドにおいては、２つの結合用官能基は互いに異なっており、互いに直接にまたはリンカーを介して結合され、かつ異なる標的の特異的な凝集を促進する（Ｓｈｏｋａｔ  Ｋ．Ｍ．およびＳｃｈｕｌｔｚ  Ｐ．Ｇ．、１９９１年  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：１８６１−１８６２頁；Ｐｅｐｙｓ  Ｍ．Ｂ．、国際公開第０３／０１３５０８号パンフレット；Ｍｕｌｌｉｓ  Ｋ．Ｂ．、米国特許出願第１０／１７８，０４６号明細書および米国特許出願第１０／６９６，７７０号明細書；Ｌｉｕ  Ｊ．ら、２００５年  Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．１２７：２０４４−２０４５頁）。Ｌｉｕらは、コレラ毒素および先天性免疫系の内因性タンパク質であるヒト血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）の双方に結合するヘテロ二官能性リガンドを開示している。ＳＡＰは、肝臓を介する三元複合体の循環からの除去を誘導する。コレラ毒素の阻害は、三元複合体中ではヘテロ二官能性リガンドおよび毒素のみの二元複合体中に見られる場合よりも、３桁大きいことが見出された。Ｓｏｌｏｍｏｎらによる報告によると（２００５年  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ７：４３６９−４３７２頁）、ヘテロ二官能性リガンドがＳＡＰとの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）シガ様毒素の特異的凝集を媒介する場合、三元複合体の形成に起因する阻害の増大は、ヘテロ二官能性リガンド中でも見られる。
【０００８】
しかしながら、現在既知のホモおよびヘテロ二官能性リガンドは、多数の重大な欠点や制限を有する。第１に、現在既知のリガンドの多数は、投与後速やかに分解される。この急速な分解は、これらのリガンドの潜在的な治療効果を著しく損なう。第２に、ホモおよびヘテロ二官能性リガンドの多くの結合は、エントロピーコストによって損なわれうる。多くの場合、現在既知の二官能性リガンドは、標的に結合していない状態において相当高レベルの柔軟性を有し、かつ標的へ結合すると、この柔軟性が大幅に低下する。柔軟性の低下はエネルギー的に好ましくなく、結合効率の大きな妨げとなりうる。第３に、ヘテロ二官能性リガンドは、結合価を利用することがない。現在、多くの試験によって、結合価が、重要な生物学的プロセスでの特異的相互作用の重要な特徴でありうることが示されている。事実、現在では多数の重要な生物学的プロセスは、複数のリガンドと標的受容体の多重結合部位との同時相互作用に起因すると考えられている。第４に、三元複合体を形成するためのヘテロ二官能性リガンドの使用は、標的の一方の濃度に応じて制限されうる。これは治療用途におけるこれらのリガンドの使用を損なう。第５に、リガンド上の結合用官能基は、標的に対して強力な結合を示す官能基のみに制限されうる。
【０００９】
最近では、これらの課題の一部を解決するために、様々なリガンドが高分子鎖上に共有結合されている。２つの異なる結合用官能基が高分子鎖上の様々な位置に個別かつ独立に固定される高分子リガンドの例が公知である（図１を参照）（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  Ｖ．Ｍ．ら、２００６年、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２７：３６６３−３６７４頁；Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  Ｖ．Ｍ．ら、国際公開第２００７／０１６５５６号パンフレット；Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ、Ｇ．ら、国際公開第９８／４６２７０号パンフレット；Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇら、米国特許第２００３／０１２５２６２号明細書）。しかし、これらのポリマーもまた、多数の深刻な欠点や制限を有する。まず第１に、高分子リガンドの各受容体に対する結合力は、他の受容体が存在するか否かによって影響を受けない。現在既知の高分子リガンドが２つの異なる生物学的受容体を互いに引き付けうる一方、２つの異なるリガンドをポリマー上に独立に固定することにより、リガンドは確定した超分子複合体の形成に起因してエントロピーの節約を利用することができない。これは、これらのポリマーの治療的および非治療的有用性にとっての大きな妨げとなりうる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、効率的使用により三元複合体のインビトロおよびインビボでの形成を可能にし、一方で上記課題の一部を解決する多価ポリマーを必要としている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の広範な態様によると、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型と、に結合するための、多価ヘテロ二官能性ポリマーが提供される。ここでポリマーは、それに結合される複数の予備配置されたヘテロ二官能性リガンドを含む。ヘテロ二官能性リガンドは、生物学的標的に結合可能な第１の官能基およびエフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を含む。ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマーと生物学的標的とエフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、ポリマーに予備配置される。第１の官能基および第２の官能基は、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。生物学的標的は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。エフェクター鋳型は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。ポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択されうる。一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は共通の原子に結合され、ここで共通の原子は直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。他の実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は直接にまたは任意のリンカーを介して互いに結合され、かつ第１の官能基または第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。
【００１２】
本発明の別の広範な態様によると、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、下記式で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーが提供される。
【化１】
2010521526.tif 000039
【００１３】
式中、「Ｘ」は多価ポリマーの高分子骨格を示し；「ＭＯ」はヘテロ二官能性リガンドを示す。ここで「Ｍ」は、生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し；「Ｏ」は、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示す。「Ｙ」は、「ＭＯ」を、高分子骨格またはその内部に結合させる任意のリンカーを示し；「ｎ」は、意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドを、ポリマー内に存在させるように選択される整数を示す。
【００１４】
一実施形態では、「ｎ」は、ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、生物学的標的およびエフェクター鋳型上の受容体の数（いずれかより大きい方）と同じかまたはそれより大きいように選択される。
【００１５】
ポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択されうる。
【００１６】
一実施形態では、「Ｍ」は、高分子骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、「Ｍ」は、高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される。一実施形態では、「Ｏ」は、高分子骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、「Ｏ」は、高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される。一実施形態では、「Ｍ」および「Ｏ」は、リンカーにより互いに結合される。
【００１７】
本発明の別の広範な態様によると、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、下記式で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーが提供される。
【化２】
2010521526.tif 000040
【００１８】
式中、「Ｘ」は、多価ポリマーの高分子骨格を示し；「Ｍ−Ｎ−Ｏ」は、ヘテロ二官能性リガンドを示す。「Ｍ」は、生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し；「Ｏ」は、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示す。「Ｎ」は、「Ｍ」および「Ｎ」に結合するリンカーを示す。「Ｙ」は、ヘテロ二官能性リガンドを、高分子骨格またはその内部に結合させる任意のリンカーを示し；「ｎ」は、意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドを、ポリマー内に存在させるように選択される整数を示す。
【００１９】
一実施形態では、「ｎ」は、ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、生物学的標的およびエフェクター鋳型上受容体の数（いずれかより大きい方）と同じであるように選択される。
【００２０】
ポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択されうる。
【００２１】
本発明の他の広範な態様によると、生体系における生物学的標的の生物学的活性に作用するための医薬組成物が提供される。この医薬組成物は、生物学的活性を示す生物学的標的と、生物学的標的の生物学的活性に作用しうるエフェクター鋳型とに結合するための、予備配置された複数のヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーと；薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む。
【００２２】
ヘテロ二官能性リガンドは生物学的標的に結合可能な第１の官能基と、エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基とを含む。ヘテロ二官能性リガンドは、ポリマーと、生物学的標的と、エフェクター鋳型とで、三元複合体を形成するようにポリマー上に予備配置される。
【００２３】
第１の官能基および第２の官能基は、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ビタミン、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００２４】
生物学的標的は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００２５】
エフェクター鋳型は、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる。
【００２６】
一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は共通の原子に結合され、ここで共通の原子は直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。一実施形態では、第１の官能基および第２の官能基は直接に互いに結合され、かつ第１の官能基または第２の官能基のいずれかは直接にまたはリンカーを介してポリマー骨格またはその内部に結合される。
【００２７】
本発明は、その構成および動作方法の双方に関し、以下の説明や様々な実施形態の添付の図面（同様の数字がいくつかの図面全体で用いられる）の参照により最もよく理解されうる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】先行技術のポリマーの略図である。
【図２】本発明において、生物学的標的とエフェクター鋳型と多価ポリマーとで、三元複合体を形成する略図である。
【図３】本発明の多価ポリマーの一実施形態の略図であり、各ヘテロ二官能性リガンドは第１の官能基および第２の官能基を含む。この実施形態では、各官能基は共通の原子にリンカーを介して結合される。
【図４】本発明の多価ポリマーの一実施形態の略図であり、各ヘテロ二官能性リガンドは第１の官能基および第２の官能基を含む。この実施形態では、各官能基は、任意のリンカーを介し、共通の原子の使用を伴わずに他方に結合される。
【図５Ａ】本発明の一実施形態における多価ポリマーの設計の原理の一部を図示する略図である。本発明の多価ポリマーは、利用可能な構造情報に基づく分子モデリングまたはタンパク質の相同性モデリングを用いて設計されうる。構築物の分子寸法は、生物学的標的およびエフェクター鋳型の結合部位の分子寸法に一致するように最適化される。
【図５Ｂ】本発明の一実施形態における多価ポリマーの設計の原理の一部を図示する略図である。本発明の多価ポリマーは、利用可能な構造情報に基づく分子モデリングまたはタンパク質の相同性モデリングを用いて設計されうる。構築物の分子寸法は、生物学的標的およびエフェクター鋳型の結合部位の分子寸法に一致するように最適化される。
【図６Ａ】ヘテロ二官能性ポリマーによるＳｔｘ１の阻害を測定するために用いられるＥＬＩＳＡ阻害プロトコルを、概略的に説明する。Ｃ１６アグリコン（１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体）に結合された合成Ｐｋ−トリサッカライドの構造の略図である。
【図６Ｂ】ヘテロ二官能性ポリマーによるＳｔｘ１の阻害を測定するために用いられるＥＬＩＳＡ阻害プロトコルを概略的に説明する。ＥＬＩＳＡ阻害アッセイについて記載する。ウェルは、Ｃ１６アグリコン（１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体）に結合された合成Ｐｋ−トリサッカライドでコートされた。次いで、阻害剤が、ＳＡＰ（２０μｇ／ｍＬ）の存在下および不在下で、Ｓｔｘ１（４ｎｇ／ｍＬ）とともに同時インキュベートされた。プレートに結合された毒素は、ウサギ抗Ｓｔｘ１ポリクローナル血清、次いでヤギ抗ウサギ西洋わさびペルオキシダーゼ二次抗体を用いて検出された。次いで、テトラメチルベンジジン基質で発色させた。
【図７】先行技術のポリマーＰＰＭおよび本発明のポリマーＰＰＩの構造を図示する略図である。
【図８】先行技術のポリマーＰＰＭおよび本発明のポリマーＰＰＩによる、血清アミロイドＰ（２０ｍｇ／ｍＬ）の存在下または不在下の、Ｐｋ−１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体ＥＬＩＳＡプレート（１０μｇ／ｍＬで一晩コート）への結合の、シガ毒素１型（Ｓｔｘ１、４ｎｇ／ｍＬ）によるＣａ２＋依存性の阻害を比較する。
シリーズ１：ＳＡＰの存在下でのＰＰＭ。シリーズ２：ＳＡＰの不在下でのＰＰＭ。シリーズ３：ＳＡＰの存在下でのＰＰＩ。シリーズ４：ＳＡＰの不在下でのＰＰＩ。
図示するように、ＰＰＭの活性は、ＳＡＰの存在による作用を受けない。さらに、ＰＰＩの阻害活性は、ＳＡＰの存在下ではＳＡＰの不在下よりも６０００倍高い。
【図９】本発明のポリマーＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２による、血清アミロイドＰ（２０μｇ／ｍＬ）の存在下における、Ｐｋ−１６−メルカプトヘキサデカニル配糖体ＥＬＩＳＡプレート（１０μｇ／ｍＬで一晩コート）への結合の、シガ毒素１型（Ｓｔｘ１、４ｎｇ／ｍＬ）によるＣａ２＋依存性の阻害を比較する。
白四角（シリーズ１）は、ＳＡＰの存在下で、ＨＰＭＡ−Ｂ１を用いて収集されたデータに対応する。黒四角（シリーズ２）は、ＳＡＰの存在下で、ＨＰＭＡ−Ｂ２を用いて収集されたデータに対応する。ＨＰＭＡ−Ｂ２は、ＨＰＭＡ−Ｂ１（１２．８μｇ／ｍＬ）よりも極めて小さいＩＣ５０値（０．０６５μｇ／ｍＬ）を有する。このことは、ポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの予備配置における最適化の重要性を示す。
【図１０】Ｖｅｒｏ細胞毒性中和アッセイの結果を示す。（約２．９１ｎｇ／ｍＬのＬＤ１００での）Ｓｔｘ１を、５％ＣＯ２／９５％大気の雰囲気中、ウシ胎仔血清が補充されたＭｅｄｉｕｍ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）内での連続希釈された阻害剤およびＳＡＰ（１０μｇ／ｍＬ）との混合物中のコンフルエントな細胞培養物に添加した。
シリーズ１：本発明の多価ヘテロ二官能性リガンドＥＰＩ−１５６の存在下で行われたＶｅｒｏ細胞毒性中和アッセイの結果。シリーズ２：先行技術分野において公知の、ＥＰＩ−１５６の一価類似体であるＢＡＩＴ２の存在下で行われたＶｅｒｏ細胞毒性中和アッセイの結果。シリーズ３：先行技術分野において公知の、半径方向に対称なデンドリマーを有するホモ十量体Ｐｋ−トリサッカライドＤＡＩＳＹ１／８の存在下で行われたＶｅｒｙ細胞毒性中和アッセイの結果。
【図１１】ＢＡＩＴ２、ＥＰＩ−１５６およびＥＰＩ−１５３の分子構造の略図である。ここでＥＰＩ−１５６は、ヨード化を可能にするチロシン残基の付加を伴う修飾形態で示される。
【図１２】Ｓｔｘ１や、先行技術および本発明の種々の阻害ポリマーの投与後に、マウスの生存を測定するマウス中毒モデルから得られたデータを示す。ＨｕＳＡＰマウスは、致死用量（ＬＤ５０）のＳｔｘ１を、尾静脈を介して静脈内に注射され、４時間ごとにシガトキセミア（ｓｈｉｇａｔｏｘｅｍｉａ）の徴候について観察された。シガトキセミアの徴候を示すマウスは安楽死された。
シリーズ１は、ＤＡＩＳＹ１／８（先行技術のＰｋを有するデンドリマー）の投与（投与量５００μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ２は、ＥＰＩ−１５６（本発明のポリマー）投与（投与量５０μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ３は、ＥＰＩ−１５３（ＥＰＩ−１５６の不活性なトランケート型リガンド類似体）の投与（投与量５０μｇ／マウス）と、ＨｕＳＡＰの投与（投与量６００μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ４は、ＥＰＩ−１５６の投与（投与量５０μｇ／マウス）、およびＨｕＳＡＰの投与（投与量６００μｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。シリーズ５は、ＢＡＩＴ２の投与（投与量２ｍｇ／マウス）後の、マウスのパーセント生存率を示す。
確認され得るとおり、本発明のポリマーＥＰ−１５６単独の静脈内投与は、トランスジェニックマウスにおいて発現されるＳｔｘ１と、ＥＰ−１５６と、ＨｕＳＡＰとで三元複合体を形成し、マウスをＳｔｘ１の毒性効果から十分保護する。
【図１３Ａ】ヒトＳＡＰを発現するトランスジェニックマウス（ＨｕＳＡＰマウス）への静脈内注射の４時間後に測定された、放射性標識ＥＰＩ−１５６（ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ）およびシガ毒素（Ｓｔｘ１−１２５Ｉ）の器官分布を示す。
図１３Ａでは、ＨｕＳＡＰマウスは、尾静脈注射を介して、９００ｎｇのＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ（１．１４×１０７ＣＰＭ／μｇ）を受けた。黒バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５ＩとＨｕＳＡＰとの混合物の器官分布を示す。白バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５ＩとＨｕＳＡＰとＳｔｘ１との混合物の器官分布を示す。図１３Ａから、ヘテロ二官能性高分子リガンドが肝臓に誘導されることが認められうる。
【図１３Ｂ】ヒトＳＡＰを発現するトランスジェニックマウス（ＨｕＳＡＰマウス）への静脈内注射の４時間後に測定された、放射性標識ＥＰＩ−１５６（ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ）およびシガ毒素（Ｓｔｘ１−１２５Ｉ）の器官分布を示す。
図１３Ｂでは、マウスは、尾静脈注射を介して、２０ｎｇ／ｇのＳｔｘ１−１２５Ｉ（４．８１×１０６ＣＰＭ／μｇ）を受けた。黒バーは、Ｓｔｘ１とＨｕＳＡＰとの混合物の器官分布を示す。白バーは、Ｓｔｘ１とＨｕＳＡＰと非標識ＥＰＩ−１５６との混合物の器官分布を示す。図１３Ｂからは、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの不在下で、腎臓および肺に誘導されることが認められるのに対して；本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの存在下で、毒素Ｓｔｘ１が肝臓に誘導されることが認められた。これはこれらのポリマーの保護作用を説明しうると思われる。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、多価ヘテロ二官能性ポリマーの発見、それを合成するための方法、その組成物、ならびにその治療および非治療用途に関する。
【００３０】
本発明の多価ポリマーの主な特徴は、それに結合された複数のヘテロ二官能性リガンドの存在である。各ヘテロ二官能性リガンドは、２つの異なる結合官能基を含む（図２を参照）。ヘテロ二官能性リガンド上の各結合官能基は、各々が異なる生物学的要素に結合しうるように予備配置される。これは、ポリマー上の異なる位置に結合された２つの独立した単官能性（ｕｎｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）官能基を与える先行技術の高分子リガンドとは異なる（図１を参照）。
【００３１】
驚くべきことに、発明者らは、本発明の多価ポリマー上にヘテロ二官能性リガンドの２つの結合官能基を予備配置することで、ポリマー上の異なる位置に結合された２つの独立した単官能性基を有する公知のポリマーの使用によっては再現できない、安定性を有する三元複合体（図１を参照）の形成を可能にすることを見出している。理論に拘束されないが、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの使用を通じて、標的受容体と数個の一価リガンドの複製体とで複合体を形成したときに失われた結合エントロピーの一部を回復させることにより、多価結合効果（multivalency effect）および超高分子効果（supermolecula effect）の双方の効果が作用する。これらの多価ポリマーは、多価結合効果および超高分子効果が互いに補完し、かつ結合自由エネルギーにおける実質的利得を見込みうることから特に有利である。これは、ポリマーの１つの生物学的要素への結合が、別の生物学的要素への結合の強化に繋がる点で特に有利でありうる。
【００３２】
図２に示されるように、本発明の多価ポリマー１は、多価ポリマー１に任意のリンカー３を介して結合された複数のヘテロ二官能性リガンド２を含む。各ヘテロ二官能性リガンド２は、三元複合体８が形成されうるように、生物学的標的５に結合可能な第１の官能基４と、エフェクター鋳型７に結合可能な第２の官能基６とを含む。理論に拘束されないが、多価ポリマー１の生物学的標的５およびエフェクター鋳型７への結合による三元複合体８の形成することで、一方の生物学的要素を他方の生物学的要素によって検出すること、阻害すること、除去すること、および／または分解することを促進する。
【００３３】
図３および図４に示されるように、ヘテロ二官能性リガンドは、第１の官能基４および第２の官能基６を、種々の形態で提示しうる。以下に考察するように、形態の選択は、意図される用途および機能に依存することになる。図３に示される一実施形態では、ヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６は、それぞれリンカー９Ａおよび９Ｂを介して共通の原子９に結合される。共通の原子９は、任意のリンカー３を介して多価ポリマー１に結合されうる。当然ながら当業者に理解されるように、共通の原子９は、リンカー３を用いることなく、多価ポリマー１に直接結合されてもよい（図示せず）。
【００３４】
図４に示される別の実施形態では、第１の官能基４および第２の官能基６は共通の原子９を用いずに任意のリンカー９Ｃを介して互いに結合され、かつ第１の官能基４または第２の官能基６のいずれかは、任意のリンカー３を介して多価ポリマー１に結合されうる。当然ながら当業者に理解されるように、得られる第１の官能基４と第２の官能基６との複合体は、リンカー３を用いることなく多価ポリマー１に直接結合されてもよい（図示せず）。
【００３５】
上記考察のように、多価ポリマー１上への、ヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６の予備配置は、高い結合効率を得るために重要である。ポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの２つの官能基の予備配置は、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７に依存することになる。
【００３６】
一実施形態では、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７は、相対位置およびそれらの結合部位の配置の観点では、酷似しているかまたはトポロジー的に同一である。この類似性を利用して、本発明のポリマーに結合されるヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６を予備配置することが可能である。これらの類似性を利用すると、三元複合体の形成が最大となるように本発明のポリマーを設計することができる。
【００３７】
当業者は、第１の官能基４および第２の官能基６の予備配置を最適化させて、適切に三元複合体を形成するためには、上記任意のリンカーの長さを変化させるとともに、ポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの近接結合点を隔てる平均距離を変化させることが必要であることを理解するであろう。リンカーの長さおよびヘテロ二官能性リガンドの近接結合点を隔てる平均距離は、当該技術分野で公知の化学合成技術を用いて容易に変更可能である。当業者はまた、得られるポリマーの生物学的活性を、多種多様なアッセイを用いて測定することができ、そのアイデンティティが、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７のアイデンティティに依存することになることを理解するであろう。
【００３８】
別の実施形態では、生物学的標的５および／またはエフェクター鋳型７における構造データが利用可能である場合には、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７の既知または予測される構造および／または結合部位を調べることにより、第１の官能基４および第２の官能基６を適切に予備配置することができる。前記構造は、当該技術分野で公知の多種多様な分子モデリングツールを用いて予測可能である。
【００３９】
図５Ａに示されるように、生物学的標的５および／またはエフェクター鋳型７における既知の構造データを考慮して本発明の多価ポリマーを設計する場合、少なくとも以下の３つの距離、すなわち「エフェクター鋳型７上の２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離１０」、「生物学的標的５上の２つの類似または同一の近接結合部位を隔てる平均距離１１」、ならびに「第１の官能基４および直近の第２の官能基６がそれらの各結合部位に結合されるときのそれらを隔てる平均距離１２」が考慮されるべきである。好ましくは、距離１２が最小になるように、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７を配置する。当然ながら当業者に理解されるように、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７の配置は、当該技術分野で公知の分子モデリングまたは画像化ソフトウェアを用いて調整されうる。距離１２は、得られる三元複合体で生物学的標的５とエフェクター鋳型７とが衝突しないように、最小であるべきである。当業者に理解されるように、すべての３つの距離は、当該技術分野で現在公知の様々な分子モデリングまたは画像化ソフトウェアを用いて測定されうる。
【００４０】
一実施形態では、生物学的鋳型５およびエフェクター鋳型７における構造データが利用可能な場合、距離１０、距離１１および距離１２は、ヘテロ二官能性リガンドを多価ポリマー１上に予備配置し、安定な三元複合体の形成を促進するための一般的指針として用いられうる。第１の官能基４および第２の官能基６を互いに関連させた空間的な配置手法の決定においては、「リンカー９Ａおよびリンカー９Ｂの長さの和」または「リンカー９Ｃの長さ」が、距離１２の長さ以上であるべきである。また、多価ポリマー１の設計には、「一方のヘテロ二官能性リガンドを、もう一方のヘテロ二官能性リガンドから隔てる距離１３」および「リンカー３の長さ」が必要とされる（図５Ｂを参照）。好ましくは、「距離１３と、リンカー３の２倍の長さと、リンカー９Ａの２倍の長さとの和」は、距離１０または距離１１（いずれかより長い方）よりも長い必要がある。一実施形態では、「距離１３とリンカー３の２倍の長さとリンカー９Ｃの長さとの和」は、距離１０または距離１１（いずれかより長い方）よりも長い必要がある。
【００４１】
構造データが利用可能な場合、他の情報も用いつつ、ヘテロ二官能性リガンド内での２つの官能基の設計および予備配置を補助することが可能である。好ましくは、リンカー９Ａおよびリンカー９Ｂの長さの和は、「距離１３の長さと、リンカー９Ａの２倍の長さと、リンカー３の２倍の長さとの和」よりも短い必要がある。さらに、リンカー９Ａおよび９Ｂの長さの和は、「距離１３の長さと、リンカー９Ｂの２倍の長さと、リンカー３の２倍の長さとの和」よりも短い必要がある。別の実施形態では、リンカー９Ｃの長さは、「距離１３の長さと、リンカー９Ｃの長さと、リンカー３の２倍の長さとの和」よりも短い必要がある。
【００４２】
上記の様々な平均距離を測定する場合、２つの官能基および／またはリガンドに結合する任意の断片またはリンカーが、拡張された高次構造（extended conformation）であると仮定することが好ましい。その基準点は、各官能基および／または各リガンドの質量中心である。当業者が理解するように、柔軟な分子の拡張された高次構造（extended conformation）とは、２つの基準点の距離が最大と考えられる距離となる構造である。上記考察のように、これらの距離は分子モデルの使用を通じて評価でき、そこでは適切な共有結合の長さおよび角度が考慮されうる。
【００４３】
さらに、共重合反応および予備形成されるポリマーの修飾に用いられる反応は、本質的にランダムである。そのため、距離１３は、ヘテロ二官能性リガンドのポリマーへの取り込みの速度を介する、統計学的意味での平均としてのみ評価されうる。例えば、「リガンド」対「繰り返し単位」の比率が１：２０である場合、距離１３は「２０の繰り返し単位からなる高分子鎖の両末端間の長さ」に等しいと仮定される。
【００４４】
ヘテロ二官能性リガンド２を予備配置するための既知の構造データを用いる場合、拡張された高次構造内に、柔軟なポリマー分子を見出す確率が一般に極めて低いことから、一般に、上記の４つの異なる制限が必要とされる。距離１０、距離１１および距離１２での結合官能基を見出す確率を高めるためには、十分な長さ以上のリンカーが必要とされる。そのため、ヘテロ二官能性多価リガンドの構造のさらなる最適化が、安定な三元複合体の形成を促進するために必要とされることが多い。上記のように、リンカーの長さおよびヘテロ二官能性リガンドの近接結合点を隔てる距離は、安定な三元複合体を形成する確率を高めるために容易に最適化されうる。最適化は、当該技術分野で公知の多種多様な技術を用いてなされうる（例えば、限定は意図されないが、Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、２００２年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５：３２８４−３２９４頁；Ｍａｍｍｅｎ  Ｍ．ら、１９９８年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６３：３１６８−３１７５頁；Ｇａｒｇａｎｏ  Ｊ．Ｍ．ら、２００１年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２３：１２９０９−１２９１０頁）。
【００４５】
上記の４つの制限において、距離１３は、少なくとも０でない正の値を有する必要がある。しかし、上記考察および図４に示されるように、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよび／またはリンカー９Ｃの長さは０でありうる。発明者らは、下記に示されるように、第１の官能基４および第２の官能基６が、エントロピー効率の良い結合部分を生成しながら、リンカーを用いずに互いに結合されうることを見出している。
【００４６】
一実施形態では、本発明の多価ポリマー１は以下のように示されうる。
【化３】
2010521526.tif 000041
【００４７】
特定の実施形態では、本発明の多価ポリマー１は、下記構造により表すことができる。
【化４】
2010521526.tif 000042
【００４８】
式中、「Ｘ」は多価ポリマー１の高分子骨格を示す。「Ｍ」は第１の官能基４を示す。「Ｏ」は第２の官能基６を示す。「Ｎ」は共通の原子９、任意のリンカー、または上記考察のように「Ｍ」および「Ｏ」に直接結合するように用いられうる結合のいずれかを示す。「Ｙ」は任意のリンカー３を示す。かつ「ｎ」は意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドがポリマー内に存在するように選択される整数を示す。好ましくは、「ｎ」の値は標的受容体内での結合部位の数と同じであるべきである。
【００４９】
第１の官能基および第２の官能基
生物学的標的５およびエフェクター鋳型７のアイデンティティ、ひいては第１の官能基４および第２の官能基６のアイデンティティは、意図される用途に応じて大きく変化しうる。一実施形態では、生物学的標的５は疾患を媒介する要素である一方、エフェクター鋳型７は生物学的標的の生物学的活性に作用しうるかまたは生物学的標的の検出を可能にする要素である。
【００５０】
「生物学的活性」という用語は、生物学的標的５により発揮される任意の有害な活性を示す。理論に拘束されないが、エフェクター鋳型７に結合可能な第２の官能基６は、得られる三元複合体８の肝臓などの特定の器官への局在化；限定はされないが、補体媒介性の細胞毒性を惹起可能な抗体でありうるエフェクター鋳型７と、生物学的標的５との会合の促進；限定はされないが、生物学的標的５を中和可能な細胞でありうるエフェクター鋳型７と、生物学的標的５との会合の促進；を含む種々の機序を介して、生物学的標的５が示す生物学的活性に作用しうる。一部の実施形態では、ヘテロ二官能性リガンド２の第１の官能基４および第２の官能基６は、同じ細胞上の複数の複製体として存在する２つの異なる膜結合タンパク質受容体である生物学的標的５およびエフェクター７を認識し、かつそれらに結合する。他の実施形態では、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７は、別々の細胞上の受容体である。
【００５１】
「検出する」という用語は、特定の生物学的標的が、生物内または環境内に存在するか否かを判定するための多価ヘテロ二官能性ポリマー１の使用用途を示す。これは診断の分野で特に有利である場合がある。これらについて後にさらに考察する。
【００５２】
多くの場合、入手可能な文献から、第１の官能基４および第２の官能基６の双方のアイデンティティは既知である。もしそれらのアイデンティティが意図される用途において知られていない場合、有効な第１および第２の官能基は既知の化合物のライブラリーのスクリーニングにより同定されうるか、またはそれらは受容体における任意の利用可能な構造データに基づいて合理的に設計されうる。
【００５３】
第１の官能基４および第２の官能基６は、限定はされないが、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、０〜約２０のモノサッカライドを有するオリゴ糖、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、ビタミン、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体を含みうる群から選択されうる。
【００５４】
生物学的標的５は、限定はされないが、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体を含みうる群から選択されうる。
【００５５】
エフェクター鋳型７は、限定はされないが、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体を含みうる群から選択されうる。
【００５６】
一実施形態では、エフェクター鋳型７が抗体である場合、第２の官能基６は、限定はされないが、高免疫原性、低分子量および／または低毒性を含みうる特性を用いて選択される任意のハプテンでありうる。
【００５７】
一実施形態では、１つ以上のヘテロ二官能性リガンド２の複製体を含む多価ポリマー１が提供される。第１の官能基４は多価生物学的標的に結合する。多価生物学的標的は、多重結合部位を与え、かつ２つ以上のリガンドに同時に結合しうるものを含む。「多価生物学的標的」という用語はまた、細胞表面上の構造モチーフ、例えば一群の類似の細胞表面受容体を包含するように意図される。
【００５８】
一実施形態では、エフェクター鋳型は血清アミロイドＰ成分である。別の実施形態では、エフェクター鋳型は自然または適応免疫系の分子または細胞成分である。
【００５９】
一実施形態では、第１の官能基４は、細菌毒素である生物学的標的５に結合する。細菌毒素の例として、限定はされないが、シガ毒素またはシガ様毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素およびコレラ毒素が挙げられる。一部の態様では、シガ毒素は、Ｏ１５７：Ｈ７大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）血清型などの腸管出血性大腸菌により産生される。一部の態様では、第１の官能基４はトリサッカライドである。他の実施形態では、第１の官能基４は、生物学的標的であるグラム陽性細菌に結合する。
【００６０】
一実施形態では、第１の官能基４は、生物学的標的であるインフルエンザウイルスなどのウイルス粒子に結合する。一部の態様では、第１の官能基４はウイルスの赤血球凝集素ノイラミニダーゼ（ＨＮ）に結合する。一実施形態では、第１の官能基４は、ノイラミン酸誘導体である。別の実施形態では、第１の官能基４はウイルスレクチンに結合する。
【００６１】
他の生物学的標的および対応する第１の官能基として、限定はされないが、マンノース基と相互作用可能な、ＦｉｍＨアドヘシン表面基を有する房状の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；グルコサミンＮ−アセチル（ＧｌｃＮａｃ）基に結合可能な、肺炎球菌表面アドヘシンＡ（ＰｓａＡ）の表面基を有する肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；ノイラミン酸（ＮｅｕＡｃ）およびラクト−Ｎ−ネオテトラオーゼ（ｎｅｏｔｅｔｒａｏｓｅ）基に結合可能な、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｐｂＡ）基；プラスミン（プラスミノーゲン）基に結合可能な、α−エノラーゼ基；およびＧｌｃＮＡＣ、ＮｅｕＡｃ、およびラクトースに結合可能な、線毛アドヘシン表面基を有する緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられる。
【００６２】
一実施形態では、第１の官能基４は、癌細胞の細胞表面受容体である生物学的標的５に結合する。一部の態様では、その細胞表面受容体は正常細胞内にも存在するが、癌細胞内で発現上昇される。一部の態様では、生物学的標的５は癌細胞の葉酸塩受容体である。
【００６３】
一実施形態では、第１の官能基４は、インテグリンである生物学的標的５に結合する。一実施形態では、インテグリンはインテグリンαｖβ３である。
【００６４】
一実施形態では、第１の官能基４は、Ｂ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質である生物学的標的５に結合する。
【００６５】
一実施形態では、第１の官能基４は、抗リン脂質抗体症候群に関連した免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を提示するＢ細胞に結合可能な、カルジオリピンなどのリン脂質である。
【００６６】
一実施形態では、第１の官能基４は、２,６-結合シアル酸を有するオリゴ糖である。
【００６７】
一実施形態では、第１の官能基４は、大部分の神経膠腫内に見出される腫瘍表面マーカーに特異的に結合可能な、巨大なイスラエルサソリ（Ｉｓｒａｅｌｉ  ｓｃｏｒｐｉｏｎ）の毒に由来するペプチドであるクロロトキシンである（Ｄｅｓｈａｎｅ  Ｊ．ら、２００３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８（６）：４１３５−４１４４頁）。
【００６８】
一実施形態では、第１の官能基４は、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸を有するペプチド（ＲＧＤ）、またはその機能誘導体もしくは合成模倣体である。一態様では、ＲＧＤはシクロペプチドである。
【００６９】
一実施形態では、第１の官能基４は、自己免疫疾患に関与する抗体である生物学的標的５に結合する。一態様では、抗体はギラン・バレー症候群を媒介する。
【００７０】
一実施形態では、第２の官能基６は、血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）であるエフェクター鋳型７に結合する。
【００７１】
別の実施形態では、エフェクター鋳型７は自然または適応免疫系の分子または細胞成分である。
【００７２】
一実施形態では、エフェクター鋳型７は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー細胞である。一実施形態では、第２の官能基６は、抗体であるエフェクター鋳型７に結合するハプテンである。一部の態様では、抗体は、第２の官能基６を有する化合物に対して予め免疫された患者において産生される。一部の態様では、第２の官能基６はスルホンアミドである。別の実施形態では、第２の官能基６はスルファチアゾールである。
【００７３】
リンカー
上記考察のように、任意のリンカー３は、ヘテロ二官能性リガンド２を多価ポリマー１に共有結合させる。任意のリンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃも存在しうる。リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃの長さおよび化学組成は、意図される用途や、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７の性質に応じて異なる。リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃの化学組成はまた、生物学的標的５および／またはエフェクター鋳型７の結合部位の周囲の環境に応じて大きく異なる。意図される用途に応じて、疎水性、親水性または両親媒性リンカーを用いることは有利でありうる。
【００７４】
リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃは、多種多様な異なる基からなってもよく、そのアイデンティティは意図される用途に依存する。これらの基は、限定はされないが、複数のメチレン基から有するアルキレン鎖を含み、ここで各メチレン基は、「二価の基」と置換されてもよい。適切な「二価の基」は、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＲＲ’−、カルバメート、尿素、およびチオ尿素部分を含む（式中、ｎは０、１、または２であり；ＲはＨまたはアルキルであり；Ｒ’はＨ、アルキル、または非水素置換基と置換されたアルキルである）。さらに、リンカーは、エチレングリコール単位を有する基を含んでいてもよい。さらにリンカーは、場合により、１つ以上のメチレン基を１,４-フェニレン基と置換された基を含みうる。
【００７５】
当然ながら、当業者は、上記していない多数の他の基を用いて、リンカー３、リンカー９Ａ、リンカー９Ｂおよびリンカー９Ｃを、それらが安定な三元複合体の形成を補助するのに必要とされる特性を有するようにすることができることを理解するであろう。これらの基は、本発明の範囲内に含まれるものとして見なされる。
【００７６】
高分子骨格
多価ヘテロ二官能性ポリマー１の高分子骨格は、意図される用途に応じて多数の異なる形態をとりうる。本発明において使用可能なポリマーは、骨格内に非環状、環状および／またはアリーレン構造を有するものを含む。ポリマー骨格またはその内部に、ヘテロ二官能性リガンドが結合される。
【００７７】
適切なポリマーの更なる例として、ポリアクリルアミド、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースなどの高分子炭水化物；ならびにポリカルボフィル、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリ（メチルメタクリレート）アクリル酸／ブチルアクリレート共重合体、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］（ＨＰＭＡ）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、およびポリ（リンゴ酸）などのアクリル酸に基づくポリマーが挙げられる。限定はされないが、デキストラン、デキストリン、アガロース、アミロース、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカンおよびキトサンを含む天然ポリマーも用いられうる。当然ながら、当業者は、複数のヘテロ二官能性リガンドに共有結合可能な任意の薬学的に許容可能なポリマーを用いて、本発明の多価ポリマーの合成が可能であることを理解するであろう。これらのポリマーは、本発明の範囲内に含まれるものとして見なされる。
【００７８】
ポリマーは、ヘテロ二官能性リガンドに結合された末端二重結合などの重合可能な基を有する単量体を、重合することにより調製されうる。ヘテロ二官能性単量体と非官能化された単量体との共重合体も利用可能である。さらには、ポリマーの溶解度または安定性などの物理的または生物学的特性を、制御および／または改善する非官能化された単量体の作製および利用も、また可能である。ポリマーを調製するための方法も限定はされないが、開環メタセシス重合（ＲＯＭＰ）を含む。
【００７９】
ポリマーにおけるヘテロ二官能性リガンドの含有率は、官能化単量体と非官能化単量体との比率や、単量体の性質および反応性に依存する。一部の態様ではポリマーは、１つのヘテロ二官能性リガンド当たり、１０〜２０の繰り返し単位を有する。他の態様では、ポリマーは、１つのヘテロ二官能性リガンド当たり、２０以上の繰り返し単位を有する。
【００８０】
「結合点」または「結合される」という用語は、ヘテロ二官能性リガンドのポリマーへの結合に適用される場合、広義に解釈される。上記考察のように、ヘテロ二官能性リガンドは、任意のリンカーを介してポリマーに結合されうるか、または直接にポリマーに結合されうる。結合様式は、ヘテロ二官能性リガンドの性質、ポリマーの性質、および意図される用途に依存する。一実施形態では、結合は共有結合である。
【００８１】
投与および医薬組成物
一般に、本発明のポリマーは、類似の有用性を発揮する作用物質における認められた投与方法のいずれかにより、治療有効量で投与されうる。ポリマーの実際の投与量は、ポリマーの薬動動態、治療されるべき疾患の重症度、対象の年齢および相対的健康状態、用いられるポリマーの効力、投与の経路および形態、ならびに他の要素などの極めて多数の要素に依存する。薬剤は、１日に２回以上、好ましくは１日に１回または２回投与されうる。これらの要素のすべては主治医の能力の範囲内にある。
【００８２】
一般に、本発明のポリマーは、以下の経路、すなわち全身（例えば経皮、鼻腔内または坐剤による）、非経口（例えば筋肉内、静脈内または皮下）、髄腔内、または経口投与のうちのいずれか１つにより医薬組成物として投与される。組成物は、タブレット、ピル、カプセル、半固体、粉末、持続放出製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアロゾル、または任意の他の適切な形態の組成物となりうる。
【００８３】
製剤の選択は、薬剤投与の方法および薬剤物質のバイオアベイラビリティなどの様々な要素に依存する。吸入を介する送達においては、ポリマーは、溶液、懸濁液、エアロゾル推進剤または乾燥粉末として調合され、かつ投与に適するディスペンサーに充填されうる。薬剤吸入装置には、ネブライザー吸入器、定量吸入器（ＭＤＩ）および乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）といったいくつかのタイプがある。
【００８４】
本組成物は、一般には本発明のポリマーと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤との組み合わせからなる。許容可能な賦形剤は、非毒性であり、投与を補助し、かつポリマーの治療効果に悪影響を及ぼさない。かかる賦形剤は、一般に当業者が使用可能な任意の固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合には、気体賦形剤でありうる。
【００８５】
固体医薬賦形剤の例には、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどが含まれる。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、ならびに石油、動物、植物または合成由来のオイルを含む様々なオイル、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などから選択されうる。特に注射可能な溶液用の好ましい液体担体は、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコールを含む。
【００８６】
圧縮ガスを用いて、エアロゾル形態での本発明のポリマーの分散が可能である。この目的に適する不活性気体として、窒素、二酸化炭素などが挙げられる。他の適切な医薬賦形剤およびそれらの製剤については、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ編、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、第ｌ８版、ｌ９９０年）に記載されている。
【００８７】
治療および非治療用途
上記考察のように、第１の官能基４および第２の官能基６のアイデンティティは、生物学的標的５およびエフェクター鋳型７のアイデンティティに応じて大きく変化しうる。本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーは、治療および非治療用途の双方に用いられうる。
【００８８】
本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマー１には、多数の異なる有望な治療用途が存在する。下記に列挙されるのは、有望な治療用途のうちのほんの数例であって、限定することを意図されていない。
【００８９】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、シガ毒素またはシガ様毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素、およびコレラ毒素を含みうる細菌毒素を除去することが可能である。
【００９０】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、インフルエンザウイルスを含みうるウイルス粒子を除去することが可能である。
【００９１】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、房状の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、コリン結合タンパク質Ａ基、α−エノラーゼ基、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を除去することが可能である。
【００９２】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、癌細胞を標的化することが可能である。
【００９３】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、インテグリンを標的化することが可能である。一実施形態では、インテグリンはインテグリンαｖβ３である。
【００９４】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、Ｂ細胞リンパ腫に関連したシアロ糖タンパク質を標的化することが可能である。
【００９５】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、抗リン脂質抗体症候群に関連したＩｇＧを提示するＢ細胞に結合可能なカルジオリピンを含みうるリン脂質を標的化することが可能である。
【００９６】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、神経膠腫を標的化することが可能である。
【００９７】
一実施形態では、限定はされないが、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、ギラン・バレー症候群を含みうる自己免疫疾患に関与する抗体を除去することが可能である。
【００９８】
一実施形態では、有効量の本発明のポリマーを投与するステップを含む、標的化免疫療法の方法が提供される。ここで、第２の官能基６がハプテンであれば、前記ポリマーの投与により既存の抗体による免疫認識が惹起する。一部の態様では、治療の開始に先立ち、第２の官能基６を提示する化合物の投与により、抗体が患者の体内で産生される。
【００９９】
一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１は、遺伝性および後天性代謝疾患の治療に用いられうる。
【０１００】
本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーはまた、様々な非治療用途にも用いられうる。これらのポリマーの使用は診断の分野で有利でありうる。一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、地下水中のＳｔｘ１の存在を検出することが可能である。別の実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１を用いて、血中の抗体の存在を検出することが可能である。これは、限定はされないが、癌を含みうる多数の疾患の診断において有利でありうる。一実施形態では、多価ヘテロ二官能性ポリマー１は、腫瘍の造影において用いられうる。当然ながら当業者に理解されるように、これらの非治療用途は、特定の三元複合体の形成が最適化されるように、ヘテロ二官能性リガンド２上で第１の官能基４および第２の官能基６を選択し、かつ予備配置することによって実現可能である。
【実施例】
【０１０１】
材料、方法および実施例
以下の材料および方法を以下の実施例において用いた。これらの材料および方法は、あくまでも例示目的であり、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されない。当業者は、いくつかの変更および置換が本発明の範囲に影響を与えることなくなされうることを理解するであろう。より詳細には、これらは以下に列挙する特定の技術および反応条件における変更および置換を含む。
【０１０２】
一般的方法
旋光性を、周囲温度で１０ｃｍのセル内のＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ２４１偏光計上で測定した。分析ＴＬＣを、蛍光の消光および／またはエタノール溶液中の１０％Ｈ２ＳＯ４でのチャージ（charging）、その後の１８０℃での加熱による検出とともに、シリカゲル６０−Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ）上で行った。カラムクロマトグラフィーを、シリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ、４０〜６０μｍ）上で行い、かつ市販品の溶媒を用いた。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、ＣＤＣｌ３（δＨ７．２４ｐｐｍでの残存ＣＨＣｌ３を基準）またはＤ２Ｏ（δＨ２．２２５ｐｐｍでの外部アセトンを基準）中、４００、５００または６００ＭＨｚ（Ｖａｒｉａｎ）で測定した。Ｊ値はＨｚで与えられる。すべての市販品の試薬を用いることができる。
【０１０３】
本発明がより十分に理解されるように、以下の実施例が示される。これらの実施例は、あくまでも例示目的であり、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されない。さらに、これらの実施例は、本発明の等価物および変形物を除外するように意図されておらず、それは当業者にとって明らかである。
【０１０４】
実施例１
化合物３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-［４-Ｏ-（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル］−β−Ｄ−グルコピラノシド（１）の合成
【化５】
2010521526.tif 000043
【０１０５】
既知のラクトースイミデート（ｌａｃｔｏｓｅ  ｉｍｉｄａｔｅ）ドナーを、三フッ化ホウ素エーテラートの存在下で、モノアリル化ヘキサ（エチレングリコール）とカップリングさせ、ラクトシド５を７１％の収率で得た。Ｚｅｍｐｌｅｎ条件下で、ラクトシド５を脱アセチル化して、ヘプタオール６を９０％の収率で得た。次いで、ヘプタオール６を、α−（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼを用いて、酵素的にガラクトシル化し、標的化合物１を７５％の収率で得た。
【０１０６】
３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-
Ｄ-グルコピラノシド（５）。
ラクトース六酢酸トリクロロアセトイミダートドナー（１．８ｇ、２．３ｍモル、α：βが９：１の混合物）、モノアリルヘキサ（エチレングリコール）（０．６４ｇ、２．０ｍモル）、および活性化された４Åのモレキュラーシーブス（１．５ｇ）を、乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）中で１時間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、ＢＦ３Ｅｔ２Ｏ（０．３ｍＬ）を滴下添加した。ＴＬＣで反応の完了を確認した後、Ｅｔ３Ｎで中和し、セライトを通して濾過し、濃縮した。シリカゲルでの残留物のクロマトグラフィーにより、表題化合物５を得た（１．３ｇ、７１％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．８９（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１．０Ｈｚ，３．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２３（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３およびアリル）、５．０８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ８．０Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，Ｈ−２’）、４．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３．５Ｈｚ，１０．５Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ８．０Ｈｚ，９．５Ｈｚ，Ｈ−２）、４．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１’およびＨ−６ａ）、４．０７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂおよびＨ−６ａ’）、４．００（ｍ，２Ｈ，アリル）、３．８４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．７７（ｔ，１Ｈ，Ｊ９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ’）、３．５７〜３．６５（ｍ，１５Ｈ）、２．１３（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．１０（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、２．０１（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、１．９４（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ９６３．３６８１４（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４１Ｈ６４Ｏ２４Ｎａ＋の要求値９６３．３６７９８）。
【０１０７】
３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシド（６）。
ラクトシド５（１．３ｇ、１．４ｍモル）を乾燥ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＮａ（３ｍＬ、０．５Ｍ溶液）を添加した。混合物を一晩撹拌し、次いでＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  Ｈ＋で中和し、濾過し、濃縮し、表題化合物６を得た（０．８ｇ、９０％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９５（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３３（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２６（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０６（ｍ，３Ｈ，アリル）、３．９７（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｍ，１Ｈ）、３．５８〜３．８４（ｍ，３１Ｈ）、３．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ６６９．２９３８９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２７Ｈ５０Ｏ１７Ｎａ＋の要求値６６９．２９４０２）。
【０１０８】
３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノシド（１）。
ラクトシド６（０．１１ｇ、０．１７ｍモル）を、Ｈ２Ｏ  ４ｍＬ、ＨＥＰＥＳ緩衝液［１．２５ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ８］、ＤＴＴ溶液（１００ｍＭ、０．３２ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（６３μｌ）の混合液中に溶解した。得られた混合物に、ＵＤＰ−Ｇｌｃ（０．１３ｇ）、次いでα−（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（０．６２５ｍＬ）を添加した。反応物を３７℃で一晩インキュベートし、次いでＣ１８担体でクロマトグラフィーを行い、表題化合物１を得た（０．１ｇ、７５％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９５（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．６Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ８．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．３５（ｍ，１Ｈ）、３．５６〜４．０７（ｍ，４２Ｈ）、３．３３（ｔ，１Ｈ，Ｊ８．４Ｈｚ，Ｈ−２’）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ８３１．３４６４９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３３Ｈ６０Ｏ２２Ｎａ＋の要求値８３１．３４６８５）。
【０１０９】
実施例２
２５-［（シス）-２-ヒドロキシカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-２４-（Ｒ,Ｓ）-ヒドロキシ-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ−オキサ-ペンタデコサ（ｐｅｎｔａｄｅｃｏｓ）-１-エン（２）の合成
【化６】
2010521526.tif 000044
【０１１０】
メタノール（４．５ｍＬ）中の２５-［（シス）-２-ジメチルアミノカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-２４-（Ｒ,Ｓ）-ヒドロキシ-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタデコサ-１-エン（１２５ｍｇ、０．２１４ｍモル）の溶液に、４Ｍ水性ＮａＯＨ（２６８μＬ）を添加した。反応混合物を８０℃で一晩撹拌した。翌日、さらに４ＭのＮａＯＨ（１３４μＬ）を添加し、混合物を８０℃で一晩放置した。翌日、ＮＭＲおよびＴＬＣにより、アミドの加水分解が完了したことを確認そた。混合物をメタノールで希釈し、Ｄｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂で脱イオン化し、濾過し、濃縮した。乾燥残留物を水中に溶解し、凍結乾燥し、生成物をシロップとして得た（９７ｍｇ；８４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：５．９９〜５．９２（ｍ，１Ｈ，ＨＣ＝ＣＨ２）、５．３６〜５．２６（ｍ，２Ｈ，ＨＣ＝ＣＨ２）、４．１８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ４．７Ｈｚ，Ｊ１１．４Ｈｚ，Ｈ−４ｅ，Ｈ−６ｅ）、４．０７（ｄ，２Ｈ，Ｊ５．９Ｈｚ，ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、３．９４〜３．９２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）、３．７４〜３．６５（ｍ，２６Ｈ，Ｈ−５，ＯＣＨ２）、３．７０〜３．６０（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４ａ，Ｈ−６ａ，ＯＣＨ２）、１．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＨＲＭＳ、計算値Ｃ２４Ｈ４４Ｏ１３Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ）：ｍ／ｚ  ５６３．２６７４１，実測値：ｍ／ｚ  ５６３．２６７７６。
【０１１１】
実施例３
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-カルボキシル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ（ｐｅｎｔａｃｏｓ）-１-エン（３）の合成
【化７】
2010521526.tif 000045
【０１１２】
既知のラクトシド７（Ｓｏｌｏｍｏｎら（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００５年、７、４３６９−４３７２頁））を、Ｚｅｍｐｌｅｎ条件下で脱アセチル化し、配糖体８を９８％の収率で得た。配糖体８を、α-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼを用いて、酵素的にガラクトシル化し、トリサッカライド９を７８％の収率で得た。基本的条件下でのトリサッカライド９のアミド基の加水分解により、標的化合物１０を９６％の収率で得た。
【０１１３】
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-ジメチルアミノカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン（８）。
化合物７（０．３３ｇ、０．３ｍモル）（Ｓｏｌｏｍｏｎら（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００５年、７、４３６９−４３７２頁））を、乾燥ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＮａ（０．５Ｍ溶液１ｍＬ）を添加した。室温で一晩撹拌後、混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（Ｈ＋）樹脂で中和し、濾過し、濃縮し、真空下で乾燥し、表題化合物８を得た（０．２４ｇ、９８％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、４．０７（ｍ，３Ｈ，アリル）、３．９６（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６１〜３．８２（ｍ，３９Ｈ，ＯＭｅ）、３．５３（ｍ，４Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２６（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、３．００（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、１．５２（ｍ，３Ｈ，Ｃ−Ｍｅ）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ９１４．４２０９７（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３８Ｈ６９ＮＯ２２Ｎａ＋の要求値９１４．４２０３５）。
【０１１４】
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-ジメチルアミノカルボニル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン（９）。
ラクトシド８（０．２４ｇ、０．２７ｍモル）を、Ｈ２Ｏ  ８ｍＬ、ＨＥＰＥＳ緩衝液［２．５ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ８］、ＤＴＴ溶液（１００ｍＭ、０．６３ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（１２５μＬ）の混合液中に溶解した。混合物にＵＤＰ−Ｇｌｃ（０．２５ｇ）、次いでα−（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（１．２５ｍＬ）を添加した。反応物を３７℃で一晩インキュベートし、次いでＣ１８担体でクロマトグラフィーを行い、表題化合物９を得た（０．２２ｇ、７８％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．６Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ６．０Ｈｚ，Ｈ−５’’）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．４９〜４．０８（ｍ，５７Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２６（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、３．００（ｓ，３Ｈ，ＮＭｅ）、１．５２（ｍ，３Ｈ，Ｃ−Ｍｅ）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  １０７６．４７３４３（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４４Ｈ７９ＮＯ２７Ｎａ＋の要求値１０７６．４７３１７）。
【０１１５】
２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-カルボキシル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン（３）。
表題化合物９（０．１５ｇ、０．１４ｍモル）およびＮａＯＨ（５当量）の溶液を、８０℃で３日間撹拌し、反応の進行をＮＭＲにより追跡し、混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  Ｈ＋樹脂で中和し、濾過し、濃縮し、表題化合物３を得た（０．１４ｇ、９６％の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９５（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．３４（ｍ，１Ｈ，アリル）、５．２７（ｍ，１Ｈ，アリル）、４．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ６．０Ｈｚ，Ｈ−５’’）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．５５〜４．０９（ｍ，５７Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、１．５０（ｍ，３Ｈ，Ｃ−Ｍｅ）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  １０４９．４２５９３（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４２Ｈ７４Ｏ２８Ｎａ＋の要求値１０４９．４２５８８）。
【０１１６】
実施例４
４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（４）の合成
【化８】
2010521526.tif 000046
【０１１７】
既知の化合物１０を、触媒ＣＳＡの存在下で、ベンズアルデヒドジメチルアセタールで処理し、ベンジリデン１１を７２％の収率で得た。ベンジリデン１１の一級ヒドロキシルを、ピリジン中の塩化トシルを用いて選択的にトシル化し、トリオール１２を５６％の収率で得た。その後、トシル基をアジドで置換し、化合物１３を７８％の収率で得た。化合物１３の水素化で得られたアミンとｐ−ニトロフェニル４−ペンテニルカーボネートとのカップリングし、ベンジリデン保護基を８０％酢酸で脱離させ、カルバメート１４を得た。ジサッカライド１４を、α-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ-４'-Ｇａｌ-エピメラーゼを用いて、酵素的にガラクトシル化し、所望のトリサッカライド４を得た。
【０１１８】
４-Ｏ-（４,６-Ｏ-ベンジリデン-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（１１）。
ヘキサオール１０（２．１９ｇ、４．２５ｍモル）を、乾燥アセトニトリル（２４ｍＬ）およびベンズアルデヒドジメチルアセタール（１．９５ｍＬ、３当量）の混合液中に溶解し、次いでカンファースルホン酸（触媒量）を添加した。ＴＬＣで反応の完了を確認した後、トリエチルアミンで中和し、溶媒を蒸発させた。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）、表題化合物１１を得た（１．５９ｇ、７２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．３５〜７．４９（ｍ，５Ｈ，芳香族陽子）、５．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．４Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４７（ｓ，１Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ）、４．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ’）、４．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３４．８Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．６Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．９３〜４．００（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−６ｂ’）、３．７３〜３．８２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−６ｂ，Ｈ−２’）、３．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．６９（ｔ，１Ｈ，Ｊ８．４Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’９．６Ｈｚ，Ｊ３’，４’３．６Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．４７（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ５’）、１．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５３７．１５７５０（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２３Ｈ３０Ｏ１３Ｎａ＋の要求値５３７．１５７８６）。
【０１１９】
４-Ｏ-（４,６-Ｏ-ベンジリデン-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-６-Ｏ-トシル-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（１２）。
化合物１１（１．ｇ、１．９ｍモル）を、乾燥ピリジン（８ｍＬ）中に溶解した。混合物を０℃に冷却後、塩化トシル（０．３ｇ）、次いで４-ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）を添加した。３時間後、さらに塩化トシル（０．２５ｇ）を添加した。冷蔵庫（＋５℃）内で１６時間放置した後、反応物をメタノールでクエンチした。溶媒を蒸発後、残留物に対してシリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）、表題化合物１２を得た（０．７３３ｇ、５６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．３２〜７．８０（ｍ，９Ｈ，芳香族陽子）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．５Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｓ，１Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ）、４．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３．５Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’８．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．２６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−６ａ’）、４．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｈ−４’）、４．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ４．５Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２．０Ｈｚ，１２．５Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’）、３．９７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３およびＨ−５）、３．７４（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２’およびＣＯＯＭｅ）、３．６６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４およびＨ−３’）、３．５６（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．４４（ｓ，３Ｈ，ＭｅＰｈ）、１．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ６９１．１６６８９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３０Ｈ３６Ｏ１５ＳＮａ＋の要求値６９１．１６６７１）。
【０１２０】
６-アジド-４-Ｏ-（４,６-Ｏ-ベンジリデン-β-Ｄ−ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ−グルコピラノース（１３）。
トリオール１２（０．７２１ｇ、１．０７８ｍモル）を、乾燥ＤＭＦ（７ｍＬ）中に溶解し、ナトリウムアジド（０．２１８ｇ、３．３５ｍモル）を添加した。反応混合物を、６０℃で１８時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＤＣＭで除去し、濾過し、２回トルエンと共蒸発させた。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：アセトン＝１：１）、表題化合物１３を得た（０．４２４ｇ、７８％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．３７〜７．４９（ｍ，５Ｈ，芳香族陽子）、５．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｓ，１Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ）、４．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’８．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１．５Ｈｚ，１３．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ’）、４．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２およびＨ−４’）、４．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２．０Ｈｚ，１３．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’）、３．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５．０Ｈｚ，８．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＭｅ）、３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ７．８Ｈｚ，９．７Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．６３〜３．７０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−３’，Ｈ−４，Ｈ−６ａ，Ｈ−６ｂ）、３．５７（ｂｄ，１Ｈ，Ｈ−５’）、１．７１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５６２．１６４４５（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２３Ｈ２９Ｎ３Ｏ１２Ｎａ＋の要求値５６２．１６４３５）。
【０１２１】
４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（１４）。
アジド１３（０．２８４ｇ、０．５２６ｍモル）を、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）中のＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２００ｍｇ）を用い、触媒作用により２４時間かけて水素化した。触媒を濾過により除去し、溶媒を蒸発させ、残留物を乾燥した。次いで、得られたアミンを乾燥アセトニトリル（６ｍＬ）中に溶解し、ｐ-ニトロフェニル４-ペンテニルカーボネート（０．１６ｇ）を添加した。反応の完了後、溶媒を蒸発させ、８０％ＡｃＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解した。混合物を８０℃で２時間撹拌し、次いで濃縮し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１〜６：１）、表題化合物１４を得た（７０ｍｇ、２５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９１（ｍ，１Ｈ，ペンテニルのＨｄ）、５．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０２〜５．１１（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｅ）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．５Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１０（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨａ）、３．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．７４〜３．８３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ａ’およびＨ−６ｂ’）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ４．０Ｈｚ，８．０Ｈｚ）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４およびＨ−５’）、３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ａおよびＨ−２’）、３．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、２．１５（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｃ）、１．７４（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｂ）、１．６６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
【０１２２】
４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（４）。
カルバメート１４（６０．８ｍｇ、０．１１６ｍモル）を、Ｈ２Ｏ  １．３４ｍＬ、ＨＥＰＥＳ緩衝液［０．３９６ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ８］、ＤＴＴ溶液（１００ｍＭ、０．１ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（１０μＬ）の混合液中に溶解した。この混合物にＵＤＰ−Ｇｌｃ（０．１１２ｇ、１．５８当量）、次いでα-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（０．１９８ｍＬ）を添加した。反応物を３７℃で２１時間インキュベートし、次いで超遠心し、ＤＯＷＥＸ（Ｈ＋）で処理し、Ｃ−１８  ＨＰＬＣ上でクロマトグラフィーを行い（水：ＭｅＯＨ：０．１％ＴＦＡ、２５〜３０％ＭｅＯＨで溶出）、表題化合物４を得た（６３．３ｍｇ、８０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．８８（ｍ，１Ｈ，ペンテニルのＨｄ）、５．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．００〜５．０９（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｅ）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ４．０Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’８．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．３７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３およびＨ−４’’）、４．３０（ｔ，１Ｈ，Ｊ４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０８（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨａ）、４．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’）、３．６５〜３．９２（ｍ，１０Ｈ，Ｈ−２’’，Ｈ−３’’，Ｈ−３’，Ｈ−６ａ）、３．５３〜３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５およびＨ−２’）、３．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ７．５Ｈｚ，１０．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．１２（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｃ）、１．７１（ｍ，２Ｈ，ペンテニルのＨｂ）、１．７０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ７０８．２３２０６（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２７Ｈ４３ＮＯ１９Ｎａ＋の要求値７０８．２３２１５）。
【０１２３】
実施例５
２つの独立の単官能性リガンドを有する先行技術のポリマーＰＰＭの調製
【化９】
2010521526.tif 000047
【０１２４】
上で示したスキーム５は、ラジカル重合を介する単官能性リガンド１および２の取り込みを図示する。化合物１（３,６,９,１２,１５,１８-ヘキサ-オキサ-ヘンイコサ-２０-エニル  ４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ−ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノシド）は、シガ様毒素を標的にし、化合物２はＳＡＰを標的にする。
【０１２５】
脱気水（１ｍＬ）中のアクリルアミド（１７．１ｍｇ、０．２５ｍモル）、単量体１（８１ｍｇ、０．１ｍモル）および単量体２（５４ｍｇ、０．１ｍモル）の混合溶液に、水（１０μＬ）中の過硫酸ナトリウム（１ｍｇ）の溶液を添加した。溶液をアルゴンでパージし、ＴＥＭＥＤ（１２μＬ）を添加した。混合物を１６時間インキュベートし、次いで透析し、凍結乾燥し、１３ｍｇのＰＰＭを得た。ＮＭＲデータ（図示せず）は各リガンドの取り込みが約４．９％であることを示した。
【０１２６】
実施例６
２つの官能基が共通の原子にリンカーを介して結合された複数のヘテロ二官能性リガンドを有する多価ポリマーＰＰＩの調製
以下に示すスキーム６は、ラジカル重合を介したヘテロ二官能性リガンドの取り込みを図示する。化合物３（２４-（Ｒ,Ｓ）-［４-Ｏ-（４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-グルコピラノシルオキシ］-２５-［（シス）-２-カルボキシル-２-メチル-［１,３］ジオキサン-５-イルオキシ］-４,７,１０,１３,１６,１９,２２-ヘプタ-オキサ-ペンタコサ-１-エン）はトリサッカライド部分を介してシガ毒素を標的にし、グリセロールの環状ピルビン酸塩を含む部分はＳＡＰを標的にする。
【化１０】
2010521526.tif 000048
【０１２７】
脱気水（１ｍＬ）中のアクリルアミド（３４．２ｍｇ、０．５ｍモル）および単量体３（１０３ｍｇ、０．１ｍモル）の溶液に、水（１０μＬ）中の過硫酸ナトリウム（１ｍｇ）の溶液を添加した。溶液をアルゴンでパージし、ＴＥＭＥＤ（１２μＬ）を添加した。混合物を１６時間インキュベートし、次いで透析し、凍結乾燥し、２４ｍｇのＰＰＩを得た。ＮＭＲデータ（図示せず）は糖単量体の取り込みが約２．６％であることを示した。
【０１２８】
実施例７
２つの官能基が共通の原子またはリンカーを用いずに互いに結合された複数のヘテロ二官能性リガンドを有する多価ポリマーＥＰＩ−１５６の調製
以下に示すスキーム７は、ラジカル重合を介したヘテロ二官能性リガンドの取り込みを図示する。化合物４（４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｎ-（４-ペンテニルカルバモイル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-α-Ｄ−グルコピラノース）はトリサッカライド部分を介してシガ毒素を標的にし、グリセロールの環状ピルビン酸塩を含む部分はＳＡＰを標的にする。
【化１１】
2010521526.tif 000049
【０１２９】
脱気水（１ｍＬ）中のアクリルアミド（３４．２ｍｇ、０．５ｍモル）および単量体４（６６ｍｇ、０．０９６ｍモル）の溶液に、水（１０μＬ）中の過硫酸ナトリウム（１ｍｇ）の溶液を添加した。溶液をアルゴンでパージし、ＴＥＭＥＤ（１２μＬ）を添加した。混合物を１６時間インキュベートし、次いで透析し、凍結乾燥し、２６ｍｇのＥＰＩ−１５６を得た。ＮＭＲデータ（図示せず）は糖単量体の取り込みが約４％であることを示す。
【０１３０】
実施例８
６-Ｏ-（２,５-ジニトラ（ｄｉｎｉｔｒａ）-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノース（２３）の合成
【化１２】
2010521526.tif 000050
【０１３１】
３-Ｏ-アセチル-４,６-Ｏ-ベンジリデン-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１５）。
ＭｅＣＮ（３０ｍＬ）中の乾燥１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（４．６２ｇ、１５．１ｍモル）の溶液に、ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）２（２．２７ｍＬ、１当量）、次いでＣＳＡ（１００ｍｇ）を添加した。３０分後、Ｐｙ−Ａｃ２Ｏ（１：１  ｖ／ｖ、１０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。反応物をＭｅＯＨの添加によりクエンチし、濃縮し、トルエンとともに２回共蒸発させた。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：酢酸エチル（３０〜４０％））、表題生成物を得た（３．１９ｇ、５４％）。
［α］Ｄ＋２３°（ｃ１．２，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．５〜７．３５（ｍ，５Ｈ，芳香族）、５．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｓ，１Ｈ，ＣＨＰｈ）、５．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３３．４Ｈｚ，Ｊ３，４８．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ５．１Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．５Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ｂ，５５．２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、３．７７〜３．７０（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，ＣＨ３）、２．１２６（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、１．７６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１６９．７９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４８（Ｃ＝Ｏ）、１３６．８０（Ｃ芳香族）、１２９．１７（ＣＨ芳香族）、１２８．２８（ＣＨ芳香族）、１２６．１４（ＣＨ芳香族）、１０４．０３（Ｃピルビン酸塩）、１０１．５９（ＣＨベンジリデン）、９８．８４（Ｃ−１）、７７．６８、７７．１５、７３．０７、６８．８４（Ｃ−６）、６２．３４、５２．６９（ＯＣＨ３）、２２．３９（ＣＨ３）、２０．９８（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１９．１３１３６（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ１９Ｈ２４Ｏ９Ｎａ＋の要求値４１９．１３１２５）。計算値Ｃ１９Ｈ２４Ｏ９：Ｃ、５７．８６％；Ｈ、５．６２％。実測値：Ｃ、５７．８４％；Ｈ、５．５９％。
【０１３２】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-ベンジル-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１６）。
乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のベンジリデン誘導体１５（１．６ｇ、４ｍモル）およびモレキュラーシーブス（４Å、１ｇ）の懸濁液に、ＮａＣＮＢＨ３（３．８ｇ、６０ｍモル）、次いでＨＣｌ−エーテル溶液（２Ｍ、約１０ｍＬ）を、気体の発生が停止するまで添加した。混合物を、飽和水性ＮａＨＣＯ３により中和し、セライトを通して濾過し、濃縮し、次いでＤＣＭで除去し、水で洗浄し、濃縮した。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）、表題化合物１６を得た（１．１６ｇ、７３％）。
［α］Ｄ＋１３°（ｃ０．９，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．２８〜７．２５（ｍ，５Ｈ，芳香族）、５．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３〜Ｊ３，４＝３．４Ｈｚ，Ｈ−３）、４．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ１２．２Ｈｚ，ＣＨ２）、４．５８（ｄ，１Ｈ，ＣＨ２）、４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．７９〜３．７５（ｍ，５Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６ａ，ＣＨ３）、３．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ３．８Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．４Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．７８（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、２．１１（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）、１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．７２（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４２（Ｃ＝Ｏ）、１３７．７４（Ｃ芳香族）、１２８．４３（ＣＨ芳香族）、１２７．７７（ＣＨ芳香族）、１０４．８７（Ｃピルビン酸塩）、９８．０７（Ｃ−１）、７４．８２、７４．５１、７３．６７（ＣＨ２−Ｂｎ）、７０．２２、６９．６２（Ｃ−６）、６９．２３、５２．６８（ＯＣＨ３）、２１．６９（ＣＨ３）、２０．８８（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１７．１１５８０（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ１９Ｈ２２Ｏ９Ｎａ＋の要求値４１７．１１５６０）。計算値Ｃ１９Ｈ２２Ｏ９：Ｃ、５７．５７％；Ｈ、６．１０％。実測値：Ｃ、５７．４２％；Ｈ、６．０１％。
【０１３３】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-６-Ｏ-ベンジル-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１７）
テトラ-Ｏ-アセチル-ガラクトピラノーストリクロロアセトイミダート（３．８３ｇ、７．７７ｍモル）と、グリコシル受容体１６（２．７７ｇ、７ｍモル）とを組み合わせ、乾燥し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中に溶解し、次いでモレキュラーシーブス（４Å、１ｇ）を添加した。３０分後、ＴＭＳＯＴｆ（１００μＬ）を添加した。１時間後、混合物をＰｙでクエンチし、濃縮した。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）、表題化合物１７を得た（２．６６ｇ、５２％）。
［α］Ｄ＋４°（ｃ２．６，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ７．４０〜７．３０（ｍ，５Ｈ，芳香族）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３２．２Ｈｚ，Ｊ３，４２．７Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’１．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’７．９Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、４．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ１２．２Ｈｚ，Ｂｎ）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｂｎ）、４．４３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１３〜４．０９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、３．８７〜３．７８（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−５’）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．６７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ２．２Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．９Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ３．４Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．１６、２．０８、２．０３、１．９７、１．９２（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、１．７３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３５（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２９（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４２（Ｃ＝Ｏ）、１６９．１１（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０６（Ｃ＝Ｏ）、１３７．８２（Ｃ芳香族）、１２８．５４（ＣＨ芳香族）、１２７．９６（ＣＨ芳香族）、１０５．３８（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０２．１３（Ｃ−１’）、９８．０８（Ｃ−１）、７６．１０、７４．０９、７３．６０（ＣＨ２−Ｐｈ）、７０．８８、７０．６９、７０．４３、６８．９０、６８．８１、６８．３３（Ｃ−６’）、６６．８７、６１．０３（Ｃ−６）、５２．６５（ＯＣＨ３）、２１．２６（ＣＨ３）、２０．８８（ＣＨ３）、２０．６９（ＣＨ３）、２０．６５（ＣＨ３）、２０．６２（ＣＨ３）、２０．５７（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ７４９．２２６６５（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３３Ｈ４２Ｏ１８Ｎａ＋の要求値７４９．２２６３４）。解析計算値Ｃ３３Ｈ４２Ｏ１８：Ｃ、５４．５４％；Ｈ、５．８３％。実測値：Ｃ、５４．２３％；Ｈ、５．７３％。
【０１３４】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノシド（１８）。
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物１７（１．６ｇ、２．２ｍモル）の溶液に、１滴の水およびＰｄ（ＯＨ）２（３０ｍｇ）を添加した。Ｈ２大気下での撹拌の２時間後、混合物を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ膜フィルタを通して濾過し、濃縮し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：アセトン＝１：１）、表題化合物１８を得た（１．０ｇ、７１％）。
［α］Ｄ＋８°（ｃ１．２，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３〜Ｊ３，４２．３Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’０．９Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’８．０Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．６４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１４〜４．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、３．９３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ４’，５’０．９Ｈｚ，Ｊ５’，６ａ’〜Ｊ５’，６ｂ’６．７Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．８５〜３．８２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６ａ）、３．７６６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ３．８Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、２．１６、２．０９、２．０６、２．０３、１．９８（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、１．７４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．３２（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０８（Ｃ＝Ｏ）、１０５．４７（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０２．２５（Ｃ−１’）、９７．７８（Ｃ−１）、７６．４９、７４．４０、７０．９３、７０．８４．７０．３６、６９．０５、６８．９８、６６．８９、６１．８０（Ｃ−６’）、６１．０５（Ｃ−６）、５２．６９（ＯＣＨ３）、２１．２７（ＣＨ３）、２０．８６（ＣＨ３）、２０．６８（ＣＨ３）、２０．６４（ＣＨ３）、２０．５５（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ６５９．１７９２０（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ２６Ｈ３６Ｏ１８Ｎａ＋の要求値６５９．１７９３９）。計算値Ｃ２６Ｈ３６Ｏ１８：Ｃ、４９．０６％；Ｈ、５．７０％。実測値：Ｃ、４９．１２％；Ｈ、５．７０％。
【０１３５】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-（４-ニトロフェニル）-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-１,２-Ｏ-［（Ｓ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ−グルコピラノシド（１９）。
乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物１８（１ｇ、１．５７ｍモル）およびクロロぎ酸４−ニトロフェニル（３８０ｍｇ、１．２当量）の溶液に、Ｐｙ（約０．２ｍＬ）を添加した。５分後に、ＴＬＣ（ヘキサン：アセトン＝１：１）によって、反応の完了を確認した。水（０．２ｍＬ）を添加し、混合物を濃縮し、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１においてシリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、表題化合物１９を得た（１．２ｇ、９５％）。
［α］Ｄ＋０．７°（ｃ１，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ８．３１〜８．２８（ｍ，２Ｈ，芳香族）、７．４２〜７．３９（ｍ，２Ｈ，芳香族）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３１．６Ｈｚ，Ｊ３，４２．５Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’１．１Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’８．０Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ａ，５２．３Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．７Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ｂ，５５．７Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６’ａ，５６．５Ｈｚ，Ｊ６’ａ，６’ｂ１１．３Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．９３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ４’，５’１．１Ｈｚ，Ｊ５’，６ａ’〜Ｊ５’，６ｂ’６．６Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．７８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４，ＣＨ３）、２．１７、２．１２、２．０７、２．０５、１．９８（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、１．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３５（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２１（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０５（Ｃ＝Ｏ）、１６９．３８（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０３（Ｃ＝Ｏ）、１５５．３３（ＰｈのＣ−Ｏ）、１５２．２８（炭酸塩のＣ＝Ｏ）、１４５．５３（ＰｈのＣ−ＮＯ２）、１２５．３６（ＰｈのＣＨ）、１２１．７１（ＰｈのＣＨ）、１０５．６７（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０１．６６（Ｃ−１’）、９７．６５（Ｃ−１）、７７．２６、７４．２２、７１．００、７０．８２．６９．７１、６８．８９、６７．７６（Ｃ−６）、６６．８５、６６．５７、６１．１８（Ｃ−６’）、５２．７９（ＯＣＨ３）、２１．２０（ＣＨ３）、２０．８４（ＣＨ３）、２０．６９（ＣＨ３）、２０．６７（ＣＨ３）、２０．６４（ＣＨ３）、２０．５４（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ８２４．１８５７３（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３３Ｈ３９ＮＯ２２Ｎａ＋の要求値８２４．１８５５９）。計算値Ｃ３３Ｈ３９ＮＯ２２：Ｃ、４９．４４％；Ｈ、４．９０％；Ｎ、１．７５％。実測値：Ｃ、４９．６４％；Ｈ、４．８８％；Ｎ、２．０７％。
【０１３６】
２-（ペンタ-４-エニルオキシカルバモイル（ｅｎｙｌｏｘｙｃａｒｂａｍｏｙｌ））-エチルアミン（２０）。
乾燥ＤＣＭ（７ｍＬ）中のペンタ-４-エノール-１（０．９７ｇ、１１．２６ｍモル）およびクロロぎ酸４-ニトロフェニル（２．３ｇ）の溶液に、Ｐｙ（０．９２ｍＬ）を徐々に添加した。３０分後、得られた混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１,２-ジアミノエタン（２ｍＬ）の溶液に添加した。２０分後、混合物を塩水で洗浄し、ＤＣＭ画分を濃縮した。シリカゲル上で残留物のクロマトグラフィーを行い（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１：１〜０：１）、生成物７を淡黄色シロップとして得た（１．１１ｇ；５７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．８８〜５．７４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．１５〜４．９０（ｍ，３Ｈ，ＮＨ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．０６（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｏ）、３．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．０Ｈｚ，ＣＨ２ＮＨＣＯ）、２．８１（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨ２）、２．１６〜２．０６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、１．７６〜１．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１５６．９０（Ｃ＝Ｏ）、１３７．５９（ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．１２（ＣＨ＝ＣＨ２）、６４．２９（ＣＨ２Ｏ）、４２．８９（ＣＨ２Ｎ）、４１．３４（ＣＨ２Ｎ）、２９．９８（ＣＨ２）、２８．２４（ＣＨ２）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  １７３．１２８４９（［Ｍ＋Ｈ］＋、Ｃ８Ｈ１７Ｎ２Ｏ２＋の要求値１７３．１２８４５）。
【０１３７】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-（２,５-ジニトラ-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-α-Ｄ-グルコピラノース（２１）。
ＤＣＭ中の化合物２０（２５０ｍｇ）の溶液に、化合物１９（８８４ｍｇ、１．１ｍモル）の溶液、次いでＥｔ３Ｎ（３００μＬ）を添加した。沸点より低温に維持しつつ時々加熱して１時間後、ＴＬＣ（ヘキサン：アセトン＝１：１）で反応の完了を確認した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ヘキサン：アセトン＝１：１）、表記化合物２１を得た（５５０ｍｇ、６０％）。
［α］Ｄ＋０．８°（ｃ１，ＣＨＣｌ３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δＨ５．８４〜５．７６（ｍ，１Ｈ，−ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３１．４Ｈｚ，Ｊ３，４２．３Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．５Ｈｚ，Ｊ４’，５’０．９Ｈｚ，Ｈ−４’）、５．２３（ブロード  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、５．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’８．２Ｈｚ，Ｊ３’，４’１０．４Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０８〜４．９７（ｍ，４Ｈ，Ｈ−３’，ＮＨ，−ＣＨ＝ＣＨ２）、４．６３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．２２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ａ，５２．０Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．６Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．１８〜４．０９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、４．０７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、３．９５（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ４’，５’１．０Ｈｚ，Ｊ５’，６ａ’〜Ｊ５’，６ｂ’＝７．３Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．６４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．３２（ブロード  ｓ，４Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、２．１７、２．１０、２．０８、２．０３、１．９８（５ｓ，１５Ｈ，ＯＡｃ）、２．１４〜２．１０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７４〜１．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２８（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．２５（Ｃ＝Ｏ）、１６９．０１（Ｃ＝Ｏ）、１５７．０３（Ｃ＝Ｏ）、１５６．２７（Ｃ＝Ｏ）、１３７．５３（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．２０（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１０５．６４（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０２．３７（Ｃ−１’）、９７．７１（Ｃ−１）、７７．３２、７３．９３、７０．８８、７０．７９、６９．８４，６８．８９、６７．２１、６６．８７、６４．５０（ＣＨ２）、６４．１２（ＣＨ２）、６１．９９（ＣＨ２）、５２．６９（ＯＣＨ３）、４１．３１（ＣＨ２）、４１．０６（ＣＨ２）、３０．００（ＣＨ２）、２８．１９（ＣＨ２）、２１．１５（ＣＨ３）、２０．８６（ＣＨ３）、２０．７０（ＣＨ３）、２０．６６（ＣＨ３）、２０．５５（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ８５７．２７９２９（［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３５Ｈ５０Ｎ２Ｏ２１Ｎａ＋の要求値８５７．２７９８３）。計算値Ｃ３５Ｈ５０Ｎ２Ｏ２１：Ｃ、５０．３６％；Ｈ、６．０４％、Ｎ、３．３６％。実測値：Ｃ、５０．３７％；Ｈ、６．１５％；Ｎ、３．３５％。
【０１３８】
６-Ｏ-（２,５-ジニトラ-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-（β-Ｄ-ガラクトピラノシル）-α-Ｄ-グルコピラノース（２２）。
保護誘導体２１（０．５３ｇ、０．６３ｍモル）を、乾燥ＭｅＯＨ（３．５ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＨ中のＮａＯＭｅ（１Ｍ、０．６４ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮し、得られた固体を水（３ｍＬ）中に溶解した。１時間後、メチルエステルの加水分解が完了した。溶液を酢酸で中和し、濃縮し、次のステップで直接用いた。少量の試料を、１％ＡｃＯＨを含有する水−ＭｅＯＨ中、Ｃ−１８担体でのＨＰＬＣクロマトグラフィーにより精製した。
［α］Ｄ＋１９°（ｃ１，Ｈ２Ｏ）。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：５．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．１０〜５．０１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４１〜４．３４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ）、４．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ５．３Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．０８〜４．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，ＯＣＨ２）、３．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’３．４Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．８３〜３．７４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６’ａ，Ｈ−６’ｂ）、３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、３．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’９．９Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．５５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２４（ｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．１２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．６４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１８１．２８（Ｃ＝Ｏ）、１５９．２３（Ｃ＝Ｏ）、１５８．４１（Ｃ＝Ｏ）、１３８．８５（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．２６（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１０７．３６（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０５．１５（Ｃ−１’）、９６．７４（Ｃ−１）、７８．５３、７５．６１、７５．３７、７２．８４、７１．０４、６９．５４、６８．８７、６８．５２、６５．２９（ＣＨ２）、６４．３４（ＣＨ２）、６１．３３（ＣＨ２）、４０．５６（ＣＨ２）、４０．３５（ＣＨ２）、２９．６６（ＣＨ２）、２７．７５（ＣＨ２）、２１．７６（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ６０９．２１３６５（［Ｍ］−）、Ｃ２４Ｈ３７Ｎ２Ｏ１６−の要求値６０９．２１３７６）。計算値Ｃ２４Ｈ３８Ｎ２Ｏ１６：Ｃ、４７．２１％；Ｈ、６．２７％；Ｎ、４．５９％。実測値：Ｃ、４６．６７％；Ｈ、６．２３％；Ｎ、４．５７％。
【０１３９】
６-Ｏ-（２,５-ジニトラ-７-オキサ-６-オキソ-ドデカ-１１-エノイル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース（２３）。
脱保護されたラクトース誘導体２２を、ＨＥＰＥＳ緩衝液［２ｍＬ、１．６Ｍ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、０．８ｍｇ／ｍＬ）、水（７．１４ｍＬ）］中に溶解後、アルカリホスファターゼ（５４μＬ）およびＵＤＰ−グルコース（０．５８ｇ；１．５当量）を添加した。α-（１,４）-ガラクトシルトランスフェラーゼ／ＵＤＰ−４’−Ｇａｌ−エピメラーゼ（０．７ｍＬ）を反応混合物に添加し、それを３７℃でインキュベートした。１８時間後、ＮＭＲで反応が完了したことを確認した。反応混合物を濃縮した。残留物をメタノールで処理し、固体沈殿物を濾過・除去し、メタノールですすいだ。組み合わせたメタノール溶液画分を濃縮し、それに対してシリカゲル上でクロマトグラフィーを行った（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（ＡｃＯＨの４％）＝６：４〜４：５）。生成物を水中に溶解し、０．２μｍの膜を通して濾過し、凍結乾燥し、白色粉末２３を得た（３９４ｍｇ；８０％）。
［α］Ｄ＋６１°（ｃ１，Ｈ２Ｏ）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δＨ５．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．１０〜５．０２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’４．１Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．７Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４２〜４．３６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．３１（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、４．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５．６ｂ５．４Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．０７（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．５Ｈｚ，ＯＣＨ２）、４．０４〜４．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−４’’，Ｈ−５）、３．９４〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−３’’）、３．８６〜３．６８（ｍ，７Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−２’’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、３．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’，３’１０．３Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．２４（ｂｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．１４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．７３（ｍ，５Ｈ，ＣＨ２，ＣＨ３）、１．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１７４．５３（Ｃ＝Ｏ）、１５９．８５（Ｃ＝Ｏ）、１５９．００（Ｃ＝Ｏ）、１３９．４４（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１１５．８４（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１０６．７１（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０６．１０（Ｃ−１’’）、１０１．１３（Ｃ−１’）、９７．８２（Ｃ−１）、７９．４４、７７．８９、７６．３８、７６．１０、７３．０１、７１．６２、７０．０６、６９．８７、６９．６０、６９．３０、６５．９０（ＣＨ２）、６４．９９（ＣＨ２）、６１．３９（ＣＨ２）、６１．１２（ＣＨ２）、４１．１５（ＣＨ２）、４０．９６（ＣＨ２）、３０．２６（ＣＨ２）、２８．３６（ＣＨ２）、２１．８５（ＣＨ３）。エレクトロスプレーイオン化ＭＳ  ｍ／ｚ  ７９５．２６４３８（［Ｍ＋Ｎａ］＋）、Ｃ３０Ｈ４８Ｎ２Ｏ２１Ｎａ＋の要求値７９５．２６４１８。計算値Ｃ３０Ｈ４７Ｎ２Ｏ２１：Ｃ、４５．３４％；Ｈ、５．９６％；Ｎ、３．５３％。実測値：Ｃ、４５．３８％；Ｈ、６．１１％；Ｎ、３．８０％。
【０１４０】
実施例９
化合物２３とアクリルアミド（ＥＰＩ−２９）との共重合体の合成
【化１３】
2010521526.tif 000051
【０１４１】
トリス緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ９；７．３２ｍＬ）中の、化合物２３（４７１ｍｇ；０．６１ｍモル）およびアクリルアミド（２６４ｍｇ；３．７ｍモル）の溶液を、アルゴンでパージし、次いでトリス緩衝液（７４．３μＬ）中の過硫酸アンモニウム（７．４３ｍｇ）の溶液を添加し、アルゴンでパージした。ＴＥＭＥＤ（３７．１５μＬ）を反応混合物に添加し、それを短時間ボルテックスし、次いで室温で一晩放置した。混合物をエタノール（４０ｍＬ）で希釈した。沈殿物を採取し、エタノールで洗浄し、水で除去し、脱イオン水（２Ｌ）に対して４回透析した。ポリマーの透析溶液を０．２μｍの膜を通して濾過し、凍結乾燥し、生成物ＥＰＩ−２９を白色粉末として得た（３９０ｍｇ）。ＮＭＲは、リガンドの取り込みが５モル％であることを示した。
【０１４２】
実施例１０
メタクリレート単量体｛２-｛１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ−ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース｝-６-イルオキシカルボニルアミノ｝-カルバミン酸５-［２-（２-メチル-アクリロイルアミノ）-エチルスルファニル］-ペンチルエステル（２５）の合成
【化１４】
2010521526.tif 000052
【０１４３】
｛２-｛１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノース｝-６-イルオキシカルボニルアミノ｝-エチル］-カルバミン酸５-（２-アミノ-エチルスルファニル）-ペンチルエステル（２４）。
化合物２３（９１ｍｇ、０．１０７ｍモル）を、石英チューブ内の脱気水（３ｍＬ）中に溶解し、アルゴンでパージし、次いでシステアミン塩酸塩（２４４ｍｇ、２．１４ｍモル）を混合溶液に添加し、混合物をアルゴンでパージした。それに対し、ＵＶランプを冷却するための短い中断を有する１５分サイクル（５回）にわたり、アルゴン下、ＵＶ光（Ｒａｙ−Ｐｅｎ）で照射した。反応の生成物を、０．１％ＴＦＡを有する水−メタノールを用い、逆相シリカゲルＣ１８上で精製した。濃縮および凍結乾燥後、生成物２４を白色泡として得た（９４ｍｇ、１００％）。
［δ］Ｄ＋４４０（ｃ１．１２，水）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ５．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’３．９４Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４２〜４．３７（ｍ，３Ｈ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．９Ｈｚ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３４．０Ｈｚ，Ｈ−３）、４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ｂ５．６Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１２〜４．００（ｍ，５Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−４’’，ＯＣＨ２）、３．９６〜３．６８（ｍ，９Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−５’，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−２’’，Ｈ−３’’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、３．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．２７〜３．２０（ｍ，６Ｈ，ＮＣＨ２）、２．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．７Ｈｚ，ＳＣＨ２）、２．６１（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．３，ＳＣＨ２）、１．５５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．５４〜１．５２（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）、１．５０〜１．４８（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１７４．２７（Ｃ＝Ｏ）、１５９．８６（Ｃ＝Ｏ）、１５８．９９（Ｃ＝Ｏ）、１０６．５４（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０６．０９（Ｃ−１’’）、１０１．１３（Ｃ−１’）、９７．８８（Ｃ−１）、７９．４３、７７．７１、７６．３９、７６．１６、７３．０３、７１．６３、７０．０７、６９．８８、６９．６２、６９．５９、６９．３５、６６．３４（ＣＨ２）、６５．００（ＣＨ２）、６１．４１（ＣＨ２）、６１．１５（ＣＨ２）、４１．１８（ＣＨ２）、４１．１７（ＣＨ２）、３９．２７（ＣＨ２）、３１．４５（ＣＨ２）、２９．０６（ＣＨ２）、２９．０１（ＣＨ２）、２８．６９（ＣＨ２）、２５．１４（ＣＨ２）、２１．８５（ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  ８７２．２９４６０［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３２Ｈ５５Ｎ３Ｏ２１ＳＮａ＋の要求値８７２．２９４１０。
【０１４４】
｛２-｛１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（カルボキシ）エチリデン］-４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-β-Ｄ-グルコピラノース｝-６-イルオキシカルボニルアミノ｝-カルバミン酸５-［２-（２-メチル-アクリロイルアミノ）-エチルスルファニル］-ペンチルエステル（２５）。
システアミン付加体２４（３８ｍｇ、０．４４ｍモル）を、水（３ｍＬ）中に溶解し、Ｎ-メタクリルオキシスクシンイミド（３０ｍｇ、０．１６ｍモル）、次いで乾燥重炭酸ナトリウムをｐＨ８に達するまで添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで５Ｍ酢酸で酸化した。１％酢酸を有する水−メタノールを用いて逆相シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、凍結乾燥後、純粋生成物２５を白色泡として得た（２８ｍｇ、６９％）。
［α］Ｄ＋４３．７°（ｃ１．２４，水）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ５．７１ｍ（ｓ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ２）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．８Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４６（ｓ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ２）、４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’’３．９Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．７Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４２〜４．３６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．３０〜４．２１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−６ｂ）、４．１０〜４．００（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−４’’）、３．９４〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−３’’）、３．８６〜３．７６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−２’’，Ｈ−６ａ’’）、３．７４〜３．６７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−６ｂ’’）、３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’３’７．９Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．４７（ｔ，Ｊ６．０Ｈｚ，ＮＣＨ２）、３．２４（ｂｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．７Ｈｚ，ＳＣＨ２）、２．６１（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．１Ｈｚ，ＳＣＨ２）、１．９３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．６６〜１．５８（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）、１．５０〜１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１７４．５９（Ｃ＝Ｏ）、１５９．７８（Ｃ＝Ｏ）、１５８．９１（Ｃ＝Ｏ）、１３９．８８（Ｈ２Ｃ＝ＣＣＨ３）、１２１．９６（Ｈ２Ｃ＝ＣＣＨ３）、１０６．７６（Ｃ−ピルビン酸塩）、１０６．６（Ｃ−１’’）、１０１．０８（Ｃ−１’）、９７．７４（Ｃ−１）、７９．４２、７７．８４、７６．３２、７６．０５、７２．９７、７１．５７、７０．０１、６９．８２、６９．５８、６９．５４，６９．２２、６６．３３（ＣＨ２）、６６．３２（ＣＨ２）、６４．９５（ＣＨ２）、６１．３９（ＣＨ２）、６１．３４（ＣＨ２）、６１．１２（ＣＨ２）、６１．０７（ＣＨ２）、４１．１１（ＣＨ２）、３９．８２（ＣＨ２）、３１．８５（ＣＨ２）、３１．１６（ＣＨ２）、２９．１７（ＣＨ２）、２８．６２（ＣＨ２）、２５．１５（ＣＨ２）、２１．８５（ＣＨ３）、１８．５３、１８．５１（ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  ９１６．３２２６１［Ｍ−Ｈ］、Ｃ３６Ｈ５８Ｎ３Ｏ２２Ｓの要求値９１６．３２３８２。
【０１４５】
実施例１１
化合物２５とＨＰＭＡ（ＨＰＭＡ−Ｂ２）との共重合体の合成
【化１５】
2010521526.tif 000053
【０１４６】
化合物２５（２７ｍｇ、０．０３ｍモル）およびＨＰＭＡ単量体（７２ｍｇ、０．５ｍモル）を、脱気した酢酸塩緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ４）中に溶解した。溶液に対して真空下で超音波処理し、次いでアルゴンで飽和させた。過硫酸アンモニウムの溶液（酢酸塩緩衝液２０μＬ中２ｍｇ）を混合物に添加し、それに対して真空下で超音波処理し、アルゴンで飽和させた。最後に、システアミン溶液（酢酸塩緩衝液２８μＬ中０．１４ｍｇ）を反応混合物に添加し、数秒間ボルテックス後、それを５０℃で一晩インキュベートした。２１時間後、溶液をアセトン（８ｍＬ）で処理した。沈殿物を分離し、次いで水中に溶解し、脱イオン水に対して透析し、次いで０．４５μｍの膜を通して濾過し、凍結乾燥し、生成物を白色粉末（２５ｍｇ）として得た。Ｄ２Ｏ中での１Ｈ-ＮＭＲは、リガンドのＨＰＭＡ−Ｂ２ポリマーへの取り込みが５モル％であることを示した。
【０１４７】
実施例１２
【化１６】
2010521526.tif 000054
【０１４８】
３-Ｏ-アセチル-６-Ｏ-ベンジル-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ−ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース（２６）。
酢酸塩１７（０．９７３ｇ；１．３４ｍモル）を、乾燥メタノール（２．５ｍＬ）中に溶解し、０．５Ｍ  ＮａＯＭｅ（２．８ｍＬ）を添加した。室温で１時間後、混合物をＤｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂で処理し、濾過し、濃縮し、白色泡を得た。生成物（０．７６４ｇ）を、水（１５ｍＬ）中に溶解し、ＨＥＰＥＳ緩衝液（４．５８ｍＬ）、次いでＤＴＴ溶液（１．１４ｍＬ）およびアルカリホスファターゼ（１１４μＬ）を添加した。次いで、ＵＤＰ−Ｇｌｃ（１．２３ｇ）、次いで融合酵素（１．５ｍＬ）を混合物に添加した。反応物を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、混合物を水で希釈し、Ｄｏｗｅｘ  Ｈ＋樹脂で酸化し、濾過し、上清を濃縮した。乾燥メタノール（２５ｍＬ）中の残留物の懸濁液に塩化アセチル（０．２５ｍＬ）を添加し、混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いでピリジンで中和した。固体残留物を濾過・除去し、メタノールですすぎ、濾過物を濃縮し、アセチル化した（ピリジン１０ｍＬ、無水酢酸１０ｍＬ、４８時間）。数摘のメタノールを混合物に添加し、過剰な試薬をクエンチし、混合物を濃縮し、トルエンと共蒸発させた。粗生成物をヘキサン−アセトン（７：３〜２：１）を用いてシリカゲルカラム上で精製し、純粋表題生成物を白色泡として得た（０．８１４ｇ；６０％）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．３９〜７．２９（ｍ，５Ｈ，Ｃ６Ｈ５）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．３Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４＝２．６Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．１９、（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’３．７Ｈｚ，Ｈ−２’’）、５．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｊ２’，３’１１．８Ｈｚ，Ｈ−２’）、５．０２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．９Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ１２．２Ｈｚ，ＣＨ２）、４．５４〜４．４９（ｍ，３Ｈ，Ｊ５’’，６ａ’’８．４Ｈｚ，Ｈ−１’，Ｈ−５’’，ＣＨ２）、４．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５’，６’６．５Ｈｚ，Ｊ６ａ’，６ｂ’１１．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ６ａ’’，６ｂ’’１０．９Ｈｚ，Ｈ−６ａ’’）、４．１１〜４．０６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ｂ’’）、４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．８９〜３．８３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５’）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５’）、３．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ６ａ）、３．６３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．９２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  １０３７．３１１２２［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４５Ｈ５８Ｏ２６Ｎａ＋の要求値１０３７．３１０８５。
【０１４９】
３-Ｏ-アセチル-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-α-Ｄ-グルコピラノース（２７）。
化合物２６（０．８０４ｇ；０．７９ｍモル）を、メタノール（５ｍＬ）中に溶解し、炭素に担持された１０％パラジウムの存在下で水素化した。２時間後、混合物をメタノールで希釈した。触媒を濾過・除去し、メタノールですすいだ。濾過物を濃縮し、純粋生成物を白色固体として得た（０．７３ｇ；１００％）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ５．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．１Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４２．４Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．２２〜５．１７（ｍ，２Ｈ，Ｊ１’，２’７．９Ｈｚ，Ｊ２’，３’１０．８Ｈｚ，Ｊ１’’，２’’３．８Ｈｚ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）、５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．８Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．６７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’’）、４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５’６ａ’６．５Ｈｚ，Ｊ６ａ’，６ｂ’１１．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ’）、４．３５〜４．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．１９〜４．０５（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、４．８９〜４．７８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’）、４．７７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、４．６８〜４．６２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  ９４７．２６３４６［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ３８Ｈ５２Ｏ２６Ｎａ＋要求値９４７．２６３９０。
【０１５０】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-６-Ｏ-（４-ニト
ロフェニルオキシカルボニル）-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-α-Ｄ-グルコピラノース（２８）。
脱ベンジル化生成物２７（０．７１４ｇ；０．７７２ｍモル）およびクロロぎ酸ｐ-ニトロフェニル（０．２４ｍｇ；１．１６ｍモル）を、乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解し、ピリジン（０．１９ｍＬ；２．３ｍモル）を混合物に滴下添加した。１時間後、混合物をＤＣＭで希釈し、塩水で洗浄し、濃縮し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い（ヘキサン−アセトン＝２：１〜１：１）、純粋生成物２８を白色泡として得た（８２ｍｇ；９７％）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ８．３０（ｄ，２Ｈ，Ｊ３．１Ｈｚ，Ｃ６Ｈ４）、７．４０（ｄ，２Ｈ，Ｃ６Ｈ４）、５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．３Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．２Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．５４（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４２．１Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｊ３’’，４’’３．４Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．２３〜５．１８（ｍ，２Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｊ２’，３’１０．７Ｈｚ，Ｊ１’’，２’’３．７Ｈｚ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）、５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．８Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．７２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５６〜４．５２（ｍ，２Ｈ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．３Ｈｚ，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．４２〜４．３４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−６ａ’，Ｈ−６ａ’’）、４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ８．４Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４．１２〜４．０６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ｂ’’）、３．８４〜３．７９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５’）、３．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  １１１２．２７０１５［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４５Ｈ５５ＮＯ３０Ｎａ＋の要求値１１１２．２７０１１。
【０１５１】
３-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-［２,３,６-トリ-Ｏ-アセチル-４-Ｏ-（２,３,４,６-テトラ-Ｏ-アセチル-α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-１,２-Ｏ-［（Ｒ
）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-６-Ｏ-［３-（２-メタクリロイルアミノ）プロピル］カルバモイル-α-Ｄ-グルコピラノース（２９）。
化合物２８（０．３９ｇ；０．３６ｍモル）およびＮ-（３-アミノプロピル）メタクリルアミノ塩酸塩（８３ｍｇ；０．４７ｍモル）を乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）中に溶解し、トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を添加した。混合物を、ＴＬＣが反応の完了を示すまで室温で４時間撹拌した。混合物を濃縮し、それに対してヘキサン−アセトン＝１１：９を溶媒として、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、表題化合物２９を白色泡として得た（０．３７７ｇ；９６％）。少量の試料を水−メタノール中でＨＰＬＣ  Ｃ−８カラムを用いてさらに精製した（生成物を５０％メタノール中に負荷し、６０％メタノールでカラムから溶出した）。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ６．５１〜６．４７（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、５．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２５．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．７３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’’，４’’３．３Ｈｚ，Ｊ４’’，５’’１．２Ｈｚ，Ｈ−４’’）、５．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４２．１Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２’’，３’’１１．０Ｈｚ，Ｊ３’’，４’’３．３Ｈｚ，Ｈ−３’’）、５．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、５．３１〜５．２９（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、５．２２〜５．１８（ｍ，２Ｈ，Ｊ１’，２’７．８Ｈｚ，Ｊ２’，３’１０．７Ｈｚ，Ｊ１’’，２’’３．７Ｈｚ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）、５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’’）、４．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ３’，４’２．９Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．５６〜４．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’’）、４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５’，６ａ’６．３Ｈｚ，Ｊ６ａ’，６ｂ’１１．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ’）、４．３３〜４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ５，６ａ２．３Ｈｚ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．８Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、４．１８〜４．１４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−６ａ’’）、４．１２〜４．０７（ｍ，２Ｈ，Ｊ５’，６ｂ’６．９Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’，Ｈ−６ｂ’’）、４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．９４〜３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５’）、３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．７２〜３．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．４１〜３．３２（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２）、３．２８〜３．２０（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（２ｓ，６Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．９７（ｂｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７２〜１．６５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。ＨＲＭＳ−ＥＳ  ｍ／ｚ  １１１５．３５４０９［Ｍ＋Ｎａ］＋、Ｃ４６Ｈ６４Ｎ２Ｏ２８Ｎａ＋の要求値１１１５．３５３７８。
【０１５２】
４-Ｏ-［４-Ｏ-（α-Ｄ-ガラクトピラノシル）-β-Ｄ-ガラクトピラノシル］-１,２-Ｏ-［（Ｒ）-１-（メトキシカルボニル）エチリデン］-６-Ｏ-［３-（２-メタクリロイルアミノ）プロピル］カルバモイル-α-Ｄ-グルコピラノース（３０）。
オクタ酢酸塩２９（９０ｍｇ；０．０８３ｍモル）を、乾燥メタノール（３ｍＬ）中に溶解し、１Ｍナトリウムメトキシド（１６５μＬ；２当量）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をＤ２Ｏ中に溶解した。溶液をＣＯ２で中和し、凍結乾燥し、生成物３０を白色泡として得た（６０ｍｇ、９８％）。
ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ５．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ１，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４４（ｓ，１Ｈ，Ｈ２Ｃ＝Ｃ）、４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’’，２’’３．９Ｈｚ，Ｈ−１’’）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’７．７Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４１〜４．３５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６ａ，Ｈ−５’’）、４．２５〜４．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）、４．１８〜４．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、４．０５〜４．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−４’，Ｈ−４’’）、３．９５〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−３’’）、３．８５〜３．６８（ｍ，７Ｈ，Ｊ２’，３’１０．２Ｈｚ，Ｈ−４，Ｈ−３’，Ｈ−６ａ，Ｈ−６ｂ，Ｈ−２’’，Ｈ−６ａ’’，Ｈ−６ｂ’’）、３．５９（ｄｄ，Ｈ−２’）、３．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．９Ｈｚ，ＮＣＨ２）、３．１９（ｔ，２Ｈ，Ｊ６．７Ｈｚ，ＮＣＨ２）、１．９３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．７８〜１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．６３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。ＥＳ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ７８７．２３５８６（［Ｍ−Ｈ＋２Ｎａ］＋）；計算値Ｃ２９Ｈ４５Ｎ２Ｏ２０Ｎａ２：７８７．２３５５６。
【０１５３】
実施例１３
化合物３０とＨＰＭＡ（ＨＰＭＡ−Ｂ１）との共重合体の合成
【化１７】
2010521526.tif 000055
【０１５４】
単量体３０（３９ｍｇ、０．０４ｍモル）およびＨＰＭＡ単量体（１０１ｍｇ；０．７ｍモル）を、脱気水（１ｍＬ）中に溶解し、アルゴンでパージした。過硫酸アンモニウム溶液（脱気水１０μＬ中１ｍｇ）、次いでＴＥＭＥＤ（１μＬ）を混合物に添加した。反応混合物を５０℃で一晩インキュベートした。翌日、それを脱イオン水に対して透析し、水を５回交換し、次いでＭｉｌｉｐｏｒｅ膜（０．４５μｍ）を通して濾過し、凍結乾燥し、ポリマーを白色泡（８５ｍｇ）として得た。
【０１５５】
実施例１４
ヘテロ二官能性ポリマーＰＰＭ、ＰＰＩおよびＥＰＩ−１５６による、シガ毒素１（Ｓｔｘ１）の阻害
固相競合的阻害アッセイにおいて、ＰＰＭ、ＰＰＩおよびＥＰＩ−１５６の、シガ毒素１型（Ｓｔｘ１）に対する阻害活性について、内因性タンパク質である血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）の存在下または不在下でアッセイした（図６および７を参照）。ポリスチレン製ＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）、ＮＵＮＣ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）を、リン酸塩緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）中、１６-メルカプトヘキサデカニル配糖体（Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、１９９８年  Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．３０７（３−４）：３６１−３６９頁）としての１０μｇ／Ｍｌの合成Ｐｋ−トリサッカライドでコートし、４℃で一晩インキュベートした。すべてのインキュベーション容量は１００μＬ／ウェルであった。０．０５％Ｔｗｅｅｎおよび２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２（ＨＢＳＴＣａ）を補充したＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび０．８５％ＮａＣＬ、ｐＨ７．２）を、各インキュベーション間での３回のプレートの洗浄に用いた。コーティングステップ後、ＨＢＳＴＣａに０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充し、すべてのインキュベーションで希釈剤として用いた。阻害剤を、シガ毒素１型（４ｎｇ／ｍＬ）および血清アミロイドＰ成分（２０ｍｇ／ｍＬ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）またはＨＢＳＴＣａ＋０．１％ＢＳＡ（ＳＡＰ陰性の形式用）と予備混合し、次いで室温で２時間のインキュベーションの間に混合物をウェルに添加した。毒素を、抗Ｓｔｘ１ハイブリドーマ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １７９４）由来のマウス腹水の１／１０００の希釈物、次いでヤギ抗マウスＩｇＧ西洋わさびペルオキシダーゼ二次抗体（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）の１／２０００の希釈物を用いて検出した。テトラメチルベンジジン（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）で１０分間発色させ、反応を１Ｍリン酸で停止させ、吸光度を４５０ｎｍの波長で測定した。
【０１５６】
阻害試験では、ポリマー足場上での２つの異なる官能基の予備配置が極めて重要であることが示された。「予備組織化された（ｐｒｅ−ｏｒｇａｎｉｚｅｄ）」ポリマーＰＰＩが、ＳＡＰの存在下で、Ｓｔｘ１に対する阻害活性において大幅な増大（６０００倍）を示した。一方、「ランダム」ポリマーＰＰＭでは、結合用官能基の取り込み度合いが実質的に高まるにもかかわらず、ＳＡＰ依存性の活性がほとんど欠如している（図８および表１を参照）。この結果は、向かい合う複合体の誘導が活性の促進にとっての必要条件である一方、（例えばポリマーＰＰＭにより）単にＳｔｘ１の直近にもたらされるＳＡＰが阻害に影響を及ぼすには不十分であることを示唆する。
【０１５７】
【表１】
2010521526.tif 000056
【０１５８】
リガンド４が結合しているポリマーの種類により、ＳＡＰ依存性の阻害力がさらに改善されることを示す。したがって、ポリマーＥＰＩ−１５６は、優れた阻害活性を示したが（ＩＣ５０（ＳＡＰを伴う場合）＝２〜４μｇ／Ｌ）、活性がＰｋ−トリサッカライド単位に基づいて計算される場合、すべての予め報告されたＰｋを有するポリマーより優れるだけでなく、デンドリマー型Ｓｔｘ拮抗剤であるＰｋ−ＳＴＡＲＦＩＳＨの阻害力よりも優れる（Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、２０００年、Ｎａｔｕｒｅ  ４０３：６６９−６７２頁）。阻害へのＳＡＰの関与の必要性は、ＳＡＰの不在下ではＥＰＩ−１５６における活性がほとんど検出されなかったという事実により強調される。
【０１５９】
実施例１５
ヘテロ二官能性ポリマーＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２によるシガ毒素１（Ｓｔｘ１）の阻害
上記実施例１４と同様に、固相拮抗的阻害アッセイにおいて、ＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２のシガ毒素１型（Ｓｔｘ１）に対する阻害活性について、内因性タンパク質である血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）の存在下または不在下でアッセイした。これらの阻害試験によると、ポリマー足場上での２つの異なる官能基の予備配置および予備配置の最適化が極めて重要であることが再び示された。ＨＰＭＡ−Ｂ１およびＨＰＭＡ−Ｂ２は、ヘテロ二官能性リガンドを高分子骨格に結合させるリンカーの長さが異なる。図９に示されるように、ＨＰＭＡ−Ｂ２はＨＰＭＡ−Ｂ１（１２．８μｇ／ｍＬ）よりも大幅に小さいＩＣ５０値（０．０６５μｇ／ｍＬ）を有し、これはポリマー上でのヘテロ二官能性リガンドの予備配置の最適化が重要であることを示す。
【０１６０】
実施例１６
Ｖｅｒｏ細胞の細胞毒性アッセイにおけるＥＰＩ−１５６のインビトロでの有効性
ＢＡＩＴ２、ＥＰＩ−１５６およびＥＰＩ−１５３をそれぞれ、二重蒸留した脱イオン水中に溶解した。精製したＳｔｘ１およびＳｔｘ２のストック溶液のそれぞれを、未補充ＭＥＭ中で、４００ｎｇ／ｍｌおよび２ｍｇ／ｍｌの濃度に調製した。各ポリマー溶液の未補充ＭＥＭ中の連続希釈物を、９６ウェルマイクロタイタープレートを用いて調製した。次いで、Ｓｔｘ１またはＳｔｘ２ストック溶液５ｍＬを、希釈プレート内の適切な列の各ウェル（８０ｍＬの最終容量）に添加した。希釈プレートの各ウェル内の溶液を完全に混合し、マイクロタイタープレートを３７℃で１時間インキュベート後、各ウェルから２０ｍＬを、コンフルエントなＶｅｒｏ細胞単層およびウシ胎仔血清を補充したＭＥＭ２００ｍＬを有する９６ウェルマイクロタイタープレートの対応するウェルに移した。Ｖｅｒｏ細胞のマイクロタイタープレートを、５％ＣＯ２／９５％大気の雰囲気下、３７℃のインキュベーター内でさらに４８時間インキュベートした。次いで、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  Ｇ．Ｄ．ら、１９９１年  Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６４：１１６０−１１６７頁に記載のように、Ｖｅｒｏ細胞単層をメタノールで固定し、細胞毒性を測定した。
【０１６１】
Ｖｅｒｏ細胞毒性アッセイの結果を図１０に示す。ヘテロ二官能性ＢＡＩＴ２は、ＳＡＰの存在下で十価リガンドＤＡＩＳＹ−１／８と同等の活性を示す。さらに、高分子足場上に存在する場合、ＢＡＩＴ２の活性が少なくとも３倍に増幅され、ＥＰＩ−１５６にとって前例のないレベルの１ｎｇ／ｍＬに達した。ヨウ素１２５での放射性標識はその活性を実質的に変化させなかった。ラクトース類似体ＥＰＩ−１５３は、３ｍｇ／ｍＬでＶｅｒｏ細胞の保護を全く示さなかった（データは示さず）。
【０１６２】
実施例１７
ＨｕＳＡＰトランスジェニックマウスにおける、ＥＰＩ−１５６のインビボでの有効性  先行技術である化合物ＢＡＩＴ２（Ｋｉｔｏｖ  Ｐ．Ｉ．ら、２００８年、Ａｎｇｅｗ．ＣｈｅｍｉｅＩｎｔｌ．Ｅｄ．４７：６７２−６７６頁）およびそのポリマー類似体（ＥＰＩ−１５６）について、インビボで試験した。不活性なラクトース二糖配列を有することからＳｔｘ１と相互作用しないポリマーＥＰＩ−１５３（図１１を参照）を、ネガティブコントロールとして用いた。一方、ＤＡＩＳＹ−１／８、十価  Ｐｋ−デンドリマーがシガ様毒素、Ｓｔｘ１およびＳｔｘ２に対する保護をインビボで示すことが以前に報告されているので（Ｍｕｌｖｅｙ  Ｇ．Ｌ．、２００３年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃ．Ｄｉｓ．１８７：６４０−６４９頁）、それをポジティブコントロールとして用いた。
【０１６３】
マウス中毒モデル（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  Ｇ．Ｄ．ら、２００６年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１９３：１２２０−１１２４頁）では、Ｓｔｘ１や先行技術および本発明の様々な阻害ポリマーの投与後にマウスの生存が測定される。ＨｕＳＡＰマウスに、Ｓｔｘ１（２０ｎｇ／ｇ）を、尾静脈を介して静脈内注射した。それらにおけるシガトキセミアの徴候について、４時間ごとに監視した。シガトキセミアの徴候を示すマウスを安楽死させた。
【０１６４】
図１２で見られるように、シリーズ１は、０．５ｍｇ／マウスでのＤＡＩＳＹ１／８の投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ２は、５０μｇ／マウスでのＥＰＩ−１５６の投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ３は、０．６ｍｇ／マウスでのＥＰＩ−１５３および６００μｇ／マウスでのＨｕＳＡＰの投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ４は、５０μｇ／マウスでのＥＰＩ−１５６および６００μｇ／マウスでのＨｕＳＡＰの投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。シリーズ５は、４ｍｇ／マウスでのＢＡＩＴ２の投与後でのマウスのパーセント生存率を示す。
【０１６５】
すべてのＨｕＳＡＰトランスジェニックマウスは、わずか５０μｇ／マウスでのＥＰＩ−１５６と同時投与される場合、致死性の２０ｎｇ／ｇのＳｔｘ１の注射から救われた。すべての他の試験化合物の中でもＤＡＩＳＹ−１／８単独はマウス数匹における徴候の発現を遅延させることによっていくらか有効であり、そこでは１０倍多い量のＤＡＩＳＹ−１／８が必要であることが示された。一価リガンドＢＡＩＴ２は５０倍高い濃度であっても効果を示さなかった。
【０１６６】
実施例１８
標識ＥＰＩ−１５６の器官局在化
これらの試験においては、ＥＰＩ−１５６をチロシン残基の付加により修飾し、ヨード化を可能にした（図１１を参照）。放射性標識ＥＰＩ−１５６（ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ）およびシガ毒素（Ｓｔｘ１−１２５Ｉ）の器官局在化を、ヒトＳＡＰを発現するトランスジェニックマウス（ＨｕＳＡＰマウス）への静脈内注射後に測定した（Ｚｈａｏ  Ｘ．ら、１９９２年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１１：７３６−７３８頁）。ＨｕＳＡＰマウスは、９００ｎｇのＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ（１．１４×１０７ＣＰＭ／μｇ）を静脈内の尾静脈注射を介して受け、それらを４時間後に安楽死させた。安楽死後、異なる器官内で放射活性を計数した。
【０１６７】
図１３Ａはこのアッセイからの結果を示す。黒バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５ＩおよびＨｕＳＡＰの混合物の器官分布を示す。一方、白バーは、ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉ、ＨｕＳＡＰおよびＳｔｘ１の混合物の器官分布を示す。図１３Ａからは、ヘテロ二官能性高分子リガンドが肝臓に誘導されることが認められうる。事実、ＥＰＩ−１５６−１２５Ｉの９５％超は、特に肝臓内に局在化された。Ｓｔｘ１の同時注射による、４時間後に肝臓内に見出されるポリマーの増加量はごくわずかであった。
【０１６８】
図１３Ｂでは、マウスは、２０ｎｇ／ｇのＳｔｘ１−１２５Ｉ（４．８１×１０６ＣＰＭ／μｇ）を、尾静脈注射を介して受けた。黒バーは、Ｓｔｘ１およびＨｕＳＡＰの混合物の器官分布を示す。一方、白バーは、Ｓｔｘ１、ＨｕＳＡＰおよび非標識ＥＰＩ−１５６の混合物の器官分布を示す。図１３Ｂから、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの不在下では毒素Ｓｔｘ１の腎臓および肺への誘導が認められたが、本発明の多価ヘテロ二官能性ポリマーの存在下では毒素Ｓｔｘ１が、腎臓および肺に誘導されずに肝臓に誘導されることが認められうる。
【０１６９】
１２５Ｉ−標識Ｓｔｘ１がヒトＨｕＳＡＰにおけるトランスジェニックマウスに注射される場合、１０％の放射活性が肝臓内で見出された（図１３Ｂを参照）。毒素の大部分が、肺および腎臓だけでなく、脳（５％）にも局在化された。ヘテロ二官能性ポリマーＥＰＩ−１５６の同時注射により、これらの重要器官由来の毒素のほぼ７０％が肝臓に移された（図１３Ｂを参照）。
【０１７０】
ヘテロ二官能性ポリマーＥＰＩ−１５６が注射による、毒素の器官分布を変更する能力は、マウス中毒モデルにおいてＥＰＩ−１５６で処理されたマウスの生存率が１００％であることを説明しうる（図１２を参照）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的活性を示す生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるかまたは前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型と、に結合するための多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、
前記ポリマーに結合されており、（ａ）前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基、および（ｂ）前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を有する、複数のヘテロ二官能性リガンドを含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記ポリマーと、生物学的標的と、エフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、前記ポリマー上に予備配置（pre-arranged）される、多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が共通の原子に結合され、かつ
前記共通の原子は直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項６】
前記第１の官能基および前記第２の官能基が、直接にまたは任意のリンカーを介して互いに結合され、かつ
前記第１の官能基または前記第２の官能基のいずれかは、直接にまたはリンカーを介して前記ポリマー骨格またはその内部に結合される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項７】
前記第１の官能基が多価生物学的標的に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項８】
前記第１の官能基が細菌毒素に結合する、請求項７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項９】
前記毒素が、シガ毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素、およびコレラ毒素からなる群から選択される、請求項８に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１０】
前記第１の官能基がトリサッカライドである、請求項９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１１】
前記第１の官能基がウイルス粒子に結合する、請求項７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１２】
前記第１の官能基が癌細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１３】
前記第２の官能基がＳＡＰに結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１４】
前記第２の官能基が環状ピルビン酸ケタールである、請求項１３に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１５】
前記第２の官能基が抗体に結合する、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１６】
前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択される、請求項１に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１７】
生物学的活性を示す生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるかまたは前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型とに結合するための、式：
【化１】
2010521526.tif 000057
で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、式中、
「Ｘ」は前記多価ポリマーの高分子骨格を示し；
「ＭＯ」はヘテロ二官能性リガンドを示し、ここで「Ｍ」は前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し、かつ「Ｏ」は前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示し；
「Ｙ」は「ＭＯ」を高分子骨格またはその内部に結合する任意のリンカーを示し；かつ  「ｎ」は意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドが前記ポリマー内に存在するように選択される整数を示す、多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１８】
前記ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型上の受容体の数と同じかまたはそれより大きくなるように、「ｎ」が選択される、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項１９】
前記第１の官能基が多価生物学的標的に結合する、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２０】
前記第１の官能基が細菌毒素に結合する、請求項１９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２１】
前記第１の官能基がトリサッカライドである、請求項２０に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２２】
前記第１の官能基がウイルス粒子に結合する、請求項１９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２３】
前記第１の官能基が癌細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２４】
前記第２の官能基がＳＡＰに結合する、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２５】
前記第２の官能基が環状ピルビン酸ケタールである、請求項２４に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２６】
前記第２の官能基が抗体に結合する、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２７】
前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択される、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２８】
「Ｍ」が、前記高分子骨格またはその内部に結合される、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項２９】
「Ｍ」が、前記高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３０】
「Ｏ」が、前記高分子骨格またはその内部に結合される、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３１】
「Ｏ」が、前記高分子骨格またはその内部にリンカー「Ｙ」を介して結合される、請求項３０に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３２】
「Ｍ」および「Ｏ」が互いにリンカーにより結合される、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３３】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３４】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３５】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項１７に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３６】
生物学的活性を示す生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるかまたは前記生物学的標的の存在を検出しうるエフェクター鋳型と、に結合するための、式：
【化２】
2010521526.tif 000058
で表される多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、式中、
「Ｘ」は、前記多価ポリマーの高分子骨格を示し；
「Ｍ−Ｎ−Ｏ」は、ヘテロ二官能性リガンドを示し、ここで「Ｍ」は前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基を示し、かつ「Ｏ」は前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を示し、かつ「Ｎ」は「Ｍ」および「Ｎ」に結合するリンカーを示し；
「Ｙ」は、前記ヘテロ二官能性リガンドを高分子骨格またはその内部に結合する任意のリンカーを示し；かつ
「ｎ」は、意図される用途に十分な数のヘテロ二官能性リガンドが前記ポリマー内に存在するように選択される整数を示す、多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３７】
前記ポリマー上のヘテロ二官能性リガンドの数が、前記生物学的標的および前記エフェクター鋳型上の受容体の数と同じであるように、「ｎ」が選択される、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３８】
前記第１の官能基が多価生物学的標的に結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項３９】
前記第１の官能基が細菌毒素に結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４０】
前記毒素が、シガ毒素、易熱性エンテロトキシン、スブチラーゼ細胞毒素、およびコレラ毒素からなる群から選択される、請求項３９に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４１】
前記第１の官能基がトリサッカライドである、請求項４０に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４２】
前記第１の官能基がウイルス粒子に結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４３】
前記第１の官能基がウイルスレクチンに結合する、請求項４２に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４４】
前記第１の官能基が癌細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４５】
前記第２の官能基がＳＡＰに結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４６】
前記第２の官能基が環状ピルビン酸ケタールである、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４７】
前記第２の官能基が抗体に結合する、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４８】
前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリサッカライド、デキストラン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、ポリ（アミノ酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、これらの組み合わせ、および他の薬学的に許容可能なポリマーからなる群から選択される、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項４９】
前記第１の官能基および前記第２の官能基がそれぞれ、アミノ酸、ペプチド、誘導体化ペプチド、モノサッカライド、オリゴ糖、ビタミン、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、細胞栄養素、抗原決定基、小分子薬剤様化合物、ハプテン、抗体または抗体断片、細胞表面受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５０】
前記生物学的標的が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、細菌、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、単細胞寄生虫、古細菌、真菌、ウイルス粒子、細菌毒素、ウイルスレクチン、癌細胞、Ｂ細胞、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５１】
前記エフェクター鋳型が、多価受容体、多価タンパク質、タンパク質、ペプチド、誘導体化ペプチド、抗体、膜結合受容体、ならびにこれらの組み合わせおよび類似体からなる群から選択されうる、請求項３６に記載の多価ヘテロ二官能性ポリマー。
【請求項５２】
生体系における生物学的標的の生物学的活性に作用するための医薬組成物であって、
（ａ）生物学的活性を示す前記生物学的標的と、前記生物学的標的の前記生物学的活性に作用しうるエフェクター鋳型とに結合するための、複数の予備配置されたヘテロ二官能性リガンドを含む多価ヘテロ二官能性ポリマーであって、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記生物学的標的に結合可能な第１の官能基および前記エフェクター鋳型に結合可能な第２の官能基を含み、
前記ヘテロ二官能性リガンドは、前記ポリマーと、前記生物学的標的と、前記エフェクター鋳型とで三元複合体を形成するように、前記ポリマー上に予備配置される、多価ヘテロ二官能性ポリマー、ならびに
（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤
を含有する、医薬組成物。
【国際調査報告】
2010521526.tif 000059
2010521526.tif 000060
2010521526.tif 000061
2010521526.tif 000062
2010521526.tif 000063