(57)【要約】  上皮細胞増殖因子；接着性高分子；並びにエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその塩、ヒスチジン、リシンまたはその無機酸塩、アルギニンまたはその無機酸塩、およびデキストランからなる群より選択される少なくとも１つの安定化剤；を含む口内炎治療用液状組成物を提供する。該液状組成物は、ＥＤＴＡ（またはその塩）または特定のアミノ酸（またはその無機酸塩）を安定化剤として使用することによって、上皮細胞増殖因子の物理化学的および生物学的な安定性を大きく高めることができ、長期間の保管および流通を可能にする。また、該安定化された組成物は、接着性高分子を含有することによって、スプレー形態で口腔に噴射される場合、炎症部位に速かに付着して長時間薬効を発揮できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
上皮細胞増殖因子；接着性高分子；並びにエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその塩、ヒスチジン、リシンまたはその無機酸塩、アルギニンまたはその無機酸塩、およびデキストランからなる群より選択される少なくとも１つの安定化剤；を含む口内炎治療用液状組成物。
【請求項２】
前記安定化剤が、ＥＤＴＡ二ナトリウム塩、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−リシン塩酸塩、Ｌ−アルギニン塩酸塩、または平均分子量が４０，０００〜１００，０００Ｄａであるデキストランである、請求項１に記載の液状組成物。
【請求項３】
前記安定化剤が、ＥＤＴＡ二ナトリウム塩またはＬ−ヒスチジンである、請求項１に記載の液状組成物。
【請求項４】
前記安定化剤の含有量が、総組成物に対して０．０１〜１０ｗ／ｖ％である、請求項１に記載の液状組成物。
【請求項５】
前記接着性高分子が、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、カルボマー、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとの共重合体、キサンタンガム、ゲランガム、プルラン、ペクチン、または澱粉類である、請求項１に記載の液状組成物。
【請求項６】
前記接着性高分子が、重量平均分子量７，０００〜１５，０００のポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとの共重合体である、請求項１に記載の液状組成物。
【請求項７】
前記接着性高分子の含有量が、総組成物に対して０．０１〜２０ｗ／ｖ％である、請求項１に記載の液状組成物。
【請求項８】
前記上皮細胞増殖因子の含有量が、総組成物に対して０．０００１〜０．０１ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項１に記載の液状組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の液状組成物を含有する口内炎治療用スプレー。
【請求項１０】
接着性高分子を含む溶剤部と、上皮細胞増殖因子および安定化剤を含む主成分部とを互いに異なる容器に含む用時調製用スプレーである、請求項９に記載のスプレー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮細胞増殖因子を含有する安定な口内炎治療用液状組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
口内炎は、口腔粘膜に影響を及ぼす疾患であり、薬理学的、特に化学療法治療または放射線治療によって引き起こされたり、または悪化することがありうる炎症のことであり、場合によっては潰瘍を伴うこともある。口内炎の症状は、軽微なものから深刻なものまでありうるが、深刻な口内炎を患っている患者は、口を介して飲食物を全く摂取できない。また、口内炎の一種である紅斑性粘膜炎は、化学療法または放射線治療を受診した後の３日以内、さらに一般的には５日〜７日以内に現れる。紅斑性粘膜炎から潰瘍性粘膜炎への進行は、一般的に化学療法治療を始めてから一週間以内に起こり、場合によっては、薬物治療を中断しなければならないほどに深刻になる。
【０００３】
化学療法治療を受ける患者の多数が、程度は異なるものの、粘膜炎を患う傾向にあるため、効果的で簡便な治療が切に必要とされている。しかし、これまで口内炎治療には、口内清浄、各種ビタミン剤の投与などが一般的であり、特に、化学療法治療および放射線治療に伴う口内炎の治療には、アロプリノールやアルギン酸ナトリウムのマウスウォッシュ投与が行われてきた（Ａｒｃｈｉｖｅｓ，Ｖｏｌ．５５，Ｎｏ．１：２８，１９９５；Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｖｏｌ．１８，Ｎｏ．５：５１０，１９９２；Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｒｓｉｎｇ  Ａｃｔｓ，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．１５：４４，１９９１；Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６：１１２９，１９９０）。しかし、これは症状改善効果が弱く、深刻な口内炎に対しては効果が不十分であり、症状が改善されるまで長時間の投与が必要であるため、十分な治療方法であるとはいえない。そこで、これらの問題を解決するために、短期間で治療効果に優れた口内炎の治療薬や治療方法の開発など、さまざまな努力がなされている。
【０００４】
従来に開発された口内炎治療用組成物は、ほとんど接着性高分子を含有する軟膏剤、パッチ剤などである。例えば、米国特許第５６，５７８，３１０号明細書は、ミネラルオイル、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含有するエマルジョンからなる生体接着性軟膏（ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ  ｏｉｎｔｍｅｎｔ）を開示しており、大韓民国特許出願公開第１９９４−００２３４６９号公報は、ステロイド剤薬物を含む二層フィルム構造の湿布剤およびその製造方法を開示している。
【０００５】
その他、軟膏剤やパッチ剤以外の剤形として、米国特許出願公開第２００２／０２１９６３４号公報は、５０〜５０，０００ｃｐｓの粘度を有する生体接着性溶液または懸濁液を開示し、大韓民国特許出願公開第２００５−５５８５８号公報は、親水性ポリマーおよび水不溶性ポリマーの混合物を含有する液状またはゲル状製剤の口腔内薬物伝達システムを開示している。
【０００６】
一方、国際公開第ＷＯ０３／９５６３７号パンフレットは、上皮細胞増殖因子を口内炎の治療に使用できることを開示している。ウロガストロン（ｕｒｏｇａｓｔｒｏｎｅ）として知られている上皮細胞増殖因子は、５３個のアミノ酸と３個のジスルフィド結合（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ｂｏｎｄ）とを有する分子量６０４５のポリペプチドであり、上皮細胞と間葉細胞などの各種細胞に対して有糸分裂促進、細胞増殖促進および胃酸分泌抑制などの活性があり、皮膚や角膜の創傷または胃潰瘍の治療に効果があることが知られている（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１６４：１−１０，１９８６）。従って、上皮細胞増殖因子をヒドロキシプロピルメチルセルロースのような接着性高分子と共に製剤化する場合、口内炎治療剤として高い効果が得られうる。
【０００７】
しかし、上皮細胞増殖因子および接着性高分子を含有する軟膏剤またはパッチ剤は、患者が直接口腔内炎症や創傷部位に塗布または付着する必要があるため不便であるばかりではなく、塗布または付着する過程で、二次感染が発生する恐れがある。前記の問題点を回避するために、上皮細胞増殖因子および接着性高分子を液状剤形として製造し、これをスプレーのような形態で製剤化することができる。しかしながら、この液状製剤の方法では、分子運動が相対的に活発な水性媒体中での形態であるため、上皮細胞増殖因子の安定性が大きく低下するという問題が発生する。
【発明の概要】
【０００８】
（発明の詳細な説明）
（技術的課題）
本発明らは、前記の従来技術の問題点を解決すべく研究を繰り返した結果、一般的な抗酸化剤である、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ：ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ：以下、ＥＤＴＡとも称する。）またはその塩、デキストラン、および特定のアミノ酸からなる群より選択されるの安定化剤を使用する場合、安定性にすぐれた液剤を製造できるということを発見した。
【０００９】
すなわち、本発明は、ＥＤＴＡまたはその塩、デキストラン、および特定のアミノ酸からなる群より選択される安定化剤；上皮細胞増殖因子；並びに接着性高分子を含有する、安定な口内炎治療用の液状組成物を提供することを目的とする。
【００１０】
また本発明は、前記液状組成物を含む口内炎治療用スプレーを提供することを目的とする。
【００１１】
（課題を解決するための手段）  本発明の一様態によって、上皮細胞増殖因子；接着性高分子；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその塩、ヒスチジン、リシンまたはその無機酸塩、アルギニンまたはその無機酸塩、およびデキストランからなる群より選択される少なくとも１つの安定化剤、を含む口内炎治療用の液状組成物が提供される。
【００１２】
また本発明の他の様態によって、前記液状組成物を含有する口内炎治療用スプレーが提供される。
【００１３】
本明細書で「口内炎」とは、口腔粘膜に影響を及ぼし、薬理学的、特に化学療法治療または放射線治療によって引き起こされたり、または悪化することがありうる炎症であり、場合によっては潰瘍を伴うこともある。口内炎の症状は、軽微なものから、口を介しての飲食物を全く摂取できない深刻なものまであり、前記口内炎は、かような症状をいずれも含む。
【００１４】
本発明の液状組成物は、ＥＤＴＡ（またはその塩）および特定のアミノ酸（またはその無機酸塩）からなる群より選択される安定化剤を含有することによって、上皮細胞増殖因子の物理化学的および生物学的安定性を大きく高めることができ、長期間の保管および流通を可能にする。また、前記安定化された液状組成物は、接着性高分子を含有することによって、スプレー形態で口腔に噴射される場合、炎症部位に速かに付着して長時間薬効を発揮できる。
【００１５】
本発明の液状組成物は、活性成分として作用する上皮細胞増殖因子を含有する。上皮細胞増殖因子は、治療上有効量の天然型蛋白質および組み替え蛋白質いずれも使用することができる。すなわち、単位剤形、例えばスプレー剤形である場合、上皮細胞増殖因子の量は、約０．１〜１，０００μｇ／ｍＬ、望ましくは０．５〜５００μｇ／ｍＬ、さらに望ましくは１．０〜１００μｇ／ｍＬでありうる。具体的な剤形に製剤化するために製造される液状組成物は、総組成物に対して０．０００１〜０．０１ｗ／ｖ％の上皮細胞増殖因子を含有できる。
【００１６】
本発明の液状組成物は、ＥＤＴＡまたはその塩（例えば、二ナトリウム塩、カルシウム二ナトリウム塩（ｃａｌｃｉｕｍ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ）、三ナトリウム塩など）、ヒスチジン、リシンまたはその無機酸塩（例えば、塩酸塩など）、アルギニンまたはその無機酸塩（例えば、塩酸塩など）、およびデキストランからなる群より選択される少なくとも１つの安定化剤を含有する。前記安定化剤は、たとえば、ＥＤＴＡ二ナトリウム塩、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−リシン塩酸塩、Ｌ−アルギニン塩酸塩、および／または平均分子量が４０，０００〜１００，０００Ｄａであるデキストランを使用することができる。望ましくは、ヒスチジン、リシン、およびアルギニンからなる群より選択される少なくとも１つの安定化剤を含むことができ、例としては、安定化剤として、ＥＤＴＡ二ナトリウム塩および／またはＬ−ヒスチジンを含むことが挙げられる。
【００１７】
本発明の組成物中の前記安定化剤の含有量は、安定化剤の種類によって異なるが、望ましくは総組成物に対して０．０１〜１０ｗ／ｖ％であり、さらに望ましくは０．０５〜５ｗ／ｖ％である。安定化剤の含有量が０．０１ｗ／ｖ％未満である場合は、上皮細胞増殖因子の安定化効果を期待し難く、１０ｗ／ｖ％を超える場合は、上皮細胞増殖因子の安定性が低くなりうる。
【００１８】
本発明の液状組成物は、接着性高分子を含有することによって、口腔への投与時に炎症部位に速かに付着でき、望ましい粘度が維持されうる。前記接着性高分子としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース類；ヒアルロン酸ナトリウム、カルボマー（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９４０ＴＭ（ＩＳＰ、米国））、キサンタンガム、ゲランガム、プルラン、ペクチン、または澱粉類（例えば、とうもろこし澱粉）のような親水性高分子；ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとの共重合体のような非イオン性界面活性剤；を単独で、または混合して使用できる。望ましくは、重量平均分子量７，０００〜１５，０００のポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとの共重合体（例えば、ポロキサマー４０７ＴＭ（ＢＡＳＦ、米国）、ポロキサマー１８８ＴＭ（ＢＡＳＦ、米国）など）を使用できる。
【００１９】
本発明の組成物中の前記接着性高分子の含有量は、高分子の種類によって異なるが、望ましくは、総組成物に対して０．０１〜２０ｗ／ｖ％であり、さらに望ましくは０．１〜１０ｗ／ｖ％である。接着性高分子の含有量が０．０１ｗ／ｖ％未満である場合は、剤形の粘度が低くて接着効果が低くなり、２０ｗ／ｖ％を超える場合には粘度が大きくなることがあり、組成物の製造および／または製剤化（例えば、スプレー剤形への製剤化）が困難になりうる。
【００２０】
本発明の液状組成物は、５０〜１０，０００ｃｐｓ（ｍＰａｓ）の粘度を有することが望ましく、５００〜５，０００ｃｐｓ（ｍＰａｓ）がさらに望ましい。粘度が５０ｃｐｓ未満である場合は、適用時に、薬液の粘度が低く創傷部位に残存できず、薬液がすぐに食道に入り込んでしまう現象が発生しうるので、非常に不便である。また、粘度が１０，０００ｃｐｓを超える場合には、薬液の粘度が高いために、薬液をスプレーなどで適用する場合、噴射が困難になりうる。
【００２１】
本発明の液状組成物は、製剤上許容可能な担体を含むことができる。例えば、本発明の液状組成物は、水、精製水、注射用水のような水性媒体を含み、必要によって、ｐＨ調節剤、保存剤、甘味剤、着香剤などを含むことができる。本発明の組成物に活性成分として含まれている上皮細胞増殖因子の安定性を考慮すれば、組成物のｐＨは５〜８、望ましくは６〜７である。ｐＨ調節のための前記ｐＨ調節剤としては、リン酸二水素ナトリウム、リン酸一水素二ナトリウム、またはクエン酸ナトリウムなどを含有する緩衝液を使用できる。また、前記保存剤としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、安息香酸ナトリウムなどを使用できる。ｐＨ調節剤、保存剤、甘味剤、着香剤などの含有量は、必要によって当業者が適切に選択できる。例えば、メチルパラベン、プロピルパラベンのような保存剤は、総組成物に対して０．０１〜１．０ｗ／ｖ％でありうるが、それに限定されるものではない。
【００２２】
本発明の前記液状組成物は、口腔内投与用剤形に適した多様な形態で製剤化することができ、望ましくは、スプレー剤形に製剤化できる。すなわち、本発明は、前記液状組成物を含有する口内炎治療用スプレーを含む。前記スプレー剤形は、エアゾール状、ポンピングスプレー形態、または用時調製用スプレー形態でありうる。前記ポンピングスプレー形態および用時調製用スプレー形態は、高圧ガスである噴射剤（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ）などの使用による活性成分の安定性低下を防止できるので、望ましく使われうる。
【００２３】
前記ポンピングスプレーとは、負圧の適用された容器内部に、薬液（すなわち、本発明の液状組成物）を入れ、ポンピングによって薬液が噴射される形態をいう。
【００２４】
前記用時調製用スプレー形態は、溶剤部（すなわち、本発明のうち接着性賦形剤溶液）と主成分部（すなわち、本発明のうちヒト増殖ホルモンと安定化剤との液状混合組成物）とに分けられ、使用時に溶剤部と主成分部とを混合して投与する形態をいう。すなわち、本発明の一形態として、本発明のスプレーは、接着性高分子を含む溶剤部と、上皮細胞増殖因子および安定化剤を含む主成分部とを互いに異なる容器に含む用時調製用スプレー形態を含む。
【００２５】
（発明の効果）
本発明の液状組成物は、ＥＤＴＡ（またはその塩）、デキストラン、および特定のアミノ酸（またはその無機酸塩）からなる群より選択されるの安定化剤を使用することによって、上皮細胞増殖因子の物理化学的および生物学的な安定性を大きく高めることができ、長期間の保管および流通を可能にする。また、前記安定化された組成物は、接着性高分子を含有することによって、スプレー形態で口腔に噴射される場合、炎症部位に速かに付着し長時間薬効を発揮できる。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明について実施例を介してさらに詳細に説明する。しかし、下記実施例は、本発明を例示するためのものであり、本発明がそれら実施例に制限されるものではない。
【００２７】
実施例１〜５および比較例１
表１の成分および含有量で、液状組成物を製造した。表１で各成分の含有量は、ｗ／ｖ％を示す。緩衝剤（リン酸二水素ナトリウム）と塩化ナトリウムとを精製水に溶解させた後、ｐＨ調整剤（リン酸）を適量添加し、ｐＨを６〜７に調整した。この溶液を８０℃に加熱して保存剤（メチルパラベン）を溶解させた後、接着性高分子（ポロキサマー４０７ＴＭ（ＢＡＳＦ、米国））を混合し、均質化されるまで撹拌した。この溶液に、安定化剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）二ナトリウム塩、Ｌ−ヒスチジン、塩酸Ｌ−アルギニン、塩酸Ｌ−リシン、またはデキストラン７０）および上皮細胞増殖因子を溶解させ、水を加えて最終体積を１Ｌにして液状組成物を製造した。比較例として、安定化剤を加えていない液状組成物を前記と同じ方法で製造した。
【００２８】
【表１】
2010505942.tif 000002
【００２９】
試験例１．熱的ストレスに対する安定性試験
実施例１〜５および比較例１で製造した液状組成物を、４０℃、７５％の相対湿度条件下で４週間保管した後、上皮細胞増殖因子の含有量と活性とを測定した。前記含有量分析は、逆相高速液体クロマトグラフィ（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｈａｓｅ  ＨＰＬＣ）を利用して測定し、活性は、ＥＬＩＳＡで分析した。得られた結果を初期値に対する％で換算した結果は、次の表２の通りである。
【００３０】
【表２】
2010505942.tif 000003
【００３１】
表２の結果から確認することができるように、本発明によって得られた液状組成物が熱的ストレスに対して優秀な安定性を有するということが分かる。特に、抗酸化剤として使用されているＥＤＴＡまたはＬ−ヒスチジンを安定化剤として使用した場合、さらにすぐれた安定性を有することがわかった。
【００３２】
試験例２．物理的ストレスに対する安定性試験
物理的な外部ストレスに対する上皮細胞増殖因子の物理的安定性を確認するために、実施例１〜５および比較例１で製造した液状組成物を、３時間２００ｒｐｍで撹拌した後、凝集物の生成を確認した。定量分析は、生成された凝集物を除去した後（０．４５μｍ  ｓｙｒｉｎｇｅ  ｆｉｌｔｅｒ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、含有量を分析した。得られた結果を初期値に対する％に換算した結果を次の表３に示した。
【００３３】
【表３】
2010505942.tif 000004
【００３４】
表３の結果から確認することができるように、本発明によって得られた液状組成物が物理的ストレスに対してすぐれた安定性を有するということが分かる。
【００３５】
実施例６〜１１
表４の成分および含有量で、実施例１〜５と同じ方法で、実施例６〜１１の液状組成物を製造した。表４で各成分の含有量は、ｗ／ｖ％を示す。
【００３６】
【表４】
2010505942.tif 000005
【００３７】
試験例３．官能試験
実施例６〜１１と比較例１とで製造した液状組成物に対する官能試験を行った。口内炎を患っている患者は、はなはだしい場合には、食物摂取もほとんど不可能であるために、可能な限り口腔粘膜への刺激があってはならず、口内炎治療薬を口腔内に適用する時に、患部に残っている薬物の量が多くなければならない。口内炎を患っている患者３５人を対象に、各実施例別に５人ずつ分けて炎症に適用した後、１時間後に、着用感、および舌への刺激感を考慮した使用感をアンケート調査した。その結果を表５に示した。表５の数値は、患者が感じる程度を平均値で示したものである。
【００３８】
【表５】
2010505942.tif 000006
【００３９】
使用感：１０（非常に優秀、刺激性が全くない）〜１（不良、刺激的であって痛みが感じられる）
着用感：１０（患部にほとんど残っている）〜１（ほぼ全て食道に流れ込む）
前記表５から確認することができるように、本発明の液状組成物は、ほとんど優秀な使用感を有するということが分かる。特に、セルロース系の賦形剤を使用する場合、使い勝手にさらにすぐれているということを確認した。
【００４０】
実施例１２〜１６
表６の成分および含有量で、実施例１〜５と同じ方法で、実施例１２〜１６の液状組成物を製造した。表６で各成分の含有量は、ｗ／ｖ％を示す。
【００４１】
【表６】
2010505942.tif 000007
【００４２】
試験例４．室温安定性試験
実施例１２〜１６で製造した液状組成物を２５℃、６０％の相対湿度条件下で３ヵ月間保管した後、上皮細胞増殖因子の含有量と活性とを測定した。前記含有量分析は、逆相高速液体クロマトグラフィ（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｈａｓｅ  ＨＰＬＣ）を利用して測定し、活性は、ＥＬＩＳＡで分析した。得られた結果を初期値に対する％に換算した結果は、次の表７の通りである。
【００４３】
【表７】
2010505942.tif 000008
【００４４】
表７の結果から確認することができるように、本発明によって得られた液状組成物は、室温で３ヵ月間非常に安定しているということが分かる。
【国際調査報告】
2010505942.tif 000009
2010505942.tif 000010