(57)【要約】  本発明は、植物抽出物、特に竹抽出物とコガネバナ抽出物とを活性成分として含むアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物に関する。  本発明による組成物は植物から分離した天然素材である。本発明の組成物はヒスタミンとロイコトリエンの放出を阻害することで免疫反応を調節でき、アレルギー疾患、炎症疾患、皮膚疾患、特にアトピーの予防又は治療において効果を有する。本発明の組成物は臨床実験を通して安定性とアトピー性皮膚炎に対する効能を確認することによってアトピー性皮膚炎の治療及び予防に利用できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を活性成分として含むアトピー性皮膚炎治療又は予防用薬剤学的組成物。
【請求項２】
上記混合組成物は、竹抽出物：コガネバナ抽出物の重量比が１〜１０:１〜１０である請求項１に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項３】
上記重量比が、１〜５：１〜５である請求項２に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項４】
上記重量比が、１〜３：１〜３である請求項２に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項５】
上記竹抽出物は、５０〜９０％エタノール抽出物である請求項１〜４のいずれかに記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項６】
上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項１〜４のいずれかに記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項７】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項５に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項８】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項６に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項９】
アトピー性皮膚炎の治療又は予防用薬剤を製造するための竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物の用途。
【請求項１０】
上記混合組成物は、竹抽出物：コガネバナ抽出物の重量比が１〜１０：１〜１０である請求項９に記載の混合組成物の用途。
【請求項１１】
上記重量比が、１〜５：１〜５である請求項１０に記載の混合組成物の用途。
【請求項１２】
上記重量比が１〜３：１〜３である請求項１０に記載の混合組成物の用途。
【請求項１３】
上記竹抽出物は、５０〜９０％エタノール抽出物である請求項９〜１２のいずれかに記載の混合組成物の用途。
【請求項１４】
上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項９〜１２のいずれかに記載の混合組成物の用途。
【請求項１５】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項１３に記載の混合組成物の用途。
【請求項１６】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項１４に記載の混合組成物の用途。
【請求項１７】
竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物の治療有効量を対象に投与し、アトピー性皮膚炎を治療又は予防する方法。
【請求項１８】
上記混合組成物は、竹抽出物：コガネバナ抽出物の重量比が１〜１０：１〜１０である請求項１７に記載の治療又は予防する方法。
【請求項１９】
上記重量比が、１〜５：１〜５である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
上記重量比が１〜３：１〜３である請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
上記竹抽出物は、５０〜９０％エタノール抽出物である請求項１７〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項１７〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を活性成分として含むアトピー性皮膚炎治療用組成物、特に、竹（Bamboo）抽出物とコガネバナ（Scutellaria）抽出物との混合組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis）は、遺伝的、環境的、又は免疫学的な原因で引き起こされる皮膚の最も外側にある保護壁である角質層の損傷によって引き起こされるアレルギー疾患であり、乾燥した気候でさらに激しくなる。多くの人が、特に総人口の０．５〜１％がアトピー性皮膚炎で苦しんでいる。未成年者の場合、子供の５〜１０％がアトピー性皮膚炎で苦しんでいる。患者の５０％は、２歳の誕生日までに回復され、２５％は思春期までに回復される。しかし、残りの２５％は回復せず、成人になってもアトピー性皮膚炎に苦しみ続けている。
【０００３】
アトピー性皮膚炎の主要症状は、ひどい掻痒症、皮膚乾燥、皮膚の発疹又は滲み出、腫れ物、鱗のような皮のある皮膚（鱗状の皮膚）などである。
【０００４】
このようなアトピー性皮膚炎の病因は完全には理解されていないが、遺伝的要因がアトピー性皮膚炎の大部分のケースに起因しており、免疫反応と関連がある。アトピー性皮膚炎は乾燥した皮膚、健常人に比べて容易に皮膚掻痒症を感じる特性、細菌・ウイルス・黴などによる感染、情緒的要因、環境的要因などが互いに複合的に作用して引き起こされる場合があることが示された。
【０００５】
特に、人体に接触するか、侵入したじんま疹の原因となる物質を自然治癒力で除去する過程で肥満細胞（mast cell）により生じた抗体（ＩｇＥ）が、再び人体にその物質（抗原）が侵入したとき、過敏反応を起こし、ヒスタミンを生じさせ、アトピー性皮膚炎の原因となる。肥満細胞は、皮膚、呼吸器、胃腸管の粘膜、リンパ管の周囲、脳などの全身の臓器に広く分布しており、様々な炎症反応及びアレルギー反応の原因細胞として知られている。肥満細胞から放出されたヒスタミンは血管拡張、腸管内及び／又は気管支平滑筋収縮、腺細胞の分泌、亢進作用などを誘発し、炎症反応及び即時型アレルギー反応を引き起こし、粘液分泌及び局所タンパク質分泌のような様々な生物学的効果を媒介する。
【０００６】
アトピー性皮膚炎に対する処方は、主にステロイド剤、抗ヒスタミン剤、抗生剤などの薬物療法からなっている。ステロイド剤（副腎皮質ホルモン剤）は消炎作用と免疫抑制物質として働くことができ、疾患の治療に優れた効果を有するが、もし、長期間使用されれば、皮膚弱化、全身ホルモンの症状、中毒性等の副作用が生じることがある。この頃、研究中のアトピー性皮膚炎の治療方向は、免疫抑制剤の使用と新しい抗ヒスタミン剤の使用である。しかし、ヒスタミンに加えて他の化学伝達物質がアレルギー反応を誘導しうることから、抗ヒスタミン剤だけではアレルギー反応を完璧に抑止することができない。肥満細胞はヒスタミンの他にも、ロイコトリエン（leukotriene）Ｃ４とロイコトリエンＢ４などの化学伝達物質を放出する。ロイコトリエンＣ４はヒスタミンと同様に気管支平滑筋を収縮し、ロイコトリエンＢ４は好中性白血球と好酸球を誘導して慢性炎症を引き起こし、周囲細胞に損傷を与える。
【０００７】
従って、アトピー性皮膚炎に効果がありながらも副作用のない新しいアトピー性皮膚炎治療用組成物の開発が求められている。
【０００８】
竹（Bamboo）はイネ科植物である。世界的に約２８０余種の竹が知られており、韓国には、約７０種の竹が自生又は栽培されている。竹の種類にはＰｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｎｉｇｒａ、Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ（Ｃｅｄｒｅｌａ ｓｉｎｅｓｉｓ）、Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｅｄｕｌｉｓ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｐｕｂｅｓｃｅｎ）、Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｎｉｇｒａ ｆｏｒ．Ｐｕｎｃｔａｔａ、 Ｓａｓａ ｂｏｒｅａｌｉｓ ｖａｒ．ｇｒａｃｉｌｉｓ、Ａｒｕｎｄｉｎａｒｉａ ｓｉｍｏｎｉｉ、 Ｓａｓａ ｂｏｒｅａｌｉｓ ｖａｒ．ｃｈｉｉｓａｎｅｎｓｉｓ、 Ｓａｓａ ｂｏｒｅａｌｉｓ、Ｓａｓａ ａｌｂｏ−ｍａｒｇｉｎａｔａ、Ｐｓｅｕｄｏｓａｓａ ｊａｐｏｎｉｃａなどの１１種の代表的な品種がある。この中の主たる栽培品種は、 Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ（Ｃｅｄｒｅｌａ ｓｉｎｅｓｉｓ）、Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ ｎｉｇｒａ及びＰｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｅｄｕｌｉｓ である。東医宝鑑、本草綱目、新農本草經によると、竹は麻痺、高血圧の治療に効果があり、解熱、去痰、清涼などの目的で肺炎と気管支炎の治療に使用した。最近、竹は高血圧、粥状動脈硬化、心血管系疾患の治療に使用されていることと報告されている。また、竹は抗癌及び老化防止に有効な抗酸化効果を有することと公知されている。また、竹に存在する有機酸、食餌繊維、タンニン、ベンゾフランのような植物化学物質（phytochemical）は循環器系の疾患予防に寄与するものと期待される。
【０００９】
従来、竹の生理活性物質の研究は、大部分抗菌活性中心にして韓国及び日本で報告されてきた。既に、竹葉から抗菌性物質である２，６−ジメチルベンゾキノンと安息香酸が日本研究者によって明らかにされており、特許文献１には竹抽出物を用いた血液循環改善及び抗炎症効果が開示されている。また、特許文献２にはエーテルを溶媒として使用するソックスレー方法で収得した竹抽出物を含有する抗アレルギー効果のある脂肪と油が開示されており、特許文献３には、水を用いて収得した竹エキスがアトピー性皮膚炎の治療に有効な鎮痒効果を有しているのが開示されている。
【００１０】
コガネバナ（Scutellaria）は生理活性及び薬理作用を有しており、漢方で熱とアレルギーの治療に使用されている。コガネバナは血管を拡張させ、さらに血圧を降下させる作用をしながら粥状動脈硬化を抑制する。コガネバナに含有されたフラボノイドの一種であるバイカリンは鎮静作用をしながら毛細血管の透過性を低下させるので、止血作用を行う。また、肥満細胞膜を強化し、化学伝達物質の遊離を抑制して抗アレルギー作用をする。特に、アレルギーによる感染を改善し、血管透過性亢進を抑制して消炎作用が強く、血管の炎症性出血、鬱血を緩和する作用など、コガネバナ抽出物が示す薬理作用は、主にバイカリンに起因することが知られている。バイカリンは加水分解され、バイカレイン及びグルクロン酸（glucuronic acid）になる。バイカレインは利尿作用を、グルクロン酸は解毒作用をする。特許文献４はコガネバナのフラボノイド成分からなる治療剤を開示している。特許文献５はコガネバナ抽出物をはじめとするフラボン配糖体を含有することを特徴とするアルコール障害予防及び治療剤組成物を開示している。特許文献６は抗菌効果に優れたコガネバナ抽出物、その製造方法及びそれらを含む薬学的組成物を開示している。また、特許文献７は抗ストレス効果を有するコガネバナ及びゴミシ（五味子）混合抽出物を開示している。
【００１１】
竹の上記特性は知られているが、竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を用いるアトピー性皮膚炎に対する治療効果はまだ報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】大韓民国特許第１０−０４６５１１３号
【特許文献２】日本特開平０９−２７８６６２号公報
【特許文献３】ＷＯ２００２／０７７４５号のパンフレット
【特許文献４】大韓民国公開特許第１９９６−０００３７２５号公報
【特許文献５】大韓民国公開特許第１９９６−００４０３７０号公報
【特許文献６】大韓民国公開特許第２００２−００３１６０８号公報
【特許文献７】大韓民国特許第０５２２５７９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
そこで、本発明者らはアトピー性皮膚炎治療用の新しい物質を鋭意研究を行ってきた。その結果、竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物がヒスタミンとロイコトリエンの放出を副作用無しに強力に阻害し、アトピー性皮膚炎に卓越した効果があることを確認し、本発明の完成に至った。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の目的は、アトピー性皮膚炎に効果が卓越しながらも副作用のない植物抽出物を活性成分とするアトピー性皮膚炎治療用組成物を提供することにある。
【００１５】
また、本発明の目的は、アトピー性皮膚炎の治療又は予防用薬剤を製造するための竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物の用途を提供することにある。
【００１６】
さらに、本発明の目的は、竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物の治療有効量を対象に投与し、アトピー性皮膚炎を治療又は予防する方法を提供することにある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の組成物投与時、前肘窩と膝窩でのそれぞれの臨床評価項目の改善率を示すグラフである。
【図２】本発明の組成物の投与に係るアトピー改善効果を製品の使用前と使用後とを比較して示すデジタルスチール写真である。
【図３】本発明の組成物の使用前と使用後の時点で、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００を用いて、前肘窩膝窩１０ｃｍ下部で単位面積及び単位時間当り発生する湿り損失（ｇ／ｍ２・ｈ）を測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、竹抽出物とコガネバナ抽出物とを活性成分として含むアトピー性皮膚炎の治療用組成物を提供する。
【００１９】
また、本発明は、アトピー性皮膚炎の治療又は予防用薬剤を製造するための竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物の用途を提供する。
【００２０】
さらに、本発明は、竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物の治療有効量を対象に投与し、アトピー性皮膚炎を治療又は予防する方法を提供する。
【００２１】
本発明の組成物において、竹はマダケ属（Phyllostachys）、ササ属（Sasa）又はヤダケ属（Pseudosasa）から選択され、上記マダケ属の竹はＰｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｎｉｇｒａ  ｖａｒ． ｈｅｎｏｎｉｓ、Ｐ． ｎｉｇｒａ、 Ｐ． ｂａｍｂｕｓｏｉｄｅｓ、 Ｐ． ｐｕｂｅｓｃｅｎｃｅ、Ｐ． ｎｉｇｒａ ｆｏｒ． ｐｕｎｃｔａｔａ及びＰ． ｃｏｍｐｒｏｓｓａからなる群から選択されるのが好ましく、ササ属の竹はＳａｓａ ｃｏｒｅａｎａ  Ｎａｋａｉ、Ｓ． ｃｏｒｅａｎａ、Ｓ． ｋｕｒｉｌｅｎｓｉｓ、Ｓ． ｑｕｅｌｐａｅｒｔｅｎｓｉｓ、Ｓ． ｂｏｒｅａｌｉｓ、Ｓ． ｂｏｒｅａｌｉｓ  ｖａｒ． ｃｈｉｉｓａｎｅｎｓｉｓ及びＳ． ｂｏｒｅａｌｉｓ ｖａｒ． ｇｒａｃｉｌｉｓ からなる群から選択されるのが好ましく、ヤダケ属の竹はＰｓｅｕｄｏｓａｓａ ｊａｐｏｎｉｃａ及びＰｓｅｕｄｏｓａｓａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓから選択されるのが好ましい。
【００２２】
本発明の組成物において、竹（Bamboo）及びコガネバナ（Scutellaria）は、商業的に購入しうる通常のハーブを使用することができる。これらのハーブの全草、枝、皮、葉、筍、根、内皮などを使用することができ、好ましく、はこれらを粉末化又は抽出物の形態で使用することができる。
【００２３】
本発明の竹抽出物とコガネバナ抽出物は水、有機溶媒、又はこれらの混合溶媒で竹及びコガネバナを抽出することによって使用できる。上記有機溶媒としては通常の全ての溶媒を使用できるが、水、Ｃ１−４アルコール（例:メタノール、エタノールなど）などの極性溶媒、又はこれらの混合溶媒が好ましい。好ましくは、上記竹抽出物としては５０〜９０％エタノール抽出物の水難溶性画分物又は熱水抽出物のエタノール溶解性画分物を使用することができる。
【００２４】
上記抽出は、熱湯抽出、超音波処理などの常法で遂行してもよく、この抽出物の凍結乾燥物を形成して本発明の組成物に使用してもよい。さらに、上記抽出物は通常の画分法又はクロマトグラフィーによってさらに精製でき、このような画分物又は精製物も本発明の範囲内である。
【００２５】
本発明の組成物において、竹又はコガネバナを単独で使用できるが、相乗効果を表すために、竹抽出物とコガネバナ抽出物をさらに混合した組み合わせ組成物を使用することが好ましい。
【００２６】
本発明の組成物において、抽出物単独処理時に比べて混合物による相乗效果の測定は、コルビー式（COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967）を利用して確認した。
【００２７】
上記で示されるように、竹抽出物とコガネバナ抽出物とを併用して使用する場合、これらの混合比は、例えば、１〜１０:１〜１０であってもよい。好ましくは、１〜５：１〜５、より好ましくは、１〜３：１〜３の重量比で混合することができる。
【００２８】
本発明の組成物は、薬剤学的分野における公知方法で製剤化することができ、抽出物自体と薬剤学的に許容される担体、賦形剤などと混合して、通常の薬学的製剤、例えば、飲料、シロップ剤、カプセル剤、粒剤、粉末、軟膏及びエマルジョンなどの溶液、ゲルなどの外表皮膚製剤に製造でき、これを経口又は非経口で投与することができる。
【００２９】
本発明の組成物は体内への活性成分の吸収範囲；排泄率；患者の年齢、体重、性別、及び状態；治療疾患の重症度によって適切に投与される。しかし、通常成人投与量は、１日当たり、０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇとすればよい。これを１日１回又は数回にわけて投与できる。上記投与量はいかなる方法でも本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明を下記実施例及び実験例に基づいてさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらによっていかなる方法でも制限されるものではない。
【００３１】
実施例１  竹抽出物の製造
１−１．竹酒精抽出物の製造
乾燥された竹２０ｋｇに、２５％のエタノール２００Ｌを加え、混合物を８０℃で６時間加熱することによって抽出した。抽出液をろ過し、抽出液の体積が約５Ｌになるまで濃縮してエタノールを除去した。その後、濃縮された抽出液を室温に冷却した。沈澱物を回収し、乾燥して竹抽出物３９０ｇを得た。
【００３２】
１−２．竹熱水抽出物の製造
乾燥された竹２０ｋｇに、重量対比１０倍の水を加え、混合物を１００℃で４時間加熱することによって抽出した。抽出液をろ過し、減圧下で濃縮した。濃縮された抽出液にエタノール１０Ｌを加え、７０℃で２時間撹拌した後、室温に冷却した。沈澱物をろ過し、減圧下で濃縮して竹抽出物３５０ｇを得た。
【００３３】
実施例２  コガネバナ抽出物の製造
コガネバナ１ｋｇに水８Ｌを加え、８０℃で２時間還流することによって抽出した。抽出物を冷却、ろ過、濃縮してコガネバナ抽出粉末３３０ｇを得た。
【００３４】
実施例３  混合組成物の製造
上記実施例1と実施例２でそれぞれ得られた竹抽出物とコガネバナ抽出物を、それぞれ１：１、１：２、１：３又は２：１、３：１の割合で混合して混合組成物を製造した。
【００３５】
実験例
実験例１  
肥満細胞からそれぞれの実施例に対するヒスタミン及びロイコトリエン放出阻害活性の測定
肥満細胞からヒスタミン及びロイコトリエンの放出は、アレルギー反応の重要な原因中の一つである。竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物が肥満細胞からのヒスタミン及びロイコトリエンの放出を阻害する効果を測定した。
【００３６】
１−１．肝から肥満細胞の分離
雌のテンジクネズミ（guinea pigs）（２００ｇ）８匹から肺組織（３ｇ／１匹）を分離して脂肪組織、気管支及び血液を除去した。分離された肺組織をＣａ２＋、Ｍｇ２＋及び０．１％ゼラチンが含有されたタイロード（Tyrode）緩衝液（ＴＧＣＭバッファー）を使用して、１５、１５、２５分間３回酵素処理（５ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ、１．８ｕｎｉｔ／２７μＧのエラスターゼ）をした。各酵素処理された肺組織をナイロンメッシュとメタルメッシュ（１００μｍ）でろ過した後、遠心分離した（‘単分散肥満細胞’という）。沈澱物をＣａ２＋、Ｍｇ２＋−欠乏、０．１％ゼラチンを含有する緩衝液（ＴＧバッファー）１６ｍＬに懸濁し、粗パーコール（１．０４１ｍｇ／ｍＬ密度）にロードして２５分間、１，４００ｒｐｍで遠心分離して沈澱物を得た。沈殿物をＴＧ緩衝液（８ｍＬ）で再懸濁し、不連続パーコール（１．０６〜１．１０ｍｇ／ｍＬ密度）にロードし、２５分間１，４００ｒｐｍで遠心分離して、様々な細胞層を分離した。その中からの第３層及び第４層に、主に肥満細胞が存在するので、上記二つの層をＴＧＣＭ緩衝液で２回洗浄した。全体細胞及び肥満細胞は、それぞれトリパンブルー及びアルシアンブルーで染色した。細胞数を算出することによって肥満細胞の純粋度を測定して、約８０〜９０％の肥満細胞を得た。
【００３７】
１−２．肥満細胞からヒスタミン放出の阻害
肥満細胞（４１０５細胞）を３７℃で、４５分間テンジクネズミＩｇＧ１抗体（ａｎｔｉ−ＯＶＡ  １ｍＬ／１０６細胞）で処理し、ＴＧＣＭ緩衝液で洗浄して肥満細胞膜に結合されないａｎｔｉ−ＯＶＡ抗体を除去した。肥満細胞をＴＧＣＭ緩衝液（１ｍＬ）で懸濁し、それぞれの試料を３０μgの濃度で前処理した。肥満細胞をオボアルブミン（１．０μｇ／ｍＬ）を用いて感作して、１０分間反応させ、氷冷し、遠心分離して上清からヒスタミンを測定した。
【００３８】
各サンプル中のヒスタミン量は、Siraganianの方法を変形して自動連続−流れ抽出（automated continuous-flow extraction）及び蛍光計量分析器（Astoria analyzer series 300, Astoria-Pacific International, Oragon, USA）を使用して測定した。１Ｎ−塩酸、０．７３Ｍリン酸、５Ｎ水酸化ナトリウム、１Ｎ水酸化ナトリウム、希薄食塩水（saline diluents）とサンプラーワッシュ（sampler  wash）、ｏ−フタルアルデヒド溶液を用意してアナライザに連結されたチューブを連結した。ヒスタミンの貯蔵溶液を２０ｎｇ、１０ｎｇ、５ｎｇ、３ｎｇ、１ｎｇに希釈して、標準曲線の濃度−依存的結果を得た。次ぎに、２％過塩素酸で各試料を希釈し、ヒスタミン量を測定した。その結果、竹抽出物及びコガネバナ抽出物、それぞれは阻害活性を示したことが示され、また、竹抽出物及びコガネバナ抽出物の混合組成物が強力な阻害活性を示した。抽出物単独の投与に比べて混合投与時の相乗效果を測定し、コルビー式（COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967）を利用して確認した（表１）。
【００３９】
【表１】
2010505944.tif 000002
【００４０】
１−３．肥満細胞からロイコトリエンの放出阻害
それぞれの試料中のロイコトリエンの量は、Aharoneyなど（Biochem. Biophys. Res. Commun., p574-579, 1983）の方法を用いて測定した。即ち、ロイコトリエン抗体を０．１％ゼラチンが含まれている５ｍＭ  ＭＥＳ緩衝溶液で懸濁し、それぞれの実験チューブに、３０μgの濃度で試料が処理された細胞の上清を１００μＬずつ添加した。ロイコトリエン抗体と［３Ｈ］ロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４）を上清に添加し、４℃で２時間反応させた。反応を、デキストランコーティング活性炭を利用して中断し、阻害活性は液体閃光分光計（liquid scintillation spectrometry）を使用して測定した。その結果、竹抽出物及びコガネバナ抽出物、それぞれは阻害活性を示したことが示され、また、竹抽出物とびコガネバナ抽出物との混合組成物は強力な阻害活性を示した。 抽出物単独の投与に比べて混合投与時の相乗效果を測定し、コルビー式（COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967）を利用して確認した（表２）。
【００４１】
【表２】
2010505944.tif 000003
【００４２】
実験例２
臨床実験
アトピー性皮膚炎から苦しんでいる重症度患者２０人を対象とし、実験例１から選択された竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を使用して、４週間臨床試験を実施した。膝窩（popliteal fossa）と前肘窩（antecubital fossa）に本発明の組成物を塗布し、結果を観察した。
【００４３】
臨床試験において、製品使用前と使用後の効果は、アトピー改善効果評価法（Local SCORAD index）を用いて評価した。６個の臨床評価項目（Intensity items）即ち、紅斑（Erythema）、浮腫／丘疹（Edema/Papulation）、滲出／痂皮（Oozing/Crust）、表皮剥離（Excoriation）、苔蘚化（Lichenification）、乾燥（Dryness）を程度によって、それぞれ前肘窩、膝窩部位の左側と右側とに区分し、４ステップ（0=absence, 1=mild, 2=moderate, 3=severe）で評価し、改善率で示した。
【００４４】
その結果、製品使用後の改善効果があり、特に、紅斑、滲出／痂皮及び表皮剥離項目で、５０％以上の改善効果があった（図１）。写真撮影は、製品使用前と使用後の時点で、デジタルスチルカメラ（DSC-S75, Sony）で一般写真撮影した（図２）。また、単位面積当たり及び単位時間当たりに発生する蒸発による湿り損失量（ｇ／ｍ２・ｈ）は製品の使用前と使用後の時点で、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００（Courage+ Khazaka, Germany）を使用して前肘窩及び膝窩１０ｃｍ下部から測定した。経皮湿り損失量は各時点によって低減しており、特に前肘窩部位より膝窩部位の改善程度が高かった（図３）。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明による組成物は植物から収得した天然成分であり、ヒスタミンとロイコトリエンの放出を調節することによって免疫活性を調節する。本発明の組成物を安全で、且つアトピー性皮膚炎の治療に有用であり、アトピー性皮膚炎の治療に使用できる。
【図１】
2010505944.tif 000004
【図２】
2010505944.tif 000005
【図３】
2010505944.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成21年10月1日(2009.10.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を活性成分として含むアトピー性皮膚炎治療又は予防用薬剤学的組成物。
【請求項２】
上記混合組成物は、竹抽出物：コガネバナ抽出物の重量比が１〜１０:１〜１０である請求項１に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項３】
上記重量比が、１〜５：１〜５である請求項２に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項４】
上記重量比が、１〜３：１〜３である請求項２に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項５】
上記竹抽出物は、５０〜９０％エタノール抽出物である請求項１〜４のいずれかに記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項６】
上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項１〜４のいずれかに記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項７】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項５に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項８】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項６に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
【請求項９】
ヒスタミン又はロイコトリエンの放出を阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
アトピー性皮膚炎の治療又は予防が、紅斑（Erythema）、浮腫（Edema）、丘疹（Papulation）、滲出（Oozing）、痂皮（Crust）、表皮剥離（Excoriation）、苔蘚化（Lichenification）、又は乾燥（Dryness）の改善である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
アトピー性皮膚炎の治療又は予防が、経皮湿り損失量の低減である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を用いることによる、アトピー性皮膚炎の治療又は予防用薬剤を製造する方法。
【請求項１３】
上記混合組成物は、竹抽出物：コガネバナ抽出物の重量比が１〜１０：１〜１０である請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
上記重量比が、１〜５：１〜５である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
上記重量比が１〜３：１〜３である請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
上記竹抽出物は、５０〜９０％エタノール抽出物である請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項１７に記載の方法。
【国際調査報告】
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