(57)【要約】本発明は、腫瘍細胞殺傷活性を有する修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート、好ましくは腫瘍細胞殺傷活性を有するグアニジン−デキストランコンジュゲートに関する。この修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートは、医薬品、特に腫瘍を治療するための医薬品又は腫瘍殺傷組成物を生産するための医薬品として使用される。該ヒドロキシポリマーコンジュゲートの製造方法もまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞殺傷効果を有する修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートであって、前記修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートはグアニジン化合物で置換されたヒドロキシポリマーであり、前記グアニジン化合物は少なくとも１つの遊離アミノ基を有し、かつ該ヒドロキシポリマー部分の活性化ヒドロキシル基へ共有結合でカップリングされていることを特徴とする、修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項２】
前記グアニジン化合物が、アグマチン又はアミノグアニジンであることを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項３】
前記ヒドロキシポリマーが、１０3〜１０6ダルトンの分子量を有することを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項４】
前記ヒドロキシポリマーがデキストランであることを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項５】
共有結合でカップリングされた少なくとも１つの官能基をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項６】
前記官能基が放射性核種であることを特徴とする、請求項５に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項７】
前記官能基が治療用化合物であることを特徴とする、請求項５に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項８】
前記官能基が抗癌薬であることを特徴とする、請求項５に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項９】
前記官能基がさらに標的薬剤であることを特徴とする、請求項５に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項１０】
およそ７０ｋＤ±２５ｋＤの平均分子量を有するグアニジン−デキストランコンジュゲートであり、デキストランのグルコース部分の１５〜６０％、好ましくは２０〜５０％が少なくとも１つの遊離アミノ側鎖基を有するグアニジン化合物で置換され、該グアニジン化合物が該デキストランの活性化ヒドロキシル基へ共有結合でカップリングされていることを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項１１】
局所的に、膀胱内に、部位局所的に、腹膜に、腫瘍内に、全身に、又は静脈内に投与可能ということを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート及び少なくとも１種の薬学的に許容されるアジュバントを含むことを特徴とする腫瘍殺傷組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの遊離アミノ基を有するグアニジン化合物が、ゲル濾過によって精製された活性化ヒドロキシポリマーを含む溶出液と混合されることを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートの製造方法。
【請求項１４】
前記活性化ヒドロキシポリマーが、ヒドキシポリマー（hydoxypolymer）を含む水溶液に過ヨウ素酸塩を加え、続いて濃硫酸を加える酸化反応によって得られ、前記酸化反応はエチレングリコールの添加によって停止され、ゲル濾過による精製が後続することを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍殺傷効果を有する修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート、特に腫瘍殺傷効果を有するグアニジン−デキストランコンジュゲート、該コンジュゲートの調製方法、及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
グアニジン化合物は、多くの興味深く重要な生物医学的な効果があり、それゆえ多くの用途がある。グアニジン化合物は、例えばフリーラジカルスカベンジャー（一酸化窒素形成を阻害する一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）のインヒビター）として使用される。グアニジン化合物は、細胞に対する特定の抗増殖効果を有することが知られている。グアニジン類は「アンチエイジング」薬としてもまた使用され、この効果は、以下の科学出版物中に記述されているように、低密度リポタンパク質酸化からの保護によって、アテローム性動脈硬化症形成の防止によって、終末糖化産物（ＡＧＥ）の形成の阻害を介して糖尿病の組織損傷効果（例えば心臓血管の損傷）を遅らせることによって、達成される（ユルドゥズ（Yildiz）ら、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Br J Pharmacol）、１９９８年７月；１２４（５）：９０５〜９１０；スカチーニ（Scaccini）ら、ジャーナル・オブ・リピッド・リサーチ（J Lipid Res）、１９９４年、第３５巻、１０８５〜１０９２；ヒガシ（Higashi）ら、ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（J Biochem）、２００４年、第１３６巻、第４号、５３３〜５３９；センデ（Szende）ら、キャンサー・セル・インターナショナル（Cancer Cell Int）、２００１年、１：３；セル（Sell）ら、Ｊ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ Ｓｏｃ Ａｍ、２００１年、５６：Ｂ４０５〜Ｂ４１１；ワン（Wang）ら、ワールド・ジャーナル・オブ・ギャストロエンテロロジー（World J Gastroenterol）、２００５年、７月７日：１１、（２５）３８３０〜３８３３；チャン（Zhang）ら、ワールド・ジャーナル・オブ・ギャストロエンテロロジー（World J Gastroenterol）、２００１年、６月７日、３）：３３１〜３３４；ＪＰバイスヴェンガー（Beisswenger）、ダートマス（Dartmouth）医科大学、http//dartmed.dartmouth.edu/sum- mer00/ html/bench#to#bedside．shtml。アミノグアニジンは米国において非処方箋薬として現在のところ提供されており、様々な疾患の治療におけるその役割は臨床試験において調査されている。ポリアミン代謝の修飾による腫瘍細胞の増殖に対するアグマチンの抑制効果は、ワン（Wang）ら、アクタ・ファーマコロジカ・シニカ（Acata Pharmacologica Sinica）２００５年、５月；２６（５）：６１６〜６２２において記載されている。
【０００３】
５０年以上前から、デキストランは、血液量減少性ショックの阻害、塞栓症の阻害及び微小循環の改善に用いられる確立された薬剤である。デキストランならびにその非毒性の特性及び高い認容性は非常によく立証されている（ＡＳシーガル（Segal）、１９６４年、最新医療モノグラフ（Modern medical monographs）、ライト、ＩＳ編、グリーン＆ストラットン（Green & Stratton）、ニューヨーク、ロンドン、５〜１７ページ中で）。したがって、デキストランは薬学的に適用可能なヒドロキシポリマーの実例としてしばしば使用される。
【発明の概要】
【０００４】
グアニジン化合物及びデキストランは、図１において示されるように、腫瘍細胞に対してほとんど毒性効果を有していない。しかしながら、グアニジン化合物が活性化デキストランなどの活性化ヒドロキシポリマーに共有結合でコンジュゲートされると、このコンジュゲートが、アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）のような従来の抗腫瘍薬の抗腫瘍効果と同様であるか、又はいくつかの投薬量ではさらに高い抗腫瘍効果を実証することが意外にも見出された。
【０００５】
従って、本発明は、腫瘍細胞殺傷効果を有する修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートに関する。修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートは、グアニジン化合物で置換されたデキストリンなどのヒドロキシポリマーであり、このグアニジン化合物は、少なくとも１つの遊離アミノ基を有し、ヒドロキシポリマー部分の活性化ヒドロキシル基に共有結合でカップリングされている。
【０００６】
本発明における好ましいグアニジン化合物は、アグマチン又はアミノグアニジンであり、ヒドロキシポリマー部分は、１０3〜１０6ダルトンの範囲の分子量を有し、該グアニジン化合物で置換される前に活性化されているデキストランである。
【０００７】
修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートは、放射性核種、治療用化合物、抗癌薬、標的薬剤などを含む共有結合でカップリングされた官能基をさらに含みうる。
【０００８】
修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートは、好ましくはおよそ７０ｋＤ±２５ｋＤの平均分子量を有するグアニジン−デキストランコンジュゲートであり、デキストランのグルコース部分の１５〜６０％、好ましくは２０〜５０％は、少なくとも１つの遊離アミノ側鎖基を有するグアニジン化合物で置換され、該グアニジン化合物、好ましくはアグマチン又はアミノグアニジンは、該デキストランの活性化ヒドロキシル基に共有結合でカップリングされている。ヒドロキシポリマーコンジュゲートは、放射性核種、治療用化合物、抗癌薬、標的薬剤などを含む共有結合でカップリングする官能基をさらに含みうる。有用な標的薬剤は例えばビホスホネート類（例えばアレンドロネート）である。
【０００９】
本発明はまた、特に腫瘍を治療するための医薬品生産のために、医薬品としての該ヒドロキシポリマーコンジュゲートの使用にも関する。医薬品は、修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート及び少なくとも薬学的に許容されるアジュバントを含む腫瘍殺傷組成物である。医薬品又は腫瘍殺傷組成物は、局所的に、膀胱内に、部位局所的に、腹膜に、腫瘍内に、全身に、又は静脈内に投与可能である。医薬品は、放射性核種、治療用化合物、抗癌薬、標的薬剤などを含む共有結合でカップリングする官能基をさらに含みうる。
【００１０】
本発明はまた、修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートの製造方法も提供する。本方法において、少なくとも１つの遊離アミノ基を有するグアニジン化合物は、ゲル濾過によって活性化ヒドロキシポリマーを精製すると得られる溶出液と混合される。ヒドロキシポリマーは、該ヒドロキシポリマーを含む水溶液に過ヨウ素酸塩を加え、続いて濃硫酸を加える酸化反応によって、及びエチレングリコールの添加により反応を終了させることによって活性化される。続いて、上述されるように活性化されたヒドロキシポリマーはゲル濾過により精製される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、尿路上皮癌の生細胞（ＲＴ４、ＡＴＣＣ、マナッサス、米国）を使用して、アントラサイクリン＝アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）と比較した、デキストラン及びアミノグアニジンの毒性効果を実証した図である。パーセント生存率はｙ軸上にプロットされ、インキュベーション濃度はｘ軸上にプロットされる。
【図２】図２は、アントラサイクリン＝アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）と比較した、グアニジン−デキストランコンジュゲートのａｍｇｄｘ＝アミノグアニジン−デキストラン、ａｇｍｄｘ＝アグマチン−デキストランの、尿路上皮癌細胞（ＲＴ４、ＡＴＣＣ、マナッサス、米国）に対する毒性効果を示した図である。パーセント生存率はｙ軸上にプロットされ、インキュベーション濃度はｘ軸上にプロットされる。尿路上皮癌細胞の生存は≦１＝０である。より低い値は１００％の細胞死を意味する。
【図３】図３は、アントラサイクリン＝アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）と比較した、グアニジン−デキストランコンジュゲートのａｍｇｄｘ＝アミノグアニジン−デキストラン、ａｇｍｄｘ＝アグマチン−デキストランの、尿路上皮癌細胞（５６３７、ＡＴＣＣ、マナッサス、米国）に対する毒性効果を示した図である。パーセント生存率はｙ軸上にプロットされ、インキュベーション濃度はｘ軸上にプロットされる。尿路上皮癌細胞の生存は≦１＝０である。
【図４】図４は、アントラサイクリン＝アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）と比較した、グアニジン−デキストランコンジュゲートのａｍｇｄｘ＝アミノグアニジン−デキストラン、ａｇｍｄｘ＝アグマチン−デキストランの、前立腺癌細胞（ＰＣ３、ＡＴＣＣ、マナッサス、米国）に対する毒性効果を示した図である。前立腺癌細胞の生存は≦１＝０である。
【図５】図５は、アントラサイクリン＝アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）と比較した、グアニジン−デキストランコンジュゲートのａｍｇｄｘ＝アミノグアニジン−デキストラン、ａｇｍｄｘ＝アグマチン−デキストランの、乳癌細胞（ＭＤＡ２３１、ＡＴＣＣ、マナッサス、米国）に対する毒性効果を示した図である。乳癌細胞の生存は≦１＝０である。
【図６】図６は、アントラサイクリン＝アドリアマイシン（Adriamycin）（登録商標）と比較した、グアニジン−デキストランコンジュゲートのａｍｇｄｘ＝アミノグアニジン−デキストラン、ａｇｍｄｘ＝アグマチン−デキストランの、腎細胞癌（Ａ４９８、ＡＴＣＣ、マナッサス、米国）に対する毒性効果を示した図である。腎臓癌細胞の生存は≦１＝０である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明者は、非常に低い内因性毒性を有する特定のグアニジン化合物が、デキストランなどの非毒性ヒドロキシルポリマーへ共有結合でコンジュゲートしたときに、高い腫瘍細胞殺傷有効性を有することを見出した。この腫瘍細胞殺傷有効性は、ファルモルビシン（Farmorubicine）（登録商標）及びアドリアマイシン（Adriamycine）（登録商標）などの確立されたアントラサイクリン抗癌製剤と同等であるか、又はいくつかの濃度では確立された抗癌薬よりも高い。該ポリマー−グアニジンコンジュゲートの成分が無害な性質であるために、かかるコンジュゲートの取り扱い（すなわち医療スタッフのための）及び患者に対する治療に関連する副作用は、従来の化学療法の抗癌製剤と比較して有利であることが予想できる可能性が高い。
【００１３】
標的化又は腫瘍細胞選択性は、アミノ−５−グアニジノペンタン酸及び構造的に関連するグアニジン化合物、ならびにポリアミン形成のための他の成分を必要とする、分裂の速い腫瘍細胞の代謝要求の増加を介して達成されると考えられる（Ｄスコット・リンド（Scott Lind）、米国栄養科学学会（Am Soc Nutr Sci）、２００４年、ジャーナル・オブ・ニュートリション（J Nutr）、１３４：２８３７〜２８４１；Ｅウェイン（Wayne）、ターキッシュ・ジャーナル・オブ・メディカル・サイエンス（Turk J Med Sci）、２００３年、３３、１９５〜２０５）。該グアニジン化合物の細胞の取り込みは、主にＮａ＋非依存性の塩基性アミノ酸輸送系ｙ＋を介して仲介される（センダン（Cendan）ら、アナルズ・オブ・サージカル・オンコロジー（Ann Surg Oncol）、１９９５年、２：２５７〜２６５）。
【００１４】
本発明のグアニジン−ポリマー−コンジュゲートは、骨格化合物としてデキストランなどのヒドロキシポリマーを有する化合物である。ヒドロキシルポリマー又はデキストランの分子量は１０3〜１０6ダルトンの間である。典型的には、ヒドロキシポリマー又はデキストランは、１５〜６０％の間の、好ましくは２０〜５０％の間のグアニジン側鎖基で置換され、すなわちデキストラン骨格中のグルコース部分の２０〜５０％はグアニジン基で置換されている。
【００１５】
１つの解析されたバッチにおいて、１００ｍｇのアミノグアニジン−デキストランコンジュゲートは、デキストランポリマーが７０ｋＤの平均分子量を有する場合には、約３０ｍｇはグアニジン側鎖基を構成することが実証された。言いかえれば、２７３μｍｏｌのアミノグアニジンが１．４μｍｏｌのデキストラン７０へカップリングされ、これはグルコース部分の約５０％がグアニジン基で置換されることを意味する。他のバッチにおいて、１００ｍｇのアミノグアニジン−デキストランコンジュゲートは、デキストランポリマーが７０ｋＤの平均分子量が有する場合には、約１０ｍｇはグアニジン側鎖基を構成することが見出された。言いかえれば、９０μｍｏｌのアミノグアニジンが１．３μｍｏｌのデキストラン７０へカップリングされ、これはグルコース部分の約１８％がグアニジン基で置換されることを意味する。
【００１６】
医薬品は、好ましくは局所的に（例えば膀胱内投与によって）、部位局所的に（例えば腹膜腔への投与によって）、腫瘍内に（すなわち固形腫瘍の中への直接的な注射によって）、又は全身に（すなわち静脈内投与によって）、投与される。すべてのこれらの投与経路が可能であり、特定の治療適用によって決まる。
【００１７】
ヒドロキシルポリマー又はデキストランポリマーは、グアニジンの側鎖基を使用して置換される。グアニジン基は、グアニジン化合物の遊離アミノ側鎖基を介して該デキストランポリマーへ共有結合でカップリングされる。この置換より先に、酸化を介する該デキストランポリマーの活性化が起こり、これは、グアニジン化合物の結合を形成する該遊離アミノ側鎖基との反応を可能にし、続いて行なわれる還元により安定したアミン結合が得られる（マツナガ（Matsunaga）ら、ニュークリア・メディスン・バイオロジー（Nucl Med Biol）、２００５年、３２、２７９〜２８５）。
【００１８】
例示される事例において、アミノグアニジンは、ヒドロキシポリマー又はデキストランポリマーとのヒドラゾン結合を形成する。ヒドラゾン結合はさらに還元することができ、グアニジノヒドラジン結合が得られる。適切なグアニジン化合物はアグマチン及びアミノグアニジンである。
【００１９】
他の官能基が、該グアニジンヒドロキシポリマーコンジュゲートへさらにカップリングされていてもよい。上記官能基は、治療用薬物、放射性核種（Ｔｃ−９９ｍ、Ｉ−１３１、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｓｍ−１５３など）、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト（タモキシフェンなど）、ペプチド（ソマトスタチンなど）、毒素、モノクローナル抗体又はその断片、フリーラジカルスカベンジャー（アミホスチンなど）又はタンパク質及びさらなる標的薬剤を含む。かかる官能基のカップリングは、直接、又は官能基の包接の前にヒドロキシポリマーへカップリングされた二官能性キレートを介して達成される。
【実施例１】
【００２０】
デキストラン活性化
医薬品グレードのデキストランＰＭ７０（１５０ｍｇ）を６ｍｌの水に溶解した。過ヨウ素酸ソーダ１２０ｍｇを加え、続いて２５μｌの濃硫酸を加えた。合わせた溶液を３０分間撹拌した。エチレングリコール（７５μｌ）を加え、さらに１５分間反応させて、酸化を停止及び過剰の過ヨウ素酸塩を破壊した。活性化デキストランは、溶出液として０．１Ｍ酢酸塩（ｐＨ６．５）により、ＰＤ−１０カラム上で１ｍｌ部分でゲル濾過によって低分子の成分から精製した。各分離において、２ｍｌの活性化デキストラン溶液を得た。
【００２１】
コンジュゲーション
上述の手順によって得られた溶出液（１ｍｌ）を下記のものと混合した。
【００２２】
Ａ）アグマチン硫酸塩（１１０ｍｇ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（５ｍｇ）、
Ｂ）塩酸アミノグアニジン（６５ｍｇ）。
【００２３】
溶液を室温で一晩にわたって撹拌し、溶出液としてＰＢＳによりＰＤ１０カラム上で低分子成分から分離した。各反応から、２ｍｌの精製コンジュゲート溶液を得た。
【００２４】
蛍光測定細胞毒性分析（図１〜６）
ラーション（Larsson）及びニーグレン（Nygren）によって記載されたように、蛍光測定細胞毒性分析を行った（ラーソン（Larson）ら、アンチキャンサー・リサーチ（Anticancer Res）、１９８９年、９：１１１１〜１１１９）。
【００２５】
簡潔には、およそ１０，０００細胞／ウェルを播種した（９６−ウェルマイクロタイタープレート、ファルコン（Falcon）、ベクトン・ディキンソン（Becton Dickinson）社、メラン、フランス）。アントラサイクリン、及びアミノグアニジン基又はアグマチン基を有するグアニジン−デキストランコンジュゲートを、等モル濃度（０．１、０．５、１、２及び４μＭ）で加えた。対照ウェルには同じ量のＰＢＳを与えた。７２時間のインキュベーション後に、マイクロタイタープレートを遠心分離し（２００×ｇで３分間）、培地はプレートをはたくことによって除去した。細胞をＰＢＳ中で洗浄した。フルオレセイン二酢酸（ＦＤＡ、シグマ（Sigma）社、ストックホルム、スウェーデン）をＤＭＳＯに溶解し、−２０℃で凍結して原液（１０ｍｇ／ｍｌ）として保存した。ＦＤＡ原液を１０μｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳ中で希釈し、２００μｌを各ウェルへ加えた。次に、プレートは３７℃で３０分間インキュベートした。９６−ウェルスキャニング蛍光測定器を使用して、生細胞から放出された蛍光をカウントした。データーをコンピューターへ移し、結果を計算した。結果を図１〜５に示す。ｙ軸は％細胞生存を示し、ｘ軸は検体のモル濃度を示す。
【００２６】
次の腫瘍細胞株を使用した（ＡＴＣＣ、マナッサス、米国から）。ＲＴ４、５６３７（尿路上皮癌）、ＭＤＡ２３１（乳癌）、ＰＣ３（前立腺癌）、Ａ４９８（腎細胞癌）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年2月18日(2009.2.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞殺傷効果を有する修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートであって、前記修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートはグアニジン化合物であるアグマチン及びアミノグアニジンで置換されたヒドロキシポリマーであるデキストランであり、前記グアニジン化合物であるアグマチン及びアミノグアニジンは少なくとも１つの遊離アミノ基を有し、かつ該ヒドロキシポリマー部分の活性化ヒドロキシル基へ共有結合でカップリングされていることを特徴とする、修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項２】
前記ヒドロキシポリマーであるデキストランが、１０3〜１０6ダルトンの分子量を有することを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項３】
共有結合でカップリングされた少なくとも１つの官能基をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項４】
前記官能基が放射性核種であることを特徴とする、請求項３に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項５】
前記官能基が治療用化合物であることを特徴とする、請求項３に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項６】
前記官能基が抗癌薬であることを特徴とする、請求項３に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項７】
前記官能基がさらに標的薬剤であることを特徴とする、請求項３に記載の修飾されたヒドロキシポリマー。
【請求項８】
およそ７０ｋＤ±２５ｋＤの平均分子量を有するグアニジン−デキストランコンジュゲートであり、デキストランのグルコース部分の１５〜６０％、好ましくは２０〜５０％が少なくとも１つの遊離アミノ側鎖基を有するグアニジン化合物であるアグマチン及びアミノグアニジンで置換され、該グアニジン化合物が該デキストランの活性化ヒドロキシル基へ共有結合でカップリングされていることを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項９】
局所的に、膀胱内に、部位局所的に、腹膜に、腫瘍内に、全身に、又は静脈内に投与可能ということを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲート。
【請求項１０】
腫瘍細胞殺傷効果を有する組成物であって、前記組成物は、少なくとも１種の薬学的に許容されるアジュバントと、グアニジン化合物であるアグマチン及びアミノグアニジンで置換されたヒドロキシポリマーであるデキストランとを含み、前記グアニジン化合物であるアグマチン及びアミノグアニジンは、少なくとも１つの遊離アミノ基を有し、かつ該ヒドロキシポリマー部分の活性化ヒドロキシル基へ共有結合でカップリングされていることを特徴とする、組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの遊離アミノ基を有するグアニジン化合物であるアグマチン又はアミノグアニジンが、ゲル濾過によって精製された活性化デキストランを含む溶出液と混合されることを特徴とする、請求項１に記載の修飾されたヒドロキシポリマーコンジュゲートの製造方法。
【請求項１２】
前記活性化デキストランが、デキストランを含む水溶液に過ヨウ素酸塩を加え、続いて濃硫酸を加える酸化反応によって得られ、前記酸化反応はエチレングリコールの添加によって停止され、ゲル濾過による精製が後続することを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【国際調査報告】
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