(57)【要約】本開示は、ＡＴおよびＮＴのＥ−１０−０Ｈ−ＮＴ代謝物質を含む組成物、それらの合成方法、ならびにそれらの使用方法を提供する。１実施形態では、化合物（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンは、キラル特異的オキサザボロリジン触媒の存在下にＥ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−オキソ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンを還元することにより製造される。他の実施形態では、ノルエピネフリン輸送体を、（−）鏡像異性体が富化されているＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む組成物と接触させることを含むノルエピネフリンの再取り込みを阻害する方法が記述される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴならびに医薬的に許容される賦形剤、担体および／または希釈剤を含む医薬組成物であって、ここで該Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、（−）−鏡像異性体が富化されている医薬組成物。
【請求項２】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、少なくとも約６０％の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、少なくとも約７０％の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、少なくとも約８０％の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、少なくとも約９０％の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、鏡像異性体的に実質的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、前記組成物中に塩として存在する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記塩がＤ−またはＬ−リンゴ酸塩である請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記塩がコハク酸塩である請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物の有効量を哺乳動物に投与することを含む哺乳動物での疼痛を処置する方法。
【請求項１２】
前記疼痛が、侵害受容性起源の疼痛である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記疼痛が、非侵害受容性起源の疼痛である請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
疼痛が、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、疱疹後神経痛、糖尿病性神経障害または化学療法誘発性神経障害性疼痛である請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、経口投与のために処方される請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物の有効量を哺乳動物に投与することを含む哺乳動物のうつ病を処置する方法。
【請求項１７】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物の有効量を患者に投与することを含む、アミトリプチリンまたはノルトリプチリンでの処置に応答性である患者の障害を処置する方法。
【請求項１８】
アミトリプチリンまたはノルトリプチリン療法に応答性である前記障害が、排尿障害、気分障害、認知障害、精神病性障害、不安障害、人格障害、摂食障害、薬物への嗜癖または物質乱用のから生じる化学物質依存症、離脱症候群、内分泌障害、衝動性障害、チック障害、胃腸管障害、血管障害、身体表現性障害、パーキンソン病、ショック、高血圧、性的機能不全、月経前症候群および線維筋痛症候群から選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者が、アミトリプチリンまたはノルトリプチリンとともに使用することが禁忌である薬剤を服用している請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
鏡像異性体的に実質的に純粋な（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテン。
【請求項２１】
鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテン。
【請求項２２】
合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ。
【請求項２３】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、遊離塩基の形態である、請求項２２に記載の合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ。
【請求項２４】
前記Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、塩の形態である、請求項２２に記載の合成由来の鏡像異性体的に純粋な、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ。
【請求項２５】
前記塩がリンゴ酸塩である、請求項２２に記載の合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ。
【請求項２６】
前記塩がコハク酸塩である、請求項２２に記載の合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ。
【請求項２７】
Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−オキソ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンをキラル特異的オキサザボロリジン触媒の存在下で還元することを含む、（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンの製造方法。
【請求項２８】
前記オキサザボロリジン触媒が、
【化３】
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である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンをメチルアミンと反応させることを含む（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの製造方法。
【請求項３０】
鏡像異性体的に実質的に純粋な（−）−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンをメチルアミンと反応させる工程を含む、鏡像異性体的に実質的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの製造方法。
【請求項３１】
（ｉ）Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−オキソ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンを、
【化４】
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の存在下、還元して（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンを生成する工程；および
（ｉｉ）（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンをメチルアミンと反応させる工程、
を含む（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの製造方法。
【請求項３２】
ノルエピネフリン輸送体を、（−）鏡像異性体が富化されたＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む組成物に接触させることを含むノルエピネフリンの取り込みを阻害する方法。
【請求項３３】
インビトロで実施される請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ノルエピネフリンの再取り込みを阻害するためのＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの有効量を含む組成物の量を対象に投与することによりインビボで実施される請求項３２に記載の方法であって、該Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは（−）鏡像異性体が富化されている方法。
【請求項３５】
哺乳動物の疼痛を処置するために有用な医薬を製造するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項３６】
前記疼痛が、侵害受容性起源の疼痛である請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記疼痛が、非侵害受容性起源の疼痛である請求項３５に記載の使用。
【請求項３８】
前記疼痛が、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、疱疹後神経痛、糖尿病性神経障害または化学療法誘発性神経障害性疼痛である請求項３５に記載の使用。
【請求項３９】
前記医薬が、経口投与のために処方される請求項３５に記載の使用。
【請求項４０】
哺乳動物でのうつ病を処置するのに有用な医薬の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項４１】
アミトリプチリンまたはノルトリプチリンでの処置に応答性である障害を処置するのに有用な医薬の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項４２】
障害が、排尿障害、気分障害、認知障害、精神病性障害、不安障害、人格障害、摂食障害、薬物嗜癖または物質乱用から生じる化学物質依存症、離脱症候群、内分泌障害、衝動性障害、チック障害、胃腸管障害、血管障害、身体表現性障害、パーキンソン病、ショック、高血圧、性的機能不全、月経前症候群および線維筋痛症候群から選択される請求項４１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願の引用
本願は、米国特許法１．１１９（ｅ）条の下で、２００７年４月３０日に出願した仮出願６０／９１５，１０３号、２００８年２月１１日に出願した仮出願６１／０２８，１２２号および２００８年２月１２日に出願した仮出願６１／０２８，１２２号に対する優先権を主張する。これらの出願の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
２．連邦政府の資金提供による研究開発に関する陳述
該当なし
３．共同研究契約の当事者
該当なし
４．配列表、表またはコンピュータプログラムの参照
該当なし
【背景技術】
【０００３】
５．背景
アミトリプチリン（ＡＴ）およびノルトリプチリン（ＮＴ）を含む３環性抗うつ剤は、ノルエピネフリンやセロトニンを含むモノアミン類の再取込みを阻害することが示され、ノルエピネフリンやセロトニンの調節不全の取り込みまたは再取り込みにより少なくとも一部分は媒介される多くの種々の障害や疾患の適応内使用（承認薬）および適応外使用（未承認薬）の両方で広く使用されてきており、それらの障害や疾患としては、限定されるものではないが、うつ病などの気分障害；強迫性障害（ＯＣＤ）などの不安障害；神経性食欲不振症や神経性過食症などの摂食障害；抜毛症などの衝動制御障害；オピオイド離脱関連不眠症などの睡眠障害；注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）などの人格障害；およびある種の疼痛などの身体表現性障害などが挙げられる。ＡＴおよびＮＴは、また、侵害受容性（例えば、体性または内臓性）起源または非侵害受容性（例えば、神経因性または交感神経性）起源のいずれかである急性および慢性の疼痛のいろいろなタイプに対する一次治療として使用されてもきており、それらは、糖尿病性神経障害や疱疹後神経痛（ＰＨＮ）などの非侵害受容性疼痛、および炎症性疼痛や間質性膀胱炎を含む侵害受容性疼痛が挙げられる。
【０００４】
しかしながら、ＡＴおよびＮＴの使用は、口腔乾燥症、便秘、吐き気、および尿閉；頭痛、多汗、耳鳴、不快な味、起立性低血圧、不整脈や頻拍などの心臓毒性効果；鎮静作用および体重増加などの抗ムスカリン効果を含むがそれらに限定されない、それらの不都合な副作用により制限される。また、ＮＴおよびＡＴは、シトクロムＰ４５０薬物代謝酵素とのＮＴおよびＡＴが共有する副作用および／または相互作用により、様々な介在物質に使用することは禁忌である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
その結果、ノルエピネフリンやセロトニンの調節不全の取り込みまたは再取り込みにより少なくとも一部分は媒介される障害や疾患を治療することができる他の化合物、およびＡＴと３環系抗うつ薬の薬理学に関与している他の標的（しかし、これらは、減少した、および／または、より少ない副作用を示し、ＡＴやＮＴとの使用に対して禁忌である薬物と投与することができる）の同定は、有益であって、望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
６．概要
ヒトを含む哺乳動物にインビボ投与した場合、アミトリプチリン（「ＡＴ」）およびノルトリプチリン（「ＮＴ」）は、インビボで多くの共通した代謝物を共有し、その主要なものの１つは、［（５−［３−メチルアミノ−プロピリデン］−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−１０−オール（「１０−ＯＨ−ＮＴ」）である。この１０−ＯＨ−ＮＴ代謝物は、２重結合についての配置に依存して２つの幾何異性体（Ｚ−１０−ＯＨ−ＮＴおよびＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ）を有する。これらの幾何異性体の各々は、１０位の炭素のキラリティのために、２つの鏡像異性体、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、ならびに（＋）−Ｚ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｚ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。ある研究では、主要な１０−ＯＨ−ＮＴ代謝物のラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ヒトに経口投与した場合、うつ病や不安の治療のために有用である可能性が示唆されている（Ｎｏｒｄｉｎら、１９８７ａ）。しかしながら、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（＋）および（−）鏡像異性体が、同様の効力でノルアドレナリン取り込みを阻害することを述べている未発表の研究（Ｎｏｒｄｉｎ  ＆  Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎ，１９９５）について言及していることを除いては、このラセミ体ならびにまた単離された（＋）および（−）鏡像異性体の特定の薬理学的および生化学的特性は、文献に報告されていない。
【０００７】
出願人によって発見され、本明細書に提示された（さらに詳細に、後のセクションで議論される）確かな証拠は、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（−）鏡像異性体が、治療的有用性と一致する重要な薬理学的および生化学的な特性を有することを示している。例えば、ＡＴやＮＴのように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ノルエピネフリン（「ＮＥ」）およびセロトニン（「５ＨＴ」）モノアミン輸送体と結合し、ＮＥおよび５ＨＴの取り込み（ＡＴおよびＮＴの抗うつ性および他の治療特性と関連しているのが知られている生物学的活性）を阻害する。意義深いことに、組み換え輸送体結合アッセイで測定されたＮＥ輸送体に対する（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性は、ＡＴのそれとほぼ等しく、ＮＴのそれの約１０倍以内であった。同様の結果が、細胞系機能性アッセイで測定されたＮＥ取り込み阻害について観測された。さらに、ＮＴのように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＮＥ輸送体対５ＨＴ輸送体に関して選択性を示した。
【０００８】
出願人は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、使用過程で不都合な副作用と相関するＡＴおよびＮＴのある種の薬理学的および生化学的な特性を共有しないことを発見した。例えば、ＡＴおよびＮＴの両方は、Ｈ１ヒスタミン受容体と強力に拮抗する（これは、ＡＴおよびＮＴの短期および長期の使用の両方で観察される有意な体重増加（Ａｌｔａｍｕｒａら，１９８９；Ｗｉｒｓｈｉｎｇら，１９９９；Ｒｉｃｈｅｌｓｏｎ，２００１；Ｋｈａｗａｍら，２００６）および望ましくない鎮静効果（Ｂｒｙｓｏｎ  ＆  Ｗｉｌｄｅ，１９９６）において役割を果たす特性）のに対して、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、Ｈ１ヒスタミン受容体に対して少ない程度で拮抗する。実際に、ＡＴおよびＮＴと比較して、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの優れた非鎮静効果は、薬物の鎮静特質を評価するのに一般的に使用されるラットの回転棒試験で確認された。その結果、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴやＮＴより鎮静作用がより弱く、不都合な食思効果がより少ないはずである。この分析評価では、５１±２０％および６０±４０％の回転棒行動のピーク欠陥（ｐｅａｋ  ｄｅｆｉｃｉｔ）は、ＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．（腹腔内投与））およびＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）をそれぞれ投与後３０分に観察された。全く対照的に、３０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ）の用量の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを服用したラットでは、行動の有意な減退は観察されなかった。
【０００９】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのこれらおよび他の新たに発見された有益な特性（以下にさらに議論される）は、３環系抗うつ剤に対して当該分野で先例のない治療効果を提供する。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、治療的に関連のある薬理学的および生化学的な特性をＡＴおよびＮＴと共有するので、それを実質的に鏡像異性体的に純粋な形態または鏡像異性体的に純粋な形態のどちらかで、本明細書でさらに記述される様々な障害および疾患を含むがそれらに限定されない、ＡＴやＮＴで共通して治療される多くの適応症を治療するために使用することができる。しかしながら、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、不都合な副作用の原因として知られるある種の薬理学的および生化学的な特性を有しないので、望ましくない副作用の発生を少なくして、患者に治療を施すことができる。特定の非限定的な例として、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴやＮＴよりも、有意に弱い効力のＨ１ヒスタミン受容体拮抗剤であるので、ＡＴおよび／またはＮＴ治療で経験する有意な体重増加の望ましくない副作用および鎮静作用を伴うことなく、この薬剤で治療効果を達成することができる。
【００１０】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのように、ラセミ体の（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよびその（＋）鏡像異性体は、また、インビトロでのアッセイで重要な、そしてほぼ同等の生化学的活性を有する。例えば、（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、それぞれ、ノルエピネフリン輸送体およびセロトニン輸送体に対してもほぼ同等の親和性を示す（参照：実施例１４）。機能性アッセイでは、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（＋）および（−）鏡像異性体は、ノルエピネフリン取り込みに対して約同等の選択的阻害を示し、インビトロでの機能性アッセイにおいてＡＴとほぼ同等の効力である（参照：実施例５）。さらに、インビボでの動物試験では、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ鏡像異性体は、ラセミ体の（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの両方よりも、神経障害性疼痛のげっ歯類モデル（Ｌ５脊髄神経結紮ラットモデル：実施例１５を参照）において治療的により有効であり、また、痛覚過敏（ＦＣＡ誘発炎症性疼痛；実施例５および１７から２０参照）およびうつ病（強制水泳試験；実施例２１参照）のげっ歯類モデルにおいて、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴよりもさらに有効でもある。（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ほぼ同等の生化学的活性とすると、こうしたインビボでの結果は全く驚くべきものであった。ラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、疼痛およびうつ病のインビボでのげっ歯類モデルにおいて、ほぼ同等の効力を示すであろうことが期待された。しかし、（−）鏡像異性体のみが、有効であることが分かった。本開示は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴに関して発見された驚異的な効力に一部は基づいている。
【００１１】
したがって、１つの態様では、本開示は、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと、任意に１つ以上の医薬的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む組成物を提供する。Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、その（−）鏡像異性体が富化された非ラセミ体混合物として組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、その組成物を含むＥ−１０−ＯＨ−ＮＴは、実質的に鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴである。いくつかの実施形態では、組成物を含むＥ−１０−ＯＨ−ＮＴは、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴである。
【００１２】
Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、遊離塩基または塩の形態で組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、医薬的に許容される酸付加塩の形態で存在する。Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（塩の形態を含む）は、また、例えば、製造または精製の過程で使用される溶剤および／または水との溶媒物および／または水和物の形態で組成物中に存在することができる。
【００１３】
Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、以下でさらに詳細に説明されるように、インビトロまたはインビボで使用することができる。インビボで使用する場合、組成物は、獣医の指示で動物に投与するために、あるいは実質的に任意の投与経路または投与様式でヒトに投与するために処方することができ、これらは、限定されるものではないが、経口投与、局所投与、経眼投与、口腔投与、全身投与、経鼻投与、注射、経皮投与、経腸投与、経膣投与、吸入投与、またはガス注入を含む。
【００１４】
上記したように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴとこれらの薬物の治療効果と相関する重要な生物学的特性を共有する。それは、また、疾患の動物モデルにおいて効力を示す。これらの同様の特性に基づいて、本明細書で記述される組成物は、ＡＴおよびＮＴによる治療に応答性である多くの疾患および適応症を治療する際に同じように有効になると予想される。したがって、別の態様では、本開示は、ＡＴまたはＮＴ療法に応答性である疾患または適応症を治療する方法を提供する。その方法は、一般に、ＡＴまたはＮＴによる治療に応答性である疾患または適応症に罹患しているヒトを含む哺乳動物に、疾患または適応症を治療するのに本明細書に記載された組成物の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）鏡像異性体が富化されているＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、実質的に鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。
【００１５】
ＡＴおよび／またはＮＴによる治療に応答性であることが知られている疾患または適応症の１つの重要なクラスは、精神疾患である。そのような精神疾患または適応症の具体例としては、限定されるものではないが、気分障害（例えば、うつ病など）、不安障害（例えば、ＯＣＤなど）、摂食障害（例えば、神経性食欲不振症や神経性過食症など）、衝動性障害（例えば、抜毛症など）、睡眠障害（例えば、オピオイド離脱に関連する不眠など）、人格障害（例えば、ＡＤＨＤなど）、および身体表現性障害（ある種の疼痛など）として「Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ＩＶ（２０００年改訂）；以下、「ＤＳＭ−ＩＶ」と称する」に分類されている様々な精神疾患および適応症が挙げられる。
【００１６】
ＡＴおよび／またはＮＴによる治療に応答性であることが知られている疾患または適応症の別の重要なクラスは、侵害受容性（例えば、体性または内臓性）または非侵害受容性（例えば、神経因性または交感神経性）の起源にかかわらず、急性および慢性の両方を含む疼痛である（さらに詳細に、後に議論される）。
【００１７】
こうした疾患または適応症の全ては、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の様々な実施形態による治療に応答することが期待される。そして、上記したように、Ｈ１ヒスタミン受容体における（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの予想外の低い拮抗性および下記で議論する予想外の、真価が認められない性質のために、ＡＴおよび／またはＮＴでの治療よりも、不都合な副作用がより少ない治療を達成することができると期待される。
【００１８】
これらの様々な疾患または適応症を治療するために使用する場合、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、単剤療法として単独で使用することができるし、あるいはまた、他の治療と組み合わせて、またはそれに補助的に使用することができる。例えば、特定の精神疾患または適応症を治療するために使用する場合、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、同じ精神疾患または適応症を治療するために有用な別の治療剤と組み合わせて、またはそれに補助的に投与してもよい。特定のタイプの疼痛を治療するために使用する場合、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、同じタイプの疼痛を治療するために有用な別の治療剤と組み合わせて、またはそれに補助的に投与してもよい。しかしながら、そのような併用療法または補助療法は、同じ適応症を治療するために有用な化合物の組み合わせに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物で治療されている疾患または障害を治療しない治療剤と組み合わせて、あるいは補助的に投与することが有用であるか、または望ましい。いくつかの実施形態では、他の療法と組み合わせて、あるいは補助的に投与されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）鏡像異性体が富化されているＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、実質的に鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。適切な組み合わせの代表的な非限定的な例は、さらに詳細に後のセクションで議論される。
【００１９】
どんな作用原理によっても束縛されることを意図するものではないが、ＮＥおよび／または５ＨＴ輸送体などのモノアミン輸送体を阻害するＡＴおよびＮＴの能力は、それらの多くの治療特性をある程度、担っていると考えられる。当該分野では十分に前例のあることであるが、少なくとも以下の疾患または適応症は、ＮＥおよび／または５ＨＴ輸送体の阻害剤による治療に応答性である：尿失禁などの排尿障害；うつ病や季節的情動障害（ＳＡＤ）などの気分障害；認知症などの認知障害；統合失調症や躁病などの精神障害；不安障害；ＡＤＨＤなどの人格障害；神経性食欲不振症や神経性過食症などの摂食障害；ニコチン、アルコール、コカイン、ヘロイン、フェノバルビタール、およびベンゾジアゼピン類などに対する嗜癖などの乱用薬物や乱用物質の嗜癖から生じる化学物質依存症；離脱症状；高プロラクチン血症などの内分泌障害；抜毛症や盗癖などの衝動性障害；トゥーレット症候群などのチック障害；過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、腸閉塞、胃不全麻痺、消化性潰瘍、逆流性食道炎（ＧＯＲＤ、またはその同義語のＧＥＲＤ）、鼓腸および消化不良（例えば、非潰瘍性胃腸症（ＮＵＤ））や非心臓性胸痛（ＮＣＣＰ）などの他の機能的な腸障害などの胃腸管障害；脳血管系などにおける血管痙攣を含む血管障害；および他の種々雑多な障害（パーキンソン病、ショック、および高血圧、性的機能不全、月経前症候群および線維筋痛症候群を含む）。
【００２０】
上で議論したように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、また、ＮＥおよび５ＨＴ輸送体並びにＮＥおよび／または５ＨＴの取り込みを阻害する。したがって、なお別の態様では、本開示はＮＥおよび／または５ＨＴの取り込みを阻害する方法を提供する。その方法は、一般的に、ＮＥおよび／または５ＨＴ輸送体を、ＮＥおよび／または５ＨＴの取り込みを阻害するのに有効な量の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、その方法は、ＡＴおよびＮＴの非存在下に実施される。いくつかの実施形態では、ＮＥおよび／または５ＨＴ輸送体は、本明細書で記載されたようにＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と接触させる。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）鏡像異性体が富化されているＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、実質的に鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。
【００２１】
方法は、単離した輸送体または１つもしくは両方の輸送体を発現する細胞を用いてインビトロで、あるいは、ＮＥおよび／または５ＨＴの調節不全の取り込みおよび再取り込みにより少なくとも一部分は媒介される疾患や障害を治療するための治療的なアプローチとして、インビボで実施することができる。ＮＥおよび／または５ＨＴの調節不全の取り込みおよび再取り込みにより少なくとも一部分は媒介される疾患や障害の具体例としては、限定されるものではないが、上に列挙したものを含む。
【００２２】
歴史的に、ＮＥ（ＮＲＩｓ）および／または５ＨＴ（ＳＲＩｓ）の再取込みを阻害するものを含む抗うつ剤は、侵害受容性起源または非侵害受容性起源のいずれかである急性および慢性の疼痛の両方、例えば、神経障害、疱疹後神経痛（ＰＨＮ）、線維筋痛症関連疼痛、過敏性腸症候群関連疼痛および間質性膀胱炎を治療するための一次治療として使用されてきた（Ｓｉｎｄｒｕｐ  ＆  Ｊｅｎｓｅｎ，１９９９；Ｃｏｌｌｉｎｓら，２０００；Ｃｒｏｗｅｌｌら，２００４）。最近の研究は、疼痛のげっ歯類モデルにおける最大効果に必要である、ＮＥおよび／または５ＨＴ輸送体での相対活性を系統的に評価した（Ｌｅｖｅｎｔｈａｌら，２００７）。観測された結果は、神経障害性疼痛状態を治療するために臨床的に観察されたものを再生している。すなわち、ＮＥ輸送体に対してより大きな親和性を有する化合物は、疼痛の治療においてより有効であり、５ＨＴ輸送体に対するより大きな親和性を有する化合物は、有効性が限られる（参照：例えば、Ｍａｘら，１９９２；Ｃｏｌｌｉｎｓら，２０００）。実際、４環性ＮＲＩマプロチリンおよびＳＲＩパロキセチンを比較する二重盲検プラセボ対照直接比較試験では、疼痛強度の減少は、パロキセチン（２６％）またはプラセボ（２７％）と比較して、マプロチリン（４５％）に無作為化された試験完了者については有意に大きかった（Ａｔｋｉｎｓｏｎら，１９９９）。最近、デュロキセチン（５ＨＴおよびＮＥ輸送体の両方で効力を有する２重のＳＲＩおよびＮＲＩ）は、糖尿病性神経障害の治療のために承認された最初の再取込み阻害剤であった（Ｂｙｍａｓｔｅｒら，２００５；Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら，２００５）。
【００２３】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴについて本明細書で示されるＮＲＩ活性は、この化合物を多くの種類の疼痛症候群の治療に理想的に適するようにさせる。実際に、出願人によって行われて、本明細書で報告された実験では、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、侵害受容性の炎症性疼痛（参照：実施例６，１５および１６）および非侵害受容性の神経障害性疼痛（参照：実施例５および１７から２０）の両方のげっ歯類モデルで強い治療有効性を示した。両方のモデルにおいて、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴに関して観察された有効性は、ＡＴのそれと同等であった。
【００２４】
したがって、さらに別の態様では、本開示はヒトを含む哺乳動物の疼痛を治療する方法を提供する。その方法は、一般に、疼痛に苦しむ哺乳動物（ヒトを含む）に、疼痛を治療するために有効な、本明細書で記述されたＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）鏡像異性体が鏡像異性体的に富化されているＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、実質的に鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。
【００２５】
方法は、いろいろな異なるタイプの疼痛症候群を治療するのに用いることができ、そのような症候群は、侵害受容性起源（例えば、体性または内臓性）または非侵害受容性起源（例えば、神経因性または交感神経性）のどちらかである急性または慢性の疼痛を含む。いくつかの実施形態では、疼痛は侵害受容性疼痛であって、限定されるものではないが、ＩＢＳまたは関節リウマチ関連炎症性疼痛、癌関連疼痛、および変形性関節炎関連疼痛が挙げられる。いくつかの実施形態では、疼痛は非侵害受容性疼痛であって、限定されるものではないが、疱疹後神経痛（ＰＨＮ）、三叉神経痛、病巣末梢神経損傷、有痛性知覚麻痺、中枢性疼痛（例えば、脳卒中後疼痛、脊髄損傷による疼痛または多発性硬化症関連疼痛）、および末梢神経障害（例えば、糖尿病性神経障害、遺伝性神経障害、または他の後天性神経障害）などの神経障害性疼痛が挙げられる。
【００２６】
Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、単独で投与することができるし、あるいは疼痛および／または他の適応症を治療するのに有用な１つ以上の他の薬剤と組み合わせて、もしくはそれに補助的に投与することができる。疼痛治療または治療計画におけるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と組み合わせて、もしくはそれに補助的に使用することができる薬物の具体的な非限定例は、後のセクションで提供される。
【００２７】
本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、疼痛、特に神経障害性疼痛症候群を治療および／または管理するのに現在使用されている薬物に対して、著しい利点を提供することが期待される。疼痛を治療するための最も一般的な３環系抗うつ薬は、Ｈ１ヒスタミン受容体と拮抗し、したがって、著しい体重増加と鎮静効果を伴う。以上のように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、この受容体にかなり少ない程度に拮抗し、侵害受容性炎症や非侵害受容性神経障害性疼痛の両方を治療する際に、インビボで有効であることが本明細書で証明された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの用量での鎮静作用のげっ歯類モデルで鎮静作用を誘発しないことが証明された。したがって、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、体重増加や鎮静作用を最小限にしながら、疼痛を治療または管理する手段を提供する。
【００２８】
本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、疼痛または本明細書に記述される任意の他の多くの疾患および適応症を治療するために使用される場合、さらに著しい利点を提供する。例えば、ＡＴおよびＮＴは、シトクロムＰ４５０アイソエンザイムのＣＹＰ２Ｄ６とＣＹＰ２Ｃ１９の公知の阻害剤であり、その結果、こうした酵素で代謝されるいくつかの重要な薬物との使用は禁忌である。ＣＹＰ２Ｄ６によって少なくとも一部が代謝されることが知られており、したがって、ＡＴおよびＮＴとの使用に対して禁忌であるかもしれない代表的な薬物は、Ｓ−メトプロロール、プロパフェノン、チモロール、クロミプラミン、デシプラミン、イミプラミン、パロキセチン、ハロペリドール、リスペリドン、チオリダジン、アリピプラゾール、コデイン、デキストロメトルファン、デュロキセチン、フレカイニド、メキシレチン、オンダンセトロン、タモキシフェン、トラマドールおよびベンラファキシンを含む。ＣＹＰ２Ｃ１９によって少なくとも一部が代謝されることが知られており、したがって、ＡＴおよびＮＴとの使用に対して禁忌であるかもしれない代表的な薬物は、オメプラゾール、ランソプラゾール、パントプラゾール、ラベプラゾール、ジアゼパム、フェニトイン、フェノバルビトン、クロミプラミン、シクロホスファミド、およびプロゲステロンを含む。本出願人によって得られ、本明細書（さらに詳細に、実施例の部で議論される）で報告されるデータは、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、ＡＴおよびＮＴよりも、ＣＹＰ２Ｃ１９とＣＹＰ２Ｄ６の両方に対してそれほど強力でない阻害剤であることを示す。この驚くべき発見に一部は基づいて、本明細書に記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、特にこれらのシトクロムＰ４５０アイソエンザイムによって少なくとも一部は代謝されている薬物と組み合わせて、あるいは補助的に使用される場合、ＡＴおよび／またはＮＴ療法よりも、望ましくない臨床的結果をより少なく生じると考えられる。
【００２９】
また、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴやＮＴよりも、ムスカリン受容体に対して著しく低い親和性を有し、ＡＴやＮＴよりも、ヒトエーテル・ア・ゴー・ゴー関連遺伝子（ｈＥＲＧ）カリウムチャネルの弱い阻害を示し、ＡＴやＮＴよりも、α１およびα２アドレナリン受容体の両方を含むアドレナリン受容体における拮抗性が弱いことが、出願人によって驚くべきことに発見された。これらの特性の全ては、ＡＴおよびＮＴ療法と比べて、向上した臨床的有益性をもたらすと予想される。例えば、ムスカリン受容体の阻害は、口腔乾燥症、便秘および霧視に関連している。α２アドレナリン受容体のアゴニストは、無痛覚をもたらすと報告（Ｏｎｇｉｏｃｏら，２０００；Ａｓａｎｏら，２０００；Ｈａｌｌら，２００１）されているが、一方、拮抗剤は、こうした鎮痛作用（Ｋａｌｓｏら，１９９１；Ｍｉｌｌａｎ  ＆  Ｃｏｌｐａｅｒｔ  １９９１；Ｐｅｔｒｏｖａａｒａら，１９９０）を阻害する。どんな作用原理によっても束縛されることを意図するものではないが、本明細書に記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物で治療される患者は、ＡＴおよび／またはＮＴで治療された患者よりも、より少ない、望ましくない副作用を示すであろうと予想される。具体的には、本明細書に記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物で治療される患者は、ＡＴおよびＮＴで治療された患者よりも、上記の減少した薬物−薬物相互作用ならびに鎮静および食欲効果に加えて、低レベルの心臓毒性および便秘を経験すると予想される。実際に、当量の経口用量では、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、胃腸管運動のげっ歯類モデルで、ＡＴやＮＴに比べて、はるかに少ない便秘をもたらした。
【００３０】
ＡＴやＮＴと異なり、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、α２アドレナリン受容体と拮抗しない。したがって、理論上、本明細書に記述されたＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、また、疼痛の治療においてＡＴやＮＴよりも優れていることが予想される。実際に、図３および４で例示されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、侵害受容性疼痛および非侵害受容性疼痛の両方のげっ歯類モデルにおいて、ＡＴよりも優れていることが証明された。
【００３１】
（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの合成は、文献（Ｒｅｍｙら，１９７３）にこれまでに報告されているが、個々の（＋）および（−）鏡像異性体のキラル合成は、まだ一度も報告されたことがない。したがって、さらに別の態様では、本開示は、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（＋）および（−）鏡像異性体を合成するキラル−特異的方法、前記方法に有用な中間体、および中間体を合成するキラル特異的方法を提供する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのキラル−特異的合成に有用な中間体は、Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテンのそれぞれ（＋）および（−）鏡像異性体であって、図１Ａの化合物（＋）−７および化合物（−）−７としてそれぞれ例示されている。化合物７の（＋）および（−）鏡像異性体のキラル１０−炭素の絶対配置は、直接には確立されていない。したがって、水酸基をこのキラル炭素原子（キラリティは星印で示される）に結合する結合手は、不特定の立体化学で例示される。しかしながら、化合物７のキラリティは、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴの絶対立体化学（図６に記載）から推論することが可能であり、それは（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴのリンゴ酸塩のＸ線結晶学的解析で決定された。
【００３３】
キラル中間体（＋）−７および（−）−７の合成方法は、一般に、Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−オキソ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテン（図１Ａで化合物６として例示）を、キラル−特異的オキサザボロリジン触媒の存在下、還元することを含む。適切なキラル−特異的オキサザボロリジン触媒の非限定的な典型的実施形態は、図１Ｂに例示される。いくつかの実施形態では、キラル−特異的オキサザボロリジン触媒は、（７αＳ）−３−メチル−１，１−ジフェニルパーヒドロ−３−ボラ−２−オキサピロリジン（「７αＳ−ＣＢＳ」；図１Ａにおいて化合物Ｓ−１０）であり、（−）−７を産生する。いくつかの実施形態では、キラル−特異的オキサザボロリジン触媒は、（７αＲ）−３−メチル−１，１−ジフェニルパーヒドロ−３−ボラ−２−オキサピロリジン（「７αＲ−ＣＢＳ」；図１Ｂにおいて化合物Ｒ−１０）であり、（＋）−７を産生する。
【００３４】
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、中間体をメチルアミンと反応させることにより、中間体（＋）−７および（−）−７からそれぞれ合成することができる。キラル−特異的触媒としてＣＢＳを利用する合成の特定の実施形態は、図１Ａに例示される。実施例のセクションで提供される反応条件下、このスキームを利用して、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、９９％超の鏡像異性体純度の高収率で容易に合成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】図１Ａは、鏡像異性体的に純粋な（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを合成するために使用することができる典型的なスキームを提供する；
【図１Ｂ】図１Ｂは、図１Ａに例示された合成スキームで使用することのできるキラル−特異的オキサザボロリジン触媒の典型的な実施形態を提供する；
【図２】図２は、鎮静作用のラット回転棒モデルでのＡＴおよびＮＴと比較した、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの非鎮静作用を示すグラフを提供する；
【図３】図３は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでのＡＴと比較した、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの優れた抗痛覚過敏効果を示すグラフを提供する；
【図４】図４は、非侵害受容性神経障害性疼痛のげっ歯類モデルでのＡＴと比較した、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの優れた抗アロディニア効果を示すグラフを提供する；
【図５】図５は、ＧＩＴのげっ歯類モデルでのＡＴおよびＮＴの両方と比較した、胃腸管運動に関する（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの優れた特性を示すグラフを提供する；
【図６】図６は、Ｘ線結晶学的解析で確立された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの絶対配置を表す；
【図７】図７は、非侵害受容性神経障害性疼痛のげっ歯類モデルでの（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、ラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよびＡＴと比較した、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの優れた抗アロディニア効果を示すグラフを提供する；
【図８】図８は、非侵害受容性神経障害性疼痛のげっ歯類モデルでの、アミトリプチリンの抗アロディニア効果と比較した、経口投与された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの抗アロディニア効果を示すグラフを提供する；
【図９】図９は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでのアミトリプチリンのＦＣＡと回転棒用量−応答関係を示す曲線を提供する；
【図１０】図１０は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでの（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのＦＣＡと回転棒用量−応答関係を示す曲線を提供する；
【図１１】図１１は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでの（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの用量−関連抗痛覚過敏活性を示すグラフを提供する；
【図１２】図１２は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでの（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴにより示される実質的抗痛覚過敏活性の非存在を示すグラフを提供する；
【図１３】図１３は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでのＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの鏡像異性体の異なる抗痛覚過敏活性を示すグラフを提供する；
【図１４】図１４は、侵害受容性炎症性疼痛のげっ歯類モデルでのＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの鏡像異性体の抗痛覚過敏活性を比較したグラフを提供する；
【図１５Ａ】図１５Ａは、うつ病のラット強制水泳試験モデルでのアミトリプチリン（ＡＴ）の活性を示すグラフを提供する；
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、うつ病のラット強制水泳試験モデルでの（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの活性を示すグラフを提供する；および
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、うつ病のラット強制水泳試験モデルにおいて、試験した用量で（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが統計学的に有意な活性を示さなかったことを表すグラフを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
８．詳細な説明
８．１  Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および組成物
本開示は、下記に図示される周知の３環系抗うつ薬アミトリプチリン（ＡＴ）およびノルトリプチリン（ＮＴ）：（Ｓ／Ｒ）−５−［３−メチルアミノ−プロピ−（Ｅ）−イリデン−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−１０−オール（本明細書では、「Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ」と称する）の一般的な主要代謝物のＥ−幾何異性体を含む組成物に関する。
【００３７】
【化１】
2010526075.tif 000003
【００３８】
１０位の炭素（星印で示される）のキラリティにより、Ｅ−幾何異性体は、２つの鏡像異性体：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。Ｘ線結晶学的解析で確立された（−）異性体のキラルの１０−炭素についての絶対配置は、図６に表記される。したがって、（−）および（＋）異性体のキラリティは、以下に表記されるとおりである。
【００３９】
【化２】
2010526075.tif 000004
【００４０】
本明細書で記述される様々な組成物において、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物は、（−）鏡像異性体が富化された非ラセミ体混合物として、実質的に、鏡像異性体的に純粋な（−）鏡像異性体として、あるいは鏡像異性体的に純粋な（−）鏡像異性体として存在することができる。特定の実施形態では、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、実質的に、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴであるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。別の特定の実施形態では、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴであるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。
【００４１】
本明細書で使用される場合、その鏡像異性体がもう片方の鏡像異性体に対して過剰に存在しているとき、つまり、その鏡像異性体が組成物中の全Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの５０％超を含むとき、組成物は、特定の鏡像異性体が「富化」されている。特定の鏡像異性体が富化されている組成物は、典型的には、特定の鏡像異性体の少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、またはさらにそれ以上を含むであろう。特定の鏡像異性体の富化の量は、当業者によって常套的に使用される従来の分析方法を使用して確認でき、そのような方法としては、キラルシフト試薬の存在下でのＮＭＲ分光分析、キラルカラムを使用するガスクロマトグラフィ分析、およびキラルカラムを使用する高圧液体クロマトグラフィ分析が挙げられる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、単一の鏡像異性体は、対応する鏡像異性体を実質的に含まない。「実質的に含まない」とは、組成物が、当業者によって常套的に使用される従来の分析方法（例えば、上記した方法）を用いて確立された、特定の望まない鏡像異性体の約１０％未満を含むことを意味する。いくつかの実施形態では、望まれない鏡像異性体の量は、１０％未満であってよく、例えば、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満またはそれ未満である。特定の鏡像異性体の少なくとも約９５％を含む鏡像異性体的に富化された組成物は、本明細書では、「実質的に鏡像異性体的に純粋な」と称される。特定の鏡像異性体の少なくとも約９９％を含む組成物は、本明細書では、「鏡像異性体的に純粋な」と称される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、本明細書で記述される、鏡像異性体的に富化されたＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴで約６０％、７０％、８０％または９０％純粋であるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。言い換えると、（−）鏡像異性体は、約６０、７０、８０または９０％ｅｅの範囲の鏡像体過剰率（ｅｅ）で存在する。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で記述される実質的に、鏡像異性体的に純粋なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）鏡像異性体で約９５〜９８％純粋であるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む；言い換えると、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、約９５〜９８％ｅｅの範囲の鏡像体過剰率で存在している）。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で記述される鏡像異性体的に純粋なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、（−）鏡像異性体で約９９．０〜１００％純粋であるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む；言い換えると、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、約９９．０〜１００％ｅｅの範囲の鏡像体過剰率で存在している）。特定の非限定的な典型的実施形態は、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが（−）鏡像異性体で約９９．０、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９または１００％純粋であるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物を含む。
【００４４】
インビボでの３環系抗うつ薬のヒドロキシ代謝物は、多形のシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６によって形成される。ＮＴは、この酵素により非常に立体特異的にＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの（−）鏡像異性体へとヒドロキシル化されると考えられる（参照：例えば、Ｎｏｒｄｉｎ  ＆  Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎ，１９９５）。したがって、理論上、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、１００％の鏡像異性体純度で生物資源から単離することができる。対照的に、当事者は、合成手段で製造された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの組成物は、通常、１００％の鏡像異性体純度を達成することができないことを理解するであろう。例えば、実施例のセクションで記述される合成方法では、（−）鏡像異性体の約９０〜９９．５％ｅｅの範囲の鏡像異性体純度が、通常、達成される。
【００４５】
特に他に断りのない限り、本明細書で記述される鏡像異性体的に純粋なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、生物起源および合成起源の両方の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含むものとする。したがって、本明細書で記述される鏡像異性体的に純粋なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、約９９％から１００％までの鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含むことができる。
【００４６】
生物起源（すなわち、生物資源から単離された）であり、したがって、１００％の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含み得る鏡像異性体的に純粋なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の実施形態は、「生物由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物」と、本明細書では称される。同様に、そのようなＥ−１０−ＯＨ−ＮＴは、「生物由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ」と、本明細書では称される。合成起源であり、ＣＹＰ２Ｄ６などのキラル特異的生体触媒を用いて、生体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で調製された組成物を含み、したがって、少なくとも約９９％、しかし、通常は１００％未満の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む、鏡像異性体的に純粋なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の実施形態は、「合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物」と、本明細書では称される。同様に、そのようなＥ−１０−ＯＨ−ＮＴは、「合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ」と、本明細書では称される。合成由来の鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、通常、約９９〜９９．９％ｅｅの範囲の鏡像異性体過剰率で（−）鏡像異性体を含むであろう。
【００４７】
目的とする使用によって、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、遊離塩基、または塩の形態で、例えば、酸付加塩の形態で組成物中に存在することができる。いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、医薬的に許容される塩の形態で組成物中に存在する。一般に、医薬的に許容される塩は、親化合物の所望の薬理活性の１つ以上を実質的に保持しており、ヒトに投与するのに適しているそれらの塩である。医薬的に許容される塩は、無機酸または有機酸で形成された酸付加塩を含む。医薬的に許容される酸付加塩を形成するのに適切な無機酸は、例えば、限定されるものではないが、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸）、硫酸、硝酸、燐酸などを含む。医薬的に許容される酸付加塩を形成するのに適切な有機酸は、例えば、限定されるものではないが、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、蓚酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、パルミチン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）ベンジン酸、桂皮酸、マンデル酸、アルキルスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸など）、アリールスルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸など）、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などを含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、有機酸付加塩、例えば、Ｄ−リンゴ酸、Ｌ−リンゴ酸およびコハク酸から選択される有機酸で形成される酸付加塩として組成物中に存在する。
【００４９】
化合物の様々な塩の形態は、異なる性質、例えば、異なる毒性、溶解度、安定性、吸湿性などを示し得ることは、当該分野で周知である。コハク酸とで形成された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの酸付加塩（コハク酸塩）は、マレイン酸とで形成された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ塩（４．４ｍｇ／ｍｌ）よりも、生理食塩水中で優れた溶解度（１８ｍｇ／ｍｌ）を有し、本質的に結晶性であり、非吸湿性であることが発見された。したがって、ラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのマレイン酸塩形態の使用（Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎら，１９８６）は、健常者ボランティアに投薬するために以前に使用されているが、一方、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのコハク酸塩は、優れた性質を有し得ると期待される。例えば、マレイン酸は、先に急性尿細管壊死の毒性と関連づけられている（Ｅｖｅｒｅｔｔら，１９９３）。コハク酸塩は、マレイン酸塩よりも、優れたＡＤＭＥと毒物学的な安全性特性を有するであろうと予想される。したがって、いくつかの実施形態では、組成物を構成する（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、コハク酸塩である。
【００５０】
遊離塩基または塩の形態のいずれにせよ、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、無水物形態で組成物中に存在することができるか、あるいは、それは溶媒和物および／または水和物であることができる。溶媒和物形成溶媒の程度と同定は、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物を合成し、保存するために使用される条件に一部分は依存するであろう。本明細書で使用される場合、特に他に断りの無い限り、表記「Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ」、（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、化合物の塩および／または溶媒和物および／または水和物の形態の全てを含むものとする。
【００５１】
８．２  合成方法
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物は、文献に記載された方法により合成または調製することができる。例えば、ラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、Ｂｅｒｔｒａｎｄら，１９９４およびＬａｓｓｅｎら，１９８３に記載されているように合成することができ、その開示は引用することにより本明細書に取り込まれる。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの鏡像異性体的に富化された組成物は、そのようなラセミ混合物から、キラル分離の標準的な方法（参照：例えば、Ｃｈｉｒａｌ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ２００１）を用いて所望の鏡像異性体を単離することにより合成できる。
【００５２】
開示の別の態様は、キラル特異的合成方法を用いるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの鏡像異性体的に純粋な異性体を合成する手段を提供する。鏡像異性体的に純粋な（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの合成に有用な方法の例示的実施形態は、図１Ａに例示される。図１Ａによれば、５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−オキソ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｂ］−シクロヘプテン（化合物６）のＥ−異性体は、キラル特異的オキサザボロリジン触媒の存在下に還元される（化合物Ｓ−１０およびＲ−１０として図示される）。図示されるように、触媒（Ｓ−１０）のＳ−異性体は、５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−オキソ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｂ］−シクロヘプテンの（−）鏡像異性体（化合物（−）−７）を産生し、そしてＲ−異性体（Ｒ−１０）は、（＋）鏡像異性体である（＋）−７を産生する。次に、これらの中間体は、メチルアミンとの反応により、それらのそれぞれの（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ生成物に変換することができる。
【００５３】
化合物６の出発原料は、文献（参照：例えば、Ｂｅｒｔｒａｎｄら，１９９４；Ｌａｓｓｅｎら，１９８３；これらの開示は引用により本明細書に取り込まれる）に記載された方法を用いて合成することができる。あるいはまた、図１Ａで例示されるように、それらを合成することができる。各例示された工程の特定条件は、実施例の部で提供される。
【００５４】
図１Ａでは、特定のキラル特異的オキサザボロリジン触媒が例示される。他のキラル特異的オキサザボロリジン触媒もまた、使用することが可能である。特定の代表的な例が、図１Ｂ（図１Ｂにおいて、Ｒは水素またはメチルである）で例示され、Ｉｔｓｕｎｏら，１９８３（触媒１０ａ），Ｃｏｒｅｙら，１９８７（触媒１０ｂ），Ｈｏｎｇら，１９９４（触媒１０ｃ），Ｑｕａｌｌｉｃｈら，１９９３（触媒１０ｄ）およびＢｅｒｅｎｇｕｅｒら，１９９４（触媒１０ｅ）に記載されている。ＣＢＳ還元系により達成された不斉誘導は、ホウ素原子に結合した可変基により非常に影響を受ける。β−水素またはβ−メチルが最も一般的に使用されているが、この基は、特定の基質に適合させるために調整することができる。ホウ素原子に結合したこの基は、ケトンのβ−Ｒ基と小さい置換基との間の相互作用が最小限となるように結合するようにケトンを誘導する（メカニズム研究の詳細については、Ｋｉｍら，２００６を参照のこと）。還元が実施される一般的な条件は、前記引用の文献およびＣｏｒｅｙら，１９９１；Ｃｏｒｅｙら，１９９２；Ｃｏｒｅｙら，１９９８；Ｐａｔｅｒｓｏｎら，２００５；Ｚａｒｔｍａｎら，２００５；Ｔａｇａｔら，２００４；Ｄｕｑｕｅｔｔｅら，２００３；Ｙａｎａｇｉら，２００３；およびＣｏｅら，２００３にも記載されており、これらの開示は引用により本明細書に取り込まれる。実施例の部で説明されるように、ボラン−ジメチルスルフィド錯体の存在下、ＴＨＦ中，−２０℃で反応を実施する場合、反応は、図１Ａで例示された特異的触媒を使用して、高収率および９９％超の鏡像異性体純度でもって実施することができる。
【００５５】
８．３  化合物および組成物の活性と用途
実施例４と１４で詳細に記載されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴとＮＴのように、ノルエピネフリン（「ＮＥ」）輸送体に対して強力な親和性を有し、ＮＥ取り込みの強力な阻害剤である。また、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、セロトニン輸送体と結合し、ＮＥに対して観測された効力より弱い効力ではあるが、５ＨＴの取り込みを阻害する。様々な疾患や障害を治療するために、ＮＥおよび／または５ＨＴの再取込みを阻害する化合物の使用は、十分に立証されている。例えば、ＡＴ、ＮＴ、デシプラミン、デュロキセチン、ベンラファキシン、シタロプラム、およびシンバルタは、うつ病治療のために承認されて、追加の適応外使用を有する；そしてパロキセチンとセルトラリンは、大うつ病性障害、ＯＣＤ、パニック障害、外傷後ストレス障害、月経前不快気分障害、および社会不安障害の治療のために承認されており、また追加の適応外使用を有する。
【００５６】
ラセミ体のＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの血液脳関門を通過する能力は、文献（例えば、Ｎｏｒｄｉｎら，１９８７ｂ参照）で確立されている。したがって、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、調節不全のＮＥの再取り込みにより少なくとも一部分は媒介される疾患および／または障害の治療に有用であることが期待される。いくつかの特定の実施形態では、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、例として、限定されるものではないが、ＡＴ、ＮＴ、アトモキセチン、レボキセチン、およびマプロチリンを含む他のＮＲＩやＳＮＲＩ剤での治療に応答する多くの異なる疾患を治療するのに有用となるであろう。調節不全のＮＥの再取り込みにより少なくとも一部分は媒介されることが知られており、ＮＲＩやＳＮＲＩ化合物での治療に応答することが知られている疾患および／または障害としては、限定されるものではないが、尿失禁などの排尿障害；うつ病や季節的情動障害（ＳＡＤ）などの気分障害；認知症などの認知障害；統合失調症や躁病などの精神障害；不安障害；ＡＤＨＤなどの人格障害；神経性食欲不振症や神経性過食症などの摂食障害；ニコチン、アルコール、コカイン、ヘロイン、フェノバルビタール、およびベンゾジアゼピン類に対する嗜癖などの乱用薬物や乱用物質の嗜癖から生じる化学物質依存症；離脱症状；高プロラクチン血症などの内分泌障害；抜毛症や盗癖などの衝動性障害；トゥーレット症候群などのチック障害；過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、腸閉塞、胃不全麻痺、消化性潰瘍、逆流性食道炎（ＧＯＲＤ、またはその同義語のＧＥＲＤ）、鼓腸および消化不良（例えば、機能性胃腸症（ＮＵＤ））や非心臓性胸痛（ＮＣＣＰ）などの他の機能的な腸障害などの胃腸管障害；脳血管系などの血管痙攣を含む血管障害；および種々雑多な他の障害（パーキンソン病、ショック、および高血圧、性的機能不全、月経前症候群および線維筋痛症候群が挙げられる。実際、実施例２１で示されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、うつ病のげっ歯類モデルで、効力を示す。
【００５７】
疼痛もまた、調節不全のＮＥおよび／または５−ＨＴの再取り込みにより少なくとも一部分は媒介されると考えられる。実際、多くのＮＲＩおよび／またはＳＲＩ化合物は、また、疼痛を治療するための適応外使用に使用される。疼痛は、通常、不快な感覚または感情的な経験の認識または病態を指すと理解され、それは組織への実際の損傷と関係している場合があるか、そうでない場合がある。一般に、それは２つの広義のカテゴリーを含むことが理解される：侵害受容性（例えば、体性または内臓性）起源または非侵害受容性（例えば、神経因性または交感神経性）起源のどちらかである急性および慢性（例えば、Ｂｕｓｃｈｍａｎｎら，２００２；Ｊａｉｎ，２０００参照のこと）。急性疼痛は、一般に、緊張／捻挫、火傷、心筋梗塞、急性膵炎、手術、外傷および癌から起こる侵害受容性疼痛を含む。慢性疼痛は、一般に、侵害受容性疼痛を含み、それらは限定されるものではないが、ＩＢＳまたは関節リウマチなどを伴う炎症性疼痛、癌関連疼痛、および変形性関節炎関連疼痛が挙げられる；そして非侵害受容性疼痛を含み、それらは限定されるものではないが、疱疹後神経痛（ＰＨＮ）、三叉神経痛、病巣末梢神経損傷、有痛性知覚麻痺、中枢性疼痛（例えば、脳卒中後疼痛、脊髄損傷による疼痛または多発性硬化症関連疼痛）、および末梢神経障害（例えば、糖尿病性神経障害、遺伝性神経障害、または他の後天性神経障害）が挙げられる。
【００５８】
実施例の部で示される動物データは、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが侵害受容性炎症および非侵害受容性神経障害性疼痛の両方の治療において有効であることを確認している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、上記した様々なタイプの疼痛を含む疼痛の治療に使用される。上で述べたように、ある実施形態では、そのような組成物は、実質的に、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、そのような組成物は、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを含む。
【００５９】
本明細書で証明されるように、ラセミ体の（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ノルエピネフリンおよびセロトニン輸送体（実施例１４）に対して同様の親和性を示し、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（−）および（＋）異性体は、６つの異なるタイプの受容体と輸送体、すなわち、ノルエピネフリン輸送体（実施例４と１４）、セロトニン輸送体（実施例４と１４）、ドーパミン輸送体（実施例４）、ヒスタミン受容体（実施例７）、α−アドレナリン受容体（実施例９）、およびムスカリン受容体（実施例１２）に対して、ならびにシトクロムＰ４５０機能（実施例１０）およびｈＥＲＧイオンチャネル（実施例１１）に対しても、インビトロで同様の活性を示した。このデータから見て、特にひとまとめにすると、ラセミ体ならびに（＋）および（−）鏡像異性体は、インビボで同様の効力を有するであろうと期待されるであろう。その期待にもかかわらず、本明細書で提示されたデータは、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（−）鏡像異性体は、ラセミ体および（＋）鏡像異性体の両方よりも、疼痛のげっ歯類モデルにおいて、治療的にさらに有効であり、そして、うつ病のげっ歯類モデルにおいて、（＋）鏡像異性体よりも、さらに有効であることを意外にも示した。より具体的には、試験された用量では、（１）（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、非侵害受容性の神経障害性疼痛のげっ歯類Ｌ５−単一神経結紮モデルにおいて、ラセミ体の（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの両方よりも、さらに有効であり（実施例１５）；（２）（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、侵害受容性疼痛のＦＣＡ−誘発痛覚過敏アッセイにおいて、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴよりも、さらに有効であり（実施例１９および２０）；そして（３）（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、うつ病のラット強制水泳試験モデルにおいて、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴよりも、さらに有効であった（実施例２１）。ラセミ体のＥ−１０−ＯＨ−ＮＴならびにその（＋）および（−）鏡像異性体で発生するインビトロでのデータに基づいて、これらの発見を予測できなかった。実際、疼痛のラットＬ５  ＳＮＬモデルでの（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの場合に観測される有効性の欠如に基づき、疾患のそのインビボまたは他のいかなる動物モデルにおいても、単離された鏡像異性体を試験する必要はないであろう。
【００６０】
いろいろな疾患または適応症を治療するのに用いられるとき、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、通常、特定の疾患または適応症を治療するために有効な量で投与されるであろう。当業者に認知されているように、何が「治療的に有効である」かや、治療的利益を提供することであるかの理解は、しばしば特異的疾患または適応症次第である。当業者は、特定の適応症に対して、古くからある評価基準に基づいて治療有効量を確かめることができるであろう。
【００６１】
一般に、組成物の「治療有効」量は、治療されている基礎疾患または適応症を根絶または改善する、および／または患者が基礎疾患または適応症にまだ悩むかもしれないということに耐えるのではなく、患者が感情または状態の改善を報告するような、基礎疾患を伴う徴候の１つ以上を根絶または改善する量である。治療的な利益は、また、改善の自覚の有無にかかわらず、疾患または適応症の進行を停止するか、または遅くすることを含む。
【００６２】
うつ病に関しては、治療有効量は、うつ病またはその徴候を根絶するか、または改善する組成物の量であり、そのようなうつ病または徴候は、限定されるものではないが、気分の変化、激しい悲しみの感覚、絶望、精神的な遅滞、集中力の欠如、悲観的な心配と、動揺、自己卑下、不眠、拒食症と、体重減少、活動力および性衝動減退、およびホルモンの概日リズムを含む。
【００６３】
不安障害に関しては、治療有効量は、不安障害またはその徴候の１つを根絶するか、または改善する組成物の量であり、そのような不安障害または徴候としては、限定されるものではないが、自分自身の行動を制しきれなくなる恐怖、明らかな理由のない恐怖の意識、大災害に対する恐怖、不安、神経過敏、将来の事象についてのしつこい不確実性、頭痛、疲労および亜急性自律神経徴候が挙げられる。
【００６４】
疼痛に関して、治療有効量は、疼痛またはその徴候を根絶するか、または改善する組成物の量であり、そのような疼痛または徴候は、限定されるものではないが、銃撃感、灼熱感、電気感覚、痛み、不快、うずき、緊張、凝り、不眠、麻痺および弱さを含む。
【００６５】
８．４  併用療法
ＡＴおよびＮＴは、他の薬剤と組み合わせて様々な疾患や障害を治療するために使用されてきた。例えば、ＡＴは、クロルジアゼポキシドと組み合わせて不安障害や大うつ病性障害を治療するのに使用されており、そしてペルフェナジンと組み合わせて不安障害、統合失調症および大うつ病性障害を治療するのに使用されてきた。さらに、ＮＴは、ブデノシドと組み合わせて喘息を治療するのに使用されてきた。本明細書で記述されるＡＴ、ＮＴおよびＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、ＮＴおよび５ＨＴの取り込みを阻害することを考慮すると、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、併用療法にも有用となることが期待される。
【００６６】
併用療法で使用されるとき、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、他の薬剤と組み合わせて、あるいは補助物として使用されてもよい。本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物が、他の薬剤と組み合わせて使用される場合は、２つの薬剤は、単一の医薬組成物で投与されてもよいし、あるいは別々の医薬組成物として投与されてもよい。２つの成分は、同じ投与経路または異なる投与経路で投与されてもよい。また、２つの成分は、互いに同時に、あるいは順番に投与されてもよい。したがって、併用療法の各成分は、別々にではあるが、所望の効果を提供するために、他方の成分の投与と十分に接近した時間で投与することが可能である。
【００６７】
本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物を含む併用療法は、多くの状況で有用であるが、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と使用される他の薬剤は、治療される特定の疾患または適応症に依存するであろう。当業者であれば、特定の適応症に対して、古くからある評価基準に基づいて、どんな他の薬剤と本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と組み合わせて使用するかを確かめることができるであろう。いかなる作用原理によっても束縛されることを意図するものではないが、併用療法は、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と、ＮＥおよび５ＨＴの再取込みを阻害することが知られている他の薬剤との投与を含む。あるいはまた、併用療法は、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と、ＮＥおよび５ＨＴの再取込みを阻害しない薬剤との投与を含んでもよい。
【００６８】
したがって、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、ＮＥや５ＨＴの再取り込み、同様にうつ病を治療するために２重および３重のモノアミン取り込みを阻害する他の薬剤と併用してもよい。本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、また、例えば、限定されるものではないが、うつ病を治療するためのフルキセチン、パロキセチン、フルボキサミン、シタプロラム、およびセルトラリンなどの選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）と併用することができる。うつ病の治療のための併用療法は、モノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯＩ）、例えばトラニルシプロミン、フェネルジン、およびイソカルボキサジドも含み得るが、これらに限定されるものではない。あるいはまた、併用療法は、アモキサピン、マプロチリン、およびトラゾドン（これらに限定されるものではない）などの複素環抗うつ剤、または別のベンラファキシン、ネファゾドン、およびミルタザピン（これらに限定されるものではない）などの別の抗うつ剤を含んでもよい。さらに、うつ病の治療のための併用療法は、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物および抗不安薬（例えば、限定されるものではないが、クロルジアゼポキシドなど）、または抗精神病薬（例えば、限定されるものではないが、ペルフェナジンなど）を含むことが可能である。
【００６９】
ＡＴおよびＮＴのように、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、不安障害、統合失調症および喘息の治療のための併用療法に役立つと予想される。不安障害に関して、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、限定されるものではないが、クロルジアゼポキシドなどの抗不安剤と併用されてもよい。統合失調症に関して、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、限定されるものではないが、統合失調症を治療することが知られているペルフェナジンなどの薬剤と併用されてもよい。喘息に関して、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、限定されるものではないが、喘息を治療することが知られている、例えばブテノシドを含む副腎皮質ステロイドなどと併用されてもよい。
【００７０】
本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、疼痛の治療のための併用療法において有用となるであろうことが、また期待される。したがって、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、限定されるものではないが、カンナビノイドやオピオイドを含む他の鎮痛薬と併用することができる。併用療法の使用に適している多くのカンナビノイドが利用できる。したがって、併用療法は、Δ９−テトラヒドロカンナビノールおよびカンナビジオール、ならびにそれらの混合物から選択されるカンナビノイドを含んでもよい。
【００７１】
あるいはまた、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、少なくとも１つのオピオイドと併用されてもよい。広範囲のオピオイドが利用可能であり、疼痛を治療する併用療法での使用に適している可能性がある。そのように、併用療法は、アルフェンタニル、アリルプロジン、アルファプロジン、アニレリジン、ベンジル−モルヒネ、ベジトラミド、ブプレノルフィン、ブトルファノール、クロニタゼン、コデイン、シクラゾシン、デソモルヒネ、デキストロモラミド、デゾシン、ジアンプロミド、ジアモルホン、ジヒドロコデイン、ジヒドロモルヒネ、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアンブテン、ジオアフェチルブチレート、ジピパノン、エプタゾシン、エトヘプタジン、エチルメチルチアンブテン、エチルモルヒネ、エトニタゼン、フェンタニル、ヘロイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、ヒドロキシペチジン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボルファノール、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、ロペラミド、メペリジン（ペチジン）、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ミロフィン、ナルブフィン、ナルセイン、ニコモルフィン、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ナロルフィン、ノルモルヒネ、ノルピナノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェノモルファン、ファナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、ピリトラミド、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スルフェンタニル、チリジン、トラマドール、それらのジアステレオマー、それらの医薬的に許容される塩、それらの錯体；およびそれらの混合物から選択されるオピオイドを含んでもよいが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、オピオイドは、モルヒネ、コデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、ジヒドロコデイン、プロポキシフェン、フェンタニル、トラマドール、およびそれらの混合物から選択される。
【００７２】
併用療法のオピオイド成分は、鎮痛剤および／または風邪咳の鎮咳剤の合剤で従来から使用され得る１つ以上の他の活性成分をさらに含んでもよい。そのような従来の成分は、例えば、アスピリン、アセトアミノフェン、デキストロメトルファン、フェニルプロパノールアミン、フェニレフリン、クロルフェニラミン、カフェイン、および／またはグアイフェネシンを含む。オピオイド成分に含まれる得る典型的または従来の成分は、例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，１９９９に記述され、その開示は、引用によりその全体が本明細書に取り込まれる。
【００７３】
オピオイド成分は、オピオイドの鎮痛性効力を高める、および／または鎮痛耐性発現を減らすように設計された１つ以上の化合物を更に含むことが可能である。そのような化合物は、例えば、デキストロメトルファンまたは他のＮＭＤＡ拮抗剤（Ｍａｏら，１９９６）、Ｌ−３６４，７１８および他のＣＣＫ拮抗剤（Ｄｏｕｒｉｓｈら，１９８８）、ＮＯＳ阻害剤（Ｂｈａｒｇａｖａら，１９９６）、ＰＫＣ阻害剤（Ｂｉｌｓｋｙら，１９９６）、およびダイノルフィン拮抗剤または抗血清（Ｎｉｃｈｏｌｓら，１９９７）を含む。前記の文献の各々の開示は、引用することによりその全体が本明細書に取り込まれる。
【００７４】
あるいはまた、本明細書で記述される化合物は、少なくとも１つの非オピオイド性鎮痛剤（例えば、ジクロフェナク、ＣＯＸ２阻害剤、アスピリン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセンなど、およびそれらの混合物）と共に使用されてもよい。
【００７５】
さらに、疼痛の治療に関して、併用療法は、抗炎症剤を含んでもよく、それは限定されるものではないが、副腎皮質ステロイド、限定されるものではないが、エトフェナメート、メクロフェナム酸、メファナム酸、ニフルム酸などのアミノアリールカルボン酸誘導体系；限定されるものではないが、アセメタシン、アンフェナクシンメタシン、クロピラク、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、フェンクロラク、フェンクロズ酸、フェンチアザク、グルカメタシン、イソゼパク、ロナゾラク、メチアジン酸、オキサメタシン、プログルメタシン、スリンダク、チアラミドおよびトルメチンなどのアリール酢酸誘導体系；限定されるものではないが、ブチブフェンおよびフェンブフェンなどのアリール酪酸誘導体系；限定されるものではないが、クリダナク、ケトロラクおよびチノリジンなどのアリールカルボン酸系；限定されるものではないが、ブクロキス酸、カルプロフェン、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸およびチアプロフェン酸などのアリールプロピオン酸誘導体系；限定されるものではないが、メピリゾールなどのピラゾール系；限定されるものではないが、クロフェゾン、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、フェニルピラゾリジニノン、スキシブゾンおよびチアゾリノブタゾンなどのピラゾロン系；限定されるものではないが、ブロモサリゲニン、フェンドサール、グリコールサリチレート、メサラミン、１−ナフチルサリチレート、オルサラジンおよびスルファサラジンなどのサリチル酸誘導体系；限定されるものではないが、ドロキシカム、イソキシカムおよびピロキシカムなどのチアジンカルボキサミド系；限定されるものではないが、ｅ−アセトアミドカプロン酸、ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、ベンダザク、ブコロム、カルバゾン類、ジフェンピラミド、ジタゾール、グアイアズレン、ミコフェノール酸の複素環アミノアルキルエステルおよび誘導体、ナブメトン、ニメスリド、オルゴテイン、オキサセプロール、オキサゾール誘導体、パラニリン、ピホキシム、２−置換−４，６−ジ−第３級−ブチル−ｓ−ヒドロキシ−１，３−ピリミジン、プロクアゾンおよびテニダプなどの他の抗炎症剤を含んでもよい。
【００７６】
８．５  製剤および投与
本明細書で記述される（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物またはその医薬的に許容される塩は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００５（その開示は、引用することによりその全体が本明細書に取り込まれる）に記述されるように、投与の選択経路及び標準的な製薬実務に基づいて選択される医薬用担体と配合されてもよい。有効成分および担体の相対的な割合は、例えば、化合物の溶解度および化学的性質、投与の選択経路ならびに標準的な製薬実務により決定することが可能である。
【００７７】
本明細書に開示される（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／または組成物は、有効成分（複数可）が、患者の体の所望の作用部位または複数の部位との接触をもたらす任意の手段により投与され得る。化合物は、個々の治療剤として、または治療剤と併用して、医薬との使用が利用できる任意の従来の手段で投与され得る。例えば、それらは、医薬組成物中の唯一の有効薬剤として投与されてもよいし、あるいは、それらは、他の治療的に有効な成分と組み合わせて用いることができる。
【００７８】
本明細書に記述される（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／または組成物は、投与の選択経路（例えば、経口的または非経口的）に適した様々な形態で哺乳類宿主に投与することが可能である。これに関して、非経口投与としては、以下の経路：静脈内；筋肉内；皮下；眼内；滑液包内；経皮、眼、舌下および口腔を含む経上皮；眼、皮膚、眼内、直腸および通気法、エアロゾルによる鼻腔内吸入を含め局所的に；および、直腸全身系による投与が挙げられる。  
【００７９】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／または組成物は、例えば、不活性の希釈剤または同化可能な食用担体と経口投与用に製剤化することができるし、または硬質または軟質殻のゼラチンカプセル剤に入れることでき、または、錠剤に圧縮もでき、または、治療食の食物に直接的に配合することもできる。治療的な経口投与では、活性化合物は、賦形剤に配合し、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハーなどの形態で用いることもできる。そのような治療的に有用な組成物中の活性化合物（複数可）の量は、好ましくは、適切な用量が得られる量である。本発明による好ましい組成物および製剤は、経口用量単位形態が各活性化合物の約０．１〜１０００ｍｇ（ならびにその中の範囲および特定の濃度のすべての組み合わせおよび下位の組み合わせ）を含むように調製し得る。
【００８０】
錠剤、トローチ、ピル、カプセルなどは、また、以下の１つ以上のものを含んでもよい：結合剤（例えば、トラガカント、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンなど）；賦形剤（例えば、リン酸ニカルシウムなど）；崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸など）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムなど）；甘味剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはサッカリンなど）；または風味剤（例えば、ペパーミント、冬緑樹油またはサクランボ香料）が含まれる。投薬単位形態がカプセルの場合、前記種類の材料に加えて、液体の担体を含む場合がある。コーティング剤として様々の他の材料が存在してもよく。例えば、錠剤、ピル、またはカプセルは、シェラック、砂糖、またはその両方を用いてコーティングされてもよい。シロップまたはエリキシルには、活性化合物、甘味剤としてスクロース、保存剤としてメチルおよびプロピルパラベン、色素および風味剤として、サクランボまたはオレンジ香料が含まれてよい。もちろん、任意の投薬単位形態の調製に使われる任意の材料は、使用される量において、好ましくは、医薬的に純粋であり、また実質的に非毒性である。
【００８１】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／または組成物は、また、非経口または腹腔内投与用に製剤化されてもよい。活性化合物の遊離塩基または薬理学的に許容される塩の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤を適度に混合した水中で製造することができる。分散液もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中で、および油中で調製することができる。貯蔵および使用の通常の条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防止するために保存剤を含有してもよい。
【００８２】
注射による投与に適した組成物としては、例えば、滅菌水溶液または分散液；および滅菌注射可能な溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。あらゆる場合において、その形態は、好ましくは、滅菌され、容易な注射可能性を生ずる液体である。それは、好ましくは、製造および貯蔵条件下で安定であり、微生物、例えば、細菌およびカビの汚染作用に対して、好ましくは、防腐される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および植物油を含有する溶剤または分散媒体であってよい。その適度な流動性は、例えば、塗膜、例として、レシチンの使用により、分散液の場合において要求される粒度の維持により、および、界面活性剤の使用により、維持することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗カビ剤、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって達成される。多くの場合、等張剤、例えば、糖類または塩化ナトリウムを含むのが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続した吸収は、吸収遅延薬剤、例えば、アルミニウムモノステアレートおよびゼラチンの使用によって達成することができる。
【００８３】
滅菌注射用液は、必要とされる場合、要求量の活性化合物を上記列挙した種々の他の成分とともに適切な溶剤に配合し、続いて、滅菌濾過することによって調製することができる。概して、分散剤は、基材分散媒体と上記列挙したものから必要とされるその他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に滅菌された活性成分を配合することによって調製することができる。滅菌注射液を調製するための滅菌粉末の場合には、調製の好ましい方法は、活性成分の粉末に加えて、先に滅菌濾過したその溶液からの所望されるさらなる成分を生成する減圧乾燥および凍結乾燥技術を含んでもよい。
【００８４】
８．６  有効用量
本明細書で記述されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／または組成物は、通常、治療有効量で投与されるであろう。投与される化合物または組成物の量は、さまざまな要因、例えば、治療される特定の適応症、投与様式、望ましい利益が予防的または治療的であるかどうかの点、治療される適応症の重症度、および患者の年齢や体重、特定の活性化合物の生物学的利用能、その他に依存するであろう。有効用量の決定は、当業者能力の十分な範囲内である。
【００８５】
投薬用量は、一般的に、約０．０００１または０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約０．１または１．０または２．０または２．５または５．０または１０．０または２０．０または２５．０または５０．０または７５．０または１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内となるが、期待される用量は、約５ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日であり、他の要因の中でも、治療される特定の疾患または適応症、化合物および／または組成物の活性、その生物学的利用能、投与様式および上で議論した様々な要因に依存して、それより高くても、低くてもよい。投薬用量と間隔は、治療または予防効果を維持するのに十分な化合物および／または組成物の血漿レベルを提供するために個々に調整されてもよい。非限定的な例として、化合物および／または組成物は、１日に１回または１日に複数回、とりわけ、投与様式、治療される特定の適応症および処方する医師の判断に依存して投与され得る。局所外用投与など局所投与や選択的摂取の場合は、活性化合物および／または組成物の有効な局所濃度は、血漿濃度とは関連しないかもしれない。当業者は、不当な実験なしで有効な局所用量を最適化することができるであろう。
【００８６】
疼痛の治療に有用な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／または組成物の初回用量は、実施例の部で記述される動物モデルなどのインビボのデータから推定することができる。その上、初回用量は、当該分野で利用できるいろいろな障害の治療についてのＡＴおよびＮＴの有効用量に関するデータから推定することが可能である。参照：例えば、Ｂｒｙｓｏｎ  ＆  Ｗｉｌｄｅ，１９９６（慢性疼痛の治療に対して、ＡＴの１０〜２５ｍｇ／日の開始量から、最大推定用量７５ｍｇ／日または耐用量に１０〜２５ｍｇ／週で増量したことを報告している）；およびラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、ならびにラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、ＡＴおよび／またはＮＴ投与後のその分離された鏡像異性体の薬物動態学的および薬力学的特性に関して当該分野で入手可能なデータ（Ｄａｈｌ−Ｐｕｕｓｔｉｎｅｎら，１９８９（ラセミ体（±）−１０−ＯＨ−ＮＴを単剤の７５ｍｇ経口用量で投与したのちに分離された鏡像異性体についての平均ＡＵＣを報告している）；Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎら，１９８６（１０から１００ｍｇの範囲の用量で投与後のＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの薬物動態学的特性を報告している）；Ｅｄｅｌｂｒｏｅｋら，１９８６（ＡＴを７５ｍｇ投与後のＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの定常状態濃度を報告している））。
【００８７】
実施例５、６および１５〜２１に記載された動物モデルに基づいて、ヒトでの疼痛治療に対する（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの有効用量は、ラットに３０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）の投与後に達成される血漿濃度に類似した血漿濃度を達成するのに十分な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの用量を投与することによって得ることが可能であると考えられる。そのように、いくつかの実施形態では、疼痛治療のための（−）−Ｅ−ＯＨ−ＮＴの有効用量は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）をラットに投与した場合に達成される血漿濃度を達成するのに必要な用量である。
【００８８】
疼痛治療のための（−）−Ｅ−ＯＨ−ＮＴの投薬用量は、一般的に、約０．０００１または０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約０．１または１．０または２．０または２．５または５．０または１０．０または２０．０または２５．０または５０．０または７５．０または１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内となり、期待される用量は、約５ｍｇ／日から約５００ｍｇ／日であるが、それより高くても、低くてもよい。約１０ｍｇ／日から約２０または２５または３０または３５または４０または４５または５０または６０または７０または８０または９０または９５または１００または１５０または２００または２５０または３００ｍｇ／日の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの経口用量は、疼痛を治療するのに有効であると考えられる。したがって、いくつかの実施形態は、約１０ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日の範囲で、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの経口用量の投与を含む。
【００８９】
実施例２１で記述される強制水泳の動物モデル試験に基づいて、ヒトのうつ病の治療のための（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの有効用量は、ラットに３０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）の投与後に達成される血漿濃度に類似した血漿濃度を達成するのに十分な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの用量を投与することによって得ることが可能であると考えられる。そのように、いくつかの実施形態では、うつ病治療のための（−）−Ｅ−ＯＨ−ＮＴの有効用量は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）をラットに投与した場合に達成される血漿濃度を達成するのに必要な用量である。
【００９０】
うつ病治療のための（−）−Ｅ−ＯＨ−ＮＴの投薬用量は、一般的に、約０．０００１または０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約０．１または１．０または２．０または２．５または５．０または１０．０または２０．０または２５．０または５０．０または７５．０または１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内となるであろうが、期待される用量は、約５ｍｇ／日から約５００ｍｇ／日であるが、それより高くても、低くてもよい。約１０ｍｇ／日から約２０または２５または３０または３５または４０または４５または５０または６０または７０または８０または９０または９５または１００または１５０または２００または２５０または３００ｍｇ／日の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの経口用量は、うつ病を治療するのに有効であると考えられる。したがって、いくつかの実施形態は、約１０ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日の範囲で、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの経口用量の投与を含む。
【００９１】
さらに、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴとその鏡像異性体の薬物動態学的特性の先の報告に基づいて、うつ病は、約１４０ｎＭと約２２０ｎＭの間でのＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの鏡像異性体の血漿レベルで治療することができると考えられる。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの報告された薬物動態学的特性に基づいて、うつ病は、約１４０ｎＭと２２０ｎＭの間での（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの血漿レベルで治療することができると考えられ、こうした血漿レベルは、約３０ｍｇ／日から約３５または４０または４５または５０または５５または６０または６５または７０または７５または８０または８５または９０または９５または１００または１５０または２００または２５０または３００ｍｇ／日の範囲で投与することによって達成することができる。したがって、特定の実施形態は、約１４０ｎＭ〜２２０ｎＭの間での血漿レベルを達成するのに必要な１日用量での（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの投与を含む。他の実施形態では、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの用量は、約３０ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日である。
【００９２】
併用療法に関しては、合剤の適切な用量は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴに対する上記の開示された用量および特定の適応症に対する古くからある評価基準に基づいて、当業者によって容易に確かめることができるであろう。一般的な指針として、カンナビノイド、オピオイドおよび／または他の薬剤が、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物と併用される場合は、一般的に、用量は、カンナビノイド、オピオイドおよび／または他の活性化合物の約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、そして、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲となる。特定の実施形態では、用量は、カンナビノイド、オピオイドおよび／または他の活性化合物の約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、そして、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、そして、他の実施形態では、１日用量は、カンナビノイド、オピオイドおよび／または他の活性化合物の約１．０ｍｇであり、そして、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の約０．１ｍｇである。あるいはまた、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物が、カンナビノイド化合物（例えば、Δ９−テトラヒドロカンナビノールまたはカンナビジオール）、オピオイド化合物（例えば、モルヒネ）および／または他の薬剤と配合され、そして、その合剤が経口で投与される場合は、用量は、一般的に、カンナビノイド、オピオイドおよび／または他の薬剤の約１５〜約２００ｍｇ／ｋｇの範囲であり、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物の約０．１〜約４ｍｇである。
【００９３】
８．７  （−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの有益な特性
本明細書で議論された不都合な副作用の結果、ＡＴおよびＮＴは、うつ病または疼痛のための一次療法としては、もはや使用されない。驚くべきことに、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物は、不都合な副作用をかなり減少させた。
【００９４】
例えば、数十年の間、（１）Ｈ１ヒスタミン受容体に対して高い親和性を有する中枢神経系に活性のある薬物は、体重増加を誘発することがある、（２）いくつかの抗精神病薬は、強力なＨ１ヒスタミン受容体拮抗薬である、（３）抗精神病薬は、体重増加を誘発することがあることが知られている。興味深いことに、高いＨ１ヒスタミン受容体への親和性を有する他の精神活性化合物、例えば、ＡＴ（Ａｌｔａｍｕｒａら，１９８９）は、著しい体重増加に関係している。オランザピンやクロザピンなどの非定型的抗精神病薬のみならず、ＡＴやミルタザピンなどのそれぞれ３環系および４環系の抗うつ薬は、強力なＨ１ヒスタミン拮抗剤であるが、体重増加を誘発する高い傾向があることが示された（Ｗｉｒｓｈｉｎｇ、１９９９）。その上、Ｈ１ヒスタミン拮抗作用で媒介される体重増加は、主に過度の食欲の結果、３環系抗うつ薬での短期間および長期間の治療による一般的な、周知の副作用として記載されている（Ｒｉｃｈｅｌｓｏｎ，２００１；Ｋｈａｗａｍら，２００６；Ｄｅｓｈｍｕｋｈら，２００３）。Ｈ１ヒスタミン拮抗作用が、体重増加を誘発するかもしれないメカニズムは、先の研究によりＨ１ヒスタミン受容体拮抗作用が、げっ歯類の摂食を増加させるのに対して、Ｈ２ヒスタミン拮抗作用は、増加させないことが証明されたが、現在のところ不明である（Ｓａｋａｔａら，１９８８；Ｆｕｋａｇａｗａら，１９８９）。さらに、神経系ヒスタミンの減少は、摂食を増加させる（Ｍｅｎｏｎら，１９７１；Ｓａｋａｉら，１９９５）。最後に、Ｈ１ノックアウトマウスは、レプチンの食欲不振の作用に比較的抵抗して、高脂肪食で肥満になる傾向がある（Ｍａｓａｋｉら，２００１ａ，Ｍａｓａｋｉら，２００１ｂ）。合わせて考えると、これらの結果は、Ｈ１ヒスタミン受容体が、レプチン依存性メカニズムによって摂食行動を調整することを意味する。Ｋｒｏｅｚｅおよび協力者（Ｋｒｏｅｚｅら，２００３）による研究は、多数の定型および非定型抗精神病薬を調べて、Ｈ１ヒスタミン受容体親和性が短期間の体重増加と有意に相関していることを証明した。これらの結果は、比較的に高いＨ１ヒスタミン受容体親和性を有する抗精神病薬は、短期間の体重増加を誘発しやすいことを意味する。
【００９５】
実施例７で詳細に説明されるように、全く予想外なことに、それぞれ、Ｈ１ヒスタミン受容体に対する（−）−Ｅ−ＯＨ−ＮＴの親和性は、ＡＴとＮＴのＨ１ヒスタミン受容体親和性と比較すると、２２０倍および４０倍それぞれ低下した。これらのインビトロでの結果に基づいて、（−）−Ｅ−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴよりも、少ない体重増加をもたらすと予想される。
【００９６】
Ｈ１ヒスタミン受容体に対する（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性に基づいて、本明細書で記述されるＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物での治療は、ＡＴおよびＮＴよりも、さらに弱い鎮静作用をもたらすと予想される。実際、実施例８で詳細に説明されるように、薬物の鎮静効果を評価するために一般に使用されているラット回転棒アッセイを用いて、回転棒行動に関するＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）およびＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の効果の大きさは、同様であり、３０分でのピーク欠陥は、それぞれ５１±２０％および６０±１４％であった。しかし、回転棒行動での減退は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）では観察されなかった。これらの結果は、実施例１７で確認された。これらのデータは、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、ＡＴまたはＮＴより、鎮静作用がかなり弱いことを証明している。
【００９７】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのさらに有利な性質は、重要な薬物代謝酵素のその減少した阻害である。薬物の代謝変換は、一般に酵素による。検討されたすべての組織は、いくらかの代謝活性を有するが、薬物の生体内変換に関係する酵素系は、主として肝臓に局在する。薬物の非経口ではない投与に続いて、用量のかなりの部分は、体循環に達する前に、肝臓または腸のどちらかで代謝されて不活性化する可能性がある。この初回通過代謝は、高度に代謝された薬物の経口による生物学的利用能を著しく制限する（Ｂｅｎｅｔら，１９９５）。シトクロムＰ４５０酵素ファミリーは、薬物の生体内変換反応の主な触媒である。酵素のこのスーパーファミリーは、多種多様な酸化反応および還元反応を触媒し、基質の化学的に多様なグループに対する活性を有する。重要なシトクロムＰ４５０酵素は、ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９を含む。多形性のため、または阻害により、これらの酵素の活性の変更は、望ましくない臨床結果をもたらす（参照：Ｉｎｇｅｌｍａｎ−Ｓｕｎｄｂｅｒｇら，１９９９）。
【００９８】
実施例１０で詳細に説明されるように、ＡＴおよびＮＴの両方は、ＣＹＰ２Ｄ６とＣＹＰ２Ｃ１９を阻害し、実際、これらの薬剤は、こうした酵素で代謝される薬物との使用に対して禁忌である。しかし、驚くべきことに、ＣＹＰ２Ｄ６もＣＹＰ２Ｃ１９も、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴで阻害されなかった（参照：実施例１０）。したがって、ＡＴおよびＮＴと比べて、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、生じる望ましくない臨床結果が少ないことが予想され、これらのシトクロムＰ４５０アイソエンザイムによって代謝される薬物と効果的に併用でき、ＡＴまたはＮＴ療法との使用に対して禁忌であった。
【００９９】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの使用のもう１つの利点は、ムスカリン受容体に対するその減少した親和性に起因する。ラセミの（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの減少したムスカリン親和性が、当該分野で報告されているが、一般的なムスカリン受容体または特定のムスカリン受容体サブタイプに対するその（−）鏡像異性体の親和性については報告されていない。インビトロでのムスカリン受容体に対するＥ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性は、これらの受容体に対するＮＴの親和性のわずか１８分の１であった（Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔら．１９９１；Ｗａｅｇｎｅｒら，１９８４）。健康な個体において、ＮＴは、Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴまたはプラセボのいずれかよりも、唾液流量を有意に大幅に減少させた（Ｎｏｒｄｉｎら，１９８７ａ）。その上、ＮＴの非常に高用量で処置されたＮＴの超迅速ヒドロキシレータにおいて、抱合されていない１０−ＯＨ−ＮＴの血漿濃度は、抗コリン作用性副作用のどんな徴候を示すことなく、非常に高かった。これらの結果は、１０−ＯＨ−ＮＴ代謝物が、ＡＴおよびＮＴよりも、はるかに少ない抗コリン作用を有することを示す。これらの結果と一致して、実施例１２で詳細に説明されるデータは、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、ムスカリン受容体の４つのクラス、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４に対して、ＡＴまたはＮＴよりも、より弱い親和性を有することを証明した。
【０１００】
ＡＴおよびＮＴに対する（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのさらなる利点は、胃腸管（ＧＩ）輸送（参照：実施例１３）に関するその減少した効果である。多数のシグナル伝達機構（腸管神経系内の様々な神経伝達物質によって媒介される）は、胃腸機能の生理的制御において大きな役割を果たすのが知られている。マウス胃腸管輸送（ＧＩＴ）アッセイは、選択された化合物の潜在的ＧＩ傾向の前臨床マーカーとして使われる。実施例１３で詳細に説明されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴよりＧＩＴの著しく低い阻害を示した。
【０１０１】
ＡＴおよびＮＴの使用は、不整脈を含む心毒性と関係している。心臓Ｋ＋チャネル（Ｉｋｒ）のブロッキングは、薬物−誘発性ＱＴ延長症候群（ＬＱＴ）と関連があり、それは多形性心室性頻拍（命を脅かす型の不整脈）をもたらし、その後の心室細動に至ることがある（参照：Ｐｅａｒｌｓｔｅｉｎら，２００３）。３環系抗うつ薬（ＴＣＡｓ）によるＱＴ延長と関連する不整脈の危険性は、迅速遅延整流電流−ｈＥＲＧを媒介するクローン化α−サブユニットにより運ばれた生体心臓遅延整流（Ｋ＋）チャネルおよび電流の薬理学的阻害と細胞レベルで一致する。実施例１１で詳細に説明されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのさらなる利点は、ｈＥＲＧチャネルにおいてＡＴやＮＴよりも、かなり低い活性を有するということである。この結果に基づいて、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを利用する治療は、ＡＴとＮＴと比較して、ＱＴ延長、多形性心室性頻拍および他の不整脈関連副作用の危険性を減少させると期待される。
【０１０２】
３環系抗うつ薬は、α１アドレナリン受容体の相互作用による血圧降下も生じさせる。α１アドレナリン受容体の遮断は、それはドキセピン、ネファゾドン、ＡＴ、およびクロミプラミンで顕著に起こるが、起立性低血圧、めまいおよび反射性頻脈の原因となる（Ｈａｍｏｎ  ＆  Ｂｏｕｒｇｏｉｎ，２００６）。実施例９で詳細に説明されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの利点は、ＡＴやＮＴに比べて、α１ａおよびα１ａアドレナリン受容体における親和性が弱いことである。これらのインビトロのデータに基づいて、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、起立性低血圧、めまいおよび反射性頻脈を発生させそうにないと予想される。
【０１０３】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのさらなる利点特性は、α２アドレナリン受容体に対するその低い親和性に起因する（参照：実施例９）。α２アドレナリン受容体アゴニストが無痛覚をもたらすことはよく証明されている（Ｏｎｇｉｏｃｏら，２０００；Ａｓａｎｏら，２０００；Ｈａｌｌら，２００１）。α２アドレナリン受容体介在の抗侵害受容性を逆にするα２アドレナリン受容体拮抗剤の能力もまた、よく知られている（Ｋａｌｓｏら，１９９１；Ｍｉｌｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｌｐａｅｒｔ，１９９１；Ｐｅｒｔｏｖａａｒａら，１９９０）。α２アドレナリン受容体拮抗剤ＲＸ８２１００２（［２−（２−メトキシ−１，−４−ベンゾジオキサン−２−イル）−２−イミダゾリン］）は、最大３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下的に単独投与された場合、酢酸誘発性の腹部収縮（疼痛アッセイ）の有意な阻害を起こさなかった。同じ実験条件の下で、他方では、α２アドレナリン受容体アゴニストであるクロニジンは、０．０１〜１．０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）の範囲に渡り、また最大用量レベルで、腹部収縮の用量依存性阻害をもたらし、それは腹部収縮応答を全く無効とし、したがって、発痛刺激に対して１００％の保護を与えた。その上、０．３および１．０ｍｇ／ｋｇでクロニジンによって誘導される抗侵害受容性効果は、ＲＸ８２１００２（１ｍｇ／ｋｇ）の同時皮下投与により著しく弱められたが、このことは、この試験におけるクロニジン応答は、α２アドレナリン受容体が関与したことを強調するものである（Ｇｒａｙら，１９９９）。
【０１０４】
疼痛応答におけるα２アドレナリン受容体拮抗剤の効果の結果は、しかし、非常に変わりやすいものであった。種々の疼痛試験でのα２アドレナリン受容体拮抗剤誘発作用における変わりやすさへの１つの説明は、これらの薬物が他の受容体タイプを介してそれらの挙動効果のいくつかを媒介する可能性があるという事実である（Ｄｅｎｎｉｓら，１９８０；Ｖｉｒｔａｎｅｎら，１９８９）。例えば、Ｋａｕｐｐｉｌａと協力者（Ｋａｕｐｐｉｌａら，１９９８）による結果は、α２アドレナリン受容体拮抗剤のアチパメゾールの疼痛行動に関する効果が、いくつかの実験的なパラメータに従い促進から抑制の間で変化することを示す。これらの報告から、α２アドレナリン受容体における拮抗性は、鎮痛活性のために必要であるようには見えない。
【０１０５】
実施例９でさらに詳細に説明されるように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、アドレナリン受容体α２ａ、α２ｂ、およびα２ｃに対して、ＡＴおよびＮＴよりも、著しく弱い親和性を示す。このデータに基づいて、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、潜在的副作用に関してＡＴおよび／またはＮＴより優れていると予想される：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの鎮痛効果は、α２アドレナリン受容体との相互作用で相殺されない可能性があるのに対して、ＡＴおよびＮＴの鎮痛効果は、α２アドレナリン受容体との相互作用で減少する可能性がある。
【０１０６】
８．８  キット
本明細書に記述される（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物および／またはその医薬塩類は、キットの形態で組み合わせてもよい。いくつかの実施形態では、キットは、投与するための組成物を調製するための化合物（複数可）および試薬を提供する。組成物は、乾燥形態または凍結乾燥形態、あるいは溶液、特に滅菌溶液であってよい。組成物が乾燥形態の場合は、試薬は液体製剤を調製するための医薬的に許容される希釈剤を含むことができる。キットは、組成物を投与するための、あるいは調剤するための、限定されるものではないが、注射器、ピペット、経皮パッチまたは吸入器を含む装置を含んでもよい。
【０１０７】
キットは、本明細書に記述される化合物とともに使用するために他の治療剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、治療剤は、別々の形態で提供されるか、本明細書に記述される化合物と混合される。
【０１０８】
キットは、組成物の調製および投与、組成物の副作用、ならびに任意の他の関連情報に関する適切な指示書を含む。指示書は、任意の適切なフォーマットで、印刷物、ビデオテープ、コンピュータ読み取り可能ディスク、または光ディスクを含むが、これらに限定されるものではない。
【実施例】
【０１０９】
９．実施例
以下の実施例は、例示的であり、限定することを意図するものではないが、本明細書に記述される様々なＥ−１０−ＯＨ−ＮＴ組成物および方法の様々な特徴と利点を強調する。
【０１１０】
実施例１：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのキラル特異的合成
図１Ａを参照して、鏡像異性体的に純粋な（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、以下のように合成された。
【０１１１】
化合物２の合成
臭素（３５．０ｍＬ、６７９ｍｍｏｌ、１．４０当量）の４塩化炭素（２００ｍＬ）中の溶液を、５−オキソ−１０，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ａ，ｂ］シクロヘプタン（化合物１；１００．０ｇ、４８５ｍｍｏｌ、１．００当量）と４塩化炭素（４００ｍＬ）との攪拌混合溶液に室温で滴下して加えた。さらに２００ｍＬの４塩化炭素を加えて攪拌を促進し、混合物を室温で９０分間、攪拌した。
【０１１２】
混合物を濾過し、４塩化炭素（２００ｍＬ）で濯ぎ、乾燥して褐色の固体１７０ｇ（９０％収率）を得た。この固体（１７０ｇ、４６４ｍｍｏｌ、１．００当量）を水酸化ナトリウム（５５．７ｇ、１．３９ｍｏｌ、３．００当量）と混合し、混合物を２時間メタノール（２Ｌ）中で還流した。その熱い溶液を濾過し、固体をジクロロメタン（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）と塩水（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、乾燥して淡いオレンジ色の固体９６．２４ｇを得た。ろ液は、一晩、室温に冷却放置してさらに生成物を析出させた。固体を濾過して淡いオレンジ色の結晶２２．２ｇを得た。合計収率：８８％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１６（ｄ，１Ｈ），７．９３（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．６８−７．５１（ｍ，４Ｈ），７．４４（ｄ，１Ｈ）。
【０１１３】
化合物３の合成
カリウムｔ−ブトキシド（６２．７ｇ、５５９ｍｍｏｌ、１．４０当量）を、化合物２（１１４ｇ、４００ｍｍｏｌ、１．００当量）とピペリジン（７９．１ｍｌ、８００ｍｍｏｌ、２．００当量）の混合物に、ｔブタノール（９００ｍｌ）中で加えた。混合物を６０分間還流し、室温に冷却し、殆ど乾固するまで減圧濃縮した。粗製生成物を酢酸エチル（４００ｍｌ）に溶解し、得られた有機混合物を水（３００ｍｌ）と塩水（２００ｍｌ）で洗浄した。有機層を濃縮し、得られた粗製の油をメタノール（５００ｍＬ）中で攪拌して黄色の固体を沈殿させ、これを濾過し、乾燥して所望の生成物６３．６ｇ（収率５５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．０８（ｄｄ，１Ｈ），７．８７（ｄｄ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，１Ｈ），７．５８（ｄｔ，１Ｈ），７．５２−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｄｔ，１Ｈ），６．３８（ｓ，１Ｈ），２．８９（ｂｒｓ，４Ｈ），１．７４（ｍ，４Ｈ），１．６１（ｂｒｍ，２Ｈ）；質量分析ｍ／ｚ＝２９０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１４】
化合物４の合成
臭化シクロプロピルマグネシウムのテトラヒドロフラン溶液（ＴＨＦ中０．５０Ｍ、５３１ｍＬ、２６６ｍｍｏｌ、１．２１当量）を、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解した化合物３（６３．６ｇ、２２０ｍｍｏｌ、１．００当量）の冷却（氷／水浴）溶液に、窒素下、滴下して加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。臭化シクロプロピルマグネシウム（ＴＨＦ中０．５０Ｍ、１００ｍＬ、５０ｍｍｏｌ、０．２３当量）の追加分を加え、さらに１時間攪拌して反応させた。反応混合物を殆ど乾固するまで濃縮し、ジクロロメタン（６００ｍＬ）で希釈し、水（８００ｍＬ）と塩水（３００ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、乾燥して黄色−オレンジ色の粘着性の油７０．１ｇ（９６％収率）を得た。粗製の生成物は、さらに精製することなく次の工程で使用された。質量分析  ｍ／ｚ＝３３２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１５】
化合物５と６の混合物の合成
５−［３−ブロモ−プロピリデン］−５，１１−ジヒドロ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテン−１０−オンのＺ−およびＥ−幾何異性体（それぞれ、化合物５および６）は、化合物４（７０．０ｇ、２１１ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を４８％臭化水素酸水溶液（２５０ｍＬ）と酢酸（２５０ｍＬ）中で１６時間還流することにより製造された。反応混合物を室温に冷却し、水（２００ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（合計５００ｍＬ）で３回抽出した。有機層を合わせ、大きなビーカー中で攪拌し、飽和重炭酸ナトリウム（３００ｍＬ）を泡の発生が止むまで慎重に加えた。層を分離し、有機層を飽和重炭酸ナトリウム（２００ｍＬ）と塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して粗製の半固体を得た。粗製の生成物をシリカ上で処理する前に、不溶性の褐色固体１１ｇを濾過してＥ−（化合物６）およびＺ−（化合物５）幾何異性体（１Ｈ  ＮＭＲによる化合物６／化合物５＝８７／１３の比率）の混合物を得た。濾液を５〜１０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いてシリカゲルプラグにより精製し、精製された生成物を１０％酢酸エチル／ヘキサンで粉末化して、幾何異性体５および６（６／５＝５５／４５；１Ｈ  ＮＭＲによる）の混合物に相当する褐色の固体１９ｇを得た。異性体のこの混合物を１：１のベンゼン：ヘキサンで再結晶して純粋な化合物６の８．６ｇ、７６％を得た。次に、この物質を幾何異性体５および６（６／５＝８７／１３；１Ｈ  ＮＭＲによる）の先に分離した混合物（１１ｇ）と混合し、１：１のベンゼン：ヘキサンで結晶化して、幾何異性体５および６（６／５＝９１／９；１Ｈ  ＮＭＲによる）の混合物に相当する淡いオレンジ色の固体１２．７ｇを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１１（ｄｄ，１Ｈ），７．５０（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｍ，３Ｈ），６．１７（ｍ，１Ｈ），４．４８（ｄ，１Ｈ），３．７８（ｄ，１Ｈ），３．４７（ｍ，２Ｈ），２．８６−２．６６（ｍ，２Ｈ）。
【０１１６】
（＋）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテン、化合物（＋）−７の合成
化合物６（２．００ｇ、６．１１ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）溶液を、ボラン−ジメチルスルフィド錯体（０．３２６ｍＬ、３．６７ｍｍｏｌ、０．６０当量）および（７αＲ）−３−メチル−１，１−ジフェニルパーヒドロ−３−ボラ−２−オキサピロリジン（１．０２ｇ、３．６７ｍｍｏｌ、０．６０当量）のテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）溶液に−２０℃（ドライアイス／アセトニトリル浴）で滴下して加えた。反応は、９０分間、−２０℃で攪拌して行い、次いで室温で４５分間攪拌した。ボラン−ジメチルスルフィド錯体（０．３２６ｍＬ、３．６７ｍｍｏｌ、０．６０当量）と（７αＲ）−３−メチル−１，１−ジフェニルパーヒドロ−３−ボラ−２−オキサピロリジン（１．０２ｇ、３．６７ｍｍｏｌ、０．６０当量）の追加分を加え、さらに３０分間、室温で攪拌して反応を行なった。反応混合物を氷／水浴中で０℃に冷却し、メタノール（１５ｍＬ）を滴下して加えた。混合物を３０分間、室温で攪拌し、再び０℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、濃縮し、ジクロロメタン（７５ｍＬ）と水（５０ｍＬ）に分配した。有機層を濃縮し、粗製の生成物を１０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いるフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製してオフホワイト色の半固体９５０ｍｇを４７％の収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．５０−７．１０（ｍ，８Ｈ），６．００−５．８４（ｍ，１Ｈ），５．０９（ｂｒｍ，２／３Ｈ），４．８５（ｂｒｍ，１／３Ｈ），３．６５−３．４３（ｍ，３Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），２．７８−２．６２（ｍ，２Ｈ），１．６４（ｄ，１Ｈ）。
【０１１７】
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、化合物（＋）−８の合成
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、（＋）−７（０．９５ｇ、２．６ｍｍｏｌ、１．００当量）とメチルアミン（水中４０重量％、７．００ｍＬ、８１ｍｍｏｌ、３１当量）の溶液をアセトニトリル（１０ｍＬ）中で６０℃、１６時間、耐圧容器中で加熱することによって合成された。反応物を殆ど乾固するまで濃縮し、５〜９％メタノール／クロロホルム勾配（＋１％水酸化アンモニウム）を用いるフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して淡いオレンジ色の泡状物６５０ｍｇを９０％の収率で得た。いくらかのＺ−異性体、すなわち（＋）−Ｚ−１０−ＯＨ−ＮＴが存在したので、不純な遊離塩基（６５０ｍｇ、２．３３ｍｍｏｌ、１．００当量）をアセトニトリルに溶解し、濾過して任意の不溶性粒子を除去した。濾液を濃縮し、アセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解し、マレイン酸（３２４ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ、１．２０当量）を加えた。混合物を３０分間攪拌し、固体を析出させた。混合物を濃縮し、乾燥し、イソプロパノール（１００ｍＬ）から再結晶して５３５ｍｇの白色の結晶性固体、つまり（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴをマレイン酸塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．２９（ｂｒｓ，２Ｈ），７．５０−７．１２（ｍ，８Ｈ），６．０２（ｓ，２Ｈ），５．９０（ｂｒｍ，１／３Ｈ），５．７１（ｂｒｍ，２／３Ｈ），５．３１（ｂｒｓ，１／３Ｈ），５．０８（ｂｒｓ，１／３Ｈ），４．６０（ｂｒｓ，１／３Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ），３．０６−２．８６（ｂｒｍ，３Ｈ），２．５２（ｄ，３Ｈ），２．３６（ｂｒｍ，２Ｈ）。質量分析ｍ／ｚ＝２８０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。キラルＬＣ分析：９９．４％キラル純度。カラム：Ｃｈｒｏｍｔｅｃｈ  ＣＨＩＲＡＬ−ＡＧＰ  １５０ｘ４．０ｍｍ，５μ。流量：１．０ｍＬ／分。移動相：８０％  ２０ｍＭリン酸ナトリウム  ｐＨ  ６．０，２０％  ＩＰＡ。検出器：２４０ｎｍでのＵＶ。ピーク保持時間：ピーク１［（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ］＝５．４分。ピーク２［（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ］＝７．３分。元素分析：Ｃ１９Ｈ２１ＮＯ．Ｃ４Ｈ４Ｏ４．理論値：％Ｃ  ６９．８６；％Ｈ  ６．３７；％Ｎ  ３．５４。実測値：％Ｃ  ６９．９１；％Ｈ  ６．４３；％Ｎ  ３．６１。［α］Ｄ２３．３＝＋２７．７９（ｃ．１０．１ｍｇ／ｍＬ，ＭｅＯＨ）．ｍ．ｐ．＝１８０．５−１８２．０°Ｃ。
【０１１８】
実施例２：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのキラル特異的合成
図１Ａを参照して、鏡像異性体的に純粋な（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、以下のように合成された。
【０１１９】
（−）−Ｅ−５−（γ−ブロモプロピリデン）−１０，１１−ジヒドロ−１０−ヒドロキシ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］−シクロヘプテン、化合物（−）−７の合成
化合物６（２．５０ｇ、７．６４ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）溶液を、ボラン−ジメチルスルフィド錯体（０．４５５ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ、０．６７当量）および（７αＳ）−３−メチル−１，１−ジフェニルパーヒドロ−３−ボラ−２−オキサピロリジン（１．４２ｇ、５．１２ｍｍｏｌ、０．６７当量）のテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）溶液に−２０℃（ドライアイス／アセトニトリル浴）で滴下して加えた。反応は、６０分間、−２０℃で攪拌して行い、次いで室温で２時間攪拌した。ボラン−ジメチルスルフィド錯体（０．４５５ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ、０．６７当量）と（７αＳ）−３−メチル−１，１−ジフェニルパーヒドロ−３−ボラ−２−オキサピロリジン（１．４２ｇ、５．１２ｍｍｏｌ、０．６７当量）の追加分を加え、さらに３０分間、室温で攪拌して反応を行なった。反応混合物を氷／水浴中で０℃に冷却し、メタノール（１５ｍｌ）を滴下して加えた。混合物を３０分間、室温で攪拌し、再び０℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、濃縮し、ジクロロメタン（７５ｍＬ）と水（５０ｍＬ）に分配した。有機層を濃縮し、粗製の生成物を１０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いるフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製してオフホワイト色の粘着性泡状物２．４５ｇを９７％の収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．５０−７．１０（ｍ，８Ｈ），６．００−５．８４（ｍ，１Ｈ），５．０９（ｂｒｍ，２／３Ｈ），４．８５（ｂｒｍ，１／３Ｈ），３．６５−３．４３（ｍ，３Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），２．７８−２．６２（ｍ，２Ｈ），１．６４（ｄ，１Ｈ）。
【０１２０】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、化合物（−）−８の合成
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、（−）−７（２．４５ｇ、６．７ｍｍｏｌ、１．００当量）とメチルアミン（水中４０重量％、２５．０ｍＬ、２９０ｍｍｏｌ、４３当量）の溶液をアセトニトリル（３５ｍＬ）中で６０℃、５時間、耐圧容器中で加熱することによって合成された。反応物を濃縮し、５〜９％メタノール／クロロホルム勾配（＋１％水酸化アンモニウム）を用いるシリカゲルプラグにより精製した。いくらかのＺ−異性体、すなわち、（−）−Ｚ−１０−ＯＨ−ＮＴが存在したので、不純な遊離塩基をジクロロメタンに溶解し、濾過して、任意の不溶性粒子を除去し、濃縮し、乾燥して淡い黄色の泡状物１．９ｇを定量的に得た。遊離塩基（１．３７ｇ、４．９ｍｍｏｌ、１．００当量）をアセトニトリル（４０ｍＬ）に溶解し、マレイン酸（０．６５４ｇ、５．６４ｍｍｏｌ、１．１５当量）を加えた。混合物を６０分間攪拌し、固体を析出させた。混合物を濃縮し、乾燥し、イソプロパノール（７０ｍＬ）から再結晶して、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの淡いオレンジ色の針状晶８２０ｍｇをマレイン酸塩として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．２９（ｂｒｓ，２Ｈ），７．５０−７．１２（ｍ，８Ｈ），６．０２（ｓ，２Ｈ），５．９０（ｂｒｍ，１／３Ｈ），５．７１（ｂｒｓ，２／３Ｈ），５．３１（ｂｒｓ，１／３Ｈ），５．０８（ｂｒｓ，１／３Ｈ），４．６０（ｂｒｓ，１／３Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ），３．０６−２．８６（ｂｒｍ，３Ｈ），２．５２（ｄ，３Ｈ），２．３６（ｂｒｍ，  ２Ｈ）．質量分析  ｍ／ｚ＝２８０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。キラルＬＣ分析：９８．６％キラル純度。カラム：Ｃｈｒｏｍｔｅｃｈ  ＣＨＩＲＡＬ−ＡＧＰ  １５０×４．０ｍｍ，５μ。流量：１．０ｍＬ／分。移動相：８０％  ２０ｍＭのリン酸ナトリウム  ｐＨ６．０、２０％ＩＰＡ。検出器：２４０ｎｍでのＵＶ。ピーク保持時間：ピーク１［（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ］＝６．１分。ピーク２［（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ］＝８．６分。元素分析：Ｃ１９Ｈ２１ＮＯＣ４Ｈ４Ｏ４、理論値：Ｃ  ６９．８６％；Ｈ  ６．３７％；Ｎ  ３．５４％、実測値：Ｃ  ６９．５３％；Ｈ  ６．４４％；Ｎ  ３．５７％。［α］Ｄ２３．４＝−２４．１２（ｃ  １０．７ｍｇ／ｍＬ、メタノール）。融点＝１７７．５−１７９．０℃．
実施例３：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴコハク酸塩は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴマレイン酸塩と比べて、改善された性質を有する。
【０１２１】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴコハク酸塩の調製
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのコハク酸塩は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴコハク酸塩は、９．１５ｇの（−）−８（遊離塩基、８８．６％のＥ異性体、１１．４％のＺ異性体）をイソプロパノール（４０ｍＬ）に溶解し、コハク酸（４．２５ｇ、１．１０当量）のイソプロパノール（９０ｍＬ）溶液を加えることによって製造された。少量の生成物が２日後に溶液から結晶化し、混合物を２０ｍＬ混合物に濃縮し、得られた固体を濾過して、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴコハク酸塩１１ｇを得たが、これは９４％のＥ異性体と６％のＺ異性体であった。固体をアセトニトリル（４００ｍＬと３００ｍＬ）から、２回再結晶して淡いオレンジ色の結晶６．７８ｇ（９９．２％のＥ異性体、０．８％のＺ異性体）を得た。得られたコハク酸塩は、事実上、結晶質であり、非吸湿性であり、生理食塩水中で、マレイン酸塩（４．４ｍｇ／ｍｌ）より高い溶解度（１８ｍｇ／ｍｌ）を有する。
【０１２２】
実施例４：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ノルエピネフリン再取込みの強力な選択的阻害剤である。
【０１２３】
プロトコル
ノルエピネフリン（ＮＥ）輸送体、セロトニン（５ＨＴ）輸送体およびドーパミン（ＤＡ）輸送体に対するＡＴ、ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの結合親和性は、放射能標識されたリガンドを用いる競合的結合アッセイで測定された。ＮＥ輸送体結合アッセイのために、［３Ｈ］ニソキセチン（１．０ｎＭ）は、いろいろな濃度の試験化合物と共に、クローン化ヒトＮＥ輸送体（ｈＮＥＴ）を異種的に発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞から調製された膜を用いて、４℃で２時間、インキュベーションされた。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１．０μＭのデシプラミンの存在下で起きた結合の量と定義された。いろいろな試験化合物のＫｉ値は、標準的な方法を使用して測定された。
【０１２４】
５ＨＴ輸送体結合アッセイのために、［３Ｈ］イミプラミン（２．０ｎＭ）は、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、ヒトセロトニン輸送体（ｈＳＥＲＴ）を異種的に発現するＣＨＯ細胞から調製された膜を用いて、２２℃で１時間、インキュベーションされた。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１０μＭイミプラミン圧で起きた結合の量と定義された。いろいろな試験化合物に対するＫｉ値は、標準的な方法を使用して測定された。
【０１２５】
ＤＡ輸送体結合アッセイのために、（［３Ｈ］Ｎ−［１−（２−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）シクロヘキシル］−ピペリジン（［３Ｈ］ＢＴＣＰ）（４．０ｎＭ）は、クローン化ヒトドーパミン輸送体（ｈＤＡＴ）を異種的に発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から調製された膜を用いて４℃で２時間、インキュベーションされた。いろいろな濃度の試験化合物を加え、結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１０μＭ  ＢＴＣＰの存在下で起きた結合として定義された。いろいろな試験化合物のＫｉ値は、標準的な方法を使用して測定された。
【０１２６】
ＮＥ、５ＨＴおよびＤＡの取り込みを阻害するＡＴ、ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの能力もまた評価された。ＮＥ取り込みでのＩＣ５０値は、３７℃で２０分間インキュベーションした際の、［３Ｈ］−ノルエピネフリンのラット視床下部シナプトソームへの取り込みの阻害を測定することにより決定された。５ＨＴの取り込みにおけるＩＣ５０値は、３７℃で１５分間インキュベーションした際の、［３Ｈ］−５ＨＴのラット脳シナプトソームへの取り込みの阻害を測定することにより決定された。ＤＡの取り込みにおけるＩＣ５０値は、３７℃で１５分間インキュベーションした際の、［３Ｈ］−ＤＡのラット線条体シナプトソームへの取り込みの阻害を測定することにより決定された。
【０１２７】
結果
いろいろな輸送体に対する結合親和性は、下記の表１に示される。表１において、Ｋｉ値は、ナノモルで表わされる。パーセントは、１０μＭ試験化合物で観察された結合のパーセント阻害である。
【０１２８】
取り込み阻害データは、下記の表２で報告される。表２において、ＩＣ５０値は、ナノモルで表わされる。パーセントは、１０μＭ試験化合物で観察された取り込みのパーセント阻害である。
【０１２９】
【表１】
2010526075.tif 000005
【０１３０】
【表２】
2010526075.tif 000006
【０１３１】
ＮＥ輸送体に対する（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性は、ＡＴのそれとほぼ同等であり、ＮＴのそれとは約１０倍の範囲内であった。類似した結果は、ＮＥ取り込みの阻害に関するＩＣ５０値についても観察された。ＮＥ取り込み阻害に関するＩＣ５０値は、ラセミのＥ−１０−ＯＨ−ＮＴについて先に報告されたものよりも低い（参照：Ｈｙｔｔｅｌ，１９８０；これは、マウス心房でのＮＥ取り込みアッセイに対して１３０ｎＭのＩＣ５０を報告した）。
【０１３２】
ＮＥ輸送体に対する（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性は、ＡＴのそれとほぼ同等であったが、ＮＴの親和性のように、５ＨＴ輸送体に対する（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性は、ＡＴの親和性よりも、著しく大きい。同様の結果は、５ＨＴ取り込みの阻害に関するＩＣ５０についても観察された。これらの結果に基づいて、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＮＴのように、ＮＥ輸送体対５ＨＴ輸送体に対して選択性を示す。
【０１３３】
実施例１４で示されるように、ラセミの（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴはまた、（＋）および（−）鏡像異性体のそれと略同等の効力の、ＮＥと５ＨＴ輸送体に対する選択的親和性を示す。
【０１３４】
実施例５：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、有効な抗痛覚過敏薬剤である。
【０１３５】
プロトコル
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの抗痛覚過敏の有効性は、侵害受容性炎症性疼痛のフロイント完全アジュバント誘発げっ歯類モデルで証明された。比較のために、ＡＴは陽性対照として試験された。薬物は、３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．で投与された。滅菌水ビヒクルは、陰性対照として試験された。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、マレイン酸塩またはコハク酸塩のいずれかで投与された。ＡＴは、塩酸塩として投与された。投薬用量は、遊離塩基の量に基づく。アッセイに関しては、ＤｅＨａｖｅｎ−Ｈｕｄｋｉｎｓら，１９９９の方法が、１５０μＬフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）の足底内投与の２４時間後にラットで機械痛覚過敏を測定するのに用いられた。後肢耐圧閾値を測定するために、ラットは、ガーゼラップで軽く拘束され、そして、圧力は、加圧式無痛覚装置を用いて円錐ピストンで、炎症を起こしている後肢および起こしていない後肢の背側面に印加された（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ）。後肢耐圧閾値は、２５０グラムのカットオフ値を使い、逃避反応を誘発するのに必要な力（グラムで）の量と定義された。後肢耐圧閾値は、薬物治療の前に、および薬物治療後の指定された時間に測定された。
【０１３６】
結果
結果は、図３に例示される。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）は、ＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）のそれに相当する強い抗痛覚過敏活性を示した。
【０１３７】
実施例６：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、非侵害受容性神経障害性疼痛の治療に有効である。
【０１３８】
プロトコル
アミトリプチリンの抗アロディニア活性と比較して、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの抗アロディニア活性は、ＬａＢｕｄａ  ａｎｄ  Ｌｉｔｔｌｅ，２００５に記載されているように、非侵害受容性神経障害性疼痛のＬ５−単一神経結紮モデルを使って、インビボでも試験された。試験動物は、プレキシガラス室（１０ｃｍ×２０ｃｍ×２５ｃｍ）に置き、１５分間馴化させた。フォン・フレイ（ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ）モノフィラメントが両方の後肢の底側面に提示することができるように、その部屋はメッシュスクリーン上に配置された。各後肢についての触覚感度の測定は、７つのフレイ・モノフィラメント（０．４、１、２、４、６、８および１５グラム）でアップ／ダウン法（Ｄｉｘｏｎ，１９８０）を使用して得られた。各試験は、約１〜２秒間、右後肢、次いで左後肢に加える２グラムのフォン・フレイ力で開始した。離脱反応がなかったならば、次のより高い力が加えられた。反応があったならば、次の低い力が加えられた。この手順は、最も高い力（１５グラム）で反応がなくなるまで、あるいは、最初の反応の後、４つの刺激が施されるまで行われた。各々の試験群は、８匹の動物を含んだ。疑似手術対照群（それは手術されたが、神経結紮されなかった）は、４匹の動物を含んだ。全ての動物は、試験化合物の投与後、６０分と２４０分に試験された。
【０１３９】
各々の肢に対する５０％後肢離脱閾値は、以下の式を使用して計算された：［Ｘｔｈ］ｌｏｇ＝［ｖＦｒ］ｌｏｇ＋ｋｙ（式中、［ｖＦｒ］は、使用された最後のフォン・フレイ力であり、ｋ＝０．２２４９であり、これはフォン・フレイモノフィラメント間の平均間隔（ｌｏｇ単位で）であり、ｙは、離脱反応のパターンに依存する値である（Ｄｉｘｏｎ，１９８０）。動物が最も高いフォン・フレイ・モノフィラメント（１５グラム）に反応しないときは、肢は１８．２３グラムの値に割り当てられた。触覚感度のための試験は２回実行され、そして、平均５０％の離脱値が各々の動物の左右の肢に対する触覚感度として割り当てられた。
【０１４０】
結果
結果は、図４に例示される。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、マレイン酸塩またはコハク酸塩として投与された。ＡＴは、塩酸塩として投与された。投薬用量は、遊離塩基の量に基づく。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の抗アロディニア活性は、ビヒクル処置対照群（ビヒクル処置、Ｌ５  ＳＮＬ  ラット）に対して観測された活性よりも統計的に有意であり、ＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）のそれに匹敵した。
【０１４１】
実施例７：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、弱い親和性のＨ１ヒスタミン受容体と結合する。
【０１４２】
プロトコル
Ｈ１ヒスタミン受容体に対するＡＴ、ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性は、競合的結合アッセイにより評価された。アッセイのために、［３Ｈ］ピリラミン（３ｎＭ）は、クローン化ヒトＨ１ヒスタミン受容体を異種的に発現するヒト胚腎臓（ＨＥＫ−２９３）細胞から調製された膜を用いて、いろいろな濃度の試験化合物とともに２２℃で１時間、インキュベーションされた。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１．０μＭ非標識ピリラミンの存在下で起きた結合の量として定義された。
【０１４３】
結果
結合試験は、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのＨ１ヒスタミン受容体親和性は、ＡＴおよびＮＴのＨ１ヒスタミン受容体親和性に比べて、意外にも２２０倍および４０倍それぞれ減少したことを示す。これらの結果に基づいて、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴまたはＮＴより、鎮静作用がより弱く、体重増加は少ないであろうと予想される。
【０１４４】
実施例８：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴよりも、インビボで鎮静作用が有意に弱い。
【０１４５】
プロトコル
ラット回転棒アッセイは、化学的薬物と関連した鎮静作用を評価するために一般的に用いられる。経時実験が、ＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）、ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）および（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いて実施された。回転棒は、恒常的な速度で動くように設定し、そして、ラットはその装置の個々の回転ドラム上に置かれた。一旦ネズミが所定位置についたら、タイマーはゼロにセットされ、そして、回転棒は、加速度的なモードに切り換えられた。回転棒は、５分間隔で、４から４０ｒｐｍまで加速した。ネズミが回転ドラムから落ちたとき、タイマーは自動的に切れ、落下する潜時を秒単位で記録した。ラットは、薬剤投与の前に、少なくとも１５分は間隔をあけた３つのトレーニングセッションを過した。行動得点は、各間隔の間、秒単位で記録された。ベースラインの回転棒行動得点は、３回目のトレーニングセッションで回転棒から落下する潜時であった。ベースラインは、ラットが実験に含まれるために、６０秒以上の持続でなければならない。動物は、試験化合物の投与後、３０分、６０分および１２０分に試験された。
【０１４６】
結果
結果は、図２に示される。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、マレイン酸塩またはコハク酸塩として投与された。ＮＴおよびＡＴは、塩酸塩として投与された。投薬用量は、遊離塩基の量に基づく。回転棒行動におけるピーク欠陥は、ＡＴまたはＮＴで処置されたラットでは、３０分に観察された。回転棒行動におけるＡＴおよびＮＴの効果の程度は、類似したものであり、それぞれ、５１±２０％と６０±１４％のピーク欠陥であった。際立って対照的に、行動減退は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で処置されたラットでは観察されなかった。
【０１４７】
実施例９：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、α−アドレナリン受容体に対して低い親和性を有する。
【０１４８】
ＡＴ、ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのα１ａ、α１ｂ、α２ａ、α２ｂおよびα２ｃアドレナリン受容体に対する親和性が試験された。α１ａアドレナリン受容体に対する親和性は、ラット唾液腺から調製された膜を使って試験された。［３Ｈ］プラゾシン（０．０６ｎＭ）は、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、その膜と２２℃で１時間、インキュベーションされた。非特異的結合は、１０μＭフェントラミンの存在下で測定された。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。
【０１４９】
α１ｂアドレナリン受容体に対する親和性は、クローン化されたヒト受容体を異種的に発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から調製された膜（これは、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、［３Ｈ］プラゾシン（０．１５ｎＭ）と２２℃、１時間、インキュベーションされた）を用いて試験された。非特異的結合は、１０μＭフェントラミンの存在下で測定された。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。
【０１５０】
α２ａアドレナリン受容体に対する親和性は、クローン化されたヒト受容体を異種的に発現するＣＨＯ細胞（これは、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、［３Ｈ］ＲＸ８２１００２（１．０ｎＭ）と２２℃、１時間、インキュベーションされた）を用いて試験された。非特異的結合は、１００μＭ（−）−エピネフリンの存在下で測定された。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。
【０１５１】
α２ｂアドレナリン受容体に対する親和性は、クローン化されたヒト受容体を異種的に発現するＣＨＯ細胞（これは、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、［３Ｈ］ＲＸ８２１００２（２．５ｎＭ）と２２℃、１時間、インキュベーションされた）を用いて試験された。非特異的結合は、１００μＭ（−）−エピネフリンの存在下で測定された。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。
【０１５２】
α２ｃアドレナリン受容体に対する親和性は、クローン化されたヒト受容体を異種的に発現するＣＨＯ細胞とともに［３Ｈ］ＲＸ８２１００２（２．０ｎＭ）とを、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、２２℃、１時間、用いて試験された。非特異的結合は、１００μＭ（−）−エピネフリンの存在下で測定された。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。
【０１５３】
結果
結果は、下記の表３に示される。表３において、Ｋｉ値は、ナノモルで表わされる。パーセンテージは、１０μＭ試験化合物で観察された結合阻害のパーセントである。
【０１５４】
【表３】
2010526075.tif 000007
【０１５５】
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、列挙したすべてのアドレナリン受容体、特にα２受容体に対して、ＡＴおよびＮＴより、著しく低い親和性を示す。したがって、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの鎮痛効果は、α２アドレナリン受容体との相互作用により相殺され得ないかもしれないが、一方、ＡＴおよびＮＴの鎮痛応答は、α２アドレナリン受容体との相互作用により相殺され得ると、予想される。さらにまた、α１ａとα１ｂ受容体における、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ間の親和性の違いは、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのプロファイルが（＋）鏡像異性体より優れていることを示唆する。
【０１５６】
実施例１０：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、シトクロムＰ４５０機能を阻害しない。
【０１５７】
プロトコル
シトクロムＰ４５０機能に関するＡＴとＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの阻害活性は、Ｃｈａｕｒｅｔら，２００１の方法を使用し、基質として７−メトキシ−４−（アミノメチル）−クマリン（ＭＡＭＣ）（Ｖｅｎｈｏｒｓｔら，２０００）を用いて試験された。酵素源は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから得られるヒト組み換え型ＣＹＰ２Ｄ６を含むミクロソームであった。７−ヒドロキシ−４−（アミノメチル）クマリンへのＭＡＭＣの変換は、３９０ｎｍ励起フィルタと４６０ｍｎ蛍光フィルタを備えたＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｆｕｓｉｏｎを使って測定された。
【０１５８】
ＣＹＰ２Ｃ１９活性は、基質としてジベンジルフルオレセイン（ＤＢＦ）を使って測定された。酵素源は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から得られるヒト組み換え型ＣＹＰ２Ｃ１９を含むミクロソームであった。フルオレセインへのＤＢＦの変換は、４８５ｎｍ励起フィルタと５３５ｍｎ蛍光フィルタを備えたＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｆｕｓｉｏｎを使って測定された。
【０１５９】
結果
結果は下記の表４に示される。表４において、ＩＣ５０値は、ナノモルの値であり、９５％信頼限界は、括弧内に示される。パーセンテージは、１０μＭ試験化合物で観察された％阻害を表す。報告された値は、６件の反復された実験の平均である。
【０１６０】
【表４】
2010526075.tif 000008
【０１６１】
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴやＮＴの両方よりも、多形シトクロムＰ４５０アイソエンザイムＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９での阻害活性における著しい、予想外の減少を、驚くべきことに証明した。Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの（＋）および（−）鏡像異性体に対する阻害活性のこの減少は、ＡＴおよびＮＴと比較した場合、望ましくない臨床結果を減らすことに繋がると期待され、そして、ＡＴやＮＴとの使用が禁忌である薬物を服用している患者で（＋）および（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの使用を可能にすることが期待される。
【０１６２】
実施例１１：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴよりも、ｈＥＲＧチャネルを低い程度で阻害する。
【０１６３】
プロトコル
心臓遅延整流カリウムチャネルを遮断するＡＴ、ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの能力は、迅速遅延整流電流（ｈＥＲＧ）を示す密接なαサブユニットを用いて試験された。
【０１６４】
結果
１０μＭ試験化合物で達成されたｈＥＲＧチャンネルの％阻害は、以下に示される：
ＡＴ：６８．６％
ＮＴ：５５．１％
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ：８．８％
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ：６．０％。
【０１６５】
著しく低い活性が、ＡＴとＮＴよりも、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの場合に観察される。これらの結果に基づいて、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを利用する治療は、ＡＴやＮＴでの治療に比べて、ＱＴ延長および他の不整脈関連副作用の危険性を少なくできるであろうことが期待される。
【０１６６】
実施例１２：（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴよりも、ムスカリン受容体に対して、より低い親和性を有する。
【０１６７】
プロトコル
ムスカリン受容体Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４およびＭ５に対するＡＴ、ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの親和性が、クローン化されたヒトムスカリン受容体Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４およびＭ５を異種的に発現するＣＨＯ細胞から調製された膜を用いて測定された。アッセイのために、膜および放射能標識リガンドが、いろいろな濃度の試験化合物と２２℃で１時間インキュベーションされた。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１．０μＭアトロピンの存在下で、結合された放射性リガンドの量として定義された。Ｍ１受容体に対する放射性リガンドは、［３Ｈ］ピレンゼピン（２ｎＭ）であった。Ｍ２受容体に対する放射性リガンドは、［３Ｈ］ＡＦ−ＤＸ３８４（２ｎＭ）であった。Ｍ３、Ｍ４およびＭ５受容体に対する放射性リガンドは、［３Ｈ］４−ＤＡＭＰであった。
【０１６８】
結果
種々の受容体に対する様々な異なる試験化合物の親和性定数（ナノモルで）は、下記の表５に示される。
【０１６９】
【表５】
2010526075.tif 000009
【０１７０】
全ての場合において、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ほぼ同等の親和性を、そして、ＡＴおよびＮＴの両方よりも著しく低い親和性を示した。
【０１７１】
実施例１３：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴよりも、胃腸管輸送の少ない抑制を示す。
【０１７２】
プロトコル
ＡＴ、ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの阻害効果は、胃腸管輸送のげっ歯類モデルで評価された。アッセイために、雄のＳｗｉｓｓ−Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（２０〜２５ｇ）を一晩、絶食させ、活性炭：小麦粉：水（１：２：８、ｗ：ｗ：ｗ）から成る炭末の各経口投与前１、２、または４時間目に、試験化合物または滅菌水ビヒクル対照で処置した。胃腸管輸送能は、炭末摂取の２５分後に測定された。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、マレイン酸塩またはコハク酸塩のいずれかで投与された；ＡＴとＮＴは、塩酸塩として投与された；投薬用量は、遊離塩基の量に基づく。
【０１７３】
胃腸管輸送（ＧＩＴ）は、小腸の全長を摘出し、炭末の最先端が小腸でどこまで遠くに移行するかを測定することにより決定された。パーセントＧＩＴ（％ＧＩＴ）は、以下の式で測定された：
％ＧＩＴ＝［炭末最先端までの距離（ｃｍ）／小腸の長さ（ｃｍ）×１００］
結果
試験化合物（滅菌水ビヒクルと比較して）で観察された％ＧＩＴは、図５に例示される。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴおよびＮＴの両方と比較して、輸送について著しく低い抑制を示した。
【０１７４】
実施例１４：モノアミン輸送体に対するラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのインビトロでの結合親和性は、お互いに匹敵する。
【０１７５】
プロトコル
ノルエピネフリン（ＮＥ）輸送体およびセロトニン（ＳＥＲＴ）輸送体に対するラセミ体Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（「（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ」）、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの結合親和性は、放射能標識リガンドとの競合的結合アッセイで測定された。ＮＥ輸送体結合アッセイのために、［３Ｈ］ニソキセチン（１．０ｎＭ）が、いろいろな濃度の試験化合物とクローン化されたヒトＮＥ輸送体（ｈＮＥＴ）を異種的に発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から調製された膜とともに、４℃で２時間、インキュベーションされた。結合放射能は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１．０μＭデシプラミンの存在下で起きた結合量として定義された。いろいろな試験化合物のＫｉ値は、標準的な方法を使用して測定された。
【０１７６】
５ＨＴ輸送体（ＳＥＲＴ）結合アッセイのために、［３Ｈ］イミプラミン（２．０ｎＭ）を、いろいろな濃度の試験化合物の存在下、ヒトセロトニン輸送体（ｈＳＥＲＴ）を異種的に発現するＣＨＯ細胞から調製された膜とともに、２２℃で１時間、インキュベーションした。結合放射能活性は、シンチレーション分光法で測定された。非特異的結合は、１０μＭイミプラミン圧で起きた結合量として定義された。いろいろな試験化合物のＫｉ値は、標準的な方法を使用して測定された。
【０１７７】
結果
いろいろな輸送体に対する結合親和性は、下記の表６に提供される。
【０１７８】
【表６】
2010526075.tif 000010
【０１７９】
ノルエピネフリン輸送体に対するラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの結合親和性は、精製された鏡像異性体（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（これらは、互いにほぼ同等である）に関して観測された結合親和性に匹敵した。同様に、セロトニン輸送体に対するラセミ体（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの結合親和性も、また、精製された（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの両方に対して観測された結合親和性に匹敵した。
【０１８０】
実施例１５：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴよりも、非侵害受容性神経障害性疼痛の治療において、より有効である。
【０１８１】
プロトコル：
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの抗アロディニア活性は、アミトリプチリン、（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ、および（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴのそれと比較して、非侵害受容性神経障害性疼痛のＬ５−単一神経結紮モデルを使用して、Ｌａｂｕｄａ  ＆  Ｌｉｔｔｌｅ，２００５に記載されているようにインビボで試験された。Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ化合物は、マレイン酸塩またはコハク酸塩のいずれかで投与された。ＡＴは、塩酸塩として投与された。投薬用量は、遊離塩基の量に基づく。試験動物は、プレキシガラス室（１０ｃｍ×２０ｃｍ×２５ｃｍ）に置かれ、１５分間馴化させた。フォン・フレイ（ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ）モノフィラメントが両方の後肢の底側面に提示することができるように、その部屋はメッシュスクリーン上に配置された。各後肢についての触覚感度の測定は、７つのフレイ・モノフィラメント（０．４、１、２、４、６、８および１５グラム）でアップ／ダウン法（Ｄｉｘｏｎ，１９８０）を使用して得られた。各試験は、約１〜２秒間、右後肢、次いで左後肢に加える２グラムのフォン・フレイ力で開始した。離脱反応がなかったならば、次のより高い力が加えられた。反応があったならば、次の低い力が加えられた。この手順は、最も高い力（１５グラム）で反応がなくなるまで、あるいは、最初の反応の後、４つの刺激が施されるまで、行われた。各々の試験群は、８匹の動物を含んだ。疑似手術対照群（それは手術されたが、神経結紮されなかった）は、４匹の動物を含んだ。全ての動物は、試験化合物の投与後、６０分に試験された。
【０１８２】
各々の肢に対する５０％後肢離脱閾値は、以下の式を使用して計算された：［Ｘｔｈ］ｌｏｇ＝［ｖＦｒ］ｌｏｇ＋ｋｙ（式中、［ｖＦｒ］は、使用された最後のフォン・フレイ力であり、ｋ＝０．２２４９であり、これはフォン・フレイモノフィラメント間の平均間隔（ｌｏｇ単位で）であり、そしてｙは、離脱反応のパターンに依存する値である（Ｄｉｘｏｎ，１９８０）。動物が最も高いフォン・フレイ・モノフィラメント（１５グラム）に反応しないときは、肢は１８．２３グラムの値に割り当てられた。触覚感度のための試験は２回実行され、そして、平均５０％の離脱値が、各々の動物の左右の肢に対する触覚感度として割り当てられた。
【０１８３】
結果
結果は、図７に例示される。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の抗アロディニア活性は、ビヒクル処置対照群（ビヒクル処置、Ｌ５  ＳＮＬ  ラット）（「ＶＥＨ」）に対して観測された活性よりも大きく、ＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）のそれに匹敵した。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の抗アロディニア活性は、また、（±）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）および（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の両方で観測された抗アロディニア活性よりも大きかった。ラセミ体混合物および（＋）鏡像異性体の活性は、両方ともビヒクルだけの対照（「ＶＥＨ」）のそれに匹敵した。
【０１８４】
実施例１６：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、Ｌ５  ＳＮＬラットモデルでの経口投与により、非侵害受容性神経障害性疼痛の治療の際にアミトリプチリンと同じくらい有効である。
【０１８５】
プロトコル：
経口投与された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（マレイン酸塩またはコハク酸塩）の抗アロディニア活性は、実施例１５で上記された方法に従って、非侵害受容性神経障害性疼痛のＬ５−単一神経結紮モデルを使用して、アミトリプチリン（塩酸塩）のそれとインビボで比較された。
【０１８６】
結果
結果は、図８に例示される。（−）−Ｅ−ｌ０−ＯＨ−ＮＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．と６０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）の抗アロディニア活性は、ビヒクル処置対照群に対して観測された活性よりも大きく、ＡＴ（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）のそれに匹敵した。投薬用量は、投与された遊離塩基の量に基づく。
【０１８７】
実施例１７：（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよびＡＴに対するＦＣＡ誘発痛覚過敏および回転棒用量−応答曲線
用量−応答実験は、アミトリプチリン（塩酸塩）と（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（マレイン酸塩またはコハク酸塩）を用いて、ＩＰ（腹腔内）投与後の抗痛覚過敏有効性と鎮静作用の間の治療可能比を測定するために、ラットＦＣＡ誘発痛覚過敏（Ｒａｎｄａｌｌ  Ｓｅｌｉｔｔｏ法）アッセイおよびラット回転棒アッセイにおいて実行された。ラットは、滅菌水ビヒクル、ＡＴ、または（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴを用いて、最大６０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ（用量は、投与された遊離塩基の量に基づく）で処置された。後肢耐圧閾値は、処置後１時間に測定された。ＡＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、２４時間ＦＣＡ処置ラットにおいて、機械痛覚過敏の逆転に対して同様の効力および有効性を示した。６０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰにおいて、高レベルの抗痛覚過敏活性（％ＡＨ）が、ＡＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴの場合に観察され、ＡＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴで処置されたラットでの％ＡＨの値は、それぞれ、２５９±３９および２７０±５３であった（図９、図１０）。機械痛覚過敏のＡＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴ逆転のためのＥＤ５０値を推定するために、６０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰで処置されたラットで得られた応答は、最大応答（１００％）として使用され、より低用量での応答が、最大効果の％として計算された。ＡＴおよび（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴに対してのＥＤ５０値は、それぞれ３８および３６ｍｇ／ｋｇ、ＩＰであった（図９、図１０）。
【０１８８】
ラットでの回転棒行動における減退は、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよびＡＴでもたらされる鎮静作用の程度を評価するのに用いられた。ＡＴは、用量依存的に回転棒行動を減少させ、２７ｍｇ／ｋｇ、ＩＰのＥＤ５０値および１００ｍｇ／ｋｇ、ＩＰの用量で観察される９６％の最大減退を有した（図９）。対照的に、３０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰの（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、回転棒行動の５％減退をもたらすだけであった。回転棒行動の（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ減退に対する推定ＥＤ５０値は、１２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰであった（図１０）。
【０１８９】
これらのデータをまとめると、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ＡＴよりも、少ないオフターゲット薬理学的副作用を示す可能性があることを証明する。
【０１９０】
実施例１８：ラットＦＣＡ誘発痛覚過敏アッセイでの（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴの抗痛覚過敏活性
プロトコル
経口投与された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（マレイン酸塩またはコハク酸塩）の抗痛覚過敏効力は、侵害受容性炎症性疼痛（用量は、投与された遊離塩基の量に基づく）のフロイント完全アジュバント誘発げっ歯類モデルにおいて証明された。比較のために、滅菌水ビヒクルは、陰性対照として試験された。ＤｅＨａｖｅｎ−Ｈｕｄｋｉｎｓら，１９９９の方法が、１５０μＬのフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）の足底内投与後２４時間のラットで機械痛覚過敏を測定するために使用された。後肢耐圧閾値を測定するために、ラットは、ガーゼラップで軽く拘束され、そして、圧力が加圧式無痛覚装置を用いて円錐ピストンで、炎症を起こしている後肢および起こしていない後肢の背側面に印加された（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ）。後肢耐圧閾値は、２５０グラムのカットオフ値を用い、逃避反応を誘発するのに必要な力（グラムで）の量と定義された。後肢耐圧閾値は、薬物治療の前に、および薬物治療後の指定された時間に測定された。
【０１９１】
結果
結果は図１１に例示され、経口投与された（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、ラットＦＣＡ誘発痛覚過敏アッセイにおいて、著しい活性を提供することを証明する。
【０１９２】
実施例１９：ラットＦＣＡ誘発痛覚過敏アッセイにおける、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの抗痛覚過敏活性の比較
（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴが、２４時間ＦＣＡ処置ラットで、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴと同様の抗痛覚過敏効力および効能を有するかどうかを測定するために実験が行われた。経時実験が、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴの３０ｍｇ／ｋｇのＩＰを用いて実施された。この実験では、ＦＣＡ処置の２４時間後に、ラットは、ビヒクルまたは（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（マレイン酸塩またはコハク酸塩を投与した；投薬用量は、投与された遊離塩基の量に基づく）の３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰが投与された。後肢耐圧閾値は、実施例５と１８で開示された方法を使用して、投与して１、２または４時間後に測定された。ビヒクル処置ラットは、処置１時間後に試験された。（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴは、試験されたどの時点でも抗痛覚過敏ではなかった（図１２）。
【０１９３】
これらの結果を確かめるために、２４時間ＦＣＡ誘発痛覚過敏実験が、行われたが、そこではラットは、ビヒクルまたは（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴもしくは（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴの３０ｍｇ／ｋｇのＩＰで処置され、１時間後に抗痛覚過敏について試験された。結果は、図１３に示される。また、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴは、著しい抗痛覚過敏（５５±７％ＡＨ）をもたらすのに対して、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴは、抗痛覚過敏でなかった。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴで観察された抗痛覚過敏の大きさは、前の実験（例えば、実験１８）と一致した。
【０１９４】
実施例２０：３０ｍｇ／ｋｇおよび６０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰでのラットＦＣＡ誘発痛覚過敏アッセイにおける、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの抗痛覚過敏活性の比較
実験が、ＦＣＡ誘発機械痛覚過敏アッセイにおける（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴの効果についての用量−応答関係を広げるために行われた（図１４）。実施例１８と１９で示されるように、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴは、３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰまでの用量で活性ではなかった。したがって、ラットは、ＦＣＡの投与後２４時間に、滅菌水ビヒクル、３０、または６０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰで処置された。ラットは、ビヒクルまたは（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴでの処置の１時間後に、痛覚過敏について試験された。
【０１９５】
結果：
抗痛覚過敏活性の統計的に有意であるが、適度なレベルが、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの６０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ（４０±１３％ＡＨ）で処置されたラットで観察されたが、３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰでは、観察されなかった。（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴ鏡像異性体は、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴ鏡像異性体よりも、試験された用量範囲（化合物は、マレイン酸塩またはコハク酸塩のいずれかで投与された；投薬用量は、遊離塩基の量に基づく）に渡って、より大きな効力および効果を有した。
【０１９６】
実施例２１：うつ病のラット強制水泳試験における、アミトリプチリン、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴの評価
プロトコル：
雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（約２００ｇ）を１５分の練習水泳のために室温水のタンクに入れる。練習水泳の最初の５分間の５秒おきに、ラットは、静止（頭を水面から出しておくために必要な運動をしながら浮いている）、水泳（泳いで渡る動き）、またはよじ登り（活発に、水のタンクからよじ登ろうとする、前足の上方への動き）として評価される。ラットがこれらの反応の各々に費やした時間のパーセントが計算される。
【０１９７】
練習水泳の約２４時間後に、ラットは、ビヒクルまたは試験化合物で処置され、５分間水泳のためにタンクに入れられる。練習水泳の場合のように、ラットは、試験水泳の間、静止、水泳またはよじ登りにランク付けされ、これらの反応の各々に費やした時間のパーセントが計算される。データは、３つの行動の反応の各々に対して、ビヒクル処置後の行動反応を薬物処置後の行動反応と比較するために、事後分析での一元配置分散分析によって分析される。有意水準は、ｐ＜０．０５にセットされる。
【０１９８】
用量応答実験は、アミトリプチリン、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴおよび（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴを用いて、強制水泳試験でそれらの効力と有効性を測定するために３つの別々の実験で実施された。これらの実験において、調整水泳の２４時間後に、ラットは、ビヒクル、アミトリプチリン（３〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）、または（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴ（３〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）を投与され、１時間後、ラットは５分間水泳試験に曝された。水泳試験での静止、水泳、およびよじ登り（活発に、水泳タンクの側面を登ろうとすること）に費やされる時間のパーセントは、図１５Ａ、Ｂ、およびＣに示される。
【０１９９】
結果：
アミトリプチリンは、１０または３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰで処置されたラットで観察された著しい減少で、静止に費やされる時間を用量依存的に減少させた。ビヒクル処置ラットに関して、アミトリプチリンは、１０および３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰで処置されたラットでは、静止を３３および４７％それぞれ減少させた。水泳に費やされる時間の量に対応する有意な増加が、アミトリプチリンの１０ｍｇ／ｋｇ（８１％増加）または３０ｍｇ／ｋｇ（１４７％増加）処置後に観察された。アミトリプチリンは、よじ登りに費やした時間の量を変更しなかった（図１５Ａ）。
【０２００】
（−）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、アミトリプチリンと同様の程度の効果をもたらし、３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰでの処置後、静止において有意な減少（４７％減少）、および１０（６４％増加）または３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ（１０８％）で処置したラットで、水泳において有意な増加を証明した。アミトリプチリンの場合のように、（−）−Ｅ−１０−ＯＨ  ＮＴは、よじ登りに費やされる時間の量を変更しなかった（図１５Ｂ）。対照的に、（＋）−Ｅ−１０−ＯＨ−ＮＴは、３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰまでの用量での強制水泳試験では、活性ではなかった（図１５Ｃ）。
【０２０１】
様々な特定の実施形態が例示されて、説明されているが、本発明の精神よび範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解されるであろう。
【０２０２】
本出願で引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、および他の文書は、あたかも各々の個々の刊行物、特許、特許出願または他の文書が、すべての目的のために参照により取り込まれることが個々に示されているかのように同程度に、あらゆる目的のために全体として参照することにより本明細書に取り込まれる。参照により本明細書に取り込まれる参考文献は以下のものを含む：
米国特許第４，９４３，６３５号
Ａｌｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４（Ｓｕｐｐｌ  １）：１０３−６．
Ａｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ＆  Ａｎａｌｇｅｓｉａ  （Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）  ９０（２）：４００−４０７．
Ａｔｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｐａｉｎ  ８３（２）：１３７−１４５．
Ｂｅｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １：  Ｔｈｅ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ，，  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  （９ｔｈ  Ｅｄ．    ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ）．
Ｂｅｒｅｎｇｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｊ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：  Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ  ５：１６５−１６８．
Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４０（３）：２６１−２６７．
Ｂｅｒｔｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２４（１１）：１５６５−１５７３．
Ｂｈａｒｇａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ３０：２１９．
Ｂｉｌｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．  ２７７：４８４．
Ｂｕｓｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ａｎａｌｇｅｓｉｃｓ  （Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，  Ｖｅｒｌａｇ  ＧＭｂＨ  ＆  Ｃｏ．  ＫｇａＡ，  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）
Ｂｒｙｓｏｎ  ＆  Ｗｉｌｄｅ  １９９６，  Ｄｒｕｇｓ  ＆  Ａｇｉｎｇ  ８（６）：４５９−４７６．
Ｂｙｍａｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  １１（１２）：１４７５−１４９３．
Ｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ，  ２００３，  Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １：１１０６−１１１１．
Ｃｈａｕｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  Ｄｉｓｐｏｓ．  ２９：１１９６−１２００．
Ｃｈｉｒａｌ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ２００１  （２ｄ  ｅｄ．  Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，    Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）．
Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  ａｎｄ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ２０（６）：４４９−４５８．
Ｃｏｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １０９：５５５１−５５５３．
Ｃｏｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５６：４４２−４４４．
Ｃｏｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１４：１９０６−１９０８．
Ｃｏｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｃｈｅｍ．，  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ３７：１９８６−２０１２．
Ｃｒｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  （Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）  ５（７）：７３６−７４２．
Ｄａｈｌ−Ｐｕｕｓｔｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４５（６）：６５０−６５６．
ＤｅＨａｖｅｎ−Ｈｕｄｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．  ２８９：４９４−５０２．
Ｄｅｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０，  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６：１２４７−１２５９．
Ｄｅｓｈｍｕｋｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ７０（７）：６１４，  ６１６，  ６１８．
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ＩＶ，  Ｔｅｘｔ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ，  ２０００  （Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）．
Ｄｉｘｏｎ，  １９８０，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ２０：４４１−４６２．
Ｄｏｕｒｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １４７：４６９．
Ｄｕｑｕｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｏｒｇ．  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ．  Ｄｅｖ．  ７：２８５−２８８．
Ｅｄｅｌｂｒｏｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３９（２）：１５６−６２．
Ｅｖｅｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ２１：５９−６５．
Ｆｕｋａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２５６（３）（Ｐｔ．  ２）：Ｒ６０５−Ｒ６１１．
Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｐａｉｎ  １１６（１−２）：１０９−１１８．
Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ３７８（２）：１６１−１６８．
Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ  ８６（１）：５−１１．
Ｈａｍｏｎ  ＆  Ｂｏｕｒｇｏｉｎ，  ２００６，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １６（Ｓｕｐｐｌ．  ５）：Ｓ６２５−Ｓ６３２．
Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ３５：６６３１−６６３４．
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｃｅｎｔｅｒ．ｏｒｇ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｐｕｌｂｉｃｈｅａｌｔｈ／ｐｕｂｌｉｃｈｅａｌｔｈ−０７．ｈｔｍ．
Ｈｙｔｔｅｌ，  １９８０，  Ｊ．  Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ｅｔ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ４７：５３−５７．
Ｉｎｇｅｌｍａｎ−Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２０（８）：３４２−３４９．
Ｉｔｓｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ８：４６９−４７０．
Ｊａｉｎ，  ２０００，  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ  ５（２）：２４１−２５７．
Ｋａｌｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｃｉｃｏｌｏｇｙ  ６８：１４０−１４３．
Ｋａｕｐｐｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ５９：４７７−４８５．
Ｋｈａｗａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ７３（４）：３５１−３，  ３５６−６１．
Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６，  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １０（５）：９４９−９５８．
Ｋｒｏｅｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２８（３）：５１９−５２６．
ＬａＢｕｄａ  ＆  Ｌｉｔｔｌｅ，  ２００５，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４４：１７５−１８１．
Ｌａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍｉｃａ  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ，  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｂ：  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂ３７（４）：３３５−３４０．
Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３２０（３）：１１７８−１１８５．
Ｎｉｃｈｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｐａｉｎ  ６９：３１７．
Ｍａｏ    ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｐａｉｎ  ６７：３６１．
Ｍａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１ａ，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５０（２）：３７６−３８４．
Ｍａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１ｂ，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５０（２）：３８５−３９１．
Ｍａｘ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３２６（１９）：１２５０−１２５６．
Ｍｅｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １０（１９）（Ｐｔ．  １）：１０９７−１１０９．
Ｍｉｌｌａｎ  ＆  Ｃｏｌｐａｅｒｔ，  １９９１，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３９：３４２−３４６．
Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ６８（１）：６４−６７．
Ｎｏｒｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７ａ，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４１（１）：９７−１０２．
Ｎｏｒｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７ｂ，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４２（１）：１０−１９．
Ｎｏｒｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １０３（３）：２８７−２９０．
Ｎｏｒｄｉｎ  ＆  Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎ，  １９９５，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ２８（１）：２６−４０．
Ｏｎｇｉｏｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ９２（４）：９６８−９７６．
Ｐａｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ７０：１５０−１６０．
Ｐｅａｒｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４６（１１）：２０１７−２０２２．
Ｐｅｒｔｏｖａａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １７９：３２３−３２８．
Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １９９９  （Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ）．
Ｑｕａｌｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ，．  １９９３，  Ｓｙｎｌｅｔｔ  １２：９２９−９３０．
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００５  （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）．
Ｒｅｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９７３，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３８（４）：７００−７０３．
Ｒｉｃｈｅｌｓｏｎ，  ２００１，  Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ７６（５）：５１１−５２７．
Ｓａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７２：８３−８８．
Ｓａｋａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４４１（１−２）：４０３−４０７．
Ｓｉｎｄｒｕｐ  ＆  Ｊｅｎｓｅｎ，  １９９９，  Ｐａｉｎ  ８３（３）：３８９−４００．
Ｔａｇａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４７：２４０５−２４０８．
Ｖｅｎｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １２：１５１−１５８．
Ｖｉｒｔａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ａｒｃｈ．  Ｉｎｔ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ．  Ｔｈｅｒ．  ２９７：１９０-２０４．
Ｗａｅｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８４，  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３５（１３）：１３７９−１３８３．
Ｗｉｒｓｈｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ６０（６）：３５８−３６３．
Ｗｉｔｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５１２（１−３）：５９−６６．
Ｙａｎａｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ５１：２２１−２２３．
Ｚａｒｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  １５：１６４７−１６５０．
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
2010526075.tif 000025
【図１５Ｂ】
2010526075.tif 000026
【図１５Ｃ】
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【図３】
2010526075.tif 000028
【図１０】
2010526075.tif 000029
【図１１】
2010526075.tif 000030
【国際調査報告】
2010526075.tif 000031