(57)【要約】  本発明は、ペプチドのような生物学的活性ベクターの放射性フッ素化方法であって、式（II）の化合物又はその塩を［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させることで式（Ｉ）の化合物又はその塩を得る段階を含んでなる方法を提供する。かかる方法は温和な反応条件下で実施できると共に、化学選択性の向上した標識アプローチを提供する。また、放射性フッ素化方法で使用するための新規試薬及びこうして得られる18Ｆ標識ベクターの使用も提供される。【選択図】化１、化２
2010532321.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射性フッ素化方法であって、下記式（II）の化合物又はその塩を［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させることで下記式（Ｉ）の化合物又はその塩を得る段階、次いで
（ｉ）式（Ｉ）の化合物を精製する任意段階、及び／又は
（ii）式（Ｉ）の化合物を製剤化する任意段階
を含んでなる方法。
【化１】
2010532321.tif 000027
【化２】
2010532321.tif 000028
【請求項２】
ベクター（ＶＥＣＴＯＲ）がペプチド、タンパク質、ホルモン、多糖、オリゴヌクレオチド、抗体フラグメント、細胞、細菌、ウイルス又は薬物様小分子である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ベクターがＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
ベクターが次式のフラグメントを含む、請求項３記載の方法。
【化３】
2010532321.tif 000029
【請求項５】
ベクターが下記式（Ａ）を有する、請求項４記載の方法。
【化４】
2010532321.tif 000030
（式中、Ｘ7は−ＮＨ2又は次式の基である。
【化５】
2010532321.tif 000031
（式中、ａは１〜１０の整数であり、好ましくはａは１である。））
【請求項６】
クリプタンド（ＣＲＹＰＴＡＮＤ）が下記式（Ｃ）を有する、請求項１ないし請求項５のいずれか１項に記載の方法。
【化６】
2010532321.tif 000032
（式中、
Ｒ１及びＲ２は下記のものから独立に選択され、
【化７】
2010532321.tif 000033
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は下記のものから独立に選択される。）
【化８】
2010532321.tif 000034
【請求項７】
クリプタンドが下記のものから選択される、請求項６記載の方法。
【化９】
2010532321.tif 000035
【請求項８】
請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義された、式（Ｉ）若しくは式（II）の化合物又はその塩。
【請求項９】
請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義された式（Ｉ）の化合物又はその塩及び生理学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を含んでなる放射性医薬品製剤。
【請求項１０】
医学で使用するための、さらに詳しくは好適にはＰＥＴによるインビボイメージング方法で使用するための、請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義された式（Ｉ）の化合物又はその塩。
【請求項１１】
ヒト又は動物の身体の画像を生成する方法であって、請求項９記載の放射性医薬品を前記身体に投与する段階、及びＰＥＴを用いて前記放射性医薬品が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含んでなる方法。
【請求項１２】
下記式（III）の化合物。
【化１０】
2010532321.tif 000036
（式中、ＲIIIはアミン、カルボン酸、活性化カルボン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、マレイミド及びα−ハロカルボニルから適宜に選択される反応基であり、ＬＩＮＫＥＲ’は請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義されたリンカー（ＬＩＮＫＥＲ）の一部であり、ＣＲＹＰＴＡＮＤは請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義された通りである。）
【請求項１３】
医学で使用するための、例えば患者灌流イメージング剤として使用するための、下記式（Ｖ）の化合物又はその塩。
【化１１】
2010532321.tif 000037
（式中、ＣＲＹＰＴＡＮＤは請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義された通りである。）
【請求項１４】
イメージング方法であって、請求項１３に定義された式（Ｖ）の化合物又はその塩の検出可能な量を被験体に投与する段階、及びＰＥＴを用いて被験体のイメージングを行う段階を含んでなる方法。
【請求項１５】
下記式（VI）の化合物。
【化１２】
2010532321.tif 000038
（式中、ＲIIIはアミン、カルボン酸、活性化カルボン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、マレイミド及びα−ハロカルボニルから適宜に選択される反応基であり、ＬＩＮＫＥＲ’は請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義されたリンカーの一部であり、ＣＲＹＰＴＡＮＤは請求項１ないし請求項７のいずれか１項に定義された通りである。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特にペプチドのような生物学的ベクターの［18Ｆ］フッ素化のための方法及び試薬に関する。こうして得られる18Ｆ標識ベクターは、放射性医薬品として、具体的には陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）で使用するための放射性医薬品として有用である。
【背景技術】
【０００２】
放射性標識された生物学的ベクターを診断イメージングのために応用することは、核医学において重要性を増しつつある。特定の細胞タイプと選択的に相互作用する生物学的活性分子は、標的組織に放射能を送達するために有用である。例えば、放射性標識された生物学的ベクターは、診断イメージング、臨床的研究及び放射線療法のため、腫瘍、梗塞巣部及び感染組織に放射性核種を送達するための大きな可能性を有している。１１０分の半減期を有する18Ｆは、多くのレセプターイメージング調査のために最適な陽電子放出核種である。したがって、18Ｆ標識された生物学的ベクターは、多種多様の病気を定量的に検出して特性決定するためにＰＥＴで利用できるので大きな臨床的可能性を有している。
【０００３】
ある種の18Ｆ標識された生物学的ベクターに関する難点の１つは、既存の18Ｆ標識剤が調製するのに多くの時間を要することである。例えば、18Ｆによるペプチド及びタンパク質の効率的な標識は、主として適当な補欠分子族を用いることで達成される。文献中には、Ｎ−スクシンイミジル−４−［18Ｆ］フルオロベンゾエート、ｍ−マレイミド−Ｎ−（ｐ−［18Ｆ］フルオロベンジル）ベンズアミド、Ｎ−（ｐ−［18Ｆ］フルオロフェニル）マレイミド及び４−［18Ｆ］フルオロフェナシルブロミドを含む数種のかかる補欠分子族が提唱されている。補欠分子族を用いる多くの標識方法は、多数の放射性標識生成物を生じる。例えば、３つのリシン残基を含むペプチドは、いずれも標識補欠分子族に対して等しく反応性をもった３つのアミン官能基を有している。しばしば「二段階」アプローチといわれるこのアプローチは、放射性標識された補欠分子族を調製し、次いで第２の段階で生物学的ベクターに結合しなければならないので、やはり多くの時間を要することがある。したがって、18Ｆを生物学的ベクター（特にペプチド及びタンパク質）中に温和な条件下で迅速かつ化学選択的に導入して、高い放射化学収率及び純度で18Ｆ標識生成物を得ることができる18Ｆ標識方法に対するニーズが今なお存在している。さらに、臨床現場での放射性医薬品の調製を容易にするための自動化に適した上記のような方法に対するニーズも存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／０９７７１３号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００５／０８２４２５号パンフレット
【特許文献３】欧州特許出願公開第０３２１３５３号明細書
【特許文献４】国際公開第２００７／１３８４０８号パンフレット
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｄａｎｉｅｌ Ｇ．Ｒｉｖｅｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２８，７１２２−７１２３，２００６
【非特許文献２】Ｂｅｒｎａｒｄ Ｄｉｅｔｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，７９，５６８−５８７，１９９６
【非特許文献３】Ｃｈｒｉｓｔｏｓ Ａ．Ｉｌｉｏｕｄｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２６，１２３９５−１２４０２，２００４
【非特許文献４】Ｂｉｎｇ−Ｇｕａｎｇ Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００４，２２０６−２２０７，２００４
【発明の概要】
【０００６】
したがって本発明は、放射性フッ素化方法であって、下記式（II）の化合物又はその塩を［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させることで下記式（Ｉ）の化合物又はその塩を得る段階、次いで
（ｉ）式（Ｉ）の化合物を精製する任意段階、及び／又は
（ii）式（Ｉ）の化合物を製剤化する任意段階
を含んでなる方法を提供する。
【０００７】
【化１】
2010532321.tif 000003
【０００８】
【化２】
2010532321.tif 000004
【０００９】
本発明は、式（II）の前駆体の合成に際して標識の正確な導入部位が予め選択される化学選択性の向上した放射性標識アプローチを提供する。したがって、この方法は化学選択的であり、それの用途は多種多様の生物学的ベクターに対して汎用的であると考えられる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書で用いる「ベクター（ＶＥＣＴＯＲ）」という用語は、放射性医薬品を生成するための放射性標識に適した生体分子、例えばペプチド、タンパク質、ホルモン、多糖、オリゴヌクレオチド、抗体フラグメント、細胞、細菌、ウイルス又は薬物様小分子を意味する。
【００１１】
式（Ｉ）及び式（II）中並びに本発明の他の態様では、特記しない限り、特に好適なベクターはペプチド、タンパク質及び薬物様小分子であり、本発明の一態様では、その生物学的機能のために血液脳関門を横切る必要のないベクターである。
【００１２】
本発明でベクターとして使用するための好適なペプチドには、オクトレオチドのようなソマトスタチン類似体、ボンベシン、血管作用性小腸ペプチド、走化性ペプチド類似体、α−メラノサイト刺激ホルモン、ニューロテンシン、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、ヒトプロインスリン結合ペプチド、インスリン、エンドセリン、アンギオテンシン、ブラジキニン、エンドスタチン、アンギオスタチン、グルタチオン、カルシトニン、マガイニンＩ及びII、黄体形成ホルモン放出ホルモン、ガストリン、コレシストキニン、サブスタンスＰ、バソプレッシン、ホルミル−ノルロイシル−ロイシル−フェニルアラニル−ノルロイシル−チロシル−リシン、アネキシンＶ類似体、バソアクティブプロテイン−１（ＶＡＰ−１）ペプチド、カスパーゼペプチド基質がある。本発明でベクターとして使用するための好ましいペプチドは、国際公開第０１／７７４１５号及び同第０３／００６４９１号に記載されているもののようなＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド及びその類似体、好ましくは次式のフラグメントを含むペプチドである。
【００１３】
【化３】
2010532321.tif 000005
【００１４】
さらに好ましくは、下記式（Ａ）のペプチドである。
【００１５】
【化４】
2010532321.tif 000006
【００１６】
式中、Ｘ7は−ＮＨ2又は次式の基である。
【００１７】
【化５】
2010532321.tif 000007
【００１８】
式中、ａは１〜１０の整数であり、好ましくはａは１である。
【００１９】
式（II）及び式（Ｉ）中並びに本発明の他の態様では、リンカー（ＬＩＮＫＥＲ）は１〜１０のヘテロ原子（例えば、酸素又は窒素）を任意に含むＣ1-50ヒドロカルビル基であり、好ましい排泄特性などの良好なインビボ薬物動態が得られるように選択できる。「ヒドロカルビル基」という用語は炭素及び水素からなる有機置換基を意味し、かかる基は飽和部分、不飽和部分又は芳香族部分を含み得る。好適なリンカー基には、アルキル鎖、アルケニル鎖、アルキニル鎖、芳香環、多核芳香環及びヘテロ芳香環（例えば、トリアゾール）、並びにエチレングリコール、アミノ酸又は炭水化物サブユニットを含むポリマーがあり、これらはいずれも例えば１以上のエーテル、チオエーテル、スルホンアミド又はアミド官能基で任意に置換されていてもよい。
【００２０】
本明細書で用いる「クリプタンド（ＣＲＹＰＴＡＮＤ）」という用語は、フッ化物陰イオン用の二環式又は多環式多座配位子を意味する。フッ化物イオンのような陰イオンを結合するための好適なクリプタンドは、Ｊ．Ｗ．Ｓｔｅｅｄ，Ｊ．Ｌ．Ａｔｗｏｏｄ ｉｎ Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００），ｐｐ１９８−２４９、Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｎｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．Ａ Ｂｉａｎｃｈｉ，Ｋ Ｂｏｗｍａｎｎ−Ｊａｍｅｓ，Ｅ．Ｇａｒｃｉａ−Ｅｓｐａｎａ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９７）並びにＰ．Ｄ．Ｂｅｅｒ，Ｐ．Ａ．Ｇａｌｅ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．２００１，１１３，５０２及びＡｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００１，４０，４８６中に総説されている。
【００２１】
本明細書で用いる好適なクリプタンドには、下記式（Ｃ）のものがある。
【００２２】
【化６】
2010532321.tif 000008
【００２３】
式中、
Ｒ１及びＲ２は下記のものから独立に選択され、
【００２４】
【化７】
2010532321.tif 000009
【００２５】
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は下記のものから独立に選択される。
【００２６】
【化８】
2010532321.tif 000010
【００２７】
本発明で有用な好ましいクリプタンドは、下記のものから選択できる。
【００２８】
【化９】
2010532321.tif 000011
【００２９】
或いは、フッ化物イオンに対する高い結合定数、フッ化物イオン結合複合体の高い安定性、及び他の陰イオンに比べて高いフッ化物イオン選択性のような望ましい性質を有するように選択できる。本発明の一態様では、クリプタンドは正電荷を有する。
【００３０】
式（Ｉ）及び式（II）の化合物では、クリプタンドはリンカー基に結合される。結合点はクリプタンド中の窒素又は炭素原子でよい。即ち、リンカー「Ｌ」への結合点は、下記のようにＲ１又はＲ２基に存在するか、或いは
【００３１】
【化１０】
2010532321.tif 000012
【００３２】
下記のようにＲ３、Ｒ４又はＲ５に存在する。
【００３３】
【化１１】
2010532321.tif 000013
【００３４】
本発明に係る好適な塩には、（ｉ）鉱酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸）から導かれるもの並びに有機酸（例えば、酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸）から導かれるもののような、生理学的に許容される酸付加塩、並びに（ii）アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩）、有機塩基（例えば、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルホリン）との塩、及びアミノ酸（例えば、アルギニン及びリシン）との塩のような、生理学的に許容される塩基塩がある。
【００３５】
本明細書で用いる「［18Ｆ］フッ化物イオン源」という用語は、反応性形態の［18Ｆ］フッ化物イオンを反応混合物に送達し得る試薬を意味する。［18Ｆ］フッ化物イオンは、簡便にはサイクロトロン内で（ｐ，ｎ）核反応を用いて18Ｏ富化水から製造される（Ｇｕｉｌｌａｕｍｅ ｅｔ ａｌ，Ａｐｐｌ．Ｒａｄｉａｔ．Ｉｓｏｔ．４２（１９９１）７４９−７６２）。例えば、［18Ｆ］フッ化物イオン源はサイクロトロンからの標的水中の［18Ｆ］フッ化物イオンであってもよいし、或いは標的水から調製した［18Ｆ］フッ化物塩であってもよい。かかる［18Ｆ］フッ化物塩には、例えば、適当な溶媒（例えば、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、スルホラン、Ｍ−メチルピロリジノン又はこれらのいずれかの水性混合物）中における［18Ｆ］フッ化ナトリウム、［18Ｆ］フッ化カリウム、［18Ｆ］フッ化セシウム、［18Ｆ］フッ化テトラアルキルアンモニウム及び［18Ｆ］フッ化テトラアルキルホスホニウムがある。
【００３６】
式（II）の化合物と［18Ｆ］フッ化物イオン源との反応は、適当な溶媒（例えば、「［18Ｆ］フッ化物イオン源」用の溶媒として上述したもの）中において１０〜５０℃のような極端でない温度、最も好ましくは周囲温度で実施するか、或いは後述のような固体支持反応として実施できる。多くの生物学的ベクターは高温で不安定であるので、周囲温度で［18Ｆ］フッ化物イオンを生物学的ベクター中に導入できることは本発明の特に有利な点である。式（II）の化合物中のクリプタンドが一定の正電荷を有していなければ、［18Ｆ］フッ化物イオン源との反応は好適には５未満のｐＨで実施されるが、これは塩酸又は硫酸のような酸の添加によって達成される。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物の製造後、例えば、過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンの除去、溶媒の除去、及び式（II）の未反応化合物からの分離を含み得る精製段階（ｉ）が必要となる場合がある。過剰の［18Ｆ］フッ化物イオンは、（例えば、ＢＩＯ−ＲＡＤ ＡＧ １−Ｘ８又はＷａｔｅｒｓ ＱＭＡを用いる）イオン交換クロマトグラフィー或いは（例えば、アルミナを用いる）固相抽出のような通常の技法によって式（Ｉ）の化合物の溶液から除去できる。過剰の溶媒は、真空中において高温で蒸発させること、或いは溶液の上方に不活性ガス（例えば、窒素又はアルゴン）の流れを通すことのような通常の技法によって除去できる。別法として、式（Ｉ）の化合物を固相（例えば、逆相吸着剤（例えば、Ｃ5-18誘導体化シリカ）のカートリッジ）上に捕捉しながら、不要の過剰試薬及び副生物を溶出させ、次いで式（Ｉ）の化合物を固相から精製された状態で溶出させることができる。式（II）の未反応化合物からの式（Ｉ）の化合物の分離は、例えば、式（II）の化合物への［18Ｆ］フッ化物イオンの結合によって引き起こされる電荷の減少、したがって親和性の変化を利用するアニオン性固相（例えば、マクロ孔質スルホン化ポリスチレン樹脂）上での固相抽出のような通常の技法によって実施できる。
【００３８】
一実施形態では、ベクターを介して式（II）の化合物をポリマービーズ又はコーティング（例えば、トリチル又はクロロトリチル樹脂）のような固体支持体に共有結合させることができる。この態様では、放射性フッ素化反応の過剰試薬及び副生物は洗浄によってポリマー結合生成物から分離できる。固体支持体からの式（II）の化合物の切断は、固相化学の通常の技法によって（例えば、Ｆｌｏｒｅｎｃｉｏ Ｚａｒａｇｏｚａ Ｄｏｒｗａｌｄ，“Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｎ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ；Ｓｕｐｐｏｒｔｓ，Ｌｉｎｋｅｒ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ”，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ（２０００）に記載されているようにして）実施できる。このアプローチは、ベクターがペプチド又はタンパク質である式（Ｉ）の化合物の自動化製造のため特に好適である。
【００３９】
式（Ｉ）の化合物又はその塩の製造後、それを被験体への投与に適した放射性医薬品として製剤化することが適切な場合がある。かかる製剤化段階（ii）は、１０％以下の適当な有機溶媒（例えば、エタノール）を含み得る無菌等張食塩水又はリン酸塩緩衝液のような適当な緩衝液に溶解することで式（Ｉ）の化合物又はその塩の水溶液を調製することを含む場合がある。安定剤（例えば、アスコルビン酸）のような他の添加剤を製剤に添加することもできる。
【００４０】
式（II）の化合物は、下記式（III）の化合物を下記式（IV）の化合物と反応させることで製造できる。
【００４１】
【化１２】
2010532321.tif 000014
【００４２】
【化１３】
2010532321.tif 000015
【００４３】
式中、ＶＥＣＴＯＲ及びＣＲＹＰＴＡＮＤは上記に定義された通りであり、ＬＩＮＫＥＲ’は上記に定義されたリンカーの一部であり、ＲIII及びＲIVは互いに共有結合することでリンカーの形成を完成し得る反応基である。好適には、ＲIII及びＲIVの一方がアミンであり、他方がカルボン酸又は活性化カルボン酸エステル、イソシアネート或いはイソチオシアネートである結果、式（III）及び式（IV）の化合物を単純なアミン反応で結合することができる。好適な活性化カルボン酸エステルには、次式のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル及びＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステルがある。
【００４４】
【化１４】
2010532321.tif 000016
【００４５】
別法として、ＲIII及びＲIVの一方がチオールであり、他方がチオールに対して反応性を有する基（例えば、マレイミド又はα−ハロカルボニル）であってもよい。
【００４６】
当業者には自明の通り、式（II）の化合物への転化時における副反応を防止又は低減するため、式（III）の化合物中のクリプタンドは露出官能基（例えば、アミノ基）上に保護基を有することが望ましい場合もある。これらの場合、保護基は問題の官能基に対して常用されるもの（例えば、アミンに対するｔｅｒｔ−ブチルカルバメート）から選択される。他の好適な保護基は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．中に見出すことができ、これにはさらにかかる保護基を導入及び除去するための方法も記載されている。
【００４７】
式（II）のある種の化合物は、ＲIIIがアミノ基又はカルボン酸基である式（III）の化合物を、ＲIVがそれぞれカルボン酸基又はアミン基である式（IV）の化合物と反応させることで製造できる。これらの場合、任意には２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）又はＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアンモニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）のようなインサイチュ活性化剤を用いることで、式（II）の化合物を式（IV）の化合物に結合できる。例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液及び塩基（例えば、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン）のような標準的条件が使用される。別法として、式（IV）の化合物中のＲIVがチオール基である場合、これをＲIIIがマレイミド又はα−ハロカルボニルのようなチオール反応基である化合物（III）と反応させることができる。この反応は、ｐＨ緩衝液又は有機溶媒中で実施できる。式（II）を有する生成物化合物は、分取高速液体クロマトグラフィーによって精製できよう。
【００４８】
ベクターがペプチド又はタンパク質である式（II）の化合物は、例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．；“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”；ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９中に記載されている固相ペプチド合成法のような標準的ペプチド合成法によって製造できる。式（II）の化合物中へのリンカー及びクリプタンドの導入は、ペプチドのＮ末端又はＣ末端の反応、或いはペプチド配列中に含まれる何らかの他の官能基であって、それの修飾がベクターの結合特性に影響を及ぼさない官能基との反応によって達成できる。上述した式（III）の化合物は、好ましくはペプチドのアミン官能基（ＲIV）とＲIIIが活性化酸である式（III）の化合物との反応、或いは別法としてペプチドの酸官能基（ＲIV）とＲIIIがアミンである式（III）の化合物との反応による安定なアミド結合の形成によって導入される。いずれの場合にも、式（III）の化合物はペプチド合成（例えば、固相ペプチド合成）の実施中又は実施後に導入できる。ＲIII又はＲIVのいずれかが酸である場合、式（III）及び式（IV）の化合物の反応は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）又はＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアンモニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）のようなインサイチュ活性化剤を用いて実施できる。本発明のかかる特定の態様の一実施形態を下記スキーム１に示す。
【００４９】
【化１５】
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【００５０】
クリプタンドは、米国特許出願公開第２００４／０２６７００９号明細書、Ｂｅｒｎａｒｄ Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｊｅａｎ−Ｍａｒｉｅ Ｌｅｈｎ，Ｊｅａｎ Ｇｕｉｌｈｅｍ ａｎｄ Ｃｌａｕｄｉｎｅ Ｐａｓｃａｒｄ，Ｔｅｔｒｅｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８９，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．３１，ｐｐ ４１２５−４１２８、Ｐａｕｌ Ｈ．Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，５８，７９３９−７９４１、Ｊｏｎａｔｈａｎ Ｗ．Ｓｔｅｅｄ ｅｔ ａｌ，２００４，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１２６，１２３９５−１２４０２、及びＢｉｎｇ−ｇｕａｎｇ Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，２００４，２２０６−２２０７に記載されているようにして合成できる。
【００５１】
式（III）の化合物の合成は、出発原料を変更しながら非誘導体化クリプタンドに関して上記の参考文献中に記載されているようにして、或いはそれに続く化学反応（例えば、下記実施例に例示されているようなクリプタンドの第二アミン基のアルキル化）を行うことで達成できる。式（III）の化合物はまた、下記スキーム２〜５に示されるようにして製造することもできる。式中、Ｌ及びＲIIIは式（III）の化合物に関して上記に定義された通りである。
【００５２】
【化１６】
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【００５３】
【化１７】
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【００５４】
本発明のさらに別の態様として、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物又はその塩が提供される。これらの化合物はＰＥＴトレーサーとして有用性を有する。ベクターがペプチド（好適にはＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体、例えば国際公開第０１／７７１４５号及び同第０３／００６４９１号に記載されたペプチド）である式（Ｉ）の化合物が好ましい。本発明のこの態様における特に好ましいペプチドは、式（Ｉ）の化合物に関して上記に定義されたような式（Ａ）のペプチドである。
【００５５】
式（Ｉ）の化合物又はその塩は、ＰＥＴイメージングのため、所望の信号を得るのに十分な量で患者に投与すればよい。通常、体重７０ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍＣｉ、好ましくは０．１〜５０ｍＣｉの典型的な放射性核種投与量はで通常は十分であるが、正確な投与量は実施すべきイメージング方法及び式（Ｉ）の化合物又はその塩の組成に依存する。
【００５６】
したがって、式（Ｉ）の化合物又はその塩は、完全に当業者の技術常識に属するやり方で、生理学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を用いて投与用の放射性医薬品として製剤化すればよい。例えば、１種以上の薬学的に許容される賦形剤を任意に添加した式（Ｉ）の化合物又はその塩を水性媒質中に懸濁又は溶解し、次いで得られた溶液又は懸濁液を滅菌すればよい。かかる放射性医薬品は本発明のさらに別の態様をなす。
【００５７】
さらに別の態様から見れば、本発明は、医学で使用するための、さらに詳しくは化合物をヒト又は動物の身体に投与する段階及び前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含むインビボイメージング方法（好適にはＰＥＴ）で使用するための、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物又はその塩を提供する。
【００５８】
さらに別の態様から見れば、本発明は、ヒト又は動物の身体の画像を生成する方法であって、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物又はその塩を含む放射性医薬品を前記身体（例えば、脈管系中）に投与する段階、及びＰＥＴを用いて前記放射性医薬品が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含んでなる方法を提供する。さらに別の態様では、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物又はその塩を含む放射性医薬品を予め投与した身体（好ましくは人体）のインビボイメージング（好適にはＰＥＴイメージング）のための方法であって、インビボイメージング技法（好適にはＰＥＴ）によって前記放射性医薬品の取込みを検出する段階を含んでなる方法が提供される。
【００５９】
さらに別の態様では、本発明は、放射性標識前駆体としての用途を有する、上記に定義されたような式（II）の化合物又はその塩を提供する。
【００６０】
別の態様では、本発明は、例えば上述した方法によって放射性フッ素化用のベクターを官能化するために有用な式（III）の新規合成中間体を提供する。したがって、下記式（III）の化合物が提供される。
【００６１】
【化１８】
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【００６２】
式中、ＲIIIは上記に定義された通りであって、好ましくはアミン、カルボン酸、活性化カルボン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、マレイミド及びα−ハロカルボニルから選択され、ＬＩＮＫＥＲ’及びＣＲＹＰＴＡＮＤは上記に定義された通りである。
【００６３】
好ましい式（III）の化合物には下記のものがある。
【００６４】
【化１９】
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【００６５】
式中、Ｌは上記に定義されたＬＩＮＫＥＲ’であり、ＲIIIは上記に定義された通りであって、好ましくはアミン、カルボン酸、活性化カルボン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、マレイミド及びα−ハロカルボニルから選択される。
【００６６】
さらに好ましい式（III）の化合物には下記のものがある。
【００６７】
【化２０】
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【００６８】
式中、Ｌは上記に定義されたＬＩＮＫＥＲ’であり、ＲIIIは上記に定義されたような反応基あって、好ましくはアミン、カルボン酸、活性化カルボン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、マレイミド及びα−ハロカルボニルから選択される。
【００６９】
本発明のさらに別の態様では、例えば灌流イメージング剤として医学で使用するための下記式（Ｖ）の化合物又はその塩が提供される。
【００７０】
【化２１】
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【００７１】
式中、ＣＲＹＰＴＡＮＤは上記に定義された通りである。
【００７２】
このような目的のための好ましい式（Ｖ）の化合物は、上記に定義されたような好ましいクリプタンドを含んでいる。このような用途のためには、式（Ｖ）の化合物又はその塩は、好適には式（Ｉ）の化合物に関して上記に記載されたような放射性医薬品として製剤化される。
【００７３】
別の態様では、イメージング方法であって、上記に定義されたような式（Ｖ）の化合物又はその塩の検出可能な量を被験体に投与する段階、及びＰＥＴを用いて被験体のイメージングを行う段階を含んでなる方法が提供される。ＰＥＴを用いる灌流イメージング方法は、Ｓｗａｉｇｅｒ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．（１９９４）６９３−８及びその中の参考文献に記載されている。
【００７４】
ある種の状況下では、ベクターの放射性フッ素化用の補欠分子族を製造することが望ましい場合がある。したがって、本発明のさらに別の態様では、下記式（VI）の化合物が提供される。
【００７５】
【化２２】
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【００７６】
式中、ＬＩＮＫＥＲ’、ＣＲＹＰＴＡＮＤ及びＲIIIは、式（III）の化合物に関して上記に定義された通りである。
【００７７】
本発明のさらに別の態様では、式（III）の合成中間体及び任意には状況に定義されたような式（IV）の化合物を含む、放射性フッ素化化合物の調製用キットが提供される。
【００７８】
キットの使用に際しては、上述した方法を用いて式（III）の化合物を式（IV）の化合物と反応させること対応する式（II）の化合物を生成し、次いでそれを［18Ｆ］フッ化物イオン源と反応させることで式（Ｉ）の放射性フッ素化ベクターを生成する。任意には、上記に記載したようにして式（Ｉ）の化合物を精製及び／又は製剤化することができる。
【実施例】
【００７９】
以下の実施例によって本発明を例示するが、実施例中では下記の略語を用いる。
ＰｒiＯＨ：イソプロパノール
Ｅｔ3Ｎ：トリエチルアミン
Ｒ．Ｔ．：室温
ＭｅＯＨ：メタノール
（ｔ）ＢＯＣ：（第三）ブトキシカルボニル
Ｌ：リットル
ｍＬ：ミリリットル
ｈｒ（ｓ）：時間
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析法
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
実施例１
実施例１：化合物４の合成
【００８０】
【化２３】
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【００８１】
実施例１(ｉ)：化合物１の合成
機械的撹拌機を備えた１Ｌの三つ口丸底フラスコに、１６．７ｍＬの９８％トリプロピルアミン及び０．３３Ｌの９９％ｉ−ＰｒＯＨを仕込み、ドライアイス−イソプロパノール浴中で−７８℃に冷却した。この混合物に、１５．０ｇの４０％水性グリオキサール（０．１０３モル）をイソプロパノールで８３ｍＬに希釈した溶液及び１０．０ｇ（０．０．６８３モル）の９６％トリス（２−アミノエチル）アミン（「トレン」）を８３ｍＬに希釈した溶液を激しく撹拌しながら２時間かけて同時に添加した。（グリオキサールの初期濃度＝１．２４Ｍ、トレンの初期濃度＝０．８２Ｍ）。次いで、反応混合物を一晩放温し、６０℃に短時間だけ加温して化合物２の生成を確実に完了させた。その表面に窒素ガスを吹き付けながら、室温に冷却した。真空下で溶媒を除去し、クロロホルム（２５０ｍＬ）を添加した。こうして得られたスラリーを砂で濾過し、真空下で濃縮することで、橙色の固体（５．２ｇ、４３％）を得た。
【００８２】
実施例１(ii)：化合物２の合成
化合物１（４ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）に溶解し、氷水浴上で冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（８ｇ、２０８ｍｍｏｌ）を３０分かけて少しずつ添加した。スティフィング（ｓｔｉｆｆｉｎｇ）を行いながら混合物を１６時間放置して室温まで上昇させた。溶液を真空下で濃縮乾固することでオフホワイトの固体を得た。固体を水（１００ｍＬ）に溶解し、６０℃で１／２時間加熱すると、その間に混合物中に油状物質が生じた。ＴＨＦ（１００ｍＬ）を添加し、有機層を分離した。水性層を再びＴＨＦ（１００ｍＬ）で抽出した。抽出液を合わせ、相分離カートリッジで濾過し、真空下で濃縮乾固した。油状固体をＴＨＦ（２０ｍＬ）に再溶解し、水（１５ｍＬ）を添加した。溶液をゆっくりと濃縮すると白色の固体が晶出したが、これを濾過によって集め、氷冷水性で洗浄し、高真空下で乾燥した（１．６ｇ、３８％）。
【００８３】
実施例１(iii)：化合物３の合成
化合物２（０．１ｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１．１ｅｑ、０．２９７ｍｍｏｌ、０．０４１ｇ）を添加した。反応物から約０．１ｍＬの容量を採取して０．１％ギ酸水溶液：アセトニトリル（１：１）１０ｍＬで希釈することによりＨＰＬＣ−質量分析法で反応を追跡しながら、臭化アルキル（１．１ｅｑ、０．２９７ｍｍｏｌ、８１．７ｍｇ）を少しずつ添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。さらに０．２５当量の臭化アルキルを添加し、反応物をさらに１６時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮乾固した。これをそれ以上精製することなく次の段階で使用した。
【００８４】
実施例１(iv)：化合物４の合成
粗化合物３を乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、ピリジン（２ｍＬ）を添加し、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート（１ｇ、４．５８ｍｍｏｌ、１７ｅｑ）を添加した。混合物を窒素下で７０℃で１６時間加熱した。粗生成物を薄層クロマトグラフィー（シリカゲルプレートを１０％メタノール／ＤＣＭで溶出）及びＬＣＭＳによって分析した。薄層クロマトグラフィーは、０．２及び０．５のＲｆ値を有する２つの主スポット並びに若干の小スポットを示した。混合物を、１００％ペトロール４０〜６０ないし１００％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＮＭＲ及びＬＣＭＳにより、第２の主ピークは所望のペンタ−ＢＯＣ生成物であることが判明した（５０ｍｇ）。
【００８５】
実施例２
【００８６】
【化２４】
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【００８７】
実施例２(ｉ)：化合物５の合成
化合物２（０．１ｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、臭化アルキル（１．１ｅｑ、０．２９７ｍｍｏｌ、８１．０７ｍｇ）の乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を５分間かけて添加した。溶液を室温で１６時間撹拌した。ＤＭＦを減圧下で除去し、白色の固体を最小量の水／メタノール（１：１）に溶解した。分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８（２） １５０×２１．２、１０分で５〜７０％のアセトニトリル／水）は８〜８．５分のｔrを有する主ピークを与えたが、これを凍結乾燥して白色の固体（１５ｍｇ）を得た。ＮＭＲ及びＬＣＭＳによって構造を確認した。
【００８８】
実施例２(ii)：［19Ｆ］フッ化物によるフッ化物イオン結合試験
化合物５（１ｍｇ）の水（０．１ｍＬ）溶液を１Ｎ ＨＣｌでｐＨ１に酸性化し、フッ化カリウム（０．１〜１ｅｑ）の水溶液を室温で添加した。溶液を逆相ＨＰＬＣ（Ｌｕｎａ Ｃ５ １５０×４．６ｍｍ上で１％ＴＦＡ／水、１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮの勾配、２５４ｎｍで検出）によって分析した。
【００８９】
実施例２(iii)：［18Ｆ］フッ化物イオンによる化合物５のフッ化物イオン放射性標識
化合物５（０．１ｍｇ、１８０ｎｍｏｌ）の５０：５０メタノール／水（０．２ｍＬ）溶液に１Ｍ ＨＣｌ（４．５μＬ、４．５μｍｏｌ）を添加した。この酸性化溶液を、標的水（０．０５ｍＬ）中の［18Ｆ］フッ化物イオン（９８ＭＢｑ）を含むガラスバイアルに直接添加し、室温で２０分間放置した。反応物を逆相ＨＰＬＣ（溶媒Ａ＝水中０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ中０．１％ＴＦＡ、Ｌｕｎａ Ｃ５ １５０×４．６ｍｍ、２５４ｎｍで検出、勾配：０〜３分（２％Ｂ）、３〜１０分（２〜７０％Ｂ）、１０〜１３分（７０％Ｂ）、１３〜１６分（７０〜２％Ｂ）、１６〜２１分（２％Ｂ）、流量：１ｍＬ／分）によって分析した。［18Ｆ］化合物５は１０．１分の保持時間を有している。同じＨＰＬＣ方法を用いて、［18Ｆ］化合物５を６４％の崩壊補正単離収率で精製した。
【国際調査報告】
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