(57)【要約】  【解決手段】  本発明は心疾患診断、予防及び／又は治療用マイクロＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）に関する。本発明は特に心疾患診断、予防及び／又は治療用配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９に関する。さらに、本発明は心疾患用及びそれに関する診断用薬剤を製造するためのこれらの配列の使用に関する。また心疾患を診断する方法、これらの配列を有するキット及び発現ベクター、発現ベクター含有細胞、また心疾患を調節する方法、及び心疾患治療及び／又は予防のための薬学的活性化合物のスクリーニング方法を包含する。  【選択図】      図４
2010505427.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
心疾患の診断、予防及び／又は治療用の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９の配列。
【請求項２】
心疾患の予防及び／又は治療用薬剤を製造するための配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９の配列の使用。
【請求項３】
心疾患診断用の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９の配列の使用。
【請求項４】
請求項２又は３記載の使用において、前記心疾患は心筋梗塞、心不全、慢性心不全及び／又は心肥大である。
【請求項５】
心疾患の診断方法であって、この方法は、
（ａ）心疾患を患っている疑いのある個人からの試料を提供する工程と、
（ｂ）前記試料中の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１個の配列の発現量を測定する工程と
を有し、
対照試料と比較して配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の発現量の増加又は減少が心疾患又は心疾患に対する素因を示唆するものである
方法。
【請求項６】
請求項５記載の方法において、前記配列は、配列ＩＤ番号５（ｍｉＲ−１３４）、配列ＩＤ番号１０（ｍｉＲ−２１２）、配列ＩＤ番号１１（ｍｉＲ−２１４）、配列ＩＤ番号１４（ｍｉＲ−２１）、ｍｉＲ−１２９（配列ＩＤ番号１６）、配列ＩＤ番号２０（ｍｉＲ−１８２）及び／又は配列ＩＤ番号２４（ｍｉＲ−２９０）である。
【請求項７】
配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列を有する心疾患診断用キット。
【請求項８】
配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列を有する発現ベクター。
【請求項９】
請求項８記載の少なくとも１つの発現ベクターを有する細胞。
【請求項１０】
心疾患を調節する方法であって、
細胞中の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の発現又は活性を調節する工程を有する、方法。
【請求項１１】
心疾患の治療及び／又は予防のための薬学的活性化合物のスクリーニングのための方法であって、この方法は、
請求項９記載の細胞を提供する工程と、
薬学的活性化合物の候補を前記細胞に接触させる工程と、
配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される配列の発現に対する前記候補の効果を測定する工程と
を有し、
配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の発現変化が薬学的活性化合物を示唆するものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は心疾患の診断、予防及び／又は治療用マイクロＲＮＡｓ（ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ：ｍｉＲＮＡｓ）に関する。
【０００２】
本発明は特に心疾患の診断、予防及び／又は治療用配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９に関する。さらに、本発明は心疾患及び心疾患を診断するための薬剤を生成するためにこれらの配列を使用することに関する。本発明はまた、心疾患を診断する方法、これらの配列を含むキット及び発現ベクター、発現ベクター含有細胞、心疾患を調節する方法、及び心疾患の治療及び／又は予防用の薬学的活性化合物をスクリーニングする方法を包含する。
【背景技術】
【０００３】
ｍｉＲＮＡｓ
マイクロＲＮＡｓ(ｍｉＲＮＡｓ)はメッセンジャーＲＮＡ分解を通して転写後に遺伝子発現を制御することができる小型非コードＲＮＡ分子である。異なるｍｉＲＮＡｓの総数は約３００〜５００であると推定される。ｍｉＲＮＡｓは従ってヒトゲノムの約１％を構成する。ｍｉＲＮＡｓは様々な種にて発見されており、高度に保存されているようである。
【０００４】
標的遺伝子（又は標的物）及びこのようなｍｉＲＮＡｓの生物学的機能は現在まであまり同定されることができなかったが、ｍｉＲＮＡｓはヒトゲノム遺伝子３０％までを制御すると推定される。
【０００５】
まず、ｍｉＲＮＡ遺伝子はＲＮＡポリメラーゼＩＩにより長い１次ｍｉＲＮＡｓ（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｉＲＮＡｓ：ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡｓ）に転写される。これらのｐｒｉ−ｍｉＲＮＡｓのさらなる処理は段階的に様々な区画でおこる。ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡｓはまず細胞核中でＲＮＡ分解酵素ＩＩＩであるＤｒｏｓｈａによって約７０〜８０ヌクレオチドを有するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡｓ）に転換される。ＤｒｏｓｈａはＲＮＡ結合タンパク質ＤＧＣＲ８と共にマイクロプロセッサ複合体（ｍｉｃｒｏｐｒｏｃｅｓｓｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ）を形成する。ｍｉＲＮＡ前駆体ヘアピンは、エクスポーチン−５（ｅｘｐｏｒｔｉｎ−５）タンパク質及び補助因子としてのＲａｎ−ＧＴＰによって、細胞核外に輸送される。細胞質中において、ｍｉＲＮＡ前駆体はＲＮＡ分解酵素ＩＩであるＤｉｃｅｒによって処理され、約２２ヌクレオチドを有する２本鎖ｍｉＲＮＡｓ（ｄｕｐｌｅｘ−ｍｉＲＮＡｓ）を形成する。Ｄｉｃｅｒはこの場合２本鎖ＲＮＡ結合タンパク質ＴＲＢＰと相互作用する。前記ｍｉＲＮＡ２本鎖分子はその後巻き戻され、成熟ｍｉＲＮＡが得られる。この成熟ｍｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の効果分子であるＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ：ＲＩＳＣ）に類似したリボ核タンパク質複合体（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ：ｍｉＲＮＰ）に取り込まれる（Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ  ａｎｄ  Ｚａｍｏｒｅ，２００２）。
【０００６】
この形において、ｍｉＲＮＡｓはａ）翻訳抑制、又は、ｂ）標的ｍＲＮＡ分解の２つの異なる機構を介してそれぞれの標的遺伝子の下方制御をもたらすことができる。機構の選択は、いわゆるアルゴノートタンパク質（Ａｒｇｏｎａｕｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）と共にｍｉＲＮＡと標的遺伝子間の相補性の程度による。相補性がほぼ完全である場合、標的遺伝子切断がその後のＲＮＡ分解と共に起こり、一方相補性が一部しかない場合に翻訳抑制が起こる（Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ  ａｎｄ  Ｚａｍｏｒｅ，２００２）。正確な翻訳抑制機構はいまだに知られていない（従来技術を示す図１参照）。
【０００７】
ｍｉＲＮＡｓによる幾つかの分化過程統制機構を説明することは既に可能であるが（Ｈａｒｆｅ，２００５；Ｈｏｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、ｍｉＲＮＡｓによる生理学的機能制御はいまだに多くは知られていない。
【０００８】
ｍｉＲＮＡｓ及びそれに関連する制御標的遺伝子の数の多さは、広範囲な疾患の発病及び進行におけるｍｉＲＮＡの重要な役割を予想させる。例えば、異なる癌試料で同定されたｍｉＲＮＡｓのほとんどは下方制御されている（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【０００９】
前記文献は既に一度心臓特異的な発達制御に取り組んでいる。Ｚｈａｏらは、特定の筋肉特異的なｍｉＲＮＡｓが心臓発達制御に重大な役割を果たすことを示すことができた（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。例えば、ｍｉＲＮＡｓのｍｉＲ１−１及びｍｉＲ１−２は特に心臓前駆細胞において発現している。ｍｉＲ−１の標的物は心臓転写因子Ｈａｎｄ２であり、Ｈａｎｄ２は発達中に心室拡張を順次制御する。ｍｉＲ−１は過度に速く且つ過大な心臓発達に反対に作用する可能性が極めて高い（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【００１０】
心筋梗塞後又は他の心疾患、例えば肥大もしくは心筋炎後の再生過程の統制におけるｍｉＲＮＡの可能性のあるさらなる役割があり得るが、これについての情報はまだ得られていない。
【００１１】
様々な心疾患の病理及び治癒過程におけるｍｉＲＮＡの考えられる重要性
瘢痕形成及びそれに続く左心室のポンプ機能の減少を有する心筋梗塞後の不適当な治癒は、西洋先進国で最も頻繁にある心不全の原因である（Ｍａｓｓｉｅ  ａｎｄ  Ｓｈａｈ，１９９７）。心不全が原因の入院率は西洋諸国において最近１０〜１５年でほぼ２倍になった。心不全の場合予後は優れるものではなく、多くの悪性腫瘍とほとんど同じくらい悪い。人々の平均寿命がますます高くなっているため、心不全の発生率及び有病率はさらに増加するだろう。従って、新世紀においても、心不全は、医療サービスの重要な挑戦の１つになるだろう。
【００１２】
「心臓リモデリング」という用語（Ｐｆｅｆｆｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒａｕｎｗａｌｄ，１９９０）は、心筋梗塞の後の又は心不全をもたらす可能性のある他の疾患（例えば心筋炎）の場合の病態生理学的状態下での心臓再生過程を表わすものである。心筋梗塞後の早期には、瘢痕形成を伴う虚血心筋壊死があるが、梗塞に直接影響していない心筋の場合には、治癒及び適応過程として最初に必ず認められる長期に渡る変化がある。梗塞心筋壁の菲薄化及び拡張は、梗塞後期の早い段階（数日〜数週）で梗塞の広がりをもたらす可能性がある。後期リモデリング（数ヶ月〜数年）は生存心筋の構造的再配置によって引き起こされ、心筋肥大、間質線維症、アポトーシス性心筋喪失、また心腔拡張及び変形によって特徴づけられる。
【００１３】
これらの構造的変化の実質的特徴は残存心筋細胞肥大、毛細血管化減少、また進行性心筋線維化を含む（Ｐｆｅｆｆｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒａｕｎｗａｌｄ，１９９０）。これらの初期再生過程は代償反応であるが、最終的には前記変化は進行性左心室拡張及び左心室ポンプ機能制限をもたらし、それらは高い致死率によって特徴づけられる。
【００１４】
心臓リモデリング過程はまた、分子変化、細胞変化及び間質変化を含む。そのような過程は、罹患した心筋細胞（肥大及び収縮性減少、壊死、アポトーシスを持つ形質的変化）だけでなく、特に細胞外マトリックス及び炎症性環境の変化でもある。心臓リモデリングは血流力学的変化、神経ホルモン性活性化、炎症性サイトカイン及び複数の他の過程によって影響される。慢性心疾患及び急性心筋梗塞はまた、前駆炎症性サイトカイン（とりわけ腫瘍壊死因子−アルファ、インターロイキン−１−ベータ、−２及び−６）の血漿レベルの増加及びそれに関連する可溶性受容体の血漿レベルの増加によって特徴付けられる。不全心筋では炎症性サイトカインが発現している。これらのサイトカインの既知の陰性変力効果に加えて、慢性心不全症例における筋細胞形質及び細胞外マトリックスに対する顕著な効果は長期的に見ると特に病態生理学的に重要である。最新の心不全の細胞学的及び分子学的機構の概説については、さらに詳細な文献が参照される（Ｈｕｎｔｅｒ，１９９９）。
【００１５】
臨床試験において、薬剤（ベータ−阻害剤、ＡＣＥ抑制剤、アルドステロン拮抗薬）使用治療下での予後の有意な改善を証明することは可能であった。それにも関らず、心不全は先進国における最も頻度の高い死因であり続けている。
【００１６】
心臓治癒過程を改善する新たな治療形態の探索と開発は現在の心臓学において最も大きな挑戦の１つになっている。ｍｉＲＮＡｓの使用は心臓病の最適な治療及び／又は診断の新しい可能性を提示する。
【００１７】
従って、本発明の目的は、心疾患の診断、予防、及び／又は治療に適した様々なｍｉＲＮＡ配列を特定することである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｂｕｉｔｒａｇｏ  Ｍ，Ｌｏｒｅｎｚ  Ｋ，Ｍａａｓｓ  ＡＨ，Ｏｂｅｒｄｏｒｆ−Ｍａａｓｓ  Ｓ，Ｋｅｌｌｅｒ  Ｕ，Ｓｃｈｍｉｔｔｅｃｋｅｒｔ  ＥＭ，Ｉｖａｓｈｃｈｅｎｋｏ  Ｙ，Ｌｏｈｓｅ  ＭＪ，Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ  Ｓ．Ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  Ｎａｂ１  ｉｓ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃａｒｄｉａｃ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００５  Ａｕｇ；１１（８）：８３７−４４．
【非特許文献２】Ｂｕｒｋａｒｄ  Ｎ，Ｂｅｃｈｅｒ  Ｊ，Ｈｅｉｎｄｌ  Ｃ，Ｎｅｙｓｅｓ  Ｌ，Ｓｃｈｕｈ  Ｋ，Ｒｉｔｔｅｒ  Ｏ．（２００５）  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ｓｕｓｔａｉｎｓ  ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１１：１０４５−５３
【非特許文献３】Ｈａｒｆｅ，Ｂ．Ｄ．（２００５）．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ  ｉｎ  ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｇｅｎｅｔ  Ｄｅｖ  １５，４１０−４１５．
【非特許文献４】Ｈｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ｅ．，Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｈ．，Ｙｅｋｔａ，Ｓ．，Ｈｕ，Ｊ．Ｋ．−Ｈ．，Ｈａｒｆｅ，Ｂ．Ｄ．，ＭｃＭａｎｕｓ，Ｍ．Ｔ．，Ｂａｓｋｅｒｖｉｌｌｅ，Ｓ．，Ｂａｒｔｅｌ，Ｄ．Ｐ．，ａｎｄ  Ｔａｂｉｎ，Ｃ．Ｊ．（２００５）．Ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｍｉＲ−１９６  ａｃｔｓ  ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  Ｈｏｘｂ８  ａｎｄ  Ｓｈｈ  ｉｎ  ｌｉｍｂ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３８，６７１−６７４．
【非特許文献５】Ｈｕｂｅｒ  Ｗ，ｖｏｎ  Ｈｅｙｄｅｂｒｅｃｋ  Ａ，Ｓｕｅｌｔｍａｎｎ  Ｈ，Ｐｏｕｓｔｋａ  Ａ，Ｖｉｎｇｒｏｎ  Ｍ：Ｖａｒｉａｎｃｅ  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｐｐｌｉｅｄ  ｔｏ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｄａｔａ  ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００２，１８：９６−１０４
【非特許文献６】Ｈｕｎｔｅｒ  ＪＪ，Ｇ．Ａ．，Ｃｈｉｅｎ  ＫＲ（１９９９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ  ａｎｄ  ｆａｉｌｕｒｅ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ）．
【非特許文献７】Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ，Ｇ．，ａｎｄ  Ｚａｍｏｒｅ，Ｐ．Ｄ．（２００２）．Ａ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｉｎ  ａ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ＲＮＡｉ  ｅｎｚｙｍｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９７，２０５６−２０６０．
【非特許文献８】Ｋｒｕｔｚｆｅｌｄｔ  Ｊ，Ｒａｊｅｗｓｋｙ  Ｎ，Ｂｒａｉｃｈ  Ｒ，Ｒａｊｅｅｖ  ＫＧ，Ｔｕｓｃｈｌ  Ｔ，Ｍａｎｏｈａｒａｎ  Ｍ，Ｓｔｏｆｆｅｌ  Ｍ．（２００５）Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｗｉｔｈ  ‘ａｎｔａｇｏｍｉｒｓ’．Ｎａｔｕｒｅ  ４３８：６８５−９．
【非特許文献９】Ｌｕ，Ｊ．，Ｇｅｔｚ，Ｇ．，Ｍｉｓｋａ，Ｅ．Ａ．，Ａｌｖａｒｅｚ−Ｓａａｖｅｄｒａ，Ｅ．，Ｌａｍｂ，Ｊ．，Ｐｅｃｋ，Ｄ．，Ｓｗｅｅｔ−Ｃｏｒｄｅｒｏ，Ａ．，Ｅｂｅｒｔ，Ｂ．Ｌ．，Ｍａｋ，Ｒ．Ｈ．，Ｆｅｒｒａｎｄｏ，Ａ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２００５）．ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｃｌａｓｓｉｆｙ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３５，８３４−８３８．
【非特許文献１０】Ｍａｓｓｉｅ，Ｂ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｓｈａｈ，Ｎ．Ｂ．（１９９７）．Ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ：ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ  １３３，７０３−７１２．
【非特許文献１１】Ｍｅｉｓｔｅｒ，  Ｇ．，Ｌａｎｄｔｈａｌｅｒ，Ｍ．，Ｐｅｔｅｒｓ，Ｌ．，Ｃｈｅｎ，Ｐ．Ｙ．，Ｕｒｌａｕｂ，Ｈ．，Ｌｕｈｒｍａｎｎ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．（２００５）．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｒｇｏｎａｕｔｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ．
【非特許文献１２】Ｐｆｅｆｆｅｒ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ  Ｂｒａｕｎｗａｌｄ，Ｅ．（１９９０）．Ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８１，１１６１−１１７２．
【非特許文献１３】Ｓｍｙｔｈ  ＧＫ：Ｌｉｎｅａｒ  ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  ｅｍｐｉｒｉｃａｌ  Ｂａｙｅｓ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１，Ａｒｔｉｃｌｅ  ３
【非特許文献１４】Ｔｈｕｍ  Ｔ，Ｇａｌｕｐｐｏ  Ｐ，Ｗｏｌｆ  Ｃ，Ｆｉｅｄｌｅｒ  Ｊ，Ｋｎｅｉｔｚ  Ｓ，ｖａｎ  Ｌａａｋｅ  ＬＷ，Ｄｏｅｖｅｎｄａｎｓ  ＰＡ，Ｍｕｍｍｅｒｙ  ＣＬ，  Ｂｏｒｌａｋ  Ｊ，Ｈａｖｅｒｉｃｈ  Ａ，Ｇｒｏｓｓ  Ｃ，Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ  Ｓ，Ｅｒｔｌ  Ｇ，Ｂａｕｅｒｓａｃｈｓ  Ｊ．（２００７）ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｒｔ：ａ  ｃｌｕｅ  ｔｏ  ｆｅｔａｌ  ｇｅｎｅ  ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１６：２５８−６７．
【非特許文献１５】Ｔｈｕｍ  Ｔ，Ｂｏｒｌａｋ  Ｊ．（２００１）Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｅｘｐｌａｎｔｅｄ  ｈｅａｒｔｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｍｙｏｓｉｎ  ＡＴＰａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｂｕｔａｎｅｄｉｏｎｅ  ｍｏｎｏｘｉｍｅ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７１：５４３−５２
【非特許文献１６】Ｔｈｕｍ  Ｔ，Ｆｒａｃｃａｒｏｌｌｏ  Ｄ，Ｇａｌｕｐｐｏ  Ｐ，Ｔｓｉｋａｓ  Ｄ，  Ｆｒａｎｔｚ  Ｓ，Ｅｒｔｌ  Ｇ，Ｂａｕｅｒｓａｃｈｓ  Ｊ．（２００６）Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ：Ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ７０：５０−６０
【非特許文献１７】Ｚｈａｏ，Ｙ．，Ｓａｍａｌ，Ｅ．，ａｎｄ  Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ，Ｄ．（２００５）．Ｓｅｒｕｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａ  ｍｕｓｃｌｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔｓ  Ｈａｎｄ２  ｄｕｒｉｎｇ  ｃａｒｄｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３６，２１４−２２０．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は心疾患の診断、予防及び／又は治療に対するための配列番号１〜配列番号２９に関する。さらに、本発明はこれらの配列の使用した心疾患及びそれに関連する診断用の薬剤の提供に関する。本発明はまた心疾患診断用方法、これらの配列を有するキット及び発現ベクター、発現ベクター含有細胞、心疾患を調節する方法、並びに心疾患治療及び／又は予防用の薬学的活性化合物のスクリーニング方法に関する。
【００２０】
本発明は下記の添付図を参照し、更に様々な実施形態に基づいて、以下により詳細に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は従来技術を表し、ｍｉＲＮＡの成熟及びｍＲＮＡの抑制工程を示すものである。
【図２】図２はキャピラリー電気泳動法による分離ｍｉＲＮＡ及び全ＲＮＡを示すものである。
【図３】図３は無制御なｍｉＲＮＡｓの階層的クラスター分析を示すものである。慢性梗塞心筋組織（梗塞；ｎ＝３）及び偽手術ラットの心筋組織（偽；ｎ＝３）における有意な差を見出だすことが可能である。
【図４】図４は偽コントロール（偽）と比較した大動脈絞扼（大動脈結紮）３日後（ＡＢ３ｄ）及び２１日後（ＡＢ２１ｄ）の左心室重量の増加を示すものである。
【図５Ａ】図５は培養新生児心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）（Ａ）。細胞核は４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色した。
【図５Ｂ】図５は培養新生児心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。Ｂ）ｍｉＲＮＡ治療下おける細胞の大きさの増加。
【図５Ｃ】図５は培養新生児心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。Ｃ）ｍｉＲＮＡ形質移入後の個々のｍｉＲＮＡ発現の増加。
【図５Ｄ】図５は培養新生児心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。Ｄ）ｍｉＲＮＡ形質移入後の胎児遺伝子プログラム活性化（ＡＮＰ＝心房性ナトリウム利尿ペプチド、ＢＮＰ＝脳性ナトリウム利尿ペプチド、ベータ−ＭＨＣ＝ベータ−ミオシン重鎖、ｃｓｐｇ２＝コンドロイチン硫酸プロテオグリカン２、ｐｈｌｄａ１＝プレクストリン相同様領域（ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ−ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎ）、ファミリーＡ、メンバー１、ＨＳＰ９０＝熱ショックタンパク質９０（ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０）、ＲＡＳＡ１＝ＲＡＳ  ｐ２１タンパク質活性化因子１、ＭＥＦ２ａ＝ミオシンエンハンサー因子２アルファ、ｃｒａｄｄ＝致死領域（ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ）と共にアダプターを含むＣＡＳＰ２及びＲＩＰＫ１領域（ＣＡＳＰ２  ａｎｄ  ＲＩＰＫ１  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ａｄａｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ）、ｄｔｎａ＝ジストロブレビンアルファ（ｄｙｓｔｒｏｂｒｅｖｉｎ  ａｌｐｈａ））。
【図６Ａ】図６は培養成体心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）(Ａ)（略語は上記に示す）。
【図６Ｂ】図６は培養成体心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。形質移入特異性（Ｂ）。細胞核は４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色した（略語は上記に特定されている）。
【図６Ｃ】図６は培養成体心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。ｍｉＲＮＡ形質移入後の個々のｍｉＲＮＡｓの発現増加（Ｃ）（略語は上記に示す）。
【図６Ｄ】図６は培養成体心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。ｍｉＲＮＡ治療下における細胞の大きさの増加（Ｄ及びＦ）。細胞核は４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色した（略語は上記に示す）。
【図６Ｅ】図６は培養成体心筋細胞のｍｉＲＮＡｓを示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。ｍｉＲＮＡ形質移入後の胎児遺伝子プログラム活性化（Ｅ）（略語は上記に示す）。
【図７Ａ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図７Ｂ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図７Ｃ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。（Ｃ）及び（Ｄ）は動物モデルの左心室圧負荷（動脈結紮）後のＳｐｒｏｕｔｙ  １の抑制及びＥＲＫ１／２リン酸化増加を示すものである（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図７Ｄ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。（Ｃ）及び（Ｄ）は動物モデルの左心室圧負荷（動脈結紮）後のＳｐｒｏｕｔｙ  １の抑制及びＥＲＫ１／２リン酸化増加を示すものである。（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図７Ｅ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。（Ｅ）は心臓における静脈注入されたＣｙ−３−標識Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）の取り込みを示すものである（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図７Ｆ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。（Ｆ）Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置後の心臓性ｍｉＲ−２１発現抑制を示すものである（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図７Ｇ】図７は培養心筋細胞でのｐｒｅ−ｍｉｒ−２１過剰発現後のＳｐｒｏｕｔｙ１（Ａ）及びサルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ）（Ｂ）の抑制を示すものである（>９０％まで；残存細胞は心臓線維芽細胞及び上皮細胞である）。（Ｇ）は動脈結紮３週後の動物体重に対する心臓重量の増加、またＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置下の心臓重量増加阻害を示すものである（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）（ＡＢ又はＴＡＣは動脈結紮手術、抗２１又は抗ｍｉＲ−２１はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１治療）。
【図８Ａ】図８Ａは動脈結紮後の心筋細胞の大きさの増加及びＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置下における正常化を示すものである（略語は上記に示す）。
【図８Ｂ】図８Ａは動脈結紮後の心筋細胞の大きさの増加及びＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置下における正常化を示すものである。（Ｂ）はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置あり及び無しの動脈結紮後の心エコー分析を示すものである（略語は上記に示す）。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は心疾患の診断、予防及び／又は治療用ｍｉＲＮＡ配列、特に配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９に関する。配列は配列一覧表に示され、表２に要約される。
【００２３】
さらに、配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９は心疾患の予防及び／又は治療用の薬剤を製造するために使用することが可能である。
【００２４】
さらに、配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９は心疾患の診断に使用されることが可能である。
【００２５】
１つの特定の望ましい実施形態では、心疾患は心筋梗塞、心不全、特に慢性心不全及び／又は心肥大である。
【００２６】
本疾患のさらなる対象は心疾患を診断する方法であり、この方法は、
（ａ）心疾患を患っている疑いのある個人からの試料を提供する工程と、
（ｂ）試料中の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の発現量を測定する工程と
を有し、対照試料と比較して配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の増加した又は減少した発現量は、心疾患、又は心疾患に対する有病率又は素因を示唆するものである。
【００２７】
さらなる実施形態は特に、配列ＩＤ番号５（ｍｉＲ−１３４）、配列ＩＤ番号１０（ｍｉＲ−２１２）、配列ＩＤ番号１１（ｍｉＲ−２１４）、配列ＩＤ番号１４（ｍｉＲ−２１）、配列ＩＤ番号２０（ｍｉＲ−１８２）及び／又は配列ＩＤ番号２４（ｍｉＲ−２９０）の配列の使用に関する。
【００２８】
特別に望ましいのは、特にｍｉＲ−２１（配列ＩＤ番号１４）である。このｍｉＲＮＡはヒト心疾患で約３．３倍に上方制御され、マウスにおいて心肥大後の早期（大動脈結紮３日）に約３．０倍に上方制御される。
【００２９】
ｍｉＲ−２１２（配列ＩＤ番号１０）もまた望ましい。このｍｉＲＮＡはヒト心不全で約５．６倍に上方制御され、ラットにおいて慢性心筋梗塞後は約２．４倍に上方制御される。
【００３０】
さらに望ましいのは、ｍｉＲ−２１４（配列ＩＤ番号１１）である。このｍｉＲＮＡはヒト心疾患では約１．２倍と僅かに上方制御され、マウスにおいて心肥大後の早期及び後期（大動脈結紮３日及び２１日）に各々約１．５倍と約２．１倍に明らかに上方制御され、慢性心筋梗塞後もまた約２．６倍、インビトロでの薬理学的心肥大誘導後は約１．５倍に上方制御される。
【００３１】
最終的には、ｍｉＲ−１３４（配列ＩＤ番号５）が望ましい。このｍｉＲＮＡはヒト心疾患では約１．２倍と僅かに上方制御され、マウスにおいて心肥大後後期（大動脈結紮２１日）に明らかに約１．７倍に、ラットにおいて慢性心筋梗塞後（３．３倍）にも上方制御される。
【００３２】
全ての上方制御されたｍｉＲＮＡｓは、処置時発現という点からみてインビトロ及びインビボでｍｉＲＮＡ抑制剤を介し正常化されることが可能である。さらに、それらは診断マーカーとして使用されることができる。
【００３３】
１つの代替的実施形態において、ｍｉＲ−１８２（配列ＩＤ番号２０）が望ましい。このｍｉＲＮＡはヒト心不全で下方制御される（−１．３倍）、マウスにおける心肥大後早期及び後期（大動脈結紮３及び２１日）で明らかに下方制御され（各−１．８倍及び−２．２倍）、ラットにおける慢性心筋梗塞後でも下方制御される（−４．０倍）。
【００３４】
ｍｉＲ−２９０（配列ＩＤ番号２４）もまた望ましい。このｍｉＲＮＡはヒト心不全で下方制御され（−１．４倍）、マウスにおける心肥大後早期（大動脈結紮３日）で下方制御され（−１．６倍）、ラットにおける慢性心筋梗塞でも下方制御される（−１．４倍）。
【００３５】
これらの減少した又は下方制御されたｍｉＲＮＡｓは外部から添加されたｍｉＲＮＡｓを介して正常化される。さらにｍｉＲＮＡｓ発現を正常化する薬剤を開発することが可能である。さらに、それらはまた選択的に診断マーカーとして上方制御されたｍｉＲＮＡｓと共に使用することが可能である。
【００３６】
本発明のさらなる対象は心疾患診断用の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列を有するキットに関する。
【００３７】
また、本発明は配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列を有する発現ベクターも包含する。
【００３８】
１つの特定の実施形態において、本発明はまた少なくとも１つの発現ベクターを有する細胞を包含する。
【００３９】
本発明のさらなる態様は心疾患を調節するための方法に関し、細胞中の配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の発現又は活性を調節する工程を有する。
【００４０】
更に本発明のもう１つの対象は心疾患治療及び／又は予防用の薬学的活性化合物をスクリーニングするための方法に関し、前記方法は、
（ａ）本発明に従って細胞を提供する工程と、
（ｂ）薬学的活性化合物の候補を細胞に接触させる工程と、
（ｃ）配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される１つの配列の発現に対する前記候補の効果を決定する工程と
を有し、
配列ＩＤ番号１〜配列ＩＤ番号２９から選択される少なくとも１つの配列の発現変化は薬学的活性化合物を示唆するものである。
【００４１】
本願明細書および特に従属項に記載の全ての要件は、それらは形式的に１若しくはそれ以上の特定の請求項を参照するものでもあるが、個々に独立して又はお互いのあらゆる組み合わせが包含されることもさらに認められるべきである。
【００４２】
本発明は次の実施例及び結果の中により詳細に記載されるだろう、それらは例示のみで、限定して理解されるものではない。
【００４３】
実施例及び結果
【実施例１】
【００４４】
１．心筋梗塞後のマイクロＲＮＡ分析
心筋組織からの３００を越える異なるｍｉＲＮＡｓの分離及びマイクロアレイに基づく検出のための全ての必要な処置を研究室で確立した。例えば、ゲル電気泳動による分離にさらなる工程を付け加えることによりｍｉＲＮＡ分離を最適化することが可能になり、スポッティッドスペシャルｍｉＲＮＡマイクロアレイ上のｍｉＲＮＡｓの後に続くハイブリダイゼーション及び検出のための良い標識が可能になる程度までになった（ＩＺＫＦマイクロアレイ施設のＤｒ．Ｓ．Ｋｎｅｉｔｚと連携した）（図２及び図３参照）。ラットの慢性梗塞心筋と健常心筋を比較することにより、多数の無制御なｍｉＲＮＡｓを同定することが可能となり、この無制御なｍｉＲＮＡｓは次の研究アプローチのために興味深い標的構造、また興味深い診断マーカーを表すものである。
【００４５】
本発明者はこのように既に、マイクロアレイに基づく技術を使用し、心臓に多く発現するｍｉＲＮＡｓの数を同定することを可能にした。慢性梗塞心筋組織における多数の特異的に発現したｍｉＲＮＡｓは心臓リモデリングにおける重要な役割を示唆する。
【００４６】
次のｍｉＲＮＡｓは心筋梗塞後に誘導される（偽手術動物のそれの>１．２倍）。１グループ当たりの動物数ｎ＝３からの平均値が与えられる：
ｍｉＲ２１１（配列ＩＤ番号９），ｍｉＲ１６−１，ｍｉＲ１３７，ｍｉＲ１９５，ｍｉＲ１９９ａ＊−１，ｍｉＲ１９９ａ−２，ｍｉＲ１４５，ｍｉＲ９６，ｍｉＲ１０１−１，ｍｉＲ３６８，ｍｉＲ１９３，ｍｉＲ２９７−１，ｍｉＲ１２５ｂ−１，ｍｉＲ１−２，ｌｅｔ７ｆ−１，ｍｉＲ２９５，ｍｉＲ１９９ａ−１，ｍｉＲ１９８，ｍｉＲ２９１−３ｐ，ｍｉＲ９９ａ，ｍｉＲ２１０，ｍｉＲ２９３，ｍｉＲ３５０，ｍｉＲ４０９，ｍｉＲ３３９，ｍｉＲ１０３−１，ｍｉＲ１２９−２，ｍｉＲ１９０，ｍｉＲ３２５，ｍｉＲ３６７，ｍｉＲ２９１−５ｐ，ｌｅｔ７ｄ＊，ｍｉＲ１９ａ，ｍｉＲ３６９，ｍｉＲ３００，ｍｉＲ１９９ａ＊−２，ｍｉＲ９８，ｍｉＲ２２１，ｍｉＲ２９２−３ｐ，ｍｉＲ１２６，ｍｉＲ１３６，ｍｉＲ１７−３ｐ，ｍｉＲ１２８ａ（配列ＩＤ番号４），ｍｉＲ１５ｂ（配列ＩＤ番号１），ｍｉＲ１５１（配列ＩＤ番号７），ｍｉＲ３２８（配列ＩＤ番号１２），ｍｉＲ１２６＊（配列ＩＤ番号３），ｍｉＲ２３ａ（配列ＩＤ番号２），ｍｉＲ２１２（配列ＩＤ番号１０），ｍｉＲ１４９（配列ＩＤ番号６），ｍｉＲ２０６（配列ＩＤ番号８），ｍｉＲ２１４（配列ＩＤ番号１１），ｍｉＲ３７１（配列ＩＤ番号１３），ｍｉＲ１３４（配列ＩＤ番号５）。
【００４７】
次のｍｉＲＮＡｓは心筋梗塞後に抑制される（偽手術動物のそれの<８０％）。１グループ当たりの動物数ｎ＝３からの平均値が与えられる：
ｍｉＲ１０６ｂ，ｍｉＲ１８２（配列ＩＤ番号１７），ｍｉＲ２９６（配列ＩＤ番号１８），ｍｉＲ１２２ａ（配列ＩＤ番号１９），ｍｉＲ３０ａ−３ｐ（配列ＩＤ番号２０），ｍｉＲ３７２，ｍｉＲ１８２＊，ｍｉＲ２９８，ｍｉＲ９−１，ｍｉＲ１５５，ｍｉＲ９９ｂ，ｍｉＲ１４７，ｍｉＲ１９７，ｍｉＲ１８９，ｍｉＲ１５４，ｍｉＲ３７６ｂ，ｍｉＲ２１９−１，ｍｉＲ２０２；ｍｉＲ３７０，ｍｉＲ３４１，ｍｉＲ２７ａ，ｌｅｔ７ｅ，ｍｉＲ３０２ｃ＊；ｍｉＲ１８８，ｍｉＲ２００ｂ，ｍｉＲ２１５，ｍｉＲ１４２−３ｐ，ｍｉＲ１５３−１，ｍｉＲ３４５，ｍｉＲ３４ａ，ｍｉＲ２１，ｍｉＲ１４８ａ，ｍｉＲ１４６，ｍｉＲ２９０，ｌｅｔ７ｉ，ｍｉＲ１０６ａ，ｍｉＲ２１７，ｌｅｔ７ｇ，ｍｉＲ１８３，ｍｉＲ２００ａ，ｍｉＲ１３３ａ−１，ｍｉＲ７−１，ｍｉＲ２２，ｍｉＲ９−１＊，ｍｉＲ９３，ｍｉＲ１４４，ｍｉＲ３４ｃ，ｍｉＲ２２０，ｍｉＲ１４１，ｍｉＲ１３０ｂ。
【００４８】
選択されたｍｉＲＮＡ配列に対して，各々の配列ＩＤ番号は括弧内に与えられる。
【００４９】
Ｅｉｓｅｎによる階層的クラスター分析（ｈｔｔｐ：／／ｒａｎａ．ｌｂｌ．ｇｏｖ／）は同様に慢性梗塞心筋組織（梗塞；ｎ＝３）と偽手術ラットからの心筋組織（偽，ｎ＝３）の有意な差を示す（図３を参照）。このバイオインフォルマティックス分析法は異なる被験グループ間の差及び類似性を探すものである。
【００５０】
データベースにおける探索によって（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）、無制御なｍｉＲＮＡｓの理論上標的遺伝子同定が既に可能になった。選択肢は表１に示す。
【００５１】
【表１−１】
2010505427.tif 000003
【００５２】
【表１−２】
2010505427.tif 000004
【００５３】
【表１−３】
2010505427.tif 000005
【００５４】
心筋梗塞後投与による一致したｍｉＲＮＡの上方制御（特定のｍｉＲＮＡのリポソーム型形質移入による）及び下方制御（特定のｍｉＲＮＡ抑制剤（ａｎｔｉ−ｍｉＲｓ（登録商標）、Ａｍｂｉｏｎ、英国又はＡｎｔａｇｏｍｉｒｓ、Ａｌｎｙｌａｍ、Ｋｕｌｍｂａｃｈ、独国）のリポソーム型形質移入による）により、個々に強く制御されたｍｉＲＮＡｓを調節することが可能である。代替的に、他の種類の形質移入を使用してもよい（例えばウィルス型又はヌクレオフェクション、又は電気穿孔法）。個々のｍｉＲＮＡｓ標的遺伝子数が多いため、従って、心筋梗塞後及び改善した心機能が戻った後の発現に関し全遺伝子ネットワークを再度正規化する。
【実施例２】
【００５５】
２．ｍｉＲＮＡ発現スクリーニング方法
ｍｉＲＮＡ発現分析
凍結心臓組織又は培養心筋細胞を液体窒素を使用して粉砕した。これらから小型ＲＮＡｓを含む全ＲＮＡを分離した（ｍｉｒＶａｎａ（商標）ｍｉＲＮＡ分離キット；Ａｍｂｉｏｎ，米国）。全ＲＮＡを別に分離し、精製ｍｉＲＮＡｓをＦｌａｓｈＰＡＧＥ分画システム（Ａｍｂｉｏｎ，米国）を使用し調製した。キャピラリー電気泳動法（Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ  ２１００；Ａｇｉｌｅｎｔ，独国）を使用し全ＲＮＡの質及びｍｉＲＮＡの純度を評価した。
【００５６】
全ＲＮＡ１０μｇから得られたマイクロＲＮＡをｍｉｒＶａｎａ（商標）ｍｉＲＮＡ標識キット（Ａｍｂｉｏｎ，米国）を使用して、製造者の取扱説明書に従ってＣｙ３色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，米国）で標識した。各標的物は別のアレイでハイブリダイズした。
【００５７】
３８４個までのｍｉＲＮＡｓを含むマイクロアレイ（ｍｉｒＶａｎａ  ｍｉＲＮＡプローブセット，Ａｍｂｉｏｎ）をＳＣＨＯＴＴ  Ｎｅｘｔｅｒｉｏｎ（登録商標）スライドＥマイクロアレイスライドに本発明者の研究室で各４回スポットした。オリゴヌクレオチドプローブは４２〜４６ｎｔの長さを有し、且つ１８〜２４ｎｔのセグメントから成り、そのセグメントはヒト、マウス、又はラットからの特定の既知のｍｉＲＮＡを標的にするものであった。
【００５８】
プローブセットの配列情報を含む使用プローブの完全なリストはｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｌｉｂ／ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ／−ｍｉＲＮＡ＿ａｒｒａｙ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌで入手可能である。スライドの調製、ｍｉＲＮＡ精製、濃縮及び標識はｍｉｒＶａｎａ（商標）のＡｍｂｉｏｎハンドブックにある取扱説明書に従い行った（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｌｉｂ／ｐｒｏｔ／）。データ取得はＳｃａｎＡｌｙｚｅソフトウェア（Ｍ．Ｅｉｓｅｎ，ＬＢＮＬ，カリフォルニア州，米国）を使用して行った。
【００５９】
アレイのデータ分析
ｍｉＲＮＡアレイデータ分析はバイオコンダクタープロジェクト（Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  ｐｒｏｊｅｃｔ）からのＲ−パッケージを使用して行った（ｗｗｗ．ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ．ｏｒｇ）。その結果得られたシグナル強度を分散安定化により正規化した（Ｈｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。全データセットの質をテストして、異なる発現遺伝子を評価するためマイクロアレイ分析用線形モデル（Ｌｉｍｍａ：Ｌｉｎｅａｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）のパッケージを使用し統計分析を行った。Ｌｉｍｍａパッケージの重要な機能はＳｍｙｔｈの経験的Ｂａｙｅｓ線形モデルアプローチの実現であり、より小さな試料の大きさでさえ安定した分析に使用することができることである（Ｓｍｙｔｈ，２００４）。
【００６０】
ｍｉＲＮＡ標的物の予想方法（表１参照）
ｍｉＲＮＡデータベースのｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）を使用して可能性のあるｍｉＲＮＡ標的物を同定した。ｍｉＲａｎｄａアルゴリズムを使用し、あるゲノムの入手可能な全ｍｉＲＮＡ配列をこのゲノムの３’ＵＴＲ配列に対してスクリーンした。前記アルゴリズムは動的プログラムを使用して二重逆平行２本鎖に一致する最大の局所的相補性を探索する。陽性スコアが相補塩基対に与えられ、陰性スコアが誤対合、転写／複製ギャップの開放部及び延長部（ギャップ開放部及びギャップ延長部）に与えられる。前記スコアはｍｉＲＮＡの５’末端に由来するが、このスコアに実験的に観察される完全なワトソン−クリック塩基対の重要性を表す因子を掛け合わせた。その後Ｋａｒｌｉｎ−Ａｌｔｓｃｈｕｌ正規化を実行した（ｍｉＲＢａｓｅ  Ｔａｒｇｅｔｓバージョン  ３．０；ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｔａｒｇｅｔｓ／ｖ３／）。
【００６１】
不全ヒト心臓のマイクロＲＮＡ分析
上記の既に記載された方法を使用し、ｎ＝４の罹患ヒト心臓及びｎ＝４の健常心臓に対するｍｉＲＮＡ発現プロファイルを確立した。罹患心臓は左心室組織を有し、その左心室組織は非代償性心不全に起因する心臓移植という状況で取り除かれた。最適化される新治療に対して将来性の高い標的構造を表す無制御なｍｉＲＮＡｓ（下方制御及び上方制御）は下記に与えられる。
【００６２】
次のｍｉＲＮＡｓは非代償性ヒト心臓（心不全）で誘導される（健常左心室組織のｎ＝４；罹患非代償性左心室組織のｎ＝４）：
ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１２（配列ＩＤ番号１０），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１（配列ＩＤ番号１４），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９ｂ（配列ＩＤ番号１５），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２９（配列ＩＤ番号１６），ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１７＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９９＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２００ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１３（配列ＩＤ番号１７），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２６＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｃ（配列ＩＤ番号１８），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０６ｂ（配列ＩＤ番号１９），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３０ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３８４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２４，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｅ，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｇ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１９９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２５ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６５，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３５，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｆ，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２６ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１４０＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３０ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１９２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１２９＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３３０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１６＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７３，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３６，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５４，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１５１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３４（配列ＩＤ番号５），ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ｃ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２７ｂ。
【００６３】
次のｍｉＲＮＡｓは非代償性ヒト心臓（心不全）で抑制される（健常左心室組織のｎ＝４；罹患非代償性左心室組織のｎ＝４）：
ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１７ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４１，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３８０＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｄ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９１＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２２ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１７＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ａ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｆ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３９，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９２＿５ｐ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３７６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９０（配列ＩＤ番号２４），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ａ＿５ｐ（配列ＩＤ番号２５），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１９（配列ＩＤ番号２６），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１５＿５ｐ（配列ＩＤ番号２７），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｂ（配列ＩＤ番号２８），ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｂ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２４ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｂ（配列ＩＤ番号２９）。
【００６４】
特定のｍｉＲＮＡｓの過剰発現が心筋細胞における胎児病理遺伝子プログラムの細胞性肥大及び活性化をもたらす
心筋細胞を参照に記載のように新生児ラットから分離し培養した（Ｂｕｒｋａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。９５％を越える培養細胞が心筋細胞特異的アクチニン発現を示し、細胞培養の非常に高い純度を結論付けることが可能になった。蛍光色素（Ｃｙ３）で標識されたｍｉＲ，ｍｉＲ−２１，ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２のスクランブル分子（Ｃｙ３−プレ−ｍｉＲ  ｍｉＲＮＡｓ，Ａｍｂｉｏｎ，米国，１００ｎＭ，４８時間）を、リポソーム型形質移入法（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，独国）を使用し、別々に又は組み合わせて培養心筋細胞に形質移入した（Ｔｈｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；図５Ａ，Ｂ）。形質移入４８時間後、細胞可溶化液を参照に記載のように細胞から精製した（Ｔｈｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。成体心筋細胞を参照に記載のように分離し培養した（Ｔｈｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。成体心筋細胞をそれらの典型的な長方形形態を基に同定し、成体心筋細胞であるという点からみても細胞培養純度は非常に高かった（図６Ａ）。成体心筋細胞をスクランブルＣｙ３−標識ｍｉＲＮＡ又はｍｉＲＮＡｓのセット（ｍｉＲ−２１，ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２，７２時間，２５ｎＭ）と共にリポソームにより形質移入した（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，独国）。細胞の大きさ用マーカーとして、画像分析プログラムＡｘｉｏＶｉｓｏｎ  Ｒｅｌ．４．４（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  ＧｍｂＨ，独国）を使用し培養新生児心筋細胞（形質移入４８時間後）及び培養成体心筋細胞（形質移入７２時間後）の表面を測定した。統計分析を一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）、続いてフィッシャー型多重比較検定（"Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｌｅａｓｔ−ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ"ｔｅｓｔ）の多重比較により行った。前記統計分析はＳｔａｔＶｉｅｗプログラム５．０（Ａｂａｃｕｓ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｂｅｒｋｌｅｙ，カリフォルニア州，米国）を使用し行った。統計学的差はＰ<０．０５と推定した。
【００６５】
心筋細胞生物学にとっての個々の無制御なｍｉＲＮＡｓの重要性を分析するため、不全ヒト心臓で上方制御される３個のｍｉＲＮＡｓ（ｍｉＲ−２１，ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２）は新生児及び成体心筋細胞において過剰発現した（図５、６参照）。形質移入効率をＣｙ−３標識プレ−ｍｉＲＮＡ分子を使用することによって分析し、それは新生児及び成体心筋細胞のいずれにおいても非常に高かった。（図５Ａ，Ｂ；図６Ａ参照；>８５％）。それに加えて、形質移入後、定量的ｍｉＲＮＡステムループＲＴ−ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ（登録商標）マイクロＲＮＡ分析，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，米国）により個々のｍｉＲＮＡｓ発現を測定した。新生児及び成体心筋細胞において、形質移入はｍｉＲＮＡｓであるｍｉＲ−２１，ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２の上方制御をもたらした（図５Ｃ，６Ｃ）。生きた心筋細胞のみに形質移入することができた（図６Ｂ）。個々のｍｉＲＮＡｓの過剰発現が肥大を含む細胞形態への相当な効果を与えた一方で、最大の効果は３個全てのｍｉＲＮＡｓ（ｍｉＲ−２１，ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２）の同時過剰発現により得ることができた（図５Ｂ、６Ｄ）。これらのｍｉＲＮＡｓの過剰発現のもう１つの結果は胎児遺伝子プログラムの再活性化であり、これは通常心肥大及び心不全を含む心疾患中に起こるものである。例えば、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ベータ−ＭＨＣ、アルファ骨格筋アクチン、ビリン２（ｖｉｌｌｉｎ２）、ｃｓｐｇ２、ｐｈｌｄａ１、ｈｓｐ９０、ＲＡＳＡ１、ＭＥＦ２ａ、ｃｒａｄｄ及びｄｔｎａの遺伝子発現は、発現量が罹患心臓の発現量になるようｍｉＲＮＡ過剰発現によって調節された（図５Ｄ，６Ｅ）。このセットのｍｉＲＮＡｓ（ｍｉＲ−２１，ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２）を成体心筋細胞に形質移入すると、同様に細胞肥大及び胎児遺伝子プログラム活性化の開始が結果として起こる（図６Ｄ，Ｅ，Ｆ）。スクランブルｍｉＲＮＡｓの形質移入は細胞肥大も胎児病理遺伝子プログラム活性化ももたらさなかった（図５，６）。
【００６６】
前記データは不全ヒト心臓における胎児遺伝子プログラムの再活性化の重要な制御因子として特定のｍｉＲＮＡｓを同定するものであり、従って、心不全症例における転写変化の説明に関する重要な貢献をなすものである。
【００６７】
インビボ及びインビトロのマウスモデルにおける心筋肥大発達中のマイクロＲＮＡ分析
インビボ：手術的介入によりマウスの大動脈径をかなり減少させた（"大動脈結紮"）。対照（"偽"手術動物）では、気管を同様に開放し大動脈を露出したが、大動脈結紮は行わなかった。３日及び２１日後、各マウスの総重量に対する左心室重量を測定し（図４参照）、その後ｍｉＲＮＡを上記のように分離した。その後、３日及び２１日後偽手術動物と比較して結紮大動脈を有する動物（"大動脈結紮動物"）のｍｉＲＮＡ発現プロファイルを確立した。無秩序なｍｉＲＮＡｓ（上方制御及び下方制御）は最適化される新治療に対して将来性の高い標的構造を表す。
【００６８】
次のｍｉＲＮＡｓは"大動脈結紮"３日後に誘導される（１グループあたりの動物数はｎ＝４）：
ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１０６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１２＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３７６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２２，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０２６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１４，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０２７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３２９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８８，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２１５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２１，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿２０＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２００ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ａ＿ＡＳ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３７６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７１，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３８０＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２３，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ａ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１０１ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１７＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｄ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６９＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４１，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０３９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２０，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２０２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２３ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｆ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ａ。
【００６９】
次のｍｉＲＮＡｓは"大動脈結紮"３日後に抑制される（１グループあたりの動物数はｎ＝４）：
ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ａ＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３０ａ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８５＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９３，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｈ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５２＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０１，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１６，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５００，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４６，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６６，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｂ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８２，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９４，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１４０＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６８＿１，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３３ａ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５９＿１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４３２＿ＡＳ，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３５２，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９０，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８４，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４９，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｆ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿７ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｅ＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７０，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０９５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｃ＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７５，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４５，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３３３，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４３２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９２，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１５＿３ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７９，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７２，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１７＿３ｐ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３５０，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１２９＿３ｐ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３３０，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７０，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２２ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４２＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｃ。
【００７０】
次のｍｉＲＮＡｓは"大動脈結紮"２１日後に誘導される（１グループあたりの動物数はｎ＝４）：
ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ａ＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１２＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｂ，ｍｍｕ＿ｌｅｔ＿７ｄ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４３２，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１４，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０２６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９１，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９１＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２４，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３２７，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０３９，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２０７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３５１，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９２＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１０，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０２７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１２＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｆ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２５＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１７ａ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８５，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３８０＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３０ａ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｄ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２４＿３ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｈ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２２ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７３＿ＡＳ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２１５，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４０９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３０，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２９，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９６ａ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３７６ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３８３，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３００，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７５，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９２＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９２，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｆ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９３ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４２９，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿２０＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２００ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６９＿３ｐ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２１７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１７＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７７，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４１１，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３３３，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４４，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９５，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿７＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１００。
【００７１】
次のｍｉＲＮＡｓは"大動脈結紮"２１日後に抑制される（１グループあたりの動物数はｎ＝４）：
ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８３，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３５２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３３ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２６，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１００，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２６ｂ，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｆ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２６ａ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３３７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２３ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２３ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２４，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｇ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｅ＿５ｐ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１２９＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４２＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２２ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２４＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８９，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１０６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２７ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４２２ａ，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０２９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３８０＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９５，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿４２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２００ｃ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１５１，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５９＿１，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｉ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２７ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１４０＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１３，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿１５１＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２５ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｅ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２８，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０３，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０５，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８５＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｂ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９３，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１９９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｄ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９９ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３２２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２３，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９１＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４８ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｂ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４３２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６２，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８０，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｅ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９２，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１５５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｅ＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０５，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９４，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８３，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６８＿１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１７＿３ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４８ａ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３３０，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿７ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９６，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ａ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２４＿５ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０３８＿１，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４１２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９３ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９９＿５ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｅ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４４９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｅ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４１０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２４ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３５ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１６＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２８。
【００７２】
新生児心筋細胞肥大のインビトロ誘導
まず、マウスからの新生児心筋細胞を分離し培養した。その後各１０μＭのフェニレフリン及びイソプロテレノール４８時間処置を行い、その処置は培養心筋細胞の細胞肥大をもたらした（Ｂｕｉｔｒａｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。その後、この例でも、処置及び非処置（非肥大）心筋細胞のｍｉＲＮＡ発現プロファイルを確立した。無秩序ｍｉＲＮＡｓ（上方制御及び下方制御）は心肥大の最適化される新治療に対して将来性の高い標的構造を表す。
【００７３】
次のｍｉＲＮＡｓは培養新生児心筋細胞の処置２日後（各１０μＭのフェニレフリン及びイソプロテレノール）に誘導される（１グループあたりの検定数はｎ＝３）：
ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｃ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１２４ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１０７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２２４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１７，ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１３，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４２４，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１０６ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｃ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２１７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８８，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９１＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１７＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３３８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４２＿５ｐ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９２＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０２ｄ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０２７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３８４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９２＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０８，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１７＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２１５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４２＿３ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ｃ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿１４０＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３０ｂ。
【００７４】
次のｍｉＲＮＡｓは培養新生児心筋細胞の処置２日後（各１０μＭのフェニレフリン及びイソプロテレノール）に抑制される（１グループあたりの検定数はｎ＝３）：
ｈｓａ＿ｌｅｔ＿７ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９３ｂ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９７，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９３，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ａ＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０９７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８５＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ａ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３３７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｅ＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４８９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ｅ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４３２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ａ＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９６，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６８＿１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９９，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿２９８，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０７６，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿７ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２４＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８８，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０６２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１３０ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３８２，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１５＿５ｐ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２０ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５２６ｂ＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１２＿５ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５９＿１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０４，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８４，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２３ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５００，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｃ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４１０，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４９２，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０９５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２０２＿ＡＳ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３８０＿５ｐ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１８ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４３２，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３０ｄ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４４９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿４５０，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０５５，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２９ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９ａ，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７３＿ＡＳ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７０８３，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３４ａ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿７，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿２４，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿４２１，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３８３，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３３６，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１８１ｂ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０３，ｒｎｏ＿ｍｉＲ＿３４９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３６１，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４２９，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３８４，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１００，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５１９ｅ＿ＡＳ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿４０９，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９９ｂ，ａｍｂｉ＿ｍｉＲ＿７１０１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿３７１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１５１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１９ｂ，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３５１，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿９９ｂ，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿５０８，ｈｓａ＿ｍｉＲ＿１４０，ｍｍｕ＿ｍｉＲ＿３４６。
【００７５】
実施された異なる方法及び病態生理学的状態（ヒト心不全、ラット梗塞モデル、"大動脈結紮"の３日及び２１日後に引き起こされるマウス肥大モデル、薬理学的インビトロ心肥大モデル）によりｍｉＲＮＡ発現に関し同じ傾向に従う結果がもたらされる。
【００７６】
最も効果的なｍｉＲＮＡ候補を次の基準に従い選択した：
（１）心筋梗塞後の誘導レベル（約２倍を越えて誘導される）、また予期された各ｍｉＲＮＡ制御標的遺伝子（例えばｍｉＲＮＡ−２１２）を基に慢性心筋梗塞後誘導ｍｉＲＮＡｓを選択した。
（２）心肥大及び心不全における誘導ｍｉＲＮＡｓを次の基準に従い選択した：
（ａ）心不全患者のヒト心臓における約１．２倍以上の誘導及び
（ｂ）追加実施モデル（３日及び２１日後の大動脈結紮；薬理学的インビトロ肥大モデル）のうちの１個における少なくとも１つのさらなる誘導。
【００７７】
配列ＩＤ番号、データベース（Ｓａｎｇｅｒ）の名称及びＭＩリファレンスを以下の表２に要約する。
【００７８】
【表２】
2010505427.tif 000006
【００７９】
最も望ましいｍｉＲＮＡｓを以下に再度要約する。
【００８０】
上方制御ｍｉＲＮＡｓ
（１） ｍｉＲ−２１２（配列ＩＤ番号１０）
このｍｉＲＮＡは特にヒト心不全で上方制御され（５．６倍）及びラットの慢性心筋梗塞後に上方制御される（２．４倍）。
（２）ｍｉＲ−２１４（配列ＩＤ番号１１）
このｍｉＲＮＡは僅かにヒト心不全で上方制御され（１．２倍）、明らかにマウスの心肥大早期及び後期（大動脈結紮３日及び２１日）に上方制御され（各々１．５倍及び２．１倍）、また慢性心筋梗塞後（２．６倍）及びインビトロ薬理学的心肥大誘導後（１．５倍）にも上方制御される。
（３）ｍｉＲ−２１（配列ＩＤ番号１４）
このｍｉＲＮＡは特にヒト心不全で上方制御され（３．３倍）、マウス心肥大後の早期（大動脈結紮３日）で上方制御される（３．０倍）。
（４）ｍｉＲ−１３４（配列ＩＤ番号５）
このｍｉＲＮＡは僅かにヒト心不全で上方制御され（１．２倍）、明らかにマウスの心肥大後期（大動脈結紮２１日）に上方制御され（１．７倍）、またラットの慢性心筋梗塞後（３．３倍）でも上方制御される。
（５）ｍｉＲ−１２９（配列ＩＤ番号１６）
このｍｉＲＮＡはヒト心不全で上方制御され（２．７倍）、明らかにマウスの心肥大後期（大動脈結紮２１日）に上方制御され（１．４倍）、またラットの慢性心筋梗塞後（１．４倍）にも上方制御される。
【００８１】
下方制御ｍｉＲＮＡｓ
（６）ｍｉＲ−１８２（配列ＩＤ番号２０）
このｍｉＲＮＡはヒト心不全で下方制御され（−１．３倍）、明らかにマウスの心肥大早期及び後期（大動脈結紮３日及び２１日）に下方制御され（各々−１．８倍及び−２．２倍）、またラットの慢性心筋梗塞後（−４．０倍）にも下方制御される。
（７）ｍｉＲ−２９０（配列ＩＤ番号２４）
このｍｉＲＮＡはヒト心不全で下方制御され（−１．４倍）、マウスの心肥大早期（大動脈結紮３日）に下方制御され（−１．６倍）、またラットの慢性心筋梗塞後（−１．４倍）にも下方制御される。
【００８２】
特に適した治療標的物としてのｍｉｒ−２１
マウスモデル心肥大誘導後に本発明者はｍｉＲ−２１発現増加を発見した（上記参照）。従って、彼らはインビボでのｍｉＲ−２１抑制により圧負荷（大動脈結紮手術による大動脈径減少）に起因する心肥大の発達を防げるかを調べた。彼らは最初バイオインフォルマティックス分析を利用し、ｍｉＲＢａｓｅデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）を使用して３’非翻訳領域中にｍｉＲ−２１結合部位のある将来性の高い標的物を探索した。ここで彼らは将来性の高いｍｉＲ−２１標的物としてＳｐｒｏｕｔｙ  １（ＳＰＲＹ１；アクセスナンバー：ＮＭ＿００１０９７５２４）、サルカルメニン（ｓａｒｃａｌｕｍｅｎｉｎ；アクセスナンバー：ＮＭ＿００１０９８８１４）及びトロポミオシン（ｔｒｏｐｏｍｙｏｓｉｎ；アクセスナンバー：ＮＭ＿００１０１８００５）を同定した。特にＳＰＲＹ１−ｍＲＮＡの３’非翻訳領域は多数の保存されたｍｉＲ結合部位を含み、その中の１個は心肥大及び心不全の心臓で上方制御されるｍｉＲ−２１に対する結合部位である。ＳＰＲＹ１及びサルカルメニン転写後制御におけるｍｉＲ−２１の直接的な役割を調べるために、本発明者はプレ−ｍｉＲ−２１分子（Ａｍｂｉｏｎ，プレ−ｍｉＲｓ，５０ｎＭ，７２時間）を培養心筋細胞に形質移入し、ＳＰＲＹ１及びサルカルメニンタンパク質発現を分析した。彼らは培養心筋細胞中のプレ−ｍｉＲ−２１過剰発現後ＳＰＲＹ１及びサルカルメニンタンパク質発現の有意な減少を観察した（図７Ａ，Ｂ）。これらのタンパク質の減少は左心室の圧負荷後におそらく心肥大及び心臓機能障害の進行をもたらす。本発明者はまたマウスの左心室圧負荷後ＳＰＲＹ１タンパク質発現減少（図７Ｃ）及び細胞外シグナル−制御キナーゼ１／２（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  １／２：ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ１／２）のリン酸化増加（図７Ｄ）を観察した。
【００８３】
本発明者はその後内因性ｍｉＲ−２１発現（Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１，Ａｌｎｙｌａｍ）を特異的に下方制御するため、頚静脈に挿入されたカテーテルを介し化学的修飾を受けたオリゴヌクレオチドを注入した。Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）配列をＣｙ３色素でさらに標識したＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−１８１ａと共に、文献に記載通り逆相補性オリゴヌクレオチドとして合成した（Ｋｒｕｔｚｆｅｌｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【００８４】
大動脈径の手術的減少（大動脈結紮）後２４時間で処置を開始した。毎朝８０ｍｇ／ｋｇ／日を１日１回３日間経静脈投与した。Ｃｙ−３標識Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）注入３時間後心臓を取り出し、Ｃ３標識Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）の心臓の取り込みを免疫蛍光により分析した。Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）の心臓への有意な取り込みを検出できた（図７Ｅ）。最初の３日のＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置３週間後でさえ、リアルタイムＰＣＲ分析により心臓性ｍｉＲ−２１発現の有意な抑制が驚くほどに見られた（図７Ｆ）。心臓性ｍｉＲ−２１発現抑制に加えて、この処置は大動脈結紮術後のＳＰＲＹ１タンパク質発現増加をもたらした（図７Ｃ）。大動脈結紮後に観察されるｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ１／２発現増加を３日間のＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置の結果として完全に防いだ（図７Ｄ）。体重で正規化される心臓重量は大動脈結紮後３週間で有意に増加するが、それにも関らずＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置の結果として完全に正常化した（図７Ｇ）。大動脈結紮手術３週後の心臓切片中の筋細胞の大きさの増加はＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置によって完全に抑制することができた（図８Ａ）。偽手術マウスのＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置は心臓重量又は筋細胞の大きさの何の変化ももたらさなかった（図７Ｇ、８Ａ）。心機能を心エコー及びカテーテルを基にした容積／圧測定により分析した。左室収縮終期径及び拡張終期径のいずれも大動脈結紮３週後に増加したが、その一方で短縮率（心機能の目安）はかなり制限された（図８Ｂ）。大動脈結紮により生じた左心室圧負荷は、左室拡張終期圧（ｌｅｆｔ−ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ−ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ：ＬＶＥＤｐ；２．８±１．３ｍｍＨｇ（偽）対７．２±１．７ｍｍＨｇ（大動脈結紮）；ｐ＝０．０９）の測定可能な増加及び心臓駆出率の減少（５５．９％±８．０％（偽）対２４．７％±５．６％（大動脈結紮）；ｐ<０．０５）をもたらした。大動脈結紮後のＡｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置は驚くほどに左室拡張を防ぎ、短縮率を正常化した（図８Ｂ）。Ａｎｔａｇｏｍｉｒ（登録商標）−２１処置後駆出率（ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ：ＥＦ）もまた改善し、左室拡張終期圧（ＬＶＥＤｐ）も正常値に戻った（ＥＦ：５０．１％±１３．１％；ＬＶＥＤｐ：２．４±１．５ｍｍＨｇ）。
【００８５】
ヒトにおける実施形態の実施例−治療
心血管系ｍｉＲＮＡｓ調節を心肥大、心不全又は心筋梗塞のような心血管性疾患の予防又は治療としてヒトにおいてもうまく使用することができた。心血管系ｍｉＲＮＡ発現を増加させる又は防ぐ物質を様々な経路、例えば、経静脈、経動脈、カテーテルを介して又は開胸手術中に心臓内、皮下、経皮、吸入、経口、経直腸などで投与することが可能である。治療は心肥大の患者、心筋梗塞後の患者又は急性又は慢性心疾患又は冠動脈心疾患の患者で行われた。本発明者によって先に行われたインビトロ及び動物試験を考慮し、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−１２９及びｍｉＲ−２１２発現阻害は様々な心血管疾患を防ぐ原因療法的アプローチとして有望であるようである。
【００８６】
ヒトにおける実施形態の実施例−診断
様々なｍｉＲＮＡｓの心臓性発現変化が心疾患、特に心肥大及び心不全の進行に先立つことをデータは証明する。患者の心臓におけるｍｉＲＮＡｓ発現を測定するため、心筋生検が行われてもよい。この心筋からｍｉＲＮＡを分離し、発現量を測定できる。個々のｍｉＲＮＡｓの増加またはそれらの任意の組み合わせ、特にｍｉＲ−２１（配列ＩＤ番号１４）、ｍｉＲ-１２９、ｍｉＲ−２１２（配列ＩＤ番号１０）、ｍｉＲ−２１４（配列ＩＤ番号１１）、ｍｉＲ−１３４（配列ＩＤ番号５）は心肥大及び／又は心不全の進行の危険性増加又は既に存在する心肥大及び／又は心不全の診断に使用できる。ｍｉＲ−１８２（配列ＩＤ番号２０）又はｍｉＲ−２９０（配列ＩＤ番号２４）又はそれらの任意の組み合わせの下方制御は心肥大及び／又は心不全の進行の危険性増加又は既に存在する心肥大及び／又は心不全の診断に使用できる。同様に、ｍｉＲ−２１（配列ＩＤ番号１４）、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−２１２（配列ＩＤ番号１０）、ｍｉＲ-２１４（配列ＩＤ番号１１）、ｍｉＲ−１３４（配列ＩＤ番号５）の発現増加と、ｍｉＲ−１８２（配列ＩＤ番号２０）又はｍｉＲ−２９０（配列ＩＤ番号２４）の発現減少との組み合わせは心肥大及び／又は心不全の進行の危険性増加又は既に存在する心肥大及び／又は心不全の診断に使用できる。各ｍｉＲＮＡｓ発現量をマイクロアレイ分析、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロッティング、又は他の適した方法のいずれかを介して測定されてもよい。
【図１】
2010505427.tif 000007
【図２】
2010505427.tif 000008
【図３】
2010505427.tif 000009
【図４】
2010505427.tif 000010
【図５Ａ】
2010505427.tif 000011
【図５Ｂ】
2010505427.tif 000012
【図５Ｃ】
2010505427.tif 000013
【図５Ｄ】
2010505427.tif 000014
【図６Ａ】
2010505427.tif 000015
【図６Ｂ】
2010505427.tif 000016
【図６Ｃ】
2010505427.tif 000017
【図６Ｄ】
2010505427.tif 000018
【図６Ｅ】
2010505427.tif 000019
【図７Ａ】
2010505427.tif 000020
【図７Ｂ】
2010505427.tif 000021
【図７Ｃ】
2010505427.tif 000022
【図７Ｄ】
2010505427.tif 000023
【図７Ｅ】
2010505427.tif 000024
【図７Ｆ】
2010505427.tif 000025
【図７Ｇ】
2010505427.tif 000026
【図８Ａ】
2010505427.tif 000027
【図８Ｂ】
2010505427.tif 000028
【国際調査報告】
2010505427.tif 000029
2010505427.tif 000030
2010505427.tif 000031
2010505427.tif 000032
2010505427.tif 000033
2010505427.tif 000034
2010505427.tif 000035
2010505427.tif 000036
2010505427.tif 000037
2010505427.tif 000038
2010505427.tif 000039
2010505427.tif 000040
2010505427.tif 000041
2010505427.tif 000042
2010505427.tif 000043
2010505427.tif 000044
2010505427.tif 000045