(57)【要約】  本発明は、非ホジキンリンパ腫の治療に関する。本発明は、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの高分子プロドラックを、それらを必要とする哺乳動物に使用する方法を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とする哺乳動物における非ホジキンリンパ腫の治療に有用な薬剤の調製に化学式（Ｉ）の化合物を使用する方法であって、
前記化学式（Ｉ）の化合物が下記構造を含み： 
【化１】
2010503691.tif 000022
ここで、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、独立してＯＨまたは（Ｌ）m−Ｄであり、
Ｌは二官能性のリンカーであり、
Ｄは、
【化２】
2010503691.tif 000023
であり、
ｍは、０または正の整数であり、
ｎは正の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4のすべてがＯＨではないことを条件とする、方法。
【請求項２】
前記化学式（Ｉ）の化合物が、約０．３ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約９０ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲の量で提供されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記量が、約０．９ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約３０ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲であることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記化学式（Ｉ）の化合物が、約１ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約１６ｍｇ／ｍ2体表面／回を毎週与えられるプロトコルにしたがって３週間にわたり提供され、その後の１週間は治療しないというサイクルを、約３回繰り返すことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記化合物が、３週間毎に、約１．２５ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約４５ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲の量で提供されることを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項６】
Ｌがアミノ酸またはアミノ酸誘導体であり、
ここで前記アミノ酸誘導体が、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、β−アラニン、β−アミノ−プロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ピペリジン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，４−アミノ酪酸、デスモシン、２，２−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、６−Ｎ−メチル−リジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、およびオルニチンからなる群より選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
Ｌが、グリシン、アラニン、メチオニン、またはサルコシンであることを特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項８】
Ｌがグリシンであることを特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項９】
Ｌが：
【化３−１】
2010503691.tif 000024
【化３−２】
2010503691.tif 000025
【化３−３】
2010503691.tif 000026
からなる群より選択されることを特徴とし、
ここで、
Ｒ21−Ｒ29は独立して、水素、アミノ、置換アミノ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シリルエーテル、スルホニル、メルカプト、Ｃ1-6アルキルメルカプト、アリールメルカプト、置換アリールメルカプト、置換Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ3-19分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ2-6置換アルケニル、Ｃ2-6置換アルキニル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ1-6ヘテロアルキル、置換Ｃ1-6ヘテロアルキル、Ｃ1-6アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ1-6へテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ2-6アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ2-6アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ2-6置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ2-6置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6置換アルカノイルオキシ、および置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され、
（ｔ）、（ｔ'）および（ｙ）は、独立して、０または正の整数であり、
（ｖ）は０または１である。
【請求項１０】
ｍが約１〜約１０であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１１】
ｍが約１であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１２】
ｎが約２８〜約３４１であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１３】
ｎが約１１４〜約２２７であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】
ｎが約２２７であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が：
【化４−１】
2010503691.tif 000027
【化４−２】
2010503691.tif 000028
からなる群より選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が：
【化５】
2010503691.tif 000029
であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１７】
必要とする哺乳動物における非ホジキンリンパ腫の治療に有用な薬剤の調製に化学式（ＩＩ）の化合物を使用する方法であって、
化学式（ＩＩ）の化合物が：
【化６】
2010503691.tif 000030
を含み、
前記化合物が、約０．３ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約９０ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲の量で提供され、
ｎが約２２７である
ことを特徴とする方法。
【請求項１８】
前記化合物が、約０．９ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約３０ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲の量で提供されることを特徴とする請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記化合物が、約１ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約１６ｍｇ／ｍ2体表面／回を毎週与えられるプロトコルにしたがって３週間にわたり提供され、その後の１週間は治療しないというサイクルを、約３回繰り返すことを特徴とする請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、３週間毎に、約１．２５ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約４５ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲の量で提供されることを特徴とする請求項１９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、２００７年２月９日に出願した米国特許出願第１１／７０４，６０７号の継続出願であり、これはすなわち、参照することにより各内容を本明細書に援用する、２００６年２月９日出願の米国仮特許出願第６０／７７２，４６４号、２００６年６月９日出願の米国仮特許出願第６０／８０４，３９１号、２００６年９月１５日出願の米国仮特許出願第６０／８４４，９３８号、および２００６年１１月６日出願の米国仮特許出願第６０／８６４，５１６号の各優先権の利益を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの高分子プロドラックを用いたリンパ腫の治療方法に関する。特に、本発明は、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンのポリエチレングリコール複合体を用いた非ホジキンリンパ腫の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、リンパ球などの免疫系に関連する癌の一種である。ＮＨＬは、脾臓、リンパ節、または扁桃腺などのリンパ系に関連する任意の器官で進行しうる。ＮＨＬは、年齢を問わず発症し、多くの場合、リンパ節の肥大、発熱、および体重の減少を特徴とする。ＮＨＬは、一般に、進行性の（進行の速い）タイプと遅発性の（進行の遅い）タイプに分類される。ＮＨＬはまた、Ｂ細胞型ＮＨＬまたはＴ細胞型ＮＨＬのいずれかに分類される。Ｂ細胞型ＮＨＬとして、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、およびマントル細胞リンパ腫が挙げられる。Ｔ細胞型ＮＨＬとしては、菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、および前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。骨髄または幹細胞の移植手術後のリンパ増殖症候群に関係するリンパ腫は、通常、Ｂ細胞型ＮＨＬである。予後診断および治療は、疾患の段階および種類に応じて決まる。
【０００４】
長年にわたり、非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療方法が、数種類提案されている。いくつかの試みには、イリノテカン（ＣＰＴ−１１、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））としても知られるＣＰＴ−１１に基づいた治療が含まれる。これらの試みについての結果は、失敗であると考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
長年にわたり、非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療方法が、数種類提案されている。いくつかの試みには、イリノテカン（ＣＰＴ−１１、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））としても知られるＣＰＴ−１１に基づいた治療が含まれる。これらの試みについての結果は、失敗であると考えられている。本発明は、これらの治療の代替方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の１つの態様では、非ホジキンリンパ腫を有する患者を治療する方法が提供される。治療には、化学式（Ｉ）の化合物を有効量で、それらを必要とする患者に投与する工程が含まれる。
【０００７】
本発明のこの態様に従って用いられる化学式（Ｉ）の化合物として、
【化１】
2010503691.tif 000002
【０００８】
が挙げられ、
ここで、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、独立してＯＨまたは（Ｌ）m−Ｄであり、
Ｌは二官能性のリンカーであり、
Ｄは、
【化２】
2010503691.tif 000003
【０００９】
であり、
ｍは０または正の整数であり、
ｎは正の整数であり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、すべてがＯＨではないことを条件とする。
【００１０】
本発明のある好ましい態様では、ｎは約２８〜約３４１であり、約２２７であることが好ましい。
【００１１】
利点については、以下の説明および図面から明らかになるであろう。
【００１２】
本発明の目的では、「残基」という用語は、化合物の部分を意味すると解されるべきものとし、それは、すなわち、別の化合物との置換反応を受けた後に残る、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンやアミノ酸などのことをいう。
【００１３】
本発明の目的では、「ポリマー含有残基」または「ＰＥＧ残基」という用語は、それぞれ、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン含有化合物との反応を受けた後に残る、ポリマーまたはＰＥＧ部分を意味すると解されるべきものとする。
【００１４】
本発明の目的では、「アルキル」という用語には、直鎖、分岐鎖、置換アルキルが含まれると解されるべきものとし、例えばハロ−、アルコキシ−、ニトロ−Ｃ1-12アルキルなどが含まれるが、Ｃ1-4アルキル、Ｃ3-8シクロアルキルまたは置換シクロアルキルなどが好ましい。
【００１５】
本発明の目的では、「置換（された）」という用語は、官能基または化合物内に含まれる１つ以上の原子に１つ以上の異なる原子を加えるか、１つ以上の異なる原子と置き換えることを含むと解されるべきものとする。
【００１６】
本発明の目的では、置換アルキルとしては、カルボキシアルキル類、アミノアルキル類、ジアルキルアミノ類、ヒドロキシアルキル類およびメルカプトアルキル類が挙げられ；置換アルキニルとしては、カルボキシアルキニル類、アミノアルキニル類、ジアルキニルアミノ類、ヒドロキシアルキニル類およびメルカプトアルキニル類が挙げられ；置換シクロアルキルとしては、４−クロロシクロヘキシルのような部分が挙げられ；アリールとしては、ナフチルのような部分が挙げられ；置換アリールとしては、３−ブロモフェニルのような部分が挙げられ；アラルキルとしては、トリルのような部分が挙げられ；ヘテロアルキルとしては、エチルチオフェンのような部分が挙げられ；アルコキシとしては、メトキシのような部分が挙げられ；フェノキシとしては、３−ニトロフェノキシのような部分が挙げられる。また、ハロには、フルオロ、クロロ、ヨードおよびブロモが含まれるものと解されるべきである。
【００１７】
本発明の目的では、「有効量」および「十分量」という用語は、効果が当業者によって理解されるような、所望の効果または治療効果を達成する量を意味すべきものとする。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】実施例１〜２に記載される４アームポリエチレングリコール酸を調製するための反応スキームの概略図。
【図２】実施例３〜７に記載される４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン）を調製するための反応スキームの概略図。
【図３】実施例１０に記載される４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン）のインビトロ代謝。
【図４】実施例１２に記載される４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン）の安定性。
【図５】実施例１２に記載される４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン）の安定性におけるｐＨの効果。
【図６】実施例１３に記載される４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン）の薬力学的特性。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、リンパ腫の治療方法に関する。本発明の１つの態様では、非ホジキンリンパ腫を有する患者を治療する方法が提供される。本方法には、化学式（Ｉ）の化合物を有効量で、それらを必要とする患者に投与する工程が含まれる。用いられる１つの実施の形態では、化学式（Ｉ）の化合物は、次の構造式を有し：
【化３】
2010503691.tif 000004
【００２０】
ここで、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、独立してＯＨまたは（Ｌ）m−Ｄであり、
Ｌは二官能性リンカーであり、
Ｄは、
【化４】
2010503691.tif 000005
【００２１】
であり、
ｍは、０または正の整数であり、約１〜約１０であることが好ましく、１であることがさらに好ましく、
ｎは正の整数であり、約２８〜約３４１であることが好ましく、約１１４〜約２２７であることがさらに好ましく、約２２７であることが最も好ましく、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、すべてがＯＨではないことを条件とする。
【００２２】
一部の好ましい態様では、治療には、化学式（ＩＩ）：
【化５】
2010503691.tif 000006
【００２３】
を有する化合物を投与する工程が含まれる。投与量は、約０．３ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約９０ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲でありうる。投与量は、約０．９ｍｇ／ｍ2〜約３０ｍｇ／ｍ2であることがさらに好ましい。本発明の目的では、用量は、投与されるポリマー複合体の量ではなく、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの量を意味するものと解されるべきである。
【００２４】
別の態様では、本発明には、必要とする哺乳動物における非ホジキンリンパ腫の治療に有用な薬剤の調製のために、化学式（Ｉ）の化合物を使用する方法が含まれる。
【００２５】
Ａ．マルチアームポリマー
本明細書に記載される化合物のポリマー部分には、マルチアームＰＥＧ類が含まれる。マルチアームＰＥＧ類は、参照することによりその開示が本明細書に援用される、日油株式会社（NOF Corp.）の薬物送達システムカタログ第８版（２００６年４月）に記載されるものである。１つの特に好ましいマルチアームＰＥＧは、次の構造式を有し：
【化６】
2010503691.tif 000007
【００２６】
ここでｎは正の整数である。
【００２７】
本発明の１つの好適な実施の形態では、ポリマーの重合度（ｎ）は、約２８〜約３４１であり、約５，０００〜約６０，０００の総分子量を有するポリマーを与え、好ましくは、約１１４〜約２２７の重合度で約２０，０００〜約４０，０００の総分子量を有するポリマーを与える。本発明の１つの特に好適な実施の形態では、ｎは約２２７である。
【００２８】
Ｂ．二官能性リンカー
本発明のある好ましい態様では、二官能性リンカーには、アミノ酸が含まれる。任意の既知の天然Ｌ−アミノ酸から選択されうるアミノ酸は、例を挙げると、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、セリン、スレオニン、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、および／またはそれらの組合せなど、枚挙にいとまがない。別の態様では、二官能性リンカー（Ｌ）はペプチド残基であって差し支えない。ペプチドのサイズは、例えば、約２〜約１０のアミノ酸残基の範囲であってよい。
【００２９】
天然アミノ酸、ならびに、さまざまな、当技術分野で既知の、疎水性または非疎水性の、非天然アミノ酸（ＤまたはＬ体）の誘導体および類似体もまた、本発明の範囲内にあることが意図されている。単に例証するにすぎないが、アミノ酸の類似体および誘導体には、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、β−アラニン、β−アミノ−プロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ピペリジン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，４−アミノ酪酸、デスモシン、２，２−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルグリシンまたはサルコシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、６−Ｎ−メチル−リジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチンおよびその他のものなど、枚挙にいとまがなく、これらは、参照することにより本明細書に援用される、米国連邦官報（63 Fed. Reg.），２９６２０，２９６２２に記載されている。いくつかの好適なＬ基として、グリシン、アラニン、メチオニンまたはサルコシンが挙げられる。本発明の化合物では、リンカー基（Ｌ）としてグリシンがさらに好ましい。
【００３０】
本発明の別の態様では、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンおよびポリマーが結合した後のＬは、下記の群から選択することができる：
【化７−１】
2010503691.tif 000008
【化７−２】
2010503691.tif 000009
【化７−３】
2010503691.tif 000010
【００３１】
ここで、
Ｒ21−Ｒ29は独立して、水素、アミノ、置換アミノ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シリルエーテル、スルホニル、メルカプト、Ｃ1-6アルキルメルカプト、アリールメルカプト、置換アリールメルカプト、置換Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ3-19分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ2-6置換アルケニル、Ｃ2-6置換アルキニル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ1-6ヘテロアルキル、置換Ｃ1-6ヘテロアルキル、Ｃ1-6アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ1-6へテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ2-6アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ2-6アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ2-6置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ2-6置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6置換アルカノイルオキシ、および置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され、
（ｔ）、（ｔ'）および（ｙ）は、独立して、０または正の整数であり、約１〜約１０が好ましく、
（ｖ）は０または１である。
【００３２】
いくつかの好適な実施の形態では、Ｌとして下記のものが挙げられ：
【化８−１】
2010503691.tif 000011
【化８−２】
2010503691.tif 000012
【化８−３】
2010503691.tif 000013
【００３３】
ここで、
（ｔ）、（ｔ'）および（ｙ）は、独立して０または正の整数であり、約１〜約１０が好ましく、
（ｖ）は０または１である。
【００３４】
本発明の別の好適な態様では、化合物には、１〜１０単位までの二官能性リンカーが含まれる。１単位からなる二官能性リンカーが含まれることがさらに好ましく、この場合、ｍは１である。
【００３５】
さらなるリンカーについては、参照することによりその内容が本明細書に援用される、Greenwaldら（Bioorganic & Medicinal Chemistry, 1998, 6:551-562）の表１に記載されている。
【００３６】
Ｃ．プロドラッグの合成
一般に、治療に用いられる本発明のプロドラッグは、アミノ基がポリマーのカルボン酸と反応して結合を生じさせるのに十分な条件下で、１当量以上の活性化マルチアームポリマーを、例えば、活性部位当たり１当量以上の７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン−アミノ酸複合体と反応させることによって調製される。
【００３７】
さらに具体的には、本発明は、
１）利用可能な２０−ヒドロキシル基を含む、１当量の７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン、および、利用可能なカルボン酸基を含む、１当量以上の二官能性リンカーを提供する工程と、
２）１,（３−ジメチルアミノプロピル）３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（または１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）、任意の適切なジアルキルカルボジイミド、向山試薬（例えば、２‐ハロ‐１‐アルキル‐ピリジニウムハライド）またはプロピルホスホン酸環状無水物（ＰＰＡＣＡ）など）のようなカップリング試薬、ならびに、ＤＭＡＰなどの適切な塩基の存在下、前記２種類の反応物質を反応させて、ＤＣＭ（またはＤＭＦ、クロロホルム、トルエン、またはそれらの混合液）などの不活性溶媒中に７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン二官能性リンカー中間体を形成する工程と、
３）例えばSigma Chemical社などの供給元から入手可能であるか、あるいは、０℃〜２２℃までの温度で既知の技法を用いて合成される、１,（３−ジメチルアミノプロピル）３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、ＰＰＡＣ（または１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）、任意の適切なジアルキルカルボジイミド、向山試薬（例えば、２‐ハロ‐１‐アルキル‐ピリジニウムハライド)またはプロピルホスホン酸環状無水物（ＰＰＡＣＡ）など）などのカップリング試薬、ならびにＤＭＡＰなどの適切な塩基の存在下、ＤＣＭ（またはＤＭＦ、クロロホルム、トルエンまたはそれらの混合液）などの不活性溶媒中で、活性部位当たり１当量以上（例えば、実施例６では２当量を用いた）の、アミノ基を有する得られた中間体を、１当量の、ＰＥＧ‐酸などの活性化ポリマーと反応させる工程と、
を有してなる。
【００３８】
１つの好適な態様では、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの１０‐ヒドロキシル基は、工程１）の前に保護化される。
【００３９】
７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン中間体自体が良好な溶解性を有しており、効率的かつ効果的に純度の高い形態に精製することが可能なことから、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの１０‐ヒドロキシル基には、芳香族の保護基が好ましい。例えば、ＴＢＤＰＳＣｌ、ＴＢＤＭＳＣｌおよびＴＭＳＣｌなどのシリル含有保護基を用いて、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの１０‐ヒドロキシル基を保護することができる。
【００４０】
活性化ポリマー、すなわち、１〜４つの末端カルボキシル酸基を含むポリマーは、例えば、日油株式会社のSunbright型、または末端ＯＨ基を有する他の分岐鎖ポリマーを、当業者に周知の標準的技法を使用して、対応するカルボキシル酸誘導体に転換させることによって、調製することができる。例えば、本明細書の実施例１〜２、および、参照することによりその内容が本明細書に援用される、本発明の譲受人に譲渡された米国特許第５，６０５，９７６号明細書を参照のこと。
【００４１】
第１および第２のカップリング試薬は同一でも、異なっていてもよい。
【００４２】
好適な二官能性リンカー基の例としては、グリシン、アラニン、メチオニン、サルコシンなどが挙げられる。別の合成法も、必要以上の実験をすることなく利用することができる。
【００４３】
本発明にしたがって投与される化合物としては下記のものが挙げられる：
【化９−１】
2010503691.tif 000014
【化９−２】
2010503691.tif 000015
【００４４】
１つの特に好適な治療方法には、下記構造を有する化合物を投与する工程が含まれる:
【化１０】
2010503691.tif 000016
【００４５】
ここで、ポリマーの４本のアームすべてがグリシンを介して７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンと結合しており(conjugated)、ポリマー部分は、約４０，０００の分子量を有する。
【００４６】
Ｄ．組成物／調合薬
本発明のポリマー複合体を含む医薬組成物は、当技術分野で周知の方法によって製造されて差し支えなく、例えば、さまざまな周知の混合、溶解、粒化、粉末化、乳化、カプセル化、封入化、または凍結乾燥化法の利用が挙げられる。賦形剤、および、活性化合物を薬学的に利用可能な製剤にする過程を促進する助剤を含む、１種類以上の生理的に許容される担体と結合させて、組成物を製剤して差し支えない。適切な製剤は、選択される投与経路に応じて決まる。本発明の多くの態様では、非経口の経路が好ましい。
【００４７】
限定はしないが、静脈注射、筋肉注射および皮下注射を含む注射では、本発明の化合物は水溶液の形態で製剤されて差し支えなく、生理食塩緩衝液あるいは限定はしないがピロリドンまたはジメチルスルホキシドを含む極性溶媒など、生理的に適合した緩衝液の形態が好ましい。
【００４８】
本明細書に記載される化合物はまた、例えばボーラス注入法または持続注入法による非経口的投与用に製剤されてもよい。注入用の製剤は、例えば、アンプルまたは複数回投与用の容器などの単位投薬形態であって構わない。有用な組成物としては、限定はしないが、懸濁液、溶液、あるいは、油性または水性媒体中のエマルションが挙げられ、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの補助剤を含めてもよい。非経口投与用の医薬組成物としては、限定はしないが活性化合物の塩（好適なもの）などの水溶性型の水溶液が挙げられる。さらには、活性化合物の懸濁液は、脂肪親和性媒体の形態で調製されて差し支えない。適切な脂肪親和性の媒体としては、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチルおよびトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームなどの物質が挙げられる。水性懸濁注入液に、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなど、懸濁液の粘度を上昇させる物質を含めてもよい。随意的に、適切な安定剤および／または化合物の溶解性を高める薬剤を懸濁液に含めて、高濃縮液を調製して差し支えない。あるいは、活性成分は、使用前に、殺菌済みの発熱物質を含まない水などの適切な媒体で構成する、粉末の形態であってもよい。
【００４９】
経口投与では、活性化合物を当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と混合することによって、化合物を製剤して構わない。このような担体は、本発明の化合物を、錠剤、丸薬、薬用キャンディー、糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、ペースト、スラリー、溶液、懸濁液、患者の飲用水で希釈する濃縮液および濃縮懸濁液、患者の食事で希釈する予混合物、および患者によって経口摂取される同様のものなどの形態に製剤することを可能にする。経口利用のための製剤は、固形の賦形剤を使用し、随意的に、得られた混合物を顆粒化し、顆粒混合物を処理し、必要に応じて他の適切な助剤を加えた後、錠剤または糖衣錠の中心部分を得ることにより、調製することができる。有用な賦形剤としては、特に、ラクトース、ショ糖、マンニトール、またはソルビトールなどを含む糖類のような充填剤、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、およびジャガイモデンプンなどのセルロース製剤、および、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム塩および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの他の物質が挙げられる。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギニン酸などの崩壊剤を加えてもよい。
【００５０】
吸入による投与では、本発明の化合物は、加圧型パック、または噴霧器および適切な推進剤を使用する噴霧スプレーの形態で便利に送達されて差し支えない。
【００５１】
本化合物は、例えばカカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤用基剤を用いて、坐剤または保持浣腸剤など、直腸用組成物の形態で製剤されてもよい。
【００５２】
上記製剤に加えて、本化合物はまた、持続性製剤として製剤されて差し支えない。このような長時間作用型の製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内に）することにより、または筋肉注射によって投与されて構わない。この発明の化合物は、適切なポリマー材料または疎水性材料を用いて（例えば、薬理学的に許容される油を用いたエマルションの形態に）、イオン交換樹脂を用いて、あるいは、限定はしないが難溶性の塩などの難溶性の誘導体として、この投与経路用に製剤されて差し支えない。
【００５３】
リポソームおよびエマルションなどの他の送達系も使用することができる。
【００５４】
さらには、本化合物は、治療薬を含む固形の疎水性ポリマーの半透性マトリクスなどの徐放系を使用して送達されてもよい。さまざまな徐放性の物質が確立されており、これらは当業者に周知である。その化学的性質に応じて、２，３週間から１００日を越える期間、徐放性カプセルから本化合物が放出されて差し支えない。特定の化合物の化学的性質および生物学的安定性に応じて、追加の安定化の方策を用いてもよい。
【００５５】
Ｅ．用量
治療に有効な量とは、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン感受性の状態の予防、緩和、または改善に効果的な化合物の量のことをいう。治療に有効な量の決定は、特に本明細書の開示を考慮すれば、十分に、当業者の能力の範囲内にある。
【００５６】
本発明の方法に使用する任意の化合物では、治療に有効な量は、最初にインビトロ・アッセイをすることによって推定することができる。次に、用量は、有効量を含む血中濃度範囲が達成されるように、動物モデル用途に製剤することができる。これらの情報を用いることにより、患者に有用な用量をさらに正確に決定することができる。
【００５７】
本明細書に記載される化合物の毒性および治療効力は、当技術分野で周知の方法を使用する、細胞培養または動物実験における標準的な薬学的方法によって決定することができる。当然ながら、用量は、投与形態および投与経路に応じて変化しうる。正確な製剤、投与経路および用量は、患者の状態を考慮して、個々の内科医が選択して差し支えない。
【００５８】
しかしながら、一般的には、本発明の化合物の全身送達用の、現在において好適な用量範囲は、約１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／週であり、約２〜約６０ｍｇ／ｋｇ／週が好ましい。
【００５９】
１つの好ましい態様では、本発明の治療には、本明細書に記載される化合物を、約０．３ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約９０ｍｇ／ｍ2体表面／回の量で投与する工程を有してなる。本明細書に記載される化合物の量は、約０．９ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約３０ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲であることがさらに好ましい。
【００６０】
治療プロトコルは、１日１回投与される単回投与に基づいて差し支えなく、あるいは複数週にわたる治療プロトコルの一部として与えることが可能な、複数回投与に分けることもできる。正確な用量は、当業者に認識されるように、病状の段階および重症度、ポリマー−プロドラッグ組成物に対する腫瘍の感受性、および治療される患者の個別の特性に応じて決定されるであろう。
【００６１】
治療は、所望の臨床結果が得られるまで、１日以上の期間与えられることも意図されている。
【００６２】
いくつかの好適な態様では、治療プロトコルは、約１ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約１６ｍｇ／ｍ2体表面／回を毎週与えられるプロトコルにしたがって３週間にわたり提供され、その後の１週間は治療しないというサイクルを、約３回繰り返すことを含む。３週間毎の投与量は、約１．２５ｍｇ／ｍ2体表面／回〜約４５ｍｇ／ｍ2体表面／回の範囲でありうる。
【００６３】
あるいは、投与される化合物は、体重に基づいていてもよい。その場合の量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重／回〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重／回の範囲であり、約０．３ｍｇ／ｋｇ体重／回〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／回の範囲であることが好ましい。ｑ２ｄ×５の投与計画（複数回投与）における１０ｍｇ／ｋｇ、または単回投与の投与計画における３０ｍｇ／ｋｇなど、特定の用量が投与されうる。
【００６４】
ポリマー複合体が投与される本発明のすべての態様では、記載される投与量は、投与されるポリマー複合体の量ではなく、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの量に基づいている。
【００６５】
本発明のさらなる態様には、本明細書に記載される化合物を、相乗効果または付加的効果を目的として、他の抗癌治療と組み合わせることが含まれる。
【００６６】
Ｆ．非ホジキンリンパ腫の治療
本発明は、リンパ腫の治療方法を提供する。１つの好ましい態様では、本発明は、非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療方法を提供する。本発明の目的では、「治療」または「治癒」は、治療後の患者において、腫瘍成長、全身腫瘍組織量および腫瘍転移の抑制、低減、改善および予防、腫瘍の寛解、または腫瘍および／または腫瘍性成長の再発の予防を意味すると解されるべきものとする。
【００６７】
治療される非ホジキンリンパ腫には、進行性の（進行の速い）タイプと、遅発性の（進行の遅い）タイプが含まれうる。あるいは、非ホジキンリンパ腫には、Ｂ細胞型またはＴ細胞型のＮＨＬが含まれうる。Ｂ細胞型ＮＨＬの非限定的リストとしては、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）型節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、毛様細胞白血病、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫が挙げられる。Ｔ細胞型ＮＨＬとしては、菌状息肉腫、未分化大細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、および前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。さらなる非ホジキンリンパ腫もまた本発明の範囲内にあることが意図されており、そのような非ホジキンリンパ腫は、当業者にとって明らかである。
【００６８】
別の態様では、治療には、Ｂ細胞ＮＨＬなど、骨髄または幹細胞の移植手術後のリンパ増殖症候群に関連するリンパ腫が含まれる。
【実施例】
【００６９】
以下の実施例は、本発明のさらなる認識をもたらす役割をするものであり、本発明の効力の範囲を限定することは多少なりとも意味していない。実施例における下線および強調された数字は、図１〜２に示すものに対応している。
【００７０】
一般的手順：
すべての反応は、乾燥窒素またはアルゴンの雰囲気下で行なわれた。市販試薬は、精製せずに使用した。すべてのＰＥＧ化合物は、使用前に真空下で、またはトルエンから共沸蒸留することにより乾燥させた。13Ｃ ＮＭＲスペクトルは、他に特記しない限り、溶媒として重クロロホルムおよびメタノ−ルを用い、Varian Mercury（登録商標）300 ＮＭＲスペクトロメータを使用して、７５．４６ＭＨｚで得た。化学シフト（δ）は、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）よりも下方領域についてｐｐｍで記載している。
【００７１】
ＨＰＬＣ法：
反応混合物、および中間体および最終生成物の純度を、Beckman Coulter System Gold（登録商標）ＨＰＬＣ機器でモニタした。多波長ＵＶ検出器と共に、ZOBAX（登録商標）300SB C8逆相カラム（１５０×４．６ｍｍ）またはPhenomenex Jupiter（登録商標）300A C18逆相カラム（１５０×４．６ｍｍ）を使用し、流量１ｍＬ／分で０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中アセトニトリルの１０〜９０％の勾配を用いた。
【００７２】
実施例１．40k４アーム‐ＰＥＧ‐ｔブチルエステル（化合物２）：
40k４アーム‐ＰＥＧ‐ＯＨ（１２．５ｇ，１当量）を２２０ｍＬのトルエンと共に共沸させ、３５ｍＬのトルエン／水を除去した。溶液を３０℃まで冷却し、ｔ−ブタノール中１．０Ｍカリウムｔ−ブトキシド（３．７５ｍＬ，３当量×４＝１２当量）を加えた。混合液を３０℃で３０分間攪拌した後、ｔ−ブチルブロモ酢酸（０．９７５ｇ，４当量×４＝１６当量）を加えた。３０℃で１時間反応を保持した後、２５℃まで冷却した。１５０ｍＬのエーテルをゆっくり加えて生成物を沈殿させた。得られた懸濁液を１７℃まで冷却し、１７℃で３０分間そのまま置いた。粗生成物をろ過し、ウェットケーキを、エーテルを用いて２回洗浄した（２×１２５ｍＬ）。単離したウェットケーキを５０ｍｌのＤＣＭに溶解し、生成物を３５０ｍｌのエーテルを用いて沈殿させ、ろ過した。ウェットケーキを、エーテルを用いて２回洗浄した（２×１２５ｍＬ）。生成物を真空下、４０℃で乾燥させた（収率＝９８％，１２．２５ｇ）。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3):δ27.71, 68.48-70.71 (PEG), 80.94, 168.97。
【００７３】
実施例２．40k４アーム‐ＰＥＧ酸（化合物３）：
40k 4アーム‐ＰＥＧ‐ｔブチルエステル（化合物２，１２ｇ）を１２０ｍＬのＤＣＭに溶解し、次いで６０ｍＬのＴＦＡを加えた。混合物を室温で３時間攪拌した後、真空下、３５℃で溶媒を除去した。得られた油状の残渣を３７．５ｍＬのＤＣＭに溶解させた。粗生成物を３７５ｍＬのエーテルで沈殿させた。ウェットケーキを３０ｍＬの０．５％ＮａＨＣＯ3に溶解させた。生成物をＤＣＭで２回抽出した（２×１５０ｍＬ）。有機層を合わせて、２．５ｇのＭｇＳＯ4で乾燥させた。真空下、室温で溶媒を除去した。得られた残渣を３７．５ｍＬのＤＣＭに溶かし、３００ｍＬのエーテルを用いて生成物を沈殿させ、ろ過した。ウェットケーキをエーテルで２回洗浄した（２×１２５ｍＬ）。真空下、４０℃で生成物を乾燥させた（収率＝９０％，１０．７５ｇ）。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3): δ67.93 ‐ 71.6 (PEG), 170.83。
【００７４】
実施例３．ＴＢＤＰＳ-(１０)-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)（化合物５）: 
１００ｍＬの無水ＤＣＭ中７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン（化合物４，  ２．０ｇ，５．１０ｍｍｏｌ，１当量）の懸濁液にＥｔ3Ｎ（４．３ｍＬ，３０．５８ｍｍｏｌ，６当量）およびＴＢＤＰＳＣｌ（７．８ｍＬ，３０．５８ｍｍｏｌ，６当量）を加えた。反応混合物を一晩加熱還流した後、０．２Ｎ ＨＣｌ溶液（２×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１００ｍＬ）および塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣を無水ＤＣＭに溶解し、ヘキサンを加えることにより沈殿させた。ＤＣＭ／ヘキサンを用いた沈殿を繰り返し、過剰のＴＢＤＰＳＣｌを除去した。固形物をろ過し、真空下で乾燥させて２．０９ｇの生成物を得た（収率６５％）。1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ0.90 (3 H, t, J = 7.6 Hz), 1.01 (3 H, t, J = 7.3 Hz), 1.17 (9H, s), 1.83-1.92 (2H, m), 2.64 (2H, q, 6.9 Hz), 3.89 (1 H, s, OH), 5.11 (2H, s), 5.27 (1H, d, J = 16.1 Hz), 5.72 (1H, d, J = 16.4 Hz), 7.07 (2 H, d, J = 2.63 Hz), 7.36-7.49 (7 H, m), 7.58 (1 H, s), 7.75-7.79 (4H, m), 8.05 (1 H, d, J = 9.4 Hz)。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3):δ7.82, 13.28, 19.52, 22.86, 26.48, 31.52, 49.23, 66.25, 72.69, 97.25, 110.09, 117.57, 125.67, 126.57, 127.65, 127.81, 130.02, 131.69, 131.97, 135.26, 143.51, 145.05, 147.12, 149.55, 149.92, 154.73, 157.43, 173.72。
【００７５】
実施例４．ＴＢＤＰＳ-(１０)-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)-(２０)-Ｇｌｙ-Ｂｏｃ（化合物６）:  
１００ｍｌの無水ＤＣＭ中のＴＢＤＰＳ-(１０)-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン) （化合物５，３．７８ｇ，５．９９ｍｍｏｌ，１ 当量）およびＢｏｃ-Ｇｌｙ-ＯＨ （１．５７ｇ，８，９９ｍｍｏｌ，１．５当量）の０℃の溶液にＥＤＣ（１．７２ｇ，８．９９ｍｍｏｌ，１．５当量）およびＤＭＡＰ（３２９ｍｇ，２．６９ｍｍｏｌ，０．４５当量）を加えた。ＨＰＬＣが出発物質の完全消失を示すまで、反応混合物を０℃で攪拌した（約１時間４５分）。有機層を０．５％のＮａＨＣＯ3溶液（２×５０ｍＬ）、水（１×５０ｍＬ）、０．１Ｎ ＨＣｌ溶液（２×５０ｍＬ）および塩水（１×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。ろ過し、真空下で蒸発させた後、４．９４ｇの組生成物を得た（定量的収量）。さらに精製することなく、粗固形物を次の反応に用いた。1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ0.89 (3 H, t, J = 7.6 Hz), 0.96 (3 H, t, J = 7.5 Hz), 1.18 (9H, s), 1.40 (9H, s), 2.07-2.29 (3H, m), 2.64 (2H, q, 7.5 Hz), 4.01-4.22 (2H, m), 5.00 (1 H, br s), 5.01 (2H, s), 5.37 (1H, d, J = 17.0 Hz), 5.66 (1H, d, J = 17.0 Hz), 7.08 (1 H, d, J = 2.34 Hz), 7.16 (1H, s), 7.37-7.50 (7 H, m), 7.77 (4H, d, J = 7.6 Hz), 8.05 (1 H, d, J = 9.4 Hz)。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3):δ7.52, 13.30, 19.50, 22.86, 26.45, 28.21, 31.64, 42.28, 49.14, 67.00, 76.65, 79.96, 95.31, 110.13, 118.98, 125.75, 126.45, 127.68, 127.81, 130.03, 131.54, 131.92, 135.25, 143.65, 144.91, 145.19, 147.08, 149.27, 154.75, 155.14, 157.10, 166.98, 169.17。
【００７６】
実施例５．ＴＢＤＰＳ-(１０)-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)-(２０)-Ｇｌｙ・ＨＣｌ（化合物７）：
５ｍｌの無水ジオキサン中のＴＢＤＰＳ-(１０)-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)-(２０)-Ｇｌｙ-Ｂｏｃ（化合物６，１ｇ，１．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ溶液を５ｍｌ加えた。ＨＰＬＣが出発物質の完全消失を示すまで、反応混合物を室温で攪拌した（１時間）。反応混合物を５０ｍｌのエチルエーテルに加え、得られた固形物をろ過した。固形物を５０ｍＬのＤＣＭに溶解させ、塩水で洗浄した（飽和ＮａＨＣＯ3溶液を加えることにより、ｐＨを２．５に調整した）。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣を５ｍＬのＤＣＭに溶解させ、５０ｍＬのエチルエーテルを加えることにより沈殿させた。ろ過により、７７０ｍｇ（収率８４％）の最終生成物を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ0.84 (3 H, t, J = 7.6 Hz), 1.05 (3 H, t, J = 7.3 Hz), 1.16 (9H, s), 2.15-2.30 (3H, m), 2.59 (2H, q, 7.6 Hz), 4.16 (1H, d, J = 17.9 Hz), 4.26 (1H, d, J = 17.9 Hz), 5.13 (2H, s), 5.46 (1H, d, J = 17.0 Hz), 5.60 (1H, d, J = 17.0 Hz), 7.11 (1 H, d, J = 2.34 Hz), 7.30 (1H, s), 7.40-7.51 (6 H, m), 7.56 (1H, dd, J = 2.34, 9.4 Hz), 7.77 (4H, dd, J = 7.6, 1.6 Hz), 7.98 (1 H, d, J = 9.1 Hz)。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3): δ 8.09, 13.72, 20.26, 23.61, 26.94, 31.83, 41.01, 50.71, 67.62, 79.51, 97.03, 111.65, 119.69, 127.13, 128.97, 128.99, 129.11, 131.43, 131.96, 133.00, 133.03,136.51, 145.62, 145.81, 147.24, 148.29, 150.58, 156.27, 158.68, 167.81, 168.34。
【００７７】
実施例６．40k４アーム-ＰＥＧ-Ｇｌｙ-(２０)-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)-(１０)-ＴＢＤＰＳ（化合物８）：
１４ｍＬの無水ＤＣＭ中の40k４アーム‐ＰＥＧＣＯＯＨ（化合物３，１．４ｇ，０．０３６ｍｍｏｌ，１当量）にＴＢＤＰＳ‐(１０)‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)‐(２０)‐Ｇｌｙ・ＨＣｌ（化合物７，２０７ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ，活性部位当たり２．０当量）、ＤＭＡＰ（１７５ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ，１０当量）およびＰＰＡＣ（ＥｔＯＡｃ中の０．８５ｍＬの５０％溶液，１．４４ｍｍｏｌ，１０当量）を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した後、真空下で蒸発させた。得られた残渣をＤＣＭに溶解させ、生成物をエーテルで沈殿させ、ろ過した。残渣をＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶化し、生成物を得た（１．２５ｇ）。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3):δ7.45, 13.20, 19.39, 22.73, 26.42, 31.67, 40.21, 49.01, 66.83, 95.16, 110.02, 118.83, 125.58, 126.40, 127.53, 127.73, 129.96, 131.49, 131.76, 131.82, 135.12, 143.51, 144.78, 145.13, 146.95, 149.21, 154.61, 156.92, 166.70, 168.46, 170.30。
【００７８】
実施例７．40k４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ(２０)‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)（化合物９）：
化合物40k４アーム‐ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(２０)‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)‐(１０)‐ＴＢＤＰＳ（化合物８，１．２５ｇ）に、ＴＨＦおよび０．０５Ｍ ＨＣｌ溶液（１２．５ｍＬ）の１：１混合液中のＴＢＡＦ（１２２ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ，４当量）溶液を加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した後、ＤＣＭで２回抽出した。有機層を合わせてＭｇＳＯ4で乾燥させ、ろ過し、真空下で蒸発させた。残渣を７ｍＬのＤＭＦに溶解させ、３７ｍＬのＩＰＡを用いて沈殿させた。固形物をろ過し、ＩＰＡで洗浄した。ＤＭＦ／ＩＰＡを用いた沈殿を繰り返した。最後に、残渣を２．５ｍＬのＤＣＭに溶解させ、２５ｍＬのエーテルを加えることにより沈殿させた。固形物をろ過し、真空オーブンで一晩、４０℃で乾燥させた（８６０ｍｇ）。13C NMR (75.4 MHz, CDCl3):δ7.48, 13.52, 22.91, 31.67, 40.22, 49.12, 66.95, 94.82, 105.03, 118.68, 122.54, 126.37, 128.20, 131.36, 142.92, 144.20, 144.98, 147.25, 148.29, 156.44, 156.98, 166.82, 168.49, 170.39。このＮＭＲデータは、ＰＥＧ‐ＣＯＯＨの兆候が無いことを示し、これは、すべてのＣＯＯＨが反応したことを示唆している。蛍光検出によって決定される充填量(loading)は、ポリマーの４つの分岐鎖のそれぞれに７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンがすべて結合(loading)していることと一致する、３．９であることが判明した。はるかに大きい規模におけるこの実験の反復実験でも、一致する結果を得られた。
【００７９】
生物学データ
実施例８．毒性データ
４アームＰＥＧ複合化７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの最大耐量（ＭＴＤ）を、ヌードマウスを用いて調べた。マウスの死亡率および病気の兆候を１４日間モニタし、体重減少が治療前体重の２０％を超えた場合は、屠殺した。
【００８０】
表１は、単回投与および複数回投与の両方について、化合物９の最大耐量を示している。複数回投与の各投与量を、マウスに一日おきに１０日間与え、別の４日間マウスを観察し、合計１４日間観察した。
【表１】
2010503691.tif 000017
【００８１】
４アーム-ＰＥＧ-Ｇｌｙ-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)（化合物９）について判明したＭＴＤは、単回投与として与えられた場合は３０ｍｇ／ｋｇであり、複数回投与（ｑ２ｄ×５）として与えられた場合には、１０ｍｇ／ｋｇであった。
【００８２】
実施例９．非ホジキンソンリンパ腫における細胞毒性：
細胞毒性は、各化合物のインビトロにおける抗腫瘍作用の指標を提供する。ＭＴＳアッセイを用いて、ＰＥＧ-Ｇｌｙ-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン) （化合物９）およびＣＰＴ−１１のインビトロにおける細胞毒性を決定した。細胞を薬物と共に３７℃で７２時間培養した。培養後、ＭＴＳ染料を加えて着色した生成物（ホルマザン）の形成を４９０ｎｍで測定した。
【００８３】
化合物９およびＣＰＴ−１１のＩＣ50値は、ＣＰＴ−１１よりもはるかに高い、試験したＮＨＬにおけるインビトロ阻害を有していることの指標である。Raji型およびDaudi型のバーキットリンパ腫細胞において２〜２０ｎＭの範囲の化合物９のＩＣ50は、ＣＰＴ−１１よりも約３０〜５０倍強力であった。
【００８４】
実施例１０．インビトロ代謝
ＰＥＧ-Ｇｌｙ-(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン) （化合物９）のインビトロ代謝を、ラットの肝細胞について観察した。化合物９を、ラットの肝細胞と共に、ｐＨ７．５、３７℃で２時間培養した。図３に示すように、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンおよび７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシングルクロニド（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンＧ）が、同定された主要な代謝産物であった。これは、インビボにおける７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの既知の代謝経路と一致するものである。
【００８５】
実施例１１．ＰＥＧ複合体の特性：
表２は、塩水溶液におけるＰＥＧ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)複合体の溶解性を示している。化合物９は、最大４ｍｇ／ｍＬに相当する７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトセシンの良好な溶解性を示した。ヒト血漿では、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンは、２２〜５２分の倍加時間で、ＰＥＧ複合体から堅調に放出され、その放出は、下記実施例１２に記載するように、ｐＨおよび濃度依存性であるように思われた。
【表２】
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【００８６】
ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン複合体は、室温で最大２４時間、塩水および他の水性媒体における良好な安定性を示す。
【００８７】
実施例１２．安定性における濃度およびｐＨの効果：
ラットおよびヒト血漿における水溶液中での安定性および加水分解特性を、ＵＶに基づくＨＰＬＣ法を使用してモニタした。４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン) 複合体（化合物９）を、各試料と共に室温で５分間培養した。
【００８８】
緩衝液中のＰＥＧ‐７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン複合体の安定性は、 ｐＨ依存性であった。図４は、さまざまな試料における４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン) の安定性を示している。図５は、ＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)からの７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの放出速度が、ｐＨの上昇に伴って上昇することを示している。 
実施例１３．薬物動態学
腫瘍を有しないＢａｌｂ／Ｃマウスに、２０ｍｇ／ｋｇの４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)複合体を単回投与で注射した。さまざまな時点で、マウスを屠殺し、血漿を、原形を保った複合体および放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンについて、ＨＰＬＣによって分析した。非コンパートメント分析（WinNonlin）を用いて、薬物動態学的分析を行った。詳細を表３に記載する。
【表３】
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【００８９】
図６に示すように、７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンのＰＥＧ化は、長い循環半減期および、元々の薬物である７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンへの高い曝露を可能にする。４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)複合体の腸肝循環を観察した。マウスにおける４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)の薬物動態学的特性は、最初の２時間に急速な血漿分布相を示した後に、１８〜２２時間の複合体の消失半減期および付随する１８〜２６時間の７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの消失半減期を示す、二相性であった。
【００９０】
さらに、４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)複合体の薬物動態学的特性を、ラットにおいて観察した。ラットでは、３，１０および３０ｍｇ／ｋｇ（７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン当量）の用量レベルを用いた。ラットにおける薬物動態学的特性は、マウスのものと一致した。
【００９１】
ラットでは、４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)は、ラットの１２〜１８時間の消失半減期を有する、循環からの二相性のクリアランスを示した。４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)複合体から放出される７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンは、２１〜２２時間の見かけの消失半減期を有していた。最高血漿濃度（Cmax）および濃度曲線下面積（ＡＵＣ）は、ラットにおいて用量依存的に上昇した。マウスまたはラットにおける４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ複合体から放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの見かけの半減期は、ＣＰＴ−１１から放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの報告された見かけの半減期よりも顕著に長く、４アームＰＥＧ‐Ｇｌｙ‐(７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシン)から放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの曝露は、ＣＰＴ−１１から放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの報告された曝露よりも顕著に高い。親化合物のクリアランスはラットにおいて０．３５ｍＬ／時間／ｋｇであった。親化合物の定常状態（Ｖｓｓ）での分布の推定量は５．４９ｍＬ／ｋｇであった。放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンのクリアランスは、ラットにおいて１３１ｍＬ／時間／ｋｇであった。放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの推定Ｖｓｓは、ラットにおいて２３８４ｍＬ／ｋｇであった。放出された７‐エチル‐１０‐ヒドロキシカンプトセシンの腸肝循環は、マウスおよびラットの両方で観察された。
【００９２】
実施例１４．インビボ・データ−マウスモデルに異種移植されたRaji型のヒト・バーキットリンパ腫における効果
実施例７の化合物９の抗癌作用を、マウスに異種移植されたRaji型のバーキットリンパ腫について測定した。播種性腫瘍の異種移植片は、２．５×１０6のヒト・バーキットリンパ腫細胞（Raji型）を静脈注射することによって、ＳＣＩＤ ＣＢ１７マウスを樹立させた。次いでマウスを各試験群に無作為に割り当てた（各群１０匹のマウス）。化合物９を用いて治療される群では第１日目に単回投与として、３０ｍｇ／ｋｇ体重の化合物９を静脈投与された。ＣＰＴ−１１で治療されたマウスでは、６０ｍｇ／ｋｇ体重のＣＰＴ−１１が注射された。治療は、細胞の注射後１日目から開始された。
【００９３】
複数回投与計画では、１０ｍｇ／ｋｇ体重の化合物９および４０ｍｇ／ｋｇのＣＰＴ−１１を、各群でｑ２ｄ×５で静脈注射した。対照群は生理食塩水を投与された。
【００９４】
すべての態様において、投与された化合物９の量は、投与されるポリマー複合体の量ではなく、７-エチル-１０-ヒドロキシカンプトセシンの量に基づいている。
【００９５】
病気の兆候、一般的な行動上の変化および生存について、毎日、動物をモニタした。体重もモニタした。裂けた壊死病斑が見られた腫瘍を有するマウスを屠殺した。体重が２０％を越えて減少したマウスも人道的に致死させた。治療群のすべてにおいて、マウスを、腫瘍成長および生存についてモニタした。研究終了時点で、ＣＯ2の吸入により、すべてのマウスを安楽死させた。治癒率および寿命の延長（ＩＬＳ）の結果を表４に記載する。
【表４】
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【００９６】
結果は、化合物９で治療されたマウスが単回投与治療において５０％の治癒率を有したことを示している。化合物９で治療されたマウスは、複数回投与では９０％の治癒率を示している。ＣＰＴ−１１で治療したマウスのいずれも、単回投与または複数回投与の治療において治癒しなかった。実施例の目的では、「治癒」は、治療完了後１００日間の巨視的観察によって腫瘍の兆候が見られないことを意味するものと理解されたい。
【００９７】
結果は、本明細書に記載される化合物が、バーキットリンパ腫などの非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療に有効であることを示唆している。本結果はまた、記載される化合物がＣＰＴ−１１に基づいた治療の代替法になりうることも示唆している。
【００９８】
実施例１５．インビボ・データ−マウスモデルに異種移植されたDaudi型のヒト・バーキットリンパ腫における効果：
Daudi型のバーキットリンパ腫における化合物９の抗癌作用についても測定した。播種性腫瘍の異種移植片は、２．５×１０6のヒト・バーキットリンパ腫細胞（Daudi型）を静脈注射することによって、ＳＣＩＤ ＣＢ１７マウスを樹立させた。次いでマウスを各試験群に無作為に割り当てた（各群１０匹のマウス）。腫瘍細胞の注射後第１日から、早期治療を開始した。遅延治療は、腫瘍細胞の注射後７日間から開始された。
【００９９】
化合物９を用いて治療される群では、第１日目（早期治療）または第７日目（遅延治療）に単回投与として、３０ｍｇ／ｋｇ体重の化合物９を静脈投与した。ＣＰＴ−１１で治療されたマウスでは、６０ｍｇ／ｋｇ体重のＣＰＴ−１１を注射した。対照群のマウスは生理食塩水を与えられた。
【０１００】
病気の兆候、一般的な行動上の変化および生存について、毎日、動物をモニタした。体重もモニタした。裂けた壊死病斑が見られた腫瘍を有するマウスを死亡させた。体重が２０％を越えて減少したマウスも人道的に死亡させた。治療群のすべてにおいて、マウスを、腫瘍成長および生存についてモニタした。研究終了時点で、ＣＯ2の吸入により、すべてのマウスを安楽死させた。治癒率および寿命の延長（ＩＬＳ）の結果を表５に記載する。
【表５】
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【０１０１】
単回投与の早期治療群では、化合物９で治療されたマウスは１００％の治癒率を有した。化合物９で治療されたマウスはまた、遅延治療の単回投与治療でも９０％の治癒率を示した。ＣＰＴ−１１で治療したマウスは、いずれも治癒しなかった。結果は、本明細書に記載される化合物が、非ホジキンリンパ腫のさまざまな段階において、非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療に有効であることを示唆している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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