(57)【要約】リンパ腫、自己免疫疾患及び移植拒絶反応を含む、ＣＤ２０と関連する疾患を処置するための組成物及び方法が提供される。組成物は、ヒトＣＤ２０発現細胞の表面上にあるヒトＣＤ２０抗原に結合可能な抗ＣＤ２０抗体を含み、該抗体は、該抗体の可変領域内にて操作された少なくとも１つの最適化ＣＤＲを有することにより達成される補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣ）の増大を有する。組成物は、モノクローナル抗体の抗原結合性断片、変異体及び誘導体、これらの抗体組成物を生産する細胞株並びに該抗体のアミノ酸配列をコードする単離核酸分子も含む。本発明は、医薬的に許容可能な担体中の本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む医薬組成物並びにこれらの抗ＣＤ２０抗体の使用法を更に含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該ＣＤＲ領域が配列番号１〜８からなる群より選択される、ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリン。
【請求項２】
前記免疫グロブリンが、配列番号１〜７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項３】
前記免疫グロブリンが、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項４】
前記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、請求項１から３のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項５】
前記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、請求項４に記載の免疫グロブリン。
【請求項６】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、請求項５に記載の免疫グロブリン。
【請求項７】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、請求項５に記載の免疫グロブリン。
【請求項８】
前記免疫グロブリンが、リツキシマブと比較して増大した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項９】
前記免疫グロブリンが、配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンが、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１１】
前記免疫グロブリンが、配列番号１２〜１８に示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖並びに配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１２】
前記重鎖が配列番号１２に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１３】
前記重鎖が配列番号１３に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１４】
前記重鎖が配列番号１４に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１５】
前記重鎖が配列番号１５に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１６】
前記重鎖が配列番号１６に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１７】
前記重鎖が配列番号１７に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１８】
前記重鎖が配列番号１８に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１９】
前記重鎖が配列番号１３に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１１に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項２０】
前記重鎖が配列番号１６に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１１に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項２１】
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、
ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１と、
ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、
ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２と、
ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と
からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
免疫グロブリン。
【請求項２２】
前記免疫グロブリンが、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と、
ｃ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項２１に記載の免疫グロブリン。
【請求項２３】
前記軽鎖の可変ドメインが、配列番号９に示されるＣＤＲ２及び配列番号８に示されるＣＤＲ３を含む、請求項２２に記載の免疫グロブリン。
【請求項２４】
ＣＤ２０に特異的に結合し、免疫グロブリン軽鎖を含む免疫グロブリンであって、該免疫グロブリン軽鎖が、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と
からなる群より選択される相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を有する可変ドメインを含む免疫グロブリン。
【請求項２５】
前記軽鎖の可変ドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む、請求項２４に記載の免疫グロブリン。
【請求項２６】
前記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項２７】
前記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、請求項２６に記載の免疫グロブリン。
【請求項２８】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、請求項２７に記載の免疫グロブリン。
【請求項２９】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、請求項２７に記載の免疫グロブリン。
【請求項３０】
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、
ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基、
ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、
ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと
からなる群より選択される、免疫グロブリン。
【請求項３１】
前記免疫グロブリンが可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択される、請求項３０に記載の免疫グロブリン。
【請求項３２】
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、配列番号１２〜１８に示される配列からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド配列を含み、該免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、免疫グロブリン。
【請求項３３】
前記ＶＬドメインが、配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含む、請求項３２に記載の免疫グロブリン。
【請求項３４】
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＬドメインが、配列番号１１に示される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド配列を含み、該免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、免疫グロブリン。
【請求項３５】
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、該ＶＬドメインが、配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、免疫グロブリン。
【請求項３６】
融合した異種ポリペプチドを更に含む、請求項１から３５及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項３７】
前記免疫グロブリンが、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、蛋白質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節物質、医薬品又はＰＥＧからなる群より選択される作用物質にコンジュゲートした、請求項１から３５及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項３８】
請求項１から３７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン及び担体を含む組成物。
【請求項３９】
免疫グロブリン重鎖の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、
ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１と、
ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、
ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２と、
ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と
からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該ＶＨドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４０】
免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と
からなる群より選択される相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、該ＶＬドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４１】
前記ＶＬドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む、請求項４０に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項４２】
免疫グロブリン重鎖の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、
ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基、
ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、
ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと
からなる群より選択され、該ＶＨドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４３】
前記ＶＨドメインが、配列番号１９〜２２からなる群より選択される配列を含む核酸にコードされる、請求項４２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項４４】
免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択され、該ＶＬドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４５】
請求項３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項４６】
請求項３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項４７】
前記ポリヌクレオチドがプロモーターと作動可能に結合している、請求項４６に記載のベクター。
【請求項４８】
請求項３９，４２及び４３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドと、免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含むベクター。
【請求項４９】
前記ＶＬドメインが、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５０】
前記ＶＬドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む、請求項４９に記載のベクター。
【請求項５１】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとが、インフレームに融合され、作動可能に結合している単一プロモーターから同時転写され、単鎖抗体又はその抗原結合性断片に同時翻訳される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５２】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとが、作動可能に結合している単一プロモーターから同時転写されるが、別個に翻訳される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５３】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとの間に配置されたＩＲＥＳ配列を更に含む、請求項５２に記載のベクター。
【請求項５４】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとが別個に転写され、各々が別個のプロモーターと作動可能に結合している、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５５】
前記別個のプロモーターが同じプロモーターのコピーである、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５６】
前記別個のプロモーターが同一でない、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５７】
請求項４６から５６のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
【請求項５８】
請求項１に記載の免疫グロブリンを含む組成物。
【請求項５９】
請求項３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項６０】
請求項４６から５６のいずれか一項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６１】
ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリンを作製する方法であって、請求項５９又は６０に記載の宿主細胞を培養するステップと、該免疫グロブリンを回収するステップとを含む方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載の方法により作製される免疫グロブリン。
【請求項６３】
前記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、請求項６２に記載の免疫グロブリン。
【請求項６４】
前記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、請求項６３に記載の免疫グロブリン。
【請求項６５】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖のＶＨドメイン内及び前記軽鎖のＶＬドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、請求項６４に記載の免疫グロブリン。
【請求項６６】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖のＶＨドメイン内及び前記軽鎖のＶＬドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、請求項６４に記載の免疫グロブリン。
【請求項６７】
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示されるＣＤＲ２を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択される、免疫グロブリン。
【請求項６８】
対象におけるＣＤ２０発現細胞と関連する癌を処置する方法であって、請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む有効量の組成物を該対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項６９】
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病及びホジキン病からなる群より選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
正常ヒトＢ細胞の増殖又は分化を阻害する方法であって、該Ｂ細胞を有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンに接触させるステップを含む、方法。
【請求項７１】
Ｂ細胞系統の癌細胞の増殖を阻害する方法であって、該癌細胞を有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンに接触させるステップを含む、方法。
【請求項７２】
前記癌細胞が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病及びホジキン病からなる群より選択される癌に由来する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
対象におけるＣＤ２０発現細胞と関連する自己免疫疾患又は炎症性疾患を処置する方法であって、該対象に有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを投与するステップを含む、方法。
【請求項７４】
前記自己免疫疾患又は炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状紅斑、ループス腎炎、サルコイドーシス、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、臓器若しくは組織移植の拒絶反応、移植片対宿主病、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸疾患）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎及び皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓溶解、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、サルコイドーシス、１型及び２型糖尿病、１型・２型・３型及び４型遅延型過敏症、アレルギー又はアレルギー性疾患、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性及び刺激性接触皮膚炎、蕁麻疹（ｕｒｔｅｃａｒｉａ）、ＩｇＥ媒介性アレルギー、アテローム性動脈硬化症、血管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病並びに慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシーからなる群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ２０に結合可能な抗体、該抗体を使用する方法及びＣＤ２０発現細胞と関連する疾患の処置方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも言う）は、プレＢリンパ球及び成熟Ｂリンパ球上にある、約３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通蛋白質である（非特許文献１；及び非特許文献２）。ＣＤ２０は、末梢血又はリンパ器官由来の９０％超のＢ細胞の表面上に見出され、早期プレＢ細胞発達時に発現し、形質細胞の分化まで残存する。ＣＤ２０は正常なＢ細胞上にも悪性Ｂ細胞上にも存在する。特に、ＣＤ２０は９０％超のＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に発現する（非特許文献３）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞又は他の正常な組織には見出されない（非特許文献４）。
【０００３】
ＣＤ２０蛋白質の８５アミノ酸のカルボキシル末端領域は細胞質内にある。この領域の長さは、それぞれ、３，３，２８，１５，１６アミノ酸の比較的短い細胞質内領域を有するＩｇＭ，ＩｇＤ及びＩｇＧ重鎖或いは組織適合抗原クラスＩＩα又はβ鎖のような他のＢ細胞特異的表面構造の長さと対照的である（非特許文献５）。最後の６１個のカルボキシル末端アミノ酸のうち、２１個が酸性残基であるのに対して２個のみが塩基性であり、この領域が強い正味の負電荷を有することを示す。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号はＮＰ＿６９０６０５である。
【０００４】
ＣＤ２０は、Ｂ細胞の活性化及び分化過程における初期段階の制御に関与し（非特許文献６）、カルシウムイオンチャンネルとして機能している（非特許文献７）可能性があると考えられている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８９）２６４（１９）：１１２８２−１１２８７
【非特許文献２】Ｅｉｎｆｉｅｌｄら、ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９８８）７（３）：３１１−７１７
【非特許文献３】Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ（１９８４）６３（６）：１４２４−１４３３
【非特許文献４】Ｔｅｄｄｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）１３５（２）：９７３−９７９
【非特許文献５】Ｋｏｍａｒｏｍｙら、ＮＡＲ（１９８３）１１：６７７５−６７８５
【非特許文献６】Ｔｅｄｄｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８６）１６：８８１−８８７
【非特許文献７】Ｔｅｄｄｅｒら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９０）１４Ｄ：１９５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
Ｂ細胞の増殖及び／又は分化の促進におけるＣＤ２０の実際の機能に関する不確実性にかかわらず、ＣＤ２０は、癌及び自己免疫疾患に関与するＢ細胞を制御或いは死滅させる抗体媒介治療のための重要な標的を提供する。特に、腫瘍細胞、例えば、ＮＨＬにおけるＣＤ２０の発現は、ＣＤ２０を、ＣＤ２０陽性腫瘍細胞に対して治療剤を特異的に標的化する抗体媒介治療のための重要な標的にする。しかし、今日まで得られた成果は、ＣＤ２０を免疫療法に有用な標的として明確に確立しているが、現在利用可能なマウス及びキメラ抗体が理想的な治療剤を構成しないということも示している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
リンパ腫、自己免疫疾患及び移植拒絶反応を含む、ＣＤ２０と関連する疾患を処置するための組成物及び方法が提供される。組成物は、ヒトＣＤ２０発現細胞の表面上にあるヒトＣＤ２０抗原に結合可能な抗ＣＤ２０抗体を含み、該抗体はリツキシマブと比べて補体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＣＤＣ）の増大を有する。組成物は、モノクローナル抗体の抗原結合性断片、変異体及び誘導体、これらの抗体組成物を生産する細胞株並びに該抗体のアミノ酸配列をコードする単離核酸分子も含む。本発明は、医薬的に許容可能な担体における本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む医薬組成物を更に含む。
【０００８】
本明細書で開示されるモノクローナル抗体は、ＣＤ２０に対して強い親和性を有し、リツキシマブと比べて向上したＣＤＣ機能を特徴とする。本発明の抗体はＣＤ２０を発現している細胞の死滅を媒介する。本発明の抗体は、ヒト細胞の表面上に発現したヒトＣＤ２０抗原に特異的に結合可能であり、抗ＣＤ２０重鎖及び／又は抗ＣＤ２０軽鎖において少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を有することを特徴とする。最適化ＣＤＲは修飾されており、配列番号１〜８の任意の１つに示される配列を含む。抗ＣＤ２０重鎖の少なくとも１つのＣＤＲ及び軽鎖のＣＤＲ３の変化を有する特定の抗体配列が開示される。本発明の組成物は、少なくとも１つの最適化ＣＤＲを含む抗ＣＤ２０抗体並びにその抗原結合性抗体断片、変異体及び誘導体を含む。
【０００９】
本発明の一実施形態では、処置方法は、好適な抗ＣＤ２０抗体或いはその抗原結合性断片、変異体又は誘導体を含む治療有効量の医薬組成物を患者に投与するステップを含む。ＣＤ２０発現細胞と関連する疾患は、自己免疫疾患、癌及び臓器・組織移植片拒絶反応を含む。本発明の方法によって処置或いは予防されうるリンパ腫は、非ホジキンリンパ腫（高悪性度リンパ腫、中悪性度リンパ腫及び低悪性度リンパ腫）、ホジキン病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病及び骨髄芽球性白血病を含む。
【００１０】
本発明の方法を用いた処置を検討される特定の自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ、クローン病、乾癬、自己免疫性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、重症筋無力症及び尋常性天疱瘡を含む。そのような抗体は、自己免疫反応を抑制することによって臓器及び組織移植片の拒絶反応を予防し、Ｂリンパ球を標的にして死滅させることによってリンパ腫を処置し、毒素をＣＤ２０保有細胞へ特異的に送達することにも用いられうる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】元のヒト化マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（ｍＡｂ  １０９７）のＨ１２８６可変重鎖ドメイン（配列番号２９）及びＬ３７３可変軽鎖ドメイン（配列番号１０）のアミノ酸配列を示す配列図である。各可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を構成する残基には下線が引かれている。
【図２】１２３６（配列番号１）、１２３７（配列番号２）及び１２３８（配列番号３）最適化ＣＤＲ３を作製するため、ヒト化マウス抗ＣＤ２０  ｍＡｂ  １０９７のＨ１２８６可変重鎖ドメインのＣＤＲ３（このＣＤＲ３は“２７１”と称される）内にて成された置換を示す配列図である（実施例１参照）。２７１  ＣＤＲ３配列（配列番号３０）はＣ２Ｂ８として公知のマウス／ヒトキメラ抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）の重鎖内可変ドメインのＣＤＲ３の配列と同等である。
【図３】最適化Ｈ１５６９（配列番号１２）、Ｈ１５７０（配列番号１３）及びＨ１５７１（配列番号１４）可変重鎖ドメインのアミノ酸配列を示す配列図である。Ｈ１５６９は最適化１２３６  ＣＤＲ３（配列番号１）を含み、Ｈ１５７０は最適化１２３７  ＣＤＲ３（配列番号２）を含み、Ｈ１５７１は最適化１２３８  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。最適化ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８を作製するため、これらの最適化可変重鎖ドメインの各々はＬ３７３可変軽鎖ドメイン（配列番号１０）と対にされた。各可変ドメインのそれぞれＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３を構成する残基には下線が引かれている。
【図４】最適化Ｈ１５６９（配列番号１９）、Ｈ１５７０（配列番号２０）及びＨ１５７１（配列番号２１）可変重鎖ドメインのコード配列を示す配列図である。
【図５】Ｌ３７３可変軽鎖ドメインのアミノ酸（配列番号１０）及びコード（配列番号２３）配列を示す配列図である。それぞれＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３の残基及びコード配列には下線が引かれている。
【図６】Ａ〜Ｄは、ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブと同一の配列を有する）と比較した、最適化ヒト化ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８の結合特異性を示すグラフ図である。ＣＤ２０を発現するＣＨＯ細胞発現（Ａ）、ＣＤ２０＋ＥＢ１細胞（Ｂ）、ＣＤ２０−ＣＨＯベクター（Ｃ）及びＣＤ２０−ＮＳＯ（Ｄ）に対するこれらの最適化ｍＡｂの結合特異性は、蛍光微量アッセイ技術（Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｍｉｃｒｏｖｏｌｕｍｅ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ＦＭＡＴ）により評価された。実施例２参照。ＮＳＯはヒトＣＤ２０を発現しないマウス骨髄腫細胞株である。
【図７】ｍＡｂ  ２７１と比較した、最適化ｍＡｂ  １２３６，１２３７及び１２３８のエピトープ認識を判定するためのマウス２Ｈ７ブロックアッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはすべてｍＡｂ  ２７１と同じエピトープを認識する。実施例２参照。
【図８】ｍＡｂ  ２７１と比較した、最適化ｍＡｂ  １２３６，１２３７及び１２３８の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を判定するためのＣＤＣ−ｍＡｂ解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）アッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはｍＡｂ  ２７１で認められるＣＤＣ機能活性に対して増大したＣＤＣ機能活性を有する。実施例２参照。
【図９】ｍＡｂ  ２７１と比較した、Ｄａｕｄｉ標的細胞に対する最適化ｍＡｂ  １２３６，１２３７及び１２３８の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を判定するためのＡＤＣＣアッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはｍＡｂ  ２７１で認められるＡＤＣＣ活性と少なくとも同等のＡＤＣＣ活性を有する。実施例２参照。
【図１０】ｍＡｂ  ２７１及びアイソタイプ対照として機能したｍＡｂ  １１と比較した、Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）細胞に対する最適化ｍＡｂ  １２３６，１２３７及び１２３８のアポトーシス活性を判定するための直接アポトーシスアッセイ（ＣＤＣ及びＡＤＣＣから独立）の結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはアポトーシス誘導においてｍＡｂ  ２７１と同程度に効果的である。実施例２参照。
【図１１】最適化ｍＡｂ  １５８９のＨ１６３９可変重鎖ドメイン（配列番号１６）及びＬ３７３可変軽鎖ドメイン（配列番号１０）のアミノ酸配列を示す配列図である。各可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ１，ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を構成する残基には下線が引かれている。
【図１２】最適化ｍＡｂ  １５８９の重鎖及び軽鎖内のそれぞれＨ１６３９可変重鎖ドメイン（配列番号２２）及びＬ３７３可変軽鎖ドメイン（配列番号２３）のコード配列を示す配列図である。可変重鎖及び可変軽鎖ドメインのそれぞれＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３に対するコドンには下線が引かれている。
【図１３】ｍＡｂ  ２７１、陰性対照抗体ｍＡｂ  １１、最適化ｍＡｂ  １２３７及びリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））と比較した、最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のエピトープ認識を判定するためのマウス２Ｈ７ブロックアッセイの結果を示すグラフ図である。陰性対照を除き、被験ｍＡｂはすべて同一或いはオーバーラップエピトープを認識する。実施例４参照。
【図１４】ｍＡｂ  ２７１，１１及び最適化ｍＡｂ  １２３７で認められるＣＤＣ活性と比較した、標的Ｄａｕｄｉ（ＮＨＬ）細胞に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＣＤＣ活性を判定するためのＣＤＣアッセイの結果を示すグラフ図である。概して、最適化ｍＡｂはすべてｍＡｂ  ２７１より強いＣＤＣ機能活性を媒介する。実施例４参照。
【図１５】Ａ及びＢは、ｍＡｂ  ２７１，ｍＡｂ  １１及び最適化ｍＡｂ  １２３７で認められるＣＤＣ活性と比較した、２つの標的Ｂ−ＣＬＬ細胞株・ＥＨＥＢ細胞（Ａ）及びＭＥＣ−１細胞（Ｂ）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＣＤＣ活性を判定するためのＣＤＣアッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはすべてｍＡｂ  ２７１に対して増大したＣＤＣ機能活性を有する。実施例４参照。
【図１６】ｍＡｂ  ２７１及び最適化ｍＡｂ  １２３７と比較した、最適化ｍＡｂ  １５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＣＤＣ活性を判定するためのＣＤＣ−ｍＡｂ解離速度アッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはすべて、ｍＡｂ  ２７１で認められるＣＤＣ機能活性に対して増大したＣＤＣ機能活性を有する。実施例４参照。
【図１７】Ａ及びＢは、ｍＡｂ  ２７１、最適化ｍＡｂ  １２３７及び陰性対照ｍＡｂ  １１（これらの図では「陰性」と呼称される）で認められるＣＤＣ活性と比較した、２つの標的ＮＨＬ細胞株・Ｄａｕｄｉ細胞（Ａ）及びＷＩＬ２−Ｓ細胞（Ｂ）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＣＤＣ活性を判定するための非放射性ＣＤＣアッセイの結果を示すグラフ図である。実施例４参照。
【図１８】Ａ及びＢは、ｍＡｂ  ２７１、最適化ｍＡｂ  １２３７及び陰性対照ｍＡｂ  １１（これらの図では「陰性」と呼称される）で認められるＣＤＣ活性と比較した、２つの標的Ｂ−ＣＬＬ細胞株・ＥＨＥＢ細胞（Ａ）及びＭＥＣ−１細胞（Ｂ）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＣＤＣ活性を判定するための非放射性ＣＤＣアッセイの結果を示すグラフ図である。実施例４参照。
【図１９】Ａ及びＢは、ｍＡｂ  ２７１、最適化ｍＡｂ  １２３７及び陰性対照ｍＡｂ  １１（これらの図では「陰性」と呼称される）で認められるＣＤＣ活性と比較した、２つの標的ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞株（「正常」Ｂ細胞）・ＳＳ  ＢＬＣＬ細胞（Ａ）及びＭｅｌＫ  ＢＬＣＬ細胞（Ｂ）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＣＤＣ活性を判定するための非放射性ＣＤＣアッセイの結果を示すグラフ図である。実施例４参照。
【図２０】ｍＡｂ  ２７１、最適化ｍＡｂ  １２３７及び対照ＩｇＧと比較した、Ｄａｕｄｉ（ＮＨＬ）細胞に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＡＤＣＣ活性を判定するためのＡＤＣＣアッセイの結果を示すグラフ図である。実施例４参照。
【図２１】ｍＡｂ  ２７１、最適化ｍＡｂ  １２３７及び対照ＩｇＧと比較した、ＭＥＣ−１（Ｂ−ＣＬＬ細胞）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＡＤＣＣ活性を判定するためのＡＤＣＣアッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはｍＡｂ  ２７１で認められるＡＤＣＣ活性と同様のＡＤＣＣ活性を有する。実施例４参照。
【図２２】ｍＡｂ  ２７１及びアイソタイプ対照として機能したｍＡｂ  １１と比較した、Ｒａｍｏｓ（ＮＨＬ）細胞に対する最適化ｍＡｂ  １２３６，１２３７及び１２３８のアポトーシス活性を判定するための直接アポトーシスアッセイ（ＣＤＣ及びＡＤＣＣから独立）を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂはアポトーシス誘導においてｍＡｂ  ２７１と同程度に効果的である。実施例４参照。
【図２３】ｍＡｂ  ２７１及び最適化ｍＡｂ  １２３７と比較した、Ｄａｕｄｉ（ＮＨＬ）細胞に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２の細胞殺滅活性を判定するための全血アッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂは、これらの細胞に対する、ｍＡｂ  ２７１と同等以上の溶解を有する。実施例４参照。
【図２４】ｍＡｂ  ２７１及び最適化ｍＡｂ  １２３７と比較した、２つの標的Ｂ−ＣＬＬ細胞株・ＥＨＥＢ細胞（Ａ）及びＭＥＣ−１細胞（Ｂ）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２の細胞殺滅活性を判定するための全血アッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂは、これらの細胞に対する、ｍＡｂ  ２７１と同等以上の溶解を有する。実施例４参照。
【図２５】ｍＡｂ  ２７１及び最適化ｍＡｂ  １２３７と比較した、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞株ＭｅｌＫ  ＢＬＣＬ（「正常」Ｂ細胞）に対する最適化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２のＡＤＣＣ活性を判定するためのＡＤＣＣ全血アッセイの結果を示すグラフ図である。最適化ｍＡｂは、これらの細胞に対する、ｍＡｂ  ２７１と同等以上の溶解を有する。実施例４参照。
【図２６】Ｄａｕｄｉ細胞異種移植モデルにおけるｍＡｂ  １５８９の活性を判定するための最適化ヒト化抗マウスＣＤ２０モノクローナル抗体１５８９のｉｎ  ｖｉｖｏ試験結果を示すグラフ図である。実施例５参照。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（Ｉ．定義）
「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」実体という用語は、１つ以上のその実体を指すことに留意すべきであり、例えば、「１つの（ａｎ）抗ＣＤ２０抗体」は１つ以上の抗ＣＤ２０抗体を表すと理解される。そういうものとして、「１つの（ａ）」（若しくは「１つの（ａｎ）」、「１つ以上の」及び「少なくとも１つの」は本明細書で互換的に用いられうる。
【００１３】
本明細書で用いられるように、「腫瘍」という用語は、悪性であろうと良性であろうと、あらゆる腫瘍細胞の成長及び増殖並びにあらゆる前癌細胞及び組織を指す。
【００１４】
「癌」及び「癌の」という用語は、通常、無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理的状態を指し、或いは示す。癌の例には、限定されないが、リンパ腫及び白血病が含まれる。
【００１５】
本明細書で用いられるように、「ポリペプチド」という用語は、単数の「ポリペプチド」及び複数の「ポリペプチド」を包含するものとし、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直鎖状に結合した単量体（アミノ酸）から成る分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖（単数又は複数）を指し、産物の特定の長さを指すものではない。従って、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「蛋白質」、「アミノ酸鎖」又は２つ以上のアミノ酸の鎖（単数又は複数）を指すのに用いられる他の任意の用語は、「ポリペプチド」の定義範囲内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの任意の用語の代わりに、或いはそれらと互換的に用いられうる。「ポリペプチド」という用語は、限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、蛋白質分解的切断又は非天然アミノ酸による修飾を含む、ポリペプチドの発現後修飾の産物も指すものとする。ポリペプチドは天然生物資源に由来し、或いは組換え技術によって生成されうるが、必ずしも指定の核酸配列から翻訳されるわけではない。ポリペプチドは化学合成を含む任意の方法で生成されうる。
【００１６】
本発明のポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１，０００以上又は２，０００以上のアミノ酸のサイズでよい。ポリペプチドは明確な三次元構造を有しうるが、必ずしもそのような構造を有さない。明確な三次元構造を有するポリペプチドは「折り畳まれた」と称され、明確な三次元構造を有するのではなく、多くの異なる構造をとることができるポリペプチドは「折り畳まれていない」と称される。本明細書で用いられるように、糖蛋白質という用語は、アミノ酸残基、例えば、セリン残基又はアスパラギン残基の酸素含有又は窒素含有側鎖を介して蛋白質に結合される少なくとも１つの炭水化物部分に結合した蛋白質を指す。
【００１７】
「単離」ポリペプチド又はその断片、変異体若しくは誘導体とは、その天然環境に存在しないポリペプチドをいう。特定レベルの精製は必要ではない。例えば、単離ポリペプチドはその天然又は自然環境から取り出すことができる。任意の好適な技法により分離、分画或いは部分的又は実質的に精製された天然又は組換えポリペプチドのように、宿主細胞に発現する組換え生成されたポリペプチド及び蛋白質は、本発明を目的として単離されたものと考えられる。
【００１８】
本発明のポリペプチドとして、前述のポリペプチドの断片、誘導体、類似体若しくは変異体又はそれらの任意の組合せも含まれる。本発明の抗ＣＤ２０抗体又は抗体ポリペプチドに言及する際、「断片」、「変異体」、「誘導体」及び「類似体」という用語は、本発明の対応する抗体又は抗体ポリペプチドの少なくとも一部の抗原結合特性を保持する任意のポリペプチドを含む。本発明のポリペプチドの断片は、本明細書の他の箇所で述べられる特定の抗体断片に加え、蛋白質分解断片及び欠失断片を含む。本発明の抗ＣＤ２０抗体及び抗体ポリペプチドの変異体は、上述のような断片、更に、アミノ酸の置換、欠失又は挿入によりアミノ酸配列が改変されたポリペプチドを含む。変異体は天然又は非天然に生じうる。非天然変異体は当該技術分野において公知の突然変異誘発技術を用いて生成されうる。変異体ポリペプチドは保存的又は非保存的アミノ酸置換、欠失若しくは付加を含みうる。本発明の抗ＣＤ２０抗体及び抗体ポリペプチドの誘導体は、本発明の基準抗体又は抗体ポリペプチドに見出されない付加的特徴を示すように改変されたポリペプチドである。その例には融合蛋白質が含まれる。変異体ポリペプチドは本明細書で「ポリペプチド類似体」とも称されうる。本明細書で用いられるように、抗ＣＤ２０抗体及び抗体ポリペプチドの「誘導体」は、官能側基の反応によって１つ以上の残基が化学的に誘導体化された対象ポリペプチドを指す。「誘導体」として、２０個の標準アミノ酸の１つ以上の天然アミノ酸誘導体を含むペプチドも含まれる。例えば、プロリンを４−ヒドロキシプロリンに置換してよく、リシンを５−ヒドロキシリシンに置換してよく、ヒスチジンを３−メチルヒスチジンに置換してよく、セリンをホモセリンに置換してよく、リシンをオルニチンに置換してよい。
【００１９】
「ポリヌクレオチド」という用語は、単数の核酸及び複数の核酸を包含するものとし、単離核酸分子又は構築体、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）又はプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは従来のリン酸ジエステル結合又は非従来的な結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見出されるようなアミド結合）を含みうる。「核酸」という用語はポリヌクレオチドに存在する任意の１つ以上の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ断片を指す。「単離」核酸又はポリヌクレオチドとは、その天然環境から取り出された核酸分子ＤＮＡ又はＲＮＡをいう。例えば、ベクターに含まれる抗ＣＤ２０抗体をコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明を目的として単離されたと考えられる。単離ポリヌクレオチドの更なる例には、異種宿主細胞内に維持される組換えポリヌクレオチド又は溶液中の精製（部分的又は実質的）ポリヌクレオチドが含まれる。単離ＲＮＡ分子は本発明のポリヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＲＮＡ転写物を含む。本発明による単離ポリヌクレオチド又は核酸は合成的に生成されるような分子を更に含む。加えて、ポリヌクレオチド又は核酸は、制御要素、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位又は転写ターミネーターでよく、或いはそれを含みうる。
【００２０】
本明細書で用いられるように、「コード領域」はアミノ酸に翻訳されるコドンから成る核酸部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ，ＴＧＡ又はＴＡＡ）はアミノ酸に翻訳されないが、コード領域の一部と考えられうる。しかし、フランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどはいずれもコード領域の一部ではない。本発明の２つ以上のコード領域は、単一のポリヌクレオチド構築体、例えば、単一ベクター又は別個のポリヌクレオチド構築体、例えば、別個の（異なる）ベクターに存在しうる。更に、いずれのベクターも単一のコード領域を含み、或いは２つ以上のコード領域を含んでよく、例えば、単一ベクターは免疫グロブリン重鎖可変領域と免疫グロブリン軽鎖可変領域とを別個にコードしうる。加えて、本発明のベクター、ポリヌクレオチド又は核酸は、抗ＣＤ２０抗体又はその断片、変異体若しくは誘導体をコードする核酸に融合し、或いは融合していない異種コード領域をコードしうる。異種コード領域は、限定されないが、特殊化要素又はモチーフ、例えば、分泌シグナルペプチド又は異種機能ドメインを含む。
【００２１】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド又は核酸はＤＮＡである。ＤＮＡの場合、通常、ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは、１つ以上のコード領域と機能的に関連するプロモーター及び／又は他の転写若しくは翻訳制御要素を含みうる。機能的関連は、遺伝子産物、例えば、ポリペプチドに対するコード領域が、遺伝子産物の発現を調節配列の影響又は制御下に置くように、１つ以上の調節配列と関連している場合である。２つのＤＮＡ断片（例えば、ポリペプチドコード領域及びそれと関連するプロモーター）は、プロモーター機能の誘導が所望の遺伝子産物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらし、また、２つのＤＮＡ断片間の結合性状が、発現調節配列の遺伝子産物の発現を指示する能力を妨げず、或いはＤＮＡ鋳型が転写される能力を妨げない場合、「機能的に関連している」。従って、プロモーターが核酸の転写を生じさせることが可能であれば、プロモーター領域はポリペプチドをコードする核酸と機能的に関連しているであろう。プロモーターは所定の細胞においてのみＤＮＡの実質的な転写を指示する細胞特異的プロモーターでよい。プロモーター以外の他の転写制御要素、例えば、エンハンサー、オペレーター、リプレッサー及び転写終止シグナルは、ポリヌクレオチドと機能的に関連して細胞特異的転写を指示することができる。好適なプロモーター及び他の転写制御領域は本明細書で開示される。
【００２２】
様々な転写制御領域が当業者には周知である。これらは、限定されないが、脊椎動物細胞において機能する転写制御領域、例えば、限定されないが、サイトメガロウイルス（イントロンＡと併せた最初期プロモーター）、サルウィルス４０（初期プロモーター）及びレトロウイルス（例えば、ラウス肉腫ウイルス）由来のプロモーター及びエンハンサーセグメントを含む。他の転写制御領域は、脊椎動物遺伝子由来のもの、例えば、アクチン、熱ショック蛋白質、ウシ成長ホルモン及びウサギβグロビン並びに真核細胞における遺伝子発現を制御することが可能な他の配列を含む。更なる好適な転写制御領域は、組織特異的プロモーター及びエンハンサー並びにリンホカイン誘導性プロモーター（例えば、インターフェロン又はインターロイキンにより誘導可能なプロモーター）を含む。
【００２３】
同様に、様々な翻訳制御要素が当業者には周知である。これらは、限定されないが、リボソーム結合部位、翻訳開始及び終止コドン並びにピコルナウイルス由来の要素（特に、内部リボソーム侵入部位又はＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列とも称される）を含む。
【００２４】
他の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の形態のＲＮＡである。
【００２５】
本発明のポリヌクレオチド及び核酸コード領域は、本発明のポリヌクレオチドにコードされたポリペプチドの分泌を指示する分泌又はシグナルペプチドをコードする更なるコード領域と関連しうる。シグナル仮説によれば、哺乳動物細胞によって分泌される蛋白質は、粗面小胞体に跨る成長蛋白質鎖の輸送が開始すると、成熟蛋白質から切断されるシグナルペプチド又は分泌リーダー配列を有する。通常、脊椎動物細胞によって分泌されるポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に融合したシグナルペプチドを有し、これは完全又は「完全長」ポリペプチドから切断され、分泌又は「成熟」形態のポリペプチドを生成するということを当業者は認識している。一部の実施形態では、天然シグナルペプチド、例えば、免疫グロブリン重鎖若しくは軽鎖シグナルペプチド又は機能的に関連するポリペプチドの分泌を指示する能力を保持する該配列の機能的誘導体が用いられる。或いは、異種哺乳動物シグナルペプチド又はその機能的誘導体が用いられうる。例えば、野生型リーダー配列はヒト組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）又はマウスβ−グルクロニダーゼのリーダー配列に置換されうる。
【００２６】
本発明は、特定の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体に関する。天然抗体のようなフルサイズの抗体に具体的に言及しない場合、「抗ＣＤ２０抗体」という用語はフルサイズの抗体及びそのような抗体の抗原結合性断片、変異体、類似体若しくは誘導体、例えば、天然抗体若しくは免疫グロブリン分子又は改変抗体分子又は抗体分子と同様に抗原に結合する断片を包含する。
【００２７】
「抗体」及び「免疫グロブリン」は本明細書で互換的に用いられる。抗体又は免疫グロブリンは重鎖の少なくとも可変ドメインを含み、通常、重鎖及び軽鎖の少なくとも可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は比較的十分に理解されている。例えば、Ｈａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ社）を参照されたい。
【００２８】
以下により詳細に述べられるように、「免疫グロブリン」という用語は生化学的に識別可能な種々広範なクラスのポリペプチドを含む。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ又はエプシロン（γ，μ，α，δ，ε）に分類され、それらの中にいくつかのサブクラスを含む（例えば、γ１−γ４）ことを当業者は理解するであろう。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ又はＩｇＥと決定するのはこの鎖の性状である。免疫グロブリンサブクラス（免疫グロブリンアイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４，ＩｇＡ１などは十分に特徴付けられており、機能的特化を付与することが公知である。これらのクラス及びアイソタイプの各々の変形型は、本発明の開示に照らして当業者には容易に識別可能であり、従って、本発明の範囲内にある。すべての免疫グロブリンクラスが明確に本発明の範囲内にあるが、以下の考察では概してＩｇＧクラスの免疫グロブリン分子を対象とする。ＩｇＧに関し、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量約２３，０００ダルトンの２本の同一軽鎖ポリペプチド及び分子量５３，０００〜７０，０００ダルトンの２本の同一重鎖ポリペプチドを含む。通常、その４本鎖は“Ｙ”字形にてジスルフィド結合によって結合され、軽鎖は“Ｙ”の開口部から開始して可変領域を通じて続く重鎖に腕木をつけた形状となっている。
【００２９】
軽鎖はカッパ又はラムダ（κ，λ）に分類される。各重鎖クラスはカッパ又はラムダ軽鎖と結合しうる。一般的に、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞又は遺伝子操作された宿主細胞によって産生される場合、軽鎖と重鎖は互いに共有結合し、２本の重鎖の「尾」部は共有ジスルフィド結合又は非共有結合によって互いに結合している。重鎖では、アミノ酸配列はＹ字形の二又状端部におけるＮ末端から各鎖の底部におけるＣ末端まで続いている。
【００３０】
軽鎖及び重鎖は「定常領域」及び「可変領域」と称される構造的・機能的相同性領域に分けられる。「定常」及び「可変」という用語は機能的に用いられる。この点において、軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）部分の可変ドメインが抗原認識及び特異性を決定することが理解されるであろう。逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１，ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣習により、定常領域ドメインの番号付けは、抗体の抗原結合部位又はアミノ末端から遠位になるほど増加する。Ｎ末端部は可変領域であり、Ｃ末端部に定常領域がある。ＣＨ３及びＣＬドメインは、それぞれ重鎖、軽鎖のカルボキシ末端を実際に含む。
【００３１】
上記のように、可変領域は抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識し、且つそれと特異的に結合することを可能にする。即ち、抗体のＶＬドメインとＶＨドメイン又はこれらの可変ドメイン内の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）のサブセットが組み合わさり、三次元抗原結合部位を画定する可変領域を形成する。この四次抗体構造はＹの各腕の端部に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位はＶＨ及びＶＬ鎖の各々における３つのＣＤＲｓによって画定される。場合により、例えば、ラクダ種由来又はラクダ免疫グロブリンに基づいて改変された特定の免疫グロブリン分子の場合、完全な免疫グロブリン分子は重鎖のみから成り、軽鎖を含まない。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８を参照されたい。
【００３２】
天然抗体では、抗体が水性環境にてその三次元構造を呈するため、各抗原結合ドメインに存在する６つの「相補性決定領域」又は“ＣＤＲｓ”は、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置されたアミノ酸の短い非連続配列である。抗原結合ドメインにおけるアミノ酸残部は「フレームワーク」領域と称され、より低い分子間可変性を示す。フレームワーク領域は主にβシート構造をとり、ＣＤＲｓは、該βシート構造に結合するループを形成し、場合により、その一部を形成する。従って、フレームワーク領域は、鎖間非共有結合的相互作用によってＣＤＲｓを適正な配向に配置するための足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲｓによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープと相補的な表面を画定する。この相補的な表面は抗体のその同族エピトープへの非共有結合を促進する。ＣＤＲｓ及びフレームワーク領域を構成するアミノ酸は、正確に定義付けられているため、任意の重鎖又は軽鎖可変ドメインに対し、当業者によってそれぞれ容易に同定されうる（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔら（１９８３）米国Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；並びにＣｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７を参照。これらはそれらの全体を参照して本明細書に組み込まれる）。
【００３３】
当該技術分野内で使用され、且つ／或いは受容されている用語の２つ以上の定義がある場合、本明細書で用いられるような用語の定義は、そうではないと明示しない限り、そのような意味をすべて含むものとする。具体的な例は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの可変領域内に見出される非連続抗原結合部位を示すための「相補性決定領域」（“ＣＤＲ”）という用語の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔら（１９８３）米国Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”並びにＣｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（参照して本明細書に組み込まれる）が述べており、その定義は、互いに比較した場合、アミノ酸残基のオーバーラップ又はサブセットを含む。しかし、抗体又はその変異体のＣＤＲに言及するためのいずれの定義の適用も、本明細書で定義・使用される用語の範囲内にあるものとする。上記引用文献の各々によって定義付けされるようなＣＤＲｓを包含する適切なアミノ酸残基が、下記に比較として表１に示される。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数はＣＤＲの配列及びサイズによって異なる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を示されれば、どの残基が特定のＣＤＲを構成するかをルーチンに判断することができる。
【００３４】
表１  ＣＤＲの定義１
【００３５】
【表１】
2010505447.tif 000002
Ｋａｂａｔらは、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列に対する番号付け方式も定義付けた。当業者は、配列それ自体を超えて実験データに依存せずに、この「Ｋａｂａｔの番号付け」方式を任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で用いられるように、「Ｋａｂａｔの番号付け」は、Ｋａｂａｔら（１９８３）米国Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”によって示される番号付け方式を指す。別記しない限り、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体における特定のアミノ酸残基位置の番号付けへの言及は、Ｋａｂａｔの番号付け方式に従う。
【００３６】
ラクダ種では、ＶＨＨと称される重鎖可変領域が抗原結合ドメイン全体を形成する。ラクダ種ＶＨＨ可変領域と従来の抗体由来の可変領域（ＶＨ）との主な相違点は、（ａ）ＶＨＨにおける対応する領域と比べ、ＶＨの軽鎖接触面におけるより多くの疎水性アミノ酸、（ｂ）ＶＨＨにおけるより長いＣＤＲ３及び（ｃ）ＶＨＨにおけるＣＤＲ１及びＣＤＲ３間のジスルフィド結合の高頻度の生起を含む。
【００３７】
本発明の抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化又はキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ又はＶＨドメインを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生成される断片並びに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書で開示される抗ＣＤ２０抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）を含む。ｓｃＦｖ分子は当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号で述べられている。本発明の免疫グロブリン又は抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ，ＩｇＥ，ＩｇＭ，ＩｇＤ，ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４，ＩｇＡ１及びＩｇＡ２など）又はサブクラスでよい。
【００３８】
単鎖抗体を含む抗体断片は、単独で、或いは以下：ヒンジ領域、ＣＨ１，ＣＨ２及びＣＨ３ドメインの全部又は一部と組み合わせて可変領域を含みうる。本発明に更に含まれるものは、やはり可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１，ＣＨ２及びＣＨ３ドメインとの任意の組合せを含む抗原結合性断片である。本明細書で開示される診断及び治療方法に用いるための抗体又はその免疫特異的断片は、トリ及び哺乳動物を含む任意の動物源に由来しうる。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ又はニワトリ抗体に由来する。別の実施形態では、可変領域はｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ由来（例えば、サメ）でよい。本明細書で用いられるように、下記に、また、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に示されるように、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、また、ヒト免疫グロブリンライブラリー又は１つ以上のヒト免疫グロブリンの遺伝子導入動物から単離され、且つ内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。
【００３９】
本明細書で用いられるように、「重鎖部分」という用語は免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。重鎖部分を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中部及び／又は下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン又はそれらの変異体若しくは断片の少なくとも１つを含む。例えば、本発明に用いる結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、少なくとも一部のヒンジドメイン及びＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、少なくとも一部のヒンジドメイン及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖或いはＣＨ１ドメイン、少なくとも一部のヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含みうる。別の実施形態では、本発明のポリペプチドはＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。更に、本発明に用いる結合ポリペプチドは、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部又は一部）を欠いてもよい。上述のように、これらのドメイン（例えば、重鎖部分）はアミノ酸配列が天然免疫グロブリン分子と異なるように修飾されうることが当業者には理解されるであろう。
【００４０】
本明細書で開示される特定の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体では、多量体の１つのポリペプチド鎖の重鎖部分は、多量体の第二のポリペプチド鎖上の重鎖部分と同一である。或いは、本発明の重鎖部分含有単量体は同一でない。例えば、各単量体は異なる標的結合部位を含み、例えば、二重特異性抗体を形成しうる。
【００４１】
本明細書で開示される診断及び治療方法に用いる結合ポリペプチドの重鎖部分は、異なる免疫グロブリン分子由来でよい。例えば、ポリペプチドの重鎖部分は、ＩｇＧ１分子由来のＣＨ１ドメイン及びＩｇＧ３分子由来のヒンジ領域を含みうる。別例では、重鎖部分は、一部がＩｇＧ１分子由来、一部がＩｇＧ３分子由来のヒンジ領域を含みうる。別例では、重鎖部分は、一部がＩｇＧ１分子由来、一部がＩｇＧ４分子由来のキメラヒンジを含みうる。
【００４２】
本明細書で用いられるように、「軽鎖部分」という用語は免疫グロブリン軽鎖由来のアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖部分はＶＬ又はＣＬドメインの少なくとも１つを含む。
【００４３】
本明細書で開示される抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、抗原、例えば、それらが認識或いは特異的に結合する標的ポリペプチド（ＣＤ２０）のエピトープ又は部分の点から説明或いは明示されうる。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的ポリペプチドの部分は、「エピトープ」又は「抗原決定基」である。標的ポリペプチドは単一のエピトープを含みうるが、通常、少なくとも２つのエピトープを含み、抗原のサイズ、構造及びタイプにより任意の数のエピトープを含みうる。更に、標的ポリペプチド上の「エピトープ」が非ポリペプチド要素であり、或いはそれを含む場合があり、例えば、エピトープが炭水化物側鎖を含みうることに留意する必要がある。
【００４４】
抗体に対するペプチド又はポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４〜５アミノ酸であると考えられている。ペプチド又はポリペプチドエピトープは、好ましくは、少なくとも７、より好ましくは、少なくとも９、最も好ましくは、少なくとも約１５〜約３０アミノ酸を含む。ＣＤＲは抗原ペプチド又はポリペプチドをその三次形態にて認識することができるため、エピトープを構成するアミノ酸は連続的である必要がなく、場合により、更には同じペプチド鎖上になくてもよい。本発明では、本発明の抗ＣＤ２０抗体によって認識されるペプチド又はポリペプチドエピトープは、ＣＤ２０の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、より好ましくは、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５又は約１５〜３０個の連続或いは非連続アミノ酸の配列を含む。
【００４５】
「特異的に結合する」とは、一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、その結合が抗原結合ドメインとエピトープとのある程度の相補性を伴うということである。この定義によると、抗体がランダムで無関係のエピトープに結合する場合より容易にその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合、抗体はエピトープに「特異的に結合する」といわれる。特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対的親和性を特徴付けるように、「特異性」という用語が本明細書で用いられる。例えば、抗体“Ａ”は所与のエピトープに対して抗体“Ｂ”より高い特異性を有するとみなされ、或いは抗体“Ａ”は関連エピトープ“Ｄ”に対して有する以上に高い特異性でエピトープ“Ｃ”に結合するといわれうる。
【００４６】
「選択的に結合する」とは、抗体が関連する同様の相同又は類似エピトープに結合する場合より容易にエピトープに特異的に結合するということである。従って、所与のエピトープに「選択的に結合する」抗体は、関連エピトープと交差反応しうるとしても、関連エピトープより該エピトープに結合する可能性が高いであろう。
【００４７】
非限定例として、抗体が第二のエピトープに対する抗体の解離定数（ＫＤ）より小さいＫＤで第一のエピトープに結合する場合、抗体は前記第一のエピトープに選択的に結合すると考えられうる。別の非限定例では、抗体が第二のエピトープに対する抗体のＫＤより少なくとも１桁小さい親和性で第一のエピトープに結合する場合、抗体は第一の抗原に選択的に結合すると考えられうる。別の非限定例では、抗体が第二のエピトープに対する抗体のＫＤより少なくとも２桁小さい親和性で第一のエピトープに結合する場合、抗体は第一のエピトープに選択的に結合すると考えられうる。
【００４８】
別の非限定例では、抗体が第二のエピトープに対する抗体の解離速度（ｋ（ｏｆｆ））より小さいｋ（ｏｆｆ）で第一のエピトープに結合する場合、抗体は第一のエピトープに選択的に結合すると考えられうる。別の非限定例では、抗体が第二のエピトープに対する抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも１桁小さい親和性で第一のエピトープに結合する場合、抗体は第一のエピトープに選択的に結合すると考えられうる。別の非限定例では、抗体が第二のエピトープに対する抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも２桁小さい親和性で第一のエピトープに結合する場合、抗体は第一のエピトープに選択的に結合すると考えられうる。
【００４９】
本明細書で開示される抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、５×１０−２秒−１，１０−２秒−１，５×１０−３秒−１又は１０−３秒−１以下の解離速度（ｋ（ｏｆｆ））で、本明細書で開示される標的ポリペプチド又はその断片若しくは変異体に結合するといわれうる。より具体的には、本発明の抗体は、５×１０−４秒−１，１０−４秒−１，５×１０−５秒−１又は１０−５秒−１，５×１０−６秒−１，１０−６秒−１，５×１０−７秒−１又は１０−７秒−１以下の解離速度（ｋ（ｏｆｆ））で、本明細書で開示される標的ポリペプチド又はその断片若しくは変異体に結合するといわれうる。
【００５０】
本明細書で開示される抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、１０３Ｍ−１秒−１，５×１０３Ｍ−１秒−１，１０４Ｍ−１秒−１又は５×１０４Ｍ−１秒−１以上の結合速度（ｋ（ｏｎ））で、本明細書で開示される標的ポリペプチド又はその断片若しくは変異体に結合するといわれうる。より具体的には、本発明の抗体は、１０５Ｍ−１秒−１，５×１０５Ｍ−１秒−１，１０６Ｍ−１秒−１，５×１０６Ｍ−１秒−１又は１０７Ｍ−１秒−１以上の結合速度（ｋ（ｏｎ））で、本明細書で開示される標的ポリペプチド又はその断片若しくは変異体に結合するといわれうる。
【００５１】
抗体が基準抗体の所与のエピトープへの結合をある程度阻止するほどに該エピトープに選択的に結合する場合、その抗体は基準抗体のエピトープへの結合を競合的に阻害するといわれる。競合的阻害は、当該技術分野において公知の任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイにより測定されうる。抗体は、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％又は少なくとも５０％、基準抗体の所与のエピトープへの結合を競合的に阻害するといわれうる。
【００５２】
本明細書で用いられるように、「親和性」という用語は、免疫グロブリン分子のＣＤＲと個々のエピトープとの結合強度の尺度を指す。例えば、Ｈａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ社、第２版）２７〜２８頁を参照されたい。本明細書で用いられるように、「結合力（ａｖｉｄｉｔｙ）」という用語は、免疫グロブリン集団と抗原との複合体の全体的な安定性、即ち、免疫グロブリン混合物と抗原との機能的な結合強度を指す。例えば、Ｈａｒｌｏｗ、２９〜３４頁を参照されたい。結合力（ａｖｉｄｉｔｙ）は、集団における個々の免疫グロブリン分子と特定のエピトープとの親和性並びに免疫グロブリン及び抗原の結合価に関連する。例えば、二価モノクローナル抗体と、高分子のような高度に反復的なエピトープ構造を有する抗原との相互作用は、高結合力の１つであろう。
【００５３】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、それらの交差反応性の点からも説明或いは明示されうる。本明細書で用いられるように、「交差反応性」という用語は、１つの抗原に対して特異的な抗体の第二の抗原と反応する能力を指し、２つの異なる抗原物質間の関連尺度をいう。従って、抗体がその形成を誘導したエピトープ以外のエピトープに結合する場合、その抗体は交差反応性である。一般的に、交差反応性エピトープは、誘導エピトープと同じ相補的な構造特徴を多く有し、場合により、実際、元々のものより良く適合しうる。
【００５４】
例えば、特定の抗体は、関連するが非同一のエピトープ、例えば、基準エピトープに対して少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％及び少なくとも５０％の同一性（当該技術分野において公知であって本明細書で述べられる方法を用いて算出されるように）を有するエピトープに結合するという点において、ある程度の交差反応性を有する。抗体が基準エピトープに対して９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満及び５０％未満の同一性（当該技術分野において公知であって本明細書で述べられる方法を用いて算出されるように）を有するエピトープに結合しない場合、その抗体は交差反応性をほとんど或いはまったく有さないといわれうる。抗体が特定のエピトープの他のアナログ、オルソログ又はホモログのいずれとも結合しない場合、その抗体は該エピトープに「高度に特異的」であるとみなされうる。
【００５５】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、本発明のポリペプチドに対するそれらの結合親和性の点からも説明或いは明示されうる。好ましい結合親和性は、５×１０−２Ｍ，１０−２Ｍ，５×１０−３Ｍ，１０−３Ｍ，５×１０−４Ｍ，１０−４Ｍ，５×１０−５Ｍ，１０−５Ｍ，５×１０−６Ｍ，１０−６Ｍ，５×１０−７Ｍ，１０−７Ｍ，５×１０−８Ｍ，１０−８Ｍ，５×１０−９Ｍ，１０−９Ｍ，５×１０−１０Ｍ，１０−１０Ｍ，５×１０−１１Ｍ，１０−１１Ｍ，５×１０−１２Ｍ，１０−１２Ｍ，５×１０−１３Ｍ，１０−１３Ｍ，５×１０−１４Ｍ，１０−１４Ｍ，５×１０−１５Ｍ又は１０−１５Ｍ未満の解離定数、即ち、Ｋｄを有するものを含む。
【００５６】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、「多特異性」、例えば、二重特異性、三重特異性又はそれ以上の多特異性でよく、それは、１つの抗原又はそれ以上の異なる抗原（例えば、蛋白質）上に存在する２つ以上の異なるエピトープを同時に認識し、これに結合するということである。従って、抗ＣＤ２０抗体が「単一特異性」又は「多特異性」、例えば、「二重特異性」であるかということは、結合ポリペプチドが反応する異なるエピトープの数を指す。多特異性抗体は、本明細書で述べられる標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり、或いは標的ポリペプチド及び異種エピトープ、例えば、異種ポリペプチド又は固体支持物質に特異的でありうる。
【００５７】
本明細書で用いられるように、「結合価」という用語は、抗ＣＤ２０抗体、結合ポリペプチド又は抗体に存在する潜在的結合ドメイン、例えば、抗原結合ドメインの数を指す。各結合ドメインは１つのエピトープに特異的に結合する。抗ＣＤ２０抗体、結合ポリペプチド又は抗体が２つ以上の結合ドメインを含む場合、各結合ドメインは同じエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体では「二価単一特異性」と称される）又は異なるエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体では「二価二重特異性」と称される）に特異的に結合しうる。抗体は二重特異性であって各特異性に対して二価でもよい（「二重特異性四価抗体」と称される）。別の実施形態では、四価ミニボディ又はドメイン削除抗体が作製されうる。
【００５８】
二重特異性二価抗体及びそれを作製する方法は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号；第５，８０７，７０６号；第５，８２１，３３３号；並びに米国特許出願公開第２００３／０２０７３４号及び第２００２／０１５５５３７号に述べられており、それらすべての開示内容は参照して本明細書に組み込まれる。二重特異性四価抗体及びそれを作製する方法は、例えば、ＷＯ  ０２／０９６９４８及びＷＯ  ００／４４７８８に述べられており、その両方の開示内容は参照して本明細書に組み込まれる。全体的には、ＰＣＴ公開ＷＯ  ９３／１７７１５；ＷＯ  ９２／０８８０２；ＷＯ  ９１／００３６０；ＷＯ  ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。
【００５９】
前述のように、種々の免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造及び三次元構造は周知である。本明細書で用いられるように、「ＶＨドメイン」という用語は免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という用語は免疫グロブリン重鎖の最初の（最もアミノ末端側）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインはＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端側である。
【００６０】
本明細書で用いられるように、「ＣＨ２ドメイン」という用語は、従来の番号付け方式を用いて、例えば、抗体のおよそ残基２４４から残基３６０まで延びる重鎖分子部分を含む（Ｋａｂａｔの番号付け方式では残基２４４〜３６０、ＥＵの番号付け方式では残基２３１〜３４０；Ｋａｂａｔ  ＥＡら、前記引用文献参照。ＣＨ２ドメインは別のドメインと密接に対にならないという点で独特である。むしろ、無傷の天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に２本のＮ結合型分岐炭水化物鎖が挿入されている。ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで延び、約１０８残基を含むということも十分に立証されている。
【００６１】
本明細書で用いられるように、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子部分を含む。このヒンジ領域は約２５残基を含み、可撓性であり、従って、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ領域は３つの異なるドメイン：上部、中部及び下部ヒンジドメインに細分されうる（Ｒｏｕｘら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３）。
【００６２】
本明細書で用いられるように、「ジスルフィド結合」という用語は、２個の硫黄原子間に形成される共有結合を含む。アミノ酸のシステインは、第二のチオール基とジスルフィド結合又は架橋を形成することができるチオール基を含む。大部分の天然ＩｇＧ分子では、ＣＨ１領域とＣＬ領域はジスルフィド結合によって結合され、２本の重鎖は、Ｋａｂａｔの番号付け方式を用いて、２３９及び２４２に対応する位置（ＥＵの番号付け方式では２２６又は２２９位置）において２つのジスルフィド結合によって結合されている。
【００６３】
本明細書で用いられるように、「キメラ抗体」という用語は、免疫反応領域又は部位が第一の種から得られ、或いはそれに由来し、定常領域（本発明に従って無傷、一部又は修飾されうる）が第二の種から得られる任意の抗体を意味するとみなされる。好ましい実施形態では、標的結合領域又は部位は非ヒト源（例えば、マウス又は霊長動物）由来であり、定常領域はヒトである。
【００６４】
本明細書で用いられるように、「改変抗体」という用語は、重鎖又は軽鎖又は両鎖における可変ドメインが、既知の特異性の抗体由来の１つ以上のＣＤＲｓの少なくとも部分的な置換、必要な場合、部分的なフレームワーク領域置換及び配列変更によって改変された抗体を指す。ＣＤＲｓはフレームワーク領域が由来する抗体と同じクラス又は更にサブクラスの抗体由来でよいが、ＣＤＲｓは異なるクラスの抗体、好ましくは、異なる種由来の抗体から得られることが想定される。既知の特異性の非ヒト抗体由来の１つ以上の「ドナー」ＣＤＲｓが、ヒト重鎖又は軽鎖フレームワーク領域に移植された改変抗体は、本明細書で「ヒト化」抗体と称される。１つの可変ドメインの抗原結合能を別の可変ドメインに移すため、すべてのＣＤＲｓをドナー可変ドメイン由来の完全ＣＤＲｓに置換する必要はないであろう。むしろ、標的結合部位の活性を維持するのに必要な残基を移すことのみが必要でありうる。
【００６５】
ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖又は両鎖における可変ドメイン内のフレームワーク領域はヒト起源の残基のみを含み得、その場合、ヒト化抗体のこれらのフレームワーク領域は「完全ヒトフレームワーク領域」と称されることが更に認識される。或いは、ＣＤ２０抗原への適切な結合を維持或いはＣＤ２０抗原への結合を増強することが必要な場合、ドナー可変ドメインのフレームワーク領域の１つ以上の残基が、ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖又は両鎖における可変ドメインのヒトフレームワーク領域の対応する位置内にて改変されうる。このように改変されたヒトフレームワーク領域は、従って、ヒト及びドナーフレームワーク残基の混合物を含み得、本明細書で「部分的ヒトフレームワーク領域」と称される。例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号及び第６，１８０，３７０号に示されている説明を鑑み、ルーチンの実験を行うことにより、或いは試行錯誤による実験により、機能的な改変又はヒト化抗体を得ることは十分に当業者の能力範囲内にある。
【００６６】
例えば、抗ＣＤ２０抗体のヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）に従って、ヒト抗ＣＤ２０抗体の対応する配列を、齧歯動物又は突然変異齧歯動物のＣＤＲｓ又はＣＤＲ配列に置換することによって行うことができる。米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；第５，８５９，２０５号も参照されたい（参照して本明細書に組み込まれる）。その結果生じるヒト化抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化抗体の重鎖及び／又は軽鎖の可変ドメインの完全ヒトフレームワーク領域内の少なくとも１つの齧歯動物又は突然変異齧歯動物ＣＤＲを含みうる。一部の例では、ヒト化抗ＣＤ２０抗体の１つ以上の可変ドメインのフレームワーク領域内の残基が、対応する非ヒト（例えば、齧歯動物）残基に置換され（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；及び第６，１８０，３７０号参照）、その場合、その結果生じるヒト化抗ＣＤ２０抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の可変ドメイン内の部分的ヒトフレームワーク領域を含みうる。
【００６７】
更に、ヒト化抗体はレシピエント抗体やドナー抗体に見出されない残基を含みうる。これらの修飾は抗体の機能を更に洗練させるためになされる（例えば、所望の親和性を得るため）。一般的に、ヒト化抗体は、実質的に全部で少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを含み、すべて又は実質的にすべてのＣＤＲｓが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲｓに対応し、すべて又は実質的にすべてのフレームワーク領域がヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は少なくとも一部の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域を任意に含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；及びＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（参照して本明細書に組み込まれる）を参照されたい。従って、そのような「ヒト化」抗体は、非ヒト種由来の対応する配列に置換された無傷ヒト可変ドメインが実質的に１つもない抗体を含みうる。実際には、通常、ヒト化抗体は、一部のＣＤＲ残基、また、おそらく一部のフレームワーク残基が齧歯動物抗体における類似部位由来の残基に置換されたヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；第５，８５９，２０５号を参照されたい。ヒト化抗体及び所定の抗原に対して親和性が向上したヒト化抗体を作製する技法が開示されている、米国特許第６，１８０，３７０号及び国際公開第ＷＯ  ０１／２７１６０号も参照されたい。
【００６８】
本明細書で用いられるように、「適切に折り畳まれたポリペプチド」という用語は、ポリペプチドを構成するすべての機能的ドメインが明確に活性を示すポリペプチド（例えば、抗ＣＤ２０抗体）を含む。本明細書で用いられるように、「不適切に折り畳まれたポリペプチド」という用語は、ポリペプチドの少なくとも１つの機能的ドメインが活性を示さないポリペプチドを含む。一実施形態では、適切に折り畳まれたポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合によって結合されたポリペプチド鎖を含み、逆に、不適切に折り畳まれたポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合によって結合されていないポリペプチド鎖を含む。
【００６９】
本明細書で用いられるように、「操作された」という用語は、合成手段（例えば、組換え技術、ｉｎ  ｖｉｔｒｏペプチド合成、ペプチドの酵素的若しくは化学的結合又はこれらの技術のいくつかの組合せ）による核酸又はポリペプチド分子の操作を含む。
【００７０】
本明細書で用いられるように、「結合した（ｌｉｎｋｅｄ）」、「融合した」又は「融合」という用語は互換的に用いられる。これらの用語は如何なる手段にもよる２つ以上の構成要素又は構成部分の結合を指し、化学的結合又は組換え手段を含む。「フレーム内融合」は、元のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦｓ）の適正な翻訳リーディングフレームを維持するように、２つ以上のポリヌクレオチドＯＲＦｓを結合し、連続的なより長いＯＲＦを形成することをいう。従って、組換え融合蛋白質は、元のＯＲＦｓにコードされたポリペプチドに対応する２つ以上のセグメントを含む単一蛋白質である（通常、それらのセグメントは本来そのようには結合しない）。従って、リーディングフレームは融合セグメント全体にわたって連続的となるが、該セグメントは、例えば、フレーム内リンカー配列によって物理的或いは空間的に分離されうる。例えば、免疫グロブリン可変領域のＣＤＲｓをコードするポリヌクレオチドはフレーム内に融合されうるが、「融合」ＣＤＲｓが連続ポリペプチドの一部として同時翻訳される限り、少なくとも１つの免疫グロブリンフレームワーク領域又は追加のＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドによって分離されうる。
【００７１】
ポリペプチドとの関連において、「直鎖状配列」又は「配列」は、アミノ末端からカルボキシル末端方向へのポリペプチドにおけるアミノ酸の順序であり、配列において互いに隣接する残基がポリペプチドの一次構造において連続的である。
【００７２】
本明細書で用いられるような「発現」という用語は、遺伝子が生化学物質、例えば、ポリペプチドを生成するプロセスを指す。該プロセスは細胞内での遺伝子の機能的存在の任意の発現を含み、遺伝子ノックダウン並びに一過性発現及び安定発現を含むが、これに限定されるものではない。発現はメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への遺伝子の転写及びそのようなｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を含むが、これに限定されるものではない。所望の最終産物が生化学物質である場合、発現はその生化学物質及び任意の前駆物質の生成を含む。遺伝子の発現は「遺伝子産物」を生成する。本明細書で用いられるように、遺伝子産物は、核酸、例えば、遺伝子の転写によって生成されるメッセンジャーＲＮＡ又は転写物から翻訳されるポリペプチドでありうる。本明細書で述べられる遺伝子産物は、転写後修飾、例えば、ポリアデニル化による核酸又は翻訳後修飾、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他の蛋白質サブユニットとの会合、蛋白質分解的切断などによるポリペプチドを更に含む。
【００７３】
本明細書で用いられるように、「処置する」又は「処置」という用語は、治療的処置及び予防的処置を含み、その目的は望まない生理学的変化又は障害、例えば、多発性硬化症の進行を予防或いは抑制（軽減）することである。有益な或いは所望の臨床結果は、限定されないが、検出可能であろうと検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患の程度の低減、疾患の安定（即ち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は軽減並びに寛解（部分又は完全）を含む。「処置」は処置を受けない場合の予想生存期間と比べて生存期間を延長することも意味しうる。処置を必要とする患者は、病状若しくは障害を既に有する患者並びに病状若しくは障害を有しやすい患者又は病状若しくは障害を予防する必要がある患者を含む。
【００７４】
「対象」又は「個体」又は「動物」又は「患者」又は「哺乳動物」とは、診断、予後診断又は治療が望まれる任意の患者、特に哺乳動物患者のことである。哺乳動物患者は、ヒト、家畜、動物園の動物、競技用動物又は愛玩動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシなどを含む。
【００７５】
本明細書で用いられるように、「抗ＣＤ２０抗体の投与から利益を得うる患者」及び「処置を必要とする動物」のような語句は、例えば、抗ＣＤ２０ポリペプチドの検出（例えば、診断法のため）及び／又は抗ＣＤ２０抗体による処置、即ち、疾患の緩和若しくは予防のために用いられる抗ＣＤ２０抗体の投与から利益を得うる患者、例えば、哺乳動物患者を含む。本明細書でより詳細に述べられるように、抗ＣＤ２０抗体は非コンジュゲート形態にて用いることができ、或いは、例えば、薬物、プロドラッグ又はアイソトープにコンジュゲートすることができる。
【００７６】
（ＩＩ．標的ポリペプチドの説明）
Ｂ１（ＣＤ２０）分子は、Ｂ細胞の増殖及び分化を調節することにより液性免疫反応に中心的な役割を果たしうるヒトＢリンパ球の表面上の約３５，０００ダルトンのリン蛋白質である。ＣＤ２０分子をコードするＤＮＡ配列が単離され、ＣＤ２０のアミノ酸配列が決定されている。Ｔｅｄｄｅｒら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２０８−２１２を参照されたい。当該技術分野において認知されているようなＣＤ２０の同義語は、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５及びＬＦ５を含む。
【００７７】
本発明の抗体はＣＤ２０ヒトＢ細胞表面抗原に対する結合特異性を有する。該抗原はポリペプチドであり、或いはＣｌａｒｋら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：１７６６−１７７０に述べられている２Ｈ７モノクローナル抗体によって結合されるポリペプチドを含む。この抗原は（Ｂｐ３５（ＣＤ２０））と称されるリン蛋白質であり、Ｂ細胞系統の細胞にのみ発現する。この抗原に対するマウスモノクローナル抗体が過去に作製されており、上記Ｃｌａｒｋらに述べられている。Ｓｔａｓｈｅｎｋｏら（１９８０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２５：１６７８−１６８５も参照されたい。
【００７８】
（ＩＩＩ．抗ＣＤ２０抗体）
一実施形態では、本発明は、その抗原結合性断片、変異体又は誘導体を含む抗ＣＤ２０抗体に関する。本発明の抗体は活性の亢進のために最適化された抗ＣＤ２０抗体である。本明細書で用いられるように、「抗ＣＤ２０抗体」という用語は、典型的にはヒトＢリンパ球限定分化抗原Ｂｐ３５ｍと称され、一般的にはＣＤ２０と称される細胞表面の約３５，０００ダルトンの非グリコシル化リン蛋白質を特異的に認識する抗体である。該抗原は９０％超のＢ細胞非ホジキンリンパ腫に発現するが、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞又は他の正常な組織には見出されない。ＣＤ２０は細胞増殖及び分化の活性プロセスの初期段階を調節する。より具体的には、本発明の抗体は上述の２Ｈ７モノクローナル抗体によって結合されるものと同じエピトープに結合する。
【００７９】
本発明の抗体は、米国特許第５，７３６，１３７号及び（Ｒｅｆｆら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５）（参照して本明細書に組み込まれる）に開示されているマウス／ヒトキメラ抗ＣＤ２０抗体であるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｃ２Ｂ８に基づいて最適化される。本発明の抗体配列は、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖及び重鎖の可変ドメイン内に操作されると、リツキシマブと比べて亢進した抗体のＣＤＣ活性をもたらすとともに、結合特異性及びアポトーシス媒介能を維持する修飾ＣＤＲｓを含む。
【００８０】
上述のように、本発明の抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブと比べて亢進したＣＤＣ活性を示す。リツキシマブは、マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−２Ｂ８（Ｒｅｆｆら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５）から単離されたマウス可変領域を有するヒトＩｇＧ１及びカッパ定常領域を含むマウス／ヒトキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である（ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．、カリフォルニア州サンディエゴ；商品名Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）にて市販）。リツキシマブは再発性低悪性度Ｂ細胞リンパ腫又は濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の処置に用いられる。如何なる作用機序にも拘束されないが、抗ＣＤ２０抗体はＣＤ２０抗原に結合し、細胞溶解機序は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含む。従って、リツキシマブ（本明細書でＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）とも称される）と比べて優れたＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性並びに／或いは増大した結合親和性を有する抗ＣＤ２０抗体の発見は、Ｂ細胞リンパ腫、特にＢ細胞非ホジキンリンパ腫の癌治療方法を改善する可能性がある。抗体は当量にてアッセイで比較される。本発明の抗ＣＤ２０抗体及びリツキシマブの「当量」とは、各抗体に対して同用量が用いられるということである。
【００８１】
これらのＣＤ２０に対する新規抗ＣＤ２０抗体の結合親和性は、ＣＤＣ解離速度アッセイを用いてリツキシマブで認められる結合親和性に対して少なくとも約５０％、約７５％、約１００％、約１２５％増大する。非放射性ＣＤＣアッセイでは、３つの異なるＮＨＬ株において同レベルの細胞殺滅を媒介するため、本発明の抗ＣＤ２０抗体を用いて必要とされるよりも少なくとも約２倍、約３倍、最大で約４倍のリツキシマブが必要とされる。
【００８２】
本発明の抗ＣＤ２０抗体は少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。「最適化ＣＤＲ」とは、ＣＤＲが、最適化ＣＤＲを含む抗ＣＤ２０抗体に付与される結合親和性の向上及び／又はＣＤＣ活性の向上に基づいて選択される修飾且つ最適化された配列であるということである。抗ＣＤ２０抗体がＣＤ２０抗原に対する特異性を保持し、結合親和性の向上及び／又はＣＤＣ活性の向上を有するように、修飾はＣＤＲ内のアミノ酸残基の置換を含む。本発明の抗ＣＤ２０抗体のＣＤＣ活性は、米国出願公開第２００４／０１６７３１９  Ａ１号（参照して本明細書に組み込まれる）に述べられているような機能アッセイにてリツキシマブと比べて向上している。本発明の新規抗ＣＤ２０抗体並びにその好適な抗原結合性断片、変異体及び誘導体は、例えば、米国出願公開第２００４／０１６７３１９  Ａ１号に述べられているような標準アッセイにて測定されるように、リツキシマブによって示されるものと少なくとも同様のＡＤＣＣ及びアポトーシス活性も示す。本発明の最適化ＣＤＲｓは、抗ＣＤ２０抗体の重鎖と軽鎖のそれぞれＶＨドメイン、ＶＬドメインにおいて用いられる。本発明の例示的な抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１２〜１８（それぞれ、Ｈ１５６９，Ｈ１５７０，Ｈ１５７１，Ｈ１６３８，Ｈ１６３９，Ｈ１６４０，Ｈ１６７０と称される）からなる群より選択されるＶＨドメイン及び／又は配列番号１０と１１（それぞれ、Ｌ３７３，Ｌ４１９と称される）から選択されるＶＬドメインを含む。
【００８３】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は最適化ＣＤＲｓを含む。即ち、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１〜８からなる群より選択される少なくとも１つの最適化ＣＤＲアミノ酸配列又は配列番号１〜８からなる群より選択される配列に対して少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。即ち、最適化ＣＤＲｓは配列番号１〜８に示される配列及び、関与ＣＤＲに依存し、少なくとも１，２，３，４若しくは５個のアミノ酸置換を有する配列番号１〜８の配列を含む。
【００８４】
従って、一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、
（ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１；
（ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；
（ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２；
（ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；
（ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；
（ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基；（ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基；及び（ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；
（ｊ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ１；
（ｋ）配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５の残基８に対応する位置においてアラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ２；
（ｌ）配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号６の残基８に対応する位置においてロイシン（Ｌｅｕ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ２；
（ｍ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；
（ｎ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該保存的アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；
（ｏ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基、（ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置における、アスパラギン酸（Ａｓｐ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；並びに
（ｐ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該保存的アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基、（ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置における、グリシン（Ｇｌｙ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３
からなる群より選択される少なくとも１つの最適化ＣＤＲを有するＶＨドメインを含む。
【００８５】
他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３；及び（ｃ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ３；及び（ｄ）配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ２からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを有するＶＬドメインを含む。これらの実施形態の一部では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ２並びに（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；及び（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３からなる群より選択されるＣＤＲ３を有するＶＬドメインを含む。
【００８６】
更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、上記項目（ａ）〜（ｐ）に列挙される群から選択される最適化ＣＤＲを有するＶＨドメイン；並びに（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３；（ｃ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ３；及び（ｄ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２からなる群より選択される少なくとも１つの最適化ＣＤＲを有するＶＬドメインを含む。これらの実施形態の一部では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ２並びに（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；及び（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３からなる群より選択されるＣＤＲ３を有するＶＬドメインを含む。
【００８７】
更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、上記項目（ａ）〜（ｐ）に列挙される群から選択される最適化ＣＤＲを有するＶＨドメイン；並びに配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を有するＶＬドメインを含む。
【００８８】
一部の実施形態では、少なくとも１つの本発明の最適化ＣＤＲｓを含む抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである。そのような実施形態では、ＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンは、免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含みうる。特定の実施形態では、ＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンは、重鎖の可変ドメイン及び軽鎖の可変ドメイン内に完全又は部分的ヒトフレームワーク領域を含む。他の実施形態では、ＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンは、重鎖の可変ドメイン及び軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む。
【００８９】
本発明の更なる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン並びに／或いは配列番号１０と１１とから選択されるアミノ酸配列又は配列番号１０〜１８に示される配列に対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。
【００９０】
本発明の更なる他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、
（ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；
（ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基；（ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基；（ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、（ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、（ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び（ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｉ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｊ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｋ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン酸（Ａｓｐ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｌ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置における、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）に対する保存的アミノ酸置換である残基、（ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｍ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基、（ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｎ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置における、ロイシン（Ｌｅｕ）に対する保存的アミノ酸置換である残基、（ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
（ｏ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置における、アラニン（Ａｌａ）に対する保存的アミノ酸置換である残基であって、該アミノ酸置換がグリシンではない残基、（ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基、（ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置における、グリシン（Ｇｌｙ）に対する保存的アミノ酸置換である残基及び（ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置における、アスパラギン（Ａｓｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；
からなる群より選択されるＶＨドメインを含む。
【００９１】
これらの実施形態の一部では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、上記項目（ａ）〜（ｏ）に列挙される群から選択されるＶＨドメインを含むとともに、
（ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメイン；
（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
（ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示されるＣＤＲ２を含むＶＬドメイン；
（ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び（ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含むＶＬドメイン；
（ｅ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び（ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置における、グルタミン（Ｇｌｎ）に対する保存的アミノ酸置換の少なくとも１つを含むＶＬドメイン
からなる群より選択される可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。
【００９２】
これらの実施形態の一部では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一部の他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。更なる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一層更なる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一部の他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。更なる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一層更なる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００９３】
更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１２〜１８に示される任意の１つの配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。これらの実施形態の一部では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は配列番号１０又は１１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを更に含む。
【００９４】
他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号２９（Ｈ１２８６と称される）に示されるＶＨドメイン又は配列番号２９に示されるＶＨドメインに対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨドメインを含む。これらの実施形態の一部では、これらの抗ＣＤ２０抗体は配列番号１０及び１１（それぞれＬ３７３，Ｌ４１９と称される）から選択されるＶＬドメインも含む。
【００９５】
更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、（ａ）配列番号２９に示されるＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２９に示されるＶＨドメインに対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメイン；並びに（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３；及び（ｃ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを有するＶＬドメインを含む。そのような抗ＣＤ２０抗体は配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ２を任意に含みうる。
【００９６】
更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、（ａ）配列番号２９に示されるＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２９に示されるＶＨドメインに対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメイン；並びに（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３；（ｃ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）に対する保存的アミノ酸置換である残基を含むＣＤＲ３；及び（ｄ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを有するＶＬドメインを含む。
【００９７】
これらの実施形態の一部では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、（ａ）配列番号２９に示されるＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２９に示されるＶＨドメインに対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメイン；並びに（ａ）配列番号１０若しくは１１に示される配列を含むＶＬドメイン；（ｂ）配列番号１０若しくは１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；（ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示されるＣＤＲ２を含むＶＬドメイン；（ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び（ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含むＶＬドメイン；及び（ｅ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び（ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置における、グルタミン（Ｇｌｎ）に対する保存的アミノ酸置換の少なくとも１つを含むＶＬドメインからなる群より選択される可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。
【００９８】
抗ＣＤ２０抗体配列は当該技術分野において公知である。例えば、米国特許第５，７３６，１３７号；第５，７７６，４５６号；第５，８４３，４３９号；第５，５００，３６２号；第５，６７７，１８０号；第５，６９３，４９３号；第５，７２１，１０８号；第５，７３６，１３７号；第６，１２０，７６７号；第５，８４３，６８５号；第５，５７６，１８４号；第６，３９９，０６１号；及び米国特許出願公開第２００４／０１６７３１９号を参照されたい（これらはすべて参照して本明細書に組み込まれる）。本明細書で述べられる修飾は、該技術分野において公知の任意の抗ＣＤ２０抗体又はその組合せに対して行われうることが認識される。従って、本明細書で述べられる少なくとも１つの最適化ＣＤＲｓを含むマウス抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体及びヒト化抗ＣＤ２０抗体が本発明で検討される。これらの修飾及び組合せで操作される抗ＣＤ２０抗体は、当該技術分野において公知であって本明細書で述べられるアッセイにより、活性の亢進を試験することができる。抗ＣＤ２０抗体の結合特異性を測定する方法は、限定されないが、標準競合結合アッセイ、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体産生のヘルパーＴ細胞アッセイ、Ｂ細胞増殖の共刺激アッセイ及びＢ細胞活性化マーカーのアップレギュレーションのアッセイを含む。例えば、ＷＯ  ００／７５３４８及び米国特許第６，０８７，３２９号に開示されているようなアッセイを参照されたい。ＣＤＣ，ＡＤＣＣ及びアポトーシスアッセイについては、例えば、Ｓｕｂｂｒａｍａｎｉａｎら（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４０：２１４１−２１４６；Ａｈｍａｎら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２４３−２５４；Ｂｒｅｚｉｃｋａら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４９：２３５−２４２；Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３−１７１；Ｐｒａｎｇら（２００５）Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９２：３４２−３４９；Ｓｈａｎら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９２：３７５６−３７７１；Ｇｈｅｔｉｅら（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１３９２−１３９８；及びＭａｔｈａｓら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：７１７０−７１７６を参照されたい（これらはすべて参照して本明細書に組み込まれる）。
【００９９】
本発明の特定の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１０又は１１又はそれらの変異体の任意の組合せでのアミノ酸配列を有するＶＬドメインと対になった、配列番号１２〜１８又はそれらの変異体の１つから選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。本発明の抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１０若しくは配列番号１１から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体を含む。
【０１００】
抗ＣＤ２０抗体の生物活性を示す好適な変異体を本発明の方法において用いることができる。そのような変異体は親抗ＣＤ２０抗体の所望の結合特性を保持する。抗体変異体を作製する方法は当該技術分野において一般的に利用可能である。
【０１０１】
例えば、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体、抗体領域、例えば、ＣＤＲｓ（配列番号１〜８）又は重鎖若しくは軽鎖の抗体可変ドメイン、例えば、配列番号１２〜１８の任意の１つに示されるＶＨドメイン又は配列番号１０若しくは配列番号１１に示されるＶＬドメインのアミノ酸配列変異体は、対象アミノ酸配列をコードするクローンＤＮＡ配列における突然変異により調製されうる。突然変異誘発及びヌクレオチド配列改変の方法は当該技術分野において公知である。例えば、Ｗａｌｋｅｒ及びＧａａｓｔｒａ（編）（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク）；米国特許第４，８７３，１９２号；並びにそれらの引用文献（参照して本明細書に組み込まれる）を参照されたい。対象ポリペプチドの生物活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関する指針は、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、ワシントンＤ．Ｃ．）、３４５−３５２頁におけるＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）（その全体を参照して本明細書に組み込まれる）のモデルに見出されうる。Ｄａｙｈｏｆｆらのモデルでは、好適な保存的アミノ酸置換を決定するため、Ｐｏｉｎｔ  Ａｃｃｅｐｔｅｄ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ（ＰＡＭ）アミノ酸類似性マトリックス（ＰＡＭ２５０マトリックス）を用いる。１つのアミノ酸を、類似特性を有する別のアミノ酸と交換するような保存的置換が好ましいであろう。ＤａｙｈｏｆｆらのモデルのＰＡＭ２５０マトリックスに教示されるような保存的アミノ酸置換の例には、限定されないが、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ，Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ，Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ，Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ，Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ及びＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが含まれる。
【０１０２】
対象とする抗ＣＤ２０抗体ポリペプチドの変異体を構築する際、変異体が、本明細書で述べられるような所望の特性、即ち、ヒト細胞の表面上に発現するヒトＣＤ２０抗原に特異的に結合可能なこと並びに機能の亢進、特にＣＤＣ活性の増大及び／又はＣＤ２０抗原に対する結合親和性の増大を有すること、を有し続けるように修飾が行われる。明らかに、変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡにおいて行われる突然変異では、配列をリーディングフレームの外部に配置してはならず、二次ｍＲＮＡ構造を生成しうる相補領域を生成しないことが好ましい。欧州特許出願公開第７５，４４４号を参照されたい。
【０１０３】
加えて、多くの方法でエフェクター機能を改変するため、抗ＣＤ２０抗体の定常領域を突然変異させることができる。例えば、Ｆｃ受容体への抗体結合を最適化するＦｃ変異を開示している米国特許第６，７３７，０５６Ｂｌ号及び米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号を参照されたい。
【０１０４】
好ましくは、基準抗ＣＤ２０抗体の変異体は、基準抗ＣＤ２０抗体分子のアミノ酸配列又は基準抗体分子のより短い部分に対して少なくとも約８０％、約８５％、約８８％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％若しくは約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは、該分子は少なくとも約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％の配列同一性を共有する。本明細書で述べられる場合、本明細書で開示されるＣＤＲｓ、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む任意特定のポリペプチドが、別のポリペプチドと少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は更には約１００％同一であるかは、当該技術分野において公知の方法及びコンピュータプログラム／ソフトウェア、例えば、限定されないが、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ、ウィスコンシン州５３７１１、マディソン）を用いて決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴでは、２配列間の相同性の最良セグメントを見出すため、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９の局所相同性アルゴリズムを用いる。ＢＥＳＴＦＩＴ又は他の任意の配列アラインメントプログラムを用いて特定の配列が、例えば、本発明による基準配列と９５％同一であるかを決定する際、当然、同一性パーセントが基準ポリペプチド配列の全長にわたって計算され、且つ基準配列におけるアミノ酸の総数の最大５％の相同性の相違が許容されるようにパラメータが設定される。
【０１０５】
本発明を目的として、配列同一性パーセントは、ギャップオープンペナルティー１２及びギャップエクステンションペナルティー２，ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２によるアフィンギャップ検索を用いて、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性検索アルゴリズムを用いて決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性検索アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９に教示されている。変異体は、例えば、基準抗ＣＤ２０抗体とわずか１〜１５アミノ酸残基、わずか１〜１０アミノ酸残基、例えば、６〜１０、わずか５、わずか４，３，２又は更には１アミノ酸残基異なりうる。
【０１０６】
２つのアミノ酸配列の最適アラインメントに関し、変異アミノ酸配列の連続セグメントは基準アミノ酸配列に対して付加アミノ酸残基又は欠失アミノ酸残基を有しうる。基準アミノ酸配列との比較に用いられる連続セグメントは、少なくとも２０個の連続アミノ酸残基を含み、３０，４０，５０又はそれ以上のアミノ酸残基でよい。保存的残基置換又はギャップと関連する配列同一性の補正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性検索アルゴリズム参照）。
【０１０７】
任意の２つのポリペプチド配列が比較のために最適にアラインメントされると、アラインメント内で互いの反対側に現れる残基がそれぞれのポリペプチド内の互いに対応する位置を占めることが認識される。そのような位置は本明細書で「対応する位置」と称され、対応する位置にある残基は「対応する残基」又は互いに「対応する」残基と称される。従って、例えば、対象ポリペプチドが、例えば、１０残基を有する基準ポリペプチド配列に対して最適にアラインメントされる場合、基準配列の残基５の反対側に現れる対象ポリペプチド内の残基は、基準配列の「残基５に対応する位置における残基」と称される。
【０１０８】
ＣＤ２０に特異的に結合可能であって所望のＣＤＣ活性の増大及び／又はＣＤ２０抗原に対する結合親和性の増大を保持するポリペプチドの正確な化学構造は、複数の因子に依存する。イオン性アミノ又はカルボキシル基が分子中に存在するため、特定のポリペプチドは酸性又は塩基性塩として、或いは中性形態にて得られうる。好適な環境条件に置かれた場合にその生物活性を保持するそのような調製物はすべて、本明細書で用いられるような抗ＣＤ２０抗体の定義内に含まれる。更に、ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を用いた誘導体化（グリコシル化）又は他の補助的分子、例えば、脂質、リン酸塩、アセチル基などによって増強されうる。それは糖類とのコンジュゲーションによっても増強されうる。そのような増強の一部の態様は産生宿主の翻訳後プロセシング系を通じて成され、他のそのような修飾はｉｎ  ｖｉｔｒｏにて導入されうる。いずれにせよ、抗ＣＤ２０抗体の所望の特性が破壊されない限り、そのような修飾は本明細書で用いられる抗ＣＤ２０抗体の定義に含まれる。そのような修飾はポリペプチドの活性を亢進或いは低下させることにより、種々のアッセイにおいて量的又は質的に活性に影響を与えうることが想定される。更に、鎖中の個々のアミノ酸残基が、酸化、還元又は他の誘導体化によって修飾され、ポリペプチドが切断されて活性を維持する断片を得うる。所望の特性（即ち、ＣＤ２０に対する結合特異性並びにＣＤＣ活性の増大及び／又はＣＤ２０抗原に対する結合親和性の増大）を破壊しないそのような改変は、ポリペプチド配列を本明細書で用いられるような対象抗ＣＤ２０抗体の定義から排除しない。
【０１０９】
当該技術分野では、ポリペプチド変異体の調製及び使用に関する十分な指針が提供されている。抗ＣＤ２０抗体変異体を調製する際、天然蛋白質のヌクレオチド又はアミノ酸配列に対するどの修飾が、本発明の方法に用いられる医薬組成物の治療活性成分としての使用に好適な変異体を生じさせるかを、当業者は容易に判断することができる。
【０１１０】
一部の抗ＣＤ２０抗体では、当該技術分野において公知の技法を用いてＦｃ部分を変異させてエフェクター機能を低下させうる。例えば、定常領域ドメインの欠失又は不活性化（点突然変異又は他の手段による）は、循環修飾抗体のＦｃ受容体結合を低下させ、これにより、腫瘍の局在化を高めうる。他の場合、本発明と整合する定常領域の修飾は補体結合を調節し、従って、結合細胞毒素の血清中半減期を短縮させ、その非特異的会合を低減する。定常領域の更に他の修飾は、抗原特異性又は抗体柔軟性の増大により局在化の増進を可能にするジスルフィド結合又はオリゴ糖部分を修飾するために用いられうる。その結果生じる修飾の生理学的プロファイル、バイオアベイラビリティ及び他の生化学的効果、例えば、腫瘍の局在化、生体内分布及び血清中半減期は、過度の実験を行わずに周知の免疫学的手法を用いて容易に測定・定量されうる。
【０１１１】
本発明の抗ＣＤ２０抗体は、例えば、共有結合が、抗体がその同族エピトープに特異的に結合することを阻止しないように、任意のタイプの分子の抗体への共有結合により修飾された誘導体も含む。例えば、限定することを目的としないが、抗体誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、蛋白質分解的切断、細胞リガンド又は他の蛋白質への結合などにより修飾された抗体を含む。特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むがこれに限定されない既知の技法により、多くの化学修飾のいずれでも行われうる。加えて、誘導体は１つ以上の非古典的アミノ酸を含みうる。
【０１１２】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基に置換される置換である。類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義付けられている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。或いは、例えば、飽和突然変異誘発によりコード配列の全体又は一部に沿って変異を無作為に導入することができ、その結果生じる変異体を生物活性についてスクリーニングし、活性（例えば、抗ＣＤ２０ポリペプチドに結合する能力）を保持する変異体を同定することができる。
【０１１３】
例えば、抗体分子のフレームワーク領域のみ又はＣＤＲ領域のみに変異を導入することが可能である。導入変異はサイレント又は中立ミスセンス変異でよく、即ち、抗体の抗原に結合する能力に対する影響がまったく、或いはほとんどない。これらのタイプの変異はコドンの使用を最適化し、或いはハイブリドーマの抗体産生を向上させるのに有用となりうる。或いは、非中立ミスセンス変異は抗体の抗原に結合する能力を変えうる。大部分のサイレント及び中立ミスセンス変異の位置はフレームワーク領域にある可能性が高く、一方、大部分の非中立ミスセンス変異の位置はＣＤＲにある可能性が高いが、これは絶対条件ではない。当業者であれば、所望の特性、例えば、抗原結合活性の変化がないこと又は結合活性の変化（例えば、抗原結合活性の向上又は抗原特異性の変化）を有する変異分子を設計・試験することができるであろう。突然変異誘発後、コードされた蛋白質は通常に発現し、コードされた蛋白質の機能的及び／又は生物学的活性（例えば、ＣＤ２０ポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに免疫特異的に結合する能力）を、本明細書で述べられる技法を用いて、或いは当該技術分野において公知の技法をルーチンに改変することにより定量することができる。
【０１１４】
（ＩＶ．抗ＣＤ２０抗体をコードするポリヌクレオチド）
本発明は、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子も提供する。
【０１１５】
一実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）をコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを提供し、該ＶＨドメインの少なくとも１つのＣＤＲｓは、配列番号１〜７の任意の１つと少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１６】
他の実施形態では、本発明は、免疫グロブリンＶＨドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを提供し、該ＶＨドメインの少なくとも１つのＣＤＲｓは、（ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１；（ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；（ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２；（ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；（ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；（ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；（ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３；並びに（ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、（ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、（ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び（ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤＲ３からなる群より選択され、コードされたＶＨドメインを含む抗ＣＤ２０抗体はＣＤ２０に特異的或いは選択的に結合する。
【０１１７】
一部の実施形態では、本発明は、免疫グロブリンＶＨドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを提供し、該ＶＨドメインの少なくとも１つのＣＤＲｓは、（ａ）配列番号７に示される配列を含むＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５又は配列番号６に示される配列を含むＣＤＲ２；並びに（ｃ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示される配列を含むＣＤＲ３からなる群より選択される。特定の実施形態では、免疫グロブリンＶＨドメインをコードする単離ポリヌクレオチドは、配列番号２４（配列番号１の最適化ＣＤＲ３をコード）、配列番号２５（配列番号２の最適化ＣＤＲ３をコード）、配列番号２６（配列番号３の最適化ＣＤＲ３をコード）及び配列番号２７（配列番号５の最適化ＣＤＲ２をコード）からなる群より選択されるＣＤＲコード配列の少なくとも１つを含む。
【０１１８】
更なる実施形態では、本発明は、配列番号１２〜１８及び２９からなる群より選択される基準ＶＨドメインポリペプチド配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＨドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含み、コードされたＶＨドメインを含む抗ＣＤ２０抗体はＣＤ２０に特異的或いは選択的に結合する。
【０１１９】
更に他の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１２〜１８及び２９からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；（ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；（ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；（ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基；（ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基；（ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；（ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；（ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、（ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び（ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメイン；並びに（ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、（ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、（ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び（ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含むＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含む。
【０１２０】
更なる実施形態では、本発明は、ＶＨドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含み、該核酸は、配列番号１９〜２２からなる群より選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は１００％の配列同一性を有する配列を有し、コードされたＶＨドメインを含む抗ＣＤ２０抗体は抗ＣＤ２０に特異的或いは選択的に結合する。
【０１２１】
他の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）をコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含み、該ＶＬドメインは、配列番号８に示されるＣＤＲ配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【０１２２】
更なる実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖のＶＬドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含み、該ＶＬドメインは、（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３；及び（ｃ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。これらの実施形態の一部では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖のＶＬドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含み、該ＶＬドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２並びに（ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；及び（ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３からなる群より選択されるＣＤＲ３を含む。
【０１２３】
一層更なる実施形態では、本発明は、配列番号１１に示される基準ＶＬドメインポリペプチド配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含み、コードされたＶＬドメインを含む抗ＣＤ２０抗体はＣＤ２０に特異的或いは選択的に結合する。
【０１２４】
更に他の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメイン；（ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；（ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示されるＣＤＲ２を含むＶＬドメイン；並びに（ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び（ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含むＶＬドメインからなる群より選択されるＶＬドメインをコードする核酸を含み、本質的にその核酸から成り、或いはその核酸から成る単離ポリヌクレオチドを含む。
【０１２５】
上述のいずれのポリヌクレオチドも、例えば、コードされたポリペプチドの分泌を指示するシグナルペプチド、本明細書で述べられるような抗体定常領域又は本明細書で述べられるような他の異種ポリペプチドをコードする追加の核酸を更に含みうる。また、本明細書の他の箇所でより詳細に述べられるように、本発明は、上述の１つ以上のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む組成物を含む。一実施形態では、本発明は、第一のポリヌクレオチド及び第二のポリヌクレオチドを含む組成物を含み、前記第一のポリヌクレオチドは本明細書で述べられるようなＶＨドメインをコードし、前記第二のポリヌクレオチドは本明細書で述べられるようなＶＬドメインをコードする。具体的には、配列番号１９〜２２の任意の１つに示されるようなＶＨドメインをコードするポリヌクレオチド並びにＶＬドメインをコードするポリヌクレオチド、例えば、配列番号１０又は配列番号１１に示されるようなＶＬドメインをコードするポリヌクレオチドを含み、本質的に該ポリヌクレオチドから成り、或いは該ポリヌクレオチドから成る組成物。
【０１２６】
本発明は、本明細書の他の箇所で述べられるような本発明のポリヌクレオチドの断片も含む。加えて、本明細書で述べられるような融合ポリポリペプチド、Ｆａｂ断片及び他の誘導体をコードするポリヌクレオチドも本明細書で検討される。
【０１２７】
ポリヌクレオチドは当該技術分野において公知の任意の方法により生成或いは製造されうる。例えば、抗体のヌクレオチド配列が既知である場合、抗体をコードするポリヌクレオチドは化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから構築され得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら（１９９４）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２に述べられているように）、これは、簡潔には、抗体をコードする配列部分を含む重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリング及びライゲーション、次に、ＰＣＲによる連結オリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【０１２８】
或いは、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、好適な供給源由来の核酸から生成されうる。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンが得られないが、抗体分子の配列が既知である場合、抗体をコードする核酸は、配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたＰＣＲ増殖により、或いは、例えば、抗体又は他の抗ＣＤ２０抗体をコードするｃＤＮＡライブラリー由来のｃＤＮＡクローンを同定するため、特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いたクローニングにより、化学的に合成され、或いは好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー又は抗体若しくは他の抗ＣＤ２０抗体を発現している任意の組織若しくは細胞、例えば、抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞から作製されたｃＤＮＡライブラリー又は該組織若しくは細胞から単離された核酸、好ましくは、ポリＡ＋ＲＮＡ）から得られうる。ＰＣＲにより生成された増幅核酸は、次に、当該技術分野において周知の任意の方法を用いて複製可能なクローニングベクターにクローン化されうる。
【０１２９】
抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体のヌクレオチド配列及び対応するアミノ酸配列が決定すると、異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製し、例えば、アミノ酸の置換、欠失及び／又は挿入を行うため、ヌクレオチド配列の操作について当該技術分野において周知の方法、例えば、組換えＤＮＡ法、部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９９０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク州）及びＡｕｓｕｂｅｌら（編）（１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク州）に述べられている技法を参照されたい。（これらは共にそれらの全体を参照して本明細書に組み込まれる）を用いてそのヌクレオチド配列が操作されうる。
【０１３０】
抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチド（ｐｏｌｙｄｅｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）から成り得、それは、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡでよい。例えば、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ並びに一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖或いは、より典型的には、二本鎖或いは一本鎖及び二本鎖領域の混合物でよいＤＮＡとＲＮＡとを含むハイブリッド分子から成りうる。加えて、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から成りうる。抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、１つ以上の修飾塩基又は安定性若しくは他の理由のために修飾されたＤＮＡ若しくはＲＮＡ骨格も含みうる。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化塩基及びイノシンのような特殊な塩基を含む。ＤＮＡ及びＲＮＡに対して様々な修飾を行うことができ、従って、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態を包含する。
【０１３１】
免疫グロブリン（例えば、免疫グロブリン重鎖部分又は軽鎖部分）由来のポリペプチドの非天然変異体をコードする単離ポリヌクレオチドは、１つ以上のアミノ酸置換、付加又は欠失がコード化蛋白質に導入されるように、１つ以上のヌクレオチド置換、付加又は欠失を免疫グロブリンのヌクレオチド配列に導入することによって作製することができる。変異は、標準的技法、例えば、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介突然変異誘発により導入されうる。保存的アミノ酸置換は１つ以上の非必須アミノ酸残基において行われることが好ましい。
【０１３２】
（ｖ．融合蛋白質及び抗体結合体）
本明細書の他の箇所でより詳細に述べられるように、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、更に、Ｎ又はＣ末端において異種ポリペプチドに組換え的に融合され、或いはポリペプチド又は他の組成物に化学的にコンジュゲート（共有及び非共有コンジュゲーション）されうる。例えば、抗ＣＤ２０抗体は、検出アッセイにおいて標識として有用な分子及びエフェクター分子、例えば、異種ポリペプチド、薬物、放射性核種又は毒素に組換え的に融合或いはコンジュゲートされうる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ  ９２／０８４９５；ＷＯ  ９１／１４４３８；ＷＯ  ８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９９５号；及び欧州特許第３９６，３８７号を参照されたい。
【０１３３】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、修飾された誘導体、即ち、共有結合が抗体のＣＤ２０への結合を阻止しないように、任意のタイプの分子の抗体への共有結合により修飾された誘導体を含む。例えば、限定することを目的としないが、抗体誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、蛋白質分解的切断、細胞リガンド又は他の蛋白質への結合などにより修飾された抗体を含む。特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むがこれに限定されない既知の技法により、多くの化学修飾のいずれでも行われうる。加えて、誘導体は１つ以上の非古典的アミノ酸を含みうる。
【０１３４】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、ペプチド結合又は改変ペプチド結合、即ち、ペプチドイソスターにより互いに結合したアミノ酸から成り得、遺伝子にコードされた２０アミノ酸以外のアミノ酸を含みうる。抗ＣＤ２０抗体は、翻訳後プロセシングのような天然プロセス又は当該技術分野において周知の化学修飾法により改変されうる。そのような修飾は、基本テキスト及びより詳細な研究論文並びに膨大な研究文献に十分に記載されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖及びアミノ若しくはカルボキシル末端を含む抗ＣＤ２０抗体のいずれの部位でも、或いは炭水化物のような部分上に生じうる。所与の抗ＣＤ２０抗体の複数の部位において同タイプの修飾が同程度又は種々の程度にて存在しうることが理解されるであろう。所与の抗ＣＤ２０抗体は多くのタイプの修飾も含みうる。抗ＣＤ２０抗体は、例えば、ユビキチン化の結果として分岐し得、また、分岐の有無にかかわらず、環状となりうる。環状、分岐及び分岐環状抗ＣＤ２０抗体は翻訳後天然プロセスから生じ得、或いは合成法により作製されうる。修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド若しくはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質若しくは脂質誘導体の共有結合、ホスフォチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化、蛋白質分解プロセシング、リン酸化、プルニル化、ラセミ化、セレノイレーション（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、トランスファーＲＮＡ媒介性の蛋白質へのアミノ酸付加、例えば、アルギニン化及びユビキチン化を含む（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄＣｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク州；第２版（１９９３）；Ｊｏｈｎｓｏｎ（編）（１９８３）Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ社、ニューヨーク州）、１−１２頁；Ｓｅｉｆｔｅｒら（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６−６４６；Ｒａｔｔａｎら（１９９２）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８−６２を参照されたい）。
【０１３５】
本発明は、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体並びに異種ポリペプチドを含む融合蛋白質も提供する。抗体が融合する異種ポリペプチドは機能に対して有用となり得、或いは抗ＣＤ２０ポリペプチド発現細胞を標的とするのに有用である。一実施形態では、本発明の融合蛋白質は、本発明の抗体の任意の１つ以上のＶＨドメインのアミノ酸配列或いは本発明の抗体又はその断片若しくは変異体の任意の１つ以上のＶＬドメインのアミノ酸配列と異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含み、本質的に該ポリペプチドから成り、或いは該ポリペプチドから成る。別の実施形態では、本明細書で開示される診断及び処置方法に用いられる融合蛋白質は、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体のＶＨドメインの任意の１，２，３つのＣＤＲｓのアミノ酸配列或いは抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体のＶＬドメインの任意の１，２，３つのＣＤＲｓのアミノ酸配列と異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含み、本質的に該ポリペプチドから成り、或いは該ポリペプチドから成る。一実施形態では、融合蛋白質は、本発明の抗ＣＤ２０特異性抗体又はその断片、誘導体若しくは変異体のＶＨドメインのＣＤＲ３のアミノ酸配列と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含み、その融合蛋白質はＣＤ２０の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、融合蛋白質は、本発明の抗ＣＤ２０抗体の少なくとも１つのＶＨドメインのアミノ酸配列と、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその断片、誘導体若しくは変異体の少なくとも１つのＶＬドメインのアミノ酸配列と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含む。好ましくは、融合蛋白質のＶＨ及びＶＬドメインは、ＣＤ２０の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する単一供給源抗体（又はｓｃＦｖ若しくはＦａｂ断片）に対応する。更に別の実施形態では、本明細書で開示される診断及び処置方法に用いられる融合蛋白質は、抗ＣＤ２０抗体のＶＨドメインの任意の１，２，３つ又はそれ以上のＣＤＲｓのアミノ酸配列と、抗ＣＤ２０抗体又はその断片若しくは変異体のＶＬドメインの任意の１，２，３つ又はそれ以上のＣＤＲｓのアミノ酸配列と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含む。好ましくは、ＶＨドメイン又はＶＬドメインの２，３，４，５，６つ又はそれ以上のＣＤＲｓは、本発明の単一供給源抗体（又はｓｃＦｖ若しくはＦａｂ断片）に対応する。これらの融合蛋白質をコードする核酸分子も本発明に包含される。
【０１３６】
文献に報告されている例示的な融合蛋白質は、Ｔ細胞受容体（Ｇａｓｃｏｉｇｎｅら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：２９３６−２９４０）；ＣＤ４（Ｃａｐｏｎら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５−５３１；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３３９：６８−７０；Ｚｅｔｔｍｅｉｓｓｌら（１９９０）ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．ＵＳＡ  ９：３４７−３５３；及びＢｙｒｎら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：６６７−６７０）；Ｌ−セレクチン（ホーミング受容体）（Ｗａｔｓｏｎら（１９９０）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１０：２２２１−２２２９；及びＷａｔｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：１６４−１６７）；ＣＤ４４（Ａｒｕｆｆｏら（１９９０）Ｃｅｌｌ  ６１：１３０３−１３１３）；ＣＤ２８及びＢ７（Ｌｉｎｓｌｅｙら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：７２１−７３０）；ＣＴＬＡ−４（Ｌｉｓｌｅｙら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：５６１−５６９）；ＣＤ２２（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９９１）Ｃｅｌｌ  ６６：１１３３−１１４４）；ＴＮＦ受容体（Ａｓｈｋｅｎａｚｉら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１０５３５−１０５３９；Ｌｅｓｓｌａｕｅｒら（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：２８８３−２８８６；及びＰｅｐｐｅｌら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３−１４８９）；並びにＩｇＥ受容体ａ（Ｒｉｄｇｗａｙ及びＧｏｒｍａｎ（１９９１）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．１１５、抄録番号１４４８）の融合を含む。
【０１３７】
本明細書の他の箇所で述べられるように、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長させ、或いは当該技術分野において公知の方法を用いたイムノアッセイ用に異種ポリペプチドに融合されうる。例えば、一実施形態では、ＰＥＧを本発明の抗ＣＤ２０抗体にコンジュゲートし、そのｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長させることができる。Ｌｅｏｎｇら（２００１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １６：１０６；Ａｄｖ．ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．（２００２）５４：５３１；又はＷｅｉｒら（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ３０：５１２を参照されたい。
【０１３８】
更に、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、その精製又は検出を容易にするため、ペプチドのようなマーカー配列に融合されうる。好ましい実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、特に、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９  Ｅｔｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、カリフォルニア州９１３１１）中に付与されたタグのようなヘキサヒスチジンペプチドであり、その多くは市販されている。Ｇｅｎｔｚら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：８２１−８２４に述べられているように、例えば、ヘキサヒスチジンは融合蛋白質の簡便な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグは、限定されないが、インフルエンザヘマグルチニン蛋白質由来のエピトープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら（１９８４）Ｃｅｌｌ  ３７：７６７）及び「フラグ」タグを含む。
【０１３９】
融合蛋白質は当該技術分野において周知の方法を用いて調製することができる（例えば、米国特許第５，１１６，９６４号及び第５，２２５，５３８号を参照されたい）。融合が行われる正確な部位は、融合蛋白質の分泌又は結合特性を最適化するように経験的に選択されうる。次に、融合蛋白質をコードするＤＮＡが発現用宿主細胞にトランスフェクションされる。
【０１４０】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、非結合形態にて用いられ得、或いは、例えば、分子の治療特性を向上させ、標的検出を促進し、又は患者の撮像若しくは治療のため、種々の分子の少なくとも１つにコンジュゲートされうる。本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、精製が行われる際、精製前又は精製後に標識化或いはコンジュゲートされうる。
【０１４１】
特に、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、蛋白質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節物質、医薬品又はＰＥＧにコンジュゲートされうる。
【０１４２】
コンジュゲートは、コンジュゲートされる選択物質に依存し、種々の技法を用いて構築されうることも当業者は理解するであろう。例えば、ビオチンとのコンジュゲートは、例えば、結合ポリペプチドを、ビオチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルのようなビオチンの活性化エステルと反応させることにより調製される。同様に、蛍光マーカーとのコンジュゲートは、例えば、本明細書で列挙されているカップリング剤の存在下にて、或いはイソチオシアネート、好ましくは、フルオレセイン−イソチオシアネートとの反応より調製されうる。本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体のコンジュゲートは類似の方法にて調整される。
【０１４３】
本発明は、診断剤又は治療剤にコンジュゲートした本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を更に包含する。その抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む抗ＣＤ２０抗体は、例えば、臨床検査手順の一部として疾患の進展又は進行をモニタリングし、例えば、所与の処置及び／又は予防レジメンの有効性を判定するために診断的に用いることができる。検出は、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を検出可能物質にカップリングすることにより容易化することができる。検出可能物質の例には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽電子放出断層撮影を用いた陽電子放出金属及び非放射性常磁性金属イオンが含まれる。本発明による診断法として用いる抗体にコンジュゲート可能な金属イオンについては、例えば、米国特許第４，７４１，９００号を参照されたい。好適な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが含まれる。好適な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれる。好適な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド又はフィコエリトリンが含まれる。発光物質の一例にはルミノールが含まれる。生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンが含まれる。そして、好適な放射性物質の例には、１２５Ｉ，１３１Ｉ，１１１Ｉｎ，９０Ｙ又は９９Ｔｃが含まれる。
【０１４４】
抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、治療成分、例えば、細胞毒素、治療剤又は放射性金属イオンにコンジュゲートされうる。細胞毒素又は細胞傷害剤は細胞に対して有害な任意の作用剤を含む。その例には、セレン、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン並びにそれらのアナログ及びホモログが含まれる。治療剤は、限定されないが、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ及びシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン及びアントラマイシン（ＡＭＣ））並びに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）を含む。本発明のコンジュゲートは所与の生物学的反応を改変するために用いることができる。薬物成分は古典的な化学治療剤に限定されると解釈すべきではない。例えば、薬物成分は所望の生物活性を有する蛋白質又はポリペプチドでよい。そのような蛋白質は、例えば、毒素、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素若しくはジフテリア毒素；蛋白質、例えば、腫瘍壊死因子、アルファ−インターフェロン、ベータ−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター；又は生物学的反応修飾物質、例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（“ＩＬ−１”）、インターロイキン−２（“ＩＬ−２”）、インターロイキン−６（“ＩＬ−６”）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（“ＧＭ−ＣＳＦ”）、顆粒球コロニー刺激因子（“Ｇ−ＣＳＦ”）又は他の増殖因子を含みうる。
【０１４５】
抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、化学発光化合物にカップリングすることにより検出可能に標識化することもできる。そして、化学発光標識された抗ＣＤ２０抗体の存在は、化学反応過程時に生じる発光の存在により判定される。特に有用な化学発光標識化化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマチックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩及びシュウ酸エステルである。
【０１４６】
抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を検出可能に標識化することができる方法の１つは、同物質を酵素に結合し、その結合した生成物を酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）にて用いることである（Ｖｏｌｌｅｒ，Ａ．，“Ｔｈｅ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）”Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、メリーランド州；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｈｏｒｉｚｏｎｓ（１９７８）２：１−７；Ｖｏｌｌｅｒら（１９７８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．３１：５０７−５２０；Ｂｕｔｌｅｒ（１９８１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：４８２−５２３；Ｍａｇｇｉｏ（編）（１９８０）Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ社、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、フロリダ州；Ｉｓｈｉｋａｗａら（編）（１９８１）Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｋｇａｋｕ  Ｓｈｏｉｎ、東京）。抗ＣＤ２０抗体に結合した酵素は、例えば、分光学的分析、蛍光分析又は視覚手段により検出可能な化学的部分を生じさせるように、適切な基質、好ましくは、発色基質と反応する。抗体を検出可能に標識化するのに用いることができる酵素は、限定されないが、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロリン酸、デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ及びアセチルコリンエステラーゼを含む。加えて、検出は、酵素に対して発色基質を用いる比色法により成すことができる。検出は、同様に調製された標準物質と比べた基質の酵素反応の程度の視覚的比較によっても成しえる。
【０１４７】
検出は他の種々のイムノアッセイのいずれを用いても成されうる。例えば、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を放射活性物質で標識化することにより、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）の使用を通じて抗体を検出することが可能である（例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ（１９８６年３月）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｃｏｕｒｓｅ  ｏｎ  Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（内分泌学会（Ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ））を参照されたい。これは参照して本明細書に組み込まれる）。ガンマカウンター、シンチレーションカウンター又はオートラジオグラフィーを含むがこれに限定されない手段により、放射性同位元素を検出することができる。
【０１４８】
抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、１５２Ｅｕのような蛍光放出金属又はランタニド系列の他の金属を用いて検出可能に標識化することもできる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＴＰＡ）又はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を用いて抗体に結合させることができる。
【０１４９】
種々の部分（ｍｏｉｅｔｉｅｓ）を抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体にコンジュゲートする手法は周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎら（１９８５）“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）中、２４３−５６頁；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら（１９８７）“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）（第２版；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）中、６２３−５３頁）；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５）“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）中、４７５−５０６頁；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら（編）中、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ社、３０３−１６頁（１９８５）；及びＴｈｏｒｐｅら（１９８２）“Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８を参照されたい。
【０１５０】
（ＶＩ．抗体ポリペプチドの発現）
抗体の軽鎖と重鎖をコードするＤＮＡ配列は、周知の方法に従って逆転写酵素及びＤＮＡポリメラーゼを用いて同時或いは別個に作製されうる。ＰＣＲは、コンセンサス定常領域プライマー或いは公開されている重鎖・軽鎖ＤＮＡ及びアミノ酸配列に基づくより特異的なプライマーにより開始されうる。上述のように、ＰＣＲは抗体の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡクローンを単離するためにも用いられうる。この場合、ライブラリーは、コンセンサスプライマー又はマウス定常領域プローブのようなより長い相同プローブによりスクリーニングされうる。
【０１５１】
ＤＮＡ、典型的にはプラスミドＤＮＡは、当該技術分野において公知の技法を用いて細胞から単離され、例えば、組換えＤＮＡ技術に関する前述の参考文献に詳細に示されている標準的な周知の技法に従って制限マッピングされ、配列決定されうる。当然ながら、ＤＮＡは単離プロセス又はその後の分析の任意の時点で本発明に従って合成でありうる。
【０１５２】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を提供するための単離遺伝物質の操作後、通常、抗ＣＤ２０抗体をコードするポリヌクレオチドは、所望量の抗ＣＤ２０抗体を産生するのに用いられうる宿主細胞への導入用発現ベクターに挿入される。
【０１５３】
抗体又はその断片、誘導体若しくは類似体、例えば、本明細書で述べられる標的分子、例えば、ＣＤ２０に結合する抗体の重鎖又は軽鎖の組換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。本発明の抗体分子又は抗体の重鎖若しくは軽鎖又はその一部（好ましくは、重鎖又は軽鎖可変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生用ベクターは当該技術分野において周知の技法を用いて組換えＤＮＡ技術により生成されうる。従って、抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現させることによって蛋白質を調製する方法が本明細書で開示される。当業者には周知の方法を用いて、抗体をコードする配列及び適切な転写・翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成法及びｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子組換えを含む。従って、本発明は、プロモーターに作動可能に結合している、本発明の抗体分子又はその重鎖若しくは軽鎖又は重鎖若しくは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。そのようなベクターは抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ  ８６／０５８０７；ＰＣＴ公開ＷＯ  ８９／０１０３６；及び米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、抗体の可変ドメインは重鎖又は軽鎖全体の発現用のそのようなベクターにクローン化されうる。
【０１５４】
「ベクター」又は「発現ベクター」という用語は、所望の遺伝子を宿主細胞に導入して発現させるためのビヒクルとして本発明に従って用いられるベクターを意味するように本明細書で用いられる。当業者には周知であるように、そのようなベクターは、プラスミド、ファージ、ウイルス及びレトロウイルスから成る群より容易に選択されうる。一般的に、本発明に整合するベクターは、選択マーカー、所望の遺伝子のクローニングを容易にする適切な制限部位及び真核細胞若しくは原核細胞に進入並びに／或いは該細胞にて複製する能力を含む。
【０１５５】
本発明を目的として多くの発現ベクター系が用いられうる。例えば、１つのクラスのベクターでは、動物ウイルス、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ，ＭＭＴＶ又はＭＯＭＬＶ）又はＳＶ４０ウイルス由来のＤＮＡ要素を用いる。他は内部リボソーム結合部位を有するポリシストロン系の使用を含む。加えて、ＤＮＡをその染色体に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することにより選択されうる。該マーカーは、栄養要求性宿主への原栄養性、殺生物剤抵抗性（例えば、抗生物質）又は銅のような重金属に対する抵抗性を付与しうる。選択マーカー遺伝子は、発現するＤＮＡ配列に直接結合され、或いは同時形質転換により同じ細胞に導入されうる。ｍＲＮＡの最適な合成のために更なる要素も必要とされうる。これらの要素は、シグナル配列、スプライスシグナル並びに転写プロモーター、エンハンサー及び終止シグナルを含みうる。
【０１５６】
特に好ましい実施形態では、クローン化可変領域遺伝子は、上述のように合成された重鎖及び軽鎖定常領域遺伝子（ヒトが好ましい）と共に発現ベクターに挿入される。当然ながら、真核細胞において発現を誘発することが可能な任意の発現ベクターが本発明において用いられうる。好適なベクターの例には、限定されないが、プラスミドｐｃＤＮＡ３，ｐＨＣＭＶ／Ｚｅｏ，ｐＣＲ３．１，ｐＥＦ１／Ｈｉｓ，ｐＩＮＤ／ＧＳ，ｐＲｃ／ＨＣＭＶ２，ｐＳＶ４０／Ｚｅｏ２，ｐＴＲＡＣＥＲ−ＨＣＭＶ，ｐＵＢ６／Ｖ５−Ｈｉｓ，ｐＶＡＸ１及びｐＺｅｏＳＶ２（カリフォルニア州サンディエゴ・Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から入手可能）並びにプラスミドｐＣＩ（ウィスコンシン州マディソン・Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能）が含まれる。一般的に、好適に高レベルの免疫グロブリン重鎖及び軽鎖を発現する形質転換細胞について、多数の形質転換細胞のスクリーニングを行うことは、例えば、ロボットシステムにより行うことが可能なルーチンの実験である。
【０１５７】
より一般的には、抗ＣＤ２０抗体の単量体サブユニットをコードするベクター又はＤＮＡ配列が調製されると、発現ベクターは適切な宿主細胞に導入されうる。宿主細胞へのプラスミドの導入は当業者には周知の種々の技法により成されうる。これらは、限定されないが、トランスフェクション（エレクトロポレーションを含む）、原形質融合、リン酸カルシウム沈殿、エンベロープＤＮＡとの細胞融合、マイクロインジェクション及び無傷ウイルスによる感染を含む。Ｒｉｄｇｗａｙ（１９８８）“Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ”Ｖｅｃｔｏｒｓ、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ及びＤｅｎｈａｒｄｔ（編）中（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ社、マサチューセッツ州ボストン）、第２４．２章、４７０−４７２頁を参照されたい。典型的には、宿主へのプラスミド導入はエレクトロポレーションによるものである。発現構築体を内部に有する宿主細胞は、軽鎖及び重鎖の生成に適切な条件下にて増殖され、重鎖及び／又は軽鎖蛋白質合成についてアッセイが行われる。例示的なアッセイ法は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ）又は蛍光標示式細胞分取分析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学などを含む。
【０１５８】
発現ベクターは従来の手法により宿主細胞に移入され、次に、トランスフェクトされた細胞は、本明細書で述べられる方法に用いられる抗体を産生するように従来の手法により培養される。従って、本発明は、異種プロモーターに作動可能に結合している、本発明の抗体又はその重鎖若しくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む。二本鎖抗体の発現のための好ましい実施形態では、重鎖及び軽鎖を共にコードするベクターが、下記のように免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞に共発現する。
【０１５９】
本明細書で用いられるように、「宿主細胞」は、組換えＤＮＡ技術を用いて構築されるとともに、少なくとも１つの異種遺伝子をコードするベクターを内部に有する細胞を指す。組換え宿主からの抗体の単離のプロセスの記述において、「細胞」及び「細胞培養物」は、明確に別記しない限り、抗体の供給源を示すために互換的に用いられる。言い換えると、「細胞」からのポリペプチドの回収は、沈澱した全細胞由来又は培地と懸濁細胞の両方を含む細胞培養物由来を意味しうる。
【０１６０】
本明細書で述べられる方法に用いられる抗体分子を発現させるため、種々の宿主発現ベクター系が用いられうる。そのような宿主発現系は、対象コード配列が生成され、その後、精製されうるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換され、或いは該配列をトランスフェクトされると、本発明の抗体分子をｉｎ  ｓｉｔｕで発現しうる細胞も表す。これらは、限定されないが、抗体コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））のような微生物；抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ））；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染し、或いは抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；並びに哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）又は哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築体を内部に有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ，ＣＨＯ，ＢＬＫ，２９３，３Ｔ３細胞）を含む。好ましくは、細菌細胞、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、より好ましくは、特に組換え抗体分子全体の発現には真核細胞が組換え抗体分子の発現に用いられる。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーター要素のようなベクターと併せた、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗体の効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら（１９８６）Ｇｅｎｅ  ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅｔｔら（１９９０）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２）。
【０１６１】
蛋白質発現に用いられる宿主細胞株は哺乳動物由来である場合が多い。当業者は、所望の遺伝子産物が発現するのに最適な特定の宿主細胞株を選択的に決定する能力があると考えられる。例示的な宿主細胞株は、限定されないが、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞）、ＤＧ４４及びＤＵＸＢ１１（チャイニーズハムスター卵巣細胞株、ＤＨＦＲマイナス）、ＨＥＬＡ（ヒト子宮頸癌細胞）、ＣＶＩ（サル腎臓細胞株）、ＣＯＳ（ＳＶ４０  Ｔ抗原によるＣＶＩの誘導体）、ＶＥＲＹ，ＢＨＫ（ベビーハムスター腎細胞）、ＭＤＣＫ，２９３，ＷＩ３８，Ｒ１６１０（チャイニーズハムスター線維芽細胞）ＢＡＬＢＣ／３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、ＨＡＫ（ハムスター腎細胞株）、ＳＰ２／Ｏ（マウス骨髄腫細胞）、Ｐ３ｘ６３−Ａｇ３．６５３（マウス骨髄腫細胞）、ＢＦＡ−１ｃ１ＢＰＴ（ウシ内皮細胞）、ＲＡＪＩ（ヒトリンパ球）並びに２９３（ヒト腎細胞）を含む。通常、宿主細胞株は、商業サービス、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ又は刊行文献から得られる。
【０１６２】
加えて、特定の所望の様式にて挿入配列の発現を調整し、或いは遺伝子産物を修飾・プロセシングする宿主細胞株が選択されうる。蛋白質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は蛋白質の機能に重要となりうる。様々な宿主細胞が蛋白質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び修飾に対する特性及び特異的なメカニズムを有する。発現する異種蛋白質の適正な修飾及びプロセシングを確実にするように、適切な細胞株又は宿主系が選択されうる。これを目的として、遺伝子産物の一次転写、グリコシル化及びリン酸化の適切なプロセシングの細胞機構を有する真核宿主細胞が用いられうる。
【０１６３】
組換え蛋白質の長期高収量産生のため、安定な発現が好ましい。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞株が操作されうる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを用いるよりも、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）により制御されるＤＮＡ及び選択マーカーで宿主細胞を形質転換することができる。異種ＤＮＡの導入後、操作された細胞は富栄養培地中で１〜２日間増殖され、次に、選択培地に移される。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する抵抗性を付与し、細胞がプラスミドをその染色体に安定に組み込み、増殖して増殖巣を形成することを可能にし、次に、その増殖巣はクローン化され、細胞株に拡大されうる。この方法は抗体分子を安定に発現する細胞株を操作するために有利に用いられうる。
【０１６４】
単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら（１９７７）Ｃｅｌｌ  １１：２２３）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ及びＳｚｙｂａｌｓｋｉ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ４８：２０２）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２：８１７）遺伝子を含むがこれに限定されない複数の選択系が用いられ得、それぞれ、ｔｋ−，ｈｇｐｒｔ−，ａｐｒｔ−細胞において用いられうる。次の遺伝子の選択の基礎として代謝拮抗抵抗性を用いることもできる：メトトレキサートに対する抵抗性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒら（１９８０）Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：３５７；Ｏ’Ｈａｒｅら（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：１５２７）；ミコフェノール酸に対する抵抗性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ及びＢｅｒｇ（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ−４１８に対する抵抗性を付与するｎｅｏ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；Ｗｕ及びＷｕ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；並びにＭｏｒｇａｎ及びＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；ＴＩＢ  ＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５（１９９３年５月）；並びにハイグロマイシンに対する抵抗性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３０：１４７。組換えＤＮＡ技術の分野で一般的に公知であって用いることが可能な方法が、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク州）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ（１９９０）“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ社、ニューヨーク州）中；Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｌｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク州）第１２及び１３章；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１（これらはそれらの全体を参照して本明細書に組み込まれる）に述べられている。
【０１６５】
抗体分子の発現レベルはベクターの増幅により高めることができる（概要については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ及びＨｅｎｔｓｃｈｅｌ（１９８７）“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｇｅｎｅ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｏｎｅｄ  Ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ社、ニューヨーク州）第３巻を参照されたい）。抗体を発現するベクター系中のマーカーが増幅されると、宿主細胞の培養物中に存在するインヒビターのレベルの増大がマーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅領域が抗体遺伝子と関連するため、抗体の産生も増大する（Ｃｒｏｕｓｅら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７）。
【０１６６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ産生は多量の所望のポリペプチドを供与するスケールアップを可能にする。組織培養条件下での哺乳動物細胞の培養の手法は当該技術分野において公知であり、例えば、エアリフトリアクター又は連続攪拌リアクターでの均一な懸濁培養或いは、例えば、ホローファイバー、マイクロカプセル、アガロースマイクロビーズ又はセラミックカートリッジでの固定又は密閉細胞培養を含む。必要な場合及び／又は所望の場合、ポリペプチドの溶液は、例えば、合成ヒンジ領域の選択的生合成後又はＨＩＣクロマトグラフィーの前後に、慣用的なクロマトグラフィー法、例えば、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ−セルロース上のクロマトグラフィー又は（イムノ）アフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる。
【０１６７】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体をコードする遺伝子は、細菌又は酵母又は植物細胞のような非哺乳動物細胞によっても発現することができる。核酸を容易に取り込む細菌は、腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）のメンバー、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）又はサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）菌株；枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のようなバシラス科（Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）；肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）；連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；並びにインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）を含む。異種ポリペプチドが細菌にて発現すると、通常、封入体の一部になることが更に理解されるであろう。異種ポリペプチドは、単離・精製され、次に、機能的分子に構築される必要がある。四価形態の抗体が所望される場合、サブユニットは四価抗体に自己構築する（ＷＯ  ０２／０９６９４８Ａ２）。
【０１６８】
細菌系では、発現する抗体分子を対象とする使用に依存し、複数のベクターが有利に選択されうる。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のため、多量のそのような蛋白質が産生される必要がある場合、容易に精製される高レベルの融合蛋白質産物の発現を指示するベクターが所望されうる。そのようなベクターは、限定されないが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ．２：１７９１）（融合蛋白質が産生されるように、抗体コード配列はｌａｃＺコード領域とインフレームに該ベクターに個々にライゲーションされうる）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ及びＩｎｏｕｙｅ（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ及びＳｃｈｕｓｔｅｒ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９）などを含む。異種ポリペプチドをグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白質として発現するためにｐＧＥＸベクターも用いられうる。一般的に、そのような融合蛋白質は可溶性であり、マトリックスのグルタチオン−アガロースビーズへの吸着及び結合、次に、遊離グルタチオンの存在下での溶出により、溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローン化標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出されうるように、トロンビン又は第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【０１６９】
原核生物に加え、真核微生物も用いられうる。サッカロミセスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又は一般的なパン酵母が真核微生物の中で最も一般的に用いられるが、複数の他の菌株、例えば、ピキアパストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）が一般的に利用可能である。
【０１７０】
サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）での発現では、例えば、プラスミドＹＲｐ７（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら（１９７９）Ｎａｔｕｒｅ  ２８２：３９；Ｋｉｎｇｓｍａｎら（１９７９）Ｇｅｎｅ  ７：１４１；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒら（１９８０）Ｇｅｎｅ  １０：１５７）が一般的に用いられる。このプラスミドは、トリプトファンの存在下にて増殖する能力を欠く酵母の変異菌株、例えば、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．４４０７６又はＰＥＰ４−１（Ｊｏｎｅｓ（１９７７）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８５：１２）の選択マーカーを付与するＴＲＰ１遺伝子を既に含んでいる。酵母宿主細胞ゲノムの特徴としてのｔｒｐ１障害の存在は、その結果、トリプトファンの非存在下での増殖による形質転換を検出するための効果的な環境を供与する。
【０１７１】
昆虫系では、典型的には、オートグラファカルフォルニカ核多角体病ウイルス（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ  ｖｉｒｕｓ）（ＡｃＮＰＶ）が外来遺伝子を発現するベクターとして用いられる。該ウイルスはスポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞にて増殖する。抗体コード配列は該ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個々にクローン化され、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれうる。
【０１７２】
本発明の抗体分子が組換えにより発現すると、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野において公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特にプロテインＡ後の特異的抗原に対するアフィニティー及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差又は蛋白質の精製のための他の任意の標準的な技法により精製されうる。或いは、本発明の抗体の親和性を増大させる好ましい方法が米国特許出願公開第２００２  ０１２３０５７  Ａ１号に開示されている。
【０１７３】
（ＶＩＩ．治療用抗ＣＤ２０抗体を用いた処置方法）
本発明の方法は、ＣＤ２０発現細胞と関連する疾患を有する患者を処置するための、その抗原結合性断片、変異体又は誘導体を含む抗ＣＤ２０抗体の使用に関する。「ＣＤ２０発現細胞」とは、ＣＤ２０抗原を発現している正常及び悪性Ｂ細胞をいう。細胞におけるＣＤ２０発現を検出する方法は当該技術分野において公知であり、限定されないが、ＰＣＲ法、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどを含む。「悪性」Ｂ細胞とは、任意の新生Ｂ細胞のことであり、限定されないが、低悪性度・中悪性度・及び高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）誘発性リンパ腫及びＡＩＤＳ関連リンパ腫並びにＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病、急性骨髄芽球性白血病などが含まれる。
【０１７４】
以下の記述では本発明の抗ＣＤ２０抗体に関する種々の疾患と障害の診断法及び処置に言及するが、本明細書で述べる方法は、本発明の抗ＣＤ２０抗体の所望の特性を保持する、即ち、ＣＤ２０に特異的に結合することができ、ＣＤＣ活性の増大及び／又はＣＤ２０抗原に対する結合親和性の増大を有する、これらの抗ＣＤ２０抗体の抗原結合性断片、変異体及び誘導体にも適用できる。
【０１７５】
「処置」は、抗ＣＤ２０抗体の患者への適用若しくは投与又は抗ＣＤ２０抗体の患者由来の単離組織若しくは細胞株への適用若しくは投与と本明細書で定義付けられ、この場合、患者は、疾患、疾患の症状又は疾患になりやすい傾向を有し、その目的は、疾患、疾患の症状又は疾患になりやすい傾向を治癒・治療・緩和・軽減・修正・矯正・寛解・改善し、或いはそれに影響を及ぼすことである。「処置」は、抗ＣＤ２０抗体を含む医薬組成物の患者への適用若しくは投与又は抗ＣＤ２０抗体を含む医薬組成物の患者由来の単離組織若しくは細胞株への適用若しくは投与も意味し、該患者は、疾患、疾患の症状又は疾患になりやすい傾向を有し、その目的は、疾患、疾患の症状又は疾患になりやすい傾向を治癒・治療・緩和・軽減・修正・矯正・寛解・改善し、或いはそれに影響を及ぼすことである。
【０１７６】
「抗腫瘍活性」とは、ＣＤ２０発現悪性細胞の増殖若しくは蓄積率の低下、従って、既存腫瘍の増殖率若しくは治療時に生じる腫瘍の減少及び／又は既存の新生（腫瘍）細胞若しくは新たに形成された新生細胞の破壊、従って、治療時の腫瘍の全体サイズの縮小のことである。「抗炎症活性」とは炎症の低減又は予防のことである。少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体による治療は、ヒトにおけるＣＤ２０発現細胞に関連する病態の処置に関して有益な生理学的反応を生じさせる。
【０１７７】
このように、本発明の方法は、異常で制御不可能なＢ細胞の増殖又は蓄積に関係する非ホジキンリンパ腫の処置に用途を見出す。本発明を目的として、そのようなリンパ腫は、ワーキングフォーミュレーション（Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）分類方式に従って言及され、即ち、それらのＢ細胞リンパ腫は低悪性度、中悪性度及び高悪性度に分類される（“Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ”Ｃａｎｃｅｒ  ４９：２１１２−２１３５  （１９８２）中を参照されたい）。従って、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫は、リンパ球性濾胞性小開裂細胞型及び濾胞性小開裂細胞大細胞混合型リンパ腫を含み、中悪性度リンパ腫は、濾胞性大細胞型、びまん性小開裂細胞型、びまん性小細胞大細胞混合型及びびまん性大細胞型リンパ腫を含み、高悪性度リンパ腫は、免疫芽球性リンパ芽球性大細胞型並びにバーキット及び非バーキット型の非開裂小細胞型リンパ腫を含む。
【０１７８】
本発明の方法は、欧州・米国リンパ腫分類改訂版（Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＲＥＡＬ）システムに従って分類されるＢ細胞リンパ腫の治療的処置に有用であると認識される。そのようなＢ細胞リンパ腫は、限定されないが、前駆Ｂ細胞新生物、例えば、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫／免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）（びまん性小細胞型、びまん性小細胞大細胞混合型及びびまん性大細胞リンパ腫を含む）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（節外性、節性及び脾性を含む）、有毛細胞白血病、形質細胞腫／骨髄腫、縦隔（胸腺）原発亜型のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫及びバーキット様高悪性度Ｂ細胞リンパ腫を含む末梢Ｂ細胞新生物；急性白血病；急性リンパ球性白血病；骨髄芽球性白血病；急性骨髄性白血病；前骨髄球性白血病；骨髄単球性白血病；単球性白血病；赤白血病；顆粒球性白血病（慢性骨髄性白血病）；慢性リンパ性白血病；真性赤血球増加症；多発性骨髄腫；ワルデンストローム・マクログロブリン血症；重鎖病；並びに分類不可能な低悪性度又は高悪性度Ｂ細胞リンパ腫を含む。
【０１７９】
本発明の方法は、治療時に生じる更なる腫瘍増殖の予防に有用となりうることが認識される。本発明の方法は、特に低悪性度Ｂ細胞リンパ腫を有する患者、特に標準化学療法後に再発を有する患者の処置に有用である。低悪性度Ｂ細胞リンパ腫は中悪性度及び高悪性度Ｂ細胞リンパ腫より進行が遅く、再発／寛解過程を特徴とする。従って、これらのリンパ腫の処置は、回数及び重症度の点で再発エピソードが低減するため、本発明の方法を用いて改善される。
【０１８０】
本発明の方法に従って、悪性ヒトＢ細胞に対して正の治療反応を促進するため、本明細書の他の箇所で定義付けされるような少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体が用いられる。癌処置に対する「正の治療反応」とは、これらの抗体若しくはそれらの断片の抗腫瘍活性と関連する疾患の改善及び／又は疾患と関連する症状の改善をいう。即ち、抗増殖効果、更なる腫瘍増殖の予防、腫瘍サイズの縮小、癌細胞数の減少及び／又は疾患と関連する１つ以上の症状の減少を認めることができる。従って、例えば、疾患の改善は完全寛解として特徴付けられうる。「完全寛解」とは、以前の異常な放射線学的検査結果、骨髄及び脳脊髄液（ＣＳＦ）の正常化を伴う、臨床的に検出可能な疾患の非存在をいう。そのような反応は、本発明の方法による処置後、少なくとも１カ月間持続する必要がある。或いは、疾患の改善は部分寛解に分類されうる。「部分寛解」とは、新規病変の非存在下、測定可能な総腫瘍量（即ち、患者に存在する腫瘍細胞の数）の少なくとも約５０％の減少であって、それが少なくとも１カ月間持続することをいう。そのような反応は測定可能な腫瘍のみに適用可能である。
【０１８１】
スクリーニング法、例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、ｘ線画像、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、生物発光画像、例えば、ルシフェラーゼ画像、骨スキャン画像及び骨髄穿刺（ＢＭＡ）を含む腫瘍生検サンプリングを用いて、腫瘍形態（即ち、総腫瘍量、腫瘍サイズなど）の変化について腫瘍反応を評価することができる。これらの正の治療反応に加え、抗ＣＤ２０抗体による治療を受ける患者は疾患と関連する症状の改善の有益な効果を経験しうる。従って、Ｂ細胞腫瘍では、患者は、いわゆるＢ症状、即ち、寝汗、発熱、体重減少及び／又は蕁麻疹の低減を経験しうる。
【０１８２】
本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０発現細胞と関連する炎症性疾患並びに免疫系の欠陥又は障害の処置にも用途を見出し得、これらには、限定されないが、全身性エリテマトーデス、乾癬、強皮症、クレスト症候群、炎症性筋炎、シェーグレン症候群、混合性結合組織疾患、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸疾患、急性呼吸促迫症候群、肺炎症、特発性肺線維症、骨粗鬆症、遅延型過敏症、喘息、原発性胆汁性肝硬変及び特発性血小板減少性紫斑病が含まれる。
【０１８３】
炎症性疾患は炎症及び組織破壊又はそれらの組合せを特徴とする。「炎症性疾患」は任意の免疫介在性炎症プロセスを含み、その場合、起因事象又は免疫反応の標的が、例えば、同種抗原、異種抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、未知の抗原又はアレルゲンを含む非自己抗原を含む。
【０１８４】
更に、本発明を目的として「炎症性疾患」という用語は「自己免疫疾患」を含む。本明細書で用いられるように、通常、「自己免疫」という用語は「自己」抗原を含む免疫介在性炎症プロセスを包含すると理解される。自己免疫疾患では自己抗原が宿主免疫反応を誘発する。
【０１８５】
本発明は、組織移植拒絶反応と関連する炎症の処置も含む。「移植拒絶反応」又は「移植片拒絶反応」は、移植片に対する宿主が開始する任意の免疫反応を指し、ＨＬＡ抗原、血液型抗原などを含むがこれに限定されない。
【０１８６】
本発明は、例えば、骨髄移植と関連するような移植片対宿主病を処置するためにも用いることができる。そのような移植片対宿主病では、ドナーの骨髄はリンパ球及びリンパ球に成熟する細胞を含む。ドナーのリンパ球はレシピエントの抗原を非自己と認識し、炎症性免疫反応を開始する。従って、本明細書で用いられるように、「移植片対宿主病」又は「移植片対宿主反応」は、ドナーのリンパ球が宿主の抗原に反応する任意のＴ細胞媒介性免疫反応を指す。
【０１８７】
本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、自己免疫及び／又は炎症性疾患を処置するため、本発明の方法に従って用いることができ、該疾患は、限定されないが、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状紅斑、ループス腎炎、サルコイドーシス、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎及び痛風性関節炎を含む炎症性関節炎、臓器若しくは組織移植の拒絶反応、超急性、急性若しくは慢性拒絶反応及び／又は移植片対宿主病、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸疾患）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎及び皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓溶解、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、１型及び２型糖尿病、１型・２型・３型及び４型遅延型過敏症、アレルギー又はアレルギー性疾患、治療用蛋白質に対する不要な／予期しない免疫反応（例えば、米国特許出願第２００２／０１１９１５１号及びＫｏｒｅｎら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：３４９−６０を参照されたい）、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性及び刺激性接触皮膚炎、蕁麻疹（ｕｒｔｅｃａｒｉａ）、ＩｇＥ媒介性アレルギー、アテローム性動脈硬化症、血管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシーなどを含む。一部の他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、肺移植片拒絶反応、喘息、サルコイドーシス、肺気腫、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎及び過敏性肺炎のような肺のアレルギー性疾患、好酸球性肺炎、骨髄及び／又は肺移植又は他の原因による閉塞性細気管支炎、移植片アテローム性動脈硬化症／移植片静脈硬化症を含むがこれに限定されない肺炎症並びにコラーゲンから生じる肺線維症、血管及び自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ及び紅斑性狼瘡を処置するのに有用である。
【０１８８】
本発明の方法に従って、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患の処置又は予防に対して正の治療反応を促進するため、本明細書の他の箇所で定義付けられるような少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体が用いられる。自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患に対する「正の治療反応」とは、これらの抗体の抗炎症活性と関連する疾患の改善及び／又は疾患と関連する症状の改善をいう。即ち、抗増殖効果、ＣＤ２０発現細胞の更なる増殖の予防、炎症性サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、免疫グロブリン（ＣＤ２０保有細胞がＢ細胞である場合）、それらの組合せなどの分泌の低下を含むがこれに限定されない炎症反応の低減、抗炎症蛋白質の産生増大、自己反応性細胞数の減少、免疫寛容の増大、自己反応性細胞の生存阻害及び／又はＣＤ２０発現細胞の刺激により媒介される１つ以上の症状の減少を認めることができる。そのような正の治療反応は投与経路に限定されず、ドナー、ドナー組織（例えば、臓器灌流）、宿主、それらの任意の組合せなどへの投与を含みうる。
【０１８９】
スクリーニング法、例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、ｘ線画像、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリー若しくは蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析、組織学、肉眼的病理及び血液化学を用いて臨床反応を評価することができ、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、クロマトグラフィーなどにより検出可能な変化を含むがこれに限定されない。これらの正の治療反応に加え、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片による治療を受ける患者は、疾患と関連する症状の改善の有益な効果を経験しうる。
【０１９０】
「治療有効量」又は「有効量」とは、投与されると、ＣＤ２０発現細胞と関連する疾患を有する患者の処置に対して正の治療反応をもたらす抗ＣＤ２０の量をいう。本発明の一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の治療有効量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ又は約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲内である。処置方法は、治療有効量の抗ＣＤ２０抗体の単回投与又は多回投与を含むことが認識される。
【０１９１】
ＣＤ２０発現細胞を含む病態の処置のため、抗ＣＤ２０抗体は既知の化学療法剤及びサイトカインと併用することができる。例えば、本発明の抗ＣＤ２０抗体はインターロイキン−２のようなサイトカインと併用することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブ（ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、カリフォルニア州サンディエゴ）と併用することができる。
【０１９２】
このように、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は少なくとも１つの他の癌療法と組み合わせて投与され、該癌療法は、限定されないが、外科手術又は外科的処置（例えば、脾臓摘出、肝切除、リンパ節切除、白血球泳動（ｌｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、骨髄移植など）；放射線療法；任意に自家骨髄移植と組み合わせた化学療法、この場合、好適な化学療法剤は、限定されないが、フルダラビン若しくはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン及びそれらの組合せ、例えば、アントラサイクリン含有レジメン、例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）を含み、また、化学療法にて用いられる他の細胞傷害剤及び／又は治療剤、例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ並びにシタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン及びネララビンを含むがこれに限定されない代謝拮抗剤；他の抗癌モノクローナル抗体療法（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））又は悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖蛋白質を標的とする他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））又は悪性Ｂ細胞上のＣＤ２０抗原を標的とする他の任意の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、二重特異性抗体ＭＴ１０３）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エピラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））又はヒト血管内皮増殖因子を標的とする他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、アルファＣＤ２２毒素であるモノクローナル抗体ＢＬ−２２）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫にて過剰発現する核因子カッパＢの活性化受容体（ＲＡＮＫ）及びそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的とする抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的とする抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞上に発現する主要組織適合抗原クラスＩＩ受容体を標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原を標的とする抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；並びに多くの固形腫瘍及び造血起源の腫瘍に発現する腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）及びＴＲＡＩＬ−Ｒ２を標的とする抗体（例えば、ヒトモノク��ーナルアゴニスト抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）；微小管及び／又はトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、有糸分裂阻害剤ドラスタチン及びドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；並びにトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イクサベピロン（エポチロン類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも称される）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２，ＣＧＰ  ４１２５１，Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン、エロキサチン（抗腫瘍剤）、ｇａｎｉｔｅ（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（以前はレビミド））、Ａｆｆｉｎｉｔａｋ（商標）（プロテインキナーゼＣ−アルファのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラク、悪性リンパ球のアポトーシスを誘導）、クロファラビンのような第二世代プリンヌクレオシド類似体、癌細胞によるＢｃｌ−２蛋白質産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリメルセン及びＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、Ｖｅｌｃａｄｅ（商標）（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショック蛋白質（ＨＳＰ）９０の低分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの低分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）剤、例えば、ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）及びＦＲ−９０１２２８）並びにアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）及びＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテクサフィンガドリニウム）を含むがこれに限定されない低分子ベースの癌療法；ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ）、個別免疫療法若しくは積極的イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法、以前はＧＴＯＰ−９９と称された）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、トール様受容体９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−アルファ療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法及びＩＬ−２１療法を含むがこれに限定されないワクチン／免疫療法ベースの癌療法；ステロイド療法；或いは他の癌療法を含み、追加の癌療法は抗ＣＤ２０抗体療法の前、その間又はその後に施行される。
【０１９３】
従って、併用療法が、化学療法、放射線療法、他の抗癌抗体療法、低分子ベースの癌療法又はワクチン／免疫療法ベースの癌療法とのように別の治療剤の投与と組み合わせた抗ＣＤ２０抗体の投与を含む場合、本発明の方法は、別個の製剤若しくは単一医薬製剤を用いた同時投与及び順序を問わない連続投与を包含する。本発明の方法が併用療法レジメンを含む場合、これらの療法は、同時に、即ち、抗ＣＤ２０抗体は同時に投与され、或いは他の癌療法と同じ時間枠内に（即ち、療法は同時に進行しているが、抗ＣＤ２０抗体は他の癌療法と正確に同じ時間に投与されない）供することができる。或いは、本発明の抗ＣＤ２０抗体は他の癌療法の前又は後に投与されてもよい。異なる癌療法の連続施行は、寛解又は再発の可能性を低下させるため、処置患者が最初の治療コースに反応するか否かにかかわらず行われうる。併用療法が細胞傷害剤の投与と組み合わせた抗ＣＤ２０抗体の抗体を含む場合、好ましくは、抗ＣＤ２０抗体は該細胞傷害剤の投与前に投与される。
【０１９４】
本発明の一部の実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、化学療法と併用して、また、任意に自家骨髄移植と併用して投与され、該抗体と化学療法剤は、順序を問わずに連続して、或いは同時に（即ち、同時或いは同じ時間枠内に）投与されうる。好適な化学療法剤の例には、限定されないが、フルダラビン若しくはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン及びそれらの組合せ、例えば、アントラサイクリン含有レジメン、例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）並びに化学療法にて用いられる他の細胞傷害剤及び／又は治療剤、例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ並びにシタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン及びネララビンを含むがこれに限定されない代謝拮抗剤が含まれる。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は化学療法剤による処置前に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は化学療法剤による処置後に投与される。更に他の実施形態では、化学療法剤は抗ＣＤ２０抗体と同時に投与される。
【０１９５】
従って、例えば、一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はフルダラビン又はリン酸フルダラビンと併用して投与される。１つのそのような実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はフルダラビン又はリン酸フルダラビンの投与前に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はフルダラビン又はリン酸フルダラビンによる処置後に投与される。更に他の実施形態では、フルダラビン又はリン酸フルダラビンは抗ＣＤ２０抗体と同時に投与される。
【０１９６】
本発明の他の実施形態では、アルキル化剤であるクロラムブシルが本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体と併用して投与される。１つのそのような実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はクロラムブシルの投与前に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はクロラムブシルによる処置後に投与される。更に他の実施形態では、クロラムブシルは抗ＣＤ２０抗体と同時に投与される。
【０１９７】
更に他の実施形態では、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）及びＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）のようなアントラサイクリン含有レジメンが、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体の投与と併用されうる。１つのそのような実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はアントラサイクリン含有レジメンの施行前に投与される。他の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はアントラサイクリン含有レジメンによる処置後に投与される。更に他の実施形態では、アントラサイクリン含有レジメンは抗ＣＤ２０抗体と同時に施行される。
【０１９８】
別の実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体はアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）；Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、カリフォルニア州リッチモンド）と併用して投与される。アレムツズマブは悪性Ｂ細胞上に発現するＣＤ５２抗原を標的とする組換えヒト化モノクローナル抗体（Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ）である。１つのそのような実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はアレムツズマブの投与前に投与される。他の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はアレムツズマブによる処置後に投与される。更に他の実施形態では、アレムツズマブは抗ＣＤ２０抗体と同時に投与される。
【０１９９】
別の実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、悪性Ｂ細胞上のＣＤ２０抗原を標的とする別の抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））又はイブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））と併用して投与される。１つのそのような実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は他の抗ＣＤ２０抗体の投与前に投与される。他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は他の抗ＣＤ２０抗体による処置後に投与される。更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は他の抗ＣＤ２０抗体と同時に投与される。
【０２００】
別の実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、微小管及び／又はトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、有糸分裂阻害剤ドラスタチン及びドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；並びにトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イクサベピロン（エポチロン類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも称される）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２，ＣＧＰ  ４１２５１，Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン、エロキサチン（抗腫瘍剤）、ｇａｎｉｔｅ（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（以前はレビミド））、Ａｆｆｉｎｉｔａｋ（商標）（プロテインキナーゼＣ−アルファのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラク、悪性リンパ球のアポトーシスを誘導）、クロファラビンのような第二世代プリンヌクレオシド類似体、癌細胞によるＢｃｌ−２蛋白質産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリメルセン及びＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、Ｖｅｌｃａｄｅ（商標）（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショック蛋白質（ＨＳＰ）９０の低分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの低分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）剤、例えば、ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）及びＦＲ−９０１２２８）並びにアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）及びＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテクサフィンガドリニウム）を含むがこれに限定されない低分子ベースの癌療法と併用して投与される。１つのそのような実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は低分子ベースの癌療法の施行前に投与される。他の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は低分子ベースの癌療法による処置後に投与される。更に他の実施形態では、低分子ベースの癌療法は抗ＣＤ２０抗体と同時に施行される。
【０２０１】
更に他の実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ）、個別免疫療法若しくは積極的イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法、以前はＧＴＯＰ−９９と称された）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、トール様受容体９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−アルファ療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法若しくはＩＬ−２１療法又はステロイド療法を含むがこれに限定されないワクチン／免疫療法ベースの癌療法と併用することができる。１つのそのような実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はワクチン／免疫療法ベースの癌療法の施行前に投与される。他の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はワクチン／免疫療法ベースの癌療法による処置後に投与される。更に他の実施形態では、ワクチン／免疫療法ベースの癌療法は抗ＣＤ２０抗体と同時に施行される。
【０２０２】
１つのそのような実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体はＩＬ−２と併用することができる。処置患者におけるナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞の数を増加させることが公知の作用剤であるＩＬ−２は、本発明の抗ＣＤ２０抗体の前或いはそれと同時に投与することができる。このＮＫエフェクター細胞数の増加は、投与抗ＣＤ２０抗体のＡＤＣＣ活性の亢進をもたらしうる。他の実施形態では、ＩＬ−２１は、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体と併用して投与されると、ＮＫ細胞活性を刺激する免疫療法剤として機能する。
【０２０３】
本発明の抗ＣＤ２０抗体は、自己免疫及び炎症性疾患の処置に有用であることが公知であり、或いは使用されたことがあり、又は現在使用されている任意の作用剤若しくは作用剤の組合せを含む、自己免疫及び炎症性疾患に対する任意の既知の療法と併用することができる。そのような療法及び治療剤は、限定されないが、外科手術又は外科的処置（例えば、脾臓摘出、リンパ節切除、甲状腺摘出、血漿交換、白血球泳動（ｌｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、細胞、組織又は臓器移植、腸処置、臓器灌流など）、放射線療法、ステロイド療法及び非ステロイド療法のような療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚病薬（例えば、アレルギー、接触皮膚炎及び乾癬のような皮膚疾患を処置するために用いられる局所薬）による治療、免疫抑制療法並びに他の抗炎症モノクローナル抗体療法などを含む。このように、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は、外科手術、臓器灌流、放射線療法、ステロイド療法、非ステロイド療法、抗生物質療法、抗真菌療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚病薬（例えば、アレルギー、接触皮膚炎及び乾癬のような皮膚疾患を処置するために用いられる局所薬）による治療、免疫抑制療法、他の抗炎症モノクローナル抗体療法、それらの組合せなどを含むがこれに限定されない少なくとも１つの他の治療法と併用して投与される。従って、併用療法が、一例としてステロイドとのように別の治療剤の投与と組み合わせた抗ＣＤ２０抗体の投与を含む場合、本発明の方法は、別個の製剤若しくは単一医薬製剤を用いた同時投与及び順序を問わない連続投与を包含する。
【０２０４】
本発明の方法が併用療法レジメンを含む場合、これらの療法は、同時に、即ち、抗ＣＤ２０抗体は同時に投与され、或いは他の療法と同じ時間枠内に（即ち、療法は同時に進行しているが、抗ＣＤ２０抗体は他の療法と正確に同じ時間に投与されない）供することができる。或いは、本発明の抗ＣＤ２０抗体は他の療法の前又は後に投与されてもよい。異なる療法の連続施行は、寛解又は再発の可能性を低下させるため、処置患者が最初の治療コースに反応するか否かにかかわらず行われうる。
【０２０５】
本発明の一部の実施形態では、本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体は免疫抑制剤又は抗炎症剤と併用して投与され、この場合、該抗体と該治療剤は、順序を問わずに連続して、或いは同時に（即ち、同時或いは同じ時間枠内に）投与されうる。本発明の抗ＣＤ２０抗体と併用して投与することができる好適な免疫抑制剤の例には、限定されないが、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、例えばエアロゾル化シクロスポリンのようなシクロスポリン（米国特許出願公開第２００２０００６９０１号参照。その全体を参照して本明細書に組み込まれる）、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆ（商標））、ミコフェノール酸モフェチル及びアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミド及びそのマロノニトリラマイド（ｍａｌｏｎｏｎｉｔｒｉｌｏａｍｉｄｅ）類似体；並びに、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体とＩｇとの融合物、抗Ｂリンパ球刺激抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（商標））とＩｇとの融合物（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、抗ＣＤ８０抗体及びエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））並びに抗Ｔ細胞抗体、例えば、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４などを含む免疫抑制蛋白質が含まれる。好適な抗炎症剤の例には、限定されないが、例えば、クロベタゾール、ハロベタゾール、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｅ、フルオシノニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロンのようなコルチコステロイド；例えば、スルファサラジン、メサラミン含有薬剤（５−ＡＳＡ製剤として公知）、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ｍｅｃｌｏｆａｍａｔｅ、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サリチル酸塩、スリンダク及びトルメチンのような非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）；アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）、ＴＮＦ−αアンタゴニスト）及びインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、ＴＮＦ−αアンタゴニスト）のような抗炎症抗体などが含まれる。
【０２０６】
移植拒絶反応及び移植片対宿主病は、超急性（液性）、急性（Ｔ細胞媒介性）又は慢性（病因不明）又はそれらの組合せとなりうる。従って、本発明の抗ＣＤ２０抗体は一部の実施形態では、肝臓、腎臓、膵臓、膵島細胞、小腸、肺、心臓、角膜、皮膚、血管、骨、異種又は自家骨髄などを含むがこれに限定されない任意の組織の超急性、急性及び／又は慢性移植拒絶反応と関連する拒絶反応及び／又は症状を予防且つ／或いは改善するために用いられる。移植片組織は任意のドナーから得られ、任意のレシピエント宿主に移植され得、従って、移植処置は、動物組織のヒトへの移植（例えば、異種移植）、一人のヒトから別のヒトへの組織の移植（例えば、同種移植）及び／又はヒトの生体の一部から別の部分への組織の移植（例えば、自家骨髄）を含みうる。本発明の抗体による処置は、移植後遺症、例えば、発熱、食欲不振、血行動態異常、白血球減少、移植臓器／組織の白血球浸潤及び日和見感染も低減しうる。
【０２０７】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、超急性、急性及び／又は慢性移植拒絶反応のような移植拒絶反応並びに／或いは移植片対宿主病を処置且つ／或いは予防するため、単独で、或いは免疫抑制剤と組み合わせて用いられうる。従って、移植拒絶反応を処置するために本発明の抗ＣＤ２０抗体が用いられる一部の実施形態では、該抗体は、メトトレキサート；シクロホスファミド；ミゾリビン；クロラムブシル；シクロスポリン、例えば、エアロゾル化シクロスポリン（米国特許出願公開第２００２０００６９０１号参照。その全体を参照して本明細書に組み込まれる）、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆ（商標））、ミコフェノール酸モフェチル及びアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミド及びそのマロノニトリラマイド（ｍａｌｏｎｏｎｉｔｒｉｌｏａｍｉｄｅ）類似体を含むがこれに限定されない好適な免疫抑制剤；並びに、例えば、抗ＣＴＬＡ抗体とＩｇとの融合物、抗Ｂリンパ球刺激抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（商標））とＩｇとの融合物（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、抗ＣＤ８０抗体及びエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））並びに抗Ｔ細胞抗体、例えば、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４などを含む免疫抑制蛋白質と併用されうる。
【０２０８】
そのようなものとして、例えば、肺移植を受けるような移植レシピエントにおける症状及び転帰を更に改善するため、本発明の組成物及び方法は他の薬剤と組み合わせて用いられることが特に検討される。従って、一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、移植拒絶反応（例えば、肺移植レシピエントにおける超急性、急性及び／又は慢性移植拒絶反応或いは移植片対宿主病）を処置するため、単独で、或いは、例えば、経口シクロスポリン、注射用シクロスポリン、エアロゾル化（例えば、吸入）シクロスポリン及びそれらの組合せを含む、非経口及び／又は非・非経口投与シクロスポリンと組み合わせて用いられる。治療の少なくとも１つの構成要素がエアロゾル化シクロスポリンである一部の実施形態では、該シクロスポリンは、例えば、加圧送達デバイス又は噴霧器を用いてエアゾールスプレー形態のシクロスポリンの吸入により、レシピエントの肺へ送達される。該シクロスポリンは乾燥粉末又は湿潤形態にて投与されうる。
【０２０９】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、関節リウマチを処置且つ／或いは予防するため、単独で、或いは免疫抑制剤と組み合わせて用いられうる。従って、関節リウマチを処置するために本発明の抗ＣＤ２０抗体が用いられる一部の実施形態では、該抗体は、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰＲＯＧＲＡＦ（商標））、ミコフェノール酸モフェチル及びアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミド及びそのマロノニトリラマイド（ｍａｌｏｎｏｎｉｔｒｉｌｏａｍｉｄｅ）類似体を含むがこれに限定されない好適な免疫抑制剤；並びに、例えば、抗ＣＴＬＡ抗体とＩｇとの融合物、抗Ｂリンパ球刺激抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（商標））とＩｇとの融合物（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、他の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））；完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；抗ＣＤ８０抗体及びエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））並びに抗Ｔ細胞抗体、例えば、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４などを含む免疫抑制蛋白質と併用されうる。上述のように、処置の有効性は任意の手段を用いて評価され得、限定されないが、米国リウマチ学会の分類基準（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）、欧州リウマチ学会の分類基準（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｌｅａｇｕｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）又は他の任意の基準によって定義付けされる臨床反応により測定されるような有効性を含む。例えば、Ｆｅｌｓｏｎら（１９９５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｒｈｅｕｍ．３８：７２７−３５及びｖａｎ  Ｇｅｓｔｅｌら（１９９６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．３９：３４−４０を参照されたい。
【０２１０】
更に他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、多発性硬化症を処置且つ／或いは予防するため、単独で、或いは免疫抑制剤と組み合わせて用いられうる。従って、多発性硬化症を処置するために本発明の抗ＣＤ２０抗体が用いられる一部の実施形態では、該抗体は、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰＲＯＧＲＡＦ（商標））、ミコフェノール酸モフェチル及びアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスペルグアリン、レフルノミド及びそのマロノニトリラマイド（ｍａｌｏｎｏｎｉｔｒｉｌｏａｍｉｄｅ）類似体を含むがこれに限定されない好適な免疫抑制剤；並びに、例えば、抗ＣＴＬＡ抗体とＩｇとの融合物、抗Ｂリンパ球刺激抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−Ｂ（商標））とＩｇとの融合物（ＢＬｙＳ−Ｉｇ）、他の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））；完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；抗ＣＤ８０抗体及びエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））並びに抗Ｔ細胞抗体、例えば、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４などを含む免疫抑制蛋白質と併用されうる。
【０２１１】
更に、１つ以上の治療剤と本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体との併用療法も、ＣＤ発現細胞と関連する病態、例えば、Ｂ細胞関連癌並びに自己免疫及び／又は炎症性疾患の処置に用いることができる。限定されることなく、その例には、２つの化学療法剤が本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体と併用して投与され、また、１つの化学療法剤と別の抗癌モノクローナル抗体（例えば、アレムツズマブ、リツキシマブ又は抗ＣＤ２３抗体）とが本明細書で述べられる抗ＣＤ２０抗体と併用して投与される３剤併用療法が含まれる。そのような併用の例には、限定されないが、フルダラビン、シクロホスファミド及び抗ＣＤ２０抗体の併用；並びにフルダラビン、別の抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、カリフォルニア州サンディエゴ）及び本発明の抗ＣＤ２０抗体の併用が含まれる。
【０２１２】
本発明の更なる実施形態は、例えば、所与の処置レジメンの有効性を判定するための臨床検査手順の一部としての組織の蛋白質レベルの診断モニタリングのための抗ＣＤ２０抗体の使用である。検出は該抗体を検出可能な物質にカップリングすることにより容易化することができる。検出可能物質の例には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質及び放射性物質が含まれる。好適な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが含まれ、好適な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれ、好適な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド又はフィコエリトリンが含まれ、発光物質の一例にはルミノールが含まれ、生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンが含まれ、好適な放射性物質の例には、１２５Ｉ，１３１Ｉ，３５Ｓ又は３Ｈが含まれる。
【０２１３】
（ＶＩＩＩ．医薬組成物及び投与方法）
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を調製し、それを必要とする患者に投与する方法は、当業者には周知であり、或いは当業者により容易に決定される。抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入又は局所でよい。本明細書で用いられるような非経口という用語は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、経直腸又は膣内投与を含む。これらの投与形態はすべて本発明の範囲内にあると明確に予期されるが、一投与形態は、特に静脈内又は動脈内・注射又は点滴のための注射用溶液となりうる。通常、好適な注射用医薬組成物は、緩衝剤（例えば、酢酸、リン酸又はクエン酸緩衝剤）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意に安定化剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含みうる。しかし、本明細書での教示と整合する他の方法では、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、有害細胞集団の部位へ直接送達することができ、これにより、病変組織の治療剤への暴露を増大させる。
【０２１４】
前述のように、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、ＣＤ２０発現細胞媒介性疾患、例えば、ＳＬＥ、ＰＢＣ、ＩＴＰ、多発性硬化症、乾癬、クローン病、移植拒絶反応及びＢ細胞リンパ腫のｉｎ  ｖｉｖｏ処置に対して医薬的に有効な量にて投与されうる。この点において、投与を容易にし、活性剤の安定性を促進するように開示抗体が製剤化されることが理解されるであろう。好ましくは、本発明による医薬組成物は、医薬的に許容可能な非毒性滅菌担体、例えば、生理食塩水、非毒性緩衝剤、防腐剤などを含む。本出願を目的として、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体（コンジュゲート化又は非コンジュゲート化）の医薬的有効量は、標的への効果的な結合を成し、利益を生じさせ、例えば、疾患又は障害の症状を改善し、或いは物質又は細胞を検出するのに十分な量を意味するとみなされるものとする。
【０２１５】
本発明において用いられる医薬組成物は、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清蛋白質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩類又は電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン・ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂を含む医薬的に許容可能な担体を含む。
【０２１６】
非経口投与用の調製物は水性又は非水性滅菌溶液、懸濁液及び乳液を含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油及びオレイン酸エチルのような注射用有機エステルである。水性担体は、生理食塩水及び緩衝媒質を含め、水、アルコール／水性溶液、乳液又は懸濁液を含む。対象とする本発明では、医薬的に許容可能な担体は、限定されないが、０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは、０．０５Ｍリン酸緩衝液又は０．８％生理食塩水を含む。他の一般的な非経口ビヒクルは、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース・塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル又は固定油を含む。静脈内ビヒクルは、流体・栄養素補充物、電解質補充物、例えば、リンゲルデキストロースに基づく補充物などを含む。防腐剤及び他の添加剤は、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤及び不活性ガスなどとしても存在しうる。
【０２１７】
より詳細には、注射用に好適な医薬組成物は、滅菌水性溶液（水溶性）若しくは分散系及び滅菌注射用溶液若しくは分散系の即時調製用の滅菌粉末を含む。そのような場合、該組成物は無菌でなければならず、容易に注射することができる程度に流体である必要がある。該組成物は製造・保存条件下にて安定である必要があり、好ましくは、細菌及び菌類のような微生物の汚染作用に備えて保存される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物を含む溶媒或いは分散媒でよい。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用、分散系の場合には必要な粒子サイズの維持及び界面活性剤の使用により、維持することができる。本明細書で開示される治療法に用いる好適な製剤形態は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）第１６版（１９８０）に記載されている。
【０２１８】
微生物作用の予防は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより成すことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール又は塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによりもたらされうる。
【０２１９】
いずれの場合でも、注射用滅菌溶液は、必要に応じて本明細書で列挙される成分の１つ又はその組合せを有する適切な溶媒に必要量にて活性化合物（例えば、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体それ自体或いは他の活性剤と併用）を組み入れ、次に、濾過滅菌により調製することができる。一般的に、分散系は、基本的な分散媒及び上記に列挙された成分からの必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに活性化合物を組み入れることにより調製される。注射用滅菌溶液調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、これにより、活性成分と従前に滅菌濾過された溶液由来の任意の追加の所望成分の粉末が得られる。注射用調製物は、当該技術分野において公知の方法により処理され、アンプル、バッグ、ビン、注射器又はバイアルのような容器に充填され、無菌条件下にて密閉される。更に、該調製物は包装され、第０９／２５９，３３７  ＵＳ−２００２−０１０２２０８  Ａｌ号として公開されている同時係属米国特許出願（その全体を参照して本明細書に組み込まれる）に述べられているようなキットの形態にて販売されうる。そのような製品は、関連組成物が疾患又は障害に罹患し、或いはその傾向になりやすい患者を処置するのに有用であることを示すラベル又は添付文書を有することが好ましい。
【０２２０】
非経口製剤は、単回ボーラス投与、注入若しくは負荷ボーラス投与、次に維持量でよい。これらの組成物は、特定の固定間隔又は可変間隔、例えば、１日１回又は「随時」ベースにて投与されうる。
【０２２１】
本発明において用いられる一部の医薬組成物は、例えば、カプセル、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含む許容可能な剤形にて経口投与されうる。一部の医薬組成物は経鼻エアロゾル又は吸入によっても投与されうる。そのような組成物は、ベンジルアルコール若しくは他の好適な防腐剤、バイオアベイラビリティを高める吸収促進剤及び／又は他の従来の可溶化剤若しくは分散剤を用いて生理食塩水中の溶液として調製されうる。
【０２２２】
単一剤形を生成するために担体物質と組み合わせられうる抗ＣＤ２０抗体又はその断片、変異体若しくは誘導体の量は、処置宿主及び特定の投与様式により異なる。組成物は、注入にて単回投与、多回投与として、或いは設定期間にわたって投与されうる。所望の至適反応（例えば、治療又は予防反応）を得るため、投薬レジメンも調整されうる。
【０２２３】
本発明の開示範囲に合わせて、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、治療効果を生じさせるのに十分な量にて、前述の処置方法に従ってヒト又は他の動物に投与されうる。本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、既知の技法に従って本発明の抗体と従来の医薬的に許容可能な担体又は希釈剤とを組み合わせることにより、従来の剤形にてそのようなヒト又は他の動物に投与することができる。医薬的に許容可能な担体又は希釈剤の形態及び特性は、組み合わされる活性成分の量、投与経路及び他の周知の変動要素により決定されることが当業者に認識されるであろう。一種以上の本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む混合物が特に効果的であることが判明しうるということを当業者は更に理解するであろう。
【０２２４】
ＳＬＥ、ＰＢＣ、ＩＴＰ、多発性硬化症、乾癬、クローン病、移植拒絶反応及びＢ細胞リンパ腫のようなＣＤ２０発現細胞媒介性疾患の処置に対する本発明の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理状態、患者がヒト又は動物であるかということ、他の投与薬剤又は処置が予防的或いは治療的であるかということを含む多くの異なる因子により異なる。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック動物を含む非ヒト動物も処置することができる。安全性及び有効性を最適化するため、処置用量は当業者には周知の慣用的方法を用いて設定されうる。
【０２２５】
少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の投与量は、本発明の開示内容を鑑みて、過度の実験を行わずに当業者により容易に決定される。投与様式並びに少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体、その抗原結合性断片、変異体又は誘導体のそれぞれの量に影響する因子は、限定されないが、治療を受ける患者の疾患の重症度、病歴並びに年齢、身長、体重、健康度及び生理状態を含む。同様に、抗ＣＤ２０抗体又はその断片、変異体若しくは誘導体の投与量は、投与様式及び患者がこの薬剤の単回投与若しくは多回投与を受けるかということに依存する。抗ＣＤ２０抗体又はその断片又はその変異体又はその誘導体の投与量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ，０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ又は約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。従って、例えば、用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ，０．０３ｍｇ／ｋｇ，０．１ｍｇ／ｋｇ，０．３ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍｇ／ｋｇ，１ｍｇ／ｋｇ，１．５ｍｇ／ｋｇ，２ｍｇ／ｋｇ，２．５ｍｇ／ｋｇ，３ｍｇ／ｋｇ，５ｍｇ／ｋｇ，７ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，１５ｍｇ／ｋｇ，２０ｍｇ／ｋｇ，２５ｍｇ／ｋｇ，３０ｍｇ／ｋｇ，３５ｍｇ／ｋｇ，４０ｍｇ／ｋｇ，４５ｍｇ／ｋｇ，５０ｍｇ／ｋｇ，６０ｍｇ／ｋｇ，７０ｍｇ／ｋｇ，８０ｍｇ／ｋｇ，９０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇでよい。
【０２２６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体による、ＳＬＥ、ＰＢＣ、ＩＴＰ、多発性硬化症、乾癬、クローン病、移植拒絶反応及びＢ細胞リンパ腫のようなＣＤ２０発現細胞媒介性疾患の処置のため、用量は、例えば、宿主の体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より普通には、０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０２ｍｇ／ｋｇ，０．２５ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍｇ／ｋｇ，０．７５ｍｇ／ｋｇ，１ｍｇ／ｋｇ，２ｍｇ／ｋｇなど）の範囲内でよい。例えば、用量は、１ｍｇ／ｋｇ体重又は１０ｍｇ／ｋｇ体重又は１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、好ましくは、少なくとも１ｍｇ／ｋｇでよい。上記範囲の中間用量も本発明の範囲内にあるものとする。患者はそのような用量を、毎日、隔日、毎週又は実証的分析により決定される他のスケジュールに従って投与されうる。例示的な用量スケジュールは、１〜１０ｍｇ／ｋｇ若しくは１５ｍｇ／ｋｇ連日、３０ｍｇ／ｋｇ隔日又は６０ｍｇ／ｋｇ毎週を含む。一部の方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、その場合、各抗体の投与量は指示範囲内にある。
【０２２７】
本発明の抗ＣＤ２０抗体、その抗原結合性断片、変異体又は誘導体は多回投与することができる。単回投与間の間隔は、１日、１週、１カ月又は１年でよい。その間隔は、患者における標的ポリペプチド又は標的分子の血中レベルを測定することにより示されるように不定期でもよい。投与量は、一部の方法では１〜１０００μｇ／ｍｌ、一部の方法では２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿ポリペプチド濃度となるように調整される。或いは、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は徐放性製剤として投与することができ、その場合、低頻回投与を必要とする。投与量及び頻度は患者における抗体の半減期により異なる。抗ＣＤ２０抗体の半減期は、安定なポリペプチド又は部分、例えば、アルブミン又はＰＥＧへの融合により延長させることもできる。一般的に、ヒト化抗体が最長半減期を示し、これにキメラ抗体及び非ヒト抗体が続く。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、非コンジュゲート形態にて投与することができる。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、コンジュゲート形態にて多回投与することができる。更に別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、非コンジュゲート形態、次にコンジュゲート形態にて、或いはその逆に投与することができる。
【０２２８】
本発明の別の実施形態では、該方法は、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の多回投与を含む。該方法は、１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１５，２０，２５，３０，３５，４０回又はそれ以上の回数の治療有効量の抗ＣＤ２０抗体、その断片、変異体又は誘導体を含む医薬組成物の投与を含みうる。抗体分子を含む医薬組成物の多回投与の頻度及び期間は、本明細書の開示内容に鑑み、過度の実験を行うことなく当業者により容易に決定されうる。更に、治療有効量の抗体による患者の処置は単回処置を含み得、或いは、好ましくは、連続処置を含みうる。好ましい例では、患者は、約１〜１０週間、好ましくは、約２〜８週間、より好ましくは、約３〜７週間、更に好ましくは、約４，５又は６週間、週１回、約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内にて抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体により処置される。再発を予防するため、処置は毎年或いは再発の徴候時に行われうる。処置に用いられる抗体分子の有効量が特定の処置の経過にわたり増減しうることも理解されるであろう。投与量の変更が生じ、本明細書で述べられるような診断アッセイ結果から明らかとなりうる。
【０２２９】
従って、一実施形態では、投薬レジメンは、処置期間中の第１，７，１４及び２１日目における治療有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の最初の投与を含む。別の実施形態では、投薬レジメンは、処置期間中の１週の第１，２，３，４，５，６及び７日目における治療有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の最初の投与を含む。更なる実施形態は、処置期間中の１週の第１，３，５，及び７日目における治療有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の最初の投与を有する投薬レジメン；処置期間中の１週の第１及び３日目における治療有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の最初の投与を含む投薬レジメン；並びに処置期間中の１週の第１日目における治療有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の最初の投与を含む好ましい投薬レジメンを含む。処置期間は、１週、２週、３週、１カ月、３カ月、６カ月又は１年を含みうる。処置期間は引き続き、或いは１日、１週、２週、１カ月、３カ月、６カ月又は１年、互いに隔てられうる。
【０２３０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の治療有効量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ又は約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲内である。従って、例えば、任意の１つの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の用量は、０．００３ｍｇ／ｋｇ，０．０１ｍｇ／ｋｇ，０．０３ｍｇ／ｋｇ，０．１ｍｇ／ｋｇ，０．３ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍｇ／ｋｇ，１ｍｇ／ｋｇ，１．５ｍｇ／ｋｇ，２ｍｇ／ｋｇ，２．５ｍｇ／ｋｇ，３ｍｇ／ｋｇ，５ｍｇ／ｋｇ，７ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，１５ｍｇ／ｋｇ，２０ｍｇ／ｋｇ，２５ｍｇ／ｋｇ，３０ｍｇ／ｋｇ，３５ｍｇ／ｋｇ，４０ｍｇ／ｋｇ，４５ｍｇ／ｋｇ，５０ｍｇ／ｋｇ又は約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の他のそのような用量でよい。同一治療有効量の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を抗体投与の各週全体にわたって投与することができる。或いは、異なる治療有効量の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を処置期間の経過にわたって用いることができる。
【０２３１】
（ＩＸ．薬剤の製造における抗ＣＤ２０抗体の使用）
本発明は、新生Ｂ細胞増殖を特徴とする癌に対する、患者を処置するための薬剤の製造における抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用も提供し、該薬剤は少なくとも１つの他の癌療法による処置と調整される。新生Ｂ細胞増殖を特徴とする癌は、限定されないが、本明細書で上述したＢ細胞関連癌、例えば、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、形質細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小開裂細胞型リンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性小開裂細胞混合型リンパ腫、びまん性小開裂細胞型リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ様組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、びまん性混合細胞型リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫及びマントル細胞リンパ腫を含む。
【０２３２】
「調整される」とは、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤が、少なくとも１つの他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられるということである。他の癌療法の例には、限定されないが、外科手術；放射線療法；任意に自家骨髄移植と組み合わせた化学療法、この場合、好適な化学療法剤は、限定されないが、フルダラビン若しくはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン及びそれらの組合せ、例えば、アントラサイクリン含有レジメン、例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）を含み、また、化学療法にて用いられる他の細胞傷害剤及び／又は治療剤、例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ並びにシタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルデカルバジン（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン及びネララビンを含むがこれに限定されない代謝拮抗剤；他の抗癌モノクローナル抗体療法（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））又は悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖蛋白質を標的とする他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））又は悪性Ｂ細胞上のＣＤ２０抗原を標的とする他の任意の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、二重特異性抗体ＭＴ１０３）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エピラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））又はヒト血管内皮増殖因子を標的とする他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、アルファＣＤ２２毒素であるモノクローナル抗体ＢＬ−２２）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫にて過剰発現する核因子カッパＢの活性化受容体（ＲＡＮＫ）及びそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的とする抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞上に発現する主要組織適合抗原クラスＩＩ受容体を標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原を標的とする抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；並びに多くの固形腫瘍及び造血起源の腫瘍に発現する腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的とする抗体（例えば、ヒトモノクローナルアゴニスト抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）；微小管及び／又はトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、有糸分裂阻害剤ド��スタチン及びドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；並びにトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イクサベピロン（エポチロン類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも称される）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２，ＣＧＰ  ４１２５１，Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン、エロキサチン（抗腫瘍剤）、ｇａｎｉｔｅ（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（以前はレビミド））、Ａｆｆｉｎｉｔａｋ（商標）（プロテインキナーゼＣ−アルファのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラク、悪性リンパ球のアポトーシスを誘導）、クロファラビンのような第二世代プリンヌクレオシド類似体、癌細胞によるＢｃｌ−２蛋白質産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリメルセン及びＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソーム阻害剤（例えば、Ｖｅｌｃａｄｅ（商標）（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショック蛋白質（ＨＳＰ）９０の低分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの低分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）剤、例えば、ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）及びＦＲ−９０１２２８）並びにアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）及びＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテクサフィンガドリニウム）を含むがこれに限定されない低分子ベースの癌療法；ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ）、個別免疫療法若しくは積極的イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法、以前はＧＴＯＰ−９９と称された）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、トール様受容体９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターフェロン−アルファ療法、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法；ＩＬ−１５療法及びＩＬ−２１療法を含むがこれに限定されないワクチン／免疫療法ベースの癌療法；ステロイド療法；或いは他の癌療法を含み、上述のように、追加の癌療法（単数又は複数）は、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤による患者の処置前、処置時又は処置後に施行される。
【０２３３】
一部の実施形態では、本発明は、患者におけるＢ細胞リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫を処置するための薬剤の製造における抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は、化学療法、抗癌抗体療法、低分子ベースの癌療法及びワクチン／免疫療法ベースの癌療法からなる群より選択される少なくとも１つの他の癌療法による処置と調整され、該薬剤は、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。
【０２３４】
従って、例えば、一部の実施形態では、本発明は、患者におけるＢ細胞リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫を処置するための薬剤の製造における、モノクローナル抗体１５８９或いは他の本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は化学療法による処置と調整され、化学療法剤は、シトキサン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン及びそれらの組合せ、例えば、ＣＨＯＰからなる群より選択される。他の実施形態では、本発明は、患者におけるＢ細胞リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫を処置するための薬剤の製造におけるモノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片の使用を提供し、該薬剤は、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））又は悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖蛋白質を標的とする他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））又は悪性Ｂ細胞上のＣＤ２０抗原を標的とする他の任意の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、二重特異性抗体ＭＴ１０３）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エピラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））又はヒト血管内皮増殖因子を標的とする他の抗癌抗体；並びにそれらの任意の組合せからなる群より選択される少なくとも１つの他の抗癌抗体による処置と調整され、該薬剤は、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多剤併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。
【０２３５】
更に他の実施形態では、本発明は、患者におけるＢ細胞リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫を処置するための薬剤の製造における、モノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は、微小管及び／又はトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、有糸分裂阻害剤ドラスタチン及びドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；並びにトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトテシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イクサベピロン（エポチロン類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも称される）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２，ＣＧＰ  ４１２５１，Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピクサントロン、エロキサチン（抗腫瘍剤）、ｇａｎｉｔｅ（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、Ｘｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテクサフィンガドリニウム）のようなアポトーシス剤、癌細胞によるＢｃｌ−２蛋白質産生の阻害剤（例えば、アンチセンス剤オブリメルセン及びＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、ネララビン並びにそれらの任意の組合せからなる群より選択される少なくとも１つの他の低分子ベースの癌療法による処置と調整され、該薬剤は、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多剤併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。
【０２３６】
更に他の実施形態では、本発明は、患者におけるＢ細胞リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫を処置するための薬剤の製造における、モノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は、ワクチン手法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ）、個別免疫療法若しくは積極的イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法、以前はＧＴＯＰ−９９と称された）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、トール様受容体９（ＴＬＲ９）に対する合成アゴニスト）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法；ＩＬ−１５療法及びＩＬ−２１療法並びにそれらの任意の組合せからなる群より選択される少なくとも１つの他のワクチン／免疫療法ベースの癌療法による処置と調整され、該薬剤は、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。
【０２３７】
一部の実施形態では、本発明は、患者におけるＢ細胞関連白血病、例えば、Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）を処置するための薬剤の製造における、抗ＣＤ２０抗体、例えば、モノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は、化学療法及び代謝拮抗療法からなる群より選択される少なくとも１つの他の癌療法による処置と調整され、該薬剤は、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。そのような実施形態の例には、限定されないが、抗ＣＤ２０抗体、例えば、モノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤が、シトキサン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、シタラビン、ミトキサントロン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、メトトレキサート、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン及びそれらの組合せからなる群より選択される化学療法剤又は代謝拮抗剤による処置と調整される例が含まれ、該薬剤は、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多剤併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。そのような例の１つでは、該薬剤は、シタラビン＋ダウノルビシン、シタラビン＋ミトキサントロン及び／又はシタラビン＋イダルビシンによる処置と調整され、該薬剤は、他の癌療法によるＢ−ＡＬＬ患者の処置前、処置時又は処置後に用いられ、或いは、多併用療法の場合、他の癌療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられる。
【０２３８】
本発明は、本明細書で上述したＢ細胞関連癌を含む新生Ｂ細胞増殖を特徴とする癌に対して患者を処置するための薬剤の製造における、抗ＣＤ２０抗体、例えば、本明細書で開示されるモノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は少なくとも１つの他の癌療法で前処置された患者において用いられる。「前処置された」又は「前処置」とは、患者が抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤を投与される前に、１つ以上の他の癌療法を受けた（即ち、少なくとも１つの他の癌療法で処置された）ということである。「前処置された」又は「前処置」は、抗ＣＤ２０抗体、例えば、本明細書で開示されるモノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤による処置の開始前２年以内、１８カ月以内、１年以内、６カ月以内、２カ月以内、６週以内、１カ月以内、４週以内、３週以内、２週以内、１週以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内又は更には１日以内に少なくとも１つの他の癌療法で処置された患者を含む。患者が前癌療法（単数又は複数）による前処置に反応したことは必要ではない。従って、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤を投与される患者は、前癌療法又は１つ以上の前癌療法（前処置が複数の癌療法を含んだ）による前処置に反応した可能性があり、或いは反応しなかった可能性がある。患者が抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤を投与される前に前処置を受けた可能性がある他の癌療法の例には、限定されないが、外科手術；放射線療法；任意に自家骨髄移植と組み合わせた化学療法、この場合、好適な化学療法剤は、限定されないが、本明細書で上記に列挙した化学療法剤を含む；本明細書で上記に列挙した抗癌抗体を含むがこれに限定されない他の抗癌モノクローナル抗体療法；本明細書で上記に列挙した低分子を含むがこれに限定されない低分子ベースの癌療法；本明細書で上記に列挙したワクチン／免疫療法ベースの癌療法を含むがこれに限定されないワクチン／免疫療法ベースの癌療法；ステロイド療法；他の癌療法；或いはそれらの任意の組合せが含まれる。
【０２３９】
本明細書で述べられる薬剤の１つ以上の他の癌療法との調整使用の文脈における「処置」は、薬剤又は他の癌療法の患者への適用又は投与或いは薬剤又は他の癌療法の患者由来の単離組織若しくは細胞株への適用又は投与と本明細書で定義付けられ、該患者は、新生Ｂ細胞増殖を特徴とする癌、そのような癌と関連する症状又はそのような癌の発達を被りやすい傾向を有し、その目的は、癌、癌の関連症状又は癌の発達を被りやすい傾向を治癒・治療・緩和・軽減・修正・矯正・寛解・改善し、或いはそれに影響を及ぼすことである。
【０２４０】
本発明は、患者における自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を処置するための薬剤の製造における、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用も提供し、該薬剤は少なくとも１つの他の癌療法による処置と調整される。「調整される」とは、該薬剤が、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患のための少なくとも１つの他の治療法による患者の処置前、処置時又は処置後に用いられるということである。他の治療法の例には、限定されないが、本明細書で上述した治療法、即ち、外科手術又は外科的処置（例えば、脾臓摘出、リンパ節切除、甲状腺摘出、血漿交換、白血球泳動（ｌｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、細胞、組織又は臓器移植、臓器灌流、腸処置など）、放射線療法、ステロイド療法及び非ステロイド療法のような療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚病薬（例えば、アレルギー、接触皮膚炎及び乾癬のような皮膚疾患を処置するために用いられる局所薬）による治療、免疫抑制療法並びに他の抗炎症モノクローナル抗体療法などが含まれ、追加療法（単数又は複数）による処置は、本明細書で上述したような抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤による患者の処置前、処置時又は処置後に行われる。そのような実施形態の１つでは、患者における自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を処置するための薬剤の製造における、モノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用を提供し、該薬剤は本明細書で上述したような少なくとも１つの他の治療法による処置と調整される。
【０２４１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体、例えば、本明細書で開示されるモノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤は、他の２つの治療法による処置と調整される。抗ＣＤ２０抗体を含む薬剤が他の２つの治療法と調整される場合、該薬剤の使用は他の治療法の一方又は両方による患者の処置前、処置時又は処置後でよい。
【０２４２】
本発明は、患者における自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を処置するための薬剤の製造における、抗ＣＤ２０抗体、例えば、本明細書で開示されるモノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の使用も提供し、該薬剤は少なくとも１つの他の治療法で前処置された患者において用いられる。「前処置された」又は「前処置」とは、患者が抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤を投与される前に１つ以上の他の治療法で処置されたということである。「前処置された」又は「前処置」は、抗ＣＤ２０抗体、例えば、本明細書で開示されるモノクローナル抗体１５８９又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤による処置の開始前２年以内、１８カ月以内、１年以内、６カ月以内、２カ月以内、６週以内、１カ月以内、４週以内、３週以内、２週以内、１週以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内又は更には１日以内に他の治療法（単数又は複数）で処置された患者を含む。患者が前治療法（単数又は複数）による前処置に反応したことは必要ではない。従って、抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を含む薬剤を投与される患者は、前治療法又は１つ以上の前治療法（前処置が複数の治療法を含んだ）による前処置に反応した可能性があり、或いは反応しなかった可能性がある。
【０２４３】
本明細書で述べられる薬剤の、１つ以上の他の自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患治療法との調整使用の文脈における「処置」は、薬剤又は他の治療法の患者への適用又は投与或いは薬剤又は他の治療法の、患者由来の単離組織若しくは細胞株への適用又は投与と本明細書で定義付けられ、該患者はＣＤ２０発現細胞と関連する自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患、そのような疾患と関連する症状又はそのような疾患の発達を被りやすい傾向を有し、その目的は、該疾患、該疾患の関連症状又は該疾患の発達を被りやすい傾向を治癒・治療・緩和・軽減・修正・矯正・寛解・改善し、或いはそれに影響を及ぼすことである。
【０２４４】
（Ｘ．診断法）
本発明は、ＣＤ２０発現細胞媒介性疾患、例えば、ＳＬＥ、ＰＢＣ、ＩＴＰ、多発性硬化症、乾癬、クローン病、移植拒絶反応及びＢ細胞リンパ腫の診断時に有用な方法を更に提供し、該方法は、患者由来の組織又は他の細胞又は体液におけるＣＤ２０蛋白質又は転写物の発現レベルを測定するステップと、その測定発現レベルを正常組織又は体液における標準的なＣＤ２０発現レベルと比較するステップとを含み、これにより、標準と比べた発現レベルの増大は疾患を示す。
【０２４５】
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、当業者には周知の古典的な免疫組織学的方法を用いて生体試料におけるＣＤ２０蛋白質レベルを測定するために用いることができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら（１９８５）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５；Ｊａｌｋａｎｅｎら（１９８７）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６を参照されたい）。ＣＤ２０蛋白質の発現を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法は、イムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降又はウエスタンブロットを含む。好適なアッセイについては本明細書の別の箇所でより詳細に述べられる。
【０２４６】
「ＣＤ２０ポリペプチドの発現レベルを測定する」とは、直接（例えば、絶対蛋白質レベルを測定或いは推定することにより）或いは相対的に（例えば、第二の生体試料中の疾患関連ポリペプチドと比較することにより）第一の生体試料中のＣＤ２０ポリペプチドのレベルを質的或いは量的に測定或いは推定することである。好ましくは、該第一の生体試料中のＣＤ２０ポリペプチドの発現レベルは測定或いは推定され、標準的なＣＤ２０ポリペプチドレベルと比較され、該標準は、疾患を有さない患者から得られる第二の生体試料から得られ、或いは疾患を有さない患者集団由来のレベルを平均化することにより求められる。当該技術分野において理解されるように、「標準的」ＣＤ２０ポリペプチドレベルが判明すると、それを比較基準として繰り返して用いることができる。
【０２４７】
「生体試料」とは、ＣＤ２０を潜在的に発現している個体、細胞株、組織培養物又は他の細胞源から得られる任意の生体試料のことである。生体組織及び体液を哺乳動物から得る方法は当該技術分野において周知である。
【０２４８】
（ＸＩ．イムノアッセイ）
本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、当該技術分野において公知の任意の方法により、免疫特異的結合について測定されうる。用いることができるイムノアッセイは、いくつか挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光免疫測定、プロテインＡイムノアッセイのような技法を用いた競合及び非競合アッセイ系を含むがこれに限定されない。そのようなアッセイはルーチンであり、当該技術分野において周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州）第１巻を参照されたい。これはその全体を参照して本明細書に組み込まれる）。例示的なイムノアッセイが以下に簡略に述べられる（しかし、限定することを目的としない）。
【０２４９】
一般的に、免疫沈降プロトコルは、蛋白質ホスファターゼ及び／又はプロテアーゼ阻害剤（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、バナジン酸ナトリウム）を補充されたＲＩＰＡ緩衝液（１％ＮＰ−４０又はＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）、１％Ｔｒａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中に細胞集団を溶解するステップと、対象とする抗体を細胞溶解物に加えるステップと、４℃で一定時間（例えば、１〜４時間）インキュベートするステップと、プロテインＡ及び／又はプロテインＧセファロースビーズを細胞溶解物に加えるステップと、４℃で約１時間以上インキュベートするステップと、該ビーズを溶解緩衝液中で洗浄するステップと、該ビーズをＳＤＳ／試料緩衝液中に再懸濁させるステップとを含む。対象抗体の特定の抗原を免疫沈降させる能力は、例えば、ウエスタンブロット解析により評価することができる。当業者であれば、抗体の抗原への結合を増大させ、バックグラウンドを減少させるために変更可能なパラメータに関する知識を有するであろう（例えば、セファロースビーズで細胞溶解物を予め清澄にする）。免疫沈降プロトコルに関する更なる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州）第１巻１０．１６．１を参照されたい。
【０２５０】
一般的に、ウエスタンブロット分析は、蛋白質試料を調製するステップと、ポリアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量により８％〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）中での該蛋白質試料の電気泳動と、該蛋白質試料を該ポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦ又はナイロンのような膜に移すステップと、ブロッキング溶液（例えば、３％ＢＳＡ又は脱脂乳を含むＰＢＳ）中で該膜をブロックするステップと、洗浄緩衝液（例えば、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０）中で該膜を洗浄するステップと、ブロッキング緩衝液中で希釈された一次抗体（対象とする抗体）と共に該膜をインキュベートするステップと、洗浄緩衝液中で該膜を洗浄するステップと、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ）又は放射性分子（例えば、３２Ｐ又は１２５１）にコンジュゲートした二次抗体（これは、一次抗体、例えば、抗ヒト抗体を認識する）と共に該膜をインキュベートするステップと、洗浄緩衝液中で該膜を洗浄するステップと、抗原の存在を検出するステップとを含む。当業者であれば、検出シグナルを増加させ、バックグラウンドノイズを減少させるために変更可能なパラメータに関する知識を有するであろう。ウエスタンブロットプロトコルに関する更なる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州）第１巻１０．８．１を参照されたい。
【０２５１】
ＥＬＩＳＡｓは、抗原を調製するステップと、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルに該抗原を被覆するステップと、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物にコンジュゲートした対象抗体を該ウェルに加えて一定時間インキュベートするステップと、抗原の存在を検出するステップとを含む。ＥＬＩＳＡｓでは、対象抗体は検出可能な化合物にコンジュゲートされる必要はない。その代わり、検出可能な化合物にコンジュゲートした二次抗体（これは対象抗体を認識する）が該ウェルに添加されうる。更に、抗原を該ウェルに被覆する代わりに、抗体が該ウェルに被覆されうる。この場合、検出可能な化合物にコンジュゲートした二次抗体は、対象抗原の被覆ウェルへの添加後に添加されうる。当業者であれば、検出シグナルを増加させるために変更可能なパラメータ及び当該技術分野において公知のＥＬＩＳＡｓの他の変形例に関する知識を有するであろう。ＥＬＩＳＡｓに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州）第１巻１１．２．１を参照されたい。
【０２５２】
抗原に対する抗体の結合親和性及び抗体−抗原相互作用の解離速度は競合結合アッセイにより測定することができる。競合結合アッセイの一例は、漸増量の非標識抗原の存在下での対象抗体を用いた標識抗原（例えば、３Ｈ又は１２５Ｉ）のインキュベーション及び該標識抗原に結合した抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。特定の抗原に対する対象抗体の親和性及び結合解離速度は、スキャッチャードプロット解析によるデータから測定することができる。二次抗体との競合もラジオイムノアッセイを用いて測定することができる。この場合、抗原は、漸増量の非標識二次抗体の存在下、標識化合物（例えば、３Ｈ又は１２５Ｉ）にコンジュゲートした対象抗体と共にインキュベートされる。
【０２５３】
加えて、本発明の抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体は、癌抗原遺伝子産物又はその保存された変異体若しくはペプチド断片のｉｎ  ｓｉｔｕ検出のため、免疫蛍光、免疫電子顕微鏡又は非免疫アッセイのように組織学的に用いることができる。ｉｎ  ｓｉｔｕ検出は、患者から組織学的標本を取り除き、これに標識された抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体を適用することにより成され得、好ましくは、該標識抗体（又は断片）を生体試料上に重ねることにより適用される。そのような方法の使用により、ＣＤ２０蛋白質又は保存された変異体若しくはペプチド断片の存在のみならず、検査組織におけるその分布も測定することが可能である。本発明を用いて、当業者は、そのようなｉｎ  ｓｉｔｕ検出を成すため、多種多様の如何なる組織学的方法（例えば、染色法）も改変されうることを容易に認識するであろう。
【０２５４】
通常、ＣＤ２０遺伝子産物又はその保存された変異体若しくはペプチド断片に対するイムノアッセイ及び非免疫アッセイは、ＣＤ２０又はその保存された変異体若しくはペプチド断片に結合可能な、検出可能に標識された抗体の存在下、生体液、組織抽出物、新鮮な採取細胞又は細胞培養中でインキュベートされた細胞溶解物のような試料をインキュベートするステップと、当該技術分野において周知の多くの技法の任意の技法により、結合した抗体を検出するステップとを含む。
【０２５５】
生体試料は、固相支持体又は担体、例えば、ニトロセルロース又は細胞、細胞粒子若しくは可溶性蛋白質を固定化することが可能な他の固相支持体に接触させられ、その上に固定されうる。次に、該支持体は好適な緩衝液で洗浄され、次に、検出可能に標識された抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体で処理されうる。次に、該固相支持体は、非結合抗体を除去するため、緩衝液でもう一度洗浄されうる。任意に、該抗体は後で標識される。次に、固相支持体上の結合標識の量が従来の手段により検出されうる。
【０２５６】
「固相支持体又は担体」とは、抗原又は抗体に結合可能な任意の支持体をいう。周知の支持体又は担体は、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、斑糲岩並びに磁鉄鉱を含む。該担体の性状は、本発明を目的として、ある程度可溶性或いは不溶性でよい。支持体材料は、その結合分子が抗原又は抗体に結合可能である限り、ほぼ如何なる可能な構造形態を有してもよい。従って、支持体の構成は、ビーズのように球状或いは試験管の内面又はロッドの外面のように円筒状でよい。或いは、その表面は、シート、検査片などのように平坦でよい。好ましい支持体はポリスチレンビーズを含む。当業者は、抗体又は抗原に結合するのに好適な他の多くの担体を知っており、或いはルーチンの実験によりこれを確認することができる。
【０２５７】
所与のロットの抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合性断片、変異体若しくは誘導体の結合活性は、周知の方法に従って測定されうる。当業者はルーチンの実験を用いることにより、各測定に対する機能的且つ最適なアッセイ条件を決定することができる。
【０２５８】
抗体・抗原相互作用の親和性を測定するための種々の方法が利用できるが、速度定数を求める方法は比較的少ない。大部分の方法は抗体又は抗原の標識化に依存し、これは必然的にルーチンの測定を複雑化し、測定量の不確実性をもたらす。
【０２５９】
ＢＩＡコアにおいて行われるような表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）は、抗体・抗原相互作用の親和性を測定する従来の方法に優る多くの利点を供与し、その利点は、（ｉ）抗体や抗原を標識する必要がない；（ｉｉ）予め抗体を精製する必要がなく、細胞培養上清を直接用いることができる；（ｉｉｉ）異なるモノクローナル抗体の相互作用の半定量的比較を可能にするリアルタイム測定が可能となり、多くの評価目的に十分である；（ｉｖ）生体特異性表面を再生することができ、その結果、同一条件下にて一連の異なるモノクローナル抗体を容易に比較することができる；（ｖ）解析手順が完全に自動化され、ユーザーが介入することなく、一連の広範な測定を行うことができることを含む。ＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、バージョンＡＢ（１９９８、再版）、ＢＩＡＣＯＲＥコード番号ＢＲ−１００１−８６；ＢＩＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、バージョンＡＢ（１９９８、再版）、ＢＩＡＣＯＲＥコード番号ＢＲ−１００１−８４。
【０２６０】
ＳＰＲベースの結合試験では、結合対の１つのメンバーがセンサー表面に固定化される必要がある。固定化される結合パートナーはリガンドと称される。溶液中の結合パートナーは分析物と称される。場合により、該リガンドは、捕捉分子と呼称される別の固定化分子への結合を通じて該表面に間接的に結合される。ＳＰＲ反応は、分析物が結合或いは解離する際の検出表面における質量濃度の変化を示す。
【０２６１】
ＳＰＲに基づき、リアルタイムＢＩＡコア測定では、生じる相互作用を直接モニタリングする。この技法は速度パラメータの決定に好適である。比較親和性等級付（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒａｎｋｉｎｇ）は行うことが極めて簡便であり、速度定数及び親和定数はセンサーグラムデータから得ることができる。
【０２６２】
分析物がリガンド表面にわたって離散的パルスにて注入されると、生じるセンサーグラムは３つの不可欠なフェーズに分割されうる：（ｉ）試料注入時の分析物とリガンドとの会合；（ｉｉ）試料注入時の平衡又は安定状態、この場合、分析物結合の速度は複合体からの解離により平衡を保つ；（ｉｉｉ）緩衝液流入時の該表面からの分析物の解離。
【０２６３】
会合及び解離フェーズは分析物・リガンド相互作用の会合及び解離の反応速度に関する情報を提供する（ｋａ及びｋｄ、複合体の形成及び解離速度、ｋｄ／ｋａ＝ＫＤ）。平衡フェーズは分析物・リガンド相互作用の親和性に関する情報を提供する（ＫＤ）。
【０２６４】
ＢＩＡ評価ソフトウェアは、数値積分及び大域フィッティングアルゴリズムを用いてカーブフィッテイングに対する包括的な機能を提供する。好適なデータ解析により、簡便なＢＩＡコア試験から相互作用に対する別個の速度定数及び親和定数を得ることができる。この技法により測定可能な親和性の範囲は極めて広範であり、ｍＭ〜ｐＭの範囲内である。
【０２６５】
エピトープ特異性はモノクローナル抗体の重要な特性である。ＢＩＡコアによるエピトープマッピングは、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ又は他の表面吸着法を用いた従来の技法と対照的に、標識付けや精製抗体を必要とせず、数個のモノクローナル抗体の配列を用いて多部位特異性試験を可能にする。加えて、多数の分析物を自動で処理することができる。
【０２６６】
対での結合実験では、２つのＭＡｂが同じ抗原に同時に結合する能力を試験する。別個のエピトープに対するＭＡｂは独立して結合し、一方、同一或いは密接に関連するエピトープに対するＭＡｂは互いの結合に干渉する。ＢＩＡコアによるこれらの結合実験は試行が直接的である。
【０２６７】
例えば、第一のＭＡｂを結合させるために捕捉分子を用いることができ、次に、抗原と第二のＭＡｂを連続的に加える。センサーグラムは以下の事項を明らかにする：１．どの程度の抗原が該第一のＭＡｂに結合するか、２．該第二のＭＡｂが表面結合抗原にどの程度結合するか、３．該第二のＭＡｂが結合しない場合、対での試験の順序を逆にすることで結果が変わるか。
【０２６８】
ペプチド阻害はエピトープマッピングに用いられる別の技法である。この方法は対での抗体結合試験を補完することができ、抗原の一次配列が判明している場合、機能的エピトープを構造的特徴に関連付けることができる。ペプチド又は抗原断片は、固定化抗原への異なるＭＡｂの結合の阻害について試験される。所与のＭＡｂの結合に干渉するペプチドは、そのＭＡｂにより規定されるエピトープに構造的に関連すると想定される。
【０２６９】
本発明の実施では、別記しない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ及び免疫学の従来の技法を用い、それらは当該技術分野の範囲内である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ社）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ（編）（１９８５）ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，第Ｉ及びＩＩ巻；Ｇａｉｔ（編）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓら、米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ（編）（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ（編）（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ社）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；論文、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州）；Ｍｉｌｌｅｒ及びＣａｌｏｓ（編）（１９８７）Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕら（編）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１５４及び１５５巻；Ｍａｙｅｒ及びＷａｌｋｅｒ（編）（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ社、ロンドン）；Ｗｅｉｒ及びＢｌａｃｋｗｅｌｌ（編）（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ−ＩＶ巻；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ社、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク州（１９８６）；並びにＡｕｓｕｂｅｌら（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ中（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ社、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、メリーランド州）を参照されたい。
【０２７０】
抗体操作の一般原理については、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（編）（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第２版；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ社）に示されている。蛋白質操作の一般原理については、Ｒｉｃｋｗｏｏｄら（編）（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ社におけるＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ社、英国オックスフォード）に示されている。抗体及び抗体・ハプテン結合の一般原理については、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ（１９８４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第２版；Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、マサチューセッツ州）；及びＳｔｅｗａｒｄ（１９８４）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｔｈｅｉｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ（Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ社、ニューヨーク州ニューヨーク）に示されている。更に、当該技術分野において公知であって具体的には述べられていない免疫学における標準的な方法は、一般的に、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク；Ｓｔｉｔｅｓら（編）（１９９４）Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第８版；Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ社、Ｎｏｒｗａｌｋ、コネティカット州）並びにＭｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ（編）（１９８０）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、ニューヨーク州）のように従う。
【０２７１】
免疫学の一般原理を示す標準的な参考文献は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク；Ｋｌｅｉｎ（１９８２）Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州）；Ｋｅｎｎｅｔｔら（編）（１９８０）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ社、ニューヨーク州）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ（１９８４）“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ”Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｂｕｒｄｅｎら（編）中（Ｅｌｓｅｖｅｒｅ社、アムステルダム）；Ｇｏｌｄｓｂｙら（編）（２０００）Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｎｏｌｏｇｙ（第４版；Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎｄ  ＆  Ｃｏ．）；Ｒｏｉｔｔら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第６版；ロンドン：Ｍｏｓｂｙ社）；Ａｂｂａｓら（２００５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第５版；Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ及びＤｕｂｅｌ（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｎ社）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ及びＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ社）；Ｌｅｗｉｎ（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＶＩＩＩ（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ社２００３）；Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ社）；Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ及びＤｖｅｋｓｌｅｒ（２００３）ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ社）を含む。
【０２７２】
上記に引用したすべての参考文献及び本明細書で引用されるすべての参考文献は、それらの全体を参照して本明細書に組み込まれる。
【０２７３】
以下の実施例は例示を目的として提供されるものであって、限定を目的としない。
【実施例】
【０２７４】
（実施例１：ヒト化マウス抗ＣＤ２０抗体の最適化）
ＣＤＣ機能の増大を有する最適化ｍＡｂを得るため、ヒト化マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ｍＡｂ１０９７を、その可変重鎖（ＶＨ；配列番号２９参照）及び可変軽鎖（ＶＫ；配列番号１０参照）ドメインの１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）内で操作した。当初のヒト化マウス抗ＣＤ２０ｍＡｂは、リツキシマブとして公知のヒト化形態のマウス／ヒトキメラ抗ＣＤ２０抗体である（即ち、ｍＡｂ  Ｃ２Ｂ８；米国特許第５，７３６，１３７号参照）。ヒト化マウス抗ＣＤ２０ｍＡｂ内の元のＶＨドメイン（Ｈ１２８６と称される）及び元のＶＫドメイン（Ｌ３７３と称される）の３つのＣＤＲｓを図１に示す。Ｌ３７３のＣＤＲ２（配列番号９に示される）はヒトＶＫ由来であってマウスＶＫ由来ではなかった。
【０２７５】
当初の最適化ステップは、Ｈ１２８６  ＶＨドメインの開始ＣＤＲ３（図１において“２７１”と称される；配列番号３０）への修飾を含んだ（図２参照）。２７１  ＣＤＲ３配列は、ｍＡｂ  Ｃ２Ｂ８の重鎖内の可変ドメインのＣＤＲ３の配列と同等である。２７１  ＣＤＲ３への当初の修飾は、
１）“１２３６”最適化ＣＤＲ３（配列番号１）を得るため、開始ＣＤＲ３の９位におけるチロシンからアスパラギン（Ｙ→Ｎ）への置換及び開始ＣＤＲ３の１２位におけるバリンからアスパラギン（Ｖ→Ｎ）への置換；
２）“１２３７”最適化ＣＤＲ３（配列番号２）を得るため、９位及び１２位における、それぞれＹ→Ｎ，Ｖ→Ｎ置換に加え、当初のＣＤＲ３の５位におけるグリシンからアラニン（Ｇ→Ａ）への置換；或いは
３）“１２３８”最適化ＣＤＲ３（配列番号３）を得るため、５位及び９位における、それぞれＧ→Ａ，Ｙ→Ｎ置換に加え、当初のＣＤＲ３の１２位におけるバリンからアスパラギン酸（Ｖ→Ｄ）への置換
を含んだ。
【０２７６】
最適化ＣＤＲ３の個々のコード配列は、配列番号２４（１２３６最適化ＣＤＲ３をコード）、配列番号２５（１２３７最適化ＣＤＲ３をコード）及び配列番号２６（１２３８最適化ＣＤＲ３をコード）に示される。
【０２７７】
次に、以下の最適化ＶＨドメインを得るため、これらの最適化ＣＤＲ３をＨ１２８６の元のヒト化ＶＨドメインフレームワーク内に操作した：配列番号１の１２３６最適化ＣＤＲ３を含むＨ１５６９（配列番号１２）；配列番号２の１２３７最適化ＣＤＲ３を含むＨ１５７０（配列番号１３）；及び配列番号３の１２３８最適化ＣＤＲ３を含むＨ１５７１（配列番号１４）（図３参照）。これらの最適化ＶＨドメインのコード配列は図４に示され、配列番号１９（Ｈ１５６９をコード）、配列番号２０（Ｈ１５７０をコード）及び配列番号２１（Ｈ１５７１をコード）に示される。次に、以下の最適化ヒト化ｍＡｂ：ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８を得るため、これらの最適化ＶＨドメインの各々を元の（Ｌ３７３）ＶＫドメインと対にした（図５参照；配列番号１０；コード配列は配列番号２３に示される）。
【０２７８】
（実施例２：最適化ヒト化マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体の結合及び機能特性）
実施例１で述べた最適化ヒト化ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８を、それぞれの結合及び機能特性について評価した。各アッセイでは、リツキシマブ（ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、カリフォルニア州サンディエゴ）と同一の配列を有するｍＡｂ  ２７１が陽性対照として機能した。
【０２７９】
蛍光微量アッセイ技術（Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｍｉｃｒｏｖｏｌｕｍｅ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ＦＭＡＴ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ８２００  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）と、ＣＤ２０陽性（ＣＤ２０＋）及びＣＤ２０陰性細胞株での染色の平均蛍光強度（Ｍｅａｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ）（ＭＦＩ）を作表するフローサイトメトリーとにより、結合特異性を評価した。ＦＭＡＴ解析では、ＣＤ２０に対する結合特異性を示した（図６Ａ〜６Ｄ）。フローサイトメトリー解析では、これらの最適化ヒト化抗ＣＤ２０  ｍＡｂのＣＤ２０＋  Ｄａｕｄｉ及びＥＢ１細胞への結合を示した（表２）。
【０２８０】
表２  ＣＤ２０膜陽性及び陰性細胞株への結合フローサイトメトリー結果（平均蛍光強度（Ｍｅａｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎｔｎｓｉｔｉｅｓ））
【０２８１】
【表２】
2010505447.tif 000003
ｍＡｂ１２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８により認識されるエピトープを評価するため、細胞及び３μｇ／ｍｌのＣＤ２０特異的マウス２Ｈ７抗体（又はマウスＩＳＯ）をＦＭＡＴプレートに加え、次に、室温で２時間インキュベートした。次に、被験ｍＡｂ（３０ｎｇ／ｍｌ）及び抗ヒトＩｇＦｃ−Ａｌｅｘａ  ６４７を加え、ＦＭＡＴにより蛍光シグナルを検出した。マウス２Ｈ７（ｍ２Ｈ７）によるシグナルの減少はエピトープのブロックを示す。
【０２８２】
図７からわかるように、また、予想通りに、ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８はすべて、ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）と同じエピトープを認識する。
【０２８３】
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を評価した。ＣＤＣでは抗体解離速度アッセイを用いた。この方法では、標的ＣＤ２０＋  Ｄａｕｄｉ細胞を５１Ｃｒ（２００μＣｉ）で２時間ロードし、次に、洗浄した。洗浄したＤａｕｄｉ細胞を、１０μｇ／ｍｌのそれぞれのｍＡｂと共に２５℃で１５分間インキュベートした。次に、標的Ｄａｕｄｉ細胞を完全に洗浄し、３７℃でインキュベートした。３７℃での０，１，２，４及び６時間のインキュベーション後、該細胞を６％ヒト血清（補体源）と共に４５分間インキュベートした。対照は、自然及び最大５１Ｃｒ放出、すべての濃度でのＤａｕｄｉ細胞を伴うｍＡｂ単独及びＤａｕｄｉ細胞を伴う血清単独を含んだ。次に、上清を処理し、放出された５１Ｃｒをガンマカウンターで測定した。ｍＡｂ及び血清単独の溶解への寄与を減じることにより、抗体特異的ＣＤＣを求めた。
【０２８４】
図８からわかるように、ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８は、ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）より有意に優れたＣＤＣ機能活性を有する。
【０２８５】
標的Ｄａｕｄｉ細胞を５１Ｃｒ（２００μＣｉ）で２時間ロードし、次に、洗浄することによりＡＤＣＣ活性を測定した。洗浄したＤａｕｄｉ細胞を、滴定濃度のそれぞれのｍＡｂ及び新鮮な調製ＰＢＭＣ（ＮＫ源）５０：１と共に４時間インキュベートした。対照は、自然及び最大５１Ｃｒ放出、すべての濃度でのＤａｕｄｉ細胞を伴うｍＡｂ単独及びＤａｕｄｉ細胞を伴うＰＢＭＣ単独を含んだ。次に、上清を処理し、放出された５１Ｃｒをガンマカウンターにより測定した。ＰＢＭＣの溶解への寄与を減じることにより、抗体特異的ＡＤＣＣを求めた。
【０２８６】
図９からわかるように、ＡＤＣＣ活性はすべての被験ｍＡｂについて漸増ｍＡｂ濃度に伴って増大した。すべてのｍＡｂ濃度にて、ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８は、対照ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）で認められるＡＤＣＣ活性と同等のＡＤＣＣ活性を有する。
【０２８７】
ＣＤＣ及びＡＤＣＣ独立的な直接アポトーシスアッセイを用いてアポトーシス活性も評価した。この方法では、架橋抗体（５μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）の存在下、Ｒａｍｏｓ細胞（ＮＨＬ）を、１０，２，０．４又は０．０８μｇ／ｍｌのそれぞれのｍＡｂと共に３７℃で１８時間インキュベートした。ｍＡｂ  １１がアイソタイプ対照として機能した。１８時間後に細胞を採取・洗浄し、アネキシン（Ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ−ＡＰＣ及びヨウ化プロピジウム（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  Ｉｏｄｉｄｅ）と共に２５℃で１５分間インキュベートした。アネキシン（Ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ陽性／ＰＩ陰性細胞の存在について、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。
【０２８８】
図１０からわかるように、最適化ヒト化ｍＡｂ  １２３６，１２３７及び１２３８は、ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）と同程度にアポトーシス誘導に効果的である。
【０２８９】
（実施例３：ｍＡｂ  １２３７の更なる最適化）
Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）細胞は、ＮＨＬ（非ホジキンリンパ腫）細胞より低いレベルのＣＤ２０を発現する。試験では、最適化ｍＡｂ  １２３６，ｍＡｂ  １２３７及びｍＡｂ  １２３８がＢ−ＣＬＬ細胞の弱いＣＤＣを示すことが示された。次のステップとして、親和性の向上、従って、Ｂ−ＣＬＬ細胞溶解の向上についてスクリーニングするため、ｍＡｂ  １２３７を選択し、突然変異させた。親和性向上の方法は、ＶＨ及びＶＫドメインにおける特定の位置を無作為化するステップと、Ｌ３７３を伴う変異ＶＨドメインを選択するステップと、Ｈ１５７０を伴う変異ＶＫドメインを選択するステップと、ＶＨ又はＶＫにおける個別の有益な変異を組み合わせるステップと、変異ＶＨドメインと変異ＶＫドメインとを組み合わせるステップとを含んだ。明らかとなった新規変異体を表３に示す。
【０２９０】
表３  明らかとなった新規変異体。ＶＨ及びＶＫドメイン内の残基位置はＫａｂａｔの番号付け方式に準拠している。
【０２９１】
【表３】
2010505447.tif 000004
最適化ｍＡｂ  １５８８は、Ｈ１６３８  ＶＨドメイン（配列番号１５）（これは、配列番号１３に示されるＨ１５７０アミノ酸配列の残基３１に対応する、Ｈ１５７０のＫａｂａｔの番号付け位置３１におけるＳ→Ｆ置換を有するＨ１５７０  ＶＨドメインである）及びＬ３７３  ＶＬドメイン（配列番号１０）を含む。このＳ→Ｆ置換はＨ１６３８  ＶＨドメイン内の最適化ＣＤＲ１を生じさせる（配列番号７参照）。
【０２９２】
最適化ｍＡｂ  １５８９は、Ｈ１６３９  ＶＨドメイン（配列番号１６）（これは、配列番号１３に示されるＨ１５７０アミノ酸配列の残基５７に対応する、Ｈ１５７０のＫａｂａｔの番号付け位置５６におけるＤ→Ａ置換を有するＨ１５７０  ＶＨドメインである）及びＬ３７３  ＶＬドメイン（配列番号１０）を含む。このＤ→Ａ置換はＨ１６３９  ＶＨドメイン内の最適化ＣＤＲ２を生じさせる（配列番号５参照；配列番号２７にコードされる）。
【０２９３】
最適化ｍＡｂ  １５９０は、Ｈ１６４０  ＶＨドメイン（配列番号１７）（これは、配列番号１３に示されるＨ１５７０アミノ酸配列の残基５７に対応する、Ｈ１５７０のＫａｂａｔの番号付け位置５６におけるＤ→Ｌ置換を有するＨ１５７０  ＶＨドメインである）及びＬ３７３  ＶＬドメイン（配列番号１０）を含む。このＤ→Ｌ置換はＨ１６４０  ＶＨドメイン内の最適化ＣＤＲ２を生じさせる（配列番号６参照）。
【０２９４】
最適化ｍＡｂ  １６５２は、Ｈ１６３９  ＶＨドメイン（配列番号１６）及びＬ４１９  ＶＬドメイン（配列番号１１）（これは、配列番号１０に示されるＬ３７３アミノ酸配列の残基９１に対応する、Ｌ３７３のＫａｂａｔの番号付け位置９２におけるＴ→Ｑ置換を有するＬ３７３  ＶＬドメインである）を含む。このＴ→Ｑ置換はＬ４１９  ＶＬドメイン内の最適化ＣＤＲ３を生じさせる（配列番号８参照）。
【０２９５】
最適化ｍＡｂ  １６９２は、Ｈ１６７０  ＶＨドメイン（配列番号１８）（これは、配列番号１３に示されるＨ１５７０アミノ酸配列の残基１０９に対応する、Ｈ１５７０のＫａｂａｔの番号付け位置１０１におけるＮ→Ｇ置換を有するＨ１５７０  ＶＨドメインである）を含む。このＮ→Ｇ置換はＨ１６７０  ＶＨドメイン内の最適化ＣＤＲ３を生じさせる（配列番号４参照）。
【０２９６】
ｍＡｂ  １５８９のＨ１６３９  ＶＨドメイン（配列番号１６）及びＬ３７３  ＶＬドメイン（配列番号１０）のアミノ酸配列を図１１に示し、それぞれのコード配列を図１２に示す。配列番号２２（Ｈ１６３９のコード配列）及び配列番号２３（Ｌ３７３のコード配列）も参照されたい。
【０２９７】
（実施例４：更なる最適化ヒト化マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体の結合及び機能特性）
実施例１の最適化ヒト化ｍＡｂ  １２３７並びに実施例３で述べた更なる最適化ヒト化ｍＡｂ  １５８８，１５８９，１５９０，１６５２及び１６９２を、それぞれの結合及び機能特性について評価した。各アッセイでは、リツキシマブ（ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、カリフォルニア州サンディエゴ）と同一の配列を有するｍＡｂ  ２７１が陽性対照として機能した。
【０２９８】
ＣＤ２０陽性（ＣＤ２０＋）及びＣＤ２０陰性細胞株での染色の平均蛍光強度（Ｍｅａｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ）（ＭＦＩ）を作表するフローサイトメトリーにより、結合特異性を評価した。フローサイトメトリー解析では、表４からわかるように、これらの最適化ヒト化抗ＣＤ２０  ｍＡｂのＣＤ２０への結合を示した。
【０２９９】
表４  ＣＤ２０膜陽性及び陰性細胞株への結合フローサイトメトリー結果（平均蛍光強度（Ｍｅａｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ））
【０３００】
【表４】
2010505447.tif 000005
結合をブロックするｍＡｂ  ２Ｈ７の能力を検討することにより、エピトープの保存を評価した。この方法では、マウス２Ｈ７（又は対照としてのアイソタイプＩｇ）をＥＢ１細胞に加え、次に、候補ヒトｍＡｂ及び抗ヒトＩｇ  Ａｌｅｘａ  ６４７を加えた。ＦＭＡＴにより結合を検出した。シグナルの減少はブロック及び一般的なエピトープの使用を示す。
【０３０１】
図１３からわかるように、すべての被験抗体は同一或いはオーバーラップエピトープを認識した。
【０３０２】
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を評価した。ＣＤＣでは複数のアッセイを用いた。最初の放射アッセイは５１Ｃｒ（２００μＣｉ）による２時間の標的細胞のロードを含んだ。洗浄した標的細胞（Ｄａｕｄｉ（ＮＨＬ）及びＢ−ＣＬＬ株）を、滴定濃度のｍＡｂ及びヒト血清（補体源）で４時間インキュベートした。対照は、自然及び最大５１Ｃｒ放出、すべての濃度での細胞を伴うｍＡｂ単独及び細胞を伴う血清単独を含んだ。上清を処理し、放出された５１Ｃｒをガンマカウンターにより測定した。ｍＡｂ及び血清単独の溶解への寄与を減じることにより、抗体特異的ＣＤＣを求めた。Ｄａｕｄｉ及び２つのＢ−ＣＬＬ細胞株での結果を、それぞれ図１４、図１５Ａ・１５Ｂに示す。Ｄａｕｄｉ細胞では、最適化ｍＡｂは、概して、特に低い濃度にてｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）より強いＣＤＣ機能を媒介した。Ｂ−ＣＬＬ細胞では、最適化ｍＡｂはｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）を上回るＣＤＣ機能の増大を示した。
【０３０３】
また、抗体解離速度アッセイを用いてＣＤＣ機能を評価した。この方法では、標的ＣＤ２０＋  Ｄａｕｄｉ細胞を５１Ｃｒ（２００μＣｉ）で２時間ロードし、次に、洗浄した。洗浄したＤａｕｄｉ細胞を、１０μｇ／ｍｌのそれぞれのｍＡｂと共に２５℃で１５分間インキュベートした。次に、標的Ｄａｕｄｉ細胞を完全に洗浄し、３７℃での０，１，２，４及び６時間のインキュベーション後、６％ヒト血清（補体源）と共に４５’間インキュベートした。対照は、自然及び最大５１Ｃｒ放出、すべての濃度でのＤａｕｄｉ細胞を伴うｍＡｂ単独及びＤａｕｄｉ細胞を伴う血清単独を含んだ。次に、上清を処理し、放出された５１Ｃｒをガンマカウンターにより測定した。ｍＡｂ及び血清単独の溶解への寄与を減じることにより、抗体特異的ＣＤＣを求めた。
【０３０４】
図１６からわかるように、すべての最適化ｍＡｂはｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）より有意に優れたＣＤＣ機能活性を有する。
【０３０５】
また、非放射性（Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（商標））ＣＤＣアッセイを用いてＣＤＣ機能を評価した。この方法では、標的細胞（各２つのＮＨＬ，Ｂ−ＣＬＬ及び正常Ｂ細胞株）を滴定濃度のｍＡｂ及びヒト血清（補体源）で洗浄した。対照は、ヒト血清を含まない標的細胞及び抗体（自然細胞死）、抗体を含まない標的細胞及び血清（バックグラウンド溶解）並びに抗体及び血清を取り換えた１０％ＳＤＳ（又は水中５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００）を用いた標的細胞のウェル（最大細胞死のため）を含んだ。２時間後にＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅを各ウェルに加え、一晩のインキュベーション後、蛍光を読み取った。このアッセイでは、蛍光が多いほど、より多くの生細胞及びＣＤＣによるより少ない細胞傷害を示す。
【０３０６】
ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）は増殖細胞における代謝活性に反応して蛍光を発する酸化・還元指標である。ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）は、共に細胞の代謝変化を検出することができるという点でテトラゾリウム塩（ＭＴＴ）に類似するが、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）はＭＴＴより毒性が低く、感度が高い。ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）の使用と５１Ｃｒ放出アッセイとを比較して細胞媒介性細胞傷害の測定にて得られた結果は、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）法が５１Ｃｒ放出測定と同程度に特異的であることを示す。その結果を図１７Ａ（Ｄａｕｄｉ  ＮＨＬ細胞株）及び１７Ｂ（ＷＩＬ２−Ｓ  ＮＨＬ細胞株）、図１８Ａ（ＥＨＥＢ  Ｂ−ＣＬＬ細胞株）及び１８Ｂ（Ｍｅｃ−１  Ｂ−ＣＬＬ細胞株）並びに図１９Ａ（ＳＳ  ＢＬＣＬ「正常」Ｂ細胞）及び１９Ｂ（Ｍｅｌ  Ｋ  ＢＬＣＬ「正常」Ｂ細胞）に示す。
【０３０７】
放射アッセイは４時間のアッセイであるが、非放射性アッセイは１８〜２０時間のアッセイである。通常、最適化ｍＡｂ候補は非放射性アッセイにて対照と比べて強い溶解を示した。薬剤がｉｎ  ｖｉｖｏ環境にて４時間を超える長時間、高濃度にて存在しうるため、非放射性アッセイはｉｎ  ｖｉｖｏ環境により類似した状況を示しうる。
【０３０８】
その結果を概略すると、最適化ｍＡｂのＣＤＣ活性はＤａｕｄｉ  ＮＨＬ細胞においてｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）と少なくとも同等である。最適化ｍＡｂは解離速度ＣＤＣアッセイにおいてｍＡｂ  ２７１より優れている。より低い解離速度は、最適化ｍＡｂの親和性がｍＡｂ  ２７１の親和性より高いということを示す。最後に、最適化ｍＡｂはＢ−ＣＬＬ細胞株及び正常Ｂ細胞標的を溶解する点でｍＡｂ  ２７１より優れている。
【０３０９】
標的細胞（Ｄａｕｄｉ及びＢ−ＣＬＬ）を５１Ｃｒ（２００μＣｉ）で２時間ロードし、次に、洗浄することによりＡＤＣＣ活性を測定した。洗浄した標的細胞を、滴定濃度のそれぞれのｍＡｂ及び新鮮な調製ＰＢＭＣ（ＮＫ源）５０：１と共に４時間インキュベートした。対照は、自然及び最大５１Ｃｒ放出、すべての濃度での標的細胞を伴うｍＡｂ単独及び標的細胞を伴うＰＢＭＣ単独を含んだ。次に、上清を処理し、放出された５１Ｃｒをガンマカウンターにより測定した。ＰＢＭＣの溶解への寄与を減じることにより、抗体特異的ＡＤＣＣを求めた。
【０３１０】
図２０（Ｄａｕｄｉ  ＮＨＬ細胞）及び図２１（ＭＥＣ−１  Ｂ−ＣＬＬ細胞）からわかるように、ＡＤＣＣ活性はすべての被験ｍＡｂについて漸増ｍＡｂ濃度に伴って増大した。最適化ｍＡｂは対照ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）で認められるＡＤＣＣ活性と同様のＡＤＣＣ活性を有していた。
【０３１１】
ＣＤＣ及びＡＤＣＣ独立的な直接アポトーシスアッセイを用いてアポトーシス活性も評価した。この方法では、架橋抗体（５μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）の存在下、Ｒａｍｏｓ細胞（ＮＨＬ）を、２，０．４又は０．０８μｇ／ｍｌのそれぞれの最適化ｍＡｂ又は対照ｍＡｂ  ２７１と共に３７℃で１８時間インキュベートした。１８時間後に細胞を採取・洗浄し、アネキシン（Ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ−ＡＰＣ及びヨウ化プロピジウム（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  Ｉｏｄｉｄｅ）と共に２５℃で１５分間インキュベートした。アネキシン（Ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ陽性／ＰＩ陰性細胞の存在について、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。
【０３１２】
図２２からわかるように、最適化ｍＡｂはｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）と同程度にアポトーシス誘導に効果的である。
【０３１３】
全血アッセイを用いて細胞殺滅活性も評価した。そのプロトコルはＣＤＣ又はＡＤＣＣアッセイと同様である。但し、血清（ＣＤＣ）又は精製ＰＢＭＣ（ＡＤＣＣ）の代わりに全血を使用する。このアッセイでは、標的細胞の溶解は、ＣＤＣ，ＡＤＣＣ及びアポトーシスの累積活性によるものである。
【０３１４】
この全血アッセイの結果を、図２３（Ｄａｕｄｉ  ＮＨＬ細胞）、図２４Ａ（ＥＨＥＢ  Ｂ−ＣＬＬ細胞）及び２４Ｂ（ＭＥＣ−１  Ｂ−ＣＬＬ細胞）並びに図２５（Ｍｅｌ  Ｋ「正常」Ｂ細胞）に示す。これらの図からわかるように、最適化ｍＡｂは、これらのそれぞれの標的細胞に対する、ｍＡｂ  ２７１（リツキシマブ配列抗体）と同等以上の溶解を有する。
【０３１５】
（実施例５：最適化ヒト化マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体１５８９の投与は、Ｄａｕｄｉ細胞異種移植マウスモデルにおける生存を延長させる）
Ｄａｕｄｉ  ＮＨＬ細胞は、ＳＣＩＤマウスにおいて全身に増殖するヒトＢ細胞リンパ腫細胞株である。Ｄａｕｄｉ細胞の増殖はマウスにおいて麻痺をもたらす（Ｇｈｅｔｉｅら（１９９０）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４５：４８１−４８５）。本発明の抗ＣＤ２０抗体が、Ｄａｕｄｉ細胞異種移植片を有するマウスの生存をもたらすかを判定するため、試験を行った。
【０３１６】
無菌条件下にてＳＣＩＤマウスを育種し、維持した。三群の五頭のＳＣＩＤマウス（総計１５頭）の尾静脈にＤａｕｄｉ  ＮＨＬ細胞（８×１０６個）を静注した。腫瘍注入後第７及び９日目に同じ経路によりＰＢＳ、ヒトＩｇＧ１  ５０μｇ又はｍＡｂ  １５８９  ５０μｇをマウスに注入した。週３回マウスを観察し、後肢麻痺の最初の徴候時に殺処分した。図２６に示すように、モノクローナル抗体１５８９は、ヒトＤａｕｄｉ細胞異種移植片を有するマウスの生存を延長させた。
【０３１７】
（実施例６：配列及び抗体設計の概要）
種々の最適化ＣＤＲｓ、これらの最適化ＣＤＲｓを含む可変重鎖及び軽鎖ドメイン、これらの要素のコード配列並びに元のヒト化抗ＣＤ２０抗体の可変重鎖ドメインに対する配列識別子を以下に概略する。下記の表５は抗ＣＤ２０抗体設計の概略を示す。
配列識別子：
１．Ｈ１５６９のＣＤＲ３−ａ．ａ．
２．Ｈ１５７０のＣＤＲ３−ａ．ａ．
３．Ｈ１５７１のＣＤＲ３−ａ．ａ．
４．Ｈ１６７０のＣＤＲ３−ａ．ａ．
５．Ｈ１６３９のＣＤＲ２−ａ．ａ．
６．Ｈ１６４０のＣＤＲ２−ａ．ａ．
７．Ｈ１６３８のＣＤＲ１−ａ．ａ．
８．Ｌ４１９のＣＤＲ３−ａ．ａ．
９．Ｌ３７３のＣＤＲ２−ａ．ａ．
１０．Ｌ３７３−ａ．ａ．
１１．Ｌ４１９−ａ．ａ．
１２．Ｈ１５６９−ａ．ａ．
１３．Ｈ１５７０−ａ．ａ．
１４．Ｈ１５７１−ａ．ａ．
１５．Ｈ１６３８−ａ．ａ．
１６．Ｈ１６３９−ａ．ａ．
１７．Ｈ１６４０−ａ．ａ．
１８．Ｈ１６７０−ａ．ａ．
１９．Ｈ１５６９−ｎｔ  ｓｅｑ
２０．Ｈ１５７０−ｎｔ  ｓｅｑ
２１．Ｈ１５７１−ｎｔ  ｓｅｑ
２２．Ｈ１６３９−ｎｔ  ｓｅｑ
２３．Ｌ３７３−ｎｔ  ｓｅｑ
２４．Ｈ１５６９のＣＤＲ３−ｎｔ  ｓｅｑ
２５．Ｈ１５７０のＣＤＲ３−ｎｔ  ｓｅｑ
２６．Ｈ１５７１のＣＤＲ３−ｎｔ  ｓｅｑ
２７．Ｈ１６３９のＣＤＲ２−ｎｔ  ｓｅｑ
２８．Ｌ３７３のＣＤＲ２−ｎｔ  ｓｅｑ
２９．Ｈ１２８６−ａ．ａ．
３０．Ｈ１２８６のＣＤＲ３−ａ．ａ．  。
【０３１８】
表５  抗体設計
【０３１９】
【表５】
2010505447.tif 000006
本明細書で示した本発明の多くの改変及び他の実施形態を、前述の記述及び関連図面において提示される教示の利益を有する、これらの発明が属する技術分野における当業者は考えつくであろう。従って、本発明は、開示した特定の実施形態に限定されるものではなく、また、改変及び他の実施形態は、添付した特許請求の範囲及び本明細書で開示した実施形態の一覧内に含まれるものと理解すべきである。本明細書で特定の用語を用いているが、これらは一般的且つ説明的な意味合いのみで用いられ、限定することを目的とするものではない。
【０３２０】
本明細書で挙げた文献及び特許出願はすべて、本発明が属する技術分野における当業者の水準を示すものである。本明細書における文献及び特許出願はすべて、個々の文献又は特許出願があたかも具体的且つ個別的に参照して組み込まれるように指示されているようなほどに、参照して本明細書に組み込まれる。
【図１】
2010505447.tif 000007
【図２】
2010505447.tif 000008
【図３】
2010505447.tif 000009
【図４】
2010505447.tif 000010
【図５】
2010505447.tif 000011
【図６】
2010505447.tif 000012
【図７】
2010505447.tif 000013
【図８】
2010505447.tif 000014
【図９】
2010505447.tif 000015
【図１０】
2010505447.tif 000016
【図１１】
2010505447.tif 000017
【図１２】
2010505447.tif 000018
【図１３】
2010505447.tif 000019
【図１４】
2010505447.tif 000020
【図１５】
2010505447.tif 000021
【図１６】
2010505447.tif 000022
【図１７】
2010505447.tif 000023
【図１８】
2010505447.tif 000024
【図１９】
2010505447.tif 000025
【図２０】
2010505447.tif 000026
【図２１】
2010505447.tif 000027
【図２２】
2010505447.tif 000028
【図２３】
2010505447.tif 000029
【図２４】
2010505447.tif 000030
【図２５】
2010505447.tif 000031
【図２６】
2010505447.tif 000032
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年9月24日(2009.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明の方法を用いた処置を検討される特定の自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ、クローン病、乾癬、自己免疫性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、重症筋無力症及び尋常性天疱瘡を含む。そのような抗体は、自己免疫反応を抑制することによって臓器及び組織移植片の拒絶反応を予防し、Ｂリンパ球を標的にして死滅させることによってリンパ腫を処置し、毒素をＣＤ２０保有細胞へ特異的に送達することにも用いられうる。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該ＣＤＲ領域が配列番号１〜８からなる群より選択される、ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリン。
（項目２）
上記免疫グロブリンが、配列番号１〜７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖を含む、項目１に記載の免疫グロブリン。
（項目３）
上記免疫グロブリンが、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を含む、項目１に記載の免疫グロブリン。
（項目４）
上記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、項目１から３のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
（項目５）
上記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、項目４に記載の免疫グロブリン。
（項目６）
上記免疫グロブリンが、上記重鎖の可変ドメイン内及び上記軽鎖の可変ドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、項目５に記載の免疫グロブリン。
（項目７）
上記免疫グロブリンが、上記重鎖の可変ドメイン内及び上記軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、項目５に記載の免疫グロブリン。
（項目８）
上記免疫グロブリンが、リツキシマブと比較して増大した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す、項目１に記載の免疫グロブリン。
（項目９）
上記免疫グロブリンが、配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含む、項目１に記載の免疫グロブリン。
（項目１０）
上記免疫グロブリンが、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含む、項目１に記載の免疫グロブリン。
（項目１１）
上記免疫グロブリンが、配列番号１２〜１８に示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖並びに配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１に記載の免疫グロブリン。
（項目１２）
上記重鎖が配列番号１２に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１３）
上記重鎖が配列番号１３に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１４）
上記重鎖が配列番号１４に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１５）
上記重鎖が配列番号１５に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１６）
上記重鎖が配列番号１６に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１７）
上記重鎖が配列番号１７に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１８）
上記重鎖が配列番号１８に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目１９）
上記重鎖が配列番号１３に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１１に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目２０）
上記重鎖が配列番号１６に示される配列を含み、上記軽鎖が配列番号１１に示される配列を含む、項目１１に記載の免疫グロブリン。
（項目２１）
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、
ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１と、
ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、
ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２と、
ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と
からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
免疫グロブリン。
（項目２２）
上記免疫グロブリンが、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と、
ｃ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を含む、項目２１に記載の免疫グロブリン。
（項目２３）
上記軽鎖の可変ドメインが、配列番号９に示されるＣＤＲ２及び配列番号８に示されるＣＤＲ３を含む、項目２２に記載の免疫グロブリン。
（項目２４）
ＣＤ２０に特異的に結合し、免疫グロブリン軽鎖を含む免疫グロブリンであって、該免疫グロブリン軽鎖が、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と
からなる群より選択される相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を有する可変ドメインを含む免疫グロブリン。
（項目２５）
上記軽鎖の可変ドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む、項目２４に記載の免疫グロブリン。
（項目２６）
上記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、項目２１から２５のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
（項目２７）
上記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、項目２６に記載の免疫グロブリン。
（項目２８）
上記免疫グロブリンが、上記重鎖の可変ドメイン内及び上記軽鎖の可変ドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、項目２７に記載の免疫グロブリン。
（項目２９）
上記免疫グロブリンが、上記重鎖の可変ドメイン内及び上記軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、項目２７に記載の免疫グロブリン。
（項目３０）
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、
ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基、
ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、
ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと
からなる群より選択される、免疫グロブリン。
（項目３１）
上記免疫グロブリンが可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択される、項目３０に記載の免疫グロブリン。
（項目３２）
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、配列番号１２〜１８に示される配列からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド配列を含み、該免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、免疫グロブリン。
（項目３３）
上記ＶＬドメインが、配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含む、項目３２に記載の免疫グロブリン。
（項目３４）
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＬドメインが、配列番号１１に示される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド配列を含み、該免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、免疫グロブリン。
（項目３５）
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、該ＶＬドメインが、配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、免疫グロブリン。
（項目３６）
融合した異種ポリペプチドを更に含む、項目１から３５及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
（項目３７）
上記免疫グロブリンが、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、蛋白質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節物質、医薬品又はＰＥＧからなる群より選択される作用物質にコンジュゲートした、項目１から３５及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
（項目３８）
項目１から３７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン及び担体を含む組成物。
（項目３９）
免疫グロブリン重鎖の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、
ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１と、
ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、
ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２と、
ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と
からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該ＶＨドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
（項目４０）
免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と
からなる群より選択される相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、該ＶＬドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
（項目４１）
上記ＶＬドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む、項目４０に記載の単離ポリヌクレオチド。
（項目４２）
免疫グロブリン重鎖の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、
ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基、
ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、
ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと
からなる群より選択され、該ＶＨドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
（項目４３）
上記ＶＨドメインが、配列番号１９〜２２からなる群より選択される配列を含む核酸にコードされる、項目４２に記載の単離ポリヌクレオチド。
（項目４４）
免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択され、該ＶＬドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
（項目４５）
項目３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む組成物。
（項目４６）
項目３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目４７）
上記ポリヌクレオチドがプロモーターと作動可能に結合している、項目４６に記載のベクター。
（項目４８）
項目３９，４２及び４３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドと、免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含むベクター。
（項目４９）
上記ＶＬドメインが、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、項目４８に記載のベクター。
（項目５０）
上記ＶＬドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む、項目４９に記載のベクター。
（項目５１）
上記ＶＨドメインをコードする上記ポリヌクレオチドと、上記ＶＬドメインをコードする上記ポリヌクレオチドとが、インフレームに融合され、作動可能に結合している単一プロモーターから同時転写され、単鎖抗体又はその抗原結合性断片に同時翻訳される、項目４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
（項目５２）
上記ＶＨドメインをコードする上記ポリヌクレオチドと、上記ＶＬドメインをコードする上記ポリヌクレオチドとが、作動可能に結合している単一プロモーターから同時転写されるが、別個に翻訳される、項目４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
（項目５３）
上記ＶＨドメインをコードする上記ポリヌクレオチドと、上記ＶＬドメインをコードする上記ポリヌクレオチドとの間に配置されたＩＲＥＳ配列を更に含む、項目５２に記載のベクター。
（項目５４）
上記ＶＨドメインをコードする上記ポリヌクレオチドと、上記ＶＬドメインをコードする上記ポリヌクレオチドとが別個に転写され、各々が別個のプロモーターと作動可能に結合している、項目４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
（項目５５）
上記別個のプロモーターが同じプロモーターのコピーである、項目５４に記載のベクター。
（項目５６）
上記別個のプロモーターが同一でない、項目５４に記載のベクター。
（項目５７）
項目４６から５６のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
（項目５８）
項目１に記載の免疫グロブリンを含む組成物。
（項目５９）
項目３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
（項目６０）
項目４６から５６のいずれか一項に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目６１）
ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリンを作製する方法であって、項目５９又は６０に記載の宿主細胞を培養するステップと、該免疫グロブリンを回収するステップとを含む方法。
（項目６２）
項目６１に記載の方法により作製される免疫グロブリン。
（項目６３）
上記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、項目６２に記載の免疫グロブリン。
（項目６４）
上記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、項目６３に記載の免疫グロブリン。
（項目６５）
上記免疫グロブリンが、上記重鎖のＶＨドメイン内及び上記軽鎖のＶＬドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、項目６４に記載の免疫グロブリン。
（項目６６）
上記免疫グロブリンが、上記重鎖のＶＨドメイン内及び上記軽鎖のＶＬドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、項目６４に記載の免疫グロブリン。
（項目６７）
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示されるＣＤＲ２を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択される、免疫グロブリン。
（項目６８）
対象におけるＣＤ２０発現細胞と関連する癌を処置する方法であって、項目１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む有効量の組成物を該対象に投与するステップを含む、方法。
（項目６９）
上記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病及びホジキン病からなる群より選択される、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
正常ヒトＢ細胞の増殖又は分化を阻害する方法であって、該Ｂ細胞を有効量の項目１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンに接触させるステップを含む、方法。
（項目７１）
Ｂ細胞系統の癌細胞の増殖を阻害する方法であって、該癌細胞を有効量の項目１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンに接触させるステップを含む、方法。
（項目７２）
上記癌細胞が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病及びホジキン病からなる群より選択される癌に由来する、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
対象におけるＣＤ２０発現細胞と関連する自己免疫疾患又は炎症性疾患を処置する方法であって、該対象に有効量の項目１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを投与するステップを含む、方法。
（項目７４）
上記自己免疫疾患又は炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状紅斑、ループス腎炎、サルコイドーシス、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、臓器若しくは組織移植の拒絶反応、移植片対宿主病、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸疾患）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎及び皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓溶解、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、サルコイドーシス、１型及び２型糖尿病、１型・２型・３型及び４型遅延型過敏症、アレルギー又はアレルギー性疾患、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性及び刺激性接触皮膚炎、蕁麻疹（ｕｒｔｅｃａｒｉａ）、ＩｇＥ媒介性アレルギー、アテローム性動脈硬化症、血管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病並びに慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシーからなる群より選択される、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
項目１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該ＣＤＲ領域が配列番号１〜８からなる群より選択される、ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリン。
【請求項２】
前記免疫グロブリンが、配列番号１〜７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項３】
前記免疫グロブリンが、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項４】
前記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、請求項１から３のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項５】
前記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、請求項４に記載の免疫グロブリン。
【請求項６】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、請求項５に記載の免疫グロブリン。
【請求項７】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、請求項５に記載の免疫グロブリン。
【請求項８】
前記免疫グロブリンが、リツキシマブと比較して増大した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項９】
前記免疫グロブリンが、配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンが、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１１】
前記免疫グロブリンが、配列番号１２〜１８に示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖並びに配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１２】
前記重鎖が配列番号１２に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１３】
前記重鎖が配列番号１３に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１４】
前記重鎖が配列番号１４に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１５】
前記重鎖が配列番号１５に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１６】
前記重鎖が配列番号１６に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１７】
前記重鎖が配列番号１７に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１８】
前記重鎖が配列番号１８に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１０に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項１９】
前記重鎖が配列番号１３に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１１に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項２０】
前記重鎖が配列番号１６に示される配列を含み、前記軽鎖が配列番号１１に示される配列を含む、請求項１１に記載の免疫グロブリン。
【請求項２１】
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、
ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１と、
ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、
ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２と、
ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と
からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、
免疫グロブリン。
【請求項２２】
前記免疫グロブリンが、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と、
ｃ）配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを有する可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項２１に記載の免疫グロブリン。
【請求項２３】
前記軽鎖の可変ドメインが、配列番号９に示されるＣＤＲ２及び配列番号８に示されるＣＤＲ３を含む、請求項２２に記載の免疫グロブリン。
【請求項２４】
ＣＤ２０に特異的に結合し、免疫グロブリン軽鎖を含む免疫グロブリンであって、該免疫グロブリン軽鎖が、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と
からなる群より選択される相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を有する可変ドメインを含む免疫グロブリン。
【請求項２５】
前記軽鎖の可変ドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む、請求項２４に記載の免疫グロブリン。
【請求項２６】
前記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項２７】
前記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、請求項２６に記載の免疫グロブリン。
【請求項２８】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、請求項２７に記載の免疫グロブリン。
【請求項２９】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖の可変ドメイン内及び前記軽鎖の可変ドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、請求項２７に記載の免疫グロブリン。
【請求項３０】
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、
ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基、
ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、
ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと
からなる群より選択される、免疫グロブリン。
【請求項３１】
前記免疫グロブリンが可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択される、請求項３０に記載の免疫グロブリン。
【請求項３２】
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、配列番号１２〜１８に示される配列からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド配列を含み、該免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、免疫グロブリン。
【請求項３３】
前記ＶＬドメインが、配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含む、請求項３２に記載の免疫グロブリン。
【請求項３４】
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＬドメインが、配列番号１１に示される配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド配列を含み、該免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、免疫グロブリン。
【請求項３５】
可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＨドメインが、配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、該ＶＬドメインが、配列番号１０又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、免疫グロブリン。
【請求項３６】
融合した異種ポリペプチドを更に含む、請求項１から３５及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項３７】
前記免疫グロブリンが、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、蛋白質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答調節物質、医薬品又はＰＥＧからなる群より選択される作用物質にコンジュゲートした、請求項１から３５及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン。
【請求項３８】
請求項１から３７のいずれか一項に記載の免疫グロブリン及び担体を含む組成物。
【請求項３９】
免疫グロブリン重鎖の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、
ｂ）配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１であって、配列番号７の残基７に対応する位置においてフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基を含むＣＤＲ１と、
ｃ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、
ｄ）配列番号５又は配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２であって、配列番号５又は配列番号６の残基８に対応する位置においてそれぞれアラニン（Ａｌａ）又はロイシン（Ｌｅｕ）残基を含むＣＤＲ２と、
ｅ）配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｆ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号１の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｇ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号２の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号２の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号２の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｈ）配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号３の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号３の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号３の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と、
ｉ）配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、該ＣＤＲ３は、
ｉ）配列番号４の残基５に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号４の残基９に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号４の残基１１に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号４の残基１２に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＣＤＲ３と
からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該ＶＨドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４０】
免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、
ｂ）配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３であって、配列番号８の残基４に対応する位置においてグルタミン（Ｇｌｎ）残基を含むＣＤＲ３と
からなる群より選択される相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、該ＶＬドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４１】
前記ＶＬドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を含む、請求項４０に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項４２】
免疫グロブリン重鎖の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＨドメインが、
ａ）配列番号１２〜１８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、
ｂ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１２の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉ）配列番号１２の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｃ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、ｉ）配列番号１３の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１３の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１３の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｄ）配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１４の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１４の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｉｉ）配列番号１４の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｅ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１５の残基３１に対応する位置におけるフェニルアラニン（Ｐｈｅ）残基、
ｉｉ）配列番号１５の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１５の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１５の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｆ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１６の残基５７に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１６の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１６の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１６の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｇ）配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１７の残基５７に対応する位置におけるロイシン（Ｌｅｕ）残基、
ｉｉ）配列番号１７の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１７の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基及び
ｉｖ）配列番号１７の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと、
ｈ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該ＶＨドメインは、
ｉ）配列番号１８の残基１０３に対応する位置におけるアラニン（Ａｌａ）残基、
ｉｉ）配列番号１８の残基１０７に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基、
ｉｉｉ）配列番号１８の残基１０９に対応する位置におけるグリシン（Ｇｌｙ）残基及び
ｉｖ）配列番号１８の残基１１０に対応する位置におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基からなる群より選択される少なくとも１つの残基を含む、ＶＨドメインと
からなる群より選択され、該ＶＨドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４３】
前記ＶＨドメインが、配列番号１９〜２２からなる群より選択される配列を含む核酸にコードされる、請求項４２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項４４】
免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示される相補性決定領域２（ＣＤＲ２）及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択され、該ＶＬドメインを含む免疫グロブリンがＣＤ２０に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４５】
請求項３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項４６】
請求項３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項４７】
前記ポリヌクレオチドがプロモーターと作動可能に結合している、請求項４６に記載のベクター。
【請求項４８】
請求項３９，４２及び４３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドと、免疫グロブリン軽鎖の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含むベクター。
【請求項４９】
前記ＶＬドメインが、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５０】
前記ＶＬドメインが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む、請求項４９に記載のベクター。
【請求項５１】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとが、インフレームに融合され、作動可能に結合している単一プロモーターから同時転写され、単鎖抗体又はその抗原結合性断片に同時翻訳される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５２】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとが、作動可能に結合している単一プロモーターから同時転写されるが、別個に翻訳される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５３】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとの間に配置されたＩＲＥＳ配列を更に含む、請求項５２に記載のベクター。
【請求項５４】
前記ＶＨドメインをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記ＶＬドメインをコードする前記ポリヌクレオチドとが別個に転写され、各々が別個のプロモーターと作動可能に結合している、請求項４８から５０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５５】
前記別個のプロモーターが同じプロモーターのコピーである、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５６】
前記別個のプロモーターが同一でない、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５７】
請求項４６から５６のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
【請求項５８】
請求項１に記載の免疫グロブリンを含む組成物。
【請求項５９】
請求項３９から４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項６０】
請求項４６から５６のいずれか一項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６１】
ＣＤ２０に特異的に結合する免疫グロブリンを作製する方法であって、請求項５９又は６０に記載の宿主細胞を培養するステップと、該免疫グロブリンを回収するステップとを含む方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載の方法により作製される免疫グロブリン。
【請求項６３】
前記免疫グロブリンがＩｇＧ１カッパ免疫グロブリンである、請求項６２に記載の免疫グロブリン。
【請求項６４】
前記免疫グロブリンが、該免疫グロブリンの重鎖内のヒトＩｇＧ１定常領域及び該免疫グロブリンの軽鎖内のヒトカッパ定常領域を含む、請求項６３に記載の免疫グロブリン。
【請求項６５】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖のＶＨドメイン内及び前記軽鎖のＶＬドメイン内に完全或いは部分的ヒトフレームワーク領域を含む、請求項６４に記載の免疫グロブリン。
【請求項６６】
前記免疫グロブリンが、前記重鎖のＶＨドメイン内及び前記軽鎖のＶＬドメイン内にマウスフレームワーク領域を含む、請求項６４に記載の免疫グロブリン。
【請求項６７】
ＣＤ２０に特異的に結合し、可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む免疫グロブリンであって、該ＶＬドメインが、
ａ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列を含むＶＬドメインと、
ｂ）配列番号１０又は配列番号１１に示される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインと、
ｃ）配列番号１０に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、配列番号９に示されるＣＤＲ２を含むＶＬドメインと、
ｄ）配列番号１１に示される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、該ＶＬドメインは、
ｉ）配列番号９に示されるＣＤＲ２及び
ｉｉ）配列番号１１の残基９１に対応する位置におけるグルタミン（Ｇｌｎ）残基の少なくとも１つを含む、ＶＬドメインと
からなる群より選択される、免疫グロブリン。
【請求項６８】
対象におけるＣＤ２０発現細胞と関連する癌を処置するための組成物であって、有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む、組成物。
【請求項６９】
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病及びホジキン病からなる群より選択される、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
正常ヒトＢ細胞の増殖又は分化を阻害するための組成物であって、有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む、組成物。
【請求項７１】
Ｂ細胞系統の癌細胞の増殖を阻害するための組成物であって、有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む、組成物。
【請求項７２】
前記癌細胞が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、中悪性度Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病及びホジキン病からなる群より選択される癌に由来する、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
対象におけるＣＤ２０発現細胞と関連する自己免疫疾患又は炎症性疾患を処置するための組成物であって、有効量の請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む、組成物。
【請求項７４】
前記自己免疫疾患又は炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状紅斑、ループス腎炎、サルコイドーシス、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、痛風性関節炎、臓器若しくは組織移植の拒絶反応、移植片対宿主病、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸疾患、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸疾患）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎及び皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓溶解、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、サルコイドーシス、１型及び２型糖尿病、１型・２型・３型及び４型遅延型過敏症、アレルギー又はアレルギー性疾患、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性及び刺激性接触皮膚炎、蕁麻疹（ｕｒｔｅｃａｒｉａ）、ＩｇＥ媒介性アレルギー、アテローム性動脈硬化症、血管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病並びに慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシーからなる群より選択される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
請求項１から３７及び６７のいずれか一項に記載の免疫グロブリンを含む医薬組成物。
【国際調査報告】
2010505447.tif 000033
2010505447.tif 000034
2010505447.tif 000035
2010505447.tif 000036
2010505447.tif 000037