(57)【要約】  本発明は、新規の窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩、その製造方法およびそれを含む癌治療用薬学組成物に関する。本発明に係る化合物は、活性酸素種によるＤＮＡ損傷を誘導してｃ−ａｂｌおよびｐ５３を活性化させ、ＲｈｏＢを誘導させてアポトーシスを誘発し、ミトコンドリアを経由するシグナルの調節異常により、生存に関連したＢｃｌ２量が下方に調節されて細胞死を起すことにより、腫瘍細胞の成長を抑制し、アポトーシスを誘発させる。よって、本発明に係る組成物は癌疾患治療に有用に利用できる。
2010500341.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
［化学式１］ 
【化１】
2010500341.tif 000029
化学式１において、
Ｒ１はＣ１〜Ｃ３０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ２〜Ｃ-３０のアルケニルであり、
Ｒ２はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキルであり、
Ｒ３はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル；Ｃ２〜Ｃ３０のアルケニル；アリル；またはＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル、Ｃ１〜Ｃ６のアルコキシ、ＯＣＦ３、ニトロおよびハロゲン原子よりなる群から選ばれた一つの基で置換された、あるいは非置換のベンジルであり、
ＡはＣ（＝Ｏ）またはＳ（＝Ｏ）２であり、
Ｘはハロゲン原子であり、
ｎは２または３の整数である。
【請求項２】
前記化学式１の化合物が、
１）４−ドコサノイル−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、
２）１，１−ジメチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
３）１−ベンジル−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
４）１−アリル−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５）１−（４−メトキシ−ベンジル）−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムクロライド、
６）１−エチル−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
７）１−ベンジル−１−エチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８）１−ベンジル−４−デカノイル−１−メチル−１−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９）１−アリル−４−デカノイル−１−メチル−１−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０）１−ベンジル−４−デカノイル−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１）１−アリル−４−デカノイル−１−エチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
１２）４−デカノイル−１−エチル−１−メチルピペラジン−１−イウムヨージド、
１３）１−アリル−１−メチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１４）１−エチル−１−メチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１５）１−ベンジル−１−エチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１６）−１−アリル−１−エチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１７）１−アリル−４−ヘキサデカノイル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１８）４−ヘキサデカノイル−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムクロライド、
１９）４−ヘキサデカノイル−１−メチル−１−ペント−４−エニル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２０）１−ブト−３−エニル−４−ヘキサデカノイル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２１）１−ベンジル−１−エチル−４−ヘキサデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２２）１−アリル−１−エチル−４−ヘキサデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２３）１−エチル−４−ヘキサデカノイル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
２４）１−エチル−４−ヘキサデカノイル−１−ペント−４−エニル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２５）１−ベンジル−１−メチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２６）１−アリル−１−メチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２７）１−エチル−１−メチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
２８）１−ベンジル−１−エチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２９）１−アリル−１−エチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
３０）１−エチル−４−イコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムヨージド、
３１）４−イコサノイル−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、
３２）１−ベンジル−４−イコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３３）１−アリル−４−イコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３４）４−ドコサノイル−１−エチル−１−メチルピペラジン−１−イウムヨージド、
３５）１−ベンジル−４−ドコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３６）１−アリル−４−ドコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３７）１−ベンジル−４−ドコサノイル−１−エチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３８）１−アリル−４−ドコサノイル−１−エチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３９）１，１−ジメチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムヨージド、
４０）１−ベンジル−１−メチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４１）１−アリル−１−メチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４２）１−エチル−１−メチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムヨージド、
４３）１−アリル−１−メチル−４−アンデク−１０−エノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
４４）１−ベンジル−１−メチル−４−アンデク−１０−エノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
４５）１，１−ジメチル−４−アンデク−１０−エノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
４６）１−ベンジル−１−メチル−４−パルミトイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４７）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−パルミトイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４８）１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４９）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５０）１−（４−ブロモベンジル）−１−エチル−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５１）１−エチル−１−（３−フルオロベンジル）−４−テトラデカノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５２）１−エチル−１−（３−メチルベンジル）−４−テトラデカノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５３）４−ドデカノイル−１−エチル−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５４）４−ドデカノイル−１−エチル−１−（３−フルオロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５５）４−ドデカノイル−１−エチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５６）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−テトラデカノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５７）１−エチル−４−オクタデシル−１−（３−（トリフルオロメトキシ)ベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５８）１−エチル−１−（３−メチルベンジル）−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５９）１−エチル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
６０）１−アリル−１−エチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６１）１−アリル−１−メチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６２）１−ベンジル−１−メチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６３）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６４）１−ベンジル−１−エチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６５）１−ベンジル−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６６）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６７）１−アリル−１−エチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６８）１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６９）１−アリル−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７０）１−ベンジル−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７１）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７２）１−アリル−１−エチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７３）１−ベンジル−１−エチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７４）１−アリル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７５）４−（デカン−１−スルホニル）−１，１−ジメチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
７６）１−ベンジル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７７）１−アリル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７８）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
７９）１−ベンジル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８０）１−アリル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８１）１−ベンジル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８２）１−アリル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８３）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
８４）１−ベンジル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８５）１−アリル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８６）４−（デカン−１−スルホニル）−１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８７）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８８）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８９）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−（ノニルスルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９０）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（４−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９１）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９２）１，１−ジエチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９３）１−エチル−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９４）１，１−ジエチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９５）１−エチル−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９６）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９７）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９８）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９９）１−エチル−１−メチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
１００）１−ベンジル−１−エチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０１）１−アリル−１−エチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０２）１，１−ジメチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
１０３）１−ベンジル−１−メチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０４）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０５）４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０６）４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０７）４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（４−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０８）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０９）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（４−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１０）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１１）１−ベンジル−１−エチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１２）１−アリル−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１３）１−ベンジル−１−エチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１４）１−（４−ｔ−ブチルベンジル）−１−エチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１５）１−ベンジル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１６）１−エチル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１１７）４−ドデカノイル−１，１−ジメチル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１１８）１−アリル−４−ドデカノイル−１−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１１９）４−ドデカノイル−１−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イウムクロライド、
１２０）１−アリル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２１）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２２）４−ヘキサデカノイル−１，１−ジメチル−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１２３）１，１−ジメチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１２４）１−ベンジル−１−メチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２５）１−ベンジル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２６）４−ヘキサデシル−１−メチル−１−（３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２７）１−アリル−１−メチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２８）１−メチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２９）１，１−ジメチル−４−ステアロイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１３０）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−ステアロイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３１）１−アリル−１−メチル−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３２）１−メチル−１−（３−メチルベンジル）−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３３）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３４）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３５）１−メチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイドよりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
１）化学式２の有機酸化合物を有機溶媒中で塩化チオニルと反応させた後、アルキルピペラジン誘導体と反応させて化学式３の化合物を製造する段階と、
２）前記１）段階で製造された化学式３の化合物をハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−１の化合物を製造する段階とを含んでなる、下記反応式１で表される請求項１の化合物の製造方法：
［反応式１］
【化２】
2010500341.tif 000030
反応式１において、Ｒ２はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキルであり、
Ｒ-３はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル；Ｃ２〜Ｃ３０のアルケニル；アリル；またはＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル、Ｃ１〜Ｃ６のアルコキシ、ＯＣＦ３、ニトロおよびハロゲン原子よりなる群から選ばれたいずれか一つの基で置換された、あるいは非置換のベンジルであり、
Ｘはハロゲン原子であり、
ｍは１〜３０の整数である。
【請求項４】
１）化学式４のスルホン酸化合物を有機溶媒中で塩化オキサリルと反応させた後、アルキルピペラジン誘導体と反応させて化学式５の化合物を製造する段階と、
２）前記１）段階で製造された化学式５の化合物をハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−２の化合物を製造する段階とを含んでなる、下記反応式２で表される請求項１の化合物の製造方法：
［反応式２］
【化３】
2010500341.tif 000031
反応式２において、
Ｒ２はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキルであり、
Ｒ-３はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル；Ｃ２〜Ｃ３０のアルケニル；アリル；またはＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル、Ｃ１〜Ｃ６のアルコキシ、ＯＣＦ３、ニトロおよびハロゲン原子よりなる群から選ばれたいずれか一つの基で置換された、または非置換のベンジルであり、
Ｘはハロゲン原子であり、
ｍは１〜３０の整数である。
【請求項５】
１）化学式２の有機酸化合物を有機溶媒中でアルキルジアゼパン誘導体と反応させて化学式６の化合物を製造する段階と、
２）前記１）段階で製造された化学式６の化合物をハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−３の化合物を製造する段階とを含んでなる、下記反応式３で表される請求項１の化合物の製造方法：
［反応式３］
【化４】
2010500341.tif 000032
反応式３において、 
Ｒ２はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキルであり、
Ｒ-３はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル；Ｃ２〜Ｃ３０のアルケニル；アリル；またはＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル、Ｃ１〜Ｃ６のアルコキシ、ＯＣＦ３、ニトロおよびハロゲン原子よりなる群から選ばれたいずれか一つの基で置換された、あるいは非置換のベンジルであり、
Ｘはハロゲン原子であり、
ｍは１〜３０の整数である。
【請求項６】
請求項１の窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分とする、癌治療用薬学組成物。
【請求項７】
前記癌が、肺癌、非小細胞肺癌、結腸癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部癌、皮膚または眼球内黒色腫、子宮癌、卵素癌、直腸癌、胃癌、肛門癌、結腸癌、乳癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性または急性白血病、リンパ球リンパ腫、膀胱癌、腎臓または輸尿管癌、腎臓細胞癌腫、腎臓骨盤癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ；central nervous system）腫瘍、１次中枢神経系リンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、および下垂体腺腫よりなる群から選ばれる１種であることを特徴とする、請求項６に記載の癌治療用薬学組成物。
【請求項８】
前記癌が前立腺癌、乳癌、または胃癌であることを特徴とする、請求項７に記載の癌治療用薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩、その製造方法およびそれを含む癌治療用薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌とは、「制御されない細胞成長」に特定付けられ、このような非正常的な細胞成長によって、腫瘍といわれる細胞塊が形成されて周囲の組織に浸透し、激しい場合には身体の他の器官に転移されることもある。癌は、学問的には新生物(neoplasia)とも呼ばれる。
癌は、手術、放射線および化学療法によって治療を行っても多くは根本的な治癒にならず、患者に苦痛を与えるうえ、究極的には死に至らせる難治性慢性疾患である。全世界的に癌に苦しめられる患者は２０００万名を超えるし、毎年６００万名以上が癌で死亡しており、２０２０年頃には１，１００万名が癌で死亡すると予測される。よって、癌はその治療法を至急探し出すべき重要疾患である。癌は、国によって異なるが、先進国または韓国の場合には全体死亡原因の２０％以上を占める。ところが、多くの努力にも拘らず、癌発生の正確な原因またはメカニズムは未だ解明されていない。癌の発生要因は、いろいろがあるが、内的要因と外的要因に区分される。正常細胞がどんなメカニズムを経て癌細胞に形質転換されたかについては正確には解明されていないが、少なくとも８０〜９０％が環境要因などの外的因子に影響されて癌が発生するものと知られている。癌の内的要因としては遺伝因子や免疫学的要因などがあり、外的要因としては化学物質、放射線、ウイルスなどがある。癌の発生に関連する遺伝子には腫瘍形成遺伝子と腫瘍抑制遺伝子があるが、これら両者間の均衡が前述した内的あるいは外的要因によって崩されるときに癌が発生する。
【０００３】
癌は血液癌と固形癌に大別される。癌は肺癌、胃癌、乳癌、口腔癌、肝癌、子宮癌、食道癌、皮膚癌など身体の略全ての部位に発生する。これらの悪性腫瘍を治療するために使用する方法のうち、手術または放射線療法を除いた化学療法剤を総称して抗癌剤といい、この抗癌剤の大部分は主にヘキサンの合成を阻害して抗癌活性を示す物質である。
【０００４】
化学療法剤は、代謝拮抗剤(antimetabolites)、アルキル化剤(alkylating agents)、有糸分裂抑制剤(antimitotic drugs)、ホルモン剤(hormones)などに大きく分類される。代謝拮抗剤は、癌細胞の増殖に必要な代謝過程を阻害するもので、例えば、メトトレキサートなどの葉酸誘導体、６−メルトカプトプリンおよび６−チオグアニンなどのプリン誘導体、および５−フルオロウラシルおよびシタラビン(cytarabine)などのピリミジン誘導体などがある。アルキル化剤は、ＤＮＡのグアニンなどにアルキル基を導入してＤＮＡの構造を変形させ、鎖を切断させて抗癌効果を発揮するもので、クロラムブシル(chlorambucil)およびシクロホスファミド(cyclophosphamide)などのニトロゲンマスタード系化合物、チオテパ(thiotepa)などのエチレンイミン系化合物、ブスルファン(busulfan)などのアルキルスルホネート系化合物、カルムスチン(carmustine)などのニトロソウレア系化合物、ダカルバジン(dacarbazine)などのトリアジン系化合物がある。有糸分裂抑制剤は、分裂時期特異性薬物であって、有糸分裂を遮断して細胞分裂を抑制するが、例えば、アクチノミシンＤやドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシンなどの抗癌性抗癌剤；ビンクリスチンやビンブラスチンなどの植物アルカロイド；タクサン環を含む有糸分裂阻害剤としてのトキソイドが含まれる。この他に、副腎皮質ホルモンおよびプロゲステロンなどのホルモン剤と、シスプラチンなどの白金含有化合物が抗癌剤として用いられている。
化学療法剤の最も大きい問題は薬剤耐性である。この薬剤耐性は、抗癌剤による初期の成功的な反応にも拘らず結局は治療が失敗する主要要因である。薬剤耐性の原因を究明する研究と同時に、既存の薬剤に対して耐性を持つ癌の治療のためには新しいメカニズムを有する抗癌剤の開発が持続的に必要である。現在開発進行中の抗癌剤は、薬剤耐性遮断剤、血管新生阻害剤、腫瘍転移抑制剤、および遺伝子発現を標的とする薬物などがある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明者らは、腫瘍成長を抑制し且つアポトーシスを誘発する新しいメカニズムの抗癌剤について研究したところ、新規の窒素原子含有ヘテロ環化合物を合成したが、この化合物が活性酸素種によるＤＮＡ損傷を誘導してｃ−ａｂｌおよびｐ５３を活性化させ、ＲｈｏＢを誘導させてアポトーシスを誘発し、ミトコンドリアを経由するシグナルの調節異常により、生存に関連したＢｃｌ２量が下方調節されて細胞死を引き起こすことを確認し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、新規の窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩、その製造方法およびそれを含む癌治療用薬学組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１はヒト由来前立腺癌細胞株（ＰＣ−３）を異種移植したヌードマウスに本発明に係る化合物（実施例５５）を腹腔投与した後の体重の変化を示す図である。
【図２】図２はヒト由来前立腺癌細胞株（ＰＣ−３）を異種移植したヌードマウスに本発明に係る化合物（実施例５５）を腹腔投与した後の腫瘍サイズの変化を示す図である。
【図３】図３はヒト由来前立腺癌細胞株（ＰＣ−３）を異種移植したヌードマウスに本発明に係る化合物（実施例５５）を腹腔投与した後の最終日（２１日目）の腫瘍重量を示す図である。
【図４】図４はヒト由来前立腺癌細胞株（ＰＣ−３）に本発明に係る化合物（実施例５５）を処理した後のウェスタンブロット分析結果を示す図である。
【図５】図５はヒト由来前立腺癌細胞株（ＰＣ−３）にＮＡＣ(N-acetylcystein)を処理し、本発明に係る化合物（実施例５５）を処理した後のアポトーシスの度合いを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明は、下記化学式１で表される窒素原子含有ヘテロ環化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
［化学式１］
【化１】
2010500341.tif 000003
【０００９】
化学式１において、
Ｒ１はＣ１〜Ｃ３０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ２〜Ｃ-３０のアルケニルであり、
Ｒ２はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキルであり、
Ｒ３はＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル；Ｃ２〜Ｃ３０のアルケニル；アリル；またはＣ１〜Ｃ６の直鎖または側鎖アルキル、Ｃ１〜Ｃ６のアルコキシ、ＯＣＦ３、ニトロおよびハロゲン原子よりなる群から選ばれた一つの基で置換された、あるいは非置換のベンジルであり、
ＡはＣ（＝Ｏ）またはＳ（＝Ｏ）２であり、
Ｘはハロゲン原子であり、
ｎは２または３の整数である。
【００１０】
本発明に係る化学式１の窒素原子含有ヘテロ環化合物のうち、好ましい化合物は、具体的には下記のとおりである：
１）４−ドコサノイル−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、
２）１，１−ジメチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
３）１−ベンジル−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
４）１−アリル−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５）１−（４−メトキシ−ベンジル）−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムクロライド、
６）１−エチル−１−メチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
７）１−ベンジル−１−エチル−４−オクタノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８）１−ベンジル−４−デカノイル−１−メチル−１−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９）１−アリル−４−デカノイル−１−メチル−１−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０）１−ベンジル−４−デカノイル−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１）１−アリル−４−デカノイル−１−エチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
１２）４−デカノイル−１−エチル−１−メチルピペラジン−１−イウムヨージド、
１３）１−アリル−１−メチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１４）１−エチル−１−メチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１５）１−ベンジル−１−エチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１６）−１−アリル−１−エチル−４−テトラデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１７）１−アリル−４−ヘキサデカノイル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１８）４−ヘキサデカノイル−１−（４−メトキシ−ベンジル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムクロライド、
１９）４−ヘキサデカノイル−１−メチル−１−ペント−４−エニル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２０）１−ブト−３−エニル−４−ヘキサデカノイル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２１）１−ベンジル−１−エチル−４−ヘキサデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２２）１−アリル−１−エチル−４−ヘキサデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２３）１−エチル−４−ヘキサデカノイル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
２４）１−エチル−４−ヘキサデカノイル−１−ペント−４−エニル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２５）１−ベンジル−１−メチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２６）１−アリル−１−メチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２７）１−エチル−１−メチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
２８）１−ベンジル−１−エチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
２９）１−アリル−１−エチル−４−オクタデカノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
３０）１−エチル−４−イコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムヨージド、
３１）４−イコサノイル−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、
３２）１−ベンジル−４−イコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３３）１−アリル−４−イコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３４）４−ドコサノイル−１−エチル−１−メチルピペラジン−１−イウムヨージド、
３５）１−ベンジル−４−ドコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３６）１−アリル−４−ドコサノイル−１−メチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３７）１−ベンジル−４−ドコサノイル−１−エチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３８）１−アリル−４−ドコサノイル−１−エチルピペラジン−１−イウムブロマイド、
３９）１，１−ジメチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムヨージド、
４０）１−ベンジル−１−メチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４１）１−アリル−１−メチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４２）１−エチル−１−メチル−４−テトラコサノイルピペラジン−１−イウムヨージド、
４３）１−アリル−１−メチル−４−アンデク−１０−エノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
４４）１−ベンジル−１−メチル−４−アンデク−１０−エノイル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
４５）１，１−ジメチル−４−アンデク−１０−エノイル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
４６）１−ベンジル−１−メチル−４−パルミトイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４７）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−パルミトイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４８）１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
４９）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５０）１−（４−ブロモベンジル）−１−エチル−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５１）１−エチル−１−（３−フルオロベンジル）−４−テトラデカノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５２）１−エチル−１−（３−メチルベンジル）−４−テトラデカノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５３）４−ドデカノイル−１−エチル−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５４）４−ドデカノイル−１−エチル−１−（３−フルオロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５５）４−ドデカノイル−１−エチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５６）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−テトラデカノイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５７）１−エチル−４−オクタデシル−１−（３−（トリフルオロメトキシ)ベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
５８）１−エチル−１−（３−メチルベンジル）−４−ステアロイルピペラジン−１−イウムブロマイド、
５９）１−エチル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
６０）１−アリル−１−エチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６１）１−アリル−１−メチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６２）１−ベンジル−１−メチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６３）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６４）１−ベンジル−１−エチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６５）１−ベンジル−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６６）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６７）１−アリル−１−エチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６８）１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
６９）１−アリル−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７０）１−ベンジル−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７１）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７２）１−アリル−１−エチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７３）１−ベンジル−１−エチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７４）１−アリル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７５）４−（デカン−１−スルホニル）−１，１−ジメチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
７６）１−ベンジル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７７）１−アリル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
７８）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
７９）１−ベンジル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８０）１−アリル−４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８１）１−ベンジル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８２）１−アリル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８３）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−メチル−ピペラジン−１−イウムヨージド、
８４）１−ベンジル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８５）１−アリル−４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８６）４−（デカン−１−スルホニル）−１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８７）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８８）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−ピペラジン−１−イウムブロマイド、
８９）１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−（ノニルスルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９０）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（４−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９１）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９２）１，１−ジエチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９３）１−エチル−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９４）１，１−ジエチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９５）１−エチル−１−メチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
９６）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９７）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（４−フルオロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９８）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
９９）１−エチル−１−メチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
１００）１−ベンジル−１−エチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０１）１−アリル−１−エチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０２）１，１−ジメチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージド、
１０３）１−ベンジル−１−メチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０４）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−（ノナン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０５）４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（３−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０６）４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０７）４−（デカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（４−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０８）４−（ドデカン−１−スルホニル）−１−メチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１０９）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（４−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１０）４−（デカン−１−スルホニル）−１−エチル−１−（３−メチルベンジル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１１）１−ベンジル−１−エチル−４−（オクタン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１２）１−アリル−１−メチル−４−（アンデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１３）１−ベンジル−１−エチル−４−（テトラデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１４）１−（４−ｔ−ブチルベンジル）−１−エチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１５）１−ベンジル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムブロマイド、
１１６）１−エチル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１１７）４−ドデカノイル−１，１−ジメチル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１１８）１−アリル−４−ドデカノイル−１−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１１９）４−ドデカノイル−１−（４−メトキシベンジル）−１−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イウムクロライド、
１２０）１−アリル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２１）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２２）４−ヘキサデカノイル−１，１−ジメチル−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１２３）１，１−ジメチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１２４）１−ベンジル−１−メチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２５）１−ベンジル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２６）４−ヘキサデシル−１−メチル−１−（３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２７）１−アリル−１−メチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２８）１−メチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１２９）１，１−ジメチル−４−ステアロイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージド、
１３０）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−ステアロイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３１）１−アリル−１−メチル−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３２）１−メチル−１−（３−メチルベンジル）−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３３）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−テトラデカノイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３４）１−（４−フルオロベンジル）−１−メチル−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド、
１３５）１−メチル−１−（３−ニトロベンジル）−４−オクタデシル−１，４−ジアゼパン−１−イウムブロマイド。
【００１１】
本発明の化合物は、当該技術分野における通常の方法によって薬学的に許容可能な塩および溶媒化物から製造できる。
薬学的に許容可能な塩としては、遊離酸によって形成された酸付加塩が有用である。酸付加塩は、通常の方法、例えば化合物を過量の酸水溶液に溶解させ、この塩をメタノール、エタノール、アセトンまたはアセトニトリルなどの水混和性有機溶媒を用いて沈殿させて製造する。同モル量の化合物および水中の酸またはアルコール（例えば、グリコールモノメチルエーテル）を加熱した後、前記混合物を蒸発させて乾燥させ、あるいは析出された塩を吸引濾過させることができる。
この際、遊離酸としては有機酸と無機酸を使用することができる。無機酸としては塩酸、リン酸、硫酸、硝酸、錫酸などを使用することができ、有機酸としてはメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、プロピオン酸、乳酸、グリコール酸、グルコーン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸などを使用することができるが、これらに制限されるのではない。
【００１２】
また、塩基を用いて、薬学的に許容可能な金属塩を製造することができる。アルカリ金属またはアルカリ土金属塩は、例えば化合物を過量のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土水酸化物溶液中に溶解し、非溶解化合物塩を濾過した後、ろ液を蒸発、乾燥させて得る。この際、金属塩としては、特にナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩を製造することが製薬上好ましい。また、これに対応する銀塩はアルカリ金属またはアルカリ土金属塩を適切な銀塩（例えば、硝酸銀）と反応させて得る。
化学式１で表される化合物の薬学的に許容可能な塩は、特に言及しない限り、化学式１の化合物に存在しうる酸性または塩基性の塩を含む。薬学的に許容可能な塩としては、ヒドロキシ基のナトリウム、カルシウムおよびカリウム塩などがある。アミノ基のその他の薬学的に許容可能な塩は、ヒドロブロマイド、硫酸塩、水素硫酸塩、リン酸塩、水素リン酸塩、二水素リン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩（メシラート）、ｐ−トルエンスルホン酸塩（トシラート）が例示され、当業界における公知の塩の製造方法または製造過程によって製造できる。
【００１３】
また、本発明は、化学式１の窒素原子含有ヘテロ環化合物の製造方法を提供し、反応式１〜３で表される。
化学式１の化合物において、ＡがＣ（＝Ｏ）であり且つｎが２である場合、本方法は、反応式１に示すように行われ、
１）化学式２の有機酸化合物を有機溶媒中で塩化チオニルと反応させた後、アルキルピペラジン誘導体と反応させて化学式３の化合物を製造する段階と、
２）前記１）段階で製造された化学式３の化合物をハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−１の化合物を製造する段階とを含んでなる。
［反応式１］
【化２】
2010500341.tif 000004
反応式１において、Ｒ２、Ｒ３およびＸは化学式１における定義のとおりであり、ｍは１〜３０の整数である。
【００１４】
また、化学式１の化合物において、ＡがＳ（＝Ｏ）２であり且つｎが２である場合、本方法は、反応式２に示すように行われ、
１）化学式４のスルホン酸化合物を有機溶媒中で塩化オキサリルと反応させた後、アルキルピペラジン誘導体と反応させて化学式５の化合物を製造する段階と、
２）前記１）段階で製造された化学式５の化合物をハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−２の化合物を製造する段階とを含んでなる。
［反応式２］
【化３】
2010500341.tif 000005
反応式２において、Ｒ２、Ｒ３およびＸは化学式１における定義のとおりであり、ｍは１〜３０の整数である。
また、化学式１の化合物において、ＡがＳ（＝Ｏ）２であり且つｎが３である場合、本方法は、反応式３に示すように行われ、
１）化学式２の有機酸化合物を有機溶媒中でアルキルジアゼパン誘導体と反応させて化学式６の化合物を製造する段階と、
２）前記１）段階で製造された化学式６の化合物をハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−３の化合物を製造する段階とを含んでなる。
［反応式３］
【化４】
2010500341.tif 000006
反応式３において、Ｒ２、Ｒ３およびＸは化学式１における定義のとおりであり、ｍは１〜３０の整数である。
【００１５】
次に、本発明に係る化学式１の化合物の製造方法について具体的に説明する。
反応式１〜３は、商業的に容易に購入可能な化学式２の有機酸化合物および化学式４のスルホン酸化合物を出発物質として、化学式１の化合物を製造するための２段階の製造過程を示す。
反応式１〜３の１）段階では、化学式２の有機酸化合物または化学式４のスルホン酸化合物を有機溶媒中で塩化チオニルまたは塩化オキサリルと常温〜６０℃範囲の温度で反応させ、中間体として有機酸塩化物またはスルホン酸塩化物を製造した後、これを０℃でアルキルピペラジン誘導体と反応させて化学式３の化合物または化学式５の化合物を製造する。または、化学式２の有機酸化合物を有機溶媒中でアルキルジアゼパン誘導体と反応させて化学式６の化合物を製造する。
【００１６】
この際、有機溶媒としては塩化メチレンなどが使用できる。塩化チオニルまたは塩化オキサリルは出発物質である化学式２の有機酸化合物または化学式４のスルホン酸化合物に対して２〜４の当量で使用でき、アルキルピペラジンは化学式２の有機酸化合物または化学式４のスルホン酸化合物に対して４の当量で使用できる。
反応式１〜３の２）段階では、前記１）段階で得た化学式３の化合物または化学式５の化合物または化学式６の化合物を有機溶媒中でハロゲン化物化合物と反応させて化学式１−１〜１−３の化合物を製造する。この際、有機溶媒としてはトルエン、ベンゼン、アセトニトリルなどを使用することができる。この際、ハロゲン化物化合物は、例えばヨウ化メチル、臭化ベンジル、臭化アリルなどが好ましく、化学式３の化合物または化学式５の化合物または化学式６の化合物に対して２〜３の当量で使用できる。これらの反応は常温〜１００℃範囲の温度で行うことができる。
【００１７】
また、本発明は、化学式１の窒素原子含有ヘテロ環化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分とする癌治療用薬学組成物を提供する。
前記癌は、肺癌、非小細胞肺癌、結腸癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部癌、皮膚または眼球内黒色腫、子宮癌、卵素癌、直腸癌、胃癌、肛門癌、結腸癌、乳癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病(Hodgkin's disease)、食道癌、小腸癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性または急性白血病、リンパ球リンパ腫、膀胱癌、腎臓または輸尿管癌、腎臓細胞癌腫、腎臓骨盤癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ；central nervous system）腫瘍、１次中枢神経系リンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫などがある。
本発明に係る化合物（３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔投与した、ヒト由来前立腺癌細胞株ＰＣ−３を異種移植したヌードマウスは、試験期間中に特異の一般症状が観察されなかったうえ、体重の減少がなく、８４．０％（ｐ＜０．００１）の統計的に有意な腫瘍成長抑制効果が観察され、実験最終日（２１日目）に７９．５％（ｐ０.００１）の統計的に有意な腫瘍重量減少が観察された（図１〜図３）。
【００１８】
また、本発明に係る化合物をヒト由来前立腺癌細胞株としてのＰＣ−３細胞に処理した後、ウェスタンブロット分析によってタンパク質の量を測定した結果、ＤＮＡ損傷と直接関連のあるｃ−ａｂｌの量が増加し、ｐ５３とリン酸化ｐ５３の量が急激に増加した。また、アポトーシスと関連のあるものと報告されたＲｈｏＢの量も増加したうえ、ＲｈｏＢを誘導させてアポトーシスを誘発した（図４Ａ）。また、ミトコンドリアを経由するシグナルの調節異常により、生存に関連したＢｃｌ２の量が下方調節された（図４Ｂ）。
また、活性酸素種（Reactive Oxygen Species；ＲＯＳ）を除去させる役割を果たす抗酸化剤ＮＡＣ(N-acetycysteine)をヒト由来前立腺癌細胞株としてのＰＣ−３細胞に処理した場合は、本発明に係る化合物のみを前立腺癌細胞株としてのＰＣ−３細胞に処理した場合よりアポトーシスの度合いが著しく減少した（図５）。
したがて、本発明に係る化合物は、活性酸素種によるＤＮＡ損傷を誘導してｃ−ａｂｌおよびｐ５３を活性化させ、ＲｈｏＢを誘導させてアポトーシスを誘発し、ミトコンドリアを経由するシグナルの調節異常により、生存に関連したＢｃｌ２の量が下方調節されて細胞死を引き起こすことにより、腫瘍細胞の成長を抑制し、アポトーシスを誘発させる。よって、本発明に係る組成物は癌疾患の治療に有用に利用可能である。
【００１９】
本発明に係る化学式１の化合物を含む薬学組成物は、通常の方法による適切な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含むことができる。本発明の組成物に含まれ得る担体、賦形剤および希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリ酸マグネシウム、および鉱物油を挙げることができる。
本発明に係る組成物は、通常の方法によって、例えば散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、外用剤、坐剤、または滅菌注射溶液の形に製剤化して使用することができる。
【００２０】
詳しくは、製剤化のために通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤，崩解剤、界面活性剤などの希釈剤、または賦形剤を用いて調剤することもできる。経口投与のための固形製剤には錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれる。このような固形製剤は前記化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調剤することができる。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウムやタルクのような潤滑剤も用いることができる。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、頻繁に用いられる単純希釈剤である、水、流動パラフィン以外に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれていてもよい。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水溶性製剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチレンのような注射可能なエステルなどを用いることができる。坐剤の基剤としては、ハードファット(witepsol)、マクロゴール、Ｔｗｅｅｎ６１、カカオ指、ラウリシルヴァ脂、グリセロゼラチンなどを用いることができる。
【００２１】
本発明に係る化合物の好ましい投与量は、患者の状態および体重、疾病の重症度、薬物形態、投与経路、および期間によって異なるが、当業者によって適切に選択できる。ところが、好ましい効果のために、本発明の化合物は０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を一日１回〜数回に分けて投与することができる。本発明の組成物において、化学式１の化合物は、全体組成物の総重量に対して０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．００１〜１重量の量で存在しなければならない。
本発明に係る化合物の薬学的投与形態は、これらの薬学的に許容可能な塩の形態であってもよく、単独でまたはその他の薬学的活性化合物との結合および適当な集合であってもよい。
本発明の薬学組成物は、ラット、マウス、家畜、ヒトなどの哺乳動物に多様な経路で投与できる。投与の全ての方式は予想できるが、例えば、経口、直腸または静脈注入、筋肉注射、皮下注射、硬膜外または脳室内注射によって投与できる。
【００２２】
以下、本発明を下記実施例に基づいてさらに詳しく説明するが、下記実施例は本発明を例示するものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１：反応式１による４−ドコサノイル−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージドの製造
１．１−（４−メチルピペラジン−１−イル）ドコサン−１−オンの製造
【化５】
2010500341.tif 000007
ドコサノサン（１ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン０．１Ｍ溶液に塩化チオニル（０．４３ｍｌ、５．８６ｍｍｏｌ）を攪拌状態で注入した後、４時間加熱した。生成混合物を常温で冷やした後、０℃でメチルピペラジン（１．３０ｍｌ、１１．７２ｍｍｏｌ）を入れて２時間攪拌した。生成混合物をクロロホルム溶液で希釈した後、１０％ＮａＯＨで（ｐＨ１３となるまで入れる）洗浄した。飽和塩水溶液で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させた後、減圧蒸留した。得られた１次化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー法（溶出剤：５％メタノール／クロロホルム）で精製して目的の化合物を２５％の収率（３０７ｍｇ）で得た。（メチルピペラジンの代わりにエチルピペラジンを入れる反応も、前記の方法と同様に実験した。）
1H-NMR (400MHz, DMSO) δ 3.64-3.48(m, 4H), 2.36-2.41(m, 4H), 2.33-2.29 (m, 2H) 2.31(s, 3H), 1.62(br m, 2H), 1.25(br s, 36H), 0.88(t, 3H ,J=6.8Hz)
【００２３】
２．４−ドコサノイル−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージドの製造
【化６】
2010500341.tif 000008
前記１段階で得た化合物（８０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のトルエン０．１Ｍ溶液にヨードメタン（０．０２ｍｌ、０．３ｍｍｏｌ）を攪拌状態で注入した後、３時間加熱した。生成混合物を０℃に十分低めた後、酢酸エチル溶液（６．０ｍｌ）を入れてから２時間攪拌した。生成された混合物を酢酸エチル溶液で濾過させて目的の化合物を７３．６％の収率（８１ｍｇ）で得た。
1H-NMR (300MHz, DMSO) δ 3.76-3.37(m, 8H), 3.12(s, 6H), 2.32(t, 2H, J=7.4Hz), 1.43(br m, 2H), 1.22(br s, 36H), 0.84(t, 3H, J=5.9Hz)
【００２４】
実施例２〜５８：
実施例１に記載された製造方法と類似の製造過程を行い、実施例２〜５８の化合物を製造した。
前記化合物の物性値は表１に示した。
【００２５】
【表１−１】
2010500341.tif 000009
【表１−２】
2010500341.tif 000010
【表１−３】
2010500341.tif 000011
【表１−４】
2010500341.tif 000012
【表１−５】
2010500341.tif 000013
【００２６】
実施例５９：反応式２による１−エチル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージドの製造
１．１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジンの製造
【化７】
2010500341.tif 000014
オクタデカノ−１−スルホン酸（２ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン０．６Ｍ溶液に塩化オキサリル（２．８ｍｌ（塩化メチレンにおける２．０Ｍ）、５．６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(N,N-Dimethylformamide)（０．３ｍｌ、０．００４ｍｍｏｌ）を攪拌状態で注入した後、４時間加熱した。生成混合物を常温で冷やした後、濾過させて得た溶液を０℃でメチルピペラジン（０．９ｍｌ、８．４ｍｍｏｌ）を入れて２時間攪拌した。生成混合物を塩化メチレンで希釈した後、飽和塩化アンモニウムで洗浄した。有機層を飽和塩水溶液で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧蒸留した。得られた１次化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー法（溶出剤：５％メタノール／クロロホルム）で精製して目的の化合物を３０％の収率（７０２ｍｇ）で得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ 3.32-3.30(m, 4H), 2.92-2.87(m, 2H), 2.51-2.48 (m, 4H), 2.34(s, 3H), 1.88-1.75(m, 2H), 1.42-1.26(m, 30H), 0.88(t, 3H, J=6.6Hz)
【００２７】
２．１−エチル−１−メチル−４−（オクタデカン−１−スルホニル）ピペラジン−１−イウムヨージドの製造
【化８】
2010500341.tif 000015
前記１段階で得た化合物（１５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル０．１Ｍ溶液にヨードエタン（０．０７ｍｌ、０．８７ｍｍｏｌ）を攪拌状態で注入した後、６時間加熱した。生成混合物を０℃に十分低めた後、酢酸エチル溶液で濾過させて目的の化合物を８３％の収率（１６８ｍｇ）で得た。
1H-NMR (300 MHz CDCl3) δ 3.94-3.81(m, 6H), 3.81-3.77(m, 2H), 3.64-3.56 (m, 2H), 3.52(s, 3H), 3.19(t, 2H, J=7.9Hz), 1.81-1.75(m, 2H), 1.49-1.44(m, 5H), 1.23(br s, 28H), 0.86(t, 3H, J=6.7Hz)
【００２８】
実施例６０〜１１５：
実施例５９に記載された製造方法と類似の製造過程を行い、実施例６０〜１１５の化合物を製造した。
前記化合物の物性値は表２に示した。
【００２９】
【表２−１】
2010500341.tif 000016
【表２−２】
2010500341.tif 000017
【表２−３】
2010500341.tif 000018
【表２−４】
2010500341.tif 000019
【表２−５】
2010500341.tif 000020
【表２−６】
2010500341.tif 000021
【００３０】
実施例１１６：反応式３による１−エチル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージドの製造
１．１−（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）ヘキサデカン−１−オンの製造
【化９】
2010500341.tif 000022
パルミチン酸（１．５ｇ、５．８０ｍｍｏｌ）の塩化メチレン０．１Ｍ溶液に１−メチルホモピペラジン（０．９ｍｌ、７．５４ｍｍｏｌ）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．４ｇ、７．５４ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．２ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を無水、攪拌状態で注入した後、常温で７時間攪拌した。生成混合物をクロロホルム溶液で希釈した後、飽和塩化アンモニウム溶液で３回洗浄した。飽和塩水溶液で洗浄した後、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧蒸留した。得られた１次化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー法（溶出剤：５％メタノール／クロロホルム）で精製して目的の化合物を９２．４％の収率（１．８９ｇ）で得た。
1H-NMR (300MHz, DMSO) δ 3.48-3.41(m, 4H), 2.45-2.40(m, 4H), 2.28-2.22 (m, 5H), 1.81-1.71(m, 2H), 1.47(br s, 2H), 1.24(br s, 24H), 0.85(t, 3H, J=6.3 Hz)
【００３１】
２．１−エチル−１−メチル−４−パルミトイル−１，４−ジアゼパン−１−イウムヨージドの製造
【化１０】
2010500341.tif 000023
前記第１段階で得た化合物（３００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル０．１Ｍ溶液にヨードエタン（０．１４ｍｌ、１．７ｍｍｏｌ）を攪拌状態で注入した後、２時間加熱した。生成混合物を、０℃に十分低めた後、酢酸エチル溶液（６．０ｍｌ）を入れて２時間攪拌した。生成された混合物を酢酸エチルで濾過させて目的の化合物を７０．６％の収率（３０４ｍｇ）で得た。
1H-NMR (300MHz, DMSO) δ 3.77-3.42(m, 10H), 3.01(s, 3H), 2.32(t, 2H, J=7.4Hz), 2.12-2.09(m, 2H), 1.49(br s, 2H), 1.24(br s, 27H), 0.85(t, 3H, J=6.4Hz)
【００３２】
実施例１１７〜１３５：
実施例１１６に記載された製造方法と類似の製造過程を行い、実施例１１７〜１３５の化合物を製造した。
前記化合物の物性値は表３に示した。
【００３３】
【表３−１】
2010500341.tif 000024
【表３−２】
2010500341.tif 000025
【００３４】
実験例１：薬理活性実験
本発明に係る化合物の薬効を検索するために、下記の実験を行った。
１−１．腫瘍細胞の成長抑制実験
ヒト腫瘍細胞株ＰＣ−３（前立腺癌、ＡＴＣＣ、米国）、ＭＢＡ−ＭＢ−２３１（乳癌、ＡＴＣＣ、米国）、ＡＣＨＮ（腎臓癌、ＡＴＣＣ、米国）、およびＮＵＧＣ−３（胃癌、ＡＴＣＣ、米国）を１０％ウシ胎仔血清（Fetal Bovine Serum ; ＦＢＳ）の含まれたＲＰＭＩ１６４０培地を用いて培養した。
抗癌活性を測定するためには、５％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地に適切な濃度（約５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）の細胞を９６ウェルプレートに分注した後、５％ＣＯ２雰囲気の下、３７℃で培養した。細胞を分注してから１日経過の後、化合物を処理する直前の細胞濃度を決定するために、ゼロ時間（Ｔ０）プレートに５０％トリクロロ酢酸をウェル当り５０μｌずつ入れて細胞を固定し、零点と定めた。化合物を処理した細胞の場合には、４８時間後に５０％トリクロロ酢酸をウェル当り５０μｌずつ入れて細胞を固定した。細胞に加えられる化合物の最終濃度を０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μｇ／ｍｌとした。固定したプレートは、水道水で洗浄し、乾燥させた後、０．１％酢酸に溶解されたスルホローダミンＢ（sulphorhodamine B；ＳＲＢ）の０．４％溶液をウェル当り１００μｌ加えて細胞を染色した。３０分間放置した後、０．１％酢酸で洗浄し、さらに常温で乾燥させた後、１０ｍＭトリスベース（ｐＨ１０．５）を加えて染色試薬を溶解させた。５４０ｎｍで測定された吸光度を対照群に対する百分率で換算した後、癌細胞の成長を５０％抑制する化合物の濃度（ＧＩ５０（μｇ／ｍｌ））を算出した。
その結果は表４に示す。
【００３５】
【表４−１】
2010500341.tif 000026
【表４−２】
2010500341.tif 000027
【表４−３】
2010500341.tif 000028
【００３６】
１−２．動物試験系の腫瘍成長抑制実験
ヒト由来前立腺癌細胞株ＰＣ−３の３×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌを雌Ｓ．Ｐ．Ｆ ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（７週齢）に移植した後、実施例５５で製造した化合物を腹腔に１日３０ｍｇ／ｋｇずつ合計２０回投与し、陽性対照群としてはアドリアマイシン２ｍｇ／ｋｇを二日に１回ずつ腹腔投与によって１０回投与した。
毒性の度合いを調べるために、投与期間における動物の体重変化、死亡動物、腫瘍のサイズ、および腫瘍重さを観察した。
動物の体重変化は図１に示し、腫瘍サイズの変化は図２に示し、最終日（２１日目）における腫瘍重さを図３に示した。
【００３７】
図１に示すように、本発明に係る化合物（実施例５５）を腹腔投与したマウスは、試験期間に特異な一般症状が観察されなかった。また、マウス体重変化の最終日（２１日目）の結果よりは、溶媒対照群と比較して本発明の化合物試料投与群では体重減少が観察された。陽性対照物質（アドリアマイシン／２ｍｇ/ｋｇ／Ｑ２Ｄ：１０回）投与群では４匹の死亡動物および１３．７％（ｐ＜０．００１）の体重減少が観察された。
図２に示すように、最終日（２１日目）の結果をみれば、溶媒対照群と比較して本発明の化合物試料投与群（３０ｍｇ／ｋｇ）で８４．０％（ｐ＜０．００１）の統計的に有意な腫瘍成長抑制効果が観察された。陽性対照物質（アドリアマイシン／２ｍｇ/ｋｇ／Ｑ２Ｄ：１０回）投与群では７４．４％（ｐ＜０．０１）の統計的に有意な腫瘍成長抑制効果が観察された。
【００３８】
図３に示すように、実験最終日（２１日目）にマウスを犠牲させて腫瘍を切除した後、その重量を測定した結果、溶媒対照群と比較して本発明の化合物試料投与群（３０ｍｇ／ｋｇ）で７９．５％（ｐ＜０．００１）の統計的に有意な腫瘍重量減少が観察された。陽性対照物質（アドリアマイシン／２ｍｇ/ｋｇ／Ｑ２Ｄ：１０回）投与群では６９．８％（ｐ＜０．０５）の統計的に有意な腫瘍重量減少が観察された。
【００３９】
実験例２：ウェスタンブロット分析
ヒト由来前立腺癌細胞株であるＰＣ−３細胞を直径１００ｍｍの培養皿に４×１０６個撒いて５％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地で一日間培養した後、実施例５５で製造した化合物をそれぞれ０、２、５μＭの濃度で２４時間処理した。その後、細胞を１０ｍｌのＰＢＳで丁寧に２回洗浄した後、プロテアーゼ阻害剤カクテル(protease inhibitor cocktail)（Ｒｏｃｈｅ、ｃｏｍｐｌｅｔｅＴＭ−ｍｉｎｉ）入りのＰＢＳ（１錠／５０ｍｌのＰＢＳ）を皿当り１ｍｌずつ入れて細胞を掻き集め、超音波処理によって細胞を破砕させた。この試料をマイクロ遠心機で１２０００ｒｐｍにて２０分間遠心分離した後、上澄み液を集めてブラッドフォード染料試薬（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）でタンパク質を定量した後、２０μｇのタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いてゲル上に展開し、これをさらにニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）に移した後、それぞれの調査すべきタンパク質に特異的な１次抗体とＨＲＰ(horseradish peroxidase)付き２次抗体（ＡｍｅｒｓｈａｍまたはＢｉｏ−Ｒａｄ）、およびＥＣＬ化学発光試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いてそれぞれのタンパク質の量的変化を分析した。
【００４０】
その結果は図４に示した。
図４に示すように、本発明に係る化合物（実施例５５）をヒト由来前立腺癌細胞株としてのＰＣ−３に処理した後、ウェスタンブロット分析によってタンパク質の量を測定した結果、ＤＮＡ損傷と直接関連のあるｃ−ａｂｌｅの量が増加し、ｐ５３およびリン酸化ｐ５３の量が急激に増加した。また、アポトーシスと関連のあるものと報告されたＲｈｏＢの量も増加したうえ、ＲｈｏＢを誘導させてアポトーシスを誘発した（図４Ａ）。また、ミトコンドリアを経由するシグナルの調節異常により、生存に関連したＢｃｌ２量が下方調節された（図４Ｂ）。
【００４１】
実験例３：フローサイトメトリー分析
５％ＣＯ２雰囲気下の３７℃培養器で、５％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で成長させたヒト由来前立腺癌細胞株であるＰＣ−３を直径６０ｍｍの培養皿に５×１０５個ずつ撒いて一日培養した。ここに各５μＭ ＮＡＣ(N-acetylcysteine)（Ｓｉｇｍａ）を３時間処理した後、実施例５５で製造した化合物を５μＭの濃度で２４時間培養し、０．１％トリプシンで処理して細胞を取り外した。その後、取り外した細胞を１５ｍｌの円錐状試験管に移して２００ｘｇで５分間遠心分離して細胞を沈殿させた後、上澄み液を除去した。ここに、０．１ｍｇ／ｍｌ濃度のＲＮａｓｅ Ａが含まれたＰＢＳ溶液を０．５ｍｌ添加して細胞を再懸濁させた後、ここにＰＩ(propidium iodide)ＤＮＡ染色液を５０μｇ／ｍｌの濃度で処理し、細胞内のＤＮＡを３０分以上染色した。このように染色された細胞をフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）を用いて４８８ｎｍのレーザービームを用いてＰＩを励起させた後、発光した波長５８８ｎｍの光の量をヒストグラムで表示し、これを定量分析して細胞内ＤＮＡの量を決定した。
【００４２】
その結果は図５に示す。
図５に示すように、活性酸素種（Reactive Oxygen Species；ＲＯＳ）を除去させる役割を果たす抗酸化剤ＮＡＣ(N-acetylcysteine)をヒト由来前立腺癌細胞株としてのＰＣ−３細胞に処理した場合、本発明に係る化合物（実施例５５）のみを前立腺癌細胞株としてのＰＣ−３細胞に処理した場合よりアポトーシスの度合いが著しく減少した。
よって、本発明に係る化合物は、活性酸素種によるＤＮＡ損傷に起因して細胞のアポトーシスを誘発させるものと推定することができる。
以下、本発明の組成物のための製剤例を例示する。
【００４３】
製剤例１：注射液剤の製造
有効成分１０ｍｇを含有する注射液剤は、次の方法で製造した。
化学式１の化合物１ｇ、塩化ナトリウム０．６ｇおよびアスコルビン酸０．１ｇを蒸留水に溶解させて１００ｍｌとなるようにした。この溶液を瓶に入れて２０℃で３０分間加熱して滅菌させた。
前記注射液剤の構成成分は、次のとおりである。
化学式１の化合物                        １ｇ
塩化ナトリウム                          ０．６ｇ
アスコルビン酸                          ０．１ｇ
蒸留水                                  定量
【００４４】
製剤例２：シロップ剤の製造
化学式１の化合物を有効成分２％（重量／体積）で含有するシロップは、次の方法で製造した。
化学式１の化合物、サッカリンおよび糖を温水８０ｇに溶解させた。この溶液を冷却させた後、ここにグリセリン、サッカリン、香味料、エタノール、ソルビン酸および蒸留水からなる溶液を製造して混合した。この混合物に水を添加して１００ｍｌとなるようにした。
前記シロップ剤の構成成分は、次のとおりである。
化学式１の化合物                 ２ｇ
サッカリン                       ０．８ｇ
糖                               ２５．４ｇ
グリセリン                       ８．０ｇ
香味料                           ０．０４ｇ
エタノール                       ４．０ｇ
ソルビン酸                       ０．４ｇ
蒸留水                           定量
【００４５】
製剤例３：錠剤の製造
有効成分１５ｍｇを含有した錠剤は、次のような方法で製造した。
化学式１の化合物２５０ｇをラクトース１７５．ｇ、ジャガイモ澱粉１８０ｇおよびコロイド性ケイ酸３２ｇと混合した。この混合物に１０％ゼラチン溶液を添加させた後、粉砕して１４メッシュの篩を通過させた。その結果物を乾燥させ、ここにジャガイモ澱粉１６０ｇ、滑石５０ｇおよびステアリン酸マグネシウム５ｇを添加して得た混合物を錠剤に作った。
前記錠剤の構成成分は、次のとおりである。
化学式１の化合物                 ２５０ｇ
ラクトース                       １７５．９ｇ
ジャガイモ澱粉                   １８０ｇ
コロイド性ケイ酸                 ３２ｇ
１０％ゼラチン溶液
ジャガイモ澱粉                   １６０ｇ
滑石                             ５０ｇ
ステアリン酸マグネシウム           ５ｇ
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明に係る化合物は、活性酸素種によるＤＮＡ損傷を誘導してｃ−ａｂｌおよびｐ５３を活性化させ、ＲｈｏＢを誘導させてアポトーシスを誘発し、ミトコンドリアを経由するシグナルの調節異常により、生存に関連したＢｃ１２量が下方調節されて細胞死を引き起こすことにより、腫瘍細胞の成長を抑制し、アポトーシスを誘発させる。よって、本発明に係る組成物は癌疾患の治療に有用に利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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