(57)【要約】  非常に少量の生体試料を使用して、動物、特にコンパニオンアニマルの健康状態を迅速に評価すると共に、動物の健康状態を改善するための栄養療法を処方する、生物学的に関連する複数のタンパク質を同時に測定可能な多重アッセイを開発するためのプローブのパネルを含む多重アッセイを提供する。プローブは、動物の健康状態を評価すると共に、その際の治療介入又は栄養介入に対する動物の応答を評価するためのプローブの使用方法と共に提供される。【選択図】  図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を、単一試料中で決定するための検出可能な分子プローブのコレクションであって、前記セットが、少なくとも１つのサイトカイン又はその遺伝子、１つのケモカイン又はその遺伝子、１つのホルモン又はその遺伝子、及び１つのアディポカイン又はその遺伝子を含み、前記セット中の各分析物について、前記分子プローブのコレクションが、その分析物の活性、存在、又は発現を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含む分子プローブのコレクション。
【請求項２】
前記分析物のセットが、１つ又は複数のニューロン増殖因子若しくはその遺伝子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子若しくはその遺伝子、可溶性受容体若しくはその遺伝子、又はその組合せをさらに含む、請求項１に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項３】
前記分析物のセット中の各遺伝子のコードされた遺伝子産物を検出するための検出可能なプローブを含み、それにより前記セット中の各遺伝子の発現を決定する、請求項２に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項４】
各プローブが前記セット中の１つの分析物の検出に特異的である、請求項３に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項５】
前記検出可能なプローブが、抗体、抗体断片、リガンド、受容体、結合タンパク質、又は核酸を含む、請求項３に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項６】
前記分析物のセットが、サイトカインインターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、若しくは形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩの１つ若しくは複数、又は前記のサイトカインのいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項１に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項７】
前記分析物のセットが、ケモカインＢリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、若しくはＣＣＬ１の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項６に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項８】
前記分析物のセットが、ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１、若しくはＰＹＹの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項７に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項９】
前記分析物のセットが、アディポカイン単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、若しくはトロンビン活性化線溶阻害因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項８に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１０】
前記所定のセットの分析物が、ニューロン増殖因子毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、若しくはベータ神経増殖因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項９に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１１】
前記所定のセットの分析物が、増殖因子アンジオゲニン、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、黒色腫増殖刺激活性、オンコスタチンＭ、胎盤増殖因子、形質転換増殖因子ベータ３、アンフィレギュリン線維芽細胞増殖因子６、顆粒球コロニー刺激因子、幹細胞因子、血管内皮増殖因子、カルジオトロフィン１、増殖関連オンコジーンベータ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、肝細胞増殖因子、ヘルペスウィルス進入媒介物質、マトリックスメタロプロテアーゼ１０、マトリックスメタロプロテアーゼ７、マトリックスメタロプロテアーゼ９、組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子、血管内皮増殖因子Ｄ、血管内皮増殖因子受容体２、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ２、若しくは組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項９に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１２】
前記所定のセットの分析物が、可溶性受容体ｓＣＤ２３、Ｆａｓ（ＣＤ９５）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン２可溶性受容体アルファ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド、可溶性糖タンパク質１３０、インターロイキン１可溶性受容体１、インターロイキン６可溶性受容体、腫瘍壊死因子受容体Ｉ、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ、血管上皮カドヘリン、ＣＣＬ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４、細胞死受容体６、Ｆａｓリガンド、細胞間接着分子３、インターロイキン２受容体ガンマ、インターロイキン５受容体アルファ、Ｌ−セレクチン、血小板内皮細胞接着分子１、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、活性化白血球細胞接着、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、毛様体神経栄養因子受容体、細胞間接着分子１、インスリン様増殖因子１受容体、インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ、インターロイキン２受容体ベータ、インターロイキン１０受容体ベータ、マクロファージコロニー刺激因子受容体、血小板由来増殖因子受容体アルファ、若しくはＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項９に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１３】
ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々に特異的なプローブを含む、請求項９に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１４】
ヒト、ネズミ、サル、イヌ、又はネコである動物に由来する所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を検出可能である、請求項１３に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１５】
ＩＬ−１５、ＫＣ、及びレプチンの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子の存在又は活性の検出に特異的なプローブをさらに含む、請求項１４に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１６】
前記分析物がイヌに由来し、前記プローブが抗体である、請求項１３に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１７】
各分析物の活性、存在、又は発現量の定量的決定を提供する、請求項１６に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１８】
各プローブがマトリックスに結合し、そのような結合したプローブの各々が、前記マトリックスと接触させた試料中で、各分析物の活性、存在、又は発現量を定量的に決定することが依然として可能である、請求項１７に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項１９】
各プローブが別々のマトリックスに結合している、請求項１８に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項２０】
各プローブが、前記コレクション中の他の各プローブから独立して検出可能である、請求項１９に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項２１】
遺伝子のセットの相対的活性又は発現を決定することにより、動物の健康状態を評価するための方法であって、
前記動物に由来する生体試料を取得するステップであり、前記試料が、所定のセットの目的分析物又はそれらの分析物の発現産物を含有することが推定され、前記セットが、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカイン、又は前記の各々をコードする遺伝子を少なくとも含むステップと、
前記所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を決定するための分子プローブのコレクションと前記試料を接触させるステップであり、前記セット中の各分析物について、前記分子プローブのコレクションが、前記分析物の活性、存在、又は発現を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含み、前記プローブに対応する前記分析物又はその発現産物が前記試料中に存在する場合、各プローブが、独立して検出可能なシグナルを生成可能であるステップと、
前記試料が前記コレクションと接触した後で生成される、前記独立して検出可能なシグナルを検出し、前記検出可能なシグナルを、前記試料中の前記所定のセットの分析物の各々の相対的活性、存在、又は発現と相関させるステップと、
前記試料中の前記所定のセットの分析物の各々の相対的活性、存在、又は発現を、公知の健康状態のパラメーターと相関させるステップと、
前記相関に従って、前記動物の健康状態の決定を行うステップと、
を含む方法。
【請求項２２】
前記分析物のセットが、ニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、可溶性受容体、又はその組合せの１つ又は複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記検出可能なプローブが、前記分析物のセット中の各分析物の存在、活性、又は発現の検出に特異的である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記検出可能なプローブが、抗体、抗体断片、リガンド、受容体、又は結合タンパク質である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記分析物のセットが、サイトカインインターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、若しくは形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記所定のセットの分析物が、ケモカインＢリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性３タンパク質アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、若しくはＣＣＬ１の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記所定のセットの分析物が、ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１、若しくはＰＹＹの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記所定のセットの分析物が、アディポカイン単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、若しくはトロンビン活性化線溶阻害因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記所定のセットの分析物が、ニューロン増殖因子毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、若しくはベータ神経増殖因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記所定のセットの分析物が、増殖因子アンジオゲニン、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、黒色腫増殖刺激活性、オンコスタチンＭ、胎盤増殖因子、形質転換増殖因子ベータ３、アンフィレギュリン線維芽細胞増殖因子６、顆粒球コロニー刺激因子、幹細胞因子、血管内皮増殖因子、カルジオトロフィン１、増殖関連オンコジーンベータ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、肝細胞増殖因子、ヘルペスウィルス進入媒介物質、マトリックスメタロプロテアーゼ１０、マトリックスメタロプロテアーゼ７、マトリックスメタロプロテアーゼ９、組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子、血管内皮増殖因子Ｄ、血管内皮増殖因子受容体２、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ２、若しくは組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記所定のセットの分析物が、可溶性受容体ｓＣＤ２３、Ｆａｓ（ＣＤ９５）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン２可溶性受容体アルファ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド、可溶性糖タンパク質１３０、インターロイキン１可溶性受容体１、インターロイキン６可溶性受容体、腫瘍壊死因子受容体Ｉ、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ、血管上皮カドヘリン、ＣＣＬ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４、細胞死受容体６、Ｆａｓリガンド、細胞間接着分子３、インターロイキン２受容体ガンマ、インターロイキン５受容体アルファ、Ｌ−セレクチン、血小板内皮細胞接着分子１、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、活性化白血球細胞接着、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、毛様体神経栄養因子受容体、細胞間接着分子１、インスリン様増殖因子１受容体、インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ、インターロイキン２受容体ベータ、インターロイキン１０受容体ベータ、マクロファージコロニー刺激因子受容体、血小板由来増殖因子受容体アルファ、若しくはＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記所定のセットの分析物が、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々、又は前記の各々を各々コードする少なくとも１つの遺伝子を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３３】
前記動物がヒト、ネズミ、サル、イヌ、又はネコである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記所定のセットの分析物が、ＩＬ−１５、ＫＣ、若しくはレプチンの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記分析物がイヌに由来し、前記プローブが抗体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記分子プローブのコレクションが、各分析物の活性、存在、又は発現量の定量的決定を可能にする、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
各プローブがマトリックスに結合し、そのような結合したプローブの各々が、前記マトリックスと接触させた試料中で、前記プローブに対応する分析物の活性、存在、又は発現量を定量的に決定することが依然として可能である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記試料及び前記分子プローブのコレクションを、特異性又は検出シグナルを増加させることにより前記検出を支援する１つ又は複数の抗体を含む二次抗体のセットと接触させるステップをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
各プローブが別々のマトリックスに結合している、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記試料が血清又は血漿である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
動物の健康を改善するための栄養療法を処方する方法であって、
ａ）所定のセットの動物の目的分析物を選択するステップであり、前記分析物の活性、存在、又は発現が、前記動物の健康状態、及び前記動物の栄養療法と相関させることができ、前記セットが、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカインの各々の少なくとも１つ、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含むステップと、
ｂ）前記動物に由来する生体試料を取得するステップであり、前記試料が、前記所定のセットの分析物、又はその発現産物を含有することが推定され、前記試料が、前記動物の現行の栄養療法を示すステップと、
ｃ）前記所定のセット分析物の各々の活性、存在、又は発現を決定するための分子プローブのコレクションと前記試料を接触させることによりベースライン測定値を決定するステップであり、前記セット中の各分析物について、前記分子プローブのコレクションが、前記分析物の活性、存在、又は発現を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含み、前記プローブに対応する前記分析物又はその発現産物が前記試料中に存在する場合、各プローブが、独立して検出可能なシグナルを生成可能であるステップと、
ｄ）前記試料が前記コレクションと接触した後で生成される、前記独立して検出可能なシグナルを検出するステップと、
ｅ）前記検出可能なシグナルを、前記試料中の前記所定のセットの分析物の各々の相対的活性、存在又は発現と相関させるステップと、
ｆ）前記試料中の前記所定のセットの分析物の各々の相対的活性、存在、又は発現を、公知の健康状態のパラメーターと相関させるステップと、
ｇ）前記相関に従って、前記現行の栄養療法下にある前記動物の健康状態の決定を行うステップと、
ｈ）前記動物の前記現行の栄養療法と比較して、主要栄養素の含量若しくは原料、微量栄養素の含量若しくは原料、補助的な食事成分、又は前記食事のカロリー含量の１つ又は複数を調整することにより、前記動物における１つ又は複数の試験的な栄養療法又は試験用の栄養補助食品を処方するステップと、
ｉ）前記所定のセットの分析物の１つ又は複数の活性、存在、又は発現を変化させるのに有効な量及び期間で、１つ又は複数の試験的な栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せを前記動物に提供するステップと、
ｊ）前記試験的な栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せが前記動物の健康状態を改善したかどうかを決定するために、各試験的な栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せについて、前記動物に由来する新しい試料を用いてステップｂ）からステップｇ）までを繰り返すステップと、
ｋ）前記動物の健康状態を改善する、処方された栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せを選択するステップと、
を含む方法。
【請求項４２】
前記動物が、肥満である、糖尿病に罹っている、糖尿病になりやすい徴候を示す、望ましくないレベルの炎症を有する、望ましくないレベルのインスリン抵抗性を有する、メタボリック症候群、早発性アテローム性動脈硬化、グルコース代謝異常、又は脂肪代謝異常を有する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記処方された栄養療法、栄養補助食品、又はその組合せが、前記動物の炎症を低減するか、インスリン抵抗性を低減するか、又はその組合せを示す、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記処方された栄養療法、栄養補助食品、又はその組合せが、前記動物の炎症を低減し、抗炎症性サイトカインを増加させるか、炎症促進性サイトカインを低減するか、又はサイトカイン炎症媒介物質を減少させるかの１つ又は複数を示す、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記炎症促進性サイトカインが、インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、又は腫瘍壊死因子アルファの１つ又は複数を含み、前記抗炎症性サイトカインが、インターロイキン４、インターロイキン１０、インターロイキン１３、形質転換増殖因子ベータ１、又は腫瘍壊死因子ベータを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記炎症促進性サイトカインが、ＩＬ−６又はＩＬ−１２、ＩＦＮであり、前記抗炎症性サイトカインが、ＩＬ−１０及びＩＬ−１３である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記処方された栄養療法、栄養補助食品、又はその組合せが、前記動物のインスリン抵抗性を低減し、アディポネクチンを増加させるか、レジスチンを減少させるか、又はレプチンを減少させるかの１つ又は複数を示す、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記処方された栄養療法、栄養補助食品、又はその組合せが、異脂肪血症、炎症、高血圧、血管反応性の変化、若しくは内臓型肥満の１つ若しくは複数を低減し、又は線溶を改善する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４９】
前記分析物のセットが、ニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、可溶性受容体、若しくはその組合せの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項５０】
前記検出可能なプローブが、前記分析物のセット中の各々の検出に特異的である、請求項４１に記載の方法。
【請求項５１】
前記検出可能なプローブが、抗体、抗体断片、リガンド、受容体、又は結合タンパク質である、請求項４１に記載の方法。
【請求項５２】
前記分析物のセットが、サイトカインインターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、若しくは形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項５３】
前記所定のセットの分析物が、ケモカインＢリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、若しくはＣＣＬ１の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記所定のセットの分析物が、ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１、若しくはＰＹＹの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記所定のセットの分析物が、アディポカイン単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、若しくはトロンビン活性化線溶阻害因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記所定のセットの分析物が、ニューロン増殖因子毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、若しくはベータ神経増殖因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記所定のセットの分析物が、増殖因子アンジオゲニン、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、黒色腫増殖刺激活性、オンコスタチンＭ、胎盤増殖因子、形質転換増殖因子ベータ３、アンフィレギュリン線維芽細胞増殖因子６、顆粒球コロニー刺激因子、幹細胞因子、血管内皮増殖因子、カルジオトロフィン１、増殖関連オンコジーンベータ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、肝細胞増殖因子、ヘルペスウィルス進入媒介物質、マトリックスメタロプロテアーゼ１０、マトリックスメタロプロテアーゼ７、マトリックスメタロプロテアーゼ９、組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子、血管内皮増殖因子Ｄ、血管内皮増殖因子受容体２、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ２、若しくは組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記所定のセットの分析物が、可溶性受容体ｓＣＤ２３、Ｆａｓ（ＣＤ９５）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン２可溶性受容体アルファ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド、可溶性糖タンパク質１３０、インターロイキン１可溶性受容体１、インターロイキン６可溶性受容体、腫瘍壊死因子受容体Ｉ、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ、血管上皮カドヘリン、ＣＣＬ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４、細胞死受容体６、Ｆａｓリガンド、細胞間接着分子３、インターロイキン２受容体ガンマ、インターロイキン５受容体アルファ、Ｌ−セレクチン、血小板内皮細胞接着分子１、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、活性化白血球細胞接着、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、毛様体神経栄養因子受容体、細胞間接着分子１、インスリン様増殖因子１受容体、インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ、インターロイキン２受容体ベータ、インターロイキン１０受容体ベータ、マクロファージコロニー刺激因子受容体、血小板由来増殖因子受容体アルファ、若しくはＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４の１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記所定のセットの分析物が、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々、又は前記の各々を各々コードする少なくとも１つの遺伝子を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項６０】
前記動物がヒト、ネズミ、サル、イヌ、又はネコである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記所定のセットの分析物が、ＩＬ−１５、ＫＣ、若しくはレプチンの１つ若しくは複数、又は前記のいずれかをコードする遺伝子をさらに含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記分析物がイヌに由来し、前記プローブが抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記分子プローブのコレクションが、各分析物の活性、存在、又は発現の定量的決定を可能にする、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
各プローブがマトリックスに結合し、そのような結合したプローブの各々が、前記マトリックスと接触させた試料中で、前記プローブに対応する分析物の活性、存在、又は発現量を定量的に決定することが依然として可能である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記試料及び前記分子プローブのコレクションを、特異性又は検出シグナルを増加させることにより前記検出を支援する１つ又は複数の抗体を含む二次抗体のセットと接触させるさらなるステップを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
各プローブが別々のマトリックスに結合している、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記試料が組織又は体液である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記液体が血清又は血漿である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
所定のセットのタンパク質分析物の存在を単一試料中で決定するための検出可能な分子プローブのコレクションであって、前記セットが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々に対する特異的プローブを含み、各プローブが、前記セット中の１つのタンパク質の検出に特異的な抗体又は抗体断片であり、各プローブが、前記コレクション中の他の各プローブから独立して検出可能であり、そのような各プローブがマトリックスに結合し、結合した各プローブは、前記マトリックスと接触させた試料中で、前記セット中の前記対応するタンパク質を定量的に決定することが可能であり、前記タンパク質は、ヒト、ネズミ、サル、イヌ、又はネコである動物に由来する遺伝子によりコードされる、分子プローブのコレクション。
【請求項７０】
ＩＬ−１５、ＫＣ、及びレプチンの１つ又は複数に特異的なプローブをさらに含む、請求項６８に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項７１】
前記タンパク質分析物のセットが、
サイトカインインターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、又は形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩの１つ又は複数と、
ケモカインＢリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、又はＣＣＬ１の１つ又は複数と、
ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１、又はＰＹＹの１つ又は複数と、
アディポカイン単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、又はトロンビン活性化線溶阻害因子の１つ又は複数と、
ニューロン増殖因子毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、若しくはベータ神経成長因子、又は
増殖因子アンジオゲニン、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、黒色腫増殖刺激活性、オンコスタチンＭ、胎盤増殖因子、形質転換増殖因子ベータ３、アンフィレギュリン線維芽細胞増殖因子６、顆粒球コロニー刺激因子、幹細胞因子、血管内皮増殖因子、カルジオトロフィン１、増殖関連オンコジーンベータ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、肝細胞増殖因子、ヘルペスウィルス進入媒介物質、マトリックスメタロプロテアーゼ１０、マトリックスメタロプロテアーゼ７、マトリックスメタロプロテアーゼ９、組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子、血管内皮増殖因子Ｄ、血管内皮増殖因子受容体２、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ２、若しくは組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子、又は
可溶性受容体ｓＣＤ２３、Ｆａｓ（ＣＤ９５）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン２可溶性受容体アルファ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド、可溶性糖タンパク質１３０、インターロイキン１可溶性受容体１、インターロイキン６可溶性受容体、腫瘍壊死因子受容体Ｉ、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ、血管上皮カドヘリン、ＣＣＬ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４、細胞死受容体６、Ｆａｓリガンド、細胞間接着分子３、インターロイキン２受容体ガンマ、インターロイキン５受容体アルファ、Ｌ−セレクチン、血小板内皮細胞接着分子１、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、活性化白血球細胞接着、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、毛様体神経栄養因子受容体、細胞間接着分子１、インスリン様増殖因子１受容体、インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ、インターロイキン２受容体ベータ、インターロイキン１０受容体ベータ、マクロファージコロニー刺激因子受容体、血小板由来増殖因子受容体アルファ、若しくはＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４の１つ又は複数と、
をさらに含む、請求項６９に記載の分子プローブのコレクション。
【請求項７２】
所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を単一試料中で決定するためのキットであって、検出可能な分子プローブのコレクションを含む多重アッセイと、（１）前記多重アッセイを使用して所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現をどのように決定するかについての使用説明、（２）前記多重アッセイを使用して動物の健康状態をどのように評価するかについての使用説明、（３）前記多重アッセイを使用して動物の健康を改善するための栄養療法を処方するための使用説明、及び（４）動物による摂取に好適な１つ又は複数の成分の１つ又は複数とを、前記キット構成要素について適切に、単一包装中の別々の容器に又は仮想包装中の別々の容器に含むキット。
【請求項７３】
（１）所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を単一試料中で決定すること、（２）動物の健康状態を評価すること、又は（３）動物の健康を改善するための栄養療法を処方することのうちの１つ又は複数についての前記多重アッセイを使用するための情報又は使用説明を伝達するための手段であって、前記情報又は使用説明を含有する文書、デジタル記憶媒体、光記憶媒体、音声説明、又は視覚的表示を含む手段。
【請求項７４】
表示されたウェブサイト、視覚的表示キオスク、パンフレット、製品ラベル、添付文書、広告、チラシ、公表、音声テープ、ビデオテープ、ＤＶＤ、ＣＤ−ＲＯＭ、コンピュータ読取り可能なチップ、コンピュータ読取り可能なカード、コンピュータ読取り可能なディスク、コンピュータメモリ、又はその組合せからなる群から選択される、請求項７３に記載の手段。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
［０００１］本出願は、２００６年１０月６日に出願された米国仮出願第６０／８４９，９２８号明細書に対する優先権を主張し、その開示は、本参照により本明細書中に組み込まれる。
【発明の背景】
【０００２】
【発明の分野】
【０００３】
［０００２］本発明は、一般に、動物の健康状態を決定するための容易なアッセイに関し、具体的には、サイトカイン、ホルモン、及びアディポカインを測定して動物の健康状態及び健康状態に対する栄養の影響を評価する多重アッセイに関する。
【関連技術の説明】
【０００４】
［０００３］サイトカイン、アディポカイン、及びホルモンは、刺激及びストレスに対する生理的応答を統合する主要な生物学的媒介物質の仲間であり、したがって、健康状態及び／又は疾患の指標の「サイン」として有用である。これらの媒介物質の静的及び経時的な変化を両方とも評価することにより、ストレス要因に対する生体系又は生物の応答についての幾つかの理解が提供される。
【０００５】
［０００４］多重解析は、利便性を有し、Ｌｕｍｉｎｅｘ社製ｘＭＡＰプラットフォームなどの機器を使用すると多数の分析物に関する検査が可能になる。そのような多重解析は、単一のアッセイで、同時に１００個までの分析物の定量的測定を可能にする。したがって、そのようなアッセイは、本明細書中に記載された物質などの生物学的媒介物質に関する検査に要求されるデータの蓄積、及び関与する試料の性質に好適である。
【０００６】
［０００５］多数の生物学的媒介物質を測定するための技術は公知であるが、非常に少量の生体試料を使用して、動物、特にコンパニオンアニマルの健康状態を迅速に評価すると共に、動物の健康状態を改善するための栄養療法を処方する、生物学的に関連する複数のタンパク質を同時に測定可能な多重アッセイを開発するためのプローブのパネルが、未だに必要とされている。特に、動物の健康状態を評価するため、及び動物健康の改善に影響を与えるのに有用な治療介入又は栄養介入のためのプローブ及び方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
［０００６］したがって、本発明の目的は、非常に少量の生体試料を使用して、多数の生物学的に関連するタンパク質を同時に測定可能な多重アッセイを開発するためのプローブのパネルを提供することである。
【０００８】
［０００７］本発明の別の目的は、動物の健康状態を迅速に評価するための方法を提供することである。
【０００９】
［０００８］本発明の別の目的は、動物の健康状態を改善するための栄養療法を提供することである。
【００１０】
［０００９］本発明のさらなる目的は、本発明の多重アッセイと、種々の目的についてアッセイをどのように使用するかに関する使用説明との組合せを含むキットの形態の製品を提供することである。
【００１１】
［００１０］これら目的及び他の目的の１つ又は複数は、単一試料中の所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を決定するための検出可能な分子プローブの新規なコレクションを使用して達成される。分析物のセットは、少なくとも１つのサイトカイン又はその遺伝子、１つのケモカイン又はその遺伝子、１つのホルモン又はその遺伝子、及び１つのアディポカイン又はその遺伝子を含み、そのセット中の各分析物について、分子プローブのコレクションは、その分析物の活性、存在、又は発現を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含む。幾つかの実施形態では、分析物のセットは、１つ又は複数のニューロン増殖因子若しくはその遺伝子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子若しくはその遺伝子、可溶性受容体若しくはその遺伝子、又はその組合せをさらに含む。
【００１２】
［００１１］本発明の他の及びさらなる目的、特徴、及び利点は、当業者であれば直ちに明らかになろう。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】［００１２］メタボリック症候群における、インスリン抵抗性が有する中心的な役割、並びに心臓疾患、脳卒中及び／又は炎症といった最大リスクを示す図である。
【図２】［００１３］ＬＰＳ刺激に対するサイトカイン応答を示す図である。ＰＢＭＣは、異なる濃度のＬＰＳで３、６又は１８時間培養した。サイトカインについて、Ｃ／Ｓをアッセイした。ＩＬ−６［Ａ］、ＴＮＦα［Ｂ］、ＩＬ−１８［Ｃ］及びＩＬ−８［Ｄ］のデータを示す。Ｘ軸はＬＰＳの用量（ｎｇ／ｍｌ）、Ｙ軸は平均蛍光強度［ＭＦＩ］又は［ＭＦ］、Ｚ軸は時点を表す。
【発明の詳細な説明】
【００１４】
定義
［００１４］遺伝子の「活性」という用語は、遺伝子により果たされる生物学上の中心的役割に関係する任意の測定、例えば、遺伝子の転写の測定又はそれから転写されたＲＮＡ種の存在量の、静的な時点又はリアルタイムのいずれかでの測定を包含する。当業者であれば、本明細書中で使用される場合、遺伝子の「活性」の測定には、リアルタイムであろうともなかろうとも、特定の組織、細胞型、又は器官において、特定の遺伝子から生成されたｍＲＮＡの量を測定することも含まれ得ることを理解するであろう。同様に、当業者であれば、タンパク質分析物は、種々の有用な方法で測定できることも理解するであろう。タンパク質及び他の分析物の測定には、分析物の存在若しくは非存在、活性（例えば、酵素活性又は他の生物学的活性）、結合特性、半減期、ターンオーバー、又は分析物の他の測定可能な属性が含まれ得る。
【００１５】
［００１５］「分析物」という用語は、それらが細胞で翻訳された際の天然型タンパク質の形態で「遺伝子から発現された」タンパク質と、翻訳後の移行、プロセシング、及び修飾などを有するタンパク質とを含む。したがって、ある場合には、タンパク質分析物は、翻訳後に切断されてもよく、又は例えばリン酸化されてもよく、又は任意のアミノ酸残基の骨格若しくは側鎖などに他の修飾を有してもよい。分析物という用語には、活性の有無に関わらず、そのようなタンパク質の代謝誘導体、及び細胞中に見出される１つ又は複数の他の置換基を有する１つ又は複数のタンパク質の複合体も含む。好ましい実施形態では、分析物はタンパク質又はペプチドであり、プローブは抗体である。プローブのコレクション中の各抗体は、セット中の１つのタンパク質のみを特異的に認識し、選択されたセット中の各タンパク質に対するそのような抗体が、コレクション中に少なくとも１つ存在する。当業者であれば、いったんそのようなタンパク質のセットが選択されれば、それらのタンパク質のアミノ酸配列が公知の場合、それらのタンパク質がそこから発現された遺伝子又はｍＲＮＡに対応する核酸又は他のプローブのセットを設計することは、多くの場合当業者の技術範囲内にあることを理解するであろう。したがって、そのような応用は、本明細書中においても有用である。
【００１６】
［００１６］「動物」という用語は、サイトカイン、ホルモン、アディポカイン、ニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、又は本発明に有用な可溶性受容体を有する任意の動物を意味し、ヒト、トリ、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ、ネズミ、ヒツジ、及びブタ様動物、好ましくはヒト、ネズミ、サル、イヌ、及びネコを含むがそれらに限定されない。
【００１７】
［００１７］分子プローブのグループを参照する場合、「コレクション」という用語は、複数であることを意味する。典型的には、複数であることには制限はないが、１００個以下のプローブのコレクションが好ましい。
【００１８】
［００１８］「分子プローブ（複数可）」という用語は、遺伝子、その対応するＲＮＡ、又はそのタンパク質発現産物の存在若しくは活性を検出するために使用できる任意の分子を意味する。
【００１９】
［００１９］「パネル」という用語は、コレクションという用語と同義である。パネルという用語は、試料をスクリーニングする際のコレクションの使用をよりよく説明することがある。本明細書中で使用される場合、コレクションは、好ましくは、しかし必ずしもそうとは限らないが、対応するセットの分析物を多重様式で検出するために使用され、つまり、複数のプローブの各々についての結果が、全て単一の反応又はアッセイ容器から取得される。プローブのコレクションは、典型的には、分析物のセットに対応し、複数のプローブの各々は、セット中の特定の分析物に対応する。ある実施形態では、分析物は、遺伝子又は遺伝子産物（タンパク質）であり、プローブは、グループ（又はセット）中の遺伝子（又はそれらの発現産物）の各々の活性又は発現の測定を可能にする。より好ましくは、分析物は、遺伝子から発現されたタンパク質である。
【００２０】
［００２０］「単一包装」という用語は、キットの構成要素が、１つ若しくは複数の容器中に又は１つ若しくは複数の容器と物理的に付随し、製造、流通、販売、又は使用の単位であると見なされることを意味する。容器には、袋、箱、ビン、収縮フィルム包装、ホッチキスで留められた若しくはその他の形で添付された構成要素、又はその組合せが含まれるが、それらに限定されない。単一包装とは、製造、流通、販売、又は使用の単位と見なされるように、物理的に付随した個々のアッセイ構成要素の容器であってよい。
【００２１】
［００２１］「仮想包装」という用語は、他の構成要素を取得する方法を使用者に指示する１つ又は複数の物理的又は仮想的キット構成要素に関する使用説明が、例えば、１つの構成要素と、キットの使用方法に関する指示を取得するために、ウェブサイトへ行くこと、録音メッセージと聞くこと、視覚的メッセージを見ること、又は世話人若しくは指導員と連絡をとることを使用者に指示する使用説明書とを含有する包装において、キットの構成要素に付随していることを意味する。
【００２２】
発明
［００２２］１つの態様では、本発明は、所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を単一試料中で決定するための検出可能な分子プローブのコレクションを提供する。分析物のセットは、少なくとも１つのサイトカイン又はその遺伝子、１つのケモカイン又はその遺伝子、１つのホルモン又はその遺伝子、及び１つのアディポカイン又はその遺伝子を含む。セット中の各分析物について、分子プローブのコレクションは、その分析物の活性、存在、又は発現を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含む。これらのプローブのコレクションは、好ましくは単一の反応容器中において都合の良いアッセイ形式で実施される検出方法での使用が意図される。適切なパターン認識及び経路解析技術を併用すると、これらのパネルは、生理的なストレス要因及び介入の機能的な結果を予測又は評価することに役立つ。
【００２３】
［００２３］好ましくは、分子プローブは、タンパク質、核酸、又はその組合せを含むが、低分子若しくは他の化合物及び構造物、又はその組合せを含んでいてもよい。タンパク質を含むプローブの例には、抗体、抗体断片、受容体、結合タンパク質、及び酵素などが含まれる。それらは、タンパク質分析物だけでなく様々な他の分析物を探索することにも使用できる。核酸プローブには、その特異性が相補的なワトソンクリック型塩基対合を介して発生するものと共に、その特異性が他の相互作用から発生するか又は他の相互作用を含むものが含まれる。例えば、アプタマー、すなわちタンパク質又は他の分子などの特定の分析物を特異的に認識するように設計され得る核酸は、本明細書中で有用である。ＤＮＡザイム（ＤＮＡｚｙｍｅ）及びリボザイムなどの核酸酵素は、当技術分野で公知であり、公知の特異性を有し、本明細書中のプローブとして有用である。プローブは、結合分子及び受容体のリガンドを含んでいてもよい。遺伝子の発現産物、又はそれどころか遺伝子自体などの分析物に対するプローブとして、そのような全ての分子を使用することは、当技術分野で公知であり、したがって当業者であれば、本明細書中で使用するためのそのような分子を選択及び適応させる方法を理解するであろう。
【００２４】
［００２４］プローブは合成できるか、又は自然から分離できる。好ましい実施形態では、分子プローブは抗体である。１つの実施形態では、コレクション中の各抗体は、対応するセットのタンパク質中の１つのタンパク質分析物を特異的に認識でき、したがって識別するのに貢献できる。プローブは、溶液又は懸濁液などの任意の都合の良い様式で使用できる。ある実施形態では、プローブは、担体若しくはビーズなどの基質に結合できるか、又は有用な、都合が良い、及び／若しくは情報価値のあるアッセイ系を生成するために、アレイ若しくはマイクロアレイなどに配置できる。
【００２５】
［００２５］ある実施形態における所定のセットの分析物は、遺伝子のセット、又はタンパク質のセットである。ある実施形態では、タンパク質分析物のセットが選択され、対応するセットの遺伝子又はｍＲＮＡに基づくアッセイが開発される。分析物のセットは、パネルから取得される情報に対するその関係性に基づいて、合理的な方式で選択される。好ましい実施形態では、分析物のセットは、個体の健康状態に対する各分析物の関係性に基づいて選択される。
【００２６】
［００２６］１つの実施形態では、分析物のセットは、少なくとも１つのサイトカイン、１つのケモカイン、１つのホルモン、及び１つのアディポカインを含むタンパク質のセットである。セット中の各分析物について、分子プローブのコレクションは、その分析物の存在、活性又は発現を決定するのに好適な少なくとも１つのプローブを含み、すなわち、その存在、活性、又は発現が決定されるセット中の各分析物に対応するプローブが存在する。さらなる実施形態では、分子プローブのコレクションは前述のタンパク質分析物のセットであり、分析物のセットは、少なくとも１つの他のタイプのプロバイオティクス生物の１つ又は複数をさらに含む。
【００２７】
［００２７］別の実施形態では、分析物のセットは、サイトカインをコードする少なくとも１つの遺伝子、ケモカインをコードする１つの遺伝子、ホルモンをコードする遺伝子、及びアディポカインをコードする遺伝子を伴う遺伝子のセットを含む。１つの実施形態では、遺伝子分析物のセットは、ニューロン増殖因子をコードする少なくとも１つの遺伝子、別の増殖因子（すなわち、ニューロン増殖因子以外の増殖因子）をコードする少なくとも１つの遺伝子、若しくは可溶性受容体をコードする少なくとも１つの遺伝子、又はその任意の組合せをさらに含む。
【００２８】
［００２８］本発明による単一のコレクションに存在し得るプローブの数には実際の制限はないが、ある実施形態では、上限が１つのコレクション当たり１００個のプローブであることが好ましい。より小さなプローブのコレクションも好適である。例えば、約９０〜１００、８０〜９０、７０〜８０又は６０〜７０個のプローブのパネルは全て、本明細書中での使用に好適である。同様に、約１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０又は５０〜６０個のコレクションも、使用に好適である。具体的には列挙しないが、４〜１００個のプローブの考え得る全ての範囲が本明細書中に含まれるように、具体的には列挙しないが、４から１００個までの他の特定のプローブの数も本明細書中に含まれる。幾つかの重複が当初は望ましいが、その後は不必要と判明することがある場合、又は代替的にｉｎ  ｖｉｖｏでの役割についてより多くが発見若しくは理解されるように、追加的プローブを特定のコレクションに含めることが有用であり得ると判定される場合、プローブの範囲は特に有用である。他の実施形態では、例えば、プローブがアレイ又はマイクロアレイに結合できる場合、１つのコレクション当たり１００個のプローブを超過することが有用であり、したがって好ましいことがある。
【００２９】
［００２９］１つの実施形態では、分子プローブのコレクションは、遺伝子のセットの各々のタンパク質（すなわちコードされた遺伝子産物）を検出するための検出可能なプローブを含み、それによりセット中の各遺伝子の発現を決定する。そのような実施形態では、好ましくは、各プローブは、セット中の１つの遺伝子のコードされたタンパク質の検出に特異的である。幾つかの実施形態では、交差反応性は実験的に許容される程度であり得る。プローブ自体が抗体などの生体分子である場合、これは特にあてはまる。ある種の抗体の交差反応性は、当技術分野で認識されている。幾つかのタンパク質などの非常に類似した抗原に対する抗体の交差反応性が、特に重度の場合は問題を引き起こし得ることを、当業者であれば理解するであろう。１つの実施形態では、交差反応性は、高度に精製された抗体又はモノクローナル抗体などの、免疫学的に識別可能な特定のエピトープに対して単一特異的な抗体の使用を介して、最小限に抑えられるか又は排除される。別の実施形態では、交差反応性は、結合定数などの結合特性、又は結合強度の測定などに基づいて、対象とする活性から識別可能である。別の実施形態では、適切で注意深い対照の使用、又は結果のコンピュータ解析などの他の手段の使用により、ある種のタイプの交差反応性の実験データは補正が可能である。
【００３０】
［００３０］本明細書中で考察したように、分析物のセットには多数の選択があるが、分析物の選択には合理的な手法が好ましい。分子プローブのコレクションは、好ましくは、意図した使用目的を念頭に置いて設計又は選択される。その目的のために、分析物のセットは、公知の、予測された、又は本明細書中で発見された、特定の分析物の存在又は活性と動物の健康の種々の側面との関係性に基づく合理的な手法を介してあらかじめ定められる。動物における炎症の状態、並びにある種のホルモン及び他の生化学的シグナル又はシグナル伝達物質の相対的存在などの要因は、動物の健康状態に関わる詳細な情報の提供に役立てることができる。
【００３１】
［００３１］したがって、１つの実施形態中では、分析物のセットは、１つ又は複数のサイトカインを含むタンパク質のセットである。好ましくは、サイトカインには、インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、又は形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩの１つ又は複数が含まれる。
【００３２】
［００３２］種々の実施形態では、タンパク質のセットは、１つ又は複数のケモカイン、例えば、Ｂリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン（６  Ｃｋｉｎｅ）、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、又はＣＣＬ１を含む。もちろん、セットは、本明細書中で例証されたサイトカインに加えて、前述のケモカインを含むことができる。
【００３３】
［００３３］種々の実施形態では、タンパク質のセットは、１つ又は複数のホルモンを含む。ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１、又はＰＹＹが好ましい。当業者であれば、他のホルモンが選択できることを理解するであろう。好ましくは、ホルモンの活性又は存在が、下記で考察されるように、選択された栄養療法により影響を受けるか、又は動物の健康状態とホルモンの活性若しくは存在との間に関連がある。本明細書中でのように、タンパク質のセットの合理的な事前決定内であるとして本明細書中で例証された範疇の各々について、特定のホルモンの含有は排除せず、他の分子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、アディポカイン、及び本明細書中に記載された他の物質の含有に加えて、含有されていてよい。
【００３４】
［００３４］別の実施形態では、タンパク質のセットは、単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、又はトロンビン活性化線溶阻害因子を含むがこれらに限定されない、１つ又は複数のアディポカインを含む。
【００３５】
［００３５］ある実施形態では、所定のセットのタンパク質分析物は、ニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、若しくは可溶性受容体、又はその組合せをさらに含む。
【００３６】
［００３６］本明細書中で使用するためのニューロン増殖因子には、毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、又はベータ神経増殖因子が含まれるが、それらに限定されない。
【００３７】
［００３７］増殖因子は、好ましくは、アンジオゲニン、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、黒色腫増殖刺激活性、オンコスタチンＭ、胎盤増殖因子、形質転換増殖因子ベータ３、アンフィレギュリン線維芽細胞増殖因子６、顆粒球コロニー刺激因子、幹細胞因子、血管内皮増殖因子、カルジオトロフィン１、増殖関連オンコジーンベータ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、肝細胞増殖因子、ヘルペスウィルス進入媒介物質、マトリックスメタロプロテアーゼ１０、マトリックスメタロプロテアーゼ７、マトリックスメタロプロテアーゼ９、組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子、血管内皮増殖因子Ｄ、血管内皮増殖因子受容体２、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ２、又は組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子から選択される。
【００３８】
［００３８］可溶性受容体ｓＣＤ２３、Ｆａｓ（ＣＤ９５）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン２可溶性受容体アルファ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド、可溶性糖タンパク質１３０、インターロイキン１可溶性受容体Ｉ、インターロイキン６可溶性受容体、腫瘍壊死因子受容体Ｉ、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ、血管上皮カドヘリン、ＣＣＬ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４、細胞死受容体６、Ｆａｓリガンド、細胞間接着分子３、インターロイキン２受容体ガンマ、インターロイキン５受容体アルファ、Ｌ−セレクチン、血小板内皮細胞接着分子１、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、活性化白血球細胞接着、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、毛様体神経栄養因子受容体、細胞間接着分子１、インスリン様増殖因子１受容体、インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ、インターロイキン２受容体ベータ、インターロイキン１０受容体ベータ、マクロファージコロニー刺激因子受容体、血小板由来増殖因子受容体アルファ、又はＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、及びその他は、全て本明細書中で有用である。
【００３９】
［００３９］別の好ましい実施形態では、分析物のセットは、１つ又は複数のサイトカインをコードする１つ又は複数の遺伝子を含む遺伝子のセットである。好ましくは、コードされたサイトカインには、本明細書中で列挙されたサイトカインの１つ又は複数が含まれる：インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、又は形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩ。
【００４０】
［００４０］ある実施形態では、遺伝子のセットは、１つ又は複数のケモカインＢリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、又はＣＣＬ１をコードする１つ又は複数の遺伝子を含む。もちろん、セットは、本明細書中で例証されたサイトカインのこれらの遺伝子に加えて、前述のケモカインの１つ又は複数の遺伝子を含むことができる。
【００４１】
［００４１］種々の実施形態では、遺伝子のセットは、種々のホルモンをコードする１つ又は複数の遺伝子を含む。ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１、又はＰＹＹをコードする遺伝子が好ましい。好ましくは、コードされたホルモンの活性又は発現と動物の健康状態との間に関連がある。分析物のセットにおける、ホルモンをコードする１つ又は複数の遺伝子の含有は、他の分子、例えばサイトカイン、ケモカイン、アディポカイン、及び本明細書中に記載された他の物質をコードする１つ又は複数の遺伝子の含有を排除しない。
【００４２】
［００４２］別の実施形態では、遺伝子のセットは、アディポカイン単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、又はトロンビン活性化線溶阻害因子の１つ又は複数をコードする１つ又は複数の遺伝子を含む。他のアディポカインの遺伝子も、本明細書中で有用である。
【００４３】
［００４３］ある実施形態では、所定のセットの遺伝子は、ニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、又は可溶性受容体をコードする１つ又は複数の遺伝子をさらに含む。好ましいニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、及び可溶性受容体には、タンパク質のセット用に本明細書中で列挙されたものが含まれるが、それらに限定されない。他のそのような分子も、本明細書中での使用のために企図される。
【００４４】
［００４４］種々の実施形態では、分析物のセットは、１つ又は複数の一次又は二次代謝産物を含む。したがって、１つの実施形態では、分析物のセットには、１つ又は複数のエイコサノイド、大部分は生物学的機能のオートクリン及びパラクリン媒介物質として機能する、酸素化された疎水性分子の一種が含まれる。例えば、ロイコトリエンは、炎症応答において作用物質の役目を果たすことが公知である。幾つかは、遊走性好中球に対して走化性効果を有し、したがって関与する組織に必要な細胞をもたらすことに役立つ。ロイコトリエンは、特に細静脈の強力な血管収縮剤でもある。それらは気管支収縮において機能し、血管透過性を増加させることもできる。本明細書中での使用に好適なロイコトリエンには、ＬＴＡ４、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、及びＬＴＦ４が含まれるが、それらに限定されない。本明細書中で使用するための分析物として好適な他のエイコサノイド（ｅｉｓｃｏｓａｎｏｉｄ）には、トロンボキサン及びプロスタグランジンＨ誘導体、プロスタノイドが含まれる。さらに、レゾルビン、イソフラン、イソプロスタン、リポキシン、エポキシエイコサトリエン酸（ＥＥＴ）、ニューロプロテクチンＤ、及び２０炭素のエンドカンナビノイドなどの他のエイコサノイド化合物は、分析物として本明細書中での使用に好適であり得る。さらに、ロイコトリエン受容体ＣｙｓＬＴ１（システイニルロイコトリエン受容体タイプ１）、ＣｙｓＬＴ２（システイニルロイコトリエン受容体タイプ２）、及びＢＬＴ１（ロイコトリエンＢ４受容体）などのエイコサノイド受容体；プロスタノイド受容体ＰＧＤ２：ＤＰ−（ＰＧＤ２）、ＰＧＥ２；、ＥＰ１−（ＰＧＥ２）、ＥＰ２−（ＰＧＥ２）、ＥＰ３−（ＰＧＥ２）、ＥＰ４−（ＰＧＥ２）、ＰＧＦ２α：ＦＰ−（ＰＧＦ２α）、ＰＧ１２（プロスタサイクリン）：ＩＰ−（ＰＧ１２）、及びＴＸＡ２（トロンボキサン）：ＴＰ−（ＴＸＡ２）も、本明細書中の態様又は実施形態のいずれかにおける分析物として有用である。
【００４５】
［００４５］好ましい実施形態では、分子プローブのコレクションは、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々に対する特異的プローブを含む。プローブのコレクションは、ある実施形態では、ＩＬ−１５、ＫＣ、及びレプチンの１つ又は複数に対する特異的プローブをさらに含む。
【００４６】
［００４６］別の好ましい実施形態では、分子プローブのコレクションは、イヌアッセイ用の生成に好適なイヌ特異的分子を使用するプローブを含む：パネル；サイトカイン／ケモカイン；分析物：ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１５、ＫＣ。パネル；内分泌物；分析物：ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、レプチン。パネル；アディポカイン；分析物：アディポネクチン、レジスチン。別の実施形態では、分子プローブのコレクションは、ネコアッセイ用の生成に好適なネコの分子を使用するプローブを含む：パネル；サイトカイン／ケモカイン；分析物：ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、Ｆａｓ、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、Ｆｌｔ−３リガンド。パネル；内分泌物；分析物：ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、レプチン。パネル；アディポカイン；分析物：アディポネクチン、レジスチン。
【００４７】
［００４７］１つの実施形態では、分子プローブは、所定のセットの分析物中の各分析物の存在、活性、又は発現などを検出可能である。好ましくは、分析物のセットは、本明細書中で示されたタンパク質及び／又は遺伝子のセットである。より好ましくは、遺伝子は、ヒト、サル、イヌ、又はネコ由来である。好ましい実施形態では、プローブのコレクションは、イヌ又はネコタンパク質のセットの存在又は活性の検出に特異的である。
【００４８】
［００４８］１つの実施形態では、分子プローブのコレクションは、イヌ由来のタンパク質分析物（すなわち、遺伝子のセットに由来する発現産物）の測定又は検出に特異的な複数の抗体である。好ましくは、プローブは、試料中に存在する各特異的タンパク質の量などの、各タンパク質の発現量の定量的決定を提供する。ある実施形態中では、結果はより質的であり、相対的な量に関する情報を提供し、例えば、試料間の差異若しくは変化、又は１個体由来の試料群における経時的な変化を示す。他の実施形態では、選択されたタンパク質に対応する遺伝子のセットについて、類似の測定が取得される。
【００４９】
［００４９］種々の実施形態では、記載された分子プローブのコレクションの場合、各プローブは、マトリックス又は担体に結合し、そのような結合したプローブの各々は、マトリックスと接触させた試料中で、分析物のセットの各々の活性量又は存在量を定量的に決定することが依然として可能である。当業者であれば、本明細書中に記載されたタイプのプローブは、より容易なアッセイの開発を可能にするために、様々な方法で結合、固定化、又は担持できることを理解するであろう。そのような実施形態では、プローブのコレクション全体は単一のマトリックスに結合でき、例えばタンパク質（又は発現された遺伝子産物）のセットの空間的の分離を介して、例えば電気泳動的に、又はプローブの各々に対応する個別の若しくは個々の検出可能なシグナルの検出を介して、区別することができる。幾つかの実施形態では、プローブは、アレイ又はマイクロアレイとして空間的に配置される。「チップ」などのようなアレイの使用も、本明細書中で有用である。或いは、各プローブは別々のマトリックスに結合してもよく、そのようなプローブの使用も当技術分野において公知である。プローブが結合され得るマトリックスの例には、種々の膜、ポリマー、担体、ビーズ、チップ、アレイ、及びアッセイウェルなどが含まれる。ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳなどのアッセイ法を使用して、マトリックスに結合されたそのようなプローブを検出できる。理想的には、そのような結合は、所定の遺伝子のセット中の複数の遺伝子を単一の反応容器中でアッセイできる多重アッセイの設計を支援できる。種々のタイプのポリマー又はガラスビーズへの分子プローブの結合は、例えば、１つのプローブを別のプローブと区別するための方法として識別標識及びＦＡＣＳを使用する多重アッセイを開発するための単純な形式を提供できる。したがって、１つの実施形態では、各プローブが別々のマトリックスに結合されている分子プローブのコレクションが提供され、各プローブは、コレクション中の他の各プローブから独立して検出可能である。プローブは、例えばシグナルを増幅若しくはクエンチするか、又は有用であるアッセイ開発を容易にすることができるシグナル及び他の分子などの種々の分子構成要素に、共有結合で又は他の手段を介してのいずれかで結合させることもできる。或いは、そのようなシグナルエンハンサー又はクエンチャー、及び他の分子は、物理的にも化学的にもそれに結合されていないが、プローブと併せて使用できる。
【００５０】
［００５０］種々のサイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカイン、同様にニューロン増殖因子、増殖因子、及び可溶性受容体は、本明細書中では、それらの略語又は他の省略命名参照で表されることがある。「参照；体系的（利用可能な場合は括弧中で）；及び名称：」として示される、そのような略語及び他の参照名のリストを以下に示す。
【００５１】
［００５１］サイトカイン。ＩＦＮ−α；インターフェロンアルファ：ＩＦＮ−γ；インターフェロンガンマ：ＩＬ−１２（ｐ４０）；インターロイキン１２ｐ４０：ＩＬ−１８；インターロイキン１８：ＩＦＮ−β；インターフェロンベータ：ＩＦＮ−ω；インターフェロンオメガ：リンフォトキシンβＲ；（ＴＮＦＲＳＦ３）；リンフォトキシンベータＲ：リンフォタクチン（Ｌｐｔｎ）；（ＸＣＬ１）；リンフォトキシン：ＩＬ−６；インターロイキン６：ＩＬ−８；（ＣＸＣＬ８）；インターロイキン８：ＴＮＦ−α；腫瘍壊死因子アルファ：ＩＬ−４；インターロイキン４：ＩＬ−１０；インターロイキン１０：ＴＧＦ−β１；形質転換増殖因子ベータ−１：ＴＮＦ−β；腫瘍壊死因子ベータ：ＩＬ−３；インターロイキン３：ＩＬ−５；インターロイキン５：ＩＬ−７；インターロイキン７：ＩＬ−１３；インターロイキン１３：ＩＬ−１５；インターロイキン１５：ＩＬ−１α；インターロイキン１アルファ：ＩＬ−１β；インターロイキン１ベータ：ＩＬ−２；インターロイキン２：ＩＬ−１１；インターロイキン１１：ＩＬ−１２（ｐ７０）；インターロイキン１２ｐ７０：ＩＬ−１６；インターロイキン１６：ＩＬ−１７；インターロイキン１７：ＲＡＮＴＥＳ；（ＣＣＬ５）；Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ：ＩＬ−２１；インターロイキン２１：ＩＬ−９；インターロイキン９：及びＴＧＦ−βＲＩＩＩ；形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩ。
【００５２】
［００５２］ケモカイン。ＢＬＣ（ＢＣＡ−１）；Ｂリンパ球化学誘引物質：ＥＮＡ−７８；（ＣＸＣＬ５）；上皮細胞由来好中球活性化ペプチド：Ｅｏｔ；（ＣＣＬ１１）；エオタキシン：Ｅｏｔ−２；（ＣＣＬ２４）；エオタキシン２：ＭＣＰ−２；（ＣＣＬ８）；単球走化性タンパク質２：ＭＣＰ−３；（ＣＣＬ７）；単球走化性タンパク質３：ＭＩＦ；マクロファージ遊走阻止因子：ＭＩＰ−１α；（ＣＣＬ３）；マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ：ＭＰＩＦ；骨髄球系前駆体阻止因子１：ＭＳＰ；マクロファージ刺激タンパク質：ＧＣＰ−２；（ＣＸＣＬ６）；顆粒球走化性タンパク質２：Ｉ−３０９；（ＣＣＬ１）；無：ＩＰ−ｌ０；（ＣＸＣＬ１０）；インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０：ＬＩＦ；白血病抑制因子：Ｍ−ＣＳＦ；マクロファージコロニー刺激因子：ＭＣＰ−１；（ＣＣＬ２）；単球走化性タンパク質１：ＭＤＣ；（ＣＣＬ２２）；マクロファージ由来ケモカイン：ＭＩＧ；（ＣＸＣＬ９）；無：ＭＩＰ−１β；（ＣＣＬ４）；マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ：ＭＩＰ−１δ；（ＣＣＬ１５）；マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ：ＮＡＰ−２；好中球活性化ペプチド２：ＰＡＲＣ；肺性及び活性化調節ケモカイン：ＳＤＦ−１α；間質細胞由来因子アルファ：ＴＡＲＣ；（ＣＣＬ１７）；胸腺性及び活性化調節ケモカイン：ＢＴＣ；ベータセルリン：６Ｃカイン；（ＣＣＬ２１）；６Ｃカイン：ＦＧＦ酸（ＦＧＦ−１）；酸性線維芽細胞増殖因子：フラクタルカイン；（ＣＸ３ＣＬ１）；フラクタルカイン：ＨＣＣ−１；（ＣＣＬ１４）；ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１：ＭＣＰ−４；（ＣＣＬ１３）；単球走化性タンパク質４：ＭＩＰ−３β；（ＣＣＬ１９）；マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ：ＰＦ４；（ＣＸＣＬ４）；血小板第４因子：ＲＡＮＫ；（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）；ＮＦカッパＢ受容体活性化因子：ＣＴＡＣＫ；（ＣＣＬ２７）；皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン：Ｅｏｔ−３；（ＣＣＬ２６）；エオタキシン３：ＦＧＦ−４；線維芽細胞増殖因子４：ホリスタチン；ホリスタチン：ＧＲＯ−γ；（ＣＸＣＬ３）；増殖関連オンコジーンガンマ：Ｉ−ＴＡＣ；（ＣＸＣＬ１１）；インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質：ｓＬＩＦ−Ｒα（ｇｐ１９０）；白血病抑制因子受容体アルファ：ミッドカイン；ミッドカイン：ＭＩＰ−３α；（ＣＣＬ２０）；マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ：プレイオトロフィン（ＰＴＮ）；プレイオトロフィン：ＳＤＦ−１β；（ＣＸＣＬ１２）；間質細胞由来因子ベータ：ＴＥＣＫ；（ＣＣＬ２５）；胸腺発現性ケモカイン：ＴＧＦ−α；形質転換増殖因子アルファ：ＴＲＡＮＣＥ（ＲＡＮＫ  Ｌ）；（ＴＮＦＳＦ１１）；ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン：ｓＶＡＰ−１；及び血管接着タンパク質１。
【００５３】
［００５３］ホルモン。プロラクチン；プロラクチン：ＩＧＦＢＰ−２；インスリン様増殖因子結合タンパク質２：レプチン／ＯＢ；レプチン：インスリン；インスリン：レジスチン；レジスチン：アディポネクチン；アディポネクチン：グルカゴン；グルカゴン：ＧＬＰ−１；グルカゴン様ペプチド１：及びＰＹＹ；ペプチドＹＹ：
［００５４］アディポネクチン。ＭＣＰ−１；単球走行性タンパク質１：レプチン；レプチン：レジスチン；レジスチン：アディポネクチン；アディポネクチン：ＩＬ−６；ＩＬ−６：ＴＮＦ−α；ＴＮＦアルファ：及びｔＰＡＩ−１；トロンビン活性化線溶阻害因子。
【００５４】
［００５５］ニューロン増殖因子。ＣＮＴＦ；毛様体神経栄養因子；ＧＤＮＦ；グリア細胞由来神経栄養因子：ＢＤＮＦ；脳由来神経栄養因子：ＮＴ−３；ニューロトロフィン３：ＮＴ−４；ニューロトロフィン４：及びβ−ＮＧＦ；ベータ神経増殖因子。
【００５５】
［００５６］増殖因子。ＡＮＧ；アンジオゲニン：ＥＧＦ；上皮増殖因子：ＦＧＦ−７；線維芽細胞増殖因子７：ＦＧＦ−９；線維芽細胞増殖因子９：ＧＭ−ＣＳＦ；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子：ＧＲＯ−α（ＭＧＳＡ）；（ＣＸＣＬ１）；黒色腫増殖刺激活性：ＯＳＭ；オンコスタチンＭ：ＰＩＧＦ；胎盤増殖因子：ＴＧＦ−β３；形質転換増殖因子ベータ３：ＡＲ；アンフィレギュリン；ＦＧＦ−６；線維芽細胞増殖因子６：Ｇ−ＣＳＦ；顆粒球コロニー刺激因子：ＳＣＦ；幹細胞因子：ＶＥＧＦ；血管内皮増殖因子：ＣＴ−１；カルジオトロフィン１：ＧＲＯ−β；（ＣＸＣＬ２）；増殖関連オンコジーンベータ：ＨＢ−ＥＧＦ；ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子：ＨＧＦ；肝細胞増殖因子：ＨＶＥＭ；（ＴＮＦＲＳＦ１４）ヘルペスウィルス進入媒介物質：ＭＭＰ−１０（トータル）；マトリックスメタロプロテアーゼ１０：ＭＭＰ−７（トータル）；マトリックスメタロプロテアーゼ７：ＭＭＰ−９（トータル）；マトリックスメタロプロテアーゼ９：ＴＩＭＰ−１；組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子：ＶＥＧＦ−Ｄ（ＦＩＧＦ）；血管内皮増殖因子Ｄ：ＶＥＧＦ−Ｒ２（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）；血管内皮増殖因子受容体２：塩基性ＦＧＦ（ＦＧＦ−２）；塩基性線維芽細胞増殖因子：ＩＧＦ−Ｉ；インスリン様増殖因子Ｉ：ＩＧＦ−ＩＩ；インスリン様増殖因子ＩＩ：ＩＧＦＢＰ−１；インスリン様増殖因子結合タンパク質１：ＩＧＦＢＰ−３；インスリン様増殖因子結合タンパク質３：ＩＧＦＢＰ−４；インスリン様増殖因子結合タンパク質４：ＩＧＦＢＰ−６；インスリン様増殖因子結合タンパク質６：ＭＭＰ−１（トータル）；マトリックスメタロプロテアーゼ１：ＭＭＰ−２（トータル）；マトリックスメタロプロテアーゼ２：及びＴＩＭＰ−２；組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子。
【００５６】
［００５７］可溶性受容体。ｓＣＤ２３；無：Ｆａｓ；Ｆａｓ（ＣＤ９５）：ＩＬ−１ｒａ；インターロイキン１受容体アンタゴニスト：ＩＬ−２ｓＲα；インターロイキン２可溶性受容体アルファ：ＴＲＡＩＬ；（ＴＮＦＳＦ１０）；ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド：ｕＰＡＲ；ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体：Ｆｌｔ−３Ｌ；ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド：ｓｇｐ１３０；可溶性糖タンパク質１３０：ＩＬ−１  ｓＲ１；インターロイキン１可溶性受容体１：ＩＬ−６  ｓＲ；インターロイキン６可溶性受容体：ＴＮＦ  ＲＩ；腫瘍壊死因子受容体Ｉ：ＴＮＦ−ＲＩＩ；腫瘍壊死因子受容体ＩＩ：ｓＶＥ−カドヘリン；血管上皮カドヘリン：ＣＣＬ２８；ＣＣＬ２８；ＣＴＬＡ−４；細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４：ＤＲ６；（ＴＮＦＲＳＦ２１）；細胞死受容体６：Ｆａｓリガンド；（ＴＮＦＳＦ６）；Ｆａｓリガンド：ＩＣＡＭ−３（ＣＤ５０）；細胞間接着分子３：ＩＬ−２Ｒγ；インターロイキン２受容体ガンマ：ＩＬ−５Ｒα（ＣＤ１２５）；インターロイキン５受容体アルファ：Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）；Ｌ−セレクチン：ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）；血小板内皮細胞接着分子１：ＳＣＦ  Ｒ；幹細胞因子受容体：ＴＲＡＩＬ  Ｒ４；（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）；ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４：ＡＬＣＡＭ（ＣＤ１６６）；活性化白血球細胞接着：ＣＤ２７；（ＴＮＦＲＳＦ７）；ＣＤ２７：ＣＤ３０；（ＴＮＦＳＦ８）；ＣＤ３０：ＣＤ４０；ＣＤ４０：ＣＮＴＦ  Ｒα；毛様体神経栄養因子受容体：ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）；細胞間接着分子１：ＩＧＦ−１Ｒ；インスリン様増殖因子１受容体：ＩＬ−１ｓＲＩＩ；インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ：ＩＬ−２Ｒβ；インターロイキン２受容体ベータ：ＩＬ−１０  Ｒβ；インターロイキン１０受容体ベータ：Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ；マクロファージコロニー刺激因子受容体：ＰＤＧＦ  Ｒα；血小板由来増殖因子受容体アルファ：及びＴＲＡＩＬ  Ｒ４；（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）；ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４。
【００５７】
［００５８］別の態様では、本発明は、分析物のセットの相対的活性又は発現の決定により、動物の健康状態を評価するための方法を提供する。一般に、本方法は以下のステップを含む：
ａ）動物に由来する生体試料を取得するステップであり、その試料が所定のセットの目的分析物を少なくとも含有することが推定されるステップ。分析物のセットは、少なくとも１つのサイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカインを含む。
ｂ）所定のセットの分析物の各々の活性又は存在を決定するための分子プローブのコレクションと試料を接触させるステップであり、セット中の各分析物について、分子プローブのコレクションが、その分析物の存在又は測定可能な活性を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含むステップ。そのプローブに対応する分析物が試料中に存在する場合、コレクション中の各プローブは、独立して検出可能なシグナルを生成可能である。
ｃ）試料がコレクションと接触した後で生成される、独立して検出可能なシグナルを検出するステップ。
ｄ）検出可能なシグナルを、試料中の所定のセットの分析物の各々の少なくとも相対的存在又は活性と相関させるステップ；
ｅ）試料中の所定のセットの分析物の各々の相対的存在又は活性を、公知の又は所定の健康状態のパラメーターと相関させるステップ；及び
ｆ）ステップｅ）で確立された相関に従って、動物の健康状態の決定を行うステップ。
【００５８】
［００５９］別の実施形態では、分析物のセットは遺伝子のセットを含み、本方法は以下のステップを含む：
ａ）動物に由来する生体試料を取得するステップであり、その試料が所定のセットの目的遺伝子又はそれらの遺伝子の発現産物を少なくとも含有することが推定されるステップ。遺伝子のセットは、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカインを各々コードする少なくとも１つの遺伝子を含む。
ｂ）所定のセットの遺伝子の各々の活性又は発現を決定するための分子プローブのコレクションと試料を接触させるステップであり、セット中の各遺伝子について、分子プローブのコレクションが、その遺伝子の活性又は発現を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含むステップ。そのプローブに対応する遺伝子又は遺伝子の発現産物が試料中に存在する場合、コレクション中の各プローブは、独立して検出可能なシグナルを生成可能である。
ｃ）試料がコレクションと接触した後で生成される、独立して検出可能なシグナルを検出するステップ。
ｄ）検出可能なシグナルを、試料中の所定のセットの遺伝子の各々の少なくとも相対的活性又は発現と相関させるステップ；
ｅ）試料中の所定のセットの遺伝子の各々の相対的活性又は発現を、公知の又は所定の健康状態のパラメーターと相関させるステップ；及び
ｆ）ステップｅ）で確立された相関に従って、動物の健康状態の決定を行うステップ。
【００５９】
［００６０］本方法は、数多くの実際的で潜在的な用途を有する。表１は、幾つかのそのような用途の部分的なリストを示す。
【００６０】
表１
【表１】
2010505420.tif 000002
【００６１】
［００６１］ある実施形態では、分析物のセットは、本明細書中で考察されたサイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカインに加えて、ニューロン増殖因子、ニューロン増殖因子以外の増殖因子、又は可溶性受容体の１つ又は複数をさらに含む。分析物が遺伝子である場合、前述の限定に従って、セットは対応する遺伝子を含む。好ましくは、検出可能なプローブは、タンパク質（又は遺伝子のセットの各々のコードされた遺伝子産物）の各々の存在若しくは活性、又は遺伝子の各々の活性若しくは発現の検出に特異的である。
【００６２】
［００６２］検出可能なプローブは、抗体、抗体断片、リガンド、受容体、又は結合タンパク質、核酸、例えばＤＮＡ又は核酸を含む。好ましくは、セットはタンパク質を含み、プローブのコレクションは、タンパク質の各々に対する抗体を含む。
【００６３】
［００６３］プローブのコレクションのための、本明細書中で考察された方法の１つの実施形態では、タンパク質又は遺伝子のセットは、サイトカインインターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン１２ｐ４０、インターロイキン１８、インターフェロンベータ、インターフェロンオメガ、リンフォトキシンベータＲ、リンフォトキシン、インターロイキン６、インターロイキン８、腫瘍壊死因子アルファ、インターロイキン４、インターロイキン１０、形質転換増殖因子ベータ１、腫瘍壊死因子ベータ、インターロイキン３、インターロイキン５、インターロイキン７、インターロイキン１３、インターロイキン１５、インターロイキン１アルファ、インターロイキン１ベータ、インターロイキン２、インターロイキン１１、インターロイキン１２ｐ７０、インターロイキン１６、インターロイキン１７、ＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、インターロイキン２１、インターロイキン９、若しくは形質転換増殖因子ベータ受容体ＩＩＩであるタンパク質又はそれをコードする１つ又は複数の遺伝子を含む。
【００６４】
［００６４］種々の実施形態では、分析物の所定のセットは、代替として又は前述のものに加えて、ケモカインＢリンパ球化学誘引物質、上皮細胞由来好中球活性化ペプチド、エオタキシン、エオタキシン２、単球走化性タンパク質２、単球走化性タンパク質３、マクロファージ遊走阻止因子、マクロファージ炎症性タンパク質１アルファ、骨髄球系前駆体阻止因子１、マクロファージ刺激タンパク質、顆粒球走化性タンパク質２、インターフェロンガンマ誘導性タンパク質１０、白血病抑制因子、マクロファージコロニー刺激因子、単球走化性タンパク質１、マクロファージ由来ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質１ベータ、マクロファージ炎症性タンパク質１デルタ、好中球活性化ペプチド２、肺性及び活性化調節ケモカイン、間質細胞由来因子アルファ、胸腺性及び活性化調節ケモカイン、ベータセルリン、６Ｃカイン、酸性線維芽細胞増殖因子、フラクタルカイン、ヘモフィルトレートＣＣケモカイン１、単球走化性タンパク質４、マクロファージ炎症性タンパク質３ベータ、血小板第４因子、ＮＦカッパＢ受容体活性化因子、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン、エオタキシン３、線維芽細胞増殖因子４、ホリスタチン、増殖関連オンコジーンガンマ、インターフェロンガンマ誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質、白血病抑制因子受容体アルファ、ミッドカイン、マクロファージ炎症性タンパク質３アルファ、プレイオトロフィン、間質細胞由来因子ベータ、胸腺発現性ケモカイン、形質転換増殖因子アルファ、ＴＮＦ関連アクチビン誘導サイトカイン、血管接着タンパク質１、ＣＸＣＬ９、若しくはＣＣＬ１である１つ又は複数のタンパク質、又はそれをコードする１つ又は複数の遺伝子を含み得る。
【００６５】
［００６５］さらに他の実施形態では、所定のセットの遺伝子又はタンパク質には、ホルモンプロラクチン、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、レプチン、インスリン、レジスチン、アディポネクチン、グルカゴン、グルカゴン関連ペプチド１若しくはＰＹＹであるタンパク質又はそれをコードする１つ又は複数の遺伝子が含まれる。
【００６６】
［００６６］１つの実施形態では、所定のセットの遺伝子又はタンパク質には、アディポカイン単球走化性タンパク質１、レプチン、レジスチン、アディポネクチン、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、若しくはトロンビン活性化線溶阻害因子であるタンパク質又はそれをコードする１つ又は複数の遺伝子も含まれ得る。
【００６７】
［００６７］他の実施形態では、所定のセットの遺伝子又はタンパク質は、以下の１つ若しくは複数をコードする１つ若しくは複数の遺伝子、又はタンパク質自体をさらに多様に含む：ニューロン増殖因子毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、若しくはベータ神経増殖因子；増殖因子アンジオゲニン、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子７、線維芽細胞増殖因子９、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、黒色腫増殖刺激活性、オンコスタチンＭ、胎盤増殖因子、形質転換増殖因子ベータ３、アンフィレギュリン線維芽細胞増殖因子６、顆粒球コロニー刺激因子、幹細胞刺激因子、血管内皮増殖因子、カルジオトロフィン１、増殖関連オンコジーンベータ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、肝細胞増殖因子、ヘルペスウィルス進入媒介物質、マトリックスメタロプロテアーゼ１０、マトリックスメタロプロテアーゼ７、マトリックスメタロプロテアーゼ９、組織性メタロプロテアーゼ１阻害因子、血管内皮増殖因子Ｄ、血管内皮増殖因子受容体２、塩基性線維芽細胞増殖因子、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ２、若しくは組織性メタロプロテアーゼ２阻害因子；又は可溶性受容体ｓＣＤ２３、Ｆａｓ（ＣＤ９５）、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン２可溶性受容体アルファ、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド、可溶性糖タンパク質１３０、インターロイキン１可溶性受容体１、インターロイキン６可溶性受容体、腫瘍壊死因子受容体Ｉ、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ、血管上皮カドヘリン、ＣＣＬ２８、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４、細胞死受容体６、Ｆａｓリガンド、細胞間接着分子３、インターロイキン２受容体ガンマ、インターロイキン５受容体アルファ、Ｌ−セレクチン、血小板内皮細胞接着分子１、幹細胞因子受容体、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４、活性化白血球細胞接着、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、毛様体神経栄養因子受容体、細胞間接着分子１、インスリン様増殖因子１受容体、インターロイキン１可溶性受容体ＩＩ、インターロイキン２受容体ベータ、インターロイキン１０受容体ベータ、マクロファージコロニー刺激因子受容体、血小板由来増殖因子受容体アルファ、若しくはＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド受容体４。
【００６８】
［００６８］本方法の１つの好ましい実施形態では、所定のセットの分析物は、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々をコードする１つ又は複数の遺伝子を含む。別の実施形態では、分析物のセットは前述のタンパク質自体を含む。種々の実施形態では、動物は、ヒト、ネズミ、サル、イヌ、又はネコである。ある実施形態では、所定のセットの分析物は、ＩＬ−１５、ＫＣ、又はレプチンをコードする１つ又は複数の遺伝子、又はタンパク質自体をさらに含む。
【００６９】
［００６９］本方法の１つの好ましい実施形態では、分析物はイヌ由来であり、プローブは、タンパク質又はそれらをコードする遺伝子の発現産物に特異的な抗体である。１つの実施形態では、分子プローブのコレクションは、タンパク質の量、又は各遺伝子の発現量の定量的決定を可能にする。
【００７０】
［００７０］本方法は、マトリックスに結合した各プローブを用いて実施でき、そのような結
合したプローブの各々は、マトリックスと接触させた試料中で、そのプローブに対応する遺伝子の発現量を定量的に決定することが依然として可能である。
【００７１】
［００７１］幾つかの実施形態では、本方法は、試料及び分子プローブのコレクションを、例えば、抗体の特定の部分又は抗体のタイプの存在を検出でき、セット中の各遺伝子の発現産物とコレクション中の対応するプローブとの特異的結合を検出できる１つ又は複数の抗体を含む二次抗体のセットに接触させるステップをさらに含む。そのような検出用の二次抗体を使用することは、ある種のＥＬＩＳＡ法及び種々のいわゆる「サンドイッチ」法など、抗体に基づくアッセイの開発における当業者により理解される。プローブ又は二次抗体のいずれかは、酵素などのシグナル発生又は増幅系にさらに結合することができる。
【００７２】
［００７２］ある実施形態における本方法は、各プローブが、ビーズ又はポリマー性担体材料などの別々のマトリックスに結合されている分子プローブのコレクションの使用を伴う。
【００７３】
［００７３］本方法は生体試料の使用を伴い、好ましくは、それは、所定のセット中に遺伝子を含む可能性が高いか又はその発現産物を含む可能性が高く、取得が容易で比較的無痛であり、豊富にあるか又はその非存在が動物に無害であり、再生可能な試料である。当業者であれば、種々のそのような生体試料を思いつくであろう。例としては、種々の組織及び液体の試料が含まれる。例としては、血液、血清、血漿、尿、組織抽出物、脳脊髄液（ＣＦＳ）、関節液、及び細胞抽出物が含まれる。組織の培養細胞、抽出物、上清液、及び使用済み培地も、本明細書中では有用である。好ましい試料は、血液、血清、及び血漿である。試料のサイズは重要ではなく、試料は、有用で、実用的で、及び分析的に意味のある任意のサイズであってよい。１ｍｌ未満の試料が好ましい。試料は、典型的には１００μｌ未満であり、例えば７５又は５０μｌである。より小さな試料も本明細書中では有用である。小型化アッセイがそうであるように、標準的な実験室用機器でのアッセイが可能なほど十分に小さい試料が、もちろん好ましい。
【００７４】
［００７４］別の態様では、本発明は、動物の健康を改善するための栄養療法を処方するための方法を提供する。本方法は、
ａ）所定のセットの動物の目的分析物を選択するステップであり、分析物の活性、又はその存在を、動物の健康状態、及び動物の栄養療法と相関させることができ、そのセットが、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、及びアディポカインのうちの少なくとも１つのタンパク質又はそれらの各々をコードする１つの遺伝子を含むステップと、
ｂ）動物に由来する生体試料を取得するステップであり、当該試料が、所定のセットの分析物、又はその発現産物を含有することが推定され、当該試料が、動物の現行の栄養療法を示すステップと、
ｃ）所定のセットの分析物又はその発現産物の各々の活性又は存在を決定するための分子プローブのコレクションと試料を接触させることにより、ベースライン測定値を決定するステップであり、セット中の各分析物について、分子プローブのコレクションが、その分析物の活性又は存在を検出するのに好適な少なくとも１つのプローブを含み、そのプローブに対応する分析物又は分析物の発現産物が試料中に存在する場合、各プローブが、独立して検出可能なシグナルを生成可能であるステップと、
ｄ）試料がコレクションと接触した後で生成される、独立して検出可能なシグナルを検出するステップと、
ｅ）検出可能なシグナルを、試料中の所定のセットの分析物又はその発現産物の各々の相対的活性又は存在と相関させるステップと、
ｆ）試料中の所定のセットの遺伝子の各々の相対的活性又は発現を、公知の健康状態のパラメーターと相関させるステップと、
ｇ）それに従って、現行の栄養療法下にある動物の健康状態の決定を行うステップと、
ｈ）動物の現行の栄養療法と比較して、主要栄養素の含量若しくは原料、微量栄養素の含量若しくは原料、補助的な食事成分、又は食事のカロリー含量の１つ又は複数を調整することにより、動物における１つ又は複数の試験的な栄養療法又は試験用の栄養補助食品を処方するステップと、
ｉ）所定のセットの分析物の１つ又は複数の活性、存在又は発現を変化させるのに有効な量及び期間で、１つ又は複数の試験的な栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せを動物に提供するステップと、
ｊ）試験的な栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せが動物の健康状態を改善したかどうかを決定するために、各試験的な栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せについて、その動物に由来する新しい試料を用いてステップｂ）からステップｇ）までを繰り返すステップと、
ｋ）動物の健康状態を改善する、処方された栄養療法若しくは栄養補助食品、又はその組合せを選択するステップと
を含む。
【００７５】
［００７５］ステップｊ）は、ステップｂ）からステップｇ）までを繰り返すことを指すが、しかしながら、これらのステップは、ステップｊ）の後、すなわちその動物が新しい栄養療法を受容した後で、その動物から採取された新しい試料を用いて繰り返されることを、当業者であれば理解するであろう。
【００７６】
［００７６］本明細書中で提供された他の方法及び組成物を用いる場合、所定の分析物の選択は、その存在、活性、又は発現を健康状態及び栄養療法の両方と相関させることができ、有用な結果を提供するであろう、それらの分析物を選択する本質的に合理的な過程である。健康状態との相関を全く示さない分析物及びいかなる栄養療法とも相関を全く示さない分析物の選択は回避すべきであるが、そのような分析物は、対照又は試験的な分析物などとして含まれていてよい。
【００７７】
［００７７］本明細書中に記載された方法は、本明細書中に記載されたように、任意の動物での任意の栄養療法の処方に有用である。種々の好ましい実施形態では、本方法は、動物が、肥満である、糖尿病に罹っている、糖尿病になりやすい徴候を示す、望ましくないレベルの炎症を有する、望ましくないレベルのインスリン抵抗性を有する、メタボリック症候群、早発性アテローム性動脈硬化、グルコース代謝異常、又は脂肪代謝異常を有する場合に特に有用である。多くのそのような状態は、当技術分野で公知であり、栄養療法、特に長期的な栄養療法と緩やかな又はより厳密な関係性をもち得る。１つの実施形態では、処方された栄養療法、栄養補助食品、又はその組合せは、動物の免疫機能を改善するか、炎症を低減するか、インスリン抵抗性を低減するか、又はその組合せを示す。
【００７８】
［００７８］種々の実施形態では、処方された栄養療法、栄養補助食品、又はその組合せは、以下の効果の１つ又は複数を有する：（１）動物の炎症を低減し、抗炎症性サイトカインを増加させるか、炎症促進性サイトカインを低減するか、又はサイトカイン炎症媒介物質を減少させるかの１つ又は複数；（２）動物のインスリン抵抗性を低減し、アディポネクチンを増加させるか、レジスチンを減少させるか、又はレプチンを減少させるかの１つ又は複数；或いは（３）異脂肪血症、炎症、高血圧、血管反応性の変化、又は内臓型肥満の１つ又は複数を低減するか、又は線溶を改善する。特定の実施形態では、分析物のセットは、本発明の他の態様用に本明細書中に記載された分析物の各々及びいずれかを含む。
【００７９】
［００７９］好ましい実施形態では、所定のセットの分析物は、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、アディポネクチン、及びレジスチンの各々をコードする１つ又は複数の遺伝子、又は対応するタンパク質を含む。追加的に、ＩＬ−１５、ＫＣ、又はレプチンをコードする１つ又は複数の遺伝子、又は対応するタンパク質が含まれていてよい。
【００８０】
［００８０］ある実施形態では、動物は、ヒト、ネズミ、サル、イヌ、又はネコである。好ましい実施形態では、分析物はイヌに由来するタンパク質であり、分子プローブは、そのようなタンパク質の量の定量的決定を可能にする抗体である。幾つかの実施形態では、各プローブは、マトリックスに結合し、試料がマトリックスと接触する際に、そのプローブに対応する分析物の量を定量的に決定することが依然として可能である。
【００８１】
［００８１］本方法は、試料及び分子プローブのコレクションを、二次プローブのセット、例えば、特異性を増加させるか又は増幅を介してシグナルを増加させる１つ又は複数の抗体を含む二次抗体と接触させるさらなるステップを含むこともできる。１つの実施形態では、各プローブは別々のマトリックスに結合されている。
【００８２】
［００８２］本明細書中に記載したように、試料は、組織又は体液などの任意の生体試料であってよい。例としては、血液、血清、血漿、尿、組織抽出物、脳脊髄液（ＣＦＳ）、関節液、及び細胞抽出物が含まれる。安定的に若しくは過渡的に培養された組織若しくは細胞、又は上清液、使用済みの培地、若しくはその浸出物などの生体外の試料も、本明細書中で有用である。血清若しくは血漿を含む試料又は血清若しくは血漿からなる試料は、本方法での使用に好ましい。
【００８３】
［００８３］さらなる態様では、本発明は、所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を単一試料中で決定するのに好適なキットを提供する。キットは、本明細書中で定義された検出可能な分子プローブのコレクションと、（１）多重アッセイを使用して所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現をどのように決定するかについての使用説明、（２）多重アッセイを使用して動物の健康状態をどのように評価するかについての使用説明、（３）多重アッセイを使用して動物の健康を改善するための栄養療法を処方するための使用説明、及び（４）動物による摂取に好適な１つ又は複数の成分のうちの１つ又は複数とを、キットの構成要素について適切に、単一包装中の別々の容器に又は仮想包装中の別々の容器に含む多重アッセイを含む。ある実施形態では、キットは、多重アッセイと、動物の健康を改善するための栄養療法を処方するのに有用なビタミン及びミネラルなどの栄養的に完全なペット用食品又は栄養補助食品などの食品組成物とを含む。
【００８４】
［００８４］キットが仮想包装を含む場合、キットは、１つ又は複数の物理的なキット構成要素と組み合わせた仮想環境中の使用説明に限定される。キットは、多重アッセイで有用な試薬を混合するための器具、又は多重アッセイを支援及び／若しくは取り扱うための器具などの追加品目を含むことができる。
【００８５】
［００８５］別の態様では、本発明は、（１）所定のセットの分析物の各々の活性、存在、又は発現を単一試料中で決定すること、（２）動物の健康状態を評価すること、又は（３）動物の健康を改善するための栄養療法を処方することのうち１つ又は複数について、多重アッセイを使用するための情報又は使用説明を伝達するための手段を提供する。この手段には、情報又は使用説明を含有する文書、デジタル記憶媒体、光記憶媒体、音声説明、又は視覚的表示が含まれる。ある実施形態では、通報手段は、そのような情報又は使用説明を含有する、表示されたウェブサイト、視覚的表示キオスク（ｖｉｓｕａｌ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｋｉｏｓｋ）、パンフレット、製品ラベル、添付文書、広告、チラシ、公表、音声テープ、ビデオテープ、ＤＶＤ、ＣＤ−ＲＯＭ、コンピュータ読取り可能なチップ、コンピュータ読取り可能なカード、コンピュータ読取り可能なディスク、コンピュータメモリ、又はその組合せである。有用な情報には、（１）多重アッセイで使用するための生体試料を取り扱うための方法及び技術、（２）多重アッセイ及びその使用について質問がある場合に使用するインディックデュアル（Ｉｎｄｉｃ  ｄｕａｌ）の連絡先のうちの１つ又は複数が含まれる。
【００８６】
［００８６］様々となり得るため、本発明は、本明細書中に記載された特定の方法、手順、及び試薬に限定されない。さらに、本明細書中で使用された用語は、特定の実施形態のみを説明するのが目的であり、本発明の範囲を限定することを意図しない。本明細書中及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明白にそうでないと指示しない限り、複数の参照を含む。例えば、「ａ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ」への参照は、複数のそのようなサイトカインを含む。同様に、「含む（複数）」、「含む（単数）」及び、「含んでいる」という単語は、排他的ではなく包含的に解釈されるべきである。
【００８７】
［００８７］別段に定義されない限り、本明細書中で使用された全ての技術的及び科学的な用語並びに任意の略語は、本発明の分野における当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載されたものと類似の又は等価な任意の組成物、方法、製品、又は他の手段若しくは材料が本発明の実施に使用できるが、本明細書中には、好ましい組成物、方法、製品、又は他の方法若しくは材料が記載されている。
【実施例】
【００８８】
［００８８］本発明は、以下の実施例によりさらに例証され得るが、これらの実施例は単に例証の目的のために含まれており、そうでないと明示されない限り、本発明の範囲を限定するとは意図されないことが理解されよう。
【００８９】
実施例１
［００８９］魚油及びビタミンＥを含む、改変された食事療法を用いたマウス研究。実験の目的は、改変された食事により影響を受けた分子経路を同定し、寿命の増加に関する作用機構を理解することであった。実験の設計：グループＩ：１０〜１６カ月齢から、改変された食事を与えたマウス［ｎ＝１９］；グループＩＩ：１０〜１６カ月齢から、対照の食事を与えたマウス［ｎ＝１９］；グループＩＩＩ：１７〜２３カ月齢から、改変された食事を与えたマウス［ｎ＝７］；及びグループＩＶ：１７〜２３カ月齢から対照の食事を与えたマウス［ｎ＝９］。実験：多重法を使用して、２７個のタンパク質（ＭＩＰ−１α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＫＣ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＰ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、インスリン、レプチン、ｔＰＡＩ−１、レジスチン、及びアディポネクチン）のレベルを、７５μｌの血漿試料を使用して測定すること。Ｌｕｍｉｎｅｘ社製の機器を使用し、２７個の選択されたタンパク質に対応するプローブのパネルを用いて行う多重測定。時点：オスＣ５７Ｂｌ／６マウスを使用した。マウスは、１０又は１７カ月齢のいずれかから食事療法を開始した。マウスには、改変された食事（Ｔ）又は対照の食事（Ｃ）のいずれかを６カ月間与え、マウスは、１０から１６カ月齢まで（「Ｙ」、若年マウス、グループＩ及びＩＩ）、又は１７から２３カ月齢まで（「Ｏ」、老年マウス、グループＩＩＩ及びＩＶ）のいずれかであった。安楽死させたマウスから血液試料を取得し、臓器を急速冷凍して組織バンクを生成した。２７個のタンパク質分析物について、バイオ試料を分析した。結果は表２に示す。
【００９０】
表２Ａ−サイトカイン
【表２】
2010505420.tif 000003
【００９１】
表２Ａ−サイトカイン（続き）
【表３】
2010505420.tif 000004
【００９２】
表２−続き
【表４】
2010505420.tif 000005
【００９３】
表２−続き（続き）
【表５】
2010505420.tif 000006
【００９４】
表２−続き
【表６】
2010505420.tif 000007
【００９５】
表２−続き（続き）
【表７】
2010505420.tif 000008
【００９６】
表２Ｂ：アディポカイン
【表８】
2010505420.tif 000009
【００９７】
表２Ｂ：アディポカイン（続き）
【表９】
2010505420.tif 000010
【００９８】
表２Ｃ．アディポネクチン
【表１０】
2010505420.tif 000011
【００９９】
表２Ｃ．アディポネクチン（続き）
【表１１】
2010505420.tif 000012
【０１００】
［００９０］表２Ａ、２Ｂ及び２Ｃを参照すると、データは、改変された食事療法がマウスの炎症を低減したことを示す［ｐ≦０．０５］。炎症促進性サイトカインＩＬ−６［Ｙ］及びＩＬ−１２［Ｏ］が減少した；炎症媒介物質ＩＬ−７［Ｙ、Ｏ］、ＩＬ−１５［Ｏ］及びＩＬ−１７［Ｏ］が減少した；抗炎症性サイトカインＩＬ−１０［Ｏ］及びＩＬ−１３［Ｏ］は増加した。「Ｏ」は老年マウスのみにおいて有意であることを指し、「Ｙ」は若年マウスグループのみにおいて有意であることを指し、「ＯＹ」は若年及び老年マウスの両方において有意であることを指す。表現型では、試験グループ内のより老年のマウスには、対照グループと比較してアトピー性皮膚炎の発生がほとんどなく、老化過程に典型的な炎症過程の低減を示した。グループＩ及びＩＩＩにおいては、炎症促進性サイトカインＩＬ−６及びＩＬ−１２が、それぞれ減少した。炎症媒介物質と考えられるサイトカイン（ＩＬ−７、ＩＬ−１５、及びＩＬ−１７）は、減少した。ＩＬ−７は、グループＩ及びＩＩＩにおいて減少したが、ＩＬ−１５及びＩＬ−１７は、グループＩＩＩにおいて減少した。抗炎症性サイトカインＩＬ−１０及びＩＬ−１３は、グループＩＩＩにおいて増加し、炎症に関する上記の観察と一致した。改変された栄養療法は、インスリン抵抗性を改善させた［ｐ≦０．０５］。グループＩＩＩのマウスでは、アディポネクチンの増加が観察された。グループＩのマウスでは、レジスチン及びレプチンの低下が、各々観察された。明らかに、試験的食事は炎症を低減させ、インスリン抵抗性を改善させた。それらの両方は老年に典型的な特徴と関連している。データは、種々のバイオマーカーを使用して動物の健康状態をアッセイすることができることも示す。
【０１０１】
実施例２
多重アッセイの開発及び最適化
［００９１］材料及び方法：多重アッセイは３つのステップで開発した。［１］試薬の獲得／特徴付け：イヌアッセイ用にイヌ分子に特異的な抗体を取得し、サンドイッチイムノアッセイ法を開発し、それらの性能を特徴付け、組み合わせてイヌアッセイ用に示された多重アッセイパネルを開発し、［２］方法の開発：その後、個々のアッセイを最適化して交差反応性を除去し、感度及びダイナミックレンジを増強し、［３］予備検証：その後、多重アッセイパネルを、（ａ）健康なイヌ由来の正常血清及び血漿、（ｂ）リポポリサッカリド［ＬＰＳ］で刺激されたイヌＰＢＭＣ由来の培養上清［Ｃ／Ｓ］で検証した。イヌアッセイ−［パネル；サイトカイン／ケモカイン；分析物：ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１５、ＫＣ。パネル；内分泌物；分析物：ＧＬＰ−１、グルカゴン、インスリン、レプチン。パネル；アディポカイン；分析物：アディポネクチン、レジスチン。］結果は表３に示す。
【０１０２】
［００９２］結果及び考察：［１］試薬の獲得／特徴付け：栄養上及び治療上の対象の様々な重要領域を包含する２０個のイヌ分子を、標的として選択した。これらの分子に特異的な幾つかの抗体対をスクリーニングした。これらはイヌ特異的抗体を含み、イヌ特異的抗体が利用可能でなかった場合は、マウス、げっ歯動物又はヒトの分子に対して誘発された抗体をスクリーニングした。イヌタンパク質で最も良好なシグナルを産出した抗体対を選択して、ビーズに基づくサンドイッチイムノアッセイ法を開発した［Ｌｕｍｉｎｅｘ社製ｘＭＡＰプラットフォーム］。［２］方法の開発：最終的な多重化パネルを取得するために、ステップ［１］から選択されたアッセイを、交差反応性、感度及びダイナミックレンジについてさらに最適化した。最適化の後は、多重パネル内の交差反応性は無視できる程度であった。「血清マトリックス」中の分析物の種々の濃度を使用して、「標準曲線」を作成した。ＩＬ−４及びＩＬ−１８［イヌサイトカインパネル］並びにレプチン及びインスリン［内分泌性ホルモンパネル］用の標準曲線の解析は、それらが、残りの分析物と比較してわずかに低い感度を有することを示す。ＩＬ−８に対する抗体は、他のサイトカインと比較して、より高いバックグラウンドシグナルを示すと考えられる。しかしながら、これらの分析物のほとんどは通常レベルがｐｇ／ｍｌの範囲であるため、これらのアッセイ特徴は、生理レベルの測定に干渉しない。［３］検証：正常血清／血漿を使用して、これらの多重化パネルの予備検証を実施した。表３Ａは、サイトカイン及びケモカインについてのデータを要約する［３９匹の健康なイヌ、ジャーマンシェパード、ラブラドルレトリーバー、シュナウツァー、シベリアンハスキー、年齢は２から６歳］。表３Ｂは、ＧＬＰ−１分解を防止するための阻害剤を含有する２つの血清試料中のイヌ内分泌性ホルモンについてのデータを要約する。表３Ｃは、アディポカインパネルから得られたデータを要約する［１７匹のビーグル及び雑種に由来する血清試料］。
【０１０３】
表３Ａ：正常なイヌ血清及び血漿中のサイトカイン(濃度、pg/ml)
【表１２】
2010505420.tif 000013
【０１０４】
表３Ｂ：正常なイヌ血清試料中のホルモン
【０１０５】
【表１３】
2010505420.tif 000014
【０１０６】
表３Ｃ：正常なイヌ血清試料中のアディポネクチン（Ａｃｒｐ３０）及びレジスチン
【表１４】
2010505420.tif 000015
【０１０７】
［００９３］これらのパネルが、ＬＰＳで刺激した後でＰＢＭＣにより分泌されたサイトカインを検出したことを確認するための実験も実施した。代表的なデータを図２に示す。ＩＬ−６、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−８及びＩＬ−１８のＬＰＳ用量依存的分泌及び時間依存的分泌が、明白に観察された。
【０１０８】
［００９４］結論：血清、血漿及び組織培養上清中の２０個の異なるイヌタンパク質を測定可能な多重化パネルの開発に成功した。パネルには、アッセイが過去に利用可能ではなかった幾つかのタンパク質のアッセイが含まれる。正常血清／血漿試料を用いたパネルの予備検証は、パネルが血清／血漿中のこれらの分子を測定可能であることを実証する。ＬＰＳで処理されたＰＢＭＣに由来する培養上清で実施されたアッセイは、パネルのアッセイが、ＬＰＳ刺激、すなわちＩＬ−６、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−８、及びＩＬ−１８に応答して、用量依存的な様式と共に時間依存的な様式で分泌されると予想されるサイトカインを検出可能であることを実証する。さらなる検証実験が、適切な栄養及び臨床研究で現在進行中である。適切なパターン認識及び経路解析技術を併用すると、これらのパネルは、生理的なストレス要因及び介入の機能的な結果を予測／評価することに役立つだろう。
【０１０９】
［００９５］本明細書中に記載された好ましい実施形態に対する種々の変更及び改変は、当業者には明白であることを理解されたい。そのような変更及び改変は、本主題の趣旨及び範囲から逸脱せずに、且つその意図した利点を損なわずに行うことができる。したがって、そのような変更及び改変は添付の特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【０１１０】
［００９６］本明細書中で引用又は参照された全ての特許、特許出願、出版物、及び他の参照は、法律により許される範囲で参照により本明細書中に組み込まれる。それらの参照の考察は、そこでなされた主張を単に要約することを意図している。そのようないかなる特許、特許出願、出版物、若しくは参照、又はその任意の部分も、本発明の関連従来技術であることを承認するものではなく、そのような特許、特許出願、出版物、及び他の参照に関する正確性及び妥当性に異議を申し立てる権利は、特に確保されている。
【図１】
2010505420.tif 000016
【図２】
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【国際調査報告】
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