(57)【要約】【課題】類似構造の既知の化合物と比べて高い活性の特異性、毒性の低下および血中での改善された安定性を示す細胞毒素薬剤を提供すること。【解決手段】本開示は、強力な細胞毒素である薬剤−リガンド複合体を提供し、リンカーが単一のアミノ酸を有する場合、薬剤とリガンドの間にリンカーを含む。本開示はまた、薬剤−リガンド複合体を含有する組成物およびそれを用いて治療する方法に関する。【選択図】          図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式の化合物又はその薬学的に許容できる塩。
【化１】
2010519310.tif 000075
（式中、
Ｌ1は置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロアルキル基であり；
ｍは０、１、２、３、４、５、もしくは６の整数であり；
ＡＡ1は天然アミノ酸および非天然αアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｌ2は置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、または置換もしくは未置換ヘテロアリールであり；
Ｌ3は置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、または置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルであり；
ｏは０または１であり；
Ｌ4はリンカーメンバーであり；
ｐは０または１であり；
Ｘ4は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、および標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化２】
2010519310.tif 000076
を含み、ここで前記環系Ａは置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルであり；
ＥおよびＧが、Ｈ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、ヘテロ原子、および単結合から独立して選択されるメンバーであるか、またはＥおよびＧが結合し、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリールならびに置換および未置換ヘテロシクロアルキルから選択される環系が形成され；
ＸはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり；
Ｒ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ3はＯＲ11であり、
ここでＲ11はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、二リン酸塩、三リン酸塩、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ12Ｒ13、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ12Ｒ13、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ12）2、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ12Ｒ13、ＳＲ12、またはＳｉＲ12Ｒ13Ｒ14であり、
ここでＲ12、Ｒ13、およびＲ14はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキルならびに置換および未置換アリールから独立して選択されるメンバーであり、ここでＲ12およびＲ13はそれらの結合対象である窒素または炭素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＳＯ3、ＳＯ2Ｒ15、ＮＲ15Ｒ16、ＮＲ16Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、およびＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、またはＲ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子とともに結合し、４〜６員を有する置換もしくは未置換のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環系が形成され；
ここで、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ15およびＲ16はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリール、置換および未置換ヘテロシクロアルキル、ならびに置換および未置換ペプチジルから独立して選択され、ここでＲ15およびＲ16はそれらの結合対象である窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ6は存在または不在のいずれかの単結合であり、存在する場合、Ｒ6およびＲ7は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ7は前記シクロプロピル環内でＲ6と結合されたＣＨ2−Ｘ1または−ＣＨ2−であり、ここでＸ1は離脱基であり、
ここでＲ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15またはＲ16の少なくとも１つはＤを前記化合物の前記残基に結合させる）
【請求項２】
Ｄが以下の構造を有する請求項１に記載の化合物。
【化３】
2010519310.tif 000077
（式中、ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、
ここでＲ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ1はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ8、またはＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8は置換アルキル、未置換アルキル、ＮＲ9Ｒ10、ＮＲ9ＮＨＲ10、またはＯＲ9であり、
ここでＲ9およびＲ10はＨ、置換および未置換アルキルならびに置換および未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり；かつ
Ｒ2はＨ、置換アルキルまたは未置換低級アルキルである）
【請求項３】
Ｄが以下の構造を有する請求項１に記載の化合物。
【化４】
2010519310.tif 000078
（式中、ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、
ここでＲ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ1はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ8、またはＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、
ここでＲ9およびＲ10はＨ、置換および未置換アルキルならびに置換および未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ1'はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、
ここでＲ9およびＲ10はＨ、置換および未置換アルキルならびに置換および未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ2はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、未置換ヘテロアルキル、シアノまたはアルコキシであり；かつ
Ｒ2'はＨ、置換もしくは未置換低級アルキルまたは未置換ヘテロアルキルである）
【請求項４】
Ｄが以下の構造を有する請求項１に記載の化合物。
【化５】
2010519310.tif 000079
（式中、
ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、
ここでＲ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ32はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ15Ｒ16、ＮＲ16Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、またはＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2（式中、ｎは１〜２０の整数である）から選択され、かつ
Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15、Ｒ16、またはＲ32の少なくとも１つはＤを前記化合物の前記残基に結合させる）
【請求項５】
Ｄが
【化６】
2010519310.tif 000080
であり、
Ｒ1はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ8、またはＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、
ここでＲ9およびＲ10はＨ、置換および未置換アルキルならびに置換および未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ1'はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、
ここでＲ9およびＲ10はＨ、置換および未置換アルキルならびに置換および未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ2はＨ、置換もしくは未置換低級アルキル、未置換ヘテロアルキル、シアノまたはアルコキシであり；かつ
Ｒ2'はＨ、置換もしくは未置換低級アルキルまたは未置換ヘテロアルキルである請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ＡＡ1がＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌからなる群から選択される請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ＡＡ1がＣｉｔ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、およびＳｅｒからなる群から選択される請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ15またはＲ16の少なくとも１つがＤを前記化合物の前記残基に結合させる請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
ｍが０でなく、かつＬ1が自己犠牲リンカーである請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｌ2が存在しかつ自己犠牲リンカーである請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｌ3が存在し、かつ−Ｌ3−ＮＨ−が、
【化７】
2010519310.tif 000081
から選択され、ここで
ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、
ここでＲ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルである請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
−Ｌ3−ＮＨ−が、
【化８】
2010519310.tif 000082
である請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、
【化９】
2010519310.tif 000083
【化１０】
2010519310.tif 000084
から選択され、ここでＸ1はＣｌまたはＢｒである請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘ1がＣｌである請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｘ4が標的化剤である請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｘ4が抗体である請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容できる担体を含有する医薬製剤。
【請求項１８】
細胞を殺滅する方法であって、前記細胞を殺滅するのに十分な量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を前記細胞に投与するステップを含む方法。
【請求項１９】
前記細胞が腫瘍細胞である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
哺乳類対象における腫瘍の成長を遅延または停止させる方法であって、前記成長を遅延または停止させるのに十分な量の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００７年２月２１日に出願された米国仮特許出願第６０／８９１，０２８号明細書の優先権を主張するものであり、その利益は米国特許法第１１９条下で本明細書で主張され、その開示はその全体が参照により本明細書中に援用される。
【０００２】
本発明は、薬剤およびリガンドに結合しかつインビボで切断される単一のアミノ酸を有するリンカーを提供する。リンカーは、本発明の細胞毒素のプロドラッグおよび複合体ならびに他の診断および治療部分の形成に用いられる。
【背景技術】
【０００３】
多数の治療剤、特に癌化学療法において特に有効なものは、インビボで急性毒性、特に骨髄毒性および粘膜毒性、ならびに慢性的な心毒性および神経毒性を示すことが多い。かかる強力な毒性はその用途を制限しうる。より多数のより安全な特定の治療剤、特に抗腫瘍剤の開発は、腫瘍細胞に対するより高い有効性およびこれらの生成物の副作用（毒性、非腫瘍細胞の破壊など）の数および重症度の低減にとって望ましい。一部の既存の治療剤に伴う別の困難は、血漿中でのその最適とはいえない安定性である。これらの化合物を安定化するための官能基の付加は、活性の有意な低下をもたらす。したがって、化合物を安定化する一方で許容可能な治療活性レベルを維持するための方法を特定することが望ましい。
【０００４】
より選択的な細胞毒性剤に対する探索が数十年にわたり非常に盛んに行われており、ここで用量制限毒性（すなわち正常組織上での細胞毒素の望ましくない活性）は癌治療が奏功しないことの主因の一つである。例えば、ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシンは極めて強力な細胞毒素であることが知られている。
【０００５】
ＣＣ−１０６５は、１９８１年、Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏｍｐａｎｙにより最初にストレプトマイセス・ゼレンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｚｅｌｅｎｓｉｓ）から単離され（Ｈａｎｋａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３１：１２１１頁（１９７８年）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３３：９０２頁（１９８０年）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３４：１１１９頁（１９８１年））、インビトロおよび実験動物の双方で強力な抗腫瘍活性および抗菌活性を有することが見出された（Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４２：９９９頁（１９８２年））。ＣＣ−１０６５は、好ましくは５’−ｄ（Ａ／ＧＮＴＴＡ）−３’および５’−ｄ（ＡＡＡＡＡ）−３’の配列を有する小溝内部の二本鎖Ｂ−ＤＮＡに結合し（Ｓｗｅｎｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４２：２８２１頁（１９８２年））、３’−アデニンのＮ３位置を分子内に存在するそのＣＰＩ左側ユニットによりアルキル化する（Ｈｕｒｌｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２６：８４３頁（１９８４年））。ＣＣ−１０６５は、その強力かつ広範な抗腫瘍活性にもかかわらず、実験動物において遅発性死亡を引き起こすことからヒトへの使用は不可である。
【０００６】
ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシンの多数の類似体および誘導体は当該技術分野で公知である。これらの化合物のうち多くの構造、合成および特性の探索についてはレビューがなされている。例えば、Ｂｏｇｅｒら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３５：１４３８頁（１９９６年）；およびＢｏｇｅｒら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９７：７８７頁（１９９７年）を参照のこと。
【０００７】
協和発酵工業のあるグループが、多数のＣＣ−１０６５誘導体を調製している。例えば、米国特許第５，１０１，０３８号明細書；米国特許第５，６４１，７８０号明細書；米国特許第５，１８７，１８６号明細書；米国特許第５，０７０，０９２号明細書；米国特許第５，７０３，０８０号明細書；米国特許第５，０７０，０９２号明細書；米国特許第５，６４１，７８０号明細書；米国特許第５，１０１，０３８号明細書；および米国特許第５，０８４，４６８号明細書；ならびに公開されたＰＣＴ出願の国際公開第９６／１０４０５号パンフレットおよび公開された欧州特許出願公開第０５３７５７５Ａ１号明細書を参照のこと。
【０００８】
Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｕｐｊｏｈｎ）もまた、ＣＣ−１０６５の誘導体の調製に積極的に取り組んでいる。例えば、米国特許第５，７３９，３５０号明細書；米国特許第４，９７８，７５７号明細書、米国特許第５，３３２，８３７号明細書および米国特許第４，９１２，２２７号明細書を参照のこと。
【０００９】
研究ではまた、構造の特定の化学的または酵素的修飾によりインビボで薬剤（活性治療化合物）に変換可能な化合物であるプロドラッグの形態の新しい治療剤の開発が注目されている。毒性を低下させることを目的として、この変換は好ましくは循環系または非標的組織でなく活性部位または標的組織に限られる。しかし、多くのプロドラッグは、プロドラッグが患者の体内の所望の部位に達する前に、プロドラッグを分解または活性化する酵素の存在に起因して、血中および血清中で安定性が低いことを特徴とするため、課題が多い。
【００１０】
Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂは、特定のリソソーム酵素切断可能な抗腫瘍剤複合体について述べている。例えば、米国特許第６，２１４，３４５号明細書を参照のこと。この特許はアミノベンジルオキシカルボニルを提供する。
【００１１】
Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、薬剤送達剤中のｐ−アミノベンジルエーテルについての記載がある出願公開の米国特許出願公開第２００３／００９６７４３号明細書および米国特許出願公開第２００３／０１３０１８９号明細書を有する。これら出願中に記載のリンカーは、アミノベンジルエーテル組成物に限定される。
【００１２】
他のグループもまたリンカーについて記載している。例えばｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２、５２７７頁（１９９９年）；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３、３０９３頁（２０００年）；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６６、８８１５頁（２００１年）；国際公開第０２／０８３１８０号パンフレット；Ｃａｒｌら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２４、４７９頁（１９８１年）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｏｒｇ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８、３３４７頁（１９９８年）を参照のこと。これらのリンカーは、アミノベンジルエーテルスペーサー、伸長された電子カスケード（ｅｌｏｎｇａｔｅｄ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｃａｓｃａｄｅ）および環化スペーサー系、環化除去（ｃｙｃｌｉｓａｔｉｏｎ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）スペーサー、例えばｗ−アミノアミノカルボニル、およびｐ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
細胞毒素薬剤のインビボでの安定性を含む安定性は、依然として対処されるべき重要な課題である。さらに、多数の化合物の毒性がその有用性を低下させることから、薬剤毒性が低下した組成物、例えば切断可能なプロドラッグの形成が必要とされる。したがって、当該技術分野における進歩にかかわらず、哺乳類、特にヒトの治療を目的とした改善された治療剤、より具体的には類似構造の既知の化合物と比べて高い活性の特異性、毒性の低下および血中での改善された安定性を示す細胞毒素の開発に対する要望はあり続ける。本発明はこれらの要望に対処する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、薬剤およびリガンドがリンカーを介して結合された薬剤−リガンド複合体に関する。これらの複合体は、目的の活性部位に活性形態で選択的に送達され、次いで切断により活性薬剤を放出しうる強力な細胞毒素である。
【００１５】
一実施形態は、式
【化１】
2010519310.tif 000002
（式中、
Ｌ1は置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロアルキル基であり；
ｍは０、１、２、３、４、５、もしくは６の整数であり；
ＡＡ1は天然アミノ酸および非天然αアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｌ2は置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、または置換もしくは未置換ヘテロアリールであり；
Ｌ3は置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、または置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルであり；
ｏは０または１であり；
Ｌ4はリンカーメンバーであり；
ｐは０または１であり；
Ｘ4は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、および標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化２】
2010519310.tif 000003
を含み、ここで環系Ａは置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルであり；
ＥおよびＧはＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、ヘテロ原子、および単結合から独立して選択されるメンバーであるか、またはＥおよびＧは結合し、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリールならびに置換および未置換ヘテロシクロアルキルから選択される環系が形成され；
ＸはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり；
Ｒ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ3はＯＲ11であり、
ここでＲ11はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、二リン酸塩、三リン酸塩、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ12Ｒ13、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ12Ｒ13、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ12）2、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ12Ｒ13、ＳＲ12、またはＳｉＲ12Ｒ13Ｒ14であり、
ここでＲ12、Ｒ13、およびＲ14はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキルならびに置換および未置換アリールから独立して選択されるメンバーであり、ここでＲ12およびＲ13はそれらの結合対象である窒素または炭素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＳＯ3、ＳＯ2Ｒ15、ＮＲ15Ｒ16、ＮＲ16Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、およびＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、またはＲ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子とともに結合し、４〜６員を有する置換もしくは未置換のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環系が形成され；
ここで
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ15およびＲ16はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリール、置換および未置換ヘテロシクロアルキル、ならびに置換および未置換ペプチジルから独立して選択され、ここでＲ15およびＲ16はそれらの結合対象である窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ6は存在または不在のいずれかの単結合であり、存在する場合、Ｒ6およびＲ7は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ7は前記シクロプロピル環内でＲ6と結合されたＣＨ2−Ｘ1または−ＣＨ2−であり、ここでＸ1は離脱基であり、
ここでＲ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15またはＲ16の少なくとも１つはＤを化合物の残基に結合させる）
の化合物あるいはその薬学的に許容できる塩である。
【００１６】
これらの化合物のいずれかを薬剤−リガンド複合体として使用可能であるかまたはそれを用いて薬剤−リガンド複合体の形成が可能である。
【００１７】
さらに別の態様では、本発明は医薬製剤に関する。かかる製剤は、典型的には本発明の複合化合物および薬学的に許容できる担体を含有する。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、本発明の複合化合物を用いる方法に関する。例えば、本発明は、細胞を殺滅する方法を提供し、ここで本発明の複合化合物は、細胞に細胞を殺滅するのに十分な量で投与される。好ましい実施形態では、細胞は腫瘍細胞である。別の実施形態では、本発明は、哺乳類対象における腫瘍の成長を遅延または停止させる方法を提供し、ここで本発明の複合化合物は対象に腫瘍の成長を遅延または停止させるのに十分な量で投与される。
【００１９】
本発明の他の態様、利点および目的は、下記の詳細な説明の検討から明白となる。
【００２０】
本発明の非限定的でかつ非網羅的な実施形態が以下の図面を参照して記述される。図面においては、同じ参照数字は、他に規定されない限り、様々な図面全体にわたる同じ部分を示す。
【００２１】
以下の詳細な説明は、図面と関連しつつ、本発明の理解を高めるために参照されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】インビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図２】インビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図３】インビボ試験における腫瘍体積中央値対投与後日数のグラフである。
【図４】インビボ試験における腫瘍体積中央値対投与後日数のグラフである。
【図５】インビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図６】インビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図７】インビボ試験における腫瘍体積中央値対投与後日数のグラフである。
【図８】インビボ試験における腫瘍体積中央値対投与後日数のグラフである。
【図９】インビボ試験におけるパーセント体重変化中央値対投与後日数のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
略語
「Ａｌａ」はアラニンを示す。
「Ｂｏｃ」はｔ−ブチルオキシカルボニルを示す。
「ＣＰＩ」はシクロプロパピロロインドールを示す。
「Ｃｂｚ」はカルボベンゾキシを示す。
「ＤＣＭ」はジクロロメタンを示す。
「ＤＤＱ」は２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを示す。
「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを示す。
「ＤＭＤＡ」はＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンを示す。
「ＲＢＦ」は丸底フラスコを示す。
「ＤＭＦ」はＮ，Ｂ−ジメチルホルムアミドを示す。
「ＨＡＴＵ」はＮ−［［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル］メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシドを示す。
記号「Ｅ」は酵素的に切断可能な基を示す。
「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドを示す。
「ＦＭＯＣ」は９−フルオレニルメチルオキシカルボニルを示す。
「ＨＯＡｔ」は７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを示す。
「Ｌｅｕ」はロイシンを示す。
「ＰＡＢＡ」はパラアミノ安息香酸を示す。
「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールを示す。
「ＰＭＢ」はパラメトキシベンジルを示す。
「ＴＢＡＦ」はテトラブチルアンモニウムフルオリドを示す。
「ＴＢＳＯ」はｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを示す。
「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを示す。
「ＴＦＡ」はトリフルオロロ酢酸を示す。
「ＥＤＣ」は（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）を示す。
「ＴＢＴＵ」は（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩）を示す。
「ＨＯＢＴ」はＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールを示す。
「Ｑ」という記号は、治療剤、診断剤または検出可能な標識を示す。
【００２４】
定義
他に定義されない限り、本明細書で用いられるあらゆる科学技術用語は、一般に、本発明が属する当該技術分野における当業者による一般的理解と同様の意味を有する。一般に、本明細書で用いられる命名法、細胞培養、分子遺伝学、有機化学および核酸化学における実験法および下記のハイブリダイゼーションは周知であり、当該技術分野で一般に用いられるものである。核酸およびペプチド合成においては標準技術が用いられる。一般に、酵素反応および精製ステップは製造業者の仕様に従って実施される。技術および手順は、一般に、当該技術分野における従来の方法および様々な一般の参考文献（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、２ｄ  ｅｄ．」（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）に従って実施され、それらは本明細書全体に提供される。本明細書で用いられる命名法、分析化学における実験法、および下記の有機合成は、周知であり、当該技術分野で一般に用いられるものである。標準技術またはその改良は、化学合成および化学分析において用いられる。
【００２５】
「治療剤」という用語は、治療有効量で存在する場合、哺乳動物に対する所望の治療効果をもたらす化合物を意味するように意図されている。癌の治療においては、治療剤がまた標的細胞に滲入可能であることが望ましい。
【００２６】
「細胞毒素」という用語は、癌細胞に対して細胞毒性を示すといった所望の効果を有する治療剤を意味するように意図されている。細胞毒性とは、その作用剤が細胞の成長を阻止するかまたは細胞を殺滅することを意味する。典型的な細胞毒素の例として、限定はされないが、コンブレタスタチン、デュオカルマイシン、ＣＣ−１０６５抗腫瘍抗生物質、アントラサイクリン、および関連化合物が挙げられる。他の細胞毒素として、マイコトキシン、リシンおよびその類似体、カリケアマイシン、ドキソルビシンおよびマイタンシノイドが挙げられる。
【００２７】
「プロドラッグ」という用語および「薬剤複合体」という用語は、本明細書中で同義的に用いられる。双方とも、まだ複合形態である間には細胞に対して比較的無害であるが、標的細胞内またはその近傍に位置する諸条件、例えば酵素により薬理活性形態に選択的に分解される化合物を示す。
【００２８】
「マーカー」という用語は、腫瘍または他の病状の特徴づけ、例えば、診断、腫瘍の進行、および腫瘍細胞により分泌される因子のアッセイにおいて有用な化合物を意味するように意図されている。マーカーは、「診断剤」のサブセットであると考えられる。
【００２９】
酵素的切断との関連で用いられる「選択的」という用語は、リンカー部分の切断の速度がアミノ酸のランダム配列を有するペプチドの切断の速度よりも大きいことを意味する。
【００３０】
「標的化基」および「標的化剤」という用語は、（１）結合対象の実体（例えば治療剤またはマーカー）を標的細胞、例えば特定のタイプの腫瘍細胞に誘導可能であるか、または（２）標的組織、例えば腫瘍で選択的に活性化される部分を意味するように意図されている。標的化基または標的化剤は小分子であり得、それは非ペプチドおよびペプチドの双方を含むように意図されている。標的化基は高分子でもあり得、それは糖、レクチン、受容体、受容体のリガンド、ＢＳＡ、抗体などのタンパク質などを含む。本発明の好ましい実施形態では、標的化基は抗体または抗体断片、より好ましくはモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体断片である。
【００３１】
「自己犠牲スペーサー」という用語は、２つの化学的部分を通常は安定な三分子に共有結合させる能力がある二官能性化学的部分を示す。自己犠牲スペーサーは、第１の部分への結合が切断される場合、第２の部分から自発的に分離可能である。
【００３２】
「検出可能な標識」という用語は、検出可能な物理的または化学的特性を有する部分を意味するように意図されている。
【００３３】
「切断可能な基」という用語は、インビボで不安定な部分を意味するように意図されている。好ましくは、「切断可能な基」は、マーカーまたは治療剤を複合体の残りから切断することによるマーカーまたは治療剤の活性化を可能にする。機能的に定義されたリンカーは、好ましくは生物学的環境によりインビボで切断される。切断は、限定はされないが、例えば酵素、還元、ｐＨなどの任意のプロセスから生じうる。好ましくは、切断可能な基は所望の作用部位（治療作用またはマーカー活性の部位などにある標的細胞（例えば癌細胞）または組織内またはその近傍の部位でありうる）で活性化が生じるように選択される。かかる切断は酵素的であり得、典型的な酵素的に切断可能な基は、天然アミノ酸または天然アミノ酸で終結するペプチド配列を含み、そのカルボキシル末端でリンカーに結合される。切断速度の増加の度合いは本発明にとって重要でないが、切断可能なリンカーの好ましい例として、切断可能な基の少なくとも約１０％、最も好ましくは少なくとも約３５％が投与後２４時間以内に血流内で切断されるものが挙げられる。
【００３４】
「リガンド」という用語は、標的細胞または組織上で受容体、基質、抗原決定基、または他の結合部位と特異的に結合するかまたは反応的に会合もしくは複合する任意の分子を意味する。リガンドの例として、抗体およびその断片（例えばモノクローナル抗体またはその断片）、酵素（例えば線維素溶解酵素）、生物学的応答修飾物質（例えばインターロイキン、インターフェロン、エリスロポエチン、またはコロニー刺激因子）、ペプチドホルモン、ならびにその抗原結合断片が挙げられる。
【００３５】
「環化反応」という用語は、リンカーまたはその任意の部分の環化に言及する場合、そのリンカーの環への環化を示し、薬剤−リガンド複合体の分離を開始させる。この速度は実験室内で測定可能であり、環化は生成物の少なくとも９０％、９５％、もしくは１００％の形成時に完了する。
【００３６】
「ポリペプチド」「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書中で同義的に用いられ、アミノ酸残基のポリマーを示す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工の化学的模擬体（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）である場合のアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語はまた、「抗体」という用語を包含する。
【００３７】
「アミノ酸」という用語は、天然および合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を示す。天然アミノ酸は、遺伝コードによりコードされたもの、ならびに後に修飾を受けたアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸塩、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミノ酸と同じ塩基性化学構造、すなわち水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合されたα炭素を有する化合物を示す。かかる類似体は、修飾Ｒ基（例えばノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ塩基性化学構造を保持する。特に使用可能なアミノ酸はアルギニンに対する前駆体であるシトルリンであり、肝臓内での尿素の形成に関与する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を示す。「非天然アミノ酸」という用語は、上記の２０種の天然アミノ酸の「Ｄ」型の立体化学形態を示すように意図されている。さらに、非天然アミノ酸という用語が天然アミノ酸の相同体および天然アミノ酸の合成的修飾形態を含むと理解される。合成的修飾形態は、限定はされないが、最大で２個の炭素原子により短縮または伸長されたアルキレン鎖を有するアミノ酸、場合により置換アリール基を含むアミノ酸、およびハロゲン化基、好ましくはハロゲン化アルキルおよびアリール基からなるアミノ酸を含む。アミノ酸は、本発明のリンカーまたは複合体に結合される場合、アミノ酸のカルボン酸基がケト（Ｃ（Ｏ））基と置換されている場合の「アミノ酸側鎖」の形態である。したがって、例えばアラニン側鎖は−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−ＣＨ3などである。
【００３８】
アミノ酸およびペプチドは保護基により保護されうる。保護基は、アミノ酸またはペプチドのＮ末端を望ましくない反応から保護する原子または化学的部分であり、薬剤−リガンド複合体の合成の間に用いられうる。それは合成を通してＮ末端に結合された状態である必要があり、薬剤複合体の合成の完了後にその除去を選択的に行う化学的または他の条件により除去されうる。Ｎ末端の保護に適する保護基は、ペプチド化学の技術分野で周知である。典型的な保護基は、限定はされないが、水素、Ｄ−アミノ酸、および塩化カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）を含む。
【００３９】
「核酸」は、一本鎖または二本鎖形態でのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそのポリマーを示す。この用語は、既知のヌクレオチド類似体または修飾骨格残基または結合を有する核酸を包含し、それは合成、天然、および非天然であり、参照核酸と同様の結合特性を有し、かつ参照ヌクレオチドと同様に代謝される。かかる類似体の例として、限定はされないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００４０】
他に指定がない限り、特定の核酸配列はまた、明確に示される配列のみならず、その保存的修飾変異体（例えば縮重コドン置換基）および相補配列を暗示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換基は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基と置換された配列を生成することにより得られうる（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１頁（１９９１年）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８頁（１９８５年）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８頁（１９９４年））。核酸という用語は遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと同義的に用いられる。
【００４１】
結合として用いられるかまたは結合に垂直に示される記号
【化３】
2010519310.tif 000004
は、示される部分が固体支持体などの分子の残りに結合される点を示す。
【００４２】
「アルキル」という用語は、それ単独でまたは別の置換基の一部として、他に明記しない限り、直鎖または分岐鎖または環状の炭化水素基、またはそれらの組み合わせを意味し、それは完全に飽和、単不飽和もしくはポリ不飽和の場合があり、かつ規定数の炭素原子を有する（すなわちＣ1〜Ｃ10は１〜１０個の炭素を意味する）二価および多価基を含みうる。飽和炭化水素基の例として、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチルなどの基や、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどの相同体および異性体が挙げられる。不飽和アルキル基は１つ以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例として、限定はされないが、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニル、ならびにより高級な相同体および異性体が挙げられる。「アルキル」という用語はまた、他に明記しない限り、下記により詳細に定義されるアルキルの誘導体、例えば「ヘテロアルキル」を含むように意図されている。炭化水素基に限定されたアルキル基は「ホモアルキル」と称される。
【００４３】
単独でのまたは別の置換基の一部としての「アルキレン」という用語は、限定はされないが、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−として例示される、アルカンから誘導される二価基を意味し、下記に「ヘテロアルキレン」として記述される基をさらに含む。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有することになり、本発明では１０個以下の炭素原子を有する基が好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、一般に８個以下の炭素原子を有する、鎖がより短いアルキルまたはアルキレン基である。
【００４４】
単独でのまたは別の用語と組み合わせられた「ヘテロアルキル」という用語は、他に明記しない限り、安定な直鎖または分岐鎖または環状の炭化水素基、またはそれらの組み合わせを意味し、規定数の炭素原子とＯ、Ｎ、Ｓｉ、およびＳからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子からなり、ここで窒素、炭素および硫黄原子は場合により酸化され、窒素ヘテロ原子は場合により四級化されうる。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置または分子の残りに結合されたアルキル基の位置に配置されうる。例として、限定はされないが、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ3、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ3、−Ｓｉ（ＣＨ3）3、−ＣＨ2−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ3、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3が挙げられる。最大で２つのヘテロ原子、例えば−ＣＨ2−ＮＨ−ＯＣＨ3および−ＣＨ2−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ3）3などが連続しうる。同様に、単独でのまたは別の置換基の一部としての「ヘテロアルキレン」という用語は、限定はされないが−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−および−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−として例示される、ヘテロアルキルから誘導される二価基を意味する。ヘテロアルキレン基においては、ヘテロ原子はまた鎖末端の一方または両方を占有しうる（例えばアルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。「ヘテロアルキル」および「ヘテロアルキレン」という用語は、ポリ（エチレングリコール）およびその誘導体を包含する（例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｃａｔａｌｏｇ、２００１年を参照）。さらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基においては、連結基の方向は連結基の式が記された方向を全く意味していない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）2Ｒ’は−Ｃ（Ｏ）2Ｒ’および−Ｒ’Ｃ（Ｏ）2の双方を表す。
【００４５】
「アルキル」または「ヘテロアルキル」という用語と併用される「低級」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する部分を示す。
【００４６】
「アルコキシ」、「アルキルアミノ」、「アルキルスルホニル」および「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）という用語は、それらの従来の意味で用いられ、それぞれ酸素原子、アミノ基、ＳＯ2基または硫黄原子を介して分子の残りに結合されたアルキル基を示す。「アリールスルホニル」という用語はＳＯ2基を介して分子の残りに結合されたアリール基を示し、「スルフヒドリル」という用語はＳＨ基を示す。
【００４７】
一般に「アシル置換基」もまた上記の基から選択される。本明細書で用いられる「アシル置換基」という用語は、本発明の化合物の多環核に結合されたカルボニル炭素に直接的または間接的に結合され、その原子価を満たす基を示す。
【００４８】
単独でのまたは別の用語と組み合わせられた「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」という用語は、他に明記しない限り、それぞれ置換もしくは未置換「アルキル」および置換もしくは未置換「ヘテロアルキル」の環状バージョンを示す。さらに、ヘテロシクロアルキルにおいては、ヘテロ原子が分子の残りに結合された複素環の位置を占有しうる。シクロアルキルの例として、限定はされないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが挙げられる。ヘテロシクロアルキルの例として、限定はされないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニルなどが挙げられる。環状構造のヘテロ原子および炭素原子は場合により酸化される。
【００４９】
単独でのまたは別の置換基の一部としての「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、他に明記しない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むように意図されている。例えば、「ハロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル」という用語は、限定はされないが、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピルなどを含むように意図されている。
【００５０】
「アリール」という用語は、他に明記しない限り、置換もしくは未置換のポリ不飽和の芳香族炭化水素置換基を意味し、これは共に縮合されるかまたは共有結合される単一環または複数環（好ましくは１〜３つの環）でありうる。「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するアリール基（または環）を示し、ここで窒素、炭素および硫黄原子は場合により酸化され、かつ窒素原子は場合により四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残りに結合されうる。アリールおよびヘテロアリール基の非限定例として、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンジミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、および６−キノリルが挙げられる。上記のアリールおよびヘテロアリール環系の各々における置換基は、下記の許容できる置換基の群から選択される。「アリール」および「ヘテロアリール」は、縮合されるかまたはそれ以外ではアリールまたはヘテロアリール系に結合された１つ以上の非芳香環系といった環系も包含する。
【００５１】
簡略化のため、「アリール」という用語は、他の用語（例えばアリールオキシ、アリールチオキシ、およびアリールアルキル）と併用される場合、上で定義されたアリールおよびヘテロアリール環の双方を含む。したがって、「アリールアルキル」という用語は、炭素原子（例えばメチレン基）が例えば酸素原子（例えばフェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチロキシ）プロピルなど）で置換されているアルキル基を含むアルキル基（例えばベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど）に結合されたアリール基といった基を含むように意図されている。
【００５２】
上記の各用語（例えば「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」および「ヘテロアリール」）は、指定される基の置換および未置換形態の双方を含む。基の各タイプにおける好ましい置換基は下記に提供される。
【００５３】
アルキルにおける置換基およびヘテロアルキル基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルとも称されることが多い基を含む）はそれぞれ一般に「アルキル置換基」および「ヘテロアルキル置換基」と称され、限定はされないが、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ2Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）2Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2から、０〜（２ｍ’＋１）（式中、ｍ’はかかる基内での炭素原子の総数である）の範囲の数で選択される種々の基のうちの１つ以上でありうる。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’の各々は、好ましくは独立して、水素、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、例えば１〜３個のハロゲンで置換されたアリール、置換もしくは未置換アルキル、アルコキシまたはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を示す。本発明の化合物が例えば２つ以上のＲ基を含む場合、Ｒ基の各々はＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基の各々としてこれらの基の２つ以上が存在する場合に独立して選択される。Ｒ’およびＲ’’が同じ窒素原子に結合される場合、それらは窒素原子と結合し、５、６、もしくは７員環が形成されうる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、限定はされないが、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むように意図されている。置換基についての上記考察から、当業者は、「アルキル」という用語が水素基以外の基に結合された炭素原子を含む基、例えばハロアルキル（例えば−ＣＦ3および−ＣＨ2ＣＦ3）およびアシル（例えば−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＯＣＨ3など）を含むように意図されることを理解するであろう。
【００５４】
アルキル基について記述される置換基と同様、アリール置換基およびヘテロアリール置換基はそれぞれ、一般に「アリール置換基」および「ヘテロアリール置換基」と称され、例えば、ハロゲン、ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＣＯ2Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）2Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2、−Ｒ’、Ｎ3、−ＣＨ（Ｐｈ）2、フルオロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルコキシ、ならびにフルオロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルから、０から芳香環系上の開放原子価（ｏｐｅｎ  ｖａｌｅｎｃｅ）の総数の範囲の数で選択され、ここでＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’は、好ましくは水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルおよびヘテロアルキル、未置換アリールおよびヘテロアリール、（未置換アリール）−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、ならびに（未置換アリール）オキシ−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルから独立して選択される。本発明の化合物が例えば２つ以上のＲ基を含む場合、各Ｒ基はＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基の各々としてこれらの基の２つ以上が存在する場合に独立して選択される。
【００５５】
アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子上のアリール置換基のうちの２つが、場合により、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）q−Ｕ−（式中、ＴおよびＵは独立してＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−または単結合であり、かつｑは０〜３の整数である）の置換基と置換されうる。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つが、場合により式−Ａ（ＣＨ2）rＢ−（式中、ＡおよびＢは独立して−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）2−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’−または単結合であり、かつｒは１〜４の整数である）の置換基と置換されうる。そのように形成された新環の単結合のうちの１つが、場合により二重結合と置換されうる。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つが、場合により式（ＣＲＲ’）s−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）d−（式中、ｓおよびｄは独立して０〜３の整数であり、かつＸはＯ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、または−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’−である）の置換基と置換されうる。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、好ましくは水素または置換もしくは未置換（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルから独立して選択される。
【００５６】
本明細書で用いられる「二リン酸塩」という用語は、限定はされないが、２つのリン酸基を有するリン酸のエステルを含む。「三リン酸塩」という用語は、限定はされないが、３つのリン酸基を有するリン酸のエステルを含む。例えば、二リン酸塩または三リン酸塩を有する特定の薬剤は、
【化４】
2010519310.tif 000005
を含む。
【００５７】
本明細書で用いられる「ヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）およびケイ素（Ｓｉ）を含む。
【００５８】
記号「Ｒ」は、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、および置換もしくは未置換ヘテロシクリル基から選択される置換基を表す一般的略語である。
【００５９】
本明細書で用いられる「薬学的に許容できる担体」という用語は、化学剤の保有または輸送に関与する、医薬品として許容される材料、組成物または媒体、例えば液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材料を意味する。薬学的に許容できる担体は薬学的に許容できる塩を含み、ここで「薬学的に許容できる塩」という用語は、本明細書中に記載の化合物上に見出される特定の置換基に依存し、比較的毒性のない酸または塩基とともに調製された活性化合物の塩を含む。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を有する場合、かかる化合物の中性形態を十分量の所望の塩基と適切にまたは適切な不活性溶媒中で接触させることにより塩基付加塩が得られうる。薬学的に許容できる塩基付加塩の例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、またはマグネシウム塩、または類似塩が挙げられる。本発明の化合物が比較的塩基性の機能性を有する場合、かかる化合物の中性形態を十分量の所望の酸と適切にまたは適切な不活性溶媒中で接触させることにより酸付加塩が得られうる。薬学的に許容できる酸付加塩の例として、無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｃａｒｂｏｎｉｃ）、リン酸、リン酸水素（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ）、リン酸二水素（ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ）、硫酸、硫酸水素（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｓｕｌｆｕｒｉｃ）、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などに由来する塩、ならびに比較的非毒性の有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、琥珀酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などに由来する塩が挙げられる。アルギネート（ａｒｇｉｎａｔｅ）などのアミノ酸の塩、および有機酸様のグルクロン酸またはガラクツロン酸などの塩も含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７７年、６６、１−１９頁）。本発明の特定の特異的化合物は、塩基付加塩または酸付加塩のいずれかへの化合物の変換を可能にする塩基性および酸性の機能性の双方を有する。
【００６０】
化合物の中性形態は、好ましくは塩を塩基または酸と接触させかつ親化合物を従来の方法で単離することにより再生される。化合物の親形態は特定の物理的特性、例えば極性溶媒中の溶解度において様々な塩形態と異なるが、それ以外では塩は本発明の目的における化合物の親形態に等価である。
【００６１】
本発明は、塩形態に加え、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書中に記載の化合物のプロドラッグは、生理的条件下で容易に化学的変化を受け、本発明の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、生体外環境下での化学的または生化学的方法により本発明の化合物に変換されうる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬を有する経皮パッチ容器内に入れられる場合、本発明の化合物に徐々に変換されうる。
【００６２】
本発明の特定の化合物は、水和形態を含む、未溶媒和形態および溶媒和形態で存在しうる。一般に、溶媒和形態は未溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明の特定の化合物は、多結晶またはアモルファス形態で存在しうる。一般に、すべての物理的形態は本発明で検討される用途において同等であり、本発明の範囲内に含まれるように意図されている。
【００６３】
本発明の特定の化合物は不斉炭素原子（光学的中心）または二重結合を有し、ラセミ酸塩、ジアステレオマー、幾何異性体および各異性体は本発明の範囲内に包含される。
【００６４】
本発明の化合物はまた、かかる化合物を構成する原子の１つ以上で天然にない比率の原子同位体を有しうる。例えば、化合物は、例えば三重水素（3Ｈ）、ヨウ素１２５（125Ｉ）または炭素１４（14Ｃ）などの放射性同位体で放射性標識されうる。本発明の化合物のあらゆる同位体の変形例は、放射性の有無にかかわらず、本発明の範囲内に包含されるように意図されている。
【００６５】
「結合部分」または「標的化基に結合するための部分」という用語は、リンカーに対する標的化基の結合を可能にする部分を示す。典型的な結合基の例として、限定はされないが、アルキル、アミノアルキル、アミノカルボニルアルキル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルキルマレイミド、アルキル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ポリ（エチレングリコール）マレイミドおよびポリ（エチレングリコール）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（これらの全部がさらに置換されうる）が挙げられる。リンカーはまた、実際には標的化基に付加された結合部分を有しうる。
【００６６】
本明細書で用いられる「離脱基」という用語は、反応において基質から切断される基質の一部を示す。
【００６７】
本明細書で記載の「抗体」という用語は、全抗体および任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）またはその一本鎖を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖またはその抗原結合部分を含む糖タンパク質を示す。各重鎖は重鎖可変領域（ＶH）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域はＣH1、ＣH2およびＣH3という３つのドメインからなり、μ、δ、γ、αまたはεアイソタイプでありうる。各軽鎖は軽鎖可変領域（ＶL）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域はＣLという１つのドメインからなり、κまたはλアイソタイプでありうる。ＶHおよびＶL領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域にさらに再分化され、骨格領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が組み入れられうる。各ＶHおよびＶLは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へ配列される。重鎖および軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの宿主組織または免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む因子への結合を媒介しうる。
【００６８】
本明細書で用いられる抗体の「抗体断片」または「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を示す。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片により果たされうることが示されている。抗体の「抗体断片」または「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含される結合断片の例として、（ｉ）ＶL、ＶH、ＣLおよびＣH１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）2断片；（ｉｉｉ）ＶHおよびＣH１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶLおよびＶHドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶHドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６頁）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインのＶLおよびＶHが別々の遺伝子でコードされるが、ＶLおよびＶH領域が、それらの一価分子を形成するように対をなす場合の単一のタンパク質鎖としての作製を可能にする合成リンカーによる組換え方法を用いて連結されうる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばＢｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６頁、およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３頁を参照）。かかる一本鎖抗体は、抗体の「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含されるようにも意図されている。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を用いて得られ、断片における有用性が無傷抗体の場合と同様の方法でスクリーニングされる。
【００６９】
本明細書で用いられる「モノクローナル抗体」という用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を示す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。
【００７０】
モノクローナルまたはポリクローナル抗体の調製においては、当該技術分野で公知の任意の技術が用いられうる（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７頁（１９７５年）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２頁（１９８３年）；Ｃｏｌｅら、７７−９６頁「ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ」、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５年）を参照）。
【００７１】
ポリクローナル抗体を産生するための方法は当業者に公知である。マウスの近交系（例えばＢＡＬＢ／Ｃマウス）またはラビットを、標準アジュバント、例えばフロインドアジュバントと標準免疫プロトコルを用い、タンパク質で免疫する。免疫原製剤に対する動物の免疫応答を、試験採血を行い、βサブユニットに対する反応性の力価を測定することにより監視する。免疫原に対して抗体の適度に高い力価が得られる場合、血液を動物から採取し、抗血清を調製する。タンパク質に反応性を示す抗体における濃縮のため、抗血清のさらなる分画化を必要に応じて行いうる。
【００７２】
モノクローナル抗体は、当業者に周知の様々な技術により得られうる。つまり、所望の抗原で免疫された動物由来の脾臓細胞は、一般に骨髄腫細胞との融合により不死化される（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９頁（１９７６年）を参照）。不死化の他の方法には、エプスタインバーウイルス、腫瘍遺伝子、またはレトロウイルスとの形質転換、あるいは当該技術分野で周知の他の方法が含まれる。
【００７３】
好ましい実施形態では、抗体はキメラまたはヒト化抗体である。本発明のキメラまたはヒト化抗体は、マウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製されうる。重鎖および軽鎖の免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから得られ、標準の分子生物学技術を用いて非マウス（例えばヒト）免疫グロブリン配列を有するように改変されうる。例えば、キメラ抗体を作製するため、マウス可変領域は、当該技術分野で公知の方法を用いてヒト定常領域に結合されうる（例えばＣａｂｉｌｌｙらに交付された米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）。ヒト化抗体を作製するため、マウスＣＤＲ領域は、当該技術分野で公知の方法を用いてヒト骨格に挿入されうる（例えば、Ｗｉｎｔｅｒに交付された米国特許第５，２２５，５３９号明細書、ならびにＱｕｅｅｎらに交付された米国特許第５，５３０，１０１号明細書；米国特許第５，５８５，０８９号明細書；米国特許第５，６９３，７６２号明細書および米国特許第６，１８０，３７０号明細書を参照）。
【００７４】
別の好ましい実施形態では、抗体はヒト抗体である。かかるヒト抗体は、内因性マウス免疫グロブリン遺伝子が不活性化されかつ外因性ヒト免疫グロブリン遺伝子が導入されているトランスジェニックまたはトランスクロモゾームマウスを免疫することにより産生されうる。かかるマウスは当該技術分野で公知である（例えば米国特許第５，５４５，８０６号明細書；米国特許第５，５６９，８２５号明細書；米国特許第５，６２５，１２６号明細書；米国特許第５，６３３，４２５号明細書；米国特許第５，７８９，６５０号明細書；米国特許第５，８７７，３９７号明細書；米国特許第５，６６１，０１６号明細書；米国特許第５，８１４，３１８号明細書；米国特許第５，８７４，２９９号明細書；および米国特許第５，７７０，４２９号明細書（すべてはＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに交付）；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに交付された米国特許第５，９３９，５９８号明細書；米国特許第６，０７５，１８１号明細書；米国特許第６，１１４，５９８号明細書；米国特許第６，１５０，５８４号明細書および米国特許第６，１６２，９６３号明細書；ならびにＩｓｈｉｄａらに交付されたＰＣＴ公開の国際公開第０２／４３４７８号パンフレットを参照）。ヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を用いて調製されうる。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ法もまた当該技術分野で公知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒらに交付された米国特許第５，２２３，４０９号明細書；米国特許第５，４０３，４８４号明細書；および米国特許第５，５７１，６９８号明細書；Ｄｏｗｅｒらに交付された米国特許第５，４２７，９０８号明細書および米国特許第５，５８０，７１７号明細書；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらに交付された米国特許第５，９６９，１０８号明細書および米国特許第６，１７２，１９７号明細書；ならびにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらに交付された米国特許第５，８８５，７９３号明細書；米国特許第６，５２１，４０４号明細書；米国特許第６，５４４，７３１号明細書；米国特許第６，５５５，３１３号明細書；米国特許第６，５８２，９１５号明細書および米国特許第６，５９３，０８１号明細書を参照）。
【００７５】
本明細書で用いられる「固体支持体」は、選択される溶媒系中に実質的に不溶性であるかまたはそれが溶解可能な選択される溶媒系から（例えば沈殿により）容易に分離されうる材料を示す。本発明の実施に有用な固体支持体は、活性化されるかまたは活性化可能であることにより選択される種の固体支持体への結合を可能にする基を含みうる。固体支持体はまた、本発明の１種または２種以上の化合物が上部に結合される基板、例えばチップ、ウエーハまたはウェルでありうる。
【００７６】
本明細書で用いられる「反応性官能基」は、限定はされないが、オレフィン、アセチレン、アルコール、フェノール、エーテル、酸化物、ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、シアン酸塩、イソシアン酸塩、チオシアン酸塩、イソチオシアン酸塩、アミン、ヒドラジン、ヒドラゾン、ヒドラジド、ジアゾ、ジアゾニウム、ニトロ、ニトリル、メルカプタン、硫化物、ジスルフィド、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、スルフィン酸、アセタール、ケタール、無水物、硫酸塩、スルフェン酸イソニトリル、アミジン、イミド、イミダート、ニトロン、ヒドロキシルアミン、オキシム、ヒドロキサム酸、チオヒドロキサム酸、アレン、オルトエステル、亜硫酸塩、エナミン、イナミン、尿素、シュードウレア（ｐｓｅｕｄｏｕｒｅａｓ）、セミカルバジド、カルボジイミド、カルバミン酸塩、イミン、アジド、アゾ化合物、アゾキシ化合物、およびニトロソ化合物を含む基を示す。反応性官能基はまた、バイオコンジュゲート、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、マレイミドなどの調製に用いられるものを含む（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、１９９６年を参照）。これらの各官能基を調製するための方法は当該技術分野で周知であり、特定の目的へのその適用またはそのための修飾は当業者の能力の範囲内である（例えば、ＳａｎｄｌｅｒおよびＫａｒｏ編、「ＯＲＧＡＮＩＣ  ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ  ＧＲＯＵＰ  ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＳ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、１９８９年を参照）。反応性官能基は保護または非保護でありうる。
【００７７】
本発明の化合物は、単一の異性体（例えば光学異性体、シス−トランス異性体、位置異性体、ジアステレオマー）または異性体の混合物として調製される。好ましい実施形態では、化合物は、実質的に単一の異性体として調製される。実質的に異性体的に純粋な化合物を調製する方法は当該技術分野で公知である。例えば、鏡像異性的に濃縮された混合物および純粋な鏡像異性化合物は、キラル中心での立体化学が不変のままであるかまたはその完全な反転をもたらす反応と組み合わせて鏡像異性的に純粋な合成中間体を用いることにより調製されうる。あるいは、合成経路の過程での最終生成物または中間体は、単一の立体異性体に分解されうる。特定の立体中心を反転させるかまたは不変状態にするための技術および立体異性体の混合物を溶解するための技術は当該技術分野で周知であり、それは十分に当業者の選択能力および特定の状況における適切な方法の範囲内にある。一般にはＦｕｒｎｉｓｓら（編）、「ＶＯＧＥＬ’Ｓ  ＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡ  ＯＦ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ５TH  ＥＤ．」、Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｌｔｄ．、Ｅｓｓｅｘ、１９９１年、８０９−８１６頁；およびＨｅｌｌｅｒ、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２３：１２８頁（１９９０年）を参照のこと。
【００７８】
リンカー
本発明は、薬剤が、明細書中で（Ｌ4）p−Ｆ−（Ｌ1）mとして表されるアミノ酸リンカーを介してリガンドに連結された薬剤−リガンド複合体を提供する。本発明は、薬剤に結合されているようなリンカーに加え、本質的に任意の分子種への結合に適する切断可能なリンカーアームも提供する。本発明のリンカーアームの態様は、本明細書中でその治療部分への結合を参照することにより例示される。しかし、リンカーが限定はされないが診断剤、分析剤、生体分子、標的化剤、検出可能な標識などを含む多様な種に結合可能であることは当業者には容易に理解されるであろう。
【００７９】
薬剤−リガンド複合体内でのペプチジルおよび他のリンカーの使用については、米国仮特許出願第６０／２９５，１９６号明細書；米国仮特許出願第６０／２９５，２５９号明細書；米国仮特許出願第６０／２９５，３４２号明細書；米国仮特許出願第６０／３０４，９０８号明細書；米国仮特許出願第６０／５７２，６６７号明細書；米国仮特許出願第６０／６６１，１７４号明細書；米国仮特許出願第６０／６６９，８７１号明細書；米国仮特許出願第６０／７２０，４９９号明細書；米国仮特許出願第６０／７３０，８０４号明細書；米国仮特許出願第６０／７３５，６５７号明細書；米国仮特許出願第６０／８８２，４６１号明細書；および米国仮特許出願第６０／９９１，３００号明細書、ならびに米国特許出願第１０／１６０，９７２号明細書；米国特許出願第１０／１６１，２３４号明細書；米国特許出願第１１／１３４，６８５号明細書；米国特許出願第１１／１３４，８２６号明細書；および米国特許出願第１１／３９８，８５４号明細書、ならびに米国特許第６，９８９，４５２号明細書およびＰＣＴ特許出願のＰＣＴ／ＵＳ２００６／３７７９３、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／６００５０、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／６０７１１、およびＰＣＴ／ＳＵ２００７／８９１００の中で記載されており、これらのすべては参照により本明細書中に援用される。
【００８０】
一態様では、本発明は、治療剤およびマーカーに対する標的化基への結合に有用なリンカーに関する。別の態様では、本発明は、化合物に安定性をもたらすか、そのインビボでの毒性を低減するか、もしくはその薬動力学、バイオアベイラビリティおよび／または薬力学に好ましい作用をもたらすリンカーを提供する。かかる実施形態では、一旦薬剤がその作用部位に送達されると、リンカーが切断され活性薬剤が放出されることが一般に好ましい。したがって、本発明の一実施形態では、本発明のリンカーは、一旦治療剤またはマーカーから除去されると（活性化される間など）リンカーの存在の痕跡が全く残らないようにトレースレスである。
【００８１】
本発明の別の実施形態では、リンカーは、治療作用またはマーカー活性の部位など、標的細胞内またはその近傍の部位でのその切断される能力により特徴づけられる。かかる切断は事実上酵素的でありうる。この特徴は、治療剤またはマーカーの全身活性化の低減や、毒性および全身性副作用の低減に役立つ。他の実施形態では、リンカーはｐＨに感受性があり、ｐＨの変化を通じて切断される。
【００８２】
リンカー内に単一のアミノ酸を含む本化合物の意外な側面は、これらの化合物がペプチジル成分を有するリンカーに類似するかまたはそれより優れた活性を有しうる点である。単一のアミノ酸が、ペプチドと異なり、必ずしも酵素に対する基質でないことから、場合により実質的に低めの活性が想定されることになる。
【００８３】
リンカーはまた、治療剤またはマーカーを循環中での分解に対して安定化させるのに役立つ。この特徴は、かかる安定化の結果、結合された治療剤またはマーカーの循環半減期が延長されることから有意な効果をもたらす。リンカーはまた、結合された治療剤またはマーカーの活性を複合体が循環中に比較的良性であるように弱めるのに役立ち、かつ、所望の作用部位での活性化後に望ましい効果を有し、例えば毒性を示す。治療剤複合体においては、リンカーのこの特徴は同剤の治療指数を改善するのに役立つ。
【００８４】
安定化基は、好ましくは、治療剤またはマーカーのクリアランスおよび代謝を血液中または非標的組織内に存在しうる酵素により制限するように選択され、さらに同剤またはマーカーの細胞への輸送を制限するように選択される。安定化基は、同剤またはマーカーの分解を遮断するのに役立ち、また同剤またはマーカーの他の物理的特性をもたらすように作用しうる。安定化基はまた、製剤または非製剤形態のいずれかで保存される間の同剤またはマーカーの安定性を改善しうる。
【００８５】
望ましくは、安定化基は、治療剤またはマーカーのヒト血液中、３７℃で２時間の保存により試験される場合に同剤またはマーカーを分解から保護するのに役立ち、かつ所与のアッセイ条件下でヒト血液中に存在する酵素により、２０％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満およびさらにより好ましくは２％未満の同剤またはマーカーの切断をもたらす場合、治療剤またはマーカーの安定化に有用である。
【００８６】
本発明は、これらのリンカーを有する複合体にも関する。より詳細には、本発明は疾患の治療、特に癌化学療法に用いられうるプロドラッグに関する。詳細には、本明細書中に記載のリンカーの使用により、類似構造のプロドラッグと比べて、活性の高い特異性、低下した毒性、および血中での改善された安定性を示すプロドラッグが提供される。
【００８７】
本明細書中に記載の本発明のリンカーは、細胞毒素複合体内部の種々の位置に存在しうる。
【００８８】
したがって、インビボ、例えば血流中で、かかる基が欠如した構築物の速度よりも高い速度で切断されることになる、種々の基のいずれかをその鎖の一部として有しうるリンカーが提供される。リンカーアームと治療剤および診断剤との複合体も提供される。リンカーは、治療剤のプロドラッグ類似体を形成しかつ治療剤または診断剤を標的化剤、検出可能な標識、または固体支持体に可逆的に連結するのに有用である。リンカーは、本発明の細胞毒素を含む複合体に組み込まれうる。
【００８９】
１つ以上の自己犠牲リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）基Ｌ1が場合により細胞毒素と標的化剤の間に導入される。これらのリンカー基はまた、スペーサー基として記述され、少なくとも２つの反応官能基を有しうる。典型的には、スペーサー基の一方の化学官能基が治療剤の化学官能基、例えば細胞毒素に結合する間、スペーサー基の他方の化学官能基は標的化剤または切断可能なリンカーの化学官能基に結合するように用いられる。スペーサー基の化学官能基の例として、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボニル基、カルボキシ基、アミノ基、ケトン基、およびメルカプト基が挙げられる。
【００９０】
Ｌ1で表される自己犠牲リンカーは、一般に置換もしくは未置換アルキル基、置換もしくは未置換アリール基、置換もしくは未置換ヘテロアリール基または置換もしくは未置換ヘテロアルキル基である。一実施形態では、アルキルまたはアリール基は１〜２０個の炭素原子を含みうる。それらはまた、ポリエチレングリコール部分を含みうる。
【００９１】
典型的なスペーサー基として、例えば、６−アミノヘキサノール、６−メルカプトヘキサノール、１０−ヒドロキシデカン酸、グリシンおよび他のアミノ酸、１，６−ヘキサンジオール、β−アラニン、２−アミノエタノール、システアミン（２−アミノエタンチオール）、５−アミノペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、３−マレイミド安息香酸、フタリド、α−置換フタリド、カルボニル基、アミナールエステル、核酸、ペプチドなどが挙げられる。
【００９２】
スペーサーは、さらなる分子量および化学官能基を細胞毒素−標的化剤複合体に導入するのに役立ちうる。一般に、さらなる分子量および官能基は複合体の血清半減期および他の特性に作用することになる。したがって、スペーサー基を注意深く選択することで、様々な血清半減期を有する細胞毒素複合体が生成されうる。
【００９３】
薬剤成分の直近に位置するスペーサーは、（Ｌ1）ｍ（式中、ｍは０、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である）としても示される。複数のＬ1スペーサーが存在する場合、同一のまたは異なるスペーサーのいずれかが用いられうる。Ｌ1は任意の自己犠牲的な基でありうる。
【００９４】
Ｌ4は、好ましくは複合体に同部分を有するリンカーを用いて溶解度の増大または凝集特性の低下をもたらすかまたは複合体の加水分解速度を変化させるリンカー部分である。Ｌ4リンカーは自己犠牲的である必要はない。一実施形態では、Ｌ4部分は、置換アルキル、未置換アルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアルキル、または未置換ヘテロアルキルであり、これらのいずれかが直鎖状、分岐鎖状、または環状でありうる。置換基は、例えば、低級（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノでありうる。特定の実施形態では、Ｌ4は非環状部分を含む。別の実施形態では、Ｌ4は任意の正または負に帯電したアミノ酸重合体、例えばポリリシンまたはポリアルギニンを含む。Ｌ4はポリエチレングリコール部分などの重合体を含みうる。さらに、Ｌ4リンカーは、例えば重合体成分と小さい化学的成分の双方を含みうる。
【００９５】
好ましい実施形態では、Ｌ4はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む。Ｌ4のＰＥＧ部分は１〜５０単位の長さでありうる。好ましくは、ＰＥＧは１〜１２の繰り返し単位、より好ましくは３〜１２の繰り返し単位、より好ましくは２〜６の繰り返し単位、またはさらにより好ましくは３〜５の繰り返し単位および最も好ましくは４の繰り返し単位を有することになる。Ｌ4は、単にＰＥＧ部分からなりうるか、あるいはさらなる置換もしくは未置換のアルキルまたはヘテロアルキルも有しうる。ＰＥＧとＬ4部分の一部として結合し、複合体の水溶性を高めることは有用である。さらに、ＰＥＧ部分は薬剤と抗体との複合の間に生じうる凝集の程度を低下させる。
【００９６】
上で考察のように、本発明のリンカーは、一般式：（Ｌ4）p−Ｆ−（Ｌ1）m（式中、Ｆはアミノ酸を含むリンカー部分を表す）により表されうる。一実施形態では、Ｆ部分は任意の追加の自己犠牲リンカーＬ2およびカルボニル基を含む。別の実施形態では、Ｆ部分はアミノ基および任意のスペーサー基Ｌ3を含む。
【００９７】
したがって、一実施形態では、リンカーを含む複合体は、式１：
【化５】
2010519310.tif 000006
の構造を含む。
【００９８】
この実施形態では、Ｌ1は上記の自己犠牲リンカーであり、かつＬ4は好ましくは上記のように溶解度の増大または凝集特性の低下をもたらすかあるいは加水分解速度を変更する部分である。Ｌ2は自己犠牲リンカーを示す。さらに、ｍは０、１、２、３、４、５、もしくは６であり、かつｏおよびｐは独立して０または１である。ＡＡ1は天然アミノ酸または非天然αアミノ酸を示す。
【００９９】
上記式１の本発明のリンカーにおいては、ＡＡ1は、そのアミノ末端で、Ｌ4に直接かまたはＬ4が不在の場合にＸ4基（すなわち標的化剤、検出可能な標識、保護反応性官能基または非保護反応性官能基）に直接結合される。
【０１００】
別の実施形態では、リンカーを含む複合体は、式２：
【化６】
2010519310.tif 000007
の構造を含む。
【０１０１】
この実施形態では、Ｌ4は上記のように好ましくは溶解度の増大または凝集特性の低下をもたらすかあるいは加水分解速度を変更する部分であり、Ｌ3は第一級もしくは第二級アミンまたはカルボキシル官能基を含むスペーサー基であり、かつＬ3のアミンはＤの懸垂カルボキシル官能基を有するアミド結合を形成するかまたはＬ3のカルボキシルはＤの懸垂アミン官能基を有するアミド結合を形成し、かつｏおよびｐは独立して０または１である。ＡＡ1は天然アミノ酸または非天然αアミノ酸を示す。この実施形態では、Ｌ1は不在である（すなわち、ｍが０であるのが一般式である）。
【０１０２】
自己犠牲リンカーＬ2
自己犠牲リンカーＬ2は、２つの距離が離れた化学的部分を共に通常は安定なトリパーテート（ｔｒｉｐａｒｔａｔｅ）分子に共有結合可能な二官能性の化学的部分であり、それにより酵素切断を用いてトリパーテート分子から前記距離が離れた化学的部分のうちの一方が放たれ、前記酵素切断後、分子の残りから自発的切断が生じ、前記距離が離れた化学的部分の他方が放出される。本発明によると、自己犠牲スペーサーは、その一方の末端でアミノ酸ＡＡ1に共有結合されかつ他方の末端で薬剤部分（その誘導化が薬理学的活性を阻害する）の化学反応性がある部位に共有結合されることで、距離が離れ、アミノ酸ＡＡ1および薬剤部分を共に標的酵素の不在下では安定かつ薬理学的に不活性であるトリパーテート分子に共有結合させるが、それはスペーサー部分およびアミノ酸ＡＡ1に共有結合する結合にてかかる標的酵素により酵素的に切断可能であり、これによりトリパーテート分子からのアミノ酸ＡＡ1の放出をもたらす。次いで、かかる酵素切断は、スペーサー部分の自己犠牲的特徴を活性化し、スペーサー部分を薬剤部分に共有結合させる結合の自発切断を開始させ、これにより薬理活性形態での薬剤の放出をもたらす。
【０１０３】
自己犠牲リンカーＬ2は任意の自己犠牲的な基でありうる。好ましくは、Ｌ2は、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、および置換もしくは未置換ヘテロアリールである。
【０１０４】
１つの特に好ましい自己犠牲スペーサーＬ2は、式３：
【化７】
2010519310.tif 000008
で表されうる。
【０１０５】
アミノベンジル基の芳香環は１つ以上の「Ｋ」基で置換されうる。「Ｋ」基は、通常では環構造の一部である４つの非置換炭素のうちの１つに結合される水素を置き換える芳香環上の置換基である。「Ｋ」基は単一の原子、例えばハロゲンでありうるか、または多重原子群、例えばアルキル、ヘテロアルキル、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルキル、およびシアノでありうる。各Ｋは、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ21Ｒ22、ＮＲ21ＣＯＲ22、ＯＣＯＮＲ21Ｒ22、ＯＣＯＲ21、およびＯＲ21（式中、Ｒ21およびＲ22は独立してＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキルおよび未置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される）からなる群から独立して選択される。典型的なＫ置換基は、限定はされないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ2、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣＨ3、Ｎ（ＣＨ3）2、ＮＨＣＯＣＦ3およびメチルを含む。「Ｋa」においては、ａは０、１、２、３、もしくは４の整数である。好ましい一実施形態では、ａは０である。
【０１０６】
上記の構造のエーテル酸素原子はカルボニル基に結合される。ＮＲ24官能基から芳香環への系統は、アミンの官能基が５個の炭素（いずれも環を形成し、−ＣＨ2−Ｏ−基で置換されない）のいずれかに結合されうることを示す。好ましくは、ＸのＮＲ24官能基は−ＣＨ2−Ｏ−基に対するパラ配位で芳香環に共有結合される。Ｒ24は、Ｈ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、および未置換ヘテロアルキルからなる群から選択されるメンバーである。特定の実施形態では、Ｒ24は水素である。
【０１０７】
一実施形態では、本発明は、上記の式（１）のリンカーを提供し、ここでＦは構造：
【化８】
2010519310.tif 000009
を含み、ここでＲ24は、Ｈ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、および未置換ヘテロアルキルからなる群から選択される）を提供する。各Ｋは、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ21Ｒ22、ＮＲ21ＣＯＲ22、ＯＣＯＮＲ21Ｒ22、ＯＣＯＲ21、およびＯＲ21（式中、Ｒ21およびＲ22は独立してＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される）からなる群から独立して選択されるメンバーであり、かつａは０、１、２、３、もしくは４の整数である。
【０１０８】
別の実施形態では、上記式（１）のリンカーは、構造：
【化９】
2010519310.tif 000010
を含む−Ｆ−（Ｌ1）m−を含み、ここで各Ｒ24は、Ｈ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、および未置換ヘテロアルキルからなる群から独立して選択されるメンバーである。
【０１０９】
一部の実施形態では、自己犠牲スペーサーＬ2は、
【化１０】
2010519310.tif 000011
を含み、ここでＲ17、Ｒ18、およびＲ19の各々は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換のヘテロアルキルおよび置換もしくは未置換アリールから独立して選択され、かつｗは０〜４の整数である。一部の実施形態では、Ｒ17およびＲ18は独立してＨまたはアルキル（好ましくは未置換Ｃ1〜Ｃ4アルキル）である。好ましくは、Ｒ17およびＲ18はＣ1〜Ｃ4アルキル、例えばメチルまたはエチルである。一部の実施形態では、ｗは０である。
【０１１０】
一部の実施形態では、Ｌ2は、
【化１１】
2010519310.tif 000012
を含む。
【０１１１】
スペーサー基Ｌ3
スペーサー基Ｌ3は第一級もしくは第二級アミンまたはカルボキシル官能基を含むように特徴づけられ、かつ、Ｌ3基のアミンがＤの懸垂カルボキシル官能基とアミド結合を形成するか、またはＬ3のカルボキシルがＤの懸垂アミン官能基とアミド結合を形成する。Ｌ3は、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、または置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択されうる。好ましい実施形態では、Ｌ3は芳香族性基を含む。より好ましくは、Ｌ3は安息香酸基、アニリン基またはインドール基を含む。−Ｌ3−ＮＨ−スペーサーとして機能しうる構造の非限定例として、
【化１２】
2010519310.tif 000013
といった構造が挙げられ、ここでＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、かつＲ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーである。
【０１１２】
Ｌ3を有する本発明のリンカーの切断時、Ｌ3部分は薬剤Ｄに結合されたままである。したがって、Ｌ3部分はＤに結合されたその存在がＤの活性を有意に変化させないように選択される。別の実施形態では、薬剤Ｄ自体の一部がＬ3スペーサーとして機能する。例えば、一実施形態では、薬剤Ｄは薬剤の一部がＬ3スペーサーとして機能するデュオカルマイシン誘導体である。かかる実施形態の非限定例として、ＮＨ2−（Ｌ3）−Ｄが
【化１３】
2010519310.tif 000014
からなる群から選択される構造を有する場合が挙げられ、ここでＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、Ｒ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーであり、かつ各構造上のＮＨ2基はＡＡ1と反応して−ＡＡ1−ＮＨ−を形成する。
【０１１３】
アミノ酸ＡＡ1
ＡＡ1基は単一のアミノ酸を示し、かつ天然アミノ酸または非天然αアミノ酸でありうる。アミノ酸はＬまたはＤ立体配置でありうる。アミノ酸は、腫瘍関連プロテアーゼなどの特定の分子による選択的切断に対するその適合性に基づいて選択されうる。
【０１１４】
抗体からの毒素の切断に関する任意の特定の機序に限定されるものではないが、本発明の化合物の少なくとも一部はカテプシンＢにより切断されると考えられる。適切な環境下での本発明の毒素の切断または放出における他の機序はまた、本発明において検討され、含められる。一実施形態では、アミノ酸ＡＡ1はリソソームプロテアーゼにより切断されるリンカーの能力に基づいて選択され、その非限定例として、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、ＬおよびＳが挙げられる。一部の実施形態では、アミノ酸ＡＡ1を有するリンカーはインビトロでカテプシンＢにより切断される能力があり、それは当該技術分野で既知のインビトロでのプロテアーゼ切断アッセイを用いて試験されうる。
【０１１５】
一部の実施形態では、アミノ酸ＡＡ1を有するリンカーは、インビトロでカテプシンＢにより実質的に切断されない（例えば２４時間以内での切断は全く実質的でない）とはいえ、インビボで切断可能であり、活性薬剤が得られる。
【０１１６】
別の実施形態では、アミノ酸ＡＡ1は、腫瘍関連プロテアーゼ、例えば腫瘍細胞の近傍の細胞外で見出されるプロテアーゼにより切断されるリンカーの能力に基づいて選択され、その非限定例として、チメトオリゴペプチダーゼ（ＴＯＰ）およびＣＤ１０が挙げられる。ＴＯＰまたはＣＤ１０により切断されるリンカーの能力は、当該技術分野で既知のインビトロでのプロテアーゼ切断アッセイを用いて試験されうる。
【０１１７】
一実施形態では、アミノ酸はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌからなる群から選択される。別の実施形態では、アミノ酸はＣｉｔ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、およびＳｅｒからなる群から選択される。
【０１１８】
プロテアーゼは癌転移に関与している。プロテアーゼウロキナーゼの合成の増大が、多数の癌内での転移能の増強と相関していた。ウロキナーゼは細胞外空間内に偏在するプラスミノゲンからプラスミンを活性化し、その活性化により転移性腫瘍細胞の浸潤を媒介する細胞外マトリックス内でタンパク質の分解が引き起こされうる。プラスミンはまたコラゲナーゼを活性化する故、毛細管およびリンパ系の周囲の基底膜内でのコラーゲンの分解を促進可能であり、それにより腫瘍細胞の標的組織への浸潤が可能になる（Ｄａｎｏら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．、４４：１３９頁（１９８５年））。したがって、ウロキナーゼにより切断されるリンカーとしての使用は本発明の範囲内に含まれる。
【０１１９】
本発明は、トリプターゼによる切断に感受性があるリンカーの使用についても提供する。ヒトマスト細胞は、α、βＩ、βＩＩ、およびβＩＩＩと称される少なくとも４種の異なるトリプターゼを発現する。これらの酵素は血漿プロテアーゼ阻害剤により制御されることがなく、インビトロで数種の生理的基質を切断するだけである。セリンプロテアーゼのトリプターゼファミリーは、マスト細胞を含む種々のアレルギー性および炎症性疾患に関与しており、その理由はこれらの障害を有する患者由来の体液中で見出されるトリプターゼレベルの上昇にある。しかし、疾患の病態生理におけるトリプターゼの正確な役割はいまだに明らかにされていない。トリプターゼの生物学的機能および対応する生理学的結果の範囲は、それらの基質特異性により実質的に画定される。
【０１２０】
トリプターゼは、腫瘍転移および浸潤に関連したプロテアーゼのチモーゲン形態であるプロウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）の強力な活性化因子である。細胞溢出および移動において細胞外マトリックスの破壊をまねくプラスミノゲンカスケードの活性化は、Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＬｙｓのＰ４〜Ｐ１配列（配列番号１）のプロウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子のトリプターゼ活性化の機能でありうる（Ｓｔａｃｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６９（１３）：９４１６−９４１９頁（１９９４年））。血管透過性の調節に関与する神経ペプチドＶＩＰ（血管作動性腸管ペプチド）もまた主にＴｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号２）配列でトリプターゼにより切断される（Ｔａｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３：２７−３２頁（１９９０年））。Ｇタンパク質共役受容体ＰＡＲ−２をＳｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（配列番号３）配列でトリプターゼにより切断し活性化することで、線維芽細胞の増殖が促進されうる一方、トロンビン活性化受容体ＰＡＲ−１がＰｒｏ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号４）配列でトリプターゼにより不活性化される（Ｍｏｌｉｎｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７２（７）：４０４３−４０４９頁（１９９７年））。総合すれば、このエビデンスは、トリプターゼにおける疾患の結果としての組織リモデリングでの中心的役割を示唆する。これはいくつかのマスト細胞媒介性の障害において観察される重大な変化に合致する。慢性喘息および他の長期の呼吸器疾患の１つの特質は、その生理的標的のトリプターゼ活性化の結果でありうる下層組織の線維化および肥厚である。同様に、血管新生が種々の癌におけるマスト細胞密度、トリプターゼ活性および予後不良に関連することを一連の報告が示している（Ｃｏｕｓｓｅｎｓら、Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３（１１）：１３８２−９７頁（１９９９年））；Ｔａｋａｎａｍｉら、Ｃａｎｃｅｒ  ８８（１２）：２６８６−９２頁（２０００年）；Ｔｏｔｈ−Ｊａｋａｔｉｃｓら、Ｈｕｍａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ３１（８）：９５５−９６０頁（２０００年）；Ｒｉｂａｔｔｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ８５（２）：１７１−５頁（２０００年））。
【０１２１】
本発明の薬剤−リガンド複合体は、場合により２つ以上のリンカーを有しうる。例えば、１つのリンカーを用いて薬剤をリガンドに結合可能であり、第２のリンカーは診断剤を複合体に結合させうる。さらなるリンカーにおける他の使用には、分析剤、生体分子、標的化剤、および検出可能な標識の薬剤−リガンド複合体への結合が含まれる。複数のリンカーは同じであるかまたは異なる場合がある。
【０１２２】
また、例えば本発明の化合物の二量体、三量体、四量体およびより多量な相同体またはそれらの反応類似体などの種を含む多価種である本発明の化合物は、本発明の範囲内に含まれる。多価種は、本発明の単一種または２種以上の種から構築可能である。例えば、二量体構築物は「ホモ二量体」または「ヘテロ二量体」でありうる。さらに、本発明の化合物またはその反応類似体がオリゴマーまたはポリマー骨格（例えばポリリシン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプンなど）に結合された多価構築物は本発明の範囲内に含まれる。骨格は、好ましくは多官能性である（すなわち本発明の化合物に結合するための一連の反応部位を有する）。さらに、骨格は、本発明の単一種または本発明の２種以上の種で誘導体化されうる。
【０１２３】
さらに、本発明は、類似官能基でない類似化合物よりも高い水溶性を有する化合物が得られる官能化化合物を含む。したがって、本明細書中に示される置換基のいずれかは水溶性を高める類似基と置換されうる。例えば、水酸基を、ジオールまたは第４級アミン、ヒドロキシアミンもしくは類似の水溶性がより高い部分を有するアミンと置換することは本発明の範囲内に含まれる。好ましい実施形態では、さらなる水溶性が、本明細書中に示される化合物のイオンチャネルに対する活性にとって本質的でない部位での、親化合物の水溶性を高める部分との置換により与えられる。有機化合物の水溶性を高める方法は当該技術分野で既知である。かかる方法は、限定はされないが、常に帯電した部分、例えば第４級アンモニウムまたは生理学的に適切なｐＨで帯電する基、例えばカルボン酸、アミンで有機核を官能化するステップを含む。他の方法は、有機核にヒドロキシルまたはアミンを有する基、例えばアルコール、ポリオール、ポリエーテルなどを付加するステップを含む。代表例は、限定はされないが、ポリリシン、ポリエチレンイミン、ポリ（エチレングリコール）およびポリ（プロピレングリコール）を含む。これらの化合物に適する官能化の化学反応および戦略は当該技術分野で既知である。例えば、Ｄｕｎｎ  Ｒ．Ｌ．ら編、「ＰＯＬＹＭＥＲＩＣ  ＤＲＵＧＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  第４６９巻」、ワシントンＤ．Ｃ．（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９１年を参照のこと。
【０１２４】
薬剤
本明細書中で「Ｄ」として示される薬剤は、本発明において、薬剤がリガンドにリンカーを介して結合される場合、薬剤−リガンド複合体の一部として提供される。薬剤は、リガンドに結合するため、所望の生物学的活性を有し、かつ反応性官能基を有する必要がある。所望の生物学的活性は、ヒトなどの動物における疾患の診断、治癒、軽減、治療、または予防を含む。したがって、「薬剤」という用語は、必要な反応性官能基を有する限り、公式の米国薬局方（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）、公式の米国ホメオパシー薬局方（Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）または公式の国民医薬品集（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）、またはその任意の付録において薬剤として認識された化学物質を示す。典型的な薬剤は、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＤＡ）により維持された医師用卓上参考書（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）（ＰＤＲ）およびオレンジブック（Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ）において示される。新薬は継続的に発見されかつ開発されつつあり、本発明はこれらの新薬が本発明の薬剤−リガンド複合体にも取り込まれうる点を提起している。
【０１２５】
好ましい反応性官能基は、第一級もしくは第二級アミン、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、アルデヒド、およびケトンを含む。より好ましい反応性官能基は、ヒドロキシル、第一級もしくは第二級アミン、スルフヒドリルおよびカルボン酸官能基を含む。さらにより好ましい官能基は、ヒドロキシル、第一級および第二級アミンならびにカルボン酸官能基を含む。薬剤は、少なくとも１つを有する必要があるが、２、３、４、５、６もしくは７以上の反応性官能基を有しうる。さらに、自己犠牲スペーサーＬ1は、薬剤の反応性官能基とリンカーとの間に取り込まれうる。
【０１２６】
薬剤−リガンド複合体は、対応する薬剤が有効である通常の目的に有効であるが、特別に有用な所望の細胞に薬剤を輸送する少なくとも一部のリガンドに固有の能力により、優れた有効性を有する。
【０１２７】
典型的な薬剤は、リガンドに結合するための官能基を有するタンパク質、ペプチド、および小分子薬剤を含む。より具体的には、これらの薬剤として、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、チミジル酸シンターゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ切断剤、トポイソメラーゼ阻害剤、アントラサイクリンファミリーの薬剤、ビンカ薬、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、プテリジンファミリーの薬剤、ダイネン（ｄｉｙｎｅｎｅｓ）、ポドフィロトキシン、分化誘発剤、およびタクソールなどの酵素阻害剤が挙げられる。
【０１２８】
本発明の好ましい薬剤は、癌治療に有用な細胞毒性薬、および所望の生物学的活性、例えば毒素を有する他の小分子、タンパク質またはポリペプチドを含む。薬剤は、腫瘍に特異的なリガンドへの複合によって腫瘍細胞で活性化されるように選択されうる。これらの腫瘍に特異的な薬剤−リガンド複合体は、リガンドの特異性に起因する腫瘍特異性を有する。この例として、腫瘍に特異的な酵素に対して高度に選択的な基質である薬剤−リガンド複合体が挙げられ、この場合、これらの酵素は腫瘍近傍で細胞毒性レベルの遊離薬剤を生成するのに十分な量で腫瘍近傍に存在する。これらの腫瘍に特異的な薬剤−リガンド複合体の１つの利点は、それらがヒト血清中の外来性プロテアーゼに対して安定である点である。薬剤−リガンド複合体の別の利点は、それらが対応する遊離薬剤よりも毒性が低い点であり、それに加え、複合体の特異性は、特異性が高まる結果として腫瘍部位に存在すべき複合体の割合が高まる故、遊離薬剤に比べて用いるべき全体濃度を低下しうる。
【０１２９】
細胞毒素
本発明において有用な細胞毒性薬として、例えば、デュオカルマイシンおよびＣＣ−１０６５とそれらの類似体（デュオカルマイシンおよびＣＣ−１０６５のＣＢＩ（１，２，９，９ａ−テトラ−ヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）に基づく類似体、ＭＣＢＩ（７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラ−ヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）に基づく類似体およびＣＣＢＩ（７−シアノ−１，２，９，９ａ−テトラ−ヒドロシクロ−プロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］−インドール−４−オン）に基づく類似体を含む）、ドキソルビシンおよびモルホリノ−ドキソルビシンおよびシアノモルホリノ−ドキソルビシンなどのドキソルビシン複合体、ドラスタチン−１０などのドラスタチン、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン、メイタンシン類似体、ＤＭ−１、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、ツブリシン、ジソラゾール、エポチロン、パクリタキセル、ドセタキセル、ＳＮ−３８、トポテカン、リゾキシン、エキノマイシン、コルヒチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エストラムスチン、セマドチン、エリュテロビン、メトトレキセイト、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、メルファラン、ロイロシン、ロイロシデイン（ｌｅｕｒｏｓｉｄｅｉｎｅ）、アクチノマイシン、ダウノルビシンおよびダウノルビシン複合体、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、カルミノマイシン、アミノプテリン、タリソマイシン、ポドフィロトキシンおよびエトポシドまたはリン酸エトポシドなどのポドフィロトキシン誘導体、ビンクリスチン、タクソール、タキソテールレチノイン酸、酪酸、Ｎ8−アセチルスペルミジン、カンプトテシン、およびそれらの類似体が挙げられる。本明細書中に記載のリンカーに、複合における官能基を提供するため、他の公知の薬剤が修飾される場合がある。かかる化学修飾は当該技術分野で公知である。
【０１３０】
本発明において用いられる好ましい細胞毒素として、デュオカルマイシン、ＣＣ−１０６５、およびそのＣＣＢＩに基づく類似体およびＭＣＢＩに基づく類似体、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、ドラスタチン−１０、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン、ＤＭ−１、アウリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ、ツブリシンＡ、ジソラゾール、エポチロンＡおよびエポチロンＢが挙げられる。
【０１３１】
本発明の特に好ましい細胞毒素は、活性のある強力なデュオカルマイシン誘導体およびＣＣ−１０６５である。親物質は、その生物学的効果を、ＤＮＡの可逆で立体電子的に（ｓｔｅｒｅｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃａｌｌｙ）制御される配列に選択的なアルキル化を通じて誘導する特に強力な抗腫瘍抗生物質である（Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：４４９９頁（１９９０年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２：８９６１頁（１９９０年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：６６４５頁（１９９１年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：９８７２頁（１９９３年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２：７５９頁（１９９２年））。デュオカルマイシンについての最初の開示後、デュオカルマイシンのＤＮＡアルキル化選択性およびその構造的起源の解明に多大な努力が注がれている。
【０１３２】
本発明の特に好ましい態様は、式４：
【化１４】
2010519310.tif 000015
による構造を有する細胞毒性化合物を提供し、ここで環系Ａは、置換もしくは未置換アリール置換もしくは未置換ヘテロアリールおよび置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーである。典型的な環系はフェニルおよびピロールを含む。
【０１３３】
記号ＥおよびＧは、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるか、またはＥおよびＧは、場合により結合し、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールおよび置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルから選択される環系が形成される。
【０１３４】
記号Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーを表す。Ｒ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーである。
【０１３５】
記号Ｒ3は、（＝Ｏ）、ＳＲ11、ＮＨＲ11およびＯＲ11から選択されるメンバーを表し、ここでＲ11は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、二リン酸塩、三リン酸塩、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ12Ｒ13、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ12Ｒ13、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ12）2、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ12Ｒ13、ＳＲ12またはＳｉＲ12Ｒ13Ｒ14である。記号Ｒ12、Ｒ13、およびＲ14は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキルおよび置換もしくは未置換アリールを独立して表し、ここでＲ12およびＲ13は、それらの結合対象である窒素または炭素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。
【０１３６】
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ15Ｒ16、ＮＣ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＳＯ3、ＳＯ2Ｒ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、およびＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2（式中、ｎは１〜２０の整数である）から独立して選択されるメンバーであるか、またはＲ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'の任意の隣接対は、それらの結合対象の炭素原子とともに結合し、４〜６員を有する置換もしくは未置換シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環系が形成される。Ｒ15およびＲ16は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルおよび置換もしくは未置換ペプチジルを独立して表し、ここでＲ15およびＲ16は、それらの結合対象の窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。１つの典型的な構造がアニリンである。
【０１３７】
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15およびＲ16の少なくとも１つを用い、本明細書中に記載のように、薬剤が本発明のリンカー、例えばＬ1（存在する場合）またはＦに結合される。
【０１３８】
一実施形態では、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15およびＲ16の少なくとも１つは化合物への複合に適する反応基を担持する。さらなる典型的な実施形態では、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15およびＲ16は、Ｈ、置換アルキルおよび置換ヘテロアルキルから独立して選択され、かつアルキルまたはヘテロアルキル部分の遊離末端に反応官能基を有する。Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15およびＲ16のうちの１つ以上は、別種、例えば標的化剤、検出可能な標識、固体支持体などに複合されうる。
【０１３９】
Ｒ6は、存在するかまたは存在しない単結合である。Ｒ6が存在する場合、Ｒ6およびＲ7は結合し、シクロプロピル環が形成される。Ｒ7はＣＨ2−Ｘ1もしくは−ＣＨ2−である。Ｒ7が−ＣＨ2−である場合、それはシクロプロパン環の成分である。記号Ｘ1は、ハロゲン、例えばＣｌ、ＢｒもしくはＦなどの離脱基を表す。Ｒ6およびＲ7の結合は、化学価の原理に反しないように解釈される。
【０１４０】
Ｘ1は任意の離脱基でありうる。有用な離脱基は、限定はされないが、ハロゲン、アジド、スルホン酸エステル（例えばアルキルスルホニル、アリールスルホニル）、オキソニウムイオン、アルキル過塩素酸塩、アンモニオアルカンスルホン酸エステル、アルキルフルオロスルホン酸塩およびフッ素化物（例えばトリフレート、ノナフレート、トレシレート）などを含む。離脱基として有用な特定のハロゲンは、Ｆ、ＣｌおよびＢｒである。特定の一連の反応条件に適するこれらおよび他の離脱基の選択は当業者の能力の範囲内である（例えば、Ｍａｒｃｈ  Ｊ．、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９２年；Ｓａｎｄｌｅｒ  ＳＲ、Ｋａｒｏ  Ｗ、「Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ」、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８３年；およびＷａｄｅ  ＬＧ、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９８０年を参照）。
【０１４１】
６員環内部の曲線は、環が１以上の不飽和度を有し、それは芳香族性でありうることを示す。したがって、下記などの環構造およびそれに関連する構造が、式（５）：
【化１５】
2010519310.tif 000016
の範囲内に含まれる。
【０１４２】
一部の実施形態では、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、およびＲ5'の少なくとも１つは前記薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる。
【０１４３】
一実施形態では、Ｒ11は、自己環化することなく、薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる部分Ｘ5を含む。部分Ｘ5は、好ましくは酵素を用いて切断可能であり、切断される場合、活性薬剤を提供する。例として、Ｒ11は構造（右側が薬剤の残りに共役した状態）：
【化１６】
2010519310.tif 000017
を有しうる。
【０１４４】
典型的な実施形態では、式（４）の環系Ａは、置換もしくは未置換フェニル環である。環系Ａは、本明細書中の定義セクションで示される１つ以上のアリール置換基で置換されうる。一部の実施形態では、フェニル環は、ＣＮまたはメトキシ部分で置換される。
【０１４５】
別の典型的な実施形態では、本発明は、式６：
【化１７】
2010519310.tif 000018
による構造を有する化合物を提供する。
【０１４６】
この実施形態では、置換基Ｒ3、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ6、Ｒ7およびＸの属性は式４における上記と実質的に同じであるとともに、特定の実施形態において好ましい。記号Ｚは、Ｏ、ＳおよびＮＲ23から独立して選択されるメンバーである。記号Ｒ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーを表す。各Ｒ23は独立して選択される。記号Ｒ1は、Ｈ、置換もしくは未置換低級アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ8もしくはＣＯ2Ｒ8を表す。Ｒ8は、置換アルキル、未置換アルキル、ＮＲ9Ｒ10、ＮＲ9ＮＨＲ10およびＯＲ9から選択されるメンバーである。Ｒ9およびＲ10は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキルおよび置換もしくは未置換ヘテロアルキルから独立して選択される。Ｒ2はＨまたは置換もしくは未置換低級アルキルである。Ｒ2が置換アルキルである場合、それはペルフルオロアルキル、例えばＣＦ3以外であることが一般に好ましい。一実施形態では、Ｒ2は置換アルキルであり、ここでは置換基はハロゲンではない。別の実施形態では、Ｒ2は未置換アルキルである。
【０１４７】
一部の実施形態では、Ｒ1はエステル部分、例えばＣＯ2ＣＨ3である。一部の実施形態では、Ｒ2は低級アルキル基であり、それは置換もしくは未置換でありうる。ここで好ましい低級アルキル基はＣＨ3である。一部の好ましい実施形態では、Ｒ1はＣＯ2ＣＨ3でありかつＲ2はＣＨ3である。
【０１４８】
一部の実施形態では、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、およびＲ5'は、Ｈ、ハロゲン、ＮＨ2、ＯＭｅ、Ｏ（ＣＨ2）2Ｎ（Ｒ29）2およびＮＯ2から独立して選択されるメンバーである。各Ｒ29は、独立してＨまたは低級アルキル（例えばメチル）である。
【０１４９】
一部の実施形態では、薬剤は、離脱基Ｘ1がハロゲン、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、およびアジドから選択されるメンバーであるように選択される。一部の実施形態では、Ｘ1はＦ、Ｃｌ、またはＢｒである。
【０１５０】
一部の実施形態では、ＺはＯまたはＮＨである。一部の実施形態では、ＸはＯである。
【０１５１】
さらに別の典型的な実施形態では、本発明は、式７または８：
【化１８】
2010519310.tif 000019
による構造を有する化合物を提供する。
【０１５２】
式４のデュオカルマイシン類似体の別の好ましい構造は、環系Ａが未置換もしくは置換フェニル環である場合の構造である。環系Ａがピロールである場合での式４の構造における上記の薬剤分子上の好ましい置換基はまた、環系Ａが未置換もしくは置換フェニル環である場合での好ましい置換基である。
【０１５３】
例えば、好ましい実施形態では、薬剤（Ｄ）は、式（９）の構造：
【化１９】
2010519310.tif 000020
を含む。
【０１５４】
この構造では、Ｒ3、Ｒ6、Ｒ7、Ｘは式４において上記の通りである。さらに、ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、ここでＲ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーである。
【０１５５】
Ｒ1は、Ｈ、置換もしくは未置換低級アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ8、またはＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、ここでＲ9およびＲ10は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキルおよび置換もしくは未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーである。
【０１５６】
Ｒ1'は、Ｈ、置換もしくは未置換低級アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、ここでＲ9およびＲ10は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキルおよび置換もしくは未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーである。
【０１５７】
Ｒ2は、Ｈ、または置換もしくは未置換低級アルキルまたは未置換ヘテロアルキルまたはシアノまたはアルコキシであり、かつＲ2'は、Ｈ、または置換もしくは未置換低級アルキルまたは未置換ヘテロアルキルである。
【０１５８】
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15またはＲ16の少なくとも１つは、薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる。
【０１５９】
薬剤（Ｄ）の別の実施形態は構造（１３）を含み、ここでＲ4およびＲ4'は結合し、ヘテロシクロアルキル：
【化２０】
2010519310.tif 000021
が形成される。
【０１６０】
この構造では、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ6、Ｒ7、Ｘは式４において上記の通りである。さらに、ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、ここでＲ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーである。
【０１６１】
Ｒ32は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ15Ｒ16、ＮＣ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、およびＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2から選択され、ここでｎは１〜２０の整数である。Ｒ15およびＲ16は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルおよび置換もしくは未置換ペプチジルを独立して表し、ここでＲ15およびＲ16はそれらの結合対象である窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。
【０１６２】
Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15、Ｒ16、またはＲ32の少なくとも１つは、薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる。少なくとも一部の実施形態では、Ｒ32は薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる。
【０１６３】
この化合物の好ましい一実施形態は、
【化２１】
2010519310.tif 000022
である。
【０１６４】
Ｒ1は、Ｈ、置換もしくは未置換低級アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ8、またはＣＯ2Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、ここでＲ9およびＲ10は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキルおよび置換もしくは未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーである。
【０１６５】
Ｒ1'は、Ｈ、置換もしくは未置換低級アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ8であり、ここでＲ8はＮＲ9Ｒ10およびＯＲ9から選択されるメンバーであり、ここでＲ9およびＲ10は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキルおよび置換もしくは未置換ヘテロアルキルから独立して選択されるメンバーである。
【０１６６】
Ｒ2は、Ｈ、または置換もしくは未置換低級アルキルまたは未置換ヘテロアルキルまたはシアノまたはアルコキシであり、かつＲ2'は、Ｈ、または置換もしくは未置換低級アルキルまたは未置換ヘテロアルキルである。
【０１６７】
さらなる実施形態は、式：
【化２２】
2010519310.tif 000023
を有する。
【０１６８】
この構造では、Ａ、Ｒ6、Ｒ7、Ｘ、Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5、およびＲ5'は式４において上記の通りである。さらに、ＺはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり、ここでＲ23は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、およびアシルから選択されるメンバーである。
【０１６９】
Ｒ33は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ15Ｒ16、ＮＣ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、ならびにＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2から選択され、ここでｎは１〜２０の整数である。Ｒ15およびＲ16は、Ｈ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルおよび置換もしくは未置換ペプチジルを独立して表し、ここでＲ15およびＲ16はそれらの結合対象である窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。Ｒ33は薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる。
【０１７０】
好ましくは、Ａは置換もしくは未置換フェニルまたは置換もしくは未置換ピロールである。さらに、Ｒ11に対する本明細書中に記載の置換基の選択はＲ33にも適用可能である。
【０１７１】
リガンド
Ｘ4は保護反応官能基、非保護反応官能基、検出可能な標識、および標的化剤からなる群から選択されるリガンドを表す。好ましいリガンドは標的化剤、例えば抗体およびその断片である。
【０１７２】
一部の実施形態では、Ｘ4基はＲ29、ＣＯＯＲ29、Ｃ（Ｏ）ＮＲ29、およびＣ（Ｏ）ＮＮＲ29から選択されるメンバーとして記述可能であり、ここでＲ29は、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキルおよび置換もしくは未置換ヘテロアリールから選択されるメンバーである。さらに別の典型的な実施形態では、Ｒ29は、Ｈ；ＯＨ；ＮＨＮＨ2；
【化２３】
2010519310.tif 000024
から選択されるメンバーであり、
ここでＲ30は、反応性官能基で終結される置換もしくは未置換アルキル、官能基で終結される置換もしくは未置換ヘテロアリールを示す。上記構造は、例えば標的化剤のアミノ酸の側鎖、例えば抗体と反応しうる反応性保護基として作用することで、標的化剤をリンカー−薬剤部分に結合させる。
【０１７３】
標的化剤
本発明のリンカーアームおよび細胞毒素は、ペイロードを身体の細胞、器官または部位に選択的に送達する標的化剤に結合されうる。抗体（例えばキメラ、ヒト化およびヒト）、受容体に対するリガンド、レクチン、糖、抗体などの典型的な標的化剤は、当該技術分野で認識されており、本発明の実施において制限なしに有用である。他の標的化剤は、特異的な分子認識モチーフを含まない化合物のクラスを含み、細胞毒素に分子量を加えるポリ（エチレングリコール）、多糖、ポリアミノ酸などの高分子を含む。追加された分子量は、細胞毒素の薬物動態、例えば血清半減期に作用する。
【０１７４】
典型的な実施形態では、本発明は、生体分子、例えば抗体、受容体、ペプチド、レクチン、糖、核酸またはこれらの組み合わせである標的化剤とともに、細胞毒素、リンカーまたは細胞毒素−リンカー複合体を提供する。
【０１７５】
本発明の実施に有用な生体分子は、任意の供給源に由来しうる。生体分子は、天然供給源から単離されうるか、または合成法により生成されうる。タンパク質は、天然タンパク質または突然変異タンパク質でありうる。突然変異は、化学的突然変異原、部位特異的突然変異誘発または当業者に公知の突然変異を誘発する他の手段により生じうる。本発明の実施に有用なタンパク質として、例えば、酵素、抗原、抗体および受容体が挙げられる。抗体はポリクローナルまたはモノクローナルのいずれかでありうるが、最も好ましくはモノクローナルである。ペプチドおよび核酸は、天然供給源から単離されうるか、または本来的に全体的かまたは部分的な合成でありうる。
【０１７６】
好ましい実施形態では、標的化剤は抗体または抗体断片であり、それは目的の標的細胞上または標的部位で発現される抗原に対するその特異性に基づいて選択される。多種多様な腫瘍に特異的であるかまたは他の疾患に特異的な抗原が同定されており、かつそうした抗原に対する抗体が、かかる腫瘍または他の疾患の治療において用いられ、またはその使用についての提案がなされている。当該技術分野で公知の抗体は、本発明の複合体中、特に標的抗原が関連する疾患の治療において用いられうる。本発明の抗体−リンカー−薬剤複合体の標的対象でありうる標的抗原（およびその関連疾患）の非限定例として、Ｈｅｒ２（乳癌）、ＣＤ２０（リンパ腫）、ＥＧＦＲ（固形腫瘍）、ＣＤ２２（非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫）、ＣＤ５２（慢性リンパ球性白血病）、ＣＤ３３（急性骨髄性白血病）、ＣＤ４（リンパ腫、自己免疫疾患、関節リウマチを含む）、ＣＤ３０（非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫）、Ｍｕｃ１８（メラノーマ）、インテグリン（固形腫瘍）、ＰＳＭＡ（前立腺癌、良性前立腺肥大）、ＣＥＡ（結腸直腸癌）、ＣＤ１１ａ（乾癬）、ＣＤ８０（乾癬）、ＣＤ２３（喘息）、ＣＤ４０Ｌ（免疫性血小板減少性紫斑病）、ＣＴＬＡ４（Ｔ細胞リンパ腫）およびＢＬｙｓ（全身性エリテマトーデスを含む自己免疫疾患）が挙げられる。
【０１７７】
認識部分がタンパク質または抗体である場合の実施形態では、タンパク質は、表面または自己組織化単分子層（ＳＡＭ）成分に結合されうるかまたはタンパク質の表面上で使用可能な任意の反応性ペプチド残基により、スペーサーアームを介して結合されうる。好ましい実施形態では、反応基はアミンまたはカルボン酸塩である。特に好ましい実施形態では、反応基はリジン残基のε−アミン基である。さらに、これらの分子は、非特異的相互作用（例えば化学吸着、物理吸着）により、基質の表面またはＳＡＭ上に吸着されうる。
【０１７８】
抗体である認識部分を用い、薬剤、除草剤、殺虫剤、工業化学剤および兵器用剤（ａｇｅｎｔｓ  ｏｆ  ｗａｒ）などのタンパク質、ペプチド、核酸、糖または小分子である分析物の認識が可能である。特異的分子に対する抗体を産生する方法は、当業者に周知である。例えば、米国特許第５，１４７，７８６号明細書；米国特許第５，３３４，５２８号明細書；米国特許第５，６８６，２３７号明細書；および米国特許第５，５７３，９２２号明細書を参照のこと。抗体を表面に結合させるための方法もまた当該技術分野で既知である。例えば、Ｄｅｌａｍａｒｃｈｅら、Ｌａｎｇｍｕｉｒ  １２：１９４４−１９４６頁（１９９６年）を参照のこと。
【０１７９】
標的化剤は、任意の使用可能な反応基により本発明のリンカーに結合されうる。例えば、ペプチドはアミン、カルボキシル、スルフヒドリル、または水酸基を介して結合されうる。かかる基は、ペプチド末端またはペプチド鎖の内部部位に存在しうる。核酸は、塩基上の反応基（例えば環外アミン）または糖部分上の使用可能な水酸基（例えば３’−もしくは５’−ヒドロキシル）を介して結合されうる。ペプチド鎖および核酸鎖が１つ以上の部位でさらに誘導体化され、適切な反応基の鎖上への結合が可能になりうる。例えば、Ｃｈｒｉｓｅｙら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４：３０３１−３０３９頁（１９９６年）を参照のこと。
【０１８０】
ペプチドまたは核酸が完全または部分的な合成分子である場合、反応基またはマスキングされた反応基が合成過程で取り込まれうる。ペプチドおよび核酸の双方での反応基の取り込みに適する多数の誘導体化された単量体は当業者に公知である。例えば、「ＴＨＥ  ＰＥＰＴＩＤＥＳ：ＡＮＡＬＹＳＩＳ，ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」  Ｇｒｏｓｓ  Ｅ．およびＭｅｌｅｎｈｏｆｅｒ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０年）を参照のこと。多数の有用な単量体は市販されている（Ｂａｃｈｅｍ、Ｓｉｇｍａなど）。次いで、このマスキングされた基は合成後に脱マスキングされる可能性があり、その時点で本発明の化合物の成分との反応における使用が可能になる。
【０１８１】
典型的な核酸標的化剤は、アプタマー、アンチセンス化合物、および三重らせんを形成する核酸を含む。典型的には、糖残基の水酸基、塩基残基由来のアミノ基、またはヌクレオチドのリン酸塩酸素（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｏｘｙｇｅｎ）が、ヌクレオチドに基づく標的化剤と細胞毒素との共役に必要な化学的機能性として用いられる。しかし、当業者は他の「非天然の」反応官能性が従来の技術により核酸に付与されうることを容易に理解するであろう。例えば、糖残基の水酸基は、当該技術分野で周知の技術を用いてメルカプトまたはアミノ基に変換されうる。
【０１８２】
アプタマー（または核酸抗体）は、特異的な分子標的に結合する一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡまたは一本鎖ＲＮＡ分子である。一般に、アプタマーは、分子標的、例えばタンパク質の作用を、血中を循環する標的のプールへの結合により阻害することで機能する。アプタマーは、化学的機能性を有することから本明細書に記載のように細胞毒素に共有結合しうる。
【０１８３】
小分子薬剤、代謝産物、共同因子、毒素、糖に基づく薬剤、ヌクレオチドに基づく薬剤、糖タンパク質などを含む多種多様な分子標的はアプタマーと共有結合ではないが特異的な結合を形成する能力があるが、一般に分子標的は、血清タンパク質、キニン、エイコサノイド、細胞表面分子などを含むタンパク質またはペプチドを含むことになる。アプタマーの例として、Ｇｉｌｅａｄ’ｓアンチトロンビン阻害剤ＧＳ５２２およびその誘導体が挙げられる（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．）。また、Ｍａｃａｙａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：３７４５−９頁（１９９３年）；Ｂｏｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３５５：５６４−５６６頁（１９９２年）およびＷａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１８９９−９０４頁（１９９３年）を参照のこと。
【０１８４】
所与の生体分子に特異的なアプタマーは、当該技術分野で公知の技術を用いて同定されうる。例えばＴｏｏｌｅら（１９９２年）ＰＣＴ公開の国際公開第９２／１４８４３号パンフレット；ＴｕｅｒｋおよびＧｏｌｄ（１９９１年）ＰＣＴ公開の国際公開第９１／１９８１３号パンフレット；ＷｅｉｎｔｒａｕｂおよびＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎ（１９９２年）ＰＣＴ公開の国際公開第９２／０５２８５号パンフレット；ならびにＥｌｌｉｎｇｔｏｎおよびＳｚｏｓｔａｋ、Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８頁（１９９０年）を参照のこと。つまり、これらの技術は、典型的には分子標的とオリゴヌクレオチドのランダム混合物との複合体化を含む。アプタマー−分子標的複合体は複合体化していないオリゴヌクレオチドから分離される。アプタマーは、分離された複合体から回収され、増幅される。このサイクルの反復により、分子標的に対して最高の親和性を有するアプタマー配列が同定される。
【０１８５】
遺伝子の不適切な発現から発症する疾患においては、かかる遺伝子の発現の特異的な阻止または低下が理想的な治療法を示す。原理的に、特定の遺伝子産物の生成は、ｍＲＮＡ内の接近可能な配列、または予備ｍＲＮＡプロセシングに必須である転写産物内の配列、または遺伝子自体の内部の配列に相補的な一本鎖デオキシヌクレオチドまたはリボデオキシヌクレオチドのハイブリダイゼーションにより阻害、低下または遮断されうる。遺伝子制御におけるこのパラダイムは、アンチセンスまたはアンチジーン阻害と称されることが多い。例えば本発明のアルキル剤の核酸への複合により、さらなる有効性が得られる。
【０１８６】
アンチセンス化合物は、特定のタンパク質の生成に関与するｍＲＮＡに結合し、そのｍＲＮＡの生成を無効化または阻止するように設計された核酸である。アンチセンス化合物は、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のオリゴヌクレオチドまたはその類似体を含み、個々のｍＲＮＡ種に特異的にハイブリダイズし、ｍＲＮＡ種の転写および／またはＲＮＡプロセシング、ならびに／あるいはコードされたポリペプチドの翻訳を阻止することにより、コードされた各ポリペプチドの量の減少がもたらされうる（Ｃｈｉｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１０００６−１００１０頁（１９８９年）；Ｂｒｏｄｅｒら、Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．１１３：６０４−６１８頁（１９９０年）；Ｌｏｒｅａｕら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２７４：５３−５６頁（１９９０年）；Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇら、国際公開第９１／１１５３５号パンフレット；国際公開第９１／０９８６５号パンフレット；国際公開第９１／０４７５３号パンフレット；国際公開第９０／１３６４１号パンフレット；国際公開第９１／１３０８０号パンフレット、国際公開第９１／０６６２９号パンフレット、および欧州特許第３８６５６３号明細書）。それらの優れた標的感受性および選択性のため、アンチセンスオリゴヌクレオチドは治療剤、例えば本発明の細胞毒素の所望の分子標的への送達にとって有用である。
【０１８７】
他にも核酸が二本鎖ＤＮＡに三重らせんの形成を介して結合し、かつ転写および／またはＤＮＡ合成を阻害しうるという報告がなされている。三重らせん化合物（三本鎖薬（ｔｒｉｐｌｅ  ｓｔｒａｎｄ  ｄｒｕｇ）とも称される）は、二本鎖ＤＮＡの配列に結合し、疾患原因遺伝子、例えばウイルス遺伝子、例えばＨＩＶおよび単純ヘルペスウイルス、ならびに腫瘍遺伝子の転写を選択的に阻害する、すなわち細胞核でタンパク質の生成を停止させるように意図されているオリゴヌクレオチドである。これらの薬剤は、細胞のゲノム内で二本鎖ＤＮＡに直接結合し、三重らせんを形成し、細胞における標的タンパク質の生成を阻止する。例えばＰＣＴ公開の国際公開第９２／１０５９０号パンフレット、国際公開第９２／０９７０５号パンフレット、国際公開第９１／０６６２６号パンフレット、および米国特許第５，１７６，９９６号明細書を参照のこと。したがって、本発明の細胞毒素はまた、三重らせんを形成する核酸配列に複合される。
【０１８８】
核酸（例えばアンチセンス化合物および三重らせん薬（ｔｒｉｐｌｅ  ｈｅｌｉｘ  ｄｒｕｇｓ））の部位特異性がリン酸ジエステル結合の修飾またはオリゴヌクレオチド末端の化学的修飾によって受ける作用は大きくない。その結果、これらの核酸は化学的に修飾可能であり、それにより全体的な結合安定性が高まり、化学的分解に対する安定性が高まり、オリゴヌクレオチドが細胞に輸送される速度が高まり、かつ分子に対する化学反応性が付与される。アンチセンス療法において有用な様々な核酸を作成するための一般的アプローチが、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｒｏｌら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８−９７６頁（１９８８年）およびＳｔｅｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：２６５９−２６６８頁（１９８８年）でレビューされている。したがって、典型的な実施形態では、本発明の細胞毒素は、リン酸ジエステル結合の修飾により核酸に複合される。
【０１８９】
さらに、本発明の細胞毒素を担持するアプタマー、アンチセンス化合物および三重らせん薬はまた、関連標的配列に対する特異的ハイブリダイゼーションまたは同配列との関連性がオリゴヌクレオチドの機能特性として保持される限り、ヌクレオチド置換、付加、欠失、または転位を含みうる。例えば、一部の実施形態では、ヌクレアーゼによる分解に対してその天然リン酸ジエステル対応物よりも耐性が高いことから、インビボでのより高い持続性およびより高い効力を有することが予想されるホスホロチオエート類似体が用いられることになる（例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２５９−２６７頁（１９９０年）を参照）。オリゴヌクレオチドのホスホルアミデート誘導体はまた、相補的ポリヌクレオチドに結合しかつ共有結合されたリガンド種に対するさらなる適合能を有することが知られ、本発明の方法に適しているであろう。例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６（１１）：４８３１頁（１９８８年）を参照のこと。
【０１９０】
一部の実施形態では、アプタマー、アンチセンス化合物および三重らせん薬はＯ−メチルリボヌクレオチドを含むことになる（欧州特許第３６０６０９号明細書）。キメラオリゴヌクレオチドもまた用いられうる（Ｄａｇｌｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：４７５１頁（１９９０年））。一部の応用においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび三重らせんは、ポリアミド核酸（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１４９７頁（１９９１年）およびＰＣＴ公開の国際公開第９０／１５０６５号パンフレット）または他のカチオン誘導体（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：４４７０−４４７１頁（１９８８年））を含みうる。他の応用では、１つ以上のリン酸ジエステル結合が、イソステリック（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）基、例えばＰＣＴ公開の国際公開第９２／０５１８６号パンフレットおよび国際公開第９１／０６５５６号パンフレットに記載の２〜４原子長のヌクレオシド間（ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）結合、あるいはホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）基（Ｍａｔｔｅｕｃｃｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：７７６７−７７６８頁（１９９１年））またはアミド基（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１４９７−１５００頁（１９９１年））と置換されているオリゴヌクレオチドが用いられうる。
【０１９１】
さらに、例えば糖または塩基が化学的に修飾されたヌクレオチド類似体は、本発明において用いられうる。プリンおよびピリミジンの「類似」形態は一般に当該技術分野で公知であり、その多数は化学療法剤として用いられる。典型的であるが網羅的でないリストとして、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ6−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルシュードウラシル（ｍｅｔｈｙｌｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ6−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（β−Ｄ−ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ6−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ウィブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル，２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、シュードウラシル、キューオシン，２−チオシトシン、および２，６−ジアミノプリンが挙げられる。さらに、ハロゲン化塩基による従来の塩基。さらに、塩基上の２’−フラノース位置は非帯電性の嵩高い基の置換基を有しうる。非帯電性の嵩高い基の例として、分岐アルキル、糖および分岐糖が挙げられる。
【０１９２】
末端修飾はまた、細胞毒素を核酸に複合させ、細胞種の特異性、薬物動態、核透過性、およびオリゴヌクレオチド医薬品における絶対細胞取り込み速度を改良するための有用な方法を提供する。例えば、反応基を含む、５’および３’末端での多数の置換基は既知であり、それにより細胞毒素の共有結合が可能になる。例えば、「ＯＬＩＧＯＤＥＯＸＹＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ：ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ  ＯＦ  ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ」、（１９８９年）Ｃｏｈｅｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＲＯＳＰＥＣＴＳ  ＦＯＲ  ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＮＵＣＬＥＩＣ  ＡＣＩＤ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ  ＦＯＲ  ＣＡＮＣＥＲ  ＡＮＤ  ＡＩＤＳ」、（１９９１年）、Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ；「ＧＥＮＥ  ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮ：ＢＩＯＬＯＧＹ  ＯＦ  ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＲＮＡ  ＡＮＤ  ＤＮＡ」、（１９９２年）ＥｒｉｃｋｓｏｎおよびＩｚａｎｔ編、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ；ならびに「ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＲＮＡ  ＡＮＤ  ＤＮＡ」、（１９９２年）、Ｍｕｒｒａｙ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓを参照のこと。アンチセンス化合物に関する一般的方法については、「ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＲＮＡ  ＡＮＤ  ＤＮＡ」、（１９８８年）、Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと。
【０１９３】
検出可能な標識
本発明の化合物および方法と併用される特定の標識または検出可能な基は、本発明の化合物の活性または有用性を有意に阻害しない限りにおいて、一般に本発明の重要な態様ではない。検出可能な基は、検出可能な物理的または化学的特性を有する任意の材料でありうる。かかる検出可能な標識はイムノアッセイの分野で十分に開発されており、一般にかかる方法で有用な大部分の任意の標識が本発明に適用可能である。したがって、標識は、分光学的、光化学的、生物化学的、免疫化学的、電気的、光学的または化学的手段により検出可能な任意の組成物である。本発明で有用な標識は、磁気ビーズ（例えばＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標））、蛍光色素（例えばフルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミンなど）、放射性標識（例えば3Ｈ、125Ｉ、35Ｓ、14Ｃ、または32Ｐ）、酵素（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびＥＬＩＳＡで一般に用いられるその他のもの）、ならびにコロイド状金または着色ガラスまたはプラスチックビーズ（例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）などの比色標識を含む。
【０１９４】
標識は、当該技術分野で周知の方法に従い、本発明の化合物に直接的または間接的に共役されうる。上記のように、多種多様な標識の使用が可能であり、標識は、要求される感受性、化合物との複合の容易性、安定性の要求、使用可能な器具類、および使い捨ての設備（ｄｉｓｐｏｓａｌ  ｐｒｏｖｉｓｉｏｎ）に応じて選択される。
【０１９５】
本発明の化合物が検出可能な標識に複合される場合、標識は好ましくは放射性同位体、蛍光物質、蛍光物質前駆体、発色団、酵素およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるメンバーである。様々な基を抗体に複合するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、抗体に複合されることが多い検出可能な標識は、酵素、例えば西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびグルコースオキシダーゼである。
【０１９６】
非放射性標識は間接的手段により結合されることが多い。一般に、リガンド分子（例えばビオチン）は複合体の成分に共有結合される。次いで、リガンドは別の分子（例えばストレプトアビジン分子）に結合し、それは本質的に検出可能であるかあるいはシグナル系、例えば検出可能な酵素、蛍光化合物、または化学発光化合物に共有結合される。
【０１９７】
本発明の複合体の成分はまた、例えば酵素またはフルオロフォアとの複合により、シグナル生成化合物に直接複合されうる。標識としての目的の酵素は、主に加水分解酵素、特にホスファターゼ、エステラーゼおよびグリコシダーゼ、またはオキシダーゼ（ｏｘｉｄｏｔａｓｅｓ）、特にペルオキシダーゼとなる。蛍光化合物は、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどを含む。化学発光化合物は、ルシフェリン、および２，３−ジヒドロフタラジンジオン、例えばルミノールを含む。使用可能な様々な標識またはシグナル生成系についてのレビューとしては、米国特許第４，３９１，９０４号明細書を参照のこと。
【０１９８】
標識を検出する方法は当業者に周知である。したがって、例えば、標識が放射性標識である場合、検出方法はオートラジオグラフィーなどではシンチレーションカウンタまたは写真フィルムの使用を含む。標識が蛍光標識である場合、それは蛍光色素を適切な光の波長で励起し、得られる蛍光を検出することで検出可能である。蛍光は、電荷結合素子（ＣＣＤ）または光電子増倍管などの電子検出器の使用により、写真フィルムによって視覚的に検出可能である。同様に、酵素標識は、酵素に適する基質を提供し、得られた反応生成物を検出することにより検出可能である。最後に、簡素な比色標識は、単に標識に関連する色を観察することにより検出可能である。したがって、様々なディップスティックアッセイでは、複合された金がピンク色を呈することが多い一方、様々な複合ビーズがビーズの色を呈する。
【０１９９】
蛍光標識は取扱い上の注意がほとんど要求されないという利点を有し、高スループット画像化技術（コンピュータを含む集積システムにおける分析用の画像のデジタル化を含む光学分析）への適合性が高いことから、好ましい。好ましい標識は、典型的には、標識における高い感受性、高い安定性、低いバックグラウンド、低い環境感受性および高い特異性のうちの１つ以上で特徴づけられる。多数の蛍光標識が、ＳＩＧＭＡ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、ＣＬＯＮＴＥＣＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）、Ｃｈｅｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｃｏｒｐ．、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）、Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｃａ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ  Ａｎａｌｙｔｉｋａ（Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ（Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））、およびＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）、ならびに当業者に既知の多数の他の市販元から市販されている。さらに、当業者は、特定の用途に適するフルオロフォアの選択方法を理解し、市販品として容易に入手できない場合、必要なフルオロフォアを新規に合成するかまたは市販の蛍光化合物を合成的に修飾し、所望の蛍光標識の入手に至ることができるであろう。
【０２００】
小分子のフルオロフォアに加え、天然蛍光タンパク質およびかかるタンパク質の改変類似体は本発明で有用である。かかるタンパク質として、例えば、刺胞動物の緑色蛍光タンパク質（Ｗａｒｄら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．３５：８０３−８０８頁（１９８２年）；Ｌｅｖｉｎｅら、Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、７２Ｂ：７７−８５頁（１９８２年））、ビブリオ・フィシェリ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｆｉｓｃｈｅｒｉ）株由来の黄色蛍光タンパク質（Ｂａｌｄｗｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９：５５０９−１５頁（１９９０年））、渦鞭毛藻のシンビオジニウム種（ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ  Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ  ｓｐ．）由来のペリジニン−クロロフィル（Ｍｏｒｒｉｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４：６７３：７７頁（１９９４年））、海洋シアノバクテリア、例えばシネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）由来のフィコビリンタンパク質、例えばフィコエリトリンおよびフィコシアニン（Ｗｉｌｂａｎｋｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２２６−３５（１９９３年））などが挙げられる。
【０２０１】
一般に、細胞毒素と標的化剤（または他の作用物質）、場合によりスペーサー基の間での結合の形成に先立ち、化学官能基の少なくとも１つが活性化されることになる。当業者は、ヒドロキシ、アミノ、およびカルボキシ基を含む種々の化学官能基が種々の標準の方法および条件を用いて活性化されうることを理解するであろう。例えば、細胞毒素または標的化剤の水酸基がホスゲンでの処理を通じて活性化され、対応するクロロギ酸塩（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ）またはクロロギ酸ｐ−ニトロフェニル（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ）が形成され、対応する炭酸塩が形成されうる。
【０２０２】
典型的な実施形態では、本発明ではカルボキシル官能基を含む標的化剤が使用される。カルボキシル基は、例えば対応するアシルハロゲン化物または活性エステルへの変換により活性化されうる。この反応は、Ｍａｒｃｈ、上記、３８８−８９頁で例示のように種々の条件下で行われうる。典型的な実施形態では、ハロゲン化アシルは、カルボキシル含有基と塩化オキサリルとの反応を通じて調製される。活性化剤は細胞毒素または細胞毒素−リンカーアーム複合体と反応し、本発明の複合体が形成される。当業者は、カルボキシル含有標的化剤の使用はあくまで例示であり、多数の他の官能基を有する作用物質が本発明のリンカーに複合されうることを理解するであろう。
【０２０３】
反応官能基
例示の簡素化のため、以下の考察では本発明の細胞毒素と標的化剤との複合について着目される。その着目により本発明の一実施形態が例示され、その他は当業者により容易に推定される。本発明が単一の実施形態に関する考察に着目することによって限定されることは全く意図されていない。
【０２０４】
本発明の典型的な化合物は一般に置換もしくは未置換アルキルまたはヘテロアルキル鎖上に位置する反応官能基を担持することから、それらの別種への容易な結合が可能になる。反応基にとって好都合な位置は鎖の末端位置である。
【０２０５】
本発明の実施において有用な反応の反応基およびクラスは、一般にバイオコンジュゲート化学の技術分野で周知のものである。反応官能基は保護または非保護の場合があり、基の保護性は有機合成の技術分野で既知の方法により変化しうる。反応性の細胞毒素類似体の場合に使用可能な本発明の好ましい反応のクラスは比較的穏やかな条件下で進行するものである。これらは、限定はされないが、求核置換基（例えばアミンおよびアルコールとハロゲン化アシル、活性エステルとの反応）、求電子置換基（例えばエナミン反応）、ならびに炭素−炭素および炭素−ヘテロ原子の複数の結合の付加（例えばマイケル反応、ディールス−アルダー付加）を含む。これらおよび他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８５年；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）、１９９６年、およびＦｅｅｎｅｙら、「Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｒｉｅｓ」、第１９８巻、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、ワシントンＤ．Ｃ．（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）、１９８２年において考察されている。
【０２０６】
典型的な反応タイプは、カルボキシル基と、限定はされないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび芳香族エステルを含むその様々な誘導体との反応を含む。水酸基は、エステル、エーテル、アルデヒドなどに変換されうる。ハロアルキル基は、例えば、アミン、カルボン酸アニオン、チオールアニオン、カルボアニオン、またはアルコキシドイオンとの反応により新種に変換される。求ジエン体（例えばマレイミド）基はディールス−アルダー付加に関与する。アルデヒドまたはケトン基は、イミン、ヒドラゾン、セミカルバゾンもしくはオキシムにまたはグリニャール付加またはアルキルリチウム付加のような機序を介して変換されうる。ハロゲン化スルホニルは例えばアミンと容易に反応し、スルホンアミドが形成される。アミンまたはスルフヒドリル基は、例えばアシル化、アルキル化または酸化される。アルケンは、付加環化、アシル化、マイケル付加などを用いて一連の新種に変換されうる。エポキシドは、アミンおよびヒドロキシル化合物と容易に反応する。
【０２０７】
当業者は、これら結合の多数が種々の方法でかつ種々の条件を用いて生成可能であることを容易に理解するであろう。エステルの調製においては例えばＭａｒｃｈ、上記、１１５７頁を参照し；チオエステルにおいてはＭａｒｃｈ、上記、３６２−３６３頁、４９１頁、７２０−７２２頁、８２９頁、９４１頁、および１１７２頁を参照し；炭酸塩においてはＭａｒｃｈ、上記、３４６−３４７頁を参照し；カルバメートにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１５６−５７頁を参照し；アミドにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１５２頁を参照し；尿素およびチオ尿素においてはＭａｒｃｈ、上記、１１７４頁を参照し；アセタールおよびケタールにおいてはＧｒｅｅｎｅら、上記、１７８−２１０頁およびＭａｒｃｈ、上記、１１４６頁を参照し；アシルオキシアルキル誘導体においては「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ｔｏｐｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｋ．Ｂ．Ｓｌｏａｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９２年を参照し；エノールエステルにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１６０頁を参照し；Ｎ−スルホニルイミデートにおいてはＢｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３１：２０６６頁（１９８８年）を参照し；無水物においてはＭａｒｃｈ、上記、３５５−５６頁、６３６−３７頁、９９０−９１頁、および１１５４頁を参照し；Ｎ−アシルアミドにおいてはＭａｒｃｈ、上記、３７９頁を参照し；Ｎ−マンニッヒ塩基においてはＭａｒｃｈ、上記、８００−０２頁および８２８頁を参照し；ヒドロキシメチルケトンエステルにおいてはＰｅｔｒａｃｅｋら、Ａｎｎａｌｓ  ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、５０７：３５３−５４頁（１９８７年）を参照し；ジスルフィドにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１６０頁を参照し；かつホスホン酸エステルおよびホスホンアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｍｉｄａｔｅ）においては。
【０２０８】
反応官能基は非保護であり、反応に関与または干渉しないように選択されうる。あるいは、反応官能基は保護基の存在により反応への関与から保護されうる。当業者は、特定の官能基を選択された一連の反応条件への干渉から保護する方法を理解するであろう。有用な保護基の例として、Ｇｒｅｅｎｅら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年を参照のこと。
【０２０９】
典型的には、標的化剤は、その各化学官能基による標準の化学技術を用いて細胞毒素に共有結合される。場合により、リンカーまたは作用物質は１つ以上のスペーサー基を介して作用物質に共役される。スペーサー基は、併用される場合、等しいかまたは異なりうる。
【０２１０】
一般に細胞毒素と反応官能基、場合によりスペーサー基の間での結合の形成に先立ち、化学官能基の少なくとも１つが活性化されることになる。当業者は、ヒドロキシ、アミノ、およびカルボキシ基を含む種々の化学官能基が種々の標準の方法および条件を用いて活性化されうることを理解するであろう。典型的な実施形態では、本発明は反応官能基としてカルボキシル官能基を含む。カルボキシル基は上記のように活性化されうる。
【０２１１】
複合体の例
本発明のリンカーは、細胞毒性剤としての、デュオカルマイシンまたはＣＢＩ類似体を含有する複合体内で用いられうる。本発明の複合体の例が、下記にさらに詳述される。他に指示しない限り、置換基は、細胞毒素およびリンカーに関するセクション中で上記のように定義される。
【０２１２】
適切な複合体の一例として、式
【化２４】
2010519310.tif 000025
（式中、
Ｌ1は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５、もしくは６の整数であり；
Ｆは構造；
【化２５】
2010519310.tif 000026
を含むリンカーであり、ここで
ＡＡ1は天然アミノ酸および非天然αアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｌ2は自己犠牲リンカーであり；
ｏは０または１であり；
Ｌ4はリンカーメンバーであり；
ｐは０または１であり；
Ｘ4は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、および標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化２６】
2010519310.tif 000027
を含み、ここで環系Ａは置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル基であり；
ＥおよびＧはＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、ヘテロ原子、および単結合から独立して選択されるメンバーであるか、またはＥおよびＧは結合し、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリールならびに置換および未置換ヘテロシクロアルキルから選択される環系が形成され；
ＸはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり；
Ｒ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ3はＯＲ11であり、
ここでＲ11はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、二リン酸塩、三リン酸塩、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ12Ｒ13、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ12Ｒ13、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ12）2、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ12Ｒ13、ＳＲ12、およびＳｉＲ12Ｒ13Ｒ14からなる群から選択されるメンバーであり、
ここでＲ12、Ｒ13、およびＲ14はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキルならびに置換および未置換アリールから独立して選択されるメンバーであり、ここでＲ12およびＲ13はそれらの結合対象である窒素または炭素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＮＲ15Ｒ16、ＮＣ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＳＯ3、ＳＯ2Ｒ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、およびＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、またはＲ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子とともに結合し、４〜６員を有する置換もしくは未置換のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環系が形成され；
ここで
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ15およびＲ16はＨ、置換および未置換アルキル、置換または未置換ヘテロアルキル、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリール、置換および未置換ヘテロシクロアルキル、ならびに置換および未置換ペプチジルから独立して選択され、ここでＲ15およびＲ16はそれらの結合対象である窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ6は存在または不在のいずれかの単結合であり、存在する場合、Ｒ6およびＲ7は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ7は前記シクロプロピル環内でＲ6と結合されたＣＨ2−Ｘ1または−ＣＨ2−であり、ここでＸ1は離脱基であり、
ここでＲ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15またはＲ16の少なくとも１つは前記薬剤をＬ1（存在する場合）またはＦに結合させる）
の化合物あるいはその薬学的に許容できる塩が挙げられる。
【０２１３】
別の実施形態は、式
【化２７】
2010519310.tif 000028
（式中、
Ｌ1は置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロアルキル基であり；
ｍは０、１、２、３、４、５、もしくは６の整数であり；
ＡＡ1は天然アミノ酸および非天然αアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｌ2は置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、または置換もしくは未置換ヘテロアリールであり；
Ｌ3は置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、または置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルであり；
ｏは０または１であり；
Ｌ4はリンカーメンバーであり；
ｐは０または１であり；
Ｘ4は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、および標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化２８】
2010519310.tif 000029
を含み、ここで環系Ａは置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリールまたは置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキルであり；
ＥおよびＧはＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、ヘテロ原子、および単結合から独立して選択されるメンバーであるか、またはＥおよびＧは結合し、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリールならびに置換および未置換ヘテロシクロアルキルから選択される環系が形成され；
ＸはＯ、ＳおよびＮＲ23から選択されるメンバーであり；
Ｒ23はＨ、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換ヘテロアルキル、またはアシルであり；
Ｒ3はＯＲ11であり、
ここでＲ11はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換ヘテロアルキル、未置換ヘテロアルキル、二リン酸塩、三リン酸塩、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ12Ｒ13、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ12Ｒ13、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ12）2、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ12Ｒ13、ＳＲ12、またはＳｉＲ12Ｒ13Ｒ14であり、
ここでＲ12、Ｒ13、およびＲ14はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキルならびに置換および未置換アリールから独立して選択されるメンバーであり、ここでＲ12およびＲ13はそれらの結合対象である窒素または炭素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'はＨ、置換アルキル、未置換アルキル、置換アリール、未置換アリール、置換ヘテロアリール、未置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、未置換ヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ2、ＳＯ3、ＳＯ2Ｒ15、ＮＲ15Ｒ16、ＮＲ16Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ15Ｒ16、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ15、Ｃ（Ｏ）Ｒ15、ＳＲ15、ＯＲ15、ＣＲ15＝ＮＲ16、およびＯ（ＣＨ2）nＮ（ＣＨ3）2からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、またはＲ4、Ｒ4'、Ｒ5およびＲ5'の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子とともに結合し、４〜６員を有する置換もしくは未置換のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環系が形成され；
ここで
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ15およびＲ16はＨ、置換および未置換アルキル、置換および未置換ヘテロアルキル、置換および未置換アリール、置換および未置換ヘテロアリール、置換および未置換ヘテロシクロアルキル、ならびに置換および未置換ペプチジルから独立して選択され、ここでＲ15およびＲ16はそれらの結合対象である窒素原子とともに場合により結合し、４〜６員を有し、場合により２つ以上のヘテロ原子を有する置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され；
Ｒ6は存在または不在のいずれかの単結合であり、存在する場合、Ｒ6およびＲ7は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ7は前記シクロプロピル環内でＲ6と結合されたＣＨ2−Ｘ1または−ＣＨ2−であり、ここでＸ1は離脱基であり、
ここでＲ4、Ｒ4'、Ｒ5、Ｒ5'、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ15またはＲ16の少なくとも１つはＤを化合物の残基に結合させる）
の化合物あるいはその薬学的に許容できる塩である。
【０２１４】
複合体としての使用に適する化合物の具体例として、
【化２９】
2010519310.tif 000030
【化３０】
2010519310.tif 000031
【化３１】
2010519310.tif 000032
【化３２】
2010519310.tif 000033
が挙げられ、ここでＸ1はＣｌまたはＢｒである。一部の好ましい実施形態では、Ｘ1はＣｌである。
【０２１５】
医薬製剤および投与
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明の化合物および薬学的に許容できる担体を含有する医薬製剤を提供する。
【０２１６】
付加塩またはその水和物などの薬学的に許容できる担体を含む本明細書中に記載の化合物は、多種多様な投与の経路または様式を用いて患者に送達されうる。投与の適切な経路は、限定はされないが、吸入、経皮、経口、直腸、経粘膜、腸、ならびに筋肉内、皮下および静脈内注射を含む非経口投与を含む。好ましくは、本発明の複合体は非経口投与され、より好ましくは静脈内投与される。
【０２１７】
本明細書で用いられる「投与する」または「投与」という用語は、化合物のその意図される作用部位への直接的および間接的送達のためのあらゆる手段を包含するように意図されている。
【０２１８】
本明細書中に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩および／または水和物は、単独で、本発明の他の化合物との併用で、および／または他の治療剤と結合されたカクテルで投与されうる。当然のことながら、本発明の化合物と同時投与可能な治療剤の選択は、治療される病態に部分的に依存することになる。
【０２１９】
例えば、本発明の化合物は、自己誘導物質に依存する生物により誘発される病状を患う患者に投与される場合、疼痛、感染症および一般的に疾患に関連する他の徴候や副作用の治療に用いられる作用物質を含有するカクテルで投与されうる。かかる作用物質として、例えば鎮痛薬、抗生物質などが挙げられる。
【０２２０】
化合物は、癌治療を受けている患者に投与される場合、抗癌剤および／または補助的薬効増強剤（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有するカクテルで投与されうる。化合物はまた、放射線療法の副作用を治療する作用物質、例えば制吐薬、放射線保護剤などを含有するカクテルで投与されうる。
【０２２１】
本発明の化合物と同時投与可能な補助的薬効増強剤として、例えば、三環系抗うつ薬（例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドクサピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピンおよびマプロチリン）；非三環系および抗うつ薬（例えば、セルトラリン、トラゾドンおよびシタロプラム）；Ｃａ+2拮抗薬（例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピンおよびカロベリン）；アンフォテリシン；トリパラノール類似体（例えばタモキシフェン）；抗不整脈薬（例えばキニジン）；抗高血圧薬（例えばレセルピン）；チオール枯渇剤（ｄｅｐｌｅｔｅｒ）（例えばブチオニンおよびスルホキシミン）；ならびにロイコボリンカルシウムが挙げられる。
【０２２２】
本発明の活性化合物はそれ自体でまたは医薬組成物の形態で投与され、ここで活性化合物は１種以上の薬学的に許容できる担体、賦形剤または希釈剤と混合される。本発明に従って用いられる医薬組成物は、典型的には、活性化合物の医薬的に使用可能な製剤への加工を促進する賦形剤および助剤を含有する１種以上の生理学的に許容できる担体を用いて従来の方法で調合される。適切な製剤か否かは選択される投与の経路に依存している。
【０２２３】
経粘膜投与においては、浸透されるべき障壁に適する浸透剤が製剤中に用いられる。かかる浸透剤は、一般に当該技術分野で公知である。
【０２２４】
経口投与においては、化合物は、活性化合物を当該技術分野で周知の薬学的に許容できる担体と結合させることにより容易に調合可能である。かかる担体により、治療対象の患者による経口摂取を目的とした、本発明の化合物をタブレット、ピル、ドラジェ、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして調合することが可能になる。経口使用のための医薬製剤は固体賦形剤として得られ、必要に応じて適切な助剤を添加後、場合により得られる混合物の粉砕および顆粒の混合物の加工により、タブレットまたはドラジェコア（ｄｒａｇｅｅ  ｃｏｒｅ）が得られうる。適切な賦形剤は、特に、乳糖、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの充填剤；例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、ガムトラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース製剤である。必要に応じ、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩が添加されうる。
【０２２５】
ドラジェコアは適切なコーティング剤とともに提供される。この目的のため、濃縮糖溶液の使用が可能であり、それは場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有する。異なる組み合わせの活性化合物用量の同定または特徴付けのため、染料または色素がタブレットまたはドラジェコーティングに添加されうる。
【０２２６】
経口使用可能な医薬製剤は、ゼラチン製の押し込み式カプセル、ならびにゼラチン製の密封ソフトカプセル、およびグリセリンまたはソルビトールなどの可塑剤を含む。押し込み式カプセルは、乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、また場合により安定化剤と混合された活性成分を含有しうる。ソフトカプセル中の活性化合物は、適切な液体、例えば脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁されうる。さらに、安定化剤が添加されうる。経口投与用のあらゆる製剤はかかる投与に適する用量である必要がある。
【０２２７】
口腔投与においては、組成物は従来の方法で調合されるタブレットまたはロゼンジの形態をとりうる。
【０２２８】
吸入による投与においては、本発明に従って用いられる化合物は、便宜上、適切なプロペラント、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体を用い、加圧パックまたは噴霧器から出てくるエアロゾルスプレー状の形態で送達される。加圧エアロゾルの場合、用量単位は定量を送達するための弁を備えることにより測定されうる。吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）または吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）において用いられる例えばゼラチン製のカプセルおよびカートリッジの調合が可能であり、それらは化合物と乳糖またはデンプンなどの適切な粉末塩基との粉末混合物を含有する。
【０２２９】
化合物は、注射、例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与のために調合されうる。注射は、本発明の組成物において好ましい投与方法である。注射用製剤は、防腐剤が添加された、例えばアンプル内または複数回用量容器内での単位剤形で提示されうる。組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとる場合があり、かつ、添加可能な懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩を含有しうる。
【０２３０】
非経口投与用の医薬製剤は、水溶性形態での活性化合物の水溶液を含む。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射用懸濁液として調製されうる。適切な親油性溶媒または媒体は、ゴマ油などの脂肪油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリド、またはリポソームを含む。水性注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含有しうる。場合により、懸濁液はまた、化合物の溶解度を高め、高度に濃縮された溶液の調製を可能にする適切な安定化剤または作用物質を含有しうる。注射においては、本発明の作用物質は、水溶液、好ましくはハンクス溶液、リンガー液、または生理食塩緩衝液などの生理的適合性緩衝液で調合されうる。
【０２３１】
あるいは、活性成分は、使用前に、適切な媒体、例えば無菌パイロジェンフリー水と構成するための粉末形態でありうる。
【０２３２】
化合物はまた、例えばカカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含有する、坐剤または持続性浣腸剤（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｅｎｅｍａ）などの直腸組成物で調合されうる。
【０２３３】
上記の製剤に加え、化合物はまたデポー調製物として調合されうる。かかる長期作用型製剤は、移植または経皮的送達（例えば皮下または筋肉内）、筋肉内注射または経皮パッチにより投与されうる。したがって、例えば化合物は、適切な高分子または疎水性物質（例えば許容範囲の油中エマルジョンとして）またはイオン交換樹脂で、あるいは難溶性誘導体、例えば難溶性塩として調合されうる。
【０２３４】
医薬組成物はまた、適切な固体またはゲル相担体または賦形剤を含有しうる。かかる担体または賦形剤の例として、限定はされないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。
【０２３５】
好ましい医薬組成物は、静脈内注射などの注射用に調合される組成物であり、医薬組成物の総重量を１００％の基準として、薬剤複合体の約０．０１重量％〜約１００重量％を含む。薬剤複合体は、抗体が特定の癌を標的化するように選択されている場合の抗体−細胞毒素複合体でありうる。
【０２３６】
ライブラリー
また、細胞毒素、細胞毒素−リンカーおよび細胞毒素の作用物質−リンカー複合体、および本発明のリンカーのライブラリーも本発明の範囲内に含まれる。典型的なライブラリーは、少なくとも１０種の化合物、より好ましくは少なくとも１００種の化合物、さらにより好ましくは少なくとも１０００種の化合物、およびさらにより好ましくは少なくとも１００，０００種の化合物を含む。ライブラリーは、特定の特性、例えば細胞毒性、酵素または他の切断試薬によるリンカーの切断について容易に探索される形態である。典型的な形態は、チップフォーマット、マイクロアレイなどを含む。
【０２３７】
パラレルまたはコンビナトリアル合成は、すべてが本明細書全体を通じて骨格と称される共通の特徴を共有する多様な分子のライブラリーの生成というその主目的を有する。骨格分子の各可変部分で異なる部分を置換することにより、ライブラリー内で探索可能な空間の大きさは増大する。諸理論および現代医薬品化学では、占有空間の概念が、所与の生物学的標的に対する所与の化合物の有効性の判定における主な要素として提唱されている。標的化空間の大部分を探索する多様な分子のライブラリーを作成することにより、極めて有効なリード化合物を開発する見込みは劇的に高まる。
【０２３８】
パラレル合成は、一般に固相支持体、例えば高分子樹脂上で行われる。骨格または他の適切な中間体は、化学リンカーにより樹脂に切断可能に結合される。骨格を粒子に結合される間に修飾するような反応が行われる。試薬および／または反応条件におけるばらつきにより、各ライブラリーの特質である構造的多様性がもたらされる。
【０２３９】
１９９０年以前には、「小」分子（２００〜１０００の分子量を有する非オリゴマー）のパラレル合成が試みられることはまれであった。例えば、Ｃａｍｐｓ．ら、Ａｎｎａｋｓ  ｄｅ  Ｑｕｉｍｉｃａ、７０：８４８頁（１９９０年）を参照のこと。最近、Ｅｌｌｍａｎｎは、数種のプロスタグランジンおよびβターン模倣体とともに１１種のベンゾジアゼピン類似体の固相支持されたパラレル（「コンビナトリアル」とも称される）合成について開示した。これらの開示は米国特許第５，２８８，５１４号明細書中に例示される。小分子のパラレル合成についての別の関連の開示が、米国特許第５，３２４，４８３号明細書中に見出されうる。この特許は１６の異なる骨格の各々での４〜４０の化合物のパラレル合成について開示している。Ｃｈｅｎらはまた、有機合成法を適用し、ポリマー支持体についての多段階プロセスを用いて合成される非ペプチドライブラリーを開発している（Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１６：２６６１−２６６２頁（１９９４年））。
【０２４０】
一旦、独自の化合物のライブラリーが調製されると、免疫複合体または抗体のライブラリーの調製は、開始点としての自己誘導物質のライブラリーおよび本明細書中に記載の方法を用いて調製されうる。
【０２４１】
キット
別の態様では、本発明は、本発明の化合物または組成物のうちの１種以上および化合物または組成物を用いるための指示書を有するキットを提供する。典型的な実施形態では、本発明は、本発明のリンカーを別の分子に複合するためのキットを提供する。キットは、リンカー、およびリンカーを特定の官能基に結合させるための指示書を含む。キットは、それに加えて、またはそれに代えて、細胞毒性薬、標的化剤、検出可能な標識、および医薬塩または緩衝液のうちの１つ以上を含みうる。キットはまた、容器、および場合により１つ以上のバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、または注射器を含みうる。キットにおける他の形式は当業者には明らかであると思われ、本発明の範囲内に含まれる。
【０２４２】
精製
別の典型的な実施形態では、本発明は、リガンドＸ4に結合する、本発明のリガンド−細胞毒素において分子標的を単離するための方法を提供する。本方法は、好ましくは、標的を含む細胞調製物を固定化化合物と接触させ、それにより受容体と固定化化合物との間で複合体を形成するステップを含む。
【０２４３】
本発明の細胞毒素は、任意の当該技術分野で認められた手段により親和性支持体上に固定化されうる。あるいは、細胞毒素は本発明のリンカーの１つ以上を用いて固定化されうる。
【０２４４】
さらに別の典型的な実施形態では、本発明は親和性精製マトリックスを提供する。
【０２４５】
標的を単離するための本発明の方法は、典型的には１つ以上の親和性クロマトグラフィー技術を用いることになる。親和性クロマトグラフィーは、生体分子または生体高分子などの種の効率的単離を、高度な選択性を備えた特定の化学的支持構造におけるその認識部位の利用により可能にする。文献については、親和性クロマトグラフィー支持体、架橋メンバー、リガンドおよびその調製物ならびに使用などの論題を含む親和性クロマトグラフィーのテーマに関する記事、モノグラフ、および書籍が豊富に存在する。それらの参考文献の例として、Ｏｓｔｒｏｖｅ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：３５７−７１頁（１９９０年）；Ｆｅｒｍｅｎｔ、Ｂｉｏｅｎｇ．７０：１９９−２０９頁（１９９０年）。Ｈｕａｎｇら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．４９２：４３１−６９頁（１９８９年）；「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｂｙ  ｈｅｐａｒｉｎ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１８４：３３５−４５頁（１９８０年）；Ｆａｒｏｏｑｉ、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｅｎｇ．、４：４４１−２頁（１９７８年）；Ｎｉｓｈｉｋａｗａ、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、５（９）：５６４−７１頁（１９７５年）；Ｇｕｉｌｆｏｒｄら、「ＰＲＡＣＴ．ＨＩＧＨ  ＰＥＲＦＯＲＭ．ＬＩＱ．ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲ．」、Ｓｉｍｐｓｏｎ（編）、１９３−２０６頁（１９７６年）；Ｎｉｓｈｉｋａｗａ、Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｐ．Ｉｍｐｒｏｖ．Ｂｌｏｏｄ  Ｐｌａｓｍａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ、Ｓａｎｄｂｅｒｇ（編）、４２２−３５頁；（１９７７年）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅｓ」、Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．２５−３８頁（１９７７年）（１９７８発行）；および「ＡＦＦＩＮＩＴＹ  ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ」、Ｄｅａｎら（編）、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ（１９８５年）が挙げられる。当業者は、本発明の材料を用いる特定の親和性クロマトグラフィー法の開発において十分な指針を有している。
【０２４６】
本方法では、様々な化学的構造の親和性クロマトグラフィー媒体が支持体として用いられうる。例えば、アガロースゲルおよび架橋アガロースゲルは、それらの親水性により非特異的結合が比較的少ないことから支持体材料として有用である。他の有用な支持体として、例えば、制御細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ）（ＣＰＧ）ビーズ、セルロース粒子、ポリアクリルアミドゲルビーズ、ならびにデキストランおよびエピクロルヒドリンから作製されるＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）ゲルビーズが挙げられる。
【０２４７】
薬剤複合体の使用方法
本発明は、上記の組成物および構築物に加え、本発明の化合物および複合体を用いて実施可能な多数の方法も提供する。本発明の薬剤−リガンド複合体を用いるための方法は、腫瘍細胞または癌細胞を殺滅するかまたはその成長もしくは複製を阻害することで癌を治療し、前癌状態を治療し、自己免疫抗体を発現する細胞を殺滅するかまたはその成長もしくは複製を阻害することで自己免疫疾患を治療し、感染病を治療し、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防することで癌を予防し、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防することで自己免疫疾患を予防し、かつ感染病を予防することを含む。これらの使用方法は、有効量の薬剤−リガンド複合体を、それを必要とする哺乳動物またはヒトなどの動物に投与するステップを含む。一部の実施形態では、酵素は腫瘍または標的細胞との結合状態を形成するように別々に投与される。
【０２４８】
本発明の薬剤−リガンド複合体は、動物における、例えば癌、自己免疫疾患または感染病の治療にとって有用である。対象に組成物を、薬学的に許容できる方法で薬学的に有効な量の本発明の組成物として提供することによって腫瘍を治療するための組成物および方法が提供される。
【０２４９】
本発明は、動物における癌の治療および腫瘍細胞または癌細胞の増殖の阻害にとって特に有用である。癌または前癌状態は、限定はされないが、腫瘍、転移、または無制限の細胞成長により特徴づけられた任意の疾患を含み、本発明の薬剤−リガンド複合体の投与により治療または予防されうる。複合体は薬剤を腫瘍細胞または癌細胞に送達する。
【０２５０】
薬剤−リガンド複合体を用いる一実施形態では、リガンドは癌細胞または腫瘍細胞関連抗原と特異的に結合または会合する。薬剤は、リガンドに接近していることから、例えば受容体媒介性エンドサイトーシスを通じて腫瘍細胞または癌細胞の内部に取り込まれうる。抗原は、腫瘍細胞または癌細胞に結合されうるか、または腫瘍細胞または癌細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質でありうる。一旦、細胞内部でリンカーが腫瘍細胞または癌細胞に関連したプロテアーゼにより切断されると、それにより薬剤が放出される。次いで、放出された薬剤は自由に拡散し、細胞毒性活性を誘発する。他の実施形態では、薬剤は、腫瘍細胞または癌細胞の外部の薬剤−リガンド複合体から切断された後、細胞に浸透する。
【０２５１】
リガンドは、例えば腫瘍細胞または癌細胞、腫瘍細胞または癌細胞の表面上に存在する腫瘍細胞または癌細胞抗原、あるいは腫瘍細胞または癌細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍細胞または癌細胞抗原に結合しうる。リガンドは、特定の腫瘍細胞または癌細胞種に対して特異的に設計されうる。したがって、有効に治療可能な腫瘍または癌のタイプは、リガンドの選択により改変されうる。
【０２５２】
複合体により標的化可能な前癌状態の代表例として、限定はされないが、化生、過形成、異形成、結腸直腸ポリープ、日光角化症、日光口唇炎、ヒトパピローマウイルス、白板症、扁平苔癬およびボーエン病が挙げられる。
【０２５３】
複合体によって標的化されうる癌または腫瘍の代表例として、限定はされないが、肺癌、大腸癌、前立腺癌、リンパ腫、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、睾丸癌、ＣＮＳ癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、口腔癌、鼻腔癌、子宮頚癌および白血病が挙げられる。複合体中に用いられる特定のリガンドまたは切断可能な基質が薬剤を薬剤で治療されるべき腫瘍組織に対して標的化するように選択されうることは、当業者は容易に理解するであろう。
【０２５４】
実施形態では、本発明は、細胞を殺滅する方法を提供する。本方法は、細胞に前記細胞を殺滅するのに十分な量の本発明の化合物を投与するステップを含む。典型的な実施形態では、化合物は細胞を担持する対象に投与される。さらに典型的な実施形態では、投与は、細胞を含む腫瘍（例えば細胞は腫瘍細胞でありうる）の成長を遅延または停止させるのに役立つ。成長を遅延させるための投与においては、細胞の成長の速度は投与前の成長の速度よりも少なくとも１０％低い必要がある。好ましくは、成長の速度は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％遅延されるかまたは完全に停止することになる。
【０２５５】
有効用量
本発明での使用に適する医薬組成物は、活性成分が治療有効量、すなわちその意図される目的を果たすための有効量で含有された組成物を含む。特定の用途にとって有効な実際の量は、特に治療される状態に依存することになる。有効量の決定は、特に本明細書中の詳細な開示を考慮すると、十分に当業者の能力の範囲内にある。
【０２５６】
本明細書中に記載の任意の化合物においては、治療有効量は最初に細胞培養アッセイから決定されうる。標的血漿濃度は、細胞成長または分裂を阻害可能な活性化合物の濃度となるであろう。好ましい実施形態では、細胞活性は少なくとも２５％阻害される。ここでは細胞活性の少なくとも約５０％、７５％、もしくはさらに９０％もしくはそれより高い阻害を誘発可能な活性化合物の標的血漿濃度が好ましい。患者における細胞活性の阻害のパーセントを監視し、得られる血漿薬剤濃度の適合性を評価することが可能であり、用量を高くまたは低く調節することで所望の阻害のパーセントが得られうる。
【０２５７】
当該技術分野で周知のように、ヒトにおいて用いられる治療有効量はまた動物モデルから決定されうる。例えば、ヒトにおける用量を調合し、動物において有効であることが見出されている血中濃度が得られうる。ヒトにおける用量は、上記のように細胞阻害を監視し、用量を高くまたは低く調節することにより調節されうる。
【０２５８】
治療有効量はまた、類似の薬理学的活性を示すことで知られる化合物におけるヒトデータから決定されうる。適用される用量は、投与化合物の既知の化合物に対する相対バイオアベイラビリティおよび効力に基づいて調節されうる。
【０２５９】
上記の方法および当該技術分野で周知の他の方法に基づき、ヒトにおける最大有効性を得るために用量を調節することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２６０】
局所投与の場合、投与化合物の全身血中濃度は特に重要なものとならない。かかる例では、化合物は意図される結果を得るのに有効な局所領域での濃度を得るように投与される。
【０２６１】
異常な細胞増殖に関連する疾患の予防および／または治療での使用においては、約０．００１μＭ〜２０μＭの投与化合物の血中濃度が好ましく、ここで約０．０１μＭ〜５μＭが好ましい。
【０２６２】
本明細書中に記載の化合物の経口投与における患者への用量は、典型的には約１ｍｇ／日〜約１０，０００ｍｇ／日、より典型的には約１０ｍｇ／日〜約１，０００ｍｇ／日、および最も典型的には約５０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日の範囲である。患者の体重について述べると、典型的用量は、約０．０１〜約１５０ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約０．１〜約１５ｍｇ／ｋｇ／日、および最も典型的には約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば５ｍｇ／ｋｇ／日または３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０２６３】
少なくとも一部の実施形態では、腫瘍成長を遅延させるかまたは阻害する患者への用量は１μｍｏｌ／ｋｇ／日以下でありうる。例えば、患者への用量は、薬剤または薬剤複合体、例えば抗体−薬剤複合体の（薬剤のモルに言及すると）０．９、０．６、０．５、０．４５、０．３、０．２、０．１５、０．１、０．０５、０．０３、０．０１、もしくは０．００５μｍｏｌ／ｋｇ／日以下でありうる。好ましくは、薬剤または薬剤複合体は、少なくとも５日間にわたり１日用量で投与される場合、腫瘍の成長を遅延させるかまたは阻害する。少なくとも一部の実施形態では、腫瘍はＳＣＩＤマウスにおけるヒト型の腫瘍である。例として、ＳＣＩＤマウスはＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹから入手可能）でありうる。
【０２６４】
他の投与様式においては、投与用量および間隔を個別に調節することで、治療対象の特定の臨床徴候に対して有効な血漿レベルの投与化合物が提供されうる。例えば、一実施形態では、本発明に記載の化合物は、１日に複数回、かなりの高濃度で投与されうる。あるいは、本発明の化合物を最低限の有効濃度で投与しかつ投与頻度が減少した計画を用いることがより望ましい場合がある。これは各疾患の重症度に適合した治療計画を提供することになる。
【０２６５】
本明細書で提供される教示内容を用いると、実質的な毒性を誘発しないだけでなく特定の患者が示す臨床徴候の治療にとって全体的に有効である有効な治療計画を立てることが可能である。この計画は、化合物の効力、相対バイオアベイラビリティ、患者の体重、副作用の存在および重症度、好ましい投与様式、ならびに選択される作用物質の毒性特性などの要素の考察による活性化合物の慎重な選択を含む必要がある。
【０２６６】
本発明の化合物、組成物および方法は、以下の実施例によりさらに例示される。これらの実施例は例示目的に提供され、特許請求される本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０２６７】
材料および方法
下記の実施例においては、他に指定のない限り、温度は摂氏温度（℃）で与えられ；操作は室温または周囲温度（典型的には約１８〜２５℃の範囲）で実施され；溶媒の蒸発は最高６０℃の浴温、減圧下（典型的には４．５〜３０ｍｍＨｇ）でロータリーエバポレーターを用いて行われ；反応の経過は典型的にはＴＬＣに従い、反応時間はあくまで例示目的で提供され；融点は未補正であり；生成物は満足できる1Ｈ  ＮＭＲおよび／または微量分析データを示し；収率はあくまで例示目的で提供され；かつ、ｍｐ（融点）、Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、ｍモル（ミリモル）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｍｉｎ（分）、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）およびｈ（時間）といった従来からの略語も用いられる。
【０２６８】
1Ｈ  ＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００ＭＨｚの分光計で測定し、それは指定された構造に一致した。化学シフトはテトラメチルシランからの１００万分の１（ｐｐｍ）の低磁場で報告された。エレクトロスプレー質量スペクトルをＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ  ３６５質量分析計で記録した。元素分析はＲｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｍｉｃｒｏｌｉｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＮＪにより行われた。フラッシュクロマトグラフィーにおけるシリカゲルはＥ．Ｍｅｒｃｋグレード（２３０〜４００メッシュ）であった。逆相分析ＨＰＬＣを、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μｍ  Ｃ−１８（２）１５０ｍｍ×４．６ｍｍカラムまたはＶａｒｉａｎ  Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ−ＭＶ  ０．１μｍ  Ｃ−１８  １５０ｍｍ×４．６ｍｍカラムを備えるＨＰ１１００またはＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１０機器のいずれかで行った。１ｍＬ／分の流速は、２５４ｎｍでのＵＶによる検出では、１５分間にわたる０％〜５０％の緩衝液Ｂまたは１０分間にわたる１０％〜１００％の緩衝液Ｂのいずれかの勾配の場合であった。緩衝液Ａ、２０ｍＭギ酸アンモニウム＋２０％アセトニトリルまたはアセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸；緩衝液Ｂ、２０ｍＭギ酸アンモニウム＋８０％アセトニトリルまたは０．１％水性トリフルオロ酢酸。逆相分取ＨＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐａｋ  １５μｍ  Ｃ−１８  ３００ｍｍ×７．８ｍｍカラムを備えるＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１５機器上で行った。
【０２６９】
実施例１
【化３３】
2010519310.tif 000034
【化３４】
2010519310.tif 000035
【０２７０】
化合物１の合成
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の２−ブロモエチルアミンブロミド（５ｇ、２４．４ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（８．５ｍＬ、４８．８ｍモル）およびクロロギ酸ベンジル（３．４８ｍＬ、２４．４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を、勾配として酢酸エチル／ヘキサン（３／７）の場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１をオイルとして得た（４ｇ、６４％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ３．５４（ｂｓ，２Ｈ）、３．６１（ｂｓ，２Ｈ）、５．１２（ｓ，２Ｈ）、７．３６（ｍ，５Ｈ）。
【０２７１】
化合物２の合成
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の化合物１（３．３４ｇ、１２．９９ｍモル）およびバリンｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．２７ｇ、１５．５９ｍモル）の溶液に、炭酸カリウム（５．３９ｇ、３８．９７ｍモル）およびヨウ化カリウム（２．５９ｇ、１５．５９ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を１００℃で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を、勾配として酢酸エチル／ヘキサン（２／８）の場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２をオイルとして得た（３．１２ｇ、６９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ０．９２（ｍ，６Ｈ）、１．４６（ｓ，９Ｈ）、１．８６（ｍ，１Ｈ）、２．５３（ｍ，１Ｈ）、２．８０（ｍ，２Ｈ）、３．１８（ｍ，１Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、５．１０（ｓ，２Ｈ）、５．２５（ｂｓ，１Ｈ）、７．３６（ｍ，５Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）２９６（Ｍ＋Ｈ−ｔブチル+）、３５２（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２７２】
化合物３の合成
メタノール（３０ｍＬ）中、化合物２（３．４ｇ、９．７２ｍモル）および活性炭上のパラジウム（２００ｍｇ）の溶液を、室温で水素大気圧下に置いた。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。パラジウムを濾過し、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物３をオイルとして得た（２．１ｇ、９８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．９４（ｍ，６Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）、１．６３（ｂｓ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．４７（ｍ，１Ｈ）、２．７３（ｍ，２Ｈ）。
【０２７３】
化合物４の合成
ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の化合物３（２．１ｇ、９．７２ｍモル）の溶液に、ＦｍｏｃＯＳｕ（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（３．２８ｇ、９．７２ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を０℃で２時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残留物を、勾配として、１００％ジクロロメタン、その後にジクロロメタン中０．５％メタノール、最後にジクロロメタン中１％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物４を無色オイルとして得た（２．５５ｇ、６０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．０３（ｄ，３Ｈ）、１．１４（ｄ，３Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）、２．２８（ｍ，１Ｈ）、３．１４（ｍ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，２Ｈ）、３．８９（ｄ，１Ｈ）、４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．４４（ｍ，２Ｈ）、７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．４０（ｍ，２Ｈ）、７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）３８３（Ｍ＋Ｈ−ｔブチル+）、４４０（Ｍ＋Ｈ+）、４６２（Ｍ＋Ｎａ+）、４７８（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２７４】
化合物５の合成
テトラヒドロフラン−水（３／１，８ｍＬ）中の化合物４（１７７ｍｇ、０．４ｍモル）の溶液にＨＣｌガスを５分間バブリングした。反応混合物を３７℃で一晩撹拌し、次いで混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物５を固体として得（１６８ｍｇ、９８％）、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．０４（ｄ，３Ｈ）、１．１４（ｄ，３Ｈ）、２．３２（ｍ，１Ｈ）、３．１８（ｍ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，２Ｈ）、３．９５（ｄ，１Ｈ）、４．２２（ｍ，１Ｈ）、４．４２（ｍ，２Ｈ）、７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，２Ｈ）、７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．７９（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）３８３（Ｍ＋Ｈ+）、４０５（Ｍ＋Ｎａ+）。
【０２７５】
化合物６の合成
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＮ−メチル−１，２−フェニレンジアミン（２ｍＬ、１７．６ｍモル）の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３．３２ｇ、１５．２ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、残留物を、勾配としてヘキサン中３０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物６を無色オイルとして得た（１．１２ｇ、３２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．４６（ｂｓ，９Ｈ）、３．１５（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｂｓ，２Ｈ）、６．７５（ｄ，２Ｈ）、７．０６（ｍ，２Ｈ）。
【０２７６】
化合物７の合成
ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の化合物６（７７７ｍｇ、３．０５ｍモル）の溶液に、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（８１１ｍｇ、３．６６ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（７９６μＬ、４．５７ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、残留物を、勾配としてヘキサン中１０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物７を黄色固体として得た（１．１７ｇ、９４％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．４９（ｂｓ，９Ｈ）、２．４７および２．６１（２ｂｓ，３Ｈ）、７．０５（ｂｄ，１Ｈ）、７．２７（ｍ，２Ｈ）、７．５６〜７．９２（ｍ，５Ｈ）。
【０２７７】
化合物８の合成
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物７（３２６ｍｇ、０．８ｍモル）の溶液に炭酸カリウム（１６４ｍｇ、１．１９ｍモル）およびヨウ化メチル（１４８μＬ、２．３９ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、残留物を、勾配としてヘキサン中１０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物８を黄色固体として得た（３７０ｍｇ、６５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３５および１．５２（２ｓ，９Ｈ）、３．１６および３．２１（２ｓ，３Ｈ）、３．２６および３．２９（２ｓ，３Ｈ）、６．９３（ｄ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．６（ｍ，２Ｈ）、７．６８〜７．８０（ｍ，４Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）４４４（Ｍ＋Ｎａ+）、４６０（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２７８】
化合物９の合成
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の化合物８（３５５ｍｇ、０．８５ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム／アンモニウム（２００ｍＬ）の間を分けた。有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮し、遊離アミン（化合物９）を白色固体として得た（２７０ｍｇ、９８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．６８（ｓ，３Ｈ）、３．３０（ｓ，３Ｈ）、６．５６（ｍ，２Ｈ）、６．８８（ｍ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．４８（ｍ，１Ｈ）、７．５７（ｍ，１Ｈ）、７．６５（ｍ，２Ｈ）。
【０２７９】
化合物１０の合成
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の化合物９（２７０ｍｇ、０．８４ｍモル）の溶液に、トルエン中２Ｎホスゲン（４４０μＬ、２．５ｍモル）を０℃で添加した。混合物を３０分間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、化合物１０を白色固体として得（２９７、９２％）、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ３．２５および３．３０（２ｓ，３Ｈ）、３．３４および３．４４（２ｓ，３Ｈ）、６．９８（ｍ，１Ｈ）、７．２５〜７．４０（ｍ，２Ｈ）、７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５５〜７．８０（ｍ，４Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）３８４（Ｍ＋Ｈ+）、４０７（Ｍ＋Ｎａ+）、４２２（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２８０】
化合物１１の合成
ＴＨＦ（３ｍＬ）中１０％ＤＭＦの溶液中の化合物１０（１２０ｍｇ、０．３１ｍモル）の溶液に、Ｂｏｃ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニルアミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル−カルバメート、２３８ｍｇ、０．６２ｍモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（７６ｍｇ、０．６２ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（５５μＬ、０．３１ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を６５℃で１０日間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１１を固体として得た（９０ｍｇ、４０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．４３（ｂｓ，９Ｈ）、１．５６〜１．７０（ｍ，３Ｈ）、１．７９（ｍ，１Ｈ）、３．０６〜３．２７（ｍ，８Ｈ）、４．１７（２ｍ，１Ｈ）、５．０４および５．１７（２ｂｓ，２Ｈ）、６．８９および６．９５（２ｄ，１Ｈ）、７．１５〜７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．３７〜７．７２（ｍ，８Ｈ）、７．８０（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）７２９（Ｍ＋Ｈ+）、７５１（Ｍ＋Ｎａ+）、７６７（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２８１】
化合物１２の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１１（８４ｍｇ、０．１１ｍモル）の溶液に、炭酸カリウム（４８ｍｇ、０．３３ｍモル）およびチオフェノール（６０μＬ、０．５５ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１２を固体として得た（５５ｍｇ、８７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．４４（ｂｓ，９Ｈ）、１．５６〜１．７０（ｍ，３Ｈ）、１．７８（ｍ，１Ｈ）、２．７６（ｂｓ，３Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，５Ｈ）、４．１７（ｂｓ，１Ｈ）、４．９９（ｂｓ，２Ｈ）、６．６２（ｍ，２Ｈ）、６．９３（ｍ，１Ｈ）、７．１５（ｍ，２Ｈ）、７．４０〜７．６０（ｍ，３Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、５６６（Ｍ＋Ｎａ+）、５８１（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２８２】
化合物１３の合成
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の化合物１２（６５ｍｇ、０．１２ｍモル）の溶液に、トルエン中２Ｎホスゲン（１８０μＬ、０．３６ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を０℃で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得（７２ｍｇ、１００％）、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０２８３】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中５％Ｎ−メチルピロリドン中のオイル（７２ｍｇ、０．１２ｍモル）の溶液に、化合物１８（下記の実施例２を参照）（２５ｍｇ、０．０６ｍモル）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２２ｍｇ、０．１８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１３をオイルとして得た（１５ｍｇ、３５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．４２（ｂｓ，９Ｈ）、１．４５〜１．８０（ｍ，４Ｈ）、２．９７（ｂｓ，６Ｈ）、３．１０〜３．３６（ｍ，７Ｈ）、３．５７（ｂｓ，３Ｈ）、３．９８（ｂｓ，１Ｈ）、４．１０〜４．３５（ｍ，４Ｈ）、４．５０〜４．７５（ｍ，３Ｈ）、５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、７．１６〜７．９５（ｍ，１６Ｈ）、８．２（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１０３４（Ｍ＋Ｈ+）、１０５６（Ｍ＋Ｎａ+）、１０７３（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２８４】
化合物１４の合成
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物１３（１３ｍｇ、０．０１１ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０２８５】
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のＴＦＡアミン塩（ＴＦＡ  ｓａｌｔｅｄ  ａｍｉｎｅ）の溶液に、化合物５（５ｍｇ、０．０１２ｍモル）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）（６ｍｇ、０．０１３ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（８μＬ、０．０４４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１４をオイルとして得た（９ｍｇ、５０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０３および１．１０（２ｍ，６Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）、２．２０（ｍ，１Ｈ）、２．９９（ｓ，６Ｈ）、３．０４〜３．５０（ｍ，１１Ｈ）、３．６０（ｂｓ，３Ｈ）、３．８（ｂｓ，１Ｈ）、４．００（ｂｓ，１Ｈ）、４．２０〜４．４５（ｍ，６Ｈ）、４．５０〜４．７５（ｍ，４Ｈ）、５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、７．２０〜７．７０（ｍ，２２Ｈ）、７．７７（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｂｓ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１３００（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２８６】
化合物１５の合成
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の化合物１４（９ｍｇ、０．００６ｍモル）の溶液に、ピペリジン（６μＬ、０．０６ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０２８７】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中１０％ＤＭＦの溶液中のオイルの溶液に、（Ｎ−｛ｙ−マレイミドブチルオキシ｝スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）（３．５ｍｇ、０．０１２ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（２μＬ、０．０１２ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１５をオイルとして得た（６．５ｍｇ、７５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０４〜１．１３（ｍ，６Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．７５（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，３Ｈ）、２．２３（ｍ，３Ｈ）、２．９８および３．０１（２ｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２５（ｍ，６Ｈ）、３．６０（ｍ，２Ｈ）、３．４５〜３．５５（ｍ，６Ｈ）、３．６４（ｔ，２Ｈ）、３．８０（ｍ，２Ｈ）、４．０５（ｍ，１Ｈ）、４．３５（ｂｓ，１Ｈ）、４．４１（ｍ，２Ｈ）、４．５５（ｍ，２Ｈ）、４．８０（ｍ，１Ｈ）、５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、６．７８（ｓ，２Ｈ）、７．２２（ｄｄ，２Ｈ）、７．３５〜７．６５（ｍ，１１Ｈ）、７．９０〜８．００（ｍ，３Ｈ）、７．７７（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｂｓ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１２４３（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２８８】
実施例２
【化３５】
2010519310.tif 000036
【化３６】
2010519310.tif 000037
【０２８９】
化合物１６の合成
ＤＭＦ（４５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（２ｇ、３．９８ｍモル）の溶液に、ピペリジン（５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残留物を、勾配として、１００％ジクロロメタン、その後のジクロロメタン中１０％メタノール、最後にジクロロメタン中３０％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨを無色オイルとして得た（１ｇ、９０％）。
【０２９０】
ＤＭＦ（４ｍＬ）中のＨ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（８０ｍｇ、０．２８ｍモル）の溶液に、化合物５（１００ｍｇ、０．２４ｍモル）（調製については実施例１を参照）、ＨＡＴＵ（１００ｍｇ、０．２６ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（１２５μＬ、０．８４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１６をオイルとして得た（１１９ｍｇ、６６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０３〜１．１１（２ｄ，６Ｈ）、１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．７７（ｍ，１Ｈ）、１．８８（ｍ，１Ｈ）、２．２３（ｍ，１Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．４４（ｍ，２Ｈ）、３．８３（ｄ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．３９（ｍ，２Ｈ）、４．５４（ｂｓ，２Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、７．３０（ｍ，４Ｈ）、７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．６２（ｍ，２Ｈ）、７．７７（ｍ，２Ｈ）、８．８０（ｄ，１Ｈ）、１０．０５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、６４６（Ｍ＋Ｈ+）、６６８（Ｍ＋Ｎａ+）、６８４（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２９１】
化合物１７の合成
ジクロロメタン（４ｍＬ）中１０％ＮＭＰ中の化合物１６（１９０ｍｇ、０．２５ｍモル））の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１３１μＬ、０．７５ｍモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１５ｍｇ、０．１２ｍモル）およびクロロギ酸４−ニトロフェニル（１０１ｍｇ、０．５ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１７をオイルとして得た（１５１ｍｇ、６５％）。（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０４〜１．１１（２ｄ，６Ｈ）、１．５９（ｍ，２Ｈ）、１．７９（ｍ，１Ｈ）、１．８９（ｍ，１Ｈ）、２．２４（ｍ，１Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．４４（ｍ，２Ｈ）、３．８３（ｄ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．３９（ｍ，２Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、５．２２（ｂｓ，１Ｈ）、７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，４Ｈ）、７．６０（ｍ，４Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）、８．８１（ｄ，１Ｈ）、１０．０５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、８１１（Ｍ＋Ｈ+）、８３３（Ｍ＋Ｎａ+）、８４８（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２９２】
化合物１９の合成
ジクロロメタン（８ｍＬ）中４０％ＴＨＦ中の化合物１８（５０ｍｇ、０．１１ｍモル））の溶液に、クロロギ酸４−ニトロフェニル（８７ｍｇ、０．４３ｍモル）およびトリエチルアミン（８８μＬ、０．６４ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を室温に温めておき、一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をエーテルでの沈殿により単離後、濾過し、ＰＮＰＣ−１８を黄色固体として得た（６０ｍｇ、９０％）。
【０２９３】
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のＰＮＰＣ−１８（６０ｍｇ、０．０９５ｍモル）の溶液に、化合物Ｂｏｃ−ピペラジン（７１ｍｇ、０．３８ｍモル）およびトリエチルアミン（５３μＬ、０．３８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１８をオイルとして得た（７７ｍｇ、９０％）。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、６７８（Ｍ＋Ｈ+）、７００（Ｍ＋Ｎａ+）、７１６（Ｍ＋Ｋ+）。
【０２９４】
化合物２０の合成
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物１９（２８ｍｇ、０．０３５ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０２９５】
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のオイルの溶液に、化合物１７（２８ｍｇ、０．０３５ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（１８μＬ、０．１０５ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物２０をオイルとして得た（３６ｍｇ、７０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０３〜１．１０（２ｄ，６Ｈ）、１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．７７（ｍ，１Ｈ）、１．８７（ｍ，１Ｈ）、２．２３（ｍ，１Ｈ）、２．９７（ｂｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．３０〜３．８５（ｍ，１４Ｈ）、３．９７（ｍ，１Ｈ）、４．１９〜４．４１（ｍ，６Ｈ）、４．６０（ｍ，２Ｈ）、４．６９（ｍ，１Ｈ）、５．１１（ｂｓ，２Ｈ）、７．１６（ｄｄ，１Ｈ）、７．２７〜７．３８（ｍ，７Ｈ）、７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５１〜７．６３（ｍ，７Ｈ）、７．７６（ｄ，２Ｈ）、７．８５（ｄ，２Ｈ）、８．２４（ｂｓ，１Ｈ）、８．７９（ｄ，１Ｈ）、１０．００（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１２４８（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２９６】
化合物２１の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物２０（３６ｍｇ、０．０２４ｍモル）の溶液に、ピペリジン（１２μＬ、０．１２ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０２９７】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中１０％ＤＭＦ中のオイルの溶液に、ＭＡＬ−ＰＥＧ4−ＮＨエステル（１９ｍｇ、０．０３７ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（８．５μＬ、０．０４８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物２１をオイルとして得た（２５ｍｇ、６２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０６〜１．１２（２ｄ，６Ｈ）、１．５９（ｍ，２Ｈ）、１．７８（ｍ，１Ｈ）、１．８９（ｍ，１Ｈ）、２．２４（ｍ，１Ｈ）、２．４４（ｔ，２Ｈ）、２．５０（ｔ，２Ｈ）、２．９９（ｂｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．４６〜３．８５（ｍ，３４Ｈ）、３．９９（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｍ，１Ｈ）、４．３５（ｍ，２Ｈ）、４．５９〜４．７３（ｍ，３Ｈ）、５．１３（ｂｓ，２Ｈ）、６．７９（ｓ，２Ｈ）、７．１８（ｄｄ，１Ｈ）、７．３１（ｄ，１Ｈ）、７．３６（ｍ，２Ｈ）、７．４７（ｍ，１Ｈ）、７．５８（ｍ，５Ｈ）、７．８９（ｍ，２Ｈ）、８．２４（ｂｓ，１Ｈ）、８．７９（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１４２３（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２９８】
化合物２２の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物２０（２６ｍｇ、０．０１７ｍモル）の溶液に、ピペリジン（９μＬ、０．０８８ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０２９９】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中１０％ＤＭＦ中のオイルの溶液に、ＧＭＢＳ（７．５ｍｇ、０．０２５ｍモル）およびジイソプロピルエチルアミン（６μＬ、０．０３４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物２２をオイルとして得た（１３ｍｇ、５２％）。δ１．０７〜１．１３（２ｄ，６Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．７８（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，３Ｈ）、２．２４（ｍ，３Ｈ）、３．００（ｂｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２４（ｍ，４Ｈ）、３．４２〜３．７４（ｍ，１６Ｈ）、３．７８〜３．９０（ｍ，４Ｈ）、４．００（ｍ，１Ｈ）、４．３４（ｍ，１Ｈ）、４．３９（ｍ，２Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、４．８０（ｍ，２Ｈ）、５．１４（ｂｓ，２Ｈ）、６．８１（ｓ，２Ｈ）、７．２２（ｄｄ，１Ｈ）、７．３７（ｍ，３Ｈ）、７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，５Ｈ）、７．９２（ｍ，２Ｈ）、８．２４（ｂｓ，１Ｈ）、８．７９（ｄ，１Ｈ）、１０．０５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１１９１（Ｍ＋Ｈ+）。
【０３００】
実施例３
【化３７】
2010519310.tif 000038
【化３８】
2010519310.tif 000039
【０３０１】
化合物２３の合成
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中５０％メタノール中の５−ニトロインドール−２カルボン酸エチル（２ｇ、８．５ｍモル）および活性炭上のパラジウム（２００ｍｇ）の溶液を、室温で水素大気圧下に置いた。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。パラジウムを濾過し、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物２３を無色オイルとして得た（１．６８ｇ、９７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３８（ｔ，３Ｈ）、４．３４（ｑ，２Ｈ）、６．８６（ｄｄ，１Ｈ）、６．９５（ｄ，１Ｈ）、６．９８（ｄ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ）。
【０３０２】
化合物２４の合成
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の化合物２３（３００ｍｇ、１．４７ｍモル）の溶液に、Ｂｏｃ2Ｏ（３８５ｍｇ、１．７６ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を、勾配としてヘキサン中１０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２４を白色固体として得た（２７２ｍｇ、６１％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３９（ｔ，３Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）、４．３７（ｑ，２Ｈ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、７．２３（ｄｄ，１Ｈ）、７．３４（ｄ，１Ｈ）、７．６８（ｂｓ，１Ｈ）。
【０３０３】
化合物２５の合成
エタノール（３ｍＬ）中の化合物２４（１００ｍｇ、０．３３ｍモル）の溶液に、水（１ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１２ｍｇ、０．４９ｍモル）の溶液を添加した。このようにして得た混合物を５０℃で室温で２時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得た。残留物を水に溶解し、１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化後、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機溶液をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、乾燥するまで濃縮し、化合物２５を無色オイルとして得た（８５ｍｇ、９２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．５１（ｓ，９Ｈ）、７．０７（ｄ，１Ｈ）、７．２３（ｄｄ，１Ｈ）、７．３３（ｄ，１Ｈ）、７．６８（ｂｓ，１Ｈ）。
【０３０４】
化合物２６の合成
ジクロロメタン（３ｍＬ）中３０％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨ（２０６ｍｇ、０．５２ｍモル）の溶液に、ＥＤＣ（１２０ｍｇ、０．６２ｍモル）、ＨＯＢｔ（８４ｍｇ、０．６２ｍモル）およびｔｅｒｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１２０ｍｇ、０．６２ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を１０分間撹拌し、次いで塩化銅（８４ｍｇ、０．６２ｍモル）を混合物に添加した。混合物を一晩撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残留物を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２６を無色オイルとして得た（１８４ｍｇ、６２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．５３〜１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．５７（ｓ，９Ｈ）、１．７１（ｍ，１Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｍ，１Ｈ）、３．１９（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，１Ｈ）、４．３８（ｍ，２Ｈ）、７．２８〜７．３９（ｍ，３Ｈ）、７．４９（ｍ，２Ｈ）、７．５６〜７．８６（ｍ，５Ｈ）、７．８９（ｍ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、５７３（Ｍ＋Ｈ+）、５９５（Ｍ＋Ｎａ+）、６１１（Ｍ＋Ｋ+）。
【０３０５】
化合物２７の合成
ＤＭＦ（１８ｍＬ）中の化合物２６（１ｇ、１．７５ｍモル）の溶液に、ピペリジン（２ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残留物を、勾配として、１００％ジクロロメタン、その後にジクロロメタン中５％メタノール、最後にジクロロメタン中２０％メタノールの場合でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、無色オイルを得た（５６１ｍｇ、９２％）。
【０３０６】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のオイル（５６１ｍｇ、１．６ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（６７９μＬ、３．９ｍモル）、化合物５（５０９ｍｇ、１．３ｍモル）（調製については実施例１を参照）およびＨＡＴＵ（４９４ｍｇ、１．３ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残留物を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２７を無色オイルとして得た（６９１ｍｇ、６５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３６（ｄｄ，６Ｈ）、１．５８〜１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．６（ｓ，９Ｈ）、１．７１（ｍ，１Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、２．００（ｍ，１Ｈ）、２．６５（ｍ，２Ｈ）、３．２〜３．３（ｍ，４Ｈ）、３．７０（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，２Ｈ）、４．３８（ｍ，２Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、７．２８〜７．３９（ｍ，４Ｈ）、７．６０〜７．７０（ｍ，４Ｈ）、７．８（ｄ，２Ｈ）、７．８９（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、７１６（Ｍ＋Ｈ+）、７３７（Ｍ＋Ｎａ+）、７５３（Ｍ＋Ｋ+）。
【０３０７】
化合物２８の合成
ＤＭＦ（９ｍＬ）中の化合物２７（３００ｍｇ、０．４５ｍモル）の溶液に、ピペリジン（１ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをエーテル（２０ｍＬ）中にクラッシュアウトした（ｃｒａｓｈｅｄ  ｏｕｔ）。材料を濾過し、白色固体を得た（１８６ｍｇ、８４％）。
【０３０８】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中の遊離アミン（３２ｍｇ、０．０６５ｍモル）の溶液に、ＭＡＬ−ＰＥＧ4−ＮＨエステル（５０ｍｇ、０．０９７ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物２８をオイルとして得た（４７ｍｇ、９５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．１０および１．１５（２ｄ，６Ｈ）、１．５８〜１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．６（ｓ，９Ｈ）、１．７５（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５（ｔ，２Ｈ）、３．１０〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．４５〜３．６５（ｍ，１６Ｈ）、３．７５（ｍ，４Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、６．８０（ｓ，２Ｈ）、７．６７（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｄ，２Ｈ）、８．８０（ｄ，１Ｈ）、１０．２０（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、８９１（Ｍ＋Ｈ+）、９１３（Ｍ＋Ｎａ+）、９２９（Ｍ＋Ｋ+）。
【０３０９】
化合物２９の合成
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物２８（４７ｍｇ、０．０６２ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物２９をオイルとして得（４０ｍｇ、９２％）、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．１０および１．１５（２ｄ，６Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５（ｔ，２Ｈ）、３．１０〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．４５〜３．６５（ｍ，１６Ｈ）、３．７５（ｍ，４Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、６．８０（ｓ，２Ｈ）、７．６７（ｄ，２Ｈ）、７．９５（ｄ，２Ｈ）、８．８０（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、８３６（Ｍ＋Ｈ+）、８５８（Ｍ＋Ｎａ+）、８７４（Ｍ＋Ｋ+）。
【０３１０】
化合物３１の合成
ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中の３０（１００ｍｇ、０．２ｍモル）の溶液に、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）中の濃縮されたＨＢｒ溶液を室温で添加した。１時間後、Ｂｏｃの脱保護を完了した。沈殿した材料を濾過した（定量的収率）。次いで、ＴＦＡアミン塩をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。この溶液に、化合物２５（５５ｍｇ、０．２ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（１７３μＬ、１ｍモル）およびＨＡＴＵ（７９ｍｇ、０．２ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物３１を白色固体として得た（８６ｍｇ、５７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．５４（ｓ，９Ｈ）、２．９１（ｓ，３Ｈ）、３．１０〜３．６０（ｍ，８Ｈ）、３．７２（ｍ，１Ｈ）、３．９７（ｍ，１Ｈ）、４．３０〜４．６０（ｍ，３Ｈ）、６．９４（ｂｓ，１Ｈ）、７．０５（ｍ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，１Ｈ）、７．４５（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，１Ｈ）、７．７５（ｂｓ，１Ｈ）、７．８６（ｄ，１Ｈ）、８．２３（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、５６２（Ｍ＋Ｈ−１００+）、６０６（Ｍ＋Ｈ−５６+）、６６２（Ｍ＋Ｈ+）、６８５（Ｍ＋Ｎａ+）、７０１（Ｍ＋Ｋ+）。
【０３１１】
化合物３２の合成
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物３１（３０ｍｇ、０．０３９ｍモル）の溶液に、アニソール（１００μＬ）およびトリフルオロ酢酸（０．４ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０３１２】
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のオイルの溶液に、化合物２９（３６ｍｇ、０．０３９ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（４０μＬ、０．２３ｍモル）およびＨＡＴＵ（１５ｍｇ、０．０３９ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物３２をオイルとして得た（３６ｍｇ、６０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．０９および１．１５（２ｄ，６Ｈ）、１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．８１（ｍ，１Ｈ）、１．９３（ｍ，１Ｈ）、２．２７（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５１（ｔ，２Ｈ）、２．９８（ｓ，３Ｈ）、３．１３〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、３．４７〜３．６２（ｍ，２４Ｈ）、３．７６（ｍ，４Ｈ）、３．８２（ｍ，１Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．５５〜４．７０（ｍ，４Ｈ）、６．７９（ｓ，２Ｈ）、７．０６（ｓ，１Ｈ）、７．３６（ｂｓ，１Ｈ）、７．４３〜７．５４（ｍ，２Ｈ）、７．７２〜７．８１（ｍ，３Ｈ）、７．９１（ｍ，３Ｈ）、８．０５（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，１Ｈ）、１０．２５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、６９１（Ｍ＋２Ｈ+）／２、１３８１（Ｍ＋Ｈ+）、１４１９（Ｍ＋Ｋ+）。
【０３１３】
実施例４
【化３９】
2010519310.tif 000040
【０３１４】
化合物３の合成
塩化ブロモアセチル２（２４０μＬ、２．８６ｍモル）を、ジクロロメタン１０ｍＬ中のベンジル２−アミノエチルカルバメート１（５００ｍｇ、２．６ｍモル）およびＴＥＡ（８００μＬ、５．７ｍモル）の溶液に０℃で滴下添加した。反応混合物を２時間撹拌しておき、温度を徐々に室温まで高めた。溶媒を蒸発させた後、水系後処理（ａｑｕｅｏｕｓ  ｗｏｒｋ  ｕｐ）を行い、酢酸エチルで抽出した。有機層を１０％クエン酸、水および飽和重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、化合物３を得た（２６０ｍｇ、３２％の収率）。ＭＳ：Ｍ+1＝３１５．３。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．３７ｐｐｍ（５Ｈ）、５．１１ｐｐｍ（２Ｈ）、３．８３ｐｐｍ（２Ｈ）、３．４０ｐｐｍ（４Ｈ）。
【化４０】
2010519310.tif 000041
【０３１５】
化合物６の合成
１．５ｇのＦｍｏｃ−シトルリン５（０．００３８モル）、０．８８ｇのｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート４（０．００４５モル）、０．６ｇのＨＯＢｔ０．００４５モル）、０．６８ｇのＥＤＣ（０．００４３モル）および触媒量の塩化銅を、ＤＣＭ／ＤＭＦ（２：１）の混合物９ｍＬ中で一晩撹拌させた。溶媒を除去し、生成物を、ＤＣＭ中５〜１０％ＭｅＯＨを用い、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物６を得た（１．５４ｇ、７１％の収率）。ＭＳ：Ｍ+1＝５７３．９。
【化４１】
2010519310.tif 000042
【０３１６】
化合物８の合成
化合物６、３００ｍｇ、０．６６ｍモルにおけるＦｍｏｃ保護基の脱保護を、ＤＭＦ中５％ピペリジンを用いて２０分間で行った。溶媒を蒸発させ、粗固体をジエチルエーテルですすぎ、２３０ｍｇの化合物７を得た（９９％の収率）。ＭＳ：Ｍ+1＝３５２。
【０３１７】
２３０ｍｇの化合物７（０．６５ｍモル）を、ＤＣＭ中５〜１０％  ＭｅＯＨシリカゲル上での精製後、ＤＭＦおよびＤＣＭ中のＦｍｏｃ−バリン３３３ｍｇ（０．９８ｍモル）およびＥＤＣ（０．９８ｍモル）１８８ｍｇと反応させ、２４０ｍｇの化合物８を得た（５５％の収率）。ＭＳ：Ｍ+1＝６７３。
【化４２】
2010519310.tif 000043
【０３１８】
化合物１０の合成
５００ｍｇの化合物８（０．７５ｍモル）を、ＤＭＦ中ピペリジンを用いて脱保護し、化合物９を得、溶媒の除去後、それをジエチルエーテルですすいだ。化合物９を、追加精製なしに１２５ｍｇのＫＩ（０．７５ｍモル）およびトリエチルアミン３１３μＬの存在下で２３５ｍｇの３（０．７５ｍモル）と４０℃で２時間反応させた。粗反応混合物を濃縮し、逆相ＨＰＬＣにより精製し、５５．８％の収率で３００ｍｇの化合物１０を得た。ＭＳ：Ｍ[+1]＝６８５。
【化４３】
2010519310.tif 000044
【０３１９】
化合物１１の合成
化合物１０（３００ｍｇ）をＨＣＬ−ＥＡで３時間脱保護した。溶媒を蒸発させ、生成物を高真空下で乾燥し、化合物１１を得た。ＭＳ：Ｍ[+1]＝６２８。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：１０．４５ｐｐｍ（１Ｈ）、８．８ｐｐｍ（１Ｈ）、８．５（１Ｈ）、７．８８ｐｐｍ（２Ｈ）、７．７５ｐｐｍ（２Ｈ）、７．３ｐｐｍ（５Ｈ）、６．１（１Ｈ）、５．５（２Ｈ）、４．９９（２Ｈ）、４．５ｐｐｍ（１Ｈ）、３．７〜３．４（３Ｈ）、３．２〜２．９（５Ｈ）、２．１６（１Ｈ）、１．４５（２Ｈ）、１．１（３Ｈ）、０．９２ｐｐｍ（３Ｈ）。
【化４４】
2010519310.tif 000045
【０３２０】
化合物１４の合成
ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の化合物１２（４２ｍｇ、０．０９ｍモル）の溶液を２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、さらに高真空下で４時間乾燥した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の残留物に対し、５−（アミノ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−インドール−２−カルボン酸（３９．２ｍｇ、０．１４ｍモル）およびＢＯＰ（７１ｍｇ、０．１６ｍモル）を添加後、ＤＩＰＥＡ（８３μＬ、０．４８ｍモル）を添加した。反応混合物を２５℃で２０分間撹拌し、シリカゲルの短いカラムを通過させた。溶媒を除去し、粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃで溶出し、化合物１４を得た（４９ｍｇ、８８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．６３（ｓ，１Ｈ）、９．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．０９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．７９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．５３〜７．５８（ｍ，３Ｈ）、７．３９〜７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．２８〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．１１（ｓ，１Ｈ）、５．２９（ｓ，２Ｈ）、４．８０（ｔ，１Ｈ，１１．２Ｈｚ）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【化４５】
2010519310.tif 000046
【０３２１】
化合物１５の合成
ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2（１／２、１０ｍｌ）中の化合物１４（４９ｍｇ、０．０８ｍモル）および１０％Ｐｄ−Ｃ（３５ｍｇ）の混合物を真空下で４０秒間脱気した。得られた混合物を水素雰囲気下に置き、２５℃で７時間撹拌した。反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した（ＭｅＯＨ−ＣＨ2Ｃｌ2洗浄）。溶媒を真空下で除去した。シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＤＣＭ中２％ＭｅＯＨで溶出し、化合物１５を得た（４０．６ｍｇ、９７％）。1ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．５９（ｓ，１Ｈ）、１０．４３（ｓ，１Ｈ）、９．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．９３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２７〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｔ，１Ｈ，１１．２Ｈｚ）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【化４６】
2010519310.tif 000047
【０３２２】
化合物１６の合成
ＣＨ2Ｃｌ2（７ｍＬ）中、化合物１５（３６ｍｇ、０．０７ｍモル）、４−メチル−１−ピペラジンカルボニルクロリド塩酸塩（２０ｍｇ、０．１０ｍモル）、アリルアルコール（０．１ｍＬ）および無水ピリジン（６３μｌ）の溶解混合物を室温で１６時間撹拌した。粗生成物に対し、溶媒を除去せずに、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ2Ｃｌ2中２％〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、化合物１６を得た（３２．４ｍｇ、７３％）。1ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．５９（ｓ，１Ｈ）、９．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．９３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２７〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｔ，１Ｈ，１１．２Ｈｚ）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、３．７７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．４７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．３７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）、２．３８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【化４７】
2010519310.tif 000048
【０３２３】
化合物１７の合成
ＥｔＯＡｃ（４ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の化合物１６（３２ｍｇ、０．０５ｍモル）の溶液を２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、さらに高真空下で４時間乾燥した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の残留物に対し、化合物１１（４８．２ｍｇ、０．０７ｍモル）およびベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）（３４．５ｍｇ、０．０８ｍモル）を添加後、ＤＩＰＥＡ（６８μＬ）を添加し、反応混合物を２５℃で２５分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、生成物を、勾配として５分間の１０％アセトニトリル、１５分間の１０％〜５０％のアセトニトリルを用い、５０％アセトニトリルを５分間、５０％〜１００％のアセトニトリルを５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、化合物１７を得た（４２．１ｍｇ、６４％）。ＭＳ：Ｃ58Ｈ67ＢｒＮ12Ｏ10（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １１７１．４３  実測値  １１７２．４０。
【化４８】
2010519310.tif 000049
【０３２４】
化合物１８の合成
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の化合物１７（３３．６ｍｇ、０．０２５ｍモル）の溶液に、１０％Ｐｄ−Ｃ（２８ｍｇ）を添加し、混合物をＮ2下で脱気した。反応混合物をＨ2で洗い流し、次いで水素雰囲気下で撹拌した。反応終了時（４０分）、反応混合物を濾過し、濃縮し、化合物１８を得た（３１．５ｍｇ、９６％）。ＭＳ：Ｃ50Ｈ61ＢｒＮ12Ｏ8（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １０３７．３９  実測値  １０３８．２０。
【化４９】
2010519310.tif 000050
【０３２５】
化合物１９の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１８（３１．５ｍｇ、０．０２４ｍモル）の溶液に、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中のＭａｌ−ＰＥＧ４−ＮＨＳエステル（４２ｍｇ、０．０８ｍモル）を添加した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。最終生成物を、勾配として５分間の１０％アセトニトリル、１５分間の１０％〜５０％のアセトニトリルを用い、５０％アセトニトリルを５分間、５０％〜１００％のアセトニトリルを５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、化合物１９を得た（２９．７ｍｇ、７７％）。ＭＳ：Ｃ68Ｈ87ＢｒＮ14Ｏ16  （Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １４３５．５６  実測値  １４３７．００。
【０３２６】
実施例５
【化５０】
2010519310.tif 000051
【０３２７】
化合物２の合成：乾燥メタノール（２０ｍＬ）中のインドール−４−カルボキサルデヒド（１、５８３ｍｇ、４ｍモル）およびアジド酢酸メチル（４６０ｍｇ、４０ｍモル）の溶液に、メタノール中ナトリウムメトキシドを、Ｎ2下、−２５℃（ドライアイス／ＣＣｌ4）で滴下添加した（２５％ＮａＯＭｅ６．９ｍＬ、３２ｍモル）。反応混合物を０℃に温め、３．５時間撹拌した。反応混合物を水（１２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。結合抽出物を飽和水性ＮａＣｌ（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶媒を真空下で除去し、２を得た（８９０ｍｇ、９１％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．２８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４５（ｓ，１Ｈ）、７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ）、７．２６（ｓ，１Ｈ）、６．７３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．９６（ｓ，３Ｈ）。
【化５１】
2010519310.tif 000052
【０３２８】
化合物３の合成：乾燥キシレン（１００ｍＬ）中、メチル２−アジド−３−（１Ｈ−インドール−４−イル）アクリレート（２、８９０ｍｇ、３．６８ｍモル）の懸濁液をＮ2下で１時間還流させた。溶媒を真空下で除去し、残留物をシリカゲルのカラムを通過させ（３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）、３を得た（６６３ｍｇ、８５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．９７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．３６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２Ｈｚ）、７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．２６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、６．８２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）。
【化５２】
2010519310.tif 000053
【０３２９】
化合物４の合成：Ｎ2下、１５℃での氷酢酸（９ｍＬ）中のメチルピロロ［３，２−ｅ］インドール−２−カルボキシレート（３、６６３ｍｇ、３．１ｍモル）の溶液をシアノ水素化ホウ素ナトリウム（６００ｍｇ、９．５ｍモル）に添加し、反応混合物を２．５時間撹拌した（１３〜１８℃）。反応混合物を水（６０ｍＬ）に注ぎ、固体炭酸ナトリウムを注意深く添加してｐＨを８〜９にした。水性混合物をＥｔＯＡｃ（３×６０ｍＬ）で抽出し、結合抽出物を乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶媒を真空下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により４を得た（５６２ｍｇ、８４％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．０４（ｓ，１Ｈ）、６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．６８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、３．２４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）。
【化５３】
2010519310.tif 000054
【０３３０】
化合物５の合成：乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）中のメチル１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（４、４５０ｍｇ、１．４２ｍモル）の溶液を、Ｎ2下、２５℃で二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６２１ｇ、２．８ｍモル）で処理した。反応混合物を１６時間撹拌し、次いで溶媒を真空下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により５を得た（５５１ｍｇ、８４％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２６（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、４．１２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、１．５７（ｓ，９Ｈ）。
【化５４】
2010519310.tif 000055
【０３３１】
化合物６の合成：ＬｉＯＨの水溶液（４．０Ｍ溶液２．２ｍＬ、８．７ｍモル）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（３：２：１）６０ｍＬ中のメチル３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（５、５５１ｍｇ、１．７４ｍモル）のスラリーに添加し、反応混合物を２５℃で１４時間撹拌した。反応混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、次いで２Ｎ  ＨＣｌでｐＨを４に調節し、白色沈殿を得た。固体を濾過により回収し、水（１０ｍＬ）で洗浄した。高真空下で固体を乾燥し、６を得た（５２４ｍｇ、９９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．９３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１１．６９（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．９１（ｓ，１Ｈ）、３．９６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、３．１８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、１．４８（ｓ，９Ｈ）。
【化５５】
2010519310.tif 000056
【０３３２】
化合物９の合成：ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の７（４８ｍｇ、０．１ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、さらに高真空下で４時間乾燥した。残留物に、３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボン酸（６、３６．２４ｍｇ、０．１２ｍモル）を添加した。ＤＭＦ（３ｍｌ）中のＥＤＣ（２２．９ｍｇ、０．１２ｍモル）の溶液を添加し、反応混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を除去した。粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ2Ｃｌ2中３〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、９を得た（２６ｍｇ、４０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．６９（ｓ，１Ｈ）、８．１７（ｓ，１Ｈ）、８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．８１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．５９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、４．８７（ｔ，１Ｈ，１０Ｈｚ）、４．５４（ｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．４３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．８９〜４．０３（ｍ，４Ｈ）、３．７６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．４６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．２６（ｍ，２Ｈ）、２．４６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、２．３８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、２．２４（ｓ，３Ｈ）、１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【化５６】
2010519310.tif 000057
【０３３３】
化合物１０の合成：ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の９（２６ｍｇ、０．０４ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、さらに真空下で１４時間乾燥し、１０を得た（２７．７ｍｇ、９８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．０９（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｓ，１Ｈ）、８．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４９〜７．５５（ｍ，２Ｈ）、７．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．３２（ｓ，１Ｈ）、４．９１（ｔ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．５４（ｄ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．４７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．８４〜３．９９（ｍ，４Ｈ）、３．２７〜３．５０（ｍ，１０Ｈ）、２．８８（ｓ，３Ｈ）。
【化５７】
2010519310.tif 000058
【０３３４】
化合物１２の合成：ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2（１／２、１０ｍｌ）中の１１（２０ｍｇ、０．０５ｍモル）および１０％Ｐｄ−Ｃ（１５ｍｇ）の溶液を真空下で４０秒間脱気した。得られた混合物を水素雰囲気下に置き、２５℃で７時間撹拌した。反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した（ＣＨ2Ｃｌ2洗浄）。溶媒を真空下で除去し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ（２／８）で溶出し、１２を得た（１５．４ｍｇ、９８％）。1ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．３６（ｓ，１Ｈ）、８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．６１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．４５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２６１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．０６（ｍ，４Ｈ）、３．７３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）。
【０３３５】
化合物１３の合成：ＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）中４Ｎ  ＨＣｌ中の１２（１４ｍｇ、０．０４ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で３０〜４５分間撹拌した。溶媒を除去し、さらに高真空下で１４時間乾燥した。残留物に、３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボン酸（６、１５．１ｍｇ、０．０５ｍモル）を添加した。ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＥＤＣ（９．６ｍｇ、０．０５ｍモル）の溶液を添加し、反応混合物を２５℃で１５時間撹拌した。溶媒を除去した。粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ2Ｃｌ2中３〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、１３を得た（１８．６ｍｇ、８６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９．４５（ｓ，１Ｈ）、８．３１（ｓ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．０２（ｓ，２Ｈ）、７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．４３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．８９（ｓ，１Ｈ）、４．７５（ｄ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．６４（ｔ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．１２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．０３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ）、３．４２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、３．２２〜３．３１（ｍ，２Ｈ）、１．６１（ｓ，９Ｈ）。
【化５８】
2010519310.tif 000059
【０３３６】
化合物１４の合成：ＤＭＦ（３ｍｌ）中の１３（１９ｍｇ、０．０４ｍモル）の溶液に、０〜５℃でのナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ７９μＬ中０．５Ｍ、０．０４ｍモル）を添加し、５分間撹拌した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、水性混合物をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。結合抽出物を乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶媒を真空下で除去し、粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ2Ｃｌ2中１０％ＭｅＯＨで溶出し、１４を得た（１５．３ｍｇ、８７％）。1ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９．２４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、８．０２（ｓ，１Ｈ）、７．５４（ｔｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、７．４３（ｔｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、７．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．２０（ｓ，１Ｈ）、６．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．８８（ｓ，１Ｈ）、４．４９（ｍ，２Ｈ）、４．１２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．２６（ｍ，２Ｈ）、２．９２（ｍ，１Ｈ）、１．７６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．６１（ｓ，９Ｈ）。
【０３３７】
化合物１５の合成：ＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の１４（６．４ｍｇ、０．０１３ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で３０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、さらに高真空下で１４時間乾燥し、１５を得た（７．１ｍｇ、９９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１６（ｓ，１Ｈ）、１０．４５（ｓ，１Ｈ）、８．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．３４（ｍ，２Ｈ）、７．２７（ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｔ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．４８（ｄ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．２８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．７７〜３．９１（ｍ，４Ｈ）、３．４１〜３．４８（ｍ，２Ｈ）。
【化５９】
2010519310.tif 000060
【０３３８】
化合物１６の合成：化合物１０（０．０３３ｍモル、２ＨＢｒ塩）を、ＨＡＴＵ（２０ｍｇ、０．０５４ｍモル）およびＴＥＡ（１５〜２０μＬ）の存在下でＤＭＦ２．５ｍＬ中、実施例３の化合物２９（４５ｍｇ、０．０５４ｍモル）と５０分間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、１０ｍｇの化合物１６を得た（２１％の収率）。ＭＳ：１４０５．６、１４２７．８および１４４４．６。
【化６０】
2010519310.tif 000061
【０３３９】
化合物１９の合成：化合物１０（２５ｍｇ、０．０３３ｍモル、２ＨＢｒ塩））を、ＨＡＴＵ（１６．５ｍｇ、０．０４３３ｍモル）およびＴＥＡ（１０〜１５μＬ）の存在下でＤＭＦ２．５ｍＬ中、実施例５の化合物Ｄ（２１．５ｍｇ、０．０４３ｍモル）と４５分間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、２５ｍｇの化合物１７を得た（７１％の収率）。ＭＳ：１０６７．０。化合物１７（０．０１８７ｍモル）をＤＭＦ（３ｍＬ）中の５％ピペリジンで４５分間脱保護した。溶媒を蒸発させ、残留物をジエチルエーテルで洗浄し、１８を得た（ＭＳ：８４５．２）。ＤＭＦ３ｍＬ中の０．００９３５ｍモルの１８の溶液に、ＤＣＭ１ｍＬ中のＭａｌ−ｄＰＥＧ４−ＮＨＳエステル（１０ｍｇ、０．０１９ｍモル）、その後にＴＥＡ（５μＬ）を添加した。３０分後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、５．２ｍｇの純粋な化合物１９を得た（ＭＳ：１２４３．２、１２６６．８および１２８１．２）。
【０３４０】
実施例６
【化６１】
2010519310.tif 000062
【０３４１】
化合物３の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１（１８．２ｍｇ、０．０３ｍモル）に、２（１６ｍｇ、０．０３６ｍモル）およびＨＡＴＵ（１４ｍｇ、０．０３６ｍモル）を添加後、ＤＩＰＥＡ（１９μＬ）を添加し、反応混合物を２５℃で７時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、３を得た（１５．８ｍｇ、５３％）。ＭＳ：計算値  Ｃ59Ｈ58ＣｌＮ7Ｏ9（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  １０４４．４  実測値  １０４５。
【０３４２】
化合物４の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３（１５ｍｇ、０．０１４ｍモル）の溶液をＤＭＦ（２ｍＬ）中の５％ピペリジンで処理した。反応混合物を２５℃で５分間撹拌した。最終生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、４を得た（１１．２ｍｇ、９５％）。ＭＳ：計算値  Ｃ44Ｈ48ＣｌＮ7Ｏ7（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  ８２２．３３  実測値  ８２２．６。
【０３４３】
化合物６の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の４（１１．２ｍｇ、０．０１４ｍモル）の溶液をＤＣＭ（０．５ｍＬ）中の５（５．５ｍｇ、０．０１８ｍモル）に添加した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。最終生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、１９を得た（１３ｍｇ、９４％）。ＭＳ：計算値  Ｃ54Ｈ59ＣｌＮ8Ｏ10（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  １０１５．４  実測値  １０１６．０。
【０３４４】
化合物７の合成：ＴＦＡ／ＤＣＭ（１／１、２ｍＬ）中の６（１３ｍｇ、０．０１３ｍモル）の溶液を１５分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、７を得た（１２ｍｇ、９７％）。ＭＳ：計算値  Ｃ50Ｈ51ＣｌＮ8Ｏ10（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  ９５９．３４  実測値  ９６０。
【０３４５】
実施例７
【化６２】
2010519310.tif 000063
【０３４６】
化合物３の合成：ＤＭＦ（３ｍｌ）中の１（４７ｍｇ、０．０６ｍモル）、２（４０ｍｇ、０．０７８ｍモル）およびＢＯＰ（３４．５ｍｇ、０．０７８ｍモル）の溶液をＤＩＰＥＡ（６８μＬ）で処理した。反応混合物を２５℃で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、さらに高真空下で４時間乾燥した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、３を得た（５６ｍｇ、８５％）。ＭＳ：計算値  Ｃ56Ｈ54ＢｒＮ9Ｏ8  （Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ１０６０．３３  実測値  １０６０．４４。
【０３４７】
化合物４の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３（２２ｍｇ、０．０２ｍモル）の溶液をＤＭＦ（２ｍＬ）中の５％ピペリジンで処理した。反応混合物を２５℃で５分間撹拌した。最終生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、４を得た（１６．２ｍｇ、９３％）。ＭＳ：計算値  Ｃ41Ｈ44ＢｒＮ9Ｏ6（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  ８３８．２６  実測値  ８３９．２。
【０３４８】
化合物６の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の４（１６ｍｇ、０．０１５ｍモル）および５（６．２ｍｇ、０．０２ｍモル）の溶液をＤＩＰＥＡ（１０μＬ）で処理した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。最終生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、６を得た（１３ｍｇ、７５％）。ＭＳ：計算値  Ｃ51Ｈ55ＢｒＮ10Ｏ9（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  １０３１．３３  実測値  １０３１．６。
【０３４９】
実施例８
【化６３】
2010519310.tif 000064
【０３５０】
化合物１の合成：ＴＨＦ（２１ｍＬ）中５％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（５００ｍｇ、１．０７ｍモル）の溶液に、ＥＤＣ（２４５ｍｇ、１．２８ｍモル）、ＨＯＢｔ（１７３ｍｇ、１．２８ｍモル）およびｔｅｒｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート（２４７ｍｇ、１．２８ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を１０分間撹拌し、次いで塩化銅（１７２ｍｇ、１．２８ｍモル）を混合物に添加した。混合物を一晩撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残留物をシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出し、化合物１を無色オイルとして得た（２８６ｍｇ、４２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３８（ｓ，９Ｈ）、１．４５〜１．５４（ｍ，４Ｈ）、１．５８（ｓ，９Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）、３．０５（ｔ，２Ｈ）、４．２２（ｍ，２Ｈ）、４．３８（ｄ，２Ｈ）、７．３０（ｍ，２Ｈ）、７．３８（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｍ，４Ｈ）、７．７８（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）、５４４（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）+、６６７（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３５１】
化合物２の合成：一般的ＥＤＣ共役手順については１の調製を参照のこと。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５００ｍｇ、１．４２ｍモル）とｔｅｒｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート（３２８ｍｇ、１．７０ｍモル）との共役により、３３５ｍｇの２を得た（４４％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．９５（ｔ，６Ｈ）、１．５８（ｓ，９Ｈ）、１．５５〜１．８０（ｍ，３Ｈ）、４．２２（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，１Ｈ）、４．４０（ｍ，２Ｈ）、７．３５（ｍ，４Ｈ）、７．６５（ｍ，４Ｈ）、７．７８（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｄ，２Ｈ）。
【０３５２】
化合物３の合成：一般的ＥＤＣ共役手順については１の調製を参照のこと。Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨ（２０６ｍｇ、０．５２ｍモル）とｔｅｒｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１２０ｍｇ、０．６２ｍモル）との共役により、１８４ｍｇの３を得た（６２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．５３〜１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．５７（ｓ，９Ｈ）、１．７１（ｍ，１Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｍ，１Ｈ）、３．１９（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，１Ｈ）、４．３８（ｍ，２Ｈ）、７．２８〜７．３９（ｍ，３Ｈ）、７．４９（ｍ，２Ｈ）、７．５６〜７．８６（ｍ，５Ｈ）、７．８９（ｍ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）、５７３（Ｍ＋Ｈ）+、５９５（Ｍ＋Ｎａ）+、６１１（Ｍ＋Ｋ）+。
【０３５３】
化合物４の合成：ジクロロメタン（４ｍＬ）中の１（２８０ｍｇ、０．４４ｍモル）の溶液にＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。残留物（２６０ｍｇ、９８％）をさらに精製せずに次のステップで用いた。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．４５〜１．８０（ｍ，５Ｈ）、１．８８（ｍ，１Ｈ）、２．０９（ｔ，２Ｈ）、４．２５（ｍ，２Ｈ）、４．４５（ｍ，２Ｈ）、７．３０（ｍ，２Ｈ）、７．３８（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｍ，４Ｈ）、７．８０（ｄ，２Ｈ）、７．９８（ｄ，２Ｈ）。
【０３５４】
化合物５の合成：ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４（２１４ｍｇ、０．４４ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１５３μＬ、０．８８ｍモル）、Ｂｏｃ2Ｏ（１４４ｍｇ、０．６６ｍモル）を室温で添加した。混合物を一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物５を白色固体として得た（１８１ｍｇ、７０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．４０（ｓ，９Ｈ）、１．４５〜１．５０（ｍ，４Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）、３．０３（ｔ，２Ｈ）、４．２１（ｍ，２Ｈ）、４．４０（ｄ，２Ｈ）、７．３５（ｍ，４Ｈ）、７．６５（ｍ，４Ｈ）、７．６８（ｄ，２Ｈ）、７．９５（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）４８９（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）+、６１０（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３５５】
化合物６の合成：ｔｅｒｔ−ブチルエステル脱保護手順については４の調製を参照のこと。２（１５ｍｇ、０．０２８ｍモル）の脱保護により、１３ｍｇの６を得た（９８％）。残留物をさらに精製せずに次のステップで用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）４９５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３５６】
化合物７の合成：ｔｅｒｔ−ブチルエステル脱保護手順については４の調製を参照のこと。３（２０ｍｇ、０．０３５ｍモル）の脱保護により、１７ｍｇの７を得た（９８％）。残留物をさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０３５７】
化合物８の合成：ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物Ａ（化合物Ａは実施例４における化合物１６についての記載と同様の方法で合成された）（２４ｍｇ、０．０３２ｍモル）の溶液に、５（１９ｍｇ、０．０３２ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（２８μＬ、０．１６ｍモル）およびＨＡＴＵ（１２ｍｇ、０．０３２ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物を白色固体として得た（２５ｍｇ、６６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．４０（ｓ，９Ｈ）、１．４５〜１．５０（ｍ，４Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）、２．９３（ｓ，３Ｈ）、３．０３（ｔ，２Ｈ）、３．１０〜３．６０（ｍ，８Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．０５（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，２Ｈ）、４．４０（ｍ，４Ｈ）、４．５２（ｍ，１Ｈ）、６．９５（ｓ，１Ｈ）、７．２７〜７．５０（ｍ，８Ｈ）、７．６３〜７．７７（ｍ，７Ｈ）、７．８４（ｍ，３Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）１０８８（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３５８】
化合物９の合成：ＨＡＴＵ共役手順については８の調製を参照のこと。６（１３ｍｇ、０．０２７ｍモル）と２５（２０ｍｇ、０．０２７ｍモル）の共役により、１７ｍｇの９を得た（５７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．８６（ｍ，６Ｈ）、１．４５〜１．７０（ｍ，３Ｈ）、２．７８（ｓ，３Ｈ）、３．０５〜３．５０（ｍ，８Ｈ）、３．７０（ｄ，１Ｈ）、３．８０（ｍ，１Ｈ）、４．０７（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．４０（ｍ，６Ｈ）、６．７６（ｓ，１Ｈ）、７．１３〜７．３０（ｍ，８Ｈ）、７．５１〜７．７２（ｍ，１０Ｈ）、７．８６（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）９７３（Ｍ＋Ｈ）+。
【０３５９】
化合物１０の合成：ＨＡＴＵ共役手順については８の調製を参照のこと。７（２７ｍｇ、０．０５３ｍモル）と２５（３９ｍｇ、０．０５３ｍモル）の共役により、３６ｍｇの１０を得た（６０％）。
【０３６０】
化合物１１の合成：ＤＭＦ（１ｍＬ）中の８（２５ｍｇ、０．０２ｍモル）の溶液に、ピペリジン（１０μＬ、０．１ｍモル）を添加した。得られた溶液を１時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。残留物をエーテルで沈殿させ（ｃｒａｓｈｅｄ  ｏｕｔ）、濾過した（１８ｍｇ、９８％）。化合物をさらに精製せずに用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）８６６（Ｍ＋Ｈ）+、８８８（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３６１】
化合物１２の合成：一般的Ｆｍｏｃ脱保護手順については１１の調製を参照のこと。９（１７ｍｇ、０．０１６ｍモル）の脱保護により、１４ｍｇの１２を得た（９８％）。残留物をさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０３６２】
化合物１３の合成：一般的Ｆｍｏｃ脱保護手順については１１の調製を参照のこと。１０（３６ｍｇ、０．０３６ｍモル）の脱保護により、２８ｍｇの１３を得た（９８％）。残留物をさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０３６３】
化合物１４の合成：ジクロロメタン（１ｍＬ）中２０％ＤＭＦ中の１１（１８ｍｇ、０．０２１ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１１μＬ、０．６３ｍモル）およびＮ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート（１０ｍｇ、０．０３１ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を準分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物１４を白色固体として得た（１９ｍｇ、７９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３２（ｍ，２Ｈ）、１．４２（ｓ，９Ｈ）、１．４５〜１．８０（ｍ，８Ｈ）、１．７８（ｍ，１Ｈ）、１．８５（ｍ，１Ｈ）、２．２８（ｔ，２Ｈ）、２．９６（ｓ，３Ｈ）、３．０５（ｔ，３Ｈ）、３．３５〜３．７０（ｂｓ，８Ｈ）、３．４７（ｔ，２Ｈ）、３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．９０（ｍ，１Ｈ）、４．０５（ｍ，１Ｈ）、４．４４（ｍ，２Ｈ）、４．５５（ｍ，１Ｈ）、６．７６（ｓ，２Ｈ）、６．９６（ｓ，１Ｈ）、７．３１（ｂｓ，２Ｈ）、７．４２（ｍ，１Ｈ）、７．４６（ｍ，１Ｈ）、７．７１（ｍ，３Ｈ）、７．８６（ｍ，３Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）１０５９（Ｍ＋Ｈ）+、１０８２（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３６４】
化合物１５の合成：ジクロロメタン（０．８ｍＬ）中の１４（１９ｍｇ、０．０８ｍモル）の溶液にＴＦＡ（０．２ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、凍結乾燥し、化合物１５を白色固体として得た（１７ｍｇ、９０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３４（ｍ，２Ｈ）、１．４５〜１．８０（ｍ，９Ｈ）、１．９５（ｍ，１Ｈ）、２．２９（ｔ，２Ｈ）、２．９６（ｔ，３Ｈ）、３．００（ｓ，３Ｈ）、３．３５〜３．７０（ｂｓ，８Ｈ）、３．４８（ｔ，２Ｈ）、３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．９８（ｄｄ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．５０（ｍ，１Ｈ）、４．６９（ｍ，２Ｈ）、６．７８（ｓ，２Ｈ）、７．１２（ｓ，１Ｈ）、７．４２（ｂｓ，２Ｈ）、７．４８（ｍ，１Ｈ）、７．５７（ｍ，１Ｈ）、７．７３（ｍ，２Ｈ）、７．８７〜７．９５（ｍ，４Ｈ）、８．０５（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）９５９（Ｍ＋Ｈ）+、９８２（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３６５】
化合物１６の合成：Ｎ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート共役手順については１４の調製を参照のこと。１２（１１ｍｇ、０．０１５ｍモル）とＮ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート（７ｍｇ、０．０２２ｍモル）の共役により、１０ｍｇの１６を得た（６６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．９７（ｄ，３Ｈ）、１．０１（ｄ，３Ｈ）、１．３１（ｍ，２Ｈ）、１．５６〜１．７５（ｍ，７Ｈ）、２．２８（ｔ，２Ｈ）、２．９７（ｓ，３Ｈ）、３．３５〜３．５５（ｍ，８Ｈ）、３．４７（ｔ，２Ｈ）、３．６２（ｍ，１Ｈ）、３．９０（ｍ，１Ｈ）、４．０６（ｍ，１Ｈ）、４．５１（ｍ，１Ｈ）、４．５５（ｍ，２Ｈ）、６．７６（ｓ，２Ｈ）、６．９９（ｓ，１Ｈ）、７．３３（ｂｓ，２Ｈ）、７．４２（ｍ，１Ｈ）、７．４９（ｍ，１Ｈ）、７．６９（ｄ，２Ｈ）、７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．８６（ｍ，３Ｈ）、８．００（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）９４４（Ｍ＋Ｈ）+、９６６（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３６６】
化合物１７の合成：Ｎ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート共役手順については１４の調製を参照のこと。１３（２８ｍｇ、０．０３５ｍモル）とＮ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート（１６ｍｇ、０．０５３ｍモル）の共役により、２４ｍｇの１７を得た（６０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１．３４（ｍ，２Ｈ）、１．５５〜１．６８（ｍ，６Ｈ）、１．６８〜１．９０（ｍ，２Ｈ）、２．２９（ｔ，２Ｈ）、３．００（ｓ，３Ｈ）、３．１２〜３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．３５〜３．７０（ｂｓ，８Ｈ）、３．４８（ｔ，２Ｈ）、３．７０（ｍ，１Ｈ）、３．９６（ｄｄ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．５０（ｍ，１Ｈ）、４．６５（ｍ，２Ｈ）、６．７８（ｓ，２Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｂｓ，２Ｈ）、７．４７（ｍ，１Ｈ）、７．５６（ｍ，１Ｈ）、７．７３（ｄ，２Ｈ）、７．８６（ｄ，４Ｈ）、７．９０（ｄ，２Ｈ）、８．０３（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ+）９８８（Ｍ＋Ｈ）+、１０１０（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０３６７】
実施例９
【化６４】
2010519310.tif 000065
【０３６８】
化合物３の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１（５０ｍｇ、０．０７９ｍモル）に、２（４９ｍｇ、０．０８５ｍモル）およびＨＡＴＵ（３３ｍｇ、０．０８６ｍモル）を添加後、ＤＩＰＥＡ（４５μＬ）を添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、３を得た（４７ｍｇ、６０％）。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+１００３。
【０３６９】
化合物５の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３（１５ｍｇ、０．０１４ｍモル）の溶液をＤＭＦ（２ｍＬ）中の５％ピペリジンで処理し、反応混合物を２５℃で１０分間撹拌した。粗生成物をジエチルエーテルで沈殿させ、さらに精製せずに次のステップで用いた。粗生成物をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解後、ＤＭＦ（２ｍＬ）およびＤＩＥＡ（２０μＬ）中の４（２５ｍｇ、０．０２５ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＴＦＡを反応混合物に添加し、反応混合物を室温で４５分間撹拌し、分析ＨＰＬＣで示されたように化合物５を得た。粗生成物を、勾配が１０％アセトニトリルで５分間、１０％〜５０％アセトニトリルで１５分間であり、５０％アセトニトリルで５分間、５０％〜１００％アセトニトリルで５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中、０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、５を得た（３ｍｇ、９４％）。ＭＳ：（ＭＨ）+８８９。
【０３７０】
実施例１０
【化６５】
2010519310.tif 000066
【０３７１】
化合物１の合成：１．５ｇ（３．７７ｍモル）のＦｍｏｃ−シトルリンを丸底フラスコ内のＤＭＦ３ｍＬ中に溶解し、それに対し、０．８７ｇ（４．５ｍモル）のＥＤＣ、０．６１ｇ（４．５ｍモル）のＨＯＢｔを添加した。次いで、ＤＣＭ６ｍＬを添加後、０．８８ｇ（４．５ｍモル）のｔ−ブチル−４−アミノベンゾエートおよび触媒量の塩化銅を添加した。反応混合物を一晩撹拌させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を、ＤＣＭ中５〜１０％ＭｅＯＨの場合、シリカゲル上で精製し、２ｇの１を９２％の収率で得た。Ｍ+1＝５７４。
【化６６】
2010519310.tif 000067
【０３７２】
化合物７の合成：２１０ｍｇ（０．６３ｍモル）の２をＨＢｒ−酢酸エチル溶液で３０分間処理した。溶媒を蒸発させ、得られた塩３を高真空下で乾燥した。上で調製した０．６３ｍモルの３を、１３３ｍｇ（０．６９ｍモル）のＥＤＣの存在下でＤＭＦ１０ｍＬ中の２１０ｍｇ（０．６９ｍモル）の４と２時間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物をシリカ上で精製し、１６０ｍｇの５を得た（４７．６％の収率）。Ｍ+1＝５１８。
【０３７３】
４０ｍｇ（０．２７ｍモル）の５を、アリルアルコール１．７ｍＬおよびピリジン２１４μＬを含有するＤＣＭ１７ｍＬ中の１６０ｍｇ（０．８１ｍモル）の市販の４−メチルピペラジンカルボニルクロリド塩酸塩と一晩反応させた。溶媒を蒸発させ、粗化合物を、溶出剤として５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いてシリカ上で精製し、７０ｍｇの６を得た（４０％の収率）。Ｍ+1＝６４５。
【０３７４】
３５ｍｇ（０．０５４ｍモル）の６を１：２のＴＦＡ−ＤＣＭ５ｍＬで５分間処理した。溶媒を蒸発させ、得られた塩７を高真空下で一晩乾燥した。Ｍ+1＝５４４であり、それを次のステップで用いた。
【化６７】
2010519310.tif 000068
【０３７５】
化合物８の合成：６６ｍｇ（０．１１ｍモル）の１を、１：２のＴＦＡ：ＤＣＭ３ｍＬとともに２０分間攪拌することにより８に変換した。溶媒を蒸発させ、酸を高真空下で乾燥した。Ｍ+1＝５１７．８、Ｍ+Na＝５４０。
【化６８】
2010519310.tif 000069
【０３７６】
化合物１０の合成：０．０６５ｍモルの８および４４．７ｍｇ（０．０６５ｍモル）のＢＯＰを、無水ＤＭＦ２ｍＬ中の溶液として、０．０５４ｍモルの７（ＭＥＤ−２４７７）を有するフラスコに添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（９３μＬ、０．５４ｍモル）を添加し、１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗混合物を逆相ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣにより精製し、精製後、４８ｍｇの９を（そのＴＦＡ塩として７７％の収率で）得た。Ｍ+1＝１０４３。１６ｍｇ（０．０１５ｍモル）の９をＤＭＦ中のピペリジンの５％溶液１ｍＬで１０分間処理した。溶媒を蒸発させ、固体残留物をヘキサンおよびジエチルエーテルで洗浄した。生成物１０を高真空下で乾燥した。Ｍ+1＝８２１。
【化６９】
2010519310.tif 000070
【０３７７】
化合物１１の合成：上で調製した０．０１５ｍモルの１０を、無水ＤＭＦ１．５ｍＬおよびＤＩＰＥＡ１０μＬ中の１１ｍｇ（０．０３５ｍモル）の市販のＮ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエートと１時間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、１０．７ｍｇの１１を（そのＴＦＡ塩として６３％の収率で）得た。Ｍ+1＝１０１４。
【０３７８】
実施例１１：薬剤−リンカー分子と抗体との複合
アミノ酸およびペプチドリンカーについて：本実施例では、（場合により他の基、例えばスペーサー、反応性官能基などを含む）本発明の薬剤−リンカー分子を標的化剤Ｘ4としての抗体に複合するための反応の条件および方法について記載する。条件および方法は、あくまで例示であって限定されるものではない。薬剤−リンカー分子を抗体に複合するための他のアプローチは当該技術分野で既知である。
【０３７９】
本明細書中に記載の複合方法は、抗体のリジンと２−イミノチオランとの反応、その後の薬剤−リンカー分子と活性マレイミド基との反応を介する、遊離チオール基の抗体への導入に基づく。最初に複合対象の抗体に対し、緩衝液を、５０ｍＭ  ＮａＣＬ、２ｍＭ  ＤＴＰＡ、ｐＨ８．０を含有するｐＨ８．０の０．１Ｍリン酸塩緩衝液に交換し、５〜１０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。チオレーションを２−イミノチオランの抗体への添加により行った。添加対象の２−イミノチオランの量は予備実験で測定されたものであり、抗体間で異なる。予備実験では、漸増量の２−イミノチオランを抗体に添加し、抗体とともに室温で１時間インキュベート後、抗体をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを用いて脱塩し、５０ｍＭヘペス緩衝液、ｐＨ６．０にし、導入されたチオール基の数をジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）との反応により速やかに測定した。チオール基とＤＴＤＰとの反応の結果、チオジピリジンが遊離され、それを３２４ｎｍで監視した。０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度での試料を用いた。２８０ｎｍでの吸光度を用い、試料中でのタンパク質の濃度を正確に測定し、次いで一定分量の各試料（０．９ｍｌ）をＤＴＤＰ０．１ｍｌ（エタノール中、５ｍＭストック溶液）とともに室温で１０分間インキュベートした。緩衝液単独＋ＤＴＤＰのブランク試料も併せてインキュベートした。１０分後、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、存在するチオールの数を、チオジピリジンにおける消衰係数１９８００Ｍ-1を用いて定量した。
【０３８０】
典型的には、１抗体当たり３つのチオール基のチオレーションレベルが望ましい。例えば、１つの特定の抗体の場合、１５倍モル過剰の２−イミノチオランの添加、次いで室温で１時間のインキュベーションによりこれを行った。したがって、複合対象の抗体を所望のモル比で２−イミノチオランとともにインキュベートし、次いで脱塩し、結合用緩衝液にした（５ｍＭグリシン、０．５％ポビドン（１０ｋ）および２ｍＭ  ＤＴＰＡを含有する５０ｍＭヘペス緩衝液、ｐＨ６．０）。チオール化材料を氷上で維持する間、導入されたチオールの数を上記のように定量した。
【０３８１】
導入されたチオールの数の検証後、活性マレイミド基を有する薬剤−リンカー分子を１チオール当たり３倍モル過剰で添加した。複合反応を、最終濃度として５％のＤＭＳＯも含有する結合用緩衝液（または適切な他の溶媒）中で行った。一般に、薬剤−リンカーストック溶液を１００％ジメチルスルホキシドに溶解した。抗体への添加については、ストック溶液をチオール化抗体に直接添加し、それは最終濃度が１０％になるように添加された十分なＤＭＳＯを含有するか、または最終濃度１０％のＤＭＳＯを含有する結合用緩衝液で予備希釈後、等容量のチオール化抗体に添加した。
【０３８２】
複合反応物を混合しながら室温で２時間インキュベートした。インキュベーション後、反応混合物を遠心し、０．２μｍのフィルタを通して濾過した。複合体の精製を、多数の方法を用いてクロマトグラフィーにより行った。複合体は、５ｍＭグリシン、５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび０．５％ポビドン（１０ｋ）を含有する５０ｍＭヘペス緩衝液、ｐＨ７．２で予備平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ２００カラム上でのサイズ排除クロマトグラフィーを用いて精製されうる。クロマトグラフィーを２８ｃｍ／ｈの線形流速で行った。複合体を含有する画分を回収し、プールし、濃縮した。あるいは、精製はイオン交換クロマトグラフィーにより可能である。条件は抗体間で異なり、各々の場合に最適化される必要がある。例えば、抗体−薬剤複合反応混合物を、５０ｍＭヘペス、５ｍＭグリシン、０．５％ポビドン（１０ｋ）、ｐＨ５．５で予備平衡化したＳＰ−セファローズカラムに適用した。抗体複合体を、ｐＨ５．５での平衡化緩衝液中、０〜１Ｍ  ＮａＣｌの勾配を用いて溶出した。複合体を含有する関連画分をプールし、（５ｍＭグリシン、１００ｍＭ  ＮａＣｌおよび０．５％ポビドン（１０ｋ）を含有する５０ｍＭヘペス緩衝液、ｐＨ７．２を含有する）調製用緩衝液に対して透析した。
【０３８３】
実施例１２：インビボ試験
Ａ．化合物Ａ〜Ｇ
７８６−Ｏ（ＡＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−１９３２）を、標準の実験方法を用いてインビトロで増殖した。６〜８週齢の雄ＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＹ）の右側腹に、マウス１匹当たりＰＢＳ／Ｍａｔｒｉｇｅｌ（１：１）０．２ｍｌ中、２５０万個の７８６−Ｏを皮下移植した。移植後、週２回、マウスを秤量し、その腫瘍について電子キャリパーを用いて三次元的に測定した。腫瘍体積を高さ×幅×長さとして計算した。平均２００ｍｍ3の腫瘍を有するマウスを治療群に無作為化した。０日目、マウスに対し、ＰＢＳ媒体、毒素に複合されたアイソタイプ対照抗体または毒素に複合された抗ＣＤ７０  ＨｕＭＡｂ  ２Ｈ５を腹腔内投与した。各群はマウス８匹を有した。
【０３８４】
以下の毒素について試験した。
【化７０】
2010519310.tif 000071
【化７１】
2010519310.tif 000072
【０３８５】
表１はμモルの毒素（化合物Ａ〜Ｇ）に基づく投与群の概要である。
【０３８６】
【表１】
2010519310.tif 000073
【０３８７】
図１、２、５、および６は平均腫瘍体積対投与後日数を示し、図３、４、７、および８は腫瘍体積中央値対投与後日数を示す（０．０３μモル−図１、３、５、および７；０．００５μモル−図２、４、６、および８）。図９は、０．０３および０．０００５μモルの用量の双方におけるパーセント体重変化中央値対投与後日数を示す。０．０３μモルの用量実験に基づく有効性は、降順で化合物Ｅ＞化合物Ｆ＞化合物Ａ＞化合物Ｃ＞化合物Ｄ＞化合物Ｂ＞化合物Ｇであるように見られる。
【０３８８】
実施例１３：カテプシンＢを介した単一のアミノ酸リンカーの切断
一群の単一のアミノ酸化合物（それぞれアミノ酸組成に関しては異なるがそれ以外では構造が類似している）のカテプシンＢ活性についてアッセイした。化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦといった化合物について試験した。カテプシンＢ媒介性の生成物の外観を、その３４０ｎｍでの吸光度による薬剤生成物の定量とともにＲＰ−ＨＰＬＣに適用することにより監視した。化合物をカテプシンＢとともに様々な期間インキュベートし、その大体の半減期（ｔ1/2）を下記の表２に報告する。試験化合物については、化合物Ａおよび化合物ＤのみがカテプシンＢにより切断された。
【０３８９】
【表２】
2010519310.tif 000074
【０３９０】
カテプシンＢ酵素アッセイ：ウシ脾臓カテプシンＢ（Ｓｉｇｍａ生成物コードＣ−６２８６）のストック溶液を、凍結乾燥固体（５６％タンパク質で６ｍｇ）を２５ｍＭ酢酸ナトリウム／１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ５．０の緩衝液（１０ｍＬ）中に溶解することにより調製した。酵素の活性化を、ストック溶液（５０μＬ）を３０ｍＭ  ＤＴＴ／１５ｍＭ  ＥＤＴＡからなる活性化緩衝液（１００μｌ）と混合後、室温で１５分間インキュベートすることにより行った。活性化されたカテプシンＢを、使用に先立ち、２５ｍＭ酢酸ナトリウム／１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ５．０の溶液で１：１に希釈した。薬剤放出についてのアッセイのため、システイン修飾化合物（ＤＭＳＯ中、２．５ｍＭ溶液４μＬ）を、２５ｍＭ酢酸ナトリウム／１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ５．０の緩衝液（８６μＬ）および活性化されたカテプシンＢ（３．６Ｕ／ｍＬで１０μＬ）に添加した。試料を３７℃で適切な時間インキュベートし、メタノール（１００μＬ）で停止した。
【０３９１】
化合物試料（４０μＬ）を、逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ−ｐａｋ  Ｃ１８、３．９×１５０ｍｍのカラム、生成物コードＷＡＴ０８６３４４）を備えるＷａｔｅｒｓ  ２７９５  ＨＰＬＣシステムに適用した。試料クロマトグラフィーを、１．０ｍＬ／分で２０分間にわたり１０〜１００％Ｂ緩衝液の勾配溶出の場合に、水／０．１％ＴＦＡ（Ａ緩衝液）およびアセトニトリル／０．１％ＴＦＡ（Ｂ緩衝液）からなる二重移動相系を用いて行った。化合物を３４０ｎｍでのその吸光度（Ａ３４０）により検出した。
【０３９２】
本明細書中に記載または言及される特許出願、特許、出版物、および他の公開文献の各々は、特許出願、特許、出版物、および他の公開文献の各々が参照により援用されるように具体的かつ個別に示される場合と同程度に、その全体が参照により本明細書中に援用される。
【０３９３】
本発明がその特定の実施形態に関して記載されている一方、本発明の真の趣旨および範囲や添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、様々な変化が施されかつ等価物が置換されうることは当業者により理解されるべきである。さらに、多数の改良を行い、特定の状況、材料、組成物、プロセス、１つまたは複数のプロセスステップを本発明の目的、趣旨および範囲に適合させることが可能である。かかるすべての変更は、本明細書に添付の特許請求の範囲内に含まれるように意図されている。
【図１】
2010519310.tif 000085
【図２】
2010519310.tif 000086
【図３】
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【図４】
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【図５】
2010519310.tif 000089
【図６】
2010519310.tif 000090
【図７】
2010519310.tif 000091
【図８】
2010519310.tif 000092
【図９】
2010519310.tif 000093
【配列表】
2010519310000001.app
【国際調査報告】
2010519310.tif 000094
2010519310.tif 000095
2010519310.tif 000096
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