(57)【要約】  ７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの薬学的に許容される塩(ただし、それは二トリフルオロ酢酸塩、二臭化水素酸塩または二酢酸塩ではない)；および医薬としての(例えば呼吸器疾患(例えば喘息またはＣＯＰＤ)の処置における)そのような化合物の使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの薬学的に許容される塩(ただし、それは二トリフルオロ酢酸塩、二臭化水素酸塩または二酢酸塩ではない)。
【請求項２】
塩が塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、ピルビン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、重硫酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、マロン酸塩、キシナホ酸塩、アスコルビン酸塩、オレイン酸塩、ニコチン酸塩、サッカリン塩、アジピン酸塩、ギ酸塩、グリコール酸塩、Ｌ−乳酸塩、Ｄ−乳酸塩、アスパラギン酸塩、リンゴ酸塩、Ｌ−酒石酸塩、Ｄ−酒石酸塩、ステアリン酸塩、２−フロエート、３−フロエート、ナパジシル酸塩(ナフタレン−１,５−二スルホン酸塩またはナフタレン−１−(スルホン酸)−５−スルホン酸塩)、エジシル酸塩(エタン−１,２−二スルホン酸塩またはエタン−１−(スルホン酸)−２−スルホン酸塩)、イセチオン酸塩(２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩)、２−メシチレンスルホン酸塩または２−ナフタレンスルホン酸塩である、請求項１に記載の薬学的に許容される塩。
【請求項３】
塩が塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩またはキシナホ酸塩である、請求項１に記載の薬学的に許容される塩。
【請求項４】
７.４(±０.１°)、１３.２(±０.１°)、１４.１(±０.１°)、１６.６(±０.１°)、２１.０(±０.１°)および２１.５(±０.１°)２θに特異的ピークを含むＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンを有する、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態(多形形態Ｂ)。
【請求項５】
アセトニトリル中のＨＢｒの水性溶液を、アセトニトリル中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態Ｂに添加し、生成物を固体として生じさせることを含む、請求項３に記載の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態Ｂの製造方法。
【請求項６】
請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項７】
治療に使用するための、請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
β２アドレナリン受容体活性の調節が有益であるヒト疾患または状態の処置用医薬の製造における、請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項９】
成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、肺気腫、気管支炎、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、喘息または鼻炎の処置用医薬の製造における、請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、肺気腫、気管支炎、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、喘息または鼻炎の処置において使用するための、請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物。
【請求項１１】
β２アドレナリン受容体活性の調節が有益である疾患または状態を処置する、またはリスクを軽減する方法であって、それを必要とする患者に、治療的有効量の請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
炎症性疾患または状態を処置する、またはリスクを軽減する方法であって、それを必要とする患者に、治療的有効量の請求項１に記載の薬学的に許容される塩、または請求項４に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
該疾患または状態が成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、肺気腫、気管支炎、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、喘息または鼻炎である、請求項１１または１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの新規塩形態、このような新規塩形態を含む組成物、このような塩形態の製造方法、および疾患状態(例えば呼吸器疾患状態、例えば喘息またはＣＯＰＤ)の処置におけるこのような塩形態の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン遊離塩基およびその二トリフルオロ酢酸塩、二臭化水素酸塩および二酢酸塩は、β２アドレナリン受容体アゴニストであり、ＰＣＴ／ＳＥ２００６／０００９８１(現在ＷＯ２００７／０２７１３４として公開)に開示されている。ＰＣＴ／ＳＥ２００６／０００９８１の実施例２５は、ここで、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態Ａと呼ぶものを製造する。これらの化合物は、アドレナリンα１Ｄ、アドレナリンβ１およびドーパミンＤ２を超える少なくとも１０倍選択性をβ２アドレナリン受容体に示す。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの薬学的に許容される塩(ただし、それは二トリフルオロ酢酸塩、二臭化水素酸塩または二酢酸塩ではない)を提供する。
【０００４】
薬学的に許容される塩は、例えば、塩酸塩(例えば二塩酸塩)、硫酸塩、リン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、ピルビン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、重硫酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、マロン酸塩、キシナホ酸塩、アスコルビン酸塩、オレイン酸塩、ニコチン酸塩、サッカリン塩、アジピン酸塩、ギ酸塩、グリコール酸塩、Ｌ−乳酸塩、Ｄ−乳酸塩、アスパラギン酸塩、リンゴ酸塩、Ｌ−酒石酸塩、Ｄ−酒石酸塩、ステアリン酸塩、２−フロエート、３−フロエート、ナパジシル酸塩(ナフタレン−１,５−二スルホン酸塩またはナフタレン−１−(スルホン酸)−５−スルホン酸塩)、エジシル酸塩(エタン−１,２−二スルホン酸塩またはエタン−１−(スルホン酸)−２−スルホン酸塩)、イセチオン酸塩(２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩)、２−メシチレンスルホン酸塩または２−ナフタレンスルホン酸塩を含む。
【０００５】
薬学的に許容される塩は、例えば、塩酸塩(例えば二塩酸塩)、硫酸塩、リン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩またはキシナホ酸塩を含む。
【０００６】
本発明の塩は溶媒和物(例えば水和物)として存在でき、本発明は全てのこのような溶媒和物を包含する。
【０００７】
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態(多形形態Ａ)は：８.０(±０.１°)、１０.０(±０.１°)、１１.９(±０.１°)、１６.０(±０.１°)、１８.９(±０.１°)および２２.６５(±０.１°)  ２θに特異的ピークを含むＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンを有する。
【０００８】
一つの特定の局面において本発明は：７.４(±０.１°)、１３.２(±０.１°)、１４.１(±０.１°)、１６.６(±０.１°)、２１.０(±０.１°)および２１.５(±０.１°)  ２θに特異的ピークを含むＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンを有する、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態(多形形態Ｂ)を提供する。
【０００９】
他の局面において本発明は、アセトニトリル中のＨＢｒの水性溶液を、アセトニトリル中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態Ｂに添加し、生成物を固体として生じさせることを含む、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二臭化水素酸塩の多形形態Ｂの製造方法を提供する。
【００１０】
他の局面において、本発明は：１０.７(±０.１°)、１１.１(±０.１°)、１３.６(±０.１°)、２０.９(±０.１°)、２２.１(±０.１°)および２５.３(±０.１°)  ２θに特異的ピークを含むＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンを有する、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二塩酸塩の第一物質形態(タイプＡ)を提供する。
【００１１】
他の局面において、本発明は：１５.２(±０.１°)、１６.５(±０.１°)、１８.２(±０.１°)および１９.０(±０.１°)  ２θに特異的ピークを含むＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンを有する、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二塩酸塩の第二物質形態(タイプＢ)を提供する。
【００１２】
他の局面において、本発明は：６.２(±０.１°)、７.４(±０.１°)、１２.５(±０.１°)、１３.２(±０.１°)、１８.６(±０.１°)および２２.８(±０.１°)  ２θに特異的ピークを含むＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)パターンを有する、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの二塩酸塩の第三物質形態(タイプＣ)を提供する。
【００１３】
さらなる局面において本発明は、７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの薬学的に許容される塩、例えば二塩酸塩、一キシナホ酸塩、一フマル酸塩、硫酸塩または一クエン酸塩を提供する。
【００１４】
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンの別の塩は、当分野で既知の方法により製造できる。例えば、二臭化水素酸塩を塩基で処理して７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンを遊離でき、次いでこれを適当な酸と適当な溶媒(例えば脂肪族アルコール、例えばメタノール)中で反応させて、所望の塩を製造できる。
【００１５】
本発明の塩は、下記の製造または実施例に示す方法を使用してまたは適合させて、または、文献に記載の方法により製造できる。
【００１６】
本発明の塩および多形は、次のものの処置に使用できる：
１. 呼吸器：次のものを含む、気道の閉塞性疾患：気管支、アレルギー性、内因性、外因性、運動誘発性、薬剤誘発性(アスピリンおよびＮＳＡＩＤ誘発型)および粉塵誘発性喘息を含む、間欠性および永続性両方の、そして全ての重症度の、および気道過敏反応性の他の原因を含む、喘息；慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)；感染性および好酸球性気管支炎を含む気管支炎；気腫；気管支拡張症；嚢胞性線維症；サルコイドーシス；農夫肺および関連疾患；過敏性肺炎；原因不明線維化肺胞炎、特発性間質性肺炎、抗新生物治療および結核およびアスペルギルス症および他の真菌感染を含む慢性感染に合併する線維症を含む、肺線維症；肺移植の合併症；肺脈管構造の血管炎性および血栓性障害、および肺高血圧；気道の炎症性および分泌状態と関連する慢性咳、および医原性咳の処置を含む鎮咳活性；薬物性鼻炎、および血管運動性鼻炎を含む急性および慢性鼻炎；神経性鼻炎(枯草熱)を含む通年性および季節性アレルギー性鼻炎；鼻のポリープ症；一般的な風邪、および呼吸器多核体ウイルス、インフルエンザ、コロナウイルス(ＳＡＲＳを含む)またはアデノウイルスによる感染を含む急性ウイルス感染；または好酸球性食道炎；
【００１７】
２. 骨および関節：原発性および、例えば、先天的股関節異形成症に二次性両方の骨関節症／骨関節症と関連するまたはそれを含む関節炎(arthritides)；頚部および腰部脊椎炎、および背下部および頚部痛；骨関節症；リウマチ性関節炎およびスチル病；強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎および未分化脊椎関節症(spondarthropathy)を含む血清反応陰性脊椎関節症；敗血症性関節炎および他の感染関連関節症(arthopathies)およびポット病およびポンセ病を含む結核のような骨障害；尿酸塩痛風、ピロリン酸カルシウム沈着疾患、およびカルシウムアパタイト関連腱、滑液包および滑膜炎症を含む急性および慢性結晶誘発滑膜炎；ベーチェット病；原発性および二次性シェーグレン症候群；全身性硬化症および限局型強皮症；全身性エリテマトーデス、混合型結合組織疾患、および未分化結合組織疾患；皮膚筋炎および多発性筋炎を含む炎症性ミオパシー；リウマチ性多発筋痛症；どんな関節分布であれ特発性炎症性関節炎(arthritides)を含む若年性関節炎および関連症候群、およびリウマチ熱およびその全身合併症；巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発性動脈炎、顕微鏡的多発動脈炎、およびウイルス感染、過敏症反応、クリオグロブリン、およびパラプロテインと関連する脈管炎を含む脈管炎；背下部痛；家族性地中海熱、マックル・ウェルズ症候群、および家族性アイルランド熱(Familial Hibernian Fever)、キクチ病；薬剤誘発性関節痛(arthalgias)、腱炎(tendonititides)、およびミオパシー；
【００１８】
３. 傷害[例えば運動傷害]または疾患による疼痛および筋骨格障害の結合組織リモデリング：関節炎(arthritides)(例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、痛風または結晶性関節症)、他の関節疾患(例えば椎間板変性または側頭下顎関節変性)、骨リモデリング疾患(例えば骨粗鬆症、ページェット病または骨壊死)、多発性軟骨炎、強皮症、混合型結合組織障害、脊椎関節症または歯周疾患(例えば歯周炎)；
【００１９】
４. 皮膚：乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎または他の湿疹性皮膚炎、および遅延型過敏症反応；植物および光皮膚炎；脂漏性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬、壊疽性膿皮症、皮膚サルコイド、円板状エリテマトーデス、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、毒性紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症、男性型禿頭、スウィート症候群、ウェーバー・クリスチャン症候群、多形性紅斑；感染性および非感染性両方の蜂巣炎；脂肪織炎；皮膚リンパ腫、非黒色腫皮膚癌および他の形成異常病巣；固定薬疹を含む薬剤誘発性障害；
【００２０】
５. 眼：眼瞼炎；通年性および春季アレルギー性結膜炎を含む結膜炎；虹彩炎；前部および後部ブドウ膜炎；脈絡膜炎；自己免疫性；網膜に影響する変性または炎症性障害；交感神経性眼炎を含む眼炎；サルコイドーシス；ウイルス、真菌および細菌を含む感染；
【００２１】
６. 胃腸管：舌炎、歯肉炎、歯周炎；逆流性を含む食道炎；好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎を含む大腸炎、直腸炎、肛門掻痒症；セリアック病、過敏性腸症候群、および腸から離れて作用し得る食物関連アレルギー(例えば偏頭痛、鼻炎または湿疹)；
【００２２】
７. 腹部：自己免疫性、アルコール性およびウイルス性を含む肝炎；肝臓の線維症および硬変；胆嚢炎；急性および慢性両方の膵炎；
【００２３】
８. 尿生殖器：間質性および糸球体腎炎を含む腎炎；ネフローゼ症候群；急性および慢性(間質性)膀胱炎およびハンナー潰瘍を含む膀胱炎；急性および慢性尿道炎、前立腺炎、精巣上体炎、卵巣炎および卵管炎；外陰部腟炎；ペイロニー病；勃起不全(男女両方)；
【００２４】
９. 同種移植片拒絶反応：例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、皮膚または角膜の移植後または輸血後の急性および慢性のもの；または慢性移植片対宿主病；
【００２５】
１０. ＣＮＳ：アルツハイマー病およびＣＪＤおよびｎｖＣＪＤを含む他の認知症になる障害；アミロイド症；多発性硬化症および他の脱髄症候群；脳アテローム性動脈硬化症および脈管炎；側頭動脈炎；重症筋無力症；内臓痛、頭痛、偏頭痛、三叉神経痛、非定型顔面痛、関節および骨痛、癌および腫瘍侵襲に起因する疼痛、糖尿病性、ヘルペス後、およびＨＩＶ関連ニューロパシーを含む神経障害性疼痛症候群を含む、急性および慢性疼痛(中枢起源であれ、末梢起源であれ、急性、間欠性または永続性)；神経サルコイドーシス；悪性、感染性または自己免疫性過程の中枢および末梢神経系合併症；
【００２６】
１１. 橋本甲状腺炎、グレーブス病、アジソン病、真性糖尿病、特発性血小板減少性紫斑病、好酸球性筋膜炎、高ＩｇＥ症候群、抗リン脂質抗体症候群を含む他の自己免疫およびアレルギー性障害；
【００２７】
１２. 炎症性または免疫学的要素を伴う他の障害；後天性免疫不全症候群(ＡＩＤＳ)、ハンセン病、セザリー症候群、および新生物随伴症候群を含む；
【００２８】
１３. 心血管：冠血管および末梢循環に影響するアテローム性動脈硬化症；心膜炎；心筋炎、心筋サルコイドを含む炎症性および自己免疫心筋症；虚血再灌流傷害；感染性(例えば梅毒性)を含む心内膜炎、弁膜炎、および大動脈炎；脈管炎；深部静脈血栓症および静脈瘤の合併症を含む静脈炎および血栓症を含む近位および末梢静脈の障害；
【００２９】
１４. 腫瘍学：前立腺、乳房、肺、卵巣、膵臓、腸および結腸、胃、皮膚および脳腫瘍および骨髄(白血病を含む)およびリンパ増殖性系に影響する悪性腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含む一般的癌の処置；転移疾患および腫瘍再発、および新生物随伴症候群の予防および処置を含む；および
【００３０】
１５. 胃腸管：セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、顕微鏡的大腸炎、判定不能大腸炎、過敏性腸障害、過敏性腸症候群、非炎症性下痢、腸から離れた部位に発現する食物関連アレルギー、例えば、偏頭痛、鼻炎および湿疹。
【００３１】
それ故、本発明は、治療において使用するための前記で定義の塩を提供する。
【００３２】
さらなる局面において、本発明は、治療において使用するための医薬の製造における、前記で定義の塩の使用を提供する。
【００３３】
さらなる局面において、本発明は、成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、肺気腫、気管支炎、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、喘息または鼻炎の処置において使用するための前記で定義の塩の使用を提供する。
【００３４】
本明細書の文脈で、用語“治療”は、それと異なる具体的指示がない限り、“予防”を含む。用語“治療的”および“治療的に”はこれに従い解釈すべきである。
【００３５】
予防は、当該疾患または状態の前のエピソードに罹患している、または、他の理由でリスクが増加していると考えられるヒトの処置に特に適切であると期待される。特定の疾患または状態を発症するリスクのあるヒトは、一般に、該疾患または状態の家族歴を有する者、または遺伝子試験またはスクリーニングで、該疾患または状態の発症に特に感受性であると同定された者を含む。
【００３６】
本発明は、なおさらに、炎症性疾患または状態(可逆性閉塞性気道疾患または状態を含む)の処置またはリスクを軽減する方法であって、それを必要とする患者に治療的有効量の前記で定義の塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００３７】
特に、本発明の化合物は、成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、肺気腫、気管支炎、気管支拡張症、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、喘息および鼻炎の処置に使用し得る。
【００３８】
上記治療的使用のために、投与する投与量は、当然、用いる化合物、投与方式、望む処置および適応される障害により変わる。例えば、本発明の化合物の１日投与量は、吸入であれば、０.０５マイクログラム／体重キログラム(μg／kg)〜１００マイクログラム／体重キログラム(μg／kg)の範囲であり得る。あるいは、本化合物を経口で投与するならば、本発明の化合物の１日投与量は０.０１マイクログラム／体重キログラム(μg／kg)〜１００ミリグラム／体重キログラム(mg／kg)の範囲であり得る。
【００３９】
本発明の塩は、それ自体で使用してよいが、一般に、本塩(活性成分)が薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合されている医薬組成物の形で投与する。適当な医薬製剤の選択および製造の慣用法は、例えば、“Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988に記載されている。
【００４０】
投与方式によって、本医薬組成物は、例えば０.０５〜９９％ｗ(重量パーセント)、例えば０.０５〜８０％ｗ、例えば０.１０〜７０％ｗ、および例えば０.１０〜５０％ｗの活性成分を含み、全ての重量パーセントは全組成物に基づく。
【００４１】
本発明はまた、前記で定義の塩を薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物も提供する。
【００４２】
本発明は、さらに、前記で定義の塩と薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することを含む、本発明の医薬組成物の製造方法を提供する。
【００４３】
本医薬組成物は、局所的に(例えば皮膚または肺および／または気道)に、例えば、クリーム、溶液、懸濁液、ヘプタフルオロアルカン(ＨＦＡ)エアロゾルまたは乾燥粉末製剤の形で、例えば、Turbuhaler(登録商標)として既知の吸入器中の製剤で；または全身的に、例えば錠剤、カプセル剤、シロップ剤、散剤または顆粒剤の形の経口投与により；または液剤または懸濁剤の形の非経腸投与により；または皮下投与により；または坐薬の形の直腸投与により；または経皮的に投与し得る。
【００４４】
本発明の塩の乾燥粉末製剤および加圧ＨＦＡエアロゾルは、経口によりまたは経鼻吸入により投与してよい。吸入のために、本化合物は望ましくは微粉化する。微粉化した化合物は、例えば、１０μm未満の質量中央粒子径を有し、噴射剤混合物中に、分散剤、例えばＣ８−Ｃ２０脂肪酸またはその塩(例えば、オレイン酸)、胆汁酸塩、リン脂質、アルキルサッカライド、過フッ素化またはポリエトキシル化界面活性剤、または他の薬学的に許容される分散剤を用いて懸濁し得る。
【００４５】
本発明の塩はまた乾燥粉末吸入器の手段により投与してもよい。本吸入器は単回または多回吸入器であってよく、呼吸作動型乾燥粉末吸入器であってよい。
【００４６】
一つの可能性は、微粉化した本発明の塩と担体物質、例えば、モノ−、ジ−またはポリサッカライド、糖アルコール、または他のポリオールとの混合である。適当な担体は、糖類、例えば、ラクトース、グルコース、ラフィノース、メレジトース、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、スクロース、マンニトール；およびデンプンである。あるいは、微粉化した化合物を他の物質でコートしてよい。本粉末混合物または硬ゼラチンカプセルに分配してもよく、各々所望の量の本活性化合物を含む。
【００４７】
他の可能性は、微粉化した粉末の、吸入過程中に破壊する球体への加工である。この球形化粉末を、多回吸入器、例えば、Turbuhaler(登録商標)として既知の吸入器の薬剤貯蔵部に充填してよく、ここで、投与ユニットが所望の投与量を計測し、次いでそれが患者に投与される。このシステムで、活性成分は、担体物質を伴いまたは伴わず、患者に送達される。
【００４８】
経口投与のために、本発明の塩は、アジュバントまたは担体、例えば、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール；デンプン、例えば、ポテトデンプン、コーンデンプンまたはアミロペクチン；セルロース誘導体；結合剤、例えば、ゼラチンまたはポリビニルピロリドン；および／または滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、蝋、パラフィンなどと混合し、次いで錠剤に圧縮してよい。コーティング錠が必要であれば、上記の通りに製造したコアを、例えば、アラビアゴム、ゼラチン、タルクおよび二酸化チタンを含み得る濃縮糖溶液でコートしてよい。あるいは、錠剤を、易揮発性有機溶媒に溶解した適当なポリマーでコートしてよい。
【００４９】
軟ゼラチンカプセルの製造のために、本発明の塩を、例えば、植物油またはポリエチレングリコールと混合し得る。硬ゼラチンカプセルは、錠剤のための上記賦形剤のいずれかを使用した、本化合物の顆粒を含み得る。本発明の化合物の液体または半固体製剤も硬ゼラチンカプセルに充填し得る。
【００５０】
経口適用用液体製剤は、シロップ剤または懸濁剤、例えば、本発明の塩を含み、残りは糖およびエタノール、水、グリセロールおよびプロピレングリコールの混合物である液剤の形であり得る。所望により、このような液体製剤は、着色剤、香味剤、サッカリンおよび／または濃化剤としてカルボキシメチルセルロースをまたは当業者に既知の他の賦形剤を含み得る。
【００５１】
本発明の塩は、上記状態の処置に使用される他の化合物と組み合わせて投与してもよい。
【００５２】
それ故、本発明は、さらに、本発明の塩または本発明の塩を含む医薬組成物もしくは製剤を、記載の状態の１種以上の処置のための他の１種または多種の治療剤と同時にまたは連続的に、または組み合わせ製剤として投与する組み合わせ治療にも関する。
【００５３】
特に、リウマチ性関節炎、骨関節症、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、乾癬、および炎症性腸疾患のような(しかしこれに限定されない)炎症性疾患の処置のために、本発明の塩を次の薬剤の１種と組み合わせ得る：局所的に適用されるものであれ全身的に適用されるものであれ非選択的シクロオキシゲナーゼＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２阻害剤を含む非ステロイド性抗炎症剤(以後ＮＳＡＩＤ)(例えばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸類、例えばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン、フェナメート類、例えばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アザプロパゾン、ピラゾロン類、例えばフェニルブタゾン、サリチレート類、例えばアスピリン)；選択的ＣＯＸ−２阻害剤(例えばメロキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ(lumarocoxib)、パレコキシブおよびエトリコキシブ)；シクロオキシゲナーゼ阻害性一酸化窒素ドナー(ＣＩＮＯＤ)；グルココルチコステロイド(局所、経口、筋肉内、静脈内、または関節内経路のいずれで投与されるものであれ)；メトトレキサート；レフルノミド；ヒドロキシクロロキン；ｄ−ペニシラミン；オーラノフィンまたは他の非経腸または経口金製剤；鎮痛剤；ジアセレイン；関節内治療剤、例えばヒアルロン酸誘導体；および栄養補助食品、例えばグルコサミン。
【００５４】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、アルファ−、ベータ−、およびガンマ−インターフェロン類；インシュリン様増殖因子Ｉ型(ＩＧＦ−１)；インターロイキン(ＩＬ)１〜１７を含む、ＩＬ、およびインターロイキンアンタゴニストまたは阻害剤、例えばアナキンラ；腫瘍壊死因子アルファ(ＴＮＦ−α)阻害剤、例えば抗ＴＮＦモノクローナル抗体(例えばインフリキシマブ；アダリムマブ、およびＣＤＰ−８７０)および免疫グロブリン分子(例えばエタネルセプト)を含むＴＮＦ受容体アンタゴニスト、および低分子量剤、例えばペントキシフィリンを含む、サイトカインまたはサイトカイン機能のアゴニストもしくはアンタゴニスト(ＳＯＣＳ系のモジュレーターのようなサイトカインシグナル伝達経路に作用する薬剤を含む)の組み合わせに関する。
【００５５】
加えて、本発明は、本発明の塩と、Ｂリンパ球(例えばＣＤ２０(リツキシマブ)、ＭＲＡ−ａＩＬｌ６ＲおよびＴリンパ球、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＨｕＭａｘ  Ｉｌ−１５)を標的とするモノクローナル抗体の組み合わせに関する。
【００５６】
本発は、なおさらに、本発明の塩と、ケモカイン受容体機能のモジュレーター、例えばＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０およびＣＣＲ１１(Ｃ−Ｃファミリーについて)；ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ５(Ｃ−Ｘ−Ｃファミリーについて)およびＣ−Ｘ３−ＣファミリーについてＣＸ３ＣＲ１のアンタゴニストの組み合わせに関する。
【００５７】
本発明は、さらに、本発明の塩と、マトリックスメタロプロテアーゼ(ＭＭＰ)、すなわち、ストロメライシン、コラゲナーゼ、およびゼラチナーゼ、ならびにアグリカナーゼ；ドキシサイクリンのような薬剤を含む、特にコラゲナーゼ−１(ＭＭＰ−１)、コラゲナーゼ−２(ＭＭＰ−８)、コラゲナーゼ−３(ＭＭＰ−１３)、ストロメライシン−１(ＭＭＰ−３)、ストロメライシン−２(ＭＭＰ−１０)、およびストロメライシン−３(ＭＭＰ−１１)およびＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１２の阻害剤の組み合わせに関する。
【００５８】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、ロイコトリエン生合成阻害剤、５−リポキシゲナーゼ(５−ＬＯ)阻害剤または５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質(ＦＬＡＰ)アンタゴニスト、例えば；ジロートン；ＡＢＴ−７６１；フェンレウトン；テポキサリン；Ａｂｂｏｔｔ−７９１７５；Ａｂｂｏｔｔ−８５７６１；Ｎ−(５−置換)−チオフェン−２−アルキルスルホンアミド；２,６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノールヒドラゾン類；メトキシテトラヒドロピラン類、例えばＺｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８；化合物ＳＢ−２１０６６１；ピリジニル−置換２−シアノナフタレン化合物、例えばＬ−７３９,０１０；２−シアノキノリン化合物、例えばＬ−７４６,５３０；またはインドールまたはキノリン化合物、例えばＭＫ−５９１、ＭＫ−８８６、およびＢＡＹ  ｘ  １００５の組み合わせに関する。
【００５９】
本発明は、さらに、本発明の塩と、フェノチアジン−３−１ｓ、例えばＬ−６５１,３９２；アミジノ化合物、例えばＣＧＳ−２５０１９ｃ；ベンゾキサルアミン、例えばオンタゾラスト；ベンゼンカルボキシミドアミド、例えばＢＩＩＬ  ２８４／２６０；および化合物、例えばザフィルカスト、アブルカスト(ablukast)、モンテルカスト、プランルカスト、ベルルカスト(verlukast)(ＭＫ−６７９)、ＲＧ−１２５２５、Ｒｏ−２４５９１３、イラルカスト(ＣＧＰ  ４５７１５Ａ)、およびＢＡＹ  ｘ  ７１９５から成る群から選択される、ロイコトリエン(ＬＴ)Ｂ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、およびＬＴＥ４の受容体アンタゴニストの組み合わせに関する。
【００６０】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、ホスホジエステラーゼ(ＰＤＥ)阻害剤、例えばテオフィリンおよびアミノフィリンを含むメチルキサンタニン；ＰＤＥ４阻害剤、アイソフォームＰＤＥ４Ｄ阻害剤、またはＰＤＥ５阻害剤を含む、選択的ＰＤＥアイソザイム阻害剤の組み合わせに関する。
【００６１】
本発明は、さらに、本発明の塩と、経口的、局所的または非経腸的に適用する；ヒスタミン１型受容体アンタゴニスト、例えばセチリジン、ロラタジン、デスロラタジン、フェキソフェナジン、アクリバスチン、テルフェナジン、アステミゾール、アゼラスチン、レボカバスチン、クロルフェニラミン、プロメタジン、シクリジン、またはミゾラスチンの組み合わせに関する。
【００６２】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、プロトンポンプ阻害剤(例えばオメプラゾール)または胃保護性ヒスタミン２型受容体アンタゴニストの組み合わせに関する。
【００６３】
本発明は、さらに、本発明の塩と、ヒスタミン４型受容体のアンタゴニストの組み合わせに関する。
【００６４】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、アルファ−１／アルファ−２アドレナリン受容体アゴニスト血管収縮剤交感神経刺激剤、例えばプロピルヘキセドリン、フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、エフェドリン、シュードエフェドリン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、塩酸キシロメタゾリン、塩酸トラマゾリンまたは塩酸エチルノルエピネフリンの組み合わせに関する。
【００６５】
本発明は、さらに、本発明の塩と、ムスカリン受容体(Ｍ１、Ｍ２、およびＭ３)アンタゴニストを含む抗コリン作動剤、例えばアトロピン、ヒヨスチン、グリコピロレート、臭化イプラトロピウム、臭化チオトロピウム、臭化オキシトロピウム、ピレンゼピンまたはテレンゼピンの組み合わせに関する。
【００６６】
本発明は、さらに、本発明の塩と、クロモン、例えばクロモグリク酸ナトリウムまたはネドクロミルナトリウムの組み合わせに関する。
【００６７】
本発は、なおさらに、本発明の塩とグルココルチコイド、例えばフルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸フルチカゾン、シクレソニドまたはフロ酸モメタゾンの組み合わせに関する。
【００６８】
本発明は、さらに、本発明の塩と、核ホルモン受容体を調節する薬剤、例えばＰＰＡＲの組み合わせに関する。
【００６９】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、免疫グロブリン(Ｉｇ)またはＩｇ製剤またはアンタゴニストまたはＩｇ機能を調節する抗体、例えば抗ＩｇＥ(例えばオマリズマブ)の組み合わせに関する。
【００７０】
本発明は、さらに、本発明の塩と、他の全身的または局所的に適用する抗炎症剤、例えばサリドマイドまたはその誘導体、レチノイド、ジトラノールまたはカルシポトリオールの組み合わせに関する。
【００７１】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、アミノサリチレートおよびスルファピリジン、例えばスルファサラジン、メサラジン、バルサラジド、およびオルサラジン；および免疫調節剤、例えばチオプリン類、およびコルチコステロイド、例えばブデソニドの組み合わせの組み合わせに関する。
【００７２】
本発明は、さらに、本発明の塩と、抗細菌剤、例えばペニシリン誘導体、テトラサイクリン、マクロライド、ベータ−ラクタム、フルオロキノロン、メトロニダゾール、吸入アミノグリコシド；アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、アマンタジン、リマンタジン、リバビリン、ザナミビル(zanamavir)およびオセルタミビル(oseltamavir)を含む抗ウイルス剤；プロテアーゼ阻害剤、例えばインジナビル、ネルフィナビル、リトナビル、およびサキナビル；ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えばジダノシン、ラミブジン、スタブジン、ザルシタビンまたはジドブジン；または非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えばネビラピンまたはエファビレンツの組み合わせに関する。
【００７３】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、心血管剤、例えばカルシウムチャネルブロッカー、ベータ−アドレナリン受容体ブロッカー、アンギオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)阻害剤、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニスト；脂質低下剤、例えばスタチンまたはフィブラート；血液細胞形態学のモジュレーター、例えばペントキシフィリン；血栓溶解、または抗凝血剤、例えば血小板凝集阻害剤の組み合わせに関する。
【００７４】
本発明は、さらに、本発明の塩と、ＣＮＳ剤、例えば抗鬱剤(例えばセルトラリン)、抗パーキンソン剤(例えばデプレニル、Ｌ−ドーパ、ロピニロール、プラミペキソール、ＭＡＯＢ阻害剤、例えばセレギリン(selegine)およびラサギリン、ｃｏｍＰ阻害剤、例えばタスマール、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニストまたは神経型一酸化窒素合成酵素阻害剤)、または抗アルツハイマー剤、例えばドネペジル、リバスチグミン、タクリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリンまたはメトリホナートの組み合わせに関する。
【００７５】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と、急性または慢性疼痛の処置剤、例えば中枢性にまたは末梢性に作用する鎮痛剤(例えばオピオイドまたはその誘導体)、カルバマゼピン、フェニトイン、バロプロ酸ナトリウム、アミトリプチリン(amitryptiline)または他の抗鬱剤、パラセタモール、または非ステロイド性抗炎症剤の組み合わせに関する。
【００７６】
本発明は、さらに、本発明の塩と、非経腸的または局所的に適用する(吸入を含む)局所麻酔剤、例えばリグノカインまたはその誘導体の組み合わせに関する。
【００７７】
本発明の塩はまた、ホルモン剤、例えばラロキシフェン、またはビホスホネート類、例えばアレンドロネートを含む、抗骨粗鬆症剤と組み合わせて使用してもよい。
【００７８】
本発明は、なおさらに、本発明の塩と：(ｉ)トリプターゼ阻害剤；(ii)血小板活性化因子(ＰＡＦ)アンタゴニスト；(iii)インターロイキン変換酵素(ＩＣＥ)阻害剤；(iv)ＩＭＰＤＨ阻害剤；(ｖ)ＶＬＡ−４アンタゴニストを含む接着分子阻害剤；(vi)カテプシン；(vii)キナーゼ阻害剤、例えばチロシンキナーゼの阻害剤(例えばＢｔｋ、Ｉｔｋ、Ｊａｋ３またはＭＡＰ、例えばゲフィチニブまたはメシル酸イマチニブ)、セリン／スレオニンキナーゼ(例えばＭＡＰキナーゼ、例えばｐ３８、ＪＮＫ、タンパク質キナーゼＡ、ＢまたはＣ、またはＩＫＫの阻害剤)、または細胞周期制御に関与するキナーゼの阻害剤(例えばサイクリン依存性キナーゼ)；(viii)グルコース−６リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤；(ix)キニン−Ｂ.sub1.−またはＢ.sub2.−受容体アンタゴニスト；(ｘ)抗痛風剤、例えばコルヒチン；(xi)キサンチンオキシダーゼ阻害剤、例えばアロプリノール；(xii)尿酸排泄促進剤、例えばプロベネシド、スルフィンピラゾンまたはベンズブロマロン；(xiii)成長ホルモン分泌促進物質；(xiv)トランスフォーミング増殖因子(ＴＧＦβ)；(xv)血小板由来増殖因子(ＰＤＧＦ)；(xvi)線維芽細胞増殖因子、例えば塩基性線維芽細胞増殖因子(ｂＦＧＦ)；(xvii)顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ−ＣＳＦ)；(xviii)カプサイシンクリーム；(xix)タキキニンＮＫ.sub1.またはＮＫ.sub3.受容体アンタゴニスト、例えばＮＫＰ−６０８Ｃ、ＳＢ−２３３４１２(タルネタント)またはＤ−４４１８；(xx)エラスターゼ阻害剤、例えばＵＴ−７７またはＺＤ−０８９２；(xxi)ＴＮＦ−アルファ変換酵素阻害剤(ＴＡＣＥ)；(xxii)誘発型一酸化窒素合成酵素(ｉＮＯＳ)阻害剤；(xxiii)ＴＨ２細胞上に発現する化学誘引物質受容体相同分子(例えばＣＲＴＨ２アンタゴニスト)；(xxiv)Ｐ３８阻害剤；(xxv)トール様受容体(ＴＬＲ)機能を調節する薬剤、(xxvi)プリン作動性受容体を調節する薬剤、例えばＰ２Ｘ７；(xxvii)転写因子活性化阻害剤、例えばＮＦｋＢ、ＡＰＩ、またはＳＴＡＴＳ；または(xxviii)グルココルチコイド受容体アゴニストの組み合わせに関する。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】化合物Ｂの多形Ａ二ＨＢｒ塩のＸＲＰＤ
【図２】化合物Ｂの二ＨＢｒ塩の多形ＢのＸＲＰＤ
【図３】化合物Ｂの二ＨＣｌ塩のタイプＡのＸＲＰＤ
【図４】化合物Ｂの二ＨＣｌ塩のタイプＢのＸＲＰＤ
【図５】化合物Ｂの二ＨＣｌ塩のタイプＣのＸＲＰＤ
【発明を実施するための形態】
【００８０】
一般的製造方法
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、Varian Inova 400 MHzまたはVarian Mercury-VX 300 MHz装置で記録した。クロロホルム−ｄ(δH 7.27 ppm)、ジメチルスルホキシド−ｄ６(δH 2.50 ppm)、アセトニトリル−ｄ３(δH 1.95 ppm)またはメタノール−ｄ４(δH 3.31 ppm)の中央ピークを内部標準として使用した。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル(０.０４０−０.０６３mm、Merck)を使用して行った。特記しない限り、出発物質は商業的に入手可能であった。全ての溶媒および市販試薬は研究室グレードであり、受領したまま使用した。
【００８１】
次の方法をＬＣ／ＭＳ分析に使用した：
装置Agilent 1100；カラムWaters Symmetry 2.1 x 30mm；質量ＡＰＣＩ；流速０.７ml／分；波長２５４nm；溶媒Ａ：水＋０.１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；勾配１５−９５％／Ｂ  ８分間、９５％Ｂ  １分間。
分析的クロマトグラフィーは、３.５μm粒子径のSymmetry C18−カラム、2.1 x 30mmで、移動相としてアセトニトリル／水／０.１％トリフルオロ酢酸を、８分間にわたり、０.７ml／分の流速で５％〜９５％アセトニトリルの勾配で用いて行った。
【００８２】
装置詳細：
。 ＸＲＰＤ(Ｘ線粉末回折)  −  反射モードおよびθ−θコンフィギュレーションで、０.０３°インクリメントあたり１００秒間暴露で、２°〜４０°  ２θの走査範囲のPhilips X-Pert MPD機。Ｘ線を、４５kVおよび４０mAで走査した銅チューブにより作製した。銅Ｘ線波長は１.５４０５Å(Ｋα１)および１.５４４４Å(Ｋα２)であった。データを、〜２mgの本化合物を載せたゼロ背景ホルダー上に回収した。ホルダーは、シリコンの単結晶から成り、それを、２°〜４０°  ２θ範囲の非回折平面に沿って切断し、次いで光学的平面仕上げに研磨した。この表面へのＸ線投射は、Bragg消光により打ち消された。
。ＸＲＰＤデータを下記の表に示し、反射角(°２θ)およびＤ間隙(Å)データ(括弧書き)を提供する。
【００８３】
。 ＤＳＣ(示差走査熱量測定)サーモグラムは、アルミニウム・パンおよび穿孔した蓋と共に、TA Q1000示差走査熱量計を使用して測定した。サンプル重量は１〜５mgの間で変化した。工程を窒素ガス流下(５０ml／分)、１分あたり１０℃上昇する一定温度上昇率で２５〜３００℃の試験温度で行った。
【００８４】
。 ＴＧＡ(熱重量分析)サーモグラムを、白金パンと共にTA Q500機を使用して測定した。サンプル重量は２〜１５mg。の範囲で変わった。工程を窒素ガス流下(６０ml／分)、１分あたり１０℃上昇する一定温度上昇率で２５〜３００℃の試験温度で行った。
【００８５】
。 １３Ｃ  ＣＰＭＡＳ(交差分極マジック角回転)固体状態ＮＭＲスペクトルを、Bruker Avance 400WB機を使用して得た。サンプルを４mmプローブを使用し、次のパラメータ下に分析した：傾斜交差分極、tppm15合成パルス、１Ｈデカップリング、２msの接触時間、および５kHzのスピン速度。
【００８６】
。 ラマンスペクトルを、Jobin Yvon Horiba Lab Ram HRラマン顕微鏡を使用して記録した。固体サンプル〜０.１mgをスライドグラスに載せ、レーザービームを、バルク・サンプルの代表である一粒子上に焦点を合わせた。スペクトルを、２００〜２０００cm−１の範囲にわたる２−４分間の獲得として記録した。
【００８７】
。 ＩＲスペクトを、Specac ATRアタッチメントを備えたElmer Spectrum GX FT-IR System機を使用して記録した。固体サンプル〜１mgをＡＴＲのダイヤモンド表面に載せ、７０cN-Mの圧力をかけた。スペクトルを、４０００〜６２５cm−１の範囲にわたる６４スキャンで、１cm−１の間隔および４cm−１の解像度で記録した。
【００８８】
。 ＧＶＳプロファイルを、Dynamic Vapour Sorption DVS-1装置を使用して測定した。固体サンプル約４−１０mgをガラス容器に入れ、サンプル重量をデュアルサイクル工程法の間記録した(１０％ＲＨ段階の４０〜９０〜０〜９０〜０％相対湿度(ＲＨ))。
【００８９】
。 イオン−化学量論  −  を、ＫＯＨ勾配およびDionex AS11カラムを、電気化学的検出およびDionex IC3000装置と共に使用して測定した。この方法は、化合物Ｂの二臭化水素酸塩のみに使用した。
【００９０】
。 キラルＨＰＬＣを、Agilent 1100 LCで、Chiralcel OJ-H 250 x 4.6mmカラムを使用して、１ml／分の流速で行った。溶媒Ａは、０.１％ジエチルアミン含有イソヘキサンおよび溶媒Ｂは０.１％ジエチルアミン含有エタノールであった。本方法は、定組成的に(isocratically)、４０℃の温度で２０％Ｂで行い、所用時間は３１分間であった。検出は、２２０nmの波長でのＵＶ吸光度によった。
【００９１】
実施例で使用する略語または用語は、以下の意味を有する：
【表１】
2010520189.tif 000002
【実施例】
【００９２】
製造１
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン二臭化水素酸塩
【化１】
2010520189.tif 000003
ａ) １−クロロ−２−[(Ｅ)−２−ニトロビニル]ベンゼン
【化２】
2010520189.tif 000004
２−クロロベンズアルデヒド(販売Aldrich)(１０.０ｇ)を、ニトロメタン(２６.０５ｇ)および酢酸アンモニウム(２１.９２ｇ)と酢酸(２００mL)中で混合し、混合物を４０分間加熱還流した。混合物を室温に冷却し、酢酸の大部分を真空で除去した。残渣をジクロロメタンに溶解し、水、次いで炭酸カリウム溶液(ｘ２)、次いで再び水で洗浄した。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の物質をオレンジ色油状物として得た(１２.８３ｇ)。
1H NMR δ( CDCl3)8.41(d, 1H), 7.62-7.57(m, 2H), 7.52-7.48(m, 1H), 7.43(dt, 1H), 7.34(ddd, 1H)
【００９３】
ｂ) ２−(２−クロロフェニル)エタナミン
【化３】
2010520189.tif 000005
アルミニウムハイドライドを、乾燥ＴＨＦ(６０mL)中の硫酸(８.４０mL)の溶液の、撹拌しているＴＨＦ中１.０Ｍ  リチウムアルミニウムハイドライド(３１４mL)への、０−１０℃で、窒素雰囲気下の滴下により製造した。５℃で３０分間撹拌後、乾燥ＴＨＦ(１６０mL)中の１−クロロ−２−[(Ｅ)−２−ニトロビニル]ベンゼン(１２.８３ｇ)の溶液を、内部温度を０℃〜１０℃に維持しながら滴下した。添加が完了したら、反応物を５分間加熱還流した。混合物を室温に冷却し、次いで０℃に冷却し、イソプロパノール(２２mL)を、内部温度を２０℃以下に維持しながら注意深く滴下した。２Ｍ  水酸化ナトリウム(３５mL)を、内部温度を２０℃以下に維持しながら注意深く滴下した。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いでセライトの層を通して濾過し、次いでそれをＴＨＦ(ｘ３)で洗浄した。濾液を蒸発乾固した。残渣をシリカカラムクロマトグラフィーを使用して、物質を充填するために酢酸エチルを使用し、次いで酢酸エチル中１０％トリエチルアミン、続いて４５％エタノール：４５％酢酸エチル中１０％トリエチルアミンを溶離剤として使用して、所望の物質を得た(４.６６ｇ)。
1H NMR δ( CDCl3)7.36(dd, 1H), 7.25-7.13(m, 3H), 2.98(dt, 2H), 2.91-2.87(m, 2H)
【００９４】
ｃ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート
【化４】
2010520189.tif 000006
撹拌している乾燥ＴＨＦ(３００mL)中の２−(２−クロロフェニル)エタナミン(２５.５７ｇ)およびトリエチルアミン(２２.８７mL)の溶液に、乾燥ＴＨＦ(５０mL)中の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル(３５.８５ｇ)の溶液を、１０分間、環境温度で、窒素雰囲気下添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空で除去して、所望の物質を黄色油状物として得た(４２.０ｇ)。
1H NMR δ(CDCL3)7.35(d, 1H), 7.25-7.14(m, 3H), 4.57(s, 1H), 3.43-3.35(m, 2H), 2.95(t, 2H), 1.43(d, 9H)
【００９５】
ｄ) ｔｅｒｔ−ブチルアリル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート
【化５】
2010520189.tif 000007
乾燥ＤＭＦ(２００mL)中の、エーテル(ｘ３)で洗浄してある水素化ナトリウム(鉱油中６０％)(７.２３ｇ)の懸濁液に、乾燥ＤＭＦ(５０mL)中のｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート(４２.０ｇ)の溶液を、１５分間にわたり、３５℃で、窒素雰囲気下滴下した。添加が完了したら、混合物を５０℃で９０分間撹拌した。混合物を室温に冷却し、次いでアリルブロマイド(１５.６３mL)を、外部冷却を使用して温度を２５℃に維持しながらゆっくり添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで水で希釈し、酢酸エチル(ｘ３)で抽出した。有機物を合わせ、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣をシリカカラムクロマトグラフィーを使用して、イソヘキサン中１％酢酸エチルで充填し、次いでイソヘキサンと酢酸エチル(０％、１％、２％、％５)を溶離剤として使用して精製して、所望の物質を得た(２７.０ｇ)。それらは数種の混合フラクションであったため、それらを合わせ、上記の通りシリカカラムクロマトグラフィーを使用して再精製して、さらに４ｇの所望の物質を得た。両方から得られた生成物を合わせて、合成３１.０ｇ得た。
1H NMR δ( CDCl3)7.36-7.31(m, 1H), 7.21-7.12(m, 3H), 5.83-5.68(m, 1H), 5.17-5.05(m, 2H), 3.86-3.66(m, 2H), 3.41(t, 2H), 3.03-2.90(m, 2H), 1.43(s, 9H)
HPLC:95.90%@ 220nm[M+H-Boc]+=196.1(計算値=295.1339)(マルチモード＋)
【００９６】
ｅ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−ヒドロキシエチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化６】
2010520189.tif 000008
ｔｅｒｔ−ブチルアリル[２−(２−クロロフェニル)エチル]カルバメート(３１.０ｇ)を２−メルカプトエタノール(７.３７mL)、およびＡＩＢＮ(１.１５ｇ)と混合し、６５℃で４５分間撹拌した。混合物を冷却し、さらにメルカプトエタノール(１mL)およびＡＩＢＮ(２００mg)を添加した。混合物を次いで６５℃でさらに３０分間加熱した。物質をシリカカラムクロマトグラフィーで、物質をイソヘキサン中２０％酢酸エチル中に充填し、次いでイソヘキサン中２０％から５０％に変える酢酸エチルで溶出して精製して、所望の物質を得た(３１.９４ｇ)。
1H NMR δ( CDCl3)7.38-7.32(m, 1H), 7.22-7.13(m, 3H), 3.75-3.68(m, 2H), 3.41(t, 2H), 3.32-3.14(m, 2H), 3.03-2.91(m, 2H), 2.72(t, 2H), 2.54-2.36(m, 2H), 1.85-1.71(m, 2H), 1.42(s, 9H)
HPLC:92.31%@ 220nm[M+H-Boc]+=274.1(計算値=373.1478)(マルチモード＋)
【００９７】
ｆ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−オキソエチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化７】
2010520189.tif 000009
三酸化硫黄：ピリジン複合体(３０.５２ｇ)をＤＭＳＯ(２００mL)に溶解し、室温、窒素雰囲気下、１５分間撹拌した。ＤＣＭ(１００mL)、続いてＤＣＭ(１６０mL)中のｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−ヒドロキシエチル)チオ]プロピル}カルバメート(２３.９ｇ)およびヒューニッヒ塩基(６３.５mL)の溶液を添加し、これは一度に添加した(発熱)。得られた混合物を環境温度で１５分間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水、次いで１Ｎ  ＨＣｌ、次いで飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去した。物質を、シリカカラムクロマトグラフィーで、イソヘキサン中２０％酢酸エチルで溶出して精製して、所望の物質を得た(１２.４３ｇ)。
1H NMR δ( CDCl3)9.46(t, 1H), 7.36-7.32(m, 1H), 7.21-7.13(m, 3H), 3.40(t, 2H), 3.29-3.13(m, 4H), 3.02-2.90(m, 2H), 2.45-2.34(m, 2H), 1.82-1.69(m, 2H), 1.49-1.36(m, 9H)
【００９８】
ｇ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−{[(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化８】
2010520189.tif 000010
ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−オキソエチル)チオ]プロピル}カルバメート(１１.３２ｇをメタノール(２００mL)と酢酸(１.７４ml)の混合物に溶解した。７−[(１Ｒ)−２−アミノ−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン塩酸塩(８.０ｇ)を溶液に添加し、混合物を室温、窒素雰囲気下、１時間撹拌した。ナトリウムシアノボロハイドライド(１.９２ｇ)を添加し、混合物をさらに２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣を水で希釈し、０.８８０水性アンモニアで塩基性化し、酢酸エチル(ｘ３)で抽出した(抽出中、セライトを通して濾過)。有機物を合わせ、塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、褐色残渣を得た(１５.５ｇ)。物質を、シリカカラムクロマトグラフィーを使用して、ＤＣＭとＭｅＯＨ(２％、５％、１０％、２０％および３０％、全て１％０.８８０水性ＮＨ３)を溶離剤として使用して精製して、所望の物質を得た(６.６７ｇ)(３８％収率)。
1H NMR δ(DMSO)7.43-7.38(m, 1H), 7.30-7.21(m, 3H), 6.86(d, 1H), 6.69(d, 1H), 4.56(dd, 1H), 3.23-3.10(m, 2H), 2.88(t, 2H), 2.71-2.48(m, 8H), 2.46-2.39(m, 2H), 1.72-1.62(m, 2H), 1.40-1.22(m, 9H)
HPLC:97.46%@ 220nm[M+H]+=582.1(計算値=582.1863)(マルチモード+)
【００９９】
ｈ) ７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン二臭化水素酸塩
【化９】
2010520189.tif 000011
撹拌しているＤＣＭ(２０mL)中のパートｇ)からのＢｏｃ化合物(５.９３ｇ)の懸濁液に、トリフルオロ酢酸(２０mL)を０℃で添加し、得られた混合物を、窒素下で３０分間撹拌した。混合物をトルエンで希釈し、溶媒を除去し、次いでトルエンと共沸蒸留した(ｘ２)。残渣をアセトニトリルに溶解し、４８％水性ＨＢｒで酸性化し、真空濃縮した(乾固のためではない)。混合物をさらにアセトニトリルで希釈し、沈殿した固体を濾過により集め、アセトニトリルで洗浄し、真空下で乾燥させて、６.３５ｇを得た。３.８％不純物が存在したため(パートｅ)からの不純物)、本物質をアセトニトリル：水の１：１混合物に再溶解し、分取ＨＰＬＣ(Sunfire 30x80mm C8カラム；ＮＨ４ＯＡｃ緩衝液；１０分間にわたりアセトニトリル５−５０％)を使用して精製した。得られた物質を、一夜、１０mbarのデシケーター中、ＫＯＨおよびＨ２ＳＯ４で乾燥させた。得られた二酢酸塩を水に溶解し、０.８８０水性アンモニアで塩基性化した。白色ガム状物が形成されたため、水性物を傾捨し、ガム状物を真空で乾燥させて、遊離塩基(４.１１ｇ)を得た。これを熱エタノールに溶解し、溶液を濾過し、次いで室温に冷却した。溶液を４８％水性ＨＢｒで酸性化し、静置して結晶化させた。白色固体を濾過により回収し、エタノールで洗浄し、真空で乾燥させて、３.８１ｇのクロップ１を得た。
1H NMR δ(DMSO)11.67(s, 1H), 10.15(s, 1H), 8.70(s, 4H), 7.50-7.30(m, 4H), 6.94(d, 1H), 6.78(d, 1H), 6.45(s, 1H), 4.96-4.90(m, 1H), 3.22-3.02(m, 10H), 2.86-2.76(m, 2H), 2.66(t, 2H), 1.91(quintet, 2H)
HPLC:99.63%@ 220nm[M+H]+=482(計算値=482.1339)(マルチモード+)
【表２】
2010520189.tif 000012
【０１００】
母液を蒸発乾固し、次いでアセトニトリルでトリチュレートした。固体を濾過により集めて、７１９mgのクロップ２を得た(合計４.５３ｇ)。
1H NMR δ(DMSO)11.67(s, 1H), 10.15(s, 1H), 8.80-8.60(m, 4H), 7.50-7.29(m, 4H), 6.94(d, 1H), 6.78(d, 1H), 6.45(s, 1H), 4.96-4.89(m, 1H), 3.22-3.00(m, 10H), 2.85-2.76(m, 2H), 2.66(t, 2H), 1.90(quintet, 2H)
HPLC:99.20%@ 220nm[M+H]+=482(計算値=482.1339)(マルチモード+)
【表３】
2010520189.tif 000013
エナンチオマー純度：９７.７８％
【０１０１】
クロップ１をＸＲＰＤにより分析し、部分的に結晶の多形Ａであることが判明した。乾燥エタノール(２０ml)中、８００mgのクロップ１の９日間のスラリー化により、６７０mgの非常に結晶性の固体を得て、ＸＰＲＤで多形Ａと同定された。
HPLC:99.04%@ 220nm[M+H]+=482.1(計算値=482.1339)(マルチモード+)
エナンチオマー純度：９８.６１％
【０１０２】
【表４】
2010520189.tif 000014
図１. 化合物Ｂの多形Ａ二ＨＢｒ塩のＸＲＰＤ
【０１０３】
次の実施例は本発明を説明する。
【０１０４】
実施例１
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン二臭化水素酸塩  −  多形Ｂ
ａ) Ｎ−[２−(２−クロロフェニル)エチル]アクリルアミド
【化１０】
2010520189.tif 000015
２−(２−クロロフェニル)エタナミン(販売Aldrich)(１当量、４９１ｇ、３.１６mol)をジクロロメタン(２５００ml)に溶解した。溶液を０℃に冷却し、ヒューニッヒ塩基(１当量、５２２ml、３.１６molを添加した。塩化アクリロイル(１当量、２５７ml、３.１６mol)を、２時間の添加中、０℃〜５℃に温度を維持しながら滴下した。反応を環境温度に温め、一夜撹拌した。混合物をジクロロメタン(１５００ml)で希釈し、２Ｍ  ＨＣｌ(２×１０００ml)、次いで水(１×１０００ml)、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の物質を白色、蝋状固体として得た(６４６ｇ)(９７％収率)。
1H NMR δ(CDCl3)3.01(t, J=7.1 Hz, 2H), 3.61(q, J=6.8 Hz, 2H), 5.62(d, J=10.6 Hz, 2H), 6.08(dd, J=17.6, 10.6 Hz, 1H), 6.25(d, J=17.6 Hz, 1H), 7.18-7.24(m, 3H), 7.34-7.38(m, 1H)
HPLC:94.02%@ 220nm[M+H]+=210.1(計算値=210.0685)(マルチモード+)
【０１０５】
ｂ) [(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−３−オキソプロピル)チオ]酢酸
【化１１】
2010520189.tif 000016
メルカプト酢酸エチル(１当量、１３８ml、１.２５mol)をエタノール(７５０ml)に溶解し、ナトリウムエトキシド(エタノール中２１重量％)(１当量、４０５ml、１.２５mol)を内部温度をずっと３０℃以下を維持しながら添加した。反応混合物を１時間撹拌し、その後エタノール(２２５０ml)中のＮ−[２−(２−クロロフェニル)エチル]アクリルアミド(１当量、２６１.８ｇ、１.２５mol)を滴下した(温度上昇は見られなかった)。混合物を１８時間撹拌した。さらにメルカプト酢酸エチル(０.１５当量)およびナトリウムエトキシド(０.１５当量)を添加し、混合物をさらに２４時間撹拌した。さらにナトリウムエトキシド(２０ml)を添加し、続いて水(１０００ml)を、温度を２０℃以下に維持しながらゆっくり添加した。混合物を次いで２４時間、環境温度で撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、酸への完全な変換を示した。混合物を〜１リットルの容積まで真空濃縮し、さらに１リットルの水を混合物に添加した。混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄した。水性層を濃ＨＣｌでｐＨ１まで酸性化し、次いでｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(１×２リットル、１×.５リットル)で抽出した。有機物を合わせ、水(１×１リットル)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の物質を黄色油状物として得た(３５７.９１ｇ)(９５％収率)。
1H NMR δ(CDCl3)2.51(t, J=7.6 Hz, 2H), 2.93(t, J=7.2 Hz, 2H), 2.97(t, J=7.2 Hz, 2H), 3.26(s, 2H), 3.55(q, J=6.4 Hz, 2H), 6.12(s, 1H), 7.15-7.25(m, 3H), 7.33-7.36(m, 1H)
HPLC:86.02%@ 220nm[M+H]+=302.1(計算値=302.0617)(マルチモード+)
【０１０６】
ｃ) ２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エタノール
【化１２】
2010520189.tif 000017
[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}−３−オキソプロピル)チオ]酢酸(１０７.７ｇ、３５７mmol)をＴＨＦ(１リットル)に溶解し、ＴＨＦ中１Ｍ  ボラン溶液(販売Aldrich)(１.５リットル)を〜４時間滴下した。内部温度は、添加中３０℃±５℃を維持した。反応物を次いで６５℃(内部温度)に一夜、撹拌しながら加熱した。メタノール(５００ml)、続いて２Ｍ  ＨＣｌ(５００ml)を滴下し、反応物を４時間穏やかに還流した。反応物を冷却し、〜１リットルの容積まで真空濃縮し、および１リットルの水を混合物に添加した。この混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(２×５００ml)で洗浄した。水性層を固体水酸化ナトリウムで〜ｐＨ９に塩基性化し、次いでｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(３×５００ml)で抽出した。有機物を合わせ、水(１×５００ml)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の物質(８５.３ｇ)(８７％収率)を得た。
1H NMR δ(CDCl3)1.73-1.82(quintet, 2H), 1.96(s, 1H), 2.63(t, J=7.2 Hz, 2H), 2.72(t, J=5.8 Hz, 2H), 2.78(t, J=6.8 Hz, 2H), 2.83-2.97(m, 4H), 3.74(t, J=5.9 Hz, 2H), 7.12-7.25(m, 3H), 7.33-7.36(m, 1H)
HPLC:89.70%@ 220nm[M+H]+=274.1(計算値=274.1032)(マルチモード+)
【０１０７】
ｄ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−ヒドロキシエチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化１３】
2010520189.tif 000018
２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エタノール(１当量、８５.０ｇ、３１２mmol)をジクロロメタン(６００ml)に溶解し、氷浴で冷却した。ヒューニッヒ塩基(１当量、５１.５ml、３１２mmol)を添加し、続いてジクロロメタン(２５０ml)中の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル(１当量、６８.１ｇ、３１２mmol)を添加し、それは内部温度を〜５℃に維持しながら〜２時間にわたり滴下した。冷却浴を除き、反応物を一夜撹拌し、環境温度に温めた。ジクロロメタン(５００ml)を添加し、反応混合物を水(２×５００ml)、２Ｍ  ＨＣｌ(２×５００ml)、次いで再び水(２×５００ml)で洗浄し、その後無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の物質を、薄黄色油状物として得た(１１６ｇ)(１００％収率)。
1H NMR δ(CDCl3)1.42(s, 9H), 1.74-1.84(m, 2H), 2.46-2.53(m, 2H), 2.72(t, J=6.7 Hz, 2H), 2.92-3.00(m, 2H), 3.15-3.32(m, 2H), 3.41(t, J=7.3 Hz, 2H), 3.71(q, J=6.0 Hz, 2H), 7.15-7.21(m, 3H), 7.33-7.37(m, 1H)
【０１０８】
ｅ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−オキソエチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化１４】
2010520189.tif 000019
ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−ヒドロキシエチル)チオ]プロピル}カルバメート(１当量、２２８ｇ、０.６１mol)をＤＭＳＯ(１.５リットル)に溶解し、トリエチルアミン(１０当量、８５０ml、６.１mol)で処理した。混合物を激しく撹拌し、ＤＭＳＯ(１.５リットル)中の三酸化硫黄：ピリジン複合体(３当量、２９１ｇ、１.８３mol)の溶液を、内部温度が２５℃を超えないような速度で添加した(約４０分間)。反応物を氷／濃ＨＣｌ(〜４リットル、２Ｍ)混合物に、３０℃以下の温度を維持するような速度で添加した。この混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル(２×１.５リットル、１×１.２リットル)で抽出した。有機抽出物を合わせ、水(３×１.２５リットル)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を二等分し、それぞれシリカの１kgパッドを通し、イソヘキサン：酢酸エチル(４：１)で溶出して、所望の物質を得た(１３０ｇ)(５７％収率)。
1H NMR δ(DMSO)9.40(t, J=3.5 Hz, 1H), 7.42-7.40(m, 1H), 7.28-7.24(m, 3H), 3.39-3.33(m, 2H), 3.21-3.15(m, 2H), 2.91-2.86(m, 2H), 2.42-2.33(m, 2H), 1.73-1.62(m, 2H), 1.35-1.18(m, 11H)。
【０１０９】
ｆ) ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−{[(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)チオ]プロピル}カルバメート
【化１５】
2010520189.tif 000020
撹拌しているＤＣＭ(１２００ml)中の７−[(１Ｒ)−２−アミノ−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンアセテート(１当量、９２.１ｇ、０.２９７mol)の懸濁液に、トリエチルアミン(５.７当量、２３７ml、１.７mol)を環境温度で添加した。クロロトリメチルシラン(４.４当量、１４１ｇ、１６４ml、１.３mol)を２０分間にわたり少しずつ添加した−  最初の２０mlは４０℃への発熱をもたらしたため、氷／水浴を使用して、２５℃の温度を維持した。混合物を４時間、室温で撹拌した。無水硫酸マグネシウム(９８ｇ)を反応混合物に一度に添加し、それを１５分間撹拌し、その後ＤＣＭ(８００ml)中のｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−オキソエチル)チオ]プロピル}カルバメート(１.１当量、１２０ｇ、０.３２３mol)の溶液を９０分間にわたり滴下した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(１.２当量、７５ｇ、０.３５mol)を、温度を２６℃に維持しながら一度に添加した。混合物を１６時間、環境温度で撹拌した。メタノール(３５０ml)、続いて酢酸(７０ml)を少しずつ添加し、混合物を２時間、室温で撹拌した。溶媒を真空で除去し、酢酸をトルエン(６００ml)共沸蒸留の手段により除去した。残渣を水(１０００ml)および酢酸エチル(４００ml)に分配し、層を分離し、水性層をさらに酢酸エチル(２×２００ml)で抽出した。有機物を合わせ、水(４００ml)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、暗色油状物(９３ｇ)を得た。イソヘキサン(２００ml)を添加し、得られたタールをスパーテルで処理した。イソヘキサンをタールから傾捨し、この工程をさらに２回繰り返した。残渣を２バッチに分け、シリカカラムクロマトグラフィー(大Biotage 75)を使用し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ(２.５カラム容積)、ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ(５カラム容積)、次いでＤＣＭ中１６％ＭｅＯＨ(２.５カラム容積)で溶出して精製して、所望の物質を得た(８６.９ｇ)(４６％収率)。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 1.27-1.36(m, 9H), 1.64-1.74(m, 2H), 2.44-2.49(m, 2H), 2.75-2.85(m, 2H), 2.86-3.02(m, 4H), 3.14-3.23(m, 2H), 3.32-3.41(m, 4H), 4.82(t, J=6.1 Hz, 1H), 6.76(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.90(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.27(s, 3H), 7.41(d, J=7.2 Hz, 1H)
HPLC:92.25%@ 220nm[M+H]+=582(計算値=582.1863)(マルチモード+)
【０１１０】
ｇ) ７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン二臭化水素酸塩多形Ｂ
【化１６】
2010520189.tif 000021
ギ酸(５４ml)を水(６ml)と混合し、数時間熟成させた(aged)。ｔｅｒｔ−ブチル[２−(２−クロロフェニル)エチル]{３−[(２−{[(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチル]アミノ}エチル)チオ]プロピル}カルバメート(６.０ｇ、１０.３mmol)を水性ギ酸に溶解し、室温で１８時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をアセトニトリル：水(１０ml)４：１混合物に溶解し、濾過し、さらに４：１アセトニトリル：水(４ml)で溶解し、次いで、30×100 Sunfireカラムでの逆相ＨＰＬＣで、ランあたり２ml(５００mg)を注入し、０.２％水性ＴＦＡ中８分間にわたり５−５０％アセトニトリルで溶出し、１５mlフラクションを集めて、精製した。適当なフラクションを合わせ、蒸発させて、５.８８ｇを得た。この物質をアセトニトリル(１２０ml)に溶解し(懸濁液が形成されることもある)、アセトニトリル中４８％水性ＨＢｒの３０％溶液(２５ml)で酸性化した。得られた懸濁液を撹拌し、１５分間静置し、次いで固体を濾過により回収し、アセトニトリル(ｘ５)で洗浄し、乾燥させて、所望の物質(４.４５ｇ)(６７％収率)を非常に結晶性の固体として得て、ＸＰＲＤで多形Ｂと同定された。
HPLC:98.42%@ 220nm[M+H]+=482.1(計算値=482.1339)(マルチモード+)
【表５】
2010520189.tif 000022
エナンチオマー純度：９７.５８％
【０１１１】
【表６】
2010520189.tif 000023
図２. 化合物Ｂの二ＨＢｒ塩の多形ＢのＸＲＰＤ
【０１１２】
実施例２
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン塩酸塩  −  タイプＡ
塩酸の３７ｗｔ／ｗｔ％溶液(１７５.７７μL)を、メタノール(５mL)中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン(０.５ｇ)の懸濁液に添加した。混合物を超音波処理し、次いで室温で１６時間撹拌した。溶媒を次いでを真空で除去し、残渣を酢酸エチル(２０mL)で処理し、室温で１時間撹拌した。表題化合物を濾過により単離し、酢酸エチル(５mL)で洗浄し、真空乾燥させた(０.４５ｇ)。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 7.45(m, 2H), 7.32(m, 2H), 6.93(d, 1H), 6.79(d, 1H), 4.98(m, 1H), 3.16(m, 6H), 3.03(m, 4H), 2.84(t, 2H), 2.68(t, 2H), 1.96(m, 2H)。エナンチオマー純度:96.7%(R);3.3%(S)。
【０１１３】
【表７】
2010520189.tif 000024
図３. 化合物Ｂの二ＨＣｌ塩のタイプＡのＸＲＰＤ
【０１１４】
実施例３
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン塩酸塩−  タイプＢ
２０mgのタイプＡ物質(実施例２)をバイアルに入れ、それにエタノール(１ml)を添加した。混合物を室温で、１週間、蓋をしたバイアルで撹拌し続けた。得られた懸濁液を次いで遠心分離し、固体を回収し、ドラフト中で一夜乾燥させた。
【０１１５】
【表８】
2010520189.tif 000025
図４. 化合物Ｂの二ＨＣｌ塩のタイプＢのＸＲＰＤ
【０１１６】
実施例４
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン塩酸塩−  タイプＣ
２０mgのタイプＡ  物質(実施例２)をバイアルに入れ、それに水(１ml)を添加した。混合物を室温で、１週間、蓋をしたバイアルで撹拌し続けた。得られた懸濁液を次いで遠心分離し、固体を回収し、ドラフト中で一夜乾燥させた。
【０１１７】
【表９】
2010520189.tif 000026
図５. 化合物Ｂの二ＨＣｌ塩のタイプＣのＸＲＰＤ
【０１１８】
実施例５
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン一キシナホ酸塩
１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸(３９４.３１mg)を、メタノール(５mL)中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン(０.５ｇ)の懸濁液に添加した。混合物を超音波処理し、次いで室温で１６時間撹拌した。溶媒を次いで真空で除去し、残渣を酢酸エチル(２０mL)で処理し、室温で１時間撹拌した。混合物を濾過したが、固体物質が単離できなかったため、該物質をフィルター上に集め、濾液をメタノールで再び合わせ、蒸発乾固した。残渣をジエチルエーテル(３０mL)中で２時間撹拌した。表題化合物を濾過により単離し、ジエチルエーテル(１０mL)で洗浄し、真空乾燥させて、非結晶性生成物(０.５３ｇ)を得た。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 8.20(d, 1H), 7.74(m, 2H), 7.48(m, 2H), 7.40(m, 2H), 7.33(m, 2H), 7.04(d, 1H), 6.93(d, 1H), 6.78(d, 1H), 4.95(m, 1H), 3.16 - 3.00(m, 10H), 2.83(m, 2H), 2.66(t, 2H), 1.93(m, 2H)。エナンチオマー純度:97.3%(R);2.7%(S). 
塩化学量論  −  １Ｈ  ＮＭＲにより一キシナホ酸塩と確認。
【０１１９】
実施例６
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン一フマル酸塩
フマル酸(１２０.３９mg)を、メタノール(５mL)中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン(０.５ｇ)の懸濁液に添加した。混合物を次いで室温で２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣を酢酸エチル(２０mL)に懸濁し、室温で４８時間撹拌した。表題化合物を濾過により単離し、酢酸エチル(５mL)で洗浄し、真空乾燥させて、非結晶性生成物(０.５９ｇ)を得た。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 7.43(m, 2H), 7.31(m, 2H), 6.91(d, 1H), 6.76(d, 1H), 6.55(s, 2H), 4.84(t, 1H), 3.07(s, 4H), 2.96(m, 6H), 2.74(t, 2H), 2.62(t, 2H), 1.90(quintet, 2H)。エナンチオマー純度：９７.２％(Ｒ)；２.８％(Ｓ)。
塩化学量論  −  １Ｈ  ＮＭＲにより一フマル酸塩と確認。
【０１２０】
実施例７
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン硫酸塩
濃硫酸(５１０.６８μL)を、メタノール(５mL)中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン(０.５ｇ)の懸濁液に添加した。混合物を超音波処理し、次いで室温で２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をジエチルエーテル(２０mL)に懸濁し、室温で１時間撹拌した。表題化合物を濾過により単離し、ジエチルエーテル(５mL)で洗浄し、真空乾燥させて、非結晶性生成物を得た。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 7.45(m, 2H), 7.32(m, 2H), 6.93(d, 1H), 6.77(d, 1H), 4.95(m, 1H), 3.50 - 3.00(m, プロトン数は決定できなかった), 2.83(m, 2H), 2.65(m, 2H), 1.92(m, 2H)。エナンチオマー純度:90.5%(R);9.5%(S)。
【０１２１】
実施例８
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンクエン酸塩
クエン酸(１９９.２７mg)を、メタノール(５mL)中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン(０.５ｇ)の懸濁液に添加した。混合物を超音波処理し、次いで室温で２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をジエチルエーテル(２０mL)に懸濁し、室温で１時間撹拌した。表題化合物を濾過により単離し、ジエチルエーテル(５mL)で洗浄し、真空乾燥させて、非結晶性生成物を得た。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 7.44(m, 2H), 7.33(m, 2H), 6.93(d, 1H), 6.79(d, 1H), 4.92(m, 1H), 3.32 - 3.01(m, プロトン数は決定できなかった), 2.79(m, 2H), 2.67 - 2.49(m, プロトン数は決定できなかった), 1.91(m, 2H)。エナンチオマー純度：９３.６％(Ｒ)；６.４％(Ｓ)。
【０１２２】
実施例９
７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オンリン酸塩
リン酸(１１９.５８mg)を、メタノール(５mL)中の７−[(１Ｒ)−２−({２−[(３−{[２−(２−クロロフェニル)エチル]アミノ}プロピル)チオ]エチル}−アミノ)−１−ヒドロキシエチル]−４−ヒドロキシ−１,３−ベンゾチアゾール−２(３Ｈ)−オン(０.５ｇ)の懸濁液に添加した。混合物を次いで室温で１時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をジエチルエーテル(２０mL)に懸濁し、室温で１６時間撹拌した。溶媒が蒸発していたため、残渣をさらにジエチルエーテル(５mL)で処理した。表題化合物を濾過により単離し、ジエチルエーテル(５mL)で洗浄し、真空乾燥させて、非結晶性生成物(０.４７ｇ)を得た。
1H NMR(300 MHz, DMSO)δ 7.44(m, 2H), 7.31(m, 2H), 6.92(d, 1H), 6.76(d, 1H), 4.93(t, 1H), 3.17 - 2.91(m, 10H), 2.88 - 2.56(m, 4H), 1.95(m, 2H)。エナンチオマー純度：９３.３％(Ｒ)；６.７％(Ｓ)。
【０１２３】
生物学的アッセイ
アドレナリンβ２仲介ｃＡＭＰ製造
細胞調製
Ｈ２９２細胞を、２２５cm２のflasksインキュベーターで３７℃で、５％ＣＯ２で、１０％(ｖ／ｖ)ＦＢＳ(ウシ胎児血清)および２mM  Ｌ−グルタミン含有ＲＰＭＩ培地中で増殖させた。
【０１２４】
実験方法
付着Ｈ２９２細胞を組織培養flasksから、AccutaseＴＭ細胞脱離溶液で１５分間処理することにより除去した。Flasksを１５分間、加湿インキュベーターで３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。脱離細胞をＲＰＭＩ培地(１０％(ｖ／ｖ)ＦＢＳおよび２mMのＬ−グルタミン含有)に０.０５×１０６細胞／mLで再懸濁した。１００μL中の５０００細胞を、組織培養処理９６ウェルプレートの各ウェルに添加し、細胞を一夜、加湿インキュベーターで３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。培養培地を除去し、細胞を２回１００μLアッセイ緩衝液で洗浄し、５０μLアッセイ緩衝液(１０mMのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７.４および５mMのグルコース含有ＨＢＳＳ溶液)で置き換えた。細胞を室温で２０分間休ませ、その後２５μLのロリプラム(２.４％(ｖ／ｖ)ジメチルスルホキシド含有アッセイ緩衝液に１.２mMで製造)を添加した。細胞を、ロリプラムと１０分間インキュベートし、その後試験化合物を添加し、細胞を６０分間、室温でインキュベートした。アッセイ中の最終ロリプラム濃度は３００μMであり、最終媒体濃度は１.６％(ｖ／ｖ)ジメチルスルホキシドであった。上清の除去により反応を停止し、１回１００μLアッセイ緩衝液で線樹脂、５０μL溶解緩衝液で置き換えた。細胞単層を−８０℃で３０分間(または一夜)凍結させた。
【０１２５】
AlphaScreenＴＭ  ｃＡＭＰ検出
ｃＡＭＰ(環状アデノシン一リン酸)の細胞溶解物中の濃度をAlphaScreenＴＭ方法を使用して測定した。凍結細胞プレートを、プレートシェーカーで２０分間融解し、次いで１０μLの細胞溶解物を９６ウェル白色プレートに移した。ビオチニル化ｃＡＭＰとプレインキュベートした、４０μLの混合したAlphaScreenＴＭ検出ビーズを各ウェルに添加し、プレートを室温で１０時間、暗所でインキュベートした。AlphaScreenＴＭシグナルを、製造社の推奨設定で、EnVision分光光度計(Perkin-Elmer Inc.)を使用して測定した。ｃＡＭＰ濃度を標準ｃＡＭＰ濃度を使用した同じ実験で決定した較正曲線を参照して決定した。アゴニストの濃度応答曲線を構築し、データをｐＥＣ５０および内因性活性両方を決定するために４パラメータロジスティック方程式に適合させた。内因性活性を、各実験でフォルモテロールについて決定された最大活性に対する分画として示した。
【０１２６】
選択性アッセイ
アドレナリンα１Ｄ
膜調製
膜を、組み換えヒトα１Ｄ受容体を発現するヒト胚腎臓２９３(ＨＥＫ２９３)細胞から調製した。これらをアッセイ緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、０.１％ゼラチン、ｐＨ７.４)で希釈して、最大および最小特異的結合の間に明らかなウィンドウをもたらす最終濃度を提供した。
【０１２７】
実験方法
アッセイをＵ字型９６ウェルポリプロピレンプレートで行った。１０μLの[３Ｈ]−プラゾシン(０.３nM最終濃度)および１０μLの試験化合物(最終濃度の１０倍)を各試験ウェルに添加した。各アッセイプレートについて、８複製を[３Ｈ]−プラゾシン結合について１０μLの媒体(アッセイ緩衝液中１０％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ；最大結合を規定)または１０μLのＢＭＹ７３７８(１０μMの最終濃度；非特異的結合を規定(ＮＳＢ))の存在下で得た。次いで膜を添加して１００μLの最終体積を達成した。プレートを２時間室温でインキュベートし、次いで１時間アッセイ緩衝液に予め浸したＰＥＩ被覆ＧＦ／Ｂフィルタープレートに、Tomtec細胞ハーベスターを使用して濾過した。２５０μLの洗浄緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、ｐＨ７.４)での５回の洗浄を４℃で行い、非結合放射活性を除去した。プレートを乾燥させ、次いで底面からPackardプレートシーラーを使用して密封し、MicroScint-O(５０μL)を各ウェルに添加した。プレートを密封し(TopSeal A)、フィルター結合放射活性を、３分間計数プロトコルを使用して、シンチレーションカウンター(TopCount, Packard BioScience)で測定した。
【０１２８】
総特異的結合(Ｂ０)を、平均最大結合から平均ＮＳＢを引くことにより決定した。ＮＳＢ値をまた全ての他のウェル由来の値から引いた。これらのデータはＢ０のパーセントとして示した。化合物濃度−効果曲線([３Ｈ]−プラゾシン結合の阻害)を、典型的に０.１nM〜１０μMの範囲の連続希釈を使用して測定した。データを化合物有効性を決定するための４パラメータロジスティック方程式に適合させ、それをｐＩＣ５０として示した([３Ｈ]−プラゾシン結合の５０％阻害を誘導する負の対数のモル濃度)。結果は下記表１に示す。
【０１２９】
アドレナリンβ１
膜調製
組み換えヒトアドレナリンベータ１受容体を含む膜をEuroscreenから得た。これらをアッセイ緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、０.１％ゼラチン、ｐＨ７.４)で希釈して、最大および最小特異的結合の間に明らかなウィンドウをもたらす最終濃度を提供した。
【０１３０】
実験方法
アッセイをＵ字型９６ウェルポリプロピレンプレートで行った。１０μLの[１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール(０.０３６nM最終濃度)および１０μLの試験化合物(最終濃度の１０倍)を各試験ウェルに添加した。各アッセイプレートについて、８複製を[１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール結合について１０μLの媒体(アッセイ緩衝液中１０％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ；最大結合を規定)または１０μLのプロプラノロール(１０μMの最終濃度；非特異的結合を規定(ＮＳＢ))の存在下で得た。次いで膜を添加して１００μLの最終体積を達成した。プレートを２時間室温でインキュベートし、次いで１時間アッセイ緩衝液に予め浸したＰＥＩ被覆ＧＦ／Ｂフィルタープレートに、Tomtec細胞ハーベスターを使用して濾過した。２５０μLの洗浄緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、ｐＨ７.４)での５回の洗浄を４℃で行い、非結合放射活性を除去した。プレートを乾燥させ、次いで底面からPackardプレートシーラーを使用して密封し、MicroScint-O(５０μL)を各ウェルに添加した。プレートを密封し(TopSeal A)、フィルター結合放射活性を、３分間計数プロトコルを使用して、シンチレーションカウンター(TopCount, Packard BioScience)で測定した。
【０１３１】
総特異的結合(Ｂ０)を、平均最大結合から平均ＮＳＢを引くことにより決定した。ＮＳＢ値をまた全ての他のウェル由来の値から引いた。これらのデータはＢ０のパーセントとして示した。化合物濃度−効果曲線([１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール結合の阻害)を、典型的に０.１nM〜１０μMの範囲の連続希釈を使用して測定した。データを化合物有効性を決定するための４パラメータロジスティック方程式に適合させ、それをｐＩＣ５０として示した([１２５Ｉ]−ヨードシアノピンドロール結合の５０％阻害を誘導する負の対数のモル濃度)。
【０１３２】
ドーパミンＤ２
膜調製
組み換えヒトドーパミンサブタイプＤ２ｓ受容体を含む膜を、Perkin Elmerから得た。これらをアッセイ緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、０.１％ゼラチン、ｐＨ７.４)で希釈して、最大および最小特異的結合の間に明らかなウィンドウをもたらす最終濃度を提供した。
【０１３３】
実験方法
アッセイをＵ字型９６ウェルポリプロピレンプレートで行った。３０μLの[３Ｈ]−スピペロン(０.１６nM最終濃度)および３０μLの試験化合物(最終濃度の１０倍)を各試験ウェルに添加した。各アッセイプレートについて、８複製を[３Ｈ]−スピペロン結合について３０μLの媒体(アッセイ緩衝液中１０％(ｖ／ｖ)ＤＭＳＯ；最大結合を規定)または３０μLのハロペリドール(１０μMの最終濃度；非特異的結合を規定(ＮＳＢ))の存在下で得た。次いで膜を添加して３００μLの最終体積を達成した。プレートを２時間室温でインキュベートし、次いで１時間アッセイ緩衝液に予め浸したＰＥＩ被覆ＧＦ／Ｂフィルタープレートに、Tomtec細胞ハーベスターを使用して濾過した。２５０μLの洗浄緩衝液(５０mMのＨＥＰＥＳ、１mMのＥＤＴＡ、１２０mMのＮａＣｌ、ｐＨ７.４)での５回の洗浄を４℃で行い、非結合放射活性を除去した。プレートを乾燥させ、次いで底面からPackardプレートシーラーを使用して密封し、MicroScint-O(５０μL)を各ウェルに添加した。プレートを密封し(TopSeal A)、フィルター結合放射活性を、３分間計数プロトコルを使用して、シンチレーションカウンター(TopCount, Packard BioScience)で測定した。
【０１３４】
総特異的結合(Ｂ０)を、平均最大結合から平均ＮＳＢを引くことにより決定した。ＮＳＢ値をまた全ての他のウェル由来の値から引いた。これらのデータはＢ０のパーセントとして示した。化合物濃度−効果曲線([３Ｈ]−スピペロン結合の阻害)を、典型的に０.１nM〜１０μMの範囲の連続希釈を使用して測定した。データを化合物有効性を決定するための４パラメータロジスティック方程式に適合させ、それをｐＩＣ５０として示した([３Ｈ]−スピペロン結合の５０％阻害を誘導する負の対数のモル濃度)。
【０１３５】
化合物Ａについての上記アッセイの結果を表１に示す。
【表１０】
2010520189.tif 000027
【０１３６】
開始アッセイ
Dunkin-Hartleyモルモット(配達時２００ｇ〜３００ｇ)を、指定の繁殖施設から得た。モルモットを頸椎脱臼により殺し、気管を摘出した。付着結合組織を除き、各気管を４個の輪に切断した。次いで組織輪をアイソメトリックトランスデューサーに接続した。組織を洗浄し、１ｇの力を各輪に適用した。全実験中、対の曲線デザインを適用した。１μM  メタコリンの刺激投与量を組織に適用した。次いで組織を洗浄し(３回、洗浄間、１分)、１ｇの静止張力を再適用し、組織を１時間急速させて、平衡化した。次いで組織を１μM  メタコリンと接触させ、定常応答が得られたら、イソプレナリン(１０−９Ｍ−１０−５Ｍ)に対する累積的濃度応答曲線を構築した。次いで組織を洗浄し(３回、洗浄間、１分)、１時間急速させた。休息時間の最後に組織を１μM  メタコリンで収縮させ、試験化合物のｐ[Ａ]５０濃度を添加した。組織が最大弛緩に達したら、試験化合物の３０×ｐ[Ａ]５０濃度を添加した。組織応答がプラトーに達したら、１０μM  ソタロールを浴に添加して、弛緩がβ２仲介であることを確認した。
【０１３７】
データをADInstruments chart4forwindows softwareを使用して集め、それはアゴニストの各濃度で生じた最大緊張を測定した。
【０１３８】
イソプレナリン累積濃度曲線の各濃度について、応答をメタコリン誘発収縮の弛緩％として計算した。曲線は、ｌｏｇ１０[アゴニスト](Ｍ)対メタコリン誘発収縮阻害％のプロットであった。次いでこれらのデータを非線状回帰曲線フィットに適合させた。各実験について、Ｅ／[Ａ]曲線データを、次の式の４パラメータロジスティック関数を使用して適合させた：
【数１】
2010520189.tif 000028
各々Ｅおよび[Ａ]は薬理学的効果(弛緩％)およびアゴニスト濃度である；α、β、[Ａ]５０およびｍは、各々漸近線、ベースライン、位置および傾斜パラメータである。各イソプレナリン曲線のｐ[Ａ]５０およびＩＡをこのフィットから決定し、組織が本試験化合物での開始時間を生じるために実行可能であるかを決定した。
【０１３９】
試験化合物の各ｐ[Ａ]５０濃度について、応答をメタコリン誘発収縮の弛緩％として計算した。結果を、時間に対する弛緩％としてプロットし、９０％弛緩値に達するまでにかかる時間を計算し、記録した。
３０×ｐ[Ａ]５０濃度の添加は、個々の組織内の最大化合物効果の決定を可能にした。それ故、ｐ[Ａ]５０濃度での最大化合物効果の％を計算し、記録した。
【０１４０】
ラットでの薬物動態学
試験化合物の投与溶液を適当な投与媒体を使用して調製した。投与溶液中の化合物濃度を、一定量を５０μg・ml−１の名目上の濃度となるまで希釈し、その濃度での標準溶液およびＱＣ標準のデュプリケート注入に対して較正することによりアッセイした。化合物を、３匹の２５０−３５０ｇラット(約１ml・kg−１)の群へ、尾静脈へボーラス注射することにより投与した。経口投与について、別の２または３匹の動物の群に強制喫食により投与した(３ml・kg−１)。送達量を体重減少により概算した。通常餌は投与前に動物から回収しないが、必要であればこの効果を試験した。
【０１４１】
血液サンプル(０.２５ml)を尾静脈から１mlシリンジに採り、サンプル採取の直後に、ＥＤＴＡチューブに移し、血漿を遠心により調製し(５分間、１３０００rpm)、その後−２０℃で貯蔵した。典型的サンプリング時間は、２、４、８、１５、３０、６０、１２０、１８０、２４０、３００(分)または最終ｔ１／２が正確に描かれるまでであった。
【０１４２】
血漿の検体の濃度を定量的質量分析により決定した。標準および品質管理貯蔵溶液を、メタノール中１mg／ml濃度で調製した。連続希釈により生じた標準およびＱＣ貯蔵の一定範囲を、対象ラット血漿(５０μl)に添加した。濃度範囲は、ラットサンプルに存在する検体のレベルの範囲をカバーした。標準、ＱＣおよびサンプルを、検体を密接に模倣するように選択した内部標準を含む５０μlの有機溶媒および１００μlの有機溶媒を使用した、液体抽出に付した。次いでサンプルを反復倒置により混合し、−２０℃で少なくとも１時間貯蔵し、３５００rpmで、遠心機中２０分間遠心分離した。各サンプルの一定量(１２０μl)を、ＬＣ−ＭＳＭＳを使用した分析のために移した。試験サンプルにおいて見られた濃度の範囲をカバーする標準および品質管理サンプルは、名目上の濃度の２５％以内であった。
【０１４３】
薬物動態学的データ分析をWinNonlinを使用して達成した。標準非コンパートメント解析を、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、Ｌａｍｂｄａ＿ｚ、ｔ１／２＿Ｌａｍｂｄａ＿ｚ、ＡＵＣａｌｌ、ＡＵＣＩＮＦ(観察値)、Ｃｌ(観察値)、Ｖｓｓ(観察値)のようなパラメータを使用して概算した。
【図１】
2010520189.tif 000029
【図２】
2010520189.tif 000030
【図３】
2010520189.tif 000031
【図４】
2010520189.tif 000032
【図５】
2010520189.tif 000033
【国際調査報告】
2010520189.tif 000034
2010520189.tif 000035
2010520189.tif 000036
2010520189.tif 000037
2010520189.tif 000038