(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：【化１】2010503615.tif 000035（式中、Ｖは疎水基であり、Ｗは非ポリエン性リンカーであり、Ｘは水素結合供与体を含む極性基である）のレチノイド化合物又はその塩、および細胞分化調節におけるかかる化合物の使用に関する。
2010503615.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞分化を調節するためのレチノイド化合物の使用であって、前記化合物が疎水基および水素結合供与体を含む極性基を含み、前記基が非ポリエン性リンカーによって離間している使用。
【請求項２】
前記リンカーが、ポリエン基よりも光異性化を受けにくい、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記リンカーが不飽和基を含む、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記レチノイド化合物が、下記式（Ｉ）：
【化１】
2010503615.tif 000023
（式中、
Ｖは疎水基であり、
Ｗは非ポリエン性リンカーであり、
Ｘは、水素結合供与体を含む極性基である）の化合物またはその塩である、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
Ｖが、下記式（ｉ）：
【化２】
2010503615.tif 000024
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、水素、Ｒ６、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいヒドロカルビル、および１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択され、
各Ｒ６は独立に、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、オキソ、＝ＮＲ７、−ＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）ｌＲ７、−Ｎ（Ｒ７）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）ｌＮ（Ｒ７）Ｒ８、およびＲ９から選択され、
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に水素またはＲ９であり、
Ｒ９は、ヒドロカルビルおよび−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択され、そのいずれかは、ハロゲン、シアノ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、およびＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されていてもよく、
ｋは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
ｌは、０、１、または２であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
あるいは、１つまたは複数のＲ１およびＲ２、Ｒ２およびＲ３、Ｒ３およびＲ４、ならびにＲ４およびＲ５は、それらが結合する原子とともに、１つまたは複数のＲ６で任意に置換されていてもよい炭素環または複素環を形成する）の基である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の２つまたは３つのみが水素である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
Ｖが、次式：
【化３】
2010503615.tif 000025
（式中、前記Ｒ基のそれぞれは、水素以外である）の１つの基である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
Ｖが式（ｖ）の基である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
Ｖが、下記式（ｖｉｉｉ）：
【化４】
2010503615.tif 000026
（式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素、Ｒ６、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいヒドロカルビル、および１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択され、
あるいはＲ１０およびＲ１３は、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいＣ１〜４アルキレンリンカーを形成する）の基である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５が、それぞれ独立に、水素およびＣ１〜６アルキルから選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
Ｖが下記式（ｉｘ）：
【化５】
2010503615.tif 000027
の基である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲ１５が、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲ１５がそれぞれメチルである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
Ｒ５が、水素、Ｒ６、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいヒドロカルビル、および１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択される、請求項５から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
Ｒ５が、水素、ハロゲン、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいＣ１〜６アルキル、−ＯＲ７、−Ｓ（Ｏ）ｌＲ７、および−Ｎ（Ｒ７）Ｒ８から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
Ｒ５が、水素ならびにＣ１、Ｃ２、Ｃ３、およびＣ４アルキルから選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ５が、水素またはメチルである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
Ｗが、２〜１０個の鎖内原子を有するリンカーである、請求項４から１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
Ｗが、２、３、４、５、６、７、または８個の鎖内原子を有するリンカーである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
Ｗが不飽和基である、請求項４から１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
Ｗが、１つまたは複数の不飽和脂肪族または芳香族基を含む、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６（Ｒ６は請求項５で定義する通り）で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、アリーレン、およびヘテロアリーレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含む、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、フェニレン、およびナフチレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含む、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルキニレン、フェニレン、およびナフチレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含む、請求項２２に記載の使用。
【請求項２５】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、フェニレン、およびナフチレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含む、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
Ｗが、前記基の少なくとも２つを含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２７】
Ｗがリンカー−Ａ−Ｂ−であり、ＡおよびＢがそれぞれ独立に、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、アリーレン、およびヘテロアリーレンから選択される、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、
アルケニレン、
アルキニレン、
−フェニレン−アルケニレン−、
−アルケニレン−フェニレン−、
−フェニレン−アルキニレン−、
−アルキニレン−フェニレン−、および
ナフチレン
から選択されるリンカーである、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、
プロピレン、
エチニレン、
−フェニレン−プロピレン−、
−プロピレン−フェニレン−、および
ナフチレン
から選択されるリンカーである、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
Ｗが、プロプ−２−イレン基が疎水基に結合している−プロプ−２−イレン−フェニレンではない、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、
−フェニレン−アルケニレン−、
−アルキニレン−フェニレン、および
ナフチレン
から選択されるリンカーである、請求項２８に記載の使用。
【請求項３２】
Ｗが、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、
−エチニレン−フェニレン−、
−フェニレン−プロピレン−、および
ナフチレン
から選択されるリンカーである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
Ｘが−Ｃ（Ｏ）Ｚを含み、Ｚが水素結合供与体を含む、請求項４から３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
Ｘが−Ｃ（Ｏ）Ｚである、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
Ｚが、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ２〜６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨ２、およびＮＨＯＨから選択される、請求項３３または３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記化合物が、下記式（ＩＩ）：
【化６】
2010503615.tif 000028
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、請求項５から１７のいずれかで定義する通りであり、
Ｚは請求項３３または請求項３５で定義する通りである）の化合物またはその塩である、請求項５に記載の使用。
【請求項３７】
前記化合物が、下記式（ＩＩＩ）：
【化７】
2010503615.tif 000029
（式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、請求項９または請求項１０で定義する通りである）の化合物である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記化合物が、式（ＩＶ）：
【化８】
2010503615.tif 000030
の化合物である、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲ１５が、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
Ｗが、請求項１８から３２のいずれかで定義する通りである、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
前記化合物が次式：
【化０９】
2010503615.tif 000031
の１つである、請求項３６に記載の使用。
【請求項４２】
前記化合物が次式：
【化１０】
2010503615.tif 000032
の１つである、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
Ｒ５が水素またはメチルである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
ＺがＯＨである、請求項４２または請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記化合物が、本明細書に記載の６、１０、１１、１２、または１３である、請求項１に記載の使用。
【請求項４６】
前記化合物が、本明細書に記載の１０、１１、または１２である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記化合物が、式（ＸＩＶ）：
【化１６】
2010503615.tif 000033
（式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、およびＲ５は下表：
【表１】
2010503615.tif 000034
の通りである）の化合物ではない、請求項１から４６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４８】
前記細胞が幹細胞である、請求項１から４７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４９】
前記細胞が全能性幹細胞ではない、請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
用途とは無関係である、請求項１から４７のいずれかに記載のレチノイド化合物。
【請求項５１】
細胞を請求項５０に記載の化合物と接触させるステップを含む、細胞分化を調節する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レチノイド化合物および例えば細胞分化におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）およびその立体異性体である９−シス型レチノイン酸（９−シスＲＡ）は、脊椎動物の発生、成長、増殖、および細胞分化を含む幅広い生物学的過程を制御することが知られている、ビタミンＡの２つの活性な代謝産物である。レチノイドは、リガンド活性化核受容体（ＲＡＲ）およびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）の別個のファミリーと結合することによって、細胞分化を誘発すると理解されている。
【０００３】
ＡＴＲＡ、９−シス型ＲＡ（９ＣＲＡ）および１３−シス型レチノイン酸（１３ＣＲＡ）を含む天然に存在するレチノイドは、選択的に光を吸収することから発色団ということができる。かかる分子は、実質的に、疎水性末端、ポリエンリンカー、および酸性基の３つの構造的に異なる領域からなる。天然に存在するレチノイドのポリエンリンカーは、高度に共役し、この領域が、光（溶媒に応じて３００〜４００ｎｍの周波数の）を吸収する能力をレチノイドに付与する。それは、これらの分子が特に光異性化を受けやすく、様々なレチノイン酸異性体の混合物に分解できるという特徴に起因する。得られるレチノイドレベルの濃度は、経時的に培養物中で著しく減少することも示されており、このことは、それらが分解も代謝もされた結果であり得る。さらに、ＡＴＲＡなどのレチノイドは温度感受性であり、容易に酸化することが知られている。
【０００４】
得られる異性体が異なる作用機序を有することから、ＡＴＲＡの異性化は、その代謝経路の重要な一部分であると理解される。これは、細胞培養実験室においてＡＴＲＡの使用者によってあまりにもしばしば見落とされている重要な点である。ＡＴＲＡの異性体は、代替系統に沿って分化する哺乳動物幹細胞の能力に様々に影響を及ぼすことが報告されており、かかる実験においては、異性化からレチノイン酸を保護するために細心の注意が払われるべきであると述べられている（非特許文献１）。このことは、細胞反応が溶液中に存在する異性体（複数可）の濃度（複数可）によって決定される場合に特に関係する。例えば、レチノイドを使用する多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞の分化の誘発は、変化しやすいことが非常に多く、その結果、代替細胞型の様々な集団からなる細胞の異種培養物が形成される。分化反応におけるかかる可変性を低減し、再現性を改善するためには、細胞分化を誘発するために使用されるものは何でも、その使用毎に同じ形態および濃度であることが必須である。現在このことは、全て光および熱感受性であり、かつサンプル調製条件下、原液保存条件下、および培養条件下で異性化を受ける傾向のあるＡＴＲＡおよびその立体異性体などの試薬を使用する場合には保証することができない。
【０００５】
異なる異性体が細胞に多様な作用を及ぼすために、異性化に対するＡＴＲＡの感受性および傾向を調節するための幾つかの試みがなされてきた。例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、フィブリノゲン、リゾチーム、ホスファチジルコリンＮ−エチルマレイミド、およびビタミンＣを含む、レチノイン酸のシス型−トランス型の相互変換または酸化を防止する幾つかの添加剤が評価されている（非特許文献２及び３）。しかし、細胞培地へのかかる分子の添加は望ましいものではなく、例えば無血清培地ではＢＳＡの使用は不可能であろう。
前述の安定性の問題に悩まされず、細胞培養への適用で容易に使用できるＡＴＲＡの改善された代替物が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｍｕｒａｙａｍａ等、Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ  ４３（１６７）１９７７年
【非特許文献２】Ｃｈｅｎ等、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６（４１０）１９９５年
【非特許文献３】Ｗａｎｇ等、Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  ７９６、２８３、２００３年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、化合物の生物活性に著しい影響を及ぼすことなく、天然に存在するレチノイド化合物のポリエン性リンカーを非ポリエン性リンカーで置き換えることによって化合物の安定性を改善できるという認識に少なくとも部分的に基付くものである。共役ポリエンリンカーは光異性化を受けやすく、ポリエン骨格を非異性化官能基で置き換えることによって化合物の安定性を改善する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明の第１の態様は、細胞分化を調節するためのレチノイド化合物の使用に関し、該化合物は、疎水基および水素結合供与体を含む極性基を含み、前記基は、非ポリエン性リンカーによって分離している。細胞分化を調節する方法も提供される。
【０００９】
本発明のレチノイド化合物を使用して、天然に存在するレチノイドと類似した形で幹細胞の分化を調節することができる。該化合物は、より均一な形での細胞分化を誘導することができ、ＡＴＲＡを使用する日常的な幹細胞培養と比較して、代替の分化細胞型の変化および異質性を低減する。改善された安定性の有益性と共に、これらの試薬の使用は、細胞分化培養物中の細胞異質性を低減することができる。細胞分化の安定な合成モジュレータは、既存技術よりも明確な利点を提供し、生物工学者にとって重要な価値のあるものとなろう。
【００１０】
メチル基を含む系と含まない系の両方の系に対して（例えば、６ａ対６ｂにおいて）この技術を適用することは重要であり、なぜならばそれによってアリールおよびビニル基の相対的回転配向の調節が可能になるからであり、そのことは受容体選択的なレチノイド類似体の開発の設計原理として構造調節にとって重要な意味をもつ。式６の化合物は、細胞分化の調節に有効である。式６ａｉｉおよび６ｂｉの化合物も、細胞分化の調節に有効であり、特に安定である。
【００１１】
アリール−アルケニルボロン酸エステル５ａのテトラヒドロナフタレン核は、白血病細胞中にアポトーシスを生じる強力なレチノイドＸ−受容体リガンドとして適用されているレチノイド誘導体を導出するための基本的なサブユニットとして既に注目されているが、この基礎構造は、幹細胞の分化のための新規な活性レチノイドの開発の柔軟な中間体である。
【００１２】
本発明の化合物は、例えば遊離酸、遊離塩基、エステル、および他のプロドラッグ、塩および互変異性体などの異なる形態で存在することができ、本開示には、化合物の全ての変形形態が含まれる。
【００１３】
本発明の特定の態様、実施形態、または実施例に関連して記載される特性、整数、特徴、化合物、化学部分、または基は、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態、または実施例に、それと適合しない場合を除いて適用できることを理解されたい。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
ポリエン性
本明細書で使用される「ポリエン」および「ポリエン性」という用語は、２つ以上の共役炭素−炭素二重結合を含む脂肪族部分を意味する。
【００１５】
ヒドロカルビル
本明細書で使用される「ヒドロカルビル」という用語は、水素および炭素原子のみからなる部分を意味し、かかる部分は、脂肪族および／または芳香部分を含むことができる。この部分は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の炭素原子を含むことができる。ヒドロカルビル基の例には、Ｃ１〜６アルキル（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、またはＣ４アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチル）；アリール（例えば、ベンジル）またはシクロアルキル（例えば、シクロプロピルメチル）で置き換えられているＣ１〜６アルキル；シクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシル）；アルケニル（例えば、２−ブテニル）；アルキニル（例えば、２−ブチニル）；アリール（例えば、フェニル、ナフチル、またはフルオレニル）等が含まれる。
【００１６】
アルキル
本明細書で使用される「アルキル」および「Ｃ１〜６アルキル」という用語は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル部分を意味する。この用語は、メチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピルまたはイソプロピル）、ブチル（ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔｅｒｔ−ブチル）、ペンチル、ヘキシルなどの基への言及を含む。特に、アルキルは、１、２、３、または４個の炭素原子を有することができる。
【００１７】
アルケニル
本明細書で使用される「アルケニル」および「Ｃ２〜６アルケニル」という用語は、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有し、適用可能な場合にはＥまたはＺ立体化学のいずれかの少なくとも１つの二重結合をさらに有する直鎖または分岐鎖のアルキル部分を意味する。この用語は、エテニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、および３−ヘキセニルなどの基への言及を含む。
【００１８】
アルキニル
本明細書で使用される「アルキニル」および「Ｃ２〜６アルキニル」という用語は、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有し、少なくとも１つの三重結合をさらに有する直鎖または分岐鎖のアルキル部分を意味する。この用語は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、および３−ヘキシニルなどの基を含む。
【００１９】
アルコキシ
本明細書で使用される「アルコキシ」および「Ｃ１〜６アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキルを意味し、ここでアルキルは、直鎖または分岐鎖であり、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を含む。諸実施形態の一クラスでは、アルコキシは１、２、３、または４個の炭素原子を有する。この用語は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどの基を含む。
【００２０】
シクロアルキル
本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、３、４、５、６、７、または８個の炭素原子を有する脂環式部分を意味する。この基は、架橋されたまたは多環式環系であってよい。シクロアルキル基は、単環式であることが多い。この用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニル、ビシクロ［２．２．２］オクチルなどの基を含む。
【００２１】
アリール
本明細書で使用される「アリール」という用語は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の環の炭素原子を含む芳香環系を意味する。アリールは、しばしばフェニルであるが、少なくとも１つが芳香族である２つ以上の環を有する多環式環系であってよい。この用語は、フェニル、ナフチル、フルオレニル、アズレニル、インデニル、アントリルなどの基を含む。
【００２２】
カルボシクリル
本明細書で使用される「カルボシクリル」という用語は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の炭素環原子を有する飽和（例えば、シクロアルキル）または不飽和（例えば、アリール）環部分を意味する。特に、カルボシクリルは、飽和または不飽和であってよい３〜１０員環または環系、特に５および６員環を含む。カルボシクリル部分は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルニル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、フェニル、ナフチル、フルオレニル、アズレニル、インデニル、アントリルなどから選択される。
【００２３】
ヘテロシクリル
本明細書で使用される「ヘテロシクリル」という用語は、少なくともその１つが窒素、酸素、リン、ケイ素、および硫黄から選択される、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の環原子を有する、飽和（例えば、ヘテロシクロアルキル）または不飽和（例えば、ヘテロアリール）複素環部分を意味する。特にヘテロシクリルは、飽和または不飽和であってよい３〜１０員環または環系、より具体的には５または６員環を含む。
【００２４】
複素環部分は、例えば、オキシラニル、アジリニル、１，２−オキサチオラニル、イミダゾリル、チエニル、フリル、テトラヒドロフリル、ピラニル、チオピラニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾリジニル、ベンズイミダゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピラゾリジニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ジチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリダジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、特にチオモルホリノ、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、ベンズイミダゾリル、クマリル、インダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、デカヒドロキノリル、オクタヒドロイソキノリル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ジベンゾチオフェニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナンスロリニル、フラザニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、クロメニル、イソクロマニル、クロマニル等から選択される。
【００２５】
ヘテロシクロアルキル
本明細書で使用される「ヘテロシクロアルキル」という用語は、３、４、５、６、または７個の環の炭素原子、ならびに窒素、酸素、リン、および硫黄から選択される１、２、３、４、または５個の環のヘテロ原子を有する飽和複素環部分を意味する。この基は、複素環系であってよいが、単環式であることが多い。この用語は、アゼチジニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、オキシラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、インドリジジニル（ｉｎｄｏｌｉｚｉｄｉｎｙｌ）、ピペラジニル、チアゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、キノリジジニル（ｑｕｉｎｏｌｉｚｉｄｉｎｙｌ）などの基を含む。
【００２６】
ヘテロアリール
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、その少なくとも１つが、窒素、酸素、および硫黄から選択される５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の環原子を有する芳香族複素環系を意味する。この基は、その少なくとも１つが芳香族である２つ以上の環を有する多環式環系であってよいが、単環式であることが多い。この用語は、ピリミジニル、フラニル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、ピロリジニル、ピリジニル、ベンゾ［ｂ］フラニル、ピラジニル、プリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、キノリニル、フェノチアジニル、トリアジニル、フタラジニル、２Ｈ−クロメニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、プテリジニルなどの基を含む。
【００２７】
ハロゲン
本明細書で使用される「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。特にハロゲンは、ＦまたはＣｌであってよく、Ｆがより一般的である。
【００２８】
置換される
部分に関して本明細書で使用される「置換される」という用語は、前記部分の１つまたは複数の、特に最大５個、より具体的には１、２、または３個の水素原子が、対応数の記載の置換基で互いに独立に置き換えられていることを意味する。本明細書で使用される「任意に置換されていてもよい」という用語は、置換または非置換を意味する。
【００２９】
当然のことながら、置換基はそれらが化学的に可能な位置のみにあり、当業者は、特定の置換が可能かどうかを過度の労力をかけずに（実験的または理論的に）決定できることが理解されよう。例えば、遊離水素を含むアミノ基またはヒドロキシ基は、不飽和（例えば、オレフィン）結合で炭素原子と結合する場合には不安定になり得る。さらに当然のことながら、本明細書に記載の置換基は、当業者に認識される適切な置換基への前述の制限を前提として、任意の置換基でそれら自体が置き換えられることが理解されよう。
【００３０】
独立に
２つ以上の部分が、原子または基の例示から「それぞれ独立に」選択されると記載される場合、これは、その部分が同じでも異なっていてもよいことを意味する。したがって各部分の同一性は、１つまたは複数の他の部分の同一性とは独立である。
【００３１】
化合物
本発明は、細胞分化を制御するためのレチノイド化合物の使用を提供し、該化合物は疎水基および水素結合供与体を含む極性基を含み、前記基は非ポリエン性リンカーによって離間している。
【００３２】
好ましくは、非ポリエン性リンカーは、ポリエン基よりも光異性化を受けにくい。好ましくは、該リンカーはさらに、不飽和基を含むことができる。
【００３３】
本発明による好ましい一使用では、レチノイド化合物は、下記式（Ｉ）の化合物またはその塩である。
【００３４】
【化１】
2010503615.tif 000003
式中、
Ｖは疎水基であり、
Ｗは非ポリエン性リンカーであり、
Ｘは、水素結合供与体を含む極性基である。
【００３５】
本発明による好ましい一つの使用では、Ｖは、下記式（ｉ）の基である。
【００３６】
【化２】
2010503615.tif 000004
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、水素、Ｒ６、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいヒドロカルビル、および１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択され、
各Ｒ６は独立に、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、オキソ、＝ＮＲ７、−ＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）ｌＲ７、−Ｎ（Ｒ７）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）ｌＮ（Ｒ７）Ｒ８、およびＲ９から選択され、
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に水素またはＲ９であり、
Ｒ９は、ヒドロカルビルおよび−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択され、そのいずれかは、ハロゲン、シアノ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、およびＣ１〜６アルコキシから独立に選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換されていてもよく、
ｋは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
ｌは、０、１、または２であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
あるいは、１つまたは複数のＲ１およびＲ２、Ｒ２およびＲ３、Ｒ３およびＲ４、ならびにＲ４およびＲ５は、それらが結合する原子とともに、１つまたは複数のＲ６で任意に置換されていてもよい炭素環または複素環を形成してもよい。
【００３７】
本発明によるさらに好ましい一使用では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つまたは２つのみが水素である。
【００３８】
本発明による好ましい一使用では、Ｖは、次式の１つの基である。
【００３９】
【化３】
2010503615.tif 000005
式中、前記Ｒ基の各々は水素以外である。
【００４０】
好ましくは、Ｖは上記式（ｖ）の基である。本発明の好ましい化合物Ｖは、下記式（ｖｉｉｉ）の基である。
【００４１】
【化４】
2010503615.tif 000006
式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素、Ｒ６、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいヒドロカルビル、および１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択され、
あるいは、Ｒ１０およびＲ１３は、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいＣ１〜４アルキレンリンカーを形成してもよい。
【００４２】
好ましくは、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素およびＣ１〜６アルキルから選択される。
【００４３】
本発明による好ましい一使用では、Ｖは下記式（ｉｘ）の基である。
【００４４】
【化５】
2010503615.tif 000007
【００４５】
好ましくは、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである。
【００４６】
さらに好ましくは、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれメチルである。
【００４７】
本発明による好ましい一使用では、Ｒ５は、水素、Ｒ６、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいヒドロカルビル、および１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい−（ＣＨ２）ｋ−ヘテロシクリルから選択される。
【００４８】
本発明によるさらに好ましい一使用では、Ｒ５は、水素、ハロゲン、１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよいＣ１〜６アルキル、−ＯＲ７、−Ｓ（Ｏ）ｌＲ７、および−Ｎ（Ｒ７）Ｒ８から選択される。
【００４９】
本発明によるさらに好ましい一使用では、Ｒ５は、水素ならびにＣ１、Ｃ２、Ｃ３、およびＣ４アルキルから選択される。
【００５０】
本発明によるまたさらに好ましい一使用では、Ｒ５は、水素またはメチルである。
【００５１】
好ましくは、Ｗは、２〜１０個の鎖内原子を有するリンカー、例えば２、３、４、５、６、７、または８個の鎖内原子を有するリンカーである。
【００５２】
好ましくは、Ｗは不飽和基である。Ｗは、１つまたは複数の、例えば２つの不飽和脂肪族または芳香族基、例えばいずれかが１、２、３、４、または５個のＲ６（Ｒ６は本明細書で定義する通り）で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、アリーレン、およびヘテロアリーレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含むことができる。
【００５３】
Ｗは、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、フェニレン、およびナフチレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含むことができる。
【００５４】
Ｗは、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルキニレン、フェニレン、およびナフチレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含むことができる。
【００５５】
Ｗは、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、フェニレン、およびナフチレンから独立に選択される１つまたは複数の基を含むことができる。
【００５６】
本発明による好ましい一使用では、Ｗはリンカー−Ａ−Ｂ−であり、ＡはＶに結合しており、ＢはＸに結合しており、ＡおよびＢはそれぞれ独立に、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、Ｃ２〜６アルケニレン、Ｃ２〜６アルキニレン、アリーレン、およびヘテロアリーレンから選択される。リンカーは、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、
アルケニレン、
アルキニレン、
−フェニレン−アルケニレン−、
−アルケニレン−フェニレン−、
−フェニレン−アルキニレン−、
−アルキニレン−フェニレン−、および
ナフチレン
から選択することができる。
【００５７】
好ましくは、リンカーは、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、−フェニレン−アルケニレン−、−アルキニレン−フェニレン、およびナフチレンから選択される。
【００５８】
好ましくは、Ｗは、各々が１、２、３、４、または５個のＲ６で任意に置換されていてもよい、
プロピレン、
エチニレン、
−フェニレン−プロピレン−、
−エチニレン−フェニレン−、および
ナフチレン
から選択されるリンカーである。
【００５９】
一実施形態では、Ｗは、リンカー−フェニレン−プロピレン−である。
【００６０】
さらなる一実施形態では、Ｗは、リンカー−エチニレン−フェニレン−である。
【００６１】
本発明の好ましい一実施形態では、Ｗは、プロプ−２−イレン基が疎水基に結合している−プロプ−２−イレン−フェニレンではない。
【００６２】
本発明による好ましい一使用では、Ｘは−Ｃ（Ｏ）Ｚを含み、Ｚは水素結合供与体を含む。好ましくは、Ｘは−Ｃ（Ｏ）Ｚである。Ｚは、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ（Ｃ１〜６アルキル）、−ＮＨ２、およびＮＨＯＨから選択することができる。好ましくは、Ｚは、−ＯＨ、ＯＣＨ３、およびＮＨＯＨから選択される。
【００６３】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（ＩＩ）の化合物またはその塩である。
【００６４】
【化６】
2010503615.tif 000008
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、本明細書で定義する通りであり、
Ｚは本明細書で定義する通りである。
【００６５】
好ましくは、化合物は、下記式（ＩＩＩ）の化合物である。
【００６６】
【化７】
2010503615.tif 000009
式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、本明細書で定義する通りである。
【００６７】
好ましくは、化合物はさらに、下記式（ＩＶ）の化合物である。
【００６８】
【化８】
2010503615.tif 000010
【００６９】
本発明による好ましい一使用では、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜６アルキルである。
【００７０】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、次式の１つである。
【００７１】
【化９】
2010503615.tif 000011
【００７２】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、式（Ｖ）、（ＶＩ）、または（ＶＩＩ）の化合物である。さらに好ましくは、化合物は、式（Ｖ）または（ＶＩＩ）の化合物である。
【００７３】
好ましい一実施形態では、化合物は、次式の１つである。
【００７４】
【化１０】
2010503615.tif 000012
【００７５】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、式（ＩＸ）、（Ｘ）、または（ＸＩ）の化合物である。さらに好ましくは、化合物は、式（ＩＸ）または（ＸＩ）の化合物である。
【００７６】
好ましくは、Ｒ５は水素またはメチルである。
【００７７】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、本明細書に記載の６、１０、１１、１２、または１３、例えば本明細書に記載の化合物１０、１１、または１２である。
【００７８】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（ＩＸ）の化合物である。
【００７９】
【化１１】
2010503615.tif 000013
式中、Ｒ５およびＺは、本明細書で定義する通りである。好ましくは、Ｒ５はＨまたはメチルである。好ましくは、ＺはＯＨ、ＯＣＨ３、またはＮＨＯＨである。
【００８０】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（Ｘ）の化合物である。
【００８１】
【化１２】
2010503615.tif 000014
式中、Ｒ５およびＺは、本明細書で定義する通りである。好ましくは、Ｒ５はＨまたはメチルである。好ましくは、Ｒ５はメチルである、好ましくは、ＺはＯＨである。
【００８２】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（ＸＩ）の化合物である。
【００８３】
【化１３】
2010503615.tif 000015
式中、Ｒ５およびＺは、本明細書で定義する通りである。好ましくは、Ｒ５はＨまたはメチルである。好ましくは、ＺはＯＨである。
【００８４】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（ＸＩＩ）の化合物である。
【００８５】
【化１４】
2010503615.tif 000016
式中、Ｒ５およびＺは、本明細書で定義する通りである。好ましくは、ＺはＯＣＨ３である。ＺがＯＨではない場合、好ましくは、Ｒ５はメチルである。
【００８６】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（ＸＩＩＩ）の化合物ではない。
【００８７】
【化１５】
2010503615.tif 000017
【００８８】
本発明による好ましい一使用では、化合物は、下記式（ＸＩＶ）の化合物ではない。
【００８９】
【化１６】
2010503615.tif 000018
式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、およびＲ５は下表の通りである。
【００９０】
【表１】
2010503615.tif 000019
【００９１】
さらなる一態様では、本発明は、その用途とは無関係に、本明細書で定義するレチノイド化合物を提供する。
【００９２】
例えば、本発明の化合物は、以下の一般スキームに従って調製することができる。
【００９３】
【化１７】
2010503615.tif 000020
【００９４】
スキーム１によれば、タイプ１の構造は、触媒の存在下で、２つのＣ−Ｈ活性化ステップを含む効率的な金属触媒反応の連続を介して５および類似体６に変換することができる。４ｂの調製の場合、この化合物は、フリーデル−クラフツ(Friedel Crafts)のアセチル化およびウィッティヒ(Wittig)メチル化の連続を介して、１ｂから２ステップで効率的に調製することができる。
【００９５】
同様に、このタイプの手法を拡張して、以下に示すスキーム２を介して化合物１０および１１が生成される。１０ａ（ｉｉｉ）が、アセチレンおよびエンラクトン誘導体の混合物として存在すると同時に、１０ａ（ｉ）および（ｉｉ）も、分化過程を調査するための有用なプローブである。
【００９６】
【化１８】
2010503615.tif 000021
【００９７】
【化１９】
2010503615.tif 000022
【００９８】
類似の戦略を使用して、スキーム３に概説のように、関連系１２および１３にアクセスすることができる。この場合、パラジウム媒介クロスカップリングを使用して、ホウ素化(borylated)中間体３ａを直接変換してケイ皮酸エステル類似体１２を導出することができ、またはナフチル系１３に容易に変換することができる。
【００９９】
先に詳説したプロセスは、単に本発明を例示する目的のものであり、限定的なものとみなすべきではないことが理解されよう。当業者に知られている同様または類似の試薬および／または条件を使用する過程を使用して、本発明の化合物を得ることもできる。
【０１００】
得られる最終生成物または中間体の任意の混合物は、知られている形で、構成成分の物理化学的な差異をベースにして、例えばクロマトグラフィー、蒸留、分別結晶によって、またはその状況下で適切もしくは可能な場合には塩を形成することによって、純粋な最終生成物または中間体に分離することができる。
【０１０１】
本明細書で述べる幾つかの基（特にヘテロ原子および共役結合を含有するもの）は、互変異性体の形態で存在することができ、全てのこれらの互変異性体は、本開示の範囲に含まれる。より一般的には、例えば有機酸および相当するそれらのアニオンの場合、多くの種が平衡状態で存在することができ、したがって本明細書の種への言及は、それらの全ての平衡形態への言及を含む。
【０１０２】
本開示の化合物は、１つまたは複数の不斉炭素原子を含有することもでき、したがって、光学および／またはジアステレオ異性を示すことができる。全てのジアステレオ異性体は、従来の技術、例えばクロマトグラフィーまたは分別結晶を使用して分離することができる。従来の、例えば分別結晶またはＨＰＬＣ技術を使用して、化合物のラセミ性または他の混合物を分離することによって、様々な立体異性体を単離することができる。あるいは、ラセミ化またはエピマー化を生じない条件下で、適切な光学活性な出発材料の反応によって、または例えばホモキラル酸もしくはアミンでの誘導体化後に、従来の手段（例えば、ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー）によりジアステレオマー誘導体を分離することによって、所望の光学異性体を生成することができる。全ての立体異性体が本開示の範囲に含まれる。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーが開示される場合、その開示は、他のエナンチオマーまたはジアステレオマー、およびラセミ化合物も包含し、これに関しては、本明細書に例示の特定の化合物が特に参照される。
【０１０３】
本開示の化合物には、幾何異性体が存在してもよい。本開示は、炭素−炭素二重結合周辺の置換基の配列から得られる様々な幾何異性体およびそれらの混合物を企図し、かかる異性体をＺまたはＥ配置のものと指定し、ここで用語「Ｚ」は、炭素−炭素二重結合の同じ側の置換基を表し、用語「Ｅ」は、炭素−炭素二重結合の反対側の置換基を表す。
【０１０４】
使用
本発明による好ましい一使用では、ある幹細胞の少なくとも１つの分化細胞型への分化に、本明細書で定義するレチノイド化合物を使用することが提供される。
【０１０５】
本発明の好ましい一実施形態では、前記幹細胞は、ヒト以外の全能性幹細胞、例えばマウスの全能性細胞である。
【０１０６】
本発明の好ましい一実施形態では、前記幹細胞は、多能性幹細胞、好ましくはヒトの多能性幹細胞である。
【０１０７】
本発明の代替の好ましい一実施形態では、前記幹細胞は多能性幹細胞である。
【０１０８】
本発明の好ましい一実施形態では、前記多能性幹細胞は、造血幹細胞、神経幹細胞、骨幹細胞、筋肉幹細胞、間葉幹細胞、上皮幹細胞（皮膚、胃腸粘膜、腎臓、膀胱、乳腺、子宮、前立腺、および下垂体などの内分泌腺などの臓器由来）、外胚葉幹細胞、中胚葉幹細胞、または内胚葉幹細胞（例えば、肝臓、膵臓、肺、および血管などの臓器由来）からなる群から選択される。
【０１０９】
本発明のさらなる一態様によれば、幹細胞の分化を誘発する方法であって、
ｉ）幹細胞を維持するのに適した、本明細書で定義するレチノイド化合物を含む細胞培地中で、幹細胞の調製物を形成するステップと、
ｉｉ）少なくとも１つの分化細胞型への幹細胞の分化を可能にする条件下で、前記幹細胞を培養するステップと
を含む方法が提供される。
【０１１０】
本発明の好ましい一方法では、前記幹細胞は全能性幹細胞ではない。好ましくは、前記幹細胞はヒトである。
【０１１１】
本発明の好ましい一方法では、前記分化細胞は、ケラチノサイト、線維芽細胞（例えば、皮膚、角膜、腸粘膜、口腔粘膜、膀胱、尿道、前立腺、肝臓）、上皮細胞（例えば、皮膚、角膜、腸粘膜、口腔粘膜、膀胱、尿道、前立腺、肝臓）、神経膠細胞または神経細胞、肝細胞、間葉細胞、筋細胞（心筋細胞または筋管細胞）、腎細胞、血球（例えば、ＣＤ４＋リンパ球、ＣＤ８＋リンパ球）、膵臓細胞、または内皮細胞からなる群から選択される。
【０１１２】
本発明の好ましい一方法では、該方法は、可視光および／またはＵＶ光、５０℃を超えない温度（例えば、−８０℃から最大５０℃、一般には−２０℃から最大約４０℃）、ならびに／あるいは酸化試薬、例えば空気またはＤＭＳＯの存在下で行われる。  
【０１１３】
本発明の方法は、ｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことができる。
【０１１４】
本発明のさらなる一態様は、本明細書で定義するレチノイド化合物に可視またはＵＶ光を照射するステップを含む、化合物を照射する方法を提供する。
【０１１５】
本発明のさらなる一態様は、治療で使用するための本明細書で定義するレチノイド化合物を提供する。
【０１１６】
本発明のまたさらなる一態様は、本明細書で定義するレチノイド化合物および医薬として許容される担体または賦形剤を含む医薬製剤を提供する。
【０１１７】
本発明のさらなる一態様では、レチノイド療法から利益を得られる疾患または状態の治療のための医薬品の製造における、本明細書で定義するレチノイド化合物の使用が提供される。レチノイド療法から利益を得られる可能性がある疾患または状態には、癌（例えば、脳腫瘍）、ニキビ、皮膚創傷、例えば日焼け、ＵＶ損傷、老化皮膚などの皮膚障害が含まれる。
【０１１８】
以下の実施例は、図面を参照しながら本発明を例示するものである。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】実験室光条件（１１月または１２月）に１時間（左）および２４時間（右）曝露した１３ＣＲＡのサンプルの天然レチノイドの相対レベルを示す円グラフである。
【図２】実験室光条件（１１月または１２月）に１時間（左）および２４時間（右）曝露したＡＴＲＡのサンプルの天然レチノイドの相対レベルを示す円グラフである。
【図３】実験室光条件（３月）に６時間曝露した１３ＣＲＡ（左）およびＡＴＲＡ（右）のサンプルの天然レチノイドの相対レベルを示す円グラフである。サンプルは直射日光下にあった。
【図４】ＵＶ光に１時間（左）および１２時間（右）曝露した１３ＣＲＡのサンプルの天然レチノイドの相対レベルを示す円グラフである。
【図５】ＵＶ光に１時間（左）および１２時間（右）曝露したＡＴＲＡのサンプルの天然レチノイドの相対レベルを示す円グラフである。
【図６】暗室中空気下で３日後（上）対蛍光に３日曝露した後（下）のガラス製ＮＭＲ管中のＤ６−ＤＭＳＯのＡＴＲＡの１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）スペクトル（ｄ５．４０〜７．８０）を示すグラフである。
【図７】暗室中空気下で３日後（上）対蛍光に３日曝露した後（下）のガラス製ＮＭＲ管中のＤ６−ＤＭＳＯのＥＣ２３（１０ａ（ｉ）（Ｒ’＝Ｈ））の１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）スペクトル（ｄ７．２０〜８．１０）を示すグラフである。
【図８】ヒトの多能性胚性癌腫幹細胞の培養物（ＴＥＲＡ２．ＳＰ１２）を、１０μＭのＡＴＲＡまたは１０μＭのＥＣ２３（１０ａ（ｉ）（Ｒ’＝Ｈ））のいずれかに曝露したときの、幹細胞（ｓｓｅａ−３、ｔｒａ−１−６０）および分化誘導体（ｖｉｎｉｓ−５３、ａ２ｂ５）のマーカーについての細胞表面抗原発現のフローサイトメトリー分析を示すグラフである。
【図９】全て１μＭで使用したＡＴＲＡ；３Ｍｅ−ＣＥＢＸ（１２）；３Ｍｅ−ＥＣ１９（１０ｂ（ｉｉ）Ｒ’−Ｈ）；３Ｍｅ−ＥＣ２３（１０ｂ（ｉ）（Ｒ’＝Ｈ））；４Ｍｅ−ＴＴＮ（６ｂ（ｉ）（Ｒ’＝Ｈ））のいずれかに７日間曝露した後の、ヒトの多能性ＴＥＲＡ２．ｃｌ．ＳＰ１２胚性癌腫幹細胞（未分化）およびそれらの分化誘導体での細胞表面抗原発現のフローサイトメトリー分析のグラフである。ビヒクル対照としてＤＭＳＯを使用した。
【実施例】
【０１２０】
実施例１：化合物の合成
上記のスキーム１、２、および３に従って、化合物６、１０、１１、１２、および１３を調製した。
【０１２１】
実験
標準のシュレンク技術を使用して、乾燥窒素雰囲気下で、またはＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．Ｓｙｓｔｅｍ１倍長グローブボックス内で全ての反応を実施した。ガラス製品を、グローブボックスに移す前にオーブン乾燥した。
【０１２２】
ヘキサンおよびＴＨＦをナトリウム／ベンゾフェノンで乾燥し、アセトニトリルをＣａＨ２で乾燥し、全てを窒素下で蒸留した。溶媒１，４−ジオキサンを、３つの冷凍ポンプ低サイクルで脱ガスした。トルエンを乾燥し、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．のＳＰＳ−４００溶媒精製系の局所的な改変版を使用して、Ａｒ圧力下で活性アルミナおよびＢＡＳＦ−Ｒ３１１触媒のカラムを通過させることによって脱酸素化した。
【０１２３】
化合物１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンを、Ａｖｏｃａｄｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入し、ＣａＨ２で乾燥し蒸留した。［Ｉｒ（μ−Ｃｌ）（ＣＯＥ）２］２（Ｅｎｔら、Ｉｎｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９９０年、２８、９０）、トランス−［Ｒｈ（Ｃｌ）（ＣＯ）（ＰＰｈ３）２］（Ｅｖａｎｓら、Ｉｎｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９６６年、８、２１５およびＭｃＬｅｖｅｒｔｙら、Ｉｎｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９６８年、１１、９９）、およびウィッティヒ試薬（Ｐｈ３ＰＭｅ＋ｌ−）を、文献の手順によって合成し、Ｂ２ｐｉｎ２は、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．およびＮｅｔＣｈｅｍ  Ｉｎｃ．から贈与として供給された。塩酸はＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得、全ての他の化合物は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから得、ＧＣ／ＭＳによって純度を試験し、さらなる精製を行わずに使用した。
【０１２４】
ＮＭＲスペクトルを、周囲温度においてＶａｒｉａｎ  Ｉｎｏｖａ  ５００（１Ｈ、１３Ｃ｛１Ｈ｝、ＨＳＱＣ）、Ｖａｒｉａｎ  Ｃ５００（１Ｈ、１３Ｃ｛１Ｈ｝、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ）、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ３００（１１Ｂおよび１１Ｂ｛１Ｈ｝）、およびＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ２００（１３Ｃ｛１Ｈ｝）計器で記録した。プロトンおよび炭素のスペクトルは、それぞれ重水素化溶媒中の残留プロトンまたは溶媒共鳴を介して外部ＳｉＭｅ４を基準とし、１１Ｂ  ＮＭＲスペクトルは外部ＢＦ３・ＯＥｔ３を基準とした。ダーラム大学の化学科で、Ｅｘｅｔｅｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．のＣＥ−４４０元素分析計を使用して元素分析を行った。
【０１２５】
ＧＣ−ＭＳ分析は、５９７１質量選択検出器および７６７３自動回収装置を備えたＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ５８９０  ＳｅｒｉｅｓＩＩガスクロマトグラフで、または５９７３Ｎ  ＭＳＤおよびＡｎａｔｕｎｅ  Ｆｏｃｕｓロボットによる液体ハンドリングシステム／自動回収装置を備えたＡｇｉｌｅｎｔ６８９０  Ｐｌｕｓ  ＧＣで実施した。溶融シリカ毛管カラム（１０ｍまたは１２ｍの架橋した５％フェニルメチルシリコーン）を使用し、オーブンの温度を２０℃／分の速度で５０℃から２８０℃に傾斜させた。ＵＨＰグレードのヘリウムをキャリアガスとして使用した。使用したネジ式キャップの自動回収装置バイアルは、Ｔｈｅｒｍｏｑｕｅｓｔ  Ｉｎｃ．から供給されたものであり、テフロン(登録商標）／シリコーン／テフロン(登録商標）隔壁および０．２ｍｌのマイクロインサートを取り付けた。
【０１２６】
ＮＭＲデータによって、それぞれ以下の化合物であることを確認した。
【０１２７】
中間体３ａ：６−Ｂｐｉｎ−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
窒素充填グローブボックス内で、［Ｉｒ（Ｃｌ）（ＣＯＥ）２］２（２３．８ｍｇ、２６．６×１０−３ｍｍｏｌ、２．５ｍｏｌ％）およびｄｔｂｐｙ（１４．３ｍｇ、５３．２×１０−３ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）のＴＨＦ２ｍｌ中溶液に、ＴＨＦ３ｍｌ中、Ｂ２ｐｉｎ２（２７０ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、１当量）および１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン１ａ（２００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の混合物を添加した（全体積５ｍｌ）。混合物を激しく撹拌して完全に混合するようにし、アンプルに移し、テフロンヤング製の（Ｔｅｆｌｏｎ  Ｙｏｕｎｇ’ｓ）栓で封止し、８０℃で加熱した。３日後、混合物をＧＣ／ＭＳで分析し、次いで溶媒を真空下で除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにかけて（ヘキサン：ＤＣＭ、５０：５０）、２４２ｍｇ（７２％）の３ａ；Ｍ．ｐ．＝１０４〜１０６℃を得ることができた。
【０１２８】
中間体４ａ：６−イソプロペニル−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
窒素充填グローブボックス内で、６−Ｂｐｉｎ−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン３ａ（５０ｍｇ、１５９×１０−３ｍｍｏｌ）および２−ブロモプロペン（１９．１ｍｇ、１５９×１０−３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン１ｍｌ中溶液を入れた、テフロンヤング製の栓で封止したアンプルに、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．７８ｍｇ、７．９５×１０−３ｍｍｏｌ）およびＰＰｈ３（４．１５ｍｇ、１５．９×１０−３ｍｍｏｌ）（全体積２ｍｌ）の１，４−ジオキサン溶液を添加した。この混合物に、Ｋ３ＰＯ４水溶液（１０１ｍｇ、４７７．５×１０−３ｍｍｏｌ）１ｍｌを窒素下で添加し、次いで反応混合物を８０℃で加熱した。３時間後、ｉｎ  ｓｉｔｕでのＧＣ／ＭＳは、ボロン酸エステル化合物のアルケン生成物への変換を示した。生成物を酢酸エチルで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィーにかけて（６０：４０のヘキサン：ＤＣＭ）、６６ｍｇ（９０％）の４ａを得た。
【０１２９】
中間体５ａ：６−（２−Ｂｐｉｎ−１−メチル−ビニル）−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
窒素充填グローブボックス内で、トランス−［Ｒｈ（Ｃｌ）（ＣＯ）（ＰＰｈ３）２］（１２．１ｍｇ、１７．５×１０−３ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）の、トルエン／アセトニトリル（３：１）混合物２ｍｌ中溶液に、３：１のトルエン／アセトニトリル溶媒（全溶媒体積４ｍｌ）２ｍｌの８９．２ｍｇ（３５１×１０−３ｍｍｏｌ、１当量）のＢ２ｐｉｎ２および６−イソプロペニル−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン４ａ（８０ｍｇ、０．３５０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を激しく撹拌して完全に混合するようにし、アンプルに移し、テフロンヤング製の栓で封止し、次いで８０℃で加熱した。反応をＧＣ／ＭＳでモニタした。３日後、溶媒を真空下で除去し、ヘキサン／ＤＣＭ（６０：４０）混合物に再溶解し、次いでシリカゲルクロマトグラフィーにかけて（ヘキサン／ＤＣＭ、６０：４０）、９８ｍｇ（８０％）；Ｍ．ｐ．１２８〜１３０℃の７を得た。
【０１３０】
化合物６ａ（ｉ）：ＴＴＮＰＢ、４−［２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−プロペニル］−安息香酸（Ｒ’＝Ｈ）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、５ａ（１４２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、および４−ヨード安息香酸（１２１ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｃｍ３）に溶解し、グローブボックス内のシュレンク管に添加した。カニューレを介して脱ガスＨ２Ｏ（３ｃｍ３）中Ｋ３ＰＯ４（２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加し、ＧＣＭＳ分析によって６ａ（ｉ）の完全消費が示されるまで混合物を加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｃｍ３）を添加し、混合物をＤＣＭ（３×１０ｃｍ３）で抽出し、有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。
【０１３１】
４［２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−安息香酸メチルエステル６ａ（ｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）
乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−［２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−［１，３，２］−ジオキサボロラン５ａ（０．４０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）、４−ヨード安息香酸メチルエステル（０．２４ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．５７ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、および脱ガスＤＭＦ（１５ｍＬ）を厚肉ガラス管に添加し、ヤング製の栓で封止した。管をシュレンクラインに接続し、カニューレを介して脱ガスＨ２Ｏ（３ｍＬ）を添加した。ＧＣＭＳ分析によって出発材料の完全消費が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物をふわふわした白色粉末６ａ（ｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）（０．２８ｇ、８４％）；ｍｐ１３７〜１３９℃として得た。
【０１３２】
３−［２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−安息香酸メチルエステル６ａ（ｉｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）
乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−［２−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−［１，３，２］−ジオキサボロラン５ａ（０．４０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）、３−ヨード安息香酸メチルエステル（０．２４ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．５７ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、および脱ガスＤＭＦ（１５ｍＬ）を厚肉ガラス管に添加し、ヤング製の栓で封止した。管をシュレンクラインに接続し、カニューレを介して脱ガスＨ２Ｏ（３ｍＬ）を添加した。ＧＣＭＳ分析によって出発材料の完全消費が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物をふわふわした白色粉末６ａ（ｉｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）（０．２５ｇ、７５％）；ｍｐ８６〜８８℃として得た。
【０１３３】
中間体：２，５−ジクロロ−２，５−ジメチルヘキサン
濃ＨＣｌ（３７％ｖ／ｖ、ｄ＝１．１８、２５０ｍｌ）を、５００ｍｌ円錐フラスコ中、２，５−ジメチル−２，５−ヘキサンジオール（２０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）に注意深く添加した。混合物を２４時間撹拌し、次いで濾過し、沈殿物を水３×２００ｍｌで洗浄した。白色結晶をジエチルエーテルに再溶解し、水１００ｍｌで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空下で除去して、２，５−ジクロロ−２，５−ジメチルヘキサン１２．９ｇ（５０％）を白色固体；Ｍ．ｐ．＝６２〜６４℃として得た。
【０１３４】
中間体１ｂ：１，１，４，４，６−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレンの合成
磁気撹拌棒および還流冷却器を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコに、２，５−ジクロロ−２，５−ジメチルヘキサン（１０ｇ、５４．５ｍｍｏｌ）、トルエン（１０ｇ、１１０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ５０ｍｌを添加した。激しく撹拌したこの溶液に、ＡｌＣｌ３（１００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した結果、ガス性ＨＣｌが急速に発生した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いでさらに１５分間還流して、赤色溶液を得た。冷却後、撹拌した溶液に１０ｍｌの２０％ＨＣｌ水溶液を添加し、反応混合物が透明／白色に変化した。有機相を水で洗浄し、ヘキサン２×１００ｍｌで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。クーゲルロール蒸留（４０〜１００℃、３×１０−４トール）によって、分析的に純粋なサンプル１ｂ（１０．５ｇ、９２％）；Ｍ．ｐ．３０〜３２℃を得た。
【０１３５】
中間体：１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−エタノン
塩化アセチル（２．３ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ５０ｍｌを入れた、磁気撹拌棒および還流冷却器を備えた２５０ｍｌの三口丸底フラスコに、１，１，４，４，６−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン１ｂ（５ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＡｌＣｌ３（７．５ｇ、５６．２ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した（約０．５ｇ部）。褐色の混合物を３０分間撹拌し、次いで１５分間加熱還流した。反応を完了するために、追加のＡｌＣｌ３（１〜２ｇ）を必要とした。冷却した反応混合物を、激しく撹拌した氷水２００ｍｌに注いだ後、２０％の塩酸水溶液５０ｍｌで酸化し、酢酸エチル１００ｍｌを添加した。有機相が黄色になるまで１５分間撹拌を継続した。有機相を酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。クーゲルロール蒸留（８０〜１２０℃、３×１０−４トール）によって、分析的に純粋なサンプル１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）エタノン５．３１ｇ（８８％）を白色固体；ｍ．ｐ．５４〜５６℃として得た。
【０１３６】
中間体４ｂ：６−イソプロペニル−１，１，４，４，７−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレンの合成
窒素充填グローブボックス内で、１−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）エタノン（０．５ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）および乾燥ＴＨＦ５０ｍｌを入れた、磁気撹拌棒を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコに、［＋ＰＰｈ３Ｍｅｌ］（１．２４ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）に次いでｔＢｕＯＫ（３４３ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で撹拌した。２４時間後、ｉｎ  ｓｉｔｕでのＧＣ／ＭＳ分析によってカルボニル化合物のアルケン生成物への完全な変換が示された。混合物を濾過して塩を除去した。溶媒を真空下で除去し、得られた固体をヘキサンに再溶解し、次いで冷蔵庫で２４時間冷却して、ＰＰｈ３Ｏを結晶化した。混合物を濾過し、再び冷却して、さらなるＰＰｈ３Ｏを除去した。このステップは、ＰＰｈ３Ｏの全てを除去するために少なくとも４回反復しなければならない。最後に溶媒を真空下で除去して、純粋なアルケンを得た。あるいは、より早い精製方法は、濾過による塩の除去後に真空下で濃縮し、次いでクーゲルロール蒸留（１００〜１４０℃、３×１０−４トール）するものであり、それによって分析的に純粋なサンプル４ａ（３９６ｍｇ、８０％）；ｍ．ｐ．３９〜４０℃が得られた。
【０１３７】
中間体５ｂ：６−（２−Ｂｐｉｎ−１−メチル−ビニル）−１，１，４，４，７−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
窒素充填グローブボックス内で、トランス−［Ｒｈ（Ｃｌ）（ＣＯ）（ＰＰｈ３）２］（２８．５ｍｇ、４１．３×１０−３ｍｍｏｌ）のトルエン／アセトニトリル（３：１）混合物２ｍｌ中溶液に、３：１のトルエン／アセトニトリル２ｍｌ中、Ｂ２ｐｉｎ３（２０１ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）および６−イソプロペニル−１，１，４，４，７−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン４ｂ（２００ｍｇ、８２６×１０−３ｍｍｏｌ）を添加した（全溶媒体積４ｍｌ）。混合物を激しく撹拌して完全に混合するようにし、アンプルに移し、テフロンヤング製の栓で封止し、次いで８０℃で加熱した。反応をｉｎ  ｓｉｔｕでのＧＣ／ＭＳでモニタした。３日後、溶媒を真空下で除去し、得られた固体をヘキサン／ＤＣＭ（６０：４０）混合物に再溶解し、次いでシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン／ＤＣＭ（６０：４０）で溶離して、１５１ｍｇ（５０％）の生成物５ｂを白色固体Ｍ．ｐ．＝７８〜８０℃として得た。
【０１３８】
中間体７ａ：６−ブロモ−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン１ａ（１０．０ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｃｍ３）中溶液に、Ｎ２下の０℃でＢｒ２（１５．５８ｇ、９７．５ｍｍｏｌ）を添加した。ＤＣＭ（１０ｃｍ３）中ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（８．２７ｇ、５８．３ｍｍｏｌ）を、２時間かけて滴加した。反応混合物を４０／６０のＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１５０ｃｍ３）で希釈し、飽和Ｎａ２ＳＯ３溶液（１００ｃｍ３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｃｍ３）、およびＨ２Ｏ（１００ｃｍ３）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で除去して、暗褐色油を得た。クーゲルロール蒸留（１２０℃、８×１０−３ミリバール）によって、７ａを薄黄色の結晶（１１．０２ｇ、７７．８％）；Ｍ．ｐ．４３℃として得た。
【０１３９】
中間体７ｂ：６−ブロモ−１，１，４，４，７−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
１，１，４，４，６−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン１ｂ（４．００ｖｇ、１９．７８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｃｍ３）中溶液に、Ｎ２下の０℃でＢｒ２（５．６９ｇ、３５．６０ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＣＭ（１０ｃｍ−３）中ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（３．０８ｇ、２１．７６ｍｍｏｌ）を、２時間かけて滴加した。反応混合物を１時間撹拌し、次いで４０／６０のＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１５０ｃｍ３）で希釈し、飽和Ｎａ２ＳＯ３溶液（１００ｃｍ３）、飽和ＨＣＯ３溶液（１００ｃｍ３）、およびＨ２Ｏ（１００ｃｍ３）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を除去して、７ｂをふわふわした白色粉末（４．９８ｇ、８９．５％）；Ｍ．ｐ．９１℃として得た。
【０１４０】
中間体８ａ：２−メチル−４−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）ブト−３−イン−２−オール（Ｐ＝ジメチルカルビノール）
ＰｄＣｌ２（０．３３１ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（０．２７４ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、７ａ（５．０ｇ、１８．７１ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（２．４５ｇ、９．３５ｍｍｏｌ）を、５００ｃｍ３のシュレンクフラスコに入れ、フラスコの空気を抜き、Ｎ２ガスで３回充填し直した。乾燥した脱ガストリエチルアミン（１５０ｃｍ３）を、カニューレを介して添加し、シリンジを介して２−メチルブト−３−イン−２−オール（４．７２ｇ、５６．１３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をＮ２下の７０℃で３日間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣をヘキサンに溶解し、シリカゲルプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＥｔＯＡＣ／ヘキサンで濾過した。ＥｔＯＡＣ／ヘキサン溶液を、希釈ＨＣｌ溶液（水溶液）（１００ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去して、８ａ（Ｐ＝ジメチルカルビノール）を少し濁った白色の固体（２．２５ｇ、４５％）；Ｍ．ｐ．１０７℃として得た。
【０１４１】
中間体８ａ（Ｐ＝ＴＭＳ）：トリメチル−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イルエチニル）−シラン
ＰｄＣｌ２（０．５５ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（０．６２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、７ａ（８．３ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（４．０６ｇ、１５．５３ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で５００ｃｍ３のシュレンクフラスコに入れた。カニューレを介して乾燥脱ガストリエチルアミン（１５０ｃｍ３）を添加し、シリンジを介してＴＭＳＡ（６．０９ｇ、６２．１ｍｍｏｌ）を添加した。ＧＣＭＳ分析が反応の完了を示すまで（１８時間）、Ｎ２下の７０℃で終夜溶液を撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣をヘキサンに溶解し、シリカプラグを介してヘキサンで濾過し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。真空下で溶媒を除去することによって、８ａ（Ｐ＝ＴＭＳ）を橙色濃化油（７．４２ｇ、８４％）として得たが、これは約１０％のＴＭＳジインおよび他のＴＭＳ担持不純物；ｍ／ｚ（ＥＩ−ＭＳ）２８４（２５％、Ｍ＋）、２６９（１００％、Ｍｅ喪失）も含有していた。
【０１４２】
中間体９ａ：６−エチニル−１，１，４，４−テトラメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン
２−メチル−４−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）ブト−３−イン−２−オール８ａ（Ｐ＝ジメチルカルビノール）（７．４２ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）の１：５のトルエン／ＭｅＯＨ１００ｃｍ３中溶液に、新しい粉末ＫＯＨ（２．９２ｇ、５２．３ｍｍｏｌ）を添加した。ＧＣＭＳ分析が反応の完了を示すまで（１８時間）、溶液を撹拌した。１：１のヘキサン／Ｈ２Ｏ（１００ｃｍ３）を添加して、極性溶媒と非極性溶媒とを分離した。混合物を希釈ＨＣｌ溶液（水溶液）（１００ｃｍ３）に次いで水（２×１００ｃｍ３）で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で溶媒を除去して、９ａを橙色の濃化油（４．９７ｇ、９０％）として得た。
【０１４３】
化合物１０ａ（ｉ）：４−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イルエチニル）安息香酸（Ｒ’＝Ｈ）
Ｃｕｌ（０．０１６４ｇ、０．０３２１ｍｍｏｌ）、４−ヨード安息香酸（０．７９７ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０．０２２５ｇ、０．０３２１ｍｍｏｌ）をＮ２下で２５０ｃｍ３のシュレンクフラスコに入れ、９ａ（１．２２４ｇ、５．７７ｍｍｏｌ）を添加した。カニューレを介して乾燥脱ガスＥｔ３Ｎ（１５０ｃｍ３）を添加し、反応混合物をＮ２下で３日間撹拌した。Ｅｔ３Ｎの体積を、真空下で５０％低減し、残りの混合物をＥｔ２Ｏ（１００ｃｍ３）で希釈し、５％のＨＣｌ溶液（水溶液）（３×８０ｃｍ３）およびブライン（３×８０ｃｍ３）で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥した。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、真空下で乾燥して粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ勾配溶離）による精製によって１０ａ（ｉ）を得、それをヘキサンから再結晶して、少し濁った白色の粉末（０．３０ｇ、２８％）；Ｍ．ｐ．２５４〜２５６℃を得た。
【０１４４】
化合物６ｂ（ｉ）：４−［２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）プロペニル］安息香酸（Ｒ’＝Ｈ）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、５ｂ（１５０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、および４−ヨード安息香酸（１２１ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｃｍ３）に溶解し、グローブボックス内のシュレンク管に添加した。カニューレを介して脱ガスＨ２Ｏ（３ｃｍ３）中、Ｋ３ＰＯ４（２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加し、ＧＣＭＳ分析が５ｂの完了な消費を示すまで混合物を加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｃｍ３）を添加し、混合物をＤＣＭ（３×１０ｃｍ３）で抽出し、有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｃｍ３）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。
【０１４５】
４−［２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−安息香酸メチルエステル６ｂ（ｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）
乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−［２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−［１，３，２］−ジオキサボロラン５ｂ（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、４−ヨード安息香酸メチルエステル（０．１８ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．４２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、および脱ガスＤＭＦ（１５ｍＬ）を厚肉ガラス管に添加し、ヤング製の栓で封止した。管をシュレンクラインに接続し、カニューレを介して脱ガスＨ２Ｏ（３ｍＬ）を添加した。ＧＣＭＳ分析によって出発材料の完全消費が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物６ｂ（ｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）をふわふわした白色粉末（０．２２ｇ、８６％）；ｍｐ１３７〜１３９℃として得た。
【０１４６】
３−［２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−安息香酸メチルエステル６ｂ（ｉｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）
乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２８５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−［２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−プロペニル］−［１，３，２］−ジオキサボロラン５ｂ（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、３−ヨード安息香酸メチルエステル（０．１８ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．４２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、および脱ガスＤＭＦ（１５ｍＬ）を厚肉ガラス管に添加し、ヤング製の栓で封止した。管をシュレンクラインに接続し、カニューレを介して脱ガスＨ２Ｏ（３ｍＬ）を添加した。ＧＣＭＳ分析によって出発材料の完全消費が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物６ｂ（ｉｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）をふわふわした白色粉末（０．２２ｇ、８６％）；ｍｐ９１〜９２℃として得た。
【０１４７】
４−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イルエチニル）−安息香酸メチルエステル１０ｂ（ｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）
Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２９ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）、Ｃｕｌ（８ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）、４−ヨード安息香酸メチルエステル（１．１ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、および６−エチニル−１，１，４，４，７−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン９ｂ（１．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で２５０ｍＬのシュレンクフラスコに入れた。カニューレを介して乾燥脱ガスＥｔ３Ｎ（１００ｍＬ）を添加した。反応物をＮ２下で３日間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、ＳｉＯ２プラグを介して残渣を濾過し、ヘキサン（２００ｍＬ）および５０／５０のＤＣＭ／ヘキサン（２００ｍＬ）で溶離した。ＤＣＭ／ヘキサン画分を真空下で蒸発させて、薄褐色固体を得た。ＥｔＯＨからの再結晶化によって白色麺状の１０ｂ（ｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）（０．１２ｇ、７７％）；ｍｐ１３５〜１３７を得た。
【０１４８】
３−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イルエチニル）−安息香酸メチルエステル１０ｂ（ｉｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）
Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２９ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）、Ｃｕｌ（８ｍｇ、０．００４２ｍｍｏｌ）、３−ヨード安息香酸メチルエステル（１．１ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）、および６−エチニル−１，１，４，４，７−ペンタメチル−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン９ｂ（１．０ｇ、４．４２ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で２５０ｍＬのシュレンクフラスコに入れた。カニューレを介して、乾燥脱ガスＥｔ３Ｎ（１００ｍＬ）を添加した。反応物をＮ２下で３日間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、ＳｉＯ２プラグを介して残渣を濾過し、ヘキサン（２００ｍＬ）および５０／５０のＤＣＭ／ヘキサン（２００ｍＬ）で溶離した。ＤＣＭ／ヘキサン画分を真空下で蒸発させて、薄褐色固体を得た。ＥｔＯＨからの再結晶化によって白色麺状の１０ｂ（ｉｉ）（Ｒ’＝Ｍｅ）（０．１１ｇ、７１％）；ｍｐ１１５〜１１７を得た。
【０１４９】
化合物１１ａ（ｉｉ）：３−（５，５，８，８−テトラメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イルエチニル）ベンゾヒドロキサム酸
Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）ヒドロキシルアミン（０．２ｍｌ、０．９２ｍｍｏｌ）および乾燥ＴＨＦ（２ｍｌ）を、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら−７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ溶液０．３７ｍｌ）を撹拌溶液にゆっくり添加し、−７８℃に再冷却した。１０ａ（ｉｉ）（１６０ｍｇ、０．４６２ｍｍｏｌ）を、撹拌溶液に添加した（依然アルゴン下）。これを−７８℃で２時間撹拌し、次いで室温に温め、終夜撹拌した。次いで溶液を加熱還流し、５時間で曇りが生じた（生成物の形成？）。次いで反応を１０％のＨＣｌ（〜４ｍｌ）でクエンチし、１時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（４ｍｌ）を溶液に添加し、次いで酢酸エチル（３×１５ｍｌ）で抽出した。混合有機物をブライン（７ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を除去して粗油（１７０ｍｇ）を得た。混合物１４０ｍｇをシリカゲルクロマトグラフィーで分離して、１１ａ（ｉｉ）を薄黄色固体（５５ｍｇ、４０％）として得た。加熱アセトニトリルからの固体の再結晶化によって、鮮明な白色の固体を得た。
【０１５０】
化合物１２（ｉ）（Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝Ｈ）
窒素雰囲気下、３ａ（５１５ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、４−ブロモケイ皮酸（３９６ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ、１．１当量）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５８．７ｍｇ、５１μｍｏｌ）、およびＢａ（ＯＨ）２・８Ｈ２Ｏ（１．２６ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／精製水（５：１、１７ｍｌ）の脱ガス混合物に溶解した。固体は完全には溶解しなかった。反応物を、封止管中８０℃で３日間加熱し、反応を希釈塩酸（２ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で抽出した。有機相をブライン（１×１０ｍｌ）および希釈塩酸（３×２０ｍｌ）で洗浄し、混合水性洗浄物をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し直した。混合有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。少し濁った白色の粗生成物を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（溶離剤としてＴＨＦ）で精製し、まずは加熱ＴＨＦ、次いで−１８℃でアセトンから再結晶化して、１２（ｉ）を白色結晶固体（３６０ｍｇ、６６％収率）として得た。
【０１５１】
３−［４−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−フェニル］−アクリル酸メチルエステル１２（ｉ）（Ｒ＝Ｍｅ、Ｒ’＝Ｍｅ）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、５，５−ジメチル−２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−［１，３，２］ジオキサボリナン３ａ（Ｒ＝Ｍｅ）（０．２０ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．２９ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、および４−（３−ブロモ−フェニル）−アクリル酸メチルエステル（０．１４ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、ヤング製の栓を取り付けた厚肉ガラス管に、脱ガスＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２ｍＬ）と共に入れた。ＧＣＭＳ分析によって反応の完了が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔ２Ｏ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物１２（ｉ）（Ｒ＝Ｍｅ、Ｒ’＝Ｍｅ）をふわふわした白色粉末（０．１７ｇ、８０％）；ｍｐ１５２〜１５３として得た。
【０１５２】
３−［３−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−フェニル］−アクリル酸メチルエステル１２（ｉｉ）（Ｒ＝Ｍｅ、Ｒ’＝Ｍｅ）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、５，５−ジメチル−２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−［１，３，２］ジオキサボリナン３ａ（Ｒ＝Ｍｅ）（０．２ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．２９ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、および３−（３−ブロモフェニル）アクリル酸メチルエステル（０．１４ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、ヤング製の栓を取り付けた厚肉ガラス管に、脱ガスＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２ｍＬ）と共に入れた。ＧＣＭＳ分析によって反応の完了が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔ２Ｏ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物１２（ｉｉ）（Ｒ＝Ｍｅ、Ｒ’＝Ｍｅ）をふわふわした白色粉末（０．１７ｇ、８３％）；ｍｐ１２１〜１２２として得た。
【０１５３】
化合物１２（ｉｉ）（Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝Ｈ）
窒素雰囲気下、３ａ（５３４ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、３−ブロモケイ皮酸（４０６ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５７．８ｍｇ、５０μｍｏｌ）、およびＢａ（ＯＨ）２・８Ｈ２Ｏ（１．２５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／精製水（５：１、１７ｍｌ）の脱ガス混合物に溶解した。固体は完全には溶解しなかった。反応物を、封止管中８０℃で３日間加熱し、反応を希釈塩酸（２ｍｌ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機相をブライン（１×１０ｍｌ）および希釈塩酸（５×２０ｍｌ）で洗浄し、混合水性洗浄物を、ＤＣＭ（２×２０ｍｌ）で抽出し直した。混合有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製（溶離剤として１：１のヘキサン：ＤＣＭ）およびまずはＥｔＯＡｃ、次いでアセトンからの再結晶化によって、１１（ｉｉ）を白色結晶固体（２８０ｍｇ、３７％収率）として得た。
【０１５４】
化合物１３（Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝Ｈ）
窒素雰囲気下、３ａ（５３２ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、６−ブロモ−２−ナフトエ酸（４３９ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５８．９ｍｇ、５１μｍｏｌ）、およびＢａ（ＯＨ）２・８Ｈ２Ｏ（１．２５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／精製水（５：１、１７ｍｌ）の脱ガス混合物に溶解した。固体は完全には溶解しなかった。反応物を、封止管中８０℃で３日間加熱し、反応を希釈塩酸（１５ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を水（３×２０ｍｌ）で洗浄し、混合水性洗浄物を、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し直した。混合有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲルパッド（溶離剤＝ＥｔＯＡｃ）を介して、粗生成物を濾過した。−２０℃でのアセトンからの再結晶化によって、１３（２５０ｍｇ、４１％収率）の４つの産物を無色結晶として得た。
【０１５５】
３’，５’，５’，８’，８’−テトラメチル−５’，６’，７’，８’−テトラヒドロ２，２’］ビナフタレニル−６−カルボン酸メチルエステル１３（Ｒ＝Ｍｅ、Ｒ’＝Ｍｅ）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、５，５−ジメチル−２−（３，５，５，８，８−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−［１，３，２］ジオキサボリナン３ａ（Ｒ＝Ｍｅ）（０．２０ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（０．２９ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および６−ブロモ−ナフタレン−２−カルボン酸メチルエステル（０．１５ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ２充填グローブボックス内で、ヤング製の栓を取り付けた厚肉ガラス管に、脱ガスＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２ｍＬ）と共に入れた。ＧＣＭＳ分析によって反応の完了が示されるまで（２日）、混合物を８０℃で加熱した。希釈ＨＣｌ（水溶液）（２ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔ２Ｏ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を希釈ＨＣｌ（水溶液）（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカプラグを介してヘキサンに次いで１０％のＤＣＭ／ヘキサンで混合物を濾過し、溶媒を真空下で除去した。加熱ＥｔＯＨからの再結晶化によって、生成物１３（Ｒ＝Ｍｅ、Ｒ’＝Ｍｅ）をふわふわした白色粉末（０．１９ｇ、８４％）；ｍｐ１６２〜１６３として得た。
【０１５６】
実施例２：物理的および化学的安定性の決定
天然に存在するレチノイドは感受性があり異性化することを考慮して、改善された安定性および類似の生物活性を示す、本明細書に記載の幾つかの合成レチノイド誘導体を設計、合成、かつ精製した。異なる種類の哺乳動物幹細胞に対するこれらの分子の生物活性およびかかる細胞の分化を調節するそれらの能力を評価した。
【０１５７】
天然レチノイドの感受性を試験するために、ＤＭＳＯまたは重クロロホルムのいずれかの１０ｍＭサンプルを、３７℃、実験室光（約５００ルクス）、白色光（約１２５０ルクス）、またはＵＶ光のいずれかに曝露した。異性化の際に、サンプルのＨＮＭＲスペクトルを採取し、純粋なサンプルのＨＮＭＲスペクトルと比較した。ＨＮＭＲスペクトルからのピーク強度％を使用して、様々なレチノイン酸および存在し得る任意の他の化合物のレベルを定量化した。
【０１５８】
３７℃で異性化したレチノイン酸
レチノイン酸溶液を３７℃の水浴に入れて、様々な時間で温度感受性を試験した。３７℃での１時間後、最初のレチノイン酸のおよそのレベルは、１３ＣＲＡサンプルについては８５％であり、ＡＴＲＡサンプルについては１００％であった。これが、２４時間後には１３ＣＲＡサンプルについては７３％に、ＡＴＲＡサンプルについては８６％に低下した。
【０１５９】
ＡＴＲＡおよび１３ＣＲＡのサンプルを、室温に１週間置いた。１３ＣＲＡの分解溶液は、約７８％の１３ＣＲＡを含有していた。ＡＴＲＡの溶液はより安定であり、依然９４％のＡＴＲＡを含有していた。上記実験の全ては、光の下のみならず３７℃およびさらには室温におけるレチノイン酸固有の不安定性を強調するものである。
【０１６０】
レチノイン酸の光異性化
様々な時間で３つの光条件の１つにＡＴＲＡ、９ＣＲＡ、および１３ＣＲＡのサンプルを置くことによって、レチノイン酸の光に対する感受性を試験した。サンプルを、通常の実験室光条件、白色光、またはＵＶ光のいずれかに曝露した。次いで、ＨＮＭＲスペクトルを純粋なサンプルのものと比較した。
【０１６１】
実験室光
１時間および２４時間、実験室光で異性化したＡＴＲＡおよび１３ＣＲＡのサンプルに見られた天然レチノイン酸異性体の相対比を、図１および２に見ることができる。ＨＮＭＲスペクトルの新しいピークは大きさが増大し、したがって異性化生成物のレベルは、２４時間かけて増大したが、程度は大きくなかった。ＡＴＲＡは、特に１時間までの曝露で１３ＣＲＡよりもわずかに安定と思われる。
【０１６２】
日光
図３の結果は、図１および２のものとは非常に異なっており、日光での６時間のレチノイド異性化は、はるかに大きな分解度を示している。調査過程にわたって分解をより示した唯一のサンプルは、ＵＶ光に１２時間曝露したサンプルであった。９ＣＲＡのレベルは、両方のサンプルの中で最も増大していたようにみえるが、１３ＣＲＡサンプルはより著しく増大した。他の多くの化合物は、ＨＮＭＲで見ることができた。
【０１６３】
ＵＶ光
図４および５は、１時間および１２時間、ＵＶ光で異性化したＡＴＲＡおよび１３ＣＲＡのサンプルに見られた天然レチノイン酸の相対比を示す。ＡＴＲＡおよび１３ＣＲＡは、１２時間で急速に分解する。図３に示されたサンプルとは対照的に、ＡＴＲＡのレベルは、図４に示されたサンプルの中で最も増大した。１３ＣＲＡのレベルは、図５に示されたサンプルの中で最も増大した。この差異は、より広い波長のスペクトルへの曝露によって、Ｃ９〜Ｃ１０結合での異性化が促進される一方、より短い波長のより狭い範囲の光は、Ｃ１〜Ｃ１４位において全トランス型から１３−シス型の配置に、または１３−シス型から全トランス型の配置に戻すいずれかの異性化を促進する傾向があるようにみえることを示している。
【０１６４】
白色光
ＡＴＲＡのレベルは、白色光への曝露の１時間後に１００％から７６％に減少し、６時間には４３％に減少し、２４時間後には２１％に減少したことが見出された（データ示さず）。また、分解速度は６時間後に著しく減速する。
【０１６５】
レチノイン酸異性化の以前の調査によって、白色光に３０分間曝露したエタノール中のＡＴＲＡのサンプルについての異性体の相対濃度は、ＡＴＲＡが２５％、９ＣＲＡが１０％、１１ＣＲＡが１０％、１３ＣＲＡが３０％、９，１３−ジシス型ＲＡが５％、不明の化合物が２０％であることが明らかとなっている（Ｇｉｇｕｅｒｅ  Ｖ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１９９４年、１５、６１〜７０頁）。これらの異性体は、光定常状態に達したと思われる。この調査で異性化したサンプルから、天然レチノイン酸を含む少なくとも９つの異性化生成物が特定された。
【０１６６】
合成レチノイド
合成レチノイド１２（ｉｉ）、１２（ｉ）、および１３のサンプルを、実験室光に１時間、白色光に１時間、およびＵＶ光に１時間曝露した。実験室光および白色光に曝露したサンプルからのＨＮＭＲスペクトルは、純粋な化合物のものと同じであった。実験室光または白色光の１時間後には分解の徴候は観察されなかった。１２（ｉｉ）および１２（ｉ）のサンプルは、ＵＶ光への曝露後に少量の分解を示した。１３は分解の徴候を示さなかった。ＵＶ光は、これらの合成レチノイドの共役二重結合領域を刺激する可能性が高い周波数で発光し、それによってわずかな分解が観察される。１２（ｉｉ）および１２（ｉ）は、実験室光および白色光の下で安定であった。１３は、全ての形態の光に曝露した場合にも安定であった。合成レチノイドは、それらの天然相当物よりもはるかに安定であることが証明された。
【０１６７】
幾つかの合成レチノイド対天然系の相対的安定性を研究するために、それぞれの溶液を異なる環境条件に曝露し、次いでＮＭＲによって研究した。図６および７は、ＡＴＲＡがＤＭＳＯ中、暗室の空気中で３日にわたりかなり安定であるが、蛍光への曝露では６３％の異性化および分解を生じ、ＮＭＲによると３日後には３７％しか残らないことを明確に示している。それとは逆に、合成レチノイド１０ａ（ｉ）（Ｒ’＝Ｈ）は、同じ条件下で完全に安定である。
【０１６８】
実施例３：生物活性の決定
これらの分子を、様々な濃度で異なる哺乳動物幹細胞系、即ち（１）ヒトの多能性幹細胞および（２）ラット成体の神経前駆細胞に曝露することによって、化合物６、１０、１１、１２、および１３の生物活性を決定した。
【０１６９】
ヒトの多能性幹細胞での化合物試験
ヒトの多能性幹細胞による組織発生は、子宮内の正常な胚形成中に行われるとかなり類似しており、この細胞系は、証明され許容された細胞分化のモデルとなっている（Ｐｒｚｙｂｏｒｓｋｉら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｅｖ．、２００４年、１３：４００〜４０８頁）。
【０１７０】
これらの幹細胞が分化する際に変化することが知られている細胞表面抗原の発現を、フローサイトメトリーによって評価した。試験分子１０ａ（ｉ）が、幹細胞マーカーＴＲＡ−１−６０およびＳＳＥＡ−３の抑制を誘発した一方、分化組織に関連する抗原Ａ２Ｂ５およびＶＩＮＩＳ−５３は、１４日間の試験期間にわたって発現の顕著な増大を示した。これらの変化は、異性化されていないＡＴＲＡによって誘発されたものと直接比較できるものであった。
【０１７１】
試験化合物１０ａ（ｉ）は、形態学的に特定可能なニューロンの形成を誘発し、これを免疫細胞化学によって確認した。試験化合物１０ａ（ｉｉ）は異なる分子構造のものであり、細胞分化の代替経路を誘発して、上皮細胞の形成をもたらした。ニューロンは、化合物１０ａ（ｉｉ）で処理した培養物では特定されなかった。
【０１７２】
試験化合物１０ａ（ｉ）は、細胞発生において必須の生体作用物質であることが知られている天然ＡＴＲＡと本質的に同一の挙動を示した。実際には、これらの２つの化合物は、ＤＭＳＯ溶液中、正常な周囲条件下（正常な空気、室温、天然、および蛍光において）、それらの構造に基づいて数週もの間安定なままであると予測され、これが予備段階での結果である。これとは非常に対照的に、全てのレチノイン酸立体異性体が急速な異性化を受けて、分解生成物と共に、まだ（ＮＭＲおよびＨＰＬＣによって）特定されていないもの、さらなる異性体の３つの主な異性体の混合物をもたらす。化合物１０ａ（ｉ）は、ＡＴＲＡに直接的に重ね合わせることができるが、１０ａ（ｉｉ）は、２つの重要なシス型立体異性体に同様に密に関係しており、それによって生物活性の保存が観察される。
【０１７３】
レチノイド１１ａ（ｉｉ）は著しい生物活性を有しており、その存在下で成長した培養物は、ほぼ即時に増殖を停止した。さらにレチノイドは、ＴＥＲＡ２．ｃｌ．ＳＰ１２細胞に対して強力な細胞毒性を示し、それらを４日以内に死滅させた。
【０１７４】
化合物６、１０、および１２の作用（複数可）をアッセイするために、フローサイトメトリーも使用した（図８および９）。これらの化合物は、幹細胞マーカーＴＲＡ−１−６０およびＳＳＥＡ−３の抑制を誘発したが、分化組織に関連する抗原Ａ２Ｂ５およびＶＩＮＩＳ−５３は、試験期間にわたって発現の顕著な増大を示した。これらの変化は、異性化されていないＡＴＲＡによって誘発されたものと直接比較できるものであった。これらのデータは、予測可能な形での細胞分化の誘発によって、幹細胞が試験分子に応答するということを明確に示している。
【０１７５】
免疫蛍光顕微鏡法によるタンパク質発現の分析は、ＡＴＲＡ、化合物ＥＣ２３（１０ａ（ｉ））、またはＥＣ１９（１０ａ（ｉｉ））（１０μＭ）のいずれかに２１日間曝露することによって誘発した細胞分化の代替経路を示した。ＡＴＲＡは、サイトケラチン−８で染色した扁平細胞の島によって示されるように、ニューロン（神経マーカーネスチン、Ｔｕｊ−１、およびＮＦ２００に対して陽性）および多数の上皮プラーク（ｐ）の形成を誘発した。ＥＣ２３への曝露は、あるとしてもごく少数の上皮プラークを生成し、主に神経分化を受ける細胞からなる、見掛け上より均質な培養物をもたらした。このことはさらに、ネスチンの、特に神経増殖の中枢を示す神経ロゼット（ｎｒ）の強い発現によって証明された。それとは逆に、ＥＣ１９は、ネスチン染色が少ない極めて少数のニューロンの形成と、Ｔｕｊ−１およびＮＦ２００に対して免疫陽性のほんのわずかの細胞の存在とを誘発した。しかし、多数のサイトケラチン−８陽性上皮プラークが認められた。
【０１７６】
成体神経前駆細胞での化合物試験
合成レチノイドＥＣ２３（１０ａ（ｉ））の生物活性は、成体ラットの海馬に由来する神経前駆細胞にそれを曝露することによって評価することもできた。これらの細胞は多能性であり、異性化されていないＡＴＲＡに応答して分化し、複雑な神経突起網をもたらすニューロンを主に形成する。試験化合物１０ａ（ｉ）に曝露した同じ細胞も、明確なニューロンに分化する。マーカーβ−チューブリン−ＩＩＩの免疫細胞化学的染色を使用して、ニューロンであることを確認した（データ示さず）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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