(57)【要約】  本発明は、生体分子結合リガンド、生体分子結合リガンドのコレクション、並びに生物学的混合物の精製、及び物質体に対する親和性を有するリガンドの同定におけるこれらの使用を提供する。リガンドは、式（ＩＩＩ）の化合物又は式（ＩＶ）の化合物であり、式（Ｉ）の化合物について、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよく、式（ＩＩ）の化合物について、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよい。2010532864.tif 000043
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物のコレクションであって、前記コレクションのそれぞれのメンバーは独立して、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）による化合物であり、
【化１】
2010532864.tif 000034
前記コレクションは、式（Ｉ）の化合物のみ、式（ＩＩ）の化合物のみ、又は式（Ｉ）と式（ＩＩ）の化合物の混合物を含み、
式（Ｉ）の化合物について、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよく、
式（ＩＩ）の化合物について、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよい
化合物のコレクション。
【請求項２】
Ｒ１ａが、支持体に結合したリンカーを含む置換基である、請求項１に記載のコレクション。
【請求項３】
Ｒ１ｂが水素である、請求項１又は請求項２に記載のコレクション。
【請求項４】
前記場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリールが、アセタール、アルキル、アリール、ヘミアセタール、アルコキシ、ケタール、ヘミケタール、ヘテロシクリル、オキソ、チオン、イミノ、ホルミル、ハロ、ヒドロキシ、チオカルボキシ、チオロカルボキシ、イミド酸、ヒドルキシアミド酸、チオノカルボキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、エーテル、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアナト、イソシアント、チオシアノ、イソチオクタノ、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、グアニジノ、テトラゾイル、イミノ、アミジン、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ、チオール、ジスルフィド、チオエーテル、スルホキシド、スルホニル、チオアミド、スルフィニルオキシ、スルフェート、スルホンアミド、スルホネート、スルファミノ、ホスフィノ、ホスホ、ホスフィニル、ホスホン酸、ホスホネート、ホスフェート、リン酸、亜リン酸、ホスホルアミダイト、ホスホルアミデート、シリル、オキシシリル、シロキシ、オキシシロキシ、及びスルホンアミノからなる群から独立して選択される１つ又は複数の置換基で置換されていてもよい、前記請求項のいずれか一項に記載のコレクション。
【請求項５】
前記場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリールが、ヒドロキシ、アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ハロ、ニトロ、スルホン酸、スルホンアミド、オキソ、チオン、カルボキシ、アミノ、ボロン酸、アミド、及びチオアミドからなる群から独立して選択される１つ又は複数の置換基で置換されていてもよい、請求項４に記載のコレクション。
【請求項６】
Ｒ２が、以下の置換基のリストから選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のコレクション：
【表１−１】
2010532864.tif 000035
【表１−２】
2010532864.tif 000036
【表１−３】
2010532864.tif 000037
【表１−４】
2010532864.tif 000038
（式中、アステリスク「＊」は結合箇所を表し、Ｇはアミノ酸の側鎖を表す）。
【請求項７】
Ｒ３が、以下の表に与えられるリストから選択される、請求項１〜３又は６のいずれか一項に記載のコレクション：
【表２】
2010532864.tif 000039
（式中、アステリスク「＊」は結合箇所を示す）。
【請求項８】
Ｒ４が、以下の表に与えられるリストから選択される、請求項１〜３、６又は７のいずれか一項に記載のコレクション：
【表３−１】
2010532864.tif 000040
【表３−２】
2010532864.tif 000041
（式中、アステリスク「＊」は結合箇所を示し、Ｇはアミノ酸の側鎖を表す）。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物についてのその他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４、又は式（ＩＩ）の化合物についてのその他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４が、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、及び場合により置換されたＣ５〜２０アリールの群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載のコレクション。
【請求項１０】
式（Ｉ）の化合物についてのその他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上、又は式（ＩＩ）の化合物についてのその他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上が、これらが結合している原子と一緒になって、場合により置換されたＣ５〜２０ヘテロシクリル基を形成している、請求項１に記載のコレクション。
【請求項１１】
前記化合物が分析用標識を有する、前記請求項のいずれか一項に記載のコレクション。
【請求項１２】
前記支持体が、ガラス、金、ポリスチレン、多糖、ポリアクリルアミド又はポリ（アルコキシド）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のコレクション。
【請求項１３】
少なくとも１０個のメンバーを有する、前記請求項のいずれか一項に記載のコレクション。
【請求項１４】
式（ＩＩＩ）の化合物、又は式（ＩＶ）の化合物：
【化２】
2010532864.tif 000042
（式中、化合物（ＩＩＩ）について、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、請求項１〜１２のいずれか一項における式（Ｉ）の化合物に従って定義され、
化合物（ＩＶ）について、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は、請求項１〜１２のいずれか一項における式（ＩＩ）の化合物に従って定義される）。
【請求項１５】
混合物から物質体を分離するための分離装置であって、デバイスは、請求項１４に記載の式（ＩＩＩ）の化合物、又は式（ＩＶ）の化合物を含む分離装置。
【請求項１６】
クロマトグラフィーカラムの形態での、請求項１５に記載の分離装置。
【請求項１７】
物質体に対する親和性を有する固定化したリガンドを同定するための方法であって、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物のコレクションを得るステップと、
前記コレクションのそれぞれのメンバーを、物質体を含む混合物と接触させるステップと、
前記コレクションを分析することによって、前記物質体がそれぞれのコレクションメンバーとどの程度結合しているかを求めるステップと
を含む方法。
【請求項１８】
前記混合物から前記コレクションを分離するステップをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
物質体に対する親和性を有する化合物を生成するための方法であって、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物のコレクションを得るステップと、
前記コレクションのそれぞれのメンバーを、物質体を含む混合物と接触させるステップと、
前記コレクションを分析することによって、前記物質体がそれぞれのコレクションメンバーとどの程度結合しているかを求めるステップと、
前記物質体に対する親和性を有するライブラリーメンバーを同定するステップと、
前記コレクションメンバーに基づく構造を有する化合物を調製するステップと
を含む方法。
【請求項２０】
前記コレクションメンバーに基づく構造を有する前記化合物が、
（ｉ）前記物質体と結合していると判定されたコレクションメンバーのリンカーを切断すること、或いは
（ｉｉ）成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップを含む方法であり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている方法、或いは成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップを含む方法であり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４の２つ以上は結合されている方法によって調製される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
混合物から物質体を分離するための方法であって、
物質体を含む混合物を、請求項１４に記載の化合物又は請求項１５若しくは請求項１６に記載の分離装置と接触させるステップと、
前記化合物又はデバイスに固定化した物質体から、生じた物質体が欠乏した混合物を分離するステップと
を含む方法。
【請求項２２】
前記化合物又はデバイスに固定化した物質体を、溶離液で処理するステップをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
分析試料中の物質体の存在を判定するための方法であって、
分析試料を、請求項１４に記載の化合物又は請求項１５若しくは請求項１６に記載の分離装置と接触させるステップと、
前記化合物又はデバイスを分析することによって、前記物質体が、前記化合物又はデバイスとどの程度結合しているかを判定するステップと
を含む方法。
【請求項２４】
前記化合物又は前記デバイスの前記化合物が、特定の疾患状態に関係する物質体に対する親和性を有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記物質体が核酸又はペプチドである、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ペプチドが血液タンパク質である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記血液タンパク質が凝固タンパク質である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記凝固タンパク質が、第ＶＩＩ因子及び第ＶＩＩＩ因子、並びにこれらの断片、変異体及び誘導体から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ペプチドが免疫グロブリンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫グロブリンが、ＩｇＧ又はその断片、変異体及び誘導体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のコレクションを調製するための方法であって、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている
ステップを含み、前記ステップは１又は複数回繰り返され、それぞれの繰り返しについて、Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤのうちの１つ又は複数が変更される
方法、
或いは成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている
ステップを含み、前記ステップは１又は複数回繰り返され、それぞれの繰り返しについて、Ａ、Ｃ又はＤのうちの１つ又は複数が変更される
方法。
【請求項３２】
請求項１４に記載の化合物を調製するための方法であって、成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の２つ以上は結合されている
ステップを含む方法、或いは成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている
ステップを含む方法。
【請求項３３】
請求項３１に記載の方法によって得られる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のコレクション。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［関連出願］
本願は、２００７年７月６日に出願された英国特許出願０７１３１８７．３号明細書に関連し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、生体分子結合リガンド、及び生物学的混合物の精製におけるその使用に関する。本発明は、リガンドのコレクション、及び生体分子に対する親和性を有する化合物の同定におけるその使用にも関する。
【０００３】
［背景］
ヒト疾患の最新の研究は、ゲノム又はｃＤＮＡマイクロアレイ試験などのハイスループット技術によって実施されるエントリーレベルのゲノム研究と並行して最初に開始することができる。これにより、モニターされる疾患状態と強く相関した、突然変異遺伝子産物又は個々の遺伝子発現のパターン変化の識別をもたらされることが多く、広範な候補遺伝子リストを迅速に作成することが可能になる。これらのＤＮＡ／ＲＮＡに基づく試験は、それ自体制限されるが、これは、こうした試験は、タンパク質が、リン酸化、及び複数のタンパク質間相互作用を介した構造の変化などを示すことができる、シグナル伝達状態の複雑な相互作用を考慮に入れないためである。したがって、臨床的なプロテオミクス試験の主な目的は、遺伝子発現によって同定されたにせよ、直接のタンパク質プロファイリング試験によって同定されたにせよ、特定の疾患状態に強く結びつけられる多数の候補タンパク質の完全な特徴づけであることが多い。
【０００４】
この手ごわい挑戦は、いくつかの個々のタンパク質が均質に精製されることが通常必要であり、時間がかかり、高価なプロセスである。これは、様々な重要なパラメータ、例えば、３次元結晶構造、翻訳後修飾、他のタンパク質との複合体形成、及び組織局在性試験を支援するための特異抗体の生成などを求めることが科学者に必要となることが多い。小分子エフェクターが、薬剤発見目的用の単離された分子に発揮することができる生物活性の調節の程度を識別することができるインビトロアッセイシステムを開発するために、標的タンパク質を精製することも重要である。
【０００５】
これにより、試験に必要とされる重要な免疫療法タンパク質の数が一般的に増加したが、新規な生物治療薬を比較的短期間に市場へもたらす開発コストにも強く影響が及ぼされた。最終製品は、既定レベルの純度、有効性、効力、安定性、並びに明らかに特徴づけられた薬物動態学的、薬力学的、及び免疫原性的特性も有するべきである。したがって、一連の重い制約が、導入スピード、作業の単純性、及び経済費用返還を考慮に入れる最新の精製プロセスの開発に置かれている。親和性クロマトグラフィーは、依然として、特異的分子標的認識の重要な課題と、大規模製造プロセスへの適合を結びつけることができる唯一の認められた技法であり、したがって、「よく特徴づけられた生物製剤」を特徴づけることに関連した上昇するコストに対処するための「理想的な」技術を提供する。治療剤製品を製造する総費用の５０〜８０％もが、下流の処理、精製及びポリッシングの間にかかり、したがって多くの従来の精製プロトコールは、親和性クロマトグラフィーに基づく高度に選択的で洗練された方策に現在置き換わりつつある（Ｌｏｗｅ、２００１）。新規な親和性吸着剤を設計し、試験するための初期開発費用の自然的要求は、後の大規模工業生産段階で実現することができる最終の節約と比較すると、依然として一般に小さいと考えられる。
【０００６】
従来の親和性リガンド、例えばペプチド、オリゴヌクレオチド及び抗体などの使用（即ち、免疫親和性精製）は、ハイスループットコンビナトリアル化学技法及びインシリコ手法の出現により、小分子スクリーニングプログラム、モデリング試験及び断片走査（ｆｒａｇｍｅｎｔ−ｓｃａｎｎｉｎｇ）インサイツ法から大部分は得られる、第二世代の完全合成の親和性吸着剤に置き換わり始めている。これは、多くの新規な標的タンパク質についての高品質結晶学的データによって作成される構造的な情報の急速な増大によっても支えられている。生物学的リガンドも様々な制限を被っており、これは、初期の精製費用、ロット間変動、不安定性及び高い大規模製造費用を含む場合がある。別の重要な考慮事項は、親和性吸着剤を多数回有効に浄化し、再使用し、したがって高い活性を維持しながらその寿命を延長し、それによって長期間の精製費用を低減する能力である。多数の高度に特異的な分子認識特性を示す親和性リガンドの、種々の小分子コンビナトリアルライブラリーの開発は、依然として費用効果的な経済的収益のために十分な収率と純度を有する最新の精製タンパク質を産業に送ることを望んでいるタンパク質精製科学者の重要な目的である。
【０００７】
１つのタンパク質の有効な精製により、固有の高い親和性でこの標的を認識する新規なｍＡｂの生産を急速に促進することができる。現在、１８の治療用ヒトｍＡｂｓが市場に出ており、１００を超えるｍＡｂｓが、最終の臨床試験を現在受けている。これまでに５つのＦａｂ分子が、ヒトに使用するためにＦＤＡによって認可されており、１つのヒト化Ｆａｂ（ラニビズマブｒｈＦａｂ）が近い将来認可されそうである。
【０００８】
生物治療薬開発におけるそのような最新動向、及び迅速な効率的な精製に対するその切迫した必要性により、リガンド設計及び合成のための新規な一般的な親和性スカフォールド（ｓｃａｆｆｏｌｄ）の開発が促進された。任意の親和性リガンドのスカフォールドは、特定の組の分子相互作用と結合定数を実現するために、複合体誘導体化の能力と一緒に、固体である不溶性支持マトリックスへの固定化という二重の能力を含まなければならない。これは、クロマトグラフィーの吸着及び脱離という別々のプロセスを識別し、さらに最適化するのに必要な絶対的必要条件である。本発明者らは、本明細書で、免疫薬剤的（ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）標的及び他の重要な生体分子の精製に適用することができる、完全合成の親和性クロマトグラフィーリガンドの開発に関する新規なスカフォールド化学を報告する。
【０００９】
親和性クロマトグラフィー分野において、対象とする物質に対する、乏しい結合性及び乏しい選択性などの問題を克服するための新規な親和性リガンドを提供することが依然として求められている。親和性リガンドとして使用するための化合物を生成するための確固たる方法も望ましい。
【００１０】
生物学及び化学の多くの分野において、核酸又はペプチドなどの対象とする物質体に対してリガンドとして作用することができる化合物を同定するための新規な方法を提供する必要がある。新規なリガンド分子の同定のために、方法は、とりわけ、自動化に適用可能、ハイスループット、再現可能、及び大規模に適用可能であることが望ましいと考えられる。さらに、広く種々の化学構造空間を探索し、それによって物質体に対する高い親和性を有するリガンドを同定する可能性を最大にすることができる方法を有することも望ましい。
【００１１】
［発明の開示］
本発明は、混合物から物質体を精製するための、親和性リガンドとして使用するための化合物に関する。本発明は、物質体に対する親和性を有するリガンドを同定するための、化合物及び化合物のコレクションの使用にも関する。
【００１２】
したがって、本発明の第１の態様では、化合物のコレクションを提供し、このコレクションのそれぞれのメンバーは独立して、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）による化合物であり、
【化１】
2010532864.tif 000002
このコレクションは、式（Ｉ）の化合物のみ、式（ＩＩ）の化合物のみ、又は式（Ｉ）と式（ＩＩ）の化合物の混合物を含み、
式（Ｉ）の化合物について、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよく、
式（ＩＩ）の化合物について、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよい。
【００１３】
本発明の第２の態様では、物質体に対する親和性を有する固定化したリガンドを同定するためのプロセスにおける、本発明の第１の態様によるコレクションの使用を提供する。このプロセスは、
本発明の第１の態様による化合物のコレクションを得るステップと、
コレクションのそれぞれのメンバーを、物質体を含む混合物と接触させるステップと、
コレクションを分析することによって、物質体がそれぞれのコレクションメンバーとどの程度結合しているかを求めるステップと
を含む。
【００１４】
物質体は、核酸又はペプチドであることが好ましい。この方法は、混合物からコレクションを分離するというさらなるステップを含むことができる。
【００１５】
本発明の第３の態様では、物質体に対する親和性を有する化合物を生成するためのプロセスにおける、本発明の第１の態様によるコレクションの使用を提供する。このプロセスは、
本発明の第１の態様による化合物のコレクションを得るステップと、
コレクションのそれぞれのメンバーを、物質体を含む混合物と接触させるステップと、
コレクションを分析することによって、物質体がそれぞれのコレクションメンバーとどの程度結合しているかを求めるステップと、
物質体に対する親和性を有するライブラリーメンバーを同定するステップと、
コレクションメンバーに基づく構造を有する化合物を調製するステップと
を含む。
【００１６】
物質体は、核酸又はペプチドであることが好ましい。この方法は、混合物からコレクションを分離するというさらなるステップを含むことができる。
【００１７】
物質体に対する親和性を有する化合物は、物質体と結合していると判定されたコレクションのリンカーを切断することによって調製することができる。或いは化合物は、成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップを含む方法であり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている方法、或いは成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップを含む方法であり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は、独立して場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている方法によって調製することができる。
【００１８】
この後者の方法ステップでは、１つの成分は、リンカーの構造的又は機能的類似体であることが好適である。
【００１９】
本発明の第４の態様では、式（ＩＩＩ）の化合物、又は式（ＩＶ）の化合物を提供し、
【化２】
2010532864.tif 000003
式（ＩＩＩ）の化合物について、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよく、
式（ＩＶ）の化合物について、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していてもよい。
【００２０】
本発明の第５の態様では、混合物から物質体を分離するための分離装置を提供し、このデバイスは、本発明の第４の態様による化合物を含む。
【００２１】
本発明の第６の態様では、混合物から物質体を分離するための方法における、本発明の第４の態様の化合物の使用、又は本発明の第５の態様の分離装置の使用を提供する。この方法は、
物質体を含む混合物を、本発明の第４の態様による化合物、又は本発明の第５の態様による分離装置と接触させるステップと、
化合物又はデバイスに固定化した物質体から、生じた物質体が欠乏した混合物を分離するステップと
を含む。
【００２２】
本発明の第７の態様では、診断方法における、本発明の第４の態様の化合物の使用、又は本発明の第５の態様の分離装置の使用を提供する。この方法は、特定の疾患状態に関係する物質体に対する親和性を有する化合物に対して、生体試料をスクリーニングするステップを含む。この方法は、
生体試料を、本発明の第４の態様による化合物、又は本発明の第５の態様による分離デバイスと接触させるステップと、
特定の疾患状態に関係する物質体が、化合物又はデバイスとどの程度結合しているかについて、化合物又はデバイスを分析するステップと
を含む。
【００２３】
本発明の第８の態様では、分析試料中の物質体の存在を判定するための分析方法における、本発明の第４の態様の化合物の使用、又は本発明の第５の態様の分離装置の使用を提供する。この方法は、物質体に対する親和性を有する化合物に対して、分析試料をスクリーニングするステップを含む。この方法は、
分析試料を、本発明の第４の態様による化合物、又は本発明の第５の態様による分離装置と接触させるステップと、
化合物又はデバイスを分析することによって、物質体が、化合物又はデバイスとどの程度結合しているかを判定するステップと
を含む。
【００２４】
本発明は、第９の態様において、本発明の第１の態様によるコレクションを調製するための方法も提供する。この方法は、成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されているステップを含み、このステップは、１若しくは複数回繰り返され、それぞれの繰返しについて、Ａ、Ｂ、Ｃ若しくはＤのうちの１つ若しくは複数は変更され、
或いはこの方法は、成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４の２つ以上は結合されているステップを含み、
このステップは、１若しくは複数回繰り返され、それぞれの繰返しについて、Ａ、Ｃ若しくはＤのうちの１つ若しくは複数は変更される。
【００２５】
これらのステップは、同時に実施されることが好ましい。それぞれステップは、別個の反応ポット内で実施されることが好ましい。
【００２６】
本発明は、第１０の態様では、本発明の第４の態様による化合物を調製するための方法も提供する。この方法は、成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されているステップを含み、或いはこの方法は、成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されているステップを含む。
【００２７】
本発明の別の態様では、本発明の第９の態様の方法によって得られる化合物のコレクションを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】化合物５についての（Ａ）１Ｈ  ＮＭＲ及び（Ｂ）１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２】インサイツＵｇｉスカフォールド形成の定性的証拠のために使用されるリガンドの蛍光画像を示す図である。
【図３】Ｕｇｉ反応で生成されたライブラリーを、最適化されていない標準的なクロマトグラフィー条件（ｃ．ｖ．：２００μｌ；ｈＩｇＧ充填：５００μｇｍｌ−１（１ｃ．ｖ．）；リガンド密度：１ｇの湿潤重量のゲル当たり２４μｍｏｌ）に基づいてｈＩｇＧ結合（μｇｍｌ−１）についてスクリーニングしたアッセイの結果を示す図である。ラベルＡ１〜８及びＣ１〜８は、実験セクションにおいて詳細に説明するように、Ｕｇｉ反応において使用されるアミン及びカルボキシ成分を識別する。
【図４】図３に関連して記載されたライブラリーを、ｈＦａｂ結合についてスクリーニングしたアッセイの結果を示す図である。
【図５】図３に関連して記載されたライブラリーを、ｈＦｃ結合についてスクリーニングしたアッセイの結果を示す図である。
【図６】ｈＩｇＧリード（ｌｅａｄ）候補リガンドについての結合率と溶出率の比較を示す図である。最適化されていない結合（１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）条件、及び溶出（０．１ＭのＮａＨＣＯ３、１０％（ｖ／ｖ）のエチレングリコール、ｐＨ１０．０）条件を適用した。溶出率は結合タンパク質の百分率として表した。（リガンド密度：１ｇの湿潤重量のゲル当たり１７．５μｍｏｌ）
【図７】図６に関連して記載された条件下での、ｈＦａｂリードリガンドについての結合率と溶出率の比較を示す図である。
【図８】図６に関連して記載された条件下での、ｈＦｃリードリガンドについての結合率と溶出率の比較を示す図である。
【図９】トリアジンリガンド３４／４３と比較した、選択リガンド化合物４Ｕ、８Ｕ及び９Ｕを用いて充填したカラムを使用した、第ＶＩＩＩ因子結合試験の結果を示す図である。
【図１０】トリアジンリガンド３４／４３と比較した、選択リガンド化合物４Ｕ、８Ｕ及び９Ｕの溶出挙動を示す図である。
【図１１】トリアジンリガンド３４／４３と比較した、選択リガンド化合物４Ｕ、６Ｕ、７Ｕ、８Ｕ、９Ｕ、１０Ｕ、１１Ｕ、１２Ｕ、１３Ｕ及び１４Ｕの第ＶＩＩＩ因子マイクロプレートアッセイ結果を示す図である。
【図１２】選択リガンド化合物４Ｕ、９Ｕ及び１４Ｕについて識別された異なる結合モードを示す図である。
【図１３】選択リガンド化合物４Ｕ、１６Ｕ、１７Ｕ及び１４Ｕについて識別された異なる結合モードを示す図である。
【図１４】選択リガンド化合物８Ｕ、１４Ｕ、１６Ｕ及び１７Ｕからの第ＶＩＩＩ因子溶出の結果を示す図である。
【００２９】
［発明の詳細な説明］
定義
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７
Ｃ１〜２０アルキル：用語「アルキル」は、本明細書で使用する場合、１〜２０個の炭素原子（別段の指定のない限り）を有する炭化水素化合物の炭素原子から水素原子を除くことによって得られる一価の部分に関係し、これは脂肪族であっても、脂環式であってもよく、飽和していても不飽和（例えば、部分的に不飽和、完全に不飽和）であってもよい。したがって、用語「アルキル」には、以下に論じられるサブクラスのアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキエニル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｅｎｙｌ）、シルコアルキニル（ｃｙｌｃｏａｌｋｙｎｙｌ）などが含まれる。
【００３０】
アルキル基の脈絡において、接頭辞（例えば、Ｃ１〜４、Ｃ１〜７、Ｃ１〜２０、Ｃ２〜７、Ｃ３〜７など）は、炭素原子の数、又は炭素原子の数の範囲を表す。例えば、用語「Ｃ１〜４アルキル」は、本明細書で使用する場合、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基に関係する。アルキル基の基の例には、Ｃ１〜４アルキル（「低級アルキル」）、Ｃ１〜７アルキル、及びＣ１〜２０アルキルが含まれる。最初の接頭辞は、他の制限によって変化する場合があることに注意されたい。例えば、不飽和アルキル基については、最初の接頭辞は、少なくとも２でなくてはならず、環式アルキル基については、最初の接頭辞は、少なくとも３でなくてはならないことなどである。
【００３１】
（非置換）飽和アルキル基の例として、それだけに限らないが、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）、ブチル（Ｃ４）、ペンチル（Ｃ５）、ヘキシル（Ｃ６）、ヘプチル（Ｃ７）、オクチル（Ｃ８）、ノニル（Ｃ９）、デシル（Ｃ１０）、ウンデシル（Ｃ１１）、ドデシル（Ｃ１２）、トリデシル（Ｃ１３）、テトラデシル（Ｃ１４）、ペンタデシル（Ｃ１５）、及びエイコデシル（ｅｉｃｏｄｅｃｙｌ）（Ｃ２０）が挙げられる。
【００３２】
（非置換）飽和直鎖アルキル基の例として、それだけに限らないが、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ５）、ｎ−ヘキシル（Ｃ６）、及びｎ−ヘプチル（Ｃ７）が挙げられる。
【００３３】
（非置換）飽和分岐アルキル基の例として、それだけに限らないが、イソプロピル（Ｃ３）、イソブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、イソペンチル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）が挙げられる。
【００３４】
アルケニル：用語「アルケニル」は、本明細書で使用する場合、１つ又は複数の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基に関係する。アルケニル基の例には、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜７アルケニル、Ｃ２〜２０アルケニルが含まれる。
【００３５】
（非置換）不飽和アルケニル基の例として、それだけに限らないが、エテニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、ブテニル（Ｃ４）、ペンテニル（Ｃ５）、及びヘキセニル（Ｃ６）が挙げられる。
【００３６】
アルキニル：用語「アルキニル」は、本明細書で使用する場合、１つ又は複数の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基に関係する。アルキニル基の例には、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ２〜７アルキニル、Ｃ２〜２０アルキニルが含まれる。
【００３７】
（非置換）不飽和アルキニル基の例として、それだけに限らないが、エチニル（ｅｔｈｙｎｙｌ）（エチニル（ｅｔｈｉｎｙｌ）、−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。
【００３８】
シクロアルキル：用語「シクロアルキル」は、本明細書で使用する場合、シクリル基でもあるアルキル基、即ち、炭素環式化合物の炭素環式の環の脂環式の環原子から水素原子を除くことによって得られる一価の部分に関係し、この炭素環式の環は、飽和していても不飽和（例えば、部分的に不飽和、完全に不飽和）であってもよく、この部分は、３〜２０個の環原子を含めて、３〜２０個の炭素原子（別段の指定のない限り）を有する。したがって、用語「シクロアルキル」には、サブクラスのシクロアルケニル及びシクロアルキニルが含まれる。それぞれの環は、３〜７個の環原子を有することが好ましい。シクロアルキル基の基の例として、Ｃ３〜２０シクロアルキル、Ｃ３〜１５シクロアルキル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキルが挙げられる。
【００３９】
シクロアルキル基の例として、それだけに限らないが、
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ３）、シクロブタン（Ｃ４）、シクロペンタン（Ｃ５）、シクロヘキサン（Ｃ６）、シクロヘプタン（Ｃ７）、メチルシクロプロパン（Ｃ４）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ５）、メチルシクロブタン（Ｃ５）、ジメチルシクロブタン（Ｃ６）、メチルシクロペンタン（Ｃ６）、ジメチルシクロペンタン（Ｃ７）、メチルシクロヘキサン（Ｃ７）、ジメチルシクロヘキサン（Ｃ８）、メンタン（Ｃ１０）；
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ３）、シクロブテン（Ｃ４）、シクロペンテン（Ｃ５）、シクロヘキセン（Ｃ６）、メチルシクロプロペン（Ｃ４）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ５）、メチルシクロブテン（Ｃ５）、ジメチルシクロブテン（Ｃ６）、メチルシクロペンテン（Ｃ６）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ７）、メチルシクロヘキセン（Ｃ７）、ジメチルシクロヘキセン（Ｃ８）；
飽和多環式炭化水素化合物：
ツジャン（Ｃ１０）、カラン（Ｃ１０）、ピナン（Ｃ１０）、ボルナン（Ｃ１０）、ノルカラン（Ｃ７）、ノルピナン（Ｃ７）、ノルボルナン（Ｃ７）、アダマンタン（Ｃ１０）、デカリン（デカヒドロナフタレン）（Ｃ１０）；
不飽和多環式炭化水素化合物：
カンフェン（Ｃ１０）、リモネン（Ｃ１０）、ピネン（Ｃ１０）；
芳香環を有する多環式炭化水素化合物：
インデン（Ｃ９）、インダン（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン）（Ｃ９）、テトラリン（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン）（Ｃ１０）、アセナフテン（Ｃ１２）、フルオレン（Ｃ１３）、フェナレン（Ｃ１３）、アセフェナントレン（Ｃ１５）、アセアントレン（Ｃ１６）、コラントレン（Ｃ２０）
に由来するものが挙げられる。
【００４０】
Ｃ３〜２０ヘテロシクリル：用語「ヘテロシクリル」は、本明細書で使用する場合、複素環化合物の環原子から水素原子を除くことによって得られる一価の部分に関係し、この部分は、３〜２０個の環原子（別段の指定のない限り）を有し、そのうち１〜１０個は環ヘテロ原子である。好ましくは、それぞれの環は、３〜７個の環原子を有し、そのうち１〜４個は環ヘテロ原子である。
【００４１】
この脈絡において、接頭辞（例えば、Ｃ３〜２０、Ｃ３〜７、Ｃ５〜６など）は、炭素原子であってもヘテロ原子であっても環原子の数、又は環原子の数の範囲を表す。例えば、用語「Ｃ５〜６ヘテロシクリル」は、本明細書で使用する場合、５又は６個の環原子を有するヘテロシクリル基に関係する。ヘテロシクリル基の基の例として、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル、Ｃ５〜２０ヘテロシクリル、Ｃ３〜１５ヘテロシクリル、Ｃ５〜１５ヘテロシクリル、Ｃ３〜１２ヘテロシクリル、Ｃ５〜１２ヘテロシクリル、Ｃ３〜１０ヘテロシクリル、Ｃ５〜１０ヘテロシクリル、Ｃ３〜７ヘテロシクリル、Ｃ５〜７ヘテロシクリル、及びＣ５〜６ヘテロシクリルが挙げられる。
【００４２】
単環式ヘテロシクリル基の例として、それだけに限らないが、
Ｎ１：アジリジン（Ｃ３）、アゼチジン（Ｃ４）、ピロリジン（テトラヒドロピロール）（Ｃ５）、ピロリン（例えば、３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロール）（Ｃ５）、２Ｈ−ピロール又は３Ｈ−ピロール（イソピロール、イソアゾール）（Ｃ５）、ピペリジン（Ｃ６）、ジヒドロピリジン（Ｃ６）、テトラヒドロピリジン（Ｃ６）、アゼピン（Ｃ７）；
Ｏ１：オキシラン（Ｃ３）、オキセタン（Ｃ４）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ５）、オキソール（ジヒドロフラン）（Ｃ５）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ６）、ジヒドロピラン（Ｃ６）、ピラン（Ｃ６）、オキセピン（Ｃ７）；
Ｓ１：チイラン（Ｃ３）、チエタン（Ｃ４）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ５）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ６）、チエパン（Ｃ７）；
Ｏ２：ジオキソラン（Ｃ５）、ジオキサン（Ｃ６）、及びジオキセパン（Ｃ７）；
Ｏ３：トリオキサン（Ｃ６）；
Ｎ２：イミダゾリジン（Ｃ５）、ピラゾリジン（ジアゾリジン）（Ｃ５）、イミダゾリン（Ｃ５）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）（Ｃ５）、ピペラジン（Ｃ６）；
Ｎ１Ｏ１：テトラヒドロオキサゾール（Ｃ５）、ジヒドロオキサゾール（Ｃ５）、テトラヒドロイソオキサゾール（Ｃ５）、ジヒドロイソオキサゾール（Ｃ５）、モルホリン（Ｃ６）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ６）、ジヒドロオキサジン（Ｃ６）、オキサジン（Ｃ６）；
Ｎ１Ｓ１：チアゾリン（Ｃ５）、チアゾリジン（Ｃ５）、チオモルホリン（Ｃ６）；
Ｎ２Ｏ１：オキサジアジン（Ｃ６）；
Ｏ１Ｓ１：オキサチオール（Ｃ５）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ６）；並びに
Ｎ１Ｏ１Ｓ１：オキサチアジン（Ｃ６）
に由来するものが挙げられる。
【００４３】
置換（非芳香族）単環式ヘテロシクリル基の例として、環式型の糖類、例えば、フラノース（Ｃ５）、例えばアラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース、及びキシロフランス（ｘｙｌｏｆｕｒａｎｓｅ）など、並びにピラノース（Ｃ６）、例えばアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、グロピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース、及びタロピラノースなどに由来するものが挙げられる。
【００４４】
スピロ−Ｃ３〜７シクロアルキル又はヘテロシクリル：用語「スピロＣ３〜７シクロアルキル又はヘテロシクリル」は、本明細書で使用する場合、両方の環に共通の１個の原子によって別の環に結合した、Ｃ３〜７シクロアルキル又はＣ３〜７ヘテロシクリル環を指す。
【００４５】
Ｃ５〜２０アリール：用語「アリール」本明細書で使用する場合、芳香族化合物の芳香環原子から水素原子を除くことによって得られる一価の部分に関係し、前記化合物は、１つの環又は２つ以上の環（例えば、縮合した）を有し、少なくとも１つの前記環（複数可）は芳香環である。それぞれの環は、５〜７個の環原子を有することが好ましい。アリール基は、Ｃ５〜２０アリール基であることが好ましい。
【００４６】
環原子は、「カルボアリール基」において見られるように、すべて炭素原子とすることができ、この場合、この基は、好都合には「Ｃ５〜２０カルボアリール」基と呼ばれることがある。
【００４７】
環ヘテロ原子を有さないＣ５〜２０アリール基（即ち、Ｃ５〜２０カルボアリール基）の例には、それだけに限らないが、ベンゼン（即ち、フェニル）（Ｃ６）、ナフタレン（Ｃ１０）、アントラセン（Ｃ１４）、フェナントレン（Ｃ１４）、及びピレン（Ｃ１６）に由来するものが含まれる。
【００４８】
或いは、環原子として、「ヘテロアリール基」において見られるように、それだけに限らないが、酸素、窒素、及び硫黄を含めて、１つ又は複数のヘテロ原子を含むことができる。この場合、この基は、便宜上「Ｃ５〜２０ヘテロアリール」基と呼ばれることがあり、「Ｃ５〜２０」は、炭素原子であってもヘテロ原子であっても環原子を表す。それぞれの環は、５〜７個の環原子を有し、そのうち０〜４個が環ヘテロ原子であることが好ましい。
【００４９】
Ｃ５〜２０ヘテロアリール基の例として、それだけに限らないが、フラン（オキソール）、チオフェン（チオール）、ピロール（アゾール）、イミダゾール（１，３−ジアゾール）、ピラゾール（１，２−ジアゾール）、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、テトラゾール及びオキサトリアゾールに由来するＣ５ヘテロアリール基；及びイソキサジン、ピリジン（アジン）、ピリダジン（１，２−ジアジン）、ピリミジン（１，３−ジアジン；例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）及びトリアジンに由来するＣ６ヘテロアリール基が挙げられる。
【００５０】
ヘテロアリール基は、炭素又はヘテロ環原子を介して結合することができる。
【００５１】
縮合環を含むＣ５〜２０ヘテロアリール基として、それだけに限らないが、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、イソインドールに由来するＣ９ヘテロアリール基；キノリン、イソキノリン、ベンゾジアジン、ピリドピリジンに由来するＣ１０ヘテロアリール基；アクリジン及びキサンテンに由来するＣ１４ヘテロアリール基が挙げられる。
【００５２】
上記アルキル、ヘテロシクリル及びアリール基は、単独であっても別の置換基の一部であっても、それ自体場合により、それ自体及び以下に列挙する追加の置換基から選択される１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００５３】
水素：−Ｈ。特定の位置での置換基が水素である場合、その位置で「非置換」である化合物又は基を指すことが好都合な場合があることに注意されたい。
【００５４】
ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、及び−Ｉ。
【００５５】
ヒドロキシ：−ＯＨ。
【００５６】
エーテル：−ＯＲ（式中、Ｒがエーテル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基（以下に論じるＣ１〜７アルコキシ基とも呼ばれる）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基（Ｃ３〜２０ヘテロシクリルオキシ基とも呼ばれる）、又はＣ５〜２０アリール基（Ｃ５〜２０アリールオキシ基とも呼ばれる）、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。
【００５７】
アルコキシ：−ＯＲ（式中、Ｒはアルキル基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基である）。Ｃ１〜７アルコキシ基の例として、それだけに限らないが、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓｅｃ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及び−Ｏ（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）が挙げられる。
【００５８】
アセタール：−ＣＨ（ＯＲ１）（ＯＲ２）（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アセタール置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、若しくはＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基であり、又は「環式の」アセタール基である場合、Ｒ１及びＲ２は、これらが結合している２個の酸素原子及びこれらが結合している炭素原子と一緒になって４〜８個の環原子を有する複素環を形成している）。アセタール基の例として、それだけに限らないが、−ＣＨ（ＯＭｅ）２、−ＣＨ（ＯＥｔ）２、及び−ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられる。
【００５９】
ヘミアセタール：−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ１）（式中、Ｒ１はヘミアセタール置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。ヘミアセタール基の例には、それだけに限らないが、−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が含まれる。
【００６０】
ケタール：−ＣＲ（ＯＲ１）（ＯＲ２）（式中、Ｒ１及びＲ２は、アセタールについて定義した通りであり、Ｒは、水素以外のケタール置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。ケタール基の例として、それだけに限らないが、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）２、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）２、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）２、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）２、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられる。
【００６１】
ヘミケタール：−ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ１）（式中、Ｒ１は、ヘミアセタールについて定義した通りであり、Ｒは、水素以外のヘミケタール置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。ヘミアセタール基の例として、それだけに限らないが、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられる。
【００６２】
オキソ（ケト、−オン）：＝Ｏ。
【００６３】
チオン（チオケトン）：＝Ｓ。
【００６４】
イミノ（イミン）：＝ＮＲ（式中、Ｒは、イミノ置換基、例えば、水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ１〜７アルキル基である）。エステル基の例として、それだけに限らないが、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ、及び＝ＮＰｈが挙げられる。
【００６５】
ホルミル（カルバルデヒド、カルボキサルデヒド）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。
【００６６】
アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒはアシル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルアシル若しくはＣ１〜７アルカノイルとも呼ばれる）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基（Ｃ３〜２０ヘテロシクリルアシルとも呼ばれる）、又はＣ５〜２０アリール基（Ｃ５〜２０アリールアシルとも呼ばれる）、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。アシル基の例として、それだけに限らないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３（ｔ−ブチリル）、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられる。
【００６７】
カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。
【００６８】
ボロン酸：−Ｂ（ＯＨ）２。
【００６９】
ボロン酸：−Ｂ（ＯＲ）２（式中、Ｒはアルキル又はアリールである）。
【００７０】
チオカルボキシ（チオカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。
【００７１】
チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。
【００７２】
チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。
【００７３】
イミド酸：−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。
【００７４】
ヒドロキサム酸：−Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。
【００７５】
エステル（カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。エステル基の例には、それだけに限らないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが含まれる。
【００７６】
アシルオキシ（逆エステル）：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒはアシルオキシ置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。アシルオキシ基の例としてとして、それだけに限らないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｐｈが挙げられる。
【００７７】
オキシカルボイルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒはエステル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。エステル基の例として、それだけに限らないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられる。
【００７８】
アミノ：−ＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ置換基、例えば、水素、Ｃ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルアミノ若しくはジ−Ｃ１〜７アルキルアミノとも呼ばれる）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ１〜７アルキル基、或いは「環式の」アミノ基の場合、Ｒ１及びＲ２は、これらが結合している窒素原子と一緒になって４〜８個の環原子を有する複素環を形成している）。アミノ基は、１級（−ＮＨ２）、２級（−ＮＨＲ１）、又は３級（−ＮＨＲ１Ｒ２）であってもよく、陽イオン性形態では４級（−＋ＮＲ１Ｒ２Ｒ３）であってもよい。アミノ基の例として、それだけに限らないが、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、及び−ＮＨＰｈが挙げられる。環式のアミノ基の例として、それだけに限らないが、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが挙げられる。
【００７９】
アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基について定義したようなアミノ置換基である）。アミド基の例として、それだけに限らないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、並びにＲ１及びＲ２が、これらが結合している窒素原子と一緒になって複素環構造、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、及びピペラジノカルボニルにおいて見られる構造を形成するアミド基が挙げられる。
【００８０】
チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基について定義したようなアミノ置換基である）。アミド基の例として、それだけに限らないが、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ３）２、及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３が挙げられる。
【００８１】
アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２（式中、Ｒ１は、アミド置換基、例えば、水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ１〜７アルキル基であり、Ｒ２は、アシル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ１〜７アルキル基である）。アシルアミド基の例には、それだけに限らないが、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈが含まれる。Ｒ１及びＲ２は一緒になって、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジルに見られるように、環式の構造を形成することができる。
【化３】
2010532864.tif 000004
【００８２】
アミノカルボニルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基について定義したようなアミノ置換基である）。アミノカルボニルオキシ基の例として、それだけに限らないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ２、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ２が挙げられる。
【００８３】
ウレイド：−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＲ２Ｒ３（式中、Ｒ２及びＲ３は独立して、アミノ基について定義したようなアミノ置換基であり、Ｒ１はウレイド置換基、例えば、水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは水素又はＣ１〜７アルキル基である。ウレイド基の例として、それだけに限らないが、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ２、−ＮＨＣＯＮＥｔ２、−ＮＭｅＣＯＮＨ２、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ２、及び−ＮＭｅＣＯＮＥｔ２が挙げられる。
【００８４】
グアニジノ：−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２。
【００８５】
テトラゾリル：４個の窒素原子及び１個の炭素原子を有する５員芳香環。
【化４】
2010532864.tif 000005
【００８６】
イミノ：＝ＮＲ（式中、Ｒはイミノ置換基、例えば、例えば、水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ１〜７アルキル基である）。イミノ基の例には、それだけに限らないが、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、及び＝ＮＥｔが含まれる。
【００８７】
アミジン（アミジノ）：−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２（式中、それぞれのＲはアミジン置換基、例えば、水素、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＨ又はＣ１〜７アルキル基である）。アミジン基の例には、それだけに限らないが、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ２、及び−Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ２が含まれる。
【００８８】
ニトロ：−ＮＯ２。
【００８９】
ニトロソ：−ＮＯ。
【００９０】
アジド：−Ｎ３。
【００９１】
シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：−ＣＮ。
【００９２】
イソシアノ：−ＮＣ。
【００９３】
シアナト：−ＯＣＮ。
【００９４】
イソシアナト：−ＮＣＯ。
【００９５】
チオシアノ（チオシアナト）：−ＳＣＮ。
【００９６】
イソチオシアノ（イソチオシアナト）：−ＮＣＳ。
【００９７】
スルフヒドリル（チオール、メルカプト）：−ＳＨ。
【００９８】
チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ（式中、Ｒは、チオエーテル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基（Ｃ１〜７アルキルチオ基とも呼ばれる）、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。Ｃ１〜７アルキルチオ基の例には、それだけに限らないが、−ＳＣＨ３及び−ＳＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【００９９】
ジスルフィド：−ＳＳ−Ｒ（式中、Ｒはジスルフィド置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基（本明細書ではＣ１〜７アルキルジスルフィドとも呼ばれる）である）。Ｃ１〜７アルキルジスルフィド基の例には、それだけに限らないが、−ＳＳＣＨ３及び−ＳＳＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０１００】
スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒはスルフィン置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルフィン基の例には、それだけに限らないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０１０１】
スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、スルホン置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは、例えば、フッ化又はペルフルオロＣ１〜７アルキル基を含めたＣ１〜７アルキル基である）。スルホン基の例として、それだけに限らないが、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＦ３（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ３（エシル）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ４Ｆ９（ノナフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＦ３（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（タウリル）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４−ブロモフェニルスルホニル（ブロシル）、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレンスルホネート（ナプシル）、及び５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−イルスルホネート（ダンシル）が挙げられる。
【０１０２】
スルフィン酸（スルフィノ）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＯ２Ｈ。
【０１０３】
スルホン酸（スルホ）：−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＨ、−ＳＯ３Ｈ。
【０１０４】
スルフィネート（スルフィン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ；（式中、Ｒはスルフィネート置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルフィネート基の例には、それだけに限らないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ３（メトキシスルフィニル；メチルスルフィネート）及び−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３（エトキシスルフィニル；エチルスルフィネート）が含まれる。
【０１０５】
スルホネート（スルホン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ（式中、Ｒはスルホネート置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルホネート基には、それだけに限らないが、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＣＨ３（メトキシスルホニル；メチルスルホネート）及び−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ３（エトキシスルホニル；エチルスルホネート）が含まれる。
【０１０６】
スルフィニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒはスルフィニルオキシ置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルフィニルオキシ基の例には、それだけに限らないが、−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０１０７】
スルホニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒはスルホニルオキシ置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルホニルオキシ基の例には、それだけに限らないが、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＣＨ３（メシレート）及び−ＯＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ３（エシレート）が含まれる。
【０１０８】
スルフェート：−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ；（式中、Ｒはスルフェート置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルフェート基の例には、それだけに限らないが、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＣＨ３及び−ＳＯ（＝Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０１０９】
スルファミル（スルファモイル；スルフィン酸アミド；スルフィンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基について定義されたようなアミノ置換基である）。スルファミル基の例として、それだけに限らないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、及び−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈが挙げられる。
【０１１０】
スルホンアミド（スルフィンアモイル；スルホン酸アミド；スルホンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、アミノ基について定義されたようなアミノ置換基である）。スルホンアミド基の例として、それだけに限らないが、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、及び−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨＰｈが挙げられる。
【０１１１】
スルファミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）２ＯＨ（式中、Ｒ１は、アミノ基について定義されたようなアミノ置換基である）。スルファミノ基の例には、それだけに限らないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＯＨ及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）２ＯＨが含まれる。
【０１１２】
スルホンアミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒ１は、アミノ基について定義されたようなアミノ置換基であり、Ｒはスルホンアミノ置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルホンアミノ基の例には、それだけに限らないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ３及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ６Ｈ５が含まれる。
【０１１３】
スルフィンアミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒ１は、アミノ基について定義されたようなアミノ置換基であり、Ｒはスルフィンアミノ置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基である）。スルフィンアミノ基の例には、それだけに限らないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ５が含まれる。
【０１１４】
ホスフィノ（ホスフィン）：−ＰＲ２（式中、Ｒはホスフィノ置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。ホスフィノ基の例として、それだけに限らないが、−ＰＨ２、−Ｐ（ＣＨ３）２、−Ｐ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｐ（ｔ−Ｂｕ）２、及び−Ｐ（Ｐｈ）２が挙げられる。
【０１１５】
ホスホ：−Ｐ（＝Ｏ）２。
【０１１６】
ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ２（式中、Ｒはホスフィニル置換基、例えば、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくはＣ１〜７アルキル基又はＣ５〜２０アリール基である）。ホスフィニル基の例として、それだけに限らないが、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ｔ−Ｂｕ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）２が挙げられる。
【０１１７】
ホスホン酸（ホスホノ）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２。
【０１１８】
ホスホネート（ホスホノエステル）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２（式中、Ｒはホスホネート置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。ホスホネート基の例として、それだけに限らないが、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）２が挙げられる。
【０１１９】
リン酸（ホスホノオキシ）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２。
【０１２０】
ホスフェート（ホスホノオキシエステル）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２（式中、Ｒはホスフェート置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。リン酸基の例として、それだけに限らないが、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ３）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）２が挙げられる。
【０１２１】
亜リン酸：−ＯＰ（ＯＨ）２。
【０１２２】
亜リン酸エステル：−ＯＰ（ＯＲ）２（式中、Ｒは亜リン酸エステル置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。亜リン酸エステル基の例として、それだけに限らないが、−ＯＰ（ＯＣＨ３）２、−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ３）２、−ＯＰ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）２、及び−ＯＰ（ＯＰｈ）２が挙げられる。
【０１２３】
ホスホルアミダイト：−ＯＰ（ＯＲ１）−ＮＲ２２（式中、Ｒ１及びＲ２はホスホルアミダイト置換基、例えば、−Ｈ、（場合により置換された）Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。ホスホルアミダイト基の例には、それだけに限らないが、−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２、及び−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２が含まれる。
【０１２４】
ホスホルアミデート：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ１）−ＮＲ２２（式中、Ｒ１及びＲ２はホスホルアミデート置換基、例えば、−Ｈ、（場合により置換された）Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。ホスホルアミデート基の例には、それだけに限らないが、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２が含まれる。
【０１２５】
シリル：−ＳｉＲ３（式中、Ｒはシリル置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。シリル基の例として、それだけに限らないが、−ＳｉＨ３、−ＳｉＨ２（ＣＨ３）、−ＳｉＨ（ＣＨ３）２、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−Ｓｉ（Ｅｔ）３、−Ｓｉ（ｉＰｒ）３、−Ｓｉ（ｔＢｕ）（ＣＨ３）２、及び−Ｓｉ（ｔＢｕ）３が挙げられる。
【０１２６】
オキシシリル：−Ｓｉ（ＯＲ）３（式中、Ｒはオキシシリル置換基、例えば、−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル基、又はＣ５〜２０アリール基、好ましくは−Ｈ、Ｃ１〜７アルキル基、又はＣ５〜２０アリール基である）。オキシシリル基の例として、それだけに限らないが、−Ｓｉ（ＯＨ）３、−Ｓｉ（ＯＭｅ）３、−Ｓｉ（ＯＥｔ）３、及び−Ｓｉ（ＯｔＢｕ）３が挙げられる。
【０１２７】
シロキシ（シリルエーテル）：−ＯＳｉＲ３（式中、ＳｉＲ３は、上記に論じたようなシリル基である）。
【０１２８】
オキシシロキシ（ｏｘｙｓｉｌｏｘｙ）：−ＯＳｉ（ＯＲ）３（式中、ＯＳｉ（ＯＲ）３は、上記に論じたようなオキシシリル基である）。
【０１２９】
多くの場合、置換基はそれ自体置換されている。
【０１３０】
例えば、Ｃ１〜７アルキル基は、例えば、：
ヒドロキシ（ヒドロキシ−Ｃ１〜７アルキル基とも呼ばれる）；
ハロ（ハロ−Ｃ１〜７アルキル基とも呼ばれる）；
アミノ（アミノ−Ｃ１〜７アルキル基とも呼ばれる）；
カルボキシ（カルボキシ−Ｃ１〜７アルキル基とも呼ばれる）；
Ｃ１〜７アルコキシ（Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ１〜７アルキル基とも呼ばれる）；
Ｃ５〜２０アリール（Ｃ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキル基とも呼ばれる）で置換されていてもよい。
【０１３１】
同様に、Ｃ５〜２０アリール基は、例えば、
ヒドロキシ（ヒドロキシ−Ｃ５〜２０アリール基とも呼ばれる）；
ハロ（ハロ−Ｃ５〜２０アリール基とも呼ばれる）；
アミノ（例えば、アニリンなどの場合、アミノ−Ｃ５〜２０アリール基とも呼ばれる、）；
カルボキシ（例えば、安息香酸などの場合、カルボキシ−Ｃ５〜２０アリール基とも呼ばれる）；
Ｃ１〜７アルキル（例えば、トルエンのなどの場合、Ｃ１〜７アルキル−Ｃ５〜２０アリール基とも呼ばれる）；
Ｃ１〜７アルコキシ（例えば、アニソールなどの場合、Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ５〜２０アリール基とも呼ばれる）；
Ｃ５〜２０アリール（例えば、ビフェニルなどの場合、Ｃ５〜２０アリール−Ｃ５〜２０アリールとも呼ばれる）で置換されていてもよい。
【０１３２】
これら及び他のそのような置換された置換基の具体例を以下に記載する。
【０１３３】
ヒドロキシ−Ｃ１〜７アルキル：用語「ヒドロキシ−Ｃ１〜７アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）がヒドロキシ基で置換されているＣ１〜７アルキル基に関係する。そのような基の例には、それだけに限らないが、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、及び−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨが含まれる。
【０１３４】
ハロ−Ｃ１〜７アルキル基：用語「ハロ−Ｃ１〜７アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、ハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置換されているＣ１〜７アルキル基に関係する。２つ以上の水素原子がハロゲン原子で置換されている場合、そのハロゲン原子は、独立して同じであっても異なっていてもよい。すべての水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよく、この場合、この基は、便宜上「Ｃ１〜７ペルハロアルキル基」と呼ばれることがある。そのような基の例として、それだけに限らないが、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２ＣＨＦ２、及び−ＣＨ２ＣＦ３が挙げられる。
【０１３５】
アミノ−Ｃ１〜７アルキル：用語「アミノ−Ｃ１〜７アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、アミノ基で置換されているＣ１〜７アルキル基に関係する。そのような基の例には、それだけに限らないが、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、及び−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２が含まれる。
【０１３６】
カルボキシ−Ｃ１〜７アルキル：用語「カルボキシ−Ｃ１〜７アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、カルボキシ基で置換されているＣ１〜７アルキル基に関係する。そのような基の例には、それだけに限らないが、−ＣＨ２ＣＯＯＨ及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨが含まれる。
【０１３７】
Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ１〜７アルキル：用語「Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ１〜７アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、Ｃ１〜７アルコキシ基で置換されているＣ１〜７アルキル基に関係する。そのような基の例には、それだけに限らないが、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、及び−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０１３８】
Ｃ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキル：用語「Ｃ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、Ｃ５〜２０アリール基で置換されているＣ１〜７アルキル基に関係する。そのような基の例として、それだけに限らないが、ベンジル（フェニルメチル、ＰｈＣＨ２−）、ベンズヒドリル（Ｐｈ２ＣＨ−）、トリチル（トリフェニルメチル、Ｐｈ３Ｃ−）、フェネチル（フェニルエチル、Ｐｈ−ＣＨ２ＣＨ２−）、スチリル（Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−）、シンナミル（Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−）が挙げられる。
【０１３９】
ヒドロキシ−Ｃ５〜２０アリール：用語「ヒドロキシ−Ｃ５〜２０アリール」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、ヒドロキシ基で置換されているＣ５〜２０アリール基に関係する。そのような基の例として、それだけに限らないが、フェノール、ナフトール、ピロカテコール、レソルシノール、ヒドロキノン、ピロガロール、フロログルシノールに由来するものが挙げられる。
【０１４０】
ハロ−Ｃ５〜２０アリール：用語「ハロ−Ｃ５〜２０アリール」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）は、ハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）基で置換されているＣ５〜２０アリール基に関係する。そのような基の例として、それだけに限らないが、ハロフェニル（例えば、オルト置換であっても、メタ置換であっても、パラ置換であっても、フルオロフェニル、クロロフェニル、ブロモフェニル、又はヨードフェニル）、ジハロフェニル、トリハロフェニル、テトラハロフェニル、及びペンタハロフェニルが挙げられる。
【０１４１】
Ｃ１〜７アルキル−Ｃ５〜２０アリール：用語「Ｃ１〜７アルキル−Ｃ５〜２０アリール」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）が、Ｃ１〜７アルキル基で置換されているＣ５〜２０アリール基に関係する。そのような基の例として、それだけに限らないが、トリル（トルエン由来）、キシリル（キシレン由来）、メシチル（メシチレン由来）、及びクメニル（又はクミル、クメン由来）、及びジュリル（ジュレン由来）が挙げられる。
【０１４２】
ヒドロキシ−Ｃ１〜７アルコキシ：−ＯＲ（式中、Ｒは、ヒドロキシ−Ｃ１〜７アルキル基である）。ヒドロキシ−Ｃ１〜７アルコキシ基の例には、それだけに限らないが、−ＯＣＨ２ＯＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、及び−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨが含まれる。
【０１４３】
ハロ−Ｃ１〜７アルコキシ：−ＯＲ（式中、Ｒは、ハロ−Ｃ１〜７アルキル基である）。ハロ−Ｃ１〜７アルコキシ基の例として、それだけに限らないが、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＯＣＨ２ＣＨＦ２、及び−ＯＣＨ２ＣＦ３が挙げられる。
【０１４４】
カルボキシ−Ｃ１〜７アルコキシ：−ＯＲ（式中、Ｒは、カルボキシ−Ｃ１〜７アルキル基である）。カルボキシ−Ｃ１〜７アルコキシ基の例には、それだけに限らないが、−ＯＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、及び−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨが含まれる。
【０１４５】
Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ１〜７アルコキシ：−ＯＲ（式中、Ｒは、Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ１〜７アルキル基である）。Ｃ１〜７アルコキシ−Ｃ１〜７アルコキシ基の例には、それだけに限らないが、−ＯＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、及び−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０１４６】
Ｃ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルコキシ：−ＯＲ（式中、Ｒは、Ｃ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキル基である）。そのような基の例として、それだけに限らないが、ベンジルオキシ、ベンズヒドリルオキシ、トリチルオキシ、フェネトキシ、スチリルオキシ、及びシンマミルオキシ（ｃｉｍｍａｍｙｌｏｘｙ）が挙げられる。
【０１４７】
Ｃ１〜７アルキル−Ｃ５〜２０アリールオキシ：−ＯＲ（式中、Ｒは、Ｃ１〜７アルキル−Ｃ５〜２０アリール基である）。そのような基の例として、それだけに限らないが、トリルオキシ、キシリルオキシ、メシチルオキシ、クメニルオキシ、及びジュリルオキシ（ｄｕｒｙｌｏｘｙ）が挙げられる。
【０１４８】
アミノ−Ｃ１〜７アルキルアミノ：用語「アミノ−Ｃ１〜７アルキルアミノ」は、本明細書で使用する場合、置換基Ｒ１又はＲ２のうちの１つがアミノ−Ｃ１〜７アルキル基（−Ｃ１〜７アルキル−ＮＲ３Ｒ４）であるアミノ基−ＮＲ１Ｒ２に関係する。アミノ−Ｃ１〜７アルキルアミノ基は、例えば、式−ＮＲ１−Ｃ１〜７アルキル−ＮＲ３Ｒ４によって表すことができる。そのような基の例には、それだけに限らないが、式−ＮＲ１（ＣＨ２）ｎＮＲ１Ｒ２の基が含まれ、式中、ｎは１〜６である（例えば、−ＮＨＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）５ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨ２、−ＮＨＣＨ２ＮＨ（Ｍｅ）、−ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（Ｍｅ）、−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ（Ｍｅ）、−ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（Ｍｅ）、−ＮＨ（ＣＨ２）５ＮＨ（Ｍｅ）、−ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨ（Ｍｅ）、−ＮＨＣＨ２ＮＨ（Ｅｔ）、−ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（Ｅｔ）、−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ（Ｅｔ）、−ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（Ｅｔ）、−ＮＨ（ＣＨ２）５ＮＨ（Ｅｔ）、及び−ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨ（Ｅｔ））。
【０１４９】
二座置換基及び二座試薬
用語「二座置換基」は、本明細書で使用する場合、２箇所の共有結合性結合を有し、２つの他の部分の間の連結基として作用する置換基に関係する。
【０１５０】
用語「二座試薬」は、本明細書で使用する場合、共有結合性結合の箇所として使用することができる２つの官能基を有する試薬に関係する。二座試薬は、二座置換基を有する生成物を生成するのに使用することができる。
【０１５１】
いくつかの場合（Ａ）では、二座置換基は、１個の原子（Ａ１）に共有結合的に結合する。いくつかの場合（Ｂ）では、二座置換基は、２個の異なる原子（Ａ１及びＡ２）に共有結合的に結合し、したがってその間の連結基として機能を果たす。
【化５】
2010532864.tif 000006
【０１５２】
（Ｂ）の範囲内で、いくつかの場合（Ｃ）では、二座置換基は、２個の異なる原子に共有結合的に結合しており、この２個の原子自体は、他の方法で共有結合的に連結されていない（直接、又は中間体の基を介して）。いくつかの場合（Ｄ）では、二座置換基は、２個の異なる原子に共有結合的に結合しており、この２個の原子自体は、既に共有結合的に連結されており（直接、又は中間基を介して）、そのような場合、環式構造が生じる。いくつかの場合では、二座の基は、親基において隣接する（ｖｉｃｉｎａｌ）原子、即ち隣接する（ａｄｊａｃｅｎｔ）原子に共有結合的に結合する。
【化６】
2010532864.tif 000007
【０１５３】
いくつかの場合（Ａ及びＤ）では、二座の基は、それが結合している原子（複数可）（及び存在する場合、任意の介在性の原子）と一緒になって、追加の環式構造を形成する。このようにして、二座置換基は、環式又は多環式（例えば、縮合、架橋、スピロ）構造を生じさせることができ、これは芳香族であってもよい。
【０１５４】
二座の基の例として、それだけに限らないが、Ｃ１〜７アルキレン基、Ｃ３〜２０ヘテロシクリレン基、及びＣ５〜２０アリーレン基、並びにこれらの置換形態が挙げられる。
【０１５５】
支持体
本明細書で記載される支持体は、化合物が、物質体を含む混合物から物理的に分離されることを可能にする任意の構造とすることができる。支持体は、固体支持体又は可溶性支持体であってもよい。
【０１５６】
固体支持体は、不溶性、機能性の、ポリマー物質とすることができ、これに化合物又は試薬が結合することができ（多くの場合、リンカーを介して）、これらが、過剰の試薬、可溶性反応副生成物、又は溶媒から容易に分離される（濾過、遠心分離などによって）ことを可能にする。
【０１５７】
可溶性支持体は、ライブラリー合成のための条件下で化合物を可溶性にするが、いくつかの単純な物理的プロセスによって望まれる場合、ほとんどの他の可溶性成分から容易に分離することができる結合とすることができる。このプロセスは、液相化学と呼ばれている。可溶性支持体の例には、ポリ（エチレングリコール）などの線状ポリマー、デンドリマー、フッ素に富む溶媒中に選択的に分配するフッ素化化合物が含まれる。
【０１５８】
支持体は、任意の物理的形態をとることができる。支持体は、とりわけ、粒子又はビーズ、膜、メッシュ、管、円柱、光ファイバーとすることができる。支持体は、とりわけ、粒子又はビーズ、膜、メッシュ、管、円柱上のライニング（ｌｉｎｉｎｇ）とすることもできる。
【０１５９】
支持体は磁性体であってもよく、又は磁性体物質を含んでもよい。支持体は、強磁性体であっても常磁性体であってもよい。
【０１６０】
支持体は、外側コーティングを有するか又は有さない粒子とすることができる。粒子は、ポリマー物質の固体コア若しくは金属のコア、又は両方の混合物を有することができる。金属は、金属形態であっても塩形態であってもよい。
【０１６１】
支持体は、ポリ（スチレン）又は多糖などのポリマーとすることができ、又は支持体はデンドリマー、好ましくは高世代デンドリマーとすることができる。
【０１６２】
支持体は、金などの金属、又は金属酸化物又は他の金属塩とすることができる。
【０１６３】
支持体は、一般にファイバー又はスライド形態のガラスとすることができる。
【０１６４】
支持体は、一般にウエハー形態の半導体物質とすることができる。
【０１６５】
支持体は、分析デバイス、例えば、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）デバイスと共に使用するためのチップ、又は他のそのような表面とすることができる。
【０１６６】
支持体は、相対的に不活性であることが好ましい。即ち、支持体は好ましくは、物質体に対してわずかしか、又はまったく親和性を有さないべきである。支持体は、物質でコーティングすることによって、非特異的結合を最小限にすることができる。
【０１６７】
用語「支持体」は、反応性の官能基を含み、又はこれを含むように誘導体化することができる剛体又は半剛体の表面を有する物質も指すことができ、これは、その表面に化合物を共有結合的に連結する機能を果たすことができる。そのような物質は当技術分野で公知であり、例として、反応性のＳｉ−ＯＨ基を含む二酸化ケイ素支持体、ポリアクリルアミド支持体、ポリスチレン支持体、ポリエチレングリコール支持体などを含む。支持体は、官能基の混合物を有する支持体とすることができる。例えば、支持体は、その上にグラフトされるのがポリエチレングリコールであるポリスチレン主鎖を有することができる。そのような支持体は、テンタゲル（Ｔｅｎｔａｇｅｌ）（商標）として入手可能である。そのような支持体は、小さなビーズ、ピン／クラウン（ｃｒｏｗｎ）、層状表面、ペレット、ディスクの形態を取ることができる。他の従来の形態も使用することができる。
【０１６８】
支持体は、リンカーが結合することができる、官能的な部位を有することができることが理解されるであろう。
【０１６９】
単位質量当たりの支持体の正確な「充填量（ｌｏａｄｉｎｇ）」、利用可能な官能的部位の数は、支持体の正確な性質に依存することになる。充填量は、その支持体の市販の供給業者によって提供することができる。充填量は、当技術分野で既知の方法の任意の１つ、例えば、元素分析、１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲなどによって実験的に測定することもできる。充填量は、支持体からの化合物の添加又は除去に由来する質量差の計算から求めることもできる。これは、いわゆる「Ｆｍｏｃカウント」に基づくものなどの分光学的測定を伴う場合がある。
【０１７０】
便宜上、支持体が本明細書に描かれる場合、ただ１つのリンカーに結合した支持体が示されている。しかし、支持体上の官能基の実際の数は、これよりはるかに多いであろう。アミノメチル化ポリスチレンなどの市販の樹脂支持体は、０．２５〜０．７５ｍｍｏｌｅｇ−１のいずれかのアミノ官能基を有することができる。セファロース支持体Ｃｌ−６Ｂ（アガロースベースの支持体）などの支持体は、約２４μｍｏｌｅｇ−１の充填量を有することができる。
【０１７１】
リンカー
本発明の化合物は、リンカーを介して支持体に結合することができる。リンカーは、直接結合又は場合により置換されたＣ１〜２０アルキル若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールなどの基とすることができる。リンカーを提供することによって、分析を補助し、又は支持体からの化合物の切断を可能にする官能基を提供することができる。リンカーは、対象とする物質体と相互作用することができる、構造的又は機能的単位も提供することができる。
【０１７２】
リンカーは、固体支持体から化合物を解放することができる切断可能なリンカーとすることができる。或いはリンカーは、切断可能でないリンカーであってもよい。リンカーは、フレキシブルリンカーであってもよい。
【０１７３】
リンカーが切断されて支持体から化合物を解放するとき、リンカー構造の一部は、解放された化合物の一部として含まれていてもよい。或いは、化合物は、リンカー分子のいずれの部分も含むことなく解放されてもよい。化合物は、化合物上にカルボン酸基などの官能基の「切れ残り」を残して、又は化合物上に水素を残して、解放されてもよい。後者を行うことができるリンカーは、トレースレスリンカーと呼ばれる。
【０１７４】
本発明の化合物において使用することができるリンカーの中では、とりわけ、Ｗａｎｇ、ＨＭＰＢ、ＨＭＰＡ、Ｓｉｅｂｅｒアミド、Ｒｉｎｋアミド、ＦＭＰＢ、ＤＨＰ、クロロトリチル、ヒドラジノベンゾイル、スルファミルブチルル（ｓｕｌｆａｍｙｌｂｕｔｙｒｌ）、オキシム、及びＭＢＨＡに基づくリンカーである。そのようなリンカーは、市販供給源から広く入手可能である。例えば、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍカタログ２００６／２００７を参照されたい。
【０１７５】
或いはリンカーは、市販されていないリンカーであってもよい。
【０１７６】
連結基は、固体支持体に提供される単純な官能基、例えばアミンであることも可能であり、この場合、連結基は、容易に切断可能ではない場合がある。この種類の連結基は、コレクションの合成において有用であり、これはオンビーズスクリーニングにかけられ（以下を参照されたい）、この場合切断は不要である。そのような樹脂は、ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ及びＲａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅを含めた多数の会社から市販されている。これらの樹脂には、アミノ−テンタゲル、及びアミノメチル化ポリスチレン樹脂が含まれる。
【０１７７】
リンカーは様々な条件下で切断することができ、本発明で使用するために選択されたリンカーは。
【０１７８】
リンカーは、支持体とリンカーの官能基の間にスペーサーをさらに含むことができる。スペーサーは、吸着及び脱離プロセスの間の立体障害を回避するために含めることができる。一般に、スペーサーは、短く柔軟なアルキル基である。
【０１７９】
他の形態の包含
これらの置換基の公知のイオン、塩、溶媒和物、及び保護形態は上記に含まれる。例えば、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物中の置換基のカルボン酸（−ＣＯＯＨ）への参照は、その陰イオン（カルボキシレート）形態（−ＣＯＯ−）、塩又は溶媒和物、並びに従来の保護形態も含む。同様に、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）中の化合物中の置換基のアミノ基への参照は、アミノ基のプロトン化形態（−Ｎ＋ＨＲ１Ｒ２）、塩又は溶媒和物、例えば、塩酸塩、並びにアミノ基の従来の保護形態を含む。同様に、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）中の化合物中の置換基のヒドロキシル基への参照は、その陰イオン形態（−Ｏ−）、塩又は溶媒和物、並びにヒドロキシル基の従来の保護形態も含む。
【０１８０】
異性体
ある特定の化合物は、１つ又は複数の特定の幾何的、光学的、鏡像異性、ジアステレオ異性、エピマー、立体異性、互変異性、立体配座、又はアノマーの形態で存在することができ、それだけに限らないが、ｃｉｓ−及びｔｒａｎｓ−型；Ｅ−及びＺ−型；ｃ−、ｔ−、及びｒ−型；ｅｎｄｏ−及びｅｘｏ−型；Ｒ−、Ｓ−、及びｍｅｓｏ−型；Ｄ−及びＬ−型；ｄ−及びｌ−型；（＋）及び（−）型；ケト−、エノール−、及びエノラート−型；ｓｙｎ−及びａｎｔｉ−型；シンクリナル−及びアンチクリナル−型；α−及びβ−型；アキシャル及びエクアトリアル型；ボート−、イス−、ねじれ−、エンベロープ−、及び半イス−型；並びにこれらの組合せを含み、以下一括して「異性体」（又は「異性体形態」）と呼ばれる。
【０１８１】
化合物が結晶形態である場合、これは、いくつかの異なる多形形態で存在する。
【０１８２】
互変異性型について以下に論じる場合を除いて、構造的な（又は構成上の）異性体（即ち、単に空間における原子の位置によってではなく、原子同士間の結合が異なる異性体）は、本明細書で使用する場合、用語「異性体」から特に除かれることに注意されたい。例えば、メトキシ基、−ＯＣＨ３への参照は、その構造的異性体であるヒドロキシメチル基、−ＣＨ２ＯＨへの参照と解釈されない。同様に、オルト−クロロフェニルへの参照は、その構造的な異性体であるメタ−クロロフェニルへの参照と解釈されない。しかし、構造の分類への参照は、その分類の範囲内に入る構造的異性体を十分に含むことができる（例えば、Ｃ１〜７アルキルは、ｎ−プロピル及びｉｓｏ−プロピルを含み、ブチルは、ｎ−、ｉｓｏ−、ｓｅｃ−、及びｔｅｒｔ−ブチルを含み、メトキシフェニルは、オルト−、メタ−、及びパラ−メトキシフェニルを含む）。
【０１８３】
上記除外は、互変異性型、例えば、以下の互変異性対の場合のように、例えば、ケト−、エノール−、及びエノラート−型に関係しない：ケト／エノール、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒロキシアゾ（ｈｙｒｏｘｙａｚｏ）、及びニトロ／ａｃｉ−ニトロ。
【０１８４】
１つ又は複数の同位体の置換を有する化合物は、用語「異性体」に特に含まれることに注意されたい。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、及び３Ｈ（Ｔ）を含めた任意の同位体形態であることができ、Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃを含めた任意の同位体形態であることができ、Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏを含めた任意の同位体形態であることができるなどである。
【０１８５】
別段の指定のない限り、特定の化合物への参照は、その（完全に又は部分的に）ラセミ及び他の混合物を含めたすべてのそのような異性型を含む。そのような異性体の調製（例えば、不斉合成）並びに分離（例えば、分別結晶及びクロマトグラフィー手段）のための方法は、当技術分野で既知であり、又は既知の様式で、本明細書に教示される方法、若しくは既知の方法を適合させることによって容易に得られる。
【０１８６】
別段の指定のない限り、特定の化合物への参照は、例えば、以下に論じるように、そのイオン、塩、溶媒和物、及び保護形態、並びにその様々な多形形態も含む。
【０１８７】
塩及びイオン
例えば、化合物が陰イオンであり、又は陰イオンとなることができる官能基（例えば、−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ−となることができる）を有する場合、塩は、適当な陽イオンを用いて形成することができる。適当な無機陽イオンの例として、それだけに限らないが、Ｎａ＋及びＫ＋などのアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋などのアルカリ土類陽イオン、並びにＡｌ３＋などの他の陽イオンが挙げられる。適当な有機陽イオンの例には、それだけに限らないが、アンモニウムイオン（即ち、ＮＨ４＋）、及び置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が含まれる。いくつかの適当な置換アンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、並びにリシン及びアルギニンなどのアミノ酸に由来するものである。一般的な四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ３）４＋である。
【０１８８】
化合物が陽イオンであり、又は陽イオンとなることができる官能基（例えば、−ＮＨ２は−ＮＨ３＋となることができる）を有する場合、塩は、適当な陰イオンを用いて形成することができる。適当な無機陰イオンの例には、それだけに限らないが、以下の無機酸に由来するものが含まれる：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸。適当な有機陰イオンの例として、それだけに限らないが、以下の有機酸に由来するものが挙げられる：酢酸、プロピオン酸、コハク酸、ギコール酸（ｇｙｃｏｌｉｃ）、ステアリン酸、パルミチン酸、乳酸、リンゴ酸、パモ酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、安息香酸、桂皮酸、ピルビン酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセチオキシ安息香酸（ａｃｅｔｙｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ）、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、吉草酸、及びグルコン酸。適当なポリマー陰イオンの例には、それだけに限らないが、以下のポリマー酸、即ちタンニン酸、カルボキシメチルセルロースに由来するものが含まれる。
【０１８９】
保護形態
化学的に保護された形態で活性化合物を調製、精製し、及び／又は取り扱うことが好都合又は望ましい場合がある。用語「化学的に保護された形態」は、本明細書で使用する場合、１つ又は複数の反応性官能基が、望ましくない化学反応から保護されている、即ち、保護された基又は保護基（マスクされた基若しくはマスキング基、又はブロックされた基若しくはブロッキング基としても知られる）の形態である化合物に関係する。反応性官能基を保護することによって、保護された基に影響することなく、他の保護されていない反応性官能基が関与する反応を実施することができ、保護基は、分子の残りに実質的に影響することなく、通常引き続くステップで除去することができる。例えば、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｔ．Ｇｒｅｅｎ及びＰ．Ｗｕｔｓ；３版；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）を参照されたい。
【０１９０】
例えば、ヒドロキシ基は、エーテル（−ＯＲ）又はエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ）として、例えば、ｔ−ブチルエーテル；ベンジル、ベンズヒドリル（ジフェニルメチル）、若しくはトリチル（トリフェニルメチル）エーテル；トリメチルシリル若しくはｔ−ブチルジメチルシリルエーテル；又はアセチルエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＯＡｃ）として保護することができる。
【０１９１】
例えば、アルデヒド又はケトン基はそれぞれ、アセタール又はケタールとして保護することができ、カルボニル基（＞Ｃ＝Ｏ）は、例えば１級アルコールとの反応によってジエーテル（＞Ｃ（ＯＲ）２）に変換される。アルデヒド又はケトン基は、酸の存在下で、大過剰の水を使用して加水分解によって容易に再生される。
【０１９２】
例えば、アミン基は、例えば、アミド又はウレタンとして、例えば、メチルアミド（−ＮＨＣＯ−ＣＨ３）；ベンジルオキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５、−ＮＨ−Ｃｂｚ）として；ｔ−ブトキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−Ｂｏｃ）として；２−ビフェニル−２−プロポキシアミド（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）２Ｃ６Ｈ４Ｃ６Ｈ５、−ＮＨ−Ｂｐｏｃ）として、９−フルオレニルメトキシアミド（−ＮＨ−Ｆｍｏｃ）として、６−ニトロベラトリルオキシアミド（−ＮＨ−Ｎｖｏｃ）として、２−トリメチルシリルエチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｔｅｏｃ）として、２，２，２−トリクロロエチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｔｒｏｃ）として、アリルオキシアミド（−ＮＨ−Ａｌｌｏｃ）として、２（−フェニルスルホニル）エチルオキシアミド（−ＮＨ−Ｐｓｅｃ）として；又は適当な場合では、Ｎ−酸化物（＞ＮＯ・）として保護することができる。
【０１９３】
例えば、カルボン酸基は、エステルとして、例えば、Ｃ１〜７アルキルエステル（例えば、メチルエステル；ｔ−ブチルエステル）；Ｃ１〜７ハロアルキルエステル（例えば、Ｃ１〜７トリハロアルキルエステル）；トリＣ１〜７アルキルシリル−Ｃ１〜７アルキルエステル；若しくはＣ５〜２０アリール−Ｃ１〜７アルキルエステル（例えば、ベンジルエステル；ニトロベンジルエステル）として；又はアミドとして、例えば、メチルアミドとして保護することができる。
【０１９４】
例えば、チオール基は、チオエーテル（−ＳＲ）として、例えば、：ベンジルチオエーテル；アセトアミドメチルエーテル（−Ｓ−ＣＨ２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３）として保護することができる。
【０１９５】
アミノ酸に由来する基が参照される場合、適切な場合、アミノ−、カルボキシ−又は側鎖−官能基を保護することができる。アミノ基については、保護基は、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ａｃ、Ｂｎ及びＺ（又はＣｂｚ）からなる群から選択することができる。側鎖も適切な場合、保護することができる。側鎖の保護基は、その側鎖について適切な場合、Ｐｍｃ、Ｐｂｆ、ＯｔＢｕ、Ｔｒｔ、Ａｃｍ、Ｍｍｔ、ｔＢｕ、Ｂｏｃ、ｉｖＤｄｅ、２−ＣｌＴｒｔ、ｔＢｕｔｈｉｏ、Ｎｐｙｓ、Ｍｔｓ、ＮＯ２、Ｔｏｓ、ＯＢｚｌ、ＯｃＨｘ、Ａｃｍ、ｐＭｅＢｚｌ、ｐＭｅＯＢｚ、ＯｃＨｘ、Ｂｏｍ、Ｄｎｐ、２−Ｃｌ−Ｚ、Ｂｚｌ、Ｆｏｒ、及び２−Ｂｒ−Ｚからなる群から選択することができる。カルボキシ基は、メチルエステルなどのエステルとして保護することができる。
【０１９６】
選択事項
本発明の第４の態様の好適な化合物を以下に記載する。本発明の第４の態様の式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物に対する選択事項は、本発明の第１の態様のコレクションによる式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物のそれぞれにも独立して適用可能である。
【０１９７】
Ｒ２への参照は、式（ＩＩＩ）及び（Ｉ）の化合物に関連してのみ行われる。
【０１９８】
選択事項は、本発明の第３、第９、及び第１０の態様の方法において使用するための成分に対しても独立して適用可能である。
【０１９９】
以下の選択事項は、適切な場合、任意の組合せで組み合わせることができる。
【０２００】
支持体
支持体は、ガラス、金、ポリスチレン、多糖、ポリアクリルアミド、又はポリ（アルコキシド）を含むことが好ましい。支持体は多糖、最も好ましくはアガロースとすることができる。
【０２０１】
リンカー
リンカーは、リンカーと結合箇所の間にスペーサーをさらに含むことができる。スペーサーは、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリールとすることができる。スペーサーは、場合により置換されたＣ１〜６アルキル基とすることができる。
【０２０２】
リンカー自体は分析用リンカー（ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｌｉｎｋｅｒ）とすることができ、これは、親和性断片を含む支持体から除くことができる。そのようなリンカーは当技術分野で公知である。
【０２０３】
リンカーは、支持体と一緒に、式（Ｖ）によって表されることが好ましい：
【化７】
2010532864.tif 000008
（式中、アステリスク「＊」は結合箇所であり、円は支持体を表す）。
【０２０４】
Ｒ１ａ及びＲ１ｂの１つが、支持体に結合したリンカーを含む基である場合、リンカーは、アルデヒド官能化リンカーに由来するリンカーであることが好ましい。このリンカーは、支持体と一緒に、とりわけ、ホルミルポリスチレン、テンタゲルアセタール樹脂、３−ホルミルインドリル）アセトアミドメチルポリスチレン、又はＧａｒｎｅｒアルデヒド官能化アミノメチル化ポリスチレンから得ることができる。
【０２０５】
Ｒ１ａ及びＲ１ｂの１つが、支持体に結合したリンカーを含む基である場合、リンカーは、式（Ｖ）によって表されることが好ましい。
【０２０６】
Ｒ２が支持体に結合したリンカーを含む基である場合、リンカーは、アミン官能化リンカーに由来するリンカーであることが好ましい。このリンカーは、支持体と一緒に、とりわけ、アミノ−メチル化ポリスチレン、３−アミノ−フェノキシメチルポリスチレン、アミノメチルノバゲル（ＮｏｖａＧｅｌ）（商標）、テンタゲル（商標）アミノエチル、アミノＰＥＧＡ、［Ｇ１，３］−アミノデンドリマーポリスチレン、ＭＢＨＡ、アミノ−（４−メトキシフェニル）メチルポリスチレン、Ｒｉｎｋアミド樹脂、ヒドロキシルアミンＷａｎｇ樹脂、及びスルファミル樹脂から得ることができる。
【０２０７】
Ｒ４が支持体に結合したリンカーを含む基である場合、リンカーは、カルボキシ官能化リンカーに由来することが好ましい。このリンカーは、支持体と一緒に、とりわけ、カルボキシポリスチレン、及びテンタゲル（商標）カルボキシ樹脂から得ることができる。
【０２０８】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、場合により置換され、又は適切な場合、場合によりさらに置換されていてもよい。
【０２０９】
アルキル基は、Ｃ１〜１０アルキル基、好ましくはＣ１〜６アルキル基とすることができる。
【０２１０】
アリール基は、Ｃ５〜２０アリール基、好ましくはＣ５〜７アリール基とすることができる。或いはアリール基は、Ｃ１０〜２０アリール基とすることができる。
【０２１１】
ヘテロシクリル基は、Ｃ５〜２０ヘテロシクリル基、好ましくはＣ５〜７ヘテロシクリル基とすることができる。或いはヘテロシクリル基は、Ｃ１０〜２０ヘテロシクリル基とすることができる。
【０２１２】
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上が、これらが結合している原子と一緒になって環を形成している場合、この環は、Ｃ５〜２０ヘテロシクリル基であることが好ましい。Ｃ５〜２０ヘテロシクリル基は、Ｃ５〜２０アリール置換基を有していてもよい。
【０２１３】
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つは、これらが結合している原子と一緒になって環を形成していることが好ましい。その他のうちの２つが、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ１ａ、又はＲ１ｂから選択される場合、２つを一緒にして、二座の置換基と呼ぶことができる。
【０２１４】
置換基Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、支持体に結合したリンカーを含まない場合、この置換基は、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリールである。アルキル又はアリール基は置換されていることが好ましい。
【０２１５】
場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は場合により置換されたＣ５〜２０アリール基は、化合物が位置づけられ、及び／又は識別されることを可能にする分析用標識を含むことができる。分析用標識は、例えば、分光学的方法によって分析されるとき、特徴的なシグナルを与える基であってもよい。一実施形態では、標識は蛍光標識である。さらに又は或いは、標識は、放射性同位体を含めた１つ又は複数の同位元素によって提供されてもよい。この標識は、質量分析法によって、例えば、ユニークな同位元素パターンを提供することによって、支持体から切断された生成物の検出及び同定を補助することができる。標識は、ＮＭＲによる分析も補助することができ、この場合標識中の同位元素は、ＮＭＲスペクトルにおいて観察されるシグナルの強度を増大させることができる。標識において使用するための同位体の例には、それだけに限らないが、２Ｈ（Ｄ）及び１３Ｃが含まれる。そのような分析により、支持体から断片を取り出す必要なく、化合物を試験することが可能になる。
【０２１６】
標識は、特徴的なＩＲ伸縮振動数を有する官能基を含むことができる。標識は、試薬と反応することができる官能基を含むことができ、その反応の生成物は、対応する化合物が存在することを示すことができる。反応生成物は、眼による識別を可能にする有色生成物であってもよい。
【０２１７】
標識は、蛍光性若しくはルミネセンス性、又は有色であってもよく、その結果標識に結合した支持体は、眼で見えることになる。そのような標識により、支持体から断片を取り出す必要なく、化合物を試験することが可能になる。
【０２１８】
化合物が切断可能なリンカーを含む場合、そのリンカーは、切断されることによって分析のための断片を放出することができる。切断の方策は、リンカーに関連して上述されている。或いは、標識自体が樹脂から切断可能であることができる。
【０２１９】
他の標識は、当業者に既知である。
【０２２０】
アリール基は蛍光性である場合がある。アリール基はピレンとすることができる。ピレンは群：
【化８】
2010532864.tif 000009
（式中、ｎは０又は１であり、アステリスクは結合箇所を示す）から選択されることが好ましい。
【０２２１】
置換されたＣ１〜２０アルキル、置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は置換されたＣ５〜２０アリール基は、アセタール、ヘミアセタール、アルコキシ、ケタール、ヘミケタール、オキソ、チオン、イミノ、ホルミル、ハロ、ヒドロキシ、チオカルボキシ、チオロカルボキシ、イミド酸、ヒドルキシアミド酸、チオノカルボキシ、エーテル、ニトロ、シアノ、エーテル、ニトロ、ニトロソ、アジド、シアナト、イソシアント（ｉｓｏｃｙａｎｔｏ）、チオシアノ、イソチオクタノ（ｉｓｏｔｈｉｏｃｔａｎｏ）、シアノ、アシル、カルボキシ、エステル、アミド、アミノ、グアニジノ、テトラゾイル、イミノ、アミジン、アシルアミド、ウレイド、アシルオキシ、チオール、ジスルフィド、チオエーテル、スルホキシド、スルホニル、チオアミド、スルフィニルオキシ、スルフェート、スルホンアミド、スルホネート、スルファミノ、ホスフィノ、ホスホ、ホスフィニル、ホスホン酸、ホスホネート、ホスフェート、リン酸、亜リン酸、ホスホルアミダイト、ホスホルアミデート、シリル、オキシシリル、シロキシ、オキシシロキシ、及びスルホンアミノからなる群から独立して選択される１つ又は複数の置換基で置換されていてもよい。さらに、アルキル置換基はそれ自体、アリール又はヘテロシクリル基で置換されていてもよく、逆の場合も同様である。
【０２２２】
置換されたＣ１〜２０アルキル、置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、又は置換されたＣ５〜２０アリール基は、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、スルホン酸、スルホンアミド、オキソ、チオン、カルボキシ、アミノ、ボロン酸、アミド、チオアミドからなる群から独立して選択される１つ又は複数の置換基で置換されていることが最も好ましい。さらに、アルキル置換基はそれ自体、アリール又はヘテロシクリル基で置換されていてもよく、逆の場合も同様である。
【０２２３】
好適なアリール及びアルキル置換基はそれ自体、好適な置換基のリストから選択される１つ又は複数の置換基で置換されていてもよい。
【０２２４】
Ｒ１ａ及びＲ１ｂ
Ｒ１ａ及びＲ１ｂが、支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは両方とも水素とすることができる。
【０２２５】
Ｒ１ａは、支持体に結合したリンカーを含む置換基であることが好ましい。
【０２２６】
Ｒ１ｂが、支持体に結合したリンカーを含む置換基でない場合、Ｒ１ｂは水素であることが好ましい。
【０２２７】
Ｒ１ｂは水素であることが好ましい。
【０２２８】
Ｒ１ａ又はＲ１ｂが、支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、Ｒ１ａ又はＲ１ｂは、以下の表に与えられる置換基のリストから独立して選択することができる。
【表１】
2010532864.tif 000010
式中、アステリスク「＊」は、結合箇所を示す。
【０２２９】
Ｒ２
Ｒ２が支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、Ｒ２は、以下の表に与えられる置換基のリストから選択することができる。
【表２−１】
2010532864.tif 000011
【表２−２】
2010532864.tif 000012
【表２−３】
2010532864.tif 000013
【表２−４】
2010532864.tif 000014
式中、アステリスク「＊」は、結合箇所を示す。
【０２３０】
上記表において、Ｇはアミノ酸の側鎖を表す。例えば、Ｇはグリシンについては−Ｈであり、Ｇはアラニンについては−ＣＨ３である。Ｇは、任意の天然又は非天然のアミノ酸の側鎖とすることができる。側鎖は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸グルタミン、グリシン、ヒスチジエン（ｈｉｓｔｉｄｉｅｎ）、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チルプトファン（ｔｙｒｐｔｏｐｈａｎ）、チロシン、又はバリンの側鎖であることが好ましい。Ｒ２アミノ酸は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸に由来することができる。
【０２３１】
Ｒ２が、支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、最も好適な置換基は、以下の表に与えられるリストから選択される。
【表３】
2010532864.tif 000015
式中、アステリスク「＊」は、結合箇所を示す。
【０２３２】
Ｒ３
Ｒ３が、支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、Ｒ３は、以下の表に与えられるリストから選択することができる。
【表４】
2010532864.tif 000016
式中、アステリスク「＊」は、結合箇所を示す。
【０２３３】
Ｒ４
Ｒ４が、支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、Ｒ４は、以下の表に与えられる置換基のリストから選択することができる。
【表５−１】
2010532864.tif 000017
【表５−２】
2010532864.tif 000018
式中、アステリスク「＊」は、結合箇所を示す。
【０２３４】
上記表において、Ｇはアミノ酸の側鎖を表す。例えば、Ｇはグリシンについては−Ｈであり、Ｇはアラニンについては−ＣＨ３である。Ｇは、任意の天然又は非天然のアミノ酸の側鎖とすることができる。側鎖は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸グルタミン、グリシン、ヒスチジエン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チルプトファン、チロシン、又はバリンの側鎖であることが好ましい。
【０２３５】
Ｒ４が、支持体に結合したリンカーを含む基でない場合、最も好適な置換基は、以下の表中のリストから選択される。
【表６】
2010532864.tif 000019
式中、アステリスク「＊」は、結合箇所を示す。
【０２３６】
コレクション
本発明は、化合物のライブラリー、又はコレクションに関する。コレクションのそれぞれのメンバーは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）のうちの１つによって表される。ライブラリー中の化合物の多様性は、置換基の１つ又は複数の素性が異なる化合物の存在を反映することができる。ライブラリー中のメンバーの数は、変形の数、及びそれぞれの変形についての可能性の数に依存する。例えば、置換基Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、それぞれの置換基について３つの可能性を伴って変更される場合、ライブラリーは、２７の化合物（３×３×３）を有することになる。ライブラリーは、１，０００、５，０００、１０，０００、１００，０００、又は１００万を超える化合物を含むことができ、これは、以下に説明するように整理することができる。或いは、ライブラリーは、９６の化合物、又はこれらの倍数を含むことができる。
【０２３７】
式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物のコレクションは、例えば、管又はウェル中で、別々の体積の溶媒中に保持することができる。或いはコレクションは、別々の粒子として、適切な場合、別々のゲルとして保持することができる。化合物のコレクションは、例えば、それぞれのピン／クラウン又はビーズ上で、別々の位置に結合されていることが好ましい。化合物のコレクションは、ライブラリーにとって適当なサイズのプレート上に提供することができ、又は標準的なサイズのいくつかのプレート、例えば、９６ウェルプレート上にあることができる。ライブラリーのメンバー数が大きい場合、プレート上のそれぞれのウェルは、ライブラリーからのいくつかの関連化合物、例えば、１０〜１００種を含むことが好ましい。化合物のこの種類の分類についての１つの可能性は、置換基のサブセットのみが既知であり、残りはランダム化されている場合であり、この整理は、反復スクリーニング法において有用である（以下を参照されたい）。ライブラリーは、公知である他の形態で存在することができる。
【０２３８】
化合物の調製
本発明の化合物は一般に、多成分反応を使用して調製される。本発明において使用するのに最も好適な反応タイプは、Ｕｇｉ−及びＰａｓｓｅｒｉｎｉ−ベースの反応である。
【０２３９】
一般に、Ｕｇｉ反応は、アルデヒド官能化試薬、カルボン酸官能化試薬、アミン官能化試薬、及びイソニトリル官能化試薬を、一般に１つの反応器中で接触させるステップを含む。一般に、Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ反応は、アルデヒド官能化試薬、カルボン酸官能化試薬、及びイソニトリル官能化試薬、一般に反応器中で接触させるステップを含む。
【０２４０】
Ｕｇｉ反応などの多成分反応は、より慣例的な「２成分」方法に対していくつかの異なる利点を有する。第１に、多成分反応は、３種又は４種（又はそれ以上）の反応物を組み込むことによって、より多様なリガンドを可能にし、そのそれぞれは、系統的に変更されることによって、最終のリガンド構造への多様なわずかな変化を生じることができる。迅速な化学的置換プロセスの明らかな容易さは、コンビナトリアル技法に向いており、それによって、比較的短時間で容易に調査することができる「化学的空間」を大いに増大させ、言い換えれば、数個の単純なステップで、非常に多数の化合物を生成することが可能である。したがって、「より広いネット」を投じることによって化学的仮定を探求し、非常に種々の化合物の限定されたセットに基づく、より伝統的な「ショットガン」手法に対する実行可能な選択肢を提供することが可能である。この特定の多成分化学に適した市販化合物数の短期間の調査により、新規な親和性吸着剤としてのスカフォールドの多様性及び用途を増大させるための、この手法についての可能性が明らかになる（表Ｉ）。第２に、多成分反応の「ワンポット」性質は、時間、試薬費用、及び精製技法に対する相当な節約を提供し、したがって、より多数の化学的仮定をより効率的に探索することを可能にする。試薬送達の迅速性及び化学的な多様性についての必要条件は、１つの合成ステップ内で対処される。Ｕｇｉ反応は、収束合成の良い例であり、いずれの化学的中間体も単離し、同定する必要なく、様々な成分間で多数の結合の形成が起こることを可能にし、したがってこの手順を、コンビナトリアルライブラリー合成にとって非常に望ましくする。
【表７】
2010532864.tif 000020
【０２４１】
化学的成分の変わりやすい反応性という困難な課題は、Ｕｇｉ反応については、最終化合物の収率に対して、はるかに低い有意性でしか影響を及ぼさない。トリプタミン及びチラミンなどのある特定のアミンは、トリアジン活性アガロースと結合されるとき過反応性を示し（未発表の研究、Ｈｕｓｓａｉｎ  ２００１）、望ましくない二置換（ｂｉ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）反応生成物をもたらす傾向がある。しかし、多成分反応又はＵｇｉ反応においては、反応機構は、アミン反応性の疑問の重要性はより小さいようになっており、これはこの反応が、完了するのに等モル量のそれぞれの４つの成分を必要とするためである。反応物が特に非反応性である場合、反応は、著しい程度までまったく進行しない。したがって、「部分的な生成物」、又は望まれない副生成物はまったく形成されない。
【０２４２】
リガンド設計のためにＵｇｉ化学反応を使用することの追加の利点は、天然のジペプチド結合を模倣するためのスカフォールドについての可能性である。Ｕｇｉスカフォールドと比較した場合の、天然ジペプチド結合におけるＯ１−Ｎ−Ｏ２の間の計算された原子間距離の差は、３つの原子のすべての間で１．０Å未満であり、このスカフォールドが、天然ジペプチド結合を正確に模倣する能力を有することができることを示している。また、スカフォールド及びしたがって、クロマトグラフィーのマトリックスの表面から離れて共に突き出ているＲ４（カルボン酸）及びＲ２（アミン）部分の呈示に注意されたい。したがって、これらの２つの官能基は、対象とする相互作用のために利用できる結合部位を与える。
【０２４３】
Ｕｇｉ反応
本発明の一態様によれば、式（ＩＩＩ）による化合物を調製するための方法が提供される。この化合物は、多成分Ｕｇｉ反応を使用して調製することができる。本発明によれば、このプロセスは、成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＢはＲ２−ＮＨ２であり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ及びＲ２は、さらに水素から選択され、Ｒ２は、その上さらに−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ６Ｒ７から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールであり、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されている
ステップを含む。
【０２４４】
一実施形態では、反応の化合物は、１つの反応器中で、試薬のすべてを混合することよって調製することができる。或いは、アミン及びアルデヒド／ケトン成分（それぞれ、Ｂ及びＡ）は、予め反応させ、それによって、他のカルボン酸及びイソニトリル試薬（それぞれ、Ｄ及びＣ）を添加する前にイミン中間体を形成することができる。これらの反応は、ワンポットで実施されることが好ましい。
【０２４５】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上が結合されている場合、対応する試薬は、２つの置換基が結合されているとき、二座の試薬と呼ばれ、又は３つの置換基が結合されているとき、三座の試薬と呼ばれる。
【０２４６】
Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤが追加の官能基を含む場合、この基は保護された形態とすることができる。保護基の例は上述されている。この保護基は、スカフォールド生成物が形成されると除去することができる。例えば、試薬Ｂは、カルボン酸基を有することができる。この基は、遊離酸（ＣＯＯ−）又はエステル（ＣＯＯＭｅ）として保護することができ、これは、必要な場合に加水分解して酸にすることができる。試薬Ｄは、アミノ基（−ＮＨ２）を有することができる。この基は、Ｆｍｏｃ（−ＮＨＦｍｏｃ）で保護することができる。この保護基は、例えば、ピリジン又はＤＢＵを用いて後に除去することができる。
【０２４７】
アミノ酸成分は、試薬Ｂ及びＤとして使用することができる。アミノ−、カルボキシ−又は側鎖の官能性が適切な場合に保護されている、適当に保護された形態のアミノ酸は、当技術分野で公知であり、市販の供給源、例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ及びＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから容易に入手可能である。
【０２４８】
Ａが、支持体に結合したリンカーを含む基である場合、Ｒ１ａ又はＲ１ｂの１つは、とりわけ、ホルミルポリスチレン、テンタゲルアセタール樹脂、３−ホルミルインドリル）アセトアミドメチルポリスチレン又はＧａｒｎｅｒアルデヒド官能化アミノ−メチル化ポリスチレンとすることができる。
【０２４９】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７についての選択事項は、上記の式（Ｉ）及び（ＩＩＩ）の化合物について与えたものと同じである。
【０２５０】
リガンド及び支持体についての選択事項は、上述した化合物及びコレクションについてのリンカー及び支持体に関連して与えたものと同じである。
【０２５１】
本発明の第３の態様によれば、物質体に対する親和性を有すると識別された化合物を調製するための方法が提供される。一実施形態では、このステップは、成分Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップを含む。これらの成分の１つは、ライブラリーメンバーのリンカーの構造的又は機能的類似体とすることができる。例えば、リンカーがアリール基を含む場合、類似体はアリール基を含むことができる。
【０２５２】
Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ反応
本発明の一態様によれば、式（ＩＶ）による化合物を調製するための方法が提供される。化合物は、多成分Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ反応を使用して調製することができる。本発明によれば、このプロセスは、成分Ａ、Ｃ及びＤを一緒に接触させるステップであり、
ＡはＲ１ａＣＯＲ１ｂであり、
ＣはＲ３−ＮＣであり、
ＤはＲ４−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの１つは、支持体に結合したリンカーを含む基であり、
その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４は独立して、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル、場合により置換されたＣ３〜２０ヘテロシクリル、若しくは場合により置換されたＣ５〜２０アリールから選択され、Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、さらに水素から選択され、
又は場合により、その他のＲ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上は結合されているステップを含む。
【０２５３】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４のうちの２つ以上が結合されている場合、対応する試薬は、２つの置換基が結合されているとき、二座の試薬と呼ばれ、又は３つの置換基が結合されているとき、三座の試薬と呼ばれる。
【０２５４】
Ａ、Ｃ又はＤが追加の官能基を含む場合、この基は保護された形態とすることができる。保護基の例は上述されている。この保護基は、スカフォールド生成物が形成されると除去することができる。例えば、試薬Ｄは、アミノ基（−ＮＨ２）を有することができる。この基は、Ｆｍｏｃ（−ＮＨＦｍｏｃ）で保護することができる。この保護基は、例えば、ピリジン又はＤＢＵを用いて後に除去することができる。
【０２５５】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ３及びＲ４についての選択事項は、式（ＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物について、及び上記で与えたものと同じである。
【０２５６】
リガンド及び支持体についての選択事項は、上述した化合物及びコレクションについてのリンカー及び支持体に関連して与えたものと同じである
【０２５７】
コレクションの調製
式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物の調製について上述した方法は、式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物のコレクションの調製に適用可能である。コレクションのメンバーは、例えばコンビナトリアル化学の技術分野で一般的な技法を使用して、並行して調製することができる。これらのステップは、当技術分野で公知である技法を使用して自動化することができる。
【０２５８】
分析
式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物は、とりわけ、ＩＲ、ＮＭＲ（ゲル相及びマジック角スピニング（ＭＡＳ）技法）、並びに元素分析によって分析することができる。リンカーが切断可能なリンカーである場合、リンカーは切断されることによって、支持体から化合物を解放することができる。解放された化合物は、当技術分野で一般的な技法、例えば、ＬＣ−ＭＳ、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ、元素分析、ＩＲ、ＴＬＣ及び重量分析を使用して分析することによって、化合物の素性及び量、したがって、固体支持体上の物質の素性及び量を確立することができる。
【０２５９】
コレクションの個々のメンバーも、上述した技法によって分析することができる。メンバーの分析は、自動化することができる。
【０２６０】
リンカー並びに基Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４に関連して上記に論じたように、これらのうちの任意の１つは、分析用マーカーを含むことによって、反応方法並びに反応生成物の素性及び量の同定並びに定量化を補助することができる。
【０２６１】
化合物及びコレクションの使用
本明細書に記載される化合物及びコレクションは、精製方法において使用することができる。この化合物は、分析用又は診断デバイス中に組み込むこともできる。
【０２６２】
化合物は、立体配座形態の物質体のためのリガンドを同定するのに使用することができる。例えば、化合物は、テロメア様ＤＮＡのセクション上のＧ−四重構造についてのリガンドを同定するのに使用することができる。そのような化合物は、その物質体の別の立体配座形態と比べて、１つの立体配座形態に対して選択的であることが好ましい。
【０２６３】
物質体とリガンドの間の結合は、多数の方法のうちの任意の１つで検出することができる。物質体自体は、これが同定されることを可能にする標識を有していてもよい。
【０２６４】
コレクション中の化合物は、例えばウェルプレートの表面上又はウェル同士間に、空間的に配置することができる。
【０２６５】
本発明は、生物学的に活性な化合物を発見するための、式ＩＩＩ及びＩＶの化合物のスクリーニング方法にも関する。スクリーニングは、核酸、例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、又はタンパク質との結合相互作用を評価するため、或いはタンパク質間相互作用若しくは核酸−タンパク質相互作用、例えば、転写因子ＤＰ−１とＥ２Ｆ−１、又はエストロゲン応答要素（ＥＲＥ）とヒトエストロゲン受容体（ホルモン活性化転写因子（ｈｏｒｍｏｎｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）として機能する６６ｋｄのタンパク質であり、その配列は当技術分野で公開されており、一般に入手可能である）に対する化合物の影響を評価するためとすることができる。スクリーニングは、標的巨大分子を、上述した個々の化合物、又はアレイ、又はライブラリーと接触させ、最も強い作用を示す化合物、又は化合物の混合物を含むウェルを選択することによって実施することができる。
【０２６６】
この作用は、単純に、細胞に対する対象の化合物の細胞毒性、又は核酸への化合物の結合とすることができる。タンパク質間相互作用、又は核酸−タンパク質相互作用の場合、作用は、試験されている相互作用の破壊とすることができる。
【０２６７】
本発明の別の態様は、診断方法における式ＩＩＩ及びＩＶの化合物の使用に関する。医学的状態の指標であると知られているＤＮＡ又はタンパク質の同定された配列に結合する、式ＩＩＩ及びＩＶの化合物は、診断方法において使用することができる。この方法は、例えば、適切に処理された血液又は組織抽出物の試料を、例えばカラム中で、固定化した式ＩＩＩ及びＩＶの化合物上に通過させることができ、引き続いて式ＩＩＩ及びＩＶの化合物への標的ＤＮＡのいずれかの結合が起きたかどうかを判定する。そのような判定は、化合物ＩＩＩ及びＩＶに結合することが知られている、既知量の標識された標的ＤＮＡをカラムに通過させ、結合しないままであった化合物ＩＩＩ及びＩＶの量を計算することによって実施することができるであろう。
【０２６８】
本発明のさらなる態様は、標的検証における式ＩＩＩ又はＩＶの化合物の使用に関する。標的検証は、配列の機能を確認するための、同定されたＤＮＡ配列の破壊であり、式ＩＩＩ又はＩＶの化合物は、同定された配列を選択的に結合するのに使用し、したがってその機能、即ち、機能的なゲノミクスを破壊することができる。式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物にコレクションも同様の様式で使用することができる。
【０２６９】
本発明は、混合物からの混入物の精製も提供する。化合物は、混合物中の混入物を固定化することができる場合がある。混合物からの混入物の除去によって混合物を精製する。そのような方法では、異なる混入物に対する親和性をそれぞれ有するいくつかの化合物を使用することができる。この方法は、１つのステップにおいて混合物をいくつかの化合物と接触させ、それによって複数の混入物を同時に除去することができる。これにより、混合物の精製時間を改善し、したがって処理量を増大させることができる。
【０２７０】
化合物のライブラリーは、市販供給源から得ることでき、又は本明細書に記載される方法によって調製することができる。
【０２７１】
定義
物質体
本発明は、混合物からの物質体の精製、並びに物質体に対する親和性リガンドを同定するための方法を提供する。
【０２７２】
物質体は、混合物から単離するのに望ましい任意の実体とすることができる。物質体は、それに結合することができる化合物を同定するのに望ましい任意の実体とすることもできる。
【０２７３】
物質体は、小有機分子若しくは大有機分子（それぞれ＜５００ダルトン及び≧５００ダルトン）、巨大分子、核酸若しくはペプチドなどのポリマー、又は細菌若しくはウイルスなどの細胞などの複合実体とすることができる。
【０２７４】
物質体は、生物活性を有する化合物であってもよい。物質体は、天然に存在する分子の構造的、調節、生化学的機能を有することができる。物質体は、代謝産物、薬剤、酵素、メッセンジャーなどとすることができる。
【０２７５】
物質体は、核酸、ペプチド、糖類、又はポリケチド又はグリコシル化型を含めた脂質であることが好ましい。
【０２７６】
好ましくは、物質体は、酵素阻害剤、調節酵素、ホルモン結合タンパク質、ビタミン結合タンパク質、受容体、レクチン及び糖タンパク質、ＲＮＡ及びＤＮＡ、細菌、ウイルス及びファージ、マイコプラズマ、天然及び人工供給源に由来する細胞及び遺伝子操作されたタンパク質産物（例えば、ＨＩＳ−タグ結合タンパク質）とすることができる。
【０２７７】
核酸及びペプチド
ペプチドとしてポリペプチド、例えばオリゴペプチド、リボソームペプチド、非リボソームペプチド、ペプトン及びこれらの翻訳後修飾形態など、並びにこれらの断片、変異体及び誘導体が挙げられる。
【０２７８】
ペプチドは、とりわけ、酵素、抗体又は受容体とすることができる。ペプチドは任意のサイズとすることができる。ペプチドは、ポリペプチドであってもよい。ポリペプチドは、一般に１０以上のアミノ酸残基を含む。
【０２７９】
用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、１つのモノクローナル抗体（アゴニスト及びアンタゴニスト抗体を含めて）、並びに多エピトープ特異性を有する抗体組成物を包含する。本明細書のモノクローナル抗体には、具体的には「キメラ」抗体（免疫グロブリン）が含まれ、この中でこれらが所望の生物活性を示す限り、重鎖及び／又は軽鎖の一部は、特定の種に由来し、又は特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体における、対応する配列と同一であるか、相同性である一方、鎖（複数可）の残りは、別の種に由来し、又は別の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体、並びにそのような抗体の断片における、対応する配列と同一であるか、相同性である（Ｃａｂｉｌｌｙら、上記を参照されたい；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１（１９８４））。
【０２８０】
ペプチドは、哺乳動物ポリペプチド、好ましくはヒトポリペプチド、又はヒトポリペプチドと高い配列同一性（例えば、＞７０％、＞８０％、＞９０％、＞９５％の同一性）を有するポリペプチドとすることができる。
【０２８１】
哺乳動物ポリペプチドの例として、例えば、レンニンなどの分子；ヒト成長ホルモン又はウシ成長ホルモンを含めた成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；１−アンチトリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；トロンボポエチン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；凝固因子、例えば、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、及びフォンウィルブランド因子など；プロテインＣなどの抗凝固因子；心房性ナトリウム利尿因子；肺表面活性剤；プラスミノーゲンアクチベーター、例えば、ウロキナーゼ又はヒト尿、又は組織型プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ）など；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子−α及び−β；ＥｒｂＢ２ドメイン（複数可）に対する抗体、例えば、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメイン（例えば、両端を含む、ＥｒｂＢ２の約残基２２〜約残基５８４の領域中の任意の１つ又は複数の残基）中の領域に結合する２Ｃ４（国際公開第０１／００２４５号パンフレット；ハイブリドーマＡＴＣＣ  ＨＢ−１２６９７）など；エンケファリナーゼ；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；β−ラクタマーゼなどの微生物タンパク質；ＤＮアーゼ；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）；ホルモン又は成長因子に対する受容体；インテグリン；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３、−４、−５、若しくは−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５、若しくはＮＴ−６）、又はＮＧＦなどの神経成長因子など；カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）などのカルジオトロフィン（心肥大因子）；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；ａＦＧＦ及びｂＦＧＦなどの線維芽細胞成長因子；上皮成長因子（ＥＧＦ）；トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−１、ＴＧＦ−２、ＴＧＦ−３、ＴＧＦ−４、又はＴＧＦ−５を含めたＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βなど；インスリン様成長因子−Ｉ及び−ＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）；インスリン様成長因子結合タンパク質；ＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ−３、ＣＤ−４、ＣＤ−８、及びＣＤ−１９など；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン、例えばインターフェロン−α、−β、及び−γなど；血清アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）など；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１０；抗ＨＥＲ−２抗体；Ａｐｏ２リガンド（Ａｐｏ２Ｌ）；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面−膜タンパク質；分解促進因子；ウイルス抗原、例えば、ＡＩＤＳエンベロープの一部など；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；抗体；並びに任意の上記に列挙したポリペプチドの断片が挙げられる。
【０２８２】
本発明で使用するのに好適な物質体は、血液タンパク質、特に凝固タンパク質、最も特に第ＶＩＩ因子及び第ＶＩＩＩ因子、並びにこれらの断片、変異体及び誘導体である。
【０２８３】
代替の実施形態では、物質体は、免疫グロブリン、好ましくはＩｇＧ、並びにその断片、変異体及び誘導体とすることができる。
【０２８４】
核酸として、ＤＮＡ、ＲＮＡ、並びに人工形態のＰＮＡ、ＬＮＡ、ＧＮＡ及びＴＮＡが挙げられる。ポリヌクレオチドは、修飾塩基及び／又は修飾主鎖を含むことができる。核酸は任意のサイズとすることができる。
【０２８５】
核酸は、センス又はアンチセンス配列とすることができる。
【０２８６】
ＤＮＡは、ｍｔＤＮＡ、ｃＤＮＡ、プラスミド、コスミド、ＢＡＣ、ＹＡＣ、又はＨＡＣとすることができる。
【０２８７】
ＲＮＡは、ｍＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｎｃＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、又はＬＮＡとすることができる。
【０２８８】
混合物
用語「混合物」は、対象とする物質体を含むことができる任意の生体試料を指すことができる。混合物は、全血又は赤血球、白血球、血小板、血清及び血漿を含めた全血成分、腹水、尿、硝子体液、リンパ液、滑液、卵胞液、精液、羊膜液、乳、唾液、痰、涙、汗、粘液、脳脊髄液などの生体液、並びに対象とする分析物を含むことができる、体の他の成分、並びに組織培養培地及び組織抽出物、例えば、ホモジナイズされた組織、及び細胞抽出物などの試料とすることができる。好ましくは、試料は、任意の動物に由来する体試料であるが、好ましくは哺乳動物に由来し、より好ましくはヒト対象に由来する体試料である。そのような生体試料は、臨床患者に由来することが最も好ましい。本明細書で好適な生体試料は、血清、血漿又は尿、より好ましくは血清、最も好ましくは臨床患者に由来する血清である。
【０２８９】
混合物は、混入物を含む場合がある。混入物は、所望の物質体と異なる物質である。混入物は、所望のポリペプチドの変異体（例えば、所望のポリペプチドの変異体）又は別のポリペプチド、核酸などとすることができる。
【０２９０】
溶出
化合物と結合し、又は他の方法で会合した物質体（これは、親和性リガンドと呼ばれる場合がある）は、溶離液（ｅｌｕｔａｎｔ）を使用して化合物から取り出すことができる。溶出混合物は、支持体に結合したリガンドと物質体の間の相互作用を破壊することが意図されている。溶出混合物は、リガンドと物質体の間の水素結合相互作用、静電相互作用、及び疎水性相互作用を破壊するように選択することができる。
【０２９１】
「溶出緩衝液」は、化合物から対象とする物質体を溶出するのに使用することができる。溶出緩衝液の伝導率及び／又はｐＨは、対象とする物質体が支持体から溶出されるようになっている。
【０２９２】
溶離液は、物質体及び化合物の解離パラメータを研究するための方法の一部として使用することができる。そのような場合では、化合物からの物質体の放出が時間ととともにモニターされる。
【０２９３】
親和性リガンドから物質体を分離するための技法は、当技術分野で公知である。
【０２９４】
分析
固定化したリガンドが、物質体と会合しているかどうかを判定するための多くの方法が存在する。
【０２９５】
化合物が、他の化合物から空間的に分離されている場合、物質体を最初に含んでいた混合物を取り出し、化合物を溶出混合物で引き続いて洗浄し、それによって物質体を取り出すことができる。次いでその溶出混合物を分析することによって、物質体が存在するかどうか、及び物質体が存在する程度を判定することができる。
【０２９６】
しかし、本発明のコレクションについては、コレクションの個々のメンバーの空間的な配置を考慮すると、そのような分析は、非現実的又は不可能である場合がある。
【０２９７】
一実施形態では、物質体は放射標識することができる。コレクションを洗浄することによって過剰の混合物を除いた後、コレクションを分析することによって、放射線の位置及び強度を求め、それによって物質体が結合しているリガンド及び物質体が結合している程度を示すことができる。
【０２９８】
別の実施形態では、物質体又はリガンドを標識することができる。標識によって生じたシグナルは、物質体とのリガンドの会合のために、消滅させることができる。予め形成された会合複合体からの物質体と競合し、これを置換する試験物質体を添加することにより、バックグラウンドを上回るシグナルが生じる。このようにして、物質体／リガンド相互作用を破壊する試験物質体を同定することができる。
【０２９９】
或いは、リガンドに結合した物質体は、ＥＬＩＳＡタイプのアッセイを使用して検出することができる。
【０３００】
物質体、具体的にはペプチドとの化合物の相互作用は、ブラッドフォードタンパク質アッセイを使用しても判定することができる。
【０３０１】
これら及び他の技法は、当技術分野で公知である。
【０３０２】
分離
本発明は、本発明の態様による混合物から物質体を分離するための方法を提供する。混合物は、本発明の化合物と接触し、それによって混合物中の物質体を化合物に固定化する。次いで物質体が欠乏した混合物を除去することができる。
【０３０３】
物質体は、混入物であってもよい。或いは、物質体は、対象とする分子であってもよい。対象とする分子は、化合物を溶離液で処理することによって、化合物から収集することができる。
【０３０４】
物質体が混入物である場合、本方法により混合物が精製される。１つ又は複数の混入物の混合物を精製することとは、組成物から少なくとも１種の物質体を（完全又は部分的に）除去することによって、組成物中の対象とする化合物の純度の程度を増大させることを意味する。「精製ステップ」は、「均一な」組成物をもたらす全体的な精製プロセスの一部とすることができ、均一な組成物は、組成物の全重量に基づいて、少なくとも約７０重量％の対象とする化合物、好ましくは少なくとも約８０重量％を含む組成物を指すのに本明細書で使用される。
【０３０５】
分離装置
本明細書に記載される化合物は、混合物の精製において使用するための装置中に組み込むことができる。この装置は、混入物を固定化することによって、或いは所望の物質体を固定化することによって混合物を精製するのに使用することができ、次いでこの混合物は後の時点で装置から解放することができる。
【０３０６】
分離装置は、適切な化合物で充填されたクロマトグラフィーカラムの形態をとることができる。或いは、装置はフィルターベッドを含むことができ、このベッドは、適切な化合物を含む。
【０３０７】
装置内では、化合物は、別々の粒子であってもよく、又はこれらは、表面に結合されているか、多孔性のマトリックス中に保持されていてもよい。
【０３０８】
親和性リガンドを含む他の種類の装置は、当業者に明らかとなろう。
【０３０９】
実験
物質
すべての化学物質は、別段の記載のない限り、試薬グレードであった。チラミン、４−アミノベンズアミド、グルタル酸、２，４−ピリジンジカルボン酸、イソフタル酸、Ｂｏｃ−グルタミン、酢酸、ベンジルアミン、アセトアルデヒド、イソプロピルイソシアニド、イソシアノ−シクロヘキサン、エピクロロヒドリン、過ヨウ素酸ナトリウム、二塩基性のリン酸ナトリウム、エチレングリコール、塩化ナトリウム、１−ピレンメチルアミン、及び１−ピレン酪酸は、すべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ、ＵＫ）から得た。１−アミノ−２−ナフトール、４−アミノフェノール、３−アミノフェノール、アミノ−８−ナフトール、安息香酸及び水酸化ナトリウムは、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ、ＵＫ）から得た。４−ヒドロキシベンジルアミンは、Ｃｈｏｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ（Ｗａｔｅｒｆｏｒｄ、ＵＳＡ）から得た。Ｂｏｃ−グリシン及び１−アミノ−２−プロパノールは、Ｆｌｕｋａ（ＵＫ）から得た。エタノール、メタノール、ジクロロメタン及びプロパン−２−オールは、すべてＦｉｓｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ＵＫから得た。架橋アガロース（セファロースＣＬ−６Ｂ）は、Ｇ．Ｅ．Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）から購入した。ヒトＩｇＧ（プールされたヒト血清から得た、≧９５％純粋）は、Ｓｉｇｍａ（Ｄｏｒｓｅｔ、ＵＫ）から得、一方ｈＦａｂ及びＦｃ（ヒト血漿から得た、≧９５％純粋）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ、ＵＫ）から購入した。ポリプロピレンカラム（０．８×６．０ｃｍ）及びフリットは、Ｖａｒｉａｎ（Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ）から購入した。タンパク質濃度判定のための、９６ウェル標準マイクロタイタープレート、及びクーマシープラス（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｐｌｕｓ）（商標）タンパク質アッセイ試薬（ブラッドフォードアッセイ）はそれぞれ、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＵＫ）及びＰｉｅｒｃｅ（ＵＫ）から購入した。
【０３１０】
装置
リガンド合成は、Ｈｙｂａｉｄ  Ｍａｘｉ  １４ハイブリダイゼーションオーブン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ、ＵＫ）を使用して実施した。全タンパク質濃度は、クーマシープラス（商標）タンパク質アッセイ試薬を使用して、Ｄｙｎｅｘ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのＯｐｓｙｓ  ＭＲプレートリーダーを使用して、波長（５９５ｎｍ）で試料の吸光度を測定することによって求めた。分子像は、Ｍｏｌｅｇｒｏ  ＡｐＳ−Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｄｅｎｍａｒｋ）からのＭｏｌｅｇｒｏ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｄｏｃｋｅｒ  ２００７  ソフトウェア  ＭＶＤ  ｖ２．０．０を使用して得た。１Ｈ及び１３Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｊｏｅｌ  ＪＮＭ  Ｌａｍｂｄａ  ＬＡ４００  ＦＴ  ＮＭＲ分光計を使用して実施した。質量スペクトルは、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫにおいて、電子衝撃モードで、ＡＥＩ  ＭＳ３０又はＡＥＩ  ＭＳ５０  質量分析計で記録した。蛍光試験は、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＣＸ４０顕微鏡、Ｎｉｋｏｎ  ＥＦＤ−３フィルター（λｅｘ＝３３０〜３８０ｎｍ）、Ｎｉｋｏｎ水銀１００Ｗランプ、及びＫｏｄａｋ  ＤＣ２９０ズームデジタルカメラを使用して実施した。
【０３１１】
方法
ＩｇＧについての親和性リガンドの同定
化合物のコレクションを調製することによって、ＩｇＧについての可能な親和性リガンドを同定した。化合物のコレクションは、Ｕｇｉ多成分反応において、支持体に結合したアルデヒド官能化リンカーを、カルボン酸、アミン及びイソニトリルと反応させることによって調製された、スカフォールドに基づいたものであった。次いで生成物を、ＩｇＧを結合するその能力についてスクリーニングした。
【０３１２】
リンカー及び支持体の調製
マトリックス支持体のセファロースＣＬ−６Ｂ（樹脂２、スキーム１）は、平均粒径が９５μＭで、ポリマーネットワーク全体にわたって１級の末端ヒドロキシル基を有する、高度に架橋された多孔質ビーズとして供給する。このビーズは、以下のスキームに示すように、リガンドスペーサーアームの付加によってさらに修飾することができる。
【化９】
2010532864.tif 000021
スキーム１−アルデヒド活性化のためのセファロースビーズへの４Ｃスペーサーアームの付加（注：明確にするために、ただ１つの官能基を示す）
【０３１３】
セファロースビーズを、ＮａＯＨの存在下でエピクロロヒドリンで最初に処理することによって、エポキシ活性化樹脂３を得た。実現される活性化の程度は、このステップで添加するＮａＯＨの量によって正確に制御することができる。「エポキシド活性化アッセイ」は、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３を用いた３のインキュベーション、次いで０．１ＭのＨＣｌに対する滴定を必要とし、ビーズのエポキシド含量は、樹脂１ｇ当たり１μｍｏｌ以内であることを示す。新たに調製した５ＭのＮａＯＨで３をさらに処理したとき、エポキシド形態が開いてジオール４を生成する。次いで後者を０．１ＭのＮａＩＯ４に曝し、ジオールを切断して、最終のアルデヒド活性化樹脂５を残す。
【０３１４】
エポキシド活性化及びアッセイ判定
セファロースビーズ（２００ｇ）（樹脂２、スキーム１）の試料を、グレード２の焼結ガラス漏斗中に注ぎ、「沈殿ゲル（ｓｅｔｔｌｅｄ  ｇｅｌ）」の粘稠度が得られるまで、水分を排出した。この試料を計量してビーカーに入れ、滅菌脱イオン水（２００ｍｌ）を使用してスラリー化して５０％のビーズ／水（ｖ／ｖ）にした。次いでこのスラリーを焼結ガラス漏斗に注いで戻し、水（５×４００ｍｌ）で徹底的に洗浄し、樹脂が十分に撹拌されたことを確実にした後、真空にかけ、こうして濾過が起こることを可能した。最後の洗浄は、真空にかけることなく、「沈殿ゲル」の粘稠度が再び得られるまで、重力下で徹底的に水分が排出するままにした（１０分）。洗浄した樹脂は、水（１００ｍＬ）中でスラリーにし、５００ｍＬのデュラン瓶に移した。１０ＭのＮａＯＨ（８ｍＬ）をこのスラリーに添加し、室温で１時間撹拌したままにした。次いで温度を３４℃に上げ、反応混合物に新鮮なエピクロロヒドリン（１４ｍＬ）を加えた。この反応混合物を、３時間穏やかに撹拌しながら３４℃に維持した。この時間の後、デュラン瓶の内容物をグレード２の焼結ガラス漏斗中に注ぎ、脱イオン水（５×４００ｍｌ）で洗浄することによって、エポキシド活性化樹脂を得た（残留するエピクロロヒドリンは、ＮａＯＨで２４時間処理した後、安全な廃棄物処理をした）。沈殿したら、樹脂を、以前に上述したエポキシド活性化アッセイにかけることによって、そのエポキシド密度について試験した。１．３ＭのＮａ２Ｓ２Ｏ３で滴定することによって測定した場合、２４．０μｍｏｌ／ｇ（沈殿ゲル）の一般的な活性化レベルを得た。
【０３１５】
Ｃｉｓ−ジオール活性化
エポキシド活性化樹脂（樹脂３、スキーム１）（６０ｇ）を、５ＭのＮａＯＨ（６０ｍＬ）で処理し、３４℃で一晩穏やかに撹拌したままにした。この塩基触媒手順により、エポキシド環を徐々に加水分解し、ｃｉｓ−ジオール反応生成物４を形成する。
【０３１６】
アルデヒド活性化
次いで、ジオール活性化樹脂４（５６ｇ）を０．１ＭのＮａＩＯ４（１００ｍｌ）で処理し、３０℃で３時間撹拌したままにした。この手順により、末端に官能化されたアルデヒド基を残して、ｃｉｓ−ジオールの切断が生じる。空気に曝された反応性のアルデヒドは、酸化し易いことが知られており、したがって、この樹脂をリガンドライブラリー生成のために直ちに準備した。
【０３１７】
化合物コレクションの調製
多数のリガンドを同時に生成するために、本発明者らは、カプチバ（Ｃａｐｔｉｖａ）（商標）９６ウェルブロック（Ｖａｒｉａｎによって供給、ＵＫ）を使用し、これは、それぞれのウェルの底部に、２０μｍのポリプロピレンフリットを含んでいた。この化学的耐性のあるブロックシステムは、それによって反応器、引き続いて最終反応の終わりでの貯蔵設備を構成した。
【０３１８】
アルデヒド活性化樹脂（樹脂５、スキーム１）（３６ｇ）の試料を、１０％のメタノールから開始し、１０％ずつ増やして１００％のメタノールで終わる、漸増メタノール濃度の一連の洗浄にかけた。このステップは必要であるが、これは、アガロースビーズは、樹脂によって吸収された水を徐々に置換することなく直ちに１００％のメタノール中に置かれると、劣化を受けやすい場合があるためである。次いで、メタノールで飽和した樹脂（３６ｇ）を、１００％のメタノール（３６ｍｌ）中でスラリーにし、振盪機上に置き、樹脂が沈殿するのを防止するために穏やかに振盪した。１ｍｌのＧｉｌｓｏｎピペットチップを、端部から約２ｍｍで切り取ることによって、１ｍｌのスラリーのアリコートを４８ウェルの反応ブロック（８×６）中に容易に移すことを可能にした。柔軟なエンドキャップマット（ｅｎｄ−ｃａｐ  ｍａｔ）をこの段階で取り出すことによって、溶媒を完全に排出させ、したがって、樹脂をブロック内で沈殿させた。次いでエンドキャップマットを、ブロックの底部の位置にしっかりと再配置した。
【０３１９】
固定濃度の第１の予め選択したアミン成分（５倍モル過剰、メタノール中）及び量（０．２５ｍｌ）を、６ウェルの第１の行（１、Ａ〜Ｆ）に添加した。第２の異なるアミン成分を、上述したように第２の行（２、Ａ〜Ｆ）に添加した。合計で８種の異なるアミンがそれぞれの行に添加されるまで、この手順を繰り返した（ライブラリー成分の構造については以下を参照されたい）。次いで、トップキャップマット（ｔｏｐ  ｃａｐ−ｍａｔ）を、ブロックにしっかりと取り付け、２００ｒｐｍで１時間振盪させた。この手順により、アミン成分が、供給された樹脂試料と完全に混合されることが可能になった。
【０３２０】
同様に、固定濃度の第１の予め選択したカルボン酸成分（５倍モル過剰、メタノール中）及び量（０．２５ｍｌ）を、第１の列（Ａ、１〜８）に添加した。第２の異なるカルボン酸成分を、第２の列（Ｂ、１〜８）に添加した。合計で６種の異なるカルボン酸が６つの列のそれぞれに添加されるまで、この手順を繰り返した（ライブラリー成分の構造については以下を参照されたい）。最後に、固定アリコート（０．２５ｍｌ）のイソプロピルイソシアニド成分（５倍モル過剰、メタノール中）を、４８ウェルのそれぞれにピペットで移した。したがって、２Ｄライブラリーアレイを構築するために、Ｕｇｉ反応に関与する４つの可能な成分のうち２つのみを変化させた。
【０３２１】
次いで、上側のキャップマットを反応ブロックの頂部にしっかりと固定した。次いでブロック全体を、振盪プラットフォーム（２００ｒｐｍ）を有するインキュベーションオーブン内に５０℃で４８時間置いた。反応期間の最後に、下側及び上側のキャップマットを慎重に取り出し、ウェルを１０分間液体排出させた。次いで、ウェルを徹底的な洗浄手順にかけることによって（以下を参照されたい）、得られた樹脂試料から未反応の試薬を除去した。
【０３２２】
反応後、誘導体化セファロースビーズは、一連の別々の洗浄ステップからなる徹底的な洗浄手順（以下を参照されたい）にかけることによって、標的スクリーニングの前にすべての未反応化合物を確実に除去する。すべての洗浄ステップは、１ウェル当たり５ｍｌにした。１）１００％のＭｅＯＨ；２）５０％のＤＭＦ＋５０％のＭｅＯＨ（ｖ／ｖ）；３）５０％のＤＭＦ（水中ｖ／ｖ）；４）水；５）０．１ＭのＨＣｌ；６）水；７）５０％のＩＰＡ中の０．２ＭのＮａＯＨ；８）２回の水及び９）２０％のＥｔＯＨ（水中ｖ／ｖ）を用いた洗浄。次いで洗浄したビーズは、必要とされるまで、４℃で２０％のＥｔＯＨ（滅菌脱イオン水中ｖ／ｖ）中に貯蔵した。
【０３２３】
イソニトリル成分を変更するために、同じライブラリーを、上述したように、しかし反応ブロック内の異なる位置で異なるイソニトリル成分を使用して調製することができる。このようにして、異なるイソニトリル成分を有するいくつかの異なるライブラリーを容易に作製することができ、したがって、リガンド構造の３Ｄアレイを有効に生じさせる。
【０３２４】
ライブラリー成分
【表８】
2010532864.tif 000022
上記表は、ｈＩｇＧ−結合Ｕｇｉコンビナトリアルライブラリーのアミン成分の構造を示す。
【表９】
2010532864.tif 000023
【０３２５】
上記表は、ｈＩｇＧ−結合Ｕｇｉコンビナトリアルライブラリーのカルボン酸成分（Ｃ１〜Ｃ６）及びイソニトリル成分（Ｉ１）の構造を示す。（注：イソプロピルイソシアニドは、全体のコンビナトリアルライブラリーについて、保存されたままであった）＊ジカルボン酸成分を、等モルのＮａＯＨで最初にインキュベート（１０分、室温）して利用可能なＣＯＯＨ基の半分を保護することによって、セファロースビーズ上の隣接する、形成されたスカフォールド構造同士間の架橋を回避した。反応後の洗浄により効率的に脱保護され、最終のリガンド構造中にカルボン酸基が現れた。
【０３２６】
定性的なＵｇｉリガンド蛍光試験
リガンドは、上述したようなアルデヒド活性化セファロースビーズＣＬ−６Ｂ（１ｇの湿潤重量のゲル当たり２６μｍｏｌ）を使用して作製した（２．５ｇの樹脂のスケール）。アミンベースのピレンリガンドについて、６０ｍｌの角口（ｓｑｕａｒｅ−ｎｅｃｋｅｄ）ナルゲン瓶内で、メタノール（５．０ｍｌ）中に溶解させた、１−ピレンメチルアミン、Ｂｏｃ−グリシン（カルボン酸成分）及びイソシアノ−シクロヘキサン（イソニトリル成分）（すべての成分は３２５μｍｏｌを使用した（即ち、２．５ｇのスケールで５倍のモル過剰））を樹脂に添加し、５０℃で穏やかに振盪しながら４２時間インキュベートした。カルボン酸ベースのピレンリガンド（Ｂ、Ｄ）は、アミン成分の４−アミノフェノール（Ａ５）、及びイソニトリル成分のイソシアノ−シクロヘキサンを使用して、同じ様式で調製した。インキュベーション後に、ビーズを慎重に洗浄し（上述したように）、５．０μｌの調製した５０％のスラリーを、顕微鏡スライド上にピペットで移し、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＣＸ４０顕微鏡、Ｎｉｋｏｎ  ＥＦＤ−３フィルター（λｅｘ＝３３０〜３８０ｎｍ）、Ｎｉｋｏｎ水銀１００Ｗランプ及びＫｏｄａｋ  ＤＣ２９０ズームデジタルカメラを使用して見た。
【０３２７】
クロマトグラフィーのスクリーニングプロトコール及び総タンパク質定量化
得られた合成リガンド吸着剤（０．４ｍｌのリガンド−５０％の調製スラリー）を、４．０ｍｌ（０．８×６ｃｍ）のポリプロピレンカラム（２００μｌ  ｃ．ｖ．）中に重力充填し、クロマトグラフィー分析（再生した（０．１ＭのＮａＯＨ、３０％のイソプロパノール、１０ｃ．ｖ）を準備し、洗浄（滅菌、脱イオン化Ｈ２Ｏ、１０ｃ．ｖ．）し、平衡化（１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｃ．ｖ））した後、充填（１ｃ．ｖ、５００μｇ  ｍｌ−１の平衡緩衝液中で再構成されたｈＩｇＧ／ｈＦａｂ／ｈＦｃ）した。１ｃ．ｖ．の分画を収集（１０×Ｆ．Ｔ．、１０×溶出）し、標準的なブラッドフォードアッセイプロトコール（クーマシープラスアッセイ試薬、Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＫ）を使用して分析することによって、それぞれの収集したカラムの分画中の総タンパク質含量を求めた。この単純な標的スクリーニング方法は、以下の本文において引き続いて標準的なクロマトグラフィー条件と呼ばれる。
【０３２８】
溶液相中での合成
セファロースビーズは、厳しい反応条件、例えば高温（＞１００℃）、非極性溶媒、及び強鉱酸などの下で損傷しやすい。したがって、穏やかな反応条件が、ライブラリー合成、並びにより大きなスケールアップ反応にとって望ましいと考えられる。Ｕｇｉ反応の基本の動態を評価するために、本発明者らは、酢酸、ベンジルアミン、アセトアルデヒド及びイソシアノ−シクロヘキサンを一緒に反応させることにより、溶液相中で穏やかな反応条件（メタノール中、室温）を使用することによって、許容される生成物の形成を確実にした。生成物５を６８％の収率で得た（２０％の高温エタノールからの再結晶後）。Ｕｇｉ付加体５の素性は、それぞれ図１（Ａ）及び（Ｂ）で以下に示すように１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲ、並びに質量分析によってさらに確認した（ｍ．ｐ１１９〜１２０℃、ｍ／ｚ（ＥＩ）３０３．４１（Ｍ＋１，１００％）、実測値：Ｍ＋１  ３０３．２０７４、Ｃ１８Ｈ２７Ｎ２Ｏ２は３０３．２０７２５３を必要とする）。
【化１０】
2010532864.tif 000024
【０３２９】
Ｕｇｉスカフォールド形成の証拠
インサイツでのＵｇｉスカフォールド形成の証拠は、「オンビーズ」蛍光試験（図２）を通じて定性的に得た。ピレンを含有するアミン成分（図２ａ）及びピレンカルボン酸成分（図２ｂ）は、Ｕｇｉスカフォールド中に別々に組み込み（それぞれ図２ｃ及びｄ）、引き続いて蛍光顕微鏡観察を使用して見た（図２ｅ及びｆ）。Ｕｇｉスカフォールド中へのアミンベースの１−ピレンメチルアミンの組込み（図２に示す構造）により、Ｕｇｉ反応機構において最初に認識されるステップである、固定化したアルデヒド活性化樹脂とのイミン形成の明らかな証拠が提供される。Ｕｇｉスカフォールド内で一体化した複合体を形成するための４つの成分のうちの最後はカルボン酸成分であると考えられ、したがって、カルボン酸ベースの１−ピレン−酪酸の組込みの証拠も、マトリックス支持体上に置換されたＵｇｉリガンドの完全な形成を示した。徹底的な洗浄も、成分が親水性セファロースビーズの表面上にただ単純に吸着されていたのではないことを保証し、アルデヒド活性化マトリックス支持体にピレン成分を添加する対照実験も、この点を確認した（データを示していない）。
【０３３０】
図２−インサイツでのＵｇｉスカフォールド形成の定性的な証拠のために使用した蛍光リガンド。ａ）１−ピレンメチルアミン；ｂ）１−ピレン酪酸；ｃ）Ｕｇｉスカフォールド中に組み込まれた１−ピレンメチルアミン：Ｂｏｃ−グリシン、イソニトリル：イソシアノ−シクロヘキサン；ｄ）Ｕｇｉスカフォールドアミン中に組み込まれた１−ピレン酪酸：４−アミノフェノール、イソニトリル：イソシアノ−シクロヘキサン；ｅ）１−ピレンメチルアミンリガンドの蛍光画像（０．０３秒の暴露、１０倍の拡大率）；ｆ）１−ピレン酪酸リガンドの蛍光画像（０．２５秒の露光、１０倍の拡大率）。スケールバー（約１００μｍ）。蛍光試験は、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＣＸ４０顕微鏡、Ｎｉｋｏｎ  ＥＦＤ−３フィルター（λｅｘ＝３３０〜３８０ｎｍ）、Ｎｉｋｏｎ水銀１００Ｗランプ及びＫｏｄａｋ  ＤＣ２９０ズームデジタルカメラを使用して実施した。
【０３３１】
合理的なライブラリー設計
ライブラリー成分の選択は、最近の科学文献から得たリガンド情報と一緒に、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫで最初に同定された、以前に述べた免疫グロブリン結合リガンドに基づいた。
【０３３２】
いくつかのリードリガンドは、様々なトリアジンベースのコンビナトリアルライブラリーから現れ、これは、親和性クロマトグラフィーによる全ＩｇＧ及び断片化ＩｇＧの精製の両方について成功を収めている。人工のプロテインＡ（ＡｐＡ）リガンド（Ｌｉら、１９９８））は、ヒト血漿から、９８％の絶対的純度までｈＩｇＧを溶出し、１ｇの湿潤重量のゲル当たり、２０ｍｇのＩｇＧの明らかな結合能力を示した。このリガンドは、天然に存在するプロテインＡ（黄色ブドウ球菌に由来する）（ＳｐＡ）の断片Ｂ内のヘリックスの末端に位置する、連続的なＰｈｅ１３２−Ｔｙｒ１３３ジペプチドを模倣すると考えられている。天然に存在するタンパク質のこの特定の領域は、大部分は疎水性相互作用を介してＩｇＧのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを結合することが知られており、したがって、従来のＦｃ結合部位、及び代替のＦａｂ結合部位の両方で、ＩｇＧを結合するＡｐＡの能力である（Ｈｉｌｌｓｏｎら、１９９３）。
【０３３３】
この試験では、特定のＦａｂ及びＦｃ結合リガンドに加えて、全ｈＩｇＧへの結合を示すＵｇｉリガンドを同定した。ＡｐＡ様相互作用を模倣するために選択された、このコンビナトリアルライブラリーの成分には、安息香酸（Ｃ５）、チラミン（Ａ１）、４−アミノフェノール（Ａ５）、３−アミノフェノール（Ａ６）、及び４−ヒドロキシベンジルアミン（Ａ７）が含まれる。
【０３３４】
トリアジンベースの免疫グロブリン特異的リガンドを以下に示す。（Ａ）人工のプロテインＡ；（Ｂ）最適化ＩｇＧ結合リガンド２２／８；（Ｃ）ＰｐＬ生物模倣型リガンド８／７。注：使用したこのリガンド命名法は、コンビナトリアルトリアジンライブラリー成分を指す。
【化１１】
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【０３３５】
関連するリガンド構造の意図的に先入観を伴ったコンビナトリアルライブラリーを使用した、数年にわたる最適化の緩やかなプロセス（Ｔｅｎｇら、１９９９）によって、ＡｐＡリガンドは、構造的に発展して、近隣（ｎｅａｒ−ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ）トリアジンリガンド２２／８になった（Ｔｅｎｇら、２０００）。この疎水性リガンド２２／８は、使用される溶出緩衝液のｐＨ値に応じて、６７〜６９％の回収率及び９７〜９９％の純度でｈＩｇＧを溶出することが示され、１ｇの湿潤重量のゲル当たり、５１．９ｍｇのＩｇＧという改善された結合能力を示し、これは、以前のＡｐＡリガンドの結合能力よりもはるかに高かった。さらに、リガンド２２／８は、ＡｐＡ及びＳｐＡの様式と同様の様式で、Ｆａｂ及びＦｃ断片への結合も示した。
【０３３６】
リガンド２２／８によって示された相互作用を模倣するために、このライブラリー中に導入された成分には、アミン：チラミン（Ａ１）、４−アミノフェノール（Ａ５）、３−アミノフェノール（Ａ６）及び４−ヒドロキシベンジルアミン（Ａ７）、並びにナフトール誘導体の１−アミノ−２−ナフトール（Ａ３）及びアミノ−８−ナフトール（Ａ８）が含まれる。ＳｐＡは、Ｆａｂ断片と相互作用するが、ＳｐＡがＩｇＧと結合する支配的な相互作用は、Ｆｃ領域を介してであり、したがって、そのような相互作用を模倣するために選択された上述した成分は、Ｕｇｉスカフォールド中に組み込まれると、同様の様式で相互作用し、潜在的にＦｃ特異的リガンドを生じることが期待されると考えられている。Ｆａｂ特異的Ｕｇｉリガンドを生成するためのさらなる試みにおいて、いくつかの別個の成分もこのライブラリー中に組み込まれ、これは、タンパク質Ｌ模倣リガンド８／７の構造及び官能基に類似していた（Ｒｏｑｕｅら、２００５ｂ）。プロテインＬ（ＰｐＬ）は、κ１、κ３及びκ４亜群の軽鎖に向けて高い親和性を有するが、κ２及びλ亜群に向けてではない細菌表面タンパク質（ペプトストレプトコッカス・マグヌス由来の）（Ｎｉｌｓｏｎら、１９９２；Ｅｎｏｋｉｚｏｎｏら、１９９７）であり、したがって、全ＩｇＧ及び軽鎖関連ＩｇＧ断片（即ち、Ｆａｂ及びｓｃＦｖ）の両方と相互作用する。この特定のリガンドの同様の機能的要素は、カルボン酸成分のグルタル酸（Ｃ１）、２，４−ピリジンジカルボン酸（Ｃ２）、イソフタル酸（Ｃ３）及びＢｏｃ保護グルタミン（Ｃ４）と一緒に、アミン成分の４−アミノベンズアミド（Ａ４）によって、本Ｕｇｉライブラリー中に反映される。また、トリアジンベースのライブラリーから現れた９種の想定されるリードリガンドのうちの７種は、チロシンを模倣し（即ち、チラミン（Ａ１）を含んでいた）、Ｕｇｉライブラリー選択プロセス中にこの成分を含めることをさらに正当化している。チロシン基を模倣することの重要性についての追加の支持する証拠は、ＰｐＬが、それぞれＰｐＬ残基のＴｙｒ５１及びＴｙｒ５３を化学修飾するとＩｇＧについて示す、親和性の１４０分の１の低減を記述する研究によってもたらされる（Ｂｅｃｋｉｎｇｈａｍら、２００１）。偶発的に、選択された最終の候補リガンド（８／７）は、リガンド８／７によって示される、より高いレベルの特異性のために、チロシン官能基を含んでいなかった。
【０３３７】
最近の文献は、様々なＰｐＬドメイン中に保存され、ＰｐＬとＩｇＧ軽鎖の一次相互作用に関与するＰｐＬドメイン（鎖β２及びα１ヘリックス）から複合体を形成すると大部分は埋もれる７種の重要な残基が存在することを示している。これらの残基を以下に列挙し、イタリック体で表示したそのＵｇｉライブラリー類似体を続ける：
【表１０】
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【０３３８】
Ｕｇｉライブラリーのスクリーニング及び想定されるリードの選択
さらなる開発及び評価のために、リード候補を迅速に同定する試みにおいて、最適化されていない標準的なクロマトグラフィーのスクリーニング条件を確立することによって、現れるライブラリー候補の効力を判定した。標準的なブラッドフォードアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  １９７６）によって求めた場合の、リガンド吸着剤についてのデータを、ｈＩｇＧ結合、ｈＦａｂ結合、及びｈＦｃ結合についてそれぞれ図３、４、及び５に示す。データの分析により、全ｈＩｇＧ、並びに特異的なｈＦａｂ及びｈＦｃ断片結合リガンドについてのリードリガンドの選択を促した。
【０３３９】
リードリガンド選択のための主な判定基準は、観察された、実現される総ｈＩｇＧ結合能力に基づく可能なｈＩｇＧ結合であった。候補リガンドのＡ７Ｃ５、Ａ８Ｃ５及びＡ８Ｃ６は、それぞれのカラムに施した、最初の５００μｇ  ｍｌ−１の充填から１００％のｈＩｇＧ結合を示した。ｈＩｇＧリードの構造及び最適化されていない吸着／脱離率について、図６を参照されたい。興味深いことに、想定されるリードリガンドのＡ７Ｃ５は、ＡｐＡリガンドの近隣の機能的な模倣体を表し、したがって、使用した全体的なライブラリー選択プロセスを支持する。逆に、Ｕｇｉライブラリー（Ａ１Ｃ５）中に存在する直接のＡｐＡ模倣体は、おそらく、より厳格な４−ヒドロキシベンジルアミン成分（Ａ７）と比較した場合のチラミン成分（Ａ１）によって寄与される追加の融通性により、Ａ７Ｃ５のように機能せず（４３％のｈＩｇＧ結合）、観察された結合能力の約５７％の損失を説明するのに役立つこともできる。Ｕｇｉライブラリーの詳細な結合分析から、アミノ−８−ナフトール成分（Ａ８）を含むすべてのリガンドは、様々なＦａｂ及びＦｃ結合特性に加えて、１００％のｈＩｇＧ結合を示した。これは、Ａ８成分を含むリガンドがトリアジンリガンド２２／８の結合特性と同様の結合特性（即ち、全Ｆａｂ及びＦｃ、Ｆａｂ及びＦｃ断片についての免疫グロブリン結合）を示すことができることを示す。
【０３４０】
アミノ−ナフトール成分の１−アミノ−２−ナフトール（Ａ３）も、有望な全ｈＩｇＧ結合（カルボン酸成分に強く依存して、約６０〜８６％）を示すが、カルボン酸Ｃ１〜Ｃ４については、Ｆａｂ断片への完全な特異性が観察された（即ち、０％のＦｃ結合）。これは、Ａ８成分と比較した場合に、Ａ３成分について観察されたｈＩｇＧ結合の低減を説明することができる。この観察に基づいて、Ａ３Ｃ１、Ａ３Ｃ２、Ａ３Ｃ３及びＡ３Ｃ４を、さらなる最適化試験のための想定されるＦａｂリードとして選択した。ｈＦａｂリードの構造及び最適化されていない吸着／脱離率について、図７を参照されたい。
【０３４１】
提案したｈＦｃリード候補リガンドのＡ２Ｃ２、Ａ２Ｃ４及びＡ２Ｃ５（図８）の選択も、Ｕｇｉ及びトリアジンスカフォールドは、リガンド結合挙動に関して実際に異なるといういくつかの証拠を提供した。置換された官能基に関して、リガンドＡ２Ｃ１はトリアジンベースの生物模倣型プロテインＬ  ８／７に対する直接の等価物であるが、同じ官能基がＵｇｉスカフォールド上で置換されると、このリガンドは、Ｆｃ断片に対する完全な特異性を明らかに示す。本発明者らは、７種の全ＩｇＧ及びＦａｂ特異的リードのうちの６種は、２つの密接に関連したナフトール成分（Ａ３又はＡ８）のうちの１つを含み、これらのリガンドの大多数は、最適化されていない溶出条件（０．１ＭのＮａＨＣＯ３、１０％（ｖ／ｖ）のエチレングリコール、ｐＨ１０．０）に対して十分に応答した。逆に、Ａ２に関連したｈＦｃリードのいずれも、選択された溶出条件に対して十分に応答せず、これらのリガンドについて、ｈＦｃへの結合モードは、この試験において同定した全ＩｇＧリード及び特異的ｈＦａｂリードの結合モードと異なることを強く示した。これはおそらく、結合部位の近傍に存在する、溶媒に曝された残基の性質のためであり、これはさらには、これらのリガンドとそのそれぞれの標的との間で起こり得る相互作用の種類を構成する。２つのランダムに選択されたｈＦａｂ及びｈＦｃ断片（それぞれＰＤＢコード１ＡＱＫ及び１Ｈ３Ｗ）の全体的な疎水性は、ソフトウェアパッケージ、ＨｙｐｅｒＣｈｅｍ  ７．５  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｙｐｅｒ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）の一部として、コンピューターによる方法を使用して比較した。溶媒に曝されたアミノ酸残基に基づく、２つのタンパク質断片のＬｏｇＰ値（ｈＦａｂのｌｏｇ１０Ｐ＝−１５７３．３；ｈＦｃのｌｏｇ１０Ｐ＝−５１０．４）は、ｈＦｃは、ｈＦａｂ断片の疎水性よりも相当により疎水性である（約３倍でＦｃ＞Ｆａｂ）ことを示した。この種類の分析は、大規模な精製プロセスのために、選択されたＦａｂ及びＦｃリードリガンドに必要とされる、最終の最適化された吸着及び脱離条件を定義するのにも役立つことができる。
【０３４２】
上記で報告した結合能力は、最適化されていない吸着／脱離条件で、平均約３０秒のカラム滞留時間を組み込んで、単一パス（ｓｉｎｇｌｅ  ｐａｓｓ）の標的タンパク質を用いて求めた。この単純なスクリーニング手順の目的は、リード選択プロセスを単純化するために、あらゆるリガンドについての相対的な結合能力値を求めることであった。現在利用可能なＩｇＧ結合リガンドに匹敵する値を示すための最適化された条件下で、リードリガンド候補（１ｍｌのｃ．ｖスケール）を求めるために、正確な前端分析で導出された結合能力も必要になることがさらに想定される。これらのリガンドは、一般に、〜４０ｍｇ  ｍｌ−１のゲル湿潤重量の範囲で結合能力を示す。最近、完全な及び断片化された免疫グロブリン標的についての他の適当な、可能な候補リガンドも、このライブラリーから現れた。最初のリード選択は、スクリーニング手順の間に適用される、最適化されていない吸収及び脱離条件に対する、絶対的な結合能力、特異性、及び応答に主に基づいていた。これらのリード候補は、リガンド結合及び溶出挙動を場合により改善するための、可変長のスペーサーアーム（Ｃ２〜Ｃ８）、使用されるクロマトグラフィー条件のさらなる最適化、及び変えられるイソニトリル成分の利用によってさらに最適化され、特徴づけられることも想定される。しかし、必要な場合、リガンド設計へのこの反復性の手法の利点を利用して、他の候補リガンドも考慮することができる。
【０３４３】
ここに示したデータにより、Ｕｇｉスカフォールド上に置換された、アミン成分の特定のファミリーも明らかになり、これは、ｈＦａｂ（Ａ３及びＡ４）並びにｈＦｃ（Ａ２及びＡ７）断片に対する特異性を提供し、したがって、すべての同定されたｈＦｃリードがＡ２アミン成分を含んでいても驚くべきことではない。さらに、Ａ８アミン成分は、全ＩｇＧ及び断片化された標的の両方に結合するための、いくつかの非特異的で、相対的に高い能力の吸着剤を生成し、したがって、２つの全ＩｇＧリード中にこれを含めることを正当化している。逆に、組み込まれたカルボン酸成分について同定される傾向は、それほど容易に同定可能ではなく、これは、アミン成分が、リガンド−標的結合インターフェースを決定することにおいて主に重要であることを示すことができる。
【０３４４】
第ＶＩＩＩ因子に対する親和性リガンドの同定
さらなる試験では、第ＶＩＩＩ因子に対する可能な親和性リガンドを同定するために、化合物のコレクションを調製した。それぞれの化合物は、上記のＩｇＧ実験について説明した様式と同様の様式で調製した。したがって、支持体に結合したアルデヒド官能化リンカーを、Ｕｇｉ多成分反応において、カルボン酸、アミン及びイソニトリルと反応させた。次いで生成物を、第ＶＩＩＩ因子を結合するその能力についてスクリーニングした。それぞれの化合物の結合能力は、以前に同定されたリガンドに対して比較した。
【０３４５】
このプロジェクトでは、全長の組換え型第ＶＩＩＩ因子の大規模な精製の費用対効果を改善するための、小分子親和性リガンドを開発することの可能性を調査した。この生成物は、血友病Ａ及び関連する血液障害の治療における、証明された臨床的な生物治療分子として現在使用されている。
【０３４６】
現存するＣ７Ｆ７モノクローナル抗体樹脂手法（Ｂａｙｅｒによって使用されたものなど）に対する小分子リガンドの利点は、小分子リガンドは、製造するのに著しくより安価であり、Ｂａｙｅｒの抗体カラムに対して現在使用することができない、複数のカラムラン（ｃｏｌｕｍｎ  ｒｕｎ）のためのより厳しい樹脂再生条件に耐え得ることである。
【０３４７】
一連の親和性リガンドは、一般的なＵｇｉ  スカフォールド上への特定の官能基の取り込みに基づいて得、このスカフォールド自体は、別個の手順で、固相マトリックス支持体（セファロースＣＬ−６Ｂ）上に定着したアルデヒド部分を介して置換した。単一の多成分反応として、セファロースビーズ上の最終のリガンド構造の形成を表している、根底にある化学反応は、４種の別個の成分である、アルデヒド（Ｒ１）、１級／２級アミン（Ｒ２）、イソニトリル（Ｒ３）及びカルボン酸（Ｒ４）の使用を必要とする。
【０３４８】
リンカー及び支持体の調製
リンカー及び支持体は、ＩｇＧ実験に関して上述したものと同じであった。
【０３４９】
化合物コレクションの調製
化合物のコレクションは、ＩｇＧ実験に関連して上述した、Ｕｇｉに基づくプロトコールに従って調製した。
【０３５０】
調製した化合物は、以下に示す一般的な構造を有する。
【化１２】
2010532864.tif 000027
式中、Ｒ１はリンカー及び支持体であり、Ｒ２はアミン成分であり、Ｒ３はイソニトリル成分であり、Ｒ４はカルボン酸成分である。
【０３５１】
コレクションを作製するのに使用した、カルボン酸、イソニトリル及びアミン成分の組合せを以下に示す。
【表１１】
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【０３５２】
Ｕ１〜Ｕ４のそれぞれの化合物は、第ＶＩＩＩ因子マイクロプレートアッセイによってスクリーニングし、結果は上記表に示されている。これらの結果は、芳香族複素環の複雑性を増大させることにより、第ＶＩＩＩ因子結合が改善されることを示す。
【０３５３】
結果は、本発明者らによって以前に調製され、第ＶＩＩＩ因子に対する既知のリガンドである、トリアジンリガンド３４／４３（１０６．３μｇ／ｍＬ）の結合能力と比べて遜色がない。
【化１３】
2010532864.tif 000029
【０３５４】
最初の第ＶＩＩＩ因子マイクロプレートアッセイの結果は、構造的及び静電気的複雑性が増大することに関して、アミン成分が変化すると、トリアジンベースのリードリガンドについて見られた同様の増大に匹敵する、第ＶＩＩＩ因子結合の増大も観察されることを示す。これは、２つのスカフォールド（トリアジン及びＵｇｉ）は、化学構造に関して大いに異なるが、個々の官能基の第ＶＩＩＩ因子結合に対する影響は保持され、したがって、リード発見の同様のプロセスが起こることを可能にすることを示す。
【０３５５】
最初のコレクションから得られた結果に基づいて、追加のリガンドを調製し、第ＶＩＩＩ因子結合及び溶出挙動に関してスクリーニングした。これらの試験は、おおよその第ＶＩＩＩ因子結合親和性を求めるための、単純なマイクロタイタープレートアッセイ（樹脂量４０□Ｌ／ウェル）を使用し、その後に重力流充填した樹脂カラム（０．５ｍＬの樹脂量）を使用した、より詳細な試験によって実施した。これらの充填カラム試験はより正確であり、カラムの段階的な飽和（２００μＬ、１００μｇ／ｍＬ）によって、及びカラムに施される、それぞれの第ＶＩＩＩ因子のアリコートの連続添加の後の、溶出液中のタンパク質濃度に従って絶対的な樹脂親和性を求めるために、単純な実験を行うことを可能にする。このようにして、それぞれのリガンドの結合及び溶出挙動を並行して証明することができる。
【０３５６】
選択されたリガンドの溶出挙動を調査するのに使用される別の種類の試験は、１つの第ＶＩＩＩ因子アリコート（１．２ｍＬ  １００μｇ／ｍＬ）を繰り返して添加する（１０回）ことによって０．５ｍＬの充填カラムを飽和させることを最初に試みることであり、その後、タンパク質濃度を経験的に求めることができ、その後、一連の洗浄液及び溶出緩衝液のアリコート（４００μＬ）が引き続いて添加される。したがって、リガンドの結合及び溶出挙動は、高い最初の第ＶＩＩＩ因子充填の条件化下で求めることができる。これらの試験の特徴は、選択されたＵｇｉリガンドは、第ＶＩＩＩ因子溶出に関して、高濃度の一価及び二価の陽イオン塩（ＣａＣｌ２、ＮａＣｌ）によく応答するという知見に導いた。これは、第ＶＩＩＩ因子の特異な精製手法のための基盤を形成することができることが、この報告で示される。結合の正確な同定、洗浄及び溶出条件によって、かなりのレベルのバックグラウンドの宿主細胞タンパク質結合を除くことも可能となり得る。
【０３５７】
次いで追加のライブラリーを、Ｕｇｉ多成分反応を使用して調製した。酸、アミン及びイソニトリル成分を、第ＶＩＩＩ因子マイクロプレートアッセイデータとともに以下の表に示す。アルデヒド成分は、やはりアルデヒド−官能化セファロースであった。
【表１２】
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【０３５８】
Ｕｇｉリガンド（４〜９Ｕ）及びトリアジンリガンド３４／４３を、第ＶＩＩＩ因子マイクロプレートアッセイによって最初にスクリーニングした。結果は、第ＶＩＩＩ因子結合に対して正の影響を有するアミン（Ｒ２）の位置において、二環式の芳香環に向けた一般的な傾向を示す。イソニトリル（Ｒ３）の位置における追加のスルファニル酸部分の存在は、第ＶＩＩＩ因子結合に強く影響するように思われず、同様に、カルボン酸（Ｒ１）の位置におけるチアゾール部分の存在は、強い追加の結合可能性を提供しなかった。これらの試験に基づくと、最初のトリアジンリガンド３４／４３は、最も強い第ＶＩＩＩ因子結合特性及び溶出特性を依然として有すると思われた。
【０３５９】
充填カラム（０．５ｍＬのリガンド樹脂）を使用した、このシリーズ（４、８、９Ｕ＋リガンド３４／４３）から選択されたリガンドのさらなる調査により、４Ｕ、８Ｕ、９Ｕの第ＶＩＩＩ因子結合の可能性は、トリアジンリガンド３４／４３の可能性より著しく低いが、溶出挙動は、同様の溶出条件：０．５ＭのＣａＣｌ２／５０％のエチレングリコール／２０トリス．ＨＣｌ  ｐＨ７．０を使用して、このリガンドに匹敵するように思われることを特定した（図９及び１０を参照されたい）。
【０３６０】
選択されたＵｇｉリガンドの４Ｕ、８Ｕ及び９Ｕについての第ＶＩＩＩ因子結合可能性の低減は、追加のリガンド及び適当な対照リガンドを設計及び合成することによって、この作用の性質をさらに調査することを本発明者らに促した。目下のＵｇｉリガンドセットは１０〜１７Ｕであり、これらは現在、第ＶＩＩＩ因子結合及び溶出挙動に関して調査されている（図７を参照されたい）。本発明者らは、いくつかのこれらの新規なリガンド及び本報告で述べた以前の例を、第ＶＩＩＩ因子マイクロプレートアッセイによって最初にスクリーニングした。リガンドのＵ１４及びＵ１７は、以前に使用した安息香酸についての置換基を考慮し、リガンド構造を再定義することを試みることによって、ホスファチジルセリンについての第ＶＩＩＩ因子の可能な結合モードを考慮するために、ニトロ及びジニトロベンゼン部分を含む。この点において、本発明者らは、カルボン酸（Ｒ１）の位置で安息香酸が置換されたさらなるリガンドを作製することによって、これまでに作製したリガンドと、可能な結合モードを比較する必要があることも明らかである。
【０３６１】
この試験の結果は、トリアジンリガンド３４／４３は、最も高い第ＶＩＩＩ因子結合可能性の１つを常に生じたことを示したが、Ｕｇｉリガンドの４Ｕ、７Ｕ、８Ｕ、９Ｕ及びＵ１４は、同様に高レベルの第ＶＩＩＩ因子結合を生じたことは注目された。ＵｇｉリガンドのＵ１０〜Ｕ１３は、この単純なアッセイによって判断した場合、著しく低い第ＶＩＩＩ因子結合を生じたことも分かった。Ｕｇｉスカフォールド自体は、官能的なナフタレン部分の存在下でさえ（Ｕｇｉリガンド−Ｕ１２）、第ＶＩＩＩ因子結合に特に強い影響を及ぼさないことが、これらに結果によって示される。リガンドＵ１０は、低減された結合可能性を示すので、ビーズ表面からＵｇｉスカフォールドによって提供される適当な間隔と、ナフタレンスルホネート部分の存在との組合せは、強い第ＶＩＩＩ因子結合可能性を提供することも分かる（図１１を参照されたい）。
【０３６２】
マイクロプレートアッセイは、これらの結果を確認するのに必要な正確さを提供しないと思われ、したがって、トリアジンリガンド３４／４３を含むこのセットからの選択されたＵｇｉリガンドに対して、０５ｍＬの充填カラムに第ＶＩＩＩ因子のアリコート（２００μＬ  １００μｇ／ｍＬ）を連続して施すことによって、さらなる第ＶＩＩＩ因子結合実験を実施した（図１２を参照されたい）。Ｕｇｉリガンドの１４Ｕは、トリアジンリガンド３４／４３の第ＶＩＩＩ因子結合可能性より高い結合可能性を示すように思われることが、この試験から注目された。Ｕｇｉリガンドの４Ｕ及び９Ｕは、同様の低減された第ＶＩＩＩ因子結合可能性を示すことも分かった（図１２を参照されたい）。この結果は、４つの選択されたＵｇｉリガンドである、４Ｕ、１４Ｕ、１６Ｕ、１７Ｕの別個の試験においても確認され、これは差別的な第ＶＩＩＩ因子結合モードを適当なリガンド設計によって識別することができることを示す（図１３を参照されたい）。この結果は、カルボン酸（Ｒ１）の位置でのベンゼン芳香環の存在は、全体的な第ＶＩＩＩ因子結合可能性に正に寄与することを強く示す。明らかに、これは、本発明者らが現在調査中である異なる官能基の適当な添加によって、さらに調査される必要がある。同様に、Ｃ２ドメインに向けられた、第ＶＩＩＩ因子の特異的な阻害剤の設計は、４つの６Ｃ−５Ｃ−５Ｃ−６Ｃ芳香環構造、及び追加の電気陰性の置換基（ＣＦ３、ＮＯ２、＝Ｓ、＝Ｏ及びジクロロベンゼン）の一般的なスキームを有することも注目に値する（Ｓｐｉｅｇｅｌら、２００４）。
【０３６３】
選択されたＵｇｉリガンド（Ｕ８、Ｕ１４、Ｕ１６、Ｕ１７）を、０．５ｍＬの充填カラム中で第ＶＩＩＩ因子を結合し、溶出するその能力についてスクリーニングした（図１４を参照されたい）。この結果は、リガンドの８Ｕ及び１４Ｕは、同様に挙動し、最初の分画中に、高効率で急激に溶出することを示す。一方、リガンドのＵ１６及びＵ１７は、より広い先端にわたってより低い効率で溶出するように思われる。リガンドのＵ１７は、特に、他のリガンドとわずかに異なる結合モードを有するように思われ、これは、ジニトロベンゼン基が溶出又は両方に強く影響していることを意味することが示される。
【化１４】
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【０３６４】
３種の対照リガンドも調製した。
【化１５】
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【０３６５】
Ｍｏｌｅｇｒｏのバーチャルドッカーソフトウェアを使用した、第ＶＩＩＩ因子−Ｃ２ドメインに対するＵｇｉリガンドのモデル化
一連のトレーニングバーチャルリガンドを最初に使用することによって、第ＶＩＩＩ因子−Ｃ２ドメインの２つの別々の領域に対する可能な結合モードを同定した（図１２を参照されたい）。これらの２つの表面キャビティー（ｓｕｒｆａｃｅ  ｃａｖｉｔｙ）は、サイズが半径で１０〜１７オングストローム異なり（図１３を参照されたい）、以前の試験で、適当なリガンドがＣ２ドメインと有利に相互作用することができる可能な領域として同定された（データは示していない）。Ｍｏｌｅｇｒｏのソフトウェアパッケージの一部として自動ドッキングソフトウェアのＭｏｌｄｏｃｋ（ＳＩＭ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）を使用することによって、合計５０種のランダムなリガンド構造のセット、４０００の別個のドッキングの反復を使用してリガンド結合を評価し、３回の独立したプログラム実行に対して平均した。プログラムは、Ｍｏｌｄｏｃｋスコア、親和性及び他の関連パラメータ、例えば、ｒｅＲａｎｋスコア、全静電気的エネルギー及び全Ｈ結合エネルギーなどの報告と合わせて、判明した一連の５つの最良のポーズ（ｐｏｓｅ）（ドッキングモード）を提供する。このプログラムによって提供される定量的なデータは、添付のエクセルファイルとして提供される。
【０３６６】
結果は、キャビティー１及び２の両方における、Ｍｏｌｄｏｃｋスコア又は親和性パラメータと関連する、Ｕｇｉリガンドの１４Ｕ、１７Ｕ、２０Ｕ及び２１Ｕと関連したドッキングモードの改善についてのいくつかの証拠が存在することを示す。提案された最良のドッキングモードは、表面図（左下）及び側面「スティック」図（右下）として、リガンドの１４Ｕについて示す（図１３を参照されたい）。このリガンドと相互作用する可能性が最も高い残基を以下のように示す：アルギニン２２２０（青色−正電荷）、グルタミン２３１６（黄緑色−正／負電荷）、フェニルアラニン２１９６（赤色−疎水性）、アスパギニン（ａｓｐａｇｉｎｉｎｅ）２２２４（薄緑色−正／負電荷）、バリン２２２３（赤紫色−非極性）、ヒスチジン２３１５（サーモンピンク−正電荷）。同様に、リガンドの１７Ｕについての最良のドッキングモードを示し、このリガンドと相互作用する可能性が最も高い残基を上述したように標識する（図１４を参照されたい）。これらの試験の注目に値する特徴は、キャビティー１及びキャビティー２の両方における、表面を露出したアルギニン残基の、スルホネート部分又はナフタレン芳香環構造との可能な相互作用である。本発明者は、リガンドの４Ｕ及び３４／４３（Ｂａｙｅｒコード−リガンド３Ａ）についての自動化されたドッキングデータもエクセルファイル中に含め、これは、これまでに得られた実験データとほぼ一致するリガンドの４Ｕと比較した場合、リガンド３４／４３のキャビティー１について高い結合可能性を示す。キャビティーへの、リガンド３４／４３についてのドッキングモードは、個々のフィンガー領域間のＣ２ドメイン構造の底部への高い結合可能性を特に良好に示している。
【０３６７】
バーチャルリガンドトレーニングセットを以下に示す。
【化１６】
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【０３６８】
第ＶＩＩＩ因子Ｃ１／Ｃ２ドメイン中のトリプトファン残基に近接して、いくつかの表面を露出したアルギニン残基が存在し、これにより、強い陽イオン−π相互作用の形成が可能になることは注目に値する。ナフタレンスルホネート部分とＣ２ドメインの間の好都合な相互作用の１つの特徴は、そのような相互作用を伴うことができることが示される。ＦｒｉｅｓｓとＺｅｎｏｂｉは、２００１年に、ＭＡＬＤＩ質量分析法によって、選択されたタンパク質中のアルギニン残基とナフタレンスルホネート誘導体の正の相互作用を識別した。タンパク質間相互作用に関与するホットスポットは、ある特定の残基、即ち、トリプトファン、チロシン及びアルギニンに富んでおり、おそらく特に強い相互作用の形成にも関与することも知られている（Ｂｏｇａｎ及びＴｈｏｒｎ、１９９８）。Ｃ２ドメインの遠位末端でのトリプトファン及びアルギニン残基のユニークな配置は、主に正に帯電したアルギニン残基、及びトリプトファン残基によって生じた広がったπ電子雲によって作り出される静電結合によって、ＶＷＦタンパク質及びリン脂質膜の両方との相互作用を形成することができる。本発明者は現在、表面を露出したアルギニン残基によるタンパク質結合に関して、スルホネート部分の役割を調査中である。この点において、第ＶＩＩＩ因子−Ｃ２ドメインは、２つのスルフェート結合部位を有し、これらは、いくつかの他のタンパク質によっても共有されている。タンパク質中のサルフェート及びホスフェート結合部位は、関与する残基に関して異なるが、アルギニン残基が主に関与していると思われることが知られている。
【０３６９】
参考文献
以下の文献が、説明本文中に参照されている。これらのそれぞれは、その全体が本明細書に組み込まれている。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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2010532864.tif 000060
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