(57)【要約】本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、すなわち、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、及びこれらの調製方法、この化合物またはその薬学的に許容される塩またはエステルを含む医薬製剤、ならびに代謝改善解毒薬の調製に用いられる用途を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、または、デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンであって、
前記レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【化９】
2010532767.tif 000014
のＲ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルであり、
前記デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンはＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【化１０】
2010532767.tif 000015
のＳ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルである
ことを特徴とする光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン。
【請求項２】
前記塩はアミノ酸塩または金属塩であり、
前記アミノ酸塩の構造式が、
【化１１】
2010532767.tif 000016
または
【化１２】
2010532767.tif 000017
であり、ただし、Ｒがアルギニン、リシン、グリシン、アスパラギン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、オルニチン、シスチン、システイン、チロシン、バリン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、２−アミノ−４−メチルチオ酪酸、プロリン、グルタミンやヒドロキシプロリンというアミノ酸であり、
前記金属塩の構造式が、
【化１３】
2010532767.tif 000018
または
【化１４】
2010532767.tif 000019
であり、ただし、Ｒ０がカリウムまたはナトリウムである
ことを特徴とする請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン。
【請求項３】
前記エステルの構造式は、
【化１５】
2010532767.tif 000020
または
【化１６】
2010532767.tif 000021
であり、ただし、Ｒ１がＣ１−Ｃ５直鎖アルキルである
ことを特徴とする請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン。
【請求項４】
Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドを取得し、前記Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを取得し、前記Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸性化させてＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る工程、
または、
Ｓ−（−）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドを取得し、前記Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを取得し、前記Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸化させてＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る工程を含み、
前記二硫化ナトリウムは、硫化ナトリウムと昇華硫黄が反応して得られたものである
ことを特徴とする請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法。
【請求項５】
急性・慢性肝炎、ウイルス性肝炎、アルコール性肝炎や薬物性肝炎、重金属中毒肝炎、脂肪肝、急性・慢性肝損傷、肝硬変を含む急性・慢性肝疾患、放射線や化学療法による外周白血球減少症、加齢性早期白内障または硝子体混濁を治療する、経口投与製剤または注射投与製剤となる医薬の調製に用いられる、
請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはその薬学的に許容される塩やエステルの医薬用途。
【請求項６】
前記医薬は、活性成分としてＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンやＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはこれらの薬学的に許容される塩やエステルを含むとともに、薬学的に許容される助剤を含む
ことを特徴とする請求項５に記載の医薬用途。
【請求項７】
前記製剤は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、チュアブル錠や発泡錠を含む一般経口製剤、分散錠や口腔内崩壊錠を含む即効経口製剤、または徐放錠剤や徐放ペレットを含む徐放製剤からなる経口製剤である
ことを特徴とする請求項５に記載の医薬用途。
【請求項８】
前記製剤は、注射液、注射用濃溶液や注射用無菌粉末を含む注射投与製剤である
ことを特徴とする請求項５に記載の医薬用途。
【請求項９】
前記経口製剤の助剤は充填剤、結合剤または崩壊剤であり、充填剤と崩壊剤の重量含有量がそれぞれ１０〜６０％、２−３０％であり、さらに流動助剤、潤滑剤及び／または界面活性剤を含んでもよく、三者の重量含有量がそれぞれ０．１〜５％、０．１〜５％、０．００５〜１％である
ことを特徴とする請求項６または７に記載の用途。
【請求項１０】
前記注射投与製剤の助剤は、ｐＨ調整剤、等張化剤、酸化防止剤、キレート剤または／及び賦形剤を含む、注射剤の要求に合致する付加剤である、
ことを特徴とする請求項６または８に記載の用途。
【請求項１１】
光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度を測定する液体クロマトグラフィーにおいて、
（１）クロマトグラフィー条件：クロマトグラフィーカラムとして３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドが固定相であるキラルカラムを採用し、流動相がｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（８０〜９５：５〜２０：０．０１〜１．０）であり、（９０：１０：０．１）が好ましく、検出波長が２００ｎｍ〜２３０ｎｍであり、２１０ｎｍが好ましく、流動相流速が０．２〜３．０ｍｌ／ｍｉｎであり、１．０ｍｌ／ｍｉｎが好ましく、
（２）試料溶液の配置：試料であるＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを有機溶剤で濃度０．１〜２０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に調合し、前記有機溶剤がｎ−プロパノール、イソプロパノール、エタノール、ｎ−ブタノール及びメタノールから選ばれるもので、エタノールが好ましく、
（３）測定：溶液を高速液体クロマトグラフィーに注ぎ、クロマトグラフィーチャートを記録して解析を行う
ことを特徴とする液体クロマトグラフィー。
【請求項１２】
高速液体クロマトグラフ質量分析法により投薬動物血漿における医薬濃度を測定することを含む、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの薬物動態学的特性の測定に用いられる方法において、
血漿サンプルの処理方法は、血漿を酸性化させて抽出し、誘導化反応を行うことで、サンプル溶液が調合されることを含み、具体的には、
（１）血漿の酸性化：ここで、酸性化に用いられる酸は塩酸、リン酸、過塩素酸、酢酸などであってもよいが、塩酸が好ましく、ｌｍｏｌ／Ｌの塩酸がより好ましく、酸の量：血漿サンプルの量が（１５０μｌ〜２５０μｌ）：（２ｍｌ〜４ｍｌ）であり、２００μｌ：３ｍｌが好ましく、
（２）酸性化された血漿の抽出：ここで、抽出に用いられる有機溶剤は酢酸エチル、クロロホルム、トリクロロメタン、エチルエーテル、ｎ−へキサンなどであってもよいが、酢酸エチルが好ましく、
（３）抽出物に対する誘導化反応：ここで用いられる誘導化試薬はフェニルイソチオシアナート、２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−ピラングルコースイソチオシアナート（ＧＩＴＣ）溶液などであってもよいが、ＧＩＴＣ溶液が好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣ溶液がより好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣのテトラヒドロフラン溶液が最も好ましく、誘導化温度は１５〜４５℃であり、２５〜３５℃が好ましく、３０℃がより好ましく、誘導化時間は１０〜３０ｍｉｎであり、１５〜２５ｍｉｎが好ましく、２０ｍｉｎがより好ましく、
クロマトグラフィーの条件：
流動相Ａ：メタノール；流動相Ｂ：水溶液、０．０５〜０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．０〜６．０ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含み、好ましくは０．１０  ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．３ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含み、ここで、Ａ：Ｂは（４０〜５０：５０〜６０であり、４４：５６が好ましく）、
質量分析条件：
イオン化方式：エレクトロスプレーイオン化；選択イオンモニタリング、湾曲型脱溶媒装置（ＣＤＬ）；温度：２００℃〜３００℃、好ましくは２５０℃；加熱ブロック温度：１５０℃〜２５０℃、好ましくは２００℃；ＣＤＬ電圧：２０Ｖ〜３０Ｖ、好ましくは２５Ｖ；検出電圧：＋１．２ｋＶ〜＋１．８ｋＶ、好ましくは＋１．５０ｋＶ；噴霧ガス流速：１．２Ｌ／ｍｉｎ〜１．８Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは１．５Ｌ／ｍｉｎ；乾燥ガス流速：１．５Ｌ／ｍｉｎ〜２．５Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは２．０Ｌ／ｍｉｎ；検出イオン：供試医薬誘導体［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｍ／ｚ）：５７５．２０、内標準Ｎ−イソブタノイル−Ｄ−システイン（ＮＩＤＣ）誘導体［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｍ／ｚ）：６０３．０５；内標準ピークとメインピークとの分離度は中華人民共和国薬典の要求に合致すればよい
ことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン及びその調製方法に関し、また、代謝改善解毒薬の調製に用いられる用途及び医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、チオプロニンと通称され、臨床で急性・慢性肝炎、肝硬変などの治療に利用され、肝疾患に優れた治療用途を有し、その調製方法及び医薬製剤も既に数多く開示されている。中国特許出願ＣＮＯ２１２９３００．７にチオプロニン医薬製剤が開示され、「中国薬物化学雑誌」１９９７年３月第７巻第１期５５〜５６頁にチオプロニンの合成プロセスが開示された。しかし、Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学活性、すなわち、そのレボ体、デキストロ体については何らも報告されていない。多くの医薬品は、その単一鏡像体は治療効果が高くて不良反応も小さく、ユートマーと呼ばれるのに対し、活性がないまたは活性が低い鏡像体は、ディストマーと呼ばれ、治療効果がないだけでなく、鏡像体の作用を部分的に相殺させ、ひいては、ひどい不良反応を引き起こし得る場合が多い。鏡像医薬品は体内での薬理的活性、代謝過程が著しく異なり、異なる生物活性と薬力を示す。臨床応用において、キラル医薬品の各鏡像体の薬力学的と薬物動態学的挙動が異なることが認識されていないため、得られた結論と治療効果や不良反応の発生とは一致しない、ひいては臨床薬剤投与を間違って指導してしまう場合がある。そのため、医薬品の光学活性に対する検討は極めて必要である。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを提供することを目的とする。
【０００４】
本発明は、また、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法を提供することを目的とする。
【０００５】
本発明は、また、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの代謝改善解毒薬の調製における用途を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明は、さらに、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン化合物を含む医薬製剤を提供することを目的とする。
【０００７】
本発明は、レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、または、デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンであって、
前記レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【０００８】
【化１】
2010532767.tif 000002
のＲ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルであり、ただし、前記塩がアミノ酸塩または金属塩であってもよく、
前記アミノ酸塩の構造式が、
【０００９】
【化２】
2010532767.tif 000003
であり、ただし、Ｒがアミノ酸であってもよく、このアミノ酸がアルギニン、リシン、グリシン、アスパラギン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、オルニチン、シスチン、システイン、チロシン、バリン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、２−アミノ−４−メチルチオ酪酸、プロリン、グルタミン、ヒドロキシプロリンなどであってもよく、
前記金属塩の構造式が、
【００１０】
【化３】
2010532767.tif 000004
であり、ただし、Ｒ０がカリウム、ナトリウムなどであってもよく、
前記エステルの構造式が、
【００１１】
【化４】
2010532767.tif 000005
であり、ただし、Ｒ１がＣ１〜Ｃ５直鎖アルキルであり、
前記デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【００１２】
【化５】
2010532767.tif 000006
のＳ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルであり、前記塩がアミノ酸塩または金属塩であってもよく、
前記アミノ酸塩の構造式が、
【００１３】
【化６】
2010532767.tif 000007
であり、
ただし、Ｒがアミノ酸であってもよく、このアミノ酸がアルギニン、リシン、グリシン、アスパラギン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、オルニチン、シスチン、システイン、チロシン、バリン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、２−アミノ−４−メチルチオ酪酸、プロリン、グルタミン、ヒドロキシプロリンなどであってもよく、
前記金属塩の構造式が、
【００１４】
【化７】
2010532767.tif 000008
であり、ただし、Ｒ０がカリウム、ナトリウムなどであってもよく、
前記エステルの構造式が、
【００１５】
【化８】
2010532767.tif 000009
であり、ただし、Ｒ１がＣ１〜Ｃ５直鎖アルキルである
光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを提供する。
【００１６】
本発明はまた、下記のような光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法を提供する。
【００１７】
一、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法：
１．Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドを得る。
【００１８】
２．Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを得る。
【００１９】
３．硫化ナトリウムと昇華硫黄とを反応させて二硫化ナトリウムを取得し、Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸性化させてＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る。
【００２０】
得られたＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンをさらに酸、アルカリまたはアルコールと反応させて塩またはエステルを得る。
【００２１】
二、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法：
１．Ｓ−（−）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドを得る。
【００２２】
２．Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを得る。
【００２３】
３．硫化ナトリウムと昇華硫黄とを反応させて二硫化ナトリウムを取得し、Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸性化させてＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る。
【００２４】
得られたＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを酸、アルカリまたはアルコールと反応させて塩またはエステルを得る。
【００２５】
本発明はまた、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、すなわち、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンやＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはその薬学的に許容される塩やエステルを、代謝改善解毒薬の調製に用いられる用途を提供し、特に、肝組織細胞に対する保護作用や各種の肝炎、例えば、急性・慢性肝炎、ウイルス性肝炎、アルコール性肝炎、薬物性肝炎、重金属中毒肝炎などの治療、脂肪肝、急性・慢性肝損傷、肝硬変の治療を含む、急性・慢性肝疾患の治療と肝機能の改善に用いられ、また、放射線や化学療法による外周白血球の減少を予防・治療して肝細胞の復元を促進し、化学療法による不良反応を低減させること、加齢性早期白内障や硝子体混濁の予防・治療、重金属解毒に用いられる用途を提供する。
【００２６】
薬力学的試験から、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンとＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、いずれも肝損傷に対して良好な保護作用を有し、その作用はいずれもＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンより強いことが分る。
【００２７】
薬物代謝動力学的試験から、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンとＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンとは体内で互いに転化されないことが分る。具体的な試験は投薬動物体内の薬物代謝動態学的試験であり、高速液体クロマトグラフ質量分析法により血漿における医薬を測定することを含む。
【００２８】
血漿サンプルの処理方法は、血漿を酸性化させて抽出し、誘導化反応を行うことで、サンプル溶液が調合されることを含み、具体的には、
１．血漿の酸性化：ここで、酸性化に用いられる酸は塩酸、リン酸、過塩素酸、酢酸などであってもよいが、塩酸が好ましく、１ｍｏｌ／Ｌの塩酸がより好ましく、酸の量：血漿サンプルの量は（１５０μｌ〜２５０μｌ）：（２ｍｌ〜４ｍｌ）であり、２００μｌ：３ｍｌが好ましい。
【００２９】
２．酸性化された血漿の抽出：ここで、抽出に用いられる有機溶剤は酢酸エチル、クロロホルム、トリクロロメタン、エチルエーテル、ｎ−へキサンなどであってもよいが、酢酸エチルが好ましい。
【００３０】
３．抽出物に対する誘導化反応：ここで用いられる誘導化試薬はフェニルイソチオシアナート、２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−ピラングルコースイソチオシアナート（ＧＩＴＣ）溶液などであってもよいが、ＧＩＴＣ溶液が好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣ溶液がより好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣのテトラヒドロフラン溶液が最も好ましく、誘導化温度は１５〜４５℃であり、２５〜３５℃が好ましく、３０℃がより好ましく、誘導化時間は１０〜３０ｍｉｎであり、１５〜２５ｍｉｎが好ましく、２０ｍｉｎがより好ましい。
【００３１】
クロマトグラフィーの条件：
流動相Ａ：メタノール。流動相Ｂ：水溶液；０．０５〜０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．０〜６．０ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含み、好ましくは０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．３ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含む。ここで、Ａ：Ｂは（４０〜５０：５０〜６０であり、４４：５６が好ましい）。
質量分析条件：
イオン化方式：エレクトロスプレーイオン化；選択イオンモニタリング；湾曲型脱溶媒装置（Ｃｕｒｖｅｄ  Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ  Ｌｉｎｅ；ＣＤＬ）；温度：２００℃〜３００℃、好ましくは２５０℃；加熱ブロック温度：１５０℃〜２５０℃、好ましくは２００℃；ＣＤＬ電圧：２０Ｖ〜３０Ｖ、好ましくは２５Ｖ；検出電圧：＋１．２ｋＶ〜＋１．８ｋＶ、好ましくは＋１．５０ｋＶ；噴霧ガス流速：１．２Ｌ／ｍｉｎ〜１．８Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは１．５Ｌ／ｍｉｎ；乾燥ガス流速：１．５Ｌ／ｍｉｎ〜２．５Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは２．０Ｌ／ｍｉｎ；検出イオン：供試医薬誘導体［Ｍ＋Ｎａ」＋（ｍ／ｚ）：５７５．２０、内標準Ｎ−イソブタノイル−Ｄ−システイン（ＮＩＤＣ）誘導体［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｍ／ｚ）：６０３．０５；
内標準物質はＮＩＤＣであり、内標準ピークとメインピークとの分離度は中華人民共和国薬典の要求に合致すればよい。
【００３２】
その結果、単にＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを投与する各時間点でのクロマトグラフィーチャートにおいて、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの存在が顕著に検出されなく、同様に、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを投与した後も、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの存在が検出されないことが示され、それは、両者が動物体内で互いに転化されていないことを意味している。
【００３３】
これにより、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを臨床用途に好適な医薬製剤とするのは、実用性がある。
【００３４】
本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンやＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはこれらの薬学的に許容される塩やエステルを活性成分とするとともに、薬学的に許容される助剤を含む臨床用途に好適な医薬製剤とし、前記製剤は経口投与製剤または注射投与製剤である。
【００３５】
前記経口投与製剤は、例えば、一般経口製剤として、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、チュアブル錠、発泡錠などであり、即効製剤として、例えば分散錠、口腔内崩壊錠などであり、徐放製剤として、例えば徐放錠剤、徐放ペレットなどであり、また、注射投与製剤としては、例えば注射液、注射用濃溶液、注射用無菌粉末などである。
【００３６】
前記経口医薬製剤においては、助剤が充填剤、結合剤、崩壊剤であり、充填剤と崩壊剤の重量組成がそれぞれ１０〜６０％、２〜３０％であり、さらに、流動助剤、潤滑剤、界面活性剤を含んでもよく、三者の重量含有量がそれぞれ０．１〜５％、０．１〜５％、０．００５〜１％である。ここで、前記充填剤としては、澱粉、予ゲル化澱粉、カルボキシメチル澱粉、微結晶セルロース、ラクトース、デキストリン、ショ糖、グリコース、マンニトール、ソルビトール、硫酸カルシウム二水和物、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、炭酸カルシウムであってもよい。前記結合剤としては、トウモロコシ澱粉、予ゲル化トウモロコシ澱粉、予ゲル化澱粉、ゼラチン、ショ糖、アラビアゴム、ポビドン、各種粘度のメチルセルロース、低粘度のカルメロースナトリウム、各種粘度のエチルセルロース、各種粘度のポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール６０００、ヒドロキシプロピルメチルセルロースの水またはアルコールの溶液であってもよい。前記崩壊剤としては、澱粉、予ゲル化澱粉、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、リグノセルロース、アルギン酸、カルボキシメチル澱粉ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、グアールガム、クロスポビドン、イオン交換樹脂、メチルセルロース、カルメロースナトリウム、及び有機酸（例えば、クエン酸、酒石酸）と炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム）からなる発泡崩壊剤である。前記潤滑剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、タルク、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール８０００、ラウリル硫酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ホウ酸、ロイシン、アジピン酸、フマル酸、グリセロールトリアセテート、ポリオキシエチレンモノステアレート、シュクロースモノラウレート、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムであってもよい。前記流動助剤は気相微粉シリカゲル、合成微粉シリカゲル、酸化マグネシウムであってもよい。前記界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム、ポロキサマー、ツイーン類、スパン類、セチルトリメチルアミニウムブロマイド、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸スルホン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンモノステアレートである。処方に矯味剤を加えてもよく、矯味剤としては、ステビア、フルクトース、ショ糖、グリコース、アスパルテーム、プロテオグリカン、キシリトール、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、マルトール、グリチルリチン、シクロヘキシルアミノスルホン酸ナトリウム、バナナエッセンス、オレンジエッセンス、パイナップルエッセンス、ミントエッセンス、ウイキョウ、バニリン、レモンエッセンス、チェリーエッセンス、ローズエッセンスである。処方にはまた、濡れ剤、すなわち、水または濃度が異なるエタノール溶液を含んでもよい。本発明の医薬製剤に用いられるコーティング材としては、セルロース及びその誘導体類、アクリル樹脂類、ビニルポリマーなどであってもよい。
【００３７】
前記注射投与製剤は、注射液、注射用濃溶液及び注射用無菌粉末を含み、助剤が注射剤の要求に合わせた付加剤であり、前記付加剤はｐＨ調整剤、等張化剤、酸化防止剤、キレート剤であり、注射用無菌粉末製剤にまた賦形剤を加えてもよい。ｐＨ調整剤としては、塩酸、乳酸、メタンスルホン酸、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸及びその塩、酢酸及びその塩、クエン酸及びその塩、アミノ酸及びその塩であり、等張化剤としては、グリコース、塩化ナトリウム、グリセリン、硫酸ナトリウムが含まれ、賦形剤としては、ソルビトール、マンニトール、デキストラン、ラクトース、ショ糖、グリコース、加水分解ゼラチン、塩化ナトリウムが含まれ、酸化防止剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウムまたはカリウム塩０．０１％〜０．１％、亜硫酸ナトリウム０．０１〜０．５％、亜硫酸水素ナトリウム０．０１％〜０．５％、チオ硫酸ナトリウム０．０１％〜０．５％、ホルムアルデヒドスルホキシル酸水素ナトリウム０．１〜０．２％、チオ尿素０．０５％〜０．１％、アスコルビン酸０．０５％〜０．２％、チオグリセリン０．１％〜０．５％、グルタチオン０．０１〜０．２％、アラニン０．０１％〜０．５％、システイン０．０１％〜０．５％、没食子酸及びそのプロポルエステルまたはオクチルエステル０．０１〜０．１％、ｔ−ブチル−ｐ−ヒドロキシアニソール０．０１〜０．１％、ジ−ｔ−ブチル−ｐ−クレゾール０．０１％〜０．５％、トコフェロールα、β、γ０．０１％〜０．１％、ノルジヒドログアヤレチック酸０．０１％〜０．５％またはアスコルビン酸パルミチルエステル０．０１％〜０．５％が含まれ、キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩、エチレンジアミン四酢酸カルシウムナトリウム塩である。
【００３８】
本発明による化合物は、代謝改善解毒薬の調製に用いることができる。
【００３９】
本発明はまた、高速液体クロマトグラフィーにより光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度を測定する方法を提供し、具体的な工程は下記の通りである。
【００４０】
１）クロマトグラフィーの条件：クロマトグラフィーカラムとして３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドが固定相であるキラルカラムを採用し、流動相がｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（８０〜９５：５〜２０：０．０１〜１．０）であり、（９０：１０：０．１）が好ましく、検出波長が２００ｎｍ〜２３０ｎｍであり、２１０ｎｍが好ましく、流動相流速が０．２〜３．０ｍｌ／ｍｉｎであり、１．０ｍｌ／ｍｉｎが好ましい。
【００４１】
２）試料溶液の配置：有機溶剤でＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン０．１〜２０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは１ｍｇ／ｍｌ）を含む溶液となるように試料を調合し、前記有機溶剤はｎ−プロパノール、イソプロパノール、エタノール、ｎ−ブタノール及びメタノールから選ばれるもので、エタノールが好ましい。
【００４２】
３）測定：溶液を高速液体クロマトグラフィーに注ぎ、クロマトグラフィーチャートを記録して解析を行う。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
実施例１：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
１）乾燥の１００ｍｌ反応瓶にＲ−（＋）−２−クロロプロピオン酸５４．３ｇ（０．５ｍｏｌ）、クロロスルホキシド６０ｇ（０．５０４ｍｏｌ）を加え、湿気から隔離された条件で４時間攪拌還流した。反応が終わった後、過量のクロロスルホキシドを蒸し出して再利用し、ｂｐ  ９５〜１０５℃の留分を収集して無色液体であるＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリド５５ｇ、８６．６％を得た。
【００４４】
２）１０００ｍｌ反応瓶にグリシン２９．９ｇ（０．４０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム２１．２ｇ（０．２０ｍｏｌ）及び水２５０ｍｌを加え、攪拌して溶解させた。氷塩浴で冷却し、激しい攪拌下でＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリド５０．６ｇ（０．４０ｍｏｌ）を滴下するとともに、無水炭酸ナトリウムの飽和溶液を加え、反応液を弱アルカリ性とした。添加した後、３〜５時間攪拌反応し続けて反応が終わった。ｐＨ＝１になるように濃塩酸で酸性化させ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して、結晶が析出するまで濾液を減圧濃縮し、放置した。ろ過して乾燥し、白い小針状の結晶体Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシン３８．６ｇを得た。ｍｐ：１２０〜１２４℃、［α］ｎ２０＝＋２３．８℃（水）。
【００４５】
３）２５０ｍｌビーカーに硫化ナトリウム（Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２Ｏ）２６．５ｇ（０．１１ｍｏｌ）、昇華硫黄３．５２ｇ（０．１１ｍｏｌ）及び水１２０ｍｌを加え、溶解されるまで加熱攪拌し、赤褐色の二硫化ナトリウム溶液を予備として得た。２５０ｍｌ反応瓶にＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシン１６．４ｇ（０．１０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム５．６ｇを加え、気泡が溢れないように徐々に水１００ｍｌを加えた。０〜１０℃に冷却して前記二硫化ナトリウム溶液を滴下し、滴下し終わった後５〜１５℃で１０〜１５時間反応した。反応が終わった後、０℃程度に降温し、ｐＨが１に近くなるように濃硫酸を滴下した。ろ過し、濾液に攪拌下で亜鉛粉１７ｇを何回かに分けて加え、常温で３時間反応して反応が終わった。ろ過し、濾液を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して減圧濃縮し、放置して固体が析出した。ろ過して固体を収集し、酢酸エチルで再結晶し、真空乾燥して白色結晶固体Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン８．４ｇを得た。ｍｐ：１０２〜１０４℃、［α］ｎ２０＝−３６．５℃（水）、含有量９９．３％（ヨウ素滴定液０．１ｍｏｌ／Ｌで滴定）、相関物質＜２％（薄層クロマトグラフィー：シリカゲルＧシートプレート、クロロホルム−アセトン−氷酢酸（９：３：１）、ヨウ素蒸気で発色）。
【００４６】
１ＨＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−Ｄ６）  δ  ｐｐｍ  ：  １．３５  （ｄ，  ３Ｈ）；  ２．７９  （ｄ，  １Ｈ）；  ３．５４  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．７７  （ｍ，  ２Ｈ）；  ８．２５  （ｔ，  １Ｈ）；  １２．５  （ｂｓ，  １Ｈ）、ＭＳ  （ｍ／ｚ）  １６３、元素分析Ｃ５Ｈ９ＮＯ３Ｓ  （％）  ：  Ｃ  ３６．６５，  Ｈ  ５．６６，  Ｎ  ８．５０，  Ｓ  １９．６８。
【００４７】
実施例２：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
１）乾燥の１００ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオン酸５４．３ｇ（０．５ｍｏｌ）、クロロスルホキシド６０ｇ（０．５０４ｍｏｌ）を加え、湿気から隔離された条件で４時間攪拌還流した。反応が終わった後、過量のクロロスルホキシドを蒸し出して再利用し、ｂｐ  ９５〜１０５℃の留分を収集して無色液体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５６ｇ、８８．２％を得た。
【００４８】
２）１０００ｍｌ反応瓶にグリシン２９．９ｇ（０．４０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム２１．２ｇ（０．２０ｍｏｌ）及び水２５０ｍｌを加え、攪拌して溶解させた。冰塩浴で冷却し、激しい攪拌下でＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５０．６ｇ（０．４０ｍｏｌ）を滴下するとともに、無水炭酸ナトリウムの飽和水溶液を加え、反応液を弱アルカリ性とした。添加した後、３〜５時間攪拌反応し続けて反応が終わった。ｐＨ＝１になるように濃塩酸で酸化させ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し、結晶が析出するまで濾液を減圧濃縮し、放置した。ろ過して乾燥し、白い小針状の結晶体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン３７．８ｇを得た。ｍｐ：１２０〜１２４℃、［α］ｎ２０＝−２４．２℃（水）。
【００４９】
３）２５０ｍｌビーカーに硫化ナトリウム（Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２０）２６．５ｇ（０．１１ｍｏｌ）、昇華硫黄３．５２ｇ（０．１１ｍｏｌ）及び水１２０ｍｌを加え、溶解まで加熱攪拌し、赤褐色の二硫化ナトリウム溶液を予備として得た。２５０ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン１６．４ｇ（０．１０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム５．６ｇを加え、気泡が溢れないように徐々に水１００ｍｌを加えた。０〜１０℃に冷却して前記二硫化ナトリウム溶液を滴下し、滴下し終わった後５〜１５℃で１０〜１５時間反応した。反応が終わった後、０℃程度に降温し、ｐＨが１に近くなるように濃硫酸を滴下した。ろ過し、濾液に攪拌下で亜鉛粉１７ｇを何回かに分けて加え、常温で３時間反応して反応が終わった。ろ過し、濾液を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して減圧濃縮し、放置して固体が析出した。ろ過して固体を収集し、酢酸エチルで再結晶し、真空乾燥して白色結晶固体Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン８．２ｇを得た。ｍｐ：１０２〜１０４℃、［α］ｎ２０＝＋３７．５℃（水）、含有量９９．１％（ヨウ素滴定液０．１ｍｏｌ／Ｌで滴定）、相関物質＜２％（薄層クロマトグラフィー：シリカゲルＧシートプレート、クロロホルム−アセトン−氷酢酸（９：３：１）、ヨウ素蒸気で発色）。
【００５０】
１ＨＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−Ｄ６）  δ  ｐｐｍ  ：  １．４０  （ｄ，  ３Ｈ）；  ２．８０  （ｄ，  １Ｈ）；  ３．６０  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．８１（ｍ，  ２Ｈ）；  ８．２８  （ｔ，  １Ｈ）；  １２．８  （ｂｓ，  １Ｈ）、ＭＳ  （ｍ／ｚ）  １６３、元素分析Ｃ５Ｈ９ＮＯ３Ｓ  （％）  ：  Ｃ  ３６．６８，  Ｈ  ５．６５，  Ｎ  ８．５３，  Ｓ  １９．６５
実施例３：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
１）乾燥の１００ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオン酸５４．３ｇ（０．５ｍｏｌ）、クロロスルホキシド６０ｇ（０．５０４ｍｏｌ）を加え、湿気から隔離された条件で４時間攪拌還流した。反応が終わった後、過量のクロロスルホキシドを蒸し出して再利用し、ｂｐ  ９５〜１０５℃の留分を収集して無色液体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５４．６ｇを得た。
【００５１】
２）１０００ｍｌ反応瓶にグリシン２９．９ｇ（０．４０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム２１．２ｇ（０．２０ｍｏｌ）及び水２５０ｍｌを加え、攪拌して溶解させた。冰塩浴で冷却し、激しい攪拌下でＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５０．６ｇ（０．４０ｍｏｌ）を滴下するとともに、無水炭酸ナトリウムの飽和溶液を加えて反応液を弱アルカリ性とした。添加した後、３〜５時間攪拌反応し続けて反応が終わった。ｐＨ＝１になるように濃塩酸で酸性化させ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し、結晶が析出するまで濾液を減圧濃縮し、放置した。ろ過して乾燥し、白い小針状の結晶体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン３８ｇを得た。
【００５２】
３）２５０ｍｌビーカーに硫化ナトリウム（Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２Ｏ）２８．８ｇ（０．１２ｍｏｌ）、昇華硫黄３．８４ｇ（０．１２ｍｏｌ）及びエタノール１５０ｍｌを加え、溶解まで加熱攪拌し、赤褐色の二硫化ナトリウム溶液を予備として得た。２５０ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン１８．３ｇ（０．１１ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム６．３ｇを加え、気泡が溢れないように徐々に水１００ｍｌを加えた。０〜１０℃に冷却して前記二硫化ナトリウム溶液を滴下し、滴下し終わった後０〜１０℃で１２時間反応した。反応が終わった後、ｐＨ＝１になるように同温度で濃硫酸を滴下した。ろ過し、濾液に攪拌下で亜鉛粉１７ｇを何回かに分けて加え、常温で３時間反応して反応が終わった。ろ過し、濾液を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して減圧濃縮し、放置して固体が析出した。ろ過して固体を収集し、酢酸エチルで再結晶し、真空乾燥して白色結晶固体Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン８．１ｇを得た。含有量９９．３％（ヨウ素滴定液０．１ｍｏｌ／Ｌで滴定）、相関物質＜２％（薄層クロマトグラフィー：シリカゲルＧシートプレート、クロロホルム−アセトン−氷酢酸（９：３：１）、ヨウ素蒸気で発色）。
【００５３】
実施例４：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度の測定
機器：高速液体クロマトグラフィー、ＳＰＤ−１０Ａｖｐ紫外検出器、ＬＣ−１０ＡＤポンプ
流動相：ｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（９０：１０：０．１）
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
クロマトグラフィーカラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（固定相として３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドを採用する）
カラム温度：２５℃
検出波長：２１０ｎｍ
試料濃度：０．５ｍｇ／ｍｌ
以上の条件で測定したところ、実施例１で得られたＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度は９９．３％である。
【００５４】
実施例５：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度の測定
機器：高速液体クロマトグラフィー、ＳＰＤ−１０ＡｖＰ紫外検出器、ＬＣ−１０ＡＤポンプ
流動相：ｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（９０：１０：０．１）
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
クロマトグラフィーカラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＡＤ−Ｈ（固定相として３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドを採用した）
カラム温度：２５℃
検出波長：２１０ｎｍ
試料濃度：０．５ｍｇ／ｍｌ
以上の条件で測定したところ、実施例２で得られたＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度は９９．２％である。
【００５５】
実施例６：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンアルギニン塩の調製
反応瓶に実施例１で得られたＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１０ｇ、Ｌ−アルギニン１１．２ｇ、９５％メタノール６０ｍｌを仕込み、攪拌し、還流まで加熱し、３時間反応した。反応が終わった後、熱いうちにろ過し、室温に濾液を冷却してから冷蔵庫に置いて冷却して晶析させた。ろ過して収集し、乾燥して白色結晶固体１９．２ｇを得た。収率：９２．８％。
【００５６】
実施例７：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンリシン塩の調製
反応瓶に実施例２で得られたＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１０ｇ、Ｌ−リシン９．４ｇ、９５％メタノール６０ｍｌを仕込み、攪拌し、還流まで加熱し、３時間反応した。反応が終わった後、熱いうちにろ過し、室温に濾液を冷却してから冷蔵庫に置いて冷却して晶析させた。ろ過して収集し、乾燥して白色結晶固体１６．８ｇを得た。収率：８８．６％。
【００５７】
実施例８：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウムの調製
１）反応瓶にＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１６．３ｇ（０．１０ｍｏｌ）、メタノール４５ｍｌを加え、１５℃でジチオスレイトール０．１５ｇを加え、１５分間攪拌し、モレキュラーシーブ５ｇを加えた。
【００５８】
２）ＮａＯＨ  ４．６５ｇを６回に分けて徐々に前記メタノール溶液に加えた。
【００５９】
３）添加した後、１５℃で１時間攪拌反応した。そして、２０〜２５℃で１時間攪拌反応した。反応が終わった後、ろ過して、モレキュラーシーブを濾去し、濾液を１３０ｍＬアセトンに加え、均一に混合させるように十分にふるった。
【００６０】
４）反応液に大量の白色沈殿が現れた場合、吸引ろ過し、ケーキを８０℃で乾燥して無水Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウム１２．８ｇを得た。
【００６１】
実施例９：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウムの調製
１）反応瓶にＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１６．３ｇ（０．１０ｍｏｌ）、メタノール４５ｍｌを加え、１５℃でジチオスレイトール０．１５ｇを加え、１５分間攪拌し、モレキュラーシーブ５ｇを加えた。
【００６２】
２）ＮａＯＨ  ４．６５ｇを６回に分けて徐々に前記メタノール溶液に加えた。
【００６３】
３）添加した後、１５℃で１時間攪拌反応した。そして、２０〜２５℃で１時間攪拌反応した。反応が終わった後、ろ過し、モレキュラーシーブを濾去し、濾液をアセトン１３０ｍＬに加え、均一に混合させるように十分にふるった。
【００６４】
４）反応液に大量の白色沈殿が現れた場合、吸引ろ過し、ケーキを８０℃で乾燥して無水Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウム１３．１ｇを得た。
【００６５】
実施例１０：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠剤の調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
微結晶セルロース        １７０ｇ
予ゲル化澱粉            ６０ｇ
８％澱粉スラリー        適量
カルボキシメチル澱粉ナトリウム      ７ｇ
ステアリン酸マグネシウム            ３ｇ
調製プロセス：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、予ゲル化澱粉を秤取し、均一に混合した後、８％の澱粉スラリーで軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のカルボキシメチル澱粉ナトリウムとステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３４５ｍｇである。
【００６６】
実施例１１：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンフィルムコーティング錠の調製
実施例１０で得られた素錠を取り、８％胃溶型オパドリー（ＯＹ−Ｃ−７０００Ａ）エタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の２．０〜３．０％である。
【００６７】
実施例１２：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン腸溶錠の調製
実施例１０で得られた素錠を取り、８％腸溶型オパドリーエタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の４．０〜５．０％である。
【００６８】
実施例１３：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠の調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｋ１５Ｍ）            １５０ｇ
ラクトース                            ５０ｇ
３％ポビドン８０％エタノール溶液      適量
ステアリン酸マグネシウム              ５ｇ
調製プロセス：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトースを取り、均一に混合した後、３％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００６９】
実施例１４：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠の調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン      １００ｇ
クロスポビドン                １５ｇ
微結晶セルロース              １８０ｇ
マンニトール                  ５０ｇ
６０％エタノール溶液            適量
ドデシル硫酸ナトリウム        ０．２ｇ
微粉シリカゲル                ５ｇ
ステアリン酸マグネシウム      ３ｇ
ステビア                      ５ｇ
調製プロセス：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠を１０００錠製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、マンニトールを秤取して均一に混合し、６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して乾燥し、その後整粒した。処方量のクロスポビドン、ドデシル硫酸ナトリウム、微粉シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステビアを加えて均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００７０】
実施例１５：Ｒ−（−）−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルの調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
澱粉                                  ４５ｇ
５％ポビドン６０％エタノール溶液      適量
ステアリン酸マグネシウム              ２ｇ
調製プロセス：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルを１０００粒製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、澱粉を秤取して均一に混合し、５％ポビドン６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して加熱乾燥した後、整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加えて均一に混合し、カプセルに充填して得た。
【００７１】
実施例１６：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒剤の調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
マンニトール                        ３５０ｇ
ショ糖                              ３５０ｇ
カルメロースナトリウム              ５０ｇ
アスパルテーム                      １０ｇ
マルトースデキストリン              １４０ｇ
５％ポビドン８０％エタノール溶液    適量
エッセンス                          １ｇ
調製プロセス：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒を１０００包調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。エッセンスを５％ポビドン８０％エタノール溶液に加え、処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ショ糖、マンニトール、カルメロースナトリウム、アスパルテーム、マルトースデキストリンを秤取し、５％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、１６メッシュのふるいで製粒して乾燥し、１４メッシュのふるいで整粒した。６０メッシュのふるいで細粉を除去し、分包して得た。包ごとは約１ｇである。
【００７２】
実施例１７：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液の調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
注射用水        ２０００ｍｌに加える
調製プロセス：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液を１０００管製造することを例とする。処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加えて均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、明澄度が要求に合致するように順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターを通過させて精密ろ過した。中間体を点検し、合格した場合、管ごとの注封量が約２ｍｌとなるように薬液を窒素ガス流の下で２ｍｌアンプル瓶に注封し、滅菌して得た。
【００７３】
実施例１８：Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射剤の調製
処方組成：
Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
デキストラン４０            ５０ｇ
亜硫酸水素ナトリウム        １ｇ
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム        ０．２ｇ
調製プロセス：注射用Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを１０００瓶製造することを例とする。処方量のＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、デキストラン４０、亜硫酸水素ナトリウムとエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。ｐＨ１．５〜２．５になるように１ｍｏｌ／Ｌの塩酸で溶液を調整し、また全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加え、均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、無菌条件で薬液を順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターを通過して滅菌ろ過を行った。中間体のｐＨ、含有量と明澄度を検出し、合格した場合、瓶ごとの注封量が約２ｍｌとなるように薬液をシリン瓶に注封し、タンポンで半分塞いで凍結乾燥し、タンポンで塞いで蓋を付け、ランプ検査して得た。
【００７４】
実施例１９：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠剤の調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
微結晶セルロース                    １７０ｇ
予ゲル化澱粉                        ６０ｇ
８％澱粉スラリー                    適量
カルボキシメチル澱粉ナトリウム      ７ｇ
ステアリン酸マグネシウム            ３ｇ
調製プロセス：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、予ゲル化澱粉を秤取して均一に混合した後、８％の澱粉スラリーで軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のカルボキシメチル澱粉ナトリウムとステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３４５ｍｇである。
【００７５】
実施例２０：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンフィルムコーティング錠の調製
実施例１９で得られた素錠を取り、８％胃溶型オパドリー（ＯＹ−Ｃ−７０００Ａ）エタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の２．０〜３．０％である。
【００７６】
実施例２１：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン腸溶錠の調製
実施例１９で得られた素錠を取り、８％腸溶型オパドリーエタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の４．０〜５．０％である。
【００７７】
実施例２２：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠の調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｋ１５Ｍ）            １５０ｇ
ラクトース                            ５０ｇ
３％ポビドン８０％エタノール溶液      適量
ステアリン酸マグネシウム              ５ｇ
調製プロセス：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトースを取って均一に混合した後、３％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合して、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００７８】
実施例２３：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠の調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
クロスポビドン              １５ｇ
微結晶セルロース            １８０ｇ
マンニトール                ５０ｇ
６０％エタノール溶液        適量
ドデシル硫酸ナトリウム      ０．２ｇ
微粉シリカゲル              ５ｇ
ステアリン酸マグネシウム    ３ｇ
ステビア                    ５ｇ
調製プロセス：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠を１０００錠製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、マンニトールを秤取して均一に混合し、６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して乾燥し、その後整粒した。処方量のクロスポビドン、ドデシル硫酸ナトリウム、微粉シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステビアを加えて均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００７９】
実施例２４：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルの調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
澱粉                                    ４５ｇ
５％ポビドン６０％エタノール溶液        適量
ステアリン酸マグネシウム                ２ｇ
調製プロセス：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルを１０００粒製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、澱粉を秤取して均一に混合し、５％ポビドン６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して加熱乾燥した後整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加えて均一に混合し、カプセルに充填して得た。
【００８０】
実施例２５：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒剤の調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン      １００ｇ
マンニトール                                  ３５０ｇ
ショ糖                                        ３５０ｇ
カルメロースナトリウム                        ５０ｇ
アスパルテーム                                １０ｇ
マルトースデキストリン                        １４０ｇ
５％ポビドン８０％エタノール溶液              適量
エッセンス                                    １ｇ
調製プロセス：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒を１０００包調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。エッセンスを５％ポビドン８０％エタノール溶液に加え、処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、マンニトール、ショ糖、カルメロースナトリウム、アスパルテーム、マルトースデキストリンを秤取し、５％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、１６メッシュのふるいで製粒して乾燥し、１４メッシュのふるいで整粒した。６０メッシュのふるいで細粉を除去し、分包して得た。包ごとは約１ｇである。
【００８１】
実施例２６：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液の調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
ピロ亜硫酸ナトリウム                    １ｇ
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム      ０．２ｇ
注射用水                                ２０００ｍｌに加える
調製プロセス：Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液を１０００管製造することを例とする。処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ピロ亜硫酸ナトリウムとエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加え、均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、明澄度が要求に合致するように順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターで精密ろ過した。中間体を検出し、合格した場合、薬液を窒素ガス流の下で２ｍｌアンブル瓶に注封し、管ごとの注封量は約２ｍｌであり、滅菌して得た。
【００８２】
実施例２７：注射用Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
処方組成：
Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
デキストラン４０    ５０ｇ
調製プロセス：注射用Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを１０００瓶製造することを例とする。処方量のＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、デキストラン４０を注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。ｐＨが１．５〜２．５になるように１ｍｏｌ／Ｌ塩酸または１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液で溶液を調整し、全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加え、均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、無菌条件下で薬液を順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターを通過して滅菌ろ過した。中間体のｐＨ、含有量と明澄度を検出し、合格した場合、瓶ごとの注封量が約２ｍｌとなるように薬液をシリン瓶に注封し、タンポンで半分塞いで凍結乾燥し、タンポンで塞いで蓋を付け、ランプ検査して得た。
【００８３】
実施例２８：光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの静脈注射のパラセタモールによるマウスの肝損傷の血清生化学的指標及び肝臓指標への影響。
【００８４】
動物を体重によってランダムに１０匹ずつ、溶剤対照群、モデル群（パラセタモール４００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋｇ、腹腔注射）、チオプロニン群（ＭＰＧ）、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群という５群に分ける。１２時間禁食させた後、溶剤対照群とモデル群に生理塩水を静脈注射する外に、その他の各試験群にそれぞれ医薬を静脈注射した直後、４００／ｍｇ／ｋｇパラセタモールを腹腔注射し、肝細胞の急性損傷を引き起こした。モデル作成してから６時間をした後給食し、そして１６時間禁食させた。モデル作成してから２４時間をした後眼球を摘出して採血し、心から離れて血清を取った。キット法に従ってＡＬＴ、ＡＳＴを測定した。１０％肝臓ホモジネートを調製し、肝ＧＳＨを測定した。同時に、肝臓と脾臓を取ってその重量を量り、臓器係数を算出した。その結果を表１、２に示す。
【００８５】
【表１】
2010532767.tif 000010
表１から分るように、溶剤対照群と比較すると、モデル群はマウスの肝臓係数が明らかに増加し、医薬投与群はいずれも血清ＡＬＴの向上を明らかに抑制することができ、なかでも、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群の作用がＳ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群より強い。チオプロニン群はＡＬＴ値がＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群より低いが、試験過程において、モデル作成後、チオプロニン群はマウスが４匹死亡し、モデル群は２匹死亡し、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群は死亡したマウスがないため、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群はパラセタモールによるマウス肝損傷に対する保護がチオプロニン群より良い。
【００８６】
【表２】
2010532767.tif 000011
表２から分るように、モデル群と比較すると、各医薬投与群はいずれも肝臓総蛋白の含有量が明らかに増加し、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群は明らかに肝臓ＧＳＨ含有量が増加するとともにＭＤＡ含有量が低減したが、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群とチオプロニン群はその作用がない。その結果、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンが強い肝損傷への保護作用を有することは明らかになる。
【００８７】
実施例２９：Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン及びその光学鏡像体の四塩化炭素によるラットの肝損傷に対する保護作用。
【００８８】
動物を体重によってランダムに１０匹ずつ、溶剤対照群、モデル群（５０％ＣＣｌ４、２ｍｌ／ｋｇ、腹腔注射）、チオプロニン群（ＭＰＧ）、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群という５群に分けた。溶剤対照群にオリブ油を腹腔注射する外に、その他の各試験群にそれぞれまず１日に１回ずつ医薬を４日胃内強制（ｉｇ）投与し、５日目にＣＣｌ４を１回腹腔注射し、肝細胞の急性損傷を引き起こした。モデル作成の３０分間前に、医薬で治療（模型対照群を除く）し、モデル作成してから２時間をした後、医薬を１回投与した。そして１６時間禁食させ、ＣＣｌ４を注射してから２４時間をした後、眼球後静脈叢から採血し、心から離れて血清を取り、キット法に従ってＡＬＴ、ＡＳＴ、アルブミンを測定した。その結果を表３、４に示す。肝臓左葉を取り、１０％肝臓ホモジネートを調製し、ＧＳＨとＭＤＡ含有量を測定した。その結果を表５に示す。
【００８９】
【表３】
2010532767.tif 000012
表３から分るように、３種類の医薬はいずれもＡＬＴ、ＡＳＴレベルを明らかに低減させることができ、なかでも、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群とＲ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群はいずれもチオプロニン群より強い。
【００９０】
【表４】
2010532767.tif 000013
表４から分るように、モデル群と比較すると、Ｒ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群は血清総蛋白、アルブミンとグロブリンの含有量を明らかに増加し、Ａ／Ｇ比率を低減することができ、Ｓ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群もＡ／Ｇ比率を低減することができるが、チオプロニン群は前記指標に顕著な影響がなく、モデル群の結果と一致した。
【手続補正書】
【提出日】平成22年1月21日(2010.1.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン及びその調製方法に関し、また、代謝改善解毒薬の調製に用いられる用途及び医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、チオプロニンと通称され、臨床で急性・慢性肝炎、肝硬変などの治療に利用され、肝疾患に優れた治療用途を有し、その調製方法及び医薬製剤も既に数多く開示されている。中国特許出願ＣＮＯ２１２９３００．７にチオプロニン医薬製剤が開示され、「中国薬物化学雑誌」１９９７年３月第７巻第１期５５〜５６頁にチオプロニンの合成プロセスが開示された。しかし、Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学活性、すなわち、そのレボ体、デキストロ体については何らも報告されていない。多くの医薬品は、その単一鏡像体は治療効果が高くて不良反応も小さく、ユートマーと呼ばれるのに対し、活性がないまたは活性が低い鏡像体は、ディストマーと呼ばれ、治療効果がないだけでなく、鏡像体の作用を部分的に相殺させ、ひいては、ひどい不良反応を引き起こし得る場合が多い。鏡像医薬品は体内での薬理的活性、代謝過程が著しく異なり、異なる生物活性と薬力を示す。臨床応用において、キラル医薬品の各鏡像体の薬力学的と薬物動態学的挙動が異なることが認識されていないため、得られた結論と治療効果や不良反応の発生とは一致しない、ひいては臨床薬剤投与を間違って指導してしまう場合がある。そのため、医薬品の光学活性に対する検討は極めて必要である。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを提供することを目的とする。
【０００４】
本発明は、また、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法を提供することを目的とする。
【０００５】
本発明は、また、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの代謝改善解毒薬の調製における用途を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明は、さらに、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン化合物を含む医薬製剤を提供することを目的とする。
【０００７】
本発明は、レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、または、デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンであって、
前記レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【０００８】
【化１】
2010532767.tif 000022
のＳ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルであり、ただし、前記塩がアミノ酸塩または金属塩であってもよく、
前記アミノ酸塩の構造式が、
【０００９】
【化２】
2010532767.tif 000023
であり、ただし、Ｒがアミノ酸であってもよく、このアミノ酸がアルギニン、リシン、グリシン、アスパラギン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、オルニチン、シスチン、システイン、チロシン、バリン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、２−アミノ−４−メチルチオ酪酸、プロリン、グルタミン、ヒドロキシプロリンなどであってもよく、
前記金属塩の構造式が、
【００１０】
【化３】
2010532767.tif 000024
であり、ただし、Ｒ０がカリウム、ナトリウムなどであってもよく、
前記エステルの構造式が、
【００１１】
【化４】
2010532767.tif 000025
であり、ただし、Ｒ１がＣ１〜Ｃ５直鎖アルキルであり、
前記デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【００１２】
【化５】
2010532767.tif 000026
のＲ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルであり、前記塩がアミノ酸塩または金属塩であってもよく、
前記アミノ酸塩の構造式が、
【００１３】
【化６】
2010532767.tif 000027
であり、
ただし、Ｒがアミノ酸であってもよく、このアミノ酸がアルギニン、リシン、グリシン、アスパラギン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、オルニチン、シスチン、システイン、チロシン、バリン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、２−アミノ−４−メチルチオ酪酸、プロリン、グルタミン、ヒドロキシプロリンなどであってもよく、
前記金属塩の構造式が、
【００１４】
【化７】
2010532767.tif 000028
であり、ただし、Ｒ０がカリウム、ナトリウムなどであってもよく、
前記エステルの構造式が、
【００１５】
【化８】
2010532767.tif 000029
であり、ただし、Ｒ１がＣ１〜Ｃ５直鎖アルキルである
光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを提供する。
【００１６】
本発明はまた、下記のような光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法を提供する。
【００１７】
一、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法：
１．Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドを得る。
【００１８】
２．Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを得る。
【００１９】
３．硫化ナトリウムと昇華硫黄とを反応させて二硫化ナトリウムを取得し、Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸性化させてＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る。
【００２０】
得られたＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンをさらに酸、アルカリまたはアルコールと反応させて塩またはエステルを得る。
【００２１】
二、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法：
１．Ｓ−（−）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドを得る。
【００２２】
２．Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを得る。
【００２３】
３．硫化ナトリウムと昇華硫黄とを反応させて二硫化ナトリウムを取得し、Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸性化させてＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る。
【００２４】
得られたＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを酸、アルカリまたはアルコールと反応させて塩またはエステルを得る。
【００２５】
本発明はまた、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、すなわち、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンやＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはその薬学的に許容される塩やエステルを、代謝改善解毒薬の調製に用いられる用途を提供し、特に、肝組織細胞に対する保護作用や各種の肝炎、例えば、急性・慢性肝炎、ウイルス性肝炎、アルコール性肝炎、薬物性肝炎、重金属中毒肝炎などの治療、脂肪肝、急性・慢性肝損傷、肝硬変の治療を含む、急性・慢性肝疾患の治療と肝機能の改善に用いられ、また、放射線や化学療法による外周白血球の減少を予防・治療して肝細胞の復元を促進し、化学療法による不良反応を低減させること、加齢性早期白内障や硝子体混濁の予防・治療、重金属解毒に用いられる用途を提供する。
【００２６】
薬力学的試験から、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンとＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、いずれも肝損傷に対して良好な保護作用を有し、その作用はいずれもＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンより強いことが分る。
【００２７】
薬物代謝動力学的試験から、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンとＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンとは体内で互いに転化されないことが分る。具体的な試験は投薬動物体内の薬物代謝動態学的試験であり、高速液体クロマトグラフ質量分析法により血漿における医薬を測定することを含む。
【００２８】
血漿サンプルの処理方法は、血漿を酸性化させて抽出し、誘導化反応を行うことで、サンプル溶液が調合されることを含み、具体的には、
１．血漿の酸性化：ここで、酸性化に用いられる酸は塩酸、リン酸、過塩素酸、酢酸などであってもよいが、塩酸が好ましく、１ｍｏｌ／Ｌの塩酸がより好ましく、酸の量：血漿サンプルの量は（１５０μｌ〜２５０μｌ）：（２ｍｌ〜４ｍｌ）であり、２００μｌ：３ｍｌが好ましい。
【００２９】
２．酸性化された血漿の抽出：ここで、抽出に用いられる有機溶剤は酢酸エチル、クロロホルム、トリクロロメタン、エチルエーテル、ｎ−へキサンなどであってもよいが、酢酸エチルが好ましい。
【００３０】
３．抽出物に対する誘導化反応：ここで用いられる誘導化試薬はフェニルイソチオシアナート、２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−ピラングルコースイソチオシアナート（ＧＩＴＣ）溶液などであってもよいが、ＧＩＴＣ溶液が好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣ溶液がより好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣのテトラヒドロフラン溶液が最も好ましく、誘導化温度は１５〜４５℃であり、２５〜３５℃が好ましく、３０℃がより好ましく、誘導化時間は１０〜３０ｍｉｎであり、１５〜２５ｍｉｎが好ましく、２０ｍｉｎがより好ましい。
【００３１】
クロマトグラフィーの条件：
流動相Ａ：メタノール。流動相Ｂ：水溶液；０．０５〜０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．０〜６．０ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含み、好ましくは０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．３ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含む。ここで、Ａ：Ｂは（４０〜５０：５０〜６０であり、４４：５６が好ましい）。
質量分析条件：
イオン化方式：エレクトロスプレーイオン化；選択イオンモニタリング；湾曲型脱溶媒装置（Ｃｕｒｖｅｄ  Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ  Ｌｉｎｅ；ＣＤＬ）；温度：２００℃〜３００℃、好ましくは２５０℃；加熱ブロック温度：１５０℃〜２５０℃、好ましくは２００℃；ＣＤＬ電圧：２０Ｖ〜３０Ｖ、好ましくは２５Ｖ；検出電圧：＋１．２ｋＶ〜＋１．８ｋＶ、好ましくは＋１．５０ｋＶ；噴霧ガス流速：１．２Ｌ／ｍｉｎ〜１．８Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは１．５Ｌ／ｍｉｎ；乾燥ガス流速：１．５Ｌ／ｍｉｎ〜２．５Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは２．０Ｌ／ｍｉｎ；検出イオン：供試医薬誘導体［Ｍ＋Ｎａ」＋（ｍ／ｚ）：５７５．２０、内標準Ｎ−イソブタノイル−Ｄ−システイン（ＮＩＤＣ）誘導体［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｍ／ｚ）：６０３．０５；
内標準物質はＮＩＤＣであり、内標準ピークとメインピークとの分離度は中華人民共和国薬典の要求に合致すればよい。
【００３２】
その結果、単にＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを投与する各時間点でのクロマトグラフィーチャートにおいて、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの存在が顕著に検出されなく、同様に、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを投与した後も、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの存在が検出されないことが示され、それは、両者が動物体内で互いに転化されていないことを意味している。
【００３３】
これにより、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを臨床用途に好適な医薬製剤とするのは、実用性がある。
【００３４】
本発明は、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンやＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはこれらの薬学的に許容される塩やエステルを活性成分とするとともに、薬学的に許容される助剤を含む臨床用途に好適な医薬製剤とし、前記製剤は経口投与製剤または注射投与製剤である。
【００３５】
前記経口投与製剤は、例えば、一般経口製剤として、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、チュアブル錠、発泡錠などであり、即効製剤として、例えば分散錠、口腔内崩壊錠などであり、徐放製剤として、例えば徐放錠剤、徐放ペレットなどであり、また、注射投与製剤としては、例えば注射液、注射用濃溶液、注射用無菌粉末などである。
【００３６】
前記経口医薬製剤においては、助剤が充填剤、結合剤、崩壊剤であり、充填剤と崩壊剤の重量組成がそれぞれ１０〜６０％、２〜３０％であり、さらに、流動助剤、潤滑剤、界面活性剤を含んでもよく、三者の重量含有量がそれぞれ０．１〜５％、０．１〜５％、０．００５〜１％である。ここで、前記充填剤としては、澱粉、予ゲル化澱粉、カルボキシメチル澱粉、微結晶セルロース、ラクトース、デキストリン、ショ糖、グリコース、マンニトール、ソルビトール、硫酸カルシウム二水和物、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、炭酸カルシウムであってもよい。前記結合剤としては、トウモロコシ澱粉、予ゲル化トウモロコシ澱粉、予ゲル化澱粉、ゼラチン、ショ糖、アラビアゴム、ポビドン、各種粘度のメチルセルロース、低粘度のカルメロースナトリウム、各種粘度のエチルセルロース、各種粘度のポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール６０００、ヒドロキシプロピルメチルセルロースの水またはアルコールの溶液であってもよい。前記崩壊剤としては、澱粉、予ゲル化澱粉、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、リグノセルロース、アルギン酸、カルボキシメチル澱粉ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、グアールガム、クロスポビドン、イオン交換樹脂、メチルセルロース、カルメロースナトリウム、及び有機酸（例えば、クエン酸、酒石酸）と炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム）からなる発泡崩壊剤である。前記潤滑剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、タルク、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール８０００、ラウリル硫酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ホウ酸、ロイシン、アジピン酸、フマル酸、グリセロールトリアセテート、ポリオキシエチレンモノステアレート、シュクロースモノラウレート、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムであってもよい。前記流動助剤は気相微粉シリカゲル、合成微粉シリカゲル、酸化マグネシウムであってもよい。前記界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム、ポロキサマー、ツイーン類、スパン類、セチルトリメチルアミニウムブロマイド、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸スルホン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンモノステアレートである。処方に矯味剤を加えてもよく、矯味剤としては、ステビア、フルクトース、ショ糖、グリコース、アスパルテーム、プロテオグリカン、キシリトール、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、マルトール、グリチルリチン、シクロヘキシルアミノスルホン酸ナトリウム、バナナエッセンス、オレンジエッセンス、パイナップルエッセンス、ミントエッセンス、ウイキョウ、バニリン、レモンエッセンス、チェリーエッセンス、ローズエッセンスである。処方にはまた、濡れ剤、すなわち、水または濃度が異なるエタノール溶液を含んでもよい。本発明の医薬製剤に用いられるコーティング材としては、セルロース及びその誘導体類、アクリル樹脂類、ビニルポリマーなどであってもよい。
【００３７】
前記注射投与製剤は、注射液、注射用濃溶液及び注射用無菌粉末を含み、助剤が注射剤の要求に合わせた付加剤であり、前記付加剤はｐＨ調整剤、等張化剤、酸化防止剤、キレート剤であり、注射用無菌粉末製剤にまた賦形剤を加えてもよい。ｐＨ調整剤としては、塩酸、乳酸、メタンスルホン酸、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸及びその塩、酢酸及びその塩、クエン酸及びその塩、アミノ酸及びその塩であり、等張化剤としては、グリコース、塩化ナトリウム、グリセリン、硫酸ナトリウムが含まれ、賦形剤としては、ソルビトール、マンニトール、デキストラン、ラクトース、ショ糖、グリコース、加水分解ゼラチン、塩化ナトリウムが含まれ、酸化防止剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウムまたはカリウム塩０．０１％〜０．１％、亜硫酸ナトリウム０．０１〜０．５％、亜硫酸水素ナトリウム０．０１％〜０．５％、チオ硫酸ナトリウム０．０１％〜０．５％、ホルムアルデヒドスルホキシル酸水素ナトリウム０．１〜０．２％、チオ尿素０．０５％〜０．１％、アスコルビン酸０．０５％〜０．２％、チオグリセリン０．１％〜０．５％、グルタチオン０．０１〜０．２％、アラニン０．０１％〜０．５％、システイン０．０１％〜０．５％、没食子酸及びそのプロポルエステルまたはオクチルエステル０．０１〜０．１％、ｔ−ブチル−ｐ−ヒドロキシアニソール０．０１〜０．１％、ジ−ｔ−ブチル−ｐ−クレゾール０．０１％〜０．５％、トコフェロールα、β、γ０．０１％〜０．１％、ノルジヒドログアヤレチック酸０．０１％〜０．５％またはアスコルビン酸パルミチルエステル０．０１％〜０．５％が含まれ、キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩、エチレンジアミン四酢酸カルシウムナトリウム塩である。
【００３８】
本発明による化合物は、代謝改善解毒薬の調製に用いることができる。
【００３９】
本発明はまた、高速液体クロマトグラフィーにより光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度を測定する方法を提供し、具体的な工程は下記の通りである。
【００４０】
１）クロマトグラフィーの条件：クロマトグラフィーカラムとして３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドが固定相であるキラルカラムを採用し、流動相がｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（８０〜９５：５〜２０：０．０１〜１．０）であり、（９０：１０：０．１）が好ましく、検出波長が２００ｎｍ〜２３０ｎｍであり、２１０ｎｍが好ましく、流動相流速が０．２〜３．０ｍｌ／ｍｉｎであり、１．０ｍｌ／ｍｉｎが好ましい。
【００４１】
２）試料溶液の配置：有機溶剤でＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン０．１〜２０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは１ｍｇ／ｍｌ）を含む溶液となるように試料を調合し、前記有機溶剤はｎ−プロパノール、イソプロパノール、エタノール、ｎ−ブタノール及びメタノールから選ばれるもので、エタノールが好ましい。
【００４２】
３）測定：溶液を高速液体クロマトグラフィーに注ぎ、クロマトグラフィーチャートを記録して解析を行う。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
実施例１：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
１）乾燥の１００ｍｌ反応瓶にＲ−（＋）−２−クロロプロピオン酸５４．３ｇ（０．５ｍｏｌ）、クロロスルホキシド６０ｇ（０．５０４ｍｏｌ）を加え、湿気から隔離された条件で４時間攪拌還流した。反応が終わった後、過量のクロロスルホキシドを蒸し出して再利用し、ｂｐ  ９５〜１０５℃の留分を収集して無色液体であるＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリド５５ｇ、８６．６％を得た。
【００４４】
２）１０００ｍｌ反応瓶にグリシン２９．９ｇ（０．４０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム２１．２ｇ（０．２０ｍｏｌ）及び水２５０ｍｌを加え、攪拌して溶解させた。氷塩浴で冷却し、激しい攪拌下でＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリド５０．６ｇ（０．４０ｍｏｌ）を滴下するとともに、無水炭酸ナトリウムの飽和溶液を加え、反応液を弱アルカリ性とした。添加した後、３〜５時間攪拌反応し続けて反応が終わった。ｐＨ＝１になるように濃塩酸で酸性化させ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して、結晶が析出するまで濾液を減圧濃縮し、放置した。ろ過して乾燥し、白い小針状の結晶体Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシン３８．６ｇを得た。ｍｐ：１２０〜１２４℃、［α］ｎ２０＝＋２３．８℃（水）。
【００４５】
３）２５０ｍｌビーカーに硫化ナトリウム（Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２Ｏ）２６．５ｇ（０．１１ｍｏｌ）、昇華硫黄３．５２ｇ（０．１１ｍｏｌ）及び水１２０ｍｌを加え、溶解されるまで加熱攪拌し、赤褐色の二硫化ナトリウム溶液を予備として得た。２５０ｍｌ反応瓶にＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシン１６．４ｇ（０．１０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム５．６ｇを加え、気泡が溢れないように徐々に水１００ｍｌを加えた。０〜１０℃に冷却して前記二硫化ナトリウム溶液を滴下し、滴下し終わった後５〜１５℃で１０〜１５時間反応した。反応が終わった後、０℃程度に降温し、ｐＨが１に近くなるように濃硫酸を滴下した。ろ過し、濾液に攪拌下で亜鉛粉１７ｇを何回かに分けて加え、常温で３時間反応して反応が終わった。ろ過し、濾液を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して減圧濃縮し、放置して固体が析出した。ろ過して固体を収集し、酢酸エチルで再結晶し、真空乾燥して白色結晶固体Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン８．４ｇを得た。ｍｐ：１０２〜１０４℃、［α］ｎ２０＝−３６．５℃（水）、含有量９９．３％（ヨウ素滴定液０．１ｍｏｌ／Ｌで滴定）、相関物質＜２％（薄層クロマトグラフィー：シリカゲルＧシートプレート、クロロホルム−アセトン−氷酢酸（９：３：１）、ヨウ素蒸気で発色）。
【００４６】
１ＨＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−Ｄ６）  δ  ｐｐｍ  ：  １．３５  （ｄ，  ３Ｈ）；  ２．７９  （ｄ，  １Ｈ）；  ３．５４  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．７７  （ｍ，  ２Ｈ）；  ８．２５  （ｔ，  １Ｈ）；  １２．５  （ｂｓ，  １Ｈ）、ＭＳ  （ｍ／ｚ）  １６３、元素分析Ｃ５Ｈ９ＮＯ３Ｓ  （％）  ：  Ｃ  ３６．６５，  Ｈ  ５．６６，  Ｎ  ８．５０，  Ｓ  １９．６８。
【００４７】
実施例２：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
１）乾燥の１００ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオン酸５４．３ｇ（０．５ｍｏｌ）、クロロスルホキシド６０ｇ（０．５０４ｍｏｌ）を加え、湿気から隔離された条件で４時間攪拌還流した。反応が終わった後、過量のクロロスルホキシドを蒸し出して再利用し、ｂｐ  ９５〜１０５℃の留分を収集して無色液体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５６ｇ、８８．２％を得た。
【００４８】
２）１０００ｍｌ反応瓶にグリシン２９．９ｇ（０．４０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム２１．２ｇ（０．２０ｍｏｌ）及び水２５０ｍｌを加え、攪拌して溶解させた。冰塩浴で冷却し、激しい攪拌下でＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５０．６ｇ（０．４０ｍｏｌ）を滴下するとともに、無水炭酸ナトリウムの飽和水溶液を加え、反応液を弱アルカリ性とした。添加した後、３〜５時間攪拌反応し続けて反応が終わった。ｐＨ＝１になるように濃塩酸で酸化させ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し、結晶が析出するまで濾液を減圧濃縮し、放置した。ろ過して乾燥し、白い小針状の結晶体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン３７．８ｇを得た。ｍｐ：１２０〜１２４℃、［α］ｎ２０＝−２４．２℃（水）。
【００４９】
３）２５０ｍｌビーカーに硫化ナトリウム（Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２０）２６．５ｇ（０．１１ｍｏｌ）、昇華硫黄３．５２ｇ（０．１１ｍｏｌ）及び水１２０ｍｌを加え、溶解まで加熱攪拌し、赤褐色の二硫化ナトリウム溶液を予備として得た。２５０ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン１６．４ｇ（０．１０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム５．６ｇを加え、気泡が溢れないように徐々に水１００ｍｌを加えた。０〜１０℃に冷却して前記二硫化ナトリウム溶液を滴下し、滴下し終わった後５〜１５℃で１０〜１５時間反応した。反応が終わった後、０℃程度に降温し、ｐＨが１に近くなるように濃硫酸を滴下した。ろ過し、濾液に攪拌下で亜鉛粉１７ｇを何回かに分けて加え、常温で３時間反応して反応が終わった。ろ過し、濾液を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して減圧濃縮し、放置して固体が析出した。ろ過して固体を収集し、酢酸エチルで再結晶し、真空乾燥して白色結晶固体Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン８．２ｇを得た。ｍｐ：１０２〜１０４℃、［α］ｎ２０＝＋３７．５℃（水）、含有量９９．１％（ヨウ素滴定液０．１ｍｏｌ／Ｌで滴定）、相関物質＜２％（薄層クロマトグラフィー：シリカゲルＧシートプレート、クロロホルム−アセトン−氷酢酸（９：３：１）、ヨウ素蒸気で発色）。
【００５０】
１ＨＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−Ｄ６）  δ  ｐｐｍ  ：  １．４０  （ｄ，  ３Ｈ）；  ２．８０  （ｄ，  １Ｈ）；  ３．６０  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．８１（ｍ，  ２Ｈ）；  ８．２８  （ｔ，  １Ｈ）；  １２．８  （ｂｓ，  １Ｈ）、ＭＳ  （ｍ／ｚ）  １６３、元素分析Ｃ５Ｈ９ＮＯ３Ｓ  （％）  ：  Ｃ  ３６．６８，  Ｈ  ５．６５，  Ｎ  ８．５３，  Ｓ  １９．６５
実施例３：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
１）乾燥の１００ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオン酸５４．３ｇ（０．５ｍｏｌ）、クロロスルホキシド６０ｇ（０．５０４ｍｏｌ）を加え、湿気から隔離された条件で４時間攪拌還流した。反応が終わった後、過量のクロロスルホキシドを蒸し出して再利用し、ｂｐ  ９５〜１０５℃の留分を収集して無色液体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５４．６ｇを得た。
【００５１】
２）１０００ｍｌ反応瓶にグリシン２９．９ｇ（０．４０ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム２１．２ｇ（０．２０ｍｏｌ）及び水２５０ｍｌを加え、攪拌して溶解させた。冰塩浴で冷却し、激しい攪拌下でＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリド５０．６ｇ（０．４０ｍｏｌ）を滴下するとともに、無水炭酸ナトリウムの飽和溶液を加えて反応液を弱アルカリ性とした。添加した後、３〜５時間攪拌反応し続けて反応が終わった。ｐＨ＝１になるように濃塩酸で酸性化させ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し、結晶が析出するまで濾液を減圧濃縮し、放置した。ろ過して乾燥し、白い小針状の結晶体Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン３８ｇを得た。
【００５２】
３）２５０ｍｌビーカーに硫化ナトリウム（Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２Ｏ）２８．８ｇ（０．１２ｍｏｌ）、昇華硫黄３．８４ｇ（０．１２ｍｏｌ）及びエタノール１５０ｍｌを加え、溶解まで加熱攪拌し、赤褐色の二硫化ナトリウム溶液を予備として得た。２５０ｍｌ反応瓶にＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシン１８．３ｇ（０．１１ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム６．３ｇを加え、気泡が溢れないように徐々に水１００ｍｌを加えた。０〜１０℃に冷却して前記二硫化ナトリウム溶液を滴下し、滴下し終わった後０〜１０℃で１２時間反応した。反応が終わった後、ｐＨ＝１になるように同温度で濃硫酸を滴下した。ろ過し、濾液に攪拌下で亜鉛粉１７ｇを何回かに分けて加え、常温で３時間反応して反応が終わった。ろ過し、濾液を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過して減圧濃縮し、放置して固体が析出した。ろ過して固体を収集し、酢酸エチルで再結晶し、真空乾燥して白色結晶固体Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン８．１ｇを得た。含有量９９．３％（ヨウ素滴定液０．１ｍｏｌ／Ｌで滴定）、相関物質＜２％（薄層クロマトグラフィー：シリカゲルＧシートプレート、クロロホルム−アセトン−氷酢酸（９：３：１）、ヨウ素蒸気で発色）。
【００５３】
実施例４：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度の測定
機器：高速液体クロマトグラフィー、ＳＰＤ−１０Ａｖｐ紫外検出器、ＬＣ−１０ＡＤポンプ
流動相：ｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（９０：１０：０．１）
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
クロマトグラフィーカラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（固定相として３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドを採用する）
カラム温度：２５℃
検出波長：２１０ｎｍ
試料濃度：０．５ｍｇ／ｍｌ
以上の条件で測定したところ、実施例１で得られたＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度は９９．３％である。
【００５４】
実施例５：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度の測定
機器：高速液体クロマトグラフィー、ＳＰＤ−１０ＡｖＰ紫外検出器、ＬＣ−１０ＡＤポンプ
流動相：ｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（９０：１０：０．１）
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
クロマトグラフィーカラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＡＤ−Ｈ（固定相として３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドを採用した）
カラム温度：２５℃
検出波長：２１０ｎｍ
試料濃度：０．５ｍｇ／ｍｌ
以上の条件で測定したところ、実施例２で得られたＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度は９９．２％である。
【００５５】
実施例６：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンアルギニン塩の調製
反応瓶に実施例１で得られたＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１０ｇ、Ｌ−アルギニン１１．２ｇ、９５％メタノール６０ｍｌを仕込み、攪拌し、還流まで加熱し、３時間反応した。反応が終わった後、熱いうちにろ過し、室温に濾液を冷却してから冷蔵庫に置いて冷却して晶析させた。ろ過して収集し、乾燥して白色結晶固体１９．２ｇを得た。収率：９２．８％。
【００５６】
実施例７：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンリシン塩の調製
反応瓶に実施例２で得られたＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１０ｇ、Ｌ−リシン９．４ｇ、９５％メタノール６０ｍｌを仕込み、攪拌し、還流まで加熱し、３時間反応した。反応が終わった後、熱いうちにろ過し、室温に濾液を冷却してから冷蔵庫に置いて冷却して晶析させた。ろ過して収集し、乾燥して白色結晶固体１６．８ｇを得た。収率：８８．６％。
【００５７】
実施例８：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウムの調製
１）反応瓶にＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１６．３ｇ（０．１０ｍｏｌ）、メタノール４５ｍｌを加え、１５℃でジチオスレイトール０．１５ｇを加え、１５分間攪拌し、モレキュラーシーブ５ｇを加えた。
【００５８】
２）ＮａＯＨ  ４．６５ｇを６回に分けて徐々に前記メタノール溶液に加えた。
【００５９】
３）添加した後、１５℃で１時間攪拌反応した。そして、２０〜２５℃で１時間攪拌反応した。反応が終わった後、ろ過して、モレキュラーシーブを濾去し、濾液を１３０ｍＬアセトンに加え、均一に混合させるように十分にふるった。
【００６０】
４）反応液に大量の白色沈殿が現れた場合、吸引ろ過し、ケーキを８０℃で乾燥して無水Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウム１２．８ｇを得た。
【００６１】
実施例９：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウムの調製
１）反応瓶にＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン１６．３ｇ（０．１０ｍｏｌ）、メタノール４５ｍｌを加え、１５℃でジチオスレイトール０．１５ｇを加え、１５分間攪拌し、モレキュラーシーブ５ｇを加えた。
【００６２】
２）ＮａＯＨ  ４．６５ｇを６回に分けて徐々に前記メタノール溶液に加えた。
【００６３】
３）添加した後、１５℃で１時間攪拌反応した。そして、２０〜２５℃で１時間攪拌反応した。反応が終わった後、ろ過し、モレキュラーシーブを濾去し、濾液をアセトン１３０ｍＬに加え、均一に混合させるように十分にふるった。
【００６４】
４）反応液に大量の白色沈殿が現れた場合、吸引ろ過し、ケーキを８０℃で乾燥して無水Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンナトリウム１３．１ｇを得た。
【００６５】
実施例１０：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠剤の調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
微結晶セルロース    １７０ｇ
予ゲル化澱粉    ６０ｇ
８％澱粉スラリー    適量
カルボキシメチル澱粉ナトリウム    ７ｇ
ステアリン酸マグネシウム    ３ｇ
調製プロセス：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、予ゲル化澱粉を秤取し、均一に混合した後、８％の澱粉スラリーで軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のカルボキシメチル澱粉ナトリウムとステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３４５ｍｇである。
【００６６】
実施例１１：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンフィルムコーティング錠の調製
実施例１０で得られた素錠を取り、８％胃溶型オパドリー（ＯＹ−Ｃ−７０００Ａ）エタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の２．０〜３．０％である。
【００６７】
実施例１２：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン腸溶錠の調製
実施例１０で得られた素錠を取り、８％腸溶型オパドリーエタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の４．０〜５．０％である。
【００６８】
実施例１３：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠の調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｋ１５Ｍ）    １５０ｇ
ラクトース    ５０ｇ
３％ポビドン８０％エタノール溶液    適量
ステアリン酸マグネシウム    ５ｇ
調製プロセス：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトースを取り、均一に混合した後、３％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００６９】
実施例１４：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠の調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
クロスポビドン    １５ｇ
微結晶セルロース    １８０ｇ
マンニトール    ５０ｇ
６０％エタノール溶液    適量
ドデシル硫酸ナトリウム    ０．２ｇ
微粉シリカゲル    ５ｇ
ステアリン酸マグネシウム    ３ｇ
ステビア    ５ｇ
調製プロセス：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠を１０００錠製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、マンニトールを秤取して均一に混合し、６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して乾燥し、その後整粒した。処方量のクロスポビドン、ドデシル硫酸ナトリウム、微粉シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステビアを加えて均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００７０】
実施例１５：Ｓ−（−）−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルの調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
澱粉    ４５ｇ
５％ポビドン６０％エタノール溶液    適量
ステアリン酸マグネシウム    ２ｇ
調製プロセス：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルを１０００粒製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、澱粉を秤取して均一に混合し、５％ポビドン６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して加熱乾燥した後、整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加えて均一に混合し、カプセルに充填して得た。
【００７１】
実施例１６：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒剤の調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
マンニトール    ３５０ｇ
ショ糖    ３５０ｇ
カルメロースナトリウム    ５０ｇ
アスパルテーム    １０ｇ
マルトースデキストリン    １４０ｇ
５％ポビドン８０％エタノール溶液    適量
エッセンス    １ｇ
調製プロセス：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒を１０００包調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。エッセンスを５％ポビドン８０％エタノール溶液に加え、処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ショ糖、マンニトール、カルメロースナトリウム、アスパルテーム、マルトースデキストリンを秤取し、５％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、１６メッシュのふるいで製粒して乾燥し、１４メッシュのふるいで整粒した。６０メッシュのふるいで細粉を除去し、分包して得た。包ごとは約１ｇである。
【００７２】
実施例１７：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液の調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
注射用水    ２０００ｍｌに加える
調製プロセス：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液を１０００管製造することを例とする。処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加えて均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、明澄度が要求に合致するように順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターを通過させて精密ろ過した。中間体を点検し、合格した場合、管ごとの注封量が約２ｍｌとなるように薬液を窒素ガス流の下で２ｍｌアンプル瓶に注封し、滅菌して得た。
【００７３】
実施例１８：Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射剤の調製
処方組成：
Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
デキストラン４０    ５０ｇ
亜硫酸水素ナトリウム    １ｇ
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム    ０．２ｇ
調製プロセス：注射用Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを１０００瓶製造することを例とする。処方量のＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、デキストラン４０、亜硫酸水素ナトリウムとエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。ｐＨ１．５〜２．５になるように１ｍｏｌ／Ｌの塩酸で溶液を調整し、また全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加え、均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、無菌条件で薬液を順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターを通過して滅菌ろ過を行った。中間体のｐＨ、含有量と明澄度を検出し、合格した場合、瓶ごとの注封量が約２ｍｌとなるように薬液をシリン瓶に注封し、タンポンで半分塞いで凍結乾燥し、タンポンで塞いで蓋を付け、ランプ検査して得た。
【００７４】
実施例１９：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠剤の調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
微結晶セルロース    １７０ｇ
予ゲル化澱粉    ６０ｇ
８％澱粉スラリー    適量
カルボキシメチル澱粉ナトリウム    ７ｇ
ステアリン酸マグネシウム    ３ｇ
調製プロセス：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、予ゲル化澱粉を秤取して均一に混合した後、８％の澱粉スラリーで軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のカルボキシメチル澱粉ナトリウムとステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３４５ｍｇである。
【００７５】
実施例２０：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンフィルムコーティング錠の調製
実施例１９で得られた素錠を取り、８％胃溶型オパドリー（ＯＹ−Ｃ−７０００Ａ）エタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の２．０〜３．０％である。
【００７６】
実施例２１：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン腸溶錠の調製
実施例１９で得られた素錠を取り、８％腸溶型オパドリーエタノール溶液を調合し、高効率コーティングパンに置いてコーティングし、コーティング粉の用量が素錠重量の４．０〜５．０％である。
【００７７】
実施例２２：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠の調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Ｋ１５Ｍ）    １５０ｇ
ラクトース    ５０ｇ
３％ポビドン８０％エタノール溶液    適量
ステアリン酸マグネシウム    ５ｇ
調製プロセス：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン徐放錠を１０００錠調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトースを取って均一に混合した後、３％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、２０メッシュのふるいで製粒して乾燥し、乾燥された顆粒を１８メッシュのふるいで整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加え、均一に混合して、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００７８】
実施例２３：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠の調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
クロスポビドン    １５ｇ
微結晶セルロース    １８０ｇ
マンニトール    ５０ｇ
６０％エタノール溶液    適量
ドデシル硫酸ナトリウム    ０．２ｇ
微粉シリカゲル    ５ｇ
ステアリン酸マグネシウム    ３ｇ
ステビア    ５ｇ
調製プロセス：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン分散錠を１０００錠製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、微結晶セルロース、マンニトールを秤取して均一に混合し、６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して乾燥し、その後整粒した。処方量のクロスポビドン、ドデシル硫酸ナトリウム、微粉シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステビアを加えて均一に混合し、打錠して得た。錠ごとの重量は約３６０ｍｇである。
【００７９】
実施例２４：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルの調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １５０ｇ
澱粉    ４５ｇ
５％ポビドン６０％エタノール溶液    適量
ステアリン酸マグネシウム    ２ｇ
調製プロセス：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンカプセルを１０００粒製造することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、澱粉を秤取して均一に混合し、５％ポビドン６０％エタノール溶液で軟材を製造し、製粒して加熱乾燥した後整粒した。処方量のステアリン酸マグネシウムを加えて均一に混合し、カプセルに充填して得た。
【００８０】
実施例２５：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒剤の調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
マンニトール    ３５０ｇ
ショ糖    ３５０ｇ
カルメロースナトリウム    ５０ｇ
アスパルテーム    １０ｇ
マルトースデキストリン    １４０ｇ
５％ポビドン８０％エタノール溶液    適量
エッセンス    １ｇ
調製プロセス：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン顆粒を１０００包調製することを例とする。元の助剤をそれぞれ粉砕して１００メッシュのふるいを通過し、用意しておいた。エッセンスを５％ポビドン８０％エタノール溶液に加え、処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、マンニトール、ショ糖、カルメロースナトリウム、アスパルテーム、マルトースデキストリンを秤取し、５％ポビドン８０％エタノール溶液で軟材を製造し、１６メッシュのふるいで製粒して乾燥し、１４メッシュのふるいで整粒した。６０メッシュのふるいで細粉を除去し、分包して得た。包ごとは約１ｇである。
【００８１】
実施例２６：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液の調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
ピロ亜硫酸ナトリウム    １ｇ
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム    ０．２ｇ
注射用水    ２０００ｍｌに加える
調製プロセス：Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン注射液を１０００管製造することを例とする。処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、ピロ亜硫酸ナトリウムとエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加え、均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、明澄度が要求に合致するように順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターで精密ろ過した。中間体を検出し、合格した場合、薬液を窒素ガス流の下で２ｍｌアンブル瓶に注封し、管ごとの注封量は約２ｍｌであり、滅菌して得た。
【００８２】
実施例２７：注射用Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製
処方組成：
Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン    １００ｇ
デキストラン４０    ５０ｇ
調製プロセス：注射用Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを１０００瓶製造することを例とする。処方量のＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、デキストラン４０を注射用水１６００ｍｌに加え、攪拌して完全に溶解させた。ｐＨが１．５〜２．５になるように１ｍｏｌ／Ｌ塩酸または１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液で溶液を調整し、全量２０００ｍｌになるように注射用水を追加し、均一に攪拌した。０．１％の針用の活性炭を加え、均一に攪拌し、薬液をチタン棒で脱炭した後、無菌条件下で薬液を順に０．４５μｍと０．２２μｍのミクロポアフィルターを通過して滅菌ろ過した。中間体のｐＨ、含有量と明澄度を検出し、合格した場合、瓶ごとの注封量が約２ｍｌとなるように薬液をシリン瓶に注封し、タンポンで半分塞いで凍結乾燥し、タンポンで塞いで蓋を付け、ランプ検査して得た。
【００８３】
実施例２８：光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの静脈注射のパラセタモールによるマウスの肝損傷の血清生化学的指標及び肝臓指標への影響。
【００８４】
動物を体重によってランダムに１０匹ずつ、溶剤対照群、モデル群（パラセタモール４００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋｇ、腹腔注射）、チオプロニン群（ＭＰＧ）、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群という５群に分ける。１２時間禁食させた後、溶剤対照群とモデル群に生理塩水を静脈注射する外に、その他の各試験群にそれぞれ医薬を静脈注射した直後、４００／ｍｇ／ｋｇパラセタモールを腹腔注射し、肝細胞の急性損傷を引き起こした。モデル作成してから６時間をした後給食し、そして１６時間禁食させた。モデル作成してから２４時間をした後眼球を摘出して採血し、心から離れて血清を取った。キット法に従ってＡＬＴ、ＡＳＴを測定した。１０％肝臓ホモジネートを調製し、肝ＧＳＨを測定した。同時に、肝臓と脾臓を取ってその重量を量り、臓器係数を算出した。その結果を表１、２に示す。
【００８５】
【表１】
2010532767.tif 000030
表１から分るように、溶剤対照群と比較すると、モデル群はマウスの肝臓係数が明らかに増加し、医薬投与群はいずれも血清ＡＬＴの向上を明らかに抑制することができ、なかでも、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群の作用がＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群より強い。チオプロニン群はＡＬＴ値がＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群より低いが、試験過程において、モデル作成後、チオプロニン群はマウスが４匹死亡し、モデル群は２匹死亡し、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群は死亡したマウスがないため、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群はパラセタモールによるマウス肝損傷に対する保護がチオプロニン群より良い。
【００８６】
【表２】
2010532767.tif 000031
表２から分るように、モデル群と比較すると、各医薬投与群はいずれも肝臓総蛋白の含有量が明らかに増加し、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群は明らかに肝臓ＧＳＨ含有量が増加するとともにＭＤＡ含有量が低減したが、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群とチオプロニン群はその作用がない。その結果、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンが強い肝損傷への保護作用を有することは明らかになる。
実施例２９：Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン及びその光学鏡像体の四塩化炭素によるラットの肝損傷に対する保護作用。
【００８７】
動物を体重によってランダムに１０匹ずつ、溶剤対照群、モデル群（５０％ＣＣｌ４、２ｍｌ／ｋｇ、腹腔注射）、チオプロニン群（ＭＰＧ）、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群という５群に分けた。溶剤対照群にオリブ油を腹腔注射する外に、その他の各試験群にそれぞれまず１日に１回ずつ医薬を４日胃内強制（ｉｇ）投与し、５日目にＣＣｌ４を１回腹腔注射し、肝細胞の急性損傷を引き起こした。モデル作成の３０分間前に、医薬で治療（模型対照群を除く）し、モデル作成してから２時間をした後、医薬を１回投与した。そして１６時間禁食させ、ＣＣｌ４を注射してから２４時間をした後、眼球後静脈叢から採血し、心から離れて血清を取り、キット法に従ってＡＬＴ、ＡＳＴ、アルブミンを測定した。その結果を表３、４に示す。肝臓左葉を取り、１０％肝臓ホモジネートを調製し、ＧＳＨとＭＤＡ含有量を測定した。その結果を表５に示す。
【００８８】
【表３】
2010532767.tif 000032
表３から分るように、３種類の医薬はいずれもＡＬＴ、ＡＳＴレベルを明らかに低減させることができ、なかでも、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群とＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群はいずれもチオプロニン群より強い。
【００８９】
【表４】
2010532767.tif 000033
表４から分るように、モデル群と比較すると、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群は血清総蛋白、アルブミンとグロブリンの含有量を明らかに増加し、Ａ／Ｇ比率を低減することができ、Ｒ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン群もＡ／Ｇ比率を低減することができるが、チオプロニン群は前記指標に顕著な影響がなく、モデル群の結果と一致した。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン、または、デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンであって、
前記レボＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンは、Ｓ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【化９】
2010532767.tif 000034
のＳ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルであり、
前記デキストロＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンはＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン
【化１０】
2010532767.tif 000035
のＲ−配置、またはその薬学的に許容される塩またはエステルである
ことを特徴とする光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン。
【請求項２】
前記塩はアミノ酸塩または金属塩であり、
前記アミノ酸塩の構造式が、
【化１１】
2010532767.tif 000036
または
【化１２】
2010532767.tif 000037
であり、ただし、Ｒがアルギニン、リシン、グリシン、アスパラギン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、オルニチン、シスチン、システイン、チロシン、バリン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、２−アミノ−４−メチルチオ酪酸、プロリン、グルタミンやヒドロキシプロリンというアミノ酸であり、
前記金属塩の構造式が、
【化１３】
2010532767.tif 000038
または
【化１４】
2010532767.tif 000039
であり、ただし、Ｒ０がカリウムまたはナトリウムであることを特徴とする請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン。
【請求項３】
前記エステルの構造式は、
【化１５】
2010532767.tif 000040
または
【化１６】
2010532767.tif 000041
であり、ただし、Ｒ１がＣ１−Ｃ５直鎖アルキルであることを特徴とする請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシン。
【請求項４】
Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドを取得し、前記Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＲ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを取得し、前記Ｒ−（＋）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸性化させてＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る工程、
または、
Ｓ−（−）−２−クロロプロピオン酸をクロロスルホキシドと反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドを取得し、前記Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルクロリドをグリシンと弱アルカリ条件下で反応させてＳ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを取得し、前記Ｓ−（−）−２−クロロプロピオニルグリシンを二硫化ナトリウムと反応させ、酸化させてＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを得る工程を含み、
前記二硫化ナトリウムは、硫化ナトリウムと昇華硫黄が反応して得られたものである
ことを特徴とする請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの調製方法。
【請求項５】
急性・慢性肝炎、ウイルス性肝炎、アルコール性肝炎や薬物性肝炎、重金属中毒肝炎、脂肪肝、急性・慢性肝損傷、肝硬変を含む急性・慢性肝疾患、放射線や化学療法による外周白血球減少症、加齢性早期白内障または硝子体混濁を治療する、経口投与製剤または注射投与製剤となる医薬の調製に用いられる、
請求項１に記載の光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはその薬学的に許容される塩やエステルの医薬用途。
【請求項６】
前記医薬は、活性成分としてＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンやＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはこれらの薬学的に許容される塩やエステルを含むとともに、薬学的に許容される助剤を含む
ことを特徴とする請求項５に記載の医薬用途。
【請求項７】
前記製剤は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、チュアブル錠や発泡錠を含む一般経口製剤、分散錠や口腔内崩壊錠を含む即効経口製剤、または徐放錠剤や徐放ペレットを含む徐放製剤からなる経口製剤である
ことを特徴とする請求項５に記載の医薬用途。
【請求項８】
前記製剤は、注射液、注射用濃溶液や注射用無菌粉末を含む注射投与製剤である
ことを特徴とする請求項５に記載の医薬用途。
【請求項９】
前記経口製剤の助剤は充填剤、結合剤または崩壊剤であり、充填剤と崩壊剤の重量含有量がそれぞれ１０〜６０％、２−３０％であり、さらに流動助剤、潤滑剤及び／または界面活性剤を含んでもよく、三者の重量含有量がそれぞれ０．１〜５％、０．１〜５％、０．００５〜１％である
ことを特徴とする請求項６または７に記載の用途。
【請求項１０】
前記注射投与製剤の助剤は、ｐＨ調整剤、等張化剤、酸化防止剤、キレート剤または／及び賦形剤を含む、注射剤の要求に合致する付加剤である、
ことを特徴とする請求項６または８に記載の用途。
【請求項１１】
光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの光学純度を測定する液体クロマトグラフィーにおいて、
（１）クロマトグラフィー条件：クロマトグラフィーカラムとして３，５−ジメチルフェニル−アミノ蟻酸グリコペプチドが固定相であるキラルカラムを採用し、流動相がｎ−へキサン−エタノール−氷酢酸（８０〜９５：５〜２０：０．０１〜１．０）であり、（９０：１０：０．１）が好ましく、検出波長が２００ｎｍ〜２３０ｎｍであり、２１０ｎｍが好ましく、流動相流速が０．２〜３．０ｍｌ／ｍｉｎであり、１．０ｍｌ／ｍｉｎが好ましく、
（２）試料溶液の配置：試料であるＳ−（−）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンまたはＲ−（＋）−Ｎ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンを有機溶剤で濃度０．１〜２０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に調合し、前記有機溶剤がｎ−プロパノール、イソプロパノール、エタノール、ｎ−ブタノール及びメタノールから選ばれるもので、エタノールが好ましく、
（３）測定：溶液を高速液体クロマトグラフィーに注ぎ、クロマトグラフィーチャートを記録して解析を行う
ことを特徴とする液体クロマトグラフィー。
【請求項１２】
高速液体クロマトグラフ質量分析法により投薬動物血漿における医薬濃度を測定することを含む、光学活性のＮ−（α−メルカプトプロピオニル）グリシンの薬物動態学的特性の測定に用いられる方法において、
血漿サンプルの処理方法は、血漿を酸性化させて抽出し、誘導化反応を行うことで、サンプル溶液が調合されることを含み、具体的には、
（１）血漿の酸性化：ここで、酸性化に用いられる酸は塩酸、リン酸、過塩素酸、酢酸などであってもよいが、塩酸が好ましく、ｌｍｏｌ／Ｌの塩酸がより好ましく、酸の量：血漿サンプルの量が（１５０μｌ〜２５０μｌ）：（２ｍｌ〜４ｍｌ）であり、２００μｌ：３ｍｌが好ましく、
（２）酸性化された血漿の抽出：ここで、抽出に用いられる有機溶剤は酢酸エチル、クロロホルム、トリクロロメタン、エチルエーテル、ｎ−へキサンなどであってもよいが、酢酸エチルが好ましく、
（３）抽出物に対する誘導化反応：ここで用いられる誘導化試薬はフェニルイソチオシアナート、２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−ピラングルコースイソチオシアナート（ＧＩＴＣ）溶液などであってもよいが、ＧＩＴＣ溶液が好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣ溶液がより好ましく、２ｍｇ／ｍｌのＧＩＴＣのテトラヒドロフラン溶液が最も好ましく、誘導化温度は１５〜４５℃であり、２５〜３５℃が好ましく、３０℃がより好ましく、誘導化時間は１０〜３０ｍｉｎであり、１５〜２５ｍｉｎが好ましく、２０ｍｉｎがより好ましく、
クロマトグラフィーの条件：
流動相Ａ：メタノール；流動相Ｂ：水溶液、０．０５〜０．２０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．０〜６．０ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含み、好ましくは０．１０  ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムと５．３ｍｍｏｌ／Ｌ蟻酸を含み、ここで、Ａ：Ｂは（４０〜５０：５０〜６０であり、４４：５６が好ましく）、
質量分析条件：
イオン化方式：エレクトロスプレーイオン化；選択イオンモニタリング、湾曲型脱溶媒装置（ＣＤＬ）；温度：２００℃〜３００℃、好ましくは２５０℃；加熱ブロック温度：１５０℃〜２５０℃、好ましくは２００℃；ＣＤＬ電圧：２０Ｖ〜３０Ｖ、好ましくは２５Ｖ；検出電圧：＋１．２ｋＶ〜＋１．８ｋＶ、好ましくは＋１．５０ｋＶ；噴霧ガス流速：１．２Ｌ／ｍｉｎ〜１．８Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは１．５Ｌ／ｍｉｎ；乾燥ガス流速：１．５Ｌ／ｍｉｎ〜２．５Ｌ／ｍｉｎ、好ましくは２．０Ｌ／ｍｉｎ；検出イオン：供試医薬誘導体［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｍ／ｚ）：５７５．２０、内標準Ｎ−イソブタノイル−Ｄ−システイン（ＮＩＤＣ）誘導体［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｍ／ｚ）：６０３．０５；内標準ピークとメインピークとの分離度は中華人民共和国薬典の要求に合致すればよい
ことを特徴とする方法。
【国際調査報告】
2010532767.tif 000042
2010532767.tif 000043
2010532767.tif 000044
2010532767.tif 000045
2010532767.tif 000046
2010532767.tif 000047
2010532767.tif 000048
2010532767.tif 000049