(57)【要約】  本発明は、新規化合物群、当該化合物を含む医薬組成物ならびに異常なまたは脱制御されたキナーゼ活性に関連した疾患または障害、特にｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβキナーゼの異常な活性化が関与する疾患または障害の処置または予防のための、当該化合物の使用方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2010526150.tif 000008
〔式中、
Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂはそれぞれ独立して、水素、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＯＸ１Ｒ８から選択され；ここでＸ１は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；Ｒ８はＣ３−１２シクロアルキルであり；あるいはＲ１とＲ２ａまたはＲ１とＲ２ｂは、Ｒ１およびＲ２ａまたはＲ２ｂが結合している炭素原子と一体となって、フェニルを形成し；Ｒ１０およびＲ１１は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールから独立して選択されるか；あるいはＲ１０とＲ１１は、Ｒ１０およびＲ１１の両方が結合している窒素と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ１−１０ヘテロアリールを形成し；
Ｒ３とＲ４は、Ｒ３およびＲ４が結合している炭素原子と一体となって、フェニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピラジニルおよびピリダジニルから選択される環系を形成し；ここでＲ３とＲ４の組合せの当該環系は、所望によりハロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−Ｘ２ＮＲ５ａＲ５ｂ、−Ｘ２ＮＲ５ａＯＲ５ｂ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ５ａ、−Ｘ２ＯＸ３Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５ａ、−Ｘ２ＯＲ５ａおよび−Ｘ２ＯＸ３ＯＲ５ａから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよく；ここでＸ２およびＸ３は結合およびＣ１−４アルキレンから独立して選択され；そしてＲ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１２シクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択され；
ここでＲ３とＲ４の組合せの前記アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル置換基は、所望によりハロ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、−Ｘ４ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ６およびＸ４Ｒ６から独立して選択される１〜３個の基でさらに置換されていてもよく；ここでＸ４は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；そしてＲ６は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択される〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂが水素、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＯＸ１Ｒ８から独立して選択され；ここでＸ１が結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；Ｒ８がＣ３−１２シクロアルキルであり；あるいはＲ１とＲ２ａが、Ｒ１およびＲ２ａが結合している炭素原子と一体となって、フェニルを形成し；Ｒ１０およびＲ１１が水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールから独立して選択されるか；あるいはＲ１０とＲ１１が、Ｒ１０およびＲ１１の両方が結合している窒素と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ１−１０ヘテロアリールを形成し；
Ｒ３とＲ４が、Ｒ３およびＲ４が結合している炭素原子と一体となって、所望によりハロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−Ｘ２ＮＲ５ａＲ５ｂ、−Ｘ２ＮＲ５ａＯＲ５ｂ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｒ５ａ、−Ｘ２ＯＸ３Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５ａ、−Ｘ２Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ５ａ、−Ｘ２ＯＲ５ａおよび−Ｘ２ＯＸ３ＯＲ５ａから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよいフェニルを形成し；ここで、Ｘ２およびＸ３は結合およびＣ１−４アルキレンから独立して選択され；そしてＲ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１２シクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択され；
ここでＲ３とＲ４の組合せの前記アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル置換基は、所望によりハロ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、−Ｘ４ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ６およびＸ４Ｒ６から独立して選択される１〜３個の基でさらに置換されていてもよく；ここでＸ４は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；そしてＲ６は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択される、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素、ピロリジニル、モルホリノ、メトキシ、２−フルオロ−エトキシおよびメチルから選択され；Ｒ２ａおよびＲ２ｂが水素であり；あるいはＲ１とＲ２ａが、Ｒ１およびＲ２ａが結合している炭素原子と一体となって、フェニルを形成する、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３とＲ４が、Ｒ３およびＲ４が結合している原子と一体となって、ハロ、メチル、エチル、ｔ−ブチル、メチル−スルホニルおよびトリフルオロメチルから独立して選択される１〜３個の基で置換されたフェニルを形成する、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｎ−（２−メチル−５−（６−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５，６−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５−クロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５−エチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（２−メチル−５−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（２−メチル−５−（５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；およびＮ−（５−（５−ブロモ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミンから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
治療上有効量の請求項１に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項７】
薬学的に許容される賦形剤が非経腸投与に適している、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
薬学的に許容される賦形剤が経口投与に適している、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
キナーゼ活性を調節する方法であって、それを必要とする系または対象に、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物を投与して、当該キナーゼ活性を調節することを含む方法。
【請求項１０】
キナーゼがｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、Ｌｙｎ、ＭＡＰＫ１４、ＡＲＧ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＢＲＫ、ＥｐｈＢ、Ｆｍｓ、Ｆｙｎ、ＫＤＲ、ＬＣＫ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｂ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆ、ＳＡＰＫ２、Ｓｒｃ、Ｔｉｅ２およびＴｒｋＢまたはそれらの組合せから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
キナーゼがｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβキナーゼ受容体から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物がｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよび／またはＰＤＧＦＲβキナーゼ受容体と直接接触する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
接触がインビトロまたはインビボで生じる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
キナーゼ活性の調節によって疾患または状態の病理および／または症状が予防、阻害または改善され得る疾患または状態を処置する方法であって、治療上有効量の請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物および所望により治療上有効量の第２薬剤を対象に投与することを含む方法。
【請求項１５】
キナーゼがｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβキナーゼ受容体から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
第２薬剤が気管支拡張剤、抗炎症剤、ロイコトリエンアンタゴニストまたはＩｇＥブロッカーである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物が第２薬剤の前、それと同時またはそれの後に投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
疾患または状態が新生物性障害、アレルギー性障害、炎症性障害、自己免疫障害、マラリア原虫関連疾患、マスト細胞関連疾患、強皮症、移植片対宿主病、メタボリック症候群、ＣＮＳ関連障害、神経変性障害、疼痛状態、薬物乱用障害、プリオン病、がん、心臓疾患、線維症、特発性動脈性高血圧および原発性肺高血圧から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
新生物性障害が肥満細胞症、消化管間質腫瘍、小細胞肺がん、非小細胞性肺がん、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、結直腸がん、胃がん、精巣がん、グリア芽腫および星状細胞腫から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
アレルギー性障害が喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー症候群、じんま疹、血管浮腫、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、結節性紅斑、多形性（multifonne）紅斑、皮膚壊死性細静脈炎、刺虫性皮膚炎症および吸血寄生虫感染症から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
炎症性障害がリウマチ様関節炎、結膜炎、リウマチ様脊椎炎、骨関節炎および痛風性関節炎から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
自己免疫障害が多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、炎症性腸症候群、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ様関節炎、多発性関節炎、局所性または全身性強皮症、全身性エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、皮膚狼瘡、皮膚筋炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸疾患および増殖性糸球体腎炎から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
移植片対宿主病が臓器移植片拒絶である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
臓器移植が腎臓移植、膵臓移植、肝臓移植、心臓移植、肺移植および骨髄移植から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
メタボリック症候群がＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病および肥満から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
ＣＮＳ関連障害が鬱病、気分変調性障害、気分循環性障害、拒食症、過食症、月経前症候群、閉経後症候群、精神機能低下、集中力低下、悲観的不安、激越、自己非難および性欲減退、不安障害、精神障害および統合失調症から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
神経変性障害がアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、プリオン病、運動ニューロン疾患および筋萎縮性側索硬化症から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
疼痛状態が急性疼痛、術後疼痛、慢性疼痛、侵害受容性疼痛、がん疼痛、神経因性疼痛および心因性疼痛症候群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
物質使用障害が薬物中毒、薬物乱用、薬物嗜癖、薬物依存、禁断症候群および過量投与から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３０】
がんが黒色腫、消化管間質腫瘍、結直腸がん、小細胞肺がんおよび他の固形腫瘍から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
線維症がＣ型肝炎、肝臓線維症、心臓線維症、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、肺線維症および骨髄線維症から選択される、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は２００７年５月４日に出願した米国仮出願第60/916,047号の優先権の利益を主張する。この出願の全開示は、その全体においてあらゆる目的のために、参照により本明細書に引用する。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明は、新規化合物群、当該化合物を含む医薬組成物ならびに異常なまたは脱制御されたキナーゼ活性に関連した疾患または障害、特にｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβキナーゼの異常な活性化が関与する疾患または障害の処置または予防のための、当該化合物の使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
背景
プロテインキナーゼは、広範な細胞プロセスの制御および細胞機能の制御の維持に中心的な役割を有する大きなタンパク質群である。これらのキナーゼの部分的な、非限定的な例は：血小板由来増殖因子受容体キナーゼ（ＰＤＧＦ−Ｒ）、神経増殖因子受容体、ｔｒｋＢおよび繊維芽細胞増殖因子受容体、ＦＧＦＲ３、Ｂ−ＲＡＦのような受容体チロシンキナーゼ；Ａｂｌおよびその融合キナーゼであるＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｌｃｋ、Ｂｍｘおよびｃ−ｓｒｃのような非受容体チロシンキナーゼ；ならびにｃ−ＲＡＦ、ｓｇｋ、ＭＡＰキナーゼ（例えばＭＫＫ４、ＭＫＫ６等）およびＳＡＰＫ２αおよびＳＡＰＫ２βのようなセリン／スレオニンキナーゼを含む。異常なキナーゼ活性は、良性および悪性増殖性疾患ならびに免疫系および神経系の不適切な活性化に由来する疾患を含む多様な疾患状態において観察される。
【０００４】
本発明の新規化合物は、１種以上のプロテインキナーゼの活性を阻害し、したがってキナーゼ関連疾患の処置に有用であると予期される。
【発明の概要】
【０００５】
発明の要約
１つの局面において、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2010526150.tif 000002
【０００６】
〔式中、
【０００７】
Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂはそれぞれ独立して、水素、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＯＸ１Ｒ８から選択され；ここでＸ１は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；Ｒ８はＣ３−１２シクロアルキルであり；あるいはＲ１とＲ２ａまたはＲ１とＲ２ｂは、Ｒ１およびＲ２ａまたはＲ２ｂが結合している炭素原子と一体となって、フェニルを形成し（すなわち、マーカッシュ構造のピリジル環は、Ｒ１／Ｒ２ａまたはＲ１／Ｒ２ｂから形成されたフェニル環と縮合して、キノリニルまたはイソキノリニル環系を形成する）；Ｒ１０およびＲ１１は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールから独立して選択されるか；あるいはＲ１０とＲ１１は、Ｒ１０およびＲ１１の両方が結合している窒素と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ１−１０ヘテロアリールを形成し；
【０００８】
Ｒ３とＲ４は、Ｒ３およびＲ４が結合している炭素原子と一体となって、フェニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピラジニルおよびピリダジニルから選択される環系を形成し（例えば、一体となってフェニルを形成するＲ３とＲ４は、マーカッシュ構造のイミダゾール環とのベンゾイミダゾール環系を形成する）；ここでＲ３とＲ４の組合せの当該環系は、所望によりハロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−Ｘ２ＮＲ５ａＲ５ｂ、−Ｘ２ＮＲ５ａＯＲ５ｂ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ５ａ、−Ｘ２ＯＸ３Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５ａ、−Ｘ２ＯＲ５ａおよび−Ｘ２ＯＸ３ＯＲ５ａから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよく；ここでＸ２およびＸ３は結合およびＣ１−４アルキレンから独立して選択され；そしてＲ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１２シクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択され；
【０００９】
ここでＲ３とＲ４の組合せの前記アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル置換基は、所望によりハロ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、−Ｘ４ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ６およびＸ４Ｒ６から独立して選択される１〜３個の基でさらに置換されていてもよく；ここでＸ４は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；そしてＲ６は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択される〕；
の化合物ならびにそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護誘導体、個々の異性体およびそれらの異性体の混合物；ならびに当該化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物（例えば水和物）を提供する。
【００１０】
第２の局面において、本発明は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；またはその薬学的に許容される塩と、１種以上の好適な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
第３の局面において、本発明は、動物におけるキナーゼ活性、特にｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよび／またはＰＤＧＦＲβ活性の阻害によって疾患の病理および／または症状が予防、阻害または改善され得る疾患を処置する方法であって、前記動物に治療上有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体および異性体の混合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００１２】
第４の局面において、本発明は、動物におけるキナーゼ活性、特にｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲαおよび／またはＰＤＧＦＲβ活性が疾患の病理および／または症状に関与する疾患の処置用医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００１３】
第５の局面において、本発明は、式Ｉの化合物ならびにそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護誘導体、個々の異性体およびそれらの異性体の混合物ならびにそれらの薬学的に許容される塩の製造方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
定義
基またはハロ置換アルキルおよびアルコキシのような他の基の構造要素としての「アルキル」は、直鎖または分枝鎖の何れかであってよい。Ｃ１−４−アルコキシはメトキシ、エトキシ等を含む。ハロ置換アルキルはトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル等を含む。
【００１５】
「アリール」は、６〜１０個の環炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環集合体を意味する。例えば、本明細書で使用するとき、Ｃ６−１０アリールはフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルを含むが、これらに限定されない。「アリーレン」は、アリール基に由来する二価基を意味する。
【００１６】
「ヘテロアリール」は、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１５員不飽和環系であり、ここでＲは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である。例えば、Ｃ１−１０ヘテロアリール（「Ｃ１−１０」は環系に１〜１０個の炭素原子が存在することを意味する）は、本明細書において使用するとき、ピラゾリル、ピリジニル、インドリル、チアゾリル、３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−６−イル、フラニル、ベンゾ［ｂ］フラニル、ピロリル、１Ｈ−インダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル、オキサゾリル、ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル、１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−５−イル、キノリニル、１Ｈ−インドリル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラノ［２，３−ｂ］ピリジニルおよび２，３−ジヒドロフロ［２，３−ｂ］ピリジニル、３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−７−イル等を含むが、これらに限定されない。
【００１７】
「シクロアルキル」は、記載した環原子数を含む飽和または部分不飽和、単環式、縮合二環式または架橋多環式環集合体を意味する。例えば、Ｃ３−１０シクロアルキルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等を含む。
【００１８】
「ヘテロシクロアルキル」は、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含む３〜８員飽和または部分不飽和環系であり、ここでＲは水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である。例えば、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルは、本発明の化合物を説明するために本明細書において使用するとき、モルホリノ、ピロリジニル、アゼパニル、ピペリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、ピロリジニル−２−オン、ピペラジニル、ピペリジニロン、１，４−ジオキサ−８−アザ−スピロ［４．５］デシ−８−イル等を含むが、これらに限定されない。
【００１９】
「ハロゲン」（またはハロ）は、好ましくはクロロまたはフルオロを意味するが、ブロモまたはヨードであってもよい。
【００２０】
「キナーゼパネル」は、Ａｂｌ（ヒト）、Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＡＬＫ、ＪＮＫ１α１、ＡＬＫ４、ＫＤＲ、Ａｕｒｏｒａ−Ａ、Ｌｃｋ、Ｂｌｋ、ＭＡＰＫ１、Ｂｍｘ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＢＲＫ、ＭＥＫ１、ＣａＭＫＩＩ（ラット）、Ｍｅｔ、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＣＨＫ２、ＰＡＫ２、ＣＫ１、ＰＤＧＦＲα、ＣＫ２、ＰＤＫ１、ｃ−ｋｉｔ、Ｐｉｍ−２、ｃ−ＲＡＦ、ＰＫＡ（ｈ）、ＣＳＫ、ＰＫＢα、ｃＳｒｃ、ＰＫＣα、ＤＹＲＫ２、Ｐｌｋ３、ＥＧＦＲ、ＲＯＣＫ−Ｉ、Ｆｅｓ、Ｒｏｎ、ＦＧＦＲ３、Ｒｏｓ、Ｆｌｔ３、ＳＡＰＫ２α、Ｆｍｓ、ＳＧＫ、Ｆｙｎ、ＳＩＫ、ＧＳＫ３β、Ｓｙｋ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｔｉｅ−２、ＩＫＫβ、ＴｒＫＢ、ＩＲ、ＷＮＫ３、ＩＲＡＫ４、ＺＡＰ−７０、ＩＴＫ、ＡＭＰＫ（ラット）、ＬＩＭＫ１、Ｒｓｋ２、Ａｘｌ、ＬＫＢ１、ＳＡＰＫ２β、ＢｒＳＫ２、Ｌｙｎ（ｈ）、ＳＡＰＫ３、ＢＴＫ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ３、ＳＡＰＫ４、ＣａＭＫＩＶ、ＭＡＲＫ１、Ｓｎｋ、ＣＤＫ２／サイクリンＡ、ＭＩＮＫ、ＳＲＰＫ１、ＣＤＫ３／サイクリンＥ、ＭＫＫ４（ｍ）、ＴＡＫ１、ＣＤＫ５／ｐ２５、ＭＫＫ６（ｈ）、ＴＢＫ１、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３、ＭＬＣＫ、ＴｒｋＡ、ＣＤＫ７／サイクリンＨ／ＭＡＴ１、ＭＲＣＫβ、ＴＳＳＫ１、ＣＨＫ１、ＭＳＫ１、Ｙｅｓ、ＣＫ１ｄ、ＭＳＴ２、ＺＩＰＫ、ｃ−Ｋｉｔ（Ｄ８１６Ｖ）、ＭｕＳＫ、ＤＡＰＫ２、ＮＥＫ２、ＤＤＲ２、ＮＥＫ６、ＤＭＰＫ、ＰＡＫ４、ＤＲＡＫ１、ＰＡＲ−１Ｂα、ＥｐｈＡ１、ＰＤＧＦＲβ、ＥｐｈＡ２、Ｐｉｍ−１、ＥｐｈＡ５、ＰＫＢβ、ＥｐｈＢ２、ＰＫＣβＩ、ＥｐｈＢ４、ＰＫＣδ、ＦＧＦＲ１、ＰＫＣη、ＦＧＦＲ２、ＰＫＣθ、ＦＧＦＲ４、ＰＫＤ２、Ｆｇｒ、ＰＫＧ１β、Ｆｌｔ１、ＰＲＫ２、Ｈｃｋ、ＰＹＫ２、ＨＩＰＫ２、Ｒｅｔ、ＩＫＫα、ＲＩＰＫ２、ＩＲＲ、ＲＯＣＫ−ＩＩ（ヒト）、ＪＮＫ２α２、Ｒｓｅ、ＪＮＫ３、Ｒｓｋ１（ｈ）、ＰＩ３  Ｋγ、ＰＩ３  ＫδおよびＰＩ３−Ｋβを含むキナーゼの一覧である。本発明の化合物は、該キナーゼパネル（野生型および／またはその変異型）についてスクリーニングされて、該パネルメンバーの少なくとも１種の活性を阻害する。
【００２１】
「処置する」、「処置し」および「処置」は、疾患および／またはそれに付随する症状を緩和または軽減する方法を意味する。
【００２２】
好ましい態様の説明
ｃ−ｋｉｔ遺伝子は受容体チロシンキナーゼをコード化し、そしてマスト細胞生存のための重要な増殖因子であるｃ−ｋｉｔ受容体に対するリガンドは、幹細胞因子（ＳＣＦ）と称される。ｃ−ｋｉｔ受容体タンパク質チロシンキナーゼの活性は正常細胞において制御されており、ｃ−ｋｉｔ遺伝子産物の正常な機能的活性は、正常な造血の維持、メラニン形成、配偶子形成（genetogenesis）ならびにマスト細胞の増殖および分化に必要である。ＳＣＦ結合の非存在下におけるｃ−ｋｉｔキナーゼ活性の構造的活性化を引き起こす変異は、肥満細胞症乃至悪性ヒトがんにわたる多様な疾患に関与している。
【００２３】
１つの態様において、式Ｉの化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは水素、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、−ＮＲ１０Ｒ１１、−ＯＸ１Ｒ８から独立して選択され；ここでＸ１は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；Ｒ８はＣ３−１２シクロアルキルであり；あるいはＲ１とＲ２ａは、Ｒ１およびＲ２ａが結合している炭素原子と一体となって、フェニルを形成し；Ｒ１０およびＲ１１は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールから独立して選択されるか；あるいはＲ１０とＲ１１は、Ｒ１０およびＲ１１の両方が結合している窒素と一体となって、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルまたはＣ１−１０ヘテロアリールを形成し；Ｒ３とＲ４は、Ｒ３およびＲ４が結合している炭素原子と一体となって、所望によりハロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ０−４アルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−Ｘ２ＮＲ５ａＲ５ｂ、−Ｘ２ＮＲ５ａＯＲ５ｂ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｒ５ａ、−Ｘ２ＯＸ３Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｒ５ａ、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５ａ、−Ｘ２Ｓ（Ｏ）０−２Ｒ５ａ、−Ｘ２ＯＲ５ａおよび−Ｘ２ＯＸ３ＯＲ５ａから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよいフェニルを形成し；ここでＸ２およびＸ３は、結合およびＣ１−４アルキレンから独立して選択され；そしてＲ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、Ｃ３−１２シクロアルキル、Ｃ１−１０ヘテロアリールおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択され；
【００２４】
ここでＲ３とＲ４の組合せの前記アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル置換基は、所望によりハロ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ置換−Ｃ１−６アルキル、ハロ置換−Ｃ１−６アルコキシ、−Ｘ４ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｘ４Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ６およびＸ４Ｒ６から独立して選択される１〜３個の基でさらに置換されていてもよく；ここでＸ４は結合およびＣ１−４アルキレンから選択され；そしてＲ６は水素、Ｃ１−６アルキルおよびＣ３−１２ヘテロシクロアルキルから選択される。
【００２５】
他の態様において、Ｒ１は水素、ピロリジニル、モルホリノ、メトキシ、２−フルオロ−エトキシおよびメチルから選択され；Ｒ２ａおよびＲ２ｂは水素であり；あるいはＲ１とＲ２ａは、Ｒ１およびＲ２ａが結合している炭素原子と一体となって、フェニルを形成する（すなわち、マーカッシュ構造のピリジル環は、Ｒ１とＲ２ａから形成されたフェニル環と縮合して、イソキノリニル環系を形成する）。
【００２６】
他の態様において、Ｒ３とＲ４は、Ｒ３およびＲ４が結合している原子と一体となって、ハロ、メチル、エチル、ｔ−ブチル、メチル−スルホニルおよびトリフルオロメチルから独立して選択される１〜３個の基で置換されたフェニルを形成する。
【００２７】
他の態様において、化合物はＮ−（２−メチル−５−（６−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５，６−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５−クロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（５−（５−エチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（２−メチル−５−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；Ｎ−（２−メチル−５−（５−（メチルスルホニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）フェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミン；およびＮ−（５−（５−ブロモ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルフェニル）−４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−アミンから選択される。
【００２８】
１つの態様において、本発明は、ｃ−ｋｉｔおよびＰＤＧＦＲα／βキナーゼ受容体によって調節される疾患または状態を処置する方法であって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２９】
本発明の化合物および組成物を用いて介在することができるｃ−ｋｉｔおよびＰＤＧＦＲα／β介在性疾患または状態の例は、新生物性障害、アレルギー性障害、炎症性障害、自己免疫障害、移植片対宿主病、マラリア原虫関連疾患、マスト細胞関連疾患、メタボリック症候群、ＣＮＳ関連障害、神経変性障害、疼痛状態、薬物乱用障害、プリオン病、がん、心臓疾患、線維症、特発性動脈性高血圧（ＩＰＡＨ）または原発性肺高血圧（ＰＰＨ）を含むが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができるマスト細胞関連疾患の例は、ざ瘡およびプロピオニバクテリウム（Propionibacterium）ざ瘡、進行性骨化性線維形成異常症（ＦＯＰ）、化学兵器または生物兵器（例えば炭疽菌および硫黄マスタード）への曝露によって誘導される炎症および組織破壊、嚢胞性線維症；腎疾患、炎症性筋障害、ＨＩＶ、ＩＩ型糖尿病、脳虚血、肥満細胞症、薬物依存および禁断症状、ＣＮＳ障害、脱毛の予防および低減、細菌感染、間質性膀胱炎、炎症性腸症候群（ＩＢＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、腫瘍新血管形成、自己免疫疾患、炎症性疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、アレルギー性障害（喘息を含む）および骨量の減少を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる新生物性障害の例は、肥満細胞症、消化管間質腫瘍、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、結直腸がん、胃がん、精巣がん、グリア芽腫または星状細胞腫を含むが、これらに限定されない。
【００３２】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができるアレルギー性障害の例は、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー症候群、じんま疹、血管浮腫、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、結節性紅斑、多形性（multifonne）紅斑、皮膚壊死性細静脈炎、刺虫性皮膚炎症または吸血寄生虫感染症を含むが、これらに限定されない。
【００３３】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる炎症性障害の例は、リウマチ様関節炎、結膜炎、リウマチ様脊椎炎、骨関節炎または痛風性関節炎を含むが、これらに限定されない。
【００３４】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる自己免疫障害の例は、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ様関節炎、多発性関節炎、局所性または全身性強皮症、全身性エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、皮膚狼瘡、皮膚筋炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群、結節性汎動脈炎、自己免疫性腸疾患または増殖性糸球体腎炎を含むが、これらに限定されない。
【００３５】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる移植片対宿主病の例は、臓器移植片拒絶、例えば腎臓移植、膵臓移植、肝臓移植、心臓移植、肺移植または骨髄移植を含むが、これらに限定されない。
【００３６】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができるメタボリック症候群の例は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病または肥満を含むが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができるＣＮＳ関連障害の例は、鬱病、気分変調性障害、気分循環性障害、拒食症、過食症、月経前症候群、閉経後症候群、精神機能低下、集中力低下、悲観的不安、激越、自己非難および性欲減退、不安障害、精神障害または統合失調症を含むが、これらに限定されない。
【００３８】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる鬱病状態の例は、双極性鬱病、重度またはメランコリー型鬱病、非定型鬱病、難治性鬱病または季節性鬱病を含むが、これらに限定されない。本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる不安障害の例は、過呼吸および心臓不整脈に関連した不安、恐怖障害、強迫神経症、外傷後ストレス障害、急性ストレス障害および一般の不安障害を含むが、これらに限定されない。本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる精神障害の例は、パニック発作、例えば神経病、妄想性障害、転換性障害、恐怖症、躁病、錯乱、解離性エピソード、例えば解離性健忘症、解離性遁走および解離性自殺行動、自己無視、凶暴症または攻撃的行動、トラウマ、境界性人格および急性精神病、例えば妄想型統合失調症、解体型統合失調症、緊張型統合失調症および鑑別不能型統合失調症を含む統合失調症を含むが、これらに限定されない。
【００３９】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる神経変性障害の例は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、プリオン病、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含むが、これらに限定されない。
【００４０】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる疼痛状態の例は、急性疼痛、術後疼痛、慢性疼痛、侵害受容性疼痛、がん疼痛、神経因性疼痛または心因性疼痛症候群を含むが、これらに限定されない。
【００４１】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる物質使用障害の例は、薬物中毒、薬物乱用、薬物嗜癖、薬物依存、禁断症候群または過量投与を含むが、これらに限定されない。
【００４２】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができるがんの例は、黒色腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、小細胞肺がん、結腸がんまたは他の固形腫瘍を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
本発明の化合物または組成物を用いて処置することができる線維症の例は、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、肝臓線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、肺線維症、強皮症または骨髄線維症を含むが、これらに限定されない。
【００４４】
他の態様において、本発明は、ｃ−ｋｉｔおよび／またはＰＤＧＦＲα／βキナーゼ受容体によって調節される疾患または状態を処置する方法であって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００４５】
薬理および有用性
本発明の化合物はキナーゼの活性を調節し、それ自体がキナーゼが疾患の病理および／または症状に関与する疾患または障害の処置に有用である。本明細書に記載の化合物および組成物によって阻害されるキナーゼならびに本明細書に記載の方法が有用であるキナーゼは、ｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、Ｌｙｎ、ＭＡＰＫ１４（ｐ３８δ）、ＡＲＧ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＢＲＫ、ＥｐｈＢ、Ｆｍｓ、Ｆｙｎ、ＫＤＲ、ＬＣＫ、ｂ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆ、ＳＡＰＫ２、Ｓｒｃ、Ｔｉｅ２およびＴｒｋＢキナーゼを含むが、これらに限定されない。
【００４６】
マスト細胞（ＭＣ）は、大部分が強い炎症促進活性を有する多様なメディエーターを産生する、造血幹細胞の特定の小集団に由来する組織要素である。ＭＣがほとんど全ての体の部位に分布しているため、活性化要素によるメディエーターの過分泌は複数の臓器不全を導き得る。したがってマスト細胞は、多様な疾患において中心的な役割を有する。本発明は、マスト細胞関連疾患を処置する方法であって、かかる処置を必要とするヒトにマスト細胞を除去することができる化合物またはマスト細胞脱顆粒を阻害する化合物を投与することを含む方法に関する。かかる化合物はｃ−ｋｉｔ阻害剤、特に非毒性、選択的および強力なｃ−ｋｉｔ阻害剤から選択することができる。好ましくは、当該阻害剤は、ＩＬ−３の存在下で培養したＩＬ−３依存性細胞の死亡を促進し得ない。
【００４７】
マスト細胞関連疾患は、ざ瘡およびプロピオニバクテリウムざ瘡（ざ瘡はPropionibacterium acnesによって誘導されるものを含むあらゆる形態の慢性皮膚炎症を含む）；極めて稀な、結合組織の遺伝的障害を引き起こす、進行性骨化性線維形成異常症（ＦＯＰ）として知られている疾患；化学兵器または生物兵器（例えば炭疽菌、硫黄マスタード等）への曝露によって引き起こされる炎症および組織破壊の有害な効果；嚢胞性線維症（肺、消化系および生殖器系の遺伝的疾患）；腎疾患、例えば急性腎炎症候群、糸球体腎炎、腎アミロイド症、腎間質性線維症（多様なネフロパシーにおける末期腎疾患を導く最終共通経路）；筋炎および筋ジストロフィーを含む炎症性筋障害；ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ感染マスト細胞の除去がＨＩＶ感染および関連する疾患の処置のための新規な経路であり得る）；ＩＩ型糖尿病、肥満および関連する障害の処置（マスト細胞はアテローム性動脈硬化症、例えば高血糖、高コレステロール血症、高血圧、内皮機能不全、インスリン抵抗性および血管リモデリングの発生に寄与する多くのプロセスを制御する）；脳虚血；肥満細胞症（異なる組織（主として皮膚および骨髄であるが、脾臓、肝臓、リンパ節および胃腸管も含む）におけるマスト細胞の異常な蓄積によって特徴付けられる極めて異種性の疾患群）；薬物依存および禁断症状（特に薬物中毒、薬物乱用、薬物嗜癖、薬物依存、禁断症候群および過量投与）；ＣＮＳ障害（特に鬱病、統合失調症、不安、偏頭痛、記憶喪失、疼痛および神経変性疾患）；発毛促進（脱毛の予防および低減を含む）；細菌感染（特にＦｉｍＨ発現細菌によって引き起こされる感染）；間質性膀胱炎（特に膀胱内膜の細胞間の間質での組織損傷をもたらす膀胱壁の慢性炎症）；炎症性腸疾患（一般に、４種の腸疾患、すなわちクローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎および感染性大腸炎に適用される）；腫瘍新血管形成；自己免疫疾患（特に多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ様関節炎および多発性関節炎、強皮症、エリテマトーデス、皮膚筋炎、天疱瘡、多発性筋炎、脈管炎および移植片対宿主病）；炎症性疾患、例えばリウマチ様関節炎（ＲＡ）；多発性硬化症（ＭＳ）；アレルギー性障害（特に喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、アナフィラキシー症候群、じんま疹、血管浮腫、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、結節性紅斑、多形性紅斑、皮膚壊死性細静脈炎および刺虫性皮膚炎症、気管支喘息）；過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および過敏性腸疾患（ＩＢＤ）；鼻のポリープ症；および骨量の減少を含むが、これらに限定されない。
【００４８】
ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）は極めて一般に存在する増殖因子であり、正常な増殖と病的細胞増殖の両方において重要な役割を有し、例えば発がんおよび血管平滑筋細胞の疾患、例えばアテローム性動脈硬化症および血栓症において見られる。本発明の化合物は、ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）活性を阻害し、したがって神経膠腫、肉腫、前立腺腫瘍および結腸、乳房および卵巣の腫瘍のような腫瘍疾患；過好酸球増加；肺線維症、肝臓線維症および強皮症のような線維症；肺高血圧；ならびに心臓血管疾患の処置に好適であり得る。
【００４９】
本発明の化合物は、アテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症および線維症のような非悪性増殖性障害の処置のためならびに幹細胞の保護のため、例えば５−フルオロウラシルのような化学療法剤の血液毒性効果に対処するためならびに喘息において使用することができる。本発明の化合物は、特にＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻害に応答する疾患の処置のために使用することができる。
【００５０】
本発明の化合物は、移植、例えば同種移植の結果として生じる障害、特に組織拒絶、例えば特に閉塞性細気管支炎（ＯＢ）、すなわち同種肺移植の慢性拒絶の処置において有用な効果を示す。ＯＢを有さない患者とは対照的に、ＯＢを有する患者はしばしば気管支肺胞洗浄液において上昇したＰＤＧＦ濃度を示す。
【００５１】
本発明の化合物はまた、血管平滑筋細胞移動および増殖に関連した疾患（ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ−Ｒもしばしば関与する）、例えば再狭窄およびアテローム性動脈硬化症において有効である。インビトロおよびインビボでの血管平滑筋細胞の増殖および移動に関するこれらの効果およびその結果は、本発明の化合物の投与によって、そしてまたインビボでの機械的外傷後の血管内皮の肥厚に対するその効果を試験することによって示すことができる。
【００５２】
Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達経路は増殖シグナルへの細胞応答を仲介する。Ｒａｓはヒトがんの〜１５％において発がん形態に変異している。Ｒａｆファミリーはセリン／スレオニンプロテインキナーゼに属し、これは３種のメンバーＡ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆおよびｃ−Ｒａｆ（またはＲａｆ−１）を含む。薬剤標的であるＲａｆへの注目は、Ｒａｓの下流エフェクターとしてのＲａｆの関連性に集中している。しかし、最近のデータによると、Ｂ−Ｒａｆが活性化Ｒａｓアレルを要求しないある種の腫瘍の形成において突出した役割を有し得ることが示唆されている（Nature 417, 949 - 954 (01 Jul 2002）。特に、Ｂ−Ｒａｆ変異は悪性黒色腫において高い割合で検出されている。
【００５３】
黒色腫の既存の医学的処置は、特に後期黒色腫について、その有効性が限定されている。本発明の化合物はまた、ｂ−Ｒａｆキナーゼを含む細胞プロセスを阻害し、ヒトのがん、特に黒色腫の処置の新規な治療機会を提供する。
【００５４】
本発明の化合物はまた、ｃ−Ｒａｆキナーゼを含む細胞プロセスを阻害する。ｃ−Ｒａｆは多くのヒトのがんにおいて変異しているｒａｓ発がん遺伝子によって活性化される。したがって、ｃ−Ｒａｆのキナーゼ活性の阻害は、ｒａｓ介在性腫瘍増殖を予防する方法を提供し得る［Campbell, S. L., Oncogene, 17, 1395 (1998)］。
【００５５】
ニューロトロフィン受容体のｔｒｋファミリー（ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ）は、神経組織および非神経組織の生存、増殖および分化を促進する。ＴｒｋＢタンパク質は、神経内分泌系タイプの細胞、小腸および結腸、膵臓のアルファ細胞、リンパ節および脾臓の単球およびマクロファージならびに上皮の顆粒層において発現している（Shibayama and Koizumi, 1996）。ＴｒｋＢタンパク質の発現は、ウィルムス腫瘍および神経芽腫の好ましくない進行に関連している。さらに、ＴｋｒＢはがん様前立腺細胞において発現するが、正常細胞においては発現しない。ｔｒｋ受容体の下流シグナル伝達経路は、Ｓｈｃ、活性化Ｒａｓ、ＥＲＫ−１およびＥＲＫ−２遺伝子を介したＭＡＰＫ活性化カスケードならびにＰＬＣ−ガンマ変換経路を含む（Sugimoto et al., 2001）。
【００５６】
キナーゼｃ−Ｓｒｃは、多様な受容体の発がんシグナルを伝達する。例えば、腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は、悪性細胞の特徴であるが正常細胞には存在しないｃ−ｓｒｃの構成的活性化を導く。他方、ｃ−ｓｒｃ発現欠損マウスは大理石骨病の表現型を示し、破骨細胞機能においてｃ−ｓｒｃが重要な関与をしており、関連する疾病に関係している可能性があることが示されている。
【００５７】
Ｔｅｃファミリーキナーゼ、Ｂｍｘ、非受容体タンパク質−チロシンキナーゼは哺乳類上皮がん細胞の増殖を制御する。
【００５８】
繊維芽増殖因子受容体３は、骨増殖に対する負の制御効果および軟骨細胞増殖の阻害を示した。致死性異形成は繊維芽増殖因子受容体３における異なる変異によって引き起こされ、１つの変異、ＴＤＩＩ  ＦＧＦＲ３は転写因子Ｓｔａｔ１を活性化する構成的チロシンキナーゼ活性を有し、細胞サイクル阻害、増殖停止および異常な骨発達の発現を導く（Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292）。ＦＧＦＲ３はまた、しばしば多発性骨髄腫タイプのがんにおいて発現している。ＦＧＦＲ３活性の阻害剤は、リウマチ様関節炎（ＲＡ）、コラーゲンＩＩ関節炎、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、乾癬、若年性糖尿病、シェーグレン病、甲状腺疾患、サルコイドーシス、自己免疫性ブドウ膜炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、セリアック病および重症筋無力症を含むが、これらに限定されないＴ細胞介在性炎症または自己免疫疾患の処置において有用である。
【００５９】
血清およびグルココルチコイド制御キナーゼ（ＳＧＫ）の活性は、摂動イオンチャネル活性、特にナトリウムおよび／またはカリウムチャネルのものに関連しており、本発明の化合物は高血圧の処置に有用であり得る。
【００６０】
Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078およびP. Lin (1998) PNAS 95, 8829-8834は、乳房腫瘍および黒色腫異種移植片モデルにおいて、アデノウイルス感染またはＴｉｅ−２（Ｔｅｋ）の細胞外ドメインの注射での腫瘍増殖および血管形成の阻害ならびに肺転移の減少を示している。Ｔｉｅ２阻害剤は、新血管形成が不適切に生じている状況（すなわち、糖尿病性網膜症、慢性炎症、乾癬、カポジ肉腫、黄斑変性による慢性新血管形成、リウマチ様関節炎、小児血管腫およびがん）において使用することができる。
【００６１】
ＬｃｋはＴ細胞シグナル伝達に関与する。Ｌｃｋ遺伝子を欠くマウスは、胸腺細胞を発生する能力が低い。Ｔ細胞シグナル伝達の正のアクチベーターとしてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋ阻害剤がリウマチ様関節炎のような自己免疫疾患を処置するために使用し得ることを示唆している。
【００６２】
他のＭＡＰＫに加えて、ＪＮＫはがん、トロンビン誘導性血小板凝集、免疫不全障害、自己免疫疾患、細胞死、アレルギー、骨粗鬆症および心臓疾患に対する細胞応答を介在する役割を有すると考えられている。ＪＮＫ経路の活性化に関連した治療標的は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、リウマチ様関節炎、喘息、骨関節炎、虚血、がんおよび神経変性疾患を含む。肝臓疾患または肝臓虚血エピソードに関連したＪＮＫ活性化の重要性の結果として、本発明の化合物はまた、多様な肝臓障害の処置に有用であり得る。心臓血管疾患、例えば心筋梗塞または鬱血性心不全におけるＪＮＫの役割はまた、ＪＮＫが多様な形態の心臓ストレスに対する異常肥大応答を介在することが示されたと報告されている。ＪＮＫカスケードはまた、ＩＬ−２プロモーターの活性化を含むＴ細胞活性化に関与することが示されている。したがって、ＪＮＫの阻害剤は、変化した病的免疫応答において治療的価値を有し得る。多様ながんにおけるＪＮＫ活性化の役割も確立されており、このことはがんにおけるＪＮＫ阻害剤の潜在的用途を示唆している。例えば、構成的に活性化されたＪＮＫはＨＴＬＶ−１介在性腫瘍形成に関与している［Oncogene 13:135-42 (1996）］。ＪＮＫはカポジ肉腫（ＫＳ）に関与し得る。ＫＳ増殖に関連する他のサイトカイン、例えば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＩＬ−６およびＴＮＦαの他の増殖性効果も、ＪＮＫが介在し得る。さらに、ｐ２１０  ＢＣＲ−ＡＢＬ形質転換細胞におけるｃ−ｊｕｎ遺伝子の制御はＪＮＫの活性に対応しており、このことは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の処置におけるＪＮＫ阻害剤の役割を示唆している［Blood 92:2450-60 (1998)］。
【００６３】
ある種の異常な増殖性状態はｒａｆ発現と関連していると考えられており、したがってｒａｆ発現の阻害に応答すると考えられる。異常に高いレベルのｒａｆタンパク質の発現はまた、形質転換および異常な細胞増殖に関与している。これらの異常な増殖性状態はまた、ｒａｆ発現の阻害に応答性であると考えられている。例えば、ｃ−ｒａｆタンパク質の発現は、全肺がん細胞系の６０％が異常に高いレベルのｃ−ｒａｆ  ｍＲＮＡおよびタンパク質を発現することが報告されているため、異常な細胞増殖に関与すると考えられる。異常な増殖性状態のさらなる例は、過増殖性障害、例えばがん、腫瘍、過形成、肺線維症、血管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症および血管における平滑筋細胞増殖、例えば血管形成術後の狭窄または再狭窄である。ｒａｆが一部である細胞シグナル伝達経路はまた、例えばＴ細胞増殖（Ｔ細胞活性化および増殖）によって特徴付けられる炎症性障害、例えば組織移植片拒絶、内毒素性ショックおよび糸球体腎炎にも関連する。
【００６４】
ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）は、ｃ−ｊｕｎ転写因子の活性化およびｃ−ｊｕｎによって制御される遺伝子の発現をもたらすシグナル伝達経路における最後から２番目の工程を意味するプロテインキナーゼのファミリーである。特に、ｃ−ｊｕｎは遺伝毒性損傷によって損傷したＤＮＡの修復に関与するタンパク質をコード化する遺伝子の転写に関与する。したがって、細胞においてＳＡＰＫ活性を阻害する薬剤は、ＤＮＡ修復を防止して、ＤＮＡ損傷を誘導し、ＤＮＡ合成を阻害し、細胞のアポトーシスを誘導し、または細胞増殖を阻害する薬剤に対して細胞を感受性にする。
【００６５】
マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）は、転写因子、翻訳因子および他の標的分子を多様な細胞外シグナルに応答して活性化する保存的シグナル伝達経路のメンバーである。ＭＡＰＫは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＫＫ）によるＴｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒ配列を有するデュアルリン酸化モチーフでのリン酸化によって活性化される。高等真核生物において、ＭＡＰＫシグナル伝達の生理的な役割は増殖、発がん、発生および分化のような細胞事象に関連している。したがって、これらの経路（特にＭＫＫ４およびＭＫＫ６）を介したシグナル伝達を制御する能力は、ＭＡＰＫシグナル伝達が関与するヒトの疾患、例えば炎症性疾患、自己免疫疾患およびがんの処置および予防的治療の開発を導き得る。
【００６６】
ヒトリボソームＳ６プロテインキナーゼのファミリーは、少なくとも８種のメンバーからなる（ＲＳＫ１、ＲＳＫ２、ＲＳＫ３、ＲＳＫ４、ＭＳＫ１、ＭＳＫ２、ｐ７０Ｓ６Ｋおよびｐ７０Ｓ６  Ｋｂ）。リボソームタンパク質Ｓ６プロテインキナーゼは重要な多向性機能を有し、タンパク質生合成におけるｍＲＮＡ翻訳の制御に深く関与している（Eur. J. Biochem 2000 November; 267(21): 6321-30、Exp Cell Res. Nov. 25, 1999; 253 (1):100-9、Mol Cell Endocrinol. May 25, 1999;151(1-2):65-77）。Ｓ６リボソームタンパク質のｐ７０Ｓ６によるリン酸化はまた、細胞運動性（Immunol. Cell Biol. 2000 August;78(4):447-51）および細胞増殖（Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000;65:101-27）の制御にも関連し、したがって腫瘍転移、免疫応答および組織修復ならびに他の疾患状態に重要であり得る。
【００６７】
ＳＡＰＫ（「ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ」または「ＪＮＫ’ｓ」とも称される）は、ｃ−ｊｕｎ転写因子の活性化およびｃ−ｊｕｎによって制御される遺伝子の発現をもたらすシグナル伝達経路における最後から２番目の工程を意味するプロテインキナーゼのファミリーである。特に、ｃ−ｊｕｎは遺伝毒性損傷によって損傷したＤＮＡの修復に関与するタンパク質をコード化する遺伝子の転写に関与する。したがって、細胞においてＳＡＰＫ活性を阻害する薬剤は、ＤＮＡ修復を防止して、ＤＮＡ損傷を誘導し、ＤＮＡ合成を阻害し、細胞のアポトーシスを誘導し、または細胞増殖を阻害する薬剤に対して細胞を感受性にする。
【００６８】
ＢＴＫは自己免疫疾患および／または炎症性疾患、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、リウマチ様関節炎、多発性脈管炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、重症筋無力症および喘息に関与する。Ｂ細胞活性化におけるＢＴＫの役割のため、ＢＴＫの阻害剤は、自己抗体産生のようなＢ細胞介在性病的活性の阻害剤として有用であり、Ｂ細胞リンパ腫および白血病の処置に有用である。
【００６９】
ＣＨＫ２はセリン／スレオニンプロテインキナーゼのチェックポイントキナーゼファミリーのメンバーであり、環境変異源および内因性活性酸素種によって引き起こされる損傷のようなＤＮＡ損傷の監視に用いられるメカニズムに関与する。結果として、それは腫瘍サプレッサーおよびがん治療の標的と考えられる。
【００７０】
ＣＳＫはがん細胞、特に結腸がんの転移能に影響する。
【００７１】
Ｆｅｓは多様なサイトカインシグナル伝達経路ならびに骨髄細胞の分化に関与する非受容体プロテインチロシンキナーゼである。Ｆｅｓはまた、顆粒球分化機構の重要な成分である。
【００７２】
Ｆｌｔ３受容体チロシンキナーゼ活性は、白血病および骨髄異形成症候群に関与する。ＡＭＬの約２５％において、白血病細胞が細胞表面で構成的に活性形態の自己リン酸化（ｐ）ＦＬＴ３チロシンキナーゼを発現する。ｐ−ＦＬＴ３の活性は、白血病細胞の増殖および生存利益を与える。白血病細胞がｐ−ＦＬＴ３キナーゼ活性を発現する急性白血病を有する患者は、不良な全体の臨床結果を有する。ｐ−ＦＬＴ３キナーゼ活性の阻害は白血病細胞のアポトーシス（プログラムされた細胞死）を誘発させる。
【００７３】
ＩＫＫαおよびＩＫＫβ（１＆２）の阻害剤は、リウマチ様関節炎、移植片拒絶、炎症性腸疾患、骨関節炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アテローム性動脈硬化症、乾癬、多発性硬化症、卒中、全身性エリテマトーデス、アルツハイマー病、脳虚血、外傷性脳損傷、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、くも膜下出血または脳および中枢神経系における炎症性メディエーターの過剰生産に関連した他の疾患もしくは障害を含む疾患の治療剤である。
【００７４】
Ｍｅｔは主要なヒトのがんのほとんどのタイプに関連し、発現はしばしば不良な予後および転移に関連する。Ｍｅｔの阻害剤は、肺がん、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、結腸がん、乳がん、婦人科腫瘍（例えば子宮肉腫、卵管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がんまたは外陰がん）、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん（例えば甲状腺がん、副甲状腺がんまたは副腎がん）、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、慢性もしくは急性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓がんもしくは尿管がん（例えば、腎細胞がん、腎盂がん）、小児悪性腫瘍、中枢神経系の新生物（例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫または下垂体腺腫）、血液腫瘍、例えば急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病等、バレット食道（前悪性症候群）新生物性皮膚疾患、乾癬、菌状息肉腫および良性前立腺肥大、糖尿病関連疾患、例えば糖尿病性網膜症、網膜虚血および網膜新血管形成、肝硬変、心臓血管病、例えばアテローム性動脈硬化症、免疫学的疾患、例えば自己免疫疾患および腎疾患のようながんを含む疾患の治療剤である。好ましくは、疾患は急性骨髄性白血病および結直腸がんのような腫瘍である。
【００７５】
Ｎｉｍａ関連キナーゼ２（Ｎｅｋ２）は、中心体に局在化する有糸分列の開始時に最大の活性を有する細胞サイクル制御プロテインキナーゼである。機能試験は中心体分離および紡錘体形成の制御におけるＮｅｋ２に関係する。Ｎｅｋ２タンパク質は子宮頸部、卵巣、前立腺および特に乳房のものを含む広範なヒトの腫瘍に由来する細胞系において２〜５倍上昇する。
【００７６】
ｐ７０Ｓ６Ｋ介在性疾患または状態は、増殖性障害、例えばがんおよび結節硬化症を含むが、これらに限定されない。
【００７７】
上記にしたがって、本発明はさらに、かかる処置を必要とする対象における上記疾患または障害の何れかを予防または処置する方法であって、当該対象に治療上有効量の（「投与および医薬組成物」参照）の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。上記何れかの使用のために、必要な投与量は投与形態、処置する具体的な状態および所望の効果に基づいて変化する。
【００７８】
投与および医薬組成物
一般に、本発明の化合物は、治療上有効量で、当該技術分薬において既知の何れかの通常の許容される形態で、単剤または１種以上の治療剤との組合せにおいて投与される。治療上有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康、使用する化合物の能力および他の要因に依存して広範に変化し得る。一般に、全身的な１日用量約０．０３〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示１日用量は約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲であり、簡便には、例えば１日４回までの分割用量または徐放形態で投与する。経口投与に好適な単位投与形態は、約１〜５０ｍｇの有効成分を含む。
【００７９】
本発明の化合物は、何れかの常套の経路、特に経腸、例えば経口的に、例えば錠剤またはカプセル剤の形態で、または非経腸的に、例えば注射液または懸濁液の形態で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形態で、または経鼻、吸入もしくは座薬形態で、医薬組成物として投与することができる。遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物と少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物は、常套の方法で、混合、造粒またはコーティング方法によって製造することができる。例えば、経口用組成物は、有効成分とａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまた、ｃ）結合剤、例えばケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；所望により、ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩または発泡性混合物；および／またはｅ）吸着剤、着色剤、風味剤および甘味剤を含む錠剤またはゼラチンカプセル剤であり得る。注射用組成物は、水性等張液または懸濁液であってよく、座薬は脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造することができる。該組成物は滅菌してよくおよび／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用の塩および／またはバッファーを含んでよい。加えて、それらはまた他の治療上有用な物質を含み得る。経皮適用に好適な製剤は、有効量の本発明の化合物と担体を含む。担体は、宿主の皮膚の通過を補助するための吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含んでいてもよい。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、所望により担体と共に化合物を含むリザーバー、所望により化合物を宿主の皮膚に制御されたおよび予め決定された速度で長期間にわたって送達するための速度制御バリア、およびデバイスを皮膚に接着させる手段を含むバンデージの形態である。経皮マトリックス製剤を使用してもよい。例えば皮膚および眼への局所適用に好適な製剤は、好ましくは当該技術分野において周知の水溶液、軟膏、クリームまたはゲルである。これらは可溶化剤、安定化剤、等張性上昇剤、バッファーおよび保存剤を含んでいてもよい。
【００８０】
本発明の化合物は、１種以上の治療剤との組合せにおいて治療上有効量で投与することができる（医薬組合せ剤）。例えば、他の喘息治療薬、例えばステロイドおよびロイコトリエンアンタゴニストとの相乗効果が生じ得る。
【００８１】
例えば、相乗効果は他の免疫調節剤または抗炎症剤と、例えば次のものと組み合わせて使用したときに相乗効果が生じ得る：シクロスポリン、ラパマイシンまたはアスコマイシンまたはその免疫抑制アナログ、例えばシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、ラパマイシンまたは同等の化合物、コルチコステロイド、気管支拡張剤、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ブレキナル、レフルノミド、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制抗体、特に白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８またはそれらのリガンド、あるいは他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４１ｇ。本発明の化合物を他の治療剤との組合せで投与するとき、共投与する化合物の用量は、当然、使用する共薬剤のタイプ、使用する具体的な薬剤、処置する状態等に依存して変化する。
【００８２】
本発明はまた、ａ）本明細書に記載の、遊離形または薬学的に許容される塩形の本発明の化合物である第１の薬剤とｂ）少なくとも１種の共薬剤を含む医薬組合せ剤、例えばキットを提供する。当該キットは投与のための指示書を含んでいてもよい。
【００８３】
「共投与」または「組合せ投与」などの用語は、本明細書において使用するとき、選択した治療薬剤を１人の患者に投与することを意味しており、薬剤を必ずしも同じ投与経路または同時に投与することのない処置レジメンを含むことを意図する。
【００８４】
用語「医薬組合せ剤」は、本明細書において使用するとき、１種以上の有効成分の混合または組合せによって得られる製品を意味しており、有効成分の固定された組合せ剤および固定されていない組合せ剤のいずれもを含む。用語「固定された組合せ剤」は、有効成分、例えば式Ｉの化合物と共薬剤が共に、同時に、１個の物または投与形で患者に投与されることを意味する。用語「固定されていない組合せ剤」は、有効成分、例えば式Ｉの化合物と共薬剤を、いずれも１人の患者に、別々の物として、同時に、同時一体的にまたは逐次的に、特に時間の限定なく、かかる投与によって患者の体内で２種の化合物の治療上有効レベルが得られるように投与することを意味する。後者はまた、カクテルセラピー、例えば３種以上の有効成分の投与に適用する。
【００８５】
本発明の化合物の製造方法
本発明はまた、本発明の化合物の製造方法を含む。記載の反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基は、これらが最終生成物において反応への望ましくない参加を避けることが望まれるとき、保護する必要があり得る。標準的な技術に従って、常套の保護基を用いることができる。例えばT.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991参照。
【００８６】
式Ｉの化合物は、次の反応スキームＩの通りに進めて製造することができる：
反応スキームＩ
【化２】
2010526150.tif 000003
【００８７】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは発明の要約に記載のとおりであり、反応スキームＩはＲ３とＲ４がそれらの両方が結合している原子と一体となってフェニルを形成する場合を示している。このフェニルはまた、置換が示されない。この反応スキームは説明のみを目的としており、本発明の範囲を限定しない。上記反応スキームＩに示した式Ｉは、発明の要約の式Ｉと均等である〕。式Ｉの化合物は、式２の化合物と式３の化合物を好適な溶媒（例えば１−プロパンリン酸環状無水物およびＮＭＰ等）中で反応させて製造することができる。該反応は、約０℃〜約１５０℃の温度範囲で実施し、完了に２４時間まで要し得る。
【００８８】
式Ｉの化合物の合成の詳細な例示は、下記実施例に見出すことができる。
【００８９】
本発明の化合物を製造するための付加的な方法
本発明の化合物は、遊離塩基形の化合物と薬学的に許容される無機または有機酸を反応させて、薬学的に許容される酸付加塩として製造することができる。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、遊離酸形の化合物と薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させて製造することができる。あるいは、塩形の本発明の化合物は、塩形の出発物質または中間体を用いて製造することができる。
【００９０】
遊離酸形または遊離塩基形の本発明の化合物は、対応する塩基塩または酸塩形からそれぞれ製造することができる。例えば、酸塩形の本発明の化合物は、好適な塩基（例えば水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウム等）で処理して対応する遊離塩基に変換してもよい。塩基塩形の本発明の化合物は、好適な酸（例えば塩酸等）で処理して対応する遊離酸に変換してもよい。
【００９１】
非酸化形の本発明の化合物は、還元剤（例えば硫黄、硫黄ジオキシド、トリフェニルホスフィン、ホウ化水素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭素化リン等）で、好適な不活性有機溶媒（例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサン等）中、０〜８０℃で処理して、本発明の化合物のＮ−オキシドから製造することができる。
【００９２】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法によって製造することができる（さらに詳しくは、例えばSaulnier et al., (1994)、Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照されたい）。例えば、適切なプロドラッグは、本発明の化合物を好適なカルバミル化剤（例えば１，１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカルボネート等）と反応させて製造することができる。
【００９３】
本発明の化合物の保護誘導体は、当業者に既知の方法によって製造することができる。保護基の作成とその除去に適用される技術の詳細な説明は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。
【００９４】
本発明の化合物は、溶媒和物（例えば水和物）として、本発明の方法によって簡便に製造または形成することができる。本発明の化合物の水和物は、ジオキサン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を用いて、水性／有機溶媒混合物から再結晶して簡便に製造することができる。
【００９５】
本化合物のラセミ混合物を光学活性分割剤と反応させ、ジアステレオ異性化合物のペアを形成し、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、その個々の立体異性体として本発明の化合物を製造できる。エナンチオマーの分割は、本発明の化合物の共有結合性ジアステレオマー誘導体を使用して行ってもよいが、解離可能な複合体が好ましい（例えば、結晶性ジアステレオマー塩）。ジアステレオマーは異なる物理的性質（例えば、融点、沸点、溶解性、反応性等）を有し、これらの差を利用して容易に分割し得る。ジアステレオマーは、クロマトグラフィーにより、または溶解度の差に基づく分離／分割技術により分離し得る。光学的に純粋なエナンチオマーを、次いで、ラセミ化をもたらさないであろう任意の実際的手段により、分割剤と共に回収する。化合物の立体異性体のそのラセミ混合物からの分割に適用可能な技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【００９６】
要約すると、式Ｉの化合物は、次のものを含む方法により製造できる：
（ａ）反応スキームＩのもの、そして
（ｂ）所望により本発明の化合物の薬学的に許容される塩への変換；
（ｃ）所望により本発明の化合物の塩形態の非塩形態への変換；
（ｄ）所望により本発明の化合物の酸化されていない形の薬学的に許容されるＮ−オキシドへの変換；
（ｅ）所望により本発明の化合物のＮ−オキシド形態のその酸化されていない形への変換；
（ｆ）所望により本発明の化合物の個々の異性体の異性体混合物からの分離；
（ｇ）所望により誘導体化されていない本発明の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体への変換；および
（ｈ）所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体の非誘導体化形態への変換。
【００９７】
出発物質の製造が特に記載されていない限り、その化合物は既知であるか、または、当分野で既知の方法に準じて、または以下の実施例に開示のとおり、製造し得る。
【００９８】
当業者は、上記の変換は本発明の化合物の製造の単なる代表例であって、他の既知の方法を同様に使用してよいことを認識しよう。
【実施例】
【００９９】
実施例
本発明を、本発明の式Ｉの化合物の製造を説明する下記実施例によってさらに例示するが、限定するものではない。
【０１００】
３−（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）−４−メチル安息香酸  ５の合成
【化３】
2010526150.tif 000004
【０１０１】
３−アミノ−４−メチル−安息香酸メチルエステル  １（０．６ｍｏｌ）のｎＢｕＯＨ（５０ｍＬ）溶液に、７０％の硝酸（２．７ｍＬ）を加えて硝酸塩を生じさせ、次いでシアナミド水溶液（５０重量％、７ｍＬ、０．０９ｍｏｌ）と共に濃縮する。得られた混合物を還流温度で１６時間加熱し、室温に冷却し、次いでジエチルエーテル（１００ｍＬ）を加える。０℃で３０分間冷却した後、濾過し、１：１＝メタノール：ジエチルエーテル（１２０ｍＬ）で洗浄して、３−グアニジノ−４−メチル−安息香酸メチルエステル硝酸塩  ２を得る。
【０１０２】
ｎＢｕＯＨ（４０ｍＬ）中の３−グアニジノ−４−メチル−安息香酸メチルエステル硝酸塩  ２（０．０２ｍｏｌ）に３（０．０２ｍｏｌ）と水酸化ナトリウムフレーク（０．０２ｍｏｌ）を加える。得られた混合物を還流温度で１２時間加熱して、エステル  ４を得る。１ＮのＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ）をエステル４のｎＢｕＯＨ溶液に加え、還流温度で３０分間加熱する。ｒｔに冷却した後、１ＮのＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）をゆっくりと、該混合物に撹拌下で加える。濾過して生成物を回収し、水で洗浄して酸  ５を得る。1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 9.28 (d, J =1.8 Hz, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.7 (dd, J = 4.7, 1.5 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.46 (dt, J = 8, 1.8 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 7.7, 4.7 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 5.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.9 Hz , 1H), 3.08 (s, 3H).  MS (m/z) (M+1)+: 307.2.
【０１０３】
次の方法で反応物  ３を得ることができる。３−アセチルピリジン（２．４７ｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２４０ｍＬ）の混合物を還流温度で１６時間加熱する。真空下で溶媒を除去し、ヘキサン（１００ｍＬ）を残渣に加えると、固体が結晶化する。塩化メチレン−ヘキサンから固体を再結晶して、３−ジメチルアミノ−１−（３−ピリジル）−２−プロペン−１−オン  ３を得る。1H NMR (400MHz, d-クロロホルム) δ 9.08 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.66 (m, 1H), 8.20 (m, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.37 (m, 1H), 5.68 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.97 (s, 3H).
【０１０４】
［２−メチル−５−（６−トリフルオロメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−フェニル］−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−アミン  Ｂ１
【化４】
2010526150.tif 000005
【０１０５】
酸５（２２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、４−トリフルオロメチル−ベンゼン−１，２−ジアミン（１２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、１−プロパンリン酸環状無水物（５０重量％のＥｔＯＡｃ溶液、０．５ｍＬ）およびＮＭＰ（０．１ｍＬ）をマイクロウェーブオーブン中、１５０℃で２５分間加熱する。分取ＬＣ／ＭＳで該混合物を精製して、生成物  Ｂ１を得る。1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 9.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 9.50 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.22 (dd, J = 4.9, 1.6 Hz, 1H), 9.18 (dt, J = 8, 1.8 Hz, 1H), 9.06 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.4 (dd, J = 7.9, 1.8 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8, 4.9 Hz, 1H), 8.01 (m, 2H), 7.94 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 3.0 (s, 1H), 2.95 (s, 3H).  MS (m/z) (M+1)+: 447.1.
【０１０６】
Ｂ２〜Ｂ８の製造には同様の方法を用いた。
【０１０７】
［５−（５，６−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−２−メチル−フェニル］−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−アミン  Ｂ２：1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 9.78 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 9.29 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 9.22 (dd, J = 4.8, 1.4 Hz, 1H), 9.0 (m, 2H), 8.41 (dd, J = 8, 1.9 Hz, 1H), 8.0 (m, 3H), 7.93 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 2.89 (s, 3H), 2.84 (s, 1H), 2.79 (s, 6H).  MS (m/z) (M+1)+: 407.2.
【０１０８】
上記実施例に記載の方法（中間体および最終化合物）を反復し、適切な出発物質を用いて、下記表１に定義の式Ｉの化合物を得る。
表１
【表１】
2010526150.tif 000006
【表２】
2010526150.tif 000007
【０１０９】
アッセイ
本発明の化合物の野生型Ｂａ／Ｆ３細胞ならびにＴｅｌ  ｃ−ｋｉｔキナーゼおよびＴｅｌ  ＰＤＧＦＲ融合チロシンキナーゼで形質転換したＢａ／Ｆ３細胞の増殖の選択的阻害能を測定するためにアッセイする。さらに、本発明の化合物はＭｏ７ｅ細胞のＳＣＦ依存増殖を選択的に阻害する。さらに、本化合物のＡｂｌ、ＡＲＧ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＢＲＫ、ＥｐｈＢ、Ｆｍｓ、Ｆｙｎ、ＫＤＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ＬＣＫ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ｂ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆ、ＳＡＰＫ２、Ｓｒｃ、Ｔｉｅ２およびＴｒｋＢキナーゼ阻害能を測定するためにアッセイする。
【０１１０】
増殖アッセイ：ＢａＦ３ライブラリー−Bright glo 読み取りプロトコル
化合物のｗｔ  Ｂａ／Ｆ３細胞およびＴｅｌ融合チロシンキナーゼで形質転換したＢａ／Ｆ３細胞の増殖の阻害能を試験する。非形質転換Ｂａ／Ｆ３細胞は、組換えＩＬ３を含む培地中で維持する。３８４ウェルＴＣプレートに細胞を５０μｌの培地中５，０００細胞／ウェルで播種し、０．０６ｎＭ〜１０μＭの試験化合物を加える。次いで細胞を３７℃、５％のＣＯ２で４８時間インキュベートする。細胞をインキュベートした後、製造業者の指示書に従って２５μＬのBRIGHT GLO（登録商標）（Promega）を各ウェルに加え、Analyst GT - ルミネッセンスモード−５００００積分時間を用いてＲＬＵでプレートを読み取る。５０％阻害に必要な化合物の濃度であるＩＣ５０値を用量応答曲線から決定する。
【０１１１】
Ｍｏ７ｅアッセイ
ｃ−ｋｉｔを内因的に発現するＭｏ７ｅ細胞を用いて、９６ウェルフォーマットで本明細書に記載の化合物をＳＣＦ依存増殖の阻害について試験する。簡潔には、ヒト組換えＳＣＦで刺激したＭｏ７ｅ細胞の抗増殖活性について、２倍連続希釈した試験化合物（Ｃｍａｘ＝１０μＭ）を評価する。３７℃で４８時間インキュベーションした後、PromegaのＭＴＴ比色分析アッセイを用いて細胞生存率を測定する。
【０１１２】
ｃ−ｋｉｔ  ＨＴＲＦプロトコル
２倍濃度のｃ−ｋｉｔ酵素混合物（enzyme mix）、２５ｎｇのｃ−ｋｉｔ（５ｎｇ／μＬ）および２μＭのビオチン−ＥＥＥＰＱＹＥＥＩＰＩＹＬＥＬＬＰ−ＮＨ２ペプチドのキナーゼバッファー（２０ｍＭのＴｒｉｓ  ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のＢＳＡ、０．１％のＢｒｉｊ３５、１ｍＭのＤＴＴ、５％のグリセロール、０．０５ｍＭのＮａ３ＶＯ４）アリコート（５μＬ）を３８４プロキシプレート（Packard）の各ウェルに加える。バックグラウンドレベルを確認するため、プロキシプレートの下２列のウェルは、それぞれ５μＬのｃ−ｋｉｔ酵素混合物を含み、ｃ−ｋｉｔを含まない。本発明の化合物を各ウェルに加え、プレートを室温で３０分間インキュベートする。キナーゼバッファー（５μＬ）中２倍のＡＴＰ（４０μＭ）を各ウェルに加え、プレートを室温で３時間インキュベートする。検出混合物（５０％のＫＦ、４０％のキナーゼバッファー、１０％のＥＤＴＡ、１：１００希釈したＭａｂ  ＰＴ６６−Ｋ（カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）および１：１００希釈したストレプトアビジン−ＸＬ（カタログ番号６１１ＳＡＸＬＢ）０（１０μＬ）を各ウェルに加え、さらにプレートを室温で１〜２時間インキュベートする。ＨＴＲＦシグナルを検出器で読み取る。
【０１１３】
ヒトＴＧ−ＨＡ−ＶＳＭＣ増殖アッセイ
１０％のＦＢＳを補ったＤＭＥＭ中で、ヒトＴＧ−ＨＡ−ＶＳＭＣ細胞（ＡＴＣＣ）を８０〜９０％コンフルエンスまで増殖した後、１％のＦＢＳと３０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＰＤＧＦ−ＢＢを補ったＤＭＡＭ中に６ｅ４細胞／ｍＬで再懸濁する。次いで３８４ウェルプレートに５０μＬ／ウェルで細胞を等分し、３７℃で２０時間インキュベートし、次いで３７℃で４８時間、１００倍の化合物０．５μＬで処理する。処理後、２５ｕＬのCellTiter-Gloを各ウェルに１５分間加え、次いでプレートをCLIPR（Molecular Devices）で読み取る。
【０１１４】
ＰＤＧＦＲα＆β  Lanceアッセイプロトコル
２倍濃度のＰＤＧＦＲβペプチドとＡＴＰ混合物（４μＭのビオチン−βＡ−βＡ−βＡ−ＡＥＥＥＥＹＶＦＩＥＡＫＫＫペプチド、アッセイバッファー（２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、５４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０、１ｍＭのＤＴＴ、１０％のグリセロール、５０μＭのＮａ３ＶＯ４）中２０μＭのＡＴＰ）のアリコート（２．５μＬ）を３８４プロキシプレート（Packard）の各ウェルに加える。該プレートを遠心分離し、本発明の化合物（５０ｎＬ）をピンツールディスペンサーを介して各ウェルに加える。２倍濃度の酵素混合物（アッセイバッファー中、４．５ｎｇ／μＬのＰＤＧＦＲα（カタログ番号ＰＶ４１１７）または１．５ｎｇ／μＬのＰＤＧＦＲβ（カタログ番号ＰＶ３５９１））またはＰＤＧＦＲα／β酵素を含まないアッセイバッファーのみを、各ウェルに加える（２．５μＬ）。プレートを室温で１．５時間インキュベートする。検出混合物（５μＬ；５０％  １ＭのＫＦ、４０％のキナーゼバッファー、１０％のＥＤＴＡ、１：１００希釈したＭａｂ  ＰＴ６６−Ｋ（カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）および１：１００希釈したストレプトアビジン−ＸＬ（カタログ番号６１１ＳＡＸＬＢ））を各ウェルに加え、プロキシプレートを室温で１時間インキュベートした後、検出器でＨＴＲＦシグナルを読み取る。
【０１１５】
Ｂａ／Ｆ３  ＦＬ  ＦＬＴ３増殖アッセイ
使用するマウス細胞系は、全長ＦＬＴ３構造を過剰発現しているＢａ／Ｆ３マウスプロＢ細胞系である。ペニシリン  ５０μｇ／ｍＬ、ストレプトマイシン  ５０μｇ／ｍＬおよびＬ−グルタミン  ２００ｍＭを補い、マウス組換えＩＬ３を加えたＲＰＭＩ１６４０／１０％胎児ウシ血清（ＲＰＭＩ／ＦＢＳ）中でこれらの細胞を維持する。Ｂａ／Ｆ３全長ＦＬＴ３細胞はＩＬ３飢餓を１６時間被り、次いで３８４ウェルＴＣプレート中、２５μＬの培地中５，０００細胞／ウェルで播種し、試験化合物０．０６ｎＭ〜１０μＭを加える。化合物添加後、ＦＬＴ３リガンドまたは細胞傷害性コントロールとしてＩＬ３を２５μｌ／ウェルの培地に適切な濃度で加える。次いで、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートする。細胞をインキュベートした後、製造業者の指示書に従って２５μＬのBRIGHT GLO（登録商標）（Promega）を各ウェルに加え、Analyst GT - ルミネッセンスモード−５００００インテグレーション時間を用いてＲＬＵでプレートを読み取る。
【０１１６】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ依存性増殖の阻害（ハイスループット法）
使用するマウス細胞系はＢＣＲ−Ａｂｌ  ｃＤＮＡ（３２Ｄ−ｐ２１０）で形質転換した３２Ｄ造血前駆細胞系である。ペニシリン  ５０μｇ／ｍＬ、ストレプトマイシン  ５０μｇ／ｍＬおよびＬ−グルタミン  ２００ｍＭを補ったＲＰＭＩ／１０％胎児ウシ血清（ＲＰＭＩ／ＦＣＳ）中でこれらの細胞を維持する。ＩＬ３源として培地を調節した１５％ＷＥＨＩ調節培地を加えて、同様に非形質転換３２Ｄ細胞を維持する。
【０１１７】
５０μＬの３２Ｄまたは３２Ｄ−ｐ２１０細胞懸濁液をＧｒｅｉｎｅｒ３８４ウェルマイクロプレート（黒色）に密度５０００細胞／ウェルで播種する。試験化合物５０ｎＬ（ＤＭＳＯ原液中１ｍＭ）を各ウェルに加える（ＳＴＩ５７１はポジティブコントロールとして含まれる）。該細胞を３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートする。各ウェルに１０μＬの６０％Alamar Blue溶液（Tek diagnostics）を加え、細胞をさらに２４時間インキュベートする。Acquest（商標）システム（Molecular Devices）を用いて蛍光強度（励起波長５３０ｎｍ、放出波長５８０ｎｍ）を定量する。
【０１１８】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ依存増殖の阻害
９６ウェルＴＣプレートに密度１５，０００細胞／ウェルで３２Ｄ−ｐ２１０細胞を播種する。試験化合物の２倍連続希釈（Ｃｍａｘは４０μＭである）５０μＬを各ウェルに加える（ＳＴＩ５７１はポジティブコントロールとして含まれる）。３７℃、５％ＣＯ２で細胞を４８時間インキュベートした後、１５μＬのＭＴＴ（Promega）を各ウェルに加え、細胞をさらに５時間インキュベートする。５７０ｎｍの吸光度を分光光度計で測定し、５０％阻害に必要な化合物の濃度であるＩＣ５０値を用量応答曲線から決定する。
【０１１９】
細胞サイクル分布に対する効果
６ウェルＴＣプレートに３２Ｄ細胞および３２Ｄ−ｐ２１０細胞を５ｍＬの培地中２．５×１０６細胞／ウェルで播種し、試験化合物を１または１０μＭで加える（ＳＴＩ５７１はコントロールとして含まれる）。次いで３７℃、５％ＣＯ２で該細胞を２４時間または４８時間インキュベートする。細胞懸濁液２ｍＬをＰＢＳで洗浄し、７０％のＥｔＯＨで１時間固定し、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＲＮａｓｅ  Ａで３０分間処理する。ヨウ化プロピジウム（Ｃｆ＝１０μｇ／ｍｌ）を加え、FACScalibur（商標）システム（BD Biosciences）によるフローサイトメトリーによって蛍光強度を定量する。本発明の試験化合物は、３２Ｄ−ｐ２１０細胞に対するアポトーシス効果を示すが、３２Ｄ親細胞のアポトーシスは誘導しない。
【０１２０】
細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化に対する効果
ｃ−ａｂｌ特異的捕捉抗体と抗ホスホチロシン抗体を用いた捕捉ＥｌｉｓａによってＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を定量する。９６ウェルＴＣプレートに３２Ｄ−ｐ２１０細胞を５０μＬの培地中２×１０５細胞／ウェルで播種する。試験化合物の２倍連続希釈（Ｃｍａｘは１０μＭである）５０μＬを各ウェルに加える（ＳＴＩ５７１はポジティブコントロールとして含まれる）。３７℃、５％ＣＯ２で細胞を９０分間インキュベートする。次いで、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む溶解バッファー（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡおよび１％のＮＰ４０）１５０μＬで氷上で細胞を１時間処理する。抗ａｂｌ特異的抗体で予めコーティングし、ブロックした９６ウェル光学プレートに５０μＬの細胞溶解物を加える。該プレートを４℃で４時間インキュベートする。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０バッファーで洗浄した後、５０μＬのアルカリホスファターゼ複合抗ホスホチロシン抗体を加え、該プレートを４℃でさらに一夜インキュベートする。ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０バッファーで洗浄した後、９０μＬの蛍光基質を加え、Acquest（商標）（Molecular Devices）を用いて蛍光を定量する。ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞の増殖を阻害する本発明の試験化合物は、用量依存的に細胞性ＢＣＲ−Ａｂｌ自己リン酸化を阻害する。
【０１２１】
変異形態のＢｃｒ  ａｂｌを発現する細胞の増殖に対する効果
野生型またはＳＴＩ５７１に対する耐性を与えるか、もしくは感受性を低下させる変異形態のＢＣＲ−Ａｂｌ（Ｇ２５０Ｅ、Ｅ２５５Ｖ、Ｔ３１５Ｉ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３５１Ｔ）を発現するＢａ／Ｆ３細胞に対する本発明の化合物の抗増殖性効果を試験する。変異ＢＣＲ−Ａｂｌ発現細胞および非形質転換細胞に対するこれらの化合物の抗増殖性効果を、（ＩＬ３を含まない培地中）１０、３．３、１．１および０．３７μＭで上記の通り試験する。非形質転換細胞に対して毒性を示さない化合物のＩＣ５０値を、上記の通りに得た用量応答曲線から決定した。
【０１２２】
ＦＧＦＲ３（酵素アッセイ）
キナーゼバッファー（３０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５ｍＭのＭｇＣｌ２、４．５ｍＭのＭｎＣｌ２、１５μＭのＮａ３ＶＯ４および５０μｇ／ｍＬのＢＳＡ）および基質（５μｇ／ｍＬのビオチン−ポリ−ＥＹ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）（CIS-US, Inc.）および３μＭのＡＴＰ）中の酵素０．２５μｇ／ｍＬを含む最終体積１０μＬで、精製ＦＧＦＲ３（Upstate）によるキナーゼ活性アッセイを実施する。２種の溶液を調製する：第１にキナーゼバッファー中のＦＧＦＲ３酵素を含む第１溶液５μＬを３８４フォーマットProxiPlate（登録商標）（Perkin-Elmer）に分注し、次いでＤＭＳＯに溶解させた化合物５０ｎＬを加え、キナーゼバッファー中に基質（ポリ−ＥＹ）およびＡＴＰを含む第２溶液５μＬを各ウェルに加えた。室温で１時間反応をインキュベートし、１０μＬのＨＴＲＦ検出混合物（３０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、０．５ＭのＫＦ、５０ｍＭのＥＴＤＡ、０．２ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、１５μｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＸＬ６６５（CIS-US, Inc.）および１５０ｎｇ／ｍＬのクリプテート複合抗ホスホチロシン抗体（CIS-US, Inc.）を含む）を加えて停止させる。室温で１時間インキュベートしてストレプトアビジンとビオチンを相互作用させた後、Analyst GT（Molecular Devices Corp.）で時間分解蛍光シグナルを読み取る。１２種の濃度（５０μＭから０．２８ｎＭの１：３希釈）での各化合物の阻害率の直線回帰分析によってＩＣ５０値を計算する。このアッセイにおいて、本発明の化合物は１０ｎＭ〜２μＭのＩＣ５０を有する。
【０１２３】
ＦＧＦＲ３（細胞アッセイ）
ＦＧＦＲ３細胞性キナーゼ活性に依存する形質転換されたＢａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３細胞増殖に対する本発明の化合物の阻害能を試験する。Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３は、培養培地として１０％の胎児ウシ血清を補ったＲＰＭＩ１６４０の懸濁液中で８００，０００細胞／ｍＬまで培養する。３８４ウェルフォーマットプレートに細胞を、培養培地５０μＬ中５０００細胞／ウェルで分注する。本発明の化合物はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、希釈する。１２点の１：３連続希釈物をＤＭＳＯで調製し、典型的には１０ｍＭ〜０．０５μＭの濃度勾配を作製する。５０ｎＬの希釈した化合物と共に細胞を加え、細胞培養インキュベーター中で４８時間インキュベートする。増殖細胞によって創出される還元環境をモニターするために使用し得るAlamarBlue（登録商標）（TREK Diagnostic Systems）を細胞に、最終濃度１０％で加える。細胞培養インキュベーター中、３７℃でさらに４時間インキュベートしたのち、還元されたAlamarBlue（登録商標）（励起波長５３０ｎｍ、放出波長５８０ｎｍ）由来の蛍光シグナルをAnalyst GT（Molecular Devices Corp.）で定量する。１２種の濃度での各化合物の阻害率の直線回帰分析によってＩＣ５０値を計算する。
【０１２４】
ｂ−Ｒａｆ酵素アッセイ
本発明の化合物のｂ−Ｒａｆ活性阻害能について試験する。黒色壁透明底の３８４ウェルMaxiSorpプレート（ＮＵＮＣ）でアッセイを実施する。基質ＩκＢαをＤＰＢＳ（１：７５０）で希釈し、各ウェルに１５μＬを加える。該プレートを４℃で一夜インキュベートし、ＥＭＢＬＡプレート洗浄機を用いてＴＢＳＴ（２５ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。室温で３時間、Superblock（１５μＬ／ウェル）でプレートをブロックし、ＴＢＳＴで３回洗浄し、パット乾燥させる。２０μＭのＡＴＰ（１０μＬ）を含むアッセイバッファー、次いで１００ｎＬまたは５００ｎＬの化合物を各ウェルに加える。ｂ−Ｒａｆをアッセイバッファー（１μＬを２５μＬに）で希釈し、１０μＬの希釈したｂ−Ｒａｆを各ウェルに加える（０．４μｇ／ウェル）。該プレートを室温で２．５時間インキュベートする。ＴＢＳＴで６回洗浄してキナーゼ反応を停止させる。ホスホ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２／３６）抗体をSuperblock（１：１０，０００）で希釈し、各ウェルに１５μＬを加える。該プレートを４℃で一夜インキュベートし、ＴＢＳＴで６回洗浄する。ＡＰ複合ヤギ抗マウスＩｇＧをSuperblock（１：１，５００）で希釈し、各ウェルに１５μＬを加える。該プレートを室温で１時間インキュベートし、ＴＢＳＴで６回洗浄する。１５μＬの蛍光Attophos AP基質（Promega）を各ウェルに加え、該プレートを室温で１５分間インキュベートする。AcquestまたはAnalyst GTで蛍光強度プログラム（励起波長４５５ｎｍ、放出波長５８０ｎｍ）を用いてプレートを読み取る。
【０１２５】
ｂ−Ｒａｆ細胞アッセイ
本発明の化合物のＭＥＫリン酸化阻害能について、Ａ３７５細胞において試験する。Ａ３７５細胞系（ＡＴＣＣ）はヒト黒色腫患者に由来し、Ｂ−Ｒａｆ遺伝子にＶ５９９Ｅ変異を有する。Ｂ−Ｒａｆの変異によってリン酸化ＭＥＫのレベルが上昇する。サブコンフルエント乃至コンフルエントなＡ３７５細胞を、無血清培地中、３７℃で２時間化合物と共にインキュベートする。次いで細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄し、１％のTriton X100を含む溶解バッファーで溶解させる。遠心分離後、上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、次いでニトロセルロース膜に移す。該膜を抗ホスホＭＥＫ抗体（ｓｅｒ２１７／２２１）（Cell Signaling）によるウェスタンブロッティングに供する。ニトロセルロース膜のホスホＭＥＫバンドの密度によってリン酸化ＭＥＫの量をモニターする。
【０１２６】
Upstate Kinase Profiler（商標）−放射性酵素フィルター結合アッセイ
本発明の化合物のキナーゼパネルの個々のメンバーの阻害能について評価する。この一般プロトコルに従って、最終濃度１０μＭ、２連で化合物を試験する。キナーゼバッファー組成物と基質は“Upstate Kinase Profiler（商標）”パネルに含まれる多様なキナーゼについて変化する。キナーゼバッファー（２．５μＬ、所望により１０倍のＭｎＣｌ２）、活性キナーゼ（０．００１〜０．０１単位；２．５μＬ）、キナーゼバッファー中の特異的またはポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド（５〜５００μＭまたは．０１ｍｇ／ｍｌ）およびキナーゼバッファー（５０μＭ；５μＬ）を氷上でエッペンドルフ内で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰ混合物（１０μＬ；６７．５（または３３．７５）ｍＭのＭｇＣｌ２、４５０（または２２５）μＭのＡＴＰおよび１μＣｉ／μｌの［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ））を加え、反応を約３０℃で約１０分間インキュベートする。２ｃｍ×２ｃｍのＰ８１（リンセルロース、正に荷電したペプチド基質について）または四角のWhatman No. 1（ポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド基質について）紙に反応混合物をスポットする（２０μＬ）。アッセイ四角片を０．７５％のリン酸で４回、それぞれ５分間洗浄し、アセトンで１回、５分間洗浄する。アッセイ四角片をシンチレーションバイアルに移し、５ｍｌのシンチレーションカクテルを加え、Beckmanシンチレーションカウンターでペプチド基質への３２Ｐ取り込み（ｃｐｍ）を定量する。阻害率を各反応について計算する。
【０１２７】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば本明細書に記載のインビトロ試験によって示されるように、有用な薬理学的特性を示す。例えば、本発明の化合物は、Ｍｏ７ｅアッセイにおいて１μＭ未満のＩＣ５０を有し、Ｂｃｒ−ａｂｌに対して少なくとも１０倍の選択性を示す。
【０１２８】
本明細書に記載の実施例および態様は説明のみを目的としており、その範囲内の多様な修飾または変形が当業者に示唆されており、本明細書および特許請求の範囲の精神および範囲に含まれることが理解される。本明細書において言及した全ての公報、特許および特許出願は、あらゆる目的のために参照により本明細書に引用する。
【国際調査報告】
2010526150.tif 000009
2010526150.tif 000010