(57)【要約】  本発明は、多官能性リンカーを含む、標的剤誘導ポリマー複合体を提供する。ポリマー送達システムを作製する方法および前記を用いて哺乳類を治療する方法もまた開示される。
2010503708.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
る式（Ｉ）：
【化１】
2010503708.tif 000072
で表される化合物であって、
ここで、
Ｒ１は実質的に非抗原性水溶性ポリマーであり；
Ａはキャップ基または：
【化２】
2010503708.tif 000073
であり；
各Ｄ１は独立して、標的部分，官能基および脱離基からなる群より選択され；
各Ｄ２は独立して、生物活性部分，官能基および脱離基からなる群より選択され；
各Ｌ１は独立して選択される永続的リンカーまたは遊離可能なリンカーであり：
Ｌ２は多官能性リンカーであり；
各Ｌ３は独立して選択される永続的リンカーまたは遊離可能なリンカーであり：および
（ａ）および（ｂ）は独立して０または正の整数である、
化合物。
【請求項２】
Ｌ２が、
【化３】
2010503708.tif 000074
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物であって、
ここで、
Ｒ２ および Ｒ’２ が独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ２−６置換アルケニル、Ｃ２−６置換アルキニル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され；
（ｃ１）、（ｃ２）、（ｃ３）、（ｃ４）、（ｃ５）、（ｃ６）、（ｃ’６）、（ｃ”６）、（ｃ７）および（ｃ８）が独立して０または正の整数であり； 
（ｄ１）、（ｄ２）、（ｄ３）、（ｄ４）、（ｄ５）および（ｄ７）が独立して０または正の整数である
ことを特徴とする、化合物。
【請求項３】
Ｌ２が、
【化４】
2010503708.tif 000075
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
【化５】
2010503708.tif 000076
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項２記載の化合物。
【請求項５】
【化６−１】
2010503708.tif 000077
【化６−２】
2010503708.tif 000078
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
前記生物活性部分が、−ＮＨ２を含む部分、−ＯＨを含む部分および−ＳＨを含む部分からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
前記生物活性部分が、医薬活性化合物、酵素、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、モノクローナル抗体、１本鎖抗体およびペプチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
前記医薬活性化合物が、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ傷害剤、代謝拮抗薬、ヌクレオシド類似体および抗がん剤からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７の化合物。
【請求項９】
前記生物活性部分がオリゴヌクレオチドであることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ロックされた核酸（ＬＮＡ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマー、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、およびホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドが、アンチセンスｂｃｌ−２オリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＩＦ−１αオリゴヌクレオチド、およびアンチセンススルビビンオリゴヌクレオチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項９記載の化合物。
【請求項１２】
前記標的剤が、モノクローナル抗体、１本鎖抗体、細胞接着ペプチド、細胞透過ペプチド、受容体リガンド、標的糖質分子またはレクチンおよびオリゴヌクレオチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
前記標的剤が、ＲＧＤペプチド、セレクチン、ＴＡＴ、ペネトラチン、（Ａｒｇ）９および葉酸からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
前記遊離可能なリンカーが、ベンジル脱離系リンカー、トリアルキルロック系リンカー、ビシン系リンカー、酸不安定性リンカー、リソソームによって切断可能なペプチドおよびカテプシンＢで切断可能なペプチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
前記遊離可能なリンカーが、独立して、
【化７−１】
2010503708.tif 000079
【化７−２】
2010503708.tif 000080
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物であって、
ここで、
Ｙ１１−１９が独立してＯ、ＳまたはＮＲ４８であり；
Ｒ３１−４８、Ｒ５０、Ｒ１００およびＡ５１が独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、フェノキシおよびＣ１−６ヘテロアルコキシからなる群より選択され；
Ａｒがアリールまたはヘテロアリール部分であり；
Ｌ１１−１５が独立して選択される二官能性スペーサーであり；
ＺおよびＺ’が独立して、標的細胞内へ能動輸送される部分、疎水性部分、二官能性結合部分およびその組み合わせからなる群より選択され；
（ｃ１１）、（ｈ１１）、（ｋ１１）、（ｌｌｌ）、（ｍｌｌ）および（ｎ１１）が独立して選択される正の整数であり；
（ａ１１）、（ｅ１１）、（ｇ１１）、（ｊ１１）、（ｏ１１）および（ｑ１１）が独立して０または正の整数であり；および
（ｂ１１）、（ｘ１１）、（ｘ’１２）、（ｆ１１）、（ｉ１１）および（ｐ１１）が独立して０または１である
ことを特徴とする、化合物。
【請求項１６】
前記永続的リンカーが独立して、
【化８】
2010503708.tif 000081
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１７】
Ｌ１およびＬ３が独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１が直鎖、末端分岐鎖またはマルチアームポリアルキレンオキサイドを含むことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１９】
前記ポリアルキレンオキサイドが、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
前記ポリアルキレンオキサイドが、 
【化９】
2010503708.tif 000082
からなる群より選択される、請求項１８記載の化合物であって、
ここで、
Ｙ２１およびＹ２３は独立してＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ５３または結合であり；
Ｙ２２はＯ、Ｓ、またはＮＲ５３であり；
Ｒ５１−５３は独立してＲ２のための群から選択され；
（ａ２）および（ｂ２）は独立して０または正の整数であり；および
（ｎ）は約１０〜約２３００の整数である
ことを特徴とする、化合物。
【請求項２１】
ポリアルキレンオキサイドが、式：−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−のポリエチレングリコールであり、
ここで（ｎ）が約１０〜約２，３００の整数である
ことを特徴とする、請求項１８記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ１の平均分子量が、約２，０００〜約１００，０００であることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ１の平均分子量が、約５，０００〜約６０，０００であることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ１の平均分子量が、約 ５，０００ 〜約 ２５，０００  または約 ２０，０００ 〜約 ４５，０００ であることを特徴とする、請求項１記載の化合物。 
【請求項２５】
【化１０−１】
2010503708.tif 000083
【化１０−２】
2010503708.tif 000084
【化１０−３】
2010503708.tif 000085
【化１０−４】
2010503708.tif 000086
【化１０−５】
2010503708.tif 000087
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物であって、
ここで、
ｍＰＥＧは式：ＣＨ３−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；
ＰＥＧは式：−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；
（ｎ）は約１０〜約２，３００の正の整数であり；
Ｒ５１および Ｒ５２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、フェノキシおよびＣ１−６ヘテロアルコキシからなる群より選択され；
Ｄ１は標的部分、官能基または脱離基であり； 
Ｄ２は生物活性部分、官能基または脱離基である
ことを特徴とする、化合物。
【請求項２６】
【化１１−１】
2010503708.tif 000088
【化１１−２】
2010503708.tif 000089
【化１１−３】
2010503708.tif 000090
【化１１−４】
2010503708.tif 000091
【化１１−５】
2010503708.tif 000092
【化１１−６】
2010503708.tif 000093
【化１１−７】
2010503708.tif 000094
【化１１−８】
2010503708.tif 000095
【化１１−９】
2010503708.tif 000096
【化１１−１０】
2010503708.tif 000097
【化１１−１１】
2010503708.tif 000098
【化１１−１２】
2010503708.tif 000099
【化１１−１３】
2010503708.tif 000100
【化１１−１４】
2010503708.tif 000101
【化１１−１５】
2010503708.tif 000102
【化１１−１６】
2010503708.tif 000103
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物であって、
ここで、
Ｓ−ＳＣＡは１本鎖抗体であり；
ＲＧＤは、
【化１２】
2010503708.tif 000104
であり；
ＬＮＡはロックされた核酸であり；
葉酸は、
【化１３】
2010503708.tif 000105
の残基であり；
ｍＰＥＧは式：ＣＨ３−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；
ＰＥＧは式−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し； 
（ｎ）は約１０〜約２，３００の正の整数である
ことを特徴とする、化合物。
【請求項２７】
多官能性リンカーを含むポリマー複合体を調製する方法であって、該方法が、
式（ＩＩＩａ）の化合物を：
【化１４】
2010503708.tif 000106
式（ＩＩＩｂ）を有する化合物を含む生物活性部分と：
【化１５】
2010503708.tif 000107
式（ＩＩＩｃ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させる：
【化１６】
2010503708.tif 000108
工程を有してなり、
ここで、
Ｒ１は実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ａ２１はキャップ基または：
【化１７】
2010503708.tif 000109
であり；
Ａ２２はキャップ基または：
【化１８】
2010503708.tif 000110
であり；
Ｍ１は官能基であり；
Ｄ２２は生物活性部分であり；
Ｍ２はＯＨまたは脱離基であり；
Ｍ３はＯＨ、ＮＨ２、またはＳＨであり；
Ｌ１は永続的リンカーまたは遊離可能なリンカーであり；
Ｌ２は多官能性リンカーであり；
Ｌ３は永続的リンカーまたは遊離可能なリンカーであり；および
（ａ）および（ｂ）は独立して０または正の整数である
ことを特徴とする、方法。
【請求項２８】
式（ＩＩＩｃ）の化合物を：
【化１９】
2010503708.tif 000111
式（ＩＩＩｄ）を有する求核部分を含む部分と
【化２０】
2010503708.tif 000112
式（ＩＩＩｅ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させる：
【化２１】
2010503708.tif 000113
工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２７記載の方法であって、
ここで、
Ａ２３はキャップ基または：
【化２２】
2010503708.tif 000114
であり； 
Ｍ１は官能基であり；
Ｄ２１は標的部分であり；および
Ｍ４はＯＨ、ＮＨ２、またはＳＨであり；および
他のすべての変数は請求項２７に定義されるのと同一である
、方法。
【請求項２９】
式（Ｉ）の化合物を有効量で、それらを必要とする患者へ投与することを含む、哺乳類を治療する方法。
【請求項３０】
式（Ｉ）の化合物を有効量で、そのような治療を必要とする細胞に送達することを含む、ポリヌクレオチドを哺乳類の細胞へ投与する方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、参照により本開示に含まれる、２００６年９月１５日出願の米国仮特許出願第６０／８４４，９４３号の優先権の利益を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、多官能性リンカーを含む、標的剤誘導ポリマー複合体を提供する。ポリマー送達システムを作製する方法およびそれらを用いて哺乳類を治療する方法についても開示する。
【背景技術】
【０００３】
多くの低分子量抗がん剤は顕著な毒性を有することが知られている。長年にわたって、低分子量抗がん剤の毒性を低減し、効力を改善するためのさまざまな試みがなされている。
【０００４】
低分子量薬物の毒性を低減し、効力を改善するための試みの一つが、標的剤誘導薬物送達システムを対象とした。たとえば、１本鎖抗体、ＲＧＤペプチド、または葉酸といった標的剤は、治療剤の送達を誘導し、その治療効果を改善することができる。同時に、非常に強力な化学療法剤の標的化送達は、その毒性を低減する。その手法は、たとえば、サイトトキシンのカリチアマイシンに結合したＣＤ３３に対するヒト化抗体であるＷｙｅｔｈ社のＭｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）ゲムツズマブオゾガマイシンの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）についてのＦＤＡ承認によって確認されている。
【０００５】
従来、免疫複合体は、モノクローナル抗体のような標的剤、サイトトキシンおよびリンカーという３つの成分を含む。
【０００６】
しかし、この手法は、抗体が、薬物との複合体化後に、抗原に対する高度な結合親和性を保持することを必要とする。さらに、抗体−薬物複合体は、緩衝液または血漿中で安定でなければならず、および循環中に毒素を早まって放出してはならない。抗体−薬物複合体はまた、抗体が腫瘍細胞表面上の抗原と一旦結合したら、内部移行しなければならない。その後、薬物分子は標的化腫瘍細胞内部で目的の速度で、未変化で放出されなければならない。
【０００７】
１本鎖抗体（ＳＣＡ）または１本鎖抗原結合抗体は、４分の１のサイズしかない、完全長抗体の結合ドメインを含む。しかし、ＳＣＡは抗原と特異的に、高い親和性で結合できる。１本鎖抗原結合タンパク質の理論および製造の記載は、たとえば、本発明の譲受人に譲渡された特許文献１〜４に見られる。参照により本開示に含まれる、上記米国特許に述べられる製法で製造された１本鎖抗原結合タンパク質は、対応するＦａｂ断片のものと実質的に同様の結合特異性および親和性を有する。より近年に、本発明のと同一の譲受人に譲渡された特許文献５はポリアルキレンオキサイド修飾された１本鎖ポリペプチドを開示した。本発明の譲受人に譲渡された前記特許のそれぞれの内容は、参照により本開示に含まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第 ４，９４６，７７８号明細書
【特許文献２】米国特許第５，２６０，２０３号明細書
【特許文献３】米国特許第５，４５５，０３０号明細書
【特許文献４】米国特許第５，５１８，８８９号明細書
【特許文献５】米国特許第６，８７２，３９３号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
それらの試みおよび進歩にもかかわらず、目的の治療活性およびより低い毒性を有する標的剤誘導ポリマー薬物送達システムを提供することが依然として必要とされている。本発明はこの必要性などに対処するものである。
【発明を解決するための手段】
【００１０】
上記の問題を克服するため、およびポリマー薬物送達のための技術を改善するため、標的剤およびＰＥＧ化技術の両方、および他の改良された治療技術を利用する、新規で有利な化合物を提供する。したがって、本発明の一態様によると、式（Ｉ）の化合物が提供され：
【化１】
2010503708.tif 000003
【００１１】
ここで：
Ｒ１は実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ａはキャップ基であり、または
【化２】
2010503708.tif 000004
【００１２】
各Ｄ１は、標的部分、官能基および脱離基、好ましくは標的部分から独立して選択され；
各Ｄ２は、生物活性部分、官能基および脱離基、好ましくは生物活性部分から独立して選択され；
各Ｌ１は、独立して、永続的リンカーまたは遊離可能なリンカー、好ましくは永続的リンカーであり；
Ｌ２は多官能性リンカーであり；
各Ｌ３は、独立して、永続的リンカーまたは遊離可能なリンカー、好ましくは遊離可能なリンカーであり；および
（ａ）および（ｂ）は独立して０または正の整数、好ましくは０または１である。
【００１３】
本発明の１つの態様では、ポリマー残基は、小分子薬物および１本鎖抗体（ＳＣＡ）の両方と遊離可能なリンカーおよび永続的リンカーを通じて多官能性リンカーを通じて複合体化されうる、ポリエチレンオキサイドである。この方法で、低分子細胞毒性化合物の標的化送達のためのＳＣＡ−ＰＥＧ−リンカー−薬物送達プラットフォームを提供するための化合物が提供される。さらに、結合部位当たりの低分子およびＳＣＡの両方の負荷が、従来のＳＣＡ−薬物複合体よりも増加していることは有利である。したがって、費用対効果の高い、低コストの、標的化ＳＣＡプロドラッグが提供されうる。さらに、本発明のプロドラッグは、薬物の循環半減期を調節する方法、たとえば、必要に応じて、適当なリンカーを用いることによって、循環半減期を延長する方法を提供する。
【００１４】
本発明の一般的な一態様は、無制限に、下記の構造に図式的に記載され：
2010503708.tif 000005
【００１５】
ここでＰＥＧはＳＣＡおよび細胞毒のような薬物の両方と、中心に位置する多官能性リンカーを通じて結合し；ＳＣＡとのリンカーは永続的であり、一方、細胞毒とのリンカーは遊離可能でありおよび血液中では安定であるがしかし部位特異的酵素の存在下では容易に分解可能であるように設計されうる。
【００１６】
好ましい１つの態様では、ＳＣＡはマレイミド基を含むもののような永続的リンカーを通じて結合し、細胞毒はカテプシンＢによって特異的に分解されうるペプチジルリンカー（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）のような遊離可能なリンカーを通じて結合する。好ましい１つの実施の形態では、細胞毒はＳＮ３８である。
【００１７】
本発明の他の態様は、多官能性リンカーを含む活性化ポリマーを作る方法、前記を含む複合体を作る方法、および生物活性部分を含む複合体を有効量でそれらを必要とする患者（哺乳類）へ投与することに基づく治療の方法を含む。
【００１８】
本発明の長所の１つは、ここに記載されるポリマー送達システムは安定でありおよびしたがって薬物のバイオアベイラビリティを増大させることである。
【００１９】
本発明の別の長所は、ポリマー送達システムが、標的となった腫瘍細胞の内部で薬物を未変化で放出できることである。
【００２０】
さらに別の長所は、薬物の放出速度は目的速度を達成できるように改変されうることである。
【００２１】
本発明に対応するポリマー系のさらに別の長所は、それらが低分子量薬物および、アンチセンス、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはＬＮＡ化合物といったオリゴヌクレオチドによく適することである。
【００２２】
その他の長所は下記の説明から明らかになる。
【００２３】
本発明の目的では、「残基」の語は、化合物、すなわちサイトトキシン、ＳＮ３８、永続的リンカー、多官能性リンカー、遊離可能なリンカーなどの、別の化合物との置換反応を受けた後に残る部分をいうことを意味すると理解される。
【００２４】
本発明の目的では、「ポリマー残基」または「ＰＥＧ残基」の語は、それぞれポリマーまたはＰＥＧの、他の化合物、部分などとの反応を受けた後に残る部分を意味すると理解される。
【００２５】
本発明の目的では、置換アルキルは、カルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルおよびメルカプトアルキルを含み；置換アルケニルは、カルボキシアルケニル、アミノアルケニル、ジアルケニルアミノ、ヒドロキシアルケニルおよびメルカプトアルケニルを含み；置換アルキニルは、カルボキシアルキニル、アミノアルキニル、ジアルキニルアミノ、ヒドロキシアルキニルおよびメルカプトアルキニルを含み；置換シクロアルキルは４−クロロシクロヘキシルといった部分を含み；アリールはナフチルといった部分を含み；置換アリールは３−ブロモフェニルといった部分を含み；アラルキルはトリル（tolyl）といった部分を含み；ヘテロアルキルはエチルチオフェンといった部分を含み；置換ヘテロアルキルは３−メトキシ−チオフェンといった部分を含み；アルコキシはメトキシといった部分を含み；およびフェノキシは３−ニトロフェノキシといった部分を含む。ハロはフルオロ、クロロ、ヨードおよびブロモを含むと理解される。
【００２６】
本発明の目的では、「核酸」または「ヌクレオチド」は、特記されない限り、１本鎖でも２本鎖でも、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）およびその任意の化学修飾を含むと理解される。
【００２７】
本発明の目的では、「生物活性部分」および「生物活性部分の残基」の語は、生物活性化合物が置換反応を受けた後に残る、輸送キャリヤー部分が結合される、生物活性化合物の部分を意味すると理解される。
【００２８】
説明の便のためにおよび限定のためでなく、「生物活性部分」の語は「薬物」、「細胞毒」、「サイトトキシン」と相互に交換可能であると理解される。
【００２９】
説明の便のためにおよび限定のためでなく、「小分子」の語は「医薬活性化合物」と相互に交換可能であると理解される。
【００３０】
別に定義されない限り、本発明の目的では：
「アルキル」の語は、直鎖、分岐鎖、置換、たとえばハロ−、アルコキシ−、およびニトロ−Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８シクロアルキルまたは置換シクロアルキル、などを含むと理解され；
「置換」の語は、官能基または化合物中に含まれる１つ以上の原子に１つ以上の別の原子を加えるかまたは置き換えることを含むと理解され；
「置換アルキル」の語は、カルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルおよびメルカプトアルキルを含むと理解され；
「置換シクロアルキル」の語は４−クロロシクロヘキシルといった部分を含み； アリールはナフチルといった部分を含み；置換アリールは３−ブロモフェニルといった部分を含み；アラルキルはトルイルといった部分を含み；ヘテロアルキルはエチルチオフェンといった部分を含み；
「置換ヘテロアルキル」の語は３−メトキシ−チオフェンといった部分を含み；アルコキシはメトキシといった部分を含み；およびフェノキシは３−ニトロフェノキシといった部分を含み；
「ハロ」の語はフルオロ、クロロ、ヨードおよびブロモを含むと理解され；および
「十分量」および「有効量」の語は本発明の目的では、当業者に理解される効果として治療効果を達成する量を意味するものとする。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、実施例１〜５に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図２】図２は、実施例６〜７に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図３】図３は、実施例８〜９に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図４】図４は、実施例１０〜１４に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図５】図５は、実施例１５〜１７に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図６】図６は、実施例１８〜１９に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図７】図７は、実施例２０〜２３に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図８】図８は、実施例２４〜２５に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図９】図９は、実施例２６〜２８に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図１０】図１０は、実施例２９〜３２に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図１１】図１１は、実施例３３〜３５に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図１２】図１２は、実施例３６〜３８に記載される合成の方法を図式的に示す。
【図１３】図１３は、実施例３９〜４０に記載される合成の方法を図式的に示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
Ａ．概観
本発明の１つの態様では、式（Ｉ）の化合物が提供され：
【化３】
2010503708.tif 000006
【００３３】
ここで：
Ｒ１は実質的に非抗原性水溶性ポリマーであり；
Ａはキャップ基または：
【化４】
2010503708.tif 000007
【００３４】
であり、
各Ｄ１は独立して、標的部分、官能基および脱離基、好ましくは標的部分から選択され；
各Ｄ２は独立して、生物活性部分、官能基および脱離基、好ましくは生物活性部分から選択され；
各Ｌ１は独立して、永続的リンカーまたは遊離可能なリンカー、好ましくは永続的リンカーであり；
Ｌ２は多官能性リンカーであり；
各Ｌ３は独立して、永続的リンカーまたは遊離可能なリンカー、好ましくは遊離可能なリンカーであり；および
（ａ）および（ｂ）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または１である。
【００３５】
本発明の好ましい１つの態様では、標的化ポリマー送達システムは次式を有する化合物を含み：
【化５】
2010503708.tif 000008
【００３６】
ここで
Ｒ２およびＲ’２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ２−６置換アルケニル、Ｃ２−６置換アルキニル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシから選択され；
（ｃ１）、（ｃ２）、（ｃ３）、（ｃ４）、（ｃ５）、（ｃ６）、（ｃ'６）、（ｃ''６）、（ｃ７）および（ｃ８）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約１０の整数、およびより好ましくは０、１または２であり；
（ｄ１）、（ｄ２）、（ｄ３）、（ｄ４）、（ｄ５）および（ｄ７）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約１０の整数、およびより好ましくは０または約１〜約４の整数であり；および
すべての他の変数は先に定義されるとおりである。
【００３７】
別の１つの態様では、ここに記載されるポリマー系は、一方の末端がＣＨ３基でキャップ化されている、すなわちｍＰＥＧで、一方、別の実施形態では、次式に対応するもののようなビス活性化ＰＥＧが提供される：
【化６−１】
2010503708.tif 000009
【化６−２】
2010503708.tif 000010
【００３８】
他の随意的なキャップ基は、Ｈ、ＮＨ２、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６アルキルを含む。好ましいキャップ基は、メトキシおよびメチルを含む。
【００３９】
本発明の大部分の態様では、ここで含まれるポリマーは一般的に、実質的に非抗原性のポリマーとして説明される。この種のポリマーの中では、ポリアルキレンオキサイドが好ましく、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が非常に好ましい。限定のためでなく説明の便のために、本発明は時に、ＰＥＧを原型的なポリマーとして用いて記載される。しかし、当然、本発明の範囲は直鎖、実質的に直鎖、分岐鎖、などでありうるさまざまなポリマーに適用で可能である。
【００４０】
本発明の別の１つの態様では、生物学的部分は、−ＮＨ２を含む部分、−ＯＨを含む部分および−ＳＨを含む部分を含む。
【００４１】
Ｂ．多官能性リンカー（Ｌ２）
本発明の構造の観点からは、多官能性リンカーは、（遊離可能なまたは永続的な）３つ以上の成分、すなわち標的剤、ポリマーおよびＳＮ３８のような生物活性細胞毒性化合物を結合することを可能にする。少なくとも３つの独立した官能基を含む他の分子もまた使用されうることが当業者に理解される。１つの好ましい多官能性リンカーは、アスパラギン酸またはリジンの残基でありうる。
【００４２】
少なくとも３つの官能部位を含むＬ２は下記から選択でき：
【化７】
2010503708.tif 000011
【００４３】
ここで
Ｒ２およびＲ’２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ２−６置換アルケニル、Ｃ２−６置換アルキニル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシから選択され；
（ｃ１）、（ｃ２）、（ｃ３）、（ｃ４）、（ｃ５）、（ｃ６）、（ｃ’６）、（ｃ”６）、（ｃ７）および（ｃ８）は先に定義されるとおりであり；
（ｄ１）、（ｄ２）、（ｄ３）、（ｄ４）、（ｄ５）および（ｄ７）もまた先に定義されるとおりである。
【００４４】
好ましい実施形態は、下記を含む：
【化８】
2010503708.tif 000012
【００４５】
Ｃ．実質的に非抗原性の水溶性ポリマー（Ｒ１）
本発明のプロドラッグは、ポリマー残基Ｒ１を含み、それは好ましくは水溶性および実質的に非抗原性である。そのようなポリマーの適当な例は、ポリエチレングリコールといったポリアルキレンオキサイド（ＰＡＯ）を含む。一部の好ましいポリマーは、ｍＰＥＧといったポリエチレングリコールである。そのようなポリマーの非限定的な一覧は、したがって、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールといったポリアルキレンオキサイドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、その共重合体およびそのブロック共重合体を含む。
【００４６】
ここに記載される化合物のポリマー部分は、約２，０００〜約１００，０００、好ましくは約５，０００〜約６０，０００の平均分子量を有する。一部の態様では、ポリアルキレンオキサイドは、タンパク質またはオリゴヌクレオチドが結合されている場合は約５，０００〜約２５，０００，および好ましくは約１２，０００〜約２０，０００でありうるか、または代替的に、医薬活性化合物（平均分子量１，５００未満のものといった小分子）がここに記載の化合物に使用される場合は約２０，０００〜約４５，０００、および好ましくは約３０，０００〜約４０，０００でありうる。
【００４７】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は一般的に下記の構造で表され：
−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−
ここで（ｎ）は約１０〜約２，３００の整数であり、マルチアームポリマーが用いられる場合はポリマーアームの数に依存する。水溶性ポリマーはリンカーの結合のために官能化されることが理解される。
【００４８】
あるいは、本発明のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基部分は下記の構造で表され：
【化９】
2010503708.tif 000013
【００４９】
ここで：
Ｙ７１およびＹ７３は独立してＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ７３または結合であり；
Ｙ７２はＯ、Ｓ、またはＮＲ７４であり；
Ｒ７１−７４は独立して、Ｒ２に使用されうる同一の部分であり；
（ａ７１）、（ａ７２）、および（ｂ７１）は、独立して０または正の整数、好ましくは０−６、およびより好ましくは１であり；および
（ｎ）は約１０〜約２３００の整数である。
【００５０】
一例として、ＰＥＧは下記の非限定的な方法で官能化でき： 
-Ｃ(＝Ｙ74)-(ＣＨ2)m-(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n-、
-Ｃ(＝Ｙ74)-Ｙ-(ＣＨ2)m-(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n-、
-Ｃ(＝Ｙ74)-ＮＲ11-(ＣＨ2)m-(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n- 、
-ＣＲ75Ｒ76-(ＣＨ2)m-(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)n- 
ここで、
Ｒ７５およびＲ７６は独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキルおよび置換Ｃ１−６アルキルから選択され；
ｍは０または正の整数であり、好ましくは１であり；
Ｙ７４はＯまたはＳであり； 
ｎは重合度を表す。
【００５１】
しかしながら、本発明のプロドラッグは、ここに記載される実質的に任意の非抗原性のポリマーを用いて作製でき、一部の好ましいポリアルキレンオキサイドは下記を含む： 
ＣＨ3Ｏ-ＰＥＧ-Ｏ-(ＣＨ2)m-ＣＯ2Ｈ；
ＰＥＧ−ＮＨＳ；
ＣＨ3Ｏ-ＰＥＧ-Ｏ-(ＣＨ2)m-ＮＲ11Ｒ12; および
ＣＨ3Ｏ-ＰＥＧ-Ｏ-(ＣＨ2)2 −Ｓ-(ＣＨ2)m-ＣＯ2Ｈ；
ＳＣ―ＰＥＧ；
または本分野で知られている活性化ＰＥＧのうち任意のもの。
【００５２】
特に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノ活性化、モノ置換ポリマーが望まれる場合はモノメチル終端ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）といったＣ１−４アルキル終端ＰＡＯが好ましく、二置換プロドラッグが望まれる場合はビス活性化ポリエチレンオキサイドが好ましい。
【００５３】
目的の結合を与えるために、ＰＥＧ酸またはＰＥＧ二酸といったモノ−またはジ−酸活性化ポリマーが用いられる。適当なＰＡＯ酸は、ｍＰＥＧ−ＯＨをエチルエステルへ変換することによって合成されうる。Ｇｅｈｒｈａｒｄｔ，Ｈ．らのＰｏｌｙｍｅｒ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ １８： ４８７ （１９８７） および Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．らのＪ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １０； １４５ （１９８９）も参照。 あるいは、ＰＡＯ酸はｍＰＥＧ−ＯＨをｔ−ブチル エステルへ変換することによって合成されうる。 たとえば、 本発明と同一の譲受人に譲渡された 米国特許第５，６０５，９７６号明細書および 米国特許第５，９６５，５６６号明細書を参照。 前記のそれぞれの開示は参照により本開示に含まれる。
【００５４】
分岐鎖またはＵ−ＰＥＧ誘導体は、それぞれの開示が参照により本開示に含まれる米国特許第５，６４３，５７５号、同第５，９１９，４５５号、同第６，１１３，９０６号および同第６，５６６，５０６号の各明細書に記載される。そのようなポリマーの非限定的な一覧は、下記の構造を有するポリマー系（ｉ）〜（ｖｉｉ）に相当し： 
【化１０−１】
2010503708.tif 000014
【化１０−２】
2010503708.tif 000015
【００５５】
ここで：
Ｙ６１−６２は独立してＯ、ＳまたはＮＲ６１であり；
Ｙ６３はＯ、ＮＲ６２、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ２であり；
（ｗ６２）、（ｗ６３）および（ｗ６４）は独立して、０または正の整数、好ましくは約０〜約１０、より好ましくは約１〜約６であり；
（ｗ６１）は０または１であり；
ｍＰＥＧはメトキシＰＥＧであり
ここでＰＥＧは既に規定されており、およびポリマー部分の総分子量は約２、０００〜約１００、０００であり； 
Ｒ６１およびＲ６２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ２−６置換アルケニル、Ｃ２−６置換アルキニル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、および置換およびアリールカルボニルオキシから選択される。
【００５６】
さらに別の１つの態様では、ポリマーは、マルチアームＰＥＧ−ＯＨ または、開示が参照により本開示に含まれる日油株式会社（NOF Corp.）薬物送達システムカタログ第８版（２００６年４月）に記載されるもののような「スター型ＰＥＧ」製品を含む。そのマルチアームポリマー複合体は４以上のポリマーアームおよび好ましくは４または８のポリマーアームを含む。
【００５７】
説明目的で、および限定目的でなく、マルチアームポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基は下記であることができ 
【化１１】
2010503708.tif 000016
【００５８】
ここで、
（ｘ）は０および正の整数、すなわち約０〜約２８であり；および
（ｎ）は重合度である。
【００５９】
本発明の特定の１つの実施の形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：
【化１２】
2010503708.tif 000017
【００６０】
ここでｎは正の整数である。本発明の好ましい１つの実施の形態では、ポリマーは約５，０００〜約６０，０００，および好ましくは１２，０００〜４０，０００の総分子量を有する。
【００６１】
さらに別の特定の１つの実施の形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：
【化１３】
2010503708.tif 000018
【００６２】
ここでｎは正の整数である。本発明の好ましい１つの実施の形態では、マルチアームポリマーの重合度（ｎ）は約２８〜約３５０であって、総分子量約５，０００〜約６０，０００のポリマーを与え、好ましくは約６５〜約２７０（１２，０００〜４５，０００）であって、総分子量１２，０００〜４５，０００のポリマーを与える。これはポリマー鎖中の反復単位の数を表し、ポリマーの分子量に依存する。
【００６３】
ポリマーは、米国特許第５，１２２，６１４号または同第５，８０８，０９６号の各明細書に記載された活性化法を用いて、適当に活性化されたポリマーへ変換されうる。具体的には、そのようなＰＥＧは次式であることができ：
【化１４】
2010503708.tif 000019
【００６４】
ここで、
（ｕ’）は約４〜約４５５の整数であり、残基の３つまでの終端部分がメチルまたは他の低級アルキルでキャップ化されている。
【００６５】
一部の好ましい実施形態では、ＰＥＧの４つのすべてのアームが、芳香族基の結合を円滑化するために、適当な活性化基へ変換されうる。変換前のそのような化合物は下記を含む： 
【化１５−１】
2010503708.tif 000020
【化１５−２】
2010503708.tif 000021
【００６６】
ここで含まれるポリマー物質は、好ましくは室温にて水溶性である。そのようなポリマーの非限定的なリストは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールといったポリアルキレンオキサイドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、その共重合体および、そのブロック共重合体の水溶性が維持されるならばブロック共重合体を含む。
【００６７】
別の１つの実施の形態では、およびＰＡＯ系ポリマーの代替として、１つ以上の有効に非抗原性の材料、たとえばデキストラン、ポリビニルアルコール、糖質系ポリマー、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリアルキレンオキサイド、および／またはその共重合体が使用されうる。参照により本開示に含まれる、本発明の譲受人に譲渡された米国特許第６，１５３，６５５号明細書も参照。ＰＥＧといったＰＡＯについてここで記載されたのと同一の種類の活性化が用いられることが当業者に理解される。前記の一覧は単に説明であり、ここに記載される性質を有するすべてのポリマー材料が考慮されることが当業者にさらに理解される。本発明の目的では、「実質的にまたは有効に非抗原性」とは、哺乳類において非毒性でありおよび認識可能な免疫応答を起こさないと本分野で理解されるすべての材料を意味する。
【００６８】
一部の態様では、末端アミン基を有するポリマーは、ここに記載される化合物を作製するのに使用されうる。末端アミンを含むポリマーを高純度で調製する方法は、それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１１／５０８，５０７号および同第１１／５３７，１７２号の各明細書に記載される。たとえば、アジドを有するポリマーは、トリフェニルホスフィンといったホスフィン系還元剤、またはＮａＢＨ４といったアルカリ金属ボロヒドリド還元剤と反応する。あるいは、脱離基を含むポリマーは、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルイミドジカルボナートのカリウム塩（ＫＮＭｅＢｏｃ）またはジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミドジカルボナートのカリウム塩（ＫＮＢｏｃ２）といった保護アミン塩と反応し、次いで保護アミン基が脱保護される。これらの製法によって作製された末端アミンを含むポリマーの純度は、約９５％より大、および好ましくは９９％より大である。
【００６９】
代替的な態様では、末端 カルボン酸基を有するポリマーが、ここに記載されるポリマー送達システム に使用されうる。 末端 カルボン酸を有するポリマーを高純度で調製する方法は、参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１１／３２８，６６２号明細書に記載される。その方法は、ポリアルキレンオキサイドの三級アルキルエステルをまず調製、次いでそのカルボン酸誘導体への変換を含む。その工程のＰＡＯカルボン酸の調製の第一段階は、ポリアルキレンオキサイドカルボン酸のｔ−ブチルエステルといった中間体の形成を含む。この中間体は、ＰＡＯをハロ酢酸ｔ−ブチルと、カリウムｔ−ブトキシドといった塩基の存在下で反応させることによって形成される。一旦ｔ−ブチルエステル中間体が形成されると、ポリアルキレンオキサイドのカルボン酸誘導体は、９２％を上回る，好ましくは９７％を上回る，より好ましくは９９％を上回る、および非常に好ましくは純度９９．５％を上回る純度で容易に提供されうる。
【００７０】
Ｄ．標的剤Ｓ（Ｄ１）
ここに記載のポリマー化合物へ標的剤が、複合体をインビボにおいて標的領域へ導くために結合されうる。標的剤は、医薬活性化合物およびオリゴヌクレオチドといった生物活性部分が、標的領域、すなわち腫瘍部位で、治療効果を有することを可能にする。インビボにおける標的送達は、これらの分子の細胞取り込みを促進し、より良好な治療効果を持たせる。一部の態様では、一部の細胞透過ペプチドは、腫瘍部位への標的化送達のために、さまざまな標的ペプチドで置換されうる。
【００７１】
本発明の１つの態様では、標的部分、たとえば１本鎖抗体（ＳＣＡ）または１本鎖抗原結合抗体、モノクローナル抗体、ＲＧＤペプチドおよびセレクチンのような細胞接着ペプチド、ＴＡＴ、ペネトラチンおよび（Ａｒｇ）９のような細胞透過ペプチド（ＣＰＰ）、受容体リガンド、標的糖質分子またはレクチン、オリゴヌクレオチド、ロックされた核酸（ＬＮＡ）およびアプタマーのようなオリゴヌクレオチド誘導体などは、細胞毒性薬物を標的化領域へ特異的に指向させることを可能にする。それぞれ参照により本開示に含まれる、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６ Ｏｃｔ；６（５）：５０９−１４，Ｃｅｌｌ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｐｅｐｔｉｄｅ，ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙを参照； Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．２００６ Ｓｅｐ；９５（９）：１８５６−７２ Ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙも参照。
【００７２】
標的部分は、ビオチニル化合物、蛍光化合物、放射性標識化合物のように標識されうる。適当なタグは、外科手術中に腫瘍組織の造影を可能にするために、本分野で標準的な任意の放射性同位体、放射線不透過標識、磁気共鳴標識、または磁気共鳴造影に適する他の非放射性同位体標識、蛍光型標識、紫外線、赤外線または電気化学刺激下で可視色を示すおよび／または蛍光を発しうる標識などと、任意の適当な部分、たとえば、アミノ酸残基を、結合することによって調製される。随意的に、診断タグが複合体化治療用部分に組み込まれおよび／または結合され、治療用生物活性材料の動物またはヒト患者中の分布のモニタを可能にする。
【００７３】
本発明のさらに別の１つの態様では、本発明のタグ化複合体は、本分野で公知の方法によって、たとえば放射性標識を含む任意の適当な標識を用いて、容易に調製されうる。単に例として、これらは、インビボでの腫瘍細胞への選択的取り込みのための放射性免疫シンチグラフィー剤を製造するための、１３１ヨウ素、１２５ヨウ素、９９ｍテクネチウムおよび／または１１１インジウムを含む。たとえば、単に例として、参照により本開示に含まれる米国特許第５，３２８，６７９号；同第５，８８８，４７４号；同第５，９９７，８４４号；および同第５，９９７，８４５号の各明細書によって示されるものを含む、ペプチドをＴｃ−９９ｍへ結合するためのいくつかの本分野で公知の方法がある。
【００７４】
好ましい標的部分は、１本鎖抗体（ＳＣＡ）または抗体の１本鎖可変断片（ｓＦｖ）である。ＳＣＡは、標的腫瘍細胞の特異的分子に結合またはそれを認識できる抗体のドメインを含む。抗原結合部位を維持することに加えて、ＰＥＧ化ＳＣＡはリンカーを通じて、抗原性を低下および血流中のＳＣＡの半減期を増大できる。
【００７５】
「１本鎖抗体」（ＳＣＡ）、「１本鎖抗原結合分子または抗体」または「１本鎖Ｆｖ」（ｓＦｖ）の語は相互に交換可能に用いられる。１本鎖抗体は抗原に対する結合親和性を有する。１本鎖抗体（ＳＣＡ）または１本鎖Ｆｖはいくつかの方法で構築でき、およびされている。１本鎖抗原結合タンパク質の理論および製造の説明は、本発明の譲受人に譲渡された、それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１０／９１５，０６９号明細書および米国特許第６，８２４，７８２号明細書に見出される。
【００７６】
典型的には、ＳＣＡまたはＦｖドメインは、２６−１０、ＭＯＰＣ３１５、７４１Ｆ８、５２０Ｃ９、ＭｃＰＣ６０３、Ｄ１．３、マウスｐｈＯｘ、ヒトｐｈＯｘ、ＲＦＬ３．８ｓＴＣＲ、１Ａ６、Ｓｅ１５５−４、１８−２−３、４−４−２０、７Ａ４−１、Ｂ６．２、ＣＣ４９、３Ｃ２、２ｃ、ＭＡ−１５Ｃ５／Ｋ１２ＧＯ、Ｏｘ、などとして文献中の略語で知られるモノクローナル抗体から選択されうる （Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３ （１９８８）； Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．らのＳＩＭ Ｎｅｗｓ ３８（４） （Ｓｕｐｐ）：１１ （１９８８）； ＭｃＣａｒｔｎｅｙ，Ｊ．らのＩＣＳＵ Ｓｈｏｒｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ １０：１１４ （１９９０）； ＭｃＣａｒｔｎｅｙ，Ｊ．Ｅ．らのｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ （１９９０）； Ｎｅｄｅｌｍａｎ，Ｍ．Ａ．らのＪ．Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄ．３２ （Ｓｕｐｐ．）：１００５ （１９９１）； Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．らのＩｎ： Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ： Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｔ Ｂ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｊ．Ｊ．Ｌａｎｇｏｎｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８ （１９９１）； Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．らのＩｎ： Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｅｐｅｎｅｔｏｓ，Ａ．Ａ．（Ｅｄ．），Ｌｏｎｄｏｎ，Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ （１９９３）； Ｂｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．らのＳｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６ （１９８８）； Ｂｅｄｚｙｋ，Ｗ．Ｄ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１８６１５−１８６２０ （１９９０）； Ｃｏｌｃｈｅｒ，Ｄ．らのＪ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：１１９１−１１９７ （１９９０）； Ｇｉｂｂｓ，Ｒ．Ａ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：４００１−４００４ （１９９１）； Ｍｉｌｅｎｉｃ，Ｄ．Ｅ．らのＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５１：６３６３−６３７１ （１９９１）； Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏ，Ｍ．Ｗ．らのＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０１１７−１０１２５ （１９９１）； Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．らのＮａｔｕｒｅ ３３９：３９４−３９７ （１９８９）； Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１０６６−１０７０ （１９９０）； Ｂａｔｒａ，Ｊ．Ｋ．らのＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７１：１−６ （１９９０）； Ｂａｔｒａ，Ｊ．Ｋ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５１９８−１５２０２ （１９９０）； Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：９４９１−９４９４ （１９９０）； Ｂａｔｒａ，Ｊ．Ｋ．らのＭｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１：２２００−２２０５ （１９９１）； Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｕ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８６１６−８６２０ （１９９１）； Ｓｅｅｔｈａｒａｍ，Ｓ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１７３７６−１７３８１ （１９９１）； Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｕ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：３０７５−３０７９ （１９９２）； Ｇｌｏｃｋｓｈｕｂｅｒ，Ｒ．らのＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９：１３６２−１３６７ （１９９０）； Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．らのＢｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．９：２７３−２７８ （１９９１）； Ｐａｃｋ，Ｐ．らのＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：１５７９−１５３４ （１９９２）； Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．らのＮａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８ （１９９１）； Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．らのＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７ （１９９１）； Ｉｖｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｌ．らのＳｃｉｅｎｃｅ ２４９：６５９−６６２ （１９９０）； Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｖ．Ａ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６６５４−６６５８ （１９９０）； Ｃｏｎｄｒａ，Ｊ．Ｈ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：２２９２−２２９５ （１９９０）； Ｌａｒｏｃｈｅ，Ｙ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１６３４３−１６３４９ （１９９１）； Ｈｏｌｖｏｅｔ，Ｐ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１９７１７−１９７２４ （１９９１）； Ａｎａｎｄ，Ｎ．Ｎ．らのＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：２１８７４−２１８７９ （１９９１）； Ｆｕｃｈｓ，Ｐ．らのＢｉｏｌ Ｔｅｃｈｎｏｌ．９：１３６９−１３７２ （１９９１）； Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ，Ｆ．らのＧｅｎｅ １０４：１０４−１５３ （１９９１）； Ｓｅｅｈａｕｓ，Ｔ．らのＧｅｎｅ １１４：２３５−２３７ （１９９２）； Ｔａｋｋｉｎｅｎ，Ｋ．らのＰｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｎｇ．４：８３７−８４１ （１９９１）； Ｄｒｅｈｅｒ，Ｍ．Ｌ．らのＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １３９：１９７−２０５ （１９９１）； Ｍｏｔｔｅｚ，Ｅ．らのＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：４６７−４７１ （１９９１）； Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，Ａ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８６４６−８６５０ （１９９１）； Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，Ａ．らのＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５−３６５９ （１９９１）； Ｈｏｏ，Ｗ．Ｆ．Ｓ．らのＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４７５９−４７６３ （１９９３）を参照）。前記出版物のそれぞれが参照により本開示に含まれる。
【００７７】
あるいは、標的部分はオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体でありうる。オリゴヌクレオチド（類似体）は１種類のオリゴヌクレオチドに限定されるのでなく、さまざまなそのような部分と共に働くように設計され、リンカーは１つ以上の３'−または５'−末端、通常はヌクレオチドのＰＯ４またはＳＯ４基と結合できると理解される。オリゴヌクレオチドは、アンチセンスまたは相補オリゴヌクレオチド、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ロックされた核酸（ＬＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴ（ＰＭＯ）およびアプタマーなどを含む。
【００７８】
たとえば、標的基の非限定的な一覧は、血管内皮細胞増殖因子、ＦＧＦ２、ソマトスタチンおよびソマトスタチン類似体、トランスフェリン、メラノトロピン、ＡｐｏＥおよびＡｐｏＥペプチド、フォンヴィルブラント因子およびフォンヴィルブラント因子ペプチド、アデノウイルス線維タンパク質およびアデノウイルス線維タンパク質ペプチド、ＰＤ１およびＰＤ１ペプチド、ＥＧＦおよびＥＧＦペプチド、ＲＧＤペプチド、葉酸などを含む。当業者に公知である他の随意的な標的剤もまた、ここに記載される化合物に使用されうる。
【００７９】
好ましくは、標的剤は、１本鎖抗体（ＳＣＡ）、ＲＧＤペプチド、セレクチン、ＴＡＴ、ペネトラチン、オリゴ（Ａｒｇ）、好ましくは（Ａｒｇ）９、葉酸、などを含む。本発明の目的では、「ＴＡＴ」は、たとえばペプチド配列ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲを含む転写活性化タンパク質のトランスアクチベーターの部分を意味すると理解されうる。本明細書および実施例で使用されたペプチドの配列および構造の一覧は下記を含む：
Ｃ−ＴＡＴ： （配列番号 １） ＣＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ ；
Ｃ−（Ａｒｇ）９： （配列番号 ２）   ＣＲＲＲＲＲＲＲＲＲ ；
ＲＧＤ は 直鎖 または 環状でありうる：
【化１６】
2010503708.tif 000022
【００８０】
葉酸
【化１７】
2010503708.tif 000023
【００８１】
（Ａｒｇ）９はＣＲＲＲＲＲＲＲＲＲのような複合体化のためのシステインを含むことができ、およびＴＡＴはＣＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＣのようなペプチドの末端の追加のシステインを加えることができる。
【００８２】
Ｅ．生物活性部分（Ｄ２）
さまざまな生物活性部分が、ここに記載される活性化ポリマーに結合されうる。生物活性部分は、医薬活性化合物、酵素、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、モノクローナル抗体、１本鎖抗体およびペプチドを含む。
【００８３】
それらの生物活性部分を含むがそれに限定されない、ポリマーに結合されうる任意の細胞毒または化学治療剤、すなわち葉酸などは、本発明の譲受人に譲渡された、参照により本開示に含まれる米国特許第５，９６５，５６６号明細書に記載される。
【００８４】
本発明の１つの態様では、生物活性化合物は、動物、たとえば、ヒトを含む哺乳類の治療における、そのような治療が望まれる症状のための、医薬用途または診断用途に適する。
【００８５】
別の１つの態様では、アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含む生物活性部分は本発明の範囲内である。ここで包括に適する生物活性部分の種類についての制限は、キャリヤー部分と反応および結合しうる利用可能な少なくとも１つのヒドロキシルまたはチオール基が存在すること、およびここに記載のポリマー送達システムと複合体化された形で生物活性の顕著な損失が無いことだけである。
【００８６】
あるいは、本発明のポリマー輸送複合体化合物への組込みに適する親化合物は、結合した化合物からの加水分解遊離後に活性でありうるか、または加水分解遊離後には活性でないが、さらなる化学処理／反応を受けた後に活性となりうる。たとえば、ポリマー輸送システムによって血流へ配送される抗がん剤は、がんまたは腫瘍細胞に入るまで不活性のままであることが可能であり、がんまたは腫瘍細胞化学によって、たとえば、その細胞に特有の酵素反応によって、活性化される。
【００８７】
好ましい１つの実施の形態では、本明細書に記載のポリマー輸送システムは、医薬活性化合物を含む。
【００８８】
本発明の目的では、医薬活性化合物は低分子量分子を含むことが意味されると理解される。典型的には、医薬活性化合物は分子量約１，５００未満である。そのような化合物の非限定的な一覧は、カンプトテシンおよび類似体といったＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤、タキサンおよびパクリタキセル誘導体、ＡＺＴおよびアシクロビルを含むヌクレオシド、ダウノルビシンおよびドキソルビシンを含むアントラサイクリン化合物、Ａｒａ−Ｃ（シトシンアラビノシド）およびゲムシタビンを含む関連代謝拮抗化合物などを含む。
【００８９】
１．タキサンおよびタキサン誘導体
本発明のプロドラッグ組成物に含まれる化合物の一分類がタキサンである。本発明の目的では、「タキサン」の語はテルペンのタキサンファミリー内のすべての化合物を含む。したがって、タキソール（登録商標）（パクリタキセル）、３'−置換ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル−アミン誘導体（タキソテール（登録商標））などおよびたとえば、ミズーリ州セントルイスの Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌから入手可能な他の類似体は本発明の範囲内である。  
これらの化合物は、有効な抗がん剤であることが見出されている。多数の研究が、当該の薬物がいくつかの悪性腫瘍に対する活性を有することを示す。現在まで、それらの使用は、特にそれらの供給不足、低い水溶性、および過敏性によって厳しく制限されている。本発明と同一の譲受人に譲渡された米国特許第５，６２２，９８６号および５，５４７，９８１号の各明細書で開示される７−アリール−カルバメートおよび７−カルバザートを含む他のタキサンもまた、本発明のプロドラッグに含まれうる。前記米国特許の内容は参照により本開示に含まれる。
【００９０】
例は特にパクリタキセルを説明目的で記載するが、ここに記載の方法は、すべてのタキサンおよび関連分子に適することが理解されるべきである。
【００９１】
２． カンプトテシンおよび関連するトポイソメラーゼＩ阻害剤
カンプトテシンは中国原産の樹木camptoteca accuminataおよびインド原産の樹木nothapodytes foetidによって産生される非水溶性細胞毒性アルカロイドである。カンプトテシンおよび関連化合物および類似体はまた強力な抗がん剤または抗腫瘍剤であることが知られており、これらの活性をインビトロ および インビボで示すことが明らかになっている。カンプトテシンおよび関連化合物はまた、本発明のプロドラッグへの変換の候補である。たとえば、米国特許第５，００４，７５８号明細書およびＨａｗｋｉｎｓ，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９２，ｐａｇｅｓ １７−２３を参照。カンプトテシンおよび関連類似体は、たとえば、トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）またはＳＮ３８である。
【００９２】
他のカンプトテシン類似体は、１０−ヒドロキシカンプトテシン、１１−ヒドロキシカンプトテシンおよび／または１０，１１−ジヒドロキシカンプトテシン、７−および／または９−アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、アミノアルキル、などカンプトテシン、１０，１１−アルキレンジオキシカンプトテシンのようなＡ環置換カンプトテシン、参照により本開示に含まれる米国特許第５，６４６，１５９号明細書に開示されるようなものなどを含む、文献に報告されたものを含む。
【００９３】
本発明の好ましい１つの実施の形態では、細胞毒はＳＮ３８である。
【００９４】
３．オリゴヌクレオチド
本発明の範囲をより完全に理解するために、下記の用語が定義される。当業者は、「核酸」または「ヌクレオチド」の語が、特記されない限り、１本鎖でも２本鎖でも、デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、リボ核酸（「ＲＮＡ」）、およびその任意の化学修飾に適用されることを認識するであろう。「オリゴヌクレオチド」は、たとえば長さ約２〜約２００塩基、またはより好ましくは約１０〜約３０塩基の範囲にわたる大きさの、一般的に相対的に短いポリヌクレオチドである。本発明に記載のオリゴヌクレオチドは、特記されない限り、一般的に合成核酸であり、１本鎖である。「ポリヌクレオチド」および「ポリ核酸」の語はまた、ここでは同意語として使用されうる。
【００９５】
本発明で考慮されるオリゴヌクレオチドへの修飾は、たとえば、望ましいポリマーとのオリゴヌクレオチドの共有結合を可能にする官能基または部分での選択されたヌクレオチドへの付加またはその置換、および／または追加の電荷、分極率、水素結合、静電相互作用、および官能性をオリゴヌクレオチドへ組み込む官能性部分の付加または置換を含む。そのような修飾は、２'位糖修飾、５位ピリミジン修飾、８位プリン修飾、環外アミンでの修飾、４−チオウリジンの置換、５−ブロモまたは５−ヨードウラシルの置換、骨格修飾、メチル化、イソ塩基のイソシチジンおよびイソグアニジンといった塩基対の組み合わせ、および類似の組み合わせを含むがそれらに限定されない。オリゴヌクレオチド修飾はまた、キャップ化のような３'および５'修飾を含みうる。ヌクレオシド類似体の非限定的な一覧は下記を含む：
【化１８】
2010503708.tif 000024
【００９６】
それぞれ参照により本開示に含まれる、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ； Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９−４４４３ および Ｕｈｌｍａｎｎ； Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３−２１３に記載されるヌクレオシド類似体のさらなる例を参照。
【００９７】
「アンチセンス」の語はここでは、遺伝子産物をコードするかまたは調節配列をコードする特定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチド配列をいう。「アンチセンス鎖」の語は、「センス」鎖と相補的である核酸鎖について用いられる。細胞代謝の通常の動作では、ＤＮＡ分子のセンス鎖は、ポリペプチドおよび／または他の遺伝子産物をコードする鎖である。センス鎖はメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）転写物（アンチセンス鎖）の合成のためのテンプレートの役割を果たし、ｍＲＮＡは、今度は任意のコードされた遺伝子産物の合成を導く。アンチセンス核酸分子は、目的の遺伝子を逆方向で、相補鎖の合成を可能にするウイルスプロモーターとライゲーションすることによる合成を含む、本分野で公知である任意の方法によって作製されうる。細胞へ一旦導入されると、この転写された鎖は、細胞によって産生される天然配列と組み合わさり、二本鎖を形成する。これらの二本鎖は次いで、さらなる転写または翻訳を遮断する。この方法で、変異表現型が生じうる。「負」または（−）もまた、アンチセンス鎖をいうことが本分野で公知であり、「正」または（＋）もまた、センス鎖をいうことが本分野で公知である。
【００９８】
好ましい１つの実施の形態では、複合体化のための選択はオリゴヌクレオチド（または「ポリヌクレオチド」）であり、複合体化後、標的はオリゴヌクレオチドの残基と呼ばれる。オリゴヌクレオチドは、ホスホロジエステル骨格またはホスホロチオエート骨格を有する任意の既知のオリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチドから選択されうる。
【００９９】
オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体は、約１０〜約１０００核酸、および好ましくはたとえば、長さ約２〜約２００塩基、またはより好ましくは約１０〜約３０塩基の範囲にわたる大きさの、相対的に短いポリヌクレオチドを含みうる。
【０１００】
さらに、本発明に記載の有用なオリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチドは、下記を含むがそれらに限定されない：
天然ホスホロジエステル骨格またはホスホロチオエート骨格または任意の他の修飾骨格類似体を有するオリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチド；
ＬＮＡ（ロックされた核酸）；
ＰＮＡ（ペプチド骨格を有する核酸）；
短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）；
ペプチド骨格を有する核酸（ＰＮＡ）；
ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）；
トリシクロ−ＤＮＡ；
デコイＯＤＮ（２本鎖オリゴヌクレオチド）；
触媒ＲＮＡ配列（ＲＮＡｉ）；
リボザイム；
アプタマー；
シュピーゲルマー（Ｌ−配座オリゴヌクレオチド）；
ＣｐＧ オリゴマーなど、たとえば下記で開示されるもの：
参照により本開示に含まれる、Ｔｉｄｅｓ ２００２，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅｓ，Ｍａｙ ６−８，２００２，Ｌａｓ Ｖｅｇａｓ，ＮＶおよび
Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ＆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１８ｔｈ ＆ １９ｔｈ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００３，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ。
【０１０１】
本発明に記載のオリゴヌクレオチドはまた、下記の表１に列記されるものを含む、本分野で公知の任意の適当なヌクレオチド類似体および誘導体を随意的に含みうる：
【表１】
2010503708.tif 000025
【０１０２】
好ましくは、オリゴヌクレオチドは、腫瘍細胞の標的化に、または抗がん剤に対する腫瘍細胞の耐性にかかわるタンパク質のダウンレギュレーションに関与する。たとえば、がん治療のためのアンチセンスオリゴヌクレオチドによるダウンレギュレーションのための、ＢＣＬ−２のような、本分野で公知である任意の細胞タンパク質ｙが本発明に使用されうる。参照により本開示に含まれる、２００４年４月９日出願の米国特許出願公開第１０／８２２，２０５号明細書を参照。好ましい 治療用オリゴヌクレオチドの非限定的な一覧は、アンチセンスＨＩＦ−１αオリゴヌクレオチドおよびアンチセンススルビビンオリゴヌクレオチドを含む。
【０１０３】
好ましい １つの実施の形態では、オリゴヌクレオチド は、たとえば、ジェナセンス（別名オブリメルセンナトリウム、Ｇｅｎｔａ Ｉｎｃ．社（米国ニュージャージー州バークリーハイツ所在）製）と同一または実質的に同様のヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドでありうる。ジェナセンスは ｉｓ ａｎ １８量体ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ（配列番号６）であり、ヒトｂｃｌ−２ｍＲＮＡの開始配列の最初の６個のコドンと相補的である（ヒトｂｃｌ−２ ｍＲＮＡは本分野で公知であり、 およびたとえば配列番号１９として参照により本開示に含まれる米国特許第６，４１４，１３４号明細書に記載される）。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は２０００年８月にジェナセンスをオーファンドラッグに指定した。好ましい実施形態は下記を含む：
(i)    アンチセンス スルビビン ＬＮＡ （配列番号 ３）
2010503708.tif 000026
【０１０４】
ここで大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート 骨格を表す；
(ii)   アンチセンス Ｂｃｌ２ ｓｉＲＮＡ：
センス     ５'-ＧＣＡＵＧＣＧＧＣＣＵＣＵＧＵＵＵＧＡｄＴｄＴ-３' （配列番号 ４）
アンチセンス ３'-ｄＴｄＴＣＧＵＡＣＧＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＵ-５' （配列番号 ５）
ここでｄＴはＤＮＡを表す；
(iii)  ジェナセンス （ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド）：
（配列番号６）
2010503708.tif 000027
【０１０５】
ここで小文字はＤＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す；
(iv)   アンチセンス ＨＩＦ１α ＬＮＡ （配列番号：７）
５'-ｓＴｓＧｓＧｓｃｓａｓａｓｇｓｃｓａｓｔｓｃｓｃｓＴｓＧｓＴｓａ-３’ 
（配列番号 ７）
ここで大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。
【０１０６】
ＬＮＡは下記に示す２’−Ｏ，４’−Ｃ メチレンビシクロヌクレオチドを含む：
【化１９】
2010503708.tif 000028
【０１０７】
それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１１／２７２，１２４号明細書（表題“ＬＮＡ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｍｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ”）および同第１０／７７６，９３４号明細書（表題“Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”）に開示されるスルビビンＬＮＡの詳細な説明を参照。また、参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１０／４０７，８０７号明細書（表題“Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ＨＩＦ−１ Ａｌｐｈａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”）および同第１１／２７１，６８６号明細書（表題Ｐ“Ｐｏｔｅｎｔ ＬＮＡ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＨＩＦ−１Ａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”）を参照。
【０１０８】
ここに記載される化合物に用いられるオリゴヌクレオチドは、（ＣＨ２）ｗ アミノ リンカーでオリゴヌクレオチドの５’または３’末端にて修飾でき、この態様ではここでｗは 、好ましくは 約１〜約 １０の正の整数、 好ましくは６である。ここに記載される化合物で考慮される修飾オリゴヌクレオチドは、ＮＨ−（ＣＨ２）ｗ−オリゴヌクレオチドでありうる。
【０１０９】
好ましい１つの実施の形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の５'末端が修飾される。たとえば、ポリマー複合体に用いられるｓｉＲＮＡが、５’−Ｃ６−ＮＨ２で修飾される。本発明の特定の一実施形態は、下記の配列を有するＢｃｌ２−ｓｉＲＮＡを用いる：
センス   ５'-(ＮＨ２-Ｃ６)ＧＣＡＵＧＣＧＧＣＣＵＣＵＧＵＵＵＧＡｄＴｄＴ-３'
アンチセンス ３'-ｄＴｄＴＣＧＵＡＣＧＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＡＣＵ-５'
【０１１０】
別の好ましい１つの実施の形態では、ここに記載の化合物は、ヒンダードエステルを含む（ＣＨ２）ｗアミノリンカーで修飾されたオリゴヌクレオチドを含みうる。参照により本開示に含まれる米国仮特許出願第６０／８４４，９４２号明細書（表題“Ｐｏｌｙａｌｋｙｌｅｎｅ Ｏｘｉｄｅｓ Ｈａｖｉｎｇ Ｈｉｎｄｅｒｅｄ Ｅｓｔｅｒ  Ｂａｓｅｄ Ｏｎ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｌｉｎｋｅｒｓ”）を参照。ポリマー化合物はアミノ末端を含まないオリゴヌクレオチドを放出しうる。たとえば、オリゴヌクレオチドは下記の構造を有することが可能であり：
【化２０】
2010503708.tif 000029
【０１１１】
ここでｗは、約１〜約１０の正の整数、好ましくは約６である。
【０１１２】
さらに別の好ましい１つの実施の形態では、オリゴヌクレオチドは（ＣＨ２）ｗスルフヒドリルリンカー（チオオリゴヌクレオチド）で修飾されうる。チオオリゴヌクレオチドは、正電荷ペプチドのシステインと直接に、またはマレイミジル基を介して複合体化するのに使用されうる。チオオリゴヌクレオチドはＳＨ−（ＣＨ２）ｗ−オリゴヌクレオチドの構造を有しうる。チオオリゴヌクレオチドはまた、下記の構造を有するヒンダードエステルを含みうる：
【化２１】
2010503708.tif 000030
【０１１３】
修飾オリゴヌクレオチドの例は下記を含む：
(i)    Ｃ６−ＮＨ２末端で修飾されたジェナセンス：
５'-ＮＨ2-Ｃ6-sｔsｃsｔsｃsｃsｃsａsｇsｃsｇsｔsｇsｃsｇsｃsｃsａsｔ-３’
【化２２】
2010503708.tif 000031
【０１１４】
(ii)   Ｃ６-ＮＨ２末端で修飾されたアンチセンスＨＩＦ１αＬＮＡ：
５'-ＮＨ2-Ｃ6-sＴsＧsＧsｃsａsａsｇsｃsａsｔsｃsｃsＴsＧsＴsａ-３'；
(iii)  Ｃ６−ＮＨ２末端で修飾されたアンチセンススルビビンＬＮＡ ：
５'-ＮＨ2-Ｃ6-smＣsＴsmＣsＡsａsｔsｃsｃsａsｔsｇsｇsmＣsＡsＧsｃ-３'；
(iv)   Ｃ６−ＳＨ末端で修飾されたアンチセンススルビビンＬＮＡ
５'-ＨＳ-Ｃ6- smＣsＴsmＣsＡsａsｔsｃsｃsａsｔsｇsｇsmＣsＡsＧsｃ-３'；
(v)    ヒンダードエステル末端で修飾されたジェナセンス：
【化２３】
2010503708.tif 000032
【０１１５】
４．他の生物活性部分
前記の分子に加えて、本発明の化合物は、多数の他の化合物を用いて調製されうる。たとえば、ＯＨ基を含むシスプラチン誘導体、フロクスウリジン、ポドフィロトキシン、および関連化合物といった生物活性化合物が含まれうる。
【０１１６】
他の有用な親化合物は、たとえば、ある種の低分子量生物活性タンパク質、酵素およびペプチドグリカンを含むペプチド、および他の抗腫瘍剤、フォルスコリンのような心血管治療薬、コンブレタスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ＡｒａＣ、マイタンシンなどのような抗悪性腫瘍薬、バンコマイシンなどのような抗感染薬、ナイスタチンまたはアムホテラシンＢのような抗真菌薬、抗炎症薬、ステロイド剤などを含む。
【０１１７】
前記は本発明のプロドラッグに適する生物活性部分の例である。
【０１１８】
Ｆ．永続的および遊離可能なリンカー：（Ｌ１およびＬ３）
Ｌ１およびＬ３リンカーは、二官能性リンカーを含む。二官能性は永続的または遊離可能なリンカーでありうる。二官能性リンカーはアミノ酸またはアミノ酸誘導体を含む。アミノ酸は天然に存在するおよび非天然に存在するアミノ酸でありうる。天然に存在するアミノ酸の誘導体および類似体、およびさまざまな本分野で公知である非天然に存在するアミノ酸（ＤまたはＬ）、疎水性または非疎水性、もまた本発明の範囲内と考えられる。非天然に存在するアミノ酸の適当な非限定的なリストとしては、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、ベータ−アラニン、ベータ−アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ピペリジン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，４−アミノ酪酸、デスモシン、２，２−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、６−Ｎ−メチル−リジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、およびオルニチンが挙げられる。一部の好ましいアミノ酸残基は、グリシン、アラニン、メチオニンおよびサルコシンから選択され、より好ましくは、グリシンである。
【０１１９】
あるいは、ＴｈｅＬ１およびＬ３は下記から選択でき：
【化２４−１】
2010503708.tif 000033
【化２４−２】
2010503708.tif 000034
【０１２０】
ここで、
Ｒ２１−２９は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェノキシおよびＣ１−６ヘテロアルコキシから選択され；
（ｔ）および（ｔ’）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約１２の整数、より好ましくは約１〜約８の整数、および非常に好ましくは１または２であり； 
（ｖ）および（ｖ’）は独立して０または１である。
【０１２１】
好ましくは、二官能性リンカーは下記から選択でき：
【化２５−１】
2010503708.tif 000035
【化２５−２】
2010503708.tif 000036
【０１２２】
ここで（ｒ）および（ｒ’）は独立して０または１であり、（ｒ）および（ｒ’）の両方が同時に０ではないことを条件とする。
【０１２３】
１．遊離可能なリンカー
本発明の好ましい１つの実施の形態では、ここに記載の化合物は、遊離可能なリンカーに結合した生物活性部分を含む。本発明の１つの長所は、生物活性部分が調節された方法で放出されうることである。
【０１２４】
遊離可能なリンカーには、ベンジル脱離系リンカー、トリアルキルロック系リンカー（またはトリアルキルロックラクトン化系）、ビシン系リンカー、酸不安定性リンカー、リソソームで切断可能なペプチドおよびカテプシンＢ切断可能ペプチドがある。酸不安定性リンカーには、ジスルフィド結合、ヒドラゾンを含むリンカーおよびチオプロピオナートを含むリンカーが含まれうる。
【０１２５】
あるいは、遊離可能なリンカーは、細胞内不安定性リンカー、細胞外リンカーおよび酸性不安定性リンカーである。ヒドラゾン結合のような酸性不安定性リンカーは、酸性リソソーム環境で加水分解されうる。一部の適当な遊離可能なリンカーは、たとえばＶａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＧｌｙおよびＰｈｅ−Ｌｙｓを含むオリゴペプチドである。１つの好ましい遊離可能なリンカーは、カテプシンＢで特異的に分解されうるペプチジルリンカー（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）である。好ましくは、Ｌ３は遊離可能なリンカーを含む。
【０１２６】
好ましい遊離可能なリンカーは下記を含み：
【化２６−１】
2010503708.tif 000037
【化２６−２】
2010503708.tif 000038
【０１２７】
ここで
Ｙ１１−１９は独立してＯ、ＳまたはＮＲ４８であり；
Ｒ３１−４８、Ｒ５０−５１およびＡ５１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、フェノキシおよびＣ１−６ヘテロアルコキシの中から選択され；
Ａｒはアリールまたはヘテロアリール部分であり；
Ｌ１１−１５は独立して選択される二官能性スペーサーであり；
ＪおよびＪ’は独立して、標的細胞内へ能動輸送される部分、疎水性部分、二官能性結合部分およびその組み合わせの中から選択され；
（ｃ１１）、（ｈ１１）、（ｋ１１）、（１１１）、（ｍ１１）および（ｎ１１）は独立して選択される正の整数、好ましくは１であり；
（ａ１１）、（ｅ１１）、（ｇ１１）、（ｊ１１）、（ｏ１１）および（ｑ１１）は独立して、０または正の整数、好ましくは１であり；および
（ｂ１１）、（ｘ１１）、（ｘ’１１）、（ｆ１１）、（ｉ１１）および（ｐ１１）は独立して０または１である。
【０１２８】
ベンジル脱離系またはトリアルキルロック系など、さまざまな遊離可能なリンカーが、たとえば、それぞれ参照により本開示に含まれる、本発明の譲受人に譲渡された米国特許第６，１８０，０９５号、同第６，７２０，３０６号、同第５，９６５，１１９号、同第６６２４，１４２号および同第６，３０３，５６９号の各明細書に記載される。ビシン系リンカーはまた、それぞれ参照により本開示に含まれる、本発明と同一の譲受人に譲渡された米国特許第７，１２２，１８９号および同第７，０８７，２２９号の各明細書および米国特許出願公開第１０／５５７，５２２号、同第１１／５０２，１０８号、および同第１１／０１１，８１８号の各明細書に記載される。
【０１２９】
好ましくは、オリゴヌクレオチドを含む生物活性化合物は、ここに記載の化合物のポリマー部分と、酸不安定性リンカーを介して結合している。理論に縛られることなく、酸不安定性リンカーは、細胞内および特にリソソーム、エンドソーム、またはマクロピノソーム内で、親ポリマー化合物からのオリゴヌクレオチドの遊離を円滑化する。
【０１３０】
２．永続的リンカー
本発明の好ましい態様では、ＳＣＡのような標的部分が、多官能性リンカーへ、永続的リンカーを介して結合される。永続的リンカーは標的部分および多官能性リンカーを複合体化させることができる。１つの好ましい永続的リンカーは、チオエーテル結合を提供できる、マレイミジルを含む分子のような分子でありうる。
【０１３１】
マレイミジル基を含む永続的リンカーは下記の中から選択されうる： 
【化２７】
2010503708.tif 000039
【０１３２】
別の１つの実施の形態では、永続的リンカーは、上記で示すものと対応するがマレイミジル基の代わりにビニルのような基、スルホン、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、カルバメートなどの残基を、マレイミジルの代わりに含む構造を含む。
【０１３３】
Ｇ．脱離基および官能基
一部の態様では、適当な脱離基としては、制限はしないが、当業者には明らかなように、ハロゲン（Ｂｒ、Ｃｌ）、活性化カルボナート、カルボニルイミダゾール、環状イミドチオン、イソシアナート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、パラ−ニトロフェノキシ、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル，イミダゾール、トシラート、メシラート、トレしラート、ノシラート、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、オルト−ニトロフェノキシ、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル、イミダゾール、ペンタフルオロフェノキシ、１，３，５−トリクロロフェノキシ、および１，３，５−トリフルオロフェノキシまたは他の適当な脱離基が挙げられる。
【０１３４】
本発明の目的では、脱離基は、目的の標的すなわち生物活性部分 および標的 部分上に見られる求核試薬と反応できる基と理解すべきである。
【０１３５】
一部の好ましい実施形態では、ポリマー輸送システムを生物活性部分へ結合する官能基は、生物活性基または標的基とさらに複合体化されうるマレイミジル、ビニル、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、カルバザートなどの残基を含む。
【０１３６】
本発明の目的では、Ｄ１またはＤ２が官能基である場合は、Ｌ１およびＬ３基は官能性部分ではない。
【０１３７】
好ましい１つの実施の形態では、官能基はマレイミジルであることが可能で、および脱離基は、ＯＨ、メトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、パラ−ニトロフェノキシおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミジルの中から選択されうる。
【０１３８】
Ｈ．式（Ｉ）に対応する好ましい実施形態
ここに記載の方法によって調製される一部の特定の実施形態は下記を含み： 
【化２８−１】
2010503708.tif 000040
【化２８−２】
2010503708.tif 000041
【化２８−３】
2010503708.tif 000042
【化２８−４】
2010503708.tif 000043
【化２８−５】
2010503708.tif 000044
【０１３９】
ここで
ｍＰＥＧは式：ＣＨ３−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；
ＰＥＧは式−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；
（ｎ）は約１０〜約２、３００の正の整数であり；
Ｒ５１およびＲ５２は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−１２分岐鎖アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、フェノキシおよびＣ１−６ヘテロアルコキシの中から選択され；
Ｄ１は標的部分、官能基または脱離基であり；および
Ｄ２は生物活性部分、官能基または脱離基である。
【０１４０】
本発明に記載の好ましいポリマー化合物は下記を含み： 
【化２９−１】
2010503708.tif 000045
【化２９−２】
2010503708.tif 000046
【化２９−３】
2010503708.tif 000047
【化２９−４】
2010503708.tif 000048
【化２９−５】
2010503708.tif 000049
【化２９−６】
2010503708.tif 000050
【化２９−７】
2010503708.tif 000051
【化２９−８】
2010503708.tif 000052
【化２９−９】
2010503708.tif 000053
【化２９−１０】
2010503708.tif 000054
【化２９−１１】
2010503708.tif 000055
【化２９−１２】
2010503708.tif 000056
【化２９−１３】
2010503708.tif 000057
【化２９−１４】
2010503708.tif 000058
【化２９−１５】
2010503708.tif 000059
【化２９−１６】
2010503708.tif 000060
【０１４１】
ここで
Ｓ−ＳＣＡは１本鎖抗体であり；
ＲＧＤは
【化３０】
2010503708.tif 000061
【０１４２】
であり；
ＬＮＡはロックされた核酸であり；
葉酸は下記の残基であり
【化３１】
2010503708.tif 000062
【０１４３】
ＳＮ３８は７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンであり；
ｍＰＥＧは式：ＣＨ３−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；
ＰＥＧは式−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−を有し；および
（ｎ）は約１０〜約２，３００の正の整数である。
【０１４４】
Ｉ．複合体を作製する方法
一般的に、複合体は、ポリマー、細胞毒および標的部分を多官能性リンカーへ順に結合することによって作製されうる。付加の正確な順序はこの順序に限定されず、および当業者に明らかになる通り、ＰＥＧが最初に多官能性リンカーへ付加され、次いで細胞毒性剤が放出可能に付加され、次いでモノクローナル 抗体のような標的剤剤が付加される態様がある。この一実施形態の一部の好ましい態様に関する詳細は下記の実施例に示される。
【０１４５】
本発明の１つの態様では、多官能性リンカーを有するポリマー化合物は、ＯＨまたは脱離基末端を有するポリマー化合物を、随意的なリンカーを介して付加された細胞毒を含む求核試薬と、複合体化することによって調製されうる。当業者は、ポリマー上の脱離基の数と比較して少ない量の求核試薬を用いて、細胞毒および脱離基の両方を含むポリマー中間体を生じさせることができる。この中間体は、標的部分とさらに反応して、細胞毒および標的剤で多置換されたポリマー複合体を生じることができる。
【０１４６】
あるいは、ポリマーは、さまざまな求核部分に対して異なる化学反応性を与えるために、異なる基を用いて活性化されうる。たとえば、カルボン酸末端のｔｅｒｔ−ブチルエステルおよびメチルエステルなどの異なる保護基は、細胞毒および標的剤のような異なる生物活性剤と複合体化すべきさまざまな程度の活性基を与えるように、選択的におよび段階的に脱保護されうる。図１に示すように、マレイミジル基およびスクシンイミジルエステルは、それぞれＳＨまたはＮＨ２を含む部分と選択的に反応しうる。
【０１４７】
ここに記載されるすべての反応は、当業者に既知の必要な段階および条件を用いる、標準的な化学反応である。ここに記載される合成反応は、したがって、過度の実験を必要としない。
【０１４８】
多官能性リンカーを含むポリマー複合体を調製する方法であって、該方法は、
式（ＩＩＩａ）の化合物を：
【化３２】
2010503708.tif 000063
【０１４９】
式（ＩＩＩｂ）を有する化合物を含む生物活性部分と：
【化３３】
2010503708.tif 000064
【０１５０】
式（ＩＩＩｃ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させる：
【化３４】
2010503708.tif 000065
【０１５１】
工程を有してなり、
ここで、
Ｒ１は実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ａ２１はキャップ基または：
【化３５】
2010503708.tif 000066
【０１５２】
であり；
Ａ２２はキャップ基または：
【化３６】
2010503708.tif 000067
【０１５３】
であり；
Ｍ１は官能基であり；
Ｄ２２は生物活性部分であり；
Ｍ２はＯＨまたは脱離基であり；
Ｍ３はＯＨ、ＮＨ２、またはＳＨであり；
Ｌ１は永続的リンカーまたは遊離可能なリンカーであり；
Ｌ２は多官能性リンカーであり；
Ｌ３は永続的リンカーまたは遊離可能なリンカーであり；
（ａ）および（ｂ）は独立して０または正の整数である。
【０１５４】
本方法はさらに、
式（ＩＩＩｃ）の化合物を：
【化３７】
2010503708.tif 000068
【０１５５】
式（ＩＩＩｄ）を有する求核部分を含む部分と
【化３８】
2010503708.tif 000069
【０１５６】
式（ＩＩＩｅ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させる：
【化３９】
2010503708.tif 000070
【０１５７】
工程をさらに有してなり、
ここで、
Ａ２３はキャップ基または：
【化４０】
2010503708.tif 000071
【０１５８】
であり；
Ｍ１は官能基であり；
Ｄ２１は標的部分であり；および
Ｍ４はＯＨ、ＮＨ２、またはＳＨである。
【０１５９】
式（ＩＩＩｂ）のような求核化合物のＰＥＧまたは他のポリマーへの付加は、当業者によく知られた標準的な化学合成法を用いて実施されうる。ＳＣ−ＰＥＧ、ＰＥＧ−アミン、ＰＥＧ酸などの活性化ポリマー部分は、購入可能であるかまたは過度の実験なしに当業者によって合成されうる。
【０１６０】
式（ＩＩＩｂ）のような求核化合物の、ポリマー部分への付加は、好ましくはカップリング剤の存在下で実施される。適当なカップリング剤の非限定的なリストとしては、たとえばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社などの製造者から入手可能な、または公知の方法で合成される、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）、任意の適当なジアルキルカルボジイミド、２−ハロ−１−アルキル−ピリジニウムハライド（向山試薬）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、プロパンリン酸環状無水物（ＰＰＡＣＡ）およびジクロロリン酸フェニルなどが挙げられる。
【０１６１】
好ましくは、反応は、塩化メチレン、クロロホルム、ＤＭＦまたはその混合物などの不活性溶媒中で実施される。反応は好ましくは、酸が生じれば中和するための、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミンなどといった塩基の存在下で実施されうる。反応は約０℃〜約２２℃（室温）の温度にて実施されうる。ここに記載される方法によって調製される一部の特定の実施形態は下記を含む：
【０１６２】
Ｈ．治療方法
本発明の代替的な態様では、式（Ｉ）の本発明の化合物を含む医薬組成物を有効量で、それらを必要とする患者へ投与することを含む、哺乳類を治療する方法もまた提供される。
【０１６３】
本発明の好ましい１つの態様では、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を有効量で、それらを必要とする患者へ投与することを含む、悪性腫瘍またはがんを有する患者を治療する方法もまた提供される。一部の態様では、治療されるがんは下記のうちの１つ以上でありうる：固形腫瘍、リンパ腫、小細胞肺がん、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、膵臓がん、神経膠芽腫、卵巣がん、胃がんなど。組成物は哺乳類において腫瘍性疾患を治療、腫瘍量を低減、腫瘍の転移を防止、および腫瘍の再発／新生物増殖を防止するのに有用である  
本発明の別の一態様は、哺乳類におけるさまざまな症状のための治療の方法を提供する。要約すると、ＰＥＧ ポリマーに結合されうる任意の 生物活性部分が、そのような治療を必要とする哺乳類 へ投与されうる。  非複合体化状態で治療効果を有する任意のオリゴヌクレオチドなどが、本明細書に記載される通り作製された複合体の形態で使用されうる。
【０１６４】
投与される 組成物の量は、それに含まれる親分子の量に依存する。一般的に、治療法に使用されるプロドラッグの量は、哺乳類において目的の治療結果を有効に達成する量である。当然、さまざまなプロドラッグ化合物の用量は、親化合物、インビボ加水分解の速度、ポリマーの分子量などに依存していくらか変化する。当業者は、臨床経験および治療適応に基づいて、選択されたポリマー輸送複合体の最適用量を決定する。実際の用量は過度の実験なしで当業者に明らかになる。
【０１６５】
本発明の化合物は、哺乳類への投与のための１つ以上の適当な医薬組成物に含まれうる。医薬組成物は、当業者によく知られた方法にしたがって調製された溶液、懸濁液、錠剤、カプセルなどの形でありうる。また、そのような組成物の投与は、当業者の必要に応じて経口および／または非経口経路によることができると考えられる。組成物の溶液および／または懸濁液は、たとえば担体ビヒクルとして、たとえば、静脈、筋肉内、腹腔内、皮下注射などによる、本分野で公知の方法による組成物の注射または浸潤に使用されうる。そのような投与はまた、体腔または洞への注入による、および吸入および／または経鼻経路によることができる。本発明の好ましい態様では、しかし、ポリマー複合体はそれらを必要とする哺乳類へ非経口的に投与される。
【０１６６】
本発明の別の１つの態様では、ポリヌクレオチド（オリゴヌクレオチド）、好ましくはアンチセンスオリゴヌクレオチドを哺乳類細胞へ投与する方法が提供される。当該の方法は、ここで記載の方法の通り調製された複合体を有効量で、治療される症状に送達することを含み、そのような症状に対するポリヌクレオチド効力に依存する。たとえば、非複合体化オリゴヌクレオチド（たとえばアンチセンスＢＣＬ２オリゴヌクレオチド、アンチセンススルビビンオリゴヌクレオチド）が特定のがんまたは新生物細胞に対する効力を有する場合、方法は、オリゴヌクレオチドを含むポリマー複合体を、元々の形態のオリゴヌクレオチドに対して感受性の細胞へ送達することを含む。送達はインビボで適当な医薬組成物の一部として、または生体外の環境で細胞に直接行うことができる。１つの特定の治療では、オリゴヌクレオチド（配列番号１、配列番号２および３、および配列番号４）を含むポリマー複合体が使用されうる。
【実施例】
【０１６７】
下記の実施例は本発明のさらなる理解を提供する役割を果たすが、本発明の範囲をいかなる方法でも制限しないことが意図される。実施例中に挙げられる太字の数字は、図１に示すものに対応する。ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＣＵ（ジシクロヘキシル尿素）、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＩＰＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド）、ＤＳＣ（ジスクシンイミジルカルボナート）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド）、ＥＥＤＱ（２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン）、ＩＰＡ（イソプロパノール）、ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）、ＮＭＭ（Ｎ−メチルモルホリン）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、ＳＣＡ−ＳＨ（１本鎖抗体）、ＳＮ３８（７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン）、ＴＢＤＰＳ（ｔｅｒｔ−ブチル−ジプロピルシリル）、およびＴＥＡ（トリエチルアミン）といった略語が実施例全体にわたって使用される。
【０１６８】
一般的手順：
すべての 反応は乾燥窒素またはアルゴン雰囲気下で実施される。  市販試薬はさらなる精製なしに使用される。すべてのＰＥＧ 化合物は使用前に減圧してまたはトルエンとの共沸蒸留によって乾燥される。特記されない限り、１Ｈ ＮＭＲスペクトルは３００ ＭＨｚにて、および １３Ｃ ＮＭＲスペクトルは７５．４６ ＭＨｚにて、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００ ＮＭＲ分光計および重水素化クロロホルムを溶媒として用いて得られた。化学シフト（δ）はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）から下方領域のｐｐｍで記録される。
【０１６９】
ＨＰＬＣ法：
反応混合物、および中間体および最終生成物の純度は、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄ（登録商標）ＨＰＬＣ装置を用いてモニタされる。それはＺＯＲＢＡＸ（登録商標）３００ＳＢ Ｃ８逆相カラム （１５０ × ４．６ｍｍ） またはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ（登録商標）３００Ａ Ｃ１８逆相カラム（１５０×４．６ ｍｍ）を１６８ダイオードアレイＵＶ検出器と共に、０．０５ ％ トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む１０〜９０％アセトニトリルの勾配を用いて流速１ ｍＬ／分にて使用する）。
【０１７０】
実施例１． Ｎ−（メトキシカルボニル）マレイミド （化合物 １）
クロロギ酸メチル（４．４ｍＬ、５６．７ｍｍｏｌ、１当量）をマレイミド（５．５ｇ、５６．７ｍｍｏｌ、１当量）およびＮＭＭ（６．２ｍＬ、５６．７ｍｍｏｌ、１当量）を含むＥｔＯＡｃ ２００ｍＬの溶液に０℃にて加えた。懸濁液を０℃にて３０分間かくはん、ろ過およびＥｔＯＡｃで洗浄した。ろ液および洗液を合わせ、および冷水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。ろ過および減圧下で乾燥後、桃色の固体が得られた。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによる精製（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ、１：１、ｖ／ｖ）が生成物を得た（４．８ｇ、５５％）。
【０１７１】
実施例２． Ｎε−マレオイル−α−（Ｂｏｃ）−Ｌ−リジン（化合物 ２） 
Ｎ−（メトキシカルボニル）マレイミド（３１５ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ、１当量）を、Ｂｏｃ−Ｌ−リジン（５００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ、１当量）を含む飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１０ｍＬに０℃にて加えた。混合物を０℃にて４０分間および室温にてさらに１時間激しくかくはんした。０℃へ冷却後、溶液をｐＨ３．０へ濃Ｈ２ＳＯ４を用いて酸性化し、その後、酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を合わせ、および無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧して除去後、残渣をＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨの混合物（５：１、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を得た（４５８ ｍｇ，６９％）： １Ｈ ＮＭＲ δ １．３９−１．８７ （６ Ｈ，ｍ，（ＣＨ２）３），１．４４ （９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），３．５２ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ，ＮＣＨ２），４．２５−４．３０ （１Ｈ，ｍ，ＣＨ），５．１５ （１Ｈ，ｄ，ＮＨ），６．７０ （２Ｈ，ｓ，マレイミド）。
【０１７２】
実施例３．Ｎε−マレオイル−α−Ｌ−リジン（化合物３）
Ｎε−マレオイル−α−（Ｂｏｃ）−Ｌ−リジン（１７２ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）を含む無水ＤＣＭ溶液５ｍＬを、２Ｎ ＨＣｌを含むエチルエーテル１０ｍＬ中で１時間室温にて処理し、次いで無水エチルエーテル１０ｍＬを加えた。結果として生じる固体をろ過し、Ｎε−マレオイル−α−Ｌ−リジンのＨＣｌ塩８２ ｍｇ （５９％）を得た：  １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ １．３６−１．５４ （２ Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．６５ （２ Ｈ，ｑ，Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ，ＣＨ２），１．８３−２．０２ （２ Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．４４ （９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），３．５３ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ，ＮＣＨ２），３．９５ （１Ｈ，ｔ，６．２ Ｈｚ，ＣＨ），６．８２ （２Ｈ，ｓ，マレイミド）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ  ２３．１７，２９．０３，３１．０１，３７．９６，１３５．２６，１７２．３４，１７５．２０。
【０１７３】
実施例４．５ＫｍＰＥＧ−アミド−Ｌｙｓ（Ｎε−マレオイル）−ＣＯＯＨ（化合物４）
５ＫｍＰＥＧＣＯＯＮＨＳ（８０５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＤＣＭ ８ｍＬの溶液に、Ｎε−マレオイル−α−Ｌ−リジン（３、８２ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、２当量）を含むＤＭＳ ２ｍＬを、次いでＤＩＥＡ（１０９μＬ、０．６２ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、ろ過し、減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いで、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶した。１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）： δ ２２．５３，２８．０２，３１．６９，３７．３２，５１．１８，５８．８６，７０．１１−７１．７３ （ＰＥＧ），１３３．８４，１６９．５１，１７０．３８，１７２．４１。
【０１７４】
実施例５．５ＫｍＰＥＧ−アミド−Ｌｙｓ（Ｎε−マレオイル）−ＮＨＳ（化合物５）
５ＫｍＰＥＧ−Ｌｙｓ（Ｎε−マレオイル）−ＣＯＯＨ（４）およびＮＨＳを含むＤＣＭを、０℃にてＤＣＣで処理する。混合物を室温にて一夜かくはんする。溶媒を減圧下で蒸発し、残渣をＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いでＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶する。
【０１７５】
実施例６．５ＫｍＰＥＧ−カルバメート−Ｌｙｓ（Ｎε−マレオイル）−ＣＯＯＨ（化合物６）
５ＫｍＰＥＧＣＯＯＮＨＳ（５ｇ、０．９８ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＤＣＭ溶液４５ ｍＬに、Ｎε−マレオイル−α−Ｌ−リジン （３、５１４ ｍｇ、１．９５ ｍｍｏｌ、２ 当量）を含むＤＭＦ ５ ｍＬ、次いでＤＩＥＡ （０．７ ｍＬ、３．９２ ｍｍｏｌ、４ 当量）を加えた。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、ろ過し、減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、次いでＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶し、化合物６を得た： １３Ｃ ＮＭＲ δ ２２．３０，２８．０１，３１．８９，３７．２９，５３．２６，５８．８９，６４．０６，６９．３１−７１．７７ （ＰＥＧ），１３３．８７，１５５．６０，１７０．４２，１７２．８２。
【０１７６】
実施例７．５ＫｍＰＥＧ−カルバメート−Ｌｙｓ（Ｎε−マレオイル）−ＮＨＳ（化合物７）
５ＫｍＰＥＧ−カルバメート−Ｌｙｓ（Ｎε−マレオイル）−ＣＯＯＨ（６、１ｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１当量）およびＮＨＳ（８８ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ、４当量）を含むＤＣＭ溶液１０ｍＬに、０℃にてＤＩＰＣ（１１８μＬ、０．７６ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。混合物を室温にて一夜かくはんした。溶媒を減圧下で蒸発し、残渣をＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いでＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶し、化合物７を得た：   １３Ｃ ＮＭＲ δ ２２．３１，２５．９０，２８．２５，３２．３９，３７．４４，５２．４２，５９．３０，６４．９２，６９．６４−７２．１８ （ＰＥＧ），１３４．２５，１５５．５９，１６７．７５，１６８．５５，１７０．９１。
【０１７７】
実施例８．化合物８
５’ｅｘｔＧＳ（５ｍｇ、０．８５μｍｏｌ）を含むＰＢＳ緩衝液（２．５ｍＬ、ｐＨ７．８）の溶液に、化合物７（９２ｍｇ、１７μｍｏｌ、２０当量）を加え、混合物を室温にて２時間かくはんした。反応混合物を水で１０ｍＬに希釈し、ろ過し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）で予め平衡化させたＰｏｒｏｓＨＱ強陰イオン交換カラム（１０ｍｍ×１．５ｍｍ、ベッドボリューム〜１６ｍＬ）に装填した。カラムを３〜４カラム体積の緩衝液Ａで洗浄して過剰なＰＥＧリンカーを除去した。次いで生成物を０から１００％１Ｍ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．０、緩衝液Ｂへ１０分間の勾配で、次いで１００％緩衝液Ｂで１０分間流速１０ｍＬ／ｍｉｎにて溶出した。溶出した生成物を、ＨｉＰｒｅｐ脱塩カラム（５０ｍＬ）を用いて脱塩し、凍結乾燥して化合物８を得た（１ｍｇオリゴ当量、収率４０％）。
【０１７８】
実施例９． 化合物 ９
化合物８（１ｍｇオリゴ当量）を含むＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ、ｐＨ７．０）の溶液にペプチドｃＲＧＤｆＣ（１ｍｇ、１．７μｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて２時間かくはんした。反応混合物を水で２０ｍＬに希釈し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．０（緩衝液Ａ）で予め平衡化させたＰｏｒｏｓＨＱ強陰イオン交換カラム（１０ｍｍ×１．５ｍｍ、ベッドボリューム〜１６ｍＬ）に装填した。カラムを３〜４カラム体積の緩衝液Ａで洗浄して過剰なＰＥＧリンカーを除去した。次いで生成物を０から１００％１Ｍ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．０、緩衝液Ｂへ１０分間の勾配で、次いで１００％緩衝液Ｂで１０分間流速１０ｍＬ／ｍｉｎにて溶出した。溶出した生成物を、ＨｉＰｒｅｐ脱塩カラム（５０ｍＬ）を用いて脱塩し、凍結乾燥して化合物９を得た（０．７８ｍｇオリゴ当量、収率７８％）。
【０１７９】
実施例１０．化合物１０
ｐ−アミノ−ベンジルアルコール（１ｇ、８．１２ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＴＨＦの溶液８０ｍＬに、ＤＩＥＡ（１．４ｍＬ、８．１２ｍｍｏｌ、１当量）およびＢｏｃ２Ｏ（１．９ｍＬ、８．１２ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。混合物を一夜加熱還流し、次いで冷却し、減圧下で蒸発した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解した。有機層を０．１Ｎ ＨＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発した。粗生成物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製し（Ｈｅｘ−ＥｔＯＡｃ、１：１、ｖ／ｖ）、生成物１．８５ｇ（定量的収量）を得た：  １Ｈ ＮＭＲ δ ０．１．４９ （９Ｈ，ｓ），２．１７ （１Ｈ，ｓ），４．５３ （２Ｈ，ｓ），６．８３ （１Ｈ，ｓ），７．１９ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ），７．２８ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ）； １３ Ｃ ＮＭＲ δ2８．２８，６４．５４，８０．３７，１１８．４９，１２７．５９，１３５．３１，１３７．４６，１５２．７２。
【０１８０】
実施例１１．化合物１１
化合物１０（２２０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ、１当量）およびＤＩＥＡ（１８８μＬ、１．０８ｍｍｏｌ、１．１当量）を含む無水ＤＣＭ８ｍＬの−２０℃溶液へ、ＭｓＣｌ（８４μＬ、１．０８ｍｍｏｌ、１．１当量）を含む無水ＤＣＭ２ｍＬの溶液を滴下して加えた。混合物を室温へ温め、および次いで１時間かくはんした。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液および鹹水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発した。粗化合物をさらに精製せずに次の段階に用いた。
【０１８１】
実施例１２．化合物１２
無水ＤＭＦ１５ｍＬに溶解した化合物１１（０．９８ｍｍｏｌ、２当量）にＳＮ３８（１９２ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１当量）およびＫ２ＣＯ３（６８ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。反応混合物を６０℃へ、予熱した油浴を用いて温めた。２時間後、ＨＰＬＣはＳＮ３８の完全な消失および主生成物の形成を示した。反応混合物を減圧下で蒸発し、残渣をＥｔＯＡｃに再溶解し、水、飽和ＮＨ４Ｃｌおよび鹹水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発した。粗生成物はシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＣＨ２Ｃｌ２−ＥｔＯＡｃ、１：１、ｖ／ｖ）、生成物１４０ｍｇを得た（収率４８％）：  １Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ０．８８ （３Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ），１．２７ （３Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ），１．４７ （９Ｈ，ｓ），１．８５−１．８８ （２Ｈ，ｍ），３．１５−３．１７ （２Ｈ，ｍ），５．２５ （２Ｈ，ｓ），５．２６ （２Ｈ，ｓ），５．４２ （２Ｈ，ｓ），６．４９ （１Ｈ，ｓ），７．２６ （１Ｈ，ｓ），７．４１−７．５６ （６Ｈ，ｍ），８．０５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ），９．３９ （１Ｈ，ｓ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ７．６５，１３．３１，２２．０９，２７．９６，３０．１１，４９．３１，６５．０５，６９．４７，７２．１７，７８．８４，９５．７４，１０３．３９，１１７．７１，１１７．９２，１２２．３５，１２７．４４，１２７．９９，１２８．４３，１２９．５９，１３１．０７，１３９．０７，１４３．４６，１４４．０６，１４５．９２，１４９．２１，１４９．６９，１５２．３７，１５６．４６，１５６．８２，１７２．１１。
【０１８２】
実施例１３．化合物１３
１５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含むＤＣＭ溶液を化合物１２（５３５ｍｇ）に加え、混合物を室温にて１時間またはＨＰＬＣが開始材料の完全な消失を示すまでかくはんした。エチルエーテル（２００ｍＬ）を加え、結果として生じる固体をろ過し、追加のエーテルで洗浄した（３０７ｍｇ、収率５８％）。
【０１８３】
実施例１４．化合物１４
化合物１３（４８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）および１５（３６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）をＥＥＤＱ（４８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、２当量）で処理した。混合物を暗所で室温にて一夜かくはんした。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体残留物をエチルエーテル１０ｍＬと共に磨砕した。固体をろ過し、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ、１５：１ｔｏ９．１）、目的生成物を得た（８ｍｇ、収率９％）：１３ Ｃ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ７．８，１３．４９，１８．１１，１８．１７，１８．５８，１９．１３，１９．２５，２２．２５，２６．５１，２６．７２，２８．１９，２９．５９，３０．２６，３０．４１，３０．５０，４９．４９，５１．６７，５１．８０，５２．９０，５５．９８，５９．２６，５９．６７，６３．０３，６５．２１，６９．５４，７２．３３，７７．９１，７８．０１，９５．９２，１０３．６３，１１８．１０，１１８．９５，１２２．５２，１２７．６３，１２８．２１，１２８．５８，１３１．１７，１３１．２７，１３８．５３，１４３．６９，１４４．２５，１４６．１０，１４９．４３，１４９．８６，１５５．１５，１５５．２６，１５６．６３，１５６．９７，１５８．４８，１５８．６６，１７０．３９，１７１．１５，１７１．３３，１７２．１５，１７２．２９。
【０１８４】
実施例１５．Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＯＨ（化合物１５）
Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＮＨＳ（１０ｇ、３１．８１ｍｍｏｌ、１当量）を含むＤＭＥ８０ｍＬを、Ｌ−シトルリン（５．８５ｇ、３３．４０ｍｍｏｌ、１．０５当量）を含むＴＨＦ２０ｍＬおよびＮａＨＣＯ３（２．８ｇ、３３．４０ｍｍｏｌ、１．０５当量）を含む水８０ｍＬの溶液へ加えた。混合物を室温にて一夜かくはんした。クエン酸水溶液（１５％水溶液２００ｍＬ）を加え、混合物を１０％ＩＰＡ／ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。懸濁液を水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で蒸発した。結果として生じる固体をエチルエーテル２００ｍＬと共に磨砕し、ろ過して生成物を得た（６．０８ｇ、収率５１％）： １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ ０．９２ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），０．９７ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），１．４４ （９Ｈ，ｓ），１．５１−２．０６ （５Ｈ，ｍ），３．１２ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），３．９０ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ），４．３７−４．４１ （１Ｈ，ｍ）。 １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ）： δ １８．５８，１９．８３，２７．５８，２８．７５，３０．０３，３２．０９，４０．４８，５３．３３，６１．３８，８０．４９，１５７．７５，１６２．０５，１７４．３０，１７４．６９。
【０１８５】
実施例１６．化合物１６（Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ）
Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ（１ｇ．２．６７ｍｍｏｌ、１当量）およびｐ−アミノベンジルアルコール（３６２ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を含む２：１ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２６ｍＬ／１３ｍＬ）をＥＥＤＱ（１．３２ｇ、５．３４ｍｍｏｌ、２当量）で処理した。混合物を暗所で室温にて一夜かくはんした。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体残留物をエチルエーテル１０ｍＬと共に磨砕した。固体をろ過によって回収し、エチルエーテルで洗浄して生成物を得た（９００ｍｇ、７０％）：１ＨＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ） δ ０．９３ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ），０．９７ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ），１．４４ （９Ｈ，ｓ），１．４９−２．０６ （５Ｈ，ｍ），３．０７−３．２９ （２Ｈ，ｍ），３．９１ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），４．５０−４．５５ （３Ｈ，ｍ），７．２９ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ），７．５４ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ），８．２２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ １８．６４，１９．８５，２７．８４，２８．７５，３０．６１，３１．９２，４０．２８，５４．９０，５４．９９，６１．７３，６４．７８，８０．６２，１２１．０９，１２８．４４，１３８．４７，１３８．５５，１５８．０１，１６２．１１，１７２．００，１７４．４２，１７４．５２。
【０１８６】
実施例１７．化合物１４（Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＥ−ＳＮ３８）
Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（２１４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１当量）を含むＣＨ３ＣＮ３ｍＬの懸濁液に、ＤＩＥＡ（０．２３ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ、３当量）を加え、次いでＭｓＣｌ（０．１ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ、３当量）を含むＣＨ３ＣＮ１ｍＬの溶液を滴下して加えた。１時間後、ＴＬＣは開始材料が残っていないことを示した（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ、５：１、ｖ／ｖ）。反応混合物を減圧下で蒸発し、結果として生じる残渣をＥｔＯＡｃに溶解した。有機相を飽和ＮＨ４Ｃｌ、飽和ＮａＨＣＯ３および鹹水で洗浄し；ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発した。ＤＭＦ５ｍＬに溶解した粗残渣に、ＳＮ３８（８８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、０．５当量）およびＫ２ＣＯ３（３１ｍｇ、０．２２当量、０．５当量）を加え、混合物を６０℃にて３時間加熱した。生成物の生成をモニタし、実施例１４で調製された生成物とＨＰＬＣによって一致した。
【０１８７】
実施例１８．化合物１７ 
ＤＣＭに含まれる化合物１４を、２Ｎ ＨＣｌを含むエーテルで処理する。反応の完了後、追加のエーテルを加え、結果として生じる固体をろ過し、エーテルで洗浄して、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＥ−ＳＮ３８を与える。化合物５の無水ＤＣＭ溶液をＨＣｌ・Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＥ−ＳＮ３８を含む無水ＤＭＦへ加え、次いでＤＩＥＡを加える。混合物を室温にて一夜かくはんする。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体をＤＣＭ／エーテルで沈澱し、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０１８８】
実施例１９．化合物１８
化合物１７（１当量）を含むＤＣＭ／ＤＭＦの混合物の溶液へ、ＲＧＤＣ（２当量）を加える。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、次いで溶媒を減圧下で蒸発する。残渣をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、ＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０１８９】
実施例２０．化合物１９
２０ｋ４アームＰＥＧＳＣ（７ｇ、０．３５ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＤＣＭ６０ｍＬの溶液へ、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（６９０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ、２当量）を含むＤＭＦ１５ｍＬ、次いでＤＩＥＡ（１ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、ろ過し、減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して化合物１９を与える：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２１．８８，２７．９７，２９．０４，３１．５７，３９．６０，４４．９８，５３．００，６３．４４，６８．８６−７０．３７ （ＰＥＧ），７８．０４，１５５．２６，１７２．８９。
【０１９０】
実施例２１．化合物２０
４アーム−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを含む無水ＤＣＭ２５ｍＬの溶液へ、４Ｎ ＨＣｌを含むジオキサン溶液（２５ｍＬ）を加えた。反応を室温にて４時間かくはんし、次いで減圧下で蒸発した。残渣をエチルエーテルの添加によって沈澱した。固体をろ過し、エーテルで洗浄して４アーム−ＰＥＧ−Ｌｙｓ−ＯＨ（１．７７ｇ）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２１．９７，２６．５４，３１．２２，３９．６３，４５．１１，５３．１６，６３．６６，６９．８８−７０．５１ （ＰＥＧ），７８．０４，１５５．５９，１７２．７８。
【０１９１】
実施例２２．化合物２１
ＢｏｃＣｙｓ（ＮＰｙｓ）−ＯＨ（３００ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１当量）およびＮＨＳ（９７ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．０５当量）を含む無水ＤＣＭの溶液１０ｍＬを０℃にてＤＣＣ（１７３ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．０５当量）で処理した。混合物を室温へ温め、および一夜かくはんした。固体ＤＣＵ副生成物をろ別した。ろ液へ化合物２０（１．７ｇ、０．０８２ｍｍｏｌ、１当量）、次いでＤＩＥＡ（１１４μＬ、０．６６ｍｍｏｌ、８当量）を加えた。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いでＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して化合物２１（１．５ｇ）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２２．３２，２５．５２，２８．２７，２８．８３，３１．９０，３９．０３，４２．４５，４５．３８，５３．４１，５３．５８，６３．９１，６４．３７，６９．３０−７２．３８ （ＰＥＧ），８０．１１，１２０．９８，１３３．９４，１４２．５４，１５３．３４，１５５．５１，１５５．７１，１５７．２８，１６９．９８，１７３．３２。
【０１９２】
実施例２３．化合物２２
化合物２１（１．５ｇ、０．０７ｍｍｏｌ、１当量）およびＮＨＳ（１２５ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１６当量）を含むＤＣＭ溶液１５ｍＬへ０℃にてＤＩＰＣ（１６８μＬ、１．０９ｍｍｏｌ、１６当量）を加えた。混合物を室温にて一夜かくはんした。溶媒を減圧下で蒸発し、残渣をＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いでＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物（１．３ｇ）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２２．０５，２５．７６，２５．９３，２８．６８，２８．９２，３２．０１，３８．８９，４２．４９，４５．７９，５２．４０，５３．９７，６４．７８，６９．５７−７１．７７ （ＰＥＧ），８０．４７，１２１．３２，１３４．２９，１４２．９３，１５３．７５，１５５．７１，１５７．６０，１６８．１８，１６９．１４，１６９．７１，１７０．５６。
【０１９３】
実施例２４．化合物２３
（ＢｏｃＰｈｅＬｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ）。ＢｏｃＰｈｅＯＳｕ（１．５ｇ、４．１４ｍｍｏｌ、１当量）を含むＤＣＭ（１０．３ｍＬ）およびＤＭＦ（１０．３ｍＬ）の溶液へ、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（１．８４ｇ、４．５５ｍｍｏｌ、１．１当量）を、次いでＤＩＥＡ（２．９ｍＬ、１６．５６ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。結果として生じる反応混合物を一夜かくはんし、酢酸エチルで希釈した。溶液を水（３０ｍＬ×２）で、および鹹水（３０ｍＬ×２）で洗浄した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して黄色の残渣を生じた。粗残渣を次いでシリカゲル上でＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（３：１、ｖ／ｖ）を用いてクロマトグラフィーし、生成物を得た。ＭＳ．[Ｍ＋１]＋ ６１６。
【０１９４】
実施例２５．化合物２４
化合物１３（１１１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１当量）および１６（２０８ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．５当量）をＥＥＤＱ（１６７ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、３当量）で処理した。混合物を暗所で室温にて一夜かくはんした。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体残留物をエチルエーテル１０ｍＬと共に磨砕した。固体をろ過し、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによって精製し（ＣＨ２Ｃｌ２−ＥｔＯＡｃ、１：１から１：２、ｖ／ｖ）、目的生成物を得た（２０ｍｇ、収率８％）。ＭＳ．[Ｍ＋１]＋１０９５。
【０１９５】
実施例２６．化合物２５
化合物２４（８当量）を、４Ｎ ＨＣｌを含むジオキサンで処理する。反応を室温にて４時間かくはんする。エチルエーテルを加え、固体をろ過する。この固体をＤＭＦに溶解し、化合物２２（１当量）のＤＣＭ溶液へ加える。その混合物へＤＩＥＡ（１６当量）を加え、反応を室温にて一夜かくはんする。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、ＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０１９６】
実施例２７．化合物２６ 
化合物２５のＤＣＭ溶液へ、ピペリジンを加える。反応混合物を４時間かくはんする。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、ＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０１９７】
実施例２８．化合物２７
化合物２６（１当量）を含むＤＣＭ／ＤＭＦの混合物の溶液へ、ＲＧＤＣ（２当量）を加える。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、次いで溶媒を減圧下で蒸発する。残渣をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、ＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０１９８】
実施例２９．ＦｍｏｃＶａｌ−Ｃｉｔ−ＯＨ（化合物２８）
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＮＨＳ（２．５ｇ、５．７３ｍｍｏｌ、１当量）を含むＤＭＥ１５ｍＬを、Ｌ−シトルリン（１．０５ｇ、６．０１ｍｍｏｌ、１．０５当量）を含むＴＨＦ８ｍＬおよびＮａＨＣＯ３（５０５ｍｇ、６．０１ｍｍｏｌ、１．０５当量）を含む水１５ｍＬの溶液へ加えた。混合物を室温にて一夜かくはんした。クエン酸水溶液（１５％水溶液７５ｍＬ）を加え、混合物を１０％ＩＰＡ／ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で蒸発した。結果として生じる固体をエチルエーテル１００ｍＬと共に磨砕し、ろ過して生成物（１．９８ｇ、収率７０％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ０．８６ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），０．９０ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ），１．４０−１．４８ （２Ｈ，ｍ），１．５１−１．７５ （２Ｈ，ｍ），１．９８ （１Ｈ，ｓｅｘｔ，Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ），２．９５ （２Ｈ，ｑ，Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ），３．９３ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ＝ ７．３，８．８ Ｈｚ），４．１４−４．２９ （４ Ｈ，ｍ），５．４０ （２Ｈ，ｂｒｓ），５．９６ （１Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ），７．３２ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ），７．３９−７．４４ （３Ｈ，ｍ），７．７５ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ），７．８９ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ），８．１９ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ）； １３ Ｃ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １８．３１，１９．２５，２６．７５，２８．４０，３０．５９，４６．６８，５１．９１，５９．８１，６４．９２，６５．６５，１１９．９８，１２５．３０，１２６．９４，１２７．５２，１４０．５５，１４３．６１，１４３．７６，１５５．８８，１５８．５８，１７１．１２，１７３．２５。
【０１９９】
実施例３０．ＦｍｏｃＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（化合物２９）
化合物２８（１ｇ、２．０１ｍｍｏｌ、１当量）およびｐ−アミノベンジルアルコール（２７３ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ、１．１当量）を含むＤＣＭ／ＭｅＯＨの混合物（２０ｍＬ／１０ｍＬ）の溶液をＥＥＤＱ（９９６ｍｇ、４．０３ｍｍｏｌ、２当量）で処理した。混合物を暗所で室温にて一夜かくはんした。溶媒を減圧下で除去し、結果として生じる固体残留物をエチルエーテル１０ｍＬと共に磨砕した。固体をろ過によって回収し、エチルエーテルで洗浄して生成物（９２５ｍｇ、収率７６％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ０．８７ （６Ｈ，ｄ，ｔ ＝ ７．５ Ｈｚ），１．３６−１．４７ （２Ｈ，ｍ），１．５１−１．７５ （２Ｈ，ｍ），１．９９ （１Ｈ，ｓｅｘｔ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），２．９０−３．０４ （３Ｈ，ｍ），３．９３ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ＝ ７．３，８．８ Ｈｚ），４．２３−４．３８ （４ Ｈ，ｍ），４．４３ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ），５．１３ （１Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ），５．４３ （２Ｈ，ｂｒｓ），５．９９ （１Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ），７．２３ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ），７．３２ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ），７．３９−７．４８ （３Ｈ，ｍ），７．５４ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝８．５ Ｈｚ），７．７４ （２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），７．８９ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ），８．１２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ）； １３ Ｃ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １８．３４，１９．２８，２６．８４，２９．５６，３０．４７，４６．６７，５３．０５，６０．０５，６２．５５，６５．６５，１１８．７１，１１９．９８，１２５．２３，１２６．７９，１２６．９４，１２７．５１，１３７．２７，１３７．３６，１４０．５５，１４３．６０，１４３．７３，１５５．９３，１５８．６９，１７０．１７，１７１．０６。
【０２００】
実施例３１．Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ（化合物３０）
化合物２９（６２２ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を含む無水ＤＭＦ１０ｍＬの溶液に、ピペリジン（２ｍＬ）を加えた。混合物を室温にて一夜かくはんし、次いで溶媒を減圧下で蒸発した。残渣ＤＣＭと共に磨砕し、結果として生じる固体をろ過し、ＤＣＭで洗浄して生成物（２８３ｍｇ、収率７２％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ０．７９ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），０．８９ （３Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ），１．３８−１．４２ （２Ｈ，ｍ），１．５２−１．６８ （２Ｈ，ｍ），１．９４ （１Ｈ，ｓｅｘｔ，Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ），２．８９−３．０１ （２Ｈ，ｍ），３．０５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ），４．４６ （２Ｈ，ｓ），５．０９ （１Ｈ，ｂｒｓ），５．４０ （２Ｈ，ｓ），５．９８ （１Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ），７．２３ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ），７．５４ （２Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ），８．１４ （１Ｈ，ｂｒｓ），１０．０３ （１Ｈ，ｓ）； １３ Ｃ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １６．８０，１９．３３，２６．５３，２９．９５，３１．１０，５２．３１，５９．３３，６２．３５，１１８．６１，１２６．５９，１３７．０６，１３７．１４，１５８．４４，１７０．０６，１７３．６９。
【０２０１】
実施例３２．化合物３１
化合物２２（１．３ｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＤＣＭ１５ｍＬの溶液および３ｍＬの無水ＤＭＦへ化合物３０（１７５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ、８当量）を加えた。反応混合物を一夜室温にてかくはんし、次いで溶媒を減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いで、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物（１．１ｇ）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ） δ １８．４８，１９．４６，２２．８５，２６．７４，２８．５４，２８．９４，２９．５０，３０．４７，３１．８１，３９．２１，４２．０４，４５．７９，５３．５１，５４．０６，５５．３２，５９．６７，６４．３２，６５．０４，６９．５４−７０．９９ （ＰＥＧ），８０．７０，１２０．２３，１２１．４４，１２７．６４，１３４．３１，１３７．１６，１４２．９４，１５３．８６，１５５．８６，１５６．８５，１６０．４４，１７０．４５，１７１．０２，１７１．８７，１７３．１９。
【０２０２】
実施例３３．化合物３２
化合物３１（１当量）を含む混合物ｏｆＤＣＭ／ＤＭＦの混合物（４／１、ｖ／ｖ）の溶液へ、ＤＳＣ（１６当量）を加え、混合物を０℃へ冷却する。次いで、ピリジン（１６当量）を加え、混合物を徐々に室温へ温め、および一夜かくはんする。溶媒を減圧下で蒸発し、残渣をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、次いで、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０２０３】
実施例３４．化合物３３
化合物３２の溶液へドキソルビシンを加える。反応混合物を室温にて一夜かくはんする。溶媒を減圧下で蒸発し、残渣をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、次いで、ＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０２０４】
実施例３５．化合物３４
化合物３３（１当量）を含むＤＣＭ／ＤＭＦの混合物の溶液に、ＲＧＤＣ（２当量）を加える。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、次いで溶媒を減圧下で蒸発する。残渣をＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、ＤＭＦ／ＩＰＡで再結晶して生成物を得た。
【０２０５】
実施例３６．化合物３５
化合物１９（６．１４ｇ、０．３０７ｍｍｏｌ、１当量）およびＮＨＳ（２８３ｍｇ、２．４５６ｍｍｏｌ、８当量）を含む無水ＤＣＭの溶液３１ｍＬに０℃にてＤＣＣ（５０７ｍｇ、２．４５６ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、セライト製パッドでろ過し、減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エチルエーテルで沈澱し、次いで、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物（５．６９ｇ、８６％）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２１．５９，２５．２１，２８．１１，２９．０３，３１．４２，３９．３６，４５．１３，５１．８０，６４．０７，６８．９０−７０．５３ （ＰＥＧ），１５５．１５，１５５．５８，１６８．１７，１６８．５４。
【０２０６】
実施例３７．化合物３６
化合物３５（５．０ｇ、０．２３２ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＤＣＭおよび無水ＤＭＦ各２３ｍＬの溶液へ、ＨＣｌ．ＮＨ２Ｃｙｓ（ＮＰｙｓ）−ＯＨ（０．７７ｇ、２．７８ｍｍｏｌ、１２当量）を、次いでＤＩＥＡ（０．６５ｍＬ、３．７１ｍｍｏｌ、１６当量）を加えた。反応混合物を室温にて一夜かくはんし、セライトのパッドを通してろ過後に減圧下で蒸発した。残渣をまずＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いで、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物（４．８８ｇ、収率９５％）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２２．１７，２８．２２，２９．２７，３１．８５，３９．９２，４５．２２，５１．８５，５４．４９，６３．９８，６９．０６−７０．６２ （ＰＥＧ），７８．５６，１２０．８７，１３２．８８，１４２．２７，１５３．４４，１５５．６７，１５６．４７，１６２．１４，１７０．７４，１７１．２０。
【０２０７】
実施例３８．化合物３７
化合物３６（４．３８ｇ、０．１９７ｍｍｏｌ、１当量）を含むＤＣＭ（４４ｍＬ）の溶液へ、ＴＦＡ８．８ｍＬを加え、反応混合物を一夜室温にてかくはんした。２０時間後、反応混合物を減圧下で蒸発し、残渣をまずＤＣＭ／エーテルで沈澱し、次いで、ＣＨ３ＣＮ／ＩＰＡで再結晶して生成物（２．１ｇ、４９％）を得た：１３Ｃ ＮＭＲ δ ２１．４７，２６．４１，３１．６４，３９．４７，４５．２５，５２．３２，５４．１１，６３．７５，６９．１２−７０．６５ （ＰＥＧ），１２０．８５，１３３．４６，１４２．２５，１５３．６７，１５５．６４，１５６．３９，１７１．５３，１７１．７９。
【０２０８】
実施例３９．化合物３８
葉酸（１２４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１当量）を含むＤＭＳＯ３．１ｍＬの溶液へ室温にてＮＨＳ（７１ｍｇ、０．６１６ｍｍｏｌ、２．２当量）を加え、次いでＤＣＣ（６４ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ、１．１当量）およびトリエチルアミン６３μＬを加えた。反応混合物を一夜暗所でかくはんし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドでろ過してＦＡ−ＮＨＳの透明黄色の溶液を得て、それをそのまま、リンカーとの次のカップリング段階に用いた。Ｈ２Ｎ−Ｌｙｓ（４アーム−ＰＥＧ）ＣｙｓＮＰｙｓ（３７、３８１ｍｇ、０．０１７５ｍｍｏｌ、１当量）を含む無水ＤＣＭおよび無水ＤＭＦ各４ｍＬの溶液へ、ＦＡ−ＮＨＳのＤＭＳＯ溶液（上記に示す通り調製）を、次いでＤＩＥＡ（４９μＬ、０．２８ｍｍｏｌ、１６当量）を加えた。反応混合物を一夜暗所で室温にてかくはんした。それを次いで蒸留水で４日間透析した。黄色溶液を次いで凍結乾燥して最終生成物１９７ｍｇを得た。
【０２０９】
実施例４０．化合物３９
Ｃ６−チオ−ＬＮＡ−スルビビン（オリゴＳＨ）を含むｐＨ６．５リン酸緩衝液溶液へ、化合物３８を加え、溶液を１時間室温にてかくはんする。反応進行を陰イオン交換ＨＰＬＣによって観察する。反応混合物を０．２ミクロンフィルターを通してろ過し、Ｐｏｒｏｓ陰イオン交換カラムに負荷する。生成物を、緩衝液系２０ｍＭ Ｔｒｉｓ．ＨＣｌ ２Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０を用いる勾配で溶出する。生成物を脱塩および凍結乾燥する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2010503708.tif 000122
【図９】
2010503708.tif 000123
【図１０】
2010503708.tif 000124
【図１１】
2010503708.tif 000125
【図１２】
2010503708.tif 000126
【図１３】
2010503708.tif 000127
【配列表】
2010503708000001.app
【国際調査報告】
2010503708.tif 000128
2010503708.tif 000129