(57)【要約】Ｃ型肝炎ウイルス感染の治療または予防のために式（１）の結晶性化合物ならびにその塩および溶媒和物が提供される。結晶性化合物（１）を作製および配合する方法が提供される。ある実施形態において、結晶性化合物（１）は、非晶質の化合物（１）および任意の他の結晶形態の化合物（１）を実質的に含まない遊離塩基である。本発明の別の実施形態は、結晶性化合物（１）を作製する方法であって、結晶化溶媒から化合物（１）を結晶化させ、および該結晶化溶媒中の水の量を制御する工程を含む方法である。2010532757.tif 000026
2010532757.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非晶質の化合物（１）を実質的に含まない、式（１）
【化１８】
2010532757.tif 000024
の結晶性化合物およびその塩。
【請求項２】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルにおいて約２３５℃に吸熱開始を有する、請求項１に記載の結晶性化合物。
【請求項３】
約８１Ｊ／ｇ（４２ＫＪ／モル）の融解熱（ＤＨｆ）を有する、請求項２に記載の結晶性化合物。
【請求項４】
Ｘ線粉末回折法で測定して約１７の回折角２θ（°）で少なくとも１つの近似ピークを有する、請求項３に記載の結晶性化合物。
【請求項５】
遊離塩基である、請求項１に記載の結晶性化合物。
【請求項６】
針または棒の形態である、請求項１に記載の結晶性化合物。
【請求項７】
約４０重量％未満の前記非晶質の化合物（１）を含む請求項１に記載の結晶性化合物を含む組成物。
【請求項８】
約１０重量％未満の非晶質の化合物（１）を含む請求項７に記載の結晶性化合物を含む組成物。
【請求項９】
前記結晶性化合物（１）が約１００ｐｐｍ未満の塩化物を含む、請求項８に記載の結晶性化合物を含む組成物。
【請求項１０】
微粉化されている、請求項１に記載の結晶性化合物。
【請求項１１】
非晶質の化合物（１）および任意の他の結晶形態の化合物（１）を実質的に含まない遊離塩基である結晶性化合物。
【請求項１２】
化合物（１）の塩化物塩を実質的に含まない、請求項１に記載の結晶性化合物。
【請求項１３】
請求項１に記載の結晶性化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む組成物。
【請求項１４】
結晶性化合物（１）
【化１９】
2010532757.tif 000025
を作製する方法であって、結晶化溶媒から化合物（１）を結晶化させ、および前記結晶化溶媒中の水の量を制御する工程を含む方法。
【請求項１５】
前記化合物（１）が、溶媒中に約０．９重量％未満の水を含む酢酸エチルまたは酢酸エチル／イソプロピルアルコール溶媒から結晶化される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
結晶化の間に約１０重量％未満の非晶質の化合物（１）が沈殿されるように、前記水の量が制御される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記結晶化溶媒から前記水を共沸除去することによって、前記水が制御される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
約１０％未満の濃度で前記結晶化溶媒中の水を与える工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
連続的により低い濃度の水を含む溶媒から結晶化が行われる、複数の結晶化工程を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
最後の前記結晶化工程が、約０．９％未満の水を含む溶媒から行われる、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
Ｃ型肝炎ウイルスは、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ科のエンベロープを持つ、一本鎖正センスＲＮＡウイルスである。ＨＣＶは主に肝臓の肝細胞内で複製する。循環ＨＣＶ粒子は、肝細胞の表面の受容体に結合し、その後細胞に入る。一旦肝細胞の中に入ると、ＨＣＶは、そのそれぞれの複製を得るために必要な細胞内機構を利用する。Ｌｉｎｄｅｎｂａｃｈ，  Ｂ．  Ｎａｔｕｒｅ、４３６巻（７０５３号）：９３２〜８頁（２００５年）。ＨＣＶゲノムは、翻訳され、約３０１１個のアミノ酸の単一タンパク質を生成する。次いで、この「ポリプロテイン」はウイルスおよび細胞のプロテアーゼによりタンパク質分解処理され、３つの構造タンパク質（ビリオン関連の）および７つの非構造（ＮＳ）タンパク質を生成する。
【０００２】
ＨＣＶは、２つのプロテアーゼであるＮＳ２システインオートプロテアーゼおよびＮＳ３−４Ａセリンプロテアーゼをコード化する。次いで、ＮＳタンパク質は、ウイルスゲノムを再構成（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）細胞質膜に関係しているＲＮＡ複製複合体中に動員する。ＲＮＡ複製は、ＮＳ５ＢのウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを介して起こり、これは負鎖ＲＮＡ中間体を生成する。次いで、この負鎖ＲＮＡは、新しい正鎖ウイルスゲノムを生成するためのテンプレートとして働く。次いで、初期ゲノムは、翻訳され、さらに複製され、または新しいウイルス粒子内に包まれ得る。新しいウイルス粒子は恐らくは、分泌経路内に成長し始め、細胞表面で放出される。
【０００３】
ＨＣＶは、感染患者において毎日生成される約１兆個の粒子を伴う高い複製速度を有する。ＨＣＶ  ＲＮＡポリメラーゼによるプルーフリーディングを欠くので、ＨＣＶは、宿主の免疫応答を逃れるのに役立ち得る要因である、例外的に高い突然変異率も有する。
【０００４】
ＨＣＶ単離体間の遺伝子差に基づいて、Ｃ型肝炎ウイルス種は、６つの遺伝子型（１〜６）に分類され、それぞれの遺伝子型内に数個のサブタイプを有する。サブタイプは、それらの遺伝的多様性に基づいて準種にさらに分類される。ＨＣＶ遺伝子型の優勢および分布は世界的に変化する。例えば、北米では遺伝子型１ａが優勢であり、その後に１、２ａ、２ｂ、および３ａが続く。欧州では、遺伝子型１が優勢であり、その後に２ａ、２ｂ、２ｃ、および３ａが続く。遺伝子型４および５は、アフリカで殆ど独占的にみられる。遺伝子型は、インターフェロンベースの治療に対する応答可能性およびこのような治療の必要期間を決定する上で臨床的に重要である。遺伝子型１および４は、他の遺伝子型（２、３、５および６）に比べてインターフェロンベースの治療にあまり応答しない。遺伝子型１および４に対する標準的なインターフェロンベースの治療の期間は４８週間であるが、遺伝子型２および３に対する治療は２４週間で終了する。
【０００５】
世界保健機構は、世界中で１億７０００万〜２億人の人々（世界人口の３％）がＨＣＶに慢性的に感染していると推定している。これらの患者の約７５％は、それらの血漿中の検出可能なＨＣＶ  ＲＮＡに慢性的に感染している。これらの慢性保菌者は、肝硬変および／または肝癌を発症するリスクがある。７〜１６年間の追跡調査による研究では、患者の７〜１６％が肝硬変を発症し、０．７〜１．３％が肝細胞癌を発症し、１．３〜３．７％が肝臓関連疾患で死亡した。
【０００６】
現在利用できる唯一の治療選択肢は、インターフェロンα−２（またはそのペグ化形態）を単独でまたはリバビリンと組み合わせてのいずれかの使用である。しかし、持続的な応答は、患者の約４０％で観察されるのみであり、治療は重度の副作用を伴う。したがって、効力がありおよび選択的なＨＣＶ阻害剤に対する緊急の必要性がある。
【０００７】
関連の開示には、米国特許第４，９１４，１０８号；同第４，９８８，７０７号；同第４，９９０，５１８号；同第５，１３７，８９６号；同第５，２０８，２４２号；同第５，２２７，３８４号；同第５，３０２，６０１号；同第５，３７４，６３８号；同第５，４０５，９６４号；同第５，４３８，０６３号；同第５，４８６，５２５号；同第６，４７９，５０８号；および米国特許出願公開第２００３／０１０８８６２Ａ１号、カナダ特許第２４２３８００Ａ１号、ドイツ特許第４２１１４７４Ａ１号、同第４２３６０２６号、同第４３０９９６９号、同第４３１８８１３号、欧州特許出願公開第ＥＰ０１３８５５２Ａ２号、同第０７０６７９５Ａ２号、同第１１３２３８１Ａ１号、英国特許第２１５８４４０Ａ号、ＰＣＴ特許公開国際公開第００／２０４１６号、同第００／３９１２７号、同第００／４０５８３号、同第０３／００７９４５Ａ１号、同第０３／０１０１４０Ａ２号、同第０３／０１０１４１Ａ２号、同第９３／０２０８０号、同第９３／１４０７２号、同第９６／１１１９２号、同第９６／１２７０３号、同第９９／２７９２９号、ＰＣＴ−ＵＳ２００４／４３１１２号、ＰＣＴ−ＢＥ２００３／０００１１７号、ＰＣＴ−ＵＳ２００５／２６６０６号、Ａｋａｍａｔｓｕら、「Ｎｅｗ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｒｏｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、４巻：４７５〜４８３頁、Ｊ．ＣＯＭＢ．  ＣＨＥＭ．、２００２年、Ｂａｇｉｎｓｋｉ  ＳＧら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．、２０００年７月５日；９７巻（１４号）：７９８１〜６頁、Ｃｌｅｖｅら、「Ｄｅｒｉｖａｔｅ  ｄｅｓ  Ｉｍｉｄａｚｏ［４．５−ｂ］−  ｕｎｄ  Ｉｍｉｄａｚｏ［４．５−ｃ］ｐｙｒｉｄｉｎｓ」、７４７巻：１５８〜１７１頁、ＪＵＳＴＵＳ  ＬＩＥＢＩＧＳ  ＡＮＮＡＬＥＮ  ＤＥＲ  ＣＨＥＭＩＣＡ、１９７１年、Ｋｉｙａｍａら、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：  Ｉｍｉｄａｚｏ［４，５−ｃ］ｐｙｒｉｄｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｗｉｔｈ  ａｎ  Ａｒｏｍａｔｉｃ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ」、４３巻（３号）：４５０〜６０頁、ＣＨＥＭ  ＰＨＡＲＭ  ＢＵＬＬ、１９９５年、Ｍｅｄｅｒｓｋｉら、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｏｍｅ  Ｎ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｉｍｉｄａｚｏｐｙｒｉｄｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、４８巻（４８号）：１０５４９〜５８頁、ＴＥＴＲＡＨＥＤＲＯＮ、１９９２年、Ｙｕｔｉｌｏｖら、２３巻（１号）：５６〜９頁、ＫＨＩＭＩＫＯＦＡＲＭＡＴＳＥＶＴＩＣＨＥＳＫＩＩ  ＺＨＵＲＮＡＬ、１９８９年が含まれる。さらに、国際公開第０５／０６３７４４号を参照されたい。
【０００８】
式（１）の化合物は、特許文献１の主題である。
【０００９】
【化１】
2010532757.tif 000003
特許文献２の方法によって製造されるような化合物（１）は、実質的にまたは完全に非晶質である。それは水和物（以下「非晶質」の化合物（１））であると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第０８／００５５１９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０５／０６３７４４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、結晶形態の化合物（１）を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の前述の目的を達成することによって、非晶質の化合物（１）を実質的に含まない、式（１）
【００１３】
【化２】
2010532757.tif 000004
を有する結晶性化合物およびその塩が提供される。
【００１４】
ある実施形態において、結晶性化合物（１）は、非晶質の化合物（１）および任意の他の結晶形態の化合物（１）を実質的に含まない遊離塩基である。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、結晶性化合物（１）
【００１６】
【化３】
2010532757.tif 000005
を作製する方法であって、結晶化溶媒から化合物（１）を結晶化させ、および該結晶化溶媒中の水の量を制御する工程を含む方法である。
【００１７】
別の実施形態において、式（１）の塩化物塩を実質的に含まない結晶性遊離塩基化合物（１）を含む組成物が提供される。
【００１８】
結晶性化合物（１）は、治療または予防用量の結晶性化合物（１）を対象に投与する工程を含むＨＣＶ感染の治療または予防のための方法に有用である。別の実施形態は、哺乳動物（より具体的にはヒト）におけるＨＣＶ感染の予防または治療用の薬剤の製造のための結晶性化合物（１）の使用を含む。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む結晶性の式（１）の化合物の薬学的組成物に関する。１つの実施形態において、式（１）の化合物は、有機酸と一緒に配合され、カプセルなどの薬学的剤形に場合によって配合される。別の実施形態において、結晶性化合物（１）は、微粉化され、懸濁液として配合される。
【００２０】
本発明の結晶性化合物（１）または薬学的組成物は、Ｃ型肝炎の治療または予防において用いられる。
【００２１】
結晶性化合物（１）は、薬理学的な特徴および費用効果、特に改善された純度、保存安定性および製造再現性において改善を示す。特定の利点は、非晶質形態と比較してそのより高い融点である。
【００２２】
新規な中間体および製品組成物を含めて、本発明の他の特徴は、全体として本出願を考慮することにより明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、実施例１の方法で得られた、結晶性化合物（１）対照標準に対して得られたＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す図である。
【図２】図２は、結晶性化合物（１）に対して得られた別のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図３】図３は、特許文献１における実施例１ａの方法で得られた化合物（１）の研究ロット番号６の非晶質形態に対して得られたＸ線粉末回折パターンの図である。
【図４】図４は、下記実施例１の方法で得られた、結晶性化合物（１）の対照標準に対して得られたＤＳＣサーモグラム（１℃／分走査）を示す図である。
【図５】図５は、特許文献１における実施例１ａの方法で得られた、化合物（１）の研究ロット番号６の非晶質形態に対して得られたＤＳＣサーモグラム（５℃／分走査）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
結晶性化合物（１）は、その構成分子が３つの空間的な次元すべてにおいて広がる規則的に秩序化した繰返しパターンに充填されている化合物（１）を含む固体と定義される。結晶性の同定は、当業者に知られているいくつかの方法で容易に得られる。試験組成物の顕微鏡検査により、規則的な形状の存在が明らかになり、秩序化した内部構造を示唆することが多い。実施例１で生成される結晶の実施形態の場合、規則的な形状は一般に棒状または針状である。
【００２５】
ＸＲＰＤは、結晶性化合物（１）を同定する別の方法である。結晶中の構成分子の規則的に秩序化した構造は、ピークのスペクトルとして示される明確なパターンで入射Ｘ線を回折する。結晶性化合物（１）に対するこのピークのパターンは、図１および図２に示される。他方、図３は、実質的に非晶質の化合物（１）に対するＸＲＰＤを示し、これは明確なピークを欠く。結晶性化合物（１）に対するＸＲＰＤピークは強度において変わり得るが、同じ一般的なパターンが反復Ｘ線回折分析で存在する。
【００２６】
結晶性化合物（１）は、約１７度（２θ）、通常は１７．４および１７．５でＸＲＰＤ主ピーク（複数可）を示す。「約」によって、本出願人らは、ＸＲＰＤピークの測定における通常の変動以内を意味する。このような変動は、異なる装置、装置設定、製品のバッチ、微粉化または粉砕などの結晶化後処理の使用から、および様々な試料調製方法により生じ得る。一般に、「約」は、±０．５度（２θ）を意味する。この種の変動の例は、図１と図２を比較することによって見ることができる。特に、ピーク強度（例えば、約３０において）は、結晶配向効果により変動し得る。
【００２７】
結晶性化合物（１）に対する他の主ピークの具体的な例は、約８、１０、１３、１６、１９および２４度（２θ）、通常８．４、１０．０、１３．５、１５．７、１６．８、１６．９、１８．８および２４．４においてである。これらのピークのいずれか１つ以上（しかし特に、約１７におけるピークの有無にかかわらず、８、１０、１５．７、１６．７および１６．９）は、結晶性化合物（１）に対するＸＲＤＰを定義するために好適に用いられる。
【００２８】
化合物（１）の結晶形態の同定は、図１または図２に見られる主ピークのいずれか１つ以上の存在を必要としない。むしろ、主ピークの存在または不存在は通常、結晶性化合物（１）として候補を同定するための他の識別上の特徴（例えば、ＤＳＣサーモグラム）とともに考慮される。
【００２９】
結晶性化合物（１）はまた、ＤＳＣサーモグラムによって特徴付けられ、これは示差走査熱量測定プロファイルにおいて約２３５℃で吸熱開始を示す。通常、この測定において一部の変動も生じる（通常、±１〜３℃）。
【００３０】
結晶性化合物（１）はまた、その約８１Ｊ／ｇ（４２ＫＪ／モル）の融解熱（ＤＨｆ）によって特徴付けられる。
【００３１】
結晶性化合物（１）は、溶媒に化合物（１）を溶解させ、それから結晶を形成させる工程を含む方法によって作製される。本明細書での使用のための通常の溶媒は、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、または、酢酸エチルおよびイソプロピルアルコールを含む共溶媒である。他の好適な溶媒は、種々の溶媒に対する誘電率およびヒルデブランド溶解度パラメータをプロットする、ＭｃＣｏｎｖｉｌｌｅ，  Ｆ．Ｘ．「Ｐｉｌｏｔ  Ｐｌａｎｔ  Ｒｅａｌ  Ｂｏｏｋ」（２００２年）の溶解度マップから得られる。
【００３２】
マップ上のエチルアルコールおよびイソプロピルアルコールに近い溶媒（誘電率２．５〜２０およびヒルデブランド１５〜２４）は、エチルエーテル、酢酸イソブチル、酢酸ブチル、アニソール、クロロベンゼン、クロロホルム、酢酸メチル、ＴＨＦ、ジクロロメタン、ジクロロエタン、１，２−ジクロロベンゼン、メチルイソブチルケトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノン、アセトン、１−ブタノール、２−メトキシエタノール、イソブタノール、２−ブタノール、シクロヘキサノール、イソアミルアルコール、ピリジン、ギ酸メチル、１−ペンタノール、および／または２−ブトキシエタノールである。
【００３３】
これらの溶媒の一部は、毒性問題のために好ましくないが、これは、製品からの注意深い溶媒除去によって克服され得る。結晶性化合物（１）の調製のための候補溶媒の適性を決定するために実験室的スクリーニングを行うことは当業者の技術範囲内である。これらの溶媒の組合せも本発明の範囲内に入る。
【００３４】
結晶性化合物（１）の調製を容易にする重要な所見は、結晶化溶媒の水含量を結晶生成物の生成を得るおよび／または最適化するために制御しなければならないことである。例えば、溶媒として酢酸エチルを用いる場合、水含量の上限は重量で約０．６％から０．９％である。
【００３５】
水含量に関するさらなる考慮事項は、液体親油性薬学的担体において結晶性遊離塩基よりも溶けにくい他の形態の化合物（１）を除去するためのその使用である。例えば、化合物（１）の塩化物塩は、本明細書で担体として用いられる脂肪酸溶液中のその遊離塩基よりも溶けにくい。十分に多い量において、このような塩は薬学的生成物において望ましくないかすみを生じる。実施例１の最終合成工程は、少量の塩化物塩と一緒の遊離塩基の混合物を生じる。かすみを生じる塩化物塩は、アルカリ性ｐＨで比較的多量の水（約３％〜１０％）を含む溶媒中にその生成物を最初に溶解させることによって除去される。この溶媒中で還流させることにより、塩化物塩を遊離塩基に逆変換させるために十分な水が存在することが保証される。その後、結晶性遊離塩基はこの溶媒から結晶化される。この処理は場合によって、減少する水濃度とともに繰り返され、生成物から塩化物塩を徐々に除去する。次いで、最終工程は、非晶質の化合物（１）を実質的に含まない遊離塩基を結晶化させるために少ない水含量（通常約０．９％未満の水）で達成される。一般に、最終生成物中の塩化物含量が通常約１００ｐｐｍ未満である場合、薬学的調製物中にかすみは生じない。用いられる水の量は、汚染塩化物塩の濃度および当業者によって決定可能な他の実験的可変要素に依存して変化する。要約すると、結晶化溶媒の水含量は、塩化物（または化合物（１）の他の比較的水溶性の塩）を変換し、および非晶質の化合物（１）の生成を回避することの両方のために制御される。
【００３６】
それぞれの機能に対する許容される水の量は、結晶化に用いられる溶媒（単数または複数）、化合物（１）の濃度、結晶化工程の温度、結晶化時間、非晶質の化合物（１）の許容量、および他の可変要素に依存して変化する。したがって、通常、典型的な可変要素のマトリックス試験を行うことによって、所望の結果を得るための最適水レベルを決定することは当業者の責務である。非晶質の化合物（１）の生成を避けるための最低水濃度は、実際の経済的側面の問題よりも重要である。例えば、０．０５重量％の水は許容される。
【００３７】
一般に、最終結晶化工程は、実質的に無水の溶媒中で行われる。実質的に無水の溶媒は、得られる生成物が結晶性化合物（１）を含み、および非晶質の化合物（１）を実質的に含まない（生成物組成物中の化合物（１）の全形態の合計中、典型的には重量で約４０％未満、通常約３０、２０、１０、５、３、２または１％未満の非晶質の化合物（１））、十分に少量の水を含む溶媒として定義される。
【００３８】
一般に、実質的に無水の溶媒は、結晶化溶媒の重量で約０．５％〜０．９％の水である。しかし、所望の生成物がより多い割合の非晶質の化合物（１）を含むことを許容される場合により多くの水が存在することができる。しかし、これは、化合物（１）組成物が検出可能な非晶質の化合物（１）を有しない場合に最適である。
【００３９】
水含量は、関係した結晶化工程において適切な量の水をもたらす任意の仕方で制御される。非晶質の化合物（１）の形成が避けられるべき場合、水の量を最小化または減少させる好適な技術には、乾燥剤を添加することおよび／または水を共沸除去することが含まれる。結晶化の直前の、化合物（１）の還流溶解中に水を除去することが最も都合がよい。当然、水含量の制御には、典型的には塩化物塩を変換する工程の間の場合と同様に、水を添加することが含まれる。
【００４０】
非晶質の化合物（１）は場合によって、結晶化（形態変換）のための出発物質として用いられる。あるいは、結晶化は、非晶質の化合物（１）の中間体の回収なしに最終反応生成物から直接行われる。結晶化は通常、還流において溶媒または溶媒混合物中に化合物（１）を与えまたは溶解させ（化合物（１）を溶解させるために十分な、約１から５時間）、その後４〜８時間かけて約１８〜２３℃に冷却し、次いで約１８〜２３℃で約８時間から２０時間場合によって攪拌して行われる。攪拌は任意選択であるが、結晶化の速度を増加させる。化合物（１）が溶液中に置かれることが必要なすべてであるので、還流は決定的ではない。しかし、化合物（１）を還流させることは、化合物（１）を迅速に溶解させ、同時に水を共沸除去するという利点を有する。結晶化が始まる前もしくは結晶化の間に、または両方で水は制御されるが、一般に、任意の化合物（１）が非晶質多形として沈殿し得る前に所望限界未満に水を減少させることが最もよい。
【００４１】
非晶質物質の生成は、比較的より長い結晶化時間、より高い温度および化合物（１）のより低い濃度を用いることによって最適化される。種々の最適な結晶化工程パラメータを決定することは、十分に当業者の技術の範囲内である。
【００４２】
本明細書での実施形態は、薬学的に許容される賦形剤および結晶性化合物（１）を組み合わせ、錠剤またはカプセルなどの薬学的剤形を形成するプロセスによって作製される組成物である。得られる生成物は結晶性化合物（１）を含む必要はない。一方、結晶性化合物（１）から作製される剤形が結晶形態の化合物（１）のみを含むことが予想される。しかし、一部の実施形態において、結晶性化合物（１）は担体または賦形剤における溶解のための中間体である。
【００４３】
本発明の結晶性化合物（１）は、治療有効量、すなわち、ＨＣＶ阻害量またはＨＣＶ複製阻害量で、当技術分野でよく知られている任意の手段、すなわち、経口、鼻腔内、皮下、筋内、皮内、静脈内、動脈内、非経口、またはカテーテル法によって対象哺乳動物（ヒトを含む）に投与される。この量は、約１００ｎＭの血漿濃度、タンパク質調整ＥＣ９０の３倍を保証する量であると考えられる。これは通常、ヒトに対して約０．５〜約５ｍｇ／ｋｇ、典型的には約０．７から２．２ｍｇ／ｋｇ、最も普通には約１．２ｍｇ／ｋｇ体重の１日経口投与によって達成されることが予想される。
【００４４】
本発明の化合物の最適投与量は、所与の製剤中の化合物のバイオアベイラビリティ、対象における化合物の代謝および分布、対象の絶食または給餌状態、製剤中の担体および賦形剤の選択、ならびに他の要因を含む、当業者に知られている多くの要因に依存する。適切な投与は典型的には、臨床前および臨床設定において決定され、十分に当業者の技術範囲内である。治療有効量の本発明の化合物は場合によって、感染の性質、患者の一般状態および本発明の化合物の製剤に依存して、１日当たり数個のサブユニットに分割されるか、または毎日もしくは２日以上の間隔で投与される。一般に、本化合物は１日２回投与される。
【００４５】
本発明の化合物は、ＨＣＶ感染に対して有効な他の薬剤と合わせて用いられる。それらは場合によって、治療コースにおいて別々に投与されるか、または、錠剤、静脈注射用溶液もしくはカプセルなどの単一の剤形において化合物（１）と組み合わせられる。このような他の薬剤には、例えば、インターフェロン−アルファ、リバビリン、ならびに／あるいは欧州特許第１１６２１９６号、国際公開第０３／０１０１４１号、国際公開第０３／００７９４５号、国際公開第００／２０４４２５号および／または国際公開第０３／０１０１４０号（およびそれらの特許ファミリー内の他の出願）の開示内に入る化合物が含まれる。本発明の化合物と一緒に治療コースにおいて投与するための他の薬剤には、現在臨床試験中の化合物、特に、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤（例えば、ＶＸ−９５０（Ｖｅｒｔｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＳＣＨ５０３０３４７（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）およびＢＩＬＮ−２０６１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）など）、ヌクレオシドＨＣＶ阻害剤（例えば、ＮＭ２８３、ＮＭ１０７（Ｉｄｅｎｉｘ／Ｎｏｖａｒｔｉｓの両方）およびＲ１６２６（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）など）、および非ヌクレオシドＨＣＶ阻害剤（ＨＣＶ−０８６および−７９６（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ／Ｗｙｅｔｈの両方）を含む）が含まれる。補助的な抗ウイルス薬は、従来の量で用いられる。本発明の化合物および補助化合物の効果が加成性である場合、それぞれの活性薬剤の量は場合によって相応に減少させられ、薬剤が相乗的に作用する場合はよりそうである。しかし、一般に、薬剤は単一の組合せ組成物においてそれらの通常の活性量で用いられる。
【００４６】
共投与剤は一般に、それらが化学的に適合しておりおよび同じ経路で投与されることが意図される限り本発明の化合物と一緒に単一の組成物中に配合される。そうでない場合、それらは場合によって、別々の容器または区画に２種の薬剤を含む医療キットまたは包装の形態で提供される。
【００４７】
本発明の化合物は通常、遊離塩基として与えられるが、また場合によって塩として調製される。塩は通常、遊離塩基に有機および／または無機酸の酸付加によって調製される。例には、（１）無機酸、例えば、ヒドロハロゲン酸（例えば、塩化水素酸または臭化水素酸）、硫酸、硝酸、リン酸およびスルファミン酸；または（２）有機酸、例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、安息香酸、２−ヒドロキシプロパン酸、２−オキソプロパン酸、乳酸、フマル酸、酒石酸、ピルビン酸、マレイン酸、マロン酸、リンゴ酸、サリチル酸（例えば、２−ヒドロキシ安息香酸）、ｐ−アミノサリチル酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸、コハク酸、シュウ酸およびクエン酸；有機スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ならびにシクロヘキサンスルファミン酸が含まれる。通常の塩は、塩化物、硫酸塩、重硫酸塩、メシレート、ベシレート、エシレート、リン酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、および／またはフマル酸塩である。また、本発明の範囲内に、１種または複数のアミノ酸、典型的にはタンパク質に見いだされるアミノ酸の１種などの天然起源のアミノ酸と本発明の化合物との塩も含まれる。この塩が、毒性が関連しない化合物の調製における中間体として用いられていない限り、この酸性対イオンは望ましくは生理学的に無毒および非毒性であるか、そうでなければ薬学的に許容される。通常、化合物（１）は遊離塩基として投与されるが、適切な塩には、メシレート（メタンスルホン酸）およびＨＣｌが含まれる。
【００４８】
本発明の化合物には、本発明の化合物またはそれらの塩と形成される溶媒和物、例えば、水和物、アルコレートなどが含まれる。
【００４９】
本発明の薬学的化合物は場合によって、通常の実務に従って選択される従来の薬学的担体および賦形剤と一緒に配合される。錠剤は、賦形剤、流動促進剤、充填剤、結合剤などを含む。水性製剤は、無菌形態で調製され、経口投与以外による送達が意図される場合、一般に等張性である。製剤は場合によって、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（２００５年）に示されるものなどの賦形剤を含み、これにはアスコルビン酸および他の酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロースなどの炭水化物および／またはオレイン酸もしくはステアリン酸などの有機酸が含まれる。
【００５０】
本明細書で用いられる「薬学的に許容される担体」という用語は、その調製および／または治療される部位に対するその塗布もしくは散布を容易にするために活性成分と一緒に配合される任意の材料または物質を意味する。本発明の組成物における使用のための好適な薬学的担体は、当業者によく知られている。それらには、例えば、湿潤剤、分散剤、接着剤、乳化剤、溶媒、流動促進剤、コーティング剤、抗菌および抗真菌剤（例えば、フェノール、ソルビン酸、クロロブタノール）、ならびに等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）などの添加剤が含まれるが、同じものが薬学的実務と一致する、すなわち、それらは哺乳動物に対して毒性でないことを条件とする。
【００５１】
本発明の薬学的組成物は、選択された担体材料および、必要に応じて、例えば、表面活性剤などの他の添加剤と一緒に任意の知られている仕方で、シングルステップまたはマルチステップ操作で活性成分を、例えば、均質に混合する、コーティングするおよび／または粉砕することによって調製される。ミクロスフィア（通常約１から１０ｇｍの直径を有する）中に配合される本発明の化合物を含む組成物は、制御または持続放出製剤として有用である。
【００５２】
１つの任意選択の製剤において、化合物（１）は、微粉化された形態、通常、約１〜２０ミクロンの範囲内の任意の点における平均粒径に粉砕される。実施例１の生成物は、棒または針であり、通常約２５〜４０ミクロンの結晶長の範囲を示す。これらは場合によって、約３〜４ミクロンの、および約７〜８平方メートル／ｇの表面積を有する粒子を得るためにＪｅｔ  ｍｉｌｌ−００において約６０〜８０ｐｓｉで微粉化される。しかし、出発時の結晶の大きさはロット間で変わり、微粉化の程度は選択の問題である。したがって、微粉化結晶性化合物（１）は、本明細書で記載される例示的な１つなどの微粉化プロセスを受けた結晶または非晶質の化合物（１）として単に定義される。得られる粒子の大きさまたは表面積のいずれも決定的ではない。微粉化化合物（１）は、以下にさらに記載されるような懸濁化剤、乳化剤および／または表面活性剤によって場合によって補助されて、水溶液中で懸濁される。
【００５３】
通常、薬学的製剤は、結晶性化合物（１）が適切な溶媒もしくは可溶化剤、またはそれらの組合せに溶解している化合物（１）の可溶化形態である。結晶性化合物（１）は、治療的または予防的投与のための薬学的に許容される賦形剤中に可溶化される。
【００５４】
薬学的調製物のための化合物（１）の好適な溶液には、通常はカプリン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸、パルミチン酸および／またはミリスチン酸のような脂肪酸である種々の有機酸（典型的にはＣ４〜Ｃ２４）と一緒の水が含まれる。脂肪酸は場合によって、飽和もしくは不飽和、またはそれらの混合物である。さらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および／または、短鎖、中鎖、もしくは長鎖のモノ、ジ、もしくはトリグリセリドが、有機酸に対して補助的に、またはそれらの代わりに用いられる。ペグ化された短鎖、中鎖または長鎖の脂肪酸も場合によって同様に用いられる。
【００５５】
最も一般的な有機酸は、その酸性がカルボキシル基−ＣＯＯＨに関係するカルボン酸である。基ＯＳＯ３Ｈを含むスルホン酸は、本明細書での使用のために比較的より強い酸である。一般に、酸は望ましくは、親油性ドメインを含む。モノカルボン酸またはジカルボン酸が好適である。
【００５６】
好適な表面活性剤は場合によって、本発明の製剤（以下の薬剤のいずれか１種または複数、通常それらのいずれか１種）の任意のものと一緒に用いられる。このような薬剤はまた、エマルゲンまたは乳化剤として知られており、本発明の薬学的組成物に有用である。それらは、好適な乳化、分散および／または湿潤特性を有する非イオン性、カチオン性および／またはアニオン性材料である。好適なアニオン性表面活性剤には、水溶性せっけんおよび水溶性合成表面活性剤の両方が含まれる。好適なせっけんは、高級脂肪酸（Ｃ１０〜Ｃ２２）のアルカリまたはアルカリ土類金属塩、非置換もしくは置換アンモニウム塩、例えば、オレイン酸もしくはステアリン酸の、またはココナッツ油もしくは獣脂油から得られる天然脂肪酸混合物のナトリウムもしくはカリウム塩である。合成表面活性剤には、ポリアクリル酸のナトリウムまたはカルシウム塩；脂肪スルホン酸塩および硫酸塩；スルホン化ベンズイミダゾール誘導体およびアルキルアリールスルホン酸塩が含まれる。脂肪スルホン酸塩または硫酸塩は、通常アルカリまたはアルカリ土類金属塩、非置換アンモニウム塩または、８から２２個の炭素原子を有するアルキルもしくはアシルラジカルで置換されたアンモニウム塩、例えば、リグノスルホン酸もしくはドデシルスルホン酸のナトリウムもしくはカルシウム塩、または天然脂肪酸から得られた高級アルコール硫酸エステル塩の混合物、硫酸もしくはスルホン酸エステル（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のアルカリもしくはアルカリ土類金属塩および脂肪アルコール／エチレンオキシド付加物のスルホン酸のアルカリもしくはアルカリ土類金属塩の形態である。好適なスルホン化ベンズイミダゾール誘導体は好ましくは、８から２２個の炭素原子を含む。アルキルアリールスルホン酸塩の例は、ドデシルベンゼンスルホン酸もしくはジブチル−ナフタレンスルホン酸またはナフタレン−スルホン酸／ホルムアルデヒド縮合生成物のナトリウム、カルシウムもしくはアルコールアミン塩である。対応するリン酸塩、例えば、リン酸エステルの塩およびｐ−ノニルフェノールとエチレンおよび／またはプロピレンオキシドとの付加物、またはリン脂質も好適である。本目的のための好適なリン脂質は、セファリンまたはレシチンタイプの天然（動物または植物細胞起源）または合成リン脂質、例えば、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセリン、リソレシチン、カルジオリピン、ジオクタニルホスファチジル−コリン、ジパルミトイルホスファチジル−コリンおよびそれらの混合物である。このような薬剤と一緒の水性エマルジョンは本発明の範囲内である。
【００５７】
好適な非イオン性界面活性剤には、分子中に少なくとも１２個の炭素原子を含むアルキルフェノール、脂肪アルコール、脂肪酸、脂肪族アミンまたはアミドのポリエトキシ化およびポリプロポキシ化誘導体、アルキルアレーンスルホネートおよびジアルキルスルホスクシネート、例えば、脂肪族およびシクロ脂肪族アルコール、飽和および不飽和脂肪酸ならびにアルキルフェノールのポリグリコールエーテル誘導体（前記誘導体は好ましくは（脂肪族）炭化水素部分に３から１０個のグリコールエーテル基および８から２０個の炭素原子ならびにアルキルフェノールのアルキル部分に６から１８個の炭素原子を含む）が含まれる。さらに好適な非イオン性界面活性剤は、アルキル鎖に１から１０個の炭素原子を含むポリプロピレングリコール、エチレンジアミノポリプロピレングリコールと一緒のポリエチレンオキシドの水溶性付加物であり、この付加物は２０から２５０個のエチレングリコールエーテル基および／または１０から１００個のプロピレングリコールエーテル基を含む。このような化合物は通常、プロピレングリコール単位当たり１から５個のエチレングリコール単位を含む。非イオン性界面活性剤の代表的な例は、ノニルフェノール−ポリエトキシエタノール、ヒマシ油ポリグリコール酸エーテル、ポリプロピレン／ポリエチレンオキシド付加物、トリブチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリエチレングリコールおよびオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである。ポリエチレンソルビタン（例えば、ポリオキシエチレンソルビタントリオレート）、グリセロール、ソルビタン、ショ糖およびペンタエリトリトールの脂肪酸エステルも好適な非イオン性界面活性剤である。
【００５８】
好適なカチオン性界面活性剤には、ハロ、フェニル、置換フェニルまたはヒドロキシで場合によって置換された４個の炭化水素ラジカルを有する四級アンモニウム塩、特にハロゲン化物；例えば、Ｎ−置換基として少なくとも１個のＣ８からＣ２２アルキルラジカル（例えば、セチル、ラウリル、パルミチル、ミリスチルおよびオレイル）ならびに、さらなる置換基として、非置換またはハロゲン化低級アルキル、ベンジルおよび／またはヒドロキシ−低級アルキルラジカルを含む四級アンモニウム塩が含まれる。
【００５９】
本目的に好適な界面活性剤のより詳細な説明は、「ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ  Ａｎｎｕａｌ」（ＭＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｒｏｐ．、Ｒｉｄｇｅｗｏｏｄ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９８１年）、「Ｔｅｎｓｉｄ−Ｔａｓｃｈｅｎｂｕｃｗ」、第２版（Ｈａｎｓｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｖｉｅｎｎａ、１９８１年）および「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ」、（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８１年）に見いだされる。
【００６０】
本発明の化合物は、治療される状態に対して適切な任意の経路、例えば、経口、直腸、鼻腔、局所（眼、頬および舌下を含む）、膣および非経口（皮下、筋内、静脈内、皮内、髄腔内および硬膜外を含む）などによって投与される。投与の好ましい経路は、例えば、受容者の状態により変わり得るが、一般には経口である。
【００６１】
経口投与のための本発明の化合物の製剤は通常、それぞれ所定量の活性成分を含むカプセル、カシェもしくは錠剤などの別個の単位として；粉末もしくは顆粒形態として；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；または水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして提示される。本発明の化合物は場合によって、ボーラス、舐剤またはペーストとして提示される。
【００６２】
錠剤は、場合によって１種または複数の補助成分と一緒に圧縮または成形によって作製される。圧縮錠剤は、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、界面活性剤および／または分散剤と場合によって混合して、粉末または顆粒などの自由流動形態で本発明の化合物を適切な機械で圧縮することによって調製される。成形錠剤は通常、不活性液体希釈剤で湿潤化された粉末化化合物の混合物を適切な機械で成形することによって作成される。錠剤は場合によって、被覆または分割されていてもよく、その中の活性成分の遅延または制御放出を与えるように配合されていてもよい。
【００６３】
製剤は、例えば、０．０７５から２０％ｗ／ｗ（例えば、０．６％ｗ／ｗ、０．７％ｗ／ｗなどの０．１％ｗ／ｗの増加で０．１％から２０％の範囲の活性成分（複数可）を含む）、好ましくは０．２から１５％ｗ／ｗ、最も好ましくは０．５から１０％ｗ／ｗの量で活性成分（複数可）を含む局所軟膏またはクリームとして場合によって適用される。軟膏で配合される場合、本化合物はパラフィン軟膏基剤または水混和性軟膏基剤とともに用いられる。あるいは、本化合物は、水中油型クリーム基剤とともにクリーム中で配合される。必要に応じて、クリーム基剤の水相には、例えば、少なくとも３０％ｗ／ｗの多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）およびそれらの混合物などの２種以上のヒドロキシル基を有するアルコールが含まれ得る。局所製剤には望ましくは、皮膚または他の患部を通して活性成分の吸収または浸透を高める化合物が含まれ得る。このような皮膚浸透強化剤の例には、ジメチルスルホキシドおよび関連類似体が含まれる。
【００６４】
本発明のエマルジョンの油相は、知られている仕方で知られている成分から構成される。この相は単に乳化剤（別にエマルゲンとして知られている）を含み得るが、脂肪もしくは油または脂肪および油の両方と一緒の少なくとも１種の乳化剤の混合物を含むことが望ましい。場合によって、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれる。油および脂肪の両方を含むことも好ましい。全体的に、安定剤（複数可）と一緒または一緒でない乳化剤（複数可）は、いわゆる乳化ワックスを構成し、油および脂肪と一緒のこのワックスは、クリーム製剤の油性分散相を形成するいわゆる乳化軟膏基剤を構成する。
【００６５】
製剤のための好適な油または脂肪の選択は、所望の化粧特性を達成することに基づく。したがって、クリームは場合によって、チューブまたは他の容器からの漏れを避けるための適切な稠度を持った、非脂肪性、非汚染性および洗浄できる製品であるべきである。例えば、ジイソアジペート、イソセチルステアレート、ココナッツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、イソプロピルミリステート、デシルオレエート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレート、２−エチルヘキシルパルミテートまたはＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして知られている分岐鎖エステルのブレンドなどの直鎖または分岐鎖の、モノまたはジ塩基性アルキルエステルが用いられ得、最後の３つは好ましいエステルである。これらは、必要とされる特性に依存して単独でまたは組み合わせて用いられ得る。あるいは、白色軟パラフィンおよび／または液体パラフィンあるいは他の鉱油などの高融点液体が用いられ得る。
【００６６】
眼に対する局所投与に好適な製剤には、活性成分が適切な担体、特に活性成分のための水性溶媒に溶解または懸濁している点眼液も含まれる。この活性成分は場合によって、このような製剤中に、０．５から２０％、有利には０．５から１０％、特に約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【００６７】
口腔における局所投与に好適な製剤には、フレーバー基剤、通常ショ糖およびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含む薬用キャンデー；ゼラチンおよびグリセリン、またはショ糖およびアカシアなどの不活性基剤中に活性成分を含むトローチ；ならびに適切な液体担体中に活性成分を含むうがい薬が含まれる。
【００６８】
直腸投与のための製剤は、例えば、ココアバターまたはサリチル酸塩を含む適切な基剤を有する坐薬として提示され得る。担体が固体である、鼻腔内投与に好適な製剤には、例えば、２０から５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗末（３０ミクロン、３５ミクロンなどの５ミクロンの増加で２０から５００ミクロンの間の範囲の粒径を含む）が含まれ、これらの多くの例が利用できるエアロゾルまたは粉末吸入器によって投与される。例えば、鼻腔内スプレーまたは点鼻薬としての投与のための、担体が液体である好適な製剤には、活性成分の水溶液または油性溶液が含まれる。
【００６９】
膣内投与に好適な製剤は、活性成分に加えて、適切であると当技術分野で知られているような担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡状物またはスプレー製剤として提示され得る。
【００７０】
非経口投与に好適な製剤には、水性および非水性の殺菌注射溶液が含まれ、これは酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬および、意図される受容者の血液と製剤を等張にさせる溶質；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性殺菌懸濁液を含み得る。製剤は、単位用量または複数用量の容器、例えば、密封アンプルおよびバイアルで提示され、使用直前に、殺菌液体担体、例えば、注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存され得る。即時注射溶液および懸濁液は、前に記載された種類の殺菌粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。
【００７１】
本発明の化合物は場合によって、より少ない頻度の投与を可能にし、または本発明化合物の薬物動態学的または毒性プロファイルを改善するために化合物の放出が制御および調節される制御放出組成物中に配合される。制御放出組成物は、その多くが１種または複数のポリマー担体、例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレン−ビニルアセテートコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよび／または硫酸プロタミンなどと一緒に活性化合物を配合することを含む、知られている方法に従って調製される。薬剤放出の速度および作用期間は場合によって、ポリマー性物質、例えば、ヒドロゲル、ポリ乳酸、ヒドロキシメチルセルロース、ポリメチルメタクリレートおよび他の上記ポリマーの粒子、例えば、マイクロカプセル中に活性成分を取り込むことによって制御される。リポソーム、ミクロスフィア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、ナノカプセルなどのコロイド薬剤送達システムも好適である。投与の経路に依存して、薬学的組成物、例えば、錠剤は、保護コーティングを必要とし得る。
【００７２】
本発明は、以下の実施例を参照することによってより十分に理解されるが、これらは単に説明に役立つためであり、本発明の範囲を限定しないと考えられるべきである。
【００７３】
文脈からその他であることが明らかでない限り、組成物パーセンテージは重量による。
【実施例】
【００７４】
（実施例１）
結晶５−（（６−（２，４−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］ピリダジン−３−イル）メチル）−２−（２−フルオロフェニル）−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジンの合成
スキーム１
【００７５】
【化４】
2010532757.tif 000006
工程１
【００７６】
【化５】
2010532757.tif 000007
２，４−ビス（トリフルオロメチル）ブロモベンゼン（１．００当量）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を含む反応器に、内容物を−１０℃に維持しながら、塩化イソプロピルマグネシウム（ｉＰｒＭｇＣｌ）（ＴＨＦ中２Ｍ、１．１４当量）を入れた。この混合物を、反応がＨＰＬＣ分析で終了するまで−１０℃で攪拌した。得られた混合物を、−１０℃の温度で保持されたホウ酸トリメチル（２．２６当量）およびＴＨＦを含む第２の反応器に移した。次いで、１，３−ビス（トリフルオロメチル）ベンゼンが２％以下になるまで反応をＨＰＬＣでモニターした。次いで、内容物を２５℃以下に維持しながら、水および３７％濃塩酸（ＨＣｌ）から調製したＨＣｌ水溶液（塩酸水溶液）を添加して反応をクエンチした。内容物を１〜２時間攪拌し、約３０分間安定させた後に、それらの層が分離された。有機層を水と混合したブライン溶液で洗浄し、次いで、真空下で濃縮した。ヘプタンを入れ、内容物を真空下でさらに濃縮した。この操作をさらに１回繰り返した。次いで、ヘプタンを入れ、得られたスラリーを３℃に冷却し、その温度で４〜６時間攪拌する。
【００７７】
生成物を濾過し、ヘプタンで２回洗浄し、真空下で最高４０℃において乾燥させた。
【００７８】
【化６】
2010532757.tif 000008
工程２
【００７９】
【化７】
2010532757.tif 000009
３−クロロ−６−メチルピリダジン（１．００当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）ビフェニル（０．０５当量）、２，４−ビス（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸（１．８５当量）、１，２−ジメトキシエタンおよび炭酸カリウム水溶液を反応器中にすべて入れた。窒素で３回脱気後に、酢酸パラジウム（０．０２５当量）を入れ、反応が終了したとみなされるまで、内容物を還流下で加熱および攪拌した。
【００８０】
この反応混合物を２２℃に冷却した。ヘプタンを入れ、その後セライトを添加した。２２℃で約３０分間攪拌後、混合物を第１の反応器中に濾過し、１，２−ジメトキシエタンおよびヘプタンの混合物ですすぎ洗い出した。濾液の層が分離される。
【００８１】
この有機層に、ボラントリメチルアミン錯体（０．０３当量）、水、および酢酸を入れた。最大４のｐＨを有する得られた混合物を２２℃で１〜２時間攪拌し、次いで約８０℃で２〜３時間還流させた。冷却して２２℃に戻した後、内容物を２２℃に維持しながら５％水酸化ナトリム水溶液を添加して混合物をｐＨ１０〜１１に調整し、次いで１〜２時間攪拌した。混合物を濾過し、それらの層を分離させた。水層を廃棄し、有機層をプロセス内の清浄第１反応器中にＺｅｔａＣａｒｂｏｎカートリッジを通して濾過し、このカーボンカートリッジを通して１，２−ジメトキシエタンですすぎ洗い出した。
【００８２】
濾液を最高６０℃のジャケット設定により真空下で濃縮した。ヘプタンを入れ、内容物を最高６０℃のジャケット設定により真空下でさらに濃縮した。追加のヘプタンをこの濃縮物に入れ、混合物の１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）含量（最大０．５％）をＮＭＲで調べた。８５℃に調整し、約１時間攪拌後、混合物を第２の反応器中にフィルターを通して熱いままポリッシュ濾過した。
【００８３】
第２の反応器中の濾液を調整して還流させ、次いで１時間攪拌した。ランプ冷却および穏やかな攪拌により、混合物を最低４時間にわたって還流から０から６℃に冷却し、次いで０から６℃で１時間攪拌する。
【００８４】
生成物を濾過し、周囲温度のヘプタンで洗浄し、乾燥減量が最大１％になるまで真空下で最高４０℃において乾燥させた。
【００８５】
【化８】
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工程３
【００８６】
【化９】
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内容物を２３℃に維持しながら、メタンスルホン酸、その後複数回に分けて五酸化リン（１．００当量）を反応器に入れた。内容物を２０℃から最高５０℃に維持しながら、３，４−ジアミノピリジン（１．００当量）を複数回に分けて入れた。次いで、２−フルオロ安息香酸（１．０９当量）を入れた。この混合物を１００℃に加熱し、反応を終了までＨＰＬＣでモニターした。
【００８７】
内容物を１０℃に調整し、内容物を最高２５℃に維持しながら水を入れた。混合物をこの温度で１時間攪拌後、第２の反応器中に濾過した。
【００８８】
ｐＨが６．０〜６．５になるまで、第２の反応器中の濾液に２７％水酸化アンモニウムを入れた。内容物温度を最高３０℃に維持した。得られた薄いスラリーを２２℃で最低１時間攪拌し、ｐＨが８．０〜９．３になるまで２７％水酸化アンモニウムをさらに入れた。このスラリーを２２℃で最低２時間さらに攪拌した。
【００８９】
生成物を濾過し、水で２回洗浄し、水含量が１％以下になるまで真空下で最高６０℃において乾燥させた。必要に応じて、生成物を粉砕し、大きな塊を除去する。
【００９０】
【化１０】
2010532757.tif 000012
工程４
【００９１】
【化１１】
2010532757.tif 000013
化合物２ａ（１．２４当量）、塩化メチレンおよびトリクロロイソシアヌル酸（０．４９１当量）を反応器に入れる。この混合物を調整して還流させ、反応が終了するまで還流下で攪拌した。
【００９２】
反応混合物を２２℃に冷却し、セライトを入れた。最低３０分間攪拌後、混合物を第２の反応器中に濾過し、塩化メチレンで３回すすぎ洗い出した。濾過ケーキを廃棄した。内容物を２２℃に維持しながら、第２の反応器中の濾液に３％水酸化ナトリウム水溶液を入れた。この混合物を１〜２時間攪拌し、それらの層を分離させた。底部有機層をプロセス内の清浄第１反応器に移し、最高４５℃のジャケット温度により真空下で濃縮した。塩化メチレンを入れ、混合物をプロセス内の清浄第２反応器にポリッシュ濾過した。
【００９３】
濾液を最高４５℃のジャケット温度により真空下で濃縮した。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を入れ、内容物をさらに濃縮する。混合物を２２℃に調整し、内容物を２２℃に維持しながらＤＭＦ、その後化合物核２（１．００当量）および１０％水酸化ナトリウム水溶液を入れた。得られた混合物を、反応をＨＰＬＣ分析でモニターするまで２２℃で攪拌した。反応期間にわたって、内容物のｐＨをモニターし、ｐＨメータで１１〜１２にｐＨを維持するために必要に応じて１０％水酸化ナトリウム水溶液を添加した。反応後、内容物を２２℃に維持しながら１０％水酸化ナトリウム水溶液を入れた。この混合物をＤＭＦで希釈し、２時間攪拌した。内容物を１６℃に維持しながら、水を含む最初のプロセス内の清浄第１反応器中に最低１時間にわたって混合物を濾過し、次いで、ＤＭＦですすぎ洗い出した。得られたスラリーを２２℃で１〜３時間攪拌した。
【００９４】
粗生成物を濾過し、水、次いでメチル第三級ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で洗浄した。湿った粗生成物をフィルターから取り出し、第１の反応器中に移し、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を入れた。この混合物を加熱還流させ、固形分がすべて溶解するまで還流温度で攪拌した。水レベルは６．０％未満でなければならない。ランプ冷却により、内容物を最低４時間にわたって２２℃に調整した。
【００９５】
結晶化した生成物を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、次いで第１の反応器に戻し入れた。酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を添加した。この混合物を加熱還流させ、固形分がすべて溶解するまでその温度で攪拌した。水レベルは１．０％以上でなければならない。混合物を、冷めないうちに、第２の反応器（ＥｔＯＡＣ前調整した）中にポリッシュフィルターを通して濾過し、ＥｔＯＡｃですすぎ洗い出した。
【００９６】
生成物を大気圧下で濃縮した。６５℃に調整し、ＥｔＯＡｃを投入後、そのポットを調整して還流させ、約３０分間還流下で攪拌した。水含量をチェックし、水レベルが０．２％を超える場合は、同じサイクルを繰り返した。
【００９７】
一旦水レベルが最大０．２％になると、内容物を調整して還流させ、次いで還流下で１〜３時間攪拌した。ランプ冷却により、内容物を最低４時間にわたって２２℃に調整し、次いでその温度で最低８時間攪拌した。
【００９８】
生成物を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、真空下で最高６０℃において乾燥させた。次いで、生成物を粉砕した。
【００９９】
【化１２】
2010532757.tif 000014
核磁気共鳴（１Ｈ−、１３Ｃ−および１９Ｆ−ＮＭＲ）スペクトル
化合物（１）の核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、提案された構造と一致している。ＤＭＳＯ−ｄ６中の化合物（１）の１３Ｃ、１９Ｆ、および１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  ＵｎｉｔｙＩｎｏｖａ−４００ＦＴ−ＮＭＲ分光計を用いて測定した。スペクトルを以下の表に示す。ＮＭＲ化学シフト帰属は、２Ｄ相関実験（ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣおよびＨＳＱＣＴＯＣＳＹ）を用いて決定した。
【０１００】
【化１３】
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示差走査熱量測定
「研究ロット番号６」と指定した化合物（１）試料（非晶質）を、その全体が参照により本明細書に組み込まれる特許文献１の実施例１ａのとおり公表された方法に従って作製した。残りの試料は結晶性化合物（１）であった。これらの試料を、試料重量５±１ｍｇ、昇温速度：１分間当たり１℃、１分間当たり５℃または１分間当たり１０℃のいずれか、蓋なしアルミニウムパン、および対照としてインジウム標準、窒素雰囲気下で示差走査熱量測定（ＤＳＣ）装置（ＤＳＣ２０１０、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）を用いて測定した。得られたＤＳＣ曲線上でエンタルピー、外挿開始温度および吸熱ピークでの頂点温度を決定した。
【０１０１】
研究ロット番号６および代表的な結晶性遊離塩基化合物（１）のバッチに対するＤＳＣ結果を、表１ならびに図４および図５にそれぞれまとめる。結晶形態の化合物（１）を１℃／分でＤＳＣ走査にかけた場合、吸熱ピークのエンタルピーは約８０Ｊ／ｇであり、外挿開始温度は２３３．２℃±２．０℃である。吸熱ピークの頂点は２３３．９℃±３．０℃である。
【０１０２】
【表１】
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Ｘ線粉末回折法−試験１
国際公開第０５／０６３７４４号の実施例１ａおよび本発明の方法によって作製された試料を、分析前にスパチュラで混合しただけで、受け取ったままの（ａｓ  ｒｅｃｅｉｖｅｄ）状態で分析した。試料をアルミニウムセルに固定し、Ｘ線粉末回折計（ＸＲＤ−６０００、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｌａｂ  Ｘ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製、Ｘ線源：Ｃｕ−Ｋα１線、管電圧：３５ｋＶ、管電流：４０ｍＡ、走査速度：１分間当たり２°、連続走査モード、サンプリングピッチ：０．０２°、走査範囲：４〜３５°、β軸回転：６０ｒｐｍ）を用いて測定を行った。
【０１０３】
本発明の方法で得られた非微粉化、針状化合物（１）結晶は、Ｘ線粉末回折計で測定して、回折角２θ（°）１３．４６、１５．５９、１６．９０、１７．４８、２３．０５および３０．１５で特徴的回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する（図１）。この実施例で試験した非微粉化「高溶融」２３５℃溶融針状結晶形態の化合物（１）は、好ましい配向および粒径によるある効果を示すことに留意されたい。結果として、結晶サイズおよび配向を変えると、プロット中のピークの大きさが変わるので、図１は単に例示と考えられるべきである。さらに、上述の回折角２θ（°）での回折ピーク値は、測定装置または測定条件などによるわずかな測定誤差を示し得る。典型的には、測定誤差は一般に、約±０．３の範囲内である。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＸＲＤ−６０００の仕様は、±０．０４である。さらに、ピーク位置の一部の変動は、生成物および実験変動によって予想され得、したがってそれらは近似と考えなくてはならない。
【０１０４】
実施例１ａの方法に従って（または本明細書での方法において、再スラリー工程前に）作製された生成物によって含まれる２２０℃「低溶融」固体形態の化合物（１）は、非晶質材料と一致するＸ線粉末回折パターンを与える（図３）。
【０１０５】
本発明の方法による化合物（１）は通常、固有溶解度０．７マイクログラム／ｍｌ、ｐＫａ５．８、ｌｏｇＰ２．８；ならびにｐＨ２において幾何平均（３ロット）ｐＨ溶解度プロファイル４５８マイクログラム／ｍｌおよびｐＨ７．３において、０．７マイクログラム／ｍｌを示す。人工腸液中の幾何平均溶解度（３ロット）（絶食：ｐＨ６．４、０．７５ｍＭレシチン、３ｍＭタウロコール酸ナトリウム、２７０ｍＯｓｍｏｌ；給餌：ｐＨ５．０、３．７５ｍＭレシチン、１５ｍＭタウロコール酸ナトリウム、６３５ｍＯｓｍｏｌ）は、１９．１マイクログラム／ｍｌ（絶食）および１２２マイクログラム／ｍｌ（給餌）であった。
【０１０６】
測定パラメータはロットからロットへ変化し、したがって、分子量を除く上述のパラメータのすべては、近似であると考えられるべきである。
【０１０７】
酸による滴定により、塩化物（約０．６ｍｇ／ｍＬ）または硫酸塩（約０．５ｍｇ／ｍＬ）対イオンに比較してメシレート（＞２０ｍｇ／ｍｌ）でのより高い溶解度が明らかとなった。
【０１０８】
Ｘ線粉末回折法−試験２
Ｘ線粉末回折計が、Ｘ線源：Ｃｕ−Ｋα線（１．５４０５９Å）、管電圧：４５ｋＶ、アンペア数：４０ｍＡ、走査範囲：１〜５５°２θ、ステップサイズ：０．００８°２θ、収集時間：３３７３秒、走査速度：１分間当たり０．９°、スリット：ＤＳ：１／２°、ＳＳ：１／４°、回転時間：０．５秒、モード：透過を用いて、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．製ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｐｒｏ  ＭＰＤ  ＰＷ３０４０Ｐｒｏであった以外は試験１と同様に、本発明の方法により調製した結晶性化合物（１）の別の試料を分析した。結果を図２に示す。
【０１０９】
（実施例２）
化合物（１）を用いる組成物の製剤
薬学的に許容される溶液を生成させるために、結晶性化合物（１）を中間体として用いる。以下の実施例は、１０％ｗ／ｗ活性を達成するために重量基準の重量で行う。１２ｋｇの溶液を作製するために、化合物（１）カプセル、２０ｍｇおよび４０ｍｇの代表的な定量的組成を以下に記載する。
【０１１０】
【化１４】
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・  容器（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ／ｖｅｓｓｅｌ）：ステンレススチール１２ｋｇ
・  順番に以下を秤量
・  ブチル化ヒドロキシトルエン（０．１０％）０．０１２ｋｇ
・  ブチル化ヒドロキシアニソール（０．３５％）０．０３５ｋｇ
・  化合物（１）遊離塩基（１０％）１．２ｋｇ
・  ポリソルベート８０（５％）０．６ｋｇ秤量
・  オレイン酸１０．１５３ｋｇ（８４．５５ｇ（８４．５５％）に等しい）
可溶化結晶性化合物（１）カプセル、２０ｍｇまたは４０ｍｇは、一連の単位処理の工程によって製造する。溶液が得られるまで、化合物（１）薬剤物質、オレイン酸、ポリソルベート８０、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、およびブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）を混合する。この溶液を２個の硬ゼラチンカプセル中に充填する。その後、閉じたカプセルを含水アルコール溶液で密封し、これは密封処理中に蒸発させる。真空漏れ試験は、包装前に密封カプセルで行う。
【０１１１】
代替製剤
式（１）の結晶性化合物は場合によって、以下の薬剤と一緒に可溶化形態中に配合する中間体として用いる：
・  脂肪酸（短、中、および長鎖の、ならびに飽和および不飽和の）、通常Ｃ４〜Ｃ２２。典型的な脂肪酸は、リノール酸、ラウリン酸、カプリン酸またはオレイン酸である。
【０１１２】
・  アルコール、例えば、エタノール、ベンジルアルコール、グリセロール、ポリエチレングリコール２００、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００。
【０１１３】
・  界面活性剤。イオン性および非イオン性界面活性剤の両方を含む。非イオン性界面活性剤の例は、ポリオキシエチレンソルビタンの脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート、ポリエチレングリコール６０、硬化ヒマシ油、および／またはエチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロックコポリマー。
【０１１４】
・  酸化防止剤、例えば、化学安定性のためのブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、アスコルビルパルミテート、ビタミンＥ、および／またはビタミンＥ  ＰＥＧ１０００スクシネート。
【０１１５】
・  粘度誘導物質（二酸化ケイ素、ポリエチレングリコール、酸化チタンなど）。
【０１１６】
・  および上記の混合物。
【０１１７】
カプセル化は、軟弾性ゼラチンもしくは硬ゼラチンまたは硬ヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセル中で行うことができる。液体製剤（溶液またはカプセル化溶液）は、改善された経口バイオアベイラビリティを与える。
【０１１８】
カプセル充填
軟弾性ゼラチンカプセルの組成物および調製は当技術分野でよく知られている。この組成物は通常、３０〜５０重量％のゼラチン、１０〜４０％の可塑剤または可塑剤のブレンドおよび約２５〜４０重量％の水を含む。可塑剤は、グリセリン、ソルビトールもしくはソルビトール誘導体、プロピレングリコールなどまたはそれらの組合せであり得る。
【０１１９】
回転式、ライナー（ｌｉｎｅｒ）またはアコゲル（ａｃｃｏｇｅｌ）機械などの軟弾性ゼラチンカプセルを製造および充填するために様々な方法を使用することができる。硬ゼラチンまたはＨＰＭＣカプセルは、Ｃａｐｓｕｇｅｌ、Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ、Ｓ．Ｃ．および他の供給業者から購入することができる。カプセルは手作業でまたはカプセル充填機械により充填する。
【０１２０】
製剤調製
一般に、本発明の組成物は、以下の仕方で調製することができる。成分を、オーバーヘッド混合機を用いて適切な容器の大きさで混合する（この混合タンクは窒素でパージしてもよい）。薬学的に許容される脂肪酸および薬学的に許容される酸化防止剤を室温で混合する。（この溶液は、脂肪酸を液化するために、必要に応じて、適切な温度、例えば、ラウリン酸の場合に約４５℃に加温してもよい）。式（１）の化合物を添加し、溶解するまで攪拌する。薬学的に許容される界面活性剤を、混合しながら添加する。得られる混合物の適切な重量を、硬ゼラチンカプセル中に充填する。
【０１２１】
【化１５】
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【０１２２】
【化１６】
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（実施例２ａ）
化合物（１）の微粉化製剤
微粉化薬剤物質（６０〜８０ｐｓｉでＪｅｔ  ｍｉｌｌ−００；３〜４ミクロン平均サイズ、約７〜８平方メートル／ｇ）を、乳糖、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、酒石酸、およびヒドロキシプロピルセルロースと乾式ブレンドした。このブレンド溶液をスプレーすることによってブレンドを顆粒化した。この顆粒を流動床で乾燥させた。乾燥顆粒を、粉砕機を通過させることによって大きさを測り、次いで、追加の微結晶セルロースおよびクロスカルメロースナトリウムとブレンドした。ステアリン酸マグネシウムを添加することによって、この粉末ブレンドを潤滑化し、次いで、ロータリー式打錠機を用いて錠剤に圧縮した。続いて、これらの錠剤をフィルムコーティングした。
【０１２３】
以下の表は、約４ｍｇ／ｋｇに相当する、４０ｍｇ化合物（１）で投与したイヌで試験した様々な製剤の要約である。表では、可溶化化合物（１）製剤の優れた性能が示される。
【０１２４】
【化１７】
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（実施例３）
化合物（１）の抗ウイルス活性
本発明の化合物は、遺伝子型１ａおよび１の両方に対して抗ＨＣＶレプリコン活性（国際公開第０５／０６３７４４号に記載されたアッセイ）、特に低細胞毒性（Ｈｕｈ−７、ＨｅｐＧ２およびＭＴ４細胞で＞５０，０００ｎＭ）、および非常に好ましい選択指数を示す。この化合物は遺伝子型２ａに対して実質的にあまり活性ではない。
【０１２５】
ＨＣＶ遺伝子型１および１ａレプリコンに対する化合物１の活性
ＨＣＶ遺伝子型１（Ｃｏｎ−１／ｌｕｃｎｅｏ）および１ａ（Ｈ７７／ｎｅｏ）レプリコン細胞を、４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の不存在または存在下で化合物（１）２’Ｃ−メチルアデノシン（２’ＣＭｅＡ）またはＩＦＮαの一連の希釈物で３日間インキュベートした。インキュベーション後、処置細胞のレプリコンＲＮＡ濃度をルシフェラーゼレポーターアッセイ（１レプリコン）または定量的実時間ＰＣＲアッセイ（１ａレプリコン）のいずれかによって決定し、これらのデータ点を用いて阻害剤のＥＣ５０（５０％有効阻害濃度）値を計算した。化合物（１）は、遺伝子型１および遺伝子型１ａレプリコンの両方を、それぞれ、ＥＣ５０値０．６および３．６ｎＭで阻害することを示した（表Ａ）。ヒト血清アルブミンの存在下で、化合物（１）のＥＣ５０値は１１ｎＭに増加した。
【表Ａ】
2010532757.tif 000021
【０１２６】
ＨＣＶ遺伝子型１ａレプリコンおよびウイルスに対する化合物（１）の活性
遺伝子型２ａウイルスに慢性感染した細胞ならびにサブゲノム２ａレプリコンを複製する細胞で、ＨＣＶ遺伝子型２ａに対する化合物（１）の抗ウイルス活性を試験した。化合物（１）または２’ＣＭｅＡと一緒に慢性的に複製するＨＣＶ遺伝子型２ａ（Ｊ６／ＪＦＨ−Ｒｌｕｃ）ウイルスまたはサブゲノムレプリコンを含むＨｕｈ−７細胞をヒト血清アルブミンの不存在下で３日間培養した。培養後、２ａ−ウイルス含有細胞におけるルシフェラーゼの量および２ａレプリコン含有細胞におけるＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ活性を、それぞれ、Ｐｒｏｍｅｇａルシフェラーゼアッセイおよび新規な時間分解蛍光アッセイを用いて決定した。
【０１２７】
化合物（１）の抗ウイルス活性は、ＨＣＶ−１サブゲノムレプリコンを複製するＨｕｈ−７細胞（ＥＣ５０＝０．０００６μＭ）と比較して、ＨＣＶ−２ａ慢性感染細胞培養モデル（ＥＣ５０＝２．９μＭ）および２ａサブゲノムレプリコンモデル（ＥＣ５０＝２１．９μＭ）の両方で有意に減少した（表２）。総合すると、これらの結果により、ＨＣＶ遺伝子型２ａに対する化合物（１）の効力の低下は、ＨＣＶの遺伝子型１および遺伝子型２間の遺伝子型の差によることがあり得ることが示唆される。
【表Ｂ】
2010532757.tif 000022
【０１２８】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、ＨＣＶレプリコン含有細胞株（Ｈｕｈ−７、ＳＬ３およびＭＨ４）および非レプリコン含有細胞株（ＨｅｐＧ２、ＭＴ４）を含む種々の細胞型で細胞毒性について化合物（１）を評価した。試験した最高濃度（５０μＭ）でのいずれの細胞株においても毒性効果は観察されなかった（表Ｃ）。これらの結果は、ＨＣＶ−１およびＨＣＶ−１ａレプリコンにおけるその強力な抗ウイルス活性（ＥＣ５０＝０．６２〜３．６ｎＭ）と相まって、化合物（１）に対する高い選択指数（ＣＣ５０／ＥＣ５０＞１３，０００〜８０，０００）を示す。
【表Ｃ】
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【０１２９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＦＮと併用した化合物（１）の抗ＨＣＶ活性
リバビリンと併用してペグ化インターフェロン−α（ＰＥＧ−ＩＦＮ−α）は、ＨＣＶ感染患者に対する治療の現在の標準を示す。化合物（１）およびＩＦＮ−αのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの併用試験をレプリコン細胞で行った。Ｐｒｉｃｈａｒｄ  ａｎｄ  Ｓｈｉｐｍａｎによって開発されたＭａｃＳｙｎｅｒｇｙテンプレートを用いてデータを分析した。これらの試験からの結果により、化合物（１）およびＩＦＮ−α間の相加的相互作用が示唆される。
【０１３０】
（実施例４）
ＨＣＶ遺伝型１感染被験者のヒトで最初の第１相試験における化合物（１）に関する抗ウイルス、薬物動態学的および安全性データ
非代償性肝硬変を有さずにＨＣＶ遺伝子型１（ＧＴ−１）に慢性的に感染した被験者における（パートＡでは）単回用量および（パートＢでは）反復用量の化合物（１）（オレイン酸溶液、上記）の安全性／忍容性、薬物動態学および抗ウイルス活性を評価するために、ランダム化二重盲検プラセボ対照試験をデザインした。予定被験者は、年齢が１８〜６０歳であり、ＨＣＶ処置を受けたことがなく、全身の健康状態が良好にある。
【０１３１】
完了したパートＡにおいて、６人の被験者の５つの連続コホートがランダム化され（５：１）、化合物１の単回漸増用量（４０、１２０、２４０、２４０−食事と一緒に、または４８０ｍｇ）またはプラセボを投与された。継続中のパートＢにおいて、１２人の被験者の４つの連続コホートがランダム化され（１０：２）、化合物１の反復漸増用量（４０ｍｇ１日２回、１２０ｍｇ１日２回、２４０ｍｇ１日１回、２４０ｍｇ１日２回）またはプラセボを８日間にわたって投与された。
【０１３２】
パートＡに登録された３１人の被験者は、平均年齢４３．６歳、大部分が男性（２０／３１）、白色人種（２５／３１）であり、およびＨＣＶ遺伝子型−１ａ（２４）または１（６）に感染していた。ベースラインのＨＣＶウイルス負荷中央値（範囲）は、６．６Ｌｏｇ１０ＲＮＡ  ＩＵ／ｍＬ（５．２〜７．３）であった。化合物（１）の単回用量は忍容性が良好で、重篤なまたは治療制限的な有害事象（ＡＥ）は報告されなかった。最もよく見られたＡＥは頭痛であった。中等度の頭痛１事象を除いて、ＡＥはすべて重症度において軽度であった。グレード３または４の治療緊急性の検査値異常はなかった。
【０１３３】
化合物（１）血漿半減期中央値は、コホート全体で１０から１５時間の範囲であった。化合物（１）を高脂肪食とともに投与した場合、全身的暴露は約２倍増加した。２４０ｍｇ絶食用量投与から２４時間後の化合物（１）濃度平均値は、タンパク質結合調整ｉｎ  ｖｉｔｒｏＨＣＶ  ＧＴ−１レプリコンＥＣ５０値よりも約７倍高かった。単回投与暴露後に、最大抗ウイルス効果は２４時間で見られ、コホート全体で中央値の減少は０．４６から１．４９Ｌｏｇ１０ＨＣＶ  ＲＮＡ  ＩＵ／ｍＬの範囲であった。化合物（１）被投与者すべての中の個々のＨＣＶ  ＲＮＡ減少は、単回投与暴露後に０．１９から２．５４ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬの範囲であった。
【０１３４】
これは、化合物（１）の抗ウイルス活性の最初の臨床実証である。化合物（１）に対する単回投与暴露は忍容性が良好で、好ましいＰＫ特性および強力な抗ウイルス活性を実証した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2010532757.tif 000031
【国際調査報告】
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