(57)【要約】  本発明は、ミクロスフェアに組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む医薬組成物に関する。組成物は、化学塞栓療法、具体的には腫瘍の局所領域治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミクロスフェア系に組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む組成物。
【請求項２】
ネモルビシン塩酸塩が、いずれの放出助剤も加えずにミクロスフェア系に組み込まれていることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ミクロスフェアが、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、２−アクリルアミド−２−メチル−１−１−プロパン−スルホン酸（ＡＭＰＳ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＣＧ）またはコラーゲンのコーティングを有するトリスアクリルゼラチンなどのポリマー物質から作られる、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ネモルビシン塩酸塩が、スルホン酸塩修飾Ｎ−フィルハイドロゲルミクロスフェア上にロードされている、請求項１から３に記載の組成物。
【請求項５】
ネモルビシン塩酸塩が、トリスアクリルゼラチンコラーゲン被覆ミクロスフェアおよび発泡ミクロスフェアと混合されている、請求項１から３に記載の組成物。
【請求項６】
ネモルビシン塩酸塩が、０．１から１０ｍｇ薬物／ｍｌミクロスフェアの濃度範囲においてロードされ／または混合されている、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
局所領域治療に適したがんを患っている患者の治療における使用のための、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
患者が、肝細胞がんまたは胆管がんなどの肝臓に原発的に限定された肝臓腫瘍または肝臓転移腫瘍を患っている、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
ネモルビシン塩酸塩が、例えば約０．１から１０．０ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与される、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
ネモルビシン塩酸塩が、０．１から５ｍｇ／ｍ２で投与されることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
局所領域治療に適したがんの治療のために使用されるネモルビシン塩酸塩およびミクロスフェアを含む製品またはキット。
【請求項１２】
適量のネモルビシン塩酸塩が、適当量のミクロスフェアのと混合される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物の調製方法。
【請求項１３】
ネモルビシン塩酸塩が、適した溶液中に予め溶解されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１から６のいずれか一項に定義されている組成物の投与による、局所領域治療に適したがんを患っている患者の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の概要）
本発明は、腫瘍性疾患の治療の分野に関する。具体的に本発明は、ミクロスフェアに組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む医薬組成物、ネモルビシン塩酸塩およびミクロスフェアを含むキットおよびこのような医薬組成物を用いる腫瘍病変の局所領域治療のための治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ネモルビシン塩酸塩、下式の化学名
【０００３】
【化１】
2010526790.tif 000002
（８Ｓ−ｃｉｓ,２”Ｓ）−７,８,９,１０−テトラヒドロ−６,８,１１−トリヒドロキシ−８−（ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−１０−｛［２,３,６−トリデオキシ−３−（２−メトキシ−４−モルホリニル）−α−Ｌ−リソ−ヘキソピラノシルオキシ）−５,１２−ナフタアセネジオン塩酸塩および３’デスアミノ−３’［２（Ｓ）メトキシ−４−モルホリニル］ドキソルビシン−塩酸塩（以下、単にネモルビシン塩酸塩と云う。）は、糖部分の３’位における−ＮＨ２のメトキシモルホリノ基による置換によって得られるドキソルビシン誘導体である。化合物は、少なくとも部分的に新規な活性様式を有し、多剤耐性の腫瘍への活性を含み、心毒性に関する限りドキソルビシンよりも低い毒性を有し、活性の広範なスペクトルを有する新規アントラサイクリンの同定を目的とする研究プログラムの過程で合成された。米国特許第４,６７２,０５７号は、ネモルビシン塩酸塩、その調製法、医薬組成物および医学的使用を開示し、特許請求している。
【０００４】
ＷＯ００／１５２０３によると、ネモルビシン塩酸塩は、肝動脈を経由して投与され得、肝転移がんの成人患者、例えば、静脈内化学療法、または肝臓内５−フルオロウラシルまたは５−フルオロデオキシウリジン（ＦＵＤＲ）化学療法を受けた後に進行した患者、または例えば肝細胞がんまたは肝臓を含む胆管がんなどの原発肝臓がんの患者に、例えば、４週間毎の約１５分から約３０分の注入または好適には４−８週間毎の５−１０分のボーラスで投与され得る。ＷＯ００／１５２０３によると、ネモルビシン塩酸塩は、例えば、約１００ｍｃｇ／ｍ２から約１０００ｍｃｇ／ｍ２、好適には約１００ｍｃｇ／ｍ２から約８００ｍｃｇ／ｍ２の用量範囲、例えば、約２００ｍｃｇ／ｍ２の用量で患者に投与され得る。
【０００５】
ＷＯ０４／７５９０４では、ヒトの肝臓腫瘍の治療のための医薬品の調製のためのネモルビシン塩酸塩の使用を記載及び特許請求され、例えば、１００ｍｃｇ／ｍ２から約８００ｍｃｇ／ｍ２、好適には約２００ｍｃｇ／ｍ２から約６００ｍｃｇ／ｍ２、例えば、６週毎に、約２００、４００または６００ｍｃｇ／ｍ２の用量で肝臓の動脈を介してネモルビシン塩酸塩を肝臓内に投与することを含む。
【０００６】
第Ｉ相試験の設定において２つの投与計画が評価された：１つの試験で、ネモルビシン塩酸塩は、肝臓内動脈（ＩＨＡ）により４週間毎の３０分間の食塩水溶液の注入で投与された。；もう一つの試験では、ネモルビシン塩酸塩は、６−８週間毎の５−１０分間の注入としてヨウ化油とともにＩＨＡにより投与された。
ＷＯ０４／０８２５７９およびＷＯ００／０６６０９３に記載されているように、ネモルビシン塩酸塩は放射線治療、アルキル化剤、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼＩ／ＩＩ阻害剤またはプラチナ誘導体との組み合わせ治療の成分として指示されている。
【０００７】
Ｓｕａｒａｔｏ, Ａら, ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ（１９９５）,５７４（アントラサイクリン抗生物質）, １４２−５５ページおよび米国特許第５,３０４,６８７号は、ネモルビシン塩酸塩の改良合成のための主要な中間体およびプロセスを開示している。
【０００８】
ＣＮ１０１０１１３４１およびＣＮ１９２３２８４（Ｊｉｎａｎ  Ｋａｎｇｑｕａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．）は、抗がん活性成分および徐放性助剤および溶媒からなるミクロスフェアまたはマイクロバルーンを含む徐放性注射剤を開示している。
【０００９】
ネモルビシン塩酸塩の抗がん活性
ネモルビシン塩酸塩は、それが、産生される優性遺伝子のＤＮＡの病変が一本鎖ＤＮＡの破断であることによって証明される、主としてトポイソメラーゼＩを介して作用する点で、古典的なアントラサイクリン類と異なるＤＮＡ−インターカレーターである。化合物は例えばプラチナ誘導体、アルキル化剤、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、タキサン、アントラサイクリンおよびビンカアルカロイドなどの異なった抗がん剤に耐性がある腫瘍に有効性を示す。さらに、アルキル化剤およびプラチナ誘導体と異なり、それは、ヌクレオチド除去修復経路のアップレギュレーションしている細胞またはミスマッチ修復欠損の細胞に有効である。
【００１０】
ネモルビシン塩酸塩は、実験モデルにおける活性のその広範なスペクトルおよび動物における等価骨髄毒性用量でのドキソルビシンより低い心毒性に基づく臨床評価により選択された。
【００１１】
第Ｉ−ＩＩ相臨床試験の設定で、ネモルビシン塩酸塩を患者に単剤で静脈内（ＩＶ）投与した場合、抗がん活性が頭頸部、頸がんおよび結腸直腸がん（第Ｉ相試験中）に認められた。第Ｉ相Ｂ試験では、非小細胞肺がん、腎臓がんおよび原発不明のがんで部分反応性（ＰＲｓ）が報告された。原発性結腸直腸および腎臓がんからの肝臓病変における退縮が繰り返し報告された。肉腫での第ＩＩ相試験中において、考慮され得た２６名の患者のうち２つのＰＲが報告された。肝臓転移を伴った乳がん患者での第ＩＩ相試験において、全体として治療された７名の患者の内、４被験者で奏功率が、観察された。この試験で達成された抗がん活性のレベルは、肝臓病変におけるネモルビシン塩酸塩の有効性を強く示唆し、原発性および再発性肝臓がんでの更なる研究を後押しした。
【００１２】
肝臓内動脈（ＩＨＡ）経路による単剤としての臨床試験
ＩＶ経路による第Ｉ−ＩＩ相試験で報告された肝臓病変における有効性の所見は、前臨床モデルにおける抗がん活性の証拠と共に、肝細胞がん（ＨＣＣ）における特異的な研究についての根拠を提供した。ＩＶ投与後に報告された全身毒性を減らすために、局所領域へのアプローチを選んだ。
【００１３】
他の原発固形がんからのＨＣＣおよび肝臓転移の患者で、ヨーロッパにおいてＩＨＡによって、食塩水を溶媒とする１つの第Ｉ相試験が行われた。更に、ＩＨＡ経路による、いずれもヨー化油（Ｌｉｐｉｏｄｏｌ（登録商標））を溶媒とする、１つの第Ｉ／ＩＩ相試験および１つの第ＩＩ／Ｉ１１相無作為化試験が、中国で切除不能のＨＣＣの患者で行われた。（Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ,  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．,  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ,  ２００６  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｐａｒｔ１．Ｖｏｌ  ２４,  Ｎｏ．１８Ｓ、２００６：１４１１６）。
【００１４】
全般的に、ＩＨＡ経路（ヨウ化油の存在下または非存在下）でヨーロッパおよび中国でＨＣＣ患者に投与されたネモルビシン塩酸塩で得られた総括的な臨床経験を考慮すると、５７名のＨＣＣが有効と考えられた。灌流された肝臓病変に注目すると、全般的に１１／５７が１から５４＋月持続したＣＲ／ＰＲ（即ち、ＲＲ１９．３％、９５％信頼区間１０．０−３１．９％）を確認した。３ヶ月以上の病気の安定化（持続中央値４．５カ月、範囲３−１２．５）が１７／５７の患者で報告され、その大半が病気の進行段階であった。（ＡＪＣＣ  ステージＩＩＩ、ＩＩＩＡおよびＩＶＡ）。安全性に関する限り、ネモルビシン塩酸塩は、吐き気および嘔吐のみならず、血液学的毒性および肝臓毒性に関して、管理可能な安全性プロフィルを示した。これらの試験において達成された良好な耐性および抗がん活性のレベルは、腫瘍病変の治療の局所領域の取り組みによるネモルビシン塩酸塩の使用を強く支持する。
【００１５】
化学塞栓療法
局所領域の分野において、化学塞栓療法は切除不能な腫瘍の姑息的治療に対する最小の侵襲性の取り組みである。言及される腫瘍は、原発性または転位性がんであり頭部、中枢神経系、腎臓、肝臓、胆嚢、頭頚部、口腔、甲状腺、皮膚、粘膜、腺器官、血管、骨組織、リンパ節、肺、食道、胃、乳腺、すい臓、眼球、鼻咽頭、子宮、卵巣、子宮内膜、頸部、前立腺、膀胱、結腸及び直腸に見出される肉腫またはがん肉腫である。
【００１６】
化学塞栓療法はまた、ラジオ周波数アブレーションに先立つ補助治療のみならず、肝臓切除の補助治療または肝臓移植に対するつなぎとして採用される。（Ａｏｋｉ,  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．， Ａｒｃｈ  Ｓｕｒｇ．２００４  Ｊｕｌ；１３９（７）：７６６−７４；Ｂｒｕｉｘ,Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．２００４ Ｎｏｖ；１２７：Ｓ１７９−８８）。
化学塞栓療法は、インターベンショナルな放射線学における最も普通に行われる手順の１つになっている。
【００１７】
化学塞栓療法は、通常、リピオドールおよび／または塞栓剤の存在下または非存在下、腫瘍に栄養供給している血管、例えば、肝臓レベルで腫瘍領域に栄養補給している肝動脈の枝への化学療法剤の注入（Ｇｅｓｃｈｗｉｎｄ,Ｊ．Ｖａｓｃ  Ｉｎｔｅｒｖ  Ｒａｄｉｏｌ．２００２；１３（１０）：９９１−４）、肺レベルで腫瘍病変を栄養補給している右または左の肺動脈への化学療法剤の注入を含む（Ｖｏｇｌ  ＴＪ．ｅｔ  ａｌ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２００５；２３４：９１７−２２）。化学塞栓療法は、体の他の領域への流れを遮断することにより化学療法剤を腫瘍内に維持する。
【００１８】
最近、ナノテクノロジーおよび薬物送達の領域で活発な研究活動がある。理想的なドラッグロード担体（ｄｒｕｇ−ｌｏａｄｅｄ）は、該薬物を正確に送達し、それを制御、持続された方法で放出し、周囲の正常組織を損傷せずに十分な期間、腫瘍内の高い薬物濃度を達成しなければならない。
【００１９】
ミクロスフェアなどの腫瘍の局所領域治療のためのいくつかの薬物送達システムが最近試験された。（Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎ,  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，ｌｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ．２００４  Ｎｏｖ  ５；２８５（１−２）：８７−９６）。ミクロスフェアは、本質的に固体の多孔性粒（５０−１２００マイクロメーター径）であり、それは、血管内での物理的捕獲（化学塞栓療法）によりドラッグカーゴ（ｄｒｕｇ  ｃａｒｇｏ）を標的でき、また制御された放出を通して治療薬の作用を持続できる。
【００２０】
ミクロスフェアは、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、２−アクリルアミド−２−メチル−１−１−プロパン−スルホン酸（ＡＭＰＳ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＣＧ）などの広範な範囲のポリマー物質から作られ得る。
【００２１】
ＷＯ２００４／０７１４９５およびＷＯ２００５／０８７１９３では、ミクロスフェアはドキソルビシンなどの単一の化学療法剤がローディングされ、選択的腫瘍標的のために動脈内投与される。
【００２２】
スルホン酸塩−修飾Ｎ−フィルハイドロゲルミクロスフェア（ポリビニルアルコール）、商品名ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）（Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ）ミクロスフェア（以下、このように云う。）は、Ｌｅｗｉｓｅら（Ｊ．Ｖａｓｅ．Ｉｎｔｅｒｖ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ；２００６；１７−３３５−４４２）の論文にドキソルビシンをローディングできるとして記載されている。
【００２３】
トリスアクリルゼラチンコラーゲン被覆ミクロスフェア、商品名Ｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）ミクロスフェア（ＢｉｏＳｐｈｅｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）および発泡性ミクロスフェア、商品名ＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標）（ＢｉｏＳｐｈｅｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ）（以下、このように云う）は、抗がん剤をローディングできると記載されている（Ｖａｌｌｅｅ  ＪＮ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｉｎｔｅｒｖ  Ｒａｄｉｏｌ  ２００３；１４：６２１−８；Ｏｓｕｇａ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．ＪＶＩＲ  ２００２；１３：９２９−３４）。
【００２４】
ミクロスフェアを用いて行われる化学塞栓療法の薬理学的活性を定義する場合に重要な決定要因は：
−遠位の塞栓を避けて、血管腔の適切な塞栓を保証するためのミクロスフェア（粒径、球状形および可塑性の点での）の未変性コンホメーション。
−治療用量の投与を保証するためのミクロスフェアへの化学療法剤のローディング比率。
−化学療法剤の持続的方法での利用および、周囲の正常組織を損傷せずに十分な時間腫瘍内の高薬物濃度の達成を保証するためのミクロスフェアからの化学療法剤の放出速度。
−化学療法剤の延長された完全な放出を保証するためのミクロスフェアからの化学療法剤の放出の動力学。
−化学療法剤の正確な用量の投与を保証するためのミクロスフェアの適切な量の使用で代表される。
【００２５】
このシステムに組み込まれている活性薬物物質は、通常、例えば、粒径分布などの物理化学的パラメータを変更し、修飾することにより、遠位の塞栓を避けて血管腔の期待塞栓（ｅｘｐｅｃｔｅｄ  ｏｃｄｕｓｉｏｎ）に影響し（即ち、薬物の存在によってミクロスフェアが収縮すれば、遠位の塞栓の危険性は高い。）、ミクロスフェアの臨床成績、活性薬物物質の製剤からの放出動力学および薬物安定性に顕著に影響されている。
われわれは、驚くべきことにすべてのそのような欠点を克服する方法を見いだした。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】米国特許第４,６７２,０５７号
【特許文献２】国際公開第００／１５２０３号
【特許文献３】国際公開第０４／７５９０４号
【特許文献４】国際公開第０４／０８２５７９号
【特許文献５】国際公開第００／０６６０９３号
【特許文献６】中国特許出願公開第１０１０１１３４号
【特許文献７】中国特許出願公開第１９２３２８４号
【特許文献８】米国特許第５,３０４,６８７号
【特許文献９】国際公開第０４／０７１４９５号
【特許文献１０】国際公開第０５／０８７１９３号
【非特許文献】
【００２７】
【非特許文献１】Ｓｕａｒａｔｏ，Ａ  ｅｔ  ａｌ, ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ（１９９５）,５７４（Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）ｐａｇｅｓ  １４２−５５
【非特許文献２】Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ,  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ,  ２００６  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｐａｒｔ１．Ｖｏｌ  ２４,  Ｎｏ．１８Ｓ、２００６：１４１１６
【非特許文献３】Ａｏｋｉ,Ｔ  ｅｔ  ａｌ．， Ａｒｃｈ  Ｓｕｒｇ．２００４  Ｊｕｌ；１３９（７）：７６６−７４
【非特許文献４】Ｂｒｕｉｘ,Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．２００４ Ｎｏｖ；１２７：Ｓ１７９−８８
【非特許文献５】Ｇｅｓｃｈｗｉｎｄ,Ｊ．Ｖａｓｃ  Ｉｎｔｅｒｖ  Ｒａｄｉｏｌ．２００２；１３（１０）：９９１−４
【非特許文献６】Ｖｏｇｌ  ＴＪ．ｅｔ  ａｌ． Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２００５；２３４：９１７−２２
【非特許文献７】Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎ,  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ．２００４  Ｎｏｖ５；２８５（１−２）：８７−９６
【非特許文献８】Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｉｎｔｅｒｖ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ；２００６；１７−３３５−４４２
【非特許文献９】Ｖａｌｌｅｅ  ＪＮ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｉｎｔｅｒｖ  Ｒａｄｉｏｌ  ２００３；１４：６２１−８；Ｏｓｕｇａ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．ＪＶＩＲ  ２００２；１３：９２９−３４
【発明の概要】
【００２８】
（発明の詳細な説明）
本発明の第一の目的は、ミクロスフェア系に組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む組成物である。
【００２９】
好適には、ネモルビシン塩酸塩は、いずれの放出助剤も加えずにミクロスフェア系に組み込まれている。
【００３０】
ネモルビシン塩酸塩がローディングされたミクロスフェアの物理化学的変化はないことに留意すべきであり、従って使用が予想される他の抗がん活性薬物で達成されるよりもより再現性があり安全な投与が可能になる。
【００３１】
本発明に適したミクロスフェアは、先述のようにポリビニルアルコール（ＰＶＡ）２−アクリルアミド−２−メチル−１−１−プロパン−スルホン酸（ＡＭＰＳ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＣＧ）またはコラーゲンの被覆を有するトリスアクリルゼラチンなどのポリマー材料の広い範囲から作られ得る。それらの調製の方法は、例えば、ＷＯ２００４／０７１４９５、ＷＯ２００５／０８７１９３およびＷＯ２２０６／１１９９６８の実施例に記載されている。
【００３２】
好適には、本発明の該ミクロスフェアは、水膨潤性、水不溶性ポリマーで作成される。特に本発明は、ネモルビシン塩酸塩をローディングする好適な担体として主としてスルホン酸塩−修飾Ｎ−フィルハイドロゲルミクロスフェアに関する。
【００３３】
従って、本発明による好適な組成物は、スルホン酸塩−修飾Ｎ−フィルハイドロゲルミクロスフェアにローディングされたネモルビシン塩酸塩を含む。このようなミクロスフェアは、上に引用したＬｅｗｉｓらの論文に記載のように調製され得る。
【００３４】
好適には、ネモルビシン塩酸塩は、０．１から１０ｍｇ薬物／ミクロスフェアｍｌまでの範囲の濃度でローディングされる。このようなローディングは、ネモルビシン塩酸塩のローディングおよび製剤自身からの放出動力学に関して再現性のある仕方で実施され得る。
【００３５】
驚くべきことに、画像解析技術の方法により顕微鏡で粒径解析を行い、ネモルビシン塩酸塩をローディングした該ミクロスフェアが、従来の技術で知られていることに関して、ユニークな特性を有することを見出した。事実、該ミクロスフェアは、その球形状を維持するだけでなく、ローディングされていない元の粒径もまた維持する。ローディングされていないミクロスフェアには、凝集は見られない。これらの特徴は、数時間から約１５日まで続き得る、製剤の期待放出時間すべてに対して維持される。
【００３６】
上記のすべての特徴は予期されなかっただけでなく、ローディングプロセスに関する限り、容易さ、再現性および定量的結果の観点から、ローディングされたスフェアからの再現性および予測性の放出プロフィル（即ち、放出表面が一定である、製剤からの活性物質の放出動力学が容易に予測できる。）の点で他の薬物と対比して、ミクロスフェア中のネモルビシン塩酸塩製剤の投与に、大きな利点を提供し、および臨床の設定に沿う、より再現性のある投与および製剤の制御を提供する。
【００３７】
ネモルビシン塩酸塩／ミクロスフェアシステムの投与中、患者に投与されるべきミクロスフェアの用量および容量を再計算する必要はなく、また材料が活性薬物物質の存在ために収縮しており、適した塞栓を得るために投与されるべきビーズの量および粒径への製剤の影響を予め予想するための経験的な計算の使用が必要な他の薬物／ミクロスフェアシステムに必要な投与の実施に沿ういずれかの操作の必要もない。
【００３８】
ネモルビシン塩酸塩／ミクロスフェアローディング製剤のこれらのユニークな特徴は、本明細書中のデータを上に引用したＬｅｗｉｓらの論文中のデータと比較した場合明らかであり、ここでＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア中のドキソルビシン（ネモルビシン塩酸塩がそうであるように、アントラサイクリンの同じ化学分類の薬物である。）のローディングは単に用量依存性であるだけでなく（即ち、ローディング時間および有効性は薬物ビーズ比に従って変化する。）、ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアの厳しい収縮をも生じ、インビトロおよびインビボ両方で、送達システムからの薬物自身の放出速度動力学に影響する。
【００３９】
更に該ミクロスフェアによって投与されたネモルビシン塩酸塩の延長された抗がん作用は、その活性薬物物質が室温で２４時間までしか化学的に安定でなく、細胞毒性および抗がん活性が関する限りその分解生成物も不活性であることは驚くべきことであった。
【００４０】
ネモルビシン塩酸塩／ミクロスフェア製剤が局所領域の治療として投与された場合、活性薬物物質自身より化学的に安定であり、該ミクロスフェアシステムは、ネモルビシン塩酸塩の化学安定性に対して保護効果を表わし、従って、活性部分だけを制御された持続的方法で放出することを可能にすることは明白である。
【００４１】
ミクロスフェアに結合されたネモルビシン塩酸塩を含む医薬組成物は、持続した仕方でネモルビシン塩酸塩の利用を保証できる該ミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩の放出速度を可能にし、腫瘍細胞を殺すことができる薬物濃度の達成を可能にする。更にミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩の放出の動力学は、ネモルビシン塩酸塩の延長された高い放出速度を保証する。
【００４２】
すべての臨床的に有用な濃度におけるネモルビシン塩酸塩ローディングは、該ミクロスフェアの平均粒径に変化をもたらさなかった。これによって、腫瘍血管の正確な、塞栓が可能になる。反対に、ドキソルビシンをローディングした商業ミクロスフェアは、平均粒径が減少している；これは、標的領域における薬物放出の正確性に影響し、腫瘍に対する有効性を減らし、合併症のリスクを増やす可能性がある。
【００４３】
特に、ミクロスフェアに結合されているネモルビシン塩酸塩を含む該組成物は、該ミクロスフェア（粒径、球状形および可塑性の点で）の未変性コンホメーション保存し、遠位の塞栓を避けて、血管腔の適切な閉塞を保証する。
【００４４】
要約すると、ミクロスフェアは、臨床上有用な用量でネモルビシン塩酸塩でローディングされ得る。ネモルビシン塩酸塩−ミクロスフェアのローディングと溶出のデータは、ネモルビシン塩酸塩はミクロスフェアを介する化学塞栓療法に適した薬物ということを裏づける。
【００４５】
該ミクロスフェア上のネモルビシン塩酸塩の有効な臨床量のローディングは、０．１および１０ｍｇ薬物／ミクロスフェアｍｌの間の範囲で試験され、ローディング溶媒中の薬物濃度と関係なく同じローディング手順および標準ローディング時間が適用され得る可能性がある再現可能な仕方で起こる。この特徴は、また、臨床の設定において精密で、正確で、再現性のある薬物の漸増を許容するのみならず、より正確で、再現性のある塞栓を許容する、本システムの送達性の点でのユニークな利点を提供する。
【００４６】
ネモルビシン塩酸塩をローディングした該ミクロスフェアは、既知の療法と比較してより安全な化学塞栓療法である。事実、例えば、ドキソルビシンをローディングした他の商業ミクロスフェアは、数日間薬物の高濃度をローディングされたままでいるがドキソルビシンをローディングされた該ミクロスフェアの厳しい収縮により、ドキソルビシンは、腫瘍領域からかなり離れて放出され得、その有害作用を増す。
【００４７】
本発明は、また、がんを患っている患者の治療法を提供する。本発明は、特に局所領域の取り組みが可能な、頭部、中枢神経系、腎臓、肝臓、胆嚢、頭頚部、口腔、甲状腺、皮膚、粘膜、腺器官、血管、骨組織、リンパ説、肺、食道、胃、乳腺、すい臓、眼球、鼻咽頭、子宮、卵巣、子宮内膜、頸部、前立腺、膀胱、結腸及び直腸に見出される原発または転移がん、肉腫またはがん肉腫の治療法を提供する。
【００４８】
より好適には本発明は、肝臓腫瘍（即ち、肝細胞がん、胆管がんまたは肝転移）に罹っている患者の治療法を提供する。
【００４９】
塞栓療法を必要とする腫瘍、例えば肝細胞がんを有する患者に投与される該組成物は、該薬物を含む膨潤粒子の水性懸濁液である。該懸濁液は、送達前に、ゲル型塞栓組成物に使用される通常の放射線不透過性薬剤のような造影剤と混合されることがしばしば望ましい。
【００５０】
ネモルビシン塩酸塩は、例えば、約０．１から１０ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与される。より好適には、採用されるコース治療は、０．１から５ｍｇ／ｍ２である。
【００５１】
ミクロスフェアに結合されたネモルビシン塩酸塩を含む医薬組成物は、患者へのネモルビシン塩酸塩の治療用量の容易な投与を保証することができる、速いローディング（約１−２時間、定温放置）および該ミクロスフェア（＞９９％）へのネモルビシン塩酸塩のローディング率を可能にした。
【００５２】
本発明の更により特別な実施形態において、適量のネモルビシン塩酸塩（好適には事前に適した溶液中に溶解した。）が適当量のミクロスフェアと混合する。
【００５３】
がんの局所領域治療のための医薬品の調製における使用のためのネモルビシン塩酸塩およびミクロスフェアを含む製品またはキットはまた本発明の目的である。
【００５４】
該ミクロスフェアの粒径の選択は、血管対象／血管サイズに基づく。次の表は、利用できるミクロスフェアの粒径範囲を示す。
【００５５】
【表１】
2010526790.tif 000003
【００５６】
再溶解されたネモルビシン塩酸塩溶液は、該ミクロスフェアに加え、混合を促進するために攪拌されなければならない。
【００５７】
ローディングは、最小径のミクロスフェアに対して最低２０分から最大径のミクロスフェアに対して３時間までかかる。
【００５８】
送達カテーテルは、化学塞栓療法のための標準的なインターベンション放射線技術に従って標的血管に導入されなければならない。塞栓は、所望の量の造影剤（ゲル型塞栓組成物に使用される通常の放射線不透過性薬剤のような造影剤）を懸濁液に、例えば、１：５から２：１の範囲の量、好適には１：２から１：１の容量範囲で加えて蛍光透視可視化下でモニターされなければならない。
【００５９】
ネモルビシン塩酸塩−ミクロスフェアは、造影剤流量を観察しながら蛍光透視可視化下で送達カテーテル中にゆっくりと注入されなければならない。
【００６０】
治療終了時に、ミクロスフェアをカテーテル腔内で取り外さないようにゆっくりと吸引しながら、カテーテルを取り去らなければならない。
【００６１】
塞栓療法を必要とする患者に投与される塞栓組成物は、単回の一回限りの用量として送達されてよい。塞栓は、通常の技術を用いて造影剤を追跡してモニターされる。ネモルビシン塩酸塩を含む組成物についての以前の治療から例えば、４−１０週間後に腫瘍に栄養供給する新規に形成された血管を例えば塞栓するために、以前の投与後一定の時間間隔で送達されることが、本発明において有用な塞栓組成物の次の投与に好ましいことが見いだされる可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】リン酸塩緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）中における、１時間ローディング時（写真Ａ、ＢおよびＣ）、１日目の溶出後（写真Ｄ、ＥおよびＦ）および７日目の溶出後（写真Ｇ、ＨおよびＩ）における実施例１で調製したＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア（１００−３００μｍ粒径）懸濁液の顕微鏡試験を示す。Ａ、ＤおよびＧの写真は、対照薬物なしのミクロスフェア；Ｂ、ＥおよびＨの写真はネモルビシン塩酸塩ローディングミクロスフェア、１ｍｇ／ｍｌおよびＣ、ＦおよびＩの写真は、ドキソルビシンローディングミクロスフェア、２５ｍｇ／ｍｌを示す。
【図２】ネモルビシン塩酸塩（薬物なし、０．１、０．５および１ｍｇ／ｍｌ）の異なる量をローディング１時間後の実施例２で調製したＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア懸濁液の顕微鏡試験を示す。
【図３】リン酸塩緩衝食塩溶液（ＰＢＳ）中における１ｍｇのネモルビシン塩酸塩／ｍｌＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアまたは１ｍｇのドキソルビシン／のｍｌＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアがそれぞれローディングされた、実施例３で調製されたＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンの放出のＨＰＬＣ／ＭＳ動力学解析から得られたグラフを示す。Ｙ軸上に溶出したネモルビシン塩酸塩（・）およびドキソルビシン（■）の量をｍｇ薬物／ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアｍｌで示し、Ｘ軸上に溶出時間で示す。
【図４】ネモルビシン塩酸塩（Ｎ）またはドキソルビシン（Ｄ）放出後１６日のＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア懸濁液の顕微鏡試験を示す。ＣＮＤ対照薬物なし。
【００６３】
本発明を次の実施例において説明する。
【実施例１】
【００６４】
ネモルビシン塩酸塩を含む医薬組成物中におけるＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアの粒径と球状形の評価
ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア−粒径測定および外観
ネモルビシン塩酸塩を、臨床的に適用可能な用量を示す０．１から２．０ｍｇ薬物／ｍｌＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）の範囲の濃度において希釈した。以下の実施例において、１００−３００μｍの直径（ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標））のミクロスフェアを用いた。３００−５００μｍの直径（ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標））のミクロスフェアを用いた場合も、類似の結果が得られた。
【００６５】
ミクロスフェアの粒径と球状形を、ネモルビシン塩酸塩をローディング後、および１６日までの薬物の放出中分析した。比較としてＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアが、２５ｍｇの薬物／ｍｌＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）の臨床用量のドキソルビシンでローディングされた。
【００６６】
薬物ローディング：ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアを水中で１０分間調整した。ついで、水を廃棄し、ネモルビシン塩酸塩またはドキソルビシンを加えた。
【００６７】
薬物放出：薬物を加えまたは加えずに、ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアを、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）または健常なドナーからのヒト血漿中で１６日間温置した。ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアの粒径および球状形を異なる時点で測定した。
【００６８】
薬物ローディングおよび薬物溶出中のネモルビシン塩酸塩−ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアの粒径と外観を、Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ＭＰ  Ｃｏｌｏｒ  ＣＣＤ  Ｃａｍｅｒａ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎａｔｉｃｓ）を装備したＬｅｉｃａ  ＤＭ  ＩＲＢ（Ｌｅｉｃａ）顕微鏡で測定した。粒径の分析は、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ（商標）（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎａｔｉｃｓ）によってなされた。粒径の較正には、１０８μｍ−標準ｂｅａｄｓ（ＰＭＭＡ  ９０−１２５μｍ，Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆｉｓｈｅｒ，ＩＮ）を用いた。試料について、少なくとも４野の画像を解析して、統計解析を支援した。
【００６９】
結果
表１および図１に報告するように、画像解析技術を用いて顕微鏡において粒径の分析を行うことにより、ローディングＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアが、従来の技術で知られていることに関してユニークな特徴を有したことを見出したことは驚嘆すべきことであった。事実、それらはそれらの球状形を維持しただけでなく、薬物ローディングおよび薬物放出後の両方でローディングされていない最初の粒径を維持した。非ローディングＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアに関して、凝集は観察されなかった。これらの特性は１６日までのすべての観察期間を通して維持された。
【００７０】
【表２】
2010526790.tif 000004
【００７１】
表１および図１に示すように、ネモルビシン塩酸塩のローディングは、非ローディングのミクロスフェア粒径のような粒径と外観を与え（対照に対して粒径範囲２５０−２８６μｍおよびネモルビシンに対して粒径範囲２３０−２９１μｍ。）、反対に、ドキソルビシンは、減少した粒径（ドキソルビシンに対して粒径範囲８５−１２５μｍ）およびより大きな不均一性（ＣＶ（変動係数）％の増加）を示した。
【００７２】
図１に示すように、上の結果は、ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア上のネモルビシン塩酸塩製剤の投与が、他の薬物に対して容易さおよびより再現性のある投与および臨床の設定に沿った製剤の制御の点で有利であることを裏付ける。
【実施例２】
【００７３】
ネモルビシン塩酸塩でのＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアのローディング。
【００７４】
臨床の設定においても適用される標準プロトコールによって活性薬物でＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアがローディングされた。パッキング液（ｐａｃｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を、ミクロスフェアから除去した。ついで、ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアを、水で一回調整し、ネモルビシン塩酸塩溶液の必要容量を、ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアに加えた。この実験的試験に使用されたネモルビシン塩酸塩の用量は、０．５および２ｍｇ薬物／ｍｌＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアであった。加えられた薬物ローディング容量は、従来の技術およびＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアのガイドラインの記載に一致した。
【００７５】
混合物を、ゆっくりとローラーで混合し、３７℃で２時間、異なる期間保った。ローディング時間の終りに、ネモルビシン塩酸塩−ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアを、水で洗浄し、ネモルビシン塩酸塩の定量のために、すべての画分を集めた。ネモルビシン塩酸塩のローディングを、溶液中の残存薬物濃度を徐々に測定することにより計算した。
【００７６】
溶出媒体中のネモルビシン塩酸塩の測定は、Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＨＰＬＣｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に直結した、ＥＳＩイオン源を装備したＦｉｎｎｉｇａｎ  ＭＡＴ／ＬＣＱ  Ｄｅｃａ  ＸＰ  ｉｏｎ  ｔｒａｐ  ＭＳにより実施したＨＰＬＣ−ＭＳ／ＵＶ分析で行った。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＵＶ分離は、酢酸エステル緩衝剤：アセトニトリル１：９によりＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｐｈｅｎｙｌ，３μｍ，５０ｘ４．６ｍｍ上にセットアップされた。ＵＶ検出は、４８０ｎｍで行われ、ＥＳＩ−ＭＳ分析のために、２７５℃での加熱毛管温度および４ＫＶでのスプレイボルテージが用いられた。
【００７７】
測定は、ネモルビシン塩酸塩の標準曲線に対してＨＰＬＣ−ＭＳ／ＵＶ分析を用いて行った。ローディング効率は、本質的に次の通り計算された：
ローディング効率（％）＝１００ｘ（最初の薬物量−残存薬物量）／最初の薬物量
【００７８】
結果
ＤＣ  Ｂｅａｄ(商標)ミクロスフェアへのネモルビシン塩酸塩のローディング効率は、非イオン溶液中（水）で２ｍｇ薬物／ｍｌＤＣ  Ｂｅａｄ(商標)ミクロスフェアまでで９９％より多かった。顕微鏡でのＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェア解析は、ローディング動力学が非常に速いこと、用量依存性であることおよび常に完全に９９％を超すことを示した。（表２および図２参照）．
【００７９】
【表３】
2010526790.tif 000005
【実施例３】
【００８０】
ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩の放出
ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩の放出を、ＰＢＳおよびヒト血漿中で評価した。ローディング時間の終りおよびそれぞれの溶出点において、ローディングされたネモルビシン塩酸塩−ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアを、温水で洗浄し、最後に３７℃でインキュベートし、ＰＢＳまたはヒト血漿中で温置した。
【００８１】
望ましい溶出時間において、ビーズの吸引を避けてシリンジで注意深く上澄を集めた。ついで、溶液をキャリー・オーバー汚染を避けるために７０μｍのナイロンフィルコンフィルター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって濾過し、エッペンドルフチューブに集め、最後に、更なる分析のために−２０℃で保存した。
【００８２】
ドキソルビシンと比較試験した。
【００８３】
試料を：
−ネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンの腫瘍細胞に対する細胞毒性の評価（細胞の成長を５０％だけ阻害できる用量として；ＩＣ５０）。
−ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＵＶ分析による（使用した方法は実施例２に報告した）ネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンの放出量の評価に分けた。
【００８４】
インビトロの抗腫瘍活性
溶出画分の細胞毒性をヒト乳腺がん細胞（ＭＣＦ−７、ＥＣＡＣＣソース）について調査した。細胞をＥ−ＭＥＭ／Ｇｌｕｔａｍａｘ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０％  ＦＢＳ（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ）および１％非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で成長させ、３７℃で５％ＣＯ２で維持した。細胞毒性試験のために細胞を９６−ウェル平板培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で、５、０００細胞／ウェルの密度でプレートし、２４時間後処理した。細胞を溶出画分の希釈を上げることによって７２時間処理した。処理の最後に、細胞をＴＳ基質（ＡＴＰＬｉｔｅ（商標））と温置した。プレートをＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）  プレートリーダーによって化学発光（４８０／５４０ｎｍ）を測定し、ＩＣ５０をＬＳＷ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（商標）  ｃｕｒｖｅ  ｆｉｔｔｉｎｇによって計算した。ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアから溶出した媒体中のネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンのＩＣ５０値を標準のネモルビシン塩酸塩またはドキソルビシンの新鮮な溶液のそれと比較した。
【００８５】
結果
表３に示すように、溶出薬を含む画分は、９６時間までネモルビシン塩酸塩またはドキソルビシン外部標準のそれと同程度の細胞毒性を示した。この時期の後、ネモルビシン塩酸塩−ＤＣ  Ｂｅａｄ(商標)ミクロスフェアまたはドキソルビシン−ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアからの溶液は、より細胞毒性が少なかった。
【００８６】
【表４】
2010526790.tif 000006
【００８７】
ドキソルビシンと比較したＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩の放出の動力学
図３に示すように、ネモルビシン塩酸塩の放出はドキソルビシンよりも速かった。ＰＢＳ中のネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンの放出の比較は、それぞれ１０８５時間および１４８７時間の半減期を示した。
【００８８】
驚くべきことに、ヒト血漿において、ネモルビシン塩酸塩−ＤＣ  Ｂｅａｄ（商標）ミクロスフェアから放出された全体の薬物は、非常に高かった（９０％以上）。反対に、ドキソルビシンは、ミクロスフェア中に取り込まれて残った（放出された全体の薬物は２．５％）。これらの結果は、ネモルビシン塩酸塩をローディングされたミクロスフェアは、９６時間後に空であったのに対して、ドキソルビシンをローディングミクロスフェアは、取り込まれた薬物の非常に多い量を示した顕微鏡における分析によって完全に裏づけられる（図４）。
【実施例４】
【００８９】
ＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標）ミクロスフェアからのネモルビシン塩酸塩の放出（ドキソルビシンとの比較における）。
【００９０】
ネモルビシン塩酸塩（１ｍｇ薬物／ｍｌＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標）、２．５ｍｇ薬物／ｍｌＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標））およびドキソルビシン（１ｍｇ薬物／ｍｌＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標）、２．５ｍｇ薬物／ｍｌ
ＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標）、２５ｍｇ薬物／ｍｌＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標））をＨｅｐａＳｐｈｅｒｅ（商標）ミクロスフェア（５０−１００μｍ）と混合した。温置２０分後、ネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンの溶出効率を１６８時間まで測定した。
【００９１】
望ましい溶出時間において、ビーズの吸引を避けて、シリンジで注意深く上澄を集めた。ついで、溶液をエッペンドルフチューブに集め、更なる分析のために−２０℃で保存した。
【００９２】
ネモルビシン塩酸塩およびドキソルビシンの放出量をＨＰＬＣ−ＭＳ／ＵＶ分析により評価した（用いた方法は、実施例２中に報告されている。）。
表４に示すように、ネモルビシン塩酸塩の溶出効率は、ドキソルビシンよりも高かった。
【００９３】
【表５】
2010526790.tif 000007
【図１】
2010526790.tif 000008
【図２】
2010526790.tif 000009
【図３】
2010526790.tif 000010
【図４】
2010526790.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成21年2月25日(2009.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
いずれかの放出助剤を加えずにミクロスフェア系に組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む組成物。
【請求項２】
ミクロスフェア系が、ポリマー物質から作られていることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ポリマー物質が、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、２−アクリルアミド−２−メチル−１−１−プロパン−スルホン酸（ＡＭＰＳ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＣＧ）およびコラーゲンのコーティングを有するトリスアクリルゼラチンからなる群から選ばれることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ネモルビシン塩酸塩が、スルホン酸塩修飾Ｎ−フィルハイドロゲルミクロスフェア上にロードされている、請求項１から３に記載の組成物。
【請求項５】
ネモルビシン塩酸塩が、トリスアクリルゼラチンコラーゲン被覆ミクロスフェアおよび発泡ミクロスフェアと混合されている、請求項１から３に記載の組成物。
【請求項６】
ネモルビシン塩酸塩が、０．１から１０ｍｇ薬物／ｍｌミクロスフェアの濃度範囲においてロードされ／または混合されている、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
局所領域治療に適したがんを患っている患者の治療における使用のための、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
患者が、肝細胞がんまたは胆管がんなどの肝臓に原発的に限定された肝臓腫瘍または肝臓転移腫瘍を患っている、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
ネモルビシン塩酸塩が、例えば約０．１から１０．０ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与される、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
ネモルビシン塩酸塩が、０．１から５ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与されることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
局所領域治療に適したがんの治療のために使用されるネモルビシン塩酸塩およびミクロスフェアを含む製品またはキット。
【請求項１２】
予め適切な溶液に溶解した適量のネモルビシン塩酸塩が、適当量のミクロスフェアと混合される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物の調製方法。
【請求項１３】
請求項１から６のいずれか一項に定義されている組成物の投与による、局所領域治療に適したがんを患っている患者の治療方法。
【手続補正書】
【提出日】平成22年1月13日(2010.1.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネモルビシン塩酸塩がスルホン酸塩修飾Ｎ−フィルハイドロゲルミクロスフェア上にロードされていることを特徴とする、いずれの放出助剤も加えずにミクロスフェア系に組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む組成物。
【請求項２】
ネモルビシン塩酸塩がトリスアクリルゼラチンコラーゲン被覆ミクロスフェアおよび発泡ミクロスフェアと混合されていることを特徴とする、いずれの放出助剤も加えずにミクロスフェア系に組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む組成物。
【請求項３】
ネモルビシン塩酸塩が、０．１から１０ｍｇ薬物／ｍｌミクロスフェアの濃度範囲においてロードされ／または混合されている、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
局所領域治療に適したがんを患っている患者の治療における使用のための、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
患者が、肝細胞がんまたは胆管がんなどの肝臓に原発的に限定された肝臓腫瘍または肝臓転移腫瘍を患っている、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ネモルビシン塩酸塩が、例えば約０．１から１０．０ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与されることを特徴とする、請求項４または５に記載の組成物。
【請求項７】
ネモルビシン塩酸塩が、０．１から５ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与されることを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ミクロスフェアが、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、２−アクリルアミド−２−メチル−１−１−プロパン−スルホン酸（ＡＭＰＳ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＣＧ）およびコラーゲンのコーティングを有するトリスアクリルゼラチンからなる群から選ばれるポリマー物質から作られることを特徴とする、いずれの放出助剤も加えずに前記ミクロスフェア系に組み込まれているネモルビシン塩酸塩を含む組成物。
【国際調査報告】
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2010526790.tif 000013
2010526790.tif 000014
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