(57)【要約】新生血管系と関連のある疾患の長期治療は、標的急性血管新生阻害剤投与とその他の薬剤の慢性投与との併用により効果を発揮する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療プロトコルにおける新生血管または新生血管が確認された部位を標的とする少なくとも１種類の血管新生阻害剤および追加治療薬を含む血管新生阻害組成物の使用であって、
前記血管新生阻害組成物が当該薬剤の投与を必要とする被験者に急性的に投与され、
前記追加治療薬が慢性的なレジメンで投与され、
望ましくない新生血管を特徴とする被験者の疾患を治療することを目的とする、使用。
【請求項２】
前記血管新生阻害組成物が、前記血管新生阻害剤を含む粒子状のデリバリー用媒体を含み、ここで前記デリバリー用媒体が新生血管を標的とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記デリバリー用媒体が、インテグリンを標的とする、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記血管新生阻害組成物が非経口投与され、かつ、前記追加治療薬が経口投与されることを特徴とする、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記追加治療薬が、前記血管新生阻害組成物の急性的投与中および投与後に投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記デリバリー用媒体が、液体／界面活性剤層でコーティングされたフッ化炭素ナノ粒子である、請求項２に記載の使用。
【請求項７】
前記血管新生阻害剤が、フマギリン、ラパマイシン、および／またはタキサンである、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記追加治療薬がスタチンである、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記被験者がヒトである、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記被験者がヒト疾患の動物モデルである、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記疾患がアテローム性動脈硬化症、癌、関節炎、または眼関連疾患である、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記疾患がアテローム性動脈硬化症である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記治療プロトコルが、更に前記慢性的なレジメンの間に定期的評価を含む、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記定期的評価が、標的ＭＲＩ造影剤を用いて新生血管のＭＲ画像を得ることを含む、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記標的ＭＲＩ造影剤が、基本的に前記新生血管を標的とするキレート化常磁性イオンからなる、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、２００６年９月２９日に提出された米国仮出願番号６０／８４８，１３１および２００６年１１月２８日に提出された仮出願番号６０／８６１，６５０の利益を主張するものである。これらの文書の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
連邦政府支援研究に基づく発明に対する権利宣言
本研究は、一部米国政府当局の助成金の支援を受けて行われたものである。米国政府は、本発明について所定の権利を有する。
【技術分野】
【０００３】
本発明は、望まれない血管新生と関連のある症状、例えばアテローム性動脈硬化症、の治療に関する。より正確には、本発明は標的化急性血管新生阻害剤と追加の薬剤を用いた慢性治療との併用療法に関する。
【背景技術】
【０００４】
２００５年８月２５日に公開されたＰＣＴ公開公報、国際公開第２００５／０７７４０７には、「急性」プロトコルとして血管新生阻害剤を含む標的担体組成物を用いる方法と、ＭＲＩ造影剤と関連づけられた標的化粒子を用いた血管病変の画像化とを用いたアテローム性動脈硬化症治療について記載されている（ＭＲＩ信号の増強は、血管新生の増大を示す）。例えば、これはＷｉｎｔｅｒら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０８：２２７０−２２７４（２００３）、Ｂｒｏｏｋｓら，Ｃｅｌｌ，７９：１１５７−１１６４（１９９４）、およびＷｉｎｔｅｒ，Ｐ．Ｍ．ら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，２６：２１０３−２１０９（２００６）により示されている。したがって、これらの文献によって示されるとおり、血管新生阻害剤とイメージング剤の両方を含むナノ粒子を用いた栄養血管への送達と、その後の画像化は、当業者にとって既知である。
【０００５】
アテローム硬化性プラークを治療するために「急性」療法のみにおいて血管新生阻害剤を使用することの１つの欠点は、実のところこの療法が急性であることにある。したがって、治療を中止すると、血管新生が再開し、プラークが再形成されるおそれがある。本発明は、急性治療と「慢性」プロトコルとを併用して、血管新生阻害剤またはその他の安定剤を投与することにより、本問題を解決すると共に、血管新生と関連のあるその他の疾患に対応する。
【発明の概要】
【０００６】
血管新生阻害剤またはその他の有効な薬剤の慢性治療と急性治療とを併用することによって、アテローム硬化症に起因するプラークの退縮が持続し、望ましくない血管新生と関連のあるその他の疾患が安定化または治癒することを確認した。したがって、一の側面において、本発明は、そのような治療を必要としている被験者に対し急性レジメンにおける少なくとも１種類の新生血管を標的とする急性血管新生阻害剤の有効量の投与と、慢性レジメンにおける血管新生阻害剤またはその他の有効な薬剤の投与との併用を含む血管新生の阻害方法に関する。急性的治療は短期間、慢性的治療はこれより長期間の治療と定義される。急性的／慢性的治療を含むあらゆる有効な併用プロトコルを用いることができる。
【０００７】
さらに、様々な画像化技術、好ましくはＭＲＩイメージング法、さらに好ましくは標的ＭＲＩイメージング法を用いて、治療の進行状況をモニタリングすることもできる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１はプラーク形成と関連のある血管新生に対する様々な治療プロトコルの効果とコントロールの効果とを比較したグラフである。
【図２】図２は、高コレステロール食下および非高コレステロール食下で、プラーク形成と関連のある血管新生に対する標的フマギリンの効果をＭＲＩ信号の増強度により測定した結果を示すグラフである。
【図３Ａ】プラーク形成と関連のある血管新生に対するスタチンの慢性的投与および非投与でのフマギリン投与の効果を同じくＭＲＩ信号の増強度により測定した結果を示すグラフである。図３Ａは、急性的治療および慢性的治療をそれぞれ単独で行ったときの効果を示す。
【図３Ｂ】プラーク形成と関連のある血管新生に対するスタチンの慢性的投与および非投与でのフマギリン投与の効果を同じくＭＲＩ信号の増強度により測定した結果を示すグラフである。図３Ｂは、フマギリンの急性的投与とスタチンの慢性的投与を併用した効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、望ましくない血管新生と関連のある疾患の急性的治療と、その疾患の負の作用を軽減し、これを安定化または回復させるだけでなく、このような安定化または回復の効果を長期間維持させることができる追加の有効な薬剤を用いた慢性的治療とを併用するという概念を包含する。また、本発明は、任意の期間または慢性的治療の期間より長期間にわたって治療の有効性を簡便にモニタリングする方法を提供する。よって、例えば本発明の方法における標的ＭＲＩ造影剤を用いて、持続的モニタリングを利用することにより、抗増殖剤の急性的追加投与が望ましいかどうかを決定することができる。
【００１０】
急性的治療は、通常単回ボーラス投与、または典型的には数時間若しくは数日間にわたって行われる持続投与、あるいは、数時間、数日間、または数週間という限定された期間にわたって行われる比較的短期間の反復投与である。具体的には、「急性的」治療は、被験者に対し血管新生阻害剤を、治療の成功を測定する時間より十分に短い時間で投与することと定義される。典型的には、治療期間は、治療の効果が少なくとも部分的に持続すると考えられる治療評価期間の１０％以下、より好ましくは５％以下、または１％以下である。したがって、評価期間が２０日間の場合、投与期間は２日以下、１日以下、または半日以下である。多くの場合、急性的投与はより短期間で行われ、評価期間の０．１％または０．０１％で行われる。評価期間が仮に６週間の場合、投与期間は数時間以下であってもよい。本発明の一の実施形態において、急性的投与は静脈内注射により行うことができ、典型的には注入が行われる時間は数時間単位であり、評価に要する時間は１ヵ月または２ヵ月である。
【００１１】
一方、慢性的治療はより長期間であり、典型的には少なくとも１週間の反復投与または持続投与を要する。該治療は数週間、数ヵ月間または数年間持続してもよい。本発明の必要条件ではないが、慢性的投与は経口投与または吸入投与等、自己投与に適していることが好ましい。急性的治療にもこのような特徴はあるが、治療センターまたは病院環境において投与されてもよい。ただし当該治療センターまたは病院環境において投与されることは必須ではない。
【００１２】
したがって、「慢性的治療」とは、評価期間の少なくとも２分の１〜４分の３の期間、好ましくは評価期間と同じ期間にわたって、反復投与により維持される治療のことである。典型的には、慢性的投与は、実質的に評価期間と同じ期間にわたって、１日１回若しくは２回投与または毎日若しくは１日おき等により、反復投与されることである。
【００１３】
本発明と関連のある治療法は、新たな血管形成を阻害し、および／または既に存在する新生血管の量を低減するようにデザインされている。したがって、本発明の方法は、血管新生が問題となる疾患に適している。このような疾患には、アテローム性動脈硬化症、具体的にはアテローム硬化性プラーク、腫瘍、具体的にはカポジ肉腫等の特に血管増殖を特徴とする腫瘍、関節炎（関節リウマチおよび変形性関節炎を含む）、糖尿病に関連するもの等の増殖性網膜症、加齢性黄斑変性症、子宮腺筋症、望まれない角膜血管新生等が挙げられる。血管新生の阻害および／または新生血管の選択的破壊が有益な疾患は、本発明が有益であると考えられる。
【００１４】
治療の急性段階では、標的化抗増殖剤または血管新生阻害剤を投与する。使用される標的化薬剤は、新生血管または血管新生が発生する位置に特徴的な薬剤である。一般的に新生血管への標的化は、αｖβ３、αｖβ５、およびα５β１等のインテグリンを標的とし、または、ＶＥＧＦ受容体等の血管新生性キナーゼの受容体、ｅ−セレクチンおよびｐ−セレクチン等のセレクチン、ＶＣＡＭ等の接着分子を標的とする成分を標的とし、適宜新生血管の形態異常特性に取り込まれるデリバリー用媒体を利用することにより、行うことができる。疾患によっては、新生血管の位置が、それ自身の標的となり得る環境を示す。例えば、腫瘍を治療するため、腫瘍特異的エピトープを標的とする抗体またはその他の薬剤を使用してもよい。アテローム性動脈硬化症の場合、栄養血管を標的とするのが有用であることもある。
【００１５】
血管は、典型的には中膜に囲まれる中空の内腔を含み、中膜は栄養血管を含む外膜層に囲まれる。アテローム硬化性プラークでは、新生血管は、主にプラークの外膜層の栄養血管で発生し、アテロームの肥厚な内膜層へ伸展する。新生血管は、通常主要動脈腔からは発生しない。新生血管増殖はアテローム性プラーク、具体的には不安定狭心症、心筋梗塞、および脳卒中と臨床的に関連のある病変に局在している。プラークにおける血管新生は、プラーク成長、プラーク内出血、および病変の不安定性を促進させる。
【００１６】
血管新生阻害剤または抗増殖剤は、血管成長を促進させる薬剤である。これらの用語は、ときに本明細書において区別なく用いられるが、求められる効果は、増殖を促進し、新生血管をもたらすことである。
【００１７】
栄養血管における新生血管に対する標的製剤は、例えばαｖβ３インテグリン、α５β１、αｖβ５またはＶＥＧＦの受容体を標的としてもよい。これらの標的に対する抗体、および例えば米国特許６，３２２，７７０；６，１３０，２３１；６，１５３，６２８および国際公開公報ＷＯ０１／９７８４８に記載された様々なペプチドミメティクスを含む広範な標的化薬剤を使用することができる。また、アプタマー、ＴＡＴ（ＨＩＶ由来）等の特異的内皮細胞標的化蛋白質または低分子ライブラリーからスクリーニングされた候補物質も用いることができる。そのような薬剤とフッ化炭素ナノ粒子とを結合させる方法は、国際公開公報ＷＯ２００３／０６２１９８に記載されている。
【００１８】
本発明のプロトコルの急性段階では、前述のとおり、抗増殖剤または血管新生阻害剤は、新生血管それ自体または血管新生が生じる位置を標的とする。単純結合または二官能性抗体の使用を含む、標的化薬剤と抗増殖剤とを結合させるいかなる方法を使用してもよい。しかし、多くの場合、標的化薬剤と抗増殖剤の両方を微粒子デリバリー用媒体と結合させると簡便である。多くの適切なデリバリー用媒体が当業者に既知であり、それらを採用することができる。
【００１９】
当該デリバリー用媒体には、リポソーム、ミセル、ポリマーマトリックス、フッ化炭素系粒子、固相、液相、または気相の粒子等が含まれる。粒子状のデリバリー用媒体のサイズは、非経口投与に適していなければならない。投与は、典型的には静脈内投与であるが、その他の非経口投与も使用してもよい。その他の粒子は、水中油型乳剤およびハロゲン化炭化水素のエマルションを含む。適切な他の担体は、前述の国際公開公報ＷＯ２００５／０７７４０７に記載されている。
【００２０】
同様に、国際公開公報ＷＯ２００５／０７７４０７には急性的血管新生阻害剤として有用な薬剤が記載されている。該公報で開示されている薬剤の一覧表は参照により本明細書に組み込まれる。急性的治療のために投与することができるこれらの血管新生阻害剤には、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、プロテインキナーゼＣ−β阻害剤、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、塩基性ＦＧＦ結合分子、パクリタキセル、ラパマイシン、フマギリン、ドキソルビシンおよび多数の他の薬剤を含む。本発明の急性段階において、任意の血管新生阻害剤を使用してもよい。
【００２１】
当然のことながら、急性的治療において抗増殖剤／血管新生阻害剤を併用してもよく、急性段階はその他の有効な薬剤と少なくとも１種類の抗増殖剤／血管新生阻害剤との併用投与を含んでいてもよい。
【００２２】
急性段階では、標的化抗増殖剤／血管新生阻害剤は限られた時間投与され、その後評価期間の少なくとも一部の期間に投与は中止される。さらなる急性的治療が、評価期間の間の後の時点で行われてもよい。例えば、評価期間が６ヵ月の場合、急性的治療は毎月または２ヵ月毎に行われてもよい。
【００２３】
本発明の方法では特定の手段を用いた実際の評価を要するものではないが、評価することを除くものではなく、本発明の方法により定期的に実施してもよい。開業医が評価技術を用いて併用治療の有効性のモニタリングを希望する場合、血管新生の位置および程度を様々な方法によりモニタリングしてもよい。任意の適切な画像化技術を使用することができる。一の実施形態において、ナノ粒子の標的化懸濁液は、被験者の血管新生部位の画像の質を高めるＭＲＩ造影剤を含む。治療の進行状況を評価するため、評価期間中の多様な時点に画像を得ることができる。
【００２４】
特定の評価法を要するものではないが、本発明者らは下記の実施例で使用した方法が特に有効であることを確認した。新生血管および血管新生の状態を評価する直接的な方法を用いることにより、必要に応じて治療法を修正するために、急性段階と慢性段階との間のバランスを含む投与法の修正が可能となる。例えば、血管新生が急性的投与によって最初阻害されたにもかかわらず、新生血管成長が再開したと考えられる場合、さらなる急性薬投与が示唆される。一方、新生血管が再形成されなければ、さらなる急性的治療は必要ではなく、慢性的治療のみで十分となりうる。標的化ナノ粒子、具体的にはインテグリン等の新生血管マーカーを標的とし、キレート化された常磁性金属イオン等の造影剤を有する液体／界面活性剤でコーティングされたペルフルオロカーボンコアからなるナノ粒子を反復投与することによって新生血管の進行状況をモニタリングでき、治療レジメンの有効性および微妙な違いが大幅に改善される。
【００２５】
「定期的」評価は、単純に評価の合間または評価期間中の２回以上の時点の評価を意味する。典型的には、評価は評価期間中３〜１０回以上、好ましくは定期的な間隔をあけて、繰り返し実施される。
【００２６】
次に、治療の慢性的特徴について説明すると、評価期間全体の少なくとも５０％、または７０％、または８０％持続するものである。
【００２７】
上記のとおり、慢性投与レジメンは、好ましくは簡単に自己投与できるものである。典型的には、そのような慢性投与は１日１回、２回または３回投与あるいは２日に１回または３日に１回の投与により行われる。慢性投与は持続投与というより反復投与であることができ、実際に持続投与が典型的である。
【００２８】
慢性的に投与される薬剤はきわめて種類が豊富であることができ、急性的治療を補い、その効果を延長させるようにデザインされる。一の重要な実施形態において、慢性的に投与される薬剤は、それ自体が血管新生阻害作用または抗アテローム硬化作用を示す薬剤を含む。
【００２９】
慢性投与される治療薬の主要なまたは最も認識されている生物活性は、抗増殖作用／抗血管新生作用ではない。しかし、本剤は特性または副作用の一としてこのような生物活性を必ず含む。実際に、同じ薬剤を慢性的投与と急性的投与の両方に使用することができる。または、主に抗増殖活性／抗血管新生活性を示す薬剤を、本プロトコルの慢性部分で使用することができる。このように、急性的投与でパクリタキセル、ラパマイシン、フマギリン、またはドキソルビシンを使用した場合、慢性段階でこれらの薬剤の同じものまたは他のものを使用することもできる。しかし、多くの薬剤が抗血管新生性の副作用を有するため、広範な薬剤を使用することができる。
【００３０】
アテローム性動脈硬化症を回避し人々を救うために一般的に使用される薬剤のクラスは、コレステロール値をコントロールする能力を有することからスタチン類である。これらは、付加的特性として血管新生阻害能を有することから、本発明のプロトコルにおける慢性的治療としても有用である。
【００３１】
したがって、慢性的に投与される典型的な薬剤は、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、メバスタチン等のスタチン類を含む。典型的には、慢性薬は経口投与されるが、非経口投与を採用することもできる。
【００３２】
慢性治療用のその他の薬剤は、コエンザイムＱ等の抗酸化剤、ホモシステイン濃度を下げる葉酸、ビタミンＢ６、およびＢ１２等の特定のビタミンＢ、ニコチン酸治療、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、およびフェノフィブラート等のフィブリン酸誘導体、プロブコール等のコレステロール輸送阻害剤、コレスチラミンおよびコレスチポール等の非吸収性樹脂等を含む。慢性プロトコル用のこれらの薬剤は、いずれも急性薬投与も同様に含む規定のプロトコルの一環として投与され、Ｏｎｅ−Ａ−Ｄａｙ（登録商標）ビタミンまたは鉄サプリメントの摂取等のしばしば個人が自ら行う慢性的投与は含まない。慢性的に投与される薬は、いかなる場合においても、ある程度抗血管新生作用を示さなければならない。急性プロトコルで使用される特定の血管新生阻害剤は、慢性レジメンでも使用することができる。
【００３３】
それに従って薬剤が投与されるプロトコルは多様であってよいが、典型的には、標的化ナノ粒子またはその他のデリバリー用媒体に含まれた急性的治療に適した血管新生阻害剤は、しばしば被験者に適した間隔をあけた反復投与で、数時間または数日間の短期間投与される。血管新生阻害剤（若しくは複数の当該薬剤）または上述で挙げたその他の薬剤は、「急性的」血管新生阻害剤の投与前、投与後、投与中、または典型的には投与中および投与後のいずれかに、長期にわたって慢性レジメンにより投与される。
【００３４】
治療の進行状況をモニタリングすることが望ましい場合、任意の適切な方法を用いることができるが、上述のとおり、簡便な方法では標的ＭＲＩ造影剤を利用する。アテローム硬化性プラークの場合、造影の経時的増強はプラークの増大を、造影の経時的低下はプラークが良好に治療されたことを示す。
【００３５】
「治療」は、被験者の症状の改善を意味する。したがって、新生血管は単に停止若しくは安定化され、リスク下の被験者において阻害され、または破壊若しくは縮小されてもよい。例えば、アテローム性動脈硬化症の場合、治療は、特にプラーク形成リスクが高い被験者において、プラークが検知される前にその形成を阻害し、プラークの大きさを縮小し、プラークの成長を停止し、またはプラークの形成および維持に関連する治療しなければ悪化する状態を改善してもよい。
【００３６】
治療に適した被験者は、典型的には人間であるが、家畜（羊、牛、豚、山羊等）およびペット（猫、犬等）等、他の温血動物も本発明の方法により良好に治療することができる。さらに、アテローム性動脈硬化症治療のための本発明の方法によって同定された多様な疾患に関する、マウス、ラット、およびウサギ等の動物モデルは、急性的治療と慢性的治療の適切な併用方法を最適化するのに有用である。
【実施例】
【００３７】
以下の実施例は本発明を例示する目的で示されるものであり、本発明を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【００３８】
併用治療の効果
コレステロール食ウサギに対し、第０週および第４週にフマギリン（３０μｇ／体重ｋｇ）投与下（ｎ＝９）または非投与下（ｎ＝９）でαｖβ３−標的化常磁性ナノ粒子（ＮＰ）を投与した。一部のウサギ（１群あたり４匹）は、高コレステロール固形飼料中のアトルバスタチンにて治療した（４４ｍｇ／飼料ｋｇ）。抗血管新生反応は、第２、４、６、および８週に、本薬剤を含まないαｖβ３−標的化常磁性ＮＰを用いて評価した。大動脈栄養血管の新生血管からのＭＲＩ信号の増強度は、ＮＰ注入前および注入４時間後に収集したｂｌａｃｋ  ｂｌｏｏｄ  ＭＲの横断画像（１．５Ｔ）から計算した（１ｍｌ／体重ｋｇ）。各時点で観測されたＭＲＩの増強度は、第０週で測定した増強度を基準として標準化した。
【００３９】
結果を図１に示す。全ての時点において、コントロールのウサギの胸大動脈におけるＭＲＩ増強度は、第０週に確認された測定値とほぼ同じであった。αｖβ３−標的フマギリンＮＰの投与を受けたウサギのスタチン投与下または非投与下での増強度は、ベースライン値と比べて第２週では低かった。αｖβ３−標的化フマギリンＮＰの単独投与を受けたウサギの増強度は、第６週で低く、第８週では高かったことから、最終のＮＰ投与４週後に病的血管新生が再発したことを反映していた。アトルバスタチン単独投与では、増強度の緩徐な低下が、経口スタチンのゆるやかな血管新生阻害効果を反映していた。
【００４０】
αｖβ３−標的化フマギリンＮＰおよびアトルバスタチンの投与を受けたウサギは第６週および第８週に増強度が低下し（＊ｐ＜０．０５）、最終のＮＰ注入後、数週間経過していたにも関わらず、新生血管の増殖が持続的に抑制されたことを示した。
【実施例２】
【００４１】
本実施例では、スタチンの慢性的投与およびフマギリンの標的化急性的投与の併用と、フマギリン投与および高コレステロール食または標準的なコレステロール食の併用とを比較した。結果から、食餌中のコレステロール量は、検出可能な効果をもたらさないことが確認された。
【００４２】
使用した技術は、前述のＷｉｎｔｅｒ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．（２００６）２６：２１０３−２１０９に記載されており、下記の通り修正した。
【００４３】
第１の実験では、雄のニュージーランドホワイト系ウサギに０．５％コレステロール食を８０日間与え、コントロール群には標準的な非高脂肪食を同等の期間与えた。０日目、上述のＷｉｎｔｅｒらの文献に記載されているとおりナノ粒子と結合させた標的化フマギリンをウサギに投与した。Ｗｉｎｔｅｒらの文献で計算されているとおり、ナノ粒子は、０．２モル％フマギリンまたは０．６モル％フマギリンを含有していた。コントロール群には、フマギリンを含有していない同様の粒子を投与した。各試験群は、高コレステロール食および標準的な固形飼料を与えた群を含むようにした。
【００４４】
同様にＷｉｎｔｅｒらの文献に記載されているとおり、各群を４週間追跡観察し、薬剤を含まない標的化常磁性ナノ粒子を用いて週１回画像を撮影した。前述のとおり、半自動化セグメンテーションプログラムを用いて、全画像スライスについて、大動脈壁のＭＲＩ信号の増強度を平均化した。
【００４５】
結果を図２に示す。示したとおり、４週間のあいだ、コントロール群では基本的に信号の増強度は同程度に維持されており、血管新生を示した。フマギリン０．２モル％含有粒子を投与したウサギでは、１週間後の信号の増強度が劇的に低下し、それが第３週頃まで持続した。第４週に、信号の増強度は基本的に元のレベルに戻った。ウサギに標準的な固形飼料を与えた場合と、高コレステロール食を与えた場合で、同じパターンが得られた。
【００４６】
フマギリン濃度を０．６モル％まで増加させても結果が変わらないことを確認した（結果は不図示）。
【実施例３】
【００４７】
慢性スタチン投与の効果
本実施例では、すべてのウサギに０．５％高コレステロール食を８０日間与え、以下の５群に分けた。
（１）アトルバスタチン非投与下のαｖβ３−標的化ナノ粒子投与
（２）アトルバスタチン投与下（アトルバスタチン投与群には、いずれも１．７５  ｍｇ／ｋｇ／日投与）のαｖβ３−標的化ナノ粒子投与
（３）アトルバスタチン投与下のαｖβ３−標的化フマギリン（０．２モル％）ナノ粒子第０週投与
（４）アトルバスタチン非投与下のαｖβ３−標的化フマギリン（０．２モル％）ナノ粒子第０および第４週投与
（５）アトルバスタチン投与下のαｖβ３−標的フマギリン（０．２モル％）ナノ粒子第０および第４週投与。
【００４８】
第１週、第２週、第４週、第６週、および第８週に、αｖβ３−標的化常磁性ナノ粒子（薬剤なし）を用いてウサギを画像化した。前述のとおり、特注の半自動化セグメンテ−ションプログラムを用いて、全画像スライスについて、大動脈壁のＭＲＩ信号の増強度を平均化した。
【００４９】
結果を図３Ａおよび図３Ｂに示す。図３Ａに示すとおり、ウサギにおける信号増強度について、アトルバスタチン非投与下コントロール粒子投与群（第１群）およびアトルバスタチン単独投与群（第２群）と、アトルバスタチン非投与下フマギリン第０週および第４週投与群（第４群）とを比較した。図３Ａで認められるとおり、標的化フマギリンは１週間後に信号の増強度を劇的に低下させ、これは第２週まで持続したが、第４週に元のレベルに戻った。第４週に再度フマギリンを追加投与することで、第０週の投与と基本的に同じパターンで信号を低下させた。その２週間後の時点で劇的に低下したが、その後高レベルに戻った。
【００５０】
図３Ｂは、ウサギに対するアトルバスタチン単独投与群（第２群）と、実験開始時のみにアトルバスタチンと共にフマギリンを投与した群（第３群）およびアトルバスタチンと共にフマギリンを第０週および第４週に投与した群（第５群）との比較を示す。図３Ｂの結果から、フマギリン投与後のスタチン持続投与が第０週にのみ実施された場合、信号の増強度が高レベルに戻るのを防げないことが明らかとなった。しかし、第４週のアトルバスタチン存在下での２回目のフマギリン注入後、同様のアトルバスタチン非投与下のプロトコルに対し、信号の増強度低下は４週間持続した。この図３Ｂの結果と図３Ａの第０週および第４週のスタチン非投与下フマギリン投与群の結果との比較により、このレジメンにおいて、スタチンが２回目の投与後フマギリンの結果を維持できることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年5月20日(2009.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管新生阻害組成物の投与を必要とする被験者に急性的に投与されることを特徴とし、新生血管または新生血管が確認された部位を標的とする少なくとも１種類の血管新生阻害剤を含む血管新生阻害組成物、および、慢性的なレジメンで投与されることを特徴とする追加治療薬とを組み合わせてなる、望ましくない新生血管を特徴とする疾患の治療剤。
【請求項２】
前記血管新生阻害組成物が、前記血管新生阻害剤を含む粒子状のデリバリー用媒体を含み、ここで前記デリバリー用媒体が新生血管を標的とする、請求項１に記載の治療剤。
【請求項３】
前記デリバリー用媒体が、液体／界面活性剤層でコーティングされたフッ化炭素ナノ粒子である、請求項２に記載の治療剤。
【請求項４】
前記血管新生阻害組成物が非経口投与され、かつ、前記追加治療薬が経口投与されることを特徴とする、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項５】
前記血管新生阻害剤が、フマギリン、ラパマイシン、および／またはタキサンであり、かつ／あるいは、前記追加治療薬がスタチンである、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項６】
前記被験者がヒトである、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項７】
前記被験者がヒト疾患の動物モデルである、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項８】
前記疾患がアテローム性動脈硬化症、癌、関節炎、または眼関連疾患である、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項９】
前記血管新生阻害組成物及び／又は追加治療薬が、更に前記慢性的なレジメンの間に定期的評価されることを特徴とする、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項１０】
前記定期的評価が、標的ＭＲＩ造影剤を用いて新生血管のＭＲ画像を得ることを含む、請求項９に記載の治療剤。
【国際調査報告】
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