(57)【要約】本発明は、基質競合的タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）阻害薬および受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害薬として作用する新しいチロホスチン誘導体、それらの調製方法、かかる化合物を含む医薬組成物、ならびにこれらの化合物および組成物の使用方法、特にＰＴＫおよびＲＴＫ関連障害（代謝障害、線維障害、および細胞増殖性障害、特に乾癬および癌など）の予防および治療のための化学療法薬としての使用方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１の構造：
【化１】
2010511694.tif 000030
（式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6は独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、および加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基から選択され、
Ｒ3およびＲ7は独立に、Ｈ、ハロゲン、ハロアルキルおよびＯＲ8から選択され、Ｒ8は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、または加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基であり、
Ｒ4は、ＨまたはＣＮである）
によって表される化合物（その塩、水和物、溶媒和物、多形、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、および混合物を含む）。
【請求項２】
Ｒ4がＣＮである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、ＣＨ3である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ3およびＲ7が、各々、水素、ハロゲン、ハロメチル、ＯＨまたはＯＣＨ3である、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がハロゲンであり、かつＲ7がＯＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々Ｈであり、かつＲ3およびＲ7が各々、ハロゲンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がハロメチルであり、かつＲ7がＯＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がハロゲンであり、かつＲ7がＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がＯＨであり、かつＲ7がハロゲンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、ＣＨ3であり、Ｒ3がハロゲンであり、かつＲ7がＯＣＨ3である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、ＣＨ3であり、かつＲ3およびＲ7が、各々、ハロゲンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ4が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、水素である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、ＣＨ3である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ3およびＲ7が、各々、水素、ハロゲン、ハロメチル、ＯＨまたはＯＣＨ3である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がハロゲンであり、かつＲ7がＯＨである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、かつＲ3およびＲ7が、各々、ハロゲンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がハロメチルであり、かつＲ7がＯＨである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がハロゲンであり、かつＲ7がＨである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、Ｈであり、Ｒ3がＯＨであり、かつＲ7がハロゲンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、ＣＨ3であり、Ｒ3がハロゲンであり、かつＲ7がＯＣＨ3である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が、各々、ＣＨ3,であり、かつＲ3およびＲ7が、各々、ハロゲンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２４】
以下の
【化２−１】
2010511694.tif 000031
【化２−２】
2010511694.tif 000032
【化２−３】
2010511694.tif 000033
【化２−４】
2010511694.tif 000034
【化２−５】
2010511694.tif 000035
【化２−６】
2010511694.tif 000036
からなる群から選択される化合物。
【請求項２５】
治療上有効量の請求項１または請求項２４に記載の化合物と、薬理学的に許容できる担体または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項２６】
タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を阻害する方法であって、前記ＰＴＫを、有効阻害量の請求項１または請求項２４に記載の化合物と接触させるステップを含む方法。
【請求項２７】
被験者においてタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）関連障害を治療または予防するための方法であって、前記被験者に、治療上有効量の請求項１または請求項２４に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２８】
前記ＰＴＫ関連障害が、細胞増殖性障害、線維障害、または代謝障害である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＰＴＫ関連障害が癌である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記タンパク質キナーゼが受容体型タンパク質チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である、請求項２６から請求項２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記受容体型タンパク質キナーゼが、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）、肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）、インスリン受容体、インスリン様増殖因子−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、上皮増殖因子受容体（ＥＤＦＲ）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、およびマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦＲ）からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物が、
【化３−１】
2010511694.tif 000037
【化３−２】
2010511694.tif 000038
【化３−３】
2010511694.tif 000039
【化３−４】
2010511694.tif 000040
【化３−５】
2010511694.tif 000041
からなる群から選択される、請求項２６から請求項３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
さらに、前記化合物と、薬理学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を投与することを含む、請求項２６から請求項３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）関連障害を治療または予防するための医薬の調製のための、請求項１または請求項２４に記載の化合物の使用。
【請求項３５】
前記化合物が化合物６、７、８、９、１０および１３からなる群から選択される、請求項３４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なチロホスチン誘導体、それらの調製、それらを含む医薬組成物、およびタンパク質キナーゼ関連障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、ＡＴＰのγ−リン酸を基質タンパク質上のチロシン残基の側鎖に転移させる酵素のファミリーである。ＰＴＫは、シグナル伝達および成長制御を含めた種々の細胞プロセスに関与する。ＰＴＫによる基質のリン酸化は、細胞内シグナル伝達における重要な事象である。
【０００３】
１つの種類のＰＴＫは、受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。これらのキナーゼは、膜貫通タンパク質のファミリーに属し、細胞内シグナル伝達経路に関係している。一部の受容体型キナーゼの主要な生物学的活性は、細胞成長および細胞増殖の刺激であるが、他の受容体型チロシンキナーゼは、増殖を阻害し分化を促すことに関与する。一部の例では、単一のチロシンキナーゼは、それが発現された細胞環境に応じて、細胞増殖を阻害または刺激することができる（非特許文献１）。ＲＴＫは、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）などに対する受容体を含む。
【０００４】
受容体型チロシンキナーゼは、少なくとも３つのドメイン、細胞外グリコシル化リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメインおよびチロシン残基をリン酸化できる細胞質触媒ドメイン、から構成されている。膜結合性受容体へのリガンドの結合は、受容体二量体の形成およびアロステリック変化を誘発し、従って細胞間キナーゼドメインを活性化し、これはさらにチロシン残基上の受容体の自己リン酸化（ｓｅｌｆ−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）（自己リン酸化（ａｕｔｏ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）および／またはトランスリン酸化）をもたらす。受容体リン酸化は、活性化された受容体と標的分子との物理的会合を刺激する。標的分子のいくつかは、次にリン酸化され、これが、シグナルを細胞質に伝達するプロセスである。活性化された受容体によって生成される二次的なシグナル伝達物質分子は、細胞分裂または細胞分化などの細胞機能を調節するシグナル伝達カスケードをもたらす。細胞内シグナル伝達は、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４に概説されている。
【０００５】
種々の細胞増殖性障害がＰＴＫによって媒介される経路の異常と関連付けられている。正常なキナーゼの過剰発現、受容体型チロシンキナーゼまたは活性化突然変異のリガンドの上方制御から生じるＰＴＫの活性の高まりは、癌を含めた細胞増殖が関与する多くの疾患の顕著な特徴である。細胞増殖性障害と関連付けられている特異的受容体型チロシンキナーゼの例としては、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、上皮増殖因子受容体（ＥＤＦＲ）、および関連するＨＥＲ２が挙げられる。
【０００６】
種々の疾患へのＰＴＫの関与から、ＰＴＫは、抗増殖薬についての標的とされる。実際に、多くのＰＴＫ遮断薬が、提唱される作用機構を含めて文献に記載されている（非特許文献５、非特許文献６）。出願人らは、チロシン基質を模倣するように設計された、チロホスチンと名付けた一群のＰＴＫ阻害薬を開発した（非特許文献５、非特許文献７、非特許文献８、特許文献１および特許文献２）。これらのチロホスチン、特にベンジリデンマロノニトリル型のチロホスチンのファルマコフォアは、親水性のカテコール環およびより親油性の置換シアノ−ビニルラジカルである。動力学的研究により、一部のチロホスチン化合物は、チロシン基質に対する純粋な競合的阻害薬であるが、ＡＴＰ結合部位については、それらは非競合的阻害薬として作用することが示された（非特許文献９、非特許文献１０）。しかしながら、多くのチロホスチンは、その基質およびＡＴＰ結合部位の両方に対して競合的阻害を示す（非特許文献６）。
【０００７】
関連する一群のチロホスチンでは、この親水性のカテコール環は、親油性のジクロロ−フェニル基またはジメトキシ−フェニル基によって交換されており、低マイクロモル濃度範囲で有効なＥＧＦＲキナーゼ阻害薬が得られている（非特許文献１１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第５，２１７，９９９号明細書
【特許文献２】米国特許第５，７７３，４７６号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】ＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒおよびＵｌｌｒｉｃｈ，  Ｎｅｕｒｏｎ（１９９２），９（３）：３８３−３９１
【非特許文献２】Ａａｒｏｎｓｏｎ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９１），２５４：１１４６−１１５３
【非特許文献３】Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，  Ｊ  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．（１９８８），１３：４４３−４４７
【非特許文献４】ＵｌｌｒｉｃｈおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，  Ｃｅｌｌ（１９９０），６１：２０３−２１２
【非特許文献５】Ｌｅｖｉｔｚｋｉら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９５），２６７：１７８２−８８
【非特許文献６】Ｐｏｓｎｅｒら，  Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９４），４５：６７３−６８３
【非特許文献７】Ｌｅｖｉｔｚｋｉら，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．（１９９０），４０：９１３−９２０
【非特許文献８】Ｌｅｖｉｔｚｋｉら，  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．（１９９２），６：３２７５−３２８２
【非特許文献９】Ｙａｉｓｈら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８），２４２：９３３−９３５
【非特許文献１０】Ｇａｚｉｔら，  Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８９），３２：２３４４−２３５２
【非特許文献１１】Ｙｏｎｅｄａら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９１），５１：４４３０−４４３５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、高められた阻害特性を有するチロホスチンに対する満たされていないニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、細胞におけるタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の阻害薬として有用な新しいチロホスチン化合物に関する。これらの新規なチロホスチン化合物は、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、およびＩＧＦ１Ｒ関連インスリン受容体（ＩＲ）の（これらに限定されない）高められた阻害特性を示す。本発明はさらに、ＩＧＦ１Ｒ直接基質（ｄｉｒｅｃｔ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）であるＩＲＳ１のセリンリン酸化の引き金となり、従ってこれらの新規なチロホスチンの阻害活性を高める長続きする効果を提供する化合物に関する。
【００１２】
１つの態様によれば、本発明は、式１の構造によって表される化合物：
【化１】
2010511694.tif 000002
（式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6は独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、および加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基から選択され、
Ｒ3およびＲ7は独立に、Ｈ、ハロゲン、ハロアルキルおよびＯＲ8から選択され、Ｒ8は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、または加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基であり、
Ｒ4は、ＨまたはＣＮである）
（その塩、水和物、溶媒和物、多形、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、混合物を含む）を提供する。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、Ｒ3がハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ）またはハロアルキル（例えば、ＣＦ3）である、式１の構造によって表される化合物を提供する。別の実施形態では、本発明は、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が各々Ｈである、式１の構造によって表される化合物を提供する。別の実施形態では、本発明は、Ｒ7が水素、ハロゲンまたはＯＲ8であり、Ｒ8がＨまたはメチルである、式１の構造によって表される化合物を提供する。一実施形態では、本発明はさらに、Ｒ4がＨである式１の化合物を提供する。別の実施形態では、本発明は、Ｒ4がＣＮである式１の化合物を提供する。
【００１４】
かかる構造の代表的かつ非限定的な例は、化合物２−１８：
【化２−１】
2010511694.tif 000003
【化２−２】
2010511694.tif 000004
【化２−３】
2010511694.tif 000005
【化２−４】
2010511694.tif 000006
【化２−５】
2010511694.tif 000007
からなる群から選択される化合物である。別の類似の誘導体は化合物番号１９：
【化３】
2010511694.tif 000008
である。
【００１５】
本発明はさらに、式１の構造によって表される化合物：
【化４】
2010511694.tif 000009
（式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6は独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、および加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基から選択され、
Ｒ3およびＲ7は独立に、Ｈ、ハロゲン、ハロアルキルおよびＯＲ8から選択され、Ｒ8は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、または加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基であり、
Ｒ4は、ＨまたはＣＮである）
のいずれか（その塩、水和物、溶媒和物、多形、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、混合物を含む）を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明はさらに、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を阻害する方法であって、このＰＴＫを有効阻害量の式１の化合物と接触させることを含む方法を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、被験者においてタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を阻害する方法であって、その被験者に、その被験者におけるタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を阻害するための治療上有効量の式１の化合物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、この方法は、その被験者に、治療上有効量の、式１の化合物のいずれかと、薬理学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を投与することを含む。
【００１８】
本発明はさらに、被験者におけるタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）関連障害を治療または予防する方法であって、その被験者に、治療上有効量の式１の化合物のいずれかを投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、この方法は、その被験者に、治療上有効量の式１の化合物と、薬理学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を投与することを含む。一実施形態では、このＰＴＫ関連障害は、細胞増殖性障害、代謝障害または線維障害である。好ましい実施形態では、このＰＴＫ関連障害は、癌である。別の実施形態では、このＰＴＫ関連障害は、糖尿病性腎症である。
【００１９】
本発明のさらなる実施形態および適用可能性の全範囲は、本願明細書中下記に提供される詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明および具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、それらは例示としてのみ提供されていることを理解されたい。なぜなら、本発明の趣旨および範囲内に含まれる種々の変更および修正は、この詳細な説明から当業者には明らかになることになるからである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明の例示的な新規なチロホスチンの合成についてのプロセスを概略的な形で示す図である。ＸおよびＹは、独立に、水素、ハロゲン、ハロアルキルおよびＯＲ8から選択され、Ｒ8はＨ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、または加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基である。
【図２】本発明の例示的な新規なチロホスチンの合成についてのプロセスを概略的な形で示す図である。ＸおよびＹは、独立に、水素、ハロゲン、ハロアルキルおよびＯＲ8から選択され、Ｒ8はＨ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、または加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基である。
【図３】本発明の新規なチロホスチンの合成において使用される中間体の合成についてのプロセスを概略的な形で示す図である。
【図４Ａ】化合物７が無処置の癌細胞においてＩＧＦ１Ｒおよびそのシグナル伝達の阻害を誘発することを示す図である。この図は、対照（化合物番号２０）と比較して、化合物７に曝露した後の癌細胞におけるＩＧＦ１Ｒ活性化およびシグナル伝達の阻害を示す。化合物７は、ＩＧＦ１Ｒの直接基質であるＩＲＳ１のチロシン−リン酸化の減少、ならびにＰＫＢおよびＥＲＫ経路のＩＧＦ１誘発性活性化の阻害を誘発する。
【図４Ｂ】化合物７が無処置の癌細胞においてＩＧＦ１Ｒおよびそのシグナル伝達の阻害を誘発することを示す図である。この図は、癌細胞におけるＩＧＦ１誘発性シグナル伝達の用量依存的阻害を表す。
【図５Ａ】化合物７が乳癌ＭＣＦ７細胞においてＩＲＳ１上でのセリン−リン酸化、およびＩＲＳ１の細胞レベルの減少を誘発することを示す図である。この図は、化合物７を用いた４時間の処置によって誘発されたＩＲＳ１の細胞レベルの減少を示す。
【図５Ｂ】化合物７が乳癌ＭＣＦ７細胞においてＩＲＳ１上でのセリン−リン酸化、およびＩＲＳ１の細胞レベルの減少を誘発することを示す図である。この図は、化合物７を用いた４時間の処置後のＩＲＳ１での誘発されたセリン−リン酸化を示す。
【図５Ｃ】化合物７が乳癌ＭＣＦ７細胞においてＩＲＳ１上でのセリン−リン酸化、およびＩＲＳ１の細胞レベルの減少を誘発することを示す図である。この図は、癌細胞におけるＩＲＳ１レベルの長続きする（曝露後２４時間）低下を示す。
【図６】化合物７、８、９、１０、１１、および１３を用いた乳癌ＭＣＦ７細胞の処置後の、ＩＲＳ１でのＳｅｒ−リン酸化を示す図である。ＩＧＦ１Ｒの下流のシグナル伝達経路、つまりＥＲＫおよびＰＫＢの活性化の阻害も、同様に示される。
【図７Ａ】化合物６と比較して、化合物７、８および９を用いた卵巣癌Ａ２７８０細胞の処置を示す図である。この図は、化合物６、７、８および９を用いて処置された細胞が、インキュベーションした後にアポトーシスを受け（切断されたＰＡＲＰの検出）、化合物６がわずかにより弱いことを示す。
【図７Ｂ】化合物６と比較して、化合物７、８および９を用いた卵巣癌Ａ２７８０細胞の処置を示す図である。この図は、ＩＲＳ１でのＳｅｒ−リン酸化（ＩＲＳ１バンドの上方への移動によって検出される）、ならびに化合物６とは対照的に、化合物７、８および９によって誘発されたＩＲＳ１レベルの減少を示す。
【図８】化合物１１および１９と比較して、ＩＲＳ１でのＳｅｒ−リン酸化、ならびにＰＡＲＰの切断（アポトーシス）が化合物７、８、９、１０、および１３を用いて処置された転移性メラノーマＹＵＭＡＣ細胞で検出されることを示す図である。
【図９Ａ】化合物７が、無処置の細胞において、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＩＲチロシンキナーゼの活性化および下流でのシグナル伝達を阻害することを示す図である。この図は、化合物７がホルモン不応性前立腺癌ＰＣ３細胞におけるＥＧＦＲ活性化、ならびにＥＧＦＲの直接基質であるＰＫＢおよびＳＴＡＴ３のＥＧＦ誘発性リン酸化を阻害することを示す。
【図９Ｂ】化合物７が、無処置の細胞において、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＩＲチロシンキナーゼの活性化および下流でのシグナル伝達を阻害することを示す図である。この図は、化合物７がＰＤＧＦＲを過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるリガンド誘発性ＰＤＧＦＲ活性化および下流でのシグナル伝達を阻害することを示す。
【図９Ｃ】化合物７が、無処置の細胞において、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＩＲチロシンキナーゼの活性化および下流でのシグナル伝達を阻害することを示す図である。この図は、化合物７が、ＩＲを過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞において、リガンド誘発性インスリン受容体（ＩＲ）活性化および下流での調節を阻害することを示す。
【図１０】化合物７（ＩＰ、１日１回、５０ｍｇ／ｋｇ）を用いたヌードマウスの処置がホルモン不応性前立腺癌（ＨＲＰＣ）ＰＣ３腫瘍の８２％成長阻害をもたらすことを示す図である。
【図１１】化合物７（ＩＰ、１日１回、５０ｍｇ／ｋｇ）を用いたヌードマウスの処置が４週間にわたってマウスの体重に有意な影響を与えないことを示す図である（ＵＴ＝未処置、Ｖｅｈ＝ビヒクル）。
【図１２】化合物７または８（ＩＰ、１日１回、２０ｍｇ／ｋｇ）を用いたヌードマウスの処置が卵巣癌Ａ２７８０腫瘍の８７％成長阻害をもたらすことを示す図である。
【図１３】ヌードマウスモデルにおける卵巣癌Ａ２７８０腫瘍の成長阻害における、化合物６と比較した、化合物７、８、および９の高い有効性を示す図である。
【図１４】化合物８（ＩＰ、１日１回、５０ｍｇ／ｋｇ）を用いた５０ｍｍ3より大きい卵巣Ａ２７８０腫瘍を有するヌードマウスの処置がその腫瘍の８２％成長阻害をもたらすことを示す図である。
【図１５】化合物８（ＩＰ、１日１回、５０ｍｇ／ｋｇ）を用いた４７０ｍｍ3より大きい卵巣Ａ２７８０腫瘍を有するヌードマウスの処置がその腫瘍のおよそ８５％成長阻害をもたらすことを示す図である。
【図１６】化合物７（腫瘍内、１日１回、１２５μｇ／日）を用いたヌードマウスの処置が膵臓癌Ｐａｎｃ１腫瘍の５０％の成長阻害をもたらすことを示す図である。
【図１７】ヌードマウスモデルにおけるメラノーマＢ１６腫瘍の成長阻害における、化合物６と比較した化合物７の有効性を示す図である。この阻害薬は、２０ｍｇ／ｋｇの用量で、１日１回ＩＰ投与された。
【図１８】ヌードマウスモデルにおけるヒトメラノーマＹＵＭＡＣ腫瘍の成長阻害における、化合物８の有効性を示す図である。化合物８は、２０ｍｇ／ｋｇの用量で、１日１回ＩＰ投与された。
【図１９Ａ】ＭＣＦ７細胞に対する化合物６の効果を示す図である。この図は、化合物６がＩＧＦ１誘発性ＩＧＦ１Ｒ活性化およびシグナル伝達（ＩＧＦ１Ｒの自己リン酸化、ＩＲＳ１のＩＧＦ１誘発性チロシンリン酸化およびＡｋｔ／ＰＫＢのＩＧＦ１誘発性活性化）を阻害することを示す。
【図１９Ｂ】ＭＣＦ７細胞に対する化合物６の効果を示す図である。この図は、化合物６がＩＲＳ１レベルに対しては効果を有しないことを示す。
【図２０Ａ】ＨＲＰＣ  ＰＣ３細胞におけるＥＧＦＲ活性に対する化合物６の効果を示す図である。この図は、化合物６がＥＧＦＲおよびその下流エレメント、ＳＴＡＴ３およびＰＫＢのＥＧＦ誘発性リン酸化を阻害することを示す。
【図２０Ｂ】ＨＲＰＣ  ＰＣ３細胞におけるＥＧＦＲ活性に対する化合物６の効果を示す図である。この図は、タンパク質レベルは等しく、化合物６を用いたＰＣ３細胞の処置後にＳＴＡＴ３、ＰＫＢまたはＥＲＫに対する効果は検出されなかったことを示す。
【図２１】増殖因子富化培地の存在下での化合物７（ＩＣ５０＝２．３μＭ）による初代ケラチノサイト成長の用量依存的阻害を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、強力なＰＴＫ阻害薬である新規なチロホスチン誘導体に関する。本発明はさらに、ＰＴＫ、例えばＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）を阻害する方法を提供する。この化合物は、ＰＴＫ関連疾患状態、特にＰＴＫによって媒介されるシグナル伝達経路での異常に関連するＰＴＫ関連障害を治療または予防する上で有用である。細胞増殖が関与する疾患の例は癌および乾癬である。
【００２２】
本発明の化合物は、以前に開示されたチロホスチン誘導体（Ｂｌｕｍら，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．（２０００），３９：１５７０５−１５７１２；米国特許第５，７７３，４７６号および同第５，２１７，９９９号）と比べて、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）に対する高められた阻害効力を有するように設計された。出願人らは、そのカテコールファルマコフォア上にさらなる置換基を導入することが阻害効力を大きく高めることを、驚きをもって見出した。さらに、第２の芳香環にさらなる置換基を導入することもこの新しい化合物の阻害効力を著しく高めることが見出された。加えて、記載された分子のサブファミリーが、ＩＧＦ−１Ｒの直接基質としての役割を果たすＩＲＳ１のセリンリン酸化の引き金となることが示された。あらゆる理論にも作用機構にも結びつけられることは望まないが、このリン酸化は、ＩＲＳ１とＩＧＦ−１Ｒとの脱共役（ｄｅｃｏｕｐｌｉｎｇ）を導き、それによってＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達を遮断するのかも知れない。さらに、このＩＲＳ１のＳｅｒ−リン酸化は、通常、ＩＲＳ１レベルの減少を伴う。これらのプロセスは、これらのチロシンキナーゼ阻害薬の阻害可能性を高め、従って長続きする効果を導入することが示されている。
【００２３】
本発明によって提供される化合物は、一般式１：
【化５】
2010511694.tif 000010
（式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6は独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、および加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基から選択され、
Ｒ3およびＲ7は独立に、Ｈ、ハロゲン、ハロアルキルおよびＯＲ8から選択され、Ｒ8は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、アシル、または加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基であり、
Ｒ4は、ＨまたはＣＮである）
によって表される（その塩、水和物、溶媒和物、多形、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、および混合物を含む）。
【００２４】
一実施形態では、本発明は、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5およびＲ6が各々独立に、Ｈまたはメチルである、式１の構造によって表される化合物を提供する。別の実施形態では、本発明は、Ｒ3がハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシルまたはハロアルキル（例えばＣＦ3）である、式１の構造によって表される化合物を提供する。別の実施形態では、本発明は、Ｒ4がＣＮである、式１の構造によって表される化合物を提供する。別の実施形態では、本発明は、Ｒ7がＨ、ハロゲンまたはＯＲ8であり、Ｒ8がＨまたはメチルである、式１の構造によって表される化合物を提供する。一実施形態では、本発明はさらに、Ｒ4がＨである、式１の化合物を提供する。かかる構造の代表的かつ非限定的な例は、化合物２−１８：
【化６−１】
2010511694.tif 000011
【化６−２】
2010511694.tif 000012
【化６−３】
2010511694.tif 000013
【化６−４】
2010511694.tif 000014
【化６−５】
2010511694.tif 000015
からなる群から選択される化合物である。別の類似の誘導体は化合物番号１９：
【化７】
2010511694.tif 000016
である。あらゆる理論にも作用機構にも結びつけられることは望まないが、ヒドロキシルがメチル基によってブロックされると、つまりその化合物が１、２、５および６位のメトキシ基からなると、その化合物の活性は、等価な位置にヒドロキシ基を有する化合物と比較して、劇的に減少する。それゆえ、化合物２−５は、化合物６−１９などと比較して、活性が低い。
【００２５】
（化学的定義）
「アルキル」基は、直鎖、分枝鎖および環状のアルキル基を含めて飽和の脂肪族炭化水素を指す。一実施形態では、このアルキル基は、１−１２個の炭素を有し、これは本願明細書においてＣ1−Ｃ12−アルキルと表される。別の実施形態では、このアルキル基は、１−６個の炭素を有し、これは本願明細書においてＣ1−Ｃ6−アルキルと表される。別の実施形態では、このアルキル基は、１−４個の炭素を有し、これは本願明細書においてＣ1−Ｃ4−アルキルと表される。このアルキル基は、不飽和であってもよく、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、チオおよびチオアルキルから選択される１つ以上の基で置換されていてもよい。
【００２６】
「ヒドロキシ」基は、ＯＨ基を指す。「アルコキシ」基は、Ｒが上で定義されたとおりのアルキルである、−Ｏ−アルキル基を指す。「チオ」基は−ＳＨ基を指す。「アルキルチオ」基は、Ｒが上で定義されたとおりのアルキルである、−ＳＲ基を指す。
【００２７】
「アミノ」基はＮＨ2基を指す。アルキルアミノ基は、Ｒが上で定義されたとおりのアルキルである、−ＮＨＲ基を指す。ジアルキルアミノ基は、ＲおよびＲ’が上で定義されたとおりのアルキルである、−ＮＲＲ’基を指す。「アミド」基は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2基を指す。アルキルアミド基は、Ｒが上で定義されたとおりアルキルである、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ基を指す。ジアルキルアミド基は、ＲおよびＲ’が上で定義されたとおりのアルキルである、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’基を指す。
【００２８】
「チオアミド」基は、Ｒがアルキル、アリール、アルキルアリールまたは水素のいずれかである、Ｃ（Ｓ）ＮＨＲを指す。
【００２９】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、単独でもしくは別の基の一部分として本願明細書で使用する場合、塩素、臭素、フッ素、およびヨウ素を指す。用語「ハロアルキル」は、水素のいくつかまたはすべてが独立に、ハロゲン基によって置き換えられたアルキル基を指し、例としてはトリクロロメチル、トリブロモメチル、トリフルオロメチル、トリヨードメチル、ジフルオロメチル、クロロジフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、ブロモメチル、クロロメチル、フルオロメチル、ヨードメチル、などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
加水分解の際にヒドロキシルを生じる官能基の例としては、エステル、無水物、カルバメート、カーボネートなどが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5またはＲ6のいずれかがアシル基（ＣＯＲ）である場合、結果として生成する官能基は、エステル（ＯＣＯＲ）である。Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5またはＲ6のいずれかがアミド基（ＣＯＮＨＲ）である場合、結果として生成する官能基は、カルバメート（ＯＣＯＮＨＲ）である。Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5またはＲ6のいずれかがカルボキシレート基（ＣＯＯＲ）である場合、結果として生成する官能基は、カーボネート（ＯＣＯＯＲ）である。
【００３１】
混合物または純粋形態または実質的に純粋形態のいずれかにある本発明の化合物のすべての立体異性体が企図される。これらの化合物は、原子のいずれかにおいて不斉中心を有することができる。その結果、上記化合物は、鏡像異性体もしくはジアステレオマーの形態で、またはその混合物として存在し得る。本発明は、あらゆるラセミ体（すなわち、等しい量の各鏡像異性体を含有する混合物）、鏡像異性体が富化された混合物（すなわち、一方の鏡像異性体について富化された混合物）、純粋な鏡像異性体もしくはジアステレオマー、またはこれらの任意の混合物の使用を企図する。キラル中心は、ＲもしくはＳもしくはＲ，Ｓまたはｄ，Ｄ、ｌ，Ｌもしくはｄ，ｌ、Ｄ，Ｌとして表すことができる。アミノ酸残基を含む化合物としては、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、またはアミノ酸のラセミ誘導体の残基が挙げられる。加えて、本発明の化合物のいくつかは、１つ以上の二重結合を含む。本発明は、それぞれの出現において独立に、ｃｉｓ、ｔｒａｎｓ、ＥおよびＺ異性体を含めて、すべての構造異性体および幾何異性体を包含することを意図している。
【００３２】
本発明の化合物の１種以上は、塩として存在してよい。用語「塩」は、カルボキシレート塩またはアミン窒素との塩を含めて（これらに限定されない）塩基付加塩および酸付加塩の両方を包含し、例として、以下で考察する有機ならびに無機のアニオンおよびカチオンと形成される塩が挙げられる。この用語には、さらに、塩基性基（アミノ基など）と有機または無機の酸との標準的な酸−塩基反応によって形成される塩が包含される。かかる酸としては、塩化水素酸、フッ化水素酸、トリフルオ酢酸、硫酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、パモ酸、ムチン酸、Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−ショウノウ酸、グルタル酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、ケイ皮酸などが挙げられる。
【００３３】
用語「有機または無機のカチオン」は、カルボキシレート塩のカルボキシレートアニオンに対する対イオンを指す。この対イオンは、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（リチウム、ナトリウム、カリウム、バリウム、アルミニウムおよびカルシウムなど）；アンモニウムおよびモノアルキルアミン、ジアルキルアミンおよびトリアルキルアミン（トリメチルアミン、シクロヘキシルアミンなど）；ならびに有機カチオン（ジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウム、ビス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム、フェニルエチルベンジルアンモニウム、ジベンジルエチレンジアンモニウム、ならびに類似のカチオンから選択される。例えば、Ｂｅｒｇｅら，  Ｊ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（１９７７），６６：１−１９を参照。この文献を、参照により本願明細書に援用する。上記の用語によって包含される他のカチオンとしては、プロカイン、キニーネおよびＮ−メチルグルコサミンのプロトン化形、ならびに塩基性アミノ酸（グリシン、オルニチン、ヒスチジン、フェニルグリシン、リジンおよびアルギニンなど）のプロトン化形が挙げられる。さらに、カルボン酸およびアミノ基によって形成される本発明の化合物の任意の双性イオン形もまた、企図される。
【００３４】
本発明はまた、式１の化合物または化合物２−１９のいずれか、およびそれらの塩の溶媒和物を包含する。「溶媒和物」は、本発明の化合物と１つ以上の溶媒分子との物理的会合を意味する。この物理的会合には、水素結合を含めて、様々な程度のイオン結合および共有結合が関与する。特定の例では、この溶媒和物は単離できるであろう。「溶媒和物」は、溶液相にある溶媒和物および単離できる溶媒和物の両方を包含する。適切な溶媒和物の非限定的な例としては、エタノール和物、メタノール和物などが挙げられる。「水和物」は、溶媒分子が水である溶媒和物である。
【００３５】
本発明はまた、式１の化合物または化合物２−１９のいずれか、およびそれらの塩の多形を含む。用語「多形」は、ある物質の、特定の物理的性質（Ｘ線回折、ＩＲスペクトル、融点など）によって特徴付けることができる、特定の結晶状態を指す。
【００３６】
（治療における使用）
本発明は、タンパク質チロシンキナーゼを阻害するのに有効な化合物および組成物を提供する。これらの化合物および組成物は、タンパク質チロシンキナーゼの変化した活性または異常な活性（タンパク質チロシンキナーゼの活性の高まりなど）に関連する疾患の治療に潜在的に有用である。
【００３７】
従って、一実施形態では、本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を阻害する方法であって、そのＰＴＫを有効阻害量の式１−１９のいずれかによって表される化合物と接触させることを含む方法を提供する。
【００３８】
本発明はさらに、被験者においてタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）を治療または予防する方法であって、その被験者に治療上有効量の式１−１９によって表される化合物のいずれかを投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、この方法は、その被験者に、治療上有効量の式１−１９によって表される化合物のいずれかと、薬理学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を投与することを含む。
【００３９】
本発明はさらに、被験者においてタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）関連障害を阻害する方法であって、その被験者に、治療上有効量の式１−１９によって表される化合物のいずれかを投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態では、この方法は、その被験者に、治療上有効量の式１−１９によって表される化合物のいずれかと、薬理学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を投与することを含む。
【００４０】
「タンパク質チロシンキナーゼ」（ＰＴＫ）は、ＡＴＰのγ−リン酸を基質タンパク質上のチロシン残基の側鎖に転移させる酵素のファミリーに属するタンパク質である。ＰＴＫは、シグナル伝達および成長制御を含めた種々の重要な細胞プロセスに関与する。タンパク質チロシンキナーゼは、本願明細書で使用する場合、受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）および細胞チロシンキナーゼ（ＣＴＫまたは非受容体型チロシンキナーゼ）を指す。従って、本発明の化合物は、受容体型タンパク質チロシンキナーゼおよび非受容体型タンパク質チロシンキナーゼの両方を阻害するのに有効である。
【００４１】
細胞チロシンキナーゼ（ＣＴＫまたは非受容体型チロシンキナーゼ）は、核へのシグナル伝達を含めたその細胞内でのシグナル伝達に関与する細胞内タンパク質である。ＣＴＫの例は、腫瘍性タンパク質のＳｒｃファミリーである。受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、膜貫通型シグナル伝達経路に関与する膜貫通タンパク質である。一部の受容体型チロシンキナーゼの主要な生物学的活性は、細胞成長および細胞増殖の刺激であるが、他の受容体型チロシンキナーゼは、成長を停止させ分化を促すことに関与する。ＲＴＫは、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、およびマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）などに対する受容体を含む。
【００４２】
用語「タンパク質チロシンキナーゼ関連障害」は、本願明細書で使用する場合、異常なまたは変化したＰＴＫ活性を特徴とする障害を指す。さらに、異常なまたは変化した活性は、（ｉ）通常はＰＴＫを発現しない細胞におけるＰＴＫの過剰発現；（ｉｉ）望まれない細胞増殖、分化および／または成長を導く高められたＰＴＫ発現；あるいは（ｉｉｉ）細胞増殖、分化および／または成長の望まれない減少を導く低下したＰＴＫ発現のいずれかを指す。ＰＴＫの過剰活性は、特定のＰＴＫをコードする遺伝子の増幅、または細胞増殖、分化および／もしくは成長と相関することができるあるレベルのＰＴＫ活性の生成のいずれかを指す。過剰活性は、リガンド結合を担うＰＴＫの断片の欠失などの突然変異の結果としての、リガンド非依存的または構成的活性化の結果でもあり得る。
【００４３】
従って、一実施形態では、本発明は、式１−１９によって表される化合物のいずれかを含む製剤であって、タンパク質チロシンキナーゼの酵素活性に影響を及ぼして、それによってかかるタンパク質により媒介されるシグナル伝達経路と干渉することによって、ＰＴＫ活性シグナル伝達を調節する製剤に関する。
【００４４】
タンパク質チロシンキナーゼ関連障害の例は、細胞増殖性障害、代謝障害または線維障害および炎症である。
【００４５】
タンパク質チロシンキナーゼによって媒介される細胞増殖性障害の例は、癌、乾癬、糖尿病性腎症、血管増殖性障害、およびメサンギウム細胞増殖性障害である。
【００４６】
癌は、細胞の個体数が、様々な程度で、増殖および分化を正常に調節する制御機構に応答しなくなった障害である。癌は、異なる部位への転移を含めて、種々の種類の悪性新生物および悪性腫瘍を指す。式１−１９によって表される化合物のいずれかによって治療することができる癌の非限定的な例は、ＰＴＫの変化した活性を示す脳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、肺癌、口腔癌および皮膚癌である。本発明の化合物が治療または予防で有効である癌の具体例は、腺癌、副腎腫瘍、エナメル上皮腫、未分化腫瘍、組織非形成性甲状腺癌（ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃｅｌｌ）、血管線維腫、血管腫、血管肉腫、アプドーマ、銀親和性細胞腫（ａｒｇｅｎｔａｆｆｉｎｏｍａ）、男化腫瘍、腹水癌細胞（ａｓｃｉｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ）、腹水腫瘍、星状芽細胞腫、星状細胞腫、毛細血管拡張性運動失調症、心房粘液腫、基底細胞癌、良性腫瘍、骨癌、骨腫瘍、脳幹部膠腫、脳腫瘍、乳癌、バーキットリンパ腫、癌腫、小脳星状細胞腫、子宮頚部癌、チェリー血管腫（ｃｈｅｒｒｙ  ａｎｇｉｏｍａ）、胆管腺癌、胆管細胞癌（ｃｈｏｌａｎｇｉｏｍａ）、軟骨芽細胞腫、軟骨腫、軟骨肉腫、絨毛芽腫（ｃｈｏｒｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）、絨毛癌、結腸癌、汎急性リンパ性白血病（ｃｏｍｍｏｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ）、頭蓋咽頭腫、嚢胞癌（ｃｙｓｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、嚢胞性線維腫（ｃｙｓｔｏｆｉｂｒｏｍａ）、嚢腫（ｃｙｓｔｏｍａ）、球腫（ｃｙｔｏｍａ）、非浸潤性乳管癌、導管乳頭腫、未分化胚細胞腫、脳軟化症、子宮内膜癌、内皮腫、上衣腫、上皮腫、赤白血病、ユーイング肉腫、節外性悪性リンパ腫、ネコ肉腫ウイルス、線維腺腫、線維肉腫、濾胞性甲状腺癌（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｒｏｉｄ）、神経節膠腫、ガストリン産生腫瘍、多形神経膠芽腫、神経膠腫、性腺芽腫、血管芽腫（ｈａｅｍａｎｇｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）、血管内皮芽細胞腫（ｈａｅｍａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）、血管内皮腫、悪性血管外皮腫（ｈａｅｍａｎｇｉｏｐｅｒｉｃｙｔｏｍａ）、血管リンパ管腫（ｈａｅｍａｔｏｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｍａ）、血球母細胞腫（ｈａｅｍｏｃｙｔｏｂｌａｓｔｏｍａ）、血液細胞腫（ｈａｅｍｏｃｙｔｏｍａ）、ヘアリー細胞白血病、過誤腫、肝臓癌（ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞腫、組織腫（ｈｉｓｔｏｍａ）、ホジキン病、グラヴィッツ腫瘍、浸潤性癌、浸潤性乳管癌（ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｄｕｃｔａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、インスリノーマ、若年性血管線維腫、カポジ肉腫、腎腫瘍、大細胞型リンパ腫、白血病、慢性白血病、急性白血病、脂肪腫、肝癌、肝転移、リュッケ癌腫（Ｌｕｃｋｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ腺腫、リンパ管腫、リンパ性白血病、リンパ球性リンパ腫、リンパ球腫、リンパ浮腫、リンパ腫、肺癌、悪性中皮腫、悪性奇形腫、マスト細胞腫、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、中皮腫、転移癌、モートン病（Ｍｏｒｔｏｎ’ｓ  ｎｅｕｒｏｍａ）、多発性骨髄腫、骨髄芽球腫、骨髄性白血病、骨髄脂肪腫、骨髄腫、筋芽細胞腫、粘液腫、上咽頭癌、腎芽腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経線維腫症、神経膠腫（ｎｅｕｒｏｇｌｉｏｍａ）、神経腫、非ホジキンリンパ腫、乏突起神経膠腫、視神経膠腫、骨軟骨腫、骨原性肉腫、骨肉腫、卵巣癌、乳房パジェット病、パンコースト腫瘍、膵臓癌、褐色細胞腫（ｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ）、褐色細胞腫（ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ）、形質細胞腫、原発性脳腫瘍、胎児転位腫（ｐｒｏｇｏｎｏｍａ）、プロラクチノーマ、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ）、横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｓａｒｃｏｍａ）、固形腫瘍、肉腫、二次腫瘍（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）、セミノーマ、皮膚癌、小細胞癌、扁平上皮癌、イチゴ状血管腫、Ｔ−細胞リンパ腫、奇形腫、精巣癌、胸腺腫、絨毛性腫瘍、腫瘍形成性（ｔｕｍｏｕｒｉｇｅｎｉｃ）、前庭神経鞘腫、ウィルム腫瘍（Ｗｉｌｍ’ｓ  ｔｕｍｏｒ）、またはこれらの組合せである。
【００４７】
血管増殖性障害は、一般に血管の異常な増殖をもたらす血管原性（ａｎｔｉｏｇｅｎｉｃ）障害および血管原性（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃ）障害を指す。血管の形成および延展、すなわち、それぞれ血管形成および血管新生は、胚発生、黄体形成、創傷治癒および臓器再生などの種々の生理学的プロセスにおいて重要な役割を果たし、そして癌の発生において極めて重要な役割を果たす。血管増殖障害の他の例としては、関節炎および眼疾患（糖尿病性網膜症、再狭窄、網膜症およびアテローム性動脈硬化など）が挙げられる。
【００４８】
メサンギウム細胞増殖性障害は、メサンギウム細胞の異常な増殖によって引き起こされる障害を指す。メサンギウム細胞増殖性障害には、種々のヒト腎臓疾患（糸球体腎炎、糖尿病性腎症、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症症候群（ｔｈｒｏｍｂｉｃ  ｍｉｃｒｏａｎｇｉｏｐａｔｈｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植片拒絶および糸球体症など）が含まれる。これに関して、ＰＤＧＦＲは、メサンギウム細胞増殖の維持に関与してきた。
【００４９】
異常なＰＴＫ活性に関与する代謝障害としては、乾癬、糖尿病、創傷治癒、炎症および神経変性疾患が挙げられる。例えば、ＥＧＦＲは、角膜および皮膚の創傷治癒に関与してきた。インスリン−ＲおよびＩＧＦ−１Ｒ受容体の異常は、ＩＩ型糖尿病に関与している。
【００５０】
線維障害は、細胞外マトリクスの異常な形成を指す。線維障害の例としては、肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性障害が挙げられる。肝硬変は、肝臓の瘢痕の形成をもたらす細胞外マトリクス構成要素の増加を特徴とする。
【００５１】
用語「治療すること」は、本願明細書で使用する場合、疾患の進行を無効にする、阻害する、遅らせる、もしくは逆転させるか、疾患の臨床症状を改善するか、または疾患の臨床症状の出現を予防することを指す。用語「予防すること」は、本願明細書においては、被験者が障害または疾患を得ることを妨げることとして定義される。
【００５２】
用語「投与すること」は、本願明細書で使用する場合、本発明の化合物と標的のタンパク質チロシンキナーゼを、そのチロホスチンがチロシンキナーゼの触媒活性に直接的に、すなわちそのキナーゼ自体と相互作用させることによって、または間接的に、すなわちその酵素の触媒活性が依存する別の分子と相互作用することによって、影響を及ぼすことができるような様式で、一緒にする方法を指す。本願明細書で使用する場合、投与は、生体外、すなわち試験管中で、または生体内で、すなわち生物（例えば、ヒト）の細胞もしくは組織中で為すことができる。一実施形態では、本発明は、本発明の化合物を被験者に投与することを包含する。
【００５３】
用語「接触させること」は、本願明細書で使用する場合、タンパク質チロシンキナーゼと本願明細書で定義される化合物とを、上で定義されたとおりの生体内条件下または生体外条件下で接触させることを指す。
【００５４】
用語「治療上有効量」は、治療されている障害の症状の１つ以上をある程度は軽減する、投与されている化合物の量を指す。本願明細書に記載される式１−１９によって表される化合物のいずれかについての治療有効用量は、細胞培養物および／または動物モデルから最初は推定することができる。ある用量が動物モデルで処方されてよく、この用量を使用して、ヒトでの有用な用量をより正確に決定することができる。
【００５５】
用語「有効阻害量」は、投与されている化合物が接触しているタンパク質チロシンキナーゼをある程度は阻害する、その投与されている化合物の量を指す。
【００５６】
（医薬組成物）
本発明はさらに、式１−１９の構造によって表される化合物のいずれかと、薬理学的に許容できる担体または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００５７】
本願明細書で使用する場合、「医薬組成物」は、適切な希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体を伴う治療上有効量の本発明の化合物を意味する。本願明細書で使用する場合の「治療上有効量」は、所与の病状および投与計画に対して治療効果を提供する量を指す。かかる組成物は、液体であるか、または凍結乾燥または他の方法で乾燥された製剤であり、種々の緩衝剤内容物（例えば、トリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣＩ．、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨおよびイオン強度の希釈剤、表面への吸収を妨げるための添加剤（アルブミンまたはゼラチンなど）、界面活性剤（例えば、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グルセロール、ポリエチレングルセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、保存料（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、増量物質または浸透圧調整剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、タンパク質へのポリマー（ポリエチレングリコールなど）の共有結合、金属イオンとの錯体化、あるいはポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなど）の粒子状製剤の中もしくは上への物質の組み込み、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層の小胞、赤血球ゴースト、もしくはスフェロプラストへの組み込みを含む。かかる組成物は物理的状態、溶解性、安定性、生体内放出の速度、および生体外クリアランスの速度に影響を及ぼすであろう。制御放出または持続放出組成物は、親油性のデポー（例えば、脂肪酸、ワックス、油）中の製剤を含む。
【００５８】
さらに、ポリマー（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）でコーティングされた粒子状組成物が本発明に包含される。本発明の組成物の他の実施形態は、粒子状形態、保護コーティング、プロテアーゼ阻害薬または種々の投与経路（非経口、肺、鼻および経口を含む）についての透過促進剤を組み込む。一実施形態では、この医薬組成物は、非経口的に、癌経由で、粘膜経由で、経皮的に、筋内で、静脈内で、皮内で、皮下で、腹腔内で、脳室内で、頭蓋内で、腫瘍内で投与される。
【００５９】
さらに、本願明細書で使用する場合、「薬理学的に許容できる担体」は当業者に周知であり、例としては０．０１−０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍリン酸緩衝液または０．８％食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、かかる薬理学的に許容できる担体は、水溶液または非水溶液、懸濁液、およびエマルジョンであってよい。非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（オリーブ油など）、および注入できる有機エステル（オレイン酸エチルなど）である。水系担体としては、食塩水および緩衝化媒体を含めて、水、アルコール／水溶液、エマルジョンまたは懸濁液が挙げられる。
【００６０】
非経口用ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル油または不揮発性油が挙げられる。静脈内用ビヒクルとしては、流体および栄養補給剤、電解質補給剤（リンゲルデキストロースに基づくものなど）などが挙げられる。保存料、および例えば抗菌剤、抗酸化剤、照合剤（ｃｏｌｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、不活性ガスなどの他の添加剤もまた、存在してよい。
【００６１】
制御放出または持続放出組成物は、親油性のデポー（例えば、脂肪酸、ワックス、油）中の製剤を含む。ポリマー（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）でコーティングされた粒子状組成物、および組織特異的受容体、リガンドもしくは抗原を指向する抗体に結合された、または組織特異的受容体のリガンドに結合された化合物もまた本発明に包含される。
【００６２】
本発明の組成物の他の実施形態は、粒子状形態、保護コーティング、プロテアーゼ阻害薬または種々の投与経路（非経口、肺、鼻および経口を含む）についての透過促進剤を組み込む。
【００６３】
水溶性ポリマー（ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンまたはポリプロリンなど）の共有結合によって修飾された化合物は、対応する非修飾化合物よりも、静脈内注射後に血中で実質的により長い半減期を示すことが公知である。かかる修飾物はまた、水溶液中での化合物の溶解性を増加させ、凝集を解消し、その化合物の物理的安定性および化学的安定性を高め、そしてその化合物の免疫原性および反応性を大きく低下させ得る。結果として、所望の生体内での生物学的活性は、かかるポリマー−化合物付加体を、非修飾化合物を用いた場合よりも少ない頻度で、またはより低い用量で投与することによって達成することができる。
【００６４】
さらに別の実施形態では、この医薬組成物は、制御放出系で送達することができる。例えば、上記薬剤は、静脈内注射、埋め込み型浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与様式を用いて投与されてもよい。一実施形態では、ポンプを使用してよい（例えばＳａｕｄｅｋら，  Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９８９），３２１：５７４−５７９を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出系を治療標的、すなわち脳、に近接して配置し、従って全身用量の一部分のみを必要とすることができる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前出（１９８４），２：１１５−１３８を参照）。好ましくは、制御放出装置が不適切な免疫活性化または腫瘍の部位に近接して、被験者の中に導入される。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０），２４９：１５２７−１５３３）による総説で考察されている。
【００６５】
本医薬製剤は、１種以上の式１−１９の化合物のみを含んでいてもよいし、さらに薬理学的に許容できる担体を含んでいてもよく、固体または液体の形態（例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、ペレット、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、ゲル、クリーム、または坐薬（直腸用坐薬および尿道用坐薬を含む））であってよい。薬理学的に許容できる担体としては、ガム、デンプン、糖類、セルロース系物質、およびこれらの混合物が挙げられる。選択的アンドロゲン受容体修飾因子を含有する医薬製剤は、被験者に、例えば、ペレットの皮下移植によって投与することができ、さらなる実施形態では、そのペレットは、ある期間にわたる選択的アンドロゲン受容体修飾因子の制御放出を提供する。この製剤は、液体製剤の静脈内、動脈内、または筋肉内注射によって、液体または固体の製剤の経口投与によって、または局所適用によって投与することができる。投与は、直腸用坐薬または尿道用坐薬の使用によって成就することもできる。
【００６６】
本発明の医薬製剤は、公知の溶解、混合、造粒、または錠剤成形プロセスによって調製することができる。経口投与用に、選択的アンドロゲン受容体修飾因子またはその生理学的に許容される誘導体（塩、エステル、Ｎ−オキシドなど）は、この目的のために慣用的な添加剤（ビヒクル、安定剤、または不活性希釈剤）と混合され、そして慣用的な方法によって適切な投与形態（錠剤、コーティングされた錠剤、硬ゼラチンカプセルもしくは軟ゼラチンカプセル、水溶液、アルコール溶液もしくは油性溶液など）へと変換される。適切な不活性ビヒクルの例は、結合剤（アラビアゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチンなど）と組合わせた、または崩壊剤（トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸と組合せた、あるいは滑沢剤（ステアリン酸もしくはステアリン酸マグネシウムなど）と組合わせた従来の錠剤基材（ラクトース、スクロース、もしくはトウモロコシデンプンなど）である。
【００６７】
適切な油性ビヒクルまたは溶媒の例は、植物油または動物油（ヒマワリ油または魚肝油など）である。調製は、乾式造粒として、および湿式造粒として、どちらででも行うことができる。非経口投与（皮下、静脈内、動脈内、または筋肉内への注射）用に、本発明の化合物またはその生理学的に許容される誘導体（塩、水和物など）は、所望の場合、この目的のために慣用的かつ適切な物質（例えば、可溶化剤または他の補助剤）とともに、液剤、懸濁剤、または乳剤に変換される。例は、界面活性剤、および他の薬理学的に許容できるアジュバントの添加を伴うかまたは伴わない滅菌された液体（水および油など）である。例示的な油は、石油由来、動物由来、植物由来、または合成由来のもの、例えば、落花生油、大豆油、または鉱油である。一般に、水、食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖類溶液、およびグリコール（プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）は、特に注射液用に好ましい液体担体である。
【００６８】
活性成分を含有する医薬組成物の調製は、当該技術分野で十分に理解されている。典型的には、かかる組成物は、上咽頭に送達されるポリペプチドのエアロゾルとして、または注射剤（液体溶液もしくは懸濁剤のいずれか）として調製されるが、しかしながら、注射前の液体への溶解、または液体への懸濁用に適切な固体形態も、調製することができる。この調製物は、乳化されていてもよい。活性な治療成分は、しばしば、薬理学的に許容できかつその活性成分と適合性である賦形剤と混合される。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グルセロール、エタノールなど、およびこれらの組合せである。
【００６９】
加えて、所望の場合、上記組成物は、少量の補助物質（湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤など）を含有することができ、この補助物質は、活性成分の有効性を高める。
【００７０】
活性成分は、中和された薬理学的に許容できる塩形態として、組成物に配合することができる。薬理学的に許容できる塩としては、無機酸（例えば、塩化水素酸もしくはリン酸など）、または有機酸（酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）とともに形成される、（ポリペプチドもしくは抗体分子の遊離アミノ基を用いて形成される）酸付加塩が挙げられる。遊離のカルボキシル基から形成される塩もまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄など）、および有機塩基（イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなど）から誘導することができる。
【００７１】
例えば、クリーム、ゲル、液滴などを使用する体表面への局所投与用に、本発明の化合物またはその生理学的に許容される誘導体（塩、水和物など）は、薬理学的担体を伴うか、または伴わずに、生理学的に許容できる希釈剤中で液剤、懸濁剤、または乳剤として調製され付与される。
【００７２】
別の実施形態では、活性化合物は、ベシクル、特にリポソーム中で送達することができる（例えばＬａｎｇｅｒ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０），２４９：１５２７−１５３３；Ｔｒｅａｔら，  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ（１９８９），Ｌｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編集），Ｌｉｓｓ，ＮＹ，３５３−３６５を参照。
【００７３】
以下の実施例は、本発明の一部の実施形態をより完全に例示するために提供される。しかしながら、それらは、決して本発明の広範な範囲を限定するものと解釈されるべきではない。当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、本願明細書に開示された原理の多くのバリエーションおよび変更態様を直ちに考案することができる。
【実施例】
【００７４】
（実施例１：合成）
化合物６−８、１１−１３、および１５−１７の合成のための一般的手順は図１に概略的に描いており、そして本願明細書中下記に開示する。
（（ｉ）Ｙ＝Ｈの場合、（ｉｉ）Ｙ＝ＯＭｅの場合、および（ｉｉｉ）Ｙ＝Ｂｒの場合を表す以下の中間体化合物の合成のための一般的手順）
【化８】
2010511694.tif 000017
アミン（１．２当量）およびシアノ酢酸メチル（１当量）を、生成物の沈殿を観察するまで、室温で撹拌した。この生成物を濾過によって集め、エタノールで２回洗浄し、減圧下で乾燥した。この生成物を、白色固体として７０−８０％収率で得た。
【００７５】
化合物（ｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ６．８５（ｍ，３Ｈ），６．３（ｂｓ，１Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．４０（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）２３５．６７；Ｃ12Ｈ14Ｎ2Ｏ3（ＭＨ+）に対する計算値［ご確認ください］  ２３５．２５。
【００７６】
化合物（ｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ６．４９（ｓ，２Ｈ），６．３７（ｂｓ，１Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，６Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）２６５．６０；Ｃ13Ｈ17Ｎ2Ｏ4（ＭＨ+）に対する計算値  ２６５．１１。
【００７７】
化合物（ｉｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．０４（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ）。
【００７８】
（（ｉｖ）Ｙ＝Ｈの場合、（ｖ）Ｙ＝ＯＭｅの場合、および（ｖｉ）Ｙ＝Ｂｒの場合を表す以下の中間体化合物の合成のための一般的手順）
【化９】
2010511694.tif 000018
アミド（１当量）およびＬａｗｅｓｓｏｎ試薬（０．５５当量）を、乾燥トルエン（１ｍｍｏｌの化合物（ｉ−ｉｉｉ）あたり約２ｍＬ）中で、還流状態で３時間（ＴＬＣがそのアミドの消失を示すまで）加熱した。この反応混合物を冷却し、減圧下でエバポレートした。残渣をフラッシュクロマトグラフィによって精製し、淡黄色固体を５０−６０％収率で得た。
【００７９】
化合物（ｉｖ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3＋アセトン−ｄ6中）：δ  ９．２０（ｂｓ，１Ｈ），６．８４（ｍ，２Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）４．７１（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）：実測値（ｍ／ｚ）２５１．４３；Ｃ12Ｈ14Ｎ2Ｏ2Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ２５０．３２。
【００８０】
化合物（ｖ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．２０（ｂｓ，１Ｈ），６．７２（ｓ，２Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）：実測値（ｍ／ｚ）２８１．５１；Ｃ13Ｈ17Ｎ2Ｏ3Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ２８１．３４。
【００８１】
化合物（ｖｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ）。
【００８２】
（（ｖｉｉ）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝Ｈの場合、（ｖｉｉｉ）Ｘ＝ＩかつＹ＝Ｈの場合、（ｉｘ）Ｘ＝ＦかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘ）Ｘ＝ＣｌかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｉ）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｉｉ）Ｘ＝ＩかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｉｉｉ）Ｘ＝ＣＦ3かつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｉｖ）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝Ｂｒの場合、および（ｘｖ）Ｘ＝ＯＭｅかつＹ＝Ｂｒの場合を表す以下の中間体化合物の合成のための一般的手順））
【化１０】
2010511694.tif 000019
触媒量のβ−アラニン（０．２当量）を、エタノール（１ｍｍｏｌの化合物（ｉｖ−ｖｉ）あたり約２０ｍＬ）中のβ−シアノチオアミド（１当量）およびアルデヒド（（１．２当量）、Ｂａｃｋｓｔｒｏｍら，  Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８９），３２：８４１−８４６に従って調製した３，４−ジメトキシ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒドを除いて市販されている）の溶液に加えた。この溶液を、６０℃で０．５時間〜一晩加熱した。生成物を沈殿させ、濾過によって集め、Ｈ2Ｏ、ＥｔＯＨ、およびエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥し、純粋な黄色固体を７０％〜定量的収率で得た。
【００８３】
化合物（ｖｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ８．６９（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｂｔ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｍ，３Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，６Ｈ）。
【００８４】
化合物（ｖｉｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ８．６７（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｂｔ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｍ，３Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，６Ｈ）。
【００８５】
化合物（ｉｘ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．６０（ｂｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｍ，３Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｓ，６Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ）。
【００８６】
化合物（ｘ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ８．６９（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｂｔ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，６Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）。
【００８７】
化合物（ｘｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．６２（ｂｔ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，２Ｈ），４．９６（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４９４．７３；Ｃ21Ｈ22ＢｒＮ2Ｏ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４９４．３７。
【００８８】
化合物（ｘｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ８．６６（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｂｔ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｓ，２Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，６Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＣＩ）：実測値（ｍ／ｚ）５４０．６７；Ｃ21Ｈ21ＩＮ2Ｏ5Ｓ（Ｍ+）に対する計算値  ５４０．３７。
【００８９】
化合物（ｘｉｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：８．７５（ｓ，１Ｈ），δ８．２２（ｂｔ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，６Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）。
【００９０】
化合物（ｘｉｖ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6＋ＣＤＣｌ3中）：δ  ９．３０（ｂｔ，１Ｈ），８．４３（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）。
【００９１】
化合物（ｘｖ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ８．７４（ｓ，１Ｈ），８．００（ｂｔ，１Ｈ），７．３４（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，６Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）。
【００９２】
（化合物６−８、１１−１３、１５−１７の合成のための一般的手順）
三臭化ホウ素（各ヒドロキシル基に対して１．５当量過剰）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍｍｏｌの化合物（ｖｉｉ−ｘｖ）あたり約２０ｍＬ）中の保護された生成物の冷却溶液に加えた。この反応混合物を室温まで加温し、２−４時間（ＨＰＬＣが所望の脱保護された生成物の形成を示すまで）撹拌した。この溶液を冷却し、希塩化水素酸で処理した。この溶液を酢酸エチルで３回抽出し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、溶媒をエバポレートした。この粗生成物を水／エタノールから再結晶し、黄色固体を６０−７０％収率で得た。
【００９３】
化合物６について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４５（ｂｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４９８．７３；Ｃ17Ｈ13Ｂｒ2Ｎ2Ｏ4Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４９８．８８。
【００９４】
化合物７について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：９．４８（ｂｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４３８．４０；Ｃ17Ｈ14ＢｒＮ2Ｏ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４３８．２６。
【００９５】
化合物８について：1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４２（ｂｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４８４．８０；Ｃ17Ｈ14ＩＮ2Ｏ5Ｓ（Ｍ+）に対する計算値  ４８４．９６。
【００９６】
化合物１１について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４２（ｂｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｓ，２Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）３９３．０７；Ｃ17Ｈ14ＣｌＮ2Ｏ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ３９３．８１。
【００９７】
化合物１２について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４７（ｂｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｓ，２Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）。
【００９８】
化合物１３について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４７（ｂｓ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｈ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４２７．３３；Ｃ18Ｈ14Ｆ3Ｎ2Ｏ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４２７．３７。
【００９９】
化合物１５について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４０（ｂｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｍ，１Ｈ），６．７９（ｍ，２Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４２２．８０；Ｃ17Ｈ14ＢｒＮ2Ｏ4Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４２２．２７。
【０１００】
化合物１６について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４０（ｂｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｓ，２Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４６８．６７；Ｃ17Ｈ13ＩＮ2Ｏ4Ｓ（Ｍ+）に対する計算値  ４６８．２７。
【０１０１】
化合物１７について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．４５（ｂｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｓ，２Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｈ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４３７．６７；Ｃ17Ｈ13ＢｒＮ2Ｏ5Ｓ（Ｍ+）に対する計算値  ４３７．２６。
【０１０２】
化合物５、９−１０、１４および１８の合成のための一般的手順は図２に概略的に描いており、そして本願明細書中下記に開示する。
（（ｘｖｉ）Ｘ＝Ｂｒの場合、（ｘｖｉｉ）Ｘ＝Ｉの場合、および（ｘｖｉｉｉ）Ｘ＝ＣＦ3の場合を表す以下の中間体化合物の合成のための一般的手順）
【化１１】
2010511694.tif 000020
触媒量のピペリジン（０．２当量）を、アルデヒド（（１当量）、Ｂａｃｋｓｔｒｏｍら，  Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９８９），３２：８４１−８４６に従って調製した３，４−ジメトキシ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒドを除いて市販されている）およびマロン酸（１．５当量）のピリジン溶液に加えた。この反応混合物を１２０℃に６時間加熱した。この溶液を室温まで冷却し、濃ＨＣｌをｐＨ＜３まで滴下した。白色固体を濾過によって集め、水で洗浄し、減圧下で乾燥した。
【０１０３】
化合物（ｘｖｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．６５（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ），７．３５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ）。
【０１０４】
化合物（ｘｖｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．６４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ）。
【０１０５】
化合物（ｘｖｉｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．６３（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ）。
【０１０６】
（（ｘｉｘ）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｘ）Ｘ＝ＩかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｘｉ）Ｘ＝ＣＦ3かつＹ＝ＯＭｅの場合、および（ｘｘｉｉ）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝Ｂｒの場合を表す以下の中間体化合物の合成のための一般的手順）
【化１２】
2010511694.tif 000021
塩化オキサリル（４当量）中の化合物（ｘｖｉ−ｘｖｉｉｉ、１当量）の溶液を、室温で１−２時間撹拌した。過剰の塩化オキサリルを留去し、その混合物を乾固するまでエバポレートした。残渣をＣＨ2Ｃｌ2に溶解し、ＣＨ2Ｃｌ2中のアミン（０．８５当量）およびＥｔ3Ｎ（４当量）の溶液に滴下した。この反応混合物を、室温で０．５−１時間（ＴＬＣがアミンの消失を示すまで）撹拌した。溶媒を減圧下でエバポレートし、残渣の油状物をフラッシュクロマトグラフィによって精製した。
【０１０７】
化合物（ｘｉｘ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．５２（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，２Ｈ），６．３７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｂｔ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８１−３．８５（ｓ，１５Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４６７．８７；Ｃ21Ｈ25ＢｒＮＯ6（ＭＨ+）に対する計算値  ４６６．３２。
【０１０８】
化合物（ｘｘ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．５１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ），６．９６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｓ，２Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｂｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）３．８２（ｓ，６Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）。
【０１０９】
化合物（ｘｘｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．５２（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，２Ｈ），６．３７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｂｔ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８１−３．８５（ｓ，１５Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４６７．８７；Ｃ21Ｈ25ＢｒＮＯ6（ＭＨ+）に対する計算値  ４６６．３２。
【０１１０】
化合物（ｘｘｉｉ）：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3＋アセトン−ｄ6中）：８．５６（ｂｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），δ７．３８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４６７．８７；Ｃ21Ｈ25ＢｒＮＯ6（ＭＨ+）に対する計算値４６６．３２。
【０１１１】
（（５）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｘｉｉｉ）Ｘ＝ＩかつＹ＝ＯＭｅの場合、（ｘｘｉｖ）Ｘ＝ＣＦ3かつＹ＝ＯＭｅの場合、および（ｘｘｖ）Ｘ＝ＢｒかつＹ＝Ｂｒの場合を表す以下の化合物の合成のための一般的手順）
【化１３】
2010511694.tif 000022
アミド（１当量）およびＬａｗｅｓｓｏｎ試薬（０．５５当量）を、トルエン中で３時間（ＴＬＣがアミドの消失を示すまで）還流させた。この反応混合物を冷却し、減圧下でエバポレートした。残渣をフラッシュクロマトグラフィによって精製し、淡黄色固体を５０−６０％収率で得た。
【０１１２】
化合物５について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．７５（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｓ，２Ｈ），４．９０（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４８３．８７；Ｃ21Ｈ25ＢｒＮＯ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４８３．３８。
【０１１３】
化合物（ｘｘｉｉｉ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．７１（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６（ｂｔ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｓ，２Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｓ，６Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ）。
【０１１４】
化合物（ｘｘｉｖ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．７５（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｓ，２Ｈ），４．９０（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４８３．８７；Ｃ21Ｈ25ＢｒＮＯ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４８３．３８。
【０１１５】
化合物（ｘｘｖ）について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．７４（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｂｔ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝５．３，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ）。
【０１１６】
（化合物９−１０、１４および１８の合成のための一般的手順）
三臭化ホウ素（各ヒドロキシル基に対して１．５当量過剰）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍｍｏｌの化合物５および（ｘｘｉｉｉ−ｘｘｖ）あたり約２０ｍＬ）中の保護された生成物の冷却溶液に加えた。この反応混合物を室温まで加温し、２−４時間（ＨＰＬＣが所望の脱保護された生成物の形成を示すまで）撹拌した。この溶液を冷却し、希塩化水素酸で処理した。この溶液を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧下でエバポレートした。この粗生成物を水／エタノールから再結晶して、所望の生成物を６０−７０％収率で得た。
【０１１７】
化合物９について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．１６（ｂｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｓ，２Ｈ），４．７６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４１１．９３；Ｃ16Ｈ15ＢｒＮＯ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４１１．９７。
【０１１８】
化合物１０について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．２（ｂｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｓ，２Ｈ），４．７６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４６０．１３；Ｃ16Ｈ15ＩＮＯ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４６０．２６。
【０１１９】
化合物１４について：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．１６（ｂｄ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｓ，２Ｈ），４．７６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４１１．９３；Ｃ16Ｈ15ＢｒＮＯ5Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４１１．９７。
【０１２０】
化合物１８について：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6中）：δ  ９．２３（ｂｔ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値（ｍ／ｚ）４７６．２７；Ｃ16Ｈ14Ｂｒ2ＮＯ4Ｓ（ＭＨ+）に対する計算値  ４７６．１５。
【０１２１】
本発明の新規なチロホスチンの合成で使用した中間体の合成のための一般的手順を図３に示し、本願明細書下記に記載する。
（本願明細書で（ｘｘｖｉ）と表される以下の化合物の合成のための一般的手順）
【化１４】
2010511694.tif 000023
５−ブロモベラトルアルデヒド（５．００ｇ、２０．５ｍｍｏｌ、１当量）を最少量の温エタノールに溶解し、水（３０ｍＬ）中のヒドロキシルアミン塩酸塩（１．７１ｇ、２４．６ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を加えた。次いで、１０％  水酸化ナトリウム（１．０９ｇ、２７．３ｍｍｏｌ、１．３３当量）の水溶液を加え、この混合物を室温で（ＴＬＣがアルデヒドの消失を示すまで）撹拌した。エタノールをエバポレートした後、生成物が沈殿し、これを濾過によって集め、水で洗浄し、減圧下で乾燥し、純粋な白色固体を定量的収率で得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ）。
【０１２２】
（本願明細書で（ｘｘｖｉｉ）と表される以下の化合物の合成のための一般的手順）
【化１５】
2010511694.tif 000024
２０ｍＬの酢酸中の（ｘｘｖｉ）（５．００ｇ、１９．２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、亜鉛（３．７７ｇ、５７．６ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。ＴＬＣがこのオキシムの消失を示すまで、この溶液を還流させた。この亜鉛塩を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液をエバポレートし、水酸化ナトリウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで３回抽出した。この有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧下でエバポレートし、黄色がかった油状物を５５％収率で得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3中）：δ  ７．０９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，２Ｈ）。
【０１２３】
（実施例２：生物学的活性）
試薬および抗体
化学合成に使用したすべての化学物質、つまりウシ血清アルブミン、ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）  ４：１（ｐＧＴ）、２，２’−アジド−ビス−３−エチルベンゾチアゾリン（ｂｅｎｚｉｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ）−６−スルホン酸、ＩＧＦ１、メチレンブルー、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）、ＨＲＰ接合抗リン酸化チロシンＰＴ−６６および二リン酸化マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ抗体（ｐＥＲＫ）をシグマ（Ｓｉｇｍａ）から購入した。抗リン酸化−ＩＲＳ１抗体をＯｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ドイツから入手し、抗ＩＲＳ１をＵｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．から入手した。抗Ａｋｔｌ／２（ＰＫＢ）、抗ＥＲＫ２、および抗ＩＧＦ１Ｒβ抗体は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した。抗リン酸化（Ｔ３０８）Ａｋｔ、抗リン酸化（Ｓｅｒ６３６／Ｓｅｒ６３９）ＩＲＳ１および抗ＰＡＲＰ抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）およびウシ胎仔血清（ＦＣＳ）は、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、イスラエル、Ｂｅｔ−Ｈａｅｍｅｋから入手した。ＤＭＳＯは、ＢＤＨから入手した。
【０１２４】
（ＩＧＦ１Ｒ触媒による基質リン酸化の阻害）
一般的なタンパク質チロシンキナーゼ基質である、ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）  ４：１（ｐＧＴ）を、１２５μｌのＰＢＳ中０．１ｍｇ／ｍｌのｐＧＴを各ウェルに加えることにより、９６ウェルマキシソープ（Ｍａｘｉｓｏｒｐ）プレート（Ｎｕｎｃ）上にコーティングした。プレートを密封し、３７℃で１６時間インキュベーションし、ＴＢＳＴ（１０ｍＭ  トリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．５、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．１％  トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００）で１回、そしてＤＤＷで１回洗浄し、２−３時間乾燥し、４℃で保存した。この受容体を、２０μＭ  ＡＴＰ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2、５ｍＭ  ＭｎＡｃ2、および２０ｍＭ  トリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４中で、阻害薬を伴うかまたは伴わずに、３０℃で２０分間インキュベートした（１０ｎｇ／ウェル）。このプレートを、０．２％  ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０を含むＴＢＳ（ＴＢＳＴ）で洗浄し、ＴＢＳＴ中の０．５％  ＢＳＡでブロッキングした。西洋ワサビペルオキダーゼに接合したマウスモノクローナル抗リン酸化チロシン抗体（ＰＴ−６６、１：５００００）をそのプレートに加えた。室温で４５分間のインキュベート後、プレートをＴＢＳＴで繰り返し洗浄した。検出を、０．００４％  Ｈ2Ｏ2を含むクエン酸−リン酸緩衝液、ｐＨ  ４．０中で発色試薬、２，２’−アジド−ビス−３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸を用いて１０分間実施し、すべて室温で、４０５ｎｍでモニターした。阻害薬のＩＣ50値を、回帰（ＲＥＧＲＥＳＳＩＯＮ）プログラムを用いて算出した。このアッセイを、ＩＧＦ−１Ｒ（ＩＧＦ１Ｒを過剰発現する細胞から部分的に精製した）の量、反応時間、およびＡＴＰ濃度に関して最適化した。シグナルは、３５ｎｇ／ウェルまでのＩＧＦ１Ｒタンパク質濃度の範囲では、３０分間、線形であった。
【０１２５】
（無処置の細胞におけるＩＧＦ１誘発性シグナル伝達および他のシグナル伝達経路（例えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦおよびインスリン誘発性シグナル伝達）の阻害）
ＩＧＦ１Ｒのβ−サブユニットのチロシン自己リン酸化、およびＩＧＦ１Ｒによって誘発される下流のシグナル伝達を、乳癌ＭＣＦ７細胞でアッセイした。ＥＧＦＲのチロシン自己リン酸化およびＥＧＦＲシグナル伝達を前立腺癌ＰＣ３細胞でアッセイした。ＰＤＧＦＲのチロシン自己リン酸化およびそのシグナル伝達を、ＰＤＧＦＲを過剰発現する線維芽細胞でアッセイした。ＩＲのチロシン自己リン酸化およびそのシグナル伝達を、ＩＲを過剰発現する線維芽細胞でアッセイした。細胞を、６ウェルプレートに播種し（ＭＣＦ７：２５０，０００細胞／ウェル、ＰＣ３：１５０，０００細胞／ウェル、線維芽細胞：１４０，０００細胞／ウェル）、２４時間後に、培地を無血清培地（１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補ったＤＭＥＭ）によって置き換えた。２０時間の血清飢餓後、培地を、０．１％  ＤＭＳＯ中に種々の濃度の阻害薬を含有する培地を用いて、さらに４時間置き換えた。次いで、細胞を、５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＧＦ−１（ＭＣＦ７細胞）、２０ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦ（ＰＣ３細胞）、５０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ（ＰＤＧＦＲを過剰発現する線維芽細胞）または１００ｎＭインスリン（ＩＲを過剰発現する線維芽細胞）を用いて５分間刺激し、ＰＢＳで２回洗浄し、試料緩衝液（１０％グリセロール、５０ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、３％  ＳＤＳ、および５％β−メルカプトエタノール）を煮沸することにより、溶解させた。１レーンあたり等量のタンパク質を８％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロース膜（ザルトリウス（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）  ＡＧ）に移した。リン酸化タンパク質を、抗リン酸化−ＩＧＦ１Ｒ（リン酸化−ＩＧＦ１Ｒ）、抗リン酸化チロシン−ＩＲＳ１（リン酸化−ＩＲＳ１）、抗リン酸化（Ｔ３０８）Ａｋｔ（リン酸化−ＰＫＢ）、抗リン酸化−Ｅｒｋ（リン酸化−ＥＲＫ）、抗リン酸化チロシン４Ｇ１０およびＰＹ２０（ｐＹ−ＥＧＦＲまたはｐＹ−ＰＤＧＦＲ）、抗リン酸化−Ｓｅｒ636/639−ＩＲＳ１（ｐＳ636/639−ＩＲＳ１）および抗リン酸化−ＳＴＡＴ３（リン酸化−ＳＴＡＴ３）抗体とともに免疫ブロットした。検出を、西洋ワサビペルオキシダーゼ接合二次抗体を用いて、ＥＣＬシステムを使用して、実施した。次いでブロットから抗体を除去し（ｓｔｒｉｐｐｅｄ  ｏｆ）、５％低脂肪乳を含むＴＢＳＴでブロッキングし、リン酸化された対応するタンパク質およびリン酸化されていない対応するタンパク質の両方を検出する抗体（例えばＩＧＦ  ＩＲβ、ＩＲＳ１、ＰＫＢ、ＥＲＫ、ＩＲβ、ＰＤＧＦＲおよびＳｔａｔ３）を用いて再度探索した。
【０１２６】
加えて、溶菌液を、刺激無しにＦＣＳの存在下または非存在下で、種々の濃度で２４時間阻害薬に曝露した細胞から調製した。溶菌液調製およびウエスタンブロットは上記と同様であった。ウサギ抗ＰＡＲＰ抗体を用いて免疫ブロットすることにより、アポトーシスを検出した。
【０１２７】
（増殖アッセイ）
（表１に列挙した）種々の癌細胞株を、９６ウェルプレートで、１０％  ＦＣＳ、１００単位／ｍｌ  ペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシンを含有する９０μｌの成長培地中に１０００−５０００細胞／ウェルの密度でプレーティングした。ＤＤＷ中の１％  ＤＭＳＯ  １０μｌ中で、阻害薬を１日後に加え、０、０．１、０．３、１、３、および１０μＭの最終濃度を得た。ＤＭＳＯの最終濃度（０．１％  ＤＭＳＯ）を、すべての試料で一定に保った。阻害薬を含む培地を、１日後および２日後に新しくした。この細胞をその阻害薬に３７℃で７２時間曝露した後、この細胞を、培地中の０．５％  グルタルアルデヒドで１０分間固定し、ＤＤＷで３回、０．１Ｍ  ホウ酸ナトリウム緩衝液ｐＨ  ８．５で１回洗浄し、０．１Ｍ  ホウ酸緩衝液に溶解した１％  メチレンブルーを用いて６０分間染色した。過剰の色素を洗い流し、細胞に結合した色素を２００μｌ／ウェルの０．１Ｍ  ＨＣｌを用いて溶出した。光学密度値を、ＥＬＩＳＡプレートリーダーで、６２０ｎｍで読み取った。データを、ビヒクル対照を１００％増殖として用いて、マイクロソフト（商標）エクセルで解析した。このアッセイを、三重で行った。表１中の値は、得られた用量依存的成長曲線から誘導したＩＣ50値を表す。
【０１２８】
（クローン形成アッセイ）
（表１に列挙した）種々の癌細胞を、非常に低い濃度（９６ウェルプレートで１９細胞／ウェル、または２４ウェルプレートで６３細胞／ウェル）で成長培地に播種した。１日後、培地を、０．１％  ＤＭＳＯの最終濃度中に種々の濃度の阻害薬を含有する成長培地で置き換えた。この阻害薬含有培地を、１週間に３回新しいものに変えた。およそ２週間後、グルタルアルデヒド（０．５％最終濃度）を１０分間加えることにより細胞を固定し、ＤＤＷで３回、０．１Ｍホウ酸緩衝液で１回洗浄し、０．１Ｍホウ酸緩衝液中の１％メチレンブルーを用いて１時間染色した。アクセス染色剤（ａｃｃｅｓｓ  ｓｔａｉｎ）を水で洗浄し、乾燥後にコロニーをカウントした。あるいは、染色剤を０．１Ｎ  ＨＣｌによって１時間抽出し、６２０ｎｍでの吸光度をＥＬＩＳＡリーダーによって測定した。このアッセイを、三重で実施した。表１中の値は、得られた用量依存的成長曲線から誘導したＩＣ50値を表す。
【０１２９】
（異種移植片モデルにおける、前立腺、卵巣、メラノーマおよび膵臓腫瘍成長に対する生体内効果）
ヒトホルモン不応性前立腺癌ＰＣ３細胞（ＡＴＣＣ、マウス１匹あたり１．５×１０6細胞）を、（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ）から購入した）ヌード：Ｈｓｄマウスの右脚に皮下注射した。１０日後、触診可能な腫瘍が発症したとき、マウスを、同程度の平均腫瘍サイズの３つの群に分けた。未処置群（ＵＴ）には、何ら治療を施さなかった。化合物７で処置したマウス群は、後述するビヒクル中に溶解させた化合物７を毎日注射し、ビヒクル処置した群（ｖｅｈ）は、ビヒクルのみを毎日注射した。ビヒクルは、ＤＤＷ中に４．４％  ＤＭＳＯ、１．２％  エタノールおよび５０％  ＰＥＧ４００を含んでおり、群は１つの群あたり３匹のマウスからなっていた。ＩＰ投与した用量は、１ヶ月間、１日１回の５０ｍｇ／Ｋｇ（４ｍｌ／Ｋｇ）であった。腫瘍の長さ（ｌ）および幅（ｗ）を毎日測定し、その腫瘍の体積を、  ｖ＝ｌｗ2／２  に従って算出した。グラフは、その腫瘍の平均体積対時間（日単位）を提示する。その手順は、以下の変更を加えて、他の記載した生体内研究に従った。
【０１３０】
ヒト卵巣癌Ａ２７８０細胞（ＥＣＡＣＣより入手、マウス１匹あたり２×１０6細胞）を、（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ）から購入した）雌のヌード：Ｈｓｄマウスの右脚に皮下注射した。阻害薬を、４ｍｌ／ｋｇの量でＤＤＷ中の４．４％ＤＭＳＯ、０．１２％  ＥｔＯＨ、５０％  ＰＥＧ−４００に溶解させた２０ｍｇ／ｋｇ（実験２および実験３）または５０ｍｇ／ｋｇ（実験４）の用量で毎日ＩＰ注射した。Ｖｅｈ群には、４ｍｌ／ｋｇの量でＤＤＷ中の４．４％ＤＭＳＯ、０．１２％  ＥｔＯＨ、５０％  ＰＥＧ−４００を与えた。
【０１３１】
マウスＢ１６メラノーマ細胞（マウス１匹あたり１．５×ｌ０6細胞）を、（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ）から購入した）雄のヌード：Ｈｓｄマウスの右脚に皮下注射した。阻害薬を、４ｍｌ／ｋｇの量のＤＤＷ中で４．４％  ＤＭＳＯ、１．２％  ＥｔＯＨ、３３％  ＰＥＧ−４００に溶解させた２０ｍｇ／ｋｇの用量で毎日ＩＰ注射した。
【０１３２】
Ｄｒ．Ｒｕｔｈ  Ｈａｌａｂａｎ（エール大学）によって提供されたヒトＹＵＭＡＣ転移性メラノーマ細胞（マウス１匹あたり２×１０6細胞）を、（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ）から購入した）雄のヌード：Ηｓｄマウスの右脚に皮下注射した。阻害薬を、４ｍｌ／ｋｇの量でＤＤＷ中の８％  ＥｔＯＨ、２％  ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）−８０、２０％  ＰＥＧ−４００および２０％  ソルトール（ｓｏｌｕｔｏｌ）に溶解させた２０ｍｇ／ｋｇの用量で毎日ＩＰ注射した。
【０１３３】
ヒト膵臓癌Ｐａｎｃ１細胞（マウス１匹あたり２×ｌ０6細胞）を、（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ）から購入した）雄のヌード：Ｈｓｄマウスの右脚に皮下注射した。化合物７を、食塩水中の０．０６％  ＤＭＳＯおよび２．１６％  ＰＥＧ４００中の１２５μｇ／マウスの用量で毎日、腫瘍内に（ＩＴ）注射した。
【０１３４】
（ケラチノサイト成長の生体外阻害）
初代ケラチノサイトを、９６ウェルプレートで増殖因子富化培地中に播種した。４８時間後、培地を新しくし、化合物７を示した濃度で（０は、すべてのウェルで一定に保った０．１％  ＤＭＳＯのことである）加えた。２４時間ごとに、培地および化合物７を新しくし、播種から５日後に細胞を０．５％グルタルアルデヒドで１０分間固定し、メチレンブルーで染色した。アクセス染色剤を洗い流し、結合した染色剤を０．１Ｎ  ＨＣｌによって抽出した。６２０ｎｍの波長での吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで読み取った。
【０１３５】
（結果）
（本発明の化合物の生化学的特性解析：無細胞アッセイにおけるＩＧＦ１Ｒ活性の阻害）
表１および表２に示すように、化合物６−１８は、部分的に精製したＩＧＦ１Ｒのキナーゼ活性を、３０−２００ｎＭのＩＣ５０値を示して用量依存的に阻害した。ヒドロキシル基を排除すると、化合物１９および化合物７の比較によって示されるように（表１）、ＩＣ５０値が増加した。動力学的研究は、化合物７、ならびに化合物６および化合物８はＡＴＰと競合しないことを示す。なぜなら、ＡＴＰ濃度が上昇してもＩＧＦ１Ｒの無細胞キナーゼアッセイにおいて測定されたＩＣ５０値の増加が誘発されないからである（表２）。
【０１３６】
表１：無細胞キナーゼアッセイにおけるＩＧＦ１Ｒ活性のＩＣ５０値
【表１】
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【０１３７】
表２：ＩＧＦ１Ｒの無細胞キナーゼアッセイにおける阻害薬とＡＴＰとの競合を試験する動力学的研究
【表２】
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【０１３８】
（細胞におけるＩＧＦ１Ｒの阻害）
化合物７への乳癌ＭＣＦ７細胞の曝露は、ＩＧＦ１誘発性シグナル伝達の有意な阻害をもたらした。図４Ａは、対照分子２０（本願明細書下記の構造を参照）はシグナル伝達に対して効果を有しないが、化合物７は、ＩＧＦ１Ｒの自己リン酸化、ＩＲＳ１（ＩＧＦ１Ｒの直接基質）のＩＧＦ１誘発性チロシンリン酸化、およびＩＧＦ１Ｒの下流の２つの主要な抗アポトーシスおよび増殖経路、Ａｋｔ／ＰＫＢ経路およびＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路、のＩＧＦ１誘発性活性化を劇的に阻害することを示す。
【化１６】
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【０１３９】
図４Ｂは、ＭＣＦ７細胞における化合物７の用量依存的活性を例示し、ＩＧＦ１Ｒの下流の中心的な抗アポトーシス経路、Ａｋｔ／ＰＫＢ経路の阻害において、１−２μＭのＩＣ５０値を示す。ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路活性化の阻害は、さらに低い濃度で検出される。
【０１４０】
化合物７は、予想外にも、乳癌ＭＣＦ７細胞において、ＩＧＦ１Ｒ−直接基質ＩＲＳ１の細胞レベルの減少を誘発することを見出した（図５）。この効果は長続きすることが示された（図５Ｂ）。細胞を化合物７に曝露してから２４時間後でさえ、ＩＲＳ１レベルの減少を検出し、それには、その下流のシグナル伝達経路、（すなわち）抗アポトーシス性ＰＫＢ／Ａｋｔ経路の阻害およびその後に続く細胞アポトーシスのマーカーとして公知のＰＡＲＰの切断を伴っていた。
【０１４１】
あらゆる特定の作用機構にも理論にも結びつけられることは望まないが、化合物７によって誘発されるＩＲＳ１レベルの減少は、ＩＲＳ１がセリン残基上での阻害的リン酸化およびその後に続く分解を経験する二次的な負の調節の誘発の結果であることが企図される。この効果は、ＰＴＫシグナル伝達の阻害機構に由来する抗癌活性において非常に重要であると考えられる。化合物７、ならびにトリヒドロキシベンジルチオアミド部分および第２のカテコール環のハロゲンまたはハロメチル部分からなる他の本発明の化合物は、ＩＲＳ１のＳｅｒ−リン酸化および／またはＩＲＳ１レベルの減少を誘発することがさらに企図される。これらの構造は、細胞におけるＩＲＳ１レベルまたはＳｅｒ−リン酸化に対して効果を示さない関連分子（例えば、化合物６）と比較して、生体外（癌細胞増殖の阻害）および生体内（腫瘍成長の阻害）ともにより高い活性を示す。
【０１４２】
化合物７を用いた細胞の処置によって誘発されるＩＲＳ１  Ｓｅｒ−リン酸化の増加は、Ｓｅｒ残基６３６および６３９でリン酸化されたＩＲＳ１に対する特異的抗体を用いて免疫ブロットすることによって（図５Ｂ）、および図５ＡにおけるＩＲＳ１バンドの移動によって実証される。ＩＲＳ１のＳｅｒ−リン酸化は、ＩＲＳ１とＩＧＦ１Ｒとの脱共役（ｄｅｃｏｕｐｌｉｎｇ）を誘発し、それによってＩＧＦ１Ｒシグナル伝達を阻害することが公知である。このサブファミリーの他の関連する阻害薬（例えば化合物８、９、１０、１１および１３）もまた、乳癌ＭＣＦ７細胞（図６）において、ならびに転移性メラノーマＹＵＭＡＣ細胞（図８）においてＩＲＳ１−ｓｅｒリン酸化の引き金となることがさらに示された。卵巣癌、Ａ２７８０細胞において、化合物７ならびに化合物８および９は、Ｓｅｒ−リン酸化（ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるＩＲＳ１バンドの上方移動）、および細胞ＩＲＳ１レベルの減少を誘発した（図７）。ＩＲＳ１に対するこの長期の効果は、上記新規な阻害薬への曝露から２１時間後の卵巣癌細胞について（図７）、および曝露から２４時間後のメラノーマ細胞について（図８；３μＭ）示されるとおり、癌細胞のアポトーシスを伴う。
【０１４３】
ＩＧＦ１Ｒ経路に対する化合物７の阻害効果に加えて、化合物７は、無処置の細胞においてＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＩＲなどの他のチロシンキナーゼを阻害する（図９）。これらのキナーゼは、有糸分裂生起において中心的な役割を有する。化合物７とのインキュベート後、これらのキナーゼ受容体を発現する細胞（例えば、ＥＧＦＲを発現する前立腺癌ＰＣ３細胞、ＰＤＧＦＲを過剰発現する線維芽細胞およびＩＲを過剰発現する線維芽細胞）を、ＥＧＦ、ＰＤＧＦまたはインスリンのいずれかを用いて刺激し（それぞれ、図９Ａ、図９Ｂおよび図９Ｃ）、溶菌液を、抗リン酸化チロシン抗体を用いて免疫ブロットし、その受容体の自己リン酸化を検出した。これらの受容体の下流のシグナル伝達も同様に測定した。
【０１４４】
ＭＥＫまたはＰＤＫのようなＳｅｒ／Ｔｈｒ−キナーゼは、化合物７が上流の調節因子に対して阻害効果を示さない細胞においてそれらの基質（それぞれ、ＥＲＫおよびＰＫＢ（Ｔｈｒ３０８））のリン酸化レベルによって検出されるとおり、化合物７によっては阻害されない。
【０１４５】
（成長阻害）
化合物６、７、８、および９を、それらの阻害可能性について、細胞増殖アッセイで試験した。このアッセイでは、細胞を、播種の１日後に、増加する濃度の分子（すべてのウェルで０．１％  ＤＭＳＯで）に曝露した。培地および阻害薬を毎日新しくし、３日間の処置後に、細胞を固定し、メチレンブルーで染色した。ＩＣ５０値を、化合物濃度に対する光学密度の曲線から決定した。このアッセイを、三重で行った。
【０１４６】
種々の適応症由来のひとまとまりの癌細胞株を、上記分子に対するその感受性について試験した（表３）。化合物７、８および９は、抗癌活性を示したが、化合物６は、より低い活性を有した。この活性は、これらの分子が細胞におけるＳｅｒ−リン酸化およびＩＲＳ１レベルの低下を誘発する能力に相関する。化合物６（図１９Ａおよび図１９Ｂ）とは異なり、化合物７、８、および９は、ＩＲＳ１−ｓｅｒ−リン酸化の増加（図５−８）およびＩＲＳ１レベルの減少（図５および図７）を誘発する。２４時間の処置は、ＰＡＲＰの切断によって検出されるとおり、これらの細胞のアポトーシスの引き金となる（図５Ｃ、図７Ａおよび図８）。
【０１４７】
表３：種々の癌細胞株の細胞増殖およびクローン形成アッセイにおける化合物６、７、８および９の阻害活性（μＭ単位のＩＣ50値）。アッセイを三重で行った。
【表３】
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【０１４８】
ヒト転移性メラノーマ細胞の感受性を、より広範な一組の化合物（表４）に対して試験したところ、化合物６、１７および１９とは異なり、ＩＲＳ１  Ｓｅｒ−リン酸化を誘発する分子、例えば、化合物７、８、９、１０および１３（図６および図８）、に対する高い感受性が示された。
【０１４９】
表４：一連の新規な分子によるヒト転移性メラノーマ細胞の阻害。結果を、下記の分子との細胞の７２時間のインキュベーション後のＩＣ50値で表す。
【表４】
2010511694.tif 000029
【０１５０】
（生体内研究）
化合物７を、動物モデルにおいて、腫瘍成長に対する阻害効果について試験した。ヌードマウスを、そのマウスの脇腹に癌細胞を皮下注射し、腫瘍が測定可能になったとき、種々の本発明の化合物の投与を開始した。グラフに提示した腫瘍の大きさは、最初の投与後に測定した大きさである。ヒトホルモン不応性前立腺癌（ＨＲＰＣ）ＰＣ３のモデルを最初に調べた。図１０は、化合物７を１日１回５０ｍｇ／ｋｇの投与量で全身投与（ＩＰ）すると、対照（ビヒクル処置および未処置）に比べて、８２％の腫瘍成長の阻害がもたらされたことを示す。さらに、このヌードマウスの体重に対する有意な効果は１ヶ月の投与後に検出されなかった（図１１）。加えて、化合物７は、ＨＲＰＣおよび膵臓ＰＡＮＣ１モデルの両方に対する腫瘍内投与を用いて試験した場合、効率的であることを見出した（図１６）。
【０１５１】
ＩＧＦ１Ｒは多くの種類の癌に関与していると報告されているため、ひとまとまりの癌細胞株、およびいくつかの他の類似体の、化合物７に対する感受性を生体外でスクリーニングした（表３）。このスクリーニングに基づき、卵巣癌Ａ２７８０モデルにおける化合物７および８の有効性を調べた。図１２は、化合物７または８のいずれかの２０ｍｇ／ｋｇの１日１回のＩＰ投与が腫瘍成長の８７％阻害をもたらすことを示す。化合物６、７、８および９（１日１回ＩＰ投与、２０ｍｇ／ｋｇ）の比較研究は、化合物７、８および９がおよそ９０％卵巣腫瘍成長を阻害し、かつ小さい腫瘍の退縮さえ誘発するのに対し、（同一条件下での）化合物６の投与は腫瘍成長の３３％阻害のみをもたらしたことを示す（図１３）。
【０１５２】
化合物６および７の有効性を、メラノーマＢ１６生体内モデルでも試験した。両方の分子は有意な阻害効果を有し、化合物７がより効率的であった（図１７）。メラノーマ腫瘍に対する本発明の化合物の有効性は、ヌードマウスにおけるヒト転移性メラノーマＹＵＭＡＣ腫瘍の、化合物８による阻害によっても実証された（図１８）。
【０１５３】
引き続いて、卵巣癌Ａ２７８０腫瘍成長の阻害についての化合物８の有効性を調べた。腫瘍サイズが５０ｍｍ3よりも大きくなったとき、あるいは腫瘍サイズが４７０ｍｍ3より大きくなったときに、投与を始めた。図１４および図１５は、化合物８の５０ｍｇ／ｋｇの１日１回のＩＰ投与が有意かつ劇的な腫瘍成長の阻害をもたらしたことを示す。このように、本発明の化合物は、生体外および生体内の両方において、種々の癌についての効率よい抗癌剤であることが実証された。
【０１５４】
（乾癬についての生体外研究）
富化培地で成長させた初代ケラチノサイトは、乾癬についての生体外モデルとして有用であることが実証された。化合物７は、初代ケラチノサイトの生体外成長を阻害し（ＩＣ５０＝２．３μＭ）、それゆえ、抗乾癬薬としての候補である（図２１）。
【０１５５】
（化合物６の生化学的特性解析）
（細胞におけるＩＧＦ１ＲおよびＥＧＦＲのチロシンキナーゼ活性の阻害）
乳癌ＭＣＦ７細胞を化合物６に曝露することで、ＩＧＦ１誘発性シグナル伝達の有意な阻害がもたらされた。図１９Ａは、化合物６がＩＧＦ１Ｒの自己リン酸化、ＩＲＳ１（ＩＧＦ１Ｒの直接基質）のＩＧＦ１誘発性チロシンリン酸化、およびＡｋｔ／ＰＫＢのＩＧＦ１誘発性活性化を阻害したことを示す。化合物７とは異なり、化合物６は、ＩＧＦ１ＲまたはＩＲＳ１のいずれのレベルに対しても効果を有しなかった（図１９Ｂ）。化合物６はまた、ＥＧＦＲの直接基質であるＳＴＡＴ３のＥＧＦＲおよびＥＧＦ誘発性チロシンリン酸化、およびＰＫＢ経路のＥＧＦ誘発性活性化も阻害した（図２０Ａおよび図２０Ｂ）。
【０１５６】
（成長阻害）
種々の癌細胞を化合物６へ曝露すると、軟寒天およびプレートの両方において、コロニー形成の有意な阻害が引き起こされた（表３、クローン形成アッセイ）。
【０１５７】
本発明の一部の実施形態を例示して説明したが、本発明は本願明細書に記載した実施形態に限定されないことは明らかなはずである。多くの修正、変更、バリエーション、置換物および均等物は、添付の特許請求の範囲によって画定される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。
【図１】
2010511694.tif 000042
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７Ａ】
2010511694.tif 000051
【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
2010511694.tif 000054
【図９Ｂ】
2010511694.tif 000055
【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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