(57)【要約】  本発明は、冠動脈カテーテル法に起因する患者での心臓合併症の診断方法であって、（ａ）冠動脈カテーテル法の施術中またはその後に該患者から少なくとも１つのベースラインサンプルを取得するステップ、および続いて（ｂ）冠動脈カテーテル法の後に該患者から少なくとも１つの被験サンプルを取得するステップ、（ｃ）ベースラインサンプルと被験サンプルとの間で、ＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップを含み、ここでステップ（ｃ）によるＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が心臓合併症を示すものである方法を開示する。好ましい実施形態ではＢＮＰ型ペプチドも測定され、ここでＢＮＰ型ペプチドレベルの有意な増大が心臓合併症を示す。ＡＮＰ型ペプチドおよびＢＮＰ型ペプチドはナトリウム利尿ペプチドの群に属する。好ましいペプチドは、ＡＮＰ（心房性ナトリウム利尿ペプチド）およびＢＮＰ（脳ナトリウム利尿ペプチド）、ならびにそれらのそれぞれのＮ末端フラグメントであるＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰである。本発明は冠動脈カテーテル法（カテーテルの導入）、例えば、血管造影法、血管形成術、バルーン拡張術、経皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）、またはステント移植に起因するかそれにより引き起こされる心臓合併症の早期診断を可能にする。検出可能な合併症の例としては、心筋虚血および心筋壊死が挙げられ、それらが無症候性または臨床的に明らかでなくとも検出可能である。本発明はまた、壊死マーカー（例えば、トロポニン）および炎症マーカー（例えば、インターロイキン）の追加的な測定を記載する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
冠動脈カテーテル法に起因する患者での心臓合併症の診断方法であって、以下のステップ；
（ａ）冠動脈カテーテル法の施術中もしくはその後に該患者から取得した少なくとも１つのベースラインサンプル中のＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルを測定するステップ、
（ｂ）冠動脈カテーテル法の後に該患者から取得した少なくとも１つの被験サンプル中のＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルを測定するステップ、および
（ｃ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間で、ＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップであって、該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が心臓合併症を示すものであるステップ
を含む、上記方法。
【請求項２】
ステップ（ｃ）が、以下：
（ｃ）前記ベースラインサンプルと前記被験サンプルとの間でＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定し、かつ該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＢＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップであって、該ＢＮＰ型ペプチドレベルの有意な増大と同時に見られる該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が、心臓合併症を示すものであるステップ
に従い実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓合併症が心筋虚血および／または心筋壊死である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記心臓合併症が臨床的に明らかでない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ａ）に記載の前記ベースラインサンプルが、冠動脈カテーテル法の２時間後またはその前に取得される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記被験サンプルが冠動脈カテーテル法の４〜４８時間後に取得される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記被験サンプルが冠動脈カテーテル法の５〜３６時間後に取得される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＡＮＰ型ペプチドレベルの低下が１０％より大きい、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＢＮＰ型ペプチドレベルの増大が２０％より大きい、特に２５％より大きい、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＮＰ型ペプチドがＮＴ−ｐｒｏＡＮＰである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＢＮＰ型ペプチドがＮＴ−ｐｒｏＢＮＰである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
壊死マーカーまたはその変異体のレベルを追加的に測定し、好ましくは該壊死マーカーは、心筋トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、虚血修飾型アルブミン（ＩＭＡ）、およびそれらの変異体からなる群より選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
炎症マーカーまたはその変異体のレベルを追加的に測定し、好ましくは該炎症マーカーは、ＣＲＰ、インターロイキン、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）、高感度ＣＲＰ（ｈｓＣＲＰ）、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、単球化学誘引タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、およびそれらの変異体からなる群より選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
冠動脈カテーテル法に起因する患者での心臓合併症の診断方法であって、以下のステップ：
（ａ）冠動脈カテーテル法の施術中もしくはその後に該患者から取得した少なくとも１つのベースラインサンプル中のＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルを測定するステップ、
（ｂ）冠動脈カテーテル法の後に該患者から取得した少なくとも１つの被験サンプル中のＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルを測定するステップ、
（ｃ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップ、および
（ｄ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＢＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップであって、該ＢＮＰ型ペプチドレベルの有意な増大と同時に見られる、ステップ（ｃ）による該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が、心臓合併症を示すものであるステップ
を含む、上記方法。
【請求項１５】
冠動脈カテーテル法の質の評価または質のモニタリングのための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項１６】
冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断のための、ＡＮＰ型ペプチドの患者レベルの測定を可能にする診断手段の使用。
【請求項１７】
冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断のための、ＡＮＰ型ペプチドの測定を可能にする手段または試薬を含むキットの使用。
【請求項１８】
以下のもの：
（ａ）患者由来のサンプル中のＡＮＰ型ペプチドの量を測定可能な手段；および
（ｂ）好ましくは、該患者由来のサンプル中のＢＮＰ型ペプチドの量を測定可能な手段；
（ｃ）好ましくは、（ａ）および／もしくは（ｂ）により測定されるレベルの間での、または（ａ）および／もしくは（ｂ）により測定されるレベルと、異なるサンプル中で測定されるレベルとの間での変化を測定可能な手段；および
（ｄ）該測定されるレベルを、少なくとも１つの参照レベルまたは参照変化と比較することにより心臓合併症を診断することが可能な手段
を含む、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断のためのデバイスの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、任意の種類の冠動脈カテーテル法、例えば血管造影法または、特に、経皮冠動脈インターベンション（例えば血管形成術またはステント移植）の後の心臓合併症の診断に関する。ゆえに、本発明はまた、どの患者が精密なモニタリングを必要とするか、および／または冠動脈カテーテル法の後に早期の強力な治療を開始することから最も利益を受けるかに関するリスク分類を提供する。
【背景技術】
【０００２】
現代医学の目的は、個人に向けたかまたは個別の治療レジメンを提供することである。それらは、例えば特定の治療レジメンまたはモニタリングレジメンを選択することによって、患者の個別の必要性またはリスクを考慮に入れた治療レジメンである。
【０００３】
心血管合併症、特に心疾患は西半球における罹病および死亡の主要原因である。冠動脈性心疾患を患っているか、または患っていると疑われる患者では、例えば診断または治療目的で、冠動脈カテーテル法が実施されることが多い。
【０００４】
冠動脈カテーテル法は、典型的に、心臓に属する血管、特に冠動脈へのカテーテルの導入を含む。このカテーテルは長くて薄くて曲げやすいチューブである。冠動脈カテーテル法の例には、冠動脈造影法ならびに経皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）が含まれる。冠動脈造影法では、典型的に、カテーテルを使用して造影剤を導入し、次いで写真（例えばＸ線写真または磁気共鳴写真）を撮影して、例えば冠動脈の内側空隙を可視化する。ＰＣＩでは、カテーテルを用いて血管形成術またはステント移植を実施する。ステントは、典型的に、血管壁に対する機械的張力によって、特に血管壁に対する拡張によって、血管を開いたままにすることが可能な補綴である。ゆえに、ステントは血管が閉塞するのを妨ぐことができ、ゆえに例えば心筋梗塞を予防することができる。展開前には、ステントは（例えば折りたたみ格子として）小さな直径に折りたたまれていて、目的の位置で拡張される。
【０００５】
冠動脈カテーテル法は診断法および治療の重要なツールになっているが、その手順自体が対応するリスクを伴い、心臓合併症、例えば心筋損傷を引き起こす可能性があることが分かっている。これは、例えば施術中の正常な血流の妨害（例えば側枝閉塞）に起因するか、または例えば挿入対象の血管壁を損傷するカテーテル自体またはステントによる血管壁の損傷に起因する。実際、心筋トロポニンＴ（cardiac troponin T）（ｃＴｎＴ）の放出によって明らかなように、冠動脈血管形成術を受けている患者の４０％超がわずかな程度の心筋損傷の証拠を有することが報告されている。心筋トロポニンＴは心筋壊死のマーカーであると考えられている（非特許文献１）。合併症の臨床的知見に明らかに基づくわずかに低い数値が、心血管医学の教科書（非特許文献２）に報告されている。
【０００６】
手順にかかわる心筋傷害は常に臨床的に明らかになるわけではないようである。これは特にやっかいである。筋細胞（心筋（heart muscle or myocard）を構成する筋細胞）は概して再生可能でないからである。したがって、わずかな心筋傷害でさえ回避されるべきであろう。Ricciardiらは、造影増強磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）が、ＥＣＧ変化または壁運動異常を欠いているにもかかわらず、手順にかかわる心筋傷害の生化学的証拠に対する解剖学的相関を提供することを報告している（非特許文献３）。同著者は、ＰＣＩの後のクレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）の穏やかな上昇が個別の微小梗塞（microinfarction）の結果であることを報告している。
【０００７】
しかし、ＭＲＩは費用がかかる技術であり、高価な設備を必要とし、該設備は冠動脈カテーテル法の後の患者をモニターするために常に利用可能なわけではない。さらにまた、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）は壊死の存在を示すマーカーであると考えられている。ゆえに、ＣＫ−ＭＢは、いくらかのおそらく不可逆的な損傷がすでに生じた後にしか、心臓合併症の指標にならない。
【０００８】
同様に、Saadeddinは、明らかに成功した経皮経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）の後の心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）、心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）、およびＣＫ−ＭＢを調べた（非特許文献４）。彼らは、ステント術を伴うか、伴わない冠動脈血管形成術の後の心筋傷害の検出において、ｃＴｎＩが非常に高感度のマーカーであったことを報告している。しかし、ｃＴｎＩも壊死の存在を示すマーカーであると考えられている。ゆえに、ｃＴｎＩは、いくらかのおそらく不可逆的な損傷がすでに生じた後にしか、心臓合併症の指標にならない。
【０００９】
上記の研究では、Abbasらは、ハイリスク冠動脈病変および血管形成術のわずかおよび主要な合併症の両方がｃＴｎＴ放出と関連していることを報告している（非特許文献５）。しかし、ｃＴｎＴも心筋壊死のマーカーであると考えられ、ゆえにいくらかのおそらく不可逆的な損傷がすでに生じた後にしか、心臓合併症の指標にならない。
【００１０】
ＢＮＰ型ペプチド（例えば脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）および／またはそのＮ末端プロペプチド断片（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ））および特定の障害の診断のためのその分子的または生化学的マーカーとしての使用はそれ自体公知である。特許文献１では、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）を測定して心筋梗塞を診断することが示唆されている。特許文献２では、ＢＮＰを使用して、うっ血性心不全、心筋梗塞、ＳＴ上昇型心筋梗塞、または非ＳＴ上昇型急性冠動脈症候群を有する患者の目先の罹病率または死亡率を予測することが示唆されている。
【００１１】
心臓病のバイオマーカーに関する概要はMaiselらによって提供されている（非特許文献６）。
【００１２】
特許文献３では、患者の心血管合併症を決定し、急性心代償不全の症状を示す患者の心臓病を診断するための方法が報告されている。該方法では、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの測定レベルの情報を組み合わせる。該レベルが測定された一部の患者で、後に血管造影法が実施された。測定後、ＰＣＴＡまたはステント移植も実施された。しかし、該研究では、ステント移植に起因する心臓合併症の診断についての問題は扱われなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ  ０２／０８９６５７
【特許文献２】ＷＯ  ０２／０８３９１３
【特許文献３】ＷＯ  ２００６／０８７３７３
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Abbas, S.A., Glazier, J.J., Wu, A.H., Dupont, C. et al. (1996). Factors associated with the release of cardiac troponin T following percutaneous transluminal coronary angioplasty. Clin. Cardiol., vol. 19, pp. 782-786
【非特許文献２】Braunwald's Heart Disease - A textbook of cardiovascular medicine, Braunwald (ed.) (2005), Table 18-3, Table 52-2, and Table 52-3
【非特許文献３】Ricciardi, M.J., Wu, E., Davidson, C.J., Choi, K.M. (2001). Visualization of discrete microinfarction after percutaneous coronary intervention associated with mild creatine kinase-MB elevation. Circulation, vol. 103, pp. 2780-2783
【非特許文献４】Saadeddin, S.M., Habbab, M.A., Sobki, S.H., Ferns, G.A. (2000) Detection of minor myocardial injury after successful percutaneous transluminal coronary angioplasty with or without stenting. Med Sci Monit, vol. 6, pp. 708-712
【非特許文献５】Abbas, S.A., Glazier, J.J., Wu, A.H., Dupont, C. et al. (1996). Factors associated with the release of cardiac troponin T following percutaneous transluminal coronary angioplasty. Clin. Cardiol., vol. 19, pp. 782-786
【非特許文献６】Maisel, A.S., Bhalla, V., and Braunwald, E. (2006). Cardiac biomarkers: a contemporary status report, Nature Clinical Practice, vol. 3, pp. 24-34
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断を改善し、かつ最新技術の不都合を克服する必要が依然として存在する。特に、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するための追加の改善された診断手段および方法を提供する必要がある。より具体的には、心筋壊死と無関係の、または心筋壊死が生じる前の、心臓合併症の診断を可能にする追加の手段および方法を提供する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の目的は、冠動脈カテーテル法に起因する、患者での心臓合併症の診断方法であって、以下のステップ：
（ａ）冠動脈カテーテル法の施術中またはその後に該患者から取得した少なくとも１つのベースラインサンプル中のＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルを測定するステップ、および次いで
（ｂ）冠動脈カテーテル法の後に該患者から取得した少なくとも１つの被験サンプル中のＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルを測定するステップ、
（ｃ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップであって、該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が心臓合併症を示すものであるステップ
を含む方法によって達成される。
【００１７】
好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）が、以下：
（ｃ）前記ベースラインサンプルと前記被験サンプルとの間でＡＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定し、かつ該ベースラインサンプルと被験サンプルとの間でＢＮＰ型ペプチドまたはその変異体レベルの変化を測定するステップであって、ＢＮＰ型ペプチドの有意な増大と同時に見られる該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が、心臓合併症を示すものであるステップ
に従い実施される。
【００１８】
本方法はまた、患者の体液または組織サンプルを取得するステップを含んでもよい。好ましくは、前記レベルは患者の体液または組織サンプル中で測定される。好ましくは該レベルはｉｎ ｖｉｔｒｏで測定される。
【００１９】
それぞれの管轄内で、本発明の方法が、ヒトまたは動物体に対して実施される診断法に関することに起因して特許性または産業上の利用可能性がない実施形態にも関すると見なされる場合、包含されるそのような実施形態は保護範囲から除外されるものとする。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断を可能にする方法および手段、特にマーカーを提供する。有利なことに、本発明は、心筋壊死と無関係の、および／または心筋壊死が生じる前の、心臓合併症の診断を可能にする手段および方法を提供する。
【００２１】
本発明の関連で、冠動脈カテーテル法の後のＡＮＰ型ペプチドレベルの低下が心臓合併症を示すことが観察されている。この知見はかなり予想外であった。他の心血管合併症では、実際に、合併症の存在を示すのがＡＮＰ型ペプチドの増大であり、低下ではないからである。さらにまた、該手順自体がＡＮＰ型ペプチドレベルの考慮すべき障害を生じさせることが予測されるが、ＡＮＰ型ペプチドが合理的な診断情報を提供することが理解されている。好都合には、冠動脈カテーテル法に続く心臓合併症の後の早期にすでに、ＡＮＰ型ペプチドの低下を観察できることが観察されている。ゆえに、ＡＮＰ型ペプチドレベルは、壊死マーカーより早期の診断情報を提供する。そのような早期の診断情報により、起こりうる壊死を最小化するための早期の治療的介入が可能になる。ゆえに、本発明は、より早期の、および／またはより強力な様式の治療の開始を可能にする。本発明の過程で得られた知見によれば、冠動脈カテーテル法を必要とした心血管合併症をすでに患っている患者でさえ、追加の心臓合併症を診断することが可能であることに注目すべきであろう。そのような追加の心臓合併症は、特に、直接または間接的に、冠動脈カテーテル法によって引き起こされる心臓合併症である。
【００２２】
本発明の関連では、ＢＮＰ型ペプチドレベルを測定することによって、診断をさらに改善および／または確認できることも観察されている。興味深いことに、ＢＮＰ型ペプチドの場合、（ＡＮＰ型ペプチドの場合のように）低下ではなく、増大が心臓合併症を示す。したがって、本発明の好ましい実施形態では、ＡＮＰ型およびＢＮＰ型ペプチドレベルの診断情報を組み合わせる（詳細はさらに下記参照のこと）。
【００２３】
有利なことに、本発明によって提供される診断情報はまた、無症候性または臨床的に明らかでない心臓合併症の診断も可能にする。例えば、本発明はまた、症候性または臨床的に明らかになる前にすでに、心臓合併症の診断を可能にする。本発明はまた、壊死が生じる前に心筋虚血の診断を可能にする。結果的に、本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症、特に壊死を患うリスクの決定に関する。心筋虚血および／または高リスクの壊死が診断された患者では、そのような壊死を回避するために、早期の強力な治療または追加の診断またはモニタリングを開始することができる。
【００２４】
本発明は非常に高感度の診断情報を提供し、該情報は容易に定量化することもできる。したがって、本発明はまた、例えばカテーテル法の異なる方法を比較するために、異なる診療所または部門の遂行能力を比較するために、またはカテーテル法もしくは後の治療の新規もしくは改善された方法を開発するための研究において、冠動脈カテーテル法の質の評価または質のモニタリングに使用することができる。有利なことに、本発明は、臨床的に明らかでないか、または無症候性である合併症のレベルで、そのような情報を提供する。したがって、心臓合併症の数の増加または低減についての統計学的に有意な情報を、少ない患者数および少ない臨床的に明らかなまたは症候性の事象数で、取得することができる。ゆえに、少ないリスクおよび／または少数の患者でそのような研究を実施することができる。該情報は容易に標準化することができ、自動化手段によって容易にまたは自動的に解析して、ルーチンの質の評価および／または警告システムを容易に確立できるようにすることができる。
【００２５】
本明細書中で提供される方法および手段は、シンプルで、高速で、かつ比較的安価である。有利なことに、ＡＮＰ型およびＢＮＰ型ペプチドレベルを測定するためのツールはすでに市販されていて、多くの場合、測定に追加の検査室機器は必要とされない。
【００２６】
用語「冠動脈カテーテル法」は当業者に公知である。本発明の関連では、該用語は、特に、心臓に属する血管、特に冠動脈へのカテーテルの導入を含む任意の種類の診断的または治療的介入に関する。
【００２７】
本発明では、用語「冠動脈カテーテル法」は診断法（例えば冠動脈造影法）ならびに治療的カテーテル法（例えば経皮冠動脈インターベンション（ＰＣＩ））を含むと見なされる。
【００２８】
特に、本発明にしたがって定義される診断的冠動脈カテーテル法は、例えば閉塞、狭窄、再狭窄、血栓症または動脈瘤の拡大、冠動脈管腔、心腔サイズ、心筋収縮性能およびいくつかの態様の心臓弁機能を認識することを可能にする。身体の外側から測定可能でない重要な内部の心臓および肺血圧を試験期間中に正確に測定することができる。該試験が扱う関連する問題は、最も一般的には、進行したアテローム性動脈硬化症、冠動脈壁内のアテローム活性の結果として生じる。他の問題、弁、心筋または不整脈の問題が該試験の主な焦点であることは少ない。冠動脈管腔の狭小化は心臓へ向かう酸素を含む血液の流量蓄積を減少させ、非常に進行すると、典型的に間欠的狭心症を生じさせ；管腔閉塞は、通常、心発作を生じさせる。
【００２９】
用語「冠動脈造影法」は当業者に公知である。より具体的には、それは医学的イメージング技術であり、該技術では、写真（例えばＸ線写真または磁気共鳴写真）を撮影して、血液充填構造、例えば動脈、静脈および心腔、特に冠動脈の内側空隙を可視化する。血管のイメージは血管造影（angiograph）、またはより通常には血管造影図と称される。血液は周囲の組織と同一の放射線密度を有するので、放射線造影剤（Ｘ線を吸収する）を血液に加えて、可能なＸ線によって血管造影の可視化を施すことができる。カテーテルと称される長くて薄く曲げやすいチューブを使用して、可視化対象の所望の領域で造影剤を投与する。該カテーテルを例えば鼠径部または前腕の動脈内に通し、動脈系を通して２つの主要な冠動脈の一方に先端を進める。血管造影イメージは、典型的に、血液を保持する心血管構造内の空隙の影絵である（例えば血液内の造影剤を用いる）。該イメージは静止画または動画として撮影することができる。動画はまた、血管内を移動する血液の速度（実際には、血液内の放射線造影剤の速度）を示す。
【００３０】
本発明における治療的冠動脈カテーテル法は、障害または疾患を治療するための任意の種類の冠動脈カテーテル法に関し、例えば冠動脈血管形成術（特にバルーン拡張術）およびステント移植が含まれる。
【００３１】
治療的カテーテル法は、慣用の外科手術の施術中に、またはＰＣＩ（経皮冠動脈インターベンション）として微小侵襲で実施することができ、それは、微小侵襲条件下で実施される任意の種類の血管形成術またはステント移植に関する。微小侵襲冠動脈血管形成術は「経管的冠動脈血管形成術」としても知られる。本発明はＰＣＩの関連で特に有用である。
【００３２】
用語「ステント」および「ステント移植」は当業者に公知である。特に、ステント移植は任意の種類のステントを冠動脈に導入することに関する。ステントは、血管壁に対する機械的張力によって、特に血管壁に対する拡張によって、血管を開いたままにすることが可能な任意の種類の補綴であると特に理解される。展開前、ステントは（例えば折りたたみ格子として）小さな直径に折りたたまれている。ステントは自己展開式（例えば壁ステント）であってよく、または追加の手段、例えば拡張バルーンによって拡張することができる（例えばＰａｌｍａｚステント）。ステントは任意の種類の材料から作製することができる。現在、臨床実務上のほとんどのステントは金属製である。典型的に、拡張後、ステントは自身の放射状張力によって血管壁に付着する。ステントは、最も一般的には、蛍光透視ガイダンスまたは内視鏡下で挿入される。それは、慣用の外科手術より概して低侵襲性の微小侵襲手順である。これにより、ステントは、進行した疾患を有する患者または、さもなければ大手術のリスクが高い患者に好適になる。さらに、通常、ステント挿入に全身麻酔は必要とされない。
【００３３】
特に、本発明は、治療的冠動脈カテーテル法の診断に関する。そのようなカテーテル法は診断的カテーテル法より高いリスクの心臓合併症を伴うからである。より具体的には、本発明は、冠動脈血管形成術（特にバルーン拡張術）および／またはステント移植に関する。
【００３４】
当業者は、心臓合併症が冠動脈カテーテル法に「起因して」生じると考えられる場合に、何が意図されるかを理解する。特に、心臓合併症は、概して、冠動脈インターベンションの後、１２時間、１日、２日、４日、または１週間以内に生じた場合に、冠動脈カテーテル法に「起因して」生じたと考えられる。あるいは、または加えて、心臓合併症は、概して、直接的であるか間接的であるかにかかわらず、合併症の原因が冠動脈インターベンションに関連する場合に、冠動脈カテーテル法に起因して生じたと考えられる。そのような因果関係の徴候には、例えば（ｉ）カテーテル法と合併症との間の緊密な時間関連性（すぐ上記を参照のこと）、および／または（ｉｉ）合併症の種類とカテーテル法との関係（例えば任意の追加の心筋虚血または心筋壊死は、概して、典型的または頻繁なカテーテル法の合併症であるから、冠動脈カテーテル法に起因すると考えられる）、および／または（ｉｉｉ）心臓組織の罹患領域とカテーテル法が実施された領域との間の関係（例えば調査対象血管またはカテーテル法の施術中に一時的に閉塞した側枝の血流の下流に心筋虚血または壊死が見られる）が含まれる。
【００３５】
本発明は特定の生化学的または分子マーカーを活用する。用語「生化学的マーカー」および「分子マーカー」は当業者に公知である。特に、生化学的または分子マーカーは、一部の症状、疾患、リスク、または合併症の存在または不存在下で発現に差異がある（すなわちアップレギュレートまたはダウンレギュレートされる）遺伝子発現産物である。通常、分子マーカーは核酸（例えばｍＲＮＡ）であると定義され、一方、生化学的マーカーはタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドである。好適な生化学的または分子マーカーのレベルは症状、疾患、または合併症の存在または不存在を示し、ゆえに診断を可能にすることができる。
【００３６】
本発明は、生化学的または分子マーカーとして、特にＡＮＰ型およびＢＮＰ型ペプチドを活用する。また、本発明の関連で、生化学的マーカーとしての、ＡＮＰ型およびＢＮＰ型ペプチドの任意の組み合わせの使用が考慮される。
【００３７】
ＡＮＰ型およびＢＮＰ型ペプチドはナトリウム利尿ペプチドの群に属する（例えばBonow, R.O. (1996). New insights into the cardiac natriuretic peptides. Circulation 93: 1946-1950を参照のこと）。
【００３８】
ＡＮＰ型ペプチドは、ｐｒｅ−ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、およびＡＮＰを含む。
【００３９】
ＢＮＰ型ペプチドは、ｐｒｅ−ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、およびＢＮＰを含む。
【００４０】
好ましい本発明のＡＮＰ型ペプチドは、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＡＮＰ、ＡＮＰ、またはその変異体である。最も好ましい本発明のＡＮＰ型ペプチドはＮＴ−ｐｒｏＡＮＰまたはその変異体である。好ましい本発明のＢＮＰ型ペプチドは、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ＢＮＰ、またはその変異体である。最も好ましい本発明のＢＮＰ型ペプチドはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはその変異体である。
【００４１】
ＡＮＰおよびＢＮＰは活性型ホルモンであり、それぞれの不活性型対応物であるＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰより短い半減期を有する。プレプロペプチド（ｐｒｅ−ｐｒｏＢＮＰの場合、１３４アミノ酸）は短いシグナルペプチドを含み、該ペプチドは酵素によって切断されてプロペプチド（ｐｒｏＢＮＰの場合、１０８アミノ酸）を放出する。該プロペプチドはさらに切断されて、Ｎ末端プロペプチド（ＮＴ−プロペプチド、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの場合、７６アミノ酸）および活性型ホルモン（ＢＮＰの場合、３２アミノ酸）になる。
【００４２】
事前分析はＢＮＰの場合よりＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの場合に、より堅牢であり、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰはサンプルを中央検査室に容易に輸送することを可能にする（Mueller T, Gegenhuber A, Dieplinger B, Poelz W, Haltmayer M. Long-term stability of endogenous B-type natriuretic peptide (BNP) and amino terminal proBNP (NT-proBNP) in frozen plasma samples. Clin Chem Lab Med 2004; 42: 942-4.）。血液サンプルは数日間室温で保存することができ、または、回収損失を伴わずに郵送または輸送することができる。対照的に、ＢＮＰを室温または４℃で４８時間保存すると、少なくとも２０％の濃度損失が生じる（Mueller T, Gegenhuber A, et al., Clin Chem Lab Med 2004; 42: 942-4, 上記; Wu AH, Packer M, Smith A, Bijou R, Fink D, Mair J, Wallentin L, Johnston N, Feldcamp CS, Haverstick DM, Ahnadi CE, Grant A, Despres N, Bluestein B, Ghani F. Analytical and clinical evaluation of the Bayer ADVIA Centaur automated B-type natriuretic peptide assay in patients with heart failure: a multisite study. Clin Chem 2004; 50: 867-73.）。
【００４３】
目的の時間経過および利用可能な分析機器または保存条件に依存して、活性型または不活性型のいずれかの測定が有益でありうる。
【００４４】
この関連で用語「変異体」とは、該ペプチドと実質的に類似のペプチドに関する。用語「実質的に類似」は当業者に十分に理解される。特に、変異体は、ヒト集団において最も広く認められるペプチドアイソフォームのアミノ酸配列と比較してアミノ酸交換を示すアイソフォームまたは対立遺伝子であってよい。好ましくは、そのような実質的に類似のペプチドは、該ペプチドの最も広く認められるアイソフォームに対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列類似性を有する。診断手段によって、またはそれぞれの完全長ペプチドに対するリガンドによって依然として認識される分解産物、例えばタンパク質分解による分解産物もまた、実質的に類似である。用語「変異体」はスプライスバリアントにも関するものとする。
【００４５】
用語「変異体」はまた、翻訳後修飾ペプチド、例えばグリコシル化ペプチドに関する。「変異体」はまた、例えばペプチドに対する標識、特に放射性標識または蛍光標識の共有結合または非共有結合による結合によって、サンプル収集後に修飾されたペプチドである。
【００４６】
特定の変異体およびその測定方法の例は公知である（例えばAla-Kopsala, M., Magga, J., Peuhkurinen, K. et al. (2004): Molecular heterogeneity has a major impact on the measurement of circulating N-terminal fragments of A-type and B-type natriuretic peptides. Clinical Chemistry, vol. 50(9), 1576-1588を参照のこと）。
【００４７】
本発明の他の実施形態には、異なるマーカーを組み合わせて同時または非同時に測定することが含まれ、例えばＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと組み合わせたＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＢＮＰと組み合わせたｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと組み合わせたＡＮＰ、またはＮＴ−ｐｒｏＡＮＰと組み合わせたＢＮＰが含まれる。
【００４８】
さらに、（ａ）炎症マーカーまたはその変異体、および（ｂ）虚血マーカーおよびその変異体からなる群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを測定してよい。
【００４９】
そのような追加のマーカーの測定は診断の選択性および特異性を増加させる。それはまた、ＡＮＰ型ペプチドおよび／またはＢＮＰ型ペプチドレベルの測定によって確立された診断を確認するために役立つ。そのような追加のマーカーはまた、心臓合併症（例えば主に炎症または虚血／壊死）の主原因にしたがって、診断をさらに分類するために役立つ。そして追加の治療を、個々の患者の必要性に、より具体的に適合させることができる。
【００５０】
本発明の炎症マーカーには、炎症プロセス、特に血管または動脈の炎症プロセスを示す任意のマーカーが含まれる。特に、本発明の炎症マーカーには炎症活性サイトカインが含まれる。炎症マーカーの例には、インターフェロン（例えばインターフェロンγ）、インターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α））、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、単球化学誘引タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）が含まれる。ＣＲＰはまた、「ｈｓＣＲＰ」（高感度Ｃ反応性タンパク質）として測定することができ、それは、例えばRoche ElecsysまたはCobas Analyzers（Roche Diagnostics）に利用可能な高感度試験、例えばカタログ番号１１９７２８５５（Roche Diagnostics）によって測定されることを意味する。これらのマーカーに関するカットオフ値および／または参照レベルは当技術分野において周知である。
【００５１】
本発明の壊死マーカーは細胞死、特に心筋細胞死を示す任意のマーカーを含む。そのような壊死は、例えば一時的または恒久的な血管の閉塞に起因して生じる虚血であってよい。壊死マーカーの例には、心筋トロポニン（例えばｃＴｎＩおよびｃＴｎＴ）、クレアチンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、および虚血修飾型アルブミン（ＩＭＡ）が含まれる。好ましくは、壊死マーカーはｃＴｎＩ、ｃＴｎＴ、およびＣＫ−ＭＢからなる群から選択される。慣用の外科手術の施術中に冠動脈カテーテル法が実施される場合、ＣＫ−ＭＢは多少好ましくないマーカーである。これは骨格筋に対する傷害をも示すからである。ｃＴｎＴはまた、「ｈｓＴｎＴ」（高感度トロポニンＴ）として測定することができ、それは、例えばRoche ElecsysまたはCobas Analyzers（Roche Diagnostics）に利用可能な高感度試験によって測定されることを意味する。これらのマーカーに関するカットオフ値および／または参照レベルは当技術分野において周知であり、例えばｃＴｎＴの典型的な参照レベルは血漿中１０ｐｇ／ｍｌである。好適なレベルは、本明細書中で参照される刊行物（例えばAbbas et al., Ricciardi et al., Saadeddin et al.）に記載のレベルから導き出してもよい。この点における該刊行物の内容は、参照により本明細書中に明示的に組み入れられる。
【００５２】
そのような追加のマーカーの関連での用語「変異体」に関しては、ＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチドの関連で提供された説明が同様に適用される。
【００５３】
用語「ベースラインサンプル」および「被験サンプル」は当業者に公知である。「ベースラインサンプル」は、特に、冠動脈カテーテル法の施術中または冠動脈カテーテル法の終了時点でそれぞれのマーカーレベルを反映するために取得されるサンプルとして理解される。したがって、ベースラインサンプルが、好ましくは、冠動脈カテーテル法の施術中または冠動脈カテーテル法の後に過度の遅延なく取得されることが当業者に明らかである。好ましくは、「ベースラインサンプル」は、冠動脈カテーテル法の後にまもなくまたはすぐに採取される。好ましくは、「ベースラインサンプル」は、冠動脈カテーテル法の後、２時間までに、より好ましくは１．５時間までに、より好ましくは１時間までに、より好ましくは０．５時間までに採取され、これらの期間はカテーテル法手順の終了時点から計算され、好ましくは冠動脈血管からのカテーテルの取り出しが終了した時点から計算される。ステント移植の場合、好適な期間は、例えば、ステント移植の後のクロピドグレル、チクロピジン（ticlopidin）、または別の血小板凝集インヒビターの投与の直前またはその投与時点であってよい（そのような血小板凝集インヒビターは、現在、ステントの閉塞を防ぐためにステント移植の後にまもなくルーチンで投与される）。
【００５４】
「被験サンプル」は、特に、ベースラインサンプルと比較して、それぞれのマーカーレベルの変化を反映するために取得されるサンプルとして理解される。好ましくは、被験サンプルは、冠動脈カテーテル法の後にそれほど遅すぎず（適時の診断を可能にするため）、ベースラインサンプルの後に早すぎず（診断を可能にするために十分に有意な変化を観察するため）に採取される。例えば、「被験サンプル」は、冠動脈カテーテル法の後、４〜４８時間以内、より好ましくは４〜３６時間以内、４〜３０時間、４〜２４時間、５〜２４時間、５〜１２時間以内に、最も好ましくは約６時間の時点で取得してよい。好ましくは、少なくとも１つの追加の被験サンプルを取得して、レベルの変化および／または診断を確認する。そのような追加の被験サンプルは、冠動脈カテーテル法の後、例えば６〜７２時間以内、より好ましくは８〜４８時間、１２〜３６時間、２０〜３０時間以内に、最も好ましくは約１日すなわち２４時間の時点で取得してよい。
【００５５】
これらのサンプルは、好ましくは、当業者に公知で本明細書中の他の箇所で説明されている、好適な体液サンプルである。
【００５６】
ＡＮＰ型ペプチドまたはＢＮＰ型ペプチドと同じサンプル中で、上述の追加のマーカー（炎症マーカーまたは壊死マーカー）を測定することができる。しかし、一部の追加のマーカーのレベルは、ＡＮＰ型またはＢＮＰ型ペプチドレベルよりゆっくり変化し、特にＡＮＰ型ペプチドよりゆっくり変化する。したがって、第１の被験サンプルが採取された後に、例えば、冠動脈カテーテル法の後、６〜７２時間以内、好ましくは８〜７２時間以内、より好ましくは１２〜４８時間以内に追加の被験サンプルにおいて、そのような追加のマーカーのレベルをさらに測定することが有利である。そのような追加のマーカーのレベルは、ベースラインサンプル中で測定されたレベルと比較された変化（有意な増大はそれぞれ炎症または壊死の存在を示す）にしたがって、または絶対レベルとして解釈される。後者の場合、ベースラインサンプル中のレベルを測定することが不要である。しかし、ベースラインサンプル中で追加測定を行うことが好ましい。炎症または壊死の存在を示す絶対レベルは、それぞれの追加のマーカーに関して公知である。例えばAbbas et al. (1996), Clin. Cardiol., vol. 19, pp. 782-786; Ricciardi et al. (2001), Circulation, vol. 103, pp. 2780-2783; およびSaadeddin et al. (2000), Med Sci Monit, vol. 6, pp. 708-712（すべて上記で引用されている）を参照のこと。追加のガイダンスに関しては、Maisel, A.S. et al. (2006), Nature Clinical Practice, vol. 3, pp. 24-34（同様に上記で引用されている）も参照のこと。
【００５７】
用語「心臓合併症」は当業者に公知である。
【００５８】
心臓合併症を患っている患者は、安定狭心症（ＳＡＰ）を患っている個体および急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）を有する個体であってよい。ＡＣＳ患者は不安定狭心症（ＵＡＰ）を示す可能性があるか、またはこれらの個体はすでに心筋梗塞（ＭＩ）を患っている。ＭＩはＳＴ上昇型ＭＩまたは非ＳＴ上昇型ＭＩであってよい。ＭＩの発生後、左心室機能障害（ＬＶＤ）が生じうる。最終的に、ＬＶＤ患者はうっ血性心不全（ＣＨＦ）を被る。その死亡率はおよそ１５％である。
【００５９】
本発明の心臓合併症には、冠動脈性心疾患、心臓弁欠損（例えば僧帽弁欠損）、膨張性心筋症（dilatative cardiomyopathy）、肥大性心筋症（hypertroph cardiomyopathy）、および心拍障害（heart rhythm defects）（不整脈）も含まれる。
【００６０】
ＣＨＤと略され、冠動脈疾患（ＣＡＤ）またはアテローム硬化型心疾患とも称される用語「冠動脈性心疾患」は当業者に公知である。特に、ＣＨＤは、心筋（心臓の筋肉）に供給する動脈の壁内のアテローム性プラークの蓄積に起因する。冠動脈性心疾患の症状および徴候は進行状態の疾患において確認され、冠動脈性心疾患を有するほとんどの個体は数十年間疾患の証拠を示さない。「突然」の心発作であることが多い症状の最初の発症が最終的に生じる前に該疾患が進行するからである。数十年間の進行の後、一部の前記アテローム性プラークは破裂し、（血液凝固系の活性化とともに）心筋への血流を制限し始める。
【００６１】
本発明の心臓合併症は「症候性」または「無症候性」であってよい。心臓合併症は、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）の機能分類体系に分類されている症状を引き起こしうる。クラスＩの患者は心血管障害の明らかな症状を有さない。身体活動は制限されず、通常の身体活動は過度の疲労、動悸、または呼吸困難（息切れ）を引き起こさない。クラスＩＩの患者は身体活動のわずかな制限を有する。彼らは安息時に苦痛はないが、通常の身体活動が疲労、動悸、または呼吸困難を生じさせる。クラスＩＩＩの患者は身体活動の顕著な制限を示す。彼らは安息時に苦痛はないが、通常に満たない活動が疲労、動悸、または呼吸困難を生じさせる。クラスＩＶの患者はいかなる身体活動をも苦痛なく行うことができない。彼らは安息時に心不全の症状を示す。いかなる身体活動を行っても、苦痛が増大する。
【００６２】
別の機能分類は、カナダ心臓血管協会（ＣＣＳ）分類体系に基づく狭心症の等級付けである：
クラスＩ：通常の身体活動、例えば歩くこと、階段を上ることは狭心症（angina）を引き起こさない。狭心症が［生じる］のは、仕事または休養時の、精力的な、急速な、または長時間の労作を伴う場合である。
【００６３】
クラスＩＩ：通常の活動がわずかに制限される。高速で歩くかまたは階段を上るか、坂を上って歩くか、食後に、または低温で、または風中で、または情動性ストレス下で、または覚醒後の数時間の期間中にのみ、歩くかまたは階段を上ると、狭心症が生じる。通常の歩調でかつ通常の条件下で、水平に２ブロックを超えて歩行すること、および通常の階段を一続きを超えて上ること。
【００６４】
クラスＩＩＩ：通常の身体活動は顕著に制限される。通常の条件でかつ通常の歩調で水平に１〜２ブロック歩行した場合および一続きの階段を上った場合に狭心症が生じる。
【００６５】
クラスＩＶ：いかなる身体活動をも苦痛なく行うことができない−−安息時に狭心症症状が存在することがある。
【００６６】
したがって、心血管障害を患っている患者を、臨床症状を示さない個体および症状（例えば呼吸困難）を有する個体に分けることができる。
【００６７】
心血管障害の別の特徴は「左心室駆出率」（ＬＶＥＦ）（「駆出率」としても知られる）でありうる。健康な心臓を有する人は、通常、障害がないＬＶＥＦを有し、それは概して５０％超と報告される。症候性の収縮期心疾患を有するほとんどの人は、概して、４０％以下のＬＶＥＦを有する。
【００６８】
本発明の関連で「心臓合併症」は、特に、心臓または冠動脈心臓血管の任意の種類の障害または機能障害に関する。より具体的には、「心臓合併症」は、任意の種類の冠動脈性心疾患に関し、より具体的には、臨床的に明らかでなく、かつ／または無症候性の冠動脈性心疾患に関する。より具体的には、「心臓合併症」は、冠動脈カテーテル法の前の患者に存在する任意の種類の冠動脈性心疾患と比較して臨床的に明らかでなく、かつ／または無症候性である冠動脈性心疾患に関する。ゆえに、用語「心臓合併症」は、特に、冠動脈カテーテル法の前の患者のＮＹＨＡおよび／またはＣＣＳクラスと比較してＮＹＨＡおよび／またはＣＣＳクラスのレベルの増大を引き起こさない追加の冠動脈性心疾患に関する。この関連で用語「臨床的に明らか」とは、特に、冠動脈性心疾患が心電図の形状の変化を引き起こさないことを意味する。
【００６９】
典型的に臨床的に明らかでないか、または無症候性の心臓合併症の例には、わずかな虚血、わずかな壊死、および／または微小梗塞が含まれる。ゆえに、本発明は、わずかな虚血、わずかな壊死、および／または微小梗塞の診断に特に有用である。
【００７０】
本発明はまた、壊死が生じる前の心筋虚血の診断を可能にする。結果的に、本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症、特に壊死を患うリスクの決定に関する。心筋虚血および／または高リスクの壊死が診断された患者では、そのような壊死を回避するために、早期の強力な治療または追加の診断またはモニタリングを開始することができる。より具体的には、用語「壊死が生じる前」は、壊死マーカー、より具体的にはトロポニンＴのレベルが有意に増大する前の期間に関すると理解される。
【００７１】
本発明の診断には、該当する障害またはリスクの決定、モニタリング、確認、細分類および予測が含まれる。決定とは、障害またはリスクを認識することに関する。モニタリングとは、診断済みの障害またはリスクの経過を追うことに関し、例えば障害もしくはリスクの進行または障害もしくはリスクの進行に対する特定の治療の影響を分析することに関する。確認とは、他の指標またはマーカーを使用して、すでに実施された診断を強化または実証することに関する。細分類とは、診断された障害またはリスクについての異なるサブクラスにしたがって診断をさらに明確にすることに関し、例えば障害の軽症型および重症型にしたがって明確にすることに関する。予測とは、他の症状またはマーカーが明らかになるか、または有意に変化する前に、障害もしくはリスクを予知することに関する。予測は、特定の障害またはリスクが所定の期間内に生じるリスクまたは可能性を指定することと理解してもよい。
【００７２】
当業者に理解されるように、そのような診断は、通常、診断対象の被験体の１００％に関して正しいことを意図されない。しかし、該用語は、被験体の統計学的に有意な割合が、該当する障害、リスクまたは必要性に関して診断できることを必要とする。割合が統計学的に有意であるかどうかは、種々の周知の統計評価ツール、例えば信頼区間の決定、ｐ値決定、スチューデントｔ検定、マン・ホイットニー検定、等を使用して、当業者が追加の面倒なく決定することができる。詳細はDowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見出せる。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、または０．０００１である。
【００７３】
本発明の用語「患者」は、健常個体、見かけの健常個体、または、特に、疾患、特に冠動脈性心疾患を有するか、またはそれが疑われる個体に関する。本明細書中で意図される個体は、好ましくは、解剖学的に正常な心臓、すなわち先天性異常を伴わない心臓を有する。好ましくは、該用語は先天性の解剖学的心臓欠損を伴わない個体に関する。この関連で先天性の解剖学的心臓欠損は、好ましくは、大動脈弁狭窄、心房中隔欠損（ＡＳＤ）、房室管欠損、大動脈縮窄、左心室発育不全症候群、肺動脈閉鎖、肺動脈狭窄、ファロー四徴症（ＴＯＦ）、全肺静脈還流異常、三尖弁閉鎖、総動脈幹、心室中隔欠損（ＶＳＤ）である。
【００７４】
本発明の診断は、好ましくは、診断手段を使用して行われる。診断手段は、目的の物質、特に目的のペプチドまたはポリペプチド、より具体的にはＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチドのレベル、量、または濃度の測定を可能にする任意の手段である。
【００７５】
それぞれのペプチドレベルの測定に使用できる方法および診断手段は当業者に公知である。これらの方法には、マイクロプレートＥＬＩＳＡに基づく方法、全自動またはロボットイムノアッセイ（例えばElecsysTMまたはCobasTMアナライザーで利用可能）、ＣＢＡ（酵素によるコバルト結合アッセイ（例えばRoche-HitachiTMアナライザーで利用可能））、およびラテックス凝集アッセイ（例えばRoche-HitachiTMアナライザーで利用可能）が含まれる。測定方法および手段には、Cardiac ReaderTM（Roche Diagnosticsから入手可能）等のポイント・オブ・ケアデバイスも含まれる。
【００７６】
ポイント・オブ・ケアデバイスは、概して、患者のベッドサイドで測定を可能にするデバイスとして理解される。好ましくは、ポイント・オブ・ケアデバイスは小型または携帯型デバイスとして理解される。一例は、例えばＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ用のテストストリップ（Roche Diagnosticsから「Cardiac proBNP」として入手可能）と組み合わせたCardiac ReaderTM（Roche Diagnosticsから入手可能）である。そのような試験では、目的のペプチド（例えばＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチド）に対する２種の（好ましくはモノクローナル）抗体を用いる。抗体は、例えばElecsysTMまたはCobasTMアッセイで使用される抗体と同一であってよい。例えば一次抗体をビオチンで標識し、二次抗体を金粒子で標識する。少量（例えば１５０μＬ）の血液サンプルをテストストリップ（例えばテストストリップのサンプルウェル）に加えることによって試験を開始することができる。例えばサンプルが好適なフリース（例えばガラスファイバーフリース）を通して流動すれば、テストストリップへの添加の前または後にサンプル中の赤血球が残りの血漿から分離される。該分離手段（例えばフリース）は、好ましくは、テストストリップの一部分である。該抗体（好ましくはテストストリップ上にすでに存在する）を残りの血漿に溶解する。該抗体は、目的のペプチドまたはポリペプチドに結合して三員サンドイッチ複合体を形成することが可能である。該抗体（結合または未結合抗体）はストリップを通って検出ゾーンに流動する。検出ゾーンは結合複合体の検出手段を含み、例えば、それはストレプトアビジンを含む。これは複合体を固定し、固定された複合体を金標識抗体によって紫線として可視化する。好ましくは、残留する遊離の金標識抗体はストリップに沿ってさらに移動し、検出対象の目的のペプチドまたはポリペプチドのエピトープを含む合成ペプチドまたはポリペプチドを含むゾーンで捕捉され、別の紫線として可視化される。そのような第二線（second line）の存在は対照として役立つ。それが、サンプルフローが正しく機能したこと、および抗体がインタクトであることを示すからである。テストストリップは、該ストリップを用いて、目的のペプチドまたはポリペプチドのいずれが検出できるかを示す標識を含んでよい。それは、検出ゾーンで検出可能な標識の量を光学測定するためのデバイスによって読み取り可能なバーコードまたは他のコードを含んでもよい。そのようなバーコードは、該ストリップを用いて、目的のペプチドまたはポリペプチドのいずれが検出できるかを示す情報を含んでよい。バーコードはテストストリップについてのロット特異的情報を含んでもよい。
【００７７】
Cardiac Reader自体は、テストストリップの検出ゾーンを光学的に記録するカメラ（例えば電荷結合素子カメラ（ＣＣＤカメラ））を含む。シグナル線および対照線はパターン認識アルゴリズムによって特定することができる。シグナル線中の標識の強度は、典型的に、目的のペプチドまたはポリペプチドの量に比例する。光学シグナルは、コードチップに保存することができるロット特異的検量線によって濃度に変換することができる。較正コードと試験ロットの一致をテストストリップ上のバーコードによってチェックすることができる。
【００７８】
さらにまた、当業者は、ペプチドまたはポリペプチドのレベルを測定する異なる方法に精通している。用語「レベル」は、患者または患者から採取されたサンプル中のペプチドまたはポリペプチドの量または濃度に関する。
【００７９】
本発明の用語「測定」は、目的の核酸、ペプチド、ポリペプチド、または他の物質の量または濃度を、好ましくは半定量的または定量的に測定することに関する。測定は直接または間接的に行うことができる。間接的測定には、細胞応答、結合リガンド、標識、または酵素反応産物の測定が含まれる。好ましくは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで測定を行う。
【００８０】
本発明の関連では、量もまた濃度に関する。既知サイズのサンプル中の目的の物質の総量から、物質の濃度を算出でき、逆の場合も真であることが明らかである。
【００８１】
測定は当技術分野において公知の任意の方法にしたがって行うことができる。好ましい方法を以下に記載する。
【００８２】
好ましい実施形態では、目的のペプチドまたはポリペプチドのレベルの測定方法は、（ａ）ペプチドまたはポリペプチドに対する細胞応答が可能な細胞をペプチドまたはポリペプチドと適切な期間接触させるステップ、（ｂ）細胞応答を測定するステップを含む。
【００８３】
別の好ましい実施形態では、目的のペプチドまたはポリペプチド、特にＢＮＰ型ペプチドのレベルの測定方法は、（ａ）ペプチドまたはポリペプチドを好適な基質と適切な期間接触させるステップ、（ｂ）生成物の量を測定するステップを含む。
【００８４】
別の好ましい実施形態では、目的のペプチドまたはポリペプチドのレベルの測定方法は、（ａ）ペプチドまたはポリペプチドを特異的結合リガンドと接触させるステップ、（ｂ）（場合により）未結合リガンドを除去するステップ、（ｃ）結合リガンドの量を測定するステップを含む。
【００８５】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドは、サンプル、特に体液または組織サンプル中に含まれる。そして該サンプル中のペプチドまたはポリペプチドの量を測定する。
【００８６】
組織、細胞、および体液サンプル中で、すなわち好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、ペプチドおよびポリペプチド（タンパク質）を測定することができる。好ましくは、体液サンプル中で目的のペプチドまたはポリペプチドを測定する。
【００８７】
本発明の組織サンプルとは、死または生存ヒトまたは動物体から得られる任意の種類の組織を表す。当業者に公知の任意の方法によって、例えば生検または掻爬によって、組織サンプルを取得することができる。
【００８８】
本発明の用語「体液サンプル」は、好ましくは、血液（その派生物、例えば血清または血漿が含まれる）、リンパ（lymphe）、脳液（cerebral liquor）、唾液、または尿のサンプルに関する。より具体的には、用語「体液サンプル」は血液（その派生物、例えば血清または血漿が含まれる）および尿に関する。最も具体的には、用語「体液サンプル」は血液（その派生物、例えば血清または血漿が含まれる）に関する。体液サンプルは、公知でかつ適切であると見なされる任意の方法によって取得することができる。
【００８９】
細胞サンプルの取得方法は、単一細胞または小細胞群を直接調製するステップ、（例えばトリプシンを使用して）組織を解離させるステップ、および、例えばろ過または遠心分離によって、体液から細胞を分離するステップを含む。本発明の細胞は、血小板および他の無核細胞、例えば赤血球をさらに含む。
【００９０】
必要であれば、サンプルをさらに処理してよい。特に、当技術分野において公知の方法にしたがって、核酸、ペプチドまたはポリペプチドをサンプルから精製することができる。該方法には、ろ過、遠心分離、または抽出法、例えばクロロホルム／フェノール抽出が含まれる。
【００９１】
細胞応答の測定では、サンプルまたは処理されたサンプルを細胞培養に加え、内部または外部細胞応答を測定する。細胞応答には、レポーター遺伝子の発現または物質、例えばペプチド、ポリペプチド、または小分子の分泌が含まれる。
【００９２】
他の好ましい測定方法には、目的のペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合するリガンドの量の測定が含まれる。本発明の結合には、共有結合および非共有結合の両者が含まれる。
【００９３】
本発明のリガンドは、目的のペプチドまたはポリペプチドに結合する任意のペプチド、ポリペプチド、核酸、または他の物質であってよい。ペプチドまたはポリペプチドをヒトまたは動物細胞から取得するか、または精製した場合、例えばグリコシル化によって、それを修飾できることが周知である。本発明の好適なリガンドは、そのような部位を介して該ペプチドまたはポリペプチドに結合してもよい。
【００９４】
好ましくは、リガンドは、測定対象のペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合すべきであろう。本発明の「特異的結合」とは、リガンドが、調査サンプル中に存在する別のペプチド、ポリペプチドまたは物質と実質的に結合しない（それらと「交差反応」しない）べきであろうことを意味する。好ましくは、特異的結合タンパク質またはアイソフォームは、任意の他の関連ペプチドまたはポリペプチドより少なくとも３倍高い親和性、より好ましくは少なくとも１０倍高い親和性、さらにより好ましくは少なくとも５０倍高い親和性で結合すべきであろう。この関連で、そのような他の関連ペプチドまたはポリペプチドは、他の構造的に関連するか、または相同なペプチドもしくはポリペプチドであってよい。
【００９５】
特に調査対象のペプチドまたはポリペプチドが、例えばウエスタンブロットでのそのサイズにしたがって、またはサンプル中の相対的に高いその存在量によって、依然として明確に識別および測定できるならば、非特異的結合が許容される。
【００９６】
リガンドの結合は、当技術分野において公知の任意の方法によって測定することができる。好ましくは、該方法は半定量的または定量的である。好適な方法を以下に記載する。
【００９７】
第１に、例えばＮＭＲまたは表面プラズモン共鳴によってリガンドの結合を直接測定することができる。
【００９８】
第２に、リガンドがさらに、目的のペプチドまたはポリペプチドの酵素活性の基質として働くならば、酵素反応生成物を測定することができる（例えば、切断された基質の量を例えばウエスタンブロットで測定することによってプロテアーゼの量を測定することができる）。
【００９９】
酵素反応生成物の測定では、好ましくは基質の量は飽和している。反応前に、検出可能な標識で基質を標識してもよい。好ましくは、サンプルを基質と適切な期間接触させる。適切な期間とは、検出可能な、好ましくは測定可能な量の生成物が生じるために必要な期間を表す。生成物の量を測定する代わりに、所定の（例えば検出可能な）量の生成物の出現に必要な期間を測定することができる。
【０１００】
第３に、リガンドの検出および測定を可能にする標識に共有結合または非共有結合によってリガンドをカップリングすることができる。
【０１０１】
標識化は直接または間接的方法によって行うことができる。直接的標識化は、標識を直接（共有結合または非共有結合によって）リガンドにカップリングすることを含む。間接的標識化は、一次リガンドに二次リガンドを（共有結合または非共有結合によって）結合させることを含む。二次リガンドは一次リガンドに特異的に結合すべきであろう。該二次リガンドは、好適な標識とカップリングしてよく、かつ／または二次リガンドと結合する三次リガンドの標的（受容体）であってよい。二次、三次またはさらに高次のリガンドの使用により、シグナルを増大させることがよくある。好適な二次および高次リガンドには、抗体、二次抗体、および周知のストレプトアビジン・ビオチン系（Vector Laboratories, Inc.）が含まれる。
【０１０２】
当技術分野において公知の１種以上のタグを用いてリガンドまたは基質を「タグ付け」してもよい。そしてそのようなタグは高次リガンドの標的であってよい。好適なタグには、ビオチン、ジゴキシゲニン（digoxygenin）、Ｈｉｓタグ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ｍｙｃタグ、インフルエンザＡウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）、マルトース結合タンパク質、等が含まれる。ペプチドまたはポリペプチドの場合、好ましくは、タグはＮ末端および／またはＣ末端に位置する。
【０１０３】
好適な標識は、適切な検出方法によって検出可能な任意の標識である。典型的な標識には、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダン（acridan）エステル、ルミノール、ルテニウム、酵素活性標識、放射性標識、磁気標識（「例えば磁気ビーズ」（常磁性および超常磁性標識が含まれる））、および蛍光標識が含まれる。
【０１０４】
酵素活性標識には、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびその誘導体が含まれる。検出に好適な基質には、ジ−アミノ−ベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’−５，５’−テトラメチルベンジジン、ＮＢＴ−ＢＣＩＰ（４−ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−リン酸（Roche Diagnosticsから既製の原液として入手可能））、CDP-StarTM（Amersham Biosciences）、ECFTM（Amersham Biosciences）が含まれる。好適な酵素と基質を組み合わせると、当技術分野において公知の方法にしたがって（例えば感光フィルムまたは好適なカメラ系を使用して）測定できる有色反応生成物、蛍光または化学発光が生じる。酵素反応の測定に関しては、上記基準が同様に適用される。
【０１０５】
典型的な蛍光標識には、蛍光タンパク質（例えばクラゲAequorea victoria由来の蛍光タンパク質（例えばＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰおよびその誘導体）またはシーパンジーRenilla reniformis由来の蛍光タンパク質）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、テキサスレッド、フルオレセイン、Ａｌｅｘａ色素（例えばAlexa 568）、および量子ドットが含まれる。追加の蛍光標識は例えばMolecular Probes（Oregon）から入手可能である。
【０１０６】
典型的な放射性標識には、３５Ｓ、１２５Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐ、３Ｈ等が含まれる。放射性標識は、公知でかつ適切な任意の方法、例えば感光フィルムまたはホスホルイメージャー（phosphor imager）によって検出することができる。
【０１０７】
本発明の好適な測定方法には、沈降（特に免疫沈降）、電気化学発光（電気発生化学発光）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、電気化学発光サンドイッチイムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）、解離促進ランタニド蛍光イムノアッセイ（ＤＥＬＦＩＡ）、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）、混濁度測定法、比濁法、ラテックス促進混濁度測定法または比濁法、固相免疫検定、および質量分析、例えばＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、またはキャピラリー電気泳動−質量分析（ＣＥ−ＭＳ）も含まれる。当技術分野において公知の追加の方法（例えばゲル電気泳動、二次元ゲル電気泳動、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、ウエスタンブロット法）を、単独でまたは、上記標識化もしくは他の検出方法と組み合わせて使用することができる。
【０１０８】
好ましいリガンドには、抗体、核酸、ペプチドまたはポリペプチド、およびアプタマー、例えば核酸またはペプチドアプタマー（例えばスピーゲルマー（spiegelmers）またはアンチカリン（anticalins））が含まれる。そのようなリガンドの取得方法は当技術分野において周知である。例えば、好適な抗体またはアプタマーの特定および生産はまた、市販の供給元によって提供されている。当業者は、高い親和性または特異性を有するそのようなリガンドの誘導体を開発する方法に精通している。例えば、核酸、ペプチドまたはポリペプチドにランダム突然変異を導入することができる。そして、当技術分野において公知のスクリーニング手順、例えばファージディスプレイにしたがって、これらの誘導体の結合を検査することができる。
【０１０９】
本明細書中で使用される用語「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナルの両抗体、ならびに抗原またはハプテンと結合可能なその変異体または断片、例えばＦｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ）２断片が含まれる。用語「抗体」には単鎖抗体も含まれる。ＡＮＰ型ペプチドまたはＢＮＰ型ペプチド、特にＡＮＰ、ＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、またはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと結合可能な抗体は市販されている。抗体の作製方法は当技術分野において周知であり、それには、目的のペプチドまたはポリペプチド（またはその免疫原性断片）で好適な動物（例えばウサギ、マウス、ヒツジまたはヤギ）を免疫化することまたは組換え技術が含まれる。
【０１１０】
別の好ましい実施形態では、好ましくは核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはアプタマーからなる群から選択されるリガンドをアレイ上に存在させる。
【０１１１】
該アレイは少なくとも１種の追加のリガンドを含有し、該リガンドは目的のペプチド、ポリペプチドまたは核酸に対するものであってよい。該追加のリガンドは、本発明の関連で、特に目的とされないペプチド、ポリペプチドまたは核酸に対するものであってもよい。好ましくは、少なくとも３種、好ましくは少なくとも５種、より好ましくは少なくとも８種の本発明の関連での目的のペプチドまたはポリペプチドに対するリガンドをアレイ上に含ませる。
【０１１２】
本発明では、用語「アレイ」とは、少なくとも２種の化合物が一次元、二次元または三次元配置で付着または結合している固相またはゲル様担体を表す。そのようなアレイ（「遺伝子チップ」、「タンパク質チップ」、抗体アレイ等が含まれる）は概して当業者に公知であり、典型的に、顕微鏡スライドガラス、特殊コーティングスライドガラス、例えばポリカチオンコーティングスライド、ニトロセルロースコーティングスライドまたはビオチンコーティングスライド、カバーガラス、およびメンブレン、例えばニトロセルロースまたはナイロンベースのメンブレン上で作製される。
【０１１３】
アレイには、結合リガンドまたは、それぞれ少なくとも１種のリガンドを発現する少なくとも２つの細胞を含ませてよい。
【０１１４】
別の好ましい実施形態では、好ましくは核酸、ペプチド、ポリペプチド、抗体およびアプタマーからなる群から選択されるリガンドを固体支持体、好ましくはアレイ上に存在させる。本発明では、用語「アレイ」（「遺伝子チップ」、「タンパク質チップ」、抗体アレイ等が含まれる）とは、少なくとも２種の化合物が一次元、二次元または三次元配置で付着または結合している固相またはゲル様担体を表す。目的のペプチドのリガンドまたは結合剤を含む固体支持体またはアレイは当技術分野において周知であり、それには、とりわけ、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンチップおよび表面、ニトロセルロースストリップ、メンブレン、シート、デュラサイト（duracytes）、反応トレイのウェルおよび壁、プラスチックチューブ等が含まれる。該リガンドまたは物質は多数の異なる担体に結合させてよい。周知の担体の例には、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボナート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、および磁鉄鉱が含まれる。本発明の目的では、担体の性質は可溶性または不溶性であってよい。該リガンドまたは物質の好適な取り付け／固定方法は周知であり、それには、非限定的にイオン性、疎水性、共有結合性相互作用等が含まれる。
【０１１５】
また、「サスペンションアレイ」を本発明のアレイとして使用することが意図される（Nolan JP, Sklar LA. (2002). Suspension array technology: evolution of the flat-array paradigm. Trends Biotechnol. 20(1):9-12）。そのようなサスペンションアレイには、担体、例えばマイクロビーズ（microbead）またはミクロスフェアが懸濁状態で存在する。該アレイは、異なるリガンドを保持する、場合により標識されている異なるマイクロビーズまたはミクロスフェアからなる。
【０１１６】
本発明はさらに、少なくとも１種のリガンドが他のリガンドに加えて担体材料に結合している上記定義のアレイの製造方法に関する。
【０１１７】
例えば固相化学および感光性保護基に基づく、そのようなアレイの製造方法は概して公知である（US 5,744,305）。そのようなアレイを、物質または物質ライブラリーと接触させて、例えば結合または確認の変化に関して相互作用を検査することもできる。したがって、上記定義のペプチドまたはポリペプチドを含むアレイを使用して、該ペプチドまたはポリペプチドと特異的に結合するリガンドを特定してよい。
【０１１８】
ゆえに、本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するために、患者のＡＮＰ型ペプチド（特にＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ）および／またはＢＮＰ型ペプチド（特にＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）レベルを好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで測定することが可能な診断手段の使用に関する。
【０１１９】
本発明はまた、ＡＮＰ型ペプチドおよび／またはＢＮＰ型ペプチドの測定を可能にする手段または試薬を含み、かつ場合により、壊死マーカーを測定するための手段または試薬を含むキットに関する。そのような手段または試薬は当業者に公知の任意の好適な手段または試薬であってよい。そのような手段または試薬ならびにその使用方法の例は本明細書中に記載されている。例えば、好適な試薬は、ＡＮＰ型ペプチドおよび／またはＢＮＰ型ペプチドと特異的に結合可能な任意の種類のリガンドまたは抗体であってよい。該キットは、それぞれのバイオマーカーのレベルを測定する関連で適切であると見なされる任意の他の成分、例えば好適なバッファー、フィルター、等を含んでもよい。
【０１２０】
場合により、該キットは、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断に関して任意の測定の結果を解釈するためのユーザーマニュアルをさらに含んでよい。特に、そのようなマニュアルは、いずれの測定レベルがいずれの種類の診断またはいずれの等級のリスクに相当するかについての情報を含んでよい。その要点は本明細書中の他の箇所で詳細に記載されている。さらに、そのようなユーザーマニュアルは、それぞれのバイオマーカーのレベルを測定するためにキットの成分を正しく使用することについての指示を提供してもよい。
【０１２１】
本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するための該キットの使用に関する。本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するための本発明の方法のいずれかにおける該キットの使用に関する。
【０１２２】
さらに、本発明は、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するためのデバイスであって、以下のもの：
（ａ）患者由来のサンプル中のＡＮＰ型ペプチドの量を測定するための、または測定可能な手段；および
（ｂ）好ましくは、該患者由来のサンプル中のＢＮＰ型ペプチドの量を測定するための、または測定可能な手段；
（ｃ）好ましくは、（ａ）および／もしくは（ｂ）により測定されるレベルと、異なるサンプル中で測定されるレベルとの間での変化を測定するための、または測定可能な手段；および
（ｄ）該測定されるレベルを、少なくとも１つの参照レベルと比較することにより該心臓合併症を診断するための、または診断することが可能な手段
を含むデバイスを含む。
【０１２３】
本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するためのそのようなデバイスの使用に関する。
【０１２４】
本明細書中で使用される用語「デバイス」は、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症の診断を可能するよう互いに作動可能に連結されている少なくとも上述の手段を含む手段の系に関する。ＡＮＰ型ペプチド（および場合によりＢＮＰ型ペプチド）レベルを測定し、かつリスクを診断するための好ましい手段が、本発明の方法に関連して、本明細書中の他の箇所で開示されている。作動様式で手段を連結する方法はデバイスに含まれる手段のタイプに依存する。例えば、目的のペプチドまたはポリペプチドのレベルを自動測定するための手段が適用される場合、例えばコンピュータプログラムによって、該自動作動手段によって取得されたデータをリスクの診断のために処理することができる。好ましくは、そのような場合、手段は単一デバイスに含まれる。したがって、該デバイスは、適用サンプル中の目的のペプチドまたはポリペプチドのレベルを測定するための分析ユニットおよび得られたデータを診断用に処理するためのコンピュータユニットを含んでよい。あるいは、目的のペプチドまたはポリペプチドのレベルの測定にテストストリップ（test stripes）等の手段が使用される場合、診断手段は、本明細書中の他の箇所で定義される参照レベルに測定レベルを割り当てる対照ストリップまたはテーブルを含んでよい。あるいはまたはさらに、診断手段は、被験サンプル中の測定レベルをベースラインサンプル中の測定レベルと比較して、該レベル間の変化を測定し、かつ該変化を参照変化と比較する。要するに、診断手段は、本明細書中で説明される任意の診断ステップを実行するために適合させることができる。テストストリップを、好ましくは、目的のペプチドまたはポリペプチドと特異的に結合するリガンドまたは物質とカップリングする。ストリップまたはデバイスは、好ましくは、該リガンドまたは物質と結合する目的のペプチドまたはポリペプチドを検出するための手段を含む。好ましい検出手段は、上記発明の方法に関する実施形態に関連して開示されている。そのような場合、マニュアルに提供される指示および解釈に基づいて系のユーザーが量の測定結果とその診断値を引き合わせる点において、該手段は作動可能に連結されている。該手段は、そのような実施形態において別々のデバイスとして存在してよく、好ましくは、キットとして一緒にパッケージされる。当業者は追加の面倒なく手段を連結する方法を理解する。好ましいデバイスは、専門臨床家の特定の知識を伴わずに適用できるものであり、例えばサンプルの挿入を必要とするだけのテストストリップまたは電子デバイスである。臨床家の解釈を必要とする診断パラメータまたは生データの出力として結果を得ることができる。追加の好ましいデバイスは、分析ユニット／デバイス（例えば目的のペプチドまたはポリペプチドと特異的に結合可能なリガンドまたは物質とカップリングさせたバイオセンサー、アレイ、固体支持体、プラズモン表面共鳴デバイス、ＮＭＲ分光計、質量分析計等）または本発明の方法に従って上記参照の評価ユニット／デバイスを含む。
【０１２５】
本発明では、ＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチドの測定レベルをベースラインサンプル中で測定されたレベルと比較することによって心臓合併症および／またはリスクを診断することができる。ゆえに、ＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチドのレベル（群）の変化を決定することができる。変化（それぞれ、ベースラインサンプルと比較された場合の増大または低下）は心臓合併症の存在を示す。
【０１２６】
本発明では、それぞれＡＮＰ型ペプチドおよびＢＮＰ型ペプチドの、同時に見られる低下または増大の関連で用語「同時に見られる」はその最も広義で理解されるものとする。好ましくは、該用語は、類似のサンプルまたは同一サンプル中での測定を参照する増大または低下に関すると理解されるものとする。例えば、ベースラインサンプルおよび／または被験サンプルが同一でないか、または両マーカーに関して同時に採取されない場合にも、同時に見られる増大が生じたと見なされる。サンプリング期間の間のわずかな差異はそれぞれの増大または低下の診断値に関してあまり重要ではないことが当業者に明らかである。しかし、好ましくは、ＡＮＰ型ペプチドおよびＢＮＰ型ペプチドのレベルを、各マーカーに関して同時に採取されたサンプルから、または、さらに好ましくは、同一サンプルから決定する。
【０１２７】
本発明では、用語「リスク」は、特定の出来事の確率に関し、より具体的には心臓合併症、より具体的には心筋壊死が生じる確率に関する。例えば、リスクは、特定の期間内、例えば翌１日または２日以内で所定の患者における少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％の確率で所定の出来事（例えば壊死および／またはＴｎＴ上昇）が生じる見込みであってよい。しかし、症候性または臨床的に明らかな心臓合併症に関して、それぞれの確率はさらに低くてよく、例えば１％、２％、３％または５％であってよい。例えば臨床研究はそのようなリスクをさらに明確にするデータを提供することができる。
【０１２８】
所定のリスクは、例えば時間対所定の出来事に関する好適なカプラン・マイヤープロットから得られる。
【０１２９】
リスクは絶対値で表記できるが、相対的表現で、例えば特定の所定のリスクと比較したリスクの増大の観点でリスクを表記することが、より有用であることが多い。当業者はそのような相対的表現に非常に精通している。例えば、冠動脈カテーテル法またはＰＣＩを受けている患者において心臓合併症（特に心筋壊死）が発症する所定のリスクの平均が存在する。しかし、それぞれの比較群（例えば冠動脈カテーテル法またはＰＣＩまたは特定のタイプのＰＣＩを受けている上記患者）と比較して、特定の患者がそのような心臓合併症を発症する追加のリスクを有するかどうか、したがってこの患者のトータルリスクが「増大」しているかどうかを知ることが、より適切であるかもしれない。好都合には、本発明はまた、そのような相対的リスクの診断を可能にする。
【０１３０】
相対的リスクは危険率の観点から表記することができる。用語「危険率」は当業者に公知である。それは、２種の亜群間のリスク、例えばＡＮＰ型ペプチドレベルの低下を示す群対ＡＮＰ型ペプチドレベルが安定なままである群間の危険率の関係を表現することができる。危険率の差異は、例えば特定レベルのＡＮＰ型ペプチドを有するリスク群の、相互作用モデルからの抽出対象である相互作用として知られる。相互作用および相互作用モデルという用語は当業者に公知である。
【０１３１】
特に、本発明は、心臓合併症、特に心筋壊死を発症する特定のリスクにさらされている患者の特定を可能にする。例えば、リスクは増大するか、増大しない可能性がある。当業者はこれらの用語の意義に精通している。例えば、特定の患者が平均的な患者より高いリスクを有する場合、当業者は、通常、そのようなリスクが「増大」したと称する。
【０１３２】
本発明の関連で、心臓合併症、特に心筋壊死を発症するリスクの増大は、特に、平均的な患者のリスク、好ましくは年齢および性別が同一の平均的な患者のリスク、より好ましくは年齢、性別、患者にすでに存在する心臓障害の性質または病因、および／または冠動脈カテーテル法の種類が同一の患者と比較して少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍または３倍のリスクの増大に関する。
【０１３３】
当業者は、異なる種類の診断または異なる等級のリスクに関連する、ＡＮＰ型ペプチドおよび／またはＢＮＰ型ペプチドレベルの参照変化を決定することができる。
【０１３４】
本発明では、ＡＮＰ型ペプチドレベルの低下が大きいほど、心臓合併症が存在する可能性が高いか、または心臓合併症が発症するリスクが高い。
【０１３５】
好ましくは、ＡＮＰ型またはＢＮＰ型ペプチドについての測定された変化を参照変化と比較することによって診断を決定する。この関連での用語「参照」は当業者に公知である。特に、参照変化は特定の診断またはリスクと関連するか、または異なる診断またはリスクの等級を識別する。所望の診断感度または特異性にしたがって参照変化を選択してもよいことが理解される。高感度とは、特定の診断を有するすべての患者のうちの大部分を特定し、かつ／または特定の診断を有する患者のうちの少数しか、診断対象の障害、合併症、またはリスクを有さないと誤診することがないことを意味する。高い特異性とは、特定の診断を有すると特定された患者のうちの大部分が実際に診断対象の疾患、合併症、またはリスクを有することを意味する。特定の診断に関する所望の感度が高いほど、この診断の特異性は低く、逆もまた真である。したがって、当業者は所望の感度および特異性にしたがって参照変化を選択してよい。所望の感度および特異性を伴う合理的な参照変化の選択に好適なツールは当技術分野において公知であり、それには、例えばレシーバー・オペレーター曲線（receiver-operator-curve）（ＲＯＣ）からそのような変化を決定することが含まれる。
【０１３６】
この考察の関連で、参照変化は単一の値であるだけでなく、一連の値を含んでもよいことが明らかである。
【０１３７】
特に、変化（増大または低下）は、診断に関して有意、特に統計学的に有意であると見なされるサイズの変化である。用語「有意」および「統計学的に有意」は当業者に公知である。例えば、変化またはレベルが統計学的に有意であるかどうかを決定するために、患者の一部分が障害、合併症、またはリスクを被っていることを最初に特定し、そして変化またはレベルを測定する。変化が統計学的に有意であるかどうかは、種々の周知の統計評価ツール、例えば信頼区間の決定、ｐ値決定、スチューデントｔ検定、マン・ホイットニー検定、等を使用して、当業者が追加の面倒なく決定することができる。詳細はDowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見出せる。好ましい信頼区間は、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である。ｐ値は好ましくは０．２、０．１、０．０５である。
【０１３８】
より具体的には、参照変化は、例えば実施例に挙げるような研究において測定されるＡＮＰ型またはＢＮＰ型ペプチドの変化から導き出すこともできる。
【０１３９】
レベルの参照変化の例を以下および実施例に挙げる。特に、指定の種類の診断もしくはリスクの等級に関連するか、またはそれを識別することが本発明の過程で見出されたＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルの変化を挙げる。
【０１４０】
以下に挙げる変化が患者の診断についての最初の分類として役立つだけであることが明らかである。例えば、最終診断は、患者の全般的な身体状況、他の診断パラメータおよび心臓カテーテル法の性質に基づいて決定してもよい。
【０１４１】
本発明では、例えばＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの１０％未満、より具体的には５％未満、最も具体的には２％未満の血漿レベルの低下に相当する低下または変化は、心臓合併症の不存在に関連するか、または心臓合併症、特に心筋壊死を発症するリスクの増大がないことに関連すると見なされる。
【０１４２】
本発明では、例えばＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの少なくとも５％、より具体的には少なくとも１０％または１５％、最も具体的には少なくとも２０％の血漿レベルの低下に相当する低下は、心臓合併症の存在または心臓合併症、特に心筋壊死を発症するリスクの増大に関連する。
【０１４３】
選択される感度および特異性に依存して所定のレベルは重複してよいことが明らかである。したがって、本発明では、例えばＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの２％〜１０％、特に５％〜１０％の血漿レベルの低下に相当する低下により、心臓合併症の存在または心臓合併症を発症するリスクの増大と比較して心臓合併症の不存在または発症リスクの増大がないことを識別することができる。測定レベルがこの識別レベルより高ければ、該測定レベルは心臓合併症の存在または心臓合併症を発症するリスクの増大を示す。そのような識別レベルを「カットオフ」または「識別閾値」と称することもできる。そのような「カットオフ」または「識別閾値」によって、計画通りの定期的治療を実行するか、そうではなく、心臓合併症の存在または心臓合併症、特に心筋壊死を発症するリスクの増大を考慮に入れた治療またはモニタリングを開始するかが担当医に示される。
【０１４４】
心臓合併症またはリスクが診断されると、下記のようにその後の治療に影響を有する。
【０１４５】
好ましくは、本発明にしたがって心臓合併症またはリスクの増大を有すると診断される患者は、心臓合併症、特に心筋壊死の発症に関する追加の注意を持ってモニタリングされるべきであろう。当業者は、治療についての最終決定が、追加の関連要因、例えば患者の年齢、心臓障害の家族歴、患者に存在する心臓障害の性質または病因、利用可能な治療選択肢、モニタリング候補の有用性等を考慮する担当医によることを理解する。
【０１４６】
本発明の方法によって心臓合併症なしまたはリスクの増大なしが示されれば、治療を計画通り継続することができる。
【０１４７】
本発明の方法によって心臓合併症またはリスクの増大が示されれば、それに合わせて治療を改変することができる。好ましくは、治療と同時に、本発明のＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチドレベルの追加の測定、炎症および／または壊死マーカーの追加の測定、および／または追加の診断、例えば心機能のモニタリングを短い間隔で、例えばほぼ毎週、好ましくはほぼ毎日、またはほぼ１２時間毎に行う。そのような診断またはモニタリングには、機能障害の場所をつきとめるか、または機能障害を特徴付けするための磁気共鳴映像法も含まれる。追加の治療には、任意の血小板凝集インヒビターを投与するか、またはそのレベルを増大させること、血栓溶解剤を投与するか、またはそのレベルを増大させること、追加のステント移植および当業者によって適切であると見なされる任意の他の手段が含まれる。したがって、本発明はまた、患者を治療またはモニタリングする方法を提供する。
【０１４８】
そのような期間または間隔の関連での用語「ほぼ（約、およそ）」は当業者に理解される。したがって、実際の間隔は、実際の状況、例えば好適な予約の手配等に依存して、意図される正規の間隔から逸脱してもよい。特に該間隔は、例えば１００％まで、好ましくは５０％まで、より好ましくは２５％まで、より好ましくは１０％まで逸脱してよい。
【０１４９】
最後に、本発明はまた、冠動脈カテーテル法に起因する心臓合併症を診断するための、本明細書中に記載のデバイスの使用ならびにＡＮＰ型および／またはＢＮＰ型ペプチドまたはその変異体の使用を包含する。
【０１５０】
本説明中で引用されるすべての参考文献は、その開示内容全体および本説明中で具体的に記述される開示内容に関して、参照によりここに組み入れられる。
【０１５１】
以下の実施例は本発明を説明するものであり、いかなる意味においてもその範囲を限定するためのものではない。
【実施例１】
【０１５２】
ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの測定
ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの測定は、例えば、同一のウサギ抗ラットｐｒｏＡＮＰポリクローナル血清、標準としてPeninsula Lab（Bachem Ltd, St. Helene, UK）から入手されたヒトｐｒｏＡＮＰ（１−３０）、および放射性標識化用のＨＰＬＣによって精製されたヨウ素化（iodined）ｐｒｏＡＮＰ １−３０を使用して、Sundsfjord, J.A., Thibault, G., et al. (1988). Identification and plasma concentrations of the N-terminal fragment of proatrial natriuretic factor in man. J Clin Endocrinol Metab 66:605-10の変法において磁気固相技術を用いる競合結合ラジオイムノアッセイによって行うことができる。高感度および良好な精度を達成するために、Dynabeads M280（Dynal Biotech, Oslo, Norway）とヒツジ抗ウサギＩｇＧを固相および二次抗体として使用することができる。
【０１５３】
実施例４に記載の研究の場合、Biomedica, Austriaから入手可能な市販のＥＬＩＳＡ試験（「proANP ELISA (1-98)」Cat. No. BI-20892）を使用してＮＴ−ｐｒｏＡＮＰを測定した。該試験は「Immundiagnostik Dr. Franz-Paul-Armbruster」によってドイツで販売されている。
【実施例２】
【０１５４】
ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの測定
ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの測定は、Elecsys 2010での電気化学発光イムノアッセイ（Elecsys proBNPサンドイッチイムノアッセイ；Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）によって行う。該アッセイは電気化学発光サンドイッチイムノアッセイの原理に従って機能する。第１ステップでは、ビオチン標識ＩｇＧ（１−２１）捕捉抗体、ルテニウム標識Ｆ（ａｂ’）２（３９−５０）シグナル抗体および２０マイクロリットルのサンプルを３７℃で９分間インキュベートする。その後、ストレプトアビジンコーティング磁気微粒子を加え、混合物をさらに９分間インキュベートする。第２のインキュベーション後、反応混合物を前記システムの測定セルに移す。該セルでは、ビーズが磁気によって電極表面に捕捉される。測定セルをバッファーで洗浄することによって未結合標識を除去する。
【０１５５】
最終ステップでは、トリプロピルアミン含有バッファーの存在下で電極に電位を印加し、得られた電気化学発光シグナルを光電子増倍管によって記録する。すべての試薬およびサンプルはElecsys（登録商標）機器によって全自動で処理される。２点較正によって機器特異的に作成される検量線および試薬バーコードによって提供される主曲線によって結果を決定する。該試験の実施は製造元の指示にしたがって行う。
【実施例３】
【０１５６】
サンプルの取得
ＢＮＰ型ペプチド分析用の血液を、５０００Ｕのアプロチニン（Trasylol, Beyer, Germany）を含有するＥＤＴＡチューブおよびリチウム−ヘパリンチューブ（臨床化学用）に、必要に応じて、採取する。血液および尿サンプルを直ちに４℃で３４００ｒｐｍで１０分間回転させる。分析まで、上清を−８０℃で保存する。
【実施例４】
【０１５７】
既知の冠動脈性心疾患を有する２２人の患者において血管造影法を実施した。すべての患者で、血管造影法は局所狭窄を示し、ステント移植によってそれを治療した。すべての患者で、臨床的合併症を伴わずに血管造影法およびステント移植が行われた。
【０１５８】
ステント移植の直後（２時間以内）に血液サンプルを採取した。６時間後および２４時間後に追加の血液サンプルを取得した。
【０１５９】
ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰおよび心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ（本実施例では「ＴｎＴ」とも称される））のレベルを測定した。一群の患者では、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルのわずかな変化しか観察されなかった。１２人の患者で、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの低下が観察され、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの（遅延した）増大を伴った。３人の患者では、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの増大が認められたが、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの増大は認められなかった。いずれの患者においても、心臓合併症は臨床的に明らかにならなかった。しかし、一部の患者では、トロポニンＴの増大によって心筋壊死が示された。
【０１６０】
結果を以下の表に示す。
【表１】
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【０１６１】
研究の個々の患者に関する例を以下の表に挙げる。
【表２】
2010503837.tif 000003
【０１６２】
患者１は、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの増大と同時に見られるＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの低下を示した。それは心臓合併症を示す。このことはトロポニンＴ（ＴｎＴ）の増大によって確認された。それは該合併症が心筋壊死を伴うことを示す。
【表３】
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【０１６３】
患者２は、比較的に一定レベルのＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを示した。それは深刻な心臓合併症が存在しなかったことを示す。このことはトロポニンＴ（ＴｎＴ）レベルがカットオフ未満であることによって確認される。それは顕著な心筋壊死が存在しなかったことを示唆する。
【表４】
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【０１６４】
患者１１は、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのわずかな増大と同時に見られるＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの低下を示した。それは心臓合併症を示す。トロポニンＴ（ＴｎＴ）のレベルはカットオフ未満のままであった。それは該合併症が顕著な心筋壊死を伴わなかったことを示唆する。
【表５】
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【０１６５】
患者１６は、比較的に一定レベルのＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを示した。それは深刻な心臓合併症が存在しなかったことを示す。このことはトロポニンＴ（ＴｎＴ）レベルがカットオフ未満であることによって確認される。それは顕著な心筋壊死が存在しなかったことを示唆する。ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの絶対レベルが高いことは、既存の心不全が存在したことを示す。興味深いことに、該レベルの変化は、既存の心不全の程度または重症度とほとんど無関係の診断的価値を有するようである。
【手続補正書】
【提出日】平成20年7月22日(2008.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
冠動脈カテーテル法により引き起こされる患者での心臓合併症の診断方法であって、以下のステップ；
（ａ）冠動脈カテーテル法の施術中もしくはその後に該患者から取得した少なくとも１つのベースラインサンプル中のＡＮＰ型ペプチドレベルを測定するステップ、
（ｂ）冠動脈カテーテル法の後に該患者から取得した少なくとも１つの被験サンプル中のＡＮＰ型ペプチドレベルを測定するステップ、および
（ｃ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間で、ＡＮＰ型ペプチドレベルの変化を測定するステップであって、該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が心臓合併症を示すものであるステップ
を含む、上記方法。
【請求項２】
ステップ（ｃ）が、以下：
（ｃ）前記ベースラインサンプルと前記被験サンプルとの間でＡＮＰ型ペプチドレベルの変化を測定し、かつ該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＢＮＰ型ペプチドレベルの変化を測定するステップであって、該ＢＮＰ型ペプチドレベルの有意な増大と同時に見られる該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が、心臓合併症を示すものであるステップ
に従い実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓合併症が心筋虚血および／または心筋壊死である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記心臓合併症が臨床的に明らかでない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ａ）に記載の前記ベースラインサンプルが、冠動脈カテーテル法の２時間後またはその前に取得される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記被験サンプルが冠動脈カテーテル法の４〜４８時間後に取得される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記被験サンプルが冠動脈カテーテル法の５〜３６時間後に取得される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＡＮＰ型ペプチドレベルの低下が１０％より大きい、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＢＮＰ型ペプチドレベルの増大が２０％より大きい、特に２５％より大きい、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＮＰ型ペプチドがＮＴ−ｐｒｏＡＮＰである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＢＮＰ型ペプチドがＮＴ−ｐｒｏＢＮＰである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
壊死マーカーのレベルを追加的に測定し、好ましくは該壊死マーカーは、心筋トロポニン、クレアチンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、虚血修飾型アルブミン（ＩＭＡ）からなる群より選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
炎症マーカーまたはその変異体のレベルを追加的に測定し、好ましくは該炎症マーカーは、ＣＲＰ、インターロイキン、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）、高感度ＣＲＰ（ｈｓＣＲＰ）、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、単球化学誘引タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）からなる群より選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
冠動脈カテーテル法により引き起こされる患者での心臓合併症の診断方法であって、以下のステップ：
（ａ）冠動脈カテーテル法の施術中もしくはその後に該患者から取得した少なくとも１つのベースラインサンプル中のＡＮＰ型ペプチドレベルを測定するステップ、
（ｂ）冠動脈カテーテル法の後に該患者から取得した少なくとも１つの被験サンプル中のＡＮＰ型ペプチドレベルを測定するステップ、
（ｃ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＡＮＰ型ペプチドレベルの変化を測定するステップ、および
（ｄ）該ベースラインサンプルと該被験サンプルとの間でＢＮＰ型ペプチドレベルの変化を測定するステップであって、該ＢＮＰ型ペプチドレベルの有意な増大と同時に見られる、ステップ（ｃ）による該ＡＮＰ型ペプチドレベルの有意な低下が、心臓合併症を示すものであるステップ
を含む、上記方法。
【請求項１５】
冠動脈カテーテル法の質の評価または質のモニタリングのための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項１６】
冠動脈カテーテル法により引き起こされる心臓合併症の診断のための、ＡＮＰ型ペプチドの患者レベルの測定を可能にする診断手段の使用。
【請求項１７】
冠動脈カテーテル法により引き起こされる心臓合併症の診断のための、ＡＮＰ型ペプチドの測定を可能にする手段または試薬を含むキットの使用。
【請求項１８】
以下のもの：
（ａ）患者由来のサンプル中のＡＮＰ型ペプチドの量を測定可能な手段；および
（ｂ）好ましくは、該患者由来のサンプル中のＢＮＰ型ペプチドの量を測定可能な手段；
（ｃ）好ましくは、（ａ）および／もしくは（ｂ）により測定されるレベルの間での、または（ａ）および／もしくは（ｂ）により測定されるレベルと、異なるサンプル中で測定されるレベルとの間での変化を測定可能な手段；および
（ｄ）該測定されるレベルを、少なくとも１つの参照レベルまたは参照変化と比較することにより心臓合併症を診断することが可能な手段
を含む、冠動脈カテーテル法により引き起こされる心臓合併症の診断のためのデバイスの使用。
【国際調査報告】
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