(57)【要約】本発明はＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、レシチン１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド又は植物性油２０〜３０重量％、グリセリン１０〜２０重量％、補助乳化剤１〜１５重量％、及び水（balance）を含む、ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。また、本発明はＣｏＱ１０の可溶化のために、ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド又は植物性油２０〜３０重量％、乳化剤１〜２５重量％、グリセリン１０〜２０重量％及び水（balance）を含む、ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。本発明によるナノ−エマルジョン組成物は好ましくは、ＣｏＱ１０の安全性、体内浸透性、吸収性及び有効性を向上させることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、レシチン１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド２０〜３０重量％、グリセリン１０〜２０重量％、補助乳化剤１〜１５重量％、及び水（バランス）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項２】
ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、レシチン１〜５重量％、植物性油２０〜３０重量％、グリセリン１０〜２０重量％、補助乳化剤１〜１５重量％、及び水（バランス）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項３】
上記植物性油は、ホホバ油、マカダミアナッツ油、ヒマワリ油、オリーブ油、ツバキ油、ヒマシ油及び植物性スクアランからなる群から選択される１以上のものである請求項２に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項４】
上記補助乳化剤は、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、アニオン性アミノ酸系の乳化剤、ポリグリセリン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、糖エステル、コレステロール及びラウリル硫酸ナトリウムからなる群から選択される１以上の物質である請求項１又は２に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項５】
上記アニオン性アミノ酸系の乳化剤は、ココイルグルタミン酸ＴＥＡ、グルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸マグネシウム、及びラウロイルグルタミン酸ナトリウムからなる群から選択される１以上の物質である請求項４に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項６】
ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド２０〜３０重量％、乳化剤１〜２５重量％、グリセリン１０〜２０重量％及び水（バランス）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項７】
ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、植物性油２０〜３０重量％、乳化剤１〜２５重量％、グリセリン１０〜２０重量％及び水（バランス）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項８】
上記植物性油は、ホホバ油、マカダミアナッツ油、ヒマワリ油、オリーブ油、ツバキ油、ヒマシ油及び植物性スクアランからなる群から選択される１以上のことである請求項７に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項９】
上記乳化剤は、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、アニオン性アミノ酸系の乳化剤、ポリグリセリン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、糖エステル、コレステロール及びラウリル硫酸ナトリウムからなる群から選択される１以上の物質である請求項６又は７に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項１０】
上記アニオン性アミノ酸系の乳化剤は、ココイルグルタミン酸ＴＥＡ、グルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸マグネシウム、及びラウロイルグルタミン酸ナトリウムからなる群から選択される１以上の物質である請求項９に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【請求項１１】
粘度が１．０〜１５ｃＰｓ（センチポアズ）である請求項１、２、６又は７に記載のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コエンザイムＱ１０の可溶化組成物に関し、さらに詳細には、コエンザイムＱ１０の安定性及び生体利用効率を高めるナノ−エマルジョン組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、人体の最も外側の器官で、外部脅威又損傷から人体を保護する役目をすることはよく知られている。皮膚の老化は自然的な生理現象であり、ヒトの出生の時からプログラム化されたコースに沿って徐々に進歩する。老化現象は、皮膚組織が代謝過程中又は紫外線に露出され、酸素遊離基（以下、‘ＯＦＲ’と呼ぶ）が発生されることを特徴とする複雑な機序を介して皮膚の全層にわたって発生しており、このＯＦＲはその酸化を促すために細胞膜の脂質を攻撃し、酸化された脂質は細胞膜を破壊し、これにより、皮膚老化をもたらす。
【０００３】
このような皮膚老化を防止するか、又は改善しようとする要求は、全般的な社会生活水準の向上に比例するきらいがある。そのような要求を満たす一つの努力として、抗老化素材を開発しようとする試みが活発に行われている。
【０００４】
このような状況下で、コエンザイムＱ１０（以下、‘ＣｏＱ１０’と呼ぶ ）は抗老化及び／又は抗酸化効果を有する物質として大きな関心を引き付けた。ＣｏＱ１０は細胞のエネルギー生成器官であるミトコンドリアでたくさん見つかり、人体に広範囲に分布されている。この物質はＯＦＲから細胞を保護するために強力な抗酸化剤として役たち、ビタミンＥの活動が皮膚老化を防ぎ、且つ循環機能をサポートすることを支援する。
【０００５】
しかし、ＣｏＱ１０が優れた抗酸化効果を有するにもかかわらず、ＣｏＱ１０は光、熱、酸素などの外部的な環境要因によって容易に分解され、水、一般的な有機溶媒、油に溶けなく、制限された適用の中でのみ使用される。
【０００６】
ＣｏＱ１０は、通常、界面活性剤又は乳化剤を用いて溶液相で安定化を通じてエマルジョン又はカプセルの形態で使用される。しかし、このような安定化方法は、ミセル凝集及び／又はＣｏＱ１０が化学的又は物理的に十分に安定化できないように溶液内で機能的物質の拡散によってカプセル又はエマルジョンの自己分解を引き起こすことができ、これにより、産業的利用に限界があった。
【０００７】
従って、上述した問題を克服するためのたくさんの調査と研究が遂行されてきたが、まだ明確な解決策は見出していない。
【０００８】
それに応じて、ＣｏＱ１０を安定的に可溶化し、その生体利用効率を向上させる新規組成物の開発が切実に求められ射る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は従来技術に関して上述した問題を解決するためのものであり、本発明の目的は、ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン化によってＣｏＱ１０の安定化及び生体利用効率を向上させる組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
技術的解決方法
上記目的を達成するために、本発明は、ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、レシチン１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド２０〜３０重量％、グリセリン１０〜２０重量％、補助乳化剤１〜１５重量％、及び水（balance）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。
【００１１】
また、本発明は、ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、レシチン１〜５重量％、植物性油２０〜３０重量％、グリセリン１０〜２０重量％、補助乳化剤１〜１５重量％、及び水（balance）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド２０〜３０重量％、乳化剤１〜２５重量％、グリセリン１０〜２０重量％及び水(balance）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。
【００１３】
また、本発明はＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、植物性油２０〜３０重量％、乳化剤１〜２５重量％、グリセリン１０〜２０重量％及び水（balance）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。
【００１４】
本発明の上記目的、特徴及び利点は添付の図面と連結して当業者に明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明に係るＣｏＱ１０のＨＰＬＣ分析用血漿サンプル準備のための手順を概略的に説明するフローチャートである。
【図２】ラットに、本発明の実施例に係るＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物（６ｍｇ／ｋｇ ）を単回静脈投与後の血漿濃度−時間曲線である。
【図３】ラットに、本発明の実施例に係るＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物（６０ｍｇ／ｋｇ ）を複数回経口投与後の血漿濃度−時間曲線である。
【図４】ラットに、対照群として、ＣｏＱ１０粉末製剤（６０ｍｇ／ｋｇ ）を複数回経口投与後の血漿濃度−時間曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下で、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１７】
可溶化とは、水に溶け難い液体や固体が界面活性剤などを含有する水溶液に溶けて熱力学的に安定な溶液を形成することを意味する。つまり、可溶化は溶液を形成するために、与えられた溶媒に物質を溶かす工程である。もし物質が溶解できない場合は、その物質は与えられた溶媒に対して不溶性であると考えられる。溶解の間に、物質のオリジナル化学物理的特性は変わらない。与えられた溶媒の低い溶解性を有する物質は、可溶化剤として呼ばれるに適した添加剤を用いる溶媒に溶解することができる。
【００１８】
このような可溶化に影響を及ぼし得るある要因としては、アルキル基の長さ、官能基の種類及び位置、イオン効果、親水−親油バランスなどの可溶化剤の化学的構造による影響、又は他の影響、例えば、被可溶化物質、温度、添加物の影響などが挙げられる。
【００１９】
本発明の１つの局面に従って、本発明はＣｏＱ１０の可溶化のために、ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド又は植物性油２０〜３０重量％、乳化剤１〜２５重量％、グリセリン１０〜２０重量％及び水（balance）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。
【００２０】
本発明の別の局面に従って、本発明はＣｏＱ１０の可溶化のために、ＣｏＱ１０  ５〜２０重量％、エタノール１〜５重量％、レシチン１〜５重量％、カプリン／カプリルグリセリド又は植物性油２０〜３０重量％、グリセリン１０〜２０重量％、補助乳化剤１〜１５重量％、及び水（balance）を含むＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を提供する。
【００２１】
本発明の組成物は、ナノ−エマルジョンの形態で製造でき、ナノ−エマルジョンは水に対する低い溶解度を有する一つ以上の油と一つ以上の生理活性有効成分を補捉するために、内部相には油を含有し、外部相には水を含有している。本発明では水に対し低い溶解度を有する有効成分としてＣｏＱ１０が用いられ、ナノ−エマルジョンの内部に捕集される油としてカプリン／カプリルグリセリド又は植物性油が用いられる。
【００２２】
上記植物性油は、好ましくは、ホホバ油、マカダミアナッツ油、ヒマワリ油、オリーブ油、ツバキ油、ヒマシ油及び植物性スクアランからなる群から選択される１以上のものを含む。
【００２３】
本発明で用いられた活性成分、つまり、ＣｏＱ１０の量は溶解度及び析出現象を考慮して、５〜２０重量％で含まれるのが好ましい。ＣｏＱ１０が２０重量％を超えると、ＣｏＱ１０の析出が起こり得る。反対に、５重量％未満の場合には、その有効成分としての効果を得るには十分ではない。
【００２４】
上記カプリン／カプリルグリセリド又は植物性油は、組成物が飲料又は経口投与用薬剤で使用される場合、ＣｏＱ１０の浸透又は吸収を促進するか、又は加速するために、オイルとして役立つ。
【００２５】
本発明の組成物は、カプリン／カプリルグリセリド又は植物性油を２０〜３０重量％で含むのが好ましい。その量が２０重量％未満の場合、組成物が長時間空気に露出させれば、ＣｏＱ１０が僅かに溶解されるか、又は析出される。
【００２６】
また、本発明の組成物は、ＣｏＱ１０の溶解のために溶解助剤としてエタノールを使用しており、このとき、エタノールの量はＣｏＱ１０の析出を防止するために、１〜５重量％で含まれるのが好ましい。
【００２７】
本発明による組成物はグリセリンを使用しており、このようにグリセリンを使用することによって、相対的に少ない量の乳化剤を使用しても、多量の難溶性（又は溶け難い）物質の溶解ができるようにする。
【００２８】
本発明は、乳化剤としてレシチンと補助乳化剤の組み合わせを採用するか、又は乳化剤だけを採用することができる。
【００２９】
本発明は両親媒性乳化剤であるレシチンを１〜５重量％で使用して乳化剤の安全性を高め、人体に投与するとき、ＣｏＱ１０の浸透を加速させる。
【００３０】
本発明は補助乳化剤１〜１５重量％を使用してナノ−エマルジョンの安定性をさらに向上させる。
【００３１】
本発明の組成物に含有される上記の乳化剤又は補助乳化剤は、好ましくは、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）；ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）；アニオン性アミノ酸系の乳化剤；ポリグリセリン脂肪酸エステル；グリセリン脂肪酸エステル；プロピレングリコール脂肪酸エステル；糖エステル；コレステロール；及びラウリル硫酸ナトリウムからなる群から選択される１つ以上を含む。
【００３２】
上記アニオン性アミノ酸系の乳化剤は、好ましくは、ココイルグルタミン酸ＴＥＡ、グルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸ナトリウム、ココイルグルタミン酸マグネシウム、及びラウロイルグルタミン酸ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の物質を含む。
【００３３】
本発明のＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物に関しては、上記で定義された構成の組成物の範囲が好ましくなることが期待される。より好ましくは、組成物内に含有されたエタノール及び乳化剤との関連で、その粘度が１．０〜１５ｃＰｓの範囲である。
【００３４】
発明効果
本発明の組成物は、水での優れた溶解性及び優れた生体内浸透性を示す。また、下記実験例で説明されるように、室温（１〜３０℃）と高温（４５℃）で、ＣｏＱ１０の含量がそれらの析出なしに、常に保持される。
【発明の実施のための最良の形態】
【００３５】
本発明は下記実施例からさらによく理解される。これらの実施例は、本発明の権利範囲を制限するものとして解釈されるものではない。
【実施例】
【００３６】
実施例1：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物は下記手順によって下記成分を用いて製造された：ＣｏＱ１０と、任意的にレシチンをカプリン／カプリルグリセリド（又は植物性油）とエタノールに溶かした。上記溶液に水、グリセリン及び補助乳化剤（又は乳化剤）を加えた後、十分に撹拌し、生成された混合物を高圧微細乳化機で１，０００ｂａｒで、連続５回通過させてナノ−エマルジョン組成物を生成した。この組成物を無菌ろ過し、小分けし、包装した。
2010530904.tif 000002
【００３７】
実施例２：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000003
【００３８】
実施例３：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000004
【００３９】
実施例４：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000005
【００４０】
実施例５：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000006
【００４１】
実施例６：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000007
【００４２】
実施例７：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000008
【００４３】
実施例８：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000009
【００４４】
実施例９：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000010
【００４５】
実施例1０：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000011
【００４６】
実施例１１：ＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の製造
ナノ−エマルジョン組成物の成分のための下記構成の組成物を使用したことを除いては、上記実施例１と同じ方法でＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を製造した。
2010530904.tif 000012
【００４７】
実験例１：ＣｏＱ１０の性状の観察
上記実施例1〜１１で生産された組成物に対して、層分離、析出、安定性及び変色を観察した。
【００４８】
製造された組成物の層分離及び／又は析出が発生されたか否かを目視で観察し、安定性を確認するために、各試料を室温及び４５℃の恒温槽にそれぞれ保管し、ＣｏＱ１０の含量変化を測定した。これらの観察結果を下記表１に示した。
【表１】
2010530904.tif 000013
【００４９】
また、上記実施例1〜１１の組成物を室温及び高温（４５℃）で２年間保管し、変色を観察した。その結果、全ての組成物で色相変化がほとんど無いことを確認することができた。
【００５０】
実験例２：薬物動力学実験
本発明によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の吸収率を評価するために、これを静脈又は経口投与した後、血漿濃度結果に対して薬物動力学的解釈を行った。
【００５１】
（１）実験材料
ＣｏＱ１０試料として、本発明の実施例1によって製造されたＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を使用する一方、現在市販されているＣｏＱ１０粉末製剤（ヨンジン製薬社製)を対照群として用いた。
【００５２】
内部標準物質であるＣｏＱ９はシグマ社から購入して使用した。その他の試薬は全て特級（Ｇ．Ｒ．）又はＨＰＬＣ級を使用した。ジエチルエーテル（Tedia Co., Inc.）、ＡＣＮ及びメタノール（Fisher Scientific Co., Ltd.）、ヘパリン（Upjohn, No.268-5）を購入して使用しており、その他の試薬は全てＧ．Ｒ．を使用した。
【００５３】
機器としては、ＨＰＬＣセット(Jasco Co.: Model PU-980 pump, LC-NetIIcontrol Borwin integrater, AS-950-10 Autoinjector)、ＵＶ／ＶＩＳ検出器（Jasco Co.）、ｐＨメータ(DMSDP-800)、冷凍遠心器(Hitachi Co. Ltd., Himac CR 15D)、卓上遠心分離機（Beckman Industries, Fullerton, CA）、冷凍庫（Scientemp Co., Ltd.）、超音波洗浄器（Mettler Electronics Co., Ltd.）、 メカニカルスターラー （Eurostar, IKA-Labortechnic Co.）、 ホモジナイザー （Ultra-Turrax T25, IKA-Labortechnic Co.）、 遠心分離機 （GS-6KR Centrifuge）などを使用した。
【００５４】
実験動物は体重２００〜３００ｇの雄性ＳＤラットをサムタコ（京畿道安城、韓国）から購入し、温度２３±２℃、相対湿度５０±１０％、喚起回数１０〜１５回／ｈｒ、照明周期１２ｈｒ点灯／１２ｈｒ消灯、照度１５０〜３００Ｌｕｘの環境下で飼育ケージに１匹ずつ収容し、飼料（Samyang Oil & Feed Corp., 江原道原州市、韓国）及びフィルタを利用してろ過された精製水を自由摂取しながら、約１週間の馴化期間を経た後、実験に用いた。
【００５５】
（２）ＨＰＬＣ分析条件確立
生体試料中のＣｏＱ１０のＨＰＬＣ分析条件は既に報告されたことがあるが、本研究では予備試験を経て、次のように検討し、最適の条件を確立した。即ち、ＨＰＬＣカラムは逆相Ｃ−８及びＣ−１８を使用して検討した後、分析条件に優れたＬｕｎａ  Ｃ１８カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）を使用した。移動相溶媒は各溶媒の割合を調整して検討した後、最適の条件であるメタノール：エタノール：２−プロパノール＝５５：２０：２５ｖ／ｖ％の混合液を使用した。流量は１．０ｍＬ／ｍｉｎとし、ＵＶ検出器波長は吸収極大を示す２７５ｎｍに固定した。内部標準物質は構造が類似の数種の化合物を使用して検討した後、分離度に優れたＣｏＱ９を使用した。生体試料中のＣｏムＱ１０の抽出溶媒としては数種の溶媒を使用して検討した結果、抽出率に優れ、且つ最も再現性の良い１−プロパノールを使用した。
【００５６】
血漿試料を実験方法に従って処理し、ＨＰＬＣで分析した時、血漿試料から求めた薬物の検量線は下記式の通りである： 
ｙ＝０．３０３４±０．００３０１（Ｒ２＝０．９９９９）
【００５７】
検量線は０．０５〜１０μｇ／ｍＬの範囲で良好な直線性を示しており、日内及び日間の精密度と正確度は、全て１５％以内であった。
【００５８】
これにより、血漿中のＣｏＱ１０に対する本ＨＰＬＣ分析法は、試験に利用しうる十分な感度、特異性、直線性、正確性及び精密性を有していることがわかった。
【００５９】
（３）静脈投与及び経口投与後の体内動態実験
本発明によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物の吸収率（生体利用効率）を評価するために、単回静脈注射実験及び５日連続経口投与実験を行った。市販中の粉末製剤を対照群として使用して、本発明によるナノ−エマルジョン組成物の吸収を比較評価した。血漿中の濃度結果を薬物動力学的に解析し、最終結論を導出した。生体内ＣｏＱ１０の微量分析にはＨＰＬＣ分析法を使用した。
【００６０】
１）静脈投与後の血漿採取
ラットをエーテルで軽く麻酔させた後、左大腿動脈及び静脈にポリエチレンチューブ（PE-50, Intramedic, Clay Adams, U.S.A.）を挿管した。ラットが麻酔から回復した後、本発明によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物とＣｏＱ１０粉末製剤（対照群）をそれぞれ静脈投与（６ｍｇ／ｋｇ）し、左側大腿動脈から０（blank）、１、５、１０、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０分に採血した。血液２５０μＬをマイクロチューブに集めて、遠心分離した後、得られた血漿１００μＬを定量に使用した。
【００６１】
２）経口投与後血漿採取
本発明によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物とＣｏＱ１０粉末製剤を４日間、それぞれ経口投与（６０ｍｇ／ｋｇ）した後、５日目投与直前、シロネズミをエーテルで軽く麻酔させ、左大腿動脈にポリエチレンチューブ（PE-50, Intramedic, Clay Adams, U.S.A.）を挿管した。シロネズミが麻酔から回復した後、本発明によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物とＣｏＱ１０粉末製剤をそれぞれ経口投与（６０ｍｇ／ｋｇ）し、左大腿動脈から０（blank）、０．５、１、１．５、２、３、４、６、８、１２、１８、２４、４８時間に採血した。血液２５０μＬをマイクロチューブに集めて、遠心分離した後、得られた血漿１００μＬを定量に使用した。
【００６２】
３）血漿中のＣｏＱ１０の濃度定量
ＣｏＱ１０に対して、０．０５μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの濃度範囲で良好な直線関係（Ｒ＝０．９９９）が成立する検量線を作成した。
図１は、本発明によるＣｏＱ１０のＨＰＬＣ分析用血漿サンプル準備のための手順を概略的に示すフローチャートである。
サンプル処理時には、採取した血漿試料０．１ｍＬに内部標準物質（ＩＳ）で５０μＭのＣｏＱ９（１０μＬ）を入れた後、１−プロパノール１ｍＬを加え、抽出、２０分間ボルテックスを行って十分に混合した後、遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分）した。上清を全部採取し、他のマイクロチューブに移し、Ｎ２ガスを蒸発させた後、これを１−プロパノール１００μＬに再溶解させた。この中から１００μＬを採取し、上述したＨＰＬＣ分析法で定量した。
【００６３】
（４）血漿中の薬物濃度推移の薬物動力学的解釈
１）静脈注射後の薬物動力学的パラメーターの算出
静脈注射した後、得られた血漿中の薬物濃度−時間データを下記の線状２−コンパートメントモデルによって速度論的に解析した。
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ここで、Ｘ１とＸ２は体循環及び末梢コンパートメント内の薬物量（μｇ／ｍＬ）を、Ｖｄ１及びＶｄ２は分布容積（ｍＬ／ｋｇ）を、ｋ１２、ｋ２１、ｋｅｌは各コンパートメント間の速度整数（ｍｉｎ−１）をそれぞれ示す。
各コンパートメント内の薬物に対するマスバランスを数式で示せば、下記通りである：
〔数式１〕
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〔数式２〕
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これをＸ１に対し解いて、両辺をＶｄ１で割れば、Ｃを数式３のように簡単に示すことができる：
〔数式３〕
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静脈注射後、得られた血漿中の濃度−時間データを上記数式３に非線形最小二乗法でフィットし、各パラメーターを算出した。その他の速度論的パラメーターを求める式は下記数式４〜８と同様である：
〔数式４〕
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〔数式５〕
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〔数式６〕
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〔数式７〕
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〔数式８〕
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【００６４】
２）経口投与後の薬物動力学的パラメーターの算出
経口投与した後、得られた血漿中の薬物濃度−時間データを下記通りに吸収部位から第１次速度過程で吸収される線状１−コンパートメントモデルによって速度論的に解析した。
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ここで、Ｘａは吸収部位の薬物量（ｍｇ／ｋｇ）を、Ｘは体内コンパートメント内の薬物量（ｍｇ／ｋｇ）を、Ｖｄは分布容積（ｍＬ／ｋｇ）を、ｋａは吸収速度定数（ｍｉｎ−１）を、ｋｅｌは薬物の消失速度定数（ｍｉｎ−１）を、Ｆは吸収率をそれぞれ示す。
各コンパートメント内の薬物に対するマスバランスを数式で示せば、下記通りである：
〔数式９〕
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〔数式１０〕
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これをＸに対して解き、両辺をＶｄで割れば、血中濃度Ｃは下記数式１１のように示すことができる：
〔数式１１〕
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経口投与後、得られた血漿中の濃度−時間データを上記数式に非線形最小二乗法でフィッティング（fitting）し、吸収速度定数（ｋａ）及び消失速度定数（ｋｅｌ）を算出した。その他の速度論的パラメーターを求める数式は下記通りである：
〔数式１２〕
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【００６５】
３）モデル非依存的解釈
血中濃度曲線下の面積（ＡＵＣ）又はＡＵＭＣのようなパラメーターを算出するとき、コンパートメントモデルを予め仮定する場合、多くの誤差が発生しうる。従って、静脈及び経口投与した後、得られた血漿中の薬物濃度−時間データから下記のようなモデル非依存的方法でパラメーターを算出した：
〔数式１３〕
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〔数式１４〕
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〔数式１５〕
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〔数式１６〕
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〔数式１７〕
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〔数式１８〕
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ここで、最後の採血時間までの血中濃度曲線下の面積（ＡＵＣｔ）は、台形面積公式で算出しており、無限大時間までの血中濃度曲線下の面積（ＡＵＣ）及びＡＵＭＣは台形面積公式及び外挿法の和で算出した。ＭＲＴは平均滞留時間、ＣＬｔは全身クリアランス、Ｖｄｓｓは定常状態分布容積を、それぞれ、示す。
【００６６】
（５）実験結果
１）ＣｏＱ１０の静脈投与後の血漿中の濃度パターン
３匹のラットに６ｍｇ／ｋｇの投与量で本発明の実施例によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を単回静脈投与後の各血漿濃度−時間データを表２に、これらのＭｅａｎ±Ｓ．Ｅ．を表３に、それぞれ、示した。また、これらの薬物動態パラメーターを表４に、そのＭｅａｎ±Ｓ．Ｅ．を表５に、それぞれ、示した。
図２は、ラットに６ｍｇ／ｋｇの投与量で本発明の実施例によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を単回静脈投与後の血漿濃度−時間曲線である。
ＣｏＱ１０を静脈投与（６ｍｇ／ｋｇ）した後の血漿中の濃度は６０分までの早い時間帯で急激に消失されており、以降、ゆっくり消失される様相を示した（図２、表２、表３）。分布前相（α相）での半減期（ｔ１／２，α）及び分布後相（β相）での半減期（ｔ１／２，β）はそれぞれ、３．３分及び５２分であった(表４、表５)。
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【００６７】
２）ＣｏＱ１０の経口投与後の血漿中の濃度パターン
３匹のラットに、６０mg/kgの投与量で本発明の実施例によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を５日連続経口投与後の血漿濃度−時間データを表６に、そのＭｅａｎ±Ｓ．Ｅ．を表７に、それぞれ、示した。
図３は、ラットに６０ｍｇ／ｋｇの投与量で本発明の実施例によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物を複数回経口投与後の血漿濃度−時間曲線である。
【表６】
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【表７】
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【００６８】
また、２匹のラットに６０ｍｇ／ｋｇの投与量で対照群であるＣｏＱ１０粉末製剤を５日連続経口投与後の血漿濃度−時間データを表８に、そのＭｅａｎ±Ｓ．Ｅ．を表９に、それぞれ、示した。
図４は、ラットに６０ｍｇ／ｋｇの投与量で対照群であるＣｏＱ１０粉末製剤を複数回経口投与後の血漿濃度−時間曲線である。
【表８】
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【表９】
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【００６９】
また、上記表６及び表８に対する薬物動態パラメーターを、それぞれ、表１０及び表１１に示し、そのＭｅａｎ±Ｓ．Ｅ．を表１２に示した。
【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【００７０】
本発明によるナノ−エマルジョン組成物を経口投与した後の最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）は対照群の粉末製剤に比べて、約２倍の値を示しており、半減期（ｔ１／２）は粉末に比べて、約２倍の大きな値を示した（表１２）。
【００７１】
また、本発明によるナノ−エマルジョン組成物は粉末製剤に比べてＣｍａｘが高く、ｔ１／２は長く示された結果、血漿中濃度曲線下の面積（ＡＵＣ）は粉末に比べて約２．５倍高い値を示した。
【００７２】
以上の結果を総合すれば、本発明によるナノ−エマルジョン組成物は対照群の粉末製剤に比べて、経口投与後の生体利用効率（吸収率）を向上させた製剤として評価された。
【産業上の利用可能性】
【００７３】
本発明による組成物の場合、水に完全に溶解させることができるので、本組成物を使用して飲料又は経口投与用製剤を製造するとき、その適用が便利である。
本発明によるＣｏＱ１０のナノ−エマルジョン組成物は経口投与用約あるいは食品に適用することができ、特に、ドリンク剤や機能性健康飲料として使用しうる。そのために、本発明による組成物を水に希釈して使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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