(57)【要約】  コルジセピンを有効成分とする肥満治療および予防用薬学組成物を開示する。コルジセピンは、脂肪組織生成および脂肪生成に関与する必須因子であるＣ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンの発現を抑え、線維芽細胞（３Ｔ３−Ｌ１細胞）の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を阻害する効果を示すので、肥満を根本的に治療し予防するだけでなく、症状を緩和および改善させることに広く使用できる。また、冬虫夏草は既に健康食品として承認された品目なので、この冬虫夏草から抽出された本発明のコルジセピンも毒性および副作用などの問題が全くない。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
コルジセピンを有効成分として含有する肥満治療および予防用薬学組成物。
【請求項２】
前記コルジセピンは、コルジセプスミリタリス(Cordyceps  militaris)冬虫夏草から分離精製したことを特徴とする請求項１に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
【請求項３】
前記組成物は、経口または非経口的に投与されることを特徴とする請求項１に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
【請求項４】
前記コルジセピンは、容量依存的に線維芽細胞の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を阻害することを特徴とする請求項１に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
【請求項５】
前記コルジセピンは、ＰＰＡＲγおよびＣ／ＥＢＰα−媒介脂肪組織生成過程によって線維芽細胞の脂肪細胞への分化を抑えることにより抗肥満効果を示すことを特徴とする、請求項１または４に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コルジセピン(Cordycepin)を有効成分とする肥満治療および予防用薬学組成物に関する。さらに詳しくは、本発明は、Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンの発現度合いを抑えることにより、線維芽細胞（３Ｔ３−Ｌ１細胞）の脂肪細胞への分化および細胞におけるトリアシルグリセロールの合成を阻害する、コルジセピンを含有する薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満とは、体内に脂肪が過度に蓄積されている状態であって、体重における脂肪の占有比率が高い状態をいう。現代人の生活が過去に比べて一層複雑且つ多様になるにつれて、様々な要因、例えば歪んだ生活習慣、摂取する栄養素の不均衡、運動不足、飲み過ぎなどによって肥満が発生する。
【０００３】
菜食中心の食生活によって肥満の頻度数が多くなかった東洋においても、近年、西洋文物の影響で食生活、習慣、住居環境などが変わって肥満症の頻度が著しく増加した。
【０００４】
肥満は、各種成人病、例えば高血圧、心臓病、糖尿病などの原因となっており、慢性疾病の罹病率を増加させ、人間の寿命を短縮させるなど、深刻な健康上の問題を引き起こしている。
【０００５】
このような肥満の原因としては、遺伝的な素因や環境因子など、様々な原因が知られている。特に、父母の両方ともが肥満の場合、子供が肥満になる確率は５０％以上であり、父母の一方が肥満の場合には、約２５％の肥満確率を示す。このことからみて、遺伝の影響は非常に大きい。
【０００６】
生活習慣の変化によるカロリーの過剰摂取、運動不足、環境的な要因によるエネルギー消費の減少も肥満の主要な原因である。
【０００７】
肥満の治療に主に用いられる方法としては、生活習慣を矯正する方法、例えば食餌療法、運動療法、行動療法などがある。この他にも、肥満の治療に用いられる方法としては、薬物治療および手術的治療がある。
【０００８】
生活習慣を矯正することは容易でないうえ、体重の減少には限界があるので、生活習慣の矯正と共に薬物治療が必要である。
【０００９】
肥満治療のための薬物使用はずっと前から試みられてきたが、人体のエネルギー恒常性の調節に関与するものと解明された多くの物質をターゲットとする肥満治療薬物は副作用のため臨床的な適用に限界がある。
【００１０】
現在、米国ＦＤＡが長期使用を承認した肥満治療薬物は、２種であって、ノルエピネフリン(norepinephrine)とセロトニン(serotonin)の再吸収を抑える作用を持つシブトラミン(sibutramine)と、膵臓および消化器系から分泌される脂質分解酵素(lipase)を抑えて抗肥満効果を示すオーリスタット(orlistat)がある。
【００１１】
ところが、シブトラミンの場合、血圧上昇、不眠症、口腔乾燥、目眩などの副作用がよく発生し、心血管疾患または調節されない高血圧を持つ患者には使用することができないという欠点がある。また、オーリスタットは、下痢、脂肪便、便秘などの副作用を示し、韓国人のように脂肪摂取が西洋人と比較して少ない場合には薬物の効果が著しくないという点で使用が制限的である。
【００１２】
したがって、最近、天然物由来の生理活性物質を用いて安全に肥満を治療することが可能な方法の開発に関する研究が盛んに行われている。
【００１３】
【表１】
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冬虫夏草は、カビの一種である冬虫夏草菌が、主に温度、湿度が高くなる時期に、生きている昆虫の身の中に入り込んで発育増殖しながら寄主昆虫を殺し、しかる後に、子実体を昆虫の表皮に形成する一種の薬用キノコである。もともと、冬虫夏草は、コウモリガ科(Hepialidae)の幼虫から出た冬虫夏草(Cordyceps  sinensis)を自称するものであるが、今日は昆虫の他にもクモ、菌類などから出たキノコを全て総称する。
【００１４】
植物分類体系上、冬虫夏草は、子嚢菌門(Ascomycota)、麦角菌目(Clavicipitales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)に属し、コルジセプス(Cordyceps)、ポドネクテリア(Podonectria)、トルビエラ(Torrubiella)などの３種があるが、それらの中で最も代表的なものがコルジセプス種である(Kobayasi  Y.,Trans  Mycol.Soc.Japan,23.329-364,1982)。全世界的に現在まで約８００余種の冬虫夏草菌が知られており、これらの中でも韓国内で採集および分類されたものは７８種である。冬虫夏草は、寄主特異性が低いため様々な昆虫を寄主とする場合が多く、一般に菌名を用いて命名されるが、天然から得られる自然産の冬虫夏草は非常に稀であって確保し難い。したがって、多様な種類の冬虫夏草が人工栽培されており、これに関する成分および効能研究が行われている。
【００１５】
コルジセプスシネンシス(Codyceps  sinensis)は、最も価値のある生薬の一つである。野生のコルジセプスシネンシスは稀であるうえ、人工的に培養することも非常に難しいため、中国科学者らは発酵能のあるＣｓ−４菌株を開発した。コルジセプスシネンシスは多様な薬学的効能、すなわち酸素遊離ラジカル消去能、抗老化、内分泌の活性化、性機能の回復、並びに呼吸器、肝臓循環器、癌および腎臓の疾患に対する効果を示すことが、Ｚｈｕによってよくまとめられている(Zhu,J.S.,J.Altern.Complement.Med.,4:289-303  1998)。コルジセプスミリタリス(Cordyceps militaris)は、コルジセプスの別の種であって、中国と韓国で幅広く用いられている。
【００１６】
コルジセピン（３−デオキシアデノシン）は、コルジセプスシネンシスの有効成分の一つとして思われている。ずっと以前に、カニガム(Cunningham)は、コルジセプスミリタリスからバシラスサブチルス成長阻害能のある産出物を分離した。この化合物は後でコルジセピンと同定された(Kaczka  E.A.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,14:456-457  1964)。構造が確認された後、コルジセピンの多様な生物学的効果が研究されたが、例えば抗菌活性、抗−マラリア活性、抗−ヘルペス活性、抗−腫瘍形成活性、抗−白血病活性に対する研究が報告されたことがある。
【００１７】
一方、コルジセピンは、これまでは癌細胞に対する細胞毒性を示すポリアデニル化阻害剤として知られていたが、最近、米国で抗白血病治療剤として臨床実験段階にある薬物である(Eiichi  N,Biochemical  Phar.,59:273-281,2000)。
【００１８】
ところが、前記文献の何処にもコルジセピンの抗肥満活性に対するいずれの教示も示唆されたことがない。
【００１９】
そこで、本発明者は、天然物を用いた肥満治療剤などを開発するために努力を行い続けた結果、コルジセプスミリタリス冬虫夏草から分離されたコルジセピンが３Ｔ３−Ｌ１細胞の脂肪細胞への分化を抑えるうえ、トリアシルグリセロールの合成を阻害することを確認し、前記コルジセピンの肥満治療剤としての用途を提供することにより、本発明を成功的に完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明は、コルジセピンを有効成分とする肥満治療および予防用薬学組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
上記目的を達成するために、本発明は、コルジセピンを有効成分として含有する肥満予防および治療用薬学組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
本発明の前記および他の目的、特徴および他の利点は、添付図面を参照する次の説明からさらに明確に理解されるのであろう。
【図１】図１は本発明に係る活性物質のＨＰＬＣプロファイルである。
【図２】図２は本発明に係る活性物質の１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は本発明に係る活性物質の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図４】図４は本発明に係るコルジセピンの濃度別３Ｔ３−Ｌ１細胞の脂肪細胞への分化抑制率を示すグラフである（ＮＣ：陰性対照区（ＤＭＥＭ）、ＰＣ：陽性対照区（ＭＳＤおよびＭＤＩ）、Ｃ４：コルジセピン４μＭ、Ｃ１６：コルジセピン１６μＭ、Ｃ３２：コルジセピン３２μＭ）。
【図５】図５は本発明に係るコルジセピンの濃度別３Ｔ３−Ｌ１細胞のトリアシルグリセロールの合成に及ぼす効果を示すグラフである（ＮＣ：陰性対照区（ＤＭＥＭ）、ＰＣ：陽性対照区（ＭＳＤおよびＭＤＩ）、Ｃ４：コルジセピン４μＭ、Ｃ１６：コルジセピン１６μＭ、Ｃ２：コルジセピン３２μＭ）。
【図６】図６はコルジセピンおよび／またはアデノシンの存在有無による３Ｔ３−Ｌ１細胞の脂肪細胞への分化抑制率を示す写真である（ＮＣ：陰性対照区（ＤＭＥＭ）、ＰＣ：陽性対照区（ＭＳＤおよびＭＤＩ）、Ｃ３２：コルジセピン３２μＭ、Ａ３２：アデノシン３２μＭ、ＣＡ：コルジセピン３２μＭ＋アデノシン３２μＭ）。
【図７】図７はコルジセピンによって誘導されるトリアシルグリセロールの合成抑制に対するアデノシンの効果を示すグラフである（ＮＣ：陰性対照区（ＤＭＥＭ）、ＰＣ：陽性対照区（ＭＳＤおよびＭＤＩ）、Ｃ３２：コルジセピン３２μＭ、Ａ３２：アデノシン３２μＭ、ＣＡ：コルジセピン３２μＭ＋アデノシン３２μＭ）。
【図８】図８は３Ｔ３−Ｌ１細胞におけるＣ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンタンパク質の発現に対するコルジセピンの効果を示すウエスタンブロット写真である（ＮＣ：陰性対照区（ＤＭＥＭ）、ＰＣ：陽性対照区（ＭＳＤおよびＭＤＩ）、Ｃ３２：コルジセピン３２μＭ、Ａ３２：アデノシン３２μＭ、ＣＡ：コルジセピン３２μＭ＋アデノシン３２μＭ）。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
本発明によれば、コルジセピン(Cordycepin)を有効成分とする肥満治療および予防用薬学組成物を提供する。
【００２５】
本発明において、コルジセピンは、市中から購入して使用し、或いはコルジセプスミリタリス冬虫夏草から分離精製したものを使用することができ、好ましくはコルジセプスミリタリス冬虫夏草から分離精製して使用することを特徴とする。
【００２６】
本発明のコルジセピンの抗肥満効果を測定した結果、脂肪組織生成(adipogenesis)および脂肪生成(lipogenesis)に関与するＣ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンタンパク質の発現を効率よく抑えることにより、線維芽細胞（３Ｔ３−Ｌ１）の脂肪細胞への分化を抑え、ＡＴＰ、ＮＡＤ＋、ＮＡＤＰ＋、ＣｏＡおよびＦＡＤの前駆体であるアデノシンと競争的に作用することにより、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）の合成を効果的に阻害することを確認することができる。
【００２７】
また、本発明のコルジセピンは、容量依存的に線維芽細胞の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を阻害することを確認することができる。
【００２８】
本発明の薬学的組成物を、当該用途に応じて、薬学的に許容可能な担体または賦形剤と共に独立にまたは薬品添加剤として使用されるか、或いはヒトへの投与に適したその他の全形態として使用できる。本発明の薬学的組成物に含有できる担体としては、増量剤、高繊維添加剤、カプセル化剤および脂質などがあり、このような担体の例は当業界における公知のものである。
【００２９】
本発明の薬学的組成物は、疾患の進行程度、年齢、性別、身体状態、投与期間、投与方法、患者の体重、食事、排出速度などによって容量を異ならせて投与できる。
【００３０】
ところが、好ましい効果のために、本発明の薬学的組成物を１日、体重１ｋｇ当たり０．０１〜１００μｇの範囲で非経口または経口投与することが良い。投与は１日に１回行ってもよく、数回に分けて行ってもよい。前記投与量はいずれの面でも本発明の範囲を限定しない。
【００３１】
以下、本発明を下記の実施例によってさらに詳しく説明する。これらの実施例は本発明を例示するものに過ぎず、本発明の内容を限定するものではない。
【００３２】
実施例１：活性物質の分離および同定
コルジセプスミリタリス冬虫夏草は、キョンドン市場（ソウル市、韓国）から購入したものを乾燥させて使用した。前記乾燥させたコルジセプスミリタリス冬虫夏草を粉砕機で粉砕して粉末化した後、１０ｍＬ／ｇの８０％エタノールを加えて８０℃で３時間３回還流冷却熱湯抽出を行い、減圧濃縮装置で濃縮してエタノール粗抽出物を製造した。
【００３３】
前記エタノール粗抽出物は、蒸留水に溶解してブタノールを１：１の割合（ｖ／ｖ）で混合して二相間の分配を３回繰り返し行い、ブタノール抽出物を減圧、濃縮、乾燥させた。
【００３４】
前記乾燥物に対して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝７：３）を行って活性分画を再び減圧、乾燥させた後、少量のメタノールに２０μｇ／ｍＬの濃度で溶解させてミリポア（０．４５ｍｍ）で濾過してＨＰＬＣ（カラム：ＯＤＳ２０×２５０ｍｍ、１５％メタノール：ジエチルアミン緩衝溶液ｐＨ４．０．１０ｍＬ／分）で活性物質を分取した。
【００３５】
図１〜図３は本発明に係る活性物質のＨＰＬＣプロファイル、１Ｈおよび１３Ｃ
ＮＭＲスペクトルを示す。
【００３６】
前記結果より、本発明に係る活性物質は下記化学式（１）で表現される３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）であることを確認することができた。
【００３７】
【化１】
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実験例１：線維芽細胞の脂肪細胞への分化抑制効果の測定
１−１．細胞培養および脂肪細胞分化の誘導
線維芽細胞（３Ｔ３−Ｌ１細胞、ＣＬ−１７３）をＡＴＣＣ(American  Type  Culture  Collection)から購入してフロストアンドレーンのプロトコルに基づいて培養および分化を誘導した(Frost  and  Lane,1985)。
【００３８】
すなわち、線維芽細胞の増殖のためのサブマージド培地（１０％ＢＣＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンで充填されたＤＭＥＭ培地）が含まれた１００ｍｍプレートを用いて３７℃の５％ＣＯ２条件で培養した。細胞数４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの６ウェルプレートでコンフルエント状態（カルチャーディッシュ全体に細胞が充満するように数的に成長した状態）になるまで培養してコンフルエント細胞を得た。コンフルエント状態に到達した二日後、細胞を分化誘導用培地（ＭＤＩ、１μＭ  ＤＥＸ、０．５ｍＭＩＢＭＸおよび１０μｇ／ｍＬインスリンが含まれたＤＭＥＭ）で二日間培養することにより、脂肪細胞への分化を誘導した後、７日間分化誘導用培地（１０％ＢＣＳおよび５μｇ／ｍＬインスリンが充填されたＭＦＩ）で分化状態を維持させた。ＭＤＩ培地は７日間４８時間間隔で交換し、分化および維持に使用された培地の組成は下記表２の通りである。
【００３９】
また、前記実施例１で分離精製したコルジセピンは、最終濃度がそれぞれ４、１６、３２μＭとなるように培地に添加した。
【００４０】
【表２】
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ＤＭＥＭ：Dulbecco's  modified  Eagle's  medium
ＢＣＳ：Bovine  calf  serum
ＦＢＳ：Fetal  Bovine  serum
ＤＥＸ：Dexamethasone、ＩＢＭＸ：1-methyl-3-isobutylxanthine。
【００４１】
１−２．オイルレッドＯ(Oil-red  O)染色
前記１−１で得られた細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で２回洗浄し、１０％ホルマリンによって室温で１時間固定した後、蒸留水で３回洗浄した。前記細胞を濾過した０．５％オイルレッドＯを用いて１０分間染色した後、再び蒸留水で３回洗浄した。染色された細胞をオリンパス顕微鏡（ＣＫＸ−４１、東京、日本）で観察し、オイルレッドＯで染色された細胞の密度を、プロパノールで溶出して分光器（ＤＵ−７０、Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）によって５１８ｎｍで吸光度を測定することにより算出した。
【００４２】
その結果、図４に示すように、本発明に係るコルジセピンが３Ｔ３−Ｌ１細胞の脂肪細胞への分化を容量依存的に抑えることを確認することができ（図４参照）、３２μＭコルジセピンが添加された場合は３Ｔ３−Ｌ１細胞の脂肪細胞への分化をほぼ完全に抑制することを確認することができた。
【００４３】
実験例２：トリアシルグリセロールの合成抑制効果の測定
本発明に係るコルジセピンが３Ｔ３−Ｌ１細胞のトリアシルグリセロール（ＴＧ）の合成に及ぼす効果を確認するために、それぞれのグループで培養した細胞をＥＤＴＡ（０．４１６ｍｇ／ｍＫ）が含まれたトリス−ＨＣｌバッファ（ｐＨ７．５）で脱着した後、超音波粉砕器で細胞を粉砕した。ＢＣＡタンパク質定量キット(BCA  protein  assay  kit)に表記された使用説明書に基づいて標準液の検量線を作り、細胞から得た脱着物をキット試薬に一定量希釈した後、３７℃で３０分間加温し、しかる後に、１０分以内に５６２ｎｍで吸光度を測定してタンパク質を定量した。タンパク質の定量後、ＢＣＳ中性脂肪測定用キット(BCS  Triacylglycerol  kit)の使用説明書に基づいて、細胞から得た脱着物をキット酵素溶液に希釈させた後、３７℃で１０分間加温し、６０分以内に試薬ブランクを対照として波長５５０ｎｍで吸光度を測定し、計算式に従って細胞内タンパク質当たりトリアシルグリセロールの量（μｇ／ｍｇタンパク質）を測定した。
【００４４】
その結果、図５に示すように、本発明に係るコルジセピンが３Ｔ３−Ｌ１細胞のトリアシルグリセロールの合成を容量依存的に抑制することが分かった。
【００４５】
実験例３：コルジセピンの分化およびトリアシルグリセロール合成の抑制に対するアデノシンの効果
コルジセピンが３Ｔ３−Ｌ１の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を抑制する活性に対するアデノシンの効果を調べるために、コルジセピン同族体の一つであるアルデノシンをコルジセピンと同一のモル濃度（３２μＭ）で分化開始のための分化用サブマージド培地に添加した。
【００４６】
その結果、図６および図７に示すように、コルジセピンが３Ｔ３−Ｌ１の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を抑制する効果がアデノシンによって抑えられることを確認することができた。
【００４７】
上記の結果より、本発明のコルジセピンはＡＴＰ、ＮＡＤ＋、ＮＡＤＰ＋、ＣｏＡおよびＦＡＤの前駆体であるアデノシンと競争的に作用することにより、トリアシルグリセロールの合成を抑制することが分かった。
【００４８】
実験例４：ウエスタンブロット分析
脂肪細胞分化過程が、脂肪組織生成(adipogenesis)および脂肪生成(lipogenesis)に関与する必須因子であるＣ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンタンパク質などの因子によって調節されるので、前記因子に対するコルジセピンの効果を調べるために、ウエスタンブロット分析を行った。
【００４９】
３Ｔ３−Ｌ１を冷たいＰＢで３回洗っだ後、１４０００ｒｐｍで１分間マイクロ遠心分離して細胞ペレットを得た。その後、細胞ペレットを０．２ｍＬの冷たいＲＩＰＡバッファ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％ＮＰ４０、０．２５％デオキシコール酸塩）およびタンパク質阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）で懸濁した。前記懸濁液を２０ゲージの針を用いて剪断させ、３０分間氷で培養した後、４℃、１４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上澄み液を集めた後、ＢＣＡアッセイキットを用いてタンパク質濃度を測定した。細胞溶解物は、Ｌａｅｍｍｌｉ  ＳＤＳローディングバッファ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）と同量で混合された。同量の溶解タンパク質（３０ｍｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにローディングされた。電気泳動は、タンパク質がニトロセルロースメンブレイン（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に転移される前に施行させた。メンブレインは、０．０５％ツイン−２０（ＵＳＢ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＵＳＡ）および５％脱脂粉乳が含まれたＰＢＳで１時間遮断し、ＰＢＳ／ツイン−２０で３回１０分間洗浄した後、Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）および抗−レプチン（Ｓｉｇｍａ）抗体と共に培養した。次いで、ブロットをＨＲＰ(horseradish  peroxidase)とコンジュゲートされた適当な２次抗体によって室温で１時間処理した後、ＰＢＳ−Ｔで１０分間３回洗浄した。反応合成物をＥＣＬ(enhanced  chemiluminescence  system、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐｌｃ、Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ  Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、Ｅｎｇｌａｎｄ)を用いてＸ線フィルムに露出させた。
【００５０】
その結果、図８に示すように、ＤＭＥＭ培地で培養された陰性対照群におけるＣ／ＥＢＰαおよび抗−レプチンタンパク質の発現度合いは無視できる程度であり、ＰＰＡＲγの発現度合いは陽性対照群に比べて顯著に低かった。これに対し、コルジセピンは、Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγ、および抗レプチンタンパク質の発現を 顯著に抑えることを確認することができた。また、アデノシンの場合、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンタンパク質の発現にはあまり影響を及ぼさなかったが、Ｃ／ＥＢＰαの発現は阻害することを確認することができた。
【００５１】
すなわち、コルジセピンとアデノシンが併用投与した場合、陽性対照群に比べてＣ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンタンパク質の発現度合いは顯著に減少するが、Ｃ３２（コルジセピン３２μＭ単独添加）に比べてＣ／ＥＢＰαの発現度合いは増加することが分かった。
【００５２】
前述したような結果より、本発明のコルジセピンはＰＰＡＲγおよびＣ／ＥＢＰα−媒介脂肪組織生成過程によって脂肪細胞の分化を、すなわち肥満を抑制することを確認することができた。
【００５３】
以上、本発明の内容の特定部分を詳細に述べたが、当業界における通常の知識を有する者であれば、このような具体的技術は好適な実施様態に過ぎず、これらの実施様態に本発明の範囲が制限されるのではないことは明白であろう。従って、本発明の実質的な範囲は請求の範囲とそれらの等価物によって定義されるといえる。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
上述したように、本発明に係るコルジセピンは、脂肪組織生成および脂肪生成に関与するＣ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγおよび抗−レプチンタンパク質の発現を抑えることにより、線維芽細胞（３Ｔ３−Ｌ１細胞）の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を抑制することができるので、肥満を根本的に治療し予防するだけでなく、症状を緩和および改善させることに広く使用できる。
【００５５】
また、冬虫夏草は既に健康食品として承認された品目なので、この冬虫夏草から抽出された本発明のコルジセピンも毒性および副作用などの問題が全くない。從って、本発明は、人体に無害なコルジセピンを有効成分とする肥満治療および予防用薬学組成物だけでなく、健康食品などに有用に使用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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