(57)【要約】【課題】本出願は一般に炎症および癌を治療するための植物抽出物に関する。【解決手段】ＣＯＸ‐２を阻害する、炎症を治療する、または癌を治療する方法は、患者に治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を投与することからなっていてもよい。本明細書に記載の薬物は、薬剤的に受容可能なベヒクルおよびベヒクルに懸濁した治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物からなっていてもよい。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を作る方法は、抽出器と溶媒によりＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料を処理することによって成分溶液を作り出すこと、および成分溶液から少なくとも部分的に液体を除去することによって抽出物を生み出すことを含んでいてもよい。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物は種々の溶媒を使用して抽出された成分からなっていてもよい【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者に治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を投与することを含む、ＣＯＸ−２を阻害する方法。
【請求項２】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
患者に治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を投与することを含む、炎症を治療する方法。
【請求項５】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記抽出物が水性抽出物を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
患者に治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を投与することを含む、癌を治療する方法。
【請求項９】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
薬剤的に受容可能なベヒクル；および
該ベヒクルに懸濁した治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を含む薬物。
【請求項１２】
極性溶媒；
非極性溶媒；
適度な極性溶媒；および
水性溶媒からなる群の溶媒を使用して抽出された成分を含む、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物。
【請求項１３】
抽出器と溶媒によりＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料を処理することによって成分溶液を作り出すこと；および
該成分溶液から少なくとも部分的に液体を除去することによって抽出物を生み出すことを含む、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を作り出す方法。
【請求項１４】
前記溶媒が：
極性溶媒；
非極性溶媒；
適度な極性溶媒；および
水性溶媒からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記溶媒が：
メタノール；
酢酸エチル；
ヘキサン；および
水からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記抽出物を分画することにより抽出物の少なくとも１つの画分を得ることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
セミプレパラティブカラム上で前記抽出物を分画することによって抽出物の少なくとも１つの画分を得ることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記溶媒が酢酸エチルを含み、前記の少なくとも１つの画分が１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５，１６、１７、２６、２７、３１、３３、３４および３５からなる群から選択される、分で表わした溶出時間を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料を乾燥すること；
該原料をすりつぶすこと；
抽出器と溶媒により該原料を処理することによって成分溶液を作り出すこと；および
該成分溶液から少なくとも部分的に液体を除去することによって抽出物を生み出すことを含む、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を作る方法。
【請求項２０】
患者に治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を投与することを含む、ＮＦ−カッパＢ活性化を阻害する方法。
【請求項２１】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記抽出物が水性抽出物を含む、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本出願は２００７年７月６日に出願された、米国仮出願第６０／９４８，２４７号および２００８年２月１５日に出願された米国特許出願番号第１２／０３２，５２０号に対する優先権を主張し、それらの開示は参照として本明細書に援用される。
【０００２】
本出願は一般に炎症および癌を治療するための植物抽出物に関する。
【背景技術】
【０００３】
慢性関節リウマチは多数の組織を冒すが、典型的には関節に最も顕著な症状を生み出す慢性炎症性疾患である。該疾患は進行性、変性的であり、最終的には衰弱をもたらす。関節における慢性炎症は軟部組織、滑膜および軟骨の破壊、ならびに骨の関節表面のびらんを導く。該疾患は米国、ヨーロッパおよび日本で３２０万人を超える人々が罹患していると推測される。該疾患は、症例の大部分を占めると推測される婦人においてより多く認められる。
【０００４】
炎症は異物または損傷から保護するための生来の身体防御機構であるが、ある種の疾患では問題を引き起こしうる。不適切な炎症は、グルココルチコイドのコルチゾールのような伝統的なステロイド、組換えＤＮＡ技術によって生み出される治療用蛋白質、および／または非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）によって治療することができる。
【０００５】
プロスタグランジンは体内の細胞によって生み出される化学物質のファミリーであり、疼痛、炎症、および発熱の増進を含む多くの本質的な機能に貢献する。その上、いくつかのプロスタグランジンは血液凝固に必要な血小板の機能を支持し、酸による傷害作用から胃の内側を保護する。プロスタグランジンは酵素シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）によって体内の細胞内で生み出される。
【０００６】
ＣＯＸ−２は疼痛を誘発することを含むが、それに限定されない多くの機能に関連する酵素である。ＣＯＸ−２は特に炎症の原因となる体内の部分にあるが、胃にはない。ＣＯＸ−２は、理想的には限られた理由で我々の体内において活性となるが、飲食物、ストレスおよび損傷のような因子はＣＯＸ−２活性を増すことができる。ＣＯＸ−２が継続的な理由で活性である場合、結果として絶え間のない疼痛が起こる。
【０００７】
たとえ作用の特定の機序が完全に理解されていなくても、ＣＯＸ−２を阻害することが結果として癌細胞をアポトーシスさせることが見出されている。Ｊｏｈｎｓｅｎらの“Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  Ｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ，  ａｎｄ  Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎｄｕｃｅ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；６４巻，７２１０−７２１５ページ（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １５  ２００４）；およびＬａｕらの“Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  ｐ５３／ｈｄｍ２  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ”，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２６巻，１９２０−１９３１ページ（２００７）を参照されたい。
【０００８】
従って、ＣＯＸ−２を阻害する可能性がある植物抽出物は炎症、関節炎、筋肉痛、および癌を含むがそれらに限定されない種々の疾患を治療する可能性がある。
【発明の概要】
【０００９】
ＣＯＸ−２を阻害する方法、炎症を治療する方法、または癌を治療する方法は、患者に治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を投与することからなっていてもよい。本明細書に記載の薬物は、薬剤的に受容可能なベヒクル、およびベヒクルに懸濁した治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物からなっていてもよい。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を作る方法は、抽出器と溶媒によりＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料を処理することによって成分溶液を作り出すこと、および成分溶液から少なくとも部分的に液体を除去することによって抽出物を生み出すことを含んでいてもよい。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物は種々の溶媒を使用して抽出された成分を含んでいてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は４種の異なる溶媒を使用して抽出したＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物の濃度９μｇ／ｍｌによるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＯＸ−２の阻害を試験するための実験から得られた結果を説明するグラフである。図１のグラフは、ｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料に由来する成分を抽出するために使用される溶媒を示す。
【図２】図２は図１の実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図２のグラフはｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料に由来する成分を抽出するために使用される溶媒を示す。
【図３】図３は図１の実験の別の追試から得られた結果を説明するグラフである。図３のグラフはｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料に由来する成分を抽出するために使用される溶媒を示す。
【図４】図４は図１の実験のさらに別の追試から得られた結果を説明するグラフである。図４のグラフはｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料に由来する成分を抽出するために使用される溶媒を示す。
【図５】図５は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＯＸ−２の阻害を試験するための実験から得られた結果を説明するグラフである。図５のグラフはｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の濃度を示す。
【図６】図６は図５の実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図６のグラフはｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の濃度を示す。
【図７】図７は血清を含む培地で培養したＳＫ−Ｍｅｌ２８ヒトメラノーマ細胞の細胞増殖における、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物により引き起こされた減少を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図７のグラフはｙ軸に細胞増殖の減少百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の濃度を示す。
【図８】図８はＳＫ−Ｍｅｌ２８ヒトメラノーマ細胞が血清を含まない培地で培養されたことを除いて、図７の実験と同種の実験の結果を説明するグラフである。図８のグラフはｙ軸に細胞増殖の減少百分率、そしてｘ軸にＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の濃度を示す。
【図９】図９は１０μｇ／ｍｌの濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の画分によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＯＸ−２の阻害を試験するための実験の結果を説明するグラフであり、ｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率、そしてｘ軸に分で表した溶出時間によって確認される画分を示す。
【図１０Ａ】図１０ＡはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の図９の画分１〜１５に関連する、液体クロマトグラフィー−質量分析および質量検出に基づいた高速液体クロマトグラフィープロファイルである。
【図１０Ｂ】図１０ＢはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の図９の画分１〜１５に関連する、液体クロマトグラフィー−質量分析および質量検出に基づいた高速液体クロマトグラフィープロファイルである。
【図１０Ｃ】図１０ＣはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の図９の画分１〜１５に関連する、液体クロマトグラフィー−質量分析および質量検出に基づいた高速液体クロマトグラフィープロファイルである。
【図１０Ｄ】図１０ＤはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の図９の画分１〜１５に関連する、液体クロマトグラフィー−質量分析および質量検出に基づいた高速液体クロマトグラフィープロファイルである。
【図１０Ｅ】図１０ＥはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物の図９の画分１〜１５に関連する、液体クロマトグラフィー−質量分析および質量検出に基づいた高速液体クロマトグラフィープロファイルである。
【図１１】図１１は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＴＮＦに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図１１のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（酢酸エチル抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１２】図１２は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＰＭＡに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図１２のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（酢酸エチル抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１３】図１３は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＴＮＦに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図１３のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（メタノール抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１４】図１４は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＰＭＡに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図１４のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（メタノール抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１５】図１５は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＴＮＦに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図１５のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（水性抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１６】図１６は種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＰＭＡに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の結果を説明するグラフである。図１６のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（水性抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１７】図１７は図１１の実験、すなわち、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＴＮＦに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図１７のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（酢酸エチル抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１８】図１８は図１２の実験、すなわち、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＰＭＡに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図１８のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（酢酸エチル抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図１９】図１９は図１３の実験、すなわち、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＴＮＦに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図１９のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（メタノール抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図２０】図２０は図１４の実験、すなわち、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＰＭＡに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図２０のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（メタノール抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図２１】図２１は図１５の実験、すなわち、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＴＮＦに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図２１のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（水性抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【図２２】図２２は図１６の実験、すなわち、種々の濃度のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、およびＮＦ−カッパＢの既知の活性化因子、すなわちＰＭＡに暴露されたヒト胎児腎臓２９３細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための実験の追試から得られた結果を説明するグラフである。図２２のグラフは、ｘ軸に処理群、そして１００％の対照（水性抽出物を含まない）に対して標準化されたＮＦ−カッパＢ活性化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書で使用する以下の用語は示された意味を有すると理解すべきである。
項目が“ａ”または“ａｎ”によって始められる場合、１以上のその項目を意味すると理解すべきである。
【００１２】
“成分”は、単独または組み合わせにおける、いずれかの気体、液体もしくは固体分子、化学物質、高分子、化合物、または要素を意味する。
“成分溶液”は液体、固体、または気体に入っている、懸濁される、保持される、または分散される１以上の成分の混合物を意味する。
【００１３】
“〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）”は含有する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）を意味するが、それに限定されない。
“〜を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”は含有すること（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）を意味するが、それに限定されない。
【００１４】
“体調（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）”は以下のものを含むがそれらに限定されない特有の健康状態を意味する：不調であるか、または適切に機能しない器官、部分、構造もしくは身体系、病気（ｉｌｌｎｅｓｓ）、気分の悪さ（ｓｉｃｋｎｅｓｓ）、軽い病気（ａｉｌｍｅｎｔ）、疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）、身体的もしくは精神的苦悩（ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ）、身体的もしくは精神的苦痛（ｄｉｓｔｒｅｓｓ）、身体的もしくは精神的不安感（ｓｅｎｓａｔｉｏｎ）、身体的もしくは精神的な長引く苦痛（ｔｏｒｍｅｎｔ）、または身体的もしくは精神的疼痛。体調は癌または炎症を含んでいてよい。
【００１５】
“ＣＯＸ−２”はシクロオキシゲナーゼ−２を意味する。
“抽出器”は、溶媒または溶液を含むように適応できる少なくとも１つのフラスコ、原料を含むように適応できる少なくとも１つのチャンバー、ならびにチャンバーおよびフラスコと流体連通する少なくとも１つの濃縮装置を有する、装置（ａｐｐａｒａｔｕｓ）、機械（ｍａｃｈｉｎｅ）、器械（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）、道具（ｔｏｏｌ）、またはその組み合わせを意味する。抽出器は抽出プロセス中のある時点で溶媒を回収するように適応できる漏斗を有していてもよい。円筒濾紙が抽出器と一緒に使用されてもよい。フィルターが抽出器と一緒に使用されてもよい。抽出器は、抽出器の完全性を減少させずに、加熱されることに適応できてもよい。抽出器には、１８７９年に、または１８７９年ごろにＦｒａｎｚ  ｖｏｎ  Ｓｏｘｈｌｅｔによって発明されたソックスレー（Ｓｏｘｈｌｅｔ）抽出器、ならびに、限定しないがＧｅｒｈａｒｄｔ  ＧｍｂＨのＳｏｘｔｈｅｒｍ（登録商標）抽出器、およびＦＯＳＳによって作られた自動または半自動抽出器であるＳｏｘｔｅｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）のようないくつかの市販の抽出器が挙げられる。
【００１６】
“すりつぶす”は、物を粉砕する、砕く、切断する、押しつぶす、すりおろす、激しくこすり落とす、刻む、引ききる、刈り取るもしくは溶解すること、またはその組み合わせにより、比較的に、より小さな粒子または小片に減じる（ｒｅｄｕｃｅ）か、または小さくする（ｌｅｓｓｅｎ）ことを意味する。
【００１７】
“有すること”は、含むことを意味するが、それに限定されない。
“ＩＣ５０”は化合物または製剤に関して、ＣＯＸ−２の５０％阻害を生み出す化合物または製剤の濃度を意味する。
【００１８】
“阻害する”は、少なくとも部分的に酵素の活性を減少させることを意味する。
“原料”は、樹皮、幹、葉、芽、茎、根、花、花粉、枝、新芽、果実、接ぎ穂、野菜、種子、またはその組み合わせを含むがそれらに限定されない、植物のいずれかの部分を意味する。
【００１９】
“患者”はヒトまたはいずれか他の哺乳動物を意味する。
“薬剤的に受容可能なベヒクル”は、キャリア、希釈剤、アジュバント、もしくは賦形剤またはその組み合わせを意味し、成分はそれらと一緒に患者に投与される。薬剤的に受容可能なベヒクルには、以下のものが挙げられるが、それらに限定されない：ポリエチレングリコール；ワックス；ラクトース；グルコース；スクロース；ステアリン酸マグネシウム；ケイ酸誘導体；硫酸カルシウム；リン酸二カルシウム；デンプン；セルロース誘導体；ゼラチン；限定しないが、アルギン酸ナトリウム、ポリエチレングリコールおよびワックスのような天然および合成ゴム；適切なオイル；生理食塩水；限定しないが、水性ブドウ糖または水性グルコースのような糖溶液；ＤＭＳＯ；限定しないが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールのようなグリコール；限定しないが、オレイン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、タルクおよびステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤；炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、寒天、デンプン、およびキサンタンゴムを含む崩壊剤；ならびに限定しないが、ベントナイトおよびクロニン（ｋｌｏｎｉｎ）のような吸収性キャリア。
【００２０】
“溶媒”は、１以上の成分を懸濁する、取り出す（ｔａｋｅ  ｏｕｔ）、抜き取る（ｄｒａｗ  ｏｕｔ）、分ける、または引きつけて溶液を形成する能力を有する液体または気体を意味する。
【００２１】
“治療的有効量”は、患者に投与した場合、少なくとも部分的に体調の治療を達成するために十分な成分の量を意味する。治療的有効量は体調、成分の投与経路、および治療されることになる患者の年齢、体重などに依存して変化することになる。
【００２２】
“治療する”は、たとえ患者によって認識されなくても、体調に関して、少なくとも部分的に体調のいずれかの症状を減じる、和らげる、または緩和すること、体調または体調の症状の開始を遅延させること、少なくとも部分的に体調のいずれかの症状を治癒させること、もしくは少なくとも部分的に体調または体調の症状を妨げるか、阻害すること、またはその組み合わせを意味する。
【００２３】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ  Ｂｅｎｔｈ．（“Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ”）は典型的にはブラジル、コロンビア、ペルーおよびベネズエラを含むが、それらに限定されない南アメリカに産するＬｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ  Ｊｕｓｓ．ファミリーの植物である。ＣＯＸ−２を阻害するＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物は本明細書に記載の方法を使用して作られてもよい。抽出方法は、ＣＯＸ−２を少なくとも部分的に阻害するＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａの成分を抽出するための溶媒の使用を含む。本明細書に記載の抽出物を使用して、患者における炎症を治療してもよい。あるいは、本明細書に記載の抽出物を使用して患者における癌を治療してもよい。ＣＯＸ−２を阻害することが炎症を減少させ、ヒトにおける癌細胞のアポトーシスまたは増殖減少の一因となることは当業者によって十分に理解されている。
【００２４】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物は以下のように作られてもよい。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料を得て、乾燥させ、そしてすりつぶしてもよい。あるいは、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料は、小片にすりつぶし、乾燥させてもよい。該原料は限定しないが、乾燥オーブンのようなオーブンで、摂氏約４５度において、または摂氏４６〜６５度の範囲の温度において乾燥させ、原料から微量の液体の大部分を除去してもよい。乾燥した原料は、抽出プロセスの次のステップの前に摂氏約−２０度で、または摂氏およそ４度で、または摂氏−７０〜−８０度で貯蔵されてもよい。あるいは、抽出プロセスの次のステップが直ちに始まってもよい。もちろん、他の適切な乾燥温度が使用されてもよい。
【００２５】
乾燥の前または後のいずれかで、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料がすりつぶされて、より小さな粒子サイズを生み出してもよい。およそ２０〜５０ミクロンの粒子サイズを得るために、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料は、ウィレーミル（Ｗｉｌｅｙ  ｍｉｌｌ）ロータリー粉砕機のような適切なグラインダーまたは粉砕機（ｐｕｌｖｅｒｉｚｅｒ）を使用してすりつぶされてもよい。その上、フィルターを使用して分離し、およそ２０〜５０ミクロンの粒子サイズを得てもよい。その後、および抽出プロセスのステップの間に、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料は、実質的に気密のプラスチック袋または他の容器中に、摂氏−２０度で、または摂氏およそ４度で、または摂氏−７０〜−８０度で貯蔵されてもよい。
【００２６】
約１０〜１００グラムのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料は抽出器を使用する抽出に供されてもよい。異なる極性の溶媒を抽出器と一緒に使用し、成分の極性または溶解度に基づいてＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料から種々の成分を抽出し、分離してもよい。始めに、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料は、濾紙から作られた“円筒濾紙（ｔｈｉｍｂｌｅ）”の内側に置かれてもよい。円筒濾紙はいずれか適切な透過性原料から作られてもよい。円筒濾紙はＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料と一緒に抽出器に載せられてもよい。抽出器は溶媒を含むフラスコおよび濃縮装置を有していてもよい。溶媒は加熱され、そのことが溶媒の蒸発を引き起こしてもよい。熱い溶媒蒸気は濃縮装置まで移動し、そこで冷やされ、チャンバー内に落ちてＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料に滴下する。抽出器内で、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料を含むチャンバーは温かい溶媒でゆっくり満たされる。その時点で、原料に由来する成分は原料から抽出され、溶媒と一緒に成分溶液を形成する。チャンバーがほとんど満たされると、成分溶液はサイホン作用により出され、フラスコに戻って落ちる。それぞれのサイクル中に、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料の成分は溶媒に抽出され、結果として成分溶液を生じる。このサイクルがそれぞれの溶媒によって何回も反復されてもよい。この抽出プロセス中に、不純物のない温かい溶媒を使用して円筒濾紙中のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料から成分が抽出されてもよい。
【００２７】
抽出器と一緒に使用されてもよい溶媒に関しては、Ｈｅｘａｎｅ−１（“ヘキサン”）のような非極性溶媒、または限定しないが、ペンタン、シクロヘキサン、ヘプタン、トリクロロエチレン、四塩化炭素、ジイソプロピルエーテル、もしくはトルエンのような他の非極性溶媒が使用されてもよい。酢酸エチル−２（“エチル−アセテート”）のような適度な極性溶媒、または限定しないが、キシレン、メチルブチルエーテル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン、ブチルアセテート、クロロホルム、ｎ−プロパノール、またはメチルエチルケトンのような他の適度な極性溶媒が使用されてもよい。メタノール−３（“メタノール”）のような極性溶媒、または限定しないが、アセトン、エタノール、アセトニトリル、酢酸、ジメチルホルムアミド、またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のような他の極性溶媒が使用されてもよい。非極性、適度な極性、および極性溶媒による抽出は摂氏４５度、またはおよそ摂氏２６度〜およそ摂氏６０度までを含むがそれらに限定されない他の適切な温度で実施されてもよい。比較的純粋な水（“水性溶媒”）を使用して、極性、適度な極性、または非極性溶媒のいずれかを使用した後に残っているＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料をおよそ１２時間、またはおよそ４時間〜１２時間浸漬することによって成分を抽出し、固体原料を濾過して取り除き、成分溶液を生じてもよい。あるいは、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する原料は、抽出法の期間のいずれかの時点で、またはいずれかの溶媒で原料を処理することに無関係に、比較的純粋な水に浸漬させてもよい。対照として、定期的に試料を抜き取り、分析して、抽出時の暴露時間の効果を評価してもよい。
【００２８】
上記のプロセスに続いて、種々のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａの成分を含む溶媒である成分溶液は抽出器のフラスコに存在する。ロータリーエバポレーター、または真空ドライヤー、真空オーブン、窒素ガス、サーモフュエルコンセントレーター（ｔｈｅｒｍｏｆｕｅｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ）、遠心およびスプレイドライヤー、もしくは他の適切な乾燥プロセスを含むが、それらに限定されない他の適切なエバポレーターを使用して成分溶液を乾燥することにより、液体が少なくとも部分的に除去されてもよい。この乾燥プロセスが実質的に成分溶液からすべての液体を除去してもよい。得られた抽出物は、凍結されるか、または凍結乾燥されてもよい。抽出物は、少なくとも部分的に乾燥粉末の形状で貯蔵されてもよい。抽出物は、予め計量されてよいシンチレーションバイアルに移され、摂氏−２０度で、または冷蔵庫中のおよそ摂氏４度で、または摂氏−７０〜−８０度または他の適切な温度で貯蔵されてもよい。
【００２９】
先に記載の方法の結果は、ヘキサン、酢酸エチル、メタノールおよび水が使用される場合、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａの４種の抽出物であり、それぞれの抽出物は使用される溶媒によって抽出される成分を含有する。これらの抽出物は、ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、メタノール抽出物および水性抽出物（まとめて、“４種の抽出物”）と呼ばれることになる。
【実施例】
【００３０】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物およびＣＯＸ−２阻害
実験の結果は、ＣＯＸ−２を阻害するためにＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物が使用されうることを証明する。本明細書に記載の結果はＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物がＮＦ−カッパＢ活性化を減少させることを証明する。本明細書に記載の結果はまた、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物がヒトメラノーマ細胞株であるＳＫ−Ｍｅｌ２８細胞の増殖を減少させることを証明する。
【００３１】
ヒト組換えＣＯＸ−２のペルオキシダーゼ活性がアッセイされる、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物が少なくとも部分的にＣＯＸ−２を阻害するかどうかを確認する実験（“ＣＯＸ−２阻害アッセイ”）が行われた。ＣＯＸ−２阻害アッセイは４種の抽出物それぞれに対して実施された。
【００３２】
ＣＯＸ−２阻害アッセイは水浴の使用により摂氏およそ３７度に維持され、実施された。手短に述べると、反応バッファー（０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび２ｍＭ  フェノールを含有する）、ヘム、およびアラキドン酸中のヒト組換えＣＯＸ−２は、４種の抽出物それぞれと２分間インキュベーションした。酸化テトラメチル−ｐ−フェニルジアミンの出現は、比色定量的にペルオキシダーゼ活性の存在を示した。
【００３３】
ＣＯＸ−２阻害アッセイの準備において、乾燥した抽出物はメタノール、ジメチルスルホキシド（“ＤＭＳＯ”）、またはエタノールに溶かされ、その後反応バッファーで希釈された。抽出物の最終濃度は９μｇ／ｍｌであった。２分間インキュベーション後、１Ｍ塩酸を添加してＣＯＸ−２活性が停止された。公知のＣＯＸ−２阻害剤、ＤＵＰ−６９７が内部対照として使用され、予想されたように、およそ２００ｎＭのＩＣ５０でＣＯＸ−２を阻害した。ＣＯＸ−２の阻害百分率は、いずれのＣＯＸ−２阻害剤も存在しない反応物中の定量されたＣＯＸ−２活性から、抽出物を含む反応物中の定量されたＣＯＸ−２活性を引き、そして抽出物を含まない反応物中の定量されたＣＯＸ−２活性で結果を割ることによって計算された。抽出物によるＣＯＸ−２の阻害百分率は５％〜１００％の範囲であった。結果は、この濃度では、酢酸エチル抽出物がメタノール抽出物、ヘキサン抽出物および水性抽出物よりＣＯＸ−２を阻害することにおいて効果的であり得ることを証明した。異なる濃度では、メタノール抽出物、ヘキサン抽出物または水性抽出物がＣＯＸ−２を阻害することにおいてより効果的であることがありうる。ＣＯＸ−２阻害アッセイは同じ変数で少なくとも４回実施された。先に記載のＣＯＸ−２阻害アッセイの結果は図１〜４に示される。ＣＯＸ−２の相対阻害はＩＣ５０値の産出に関与しうる。
【００３４】
酢酸エチル抽出物は、ＣＯＸ−２阻害アッセイにおいて、１．５６μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度で使用された。２つの同一の実験から得られた結果は図５および図６に表される。酢酸エチル抽出物は図５では１０．６μｇ／ｍｌ、図６では３４．８μｇ／ｍｌのＩＣ５０を示した。ＣＯＸ−２のより強い阻害が酢酸エチル抽出物のより高い濃度と相関してもよい。
【００３５】
ＣＯＸ−２の阻害の原因となる酢酸エチル抽出物の成分を確認するために、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する酢酸エチル抽出物はセミプレパラティブカラムで分画された。酢酸エチル抽出物は、ＣＴＣ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ（登録商標）  ＰＡＬ（登録商標）インジェクター（液体クロマトグラフィー自動インジェクター）を使用して、インジェクション容量５０μｌで、Ａｇｉｌｅｎｔ（登録商標）  Ｚｏｒｂａｘ（登録商標）  ＸＤＢ  Ｃ１８  ２１．２ｘ１００ｍｍカラムにロードされた。酢酸エチル抽出物はＳｈｉｍａｄｚｕ（登録商標）  ＬＣ−６（登録商標）バイナリー高圧システムを使用して溶出された。第１の移動相は０．０５％トリフルオロ酢酸（“ＴＦＡ”）を含む水であり、第２の移動相は０．０５％ＴＦＡを含むメタノールであった。３０μｍの内部直径（“ｉｄ”）、長さ１５ｃｍのリストリクションキャピラリー、およびおよそ５００：１のスプリット比を持つ２つのＶａｌｃｏ  Ｙフィッティングを有するポストカラムスプリットが利用された。フラクションコレクターはＡｄｖａｎｔｅｃであり、０．８分および０．２０分のコレクションステップで開始する分画に基づいて時間が設定された。もちろん、同じか、または同種の分画を達成するために、他の変数を使用してもよい。異なる時期に溶出する画分が集められ、窒素下で乾燥させるか、または凍結乾燥させ、結果として比較的純粋な画分を生じてもよい。乾燥した画分は、当該技術分野で公知の方法に従って、炎症または癌に関連する疾患を含むがそれらに限定されない、ＣＯＸ−２を阻害することによって治療されうるいずれかの疾患、または病気（ａｉｌｍｅｎｔ）を治療するための薬物に含まれてもよい。
【００３６】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物に由来する画分によるＣＯＸ−２の阻害はＣＯＸ−２阻害アッセイによって検討された。ＣＯＸ−２阻害アッセイのための乾燥した画分を調製するために、乾燥した画分は１００％ＤＭＳＯと水の中に懸濁し、０．５％ＤＭＳＯの濃度とした。０．５％ＤＭＳＯだけを含む対照がＣＯＸ−２阻害アッセイに含まれてもよい。画分は限定しないが、１．５６〜１００μｇ／ｍｌのような種々の濃度で試験された。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物に由来する画分を１０μｇ／ｍｌの濃度で使用するＣＯＸ−２阻害アッセイの結果は図９に示される。図９は、ｘ軸に分で表した溶出時間による画分番号（以後分で表した溶出時間はそれぞれの画分の確認番号である）、そしてｙ軸にヒト組換えＣＯＸ−２の阻害百分率を示す。図９に見ることができるように、それぞれ８分、９分、１０分、１１分および１２分で溶出される画分８、９、１０、１１および１２は最も強いＣＯＸ−２阻害を示したが、画分１、６、７、１３、１４、１５、３３および３４も顕著なＣＯＸ−２阻害を示した。画分５、１６、１７、２６、２７、３１および３５も若干の阻害を示した。
【００３７】
最も強いＣＯＸ−２阻害を示した画分、特に画分１〜１５は、ハイパーシル（ｈｙｐｅｒｓｉｌ）Ｃ１８逆相カラム（１００ｘ２．１ｍｍ、５ｍｍ）で、アナリティカル液体クロマトグラフィー−マススペクトロメトリー（“ＬＣ−ＭＳ”）を使用して構造をプロファイリングされ、０．６ｍｌ／分の流速で水−アセトニトリルグラジエントにより溶出された。図１０Ａ〜１０Ｅは画分１〜１５に由来するマススペクトルを示す。図１０Ａ〜１０Ｅに示すように、画分１〜１５に存在しうる成分はオレアナンである。
【００３８】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物は本明細書に記載の方法を使用して作り出されてもよい。酢酸エチルまたは、限定しないが、極性、非極性、適度な極性もしくは水性溶媒のようないくつかの他の溶媒を使用して、少なくとも部分的にＣＯＸ−２を阻害するＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ成分を抽出してもよい。ＣＯＸ−２は一般に炎症と呼ばれる免疫反応の一因となる酵素であるため、ＣＯＸ−２を阻害することが結果として炎症を減少させることは当業者によって理解されている。ＣＯＸ−２を阻害することが結果として癌細胞をアポトーシスさせるか、または癌細胞の増殖を減少させることも当業者によって理解されている。そのようなものとして、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物が薬物に包含されてもよく、そして癌細胞の増殖を減少させるか、または癌細胞のアポトーシスを誘導するかのいずれかにより癌を治療することを期待されることになる。そのような抽出物はまた、濃縮されるかまたは乾燥され、そして薬物に包含されてもよい。あるいは、そのような抽出物はＣＯＸ−２を阻害するある種の画分をさらに分離するために分画されてもよい。たとえば、そして限定しないが、１、２、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３３および３４の画分が、任意の組み合わせで、または別々に薬物に包含され、少なくとも部分的に患者のＣＯＸ−２を阻害してもよい。
【００３９】
ＮＦ−カッパＢ活性化ならびにＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａの水性抽出物、メタノール抽出物、および酢酸エチル抽出物
ＮＦ−カッパＢアッセイは、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、およびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物がヒト胎児腎臓２９３細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで炎症反応を減少させてもよいことを証明した。ヒト胎児腎臓２９３細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで炎症反応を試験するための、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａのヘキサン抽出物によるＮＦ−カッパＢアッセイの結果は結論がでなかった。ＮＦ−カッパＢは転写因子である。ＮＦ−カッパＢ活性化／発現は多くの初期の炎症反応の１種であり、炎症の指標であることは当業者によって理解されている。ＮＦ−カッパＢ活性化の阻害は対応する炎症の阻害に関与しうる。従って、ＮＦ−カッパＢ活性化を阻害する抽出物が患者において炎症を治療しうる。図１１〜２２は、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、およびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物のＮＦ−カッパＢ活性化に対する効果を試験するためのＮＦ−カッパＢレポート遺伝子アッセイの結果を示す。ヒト胎児腎臓２９３細胞はホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流のＮＦ−カッパＢリスポンスエレメントを含むＤＮＡプラスミドによりトランスフェクションされた。ＮＦ−カッパＢが活性化されると、ルシフェラーゼ発現が増大する。ルシフェラーゼ発現は、ルシフェラーゼが光りを生み出す酵素反応によって測定される。光の程度の大きいことがＮＦ−カッパＢ活性化増大に対応する。
【００４０】
ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）およびＰＭＡ（ホルボールエステル）は共に、ＮＦ−カッパＢの公知の強力な活性化因子である。ＮＦ−カッパＢアッセイのために、ヒト胎児腎臓２９３細胞は、一晩チャコール処理培地で培養された。ヒト胎児腎臓２９３細胞は別個にＤＭＳＯだけおよび濃度２０μｇ／ｍｌのＰＭＡに、そして第２の実験ではＤＭＳＯだけおよび濃度５０μｇ／ｍｌのＴＮＦに暴露され、上述の処理群のそれぞれは、２０μｇ／ｍｌ、２．０μｇ／ｍｌ、または０．２μｇ／ｍｌの用量範囲の、ＤＭＳＯに溶かしたＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物、またはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を与えられ、一晩インキュベートされた。細胞は採取され、ルシフェラーゼアッセイのために翌日溶解された。それぞれの処理群におけるＮＦ−カッパＢの活性化百分率が観察された。ＮＦ−カッパＢの活性化はＤＭＳＯおよび公知の活性化因子（ＴＮＦまたはＰＭＡ）を含有する対照を１００％として標準化された。
【００４１】
図１１および１７は、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌおよびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための２つの別々の実験の結果を説明するグラフである。図１１で説明するように、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌ処理群では、２０μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが７４％活性化され、２μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが６７％活性化され、そして０．２μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが８７％活性化された。図１７で説明するように、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌ処理群では、２０μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが７３％活性化され、２μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが６２％活性化され、そして０．２μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが５７％活性化された。図１２および１８はＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌおよびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための２つの別々の実験の結果を説明するグラフである。図１２に示すように、ＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌ処理群では、ＮＦ−カッパＢ活性化は２０μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞ではおよそ１１３％、２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞ではおよそ７４％、そして０．２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞ではおよそ９２％であった。図１８に示すように、ＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌ処理群では、ＮＦ−カッパＢ活性化は２０μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞ではおよそ７８％、２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞ではおよそ８０％、そして０．２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物を投与された細胞ではおよそ７９％であった。
【００４２】
図１３および１９は、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌおよびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための２つの別々の実験の結果を説明するグラフである。図１３で説明するように、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌ処理群では、２０μｇ／ｍｌのメタノール抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが６７％活性化され、２μｇ／ｍｌのメタノール抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが８０％活性化され、そして０．２μｇ／ｍｌのメタノール抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが８９％活性化された。図１９で説明するように、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌ処理群では、２０μｇ／ｍｌのメタノール抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが８５％活性化され、２μｇ／ｍｌのメタノール抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが７０％活性化され、そして０．２μｇ／ｍｌのメタノール抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが５６％活性化された。図１４および２０はＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌおよびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための２つの別々の実験の結果を説明するグラフである。図１４に示すように、ＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌ処理群では、ＮＦ−カッパＢ活性化は２０μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞ではおよそ７７％、２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞ではおよそ９３％、そして０．２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞ではおよそ７２％であった。図２０に示すように、ＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌ処理群では、ＮＦ−カッパＢ活性化は２０μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞ではおよそ４０％、２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞ではおよそ５７％、そして０．２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａメタノール抽出物を投与された細胞ではおよそ５０％であった。
【００４３】
図１５および２１は、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌおよびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための２つの別々の実験の結果を説明するグラフである。図１５で説明するように、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌ処理群では、２０μｇ／ｍｌの水性抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが７７％活性化され、２μｇ／ｍｌの水性抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが７１％活性化され、そして０．２μｇ／ｍｌの水性抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが１１２％活性化された。図２１で説明するように、ＴＮＦ５０ｎｇ／ｍｌ処理群では、２０μｇ／ｍｌの水性抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが７０％活性化され、２μｇ／ｍｌの水性抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが５０％活性化され、そして０．２μｇ／ｍｌの水性抽出物を投与された細胞はＮＦ−カッパＢが８０％活性化された。図１６および２２はＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌおよびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞におけるＮＦ−カッパＢ活性化を試験するための２つの別々の実験の結果を説明するグラフである。図１６に示すように、ＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌ処理群では、ＮＦ−カッパＢ活性化は２０μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞ではおよそ５９％、２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞ではおよそ３３％、そして０．２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞ではおよそ５８％であった。図２２に示すように、ＰＭＡ２０ｎｇ／ｍｌ処理群では、ＮＦ−カッパＢ活性化は２０μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞ではおよそ７６％、２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞ではおよそ４８％、そして０．２μｇ／ｍｌのＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ水性抽出物を投与された細胞ではおよそ６０％であった。
【００４４】
癌細胞の増殖およびＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物
ヒト癌細胞の増殖に対する酢酸エチル抽出物の効果を確定するために、付加的なアッセイが実施された。ヒトメラノーマ細胞株、ＳＫ−Ｍｅｌ２８細胞が２種の独立した実験で使用された。酢酸エチル抽出物は、１．６μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度でＳＫ−Ｍｅｌ２８細胞に投与された。通常種々の成長因子を含有する血清はＳＫ−Ｍｅｌ２８細胞増殖の阻害を妨害する可能性があるため、酢酸エチル抽出物はヒト成長血清の存在下、または非存在下で培養された。細胞増殖はＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）により測定され、該アッセイは、テトラゾリウム化合物［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム，分子内塩、または“ＭＴＳ”］を電子カップリング剤（フェナジンエトスルフェートまたは“ＰＥＳ”）と組み合わせて使用し、細胞増殖を示す比色変化を生み出す。アッセイは４９０ｎｍにおける吸光度を記録することによって、酢酸エチル抽出物によるＳＫ−Ｍｅｌ２８の増殖の減少を測定した。アッセイの結果は図７および８に示す。図７は、１００μｇ／ｍｌの酢酸エチル抽出物が、血清を補足した成長培地におけるヒトメラノーマ細胞株ＳＫ−Ｍｅｌ２８の増殖の約２６％減少を生み出したことを示す。酢酸エチル抽出物によるＳＫ−Ｍｅｌ２８の増殖の減少はまた、血清を含まない成長培地におけるＳＫ−Ｍｅｌ２８細胞においてアッセイされ、その結果は図８に示す。図８に示すように、８９μｇ／ｍｌのＩＣ５０を有する酢酸エチル抽出物によるＳＫ−Ｍｅｌ２８細胞増殖の顕著な減少が観察された。また図７〜８は、酢酸エチル抽出物が用量依存的様式でＳＫ−Ｍｅｌ２８の増殖を減少させたことを示す結果を説明する。
【００４５】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を含む薬物
治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を含む薬物は、炎症を治療するか、または癌を治療するために患者に投与されてもよいことが期待される。Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を含む薬物は調製され、製剤されて、当業者に公知の方法に手順によって患者に投与されてもよい。
【００４６】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を含む薬物は、化合物を調合し（ｂｌｅｎｄ）、混ぜ合わせるための当業者に公知の慣用の手順により調製されてもよい。たとえば、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物、または画分１、２、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、３３および３４のようなＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ酢酸エチル抽出物に由来する画分の単独または組み合わせが、薬剤的に受容可能なベヒクルの使用により治療的有効量で溶液剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、懸濁剤、粉末剤、カプセル剤、錠剤、または液剤（ｌｉｑｕｉｄ）に製剤され、抽出物の経口または腸内（ｅｎｔｅｒａｌ）投与を容易にして、患者を治療してもよい。あるいは、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物、またはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物の特有の画分が、薬剤的に受容可能なベヒクルに含有されて静脈内、皮内、筋肉内、および皮下投与を含む非経口投与を容易にしてもよい。代わりとなる態様では、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａに由来する抽出物、またはＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物に由来する画分の単独、もしくは組み合わせが、薬剤的に受容可能なベヒクルを使用して、局所適用、または経皮適用のための溶液剤、クリーム剤、またはゲル剤に包含されてもよい。
【００４７】
前述の特定の詳細は本発明のある種の態様を記載するが、当業者は、添付の特許請求の範囲に定義された本発明の意図および範囲から逸脱せずに、そして均等物の原則を考慮して、本発明の詳細において種々の変更が行われてもよいことを認識するであろう。従って、本発明が、本明細書に示され、そして記載された特定の詳細に限定されないことは理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図９】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【手続補正書】
【提出日】平成22年3月26日(2010.3.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を有効成分として含む、ＣＯＸ−２を阻害するための医薬。
【請求項２】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を有効成分として含む、炎症を治療するための医薬。
【請求項５】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項４に記載の医薬。
【請求項７】
前記抽出物が水性抽出物を含む、請求項４に記載の医薬。
【請求項８】
治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を有効成分として含む、癌を治療するための医薬。
【請求項９】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項８に記載の医薬。
【請求項１１】
薬剤的に受容可能なベヒクル；および
該ベヒクルに懸濁した治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を含む医薬。
【請求項１２】
極性溶媒；
非極性溶媒；
適度な極性溶媒；および
水性溶媒からなる群の溶媒を使用して抽出された成分を含む、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物。
【請求項１３】
抽出器と溶媒によりＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料を処理することによって成分溶液を作り出すこと；および
該成分溶液から少なくとも部分的に液体を除去することによって抽出物を生み出すことを含む、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を作り出す方法。
【請求項１４】
前記溶媒が：
極性溶媒；
非極性溶媒；
適度な極性溶媒；および
水性溶媒からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記溶媒が：
メタノール；
酢酸エチル；
ヘキサン；および
水からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記抽出物を分画することにより抽出物の少なくとも１つの画分を得ることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
セミプレパラティブカラム上で前記抽出物を分画することによって抽出物の少なくとも１つの画分を得ることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記溶媒が酢酸エチルを含み、前記の少なくとも１つの画分が１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５，１６、１７、２６、２７、３１、３３、３４および３５からなる群から選択される、分で表わした溶出時間を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ原料を乾燥すること；
該原料をすりつぶすこと；
抽出器と溶媒により該原料を処理することによって成分溶液を作り出すこと；および
該成分溶液から少なくとも部分的に液体を除去することによって抽出物を生み出すことを含む、Ｃａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を作る方法。
【請求項２０】
治療的有効量のＣａｍｐｓｉａｎｄｒａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ抽出物を有効成分として含む、ＮＦ−カッパＢ活性化を阻害するための医薬。
【請求項２１】
前記抽出物がメタノール抽出物を含む、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２２】
前記抽出物が酢酸エチル抽出物を含む、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２３】
前記抽出物が水性抽出物を含む、請求項２０に記載の医薬。
【国際調査報告】
2010532789.tif 000029