(57)【要約】  特定の人における少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌消化管系成分を測定する方法、及び少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌消化管系成分の濃度、及び／又は少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌消化管系成分の濃度と少なくとも１種の粘膜放出された炎症性放出媒介物の濃度の割合に基づき、特定の人の障害を診断する方法が提供される。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
特定の人における少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定する方法において、該人からの少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定することを含み、ここで、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分は粘膜から放出される、上記の方法。
【請求項２】
測定物が結腸、直腸又はそれらの組み合わせの管腔放出から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記神経内分泌消化管系成分の測定が、粘膜パッチ技術、結腸及び／又は直腸の潅流、結腸及び／又は直腸の透析、糞便内容物の分析、又はこれらに組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記神経内分泌消化管系成分が、神経ホルモン、神経ペプチド、内因性オピオイド、神経伝達物質又はそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
特定の人の胃腸管障害を診断する方法において、該人の少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度を計算し、そして該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度に基づき該人の胃腸管障害を診断することを含み、ここで、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分は粘膜から放出される、上記の方法。
【請求項６】
上記胃腸管障害が、炎症性胃腸管障害、機能性胃腸管障害、又は胃腸管障害の組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
上記炎症性胃腸管障害が、潰瘍性大腸炎、クローン病又はそれらの組み合わせを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
上記機能性胃腸管障害が、過敏性腸疾患である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
測定物が結腸、直腸又はそれらの組み合わせの管腔放出から得られる、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
上記神経内分泌消化管系成分の測定が、粘膜パッチ技術、結腸及び／又は直腸の潅流、結腸及び／又は直腸の透析、糞便内容物の分析、又はこれらの組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
上記神経内分泌消化管系成分が、神経ホルモン、神経ペプチド、内因性オピオイド、神経伝達物質又はそれらの組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
上記神経ホルモンが、クロモグラニンＡ、クロモグラニンＢ又はこれらの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
上記神経ペプチドが、ＣＲＨ、物質Ｐ、ＰＹＹ、ＶＩＰ又はこれらの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
上記神経伝達物質が、セロトニン、アドレナリン、ノンアドレナリン、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
特定の人の胃腸管障害を診断する方法において、該人の少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分及び少なくとも１種の放出炎症性媒介物を測定し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度及び該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度を計算し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度との割合を決定し、そして該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度の該割合に基づき、該人の胃腸管障害を診断することを含み、ここで、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分及び／又は該少なくとも１種の放出炎症性媒介物は、粘膜から放出される、上記の方法。
【請求項１６】
上記神経内分泌消化管系成分の測定が、粘膜パッチ技術、結腸及び／又は直腸の潅流、結腸及び／又は直腸の透析、糞便内容物の分析、又はこれらの組み合わせを含み、そして上記放出炎症性媒介物の測定が、粘膜パッチ技術、結腸及び／又は直腸の潅流、結腸及び／又は直腸の透析、糞便内容物の分析、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
上記神経内分泌消化管系成分が、神経ホルモン、神経ペプチド、内因性オピオイド、神経伝達物質又はそれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
上記神経ホルモンが、クロモグラニンＡ、クロモグラニンＢ又はこれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
上記神経ペプチドが、ＣＲＨ、物質Ｐ、ＰＹＹ、ＶＩＰ又はこれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
上記神経伝達物質が、セロトニン、アドレナリン、ノンアドレナリン、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
上記炎症性媒介物が、前炎症性(proinflammatory)サイトカイン；マクロファージ、顆粒球又は好塩基球／肥満細胞からの顆粒構成物；又はそれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌消化管系(neuroendocrine gut system)成分を測定する方法に関する。本発明はまた、特定の人(individual)の胃腸障害を、少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌消化管系成分の濃度及び／又は少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌消化管系成分の濃度と少なくとも１種の粘膜放出された炎症性放出媒介物の濃度との比に基づき、診断する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）は、腹部の痛みと不快の存在、及び信頼できる生物学的マーカーの存在しない用便習慣（下痢及び／又は便秘）の変化により特徴付けられる非常に普及した機能障害である。ＩＢＳは、内臓機能の無調節、求心性神経知覚、及び感情的因子及びストレスへの連想を有する多種多様の症状を表す。この症候群は、脳−消化管軸の障害と見られていたが、最近は、腸管感染症及び胃腸炎症の役割もまた提案された。潰瘍性大腸炎（ＵＣ）はＩＢＳの兆候を共有するが、ＩＢＳと対照的に、大腸の明白な炎症性粘膜疾病である。免疫系、神経系及び神経内分泌系の間に分子漏話（crosstalk)が存在するという考察は、消化管を含む種々の器官への炎症性攻撃の病態生理学の展望を広げた。
【０００３】
神経系及び免疫系は、小分子−漏話及び神経伝達物質／ペプチドに基づく共通の言語を有する。腸管神経系（ＥＮＳ）はおおよそ独立した系であり、その反射神経は脳の影響から独立して作用し得る。しかしながら、どの神経も消化管上皮に入らず、従って管腔(luminal)刺激は、クローム親和性（ＥＣ）細胞によって放出される神経伝達物質／ペプチドにより検出されそして神経に伝達されなければならない。ＥＣ細胞は巨大な量の種々の神経ペプチドを貯蔵し、そして事実、体内の最も大きい内分泌器官である。神経伝達物質／ペプチドは、顆粒特異性、水溶性の酸性タンパク質の一族であるクロモグラニンと共に貯蔵される。この一族は５つの部員を含み、それらの中で、クロモグラニンＡ（ＣＧＡ）及びクロモグラニンＢ（ＣＧＢ）は、内分泌腺（エンドクリン）細胞及びニューロンの分泌細胞小器官に局在する最も頻度の高いグラーニンである。細胞内ＣＧＡ及びＣＧＢは、分泌過程で部分的にペプチド、ホルモン又は神経ペプチドをまとめるのにヘルパータンパク質として作用することにより中心的役割を果たし得る。
【０００４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）のような機能性腸障害における神経伝達物質／ペプチドの関与を解明する試みで、臨床的研究は血漿測定、免疫組織化学又は粘膜生体中の神経ペプチドの含量の定量に基づいていた。しかしながら、得られた結果の多くは矛盾していた。ＵＣ及びＩＢＤにおける神経ペプチドの関与を評価するために容易に接近できる方法がないことが、神経ペプチドがこれらの症状に果たす役割の臨床的考察を妨げた。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、特定の人における少なくとも１種の神経内分泌（ニューロエンドクリン）消化管系成分を測定する方法を提供する。該方法は、特定の人からの少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定することを含む。該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分は粘膜から放出される。
【０００６】
本発明はまた、特定の人の胃腸管障害を診断する方法を提供する。該方法は、特定の人の少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度を計算し、そして該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度に基づき該人の胃腸管障害を診断することを含む。該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分は粘膜から放出される。
【０００７】
本発明は更に、特定の人の胃腸管障害を診断する方法を提供する。該方法は、特定の人の少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分及び少なくとも１種の放出炎症性媒介物を測定し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度及び該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度を計算し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度との割合を決定し、そして該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度の該割合に基づき、該人の胃腸管障害を診断することを含む。該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分及び／又は該少なくとも１種の放出炎症性媒介物は、粘膜から放出される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
下記の詳細な記述は図面を参照してより十分に理解されるであろう。
【０００９】
【図１Ａ】活性／不活性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する特定の人、下痢が優勢な又は交互型（ＩＢＳ）又は便秘（ＩＢＳｃ）の過敏性腸疾患を有する特定の人、及び健康な特定の人におけるＣＧＢの直腸管腔放出を示す。特定の人の間の統計的比較（マンーウイットネーＵテスト）が示される：＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１Ｂ】活性／不活性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する特定の人、下痢が優勢な又は交互型（ＩＢＳ）又は便秘（ＩＢＳｃ）の過敏性腸疾患を有する特定の人、及び健康な特定の人におけるＣＧＡの直腸管腔放出を示す。特定の人の間の統計的比較（マンーウイットネーＵテスト）が示される：＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００１０】
【図２】活性／不活性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する特定の人、下痢が優勢な又は交互型（ＩＢＳ）又は便秘（ＩＢＳｃ）の過敏性腸疾患を有する特定の人、及び健康な特定の人におけるダイノルフィンの直腸粘膜放出を示す。マンーウイットネーＵテストを使用した特定の人の間の統計的比較が記号：＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１で示される。
【図３】活性／不活性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する特定の人、下痢が優勢な又は交互型（ＩＢＳ）又は便秘（ＩＢＳｃ）の過敏性腸疾患を有する特定の人、及び健康な特定の人におけるエンドモルフィンの直腸粘膜放出を示す。マンーウイットネーＵテストを使用した特定の人の間の統計的比較が記号：＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１で示される。
【図４】活性／不活性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する特定の人、下痢が優勢な又は交互型（ＩＢＳ）又は便秘（ＩＢＳｃ）の過敏性腸疾患を有する特定の人、及び健康な特定の人におけるベータ−エンドルフィンの直腸粘膜放出を示す。マンーウイットネーＵテストを使用した特定の人の間の統計的比較が記号：＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１で示される。
【図５】活性／不活性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する特定の人、下痢が優勢な又は交互型（ＩＢＳ）又は便秘（ＩＢＳｃ）の過敏性腸疾患を有する特定の人、及び健康な特定の人におけるmet（メット）-エンケファリンの直腸粘膜放出を示す。マンーウイットネーＵテストを使用した特定の人の間の統計的比較が記号：＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１で示される。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明者は、神経内分泌消化管系成分は結腸及び／又は直腸管腔に放出されそして特定の人が胃腸管障害を有すると増加した濃度で出現することを決定した。従って、本発明者は特定の人における少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定する方法を決定した。一態様において、該方法は特定の人からの少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定することを含む。該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分は粘膜放出される。
【００１２】
本発明者はまた、特定の人の胃腸管障害を診断する方法を決定した。一態様において、該方法は、特定の人の少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分を測定し、該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度を計算し、そして該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分の濃度に基づき特定の人の胃腸管障害を診断することを含む。該少なくとも１種の神経内分泌消化管系成分は粘膜から放出される。
【００１３】
当業者は、本願方法により診断され得る胃腸管障害の種々のタイプを理解するであろう。本願方法により診断され得る胃腸管障害は、炎症性胃腸管障害、機能性胃腸管障害、又は胃腸管障害の組み合わせである。炎症性胃腸管障害の例には、潰瘍性大腸炎、クローン病又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。機能性胃腸管障害の例には、過敏性腸疾患が含まれるが、これに限定されない。
【００１４】
当業者はまた、測定し得る種々の粘膜放出された神経内分泌消化管系成分を理解するであろう。それらのいずれも本願で測定し得る。粘膜放出された神経内分泌消化管系成分の例には、神経ホルモン、神経ペプチド、内因性オピオイド、神経伝達物質又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。神経ホルモンの例には、クロモグラニンＡ、クロモグラニンＢ又はこれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。神経ペプチドの例には、ＣＲＨ、物質Ｐ，ＰＹＹ，ＶＩＰ又はこれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。神経伝達物質の例には、セロトニン、アドレナリン、ノンアドレナリン、又はこれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００１５】
当業者はまた、特定の人における粘膜放出された神経内分泌消化管系成分を測定するために使用し得る方法を理解するであろう。それらのいずれも本願で使用し得る。かかる測定技術には、粘膜パッチ技術、結腸及び／又は直腸の潅流、結腸及び／又は直腸の透析、糞便内容物の分析、又はこれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。Kristjansson外、"Clinical and subclinical intestinal inflammation assessed by
the mucosal patch technique;studies of mucosal neutrophil and eosinophil
activation in inflammatory bowel diseases and irritable bowel syndrome."Gut 2004;53(12):1806-12に記載されたような粘膜パッチ技術は、バルーンに取り付けられ、それにより特定の人の直腸及び／又は結腸粘膜に押し込められた濾紙は、粘膜から管腔に放出された神経内分泌腺消化管系成分を吸収する、という原理に基づく。吸収された該神経内分泌腺消化管系成分を次に測定し、それらの濃度を決定することができる。該吸収された神経内分泌腺消化管系成分は次に規定量の抽出流体により濾紙（パッチ）から抽出しそして測定して、それらの濃度を決定する。粘膜放出された炎症性媒介物は、同じ方法で計算される。
【００１６】
本発明者は、特定の人の胃腸管障害が、少なくとも１種の粘膜放出された神経内分泌腺消化管系成分の濃度に基づき診断できることを決定した。一態様において、粘膜放出されたＣＲＨに２μｇ／Ｌを越える濃度の増加があると、該人は胃腸管障害があると診断されるであろう。
【００１７】
本発明者は、ある種の胃腸管障害は炎症性活性粘膜疾患であることを決定した。従って、更なる態様において、本発明者は、特定の人の胃腸管障害を診断する方法であって、下記を含む方法を決定した：該人の少なくとも１種の神経内分泌腺消化管系成分及び少なくとも１種の放出炎症性媒介物を測定し、該少なくとも１種の神経内分泌腺消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度とを計算し、該少なくとも１種の神経内分泌腺消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度の割合を決定し、そして該少なくとも１種の神経内分泌腺消化管系成分の濃度と該少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度の該割合に基づき、該人の胃腸管障害を診断する。該少なくとも１種の神経内分泌腺消化管系成分及び／又は該少なくとも１種の放出炎症性媒介物は、粘膜から放出される。
【００１８】
当業者は、測定し得る種々の粘膜放出された炎症性媒介物のいずれも本願で使用し得ることを理解するであろう。炎症性媒介物の例には、前炎症性(proinflammatory)サイトカイン、及びマクロファージ、顆粒球又は好塩基球／肥満細胞からの顆粒構成物又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００１９】
本発明者は、特定の人の胃腸管障害が、少なくとも１種の神経内分泌腺消化管系成分の濃度及び少なくとも１種の放出炎症性媒介物の濃度の割合に基づき診断できることを決定した。一態様において、ＣＲＨ(ng/L)：ＩＬ−６の割合値が約２００より小さいと、特定の人は潰瘍性大腸炎があると診断される。更なる態様において、ＣＲＨ(ng/L)：ＩＬＨ−６の割合値が約２５０より大きいと、特定の人は、下痢優位性又は交互型のＩＢＳがあると診断される。更なる態様において、ＣｇＡ(nmol/L)：ＭＰＯ(μg/L)の割合値が約１５より小さいと、特定の人は潰瘍性大腸炎があると診断される。別の態様において、ＣｇＡ(nmol/L)：ＭＰＯ(μg/L)の割合値が約２０より大きいと、特定の人は、下痢優位性又は交互型のＩＢＳがあると診断される。
【実施例】
【００２０】
実施例１−過敏性腸症候群及び潰瘍性大腸炎の生物学的マーカーとしてのクロモグラニン及び神経ペプチドの管腔放出
ＵＣ又は下痢が優勢なＩＢＳを有する特定の人は、通常、内分泌腺及びニューロン細胞のマーカーとして見なされるクロモグラニンＡ及びＢ（ＣｇＡ及びＣｇＢ）の明白な管腔内放出があることが確定された。この観察は本発明者に、副腎皮質刺激ホルモン放出性ホルモン（ＣＲＨ）及び物質Ｐ、即ち、ＵＣ及びＩＢＳの病理学で検討した神経ペプチド、の可能な同時放出をも研究するように導いた。最終的に、クロモグラニン発見は粘膜炎症性活性に関係する。
【００２１】
対象及び方法
ＵＣ（ｎ＝２５）、ＩＢＳ（ｎ＝１３）を有する特定の人、及び健康な特定の人（ｎ＝１５）に、粘膜パッチ技術を使用して直腸粘膜の検査を行った。該パッチ技術で、粘膜に押し込んだ濾紙は、粘膜から消化管腔に放出された媒介物を吸収する。クロモグラニンＡ及びＢ（ＣｇＡ及びＣｇＢ）、副腎皮質刺激ホルモン放出性ホルモン（ＣＲＨ）及び物質Ｐ、並びに前炎症性サイトカインを測定する。
【００２２】
対象
健康な特定の人（ｎ＝１７，Ｍ／Ｆ＝１２／５，平均年齢３０歳、範囲１９−５８歳）、及び機能性及び炎症性腸疾患を有する特定の人を、ウプサラの大学病院の胃腸病学の部門で研究する。グループは下記を含む：Ａ．下痢優位性又は交互型（ｎ＝１３，Ｍ／Ｆ＝１１／２，平均年齢３９歳、範囲２２−６１歳）及び便秘型（ｎ＝８，Ｍ／Ｆ＝７／１，平均年齢５２歳、範囲３３−６８歳）の過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有する人。Ｂ．潰瘍性大腸炎（ＵＣ；ｎ＝２７，Ｍ／Ｆ＝１８／７，平均年齢４４．７歳、範囲１９−７９歳）を有する人。Ｃ．セリアリック病（ｎ＝１０，Ｍ／Ｆ＝５／５，平均年齢５１歳、範囲２５−６８歳）を有する人、及びコラーゲン大腸炎（ｎ＝９，Ｍ／Ｆ＝０／９，平均年齢５０歳、範囲３３−８０歳）を有する人。ＩＢＳの人はＲＯＭＥ  ＩＩ基準を満たした。ＵＣの診断は、臨床的及び内視鏡的基準、並びに消化管のＸ−線に基づく。コラーゲン大腸炎の診断は、臨床的兆候及び結腸生検に基づく。セリアリック病を有する特定の人は、グルテンなしの食餌の後の十二指腸の回帰又は正常化を示す十二指腸生検に基づき診断される。特定の人及び健常者を、非刺激性高浸透圧性ソルビトール直腸浣腸を用いる通常の繊維Ｓ状結腸検査用に準備する（Klyx;Ferring,Malmo,Sweden)。
【００２３】
粘膜パッチ技術
特定の人及び健常者を、粘膜パッチ技術により検査する。該技術は、膨張性バルーンに取り付けられた濾紙を直腸粘膜に押し込める、という原理に基づく。該パッチは粘膜から放出された媒介物を吸収する。検査後、媒介物をパッチから抽出し、分析する。遠心分離後の抽出物を直ちに−７０℃に冷凍し、そして順々に分析を行うまで冷凍状態に保持する。
【００２４】
分析的測定
クロモグラニンＡ（ＣＧＡ）及びクロモグラニンＢ（ＣＧＢ）を、放射免疫測定を用いて測定する。種々のサイトカイン（ＴＮＲ−アルファ、ＩＬ−２，ＩＬ−６，ＩＬ−８及びインターフェロン−ガンマ）を、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘアミンカップリングキットを用いて測定し、そしてＢｉｏ−Ｐｌｅｘタンパク質アレーシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄラボラトリー社、ヘルキュレス、カルフォルニア、米国）を用いて分析する。
【００２５】
結果
健常者、並びにセリアリック病有する特定の人及びコラーゲン大腸炎を有する特定の人は、非常に低い水準のＣＧＢ及びＣＧＡを放出する。これらのクロモグラニンの増加した放出は、潰瘍性大腸炎を有する人、及び下痢優位性又は交互型ＩＢＳを有する人に見られる。便秘ＩＢＳを有する人は健常者のように、最小量のＣＧＡ及びＣＧＢを放出する（図１）。全ての人及び健常者は同じ低循環水準のクロモグラニンを有する。
【００２６】
クロモグラニンの放出パターンを、ＵＣ及びＩＢＳを有する人における粘膜炎症に関して更に分析する。ＩＢＳには消化管粘膜構造に異常は見られないが、ＵＣを有する人は、いろいろな程度の粘膜炎症を有していた。ＵＣの活性の臨床的等級付けは、４等級の内視鏡尺度を使用し、ここでスコア１は正常粘膜を示し、そしてスコア４は進んだ粒状性及び脆弱性と潰瘍形成を有する粘膜である。活性ＵＣを有する人（ｎ＝２６）は、健常者及びＩＢＳを有する人と比べて、かなり増加したＣＧＢ値を有する。不活性疾病を有するＵＣの人（ｎ＝８）はそれらのＣＧＢ値が殆ど正常化されている。最も高いＣＧＡ値は、ＩＢＳを有する人に見られ、疾病活性スコアはＵＣにおいてＣＧＡの影響を受けない（図１）。
【００２７】
管腔に放出される多くの前炎症性サイトカインをＵＣ及びＩＢＳを有する特定の人において分析して、炎症性反応を更に特徴付ける。データを表１に要約する。活性ＵＣにおいて、ＴＮＲ−アルファ、ＩＬ−６、インターフェロン−ガンマ、特にＩＬ−８の強い放出が明白である。臨床的に不活性ＵＣを有する人はずっと低い水準を有するが、該人と比べてこれらのサイトカインの著しい増加を有する。ＩＢＳを有する人は増加したＩＬ−８及びインターフェロン−ガンマの水準を有するが、低い程度の炎症性反応を示唆する。ＵＳの人における放出されたＣＧＢは、ＴＮＲ−アルファの放出量（ｒ＝０／５４）、ＩＬ−２の放出量（ｒ＝０．５８）、ＩＬ−６の放出量（ｒ＝０．６５）及びインターフェロン−ガンマの放出量（ｒ＝０．５６）と著しく相関し、ＣＧＢがこれらの疾病で炎症性反応の一部であることを示す。対照的に、ＣＧＡは測定されたサイトカインのいずれにも関係しない。ＩＢＳにおける放出されたクロモグラニンはサイトカインと相関しない。
【００２８】
【表１】
2010503827.tif 000003
【００２９】
最後に、これらの神経ペプチドがクロモグラニン放出と平行して放出されるか否かを明らかにするために、二つの神経ペプチド、物質−Ｐ及びＣＲＨ、の管腔放出を測定する。神経ペプチド値を表２に提示する。放出された物質Ｐに対して多量の放出されたＣＲＨは明白である。物質Ｐ及びＣＲＨは、活性ＵＣ又は不活性ＵＣにおいて同じ程度に増加する。物質Ｐ及びＣＲＨの最も高い値は下痢優位性又は交互型のＩＢＳに顕著である（表２）。ＵＳを有する人において、著しい相関が物質ＰとＣＧＢ、及びＣＲＨとＣＧＡとの間に見出される（表３）。ＩＢＳの人において、物質Ｐの放出は、ＣＧＢ並びにＣＧＡと著しく相関する（表３）。ＩＢＳにおいて、ＣＲＨとＣＧＢとＣＧＡとの間に強い相関も確定される（表３）。
【００３０】
【表２】
2010503827.tif 000004
【００３１】
【表３】
2010503827.tif 000005
【００３２】
検討
本願の例は、クロモグラニンが管腔内に放出され得ることを示す。ＣｇＡ及びＣｇＢの管腔内放出は、健常者、及びセリアリック病又はコラーゲン大腸炎のような病人には存在しないが、ＵＣを有する人、及び下痢又は交互性便秘及び下痢の兆候を有するＩＢＳの人に極めて明白であり、便秘を有するＩＢＳの人には存在しない。
【００３３】
クロモグラニンは二重の機能、即ち、ホルモン保存及び顆粒形成(granulogenesis)のためのタンパク質としての機能、及び調節性ペプチドのためのプロホルモンとしての機能、を有する。ＣＧＡ及びＣＧＢ誘導ペプチドのいくつかは細菌及びカビの生長に阻害性であり、ＵＣ及びＩＢＳに主として又は二次的に関連する可能性がある種々の病原に対してのクロモグラニンの防御反応を意味する。クロモグラニンは、殆どの内分泌腺及び神経内分泌腺細胞の高密度コア分泌性粒状物、及び末梢及び脳内の多くの神経細胞に、やや高濃度で貯蔵される。これらの分泌性粒状物は神経内分泌腺細胞の調節された分泌経路の貯蔵小器官であり、クロモグラニンはこれらの小器官についてのマーカータンパク質と定義されていた。クロモグラニンは通常、循環器に低ナノモル濃度で存在するが、神経分泌腺腫瘍を有する人に高濃度で出現する。ＵＣ又はＩＢＳを有する本例における人は、高血液濃度の測定されたクロモグラニンを有しないが、これはＣＧＢ及びＣＧＡの粘膜放出は局部的な粘膜の出来事であること、そして粒状物の主な粘膜放出は消化管管腔に向けられ、循環器に向けられないことを意味する。
【００３４】
理論に拘束されることを望まないが、本発明者は、本例で得られたデータがある可能な刺激経路を示唆すると信じる。潜在的関心のある一つの観察は、ＵＣにおける測定されたクロモグラニンと粘膜炎症の種々の可変の反映程度との間に見られる関係である。ＣＧＡ放出は、活性疾病又は鎮静された疾病を有する対象において類似する。これと対照的に、ＣＧＢ放出は、活性疾病においてのみ明らかであり、履歴的活性スコア、並びに前炎症性サイトカイン（ＴＮＲ−アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−８及びインターフェロン−ガンマ）の粘膜向上放出にも関係する。これらのサイトカインは、粘膜パッチ技術以外の技術により、ＵＣを有する人の結腸粘膜において前に例証され、それらは全て、ＵＣに見られる粘膜損傷に関係するように見えるので、粘膜炎症のマーカーとして適当である。クロモグラニンの管腔放出パターンは、少なくとも向上したＣＧＢ放出はＵＣにおける炎症性反応の一部であることを意味する。事実、ＣＧＢをコードするがＣＧＡをコードしないＲＮＡ−メッセンジャーは最近、ヒト単球に確認され、ＣＧＢがある程度、免疫起源でありえることを示唆する。
【００３５】
ＩＢＳを有する人は構造的な粘膜変化がなかったが、いくとかのサイトカイン（ＩＬ−８及びインターフェロン−ガンマ）の周縁的に向上した粘膜放出があり、ＩＢＳにおける亜臨床的（無症状の）炎症の前の観察を支持する別の発見である。しかしながら、本発明者は、ＩＢＳにおいて観察されたＣＧＢ及びＣＧＡの向上した粘膜放出は炎症反応に二次的ではなさそうであることを見出す。理論に拘束されることを望まないが、本発明者は、ＩＢＳにおけるクロモグラニンの粘膜放出は、ニューロン起源であるか、又は向上した局部的交感神経／副交感神経活性に結び付く若しくは誘発されることを提案する。
【００３６】
ＩＢＳ及びＵＣを有する対象における副腎皮質刺激ホルモン（コルチコトロピン）放出ホルモン（ＣＲＨ）並びに物質Ｐの向上した放出もまた確定された。これらの神経ペプチドは、少なくともＵＣに増加した粘膜量で見出され、それらの生物学的活性は粘膜炎症反応及び消化管運動不全に関係すると提案される。多量の粘膜ＣＲＨは興味をそそり、ＣＲＨが特に病態生理学に関係し得ることを示唆する。ＣＲＨはＵＣにおいて、粘膜炎症反応を向上させるが誘発しないことによって、前炎症性サイトカインとして作用し得る。ＣＲＨは刺激されていない免疫細胞に最小の刺激作用を有するようであるので、ＩＢＳにおけるその主な作用は、結腸管腔圧力を増加させることにより結腸運動を増加させることであろう。
【００３７】
物質Ｐの放出量は、ＵＣにおいて放出ＣＧＢと共に変化し、そしてＩＢＳを有する人においてＣＧＢ及びＣＧＡの両方に強く関係する。放出ＣＲＨに対する相関は、ＵＣにおいてＣＧＡに見られるが、ＣＧＢには見られず、そして強い相関がＩＢＳにおいてＣＲＨとＣＧＡ及びＣＧＢの両方との間に見られた。共同変化／共同変化の欠如のこのパターンは、物質Ｐ及びＣＲＨが、これらの疾病で異なり得る不均一なクロモグラニン発現細胞に貯蔵されることを示唆し得る。
【００３８】
ＵＣ及びＩＢＳに観察される粘膜ＣＧＡ及びＣＧＡの機構及び細胞起源にかかわらず、該実施例は、クロモグラニン並びに特定の神経ペプチドが管腔放出されることを明確に示す。この知識は、ＩＢＳの異なるサブグループの特性化と、ＵＣ及びＩＢＳを有する人における治療的追跡研究とに臨床的価値がある。
【００３９】
実施例２−過敏性腸症候群及び潰瘍性大腸炎における内因性オピオイドの向上した直腸粘膜分泌；ＣＲＨ及びＩＬ−１の局部的産生との関係
この実施例では、ＩＢＳを有する人における内因性オピオイドの管腔直腸放出を、健常者及びＵＣを有する人と比較した場合を研究する。内因性オピオイドは活性ペプチドの３つの異なるクラス（エンケファリン、ダイノルフィン、及びエンドルフィン／エンドモルフィン）に概略的に分類される。ＩＢＳ及びＵＣにおけるかかるオピオイドの向上した管腔分泌を決定した。オピオイドの生物学的活性は、痛みの調節、電解質の粘膜分泌及び水の吸収だけでなく、免疫調節も含むので、これらの発見は特にＩＢＳ、即ち、生物学的マーカーがないことが悩みである不均質症候群、の病態生理学的理解に貢献するであろう。オピオイドの管腔放出の背後のいくつかの可能な機構を解明するために、両方とも内因性オピオイドの放出を生じると報告されているＩＬ−１及びＣＲＨ（副腎皮質刺激ホルモン放出性ホルモン）の管腔分泌もまた測定する。
【００４０】
対象及び方法
対象
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、コラーゲン大腸炎及びセリアリック病を有する人を、ウプサラの大学病院の胃腸病学の部門で募集する。いろいろな診断グループ、性、及び年齢範囲の人の数を表４に示す。ＵＣの診断は、消化管の臨床的及び内視鏡基準及びｘ−線に基づく。粘膜活性の組織学的等級付けは、Ｂｉｎｄｅｒによる等級付けに基づき、そしてＧｅｂｏｅｓ外により僅かに変更しそして認証される。ＵＣを有する人は、６．３年の平均病気期間（１カ月から２２年）を有していた。不活性ＵＣは、内視鏡での正常な顕微鏡的所見と、正常血液テスト及び正常腸運動との組み合わせとして定義される。活性ＵＣは臨床的兆候に基づき、そして内視鏡スコアが２−４の場合に診断される。不活性ＵＣを有する５人の人及び活性ＵＣを有する７人の人が全体的大腸炎を有していた。残りの人はいろいろな範囲の遠位大腸炎を患っている。ＩＢＳを有する２１人がＲｏｍｅＩＩ基準を満たした。これらの中の８人は下痢優位性であり、８人は便秘であり、そして５人は交互型のＩＢＳを有する。痔、直腸瘻、及び肛門直腸脱出を有する人は、進行中の感染症又は既知のラテックアレルギーの人であるので、除いた。この研究に含まれる健常者は胃腸病歴がなかった。多くの血液スクリーニングテストの後、全員は正常の結果を有した。
【００４１】
人及び健常者を、テスト手順１時間前に、非刺激性高浸透圧性ソルビトール直腸浣腸：１２０−２４０mL（Klyx;Ferring,Malmo,Sweden)を用いて通常のファイバーＳ状結腸鏡検査用に準備する。９人は、活性ＵＣを患っているので、前準備なしでテストを行った。
【００４２】
【表４】
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【００４３】
粘膜パッチ技術
粘膜パッチ技術に使用した機器及び該機器の配置は前に記載した通りである。パッチを直腸粘膜に押し込め、そして管腔に放出された媒介物を吸収するために使用する。要約すると、該パッチを、0.3％CTAB(N-セチル-N,N,N-トリメチルアンモニウムブロミド;E Merk,Darmstadtr,ドイツ）を含む溶液に抽出する。内容物を含む抽出物を直ちに−７０℃に冷凍し、そして順々に分析を行うまで冷凍状態に保持する。血液サンプルを収集し、そして血清／血漿を分析するまで−７０℃に冷凍する。
【００４４】
分析的測定
４種の内因性オピオイド；ベータ−エンドルフィン、エンドモルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン、及びダイノルフィン、を、放射免疫検定を用いて測定する。副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）もまた、放射免疫検定により分析する。ＩＬ−１はＢｉｏ−Ｐｌｅｘアミンカップリングキットを用いて測定し、そしてＢｉｏ−Ｐｌｅｘタンパク質アレーシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄラボラトリー社、ヘルキュレス、カルフォルニア、米国）を用いて分析する。
【００４５】
統計及び計算
結果は、括弧内の範囲で平均＋平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。統計的計算に、Mann-Whitney Uテスト、Friedman Anova,サインテスト及びスペアマンのサインランクテストを使用する。
【００４６】
結果
オピオイドの粘膜放出
図２−５は、潰瘍性大腸炎を有する人、下痢優位性又は交互型のＩＢＳを有する人、ＩＢＳ及び便秘を有する人、及び健常者におけるベータ−エンドルフィン、エンドモルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン、及びダイノルフィンの管腔放出を表す。
【００４７】
活性ＵＣの人は、健常者に比べて、測定した全てのオピオイドの著しく増加した放出を有する。不活性ＵＣの人は、かれらのオピオイドレベル（水準）を正常化し始めた。ＩＢＳ及び下痢／交互の下痢−便秘を有する人もまた、全てのオピオイドの増加した放出を示し、そして著しい増加がｍｅｔ−エンケファリン及びダイノルフィンに注目された。健常者に比べて、便秘優位性ＩＢＳの人はベータ−エンドルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン及びダイノルフィンについて類似のレベルを有するが、エンドモルフィンについては健常者に比べて幾分低いレベルを有する。セリアリック病を有する人（ｎ＝６）又はコラーゲン大腸炎を有する人（ｎ＝９）におけるオピオイド放出パターンは、健常者の放出パターンに極めて類似する（データは示されていない）。
【００４８】
オピオイドの粘膜放出及び粘膜炎症の組織学的／生化学的評価
ＵＣの人（ｎ＝１４）における粘膜炎症の程度と、本願調査の期間（平均＋１．８日）に取った生検と、オピオイドの粘膜放出の関係を調べる。ｍｅｔ−エンケファリンの値とエンドモルフィンの値は、全体的組織学的活性と著しく相関する（スペアマンランクオーダー相関テストにより試験した）（それぞれ、ｒ＝０．５５（ｐ＜０．０５）及びｒ＝０．６（ｐ＜０．０５））。エンドモルフィンもまた、薄層プロプリア（ｒ＝０．５７）及び上皮組織（ｒ＝０．６１）内の好中球の数、腺窩破壊（ｒ＝０．５５）、及び潰瘍形成／侵食に相関した。Ｍｅｔ−エンケファリンは薄層プロプリア好酸球（ｒ＝０．６７）及び潰瘍形成（ｒ＝０．４７）に関係する（ｐ＜０．０５）。ベータ−エンドルフィンは潰瘍形成／侵食（ｒ＝０．５７）のみに相関した（ｐ＜０．０５）。
【００４９】
前炎症性サイトカインＩＬ−１の粘膜放出は、健常者及びＩＢＳを有する人では検出可能レベルより低かった（＜２ｎｇ／Ｌ）。活性ＵＣを有する人は、Mann-WhitneyUテストで試験して、健常者に比べてかなりＩＬ−１の放出が増加しており、平均１０９＋４４ｎｇ／Ｌである（ｐ＜００１）。不活性ＵＣの人も測定可能なＩＬ−１レベル（６．５＋３．０ｎｇ／Ｌ）を有していた。ＩＬ−１はＵＣグループでエンドモルフィンと相関する（表５）。
【００５０】
ＣＲＨ、前炎症性神経ペプチド、の粘膜放出は、健常者に明確で（１．５８＋０．０７μｇ／Ｌ）、コラーゲン大腸炎（１．５３＋０．０７ｎｇ／Ｌ）及びセリアリック病（１．５０＋０．０６ｎｇ／Ｌ）の人に見られる強度と同じ強度である。ＣＲＨの放出は、ＵＣを有する人において広範囲に変化し、疾病活性に関係しない。中央値ＣＲＨレベルは、活性ＵＣで２．４１μｇ／Ｌ（範囲１．６９−８．２４）（ｐ＜０．００１）、そして不活性ＵＣで４．０８μｇ／Ｌ（範囲１．１７−１５．９５）である。ＵＣの人において、ＣＲＨ放出はｍｅｔ−エンケファリン及びダイノルフィンに相関する（表５）。便秘優位性ＩＢＳの人におけるＣＲＨ放出は、小さい変動を有するが正常であり（１．４３＋０．０８μｇ／Ｌ）、一方下痢優位性又は交互型ＩＢＳの人は著しく増加しており（ｐ＜０．００１）、ＵＣの人のように非常に変動する値を有した；中央値は５．９４μｇ／Ｌ（範囲１．４６−２６．０８）である。ＣＲＨ放出はベータ−エンドモルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン、ダイノルフィンの放出と相関した（表６）。
【００５１】
【表５】
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【００５２】
【表６】
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【００５３】
検討
エンドモルフィン、ベータ−エンドルフィン、ダイノルフィン及びｍｅｔ−エンケファリンの管腔分泌は病気の直腸及び健康な直腸において測定可能である、というこの実施例における発見は新規であり、そして内因性オピオイドが炎症性及び機能的胃腸障害に果たす役割に関して、臨床的研究を容易に行える可能性を与える。下痢優位性ＩＢＳを有する人がＵＣを有する人と同様の管腔オピオイド分泌の増加を共有したという観察は、好奇心をそそりそしてこれらの症状の間に病態生理学的つながりを示唆する。
【００５４】
潰瘍性大腸炎は、好中球及びマクロファージのような免疫細胞の優勢な活性を有する伝統的な慢性炎症性疾病である。兆候及び粘膜炎症はグルココルチコイド治療に対して優れた方法で反応する。対照的に、副腎皮質ステロイドの効能がないことがＩＢＳに観察され、そのことは、この普通の疾病に炎症性成分がないことを支持し得る。しかしながら、ＩＢＳが粘膜構造の異常がないことに特徴付けられるという定説は最近、消化管粘膜の低度のリンパ球浸潤、増加した浸透性及び種々の炎症性媒介物の粘膜含量の増加を示すことにより、問題にされた。更に、感染性胃腸炎がＩＢＳを誘発するかもしれない。
【００５５】
内因性オピオイドは脳、脊髄、自律神経節及び腸神経系の特定部位に局在する。内因性オピオイドの種々のクラスの代表である、本願の研究で研究したベータ−エンドルフィン、エンドモルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン及びダイノルフィンは、特定の受容体、ミューデルタ及びカッパ受容体に、いろいろな親和性で結合される。周辺では、オピオイドは末梢知覚神経に存在するこれらの受容体と相互作用し、強力な無痛覚を生じる結果となる。ＩＢＳを有する人は、ある種のタイプの内臓刺激に対する向上した感度を示唆するいくつかの臨床的及び実験的所見を示す。疼痛調節系の活性化の変更が、不快及び痛みがあるが検出可能な構造的異常がないことにより特徴付けられる症候群において役割を果たすことが提唱された。ＩＢＳにおける腹部の痛み及び不快は筋膜（ｆａｓｃｉｌｉａｔｏｒｙ）系の向上した活性化及び/又は疼痛阻害系の不適当な活性化によることが示唆された。これらの結果は、ＩＢＳの人は粘膜オピオイドの増加した合成を有することが示唆され、これは腹部痛みを軽減するための内因性機能的方法を反映し得る。オピオイドは、炎症を起こした組織から生じる痛覚を阻止することができ、該組織ではオピオイドペプチドが、炎症反応に役割を果たす免疫細胞から局部的に放出される。炎症反応は、疼痛受容体の活性化も誘発する。ＵＣにおけるオピオイドの向上した管腔分泌は、この炎症の筋書きと両立し、そして体が腹部痛みを軽減しようとする試みを示すであろう。下痢はＵＣに見られる別の兆候であり、ＩＢＳを有する人の下位グループである。内因性オピオイドはまた、いくつかの運動機能における末梢作用により参加し、消化管運動を低減する。オピオイドはＮａ及びＣｌ吸収を増加させそしてＣｌ分泌を阻止する。従って、オピオイドの向上した管腔分泌は、下痢を減少させることにより恒常性を維持する適応機構を示し得る。
【００５６】
エンドルフィン、エンドモルフィン、ｍｅｔ−エンケファリン及びダイノルフィンのようなオピオイドペプチドは、炎症を起こした組織内の免疫細胞により生成することができる。これら全てのオピオイドの粘膜放出は活性ＵＣで増加するが、臨床的鎮静後は正常化し始める、という上記の発見は、局部的炎症の強度は局部的オピオイド放出を指図するという考えと両立する。前炎症性サイトカインＩL−１の管腔放出は活性ＵＣでかなりであるが、統計的関係は、これらのサイトカインの放出とエンドモルフィン及びエンドルフィンの間に見られただけである。以前の研究は実際、ＩＬ−１はエンドルフィンの分泌促進薬であるがエンケファリンの分泌促進薬ではないことを示した。他の機構がダイノルフィン及びｍｅｔ−エンケファリンの放出を調節し得、それらは相互に関係する。ＩＢＳにおける向上した粘膜オピオイド放出の背後の媒介物は知られてないが、ＩＬ−１のような前炎症性サイトカインが関係しそうではない。増加したインターロイキン−１（ベータ）ｍＲＮＡ発現が、感染起源のようなＩＢＳの人からの直腸Ｓ状結腸生検で検出されたことは本当である。しかしながら、下痢優位性ＩＢＳを有する本願研究におけるＩＢＳの人の少数しか感染後に進展する兆候歴を有していなかった。更に、ＩＢＳの人においてＩＬ−１の著しい管腔分泌は検出されない。従って、ＩＬ−１以外の媒介物が、ＩＢＳにおけるオピオイドの増加した粘膜放出に関係するはずである。
【００５７】
副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）としても知られる副腎皮質刺激ホルモン放出因子は１９８１年に、核のあるニューロンで生成される新規な４ｌ−アミノ酸として特性化された。ＣＲＨは主な視床下部調節ホルモンであり、決定的に重要である。かなりの量の免疫反応性ＣＲＨも炎症を起こした組織に見出され、炎症の部位で神経末端及び免疫細胞により放出され、そして傍分泌作用により局部的に作用する。ＣＲＨの局部的活性には、生体外及び生体内で免疫細胞からオピオイドペプチドの放出を開始させることが含まれる。本発明者は、ＵＣの人に高い粘膜濃度のＣＲＨを見出したが、粘膜炎症性の組織学的又は生化学的評価との相関を見出さなかった。事実、緩和状態のＵＣを有する人は活性疾病を有する人よりも高いＣＲＨ濃度を有する。著しい関係がＣＲＨ放出とダイノルフィン及びｍｅｔ−エンケファリンの濃度との間に見られるが、エンドルフィン／エンドモルフィンの濃度との間には見られない。前の生体外研究は、エンケファリンがＣＲＨにより放出され、ＩＬ−１によっては放出されないことを報告した。従って、ＩＬ−１はＵＣにおいてエンドモルフィン放出を導くようであるが、ＣＲＨはｍｅｔ−エンケファリンペプチド及びダイノルフィンの放出にかかる役割を果たすようである。
【００５８】
ＣＲＨの増加した管腔分泌が、下痢優位性ＩＢＳの人に見出された。理論に拘束されることを望まないが、この増加を、起こり得る臨床的粘膜炎症でなく、むしろ非炎症性ストレス刺激に帰すのが妥当である。これらの人々に観察される、彼らのＣＲＨの粘膜濃度と測定された内因性オピオイドとの間の著しい相関は、ＣＲＨが下痢−前優勢ＩＢＳにおけるオピオイド放出の中心的指令物であることを示唆する。最近、ＣＲＨのＩＢＳにおける症候学への可能な役割に注意が向けられた。ＣＲＨに対する二つの主なＧタンパク質結合受容体、ＣＲＨ受容体１（ＣＲＨ−Ｒ１）及びＣＲＨ受容体２（ＣＲＨ−Ｒ１）、が確認された。実験用動物で、ＣＲＨ−Ｒ１の活性化は結腸運動のストレス誘発活性化、水のような下痢の誘発、及び結腸膨張に対する過度の感度に関係していた。健常者及びＩＢＳの人におけるＣＲＨの投与は、ＩＢＳの病態生理学において主な出来事である、増大した結腸運動及び内臓認識を誘発した。ＣＲＨ受容体拮抗薬を用いた治療を試みて、兆候に対する興味のある正の効果を得た。多分末梢活性によるのであろう。何故なら、免疫反応性ＣＲＨだけでなく、ＣＲＨ−Ｒ１ｍＲＮＡもまた人の結腸粘膜に検出されたからである。従って、観察された粘膜ＣＲＨの増加した放出はＣＲＨ受容体に対して刺激効果を有し得、従ってＵＣ及びＩＢＳに見られる共通の症候学に貢献することがあり得るが、局部的に放出されたＣＲＨの過重負担による受容体の可能な抑制を考慮しなければならない。しかしながら、潜在的なエフェクターの結果の複雑さは、ＣＲＨ−Ｒ２の活性化が内臓鋭敏化を阻止するという観察により示される。それにもかかわらず、蓄積したデータは興奮させるものであり、ＩＢＳの未来の薬物開発はＣＲＨの放出又はＣＲＨ受容体のいずれかの妨害について、いろいろな可能な戦略を考慮しなければならないことを示唆する。
【００５９】
ＣＲＨ並びに局部的に生成された内因性オピオイドはまた、炎症性反応を調節している。末梢組織に存在するＣＲＨは、末梢血管膨張及び増加した血管透過性を引き起こしそして前炎症性サイトカイン、例えばＩL、の分泌を含む免疫細胞の活性化を刺激することにより、前炎症性自己分泌／傍分泌の役割を有するようである。更に、特定のＣＲＨ−Ｒ１受容体作用薬若しくは拮抗薬を用いた経験は、生体内においても前炎症の役割を明確に例証した。しかしながら、ＣＲＨ−Ｒ２の活性化は抗炎症変化を招く。ＣＲＨと対照的に、局部的に生成された内因性オピオイド、特にベータ−エンドルフィンは、例えば脾細胞の増殖、及び炎症性及び免疫調節性サイトカインの生成を調節することにより、抗炎症性を有する。ベータ−エンドルフィンは、ミュー受容体（ＭＯＲ）を活性化することにより、これらの作用を媒介する。最近、選択的ＭＯＲ作用薬は大腸炎の二つの実験モデルにおいて著しく炎症を低減することが報告された。ＭＯＲ作用薬は沈痛機能、胃腸運動の阻害及び抗炎症性作用を合わせ持つので、ＭＯＲの発現が抑制されない限り、ＵＣ及びＩＢＳにおける疾病消化管中の内因性オピオイドを刺激放出させるのが有益のようである。通常、腸管筋及び粘膜下叢に豊富なＭＯＲは、事実、ヒトＩＢＤ粘膜、そして主として炎症性単核細胞において上方調節される。
【００６０】
局部的に生成された前炎症性ＣＲＨの役割は、粘膜炎症性反応の向上に対する中心的成分のようである。ＩＢＳのような機能的非炎症性疾病におけるＣＲＨの増加した放出の生物学的効果は確かではない。それは、結腸管腔内圧力を増加させることにより、結腸運動に確かに影響を及ぼし得る。ＩＢＳの人において、多量の前炎症性ＣＲＨにかかわらず、粘膜炎症の明らかな欠如及び検出可能なＩＬ−１放出の不存在は、矛盾するように見える。しかしながら、本発見は、刺激されない免疫細胞によるサイトカイン生成に対するＣＲＨによる最小の効果と両立する。ＩＢＳ粘膜において報告された別個の炎症シグナルは局部的ＣＲＨ効果を反映することがあり得る。ＩＢＳにおける増加した粘膜ＣＲＨは炎症についての二次的出来事ではなく、ニューロン源を向上させる非炎症性ストレス刺激を反映することができる、と仮定するのが妥当である。ＩＢＳにおけるＣＲＨの増加した基本的粘膜合成は、粘膜に、例えば感染物質により誘発された炎症反応の準備をさせ得るとも推測し得る。
【００６１】
ＩＢＳにおける内因性オピオイド及びＣＲＨの増加した粘膜放出の観察は、ＩＢＳの複雑性に更なるデータを提供し、そしてこの症候群とＵＣとの間の繋がりを強調する。更に、特に、容易に利用可能な生物学的マーカーが待望されている疾病であるＩＢＳを有する人の診断及び治療上の追跡研究における潜在的な臨床的重要性を有する目的方法が提供される。
【００６２】
本願に記載した特定の例示及び態様は本来例示にすぎず、特許請求の範囲に規定された本発明を限定するものではない。更なる態様及び実施例が、本願明細書から当業者に明らかであり、特許請求の範囲の発明の範囲にある。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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