(57)【要約】本発明は、ＰＧＡ−タキサンコンジュゲート中のコンジュゲート型タキサン、特にパクリタキセルの量を決定する方法に関し、前記方法は、ａ）ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートを式（Ｉ）の化合物：Ｒ1Ｒ2Ｎ−ＮＨ2（Ｉ）（式中Ｒ1およびＲ2が、記述に定義されているとおりである）と反応させて非結合タキサンおよびＰＧＡヒドラジドを得るステップと、ｂ）非結合タキサンの量を決定するステップとを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数のタキサン分子が、２’−ヒドロキシ位を介してαポリ−Ｌ−グルタミン酸のγカルボキシ基に結合しているポリグルタミン酸−タキサンコンジュゲートにおけるコンジュゲート型タキサンの量を決定する方法であって、
前記方法が、以下のステップ
ａ）ポリグルタミン酸−タキサンコンジュゲートを式（Ｉ）の化合物
Ｒ1Ｒ2Ｎ−ＮＨ2（Ｉ）
［式中、Ｒ1およびＲ2は独立に、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ヒドロキシアルキル、Ｃ3〜Ｃ10アルケニル、Ｃ3〜Ｃ10ヒドロキシアルキル、Ｃ3〜Ｃ10アルキニル、Ｃ3〜Ｃ10ヒドロキシアルキニル、アリール、ヘテロアリールであるか、またはＲ1およびＲ2は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＳおよびＮから選択される最大３個のヘテロ原子を場合により含有し、最大２個のヒドロキシ基で場合により置換されている３〜８員の飽和複素環を形成する］
と反応させて、非結合タキサンおよびポリグルタミン酸ヒドラジドを得るステップと、
ｂ）非結合タキサンの量を決定するステップと
を含む、ポリグルタミン酸−タキサンコンジュゲートにおけるコンジュゲート型タキサンの量を決定する方法。
【請求項２】
前記非結合タキサンの量がＨＰＬＣによって決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記タキサンが、パクリタキセル、ドセタキセル、１０−デアセチルパクリタキセル、７−エピパクリタキセル、セファロマンニン、７−エピ−セファロマンニン、およびＮ−デベンゾイル−Ｎ−フェニルアセチルパクリタキセルから選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記タキサンがパクリタキセルである、請求項１から３に記載の方法。
【請求項５】
前記式（Ｉ）の化合物が、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、４−ブロモフェニルヒドラジン、４−イソプロピルフェニルヒドラジン、４−メトキシフェニルヒドラジン、１−メチル−１−フェニルヒドラジン、１−アミノピロリジン、１−アミノ−２，６−ジメチルピペリジン、１−アミノ−シス−２，６−ジメチルピペリジン、（Ｓ）−（−）−１−アミノ−２−（メトキシメチル）ピロリジン、（Ｒ）−（＋）−１−アミノ−２−（メトキシメチル）ピロリジン、４−アミノモルホリン、１−アミノピペリジン、１−アミノ−４−メチルピペラジン、１−アミノ−４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジンおよび１−アミノ−ホモピペリジンから選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記式（Ｉ）の化合物が、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、４−アミノモルホリンおよび１−アミノピペリジンから選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記式（Ｉ）の化合物が４−アミノモルホリンである、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップａ）が、２０から４２℃までの温度でジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド中で行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ステップａ）が、３８〜４２℃の間の温度でジメチルスルホキシド中で行われる、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒドロペルオキシアニオンの代わりにヒドラジン誘導体を用いる、非水性媒体中でのコンジュゲートの加水分解を含む、ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートにおけるコンジュゲート型タキサンの量を決定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
パクリタキセル［タキソール（登録商標）注射液として市場で入手できる］は、化学療法タキサンの原型であり、βチューブリンに結合し、このタンパク質の微小管への会合を促進し、それらを安定させて、最終的には細胞死を引き起こす。以下ＰＰＸと称する、パクリタキセルポリグルメクス（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｏｌｉｇｌｕｍｅｘ）（ＰＰＸ、化学名（２’Ｒ，３’Ｓ）−３’−ベンゾイルアミド−１’−［［４，１０β−ビス（アセトキシ）−２α−（ベンゾイルオキシ）−１，７β−ジヒドロキシ−９−オキソ−５，２０−エポキシタキサ−１１−エン−１３α−イル］オキシ］−１’−オキソ−３’−フェニルプロパン−２’−オールで部分的にγエステル化されたＮ−（Ｌ−ピログルタミル）−［ポリ（Ｌ−グルタミル）］−Ｌ−グルタミン酸）は、α−ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ＰＧＡ）およびパクリタキセルのエステルコンジュゲートであり、パクリタキセルは、２’−ヒドロキシ位を介してＰＧＡに共有結合している。
【０００３】
ＰＰＸは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および卵巣癌での使用に関して現在研究中である。パクリタキセルは、腫瘍組織でのコンジュゲートの摂取およびタンパク分解／加水分解後に放出される。
【０００４】
ＰＰＸの分子式および分子量は、αポリ−Ｌ−グルタミン酸の重合度およびパクリタキセルとのコンジュゲーション部位の数が製造方法により変化するため、分布がある。ＰＰＸの平均分子量は、多角レーザー光散乱（ｍｕｌｔｉ  ａｎｇｌｅ  ｌａｓｅｒ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）による検出を伴う非水ゲル透過クロマトグラフィー（ｎｏｎ−ａｑｕｅｏｕｓ  ｇｅｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）により決定すると、約４００００ダルトンである。約３５重量％パクリタキセルは、コンジュゲートにおいて結合形態で存在し、それは、１１個のモノマー単位当たり約１つのパクリタキセルエステル結合に相当する。ＰＰＸの合成方法は、PCT公開WO第97/33552号に開示されている。
【０００５】
有効成分および最終医薬品の両方としてＰＰＸについて行われるべき製造試験の中に、コンジュゲート型パクリタキセルおよび関連のタキサン系不純物を定量するための試験が規定されている。しかし、後者の試験はＰＰＸそれ自体に行うことができず、パクリタキセルを遊離させるために脱エステル化が必要となる。Tetrahedron Letters, (1995), 36(12), 2001-2004は、パーアセチル化パクリタキセルの２’−アセテートが１０−アセチル位よりも迅速に加水分解される、塩基性過酸化水素／テトラヒドロフラン混合物を用いてパクリタキセルの様々なエステルを加水分解により切断するための手順を開示している。この方法をパクリタキセルに適用したときに、報告されている生成物は１０−デアセチルパクリタキセル（１０−ＤＡＴ）である。ＰＰＸ中のコンジュゲート型パクリタキセルおよび関連のタキサン不純物の定量のために最初に使用される公知の手順は、重炭酸ナトリウム／過酸化ナトリウムによりＰＰＸを完全に水性加水分解し、ＣＨＣｌ3中にパクリタキセルおよび関連のタキサンの不純物を同時に抽出し、ＨＰＬＣで定量することを含む。第２相としてＣＨＣｌ3を加えることにより、加水分解直後に遊離タキサンを抽出することが可能となり、１０−ＤＡＴの形成の大部分が防止される。しかし、加水分解反応は、パクリタキセルの主として１０−デアセチルパクリタキセル（１０−ＤＡＴ）への顕著な分解を引き起こし、２相系が１０位で加水分解を完全に抑制しなかった場合、この方法を用いると２０％レベルの１０−ＤＡＴが一般的であった。その結果、パクリタキセルおよび１０−ＤＡＴの両方のピークが一緒に定量され、パクリタキセル＋１０−ＤＡＴとして報告される。加水分解法から得られたパクリタキセル＋１０−ＤＡＴの量をパクリタキセルの総量のみに修正することができるように、ＮＭＲ定量を用いる第２の方法を行って固有のコンジュゲート型１０−ＤＡＴの量を定量する必要がある。したがって、分解生成物の形成およびコンジュゲート型タキサンプロファイルの変化が、この手順の明らかな欠点である。さらに、このクロマトグラフィー条件は、分解化合物に対して特異的ではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】PCT公開WO第97/33552号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Tetrahedron Letters, (1995), 36(12), 2001-2004
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、ＰＧＡ−コンジュゲート型パクリタキセルおよび他のＰＧＡ−コンジュゲート型タキサンの定量の改良法が必要とされている。
【０００９】
発明の詳細な説明
したがって、本発明は、ヒドロペルオキシアニオンの代わりにヒドラジン誘導体を用いる、非水性媒体中でのコンジュゲートの加水分解を含む、ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートにおけるコンジュゲート型タキサンの量を決定する方法に関する。
【００１０】
より詳細には、本発明の方法は、ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートを式（Ｉ）の化合物
Ｒ1Ｒ2Ｎ−ＮＨ2（Ｉ）
［式中、Ｒ1およびＲ2は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10ヒドロキシアルキル、Ｃ3〜Ｃ10アルケニル、Ｃ3〜Ｃ10ヒドロキシアルケニル、Ｃ3〜Ｃ10アルキニル、Ｃ3〜Ｃ10ヒドロキシアルキニル、アリール、ヘテロアリールから独立に選択されるか、またはＲ1およびＲ2は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＳおよびＮから選択される最大３個のヘテロ原子を場合により含有し、最大２個のヒドロキシ基で場合により置換されている３〜８員の飽和複素環を形成する］
と反応させて、非結合タキサンおよびＰＧＡ−ヒドラジドを得、
次いで、非結合タキサンを決定することを含む。
【００１１】
本発明の目的のために、ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートは、グルタミン酸繰り返し単位の１個または複数のγカルボキシ基が、タキサン分子の２’−ヒドロキシ基を介してタキサン分子でエステル化されたα−ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ＰＧＡ）である。通常、ＰＧＡは、６０〜３１０個のモノマー単位を含有し、８０００から４００００ダルトンまでの分子量を有する。ＰＧＡ−ヒドラジドは、ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートにおいてタキサンの２’−ヒドロキシ基をＰＧＡのグルタミン酸繰り返し単位のγカルボキシ基に結合しているエステル基と式（Ｉ）のヒドラジンの反応から生じるヒドラジドである。ＰＧＡ−ヒドラジドにおいて、式（Ｉ）の化合物の第１級アミノ基の窒素がＰＧＡのグルタミン酸繰り返し単位のγカルボキシ基のカルボニルに結合している。
【００１２】
本明細書で使用する場合、タキサンは、イチイ等の天然源もしくは培養細胞から単離されている場合も、または化学的に合成されている場合もある、パクリタキセル、ドセタキセル、または他のタキサン、例えば１０−デアセチルパクリタキセル、７−エピパクリタキセル、セファロマンニン、７−エピ−セファロマンニン、およびＮ−デベンゾイル−Ｎ−フェニルアセチルパクリタキセルを意味する。最も好ましいタキサンは、パクリタキセルである。
【００１３】
本明細書で使用する場合、「Ｃ1〜Ｃ10アルキル」という用語は、１〜約１０個の炭素原子を含有する直鎖または分子の飽和炭化水素基、例えばメチル、エチル、プロピル（例えば、ｎ−プロピルおよびイソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）等を指す。
【００１４】
本明細書で使用する場合、「Ｃ1〜Ｃ10ヒドロキシアルキル」という用語は、最大３個のヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基を指す。
【００１５】
本明細書で使用する場合、「Ｃ3〜Ｃ10アルケニル」という用語は、３〜約１０個の炭素原子を含有し、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基を指す。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル等が挙げられる。
【００１６】
本明細書で使用する場合、「Ｃ3〜Ｃ10ヒドロキシアルケニル」という用語は、炭素−炭素二重結合に関与しない炭素原子上で最大３個のヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ3〜Ｃ10アルケニル基を指す。
【００１７】
本明細書で使用する場合、「Ｃ3〜Ｃ10アルキニル」は、３〜約１０個の炭素原子を含有し、１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基を指す。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル等が挙げられる。
【００１８】
本明細書で使用する場合、「Ｃ3〜Ｃ10ヒドロキシアルキニル」という用語は、炭素−炭素三重結合に関与しない炭素原子上で最大３個のヒドロキシル基で置換されていてもよいＣ3〜Ｃ10アルキニル基を指す。
【００１９】
本明細書で使用する場合、「Ｃ1〜Ｃ3アルキル」という用語は、１〜３個の炭素原子を含有する直鎖または分子の飽和炭化水素基を指す。
【００２０】
本明細書で使用する場合、「Ｃ1〜Ｃ3ハロゲノアルキル」という用語は、最大３個のハロゲン（即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）原子で置換されているＣ1〜Ｃ3アルキル基を指す。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ」という用語は、Ｏ−Ｃ1〜Ｃ3アルキル基、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシを指す。
【００２２】
本明細書で使用する場合、「Ｃ1〜Ｃ3チオアルコキシ」という用語は、Ｓ−Ｃ1〜Ｃ3アルキル基、即ちメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオおよびイソプロピルチオを指す。
【００２３】
本明細書で使用する場合、「アリール」とは、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ3アルキル基、Ｃ1〜Ｃ3ハロゲノアルキル基、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ基、Ｃ1〜Ｃ3チオアルコキシ基または窒素基で場合により置換されていてもよい、単環式または多環式の芳香族炭化水素、例えばフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニル等を含む、芳香族カルボシクリル（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ）基を指す。
【００２４】
本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」基は、芳香族ヘテロカルボシクリル基であって、少なくとも１つのヘテロ原子環員、例えば硫黄、酸素または窒素を含有し、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、Ｃ1〜Ｃ3ハロゲノアルキル、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ3チオアルコキシまたは窒素基で場合により置換されていてもよい、単環式および多環式の芳香族炭化水素を含む。ヘテロアリール基は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピロリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズチアゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、プリニル、カルバゾリル、ベンズイミダゾリル等が挙げられる。
【００２５】
本発明を実行するために有利に使用できる式（Ｉ）の化合物の例としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、４−ブロモフェニルヒドラジン、４−イソプロピルフェニルヒドラジン、４−メトキシフェニルヒドラジン、１−メチル−１−フェニルヒドラジン、１−アミノピロリジン、１−アミノ−２，６−ジメチルピペリジン、１−アミノ−シス−２，６−ジメチルピペリジン、（Ｓ）−（−）−１−アミノ−２−（メトキシメチル）ピロリジン、（Ｒ）−（＋）−１−アミノ−２−（メトキシメチル）ピロリジン、４−アミノモルホリン、１−アミノピペリジン、１−アミノ−４−メチルピペラジン、１−アミノ−４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン、１−アミノ−ホモピペリジンが挙げられる。好ましい試薬は、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、４−アミノモルホリンおよび１−アミノピペリジンであり、４−アミノモルホリンが最も好ましい。
【００２６】
ＰＧＡ−タキサンコンジュゲートと（Ｉ）との間の反応は、非プロトン性有機溶媒、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリジノン等中で行われる。本発明の好ましい実施形態によれば、ＰＰＸ試料またはＰＰＸ含有薬剤試料を、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド中に溶解または懸濁して、２５〜５２ｍｇ／ｍｌの間のＰＰＸ濃度を得、次いで、４−アミノモルホリンまたはトリフルオロ酢酸中の４−アミノモルホリン溶液を加える。ＰＰＸ溶液と４−アミノモルホリン／トリフルオロ酢酸との間の比は、１：０．３ｖ／ｖ〜１：０．５ｖ／ｖの間である。該混合物を約２０℃〜約４２℃の間の温度にて約２時間から約２４時間までの時間撹拌する。
【００２７】
非結合タキサンの決定は、ＨＰＬＣにより、またはタキサンの定量分析に関して当技術分野で公知の任意の他の方法により行うことができる。
【００２８】
本発明の好ましい実施形態によれば、ＰＰＸ試料またはＰＰＸ含有薬剤試料をジメチルスルホキシド中に溶解して、４８〜５２ｎｇ／ｍｌの間のＰＰＸ濃度を得、トリフルオロ酢酸中の４−アミノモルホリン溶液を加え、ここで、トリフルオロ酢酸と４−アミノモルホリンとの比は、０．０１７：１ｖ／ｖである。ＰＰＸ溶液と４−アミノモルホリン／トリフルオロ酢酸との比は、１：０．５ｖ／ｖである。該混合物を撹拌し、コンジュゲート型タキサンの約２％〜７％が放出されるまで、温度および反応時間を監視する。好ましくは、温度は約３８〜４２℃の範囲で維持され、反応時間は約１．９〜約２．１時間の範囲である。これらの範囲内では、純度プロファイルは変換関数として変化することはない。アセトニトリルを加えた後で、溶液を遠心分離により限外濾過して、未反応ポリマーを除去し、次いでＨＰＬＣカラムに直接注入して、パクリタキセルおよび各タキサン不純物の面積率（％）を決定する。ＵＳＰに報告されているか、または計算したＵＶ応答係数を適用し、公知の不純物の面積％をパクリタキセルに対するｗ／ｗ％に変換する。他の未知の不純物の量を面積％として代わりに計算する。パクリタキセルの純度は、全ての不純物の合計を１００％から減じることにより計算される。
【００２９】
本発明の方法の温和な反応条件により、パクリタキセルの分解量が約２０％から０．５％未満に減少し、０．２％を超える１０−ＤＡＴの定量が可能になり、それによりＮＭＲによる定量の必要性がなくなる。
【００３０】
次に、本発明を、以下の例によりさらに詳細に例示する。
【００３１】
例
本発明の方法の精度および感度を証明するために、パクリタキセルを公知の量（１０％ｗ／ｗ）の３つの化学的に異なるタキサンでスパイク（ｓｐｉｋｅ）し、次いで３７％ｗ／ｗの量でαポリ−（Ｌ）−グルタミン酸にコンジュゲートさせた。３つのタキサンの内の２つは合成不純物（セファロマンニンおよび７−エピ−セファロマンニン）であり、３つ目は、分解不純物（７−エピパクリタキセル）であった。定量限界および仕様上限内の範囲で各タキサンについて３種のスパイクレベル（ｓｐｉｋｉｎｇ  ｌｅｖｅｌ）（１．２％、９．８％、２８％ｗ／ｗ）を調べた。３つの不純物は全て１００％〜１１５％の間の量で回収され、この量は、本方法の意図された使用について許容できるものと見なされた。本実験の代表例を例１に示す。ＰＰＸバッチの慣用の放出分析を例２に報告する。
【００３２】
例１
パクリタキセル／７−エピパクリタキセルコンジュゲートの溶液は、１０ｍＬのフラスコにコンジュゲート３５０±５ｍｇを正確に秤量し、ジメチルスルホキシドで溶解することにより調製した。該溶液を同じ溶媒である体積まで希釈した。ＰＰＸ（医薬等級）２５０±２．５ｍｇを５ｍＬのフラスコに正確に秤量した。スパイク溶液（ｓｐｉｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（１．２％ｗ／ｗのスパイクレベルに対応）０．０８５ｍＬを同じフラスコに加え、ジメチルスルホキシドである体積まで希釈した。次いで、例２に示す一般的な手順に従ってアミノリシス反応を行い、ＨＰＬＣにより分析した。７−エピパクリタキセルの回収率は１１０．７％であった。
【００３３】
例２
正確に秤量したＰＰＸ（医薬品有効成分）２５０ｍｇを５ｍＬのフラスコに移した。ジメチルスルホキシドで溶解した後、該試料を同じ溶媒である体積まで希釈した。この溶液１．０ｍＬを５ｍＬの円錐底のバイアルに移した。三角形の磁気撹拌棒を各バイアルに入れて、０．０１７：１の比でトリフルオロ酢酸と４−アミノモルホリンとを含む溶液０．５ｍＬ（ＴＦＡ０．０３４ｍＬを４−アミノモルホリン２．０ｍＬに加えた）を加えた。バイアルにしっかり蓋をして、４０℃±２℃で恒温撹拌水槽（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｅｄ  ｓｔｉｒｒｉｎｇ  ｗａｔｅｒ  ｂａｔｈ）に置き、２±０．１時間撹拌した。反応の最後に、バイアルを約１０分かけて室温まで徐々に冷却させた後、アセトニトリル０．７５ｍＬを加えた。混合後、該試料を遠心分離フィルター（分子量カットオフ＝１００００ダルトン）に移し、３０００×ｇで１時間遠心分離した。試料１ｍＬをＨＰＬＣバイアルに移し、氷酢酸１０μＬを加え、４０℃で維持したＺｏｒｂａｘ３００ＳＢ−Ｃ８カラム、４．６×１００ｍｍ３．５μｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｃａｔ．Ｎｏ．８６１９７３−９０６を使用し、２０％アセトニトリル／８０％水〜９０％アセトニトリル／１０％水の水／アセトニトリル勾配混合物で６０分間溶出し、２２７ｎｍでＵＶ検出することにより、タキサン含量を決定するためにＨＰＬＣで分析した。
【００３４】
結果（６つの二組の平均、および相対感度係数について補正した面積％として表現）を、表１に報告する。
【００３５】
【表１】
2010520468.tif 000002
【００３６】
ＯＲ1、ＯＲ2およびＯＲ3として示された不純物は、以下の式を有するαポリ−（Ｌ）−グルタミン酸とタキサンとの間のコンジュゲートである。
【００３７】
【化１】
2010520468.tif 000003
【国際調査報告】
2010520468.tif 000004
2010520468.tif 000005
2010520468.tif 000006