(57)【要約】  １つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）ヌクレオシドを有する核酸を含む免疫刺激剤が提供される。核酸は、更にＣｐＧモチーフを含んでもよい。核酸は二本鎖であってもよく、ｄｓＲＮＡを含んでもよい。【選択図】図１
2010519915.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物：
【化１】
2010519915.tif 000072
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｚ、ＱおよびＷは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよく；かつ
−Ｖ、Ｓ、Ｄ、Ｚ、Ｑ、ＲおよびＷのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）。
【請求項２】
次式の化合物：
Ｒk1−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒk2
式ＩＶｃ
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＶおよびＷは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1およびｋ2は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよく；かつ
−Ｖ、Ｓ、ＲおよびＷのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）。
【請求項３】
次式の化合物
Ｒk4−Ｑp−（Ｄm）−Ｚn−Ｒk3
式ＩＶｄ
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＺおよびＱは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であり、
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよく、ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ、かつ；
−Ｒ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）。
【請求項４】
次式の化合物
【化２】
2010519915.tif 000073
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱはいずれかのヌクレオシドであり；
−ｍは１〜５００のいずれかの整数であり、
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよく、ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ、かつ；
−Ｖ、Ｓ、Ｗ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む）を製造する方法であって、
請求項２に記載の化合物に従うオリゴマーを、請求項３に記載の化合物に従うオリゴマーと、約０．５−１．０から約１．０−０．５のモル比で混合する工程と、前記第１のオリゴマーおよび前記第２のオリゴマーをアニールして二本鎖化合物を形成する工程とを含む方法。
【請求項５】
Ｓがイノシンであり、Ｄがシトシンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物、ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースを含む組成物。
【請求項７】
請求項５に記載の化合物および免疫原を含む組成物。
【請求項８】
次式の化合物
【化３】
2010519915.tif 000074
【化４】
2010519915.tif 000075
【化５】
2010519915.tif 000076
または、
【化６】
2010519915.tif 000077
（式中、
−ＥLNAは、ＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここで前記ＣｐＧまたは前記ＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ＦLNAは、ＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここで前記ＣｐＧまたは前記ＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ｍは１〜５００のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）。
【請求項９】
Ｓがイノシンであり、Ｄがシトシンである、請求項８に記載の式ＶＩａ、ＶＩｂ、ＶＩｃまたはＶＩｄに従う化合物。
【請求項１０】
請求項９に記載の化合物および免疫原を含む組成物。
【請求項１１】
１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに１〜１０のロックされた核酸残基を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；
１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに１〜１０のロックされた核酸残基を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；
前記第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび前記第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、前記二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含むことを特徴とする化合物。
【請求項１２】
１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２３に従う核酸配列を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；
１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２４に従う核酸配列を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；
前記第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび前記第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、前記二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含むことを特徴とする化合物。
【請求項１３】
請求項１１に記載の化合物を含むアジュバント組成物。
【請求項１４】
請求項１２に記載の化合物を含むアジュバント組成物。
【請求項１５】
請求項１２に記載の化合物を含む、ＴＬＲ３およびＴＬＲ９のアゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮出願第６０／９０５，４６１号および第６０／９５０／２７１号の利益を主張するものであり、それらの両方はそれらの全体を参照することにより本明細書に組み入れられる。
本発明は免疫学の分野および免疫刺激剤に関する。より具体的には、本発明は二本鎖のロックされた核酸組成物に関する。核酸はｄｓＲＮＡを含みうる。
【背景技術】
【０００２】
先天性免疫系は、侵入病原体に対する防御の「最前線」、およびさらに適応的免疫応答の支援役の両方の役割を有する。トール様受容体（ＴＬＲ）は、先天性免疫応答および適応的免疫応答の両方の開始の鍵となる役割を有する受容体の１つのファミリーである。ＴＬＲは様々な感染因子の特徴に個別に反応し、例えば、ＴＬＲ４は特にリポポリサッカライドに反応し、ｄｓＲＮＡはＴＬＲ３の好ましいアゴニストであるが、ＴＬＲ９はＣｐＧモチーフを含む核酸などのメチル化された核酸に優先的に反応する。
【０００３】
二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）はウイルス感染の一般的な複製中間体である。ウイルス複製が宿主中で起こる場合、または宿主がポリＩＣ二本鎖ＲＮＡなどのウイルス複製模倣物に暴露される場合、ＴＬＲ３は非特異的先天性免疫応答を開始する。ＴＬＲ３の刺激は、ＮＦ−ｋＢの活性化およびインターフェロンを含む炎症性サイトカインの後続する産生を導き、それは次に、ＭＨＣのクラスＩおよびクラスＩＩの発現増加の刺激によって、適応的免疫応答を促進する。
【０００４】
ｄｓＲＮＡの免疫刺激特性は癌治療の開発に関して興味深いものであった。アジュバントとしてのポリＩＣの使用、および治療剤との組合せにおける使用は，周知である。さらに、ポリＩＣのｄｓＲＮＡは、安定性を改善するために他の薬剤と組み合わせられている。米国特許第４，３４６，５３８号は、比較的高分子量のポリＩ：Ｃ、１３〜３５ｋＤａの分子量範囲内のポリ−Ｌ−リジン（ポリカチオン性ポリペプチド）およびカルボキシメチルセルロースを含むポリＩＣ複合体（「ポリＩＣＬＣ」）；ならびに調製の方法およびかかる組成物の使用について記述する。いくつかの癌、ＨＩＶまたはエボラなどのいくつかのウイルス疾患、およびさらに多発性硬化症の治療のための治療剤としてのポリＩＣＬＣの使用もまた示唆された（米国公報２００６／０２２３７４２）。
【０００５】
他のｄｓＲＮＡもまた癌治療剤としてある程度の能力を有することが実証された。例えば、リンホカインとの組合せにおけるｄｓＲＮＡは、メラノーマの治療のための治療剤として相乗効果を有することが記載されている（ＥＰ０２８１３８０）。改善された癌治療法における使用のためのＴＬＲ３アゴニスト（ポリＩＣおよびポリＡＵを含む）もまた記述された（ＵＳ２００６／０１１０７４６）。
【０００６】
Zhuら（J. Translational Medicine 2007 5:10  ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７９−５８７６−５−１０）は、ポリＩＣＬＣ（筋肉内に投与された）および特異的腫瘍免疫原（ＩＦＡとの組合せで皮下に投与された）の組合せを、ＣＮＳ神経膠腫を持つマウスのための効果的な治療として記載する。
【０００７】
いくつかのポリＩ：Ｃ組成物は、慢性疲労症候群の治療、およびＨＩＶ感染変異型の治療における抗ウイルス剤との組合せで使用されてきた（Thompson et al., Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1996 Jul; 15(7):580-7；Gillespie et al., In Vivo. 1994 May-Jun; 8(3):375-81；Strayer et al., Clin Infect Dis 1994 Jan;18 Suppl 1:S88-95）。
【０００８】
他の特異的オリゴヌクレオチドモチーフ（例えばＣｐＧジヌクレオチド）は、免疫刺激効果を有するものとして同定された。ＤＮＡ中のいくつかの非メチル化ＣｐＧモチーフはＴＬＲ９アゴニストであり、癌療法として提案されている（Krieg AM. 2007 J. Clin Invest 117:1184-94）。ＵＳ７，１４８，１９１は、低分子（６〜２０アミノ酸）抗原との組合せにおける使用のための、ポリカチオン性ペプチドならびにイノシンおよびシトシンを含む核酸を含む抗原組成について記述する。ＷＯ０１／９３９０５は、ＴＮＦ−αの全身的な高濃度などの副作用および特異性の欠如を引用して、ＣｐＧモチーフを除いた免疫刺激オリゴデオキシヌクレオチドについて記述する。
【０００９】
ＲＮＡを含む治療用核酸は、先天性のウイルス防御応答の一部として、それらが刺激する免疫応答によって破壊されうる。ＵＳ６，１９４，３８８（およびその中の参照）は、リボース糖の特異的形態が免疫活性化のために必要であると思われるので、核酸組成物中のデオキシリボースヌクレオシドをリボースヌクレオシドと交換することは、安定性の増加に効果的ではないことを教示する。毒性は用量依存的であるので、用量を増加させることでは安定性の問題点は回避されない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
改善された安定性を備え、少なくとも１つの治療剤（例えば、ウイルス免疫原であるが、これに限定されない）との組合せでの共投与のために適切であり、ウイルス免疫原の免疫刺激活性を促進することができるアジュバントが、所望される。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は免疫刺激剤に関し、二本鎖のロックされた核酸（ＬＮＡ）組成物を提供する。核酸はｄｓＲＮＡを含んでもよい。
【００１２】
本発明は、改善されたｄｓＲＮＡを含む化合物を提供することをさらなる目的とする。
【００１３】
本発明は、さらに次式の化合物：
【化１】
2010519915.tif 000003
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱはいずれかのヌクレオシドであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＶ、Ｓ、Ｗ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）
を提供する。
【００１４】
本発明は、上で定義されるような化合物（式中、ＢはイノシンでありＤはシトシンである）もまた提供する。
【００１５】
本発明は、上で定義されるような化合物、ならびにポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチンおよびカルボキシメチルセルロースなどのポリカチオン性ポリペプチドを含む組成物に関する。
【００１６】
本発明は、上で定義された任意の化合物および免疫原（例えばＨｓｐＥ７）を含む組成物もまた提供する。
【００１７】
本発明は、次式の化合物
【化２】
2010519915.tif 000004
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、独立してヌクレオシド間結合基によって結合されるいずれかのリボヌクレオシドでありえ、ここでＶおよびＺは結合でき、ＷおよびＱは結合できる。
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間の任意の整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様において、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ；および
【００１８】
−ここでＶ、Ｓ、Ｄ、Ｚ、Ｑ、ＲおよびＷのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。）
もまた提供する。
【００１９】
式ＩＩａは、５’、３’、または５’および３’の両方でオーバーラップする塩基を有し、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒkおよび第２のストランドＲk−Ｚn−（Ｄm）−Ｑp−Ｒkを有する、二本鎖ＲＮＡ分子を表す。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【００２０】
本発明は、癌、または細菌性病原体もしくはウイルス病原体に関連した疾患もしくは障害について被験体を治療する方法であって、次式に従う化合物：
【化３】
2010519915.tif 000005
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱはいずれかのヌクレオシドであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シチジン、シチジンアナログヌクレオシド、ウリジンまたはウリジンアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＶ、Ｗ、Ｓ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）
を、被験体に投与することを含む方法、にもまた関する。
【００２１】
本発明は、上述の方法（式中、ＳはイノシンでありＤはシトシンである）にもまた関する。さらに、化合物は免疫原（例えばＨｓｐＥ７）と共に投与されてもよい。
【００２２】
本発明の他の態様に従って、免疫原に対する被験体の免疫応答を促進する方法であって、免疫原およびＬＮＡを含むｄｓＲＮＡを含む組成物を、被験体に投与することを含む方法が提供される。免疫原は、殺傷した生物全体、タンパク質、ペプチド、融合タンパク質、融合ペプチド、組換えタンパク質または組換えペプチドでありえる。免疫原はＨｓｐＥ７でありえる。ＬＮＡを含むｄｓＲＮＡの例は、本発明の式ＩＩ〜ＶＩＩを含むが、これらに限定されない。
【００２３】
本発明のｄｓＲＮＡを含む分子は１つまたは複数のＬＮＡを含む。ＬＮＡを含むｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡ活性を保持しているが、安定性が増加した特性を示す。ＬＮＡは、一本鎖核酸および二本鎖核酸により、核酸塩基に特異的な二重らせんおよび三重らせんを形成することができる。これらの複合体は、正常な核酸により形成された対応する複合体よりも高い耐熱性を示す。
【００２４】
本発明は、次式の化合物  
Ｖn−（Ｓm）−Ｗp
式ＩＶａ
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間の任意の量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＶおよびＷは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり、および；
−ここで１つまたはそれ以上のＶ、Ｓ、Ｗは、１つまたはそれ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）
もまた提供する。
【００２５】
本発明は、次式の化合物
Ｑp−（Ｄm）−Ｚn
式ＩＶｂ
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＺおよびＱは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＺ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）
もまた提供する。
【００２６】
本発明は、次式の化合物
【化４】
2010519915.tif 000006
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱはいずれかのヌクレオシドであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＶ、Ｓ、Ｗ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。）
を製造する方法であって、
式Ｖn−（Ｓm）−Ｗpの化合物に従う第１のオリゴマーを、式Ｑp−（Ｄm）−Ｚnの化合物に従う第２オリゴマーと約０．５−１．０から約１．０−０．５のモル比で混合する工程と、前記の第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーをアニールして二本鎖核酸を形成する工程とを含む方法もまた提供する。
【００２７】
本発明は、次式の化合物
Ｒk1−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒk2
式ＩＶｃ
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1およびｋ2は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ、ここでＶ、Ｓ、ＲおよびＷのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）
を提供する。
【００２８】
本発明は、次式の化合物
Ｒk4−Ｑp−（Ｄm）−Ｚn−Ｒk3
式ＩＶｄ
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６または７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＺおよびＱは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく、；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ、ここでＲ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）を提供する。
【００２９】
本発明は、次式の化合物
【化５】
2010519915.tif 000007
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱはいずれかのヌクレオシドであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
【００３０】
−Ｒは、独立してヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合された任意のリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。）を製造する方法であって、式Ｒk−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒkの化合物に従う第１のオリゴマーを、式Ｒk−Ｑp−（Ｄm）−Ｚn−Ｒkの化合物に従う第２オリゴマーと約０．５−１．０から約１．０−０．５のモル比で混合することと、前記の第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーをアニールして二本鎖核酸を形成することとを含む方法、を提供する。
【００３１】
本発明は、次式の化合物：
ＶＩａ：
【化６】
2010519915.tif 000008
ＶＩｂ：
【化７】
2010519915.tif 000009
ＶＩｃ：
【化８】
2010519915.tif 000010
ＶＩｄ：
【化９】
2010519915.tif 000011
（式中、
−ＥLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ＦLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ｍは１〜５００、もしくは１０〜５０のいずれかの整数または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）を提供する。
【００３２】
本発明は、次式のうちのいずれか１つの化合物：
ＶＩＩａ：  Ｒk3−（Ｓm）−（ＥLNA）
ＶＩＩｂ：  Ｒk2−（Ｄm）−（ＦLNA）
ＶＩＩｃ：  Ｒk3−（Ｄm）−（ＥLNA）
ＶＩＩｄ：  Ｒk1−（Ｓm）−（ＦLNA）
ＶＩＩｅ：  （ＥLNA）−（Ｓm）−Ｒk3
ＶＩＩｆ：  （ＦLNA）−（Ｄm）−Ｒk1
ＶＩＩｇ：  （ＥLNA）−（Ｄm）−Ｒk2
ＶＩＩｈ：  （ＦLNA）−（Ｓm）−Ｒk1
（式中、−ＥLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ＦLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）もまた提供する。
【００３３】
本発明のいくつかの態様に従って、
−ＥLNAは配列番号：２３であり、および
−ＦLNAは配列番号：２４である。
【００３４】
本発明は、次式のうちのいずれか１つの化合物：
ＶＩｅ：
【化１０】
2010519915.tif 000012
ＶＩｆ：
【化１１】
2010519915.tif 000013
ＶＩｇ：
【化１２】
2010519915.tif 000014
ＶＩｈ：
【化１３】
2010519915.tif 000015
（式中、
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立してヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）を提供する。
【００３５】
本発明は、次式のうちのいずれか１つの化合物：
ＶＩｉ：Ｒk1−（Ｓm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｄm）−Ｒk2
ＶＩｊ：Ｒk3−（Ｄm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｓm）−Ｒk4
ＶＩｋ：Ｒk1−（Ｄm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｓm）−Ｒk2
ＶＩｌ：Ｒk3−（Ｓm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｄm）−Ｒk4
ＶＩｌｍ：Ｒk1−（Ｓm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｓm）−Ｒk2
ＶＩｎ：Ｒk3−（Ｄm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｄm）−Ｒk4
ＶＩｏ：Ｒk1−（Ｄm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｄm）−Ｒk2
ＶＩｐ：Ｒk3−（Ｓm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｓm）−Ｒk4
（式中、
−ｍは１〜５００のいずれかの整数または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）を提供する。
【００３６】
本発明は、次式の化合物
ＶＩｅ：
【化１４】
2010519915.tif 000016
（式中、
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数でありえ；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）
を製造する方法（Ａ）であって、
次式
ＶＩｉ：Ｒk1−（Ｓm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｄm）−Ｒk2
に従う第１のオリゴマーを、次式
ＶＩｊ：Ｒk3−（Ｄm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｓm）−Ｒk4
に従う第２のオリゴマーと約０．５：１．０から約１．０：０．５のモル比で混合することと、
前記の第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーをアニールして二本鎖核酸を形成することとを含む方法、を提供する。
【００３７】
本発明は、次式の化合物
ＶＩｆ：
【化１５】
2010519915.tif 000017
（式中、
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）
を製造する方法（Ｂ）であって、
【００３８】
次式の化合物
ＶＩｋ：Ｒk1−（Ｄm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｓm）−Ｒk2
に従う第１のオリゴマーを、次式の化合物
ＶＩｌ：Ｒk3−（Ｓm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｄm）−Ｒk4
に従う第２のオリゴマーと約０．５：１．０から約１．０：０．５のモル比で混合することと、
前記の第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーをアニールして二本鎖核酸を形成することと含む方法、を提供する。
【００３９】
本発明は、次式の化合物
ＶＩｇ：
【化１６】
2010519915.tif 000018
（式中、
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）
を製造する方法（Ｃ）であって、
【００４０】
次式の化合物
ＶＩｍ：Ｒk1−（Ｓm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｓm）−Ｒk2
に従う第１のオリゴマーを、次式の化合物
ＶＩｎ：Ｒk3−（Ｄm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｄm）−Ｒk4
に従う第２のオリゴマーと約０．５：１．０から約１．０：０．５のモル比で混合することと、
前記の第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーをアニールして二本鎖核酸を形成することとを含む方法、を提供する。
【００４１】
本発明は、次式の化合物
ＶＩｈ：
【化１７】
2010519915.tif 000019
（式中、
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋは０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。）
を製造する方法（Ｄ）であって、
【００４２】
次式の化合物
ＶＩｏ：Ｒk1−（Ｄm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｄm）−Ｒk2
に従う第１のオリゴマーを、次式の化合物
ＶＩｐ：Ｒk3−（Ｓm）−ＣLNA  ＡLNA  ＧLNA  ＣLNA  ＡLNA  ＡLNA−（Ｓm）−Ｒk4
に従う第２のオリゴマーと約０．５：１．０から約１．０：０．５のモル比で混合することと、
前記の第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーをアニールして二本鎖核酸を形成することとを含む方法、を提供する。
【００４３】
本発明は、次式に従う化合物：
【化１８】
2010519915.tif 000020
もまた提供する。
【００４４】
本発明は、式ＩＩＩａに従って化合物を製造する方法であって、配列番号：１のオリゴマーおよび配列番号：２のオリゴマーの各々を組み合わせることと、オリゴマーをアニールさせて式ＩＩＩａの二本鎖化合物を提供することとを含む方法、もまた提供する。
【００４５】
本発明は、次式に従う化合物：
【化１９】
2010519915.tif 000021
【化２０】
2010519915.tif 000022
【化２１】
2010519915.tif 000023
もまた提供する。
【００４６】
本発明は、式Ｖａ、ＶｂおよびＶｃに従う化合物を製造する方法であって、配列番号：３に従うオリゴマーおよび配列番号：４に従うオリゴマー、または配列番号：５に従うオリゴマーおよび配列番号：６に従うオリゴマー、または配列番号：７に従うオリゴマーおよび配列番号：８に従うオリゴマーを組み合わせることと；オリゴマーをアニールさせて式Ｖａ、ＶｂおよびＶｃで示される二本鎖核酸化合物をそれぞれ産生することとを含む方法、もまた提供する。
（Ｉ15）−Ｇ−ＴLNA−ＧLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＧLNA（配列番号：３）
（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−Ｃ−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：４）
ＧLNA−（Ｉ15）−Ｇ−ＴLNA−ＧLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA（配列番号：５）
ＣLNA−（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−Ｕ−ＣLNA−ＡLNA（配列番号：６）
ＴLNA−ＧLNA−（Ｉ15）−ＴLNA−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＡLNA（配列番号：７）
ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＣLNA（配列番号：８）
【００４７】
本発明は、３’非対合末端を備えた二本鎖オリゴマーもまた提供する。本発明は、さらに３’非対合末端を備えた二本鎖オリゴマーを作製する方法であって、配列番号：９に従うオリゴマーおよび配列番号：１０に従うオリゴマー、または配列番号：１１に従うオリゴマーおよび配列番号：１２に従うオリゴマー、または配列番号：１１に従うオリゴマーおよび配列番号：２５に従うオリゴマーを組み合わせることと、組み合わせたものをアニールさせてそれぞれ式Ｖｄおよび式Ｖｅにおいて示される二本鎖核酸化合物を産生することとを含む方法、を提供する。
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−（Ａ）15（配列番号：９）
（Ｃ）15−ＣLNA−ＣLNA−（Ｕ）15（配列番号：１０）
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）10−（Ａ）10（配列番号：１１）
（Ｕ）10−ＣLNA−ＣLNA−（Ｃ）10（配列番号：１２）
（Ｃ）10−ＣLNA−ＣLNA−（Ｕ）10（配列番号：２５）
【００４８】
本発明は、ＣｐＧモチーフを含む二本鎖オリゴマーもまた提供する。本発明は、配列番号：１３に従うオリゴマーおよび配列番号：１４に従うオリゴマー、または配列番号：１５に従うオリゴマーおよび配列番号：１６に従うオリゴマー、または配列番号：１７に従うオリゴマーおよび配列番号：１８に従うオリゴマー、または配列番号：１９に従うオリゴマーおよび配列番号：２０に従うオリゴマー、または配列番号：２１に従うオリゴマーおよび配列番号：２２に従うオリゴマーを組み合わせることと、オリゴマーをアニールさせて、式ＶＩｇ、ＶＩｈ、ＶＩｉ、ＶＩｊおよびＶＩｋに従うｄｓＲＮＡ化合物を産生することと、を含む二本鎖オリゴマーを作製する方法もまた提供する。
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＧLNA（配列番号：１３）
ＣLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＣLNA−ＣLNA（配列番号：１４）
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（配列番号：１５）
ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＣLNA−ＣLNA（配列番号：１６）
（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA（配列番号：１７）
（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：１８）
ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（配列番号：１９）
ＣLNA−（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：２０）
ＣLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA（配列番号：２１）
ＧLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：２２）
【００４９】
上述されるような本発明の化合物は、１つまたはそれ以上のＬＮＡを含むＣｐＧモチーフを含む。ＬＮＡを含む核酸は、ＣｐＧ関連活性を保持しているが、安定性が増加した特性を示す。ＬＮＡは、一本鎖核酸および二本鎖核酸により、核酸塩基に特異的な二重らせんおよび三重らせんを形成することができる。これらの複合体は、正常な核酸により形成された対応する複合体よりも高い耐熱性を示す。
【００５０】
本発明のいくつかの態様に従う式ＶＩａ〜式ＶＩｄ、式ＶＩＩａ〜式ＶＩＩｈ、または式ＶＩＩＩａ〜式ＶＩＩＩｈのうちのいずれか１つによって定義された化合物において、
−ＥLNAは配列番号：２３であり、および
−ＦLNAは配列番号：２４である。
【００５１】
本発明のいくつかの態様に従う式ＩＩ、式ＩＩａ〜式ＩＩｅ、式ＩＶａ〜式ＩＶｄ、式ＶＩａ〜式ＶＩｄ、式ＶＩｅ〜式ＶＩｈ、式ＶＩｉ〜式ＶＩｐ、式ＶＩＩａ〜式ＶＩＩｈ、式ＶＩＩＩａ〜式ＶＩＩＩｈのうちのいずれか１つによって定義された化合物において、上で定義されるような化合物のＳはイノシンでありＤはシトシンである。
【００５２】
本発明のいくつかの態様に従う、式ＩＩ、式ＩＩａ〜式ＩＩｅ、式ＩＩＩ、式ＩＩＩａ〜式ＩＩＩｄ、式ＩＶａ〜式ＩＶｄ、式Ｖａ〜式Ｖｃ、式ＶＩａ〜式ＶＩｄ、式ＶＩｅ〜式ＶＩｈ、式ＶＩｉ〜式ＶＩｐ、式ＶＩＩａ〜式ＶＩＩｈ、式ＶＩＩＩａ〜式ＶＩＩＩｈのうちのいずれかによって上で定義されるような化合物は、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチンを含むポリカチオン性ポリペプチドをさらに含んでもよい。
【００５３】
本発明は、上で定義されるような化合物（式ＩＩ、式ＩＩａ〜式ＩＩｅ、式ＩＩＩ、式ＩＩＩａ〜式ＩＩＩｄ、式ＩＶａ〜式ＩＶｄ、式Ｖａ〜式Ｖｃ、式ＶＩａ〜式ＶＩｄ、式ＶＩｅ〜式ＶＩｈ、式ＶＩｉ〜式ＶＩｐ、式ＶＩＩａ〜式ＶＩＩｈ、式ＶＩＩＩａ〜式ＶＩＩＩｈ）および免疫原（例えばＨｓｐＥ７）を含む組成物もまた提供する。本発明は、薬学的に許容される量の組成物を被験体に投与することを含む、被験体を治療する方法もまた提供する。
【００５４】
本発明の他の態様に従って、免疫原に対する被験体の免疫応答を促進する方法であって、免疫原、および式ＩＩ、式ＩＩａ〜式ＩＩｅ、式ＩＩＩ、式ＩＩＩａ〜式ＩＩＩｄ、式ＩＶａ〜式ＩＶｄ、式Ｖａ〜式Ｖｃ、式ＶＩａ〜式ＶＩｄ、式ＶＩｅ〜式ＶＩｈ、式ＶＩｉ〜式ＶＩｐ、式ＶＩＩａ〜式ＶＩＩｈ、式ＶＩＩＩａ〜式ＶＩＩＩｈのうちのいずれか１つによって上で定義されるような化合物を含む組成物を、被験体に投与することを含む方法が提供される。免疫原は、殺傷した生物全体、タンパク質、ペプチド、融合タンパク質、融合ペプチド、組換えタンパク質または組換えペプチドでありえる。免疫原はＨｓｐＥ７でありえる。
【００５５】
本発明の他の態様に従って、１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに１〜１０のロックされた核酸残基を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに１〜１０のロックされた核酸残基を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；ここで第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含む、化合物が提供される。
【００５６】
本発明は、１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２３に従う核酸配列を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２４に従う核酸配列を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；ここで第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含む、化合物もまた提供する。
【００５７】
本発明は、１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２３に従う核酸配列を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２４に従う核酸配列を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；ここで第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含む、アジュバントまたはアジュバント組成物をさらに提供する。
【００５８】
本発明は、１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに１〜１０のロックされた核酸残基を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに１〜１０のロックされた核酸残基を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；ここで第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含む、アジュバントまたはアジュバント組成物をさらに提供する。
【００５９】
本発明は、ＴＬＲ３受容体およびＴＬＲ９受容体のためのデュアル受容体アゴニスト活性を有するアジュバントまたはアジュバント組成物であって、１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２３に従う核酸配列を含む第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーと；１〜５００のイノシン、シトシン、またはイノシンリボヌクレオチドおよびシトシンリボヌクレオチドの組合せ、ならびに配列番号：２４に従う核酸配列を含む第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーとを含み；ここで第１の一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび第２の一本鎖ヌクレオチドポリマーが水素結合して二本鎖核酸を形成し、二本鎖核酸が二本鎖ポリＩＣ領域およびロックされた核酸残基を含む二本鎖領域を含む、アジュバントまたはアジュバント組成物、をさらに提供する。
【００６０】
本発明のこの要約は、必ずしも本発明のすべての特徴について記述するとは限らない。他の態様および本発明の特徴は、本発明の具体的な実施形態の以下の説明の検討に際して当業者に明らかになる。
【００６１】
本発明のこれらおよび他のものの特徴は、添付された図面が参照される以下の説明からより明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本発明の実施形態で用いる、式ＶｄおよびＶｅに従う二本鎖核酸化合物を示した図である。
【図２】本発明の実施形態で用いる、式ＶＩｇ〜式ＶＩｋに従う二本鎖核酸を示した図である。
【図３】本発明の実施形態で用いる、ポリＡおよびポリＵの領域を含む二本鎖核酸を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
本発明は免疫刺激剤に関し、二本鎖のロックされた核酸（ＬＮＡ）組成物を提供する。核酸はｄｓＲＮＡを含みうる。
【００６４】
本明細書における例の使用（用語の例を含む）は、説明の目的のみのためであり、本発明の実施形態の範囲および意味を本明細書において限定するようには意図されない。
【００６５】
本発明は、ポリＩおよびポリＣのオリゴヌクレオチドポリマー、またはポリＡおよびポリＵのオリゴヌクレオチドポリマーを含み、ここでオリゴヌクレオチドポリマーの各々が少なくとも１つのロックされた核酸（ＬＮＡ）残基を含む、組成物を提供する。ｄｓＲＮＡは、約等モルの量のポリＩおよびポリＣのオリゴヌクレオチドポリマー（ポリＩ：Ｃ）、または約等モルの量のポリＡおよびポリＵのオリゴヌクレオチドポリマー（ポリＡ：Ｕ）を含んでもよい。
【００６６】
さらに本発明は、１対のオリゴヌクレオチドポリマーを含み、各々がＩ（イノシン）およびＣ（シトシン）ヌクレオシドの混合物を含み、ここでその１対のオリゴヌクレオチドポリマー中のＩヌクレオシドおよびＣヌクレオシドは、その１対のオリゴヌクレオチドポリマーがハイブリダイズできるようにアレンジされて二本鎖分子を形成する、組成物を提供する。
【００６７】
本発明は、ポリＩおよびポリＣのオリゴヌクレオチドポリマー、またはポリＡおよびポリＵのオリゴヌクレオチドポリマーを含み、ここでオリゴヌクレオチドポリマーの各々が少なくとも１つのＣｐＧモチーフおよび少なくとも１つのロックされた核酸（ＬＮＡ）残基を含む、組成物をさらに提供する。ＣｐＧモチーフは少なくとも１つのＬＮＡ残基を含んでもよい。ｄｓＲＮＡは、約等モルの量のポリＩおよびポリＣのオリゴヌクレオチドポリマー（ポリＩ：Ｃ）、または約等モルの量のポリＡおよびポリＵのオリゴヌクレオチドポリマー（ポリＡ：Ｕ）を含んでもよい。
【００６８】
本発明は、少なくとも１つのＣｐＧモチーフおよび少なくとも１つのＬＮＡ残基、ならびにＩ残基およびＣ残基の組合せまたはＡ残基およびＵ残基の組合せを含むオリゴヌクレオチドポリマーを含む組成物をさらに提供する。オリゴヌクレオチドポリマーは、ハイブリダイズして二本鎖分子（例えば二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ））を形成してもよい。例えば、ＣｐＧモチーフを含み、１つまたはそれ以上のＬＮＡを有するｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上のＬＮＡを含むポリＩ：Ｃ化合物であってもよい。ｄｓＲＮＡは、約等モルの量のポリＩおよびポリＣのオリゴヌクレオチドポリマー（ポリＩ：Ｃ）、または約等モルの量のポリＡおよびポリＵのオリゴヌクレオチドポリマー（ポリＡ：Ｕ）を含んでもよい。他の実施例において、オリゴヌクレオチドポリマーは、１つまたはそれ以上のＬＮＡを含むＣｐＧモチーフ、ならびにＩヌクレオシドおよびＣヌクレオシドの混合物、またはＡヌクレオシドおよびＵのヌクレオシドの混合物を含んでもよく、ここでＣｐＧモチーフ、ならびに対中の各オリゴヌクレオチドのＩヌクレオシドおよびＣヌクレオシドがハイブリダイズするようにアレンジされて二本鎖分子を形成する。
【００６９】
少なくとも１つのＣｐＧモチーフおよび１つまたはそれ以上のＬＮＡを含む本発明のｄｓＲＮＡは、例えば、アジュバント、または免疫刺激剤、または治療剤として様々な目的のために使用されてもよいが、これらの使用に限定されない。例えば、少なくとも１つのＣｐＧモチーフおよび１つまたはそれ以上のＬＮＡを含むｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上のＬＮＡを含むポリＩ：Ｃ化合物であってもよい。
【００７０】
免疫刺激剤は、免疫応答を開始するか、または免疫応答を開始する際に触媒効果を提供する、化合物または組成物である。免疫応答は、もっぱらサイトカイン（例えばインターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子および同種のもの）の産生および分泌の誘導などの、先天性（または非適応的）免疫応答でありえ、それは今度は、食細胞を刺激して移動させ、外来の免疫原を非特異的に捕食させ、適応的免疫系による認識のための免疫原を提示させる。あるいは、免疫応答は、特定の免疫原（抗原提示細胞とも呼ばれる食細胞により提示されたものなどの）の存在に応答する、適応的免疫応答でありうる。
【００７１】
用語「１つ（ａ）」または「１つ（ａｎ）」の使用は、単数および複数の参照の両方を含む。
【００７２】
アジュバントは、単独では特異的な免疫原性効果がないが、特異的な免疫原または免疫原群に対する応答を増加または促進させるように免疫系を刺激する免疫刺激剤である。免疫原が先天性免疫系または適応的免疫系の応答を誘導する能力は、免疫原の「生物学的活性」と呼ばれる。アジュバントは、免疫原の生物学的活性を仲介、増大、または刺激できる。いくつかの実施例において、免疫原はアジュバントの非存在下において非常にわずかまたは無視できる生物学的活性を有しうる。
【００７３】
免疫原の生物学的活性、は当技術分野において公知のいくつかの分析のいずれかにより測定できる。例えば、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔリンパ球の誘導は、ＥＬＩＳＰＯＴ分析の使用によって定量されてもよい（Asai et al 2000 Clin. Diag. Lab Immunol 7:145-154）。ＥＬＩＳＰＯＴ分析の他のバージョンは、他のサイトカインのために使用されてもよく、例えば、Kalyzhny et al 2005. Methods Mol Biol 302:15-31；Ott, et al. J. Immunol. Methods. 2004 Feb 15;285(2):223-35；Forsthuber, et al. Science, 271: 1728-1730を参照。免疫原に対する応答のモニタリングのために有用でありうる他のＴ細胞分析は、細胞内サイトカインフローサイトメトリー、増殖分析、抗体マイクロアレイおよび同種のものを含む。例えば、Nagorsen et al 2004. Expert Opin Biol Ther 4:1677-84、または実験免疫学のハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ｌ−ＩＶ巻、Ｄ．  Ｍ．  ＷｅｉｒおよびＣ．  Ｃ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、１９８６年、ブラックウェル・サイエンティフィック・パブリケーション（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）社を参照。インターフェロン−αおよびインターフェロン−βはインターフェロンＥＬＩＳＡキットにより定量されてもよい（Kim et al 2004. Nature Biotechnology 22:321-325）。多重化分析、例えばビーズベースシステム（ルミネックス（Ｌｕｍｉｎｅｘ）、パノミックス（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）および同種のもの）は、複数のサイトカインの同時定量を可能にする。サイトカインの例は、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、Ｉｌ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、エオタキシン、ランテス、ＦＧＦ−塩基性、ＶＥＧＦ、および同種のものを含む。明確にするために、用語「サイトカイン」は、リンホカイン、インターロイキンまたはケモカインなどの代わりの呼称を含む。
【００７４】
用語「被験体」および「患者」は、同じ意味で使用できる。「被験体」は、動物、またはマウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、もしくはサル、またはチンパンジーもしくはヒトを含むがこれらに限定されない霊長類を含むが、これらに限定されない哺乳類を指す。被験体は特定の免疫原または免疫原群に関して免疫学的にナイーブであるか、または被験体は事前に特定の免疫原または免疫原群に暴露されうる。事前の暴露は、例えば、特定の免疫原もしくは免疫原群による計画的免疫、特定の免疫原もしくは免疫原群を含む感染因子への暴露、または第２の免疫原もしくは免疫原群に対する免疫応答を可能にする第１の免疫原もしくは免疫原群への交差反応性暴露に由来してもよい。第２の免疫原または免疫原群は、第１の免疫原または免疫原群に類似のもの、それらと同一のもの、またはそれらと異なるものであってもよい。
【００７５】
本明細書において使用されるように、用語「ＬＮＡ修飾したオリゴヌクレオチド」は、１つまたは複数のＬＮＡモノマーにより、完全または部分的のいずれかで修飾された任意のオリゴヌクレオチドを含む。したがって、ＬＮＡ修飾したオリゴヌクレオチドは完全にＬＮＡモノマーにより構成してもよいか、またはＬＮＡ修飾したオリゴヌクレオチドは１つのＬＮＡモノマーを含んでもよい。
【００７６】
用語「ＤＮＡモノマー」は窒素含有塩基に結合するデオキシリボース糖を指し、一方用語「ＲＮＡモノマー」は窒素含有塩基に結合するリボース糖を指す。本発明の様々な実施形態に従う組成物を含みうるＤＮＡモノマーの例は、デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、デオキシウリジン、デオキシシチジン、デオキシイノシンおよび同種のものを含むが、これらに限定されない。本発明の様々な実施形態に従う組成物を含みうるＲＮＡモノマーの例は、アデノシン、グアノシン、５−メチルウリジン、ウリジン、シチジン、イノシンおよび同種のものを含むが、これらに限定されない。当技術分野において公知であるように、本発明の様々な実施形態に従う他のＤＮＡモノマーまたはＲＮＡモノマーは、他の窒素含有塩基を含んでもよい。
【００７７】
本明細書において使用されるように、用語「ＬＮＡモノマー」は、典型的にはＵＳ６，２６８，４９０、ＵＳ６，７９４，４９９、ＵＳ７，０３４，１３３（その各々は参照することにより本明細書に組み入れられる）に記述されるような２’−４’環状結合を有するヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシド（以下参照）はオリゴヌクレオチドに立体配座的制限を提供し、未修飾オリゴヌクレオチドと比較して、ハイブリダイゼーションまたは安定性のプロフィールの変更を提供しうる。
【００７８】
用語「ヌクレオシド」は、糖環の炭素−１を介して窒素含有塩基に結合するリボース糖またはデオキシリボース糖の分子を指す。窒素含有塩基の例は、アデニン、グアニン、６−チオグアニン、ヒポキサンチン、キサンチンなどのプリン、ならびにシトシン、チミンおよびウラシルなどのピリミジンを含む。プリンヌクレオシドの例は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、イノシン（Ｉ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−グアニン、２−クロロデオキシアデノシン、７−ハロ−７−デアザ−アデノシン、７−ハロ−７−デアザ−グアニン、７−プロピン−７−デアザアデノシン、７−プロピン−７−デアザ−グアニン、２−アミノ−アデノシン、７−デアザイノシン、７−チア−７，９−ジデアザイノシン、フォルマイシンＢ、８−アザイノシン、９−デアザイノシン、アロプリノールリボシド、８−ブロモ−イノシン、８−クロロイノシン、７−デアザ−２−デオキシ−キサントシン、７−デアザ−８−アザ−アデノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−デオキシアデノシン、７−デアザ−８−アザ−デオキシグアノシン、７−デアザ−アデノシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−デオキシアデノシン、７−デアザ−デオキシグアノシン、８−アミノ−アデノシン、８−アミノ−デオキシアデノシン、８−アミノ−グアノシン、８−アミノ−デオキシグアノシン，３−デアザ−デオキシアデノシン、３−デアザ−アデノシン、６−チオ−デオキシグアノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、１−メチルアデノシン、１−メチルプソイドウリジン、１−メチルグアノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアノシン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、２−メチルチオＮ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ−（（９−β−Ｄ−リボフラノシル−２−メチルチオプリン−６−イル）カルバモイル）スレオニン、Ｎ−（（９−β−Ｄ−リボフラノシルプリン−６−イル）Ｎ−メチルカルバモイル）スレオニン、Ｎ−（（９−β−Ｄ−リボフラノシルプリン−６−イル）カルバモイル）スレオニン、ワイブトシン、ワイブトキソシンおよび同種のもの、ならびにFreierなど1997（Nucleic Acids Res. 25:4429-4443）（参照することにより本明細書に組み入れられる）に記述されているような他のプリンヌクレオシドを含む。
【００７９】
ピリミジンヌクレオシドの例は、デオキシウリジン（ｄＵ）、ウリジン（Ｕ）、シチジン（Ｃ）、デオキシシチジン（ｄＣ）、チミジン（Ｔ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロムウラシル、２’−Ｏ−メチル−ウリジン、２’−Ｏ−メチルシチジン、５−ヨードウラシル、５−メトキシ−エトキシ−メチル−ウラシル、５−プロピニルデオキシウリジン、シュードイソシチジン、５−アザシチジン、５−（１−プロピニル）シチジン、２’−デオキシシュードウリジン、４−チオ−デオキシチミジン、４−チオ−デオキシウリジン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン２’−Ｏ−メチルシチジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、ジヒドロウリジン、２’−Ｏ−メチルシュードウリジン、３−メチルシチジン、５−メチルシチジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリジン、５−メトキシカルボニルメチルウリジン、５−メトキシウリジン、ウリジン−５−オキシ酢酸−メチルエステル、ウリジン−５−オキシ酢酸、シュードウリジン、２−チオシチジン、５−メチル−２−チオウリジン、２−チオウリジン、４−チオウリジン、５−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシ−プロピル）ウリジンおよび同種のもの、ならびにFreierなど、1997（Nucleic Acids Res. 25:4429-4443）において開示されるような他の置換されたピリミジンを含む。
【００８０】
プリンヌクレオシドまたはピリミジンヌクレオシドは、標準的な方法を使用するオリゴヌクレオチド合成において使用されるホスホアミダイト誘導体もまた含む。
【００８１】
例えばＵＳ６２６８４９０（参照することにより組み入れられる）中で記述されるように、用語ヌクレオシドは、式（Ｉ）に従う二環式ヌクレオシドアナログ：
【化２２】
2010519915.tif 000024
（式Ｉ）
をさらに含む。
−Ｂは、任意の窒素含有塩基（例えばピリミジン核酸塩基またはプリン核酸塩基）またはそのアナログありえる。
−ＸおよびＹは、同一または異なっていてもよく、いずれのヌクレオシド間結合基であってもよい。
【００８２】
かかる二環式ヌクレオシドアナログは、「ロックされた核酸モノマー」または「ロックされたヌクレオシドモノマー」または「ＬＮＡモノマー」または「ＬＮＡ残基」  として代わりに呼ぶことができる。ＬＮＡモノマーを含む核酸ポリマーの合成および重合の方法は、例えば、ＷＯ９９／１４２２６、ＷＯ００／５６７４６、ＷＯ００／５６７４８、ＷＯ０１／２５２４８、ＷＯ０１４８１９０、ＷＯ０２／２８８７５、ＷＯ０３／００６４７５、ＷＯ０３／０９５４７、ＷＯ２００４／０８３４３０、ＵＳ６，２６８，４９０、ＵＳ６，７９４，４９９、ＵＳ７，０３４，１３３（その各々は参照することにより本明細書に組み入れられる）中で記述される。
【００８３】
ヌクレオシドアナログの他の例は、ＷＯ０１／０４８１９０（参照することにより本明細書に組み入れられる）中で開示されるように、非ＬＮＡ二環式ヌクレオシド、例えば：
−追加のＣ−３’，Ｃ−５’−エタノ架橋を有するビシクロ［３．３．０］ヌクレオシド；
−追加のＣ−１’，Ｃ−６’メタノ架橋またはＣ−６’，Ｃ−４’メタノ架橋を有するビカルボシクロ［３．１．０］ヌクレオシド
−未修飾ヌクレオシドを有する二量体として合成された追加のＣ−２’，Ｃ−３’ジオキサラン環を含むビシクロ［３．３．０］ヌクレオシドおよびビシクロ［４．３．０］ヌクレオシド、（ここで追加の環は、天然のホスホルジエステル（ｐｈｏｓｐｈｏｒｄｉｅｓｔｅｒ）結合を置き換えるヌクレオシド間結合の一部である）；アミド型およびスルホンアミド型のヌクレオシド間結合の一部としてＣ−２’，Ｃ−３’−メタノ架橋を有するビシクロ［３．１．０］ヌクレオシドを含む二量体；
−ホルムアセタールヌクレオシド間結合を介して三量体の中間に取り込まれたビシクロ［３．３．０］グルコース由来ヌクレオシドアナログ；
−２つの五員環および１つの三員環が骨格を構成するトリシクロＤＮＡ；
−１，５−アンヒドロヘキシトール核酸；および
−追加のＣ−２’，Ｃ−３’結合の六員環および五員環を有する、二環式［４．３．０］ヌクレオシドおよび二環式［３．３．０］ヌクレオシド
を含むが、これらに限定されない。
【００８４】
「ヌクレオシド」は、置換されたリボース糖（二環式またはほかの）を有するヌクレオシドもまた含む。置換されたリボース糖の例は、例えばFreier,1997（Nucleic Acids Res. 25:4429-4443）（参照することにより組み入れられる）中で記述されている。
【００８５】
「ヌクレオチド」は、糖環の炭素−５を介して結合されるヌクレオシド間結合基を有するヌクレオシドを指す。オリゴヌクレオチド「骨格」は、例えば天然に存在する核酸中の、ヌクレオチドの集団の重合により形成される、連続する糖の炭素−５および炭素−３を介して共有結合する、交互にあるリボース／リン酸塩鎖を指す。当技術分野において公知であるように、これは合成化学的方法を含みうる。例えば、オリゴヌクレオチドの合成：実際的なアプローチ（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）、Ｍ．  Ｊ．  Ｇａｉｔ編、１９８４年、ＩＲＬ出版（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ）、オックスフォード、中の、Ｇａｉｔ、１〜２２ページ；Ａｔｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、３５〜８１ページ；Ｓｐｒｏａｔ  ｅｔ  ａｌ．、８３〜１１５ページ；およびＷｕ  ｅｔ  ａｌ．、１３５〜１５１ページ；または分子クローニング：実験手引き書（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、第３版、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、ＣＳＨＬプレス（ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ）、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（それらのすべては参照することにより本明細書に組み入れられる）を参照。
【００８６】
重合は酵素によるものであってもよい。ＬＮＡヌクレオシド三リン酸は、本発明のいくつかの実施形態に従う核酸化合物または核酸組成物の酵素による重合のための基質としてもまた使用されてもよい。ＬＮＡヌクレオシドは、ＰＣＲ反応またはプライマー伸長分析において、ポリメラーゼ（例えばＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼ）により伸長する核酸ポリマーへと取り込まれてもよい。適切なポリメラーゼの例は、フュージョン（Ｐｈｕｓｉｏｎ）（商標）高忠実度ＤＮＡポリメラーゼ（フィンザイム（Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ））、または９oＮm（商標）ＤＮＡポリメラーゼを含むが、これらに限定されない。ＬＮＡヌクレオシドの酵素による取り込みの方法は、例えばVeedu RN et al 2007. Nucleic Acids Symposium 51:29-30およびVeedu RN et al. 2007. ChemBioChem 8:490-492およびVeedu et al 2007. Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 26:1207-1210（その各々は参照することにより本明細書に組み入れられる）中で記述される。
【００８７】
ヌクレオシド間結合基は、オリゴヌクレオチド骨格の一部として、２つのヌクレオシドをカップリングできる基を指す。ヌクレオシド間結合基の例は、Praseuthら（Biochimica et Biophysica Acta 1489:181-206、参照することにより本明細書に組み入れられる）により記述され、ホスホジエステル（ＰＯ4−）、ホスホロチオエート（ＰＯ３S−）、ホスホロアミダート（Ｎ３’−Ｐ５’）（ＰＯ3ＮＨ）およびメチルホスホネート（ＰＯ3ＣＨ3）、ペプチド結合（「ＰＮＡ」）ならびに同種のものを含む。
【００８８】
用語「ヌクレオチドポリマー」、「オリゴヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチドポリマー」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」、「オリゴマー」または「核酸ポリマー」は、同じ意味で使用され、少なくとも２つのヌクレオチドを含むポリマーを指す。ヌクレオチドポリマーは、単一の種類のＤＮＡモノマー、ＲＮＡモノマーを含んでもよいか、またはいずれかの組合せで２つまたは複数の種類のＤＮＡモノマー、ＲＮＡモノマーを含んでもよい。核酸は一本鎖または二本鎖であってもよく、例えば、二本鎖核酸分子は、相補的な塩基で対合する塩基を介してハイブリダイズする２つの一本鎖核酸を含んでもよい。
【００８９】
「ポリＩ」オリゴヌクレオチドは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシドまたはその組合せの大部分を含む。イノシンアナログヌクレオシドは、例えば、７−デアザイノシン、２’−Ｏ−メチル−イノシン、７−チア−７，９−ジデアザイノシン、フォルマイシンＢ、８−アザイノシン、９−デアザイノシン、アロプリノールリボシド、８−ブロモ−イノシン、８−クロロイノシンおよび同種のものを含む。
【００９０】
「ポリＣ」オリゴヌクレオチドは、シチジン、シチジンアナログヌクレオシドまたはその組合せの大部分を含む。シチジンアナログヌクレオシドは、例えば、５−メチルシチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン、５−（１−プロピニル）シチジンおよび同種のものを含む。
【００９１】
「ポリＡ」オリゴヌクレオチドは、アデノシン、アデノシンアナログヌクレオシドまたはその組合せの大部分を含む。アデノシンアナログヌクレオシドは例えば、２−アミノ−アデモシン（ａｄｅｍｏｓｉｎｅ）、２’−Ｏ−メチル−アデノシン、２−アミノ−デオキシアデモシン（ｄｅｏｘｙａｄｅｍｏｓｉｎｅ）、７−デアザ−２’−アデノシン、７−デアザ−２’−デオキシアデノシンおよび同種のものを含む。
【００９２】
「ポリＵ」オリゴヌクレオチドは、ウリジン、ウリジンアナログヌクレオシドまたはその組合せの大部分を含む。ウリジンアナログヌクレオシドは、例えばデオキシウリジン（ｄＵ）、シチジン（Ｃ）、デオキシシチジン（ｄＣ）、チミジン（Ｔ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロムウラシル、２’−Ｏ−メチル−ウリジン、５−ヨードウラシル、５−メトキシ−エトキシ−メチル−ウラシル、５−プロピニルデオキシウリジンおよび同種のものを含む。
【００９３】
「ＣｐＧモチーフ」または「ＣｐＧエレメント」または「ＣｐＧ部位」は、核酸中のグアニンヌクレオシドに隣接して現われるシトシンヌクレオシドを含むヌクレオチドモチーフを指す。ヌクレオシドのＣおよびＧは、従来の５’−３’ヌクレオシド結合で２つをともに連結するリン酸塩により隔てられる。ＣｐＧモチーフは、ＸｎＣｐＧＸｎとして一般的に記載されてもよく、式中、Ｘはいずれかのヌクレオシドであり、ｎは１〜約５００のいずれかの数もしくはそれらの間のいずれかの量、例えば、約１〜約３００もしくはそれらの間のいずれかの量、約１〜約２５０もしくはそれらの間のいずれかの量、約１〜約２００もしくはそれらの間のいずれかの量、約１〜約１５０もしくはそれらの間のいずれかの量、または１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、２５０、２７５、４００、４２５、２５０、４７５、５００からであるか、もしくはそれらの間のいずれかの量である。本明細書において記述されるように、ＣｐＧモチーフ内のヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上が、ＬＮＡであることが好ましい。
【００９４】
ｄｓＲＮＡを含む二本鎖核酸分子のストランドは、水素結合（「ワトソン−クリック」塩基対とも呼ばれる）を介して秩序正しい様式で相互作用する。変異型塩基対は、フーグスティーン塩基対を含む非標準水素結合を介してもまた生じうる。いくつかの熱力学的条件、イオン条件またはｐＨ条件下で、三重らせんが特にリボ核酸により生じてもよい。これらおよび他の変異型水素結合または塩基対は当技術分野において公知であり、レーニンジャー−生化学の原理（Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ−Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第３版（ＮｅｌｓｏｎおよびＣｏｘ編、ワース・パブリッシャー（Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ニューヨーク）（参照することにより本明細書に組み入れられる）中で、例えば見出すことができる。
【００９５】
本発明の様々な態様に従い、適切な温度、イオンおよびｐＨの条件下で、ポリＩおよびポリＣのオリゴヌクレオチド、またはポリＡおよびポリＵのオリゴヌクレオチドは、ワトソン−クリック水素結合を介して二本鎖複合体を形成しえる。かかる複合体形成のために適切な特定の温度、イオンおよびｐＨの条件は当業者により認識可能であり、−そのような条件の識別のための方法、計算、技術および同種のものの例は、Freier（1997, Nucleic Acids Res. 25:4429-4443；参照することにより本明細書に組み入れられる）中で、例えば見出しうる。そのような二本鎖複合体の形成を、代わりに「ハイブリダイゼーション」と呼んでもよい。
【００９６】
本発明の様々な態様に従う、少なくとも１つのＬＮＡを含む二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、式ＩＩ：
【化２３】
2010519915.tif 000025
によって一般的に記述される。
【００９７】
式ＩＩは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＶn−（Ｓm）−Ｗpおよび第２のストランドＺn−（Ｄm）−Ｑpを有する、二本鎖ＲＮＡ分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であり；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＶ、Ｓ、Ｗ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。
【００９８】
少なくとも１つのＬＮＡを含みＲをさらに含む、本発明の様々な態様に従う二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、式ＩＩａ：
【化２４】
2010519915.tif 000026
によって一般的に記述される。
【００９９】
式ＩＩａは、５’、３’、または５’および３’の両方でオーバーラップする塩基を有し、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk1−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒk2および第２のストランドＲk3−Ｚn−（Ｄm）−Ｑp−Ｒk4を有する、二本鎖ＲＮＡ分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、独立して、ヌクレオシド間結合基によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよく、ここでＶおよびＺは結合でき、ＷおよびＱは結合できる。
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ；および
−ここでＲ、Ｖ、Ｓ、Ｗ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。
【０１００】
ポリＩ：Ｃを含む核酸
本発明は、式ＩＩのｄｓＲＮＡ化合物（式中、ＳおよびＤは、以下（式ＩＩｂ）：
【化２５】
2010519915.tif 000027
で定義されるようなＩおよびＣである。）もまた提供する。
【０１０１】
式ＩＩｂは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＶn−（Ｉm）−Ｗpおよび第２のストランドＺn−（Ｃm）−Ｑpを有する、二本鎖ＲＮＡ分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、独立して、ヌクレオシド間結合基によって連結されるいずれかのヌクレオシドであってもよく、ここでＶおよびＺは結合でき、ＷおよびＱは結合でき；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｉは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗ、およびジェミナルイノシンもしくはイノシンアナログヌクレオシドに結合されたイノシンまたはいずれかのイノシンアナログヌクレオシドであり；
−Ｃは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗ、およびジェミナルシトシンもしくはいずれかのシトシンアナログヌクレオシドに結合されたシトシンまたはいずれかのシトシンアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＶ、Ｉ、Ｗ、Ｚ、ＣおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。
【０１０２】
本発明の別のｄｓＲＮＡ分子は、式ＩＩの化合物（式中、ＳおよびＤは、以下（式ＩＩｃ）：
【化２６】
2010519915.tif 000028
で定義されるようなＩおよびＣであり、Ｒをさらに含む。）を含む。
【０１０３】
式ＩＩｃは、５’、３’、または５’および３’の両方でオーバーラップする塩基を有し、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk−Ｖn−（Ｉm）−Ｗp−Ｒkおよび第２のストランドＲk−Ｚn−（Ｃm）−Ｑp−Ｒkを有する、二本鎖ＲＮＡ分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、独立して、ヌクレオシド間結合基によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよく、ここでＶおよびＺは結合でき、ＷおよびＱは結合できる。
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｉは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗおよびジェミナルイノシンもしくはイノシンアナログに結合されたイノシンまたはいずれかのイノシンアナログヌクレオシドでありえる。
−Ｃは、ヌクレオシド間結合基結合によってＶ、Ｗおよびジェミナルシトシンもしくはいずれかのシトシンアナログに結合されたシトシンまたはいずれかのシトシンアナログリボヌクレオシドでありえる。
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様において、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ；および
−ここでＲ、Ｖ、Ｉ、Ｗ、Ｚ、ＣおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。
【０１０４】
少なくとも１つのＬＮＡを含む二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、式ＩＩの化合物（式中、ＳおよびＤは、以下（式ＩＩｄ）で定義されるようなＡおよびＵであり：式ＩＩｄ：
【化２７】
2010519915.tif 000029
によってもまた一般的に記述される。）を含む。
【０１０５】
式ＩＩｄは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＶn−（Ａm）−Ｗpおよび第２のストランドＺn−（Ｕm）−Ｑpを有する二本鎖ＲＮＡ分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、独立して、ヌクレオシド間結合基によって連結されるいずれかのヌクレオシドであってもよく、ここでＶおよびＺは結合でき、ＷおよびＱは結合でき；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ａは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗ、およびジェミナルアデノシンもしくはアデノシンアナログに結合されたアデノシンまたはいずれかのアデノシンアナログヌクレオシドであってもよく；
−Ｕは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗ、およびジェミナルウリジンもしくはいずれかのウリジンアナログに結合されたウリジンまたはいずれかのウリジンアナログヌクレオシドであってもよく；および
−ここでＲ、Ｖ、Ａ、Ｗ、Ｚ、ＵおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。
【０１０６】
本発明の別のｄｓＲＮＡ分子は、式ＩＩの化合物を含み、式中、（式ＩＩｅ）：
【化２８】
2010519915.tif 000030
で、以下に定義されるようなＳおよびＤはＡおよびＵでありＲをさらに含み、ここでｄｓＲＮＡのための少なくとも１つのヌクレオシドはＬＮＡである。
【０１０７】
式ＩＩｅは、５’、３’、または５’および３’の両方でオーバーラップする塩基を有し、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk1−Ｖn−（Ｉm）−Ｗp−Ｒk2および第２のストランドＲk4−Ｚn−（Ｃm）−Ｑp−Ｒk3を有する、二本鎖ＲＮＡ分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−Ｖ、Ｗ、ＺおよびＱは、独立して、ヌクレオシド間結合基によって連結されるいずれかのヌクレオシドであってもよく、ここでＶおよびＺは結合でき、ＷおよびＱは結合できる。
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ａは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗ、およびジェミナルアデノシンもしくはアデノシンアナログに結合されたアデノシンまたはいずれかのアデノシンアナログヌクレオシドであってもよく；
−Ｕは、ヌクレオシド間結合基によってＶ、Ｗ、およびジェミナルウリジンもしくはいずれかのウリジンアナログに結合されたウリジンまたはいずれかのウリジンアナログヌクレオシドであってもよく；および
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒヌクレオシドにより結合することができ；および
−ここでＲ、ＶおよびＡ、Ｗ、Ｚ、ＵおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のＬＮＡモノマーを含む。
【０１０８】
式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩｄ、ＩＩｅに従う化合物は、Ｒ、Ｖ、Ｗ、Ｚ、Ｑのうちの１つ以上において、１つ以上のＬＮＡ分子を含みうる。例えば、１つ以上のＬＮＡ分子は、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの５’末端のＶ、ＱもしくはＶおよびＱの両方の内に位置してもよいし、１つ以上のＬＮＡ分子は、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの３’末端のＺ、ＷもしくはＺおよびＷの両方の内に位置してもよいし、または１つ以上のＬＮＡ分子は、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩｄもしくはＩＩｅの５’末端および３’末端のＶ、Ｗ、Ｚ、Ｑもしくはその組合せの内に位置してもよい。
【０１０９】
本発明は、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩｉｄまたはＩＩｅに従う化合物（式中、ＶおよびＷはＬＮＡヌクレオシド（それぞれ、ＶLNA、ＷLNA）であり、ＺおよびＱはＬＮＡヌクレオシド（それぞれ、ＺLNA、ＱLNA）であり、Ｉはイノシンであり、Ｃはシチジンであり、ｎおよびｐは２であり、ｍは上で定義された通りであり、約１〜約５００またはそれらの間のいずれかの量であってもよく、例えば、ｍは約１０〜約５０またはそれらの間のいずれかの量であり、例えば、ｍは、約１、２、５、７、１０、１２、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００またはそれらの間のいずれかの量であり、例えば、ｍは１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５であってもよく、ヌクレオシド間結合基はその間のホスホジエステルである。）もまた提供する。この化合物の非限定例は、式ＩＩＩ：
【化２９】
2010519915.tif 000031
において示される。
【０１１０】
本発明のｄｓＲＮＡの非限定例は、式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、ＩＩＩｃまたはＩＩＩｄのうちのいずれか１つにおいて示される通りでありえる（式中、Ｇはグアノシンヌクレオシドであり、Ｃはシチジンヌクレオシドであり、ｍは２２である。）。
【化３０】
2010519915.tif 000032
【化３１】
2010519915.tif 000033
【化３２】
2010519915.tif 000034
【化３３】
2010519915.tif 000035
【０１１１】
少なくとも１つのＬＮＡを含む、一本鎖核酸分子、または本発明の様々な態様に従う一本鎖ＲＮＡ（１本鎖ＲＮＡ）分子は、式ＩＶａ：
Ｖn−（Ｓm）−Ｗp
式ＩＶａ
によって一般的に記述される。
【０１１２】
式ＩＶａは、５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされる、立体配置Ｖn−（Ｓm）−Ｗp
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＶおよびＷは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり、および；
−ここでＶ、ＳおよびＷのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）を有する一本鎖核酸分子を表す。
【０１１３】
少なくとも１つのＬＮＡを含む、一本鎖核酸分子、または本発明の様々な態様に従う一本鎖ＲＮＡ（１本鎖ＲＮＡ）分子は、式ＩＶｂ：
Ｑp−（Ｄm）−Ｚn
式ＩＶｂ
によって一般的に記述される。
【０１１４】
式ＩＶｂは、５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされる、第１のストランドＱp−（Ｄm）−Ｚn
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＺおよびＱは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；および
−ここでＺ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）を有する一本鎖ＲＮＡ分子を表わす。
【０１１５】
本発明のいくつかの実施形態において、組成物は、式ＩＶａもしくは式ＩＶｂ、または式ＩＶａおよび式ＩＶｂの両方に従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、ある態様において、式ＩＶａおよび式ＩＶｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＩＶａおよび式ＩＶｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１１６】
他の態様において、式ＩＶａに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶａまたは式ＩＶｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１１７】
他の態様において、式ＩＶｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶａに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰中で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶａまたは式ＩＶｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１１８】
少なくとも１つのＬＮＡを含む、一本鎖核酸分子、または本発明の様々な態様に従う一本鎖ＲＮＡ（１本鎖ＲＮＡ）分子は、式ＩＶｃ：
Ｒk1−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒk2
式ＩＶｃ
によって一般的に記述される。
【０１１９】
式ＩＶｃは、５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされる、立体配置Ｒk1−Ｖn−（Ｓm）−Ｗp−Ｒk2
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＶおよびＷは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1およびｋ2は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様では、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ、および；
−ここでＶ、Ｓ、ＲおよびＷのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）を有する一本鎖核酸分子を表す。
【０１２０】
少なくとも１つのＬＮＡを含む、一本鎖核酸分子、または本発明の様々な態様に従う一本鎖ＲＮＡ（１本鎖ＲＮＡ）分子は、式ＩＶｄ：
Ｒk3−Ｑp−（Ｄm）−Ｚn−Ｒk4
式ＩＶｄ
によって一般的に記述される。
【０１２１】
式ＩＶｄは、５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされる、立体配置Ｒk3−Ｑp−（Ｄm）−Ｚn−Ｒk4
（式中、
−ｎは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｎ＝０という条件では、ｐ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ｐは０〜１０のいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの量であって、ｐ＝０という条件では、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
−ＺおよびＱは、いずれかのヌクレオシド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオシドアナログまたはデオキシリボヌクレオシドアナログであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合基によってジェミナルヌクレオシドに結合されたいずれかのリボヌクレオシドであってもよいか、またはＲは不在であってもよい。ある態様において、例えば、第１のストランドの５’Ｒリボヌクレオシドは、第２のストランドの３’Ｒリボヌクレオシドと結合することができ、および；
−ここでＲ、Ｚ、ＤおよびＱのうちの１つ以上は、１つ以上のロックされた核酸（ＬＮＡ）モノマーを含む。）を有する一本鎖核酸分子を表す。
【０１２２】
本発明のある態様では、組成物は、式ＩＶｃもしくは式ＩＶｄ、または式ＩＶｃおよび式ＩＶｄの両方に従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、ある態様において、式ＩＶｃおよび式ＩＶｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＩＶｃおよび式ＩＶｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１２３】
他の態様において、式ＩＶｃに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰でまたは約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｃまたは式ＩＶｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１２４】
他の態様において、式ＩＶｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｃに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰中で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｃまたは式ＩＶｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１２５】
本発明の一本鎖核酸の非限定例は、式ＩＶｅ、ＩＶｆ、ＩＶｇ、ＩＶｈ、ＩＶｉまたはＩＶｊのうちのいずれか１つで示される通りであってもよく（５’−３’の向き（左側〜右側）で示される）、式中、Ｉは２’−Ｏ−メチル−イノシンヌクレオシドであり、Ｃは２’−Ｏ−メチル−シトシンヌクレオシドであり、Ｇは２’−Ｏ−メチル−グアノシンヌクレオシドであり、Ｔは２’−Ｏ’メチル−チミジンヌクレオシドであり、Ａは２’−Ｏ−メチル−アデノシンヌクレオシドであり、Ｕは２’−Ｏ−メチル−ウリジンヌクレオシドであり、ＴLNAはＬＮＡリボースを有するチミジンヌクレオシドであり、ＧLNAはＬＮＡリボースを有するグアノシンヌクレオシドであり、ＣLNAはＬＮＡリボースを有するシトシンヌクレオシドであり、ＡLNAはＬＮＡリボースを有するアデノシンヌクレオシドであり、ｍは１５である。
（Ｉ15）−Ｇ−ＴLNA−ＧLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＧLNA
式ＩＶｅ
（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−Ｃ−ＡLNA−ＣLNA
式ＩＶｆ
ＧLNA−（Ｉ15）−Ｇ−ＴLNA−ＧLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA
式ＩＶｇ
ＣLNA−（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−Ｕ−ＣLNA−ＡLNA
式ＩＶｈ
ＴLNA−ＧLNA−（Ｉ15）−ＴLNA−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＡLNA
式ＩＶｉ
ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＣLNA
式ＩＶｊ
【０１２６】
本発明のある態様において、組成物は、式ＩＶｅもしくは式ＩＶｆ、または式ＩＶｅおよび式ＩＶｆの両方に従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、ある態様において、式ＩＶｅおよび式ＩＶｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＩＶｅおよび式ＩＶｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１２７】
他の態様において、式ＩＶｅに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｅまたは式ＩＶｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１２８】
他の態様において、式ＩＶｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｅに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰中で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｅまたは式ＩＶｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１２９】
本発明のある態様では、組成物は、式ＩＶｇもしくは式ＩＶｈ、または式ＩＶｇおよび式ＩＶｈの両方に従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、ある態様において、式ＩＶｇおよび式ＩＶｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＩＶｇおよび式ＩＶｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１３０】
他の態様において、式ＩＶｇに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰中で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｇまたは式ＩＶｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１３１】
他の態様において、式ＩＶｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｇに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｇまたは式ＩＶｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１３２】
本発明のある態様では、組成物は、式ＩＶｉもしくは式ＩＶｊ、または式ＩＶｉおよび式ＩＶｊの両方に従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、ある態様において、式ＩＶｉおよび式ＩＶｊに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＩＶｉおよび式ＩＶｊに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１３３】
他の態様において、式ＩＶｉに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｊに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｉまたは式ＩＶｊに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１３４】
他の態様において、式ＩＶｊに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＩＶｉに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＩＶｉまたは式ＩＶｊに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１３５】
ある態様において、対の一本鎖核酸、例えば式ＩＶｅおよびＩＶｆ、または式ＩＶｇおよびＩＶｈ、または式ＩＶｉおよびＩＶｊは、ある熱力学的、イオンまたはｐＨの条件下でハイブリダイズおよび／またはコンカテマー化してもよい。
【０１３６】
ＣｐＧモチーフを含む核酸
ＣｐＧモチーフが少なくとも１つのＬＮＡを含むＣｐＧモチーフを含む本発明の様々な態様に従う二本鎖核酸分子は、式ＶＩ〜ＶＩｄ：
【化３４】
2010519915.tif 000036
によって一般的に記述される。
【０１３７】
式ＶＩａは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk1−（Ｓm）−（ＥLNA）−（Ｄm）−Ｒk2および第２のストランドＲk3−（Ｄm）−（ＦLNA）−（Ｓm）−Ｒk4を有する二本鎖核酸分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【化３５】
2010519915.tif 000037
【０１３８】
式ＶＩｂは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk1−（Ｄm）−（ＥLNA）−（Ｓm）−Ｒk2および第２のストランドＲk3−（Ｓm）−（ＦLNA）−（Ｄm）−Ｒk4を有する二本鎖核酸分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）までので表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【化３６】
2010519915.tif 000038
【０１３９】
式ＶＩｃは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk1−（Ｓm）−（ＥLNA）−（Ｓm）−Ｒk2および第２のストランドＲk3−（Ｄm）−（ＦLNA）−（Ｄm）−Ｒk4を有する二本鎖核酸分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【化３７】
2010519915.tif 000039
【０１４０】
式ＶＩｄは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランドＲk1−（Ｄm）−（ＥLNA）−（Ｄm）−Ｒk2および第２のストランドＲk3−（Ｓm）−（ＦLNA）−（Ｓm）−Ｒk4を有する二本鎖核酸分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
各々の式ＶＩａ〜ｄについて；
−ＥLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ＦLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。
【０１４１】
いずれかの様式で限定して考慮すべできない本発明のある態様において、ＣｐＧモチーフは、ＬＮＡヌクレオシドの２つのヘキサマー配列：
ＥLNA＝５’−ＧLNA  ＴLNA  ＣLNA  ＧLNA  ＴLNA  ＴLNA−３’（配列番号：２３）；および
ＦLNA＝５’−ＡLNA  ＡLNA  ＣLNA  ＧLNA  ＡLNA  ＣLNA−３’（配列番号：２４）を含んでもよい。
かかる配列の非限定例は、式ＶＩｅ〜ＶＩｈによって一般的に記述される。
【化３８】
2010519915.tif 000040
【０１４２】
式ＶＩｅは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランド
ＶＩｉ：Ｒk1−（Ｓm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｄm）−Ｒk2
および第２のストランド
ＶＩｊ：Ｒk3−（Ｄm）−ＣLNA−ＡLNA−ＧLNA−ＣLNA−ＡLNA−ＡLNA−（Ｓm）−Ｒk4
を有する二本鎖核酸分子を表わす。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表わされるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表わされる（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【化３９】
2010519915.tif 000041
【０１４３】
式ＶＩｆは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランド
ＶＩｋ：Ｒk1−（Ｄm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｓm）−Ｒk2
および第２のストランド
ＶＩｌ：Ｒk3−（Ｓm）−ＣLNA−ＡLNA−ＧLNA−ＣLNA−ＡLNA−ＡLNA−（Ｄm）−Ｒk4
を有する二本鎖核酸分子を表す。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表されるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表される（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【化４０】
2010519915.tif 000042
【０１４４】
式ＶＩｇは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランド
ＶＩｍ：Ｒk1−（Ｓm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｓm）−Ｒk2
および第２のストランド
ＶＩｎ：Ｒk3−（Ｄm）−ＣLNA−ＡLNA−ＧLNA−ＣLNA−ＡLNA−ＡLNA−（Ｄm）−Ｒk4
を有する二本鎖核酸分子を表す。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表されるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表される（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【化４１】
2010519915.tif 000043
【０１４５】
式ＶＩｈは、単一水平線によって表わされる相補的なヌクレオシドとの間に結合を備えた、第１のストランド
ＶＩｏ：Ｒk1−（Ｄm）−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｄm）−Ｒk2
および第２のストランド
ＶＩｐ：Ｒk3−（Ｓm）−ＣLNA−ＡLNA−ＧLNA−ＣLNA−ＡLNA−ＡLNA−（Ｓm）−Ｒk4
を有する二本鎖核酸分子を表す。第１のストランドは５’〜３’方向（左側〜右側）で表されるが、第２のストランドは第１のストランドに対して逆平行の向きで表される（左側〜右側で読む場合３’〜５’として見える）。
【０１４６】
各々の式ＶＩｅ〜ＶＩｈおよびＶＩｉ〜ＶＩｐについて；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。
【０１４７】
コンカテマーの組合せ
本発明のある態様において、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドを含む少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含む二本鎖核酸は、「付着末端」を形成する非対合ヌクレオシドを含み、コンカテマーを形成してもよい。式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈ（左側〜右側で読んで５’〜３’の向きで以下に示される）は、例えば式ＶＩａ〜ＶＩｈにおいて上述されたもののような二本鎖核酸を形成するように配列相補性に従ってハイブリダイズする一本鎖核酸を表す。「付着末端」を含む二本鎖核酸は、本発明のいくつかの実施形態に従って、コンカテマーポリマーについてのモノマーともまた呼ぶことができる。式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈ、続いて式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈを含む核酸の組合せの例を以下に示す。
Ｒk1−（Ｓm）−（ＥLNA）  式ＶＩＩａ
Ｒk2−（Ｄm）−（ＦLNA）  式ＶＩＩｂ
Ｒk3−（Ｄm）−（ＥLNA）  式ＶＩＩｃ
Ｒk4−（Ｓm）−（ＦLNA）  式ＶＩＩｄ
（ＥLNA）−（Ｓm）−Ｒk1  式ＶＩＩｅ
（ＦLNA）−（Ｄm）−Ｒk2  式ＶＩＩｆ
（ＥLNA）−（Ｄm）−Ｒk2  式ＶＩＩｇ
（ＦLNA）−（Ｓm）−Ｒk2  式ＶＩＩｈ
【０１４８】
各々の式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈについて；
−ＥLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ＦLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結しているいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。
【０１４９】
本発明のある態様では、組成物は、式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈの１つまたはそれ以上の核酸、または式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈの少なくとも２つまたはそれ以上の核酸の組合せに従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、ある態様において、式ＶＩＩａおよび式ＶＩＩｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＶＩＩｃ、式ＶＩＩｄ、式ＶＩＩｅ、式ＶＩＩｆ、式ＶＩＩｇまたは式ＶＩＩｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５０】
他の態様において、式ＶＩＩａに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰でまたは約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩａまたは式ＶＩＩｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５１】
他の態様において、式ＶＩＩｃに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子と約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩｃまたは式ＶＩＩｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５２】
他の態様において、式ＶＩＩｅに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩｅまたは式ＶＩＩｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５３】
他の態様において、式ＶＩＩｇに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩｇまたは式ＶＩＩｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５４】
他の態様において、式ＶＩＩｇに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩｇまたは式ＶＩＩｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５５】
他の態様において、式ＶＩＩａに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰でまたは約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩａまたは式ＶＩＩｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５６】
他の態様において、式ＶＩＩｅに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩｅまたは式ＶＩＩｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５７】
他の態様において、式ＶＩＩｃに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、ＶＩＩｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で式組み合わせてもよい。式ＶＩＩｃまたは式ＶＩＩｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１５８】
例示的な塩基対アレンジを以下に図示する。本発明の様々な実施形態に従う他の対合および二本鎖核酸のアレンジは、当業者に明らかである。以下に図示される各々の例示的な対合について、当技術分野における慣例に従って左側〜右側で読む場合、第１のストランドは５’〜３’の向きで提供され、第２のストランドは３’〜５’の向きで提供される。
【化４２】
2010519915.tif 000044
【化４３】
2010519915.tif 000045
【化４４】
2010519915.tif 000046
【化４５】
2010519915.tif 000047
式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈについての代替の対合、式中、ｋ１，２，３，４＝０：
【化４６】
2010519915.tif 000048
【化４７】
2010519915.tif 000049
【化４８】
2010519915.tif 000050
【化４９】
2010519915.tif 000051
かかるモノマーはコンカテマーを作って、より長いまたは環状の二本鎖核酸ポリマーを形成する。
【０１５９】
本発明のいくつかの実施形態において、式ＶＩＩａ〜ｈに従う一本鎖核酸分子は、塩基対を作って平滑末端の二本鎖核酸分子を形成する。例示的な塩基対アレンジを以下に図示する。
【化５０】
2010519915.tif 000052
【化５１】
2010519915.tif 000053
【化５２】
2010519915.tif 000054
【化５３】
2010519915.tif 000055
【０１６０】
上述の例において、ｋ１，２，３，４は１〜１０の（かつゼロではない）整数であり、Ｒはいずれかのヌクレオシドまたは上述されるようなヌクレオシド群であってもよく、そこでは、第１のストランドおよび第２のストランドの各々に由来する少なくとも１つのヌクレオシドは、水素結合した塩基対を形成する。
【０１６１】
ある態様において、対の一本鎖核酸、例えば式ＶＩＩａおよびＶＩＩｂ、または式ＶＩＩｃおよびＶＩＩｄ、または式ＶＩＩｅおよびＶＩＩｆ、または式ＶＩＩｇおよびＶＩＩｈ、または式ＶＩＩｇおよびＶＩＩｄ、または式ＶＩＩａおよびＶＩＩｆ、または式ＶＩＩｅおよびＶＩＩｂ、または式ＶＩＩｃおよびＶＩＩｈは、ある熱力学的、イオンまたはｐＨの条件下で、コンカテマー化してもよい。
【０１６２】
本発明のある態様において、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドを含む少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含む二本鎖核酸は、「付着末端」を形成する非対合ヌクレオシドを含み、コンカテマーを形成してもよい。式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈ（左側〜右側で読んで５’〜３’向きで以下に示される）は、例えば式ＶＩａ〜ＶＩｈにおいて上述されたもののような、式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈについて上述されたもののような、二本鎖核酸を形成するように配列相補性に従ってハイブリダイズする一本鎖核酸を表す。「付着末端」を含む二本鎖核酸は、本発明のある態様に従って、コンカテマーポリマーについてのモノマーともまた呼ぶことができる。式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈ、続いて式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈを含む核酸の組合せの例を以下に示す。
（Ｓm）−Ｒk1−（ＥLNA）  式ＶＩＩＩａ
（Ｄm）−Ｒk2−（ＦLNA）  式ＶＩＩＩｂ
（Ｄm）−Ｒk3−（ＥLNA）  式ＶＩＩＩｃ
（Ｓm）−Ｒk4−（ＦLNA）  式ＶＩＩＩｄ
（ＥLNA）−Ｒk1−（Ｓm）  式ＶＩＩＩｅ
（ＦLNA）−Ｒk2  （Ｄm）  式ＶＩＩＩｆ
（ＥLNA）−Ｒk2−（Ｄm）  式ＶＩＩＩｇ
（ＦLNA）−Ｒk2−（Ｓm）  式ＶＩＩＩｈ
各々の式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈについて；
−ＥLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ＦLNAはＣｐＧまたはＣｐＧモチーフであり、ここでＣｐＧまたはＣｐＧモチーフを含むヌクレオシド、Ｃ、Ｇのうちの１つ以上はＬＮＡであり；
−ｍは１〜５００もしくは１０〜５０のいずれかの整数、または５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０または１００を含む、それらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｓは、イノシン、イノシンアナログヌクレオシド、アデニンまたはアデニンアナログヌクレオシドであり；
−Ｄは、シトシン、シトシンアナログヌクレオシド、ウラシルまたはウラシルアナログヌクレオシドであり；
−ｋ1、ｋ2、ｋ3およびｋ4は、独立して、０〜１０を含めたいずれかの整数、またはそれらの間のいずれかの整数であってもよく；
−Ｒは、独立して、ヌクレオシド間結合によって連結されるいずれかのリボヌクレオシドであってもよい。
【０１６３】
本発明のある態様において、組成物は、式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈの１つまたはそれ以上の核酸、または式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈの少なくとも２つまたはそれ以上の核酸の組合せに従う一本鎖ＲＮＡ分子を様々なモル比で含みうる。例えば、いくつかの実施形態において、式ＶＩＩＩａおよび式ＶＩＩＩｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、およそ等モルの比率で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｃ、式ＶＩＩＩｄ、式ＶＩＩＩｅ、式ＶＩＩＩｆ、式ＶＩＩＩｇまたは式ＶＩＩＩｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１６４】
他の態様において、式ＶＩＩＩａに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩａまたは式ＶＩＩＩｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１６５】
他の態様において、式ＶＩＩＩｃに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｃまたは式ＶＩＩＩｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１６６】
他の態様において、式ＶＩＩＩｅに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｅまたは式ＶＩＩＩｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１６７】
他の態様において、式ＶＩＩＩｇに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｇまたは式ＶＩＩＩｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１６８】
他の実施形態において、式ＶＩＩＩｇに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｄに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｇまたは式ＶＩＩＩｄに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１６９】
他の態様において、式ＶＩＩＩａに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｆに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩａまたは式ＶＩＩＩｆに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１７０】
他の態様において、式ＶＩＩＩｅに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｂに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｅまたは式ＶＩＩＩｂに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１７１】
他の態様において、式ＶＩＩＩｃに従う一本鎖ＲＮＡ分子を、式ＶＩＩＩｈに従う一本鎖ＲＮＡ分子と、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のモル過剰で、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍の過剰で、組成物中で組み合わせてもよい。式ＶＩＩＩｃまたは式ＶＩＩＩｈに従う、いくつかの一本鎖ＲＮＡ分子、またはすべての一本鎖ＲＮＡ分子は、他の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子とハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ分子を形成してもよいし、形成しなくてもよい。
【０１７２】
例示的な塩基対アレンジを以下に図示する。本発明の様々な実施形態に従う他の対合および二本鎖核酸のアレンジは、当業者に明らかでなる。以下に図示される各々の例示的な対合について、当技術分野における慣例に従って左側〜右側で読む場合、第１のストランドは５’〜３’の向きで提供され、第２のストランドは３’〜５’の向きで提供される。
【化５４】
2010519915.tif 000056
【化５５】
2010519915.tif 000057
【化５６】
2010519915.tif 000058
【化５７】
2010519915.tif 000059
式ＶＩＩＩａ〜ＶＩＩＩｈについての代替の対合：
【化５８】
2010519915.tif 000060
【化５９】
2010519915.tif 000061
【化６０】
2010519915.tif 000062
【化６１】
2010519915.tif 000063
かかるモノマーはコンカテマーを作って、より長いまたは環状の二本鎖核酸ポリマーを形成する。
【０１７３】
本発明のいくつかの実施形態において、式ＶＩＩＩａ〜ｈに従う一本鎖核酸分子は、塩基対を作って平滑末端の二本鎖核酸分子を形成する。例示的な塩基対アレンジを以下に図示する。
【化６２】
2010519915.tif 000064
【化６３】
2010519915.tif 000065
【化６４】
2010519915.tif 000066
【化６５】
2010519915.tif 000067
【０１７４】
上述の例において、ｋ１，２，３，４は０〜１０の整数であってもよく、Ｒはいずれかのヌクレオシドまたは上述されるようなヌクレオシド群であってもよい。ある態様において、ｋが０以上である場合、第１のストランドおよび第２のストランドの各々に由来するＲの少なくとも１つのヌクレオシドは、水素結合した塩基対を形成する。
【０１７５】
ある態様において、対の一本鎖核酸、例えば式ＶＩＩＩａおよびＶＩＩＩｂ、または式ＶＩＩＩｃおよびＶＩＩＩｄ、または式ＶＩＩＩｅおよびＶＩＩＩｆ、または式ＶＩＩＩｇおよびＶＩＩＩｈ、または式ＶＩＩＩｇおよびＶＩＩＩｄ、または式ＶＩＩＩａおよびＶＩＩＩｆ、または式ＶＩＩＩｅおよびＶＩＩＩｂ、または式ＶＩＩＩｃおよびＶＩＩＩｈは、ある熱力学的、イオンまたはｐＨの条件下で、コンカテマー化してもよい。
【０１７６】
本発明の様々な態様に従う、アジュバントまたはアジュバント組成物は、本明細書において記述されるような１つまたはそれ以上の核酸種を含む。核酸種は一本鎖または二本鎖でありえる。一本鎖種および二本鎖種の組合せはアジュバントまたはアジュバント組成物中に存在してもよい。
【０１７７】
アジュバントまたはアジュバント組成物は、ＴＬＲ３またはＴＬＲ９についての選択的アゴニストであってもよい。本発明のある態様において、アジュバントまたはアジュバント組成物はＴＬＲ３およびＴＬＲ９の両方についてのアゴニストである。ＴＬＲ３およびＴＬＲ９の両方を含む二本鎖核酸の例は、２つまたは複数の式ＶＩＩａ〜ｈもしく式ＶＩＩＩａ〜ｈ、または式ＶＩＩａ〜ｈおよび式ＶＩＩＩａ〜ｈを含む核酸を含む。
【０１７８】
本発明のある態様に従う二本鎖核酸（例えば２つまたは複数の式ＶＩＩａ〜ｈまたは式ＶＩＩＩａ〜ｈを含む核酸）は、アジュバントまたはアジュバント組成物中に含まれ、ＴＬＲ３およびＴＬＲ９のアゴニスト活性の両方を含むアジュバントまたはアジュバント組成物を提供する。ＴＬＲ３およびＴＬＲ９のアゴニスト活性は単一種の二本鎖核酸によって提供されえる。
【０１７９】
ＩＰ−１０分析を使用して、アジュバント組成物がＴＬＲ−３アゴニスト活性を提供する能力を評価しえる。ヒトＨＴ２９細胞は、ＴＬＲ−３アゴニストの刺激の結果として培養上清の中へＩＰ−１０を分泌する。培養上清におけるＩＰ−１０は例えばＥＬＩＳＡによって定量されてもよい。他の例として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）はＴＬＲ−３アゴニストの刺激の結果として上清の中へサイトカインを分泌する。分泌サイトカイン、例えばインターフェロン−α、インターフェロン−βおよび／またはインターフェロン−γは、例えばＥＬＩＳＡによって定量されてもよい。他の例として、樹状細胞などの免疫のエフェクター細胞の成熟を評価しえる。
【０１８０】
アジュバント組成物がＴＬＲ９アゴニスト活性を提供する能力を評価するのに、インビトロの分析を使用してもよい。例えば、二本鎖核酸組成物の活性は、Ｂ細胞増殖分析またはマクロファージもしくは樹状細胞によるサイトカイン産生によって評価されてもよい。そのような分析の例は、例えばJiang W et al 2006. Methods Mol Med 127:55-70中に記述される。
【０１８１】
アジュバント組成物を含む本発明の様々な実施形態に従う組成物は、約０．１ｕｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの核酸の用量（被験体の重量に基づいた）もしくはそれらの間のいずれかの量、例えば約１ｕｇ〜約２０００ｕｇ／ｍｌもしくはそれらの間のいずれかの量の核酸、約１０ｕｇ〜約１０００ｕｇもしくはそれらの間のいずれかの量の核酸、または約３０ｕｇ〜約１０００ｕｇもしくはそれらの間のいずれかの量の核酸として投与されてもよい。例えば、約０．１、０．５、１．０、２．０、５．０、１０．０  １５．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、５０．０  ６０．０、７０．０、８０．０、９０．０、１００、１２０、１４０、１６０  １８０、２００、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、５０００、１００００、２００００ｕｇまたはそれらの間のいずれかの量の核酸の用量を使用してもよい。
【０１８２】
本明細書において使用されるようなアジュバントの「有効量」は、免疫原が生物学的活性を示す免疫原と共に共投与された場合に免疫刺激効果を持つのに必要なアジュバントの量を指す。免疫原は、約０．１ｕｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの量、もしくはそれらの間のいずれかの量、または約１ｕｇ／ｍｌ〜約２０００ｕｇ／ｍｌ、もしくはそれらの間のいずれかの量で存在してもよい。アジュバントは、約０．１ｕｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの量、もしくはそれらの間のいずれかの量、または約１ｕｇ／ｍｌ〜約２０００ｕｇ／ｍｌ、もしくはそれらの間のいずれかの量で存在してもよい。免疫原は、殺傷した生物全体、タンパク質、ペプチド、融合タンパク質、融合ペプチド、組換えタンパク質または組換えペプチドであってもよい。免疫原はＨｓｐＥ７であってもよい。
【０１８３】
本発明の様々な態様に従うアジュバントは、様々な薬学的に許容される賦形剤のいずれかと共に、しばしば水性媒体、例えば注射用水、乳酸リンゲル液、等張食塩水などの中に製剤化されてもよい。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、塩、バッファー、抗酸化剤、錯化剤、等張剤、凍結防止剤、溶解保護剤、懸濁化剤、乳化剤、抗菌剤、防腐剤、キレート剤、結合剤、界面活性剤、湿潤剤、固定油などの非水性媒体、または持続放出もしくは制御放出のためのポリマーを含む。例えば、Berge et al.（1977. J. Pharm Sci. 66:1-19）、またはレミントン−製薬の科学と実行（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ−Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ編、リッピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンズ・フィラデルフィア（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）（それらの両方は参照することにより本明細書に組み入れられる）を参照。
【０１８４】
賦形剤は、カルボキシメチルセルロースまたはポリカチオン性ポリマーであってもよい。ポリカチオン性ポリマーの例は、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、またはカチオン性アミノ酸の大部分を含むポリペプチドを含むが、これらに限定されない。そのような賦形剤の分子量、濃度および調製の方法は、例えばＵＳ４，３４９，５３８（参照することにより本明細書に組み入れられる）中で見出しうる。
【０１８５】
本発明の様々な態様に従うアジュバントを含む組成物は、例えば、皮下注射、腹膜腔内注射、筋肉注射、静脈注射、表皮または経皮の投与、経口的、経鼻的、経直腸的または経膣的な粘膜膜投与を含むいくつかの経路のうちのいずれかによって投与されてもよい。例えば、レミントン−製薬の科学と実行、第２１版、Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ編、リッピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンズ・フィラデルフィアを参照。担体製剤は、投与経路に従って選択または修飾されてもよい。
【０１８６】
本発明の様々な態様に従う組成物は、単位投与量形態で、または製剤もしくは使用の時点での希釈のために適切なバルク形態で提供されてもよい。
【０１８７】
本発明の様々な態様に従う組成物は、単一用量で、または長期にわたって投与する複数用量で被験体に投与されてもよい。投与計画は、例えば被験体の病態、年齢、性別、体重、投与経路、製剤形態、または全体的な健康に依存しうる。投与計画は、被験体における吸着、分布、代謝、排泄および毒性の測定から算定されえるか、またはヒト被験体における使用のためのラットまたはマウスなどの実験動物での測定から推定されえる。投与量および治療のレジメンの最適化は、例えば、グッドマン＆ギルマンの治療学の薬理学的基礎（Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）第１１版、２００６年、ＬＬ  Ｂｒｕｎｔｏｎ編、マグロウヒル（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ）社、ニューヨーク、またはレミントン−製薬の科学と実行、第２１版、Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ編、リッピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンズ・フィラデルフィア、中で検討される。
【０１８８】
本発明の文脈中で、本明細書において使用されるような用語「治療」、「治療すること」、「治療用使用」または「治療レジメン」は、同じ意味で使用でき、本発明の組成物の投与の予防的、対症的および治療的なモダリティを包含することを意味し、病状、病態、症状、徴候、または炎症に基づく病理、癌、感染症、アレルギー反応、高度免疫反応、もしくは他の治療すべき疾患もしくは障害によって引き起こされる障害を改善するか、または症状、徴候、病態、もしくはそれと関連する障害の進行を予防、妨害、遅延もしくは好転させる、ここで請求された化合物のいずれかのおよび全ての使用を含む。したがって、所望されない病状、症状、病態、徴候、または炎症に基づく病理に関連した障害、または身体の免疫応答の刺激から利益を得る他の疾患もしくは障害の、任意の予防、改善、緩和、好転または完全な消失は、本発明によって包含される。治療は、単独でまたは免疫原との組合せで、本明細書において記述されるような組成物の有効量の投与を含みうる。
【０１８９】
本発明の様々な態様に従う組成物は、１つ以上の免疫原、例えばウイルス性または細菌性の（「病原体」）免疫原をさらに含んでもよい。免疫原は、殺傷された生物全体（「死菌ワクチン」）から調製されえるか、または特異的なタンパク質、ペプチド、もしくは病原体の他の下位構造から調製されえる。あるいは、免疫原は、「Ｈｉｓ−タグ」などの他の非病原体タンパク質もしくはペプチドまたは免疫原の精製において有用な他の部分と融合した病原体からのタンパク質またはペプチドの全体もしくは一部を含む、融合タンパク質であってもよい。特異的なタンパク質またはペプチドは、分子生物学の技術または方法を使用して産生されてもよい（「組換え」タンパク質またはペプチド）。組換え分子生物学で使用される従来の技術または方法は、例えば、分子クローニング：実験手引き書、第３版、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、ＣＳＨＬプレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク；分子生物学における最新のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、２００７年、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ編、ワイリー・インターサイエンス（Ｗｉｌｅｙ  ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ）、ニューヨーク；免疫学における最新のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、２００６年、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ編、ワイリー・インターサイエンス、ニューヨーク中で記述される。
【０１９０】
免疫原の例は、熱ショックタンパク質、細菌性、真菌性もしくはウイルス性の病原体に由来する抗原、または細菌性もしくはウイルス性の病原体に由来する抗原を含む熱ショック融合タンパク質、例えばＨｓｐＥ７（ＷＯ９９／０７８６０、ＵＳ７，１５７，０８９、これらの両方は参照することにより本明細書に組み入れられる）であるがこれに限定されないタンパク質を含むが、これらに限定されない。細菌性、真菌性またはウイルス性の病原体の例は、以下の疾患の原因因子を含むが、これらに限定されない。乳頭腫、性器疣贅、インフルエンザ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、Ｇ型肝炎、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＡＩＤＳ、エイズ関連症候群、水ぼうそう（水痘）、風邪、サイトメガロウイルス感染症、コロラドダニ熱−デング熱、エボラ出血熱−手足口病、肝炎、単純ヘルペス、帯状疱疹、ＨＰＶ、インフルエンザ（Ｆｌｕ）、ラッサ熱、麻疹、マールブルク出血熱、伝染性単核症、耳下腺炎、小児麻痺、進行性多病巣性白質脳症、狂犬病、風疹、ＳＡＲＳ、天然痘（痘瘡）、ウイルス性脳炎、ウイルス性胃腸炎、ウイルス性髄膜炎、ウイルス性肺炎、西ナイル疾患、黄熱病、炭疽菌、細菌性髄膜炎、ボツリヌス中毒、ブルセラ症、カンピロバクター症、ネコひっかき病、コレラ、ジフテリア、発疹チフス、淋病、とびひ、レジオネラ症、レプラ（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、類鼻疽、ＭＲＳＡ感染症、ノカルジア症、百日咳、ペスト、肺炎球菌性肺炎、オウム病、Ｑ熱、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、サルモネラ症、猖紅熱、細菌性赤痢、梅毒、破傷風、トラホーム、結核、野兎病、腸チフス熱、チフス、尿路感染、アスペルギルス症、バシディオボールス症（ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｏｍｙｃｏｓｉｓ）、カンジダ症、クリプトコッカス症、コクシジオイデス症、皮膚糸状菌症、白癬、ヒストプラスマ症、真菌血症、パラコクシジオイドミコーシス、ニューモシスティス肺炎、および同種のもの。組換え免疫原は、組換え発現系、例えば、細菌、酵母、バキュロウイルス、哺乳類細胞または植物の発現系を使用して発現できる。
【０１９１】
本発明のある態様では、本発明の様々な態様に従う組成物は、細菌性またはウイルス性の病原体に関連した疾患または障害の治療のために使用されえる。細菌性またはウイルス性の病原体に関連した疾患または障害は、細菌性またはウイルス性の病原体による活動性感染または潜伏感染、細菌性またはウイルス性の病原体による活動性感染または潜伏感染と同時にまたはその後に生じた自己免疫反応、細菌性またはウイルス性の病原体による活動性感染または潜伏感染と同時にまたはその後に生じた副作用を含むが、これらに限定されない。
【０１９２】
本発明のある態様において、免疫原は、腫瘍抗原、または癌に関連して見出される抗原であってもよい。
【０１９３】
用語「癌」には多くの定義がある。米国癌学会によれば、癌は、異常な細胞の制御されない増殖（時には蔓延）により特徴づけられる疾患のグループである。しばしば単一の病態と呼ばれるが、実際に２００以上の異なる疾患からなる。かかる細胞が重要臓器の正常機能を妨害する場合は、癌腫瘍は死を招くか、または身体の全体にわたって蔓延して、重要なシステムを損なう。本発明の組成物は、本発明の化合物または組成物の有効量をその必要性のある動物または被験体に投与することを含む方法で、動物または被験体中の感受性のある新生物を治療するのに使用されてもよい。
【０１９４】
本発明の化合物が治療剤として効果的でありえる異なるタイプの癌の非限定例は、多形性神経膠芽腫、星状細胞腫、希突起膠腫、上衣腫瘍および脈絡叢腫瘍、松果体部腫瘍、神経腫瘍、髄芽細胞腫、神経鞘腫、髄膜腫ならびに髄膜肉腫を含む、中枢神経系の新生物；基底細胞癌、扁平上皮癌、メラノーマ、横紋筋肉腫および網膜芽細胞腫を含む、目の新生物；下垂体腫瘍、甲状腺の新生物、副腎皮質の新生物、神経内分泌系の新生物、胃腸膵内分泌系の新生物および性腺の新生物を含む、内分泌腺の新生物；頭頸部癌、口腔、咽頭および喉頭の新生物、ならびに歯原性腫瘍を含む、頭頸部の新生物；大細胞肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、悪性中皮腫、胸腺腫および胸部の原発性胚細胞腫瘍を含む、胸部の新生物；食道、胃、肝臓、胆嚢、膵臓外分泌腺、小腸、虫垂および腹膜の新生物、大腸および直腸の腺癌、ならびに肛門の新生物を含む、消化管の新生物；腎細胞癌、腎盤、尿管、膀胱、尿道、前立腺、陰茎、精巣の新生物を含む、尿生殖路の新生物；ならびに外陰部および膣、頚管の新生物、子宮体部の腺癌、卵巣癌、婦人科領域の肉腫ならびに乳房の新生物を含む、女性生殖器の新生物；基底細胞癌、扁平上皮癌、皮幹線維肉腫、メルケル細胞腫瘍および悪性メラノーマを含む、皮膚の新生物；骨原性肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、原始神経上皮腫瘍および血管肉腫を含む、骨および軟組織の新生物；骨髄異形成症候群、急性骨髄白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−５、Ｔ細胞白血病／リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫ならびに肥胖細胞性白血病を含む、造血系の新生物；ならびに急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄球性白血病、神経芽細胞腫、骨腫瘍、横紋筋肉腫、リンパ腫、腎腫瘍および同種のものを含む、小児の新生物などの癌腫を含む。
【０１９５】
本発明のある態様において、免疫原はアレルゲンであってもよい。アレルゲンは、アレルゲンに対する暴露に際して被験体におけるアレルギー反応を誘導する薬剤である。吸入アレルゲンから結果として生じるアレルギー性障害および喘息性障害において観察される慢性炎症は、主としてエオシン好性細胞の局所的な組織浸潤、およびアレルゲンに対する組織の過反応性により支配される。炎症は、コルチコステロイドおよび／または気管支拡張薬の使用を介して減少されえるが、これらは根本的原因を治療するのではない。ＷＯ９９／０７８６０において検討されるように、アレルゲン特異的Ｔリンパ球はそのような過反応性組織において選択的に濃縮され、この感受性は幼年期または乳児期における早期抗原暴露に依存しうる。
【０１９６】
吸入抗原に対する個々の免疫応答における特異的なＴｈ１様メモリー細胞対Ｔｈ２様メモリー細胞についての選択は、誘導気道から流入する領域リンパ節中で生じる。この選択は、抗原に特異的なＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によって産生された様々なサイトカインにより調節されうる。このＴ細胞選択プロセスは感染因子によって影響を受けうる。気道粘膜における感染は、領域リンパ節に移動し、ＩＬ−１２およびαインターフェロンなどのＴｈ２阻害性サイトカインを分泌する局所組織（肺胞）マクロファージを動員および活性化しえる。さらに、それらは、ナチュラルキラー細胞の活性化を介して環境中のγ−インターフェロンレベルを増やしうる。最終結果はＣＴＬ（それらは大部分はＣＤ８＋細胞である）の産生である。γ−インターフェロンはＴｈ２細胞の生成を阻害し、したがって、液性アレルギー反応（ＩｇＥ）および細胞性アレルギー反応（エオシン好性細胞、好塩基球およびマスト細胞）の生成のための重要なサイトカインであるＩＬ−４およびＩＬ−５の産生を阻害する（Anderson, G. P. and Coyle, A. J., Trends Pharmacol. Sci., 15:324-332 (1995); Stam, W. B., van Oosterhout, A. J. and Nijkamp, F. P., Life Sci., 53:1921-1934 (1993)）。
【０１９７】
哺乳類において、ストレスタンパク質は細胞性免疫反応に加えて体液性免疫反応も誘導することが示されている。可溶性抗原を、ストレスタンパク質と混合するか、それに化学的にコンジュゲートするか、またはそれに融合して、哺乳類に投与する場合、細胞仲介性細胞傷害免疫応答が実質的に促進される。これらの反応は主としてＣＤ８＋Ｔ細胞に起因する。したがって、抗原単独に対するＣＤ４＋応答を、ストレスタンパク質と混合またはそれにカップリングした抗原に対するＣＤ４＋応答に対して比較することは、予測されたプロフィールを与える。ストレスタンパク質と混合、またはそれに結合した可溶性抗原は、前述したＴｈ１経路の刺激の測定値であるＣＴＬ（主としてＣＤ８＋Ｔ細胞）を高比率でもたらし、これは、これらのＣＴＬがＴｈ１タイプの抗原に特異的なＴ細胞の誘導の結果として生じたためである。これらのＴｈ１細胞は、Ｔｈ２細胞を阻害するγ−インターフェロンを産生する。したがって、Ｔｈ２サイトカインのＩＬ−４およびＩＬ−５は、ＩｇＥおよびエオシン好性細胞の産生を支援するためにはもはや利用可能ではない。ＩｇＥ力価の減少により、マスト細胞および好塩基性細胞の直接的な抗原刺激は減少するだろう。さらに、ＩＬ−５産生減少は、エオシン好性細胞の産生、分化および活性化の減少を導くだろう。このパターンは、関与する組織の炎症の減少を引き起こし、その結果より少ない過反応性（喘息性）事象をもたらすだろう。
【０１９８】
したがって、公知のアレルゲン性抗原（アレルゲン）の混合物、またはストレスタンパク質もしくはストレスタンパク質を化学的に連結もしくはそれに融合したアレルゲンを含む組成物を、式ＩＩ、ＩＩａ〜ｅ、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ〜ｄ、式ＩＶａ〜ｊ、に従う薬剤、式ＩＶａ〜ｊ、式Ｖａ〜式Ｖｃ、式ＶＩａ〜式ＶＩｈ、式ＶＩｊ〜式ＶＩｏ、式ＶＩＩａ〜ＶＩＩｈ、式ＶＩＩＩａ〜式ＶＩＩＩＨのうちの少なくとも２つの組合せと、様々なモル比で組み合わせて投与すると、アトピー患者におけるＴｈ１対Ｔｈ２の比率に影響し、より正常なバランスに回復させ、アレルギー反応または喘息反応の減少を導きうる。
【０１９９】
したがって、本発明は、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、もしくはＴＬＲ３およびＴＬＲ９アゴニストの両方である組成物、およびアジュバント、またはＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、もしくはＴＬＲ３およびＴＬＲ９アゴニストの両方である組成物を含む、アジュバント組成物を提供する。
【０２００】
本発明のある態様では、免疫原はＨｓｐＥ７を含む。ＨｓｐＥ７融合タンパク質を産生する方法は、ＷＯ９９／０７８６０およびＵＳ６０／８０３，６０６中で記述されており、それらの両方は参照することにより本明細書に組み入れられる。
【０２０１】
配列
配列番号：１に従う配列について、残基Ｇ１、Ｇ２、Ｇ２５およびＧ２６はＬＮＡ残基であり；残基３〜２４はイノシンリボヌクレオチドである。
【０２０２】
配列番号：２に従う配列について、残基Ｃ１、Ｃ２、Ｃ２５およびＣ２６はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ３〜Ｃ２４はリボヌクレオチドである。
【０２０３】
配列番号：３に従う配列について、残基Ｔ１７、Ｇ１８、Ｔ２０、Ｔ２２およびＧ２３はＬＮＡ残基であり；残基１〜１５はイノシンリボヌクレオチドであり；残基Ｇ１６、Ａ１９およびＡ２１はリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドでありえる。
【０２０４】
配列番号：４に従う配列について、残基Ｃ１６、Ｔ１８、Ｔ２０、Ａ２２およびＣ２３はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ１〜Ｃ１５はリボヌクレオチドであり；残基Ａ１７、Ａ１９およびＣ２１はリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドでありえる。
【０２０５】
配列番号：５に従う配列について、残基Ｇ１、Ｔ１８、Ｔ１９、Ｔ２１およびＴ２３はＬＮＡ残基であり；残基１〜１７はイノシンリボヌクレオチドであり；残基Ｇ１７、Ａ２０およびａ２２はリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドでありえる。
【０２０６】
配列番号：６に従う配列について、残基Ｃ１、Ｃ１７、Ｔ１９、Ｃ２２およびＣ２３はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ２〜Ｃ１６はリボヌクレオチドであり；残基Ａ１８、Ａ２０およびＵ２１はリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドでありえる。
【０２０７】
配列番号：７に従う配列について、残基Ｔ１、Ｔ２、Ｔ１８、Ｔ１９、Ｔ２１およびＡ２２は、ＬＮＡ残基であり、残基３〜１７はイノシンリボヌクレオチドであり；残基Ａ１９およびＡ２１はリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドでありえる。
【０２０８】
配列番号：８に従う配列について、残基Ａ１、Ｃ２、Ｃ１８、Ｔ２０、Ｔ２２およびＣ２３はＬＮＡ残基であり、Ｃ３〜Ｃ１７はリボヌクレオチドであり；残基Ａ１９およびＡ２１はリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドでありえる。
【０２０９】
配列番号：９に従う配列について、残基Ｇ１およびＧ２はＬＮＡ残基であり；残基２〜１７はイノシンリボヌクレオチドであり、Ａ１８〜Ａ３２はリボヌクレオチドである。
【０２１０】
配列番号：１０に従う配列について、残基Ｃ１６およびＣ１７はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ１〜Ｃ１５およびＵ１８〜Ｕ３２はリボヌクレオチドである。
【０２１１】
配列番号：１１に従う配列について、残基Ｇ１およびＧ２はＬＮＡ残基であり；残基３〜１２はイノシンリボヌクレオチドであり、Ａ１３〜Ａ２２はリボヌクレオチドである。
【０２１２】
配列番号：１２に従う配列について、残基Ｃ１１およびＣ１２はＬＮＡ残基であり；残基Ｕ１〜Ｕ１０およびＣ１３〜Ｃ２２はリボヌクレオチドである。
【０２１３】
配列番号：１３に従う配列について、残基Ｇ１、Ｇ２、Ｇ１８、Ｔ１９、Ｃ２０、Ｇ２１、Ｔ１１、Ｔ２３、Ｇ３９およびＧ４０はＬＮＡ残基であり；残基３〜１７および２４〜３８はイノシンリボヌクレオチドである。
【０２１４】
配列番号：１４に従う配列について、残基Ｃ１、Ｃ２、Ａ１８、Ａ１９、Ｃ２０、Ｇ２１、Ａ２２、Ｃ２３、Ｃ３９およびＣ４０およびＣ２３はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ３〜Ｃ１７およびＣ２４〜Ｃ３８はリボヌクレオチドである。
【０２１５】
配列番号：１５に従う配列について、残基Ｇ１、Ｇ２、Ｇ１８、Ｔ１９、Ｃ２０、Ｇ２１、Ｔ２２およびＴ２３はＬＮＡ残基であり；残基３〜１７はイノシンリボヌクレオチドである。
【０２１６】
配列番号：１６に従う配列について、残基Ａ１、Ａ２、Ｃ３、Ｇ４、Ａ５、Ｃ６、Ｃ２２およびＣ２３はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ７〜Ｃ２１はリボヌクレオチドである。
【０２１７】
配列番号：１７に従う配列について、残基Ｇ１６、Ｔ１７、Ｃ１８、Ｇ１９、Ｔ２０およびＴ２１はＬＮＡ残基であり；残基１〜１５はイノシンリボヌクレオチドである。
【０２１８】
配列番号：１８に従う配列について、残基Ａ１６、Ａ１７、Ｃ１８、Ｇ１９、Ａ２０およびＣ２１はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ１〜Ｃ１５はリボヌクレオチドである。
【０２１９】
配列番号：１９に従う配列について、残基Ｇ１、Ｇ１７、Ｔ１８、Ｃ１９、Ｇ２０、Ｔ２１およびＴ２２はＬＮＡ残基であり；残基２〜１６はイノシンリボヌクレオチドである。
【０２２０】
配列番号：２０に従う配列について、残基Ｃ１、Ａ１７、Ａ１８、Ｃ１９、Ｇ２０、Ａ２１およびＣ２２はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ２〜Ｃ１６はリボヌクレオチドである。
【０２２１】
配列番号：２１に従う配列について、残基Ｃ１、Ｇ２、Ｇ１８、Ｔ１９、Ｃ２０、Ｇ２１、Ｔ２２およびＴ２３はＬＮＡ残基であり；残基３〜１７はイノシンリボヌクレオチドである。
【０２２２】
配列番号：２２に従う配列について、残基Ｇ１、Ｃ２、Ａ１８、Ａ１９、Ｃ２０、Ｇ２１、Ａ２２およびＣ２３はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ３〜Ｃ１７はリボヌクレオチドである。
【０２２３】
配列番号：２３に従う配列について、６残基はすべてＬＮＡ残基である。
【０２２４】
配列番号：２４に従う配列について、６残基はすべてＬＮＡ残基である。
【０２２５】
配列番号：２５に従う配列について、残基Ｃ２およびＣ３はＬＮＡ残基であり；残基Ｃ１〜Ｃ１０およびＵ１３〜Ｕ２３はリボヌクレオチドである。
【０２２６】
配列番号：２６に従う配列について、残基Ｇ１およびＧ２はロックされた核酸残基であり；Ｃ３、Ｇ４、Ｔ５、Ｃ６、Ｇ７、Ｔ８、Ｔ９、Ａ１０、Ｔ２６、Ｇ２７、Ｔ２８、Ｃ２９、Ｇ３０、Ｔ３１、Ｔ３２、Ｇ３３はデオキシリボヌクレオチドであり；Ａ１１〜Ａ２５に含まれるものはリボヌクレオチドである。
【０２２７】
配列番号：２７に従う配列について、残基Ｕ１〜Ｕ１５に含まれるものはリボヌクレオチドであり；残基Ｔ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ｃ１９、Ｇ２０、Ａ２１、Ｃ２２、Ｇ２３、Ｃ２６、Ａ２７、Ａ２８、Ｃ２９、Ｇ３０、Ａ３１、Ｃ３２およびＡ３３はデオキシリボヌクレオチドであり；Ｃ２４およびＣ２５はロックされた核酸残基である。
【０２２８】
単一文字塩基名称（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、Ｕ、Ｉ）と組合せた「ＬＮＡ」の下付き添字は、上述されるような２’−４’を含む、関連するヌクレオチドがロックされた核酸残基であることを示す。
【実施例１】
【０２２９】
二本鎖オリゴマーの調製：ＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡ：
配列番号：１および配列番号：２に従うオリゴマーを、標準的な技術に従って、製造者のプロトコール（グレン・リサーチ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）社、スターリング、バージニア）の通りに、２’−ＯＭｅ−Ｉ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｃ−ＣＥホスホアミダイト、５−Ｍｅ−Ｂｚ−Ｃ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイトおよびｄｍｆ−Ｇ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイトを使用して合成した。
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ22）−ＧLNA−ＧLNA（配列番号：１）
および
ＣLNA−ＣLNA−（Ｃ22）−ＣLNA−ＣLNA（配列番号：２）。
【０２３０】
第１のオリゴマーおよび第２のオリゴマーの各々の等モル量を組み合わせ、アニールさせて、式ＩＩＩａ：
【化６６】
2010519915.tif 000068
で示されるｄｓＲＮＡ化合物ＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡを産生した。
【実施例２】
【０２３１】
３’非対合末端を備えた二本鎖オリゴマーの調製
配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７および配列番号：８に従うオリゴマーを、標準的な技術に従って、製造者のプロトコール（グレン・リサーチ社、スターリング、バージニア）の通りに、５−Ｍｅ−Ｂｚ−Ｃ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、Ｂｚ−Ａ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、ｄｍｆ−Ｇ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、Ｔ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｉ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｃ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ａ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｇ−ＣＥホスホアミダイトおよび２’−ＯＭｅ−Ｕ−ＣＥホスホアミダイトを使用して合成しえる。
（Ｉ15）−Ｇ−ＴLNA−ＧLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＧLNA（配列番号：３）
（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−Ｃ−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：４）
ＧLNA−（Ｉ15）−Ｇ−ＴLNA−ＧLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA（配列番号：５）
ＣLNA−（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−Ｕ−ＣLNA−ＡLNA（配列番号：６）
ＴLNA−ＧLNA−（Ｉ15）−ＴLNA−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＡLNA（配列番号：７）
ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ15）−ＣLNA−Ａ−ＴLNA−Ａ−ＴLNA−ＣLNA（配列番号：８）
【０２３２】
配列番号：３および配列番号：４、または配列番号：５および配列番号：６、または配列番号：７および配列番号：８の各々の等モル量を組み合わせ、アニールさせて、式Ｖａ、ＶｂおよびＶｃで示される二本鎖核酸化合物をそれぞれ産生しえる。
【化６７】
2010519915.tif 000069
【化６８】
2010519915.tif 000070
【化６９】
2010519915.tif 000071
【実施例３】
【０２３３】
３’非対合末端を備えた二本鎖オリゴマーの調製
配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１および配列番号：１２に従うオリゴマーを、標準的な技術に従って、製造者のプロトコール（グレン・リサーチ社、スターリング、バージニア）の通りに、５−Ｍｅ−Ｂｚ−Ｃ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、Ｂｚ−Ａ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、ｄｍｆ−Ｇ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、Ｔ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｉ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｃ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ａ−ＣＥ  ホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｇ−ＣＥホスホアミダイトおよび２’−ＯＭｅ−Ｕ−ＣＥホスホアミダイトを使用して合成しえる。
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−（Ａ）15（配列番号：９）
（Ｃ）15−ＣLNA−ＣLNA−（Ｕ）15（配列番号：１０）
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）10−（Ａ）10（配列番号：１１）
（Ｕ）10−ＣLNA−ＣLNA−（Ｃ）10（配列番号：１２）
（Ｃ）10−ＣLNA−ＣLNA−（Ｕ）10（配列番号：２５）
【０２３４】
配列番号：９および配列番号：１０、または配列番号：１１および配列番号：１２、または配列番号：１１および配列番号：２５の各々の等モル量を組み合わせ、アニールさせて、式ＶｄおよびＶｅで示される二本鎖核酸化合物をそれぞれ産生しえる（図１）。
【実施例４】
【０２３５】
免疫原との組合せにおけるｄｓＲＮＡのインビトロの生物学的活性
ＵＳ６０／８０３，６０６（参照することにより本明細書に組み入れられる）の方法に従って産生されたＨｓｐＥ７、および上述の実施例１に従って産生されたＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡを含む組成物は、インビトロの生物学的活性について試験しうる。
【０２３６】
ＨｓｐＥ７がＥ７特異的ＣＤ８陽性Ｔリンパ球を誘導する能力の増加は（例示的な抗ウイルス薬の治療的アプローチとして）、ＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡの存在下において決定しうる。ナイーブＣ５７Ｂｌ／６マウスに、ＨｓｐＥ７単独、またはＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡプラスＨｓｐＥ７のいずれかを皮下注射しえる。時間間隔（例えば５日）後に、脾臓をマウスから取り出し、Ｅ７特異的脾細胞の数を、Ｅ７特異的クラスＩＭＨＣ結合ペプチドＥ７４９−５７（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ；ダルトン・ケミカル・ラボラトリーズ（Ｄａｌｔｏｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社）、またはリコール抗原としての対照ペプチドＨＢＣＡｇ９３−１００（ＭＧＬＫＦＲＱＬ；ダルトン・ケミカル・ラボラトリーズ社）を使用して、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴによって測定した。
【実施例５】
【０２３７】
免疫原との組合せにおけるｄｓＲＮＡのインビボの生物学的活性
ＰＣＴ公報ＷＯ２００７／１３７４２７（参照することにより本明細書に組み入れられる）の方法に従って産生されたＨｓｐＥ７、および上述の実施例１に従って産生されたＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡを含む組成物を、インビボの生物学的活性について試験しえる。
【０２３８】
癌治療方法の例示的な方法において、ＴＣ−１腫瘍をナイーブＣ５７Ｂｌ／６マウスで最初に確立する。マウスの横腹に６×１０4のＴＣ−１腫瘍細胞を注入した。７日目に、確立しているＴＣ−１腫瘍を持つマウスに、希釈剤、精製ＨｓｐＥ７単独、または異なる用量ＧＣＬＮＡ−ポリＩＣ−ＧＣＬＮＡと混合した段階的な用量の精製ＨｓｐＥ７のいずれかを首筋に皮下注射しえる。追加の時間間隔（例えば４２日）で、腫瘍増殖についてマウスを追跡し、−この例では、腫瘍移植４９日後に腫瘍のないマウスを、腫瘍がないと判断しえる。
【実施例６】
【０２３９】
ＣｐＧモチーフを含む二本鎖オリゴマーの調製
配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１および配列番号：２２に従うオリゴマーを、標準的な技術に従って、製造者のプロトコール（グレン・リサーチ社、スターリング、バージニア）の通りに、２’−ＯＭｅ−Ｉ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｃ−ＣＥホスホアミダイト、５−Ｍｅ−Ｂｚ−Ｃ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイトおよびｄｍｆ−Ｇ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイトを使用して合成した。
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＧLNA（配列番号：１３）
ＣLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＣLNA−ＣLNA（配列番号：１４）
ＧLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（配列番号：１５）
ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＣLNA−ＣLNA（配列番号：１６）
（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA（配列番号：１７）
（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：１８）
ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA−（配列番号：１９）
ＣLNA−（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：２０）
ＣLNA−ＧLNA−（Ｉ）15−ＧLNA−ＴLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＴLNA−ＴLNA（配列番号：２１）
ＧLNA−ＣLNA−（Ｃ）15−ＡLNA−ＡLNA−ＣLNA−ＧLNA−ＡLNA−ＣLNA（配列番号：２２）
【０２４０】
配列番号：１３および配列番号：１４、または配列番号：１５および配列番号：１６、または配列番号：１７および配列番号：１８、または配列番号：１９および配列番号：２０、または配列番号：２１および配列番号：２２の各々の等モル量を組み合わせ、アニールさせて、式ＶＩｇ、ＶＩｈ、ＶＩｉ、ＶＩｊおよびＶＩｋに従ってｄｓＲＮＡ化合物を産生した（図２）。
【実施例７】
【０２４１】
ＣｐＧおよびポリＡ：Ｕモチーフを含む二本鎖オリゴマーの調製
配列番号：２６および配列番号：２７に従うオリゴマーを、標準的な技術に従って、製造者のプロトコール（ユーロジェンテック・ノース・アメリカ（Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｃ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）北米社）の通りに、２’−ＯＭｅ−Ａ−ＣＥホスホアミダイト、２’−ＯＭｅ−Ｕ−ＣＥホスホアミダイト、ＤＭＴ−ｄＡ−ホスホアミダイト、ＤＭＴ−ｄＣ−ホスホアミダイト、ＤＭＴ−ｄＧ−ホスホアミダイト、ＤＭＴ−ｄＴ−ホスホアミダイト、５−Ｍｅ−Ｂｚ−Ｃ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイトおよびｄｍｆ−Ｇ−ＬＮＡ−ＣＥホスホアミダイトを使用して合成した。
ＧLNA−ＧLNA−ｄＣ−ｄＧ−ｄＴ−ｄＣ−ｄＧ−ｄＴ−ｄＴ−ｄＡ−（ｒＡ）15−ｄＴ−ｄＧ−ｄＴ−ｄＣ−ｄＧ−ｄＴ−ｄＴ−ｄＧ（配列番号：２６）
（ｒＵ）15−ｄＴ−ｄＡ−ｄＡ−ｄＣ−ｄＧ−ｄＡ−ｄＣ−ｄＧ−ＣLNA−ＣLNA−ｄＣ−ｄＡ−ｄＡ−ｄＣ−ｄＧ−ｄＡ−ｄＣ−ｄＡ（配列番号：２７）
【０２４２】
配列番号：２６および配列番号：２７の各々の等モル量を組み合わせ、アニールさせて、いずれかの末端で非対合ヌクレオシドのセクションを有する、図３中に示される二本鎖核酸化合物を産生しうる。非対合ヌクレオシドにより、化合物のコンカテマー化が可能となる。
【０２４３】
すべての引用は参照することにより本明細書に組み入れられる。
【０２４４】
１つまたは複数のこれまでの好ましい態様は一例として記述されたものである。請求項において定義されるような本発明の範囲から逸脱せずに、多数の変形および修飾を行うことができることは当業者に明らかだろう。
【図１】
2010519915.tif 000078
【図２ａ】
2010519915.tif 000079
【図２ｂ】
2010519915.tif 000080
【図３】
2010519915.tif 000081
【配列表】
2010519915000001.app
【国際調査報告】
2010519915.tif 000082
2010519915.tif 000083
2010519915.tif 000084
2010519915.tif 000085
2010519915.tif 000086
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