(57)【要約】  本発明は、非病原性のリシン取り込み刺激乳酸菌株；好ましくはラクトバシラス・ロイテリ株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７などのラクトバシラス・ロイテリの株の、選択及び使用に関する。例えばペット動物における毛皮−毛及び爪の品質の改善のための、このような株を使用する製品及び方法も、本発明に包含される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバシラス・ロイテリ（ラクトバシラス・ロイテリ）の非病原性のリシン取り込み刺激乳酸菌株を選択するステップと、選択した株の生物学的に純粋な培養物を含む製品を動物に提供するステップとを含む、コンパニオン動物における毛皮及び爪の品質を改善する方法。
【請求項２】
選択するステップが、乳酸菌株が動物におけるリシンの吸収を直接促進又は改善する能力を分析することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
選択するステップが、腸上皮透過性研究のためのＣａｃｏ−２細胞系の使用を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
選択が、リシンの放射標識流動の使用を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
株が、ラクトバシラス・ロイテリ（ラクトバシラス・ロイテリ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７の生物学的に純粋な培養物である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法によって選択された、乳酸菌の株の生物学的に純粋な培養物。
【請求項７】
ラクトバシラス・ロイテリ（ラクトバシラス・ロイテリ）株ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７の生物学的に純粋な培養物である、請求項５に記載の株。
【請求項８】
ａ）請求項１に従って選択されたラクトバシラス・ロイテリ（ラクトバシラス・ロイテリ）株の生物学的に純粋な培養物、及び
ｂ）コーティング基材でコーティングされ、次いで選択された株の生物学的に純粋な培養物の乾式噴霧でコーティングされた飼料混合物
を含む、ペット動物における毛皮及び爪の品質を改善する製品。
【請求項９】
飼料混合物がペレット化されている、請求項８に記載の製品。
【請求項１０】
Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株がＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７である、請求項８に記載の製品。
【請求項１１】
飼料混合物が、トウモロコシ、コーングルテン、鶏肉及び魚粉、塩類、ビタミン並びにミネラルを含む、請求項８に記載の製品。
【請求項１２】
コーティング基材が獣脂を含む、請求項８に記載の製品。
【請求項１３】
生物学的に純粋な培養物が、製品１グラム当たり１０７ＣＦＵのレベルで乾式噴霧により適用され、その後獣脂が、脂肪層に付着するか又は脂肪層中に部分的に浸透するように配置される、請求項１２に記載の製品。
【請求項１４】
飼料、錠剤及びカプセルからなる群より選択される形態である、請求項８に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非病原性のリシン取り込み刺激乳酸菌株の選択及び使用、並びに例えばペット動物における毛皮及び爪の品質の改善のための、このような株を使用する製品及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９０８年に、ロシアの生物学者Ｅｌｉ  Ｍｅｔｃｈｎｉｋｏｆｆは、特定のブルガリア及びロシアの住民の長命が、発酵乳製品の大量消費にあると認めた（１）。これらの食品中の重要な生物は、アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）として後に同定された乳酸産生細菌であった（２）。乳酸産生細菌は、乳酸を産生するその能力に因んでそう命名された。しかし、乳酸産生は、この細菌の収集に由来する多くの利点のうちの１つに過ぎない。
【０００３】
Ｍｅｔｃｈｎｉｋｏｆｆ及びその他の研究に基づいて、科学者たちは、動物の健康状態及び性能を改善するために、生きた乳酸産生細菌及び酵母をその動物に直接給餌する、プロバイオティクス微生物の概念を展開した。観察された利点は、以下から生じたものであり得る：１）消化管中の付着部位をめぐる競争、２）必須栄養素をめぐる競争、３）抗菌物質の産生、４）有益な細菌の増殖の増大、及び５）免疫系の刺激（３）。
【０００４】
いくつかの疾患原因細菌は、小腸の内層を破壊することによって、動物が栄養素を吸収する能力を低下させる（４）。研究により、乳酸産生細菌は小腸に付着し、疾患原因生物が小腸壁に結合するのを防止する物質を産生することが示されている（５）。さらに、有益な細菌の付着は、小腸の吸収表面積を増大させ得、動物によるよりよい栄養素吸収のために酵素活性を増大させ得る（８、６）。
【０００５】
健康増進細菌及び疾患原因細菌は共に、増殖のために特定の栄養素を必要とする。乳酸産生細菌は、その他の場合では有害細菌の増殖を支持する可能性があるビタミン、アミノ酸又は他の栄養素を利用できる（７）。
【０００６】
直接摂食した微生物培養物の、疾患原因生物を阻害する物質を産生する能力に対して、かなりの研究が焦点を当ててきた。乳酸、酢酸及びギ酸は、腸のｐＨを低下させて、有害生物に不適切な環境を作り出す（４）。乳酸産生細菌はまた、過酸化水素を分泌し、酸素要求微生物にとって好ましくない条件を生じる（８）。
【０００７】
低分子量抗菌物質、例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉが産生するロイテリン；及びバクテリオシンという２つの群の抗菌物質が同定されている。バクテリオシンは、しばしば遺伝的に関連する細菌の増殖を阻害する、微生物により産生される物質である（４）。バクテリオシンはポリペプチドであり、その阻害特性はプロテアーゼによって破壊されるが、広いスペクトルの抗菌物質であるロイテリンはポリペプチドではなく、その抗菌活性はプロテアーゼにより影響を受けない。
【０００８】
研究により、乳酸産生細菌の、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及びウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｉｎｇｅｎｓ）を阻害する能力が報告されている（７）。下痢原因生物の減少は、新生仔及び若齢の動物において特に重要である。
【０００９】
しかし、コンパニオン動物におけるプロバイオティクスについてはほとんど研究されていない。１つの最近の研究（９）では、イヌにおけるアシドフィルス菌ＤＳＭ  １３２４１の適用が調査された。この株は、その増殖特徴、病原体に対する抗菌活性及び腸モデルにおける生存率に基づいて選択された。健康なイヌの給餌は、クロストリジウム集団の減少を同時に伴った、排泄物中の回収可能な乳酸桿菌集団の有意な増加を生じた。研究者らは、プロバイオティクスの給餌が、腸の微生物学的状態、及びラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）菌種を消費した後にヒトにおいて観察される免疫系の刺激を示唆する全身的効果において、ポジティブな変化を生じたと結論付けた（１０）。
【００１０】
イヌ同様、ネコ、ミンク（Ｍｕｓｔｅｌａ  ｖｉｓｏｎ）及びブルーフォックス（Ａｌｏｐｅｘ  ｌａｇｏｐｕｓ）は、食肉目の哺乳動物に属する。食肉類は、比較的濃縮された非常に消化されやすい食餌に適応しており、胃及び比較的短い単純な腸を特徴とする。ミンクは盲腸を欠き、結腸において非常に限定された細菌活性を有する短い消化管を有する。イヌ及びキツネは、盲腸の容量がほとんどなく、小嚢のない結腸を有するが、いくらかの細菌発酵が、盲腸及び結腸において生じる（１１）。
【００１１】
タンパク質は、体組織の成長、修復及び維持に必要である。タンパク質は酵素及び抗体の基礎をなす。動物及び鳥類について、多数のタンパク質が、主にα−ケラチンである毛皮、羽毛及び爪を形成するためのエネルギーとして使用される。α−ケラチンは、互いの周りに巻きついて三重ヘリックスを形成する長いα−ヘリックスのポリペプチドからなる。毛皮動物にとっては一般に、硫黄含有アミノ酸は、通常、第一の制限アミノ酸とみなされる（１２）。毛皮、羽毛及び爪を形成するタンパク質は、食餌に由来するほかない。食餌は、非必須アミノ酸を生成する窒素を供給するのに充分過剰なアミノ酸と共に、必須アミノ酸の要件を満たすのに充分なアミノ酸を供給しなければならない。食餌中の余分なタンパク質は貯蔵することができず、脂肪に変換されるか、腎臓によって排出されることになる。
【００１２】
リシンは必須アミノ酸であり、従ってアミノ基転移によって合成することができない。リシンは、カルニチンを産生することによって脂肪を体にとって使用可能なものにし、体から毒素を除去し、毛皮、羽毛及び骨を構築するのに役立つ。高いレベルは、アルギニンの必要性を増大させる。リシンは、無傷のタンパク質中で非常に不安定である。リシンはグルコースと反応し、この反応は温かさ及び湿気の存在下で加速する。若齢のブタ及び家禽に関する研究により、リシンが成長にとって第一の制限アミノ酸であることが見出されている（例えば、Ｂｏｉｓｅｎら、２０００；（１３、１４））。
【００１３】
メチオニン及びシステインは栄養アミノ酸であり、必須アミノ酸の中で最も活性である。これらは、カルニチン（脂肪酸の輸送において使用される）、クレアチン、ナイアシン、ポリアミン、及びプリン（尿酸を生成するために使用される）などの重要な分子を生成するために使用される。これらは、毛皮及び羽毛の形成においても使用される。システインはメチオニンから合成でき、従って、非必須に分類される。しかし、システイン及びその酸化生成物シスチンは、総硫黄アミノ酸の必要性の約５０％を充足し得、このようにして、メチオニンの必要性を減少させ得る。メチオニンはシステインからは合成できず、従って必須である。メチオニンは、シスチンの非存在下で硫黄アミノ酸の全必要性を満たすことができる。いくつかの研究により、メチオニンがミンクにおける毛髪の成長及び毛皮の品質にとって第一の制限アミノ酸であることが見出されている（１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１）。
【００１４】
ほとんどの家庭のペットにおいて、健康な皮膚及び毛は、動物が全般的に良好な健康状態であることを示す。皮膚及び毛の問題は家庭のペットにおいて一般的であるので、多数の研究が、皮膚及び毛の状態の悪化を修復する食餌を提供し、それによって、以下に記載するように健康な皮膚及び毛の基本的レベルを提供することに向けられてきた。
【００１５】
完全でバランスのとれた市販のドッグフードへの亜鉛及びリノール酸の補充が、イヌにおける皮膚及び毛の状態の有意かつ実質的な増強を生じ得ることが、研究により示されている。イヌは、標準的食餌を受けたコントロール群と比較した場合、毛艶及び毛のスケールにおいて有意な改善を示した。このアプローチは、特許ＥＰ０９８７９６１Ｂ１にも記載されている。
【００１６】
栄養は、皮膚のバリア機能に影響を与え得る。国際特許出願ＷＯ０２０７５３１Ａ１は、皮膚の健康状態及び／又は毛の品質を改善又は維持することを意図した飼料組成物の調製のための、抗菌脂肪酸を含む食餌性脂質の使用を開示している。
【００１７】
Ｋｅｒｍｉｎｅｎ−Ｈａｋｋｉｏによる研究（２１）において、ミンクにおけるタンパク質品質の不良により、生皮の長さが平均して４ｃｍ減少した。最良の全体的な毛皮の品質は、良好な品質の高レベルタンパク質群で観察された。著者らは、不可欠なアミノ酸の供給の欠乏は、食餌中のタンパク質レベルを増大させることによっては完全には補償できないと結論付けている。
【００１８】
いくつかの場合、最適な利用可能な量を確保するには非必須アミノ酸が依然として補充されなければならない。本発明者らは、利用可能なメチオニンは、毛皮及び爪の成長及び品質を改善するために、ネコ及びイヌ用の飼料においてもリシンとバランスをとるべきであることを見出した。飼料由来のリシンをよりよく使用する優れた方法は、単純により多くを給餌するのではなく、その吸収を改善する方法を探すことである。
【００１９】
乳酸菌（ＬＡＢ）を給餌した動物は、一般に栄養素の吸収の改善に起因して、成長が促進されることが知られている。今日の現代的な動物の繁殖において、多数の国が、動物を肥育するためにプロバイオティクス微生物を含む飼料添加物を既に使用している。動物がＬＡＢを消費すると、ＬＡＢは消化管でコロニー形成し、デンプンを消化する酵素（アミラーゼ）、タンパク質を消化する酵素（プロテアーゼ）、脂肪を消化する酵素（リパーゼ）を産生し始める。これらの酵素は、家畜用飼料中の複雑な有機化合物の、低分子化合物への分解に寄与する。動物は、これらの低分子化合物をよりよく使用できる。動物の食欲が改善し、家畜用飼料の変換速度がよりよくなり、産生性能が改善される。動物飼料におけるＬＡＢの使用は、病原体に対する免疫防御にも寄与する。ＬＡＢは、炭水化物を消化管内容のｐＨを低下させる乳酸に分解し、消化管内容は病原体微生物にとって非常に好ましくない環境になる。
【００２０】
本発明者らは驚くべきことに、飼料中又は胃腸管中に存在する種々の株のＬＡＢが、アミノ酸、特にリシンの吸収を差次的に助けることができることを見出した。そして、このような差異が測定でき、それによってリシン取り込みを最も改善する乳酸菌の特定の株を選択することが可能になることも見出した。
【００２１】
Ｃａｃｏ−２細胞系は、両方の栄養素［ペプチド及びアミノ酸（２３、２４、２５、２６）］及び医薬製品（２７、２４）の腸上皮透過性研究（２２）に適したモデル系であると証明された。Ｔｗａｉｔｅｓによってなされた１９９６年の研究は、腸Ｃａｃｏ−２細胞が塩基性アミノ酸リシンを輸送する能力を記載している（２８）。
【００２２】
しかし、ペット動物において食餌からのアミノ酸の吸収を促進又は増加させるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓについての研究はほとんど存在しなかった。
【００２３】
４種の異なる細菌（メチロコッカス・カプスラタス（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）、アルカリゲネス・アシドボランス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ）、バシラス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）及びバシラス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ））の規定された混合物並びに炭素及びエネルギー源として天然ガスを使用した持続的細菌発酵によって製造される細菌タンパク質食（ＢＰＭ）は、新たな高タンパク質飼料成分である。ブルーフォックスをモデル動物として使用して、イヌ用の食餌の成分としてのＢＰＭの知識を拡張するための研究が実施された。動物は全般的に良好な成長を示したが、毛皮の品質の改善の存在を示すデータは存在しなかった（７）。
【００２４】
特許ＷＯ０１／１７３６５Ａ１は、ペットの皮膚及び毛の系を改善及び維持するための方法を記載しており、この方法において、栄養剤はプレバイオティクス又は任意のプロバイオティクス微生物であり得る。その出願人らは、プロバイオティクスとして１７の異なる細菌属及びほぼ３０のプロバイオティクス微生物の具体例に言及している。バシラス・コアグランス・ラクリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ  Ｌａｃｒｉｓ）−Ｓ株（ＳＡＮＫＹＯ  ＬＩＦＥＴＥＣＨ  ＣＯ．，ＬＴＤ、日本国、東京都、文京区、本郷）は、記載された唯一の具体的な株であり、好ましい株の選択については何ら言及されておらず、ＬＡＢ株がリシン取り込みを刺激する能力についても何ら基づくものではない。
【００２５】
動物におけるよりよい毛皮及び羽毛のためのプロバイオティクスの使用は当該分野で公知であったものの、種々のプロバイオティクス株が動物（例えば、イヌ又はネコ）の毛皮及び爪の品質を改善するそれらの能力において異なり、またこの能力が動物の腸におけるリシン吸収に対するプロバイオティクス株の影響と相関することは、以前には知られていなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
従って、本発明の目的は、動物におけるリシンの吸収を直接促進又は改善するそれらの能力を分析することによってこのようなより適切な株を選択すること、及びこのような選択された株を、例えばイヌ又はネコの毛皮及び爪の品質を改善するために、動物飼料又はサプリメントにおいて使用することである。新たな株ラクトバシラス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７は、毛皮動物においてリシン取り込みを刺激することが示され、この特性は、毛皮及び爪の品質の改善を生じる。
【００２７】
他の目的及び利点は、以下の開示及び添付の特許請求の範囲から、より完全に明らかとなろう。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明は、非病原性のリシン取り込み刺激乳酸菌株の選択及び使用に関し、ペット動物における毛皮及び爪の品質の治療及び予防のための、このような株を使用する製品及び方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】Ｃａｃｏ−２腸細胞によるリシンの取り込みに対する、７．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌの種々のＬＡＢ株の影響を示す棒グラフである。使用した株は、ラクトバシラス・ロイテリＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７、ラクトバシラス・ロイテリ１０６８、ラクトバシラス・ロイテリＳＤ２１１２及びバシラス・コアグランス・ラクリス−Ｓ株である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は、非病原性のリシン取り込み刺激乳酸菌株の選択及び使用に関し、ペットにおける毛皮及び爪の品質の治療及び予防のための、このような株を使用する製品及び方法に関する。
【００３１】
本発明の１つの目的は、動物におけるリシンの吸収を直接促進又は改善する能力を分析することによって最良の適切な株を選択すること、及びこのような選択された株を、例えばイヌ又はネコの毛皮及び爪の品質を改善するために、動物飼料又はサプリメントにおいて使用することである。ラクトバシラス・ロイテリの新たな株（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７）は、毛皮動物におけるリシン取り込みを刺激することが示され、この特性は、毛皮及び爪の品質の改善を生じる。この株は、ブダペスト条約の下に、２００４年７月２２日付けでＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に寄託された。公への利用可能性に対する全ての制限は、特許付与後に、取り消し不能に取り除かれるであろう。
【００３２】
本発明の製品は、飼料、錠剤若しくはカプセル又は他の剤形などの形態であり得、選択されたＬＡＢ培養物を含む基本的な製品を調製する標準的な方法は、当該分野で公知である。
【００３３】
特定の代表的な実施形態が本明細書中に示されているが、当業者は、本発明の精神又は範囲から逸脱することなしに、改変がなされ得ることを容易に理解するであろう。
【実施例】
【００３４】
（実施例１）
細胞培養物の調製
Ｃａｃｏ−２細胞（ＡＴＣＣ番号：ＨＴＢ−３７、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）を、（Ｔｈｗａｉｔｅｓら、１９９３ａ；１９９３ｂ）に記載のとおりに培養した。細胞単層を、高密度（４．４〜５．０°−１０５細胞／ｃｍ２）で直径１２ｍｍ又は２４．５ｍｍの組織培養インサート［Ｔｒａｎｓｗｅｌｌポリカーボネートフィルター（Ｃｏｓｔａｒ）］上に播種することにより調製した。細胞単層を、空気中５％のＣＯ２の加湿雰囲気中で３７℃で維持した。細胞のコンフルエンスを顕微鏡及び経上皮抵抗の決定によって推定した。リシンの放射標識流動を、播種後１８〜２５日及び給餌後１８〜２４時間に実施した。
【００３５】
（実施例２）
腸リシン取り込みについてＬ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）株を選択する方法
Ｃａｃｏ−２細胞単層を洗浄し（５００ｍｌの改変Ｋｒｅｂｓ緩衝液（組成は以下のとおり（全てｍｍｏｌ／ｌ）、ＮａＣｌ  １４０、ＫＣｌ  ５．４、ＣａＣｌ２  ２．８、ＭｇＳＯ４  １．２、ＮａＨ２ＰＯ４  ０．３、ＫＨ２ＰＯ４  ０．３、ＨＥＰＥＳ  １０、グルコース１０（Ｔｒｉｓ塩基でｐＨを７．４にして３７℃で））中で４回）又は必要に応じてＮａ＋不含Ｋｒｅｂｓ緩衝液（上記と同様であるが、ＮａＣｌ及びＮａＨ２ＰＯ４の代わりにコリンＣｌ−）で、予め温めた（３７℃）Ｎａ＋不含Ｋｒｅｂｂｓ緩衝液２ｍｌを含む６ウェルプレート（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に配置した。新たなＫｒｅｂｓ緩衝液又はＮａ＋不含Ｋｒｅｂｂｓ緩衝液のアリコートを、チャンバー中に配置した。放射標識リシン（（３Ｈ）Ａｍｅｒｓｈａｍ）を、トレーサー濃度（０．２μＣｉ／ｍｌ）で使用した。次いで上皮層を、７．０×１０７ｃｆｕ／ｍｌの濃度の試験すべき種々のＬＡＢ（ラクトバシラス・ロイテリＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７、ラクトバシラス・ロイテリ１０６８、ラクトバシラス・ロイテリＳＤ２１１２及びバシラス・コアグランス・ラクリス−Ｓ株）と共に３７℃で６時間インキュベートした。２００μＬのサンプルを、経上皮輸送の決定のために基礎溶液から６０分毎に採取した。放射標識を、シンチレーションカウントによって決定した。結果については図１を参照のこと。
【００３６】
（実施例３）
選択された株を含む飼料製品の製造
本実施例では、Ｌ．ロイテリ「Ｓｈｉｎｙ」（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７）を、市販製品にこの株を添加するために、一般的に良好な成長特徴及び実施例２で既に言及した選択における好ましい結果に基づいて選択する。このＬ．ロイテリＳｈｉｎｙ株は、業界でラクトバシラスを増殖させるための標準的な方法を使用して、増殖及び凍結乾燥させる。
【００３７】
飼料混合物を、トウモロコシ、コーングルテン、鶏肉及び魚粉、塩類、ビタミン並びにミネラルから製造する。飼料混合物をプレコンディショナー中に供給し、加湿する。次いで、プレコンディショナーから取り出した加湿飼料を、押出機−調理器中に供給し、ゼラチン化する。押出機から取り出したゼラチン化マトリックスを、ダイを通して押し出す。ダイヘッドを離れた押し出し物を切ってイヌへの給餌に適切な断片にし、約１４０℃で約２０分間乾燥させ、冷却してペレットを形成する。ペレットの水分活性は約０．６である。
【００３８】
これらのペレットに、獣脂を含むコーティング基材を噴霧する。プロバイオティクスＬ．ロイテリ「Ｓｈｉｎｙ」（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７）を、製品１グラム当たり１０７ＣＦＵのレベルで乾式噴霧することによって適用し、その後、獣脂を、脂肪層に付着するか又は脂肪層中に部分的に浸透するように配置する。３７℃で８週間の保存の結果は、微生物が優れた安定性を示し、通常の条件での１年間の保存後に安定である可能性が高いことを示している。
【００３９】
（実施例４）
イヌ試験
４５匹のビーグル犬を使用して試験を実施する。イヌに、実施例３の食餌に対応する標準的な乾燥食餌を１週間給餌し、その後試験を開始する。試験開始の直前に、参加するイヌの毛の状態を、実施例５に記載したように評価パネルによって評価する。イヌを、１５匹ずつ３グループに分ける。１グループのイヌに、Ｌ．ロイテリ「Ｓｈｉｎｙ」（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７）でコーティングした乾燥ペレットを給餌し、他のグループのイヌに、Ｌ．ロイテリ株１０６８でコーティングした乾燥ペレットを給餌し、３番目のグループには標準的な食餌を続けることにより、コントロール食餌を提供する。全てのグループを、飼料及び水に自由にアクセスできるようにする。１２週間後、各イヌの毛の状態を再度評価する。Ｌ．ロイテリ「Ｓｈｉｎｙ」コーティングを有するペレットを給餌したイヌは、顕著に艶が増した外観を有し、Ｌ．ロイテリ１０６８株を有するペレットを給餌したイヌ及びコントロール群のイヌと比較して、顕著なフケを示さない。
【００４０】
（実施例５）
爪の成長及び毛皮の特徴
実施例４のイヌの爪は、熟練のネイルグルーマーがスコア付けし、毛皮は、ビーグルの繁殖を専門とする２人の経験のあるドッグショー審判がスコア付けする。試験前に、イヌを、毛皮及び爪の品質によって、グループ間に均等に分配する。１２週間後、爪を、カットしたときの割れ及び成長に関して品質を評価し、１を悪いとし、５を優れているとして、５つのレベルの尺度でスコア付けする。毛皮を、全体的な品質、フケ、毛皮の長さ及び艶について、１（最も悪い）から５（最も良い）の範囲の尺度で評価する。
【表１】
2010519900.tif 000003
【表２】
2010519900.tif 000004
【００４１】
（参考文献）
2010519900.tif 000005
2010519900.tif 000006
2010519900.tif 000007
2010519900.tif 000008
【００４２】
ＰＣＴ  紙面による写し（電子データが原本）
2010519900.tif 000009
【００４３】
受理官庁記入欄
2010519900.tif 000010
【００４４】
国際事務局記入欄
2010519900.tif 000011
【図１】
2010519900.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成21年11月5日(2009.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
本発明の１つの目的は、動物におけるリシンの吸収を直接促進又は改善する能力を分析することによって最良の適切な株を選択すること、及びこのような選択された株を、例えばイヌ又はネコの毛皮及び爪の品質を改善するために、動物飼料又はサプリメントにおいて使用することである。ラクトバシラス・ロイテリの新たな株（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６１２７）は、毛皮動物におけるリシン取り込みを刺激することが示され、この特性は、毛皮及び爪の品質の改善を生じる。この株は、ブダペスト条約の下に、２００４年７月２２日付けでＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に寄託された。
【国際調査報告】
2010519900.tif 000013
2010519900.tif 000014
2010519900.tif 000015
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2010519900.tif 000019
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