(57)【要約】種々の保存条件下で安定性が増強したプロバイオティクス組成物が提供される。前記プロバイオティクス組成物の安定性は、種々の薬剤および賦形剤を添加することにより増強される。プロバイオティクス組成物の安定性増強に使用される場合がある薬剤および賦形剤の例には、糖アルコールであるマンニトール、ソルビトールおよびラクチトールなどのプレバイオティクス、ならびに／またはオリゴマープロアントシアニジン（ＯＰＣ）などの植物性栄養素が含まれる。プロバイオティクス組成物は、錠剤、カプレット剤、およびカプセル剤などの経口剤形として配合される場合もあれば、チューインガムとして、または水、牛乳、ジュース、もしくはヨーグルトなどの液体に溶解する粉末として製造される場合もある。
2010504981.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、およびキシリトールからなる群より選択される少なくとも２つの糖アルコールからなる担体中に、少なくとも１つのプロバイオティクス種を含む組成物。
【請求項２】
前記担体がさらに崩壊剤も含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記崩壊剤が、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ジェランガム、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、およびデンプングリコール酸ナトリウムからなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記担体がさらに流動促進剤も含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記流動促進剤が、二酸化ケイ素、コロイド状二酸化ケイ素、およびタルクからなる群より選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記担体がさらに滑沢剤も含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記滑沢剤が、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、および植物系脂肪酸からなる群より選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記担体が、約３０重量／重量％〜約９８重量／重量％の範囲で前記組成物中に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記少なくとも２つの糖アルコールが、マンニトールおよびソルビトールからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記少なくとも２つの糖アルコールが、マンニトール、ソルビトール、およびラクチトールからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのプロバイオティクス種が、ラクトバチルス・アシドフィルス、Ｌ．ブルガリクス、Ｌ．カゼイ、Ｌ．パラカゼイ、Ｌ．ファーメンタム、Ｌ．プランタルム、Ｌ．ラムノサス、Ｌ．サリバリウス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、Ｂ．インファンティス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、Ｂ．ロンガム、ストレプトコッカス・サーモフィルス、エンテロコッカス・フェカリス、およびＥ．フェシウムからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのプロバイオティクス種が、Ｌ．アシドフィルス、Ｌ．サリバリウス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、およびＳ．サーモフィルスから選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、ラクトバチルス・アシドフィルス、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、およびストレプトコッカス・サーモフィルスから選択される少なくとも２つのプロバイオティクス種を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも１つのプロバイオティクス種が、投与量単位につき約１０６〜約１０１０コロニーの範囲で前記組成物中に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
植物性栄養素もさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記植物性栄養素が、カテキン、ポリフェノール、およびオリゴマープロアントシアニジン（ＯＰＣ）から選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記植物性栄養素がＯＰＣである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＯＰＣがブドウ種子またはマツ樹皮から抽出される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＯＰＣが、約０．５重量／重量％〜約１０重量／重量％の範囲で前記組成物中に存在する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸）、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＤ１（ラミステロール）、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（ジヒドロタキステロール）、ビタミンＤ４（７−デヒドロシトステロール）、ビタミンＥ（トコフェロール）、およびビタミンＫ（ナフトキノン）からなる群より選択されるビタミンもさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
カルシウム、塩化物、マグネシウム、リン、カリウム、ナトリウム、および硫黄からなる群より選択される食事性無機質もさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
クロム、コバルト、銅、フッ素、ヨウ素、鉄、マンガン、モリブデン、セレン、および亜鉛からなる群より選択される微量無機質もさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が経口剤形である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記経口剤形が錠剤、カプレット剤、およびカプセル剤からなる群より選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記錠剤およびカプレット剤が咀嚼可能である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、液体に混合される粉末である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
前記液体が、水、牛乳、ジュース、およびヨーグルトからなる群より選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物がチューインガムである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
プロバイオティクス組成物の安定性を増強する方法であって、少なくとも１つのプロバイオティクス種を、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、およびキシリトールからなる群より選択される少なくとも２つの糖アルコールからなる担体と組み合わせることを含む、方法。
【請求項３０】
前記担体がさらに崩壊剤も含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記崩壊剤が、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ジェランガム、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、およびデンプングリコール酸ナトリウムからなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記担体がさらに流動促進剤も含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記流動促進剤が、二酸化ケイ素、コロイド状二酸化ケイ素、およびタルクからなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記担体がさらに滑沢剤も含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】
前記滑沢剤が、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、および植物系脂肪酸からなる群より選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記担体が、約３０重量／重量％〜約９８重量／重量％の範囲で前記組成物中に存在する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも２つの糖アルコールが、マンニトールおよびソルビトールからなる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３８】
前記少なくとも２つの糖アルコールが、マンニトール、ソルビトール、およびラクチトールからなる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３９】
前記少なくとも１つのプロバイオティクス種が、ラクトバチルス・アシドフィルス、Ｌ．ブルガリクス、Ｌ．カゼイ、Ｌ．パラカゼイ、Ｌ．ファーメンタム、Ｌ．プランタルム、Ｌ．ラムノサス、Ｌ．サリバリウス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、Ｂ．インファンティス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、Ｂ．ロンガム、ストレプトコッカス・サーモフィルス、エンテロコッカス・フェカリス、およびＥ．フェシウムからなる群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項４０】
前記少なくとも１つのプロバイオティクス種が、Ｌ．アシドフィルス、Ｌ．サリバリウス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、およびＳ．サーモフィルスから選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記組成物が、ラクトバチルス・アシドフィルス、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、およびストレプトコッカス・サーモフィルスから選択される少なくとも２つのプロバイオティクス種を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも１つのプロバイオティクス種が、投与量単位につき約１０６〜約１０１０コロニーの範囲で前記組成物中に存在する、請求項２９に記載の方法。
【請求項４３】
植物性栄養素もさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項４４】
前記植物性栄養素がオリゴマープロアントシアニジン（ＯＰＣ）である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＯＰＣがブドウ種子またはマツ樹皮から抽出される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＯＰＣが、約０．５重量／重量％〜約１０重量／重量％の範囲で前記組成物中に存在する、請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般にプロバイオティクス製剤に関し、より具体的には保存条件下で安定性を維持するプロバイオティクス経口剤形に関する。
【背景技術】
【０００２】
胃腸（「ＧＩ」）管は、宿主の粘膜内層が、内壁に住むまたは内壁に付着する数十億の微生物と共存する、微小生態系である。胃腸管に住む微生物には「プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ）」細菌があり、宿主生物の胃腸管の健康維持に役立つ。宿主の胃腸管内では、プロバイオティクス細菌に住処と援助、そして大量の食物基質が与えられる代わりに、プロバイオティクス細菌は宿主に種々の潜在的な治療用途を提供する。これらの用途としては、抗生物質によって破壊される腸内細菌の置換、消化促進および病原菌の抑制、特にロタウイルス（通常小児下痢症を引き起こすウイルス）由来の下痢（感染性下痢症を含む）の予防および治療、胃腸管中の「悪性」生物の過成長（下痢を発症する傾向があり、抗生物質の使用によって起こり得る状態）の治療、過敏性腸症候群および場合によっては炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）の症状の緩和、腟酵母菌感染、尿路感染および膀胱炎（膀胱の炎症）の再発の予防および／または抑制、ラクトース不耐症者のラクトース吸収消化の改善、ならびに免疫応答の増強が含まれる。プロバイオティクスが多くの有益な用途を有することから、当該技術分野ではプロバイオティクス補助食品が必要とされている。
【０００３】
補助食品に含まれる場合があるプロバイオティクスには、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ．ブルガリクス（Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、Ｌ．ファーメンタム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、Ｌ．パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）、Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、Ｌ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、Ｂ．インファンティス（Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス（Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｂ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、およびＥ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）があり、これらはすべてヒトの胃腸管および膣管に存在する。ラクトバチルス菌種は、腸管内のラクトースおよび他の単糖を吸収して乳酸を産生するグラム陽性乳酸菌であり、乳酸は、臓器のＰＨを低下させて、有害な細菌の成長に不利な臓器環境を作り出す有益な効果を有する。ビフィドバクテリウム菌種は、母親から授乳を受ける新生児の無菌の大腸にコロニーを形成する最初の微生物種である。ビフィドバクテリウムは、他の場合では有害な細菌が繁殖に使用する栄養素を消化するために、込み合いの機序を使用する。プロバイオティクス補助食品は、各補助食品につき最高で約１００億のコロニー形成単位を有する場合がある。
【０００４】
Ｌ．アシドフィルスは、特に抗菌物質（すなわち天然の抗生物質）であるアシドリン、アシドフィリン、ラクトシジン、およびバクテリオシンを産生するというさらなる有益な効果を有し、これらの物質により、カンジダ菌などの真菌や、有害な菌種である大腸菌、黄色ブドウ球菌、およびサルモネラ菌に対する免疫系の耐性が増強される。
【０００５】
Ｌ．ブルガリクスは、タンパク質および乳製品の消化率を向上させて、天然の抗生物質の産生を助け、全腸炎などの胃腸疾患の治療に使用されている。
【０００６】
Ｌ．カゼイは、病原性リステリア菌に対する保護活性を有することが明らかになっている。
【０００７】
Ｌ．ファーメンタムは、乳児の免疫細胞がヒト免疫不全ウイルス（「ＨＩＶ」）に感染するのを予防することが明らかになっている（Ｋａｒｌａ  Ｇａｌｅ，Ｒｅｕｔｅｒｓ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｍａｙ  ２５，２００４，ｈｔｔｐ：／／ｐｒｏｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．ｏｒｇ／ａｒｃｈｉｖｅ／２００４０６／ｍｓｇ００００２．ｐｈｐ）。
【０００８】
Ｌ．プランタルムは、天然の抗生物質であるラクトリンの産生を助け、Ｌ−リジンを合成する。
【０００９】
Ｌ．サリバリウスは、口腔およびガムに最も多く存在する通性細菌（すなわち、嫌気性および好気性の両環境下で生存し、成長する菌種）である。Ｌ．サリバリウスは、プロバイオティクスとしての利点をいくつか有する。すなわち、この菌種は、未消化のタンパク質を分解して、タンパク質の腐敗によって発生する毒素を分離する能力を有し、潰瘍の原因であることが知られているヘリコバクターピロリの予防および除菌に有用であり、またこの菌種の集団が２０分ごとに倍増することから、患者へのプロバイオティクス投与量をより少量にすることによって、プロバイオティクスの使用に経済的な利点を加えることが可能となる。
【００１０】
Ｌ．ラムノサスは、幅広い温度およびＰＨ値にわたって優れた安定性を有しており、湿疹や食物アレルギーを持つ個体の過敏性反応や腸の炎症を軽減する。
【００１１】
Ｂ．アニマリスは、腸粘膜を保護する役割を果たすプロバイオティクス細菌である。Ｂ．アニマリスには、Ｂ．アニマリス亜種アニマリスとＢ．アニマリス亜種ラクティスという２種類の亜種が存在し、これらの亜種はいずれも、２００４年まではＢ．アニマリスとＢ．アニマリス亜種ラクティスと呼ばれていた（非特許文献１）。Ｂ．アニマリス亜種アニマリスは嫌気性環境下においてのみ成長し、牛乳培養物中で増殖できないためプロバイオティクスとして有用ではない。対照的に、Ｂ．アニマリス亜種ラクティスは、高い酸素耐性を有し、大量のギ酸塩を産生することを特徴とした乳酸菌であり、牛乳培養物中でよく成長することから、有用なプロバイオティクスである。Ｂ．アニマリス亜種ラクティスは、授乳を受けていない新生児にビフィドバクテリウムが十分なコロニーを形成するように特殊調整粉乳に添加されており、ヨーグルト培養物に含まれる唯一のビフィドバクテリウム菌種である。
【００１２】
Ｂ．ビフィダムは、例えば二価鉄イオンなど、多くの有害な細菌種が増殖に必要とする栄養素を消費することにより、有害な菌種であるサルモネラ菌、リステリア菌、赤痢菌、大腸菌およびウェルシュ菌の増殖を阻害する。Ｂ．ビフィダムはまた、いくつかのビタミンを合成し、カルシウム、マグネシウムおよび亜鉛などの無機質の吸収を助ける。
【００１３】
Ｂ．インファンティスは、母親から授乳を受ける新生児の無菌の胃腸管にコロニーを形成する最初のプロバイオティクスである。人工栄養の乳児の場合、このプロバイオティクスは、新生児が適切な腸管内菌叢を有するように栄養補助食品の形態で投与することができる。
【００１４】
Ｂ．ロンガム次亜種ロンガム（Ｂ．ロンガムと呼ぶ）は、腸管からの硝酸塩の除去が可能であることが明らかになっている。
【００１５】
Ｓ．サーモフィルスは、ラクターゼ活性を起こし、牛乳中のラクトースの消化を促進する。
【００１６】
Ｅ．フェカリスおよびＥ．フェシウムは、いずれも大腸菌、サルモネラ菌、赤痢菌、およびクロストリジウムなどの腸管病原体に対して抑制効果を有する乳酸菌である。
【００１７】
特許文献１（Ｇｅｈｒｍａｎら）では、室温で安定性を有する乾燥状の生きたラクトバチルス細胞の製造にヒマワリ油を液体懸濁溶媒として使用することについて教示されている。
【００１８】
特許文献２（Ｆｏｒｄら）では、抗菌剤およびマイクロカプセル化したラクトバチルス菌（これらの菌は、抗菌剤の作用から保護するためにマイクロカプセル化される）の生菌コロニーを含有する腟坐薬について教示されている。
【００１９】
特許文献３、特許文献４、特許文献５、および特許文献６（すべてＦｏｒｄら）では、各単位服用量につき１０３個のマイクロカプセル化した生存ラクトバチルスを有する、哺乳類への経口投与および局所投与のためのマイクロカプセル化したラクトバチルス菌について教示されている。
【００２０】
特許文献７（Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎら）では、尿素およびアンモニアをアミノ酸に代謝することが可能な、ラクトバチルスおよびビフィダム菌種などのマイクロカプセル化および／または腸溶コーティングしたプロバイオティクスについて教示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】米国特許第４，５１８，６９６号明細書
【特許文献２】米国特許第５，４６６，４６３号明細書
【特許文献３】米国特許第５，６１４，２０９号明細書
【特許文献４】米国特許第５，６３３，０１２号明細書
【特許文献５】米国特許第５，６３５，２０２号明細書
【特許文献６】米国特許第５，７３３，５６８号明細書
【特許文献７】米国特許第６，７０６，２８７号明細書
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ｍａｓｃｏら、ＩＮＴ’Ｌ  Ｊ  ＳＹＳＴ  ＥＶＯＬ  ＢＩＯＬ（２００４）５４：１１３７−１１４３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
市販されるプロバイオティクス製剤の多くの欠点は、製剤の貯蔵寿命が短い点であり、従って、例えばラクトバチルスおよびビフィドバクテリウムなどのプロバイオティクス細菌の生菌コロニーを有するプロバイオティクス製剤の貯蔵寿命を改善することが、当該技術分野で求められている。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明は、保存条件下におけるプロバイオティクスの安定性を最大にする１つ以上の薬剤および／または賦形剤を含むプロバイオティクス組成物を供給することによって、当該技術分野における必要性を克服する。
【００２５】
本発明の一実施形態においては、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、およびキシリトールからなる群より選択される少なくとも２つの糖アルコールを含む担体中に少なくとも１つのプロバイオティクス種を含む組成物が提供される。
【００２６】
本発明の別の実施形態においては、プロバイオティクス組成物の安定性を増強する方法であって、エリスリトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、およびキシリトールからなる群より選択される少なくとも２つの糖アルコールを含む担体と、少なくとも１つ以上のプロバイオティクス種を組み合わせることを含む、方法が提供される。
【００２７】
本発明の組成物および方法において、担体はさらに崩壊剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、および／または滑沢剤も含む場合がある。崩壊剤は、例えばクロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ジェランガム（ｇｅｌｌａｎ  ｇｕｍ）、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、およびデンプングリコール酸ナトリウムからなる群より選択される崩壊剤などのいずれかの適切な崩壊剤である場合がある。流動促進剤は、例えば二酸化ケイ素、コロイド状二酸化ケイ素、およびタルクからなる群より選択される流動促進剤などのいずれかの適切な流動促進剤である場合がある。滑沢剤は、例えばステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、および植物系脂肪酸からなる群より選択される滑沢剤などのいずれかの適切な滑沢剤である場合がある。本発明の組成物および方法において、担体は、組成物中に約３０重量／重量％〜約９８重量／重量％の範囲で含まれる（この重量パーセンテージは、担体中に存在する全成分を考慮に入れた累積的な重量パーセンテージである）。
【００２８】
本発明の組成物および方法において、プロバイオティクスは、例えばラクトバチルス・アシドフィルス、Ｌ．ブルガリクス、Ｌ．カゼイ、Ｌ．パラカゼイ、Ｌ．ファーメンタム、Ｌ．プランタルム、Ｌ．ラムノサス、Ｌ．サリバリウス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、Ｂ．インファンティス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、Ｂ．ロンガム、ストレプトコッカス・サーモフィルス、エンテロコッカス・フェカリス、およびＥ．フェシウムからなる群より選択されるプロバイオティクスなどのいずれかのプロバイオティクス種である場合がある。また、プロバイオティクス種の組み合わせは、例えばＬ．アシドフィルスとＢ．アニマリス亜種ラクティスの組み合わせなど、本発明の組成物および方法の下で企図される。本発明の組成物および方法の下で企図されるプロバイオティクスの濃度は、各剤形につき約１０６〜約１０１０コロニーの範囲内であり、この濃度は、組成物中に存在する各プロバイオティクスの個々の濃度範囲である。
【００２９】
本発明の組成物および方法において、組成物はさらに植物性栄養素（ｐｈｙｔｏｎｕｔｒｉｅｎｔ）も含む場合があり、例えば、植物性栄養素は、カテキン、ポリフェノール、およびオリゴメリックプロアントシアニジン（ＯＰＣ）から選択される。植物性栄養素がＯＰＣである場合、これはブドウ種子またはマツ樹皮から得られ、約０．５重量／重量％〜約１０重量／重量％の範囲内で組成物中に組み込まれる場合がある。
【００３０】
本発明の組成物および方法において、組成物はさらにビタミン、食事性無機質、および／または微量無機質も含む場合がある。ビタミンは、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸）、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＤ１（ラミステロール（ｌａｍｉｓｔｅｒｏｌ））、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（ジヒドロタキステロール）、ビタミンＤ４（７−デヒドロシトステロール）、ビタミンＥ（トコフェロール）、およびビタミンＫ（ナフトキノン）からなる群より選択される場合がある。食事性無機質は、カルシウム、塩化物、マグネシウム、リン、カリウム、ナトリウム、および硫黄からなる群より選択される場合がある。微量無機質は、クロム、コバルト、銅、フッ素、ヨウ素、鉄、マンガン、モリブデン、セレン、および亜鉛からなる群より選択される場合がある。
【００３１】
本発明の組成物は、経口剤形、液体に混合した粉末、またはチューインガムである場合がある。組成物が経口剤形である場合、経口剤形は、錠剤、カプレット剤（ｃａｐｌｅｔ）、およびカプセル剤からなる群より選択される場合があり、前記錠剤およびカプレット剤は固形である場合もあれば、咀嚼可能である場合もある。組成物が粉末である場合、粉末は、水、牛乳、ジュース、およびヨーグルトからなる群より選択される液体に混合される場合がある。組成物がチューインガムである場合、ガムはソフトガムである場合もあれば、ハードチューインガム錠剤である場合もある。
【００３２】
本発明の発明者等は、プロバイオティクス種と、マンニトール、ソルビトールなどの糖アルコールを単独で、またはさらに糖アルコールのラクチトールおよび／またはＯＰＣなどの植物性栄養素とを混合することによって、プロバイオティクス製剤の安定性が種々の保存条件下で驚くほどかつ予想外に増強することを発見した。
【００３３】
本発明のさらなる態様、利点および特徴は、一部は以下の説明に記載され、一部は以下の試験により当業者に明らかになるか、または本発明の実施により認識される場合がある。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】実施例１１および１２（表３２および３４）に記載するＬ．アシドフィルスの安定性試験の結果を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以下は、本発明の例示的実施形態の説明である。以下に記載する定義は、単に例示的実施形態の例示を目的として提示するものであり、本発明の適用範囲を限定することを目的としたものではない。本明細書に記載の実施形態は例示的なものであることから、記載した本発明は、例示的実施形態の機能、目的および／または構造の改変が企図されるものと理解されるべきである。
【００３６】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別途文脈で明記されない限り、複数の対象を含む。
【００３７】
本明細書で使用される「動物」という用語は、ヒト以外の種を指し、「生物」という用語は動物とヒトの両方の種を指す。本明細書で使用される「動物」という用語は、典型的には哺乳類を指すものとして使用されるが、本用語は哺乳類に限定するものではなく、適宜哺乳類と非哺乳類の両方を含む場合がある。
【００３８】
「賦形剤」という用語は、典型的には薬物または栄養補助食品用の希釈剤またはビヒクルとして使用される不活性物質を指す。
【００３９】
「プロバイオティクス」という用語は、ヒトの胃腸管および膣管などの動物の器官において有益な効果を有する細菌属を指す。プロバイオティクスとして最も多く使用される細菌属は、ラクトバチルスおよびビフィドバクテリウムであるが、Ｓ．サーモフィルスなどの他の有益な細菌種もまたプロバイオティクスである。一部のプロバイオティクスは、胃と小腸を通り抜けた後も大腸の中で生き残って、一時的に定着し、大腸の発酵能力が良好に改善される。例えば、Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ，ＡＭ  Ｊ  ＣＬＩＮ  ＮＵＴＲ  ７１（ＳＵＰＰＬ）：１６８２Ｓ−１６８７Ｓ（２０００）を参照されたい。
【００４０】
本発明の組成物で使用される場合があるプロバイオティクス種は、例えばＬ．アシドフィルス、Ｌ．ブルガリクス、Ｌ．カゼイ、Ｌ．パラカゼイ、Ｌ．ファーメンタム、Ｌ．プランタルム、Ｌ．ラムノサス、Ｌ．サリバリウス、Ｂ．ビフィダム、Ｂ．インファンティス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、Ｂ．ロンガム、Ｓ．サーモフィルス、Ｅ．フェカリス、およびＥ．フェシウムなどのいずれかの既知のプロバイオティクスである場合がある。上記の一覧は、単に例示のためのものであり、本発明のプロバイオティクス組成物に含まれる場合があるプロバイオティクスを限定的に示すものではないと理解されるべきである。この点においてはまた、例えば他の既知のおよび／または利用可能なラクトバチルスまたはビフィドバクテリウム菌種などの他のいずれのプロバイオティクス種も、本発明の組成物で使用される場合がある。
【００４１】
「プレバイオティクス」という用語は、例えばラクトバチルスおよび／またはビフィドバクテリウムなど、大腸内で１つ以上のプロバイオティクス種の増殖および／または活性を選択的に刺激することにより、宿主に有益な影響を与える非消化性食品成分を指す。プレバイオティクスは、消化管を通した消化に耐える化学構造を有するため、完全な分子として大腸に到達し、全身の生理学的機能を誘発し、結腸細菌叢の発酵性基質として作用することができる。プレバイオティクスの例には、フラクトオリゴ糖（例えば、チコリ、アーティチョーク、アスパラガス、タンポポ、ダリア、エンダイブ、ニンニク、リーキ、レタスおよびタマネギから抽出されるイヌリン）、トランス−ガラクトシルオリゴ糖、ガラクトシルラクトース、イソマルトオリゴ糖、ラフィノース、ラクツロース、ラクチトール（糖アルコール）、および部分的に加水分解したグアーガムが含まれる。最も一般的に使用されるプレバイオティクスは、イヌリンである。イヌリンは、バクテロイデスおよびビフィドバクテリウム菌種（Ｂ．ビフィダムおよびＢ．ロンガムは除く）にとって良好な基質であることが明らかになっているものの、他のプロバイオティクスにとっては優れた基質とではない（Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄら、ＮＵＴＲ．ＲＥＶ．５１：１３７−１４６（１９９３））。プレバイオティクスをプロバイオティクスと混合する場合、得られる補助食品は「シンバイオティクス」と呼ばれることがある。
【００４２】
本発明のプロバイオティクス組成物とともに使用される場合があるプレバイオティクスの例には、糖アルコールのラクチトールがあり、これは低カロリー食品用の代替甘味料として現在商業的に使用されている。ラクチトールは、１グラムに付き２カロリー（９キロジュール）を有し、砂糖の甘味の約４０％を有する。米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、ラクチトールを他の糖アルコール（プレバイオティクスである場合もあれば、プレバイオティクスでない場合もある；すなわち、エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、およびキシリトール）とともに、「一般に安全と認められる」（「ＧＲＡＳ」）ものとして分類している。
【００４３】
上記の通り、特定のプロバイオティクスと混合するプレバイオティクスの選択は、どのプレバイオティクスが特定のプロバイオティクスに最も適切な基質を提供するかによって決定される。特定のプレバイオティクスの使用について検討する際には、１つ以上のプレバイオティクス間の相乗効果、および／または１つ以上のプレバイオティクスと他の成分との間の相乗効果を常に考慮しなければならない。プレバイオティクスのラクチトールと、糖アルコールのマンニトールおよびソルビトールを含むＯＰＣとの間の相乗効果については、実施例１０に記載する試験において例示する。
【００４４】
実施例１０では、参考として本明細書で援用される米国特許出願公開第２００３／０１１８６４２（Ａ１）号（Ｎｏｒｍａｎら）に開示される炭水化物輸送系において記載した糖アルコールのマンニトールとソルビトールを、Ｌ．アシドフィルスと混合して、２つのプロバイオティクスのバッチを形成し（表２７）、これらの安定性を試験した（表２８）。対照として、Ｎｏｒｍａｎらの特許出願公開で取り上げた市販の製品であるＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）製品（ＳＰＩ  Ｐｏｌｙｏｌｓ、米国デラウェア州ニューキャッスル）を、Ｌ．アシドフィルスプロバイオティクスの調製に担体として使用した。ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）は、糖アルコールのマンニトールとソルビトールを含む。表２８に示す通り、マンニトールとソルビトールは単独では、気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下においてＬ．アシドフィルスを生存したまま維持することができないのに対し、表３０に示す通り、気温２５℃／相対湿度６０％の穏やかな保存条件下においてはＬ．アシドフィルスを生存したまま２週間維持することができるものの、生存能力は限られたものであった。対照的に、表３１および表３２（実施例１１）に示す通り、ラクチトールおよび／またはＯＰＣを表２９のＬ．アシドフィルスプロバイオティクス製剤に添加した場合、Ｌ．アシドフィルスは、乾燥剤を使用せずに気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下において２週間にわたり高水準の安定性を維持し（表３２、バッチＥを参照）、これにより糖アルコールのマンニトールおよびソルビトールと、プレバイオティクスのラクチトールおよび／またはＯＰＣとの相乗効果が示された。上述より、少なくとも糖アルコールのマンニトールとソルビトールをラクチトールおよび／またはＯＰＣと組み合わせて含むように配合したＬ．アシドフィルスプロバイオティクスが、長期の貯蔵寿命を有するプロバイオティクス組成物をもたらすことが示唆される。
【００４５】
ラクチトールがＬ．アシドフィルスの安定性に対して顕著な効果を有するかどうかを判定するため、表３３（実施例１２）に記載の通り、Ｌ．アシドフィルスプロバイオティクス錠剤を３バッチ調製した。これらは、１つ目のバッチがＬ．アシドフィルスとラクチトールを含み（バッチＩ）、２つ目がＬ．アシドフィルスとＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）を含み（バッチＪ）、３つ目がＬ．アシドフィルスとラクチトールとＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）を含む（バッチＫ）。表３４（実施例１２）の結果は、気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい条件下においてラクチトール単独では、Ｌ．アシドフィルスの安定性を維持するのに有効でないのに対し、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）単独の場合、および比較的低重量パーセントのＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）とラクチトールとを組み合わせた混合物の場合では、２週間後にＬ．アシドフィルスの生菌コロニーが一部確認されたことを示している。バッチＥ（表３２）とバッチＩ、ＪおよびＫ（表３４）の安定性試験の結果を比較した対数グラフを図１に示す。グラフに示す通り、気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下に２週間置いたところ、ラクチトール１００％の場合はＬ．アシドフィルスを安定化させることがなく、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）１００％の場合は、Ｌ．アシドフィルスの限定的な生存能力を示した。ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）１０％とラクチトール９０％の組み合わせの場合は、Ｌ．アシドフィルスの限定的な生存能力を示し、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）８７％とラクチトール１３％の組み合わせの場合は、Ｌ．アシドフィルスの顕著な生存能力を示した。図１に示す安定性試験の結果は、最適な比率であれば、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）成分とラクチトールとの間に相乗効果が生じることを示唆している。
【００４６】
「植物性栄養素」という用語は、植物性栄養素を摂取する生物（すなわち、動物またはヒト）の健康に対して有益な効果を有する植物原料由来の栄養素を指す。植物性栄養素は、生物の通常の代謝に必要とされないという点で栄養素とは異なる。多くの植物性栄養素は、果物や野菜に明るい色にする抗酸化剤である。例えば、ルテインはトウモロコシの黄色を、リコピンはトマトの赤色を、カロチンはニンジンのオレンジを、アントシアニンはブルーベリーの青色を作り出す。植物性栄養素の明るい色と抗酸化特性はいずれも、単結合の炭素と二重結合の炭素を交互に有することによる。本発明のプロバイオティクス製剤に含まれる場合がある植物性栄養素には、お茶に含まれるカテキン、ブドウ皮、リンゴ皮およびオレンジ皮などの果皮に含まれるポリフェノール、ならびに果実、野菜、ナッツ、種子、花および樹皮に含まれるが、一般的にはブドウ種子および／またはマツ樹皮から抽出されるオリゴメリックプロアントシアニジン（「ＯＰＣ」）が含まれるが、これらに限定されない。ＯＰＣの単離については、米国特許第３４３６４０７号および第４６９８３６０号（いずれもＭａｓｑｕｅｌｉｅｒら）に記載されている。実施例１１の表３１および表３２（バッチＨ）は、ＯＰＣ（ラクチトール無）を上記文献に記載のＬ．アシドフィルスプロバイオティクス組成物に添加すると、Ｌ．アシドフィルスの安定性が、乾燥剤を使用せずに気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下で２週間にわたりきわめて高水準に維持されたことを示している。本発明の状況の範囲内において、ＯＰＣは、例えば約０．０５重量／重量％〜約２５重量／重量％などの広い範囲でプロバイオティクス組成物に添加することができるが、一般的には、約０．５重量／重量％〜約１０重量／重量％の範囲が、ＯＰＣが効果を示すのに十分なはずである。
【００４７】
上記の他にも、本発明はまた、少なくとも１つのプレバイオティクスおよび少なくとも１つのＯＰＣと組み合わせた少なくとも１つのプロバイオティクス種の添加も包含する。実施例７の表１８に示す通り、プレバイオティクスのラクチトールと植物性栄養素のＯＰＣとを、上記に記載するＬ．アシドフィルスとＢ．アニマリス亜種ラクティスのプロバイオティクス組成物に添加すると、乾燥剤を使用せずに気温２５℃／相対湿度６０％の保存条件下で６ヵ月目にプロバイオティクス組成物の最も高い安定性の数値を記録した。さらに、実施例１１の表３１および表３２のバッチＩは、プレバイオティクスのラクチトールと植物性栄養素のＯＰＣとを、上記に記載するＬ．アシドフィルスのプロバイオティクス組成物に添加すると、Ｌ．アシドフィルスのプロバイオティクス組成物の安定性の数値が、乾燥剤を使用せずに気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下で２週間にわたりきわめて高水準に維持されたことを示している。
【００４８】
上述のプロバイオティクスの組み合わせとともに含まれる場合があるさらなる成分には、ビタミン、食事性無機質、微量無機質、および他の植物性栄養素が含まれる。実施例８（表２０〜２２）を参照されたい。
【００４９】
本発明のプロバイオティクス組成物に含まれる場合があるビタミンには、ビタミンＡ（レチノール）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（葉酸）、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＤ１（ラミステロール）、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（ジヒドロタキステロール）、ビタミンＤ４（７−デヒドロシトステロール）、ビタミンＥ（トコフェロール）、およびビタミンＫ（ナフトキノン）などのビタミンが含まれるが、これらに限定されない。上記の一覧には、例えば酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、および硝酸チアミンなどのビタミン塩が含まれる。
【００５０】
本発明のプロバイオティクス組成物に含まれる場合がある食事性無機質には、カルシウム、塩化物、マグネシウム、リン、カリウム、ナトリウム、および硫黄が含まれるが、これらに限定されない。
【００５１】
本発明のプロバイオティクス組成物に含まれる場合がある微量無機質には、クロム、コバルト、銅、フッ素、ヨウ素、鉄、マンガン、モリブデン、セレン、および亜鉛が含まれるが、これらに限定されない。
【００５２】
本発明のプロバイオティクス組成物は、例えば、経口剤形（例えば、錠剤、カプレット剤またはカプセル剤）、チューインガム、または液体に溶解させる粉末などの種々の製剤に製造される場合がある。
【００５３】
上述の通り、本発明のプロバイオティクス組成物は、錠剤、カプレット剤またはカプセル剤などの経口剤形に配合される場合がある。本発明のプロバイオティクス錠剤およびカプレット剤は、嚥下用または咀嚼用として配合される場合がある。後者の場合、錠剤とカプレット剤は香味料を加えて調製しなければならない。必要に応じて、風味付けしたチュアブル錠およびカプレット剤は甘味料を含む場合があり、甘味料は、人工の甘味料である場合もあれば、天然の甘味料である場合もあり、あるいはその両方である場合もある。本発明のプロバイオティクスカプセル剤は、主に嚥下用として製造される。
【００５４】
錠剤、カプレット剤、およびカプセル剤を調製する手順は当業者に既知であり、これには、湿式造粒法、乾式造粒法、および直接圧縮法（錠剤およびカプレット剤用）が含まれるが、これらに限定されない。
【００５５】
錠剤、カプレット剤、またはカプセル剤の製造には、湿式および乾式造粒法が使用される。造粒法では、剤形の粉末の製造にチルソネーションが使用される。チルソネーターは、水圧により互いにしっかりと押し付けられた溝付きの回転ローラーを収容する。チルソネーターのホッパーに原料を入れ、水平および垂直スクリュー方式によってローラーに供給する。ローラー内の溝を通過した原料は、きわめて高い圧力下で圧縮され、高密度シートとしてチルソネーターから排出される。これらのシートを、フィッツミルを使用して細かい粒状粉末に粉砕した後、網に通して、均一な流動性の顆粒を生成する。このチルソネーションプロセスにより、完成した粉末は、出発原料よりも２倍〜４倍高密度になり、所望の剤形に原料を作り変えられる特徴を有するようになる。
【００５６】
乾式造粒法では、粉末をゼラチンカプセル剤に組み込む場合もあれば、粉末をゼラチンと混合して、錠剤またはカプレット剤を形成する場合もある。湿式造粒法では、粉末を湿らせて大きな原料の「塊」を作った後、これを乾燥させて粉砕し、製造プロセスに所望のサイズの粒子からなる塊に変える。所望のサイズの粒子が得られたら、粒子をゼラチンカプセル剤に組み込むか、ゼラチンと混合して、錠剤またはカプレット剤を形成する。
【００５７】
ほとんどの直接圧縮製剤は、最終的な剤形に容積を与える不活性担体と、圧縮プロセスに有用な滑沢剤と、活性成分の３種類の材料で構成される。担体は０．５重量／重量％〜９５重量／重量％までの広い範囲で剤形に含まれる場合がある。本発明の状況の範囲内において、本発明のプロバイオティクス組成物を配合するのに使用される担体は、一般的に約３０重量／重量％〜約９８重量／重量％の範囲である。実施例で使用される担体は、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）担体（ＳＰＩ  Ｐｏｌｙｏｌｓ、米国デラウェア州ニューキャッスル）である。
【００５８】
直接圧縮法では、ツインシェルまたはＶ型ブレンダーなどのバッチブレンダーで原料を混合して、ビン（通常はポータブルビン）に排出した後、ここから錠剤化プロセスへと続くシュートに供給する。バッチブレンドに代わるものとして、ビン内ブレンドも使用される。ビン内ブレンドでは、混合していない材料をポータブルビン（内部バッフルを備える場合がある）に入れて回転させる。ビン内ブレンドでは、ブレンダーからポータブル容器に材料を移す必要がなくなる。直接圧縮製剤では、幅広い粒子径分布が見られ、活性剤は通常その範囲内の細かい側に当たる。粒子の分離を避けるため、ビンの中は常に確かな流動を維持しなければならない。また、すべての錠剤が最高品質であることを保証するため、製造中に一定の間隔で錠剤の試料を採取し、活性成分の濃度、錠剤の硬度、および溶解速度を評価しなければならない。
【００５９】
直接圧縮法は、嚥下用の錠剤およびカプレット剤のほか、チュアブル錠およびカプレット剤を製造する際にも使用される場合がある。後者の場合は、錠剤およびカプレット剤の硬度を下げ、錠剤およびカプレット剤の風味と口当たりが良くなるように錠剤およびカプレット剤の成分を調製する必要がある。チュアブル錠およびカプレット剤の風味は、種々の香味料および甘味料を使用して調整される場合があり、チュアブル錠およびカプレット剤の口当たりは、イヌリン、ラクチトール、マンニトールなどの種々のプレバイオティクスを使用して調整される場合がある。
【００６０】
チュアブル錠の口当たりは、錠剤またはカプレット剤の本体を潰した時に、風味付けしたマトリックスに混ざるように調整しなければならず、錠剤本体がもろすぎると、使用者の口内で砕けて、不快な感覚を生じる場合がある。チュアブル錠では、風味が使用者の受容性において重要な場合は、バルク包装を開けた時に、製品が心地よい香りも有さなければならない。チュアブル錠のそれぞれの特徴は、所望の特性が得られるまで賦形剤を調整することにより達成される場合がある。
【００６１】
錠剤およびカプレット剤の最終的なサイズおよび特徴（すなわち、サイズ、硬度、脆性、咀しゃくした際の口当たりなど）に応じて、２種類の直接圧縮機が剤形の製造に使用される場合がある。典型的には単発式打錠機が低い圧縮速度を示すのに対して、ロータリー式打錠機が高い圧縮速度を示す。実施例では、単発式打錠機（実施例１および２）とロータリー式打錠機（ロータリー機とも呼ぶ、実施例２〜４および７〜１０）の両方の使用について説明する。
【００６２】
本発明のプロバイオティクス組成物はまた、チューインガムに組み込む場合もある。チューインガムは、好ましくは風味を含み、ハードチューインガムである場合もあれば、ソフトチューインガムである場合もある。必要に応じて、風味付けしたハードチューインガムまたはソフトチューインガムは甘味料を含む場合があり、甘味料は、人工の甘味料である場合もあれば、天然の甘味料である場合もあり、あるいはその両方である場合もある。ガムを製造する手順は当業者に既知である。
【００６３】
従来、ガムは、ガム基礎剤（例えば、マツの木から得られる樹脂）、天然甘味料（例えば、砂糖）または人工甘味料、軟化剤（例えば、グリセリン）、および香味料の４種類の材料を使用して作られる。ガムの原料は、所定の加工時間の間一定の温度を維持しながら、ミキサーで混合する。その後、混合したガム原料をホッパーに送り、ツインスクリューで押し出して、ガムシートを作る。ガムシートの内側と外側には粉を振り、圧延時や包装時に機械に付着しないようにする。押出プロセス時に、ガムシートの厚さはローラーで制御される。押出成形の後、ガムシートに刻み目を入れ、適切なサイズに切断して、冷却トンネルに通し、包装用のトレーの上に積み重ねる。ガムがチューインガム錠剤などのハードチューインガムである場合は、切断手順と冷却手順の間にガムをコーティングする。各手順には特別設計の機械が用意されており、したがって、ガムは、混合機、押出し機、二次成形機、冷却機、およびスタック機を使用して製造することができる。
【００６４】
また、ガムは、参考として本明細書で援用される米国特許出願公開第２００４／００１３７６７号（Ｎｏｒｍａｎ  ａｎｄ  Ａｍｉｎ）に記載の直接圧縮法を使用して調製される場合がある。この手順では、ガム基礎剤、造粒剤、加工助剤、および１つ以上の滑沢剤を混合して、従来の錠剤機で直接圧縮を行う。甘味料、着色剤、および香味料を混合物に添加する場合もある。ガム基礎剤中にポリオールおよび／または糖を混合した製品は、ＰＨＡＲＭＡＧＵＭ（登録商標）（ＳＰＩ  Ｐｏｌｙｏｌｓ，Ｉｎｃ．、米国デラウェア州ニューキャッスル）として市販されている。直接圧縮法は、特にチューインガム錠剤の調製に有用である。
【００６５】
上記の手順のいずれにおいても、プロバイオティクスは、押出成形または直接圧縮よりも前の最初の混合段階の間に添加される。
【００６６】
上記の他にも、本発明のプロバイオティクス組成物は、水、牛乳、ジュースおよびヨーグルトなどの液体に溶解することを目的とした粉末として調製される場合もある。個々の液体を適宜一緒に混合する場合もあることが理解される。例えば、プロバイオティクス製剤をフルーツジュースとヨーグルト、または牛乳とヨーグルトと組み合わせて、プロバイオティクスヨーグルトシェイクを作る場合がある。また、プロバイオティクス製剤を牛乳とアイスクリームと組み合わせて、プロバイオティクスミルクセーキを作る場合もある。本発明で企図されるプロバイオティクス液体製剤の香味料は、当業者に既知である。
【００６７】
適切な剤形を配合するのに使用される場合がある賦形剤の例には、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、可塑剤、圧縮剤、湿式造粒剤、および甘味料が含まれ、これらはすべて、本発明が関係する当該技術分野の当業者に既知である。以下の例はすべて、例示を目的として提示するものであり、限定を目的として提示するものではない。結合剤は、剤形の成分をさらに合わせるのを助けるために適宜使用される。結合剤の例には、カルボポール、ポビドン、およびキサンタンガムが含まれる。滑沢剤は一般的に、錠剤化またはカプセル化プロセス時に圧縮した粉末塊が装置に付着するのを防止するために、直接圧縮法による剤形の製造で常に使用される。滑沢剤の例には、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、および植物系脂肪酸が含まれる。崩壊剤は、圧縮した塊を液体環境に入れた時の分解を助ける。崩壊剤の例には、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ジェランガム、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、およびデンプングリコール酸ナトリウムが含まれる。被覆剤は、薬物の溶解性を制御するのに使用される。被覆剤の例には、カラゲナン、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ジェランガム、マルトデキストリン、メタクリル酸塩、メチルセルロース、微結晶性セルロース、およびセラックが含まれる。可塑剤は、剤形からの薬物の放出速度を制御するために使用される。可塑剤の例には、クエン酸エステル、セバシン酸ジブチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ポリ酢酸ビニル、およびトリアセチンが含まれる。圧縮剤には、炭酸カルシウム、デキストロース、フルクトース、グアーガム、ハチミツ、ラクトース、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、微結晶性セルロース、モラセス、ソルビトール、デンプン、およびスクロースが含まれる。湿式造粒剤には、炭酸カルシウム、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、微結晶性セルロース、ポビドン、およびデンプンが含まれる。甘味料には、アスパルテーム、デキストロース、フルクトース、ハチミツ、ラクトース、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、モラセス、グリチルリチン酸モノアンモニウム、ソルビトール、スクラロース、およびスクロースが含まれる。チュアブル錠の製造で一般的に使用される賦形剤には、例示として、デキストロース、フルクトース、グアーガム、ラクトース、マルトデキストリン、マルトース、マンニトール、微結晶性セルロース、およびソルビトールが含まれるが、これらに限定されない。上記の一覧から明らかなように、同じ材料の多くが、種々の異なる剤形において種々の異なる目的のために使用される場合がある。
【００６８】
上述のプロバイオティクス組成物のそれぞれにおいて、プロバイオティクスは、投与量単位につき約１０６コロニー〜約１０１０コロニーの範囲で含まれなければならないが、これよりも高い数値でも許容される。プロバイオティクス組成物が成人のヒト（すなわち、１６歳を超えるヒト）に投与される場合、プロバイオティクスは、好ましくは少なくとも１０９、より好ましくは１０１０、またはさらに高い数値の範囲に及ぶ。プロバイオティクス組成物が小児（すなわち、１６歳未満のヒト）に投与される場合、プロバイオティクスは、好ましくは約１０６〜約１０８の範囲に及ぶ。実施例では、本発明のプロバイオティクス組成物が最も長く持続する条件を判定するための種々の試験について説明する。実施例１０に示す通り、また予測通り、保存条件はプロバイオティクス組成物の持続時間において有意差を生じる（気温２５℃／相対湿度６０％、気温３０℃／相対湿度６５％、および気温４０℃／相対湿度７５％におけるプロバイオティクス組成物の安定性を参照（表１６〜１８、表２０〜２２、および表２４〜２６））。さらに、保存包装中に乾燥剤を含めることによっても、特定の保存条件下で差異を生じる場合があるが、必ずしもそうでない場合もある（表１２、１３、１６〜１８を参照）。本発明とともに使用することができる乾燥剤の例には、シリカゲル（二酸化ケイ素）、指示シリカゲル（塩化コバルトで洗浄したシリカゲル）、モンモリロナイト粘土、酸化カルシウム、硫酸カルシウム、活性アルミナビーズ、およびモレキュラーシーブ（例えば、粘土、多孔質ガラス、ミクロ孔炭、または活性炭などのアルミノケイ酸塩物質または合成化合物）が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
本発明のプロバイオティクス組成物は、ヒトまたは動物が摂取した際に生存プロバイオティクス種が消化管に住むようにすることによって消化器系を調節する種々の市販される消耗品の製造において、広範囲にわたる有用性を有する。摂取時にプロバイオティクス種が生存していることが不可欠であるため、本発明のプロバイオティクス組成物中におけるプロバイオティクス種の安定性を増強させることによって、プロバイオティクス組成物は、大腸内における病原性菌種の数を減少させる能力を有するようになる。本発明のプロバイオティクス組成物を摂取することによって減少させることができる病原菌の例には、カンピロバクター・ジェジュニ菌、大腸菌、黄色ブドウ球菌、ビブリオ・コレラ菌、バクテロイデス菌、クロストリジウム菌、クレブシェラ菌、リステリア菌、プロテウス菌、サルモネラ菌、赤痢菌、およびベイヨネラ菌が含まれるが、これらに限定されない。本発明のプロバイオティクス組成物を摂取することによって減少させることができる病原性酵母菌の例には、Ｃ．アルビカンスが含まれるが、これに限定されない。既述の通り、ラクトバチルスおよびビフィドバクテリウムなどの有益なプロバイオティクス種は、潜在的な病原体を制御下に維持して、疾患に関連する機能不全を予防する働きを持つ。
【００７０】
本明細書において以上および以下に言及する特許文献および非特許文献はすべて、全体が参考として援用される。
【００７１】
本発明のプロバイオティクス製剤の利点は、水がなくても消費することができる口当たりのよい製品である点である。さらに、本発明のプロバイオティクス製剤は室温で安定しているため、製品の貯蔵寿命を改善または維持するために特別な条件を必要としない。
【実施例】
【００７２】
以下の実施例は、本発明の組成物の製造法および使用法に関する完全な開示と説明を当業者に提供するために示すものである。これらの実施例は、本発明の非限定例として意図される。
【００７３】
以下の実施例では、特に記載がない限り、当該技術分野の技術範囲内に含まれる、医薬組成物、医薬品化学などの従来の技法を使用する。このような技法については、文献で詳細に説明されている。種々の医薬組成物の調製法については、例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００）、およびＡｎｓｅｌら、ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＤＯＳＡＧＥ  ＦＯＲＭＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，６ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍｅｄｉａ，ＰＡ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９５）に記載されている。
【００７４】
以下の実施例では、数値（例えば、量、温度など）に関して正確を期すように努めているが、記載した試験を実施する際には実験誤差や偏差を考慮しなければならない。別途記載がない限り、部は重量部であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧またはその付近である。すべての成分は、特に記載がない限り、市販のものから得ている。
【００７５】
実施例に記載の安定性試験のそれぞれでは、Ｌ．アシドフィルスのみを用いたＬ．アシドフィルスの安定性試験に一服当たり５錠を試験し、Ｂ．アニマリス亜種ラクティスのみを用いたＢ．アニマリス亜種ラクティスの安定性試験に一服当たり５錠を試験し、組み合わせたアッセイとしてＬ．アシドフィルスとＢ．アニマリス亜種ラクティスを試験する際には一服当たり５錠を試験し、Ｌ．アシドフィルスとＢ．アニマリス亜種ラクティスを、組み合わせた製品から個々に検定した試料の場合は一服当たり６錠を試験した。安定性試験においては、１×１０６未満のアッセイ数の減少を認められるまで、週１回、２週間に１回、または月１回の服用を実施した（本手順における例外は実施例に記載する）。
【００７６】
（実施例１）
Ｌ．アシドフィルス錠剤の製造
２０個のＬ．アシドフィルスプロバイオティクス錠剤を、表１に記載の材料を使用して製造した。
【００７７】
【表１】
2010504981.tif 000003
Ｌ．アシドフィルス錠剤を、３／８インチの標準凹金型を使用した単発式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は、８〜１０ｋｐ（キロポンド＝キログラム／Ｎ＝１ｋｇの塊が地球の重力において及ぼす力）であった。圧縮錠を６０ｃｃの高密度ポリエチレン（「ＨＤＰＥ」）ボトルに入れ、気温２５℃／相対湿度６０％の制御温度下に置いた。製品を、０時間、１ヵ月、２ヵ月、４．５ヵ月、６ヵ月、および８．５ヵ月の間隔で微生物安定性試験に供した。安定性試験の結果は表２に記載する。
【００７８】
【表２】
2010504981.tif 000004
（実施例２）
着色料、香味料、および甘味料を含むＬ．アシドフィルス錠剤の製造
Ｌ．アシドフィルスプロバイオティクス錠剤を、表３に記載の成分を使用して製造した。錠剤化する前に、Ｌ．アシドフィルス原料を試験し、この原料が１．８×１０１１コロニー／グラムの菌数を有することが明らかになった。
【００７９】
【表３】
2010504981.tif 000005
オレンジ風味およびバブルガム風味の錠剤を、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製し、パイナップル風味の錠剤は、単発式打錠機のカプセル型金型を使用して製造した。すべての錠剤の硬度は７〜９ｋｐの範囲内であり、崩壊時間はすべて約２２秒であった。
【００８０】
表３の錠剤を、乾燥剤を使用せずに安定性試験の気温２５℃／相対湿度６０％で保存し、各バッチにつき３錠からなる１組をそれぞれの風味付き剤形の予備試料として別に取っておいた。予備試料は４℃で保存した。表４には、表３の剤形を１１ヵ月間にわたり月１回安定性試験を行った結果が記載されており、表５には、１３ヵ月目に行った予備試料の安定性試験の結果が記載されている。各安定性試験では、一服当たり５錠を選択した。剤形に含まれるＬ．アシドフィルスの安定性は、Ｌ．アシドフィルスのグラム陽性桿菌の生存数を測定することによって判定した。
【００８１】
【表４】
2010504981.tif 000006
【００８２】
【表５】
2010504981.tif 000007
表４に示す通り、各風味付けしたバッチにおけるＬ．アシドフィルスのグラム桿菌の合計数は、１０ヵ月の時点で１×１０６を下回っていたのに対し、４℃で保存した試料は、１３ヵ月の時点で細菌数の減少が見られなかった。
【００８３】
（実施例３）
Ｂ．アニマリス亜種ラクティスＢＢ１２錠剤の製造
Ｂ．アニマリス亜種ラクティスＢＢ１２株（以下「Ｂ．アニマリス亜種ラクティス」と呼ぶ）のプロバイオティクス錠剤３０個からなるバッチを、表６に記載の成分を使用して製造した。
【００８４】
【表６】
2010504981.tif 000008
Ｂ．アニマリス亜種ラクティス錠剤を、７／１６インチの標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は、１０〜１２ｋｐの範囲内であった。圧縮錠を、乾燥剤を使用せずに６０ｃｃのＨＤＰＥボトルに入れ、気温２５℃／相対湿度６０％の制御温度に曝露した。一服当たり５錠を、０時間、１ヵ月、２ヵ月、および３ヵ月の間隔で微生物安定性試験に供した。安定性試験の結果は表７に記載する。
【００８５】
【表７】
2010504981.tif 000009
２ヵ月目の服用の時点で安定性試験の結果は１×１０６を下回っていたが、さらに１ヵ月間試験を継続した。
【００８６】
（実施例４）
着色料、香味料および甘味料を含むＬ．アシドフィルス錠剤の製造
Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスの両方を含むプロバイオティクス錠剤（各風味付けしたバッチにつき２０００錠）を、表８に記載の成分を使用して調製した。
【００８７】
【表８】
2010504981.tif 000010
錠剤を、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は８〜１０ｋｐの範囲内であった。圧縮錠を、乾燥剤を使用せずに１８０ｃｃの各ＨＤＰＥボトルに１００錠ずつ詰め、気温２５℃／相対湿度６０％の制御温度に曝露した。製品を、１２ヵ月間、または１×１０６未満のアッセイ数の減少を認められるまで、月１回の微生物安定性試験に供した。０時間と１ヵ月の時点では、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスの両方について一服当たり６錠の分析を行い、残りの期間では、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスのそれぞれについて一服当たり５錠の試験を行った。安定性試験の結果はそれぞれ表９および表１０に記載する。
【００８８】
【表９】
2010504981.tif 000011
【００８９】
【表１０】
2010504981.tif 000012
表１０に示す通り、オレンジ風味の錠剤およびバブルガム風味の錠剤は、８ヵ月後にグラム陽性桿菌の産生が１．０×１０６／グラムを下回り、パイナップル風味の錠剤は、７ヵ月後にグラム陽性桿菌の産生が１．０×１０６／グラムを下回った。従って、安定性試験は８ヵ月後の時点で中止した。
【００９０】
（実施例５）
乾燥剤不使用の複合材料包装
実施例４の３種類の風味付けしたバッチは、乾燥剤不使用の１００錠（各風味につき３３錠と、無作為に選択した１錠を加えたもの）からなる複合材料包装を１８０ｃｃのＨＤＰＥボトルに入れ、気温２５℃／相対湿度６０％の制御温度下に置き、１２ヵ月間、または１×１０６未満のアッセイ数の減少を認められるまで、錠剤を月１回の微生物安定性試験に供することにより、複合材料包装における安定性試験を行った。１ヵ月の時点では、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスの組み合わせの合計数について一服当たり５錠（各風味から無作為に選択）を分析し、残りの期間では、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスのそれぞれについて一服当たり６錠（各風味から無作為に選択）を分析した（この試験では、組み合わせて服用したプロバイオティクスに典型的な一服当たり６錠と、個別に服用したプロバイオティクスに典型的な一服当たり５錠のパターンが逆転した）。安定性試験の結果は、それぞれ表１１および表１２に記載する。
【００９１】
【表１１】
2010504981.tif 000013
【００９２】
【表１２】
2010504981.tif 000014
６ヵ月後に安定性試験の結果は１×１０６を下回っていたが、さらに１ヵ月の間試験を継続した。
【００９３】
（実施例６）
乾燥剤を使用した複合材料包装
実施例６の３種類の風味付けしたバッチは、乾燥剤を使用した１００錠（各風味につき３３錠と、無作為に選択した１錠を加えたもの）からなる複合材料包装を１８０ｃｃのＨＤＰＥボトルに入れ、気温２５℃／相対湿度６０％の制御温度下に置き、３ヵ月、６ヵ月、９ヵ月、および１２ヵ月の時点、または１×１０６未満のアッセイ数の減少を認められるまで、錠剤を月１回の微生物安定性試験に供することにより、複合材料包装における安定性試験を行った。Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスに関して個別に錠剤の分析を行った。安定性試験の結果は表１３に記載する。
【００９４】
【表１３】
2010504981.tif 000015
６ヵ月後に安定性試験の結果は１×１０６を下回っていたため、試験は６ヵ月の服用後の時点で中止した。
【００９５】
（実施例７）
Ｌ．アシドフィルス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、ラクチトール（プレバイオティクス）、およびブドウ種子抽出物由来のＯＰＣ（抗酸化剤）を含むプロバイオティクス剤形の製造
オレンジ風味の錠剤のバッチは、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１、２つのラクチトールプレバイオティクス（すなわち、７．７％のＣＭ５０、または３９．７％のＦＩＮＬＡＣ（登録商標）ＤＣ（Ｘｙｒｏｆｉｎ  Ｏｙ  Ｃｏｒｐ．、フィンランド  ヘルシンキ）；それに応じてＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１を減量）の内の１つ、およびブドウ種子抽出物由来のＯＰＣを加えて製造した。これらのバッチを使用して、以下のパラメータを試験した：（１）ラクチトールおよびＯＰＣ含有製品の官能特性、（２）プロバイオティクスの安定性に対するプレバイオティクスラクチトールの効果、および（３）プロバイオティクスの安定性に対するＯＰＣの効果。各バッチの錠剤の製造において記載した成分を表１４に記載する。各バッチの見出しには、使用したラクチトール甘味料と各バッチ当たりの錠剤数を記載する。
【００９６】
【表１４】
2010504981.tif 000016
表１４の錠剤は、１／２インチの標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は８〜１０ｋｐの範囲内であった。各バッチの圧縮錠１００錠を１８０ｃｃのＨＤＰＥボトルに詰め、アッセイ数の減少を認められるまで、制御温度下にて安定性試験に供した。表１５には、表１４に記載のバッチ１〜４の安定性試験のパラメータを示すほか、各試験ロットにおける、使用した制御温度、試験時期、および乾燥剤使用の有無を記載している。また、すべての試料は、表１５に記載の時間に加えて、０時間にも試験を行った。
【００９７】
【表１５】
2010504981.tif 000017
表１５の試験ロットの安定性試験の結果は、表１６に記載する。
【００９８】
【表１６−１】
2010504981.tif 000018
【００９９】
【表１６−２】
2010504981.tif 000019
６週間の時点では、バッチ３の試験ロット６（７．７％ラクチトール、ＯＰＣ無、乾燥剤無）の安定性測定値が１×１０７を上回っており、このことから、７．７％のラクチトール（すなわち、ＣＭ５０）を使用し、乾燥剤を使用しない場合は、同等の剤形を３９．７％のラクチトール（すなわち、ＦＩＮＬＡＣ（登録商標））を使用して調製し、および／または乾燥剤を使用して保存した場合に比べて、剤形のプロバイオティクスの安定性に対し良い効果があることが示唆される。６週間の時点では、バッチ３の試験ロット５と、バッチ４の試験ロット５および６のいずれの結果も、１×１０６を下回っていた。
【０１００】
【表１７−１】
2010504981.tif 000020
【０１０１】
【表１７−２】
2010504981.tif 000021
５ヵ月後の全試験ロットの結果は１×１０６を下回っていた。バッチ１の試験ロット３（乾燥剤有）および試験ロット４（乾燥剤無）の安定性試験は、６ヵ月の服用後の時点で中止し、残りの試験ロットの安定性試験は、５ヵ月の服用後の時点で中止した。
【０１０２】
表１７の結果は、バッチ１の試験ロット４（７．７％ラクチトール、ＯＰＣ有、乾燥剤無）が残りの試験期間の間にプロバイオティクスの安定性をわずかに増加させたことを示している。
【０１０３】
【表１８】
2010504981.tif 000022
表１８の結果は、３ヵ月まで全試験ロットを比較的一貫して試験し、バッチ１の試験ロット１および２（７．７％ラクチトール、ＯＰＣ有、乾燥剤有および無）が最高の計測値であったことを示している。６ヵ月の時点では、バッチ１の試験ロット１（７．７％ラクチトール、ＯＰＣ有、乾燥剤有）が、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスの両方の生菌コロニー数において最高を記録した。しかし、９ヵ月の時点では、バッチ１の試験ロット１でコロニーの生存が見られなかったのに対し、バッチ３および４の両方の試験ロット３（ＯＰＣ無、乾燥剤有）では、１０ヵ月の時点においても両細菌種の生菌コロニーが見られた。９ヵ月および１０ヵ月の時点では、バッチ３の試験ロット３（７．７％のラクチトール、ＯＰＣ無、乾燥剤有）の方が、バッチ４の試験ロット３（３９．７％のラクチトール、ＯＰＣ無、乾燥剤有）よりも有意に高い生菌数を示した。
【０１０４】
（実施例８）
Ｌ．アシドフィルス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、ビタミンＡのパルミチン酸塩、およびカプセル化した酸化亜鉛を含むプロバイオティクス剤形の製造
Ｌ．アシドフィルス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、ビタミンＡ、および酸化亜鉛を含有する、マンゴー風味の組み合わせたプロバイオティクス剤形５００錠からなるバッチを、表１９に記載の成分を使用して調製した。
【０１０５】
【表１９】
2010504981.tif 000023
錠剤は、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は８〜１２ｋｐの範囲内であった。マンゴー風味の錠剤を、乾燥剤を使用して保存し、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスのそれぞれについて、気温４０℃／相対湿度７５％（表２０）、気温３５℃／相対湿度６５％（表２１）、および気温２５℃／相対湿度６０％（表２２）の３種類の保存条件の下、種々の時点で安定性試験に供した。
【０１０６】
【表２０】
2010504981.tif 000024
【０１０７】
【表２１】
2010504981.tif 000025
【０１０８】
【表２２】
2010504981.tif 000026
表２１および表２２から、気温３０℃／相対湿度６５％および気温２５℃／相対湿度６０％で試験を行った試料は、３ヵ月の時点できわめて高い安定性の計測値が見られ、気温２５℃／相対湿度６０％で試験を行った試料は、６ヵ月の時点で高い安定性の計測値が見られたことを示すことから、ビタミンＡと酸化亜鉛を使用した場合は、３〜６ヵ月の期間に前記条件下においてプロバイオティクス剤形の安定性に対し良い効果が見られる場合があることが示唆される。比較してみると、表２１および表２２の試料の３ヵ月時点における計測値は、表１７および表１８の試料の３ヵ月時点における計測値よりも有意に高い。
【０１０９】
（実施例９）
Ｌ．アシドフィルス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、およびマツ樹皮原料由来のＯＰＣを含むプロバイオティクス剤形の製造
Ｌ．アシドフィルス、Ｂ．アニマリス亜種ラクティス、およびマツ樹皮原料由来のＯＰＣを含有する、オレンジ風味の組み合わせたプロバイオティクス剤形６００錠を、表２３に記載の成分を使用して調製した。
【０１１０】
【表２３】
2010504981.tif 000027
錠剤は、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は８〜１２ｋｐの範囲内であった。調製した錠剤を、乾燥剤を使用して保存し、表２４、２５および２６に記載の通り、Ｌ．アシドフィルスおよびＢ．アニマリス亜種ラクティスについて安定性試験に供した。
【０１１１】
【表２４】
2010504981.tif 000028
【０１１２】
【表２５】
2010504981.tif 000029
【０１１３】
【表２６】
2010504981.tif 000030
表２５は、気温３０℃／相対湿度６５％にて６ヵ月の時点で両細菌種の生菌コロニーの割合が高いことを示しており、表２６は、気温２５℃／相対湿度６０％にて９ヵ月の時点で両細菌種の生菌コロニーの割合がきわめて高いことを示すことから、おそらくマツ樹皮由来のＯＰＣは、所定の条件下でプロバイオティクスの安定性を増強することが示唆される。比較してみると、表２５および表２６の試料（マツ樹皮由来のＯＰＣ、ＦＩＮＬＡＣ（登録商標）ラクチトール、乾燥剤有）の３ヵ月時点における計測値は、表１７および表１８のバッチ２の試験ロット２の試料（ブドウ種子由来のＯＰＣ、ＦＩＮＬＡＣ（登録商標）ラクチトール、乾燥剤有）の３ヵ月時点における計測値よりも有意に高い。
【０１１４】
（実施例１０）
マンニトールおよび／またはソルビトールを併せたＬ．アシドフィルスの安定性評価
プロバイオティクス錠剤２００錠からなる２つのバッチを、Ｌ．アシドフィルスとマンニトール（バッチＡ）、およびＬ．アシドフィルスとソルビトール（バッチＢ）を使用して調製した。表２７には、錠剤の調製に使用した成分を記載する。
【０１１５】
【表２７】
2010504981.tif 000031
錠剤は、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。表２７に示す通り、錠剤の硬度は、マンニトールおよびソルビトールの特性により大きく変動した。表２８には、気温４０℃／相対湿度７５％にて乾燥剤を使用せずに３つの時点で行ったＬ．アシドフィルスの安定性検査の結果を示す。
【０１１６】
【表２８】
2010504981.tif 000032
表２８の結果は、錠剤中のプロバイオティクス培養物が気温４０℃／相対湿度７５％の保存条件下で生存しなかったことを示しており、このことから、マンニトールおよびソルビトールを単独で使用しても、気温４０℃／相対湿度７５％におけるＬ．アシドフィルスの安定性に対し効力を有さないことを示唆している。
【０１１７】
バッチＡおよびＢの試験の対照として、担体であるＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１（バッチＣ；ＳＰＩ  Ｐｏｌｙｏｌｓ、米国デラウェア州ニューキャッスル）およびＳＴＡＲＣＨ  １５００（登録商標）（バッチＤ；Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｉｎｃ．、米国ペンシルバニア州ウェストポイント）を使用したプロバイオティクス製剤を調製した。対照製剤の成分は表２９に記載する。
【０１１８】
【表２９】
2010504981.tif 000033
錠剤は、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は各製剤の特性によって変動した。対照のバッチは、気温４０℃／相対湿度７５％にて乾燥剤を使用せずに２週間保存し、表３０に示す２つの時点にＬ．アシドフィルスの安定性試験を行った。
【０１１９】
【表３０】
2010504981.tif 000034
表３０の結果は、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）を単独で使用した場合に、気温２５℃／相対湿度６０％にて０時間〜２週間の間に見られるプロバイオティクス剤形の安定性の増加は限られたものであることを示している。
【０１２０】
（実施例１１）
プロバイオティクスの安定性に対するＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）、ラクチトール、およびＯＰＣの相乗作用の試験
ラクチトールおよびＯＰＣが、表２９および表３０のＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）の担体と相乗効果を示し、従ってＬ．アシドフィルスプロバイオティクスの安定性を増強するかどうかを判定するため、４つの錠剤バッチを調製し、気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下で試験を行った。また、以下の比較製剤も製造した：（１）ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１（表３１および表３２では「ＰＨＲＭＢＲＳＴ」と略記する）およびステアリン酸マグネシウム含有ラクチトール（バッチＥ）、（２）ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１およびステアリン酸カルシウム含有ラクチトール（バッチＦ）、（３）ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１およびラクチトール含有マツ樹皮ＯＰＣ（バッチＧ）、ならびに（４）ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）Ｃ１およびラクチトール非含有マツ樹皮ＯＰＣ（バッチＨ）。すべての比較製剤は、表３１に記載の製剤に従って加速安定性試験に使用した。
【０１２１】
【表３１】
2010504981.tif 000035
錠剤は、１／２インチの円形標準凹金型を使用した回転式打錠機で直接圧縮することによって調製した。錠剤の硬度は各製剤の特性によって変動した。すべての試料は、乾燥剤を使用せずに気温４０℃／相対湿度７５％にて１ヵ月間保存し、表３２に記載した時点にＬ．アシドフィルスの安定性試験を行った。
【０１２２】
【表３２】
2010504981.tif 000036
（実施例１２）
気温４０℃／相対湿度７５％におけるＬ．アシドフィルスの安定性に対するラクチトールおよびＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）の効果
ラクチトールとＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）の間で相乗効果が生じ、Ｌ．アシドフィルスの安定性を増加させるかどうかを試験するため、表３３に示す通りに、さらに３種類の錠剤バッチ（バッチＩ、ＪおよびＫ）を配合した。気温４０℃／相対湿度７５％ＲＨにおける３種類のバッチ錠剤の安定性の結果は、表３４に記載する。
【０１２３】
【表３３】
2010504981.tif 000037
【０１２４】
【表３４】
2010504981.tif 000038
表３４の結果は、ラクチトールを単独で使用しても、気温４０℃／相対湿度７５％にて２週間にＬ．アシドフィルスの生菌コロニーが見られなかったのに対して、ＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）を単独で使用した場合と、ラクチトールだけでなく、比較的少ない重量パーセントであってもＰＨＡＲＭＡＢＵＲＳＴ（登録商標）を含めて使用した場合とでは、気温４０℃／相対湿度７５％という厳しい保存条件下にて２週間の時点で生菌コロニーが見られたことを示している。
【図１】
2010504981.tif 000039
【国際調査報告】
2010504981.tif 000040
2010504981.tif 000041
2010504981.tif 000042