(57)【要約】  本発明は、５−ヒドロキシトリプトファンとセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合するセロトニン再取り込み阻害薬との組み合わせを含む併用療法および医薬組成物に関する。本発明はさらに、（ｉ）約１ｍｇ〜約７５ｍｇの範囲の５−ヒドロキシトリプトファン；および（ｉｉ）セロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合するセロトニン再取り込み阻害薬を含む医薬組成物も提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）約１ｍｇ〜約７５ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファン；および（ｉｉ）２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記組成物が１ｍｇ〜５０ｍｇの２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が３ｍｇ〜５０ｍｇの５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が１０ｍｇ〜５０ｍｇの５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記末梢性脱炭酸阻害剤がカルビドパである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が約１００ｍｇ〜約１５０ｍｇの範囲の量のカルビドパを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が錠剤またはカプセル剤である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
（ｉ）５−ヒドロキシトリプトファン；および（ｉｉ）２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む、医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が約１ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が（ｉ）約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇの量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（ｉｉ）約１ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が（ｉ）約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇの量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（ｉｉ）約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が（ｉ）約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇの量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび（ｉｉ）約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファンを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１６】
末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
前記末梢性脱炭酸阻害剤がカルビドパである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が約１００ｍｇ〜約１５０ｍｇの範囲の量のカルビドパを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が錠剤またはカプセル剤である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が単位投与形態である、請求項１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５−ヒドロキシトリプトファンとセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合するセロトニン再取り込み阻害薬との組み合わせを含む、有効性が改善された併用療法および医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願を通じて様々な刊行物が参照される。本発明の属する技術分野をより詳細に説明するため、そうした刊行物の開示内容全体を参照によって本出願に援用する。
【０００３】
５−ヒドロキシトリプトファン（５−ＨＴＰ）はセロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン；５−ＨＴ）の直接の前駆体である。５−ＨＴＰはインビボで脱炭酸されて５−ＨＴとなる。脳内の５−ＨＴレベルは中枢神経系（ＣＮＳ）における５−ＨＴＰレベルに左右される。５−ＨＴＰが血液脳関門を通過するのに輸送分子は必要ない。５−ＨＴＰは脳内のセロトニンの産生を増加させることが臨床的に明らかにされており、したがって、軽度または中等度の鬱病患者の処置として５−ＨＴＰの投与が提案されてきた（総説として、非特許文献１および非特許文献２を参照されたい）。
【０００４】
セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＲＩ）は効果的であるうえ、忍容性が高く、従来の三環系抗鬱薬に比べて安全性プロファイルに優れているため、情動障害、特に鬱病の処置において第一選択治療薬になっている。
【０００５】
しかしながら、患者に効果があっても、ある程度の有害な副作用を伴わない医薬品治療はほとんど知られていない。ヒト患者のオープン試験において５−ＨＴＰの単独療法には消化管の副作用（悪心、嘔吐、下痢）および精神病理学的副作用（急性不安状態、軽躁）が伴ってきた（非特許文献３；非特許文献４）。５−ＨＴＰの投与は好酸球増多筋痛症候群の原因である可能性があると考えられている（総説として、非特許文献５を参照されたい）。こうした副作用のリスクを管理する１つのアプローチとしては５−ＨＴＰの用量を減量し得る。
【０００６】
ＳＲＩでは、ＳＲＩの周知の効果と比較検討して管理すべき、予想される副作用として性機能障害および睡眠障害が挙げられる。ＳＲＩの単独療法では多くの患者で治療効果の発現が遅延した。さらに、鬱病および不安障害の臨床試験からは、１つのクラスとしてＳＲＩの単独療法で処置された患者の３０％超が非応答であることが示されている。
【０００７】
様々な動物モデルでは、種々のＳＲＩを５−ＨＴＰと一緒に投与した際のＳＲＩの様々な増強作用に関する知見が認められている。たとえば、非特許文献６では、隔離飼育による攻撃性マウスモデルを用いて有効量以下の用量のＬ，５−ＨＴＰにより、シタロプラムおよびパロキセチンの抗攻撃性作用が大きく増強されることが認められた。
【０００８】
また、非特許文献７でも、不安誘発超音波発声ラットモデルを用いてＬ，５−ＨＴＰとシタロプラムまたはエスシタロプラムとの併用投与が試験された。このモデルの場合、超音波発声がラットのパニック不安を模倣すると理論立てられており、Ｌ，５−ＨＴＰとシタロプラムとを併用処置すると抗不安反応がやや減弱し、Ｌ，５−ＨＴＰとエスシタロプラムとの併用処置では顕著に増強されることが確認された。Ｒ−シタロプラムとの併用の処置では対照と比較して超音波発声が顕著に増加した。
【０００９】
したがって、患者はより低用量の５−ＨＴＰの投与で効果が得られる可能性がある。患者はまた、より低用量のＳＲＩの投与で効果が得られる可能性もある。さらに、ＳＲＩに反応しない患者もＳＲＩと５−ＨＴＰとの併用療法で効果が得られるかもしれない。こうした併用療法はＳＲＩまたは５−ＨＴＰのどちらかをより低用量で含むものであるが、ＳＲＩまたは５−ＨＴＰの単独療法よりも有効性を高めるか、あるいは治療効果の発現を早める可能性がある。こうした併用療法は、ＳＲＩがセロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）のアロステリック部位に結合するときに特に有益である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第０５／０６１４５５Ａ１号パンフレット
【特許文献２】米国特許第４，９４３，５９０号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｍｅｙｅｒｓ，Ｓ．、Ａｌｔｅｒｍ  Ｍｅｄ  Ｒｅｖ．２０００  Ｆｅｂ、５（１）：６４−７１
【非特許文献２】Ｂｉｒｄｓａｌｌ，Ｔ．Ｃ．、Ａｌｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  Ｒｅｖ．１９９８  Ａｕｇ；３（４）：２７１−８０
【非特許文献３】Ｚｍｉｌａｃｈｅｒ，Ｋ．、Ｂａｔｔｅｇａｙ，Ｒ．およびＧａｓｔｐａｒ，Ｍ．、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ．１９８８、２０（１）：２８−３５
【非特許文献４】Ｇｉｊｓｍａｎ，Ｈ．Ｊ．ら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００２  Ａｐｒ、２２（２）：１８３−９
【非特許文献５】Ｄａｓ，Ｙ．Ｔ．ら、Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｌｅｔｔ．２００４  Ａｐｒ  １５；１５０（１）：１１１−２２
【非特許文献６】Ｓａｎｃｈｅｚ，Ｃ．およびＨｙｔｔｅｌ，Ｊ．、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９４）２６４：２４１−２４７
【非特許文献７】Ｃ．Ｓａｎｃｈｅｚ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００３）４６４：１５５−１５８
【非特許文献８】Ｒｉｇｄｏｎ，ＧＣおよびＷａｎｇ，ＣＭ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９１、２２：１３５−１４０
【非特許文献９】ＳａｎｃｈｅｚおよびＭｅｉｅｒ、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１２９：１９７−２０５；１９９７
【非特許文献１０】Ｍｏｒｋ，Ａ．、Ｋｒｅｉｌｇａａｒｄ，Ｍ．およびＳａｎｃｈｅｚ，Ｃ．、Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２００３  Ａｕｇ、４５（２）：１６７−７３
【非特許文献１１】Ａｇｈａｊａｎｉａｎ，Ｇ．Ｋ．、Ｅｓｓａｙｓ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２０００、３：１−３２
【非特許文献１２】Ｈｙｔｔｅｌ，Ｊ．、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９７８、６０：１３−１８
【非特許文献１３】Ｈｙｔｔｅｌ，Ｊ．、Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．＆  Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈａｉｔ．１９８２、６：２７７−２９５
【非特許文献１４】Ｈｙｔｔｅｌ，Ｊ．およびＬａｒｓｅｎ、Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘ．１９８５、５６（ｓｕｐｐｌ．１）：１４６−１５３
【非特許文献１５】Ｓａｎｃｈｅｚ，Ｃ．および  Ｈｙｔｔｅｌ，Ｊ．、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１９９４、２６４：２４１−２４７
【非特許文献１６】Ｐｌｅｎｇｅ，Ｐ．およびＭｅｌｌｅｒｕｐ，Ｅ．Ｔ．、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８５  Ｄｅｃ  １０；１１９（１−２）：１−８
【非特許文献１７】Ｗｅｎｎｏｇｌｅ，Ｌ．Ｐ．およびＭｅｙｅｒｓｏｎ，Ｌ．Ｒ．、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１９８５  Ａｐｒ  ２２；３６（１６）：１５４１−５０
【非特許文献１８】Ｃｈｅｎ，Ｆ．ら、Ｅｕｒ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５  Ｍａｒ；１５（２）：１９３−８
【非特許文献１９】Ｃｈｅｎ，Ｆ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００５、９２：２１−２８
【非特許文献２０】Ｃｈｅｎ，ＦＣ．、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、２００５、９２、２１−２８
【非特許文献２１】Ｓａｎｃｈｅｚ，Ｃ．ら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２００３；１６７：３５３−３６２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、（ｉ）５−ヒドロキシトリトファンおよび（ｉｉ）２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む医薬組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明のもう１つの目的は、（ｉ）約１ｍｇ〜約７５ｍｇの範囲の量の５−ヒドロキシトリプトファン；および（ｉｉ）セロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合するセロトニン再取り込み阻害薬２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む医薬組成物を提供することにある。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】麻酔ラットの背側縫線におけるセロトニン含有ニューロンの自発発火を示す発火率のヒストグラムである。低閾値下用量（ｌｏｗ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｄｏｓｅ）の５−ＨＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ）（左矢印）を注射すると、細胞発火率が低下する。続けて２５μｇ／ｋｇの化合物ＩＩ、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン（右矢印）の第２の注射により、さらに低下することが観察される。
【図２】麻酔ラットの背側縫線におけるセロトニン含有ニューロンの自発発火を示す発火率のヒストグラムである。図１に示したのと同様の実験において化合物ＩＩ、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン（左矢印）の後に２５ｍｇ／ｋｇの５−ＨＴＰ（中央の矢印）を投与する。２回目の注射（５−ＨＴＰ）により細胞の発火が著しく低下する。ニューロンはその後に投与するＷＡＹ−１００６３５（選択的５−ＨＴ１Ａアンタゴニスト）（右矢印）に反応し、ニューロンの自発発火率が上昇する。
【図３】背側縫線細胞の発火に関して化合物ＩＩと５−ＨＴＰとの組み合わせ投与の概要をグラフ化したものである。処置の順序に関係なく、このＳＲＩとこの５−ＨＴ前駆体とを組み合わせると、ニューロン活動に対する作用は個々の投与作用を単純に足して得られるものよりも大きくなる。化合物ＩＩの後に５−ＨＴＰを注射した組み合わせでは細胞発火率に対する作用が５−ＨＴＰ単独の場合より有意に増大する（＊＊ｐ＜０．０１）。同様に、５−ＨＴＰの後に化合物ＩＩを注射した場合の細胞発火率に対する作用も化合物ＩＩ単独の作用より有意に増大する（＊＊ｐ＜０．０１）。統計解析は６匹の異なるラットから収集したデータについて行った。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、５−ヒドロキシトリプトファンとセロトニントランスポーターのアロステリック部位に結合するセロトニン再取り込み阻害薬、たとえば、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンとを含む医薬組成物に関する。
【００１６】
本明細書で使用する場合、「セロトニン再取り込み阻害薬」または「ＳＲＩ」とは、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるセロトニントランスポーターの主要なリガンド結合部位に結合してセロトニンの再取り込みを阻害することで治療効果を十分にまたはある程度発揮する化合物を意味する。
【００１７】
本明細書で使用する場合、「アロステリックモジュレーター」とは、セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）のアロステリック部位に結合するＳＲＩを意味する。こうした化合物はアロステリックセロトニン再取り込み阻害薬（ＡＳＲＩ）とも呼ばれる。
【００１８】
本発明の一実施形態では、アロステリックモジュレーターはＳＥＲＴの１つまたは２つ以上のアロステリック部位に結合する。別の実施形態では、アロステリックモジュレーターは、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンに結合できるＳＥＲＴのアロステリック部位に結合する。
【００１９】
５−ヒドロキシトリプトファン（５−ＨＴＰ）は、アミノ酸Ｌ−トリプトファンから体内で自然に生成される芳香族アミノ酸である。５−ＨＴＰは５−ＨＴの直接の前駆体である。以下に５−ＨＴＰの式を式Ｉとして示す。
【化１】
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【００２０】
５−ＨＴＰは、２−アミノ−３−（５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）−プロパン酸（Ｃ１１Ｈ１２Ｎ２Ｏ３）としても知られている。本明細書および特許請求の範囲を通じて「５−ＨＴＰ」および「５−ヒドロキシトリトファン」は、塩基（両性イオン）、薬学的に許容可能な塩、塩基もしくは塩の水和物または溶媒和物、ならびに無水物、および非晶質または結晶質形態を含むアミノ酸５−ヒドロキシトリプトファンの任意の形態を含むことを意図している。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能な酸または塩基との塩を含む。５−ＨＴＰに関しては、こうした塩を薬学的に許容可能な塩基、特に水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化アンモニウムなどの強塩基と形成してもよい。また、こうした５−ＨＴＰの塩を塩酸、臭化水素酸、リン酸、マレイン酸、シュウ酸、酒石酸および同種のものなど薬学的に許容可能な酸と形成してもよい。したがって、５−ＨＴＰは酸付加塩の形態、または両性イオン水和物、両性イオン一水和物もしくは両性イオン無水物の形態で用いてもよい。
【００２１】
本発明の目的においては、５−ＨＴＰはラセミ混合物中に存在してもよいし、実質的に純粋なＤ−エナンチオマー、Ｄ−５−ヒドロキシトリプトファン、または実質的に純粋なＬ−エナンチオマー、Ｌ−５−ヒドロキシトリプトファンとして存在してもよい。
【００２２】
本発明の一態様は、ＳＲＩとの併用療法に使用するための５−ＨＴＰを含む医薬組成物に関する。
【００２３】
本発明の別の態様は、（ｉ）約１ｍｇ〜約７５ｍｇの範囲の５−ヒドロキシトリプトファン；および（ｉｉ）２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む医薬組成物を提供する。
【００２４】
本明細書に記載の本発明によれば、５−ＨＴＰはアロステリックモジュレーターなどのセロトニン再取り込み阻害薬の治療効果を増強し、および／またはその発現を早めるために使用することができる。さらに、本発明の一部として、併用療法で使用する際により低い用量の５−ＨＴＰがアロステリックモジュレーターの治療効果を増強し、および／またはその治療効果のより速い発現を提供し得る。本発明の一実施形態では、５−ＨＴＰを約１ｍｇ〜約７５ｍｇの範囲の量で２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンと併用投与する。本発明の別の実施形態では、５−ＨＴＰを約３ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の量で２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンと併用投与する。本発明のなお別の実施形態では、５−ＨＴＰを約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の量で２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンと併用投与する。
【００２５】
本明細書で使用する場合、「増強する」とは、ＳＲＩの治療効果を改善し、および／または作用を強化することを意味するものとする。
【００２６】
本明細書に記載するように、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは本発明の実施形態を形成するＳＲＩ、またはそうした化合物のいずれかの薬学的に許容可能な塩である。２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの式は式ＩＩとして示される。
【化２】
2010540461.tif 000004
【００２７】
式ＩＩの化合物（以下、化合物ＩＩという）は、インビトロでの再取り込み阻害効力により測定するとセロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）とノルエピネフリントランスポーター（ＮＥＴ）との両方で阻害作用を発揮するため、セロトニン−ノルエピネフリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）と見なされる。本明細書で使用する場合、ノルエピネフリンはノルアドレナリンも意味する。
【００２８】
このため、特定の理論に拘泥するわけではないが、本出願人らは化合物ＩＩがＳＲＩ、ＳＮＲＩおよびＡＳＲＩの定義を満たすものと認めている。
【００２９】
上述の化合物ＩＩは遊離塩基の形態で用いても、酸付加塩などの薬学的に許容可能な塩の形態で用いてもよく、後者は塩基形態と適当な酸との反応により得ることができる。
【００３０】
換言すれば、本発明の一実施形態では、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは薬学的に許容可能な塩の形態にある。
【００３１】
たとえば、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンはＬ−（＋）−酒石酸水素塩の形態で使用してもよい。
【００３２】
別の実施形態では、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンは非晶質形態の遊離塩基ではない。
【００３３】
他の実施形態では、こうした塩は、薬学的に許容可能な酸付加塩、薬学的に許容可能な金属塩、アンモニウム塩およびアルキル化アンモニウム塩を含むことができる。酸付加塩は、無機酸の塩および有機酸の塩を含む。さらに、薬学的に許容可能な酸付加塩としては本化合物が形成できる水和物も意図している。好適な無機酸および有機酸の例は、参照によってその全体を本明細書に援用する特許文献１に記載されている。
【００３４】
セロトニン再取り込みの強力な阻害作用が明らかになっている抗鬱薬化合物（たとえば、ＳＲＩ）は、背側縫線ニューロンの発火率を抑制する（非特許文献８）。このため、本明細書では５−ＨＴＰとＳＲＩ、すなわち化合物ＩＩまたはその薬学的に許容可能な塩とを併用投与が、どちらかの化合物の単独投与よりも背側縫線ニューロンの発火に対して、より大きな作用を有することが示される。５−ＨＴＰとこのＳＲＩを組み合わせた投与の驚くべき作用は相加的ではなく相乗的であることが確認されており、したがって、治療可能性が改善される。
【００３５】
上記のように、本発明の一実施形態では、単独療法で通常使用されるよりも低用量の５−ＨＴＰを単独療法で通常使用される用量の化合物ＩＩと組み合わせて用いて５−ＨＴ放出量（ｏｕｔｐｕｔ）を増強し、それにより治療効果のより速い発現を提供することができる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、併用療法に使用すべき５−ＨＴＰの量は１日約３〜約５０ｍｇまたは１日約１０〜約５０ｍｇなど１日約１〜約７５ｍｇの範囲としてもよい。したがって、本発明の医薬組成物は、約３〜約５０ｍｇまたは約１０〜約５０ｍｇなど約１〜約７５ｍｇの５−ＨＴＰを含んでもよい。
【００３７】
本明細書で使用する場合、化合物の「治療有効量」とは、ある疾患ならびにその徴候および／または合併症の臨床症状を治癒、軽減または部分的に阻止するのに十分な化合物の量を意味する。これを達成するのに十分な量を「治療有効量」と定義する。それぞれの目的に対する有効量は疾患または傷害の重症度のほか、対象の体重および全身状態に依存する。適切な投薬量については、数値マトリックスを作成してマトリックスの様々なポイントを試験することで通常の実験により判定できることが理解されよう。こうしたことはどれも訓練を受けた医師の通常の技術の範囲内である。
【００３８】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む。さらなる実施形態では、医薬組成物は、０．１ｍｇ〜５０ｍｇの２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む。さらに、本発明では、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの１日の用量範囲が１日あたり０．１ｍｇ〜５０ｍｇになるように、こうした医薬組成物をそれを必要している患者に投与することも含む。
【００３９】
本明細書で使用する場合、「有効量以下の用量（ｓｕｂｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」とは、単独療法としての臨床成績を達成するために投与される最低用量を下回る量の用量を意味するものとする。
【００４０】
本発明のなお別の態様では、医薬組成物は、５０ｍｇ未満の量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび約１ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含む。本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、５０ｍｇ未満の量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含む。
【００４１】
本発明のさらに別の実施形態では、医薬組成物は、５０ｍｇ未満の量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含む。本発明のさらなる実施形態では、医薬組成物は、約０．１ｍｇ〜約４９．９ｍｇの量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む。
【００４２】
本発明のさらなる実施形態では、併用療法に使用すべき５−ＨＴＰの量は１日約２５ｍｇ〜約３００ｍｇまたは１日約５０ｍｇ〜約２００ｍｇなど１日約１ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲としてもよい。したがって、本発明の医薬組成物は、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇなど約１ｍｇ〜約６００ｍｇの５−ＨＴＰを含んでもよい。
【００４３】
このため、本発明の一実施形態は有効量以下の用量の化合物ＩＩおよび５−ＨＴＰを含有する医薬組成物を含み、この組成物は約１ｍｇ〜約６００ｍｇ、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含む。さらに、本発明では、５−ＨＴＰの１日の用量範囲が１日約１ｍｇ〜約６００ｍｇまたは１日約２５ｍｇ〜約３００ｍｇまたは１日約５０ｍｇ〜２００ｍｇになるように、こうした医薬組成物をそれを必要している患者に投与することも含む。
【００４４】
５−ＨＴＰをセロトニンに分解する芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼは広く全身に分布する。５−ＨＴＰのセロトニンへの分解を抑えるため、５−ＨＴＰと併用して末梢性脱炭酸阻害剤を投与してもよい。
【００４５】
このため、本医薬組成物は末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含んでもよい。末梢性脱炭酸阻害剤には、カルビドパ、Ｌ−α−メチルドパ、モノフルオロメチルドパ、ジフルオロメチルドパおよびベンセラジドが含まれるが、これに限定されるものではない。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、約１００ｍｇ〜約１５０ｍｇの範囲の量のカルビドパを含んでもよい。
【００４７】
本発明によれば、本明細書に記載の医薬組成物は、たとえば、経口または非経口など任意の好適な方式で投与することができ、たとえば、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤または注射用溶液剤もしくは分散剤など、そうした投与に好適な任意の形態としてもよい。本発明の一実施形態では、この組成物を錠剤またはカプセル剤として好適な医薬品固形製剤（ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｙ）の形態で投与しても、注射用の懸濁剤、溶液剤または分散剤の形態で投与してもよい。
【００４８】
固形医薬組成物の調製方法は当該技術分野において周知である。したがって、たとえば、錠剤の場合、活性成分を通常の佐剤および／または希釈液と混合し、その後都合のよい打錠機でその混合物を圧縮して調製してもよい。佐剤または希釈液の例として、コーンスターチ、ラクトース、滑石、ステアリン酸マグネシウム、ゼラチン、ゴムおよび同種のものが挙げられる。活性成分と適合性があることを条件として、着色料、香料、防腐剤など他の佐剤または添加剤を用いてもよい。
【００４９】
本医薬組成物は、特許請求の範囲に記載されている発明の一部として固形投与形態、典型的には錠剤またはカプセル剤などの経口投与形態で投与しても、あるいは液体経口投与形態で投与してもよい。本明細書に記載の医薬組成物は錠剤またはカプセル剤などの単位剤形で投与すると最も都合がよい。たとえば、こうした錠剤またはカプセル剤は約１〜約６００ｍｇ、または約２５ｍｇ〜約３００ｍｇ、または約１０〜５０ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含んでもよい。
【００５０】
本発明の医薬組成物を調製する際は、適当な量の塩の形態または塩基形態の５−ＨＴＰおよび／または化合物ＩＩを薬学的に許容可能なキャリアとの密な混合物（ｉｎｔｉｍａｔｅ ａｄｍｉｘｔｕｒｅ）中で組み合わせ、所望の投与形態に応じて様々な形態をとってもよい。こうした医薬組成物は経口投与、直腸内投与、経皮投与または非経口注射による投与に好適な単位投与形態としてもよい。たとえば、経口剤形の組成物を調製する場合、水、グリコール、油、アルコールおよび同種のものなど通常の製剤基材（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｍｅｄｉａ）のいずれかを経口液体製剤の形態に組み込んでもよい。経口液体製剤は懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤および溶液剤であってもよい。経口剤形の組成物を調製するには、デンプン、糖、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩壊剤および同種のものなど通常の製剤基材のいずれかを固体キャリアの形態に組み込んでもよい。経口固体製剤は散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤であってもよい。投与のしやすさから、錠剤およびカプセル剤が最も都合がよい経口剤形であり、この場合、固体医薬キャリアを使用することになるだろう。
【００５１】
投与のしやすさと投薬量の均一性から、前述の医薬組成物を単位投与形態で製剤化すると特に都合がよい。本明細書で使用する場合、単位投与形態とは単位投薬量として好適な物理的に分離したユニットを意味し、各ユニットは、必要とされる医薬キャリアとともに、所望の治療効果を発揮するように予め定められた量の５−ＨＴＰおよび／または化合物ＩＩを含む。単位投与形態の例として、錠剤（割線入りコーティング剤を含む）、カプセル剤、丸剤、分包散剤、オブラート剤（ｗａｆｅｒ）、注射用溶液剤または懸濁剤および同種のものならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００５２】
５−ＨＴＰは化合物ＩＩの投与の前に投与しても、その投与の最中に投与しても、またはその投与の後に投与してもよく、ただし５−ＨＴＰの投与から化合物ＩＩの投与までの時間については、各成分が中枢神経系に対して相乗的に作用できるような時間であることを条件とする。５−ＨＴＰと化合物ＩＩとの同時投与を想定している場合、化合物ＩＩおよび５−ＨＴＰをともに含む単一の組成物であれば特に都合がよい。あるいは、好適な組成物の形態でセロトニン再取り込み阻害薬および５−ＨＴＰを別々に投与してもよい。こうした医薬組成物は末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含んでもよい。この組成物は本明細書に上述したように調製してもよい。よって、こうした組成物は、化合物ＩＩおよびカルビドパなどの末梢性脱炭酸阻害剤を含んでもよい。他の組成物は、５−ＨＴＰおよびカルビドパなどの末梢性脱炭酸阻害剤を含んでもよい。こうした組成物は単一錠剤および同種のものなどとして同時に投与しても、または別個の組成物または錠剤および同種のものなどとして別々に投与してもよい。
【００５３】
本発明はまた、精神医学的薬物療法において同時に、別々にあるいは連続的に使用できる組み合わせ製剤として５−ＨＴＰおよび化合物ＩＩを含む。こうした組成物は、たとえば、５−ＨＴＰを含む分離した単位剤形および化合物ＩＩの分離した単位剤形を含むキットを含むことができ、すべてが同一容器またはブリスターパックなどのパックに入っていてもよい。こうした医薬組成物は、末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含んでもよい。上述の組成物は本明細書に記載の本発明のいずれかの態様に準じて製造する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、本発明は、ある用量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび５−ＨＴＰを含むキットに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、ある用量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび約１ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲の量、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲の量または約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含むキットに関する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、本発明は、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび約１ｍｇ〜約７５ｍｇの範囲の量、約３ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の量または約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含むキットに関する。さらなる実施形態では、このキットは、約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の量の２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む。
【００５６】
他の実施形態では、本発明は、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび５−ＨＴＰを含むキットに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンおよび約１ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲の量、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲の量または約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の量の５−ＨＴＰを含むキットに関する。いくつかの態様では、このキットは末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含む。
【００５７】
他の態様では、本発明は、情動障害の処置のための併用療法に使用される５−ＨＴＰおよび２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む、本明細書に記載するような医薬組成物に関する。本発明の別の態様では、本発明は、鬱病の処置のための併用療法に使用される５−ＨＴＰおよび２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む、本明細書に記載するような医薬組成物に関する。さらに別の態様では、本発明は、不安障害の処置のための併用療法に使用される５−ＨＴＰおよび２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンを含む、本明細書に記載するような医薬組成物に関する。
【００５８】
本明細書に記載の医薬組成物はすべて末梢性脱炭酸阻害剤をさらに含んでもよい。
【００５９】
本発明は、ヒトを含む動物の生体における鬱病ならびに全般性不安障害、社会不安障害、急性ストレス障害、心的外傷後ストレス障害、強迫性障害およびパニック不安を含む不安障害などの情動障害からなる群から選択される疾患または障害の処置方法であって、それを必要とする対象に遊離塩基またはその塩としての治療有効量の化合物ＩＩおよび５−ＨＴＰを投与することを含む、方法に関する。
【００６０】
本発明は、鬱病ならびに全般性不安障害、社会不安障害、急性ストレス障害、心的外傷後ストレス障害、強迫性障害およびパニック不安を含む不安障害などの情動障害を処置するための医薬組成物を調製するための、遊離塩基またはその塩としての化合物ＩＩの使用に関する。
【００６１】
他の態様では、本発明は、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンと組み合わせて使用される医薬組成物を調製するための５−ＨＴＰの使用に関する。さらなる態様では、本発明は、２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの治療効果を増強し、および／またはそのより発現を提供するのに有用な医薬組成物を調製するための５−ＨＴＰの使用に関する。
【００６２】
なおさらなる態様では、本発明は、ＳＲＩに応答する疾患または障害の処置方法であって、５−ＨＴＰおよび２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンをそれを必要としているヒト患者に投与することを含む、方法に関する。
【００６３】
本発明のさらなる態様は、ＳＲＩの治療効果に応答する疾患または障害を処置するための医薬組成物を調製するための５−ＨＴＰおよび２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンの使用に関する。
【００６４】
別の態様では、本発明はＳＲＩにより処置されるべきか、処置を受けている個体を処置する医薬組成物を調製するための５−ＨＴＰの使用に関し、前記個体はＳＲＩの治療効果に応答する疾患または障害に罹患している。いくつかの態様では、本発明は、ＳＲＩにより処置されるべきか、処置を受けている個体を処置するためのキットを作製するための５−ＨＴＰの使用に関し、前記個体はＳＲＩの治療効果に応答する疾患または障害に罹患している。
【００６５】
ＳＲＩによる処置に応答する疾患または障害には、情動障害、摂食障害、恐怖症、気分変調症、月経前症候群、認知障害、衝動調節障害、注意欠陥多動性障害および薬物乱用が含まれるが、これに限定されるものではない。情動障害には、鬱病および不安障害が含まれるが、これに限定されるものではない。摂食障害には、過食症、無食欲症および肥満症が含まれるが、これに限定されるものではない。不安障害には、全般性不安障害、パニック不安、強迫性障害、急性ストレス障害、心的外傷後ストレス障害および社会不安障害が含まれるが、これに限定されるものではない。
【００６６】
他の実施形態では、本発明は、ＳＲＩの治療効果を増強し、および／またはそのより速い発現を提供する方法であって、ＳＲＩにより処置されるべきか、処置を受けているヒト患者に５−ＨＴＰを投与することを含む、方法に関する。
【００６７】
別の実施形態では、本明細書に記載するような医薬組成物を鬱病、不安障害および他の情動障害、過食症、無食欲症および肥満症などの摂食障害、恐怖症、気分変調症、月経前症候群、認知障害、衝動調節障害、注意欠陥多動性障害および薬物乱用の処置、特に鬱病の処置に使用する。
【００６８】
さらなる実施形態では、本明細書に記載するような医薬組成物を全般性不安障害、パニック不安、強迫性障害、急性ストレス障害、心的外傷後ストレス障害または社会不安障害などの不安障害の処置に使用する。
【００６９】
例示ではあるが、以下の実施例の詳細により本発明の理解が深まるであろう。当業者であれば、個々の方法およびそこで論じられる結果が本発明の例証にすぎず、本発明はその後に記載される特許請求の範囲に詳述されることを容易に理解するであろう。
【実施例】
【００７０】
実施例の詳細
マウス強制水泳試験
雄ＮＭＲＩ／ＢＯＭマウス（１８〜２５ｇ；Ｂｏｍｈｏｌｔｇａａｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用することができる。マウスをプラスチックケージ（３５×３０×１２ｃｍ）ごとに１０匹ずつ飼育し、試験前の少なくとも１週間この動物施設に慣れさせる。室温（２１＋／−２℃）、相対湿度（５５＋／−５％）および換気（１６回／時）は自動的に調節する。動物には試験前に市販の食餌ペレットおよび水道水を自由摂取させるものとする。
【００７１】
空間が限られた容器内でマウスに強制的に水泳させると、特徴的な不動状態を呈するようになる。この現象は抗鬱薬による前処置を行うと抑えられる。本試験は（非特許文献９）に詳述されているように行った。簡単に説明すると、６つの水泳ユニット（以前にマウスを入れたことがある新鮮でない水（ｓｏｉｌｅｄ  ｗａｔｅｒ）（２３〜２５℃）１２００ｍｌで満たされた２０００ｍｌのガラス製広口瓶）を備えた完全自動の試験系を用いる。不動に関する評価は画像解析により行う。
【００７２】
マウスを薬剤処置またはビヒクル処置してから３０分後、５−ＨＴＰで処置し、２０分後にガラス製広口瓶に入れ、合計６分間水に入れたままにしておく。最後の３分間に不動状態の累積時間を測定する。
【００７３】
ラットにおけるマイクロダイアリシス
非特許文献１０に詳述されているように自由行動ラットを用いてマイクロダイアリシスを行い、細胞外セロトニンレベルに対するエスシタロプラム単独およびフルオキセチン単独の作用と、５−ＨＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）との組み合わせの作用とを調査することができる。
【００７４】
簡単に説明すると、脳内ガイドカニューレを外科的に埋め込んでマイクロダイアリシスのための雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを作製する。マイクロダイアリシスプローブをガイドカニューレに挿入する。マイクロダイアリシスプローブの挿入の前に、濾過したリンゲル液（１４６ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１．２ｍＭのＣａＣｌ２）でプローブの灌流を行い、実験の間は流速を１μｌ／分で一定にして前頭皮質への灌流を続ける。動物が安定したら、式ＩＩの化合物を注射して試験を開始する。実験中は２０分間隔でサンプリングを行ってもよい。式ＩＩの化合物の注射から６０分後、５−ＨＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）を注射する。サンプルごとに透析液中の５−ＨＴレベルを電気化学検出ＨＰＬＣで測定する。
【００７５】
マウスのガラス玉覆い隠し行動
雄ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ））が到着したら、５匹／ケージで飼育する。到着時のマウスは７〜８週齢であってもよい。動物は、試験前に少なくとも１週間標準的な実験室条件下で飼育施設に馴化させる（午前６時点灯）。
【００７６】
試験室に１時間馴化させたら、動物にビヒクル（食塩水）または式ＩＩの化合物を投与する。３０分後、動物にビヒクルまたは５−ＨＴＰ（２．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を注射する。第２の注射から１５分後、動物をそれぞれ新規なケージに入れる。ケージには床敷としてアスペン／マツ（Ａｓｐｅｎ  Ｐｉｎｅ）が重ねて敷かれ、その上に１０個のガラス玉がそれぞれ２列（すなわち、合計２０個）平行に配されている。３０分経過したら、マウスを試験ケージから取り出し、ホームケージに戻す。十分に目視できるガラス玉の数（床敷で覆われている部分が２／３未満）を数え、２０から差し引いて覆われたガラス玉の数を算出する。
【００７７】
５−ＨＴニューロンの発火活動に対する阻害作用
実験日の体重が２５０〜３００ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｇａｎｎａｔ，ＦＲＡＮＣＥ）を用いて実験を行った。ラットは標準的な実験室条件下（明暗周期は各１２時間、飼料および水は自由摂取）で飼育されていた。この動物を抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔した。追加投与を行い麻酔を一定に維持し、テイルピンチに対する侵害受容反応を抑制した。
【００７８】
充填しやすいように予め繊維ガラスフィラメントが装着された単連（ｓｉｎｇｌｅ−ｂａｒｒｅｌｅｄ）ガラスマイクロピペットで背側縫線５−ＨＴニューロンの単一の（ｕｎｉｔａｒｙ）細胞外記録を行った。その先端を２〜４μｍに折り（ｂｒｏｋｅｎ  ｂａｃｋ）、Ｂｌｕｅ  Ｃｈｉｃａｇｏ色素で飽和した２ＭのＮａＣｌ溶液を充填した。ラット（対照または処置）を定位固定装置に置き、正中のラムダ前方１ｍｍに穿頭孔を開けた。背側縫線５−ＨＴニューロンはシルビウス水道の腹側縁（ｖｅｎｔｒａｌ  ｂｏｒｄｅｒ）の直下１ｍｍの距離に認められた。こうしたニューロンについては、Ａｇｈａｊａｎｉａｎの基準（非特許文献１１）である遅い発火率（０．５〜２．５Ｈｚ）および定常的な発火率、さらに持続時間の長い（０．８〜１．２ｍｓ）正の活動電位により同定した。
【００７９】
背側縫線５−ＨＴニューロンの発火活動に対する５−ＨＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ、静脈内）の阻害作用への化合物ＩＩ（２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミン）の推定される相乗効果を判定するため、阻害の２０〜３０％に相当する用量の化合物ＩＩを５−ＨＴＰの投与の前後に注射した。
【００８０】
統計解析については、Ｗｉｎｄｏｗ対応ＳｉｇｍａＳｔａｔバージョン４．０ソフトウェア（Ｊａｎｄｅｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で行った。平均は平均値±ＳＥＭとした。ｐ＜０．０５の場合に有意と判断した。
【００８１】
６匹のラット群では、背側縫線５−ＨＴニューロンの基準となる平均発火率が１．８２±０．２３Ｈｚであった。２５ｍｇ／ｋｇの５−ＨＴＰを注射すると、発火が１３．４±２．２６％抑制された（図１を参照）。このラットに第２の注射剤として化合物ＩＩ（０．０２５ｍｇ／ｋｇ）を投与したところ、さらに８２．４３±２．７８％の低下が認められた（図１）。別の実験では、化合物ＩＩを５−ＨＴＰより前に注射した。６匹のラットの背側縫線５−ＨＴ細胞の基準となる平均発火率は１．７０±０．０７Ｈｚであり、化合物ＩＩ（０．０２５ｍｇ／ｋｇ）は発火を２４．１±４．９８％阻害し、続いて５−ＨＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ）を注射したところ、発火はさらに７０．５３±２．７６％抑制された（図２）。各化合物から独立に得られる背側縫線細胞発火の阻害作用の程度は、５−ＨＴＰ＝１３．４±２．２６％、化合物ＩＩ＝２４．１０±４．９８％であった。５−ＨＴＰ＋化合物ＩＩの併用効果は単純な相加的相互作用から予想されるものよりも著しく大きかった（相加＝３７．５％；５−ＨＴＰが先の場合＝９５．８３％；化合物ＩＩが先の場合＝９４．６３％；図３）。したがって、５−ＨＴＰの効果は化合物ＩＩの存在下で有意に高まる（ｐ＜０．０１）。同様に、化合物ＩＩの効果も５−ＨＴＰの存在下で有意に高まることが明らかになった（ｐ＜０．０１）。
【００８２】
続けて選択的５−ＨＴ１ＡアンタゴニストであるＷＡＹ−１００６３５を投与するとニューロンの自発発火率が増大することから、５−ＨＴ１Ａ受容体を遮断することで５−ＨＴニューロン発火のフィードバック阻害が解除されることが示唆される。
【００８３】
こうした結果からは、背側縫線核のニューロン発火に対して５−ＨＴＰと化合物ＩＩとの併用により得られる効果が相乗的なものであり、相加的なものでないことが示される。
【００８４】
ラット脳シナプトソームにおける３Ｈ−セロトニン取り込みの阻害
セロトニントランスポーターの主要な高親和性結合部位における化合物を試験するため、すなわち、化合物がセロトニン再取り込み阻害薬であるかどうかを判定するため、セロトニン（５−ＨＴ）取り込みの阻害作用を判定した。
【００８５】
以下の方法により、ラット脳シナプトソームを用いて被検化合物による３Ｈ−セロトニン（３Ｈ−５−ＨＴ）（１０ｎＭ）取り込みの阻害作用をインビトロで判定した。特定のＳＲＩに関するセロトニン取り込みの例示的な方法、さらに結果については、非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５；および１９９０年７月２４日に発行された、Ｂｏｇｅｓｏ，Ｋらの特許文献２に記載されている。
【００８６】
手順：雄ウィスター系（Ｍｏｌ：Ｗｉｓｔ）ラット（１２５〜２５０ｇ）を断頭屠殺し、失血死させた（ｅｘａｎｇｕｉｎａｔｅｄ）。１ｍＭのニアラミドを含む４０容（ｗ／ｖ）の０．３２Ｍ氷冷スクロース中で脳組織（小脳を除く）を軽くホモジナイズした（ガラスＴｅｆｌｏｎホモジナイザー）。Ｐ２画分（シナプトソーム画分）を遠心分離（４℃で６００×ｇ、１０分および２５０００×ｇ、５５分）により得て、８００容の改変クレブス−リンゲルリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）に懸濁した。
【００８７】
４００μｌの氷上シナプトソーム懸濁液（５ｍｇの原組織）に、１００μｌの被検化合物の水溶液を加えた。３７℃で５分間のプレインキュベーション後、１００μｌの３Ｈ−５−ＨＴ（最終濃度１０ｎＭ）を加え、このサンプルを３７℃で１０分間インキュベートした。ＷｈａｔｍａｎのＧＦ／Ｆフィルターでサンプルを真空濾過してインキュベーションを終了させ、１０μＭの非標識５−ＨＴを含む５ｍｌの緩衝液で洗浄した。フィルターを計数バイアルに入れ、４ｍｌの適当なシンチレーション液（たとえば、Ｐｉｃｏｆｌｕｏｒ（商標）１５、Ｐａｃｋａｒｄ）を加えた。１時間振盪し暗所で２時間保管してから、放射能量を液体シンチレーション計測法で測定した（ｃｐｍ）。取り込み量については、１０μＭの被検化合物の存在下で測定された非特異的結合および受動輸送を差し引いて得た。測定したｃｐｍを被検化合物の濃度に対してプロットし、最もフィットしたｓ字曲線を使用した。取り込みの阻害効力はｎＭ単位のＩＣ５０値（対数平均）で表す。５つの濃度の被検化合物で２本の完全な（ｆｕｌｌ）濃度反応曲線を３回ずつ測定した。ＩＣ５０値は、取り込み量が対照サンプルの総取り込み量から被検化合物１０μｍの存在下での非特異的結合および取り込みを差し引いた取り込み量の５０％になる濃度として求めた。
【００８８】
２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンはセロトニントランスポーターに高親和性で結合し、取り込み阻害効力（ＩＣ５０）は０．３５ｎＭを示す。
【００８９】
セロトニントランスポーターのアロステリック調節
タンパク質のアロステリック部位は、主要なリガンド結合部位とは異なる別の結合部位である。たとえば、リガンドとリガンド結合部位との結合を促進し、および／または安定化させるなどの調節を行う化合物は一般に、アロステリック機構を介して作用すると考えられる。
【００９０】
特定の理論に拘泥するわけではないが、セロトニントランスポーターには少なくとも２種類の別個の結合部位、すなわち、セロトニン再取り込みの阻害に関与する主要な高親和性結合部位と、主要部位でのリガンドの結合をアロステリックに調節する１つまたは２つ以上の低親和性結合部位とがあると考えられる（非特許文献１６；非特許文献１７）。
【００９１】
エスシタロプラムがＳＥＲＴのアロステリック結合部位に結合することは複数の研究で明らかにされている。エスシタロプラムとＣＯＳ−１細胞膜に発現するヒトセロトニントランスポーターとの相互作用に関する研究から、エスシタロプラムが第２の低親和性アロステリック部位に結合し、トランスポーターからの（高親和性主要部位のみに結合する濃度で使用される）３Ｈ−エスシタロプラムの解離速度を遅くすることが明らかになった。言い換えれば、エスシタロプラムにはエスシタロプラム：セロトニントランスポーター複合体に対して安定化／自己増強作用があると考えられる。このエスシタロプラムの作用は濃度依存性である（非特許文献１８；および非特許文献１９を参照されたい）。
【００９２】
エスシタロプラム以外にも、パロキセチン、セルトラリン、フルオキセチン、ベンラファキシン、デュロキセチンおよびセロトニンと、ＣＯＳ−１細胞膜に発現するヒトセロトニントランスポーターの高親和性および低親和性結合部位との相互作用が検討されたことがある（非特許文献１８）。その研究によれば、パロキセチンは、程度はエスシタロプラムよりも低いが、主要な高親和性部位での３Ｈ−パロキセチン：ヒトセロトニントランスポーター複合体を安定化させることが示唆された。セルトラリン、フルオキセチン、ベンラファクシンおよびデュロキセチンには、セロトニントランスポーターの主要結合部位に対する結合を安定化させる作用がほとんどないか、あるいはまったくなかった（非特許文献１８）。
【００９３】
化合物がアロステリック機構を介して作用するかどうかはインビトロの解離実験により判定できる。解離結合実験ではタンパク質の放射性リガンドの「解離速度」（ｋｏｆｆ）が測定される。放射性リガンドとトランスポータータンパク質を結合（すなわち、複合体を形成）させてから、解離速度が測定できるようにリガンドを加えてトランスポーターに対する放射性リガンドのそれ以上の結合を遮断する。様々な時間で結合（放射性リガンド：トランスポーター複合体の放射能により測定される）を測定して放射性リガンドがトランスポーターから解離する速度を判定する。解離速度定数を用いて結合複合体の半減期を判定することができる。半減期の測定値を用いれば、化合物がヒトＳＥＲＴのアロステリックモジュレーターであるかどうかの確認が可能である。
【００９４】
非特許文献２０に記載されているのと同様に解離結合試験を行うことで、化合物２−（６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イルスルファニル）−ベンジル］−メチル−アミンがＳＥＲＴのアロステリック部位に結合し、２６ｕＭのＩＣ５０で３Ｈ−エスシタロプラムの解離速度を著しく遅らせることが測定された。
【００９５】
他の方法では、以下の段落に記載の方法により化合物のＺ係数（Ｚ−ｆａｃｔｏｒ）を判定することで、ある化合物、特にＳＲＩが本出願の特許請求の範囲に記載するヒトセロトニントランスポーター（ｈＳＥＲＴ）のアロステリックモジュレーターであるかどうかを当業者であれば判定できる。
【００９６】
始めに解離速度を判定するため、ｈＳＥＲＴ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ７０６９７）で一過性にトランスフェクトしたＣＯＳ−１細胞から単離した膜を標準的な方法により調製する。トランスフェクション法も当該技術分野において周知である。以下、同じトランスフェクション法により、独立した少なくとも３回のトランスフェクションからアッセイを２回ずつ行う。
【００９７】
最初に、ｈＳＥＲＴを発現する膜調製物と放射性リガンド（放射能標識被検化合物）とを緩衝液（５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．４；１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ）中にて４℃で３０分間インキュベートして放射性リガンド／ｈＳＥＲＴ複合体を形成する。放射性リガンドの濃度は放射性リガンドのＫｄ値の約１０倍とする。（Ｋｄ値は同じ緩衝液中で予め測定しておく）。
【００９８】
同じ緩衝液で放射性リガンド／ｈＳＥＲＴ複合体を３０倍希釈する。別の実験では、被検化合物（ｃｏｌｄ、非放射能標識）を含む同じ緩衝液で放射性リガンド／ｈＳＥＲＴ複合体を３０倍希釈する。被検化合物を含む、あるいは含まない緩衝液で希釈した放射性リガンド／ｈＳＥＲＴ複合体のインキュベーションを２０℃で時間間隔を長くしながら続ける。各時間間隔（たとえば、１０分、２０分、３０分など）で、インキュベーションからサンプルを取り出し、セルハーベスターのＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターで濾過して反応を止める。Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｅｌｌマイクロプレートシンチレーションカウンターによりプレートを直接カウントして、サンプルごとに集積した放射能を測定する。放射能は結合に相当し、ｆｍｏｌ複合体／ｍｇ膜で表す。サンプルごとの結合を経過時間に対してプロットして解離速度を判定する。放射性リガンドの解離速度（ｋｏｆｆ）はＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭプログラム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて非線形回帰により求める。解離半減期（ｔ１／２）は０．６９３０２／ｋｏｆｆから算出し、時間単位で表す。
【００９９】
放射性リガンド／ｈＳＥＲＴ複合体の解離半減期（分単位）については、解離緩衝液中で被検化合物の濃度を上げてその濃度（たとえば、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭおよび５０μＭの被検化合物）に対してプロットする。このプロットの傾きはＺ係数（Ｚ−ｆａｃｔｏｒ）と呼ばれる。Ｚ係数については、独立した少なくとも４回の測定から算出する。Ｚ係数は放射性リガンド／ｈＳＥＲＴ複合体の安定化の度合いの尺度となる。Ｚ係数が０（ゼロ）を超えると、正のアロステリックモジュレーターであることが示唆される。本発明をさらに明らかにする非限定的な例として、Ｒ−シタロプラムはセロトニントランスポーターの主要な結合部位に結合し、報告されたＩＣ５０値が５０ｎＭを超えるため、ＳＲＩクラスに包含されず、したがって、アロステリックＳＲＩとは見なされない。たとえば、非特許文献２１を参照されたい。
【図１】
2010540461.tif 000005
【図２】
2010540461.tif 000006
【図３】
2010540461.tif 000007
【国際調査報告】
2010540461.tif 000008
2010540461.tif 000009