(57)【要約】  本発明は化合物の光学異性体又はエナンチオマーの分離のために用いる新規のキラルセレクタとする化合物の用途に関し、ここで、キラルセレクタは、少なくとも１つの以下に示す化合物及び少なくとも１つの金属イオン、例えば、Ｃｕ２＋、Ｎｉ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃｄ２＋又はＣｏ２＋を含んでいる。2010522696.tif 000043【選択図】図１
2010522696.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物のエナンチオマー同士を分離するためのキラルセレクタであり、
以下の（ａ）及び（ｂ）を含んでいる：
（ａ）少なくとも１つの［化１］に示す化合物：
【化１】
2010522696.tif 000024
ここで、ＷはＣＲ４Ｒ５、ＮＲ４、Ｏ又はＳを示し、
ＸはＣＲ６Ｒ７、ＮＲ６、Ｏ又はＳを示し、
ＹはＣＲ８Ｒ９、ＮＲ８、Ｏ又はＳを示し、
ＺはＣＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０、Ｏ又はＳを示し、
Ｒ１はＯＨ又はＳＨを示し、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、以下のいずれかを示す：
Ｈ、
ＯＨ、ＳＨ、
アミン基、
直鎖状又は分枝鎖状に１個〜３０個の炭素原子を含むアルキル基、ハロアルキル基又はヘテロアルキル基、
直鎖状又は分枝鎖状に２個〜３０個の炭素原子を含むアルケニル基又はアルキニル基、
直鎖状又は分枝鎖状に３個〜３０個の炭素原子を含む１つ又はそれ以上のシクロアルキル基、シクロアルケニル基又はシクロアルキニル基、
１つの環毎に３個〜１０個の炭素原子を含む１つ又はそれ以上のアリール基又はヘテロアリール基、
前記の定義を有するアリール及びアルキルに関する１個〜３０個の炭素原子を含むアルカリール基又はアラルキル基、
直鎖状又は分枝鎖状に１個〜３０個の炭素原子を含むアルコキシ基、チオアルキル基、スルホニルアルキル基又はアミノアルキル基、
直鎖状又は分枝鎖状に１個〜３０個の炭素原子を含むアルコキシアルキル基、アルキルチオアルキル基、アルキルスルホニルアルキル基又はアルキルアミノアルキル基、
及び１つの環毎に５個〜１０個の炭素原子を含む１つ又はそれ以上のヘテロサイクリック基；
前記の全ての基は、Ｒ２により、１つ若しくはそれ以上のニトロ基、シアノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、カルボニル基若しくはアミノ基により、１つ若しくはそれ以上のハロゲンにより又は１つ若しくはそれ以上のニトリル、シアノヒドリン若しくはアルデヒド官能基により任意に置換される；
［化１］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【請求項２】
以下の（ａ）及び（ｂ）を含むことを特徴とする請求項１に記載のキラルセレクタ：
（ａ）少なくとも１つの［化２］に示す化合物：
【化２】
2010522696.tif 000025
ここで、ＸはＣＲ４Ｒ５、Ｏ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＲ４Ｒ５-ＣＲ６Ｒ７、ＣＲ４Ｒ５-ＮＲ６、Ｏ-ＣＲ４Ｒ５、Ｓ-ＣＲ４Ｒ５、Ｏ-ＮＲ４、ＮＲ４-ＮＲ６又はＳ-Ｓを示し、
Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化２］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【請求項３】
以下の（ａ）及び（ｂ）を含むことを特徴とする請求項２に記載のキラルセレクタ：
（ａ）少なくとも１つの［化３］に示す化合物：
【化３】
2010522696.tif 000026
ここで、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化３］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【請求項４】
以下の（ａ）及び（ｂ）を含むことを特徴とする請求項３に記載のキラルセレクタ：
（ａ）少なくとも１つの［化４］又は［化５］に示す化合物：
【化４】
2010522696.tif 000027
【化５】
2010522696.tif 000028
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化４］及び［化５］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【請求項５】
以下の（ａ）及び（ｂ）を含むことを特徴とする請求項４に記載のキラルセレクタ：
（ａ）少なくとも１つの［化６］又は［化７］に示す化合物：
【化６】
2010522696.tif 000029
【化７】
2010522696.tif 000030
ここで、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化６］及び［化７］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【請求項６】
前記［化１］に示す化合物は、以下の［化８］〜［化１９］に示す化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載のキラルセレクタ：
【化８】
2010522696.tif 000031
【化９】
2010522696.tif 000032
【化１０】
2010522696.tif 000033
【化１１】
2010522696.tif 000034
【化１２】
2010522696.tif 000035
【化１３】
2010522696.tif 000036
【化１４】
2010522696.tif 000037
【化１５】
2010522696.tif 000038
【化１６】
2010522696.tif 000039
【化１７】
2010522696.tif 000040
【化１８】
2010522696.tif 000041
【化１９】
2010522696.tif 000042
ここで、［化１７］は５位がアルキル化されたネアミンを示し、
［化１８］は６位がアルキル化されたネアミンを示し、
［化１９］は４’位がアルキル化されたネアミンを示す。
【請求項７】
前記金属イオンは、Ｃｕ２＋、Ｎｉ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃｄ２＋又はＣｏ２＋から選択される２価の金属イオンである請求項１〜６のうちのいずれか１項に記載のキラルセレクタ。
【請求項８】
請求項１〜７のうちのいずれか１項に記載のキラルセレクタ及び移動液を含んでいるキラル移動相。
【請求項９】
請求項１〜７のうちのいずれか１項に記載のキラルセレクタ及び固体担体を含んでいるキラル固定相。
【請求項１０】
前記固体担体は、アルキル鎖が結合しているシリカ粒子を含む請求項９に記載のキラル固定相。
【請求項１１】
以下の（ａ）及び（ｂ）を含む化合物のエナンチオマー同士を分離する方法：
（ａ）請求項９若しくは１０に記載のキラル固定相又は請求項８に記載のキラル移動相の調製、
（ｂ）分離させるエナンチオマーと前記キラル固定相又はキラル移動相との接触、及び、
（ｃ）少なくとも１つの前記化合物のエナンチオマーの回収。
【請求項１２】
前記化合物は、アミノ酸、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、アミノアルコール、アルコール酸及びヌクレオシドから選択される化合物である請求項１１に記載の化合物のエナンチオマーを分離する方法。
【請求項１３】
化合物のエナンチオマー同士を分離するために用いる請求項１に記載の［化１］に示す化合物及び金属イオンの用途。
【請求項１４】
化合物のエナンチオマーを含む混合物中における前記化合物のエナンチオマーの量を測定する方法であって、該方法は、以下の（ａ）及び（ｂ）を含む：
（ａ）分離させるエナンチオマーと請求項９若しくは１０に記載のキラル固定相又は請求項８に記載のキラル移動相との接触、
（ｂ）少なくとも１つの前記化合物のエナンチオマーの回収、及び、
（ｃ）前記化合物のエナンチオマーの定量。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学異性体同士を分離する方法に関する。また、本発明は、新規のキラルセレクタとして用いるための化合物の用途を提供する。
【発明の概要】
【０００２】
キラリティは、分子又は化合物が非対称性であり、その鏡像と重ね合わすことができない構造的特徴として定義される。このような特徴を示す分子は、光学異性体又はエナンチオマーと呼ばれる。
【０００３】
エナンチオマーは、そのホモログの鏡像対称体と重ね合わせることができる配置異性体である。エナンチオマー同士は、それぞれの分子における構成原子数は同一であるが、空間的分布はそれぞれが互いの鏡像であり、重ね合わすことはできない。
【０００４】
本発明は、化合物の光学異性体同士又はエナンチオマー同士を分離するために、キラルセレクタとして新規の化合物を用いる。前記の新規の化合物は、エナンチオマー同士を分離させるために該エナンチオマー同士のうちの１つに対してより強い親和性を示す。従って、前記の新規の化合物は、分離するエナンチオマー同士のうちの１つに対し特異的に保持又は吸着することができる。親和性とは、２つの物質の相互の化学的誘引を意味する。
【０００５】
キラルセレクタは、化合物の光学異性体同士又はエナンチオマー同士のうちの１つに特異的に反応、認識、結合又は吸着できる光学活性試薬であり、そのため、化合物の１つのエナンチオマーと、これに対する同一の化合物における他の１つのエナンチオマーとを分離することができる。
【０００６】
キラル分離のためのクロマトグラフィ及び電気泳動の技術は、エナンチオマー同士の分離、精製及び定量のために用いられ、特に、化合物の１つのエナンチオマーと、これに対する同一の化合物における他の１つのエナンチオマーとを分離、精製及び定量するために用いられる。これらの技術は、化合物の光学異性体同士又はエナンチオマー同士のうちの１つに対して特異的に反応、認識、結合又は吸着できるキラルセレクタの使用を含み、そのため、化合物の１つのエナンチオマーと、これに対する同一の化合物の他の１つのエナンチオマーとを分離できる。これらのキラルセレクタは、一定の特性を示さなければならず、特に、高い特異性及び親和性を有する標的を認識できなければならない。
【０００７】
キラルセレクタは、特に、分離技術に効果的である。リガンド交換に基づくキラル分離は、Davankovによって１９７０年代に導入された。得ることができる全てのキラルセレクタのうち数種の化合物だけは、近年においてもリガンド交換に用いられ、特に、また主に、それらはキラルリガンド交換クロマトグラフィにおいて用いることが可能なセレクタとして記述されているアミノ酸／金属イオン複合体（Davancov.,J.Chromatogr.A,2003）、及びキトサン／金属イオン複合体（Liu Y 等.,J.Sep.Sci.,2006）である。
【０００８】
リガンド交換に基づく分離におけるキラルセレクタとしてアミノ酸／金属イオン複合体又はキトサン／金属イオン複合体を用いることは、多くの不利な点がある。まず、アミノ酸又はキトサンに対する機能付与は、これらに利用可能な反応性官能基の数が少ないため、限られることとなる。これは、結果としてそれらの用途が制限されることとなる。さらに、反応性官能基の数が少ないため、例えば、選択性の調節又はアミノ酸若しくはキトサンの一部との置換によるエナンチオマーの溶出の順序の逆転ができない。さらに、アミノ酸は、特に医薬品産業において、近年ますます用いられているヌクレオシドのエナンチオマー同士を分離できない。
【０００９】
本発明の１つの目的は、機能付与において、より多くの可能性を有するキラルセレクタを提供し、言い換えると、キラルセレクタと、分離されるエナンチオマー及びキラル固定相においては固体担体の両方との相互作用の調節のために、それぞれが吸着する異なる位置を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、化合物の分離の最適性という観点において、使用の際に、より大きな柔軟性を示すキラルセレクタを提供することにある。
【００１１】
本発明の他の目的は、エナンチオマー同士の溶出の順序を逆転させることができるキラルセレクタを提供することにある。溶出の順序の逆転は、エナンチオマーの純度の測定及び少量のエナンチオマーを第１に溶出するのに有利である。
【００１２】
さらに、本発明の他の目的は、アミノ酸、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド等、アミノアルコール及びヌクレオシドのエナンチオマーの全てを分離できるキラルセレクタを提供することにあり、これらの化学的分類のものに一般に用いられる。
【００１３】
本発明の他の目的は、キラルセレクタの単一の型を用いて、多数の化合物のエナンチオマー同士を分離する方法を提供することにある。
【００１４】
さらに、本発明の他の目的は、安価で、使用が簡単で且つ高い作用が認められるキラルセレクタを提供することにある。
【００１５】
本発明の他の目的は、リガンドのエナンチオ選択性を調節するために異なる金属イオンを利用するキラルセレクタを提供することにある。
【００１６】
さらに、本発明の他の目的は、異なる分離方法（特に、クロマトグラフィ及びキャピラリ電気泳動）を用いることができるキラルセレクタを提供することにある。
【００１７】
従って、本発明は第１に化合物のエナンチオマー同士を分離するためのキラルセレクタに関し、該キラルセレクタは下記の（ａ）及び（ｂ）を含む。
【００１８】
（ａ）少なくとも１つの［化１］に示す化合物：
【００１９】
【化１】
2010522696.tif 000003
【００２０】
ここで、ＷはＣＲ４Ｒ５、ＮＲ４、Ｏ又はＳを示し、
ＸはＣＲ６Ｒ７、ＮＲ６、Ｏ又はＳを示し、
ＹはＣＲ８Ｒ９、ＮＲ８、Ｏ又はＳを示し、
ＺはＣＲ１０Ｒ１１、ＮＲ１０、Ｏ又はＳを示し、
Ｒ１はＯＨ又はＳＨを示し、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、以下のいずれかを示す：
Ｈ、
ＯＨ、ＳＨ、
アミン基、
直鎖状又は分枝鎖状に１個〜３０個の炭素原子を含むアルキル基、ハロアルキル基又はヘテロアルキル基、
直鎖状又は分枝鎖状に２個〜３０個の炭素原子を含むアルケニル基又はアルキニル基、
直鎖状又は分枝鎖状に３個〜３０個の炭素原子を含む１つ又はそれ以上のシクロアルキル基、シクロアルケニル基又はシクロアルキニル基、
１つの環毎に３個〜１０個の炭素原子を含む１つ又はそれ以上のアリール基又はヘテロアリール基、
前記の定義を有するアリール及びアルキルに関する１個〜３０個の炭素原子を含むアルカリール基又はアラルキル基、
直鎖状又は分枝鎖状に１個〜３０個の炭素原子を含むアルコキシ基、チオアルキル基、スルホニルアルキル基又はアミノアルキル基、
直鎖状又は分枝鎖状に１個〜３０個の炭素原子を含むアルコキシアルキル基、アルキルチオアルキル基、アルキルスルホニルアルキル基又はアルキルアミノアルキル基、
及び１つの環毎に５個〜１０個の炭素原子を含む１つ又はそれ以上のヘテロサイクリック基；
前記の全ての基は、Ｒ２により、１つ若しくはそれ以上のニトロ基、シアノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、カルボニル基若しくはアミノ基により、１つ若しくはそれ以上のハロゲンにより又は１つ若しくはそれ以上のニトリル、シアノヒドリン若しくはアルデヒド官能基により任意に置換される；
［化１］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【００２１】
本発明の目的において：
「アミン」は窒素原子を含む基を意味する。アミンには１級アミンＮＨ２、２級アミンＮＨＲ’又は３級アミンＮＲ’Ｒ’’がある。Ｒ’及びＲ’’は同一又は異なり、前記のＲ２と同一の定義である；
「アルキル」はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、３級ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、又はイソシルのように１個〜３０個の炭素原子の直鎖状又は分枝鎖状の炭化水素ラジカルを意味する。上記に定義されたアルキル基は、１つ又はそれ以上のハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）を含んでもよい。その場合、それらを「ハロアルキル」基と呼ぶ。アルキル基はＰ、Ｏ、Ｎ、Ｓ及びＳｅから選択されるヘテロ原子を含んでもよい。その場合、それらを「ヘテロアルキル」基と呼ぶ；
「アルケニル」は１つ又はそれ以上の二重結合を含む２個〜３０個の炭素原子を有する直鎖状又は分枝鎖状の炭化水素を意味する。アルケニルの例としては、-CH-CH=CH-CH2、H2C=CH-（ビニル）又はH2C=CH-CH2-（アリル）のように１つの二重結合を有するアルケニル基である。
【００２２】
「アルキニル」は１つ又はそれ以上の三重結合を含む２個〜３０個の炭素原子を有する直鎖状又は分枝鎖状の炭化水素を意味する。アルキニル基の例としては、-CH2-C≡CHのように１つの三重結合を有するアルキニル基である；
「シクロアルキル」は単環式又は多環式であり、３個〜１０個の炭素原子を含む飽和炭化水素を意味する。それらは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル及びシクロドデシルのような単環式のシクロアルキル基である；
「シクロアルケニル」は１つ又はそれ以上の二重結合、例えば、２つの二重結合を有し、上記に定義されるシクロアルキル基から派生する基を意味する。該当する基として、例えば、シクロヘキセン基（１つの二重結合）又はシクロペンタ-1,3-ジエン基（２つの二重結合）がある；
「シクロアルキニル」は１つ又はそれ以上の三重結合、例えば、１つの三重結合を有し、上記に定義されるシクロアルキル基から派生する基を意味する；
「アリール」はフェニル又はナフチルのように、１つの環毎に３個〜１０個の炭素原子を含む単環式又は多環式の芳香族炭化水素基を意味する；
「ヘテロアリール」は１つの環毎に３個〜１０個の炭素原子を含み、また、１つの環毎にＰ、Ｏ、Ｎ、Ｓ及びＳｅから選択される１つ、２つ又は３つの環内のヘテロ原子を含む単環式又は多環式の芳香族基を意味する。例として、フリル基、チエニル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサチアゾリル基、トリアゾリル基、チアジアゾリル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピラジニル基及びトリアジニル基が挙げられる；
「アルカリル」は上記に定義されるアリール基により置換される上記に定義されるアルキル基を意味する；
「アラルキル」は上記に定義されるアリール基により置換される上記に定義されるアルキル基を意味する；
「アルコキシ」は１個〜３０個の炭素原子を有するＯ−アルキル基を意味し、特に、メトキシ、エトキシ、プロポキシ及びブトキシを意味する。「アルコキシアルキル」は１個〜３０個の炭素原子を有するアルキル−Ｏ−アルキル基を意味する。「チオアルキル」又は「アルキルチオアルキル」、「スルホニルアルキル」又は「アルキルスルホニルアルキル」及び「アミノアルキル」又は「アルキルアミノアルキル」は、それぞれ１つ又はそれ以上の硫黄原子、１つ又はそれ以上のスルホニル基及び１つ又はそれ以上のアミン官能基をさらに含んでいる。
【００２３】
「ヘテロサイクリック基」は１つ、２つ又は３つのＰ、Ｏ、Ｎ、Ｓ及びＳｅから選択される環内のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の単環式又は多環式の炭素環を意味する。これらは、一般に、上記のヘテロアリールの誘導体である。不飽和のヘテロ環は、例えば、ジヒドロフリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロピロリル、ピロリニル、オキサゾリニル、チアゾリニル、イミダゾリニル、ピラゾリニル、イソオキサゾリニル、イソチアゾリニル、オキサジアゾリニル、ピラニル、並びにピペリジン、ジオキサン、ピペラジン、トリチアン、モルフォリン、ジチアン及びチオモルフォリンの一不飽和誘導体、さらに、テトラヒドロピリダジニル、テトラヒドロピリミジニル及びテトラジドロトリアジニルがある。
【００２４】
上記に定義される基は、本発明に従って、Ｒ２により、１つ若しくはそれ以上のニトロ基、シアノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、カルボニル基若しくはアミノ基により、１若しくはそれ以上のハロゲンにより、又は１つ若しくはそれ以上のニトリル官能基、シアノヒドリン官能基若しくはアルデヒド官能基により置換され得る。
【００２５】
［化１］に示す化合物は金属イオン、例えば遷移金属のイオンを多く複合している特徴を有する。
【００２６】
金属イオンは２価であることが好ましい。金属イオンは、例えば、Ｃｕ２＋、Ｎｉ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃｄ２＋及びＣｏ２＋から選択され、Ｃｕ２＋がより好ましい。
【００２７】
金属イオンはアニオンと結合した形であってもよく、硫酸銅ＣｕＳＯ４又は酢酸銅Ｃｕ（ＣＨ３ＣＯＯ）２であることが好ましい。
【００２８】
本発明によると、化合物の５員環又は６員環及び［化１］の置換基、言い換えると、［化１］に示す化合物の置換基のみでなく［化１］の全体が、反応性の種であることが重要である。「反応性の種」とは、化合物の光学異性体同士又はエナンチオマー同士のうちの１つと結合できる又は特異的に吸着する原子の配置を意味する。例えばそれは、上記の［化１］に示す化合物の置換基として上記に示す化合物又は下記の［化２］〜［化１９］に示す化合物のうちのいずれかが考えられる。さらに、本発明の化合物（上記の［化１］及び下記の［化２］〜［化１９］）は、特に、溶出の順序の逆転及び選択性の変更ができるように異なる位置に官能性を持たせてもよい。同一の単位で、より大きな多様性が提供される。
【００２９】
本発明の一実施例によると、化合物のエナンチオマー同士を分離するためのキラルセレクタは下記の（ａ）及び（ｂ）を含む。
【００３０】
（ａ）少なくとも１つの［化２］に示す化合物：
【００３１】
【化２】
2010522696.tif 000004
【００３２】
ここで、ＸはＣＲ４Ｒ５、Ｏ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＲ４Ｒ５-ＣＲ６Ｒ７、ＣＲ４Ｒ５-ＮＲ６、Ｏ-ＣＲ４Ｒ５、Ｓ-ＣＲ４Ｒ５、Ｏ-ＮＲ４、ＮＲ４-ＮＲ６又はＳ-Ｓを示し、
Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化２］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【００３３】
本発明の他の実施例によると、化合物のエナンチオマー同士を分離するためのキラルセレクタは下記の（ａ）及び（ｂ）を含む。
【００３４】
（ａ）少なくとも１つの［化３］に示す化合物：
【００３５】
【化３】
2010522696.tif 000005
【００３６】
ここで、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化３］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【００３７】
本発明の他の実施例によると、化合物のエナンチオマー同士を分離するためのキラルセレクタは下記の（ａ）及び（ｂ）を含む。
【００３８】
（ａ）少なくとも１つの［化４］又は［化５］に示す化合物：
【００３９】
【化４】
2010522696.tif 000006
【００４０】
【化５】
2010522696.tif 000007
【００４１】
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化４］及び［化５］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【００４２】
本発明の他の実施例によると、化合物のエナンチオマー同士を分離するためのキラルセレクタは下記の（ａ）及び（ｂ）を含む。
【００４３】
（ａ）少なくとも１つの［化６］又は［化７］に示す化合物：
【００４４】
【化６】
2010522696.tif 000008
【００４５】
【化７】
2010522696.tif 000009
【００４６】
ここで、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は同一又は異なり、請求項１において定義された通りである；
［化６］及び［化７］に示す化合物は、キトサン、ネオマイシン、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ネアミン及びアミカシン以外である；
（ｂ）少なくとも１つの金属イオン。
【００４７】
［化６］及び［化７］の化合物は、アミノグリコシド誘導体である。特に、それらは、天然由来、合成又は半合成、及び天然のアミノグリコシドから切断することによって得られたアミノグリコシドのうちから選択される。
【００４８】
アミノグリコシドは、アミン官能基、環内の酸素及び少なくとも１つのヒドロキシル官能基を含む環状化合物である。アミノグリコシドはアミノシドとも呼ばれ、以前から知られ、示されている（例えば米国特許出願公開２００３／０１０９４６１号又は米国特許出願公開２００５／０１７１０３５号）。これらは数種類の細菌に有効な抗生物質を構成する。
【００４９】
本発明によると、［化１］〜［化１９］に示す化合物は、抗生物質又は医薬品に用いられるのではなく、調製用又は分析用のキラル分離を目的とするキラルセレクタとして用いられる。
【００５０】
［化１］に示す化合物は以下から選択されることが好ましい。
【００５１】
【化８】
2010522696.tif 000010
【００５２】
【化９】
2010522696.tif 000011
【００５３】
【化１０】
2010522696.tif 000012
【００５４】
【化１１】
2010522696.tif 000013
【００５５】
【化１２】
2010522696.tif 000014
【００５６】
【化１３】
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【００５７】
【化１４】
2010522696.tif 000016
【００５８】
【化１５】
2010522696.tif 000017
【００５９】
【化１６】
2010522696.tif 000018
【００６０】
本発明に係る［化１］に示す化合物は、担体に固定化させることができる基を含んでいてもよい。そのような基を含まない場合及びエナンチオマーの分離のために必要な基がある場合は、［化１］に示す化合物に官能性を持たせることができる。
【００６１】
本発明によると、例えば、担体に固定化させるために、［化８］〜［化１７］に示す化合物に官能性を持たせることが可能である。化合物に官能性を持たせる方法は、文献に記載されている。
【００６２】
担体に固定化される基は、炭化水素鎖、芳香族基又は極性基があり得る。このような基は、多様な極性のクロマトグラフィの担体（例えば、Ｃ１、Ｃ４、Ｃ８、Ｃ１８、フェニル、多孔性グラファイトカーボン、シアノ、シリカ又はジオール型の固定相）に非共有結合により固定化するために選択される。基の選択は、用いられるクロマトグラフィの担体の型に従い行われる。
【００６３】
例えば、［化１］に示す化合物は、多孔性グラファイトカーボンにより構成される固定相の場合、芳香族置換基により官能性を持たされる。
【００６４】
他の例として、［化１］に示す化合物は、ミセル動電クロマトグラフィにおけるリガンド交換によりエナンチオマーを分離する場合、１つ又はそれ以上の脂溶性鎖により官能性を持たされる。
【００６５】
同じく、固体担体にストレプトアビジンにより官能性を持たせると、［化１］に示す化合物はその担体に固定されるためにビオチン化される。
【００６６】
代わりに、該化合物に、例えばアルキル又はフェニル鎖といったスペーサーアームにより官能性を持たせると、疎水性の効果（無極性固定相）を介して固定させる固体担体を用いることができる。
【００６７】
１つの好ましい実施例によると、本発明に係る［化１］に示す化合物は、上記のＲ２の定義に相当する置換基Ｒ'''により５位、６位、３’位及び／又は４’位において置換されたネアミン誘導体である。これは、下記から選択される５位、６位、３’位及び／又は４’位においてアルキル化されたネアミンであってもよい。
【００６８】
【化１７】
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【００６９】
【化１８】
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【００７０】
【化１９】
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【００７１】
［化１７］は５位がアルキル化されたネアミンを示し、
［化１８］は６位がアルキル化されたネアミンを示し、
［化１９］は４’位がアルキル化されたネアミンを示している。
【００７２】
ネアミン誘導体は、［化２０］に示すネアミンから開始する下記の工程により調製され得る。
【００７３】
【化２０】
2010522696.tif 000022
【００７４】
５位、６位、３’位及び／又は４’位がアルキル化されたネアミンを調製するための方法は、国際特許出願公開２００５／０６０５７３号に記載の工程に従い、ネアミンのアミン官能基よりも大きなｐＫａを有する塩基の存在下において、トリチル基、モノメトキシトリチル基又はジメトキシトリチル基を用いてネアミンのアミン官能基を保護する工程を含む。その方法はさらに、アルキル化をさせないヒドロキシル官能基を保護する工程を含む。ヒドロキシル官能基は、例えばｐ−メトキシベンジル基を用いて保護される。その後に、アルキル化させるヒドロキシル官能基は、ヒドロキシル官能基を脱プロトン化できる塩基の存在下において、例えば１−ブロモオクタデカンと反応させることにより選択的にアルキル化される。その後に、例えばＴＦＡ／アニソール混合液処理をすることにより、アミン及びヒドロキシル官能基の脱保護をすることによって、所望の誘導体が得られる。
【００７５】
上記の［化１７］に示す化合物を得るためには、３’位、４’位及び６位のヒドロキシル官能基が保護される。そのようにすると、５位のヒドロキシル官能基は選択的にアルキル化される。その後に、アミン及びヒドロキシル官能基は、処理によって脱保護されて、［化１７］に示す化合物が得られる。［化１９］に示す化合物は同様に、ｐ−メトキシベンジル基により３’位及び６位のヒドロキシル官能基を保護し、トリチル化誘導体の選択的アルキル化によって得られる。脱保護は、例えばＴＦＡ／アニソール混合液により行われ、その後に［化１９］に示す化合物が得られる。
【００７６】
６−アルキル化誘導体（上記の［化１８］に示す化合物）を調製する方法は、より単純であるため有利である。それは、例えばｐ−メトキシベンジル基によるヒドロキシル官能基の保護を行うことなく、直接にアルキル鎖が導入されるからである。４つのアミンをトリチル化させた誘導体は、ヒドロキシル官能基を脱プロトン化することができる塩基の存在下において、例えば１−ブロモオクタデカンを用いて、直接にアルキル化される。その反応は、主に６位において起こる。脱保護は、例えばＴＦＡ／アニソール混合液により行われる。
【００７７】
上記の方法は、固体担体に共有結合的に固定させるために、ネアミン誘導体と一致させる末端官能基（カルボン酸又はアミン等の官能基）を有する鎖を、４’位、５位又は６位に導入するのに便利である。また、その方法は、異なる官能性及びキラル分離の選択性の増強又は増加のためのネアミンの核の認識における異なる特異性の導入も可能とする。
【００７８】
本発明は、上記のキラルセレクタから調製されるキラル相にも関する。
【００７９】
一般に、本発明に係るキラルセレクタの構造の観点において、キラル分離はリガンド交換に基づく。キラル分離の方法は数多くある。これらの方法は、キラル固定相とキラル移動相（キラル移動緩衝液とも呼ばれる）との２つの分類に分けられる。キラル固定相は、キラルセレクタが固定された固体担体を含み、その一方、キラル移動相（キラル移動緩衝液）は、キラルセレクタを含む液体培地又は移動液を含む。共通する方法の１つは、化合物のエナンチオマー同士を含む溶液を、そのエナンチオマー同士のうちの１つを得るためにキラル固定相に通過させる又はキラル移動相に入れる操作を含む。その後に、慎重な溶出により化合物のエナンチオマーを分離回収する。
【００８０】
下記から選択する方法によって、より特異的に行うことができる：
キラル分離のためのクロマトグラフィ法は、特に、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、超臨界クロマトグラフィ又はガスクロマトグラフィ（ＳＦＣ又はＧＣ）及び薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）である；
キラル分離のための電気泳動法は、特に、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）、キャピラリゾーン電気泳動（ＣＺＥ）及び電気クロマトグラフィ（ＥＣＣ）である。
【００８１】
本発明は分析用キラル分離と共に調製用キラル分離に関する。
【００８２】
本発明のキラル相は、化合物の数種の型のエナンチオマーの調製を可能とする。これらの化合物は電子供与性基を含まなければならない。特に、アミノ酸（１つの−ＣＯＯＨ官能基及び１つの−ＮＨ２官能基）、アルコール酸（１つの−ＣＯＯＨ官能基及び１つの−ＯＨ官能基）、ペプチド（−ＣＯ−ＮＨ）、ジペプチド、トリペプチド等、アミノアルコール（１つの−ＯＨ官能基及び１つの−ＮＨ２官能基）、ヌクレオシド（ヌクレオチド及びリボソーム）及びオリゴペプチドのエナンチオマーの分離が挙げられる。
【００８３】
キラル固定相の担体、キラル移動相の移動溶液及びそれらが用いられる条件（ｐＨ、温度及び濃度等）は、当業者に知られ、また、文献に記載されている（J.Chromatogr.A 2001,906,1-489; Chiral Analysis,Ed: K.及びM.Bush,Elsevier,2006年10月,第２章）。
【００８４】
さらに、本発明は、化合物のエナンチオマー同士又は光学異性体同士を分離するためのキラル固定相を提供し、該キラル固定相は、キラルセレクタが固定化された不活性な固体担体を含み、このキラルセレクタは、上記の［化１］に示す化合物と金属イオンとの混合物である。［化１］に示す化合物と固体担体との固定は共有結合又は非共有結合であってもよい。
【００８５】
不活性な固体担体は、例えばアガロース粒子、シリカ粒子、ポリスチレン−ジビニルベンジル及びモノリス相を含む。担体は、例えば１８個の炭素原子（オクタデシル）を含むアルキル鎖を結合されたシリカ粒子であってもよい。Ｃ１８相が過剰に疎水的な場合は、Ｃ８（オクチル）又はＣ４（ブチル）を用いることもできる。担体は、多孔性グラファイトカーボン型又はジオール型若しくはシアノ型である極性が比較的強い担体であってもよい。同一の型の担体は、その他のクロマトグラフィ法（ＣＣＭ及び超臨界クロマトグラフィ等）に用いることもできる。
【００８６】
ラセミ混合物は、移動相と呼ばれる液体によって運ばれる。移動相の例としては、予め決められたＣｕ２＋の濃度（例えば０．５ｍＭ）を含む水−有機物（水／メタノール）混合液を含む。ラセミ混合物中のエナンチオマー同士は、キラル固定相と相互作用する。そのエナンチオマー同士は、キラルセレクタと化合物のエナンチオマーとによる複合体の可逆的形成によって分離される。これらの複合体は、異なる物理的特徴を有し、この特徴によりエナンチオマー同士の物理的分離を可能とする。移動相及びキラル固定相の２つの相にそれぞれエナンチオマーの分布がある。エナンチオマー同士のうちの１つは、キラルセレクタと複合体を形成し、他方のエナンチオマーは、移動相において浮遊する。このように、エナンチオマー同士の分離を可能とする。
【００８７】
従って、キラルセレクタは、分離されるエナンチオマー同士のうちの１つに対して、より強い親和性を示さなければならない。
【００８８】
不活性な固体担体に対する上記に定義された［化１］に示す化合物の非共有結合性の固定化（疎水効果、水素結合又はファンデルワールス力による）の方法は、用いられる置換基に従って選択される（例えば、芳香族置換基／多孔性グラファイトカーボンの固定相、脂溶性鎖の置換基／Ｃ１８固定相及び極性置換基／シアノ固定相等）。
【００８９】
上記のように、必要ならば、固体担体に固定するために、例えばネアミン又はグルコサミンといった［化１］〜［化１９］のうちの１つに従う化合物に官能性を持たせることができる。
【００９０】
本発明は、化合物又は分子のエナンチオマー同士の分離のためのキラル固定相を調製する方法にも関し、この方法は、以下の（ａ）及び（ｂ）工程を含む。
【００９１】
（ａ）光学活性を有し、分離するエナンチオマー同士のうちの１つに対して親和性を有する上記に定義された［化１］に示す化合物を得る。
【００９２】
（ｂ）キラル固定相を得るために、工程（ａ）において選択された化合物を固体担体に固定する。
【００９３】
工程（ａ）において選択された化合物と担体との固定は、共有結合又は非共有結合によることができる。
【００９４】
さらに、本発明は、移動緩衝液と該緩衝液の溶液中のキラルセレクタとを含む、エナンチオマーを分離するためのキラル移動相を提供し、このキラルセレクタは、光学活性を有し、分離するエナンチオマー同士のうちの１つに親和性を有する上記に定義された［化１］に示す化合物から選択される。
【００９５】
移動緩衝液は、例えば、ＴＲＩＳ、ホウ酸、リン酸又は酢酸緩衝液を含む。
【００９６】
本発明の一実施例によると、移動緩衝液のｐＨは３〜８の間で変動し、例えば４〜７又は変動が小さい場合は５〜６である。
【００９７】
濃度に関しては、ミセル動電クロマトグラフィ（ＭＥＫＣ）と関連して、臨界ミセル濃度よりも大きな濃度において、脂溶性基（例えばＣ１８）により置換される化合物を用いることが好ましい。キャピラリ電気泳動（ＣＥＣ）の場合は、１ｍＭ〜２０ｍＭの濃度において、置換されていない化合物又は疎水性基に置換された化合物を用いることが好ましい。
【００９８】
本発明の一実施例によると、ミセル動電クロマトグラフィ（キャピラリ電気泳動装置）が用いられる。この場合、エナンチオマー同士を分離するために、脂溶性鎖を含む［化１］に示す化合物、又はそのような基により官能性を持たせた化合物が用いられる。例えば、キャピラリの内側の表面がシアノール基によりマスクされた被膜キャピラリ（ＰＶＡ型）が用いられてもよい。［化１］に示す化合物は、例えばＣｕ２＋である金属イオンの存在下において、臨界ミセル濃度よりも濃度が大きくなるように、移動緩衝液に入れられる。エナンチオマー同士の分離は溶質の移動率の差に基づき、それは結合形固定ミセル相（ジアステレオ異性複合体の形成）との相互作用に依存する。
【００９９】
本発明の他の態様としては、以下の（ａ）〜（ｃ）を含む、化合物のエナンチオマー同士を分離する方法に関する。
【０１００】
（ａ）固定又は移動キラル相を調製する。
【０１０１】
（ｂ）エナンチオマー同士を分離するために、エナンチオマーと前記のキラル相とを接触させる。
【０１０２】
（ｃ）前記の化合物の少なくとも１つのエナンチオマーを収集する。
【０１０３】
キラル相の調製を含む工程（ａ）は、複数の工程を含んでもよい。
【０１０４】
キラル固定相の場合、固体担体に、上記に定義された［化１］に示す化合物の固定化をすることが必要であってもよい。固定化の工程は、［化１］に示す化合物と固体担体との間の共有結合又は非共有結合の形成を含む。［化１］に示す化合物はエナンチオマーに対する親和性を有さなければならないため、前記の結合の形成は［化１］に示す化合物を変性させることなく行わなければならない。
【０１０５】
工程（ｂ）は、［化１］に示す化合物と金属イオンと例えばアミノ酸又はヌクレオシド等の化合物のエナンチオマーのうちの１つとによる３元複合体の形成に相当する。
【０１０６】
化合物のエナンチオマー同士の混合物は、特に、反応混合物から得られる、又は精製形態において存在し得る。
【０１０７】
工程（ｂ）の一実施例において、エナンチオマー同士の混合物を含む溶液は、クロマトグラフィシステムにおけるキラル固定相と接触する。この工程は、２つのエナンチオマーのうちの１つの吸着と同時に他のエナンチオマーの除去に相当する。エナンチオマー同士のうちの１つは、キラルセレクタにより特異的に認識され、このエナンチオマーの保持時間が、同じ化合物の他のエナンチオマーよりも長いことにより顕在化される。保持時間の差異が、クロマトグラフィのカラムの末端又は電気泳動キャピラリの末端におけるエナンチオマー同士のうちの少なくとも１つの分離回収を可能とする。
【０１０８】
工程（ｂ）の他の実施例において、キラルセレクタは、例えばキャピラリ電気泳動システムにおける移動緩衝液に加えられる。エナンチオマー同士の混合物を含む溶液は、移動緩衝液を含むキャピラリに注入される。前記の通り、エナンチオマー同士のうちの１つは、キラルセレクタにより特異的に認識され、このエナンチオマーは、同一の化合物の他のエナンチオマーよりも長い移動時間により顕在化される。この保持時間の差異が、キャピラリの末端におけるエナンチオマー同士のうちの１つの分離回収を可能とする。
【０１０９】
キラル固定相の担体、キラル移動相の移動溶液及びそれらを用いる条件（ｐＨ、温度及び濃度等）は、当業者に知られ、また、文献に記載されている（J.Chromatogr. A 2001,906,1-489; Chiral Analysis, Ed: K及びM.Bush,Elsevier, 2006年10月,第２章）。
【０１１０】
一実施例は、化合物のエナンチオマー同士を分離する方法は、８℃〜３５℃の間、例えば１８℃〜３５℃の間、好ましくは２４℃〜２８℃の間の温度において行われる。
【０１１１】
本発明の他の態様としては、化合物のエナンチオマー同士を含む混合物中の１つのエナンチオマーの量を測定する方法に関し、その方法は以下の（ａ）〜（ｃ）を含む。
【０１１２】
（ａ）上記の通りに、エナンチオマー同士を分離するために、エナンチオマー同士と固定キラル相又は移動キラル相とを接触させる。
【０１１３】
（ｂ）前記の化合物の少なくとも１つのエナンチオマーを回収する。
【０１１４】
（ｃ）前記の化合物のエナンチオマーを測定する。
【０１１５】
本発明の最後の態様としては、クロマトグラフィ法によるキラル分離、電気泳動法によるキラル分離及び電気クロマトグラフィ法によるキラル分離における上記に定義したキラルセレクタの使用にも関する。
【０１１６】
以下の実施例及び図面は、本発明の利点及び特徴のうちの数種を示す。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】移動相において、銅の濃度と保持因子ｋとの相関を示すグラフである。キラル固定相（ＣＳＰ）：１×１５０ｍｍ、３μｍ；流速：４０μｌ／ｍｉｎ；温度：２４℃；２５０ｎＬ注入；Ｄ−Ｌプロリン０．６２５ｍＭ（エナンチオマーのそれぞれの濃度）；移動相：９８−２％（Ｈ２Ｏ−ＭｅＯＨ）＋ＣｕＳＯ４；λ＝２３６ｎｍ。
【図２】移動相において、銅の濃度とエナンチオ選択性及び分離能との相関を示すグラフである。ＣＳＰ：１×１５０ｍｍ、３μｍ；流速：４０μｌ／ｍｉｎ；温度：２４℃；２５０ｎＬ注入；Ｄ−Ｌプロリン０．６２５ｍＭ（エナンチオマーのそれぞれの濃度）；移動相：９８−２％（Ｈ２Ｏ−ＭｅＯＨ）＋ＣｕＳＯ４；λ＝２３６ｎｍ。
【図３】プロリンのエナンチオマー同士の分離を示すグラフである（移動相は１０ｍＭのＣｕＳＯ４を含む）。ＣＳＰ：１×１５０ｍｍ、３μｍ；流速：４０μｌ／ｍｉｎ；温度：２４℃；２５０ｎＬ注入；Ｄ−Ｌプロリン０．６２５ｍＭ（エナンチオマーのそれぞれの濃度）；移動相：９８−２％（Ｈ２Ｏ−ＭｅＯＨ）＋ＣｕＳＯ４；λ＝２３６ｎｍ。
【図４】（ａ）は１／Ｔとｌｎ（α）との相関を示し、（ｂ）は１／Ｔとｋとの相関を示すグラフである。ＣＳＰ：１×１５０ｍｍ、３μｍ；流速：４０μｌ／ｍｉｎ；２５０ｎＬ注入；Ｄ−Ｌプロリン０．６２５ｍＭ（エナンチオマーのそれぞれの濃度）；移動相：９８−２％（Ｈ２Ｏ−ＭｅＯＨ）＋ＣｕＳＯ４（０．５ｍＭ）；λ＝２３６ｎｍ。
【図５】長期における選択性及び分離能の安定性を示すグラフである。ＣＳＰ：１×１５０ｍｍ、３μｍ；移動相：９８−２％（Ｈ２Ｏ−ＭｅＯＨ）＋ＣｕＳＯ４（０．５ｍＭ）；温度：２０℃；流速：４０μｌ／ｍｉｎ；２５０ｎＬ注入；Ｄ−Ｌプロリン０．６２５ｍＭ（エナンチオマーのそれぞれの濃度）；λ＝２３６ｎｍ。
【図６】４’モノＣ１８ネアミンカラムによるプロリンのエナンチオマー同士の分離を示すグラフである。移動相：Ｈ２Ｏ−ＣＨ３ＯＨ（９８：２、ｖ／ｖ）＋ＣｕＳＯ４０．５ｍＭ；ＣＳＰ：０．３×１５０ｍｍ、３μｍ；温度：２０℃；注入量：０．２５μＬ；エナンチオマーのそれぞれの濃度：０．５ｍＭ；流速：２μｌ／ｍｉｎ；検出：２３６ｎｍ。
【発明を実施するための形態】
【０１１８】
１．装置及び方法
１．１．装置
本実施例における検討は、ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＩＬ １０ＡＴポンプ（Sarregumines,フランス）、ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＩＬ １０ＡＤ注入システム（５−モノＣ１８ネアミン）又は２５０ｎＬ注入ループが取り付けられたＣＨＥＭＩＮＥＲＴ ＴＭ ＣＮ２−４３４６注入バルブ、及びＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＰＤ−１０Ａ紫外線−可視光検出器（ネアミンの固定の検出の場合はλ＝１９２ｎｍ；注入された溶質の検出の場合はλ＝２２０ｎｍ及び２３６ｎｍ）からなる２つのマイクロＨＰＬＣステーションによって行われる。ダイオネクス社（Amsterdam,オランダ）から得られるＲＰ−Ｃ１８（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ−ＯＤＳ−３）型の逆相カラムの多くは、ＩＧＬＯＯＣＩＬオーブン（Interchim社）による温度制御下において用いられる。
【０１１９】
１．２．試薬
ラセミ体及びエナンチオマーの全ては、Sigma-Aldrich社（Saint-Quentin,フランス）、Bachem社（Weil am Rhein,ドイツ）又はChemGenes社（Wilmington,アメリカ）から入手した。
【０１２０】
硫酸銅はProlabo社（Rhone-Poulenc,フランス）から供給された。
【０１２１】
ＨＰＬＣグレードのメタノールは、Fisher Scientific社（Leicestershire,イギリス）から購入した。
【０１２２】
水は逆浸透カートリッジを備えたエルガスタットオプション水精製システム（Odil,Talant,フランス）から得られた。
【０１２３】
４’−モノＣ１８ネアミン、５−モノＣ１８ネアミン及び６−モノＣ１８ネアミンは下記の通りに調製された。
【０１２４】
１．３．４’−モノＣ１８ネアミン、５−モノＣ１８ネアミン及び６−モノＣ１８ネアミン誘導体の調製
４’−モノＣ１８ネアミン（［化１９］に示す化合物）及び５−モノＣ１８ネアミン（［化１７］に示す化合物）は、国際特許出願公開２００５／０６０５７３号に記載された工程に従い調製される。６−モノＣ１８ネアミン（［化１８］に示す化合物）は、ヒドロキシル官能基の保護のないテトラトリチル化ネアミンから直接に、ヒドロキシル官能基の保護をすることなく調製される。
【０１２５】
この工程は下記を含む：
テトラトリチル化誘導体を生成するために、トリチル基によりネアミンの１位、３位、２’位及び５’位の４つのアミン官能基の保護、及び
以下のヒドロキシル官能基のｐ−メトキシベンジル基による保護：
４’−モノＣ１８ネアミンにおける６位及び３’位、
５−モノＣ１８ネアミンにおける６位、３’位及び４位。
【０１２６】
トリチル基によるネアミンのアミン官能基の保護工程は、ネアミンのアミン官能基のｐＫａよりも大きいｐＫａをもつ塩基の存在下において行われる。この基準に適う塩基の例としては、国際特許出願公開２００５／０６０５７３号に記載されている。
【０１２７】
メトキシベンジル基によるネアミンのヒドロキシル官能基の保護工程は、ヒドロキシル官能基の脱プロトン化ができる塩基の存在下において行われる。この基準に適う塩基の例としては、国際特許出願公開２００５／０６０５７３号に記載されている。
【０１２８】
アミン及びヒドロキシル官能基の脱保護は、酸性培地、例えばＴＦＡ／アニソール混合液中において起こる。
【０１２９】
１．３．１．５−Ｃ１８−ネアミン誘導体（［化１７］に示す化合物）の合成
１位、３位、２’位及び５’位のアミン官能基並びに６位、３’位及び４’位のヒドロキシル官能基が保護されたネアミン（１．０ｇ；０．６０ｍｍｏｌ）は、アルゴン存在下の外界温度において、６０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解され、そこに水素化ナトリウムと油との懸濁液（ＮａＨ ６０％、２５０ｍｇ；６．２５ｍｍｏｌ）が加えられる。その３０分後、その反応液に１−ブロモオクタデカン（１．０ｇ；３．０ｍｍｏｌ）が加えられ、減圧下において、濃縮される前に７０℃で２４時間撹拌される。その残留物はジクロロメタンに溶かされ、この有機溶液は飽和塩化アンモニウム、水及び飽和ＮａＣｌ溶液を用いて洗浄される。この有機相は、硫酸マグネシウム上において乾燥され、ろ過され、その後蒸発乾固される。この未精製の生成物は、溶出剤としてＣＨ２Ｃｌ２／シクロヘキサン（２０／８０）混合液を用いて、アルミナカラムにより精製されて、５位がアルキル化された保護ネアミンが６８％の収率で得られる。その保護基は、後に、E.Riguet等,Tetrahedron,2004の論文に記載された方法に相当するトリフルオロ酢酸／アニソール混合液処理による除去がなされて、５−Ｃ１８−ネアミン（［化１７］に示す化合物）が６４％の収率で得られる。
【０１３０】
1H NMR(400MHz,D2O):σ=5.70(d,J=3.6Hz,1H,H1'), 3.77-3.96(m,4H,H3',H4,H5',H6), 3.52-3.68(m,3H,H5,CH2O鎖), 3.37-4.48(m,2H,H3,H4'), 3.30(t,J=9Hz,1H,H6'b), 3.19-3.27(m,2H,H1,H2'), 3.04(dd,J=8.4及び13.2Hz,1H,H6'a), 2.35(dd,J=4.0及び12.4Hz,1H,H2eq), 1.76(dd,J=12.4Hz,1H,H2ax), 1.43(s,2H,CH2鎖), 1.05-1.25(m,30H,CH2鎖), 0.76(t,J=6.8Hz,3H,CH3); 13C NMR(100MHz,D2O):σ=92.9(C1'), 82.4(C5), 73.5(C4), 72.9(C6), 72.2(CH2O鎖), 70.7(C4'), 70.0(C5'), 68.7(C3'), 53.5(C2'), 49.9(C1), 48.9(C3), 40.5(C6'), 31.8, 29.7, 29.5, 29.4, 29.3及び29.2(CH2鎖), 27.9(C2), 25.3及び22.5(CH2鎖), 13.7(CH3鎖);MS(FAB):m/z=575[M+H]+, 415, 397, 161;HRMS(ESI):[M+H]+ m/z理論値=575.4548,測定値=575.4751, [M+Na]+ m/z理論値=597.4567,測定値=597.4546。
【０１３１】
１．３．２．４’−Ｃ１８−ネアミン誘導体（［化１９］に示す化合物）の合成
１位、３位、２’位及び５’位のアミン官能基並びに６位及び３’位のヒドロキシル官能基が保護されたネアミン（１．０ｇ；０．６５ｍｍｏｌ）は、アルゴン存在下の外界温度において、６０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解され、そこに水素化ナトリウムと油との懸濁液（ＮａＨ ６０％、５２０ｍｇ；１３ｍｍｏｌ）が加えられる。その３０分後、その反応液に１−ブロモオクタデカン（３２５ｍｇ；０．９５ｍｍｏｌ）が加えられ、減圧下において、濃縮される前に７０℃で２４時間撹拌される。その残留物はジクロロメタンに溶かされ、この有機溶液は飽和塩化アンモニウム、水及び飽和ＮａＣｌ溶液を用いて洗浄される。この有機相は硫酸マグネシウム上において乾燥され、ろ過され、その後蒸発乾固される。この未精製の生成物は、溶出剤としてＣＨ２Ｃｌ２／シクロヘキサン（３０／７０）混合液を用いて、アルミナカラムにより精製されて、４’位がアルキル化された保護ネアミンが４０％の収率で得られる。その保護基は、後に、E.Riguet等,Tetrahedron,2004の論文に記載された方法に相当するトリフルオロ酢酸／アニソール混合液処理による除去がなされて、４’−Ｃ１８−ネアミン（［化１９］に示す化合物）が６０％の収率で得られる。
【０１３２】
1H NMR(400MHz,D2O):σ=5.98(d,J=3.6Hz,1H,H1'), 4.00-4.16(m,3H,H3',H4,H5',H6), 3.83(m,1H,CH2O鎖), 3.73(t,J=9.2Hz,1H,H5), 3.50-3.65(m,4H,H3,H2',H6,1H,CH2O鎖), 3.26-3.46(m,3H,H1,H4',H6'b), 3.20(m,1H,H6'a), 2.51(m,1H,H2eq), 1.94(dd,J=12.4Hz,1H,H2ax), 1.53(s,2H,CH2鎖), 1.05-1.35(m,30H,CH2鎖), 0.78(t,J=6.4Hz,3H,CH3); 13C NMR(100MHz,D2O):σ=95.2(C1'), 79.5(C4'), 77.1(C4), 75.2(C5), 74.3(CH2O鎖), 72.6(C6), 70.0(C5'), 68.6及び68.5(C5'及びC3'), 53.8(C2'), 49.8(C1), 48.7(C3), 40.6(C6'), 32.0, 29.9, 29.8及び29.5(CH2鎖), 28.2(C2), 25.7及び22.7(CH2鎖), 13.9(CH3鎖);MS(FAB):m/z=615[M+K]+,575[M+H]+, 413, 395, 366, 324, 203, 163;HRMS(ESI):[M+H]+ m/z理論値=575.4548,測定値=575.4748。
【０１３３】
１．３．３．６−Ｃ１８−ネアミン誘導体（［化１８］に示す化合物）の合成
１位、３位、２’位及び５’位がテトラトリチル化されたネアミン（１．５ｇ；１．１６ｍｍｏｌ）は、アルゴン存在下の外界温度において、６０ｍＬのＤＭＦ／ＴＨＦ混合液（８ｍＬ／８ｍＬ）に溶解され、そこに水素化ナトリウムと油との懸濁液（ＮａＨ ６０％、４３９ｍｇ；１１ｍｍｏｌ）が加えられる。その３０分後、その反応液に１−ブロモオクタデカン（８５０ｍｇ；２．５５ｍｍｏｌ）が加えられ、減圧下において、濃縮される前に外界温度で４時間撹拌される。その残留物はジクロロメタンに溶かされ、この有機溶液は飽和塩化アンモニウム、水及び飽和ＮａＣｌ溶液を用いて洗浄される。この有機相は硫酸マグネシウム上において乾燥され、ろ過され、その後蒸発乾固される。この未精製の生成物は、溶出剤としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９９．５／０．５）混合液を用いて、アルミナカラムにより精製されて、６位がアルキル化された保護ネアミンが２１％の収率で得られる。その保護基は、後に、E.Riguet等,Tetrahedron,2004の論文に記載された方法に相当するトリフルオロ酢酸／アニソール混合液処理によれ除去がなされて、４’−Ｃ１８−ネアミン（［化１８］に示す化合物）が５６％の収率で得られる。
【０１３４】
1H NMR(400MHz,D2O):σ=5.83(d,J=3.2Hz,1H,H1'), 3.80-3.93(m,3H,H3',H4,H5'), 3.78(m,J=7.6Hz,1H,CH2O鎖), 3.67(t,J=9.2Hz,1H,H5), 3.52(m,J=7.6Hz,1H,CH2O鎖), 3.29-3.41(m,5H,H3,H2',H6,H4',H6'b), 3.10-3.24(m,2H,1H,H6'a), 2.37(m,1H,H2eq), 1.82(dd,J=12.4Hz,1H,H2ax), 1.48(s,2H,CH2鎖), 1.05-1.25(m,30H,CH2鎖), 0.75(t,J=6.8Hz,3H,CH3); 13C NMR(100MHz,D2O):σ=95.9(C1'), 80.5(C6), 77.8(C4), 75.7(C5), 74.2(CH2O鎖), 70.8(C4'), 69.2(C5'), 68.3(C3'), 53.5(C2'), 49.0(C1), 48.4(C3), 40.2(C6'), 31.8, 29.6, 29.5及び29.3(CH2鎖), 28.3(C2), 25.3及び22.5(CH2鎖), 13.7(CH3鎖);MS(FAB):m/z=615[M+K]+,575[M+H]+, 415, 397, 161;HRMS(ESI):[M+H]+ m/z理論値=575.4548,測定値=575.4749。
【０１３５】
１．４．固定相の調製
１８個の炭素原子を含む鎖を有する５位、６位及び４’位の３つのネアミンの異性体は、水／メタノール（９８／２％）混合液に溶解される。これらのそれぞれの最終濃度は７．５×１０−３ｍｏｌ／ｌ及び１１．８×１０−３ｍｏｌ／ｌである。それらは、その後に、前端分析によるＣ１８逆相クロマトグラフィのためのミクロボアカラム（３００ｍｍ ｉｄ×１５ｃｍ）に固定化される。Ｃ１８固定相にネアミン誘導体を固定化させるために、２つの方法が用いられる。
【０１３６】
（ａ）９０μｌの４’−モノＣ１８ネアミンを、外界温度において３μｌ／ｍｉｎの流速で注入する。この操作を３回繰り返す。これにより、１０μｌのカラムに対して、３．１８μｍｏｌのネアミンが供給される。
【０１３７】
（ｂ）９０μｌの５−モノＣ１８ネアミンを、外界温度において１μｌ／ｍｉｎの流速で注入する。この操作を３回繰り返す。これにより、１０μｌのカラムに対して、１．１７μｍｏｌのネアミンが供給される。
【０１３８】
ネアミン誘導体は不可逆的には固定されない（非共有結合、疎水効果）。
【０１３９】
両方の場合において用いられる移動相は、水／メタノール（９８／２％、ｖ／ｖ）により構成される。
【０１４０】
１．５．固定化されたネアミンの量の評価
銅はネアミンと複合体を形成する性質を有する。
【０１４１】
５３０μｌの５ｍＭ硫酸銅溶液を１μｌ／ｍｉｎを注入する。用いられる移動相は水からなる。この分析は２１７ｎｍ及び２２０ｎｍにおいて記録する。結合した銅の量、すなわち活性化ネアミンの量は、前端分析により得られたプラトーの第１の誘導体から算出される。この方法による固定化されたネアミンの量は、１０μｌのカラムに対して０．３μｍｏｌである。
【０１４２】
２．キラルリガンド交換クロマトグラフィ
２．１．クロマトグラフィの条件
移動相は異なる濃度において加えられたＣｕＳＯ４を含むメタノール／水（２／９８％）混合液から構成される。流速は分離する分子に依存し１μｌ／ｍｉｎ〜８μｌ／ｍｉｎである。
【０１４３】
エナンチオマーのサンプルは、水又はメタノール／水混合液で調製され、濃度は溶質に依存する。
【０１４４】
２５０ｎＬ又は１００ｎＬを異なる３通りの温度において注入し、保持時間を計測する。
【０１４５】
見かけの保持因子ｋは下記の式を用いて算出される：
ｋ＝（ｔＲ−ｔ０）／ｔ０
ここで、ｔＲはエナンチオマーのそれぞれの保持時間であり、ｔ０は保持されない溶質（チオ尿素）の保持時間である。
【０１４６】
保持時間及びカラムの不感時間は、別のカラム不感時間により補正される。
【０１４７】
エナンチオ選択性αは下記の式により算出される：
α＝ｋ２／ｋ１
ここで、ｋ２は複数のエナンチオマー同士のうち、より保持されるエナンチオマーの保持因子であり、ｋ１は保持されない方のエナンチオマーの保持因子である。
【０１４８】
分離能Ｒｓは下記の式により算出される：
Ｒｓ＝２［（ｔｒ２−ｔｒ１）／（ｗ２＋ｗ１）］
ここで、ｔｒ２はエナンチオマー同士のうち、より保持されるエナンチオマーの保持因子であり、ｔｒ２は保持されない方のエナンチオマーの保持因子であり、ｗ２はより保持されるエナンチオマーのピークにおける底部の幅であり、ｗ１は保持されない方のエナンチオマーのピークにおける底部の幅である。
【０１４９】
２．２．操作条件の決定
使用するための最適な操作条件を決定するために、４位を修飾したネアミンの保持及びエナンチオ選択性における異なるクロマトグラフィ条件の影響を、試験アミノ酸のプロリンにおいて検討する。
【０１５０】
２．２．１．銅の濃度の影響
まず、エナンチオマーの分離の最適化を目的として、カラムにおける保持に対する銅の影響を理解し、分析物と固定相との間の相互作用を調節するために、銅の濃度の影響を２４℃において検討する。分析はメタノール／Ｈ２Ｏ（２／９８％）混合液及び０．１ｍＭ〜１０ｍＭの異なる濃度のＣｕＳＯ４からなる移動相を用いて行われる。
【０１５１】
Ｄ−プロリンの見かけの保持時間ｋ（白の四角形）及びＬ−プロリンの見かけの保持時間（黒の四角形）の変化を図１に示している。
【０１５２】
分離能Ｒｓ（黒の丸）及び選択性α（白い丸）の変化を図２に示している。
【０１５３】
移動相に高濃度の銅を添加すると、Ｌ系のエナンチオマーの見かけの保持因子が顕著に減少し（見かけの保持因子ｋ＝２．５１がｋ＝０．５５となる）、Ｄ系のエナンチオマーにおいても同じようになる（見かけ上の保持因子ｋ＝４．１８がｋ＝１．３８となる）。
【０１５４】
対照的に、分離能Ｒｓ及び選択性αはＣｕＳＯ４の濃度と共に増加する（図２）。
【０１５５】
ＣｕＳＯ４＝５ｍＭの場合、Ｒｓ＝２．７５、α＝２．２３
ＣｕＳＯ４＝１０ｍＭの場合、Ｒｓ＝２．９０、α＝ｋ２／ｋ１＝１．３８／０．５５＝２．５１。
【０１５６】
分析時間及び分離能の点における最適条件は、５ｍＭ〜１５ｍＭのＣｕ２＋濃度において得られ、好ましくは７ｍＭ〜１３ｍＭであり、その中でも特に１０ｍＭのＣｕ２＋濃度が好ましい。
【０１５７】
図３は１０ｍＭのＣｕ２＋を含む移動相を用いた場合におけるプロリンのエナンチオマーの分離プロファイルを示している。分離能について、最小分析時間においては最適であるように見える。
【０１５８】
しかしながら、カラムはこれらの条件において、さらなる時間をかけると安定しない（下記に示す）。
【０１５９】
２．２．２．金属の型及び結合している無機アニオンの型の影響
プロリンと４’位が修飾されたネアミンとの間で形成されたジアステレオ異性体の複合体の保持における中心位置の金属イオンの影響については、プロリンのエナンチオマーにおいて、Ｃｕ２＋をＮｉ２＋、Ｚｎ２＋又はＣｏ２＋と換えて検討する。
【０１６０】
その結果、Ｄ−Ｌプロリンの分離において、最も良好なエナンチオ選択性を示した金属（０．５ｍＭ）は銅であった（α＝１．５０５）。エナンチオ選択性は亜鉛を用いると減少した（α＝１．２）。ニッケル及びコバルトを用いると、分離は見られなかった。
【０１６１】
銅と結合している硫酸イオン及び酢酸イオンの２つの無機アニオン（それぞれ０．５ｍＭのＣｕＳＯ４及びＣｕ（ＣＨ３ＣＯＯ）２）を、プロリンの保持及びエナンチオ選択性の点について検討する。
【０１６２】
硫酸イオンは酢酸イオンと比較してＤ型のエナンチオマーの保持を顕著に増強させた（硫酸イオンが３．３９であるのに対して酢酸イオンは２．８６）が、Ｌ型のエナンチオマーの保持においては影響しなかった（硫酸イオンが１．８５、酢酸イオンが１．８９）。
【０１６３】
選択性及び分離能は、硫酸イオン存在下においてそれぞれ１．８４及び２．０９であり、酢酸イオン存在下においては１．５４及び１．２４と減少した。
【０１６４】
従って、Ｎｉ２＋ニッケルイオン又はＣｏ２＋コバルトイオンよりもＣｕ２＋銅イオン又はＺｎ２＋亜鉛イオンを用いることが好ましい。
【０１６５】
さらに、酢酸銅Ｃｕ（ＣＨ３ＣＯＯ）２よりも硫酸銅ＣｕＳＯ４を用いることが好ましい。
【０１６６】
２．２．３．温度の影響
本検討は８℃〜２８℃の間の異なった温度Ｔにおいて行われる。
【０１６７】
図４（ａ）及び図４（ｂ）に示すように、プロリンにおける保持因子ｋ及びエナンチオ選択性αを比較すると、温度Ｔの上昇に従って溶質の固定量の減少（因子ｋの減少）及び選択性の減少が起こることがわかる。
【０１６８】
温度により分離能が顕著に変化しないように、１８℃〜３５℃において行われることが好ましく、特に、２４℃〜２８℃が好ましい。
【０１６９】
２．２．４．カラムの安定性
キラル固定相（ＣＳＰ）の安定性は、温度及び移動相（ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ：２％／９８％＋０．５ｍＭＣｕＳＯ４）が同一の条件において、４２日間、プロリンのエナンチオマーのエナンチオ選択性α及び分離能Ｒｓを比較することにより評価される。
【０１７０】
図５に示すように、ＣＳＰは選択性α（黒い丸）及び分離能（白い丸）の値が安定している限り安定している。
【０１７１】
さらに、移動相に２％のメタノールを加えても４’位が修飾されたネアミンの固定に影響しないことが観察された。
【０１７２】
７％のメタノールを用いた予備試験では、カラムのキラル識別能の減少が見られた。
【０１７３】
メタノールは、修飾されたネアミンＣ１８がクロマトグラフィの担体に固定化されることに直接に作用する。
【０１７４】
同じように、非常に高い濃度のＣｕ２＋の存在下におけるＣＳＰｓの使用は、カラムの性能の悪化を引き起こす。
【０１７５】
２．３．複数の種類のエナンチオマーの分離
上記の結果は、硫酸イオンと結合している銅がプロリンのエナンチオマーの分離のために最も有利な金属イオンであることを示し、また、その濃度が修飾されているネアミンのキラル識別特性に影響する因子であることを示している。カラムの最適な安定性は、Ｃｕ２＋濃度が０．５ｍＭの場合に見られる。
【０１７６】
これらの条件は、従って、下記の試験に用いられる。
【０１７７】
これらの条件の下に製造された固定相は、アミノ酸、ジペプチド及びヌクレオシドのような分子の約１０組のエナンチオマーの分離を可能とする。
【０１７８】
検出は２２０ｎｍ又は２３６ｎｍの波長のＵＶを用いて行う。カラムの温度は２０℃に固定する。注入する容量は０．２５μＬとする。
【０１７９】
４位がアルキル化されたネアミン誘導体から調製されたキラル固定相を用いた場合において、アミノ酸（プロリン）のエナンチオマー同士のクロマトグラフィによる分離の代表的な例を図６に示している。
【０１８０】
下記の表は、２つの異なるキラル固定相における異なる化合物のエナンチオマーの分離の結果を示している。
【０１８１】
【表１】
2010522696.tif 000023
【０１８２】
［表１］：エナンチオ選択性の変化及び炭化水素鎖が吸着しているネアミンの位置（５位及び４’位）の官能性によるエナンチオマーの溶出の順序の変化の例である。２つの固定相において作用条件は同一である。
＊５−モノＣ１８ネアミンにおいて、これらの化合物の溶出の順序は逆転している（Ｌ＞Ｄ）。
【０１８３】
上記の［表１］より、以下のことが明白である：
本発明のキラルセレクタは、アミノ酸及びヌクレオシドの分離を可能とする、また、化合物の異なる位置に機能付与することにより、エナンチオマーの溶出の順序を逆転することを可能とし（グルタミン酸及びアスパラギン酸）、それは、特にエナンチオマーの純度の決定又は少量存在するエナンチオマーを最初に溶出させることにおいて非常に有利であり、また、キラル固定相のエナンチオ選択性を変更することを可能とする。
【図１】
2010522696.tif 000044
2010522696.tif 000045
【図２】
2010522696.tif 000046
【図３】
2010522696.tif 000047
【図４】
2010522696.tif 000048
【図５】
2010522696.tif 000049
【図６】
2010522696.tif 000050
【国際調査報告】
2010522696.tif 000051
2010522696.tif 000052
2010522696.tif 000053
2010522696.tif 000054
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