(57)【要約】  特定のキノリン誘導体は、炎症性成分を有する状態の治療に有用である、ＣＲＴＨ２アンタゴニストである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
［３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メトキシカルボニルアミノベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸、
（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸、
｛４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）ベンジル］キノリン−５−イルオキシ｝酢酸、
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−８−フルオロ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
ならびにその塩、Ｎ−オキシド、水和物および溶媒和物
からなる群から選択される化合物。
【請求項２】
治療に使用される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４】
喘息、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、アレルギー性気道症候群またはアレルギー性鼻気管支炎の治療のための組成物の製造のための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項５】
乾癬、アトピー性皮膚炎および非アトピー性皮膚炎、クローン病、潰瘍性大腸炎または過敏性腸疾患の治療のための組成物の製造のための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６】
喘息、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、アレルギー性気道症候群またはアレルギー性鼻気管支炎の治療方法であって、そのような疾患に罹った患者に請求項１に記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項７】
乾癬、アトピー性皮膚炎もしくは非アトピー性皮膚炎、クローン病、潰瘍性大腸炎または過敏性腸疾患の治療方法であって、そのような疾患に罹った患者に請求項１に記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＲＴＨ２受容体（Ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｏｎ  Ｔ  Ｈｅｌｐｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｙｐｅ  ２、ヘルパーＴ細胞２型上で発現される化学誘引物質受容体相同分子）のリガンドである特定のキノリン化合物、およびＣＲＴＨ２受容体活性の調節に応答性である疾患、主にかなりの炎症成分を有する疾患の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満細胞は、いくつかの媒介物質、例えばヒスタミン、ロイコトリエン、サイトカイン、プロスタグランジンＤ２などの放出を通して、アレルギーおよび免疫応答で重要な役割を果たすことが知られている（Ｂｏｙｃｅ；Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｐｒｏｃ．、２００４、２５、２７〜３０頁）。プロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）は、アレルゲンチャレンジに応じる、肥満細胞によるアラカドン（ａｒａｃｈａｄｏｎｉｃ）酸に対するシクロオキシゲナーゼの作用によって生成される、主要な代謝産物である（Ｌｅｗｉｓら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８２、１２９、１６２７〜１６３１頁）。ＰＧＤ２生成は、全身性の肥満細胞症（Ｒｏｂｅｒｔｓ；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９８０、３０３、１４００〜１４０４頁）、アレルギー性鼻炎（Ｎａｃｌｅｒｉｏら；Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１９８３、１２８、５９７〜６０２頁；Ｂｒｏｗｎら；Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌａｒｙｎｏｌ．Ｈｅａｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇ．、１９８７、１１３、１７９〜１８３頁；Ｌｅｂｅｌら；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８８、８２、８６９〜８７７頁）、気管支喘息（Ｍｕｒｒａｙら；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９８６、３１５、８００〜８０４頁；Ｌｉｕら；Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１９９０、１４２、１２６〜１３２頁；Ｗｅｎｚｅｌら；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９１、８７、５４０〜５４８頁）、およびじんま疹（Ｈｅａｖｅｙら；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８６、７８、４５８〜４６１頁）の患者で増加することが示されている。ＰＧＤ２は、２つの受容体、ＰＧＤ２（またはＤＰ）受容体（Ｂｏｉｅら；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５、２７０、１８９１０〜１８９１６頁）およびＴｈ２（またはＣＲＴＨ２）上で発現される化学誘引物質受容体相同分子（Ｎａｇａｔａら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、１６２、１２７８〜１２８９頁；Ｐｏｗｅｌｌ；Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｌｕｅｋｏｔ．Ｅｓｓｅｎｔ．Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ、２００３、６９、１７９〜１８５頁）を通してその作用を媒介する。したがって、ＰＧＤ２の作用にその受容体において拮抗する剤は、いくつかの疾患状態で有益な影響を有するであろうと仮定されている。
【０００３】
ＣＲＴＨ２受容体は、アレルギー性炎症に関連する細胞型、例えば好塩基球、好酸球およびＴｈ２型免疫性ヘルパー細胞の上で発現されることが示されている（Ｈｉｒａｉら；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００１、１９３、２５５〜２６１頁）。ＣＲＴＨ２受容体は、これらの細胞型でＰＧＤ２媒介細胞移動を媒介すること（Ｈｉｒａｉら；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００１、１９３、２５５〜２６１頁）、また、接触性皮膚炎のモデルにおいて好中球および好酸球細胞の動員で主要な役割をすること（Ｔａｋｅｓｈｉｔａら；Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００４、１６、９４７〜９５９頁）が示されている。二重のＣＲＴＨ２およびトロンボキサンＡ２受容体アンタゴニストであるラマトロバン｛（３Ｒ）−３−［（４−フルオロフェニル）スルホニル−アミノ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−プロパン酸｝が、これらの応答を弱めることが示されている（Ｓｕｇｉｍｏｔｏら；Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２００３、３０５、３４７〜３５２頁；Ｔａｋｅｓｈｉｔａら；前掲書）。アレルギー性炎症を強め、炎症性応答を誘導するＰＧＤ２の両能力が、マウスおよびラットで証明されている。ＰＧＤ２合成酵素を過剰発現するトランスジェニックマウスは、アレルゲンチャレンジに応じて肺好酸球増加症の高進およびＴｈ２サイトカインレベルの増加を示す（Ｆｕｊｉｔａｎｉら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００２、１６８、４４３〜４４９頁）。さらに、外部から投与されたＣＲＴＨ２アゴニストは、感作されたマウスでアレルギー応答を高める（Ｓｐｉｋら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００５、１７４、３７０３〜３７０８頁）。ラットでは、外部から加えられるＣＲＴＨ２アゴニストは肺好酸球増加症を引き起こすが、ＤＰアゴニスト（ＢＷ  ２４５Ｃ）またはＴＰアゴニスト（Ｉ−ＢＯＰ）はいかなる影響も示さなかった（Ｓｈｉｒａｓｈｉら；Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ、２００５、３１２、９５４〜９６０頁）。これらの知見から、ＣＲＴＨ２アンタゴニストが、ＰＧＤ２によって媒介される疾患の治療のために価値ある特性を有する可能性があることが示唆される。
【０００４】
本発明者らの同時係属の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３６４４は、ＣＲＴＨ２受容体活性の調節に応答性である状態の治療に使用される医薬の製造のための、式［１］の化合物または薬学的に許容されるその塩、Ｎ−オキシド、水和物もしくは溶媒和物の使用を記載し、
【０００５】
【化１】
2010522731.tif 000002
【０００６】
上式で、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、完全もしくは部分フッ化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロプロピル、ハロ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲ６、−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＯ２、−ＣＮまたは基−ＯＲ９であり；
式中、各Ｒ６は、独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、完全もしくは部分フッ化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７、Ｒ８は、独立してＣ１〜Ｃ６アルキル、完全もしくは部分フッ化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−、アリール、ヘテロアリールまたは水素であり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、完全もしくは部分フッ化Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−または基−ＳＯ２Ｒ６であり；
Ａは、−ＣＨＲ１０−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−Ｏ−または−ＮＲ１０−であり、式中、ｎは０〜２の整数であり、Ｒ１０は水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたは完全もしくは部分フッ化Ｃ１〜Ｃ３アルキル基であり；
Ｂは、直接結合、またはいずれかの方向の−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨＲ１１−、−ＣＲ１１Ｒ１２−、−ＣＨ２ＣＨＲ１１−、いずれかの方向の−ＣＨ２ＣＲ１１Ｒ１２−、いずれかの方向の−ＣＨＲ１１ＣＨＲ１２−、および式−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｐ−Ｚ−の二価の基から選択される二価の基であり、式中ＺはＲ１、Ｒ２およびＲ３を有する環に結合され、上式で、
Ｒ１１は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、シクロプロピルまたは完全もしくは部分フッ化Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ１２は、メチルまたは完全もしくは部分フッ化メチルであり；
ｐは、独立して１または２であり；
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｓ（Ｏ）ｎ−であって式中ｎは０〜２の整数であり；
Ｘは、カルボン酸、テトラゾール、３−ヒドロキシイソオキサゾール、ヒドロキサム酸、ホスフィネート、ホスホネート、ホスホンアミドまたはスルホン酸の基、または式Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ２Ｒ６もしくはＳＯ２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ８の基であり；
Ｙは、アリール、ヘテロアリール、アリール縮合ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール縮合シクロアルキル、ヘテロアリール縮合ヘテロシクロアルキルまたはアリール縮合シクロアルキル基である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３６４４
【特許文献２】国際公開第９７／０３０９４号
【特許文献３】国際公開第９７／０２２８９号
【特許文献４】国際公開第２００５／０２６１２４号
【特許文献５】国際公開第２００３／０５３９３０号
【特許文献６】ＥＰ１０５２２６４
【特許文献７】ＥＰ１２４１１７６
【特許文献８】国際公開第２００２／４２２９８号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂｏｙｃｅ；Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｐｒｏｃ．、２００４、２５、２７〜３０頁
【非特許文献２】Ｌｅｗｉｓら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８２、１２９、１６２７〜１６３１頁
【非特許文献３】Ｒｏｂｅｒｔｓ；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９８０、３０３、１４００〜１４０４頁
【非特許文献４】Ｎａｃｌｅｒｉｏら；Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１９８３、１２８、５９７〜６０２頁
【非特許文献５】Ｂｒｏｗｎら；Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌａｒｙｎｏｌ．Ｈｅａｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇ．、１９８７、１１３、１７９〜１８３頁
【非特許文献６】Ｌｅｂｅｌら；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８８、８２、８６９〜８７７頁
【非特許文献７】Ｍｕｒｒａｙら；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９８６、３１５、８００〜８０４頁
【非特許文献８】Ｌｉｕら；Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１９９０、１４２、１２６〜１３２頁
【非特許文献９】Ｗｅｎｚｅｌら；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９１、８７、５４０〜５４８頁
【非特許文献１０】Ｈｅａｖｅｙら；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８６、７８、４５８〜４６１頁
【非特許文献１１】Ｂｏｉｅら；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５、２７０、１８９１０〜１８９１６頁
【非特許文献１２】Ｎａｇａｔａら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、１６２、１２７８〜１２８９頁
【非特許文献１３】Ｐｏｗｅｌｌ；Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｌｕｅｋｏｔ．Ｅｓｓｅｎｔ．Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ、２００３、６９、１７９〜１８５頁
【非特許文献１４】Ｈｉｒａｉら；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００１、１９３、２５５〜２６１頁
【非特許文献１５】Ｔａｋｅｓｈｉｔａら；Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００４、１６、９４７〜９５９頁
【非特許文献１６】Ｓｕｇｉｍｏｔｏら；Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２００３、３０５、３４７〜３５２頁
【非特許文献１７】Ｆｕｊｉｔａｎｉら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００２、１６８、４４３〜４４９頁
【非特許文献１８】Ｓｐｉｋら；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００５、１７４、３７０３〜３７０８頁
【非特許文献１９】Ｓｈｉｒａｓｈｉら；Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ、２００５、３１２、９５４〜９６０頁
【非特許文献２０】Ｆ．Ｊ．Ｌｅｉｎｗｅｂｅｒ、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．、１９８７；１８、３７９頁
【特許文献２】国際公開第９７／０３０９４号
【特許文献３】国際公開第９７／０２２８９号
【特許文献４】国際公開第２００５／０２６１２４号
【特許文献５】国際公開第２００３／０５３９３０号
【特許文献６】ＥＰ１０５２２６４
【特許文献７】ＥＰ１２４１１７６
【特許文献８】国際公開第２００２／４２２９８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、上記の本発明者らの同時係属出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３６４４が関係するものと同じ構造クラスであるが、その中で具体的に開示されていない特定の化合物群を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、
［３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メトキシカルボニルアミノベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸、
（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸、
｛４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）ベンジル］キノリン−５−イルオキシ｝酢酸、
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸、
［３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−８−フルオロ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
ならびにその塩、Ｎ−オキシド、水和物および溶媒和物
からなる群から選択される化合物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明が関係する化合物は、ＣＲＴＨ２受容体アンタゴニストである。
【００１２】
本発明の第２の態様は、ＣＲＴＨ２受容体活性の調節に応答性である状態の治療方法であって、そのような疾患に罹った患者に、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩、Ｎ−オキシド、水和物もしくは溶媒和物の有効量を投与することを含む方法である。
【００１３】
そのような疾患の例には、喘息、鼻炎、アレルギー性気道症候群、アレルギー性鼻気管支炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、鼻ポリポーシス、サルコイドーシス、農夫肺、肺線維症、嚢胞性線維症、慢性咳嗽、結膜炎、アトピー性皮膚炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、エイズ認知症複合症候群、ハンチントン病、前頭側頭骨認知症、レーヴィ小体認知症、血管認知症、ギランバレー症候群、慢性脱髄性多発神経根筋障害、多巣性運動ニューロパチー、神経叢病、多発性硬化症、脳脊髄炎、全脳炎、小脳変性および脳脊髄炎、ＣＮＳ外傷、片頭痛、脳卒中、関節リウマチ、強直性脊椎炎、ベーチェット病、滑液包炎、手根管症候群、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、皮膚筋炎、エーラース−ダンロス症候群（ＥＤＳ）、線維筋痛、筋筋膜痛、骨関節炎（ＯＡ）、骨壊死、乾癬性関節炎、ライター症候群（反応性関節炎）、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、軟組織疾患、スチル病、腱炎、結節性多発性動脈炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、筋炎（多発筋炎皮膚筋炎）、痛風、アテローム性動脈硬化症、エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｉ型糖尿病、腎炎症候群、糸球体腎炎、急性および慢性腎不全、好酸球増加筋膜炎、過剰ＩｇＥ症候群、敗血症、敗血症性ショック、心臓の虚血性再灌流傷害、移植後の同種異系移植片拒絶反応ならびに移植片対宿主病が含まれる。
【００１４】
しかし、本発明が関係する化合物は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、鼻炎、アレルギー性気道症候群またはアレルギー性鼻気管支炎を治療するのに主に有用である。乾癬、アトピー性および非アトピー性皮膚炎、クローン病、潰瘍性大腸炎および過敏性腸疾患は、本化合物が特に有用であり得る他の具体的な状態である。
【００１５】
本明細書で用いるように、用語「塩」は、塩基付加塩、酸付加塩および第四級塩を含む。酸性である本発明の化合物は、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウム；アルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化カルシウム、水酸化バリウムおよび水酸化マグネシウムなどの塩基；有機塩基、例えばＮ−メチル−Ｄ−グルカミン、コリントリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミンなどと、薬学的に許容される塩を含む塩を形成することができる。塩基を有する具体的な塩には、ベンザチン、カルシウム、ジオラミン、メグルミン、オラミン、カリウム、プロカイン、ナトリウム、トロメタミンおよび亜鉛の塩が含まれる。塩基性である本発明の化合物は、無機酸、例えば塩酸もしくは臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸などと、ならびに有機酸、例えば酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、安息香酸、ベンゼンスンホン酸、グルタミン酸、乳酸およびマンデル酸などと、薬学的に許容される塩を含む塩を形成することができる。化合物が第四級アンモニウム基を含む場合、許容される対イオンは、例えば、塩化物、臭化物、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）、ナパジシル酸塩（ナフタレン−１，５−二スルホン酸塩もしくはナフタレン−１−（スルホン酸）−５−スルホン酸塩）、エジシル酸塩（エタン−１，２−二スルホン酸塩もしくはエタン−１−（スルホン酸）−２−スルホン酸塩）、イセチオン酸塩（２−ヒドロキシエチルスルホン酸塩）、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メシレート、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、キシナホ酸塩、ｐ−アセトアミドベンゾエートなどでもよく、第四級アンモニウム種の数は、その化合物が純電荷を有しないように、薬学的に許容される塩と均衡する。
【００１６】
本発明が関係する化合物のプロドラッグ、例えばエステルの使用も、本発明の一部である。「プロドラッグ」は、代謝手段によって（例えば加水分解、還元または酸化によって）、式（Ｉ）の化合物にインビボで変換可能な化合物を意味する。例えば、式（Ｉ）の化合物のエステルプロドラッグは、インビボで加水分解によって親分子に変換できる。式（Ｉ）の化合物の適するエステルは、例えば、酢酸エステル、クエン酸エステル、乳酸エステル、酒石酸エステル、マロン酸エステル、シュウ酸エステル、サリチル酸エステル、プロピオン酸エステル、コハク酸エステル、フマル酸エステル、マレイン酸エステル、メチレン−ビス−β−ヒドロキシナフトエート、ゲンチシル酸エステル、イセチオン酸エステル、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸エステル、メタンスルホン酸エステル、エタンスルホン酸エステル、ベンゼンスルホン酸エステル、ｐ−トルエンスルホン酸エステル、シクロヘキシルスルファミン酸エステルおよびキナ酸エステルである。エステルプロドラッグの例は、Ｆ．Ｊ．Ｌｅｉｎｗｅｂｅｒ、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．、１９８７；１８、３７９頁に記載のものである。本明細書で用いるように、式（Ｉ）の化合物への言及は、プロドラッグの形態も含むものとする。
【００１７】
組成物
上記のように、本発明が関係する化合物はＣＲＴＨ２受容体アンタゴニストであり、そのような調節が有益である疾患の治療に有用である。そのような疾患の例は上で言及され、例えば喘息、鼻炎、アレルギー性気道症候群およびアレルギー性鼻気管支炎が含まれる。
【００１８】
任意の特定の患者のための特定の用量レベルが、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与回数、投与経路、排出速度、薬剤組合せおよび治療する特定の疾患の重症度を含む様々な因子によって決まることが理解されよう。医薬分野で必要とされているように、投薬の最適な用量レベルおよび頻度は、臨床試験によって決定される。一般に、日用量範囲は、単回用量または分割用量による、哺乳動物の体重１ｋｇにつき約０．００１ｍｇから約１００ｍｇ、多くの場合１ｋｇにつき０．０１ｍｇから約５０ｍｇ、例えば１ｋｇにつき０．１から１０ｍｇの範囲内である。また場合によっては、これらの限度外の投薬量を用いることが必要であることもある。
【００１９】
本発明が関係する化合物は、それらの薬物動態特性と整合した任意の経路による投与のために調製することができる。経口的投与可能な組成物は、錠剤、カプセル、粉末、粒剤、ロゼンジ、液状もしくはゲル状の調製物、例えば経口用、局所用または滅菌された非経口溶液または懸濁液の形態であることができる。経口投与のための錠剤およびカプセルは、単位用量で提供する形態であることができ、従来の賦形剤、例えば結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴムもしくはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールもしくはグリシン；錠剤成形滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールもしくはシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン、または許容される湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含むことができる。錠剤は、通常の製薬業務で公知である方法によってコーティングすることができる。経口用液状調製物は、例えば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳剤、シロップ剤またはエリキシルの形態をとることができ、または、使用時に水または他の適する媒体によって再構成するための乾燥品として提供することができる。そのような液状調製物は、従来の添加剤、例えば懸濁剤、例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水素化食用脂；乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートもしくはアカシア；非水性媒体（食用油を含むことができる）、例えばアーモンドオイル、ヤシ油、油性エステル、例えばグリセリン、プロピレングリコールもしくはエチルアルコール；防腐剤、例えばメチルもしくはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸、および所望により従来の着香剤または着色剤を含むことができる。
【００２０】
皮膚への局所投与のために、薬剤をクリーム、ローションまたは軟膏に組み込むことができる。薬剤のために用いることができるクリームまたは軟膏製剤は、当技術分野で公知の従来の製剤、例えば英国薬局方などの薬剤学の標準教科書に記載のものである。
【００２１】
薬剤は、吸入のために、例えば鼻内噴霧、または乾燥粉末もしくはエアゾール吸入剤として製剤化することもできる。吸入による送達のために、活性化合物は微小粒子の形であるのが好ましい。それらは、噴霧乾燥、凍結乾燥および微粉化を含む様々な技術によって調製することができる。エアゾール発生は、例えば圧力作動ジェット噴霧器または超音波噴霧器を用いて、好ましくは、噴射剤作動計量器付エアゾールまたは、例えば吸入カプセルもしくは他の「乾燥粉末」送達系からの微粉化活性化合物の噴射剤なしの投与を用いて実施することができる。
【００２２】
有効成分は、滅菌媒体に入れて非経口的に投与することもできる。用いるビヒクルおよび濃度によって、薬剤をビヒクル中に懸濁または溶解させることができる。有利には、局部麻酔薬、防腐剤および緩衝剤などの補助剤を、ビヒクルに溶解させることができる。
【００２３】
プロスタグランジン媒介性疾患の予防および治療のために、他の化合物を本発明の化合物と組み合わせることができる。したがって、本発明は、ＰＧＤ２媒介性疾患を予防および治療するための、本発明の化合物の治療有効量および１つまたは複数の他の治療剤を含む、医薬組成物にも関係する。本発明の化合物との併用療法に適する治療剤には、それらに限定されないが、以下のものが含まれる。（１）フルチカソン、ブデソニドまたはシクレソニドなどのコルチコステロイド；（２）サルメテロール、ホルメテロールまたはインダカテロールなどのβ２−アドレナリン受容体アゴニスト；（３）ロイコトリエン調節因子、例えばモンテルカストもしくはプランルカストなどのロイコトリエンアンタゴニストまたはＺｉｌｅｕｔｏｎもしくはＢＡＹ−ｘ１００５などのロイコトリエン生合成阻害剤；（４）抗コリン作用薬、例えば臭化チオトロピウムなどのムスカリン−３（Ｍ３）受容体アンタゴニスト；（５）ロフルミラストまたはシロミラストなどのホスホジエステラーゼ−ＩＶ（ＰＤＥ−ＩＶ）阻害剤；（６）抗ヒスタミン薬、例えばロラチジンまたはアステミゾールなどの選択的ヒスタミン−１（Ｈ１）受容体アンタゴニスト；（７）コデインまたはデキストラモルファンなどの鎮咳剤；（８）イブプロフェンまたはケトプロフェンなどの非選択的ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２阻害剤；（９）セレコキシブおよびロフェコキシブなどのＣＯＸ−２阻害剤；（１０）国際公開第９７／０３０９４号および同第９７／０２２８９号に記載のものなどのＶＬＡ−４アンタゴニスト；（１１）ＴＮＦ−α阻害剤、例えばＲｅｍｉｃａｄｅおよびＣＤＰ−８７０などの抗ＴＮＦモノクローナル抗体、ならびにＥｎｂｒｅｌなどのＴＮＦ受容体免疫グロブリン分子；（１２）例えばＭＭＰ８、９および１２などのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤；（１３）国際公開第２００５／０２６１２４号および同第２００３／０５３９３０号に記載のものなどのヒト好中球エラスターゼ阻害剤；（１４）ＥＰ１０５２２６４およびＥＰ１２４１１７６に記載のものなどのアデノシンＡ２ａアゴニスト（１５）国際公開第２００２／４２２９８号に記載のものなどのアデノシンＡ２ｂアンタゴニスト；（１６）ケモカイン受容体機能の調節因子、例えばＣＣＲ３およびＣＣＲ８のアンタゴニスト；（１７）他のプロスタノイド受容体の作用を調節する化合物、例えばＰＧＤ２（ＤＰ）受容体アンタゴニストまたはトロンボキサンＡ２アンタゴニスト；ならびに（１８）Ｔｈ２機能を調節する化合物、例えばＰＰＡＲアゴニスト。
【００２４】
第２の有効成分に対する本発明の化合物の重量比は異なってもよく、各成分の有効量によって決まる。一般に、各々の有効量が用いられる。
【００２５】
以下の実施例は、本発明の化合物の調製を記載する：
【実施例】
【００２６】
次に、本発明を以下の実施例に関して記載する。本発明を例示として記載するにすぎず、本発明の範囲を逸脱せずに詳細の修正を加えることができることは理解されよう。
【００２７】
Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ（４００ＭＨｚ）分光器を三重共鳴５ｍｍプローブ分光器と用いて、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを周囲温度で記録した。化学シフトを、テトラメチルシランと比較してｐｐｍで表す。以下の略記号を用いた：ｂｒｓ＝広範一重項、ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｄｄ＝倍二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項。
【００２８】
保持時間および関連する質量イオンを判定する質量分析（ＬＣＭＳ）実験を、以下の方法を用いて実施した：
方法Ａ：実験は、Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｃｌｉｐｅｕｓ  Ｃ１８  ５μｍ  １００×３．０ｍｍカラムおよび２ｍＬ／分の流量を用いて、陽イオンエレクトロスプレーおよび単一波長ＵＶ  ２５４ｎｍ検出によりＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＬＣＴ分光器で実施した。初期溶媒系は、最初の１分間は０．１％ギ酸を含む９５％水（溶媒Ａ）および０．１％ギ酸を含む５％アセトニトリル（溶媒Ｂ）であり、続く次の１４分間は、５％溶媒Ａおよび９５％溶媒Ｂまでの勾配であった。最終溶媒系を、さらなる２分間一定に保持した。
【００２９】
方法Ｂ：実験は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）３０×４．６ｍｍカラムおよび２ｍＬ／分の流量を用いて、陽性および陰性のイオンエレクトロスプレーおよびＥＬＳ／ダイオードアレイ検出によりＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＬＣ分光器で実施した。溶媒系は、最初の０．５０分間は９５％溶媒Ａおよび５％溶媒Ｂであり、続く次の４分間は５％溶媒Ａおよび９５％溶媒Ｂまでの勾配であった。最終溶媒系を、さらなる０．５０分間一定に保持した。
【００３０】
長さ１０ｃｍ、内径２ｃｍのカラム内でＧｅｎｅｓｉｓ７ミクロンＣ−１８結合シリカ固定相を用いて、逆相分取ＨＰＬＣ精製を実施した。用いた移動相は、アセトニトリルおよび水（両方とも０．１Ｖ／Ｖ％のギ酸で緩衝した）の混合液であり、１分につき１０ｍＬの流量、３０分から４０分間にわたって傾斜させた４０％から９０％の有機調整剤の一般的な勾配であった。求める生成物（ＬＣ−ＭＳ分析によって同定した）を含む分画をプールし、有機分画を蒸発によって除去し、残りの水性分画を凍結乾燥して、最終生成物を得た。
［実施例１］
【００３１】
［３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００３２】
【化２】
2010522731.tif 000003
【００３３】
調製物１ａ：（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）酢酸メチルエステル
３−アミノ−４−フルオロフェノール（３．０ｇ）を、０℃のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中の水素化ナトリウムの攪拌懸濁液（油に６０％、０．９４ｇ）に加えた。混合液を室温に１５分間温め、次に０℃に冷却させ、この混合液をブロモ酢酸メチルエステル（３．３ｇ）で処理した。生じた混合液を室温に温め、次にこの温度で２時間攪拌した。混合液を希塩化アンモニウム水溶液で処理し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。トルエン、ジクロロメタンおよび酢酸エチル（容量で２：１：０から０：１：０から０：２０：１）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる残留物を精製し、標題化合物２．７ｇを得た。
【００３４】
1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (s, 3H), 4.65 (s, 2H), 5.15 (br s, 2H), 6.00 (dt, J = 3.1, 8.8 Hz, 1H), 6.30 (dd, J = 3.1, 7.6 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 8.8, 11.2 Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法B): 200 (M+H)+, 保持時間2.5分.
調製物１ｂ：２−（４−シアノベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステル
０℃のテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４．７ｇ）の懸濁液を、ｔｅｒｔ−ブタノール（５．０ｍＬ）および３−オキソ酪酸エチルエステル（５．０ｍＬ）の混合液で処理し、生じた混合液を室温で４５分間攪拌した。混合液をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中の４−ブロモメチルベンゾニトリル（６．９ｇ）の溶液で処理し、生じた混合液を７０℃で２０時間加熱した。混合液を室温に冷却し、水で希釈し、減圧下でテトラヒドロフランを除去した。残留物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物をジエチルエーテルで磨砕し、オフホワイトの固体として標題化合物２．９ｇを得た。
【００３５】
MS: ESI (+ve) (方法B): 260 (M+H)+, 保持時間3.2分.
調製物１ｃ：［３−（４−シアノベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−ヒドロキシキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）酢酸メチルエステル（０．９０ｇ）、２−（４−シアノベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステル（１．２ｇ）、ポリリン酸（５．０ｇ）および１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）の混合液を、１００℃で１８時間加熱した。混合液を室温に冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。シクロヘキサンおよび酢酸エチルの混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製し、標題化合物０．１８ｇを得た。
【００３６】
MS: ESI (+ve) (方法B): 395 (M+H)+, 保持時間2.9分.
調製物１ｄ：［３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
［３−（４−シアノベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−ヒドロキシキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．１７ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）、炭酸カリウム（０．０９０ｇ）および酢酸クロロジフルオロメチルエステル（０．１４ｍＬ）の混合液を、８０℃で６時間攪拌した。混合液を室温に冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、シクロヘキサンおよび酢酸エチルの混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製した。ジクロロメタンおよび酢酸エチルの混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによるさらなる精製により、標題化合物０．１２ｇを得た。
【００３７】
1H NMR (CDCl3): δ 1.30 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 2.85 (q, J = 7.5 Hz, 2H),3.85 (s, 3H), 4.45 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 6.70 (dd, J = 3.7, 8.7 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 75 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.30 (dd, J = 8.7, 9.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
MS: ESI (+ve) (方法B): 445 (M+H)+, 保持時間3.6分.
調製物１ｅ：［３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸
テトラヒドロフラン（５．０ｍＬ）中の［３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．１２ｇ）の溶液を１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．５２ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で１時間攪拌した。有機溶媒を減圧下で除去し、１．０Ｍ塩酸水の添加によって残留物のｐＨを４〜５に調節した。混合液を酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、水およびメタノールの混合液で溶出するＣ−１８カラムによるカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、標題化合物０．０６５ｇを得た。
【００３８】
1H NMR (CDCl3): δ 1.25 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 2.90 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.75 (dd, J = 3.6, 8.8 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 75 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 8.8, 9.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 431 (M+H)+, 保持時間10.9分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 431 (M+H)+, 保持時間3.3分.
［実施例２］
【００３９】
［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００４０】
【化３】
2010522731.tif 000004
【００４１】
調製物２ａ：２−（４−ブロモベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステル
標題化合物は、（３−オキソ酪酸エチルエステルおよび１−ブロモ−４−ブロモメチルベンゼンを用いて、調製物１ｂの方法によって調製した。
【００４２】
1H NMR (CDCl3): δ 1.05 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 3.10 (m, 2H), 3.75 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.15 (m, 2H), 7.05 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
調製物２ｂ：［３−（４−ブロモベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−ヒドロキシキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）酢酸メチルエステルおよび２−（４−ブロモベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステルを用いて、調製物１ｃの方法によって調製した。
【００４３】
MS: ESI (+ve) (方法B): 448 (M+H)+, 保持時間3.2分.
調製物２ｃ：［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、［３−（４−ブロモベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−ヒドロキシキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステルおよび酢酸クロロジフルオロメチルエステルを用いて、調製物１ｄの方法によって調製した。
【００４４】
MS: ESI (+ve) (方法B): 498 (M+H)+, 保持時間4.1分.
調製物２ｄ：［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸
［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．２０ｇ）、メタノール（８．０ｍＬ）および水（０．３２ｍＬ）の混合液を５．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．４０ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で３０分間攪拌した。氷酢酸の添加によって混合液を酸性化し、減圧下で濃縮した。残留物を水で希釈し、生じた沈殿物をろ過によって収集し、水で洗浄し、次に乾燥させて、淡いサクラソウ色の固体として標題化合物０．１３ｇを得た。
【００４５】
1H NMR (DMSO-d6): δ 1.20 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 2.75 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 4.25 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 6.80 (dd, J = 3.7, 5.1 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.40 (m, 3H), 7.80 (t, J = 75 Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 484 (M+H)+, 保持時間12.7分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 484 (M+H)+, 保持時間3.8分.
［実施例３および実施例４］
【００４６】
［４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸および［２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００４７】
【化４】
2010522731.tif 000005
【００４８】
調製物３ａおよび４ａ：３−（４−メタンスルホニルベンジル）ヘキサン−２，４−ジオン
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）中のヘキサン−２，４−ジオン（３．５ｇ）の溶液を、０℃のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（油に６０％、１．１ｇ）の攪拌懸濁液に、１５分間にわたって滴下した。混合液を室温まで温め、−１０℃に冷却し、次に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の１−ブロモメチル−４−メタンスルホニルベンゼン（８．９ｇ）の溶液で処理した。生じた混合液を室温に温め、次にこの温度で一晩攪拌した。混合液を１．０Ｍ塩酸水（１００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で希釈し、次に酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。トルエンおよび酢酸エチル（容量で１：０から０：１）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる残留物の精製により、無色オイルとして標題化合物３．６ｇを得た。
【００４９】
MS: ESI (-ve) (方法B): 281 (M-H)-, 保持時間2.7分.
調製物３ｂおよび４ｂ：４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−オールおよび２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−オール
３−アミノ−４−フルオロフェノール（０．８１ｇ）、３−（４−メタンスルホニルベンジル）ヘキサン−２，４−ジオン（１．８ｇ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．１ｇ）の混合液を１５０℃で１．５時間加熱し、次に室温で一晩静置した。混合液を３−アミノ−４−フルオロフェノールのさらなる部分（０．８１ｇ）で処理し、１５０℃で２時間加熱し、次に室温に冷却した。トルエンおよび酢酸エチルの混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製で、４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−オールを蜂蜜色のガム／ガラス０．２２ｇとして得、２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−オールを蜂蜜色のガム／ガラス０．７３ｇとして得た。
【００５０】
４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−オール
MS: ESI (+ve) (方法B): 374 (M+H)+, 保持時間2.3分.
２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−オール
MS: ESI (+ve) (方法B): 374 (M+H)+, 保持時間2.4分.
調製物３ｃ：［４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチル−キノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．０ｍＬ）中の４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−オール（０．２２ｇ）の溶液を炭酸カリウム（０．１２ｇ）およびブロモ酢酸メチルエステル（０．０７８ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で２時間攪拌した。混合液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、シクロヘキサンおよび酢酸エチル（容量で１：０から０：１）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製し、蜂蜜色のガムとして標題化合物０．０８３ｇを得た。
【００５１】
1H NMR (CDCl3): δ 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 2.65 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 3.35 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.40 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 6.65 (dd, J = 4.0, 8.7 Hz, 1H), 7.20-7.25 (m, 3H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H).
調製物４ｃ：［２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−オールおよびブロモ酢酸メチルエステルを用いて、調製物３ｃの方法によって調製した。
【００５２】
MS: ESI (+ve) (方法B): 446 (M+H)+, 保持時間3.6分.
調製物３ｄ：［４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
メタノール（５．０ｍＬ）および水（０．５０ｍＬ）中の［４−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−２−メチル−キノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．０８０ｇ）の溶液を５．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．２５ｍＬ）で処理し、生じた溶液を室温で２時間攪拌した。氷酢酸の添加によって混合液を酸性化し、減圧下で濃縮し、次に酢酸エチルと水に分配した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、サクラソウ色粉末として標題化合物０．０３１ｇを得た。
【００５３】
1H NMR (DMSO-d6): δ 1.10 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 2.50 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 3.30 (q, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.80 (s, .2H), 6.80 (dd, J = 4.0, 8.7 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 8.7, 10.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 2H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 432 (M+H)+, 保持時間7.3分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 432 (M+H)+, 保持時間2.6分..
調製物４ｄ：［２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
メタノール（１５ｍＬ）および水（１．５ｍＬ）中の２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メタンスルホニルベンジル）−４−メチルキノリン−５−オール（０．４１ｇ）の溶液を５．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．７５ｍＬ）で処理し、生じた溶液を室温で２時間攪拌した。氷酢酸の添加によって混合液を酸性化し、減圧下で濃縮し、酢酸エチルと水に分配した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、白色粉末として標題化合物０．０８２ｇを得た。
【００５４】
1H NMR (DMSO-d6): δ 1.15 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 2.75 (s, 3H), 2.85 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 3.15 (s, 3H), 4.40 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 6.85 (dd, J = 4.0, 8.7 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 8.7, 10.1 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 13.0 (br s, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 432 (M+H)+, 保持時間10.9分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 432 (M+H)+, 保持時間3.3分.
［実施例５］
【００５５】
［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メトキシカルボニルアミノベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００５６】
【化５】
2010522731.tif 000006
【００５７】
調製物５ａ：［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メトキシカルボニルアミノベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
［３−（４−ブロモベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．３０ｇ）、カルバミン酸メチルエステル（０．０９０ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０２８ｇ）、Ｘａｎｔｐｈｏｓ（０．０５２ｇ）、炭酸セシウム（０．４３ｇ）および１，４−ジオキサン（３．０ｍＬ）の混合液を、１００℃で５時間加熱した。混合液を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、Ｈｉ−Ｆｌｏの層を通してろ過した。溶媒を減圧下で除去して、黄色ガムとして標題化合物０．４６ｇを得た。
【００５８】
MS: ESI (+ve) (方法B): 493 (M+H)+, 保持時間3.8分.
調製物５ｂ：［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メトキシカルボニルアミノベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸
メタノール（６．４ｍＬ）および水（０．６４ｍＬ）中の［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（４−メトキシカルボニルアミノベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．６１ｇ）の溶液を５．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（１．６ｍＬ）で処理し、生じた溶液を室温で２時間攪拌した。氷酢酸の添加によって混合液を酸性化し、減圧下で濃縮し、酢酸エチルと水に分配した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、サクラソウ色固体として標題化合物０．０３２ｇを得た。
【００５９】
1H NMR (CDCl3): δ 1.10 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 2.80. (q, J = 7.4 Hz, 2H), 3.60 (s, 3H), 4.20 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.90-6.95 (m, 3H), 7.20 (t, J = 75 Hz, 1 H), 7.30 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 8.9, 10.1 Hz, 1H), 9.50 (s, 1H), 13.00 (br s, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 479 (M+H)+, 保持時間10.2分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 479 (M+H)+, 保持時間3.2分.
［実施例６］
【００６０】
［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００６１】
【化６】
2010522731.tif 000007
【００６２】
調製物６ａ：２−（３−メタンスルホニルベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステル
標題化合物は、３−オキソペンタン酸エチルエステルおよび１−ブロモメチル−３−メタンスルホニルベンゼンを用いて、調製物１ｂの方法によって調製した。
【００６３】
1H NMR (CDCl3): δ 1.05 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 2.40 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 3.05 (s, 3H), 3.25 (m, 2H), 3.80 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.15 (m, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.80 (m, 2H).
調製物６ｂ：［２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）酢酸メチルエステルおよび２−（３−メタンスルホニルベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステルを用いて、調製物１ｃの方法によって調製した。
【００６４】
MS: ESI (+ve) (方法B): 448 (M+H)+, 保持時間2.6分.
調製物６ｃ：［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、［２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステルおよび酢酸クロロジフルオロメチルエステルを用いて、調製物１ｄの方法によって調製した。
【００６５】
MS: ESI (+ve) (方法B): 498 (M+H)+, 保持時間3.6分.
調製物６ｄ：［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸
メタノール（１０ｍＬ）中の［４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−（３−メタンスルホニルベンジル）キノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．５４ｇ）の溶液を１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６．０ｍＬ）で処理し、生じた溶液を室温で２時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、ジクロロメタンで洗浄した。水相を氷酢酸の添加によって酸性化し、ジクロロメタンで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、淡黄色固体として標題化合物０．２７ｇを得た。
【００６６】
1H NMR (CDCl3): δ 1.25 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 2.85 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 3.00 (s, 3H), 4.45 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 6.80 (dd, J = 3.6, 8.7 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 75 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.75 (d,. J = 7.8 Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 484 (M+H)+, 保持時間9.5分.
［実施例７］
【００６７】
（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸
【００６８】
【化７】
2010522731.tif 000008
【００６９】
調製物７ａ（Ｓ）−２−（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）プロピオン酸メチルエステル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の３−アミノ−４−フルオロフェノール（４．１ｇ）の溶液を、０℃のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）中の水素化ナトリウム（油に６０％、１．３ｇ）の攪拌懸濁液に滴下した。混合液を室温で３０分間攪拌し、０℃に冷却し、（Ｒ）−２−クロロプロピオン酸メチルエステル（４．０ｇ）を１回で加えた。生じた混合液を室温で一晩攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液で処理し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。ジクロロメタンおよび酢酸エチル（容量で１：０から３：２）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる残留物の精製により、黄金色オイルとして標題化合物２．５ｇを得た。
【００７０】
1H NMR (CDCl3): δ 1.55 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.75 (s, 3H), 4.65 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 6.15 (dt, J = 3.0, 8.8 Hz, 1H), 6.35 (dd, J = 3.0, 7.5 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 8.8, 10.6 Hz, 1H).
調製物７ｂ：２−（４−クロロベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステル
０℃の無水テトラヒドロフラン（１４０ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７．８ｇ）の懸濁液を、ｔｅｒｔ−ブタノール（０．３ｍＬ）および３−オキソペンタン酸エチルエステル（１０ｇ）の混合液で処理した。室温で３０分間攪拌した後に、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の１−ブロモメチル−４−クロロベンゼン（１４ｇ）の溶液を加え、生じた混合液を室温で６日間攪拌した。混合液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、ペンタンおよび酢酸エチル（容量で１：０から１０：１）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製し、黄色オイルとして標題化合物９．３ｇを得た。
【００７１】
調製物７ｃ：（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸メチルエステル
標題化合物は、（Ｓ）−２−（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）プロピオン酸メチルエステルおよび２−（４−クロロベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステルを用いて、調製物１ｃの方法によって調製した。
【００７２】
調製物７ｄ：（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸メチルエステル
標題化合物は、（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸メチルエステルおよび酢酸クロロジフルオロメチルエステルを用いて、調製物１ｄの方法によって調製した。
【００７３】
1H NMR (CDCl3): δ 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.75 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 2.85 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.20 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 16 Hz, 1H), 4.95 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 6.60 (dd, J = 3.5, 8.6 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 69, 82 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.10-7.30 (m, 3H).
調製物７ｅ：（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸
工業用変性アルコール（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［３−（４−クロロベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］プロピオン酸メチルエステル（１．５ｇ）の溶液を水（２．０ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（０．３２ｇ）の溶液で処理し、生じた溶液を室温で１時間攪拌した。混合液を、酢酸エチルおよび２．０Ｍ塩酸水に分配した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。トルエンおよび氷酢酸（容量で１：０から９：１）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製して、黄色固体として標題化合物０．８９ｇを得た。
【００７４】
1H NMR (DMSO-d6): δ 1.20 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.55 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 2.75 (m, 2H), 4.30 (m, 2H), 5.10 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 3.7, 9.0 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.25 (dd, J = 72, 79 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.50 (dd, J = 9.0, 10.1 Hz, 1H), 13.30 (br s, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 453 (M+H)+, 保持時間12.9分.
［実施例８］
【００７５】
｛４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）ベンジル］キノリン−５−イルオキシ｝酢酸
【００７６】
【化８】
2010522731.tif 000009
【００７７】
調製物８ａ：２−（４−アセチルベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステル
標題化合物は、３−オキソ酪酸エチルエステルおよび１−（４−ブロモメチルフェニル）エタノンを用いて、調製物１ｂの方法によって調製した。
【００７８】
1H NMR (CDCl3): δ 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.60 (m, 1H), 3.20 (m, 2H), 3.80 (t, J = 7.5 Hz; 1H), 4.15 (m, 2H), 7.25 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.85(d, J=8.5 Hz, 2H).
調製物８ｂ：［３−（４−アセチルベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、（３−アミノ−４−フルオロフェノキシ）酢酸メチルエステルおよび２−（４−アセチルベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステルを用いて、調製物１ｃの方法によって調製した。
【００７９】
MS: ESI (+ve) (方法B): 412 (M+H)+, 保持時間2.9分.
調製物８ｃ：［３−（４−アセチルベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、［３−（４−アセチルベンジル）−２−エチル−８−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステルおよび酢酸クロロジフルオロメチルエステルを用いて、調製物１ｄの方法によって調製した。
【００８０】
MS: ESI (+ve) (方法B): 462 (M+H)+, 保持時間4.0分.
調製物８ｄ：［３−（４−アセチルベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸
メタノール（５．０ｍＬ）中の［３−（４−アセチルベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．１３ｇ）の溶液を１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．５４ｍＬ）で処理し、生じた溶液を室温で３０分間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、０．１Ｍ塩酸水の添加によって酸性化した。混合液を酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、Ｃ−１８カラムによるカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、標題化合物０．２０ｇを得た。
【００８１】
1H NMR (CD3OD): δ 1.15 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.85 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.90 (dd, J = 3.7, 8.8 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 75 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 (dd, J= 8.8, 10.0 Hz, 1H), 7.90(d, J = 8.3 Hz, 2H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 448 (M+H)+, 保持時間10.4分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 448 (M+H)+, 保持時間3.7分.
調製物８ｅ：｛４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロ−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）ベンジル］キノリン−５−イルオキシ｝酢酸
テトラヒドロフラン（５．０ｍＬ）中の［３−（４−アセチルベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチル−８−フルオロキノリン−５−イルオキシ］酢酸（０．０６０ｇ）の溶液をメチルマグネシウムブロミド（３．０Ｍのジエチルエーテル溶液、０．５８ｍＬ）で処理し、生じた混合液を還流させながら２９時間加熱した。混合液を室温に冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をＣ−１８カラムによるカラムクロマトグラフィーによって精製し、標題化合物０．０１１ｇを得た。
【００８２】
1H NMR (DMSO-d6): δ 1.15 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.35 (s, 6H), 2.80 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 4.25 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.85 (s, 1H), 6.80 (dd, J = 3.7, 8.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.40 (dd, J = 8.8, 10.1 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 75 Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 464 (M+H)+, 保持時間10.0分.
MS: ESI (+ve) (方法B): 464 (M+H)+, 保持時間3.7分.
［実施例９］
【００８３】
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００８４】
【化９】
2010522731.tif 000010
【００８５】
調製物９ａ：（４−クロロ−３−ニトロフェノキシ）酢酸メチルエステル
４−クロロ−３−ニトロフェノール（２５ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）、炭酸カリウム（６０ｇ）およびブロモ酢酸メチルエステル（１５．５ｍＬ）の混合液を、室温で２．５時間攪拌した。混合液を酢酸エチルおよび水に分配し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。残留物をジエチルエーテルで洗浄して、白色固体として標題化合物３０ｇを得た。
【００８６】
1H NMR (CDCl3): δ 3.85 (s, 3H), 4.70 (s, 2H), 7.10 (dd, J = 3.0, 8.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 3.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.9 Hz, 1H).
調製物９ｂ：（３−アミノ−４−クロロフェノキシ）酢酸メチルエステル
メタノール（１００ｍＬ）中の（４−クロロ−３−ニトロフェノキシ）酢酸メチルエステル（３０ｇ）の溶液を、鉄（２６ｇ）、塩化アンモニウム（３３ｇ）および水（４００ｍＬ）の混合液に室温で加えた。生じた混合液を、６０℃の超音波浴内で４時間加熱した。混合液を水酸化ナトリウムの添加によって塩基性化し、次に酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を１．０Ｍ塩酸水で洗浄し、合わせた水相のｐＨを水酸化ナトリウムの添加によって７〜８に調節した。生じた沈殿物をろ過によって収集し、乾燥させて、標題化合物１４ｇを得た。
【００８７】
1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (s, 3H), 4.60 (s, 2H), 5.35 (br s, 2H), 6.10 (dd, J = 3.0, 8.8 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H).
調製物９ｃ：［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−エチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、（３−アミノ−４−クロロフェノキシ）酢酸メチルエステルおよび２−（４−シアノベンジル）−３−オキソペンタン酸エチルエステルを用いて、調製物１ｃの方法によって調製した。
【００８８】
MS: ESI (+ve) (方法B): 411 (M+H)+, 保持時間3.3分.
調製物９ｄ：［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−エチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．１９ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）および炭酸カリウム（０．１９ｇ）の−８０℃の混合液に、クロロジフルオロメタン（０．４ｍＬ）を加えた。フラスコを密封し、生じた混合液を室温に温め、次に４０℃で６時間攪拌した。過剰なクロロジフルオロメタンを蒸発させ、残留物を酢酸エチルおよび飽和塩化ナトリウム水溶液に分配した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。シクロヘキサンおよび酢酸エチル（容量で１：０から１：１）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製し、標題化合物０．１３ｇを得た。
【００８９】
MS: ESI (+ve) (方法B): 461 (M+H)+, 保持時間4.3分.
調製物９ｅ：［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．１３ｇ）の溶液を１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．５６ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で３時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、０．１Ｍ塩酸水の添加によってｐＨ４〜５に調節した。混合液を酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次に減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、標題化合物０．０８７ｇを得た。
【００９０】
1H NMR (CDCl3): δ 1.35 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 2.85 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.90 (s, 2H), 6.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 75 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 447 (M+H)+, 保持時間12.0分.
［実施例１０］
【００９１】
［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００９２】
【化１０】
2010522731.tif 000011
【００９３】
調製物１０ａ：２−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−３−オキソペンタン酸メチルエステル
標題化合物は、３−オキソペンタン酸メチルエステルおよび４−ブロモメチル−３−クロロベンゾニトリルを用いて、調製物１ｂの方法によって調製した。
【００９４】
MS: ESI (+ve) (方法B): 280 (M+H)+, 保持時間3.6分.
調製物１０ｂ：［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−２−エチル−４−ヒドロキシキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、（３−アミノ−４−クロロフェノキシ）酢酸メチルエステルおよび２−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−３−オキソペンタン酸メチルエステルを用いて、調製物１ｃの方法によって調製した。
【００９５】
MS: ESI (+ve) (方法B): 445 (M+H)+, 保持時間3.6分.
調製物１０ｃ：［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−２−エチル−４−ヒドロキシキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステルおよびクロロジフルオロメタンを用いて、調製物９ｄの方法によって調製した。
【００９６】
1H NMR (CDCl3): δ 1.35 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 2.80 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.50 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 75Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 1.6, 8.0Hz, 1H), 7.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.5 Hz, 1H).
調製物１０ｄ：［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
［８−クロロ−３−（２−クロロ−４−シアノベンジル）−４−ジフルオロメトキシ−２−エチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．２２ｇ）、テトラヒドロフラン（８．０ｍＬ）、メタノール（１．０ｍＬ）および水（１．０ｍＬ）の混合液を１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．９０ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で２時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、０．１Ｍ塩酸水の添加によってｐＨ４〜５に調節した。混合液を酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次に減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、標題化合物０．１１ｇを得た。
【００９７】
1H NMR (CDCl3): δ 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 2.80 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.70 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 75 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.70-7.75 (m, 2H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 481 (M+H)+, 保持時間13.0分.
［実施例１１］
【００９８】
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【００９９】
【化１１】
2010522731.tif 000012
【０１００】
調製物１１ａ：２−（４−シアノベンジル）−３−オキソチオ酪酸Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル
１，２−ジメトキシエタン（２０ｍＬ）中の３−オキソチオ酪酸Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５．０ｇ）の溶液を、−２０℃の１，２−ジメトキシエタン（５０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（油に６０％、１．２ｇ）の攪拌懸濁液に加えた。混合液を０℃に１５分間温め、−２０℃まで冷却し、次に、１，２−ジメトキシエタン（６０ｍＬ）中の４−ブロモメチルベンゾニトリル（８．４ｇ）の溶液を滴下した。生じた混合液を４５分間かけて室温に温め、次にこの温度で１８時間攪拌した。混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で希釈し、相を分離した。水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。シクロヘキサンおよび酢酸エチル（容量で１：０から３：２）の混合液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製し、標題化合物７．１ｇを得た。
【０１０１】
1H NMR (CDCl3): δ 1.40 (s, 9H), 2.25 (s, 3H), 3.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.20 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 6.8, 8.1 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
調製物１１ｂ：Ｎ−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（４−シアノベンジル）−３−オキソブチルアミド
トリフルオロ酢酸銀（１．１ｇ）を、室温の１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）中の３−アミノ−４−クロロフェノール（０．５６ｇ）および２−（４−シアノベンジル）−３−オキソチオ酪酸Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．９５ｇ）の攪拌溶液に加え、生じた混合液を室温で一晩攪拌した。混合液をＨｙ−Ｆｌｏでろ過し、１，２−ジメトキシエタンで洗浄し、次に減圧下で濃縮した。残留物をジクロロメタンで磨砕して、褐色固体として標題化合物０．５２ｇを得た。
【０１０２】
MS: ESI (+ve) (方法B): 343 (M+H)+, 保持時間2.9分.
調製物１１ｃ：４−（８−クロロ−２，５−ジヒドロキシ−４−メチルキノリン−３−イルメチル）ベンゾニトリル
Ｎ−（２−クロロ−５−ヒドロキシフェニル）−２−（４−シアノベンジル）−３−オキソブチルアミド（０．２３ｇ）、トルエン（２０ｍＬ）およびトルエン−４−スルホン酸一水和物（０．２６ｇ）の混合液を、１２０℃で２時間加熱した。混合液を室温に冷却し、飽和酢酸ナトリウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。残留物をメタノールで磨砕して、白色固体として標題化合物０．１６ｇを得た。
【０１０３】
1H NMR (DMSO-d6): δ 2.60 (s, 3H), 4.15 (s, 2H), 6.60 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.40 (m, 3H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 10.4 (br s, 1H).
調製物１１ｄ：［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ヒドロキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、４−（８−クロロ−２，５−ジヒドロキシ−４−メチルキノリン−３−イルメチル）ベンゾニトリルおよびブロモ酢酸メチルエステルを用いて、調製物３ｃの方法によって調製した。
【０１０４】
MS: ESI (+ve) (方法B): 397 (M+H)+, 保持時間3.5分.
調製物１１ｅ：［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ヒドロキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．０７９ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）および炭酸カリウム（０．０８３ｇ）の混合液を、クロロジフルオロメタンの雰囲気下において４０℃で２．５時間攪拌した。混合液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物をメタノールで磨砕し、標題化合物０．０７５ｇを得た。
【０１０５】
MS: ESI (+ve) (方法B): 447 (M+H)+, 保持時間4.4分.
調製物１１ｆ：［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
テトラヒドロフラン（３．０ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中の［８−クロロ−３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．０４２ｇ）の溶液を１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．３４ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で２時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、０．１Ｍ塩酸水の添加によってｐＨ４〜５に調節した。混合液を酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次に減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、標題化合物０．０２５ｇを得た。
【０１０６】
1H NMR (DMSO-d6): δ 2.80 (s, 3H), 4.30 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 6.95 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 72Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 433 (M+H)+, 保持時間12.0分.
［実施例１２］
【０１０７】
［３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−８−フルオロ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
【０１０８】
【化１２】
2010522731.tif 000013
【０１０９】
調製物１２ａ：２−（４−シアノベンジル）−Ｎ−（２−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−３−オキソブチルアミド
標題化合物は、３−アミノ−４−クロロフェノールおよび２−（４−シアノベンジル）−３−オキソチオ酪酸Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いて、調製物１１ｂの方法によって調製した。
【０１１０】
MS: ESI (+ve) (方法B): 327 (M+H)+, 保持時間2.8分.
調製物１２ｂ：４−（８−フルオロ−２，５−ジヒドロキシ−４−メチルキノリン−３−イルメチル）ベンゾニトリル
標題化合物は、２−（４−シアノベンジル）−Ｎ−（２−フルオロ−５−ヒドロキシフェニル）−３−オキソブチルアミドを用いて、調製物１１ｃの方法によって調製した
1H NMR (DMSO-d6): δ 2.60 (s, 3H), 4.10 (s, 2H), 6.50 (dd, J = 4.4, 8.7 Hz, 1H), 7.15 (m, 1H), 7.40 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 10.20 (br s, 1H), 11.50 (br s, 1H).
調製物１２ｃ：［３−（４−シアノベンジル）−８−フルオロ−２−ヒドロキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、４−（８−フルオロ−２，５−ジヒドロキシ−４−メチルキノリン−３−イルメチル）ベンゾニトリルおよびブロモ酢酸メチルエステルを用いて、調製物３ｃの方法によって調製した。
【０１１１】
MS: ESI (+ve) (方法B): 381 (M+H)+, 保持時間3.2分.
調製物１２ｄ：［３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−８−フルオロ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル
標題化合物は、［３−（４−シアノベンジル）−８−フルオロ−２−ヒドロキシ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステルおよびクロロジフルオロメタンを用いて、調製物１１ｅの方法によって調製した。
【０１１２】
MS: ESI (+ve) (方法B): 431 (M+H)+, 保持時間4.2分.
調製物１２ｅ：［３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−８−フルオロ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸
テトラヒドロフラン（３．０ｍＬ）および水（１．０ｍＬ）中の［３−（４−シアノベンジル）−２−ジフルオロメトキシ−８−フルオロ−４−メチルキノリン−５−イルオキシ］酢酸メチルエステル（０．０８９ｇ）の溶液を１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．４２ｍＬ）で処理し、生じた混合液を室温で１．５時間攪拌した。混合液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、０．１Ｍ塩酸水の添加によってｐＨ４〜５に調節した。混合液を酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次に減圧下で濃縮した。分取逆相ＨＰＬＣによって残留物を精製して、標題化合物０．０１５ｇを得た。
【０１１３】
1H NMR (DMSO-d6): δ 2.85 (s, 3H), 4.30 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.95 (dd, J = 4.0, 9.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.50 (dd, J = 9.0, 9.7 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.85 (t, J = 72 Hz, 1H).
MS: ESI (+ve) (方法A): 417 (M+H)+, 保持時間11.3分.
生物学的方法
本発明の化合物を、ＣＲＴＨ２受容体からＰＧＤ２を置換するそれらの能力、およびＣＲＴＨ２受容体でＰＧＤ２の機能的作用に拮抗するそれらの能力を判定するために、以下の生物学的試験方法を用いて試験した。
【０１１４】
放射性リガンド結合アッセイ
受容体結合アッセイを、２００μＬの結合緩衝液［１０ｍＭ  ＢＥＳ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ塩化マンガン、０．０１％ＢＳＡ］および１ｎＭ［３Ｈ］−ＰＧＤ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＫ社製）の最終容量で実施する。リガンドを、一定量（１容量％）のＤＭＳＯを含むアッセイ緩衝液に加える。アッセイ緩衝液中の１容量％のＤＭＳＯを用いて全結合を判定し、１０μＭの非標識ＰＧＤ２（Ｓｉｇｍａ）を用いて非特異的結合を判定する。ＣＲＴＨ２受容体を発現するヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞膜（３．５μｇ）を、１．５ｍｇのコムギ胚芽凝集素ＳＰＡビーズおよび１ｎＭ［３Ｈ］−ＰＧＤ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＫ社製）とインキュベートし、混合液を室温で３時間インキュベートする。結合した［３Ｈ］−ＰＧＤ２を、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  ＴＲＩＬＵＸ液体シンチレーション計数器（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて検出する。片対数化合物連続希釈による２反復の６点用量反応曲線を用いて、化合物のＩＣ５０値を判定する。ＩＣ５０値の計算は、ＥｘｃｅｌおよびＸＬｆｉｔ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を用いて実施し、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を用いて試験化合物のＫｉ値を求めるためにこの値を用いる。
【０１１５】
機能アッセイ
ＧＴＰγＳアッセイ
ＧＴＰγＳアッセイは、２００ｍＬアッセイ緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０μｇ／ｍＬサポニン）の最終容量で実施する。ＤＭＳＯ濃度は、１容量％で一定にする。ＰＧＤ２（３０ｎＭの最終濃度）およびＧＴＰ（１０μＭの最終濃度）の添加の前に、ＣＲＴＨ２受容体を発現するヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞膜（３．５μｇ）を３０℃で１５分間化合物とインキュベートする。次にアッセイ溶液を３０℃で３０分間インキュベートし、その後［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ（０．１ｎＭの最終濃度）を添加する。次にアッセイプレートを振盪し、３０℃で５分間インキュベートする。最後に、ＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＫ）を１．５ｍｇ／ウェルの最終濃度まで加え、プレートを振盪し、３０℃で３０分間インキュベートする。密封したプレートを３０℃で１０分間、１０００ｇで遠心分離し、結合した［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳをＭｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーション計数器（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で検出する。片対数化合物連続希釈による２反復の６点用量反応曲線を用いて、化合物のＩＣ５０値を判定する。ＩＣ５０値の計算は、ＥｘｃｅｌおよびＸＬｆｉｔ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を用いて実施し、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を用いて試験化合物のＫｉ値を求めるためにこの値を用いる。
【０１１６】
生物学的結果：
上の実施例の化合物を、上記のＣＲＴＨ２放射性リガンド結合アッセイおよびＧＴＰγＳ機能アッセイで試験した。全化合物は、両アッセイで１μＭ未満のＩＣ５０値を有する。例えば、実施例１の化合物はＣＲＴＨ２放射性リガンド結合アッセイで６．１ｎＭのＩＣ５０値を有し、実施例２の化合物はそのアッセイで７．５ｎＭのＩＣ５０値を有した。
【国際調査報告】
2010522731.tif 000014
2010522731.tif 000015
2010522731.tif 000016
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