(57)【要約】  β炭素の位置に（Ｓ）立体配置を有し（Ｓ）−ノルアドレナリンより親油性の高い式（Ｉ）のカテコールアミン又は関連化合物、その生理学的に許容される塩、そのプロドラッグ、生理的に機能するその誘導体又はその任意の混合物は、血管新生阻害剤として有用である。β水酸基が修飾されている式（ＩＩ）のカテコールアミン又は関連化合物も血管新生阻害性である。 2010516716.tif 000015【選択図】図２Ａ
2010516716.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管新生阻害剤としての、血管新生阻害に有効な量の式（Ｉ）
【化１】
2010516716.tif 000011
の化合物、その生理学的に許容される塩、そのプロドラッグ、生理的に機能するその誘導体又はその任意の混合物の使用であって、
前記血管新生阻害剤の親油性が（Ｓ）−ノルアドレナリンより高く、式中、
Ｒ１及びＲ７はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、若しくは脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すか、又はＲ１及びＲ７は結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し、
Ｒ２及びＲ’２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基若しくはＣＯＯＨを表すか、又はＲ２若しくはＲ’２の一方がＲ１と結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し、
Ｒ３は、ＯＲ８、ＳＲ８又はＮＲ８Ｒ９を表し（式中、Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、又は脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すが、但し、Ｒ８及びＲ９が両方ともアシル基であることはない）、
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、ＯＹ、ＮＨＹ又はＳＹを表し（式中、Ｙは
【化２】
2010516716.tif 000012
を表す（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基又はＣ３−１０シクロアルキル基を表す））、
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ及びＲ６ｃはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ１０又はＳＲ１０を表し（式中、Ｒ１０は、脂肪族酸又は芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表す）、
（Ｓ）は、前記化合物の（Ｓ）立体配置を規定するキラル中心を表し、
Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、Ｃ１−１０アシル基、Ｃ３−８窒素含有複素環基は、それぞれ独立に、１個又は複数のヘテロ原子Ｎ、Ｏ又はＳを含み又は含まず、独立に、１つ又は複数のＣ６−１０アリール基、Ｃ６−１８アルカリール基又はＣ６−１８アラルキル基で置換されておらず又は置換されており、
但し、Ｒ２及びＲ’２が両方ともＨである場合は、Ｒ１及びＲ７が両方ともＨであることはない、使用。
【請求項２】
前記化合物の光学純度が９５％以上である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化合物の光学純度が９７％以上である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記化合物の光学純度が９９％以上である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
Ｒ３がＯＲ８を表す、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
Ｒ８がＨを表す、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
血管新生阻害剤としての、血管新生阻害に有効な量の式（ＩＩ）
【化３】
2010516716.tif 000013
の化合物、その生理学的に許容される塩、そのプロドラッグ、生理的に機能するその誘導体又はその任意の混合物の使用であって、
式中、
Ｒ１及びＲ７はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、若しくは脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すか、又はＲ１及びＲ７は結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し、
Ｒ２及びＲ’２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基若しくはＣＯＯＨを表すか、又はＲ２若しくはＲ’２の一方がＲ１と結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し、
Ｒ１３は、ＯＲ１８、ＳＲ１８又はＮＲ１８Ｒ１９を表し（式中、Ｒ１８及びＲ１９はそれぞれ独立に、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、又は脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すが、但し、Ｒ１８及びＲ１９が両方ともアシル基であることはない）、
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、ＯＹ、ＮＨＹ又はＳＹを表し（式中、Ｙは
【化４】
2010516716.tif 000014
を表す（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基又はＣ３−１０シクロアルキル基を表す））、
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ及びＲ６ｃはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ１０又はＳＲ１０を表し（式中、Ｒ１０は、脂肪族酸又は芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表す）、
Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、Ｃ１−１０アシル基、Ｃ３−８窒素含有複素環基は、それぞれ独立に、１個又は複数のヘテロ原子Ｎ、Ｏ又はＳを含み又は含まず、独立に、１つ又は複数のＣ６−１０アリール基、Ｃ６−１８アルカリール基又はＣ６−１８アラルキル基で置換されておらず又は置換されている、使用。
【請求項８】
Ｒ１３がＯＲ１８を表す、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
Ｒ１８がＣ１−１０アルキル基を表す、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
Ｒ１８が−ＣＨ３を表す、請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
Ｒ７がＨを表す、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
Ｒ１がＣ１−１０アルキル基を表す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
Ｒ２及びＲ’２が両方ともＨを表す、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
Ｒ２がＨを表し、Ｒ’２が−ＣＨ２ＣＨ３を表す、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ及びＲ６ｃがそれぞれＨを表す、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
Ｒ４及びＲ５がそれぞれ独立にＯＹを表し、各Ｙが独立に、Ｈ、ピバロイル、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、イソブタノイル、ペンタノイル、２−ブテノイル、シクロプロパノイル、シクロヘキサノイル、ベンゾイル、４−メチルベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、フェナセチル、４−メチルフェナセチル、メトキシアセチル又はＮ，Ｎ−ジメチルアミドを表す、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ４及びＲ５がそれぞれＯＹを表し、各Ｙがピバロイルを表す、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
Ｒ４及びＲ５がそれぞれＯＹを表し、各ＹがＨを表す、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
前記化合物が、（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−プロピルノルアドレナリン、１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−（イソプロピルアミノ）−１（Ｓ）−ブタノール、エリスロ−（Ｄ，Ｌ）−ドパセリン、デキストロノルデフリン、（Ｓ）−ジオキシフェドリン、（Ｓ）−ジオキセテドリン又は（Ｓ）−ノルブドリンである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
前記化合物が、（Ｓ）−４−（ヒドロキシ−２−ピペリジニル−メチル）−１，２−ベンゼンジオール、（Ｓ）−ピプラテコール、（Ｓ）−アルブタミン、（Ｓ）−プロトキロール、（Ｓ）−テオドレナリネル、（Ｓ、Ｓ'）−ヘキソプレナリン又は（Ｓ）−ＰＴＦＭＡである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
前記化合物が、（Ｓ）−イソプロテレノール又は（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
前記化合物が１−（Ｎ−イソプロピル）−３−メトキシドパミンである、請求項７に記載の使用。
【請求項２３】
前記化合物が、（Ｓ）−Ｎ−エチルアドレナリンジピバレート、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンジピバレート、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリンジピバレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジイソブチレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジベンゾイレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジトルオイレート又はイソエタリンジピバレートである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
対象における血管新生を治療及び／又は予防する方法であって、血管新生阻害に有効な量の請求項１〜２３のいずれか一項に記載の血管新生阻害剤を前記対象に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
[0001]本出願は、２００７年１月２９日出願の米国特許仮出願第６０／８９７，８１４号明細書及び２００７年５月２５日出願の同第６０／９２４，６７４号明細書の利益を主張するものであり、その両方の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
［発明の分野］
[0002]本発明は、血管新生及び関連の疾患を予防及び／又は治療する血管新生阻害剤としてのカテコールアミン及び関連化合物の使用に関する。
【０００３】
［発明の背景］
[0003]血管新生は、細胞外マトリックスのリモデリングを伴う内皮細胞の増殖及び遊走による、既存の血管からの新しい血管の成長に関わる生理的過程である。血管新生は、胚形成中の器官の発達及び分化において、創傷治癒において、並びに子宮及び卵巣においては、正常な過程である。血管新生は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性症、虚血性心障害、関節リウマチ、乾癬、腫瘍発生及び腫瘍成長などの病原性障害にも関与している。
【０００４】
[0004]Ｔｈｅ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎによれば、西欧諸国のみにおいて、少なくとも１億８４００万人の患者が何らかの形態の血管新生阻害療法から、又、少なくとも３億１４００万人が何らかの形態の血管新生促進療法から恩恵を受けることができるであろうとされている。例えば、血管新生阻害療法は、全ての固形腫瘍（肺癌、乳癌、前立腺癌、大腸癌など）に適用される。血管新生阻害療法の市場は、加齢黄斑変性症を治療するラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）（商標）の２００７年度第１四半期の財務報告書により示唆されているとおり巨大である。この薬剤はすでに２００７年度の超大型医薬品となっており、年間売上は１０億ドル超と推定される。
【０００５】
[0005]血管新生の機序はあまりよく理解されていないが、いくつかの因子が血管新生刺激因子及び同阻害因子として血管新生に関与していることが確認されている。血管新生因子の一部が、線維芽細胞成長因子、形質転換成長因子−α、形質転換成長因子−β、アンギオゲニン、インターロイキン−８、血小板由来成長因子、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）である。中でもＶＥＧＦは、病理的な血管新生における最も重要なサイトカインと考えられる。
【０００６】
[0006]潜在的に有効な血管新生阻害剤がいくつか開発され、動物試験、疫学的試験及び臨床試験において調査されてきた（Ｋｙｓｅｌｏｖａら、２００４）。そのような血管新生阻害剤は、ＶＥＧＦ阻害薬、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）拮抗薬及びＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬に分類し得る。ＶＥＧＦ阻害薬は、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦトラップ（ＶＥＧＦＲの可溶性の切断型）のヒト化モノクローナル抗体であってよいと考えられる。ＶＥＧＦＲ拮抗薬は、ヒト化モノクローナル抗体又は低分子阻害薬であってよいと考えられる。ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬の低分子阻害薬がいくつか開発されており、その中には、ＶＥＧＦＲ２及び／又は他のＶＥＧＦＲに選択的であるものもあれば、それより選択性は低いが癌の成長を標的とするものもある。さらに、血管新生阻害剤としてのドパミンＤ２受容体作動薬も報告され、併せて、表面にあるＶＥＧＦＲ−２の内在化の機序も示唆された（Ｂａｓｕら、２００１）。血管新生の低分子阻害薬は、伝統的な化学療法的治療レジメンと比較して副作用が顕著に少ない潜在的に長期の治療をもたらすことから、このような阻害薬の開発は重要な治療分野と考えられる。
【０００７】
[0007]ＶＥＧＦの特異的阻害薬３種が市販されている：ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ＆Ｒｏｃｈｅ）、ラニビズマブ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ＆Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びペガプタニブ（Ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ）（商標）（Ｐｆｉｚｅｒ）。しかしながら、その全ては高コストを伴うことから、低コストの血管新生阻害薬の開発が強く望まれる。
【０００８】
[0008]本発明者らは、カテコール、ドパミン及びアドレナリンの強力な糖化阻害活性（Ｙｅｂｏａｈら、２００５）、並びに白内障を予防するためのその適用（Ｍｕｌｌｉｃｋ＆Ｋｏｎｉｓｈｉ、２００７）についてこれまでに報告した。アドレナリンの新薬再創出は、（Ｒ，Ｓ）−アドレナリンのプロドラッグであるジピベフリンが緑内障を治療するための市販の点眼薬であるのと同様、眼の局所施用にとって有利である。そのため、本発明者らは、アドレナリンをベースに、糖尿病性網膜症を予防するための点眼剤を開発した。
【０００９】
[0009]リード化合物の１つは、（Ｓ）−イソプロテレノールである。（Ｓ）−イソプロテレノールを全身に用いた場合、（Ｒ）−イソプロテレノールと比較して、血圧低下、灌流心臓の心拍数低下及び子宮弛緩についての有効性は２００から１６００分の１であり、β−アドレナリン受容体作動薬としては弱い活性を示した（Ｌａｎｄｓら、１９５４）。α２−アドレナリン作動性受容体作動薬により侵害受容作用が典型的に引き起こされる場面で（Ｓ）−イソプロテレノールは抗侵害受容作用を示すことから、（Ｓ）−イソプロテレノールはα−アドレナリン作動性受容体拮抗薬である（Ｂｅｎｔｌｅｙ及びＳｔａｒｒ、１９８６）。
【００１０】
[0010]（Ｓ）−イソプロテレノールは、ヒトにとって安全と考えられる。マウスにおける（Ｓ）−イソプロテレノールの急性静脈内毒性は、（Ｒ）−イソプロテレノールの場合のおよそ半分であり、すなわち、（Ｓ）−イソプロテレノール及び（Ｒ）−イソプロテレノールのＬＤ５０値は、それぞれ、１１３±５ｍｇ／ｋｇ及び５７±２ｍｇ／ｋｇであった（Ｌａｎｄｓら、１９５４）。さらに、（Ｓ）−イソプロテレノールは、（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールを用いた市販の気管支拡張薬及び局所用の抗アレルギー薬の不活性成分である。（Ｓ）−イソプロテレノールの副作用は、極端に高濃度の場合にのみいくつか報告されている。ヒトにおいて局所施用された１０％（Ｓ）−イソプロテレノールは、短時間の軽い結膜充血及び刺激を引き起こし、２０％（Ｓ）−イソプロテレノール点眼剤は、数時間持続する著しい結膜充血及び軽い瞳孔縮小を生じた（Ｋａｓｓら、１９７６）。しかしながら、ウサギにおいては、１７．６％（Ｓ）−イソプロテレノール点眼剤を用いた場合でも、心拍数、血圧及び血液化学値又は血清化学値の全身的な効果も剖検時の変化も観察されなかった（Ｓｅｉｄｅｈａｍｅｌら、１９７５）。さらに、静脈内の大用量の（Ｓ）−イソプロテレノールは、血圧及び脈拍数に対し、わずかで一時的な効果のみ有するようであった（Ｋａｓｓら、１９７６）。
【００１１】
[0011]（Ｓ）−イソプロテレノールのプロドラッグ形態の１つは、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートである。（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートの全身試験は報告されていないが、ラセミ混合物の（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート（５８μｇ／ｋｇ）は、イヌにおいて静脈内注射された。（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートは、（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールの場合と同じ応答、すなわち、心拍数及び心拍出量の大幅な増加、総末梢抵抗の著しい低下、大動脈圧、中心静脈圧及び左心房圧の低下、並びに肺血管抵抗の顕著な変化なしという応答を示した。このような応答は（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールの場合より遅く始まり、長く続いた。この結果から、（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートは不活性であり、（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールに加水分解された後で効果を発揮することが示唆される（Ｗａｎｇら、１９７７）。
【００１２】
［発明の概要］
[0012]驚くべきことに、β炭素の位置にＳ立体配置を有し（Ｓ）−ノルアドレナリンより親油性の高い（Ｓ）−アイソフォームのカテコールアミン及び関連化合物は血管新生阻害性であることが、ここに見出された。さらに、β水酸基が修飾されているカテコールアミンも、（Ｓ）−アイソフォームであるか（Ｒ）−アイソフォームであるかに関わらず、血管新生阻害性であることも見出された。
【００１３】
[0013]したがって、血管新生阻害剤としての、血管新生阻害に有効な量の式（Ｉ）
【化１】
2010516716.tif 000003
の化合物、その生理学的に許容される塩、そのプロドラッグ、生理的に機能するその誘導体又はその任意の混合物の使用が提供される［式中、Ｒ１及びＲ７はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、若しくは脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すか、又はＲ１及びＲ７は結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し；Ｒ２及びＲ’２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基若しくはＣＯＯＨを表すか、又はＲ２若しくはＲ’ ２の一方がＲ１と結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し；Ｒ３は、ＯＲ８、ＳＲ８又はＮＲ８Ｒ９を表し（式中、Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、又は脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すが、但し、Ｒ８及びＲ９が両方ともアシル基であることはない）；Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、ＯＹ、ＮＨＹ又はＳＹを表し（式中、Ｙは
【化２】
2010516716.tif 000004
を表す（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基又はＣ３−１０シクロアルキル基を表す））；Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ及びＲ６ｃはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ１０又はＳＲ１０を表し（式中、Ｒ１０は、脂肪族酸又は芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表す）；（Ｓ）は、この化合物の（Ｓ）立体配置を規定するキラル中心を表し；Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、Ｃ１−１０アシル基、Ｃ３−８窒素含有複素環基は、それぞれ独立に、１個又は複数のヘテロ原子Ｎ、Ｏ又はＳを含み又は含まず、独立に、１つ又は複数のＣ６−１０アリール基、Ｃ６−１８アルカリール基又はＣ６−１８アラルキル基で置換されておらず又は置換されており；但し、Ｒ２及びＲ’２が両方ともＨである場合は、Ｒ１及びＲ７が両方ともＨであることはない］。ＹがＨを表さないとき、Ｙはｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解性であり、ＹがＨを表す化合物をもたらす。
【００１４】
[0014]さらに、血管新生阻害剤としての、血管新生阻害に有効な量の式（ＩＩ）
【化３】
2010516716.tif 000005
の化合物、その生理学的に許容される塩、そのプロドラッグ、生理的に機能するその誘導体又はその任意の混合物の使用が提供される［式中、Ｒ１及びＲ７はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、若しくは脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すか、又はＲ１及びＲ７は結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し；Ｒ２及びＲ’２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基若しくはＣＯＯＨを表すか、又はＲ２若しくはＲ’２の一方がＲ１と結合してＣ３−７窒素含有複素環を形成し；Ｒ１３は、ＯＲ１８、ＳＲ１８又はＮＲ１８Ｒ１９を表し（式中、Ｒ１８及びＲ１９はそれぞれ独立に、Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、又は脂肪族酸若しくは芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表すが、但し、Ｒ１８及びＲ１９が両方ともアシル基であることはない）；Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、ＯＹ、ＮＨＹ又はＳＹを表し（式中、Ｙは
【化４】
2010516716.tif 000006
を表す（式中、Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１０アルキル基又はＣ３−１０シクロアルキル基を表す））；Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ及びＲ６ｃはそれぞれ独立に、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ１０又はＳＲ１０を表し（式中、Ｒ１０は、脂肪族酸又は芳香族酸由来のＣ１−１０アシル基を表す）；Ｃ１−１０アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、Ｃ１−１０アシル基、Ｃ３−８窒素含有複素環基は、それぞれ独立に、１個又は複数のヘテロ原子Ｎ、Ｏ又はＳを含み又は含まず、独立に、１つ又は複数のＣ６−１０アリール基、Ｃ６−１８アルカリール基又はＣ６−１８アラルキル基で置換されておらず又は置換されている］。ＹがＨを表さないとき、Ｙはｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解性であり、ＹがＨを表す化合物をもたらす。
【００１５】
[0015]さらに、対象における血管新生を治療及び／又は予防する方法であって、血管新生阻害に有効な量の上述の血管新生阻害剤を対象に投与することを含む方法が提供される。
【００１６】
[0016]さらに、対象における血管新生を治療及び／又は予防するための医薬を調製するための、血管新生阻害に有効な量の上述の血管新生阻害剤の使用が提供される。
【００１７】
[0017]さらに、血管新生阻害に有効な量の上述の血管新生阻害剤を、対象における血管新生の治療及び／又は予防において使用するための取扱説明書と共に含む市販用パッケージ品も提供される。
【００１８】
[0018]Ｒ７は、好ましくはＨを表す。Ｒ１は、好ましくはＣ１−１０アルキル基を表す。好ましくは、Ｒ２及びＲ’２は両方ともＨを表すか、又はＲ２はＨを表し、Ｒ’２は−ＣＨ２ＣＨ３を表す。Ｒ４及びＲ５は、好ましくはそれぞれ独立にＯＹを表し、各Ｙは、好ましくは独立に、Ｈ、ピバロイル、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、イソブタノイル、ペンタノイル、２−ブテノイル、シクロプロパノイル、シクロヘキサノイル、ベンゾイル、４−メチルベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、フェナセチル、４−メチルフェナセチル、メトキシアセチル又はＮ，Ｎ−ジメチルアミドを表す。より好ましくは、Ｒ４及びＲ５はそれぞれＯＹを表し、各ＹはＨ又はピバロイルを表す。Ｙは、最も好ましくはＨである。好ましくは、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ及びＲ６ｃはそれぞれＨを表す。式（Ｉ）の化合物において、Ｒ３は好ましくはＯＲ８を表し、Ｒ８は好ましくはＣ１−１０アルキル基を表す。式（ＩＩ）の化合物において、Ｒ１３は好ましくはＯＲ１８を表し、Ｒ１８は、好ましくはＣ１−１０アルキル基、より好ましくは−ＣＨ３を表す。本明細書で述べるアルキル基は、直鎖でも分枝鎖でもよい。
【００１９】
[0019]式（Ｉ）の化合物の場合、この化合物は、好ましくは、（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−プロピルノルアドレナリン、１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−（イソプロピルアミノ）−１（Ｓ）−ブタノール、エリスロ−（Ｄ，Ｌ）−ドパセリン（ｄｏｐａｓｅｒｉｎｅ）、デキストロノルデフリン（ｄｅｘｔｒｏｎｏｒｄｅｆｒｉｎ）、（Ｓ）−ジオキシフェドリン、（Ｓ）−ジオキセテドリン、（Ｓ）−ノルブドリン、（Ｓ）−４−（ヒドロキシ−２−ピペリジニルメチル）−１，２−ベンゼンジオール、（Ｓ）−ピプラテコール、（Ｓ）−アルブタミン、（Ｓ）−プロトキロール、（Ｓ）−テオドレナリネル（ｔｈｅｏｄｒｅｎａｌｉｎｅｌ）、（Ｓ，Ｓ’）−ヘキソプレナリン又は（Ｓ）−ＰＴＦＭＡである。より好ましくは、この化合物は、（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−プロピルノルアドレナリン、１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−（イソプロピルアミノ）−１（Ｓ）−ブタノール、エリスロ−（Ｄ，Ｌ）−ドパセリン、デキストロノルデフリン、（Ｓ）−ジオキシフェドリン、（Ｓ）−ジオキセテドリン又は（Ｓ）−ノルブドリンである。さらにより好ましくは、この化合物は（Ｓ）−イソプロテレノールである。
【００２０】
[0020]式（Ｉ）の化合物をベースにした血管新生阻害剤の場合、その化合物の光学純度は、特定の化合物に依存する。（Ｒ）−異性体の混入は、（Ｓ）−異性体の血管新生阻害活性が、対応する（Ｒ）−異性体の一切の血管新生活性を上回るように、十分低くなければならない。好ましくは、この血管新生阻害剤の光学純度は、５０重量％以上、より好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９７％以上、さらに一層より好ましくは９９％以上、それよりさらに一層より好ましくは９９．９％以上、それよりさらに尚一層より好ましくは９９．９９％以上である。局所施用の場合、光学純度は好ましくは９７重量％以上、より好ましくは９９．９％以上であり、全身施用の場合は、光学純度は好ましくは９９．９重量％以上、より好ましくは９９．９９％以上である。高純度であれば、血管新生阻害剤の血管新生阻害効果が増すと共に、短期及び／又は長期の使用において（Ｒ）−アイソフォーム不純物が有する可能性のあるβ２−アドレナリン作動性受容体作動薬としての効果も低下する。さらに、β２−アドレナリン作動性受容体作動薬は一般に血管新生性であり（Ｔｈａｋｅｒら、２００６）、そのことは、本発明において使用する（Ｓ）−異性体の血管新生阻害効果に対し逆効果となると考えられる。
【００２１】
[0021]式（ＩＩ）の化合物の場合、この化合物は、好ましくは、（Ｓ）−アイソフォーム、（Ｒ）−アイソフォーム又はその混合物としての１−（Ｎ−イソプロピル）−３−メトキシドパミンである。
【００２２】
[0022]生理学的に許容される塩の例としては、塩酸塩、酒石酸水素塩、酢酸塩、炭酸塩、タンニン酸塩、硫酸塩、ステアリン酸塩及びクエン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。塩酸塩形態が好ましい。
【００２３】
[0023]プロドラッグ又は生理的に機能する誘導体の例としては、脂肪族酸若しくは芳香族酸由来の少なくとも１つのＣ１〜１０アシル基を含む化合物が挙げられるが、これに限定されない。アシル基としては、例えば、ピバロイル基、アセチル基、プロピオニル基、ブタノイル基、イソブタノイル基、ペンタノイル基、シクロプロパノイル基、シクロヘキサノイル基、ジベンゾイル基及びジ（４−メチルベンゾイル）基が挙げられる（Ｊａｒｖｉｎｅｎ＆Ｊａｒｖｉｎｅｎ、１９９６）。ピバロイル（トリメチルアセチル）基は、とりわけ好ましいアシル基である。そのようなアシル基を有する化合物は、有利なことに、治療上有効な濃度の化合物を標的組織へ（例えば、糖尿病性網膜症を治療するために網膜へ）より効率的に送達することとなり、細胞膜に有効に浸透するための親油性を高め、酸化による劣化から当該化合物を保護し、且つ、保管中のラセミ化から当該化合物を保護する。
【００２４】
[0024]活性のある血管新生阻害剤は、薬理学上許容される組成物の形で製剤してよい。本発明による活性のある血管新生阻害剤に加え、この組成物は、１つ又は複数の薬理学上耐容性のある成分、例えば、担体（例えば溶媒）、緩衝液、粘度調節剤、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤、滑沢剤、オスモル濃度調節剤、結合剤、流動促進剤、抗粘着剤、希釈剤、甘味剤、着色料、フレーバー剤、他の薬理学上活性のある作用剤又はその混合物をさらに含んでよい。
【００２５】
[0025]本発明による眼の局所投与のための組成物は、溶液、懸濁液又は乳剤など、眼用の局所送達に適した任意の剤形で製剤してよい。中でも、眼用の水溶液が好ましい。血管新生阻害剤以外に、この組成物は、抗微生物保存剤（複数も）、薬物及びプロドラッグの保持を高めるための粘度増加剤（複数も）、緩衝剤（複数も）、オスモル濃度調節剤（複数も）、界面活性剤（複数も）、抗酸化剤（複数も）又はその混合物など慣習的な眼用の添加剤及び賦形剤を、必要又は適切であれば、さらに含有してよい。眼の局所治療は、点眼又は硝子体内注射であってよいが、これに限定されない。この組成物は、ソフトコンタクトレンズ中に染み込ませるなど、他の方法により施用することもでき、これにより、長期継続する場合の薬物又はプロドラッグの有効濃度を低下させ得る。
【００２６】
[0026]本発明による全身投与用の組成物は、経口投与、吸入、舌下投与、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、骨内注入又はデポ注射であってよいが、これらに限定されない。活性のある血管新生阻害剤に加え、薬理学上許容される成分としては、分散媒、結合剤、希釈剤、滑沢剤、抗粘着剤、流動促進剤、崩壊剤、保存剤、香味料、抗酸化剤、甘味料、着色料、フレーバー剤又はその混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
[0027]ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの血管新生阻害活性は、約１００μＭ未満、特に約５０μＭ未満、それより特に約３０μＭ未満の濃度で示される。血管新生及び細胞浸潤を予防／遅延／治療するための治療上有効な用量は、局所施用の場合、好ましくは約０．０１から１０％ｗ／ｖ、特に好ましくは０．０１から５％ｗ／ｖ、とりわけ０．０１から１％ｗ／ｖ、特に０．１から０．５％ｗ／ｖである。活性のある血管新生阻害剤は、単位剤形の形態で製剤できる。例えば、点眼製剤において、単位用量は、好ましくは５〜２００μＬ、さらにとりわけ１０〜１００μＬ、特に３０〜５０μＬであり、この場合、約５０μＬが１点眼当りの典型的な体積であり、すなわち、２００μＬ及び１００μＬは、１回用量で４点眼及び２点眼に相当する。市販の点眼剤製品の中には、１回用量で２から３点眼を推奨しているものもある。全身に治療を施す場合の投与量は、約０．１から５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、例えば、１から２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、とりわけ５０から１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの範囲であってよい。特定のレジメンにとって最も有効な用量は、当業者により容易に決定される。
【００２８】
[0028]本発明による血管新生阻害剤の使用により、いくつかの疾患状態、例えば、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性症、虚血性心障害、関節リウマチ、乾癬、腫瘍発生、転移及び／又は腫瘍成長の治療及び／又は予防が可能になる。哺乳動物対象、例えば、ヒト、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、モルモット及びマウスが好ましい。
【００２９】
[0029]本発明のさらなる特徴は、以下の詳細な説明の中で記載され、又は明らかになるであろう。
【００３０】
[0030]本発明がより明確に理解できるように、添付の図面を参照しながら、実施例を用いて、本発明の実施形態をここに詳細に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】[0031]（Ｓ）−イソプロテレノールによる、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）の毛細血管形成の阻害。ＨＵＶＥＣｓは、示してある濃度（１〜５０μＭ）の（Ｓ）−イソプロテレノールが存在する条件のマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）上でＥＢＭ−２培地中にて３７℃で２２時間培養された。対照は、この培地に（Ｓ）−イソプロテレノールが添加されない条件を表す。
【図２Ａ】[0032]（Ｓ）−イソプロテレノール及びその類似体の血管新生阻害活性を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのマトリゲル内皮細胞毛細血管形成アッセイにより測定した。ドパミン、（Ｓ）−ノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｒ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリン、（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン、イソエタリン、（Ｓ）−Ｏ−メチルイソプロテレノール及び（Ｒ）−Ｏ−メチルイソプロテレノール（それらの濃度は２０μＭに調節した）が存在しない条件（対照）及び存在する条件のマトリゲル（商標）上でＨＵＶＥＣｓを培養した。２２時間のインキュベーション後、各細胞培養物について、無作為に選んだ顕微鏡視野２箇所を撮影した。各写真に写っているＨＵＶＥＣｓの管構造の全長を、フリーソフトウェアのイメージＪ（ＩｍａｇｅＪ）（商標）を用いて測定し、対照培養物の測定値を用いて正規化した。３つの独立した実験から得た合計６枚の写真のデータを平均し、併せて標準偏差を求めた。（Ａ）３つの独立した実験から得た合計６枚の写真のデータを平均し、標準偏差を求めた。
【図２Ｂ】（Ｓ）−イソプロテレノール及びその類似体の血管新生阻害活性を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのマトリゲル内皮細胞毛細血管形成アッセイにより測定した。ドパミン、（Ｓ）−ノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｒ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリン、（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン、イソエタリン、（Ｓ）−Ｏ−メチルイソプロテレノール及び（Ｒ）−Ｏ−メチルイソプロテレノール（それらの濃度は２０μＭに調節した）が存在しない条件（対照）及び存在する条件のマトリゲル（商標）上でＨＵＶＥＣｓを培養した。２２時間のインキュベーション後、各細胞培養物について、無作為に選んだ顕微鏡視野２箇所を撮影した。各写真に写っているＨＵＶＥＣｓの管構造の全長を、フリーソフトウェアのイメージＪ（ＩｍａｇｅＪ）（商標）を用いて測定し、対照培養物の測定値を用いて正規化した。３つの独立した実験から得た合計６枚の写真のデータを平均し、併せて標準偏差を求めた。（Ｂ）分析に使用した数枚の写真を示す。
【図３】[0033]ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの毛細血管形成における（Ｓ）−イソプロテレノールと（Ｒ）−イソプロテレノールとの競合。多様な比率の（Ｓ）−イソプロテレノール及び（Ｒ）−イソプロテレノール（イソプロテレノールの総濃度は２０μＭに維持した）が存在する条件のマトリゲル（商標）上でＨＵＶＥＣｓを培養した。２２時間のインキュベーション後、各細胞培養物について、無作為に選んだ顕微鏡視野２箇所を撮影した。各写真に写っている管構造の全長を、フリーソフトウェアのイメージＪ（商標）を用いて測定し、イソプロテレノールを含有しない対照培養物の測定値を用いて正規化した。３つの独立した実験から得た合計６枚の写真のデータを平均し、併せて標準偏差を求めた。
【図４】[0034]（Ｓ）−イソプロテレノール及びその類似体並びにβ−アドレナリン作動性受容体拮抗薬プロプラノロールの浸潤阻害活性を、マトリゲルでコーティングしたフィルターを通したＨＵＶＥＣｓの浸潤により測定し、テスト化合物を加えていない対照ＨＵＶＥＣｓの値を用いて正規化した。この値は、２つの独立した実験から得た合計４枚の写真の平均及び標準偏差である。
【図５Ａ】[0035]実験期間中にわたるラットの平均体重。ビヒクルを投与されている正常（黒菱形）又は糖尿病（黒四角）のラットを毎週計量した。
【図５Ｂ】実験期間中にわたるラットの平均体重。（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート点眼剤を投与されている正常（黒菱形）又は糖尿病（黒四角）のラットを毎週計量した。
【図６】[0036]赤色蛍光に染まっている糖化した毛細血管密度としての網膜毛細血管の糖化量を、非糖尿病ラット、ビヒクル投与の糖尿病ラット、及び０．１％（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート点眼剤治療を施した糖尿病ラットにおける網膜毛細血管全体の密度により正規化した。非糖尿病ラット対ビヒクル投与の糖尿病ラット、及び（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート治療を施した糖尿病ラット対ビヒクル投与の糖尿病ラットについてのＰ値は、それぞれ、０．０５２及び０．０６８である。（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート治療を施していない糖尿病の網膜に豊富な無細胞毛細血管は高度に糖化している傾向があり、上述のＰ値はさらに低下すると考えられることに注目すべきである。「ｎ」は、分析に使用した眼の数である。
【図７】[0037]本発明において有用な化合物数種の化学構造。
【図８】[0038]本発明の化合物の芳香族ジヒドロキシル基の保護基数種の化学構造。
【図９】[0039]本発明において有用なプロドラッグ数種の化学構造。
【図１０】[0040]ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのマトリゲル内皮細胞毛細血管形成アッセイにより、（Ｓ）−イソプロテレノール及びそのプロドラッグ数種の血管新生阻害活性を測定した。（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジイソブチレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジベンゾイレート（ｄｉｂｅｎｚｏｙｌａｔｅ）及び（Ｓ）−イソプロテレノールジトルオイレート（ｄｉｔｏｌｕｏｙｌａｔｅ）（それらの濃度は２０μＭに調節した）が存在しない条件（対照）及び存在する条件のマトリゲル（商標）上でＨＵＶＥＣｓを培養した。２２時間のインキュベーション後、各細胞培養物について、無作為に選んだ顕微鏡視野２箇所を撮影した。各写真に写っているＨＵＶＥＣｓの管構造の全長を、フリーソフトウェアのイメージＪ（商標）を用いて測定し、対照培養物の測定値を用いて正規化した。平均したデータを標準偏差と併せて示す。
【００３２】
［好ましい実施形態の説明］
[0041]材料及び方法：
【００３３】
[0042]化学薬品：（Ｓ）−イソプロテレノールＬ−ビタルトレート、（Ｓ）−ノルアドレナリンＬ−ビタルトレート、Ｄ−マンニトール、塩化ベンザルコニウム、塩化ピバロイル（塩化トリメチルアセチル）、ヨードエタン、１−ヨードプロパン、１−ヨードブタン、水素化ホウ素ナトリウム、トリフルオロメタンスルホン酸メチル、２−クロロ−３，４−ジヒドロキシアセトフェノン、１，４−ジオキサン、ｐ−塩化トルオイル、硫酸二ナトリウム、クロロブタノール、アミノカプロン酸、過塩素酸ナトリウム、［Ｇｌｕ１］−フィブリノペプチドＢ、（Ｒ）−イソプロテレノールヒドロクロリド、メシル酸イソエタリン、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート、トリエチルアミン、塩化アセチル、２−プロパノール、ジメチルホルムアミド、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、塩化イソブチリル、塩化ベンゾイル、塩化セチルピリジニウム及びポビドン（Ｋ３０）を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｏａｋｖｉｌｌｅ、Ｏｎｔａｒｉｏ、カナダ）から入手した。アセトン、塩化メチレン、酢酸エチル、氷酢酸、炭酸二ナトリウム、塩化ナトリウム及びＮａＯＨを、ＥＭＤ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）から得た。エデト酸二ナトリウム、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）及び水を、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）から購入した。１．０Ｍ  ＨＣｌを、ＶＷＲ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ、Ｑｕｅｂｅｃ、カナダ）から入手した。質量分析用の水をＡｎａｃｈｅｍｉａ（Ｌａｃｈｉｎｅ、ＱＣ、カナダ）から購入した。ギ酸をＲｉｅｄｅｌ  ｄｅ  Ｈａｅｎ（Ｏａｋｖｉｌｌｅ、Ｏｎｔａｒｉｏ、カナダ）から購入した。アセトニトリル及びヘキサンを、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｎｅｐｅａｎ、Ｏｎｔａｒｉｏ、カナダ）から得た。ＡＧ（登録商標）４−Ｘ４樹脂、１００〜２００メッシュ、遊離塩基型を、ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）から購入した。全ての化学薬品は、さらに精製することなく使用した。
【００３４】
[0043]塩化セチルピリジニウムからトリフルオロ酢酸セチルピリジニウムを調製した。メタノール中のトリフルオロ酢酸ナトリウム溶液に、トリフルオロ酢酸を加えた。次に、この結果得られたＴＦＡ−Ｎａのメタノール溶液を、エタノール中の塩化セチルピリジニウムの溶液に、撹拌しながら、液滴として加えた。３０分後、沈殿したＮａＣｌを濾過して取り除き、回転式の蒸発装置を用いて蒸発させた（＜４０℃）。残留物をジクロロメタン中に溶解させてから、溶解しない成分を濾過して取り除いた。蒸発後、ｔｅｒｔ−ブタノールを加えてから凍結乾燥させて、白色の結晶を得た。
【００３５】
[0044]塩化セチルピリジニウムから酢酸セチルピリジニウムを調製した。塩化セチルピリジニウムをメタノール中に溶解させてから、酢酸及び酢酸ナトリウムを加えた。溶媒を蒸発させた後、残留物を塩化メチレン中で溶解させた。酢酸セチルピリジニウムは塩化メチレン中で溶解したが、塩化ナトリウムは沈殿したため、濾過により除去した。溶媒を蒸発させた後、生成物に硝酸銀溶液を加えたときに沈殿物が形成されなかったことから、塩化物イオンが存在しないことを確認した。
【００３６】
[0045]（Ｓ）−ノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリドの合成：
【００３７】
[0046]この化合物は、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリンヒドロクロリド、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンヒドロクロリド及び（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンヒドロクロリドの合成において使用する。
【００３８】
[0047]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ノルアドレナリン
【００３９】
[0048]テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）−水１００ｍＬ（１：１  ｖ／ｖ）中の（Ｓ）−ノルアドレナリンビタルトレート（３．８３ｇ、１２ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸水素ナトリウム（３．３ｇ、４０ｍｍｏｌ）を加え、勢いよく撹拌した。次に、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（２．９ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を室温で液滴として加えた。この反応混合物を３時間撹拌した。生成物の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ノルアドレナリンをジクロロメタン（ＤＣＭ）５０ｍＬで３回抽出した。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄した。生成溶液を、硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過してから、蒸発により乾燥させて所望の生成物を得た。この生成物はＨＰＬＣプロファイル（Ｗａｔｅｒｓ製の分析用ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓシンメトリーシールド（ＳｙｍｍｅｔｒｙＳｈｉｅｌｄ）（商標）３．５μｍ、４．６×５０ｍｍ  Ｃ１８−逆相カラム）によれば、９５％を超える純度を示した。勾配１０〜９０％の水中アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、流速２ｍＬ／分で９分間（Ａ系）を用いた。この生成物は、精製せずにさらに使用した。
【００４０】
[0049]Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ５、白色の固形物、Ｒｔ＝４．９分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値＝２７０．１３４１、実測値＝２７０．１３４２。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（衝突エネルギー（ＣＥ）＝２）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：２７０（Ｍ＋Ｈ＋，９４）、２５２（１００）、２１４（１．３）、１９６（５１）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ６．８０（ｓ，１Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、４．５４（ｄｄ（ｂｒ），Ｊ＝５，７Ｈｚ，１Ｈ）、３．２４（ｄｄ，Ｊ＝５，１３Ｈｚ，１Ｈ）、３．１６（ｄｄ，Ｊ＝７，１４Ｈｚ，１Ｈ）、１．４３（ｓ，９Ｈ）。
【００４１】
[0050]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ノルアドレナリンジピバレート
【００４２】
[0051]ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ノルアドレナリン（３．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（５ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）との混合物に、窒素下にて０℃で塩化ピバロイル（２．９ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。この反応混合物を０℃で１５分間、次いで室温で２時間撹拌した。この生成溶液を、水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムを介して乾燥させてから濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（勾配が２０〜４０％の酢酸エチル／ヘキサンを使用）により、粘性のある液体としての純粋な生成物（２．４０ｇ、（Ｓ）−ノルアドレナリンビタルトレートからの収率４６％）を得た。
【００４３】
[0052]Ｃ２３Ｈ３５ＮＯ７、粘性のある液体、Ｒｔ＝９．０分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｍ＋Ｈ＋］の測定値＝４３８．２４９２、実測値＝４３８．２４８２。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝２）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：４３８（Ｍ＋Ｈ＋，１００）、４２０（２．３）、３８２（８６）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．２９（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、７．１７（ｓ，１Ｈ）、７．１４（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７４（ｔ（ｂｒ），Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、３．２８（ｄｄ，１Ｈ）、３．２２（ｄｄ，Ｊ＝８，１５Ｈｚ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）、１．３４（ｓ，９Ｈ）。
【００４４】
[0053]（Ｓ）−ノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド
【００４５】
[0054]乾燥メタノール（１００ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ノルアドレナリンジピバレート（２．４ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の溶液に塩化アセチル（８ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を０℃で液滴として加えた。この反応混合物を０℃、次いで室温で、１５分間撹拌した。ＴＬＣにより反応をモニターした。反応（３時間）の完了後、溶媒を減圧下で蒸発させてから、高性能置換クロマトグラフィー（ＨＰＤＣ）（０．１％ＴＦＡ／水、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により生成物を精製した。この生成物は、以下に記載の（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド及び（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリドの調製においてさらに使用した。
【００４６】
[0055]Ｃ１８Ｈ２８ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．０分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１８Ｈ２７ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝３３８．１９６７、実測値＝３３８．１９８３。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１３）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：３３８（Ｍ＋Ｈ＋，５．９）、３２０（１００）、２３６（２６）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．３６（ｄｄ，Ｊ＝２，８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９４（ｄｄ，Ｊ＝４，９Ｈｚ，１Ｈ）、３．２０（ｄｄ，Ｊ＝４，１３Ｈｚ，１Ｈ）、３．０４（ｄｄ，Ｊ＝９，１３Ｈｚ，１Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）。
【００４７】
[0056]（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリンヒドロクロリドの合成：
【００４８】
[0057]（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（プロドラッグ）
【００４９】
[0058]乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中の（Ｓ）−ノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（０．３７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．４ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨードエタン（０．１２ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を窒素下にて室温で２４時間撹拌してから凍結乾燥させた。この混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）中に取り、ＮａＨ２ＰＯ３緩衝液（４×２０ｍＬ、ｐＨ３）を用いて抽出した。有機層を水（３×２０ｍＬ）で再度抽出した。１．０Ｎ  ＮａＯＨを用いて、緩衝液抽出物及び水抽出物を合わせたものをｐＨ１１に調節してから、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。分離された有機相を水（２０ｍＬ）及び鹹水（２０ｍＬ）でさらに洗浄し、硫酸ナトリウムを介して乾燥させてから濃縮した。ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／水、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）を用いて、未精製混合物を精製した。単離された化合物を過剰な１．０Ｎ  ＨＣｌで処理してから凍結乾燥させて、固形のモノエチル化生成物（０．１１ｇ、収率２７％）を得た。
【００５０】
[0059]Ｃ２０Ｈ３２ＮＯ５Ｃｌ（モノエチル化）、白色の固形物、Ｒｔ＝６．２分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２０Ｈ３１ＮＯ５＋Ｈ＋］の測定値＝３６６．２２８０、実測値＝３６６．２２６８。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１５）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：３６６（Ｍ＋Ｈ＋，５５）、３４８（１００）、２６４（２４）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．３７（ｄｄ，Ｊ＝２，８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９８（ｄｄ，Ｊ＝３，１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．２４（ｄｄ，Ｊ＝３，１３Ｈｚ，１Ｈ）、３．１２（ｍ，３Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、１．３４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５１】
[0060]（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリンヒドロクロリド
【００５２】
[0061]乾燥メタノール（３ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（５０ｍｇ、１２５μｍｏｌ）の溶液に、過剰な固形の水素化ホウ素ナトリウムを加え、未反応の出発物質が残らなくなるまで、ＨＰＬＣを用いてその反応混合物をモニターした。乾燥するまで溶媒を蒸発させると、白色の固形物を得た。溶出剤として０．１％ＴＦＡ／水を用いる調製用ＨＰＬＣにより、未精製混合物を精製した。残留物を過剰な１．０Ｎ  ＨＣｌで処理してから凍結乾燥させると、白色の固形物としての所望の生成物（２２ｍｇ、収率７６％）を得た。
【００５３】
[0062]Ｃ１０Ｈ１６ＮＯ３Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝０．５３分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１０Ｈ１５ＮＯ３＋Ｈ＋］の計算値＝１９８．１１３０、実測値＝１９８．１１２８。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝８）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：１９８（Ｍ＋Ｈ＋，４８）、１８０（１００）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．９９（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、８．９６（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、６．７９（ｓ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、５．９２（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、４．７７（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ）、２．９４（ｍ（ｂｒ），３Ｈ）、２．８７（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、１．２１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５４】
[0063]（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンヒドロクロリドの合成：
【００５５】
[0064]（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（プロドラッグ）
【００５６】
[0065]乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−ノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（０．３７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．４ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）の混合物にヨードプロパン（０．１５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加え、窒素下にて室温で２４時間撹拌した。その結果得られた混合物を凍結乾燥させた。この混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）中に取り、ＮａＨ２ＰＯ３緩衝液（４×２０ｍＬ、ｐＨ３）で抽出した。有機層を水（３×２０ｍＬ）で再度抽出した。１．０Ｎ  ＮａＯＨを用いて、緩衝液抽出物と水抽出物とを合わせたものをｐＨ１１に調節してから、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。分離された有機相を水（２０ｍＬ）及び鹹水（２０ｍＬ）でさらに洗浄し、硫酸ナトリウムを介して乾燥させてから濃縮した。ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／水、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により、未精製混合物を精製した。単離された化合物を過剰な１．０Ｎ  ＨＣｌで処理してから凍結乾燥させると、固形生成物（０．０９ｇ、収率２２％）を得た。
【００５７】
[0066]Ｃ２１Ｈ３４ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．４分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２１Ｈ３３ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝３８０．２４３７、実測値＝３８０．２４２１。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１５）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：３８０（Ｍ＋Ｈ＋，７８）、３６２（１００）、２７８（２０）、２５０（０．９）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．３８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８（ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、５．０１（ｄｄ，Ｊ＝３，１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．２６（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ）、３．１４（ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．０３（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、１．７６（ｍ（ｂｒ），２Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、１．０４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５８】
[0067]（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンヒドロクロリド
【００５９】
[0068]乾燥メタノール（３ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（４０ｍｇ、９６μｍｏｌ）の溶液に、過剰な固形の水素化ホウ素ナトリウムを加え、未反応の出発物質が残らなくなるまで、ＨＰＬＣによりこの反応混合物をモニターした。乾燥するまで溶媒を蒸発させると、白色の固形物を得た。溶出剤として０．１％ＴＦＡ／水を用いる調製用ＨＰＬＣにより、未精製混合物を精製した。残留物を過剰な１．０Ｎ  ＨＣｌで処理してから凍結乾燥させると、白色の固形物としての所望の生成物（１５ｍｇ、収率６３％）を得た。
【００６０】
[0069]Ｃ１１Ｈ１８ＮＯ３Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝０．５７分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１１Ｈ１７ＮＯ３＋Ｈ＋］の計算値＝２１２．１２８６、実測値＝２１２．１２８０。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝８）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：２１２（Ｍ＋Ｈ＋，６３）、１９４（１００）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．９６（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、８．９３（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、６．７８（ｓ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、５．９３（ｄ（ｂｒ），Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、２．９９（ｍ（ｂｒ），１Ｈ）、２．８７（ｍ（ｂｒ），２Ｈ）、２．７２（ｍ（ｂｒ），１Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、０．８９（ｍ，３Ｈ）。
【００６１】
[0070]（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンヒドロクロリドの合成：
【００６２】
[0071]（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（プロドラッグ）
【００６３】
[0072]乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の（Ｓ）−ノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（０．５６ｇ、１．５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．５ｍｍｏｌ）の混合物に、ヨードブタン（０．２６ｍＬ、２．２５ｍｍｏｌ）を加え、窒素下にて室温で２４時間撹拌した。その結果得られた混合物を凍結乾燥させた。この混合物を酢酸エチル（４０ｍＬ）中に取り、ＮａＨ２ＰＯ３緩衝液（４×２０ｍＬ、ｐＨ３）で抽出した。有機層を水（３×２０ｍＬ）で再度抽出した。１．０Ｎ  ＮａＯＨを用いて、緩衝液抽出物と水抽出物とを合わせたものをｐＨ１１に調節してから、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。分離された有機相を水（２０ｍＬ）及び鹹水（２０ｍＬ）でさらに洗浄し、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させてから濃縮した。ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／水、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により、未精製混合物を精製した。単離された化合物を過剰な１．０Ｎ  ＨＣｌで処理してから凍結乾燥させると、固形生成物（０．２２ｇ、収率３４％）を得た。
【００６４】
[0073]Ｃ２２Ｈ３６ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．７分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２２Ｈ３５ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝３９４．２５９３、実測値＝３９４．２５８２。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１５）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：３９４（Ｍ＋Ｈ＋，１００）、３７６（３４）、２９２（４）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．３７（ｄｄ，Ｊ＝２，８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、５．００（ｄｄ，Ｊ＝３，１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．２５（ｄｄ，Ｊ＝３，１２Ｈｚ，１Ｈ）、３．１４（ｄｄ，Ｊ＝１０，１２Ｈｚ，１Ｈ）、３．０６（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）、１．７１（ｍ（ｂｒ），２Ｈ）、１．４６（ｍ，２Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、１．０１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６５】
[0074]（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンヒドロクロリド
【００６６】
[0075]乾燥メタノール（３ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンジピバレートヒドロクロリド（５０ｍｇ、１２０μｍｏｌ）の溶液に、過剰な固形の水素化ホウ素ナトリウムを加え、未反応の出発物質が残らなくなるまで、ＨＰＬＣによりこの反応混合物をモニターした。乾燥するまで溶媒を蒸発させると、白色の固形物を得た。この固形物にＴＨＦ（１０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ溶液（１０ｍＬ）を加え、ＴＨＦ（４×１５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせたものを、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過し、真空中で乾燥させた。残留物を過剰な１．０Ｎ  ＨＣｌで処理してから凍結乾燥させると、白色の固形物としての所望の生成物（２５ｍｇ、収率８０％）を得た。
【００６７】
[0076]Ｃ１２Ｈ２０ＮＯ３Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝０．８４分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ３＋Ｈ＋］の計算値＝２２６．１４４３、実測値＝２２６．１４３７。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝８）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：２２６（Ｍ＋Ｈ＋，７８）、２０８（１００）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．９５（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、８．９３（ｓ（ｂｒ），１Ｈ）、６．７８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、６．６２（ｄｄ，Ｊ＝２，９Ｈｚ，１Ｈ）、５．９３（ｄ（ｂｒ），Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、２．９９（ｄｄ，Ｊ＝３，１３Ｈｚ，１Ｈ）、２．８９（ｍ，３Ｈ）、１．６１（ｍ，２Ｈ）、１．３１（ｍ，２Ｈ）、０．８９（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６８】
[0077]（Ｒ）−Ｏ−メチルイソプロテレノールヒドロクロリドの合成：
【００６９】
[0078]メタノール（５ｍＬ）中の（Ｒ）−イソプロテレノールヒドロクロリド（１２３．６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸メチル（２２０μｌ、２．０ｍｍｏｌ）を室温で加え、一晩撹拌した。さらなるトリフルオロメタンスルホン酸メチル（２２０μｌ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた後、この溶液を再度、一晩撹拌した。蒸発装置を用いて溶媒を除去した。次に、調製用ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、５×２５ｃｍカラム、均一濃度の溶媒（５％アセトニトリル／水中の０．１％ＴＦＡ）、流速２０ｍｌ／分）により、残留物を精製した。精製した生成物を０．０５Ｎ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）で処理してから凍結乾燥させると、淡褐色の固形物としての（Ｒ）−Ｏ−メチルイソプロテレノールヒドロクロリド（６２．３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、収率４８％）を得た。
【００７０】
[0079]Ｃ１２Ｈ２０ＮＯ３Ｃｌ、淡褐色の固形物、Ｒｔ＝４．６分（Ｂ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ３＋Ｈ＋］の計算値＝２２６．１４４３、実測値＝２２６．１４４０。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１０）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：２２６（Ｍ＋Ｈ＋，２３）、１９４（１００）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ６．７９（ｍ，２Ｈ）、６．６９（ｄｄ，Ｊ＝３，８Ｈｚ，１Ｈ）、４．３４（ｄｄ（ｂｒ），Ｊ＝３，１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．４０（七重線，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、３．２３（ｓ，３Ｈ）、３．０４〜３．１６（ｍ，２Ｈ）、１．３４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７１】
[0080]（Ｓ）−Ｏ−メチルイソプロテレノールヒドロクロリドの合成：
【００７２】
[0081]メタノール（１ｍＬ）中の（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート（３６１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でトリフルオロメタンスルホン酸メチル（１ｍＬ、８．０ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、４時間撹拌した。蒸発装置を用いて溶媒を速やかに除去してから、次いで調製用ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、５×２５ｃｍカラム、勾配溶離（０〜４０％、アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）、流速２０ｍＬ／分）により生成物を精製した。精製した化合物を０．１Ｎ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）で処理してから凍結乾燥させると、白色の固形物としての（Ｓ）−Ｏ−メチルイソプロテレノールヒドロクロリドを得た。この生成物を、Ｗａｔｅｒｓ製の分析用ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓシンメトリーシールド（商標）３．５μｍ、４．６×５０ｍｍ  Ｃ１８−逆相カラム）により分析した。勾配０〜９０％の水中アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１２分間、流速２ｍＬ／分（Ｂ系）を用いた。
【００７３】
[0082] Ｃ１２Ｈ２０ＮＯ３Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝４．６分（Ｂ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ３＋Ｈ＋］の計算値＝２２６．１４４３、実測値＝２２６．１４３２。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１０）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：２２６（Ｍ＋Ｈ＋，１７）、１９４（１００）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ６．７５（ｍ（ｂｒ），２Ｈ）、６．６４（ｄ（ｂｒ），Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、４．３３（ｄ（ｂｒ），Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、３．３６（ｍ（ｂｒ），１Ｈ）、３．１９（ｓ，３Ｈ）、３．００〜３．１２（ｍ，２Ｈ）、１．２９（ｔ（ｂｒ），Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ）。
【００７４】
[0083]（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリンの合成：
【００７５】
[0084]ω−ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−３，４−ジヒドロキシアセトフェノンヒドロクロリド
【００７６】
[0085]ジオキサン（１０ｍＬ）中のω−クロロ−３，４−ジヒドロキシアセトフェノン（５ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（８．４ｍＬ、８０ｍｍｏｌｅ）を加え、７０〜８０℃で３時間撹拌した。未反応の出発物質が残らなくなるまで、ＨＰＬＣによりこの反応混合物をモニターした。生成物のアミノケトン基に１０％ＨＣｌを加えた。室温で一晩冷却した後、固形物を濾過し、アセトンで洗浄してから乾燥させると、アミノケトンヒドロクロリドを得た（５．６２ｇ、収率８１％、ｍ．ｐ．２３３〜２３５℃）。
【００７７】
[0086]Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン
【００７８】
[0087]メタノール（２０ｍＬ）中のω−ｔｅｒｔ−ブチルアミノ−３，４−ジヒドロキシアセトフェノンヒドロクロリド（９００ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温でＮａＢＨ４（２６６ｍｇ、７ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。未反応の出発物質が残らなくなるまで、ＨＰＬＣによりこの反応混合物をモニターした（４時間）。溶媒を蒸発させてから生成物をさらに凍結乾燥させると、未精製の遊離塩基（１．３２ｇ）を得た。この未精製の遊離塩基（５００ｍｇ）を、水２．５ｍＬ中に溶解させてから１０％ＨＣｌを用いてｐＨ９〜１０に調節した。濾過後、結果として得られた褐色の溶液を、ＲＰ−１８カラムクロマトグラフィー上で４０％メタノール／水を用いて溶出させた。収集した画分を合わせて真空中で乾燥させると褐色の生成物が得られ、これを、溶出剤として純水を用いるＡＧ（登録商標）４−Ｘ４樹脂（１００〜２００メッシュ）カラムクロマトグラフィーにかけた。凍結乾燥後、黄色がかった結晶としての純粋なＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−ノルアドレナリンを得た。
【００７９】
[0088] Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ３、黄色がかった結晶、Ｒｔ＝４．５分（Ｂ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ３＋Ｈ＋］の計算値＝２２６．１４４３、実測値＝２２６．１４３２。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１０）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：２２６（Ｍ＋Ｈ＋，１００）、２０８（６０）、１５２（９）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ６．６３（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．５０〜６．６０（ｍ，２Ｈ）、４．６６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、３．００（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ）、１．３３（ｓ，９Ｈ）。
【００８０】
[0089]（Ｓ）−イソプロテレノールジイソブチレート（プロドラッグ）の合成
【００８１】
[0090]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノール
【００８２】
[0091]ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート（１．０ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１．２５ｍＬ、９ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ２Ｏ（０．６７ｇ、３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この混合物を勢いよく一晩撹拌し、ＨＰＬＣにより反応をモニターした。未精製物質をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。抽出物を合わせたものを、水（３×５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄してから、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させた。その結果得られた残留物を蒸発により乾燥させると、淡褐色の固形物０．９６ｇを得た。この生成物は、精製せずにさらに使用した。
【００８３】
[0092]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジイソブチレート
【００８４】
[0093]ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノール（０．９６ｇ、３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．９８ｍＬ、７ｍｍｏｌ）の混合物に、窒素下にて０℃で１０分かけて塩化イソブチリル（０．６５ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を液滴として加えてから、室温で２時間撹拌した。未精製物質をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、水（３×５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄してから、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させた。その結果得られた溶液を蒸発により乾燥させると、白色の結晶としての（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジイソブチレート（１．２ｇ）を得、これを精製せずにさらに使用した。
【００８５】
[0094]（Ｓ）−イソプロテレノールジイソブチレートヒドロクロリド
【００８６】
[0095]イソプロパノール（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジイソブチレート（１．２ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アセチル（１．８８ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１．５時間撹拌した。ＨＰＬＣにより反応をモニターした。溶媒を除去した後、ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／水、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により、生成物の（Ｓ）−イソプロテレノールジイソブチレートを精製すると、３１９ｍｇ（全収率３２％）を得た。
【００８７】
[0096]Ｃ１９Ｈ３０ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝５．８分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ１９Ｈ２９ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝３５２．２１２４、実測値＝３５２．２１１９。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．４０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３４（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、５．０２（ｄｄ，Ｊ＝３，１１Ｈｚ，１Ｈ）、３．４７（ｍ，１Ｈ）、３．２５（ｄｄ，Ｊ＝３，１２Ｈｚ，１Ｈ）、３．１３（ｄｄ，Ｊ＝１０，１２Ｈｚ，１Ｈ）、２．８３（ｍ，２Ｈ）、１．３７（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ）、１．３０（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１２Ｈ）。
【００８８】
[0097]（Ｓ）−イソプロテレノールジベンゾイレート（プロドラッグ）の合成：
【００８９】
[0098]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノール
【００９０】
[0099]ＤＭＦ１５ｍＬ中の（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート（１．０ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１．２５ｍＬ、９ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ２Ｏ（０．６７ｇ、３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この混合物を勢いよく一晩撹拌し、ＨＰＬＣによりこの反応をモニターした。生成物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、水（３×５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄してから、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させた。残留物をさらに蒸発により乾燥させると、淡褐色の固形物０．８５ｇを得た。この生成物は、精製せずにさらに使用した。
【００９１】
[00100]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジベンゾイレート
【００９２】
[00101]ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノール（０．８５ｇ、２．７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．８９ｍＬ、６．４ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化ベンゾイル（０．６３ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）を、窒素下にて０℃で１０分かけて液滴として加え、室温で２時間撹拌した。生成物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、水（３×５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄してから、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させた。その結果得られた溶液を蒸発により乾燥させると、白色の結晶としての（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジベンゾイレート（１．４３ｇ）を得た。
【００９３】
[00102]（Ｓ）−イソプロテレノールジベンゾイレート
【００９４】
[00103]イソプロパノール（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジベンゾイレート（１．４３ｇ）の溶液に、塩化アセチル（２．０１ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１．５時間撹拌した。溶媒を除去した後、ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により、所望の（Ｓ）−イソプロテレノールジベンゾイレートを精製すると、８０６ｍｇ（全収率６４％）を得た。
【００９５】
[00104]Ｃ２５Ｈ２６ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．３分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２５Ｈ２５ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝４２０．１８１１、実測値＝４２０．１８１５。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ  ８．０３（ｍ，４Ｈ）、７．６３（ｍ，２Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．４４（ｍ，４Ｈ）、５．１４（ｄｄ，Ｊ＝３，１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．５３（ｍ，１Ｈ）、３．３３（ｄｄ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．２１（ｄｄ，Ｊ＝１０，１２Ｈｚ，１Ｈ）、１．４１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）。
【００９６】
[00105]（Ｓ）−イソプロテレノールジトルオイレート（プロドラッグ）の合成：
【００９７】
[00106]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノール
【００９８】
[00107]ＤＭＦ１５ｍＬ中の（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート（１．０ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１．２５ｍＬ、９ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ２Ｏ（０．６７ｇ、３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この混合物を勢いよく一晩撹拌し、ＨＰＬＣにより反応をモニターした。（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールをＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、水（３×５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄してから、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させた。乾燥するまで溶媒を蒸発させると、淡褐色の固形物０．９１ｇを得た。
【００９９】
[00108]（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジトルオイレート
【０１００】
[00109]ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノール（０．９１ｇ、２．９ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．９４ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ）との混合物に塩化トルオイル（０．７７ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）を窒素下にて０℃で１０分かけて液滴として加え、室温で２時間撹拌した。生成物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、水（３×５０ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄してから、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させた。この溶液を蒸発により乾燥させると、白色の結晶としての（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジトルオイレート（１．５２ｇ）を得た。
【０１０１】
[00110]（Ｓ）−イソプロテレノールジトルオイレート
【０１０２】
[00111]イソプロパノール（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−イソプロテレノールジトルオイレート（１．５２ｇ）の溶液に、塩化アセチル（２．０４ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１．５時間撹拌した。溶媒を除去した後、ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により所望の（Ｓ）−イソプロテレノールジトルオイレートを精製すると、７１５ｍｇ（全収率５５％）を得た。
【０１０３】
[00112]Ｃ２７Ｈ３０ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．８分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２７Ｈ２９ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝４４８．２１２４、実測値＝４４８．２１０９。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．８９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，４Ｈ）、７．５３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，４Ｈ）、５．０６（ｄｄ，Ｊ＝３，１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．４９（ｍ，１Ｈ）、３．３１（ｄｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．１９（ｄｄ，Ｊ＝１０，１３Ｈｚ，１Ｈ）、２．３８（ｓ，６Ｈ）、１．３８（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１０４】
[00113]イソエタリンジピバレートヒドロクロリド（プロドラッグ）の合成：
【０１０５】
[00114]アセトン（２５ｍＬ）中のメシル酸イソエタリン（１．６８ｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液に、１．０Ｎ  ＮａＯＨ（２５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）を室温で加え、１０秒間撹拌してから、塩化ピバロイル（２．４７ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を一度に加えた。この反応溶液をさらに１５秒間撹拌してから、１．０Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）を用いて反応停止させた。生成物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出し、１０％炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）及び鹹水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させ、濾過してから真空中で濃縮した。ＨＰＤＣ（０．１％ＴＦＡ／水、トリフルオロ酢酸セチルピリジニウム４ｇ／Ｌを溶出剤として）により未精製の生成物を精製すると、白色の固形物（１．０ｇ、収率４５％）を得た。
【０１０６】
[00115]Ｃ２３Ｈ３８ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．６分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２３Ｈ３７ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝４０８．２７５０、実測値＝４０８．２７３２。ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ＣＥ＝１５）：ｍ／ｚ（相対強度  ％）：４０８（Ｍ＋Ｈ＋，１００）、３９０（１６）、３４８（０．８）、３０６（２．３）。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ７．３９（ｄｄ，Ｊ＝２，９Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ）、５．１７（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、３．６０（七重線，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４２（ｍ，１Ｈ）、１．６９（ｍ，１Ｈ）、１．５９（ｍ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，３Ｈ）、１．４３（ｓ，３Ｈ）、１．３６（ｓ，９Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、０．８７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１０７】
[00116]Ｗａｔｅｒｓ製の分析用ＨＰＬＣシステム（６００−ＭＳコントローラー、６００Ｅポンプ、７１７自動サンプラー、９９６フォトダイオードアレイ検出器）により、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドの純度を調べた。別のＷａｔｅｒｓ製ＨＰＬＣシステム（６００コントローラー、６００Ｅポンプ、７１７自動サンプラー及び２９９６フォトダイオードアレイ検出器）を用いることにより、（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート及び（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドの光学純度を調べた。後者のシステムを用いることにより、高性能置換クロマトグラフィー（ＨＰＤＣ）も実施した。Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ５００ＭＨｚ  ＮＭＲにより、ＮＭＲスペクトルを測定した。ＭｉｃｒｏＭａｓｓ  Ｗａｔｅｒｓ  Ｑ−Ｔｏｆウルティマ（Ｕｌｔｉｍａ）（商標）グローバル（ＧＬＯＢＡＬ）質量分光計（Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、Ｏｎｔ、カナダ）をＮａｎｏＬｏｃｋｓｐｒａｙ（対照化合物としての［Ｇｌｕ１］−フィブリノペプチドＢ）と共に用いて、高分解能質量スペクトルを測定した。
【０１０８】
[00117]Ｃｅｄａｒｌａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、カナダ）からＨＵＶＥＣｓを購入し、ＥＧＭ−２成長因子混合物（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）及び２％ウシ胎児血清を添加した内皮細胞基本培地−２（ＥＢＭ−２）中で維持した。この細胞を、空気とＣＯ２との９５％／５％（ｖ／ｖ）の加湿した混合気体下にて３７℃で培養した。
【０１０９】
[00118]ＢＤ  マトリゲル（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、マトリゲル内皮細胞管形成アッセイを実施した。ＢＤ  マトリゲル（商標）を４℃で解凍し、１５０μＬを４８ウエルプレートの各ウエルに速やかに加えてから、３７℃で６０分間凝固させた。ＥＣ基本培地−２（ＥＢＭ−２）中のＨＵＶＥＣｓ（７×１０４細胞／ｍＬ）を、テスト対象の化合物が存在する条件の固形のＢＤ  マトリゲル（商標）の表面上に、１ウエル当り２５０μＬ播種した。細胞を５％ＣＯ２インキュベーター中に入れて３７℃で２２時間インキュベートした。Ｌｅｉｔｚ  Ｌａｂｏｖｅｒｔ（Ｌｅｉｔｚ、Ｗｅｔｚｌａｒ、ドイツ）製の倒立顕微鏡を用いることにより、管形成をモニターした。無作為に選んだ顕微鏡視野２箇所をデジタルカメラ（Ｎｉｋｏｎ、ＣＯＯＬＰＩＣＫＳ９９５）で撮影した。各写真に写っている管構造の全長を、フリーソフトウェアのイメージＪ（商標）（ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を用いて測定し、テスト化合物を含まない対照の測定値を用いて正規化した。報告する各値は、３つの独立した実験から得た合計６枚の写真の平均を表すものである。
【０１１０】
[00119]ＢＤバイオコート（ＢｉｏＣｏａｔ）（商標）成長因子低減マトリゲル（商標）浸潤チャンバー（Ｂｅｃｋｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、孔径８ｍｍ）を用いて、内皮細胞の浸潤を測定した。ＥＢＭ−２培地（各５００μＬ）を下の方のウエル中に置いた。ＥＢＭ−２無血清培地（５００μＬ）中のＨＵＶＥＣｓ（２．５×１０４）を上の方のウエルそれぞれの中に播種し、テスト化合物の存在下でインキュベートした。空気９５％／ＣＯ２  ５％の雰囲気中にて３７℃で３６時間、ＨＵＶＥＣｓを遊走させた。フィルターの上表面上に残ったＨＵＶＥＣｓを、綿のスワブを用いて除去した。フィルターの下表面に遊走していたＨＵＶＥＣｓを、メタノールで固定し、０．１％クリスタルバイオレット／２０％（ｖ／ｖ）メタノールで染色してからスライド上に載せた後で、Ｌｅｉｔｚ  Ｌａｂｏｖｅｒｔ（Ｌｅｉｔｚ、Ｗｅｔｚｌａｒ、ドイツ）製の倒立顕微鏡を用いて調べた。無作為に選んだ顕微鏡視野３箇所を、Ｎｉｋｏｎ製のクールピクス（ＣＯＯＬＰＩＣＫＳ）（商標）９９５デジタルカメラを用いてデジタル画像としてとらえ、各写真に写っているＨＵＶＥＣｓの数を直接数えた。報告する各値は、２つの独立した実験から得た合計４枚の写真の平均及び標準偏差を表すものである。
【０１１１】
[00120]動物試験において使用する（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドを、（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレートから合成した。塩化ピバロイル（塩化トリメチルアセチル）（４．１ｍｍｏｌ、５００ｍＬ）を、５０％  １．０Ｎ  ＮａＯＨ水溶液／アセトン（５．５ｍｌ／５．５ｍＬ）中の（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート（１．０ｍｍｏｌ、３６１．３ｍｇ）の溶液に加えた。この混合物を室温で１時間反応させた。１．０Ｎ  ＨＣｌを用いて、この溶液をｐＨ３〜５に酸性化した。ｎ−ヘキサン（Ｆｉｓｈｅｒ、Ｎｅｐｅａｎ、Ｏｎｔａｒｉｏ、カナダ）で洗浄した後、この溶液をＤＣＭで抽出した。有機層を、１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、無水の硫酸ナトリウムを介して乾燥させてから、減圧下で濃縮した。高性能置換クロマトグラフィー（カラムは、Ｓｈｉｓｅｉｄｏカプセル（Ｃａｐｃｅｌｌ）（商標）パック（ＰＡＫ）Ｃ１８  ＡＱ  ５μｍ、２５０×４．６ｍｍ、４．０ｍｇ／ｍＬの酢酸セチルピリジニウムの水中０．１％酢酸溶液、流速１．０ｍＬ／分）により残留物を精製した。この生成物を、置換剤である、４．０ｍｇ／ｍｌの酢酸セチルピリジニウムの水中０．１％酢酸溶液により外に溶出させた。０．１Ｎ  ＨＣｌを用いて塩を交換させ凍結乾燥させた後、収率３２±４％、及び以下に記載の不純物の定量化に基づく純度９７．２±０．７％で、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドを得た。
【０１１２】
[00121]Ｃ２１Ｈ３４ＮＯ５Ｃｌ、白色の固形物、Ｒｔ＝６．６分（Ａ系）。ＨＲＭＳ：［Ｃ２１Ｈ３３ＮＯ５＋Ｈ＋］の計算値＝３８０．２４３７、実測値＝３８０．２４２６。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．３３（ｄｄ，７．２，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．９６（ｄｄ，９．９，３．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．４０（ｍ，１Ｈ，）、３．１８（ｄｄ，１２．３，３．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．０７（ｄｄ，１２．６２，９．９Ｈｚ，１Ｈ）、１．３２（ｄ，７．０Ｈｚ，６Ｈ）、１．３０（ｓ，９Ｈ）、１．２９（ｓ，９Ｈ）。
【０１１３】
[00122]（Ｓ）−イソプロテレノールビタルトレート及び（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドの光学異性体を、Ｓｈｉｓｅｉｄｏ製のキラルＣＤ−Ｐｈカラム（２５０×４．６ｍｍ、５μｍ、均一濃度の６０：４０の０．５Ｍ過塩素酸ナトリウム／水及びアセトニトリル、流速１．０ｍＬ／分）を用いたＨＰＬＣにより分離した。イソプロテレノールビタルトレートについては２２３ｎｍ、イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドについては２６４ｎｍでの吸収により、溶出プロファイルをモニターした。イソプロテレノールビタルトレートについては２２３ｎｍ、イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドについては２６４ｎｍでの吸光度により、及び、カーブフィッティングソフトウェアのＴＡＢＬＥＣｕｒｖｅ２Ｄ（Ｓｙｓｔａｔ）を用いることにより、光学的不純物を定量化した。（Ｒ）−イソプロテレノールビタルトレート及び（Ｒ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドの不純物を、それぞれ、２．０±０．３％及び３．３±０．２％と推定した。したがって、合成及び精製の間に引き起こされたラセミ化は、生じたとしても最低限であった。
【０１１４】
[00123]ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験で使用する（Ｓ）−イソプロテレノールヒドロクロリド及び（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドの光学純度は、９９．９％以上である。
【０１１５】
[00124]ｉｎ  ｖｉｖｏ試験：（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドは、ラットモデルにおける糖尿病性網膜症を試験するために使用した。アドレナリンの別の利点は製剤であり、すなわち、市販の点眼剤であるジピベフリンは（Ｒ，Ｓ）−アドレナリンのプロドラッグである。ジピベフリンはアドレナリンより親油性が高く、さらに、点眼剤溶液中で水に溶解し安定である。アドレナリンは角膜を通過する際に放出され、保護基の切断型であるピバリン酸は、高用量の経口投与の場合でも安全域が広い。ジピベフリンは、アドレナリンより１７倍良好に眼の吸収を高めるため、１回用量の量及び副作用の可能性を減少させることが可能になる（Ｍａｎｄｅｌｌら、１９７８）。同様の製剤のプロドラッグは、イソプロテレノールに首尾よく適用された（Ｈｕｓｓａｉｎ＆Ｔｒｕｅｌｏｖｅ、１９７５）。そのため、製剤した（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドがラットモデルの糖尿病性網膜症に及ぼす影響を調べた。
【０１１６】
[00125]点眼剤中の活性成分は（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートヒドロクロリドが０．１０％（ｗ／ｖ）であり、不活性成分は、Ｄ−マンニトールが１．８４％（ｗ／ｖ）、エデト酸二ナトリウムが０．００５％（ｗ／ｖ）、クロロブタノールが０．１０％（ｗ／ｖ）、ε−アミノカプロン酸が０．１６％（ｗ／ｖ）、塩化ナトリウムが０．５％（ｗ／ｖ）、塩化ベンザルコニウムが０．００３％（ｗ／ｖ）、及びポビドンが０．２０％（ｗ／ｖ）である。点眼剤のｐＨは、１．０Ｎ  ＨＣｌを用いて５．５に調節した。対照点眼剤は同様の不活性成分を有するが、活性成分を欠く。この点眼薬を毎月新たに調製し、４℃で保管した。４℃で１カ月の保管後、成分のＨＰＬＣプロファイルによれば、活性／不活性勾配の崩壊は検出されなかった。各点眼剤の体積は５０μＬであった。
【０１１７】
[00126]ラットモデルを用い、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート点眼剤による糖尿病性網膜症の予防について試験した。生後２カ月のオスのＳｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、カナダから購入した。このラットを、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＢＲＩ）の動物施設に収容した。収容設備及び全ての実験的操作は、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅのガイドラインの下に機能するＢＲＩ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認された。体重およそ２００から２５０ｇのオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて、体重１ｋｇ当り、０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）中６０ｍｇの用量で、β細胞毒のストレプトゾトシン（ＳＴＺ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＩ）の単回の腹腔内注射により糖尿病を誘発させた。非糖尿病の対照ラットには、クエン酸緩衝液のみを投与した。
【０１１８】
[00127]糖尿病誘発の１週間後、血糖モニタリングシステム（Ａｓｃｅｎｓｉａ  ＥＬＩＴＥ  Ｂｌｏｏｄ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｔｅｒ、Ｂａｙｅｒ  Ｉｎｃ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、ＯＮ、カナダ）を用い、尾静脈から採取した血液中の血糖値を定量した。血糖計の検出限度が３３ｍＭであったため、それを超える値は全て、最大値の３５ｍＭとした。血糖値が１５ｍＭを超える動物のみを試験に留めた。そのようにして、動物を、Ｉ群（ｎはおよそ２０）：非糖尿病ラット、ビヒクル投与；ＩＩ群（ｎはおよそ２０）：非糖尿病ラット、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートを含有する点眼剤投与；ＩＩＩ群（ｎはおよそ２０）：糖尿病ラット、ビヒクル投与；ＩＶ群（ｎはおよそ２０）：糖尿病ラット、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートを含有する点眼剤投与の４群の１つに割り当てた。
【０１１９】
[00128]点眼剤又はビヒクルは、１日２回、１週間に７日、２回の処置間に最低７時間の間隔をあけて、異なるラット群の角膜上に投与した。体重増加を促進し高血糖を制限するために、糖尿病ラットに２ＩＵのウルトラレンテインスリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、ＯＮ、カナダ）を１週間に３回、皮下注射した。動物の体重を毎週モニターした。
【０１２０】
[00129]レクチンに対する抗体で網膜毛細血管を染色することにより、（Ｓ）−イソプロテレノールが糖尿病性網膜症に及ぼす影響を試験した。ヒトの眼の黄斑に相当する網膜の中心部での毛細血管密度を分析した。
【０１２１】
[00130]糖尿病は、網膜において糖化を誘発する。（Ｓ）−イソプロテレノールは強力な糖化阻害剤であるため、（Ｓ）−イソプロテレノールが浸透すると、糖尿病の網膜毛細血管中の糖化が低減する。そのことから、レクチンに対する抗体で染色した網膜を、糖化したウシ血清アルブミンに対する抗体でも染色して、網膜毛細血管の糖化の程度を分析した。
【０１２２】
[00131]結果：
【０１２３】
[00132]マトリゲルアッセイにおいてＨＵＶＥＣｓの毛細血管形成を阻害することにより、カテコールアミン及び関連化合物の血管新生阻害活性を測定した（図１）。図１において使用した血管新生アッセイの条件下では、（Ｓ）−イソプロテレノールの効力は１０μＭ近辺である。ドパミンは、同じアッセイにおいて同程度の効力を示し（図２Ａ）、１μＭで有効な血管新生阻害活性を示した（Ｂａｓｕら、２００１）ことから、（Ｓ）−イソプロテレノールのｉｎ  ｖｉｖｏでの効力は１０μＭ未満と考え得る。
【０１２４】
[00133]本発明のいくつかの血管新生阻害剤の血管新生阻害性を表１Ａに掲載する。表１Ｂには、ドパミン、公知の血管新生阻害化合物、及び血管新生阻害効果を示さないいくつかのカテコールアミンを掲載する。図２Ａは、これらの化合物の血管新生阻害性を定量的に表したものであり、図２Ｂは、分析において使用した写真のうちの数枚である。
【０１２５】
[00134]ドパミンは、ドパミンＤ２受容体を介した血管新生阻害剤であり（Ｂａｓｕら、２００１）、一方、（Ｒ）−アドレナリン（カテコールアミン系の化合物に属する）は、β２−アドレナリン作動性受容体を介して血管を新生する（Ｔｈａｋｅら、２００６）。構造上はドパミンと類似している（Ｓ）−ノルアドレナリンが血管新生阻害性でないのに対し、（Ｓ）−ノルアドレナリンと比較してドパミンとの類似性は低い（Ｓ）−イソプロテレノールが血管新生阻害性であるということは、驚くべき、且つ、予想外のことであった。そのうえ、類似性のさらに低い（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリンは、（Ｒ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリンがβ２−アドレナリン作動性受容体作動薬であるにもかかわらず、血管新生阻害性であった（Ｗａｌｋｅｒら、１９８５）。結果的に、表１Ａに掲載した化合物の血管新生阻害活性は、予想外のものである。
【０１２６】
[00135]（Ｒ）−イソプロテレノールは、血管新生性であることが知られており、ラセミ混合物（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールは血管新生阻害活性を示さなかったことから、（Ｓ）−イソプロテレノールの血管新生阻害活性と競合している。そのことから、血管新生阻害活性を発現するために必要な（Ｓ）−イソプロテレノールの光学純度を、多様な光学純度の（Ｓ）−イソプロテレノールを用いて調べた（図３）。（Ｓ）−イソプロテレノールの光学純度が９７重量％以上である場合には血管新生阻害活性が観察されたが、光学的な純粋性が９５重量％の（Ｓ）−イソプロテレノールは、血管新生阻害性ではない状態から血管新生阻害性への移行途中であった。したがって、光学純度が少なくとも９７重量％の（Ｓ）−イソプロテレノールが好ましく、より好ましくは少なくとも９９．９重量％、さらにより好ましくは少なくとも９９．９９重量％であるが、その理由は、標的組織中のβ２−アドレナリン作動性受容体のｉｎ  ｖｉｖｏでの発現率は、アッセイにおいて使用したＨＵＶＥＣｓにおける発現率より高い可能性があるからであり、そのため、薬物中の（Ｒ）−イソプロテレノールのさらなる排除が必要となる。
【０１２７】
[00136]表１Ａ及び１Ｂに掲載したいくつかの（Ｓ）−アドレナリンは、（Ｓ）−ノルアドレナリン、（Ｒ，Ｓ）−アドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリン、（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン（Ｃｏｌｔｅｒｏｌ）及びイソエタリンである。親油性が最も低い（Ｓ）−ノルアドレナリンは血管新生阻害性ではなかったが、より親油性の高い（Ｓ）−Ｎ−エチルノルアドレナリン、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリン、（Ｓ）−イソプロテレノール、（Ｓ）−Ｎ−ブチルノルアドレナリンは、血管新生阻害活性を示した。ラセミ混合物においては、比較的親油性の（Ｒ，Ｓ）−アドレナリン及び（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールは、血管新生阻害活性を示さなかった。しかしながら、より親油性の高い（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルノルアドレナリン及びイソエタリンは、血管新生阻害活性を示した。これらのアドレナリンの（Ｒ）−アイソフォームは、それらのβ２−アドレナリン作動性受容体作動薬の活性により血管を新生するため、これらのアドレナリンの（Ｓ）−アイソフォームの血管新生阻害活性は、それらの親油性が増すにつれて高まると考え得る。本発明において有用な他のいくつかの（Ｓ）−アドレナリンの例を図７に掲載する。
【０１２８】
【表１】
2010516716.tif 000007
【０１２９】
【表２】
2010516716.tif 000008
【０１３０】
[00137]（Ｓ）−イソプロテレノール及びその類似体が糖化阻害剤であり（Ｙｅｂｏａｈら、２００５）、それらは血管新生阻害性であると本発明者らが今回見出したことから、糖化及び血管新生が両方とも、疾患、例えば糖尿病性網膜症の一因となっている場合には、これらの活性は相乗効果を示すと考えられる。そのような用途の場合は、糖化阻害活性及び血管新生阻害活性は有するがアドレナリン作動活性をもたない化合物及びそのプロドラッグが好ましい。より具体的には、（Ｓ）−イソプロテレノール及びそのプロドラッグがとりわけ興味深い。図９に掲載した数種のプロドラッグは、（Ｓ）−Ｎ−エチルアドレナリンジピバレート、（Ｓ）−Ｎ−プロピルノルアドレナリンジピバレート、（Ｓ）−Ｎ−ｎ−ブチルノルアドレナリンジピバレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジイソブチレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジベンゾイレート、（Ｓ）−イソプロテレノールジトルオイレート及びイソエタリンジピバレートである。数種のプロドラッグについて血管新生阻害活性を測定した結果、図１０に示すとおり、血管新生阻害活性は全くないか、又は弱かった。数種のプロドラッグの一部は、２２時間のインキュベーション期間中に加水分解されて血管新生阻害性の（Ｓ）−イソプロテレノールになる可能性があることを考えると、図１１のプロドラッグは、血管新生阻害性がないか、又は非常に弱い血管新生阻害剤である可能性がある。
【０１３１】
[00138]腫瘍細胞浸潤は、腫瘍が１つの組織から他の組織へ遊走する、癌発生の後期段階に含まれる過程である。本発明は、腫瘍細胞浸潤を予防する、（Ｓ）−イソプロテレノールの新規の活性を提供する。図３は、（Ｓ）−イソプロテレノール（２０μＭ）がマトリゲル中のＨＵＶＥＣｓの浸潤を６０％低減させたことを示すものである。対照的に、その光学異性体である（Ｒ）−イソプロテレノールは、浸潤阻害活性を一切示さなかった。血管新生阻害活性と共に、（Ｓ）−イソプロテレノールは、腫瘍転移を治療するための二重の活性を有する。
【０１３２】
[00139]本発明は、成分の血管新生阻害活性がβ２−アドレナリン作動性の作動薬要素（複数も）の血管新生活性を上回り、β２−アドレナリン作動活性が本発明の治療効果を妨げず、アドレナリン作動性の有害作用をもたらさないということでない限り、（Ｒ）−イソプロテレノールなどβ２−アドレナリン作動性の作動薬活性を有する化合物の使用を除外するが、それは、β２−アドレナリン作動性の作動薬が血管新生性だからである（Ｔｈａｋｅｒら、２００６）。
【０１３３】
[00140]本発明は、芳香族ヒドロキシル基（複数も）が修飾されている（Ｓ）−イソプロテレノール及びその類似体のプロドラッグの使用を含む。このプロドラッグは、親油性が高いため、組織への吸収及び浸透を向上及び加速させると考えられる。さらに、このプロドラッグは、保管中の酸化などの化学反応から芳香族ヒドロキシル基（複数も）を保護もする。さらに、このプロドラッグは、対応する薬物と比較した場合、紫外光感受性が低い。
【０１３４】
[00141]血管新生阻害活性のため、又、アドレナリン作動性の有害作用を最小化するために高い光学純度が望ましい場合には、プロドラッグは、保管中のラセミ化を低減させる。表２には、多様な点眼製剤中において５５℃で１０日間インキュベーションした後の（Ｓ）−イソプロテレノール及び（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートの光学純度を記載し、インキュベーション前のものと比較してある。５５℃で１０日間のインキュベーションは、２２℃で１６７日間のインキュベーションに相当する。
【０１３５】
[00142]５５℃で１０日インキュベートした後の（Ｓ）−イソプロテレノールの平均光学純度は９７．３５±０．５２％であり、結果として、（Ｓ）−イソプロテレノールの２．５５％が（Ｒ）−イソプロテレノールに変換したことになる。このことは、室温での６５５日の保管後に、（Ｓ）−イソプロテレノールの光学純度が９９．９０％から９０％に低下したことに相当する。これに反し、５５℃で１０日インキュベートした後の（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートの平均光学純度はおよそ９９．８５±０．０８％であり、結果として、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートの０．０２％が、対応する（Ｒ）−アイソフォームに変換したことになる。このことは、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートの光学純度は、室温で２年保管した後は、９９．８７％から９９．７８％に低下することを示唆するものである。（Ｓ）−イソプロテレノールの高い光学純度は、血管新生阻害活性にとって非常に望ましいことから、プロドラッグ製剤が好ましい。プロドラッグ製剤は、ピバレートエステルに限定されない。芳香族ヒドロキシル基の保護基の例をいくつか図８に掲載する。
【０１３６】
【表３】
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【０１３７】
【表４】
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【０１３８】
[00143]ストレプトゾトシンを用いて、ラットにおいて糖尿病を誘発させた。非糖尿病ラット及び糖尿病ラットについて、１週間に１回、２７週の期間にわたり血糖値をモニターした。対照である非糖尿病動物（黒菱形）のＩ群（ビヒクル投与）及びＩＩ群（プロドラッグ投与）は、それぞれ、５．１±０．４ｍＭ及び５．１±０．４ｍＭの一定した血糖値を有する。ＩＩＩ群（ビヒクル投与）及びＩＶ群（プロドラッグ投与）の糖尿病ラットについては、糖尿病誘発の最初の２週間の間に血糖値の上昇が認められた。その後、血糖値は、それぞれ、２８±４ｍＭ及び２７±５ｍＭで安定した。５ｍＭ前後の血糖値を正常とみなすことから、Ｉ群及びＩＩ群のラットは非糖尿病である。血糖値が１５ｍＭを超える場合は、ラットを糖尿病とみなす。したがって、ＩＩＩ群及びＩＶ群のラットは全て糖尿病である。Ｉ群とＩＩ群との間、及びＩＩＩ群とＩＶ群との間の血糖値が一致していることから、（Ｓ）−イソプロテレノールは血糖値及び糖尿病に影響しないことが示される。
【０１３９】
[00144]（Ｓ）−イソプロテレノールが体重の減少／増加に及ぼす可能性がある別の有害作用をモニターした。実験期間中の体重増加は、図５ＡのＩ群（ビヒクル投与の非糖尿病ラット）と図５ＢのＩＩ群（プロドラッグ投与の非糖尿病ラット）との間で本質的に同じであり、このことから、非糖尿病ラットの体重の増加／減少において（Ｓ）−イソプロテレノールの影響はないことが示唆される。体重増加は、非糖尿病ラットの場合と比較して糖尿病ラットにおいてはるかに少ない（Ｃｈｅｎら、２００４）が、図５ＡのＩＩＩ群（ビヒクル投与の糖尿病ラット）の体重増加は、図５ＢのＩＶ群（プロドラッグ投与の糖尿病ラット）の場合と本質的に同じであり、このことから、糖尿病ラットの体重の増加／減少において（Ｓ）−イソプロテレノールの影響はないことが示される。
【０１４０】
[00145]ラットは、血管新生阻害性を直接試験するのに適切なモデル生物ではないが、薬物が眼の網膜に浸透する能力を試験するにはラットを使用し得る。（Ｓ）−イソプロテレノールが強力な糖化阻害剤であることは公知である（Ｙｅｂｏａｈら、２００５）。（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート点眼剤を用いて網膜糖化を阻害することにより、網膜中に（Ｓ）−イソプロテレノールが送達されることを実証した。糖化したウシ血清アルブミンに対する抗体は、糖化した網膜タンパク質を赤色蛍光に染色した。上述の糖化阻害抗体の赤色蛍光を抗レクチン抗体の緑色蛍光と重ねることにより網膜毛細血管の糖化を評価した結果、糖化度の低い健康な網膜毛細血管は緑色から明るいオレンジ色の蛍光に、又、高度に糖化した網膜毛細血管は赤色蛍光になった。糖化の度合いの最も低い非糖尿病ラットの眼の網膜毛細血管は、緑色から明るいオレンジ色の蛍光を示した。（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートを投与した糖尿病ラットの眼では、同様の健康な毛細血管が観察された。ビヒクルを投与した糖尿病ラットの眼の網膜毛細血管は赤色蛍光に染色され、又、少なめの数の毛細血管が染色されたことから、網膜毛細血管は損傷を受けてもいた。図６は、網膜毛細血管の密度によりＡＧＥの赤色蛍光の強さを正規化することにより効果を定量化したもので、結果は、非糖尿病ラット、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート治療を施した糖尿病ラット及びビヒクル投与の糖尿病ラットについて、それぞれ、０．４３±０．１５、０．４４±０．１７及び０．７６±０．１４であった。Ｐ値は、非糖尿病ラット対ビヒクル投与の糖尿病ラット、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート投与の糖尿病ラット対ビヒクル投与の糖尿病ラット、及び非糖尿病ラット対（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレート投与の糖尿病ラットについて、それぞれ、０．０５２、０．０６８及び０．９７１である。ビヒクルを投与した糖尿病の網膜に豊富な無細胞の毛細血管は高度に糖化されると予想されるため、ビヒクル投与の糖尿病ラットについての糖化度は図６における０．７６±０．１４より高いと考えられ、したがって、（Ｓ）−イソプロテレノールジピバレートは（Ｓ）−イソプロテレノールを網膜中に有効に送達し、網膜毛細血管における糖化を顕著に低減させたことが実証される、という点に注目すべきである。（Ｓ）−イソプロテレノールは、その血管新生阻害効果を発揮できる眼の網膜に有効に送達できるため、この物質は、糖尿病性網膜症の治療及び／又は予防において有用と予想される。
【０１４１】
[00146]好ましい一実施形態では、本発明は、血管新生及び／又は浸潤に関する疾患を予防及び／又は治療するための、イソプロテレノールの（Ｓ）−アイソフォーム及びその類似体の新規の使用を提供する。これらの化合物は、本出願にとって重要ないくつかの規準を満たす。まず、（Ｓ）−イソプロテレノール及びその類似体の血管新生阻害活性が高いことである。細胞レベルでの血管新生阻害活性は、１ｍＭ以下、好ましくは１００μＭ以下、より好ましくは２０μＭ以下で観察できなくてはならない。２番目に、（Ｒ）−アイソフォームの特徴であるアドレナリン作動活性が（Ｓ）−アイソフォームに対して意味をもたないことである。アドレナリンの（Ｓ）−アイソフォームのアドレナリン作動活性は、対応する（Ｒ）−アイソフォームのものよりはるかに低い（Ｐａｔｉｌら、１９７４）。とりわけ、最大２０％の（Ｓ）−イソプロテレノールヒドロクロリドを局所投与しても、ヒトの眼における眼内圧低下の兆候は一切示されなかった（Ｋａｓｓら、１９７６）。
【０１４２】
[00147]イソプロテレノールの（Ｓ）−アイソフォーム及びその類似体は、アドレナリン作動性としては不活性で、局所投与及び全身投与用として安全であると考えられる。アドレナリン作動性の作動薬の最も多い市販薬はラセミ混合物であるという証拠は、（Ｓ）−異性体が不活性であることについての強い実際上の理由となる（Ｂｏｕｌｔｏｎ＆Ｆａｗｃｅｔｔ、２００２）。本発明の好ましい一実施形態による調製物は、アドレナリン作動性受容体を刺激することによる有害作用の可能性を低減させるため、イソプロテレノールの（Ｓ）−アイソフォーム及びその類似体のみを含有する。
【０１４３】
[00148]イソプロテレノールは、１日２回投与など無理のない頻度の投与に向く、十分長い持続時間を有することが公知であり、例えば、２．４７％の（Ｒ，Ｓ）−イソプロテレノールを正常なヒトの眼に滴下すると眼圧が２０％低下することが観察され、それが少なくとも１２時間続いた（Ｒｏｓｓ＆Ｄｒａｎｃｅ、１９７０）。
【０１４４】
[00149]（Ｓ）−イソプロテレノールは、一旦血液循環系中に入ると代謝されて３−メチル−（Ｓ）−イソプロテレノールとなり、その血漿の半減期は３．０から４．１分の範囲であり（Ｃｏｎｗａｙら、１９６８）、（Ｓ）−イソプロテレノールの一切の全身有害作用の可能性は最小限である。
【０１４５】
[00150]参考文献：これを参照することにより、各文献の全体の内容が組み込まれる。
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【０１４６】
[00151]この構造に固有の他の利点は、当業者には自明である。実施形態は、例証として本明細書に記載するものであり、特許請求する本発明の範囲を限定することを意図したものではない。前述の実施形態の変形は当業者には明白であり、本発明者は、以下の特許請求の範囲によりこれらが包含されることを意図するものである。
【図２Ａ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１】
2010516716.tif 000025
【図２Ｂ】
2010516716.tif 000026
【図５Ａ】
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【国際調査報告】
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