(57)【要約】本発明は、ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターを含む、癌およびその他の新生物を処置するための併用療法を提供する。ロミデプシンとプロテアソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）を組み合わせて投与すると、その両者は相乗的に相互作用して、低濃度（ナノモル）で悪性細胞を選択的に死滅させる。この作用は、悪性の血液系細胞（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫など）において特に顕著である。また、この組み合わせは、ボルテゾミブ抵抗性癌およびステロイド抵抗性癌の処置にも有効であることが分かっている。本発明は、インビトロおよびインビボにおいて悪性細胞を死滅させる方法を提供する。また、ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターを含む医薬組成物、調製物、およびキットも提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な量のロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターを、癌またはその他の新生物を患う被検体に投与する工程を含む、被検体における癌またはその他の新生物を処置する方法。
【請求項２】
ロミデプシンが以下の化学式のものである、請求項１に記載の方法：
【化９】
2010516767.tif 000014
。
【請求項３】
前記プロテアソームインヒビターが、ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）、ペプチドボロン酸、サリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）、ラクタシスチン、エポキソミシン（Ａｃ（Ｍｅ）−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−ＥＸ）、ＭＧ−１３２（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ａｌ）、ＰＲ−１７１、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、アクラシノマイシンＡ、ＣＥＰ−１６１２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１（ピラジルカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）、ＰＳＩ（Ｚ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ａｌ）、ＭＧ−２６２（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ｂｏｒ）、ＰＳ−２７３（ＭＮＬＢ）、オムラリド（ｃｌａｓｔｏ−ラクタシスチン−β−ラクトン）、ＮＬＶＳ（Ｎｉｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ビニルスルホン）、ＹＬＶＳ（Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ｖｓ）、ジヒドロエポネマイシン、ＤＦＬＢ（ダンシル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）、ＡＬＬＮ（Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ａｌ）、３，４−ジクロロイソクマリン、４−（２−アミノエチル）−ベンゼンスルホニルフルオリド、ＴＭＣ−９５Ａ、グリオトキシン、ＥＧＣＧ（（−）−エピガロカテキン−３−ガレート）、およびＹＵ１０１（Ａｃ−ｈＦＬＦＬ−ｅｘ）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記プロテアソームインヒビターがボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記プロテアソームインヒビターがピラジルカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート（ＰＳ−３４１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記プロテアソームインヒビターがサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記プロテアソームインヒビターがＰＲ−１７１である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記癌が血液系細胞の悪性腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が白血病である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌がリンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌が非ホジキンリンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌がホジキンリンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌が皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）である、請求項１に載の方法。
【請求項１５】
前記癌がリンパ増殖性悪性腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が多発性骨髄腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記癌が形質細胞由来の癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記癌が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌が急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記癌が固形腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌が前立腺癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記癌が再発した癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記癌が難治性癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌がボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）抵抗性癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記癌がステロイド抵抗性癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌がデキサメタゾン抵抗性多発性骨髄腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約０．５ｍｇ／ｍ２から約２８ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約１ｍｇ／ｍ２から約１５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約４ｍｇ／ｍ２から約１５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約８ｍｇ／ｍ２から約１４ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約４ｍｇ／ｍ２から約１０ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約８ｍｇ／ｍ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約１０ｍｇ／ｍ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約１２ｍｇ／ｍ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が約１４ｍｇ／ｍ２である、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約０．１ｍｇ／ｍ２から約５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項３８】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約０．５ｍｇ／ｍ２から約３ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項３９】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約１ｍｇ／ｍ２から約２．５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項４０】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約０．７５ｍｇ／ｍ２から約２ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項４１】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約０．７５ｍｇ／ｍ２から約１．５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項４２】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約０．５ｍｇ／ｍ２から約１．２５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項４３】
前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が約１．３ｍｇ／ｍ２である、請求項４に記載の方法。
【請求項４４】
前記ロミデプシンの治療上有効な量が４ｍｇ／ｍ２から１５ｍｇ／ｍ２の範囲であり、前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量が０．５ｍｇ／ｍ２から３ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項４５】
ロミデプシンまたはボルテゾミブのそれぞれが、それぞれが単独で投与されるときよりも低い投与量で組み合わせて投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項４６】
前記組み合わせて投与されるロミデプシンおよびボルテゾミブの投与量がともに、前記それぞれが単独で投与される投与量よりも低い、請求項４に記載の方法。
【請求項４７】
別の抗腫瘍性剤を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４８】
細胞傷害性剤を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４９】
ステロイド剤を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５０】
前記ステロイド剤が、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸ベタメタゾン・リン酸ベタメタゾンナトリウム、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、ピバル酸クロコルトロン、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、酢酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、酪酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、シピオン酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、リン酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾールナトリウム、コハク酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾールナトリウム、吉草酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、酢酸コルチゾン、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、二酢酸ジフロラゾン、酢酸フルドロコルチゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオロメトロン、フルランドレノリド、ハルシノニド、メドリゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、フランカルボン酸モメタゾン、酢酸パラメタゾン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、およびトリアムシノロンヘキサアセトニド、ならびにこれらの組み合わせ物からなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ステロイド剤がプレドニゾロンである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ステロイド剤がデキサメタゾンである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
デキサメタゾンが、０．２５ｍｇから１００ｍｇまでの用量範囲で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
デキサメタゾンが、５ｍｇから６０ｍｇまでの用量範囲で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
デキサメタゾンが、１０ｍｇから５０ｍｇまでの用量範囲で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
デキサメタゾンが、約４０ｍｇの用量で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
デキサメタゾンが、約２０ｍｇの用量で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
ロミデプシンおよび前記プロテアソームインヒビターが静脈内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５９】
前記ロミデプシンおよび前記プロテアソームインヒビターのそれぞれが、２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６０】
ロミデプシンが週１回投与され、かつ前記プロテアソームインヒビターが週２回投与される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ステロイド剤が、２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、週４回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６２】
前記ステロイド剤が、前記ロミデプシンまたは前記プロテアソームインヒビターとともに投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６３】
前記ステロイド剤が、ロミデプシンまたは前記プロテアソームインヒビターの投与前または投与後に投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６４】
前記ステロイド剤が、ロミデプシンまたは前記プロテアソームインヒビターを投与する５日から７日前に投与される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
治療上有効な量のロミデプシンおよびボルテゾミブを、多発性骨髄腫を患う被検体に投与する工程を含む、被検体における多発性骨髄腫を処置する方法。
【請求項６６】
前記治療上有効な量のロミデプシンが４ｍｇ／ｍ２から１５ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記治療上有効な量のロミデプシンが８ｍｇ／ｍ２から１０ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記治療上有効な量のボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）が０．５ｍｇ／ｍ２から３ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
前記治療上有効な量のボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）が約１．３ｍｇ／ｍ２である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記治療上有効な量のロミデプシンが８ｍｇ／ｍ２から１０ｍｇ／ｍ２の範囲であり、前記治療上有効な量のボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）が約１．３ｍｇ／ｍ２である、請求項６５に記載の方法。
【請求項７１】
ロミデプシンが週１回投与され、かつボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）が週２回投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
ステロイド剤を投与する工程をさらに含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項７３】
前記ステロイド剤が、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、プロピオン酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸ベタメタゾン・リン酸ベタメタゾンナトリウム、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、ピバル酸クロコルトロン、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、酢酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、酪酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、シピオン酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、リン酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾールナトリウム、コハク酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾールナトリウム、吉草酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、酢酸コルチゾン、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、二酢酸ジフロラゾン、酢酸フルドロコルチゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオロメトロン、フルランドレノリド、ハルシノニド、メドリゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、フランカルボン酸モメタゾン、酢酸パラメタゾン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、およびトリアムシノロンヘキサアセトニド、もしくはこれらの合成類似化合物、またはこれらの組み合わせ物からなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記ステロイド剤がプレニゾロンである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ステロイド剤がデキサメタゾンである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
デキサメタゾンが、０．２５ｍｇから１００ｍｇまでの用量範囲で投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
デキサメタゾンが、約４０ｍｇの用量で投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
デキサメタゾンが、約２０ｍｇの用量で投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記ロミデプシンおよび前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）のそれぞれが、２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、週４回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与される、請求項６５に記載の方法。
【請求項８０】
ロミデプシンが週１回投与され、かつ前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）が週２回投与される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ステロイド剤が、２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、週４回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８２】
前記ステロイド剤が、前記ロミデプシンまたは前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）とともに投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８３】
前記ステロイド剤が、ロミデプシンまたは前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の投与前または投与後に投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８４】
前記ステロイド剤が、ロミデプシンまたは前記ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）を投与する５日から７日前に投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項８５】
ロミデプシンおよびボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）を組み合わせて細胞に投与する工程を含む、細胞を処理する方法。
【請求項８６】
前記投与する工程が、ロミデプシンおよびボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）を組み合わせて、細胞を死滅させるのに十分な濃度で該細胞に投与する工程を含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ＩＣＡＭ−１、およびｃ−ＦＬＩＰからなる群から選択される抗アポトーシスタンパク質をアッセイする工程をさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
ＪＮＫ経路のタンパク質をアッセイする工程をさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８９】
前記細胞が癌細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記細胞が癌細胞株に由来している、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記細胞が原発癌に由来している、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９３】
前記細胞が齧歯動物細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記細胞がヒト細胞である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
前記細胞がボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）に抵抗性である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
前記細胞が、ステロイドによる処理に不応性である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
細胞におけるＪＮＫ経路を活性化するのに有効な量のロミデプシンおよびボルテゾミブを投与する工程を含む、細胞におけるＪＮＫ経路を活性化する方法。
【請求項９８】
ロミデプシンおよびボルテゾミブのそれぞれの濃度が、約１ｎＭから約１００ｎＭの範囲である、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
ロミデプシンおよびボルテゾミブのそれぞれの濃度が、約１ｎＭから約１０ｎＭの範囲である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
細胞におけるＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質を下方制御するのに有効な量のロミデプシンおよびボルテゾミブを投与する工程を含む、細胞におけるＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質を下方制御する方法。
【請求項１０１】
デプシペプチドおよびボルテゾミブのそれぞれの濃度が、約１ｎＭから約１００ｎＭの範囲である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
デプシペプチドおよびボルテゾミブのそれぞれの濃度が、約１ｎＭから約１０ｎＭの範囲である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
細胞においてアポトーシスを誘導するのに有効な量のロミデプシンおよびボルテゾミブを投与する工程を含む、細胞においてアポトーシスを誘導する方法。
【請求項１０４】
前記細胞がＣＤ１３８＋細胞である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
細胞においてカスパーゼ−１２の切断を誘導するのに有効な量のロミデプシンおよびボルテゾミブを投与する工程を含む、細胞においてカスパーゼ−１２の切断を誘導する方法。
【請求項１０６】
細胞において抗アポトーシスタンパク質の発現低下をもたらす量のロミデプシンおよびボルテゾミブを投与する工程を含む、細胞において抗アポトーシスタンパク質の発現を低下させる方法。
【請求項１０７】
前記抗アポトーシスタンパク質が、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ＩＣＡＭ−１、およびｃ−ＦＬＩＰからなる群から選択される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
治療上有効な量のロミデプシンおよび治療上有効な量のボルテゾミブを含む、癌を処置するための医薬組成物。
【請求項１０９】
前記ロミデプシンおよびボルテゾミブが別々にパッケージされている、請求項１０８に記載の医薬組成物。
【請求項１１０】
前記ロミデプシンおよびボルテゾミブのそれぞれの量が、癌を処置するために単独で用いられる該薬剤の量よりも少ない、請求項１０８に記載の医薬組成物。
【請求項１１１】
前記癌が多発性骨髄腫である、請求項１０８に記載の医薬組成物。
【請求項１１２】
前記癌がＣＬＬである、請求項１０８に記載の医薬組成物。
【請求項１１３】
請求項１０８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項１１４】
請求項１０８に記載の医薬組成物を複数の投薬単位で含む、請求項１１３に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願
本出願は、米国特許法第１１９条第ｅ項の下、２００７年１月２３日に出願された米国仮出願第６０／８８６，１６９号、および２００７年１２月７日に出願された同第６１／００５，７７４号に優先権の主張をしており、それらの各々を参照として本明細書中に援用する。
【背景技術】
【０００２】
ロミデプシンは、藤沢薬品によってクロモバクテリウム・ビオラセウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）から単離された天然物である。特許文献１；１９９０年１２月１１日に発行された米国特許第４，９７７，１３８号参照。これらは、参照されて本明細書に組み込まれる。ロミデプシンは、４個のアミノ酸残基（Ｄ−バリン、Ｄ−システイン、デヒドロブチリン、およびＬ−バリン）および新規の酸（３−ヒドロキシ−７−メルカプト−４−ヘプテン酸）からなる二環式ペプチドである。ロミデプシンは、アミド結合およびエステル結合を含むデプシペプチドである。ロミデプシンは、Ｃ．ビオラセウムからの発酵処理によるだけでなく、合成手段または半合成手段によっても調製することができる。Ｋａｈｎらによって報告されたロミデプシンの全合成は１４の工程を含み、１８％の全収率でロミデプシンが得られる。非特許文献１。ロミデプシンの構造を以下に示す：
【０００３】
【化１】
2010516767.tif 000002
【０００４】
。
ロミデプシンには、抗菌活性、免疫抑制活性、および抗腫瘍活性があることが分かっている。これは、抗癌治療を開発する上で有望になった新たな標的である脱アセチル化酵素（例えば、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）、チューブリン脱アセチル化酵素（ＴＤＡＣ））を選択的に阻害することによって作用すると考えられている。非特許文献２。一つの作用機序は、一種類以上のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）を阻害することを含むと考えられる。
【０００５】
ヒストン脱アセチル化酵素は、その活性部位に亜鉛を有するメタロ脱アセチル化酵素である。非特許文献３。この酵素は、ヒストンのアセチル化を促すことによって遺伝子発現を調節し、それによって、クロマチンの弛緩を誘導し、また、普遍的ではないが、一般的に、転写の活性化を誘導すると考えられている。これらの酵素はＨＤＡＣとして知られているが、その他の多様な細胞過程にも関与するとされてきた。例えば、ＨＤＡＣインヒビターは、デスレセプター（ｄｅａｔｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の上方制御、Ｂｉｄ切断、ＲＯＳ産生、Ｈｓｐ９０の調節異常、およびとりわけセラミド産生など、多様なメカニズムを介して腫瘍性の細胞におけるアポトーシスを開始させることが分かっている。いくつかのＨＤＡＣインヒビターは、臨床の活舞台（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｒｅｎａ）に入っており、血液系悪性腫瘍（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）および非血液系悪性腫瘍の両方において活性を示している。ロミデプシンは、ある血液系悪性腫瘍、特にＴ細胞リンパ腫において目覚しい活性を示している（非特許文献４；これは参照されて本明細書に組み込まれる）。
【０００６】
ロミデプシン以外にも、さまざまな誘導体も調製されて研究されている。次の特許および特許出願には、ロミデプシンの多様な誘導体が記載されている：米国特許第６，５４８，４７９号；特許文献２；特許文献３；および特許文献４；これらはそれぞれ参照されて本明細書に組み込まれる。
【０００７】
プロテアソームインヒビターであるボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）は、２６Ｓプロテアソームの触媒ユニットの強力な阻害剤である。これは、さまざまな腫瘍性の細胞株においてアポトーシスを誘導する一方で、正常な細胞に対しては比較的低い毒性を及ぼすのみである。ボルテゾミブの致死性のメカニズムは明確には知られていないが、とりわけ、ＮＦ−κＢインヒビターであるＩκＢαのプロテアソーム分解からの回避に伴う二次的なＮＦ−κＢの阻害に因るものとされている。ボルテゾミブは、多発性骨髄腫において高い活性を示し、標準的な治療では治療が難しい骨髄腫患者における使用が認められている。最近の研究で、これがマントル細胞リンパ腫など、非ホジキンリンパ腫のいくつかの型に対しても活性を示すと考えられることが示唆されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許出願公開平７−６４８７２号（１９９５年）
【特許文献２】国際公開第０５／０２０９１３４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０５／０５８２９８号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０６／１２９１０５号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．  １１８：７２３７−７２３８，１９９６
【非特許文献２】Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２４１：１２６−１３３，１９９８
【非特許文献３】Ｆｉｎｎｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ，４０１：１８８−１９３，１９９９
【非特許文献４】Ｐｉｅｋａｒｚら、“Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ”Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．１０：２２８９−９８，２００４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）を組み合わせる、癌およびその他の新生物などの増殖性疾患の処置を提供する。本発明は、これらの医薬の両方を一緒に投与すると、これら２つの医薬の間に予想外の相乗効果が見られることが分かったために生まれたものである。すなわち、これら２つの薬を、各薬剤を個別に使用するときに通常用いるよりも少ない用量で投与しても、被検体の癌またはその他の新生物を処置するのに依然として有効でありえる。この相乗効果は、血液系細胞の悪性腫瘍を処置する場合に特に顕著である。例えば、多発性骨髄腫および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の処置において特に効果的な組み合わせが本明細書に示されている。ある実施形態において、このような低用量の組み合わせは、正常な細胞よりも腫瘍性の細胞に対して細胞傷害性が高い。本発明の併用療法は、難治性および／または再発性の癌（例えば、ボルテゾミブ抵抗性の癌、ステロイド抵抗性の癌）の処置において特に有用であることが分かっている。本発明は、本発明の薬剤の組み合わせて使用する方法を提供するだけでなく、本発明の組み合わせを含む医薬組成物およびキットも含む。
【００１１】
一つの局面において、本発明は、被検体に治療上有効な量のロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターを投与することによって、その被検体（例えば、ヒト）の癌を処置する方法を提供する。ある実施形態において、この組み合わせはロミデプシンおよびボルテゾミブを含む。これらの薬剤はいずれも、癌を患うヒト被検体を処置するために、臨床上利用されてきたものである。ある実施形態において、ロミデプシンおよびボルテゾミブを、それぞれ個別に使用する場合よりも低い投与量で組み合わせて使用することできる。別の実施形態において、この組み合わせの相加的な性質が、癌またはその他の新生物を処置するのに特に有用である。ある実施形態において、ロミデプシンは、０．５ｍｇ／ｍ２から１５ｍｇ／ｍ２の用量で、ボルテゾミブは、０．１ｍｇ／ｍ２から５ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。これら２つの薬は一緒に投与しても、一つずつ投与してもよい。本方法は、血液系悪性腫瘍（例えば、多発性骨髄腫、ＣＬＬ）を処置するのに特に有用である。ある実施形態において、癌はボルテゾミブに対して抵抗性を示す。ある実施形態において、癌はステロイド処置に対して抵抗性を示す。ある実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターは、別の抗新生物剤またはステロイド剤とともに投与される。一つの具体的な実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターは、ステロイド剤（例えば、プレドニソロン、デキサメタゾン）とともに投与される。ある実施形態において、ステロイド剤は、０．２５ｍｇ〜１００ｍｇ、または５ｍｇ〜６０ｍｇ、もしくは１０ｍｇ〜５０ｍｇの範囲の用量で投与される。具体的な実施形態において、ステロイド剤は、約４０ｍｇの用量で投与される。別の具体的な実施形態において、ステロイド剤は、約２０ｍｇの用量で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターは静脈内投与される。ある実施形態において、ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターのそれぞれを２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与する。ある実施形態において、ロミデプシンを週１回投与し、プロテアソームインヒビターを週２回投与する。ある実施形態において、ステロイド剤は、２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、週４回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与される。ある実施形態において、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはプロテアソームインヒビターと一緒に投与する。ある実施形態において、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはプロテアソームインヒビターを投与する前か後に投与する。例えば、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはプロテアソームインヒビターを投与する５〜７日前に投与してもよい。
【００１２】
別の局面において、本発明は、多発性骨髄腫を患う被検体に、治療上有効な量のロミデプシンおよびボルテゾミブを投与して、被検体（例えば、ヒト）の多発性骨髄腫を処置する方法を提供する。ある実施形態において、ロミデプシンの治療上有効な量の範囲は、４ｍｇ／ｍ２から１５ｍｇ／ｍ２または８ｍｇ／ｍ２から１０ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量の範囲は、０．５ｍｇ／ｍ２から３ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量は約１．３ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、ロミデプシンの治療上有効な量の範囲は８ｍｇ／ｍ２から１０ｍｇ／ｍ２であり、ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）の治療上有効な量は約１．３ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、ロミデプシンを週１回投与し、ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）を週２回投与する。いくつかの実施形態において、ロミデプシンおよびボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）は、ステロイド剤（例えば、プレドニソロン、デキサメタゾン）とともに投与される。ある実施形態において、ステロイド剤は、０．２５ｍｇ〜１００ｍｇ、または５ｍｇ〜６０ｍｇ、または１０ｍｇ〜５０ｍｇの範囲の用量で投与される。具体的な実施形態において、ステロイド剤は、約４０ｍｇの用量で投与される。別の具体的な実施形態において、ステロイド剤は、約２０ｍｇの用量で投与される。ある実施形態において、ステロイド剤は、２か月に１回、月１回、３週間に１回、２週間に１回、週１回、週２回、週４回、１日１回、またはさまざまな間隔で投与される。ある実施形態において、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）と一緒に投与する。ある実施形態において、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）を投与する前か後に投与する。例えば、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）を投与する５〜７日前に投与してもよい。
【００１３】
別の局面において、本発明は、細胞を、ロミデプシンと、ボルテゾミブなどのプロテアソームインヒビターとの組み合わせに接触させることによって、細胞をインビトロで処置する方法を提供する。細胞は、処置する細胞を死滅させるのに十分な濃度の該組み合わせによって処置することができる。ある実施形態において、アポトーシスの細胞内マーカーのレベルが変化することで明らかに示されるようにアポトーシスを誘導するのに十分な濃度の組み合わせが使用される。ある実施形態において、細胞は腫瘍性の細胞である。この細胞は、ヒト癌由来のものであっても、癌細胞株（例えば、多発性骨髄腫、ＣＬＬ）由来のものであってもよい。ある実施形態において、細胞は血液系細胞、具体的には白血球細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞など）である。ある実施形態において、細胞は、Ｂ細胞またはＴ細胞などのリンパ球である。ある実施形態において、細胞は形質細胞である。細胞は、如何なる分化または発達の段階にあってもよい。ある実施形態において、細胞は、ボルテゾミブに対して抵抗性を示す。ある実施形態において、細胞は、ステロイド剤（例えば、デキサメタゾン、プレドニソロンなど）に対して抵抗性を示す。本方法は、ある条件下（例えば、各薬剤の濃度、他の医薬との組み合わせ）で、ある組み合わせの細胞傷害性を評価するのに特に有用である。本発明の方法を利用して、併用療法に対する被検体の癌または新生物の感受性を確認することができる。また、本発明の組み合わせを利用して、細胞内におけるＪＮＫ経路を活性化させたり、細胞内におけるＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質またはその他の抗アポトーシスタンパク質を下方制御したり、および／または細胞内におけるカスパーゼ−１２の切断を誘導したりすることもできる。本発明の組み合わせによる、このような細胞経路の調節は、臨床目的のためであっても、研究目的のためであってもよい。
【００１４】
さらに別の局面において、ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターを含む医薬組成物または調製物が提供される。ある具体的な実施形態において、この組成物または調製物は、ロミデプシンおよびボルテゾミブを含む。この医薬組成物は、癌（例えば、多発性骨髄腫、ボルテゾミブ抵抗性多発性骨髄腫、ＣＬＬ）を処置するために治療上有効な量の各薬剤を含む。これらの医薬を組み合わせて投与すると相乗作用があるため、これらの薬剤を個別に送達する場合よりも各々の薬剤の量を少なくすることができる。この医薬組成物は、他の細胞傷害性薬剤または抗腫瘍性剤を含むことが可能である。この医薬組成物は、疼痛、悪心、脱毛、体重減少、体重増加、神経障害、不整脈、電解質欠乏症または平衡失調、貧血、血小板減少症、免疫抑制、皮膚症状、または癌もしくは癌処置に付随するその他の症状を緩和させるために、その他の薬剤も含むことができる。また、本発明は、便利な投薬形態にした本発明の医薬組成物を含むキットも提供する。薬剤は、キットの中で一緒に包装されていても、個別包装されていてもよい。このキットは、複数回投与用量分の各薬剤を含んでいてもよい。ある実施形態において、本キットは、被検体の癌の処置における化学療法の全コースを行うのに十分な量の各薬剤を含む。また、本キットは、本発明の組み合わせを投与するための賦形剤または装置を含むこともできる。本キットは、本発明の組み合わせを投与する上での説明書を含むこともできる。
（定義）
本明細書全体を通じて使用されているその他の用語の定義には以下のものがある：
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明確に別段の記載がない限り、複数形への言及も含む。従って、例えば、「一つの細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」という場合には、そのような細胞が複数の場合も含む。
【００１５】
「動物」：本明細書において用いる場合、「動物」という用語は、動物界の任意のものを意味する。いくつかの実施形態において、「動物」は、ヒトを意味し、如何なる発育段階にあってもよい。いくつかの実施形態において、「動物」は、ヒト以外の動物を意味し、如何なる発育段階にあってもよい。いくつかの実施形態において、動物とは、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、および／またはワーム（ｗｏｒｍ）などであるが、それらに限定されない。ある実施形態において、ヒト以外の動物は哺乳動物（例えば、齧歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、および／またはブタ）である。いくつかの実施形態において、動物はトランスジェニック動物、遺伝子改変動物、および／またはクローンであってもよい。
【００１６】
「デプシペプチド」：「デプシペプチド」という用語は、本明細書において用いる場合、エステル結合とアミド結合の両方を含むポリペプチドを意味する。天然型デプシペプチドは、通常は環状である。いくつかのデプシペプチドは、強力な抗生物質活性をもつことが分かっている。デプシペプチドの例は、アクチノマイシン、エンニアチン、バリノマイシン、およびロミデプシンなどである。
【００１７】
「有効量」：一般的には、ある活性薬剤、または薬剤を組み合わせしたものの「有効量」とは、所望の生物学的応答を誘発させるのに十分な量を意味する。当業者には理解されるように、本発明の組み合わせの有効量は、所望の生物的エンドポイント、送達されている薬剤の薬物動態、処置される疾患、投与方法、および患者などの因子に応じて変えることができる。例えば、本発明の組み合わせ（例えば、ロミデプシンおよびボルテゾミブ）の有効量とは、腫瘍負荷を軽減させたり、寛解を生じさせたり、患者を治癒させたりという結果をもたらす量のことである。
【００１８】
「ペプチド」または「タンパク質」：本発明では、「ペプチド」または「タンパク質」は、ペプチド結合によって連結した少なくとも３個のアミノ酸のつながりを含む。「タンパク質」または「ペプチド」という用語は、同義的に使用することができる。ペプチドは、好ましくは、天然型アミノ酸のみを含むが、当技術分野において知られている非天然型アミノ酸（すなわち、天然には存在しないが、ポリペプチド鎖に取り込むことができる化合物）および／またはアミノ酸類似体を代替的に用いることも可能である。また、ペプチド中のアミノ酸の一つ以上を、例えば、炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、共役、機能付加、またはその他の改変を行うためのリンカーなどの化学物質を付加することによって改変することもできる。ある実施形態において、ペプチドの改変は、より安定したペプチド（例えば、インビボにおける半減期の延長）をもたらすことができる。これらの改変には、ペプチドの環化、Ｄ−アミノ酸の取り込みなどが含まれる。これらの改変はいずれも、そのペプチドの所望の生物学的活性を実質的に阻害するものであるべきではない。ある実施形態において、ペプチドはデプシペプチドを意味する。
【００１９】
「ロミデプシン」：「ロミデプシン」という用語は、以下の化学構造をもつ天然物を意味する：
【００２０】
【化２】
2010516767.tif 000003
【００２１】
。
ロミデプシンは脱アセチル化酵素インヒビターであり、ＦＫ２２８、ＦＲ９０１２２８、ＮＳＣ６３０１７６、またはデプシペプチドという名前でも当技術分野において知られている。ロミデプシンの同定および調製については、１９９０年１２月１１日に発行された米国特許第４，９７７，１３８号に記載されており、これは参照されて本明細書に組み込まれる。この分子式はＣ２４Ｈ３６Ｎ４Ｏ６Ｓ２であり、分子量は５４０．７１ｇ／ｍｏｌである。ロミデプシンの化学名は（１Ｓ、４Ｓ、１０Ｓ、１６Ｅ，２１Ｒ）−７−［（２Ｚ）−エチリデン］−４，２１−ジイソプロピル−２−オキサ−１２，１３−ジチア−５，８，２０，２３−テトラアザビシクロ［８．７．６］トリコス−１６−エン−３，６，９，１９，２２−ペンタノンである。ロミデプシンは、１２８５１７−０７−７というＣＡＳ番号を割り当てられている。ロミデプシンは、結晶状態では、一般的には白色から淡黄白色の結晶または結晶性粉末である。「ロミデプシン」という用語には、この化合物およびその任意の医薬物形態が含まれる。ある実施形態において、「ロミデプシン」という用語は、その塩、プロドラッグ、エステル、保護型、還元型、酸化型、異性体、立体異性体（例えば、鏡像変異体、ジアステレオマー）、互変異性体、および誘導体も含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ（ボルテゾミブ）は、ヒト多発性骨髄腫細胞において、デプシペプチドによって誘導されるアポトーシスを顕著に増強する。ヒト骨髄腫のＵ２６６細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞を、３〜４ｎＭのボルテゾミブの非存在下または存在下で、２〜３ｎＭのロミデプシンＦＫ２８８に４８時間曝露し、その後、フローサイトメトリーによって、アネキシンＶ＋（アポトーシス）細胞の割合を測定した。その結果、ボルテゾミブおよびロミデプシンは、低い（ナノモル）濃度で投与されると相乗的に相互作用して、ヒト多発性骨髄腫細胞株においてアポトーシスを誘導する。
【図２】ロミデプシン（ＦＫ２８８）およびボルテゾミブは、ＣＤ１３８＋初代ヒト骨髄多発性骨髄腫細胞において相乗的に相互作用するが、その対応する正常ＣＤ１３８−細胞においてはそのように作用しない。初代ＣＤ１３８＋骨髄腫細胞を、多発性骨髄腫患者の骨髄サンプルから単離した。そして、ＣＤ１３８＋細胞およびＣＤ１３８−細胞を、３ｎＭのボルテゾミブとともに、またはボルテゾミブなしで、３ｎＭのロミデプシンによって２４時間処理し、その後、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ染色法およびフローサイトメトリーによってアポトーシスを測定した。ボルテゾミブおよびロミデプシンは、低い（ナノモル）濃度で投与されると、高度に相乗的に相互作用して初代ヒト多発性骨髄腫細胞においてアポトーシスを誘導するが、正常な骨髄細胞には何もしないため、このことが治療選択性の根拠となる可能性を示唆している。
【図３】ロミデプシン（ＦＫ２８８）／ボルテゾミブ（Ｂｔｚｍｂ）は、ステロイド抵抗性ヒト多発性骨髄腫細胞においてアポトーシスを相乗的に誘導する。デキサメタゾン感受性ヒト骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｓ）およびデキサメタゾン抵抗性ヒト骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｒ）を、２ｎＭのボルテゾミブとともに、またはボルテゾミブなしで、１ｎＭのロミデプシンに２４時間曝露し、その後、フローサイトメトリーによって、アネキシンＶ＋（アポトーシス）細胞の割合を測定した。その結果、これら２つの薬を低い（ナノモル）濃度で投与すると、ロミデプシンが、ステロイド抵抗性の多発性骨髄腫細胞におけるボルテゾミブの致死性を増強させることが明らかになった。
【図４】ロミデプシン（ＦＫ２８８）は、ボルテゾミブ抵抗性のＵ２６６多発性骨髄腫細胞におけるボルテゾミブの致死性を高める。ボルテゾミブ抵抗性細胞（Ｕ２６６／ＰＳ−Ｒ）を、ボルテゾミブの濃度を徐々に上げ、１２ｎＭの濃度に達するまで上昇させながらＵ２６６細胞を培養することによって作製した。Ｕ２６６／ＰＳ−Ｒ細胞を、５〜１５ｎＭのボルテゾミブとともに、またはボルテゾミブなしで、２ｎＭのロミデプシンにより４８時間処理し、その後、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ染色法およびフローサイトメトリーによってアポトーシスを評価した。ロミデプシンが、ボルテゾミブのみに抵抗性を示す多発性骨髄腫細胞においてボルテゾミブの致死性を増強させることが明らかになった。
【図５】ロミデプシン（ＦＫ２８８）とボルテゾミブの組み合わせは、ヒト骨髄腫細胞においてストレス関連キナーゼＪＮＫの活性化およびＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質の下方制御を誘導する。ヒト多発性骨髄腫（Ｕ２６６）細胞を、３ｎＭのボルテゾミブとともに、またはボルテゾミブなしで、２ｎＭのロミデプシンに４８時間曝露し、その後、イムノブロット解析を実施してＪＮＫ活性化（Ａ）およびＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質の発現（Ｂ）をモニターした。ヒト多発性骨髄腫細胞におけるロミデプシンとボルテゾミブの間の相乗的相互作用は、ストレス関連ＪＮＫ経路の活性化、およびいくつかのＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質（例えば、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、およびＸＩＡＰ）の下方制御を伴っている。
【図６】低濃度（３ｎＭ）で投与されるボルテゾミブ（Ｂｔｚｍｂ）およびロミデプシン（ＦＫ２８８）による組み合わせ処置は、初代ＣＬＬ細胞においてアポトーシスおよびカスパーゼ−１２切断を強力に誘導する。ロミデプシンおよびボルテゾミブは、ＥＲストレスに関係する可能性のある過程を介して、患者由来の初代ＣＬＬ細胞において相乗的に相互作用する。
【図７】ロミデプシン（ＦＫ２８８）とともに、またはそれがないところで、ボルテゾミブ（Ｂｔｚｍｂ）に曝露されたＣＬＬ細胞の顕微鏡写真（１００×）。各処置（それぞれ３ｎＭ；２４時間）は比較的非毒性であるが、組み合わせ処置はアポトーシス細胞を顕著に増加させている。
【図８】ＪＶＭ−３ＣＬＬ細胞株およびＭＥＣ−２（プロリンパ芽球性）ＣＬＬ細胞株におけるロミデプシン（ＦＫ２２８）／ボルテゾミブの相互作用（４８時間）。いずれの場合にも、細胞死の相乗的誘導が見られる。
【図９】初代ＣＬＬ細胞を、ロミデプシン（ＦＫ２８８）とともに、またはそれがないところで、ボルテゾミブ（Ｂｔｚｍｂ）（それぞれ３ｎＭ）に２４時間曝露し、その後ウエスタンブロット解析法を用いて、さまざまなアポトーシス調節タンパク質の発現をモニターした。ボルテゾミブおよびロミデプシンによる初代ＣＬＬ細胞の組み合わせ処置は、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ＩＣＡＭ−１、およびｃ−ＦＬＩＰなどの抗アポトーシスタンパク質の発現を顕著に減少させる。
【図１０】臨床試験デザイン。臨床試験は、再発性または難治性の多発性骨髄腫を患う患者におけるボルテゾミブ、デキサメタゾン、およびロミデプシンの非盲検、単一施設、単一群、第Ｉ／ＩＩ相の用量漸増試験の後、病勢悪化までロミデプシン維持治療を行うものであった。
【図１１】各患者の処置曝露の結果をまとめたグラフの一例を示す。
【図１２】最終処置用量レベルの分布を示す。用量レベル２が、ほとんどの患者にとって最終処置用量レベルである。
【図１３】患者における血小板減少症の動態の一例を示す。
【図１４】患者間における最良の応答結果をまとめたグラフである。免疫固定法陰性で完全寛解（ＣＲ）した者が１人、部分寛解（ＰＲ）した者が６人、またやや寛解（ＭＲ）した者が１人いた。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明は、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターを組み合わせて投与することで増殖性疾患を処置するための新規のシステムを提供する。これらの薬剤の組み合わせは相加的効果または相乗的効果をもたらすことができる。ある実施形態において、癌またはその他の新生物の処置において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターの間に相乗的相互作用があることが、本明細書に記載されているように実証されている。図１〜９参照。この相乗効果は、悪性の血液系細胞、具体的には白血球細胞（例えば、白血病細胞、リンパ腫細胞、および骨髄腫細胞）の場合に特に顕著である。如何なる特定の理論にも拘泥するものではないが、この効果は、薬剤の組み合わせによって、ミトコンドリア損傷および／または活性酸素種（ＲＯＳ）生成の誘導と連携してアポトーシスの相乗的誘導に起因し得る。
【００２４】
一つの仮説は、ロミデプシンによるＨＤＡＣ６インヒビターが介在するアセチル化によって生じるＨｓｐ９０機能およびダイニン機能の干渉によって、タンパク質のミスフォールディングおよびアグリソームの機能障害がもたらされ、その結果、プロテアソームの阻害と連動してアポトーシスの増強が生じるというものである。二番目の仮説は、ＮＫ−κＢ機能の干渉が、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターの組み合わせによる相乗作用に寄与している可能性があるというものである。ＨＤＡＣインヒビターが介在するｐ６５／ＲｅｌＡのアセチル化によって、ＮＦ−κＢの活性化がもたらされ、ＨＤＡＣインヒビターによって誘導されるＲＯＳの生成および致死性を促進する。ボルテゾミブなどのプロテアソームインヒビターは、同様の作用をすると考えられている。
【００２５】
ロミデプシンも、ボルテゾミブなどのプロテアソームインヒビターも、腫瘍性の細胞を選択的に標的とし、酸化的傷害を誘導して腫瘍性の細胞を死滅させ、また、相乗的に作用して、悪性細胞におけるアポトーシスを誘導することができるため、ロミデプシンと、プロテアソームインヒビターであるボルテゾミブとの組み合わせが癌の処置に有用であるかを試験したところ、本明細書に記載したように特に有効であることが分かった。ロミデプシンとボルテゾミブとの組み合わせは、悪性の血液系細胞を処置するのに特に有用であることが分かっている。本発明の組み合わせは、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、およびその他の血液系悪性腫瘍を処置するのに有用である。また、本発明の組み合わせは、薬剤抵抗性を示す悪性腫瘍、例えば、ボルテゾミブ抵抗性の多発性骨髄腫、およびステロイド抵抗性の悪性腫瘍、例えばデキサメタゾン抵抗性多発性骨髄腫を処置するのにも有用であることが分かっている。
【００２６】
これらの発見の基づき、本発明は、インビトロおよびインビボの両方において、本発明の組み合わせによって細胞を処置する方法を提供する。また、本発明は、本発明の組み合わせを含む医薬組成物およびキットも提供する。ある具体的な実施形態において、本発明の組み合わせはロミデプシンおよびボルテゾミブを含む。
ロミデプシン
ロミデプシンは以下の化学式をもつ環状デプシペプチドである：
【００２７】
【化３】
2010516767.tif 000004
【００２８】
。
ロミデプシンは任意の形状で提供することができる。薬学的に許容される形状が特に好適である。ロミデプシンの形状の例には、所望の活性（例えば、脱アセチル化酵素阻害活性、アグリソーム阻害、細胞傷害性）を有する塩、エステル、プロドラッグ、異性体、立体異性体（例えば、鏡像変異体、ジアステレオマー）、互変異性体、保護型、還元型、酸化型、誘導体、およびそれらを組み合わせたものが含まれるが、これらに限定されない。ある実施形態において、併用療法に使用されるロミデプシンは、医薬品等級の物質であり、かつ、米国薬局方、日本薬局方、および欧州薬局方の基準を満たすものである。ある実施形態において、ロミデプシンは、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．９％、または少なくとも９９．９５％である。ある実施形態において、ロミデプシンは、純度が少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．９％、または少なくとも９９．９５％のモノマーである。ある実施形態において、ロミデプシンの材料（例えば、酸化された材料、還元された材料、二量体またはオリゴマーの材料、副生成物など）では、不純物は検出されない。ロミデプシンは、一般的に、全体のその他未知物質を１．０％未満、０．５％未満、０．２％未満、または０．１％未満含む。ロミデプシンの純度は、外観、ＨＰＬＣ法、比旋光度法、ＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、紫外・可視分光法、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）解析法、元素分析法、ＬＣ−質量分析法、および質量分析法によって評価することができる。
【００２９】
本発明の併用療法は、ロミデプシンの誘導体を含むこともできる。ある実施形態において、ロミデプシンの誘導体は、以下の化学式（Ｉ）のものである：
【００３０】
【化４】
2010516767.tif 000005
【００３１】
ただし、式中、
ｍは１、２、３、または４であり；
ｎは０、１、２、または３であり；
ｐおよびｑは、それぞれ独立して１または２であり；
ＸはＯ、ＮＨ、またはＮＲ８であり；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、それぞれ独立して水素；非置換型か置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族化合物；非置換型か置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の複素脂肪族化合物；非置換型か置換型のアリール；または非置換型か置換型の複素アリールであり；かつ、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、それぞれ独立して水素；または置換型か非置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族化合物；およびその薬学的に許容される形状である。ある実施形態において、ｍは１である。ある実施形態において、ｎは１である。ある実施形態において、ｐは１である。ある実施形態において、ｑは１である。ある実施形態において、ＸはＯである。ある実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は非置換型か置換型、分岐型か非分岐型の非環状脂肪族化合物である。ある実施形態において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はすべて水素である。
【００３２】
ある実施形態において、ロミデプシンの誘導体は、以下の化学式（ＩＩ）のものである：
【００３３】
【化５】
2010516767.tif 000006
【００３４】
ただし、式中、
ｍは１、２、３、または４であり；
ｎは０、１、２、または３であり；
ｑは２または３であり；
ＸはＯ、ＮＨ、またはＮＲ８であり；
ＹはＯＲ８またはＳＲ８であり；
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して水素；非置換型か置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族化合物；非置換型か置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の複素脂肪族（ｈｅｔｅｒｏａｌｉｐｈａｔｉｃ）化合物；非置換型か置換型のアリール；または非置換型か置換型の複素アリールであり；  
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、それぞれ独立して、水素；置換型か非置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族化合物；およびその薬学的に許容される形状から選択される。ある実施形態において、ｍは１である。ある実施形態において、ｎは１である。ある実施形態において、ｑは２である。ある実施形態において、ＸはＯである。他の実施形態において、ＸはＮＨである。ある実施形態において、Ｒ２およびＲ３は非置換型か置換型、分岐型か非分岐型の非環状脂肪族化合物である。ある実施形態において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はすべて水素である。
【００３５】
ある実施形態において、ロミデプシンの誘導体は、以下の化学式（ＩＩＩ）のものである：
【００３６】
【化６】
2010516767.tif 000007
【００３７】
ただし、式中、
Ａは、生理学的条件下で切断されてチオール基を生じる部分であり、例えば、（チオエステル結合を形成するための）脂肪族または芳香族のアシル部分；（ジスルフィド結合を形成するための）脂肪族または芳香族のチオキシなど；およびその薬学的に許容される形状などが挙げられる。そのような脂肪族または芳香族の基には、置換型か非置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族基；置換型か非置換型の芳香族基；置換型か非置換型の複素芳香族基（ｈｅｔｅｒｏａｒｏｍａｔｉｃ  ｇｒｏｕｐ）；または置換型か非置換型の複素環基などを含み得る。Ａは、例えば、−ＣＯＲ１、−ＳＣ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１、または−ＳＲ２であってもよい。Ｒ１は独立して水素；置換型か非置換型のアミノ；置換型か非置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族；置換型か非置換型の芳香族基；置換型か非置換型の複素芳香族基；または置換型か非置換型の複素環基である。ある実施形態において、Ｒ１は水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ベンジル、またはブロモベンジルである。Ｒ２は、置換型か非置換型、分岐型か非分岐型、環状か非環状の脂肪族基；置換型か非置換型の芳香族基；置換型か非置換型の複素芳香族基；または置換型か非置換型の複素環基である。ある実施形態において、Ｒ２はメチル、エチル、２−ヒドロキシエチル、イソブチル、脂肪酸、置換型か非置換型のベンジル、置換型か非置換型のアリール、システイン、ホモシステイン、またはグルタチオンである。
【００３８】
ある実施形態において、ロミデプシンの誘導体は、以下の化学式（ＩＶ）または（ＩＶ’）のものである：
【００３９】
【化７】
2010516767.tif 000008
【００４０】
ただし、式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、同一であるか、相異なっており、アミノ酸側鎖部分を表しており、各Ｒ６は同一であるか相異なっており、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルを表しており、Ｐｒ１およびＰｒ２は、同一であるか相異なっており、水素またはチオール保護基を表している。ある実施形態において、アミノ酸側鎖部分は天然型アミノ酸に由来するものである。別の実施形態において、アミノ酸側鎖部分は非天然型アミノ酸に由来するものである。ある実施形態において、各アミノ酸側鎖は、−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、−Ｌ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ’、−Ｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ”、−Ｌ−Ａ、−Ｌ−ＮＲ”Ｒ”、−Ｌ−Ｈｅｔ−Ｃ（Ｏ）−Ｈｅｔ−Ｒ”、および-Ｌ−Ｈｅｔ−Ｒ”から選択された部分である。ただし、ＬはＣ１〜Ｃ６アルキレン基、Ａはフェニルまたは５員もしくは６員の複素アリール基、各Ｒ’は同一であるか相異なっていて、Ｃ１〜Ｃ４アルキルを表し、各Ｒ”は同一であるか相異なっていて、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルを表し、各−Ｈｅｔ−は同一であるか相異なっていて、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’’’）−、および−Ｓ−から選択される複素原子スペーサーであり、各Ｒ’’’は同一であるか相異なっていて、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルを表している。ある実施形態において、Ｒ６は−Ｈである。ある実施形態において、Ｐｒ１およびＰｒ２は同一であるか相異なっており、水素、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシによって任意で置換されているベンジル基、Ｃ１〜Ｃ６アシルオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、ピコリル、ピコリル−Ｎ−オキシド、アントリルメチル、ジフェニルメチル、フェニル、ｔ−ブチル、アダマンチル、Ｃ１〜Ｃ６アシルオキシメチル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシメチル、テトラヒドロピラニル、ベンジルチオメチル、フェニルチオメチル、チアゾリジン、アセトアミドメチル、ベンズアミドメチル、三級ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アセチルおよびその誘導体、ベンゾイルおよびその誘導体、カルバモイル、フェニルカルバモイル、ならびにＣ１〜Ｃ６アルキルカルバモイルから選択される保護基から選択される。ある実施形態において、Ｐｒ１およびＰｒ２は水素である。化学式（ＩＶ）および（ＩＶ’）をもつ、さまざまなロミデプシン誘導体が、２００６年１２月７日に公開されたＰＣＴ出願国際公開公報第２００６／１２９１０５号に開示されており；参照されて本明細書に組み込まれる。
【００４１】
ロミデプシンを調製する方法は、当技術分野において知られている。例えば、ロミデプシンを調製する方法の例が、２００６年１２月２９日に出願された米国特許出願第６０／８８２，６９８号；２００６年１２月２９日に出願された米国特許出願第６０／８８２，７０４号；および２００６年１２月２９日に出願された米国特許出願第６０／８８２，７１２号に記載されおり、その教示内容は、すべて参照されて本明細書に組み込まれる。ロミデプシンは天然産物であるため、一般的には、これを産生する微生物の発酵物から、これを単離して調製する。ある実施形態において、ロミデプシンまたはその誘導体を、例えば、クロモバクテリウム・ビオラセウムの発酵物から精製する。例えば、Ｕｅｄａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）４７：３０１−３１０，１９９４；Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２４１：１２６−１３３，１９９８；国際公開公報第０２／２０８１７号；米国特許第４，９７７，１３８号参照；これらは、それぞれ参照されて本明細書に組み込まれる。別の実施形態において、ロミデプシンまたはその誘導体は、合成法または半合成法によって調製される。Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８：７２３７−７２３８，１９９６；これは、参照されて本明細書に組み込まれる。
【００４２】
併用療法に含まれるロミデプシンの治療上有効な量は、患者、処置対象となっている癌または新生物、癌の病期、癌または新生物の病態、癌または新生物の遺伝子型、癌または腫瘍の表現型、投与経路などに応じて変わる。ある実施形態において、ロミデプシンは、０．５ｍｇ／ｍ２〜２８ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、１ｍｇ／ｍ２〜２５ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、０．５ｍｇ／ｍ２〜１５ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、１ｍｇ／ｍ２〜１５ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、１ｍｇ／ｍ２〜８ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、０．５ｍｇ／ｍ２〜５ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、２ｍｇ／ｍ２〜１０ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、４ｍｇ／ｍ２〜１５ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、８ｍｇ／ｍ２〜１０ｍｇ／ｍ２の範囲で投与される。別の実施形態において、投薬量は、１０ｍｇ／ｍ２〜２０ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は、５ｍｇ／ｍ２〜１０ｍｇ／ｍ２の範囲である。別の実施形態において、投薬量は、１０ｍｇ／ｍ２〜１５ｍｇ／ｍ２の範囲である。さらに別の実施形態において、投薬量は約８ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約９ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約１０ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約１１ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約１２ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約１３ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約１４ｍｇ／ｍ２である。さらに別の実施形態において、投薬量は約１５ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、投薬サイクルの間、ロミデプシンの用量を増加させて投与する。例えば、ある実施形態において、約８ｍｇ／ｍ２の用量、その後、約１０ｍｇ／ｍ２の用量、その後、約１２ｍｇ／ｍ２の用量を１サイクル（ａ  ｃｙｃｌｅ）の間に投与してもよい。当業者には理解されるが、投与されるロミデプシンの形状に応じて、投与法を変えることができる。本明細書に記載されている投薬量は、活性成分であるロミデプシンについての等価用量である。当業者には理解されるが、一層多くの塩、水和物、共結晶、プロドラッグ、エステル、溶質などを投与して、等価数のロミデプシン分子を送達する必要があり得る。ある実施形態において、ロミデプシンを静脈内に投与する。ある実施形態において、ロミデプシンを１〜６時間かけて静脈内に投与する。ある具体的な実施形態において、ロミデプシンを３〜４時間かけて静脈内に投与する。ある具体的な実施形態において、ロミデプシンを５〜６時間かけて静脈内に投与する。ある実施形態において、ロミデプシンを１日投与し、その後数日間ロミデプシンを投与しない。ある実施形態において、ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターは一緒に投与される。別の実施形態において、ロ���デプシンとプロテアソームインヒビターは別々に投与される。例えば、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターの投与は、一日以上の間隔を置くことができる。ある実施形態において、ロミデプシンを週２回投与する。ある実施形態において、ロミデプシンを週１回投与する。別の実施形態において、ロミデプシンを２週間に１回に投与する。ある実施形態において、ロミデプシンを２８日サイクルの１日目、８日目、および１５日目に投与する。ある具体的な実施形態において、８ｍｇ／ｍ２の用量のロミデプシンを１日目に投与し、１０ｍｇ／ｍ２の用量のロミデプシンを８日目に投与し、１２ｍｇ／ｍ２の用量のロミデプシンを１５日目に投与する。ある実施形態において、ロミデプシンを２８日サイクルの１日目および１５日目に投与する。この２８日サイクルを反復することができる。ある実施形態において、２８日サイクルを３〜１０回反復する。ある実施形態において、処置は５サイクルを含む。ある実施形態において、処置は６サイクルを含む。ある実施形態において、処置は７サイクルを含む。ある実施形態において、処置は８サイクルを含む。ある実施形態において、１０サイクルよりも多く投与される。ある実施形態において、患者が応答している限り、サイクルを続ける。疾患の進行が見られたり、治癒または寛解が達成されたり、副作用が許容できなくなったりしたところで、この治療を終わらせることができる。
【００４３】
あるいは、ロミデプシンは経口投与することができる。ある実施形態において、ロミデプシンは、１０ｍｇ／ｍ２〜３００ｍｇ／ｍ２の範囲で経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、２５ｍｇ／ｍ２〜１００ｍｇ／ｍ２の範囲で経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、１００ｍｇ／ｍ２〜２００ｍｇ／ｍ２の範囲で経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、２００ｍｇ／ｍ２〜３００ｍｇ／ｍ２の範囲で経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは３００ｍｇ／ｍ２を超えて経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは、５０ｍｇ／ｍ２〜１５０ｍｇ／ｍ２の範囲で経口投与される。別の実施形態において、経口投与量の範囲は、２５ｍｇ／ｍ２〜７５ｍｇ／ｍ２である。当業者には理解されるが、投与されるロミデプシンの形状に応じて、投与法を変えることができる。本明細書に記載されている投薬量は、活性成分であるロミデプシンについての等価用量である。ある実施形態において、ロミデプシンは、１日１回ずつ経口投与される。別の実施形態において、ロミデプシンは、１日おきに経口投与される。さらに別の実施形態において、ロミデプシンは、３日おき、４日おき、５日おき、または６日おきに経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは週に１回ずつ経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンは２週間に１回に経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターは一緒に投与される。別の実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターは別々に投与される。例えば、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターの投与は、一日以上の間隔を置くことができる。ある実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターはともに経口投与される。ある実施形態において、ロミデプシンだけが経口投与される。疾患の進行が見られたり、治癒または寛解が達成されたり、副作用が許容できなくなったりしたところで、ロミデプシンの単独投与、またはロミデプシンとプロテアソームインヒビターの組み合わせの投与を終わらせることができる。
プロテアソームインヒビター
プロテアソームは、ほとんどの細胞基質、小胞体、および核タンパク質を分解する多サブユニットプロテアーゼである。ＫｉｓｓｅｌｅｖおよびＧｏｌｄｂｅｒｇ、“Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：  ｆｒｏｍ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌｓ  ｔｏ  ｄｒｕｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ”  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．８：７３９−５８，２００１；これは参照されて本明細書に組み込まれる。ユビキチン標識されたタンパク質は折りたたまれずに、さまざまなタンパク質分解活性部位を有するプロテアソームの中心部を通って食される。
【００４４】
癌またはその他の新生物の処置において、任意のプロテアソームインヒビターをロミデプシンと組み合わせることができる。プロテアソームインヒビターは、一般的に、ロミデプシンと相乗的に、または相加的に相互作用して、腫瘍性の細胞または悪性細胞を死滅させる。相乗作用があれば、癌または別の新生物の処置においてプロテアソームインヒビターを単独で投与する場合に通常使用されるよりも低用量のプロテアソームインヒビターの使用が可能になる。ある実施形態において、プロテアソームインヒビターは、ロミデプシンと相乗的に相互作用して、腫瘍性の細胞または悪性細胞においてアポトーシスを誘導することができる。ある実施形態において、この組み合わせが相乗的に作用して酸化的傷害を誘導する。
【００４５】
プロテアソームインヒビターの例には、ボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）、ペプチドボロン酸、サリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）、ラクタシスチン、エポキソミシン（Ａｃ（Ｍｅ）−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−ＥＸ）、ＭＧ−１３２（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ａｌ）、ＰＲ−１７１、ＰＳ−５１９、エポネマイシン、アクラシノマイシンＡ、ＣＥＰ−１６１２、ＣＶＴ−６３４１７、ＰＳ−３４１（ピラジルカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）、ＰＳＩ（Ｚ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ａｌ）、ＭＧ−２６２（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ｂｏｒ）、ＰＳ−２７３（ＭＮＬＢ）、オムラリド（ｃｌａｓｔｏ−ラクタシスチン−β−ラクトン）、ＮＬＶＳ（Ｎｉｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ビニルスルホン）、ＹＬＶＳ（Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ｖｓ）、ジヒドロエポネマイシン、ＤＦＬＢ（ダンシル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）、ＡＬＬＮ（Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ａｌ）、３，４−ジクロロイソクマリン、４−（２−アミノエチル）−ベンゼンスルホニルフルオリド、ＴＭＣ−９５Ａ、グリオトキシン、ＥＧＣＧ（（−）−エピガロカテキン−３−ガレート）、およびＹＵ１０１（Ａｃ−ｈＦＬＦＬ−ｅｘ）などが含まれる。ある実施形態において、ロミデプシンをボルテゾミブ（登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをラクタシスチンと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをエポキソミシン（Ａｃ（Ｍｅ）−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−ＥＸ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＭＧ−１３２（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ａｌ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＰＲ−１７１と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＰＳ−５１９と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをエポネマイシンと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをアクラシノマイシンＡと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＣＥＰ−１６１２と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＣＶＴ−６３４１７と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＰＳ−３４１（ピラジルカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＰＳＩ（Ｚ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ａｌ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＰＳ−３４１（ピラジルカルボニル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＭＧ−２６２（Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ｂｏｒ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＰＳ−２７３（ＭＮＬＢ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをオムラリド（ｃｌａｓｔｏ−ラクタシスチン−β−ラクトン）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＮＬＶＳ（Ｎｉｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ビニルスルホン）と組み合わせる。ある実施形態において、ロ��デプシンをＰＳ−２７３（ＭＮＬＢ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＹＬＶＳ（Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ｖｓ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをジヒドロエポネマイシンと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＤＦＬＢ（ダンシル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ボロネート）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＡＬＬＮ（Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ａｌ）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンを３，４−ジクロロイソクマリンと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンを４−（２−アミノエチル）−ベンゼンスルホニルフルオリドと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＴＭＣ−９５Ａと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをグリオトキシンと組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＥＧＣＧ（（−）−エピガロカテキン−３−ガレート）と組み合わせる。ある実施形態において、ロミデプシンをＹＵ１０１（Ａｃ−ｈＦＬＦＬ−ｅｘ）と組み合わせる。
【００４６】
ある具体的な実施形態において、プロテアソームインヒビターであるボルテゾミブをロミデプシンと組み合わせる。ボルテゾミブは、［（１Ｒ）−３−メチル−１−［［（２Ｓ）−１−オキソ−３−フェニル−２−［（ピラジニルカルボニル）アミノ］プロピル］アミノ］ブチル］ボロン酸という化学名をもち、次の化学式からなる：
【００４７】
【化８】
2010516767.tif 000009
【００４８】
。
ボルテゾミブは、ロミデプシンと同時に、ロミデプシンに続いて、またはロミデプシンの前に投与することができる。ボルテゾミブは、一般的には、静脈内ボーラスとして非経口的に投与される。ある実施形態において、ボルテゾミブの投薬量は、０．１〜１０ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、ボルテゾミブの投薬量は、０．１〜５ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は、１〜５ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は、０．１〜１ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は、０．５〜１．５ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は、０．５〜１．０ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は、０．５〜３．０ｍｇ／ｍ２の範囲である。ある実施形態において、投薬量は約０．７ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、投薬量は約０．８ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、投薬量は約０．９ｍｇ／ｍ２である。ある実施形態において、投薬量は約１．０ｍｇ／ｍ２である。ある別の実施形態において、投薬量は約１．１ｍｇ／ｍ２である。ある別の実施形態において、投薬量は約１．２ｍｇ／ｍ２である。ある別の実施形態において、投薬量は約１．３ｍｇ／ｍ２である。ある別の実施形態において、投薬量は約１．４ｍｇ／ｍ２である。ある別の実施形態において、投薬量は約１．５ｍｇ／ｍ２である。当業者には理解されるが、投与されるボルテゾミブの形状に応じて、投与法を変えることができる。本明細書に記載された投薬量は、活性成分であるボルテゾミブについて等価用量である。一般的には、ボルテゾミブを投与した後には、休止期間をおく。休止期間は２日から１４日でよい。ある実施形態において、休止期間は少なくとも２４時間、４８時間、または７２時間である。ある実施形態において、休止期間は１週間である。ある実施形態において、ボルテゾミブを２週間に１回に投与する。ある実施形態において、ボルテゾミブを週１回投与する。ある具体的な実施形態において、ボルテゾミブを週１回ずつ４週間投与する。別の実施形態において、ボルテゾミブを週２回投与する。ある実施形態において、ボルテゾミブを、週２回ずつ２週間（１日目、４日目、８日目、および１１日目に）投与し、その後、１０日間の休止期間をおく。ある実施形態において、２８日サイクルの１日目、４日目、８日目、および１１日目にボルテゾミブを投与する。処置サイクルは、３週間から１０週間の範囲とすることができる。ある実施形態において、処置サイクルは３週間である。別の実施形態において、処置サイクルは４週間である。別の実施形態において、処置サイクルは５週間である。さらに別の実施形態において、処置サイクルは６週間である。さらに別の実施形態において、処置サイクルは７週間である。さらに別の実施形態において、処置サイクルは８週間である。ある実施形態において、患者が応答するかぎり処置サイクルを継続する。疾患の進行がみられたり、治癒または寛解が達成されたり、または副作用が許容できなくなったりしたところで、処置を終わらせることができる。
抗腫瘍性剤およびステロイド剤
本発明に適する抗腫瘍性剤には、悪性細胞の成熟および増殖を抑制して、新生物の増殖を阻害または防止する薬剤などがある。増殖阻害は、腫瘍性の細胞の静止または細胞死を誘導することによって生じさせることができる。一般的には、抗腫瘍性剤は、通常の細胞傷害性剤などである。抗腫瘍性剤の例には、サイトカイン、リガンド、抗体、放射性核種、および化学療法剤などがあるが、これらに限定されない。具体的には、そのような薬剤は、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターフェロン（ＩＦＮ）ＴＮＦ；アルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンテトラスルホン酸、ヘマトポルフィリン、およびフタロシアニンなどの光増感剤；ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、イットリウム−９０（９０Ｙ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス−２１３（２１３Ｂｉ）、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）、およびレニウム−１８８（１８８Ｒｅ）などの放射性核種；ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、ダウノマイシン、ネオカルチノスタチン、およびカルボプラチンなどの化学療法剤；ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素Ａ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、アブリン−Ａ毒素、リシンＡ（脱グリコシル化リシンＡおよび天然リシンＡ）、ＴＧＦ−アルファ毒素、中国コブラ（台湾コブラ）由来の細胞毒、およびゲロニン（植物毒素）などの細菌性、植物性、またはその他の毒素；レストリクトシン（アスペルギルス・レストリクタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｒｅｓｔｒｉｃｔｕｓ）によって産生されるリボソーム不活性化タンパク質）、サポリン（サボンソウ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）由来のリボソーム不活性化タンパク質）、およびＲＮＡ分解酵素など、植物、細菌および真菌に由来するリボソーム不活性化タンパク質；、チロシンキナーゼインヒビター；ｌｙ２０７７０２（二フッ素化プリンヌクレオシド）；抗腫瘍性剤（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、毒素をコードするプラスミド、メトトレキサートなど）を含有するリポソーム；ならびにその他の抗体または抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ）などが挙げられる。
【００４９】
本発明に適するステロイド剤の例には、ジプロピオン酸アルクロメタゾン（ａｌｃｌｏｍｅｔａｓｏｎｅ  ｄｉｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）、アムシノニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｄｉｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）、ベタメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｄｉｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）、リン酸ベタメタゾンナトリウム、酢酸ベタメタゾン・リン酸ベタメタゾンナトリウム、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、ピバル酸クロコルトロン、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、酢酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、酪酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、シピオン酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、リン酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾールナトリウム、コハク酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾールナトリウム、吉草酸（ヒドロコルチゾン）コルチゾール、酢酸コルチゾン、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、二酢酸ジフロラゾン、酢酸フルドロコルチゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオロメトロン、フルランドレノリド、ハルシノニド、メドリゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、フランカルボン酸モメタゾン、酢酸パラメタゾン、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、二酢酸トリアムシノロン、およびトリアムシノロンヘキサアセトニド、またはその合成アナログ、もしくはそれらを組み合わせしたものなどがあるが、これらに限定されない。ある実施形態において、本発明に適したステロイド剤は、デキサメタゾンである。ある実施形態において、本発明に適したステロイド剤は、プレドニゾロンである。
【００５０】
ある実施形態において、ステロイド剤を０．２５ｍｇ〜１００ｍｇの投薬量の範囲で投与する。ある実施形態において、ステロイド剤を５ｍｇ〜６０ｍｇの投薬量の範囲で投与する。ある実施形態において、ステロイド剤を１０ｍｇ〜５０ｍｇの投薬量の範囲で投与する。具体的な実施形態において、ステロイド剤を約４０ｍｇの投薬量で投与する。具体的な実施形態において、ステロイド剤を約３０ｍｇの投薬量で投与する。別の具体的な実施形態において、ステロイド剤を約２０ｍｇの投薬量で投与する。具体的な実施形態において、ステロイド剤を約１０ｍｇの投薬量で投与する。具体的な実施形態において、ステロイド剤を約５ｍｇの投薬量で投与する。ある実施形態において、ステロイド剤を、ロミデプシンおよび／またはプロテアソームインヒビターと同時に投与する。ある実施形態において、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはプロテアソームインヒビターを投与する前か後に投与する。例えば、ステロイド剤を、ロミデプシンまたはプロテアソームインヒビターを投与する５〜７日前に投与することができる。ある実施形態において、ステロイド剤はデキサメタゾンであり、デキサメタゾンの投与量は２０ｍｇである。
用途
ロミデプシンおよびプロテアソームインヒビターの組み合わせは、インビボまたはインビトロで使用することができる。本発明の組み合わせは、インビボにおける新生物の処置において特に有用である。しかし、この組み合わせを、研究目的または臨床目的（例えば、本発明の組み合わせに対する患者の疾患の感受性の測定、作用機序の研究、細胞経路または細胞過程の解明）のためにインビトロで利用することもできる。ある実施形態において、新生物は良性新生物である。別の実施形態において、新生物は悪性新生物である。本発明の組み合わせを使用して、任意の癌を処置することができる。
【００５１】
ある実施形態において、悪性腫瘍は血液系悪性腫瘍である。血液系悪性腫瘍は、血液、骨髄、および／またはリンパ節を冒すタイプの癌である。本発明の併用療法を用いて処置することができる悪性腫瘍の例には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）（ＣＴＣＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、および多発性骨髄腫などがあるが、これらに限定されない。ある実施形態において、本発明の組み合わせを用いて多発性骨髄腫を処置する。ある具体的な実施形態において、癌は、再発性および／または難治性の多発性骨髄腫である。別の実施形態では、本発明の組み合わせを用いて、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を処置する。ある実施形態において、本発明の組み合わせを用いて、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を処置する。ある実施形態において、本発明の組み合わせを用いて、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を処置する。ある実施形態において、癌は皮膚Ｔ細胞リンパ腫である。別の実施形態において、癌は末梢Ｔ細胞リンパ腫である。
【００５２】
血液系悪性腫瘍以外の別の癌も、本発明の組み合わせを使用して処置することができる。ある実施形態において、癌は固形腫瘍である。併用療法を用いて処置することができる癌の例には、結腸癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、皮膚癌、脳癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、神経内分泌の癌などがあげられる。ある実施形態において、本発明の組み合わせは膵臓癌を処置するために用いられる。ある実施形態において、本発明の組み合わせは前立腺癌を処置するために用いられる。ある具体的な実施形態において、前立腺癌は、ホルモン治療不応性の前立腺癌である。
【００５３】
また、併用療法を用いて、難治性または再発性の悪性腫瘍を処置することもできる。ある実施形態において、癌は、難治性および／または再発性の血液系悪性腫瘍である。例えば、癌が特定の化学療法剤に対して抵抗性であってもよい。ある実施形態において、癌はボルテゾミブ抵抗性の悪性腫瘍である。ある具体的な実施形態において、癌はボルテゾミブ抵抗性の血液系悪性腫瘍である。ある具体的な実施形態において、癌はボルテゾミブ抵抗性の多発性骨髄腫である。ロミデプシンとボルテゾミブの組み合わせは、ボルテゾミブ抵抗性多発性骨髄腫のような、ボルテゾミブ抵抗性血液系悪性腫瘍を処置するのに特に有用であることが分かっている。別の実施形態において、癌は、ステロイド処置に対して抵抗性である。ある実施形態において、癌は、ステロイド処置に対して抵抗性を示す血液系悪性腫瘍である。ある実施形態において、癌は、ステロイド抵抗性の多発性骨髄腫である。ある具体的な実施形態において、癌は、デキサメタゾン抵抗性の多発性骨髄腫である。ある具体的な実施形態において、癌は、プレドニゾロン抵抗性の多発性骨髄腫である。
【００５４】
また、ロミデプシンにプロテアソームインヒビターを加えた本発明の組み合わせを使用して、インビトロにおいて細胞を処理および／または死滅させることができる。ある実施形態において、細胞を死滅させるために、細胞傷害性濃度の薬剤の組み合わせを細胞に接触させる。別の実施形態において、致死性濃度よりも低い濃度の組み合わせを使用して細胞を処理する。ある実施形態において、薬剤の組み合わせは、相加的に作用して細胞を死滅させる。ある実施形態において、薬剤の組み合わせは、相乗的に作用して、細胞を死滅させる。そのため、細胞を死滅させるためには、どちらかの薬剤を単独で使用した場合に必要とされるよりも低い濃度での一方または両方の薬剤が必要である。ある実施形態において、各薬剤の濃度は、０．０１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲である。ある実施形態において、各薬剤の濃度は、０．１ｎＭ〜５０ｎＭの範囲である。ある実施形態において、ロミデプシンの濃度は、１ｎＭ〜１０ｎＭの範囲である。ある実施形態において、各薬剤の濃度は、１ｎＭ〜１０ｎＭ、より具体的には１ｎＭ〜５ｎＭの範囲である。ある実施形態において、プロテアソームインヒビターであるボルテゾミブの濃度は１ｎＭ〜１０ｎＭ、より具体的には１ｎＭ〜５ｎＭの範囲である。
【００５５】
併用療法（すなわち、ロミデプシンとプロテアソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ））によって、任意の種類の細胞を試験したり死滅させたりすることができる。細胞は、任意の動物、植物、細菌、または真菌源に由来するものであってもよい。細胞は、どのような分化または成長の段階にあってもよい。ある実施形態において、細胞は動物細胞である。ある実施形態において、細胞は脊椎動物細胞である。ある実施形態において、細胞は哺乳動物細胞である。ある実施形態において、細胞はヒト細胞である。これらの細胞は、任意の成長段階にある男性または女性から得ることができる。ある実施形態において、細胞は霊長動物細胞である。別の実施形態において、細胞は齧歯類（例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ）に由来するものである。ある実施形態において、細胞は、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ブタなどの家畜動物に由来するものである。また、細胞は、遺伝子操作された動物または植物、例えば、トランスジェニックマウスなどに由来するものであってもよい。
【００５６】
使用される細胞は、野生型細胞であっても変異型細胞であってもよい。これらの細胞は遺伝子操作されたものであってもよい。ある実施形態において、細胞は正常細胞である。ある実施形態において、細胞は血液系細胞である。ある実施形態において、細胞は白血球である。ある具体的な実施形態において、細胞は白血球の前駆細胞（例えば、幹細胞、前駆細胞、芽細胞）である。ある実施形態において、細胞は腫瘍性の細胞である。ある実施形態において、細胞は癌細胞である。ある実施形態において、細胞は血液系悪性腫瘍に由来するものである。別の実施形態において、細胞は固形腫瘍に由来するものである。例えば、細胞は、（例えば、生検切除または外科的切除による）患者の腫瘍に由来するものであってもよい。ある実施形態において、細胞は、被検体から得られた血液サンプル、または骨髄生検から得られる。ある実施形態において、細胞はリンパ節生検から得られる。細胞傷害性について、そのような試験をすることは、患者が特定の併用療法に応答するか否かを決定するのに有用であり得る。そのような試験は、悪性腫瘍を処置するのに必要な投薬量を決定するのにも有用であり得る。併用療法に対する患者の癌の感受性をこのように試験すると、患者に全く効果のない薬剤を不必要に患者に投与することを防止する。また、この試験によって、患者の癌が、組み合わせに対して特に感受性がある場合には、薬剤の一方または両方をより低い用量で使用することも可能になる。
【００５７】
別の実施形態において、細胞は、癌細胞株に由来するものである。ある実施形態において、細胞は、本明細書において考察されているような血液系悪性腫瘍に由来するものである。ヒト白血病細胞株は、Ｕ９３７、ＨＬ−６０、ＴＨＰ−１、Ｒａｊｉ、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ、およびジャーカットなどである。ＣＬＬ細胞株の例には、ＪＶＭ−３およびＭＥＣ−２などがある。骨髄腫細胞株の例は、ＭＭ１．Ｓ、ＭＭ１．Ｒ（デキサメタゾン抵抗性）、ＲＰＭＩ８２２６、ＮＣＩ−Ｈ９２９、およびＵ２６６などである。リンパ腫細胞株の例は、カルパス、ＳＵＤＨ−６、ＳＵＤＨ−１６、Ｌ４２８、ＫＭＨ２、およびグランタ（Ｇｒａｎｔａ）マントルリンパ腫細胞株などである。ある実施形態において、細胞は、ＡＭＬ細胞または多発性骨髄腫（ＣＤ１３８＋）細胞である。ある実施形態において、細胞は、造血幹細胞または造血前駆細胞である。例えば、ある実施形態において、細胞は、ＣＤ３４＋骨髄細胞などの造血前駆細胞である。ある実施形態において、細胞株は、特定の化学療法剤に対して抵抗性を示すものである。ある具体的な実施形態において、細胞株は、ボルテゾミブに対して抵抗性を示す。別の実施形態において、細胞株はステロイド抵抗性（例えば、デキサメタゾン抵抗性、プレドニゾロン抵抗性）である。ある具体的な実施形態において、細胞は、ステロイド抵抗性ヒト多発性骨髄腫細胞である。
【００５８】
本発明の併用療法で処理された細胞においては、さまざまなマーカーについてアッセイすることができる。例えば、マーカーであるアネキシンＶを利用して、アポトーシスを起こしている細胞を同定することができる。ＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質は、本併用療法によって下方制御されることが示されている。アッセイすることができる抗アポトーシスタンパク質は、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ＩＣＡＭ−１、およびｃ−ＦＬＩＰなどである。ある実施形態において、細胞内でＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質（例えば、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、ＩＣＡＭ−１、およびｃ−ＦＬＩＰ）を下方制御するのに有効な量のロミデプシンと、ボルテゾミブなどプロテアソームインヒビターによって細胞を処理する。ロミデプシンとボルテゾミブの組み合わせが、ストレスに関連するＪＮＫ経路を活性化することが明らかになっているため、ｐ−ＪＮＫなど、ＪＮＫ経路のタンパク質もアッセイすることができる。ある実施形態では、細胞内でＪＮＫ経路を活性化するのに有効な量のロミデプシンと、ボルテゾミブなどプロテアソームインヒビターによって細胞を処理する。ある実施形態では、細胞内でカスパーゼ−１２の切断を誘導するのに有効な量のロミデプシンと、ボルテゾミブなどプロテアソームインヒビターによって細胞を処理する。
医薬組成物
また、本発明は、組み合わせることによって血液系悪性腫瘍など腫瘍性の細胞に対して細胞増殖抑制活性または細胞傷害性活性を示す、本明細書に記載されているロミデプシンおよび／またはプロテアソームインヒビターを含む医薬組成物、調製物、またはキットも提供する。これらの医薬組成物、調製物、またはキットは、一般的に、ロミデプシンおよび／またはプロテアソームインヒビターを投与するのに適した量を含む。ある実施形態において、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターを、同一組成物に混合しない。例えば、これら２つの薬剤は、同一の液体または粉末の一部としない。一般的には、これら２つの薬剤は、２つの異なる組成物に分けておき、別々に送達する。キットは、ロミデプシンの医薬組成物と、別にプロテアソームインヒビターの医薬組成物とを含むことが可能である。ある具体的な実施形態において、医薬組成物、調製物、またはキットは、ロミデプシンおよびボルテゾミブを含む。ある実施形態において、これら２つの医薬の間で相乗作用が生じる場合、一方または両方の薬剤の量は、薬剤を単独で投与する場合に投与される量よりも低量である。ある実施形態において、両方の薬剤ともより低量である。ある実施形態において、投与される量は、被検体の血中でナノモルレベル（ｎａｎｏｍｏｌａｒ  ｌｅｖｅｌ）となるのに十分な量である。ある実施形態において、投与される量は、被検体の癌またはその他の新生物の部位においてナノモル濃度となるのに十分な量である。ロミデプシンおよびボルテゾミブそれぞれの用量は、上記で詳細に記載されている。
【００５９】
上記で考察したように、本発明は、細胞傷害性活性をもつ、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターの新規の組み合わせを提供し、それゆえ、本発明の化合物は、癌およびその他の新生物を含む、さまざまな病状を処置するのに役立つ。ある実施形態において、本薬剤は相乗的に作用して癌細胞を死滅させる。別の実施形態において、本薬剤は相加的に作用して癌細胞を死滅させる。
【００６０】
本発明の医薬組成物、調製物、またはキットは、他の治療剤を含むことができる。他の医薬は、被検体に投与するのに有用である、任意の別の治療剤であろう。他の治療剤は、好ましくは、投与されるロミデプシンまたはプロテアソームインヒビターと有害な相互作用をしない。ある実施形態において、本発明は、一つ以上の他の治療剤、例えば、別の細胞傷害性剤、ステロイド剤、鎮痛剤などを組み合わせした、ロミデプシンとプロテアソームインヒビターの投与を提供する。ある実施形態において、他の治療剤は、別の化学療法剤である。ある実施形態において、他の治療剤はステロイド剤（例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン、プレドニソロン）である。他の治療剤には、ロミデプシンおよび／またはプロテアソームインヒビターの副作用を緩和もしくは軽減する薬剤が含まれ得る。ある実施形態において、他の治療剤は、アスピリン、イブプロフェン、アセトアミノフェンなどの抗炎症剤、鎮痛剤、抗吐剤、または解熱剤である。ある実施形態において、他の治療剤は、悪心、嘔吐、胃の不調、および下痢などの胃腸障害を処置するための薬剤である。これらの付加的薬剤には、制吐剤、下痢止め、液置換（ｆｌｕｉｄ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、電解質置換などが含まれる。ある具体的な実施形態において、他の治療剤は、カリウム、マグネシウム、およびカルシウム、特に、カリウム、およびマグネシウムなどの電解質置換または電解質補充である。ある実施形態において、他の治療剤は抗不整脈剤である。ある実施形態において、他の治療剤は血小板増強剤（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｂｏｏｓｔｅｒ）、例えば、血小板の産生および／または放出を増加させる薬剤である。ある実施形態において、他の治療剤は、エリスロポエチンなど、血球の産生を促進する薬剤である。ある実施形態において、他の治療剤は、高血糖を抑制するための薬剤である。ある実施形態において、他の治療剤は免疫系刺激剤である。ある実施形態において、本発明は、ロミデプシン以外のＨＤＡＣインヒビターの投与を含まない。
【００６１】
また、当然のことながら、本発明に従って利用される薬剤のうちのあるものは、処置のために特別な制限を受けない形状で存在しうるか、または特定の場合、その薬学的に許容される形態として存在しうる。本発明によれば、薬学的に許容される形状には、薬学的に許容される塩、エステル、そのようなエステルの塩、保護型、立体異性体、異性体、還元型、酸化型、互変異性体、または必要とする患者に投与されると、本明細書において別様に記載されている薬剤を直接的または間接的に提供することができる、その他の任意の付加物もしくは誘導体、またはそれらの代謝物もしくは残留物（ｒｅｓｉｄｕｅ）、例えば、プロドラッグなどがあるが、これらに限定されない。
【００６２】
本明細書において用いる場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応などを伴わずにヒトおよびその他の動物の組織に接触させて使用するのに適しており、かつ妥当な利益／リスク比に適合する塩を意味する。薬学的に許容される塩は、当技術分野においてよく知られている。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらが、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，１９７７において薬学的に許容される塩を詳細に記載しており；これは、参照されて本明細書に組み込まれる。これらの塩は、本発明の化合物を最終的に単離および精製する過程において原位置で調製するか、または遊離塩基型官能基を適当な有機酸または無機酸と反応させることによって別々に調製することができる。薬学的に許容される無毒性酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸によって形成されるアミノ基の塩、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸などの有機酸によって形成されるアミノ基の塩、またはイオン交換法など、当技術分野において利用されているその他の方法を用いて形成されるアミノ基の塩である。その他の薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などがあげられる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどがあげられる。さらなる薬学的に許容される塩には、特定の場合、非毒性アンモニウム、第４級アンモニウム、およびハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを用いて形成されるアミンカチオンなどがあげられる。
【００６３】
さらに、本明細書において用いる場合、「薬学的に許容されるエステル」という用語は、インビボで加水分解するエステルを意味し、ヒトの体内で直ちに分解して親化合物またはその塩を残すものが含まれる。適当なエステル基は、例えば、薬学的に許容される脂肪族カルボン酸に由来する基であり、具体的には、アルキル部分またはアルケニル部分のそれぞれが、有利には、６個よりも多い炭素原子をもたないアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン二酸（ａｌｋａｎｅｄｉｏｉｃ  ａｃｉｄ）などである。特定のエステルの例は、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、アクリル酸塩、およびエチルコハク酸塩を含む。ある実施形態において、これらのエステルは、エステラーゼなどの酵素によって切断される。
【００６４】
さらに、本明細書において用いる場合、「薬学的に許容されるプロドラッグ」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激性、アレルギー反応などを伴わずにヒトおよびその他の動物の組織に接触させて使用するのに適しており、かつ妥当な利益／リスク比に適合し、かつ使用目的にとって有効な、本発明に従って使用される化合物のプロドラッグを意味する。「プロドラッグ」という用語は、例えば、血液中での加水分解によって、インビボで急速に変換されて上記の化学式の親化合物を生じさせる化合物を意味する。Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖｏｌ．１４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ、およびＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７には徹底的な考察が記載されており、これらは、いずれも参照されて本明細書に組み込まれる。
【００６５】
上記したとおり、本発明の医薬組成物は、さらに、薬学的に許容される担体または賦形剤を含むが、本明細書において用いる場合、それらは、所望の特定の投薬形状に適する溶媒、希釈剤、またはその他の液体溶媒、分散補助剤または懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固形結合剤、潤滑剤、浸透増進剤、可溶化剤などである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｉｆｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，１９７５）には、医薬組成物の処方に利用されるさまざまな担体、およびそれらを調製するための既知の技術が開示されている。従来からの担体媒質が、例えば、何らかの望ましくない生物学的作用を生じるか、さもなければ、医薬組成物のその他の成分（一つまたは複数）と有害な局面で相互作用するかして、本発明の抗癌化合物には適合しないというのでない限り、その使用は本発明の範囲内にあるものとみなされる。薬学的に許容される担体として使用することができる物質のいくつかの例には、ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖類；コーンスターチおよびポテトスターチなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；トラガカント末；麦芽；ゼラチン；タルク；クレモホル（ポリエトキシル化ヒマシ油（ｃａｓｔｅｒ  ｏｉｌ））；ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）（１２−ヒドロキシステアリン酸のポリオキシエチレンエステル）；ココアバターおよび座薬用ワックスなどの賦形剤；落花生油および綿実油などの油脂、紅花油；胡麻油；オリーブ油；コーン油；大豆油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝液、また、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの無毒性の適合潤滑剤、ならびに着色剤、放出剤、被覆剤、甘味料、風味料、および香料、保存剤、および抗酸化剤も、処方者の判断に従って組成物に入れることができる。
【００６６】
これらおよびその他の本発明の局面は、以下の実施例を考慮すると、より深く理解することができる。ただし、以下の実施例は、本発明のある具体的な実施形態を記載するためのものであり、本特許請求の範囲によって規定されるように、その範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００６７】
（実施例１）多発性骨髄腫細胞におけるロミデプシンとボルテゾミブの組み合わせ
方法。ヒト骨髄腫のＵ２６６細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞を、３〜４ｎＭの登録商標ＶＥＬＣＡＤＥ（ボルテゾミブ）の非存在下または存在下で、２〜３ｎＭのロミデプシン（ＦＫ２８８）に４８時間曝露し、その後、アネキシンＶ＋染色法およびフローサイトメトリーによってアポトーシス細胞の割合を測定した。初代ＣＤ１３８＋骨髄腫細胞を、多発性骨髄腫患者の骨髄サンプルから単離した。次に、ＣＤ１３８＋細胞およびＣＤ１３８−細胞を、３ｎＭのロミデプシン±３ｎＭのボルテゾミブで２４時間処理し、その後、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ染色法およびフローサイトメトリーによってアポトーシスを評価した。デキサメタゾン感受性ヒト骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｓ）およびデキサメタゾン抵抗性ヒト骨髄腫細胞（ＭＭ．１Ｒ）を、１ｎＭのロミデプシン±２ｎＭのボルテゾミブに２４時間曝露し、その後、アネキシンＶ＋染色法およびフローサイトメトリーによってアポトーシス細胞の割合を測定した。１２ｎＭの濃度に達すまでボルテゾミブの濃度を徐々に高めながらＵ２６６細胞を培養して、ボルテゾミブ抵抗性細胞（Ｕ２６６／ＰＳ−Ｒ）を作製した。次に、５〜１５ｎＭのボルテゾミブの非存在下または存在下で、Ｕ２６６／ＰＳ−Ｒ細胞を２ｎＭのロミデプシンで４８時間処理し、その後、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ染色法およびフローサイトメトリーによってアポトーシスを評価した。ヒト多発性骨髄腫細胞（Ｕ２６６）を２ｎＭロミデプシン±３ｎＭのボルテゾミブに４８時間曝露し、その後、イムノブロット解析を行って、ＪＮＫ活性化、およびＮＦ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質の発現をモニターした。
【００６８】
結果。極めて低い（ナノモル）濃度で投与されたボルテゾミブとロミデプシンは、相乗的に相互作用して、ヒト多発性骨髄腫細胞株においてアポトーシスを誘導する（図１）。さらに、極めて低濃度で投与されたボルテゾミブとロミデプシンの組み合わせは、初代ヒト多発性骨髄腫細胞においてアポトーシスを誘導するが、正常な骨髄細胞は傷つけないため、治療選択性の根拠となる可能性を示唆している（図２）。これら２つの薬剤を極めて低い（ナノモル）濃度で投与すると、ステロイド抵抗性の多発性骨髄腫細胞において、ロミデプシンがボルテゾミブの致死性を増強すると考えられている（図３）。また、ロミデプシンは、ボルテゾミブ単独には抵抗性を示す多発性骨髄腫細胞においてボルテゾミブの致死性を増強する（図４）。ヒト多発性骨髄腫細胞におけるロミデプシンとボルテゾミブの間の相乗的相互作用は、ストレス関連ＪＮＫ経路の活性化と、いくつかのＮＫ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質（例えば、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、およびＸＩＡＰ）の下方制御とを伴う（図５）。
【００６９】
結論。ロミデプシンおよびボルテゾミブは、極めて低濃度（例えば、低ｎＭ）で同時に投与されると相乗的に相互作用して、培養された多発性骨髄腫細胞および初代多発性骨髄腫細胞（ステロイドまたはボルテゾミブに抵抗性を示すものを含む）においてアポトーシスを誘導する。これらの作用は、ストレス関連ＪＮＫ経路の活性化およびＮＫ−κＢ依存性抗アポトーシスタンパク質の下方制御を伴う。これらの知見は、ロミデプシンおよびボルテゾミブを含む組み合わせのレジメンが、多発性骨髄腫患者を処置する際の有効な方策となりうることを示している。
（実施例２）慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞におけるロミデプシンとボルテゾミブの組み合わせ
方法。初代ＣＬＬ細胞を５人のＣＬＬ患者から単離し、最低毒性濃度のボルテゾミブ（３ｎＭ）±ロミデプシン（３〜５ｎＭ）に２４時間曝露し、その後、７ＡＡＤ染色法／フローサイトメトリー、および光学顕微鏡下におけるライト−ギムザ染色されたサイトスピンスライドによって、細胞死を測定した。イムノブロット解析（条件当たり３０μｇのタンパク質）を行って、カスパーゼ−１２およびＰＡＲＰの切断、ＩκＢαのレベル、ホスホ−ＩκＢαのレベル、ｐ６５のレベル、ｐ１００／ｐ５２のレベル、ならびにＮＦ−κＢの下流にある抗アポトーシスタンパク質の発現を検出した。２つの樹立ＣＬＬ細胞株（ＪＶＭ−３およびＭＥＣ−２、ＤＳＭＺ）において並行研究を行った。細胞を、毒性濃度よりも低い濃度のボルテゾミブ（ＪＶＭ−３、３ｎＭ；ＭＥＣ−２、５ｎＭ）およびロミデプシン（ＪＶＭ−３、３ｎＭ；ＭＥＣ−２、５ｎＭ）によって４８時間同時処理し、その後、それぞれアネキシンＶ／ＰＩ染色またはアネキシンＶ／ＤｉＯＣ６染色した後、フローサイトメトリーによって、アポトーシス細胞と、ミトコンドリア膜電位（ΔΨｍ）が失われた細胞の割合を測定した。固定濃度比（１：１）でボルテゾミブおよびロミデプシンを投与した後、市販のソフトウェアプログラム（Ｃａｌｃｕｓｙｎ；Ｂｉｏｓｏｆｔ）を用いて、用量中央値効果（Ｍｅｄｉａｎ  Ｄｏｓｅ  Ｅｆｆｅｃｔ）解析法によって、これらの薬剤の相乗性を評価した。Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒデバイス（Ｕ−１５プログラム）を使用して、一過性トランスフェクションを行い、ヒトＢ細胞Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒキットを使用して、ＮＦ−κＢ活性、および不活性型ＲｅｌＡ／ｐ６５変異体（アセチル化部位変異体）の機能的作用を評価した。
【００７０】
結果。低濃度（３ｎＭ）で投与されたボルテゾミブとロミデプシンによる組み合わせ処理は、初代ＣＬＬ細胞においてアポトーシスおよびカスパーゼ−１２切断を強力に誘導する（図６）。ロミデプシンは、５種類の初代ＣＬＬサンプル中の４例において、ボルテゾミブの致死性を劇的に増加させ、１つのサンプルにおいて相加的致死性をもたらした（図７）。毒性濃度よりも低い濃度（例えば、２〜５ｎＭ）でロミデプシンとボルテゾミブを同時に投与したところ、ＣＬＬ細胞株（ＪＶＭ−３およびＭＥＣ−２）においてアポトーシスが劇的に誘導された。高度の相乗的相互作用が、用量中央値効果解析によって記録された（図８）。ロミデプシンは単独で、初代ＣＬＬ細胞においてＮＦ−κＢ活性を活性化したが、これは、ボルテゾミブとの同時投与によって阻害された一作用であった。ボルテゾミブはまた、ＮＦ−κＢ２前駆体であるｐ１００をその活性型であるｐ５２にする、ロミデプシンが介在するプロセッシングを遮断した。ボルテゾミブとロミデプシンの同時投与によって、Ａ１、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＸＡＩＰ、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ｃ−ＦＬＩＰ、およびＩＣＡＭ−１など、複数のＮＦ−κＢの下流にある生存タンパク質の発現が下方制御された。ボルテゾミブ処理単独では、Ｍｃｌ−１蓄積を誘導したが、これは、ロミデプシンに同時曝露された細胞内では減少した。この組み合わせは、抗アポトーシスタンパク質であるサバイビンの切断ももたらした（図９）。
【００７１】
結論。ぎりぎりの毒性濃度のロミデプシンとボルテゾミブを同時に投与すると、初代ヒトＣＬＬ細胞およびＣＬＬ細胞株において、高度に相乗的なアポトーシス誘導が起きる。これらの事象は、ＮＦ−κＢ経路の破壊、およびＢｃｌ−２ファミリーの複数の抗アポトーシスメンバーの下方制御を伴う。まとめると、これらの知見は、ロミデプシンとボルテゾミブを含む組み合わせレジメンが難治性ＣＬＬ患者を処置する際の有効な戦略であり得るという可能性を提起するものである。
（実施例３）ロミデプシンとボルテゾミブを組み合わせて用いた多発性骨髄腫の処置
ロミデプシンとボルテゾミブを組み合わせて用いて、ヒト臨床試験において多発性骨髄腫（ＭＭ）患者を処置した。この臨床試験は、再発性または難治性の多発性骨髄腫を患う患者におけるボルテゾミブ、デキサメタゾン、およびロミデプシン（デプシペプチド、ＦＫ２２８）の非盲検、単一施設、単一群の第Ｉ／ＩＩ相の用量漸増試験（ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｔｒｉａｌ）であり、その後、病勢悪化までロミデプシン治療を維持した。図１０に試験デザインを示す。
【００７２】
この臨床試験の目的は、再発性多発性骨髄腫患者における、ボルテゾミブとともに投与されるロミデプシンの最大耐用量（ＭＴＤ）、および総合的な反応、進行までの期間、および全生存率について、この組み合わせのＭＴＤにおける効果を判定することを含む。
【００７３】
具体的には、第Ｉ相（加速用量増加相（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ））の間は、加速増量法（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｄｅｓｉｇｎ）を用いて、ロミデプシンのＭＴＤを確認した。例えば、用量規定毒性（ＤＬＴ）がなく、かつ２例よりも少ない患者が、第１サイクル（Ｃ１）において中程度の毒性である場合には、次の患者を１レベル上げて開始する。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ＮＣＩ−ＣＴＣ）（３版）によれば、ＤＬＴは、次のように定義される。血小板数２５×１０９／Ｌ未満、Ｇ−ＣＳＦサポートにもかかわらずグレード４の好中球減少、処置にもかかわらずグレード３または４の悪心、嘔吐、または下痢、他の任意のグレード３か４の非血液系毒性、または毒性に起因する４週間よりも長期の処置中断。加速相（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｐｈａｓｅ）は、１人の患者がＣ１においてＤＬＴを示すか、２人の患者が最初の処置サイクルの過程で「中程度」の毒性を経験したときに終了する。標準的な用量漸増デザインに従って、患者を３つのコホートに参加させた。最大６人の患者を任意の投薬量で処置した。ＭＴＤは、ＤＬＴの発生率が３３％未満である最大投薬量と定義される。下記の表１に、一般的な用量漸増計画を示す。
【００７４】
【表１】
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【００７５】
ＭＴＤを決定した後、ボルテゾミブ−ロミデプシンの組み合わせの効果に関するさらなるデータを得るために、このＭＴＤでの第ＩＩ相において、さらに１５人の患者を加える。
【００７６】
加入可能な患者は、１８歳以上で、再発性多発性骨髄腫にかかっており、最大４回までの治療歴のある者でなければならない。また、適格な患者は、計測可能な疾病を持ち、および、血小板数が５０×１０９／ｌ以上であり、血液ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度が少なくとも７５ｇ／Ｌであり、好中球絶対数が少なくとも０．７５×１００／Ｌであり、かつ充分な肝臓および腎臓の機能をもつ必要がある。
【００７７】
治験（ｔｒａｉｌ）に適さない患者は、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｏｆ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ）（３．０版）によって示された判定基準によれば、グレード３、またはそれよりも悪化している神経障害、またはグレード１、またはそれよりも強い疼痛を伴うグレード２の神経障害を有する者；心不整脈または活動性冠状動脈疾患の既往のある者；ＱＴｃ間隔延長を起こす薬および／またはＣＹＰ３Ａ４阻害剤など組み合わせ薬剤を使用する者などである。
【００７８】
加入患者の特徴を下記の表２にまとめる。
【００７９】
【表２】
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【００８０】
患者は全員、２８日サイクルの１日目、４日目、８日目、および１１日目に１．３ｍｇ／ｍ２用量のボルテゾミブ、１日目、２日目、４日目、５日目、８日目、９日目、１１日目、および１２日目に２０ｍｇ用量のデキサメタゾンの投与を受けた。ロミデプシンの用量増加は、２８日サイクルの１日目、８日目、および１５日目に８ｍｇ／ｍ２用量を静脈内に投与することから始まり、ロミデプシンの患者内用量漸増を伴う、加速用量増加相を含んでいた。
【００８１】
この２８日の誘導サイクルは、例えば、最大８サイクルまで反復することができる。２００７年８月現在、患者に送達されるサイクル数の中央値は３回である。各個人が受けたサイクルの数は図１１に要約されている。最終処置用量レベルの分布を図１２に示す。
【００８２】
現在までに、８ｍｇ／ｍ２（ｎ＝１）または１０ｍｇ／ｍ２（ｎ＝３）というロミデプシン用量では、用量規定毒性が示されていなかった。１２ｍｇ／ｍ２のロミデプシン用量では、グレード４の血小板減少症のエピソードが３例、および発熱性好中球減少症のエピソードが１例発生している。注目すべきは、グレード４の血小板減少症患者のうちの２人が、本組み合わせを開始する前には、血小板数が１００×１０９個／Ｌ以下であった（加入させるに当たっては、患者の血小板数は５０×１０９／Ｌより大でなければならなかった）。
【００８３】
観察されたその他の薬物関連毒性には以下のものがある：グレード３の疲労感（ｎ＝１）；好中球減少（ｎ＝１）；敗血症（ｎ＝１）；グレード２の疲労感（ｎ＝１）；末梢神経障害（ｎ＝２）；悪心（ｎ＝１）；および下痢（ｎ＝１）。末梢神経障害のために、２人の患者でボルテゾミブの減量が必要になった（これらの患者は、１２ｍｇ／ｍ２のロミデプシンを同時投与されていた）。表３に、薬物関連有害事象がまとめられている。
【００８４】
【表３】
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【００８５】
ロミデプシンとボルテゾミブの組み合わせは、充分な忍容性が認められた。最大許容投与量は、処置用量レベル２、すなわち、１．３ｍｇ／ｍ２用量のボルテゾミブ、２０ｍｇ用量のデキサメタゾン、および１０ｍｇ／ｍ２用量のロミデプシンに相当している。表３に示されているように、血小板減少症がグレード３以上の毒性で最もよく見られる。血小板減少症の動態の例が図１３に示されている。
【００８６】
第３サイクル、第５サイクル、および第７サイクルの１日目、および各維持サイクルの１日目に反応を評価した。Ｍ−タンパク質応答基準に従って反応率（ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒａｔｅ）を評価し、完全な反応をＢｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＥＭＢＴ）基準に従って記録した。
【００８７】
表４は、本試験の応答結果をまとめたものである。患者には、免疫固定法陰性で完全寛解（ＣＲ）した者が１人、部分寛解（ＰＲ）した者が６人、またやや寛解（ＭＲ）した者が１人いた（図１４も参照）。ほとんどの患者に併用療法を続けた。この臨床試験は、ロミデプシン（１０ｍｇ／ｍ２）とボルテゾミブ（１．３ｍｇ／ｍ２）の用量で患者を追加しながら継続される。
【００８８】
【表４】
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【００８９】
この臨床試験の結果は、ボルテゾミブとロミデプシンの組み合わせが、再発性／難治性の多発性骨髄腫において有望な応答率および持続的応答を示すことを示唆ている。
【００９０】
（均等および範囲）
上記したものは、本発明のある非限定的で好適な実施形態の記載であった。当業者は、日常的な実験のみを用いて、本明細書で記載した本発明の具体的な実施形態に等価な多くのものを認識するかあるいは、確認することができる。当業者は、以下の特許請求の範囲に規定されているように、本発明の趣旨または範囲を逸脱することなく、この記載にさまざまな変更または改変を加えることができることを理解する。
【００９１】
請求項において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対の指示があるか、または文脈から明確にそうでないことが分からない限り、一つまたは一つ以上を意味し得る。一つの群の一つ以上のメンバーの間に「ｏｒ」が含まれている請求項または記載は、反対の指示があるか、または文脈から明確にそうでないことが分からない限り、その群のメンバーの一つ、一つ以上、または全部が、所定の物または方法に存在しているか、使用されているか、またはそれに関連していても要件を満たすものみなされる。本発明は、群の一つだけのメンバーが、所定の物または方法に存在しているか、使用されているか、または関連している実施形態を含む。また、本発明は、群のメンバーの一つ以上、またはすべてが所定の物または方法に存在しているか、使用されているか、または関連している実施形態も含む。さらに、当然ながら、本発明は、一つ以上の限定、要素、条項、記載用語などを、一つ以上の請求項から、または本明細書の関連箇所から、別の請求項に導入する、すべての改変、組み合わせ、および置換を包含する。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項は、同じ基本請求項に従属する別の任意の請求項に記載されている一つ以上の限定事項を含むように改変することができる。さらに、これらの請求項に組成物が記載されている場合には、別段の指示があるか、矛盾や不整合が生じることが当業者に明らかでない限り、本明細書に開示されている目的のいずれかのためにその組成物を使用する方法も含まれ、また、本明細書に開示されている作製法のいずれか、または当技術分野において既知の方法に従って組成物を作製する方法も含まれるものと理解される。さらに、本発明は、本明細書に開示されている組成物の調製法のいずれかに従って作製された組成物を包含する。
【００９２】
構成要素が列挙されて示されている場合、例えば、マーカッシュ群形式で提示されている場合には、構成要素の各下位群も開示されており、その群から任意の構成要素（一つまたは複数）を削除することができると理解される。また、「含む」という用語は、限定するのではなく、さらなる要素または工程を含むことができる。一般的に、本発明または本発明の局面が、特定の要素、特徴、工程などを含むと言う場合、本発明のある実施形態または本発明の局面は、そのような要素、特徴、工程などからなるか、または実質的にそれらからなると理解されるべきである。便宜上、それらの実施形態は、本明細書において正確に引用されて、具体的に記載されているのではない。したがって、一つ以上の要素、特徴、工程などを含む、本発明の各実施形態について、本発明は、それらの要素、特徴、工程などからなるか、または実質的にそれらからなる実施形態も提供する。
【００９３】
範囲が記載されている場合には、端点が含まれる。さらに、別段の記載がない限り、または文脈および／または当業者の理解するところから明確に別様でない限り、範囲で表現されている数値は、文脈上明らかに別段の記載がなされていない限り、その範囲の下限の単位の１０分の１まで、記載された範囲内にある任意の具体的数値を、本発明の異なった実施形態において想定することができると理解される。また、別段の記載がない限り、または文脈および／または当業者の理解するところから明確に別様でない限り、範囲で表現されている数値は、その所定の範囲内の任意の部分的範囲を想定することができ、その部分範囲の端点も、その範囲の下限の単位の１０分の１と同じ精度で表現されていると理解される。
【００９４】
また、本発明の任意の具体的な実施形態を、任意の一つ以上の請求項から明示的に除外することができるものと理解される。任意の実施形態、要素、特徴、用途、または本発明の組成物および／または方法の局面を、一つ以上の請求項から除外することができる。例えば、本発明のある実施形態において、生理活性物質（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）は抗増殖剤ではない。簡略を期すために、一つ以上の要素、特徴、目的、または局面が除外されている実施形態のすべてを本明細書において明示的に示すことはしない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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