(57)【要約】本発明に係る調製方法では、カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアミノ官能基を有する上記水不溶性テルペノイドの当該官能基が、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨである上記水不溶性テルペノイドの上記ヒドロキシル基に結合する一般式Ｘａで示される置換基と、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨである上記テルペノイドの上記アミノ基に結合する一般式Ｘａで示される置換基と、Ｘｂが‐（ＣＨ２）ｎＮ＋Ｒ３Ｙ−である上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｂの第四アンモニウム置換基と、Ｘｃが‐（ＣＨ２）ｎＲ＋Ｙ−である上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基と、Ｘｄが‐Ｒ‐ＣＯＯＨを表す上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｄで示される置換基と、Ｘｅがグルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、上記テルペノイドの上記ヒドロキシル基または上記カルボキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅとからなる群から選択される置換基によって誘導体化され、続いて、調製された当該誘導体が、水と、シクロデキストリンと、必要に応じて薬学的に許容される補助物質とを含有する溶液に溶解されて、シクロデキストリンを含有する包接誘導体を形成する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水不溶性の五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドの可溶性処方物の調製方法であって、カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアミノ官能基を有する当該水不溶性テルペノイドの当該官能基が、
ａ）上記水不溶性テルペノイドの上記ヒドロキシル基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基：
【化１】
2010504921.tif 000013
ｂ）上記水不溶性テルペノイドの上記アミノ基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基： 
【化２】
2010504921.tif 000014
ｃ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基であって、Ｘｂが‐（ＣＨ２）ｎＮ＋Ｒ３Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒが、必要に応じて‐ＯＨ、‐ＮＨ２、またはハロゲンで置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基：
【化３】
2010504921.tif 000015
ｄ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｃの第四アンモニウム置換基であって、Ｘｃが‐（ＣＨ２）ｎＲ＋Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒ＋が、１〜２の窒素原子および４〜９の炭素原子、並びに、少なくとも１つの芳香族環を含有しているプロトン化した窒素含有の複素環であり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基：
【化４】
2010504921.tif 000016
ｅ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｄで示される置換基であって、Ｘｄが‐Ｒ‐ＣＯＯＨを表し、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘｄで示される置換基：
【化５】
2010504921.tif 000017
ｆ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ：
【化６】
2010504921.tif 000018
ｇ）上記水不溶性テルペノイドの上記ヒドロキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ：
【化７】
2010504921.tif 000019
からなる群から選択される置換基によって誘導体化され、続いて、調製された当該誘導体が、水と、シクロデキストリンと、必要に応じて薬学的に許容される補助物質とを含有する溶液に溶解されて、シクロデキストリンを含有する包接誘導体を形成することを特徴とする、調製方法。
【請求項２】
一般式Ｘａで示される上記置換基は、コハク酸エステル、グルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルグルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルコハク酸エステル、テトラヒドロフタル酸エステル、ジグリコール酸エステル、またはフタル酸エステルからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の調製方法。
【請求項３】
一般式Ｘｂで示される上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＝ＣＨ３を満たすコリンエステルであることを特徴とする、請求項１に記載の調製方法。
【請求項４】
一般式Ｘｃで示される上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＋＝ＰｙＨ＋、Ｙ−＝Ｂｒ−を満たすピリジニウム塩であることを特徴とする、請求項１に記載の調製方法。
【請求項５】
一般式Ｘｄで示される上記置換基は、Ｒ＝ＣＨ２を満たすグリコール酸であることを特徴とする、請求項１に記載の調製方法。
【請求項６】
一般式Ｘｅで示される上記置換基は、グルコシル、ガラクトシル、ラクトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の調製方法。
【請求項７】
上記シクロデキストリンは、未変成または置換β‐シクロデキストリンおよびγ‐シクロデキストリンからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の調製方法。
【請求項８】
上記補助物質は、包接錯体の形成を促進する生体適合性有機溶媒および／または化合物であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の調製方法。
【請求項９】
上記生体適合性有機溶媒は、エタノールまたはプロピレングリコールであることを特徴とする、請求項８に記載の調製方法。
【請求項１０】
包接錯体の形成を促進する上記化合物は、アルカリ炭酸塩または炭酸水素塩であることを特徴とする、請求項８に記載の調製方法。
【請求項１１】
五環性テルペノイドまたは四環性トリテルペノイドの可溶性処方物であって、そのカルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基が、
ａ）上記テルペノイドの上記ヒドロキシル基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基、またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基；
ｂ）上記テルペノイドの上記アミノ基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基、またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基；
ｃ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基であって、Ｘｂが‐（ＣＨ２）ｎＮ＋Ｒ３Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒが必要に応じて‐ＯＨ、‐ＮＨ２、またはハロゲンで置換された直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基；
ｄ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基であって、Ｘｃが‐（ＣＨ２）ｎＲ＋Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒ＋が、１〜２の窒素原子および４〜９の炭素原子、並びに、少なくとも１つの芳香族環を含有しているプロトン化した窒素含有の複素環であり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基；
ｅ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｄで示される置換基であって、Ｘｄが‐Ｒ‐ＣＯＯＨを表し、Ｒが、置換されていないあるいはハロゲン基、ヒドロキシル基、またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘｄで示される置換基；
ｆ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ；
ｇ）上記テルペノイドの上記ヒドロキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ；
からなる群から選択された置換基で誘導体化された、五環性テルペノイドまたは四環性テルペノイドの包接錯体を含有しており、
シクロデキストリン、および、必要に応じて水ならびに薬学的に許容される補助物質を含有している、五環性テルペノイドまたは四環性トリテルペノイドの可溶性処方物。
【請求項１２】
一般式Ｘａで示される上記置換基は、コハク酸エステル、グルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルグルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルコハク酸エステル、テトラヒドロフタル酸エステル、ジグリコール酸エステル、またはフタル酸エステルからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の可溶性処方物。
【請求項１３】
一般式Ｘｂで示される上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＝ＣＨ３を満たすコリンエステルであることを特徴とする、請求項１１に記載の可溶性処方物。
【請求項１４】
一般式Ｘｃで示される上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＋＝ＰｙＨ＋、Ｙ−＝Ｂｒ−を満たすピリジニウム塩であることを特徴とする、請求項１１に記載の可溶性処方物。
【請求項１５】
一般式Ｘｄで示される上記置換基は、Ｒ＝ＣＨ２を満たすグリコール酸エステルであることを特徴とする、請求項１１に記載の可溶性処方物。
【請求項１６】
一般式Ｘｅで示される上記置換基は、グルコシル、ガラクトシル、ラクトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の可溶性処方物。
【請求項１７】
上記シクロデキストリンは、未変成または置換β‐シクロデキストリンおよびγ‐シクロデキストリンからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の可溶性処方物。
【請求項１８】
上記補助物質は、生体適合性有機溶媒、および包接錯体の形成を促進する化合物であることを特徴とする、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の可溶性処方物。
【請求項１９】
上記生体適合性有機溶媒は、エタノールまたはプロピレングリコールであることを特徴とする、請求項１８に記載の可溶性処方物。
【請求項２０】
包接錯体の形成を促進する上記化合物は、アルカリ炭酸塩または炭酸水素塩であることを特徴とする、請求項１８に記載の可溶性処方物。
【請求項２１】
請求項１１〜２０のいずれか１項に記載の可溶性処方物と、薬学的に許容される溶媒とを含有することを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項２２】
上記薬学的に許容される溶媒が水であることを特徴とする、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水不溶性の五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドの可溶性処方物の調製方法、五環性テルペノイドまたは四環性テルペノイドの可溶性処方物、および当該可溶性処方物を含んだ薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドは、自然物質の群であるイソプレノイドを代表するものであり、広範囲の生物活性を示す（非特許文献１）ため、医薬産業の注目を集めている。しかし、これら自然物質の修飾誘導体および半合成誘導体のいずれも、最適な薬理学的特性を有していない。これらには、水性媒体への可溶性が低いという不都合がある。さらに、例えば生物学的利用性が低く、排泄の半減期が短く、安定性が不十分であるという不都合な薬物動態指標を有しており、このため動物の生体内試験の実行、およびその後における患者治療への使用には適していない。
【０００３】
五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドは、極性官能基（例えば、‐ＯＨ、‐ＣＯＯＨ、＝Ｏ、‐ＮＨ２等）を有している場合であっても硬質な脂溶性の骨格を有しており、また２５〜３０の炭素原子から成るため、ほぼ水不溶性である。例えばクロロホルム、アセトン、酢酸エチル等、化学的操作（chemical practice）において一般的に用いられる溶媒は、生体との非相溶性ゆえに、製薬目的での溶解に用いることはできない。従来技術では、アルカリ炭酸塩または炭酸水素塩の存在下において、五環性トリテルペノイド酸は、シクロデキストリンを有する包接化合物を形成し、これらの包接化合物は、適切な添加物を添加することによって水性の媒体に溶解することが知られている（特許文献１）。トリテルペノイド酸の最大の可溶性は、高級シクロデキストリン、具体的には、β体およびγ体を用い、低級アルコール（メタノール）またはグリコール（プロピレングリコール、ブタンジオール）を添加物として用いることによって達成可能であることが教示されている（非特許文献２）。賦形剤に用いられる場合、トリテルペノイドの可溶性は１０〜５０ｍｇ／ｍｌ（特許文献１）に達する。包接化合物は、その溶液から、凍結乾燥によって粉末状の固形物質として単離することができる。しかし、水性の媒体に溶解することができるのは、遊離カルボン酸官能基を有する未変成トリテルペノイドカルボン酸のみであって、カルボン酸官能基を有していないその機能性誘導体またはテルペノイドは溶解しない。さらに、多数の不利な薬理学的特性（例えば、精製の困難性ならびに不安定性）を有している生物活性遊離トリテルペノイド酸は、製剤操作（pharmaceutical practice）において、誘導体に変換されて、代謝を鈍化させ（半減期を長くする）、安定性あるいはプロドラッグとしての機能を増加させる場合が多い。これら誘導体の１つのタイプとしては、例えばモルホリノエチルエステル、アセトキシメチルエステル、ヘプチルエステルなど、生物学的に開裂可能な様々なエステルが挙げられる（非特許文献３）。
【０００４】
一般的に、カルボン酸誘導体は、水性の賦形剤との相溶性が遊離酸よりも低い。カルボン酸誘導体を製剤行為において利用する場合、水性の賦形剤との使用を可能にする処方物を見出す必要がある。
【０００５】
これらの理由から、さらなる発展のために、水性の媒体に溶解し、生物学的に利用可能であり（好ましくは経口投与可能であり）、排泄の半減期が適切であり、かつ安定的である、すなわち最適な薬物動態パラメータを有する、不溶性の生物活性を有する五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドの誘導体を調製する必要があるのは明らかである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第９２／０９５５３号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Dzubak, P.；Hajduch, M.；Vydra, D.；Hustova, A.；Kvasnica, M.；Biedermann, D.；Markova, L.；Urban, M.；Sarek, J. Nat. Prod. Rep. 2006, 23, 394-411
【非特許文献２】Uekama K., Hirayama F., Irie T.：Chem. Rev. 1998, 98, 2045-2076, Hedges A. R.：Chem. Rev. 1998, 98, 2035-2044
【非特許文献３】Gewehr M., Kunz H.：Synthesis 1997, 1499；Urban M., Sarek J., Tislerova I., Dzubak P., Hajduch M.：Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 5527
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、水不溶性の五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドの可溶性処方物の調製方法を提供することであって、本調製方法は、遊離型の、カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアミノ官能基を有する上記水不溶性テルペノイドの当該官能基が、
ａ）上記水不溶性テルペノイドの上記ヒドロキシル基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基：
【０００９】
【化１】
2010504921.tif 000002
【００１０】
ｂ）上記水不溶性テルペノイドの上記アミノ基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基：
【００１１】
【化２】
2010504921.tif 000003
【００１２】
ｃ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基であって、Ｘｂが‐（ＣＨ２）ｎＮ＋Ｒ３Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒが、置換されていない、あるいは‐ＯＨ、‐ＮＨ２またはハロゲンで置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基：
【００１３】
【化３】
2010504921.tif 000004
【００１４】
ｄ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基であって、Ｘｃが‐（ＣＨ２）ｎＲ＋Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒ＋が、１〜２の窒素原子および４〜９の炭素原子、並びに、少なくとも１つの芳香族環を含有しているプロトン化した窒素含有の複素環であり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基：
【００１５】
【化４】
2010504921.tif 000005
【００１６】
ｅ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｄで示される置換基であって、Ｘｄが‐Ｒ‐ＣＯＯＨを表し、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘｄで示される置換基：
【００１７】
【化５】
2010504921.tif 000006
【００１８】
ｆ）上記水不溶性テルペノイドの上記カルボキシル基に対してαまたはβグリコシド結合よって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ：
【００１９】
【化６】
2010504921.tif 000007
【００２０】
ｇ）上記水不溶性テルペノイドの上記ヒドロキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ：
【００２１】
【化７】
2010504921.tif 000008
【００２２】
からなる群から選択される置換基によって誘導体化され、続いて、調製された当該誘導体が、水と、シクロデキストリンと、必要に応じて薬学的に許容される補助物質とを含有する溶液に溶解されて、シクロデキストリンを含有する包接誘導体（inclusion derivative）を形成することを特徴とする。
【００２３】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘａで示される上記置換基は、コハク酸エステル、グルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルグルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルコハク酸エステル、テトラヒドロフタル酸エステル、ジグリコール酸エステル、またはフタル酸エステルからなる群から選択される。
【００２４】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｂで示される上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＝ＣＨ３を満たすコリンエステルである。
【００２５】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｃで示される上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＋＝ＰｙＨ＋、Ｙ−＝Ｂｒ−を満たすピリジニウム塩である。
【００２６】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｄで示される上記置換基は、Ｒ＝ＣＨ２を満たすグリコール酸エステルである。
【００２７】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｅで示される上記置換基は、グルコシル、ガラクトシル、ラクトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される。
【００２８】
本発明の好ましい一実施形態では、上記シクロデキストリンは、未変成または置換β‐シクロデキストリンおよびγ‐シクロデキストリンからなる群から選択される。
【００２９】
エタノールまたはプロピレングリコールなどの生体適合性有機溶媒、および、アルカリ炭酸塩または炭酸水素塩などの包接錯体の形成を促進する化合物は、補助物質であってよい。
【００３０】
本発明の目的はさらに、五環性テルペノイドまたは四環性トリテルペノイドの可溶性処方物を提供することであって、本可溶性処方物は、五環性テルペノイドまたは四環性トリテルペノイドのカルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基が、
ａ）上記テルペノイドの上記ヒドロキシル基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基、またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基；
ｂ）上記テルペノイドの上記アミノ基に結合する一般式Ｘａで示される置換基であって、Ｘａが‐ＯＣ‐Ｒ‐ＣＯＯＨであり、Ｒが、置換されていない、あるいはハロゲン基、ヒドロキシル基、またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、直鎖または分岐Ｃ３〜Ｃ８オキサアルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルケニレン、Ｃ６シクロアルキレン、Ｃ６シクロアルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘａで示される置換基；
ｃ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基であって、Ｘｂが‐（ＣＨ２）ｎＮ＋Ｒ３Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒが必要に応じて‐ＯＨ、‐ＮＨ２、またはハロゲンで置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｂで示される第四アンモニウム置換基；
ｄ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｃの第四アンモニウム置換基であって、Ｘｃが‐（ＣＨ２）ｎＲ＋Ｙ−であり、ｎが２〜８であり、Ｒ＋が、１〜２の窒素原子および４〜９の炭素原子、並びに、少なくとも１つの芳香族環を含有しているプロトン化した窒素含有の複素環であり、Ｙ−がハロゲン化物、硫酸エステル、硫酸水素塩、およびトリフラートからなる群から選択されるアニオンである、一般式Ｘｃで示される第四アンモニウム置換基；
ｅ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に結合する一般式Ｘｄで示される置換基であって、Ｘｄが‐Ｒ‐ＣＯＯＨを表し、Ｒが、置換されていないまたはハロゲン基、ヒドロキシル基、またはアミノ基で置換された、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、直鎖または分岐Ｃ１〜Ｃ４アルケニレン、Ｃ６アリーレンである、一般式Ｘｄで示される置換基；
ｆ）上記テルペノイドの上記カルボキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ；
ｇ）上記テルペノイドの上記ヒドロキシル基に対してαまたはβグリコシド結合によって結合するグリコシル置換基Ｘｅであって、Ｘｅが、グルコシル、ガラクトシル、アラビノシル、ラムノシル、ラクトシル、セロビオシル、マルトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される、グリコシル置換基Ｘｅ；
からなる群から選択された置換基で誘導体化された、上記五環性テルペノイドまたは四環性テルペノイドの包接錯体を含有しており、
シクロデキストリン、および、必要に応じて水ならびに薬学的に許容される補助物質を含有している。
【００３１】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘａの上記置換基は、コハク酸エステル、グルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルグルタル酸エステル、３’，３’‐ジメチルコハク酸エステル、テトラヒドロフタル酸、ジグリコール酸エステル、またはフタル酸エステルからなる群から選択される。
【００３２】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｂの上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＝ＣＨ３を満たすコリンエステルである。
【００３３】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｃの上記置換基は、ｎ＝２、Ｒ＋＝ＰｙＨ＋、Ｙ−＝Ｂｒ−を満たすピリジニウム塩である。
【００３４】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｄの上記置換基は、Ｒ＝ＣＨ２を満たすグリコール酸エステルである。
【００３５】
本発明の好ましい一実施形態では、一般式Ｘｅの上記置換基は、グルコシル、ガラクトシル、ラクトシル、およびそれらの２‐デオキシ類似体からなる群から選択される。
【００３６】
本発明の好ましい一実施形態では、上記シクロデキストリンは、未変成または置換β‐シクロデキストリンおよびγ‐シクロデキストリンからなる群から選択される。
【００３７】
エタノールまたはプロピレングリコールなどの生体適合性有機溶媒、および、アルカリ炭酸塩または炭酸水素塩などの包接錯体の形成を促進する化合物は、補助物質であってよい。
【００３８】
本発明の目的はさらに、本発明に係る可溶性処方物と、薬学的に許容される溶媒とを含有する薬学的組成物を提供することである。
【００３９】
本発明の好ましい一実施形態では、上記薬学的に許容される溶媒は水である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したヘミコハク酸エステル２ｂの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図２】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したアルデヒド３の薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図３】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したヘミコハク酸エステル３ｂの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図４】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したヘミコハク酸エステル５ａの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図５】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したジケトン‐ジヘミコハク酸エステル５ｅの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図６】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したピラジン６ａの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図７】２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンとの包接錯体の水溶液としてマウスへ経口投与したヘミコハク酸エステル８ａの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図８】カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）懸濁剤としてマウスへ経口投与した化合物５ｃ、５ｄ、６、７、８の薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図９】マウスへ経口投与した２‐デオキシガラクトシド４ｖの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図１０】マウスへ経口投与したグルコシド４ｉの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図１１】マウスへ経口投与したヘミグルタル酸エステル２ｉの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【図１２】マウスへ経口投与した３’，３’‐ジメチルヘミコハク酸エステル４ｔの薬物動態プロファイルを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
水不溶性の五環性テルペノイドおよび四環性テルペノイドの可溶性処方物の調製方法は、ａ）不溶性出発化合物の誘導体化、およびｂ）当該誘導体とシクロデキストリンとの包接錯体の水溶液の調製という２つの工程から成る。
【００４２】
実施例に記載されている全ての化合物、およびそれらの特性の評価は、表１に要約されていると共に化１〜９に示されている。
【００４３】
不溶性の五環性テルペノイドおよび四環性トリテルペノイドを誘導体化する一般的な方法は、Ｈ‐１、Ｈ‐１＊、Ｈ‐２、Ｈ‐３、Ｈ‐４、Ｈ‐５、Ｈ‐６、Ｈ‐６＊、Ｈ‐７、Ｈ‐７＊、Ｈ‐８、Ｈ‐９、Ｋ‐１、Ｋ‐２、Ｋ‐３で表示されており、本明細書の以下の部分において具体的な実施例で説明されている。アスタリスクのない方法の表示は、直接的な誘導体化方法を示している。一方、アスタリスクのある方法表示は、２つの遊離カルボキシル基（一方は誘導体化によって形成され、他方は骨格カルボキシル基である）を有する誘導体をもたらす、トリテルペン酸（triterpenic acid）のベンジルエステルを介した誘導体化方法を示している。物質を溶解する工程を含む、包接錯体の一般的な調製方法は、ＡおよびＢで表示されている。
【実施例】
【００４４】
ａ）不溶性物質の誘導体化
【実施例１】
【００４５】
ベツリン‐ジヘミコハク酸エステル（１ａ）の調製（方法Ｈ‐１）
ピリジン（２０ｍｌ）にベツリン（１）（５００ｍｇ；１.１３ｍｍｏｌ）を入れた溶液内に、無水コハク酸（１.２ｇ；１２.０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ‐ジメチルアミノピリジン（以下ではＤＭＡＰ）（１.２ｇ；１０.０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌しながら還流させた。反応の過程は、薄層クロマトグラフィー（以下ではＴＬＣ）（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。この反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相（combined organic phases）を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムを用いて乾燥させ、当該溶媒を回転真空蒸発器において真空乾燥させた。濃縮物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ヘキサン内の酢酸エチルを２０％から１００％まで勾配溶離させることによって精製した。クロマトグラフ的に均一なジヘミコハク酸エステル１ａを、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコールから凍結乾燥させた。得られたヘミコハク酸エステル１ａ（３８７ｍｇ；６７％）は、融点が１０７℃、［α］Ｄ＝１０°（ｃ＝０.４４）であった。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１４.８、１６.０、１６.１、１６.５、１８.１、１９.１、２０.８、２３.６、２５.２、２７.０、２７.９、２９.０、２９.０、２９.１、２９.３、２９.５、２９.６、３４.１、３４.４、３７.０、３７.６、３７.８、３８.４、４０.９、４２.７、４６.４、４７.７、４８.８、５０.３、５５.４、６３.２、８１.５、１０９.９、１５０.１、１７１.８、１７２.４、１７７.８、１７７.８。
【実施例２】
【００４６】
ヘミコハク酸エステル５ａの調製（方法Ｈ‐１）
ピリジン（１５ｍｌ）とテトラヒドロフラン（以下ではＴＨＦ）（５ｍｌ）との混合物にヒドロキシジケトン５（５００ｍｇ；１.０ｍｍｏｌ）を入れた溶液内に、無水コハク酸（９００ｍｇ；９.０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（９８２ｍｇ；８.０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌しながら還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。次に、化合物１ａの調製と同様に、反応混合物を冷却し、さらに後処理をした。クロマトグラフ的に均一なヘミコハク酸エステル５ａを、アセトニトリルと水との混合物から結晶化した。得られたヘミコハク酸エステル５ａ（３８３ｍｇ；６４％）は、ｍ．ｐ．が１５４〜１５７℃、［α］Ｄ＝−９９°（ｃ＝０.２４）であった。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１６.１、１６.５、１６.７、１６.８、１８.０、１９.７、１９.８、２１.０、２３.５、２５.９、２７.４、２７.８、２７.９、２８.４、２８.９、２９.２、３４.５、３７.１、３７.８、３８.５、４１.５、４５.５、４６.１、５０.８、５０.８、５３.４、５５.４、８１.２、１５０.６、１６８.１、１７１.０、１７１.９、１７７.６、１８９.２、１９４.３。
【実施例３】
【００４７】
ヘミコハク酸エステル８ａの調製（方法Ｈ‐１）
テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）にアミノアルコール８（５００ｍｇ；１.１ｍｍｏｌ）を入れた溶液内に、無水コハク酸（９００ｍｇ；９.０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５時間攪拌しながら還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。続いて、化合物１ａの調製と同様に、反応混合物を冷却し、さらに後処理をした。クロマトグラフ的に均一なヘミコハク酸エステル８ａを、アセトニトリルと水との混合物から結晶化した。得られたヘミコハク酸エステル８ａ（４０６ｍｇ；６７％）は、ｍ．ｐ．が２８３〜２８４℃、［α］Ｄ＝＋６５°（ｃ＝０.３４）であった。
【実施例４】
【００４８】
遊離酸ヘミコハク酸エステル２ｅの調製（方法Ｈ‐１＊）
Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド（以下ではＤＭＦ（２０ｍｌ）にベツリン酸（２）（５００ｍｇ；１.１ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（２７６ｍｇ；２.０ｍｍｏｌ）とを入れた混合物に、臭化ベンジル（１７８ｍｌ；１,５ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル１０：１）によってモニタした。反応混合物を１０倍過剰の水で希釈し、酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（移動相はトルエン）。得られた粗ベツリン酸ベンジル（crude benzyl betulinate）（５１７ｍｇ；８６％）は、精製せずに次の工程で使用した。
【００４９】
ピリジン（２０ｍｌ）に入れたベツリン酸ベンジル（５００ｍｇ；０.９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水コハク酸（９００ｍｇ；９.０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（９８２ｍｇ；８.０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１５時間攪拌しながら還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機抽出物を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、ヘキサン内の酢酸エチルを１０％から５０％に勾配溶離させることによって精製した。クロマトグラフ的に均一なベツリン酸ベンジル ヘミコハク酸エステル（benzyl betulinate hemisuccinate）は、精製せずに次の工程で使用した。
【００５０】
テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）とメタノール（５ｍｌ）との混合物内にベツリン酸ベンジル ヘミコハク酸エステル（３８９ｍｇ；０,６ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、パラジウム炭素（５０ｍｇ；１０％）および１，４‐シクロヘキサジエン（５６８ｍｌ；６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２２時間攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。反応混合物を珪藻土で濾過し、溶離物を回転真空蒸発器において蒸発させた。ベンゼンからの濃縮物を結晶化することによって、ｍ．ｐ．が２６５℃であり［α］Ｄ＝１５°（ｃ＝０.３７）であるヘミコハク酸エステル２ｅ（３６６ｍｇ；９１％）が得られた。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１４.６、１６.２、１６.２、１６.６、１８.２、１９.３、２０.９、２３.６、２５.４、２８.０、２９.２、２９.４、２９.７、３０.５、３２.１、３４.１、３７.１、３７.１、３７.９、３８.２、３８.４、４０.７、４２.４、４６.９、４９.２、５０.２、５５.３、５６.５、８１.５、１０９.７、１５０.３、１７１.７、１７８.３、１８２.７。
【実施例５】
【００５１】
ヘミフタル酸エステル２ｃの調製（方法Ｈ‐２）
ピリジン（２０ｍｌ）にベツリン酸エチル（２ａ）（５００ｍｇ；１.０ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、無水フタル酸（１.４８ｇ；１０.０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３６６ｍｇ；３.０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２８時間攪拌しながら還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。次に、化合物１ａの調製と同様に、反応混合物を冷却して、さらに後処理をし、生成物を精製した。クロマトグラフ的に均一なヘミフタル酸エステル２ｃを、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコールから凍結乾燥した。得られたヘミフタル酸エステル２ｃ（３３５ｍｇ；５３％）は、ｍ．ｐ．が１３１℃、［α］Ｄ＝２６°（ｃ＝０.４５）であった。
【実施例６】
【００５２】
ベツリン ジヘミフタル酸エステル（１ｂ）の調製（方法Ｈ‐２）
ピリジン（２０ｍｌ）にベツリン（１）（５００ｍｇ；１.１３ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、無水フタル酸（１.３３ｇ；９.０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３６６ｍｇ；３.０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３７時間攪拌しながら還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル１：１）によってモニタした。次に、化合物１ａの調製と同様に、反応混合物を冷却し、さらに後処理し、生成物を精製した。クロマトグラフ的に均一なジヘミフタル酸エステル１ｂを、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコールから凍結乾燥した。得られたジヘミフタル酸エステル１ｂ（６３３ｍｇ；７６％）は、ｍ．ｐ．が１７８〜１８０℃、［α］Ｄ＝２８°（ｃ＝０.５５）であった。
【実施例７】
【００５３】
グルコシド４ｉの調製（方法Ｈ‐３）
ｉ）乾燥アセトニトリル（２５ｍｌ）にエチルエステル４ｇ（１.００ｇ；２.０７ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、２，３，４，６‐テトラアセチル‐α‐Ｄ‐臭化グルコピラノシル（１.７ｇ；４.１ｍｍｏｌ）およびシアン化水銀（７８２ｍｇ；３.１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、湿気を排除して還流冷却器で還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／エーテル６：１）によってモニタした。冷却した反応混合物を湿潤硫化水素で泡立て、珪藻土で濾過し、濾液を１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機抽出物を水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。移動相は、濃度勾配のある、ジエチルエーテルを含むトルエンである。得られたアセチル化グルコシド４ｈ（５５０ｍｇ；３３％）は、ｍ．ｐ．が１１０℃、［α］Ｄ＝−３３°（ｃ＝０.３２）であった。赤外線スペクトル：１２４６（Ｃ‐Ｏ）；１６０９（Ｃ＝Ｃ）；１６９７、１７５４（Ｃ＝Ｏ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.７３ｓ、３Ｈ；０.８７ｓ、３Ｈ；０.９０ｓ、３Ｈ；０.９２ｓ、３Ｈ；１.０２ｓ、３Ｈ；１.２０ｓ、３Ｈ；１.２２ｓ、３Ｈ；（７×ＣＨ３）；１.２６ｔ、３Ｈ（Ｊ＝７.４；‐ＣＨ２‐ＣＨ３）；２.０１ｓ、３Ｈ；２.０３ｓ、３Ｈ；２.０４ｓ、３Ｈ；２.０９ｓ、３Ｈ（４×ＣＨ３ＣＯＯ）；２.４６ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１８.６；Ｈ‐２２ｂ）；２.４６ｍ、１Ｈ（ΣＪ＝１２.０；Ｈ‐１６β）；２.６８ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１２.７、Ｊ２＝３.２；Ｈ‐１３β）；３.０８ｍ、１Ｈ、（ΣＪ＝１６.４；Ｈ‐３α）；３.２０ septet、１Ｈ（Ｊ＝７.１；Ｈ‐２０）；３.６９ｍ、１Ｈ（Ｊ＝２０.０；Ｈ‐５’）；４.１０〜４.２８ｍ、４Ｈ（Ｏ‐ＣＨ２、Ｈ‐６’ａ，ｂ）；４.５４ｄ、１Ｈ（Ｊ＝８.１；Ｈ‐１’）；５.０１〜５.０９ｍ、２Ｈ（Ｈ‐４’、Ｈ‐２’）；５.１８〜５.２４ｍ、１Ｈ（ΣＪ＝２４；Ｈ‐３’）。ＭＳ  ＥＳＩ ｍ／ｚ（％）：[Ｃ４６Ｈ６４Ｏ１３、Ｍ＋，８２８]、８２９（［Ｍ＋Ｈ］＋、１０）；（８５１（[Ｍ＋Ｎａ]＋、４０）。Ｃ４６Ｈ６４Ｏ１３の元素分析：計算値はＣ６６.６４％、Ｈ８.２７％、分析値はＣ６１.９７％、Ｈ８.１２％であった。
【００５４】
ｉｉ）得られたアセチル化グルコシド４ｈ（３３０ｍｇ；０.３９ｍｍｏｌ）と乾燥メタノール（１０ｍｌ）とを混合し、金属ナトリウム（５ｍｇ）を添加した。反応過程は、逆ＴＬＣ（水／ＴＨＦ１：１）でモニタした。反応混合物を、酢酸を用いてｐＨ６の酸性にし、回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物に水を添加し、生じた懸濁剤は排出して水で洗浄した。沈殿物を乾燥器内において酸化リン（Ｖ）を用いて乾燥させた。得られた遊離グルコシド４ｉ（１８０ｍｇ；０.２８ｍｍｏｌ）、６８％）は、ｍ．ｐ．が１９６.０℃、［α］Ｄ＝−４６°（ｃ＝０.２９）であった。赤外線スペクトル：１６０９（Ｃ＝Ｃ）；１６９７、１７２４（Ｃ＝Ｏ）；３４１１（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.８２ｓ、３Ｈ；０.８９ｓ、３Ｈ；０.９３ｓ、３Ｈ；１.０２ｓ、３Ｈ；１.０３ｓ、３Ｈ；１.２０ｓ、３Ｈ；１.２１ｓ、３Ｈ（７×ＣＨ３）；１.２５ｔ、３Ｈ（Ｊ＝７.２；‐ＣＨ２‐ＣＨ３）；２.１４ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１８.５；Ｈ‐２２ｂ）；２.４５ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１８.８；Ｈ‐２２ａ）；２.４２〜２.５２ｍ、１Ｈ（ΣＪ＝４０；Ｈ‐１６β）；２.６８ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１２.８、Ｊ２＝２.６；Ｈ‐１３β）；３.１３〜３.５０ｍ、６Ｈ（Ｈ‐３α、Ｈ‐２０、Ｈ‐５’、Ｈ‐３’、Ｈ‐４’、Ｈ‐２’）；３.７５〜３.８７ｍ、２Ｈ（Ｈ‐６’ａ，ｂ）；４.１０〜４.２４ｍ、２Ｈ（Ｏ‐ＣＨ２）；３.７９ｄ、１Ｈ（Ｊ＝７，６；Ｈ‐１’）。ＭＳ  ＥＳＩ ｍ／ｚ（％）：[Ｃ３８Ｈ６０Ｏ９、Ｍ＋６６０]、６８３（[Ｍ＋Ｎａ]＋、６０）。Ｃ３８Ｈ６０Ｏ９の元素分析：計算値はＣ６６.０６％、Ｈ９.１５％、分析値はＣ６６.３９％、Ｈ８.９８％であった。
【実施例８】
【００５５】
ビスグルコシド７ｅ、７ｆの調製（方法Ｈ‐３）
ｉ）乾燥アセトニトリル（２５ｍｌ）にジオール７ａ（２.００ｇ；３.９２ｍｍｏｌ）を入れた懸濁剤に、２，３，４，６‐テトラアセチル‐α‐Ｄ‐臭化グルコピラノシル（６.４ｇ；１５.７ｍｍｏｌ）およびシアン化水銀（ＩＩ）（３.０ｇ；１１.８ｍｍｏｌ）を添加し、湿気を排除して混合物を還流冷却器で還流した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／エーテル６：１）によってモニタした。湿潤硫化水素を用いて、冷却した反応混合物を泡立て、珪藻土で濾過し、濾液を１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機抽出物を水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させて、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した移動相は、濃度勾配のある、ジエチルエーテルを含むトルエンである。得られたアセチル化ビスグルコシド７ｄ（２,５０ｇ；５４％）は、ｍ．ｐ．が１０２.７℃、［α］Ｄ＝＋１４°（ｃ＝０.２８）であった。赤外線スペクトル：１２３４（Ｃ‐Ｏ）；１６０３（Ｃ＝Ｃ）；１７５５（Ｃ＝Ｏ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.７３ｓ、３Ｈ；０.８７ｓ、３Ｈ；０.８９ｓ、３Ｈ；０.９０ｓ、３Ｈ；１.０９ｓ、３Ｈ（５×ＣＨ３）；１.９９ｓ、３Ｈ；２.０１ｓ、３Ｈ；２.０２ｓ、３Ｈ；２.０２ｓ、３Ｈ；２.０３ｓ、３Ｈ；２.０３ｓ、３Ｈ；２.０４ｓ、３Ｈ；２.０８ｓ、３Ｈ（８×ＣＨ３ＣＯＯ）；２.３８ｄｔ、１Ｈ（Ｊ１＝１４.０、Ｊ２＝４.９；Ｈ‐１６α）；３.５８ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１１.８、Ｊ２＝３.５；Ｈ‐１３β）；３.０７ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１１.６、Ｊ２＝４.９；Ｈ‐３α）；３.５１ｍ、１Ｈ（ΣＪ＝１６.８；Ｈ‐５’）；３.６７ｍ、１Ｈ（ΣＪ＝１７.７；Ｈ‐５’）；３.９９ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１１.０；Ｈ‐２８ａ）；４.１１ｍ、２Ｈ（Ｈ‐６’ａ，ｂ）；４.２０ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１０.７；Ｈ‐２８ｂ）；４.２５ｍ、２Ｈ（Ｈ‐６’ａ，ｂ）；４.５３ｄ、１Ｈ（Ｊ＝７.９；Ｈ‐１’）；４.６３ｄ、１Ｈ（Ｊ＝８.２；Ｈ‐１’）；４.８９ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝９.５、Ｊ２＝７.９；Ｈ‐３’）；５.０３ｍ、１Ｈ（ΣＪ＝２４.０；Ｈ‐３'）；５.０７〜５.１６ｍ、３Ｈ（２×Ｈ‐２’）；５.１７〜５.２３ｍ、２Ｈ（２×Ｈ‐４’）；５.１９ｂｓ、２Ｈ（Ｂｎ）；７.３７ｍ、５Ｈ（Ｐｈ）。ＭＳ  ＥＳＩ ｍ／ｚ（％）：[Ｐｒｏ Ｃ６０Ｈ８２Ｏ２３、Ｍ＋１１７０]、１１９３（[Ｍ＋Ｎａ]＋、６０）。Ｃ６０Ｈ８２Ｏ２３の元素分析：計算値はＣ６１.５３％、Ｈ７.０６％、分析値はＣ６３.８６％、Ｈ７.５２％であった。
【００５６】
ｉｉ）得られたアセチル化ビスグルコシド７ｄ（２.３０ｇ；１.９７ｍｍｏｌ）を乾燥メタノール（２５０ｍｌ）と混合し、混合物に金属ナトリウム（１０ｍｇ）を添加した。反応過程は、逆ＴＬＣ（水／ＴＨＦ１：１）でモニタした。反応混合物を、酢酸を用いてｐＨ６の酸性にし、回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物に水を添加し、得られた懸濁剤を濾過して水で洗浄した。沈殿物をリン（Ｖ）酸化物を用いて乾燥器内で乾燥させた。得られたビスグルコシド７ｅ（１.３６ｇ；５４％）は、ｍ．ｐ．が１８６℃、［α］Ｄ＝＋５°（ｃ＝０.３３）であった。赤外線スペクトル（ＡＴＲ技術で測定）：１０３４、１０７６（Ｃ‐Ｏ）；１７０８、１７２６（Ｃ＝Ｏ）；３４０３（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.８４ｓ、３Ｈ；０.８９ｓ、３Ｈ；０.９３ｓ、３Ｈ；１.０２ｓ、３Ｈ；１.１２ｓ、３Ｈ（５×ＣＨ３）；２.３９ｄｔ、１Ｈ（Ｊ１＝１３.０、Ｊ２＝３.７；Ｈ‐１６α）；２.７１ｄ、１Ｈ（Ｊ＝９.０；Ｈ‐１３β）；３.１７ｍ、１Ｈ（Ｈ‐３α）；３.２４〜３.３４ｍ、４Ｈ（２×Ｈ‐５’、２×Ｈ‐２’）；３.３６〜３.４８ｍ、４Ｈ（Ｈ‐３’、Ｈ‐４’）；３.６８〜３.８０ｍ、２Ｈ（Ｈ‐６’ａ，ｂ）；３.８４ｍ、２Ｈ（Ｈ‐６’ａ，ｂ）；３.９４ｄ、１Ｈ（Ｊ＝９.８；Ｈ‐２８ａ）；４.３０ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１０.０；Ｈ‐２８ｂ）；４.３３ｄ、１Ｈ（Ｊ＝７.６；Ｈ‐１’）；４.３４ｄ、１Ｈ（Ｊ＝７.６；Ｈ‐１’） ５.２０ｂｓ、２Ｈ（Ｂｎ）；７.３５ｍ、５Ｈ（ΣＪ＝３.２；Ｐｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは表３に示されている。ＭＳ  ＥＳＩ ｍ／ｚ（％）：[Ｃ４４Ｈ６６Ｏ１５、Ｍ＋８３４]、８５８（[Ｍ＋Ｎａ] ＋、４０）。Ｃ４４Ｈ６６Ｏ１５の元素分析：計算値はＣ６３.２９％、Ｈ７.９７％、分析値はＣ６３.４４％、Ｈ７.５２％であった。
【００５７】
ｉｉ）ＴＨＦ（１０ｍｌ）とメタノール（１０ｍｌ）との混合物に、ビスグルコシド７ｅ（１.,１０ｇ；１.３２ｍｍｏｌ）を溶解し、そして水素過圧（hydrogen overpressure）（０.６ＭＰａ）下にあるＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ；１０％）のオートクレーブ内において、ベンジル基を攪拌しながら脱保護した。反応過程は、逆ＴＬＣ（水／ＴＨＦ１：１）によってモニタした。２４時間後にオートクレーブを開き、反応混合物を珪藻土カラムで濾過した。溶離物を回転真空蒸発器で蒸発させ、濃縮物をメタノールから再結晶化した。得られたビスグルコシド酸（bisglucosidic acid）７ｆ（７８５ｍｇ；４２％）は、ｍ．ｐ．が１９４℃、［α］Ｄ＝＋１９（ｃ＝０.３１）であった。赤外線スペクトル（ＡＴＲ技術で測定）：１０３３、１０７９（Ｃ‐Ｏ）；１６９３、１７０７（Ｃ＝Ｏ）；３３８６（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.８５ｓ、３Ｈ；０.９３ｓ、３Ｈ；０.９６ｓ、３Ｈ；１.０５ｓ、３Ｈ；１.１８ｓ、３Ｈ（５×ＣＨ３）；２.３２〜２.４５ｍ、１Ｈ（Ｈ‐１６α）；２.８７ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１１.２、Ｊ２＝２.８；Ｈ‐１３β）；３.１１〜３.１５ｍ（ΣＪ＝１７.２；Ｈ‐３α）；３.１５〜３.２２ｍ、４Ｈ；３.２４〜３.３０ｍ、４Ｈ；３.６５ｄ、２Ｈ（Ｊ＝４.７；２×Ｈ‐６’ａ）；３.６８ｄ、２Ｈ（Ｊ＝４.９；２×Ｈ‐６’ｂ）；３.８５ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１２.４；Ｈ‐２８ａ）；４.２９ｄ、２Ｈ（Ｊ＝８.１；Ｈ‐１’）；４.３１ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１３.７；Ｈ‐２８ｂ）；４.３２ｄ、１Ｈ（Ｊ＝７.７；Ｈ‐１’）。ＭＳ  ＥＳＩ ｍ／ｚ（％）：[Ｐｒｏ Ｃ３７Ｈ６０Ｏ１５、Ｍ＋７３４]、７６７（[Ｍ＋Ｎａ]＋、４０）。Ｃ３７Ｈ６０Ｏ１５の元素分析：計算値はＣ５９.６６％、Ｈ８.１２％、分析値はＣ５９.９３％、Ｈ８.０１％であった。
【実施例９】
【００５８】
２‐デオキシガラクトシド４ｋの調製（方法Ｈ‐４）
ｉ）乾燥アセトニトリル（３０ｍｌ）にトリテルペン ヒドロキシ誘導体（triterpenic hydroxyderivative）４ｇ（５００ｍｇ；１.０ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、ｔｒｉ‐Ｏ‐アセチルガラクタル（acetylgalactal）（１.２ｍｍｏｌ）、分子篩４Ａ（５００ｍｇ）、臭化リチウム（７３０ｍｇ）、およびＨ＋サイクルの乾燥陽イオン交換樹脂（９００ｍｇ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応過程は、薄層クロマトグラフィーによってモニタした、（移動相は、ヘキサン：酢酸エチル２：１）。珪藻土層によって反応混合物を濾過し、カラムを酢酸エチルで洗浄した。反応混合物を水（５０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出し、有機相を回転真空蒸発器で蒸発させた。濃縮物をクロロホルム（５ｍｌ）に溶解し、この溶液をシリカゲルのショートカラムに注いだ（酢酸エチルで溶離）。溶離物を、回転真空蒸発器で蒸発させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離した（トルエンで溶離）。生成物を２‐メチルプロパン‐２‐オールから凍結乾燥し、融点が１００.８℃、［ａ］Ｄ＝＋３８.９°（ｃ＝０.５２）の白色凍結乾燥物４ｊ（３６０ｍｇ；４７％）が得られた。
【００５９】
ｉｉ）乾燥メタノール（３００ｍｌ）に２‐デオキシガラクトシド４ｊ（２００ｍｇ；０.２６ｍｍｏｌ）を溶解し、この溶液に触媒量のナトリウム（５ｍｇ）を添加した。反応過程は、逆相薄層クロマトグラフィーによってモニタした（移動相は、水／テトラヒドロフラン１：１）。反応混合物を酢酸で中和し、回転真空蒸発器で蒸発させた。濃縮物に水（３００ｍｌ）を添加し、生成物から生じた沈殿物を濾過した。濾過ケーキを水で洗浄した。融点１５８.０℃、［α］Ｄ＝＋１７.２°（ｃ＝０.５１）の、白色結晶性２‐デオキシグルコシド４ｋ（１６１ｍｇ；９７％）が得られた。
【実施例１０】
【００６０】
２‐デオキシグルコシド４ｍの調製（方法Ｈ‐４）
ｉ）乾燥アセトニトリル（３０ｍｌ）内にトリテルペン ヒドロキシ誘導体４ｄ（５００ｍｇ；１.０ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、ｔｒｉ‐Ｏ‐アセチルグルカル（１.２ｍｍｏｌ）、分子篩４Ａ（５００ｍｇ）、臭化リチウム（７３０ｍｇ）、およびＨ＋サイクルの乾燥陽イオン交換樹脂（９００ｍｇ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応過程は、薄層クロマトグラフィーによってモニタした（移動相は、ヘキサン：酢酸エチル２：１）。反応混合物を珪藻土層によって濾過し、カラムを酢酸エチルで洗浄した。反応混合物を水（５０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出して、有機相を回転真空蒸発器で蒸発させた。濃縮物をクロロホルム（５ｍｌ）に溶解し、この溶液をシリカゲルのショートカラムに注いだ（酢酸エチルにて溶離）。溶離物を回転真空蒸発器で蒸発させた。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離した（トルエン溶離）。生成物を２‐メチルプロパン‐２‐オールから凍結乾燥し、融点２０４.１℃、［α］Ｄ＝＋２４.２（ｃ＝０.４３）の白色凍結乾燥物４ｌ（２４５ｍｇ；３４％）が得られた。
【００６１】
ｉｉ）乾燥メタノール（１００ｍｌ）に２‐デオキシグルコシド４ｌ（６０ｍｇ；０.０８ｍｍｏｌ）を溶解し、溶液に触媒量のナトリウム（５ｍｇ）を添加した。反応過程は、逆相薄層クロマトグラフィーによってモニタした（移動相は、水：テトラヒドロフラン１：１）。反応混合物を酢酸で中和し、回転真空蒸発器で蒸発させた。濃縮物に水（１００ｍｌ）を添加して、生成物から生じた沈殿物を濾過した。濾過ケーキを水で洗浄した。融点２０８.０℃、［ａ］Ｄ＝＋１４.０（ｃ＝０.４０）の白色結晶性２‐デオキシグルコシド４ｍ（３９ｍｇ；７４％）が得られた。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１５.７、１６.１、１６.５、１６.６、１８.０、１９.７、１９.８、２１.０、２１.６、２４.９、２７.５、２８.３、２８.９、３３.５、３４.７、３７.０、３７.６、３８.２、３８.３、４１.１、４５.１、４５.２、４７.４、５０.９、５２.４、５３.０、５５.４、６２.７、６８.６、７１.２、７２.１、８１.４、９３.１、１７４.９、１４５.５、１７２.７、２０８.０。ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：[Ｃ３Ｈ５８Ｏ８、Ｍ＋６３０]、６５３（[Ｍ＋Ｎａ]＋、３０）、６３１（［Ｍ＋Ｈ］＋、３０）。Ｃ３７Ｈ５８Ｏ８（６３０.９）：計算値はＣ７０.４４％、Ｈ９.２７％、分析値はＣ７０.５８％、Ｈ９.１３％であった。
【実施例１１】
【００６２】
グリコール酸エステル４ａの調製（方法Ｋ‐１）
ｉ）ジクロロメタン（１０ｍｌ）およびアセトニトリル（５ｍｌ）に入れた、２１‐オキソ酸４（５００ｍｇ；０.９８ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（２７６ｍｇ；２.０ｍｍｏｌ）との混合物に、ブロモ酢酸ベンジル（２４０ｍｌ；１.５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル６：１）によってモニタした。反応混合物を１０倍過剰の水で希釈し、ジクロロメタンに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで１回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（移動相はトルエン）。得られた粗２１‐オキソ酸ベンジルグリコール酸エステル（21-oxoacid benzyl glycolate）（５０９ｍｇ；７９％）は、次の工程において使用した。
【００６３】
ｉｉ）テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）とメタノール（１０ｍｌ）との混合物に２１‐オキソ酸ベンジルグリコール酸エステル（３５０ｍｇ；０.５ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、パラジウム炭素（７５ｍｇ；１０％）および１，４‐シクロヘキサジエン（４７３μｌ；５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２０時間攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル４：１）を用いてモニタした。反応混合物を珪藻土で濾過し、溶離物を回転真空蒸発器で蒸発させた。アセトン／水の混合物からの濃縮物を結晶化させることによって、ｍ．ｐ．２６７〜２６９℃、［α］Ｄ＝−３３°（ｃ＝０.３９）の２１‐オキソ酸グリコール酸エステル４ａ（２７２ｍｇ；９０％）が得られた。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１５.９、１６.５、１６.６、１６.８、１８.１、２０.０、２０.１、２１.２、２１.３、２７.７、２９.０、２３.６、２５.１、２７.９、３３.５、３４.９、３７.１、３７.７、３８.５、４１.４、４５.３、４５.３、４７.３、５１.１、５３.１、５５.４、６０.４、８０.８、１４６.０、１７１.２、１７１.７、１７２.４、１７３.７、２０８.０。ＭＳ、ｍ／ｚ（％）：[Ｃ３４Ｈ５０Ｏ７、Ｍ＋ ５７０]、５７０（Ｍ＋、１８）、５２７（５）、５１０（２２）、４９５（６）、４６７（２３）、３７５（４）、３５９（３）、３２０（１６）、３０７（９８）、２２９（１０）、２０３（３１）、１８９（５２）。Ｃ３４Ｈ５０Ｏ７（５７０.４）：計算値は７１.５５％  Ｃ、８.８３％  Ｈ、分析値は７１.５２％  Ｃ、８.８５％  Ｈであった。
【実施例１２】
【００６４】
グリコール酸エステル７ｄの調製（方法Ｋ‐１）
ｉ）クロロホルム（１０ｍｌ）とアセトニトリル（７ｍｌ）との混合物に入れたペンタノール酸（pentanoracid）７（６００ｍｇ；１.２ｍｍｏｌ）と炭酸銀（４４０ｍｇ；１.６ｍｍｏｌ）との混合物に、ブロモ酢酸ベンジル（２６０ｍｌ；１.６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２８時間攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル６：１）によってモニタした。次に、この反応混合物を珪藻土で濾過し、２１‐オキソ酸ベンジルグリコール酸の調製と同様の手順で濾液を後処理して生成物を精製した。得られた粗ペンタノール酸ベンジルグリコール酸エステル（３５８ｍｇ；４６％）は、ｍ．ｐ．１５６〜１５７℃（メタノール）、［α］Ｄ＝＋５７°（ｃ＝０.３１）であり、次の工程において使用した。
【００６５】
ｉｉ）テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）とメタノール（３ｍｌ）との混合物にペンタノール酸ベンジルグリコール酸エステル（３００ｍｇ；０.５ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、パラジウム炭素（７５ｍｇ；１０％）を添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌しながらオートクレーブ内で水素によって水素化した。反応過程は、ＴＬＣ（クロロホルム）によってモニタした。反応混合物を珪藻土で濾過し、溶離物を回転真空蒸発器で蒸発させた。アセトン／水の混合物からの濃縮物を結晶化することによって、ｐ．２３０〜２３０℃、［α］Ｄ＝６６°（ｃ＝０.２３）のグリコール酸エステル７ｄ（２１５ｍｇ；８３％）が得られた。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１６.０、１６.２、１６.５、１６.７、１８.１、１９.７、２０.７、２１.３、２１.８、２３.６、２６.５、２７.１、２７.９、３４.０、３７.１、３７.８、３８.５、４１.０、４６.７、５０.５、５０.４、５５.４、６１.０、６３.２、８０.６、１７０.２、１７０.７、１７１.０、１７１.２、２１０.５。ＭＳ、ｍ／ｚ（％）：[Ｃ３１Ｈ４６Ｏ９、Ｍ＋ ５６２]、５６２（Ｍ＋、１）、５１６（３６）、５０２（３８）、４８７（１８）、４５９（１９）、４１５（１０）、３３９（８）、３１３（５４）、２２３（１１）、２０４（１５）、１８９（７０）。Ｃ３１Ｈ４９Ｏ９（５６２.３）：計算値は６６.１７％  Ｃ、８.２４％  Ｈ、分析値は６６.２４％  Ｃ、８.３１％  Ｈであった。
【実施例１３】
【００６６】
第四アンモニウム塩２ｆの調製（方法Ｋ‐２）
ｉ）ジクロロメタン（１５ｍｌ）とアセトニトリル（１ｍｌ）との混合物にベツリン酸２（１.３７ｇ；３ｍｍｏｌ）を入れた懸濁剤に、炭酸カリウム（０.４２ｇ；３ｍｍｏｌ）および１，２‐ジブロモエタン（５５０ｕｌ；４.５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／エーテル６：１）によってモニタした。全ての試薬が消費された後、濾過によって塩基を除去し、混合物を１０倍過剰の水で希釈して、酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを段階的に濃度変化させた）。得られた２’‐ブロモベツリン酸エチル（４８０ｍｇ；２８％）は、ｍ．ｐ．が１８４℃、［ａ］Ｄ＝＋７°（ｃ＝０.２４）であった。
【００６７】
ｉｉ）２’‐ブロモベツリン酸エチル（２００ｍｇ；０.３５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。この溶液にトリメチルアミン（０.５ｍｌ；５.６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応槽を密封して６０℃で１時間放置した。冷却後、反応混合物を１０倍過剰の水で希釈し、酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（クロロホルム中のメタノールを段階的に濃度変化させた）。得られた第四アンモニウム塩２ｆ（１６３ｍｇ；７５％）は、ｍ．ｐ．が１５５〜１５６℃、［α］Ｄ＝＋２２°（ｃ＝０.４０）であった。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１５.１、１６.１、１６.６、１６.７、１９.３、１９.５、２１.９、２６.６、２７.９、２８.６、３０.８、３１.３、３２.７、３５.４、３７.５、３８.２、３９.３、３９.８、３９.９、４１.８、４３.４、５０.５、５１.８、５４.４、５６.６、５７.７、５８.４、５９.５、６５.９、７８.７、７９.１、７９.４、７９.５、１１０.５、１２８.１、１３７.３、１５１.２、１７６.１。Ｃ３５Ｈ６０ＢｒＮＯ３の元素分析：計算値はＣ６７.５０％、Ｈ９.７１％、分析値はＣ６７.４６％、Ｈ９.６８％であった。
【実施例１４】
【００６８】
第四アンモニウム塩２ｇの調製（方法Ｋ‐２）
実施例１２で調製した２’‐ブロモベツリン酸エチル（２８５ｍｇ；０.４６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解し、この溶液にピリジン（１ｍｌ；９.４９ｍｍｏｌ）を添加した。反応槽を密封し、６０℃で４日間放置した。冷却後、反応混合物を１０倍過剰の水で希釈し、酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（クロロホルム中のメタノールを段階的に濃度変化させた）。得られた第四アンモニウム塩２ｇ（５２７ｍｇ；８６％）は、ｍ．ｐ．が１８６〜１８７℃、［ａ］Ｄ＝＋４５°（ｃ＝０.３９）であった。１３ＣＮＭＲスペクトル：１５.０、１６.１、１６.７、１６.７、１９.４、１９.４、２１.９、２６.６、２８.０、２８.６、３０.８、３１.４、３２.７、３５.５、３７.５、３８.２、３９.５、３９.９、４０.０、４１.８、４３.４、５０.６、５１.８、５６.７、５７.９、６１.５、６３.６、７９.５、７９.５、１１０.５、１２９.７、１４６.６、１４７.７、１５１.４、１７６.３。Ｃ３７Ｈ５６ＢｒＮＯ３の元素分析：計算値はＣ６９.１４％、Ｈ８.７８％であり、分析値はＣ６９.１８％、Ｈ８.７６％であった。
【実施例１５】
【００６９】
第四アンモニウム塩４ｏの調製（方法Ｋ‐２）
ｉ）ジクロロメタン（１５０ｍｌ）とアセトニトリル（５ｍｌ）との混合物に酸４（５.０ｇ；１０ｍｍｏｌ）を入れた懸濁剤に、炭酸カリウム（２ｇ；１４.２ｍｍｏｌ）および１，２‐ジブロモエタン（１.６５ｍｌ；１３.５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／エーテル６：１）によってモニタした。全ての試薬が消費された後、濾過によって基剤を除去し、混合物を１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させて、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを段階的に濃度変化させた）。得られた酸４の２’‐ブロモエチルエステル（２.３ｍｇ；３７％）は、ｍ．ｐ．が２１０℃、［α］Ｄ＝２３°（ｃ＝０.３５）であった。
【００７０】
ｉｉ）得られた酸４の２’‐ブロモエチルエステル（２８５ｍｇ；０.４６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。この溶液に、トリエチルアミン（０.５ｍｌ；３.３９ｍｍｏｌ）を添加し、反応槽を密封して６０℃で４日間放置した。冷却後、反応混合物を１０倍過剰の水で希釈し、酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（クロロホルム中のメタノールを段階的に濃度変化させた）。得られた第四アンモニウム塩４ｏ（６８ｍｇ；１９％）は、ｍ．ｐ．が１８３℃、［α］Ｄ＝＋１５°（ｃ＝０.３１）であった。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１６.４、１６.８、１７.２、１７.２、１８.７、２０.１、２１.４、２１.８、２４.２、２５.７、２８.３、２９.６、２９.８、３３.９、３５.５、３７.８、３８.４、４２.０、４５.９、５１.７、５３.９、５６.１、６５.３、７８.０、７８.３、７８.６、８１.９、１４６.５、１７２.５、１７４.６、２０９.１。Ｃ４０Ｈ６６ＢｒＮＯ５の元素分析：計算値はＣ６６.６５％、Ｈ９.２３％、分析値はＣ６６.６６％、Ｈ９.２６％であった。
【実施例１６】
【００７１】
第四アンモニウム塩４ｐの調製（方法Ｋ‐２）
実施例１４で得られた酸４の２’‐ブロモエチルエステル（２８５ｍｇ；０.４６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。この溶液に、トリエタノールアミン（５００ｍｇ；４.７ｍｍｏｌ）を添加し、反応槽を密封して６０℃で１０日間放置した。冷却後、反応混合物を１０倍過剰の水で希釈し、酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（クロロホルム中のメタノールを段階的に濃度変化させた）。得られた第四アンモニウム塩４ｐ（１３４ｍｇ；４１％）は、ｍ．ｐ．が１６２〜１６３℃、［α］Ｄ＝＋２８°（ｃ＝０.１３）であった。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１６.５、１７.０、１７.３、１７.４、１９.２、２０.３、２０.６、２１.１、２２.４、２.６、２６.４、２８.４、２８.８、３.２、３４.５、３６.０、３８.３、３８.９、３９.６、４２.６、４６.０、４６.５、４６.８、５２.３、５４.３、５４.５、５６.７、５７.９、６０.８、６４.６、７９.５、１４６.８、１７２.８、１４.４、１５.５、２０９.７。Ｃ４０Ｈ６６ＢｒＮＯ８の元素分析：計算値はＣ６２.４９％、Ｈ８.６５％、分析値はＣ６２.５２％、Ｈ８.６２％であった。
【実施例１７】
【００７２】
ヘミグルタル酸エステル２ｉの調製（方法Ｈ‐５）
２，４，６‐トリメチルピリジン（１０ｍｌ）にベツリン酸メチル（２ｈ）（５００ｍｇ；０.９４ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、グルタル酸無水物（１.１５ｇ；１０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ；０.４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８時間攪拌しながら還流させた。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル２：１）によってモニタした。この反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを８％から２５％に段階的に濃度変化させて溶離を行った）。２，２，４‐トリメチルペンタンを結晶化することによって、ｍ．ｐ．１６５℃、［α］Ｄ＋１７.５（ｃ０.３２）の白色結晶のヘミグルタル酸エステル２ｉ（３８６ｍｇ；６２％）が得られた。赤外線スペクトル：１２３０（Ｃ‐Ｏ）、１６４１（Ｃ＝Ｃ）、１７１６（Ｃ＝Ｏ）、２４３０〜３５００（ＣＯＯＨ）、３５２１（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.８３ｓ、３Ｈ；０.８３ｓ、３Ｈ；０.８４ｓ、３Ｈ；０.９１ｓ、３Ｈ；０.９６ｓ、３Ｈ；１.６９ｓ、３Ｈ、（６×ＣＨ３）；１.８７〜１.９０ｍ、２Ｈ；１.９２〜２.００pentet、２Ｈ（Ｊ＝７.２Ｈｚ、Ｈ‐３３）；２.１６〜２.２５ｍ、２Ｈ；２.３７〜２.４１ｔ、２Ｈ（Ｊ＝７.３Ｈｚ、Ｈ‐３２）；２.４１〜２.４５ｔ、２Ｈ（Ｊ＝７.３Ｈｚ、Ｈ‐３４）；３.００ｍ、１Ｈ；３.６７ｓ、３Ｈ（ＯＣＨ３）；４.４６〜４.５０ｍ、１Ｈ（Ｈ‐３α）；４.６０ｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｅ）；４.７３ｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１４.６８、１５.９４、１６.１６、１６.５４、１８.１８、１９.３４、２０.００、２０.８９、２３.７３、２５.４６、２７.９９、２９.６６、３０.５９、３２.１６、３２.９３、３３.６４、３４.２４、３６.９６、３７.１０、３７.８２、３８.２４、３８.３６、４０.６８、４２.３８、４６.９９、４９.４５、５０.４４、５１.２５、５５.４１、５６.５５、８１.１０、１０９.６１、１５０.５４、１７２.６２、１７６.６８、１７８.２７。ＭＳ、ｍ／ｚ（％）：[Ｐｒｏ Ｃ３６Ｈ５６Ｏ６、Ｍ＋ ５８４]、５８４（Ｍ＋、３）、５６９（２）、５５２（１）、５２４（３）、５０９（１）、４６６（１）、４５２（１５）、４３７（７）、４０９（５）、３９３（４）、２７３（３）、２６２（１２）、２４９（６）、２３３（５）、２１５（６）、２０３（１４）、１８９（３７）。Ｃ３６Ｈ５６Ｏ６の元素分析：計算値はＣ７３.９３％、Ｈ９.６５％、分析値はＣ７３.７９％、Ｈ９.８１％であった。
【実施例１８】
【００７３】
ガラクトピラノシルエステル２ｌの調製（方法Ｋ‐３）
ｉ）アセトン（４０ｍｌ）とアセトニトリル（２０ｍｌ）との混合物にベツリン酸（２）（１.００ｇ；２.２ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、炭酸カリウム（３５０ｍｇ；２.５ｍｍｏｌ）および２，３，４，６‐テトラアセチル‐α‐Ｄ‐臭化ガラクトピラノシル（１.６０ｇ；３.６ｍｍｏｌ）を添加した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／エーテル１０：１）によってモニタした。全ての出発材料が消費された後、塩基である炭酸カリウムを濾過によって除去し、混合物を１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで１回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（酢酸エチル／ヘキサン１：４）。得られた２’，３’，４’，６’‐テトラアセチル‐α‐Ｄ‐ガラクトピラノシル ベツリン酸エステル２ｋ（１.６０ｇ；９３％）は、ｍ．ｐ．が１８９〜１９０℃（２，２，４‐トリメチルペンタン）、［α］Ｄ＋３.３°（ｃ０.４６、エタノール）であった。赤外線スペクトル：１６４１（Ｃ＝Ｃ）、１７５２（Ｃ＝Ｏ）、３６１２（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.７５ ｓ、３Ｈ；０.８２ｓ、３Ｈ；０.９０ｓ、３Ｈ；０.９２ｓ、３Ｈ；０.９６ｓ、３Ｈ；１.６８ｓ、３Ｈ；（６×ＣＨ３）；２.００ｓ、３Ｈ；２.０３ｓ、３Ｈ；２.０４ｓ、３Ｈ；２.１７ｓ、３Ｈ；（４×ＣＨ３ＣＯＯ）；２.９５ｔｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１１.２、Ｊ２＝４.９；Ｈ‐１９β）；３.１８ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１１.２、Ｊ２＝４.６；Ｈ‐３α）；４.０２〜４.０６ｍ、１Ｈ（Ｈ‐５’）；４.０８〜４.１８ｍ、２Ｈ（Ｈ‐６’ａ、Ｈ‐６’ｂ）；４.６０ｂｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｅ）；４.７４ｄ、１Ｈ（Ｊ＝１.７；Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｚ）；５.１１ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１０.５、Ｊ２＝３.４；Ｈ‐３’）；５.３７ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１０.５、Ｊ２＝８.３；Ｈ‐２’）；５.４３ｄ、１Ｈ（Ｊ＝３.４；Ｈ‐４’）；５.６５ｄ、１Ｈ（Ｊ＝８.５；Ｈ‐１’）。ＭＳ、ｍ／ｚ（％）：[Ｃ４４Ｈ６６Ｏ１２、Ｍ＋ ７８６に対して]、７８６（Ｍ＋、０.５）、６９６（１）、５７９（１）、４５５（８）、４３７（７）、４１１（２０）、３９３（１１）、３３１（１００）、２０３（６）、１８９（１２）。Ｃ４４Ｈ６６Ｏ１２（７８６.５）の元素分析：計算値は６７.１５％  Ｃ、８.４５％  Ｈ、分析値は６７.１９％  Ｃ、８.５１％  Ｈであった。
【００７４】
ｉｉ）２’，３’，４’，６’‐テトラアセチル‐α‐Ｄ‐ガラクトピラノシル ベツリン酸エステル２ｋ（１.００ｇ；１.３ｍｍｏｌ）を乾燥メタノール（４０ｍｌ）に溶解し、この溶液に触媒量のナトリウム（５ｍｇ）を添加した。反応過程は、逆相薄層クロマトグラフィー（移動相 水：テトラヒドロフラン１：１）によってモニタした。１時間後、反応混合物を酢酸で中和し、回転真空蒸発器で蒸発させた。濃縮物に水（１００ｍｌ）を添加し、生成物から生じた沈殿物を濾過した。濾過ケーキを水で洗浄した。ｍ．ｐ．２３８〜２４０℃（クロロホルム）、［α］Ｄ０°（ｃ０.３９、エタノール）を有する、白色粉末（６８５ｍｇ；８６％）のガラクトピラノシル エステル２ｌが得られた。赤外線スペクトル（ＫＢｒ）：１６４１（Ｃ＝Ｃ）、１７４０（Ｃ＝Ｏ）、３２００〜３６００（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.７５ｓ、３Ｈ；０.８２ｓ、３Ｈ；０.９３ｓ、３Ｈ；０.９５ｓ、３Ｈ；０.９８ｓ、３Ｈ；１.６９ｓ、３Ｈ；（６×ＣＨ３）；１.８８〜２.０４ｍ、２Ｈ（Ｈ‐２１β、Ｈ‐２２β）；２.２３〜２.３７ｍ、２Ｈ（Ｈ‐１３β、Ｈ‐１６β）；３.００ｔｄ、１Ｈ（Ｊ１＝１０.４、Ｊ２＝４.６；Ｈ‐１９β）；３.１６ｔ、１Ｈ（Ｊ＝７.８；Ｈ‐３α）；３.５７ｄｄ、１Ｈ（Ｊ１＝９.５、Ｊ２＝３.２；Ｈ‐３’）；３.６２〜３.８２ｍ、４Ｈ（Ｈ‐２’、 Ｈ‐５’、Ｈ‐６’ａ、Ｈ‐６’ｂ）；３.９７ｄ、１Ｈ（Ｊ＝２.９；Ｈ‐４’）；４.６０ｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｅ）；４.７３ｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｚ）；５.４６ｄ、１Ｈ（Ｊ＝８.１；Ｈ‐１’）。ＭＳ、ｍ／ｚ（％）：[Ｃ３６Ｈ５８Ｏ８、Ｍ＋６１８に対して]、６１８（Ｍ＋、発見されず）、５９２（１）、５３１（１）、４５６（１８）、４３８（１７）、４１２（１０）、３９５（１１）、３２７（６）、２４８（４７）、２０７（５３）、１８９（１００）。Ｃ３６Ｈ５８Ｏ８（６１８.４）の元素分析：計算値は６７.８７％  Ｃ、９.４５％  Ｈ、分析値は６７.７９％  Ｃ、９.５０％  Ｈであった。
【実施例１９】
【００７５】
３’，３’‐ジメチルヘミグルタル酸エステル４ｑの調製（方法Ｈ‐６）
２，４，６‐トリメチルピリジン（１０ｍｌ）にエチルエステル４ｇ（５００ｍｇ；０.９９ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、３，３‐ジメチルグルタル酸無水物（６００ｍｇ；２.４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ；０.４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８時間攪拌しながら還流した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル５：１）によってモニタした。反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを８％から２５％まで段階的に濃度変化させて溶離を行った）。クロマトグラフ的に均一なジメチルヘミグルタル酸エステル４ｑをｔｅｒｔ‐ブチルアルコール（３７５ｍｇ；５９％）から凍結乾燥した。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１４.１５、１５.９１、１６.６２、１６.７６、１８.１１、１９.９３、２０.１６、２１.２５、２３.６８、２３.８３、２４.０３、２５.１０、２７.６３、２９.０８、３０.８０、３２.７０、３３.５１、３３.８４、３４.７９、３５.４１、３７.１２、３７.６７、３７.８１、３８.５３、４１.２９、４５.１２、４５.５２、４７.６１、５０.９９、５２.９８、５５.４３、６１.０１、８１.２４、１４５.６７、１７１.８２、１７２.４１、１７４.３２、１７５.８７、２０７.３６。
【実施例２０】
【００７６】
３’，３’‐ジメチルヘミコハク酸エステル４ｔの調製（方法Ｈ‐７＊）
ｉ）２，４，６‐トリメチルピリジン（１０ｍｌ）に３β‐ヒドロキシ‐２１‐oxolup‐１８‐エン‐２８‐酸ベンジル（５００ｍｇ；０.８９ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、２，２‐ジメチル無水コハク酸（５００ｍｇ；２.３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ；０.４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８時間攪拌しながら還流した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル５：１）によってモニタした。反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを８％から２５％まで段階的に濃度変化させて溶離を行った）。クロマトグラフ的に均一な３β‐（３’，３’‐ジメチルスクシニルオキシ）‐２１‐oxolup‐１８‐エン‐２８‐酸ベンジルを、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコール（３８０ｍｇ；５５％）から凍結乾燥した。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１５.８５、１６.４３、１６.５０、１６.７３、１８.０４、１９.８９、２０.２５、２１.０４、２３.５２、２５.０１、２５.１０、２５.５９、２７.５４、２７.８６、２８.８７、３３.４３、３４.７７、３７.０５、３７.６９、３８.５３、４０.４４、４０.７４、４１.１９、４４.６７、４５.０５、４５.１６、４７.４１、５０.９６、５２.９１、５５.４１、６６.５２、８１.３２、１２８.３４、１２８.５８、１３５.８０、１４５.６２、１７０.９２、１７１.８４、１７３.８９、１７６.２４、２０７.３０。
【００７７】
ｉｉ）エタノール（１０ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１０ｍｌ）に３β‐（３’，３’‐ジメチルヘミスクシニルオキシ）‐２１‐oxolup‐１８‐エン‐２８‐酸ベンジル（３８０ｍｇ；０.５５ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、シクロヘキサジエン（２００μl；２.１４ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１５０ｍｇ；１０％）を添加し、反応混合物を実験室温度で４８時間攪拌した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル５：１）によってモニタした。反応混合物を濾紙で濾過し、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。ジメチルコハク酸エステル４ｔを、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコール（３１２ｍｇ；９５％）から凍結乾燥した。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１５.８５、１６.４３、１６.５０、１６.７３、１８.０４、１９.８９、２０.２５、２１.０４、２３.５２、２５.０１、２５.１０、２５.５９、２７.５４、２７.８６、２８.８７、３３.４３、３４.７７、３７.０５、３７.６９、３８.５３、４０.４４、４０.７４、４１.１９、４４.６７、４５.０５、４５.１６、４７.４１、５０.９６、５２.９１、５５.４１、８１.３２、１７０.９２、１７１.８４、１７３.８９、１７６.２４、２０７.３０。
【実施例２１】
【００７８】
ヘミテトラヒドロフタル酸エステル２ｍの調製（方法Ｈ‐８）
２，４，６‐トリメチルピリジン（１０ｍｌ）にベツリン酸メチル（２ｈ）（５００ｍｇ；０.９４ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、ｃｉｓ‐１，２，３，６‐テトラヒドロ無水フタル酸（７６０ｍｇ；５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ；０.４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８時間攪拌しながら還流した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル５：１）によってモニタした。反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを８％から２５％まで段階的に濃度変化させて溶離を行った）。イソオクタンから結晶化することによって、ｍ．ｐ．２２４℃、［α］Ｄ＋９.５（ｃ０.３２）を有する、白色結晶のヘミテトラヒドロフタル酸２ｍ（５１０ｍｇ；７８％）が得られた。赤外線スペクトル：１２３５（Ｃ‐Ｏ）、１６４１（Ｃ＝Ｃ）、１７１６（Ｃ＝Ｏ）、２２５０〜３４９０（ＣＯＯＨ）、３５１２（Ｏ‐Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル：０.８０ｓ、３Ｈ；０.８１ｓ、３Ｈ；０.８３ｓ、３Ｈ；０.９１ｓ、３Ｈ；０.９６ｓ、３Ｈ；１.６９ｓ、３Ｈ、（６×ＣＨ３）；１.８４〜１.９３ｍ、２Ｈ；２.１８〜２.２５ｍ、２Ｈ；２.３３〜２.６６ｍ、４Ｈ（Ｈ‐３３、Ｈ‐３６）；３.００ｍ、１Ｈ；３.０７〜３.１５ｍ、２Ｈ（Ｈ‐３２、Ｈ‐３７）；３.６７ｓ、３Ｈ（ＯＣＨ３）；４.４７〜４.５３ｍ、１Ｈ（Ｈ‐３α）；４.６０ｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｅ）；４.７３ｓ、１Ｈ（Ｈ‐２９ ｐｒｏ‐Ｚ）；５.６９ｄ、２Ｈ（Ｊ＝７.６Ｈｚ、Ｈ‐３４、Ｈ‐３５）。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１４.６９、１５.９４、１６.１１、１６.５１、１８.１４、１９.３３、２０.８９、２３.５１、２５.３１、２５.４５、２６.３４、２７.８０、２９.６５、３０.５８、３２.１５、３４.２２、３６.９４、３７.０８、３７.８６、３８.２３、３８.３６、３９.６７、３９.９０、４０.６８、４２.３８、４６.９８、４９.４４、５０.４０、５１.２４、５５.４３、５６.５４、８１.６１、１０９.６１、１２５.１１、１２５.３９、１５０.５４、１７２.８１、１７６.６６、１７８.８４。ＭＳ、ｍ／ｚ（％）：[Pro Ｃ３９Ｈ５８Ｏ６、Ｍ＋６２２]、６２２（Ｍ＋、４）、６０７（２）、５７９（１）、５６２（５）、４５２（５２）、４３７（１７）、４０９（１３）、３９３（１５）、２７３（６）、２６２（２５）、２４９（１４）、２３３（７）、２１５（１３）、２０３（４１）、１８９（１００）。Ｃ３９Ｈ５８Ｏ６（６２２）の元素分析：計算値はＣ７５.２０％、Ｈ９.３９％、分析値はＣ７５.０８％、Ｈ９.４８％であった。
【実施例２２】
【００７９】
ヘミジグリコール酸エステル４ｘの調製（方法Ｈ‐９）
２，４，６‐トリメチルピリジン（１０ｍｌ）にエチルエステル４ｇ（５００ｍｇ；０.９９ｍｍｏｌ）を入れた溶液に、無水ジグリコール（５００ｍｇ；２.３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ；０.４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８時間攪拌しながら還流した。反応過程は、ＴＬＣ（トルエン／ジエチルエーテル５：１）によってモニタした。反応混合物を冷却し、１０倍過剰の水で希釈して酢酸エチルに抽出した。一層化した有機相を５％のＨＣｌで３回、水で３回振り、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を回転真空蒸発器において蒸発させた。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した（ヘキサン中の酢酸エチルを８％から２５％まで段階的に濃度変化させて溶離を行った）。クロマトグラフ的に均一なジグリコール酸エステル４ｘをtert‐ブチルアルコールから凍結乾燥した（４０６ｍｇ；６６％）。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：１４.１６、１５.９２、１６.５１、１６.６２、１６.７７、１８.１２、１９.９８、２０.１５、２１.３０、２３.５７、２５.１３、２６.３８、２７.４８、２７.６２、２８.０４、２９.０９、２９.６８、３３.５０、３４.７７、３７.０９、３７.８６、３８.５１、４１.２９、４５.１０、４７.６１、５１.０１、５２.９６、５５.３６、６１.０５、１４５.６６、１７１.６６、１７２.５８、１７４.２７、１７５.４３、２０７.２７。
【００８０】
ｂ）包接化合物の調製
方法Ａ：水（２６.０ｍｌ）とナトリウム炭酸水素塩溶液（５.０ｍｌ；飽和溶液）とエタノール（７.０ｍｌ；９９％）との混合物に、２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリン（１０.０ｇ）を激しく攪拌しながら５０℃の温度で溶解した。得られた無色の粘性溶液に、可溶性トリテルペン誘導体（１.５０ｇ）をすぐに添加し、この混合物を５０℃の温度で再び激しく攪拌した。完全に溶解するためには、通常２０〜４０分間攪拌する必要がある。トリテルペノイドが完全に溶解したら、得られた透明な溶液を室温まで冷まし、滅菌のためにシリンジフィルタ（親水性、細孔サイズ０.２２ｍｍ）によって濾過した後、冷蔵庫内に置いた。得られた溶液は、知覚可能ないかなる分解もなく、冷凍庫内に−２０℃で次の使用時まで保管しておくことができる。
【００８１】
方法Ｂ：水（１４.０ｍｌ）とプロピレングリコール（６.０ｍｌ）との混合物に、２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリン（７.００ｇ）を、激しく攪拌しながら５０℃の温度で溶解した。得られた無色の粘性溶液に、可溶性トリテルペン誘導体（１.００ｇ）をすぐに添加し、５０℃の温度で再び激しく攪拌した。通常２０〜４０分間攪拌する必要がある。トリテルペノイドが完全に溶解したら、得られた透明な溶液を室温まで冷まし、滅菌のためにシリンジフィルタ（親水性、細孔サイズ０.２２ｍｍ）によって濾過した後、冷蔵庫内に置いた。得られた溶液は、知覚可能ないかなる分解もなく、冷凍庫内に−２０℃で次の使用時まで保管しておくことができる。
【００８２】
〔上記化合物の生物学的利用性、および実験用マウスへ経口投与した場合の薬物動態プロファイルの判定〕
前述の方法ＡまたはＢに従って調製されたテルペノイド化合物の可溶性シクロデキストリンの処方物を、希釈せずに、水溶液として、胃管を備えた注射器で非近交系マウスＣＤ‐１の胃内に投与した（２００ｍｌを単回投与）。さらに、０.５〜１％のカルボキシメチルセルロース水性懸濁液である不溶性化合物も胃内に投与した（２００ｍｌを単回投与）。２、４、６、８、１２、および２４時間の時間間隔でマウスから血液を採取して遠心分離し、得られた血漿をＨＰＬＣ‐ＥＳＩ  ＭＳ技術によって解析した。
【００８３】
〔使用形態および血漿試料内の溶解トリテルペノイド濃度の分析的判定〕
ＨＰＬＣ‐ＥＳＩ  ＭＳ技術を用いて、溶解トリテルペノイド濃度の判定を行った。試料は、１つの分析バッチ内においてキャリブレーション溶液およびブラインドコントロール（blind control）を用いて測定した。測定用の試料は、包接化合物を含有する５０ｍｌの水溶液を体積が１０ｍｌになるまでメタノールで希釈することによって調製した。続いて、第１の希釈後の１０ｍｌの試料溶液を、移動相によって１ｍｌまでさらに希釈した。ブラインドコントロールは、前調製された２‐ヒドロキシプロピル‐γ‐シクロデキストリンの５０ｍｌの水溶液をメタノールで１０ｍｌまで希釈することによってなされた。続いて、第１の希釈後の１０ｍｌのブラインドコントロール溶液を、メタノールで１ｍｌまでさらに希釈した。さらに標準液の原液（濃度０.２ｍｇ／ｍｌ）を、２.００ｍｇの検体を１０ｍｌの目盛付きフラスコで計量してメタノールに溶解することによって調製した。次に、原液を移動相で希釈することによって較正試料を調製した（それぞれ、０.４μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ）。
【００８４】
分析は、ＯＤＳ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  １２５ｘ２.１ｍｍ、５ｕｍ、ＳＮ  ０７４５４１５Ｘ、Ｔｈｅｒｍｏ  ＥＣ  カラム、ＯＤＳ４．０ｘ３．０ｍｍ  プレカラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、移動相Ａ（１００ｍｍｏｌ／Ｌのギ酸アンモニウムの水溶液、ｐＨはギ酸によって５に調整）、移動相Ｂ（１００ｍｍｏｌ／Ｌのギ酸アンモニウムのメタノール溶液、カラム温度２５℃、直線勾配または定組成溶離、注入量３０ｍｌで行った。濃度は、規格と比較することによって判定し、包接化合物を含有する元の溶液に対して計算した。
【００８５】
マウスへ経口投与した、選択された誘導体の薬物動態プロファイル（化合物２ｂ、３、３ｂ、５ａ、５ｆ、６ａ、８ａ、４ｖ、４ｉ、２ｉ、４ｔはシクロデキストリン処方物として投与し、化合物５ｃ、５ｄ、６、７、８は、カルボキシメチルセルロース懸濁剤として投与した）は、図１〜図１２に示されている。結果は、可溶性シクロデキストリンテルペノイド処方物の経口投与が利用可能であるが、不溶性懸濁剤は利用可能ではないことを示している。
【００８６】
表１、表２：生物活性トリテルペノイドの可溶性の例（「ｎ」は検知閾値（すなわち１ｎｇ／ｍｌ）より低い濃度を意味し、「月」は二ヶ月以上を意味する）
【００８７】
【表１】
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【００８８】
【表２】
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【００８９】
【化８】
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【００９０】
【化９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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