(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物においてインフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）感染に対する防御免疫応答を上昇させる方法において使用するためのＮＴ０６７抗原を含む免疫原性組成物であって、ここで、前記ＮＴ０６７抗原が、配列番号５または配列番号５２に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列ポリペプチドであり、前記免疫原性組成物がさらに、
（ｉ）（８）ＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０（ＮＴ０５２）、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（７）ＮＴＨＩ０２６６（ＮＴ０１６）、（９）ＮＴＨＩ１６２７（ＮＴ００２）、（１０）ＮＴＨＩ１１０９（ＮＴ０２６）、（１１）ＮＴＨＩ０８２１（ＮＴ００９）、（１２）ＮＴＨＩ０４０９（ＮＴ０２５）、（１３）ＮＴＨＩ１９５４（ＮＴ０２８）、（１４）ＮＴＨＩ０３７１（ＮＴ０２９）、（１５）ＮＴＨＩ０５０９（ＮＴ０３１）、（１６）ＮＴＨＩ０４４９（ＮＴ０１５）、（１７）ＮＴＨＩ１４７３（ＮＴ０２３）、（１８）ｇｉ−１４５６３３１８４（ＮＴ１００）、（１９）ＮＴＨＩ１１１０（ＮＴ０４０）、（２０）ｇｉ−４６１２９０７５（ＮＴ０４８）、（２１）ｇｉ−１４５６２８２３６（ＮＴ０５３）、（２２）ＮＴＨＩ１２３０（ＮＴ０６６）、（２３）ＮＴＨＩ０５２２（ＮＴ０９７）、（５０）ＮＴ００４、（５１）ＮＴ０１４、（５２）ＮＴ０２２からなる群より選択される１種または複数の分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の単離または組換えポリペプチド抗原；ならびに／あるいは
（ｉｉ）（２４）Ｐ４８（ＮＴＨＩ０２５４、ＮＴ００７とも定義される）、（２５）ＨｔｒＡ（ＮＴＨＩ１９０５、ＮＴ００６とも定義される）、（２６）ＰＥ（ＮＴＨＩ０２６７、ＮＴ０３５とも定義される）、（２７）Ｐ２６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０１０とも定義される）、（２８）ＰＨｉＤ（ＮＴＨＩ０８１１、ＮＴ０８０とも定義される）、（２９）Ｐ６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０８１とも定義される）からなる群より選択される１種または複数の分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の単離または組換えポリペプチド抗原；ならびに／あるいは
（ｉｉｉ）（３０）ＮＴ０１３、（３１）ＮＴ１０６、（３２）ＮＴ１０７、（３３）ＮＴ１０８、（３４）ＮＴ１０９、（３５）ＮＴ１１０、（３６）ＮＴ１１１、（３７）ＮＴ１１２、（３８）ＮＴ１１３、（３９）ＮＴ１１４、（４０）ＮＴ１１５、（４１）ＮＴ１１６、（４２）ＮＴ１１７、（４３）ＮＴ１１８、（４４）ＮＴ１２３、（４５）ＮＴ１２４、（４６）ＮＴ１１９、（４７）ＮＴ１２０、（４８）ＮＴ１２１、（４９）ＮＴ１２２および／または（５３）ＮＴ０６１からなる群より選択される１種または複数の分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の単離または組換えポリペプチド抗原
を含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
３種以上の抗原の組み合わせを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の単離または組換えポリペプチド抗原の少なくとも１つが種々の病原性の分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）株の間で保存されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
−  髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来の抗原
−  肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖類またはポリペプチド抗原
−  Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原
−  Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原
−  ジフテリアトキソイドなどのジフテリア抗原
−  破傷風抗原
−  百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）由来の抗原
−  全細胞百日咳抗原
−  インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）Ｂ由来の糖類抗原
−  ポリオ抗原（複数可）
−  麻疹、流行性耳下腺炎および／または風疹抗原
−  インフルエンザ抗原（複数可）
−  モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）由来の抗原
−  呼吸器系合胞体ウイルス由来の抗原
−  ジフテリア（Ｄ）、破傷風（Ｔ）、百日咳（無細胞、成分）（Ｐａ）、Ｂ型肝炎（ｒＤＮＡ）（ＨＢＶ）、灰白髄炎（不活化）（ＩＰＶ）およびインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）結合体ワクチン（吸着）を含むワクチン組成物、例えばＩｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（登録商標）
のいずれかから選択される分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）抗原ではない少なくとも１種のワクチン抗原をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
１種または複数種の薬学的に許容される担体、希釈剤および／またはアジュバントをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
医薬において使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
ワクチンである、請求項１から５までのいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
インフルエンザ菌種（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｓｐ）に対する免疫化剤として使用するための、請求項１から５までのいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
中耳炎などの分類不能型インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）によって引き起こされる感染症に対する免疫化剤として使用するための、請求項１から５までのいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）によって引き起こされる疾患に対するワクチンとして使用するための、請求項１から５までのいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
分類不能型インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）による感染を予防または処置するための、請求項１から５までのいずれかに記載の組成物、または請求項１に記載のＮＴ０６７抗原と２種もしくはそれよりも多い抗原を含む組み合わせ物。
【請求項１２】
請求項１に記載のＮＴ０６７抗原と２種もしくはそれよりも多い抗原が同時に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組み合わせ物。
【請求項１３】
請求項１から５までのいずれかに記載のＮＴ０６７抗原と２種もしくはそれよりも多い抗原が２つ以上のステップで別々に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組み合わせ物。
【請求項１４】
哺乳動物において免疫応答を上昇させることにおいて組み合わせて使用するための、請求項１から５までのいずれかに記載のＮＴ０６７抗原と２種もしくはそれよりも多い抗原とを含む組み合わせ物、または、請求項１に記載のＮＴ０６７抗原と１種もしくはそれよりも多い抗原とを含む組み合わせ物。
【請求項１５】
１種または複数の抗原をアジュバントと混合するステップを含む、請求項１から５までのいずれかに記載の組成物を調製するための方法。
【請求項１６】
混合物を医薬またはワクチンとして処方するステップをさらに含み、かつ場合により、その後に処方物を医薬またはワクチンとして配布するために包装するステップをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０１２年４月２６日に出願された英国仮出願第１２０７３８５．４号および２０１２年１２月２１日に出願された欧州出願第ＥＰ１２１９９０７９．０号（これら両方の完全な内容は、全ての目的のために参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの免疫学およびワクチン学、具体的には、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（ＮＴＨＩ）の分野に入る。本発明は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株に対する抗体および免疫応答を上昇させるための抗原ポリペプチドおよび抗原ポリペプチドの組み合わせを提供する。本発明は、そのような抗原を含有する組成物、およびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対するワクチンまたは薬物としてのその使用も提供する。本発明は、単独でもしくは組み合わせて使用される、またはその他のワクチンと一緒に使用されるそのような抗原を含有する免疫原性組成物も提供する。本発明は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する免疫応答を上昇させるための方法、およびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによる感染を処置および予防するための方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅは、小さな非運動性のグラム陰性球杆菌である。Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅは、上気道の無症候性コロニー形成（すなわち、保因）；コロニー形成された粘膜表面から広がって中耳炎（中耳の炎症）、気管支炎、結膜炎、副鼻腔炎、尿路感染症および肺炎を引き起こす感染症；ならびに菌血症、化膿性関節炎、喉頭蓋炎、肺炎、蓄膿症、心膜炎、蜂巣炎、骨髄炎および髄膜炎などの浸潤性感染症を含めた広範なヒト感染症を引き起こす呼吸器病原体である。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅは完全なゲノム配列が公開された最初の細菌であった［１］。
【０００４】
Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株は、莢膜を有する（分類可能である）か、莢膜を有さない（分類不可能である）かのいずれかであり、莢膜を有する株には６種の主要な血清型（ａ〜ｆ）が存在する。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに引き起こされる浸潤性疾患の９５％はＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂ型（「Ｈｉｂ」）株によって引き起こされる。Ｈｉｂ疾患の最も重篤な症状発現は髄膜炎であるが、１９８０年代に結合体化したＨｉｂ莢膜糖に基づくワクチンが導入されたことにより、この疾患の発生率が大きく低下した。
【０００５】
Ｈｉｂ感染症は、現在はワクチン接種によって制御できるが、その他の病原性Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株はリスクであるままである。例えば、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（ＮＴＨＩ）は、中耳炎（ＯＭ）、特に慢性ＯＭおよび急性ＯＭの原因となる。ＯＭが死亡に関連することはめったにないが、著しい病的状態に関連する。聴力損失は最も一般的なＯＭの合併症であり、行動、教育および言葉の発達の遅延が、滲出液を伴う早発性ＯＭの追加の結果である。急性ＯＭは、ＵＳＡにおける小児の最も一般的な細菌感染症である。分類不能型Ｈ．  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂｉｏｇｒｏｕｐ  ａｅｇｙｐｔｉｕｓは流行性結膜炎およびブラジル紫斑熱（ＢＰＦ）を引き起こし［２］、ＢＰＦの死亡率は最大７０％である。
【０００６】
現在まで、抗生物質が、集合的にＯＭとして公知の臨床的実体のスペクトルに対する主要なツールになっているが、ＯＭに対して抗生物質を広範にわたって使用することは、多抗生物質耐性微生物の出現に起因して、議論を呼んでいる。ＯＭの病因およびそれに対する免疫応答の両方に関する理解が不完全であることに起因して、ワクチンへの進展は緩慢である。
【０００７】
血清型ｄ株ＫＷ２０のゲノム配列［１、３］は、基本的なＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの生物学を理解するために有用なものになっているが、血清型ｄ株は一般的に病原体ではないので、病原性Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株を阻止することにおいてはそれほど有用なものにはなっていない。病原性の分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のポリペプチドが同定され、ワクチン候補として調査されている。参考文献４には、病原性の分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株由来の免疫原性ポリペプチドが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００５／１１１０６６号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９５）２６９：４９６〜５１２
【非特許文献２】Ｌｉら、Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２００３）４７：１１０１〜１１１１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、依然として、広域スペクトルのＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株から防御するワクチンをもたらすことが必要とされている。Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅは、新しいニッチに適合する能力および広域スペクトルの疾患を引き起こす能力が改善された多用途の微生物である。この微生物が種々の組織および宿主に適合することを可能にするために、適応度、ビルレンスおよびコロニー形成因子を変化させることができる。したがって、可能性のある抗原は高い選択圧力にさらされ、その結果として、異なる株の間で配列変動性を有し得る。
【００１１】
したがって、依然として、分類不能型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅワクチンに使用するためのさらなる改善された抗原を同定すること、具体的には、多数のＮＴＨＩに引き起こされる病態に有用なワクチンが必要とされている。
【００１２】
ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ  ｕｎｄｅｒ  ｇｅｎｏｍｅｓにおいて利用可能なゲノムのデータベースに、わずか２，５００タンパク質から４，０００タンパク質までもを伴う病原性および非病原性のＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅゲノムが列挙された。しかし、そのような一覧表では、いずれが病原性ＮＴＨＩのかなりの部分にわたって保存されているか、そのように保存されたタンパク質において保存された領域はどこであるか、または何千もの可能性のあるタンパク質の中で、どのタンパク質が、最良の候補を同定するために多数のタンパク質をスクリーニングすることを必要とする、病原性ＮＴＨＩから防御するための十分な免疫応答を生じさせるためのワクチンに使用され得るかは識別されない。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の目的は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ病原体、具体的には、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによって引き起こされる感染症を予防および／または処置するためワクチンの開発において使用するための、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの異なる株に対する免疫応答を上昇させることにおいて効果的なさらなるより良い抗原および／または組み合わせを提供することである。具体的には、目的は、そのような感染症、具体的には、急性中耳炎および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を予防するためおよび／または処置することにおける改善された免疫原性組成物およびワクチンに使用するためのポリペプチドおよびポリペプチドの組み合わせを提供することである。ポリペプチドは、診断のために、また抗生物質の標的としても有用であり得る。
【００１４】
本発明には、免疫化のために有用な、単独で、または組み合わせて使用するための分類不能型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（ＮＴＨＩ）ポリペプチドが記載されている。これらのポリペプチドは、その他のＮＴＨＩポリペプチドとも同様に組み合わせることができる。抗原は、ＮＴＨＩワクチンにおいて有用であるが、多数の病原体に対する免疫化のためのワクチンの成分としても使用され得る。
【００１５】
２つの並行的手法、すなわち、外膜小胞（ＯＭＶ）の逆ワクチン学（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ）およびプロテオミクス解析を使用することによって、８６種の異なるＮＴＨＩ株の間で保存されている抗原を同定することが可能になった。逆ワクチン学では、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ解析を使用して、異なるＮＴＨＩ株のゲノム内に保存されており、潜在的に表面に露出しているタンパク質を同定する。第２の手法では、その代わりに、ＮＴＨＩによって産生される外膜小胞に含有されるタンパク質の質量分析によって抗原を同定することに焦点が当てられる。
【００１６】
ＮＴＨＩ株のゲノムは、約１８００種の遺伝子を含む。本発明者らは、全て現在公的に入手可能な、１５の完全なゲノムと、それに加えて、地理的分布に基づいて選択された３９種の株および中耳炎Ｆｉｎｎｉｓｈコレクションに由来する３２種の株から２７４種の保存された抗原を同定した。これらの２７４種から、特に興味深い５３種のポリペプチドを選択した。これらの抗原は株ＮＰ８６−０２８から選択されたが、例外として、ＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０はＰｉｔｔＧから選択され、ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００はＰｉｔｔＧから選択され、ｇｉ−１４５６３３１８４は３６５５株から選択され、ｇｉ−１４５６２８２３６は２２．１−２１株から選択された。
【００１７】
以下の５３種の抗原の群の中で、免疫原性および保存の基準を考慮してさらなる選択が生じた：
・本明細書では「第１の抗原群」と呼ばれる２６種の抗原のセット
・本明細書では「第２の抗原群」と呼ばれる６種の抗原のセット
・本明細書では「第３の抗原群」と呼ばれる２１種の抗原のセット
最も好ましい抗原のセットは、本明細書では、「第１の抗原群」と呼ばれる。したがって、本発明は、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（５）ＮＴＨＩ１２９２（ＮＴ０６７）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（７）ＮＴＨＩ０２６６（ＮＴ０１６）、（８）ＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０（ＮＴ０５２）、（９）ＮＴＨＩ１６２７（ＮＴ００２）、（１０）ＮＴＨＩ１１０９（ＮＴ０２６）、（１１）ＮＴＨＩ０８２１（ＮＴ００９）、（１２）ＮＴＨＩ０４０９（ＮＴ０２５）、（１３）ＮＴＨＩ１９５４（ＮＴ０２８）、（１４）ＮＴＨＩ０３７１（ＮＴ０２９）、（１５）ＮＴＨＩ０５０９（ＮＴ０３１）、（１６）ＮＴＨＩ０４４９（ＮＴ０１５）、（１７）ＮＴＨＩ１４７３（ＮＴ０２３）、（１８）ｇｉ−１４５６３３１８４（ＮＴ１００）、（１９）ＮＴＨＩ１１１０（ＮＴ０４０）、（２０）ｇｉ−４６１２９０７５（ＮＴ０４８）、（２１）ｇｉ−１４５６２８２３６（ＮＴ０５３）、（２２）ＮＴＨＩ１２３０（ＮＴ０６６）、（２３）ＮＴＨＩ０５２２（ＮＴ０９７）、（５０）ＮＴ００４、（５１）ＮＴ０１４、（５２）ＮＴ０２２からなる群より選択される少なくとも１種の抗原を含む、好ましくは１種または複数（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）の抗原を含む免疫原性組成物を提供する。これらの抗原は、表ＩＩＩおよび表ＩＶに示されているように、陽性の殺菌活性を示す。
【００１８】
第１の抗原群の中で、好ましい抗原は、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）抗原、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）抗原、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）抗原、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（５）ＮＴＨＩ１２９２抗原（ＮＴ０６７）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）抗原、（８）ＮＴ０５２抗原、（５０）ＮＴ００４抗原、（５１）ＮＴ０１４抗原、（５２）ＮＴ０２２抗原、（７）ＮＴＨＩ０２６６ＮＴ０１６抗原のいずれかのサブセットから選択される。これらの抗原は全て、表ＩＩに示されているように良好な精製のレベルを示し、また、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおいて免疫原性有効性が報告されている。
【００１９】
特に好ましい抗原はＮＴ０６７、ＮＴ０１４、ＮＴ０１６、ＮＴ０２２であった。
【００２０】
したがって、本発明は、「第１の抗原群」からなる群より選択される１種または複数（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）の抗原を含む免疫原性組成物を提供する。
【００２１】
本発明者らは、以下の６種のポリペプチドも同定した：（２４）Ｐ４８（ＮＴＨＩ０２５４、ＮＴ００７とも定義される）、（２５）ＨｔｒＡ（ＮＴＨＩ１９０５、ＮＴ００６とも定義される）、（２６）ＰＥ（ＮＴＨＩ０２６７、ＮＴ０３５とも定義される）、（２７）Ｐ２６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０１０とも定義される）、（２８）ＰＨｉＤ（ＮＴＨＩ０８１１、ＮＴ０８０とも定義される）、（２９）Ｐ６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０８１とも定義される）。この６種の抗原のセットは、本明細書では「第２の抗原群」と呼ばれる。
【００２２】
本発明者らは、以下の２２種のポリペプチド：（３０）ＮＴＨＩ０５３２（ＮＴ０１３）、（３１）ＮＴＨＩ０３６３（ＮＴ１０６）、（３２）ＮＴＨＩ０３７０（ＮＴ１０７）、（３３）ＮＴＨＩ０２０５（ＮＴ１０８）、（３４）ＮＴＨＩ０３７４（ＮＴ１０９）、（３５）ＮＴＨＩ０５７９（ＮＴ１１０）、（３６）ＮＴＨＩ０８３７（ＮＴ１１１）、（３７）ＮＴＨＩ０８４９（ＮＴ１１２）、（３８）ＮＴＨＩ０９２１（ＮＴ１１３）、（３９）ＮＴＨＩ０９９５（ＮＴ１１４）、（４０）ＮＴＨＩ１０９１（ＮＴ１１５）、（４１）ＮＴＨＩ１１６９（ＮＴ１１６）、（４２）ＮＴＨＩ１２０８（ＮＴ１１７）、（４３）ＮＴＨＩ１３１８（ＮＴ１１８）、（４４）ＮＴＨＩ１７９６（ＮＴ１２３）、（４５）ＮＴＨＩ１９３０（ＮＴ１２４）、（４６）ＮＴＨＩ１５６５（ＮＴ１１９）、（４７）ＮＴＨＩ１５６９（ＮＴ１２０）、（４８）ＮＴＨＩ１５７１（ＮＴ１２１）、（４９）ＮＴＨＩ１６６７（ＮＴ１２２）、（５３）ＮＴＨＩ０５８８（ＮＴ０６１）、（５４）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１７）も同定した。この２２種の抗原のセットは、本明細書では、「第３の抗原群」と呼ばれる。
【００２３】
一実施形態では、組成物は、第１の抗原群より選択される少なくとも１種の抗原（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）および／または第２の抗原群より選択される少なくとも１種の抗原（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）および／または第３の抗原群より選択される少なくとも１種の抗原（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）を含む。第１の抗原群からの抗原は、最も好ましい抗原のサブセットから選択され得る。
【００２４】
好ましくは、本発明は、第１の抗原群または第２の抗原群または第３の抗原群のいずれかから選択される１種の抗原を含む免疫原性組成物を提供する。
【００２５】
したがって、本発明はまた、「第１の抗原群」および／または「第２の抗原群」および／または「第３の抗原群」からなる群より選択される２種以上（すなわち、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）の抗原を含む抗原の組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。
【００２６】
組成物が「第２の抗原群」からの抗原を含む場合、好ましくは、組成物は、（ｉ）「第２の抗原群」からの少なくとも１種のさらなる抗原または（ｉｉ）「第１の抗原群」または「第３の抗原群」からの少なくとも１種の抗原も包含すべきである。したがって、本発明は、「第２の抗原群」からの単一の抗原をその唯一の抗原性成分として含む組成物は包含しない。組成物が「第２の抗原群」からの２種以上の抗原を含む場合、好ましくは、組成物は、（ａ）Ｐ４８抗原（ｂ）ＨｔｒＡ抗原（ｃ）ＰＥ抗原または（ｄ）Ｐ２６抗原ではない少なくとも１種の抗原を含むべきである。したがって、一部の実施形態では、本発明は、Ｐ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥおよび／またはＰ２６のみの組み合わせを包含しない。同様に、一部の実施形態では、本発明は、Ｐ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥおよび／またはＰ２６からのみの「Ｘ」部分を含むハイブリッド抗原を包含しない。
【００２７】
第１の抗原群の１１種の好ましい抗原の中で、可能性のある異なる抗原の対は５５対存在する。そのような対は全て本明細書に開示されており、本発明の一部である。したがって、本発明は、前記５５対のうち１つである抗原の対を含む免疫原性組成物を提供する。
【００２８】
一実施形態では、組成物は、第１の抗原群より選択される少なくとも１種の抗原（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）および／または第２の抗原群より選択される少なくとも１種の抗原（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）、および／または第３の抗原群より選択される少なくとも１種の抗原（すなわち、１種、２種、３種、４種、５種、６種またはそれより多い）を含む。
【００２９】
全ての場合において、第１の抗原群からの抗原は、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（５）ＮＴＨＩ１２９２（ＮＴ０６７）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（８）ＮＴ０５２、（５０）ＮＴ００４、（５１）ＮＴ０１４、（５２）ＮＴ０２２、（７）ＮＴ０１６のいずれかの最も好ましいサブセットから有利に選択され得る。
【００３０】
本発明はまた、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（５）ＮＴＨＩ１２９２（ＮＴ０６７）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（８）ＮＴ０５２、（５０）ＮＴ００４、（５１）ＮＴ０１４、（５２）ＮＴ０２２、（７）ＮＴ０１６からなる群より選択される２種以上（すなわち、２種、３種、４種または５種）の抗原を含む抗原の組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。組成物は、アジュバント、例えば水中油型エマルジョンまたはアルミニウム塩を含むアジュバントも含み得る。
【００３１】
参考文献５では、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ抗原が、とりわけワクチンへの可能性のある使用の候補として考察されている。参考文献６〜１０は、個別に、それぞれ、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅポリペプチドであるＰ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥおよびＰ２６、とりわけ、それらの免疫原性の潜在性に関する。参考文献５でも同様に、ＨｔｒＡ、ＰＥおよびＰ２６について、個別に、より多数のワクチン候補の中で言及されており、また、例えば、参考文献１０はポリペプチドＰＥに関する。しかし、これらの抗原は「第２の抗原群」に属し、組み合わせへの使用については記載されていない。今では、驚いたことに、これらの抗原（第２の抗原群）のうち１種または複数と「第１の抗原群」に列挙されている抗原のうち少なくとも１種との組み合わせが、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する防御免疫応答を生成するために、したがって、上記の本発明の目的のために特に適していることが見いだされている。
【００３２】
本発明の有利な組み合わせは、２種以上の抗原が相乗的に作用するものである。したがって、それらの併用投与によって実現されるＮＴＨＩ病原体に対する防御は、それらの個々の防御有効性を単に足し算することによって予測される防御を超える。
【００３３】
第１の抗原群
ＮＴ０１８抗原
「ＮＴ０１８」抗原は、ＴＰＲ反復含有タンパク質としてアノテートされ、チトクロムｃ成熟化ヘムリアーゼサブユニットＣｃｍＨ２としてもアノテートされる。これは、株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０９１５としてアノテートされている。前記配列は分析された全ての株の間で高度に保存されており、膜結合型金属ペプチダーゼであることが予測される。表ＩＩＩに示されているように、ＮＴ０１８は表面に露出している。ＮＴ０１８は、Ｆｉｎｌａｎｄ中耳炎コレクションから単離された株である別の分類不能型株Ｆｉ１７６からクローニングされ、発現されている。
【００３４】
有用なＮＴ０１８抗原は、配列番号１を認識する抗体を惹起でき（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または（ａ）配列番号１に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０１８タンパク質としては、クローニングされ、発現され、免疫原性に関して試験されている配列番号４９などの配列番号１の改変体が挙げられる（表ＩＩＩ、表ＩＶ）。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、２６個、２７個、２８個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００３５】
本発明のＮＴ０１８抗原は、ＮＴ０１８のその天然の２８個のＮ末端アミノ酸（ＭＮＦＴＬＩＦＩＬＴＴＬＶＶＡＬＩＣＦＹＰＬＬＲＱＦＫＡ；配列番号６９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００３６】
ＮＴ０２４抗原
「ＮＴ０２４」抗原は、「仮定タンパク質」としてアノテートされ、また、ゲノム８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ１４１６としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００３７】
有用なＮＴ０２４抗原は、配列番号２を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号２に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２４タンパク質として、株Ｆｉ１７６からクローニングされた配列番号５０などの配列番号２の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００３８】
本発明のＮＴ０２４抗原は、ＮＴ０２４の天然の２０個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＬＫＬＦＦＨＩＶＬＬＣＦＳＬＰＶＷＡ；配列番号７０）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００３９】
ＮＴ０３２抗原
「ＮＴ０３２」抗原は、「仮定タンパク質」としてアノテートされ、また、ゲノム８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ２０１７としてアノテートされている。試験された株の間で最も保存されているドメインは、「細菌ＯＢフォールド（ＢＯＦ）タンパク質」と記載される。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００４０】
有用なＮＴ０３２抗原は、配列番号３を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０３２タンパク質として、Ｆｉ１７６株からクローニングされた配列番号５１などの配列番号３の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００４１】
本発明のＮＴ０３２抗原は、ＮＴ０３２の天然の１９個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＦＡＬＡＴＩＦＡＬＡＴＴＳＡＦＡ；配列番号７１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００４２】
ＮＴ０６７抗原
「ＮＴ０６７」抗原は、ＡＢＣ輸送体タンパク質としてアノテートされ、ペリプラズムオリゴペプチド結合性タンパク質ＯｐｐＡとしてのその仮定される機能が提唱されている。株８６−０２８ＮＰにおいて、ＮＴＨＩ１２９２としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００４３】
有用なＮＴ０６７抗原は、配列番号５を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号５に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号５の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０６７タンパク質として、Ｆｉ１７６株からクローニングされた配列番号５２などの配列番号５の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号５由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号５のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号５の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００４４】
本発明のＮＴ０６７抗原は、ＮＴ０６７の天然の２０個のＮ末端アミノ酸（ＭＱＨＫＬＬＦＳＡＩＡＬＡＬＳＹＳＶＱＡ；配列番号７２）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００４５】
ＮＴ０３８抗原
この抗原は、Ｈｉａ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ａｄｈｅｓｉｎ）タンパク質として公知であり［１１］、株ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００において、２８２アミノ酸の長さで同定されているが、これは株８６−０２８ＮＰまたはその他のＮＴＨｉ株における最初に記載されたＨｉａ（６１６アミノ酸）の切断型である。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされている。
【００４６】
有用なＮＴ０３８抗原は、配列番号４を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０３８タンパク質として、最初の２３個の天然のＮ末端アミノ酸およびＣ末端の１０２個のアミノ酸を欠く配列番号５３などの配列番号４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）（１０２アミノ酸に至るまで）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２３個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００４７】
本発明のＮＴ０３８抗原は、ＮＴ０３８の天然の２３個のＮ末端アミノ酸（ＭＰＦＱＹＶＴＥＤＧＫＴＶＶＫＶＧＮＧＹＹＥＡ；配列番号７３）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００４８】
ＮＴ００１抗原
この抗原は、ゲノム８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０８７７としてアノテートされており、また、Ｄ−メチオニン−結合性リポタンパク質ＭｅｔＱとして公知である。ＭｅｔＤは、ＤＬメチオニン取り込み系をコードするＡＢＣ輸送体である。この抗原は、以前にＢＡＳＢ２０２（２８Ｋｄａ）として開示されており［１２、１３］、ＮＴＨＩに対するワクチンとしてのその使用が提唱されている。この抗原は、Ｒｅｆ（４）に記載されているホモログ抗原と９９，６３％のアラインメントＩＤを共有し、また、本発明において検討された全ての株の間でよく保存されていることが見いだされている。本発明では、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現される。
【００４９】
有用なＮＴ００１抗原は、配列番号６を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号６に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号６の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ００１タンパク質として、配列番号５４などの配列番号４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号６由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号６のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２１個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号６の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００５０】
本発明のＮＴ００１抗原は、ＮＴ００１の天然の２１個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＬＫＱＬＦＡＩＴＡＩＡＳＡＬＶＬＴＧＣ；配列番号７４）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００５１】
ＮＴ０１６抗原
この抗原は、株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０２６６としてアノテートされており、また、仮定リポタンパク質と記載されている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００５２】
有用なＮＴ０１６抗原は、配列番号７を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号７に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号７の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０１６タンパク質として、配列番号５５などの配列番号７の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号７由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号７のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、１９個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号７の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００５３】
本発明のＮＴ０１６抗原は、ＮＴ０１６の天然の１６個のＮ末端アミノ酸（ＭＲＫＩＫＳＬＡＬＬＡＶＡＡＬＶＩＧＣ；配列番号７５）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００５４】
ＮＴ０５２抗原
この抗原は、ＰｉｔｔＧＧ株由来のＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０としてアノテートされている。この抗原は、Ｓｅｌ１ドメイン含有タンパク質ファミリーの一部である。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされており、クローニングされた配列は配列番号８として報告されている。Ｒ２８４６からクローニングされた配列はＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０としてアノテートされた配列と６４．１６％の同一性しか共有しないにもかかわらず、効果的な抗原性をもたらすために有用な配列にわたって反復される保存されたＳｅｌ１ドメインが存在することが示されている。この反復のコンセンサスは配列番号：ＥＡＶＫＷＹＲＫＡＡＥＱである。
【００５５】
有用なＮＴ０５２抗原は、配列番号８を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号８に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号８の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０５２タンパク質として、配列番号５６などの配列番号８の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号８由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号８のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号８の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００５６】
本発明のＮＴ０５２抗原は、ＮＴ０５２の天然の１１個のＮ末端アミノ酸（ＭＬＬＦＩＬＳＩＡＷＡ；配列番号７６）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００５７】
ＮＴ００２抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１６２７として、およびリポタンパク質としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００５８】
有用なＮＴ００２抗原は、配列番号９を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号９に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号９の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ００２タンパク質として、配列番号５７などの配列番号９の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号９由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号９のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号９の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００５９】
本発明のＮＴ００２抗原は、ＮＴ００２の天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＶＹＫＳＦＬＩＡＴＡＳＬＦＬＦＡ；配列番号７７）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００６０】
本発明のＮＴ００２抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【００６１】
ＮＴ０２６抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における仮定タンパク質ＮＴＨＩ１１０９としてアノテートされている。この抗原は、細胞質膜タンパク質であると予測されている。この抗原は、株Ｆｉ１７６からクローニングされ、発現されている。
【００６２】
有用なＮＴ０２６抗原は、配列番号１０を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１０に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１０の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２６タンパク質として、Ｆｉ１７６株からクローニングされた配列番号５８などの配列番号１０の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１０由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１０のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１０の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００６３】
本発明のＮＴ０２６抗原は、ＮＴ０２６の天然の２４個のＮ末端アミノ酸（ＭＱＫＧＭＴＬＶＥＬＬＩＧＬＡＩＩＳＩＶＬＮＦＡ；配列番号７８）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００６４】
ＮＴ００９抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ０８２１としてアノテートされており、ＯＭＰ８５ファミリータンパク質の一部である。この抗原は、細菌の外膜内に位置する。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００６５】
有用なＮＴ００９抗原は、配列番号１１を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１１に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ００９タンパク質として、Ｆｉ１７６からクローニングされた配列番号５９などの配列番号１１の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１１由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１１のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２２個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１１の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００６６】
本発明のＮＴ００９抗原は、ＮＴ００９の天然の２２個のＮ末端アミノ酸（ＭＮＫＴＬＬＫＬＴＡＬＦＬＡＬＮＣＦＰＡＦＡ；配列番号７９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００６７】
ＮＴ０２５抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ０４０９としてアノテートされており、また、ＩＶ型ピリンサブユニットタンパク質ファミリーに属する。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００６８】
有用なＮＴ０２５抗原は、配列番号１２を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１２に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１２の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２５タンパク質として、Ｆｉ１７６からクローニングされた配列番号６０などの配列番号１２の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１２由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１２のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２３個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１２の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００６９】
本発明のＮＴ０２５抗原は、ＮＴ０２５の天然の２３個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＬＴＴＱＱＴＬＫＫＧＦＴＬＩＥＬＭＩＶＩＡ；配列番号８０）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００７０】
ＮＴ０２８抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１９５４として、およびリポタンパク質ＮｌｐＣとしてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００７１】
有用なＮＴ０２８抗原は、配列番号１３を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１３に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１３の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２８タンパク質として、Ｆｉ１７６からクローニングされた配列番号６１などの配列番号１３の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１３由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１３のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１３の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００７２】
本発明のＮＴ０２８抗原は、ＮＴ０２８の天然の２１個のＮ末端アミノ酸（ＭＬＫＲＩＬＶＩＩＧＬＡＶＬＡＴＡＣＳＮＡ；配列番号８１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００７３】
本発明のＮＴ０２８抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【００７４】
ＮＴ０２９抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ０３７１として、および外膜タンパク質ファミリーに属するヘム／ヘモペキシン結合性タンパク質Ａとしてアノテートされている。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされ、発現されている。
【００７５】
有用なＮＴ０２９抗原は、配列番号１４を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２９タンパク質として、Ｒ２８４６株からクローニングされた配列番号６２などの配列番号１４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００７６】
本発明のＮＴ０２９抗原は、ＮＴ０２９の天然の２１個のＮ末端アミノ酸（ＭＹＫＬＮＶＩＳＬＩＩＬＴＴＹＴＧＡＴＹＡ；配列番号８２）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００７７】
ＮＴ０３１抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における飢餓誘導性外膜リポタンパク質ＮＴＨＩ０５０９としてアノテートされている。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされ、発現されている。
【００７８】
有用なＮＴ０３１抗原は、配列番号１５を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１５に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１５の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０３１タンパク質として、Ｒ２８４６株からクローニングされ、発現された配列番号６３などの配列番号１５の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１５由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１５のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、１８個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１５の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００７９】
本発明のＮＴ０３１抗原は、ＮＴ０３１の天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＧＫＩＴＬＦＦＴＡＬＣＦＧＬＴＧ；配列番号８３）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００８０】
本発明のＮＴ０３１抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【００８１】
ＮＴ０１５抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における不透明性関連タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）ＯａｐＢ  ＮＴＨＩ０４４９としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【００８２】
有用なＮＴ０１５抗原は、配列番号１６を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１６に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１６の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０１５タンパク質として、Ｆｉ１７６からクローニングされ、発現された配列番号６４などの配列番号１６の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１６由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１６のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１６の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００８３】
本発明のＮＴ０１５抗原は、ＮＴ０１５の天然の１７個のＮ末端アミノ酸（ＭＬＫＫＴＳＬＩＦＴＡＬＬＬＡＧＣ；配列番号８４）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００８４】
ＮＴ０２３抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における外膜リポタンパク質ＰＣＰ、ＮＴＨＩ１４７３としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉｌ７６株からクローニングされ、発現されている。
【００８５】
有用なＮＴ０２３抗原は、配列番号１７を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１７に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１７の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２３タンパク質として、株Ｆｉ１７６からクローニングされ、発現された配列番号６５などの配列番号１７の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１７由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１７のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１７の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００８６】
本発明のＮＴ０２３抗原は、ＮＴ０２３の天然の２０個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＴＮＭＡＬＡＬＬＶＡＦＳＶＴＧＣＡ；配列番号８５）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００８７】
本発明のＮＴ０２３抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【００８８】
ＮＴ１００抗原
この抗原は、「推定ヒドロキサメート型鉄シデロフォア受容体（ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍａｔｅ−ｔｙｐｅ  ｆｅｒｒｉｃ  ｓｉｄｅｒｏｐｈｏｒｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」として、およびＮＣＢＩにおいて株３６５５由来のｇｉ−１４５６３３１８４としてアノテートされている。この抗原は、Ｒ２４６株からクローニングされている。
【００８９】
有用なＮＴ１００抗原は、配列番号１８を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１８に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１８の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１００タンパク質として、配列番号６６などの配列番号１８の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１８由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１８のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１８の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００９０】
本発明のＮＴ１００抗原は、ＮＴ１００の天然の３０個のＮ末端アミノ酸（ＭＤＬＧＰＩＹＮＴＲＤＩＮＤＧＫＶＩＮＩＤＮＰＮＹＴＮＰＶＡ；配列番号８６）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００９１】
ＮＴ０４０抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における仮定タンパク質ＮＴＨＩ１１１０としてアノテートされている。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされ、発現されている。
【００９２】
有用なＮＴ０４０抗原は、配列番号１９を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１９に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１９の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０４０タンパク質として、配列番号１９の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１９由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１９のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１９の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００９３】
本発明のＮＴ０４０抗原は、ＮＴ０４０の天然の２６個のＮ末端アミノ酸（ＭＭＫＴＬＬＫＧＱＴＬＬＡＬＭＩＳＬＴＬＳＳＬＬＬＬ；配列番号８７）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００９４】
ＮＴ０４８抗原
この抗原は、株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ１１６９としてアノテートされている。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされ、発現されている。
【００９５】
有用なＮＴ０４８抗原は、配列番号２０を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号２０に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２０の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０４８タンパク質として、配列番号２０の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２０由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２０のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２０の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００９６】
本発明のＮＴ０４８抗原は、ＮＴ０４８の天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＳＶＰＬＩＴＧＧＬＳＦＬＬＳＡＣ；配列番号８８）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【００９７】
ＮＴ０５３抗原
この抗原は、Ｒ２８４６株におけるｇｉ−１４５６２８２３６としてアノテートされており、また、前記株からクローニングされている。
【００９８】
有用なＮＴ０５３抗原は、配列番号２１を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号２１に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０５３タンパク質として、配列番号２１の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２１由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２１のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２１の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【００９９】
本発明のＮＴ０５３抗原は、ＮＴ０５３の天然のＮ末端Ｍｅｔとともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、Ｍｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１００】
ＮＴ０６６抗原
この抗原は、ＮＰ８６−０２８株におけるＮＴＨＩ１２３０としてアノテートされており、また、細菌のペリプラズムに局在している。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【０１０１】
有用なＮＴ０６６抗原は、配列番号２２を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号２２に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２２の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０６６タンパク質として、配列番号６７などの配列番号２２の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２２由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２２のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、２７個、３０個、３３個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２２の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１０２】
本発明のＮＴ０６６抗原は、ＮＴ０６６の天然の３３個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＩＹＬＲＦＶＷＩＬＩＩＩＬＮＦＬＬＮＬＦＩＴＴＮＧＶＩＩＶＮＡ；配列番号９０）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１０３】
ＮＴ０９７抗原
この抗原は、ＮＰ８６−０２８株におけるＮＴＨＩ０５２２としてアノテートされており、また、外膜環境に存在することが予測される長鎖脂肪酸ＦａｄＬ様輸送体タンパク質として記載されている。この抗原は、Ｒ２８４６株からクローニングされ、発現されている。
【０１０４】
有用なＮＴ０９７抗原は、配列番号２３を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号２３に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２３の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０９７タンパク質として、配列番号２３の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２３由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２３のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２２個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２３の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１０５】
本発明のＮＴ０９７抗原は、ＮＴ０９７の天然の２２個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＦＮＱＳＩＬＡＴＡＭＬＬＡＡＧＧＡＮＡ；配列番号９１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１０６】
ＮＴ００４抗原
この抗原は、外膜環境にある株ＰｉｔｔＧＧ由来の仮定タンパク質ＣＧＳＨｉＧＧ＿０８２１５としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【０１０７】
有用なＮＴ００４抗原は、配列番号１２２を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１２２に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１２２の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ００４タンパク質として、配列番号１２２の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１２２由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１２２のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２２個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１２２の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１０８】
本発明のＮＴ００４抗原は、ＮＴ００４の天然の２０個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＫＮＱＩＬＶＳＬＳＩＶＡＬＬＧＧＣ；配列番号１２５）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１０９】
ＮＴ０１４抗原
この抗原は、株Ｒｄ  ＫＷ２０由来の仮定タンパク質ＨＩ１６５８としてアノテートされている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【０１１０】
有用なＮＴ０１４抗原は、配列番号１２３を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１２３に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１２３の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０１４タンパク質として、配列番号１２３の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１２３由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１２３のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２２個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１２３の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１１１】
本発明のＮＴ０１４抗原は、ＮＴ０１４の天然の２２個のＮ末端アミノ酸（ＭＴＬＳＰＬＫＫＬＡＩＬＬＧＡＴＩＦＬＱＧＣ；配列番号１２６）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１１２】
ＮＴ０２２抗原
この抗原は、株ＮＰ８６−０２８由来のＮＴＨＩ０８３０としてアノテートされており、また、可能性のある外膜抗原性リポタンパク質Ｂであると同定されている。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。この抗原は、ＬｙｔＭ触媒ドメインを含有すること、および表面に露出しおり、分泌されることも見いだされている。
【０１１３】
有用なＮＴ０２２抗原は、配列番号１２４を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１２４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１２４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０２２タンパク質として、配列番号１２４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１２４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１２４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２２個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１２４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１１４】
本発明のＮＴ０２２抗原は、ＮＴ０２２の天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＳＦＬＬＬＰＬＳＬＶＶＬＳＡＣ；配列番号１２７）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１１５】
第２の抗原群
抗原Ｐ４８
Ｐ４８ポリペプチドは、文献において、Ｎａ（＋）トランスロケーションＮＡＤＨ−キノンレダクターゼサブユニットＡとしてアノテートされている。参照のために、Ｐ４８の全長アミノ酸配列が本明細書において配列番号２４として示されている。
【０１１６】
本発明で使用されるために好ましいＰ４８ポリペプチドは、（ａ）配列番号２４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上；例えば、２０以上；または例えば、５０以上；または例えば、８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰ４８ポリペプチドとして、配列番号２４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１１７】
本発明のＰ４８抗原は、理想的には、Ｐ４８の天然の２５個のＮ末端アミノ酸（ＭＩＴＩＫＫＧＬＤＬＰＩＡＧＫＰＡＱＶＩＨＳＧＮＡ；配列番号９２）を有さず、したがって、代替のＮ末端配列、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現されるべきである。
【０１１８】
本発明によると、Ｐ４８抗原は、本明細書に記載の抗原ＨｔｒＡ、ＰＥ、Ｐ２６、ＰＨｉＤ抗原および／またはＰ６のうち１種または複数（例えば、１種、２種または３種）、具体的には、例えば、ＨｔｒＡと有利に組み合わせることができる。
【０１１９】
抗原ＨｔｒＡ
ＨｔｒＡポリペプチドは、文献において、ペリプラズムセリンプロテアーゼｄｏ／ＨｈｏＡ様前駆体としてアノテートされており、また、熱ショックタンパク質またはシャペロンとして記載されている。参照のために、ＨｔｒＡの全長アミノ酸配列が本明細書において配列番号２５として示されている。
【０１２０】
本発明で使用されるために好ましいＨｔｒＡポリペプチドは、（ａ）配列番号２５に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２５の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上；例えば、２０以上；または例えば、５０以上；または例えば、８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。これらのＨｔｒＡポリペプチドとして、配列番号２５の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２５由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２５のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２５の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のポリペプチドドメインが省かれている。
【０１２１】
本発明のＨｔｒＡ抗原は、理想的には、ＨｔｒＡの天然の２６個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＴＲＦＶＬＮＳＩＡＬＧＬＳＶＬＳＴＳＦＶＡＱＡ；配列番号９３）を有さず、したがって、代替のＮ末端配列、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現されるべきである。
【０１２２】
本発明によると、ＨｔｒＡ抗原は、抗原Ｐ４８、ＰＥ、Ｐ２６、Ｐ６および／またはＰＨｉＤの１種または複数（例えば、１種、２種、または３種）、具体的には、例えば、Ｐ４８と有利に組み合わせることができる。
【０１２３】
抗原ＰＥ
ＰＥポリペプチドは、リポタンパク質−ビトロネクチン結合性タンパク質として、または結合性ＩｇＤとしてアノテートされており、また、２型肺胞細胞への接着として作用する。参照のために、ＰＥの全長アミノ酸配列が本明細書において配列番号２６として示されている。
【０１２４】
本発明で使用されるために好ましいＰＥポリペプチドは、（ａ）配列番号２６に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２６の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０またはそれ以上；例えば、２０以上；または例えば、５０以上；または例えば、８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰＥポリペプチドとして、配列番号２６の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２６由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２６のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２６の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のポリペプチドドメインが省かれている。
【０１２５】
本発明のＰＥ抗原は、理想的には、ＰＥの天然の１６個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＩＩＬＴＬＳＬＧＬＬＴＡＣ；配列番号９４）を有さず、したがって、代替のＮ末端配列、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現されるべきである。
【０１２６】
本発明によると、ＰＥ抗原は、本明細書に記載の抗原Ｐ４８、ＨｔｒＡ、Ｐ２６、Ｐ６および／またはＰＨｉＤのうち１種または複数（例えば、１種、２種または３種）と有利に組み合わせることができる。
【０１２７】
抗原Ｐ２６
Ｐ２６ポリペプチドは、外膜タンパク質２６としても公知である。Ｐ２６ポリペプチドは、タンパク質のＳｋｐファミリーのメンバーとしてアノテートされており、その推定される機能は、外膜タンパク質のトランスロケーションである［５］。参照のために、Ｐ２６の全長アミノ酸配列が本明細書において配列番号２７として示されている。
【０１２８】
本発明で使用されるために好ましいＰ２６ポリペプチドは、（ａ）配列番号２７に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２７の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０またはそれ以上；例えば、２０以上；または例えば、５０以上；または例えば、８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰ２６ポリペプチドとして、配列番号２７の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２７由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２７のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２７の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１２９】
本発明によると、Ｐ２６抗原は、本明細書に記載の抗原Ｐ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥ、ＰＨｉＤおよび／またはＰ６の１種または複数（例えば、１種、２種、または３種）、具体的には、本明細書に記載のＰ４８、ＨｔｒＡおよび／またはＰＥのいずれかまたはその全てと有利に組み合わせることができる。
【０１３０】
ＰＨｉＤ抗原
ＰＨｉＤ抗原は「タンパク質Ｄ」としても公知であり、また、主に複合糖質ＮＴＨｉワクチン手法において担体タンパク質として使用されている［９５］。この抗原は、Ｆｉ１７６株からクローニングされ、発現されている。
【０１３１】
本発明で使用されるために好ましいＰＨｉＤポリペプチドは、（ａ）配列番号２８に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２８の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０またはそれ以上；例えば、２０以上；または例えば、５０以上；または例えば、８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰＨｉＤポリペプチドとして、配列番号２８の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２８由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２８のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２８の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１３２】
本発明のＰｈｉＤ抗原は、ＰｈｉＤの天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＬＫＴＬＡＬＳＬＬＡＡＧＶＬＡＧ；配列番号９５）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１３３】
本発明によると、ＰＨｉＤ抗原は、本明細書に記載の抗原Ｐ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥ、Ｐ２６、および／またはＰ６の任意の１種または複数（例えば、１種、２種、または３種）と有利に組み合わせることができる。
【０１３４】
本発明のＰｈｉＤ抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１３５】
Ｐ６抗原
Ｐ６抗原は、ＯＭＰ６（外膜タンパク質６）としても公知である［１４］。この抗原はＦｉ１７６株からクローニングされ、発現された。
【０１３６】
本発明で使用されるために好ましいＰ６ポリペプチドは、（ａ）配列番号２９に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２９の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０またはそれ以上；例えば、２０以上；または例えば、５０以上；または例えば、８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰ６ポリペプチドとして、配列番号２９の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２９由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号２９のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号２９の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１３７】
本発明のＰ６抗原は、Ｐ６の天然の１９個のＮ末端アミノ酸（ＭＮＫＦＶＫＳＬＬＶＡＧＳＶＡＡＬＡＡ；配列番号９６）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１３８】
本発明によると、Ｐ６抗原は、本明細書に記載の抗原Ｐ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥ、Ｐ２６、および／またはＰＨｉＤの任意の１種または複数（例えば、１種、２種、または３種）と有利に組み合わせることができる。
【０１３９】
本発明のＰ６抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１４０】
第３の抗原群
ＮＴ０１３抗原
「ＮＴ０１３」抗原は、ＴＰＲ反復含有タンパク質としてアノテートされ、チトクロムｃ成熟化ヘムリアーゼサブユニットＣｃｍＨ２としてもアノテートされる。ＮＴ０１３は、株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０５３２として公開されている。ＮＴ０１３は、メタロプロテアーゼタンパク質ファミリーに属するとしてアノテートされており、また、ＮＴ０１３はＬｙｔＭ触媒ドメインを有する。
【０１４１】
有用なＮＴ０１３抗原は、配列番号３０を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３０に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３０の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０１３タンパク質として、配列番号３０の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３０由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３０のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３０の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１４２】
本発明のＮＴ０１３抗原は、ＮＴ０１３の天然の４２個のＮ末端アミノ酸（ＭＰＶＱＨＶＫＬＡＲＤＲＲＫＫＲＴＹＩＫＶＧＶＦＦＶＡＩＬＬＩＬＴＧＩＬＬＴＩＫＤＫ；配列番号９７）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１４３】
ＮＴ１０６抗原
「ＮＴ１０６」抗原は、リポタンパク質としてアノテートされ、また、ゲノム８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０３６３として公開されている。
【０１４４】
有用なＮＴ１０６抗原は、配列番号３１を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３１に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１０６タンパク質として、配列番号３１の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３１由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３１のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３１の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１４５】
本発明のＮＴ１０６抗原は、ＮＴ１０６の天然の１７個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＩＩＬＮＬＶＴＡＩＩＬＡＧＣ；配列番号９８）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１４６】
本発明のＮＴ１０６抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１４７】
ＮＴ１０７抗原
「ＮＴ１０７」抗原は、「ヘム／ヘモペキシン−結合性タンパク質Ｂ」としてアノテートされ、ゲノム８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０３７０として公開されている。
【０１４８】
有用なＮＴ１０７抗原は、配列番号３２を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３２に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３２の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１０７タンパク質として、配列番号３２の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３２由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３２のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３２の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１４９】
本発明のＮＴ１０７抗原は、ＮＴ１０７の天然の２８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＭＲＰＲＹＳＶＩＡＳＡＶＳＬＧＦＶＬＳＫＳＶＭＡＬＧ；配列番号９９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１５０】
ＮＴ１０８抗原
「ＮＴ１０８」抗原は、ムレイントランスグリコシラーゼＡリポタンパク質としてアノテートされる。株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０２０５としてアノテートされている。
【０１５１】
有用なＮＴ１０８抗原は、配列番号３３を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３３に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３３の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１０８タンパク質として、配列番号３３の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３３由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３３のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３３の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１５２】
本発明のＮＴ１０８抗原は、ＮＴ１０８の天然の２４個のＮ末端アミノ酸（ＭＳＶＣＫＰＦＷＦＫＴＦＳＩＳＩＩＴＡＬＬＶＳＣ；配列番号１００）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１５３】
本発明のＮＴ１０８抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１５４】
ＮＴ１０９抗原
この抗原は、硝酸／亜硝酸センサータンパク質ＮａｒＱとしてアノテートされており、株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０３７４と同定されており、また、分析された株において保存されていることが見いだされている。
【０１５５】
有用なＮＴ１０９抗原は、配列番号３４を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１０９タンパク質として、配列番号３４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１５６】
本発明のＮＴ１０９抗原は、ＮＴ１０９の天然の３３個のＮ末端アミノ酸（ＭＹＴＫＧＳＶＳＴＲＩＡＫＹＬＦＩＩＬＩＶＡＧＶＩＳＳＬＳＬＡＩＭ；配列番号１０１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１５７】
ＮＴ１１０抗原
この抗原は、ゲノム８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０５７９としてアノテートされており、また、推定溶血ＴｌｙＣとして公知である。この抗原は、外膜に結合していることが見いだされている。
【０１５８】
有用なＮＴ１１０抗原は、配列番号３５を認識する抗体を惹起できる（例えば、ヒトに投与されると）。
【０１５９】
（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３５由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３５のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３５の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１６０】
本発明のＮＴ１１０抗原は、ＮＴ１１０の天然の３０個のＮ末端アミノ酸（ＭＩＭＥＬＦＨＴＩＬＡＩＶＡＬＩＬＳＳＡＶＶＳＳＡＥＩＳＬＡ；配列番号１０２）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１６１】
ＮＴ１１１抗原
この抗原は、株８６−０２８ＮＰにおけるＮＴＨＩ０８３７としてアノテートされており、また、推定リポタンパク質として記載されている。
【０１６２】
有用なＮＴ１１１抗原は、配列番号３６を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３６に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３６の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１１タンパク質として、配列番号３６の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３６由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３６のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３６の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１６３】
本発明のＮＴ１１１抗原は、ＮＴ１１１の天然の１９個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＴＬＶＡＡＬＩＳＳＶＩＬＬＴＧＣ；配列番号１０３）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１６４】
本発明のＮＴ１１０抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１６５】
ＮＴ１１２抗原
この抗原は、ＮＰ８６−０２８株由来のＮＴＨＩ０８４９としてアノテートされている。この抗原は、ＶａｃＪリポタンパク質としてアノテートされる。
【０１６６】
有用なＮＴ１１２抗原は、配列番号３７を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３７に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３７の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１２タンパク質として、配列番号３７の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３７由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３７のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３７の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１６７】
本発明のＮＴ１１２抗原は、ＮＴ１１２の天然の１９個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＴＫＶＩＬＴＡＬＬＳＡＩＡＬＴＧＣ；配列番号１０４）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１６８】
本発明のＮＴ１１２抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１６９】
ＮＴ１１３抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ０９２１として、およびリポタンパク質としてアノテートされている。
【０１７０】
有用なＮＴ１１３抗原は、配列番号３８を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３８に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３８の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１３タンパク質として、配列番号３８の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３８由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３８のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３８の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１７１】
本発明のＮＴ１１３抗原は、ＮＴ１１３の天然の１６個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＹＬＬＬＡＬＬＰＦＬＹＡＣ；配列番号１０５）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１７２】
本発明のＮＴ１１３抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１７３】
ＮＴ１１４抗原
この抗原は、可溶性溶解性ムレイントランスグリコシラーゼタンパク質として、および８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ０９９５としてアノテートされている。
【０１７４】
有用なＮＴ１１４抗原は、配列番号３９を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号３９に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号３９の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１４タンパク質として、配列番号３９の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号３９由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号３９のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号３９の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１７５】
本発明のＮＴ１１４抗原は、ＮＴ１１４の天然の１９個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＶＡＬＩＳＬＣＩＦＴＡＬＳＡＦＡ；配列番号１０６）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１７６】
ＮＴ１１５抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１０９１として、および推定ＬｐｔＥリポタンパク質としてアノテートされている。この抗原は、細胞外環境に位置する。
【０１７７】
有用なＮＴ１１５抗原は、配列番号４０を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４０に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４０の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１５タンパク質として、配列番号４０の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４０由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４０のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４０の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１７８】
本発明のＮＴ１１５抗原は、ＮＴ１１５の天然の３５個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＹＬＨＦＴＲＰＴＩＫＶＩＦＭＩＮＳＩＫＴＬＬＬＩＡＴＬＡＩＬＳＡＣ；配列番号１０７）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１７９】
本発明のＮＴ１１５抗原は、リポタンパク質、例えば、Ｎ末端システインにおいて脂質付加されたものであってよい。
【０１８０】
ＮＴ１１６抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１１６９として記載されており、また、トランスフェリン−結合性タンパク質ファミリーに属する。
【０１８１】
有用なＮＴ１１６抗原は、配列番号４１を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４１に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１６タンパク質として、配列番号４１の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４１由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４１のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４１の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１８２】
本発明のＮＴ１１６抗原は、ＮＴ１１６の天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＳＶＰＬＩＴＧＧＬＳＦＬＬＳＡＣ；配列番号１０８）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１８３】
ＮＴ１１７抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１２０８および推定トランスグルタミナーゼとしてアノテートされている。この抗原は外膜に位置している。
【０１８４】
有用なＮＴ１１７抗原は、配列番号４２を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４２に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４２の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１７タンパク質として、配列番号４２の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４２由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４２のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４２の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１８５】
本発明のＮＴ１１７抗原は、ＮＴ１１７の天然の１９個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＬＩＡＶＡＶＦＳＡＣＧＳＬＡＨＡ；配列番号１０９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１８６】
ＮＴ１１８抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１３１８として、および仮定タンパク質としてアノテートされている。
【０１８７】
有用なＮＴ１１８抗原は、配列番号４３を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４３に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４３の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１８タンパク質として、配列番号４３の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４３由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４３のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４３の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１８８】
本発明のＮＴ１１８抗原は、ＮＴ１１８の天然の１８個のＮ末端アミノ酸（ＭＮＩＲＷＮＶＩＬＧＶＩＡＬＣＡＬＡ；配列番号１１０）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１８９】
ＮＴ１１９抗原
この抗原は、８６−０２８ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１５６５仮定タンパク質としてアノテートされている。
【０１９０】
有用なＮＴ１１９抗原は、配列番号１１４を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１１４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１１４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１１９タンパク質として、配列番号１１４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１１４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１１４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１１４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１９１】
本発明のＮＴ１１９抗原は、ＮＴ１１９の天然の２６個のＮ末端アミノ酸（ＭＲＦＴＫＴＬＦＴＴＡＬＬＧＡＳＩＦＳＦＱＳＴＡＷＡ；配列番号１１８）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１９２】
ＮＴ１２０抗原
この抗原は、８６−０２８ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１５６９仮定タンパク質としてアノテートされている。
【０１９３】
有用なＮＴ１２０抗原は、配列番号１１５を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１１５に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１１５の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１２０タンパク質として、配列番号１１５の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１１５由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１１５のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１１５の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１９４】
本発明のＮＴ１２０抗原は、ＮＴ１２０の天然の２６個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＬＴＫＴＬＬＴＴＡＬＦＧＡＳＶＦＳＦＱＳＴＡＷＡ；配列番号１１９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１９５】
ＮＴ１２１抗原
この抗原は、８６−０２８ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１５７１仮定タンパク質としてアノテートされている。
【０１９６】
有用なＮＴ１２１抗原は、配列番号１１６を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１１６に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１１６の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１２１タンパク質として、配列番号１１６の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１１６由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１１６のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１１６の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０１９７】
本発明のＮＴ１２１抗原は、ＮＴ１２１の天然の２６個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＬＴＫＴＬＬＴＴＡＬＬＧＡＳＶＦＳＦＱＳＴＡＷＡ；配列番号１２０）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０１９８】
ＮＴ１２２抗原
この抗原は、８６−０２８ＮＰ株におけるＮＴＨＩ１６６７仮定タンパク質としてアノテートされている。
【０１９９】
有用なＮＴ１２２抗原は、配列番号１１７を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１１７に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１１７の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１２２タンパク質として、配列番号１１７の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１１７由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１１７のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１１７の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０２００】
本発明のＮＴ１２２抗原は、ＮＴ１２２の天然の２３個のＮ末端アミノ酸（ＭＥＫＩＭＫＫＬＴＬＡＬＶＬＧＳＡＬＡＶＴＧＣ；配列番号１２１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０２０１】
ＮＴ１２３抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における亜鉛プロテアーゼＮＴＨＩ１７９６としてアノテートされている。
【０２０２】
有用なＮＴ１２３抗原は、配列番号４４を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４４に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４４の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１２３タンパク質として、配列番号４４の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４４由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４４のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４４の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０２０３】
本発明のＮＴ１２３抗原は、ＮＴ１２３の天然の１７個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＴＴＡＬＦＬＬＩＦＳＬＩＡＣ；配列番号１１１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０２０４】
ＮＴ１２４抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における仮定タンパク質ＮＴＨＩ１９３０としてアノテートされている。
【０２０５】
有用なＮＴ１２４抗原は、配列番号４５を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号４５に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号４５の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ１２４タンパク質として、配列番号４５の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号４５由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号４５のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号４５の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０２０６】
本発明のＮＴ１２４抗原は、ＮＴ１２４の天然の２２個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＫＳＫＩＡＡＧＶＶＩＳＬＡＡＶＷＣＡＧＡ；配列番号８９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０２０７】
ＮＴ０６１抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における生存タンパク質ＳｕｒＡ様タンパク質ＮＴＨＩ０５８８としてアノテートされている。
【０２０８】
有用なＮＴ０６１抗原は、配列番号１２８を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１２８に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１２８の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０６１タンパク質として、配列番号１２８の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１２８由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１２８のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１２８の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０２０９】
本発明のＮＴ０６１抗原は、ＮＴ０６１の天然の２７個のＮ末端アミノ酸（ＭＫＭＫＫＦＩＬＫＳＦＬＬＡＴＬＧＣＶＡＦＴＳＭＡＱＡ；配列番号１２９）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０２１０】
ＮＴ０１７抗原
この抗原は、８６−０２６ＮＰ株における生存タンパク質ＳｕｒＡ様タンパク質ＮＴＨＩ０９１５としてアノテートされている。
【０２１１】
有用なＮＴ０１７抗原は、配列番号１３０を認識する抗体を惹起することができ（例えば、ヒトに投与されると）、かつ／または、（ａ）配列番号１３０に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１３０の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのＮＴ０１７タンパク質として、配列番号１３０の改変体が挙げられる。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１３０由来のエピトープを含む。その他の好ましい断片は、配列番号１３０のＣ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）および／またはＮ末端からの１個または複数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個またはそれより多い）を欠くが、配列番号１３０の少なくとも１つのエピトープを保持する。その他の断片では、１つまたは複数のタンパク質ドメインが省かれている。
【０２１２】
本発明のＮＴ０１７抗原は、ＮＴ０１７の天然の２０個のＮ末端アミノ酸（ＭＬＲＦＧＶＮＱＫＴＳＬＬＬＴＡＬＬＳＣ；配列番号１３１）とともに発現され得るか、または代替のＮ末端配列とともに、例えば、単純なＮ末端メチオニン、またはＭｅｔ−Ａｌａ−、または発現されたタンパク質を所望の様式で標的とするまたは輸送するリーダーペプチドとともに発現され得る。
【０２１３】
ハイブリッドポリペプチド
本発明で使用されるポリペプチドは、個別にまたはそれぞれ独立に別々のポリペプチド鎖上で発現させ得る。あるいは、本発明で使用されるポリペプチドの２種以上を単一のポリペプチド鎖（「ハイブリッド」ポリペプチド）としても発現させ得る。ハイブリッドポリペプチドは、式ＮＨ２−Ａ−｛−Ｘ−Ｌ−｝ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨで示すことができ、式中、Ａは任意選択のＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは任意選択のＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは２以上の整数（例えば、２、３、４、５、６など）であり、Ｘｎの少なくとも１つは、本発明の抗原のアミノ酸配列（上記の通り）であり、Ｌは任意選択のリンカーアミノ酸配列である。本発明によると、例えば、各Ｘｎは、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８、しかし、これはこの中で好ましいものではない）、（５）ＮＴＨＩ１２９２（ＮＴ０６７）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（７）ＮＴＨＩ０２６６（ＮＴ０１６）、（８）ＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０（ＮＴ０５２）、（９）ＮＴＨＩ１６２７（ＮＴ００２）、（１０）ＮＴＨＩ１１０９（ＮＴ０２６）、（１１）ＮＴＨＩ０８２１（ＮＴ００９）、（１２）ＮＴＨＩ０４０９（ＮＴ０２５）、（１３）ＮＴＨＩ１９５４（ＮＴ０２８）、（１４）ＮＴＨＩ０３７１（ＮＴ０２９）、（１５）ＮＴＨＩ０５０９（ＮＴ０３１）、（１６）ＮＴＨＩ０４４９（ＮＴ０１５）、（１７）ＮＴＨＩ１４７３（ＮＴ０２３）、（１８）ｇｉ−１４５６３３１８４（ＮＴ１００）、（１９）ＮＴＨＩ１１１０（ＮＴ０４０）、（２０）ｇｉ−４６１２９０７５（ＮＴ０４８）、（２１）ｇｉ−１４５６２８２３６（ＮＴ０５３）、（２２）ＮＴＨＩ１２３０（ＮＴ０６６）、（２３）ＮＴＨＩ０５２２（ＮＴ０９７）、（２４）Ｐ４８（ＮＴＨＩ０２５４、ＮＴ００７とも定義される）、（２５）ＨｔｒＡ（ＮＴＨＩ１９０５、ＮＴ００６とも定義される）、（２６）ＰＥ（ＮＴＨＩ０２６７、ＮＴ０３５とも定義される）、（２７）Ｐ２６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０１０とも定義される）、（２８）ＰＨｉＤ（ＮＴＨＩ０８１１、ＮＴ０８０とも定義される）、（２９）Ｐ６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０８１とも定義される）、（３０）ＮＴ０１３、（３１）ＮＴ１０６、（３２）ＮＴ１０７、（３３）ＮＴ１０８、（３４）ＮＴ１０９、（３５）ＮＴ１１０、（３６）ＮＴ１１１、（３７）ＮＴ１１２、（３８）ＮＴ１１３、（３９）ＮＴ１１４、（４０）ＮＴ１１５、（４１）ＮＴ１１６、（４２）ＮＴ１１７、（４３）ＮＴ１１８、（４６）ＮＴ１１９、（４７）ＮＴ１２０、（４８）ＮＴ１２１、（４９）、ＮＴ１２２、（４４）ＮＴ１２３、（４５）ＮＴ１２４；（５０）ＮＴ００４；（５１）ＮＴ０１４；（５２）ＮＴ０２２（ＮＴＨＩ０８３０としてもアノテートされる）；（７）ＮＴ０１６（ＮＴＨＩ０２６６としてもアノテートされる）からなる群より選択される抗原のアミノ酸配列を含んでよい。
【０２１４】
本発明によると、Ｘｎは、「第１の抗原群」に列挙されている抗原のいずれかおよび「第２の抗原群」に列挙されている抗原のいずれかからなる群より選択される２種以上の抗原のアミノ酸配列を含んでよい。各Ｘｎは、本発明の抗原組み合わせの抗原のアミノ酸配列であってよい（上記の通り）。ある特定の実施形態では、ｎは２である。ｎが２である場合、上記の抗原のうち２種の任意の組み合わせも、本発明に従って使用され得る。ｎが３である場合、例えば、上記の３種の抗原の本発明の任意の組み合わせが使用され得る。一般的に、Ｘｎの２つ以上が同じ抗原であってもよく、ｎが２、３または４である場合には、各Ｘｎは異なる抗原であってもよい。Ｘｎの２つ以上が同じ抗原の配列である場合、前記２つ以上のＸｎは同じポリペプチド配列を有してもよく、異なるポリペプチド配列を有してもよく、例えば、上記の通り、所与の抗原の異なる改変体または断片であってよい。
【０２１５】
これらの抗原が（ａ）所与の配列に対して５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）の同一性を有すること；および／または（ｂ）所与の配列の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片を含むこと（ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）である）に関して定義される場合、（ａ）の同一性のレベルおよび（ｂ）の「ｎ」の値は、各Ｘについて同じであってよい。
【０２１６】
野生型形態の各−Ｘ−部分のリーダーペプチド配列はハイブリッドタンパク質に含まれていても省かれていてもよい。一部の実施形態では、リーダーペプチドは、ハイブリッドタンパク質のＮ末端に位置する−Ｘ−部分のリーダーペプチド以外は欠失させる、すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは保持されるが、Ｘ２…Ｘｎのリーダーペプチドは省かれる。これは、全てのリーダーペプチドを欠失させ、Ｘ１のリーダーペプチドを部分−Ａ−として使用することと等しい。
【０２１７】
｛−Ｘ−Ｌ−｝の各ｎの場合について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−が存在しても存在しなくてもよい。例えば、ｎ＝２の場合、ハイブリッドは、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであってよい。リンカーアミノ酸配列（複数可）−Ｌ−は、一般的には短い（例えば、２０アミノ酸以下、すなわち、２０アミノ酸、１９アミノ酸、１８アミノ酸、１７アミノ酸、１６アミノ酸、１５アミノ酸、１４アミノ酸、１３アミノ酸、１２アミノ酸、１１アミノ酸、１０アミノ酸、９アミノ酸、８アミノ酸、７アミノ酸、６アミノ酸、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸、１アミノ酸）。例は、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎ、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい、を含む）、およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい）を含む。その他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者には明らかになるであろう。有用なリンカーは、ＧＳＧＧＧＧ（配列番号４６）またはＧＳＧＳＧＧＧＧ（配列番号４７）であり、ＢａｍＨＩ制限部位からＧｌｙ−Ｓｅｒジペプチドが形成され、したがって、クローニングおよび操作の助けになり、また、（Ｇｌｙ）４テトラペプチドは典型的なポリグリシンリンカーである。その他の適切なリンカー、特に最後のＬｎとして使用するためのリンカーは、Ｌｅｕ−Ｇｌｕジペプチドである。
【０２１８】
−Ａ−は任意選択のＮ末端アミノ酸配列である。これは、一般的には短い（例えば、４０アミノ酸以下、すなわち、４０アミノ酸、３９アミノ酸、３８アミノ酸、３７アミノ酸、３６アミノ酸、３５アミノ酸、３４アミノ酸、３３アミノ酸、３２アミノ酸、３１アミノ酸、３０アミノ酸、２９アミノ酸、２８アミノ酸、２７アミノ酸、２６アミノ酸、２５アミノ酸、２４アミノ酸、２３アミノ酸、２２アミノ酸、２１アミノ酸、２０アミノ酸、１９アミノ酸、１８アミノ酸、１７アミノ酸、１６アミノ酸、１５アミノ酸、１４アミノ酸、１３アミノ酸、１２アミノ酸、１１アミノ酸、１０アミノ酸、９アミノ酸、８アミノ酸、７アミノ酸、６アミノ酸、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸、１アミノ酸）。例として、タンパク質輸送を導くためのリーダー配列、またはクローニングまたは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより大きい）、例えば、配列番号４８などが挙げられる。その他の適切なＮ末端アミノ酸配列は当業者には明らかになるであろう。Ｘ１がそれ自体のＮ末端メチオニンを欠く場合、−Ａ−はＮ末端メチオニンをもたらすオリゴペプチド（例えば、１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸または８アミノ酸を有する）、例えば、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｓｅｒ、または単一のＭｅｔ残基であることが好ましい。
【０２１９】
−Ｂ−は任意選択のＣ末端アミノ酸配列である。これは、一般的には短い（例えば、４０アミノ酸以下、すなわち、３９アミノ酸、３８アミノ酸、３７アミノ酸、３６アミノ酸、３５アミノ酸、３４アミノ酸、３３アミノ酸、３２アミノ酸、３１アミノ酸、３０アミノ酸、２９アミノ酸、２８アミノ酸、２７アミノ酸、２６アミノ酸、２５アミノ酸、２４アミノ酸、２３アミノ酸、２２アミノ酸、２１アミノ酸、２０アミノ酸、１９アミノ酸、１８アミノ酸、１７アミノ酸、１６アミノ酸、１５アミノ酸、１４アミノ酸、１３アミノ酸、１２アミノ酸、１１アミノ酸、１０アミノ酸、９アミノ酸、８アミノ酸、７アミノ酸、６アミノ酸、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸、１アミノ酸）。例として、タンパク質輸送を導くための配列、クローニングまたは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Ｈｉｓｎ、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上、例えば配列番号６８などを含む）、またはタンパク質安定性を増進する配列が挙げられる。その他の適切なＣ末端アミノ酸配列は当業者には明らかになるであろう。
【０２２０】
株および改変体
抗原は、文献からの命名規則、例えば、「ＮＴＨＩ」番号付け（株８６−０２８ＮＰのゲノムから）またはＣＧＳＨｉＧＧ番号付け（株ＰｉｔｔＧＧのゲノムから）を参照することによって上で定義されている。そのような規則は、参考文献１５（特に表１）においてより詳細に説明されている。本明細書の表Ｖは、本明細書で使用される「ＮＴ」命名法に対する現行の命名法に関する。したがって、任意の本発明の抗原の例示的なアミノ酸配列およびヌクレオチド配列は、示されている株についての公共の配列データベースにおいて容易に見いだすことができるが（機能のアノテーションなどの追加的な情報と一緒に）、本発明は、８６−０２８ＮＰ株、３６５５株またはＰｉｔｔＧＧ株からの配列に限定されない。いくつかのその他のＮＴＨＩ株のゲノム配列が利用可能である（再度、参考文献１５の表１を参照のこと）。標準の検索およびアラインメント技法を使用して、これらの（またはその他の）さらなるゲノム配列のいずれかにおいて本明細書において示されている任意の特定の配列のホモログが同定され得る。さらに、利用可能な配列を使用して、その他の株由来の相同な配列を増幅するためのプライマーを設計できる。したがって、本発明は、これらの特定の株に限定されるのではなく、その他のＮＴＨＩ株由来のそのような改変体およびホモログ、ならびに非天然改変体を包含する。一般的に、特定の配列番号の適切な改変体として、その対立遺伝子改変体、その多型形態、そのホモログ、そのオルソログ、そのパラログ、その変異体などが挙げられる。例えば、配列番号４９、５２、５４、５５、５７〜５９、６４、６５および６７は、下記の変異を含む。
【０２２１】
したがって、例えば、本発明で使用されるポリペプチドは、本明細書の配列番号と比較して、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つなど）のアミノ酸置換、例えば、保存された置換（すなわち、あるアミノ酸の、関連する側鎖を有する別のアミノ酸への置換）などを含むことができる。遺伝子にコードされるアミノ酸は、一般的に、４つのファミリー：（１）酸性、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわち、リシン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンに分けられる。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時には、一緒に芳香族アミノ酸に分類される。一般的に、これらのファミリー内の単一のアミノ酸の置換は、生物学的活性に大きな影響を及ぼさない。ポリペプチドは、配列番号配列と比較して１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つなど）の単一のアミノ酸欠失も含んでよい。ポリペプチドは、配列番号配列と比較して１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つなど）の挿入（例えば、１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸または５アミノ酸のそれぞれ）も含んでよい。
【０２２２】
同様に、本発明で使用されるポリペプチドは、
（ａ）配列表に開示されている配列と同一（すなわち、１００％同一）であるアミノ酸配列；
（ｂ）配列表に開示されている配列と配列同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより高い）を共有するアミノ酸配列；
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の配列と比較して、別々の位置におけるものであってもよく、連続していてもよい１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つまたは１０（またはそれより多い）の単一のアミノ酸の変更（欠失、挿入、置換）を有するアミノ酸配列；および／または
（ｄ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列表からの特定の配列とアラインメントした場合に、ｘアミノ酸のＮ末端からＣ末端への各ムービングウィンドウ（したがって、ｐアミノ酸まで延びるアラインメントに関して、ｐ＞ｘである場合、そのようなウインドウがｐ−ｘ＋１個存在する）は、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここでｘは２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００から選択され、ｙは０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９から選択され、また、ｘ・ｙが整数でない場合には最も近い整数に切り上げる。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトのパラメータ（例えば、ギャップ開始ペナルティ＝１０．０、およびギャップ伸長ペナルティ＝０．５、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用する）を使用したＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈグローバルアラインメントアルゴリズム［１６］である。このアルゴリズムは、ＥＭＢＯＳＳパッケージ内のニードルツールで都合よく実装される［１７］。
【０２２３】
ハイブリッドポリペプチドを使用する場合、ハイブリッド内の個々の抗原（すなわち、個々の−Ｘ−部分）は、１種または複数の株由来であってよい。ｎ＝２である場合、例えば、Ｘ２は、Ｘ１と同じ株由来であってもよく、異なる株由来であってもよい。ｎ＝３の場合、株は、（ｉ）Ｘ１＝Ｘ２＝Ｘ３（ｉｉ）Ｘ１＝Ｘ２≠Ｘ３（ｉｉｉ）Ｘ１≠Ｘ２＝Ｘ３（ｉｖ）Ｘ１≠Ｘ２≠Ｘ３または（ｖ）Ｘ１＝Ｘ３≠Ｘ２などであってよい。
【０２２４】
群（ｃ）の中で、欠失または置換はＮ末端および／またはＣ末端におけるものであってもよく、２つの末端の間におけるものであってもよい。したがって、切断は欠失の一例である。切断は、Ｎ末端および／またはＣ末端における最大４０個（またはそれより多い）のアミノ酸の欠失を伴ってよい。Ｎ末端切断により、例えば、異種宿主における組換え発現を容易にするためにリーダーペプチドを除去できる。Ｃ末端切断により、例えば、異種宿主における組換え発現を容易にするためにアンカー配列を除去できる。
【０２２５】
一般的に、抗原が、配列表からのＮＴＨＩ配列と同一ではない配列を含む場合（例えば、抗原が、それと＜１００％配列同一性を有する配列表を含む、またはその断片を含む）、個々の例において、抗原により、配列表からのそれぞれのＮＴＨＩ配列を認識する抗体が惹起され得ることが好ましい。
【０２２６】
変異体細菌
本発明は、本発明の抗原のうち１種または複数がノックアウトされたＮＴＨｉ細菌も提供する［１８］。ノックアウト細菌を作出するための技法は周知であり、ＮＴＨｉ株からの遺伝子のノックアウトは、すなわち、参考文献１９において報告されている。ノックアウト変異は、遺伝子のコード領域内にあってもよく、その転写制御領域内（例えば、そのプロモーター内）にあってもよい。ノックアウト変異により、抗原をコードするｍＲＮＡのレベルが、野生型細菌によって産生されるものの＜１％まで、好ましくは＜０．５％まで、より好ましくは＜０．１％まで、最も好ましくは０％まで低下する。
【０２２７】
本発明は、本発明の抗原のうち１種または複数が、その活性を阻害する変異を有するＮＴＨＩ細菌も提供する。抗原をコードする遺伝子は、コードされるアミノ酸配列を変化させるまたはその発現を無効にする変異を有する。変異は、欠失、置換、および／または挿入を伴ってよく、そのいずれにも１個または複数のアミノ酸が関与してよい。
【０２２８】
一実施形態は、本発明の抗原をコードする１種または複数の遺伝子の欠失を提供する。
【０２２９】
Ｅ．ｃｏｌｉにおいて、ＬｙｔＭドメインを有する分裂機構の２つの成分（ＥｎｖＣおよびＮｌｐＤ）は、細胞分離を担う細胞壁ヒドロラーゼ（アミダーゼ）（ＡｍｉＡ、ＡｍｉＢおよびＡｍｉＣ）の直接的な調節因子であることは公知であった［２０］。Ｅ．ｃｏｌｉにおいてＬｙｔＭメタロプロテアーゼが娘細胞分離のために絶対的に必要であることも公知である。
【０２３０】
一実施形態では、本発明は、ＬｙｔＭ触媒ドメインを有するポリペプチドをコードするＮＴＨＩ遺伝子を提供する。一般的に、メタロプロテアーゼは、それらの触媒ドメイン内にＨｘＨアミノ酸ドメインおよびＨｘｘｘＤアミノ酸ドメインを含有すると同定される。好ましくは、これらの１種または複数の遺伝子はＮＴ０１３、ＮＴ０２２またはＮＴ０１７のいずれか１つをコードする。
【０２３１】
本発明には、ＬｙｔＭ触媒ドメインを共通して有するポリペプチドをコードする１種または複数の遺伝子の変異または欠失により、細菌細胞分裂および細菌の表現型に著しい変化が生じることが記載されている。
【０２３２】
発明者らは、前記変異または欠失により、ＯＭＶまたは外膜小胞として公知の小胞が放出されるが、同じ野生型ＮＴＨｉ株は、通常はＯＭＶを放出しないことも示した。
【０２３３】
特に好ましい一実施形態では、ＮＴ０１３および／またはＮＴ０２２を欠失させることにより、細菌細胞分裂が影響を受けるだけでなく、通常はＯＭＶを放出しないＮＴＨＩ株における外膜小胞（ＯＭＶ）の驚くべき産生および放出もあることが記載されている。
【０２３４】
好ましい実施形態は、ＮＴ０１３またはＮＴ０２２またはＮＴ０１７のいずれか１つをコードする１種または複数の遺伝子が欠失しているＮＴＨＩ株を提供する。例えば、欠失した遺伝子は、抗生物質耐性カセット、例えば、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｒｏｍｙｃｉｎ）耐性カセットなどで置換され得る。上記のポリペプチドは全て、ＬｙｔＭ触媒ドメインを共通して有し、また、全てメタロプロテアーゼであることが見いだされている。
【０２３５】
ＮＴ０１３およびＮＴ０２２においてＬｙｔＭドメインが保存されていることも見いだされている。ＮＴ０１３触媒活性部位は、Ｃ末端部分における以下のアミノ酸モチーフ−ＨＫＧＤ−および−ＨＬＨ−で表される。ＮＴ０２２触媒活性部位は、Ｃ末端における以下のアミノ酸モチーフ−ＮＫＧＩＤ−および−ＫＬＨ−で表される。
【０２３６】
本発明はまた、本発明の抗原を高発現するＮＴＨｉ細菌のような細菌を提供する。
【０２３７】
本発明はまた、本発明の抗原を構成的に発現するＮＴＨｉ細菌のような細菌を提供する。本発明は、少なくとも本発明の抗原をコードする遺伝子を含み、当該遺伝子が誘導性プロモーターの制御下にあるＥ．ｃｏｌｉも提供する。
【０２３８】
ＯＭＶに基づくワクチン
グラム陰性細菌は、２つの連続的な膜構造の層によって外部の媒体から分離されている。これらの構造は細胞膜および外膜（ＯＭ）と呼ばれ、構造的にも機能的にも異なる。外膜は、病原性細菌とそれらのそれぞれの宿主との相互作用において重要な役割を果たす。したがって、表面に露出した細菌分子は、宿主免疫応答の重要な標的を表し、これにより、外膜成分が、ワクチン、診断用試薬および治療用試薬をもたらすことにおいて魅力的な候補になる。
【０２３９】
本発明の変異体細菌は、ＮＴＨｉ抗原（例えば本発明の抗原）を含み、免疫原として使用され得る細菌外膜小胞を調製するために特に有用である。
【０２４０】
本発明はまた、好ましくはＯＭＶを過剰産生することによって本発明の少なくとも１種の抗原を高発現するＮＴＨｉ細菌のような細菌を提供する。
【０２４１】
上方制御を使用して、ＯＭＶにおける有用なＮＴＨｉタンパク質のレベルを上昇させることができる。
【０２４２】
本発明のＯＭＶを過剰産生するＮＴＨｉ細菌を作出するための方法も提供され、当該方法は、グラム陰性細菌株を以下のプロセスの１つまたは複数によって遺伝子改変することを含む：（ａ）株を操作して、１種または複数のＴｏｌ遺伝子の発現を下方制御すること、および（ｂ）ペプチドグリカン関連部位を含むタンパク質をコードする１種または複数の遺伝子（複数可）を変異させて、タンパク質（複数可）のペプチドグリカン結合活性を減弱させること、（ｃ）ＬｙｔＭ触媒ドメインを共通して有するポリペプチドをコードする１種または複数の遺伝子を変異または欠失させることによるもの。特に好ましい一実施形態では、ＮＴＨｉは、活性なＮＴ０１３遺伝子、ＮＴ０２２遺伝子および／または任意のＴｏｌ遺伝子を発現しなくてよい［１９］、［１８］。
【０２４３】
本発明はまた、本発明のＮＴＨｉ細菌を、その外膜により小胞が形成されるように処理するステップを含む、ＮＴＨｉ小胞を調製するためのプロセスを提供する。
【０２４４】
本発明はまた、本発明のＮＴＨｉ細菌を、その外膜により小胞が自発的に脱落する条件下で培養するステップを含む、ＮＴＨｉ小胞を調製するためのプロセスを提供する。
【０２４５】
本発明はまた、ＯＭＶを過剰産生し、また本発明の抗原を高発現するＮＴＨｉ細菌を提供する。
【０２４６】
本発明で使用されるポリペプチド
本発明で使用されるポリペプチドは、種々の形態をとることができる（例えば、天然形態、融合形態、グリコシル化形態、非グリコシル化形態、脂質付加形態、非脂質付加形態、リン酸化形態、非リン酸化形態、ミリストイル化形態、非ミリストイル化形態、モノマー形態、マルチマー形態、粒子状形態、変性形態など）。
【０２４７】
本発明で使用されるポリペプチドは、種々の手段（例えば、組換え発現、細胞培養物からの精製、化学合成など）によって調製できる。特にハイブリッドポリペプチドに関して、組換えによって発現されたタンパク質が好ましい。
【０２４８】
本発明で使用されるポリペプチドは、精製または実質的に精製された形態、すなわち、その他のポリペプチド、特に、その他のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のものまたは宿主細胞ポリペプチドを実質的に含まず（例えば、天然に存在するポリペプチドを含まない）、一般的に、少なくとも約５０％純粋（重量で）であり、通常は少なくとも約９０％純粋である、すなわち、組成物の約５０％未満、より好ましくは約１０％未満（例えば、５％）がその他の発現ポリペプチドで構成される形態で提供されることが好ましい。したがって、組成物中の抗原は、分子を発現させる生物体全体から分離されている。
【０２４９】
用語「ポリペプチド」とは、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指す。ポリマーは、直鎖であっても、分岐していてもよく、修飾されたアミノ酸を含んでいてもよく、非アミノ酸によって割り込まれていてもよい。この用語はまた、天然に、または介入によって、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化または標識成分との結合体化などの任意のその他の操作または修飾によって修飾されているアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、１個または複数のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含めた）、ならびに当技術分野で公知のその他の修飾を含有するポリペプチドも包含される。ポリペプチドは、単一鎖または会合している鎖として生じ得る。
【０２５０】
本発明で使用されるポリペプチドは、配列−Ｐ−Ｑ−または−Ｑ−Ｐ−を含んでよく、−Ｐ−は上で定義されているアミノ酸配列であり、−Ｑ−は、上で定義されているものではない配列である、すなわち、融合タンパク質として提供され得る。−Ｐ−のＮ末端コドンがＡＴＧではないが、このコドンがポリペプチドのＮ末端に存在しない場合、これは、Ｍｅｔとしてではなく、そのコドンに対する標準のアミノ酸として翻訳される。しかし、このコドンがポリペプチドのＮ末端にある場合には、Ｍｅｔとして翻訳される。−Ｑ−部分の例として、これだけに限定されないが、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上、例えば、配列番号６８）、マルトース結合性タンパク質、またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）が挙げられる。
【０２５１】
本発明で使用されるポリペプチドは、新生タンパク質として最初に発現される場合、配列−Ｐ−Ｑ−または−Ｑ−Ｐを含んでよいが、一部の実施形態では、タンパク質を使用する時点でタンパク質に−Ｑ−部分が存在しなくてよい、例えば、リーダーペプチドが翻訳後に切断され得る。
【０２５２】
発現のために有用なＮ末端配列は配列番号４８である。
【０２５３】
本発明で使用されるポリペプチドの発現は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅにおいて起こり得るが、本発明では、通常、発現（組換え発現）のために異種宿主を使用する。異種宿主は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物であり得る。異種宿主はＥ．ｃｏｌｉであり得るが、その他の適切な宿主として、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、マイコバクテリア（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、酵母などが挙げられる。本発明のポリペプチドをコードする野生型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ遺伝子と比較して、コドンを変化させて、そのような宿主における発現効率を、コードされるアミノ酸に影響を及ぼすことなく最適化することが有益である。
【０２５４】
本発明で使用されるポリペプチドは、化学的手段によってポリペプチドの少なくとも一部を合成するステップを含むプロセスによって合成され得る。
【０２５５】
核酸
本発明は、本発明で使用されるポリペプチド、本発明のポリペプチドの組み合わせまたはハイブリッドポリペプチドをコードする核酸も提供する（例えば、核酸の組み合わせ、ベクター、またはベクターの組み合わせ）。本発明は、本発明の抗原組み合わせの１種または複数（例えば、２種、３種または４種）のポリペプチドまたはハイブリッドポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。核酸は、例えば、ベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）であってよい。
【０２５６】
本発明の１種または複数（少なくとも１種）の抗原および抗原組み合わせのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、公知のものであってもよく（例えば、参考文献６〜９を参照のこと）、遺伝暗号にしたがって設計することもできる。したがって、本発明の中で、そのようなヌクレオチド配列は、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（５）ＮＴＨＩ１２９２（ＮＴ０６７）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（７）ＮＴＨＩ０２６６（ＮＴ０１６）、（８）ＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０（ＮＴ０５２）、（９）ＮＴＨＩ１６２７（ＮＴ００２）、（１０）ＮＴＨＩ１１０９（ＮＴ０２６）、（１１）ＮＴＨＩ０８２１（ＮＴ００９）、（１２）ＮＴＨＩ０４０９（ＮＴ０２５）、（１３）ＮＴＨＩ１９５４（ＮＴ０２８）、（１４）ＮＴＨＩ０３７１（ＮＴ０２９）、（１５）ＮＴＨＩ０５０９（ＮＴ０３１）、（１６）ＮＴＨＩ０４４９（ＮＴ０１５）、（１７）ＮＴＨＩ１４７３（ＮＴ０２３）、（１８）ｇｉ−１４５６３３１８４（ＮＴ１００）、（１９）ＮＴＨＩ１１１０（ＮＴ０４０）、（２０）ｇｉ−４６１２９０７５（ＮＴ０４８）、（２１）ｇｉ−１４５６２８２３６（ＮＴ０５３）、（２２）ＮＴＨＩ１２３０（ＮＴ０６６）、（２３）ＮＴＨＩ０５２２（ＮＴ０９７）またはＰ４８抗原（例えば、配列番号２４など）；ＨｔｒＡ抗原（例えば、配列番号２５など）；ＰＥ抗原（例えば、配列番号２６など）；Ｐ２６抗原（例えば、配列番号２７など）；ＰＨｉＤ抗原（例えば、配列番号２８など）；Ｐ６抗原（例えば、配列番号２９など）、（５０）ＮＴ００４、（５１）ＮＴ０１４、（５２）ＮＴ０２２または「第３の抗原群」からの１種または複数の抗原のうち１種または複数をコードしてもよく、（ａ）上記のポリペプチドのいずれかに対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上、例えば、９０％以上の同一性、または９５％以上の同一性、または９９％以上の同一性）を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）前記ポリペプチド：１のいずれかの少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸の断片であって、ここで「ｎ」が７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上；例えば２０以上；または、例えば５０以上；または、例えば８０以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列をコードしてもよい。
【０２５７】
本発明は、これらの核酸とハイブリダイズできる核酸も提供する。ハイブリダイゼーション反応は、種々の「ストリンジェンシー」の条件下で実施され得る。当技術分野において広く知られており公開されている（例えば、参考文献１２１の７５２頁）ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを上昇させる条件。関連する条件の例として、（ストリンジェンシーが上昇する順に）インキュベーション温度、２５℃、３７℃、５０℃、５５℃および６８℃；緩衝液の濃度、１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ（ＳＳＣは、０．１５ＭのＮａＣｌおよび１５ｍＭのクエン酸緩衝液である）およびその他の緩衝系を使用したそれらの等価物；ホルムアミド濃度、０％、２５％、５０％、および７５％；インキュベーションの時間、５分から２４時間まで；１回、２回、またはそれ以上の洗浄ステップ；洗浄インキュベーションの時間、１分、２分、または１５分；ならびに洗浄溶液、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水を含む。ハイブリダイゼーション技法およびそれらの最適化は当技術分野で周知である（例えば、参考文献２１、２２および１２３を参照のこと）。
【０２５８】
核酸は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリダイズすることができ、その他の実施形態では、核酸は中間のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし、好ましい実施形態では、核酸は、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。例示的な低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件のセットは５０℃および１０×ＳＳＣである。例示的な中間のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件のセットは５５℃および１×ＳＳＣである。例示的な高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件のセットは６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【０２５９】
本発明は、これらの配列と相補的な配列を含む核酸を包含する（例えば、アンチセンスもしくはプロービング用、またはプライマーとして使用するため）。
【０２６０】
本発明による核酸は、種々の形態をとることができる（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プライマー、プローブ、標識されたものなど）。本発明の核酸は環状であっても分枝していてもよいが、一般的に、直鎖である。別段の指定または必要性がない限り、核酸を利用する本発明の任意の実施形態では、二本鎖形態および二本鎖形態を構成する２つの相補的な一本鎖形態のそれぞれのどちらも利用できる。プライマーおよびプローブは、一般的に、アンチセンス核酸と同様に、一本鎖である。
【０２６１】
本明細書に記載の抗原をコードする核酸は、精製または実質的に精製された形態、すなわち、その他の核酸、特にその他のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来の核酸または宿主細胞核酸を実質的に含まず（例えば、天然に存在する核酸を含まず）、一般的に、少なくとも約５０％純粋（重量で）であり、通常は少なくとも約９０％純粋である形態で提供されることが好ましい。本発明の核酸は、好ましくはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ核酸である。
【０２６２】
本明細書に記載の抗原をコードする核酸は、多くの方法で、例えば、全体または部分的な化学合成によって（例えば、ＤＮＡのホスホラミダイト合成）、ヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）を使用してより長い核酸を消化することによって、より短い核酸またはヌクレオチドをつなぐことによって（例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを使用して）、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーなどから調製できる。
【０２６３】
核酸は、固体支持体（例えば、ビーズ、プレート、フィルター、フィルム、スライド、マイクロアレイ支持体、樹脂など）に付着させることができる。核酸は、例えば、放射性標識もしくは蛍光標識、またはビオチン標識を用いて標識できる。これは、核酸が検出技法において使用されるものである場合、例えば、核酸がプライマーであるまたはプローブとしてのものである場合に特に有用である。
【０２６４】
用語「核酸」とは、一般的な意味で、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそれらの類似体を含有する任意の長さのヌクレオチドのポリマーの形態を包含する。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを包含する。核酸は、修飾された骨格（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホロチオエート）または修飾された塩基を含有するものなどのＤＮＡ類似体またはＲＮＡ類似体も包含する。したがって、本発明は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸、分枝核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを包含する。本発明の核酸がＲＮＡの形態をとる場合、５’キャップを有しても有さなくてもよい。
【０２６５】
本明細書に記載の抗原をコードする核酸は、ベクターの一部、すなわち、１種または複数の細胞型を形質導入／トランスフェクションするために設計された核酸構築物の一部であってよい。ベクターは、例えば、挿入されたヌクレオチドを単離、増幅および複製するために設計された「クローニングベクター」、ヌクレオチド配列を宿主細胞において発現させるために設計された「発現ベクター」、組換えウイルスまたはウイルス様粒子の産生をもたらすために設計された「ウイルスベクター」、または２種類以上のベクターの特質を含む「シャトルベクター」であってよい。好ましいベクターはプラスミドである。「宿主細胞」は、外因核酸のレシピエントになり得るまたはなっている個々の細胞または細胞培養物を包含する。宿主細胞とは、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然の、偶発的な、または意図的な変異および／または変化に起因して、元の親細胞と完全に同一である必要はない（形態または総ＤＮＡ量（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）において）。宿主細胞とは、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて本発明の核酸を用いてトランスフェクトしたまたは感染させた細胞を包含する。
【０２６６】
用語「相補体」または「相補的な」とは、核酸に関して使用される場合、ワトソン・クリック塩基対合を指す。したがって、Ｃの相補体はＧであり、Ｇの相補体はＣであり、Ａの相補体はＴ（またはＵ）であり、Ｔ（またはＵ）の相補体は、Ａである。Ｉ（プリンイノシン）などの塩基を使用して、例えば、ピリミジン（ＣまたはＴ）を相補することも可能である。
【０２６７】
本明細書に記載の抗原をコードする核酸は、例えば：ポリペプチドを作出するために；生体試料中の核酸を検出するためのハイブリダイゼーションプローブとして；核酸の追加的なコピーを作製するために；  リボザイムもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製するために；一本鎖ＤＮＡプライマーもしくはプローブとして；または三重鎖形成オリゴヌクレオチドとして使用され得る。
【０２６８】
本発明は、本明細書に記載の抗原をコードする核酸を作出するためのプロセスであって、核酸を一部または全部において化学的手段を使用して合成するプロセスを提供する。
【０２６９】
本発明は、本明細書に記載の抗原をコードするヌクレオチド配列を含むベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）およびそのようなベクターで形質転換した宿主細胞を提供する。
【０２７０】
本発明のある特定の実施形態に関して、核酸は、好ましくは、長さが少なくとも７ヌクレオチドである（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００ヌクレオチドまたはそれより長い）。
【０２７１】
本発明のある特定の実施形態に関して、核酸は、好ましくは、長さが最大で５００ヌクレオチドである（例えば、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５ヌクレオチドまたはそれより短い）。
【０２７２】
免疫原性組成物および医薬
本発明の免疫原性組成物はワクチンとして有用であり得る。本発明によるワクチンは、予防的（すなわち、感染症を予防するためのもの）であっても治療的（すなわち、感染症を処置するためのもの）であってもよいが、一般的には予防的なものである。
【０２７３】
したがって、組成物は、薬学的に許容され得る。組成物は、通常、抗原に加えて成分を含み、例えば、組成物は、一般的には、１種または複数の薬学的担体および／または賦形剤を含む。そのような成分の徹底的な考察が参考文献１１８において利用可能である。
【０２７４】
組成物は、一般的に、哺乳動物に水性形態で投与される。しかし、投与の前に、組成物は非水性形態であってよい。例えば、いくつかのワクチンは水性形態で製造され、次いで充填および配布され、同じく水性形態で投与されるが、その他のワクチンは製造中に凍結乾燥され、使用時に水性形態に再構成される。よって、本発明の組成物は、凍結乾燥処方物のように乾燥され得る。
【０２７５】
組成物は、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールのような防腐剤を含んでよい。しかし、好ましくは、ワクチンは、水銀物質を実質的に含まない（すなわち５μｇ／ｍｌ未満）、例えばチオメルサールを含まないようにすべきである。水銀を含まないワクチンがより好ましい。防腐剤を含まないワクチンが特に好ましい。
【０２７６】
熱安定性を改善するために、組成物は、温度保護剤（ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）を含んでよい。そのような薬剤のさらなる詳細は以下に提供される。
【０２７７】
張度を制御するために、ナトリウム塩のような生理的な塩を含むことが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、例えば約１０±２ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌで存在してよい。存在し得るその他の塩は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二ナトリウム無水物（ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどを含む。
【０２７８】
組成物は、一般的に、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの質量オスモル濃度を有し、より好ましくは、２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内にある。
【０２７９】
組成物は、１または複数の緩衝液を含んでよい。典型的な緩衝液は、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液（特に水酸化アルミニウムアジュバントとともに）またはクエン酸緩衝液を含む。緩衝液は、典型的には、５〜２０ｍＭの範囲で含まれる。
【０２８０】
組成物のｐＨは、一般的に、５．０〜８．１であり、より典型的には６．０〜８．０、例えば６．５および７．５、または７．０〜７．８である。
【０２８１】
組成物は、好ましくは無菌である。組成物は、好ましくは非発熱性であり、例えば用量あたり＜１ＥＵ（内毒素単位、標準的な尺度）、好ましくは用量あたり＜０．１ＥＵを含有する。組成物は、好ましくは、グルテンを含まない。
【０２８２】
組成物は、単回の免疫化のための材料を含んでも、複数回の免疫化（すなわち「複数回用量（ｍｕｌｔｉｄｏｓｅ）」キット）のための材料を含んでもよい。複数回用量の構成（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）において、防腐剤を含むことが好ましい。複数回用量組成物に防腐剤を含める代わりに（またはそれに加えて）、組成物を、材料を取り出すための無菌アダプタを有する容器中に入れてよい。
【０２８３】
ヒトワクチンは、典型的には、約０．５ｍｌの投与体積で投与されるが、小児には半分の用量（すなわち約０．２５ｍｌ）を投与してよい。
【０２８４】
本発明の免疫原性組成物は、１種または複数の免疫調節剤も含んでよい。好ましくは、免疫調節剤のうち１種または複数は１種または複数のアジュバントを含む。アジュバントは、以下にさらに考察するＴＨ１アジュバントおよび／またはＴＨ２アジュバントを含んでよい。
【０２８５】
本発明の組成物において使用され得るアジュバントとして、これだけに限定されないが、以下が挙げられる：
・無機塩、例えば、水酸化物（例えば、オキシ水酸化物）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）および硫酸塩などを含めたアルミニウム塩およびカルシウム塩［例えば、参考文献２３の８＆９章を参照のこと］、
・水中油型エマルジョン、例えば、ＭＦ５９（マイクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方された、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０および０．５％Ｓｐａｎ  ８５）を含めたスクアレン−水エマルジョン［参考文献２３の１０章、参考文献２４〜２６、参考文献２７の１２章も参照のこと］、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、
・サポニン処方物［参考文献２３の２２章］、例えば、ＱＳ２１［２８］およびＩＳＣＯＭ［参考文献２３の２３章］、
・ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）［２９〜３５］、
・細菌または微生物誘導体、例えば、腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、脂質Ａ誘導体［３６、３７］、ＩＣ−３１（商標）［４４］（２６マーの配列５’−（ＩＣ）１３−３’（配列番号１１２）を含むデオキシヌクレオチドおよび１１マーのアミノ酸配列ＫＬＫＬＬＬＬＬＫＬＫ（配列番号１１３）を含むポリカチオンポリマーペプチド）などの免疫賦活性オリゴヌクレオチド［３８〜４３］、ならびにＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒された誘導体［４５〜５４］、
・インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［５５、５６］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子などのサイトカインを含めたヒト免疫調節物質、
・生体付着性物質および粘膜付着性物質、例えばキトサンおよびその誘導体、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア［５７］または粘膜付着性物質、例えば、ポリ（アクリル酸）の架橋された誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖およびカルボキシメチルセルロース［５８］、
・生分解性で、非毒性である材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成されるマイクロパーティクル（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径約２００ｎｍ〜約３０μｍおよび最も好ましくは、直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）、
・リポソーム［参考文献２３の１３＆１４章、参考文献５９〜６１］、
・ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル［６２］、
・ＰＣＰＰ処方物［６３および６４］、
・Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）を含めたムラミルペプチド、および
・イミクアモド（Ｉｍｉｑｕａｍｏｄ）およびその同族化合物（例えば、「レシキモド３Ｍ」）を含めたイミダゾキノロン化合物［６５および６６］。
【０２８６】
本発明の免疫原性組成物およびワクチンは、上で同定されたアジュバントのうち１種または複数の態様の組み合わせも含み得る。例えば、本発明において以下のアジュバント組成物が使用され得る：（１）サポニンおよび水中油型エマルジョン［６７］、（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［６８］、（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール、（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（場合により、＋ステロール）［６９］、（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組み合わせ［７０］、（６）より大きな粒径のエマルジョンを作製するために、サブミクロンエマルジョンにマイクロフルイダイズされたか、またはボルテックス処理された、１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０（商標）、５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ。（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、ジミコール酸トレハロース（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群から１種または複数の細菌細胞壁成分を含有するＲｉｂｉ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）および（８）１種または複数の無機塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＭＰＬなど）。
【０２８７】
免疫刺激剤として作用するその他の物質は、参考文献２３の７章に開示されている。
【０２８８】
水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が特に好ましく、抗原は、一般的に、これらの塩に吸着される。リン酸カルシウムは別の好ましいアジュバントである。その他の好ましいアジュバントの組み合わせとして、ＣｐＧ＆ミョウバンまたはレシキモド＆ミョウバンなどのＴｈ１およびＴｈ２アジュバントの組み合わせが挙げられる。リン酸アルミニウムおよび３ｄＭＰＬの組み合わせを使用してもよい（これは、肺炎球菌免疫化において有効であると報告されている［７１］）。ＭＦ５９アジュバントの使用は、特に、ＩＭ（筋肉内）免疫化またはＩＰ（腹腔内）免疫化の場合に好ましい。
【０２８９】
本発明の組成物は、細胞媒介性免疫応答ならびに体液性免疫応答の両方を惹起できる。この免疫応答により、長く続く（例えば、中和性）抗体およびＮＴＨＩに曝露されると直ちに応答することができる細胞媒介性免疫が好ましく誘導される。
【０２９０】
２つの型のＴ細胞、ＣＤ４およびＣＤ８細胞は、一般的に、細胞媒介性免疫および体液性免疫を開始および／または増進するために必要であると考えられている。ＣＤ８  Ｔ細胞は、ＣＤ８共受容体を発現でき、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）と一般に呼ばれる。ＣＤ８  Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子上に提示される抗原を認識でき、またはそれと相互作用できる。
【０２９１】
ＣＤ４  Ｔ細胞は、ＣＤ４共受容体を発現でき、Ｔヘルパー細胞と一般に呼ばれる。ＣＤ４  Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結合した抗原性ペプチドを認識できる。ＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用の際に、ＣＤ４細胞は、サイトカインのような因子を分泌できる。これらの分泌されたサイトカインは、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージおよび免疫応答に参加するその他の細胞を活性化できる。ヘルパーＴ細胞またはＣＤ４＋細胞は、２つの機能的に異なるサブセット：それらのサイトカインおよびエフェクター機能が異なるＴＨ１表現型およびＴＨ２表現型にさらに分けることができる。
【０２９２】
活性化ＴＨ１細胞は、細胞性免疫を増進し（抗原特異的ＣＴＬの生成の増加を含む）、よって、細胞内感染に対する応答において特に価値がある。活性化ＴＨ１細胞は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−βの１または複数を分泌し得る。ＴＨ１免疫応答は、マクロファージ、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞およびＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を活性化することにより局所的炎症反応をもたらし得る。ＴＨ１免疫応答は、ＢおよびＴ細胞の増殖を、ＩＬ−１２を用いて刺激することにより免疫応答を拡大するように作用することもある。ＴＨ１に刺激されたＢ細胞は、ＩｇＧ２ａを分泌し得る。
【０２９３】
活性化ＴＨ２細胞は、抗体生成を増進し、よって、細胞外感染に対する応答において価値がある。活性化ＴＨ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０の１または複数を分泌し得る。ＴＨ２免疫応答は、ＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡおよび将来の防御のためのメモリーＢ細胞の生成をもたらし得る。
【０２９４】
増強された免疫応答は、増強されたＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答の１または複数を含み得る。
【０２９５】
ＴＨ１免疫応答は、ＣＴＬの増加、ＴＨ１免疫応答と関連するサイトカインの１もしくは複数（例えばＩＬ−２、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−β）の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の上昇、またはＩｇＧ２ａの生成の増加の１または複数を含み得る。好ましくは、増強されたＴＨ１免疫応答は、ＩｇＧ２ａ生成の増加を含む。
【０２９６】
ＴＨ１免疫応答は、ＴＨ１アジュバントを用いて惹起し得る。ＴＨ１アジュバントは、一般的に、アジュバントなしの抗原での免疫化と比べて、増加したレベルのＩｇＧ２ａ生成を惹起する。本発明で用いるために適切なＴＨ１アジュバントは、例えばサポニン処方物、ビロソームおよびウイルス様粒子、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドを含んでよい。ＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチドのような免疫刺激オリゴヌクレオチドは、本発明で用いるために好ましいＴＨ１アジュバントである。
【０２９７】
ＴＨ２免疫応答は、ＴＨ２免疫応答と関連するサイトカインの１種もしくは複数（例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０）の増加、またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡおよびメモリーＢ細胞の生成の増加の１または複数を含み得る。好ましくは、増強されたＴＨ２免疫応答は、ＩｇＧ１生成の増加を含む。
【０２９８】
ＴＨ２免疫応答は、ＴＨ２アジュバントを用いて惹起し得る。ＴＨ２アジュバントは、一般的に、アジュバントなしの抗原での免疫化と比べて、増加したレベルのＩｇＧ１生成を惹起する。本発明で用いるために適切なＴＨ２アジュバントは、例えば無機質含有組成物、油性エマルジョンならびにＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒化誘導体を含む。アルミニウム塩のような無機質含有組成物は、本発明で用いるために好ましいＴＨ２アジュバントである。
【０２９９】
好ましくは、本発明は、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントとの組み合わせを含む組成物を包含する。好ましくは、このような組成物は、増強されたＴＨ１応答および増強されたＴＨ２応答を惹起し、すなわちアジュバントなしでの免疫化と比べて、ＩｇＧ１生成およびＩｇＧ２ａ生成の両方の生成の増加を惹起する。さらにより好ましくは、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントとの組み合わせを含む組成物は、単一アジュバントを用いる免疫化と比べて（すなわち、ＴＨ１アジュバントのみでの免疫化またはＴＨ２アジュバントのみでの免疫化と比べて）、ＴＨ１免疫応答の増加および／またはＴＨ２免疫応答の増加を惹起する。
【０３００】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２応答の一方または両方であってよい。好ましくは、免疫応答は、増強されたＴＨ１応答および増強されたＴＨ２応答の一方または両方をもたらす。
【０３０１】
増強された免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、増強された全身免疫応答および増強された粘膜免疫応答の一方または両方をもたらす。好ましくは、粘膜免疫応答は、ＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答は、ＩｇＡの生成の増加を含む。
【０３０２】
Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染は、身体の種々の領域を侵し得、そのため本発明の組成物は、種々の形態で調製してよい。例えば、組成物は、液体溶液または懸濁物のいずれかとしての注射剤として調製してよい。注射前に液体ビヒクルに溶解または懸濁するために適切な固体の形態も調製できる（例えば凍結乾燥組成物または噴霧凍結乾燥組成物）。組成物は、局部投与用に、例えば軟膏剤、クリームまたは散剤として調製してよい。組成物は、経口投与用に、例えば錠剤もしくはカプセル剤として、噴霧剤として、またはシロップ剤（所望により矯味矯臭して）として調製してよい。組成物は、肺投与用に、例えば微細粉末または噴霧剤を用いる吸入器として調製してよい。組成物は、坐剤または膣坐剤として調製してよい。組成物は、鼻、耳または眼の投与用に、例えば滴剤として調製してよい。組成物は、組み合わせ組成物が、患者への投与の直前に再構成されるように設計されたキットの形態であってよい。このようなキットは、液体の形態の１または複数の抗原と、凍結乾燥された１または複数の抗原とを含んでよい。
【０３０３】
組成物が使用前に即席で調製され（例えば成分が凍結乾燥された形態である場合）、かつキットとして提示される場合、キットは２つのバイアルを含んでも、１つの充填済み（ｒｅａｄｙ−ｆｉｌｌｅｄ）シリンジと１つのバイアルとを含んでもよく、シリンジの内容物は、注射前にバイアルの内容物を再活性化するために用いられる。
【０３０４】
ワクチンとして用いられる免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原（複数可）と、必要に応じて任意のその他の成分とを含む。「免疫学的有効量」により、単回用量または一連のものの一部のいずれかとしてその量を個体に投与することが、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康および身体の状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、医学的状況についての処置医師の評価、およびその他の関連する要因に依存して変動する。この量は、日常的な試験により決定できる比較的広い範囲内にあると予測される。組成物中に２種以上の抗原が含まれる場合には、２種の抗原は互いと同じ用量で存在しても異なる用量で存在してもよい。
【０３０５】
上記の通り、組成物は温度保護剤を含んでよく、この成分は、アジュバント化（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）組成物（特にアルミニウム塩などの無機アジュバントを含有するもの）において特に有用であり得る。参考文献７２に記載の通り、液体温度保護剤を水性ワクチン組成物に添加して、その凝固点を低下させること、例えば、凝固点を０℃未満まで低下させることができる。したがって、組成物を、０℃を下回るがその凝固点を上回る温度で保存して、熱による分解を阻害することができる。温度保護剤により、無機塩アジュバントを凍結および解凍後の凝塊形成または沈降から保護しながら組成物を凍結させることも可能になり、また、組成物を高温、例えば、４０℃超で保護することもできる。出発水性ワクチンおよび液体温度保護剤を、液体温度保護剤が体積で最終混合物の１〜８０％を形成するように混合することができる。適切な温度保護剤は、ヒト投与のために安全であるべきであり、水に対して易混和性／可溶性であるべきであり、組成物中のその他の成分（例えば抗原およびアジュバント）を損傷させるものではないべきである。例として、グリセリン、プロピレングリコール、および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。適切なＰＥＧの平均分子量は、２００〜２０，０００Ｄａにわたり得る。好ましい実施形態では、ポリエチレングリコールの平均分子量は約３００Ｄａであり得る（「ＰＥＧ−３００」）。
【０３０６】
本発明の組成物は、（ｉ）本発明の抗原組み合わせのうち２以上（例えば、１、２、３、４）の抗原を含む水性組成物と（ｉｉ）温度保護剤を混合することによって形成され得る。次いで、混合物は、例えば、０℃未満、０〜２０℃、２０〜３５℃、３５〜５５℃、またはそれより高い温度で保存され得る。混合物は、液体の形態でも凍結した形態でも保存され得る。混合物は凍結乾燥され得る。あるいは、組成物は、（ｉ）本発明の抗原組み合わせのうち２以上（例えば、１、２、３、４）の抗原を含む乾燥した組成物と（ｉｉ）温度保護剤を含む液体組成物を混合することによって形成され得る。したがって、成分（ｉｉ）を使用して成分（ｉ）が再構成され得る。
【０３０７】
処置方法、およびワクチンの投与
本発明はまた、有効量の本発明の組成物を投与するステップ、または本発明の少なくとも１種、または複数（例えば、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種または１０種）の抗原を投与する１つまたは複数のステップを含む、哺乳動物において免疫応答を上昇させるための方法を提供する。免疫応答は、好ましくは、防御的であり、好ましくは、抗体および／または細胞性免疫を含む。方法は、追加免疫応答を引き起こし得る。
【０３０８】
本発明はまた、例えば、哺乳動物において免疫応答を上昇させることにおいて使用するための医薬として併用するための本発明の少なくとも１種、または複数の抗原を提供する。
【０３０９】
本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を上昇させるための医薬の製造における、本発明の少なくとも１種、または複数の抗原の使用を提供する。
【０３１０】
本発明の方法および使用において、本発明の少なくとも１種、または複数（例えば、１種、２種、３種、４種）の抗原は、同時に、別々にまたは逐次的に投与され得る。
【０３１１】
これらの使用および方法により、哺乳動物において免疫応答を上昇させることによって、哺乳動物は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染に対して防御され得る。本発明は、種々の異なる血清型のＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対して有効であるが、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅｌ（ＮＴＨＩ）による感染によって生じる疾患に対する防御において特に有用であり得る。本発明によると、感染は、例えば、中耳炎（急性中耳炎を含む）、気管支炎、結膜炎、副鼻腔炎、尿路感染症、肺炎、菌血症、化膿性関節炎、喉頭蓋炎、肺炎、蓄膿症、心膜炎、蜂巣炎、骨髄炎、下気道感染症または髄膜炎から選択される疾患または状態と関連する可能性がある。本発明は、細菌がのどから耳管を介して中耳に移動し、次いで中耳においてコロニー形成することを予防する免疫応答を惹起することによって中耳の炎症を処置または予防するため、またはＣＯＰＤ疾患を処置または予防するために特に有用である。
【０３１２】
本発明はまた、第１の成分および第２の成分を含むキットであって、第１の成分も第２の成分も上記の本発明の組成物ではないが、第１の成分と第２の成分を組み合わせて上記の本発明の組成物をもたらすことができるキットを提供する。キットは、説明書、シリンジまたはその他の送達デバイス、アジュバント、または薬学的に許容される処方溶液のうち１つまたは複数を含む第３の成分をさらに含んでよい。
【０３１３】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物で予め充填された送達デバイスを提供する。
【０３１４】
哺乳動物は、好ましくは、ヒト、例えば、ヒト患者である。ワクチンが予防用使用のためのものである場合、ヒトは、好ましくは、小児（例えば、よちよち歩きの幼児（ｔｏｄｄｌｅｒ）または乳児）またはティーンエイジャーであり、ワクチンが治療用使用のためのものである場合には、ヒトは、好ましくは、ティーンエイジャーまたは成人である。小児のために意図されたワクチンはまた、例えば、安全性、投与量、免疫原性などを評価するために、成人に投与され得る。哺乳動物（例えば、ヒト、例えば、患者）は、疾患自体のリスクがあってもよく、妊婦、例えば、女性（「母体免疫化」）であってもよい。
【０３１５】
治療処置の有効性を調べる１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染をモニタリングすることを含む。予防処置の有効性を調べる１つの方法は、組成物の投与後の、本発明の組成物中の抗原に対する免疫応答を、全身的に（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ生成のレベルをモニタリングすることなど）および／または粘膜的に（ＩｇＡ生成のレベルをモニタリングすることなど）モニタリングすることを含む。本発明の組成物の免疫原性は、それらを試験被験体（例えば、１２〜１６カ月齢の小児、またはチンチラモデルなどの動物モデル［７３］）に投与し、次いで、ＩｇＧのＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含めた標準のパラメータを決定することによって決定され得る。これらの免疫応答は、一般的に、組成物の投与後およそ４週間で、組成物の投与前に決定された値と比較して決定される。組成物の２つ以上の用量を投与する場合、投与後の決定は２回以上行われ得る。通常、抗原特異的血清抗体反応は免疫化後であるがチャレンジ前に決定されるが、抗原特異的粘膜抗体反応は免疫化後かつチャレンジ後に決定される。
【０３１６】
本発明の組成物の免疫原性を評価する別の方法は、イムノブロットおよび／またはマイクロアレイによって患者血清または粘膜分泌物をスクリーニングするために組換えによってタンパク質を発現させることである。タンパク質と患者試料の間の陽性の反応は、患者が、問題のタンパク質に対する免疫応答を開始したことを示す。この方法はまた、免疫優性抗原および／または抗原内のエピトープを同定するために用いてもよい。
【０３１７】
ワクチン組成物の有効性はまた、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染の動物モデル、例えば、モルモット、チンチラ、またはマウスにおけるワクチン組成物を用いた免疫化試験によってｉｎ  ｖｉｖｏで決定することもできる。そのようなモデルの１つは、参考文献７４に記載されている。
【０３１８】
本発明のワクチン組成物の有効性をｉｎ  ｖｉｖｏで決定するために使用されるその他の有用な動物モデルは、参考文献７５に記載されている。
【０３１９】
本発明の組成物は、一般的に、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質腔への注射）、または粘膜、例えば、直腸、経口（例えば、錠剤、噴霧剤）、膣、局部、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）または経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、鼻腔内、眼、耳、肺またはその他の粘膜投与によって達成され得る。
【０３２０】
本発明は、全身免疫および／または粘膜免疫を惹起するため、好ましくは増強された全身免疫および／または粘膜免疫を惹起するために使用され得る。
【０３２１】
好ましくは、増強された全身免疫および／または粘膜免疫は、増強されたＴＨ１免疫応答および／またはＴＨ２免疫応答に反映される。好ましくは、増強された免疫応答は、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡの生成の増加を含む。
【０３２２】
投薬は、単回用量スケジュールによるものであっても、複数回用量スケジュールによるものであってもよい。複数回用量は、一次免疫スケジュールにおいて、および／または追加免疫スケジュールにおいて使用され得る。複数回用量スケジュールでは、種々の用量を、同一または異なる経路、例えば、非経口初回刺激（ｐｒｉｍｅ）および粘膜追加刺激（ｂｏｏｓｔ）、粘膜初回刺激および非経口追加刺激などによって与えてもよい。複数回用量は、通常、少なくとも１週間隔てて（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１０週間、約１２週間、約１６週間など）投与される。
【０３２３】
本発明に従って調製されたワクチンは、小児および成人の両方を処置するために用いてよい。したがって、ヒト患者は、１歳未満、１〜５歳、５〜１５歳、１５〜５５歳または少なくとも５５歳であってよい。ワクチンを受ける好ましい患者は、高齢者（例えば、≧５０歳、≧６０歳、好ましくは、≧６５歳）、年少者（例えば、≦５歳）、入院患者、医療従事者、軍隊および軍人、妊娠中の女性、慢性の病人または免疫不全患者である。ワクチンは、これらの群に対してのみ適しているわけではなく、より一般的には、集団において使用され得る。
【０３２４】
本発明によって作出されるワクチンは、その他のワクチンと実質的に同時に（例えば、医療専門家またはワクチン接種センターへの同一の医療相談または訪問中に）、例えば、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、結合体化Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂ型ワクチン、不活化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合体ワクチン（四価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチンなど）、呼吸器系合胞体ウイルスワクチンなどと実質的に同時に患者に投与してよい。
【０３２５】
粘膜免疫化
本発明は、粘膜免疫化のための本発明の抗原、抗原組み合わせ、および組成物を提供する。例えば、本発明は、（ｉ）本発明のポリペプチド抗原組み合わせ、および（ｉｉ）細菌性ＡＤＰ−リボシル化毒素および／またはその解毒された誘導体を含む免疫原性組成物を提供する。本発明はまた、有効量のそのような免疫原性組成物を哺乳動物に投与するステップを含む、哺乳動物において免疫応答を上昇させるための方法を提供する。組成物は、好ましくは、粘膜を介して（粘膜表面に）投与され、例えば、組成物は、鼻腔内に投与され得る。
【０３２６】
成分（ｉｉ）の毒素は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン（「ＬＴ」）に由来することができる。誘導体は、そのＡサブユニットに解毒化変異を有し得る。例えば、誘導体はＬＴ−Ｋ６３またはＬＴ−Ｒ７２であってよい。特に、誘導体はＬＴ−Ｋ６３であってよい。その他の実施形態では、誘導体はＬＴ−Ｋ６３ではない。
【０３２７】
本発明の抗原または組成物およびＬＴ−Ｋ６３アジュバントを鼻腔内投与することが好ましい。これにより、鼻咽頭、肺および血液におけるＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ細菌負荷が減少し得、感染した哺乳動物の生存率が上昇し得る。
【０３２８】
本発明の組成物のさらなる抗原性成分
本発明はまた、少なくとも１種のさらなる分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ抗原をさらに含む組成物を提供する。
【０３２９】
本発明はまた、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ抗原ではない少なくとも１種の抗原をさらに含む組成物を提供する。
【０３３０】
具体的には、本発明はまた、本発明の１種または複数のポリペプチドおよび以下のさらなる抗原の１種または複数を含む組成物を提供する：
−Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来の抗原
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の糖類またはポリペプチド抗原［例えば、７６、７７、７８］
−不活化ウイルスなどのＡ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、７９、８０］
−表面抗原および／またはコア抗原などのＢ型肝炎ウイルス由来の抗原［例えば、８０、８１］
−ジフテリア抗原、例えば、ジフテリアトキソイド［例えば、参考文献８２の３章］またはＣＲＭ１９７変異体［例えば、８３］
−破傷風トキソイドなどの破傷風抗原［例えば、参考文献８２の４章］
−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原、例えば、必要に応じてパータクチンおよび／または凝集原２および３とも組み合わせた、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）［例えば、参考文献８４＆８５］
−全細胞百日咳抗原
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ由来の糖類抗原［例えば、８６］
−ＩＰＶなどのポリオ抗原（複数可）［例えば、８７、８８］
−麻疹、流行性耳下腺炎および／または風疹抗原［例えば、参考文献８２の９章、１０章＆１１章］
−赤血球凝集素および／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質などのインフルエンザ抗原（複数可）［例えば、参考文献８２の１９章］
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原［例えば、８９］
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）由来のタンパク質抗原［例えば、９０、９１］
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）由来の糖類抗原
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）由来の抗原［例えば、９１、９２、９３］
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の抗原［例えば、９４］
−呼吸器系合胞体ウイルス由来の抗原、例えば、組換えタンパク質Ｆ［例えば、１４２］
−ジフテリア（Ｄ）、破傷風（Ｔ）、百日咳（無細胞、成分）（Ｐａ）、Ｂ型肝炎（ｒＤＮＡ）（ＨＢＶ）、灰白髄炎（不活化）（ＩＰＶ）およびＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂ型（Ｈｉｂ）結合体ワクチン（吸着）を含むワクチン組成物、例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ。
【０３３１】
組成物は、これらのさらなる抗原のうち１種または複数を含んでよい。ＲＳＶワクチンとの組み合わせおよび／またはＤＴＰａ含有ワクチンとの組み合わせが特に興味深い。
【０３３２】
毒性タンパク質抗原は、必要な場合には解毒され得る（例えば、百日咳毒素の化学的手段および／または遺伝学的手段による解毒［８５］）。
【０３３３】
ジフテリア抗原が組成物に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原も含まれることが好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリアおよび百日咳抗原も含まれることが好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリアおよび破傷風抗原も含まれることが好ましい。したがって、ＤＴＰの組み合わせが好ましい。
【０３３４】
糖類抗原は、好ましくは、結合体の形態である。結合体のための担体タンパク質として、ジフテリア毒素、破傷風毒素、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質［９５］、合成ペプチド［９６、９７］、熱ショックタンパク質［９８、９９］、百日咳タンパク質［１００、１０１］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［１０２］、サイトカイン［１０３］、リンフォカイン［１０３］、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓのタンパク質、ホルモン［１０３］、増殖因子［１０３］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［１０４］、鉄取り込みタンパク質（ｉｒｏｎ−ｕｐｔａｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）［１０５］などが挙げられる。好ましい担体タンパク質は、ジフテリア毒素のＣＲＭ１９７変異体である［１０６］。
【０３３５】
組成物中の抗原は、一般的には、それぞれ少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般的に、任意の所与の抗原の濃度は、その抗原に対する免疫応答を惹起するために十分なものである。
【０３３６】
本発明の免疫原性組成物にタンパク質抗原を使用することの代替として、抗原をコードする核酸（好ましくは、ＤＮＡ、例えば、プラスミドの形態で）が使用され得る。
【０３３７】
抗原は、好ましくは、アルミニウム塩に吸着される。
【０３３８】
抗体
本発明による抗原に対する抗体は、受動免疫化のために使用され得る［１０７］。したがって、本発明は、療法において使用するための、本発明の抗原に特異的な抗体を提供する。これらの抗体は、単独でまたは組み合わせて使用され得る。本発明はまた、そのような抗体を含む免疫原性かつ薬学的な組成物を提供する。
【０３３９】
抗体は、医薬品において、および療法において、例えば、ＮＴＨＩに対する受動免疫化のために、またはＮＴＨＩ感染を除去するために使用され得る。本発明はまた、医薬の製造におけるそのような抗体の使用を提供する。本発明はまた、有効量の本発明の抗体を投与するステップを含む、哺乳動物を処置するための方法を提供する。免疫原性組成物について上記の通り、これらの方法および使用により、哺乳動物がＮＴＨＩ感染に対して防御されることが可能になる。具体的には、本発明の抗体は、哺乳動物に有効量の本明細書に記載の抗体、またはそのような抗体を含む組成物を投与するステップを含む、ＮＴＨＩによる感染を処置または予防する方法において使用され得る。
【０３４０】
用語「抗体」とは、インタクトな免疫グロブリン分子（パリビズマブのような）、ならびにＮＴＨＩ抗原に結合できるその断片を包含する。これらとして、ハイブリッド（キメラ）抗体分子［１０８、１０９］；Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ａｂ）断片およびＦｖ分子；非共有結合性ヘテロ二量体［１１０、１１１］；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）［１１２］；二量体抗体断片構築物および三量体抗体断片構築物；小型抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）［１１３、１１４］；ヒト化抗体分子［１１５〜１１７］；およびそのような分子から得られる任意の機能性断片、ならびにファージディスプレイのような従来のものではないプロセスによって得られる抗体が挙げられる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は当技術分野で周知である。ヒト化抗体または完全ヒト抗体が好ましい。本発明の抗体および抗体組み合わせは、精製または単離され得る。
【０３４１】
一般
本発明の実施は、特に断りのない限り、当技術分野の技術の範囲内の化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を使用する。このような技術は、文献において完全に説明されている。例えば、参考文献１１８〜１２５などを参照のこと。
【０３４２】
本発明で「エピトープ」に関する場合、このエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／またはＴ細胞エピトープであり得る。そのようなエピトープは経験的に同定することもでき（例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ［１２６、１２７］または同様の方法を使用して）、予測することもできる（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｉｎｄｅｘ）［１２８］、マトリックスに基づく手法［１２９］、ＭＡＰＩＴＯＰＥ［１３０］、ＴＥＰＩＴＯＰＥ［１３１、１３２］、ニューラルネットワーク（ｎｅｕｒａｌ  ｎｅｔｗｏｒｋ）［１３３］、ＯｐｔｉＭｅｒ＆ＥｐｉＭｅｒ［１３４、１３５］、ＡＤＥＰＴ［１３６］、Ｔｓｉｔｅｓ［１３７］、親水性［１３８］、抗原性指数［１３９］または参考文献１４０〜１４４に開示されている方法などを使用して）。エピトープは、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位により認識され、それが結合する抗原の部分であり、「抗原決定基」とも呼ばれ得る。
【０３４３】
抗原「ドメイン」が省かれる場合、これには、シグナルペプチドの省略、細胞質ドメインの省略、膜貫通ドメインの省略、細胞外ドメインの省略などが含まれ得る。
【０３４４】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、排他的にＸからなってもよく、追加的な何かを含んでもよい、例えば、Ｘ＋Ｙであってよい。
【０３４５】
用語「約」とは、数値ｘとの関連では、任意選択であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０３４６】
２種のアミノ酸配列間の配列同一性パーセンテージへの言及は、アラインメントされた場合に、アミノ酸のそのパーセンテージが、２種の配列の比較において同じであることを意味する。このアラインメントおよび相同性または配列同一性パーセントは、当技術分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば、参考文献２２の７．７．１８節に記載のものを使用して決定できる。好ましいアラインメントは、１２のギャップオープンペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを用いるアフィンギャップ検索を使用するＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献１４５に開示されている。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
（５）ＮＴＨＩ１２９２（ＮＴ０６７）、（８）ＣＧＳＨｉＧＧ＿００１３０（ＮＴ０５２）、（１）ＮＴＨＩ０９１５（ＮＴ０１８）、（２）ＮＴＨＩ１４１６（ＮＴ０２４）、（３）ＮＴＨＩ２０１７（ＮＴ０３２）、（４）ＣＧＳＨｉＧＧ＿０２４００（ＮＴ０３８）、（６）ＮＴＨＩ０８７７（ＮＴ００１）、（７）ＮＴＨＩ０２６６（ＮＴ０１６）、（９）ＮＴＨＩ１６２７（ＮＴ００２）、（１０）ＮＴＨＩ１１０９（ＮＴ０２６）、（１１）ＮＴＨＩ０８２１（ＮＴ００９）、（１２）ＮＴＨＩ０４０９（ＮＴ０２５）、（１３）ＮＴＨＩ１９５４（ＮＴ０２８）、（１４）ＮＴＨＩ０３７１（ＮＴ０２９）、（１５）ＮＴＨＩ０５０９（ＮＴ０３１）、（１６）ＮＴＨＩ０４４９（ＮＴ０１５）、（１７）ＮＴＨＩ１４７３（ＮＴ０２３）、（１８）ｇｉ−１４５６３３１８４（ＮＴ１００）、（１９）ＮＴＨＩ１１１０（ＮＴ０４０）、（２０）ｇｉ−４６１２９０７５（ＮＴ０４８）、（２１）ｇｉ−１４５６２８２３６（ＮＴ０５３）、（２２）ＮＴＨＩ１２３０（ＮＴ０６６）、（２３）ＮＴＨＩ０５２２（ＮＴ０９７）、（５０）ＮＴ００４、（５１）ＮＴ０１４、（５２）ＮＴ０２２からなる群より選択される１種または複数の分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの単離または組換えポリペプチド抗原を含む免疫原性組成物。
（項目２）
上記ＮＴ０６７抗原が、（ａ）配列番号５または配列番号５２に対して８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／あるいは（ｂ）配列番号５または配列番号５２の少なくとも１０個の連続するアミノ酸の断片であり、かつ配列番号５または配列番号５２のエピトープを含むアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
上記ＮＴ０１６抗原が、（ａ）配列番号７または配列番号５５に対して８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／あるいは（ｂ）配列番号７または配列番号５５の少なくとも１０個の連続するアミノ酸の断片であり、かつ配列番号７または配列番号５５のエピトープを含むアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
上記ＮＴ０１４抗原が、（ａ）配列番号１２３に対して８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／あるいは（ｂ）配列番号１２３の少なくとも１０個の連続するアミノ酸の断片であり、かつ配列番号１２３のエピトープを含むアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
上記ＮＴ０２２抗原が、（ａ）配列番号１２４に対して８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列；および／あるいは（ｂ）配列番号１２４の少なくとも１０個の連続するアミノ酸の断片であり、かつ配列番号１２４のエピトープを含むアミノ酸配列を含むポリペプチドである、
項目１に記載の組成物。
（項目３）
（２４）Ｐ４８（ＮＴＨＩ０２５４、ＮＴ００７とも定義される）、（２５）ＨｔｒＡ（ＮＴＨＩ１９０５、ＮＴ００６とも定義される）、（２６）ＰＥ（ＮＴＨＩ０２６７、ＮＴ０３５とも定義される）、（２７）Ｐ２６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０１０とも定義される）、（２８）ＰＨｉＤ（ＮＴＨＩ０８１１、ＮＴ０８０とも定義される）、（２９）Ｐ６（ＮＴＨＩ０５０１、ＮＴ０８１とも定義される）からなる群より選択される少なくとも１種のポリペプチドをさらに含む、項目１に記載の免疫原性組成物。
（項目４）
（３０）ＮＴ０１３、（３１）ＮＴ１０６、（３２）ＮＴ１０７、（３３）ＮＴ１０８、（３４）ＮＴ１０９、（３５）ＮＴ１１０、（３６）ＮＴ１１１、（３７）ＮＴ１１２、（３８）ＮＴ１１３、（３９）ＮＴ１１４、（４０）ＮＴ１１５、（４１）ＮＴ１１６、（４２）ＮＴ１１７、（４３）ＮＴ１１８、（４４）ＮＴ１２３、（４５）ＮＴ１２４、（４６）ＮＴ１１９、（４７）ＮＴ１２０、（４８）ＮＴ１２１、（４９）ＮＴ１２２および／または（５３）ＮＴ０６１からなる群より選択される少なくとも１種のポリペプチドをさらに含む、上記項目のいずれかに記載の免疫原性組成物。
（項目５）
２種以上の抗原の組み合わせを含む、項目１から４までに記載の免疫原性組成物。
（項目６）
上記分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの単離または組換えポリペプチド抗原の少なくとも１つが種々の病原性の分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ株の間で保存されている、項目１に記載の組成物。
（項目７）
−  Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来の抗原
−  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の糖類またはポリペプチド抗原
−  Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原
−  Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原
−  ジフテリアトキソイドなどのジフテリア抗原
−  破傷風抗原
−  Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原
−  全細胞百日咳抗原
−  Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ由来の糖類抗原
−  ポリオ抗原（複数可）
−  麻疹、流行性耳下腺炎および／または風疹抗原
−  インフルエンザ抗原（複数可）
−  Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原
−  呼吸器系合胞体ウイルス由来の抗原
−  ジフテリア（Ｄ）、破傷風（Ｔ）、百日咳（無細胞、成分）（Ｐａ）、Ｂ型肝炎（ｒＤＮＡ）（ＨＢＶ）、灰白髄炎（不活化）（ＩＰＶ）およびＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂ型（Ｈｉｂ）結合体ワクチン（吸着）を含むワクチン組成物、例えばＩｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ
のいずれかから選択される分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ抗原ではない少なくとも１種のワクチン抗原をさらに含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
１種または複数種の薬学的に許容される担体、希釈剤および／またはアジュバントをさらに含む、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
医薬において使用するための、上記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目１０）
ワクチンである、項目１から８までのいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｓｐに対する免疫化剤として使用するための、項目１から８までのいずれかに記載の組成物。
（項目１２）
中耳炎などの分類不能型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによって引き起こされる感染症に対する免疫化剤として使用するための、項目１から８までのいずれかに記載の組成物。
（項目１３）
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによって引き起こされる疾患に対するワクチンとして使用するための、項目１から８までのいずれかに記載の組成物。
（項目１４）
分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによる感染を予防または処置するための方法であって、上記方法は、哺乳動物に、有効量の項目１から８までのいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、または項目１から４に記載の少なくとも１種の抗原を投与する１つまたは複数のステップを含む、方法。
（項目１５）
項目１から４に記載の少なくとも１種の抗原を同時に投与するステップを含む、項目１３のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
項目１から８までのいずれかに記載の少なくとも１種の抗原が２つ以上のステップで別々に投与される、項目１３から１４までのいずれかに記載の方法。
（項目１７）
哺乳動物において免疫応答を上昇させることにおいて組み合わせて使用するための、項目１から８までのいずれかに記載の少なくとも１種の抗原。
（項目１８）
１種または複数の抗原をアジュバントと混合するステップを含む、項目１から８までのいずれかに記載の組成物を調製するためのプロセス。
（項目１９）
混合物を医薬またはワクチンとして処方するステップをさらに含み、かつ場合により、その後に処方物を医薬またはワクチンとして配布するために包装するステップをさらに含む、項目１８に記載のプロセス。
【図面の簡単な説明】
【０３４７】
【図１Ａ】図１は、ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１ｒ細胞における抗原の強力な発現が確認される小規模誘導を示す図である。（ａ）：（ＬＭＷＭ：分子量標準マーカー）。
【図１Ｂ】図１は、ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１ｒ細胞における抗原の強力な発現が確認される小規模誘導を示す図である。（ａ）：（ＬＭＷＭ：分子量標準マーカー）。
【図１Ｃ】図１は、ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１ｒ細胞における抗原の強力な発現が確認される小規模誘導を示す図である。（ａ）：（ＬＭＷＭ：分子量標準マーカー）。
【図２】図２は、ＮＴ００１、ＮＴ００７、ＮＴ０１８、ＮＴ０２４、ＮＴ０３２およびＮＴ０６７についての種々の結果を示す図である。ＮＴ０５２、ＮＴ００４、ＮＴ０１４、ＮＴ０１６またはＮＴ０２２などのその他の好ましい抗原を使用して、同様の発現結果が得られた。各パネルは、ウエスタンブロットおよびＦＡＣＳのデータを示す。ウエスタンブロットを、マウス血清を使用して実施し、レーンは、全細菌抽出物（「ＴＥ」）、ＮＴＨＩ外膜（「ＯＭＶ」）から調製した小胞、または精製された組換えタンパク質（「ＰＰ」）との反応性を示す。陰性対照としてミョウバンのみを使用して、種々の抗原組成物を用いて免疫化したマウス由来の血清を不活化細菌と一緒にインキュベートした後にＦＡＣＳ分析を行った；免疫化前の血清である陰性対照は黒塗りの領域として示されており、試料血清を用いて得られた表面発現シグナルは一本線として示されている。
【図３】図３は、本発明の抗原に対する抗血清のＮＴＨＩを死滅させる能力を検証するための血清殺菌アッセイの９６ウェルプレート上のレイアウトを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０３４８】
概要
本発明者らが実施した少なくとも８６種の異なるＮＴＨＩ株の比較分析において保存されていると同定された抗原の全てである抗原リストをクローニングし、発現させた。タンパク質を精製し、マウスを免疫化するために使用した。免疫したマウス由来の抗血清を使用し、免疫化において使用されたタンパク質の表面局在化および防御能力を検証した（表ＩＩＩおよび／または表ＩＶ）。結果は、ＮＴ０５２、ＮＴ０２４、ＮＴ０３２、ＮＴ００１、ＮＴ０６７、ＮＴ００４、ＮＴ０１４、ＮＴ０２２、ＮＴ０１６での免疫化がＮＴＨＩに対して高度に防御的であり、これらが、「第２の抗原群」と比較してさえも、細菌死滅活性ＳＢＡ（血清殺菌アッセイ）力価がより高い、または少なくともそれに匹敵することを示す。
【０３４９】
株および改変体
本発明者らは、分析された８６種のゲノム配列全てにおいて、ＮＴ０２２、ＮＴ０１６、ＮＴ０１４、ＮＴ０１８、ＮＴ０２４、ＮＴ０３２、ＮＴ０６７およびＮＴ００１をコードする遺伝子が存在しており、保存されていることを見いだした。
【０３５０】
コードされるＮＴ０１８配列は、１５種の完全なゲノムおよびＦｉｎｎｉｓｈ耳炎コレクションからの３２種の株で構成されるパネルにわたって９５〜１００％同一であった。コードされるＮＴ０２４配列は、１５種の完全なゲノムおよびＦｉｎｎｉｓｈ耳炎コレクションからの３２種の株で構成されるパネルにおいて９０〜１００％同一であった。
【０３５１】
コードされるＮＴ０３２配列は、１５種の完全なゲノムおよびＦｉｎｎｉｓｈ耳炎コレクションからの３２種の株で構成されるパネルにおいて９５〜１００％同一であった；コードされるＮＴ０６７配列は、１５種の完全なゲノムおよびＦｉｎｎｉｓｈ耳炎コレクションからの３２種の株で構成されるパネルにおいて９５〜１００％同一であった。コードされるＮＴ００１配列は、１５種の完全なゲノムおよびＦｉｎｎｉｓｈ耳炎コレクションからの３２種の株で構成されるパネルにおいて９５〜１００％同一であった。
【０３５２】
コードされるアミノ酸配列における保存が表Ｉに示されている。
【０３５３】
【表１】
0006401148.tif 000002
【０３５４】
発現させるために、「第１の抗原群」および／または「第２の抗原群」に属する抗原を、中耳炎の患者から得られた株のＦｉｎｎｉｓｈコレクションから単離された株の１つである株Ｆｉ１７６から、または株Ｒ２８４６［１４６］からクローニングした。選択され、かつ動物モデルにおいてさらに試験された抗原の大部分もまた、株、例えば、ＮＴ０１６、ＮＴ０６７、ＮＴ０２２、ＮＴ０１４の間でよく保存されていることが見いだされた。
【０３５５】
いくつかの場合には、野生型配列に変異が導入されている。ＮＴ０１８、ＮＴ０６７、ＮＴ００１、ＮＴ０１６、ＮＴ００２、ＮＴ０２６、ＮＴ００９、ＮＴ０１５、ＮＴ０２３およびＮＴ０６６についての配列表においてこれらの変異に下線が引かれている（配列番号４９、５２、５４、５５、５７〜５９、６４、６５＆６７を参照のこと）。
【０３５６】
ＮＴＨＩ組換えタンパク質のクローニングおよび発現
抗原のクローニングおよび発現は、標準の方法によって実施され得る［１２１］。
【０３５７】
ＮＴＨＩ株Ｆｉ１７６またはＲ２８４６由来の抗原についてのＯＲＦを、特異的なオリゴヌクレオチドおよび鋳型としてＮＴＨＩ染色体ＤＮＡを使用してＰＣＲ増幅した。生じたＰＣＲ産物を、クローニングベクターのＰＣＲ増幅（Ｖ−ＰＣＲ）であるＰＩＰＥ法、および挿入断片のＰＣＲ増幅（Ｉ−ＰＣＲ）からなるＰＩＰＥ法［１４７］を使用してｐＥＴ１５ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。次いで、１μｌのＶ−ＰＣＲおよび１μｌのＩ−ＰＣＲを混合し、化学的にコンピテントなＨＫ１００細胞において形質転換を行った［１４８］。Ｉ−ＰＣＲ反応は、それぞれ１μＭのフォワードプライマーおよびリバースプライマー、１×クローニングされたＰｆｕ  ＤＮＡポリメラーゼ反応緩衝液、２．５ユニットのＰｆｕ  ＴｕｒｂｏＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、２００μＭの各ｄＮＴＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびゲノムＤＮＡ鋳型５０ｎｇを含有する設定であった。反応を以下の通り行った：最初の変性を９５℃で２分行い、次いで、９５℃で３０秒、５５℃で４５秒、および６８℃で３分を２５サイクル行い、その後、最終的に４℃まで冷却した。Ｖ−ＰＣＲ反応はＩ−ＰＣＲ反応と同一であったが、６８℃のステップを１４分続け、また、ＤＮＡ鋳型としてｐＥＴ１５ｂプラスミド２ｎｇを使用した。正しい形質転換体をＰＣＲスクリーニングおよびベクター−インサート接合部のＤＮＡプラスミド配列決定によって選択した。次いで、正しいプラスミドを、選択されたＨＫ１００クローンから調製し、それを使用して、タンパク質の発現を可能にするためにＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１ｒ細胞（Ｓｉｇｍａ）を形質転換した。
【０３５８】
クローニングされたタンパク質を発現させるために、ｐＥＴ１５ｂ構築物を含有するＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１ｒクローンを、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有するＬＢ培地中、３７℃でＯＤ６００＝０．５になるまで増殖させた。次いで、１ｍＭのＩＰＴＧを添加し、同じ温度でさらに３時間増殖させることによってタンパク質の発現を誘導した。従来のタンパク質抽出およびＳＤＳ−Ｐａｇｅを実施して、タンパク質の発現を確認した。図１は、抗原の良好な発現が確認される小規模誘導を示す。
【０３５９】
タンパク質の精製
タンパク質を以下の一般的な手順によって精製した：ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１湿性バイオマスを溶解緩衝液に懸濁させ、遠心分離によって清澄化する。可溶性タンパク質（）を精製するために、溶解後の上清をＨｉｓ  Ｍｕｌｔｉｔｒａｐ  ＨＰ  ５０μｌ  ＮｉＳｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ９６ウェルプレートに適用する。不溶性のタンパク質（ＨｔｒＡ、ＰＥおよびＰ４８）については、溶解後の不溶性画分を含有するペレットを、６Ｍのグアニジン−ＨＣｌを用いて可溶化し、再度遠心分離し、上清をＨｉｓ  Ｍｕｌｔｉｔｒａｐ  ＨＰ  ５０ｍｌ  ＮｉＳｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ９６ウェルプレートに適用する。
【０３６０】
フロースルーを採取し、全てのウェルを、２０ｍＭのイミダゾールを含有する緩衝液を用いて洗浄する。次いで、２５０ｍＭのイミダゾールを用いてＨｉｓ融合タンパク質を溶出する。この手順は、真空システムを使用して実施する。精製された抗原を、本明細書に記載の免疫化スキームにおいて使用する。
【０３６１】
以下のプロトコールに従った：
１）ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｔ１ペレット（１ｇ）をＢ−ＰＥＲ（商標）（Ｐｉｅｒｃｅ）緩衝液１．５ｍｌに再懸濁させ、リゾチーム１５μｌ、ＤＮＡｓｅ７．５μｌおよび１ＭのＭｇＣｌ２３μｌを添加する
２）溶解のために３０分インキュベートする
３）４℃、２００００ｒｐｍで３０分、遠心分離する；あらゆる不溶性のタンパク質も精製するために、６Ｍのグアニジン−ＨＣｌを用いて溶解後の不溶性画分を含有するペレットを可溶化し、再度遠心分離する
４）上清を回収し濾過する（０．８μｍの孔）。
【０３６２】
５）真空システムに接続されたＨｉｓ  Ｍｕｌｔｉｔｒａｐ  ＨＰ  ５０μｌ  ＮｉＳｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ９６ウェルを使用する。
【０３６３】
緩衝液Ａ：５０ｍＭのＮａＰＰｉ、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８
緩衝液Ｂ：５０ｍＭのＮａＰＰｉ、３００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８
緩衝液Ｃ：５０ｍＭのＮａＰＰｉ、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８  。
【０３６４】
第１ステップ：プレートからエタノールを除去する
第２ステップ：４００μｌのｍｉｌｌｉＱ  Ｈ２Ｏを用いてプレートを洗浄する
第３ステップ：４００μｌの緩衝液Ａを用いてプレートを平衡化する
第４ステップ：各タンパク質について１２列のうち１つに出発材料６００μｌをローディングする。体積が大きい場合、材料の全てが十分にローディングされるまで繰り返す
フロースルーを回収する
第５ステップ：洗浄ステップ：４００μｌの緩衝液Ｃを用いて４回洗浄する。フロースルーを廃棄する
第６ステップ：溶出：２×３００μｌの緩衝液Ｂ（２つの溶出ステップ）
緩衝液の添加後、１５分吸引（ｖａｃｕｕｍ）を作動させる
全抽出物１μｌ、出発材料１μｌ、フロースルー１μｌおよび溶出体積１０μｌ（各タンパク質について）をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析する
不溶性のタンパク質については、緩衝液Ｂを１０ｍＭのトリス、５０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、８Ｍの尿素、２５０ｍＭのイミダゾール、４０％グリセロールで置き換える。
【０３６５】
ＬＡＬ試験
ＬＡＬ試験は、ｅｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）−ＰＴＳ（商標）Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙを使用してワクチン試料中の内毒素濃度を測定する試験である。
【０３６６】
試験技術
ＰＴＳでは、ＬＡＬ動力学的発色方法論を利用して、試料中の内毒素濃度に直接関連する色の強度を測定する。各カートリッジは、正確な量の認可されたＬＡＬ試薬、発色基質、および対照標準内毒素（ＣＳＥ）を含有する。カートリッジは、試験の正確度および製品の安定性を確実にするために、確固とした品質管理手順にしたがって製造されたものである。
【０３６７】
【表２】
0006401148.tif 000003
【０３６８】
マウスの免疫化および抗血清の産生
５週齢のＣＤ１マウス（各抗原について８匹）を、フロイントアジュバント（マウス当たり２００マイクロリットル）を用いるか、ミョウバン（水酸化アルミニウムアジュバント；２ｍｇ／ｍｌ）を用いる、精製タンパク質抗原１０マイクログラムを３回腹腔内注射すること（２週間ごと）によって免疫化した。３回目の注射の２週間後に血清を採取し、−２０℃で貯蔵した。対照は、フロイントアジュバントのみまたはミョウバンのみを注射した。
【０３６９】
ＦＡＣＳ分析
異なる株における選択された抗原の表面露出および発現のレベルを検査するために、ＦＡＣＳによる表面標識アッセイを実施した。ＮＴＨＩを、組換えタンパク質または陰性対照を用いて免疫化したマウスに由来する血清と一緒にインキュベートし、ＦＡＣＳによって分析した。図２に結果が示されている。図２では、免疫化前の血清である陰性対照は黒塗りの領域として示されており、試料血清を用いて得られたシグナルは一本線として示されている。抗原Ｐ４８、ＨｔｒＡ、ＰＥ、およびＰ２６のＦＡＣＳ分析の結果は、これらの抗原のそれぞれが細菌の表面上に露出しており、したがって、抗体結合に利用できることを実証する。
【０３７０】
この分析では以下の材料および方法を使用した：
材料
１．９６Ｕ底ウェルプレート
２．ブロッキングおよび洗浄緩衝液：１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含有するＰＢＳ
３．ヤギ抗マウスＩｇＧ−フルオレセインイソチオシアネートＦＩＴＣ
４．０．５％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒドを含有するＰＢＳ：アッセイ前に新鮮に４％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒドのストック溶液をＰＢＳ中に希釈して０．５％（ｖ／ｖ）にし、濾過滅菌する（０．２２μｍのフィルター）
５．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含有するＰＢＳ。この溶液を調製するために、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡをＰＢＳ中に溶解させ、各株について少なくとも１００ｍｌを作製する。この溶液を濾過滅菌し（０．２２μｍのフィルター）、使用するために新鮮に調製する
６．ＦＡＣＳｃａｎチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ）
７．ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）  。
【０３７１】
方法
１．ＮＴＨＩをＯＤλ６００ｎｍ値が０．５に達するまで増殖させ、次いで、培養物１ｍｌを１．５ｍｌの滅菌Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに移し、微量遠心機において１３０００ｇで３分遠心分離して、細菌をペレット化する。上清を廃棄し、ペレットを、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含有するＰＢＳ１ｍｌに懸濁させる。最後に、細菌懸濁液を、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含有するＰＢＳ中１／５０に希釈する
２．ブロッキング緩衝液中に希釈した（１／１００、１／２００および１／４００）血清の試料５０μｌを９６ウェルプレートに添加する。抗ＯＭＶ抗血清のような陽性対照を含める
３．細菌細胞５０μｌを各ウェルに添加し、プレートを４℃で２時間保存する
４．細胞を３５００ｇで５分遠心分離し、上清を廃棄し、ウェル当たり２００μｌの洗浄緩衝液を添加することによって細胞を洗浄する
５．ＦＩＴＣ結合体化ヤギ抗マウスＩｇの１／１００希釈物５０μｌを各ウェルに添加し、プレートを４℃で１時間保存する
６．細胞を３５００ｇで５分遠心分離し、ウェル当たり２００μｌのＰＢＳを用いてペレットを洗浄する
７．遠心分離ステップを繰り返し、細胞を固定するために、上清を廃棄し、０．５％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒドを含有するＰＢＳをウェル当たり２００μｌ添加する
８．固定された試料を個々のＦＡＣＳｃａｎチューブに移し、フローサイトメトリーによって、設備製造者の説明書に従って分析する。
【０３７２】
血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）
ＮＴＨＩの死滅を誘導することができる機能的な抗体の存在を検証するために、組換えタンパク質を用いて免疫化したマウスに由来する抗血清を血清殺菌アッセイにおいて試験した。免疫化前の血清およびアジュバントのみを注射したマウス由来の血清を陰性対照として使用した。ＮＴＨＩ（株１７６）培養物（ＢＨＩ＋ＮＡＤおよびＨａｅｍｉｎ）を３７℃で振とうしながら、ＯＤ５９５ｎｍが０．２５〜０．２７になるまでインキュベートした。細菌細胞をＤ−ＰＢＳ緩衝液中に作業希釈度１：５００００で希釈した。血清を５６℃で３０分にわたって不活化させ、次いで、９６ウェルＵ底プレート中のＤ−ＰＢＳに段階的に希釈した（図３参照）。図３に示されているプレートの列１１および１２は、細菌の増殖を評価するため、および、あらゆる非補体媒介性死滅を検出するための陰性対照を含有する。細菌および補体の供給源（ウサギ７５０４、Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）を、熱不活化された補体を受容した補体対照ウェルを除いた各ウェルに添加した。
【０３７３】
図３に示されている通り、列１〜１０のウェルは、希釈した血清２５μｌ、活性な補体１２．５μｌ、および細菌１２．５μｌを含有する。列１１のウェルは、緩衝液２５μｌ、活性な補体１２．５μｌ、および細菌１２．５μｌを含有する。列１２のウェルは、緩衝液２５μｌ、血清５μｌ、熱不活化された補体１２．５μｌ、および細菌１２．５μｌを含有する。
【０３７４】
ゼロ時間（Ｔ０）アッセイ対照１０μｌ（列１１〜１２）を寒天チョコレートプレート（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ）上で、スポットアンドチルト法（ｓｐｏｔ  ａｎｄ  ｔｉｌｔ  ｍｅｔｈｏｄ）によって平板培養した。プレートを３７℃、ＯＮでインキュベートした。アッセイマイクロタイタープレートを３７℃で１時間インキュベートした。この期間後（Ｔ６０）に、各ウェルの７μｌを寒天チョコレートプレート上でスポットとして平板培養した（各ウェルを２連で平板培養した）。コロニーの数（コロニー形成単位、ＣＦＵ）を、コロニー計数器を使用して、または手動で計数した。コロニーの数がＴ＝０の５０％未満の場合に殺菌効果が観察されたとみなした。
【０３７５】
結果の概要が以下の表ＩＩＩおよび表ＩＶにおいて提供される。
【０３７６】
【表３−１】
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【０３７７】
【表３−２】
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【０３７８】
これらの結果は、選択された抗原が、ＮＴＨＩ病原体を死滅させることにおいて高度に有効であることを示す。具体的には、ＮＴ０１８、ＮＴ００１、ＮＴ０２４、ＮＴ０３２、ＮＴ０６７、ＮＴ０１６は全て、特に強力な防御効果を示した。
【０３７９】
【表４】
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【０３８０】
これらの結果により、選択された抗原が、ミョウバンをアジュバントとして用いる免疫原性組成物に使用した場合にも、ＮＴＨＩ病原体を死滅させることにおいて高度に有効であることがさらに確認された。
【０３８１】
具体的には、ＮＴ０１６、ＮＴ０５２、ＮＴ０１８、ＮＴ００１、ＮＴ０２４、ＮＴ０３２、ＮＴ０６７、ＮＴ０１４、ＮＴ０２２の全てについて、血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）において測定された通り、特に強力な防御効果が確認された。
【０３８２】
特に好ましい抗原は、ＮＴ０６７、ＮＴ０１４、ＮＴ０１６、ＮＴ０２２であった。これらの抗原は、ｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルにおいても、参考文献７５に記載されているプロトコールに従って試験されている。
【０３８３】
ｉｎ  ｖｉｖｏワクチン有効性試験
表ＩＶに列挙されている個々の抗原は、中耳炎（ＯＭ）感染症から防御するそれらの能力について、Ｊｕｎｂｏマウス変異体およびＪｅｆｆマウス変異体［７５］などのｉｎ  ｖｉｖｏモデルを使用して試験され得る。
【０３８４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ防御実験におけるワクチン有効性を、マウス当たり１０マイクログラムの、アジュバントを用いてか、用いずに処方された精製された組換えタンパク質抗原を３回投与し（０日目、２１日目、３５日目）、その後、選択されたＮＴＨＩ病原性株を鼻腔内接種することを用いて実施する。
【０３８５】
免疫化前の血清、免疫化後の血清、およびＮＴＨＩ接種の７日後の終末血清を採取し、−８０℃で保存する。対照を、アジュバントまたは無関係の抗原を対照として用いて免疫化する。中耳水泡および鼻咽腔（ＮＰ）洗浄試料を採取し、平板培養して、ＮＴＨｉ数を決定し、次いで、水泡感染および鼻咽頭保因率、および水泡ＮＴＨｉ力価を算出した。
【０３８６】
本発明は、上では単に例として記載されており、本発明の範囲および主旨の範囲内で修飾を行うことができることが理解されよう。
【０３８７】
【表５−１】
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【０３８８】
【表５−２】
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【０３８９】
【化１】
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【０３９０】
【化２】
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【０３９１】
【化３】
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【０３９２】
【化４】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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