(57)【要約】  下記式（Ｉ）【化１】2010504932.tif 000030の多環式化合物および抗炎症剤および免疫抑制剤としてのそれらの使用を開示する。
2010504932.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2010504932.tif 000025
〔式中、
ｉ．  Ｒ１は式（ａ）
【化２】
2010504932.tif 000026
｛式中、ＺはＣＨまたはＮであり；
各Ｒ５およびＲ６は独立して、Ｈ；ハロゲン；所望によりＯＨ、Ｃ１−４アルコキシ、＝Ｎ−ＯＨもしくは＝Ｎ−ＯＣ１−４アルキルで置換されたＣ１−８アルキル；ハロ−Ｃ１−８アルキル；ＣＮ；Ｃ１−８アルコキシ；ハロ−Ｃ１−８アルコキシ；Ｃ１−８アルキルチオ；Ｒａ−ＣＯ（ここで、ＲａはＣ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１−４アルキルである）；またはフェニルであるか；または
Ｒ５およびＲ６はそれらが結合した２個の炭素原子と一体となって他の環、例えば式（ｂ）
【化３】
2010504932.tif 000027
（式中、ＺはＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨであり；
ＲａはＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；フェニル；またはフェニル−Ｃ１−４アルキルであり；そして
各ＲｂおよびＲ’ｂは独立して、Ｃ１−４アルキルである）
の基を形成する；
ただし、多くともＲ５およびＲ６の一方がＨである｝
の基であり；
Ｒ２は−Ｒ７−ＮＲ８Ｒ９｛ここで、Ｒ７は所望により置換されたＣ１−４アルキレン；Ｃ１−４アルキレン（ここで、アルキレン鎖の炭素原子の２個の結合が
【化４】
2010504932.tif 000028
を形成し、ｐは１、２または３である）であり；そして各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、所望により置換されたＣ１−８アルキル、Ｒｄ−ＣＯまたはヘテロ環式基であるか、またはＲ８およびＲ９はそれらが結合している窒素原子と一体となって所望により置換されたヘテロ環式基を形成し；そして
ＲｄはＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；フェニル；またはフェニル−Ｃ１−４アルキルである｝
であるか；または
Ｒ２は所望により置換されたヘテロ環式基であり；そして
各Ｒ３およびＲ４はＨである；
ただし、
１．  Ｒ２が−ＣＨ２−ＮＨ２であるとき、Ｒ１は２−ＣＦ３−４−ビフェニリル、３−ＣＦ３−４−トリフルオロエトキシ−フェニルまたは３−ＣＦ３−４−イソプロポキシ−フェニル以外であり；そして
２．  Ｒ２が−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ２であるとき、Ｒ１は２−ＣＦ３−４−ビフェニリル以外であるか；あるいは
ｉｉ．  Ｒ１は置換ビフェニリル、４−フェノキシ−フェニルまたは４−（フェニル−Ｃ１−４アルコキシ）−フェニル（ここで、少なくとも１個のフェニル基はモノ置換されている）；またはハロゲン、ニトリル、Ｃ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルキル−Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルキル−ハロＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルキル−Ｃ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルキル−ハロＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルキル、Ｃ２−６アルケニルオキシ、Ｃ２−６アルキニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルキル−オキシ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシおよびヘテロ環式−Ｃ１−４アルコキシから成る群から選択される１個以上の置換基で置換されたフェニルであり；
Ｒ２はＳＯ２ＮＨ２；またはＳＯ２ＮＨ−Ｒ１０−ＣＯＯＨ（ここで、Ｒ１０はＯ、ＳまたはＣ＝ＣＨ２で所望により中断されたＣ１−６アルキレンである）であり；
Ｒ３およびＲ４の一方はＨまたはＣ１−４アルキルであり；他方はＣ１−４アルキルまたはハロＣ１−４アルコキシである；
ただし、Ｒ２がＳＯ２ＮＨ２でありＲ４がエチルであるとき、Ｒ１は
ａ）  ＣＦ３および所望によりフルオロで置換されたビフェニリル；または
ｂ）  ＣＦ３およびシクロヘキシルで置換されたフェニル；
以外である〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｒ１が式（ａ）
〔式中、ＺはＣＨまたはＮであり；
各Ｒ５およびＲ６は独立して、Ｈ；ハロゲン；所望によりＯＨ、Ｃ１−４アルコキシ、＝Ｎ−ＯＨもしくは＝Ｎ−ＯＣ１−４アルキルで置換されたＣ１−８アルキル；ハロ−Ｃ１−８アルキル；ＣＮ；Ｃ１−８アルコキシ；ハロ−Ｃ１−８アルコキシ；Ｃ１−８アルキルチオ；Ｒａ−ＣＯ（ここで、ＲａはＣ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１−４アルキルである）；またはフェニルである；
ただし、多くともＲ５およびＲ６の一方はＨである〕
の基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＺがＣＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が−Ｒ７−ＮＲ８Ｒ９または炭素原子で結合したヘテロ環式環（ここで、可変部は請求項１に記載の意味を有する）である、請求項１−３の何れかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の式Ｉの化合物の製造方法であって、
下記スキーム
【化５】
2010504932.tif 000029
に従って、
ａ）  式ＩＩ（Ｒ１は請求項１に定義のとおりである）の化合物またはその官能性誘導体を、式ＩＩＩの化合物と縮合すること（経路Ａ）；または
ｂ）  式ＩＶまたはＶの化合物を式Ｉの化合物に変換すること（経路ＢまたはＣ）：
そして
遊離形または塩形で得られた式Ｉの化合物を回収すること、そして所望により、遊離形で得られた式Ｉの化合物を所望の塩形に、あるいはその逆に変換することを含んで成る、方法。
【請求項７】
医薬として使用するための、請求項１に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的塩。
【請求項８】
遊離形または薬学的に許容される塩形の請求項１に記載の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む医薬組成物。
【請求項９】
リンパ球介在性障害または疾患の予防または処置用医薬組成物の製造において使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１０】
ａ）遊離形または薬学的に許容される塩形の請求項１に記載の式Ｉの化合物である、第１薬剤、およびｂ）少なくとも１種の共薬剤を含む、医薬組合せ剤、例えばキット。
【請求項１１】
実質的に上記定義および記載の、請求項１に記載の式Ｉの化合物、医薬としてのその使用、当該化合物を含む医薬組成物、および当該化合物と共薬剤の組合せ剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多環式化合物、それらの製造方法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。
【発明の概要】
【０００２】
より具体的には、第１の局面において本発明は、式Ｉ
【化１】
2010504932.tif 000003
〔式中、
ｉ．  Ｒ１は式（ａ）
【化２】
2010504932.tif 000004
｛式中、ＺはＣＨまたはＮであり；
各Ｒ５およびＲ６は独立して、Ｈ；ハロゲン；所望によりＯＨ、Ｃ１−４アルコキシ、＝Ｎ−ＯＨもしくは＝Ｎ−ＯＣ１−４アルキルで置換されたＣ１−８アルキル；ハロ−Ｃ１−８アルキル；ＣＮ；Ｃ１−８アルコキシ；ハロ−Ｃ１−８アルコキシ；Ｃ１−８アルキルチオ；Ｒａ−ＣＯ（ここで、ＲａはＣ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１−４アルキルである）；またはフェニルであるか；または
Ｒ５およびＲ６はそれらが結合した２個の炭素原子と一体となって他の環、例えば式（ｂ）
【化３】
2010504932.tif 000005
（式中、ＺはＣＨまたはＮ、好ましくはＣＨであり；
ＲａはＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；フェニル；またはフェニル−Ｃ１−４アルキルであり；そして
各ＲｂおよびＲ’ｂは独立して、Ｃ１−４アルキルである）
の基を形成する；
ただし、多くともＲ５およびＲ６の一方がＨである｝
の基であり；
Ｒ２は−Ｒ７−ＮＲ８Ｒ９｛ここで、Ｒ７は所望により置換されたＣ１−４アルキレン；Ｃ１−４アルキレン（ここで、アルキレン鎖の炭素原子の２個の結合が
【化４】
2010504932.tif 000006
を形成し、ｐは１、２または３である）であり；そして各Ｒ８およびＲ９は独立してＨ、所望により置換されたＣ１−８アルキル、Ｒｄ−ＣＯまたはヘテロ環式基であるか、またはＲ８およびＲ９はそれらが結合している窒素原子と一体となって所望により置換されたヘテロ環式基を形成し；そして
ＲｄはＣ１−４アルキル；Ｃ３−６シクロアルキル；フェニル；またはフェニル−Ｃ１−４アルキルである｝
であるか；または
Ｒ２は所望により置換されたヘテロ環式基であり；そして
各Ｒ３およびＲ４はＨである；
ただし、
１．  Ｒ２が−ＣＨ２−ＮＨ２であるとき、Ｒ１は２−ＣＦ３−４−ビフェニリル、３−ＣＦ３−４−トリフルオロエトキシ−フェニルまたは３−ＣＦ３−４−イソプロポキシ−フェニル以外であり；そして
２．  Ｒ２が−Ｃ（ＣＨ３）２−ＮＨ２であるとき、Ｒ１は２−ＣＦ３−４−ビフェニリル以外であるか；あるいは
【０００３】
ｉｉ．  Ｒ１は置換ビフェニリル、４−フェノキシ−フェニルまたは４−（フェニル−Ｃ１−４アルコキシ）−フェニル（ここで、少なくとも１個のフェニル基はモノ置換されている）；またはハロゲン、ニトリル、Ｃ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルキル−Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルキル−ハロＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルキル−Ｃ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルキル−ハロＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルコキシ、Ｃ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルコキシ−Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルコキシ−ハロＣ１−８アルキル、Ｃ２−６アルケニルオキシ、Ｃ２−６アルキニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルキル−オキシ、フェニル−Ｃ１−４アルコキシおよびヘテロ環式−Ｃ１−４アルコキシから成る群から選択される１個以上の置換基で置換されたフェニルであり；
Ｒ２はＳＯ２ＮＨ２；またはＳＯ２ＮＨ−Ｒ１０−ＣＯＯＨ（ここで、Ｒ１０はＯ、ＳまたはＣ＝ＣＨ２で所望により中断されたＣ１−６アルキレンである）であり；
Ｒ３およびＲ４の一方はＨまたはＣ１−４アルキルであり；他方はＣ１−４アルキルまたはハロＣ１−４アルコキシである；
ただし、Ｒ２がＳＯ２ＮＨ２でありＲ４がエチルであるとき、Ｒ１は
ａ）  ＣＦ３および所望によりフルオロで置換されたビフェニリル；または
ｂ）  ＣＦ３およびシクロヘキシルで置換されたフェニル；
以外である〕
の化合物またはその塩を提供する。
【０００４】
式Ｉの化合物において、式（ａ）の基における典型的な結合点は、置換基Ｒ５またはＲ６に占有されていない何れかの位置である。好ましくは置換基Ｒ５およびＲ６はオキサジアゾール環に対してメタおよびパラ位である。
同様に、式（ｂ）の基における典型的な結合点は、基Ｚを担持する環の何れか自由な位置である。
【０００５】
ハロまたはハロゲンは、フッ素、塩素または臭素、好ましくはフッ素または塩素であり得る。基としてのまたは基の中に存在するアルキルまたはアルコキシは、直鎖または分枝鎖であり得る。Ｃ１−４アルキレンは直鎖または分枝鎖であり得る。
基または基の中の部分としてのハロ−アルキルまたはハロ−アルコキシは、１〜５個のハロゲンで置換された対応するアルキルまたはアルコキシ、例えばＣＦ３またはＣＦ３−ＣＨ２−Ｏ−であり得る。
【０００６】
ヘテロ環式基はＮ、ＳおよびＯから選択される１または２個のヘテロ原子を有し、かつ所望により置換されている５または６員飽和ヘテロ環式環であり得る。好適な例には例えば、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニルまたはモルホリノが含まれる。ヘテロ環式環が置換されているとき、環状炭素または窒素原子上に置換基が存在し得る。環状炭素上の置換基の例は、例えばＯＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシまたはヒドロキシ−Ｃ１−４アルキレンであり得る。窒素原子上の置換基の例は、Ｃ１−４アルキルであり得る。
【０００７】
Ｒ７が所望により置換されたＣ１−６アルキレンであるとき、アルキレンはＯＨ、Ｃ１−４アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−４アルキレンおよび／またはＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキレンで置換されていてもよい。
Ｒ８またはＲ９が所望により置換されたＣ１−６アルキルであるとき、置換基はＯＨまたはＣ１−４アルコキシであってよく；好ましくは置換基はアルキル鎖の末端炭素原子上に存在する。
Ｒ８およびＲ９がそれらが結合している窒素原子と一体となってヘテロ環式基を形成するとき、Ｒ８とＲ９によって形成されるヘテロ環式基が窒素原子によって結合していない限り、これは上記定義のヘテロ環式環であり得る。
【０００８】
Ｒ１が置換ビフェニリル、４−フェノキシ−フェニルまたは４−（フェニル−Ｃ１−４アルコキシ）−フェニルであるとき、一方および／または両方のフェニル基が、例えばハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルキル、ハロＣ１−８アルコキシまたはニトリルで置換、例えばモノまたはジ置換されていてもよい。好ましくはビフェニリル、４−フェノキシ−フェニルまたは４−（フェニル−Ｃ１−４アルコキシ）−フェニルの少なくとも１個のフェニル基が例えば上記のとおりに、モノ置換されている。あるいはビフェニリル、４−フェノキシ−フェニルまたは４−（フェニル−Ｃ１−４アルコキシ）−フェニルの各フェニル基が、例えば上記のとおりに、例えばハロＣ１−８アルキルで、および所望により第２のフェニル基の置換基としてハロゲン、Ｃ１−８アルキルまたはＣ１−８アルコキシ、ハロＣ１−８アルキルまたはハロＣ１−８アルコキシでモノ置換されている。
【０００９】
Ｒ１が置換フェニルであるとき、これはモノまたはジ置換されていてもよい。Ｒ１がジ置換フェニルであるとき、一方の置換基は好ましくはハロＣ１−８アルキルまたはハロＣ１−８アルコキシであってよく、そして第２の置換基は上記のとおりであり得る。
【００１０】
式Ｉの化合物について、下記意味が独立して、集合的に、またはいずれかの組合せもしくはサブコンビネーションにおいて好ましい：
（ｉ）      Ｒ１が式（ａ）の基である；
（ｉｉ）    ＺがＣＨである；
（ｉｉｉ）  Ｒ２が炭素原子で結合した−Ｒ７−ＮＲ８Ｒ９またはヘテロ環式環、ここで可変部は上記の意味を有する；
（ｉｖ）    Ｒ３がＨである；
（ｖ）      Ｒ５およびＲ６が他の環を形成せず、そして独立してＨ；ハロゲン；ＯＨまたはＣ１−４アルコキシで所望により置換されたＣ１−８アルキル；ハロ−Ｃ１−８アルキル；ＣＮ；Ｃ１−８アルコキシ；ハロ−Ｃ１−８アルコキシ；およびフェニルから選択される；ただし、少なくともＲ５またはＲ６の一方がＨでない；
（ｖｉ）    Ｒ５およびＲ６がＨ以外である；
（ｖｉｉ）  Ｒ５およびＲ６が同時にいずれもＣ１−８アルコキシではない；
（ｖｉｉｉ）  Ｒ１が式（ａ）の基であり、そしてＲ２が炭素原子で結合したヘテロ環式環である。
【００１１】
式Ｉの化合物は遊離形または塩形、例えば有機酸もしくは無機酸、例えば塩酸もしくは酢酸との酸付加塩形で存在していてもよい。
式Ｉの化合物が光学異性体、ラセミ体またはジアステレオマーの形態で存在していてもよいことが理解される。例えば、Ｒ７が分枝鎖アルキレンまたは置換アルキレンであるとき、Ｒ７は不斉炭素原子を含み得る。本発明は全てのエナンチオマーおよび配座異性体およびそれらの混合物を包含することが理解される。同様の考えが上記不斉炭素原子を示す出発物質との関係に適用される。
【００１２】
本発明はまた、式Ｉの化合物の製造方法であって、
ａ）  式ＩＩ（Ｒ１は上記定義のとおりである）の化合物またはその官能性誘導体を、式ＩＩＩの化合物と縮合すること（経路Ａ）；または
ｂ）  式ＩＶまたはＶの化合物を式Ｉの化合物に変換すること（経路ＢまたはＣ）：
そして
遊離形または塩形で得られた式Ｉの化合物を回収すること、そして所望により、遊離形で得られた式Ｉの化合物を所望の塩形に、あるいはその逆に変換することを含んで成る、方法を含む。
スキーム１
【化５】
2010504932.tif 000007
【００１３】
全ての反応を、溶媒、例えばメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、トルエン、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、Ｎ−メチルピロリドン、キシレン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ヘキサン、シクロヘキサン、ジメチルホルムアミド、アセトン、ジメチルスルホキシド、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル中で行うことができる。全ての化合物を、当業者に既知の方法（例えば結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ）を用いて単離することができる。
【００１４】
経路Ａに従って、式ＩＩの化合物を式ＩＩＩのＮ−ヒドロキシアミジンと、カップリング剤、例えばＥＤＣまたはＨＯＢｔの存在下、そして好適な塩基（例えば、３級アミン、例えばＥｔ３ＮまたはＨｕｅｎｉｇ塩基）の存在下または非存在下、好適な溶媒（例えばジオキサン、ＴＨＦ、トルエン、ＤＭＦ、アセトニトリル）中で縮合することができる。式ＩＩの酸の官能性誘導体は例えば、酸クロライドまたは活性化エステルであり得る。式ＩＩの酸は縮合の前に対応する酸クロライドとして、または活性化エステル（例えばスクシンイミドエステル）として活性化されてもよい（スキーム２参照）。
スキーム２：
【化６】
2010504932.tif 000008
【００１５】
経路Ｂに従って、カルボキシル官能基またはアミン官能基の脱保護によって、式ＩＶ−ａ，ｂの化合物をそれぞれ式Ｉ−ａ，ｂの化合物に変換する。カルボン酸（例えばエステル）およびアミンの標準的な保護基を用いる（例えばカルバメート）。経路Ｂを用いて、当業者に既知の方法を用いて式ＩＶ−ｃの化合物の窒素原子をアルキル化またはアシル化して、式ＩＶａからＩ−ｃの化合物を得る（スキーム３参照）。
スキーム３：
【化７】
2010504932.tif 000009
【００１６】
経路Ｃに従って、ＹがＯＨである式Ｖの化合物を標準的な条件を用いて（例えば、Ｋ２ＣＯ３、ＣｓＣＯ３またはＮａＯＨのような塩基、および溶媒、例えばＴＨＦ、エタノール、アセトニトリル、アセトン、および適当な求電子アルキル化剤を用いて）アルキル化して、あるいはＹがＦである式Ｖの化合物を標準的な条件を用いて（例えばＫ２ＣＯ３、ＣｓＣＯ３またはＮａＨの様な塩基、および溶媒、例えばＴＨＦ、アセトニトリル、ＤＭＦおよび適当なアルコールを用いて）フッ素を置換して、式Ｖの化合物をＲ６がＣ１−４アルコキシである式Ｉの化合物に変換することができる（スキーム４参照）。
スキーム４：
【化８】
2010504932.tif 000010
【００１７】
出発物質として用いる式ＩＩの化合物を、下記のとおりに製造することができる：
式ＶＩ−ａ，ｂの化合物が商業的に入手可能ではないか、または文献に記載されていないとき、これは２種の経路に従って合成することができる。式ＶＩ−ａのビアリールカルボン酸は、Ｐｄ触媒鈴木条件を用いて、４−クロロ安息香酸および対応するアリールボロン酸から得ることができる（スキーム５参照）。式ＶＩ−ｂの４−アルコキシ安息香酸は、（Ｙ＝Ｆのとき）標準的な条件を用いて（例えば、Ｋ２ＣＯ３、ＣｓＣＯ３またはＮａＨのような塩基、およびＴＨＦ、アセトニトリル、ＤＭＦおよび適当なアルコールのような溶媒を用いて）Ｆを置換することにより、あるいは（Ｙがヒドロキシ基であるとき）標準的な条件を用いて（例えば、Ｋ２ＣＯ３、ＣｓＣＯ３またはＮａＯＨのような塩基、およびＴＨＦ、エタノール、アセトニトリル、アセトンのような溶媒、および適当な求電子試薬を用いて）アルキル化することにより、得ることができる（スキーム５参照）。
スキーム５：
【化９】
2010504932.tif 000011
【００１８】
出発物質を用いて式ＩＩＩの化合物を下記のとおりに製造することができる：
式ＩＩＩの化合物が商業的に入手可能ではないか、または文献に記載されていないとき、これは対応するニトリルから、好適な溶媒、例えば水、エタノール、ＴＨＦ、ジクロロメタン中でのヒドロキシルアミンとの縮合によって製造することができる（スキーム６参照）。
スキーム６：
【化１０】
2010504932.tif 000012
【００１９】
出発物質の製造が具体的に記載されていないとき、当該化合物は既知であるか、または当業者に既知であるかもしくは後記方法と同様に製造することができる。
【００２０】
下記実施例は本発明の説明であり、如何なる限定でもない。
溶液の濃縮を減圧下ロータリーエバポレーターで行う。常套のフラッシュクロマトグラフィーをシリカゲルで行う。フラッシュクロマトグラフィーはまた、Biotage Flash Chromatography装置またはFlashmaster 装置を用いて行う。
【００２１】
さらなる局面において、本発明は、請求項および／または実施例に個別に、集合的にまたはいずれかの選択および／またはそれらの組合せにおいて開示および説明しているあらゆる局面に関する。
【００２２】
本明細書において使用されている典型的な略語は以下のとおりである：
ＴＢＭＥ  ＝    ｔｅｒｔ．−ブチルメチルエーテル
ＢＯＣ  ＝      ｔｅｒｔ．−ブチルオキシカルボニル
Ｂｏｃ２Ｏ  ＝    ｔｅｒｔ．−ブチルオキシカルボニル無水物
ＤＭＦ  ＝      ジメチルホルムアミド
ＬｉＯＨ  ＝    水酸化リチウム
ＨＣｌ  ＝      塩酸
ＴＨＦ  ＝      テトラヒドロフラン
ＣＨ２Ｃｌ２  ＝  ジクロロメタン
ＲＴ  ＝        室温
ＮａＯＨ  ＝    水酸化ナトリウム
ＨＰＬＣ  ＝    高速液体クロマトグラフィー
ＨＯＢｔ  ＝    ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＥＤＣ．ＨＣｌ  ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロライド
ＭＳ  ＝        質量スペクトル
ＥＳ  ＝        電子スプレー
ｍ／ｚ  ＝      電荷数に対する質量
【実施例】
【００２３】
実施例１：２−トリフルオロメトキシ−４−［５−（２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンゼンスルホンアミド
ａ）２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−カルボン酸
４−クロロ−３−トリフルオロメチル安息香酸（１５ｇ、６７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６００ｍｌ）溶液に、不活性雰囲気下でフェニルボロン酸（１４．７ｇ、１２０ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルホスフィノ−２，４，６−トリイソプロピルビフェニル（３．１８ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）、ＫＦ（１１．６５ｇ、０．２ｍｏｌ）および最後にＰｄ（ＯＡｃ）２（０．７５ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を還流下で１時間撹拌する。反応混合物を冷却し、濃縮乾固させる。フラッシュクロマトグラフィーを用いて濾過して、表題化合物を得る。
m/z = 265 (M-H)-
【００２４】
ｂ）４−ブロモ−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホンアミド
ＮＨ４ＯＨ（水中２５％）（３ｍｌ、４４ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍｌ）溶液に、不活性雰囲気下で４−ブロモ−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホニルクロライド（３ｇ、８．８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で３時間撹拌する。反応混合物を濃縮乾固して、残渣を乾燥させ、ジエチルエーテル／シクロヘキサンから再結晶化する。
m/z = 320 (M-H)-
【００２５】
ｃ）４−シアノ−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホンアミド
密封チューブ中の４−ブロモ−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホンアミド（２ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリドン（８ｍｌ）溶液およびＣｕＣＮ（２ｇ、２２ｍｍｏｌ）を撹拌し、マイクロウェーブ条件下、１７０℃で９０分間加熱する。冷却後、反応混合物を水に注ぎ、塩化メチレンで抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮し、乾燥させて、シクロヘキサン／酢酸エチル  ２／１→１／１を移動相として用いてシリカゲルで精製する。
m/z = 267(M+H)+
【００２６】
ｄ）Ｎ−ヒドロキシ−４−スルファモイル−３−トリフルオロメトキシ−ベンズアミジン
４−シアノ−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホンアミド（１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍｌ）溶液に、５０％ヒドロキシルアミン水溶液（２．５ｍｌ、３７．５ｍｍｏｌ）を５℃で加える。反応混合物を室温で１６時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＴＨＦを真空下で除去する。得られたスラリーを酢酸エチルで抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮する。残渣をジエチルエーテルで処理して表題化合物を白色沈殿として得る。
m/z = 300 (M+H)+
【００２７】
ｅ）２−トリフルオロメトキシ−４−［５−（２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンゼン−スルホンアミド（実施例１）
２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−カルボン酸（１０６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５ｍｌ）溶液にＥＤＣ．ＨＣｌ（１５７ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（８２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。次にＮ−ヒドロキシ−４−スルファモイル−３−トリフルオロメトキシ−ベンズアミジン（１２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、３０分間室温で撹拌した後、一晩９５℃で撹拌する。反応混合物を濃縮乾固して、塩化メチレンに溶解させ、１Ｎ  ＨＣｌ、次に飽和ＮａＨＣＯ３溶液で抽出し、そしてフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、純粋な表題化合物を得る。
m/z = 528 (M-H)-
【００２８】
実施例６：４−｛４−［５−（２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−モルホリン
これは実施例１の方法に従って、４−シアノ−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホンアミドを４−モルホリン−４−イルメチル−ベンゾニトリルで置き換えて合成する。
m/z = 465.8 (M+H)+.
【００２９】
実施例１または６に記載の方法に従って、そして経路ＡまたはＢに記載の方法を用いて、そして適当な出発物質を用いて、式Ｘ１
【化１１】
2010504932.tif 000013
〔式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は下記表１に定義のとおりである〕
の化合物を得る。
【表１】
2010504932.tif 000014
【００３０】
実施例７：３−（２−エチル−４−｛５−［４−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−３−トリフルオロメチル−フェニル］−１，２，４］オキサジアゾール−３−イル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸
ａ）３−（４−ブロモ−２−エチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステル
４−ブロモ−２−エチル−ベンゼンスルホニルクロライド（４．２ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍｌ）溶液にβアラニンメチルエステルヒドロクロライド（４ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で１６時間撹拌する。反応混合物を濃縮して乾燥させ、残渣を塩化メチレンに溶解させ、１Ｎ  ＨＣｌで抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減少させ、シクロヘキサン／酢酸エチル  ２／１→１／１を移動相として用いてシリカゲルで精製する。
m/z = 351.5/353.5 (M+H)+.
【００３１】
ｂ）３−（４−シアノ−２−エチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステル
３−（４−ブロモ−２−エチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステル（１．２ｇ、３．４ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリドン（３ｍｌ）溶液およびＣｕＣＮ（１．２ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を密封チューブ中に１７０℃（マイクロウェーブ）で９０分間維持する。冷却後、反応混合物を水に注ぎ、塩化メチレンで抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減少させ、そしてシクロヘキサン／酢酸エチル  ２／１→１／１を移動相として用いてシリカゲルで精製する。
m/z = 294.9 (M-H)-.
【００３２】
ｃ）３−［２−エチル−４−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ］−プロピオン酸メチルエステル
３−（４−シアノ−２−エチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステル（０．４ｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に５０％ヒドロキシルアミン水溶液（１ｍｌ、１４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で４８時間撹拌する。反応混合物を濃縮乾固して、次に水で希釈し、そして塩化メチレンで抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減少させ、そしてシクロヘキサン／酢酸エチル  １／１→１００％酢酸エチルを移動相として用いてシリカゲルで精製する。
m/z = 329.8 (M+H)+.
【００３３】
ｄ）３−｛２−エチル−４−［５−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンゼンスルホニル−アミノ｝−プロピオン酸メチルエステル
４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−安息香酸（２１０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍｌ）溶液にＥＤＣ．ＨＣｌ（３９０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２００ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。次に３−［２−エチル−４−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）−ベンゼンスルホニルアミノ］−プロピオン酸メチルエステル（２２５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、さらに３０分間室温で撹拌し、次に一晩９５℃で撹拌する。反応混合物を濃縮して乾燥させ、そしてフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、３−（２−エチル−４−｛５−［４−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−３−トリフルオロメチル−フェニル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル｝−ベンゼンスルホニル−アミノ）−プロピオン酸メチルエステルを得る。
m/z = 501.7 (M+H)+.
【００３４】
ｅ）３−（２−エチル−４−｛５−［４−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−３−トリフルオロメチル−フェニル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル｝−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸
２，２，２−トリフルオロエタノール（１１０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）溶液にＮａＨ（鉱油中６０％）（２１ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を加える。１０分後（透明溶液）、３−｛２−エチル−４−［５−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンゼンスルホニル−アミノ｝−プロピオン酸メチルエステル（９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、そして反応混合物を室温で２時間撹拌する。溶媒を除去した後、残渣をメタノール／水  １／１（５ｍｌ）に溶解させ、ＬｉＯＨ（２０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を５０℃で１時間撹拌し、次に水で希釈し、ｐＨを〜３に調節し、そして反応物を塩化メチレンで抽出する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、そして残渣をシクロヘキサンから結晶化させるかまたは、フラッシュクロマトグラフィーで精製する。
ES - MS: m/z = 566 (M-H)-.
【００３５】
実施例１４：４−［５−（２−メチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアミン
ａ）２−メチル−ビフェニル−４−カルボン酸
４−ブロモ−３−メチル−安息香酸（２．５ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍｌ）溶液に不活性雰囲気下でフェニルボロン酸（２．９４ｇ、２３．４ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルホスフィノ−２，４，６−トリイソプロピルビフェニル（５７０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、ＫＦ（２．７ｇ、６０ｍｍｏｌ）および最後にＰｄ（ＯＡｃ）２（１３３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を還流下で１時間撹拌する。反応混合物を冷却し、濃縮して乾燥させる。フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、表題化合物を得る。
m/z = 211 (M-H)-
【００３６】
ｂ）Ｎ−Ｂｏｃ−４−アミノメチルベンゾニトリル
４−アミノエチルベンゾニトリルヒドロクロライド（１５ｇ、９４ｍｍｏｌ）のジオキサン／１Ｎ  ＮａＯＨ  １／１（４５０ｍｌ）溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（２８．８ｇ、１３２ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温、不活性雰囲気下で１６時間撹拌する。沈殿を回収し、乾燥させて、さらに精製することなくＮ−ｂｏｃ−４−アミノメチルベンゾニトリルを得る。
m/z = 233.3 (M+H)+
【００３７】
ｃ）Ｎ−Ｂｏｃ−４−アミノメチル−Ｎ−ヒドロキシ−ベンズアミジン
Ｎ−Ｂｏｃ−４−アミノエチルベンゾニトリル（１４ｇ；６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍｌ）溶液にヒドロキシルアミン水溶液（１／１；８０ｍｌ；１．８ｍｏｌ）を５℃で加える。反応混合物を室温で１６時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、真空下でＴＨＦを除去する。得られた沈殿を濾過によって回収し、乾燥させる。ジエチルエーテルから再結晶化して、純粋な表題化合物を得る。
m/z = 266.3 (M+H)+
【００３８】
ｄ）｛４−［５−（２−メチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
２−メチル−ビフェニル−４−カルボン酸（２３４ｍｇ；１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液にＥＤＣ．ＨＣｌ（３９４ｍｇ；２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２０５ｍｇ；１．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。次にＮ−Ｂｏｃ−４−アミノメチル−Ｎ−ヒドロキシ−ベンズアミジン（２６６ｍｇ；１ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、３０分間室温で撹拌し、次に一晩９５℃で撹拌する。反応混合物を濃縮して乾燥させ、そしてフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して表題化合物を得る。
m/z = 442 (M+H)+
【００３９】
ｅ）４−［５−（２−メチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンジルアミン
｛４−［５−（２−メチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンジル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１８０ｍｇ；０．４ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／Ｈ２Ｏ  ９５／５（１．８ｍｌ；１９．５ｍｍｏｌ）溶液を室温で５分間撹拌する。ジエチルエーテル（２５ｍｌ）およびジエチルエーテル中ＨＣｌ（３Ｍ；３ｍｌ）を加えた後、得られた沈殿を濾取し、乾燥させる。
m/z = 341.9 (M+H)+
【００４０】
上記実施例に記載の方法に従って、そして経路ＡまたはＢに記載の方法を用いて、そして適当な出発物質を用いて、式Ｘ２
【化１２】
2010504932.tif 000015
〔式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ２およびＲ３は下記表２に定義のとおりである〕
の化合物を得る。
【表２】
2010504932.tif 000016
【表３】
2010504932.tif 000017
【表４】
2010504932.tif 000018
【表５】
2010504932.tif 000019
【表６】
2010504932.tif 000020
【表７】
2010504932.tif 000021
【００４１】
実施例８５：４−｛５−［４−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−３−トリフルオロメチル−フェニル］−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル｝−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼンスルホンアミド
ａ）４−［５−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼン−スルホンアミド
４−［５−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼン−スルホンアミドを２−トリフルオロメトキシ−４−［５−（２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−ベンゼンスルホンアミド（実施例１）の方法に従って、２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−カルボン酸を４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−安息香酸で置き換えて合成する。
m/z = 470 (M-H)-
【００４２】
ｂ）２，２，２−トリフルオロエタノール（６３ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）溶液にＮａＨ（鉱油中６０％）（２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を１０分間撹拌し（透明溶液）、次に４−［５−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］−２−トリフルオロメトキシ−ベンゼン−スルホンアミド（１１８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、そして反応混合物を温度で１６時間撹拌する。溶媒を除去した後、シクロヘキサン／酢酸エチル  ４／１→２／１を移動相として用いたシリカゲルクロマトグラフィーの後、生成物を得る。
m/z = 550 (M-H)-
【００４３】
上記実施例に記載の方法に従って、そして経路ＡまたはＢに記載の方法を用いて、そして適当な出発物質を用いて、式Ｘ３
【化１３】
2010504932.tif 000022
〔式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は下記表３に定義のとおりである〕
の化合物を得る。
【表８】
2010504932.tif 000023
【表９】
2010504932.tif 000024
【００４４】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えばＳ１Ｐ１受容体アゴニストとして、例えばインビトロおよびインビボで示されるように、有用な薬理学的特性を示し、したがって治療に適用される。
【００４５】
Ａ．インビトロ
式Ｉの化合物は下記アッセイで測定されるとおり、各ヒトＳ１Ｐ受容体に対する結合親和性を有する：
Ａ．インビトロ：ヒトＳ１Ｐ受容体を発現するＣＨＯ細胞から製造した膜へのＧＴＰ［γ−３５Ｓ］結合を測定するＧＰＣＲ活性アッセイ
Ｓ１Ｐ１（ＥＤＧ−１）ＧＴＰ［γ−３５Ｓ］結合アッセイ：ホモジナイズした膜を、ヒトＥＤＧ−１  Ｎ−末端ｃ−ｍｙｃタグを安定的に発現するＣＨＯ細胞クローンから製造する。細胞を懸濁液中で、２個の８５０ｃｍ２ローラーボトル中で３または４日間増殖させた後、収穫する。細胞を遠心沈降し、冷ＰＢＳで１回洗浄し、≦２０ｍｌのバッファーＡ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、無ＥＤＴＡ完全プロテアーゼ阻害剤カクテル［１錠剤／２５ｍｌ］）に再懸濁する。細胞懸濁液を氷上で、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いて３００００ｒｐｍで、各１５秒の間隔で３回ホモジナイズする。ホモジネートを第１に、２０００ｒｐｍで卓上低速遠心分離機で１０分間遠心分離する。細胞濾過器を通過させた後、上清を５０，０００ｒｐｍ×ｇで２５分間、４℃で再度遠心分離する。ペレットをバッファーＢ（１５％  グリセロール、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、無ＥＤＴＡ完全プロテアーゼ阻害剤カクテル［１錠剤／１０ｍｌ］）に再懸濁する。調製物のタンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Pierce）を用いて、スタンダードとしてＢＳＡを用いて測定する。膜を等分し、−８０℃で凍結する。
【００４６】
１０ｍＭ〜０．０１ｎＭの範囲の試験化合物溶液をＤＭＳＯで製造する。Ｓ１Ｐを、陽性対照として、４％ＢＳＡ溶液で希釈する。所望の量の膜調製物を氷冷アッセイバッファー（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％無脂肪酸ＢＳＡ、５μＭ  ＧＤＰ）で希釈し、十分撹拌する。２μｌ以下の化合物を丸底９６ウェルポリスチレンアッセイプレートの各ウェルに分注し、希釈膜（３〜１０μｇ／ウェル）１００μｌを加え、熱ＧＴＰγＳの添加まで氷上に保つ。［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを１：１０００（ｖ／ｖ）に冷アッセイバッファーで希釈し、１００μｌを各ウェルに加える。反応を室温で９０分間行った後、膜をPackard Filtermate Harvesterを用いてPerkin-Elmer Unifilter（登録商標）GF/B-96フィルタープレート上に回収する。洗浄バッファー（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）で数回洗浄し、９５％  エタノールでリンスした後、フィルターを３７℃オーブンで３０分間乾燥する。ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０を加え、プレートをＴｏｐＣｏｕｎｔでのシンチレーションカウンティングのために密封する。ＥＣ５０値を、ＧＴＰ［γ−３５Ｓ］結合曲線（生データ）をGraphPad Prismの用量依存曲線フィッティングツールでフィッティングして得る。６または１２個の異なる濃度を用いて、濃度応答曲線を製造する（濃度あたり３個のデータポイントを用いる）。
【００４７】
Ｓ１Ｐ２、３、４および５ＧＴＰ［γ−３５Ｓ］結合アッセイを、Ｓ１Ｐ１  ＧＴＰ［γ−３５Ｓ］結合アッセイと同様の方法で、ｃ−末端ｃ−ｍｙｃタグ化または非タグ化受容体を安定的に発現するＣＨＯ細胞に由来する膜を用いて行う。各膜製造のために、アッセイウェル毎に加えるべき最適な膜の量を決定するための滴定実験を、Ｓ１Ｐ対照で最初に行う。
【００４８】
式Ｉの化合物を、上記アッセイに従って試験して、Ｓ１Ｐ、例えばＳ１Ｐ１受容体に対してＥＣ５０＜１μＭで結合親和性を示す。より具体的には、式Ｉの化合物はＳ１Ｐ１受容体に選択性を示す。例えば、実施例２１、４４および１０５の化合物は、上記Ｓ１Ｐ１受容体結合アッセイにおいてＥＣ５０＜１００ｎＭを有しており、例えばＳ１Ｐ３と比較してＳ１Ｐ１に対して少なくとも２０倍、そして例えば、Ｓ１Ｐ５と比較してＳ１Ｐ１に対して少なくとも２０倍選択的である。
【００４９】
Ｂ．インビトロ：ＦＬＩＰＲカルシウム流出アッセイ
式Ｉの化合物を、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ５およびＳ１Ｐ６のアゴニスト活性について、ＦＬＩＰＲカルシウム流出アッセイで試験する。簡潔に説明すると、Ｓ１Ｐ受容体を発現するＣＨＯ細胞を、５％ＦＢＳと５００μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８を含むＦ−１２Ｋ培地（ＡＴＣＣ）中で維持する。アッセイの前に、細胞を３８４黒色透明底プレートに、１０，０００細胞／ウェル／２５μｌの密度で、１％ＦＢＳを含むＦ−１２Ｋの培地に播種する。２日目に、細胞を洗浄バッファーで３回（各２５μｌ）で洗浄する。染料約２５μｌを各ウェルに加え、１時間３７℃、５％  ＣＯ２でインキュベートする。細胞を洗浄バッファーで４回（各２５μｌ）洗浄する。ＳＥＷ２８７１（Ｒｏｓｅｎらによって公開、レファレンスとして使用する）溶液２５μｌを各ウェルの細胞に加えた後、カルシウム流出をアッセイする。同じアッセイを、異なるＳ１Ｐ受容体を発現する各細胞について行う。ＦＬＩＰＲカルシウム流出における滴定を、３分間隔で記録し、Ｓ１Ｐ−１活性に対する最強ピーク高割合応答として定量する。本発明の化合物は、このアッセイにおいて１０−１２〜３．１０−５ｎＭの濃度で活性である。
【００５０】
Ｃ．インビボ：血中リンパ球減少の測定についてのスクリーニングアッセイ
循環リンパ球の測定：試験化合物をＤＭＳＯ／ＰＥＧ２００に溶解し、脱イオン水でさらに希釈する。ラット（Ｌｅｗｉｓ系、メス、６−１２週齢）に、４ｍｌ／ｋｇビークル（最大２％ＤＭＳＯ／最大２％ＰＥＧ２００／水）中試験化合物１ｍｇ／ｋｇを経口適用で投与する。ＤＭＳＯ／ＰＥＧ２００／水およびＦＴＹ７２０（０．３ｍｇ／ｋｇ）をそれぞれ陰性対照および陽性対照として含む。
【００５１】
血液を舌下静脈から、投与の２、６、２４および４８時間後に、短時間イソフルラン麻酔下で回収する。全血サンプルを血液学的分析に供する。末梢リンパ球数を自動分析機を用いて測定する。末梢血リンパ球亜集団をフルオロクローム結合特異的抗体で染色し、蛍光活性化細胞分類機（Facscalibur）を用いて分類する。２匹のラットを用いて、選択した各化合物のリンパ球減少活性について評価する。結果は、５０％の血中リンパ球減少を示すのに必要な有効用量として定義されるＥＤ５０である。式Ｉの化合物を上記アッセイに従って試験し、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＤ５０を有する。
【００５２】
したがって、式Ｉの化合物は、リンパ球相互作用によって介在される疾患または障害、例えば移植における、例えば急性もしくは慢性細胞、組織もしくは臓器の同種もしくは異種移植、または移植片機能の減少、移植片対宿主病、自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、１型または２型糖尿病、およびそれに関連する障害、脈管炎、悪性貧血、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、乾癬、グレーブス眼症、円形脱毛症および他のもの、アレルギー性疾患、例えばアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎／結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、所望により異常反応を伴う炎症性疾患、例えば炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎、内因性喘息、炎症性肺傷害、炎症性肝傷害、炎症性糸球体傷害、アテローム性動脈硬化症、骨関節炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらに、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、免疫学的に介在される傷害の皮膚症状、炎症性眼疾患、角結膜炎、心筋炎または肝炎、虚血／再灌流障害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血ショック、外傷性ショック、がん、例えば乳がん、Ｔ細胞リンパ腫またはＴ細胞白血病、ネフローゼ症候群、感染症、例えば毒ショック（例えば超抗原誘導性）、感染性ショック、成人呼吸窮迫症候群またはウイルス感染、例えばＡＩＤＳ、ウイルス性肝炎、例えばＢ型肝炎、慢性細菌感染または神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、または老年性認知症の処置および／または予防に有用である。細胞、組織または固体臓器移植の例には、例えば膵島、幹細胞、骨髄、角膜組織、神経組織、心臓、肺、心肺複合、腎臓、肝臓、腸、膵臓、気管または食道が含まれる。上記使用のために必要な用量は、当然、投与形態、処置する具体的な状態および所望の効果に依存して変化する。
【００５３】
一般的に、満足のいく結果が、約０．０３〜約５．０ｍｇ／ｋｇ体重の全身的な１日投与量で達成され得る。大型哺乳類、例えばヒトで適用される１日用量は、約０．５ｍｇ〜５００ｍｇの範囲で、簡便には、例えば１日４回までの分割用量で、または徐放形態で投与される。経口投与のための適当な単位投与形態には、約０．１〜５０ｍｇの有効成分が含まれる。
【００５４】
式Ｉの化合物をあらゆる常套の経路、とりわけ経腸、例えば経口的に、例えば錠剤またはカプセル剤の形態で；または非経腸的に、例えば注射溶液または懸濁液の形態で；局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形態で；または経鼻もしくは座薬形態で投与することができる。遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物を、常套の方法で、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合することによって製造することができる。
【００５５】
式Ｉの化合物を、例えば上記の通り、遊離形または薬学的に許容される塩形で投与することができる。かかる塩を常套の方法で製造することができ、そしてこれは遊離化合物と同程度の活性を示す。
【００５６】
上記に従って、本発明はさらに下記のものを提供する：
１．１  処置を必要とする対象におけるリンパ球介在性障害または疾患の予防または処置法であって、当該対象に有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含んでなる方法；
１．２  処置を必要とする対象における急性もしくは慢性移植片拒絶またはＴ細胞介在性炎症性もしくは自己免疫性疾患の予防または処置法であって、当該対象に有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含んでなる方法；
２．  例えば上記１．１または１．２のいずれかに記載の方法において、医薬として使用するための遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物。
３．  例えば上記１．１または１．２のいずれかに記載の方法において使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む医薬組成物。
４．  上記１．１または１．２のいずれかに記載の方法に使用する医薬の製造に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩。
【００５７】
式Ｉの化合物を、単独の有効成分として、あるいはアジュバントとして他の薬剤、例えば免疫抑制剤または免疫調節剤、例えば同種もしくは異種移植片急性もしくは慢性拒絶、または炎症性もしくは自己免疫性障害の処置または予防用の他の抗炎症剤、または化学療法剤、例えば悪性細胞抗増殖剤と共に投与することができる。例えば、式Ｉの化合物は、カルシニューリン阻害剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８、ＡＰ２３５７３、ビオリムス−７またはビオリムス−９；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えばＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１等；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキセート；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸または塩；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその免疫抑制ホモログ、アナログもしくは誘導体；ＰＫＣ阻害剤、例えばＷＯ  ０２／３８５６１またはＷＯ  ０３／８２８５９に記載のもの、例えば実施例５６または７０の化合物；ＪＡＫ３キナーゼ阻害剤、例えばＮ−ベンジル−３，４−ジヒドロキシ−ベンジリデン−シアノアセトアミド、α−シアノ−（３，４−ジヒドロキシ）−］Ｎ−ベンジルシンナモアミド（チルホスチンＡＧ４９０）、プロジギオシン２５−Ｃ（PNU156804）、［４−（４’−ヒドロキシフェニル）−アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン］（ＷＨＩ−Ｐ１３１）、［４−（３’−ブロモ−４’−ヒドロキシルフェニル）−アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン］（ＷＨＩ−Ｐ１５４）、［４−（３’，５’−ジブロモ−４’−ヒドロキシルフェニル）−アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン］ＷＨＩ−Ｐ９７、ＫＲＸ−２１１、遊離形または薬学的に許容される塩形の３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−［メチル−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−アミノ］−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル、例えばモノサイトレート（CP-690,550とも呼ばれる）またはＷＯ  ０４／０５２３５９またはＷＯ  ０５／０６６１５６に記載の化合物；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンド；他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外ドメインの少なくとも一部、例えば非ＣＴＬＡ４タンパク質配列へと結合した少なくともＣＴＬＡ４の細胞外部位またはその変異体を有する組み換え結合分子またはその変異体、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ（例えば命名ＡＴＣＣ  ６８６２９）またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えばＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１もしくは−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または化学療法剤、例えばパクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチナム、ドキソルビシンまたは５−フルオロウラシル；または抗感染剤との組合せで使用することができる。
【００５８】
式Ｉの化合物を他の免疫抑制／免疫調節剤、抗炎症剤、化学療法剤または抗感染治療との組合せで投与するとき、共投与する免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、化学療法剤または抗感染化合物の用量は、当然、使用する共薬剤のタイプ、例えばステロイドであるかカルシニューリン阻害剤であるか、使用する具体的な薬剤、処置する疾患等に依存して変化する。上記に従って、本発明は下記さらなる局面を提供する：
５．  治療上有効かつ非毒性量の式Ｉの化合物と、少なくとも１種の第２の薬剤物質、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤、例えば上記のものを、例えば同時または連続的に、共投与することを含む、上記定義の方法。
６．  ａ）遊離形または薬学的に許容される塩形の、本明細書に記載の式Ｉの化合物である第１薬剤、およびｂ）少なくとも１種の共薬剤、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、化学療法剤または抗感染剤を含む医薬組合せ剤、例えばキット。当該キットは投与のための指示書を含んでいてもよい。
【００５９】
「共投与」または「組合せ投与」などの用語は、本明細書において使用するとき、選択した治療薬剤を１人の患者に投与することを意味しており、薬剤を必ずしも同じ投与経路で、または同時に投与することのない処置レジメンを含むことを意図する。
【００６０】
「医薬組合せ剤」なる用語は、本明細書において使用するとき、１種以上の有効成分の混合または組合せによって得られる製品を意味しており、有効成分の固定された組合せ剤および固定されていない組合せ剤のいずれもを含む。「固定された組合せ剤」なる用語は、有効成分、例えば式Ｉの化合物と共薬剤が共に、同時に、１個の物または投与形で患者に投与されることを意味する。「固定されていない組合せ剤」なる用語は、有効成分、例えば式Ｉの化合物と共薬剤を、いずれも１人の患者に、別々の物として、同時に、一度にまたは逐次的に、特に時間の限定なく、かかる投与によって患者の体内で２種の化合物の治療上有効レベルが得られるように投与することを意味する。後者はまた、カクテルセラピー、例えば３種以上の有効成分の投与に適用する。
【国際調査報告】
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