(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面を有するバルーンと、
水不溶性治療剤、及びエピガロカテキンガレートとタンニン酸とからなる群から選択されるガレート含有化合物、を含む前記表面上のコーティングと、
を含み、
前記ガレート含有化合物が、体内に埋め込まれた時の前記コーティングからの前記水不溶性治療剤の放出速度を増加させるのに有効な量で存在する、医療用デバイス。
【請求項２】
前記ガレート含有化合物と前記水不溶性治療剤が、ガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比１：４０〜５００：１で存在する、請求項１に記載の医療用デバイス。
【請求項３】
前記コーティングが、前記水不溶性治療剤の放出速度を変化させる追加のポリマー担体または非ポリマー担体を含まない、請求項１又は２に記載の医療用デバイス。
【請求項４】
前記水不溶性治療剤が、前記ガレート含有化合物のマトリック内に含まれている、請求項１乃至３の何れか一項に記載の医療用デバイス。
【請求項５】
前記ガレート含有化合物がタンニン酸である、請求項１乃至４の何れか一項に記載の医療用デバイス。
【請求項６】
前記ガレート含有化合物がエピガロカテキンガレートである、請求項１乃至４の何れ一項に記載の医療用デバイス。
【請求項７】
前記ガレート含有化合物と前記水不溶性治療剤が、ガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比３０：１〜５００：１で存在する、請求項１に記載の医療用デバイス。
【請求項８】
前記水不溶性治療剤が前記ガレート含有化合物のマトリックス内に含有され、前記水不溶性治療剤がガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比３０：１〜１００：１で存在する、請求項７に記載の医療用デバイス。
【請求項９】
前記医療用デバイスが、バルーンカテーテルである、請求項１乃至８の何れか一項に記載の医療用デバイス。
【請求項１０】
前記水不溶性治療剤が、免疫抑制剤、増殖抑制剤、微小管安定剤、再狭窄抑制剤、または哺乳類ラパマイシン標的阻害剤である、請求項１乃至９の何れか一項に記載の医療用デバイス。
【請求項１１】
前記水不溶性治療剤がタキサン化合物である、請求項１０に記載の医療用デバイス。
【請求項１２】
前記タキサン化合物がパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項１１に記載の医療用デバイス。
【請求項１３】
前記水不溶性治療剤がマクロライド系免疫抑制剤である、請求項１２に記載の医療用デバイス。
【請求項１４】
前記コーティングの層が前記バルーンの表面に直接接着している、請求項１に記載の医療用デバイス。
【請求項１５】
前記タキサン化合物がパクリタキセルである、請求項１２に記載の医療用デバイス。
【請求項１６】
前記コーティングが前記水不溶性治療剤と前記ガレート含有化合物とから本質的になる、請求項１乃至１５の何れか一項に記載の医療用デバイス。
【請求項１７】
バルーンと、
タキサン剤、及びエピガロカテキンガレートとタンニン酸とからなる群から選択されるガレート含有化合物を含む組成物であって、前記ガレート含有化合物と前記タキサン剤がガレート含有化合物対タキサン剤の重量比１：４０〜５００：１で存在する組成物と、
を含む医療用デバイス。
【請求項１８】
タキサン剤がパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項１７に記載の医療用デバイス。
【請求項１９】
前記水不溶性治療剤が再狭窄抑制剤である、請求項１０に記載の医療用デバイス。
【請求項２０】
前記再狭窄抑制剤が、パクリタキセル、ドセタキセル、シロリムス、ピメクロリムス、タクロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、ノボリムス、ミオリムス、テムシロリムス、デフォロリムス、およびバイオリムスからなる群から選択される、請求項１９に記載の医療用デバイス。
【請求項２１】
前記再狭窄抑制剤がシロリムスである、請求項２０に記載の医療用デバイス。
【請求項２２】
前記再狭窄抑制剤がゾタロリムスである、請求項２０に記載の医療用デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、ガレート含有化合物のマトリックス中に可溶化された水不溶性治療剤を含む組成物およびデバイス、ならびにこのような組成物およびデバイスの製造方法および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
治療剤の局所送達は、多くの症状の治療に有用となり得る。実例として、脈管内にまたは体内組織の選択された部分に治療剤を局所送達することにより、治療剤を全身送達する必要性をなくすまたは低減することができるため、治療を必要としない身体領域に対して起こり得る治療剤の副作用を最小限に抑えることができる。
【０００３】
バルーン、カテーテルおよびステントなどの低侵襲性埋め込み型医療用デバイスは、治療剤を体内組織に送達するためのプラットフォームとなり得る。例えば、バルーンカテーテルまたはステントを使用して、治療剤を動脈または静脈などの脈管内の標的部位に直接送達することができる。
【０００４】
バルーンカテーテルを用いて治療剤を局所投与することにより有利に治療できる症状の一例には、血管狭窄部の拡張に使用される方法である経皮経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）と組み合わせた治療剤の送達がある。このような場合、治療剤をコーティングしたカテーテルバルーンを、閉塞した管腔または標的部位にＰＴＣＡ中に配置することができ、ルーンを膨張させて、血管管腔を拡張させる。治療剤を血管壁に送達するために、カテーテルバルーンを血管壁に押し当てる。バルーンを収縮させた後、カテーテルを標的部位から抜去し、それにより患者の管腔では、制限が小さくなった管腔を血液がより容易に流動することが可能となる。
【０００５】
ＰＴＣＡおよび関連する処置は管腔内の狭窄の軽減に役立つが、多くの場合、このような狭窄または閉塞は再発する可能性がある。再狭窄と称されるこれらの再発性閉鎖症は、身体が外科的処置に反応することによって起こる可能性がある。血管の再狭窄は処置後数ヶ月かけて発症することがあり、治療するために血管形成術が再度必要となることがある、または外科的バイパス手術が必要となることがある。管腔の中膜層から内膜層への平滑筋細胞（ＳＭＣ）の増殖および遊走は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の過剰な産生を引き起こし、これは再狭窄発症の主因の１つであると考えられている。組織が大きく肥厚化することにより血管の管腔が狭小化し、血管を通る血流を阻害するまたは遮断する。再狭窄を抑制する治療剤をＰＴＣＡ中にカテーテルから、またはＰＴＣＡ処置後に治療剤を放出し続けるように構成されたステントを留置することにより局所的に送達することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第８１９２４７９号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１００１６８８３７号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
送達中に耐久性があり、且つ局所治療が必要な部位に埋め込まれたときに治療剤を効果的に送達するコーティングを有する必要があるため、前述のおよび他の低侵襲性処置におけるコーティングからの治療剤の送達は複雑になり得る。さらに、多くの治療剤は水性環境中で易溶解性ではない。自然の生物環境は水性であるため、水不溶性治療剤を含有するコーティングは目的とする送達部位への移動中に十分な耐久性があるが、目的とする部位で治療剤を最適に送達することができないということが起こり得る。従って、水不溶性治療剤を治療しようとする部位に局所的に有利に送達することができる、組成物、コーティング、およびコーティングされた埋め込み型医療用デバイスが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示の一態様は、少なくとも１種のガレート含有化合物のマトリックス中に可溶化された少なくとも１種の水不溶性治療剤を含む組成物に関する。幾つかの実施形態では、ガレート含有化合物は、水性媒体に対する水不溶性治療剤の溶解度を増加させる、および／または、患者の脈管壁へのおよび組織内への水不溶性治療剤の送達を向上させる。特定の実施形態では、ガレート含有化合物と水不溶性治療剤は、ガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比１：４０〜５００：１で存在する。他の実施形態では、ガレート含有化合物は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、タンニン酸またはエピカテキンガレートである。
【０００９】
本開示の別の態様は、このような組成物を含有するコーティングを含む表面を有する、および／または組成物がデバイスの構造の少なくとも一部に組み込まれている医療用デバイスに関する。一実施形態では、コーティングは、患者の体内に埋め込まれた時のデバイスからの治療剤の放出速度を変化させる追加のポリマー担体または非ポリマー担体を含まない。
【００１０】
特定の実施形態では、埋め込み型医療用デバイスは拡張型デバイスである。他の実施形態では、デバイスは、脈管用ステント、尿管用ステント、カテーテル、バルーン、バルーンカテーテル、塞栓用デバイス、ステントグラフト、ガイドワイヤ、またはカニューレである。
【００１１】
水不溶性治療剤は、例えば、免疫抑制剤、増殖抑制剤、微小管安定剤、再狭窄抑制剤、または哺乳類ラパマイシン標的阻害剤であってもよい。特定の実施形態では、水不溶性治療剤は、タキサン化合物、例えば、パクリタキセルである。
【００１２】
本発明の別の態様は、治療有効量の水不溶性治療剤を患者の組織に局所的に送達する方法に関する。特定の実施形態では、本方法は、本発明により提供される医療用デバイスを患者の脈管壁に接触させる工程と、水不溶性治療剤を患者の組織に送達するのに十分な時間、デバイスを脈管壁と接触した状態に維持する工程とを含む。
【００１３】
本発明の別の態様は、疾患に罹患しているまたは症状のある患者を治療する方法を提供する。本方法の一実施形態は、治療有効量の水不溶性治療剤を患者の組織に送達するのに十分な時間、本発明により提供される医療用デバイスを患者の脈管に埋め込む工程を含む。本方法の別の実施形態は、水不溶性治療剤とガレート含有化合物との溶液を、医療用デバイスによりまたは医療用デバイスと共に送達する工程を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】ＥＧＣＧ濃度によるアムホテリシンの溶解度を示すグラフである。ＥＧＣＧを含む溶液に関する、溶解度に対する貯蔵温度の影響を示す。
【図１Ｂ】タンニン酸濃度によるアムホテリシンの溶解度を示すグラフである。タンニン酸を含む溶液の溶解度に対する貯蔵温度の影響を示す。
【図１Ｃ】タンニン酸濃度によるアムホテリシンの溶解度を示すグラフである。ｐＨによるアムホテリシンの溶解度の変化を示す。
【図２Ａ】２時間後および２４時間後の、ＥＧＣＧ溶液に対するクルクミンの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図２ｂ】２時間後および２４時間後の、タンニン酸溶液に対するクルクミンの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図３Ａ】様々な時間における、ＥＧＣＧ溶液に対するパクリタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図３Ｂ】様々な時間における、タンニン酸溶液に対するパクリタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図３Ｃ】様々な温度における、ＥＧＣＧ溶液に対するパクリタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図３Ｄ】様々な温度における、タンニン酸溶液に対するパクリタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図４Ａ】様々な時間における、ＥＧＣＧ溶液に対するドセタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図４Ｂ】様々な時間における、タンニン酸溶液に対するドセタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図４Ｃ】様々な温度における、ＥＧＣＧ溶液に対するドセタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図４Ｄ】様々な温度における、タンニン酸溶液に対するドセタキセルの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図５】ドセタキセルを可溶化剤であるｔｗｅｅｎ、ジブロック共重合体またはＥＧＣＧと組み合わせた場合の、単層のｍｄｃｋ細胞内へのおよびそれを透過した取り込みを示す棒グラフである。
【図６】ミセルとしてのまたは可溶化剤としてＥＧＣＧを用いた後のクルクミンに関する、単層のｃａｃｏ２細胞内へのおよびそれを透過した取り込みを示す棒グラフである。この棒グラフは、２５０μｇ／ｍｌの薬物のミセル（ジブロック重合体）溶液またはＥＧＣＧ溶液と共にインキュベートしたＣａｃｏ２細胞内でのクルクミンの頂端側から基底側への輸送（経細胞）および蓄積（細胞内）を示す。
【図７】ＥＧＣＧコーティングしたバルーンカテーテルからパクリタキセルを放出するジブロック共重合体の効果を示すグラフである。バルーンは、ＥＧＣＧ３０ｍｇとパクリタキセル３００μｇでコーティングされている。３７℃でのＰＢＳへの放出率はＨＰＬＣで測定する。
【図８】ＥＧＣＧコーティングしたバルーンカテーテルからラット大動脈へのパクリタキセルの移行を示す棒グラフである。
【図９】ＥＧＣＧコーティングしたカテーテルから大動脈へのパクリタキセルの移行に対する超音波の効果示す棒グラフである。
【図１０】ジブロック共重合体コーティングを用いた、動脈内へのパクリタキセルの移行を示す棒グラフである。
【図１１】タンニン酸コーティングしたバルーンカテーテルから動脈内へのパクリタキセルの移行を示す棒グラフである。
【図１２】ｈｕｖｅｃ細胞内へのドセタキセルの取り込みおよび超音波の効果を示す棒グラフである。
【図１３】Ｃａｃｏ２細胞内でのアムホテリシンＢの取り込みおよび移行を示す棒グラフである。
【図１４】ＰＡＭＡＭデンドリマー架橋没食子酸化合物を製造するための反応スキームを示す図である。
【図１５】タンニン酸コーティングまたはＥＧＣＧコーティングに対する薬物の溶解度を示す棒グラフである。
【図１６ａ】２時間後および２４時間後の、ＥＧＣＧ溶液に対するラパマイシンの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図１６ｂ】２時間後および２４時間後の、タンニン酸溶液に対するラパマイシンの溶解度および安定性を示すグラフである。
【図１７】ＥＧＣＧコーティングしたバルーンカテーテルから動脈壁へのラパマイシンの移行を示すグラフである。
【図１８】ｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅｓ（Ｍｅｒｉｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ）またはＰＶＡフォーム塞栓用粒子（ＰＶＡ  ｆｏａｍ  ｅｍｂｏｌｉｃ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）（Ｃｏｏｋ  Ｍｅｄｉｃａｌ）からのフィナステリドの放出を示すグラフである。
【図１９】ＰＬＧＡマイクロスフェアからのフィナステリドの放出に対するＥＧＥＣまたはタンニン酸の効果を示すグラフである。
【図２０】ＥＧＣＧによるフィナステリドの可溶化を示すグラフである。
【図２１】タンニン酸によるフィナステリドの可溶化を示すグラフである。
【図２２Ａ】薬物のｅｇｃｇ溶液またはタンニン酸溶液と共にインキュベートした後の、ブタ膀胱組織内へのドセタキセルの取り込みを示すグラフである。
【図２２Ｂ】薬物のｅｇｃｇ溶液またはタンニン酸溶液と共にインキュベートした後の、ブタ膀胱組織内へのパクリタキセルの取り込みを示すグラフである。
【図２３】メトキシポリエチレングリコールとｅｇｃｇまたはタンニン酸とからなるペースト製剤を膀胱組織の尿路上皮表面または精嚢周囲表面に塗布してインキュベートした後の、膀胱組織内へのパクリタキセルの取り込みを示すグラフである。
【図２４】トリブロック共重合体とメトキシポリエチレングリコールとの中にＥＧＣＧまたはタンニン酸を含有するペーストを精嚢周囲に塗布した後の、膀胱組織へのパクリタキセルまたはドセタキセルの取り込みを示すグラフである。
【図２５】ジブロック共重合体とメトキシポリエチレングリコールとの中にＥＧＣＧまたはタンニン酸を含有するペーストを精嚢周囲に塗布した後の、膀胱組織内へのパクリタキセルの取り込みを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の原理の理解を促進するために実施形態を参照するが、その幾つかを図面に示し、それを説明するために特定の用語を使用する。しかし、本発明の範囲はそれにより限定されるものではないことを理解されたい。本発明が関連する技術分野の当業者が通常想到し得るような、記載する実施形態中の任意の変更およびその他の修正、ならびに本明細書に記載の本発明の原理のその他の任意の応用も考えられる。
【００１６】
以下の論述では、水不溶性治療剤、ガレート含有化合物、埋め込み型医療用デバイスの構造、または他の態様の幾つかの可能な特徴または選択を開示する。開示するこのような１つまたは複数の特徴をそれぞれ、本明細書で検討する一般化された特徴と組み合わせて、開示する本発明の実施形態を構成できることを理解されたい。
【００１７】
定義
本明細書で使用する「治療効果」という用語は、ヒト患者もしくは動物患者の病理学的症状、疾患の進行、または、例えば、再狭窄などの障害に関連する生理学的状態、もしくはそれに対する抵抗性の改善をもたらす、向上させる、または他に引き起こす効果を意味する。治療剤に関して使用する「治療有効量」という用語は、ヒト患者または動物患者に治療効果を付与する治療剤の量を意味する。
【００１８】
本明細書で治療剤に使用される「水不溶性」という用語は、２５℃の水に対する溶解度が１ｍｌ当たり２ｍｇ（２ｍｇ／ｍｌ）未満の治療剤を指す。より好ましくは、水不溶性治療剤の２５℃の水に対する溶解度は１ｍｇ／ｍｌ未満、さらにより好ましくは、０．１ｍｇ／ｍｌ未満、特定の実施形態では、１ｍｌ当たり１０μｇ（１０μｇ／ｍｌ）未満である。
【００１９】
「薬学的に許容される担体」という用語には、医薬投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。このような担体または希釈剤の好ましい例としては、水、生理食塩水、ブドウ糖溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。リポソームおよび非水性溶媒、例えば、不揮発性油を使用してもよい。補助的活性化合物を組成物に組み込むこともできる。
【００２０】
「可溶化された」という用語は、水不溶性治療剤、例えば、パクリタキセルが溶媒、例えば、ガレート含有化合物のマトリックスに溶解している状態を表す。「可溶化」は、薬剤が、典型的には単分子レベルの非粒子状で存在することである。可溶化された薬剤は、液体の溶液中に、例えば、水性媒体中または有機溶媒中に存在してもよい。あるいは、可溶化された薬剤は、別の非液体物質からなる固体または半固体のマトリックス中に非粒子状で存在する。幾つかの場合、可溶化された薬剤は、水性媒体中に懸濁したナノ粒子またはミセルの中心に存在してもよい。
【００２１】
組成物
本発明の一態様は、少なくとも１種の水不溶性治療剤と少なくとも１種のガレート含有化合物とを含む組成物に関する。特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒、例えば、水または薬学的に許容される緩衝液を含む。これらの実施形態では、ガレート含有化合物が存在すると、ガレート含有化合物が存在しない場合に同じ条件下で可能となり得る濃度より高い濃度で、水不溶性治療剤が水性溶媒に溶解している水溶液が得られる。
【００２２】
別の実施形態は、少なくとも１種のガレート含有化合物のマトリックス内に可溶化された少なくとも１種の水不溶性治療剤を含む組成物に関する。「固溶体」と称されるこのような組成物は、水性溶媒を含まない。代わりに、水不溶性治療剤は、溶媒の役割を果たすガレート含有化合物のマトリックス内に分子レベルで溶解している。さらに別の実施形態は、固溶体に水性溶媒を添加することにより形成される組成物に関する。このような組成物は、水性溶媒に溶解した水不溶性治療剤だけでなく、水不溶性治療剤用のナノ粒子の形態も含有し得る。
【００２３】
幾つかの実施形態では、ガレート含有化合物は、組成物を水性媒体に適用するとき、例えば、ヒト患者または動物患者に投与するとき、水不溶性治療剤の溶解度を増加させる、および／または、患者の脈管壁に達しおよび／またはそれを透過し、組織に入る水不溶性治療剤の送達を向上させる。さらに他の実施形態では、ガレート含有化合物は水不溶性治療剤の細胞取り込みを増加させる。他の実施形態では、水性環境中で、ガレート含有化合物が溶解する時に薬物が製剤から放出されるように、薬物はガレート含有化合物の固相に部分的にまたは完全に溶解している。
【００２４】
ガレート含有化合物は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）またはタンニン酸などの化合物であってもよいが、これらに限定されるものではない。他の好ましい化合物としては、ガレート類を含有する天然および合成の化合物が挙げられる。さらに他の好ましい化合物としては、ガレート、カテキン、タンニンの化学的部分、または天然由来化合物を含む類似のポリフェノール部分と、合成的に修飾され、これらの部分に共有結合したポリマーとを含有する化合物が挙げられる。
【００２５】
他の実施形態では、ガレート含有化合物としては、タンニン類、カテキンガレート類、クエルグラニン類（ｑｕｅｒｇｌａｎｉｎｓ）、ガロイルアルブチン、テアフラビンガレートまたはジガレートガロイルベルゲニン、カメリアタンニン、テアシネンシン、プロシアニジンガレート、ガロイルシリビン（ｇａｌｌｏｙｌ  ｓｉｌｉｂｉｎ）、トリヒドロキシスチルベン−４−６−ガロイルグリコピラノシド、コルヌシドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、これらの化合物は、高レベルのＨ結合供与体部位および受容体部位、ならびにベンゼン環構造またはラクトン環構造を特徴とする。他の実施形態では、ガレート含有化合物は、ガレートのトリヒドロキシ安息香酸基を明確に含有しないがガレートと非常に類似した構造を有するＥＧＣＧまたはタンニン類に類似の分子を含む。このような化合物の例としては、マンギフェリン類、ケルセチン類、とりわけ、ケルセチン３グルコピラノシド、ケルセチングルコシド、ケルセチンガラクトシド、ケルセチンメリトリン、ヘスペリジンメチルカルコン、イソブトリン、ヒポラクチン（ｈｙｐｏｌａｃｔｉｎ）グルコシド、ルチン、ならびにプロシアナジン（ｐｒｏｃｙａｎａｄｉｎ）およびプロアントシアンジン（ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｄｉｎ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２６】
特定の実施形態では、組成物中のガレート含有化合物：水不溶性治療剤の重量比は、２００：１〜１０：１、または２００：１〜３０：１、または２００：１〜５０：１、または１００：１〜１０：１、または１００：１〜３０：１、または１００：１〜５０：１、または１：４０〜５００：１、または１：２０〜４００：１、または１：１０〜２００：１、または１：１〜２００：１、または１：４０〜２００：１、または１：２０〜２００：１、または１：１０〜５００：１の範囲である。２種以上のガレート含有化合物が存在する場合、上記範囲は、各個々のガレート含有化合物の重量対水不溶性治療剤の重量の比に、または存在するガレート含有化合物の全重量対水溶性治療剤の重量の比に適用することができる。ガレート含有化合物対水不溶性薬物の重量比は、ガレート含有化合物に水不溶性治療剤が溶解した溶液が形成されるような重量比とする。
【００２７】
他の実施形態では、組成物は、ガレート含有化合物を含まないこと以外は同一の組成物と比較して、水性媒体に対する組成物中の水不溶性治療剤の溶解度を１０パーセント、２０パーセント、３０パーセント、４０パーセント、５０パーセント  ７５パーセント、１００パーセント、１２５パーセント、１５０パーセント、２００パーセント、３００パーセントまたは４００パーセント増加させる量でガレート含有化合物を含む。
【００２８】
さらに他の実施形態では、組成物は、１０〜５０ｍｇ／ｍｌ、または２０〜５０ｍｇ／ｍｌ、または３０〜５０ｍｇ／ｍｌ、または４０〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度のガレート含有化合物、および４００μｇ／ｍｌ以上、５００μｇ／ｍｌ以上、６００μｇ／ｍｌ以上、７００μｇ／ｍｌ以上、８００μｇ／ｍｌ以上、９００μｇ／ｍｌ以上、または１０００μｇ／ｍｌ以上の濃度になるように可溶化された水不溶性治療剤、例えば、パクリタキセルまたはドセタキセルを含む。
【００２９】
本実施形態の範囲内の水不溶性治療剤としては、水不溶性の増殖抑制剤、免疫抑制剤、再狭窄抑制剤、制癌剤、鎮痛薬／解熱薬、麻酔薬、抗喘息薬、抗生物質、抗うつ薬、抗糖尿病薬、抗真菌剤、降圧剤、抗炎症薬、抗新生物薬、抗不安薬、鎮静薬／催眠薬、抗狭心症薬、硝酸薬、抗精神病薬、抗躁薬、抗不整脈薬、抗関節炎薬、抗痛風薬、血栓溶解剤、血流改善薬、抗痙攣薬、抗ヒスタミン薬、カルシウム調節に有用な薬剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗微生物剤、抗感染症薬、気管支拡張薬、ステロイド剤およびホルモン剤が挙げられる。
【００３０】
このような水不溶性治療剤の非限定例としては、ドキソルビシン、カンプトテシン、エトポシド、ミトキサントロン、シクロスポリン、エポチロン類、ナプトキノン類（ｎａｐｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅｓ）、５フルオロウラシル、メトトレキサート、コルヒチン類、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ゲムシタビン、スタチン類（例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチン）、ステロイド剤（例えば、コルチステロイド（ｃｏｒｔｉｓｔｅｒｏｉｄｓ）、プレドニジロン（ｐｒｅｄｎｉｓｉｌｏｎｅ）およびデキサメタゾン）マイトマイシン、アムホテリシン、クルクミン、およびこれらの薬剤の誘導体または類似体が挙げられる。
【００３１】
好ましい水不溶性治療剤としては、水不溶性の増殖抑制剤、免疫抑制剤、および再狭窄抑制剤が挙げられる。特定の実施形態では、脈管の内壁に適用されると脈管の再狭窄を抑制するのに有効となり得る再狭窄抑制剤となる増殖抑制剤または免疫抑制剤が使用される。これに関して、「再狭窄抑制」は、再狭窄を予防することまたはその程度を低減することを含む。拡張のため、例えば、バルーンカテーテルのバルーンを用いた拡張中に、および／またはステントの拡張により脈管壁が損傷するような処置を行った後、再狭窄の抑制が認められることがある。
【００３２】
水不溶性再狭窄抑制剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、パクリタキセル類似体、またはパクリタキセル誘導体または他のタキサン化合物などの微小管安定剤；シロリムス（ラパマイシン）、ピメクロリムス、タクロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、ノボリムス（ｎｏｖｏｌｉｍｕｓ）、ミオリムス（ｍｙｏｌｉｍｕｓ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、デフォロリムス、またはバイオリムスなどのマクロライド系免疫抑制剤；増殖抑制剤；平滑筋細胞抑制剤；哺乳類ラパマイシン標的阻害剤（ｍＴＯＲ阻害剤）；または、これらのいずれかの２種または２種以上の混合物であってもよい。本明細書に明記する各薬剤または薬剤のタイプを含む、前述のまたは他の水不溶性再狭窄抑制剤の２５℃の水に対する溶解度は、より好ましくは１ｍｇ／ｍｌ未満、さらにより好ましくは０．１ｍｇ／ｍｌ未満、特定の実施形態では１０μｇ／ｍｌ未満である。パクリタキセル、ドセタキセル、シロリムス、ピメクロリムス、タクロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、ノボリムス、ミオリムス、テムシロリムス、デフォロリムス、およびバイオリムスは、本明細書で使用するのに好ましい水不溶性再狭窄抑制剤である（それぞれ、水に対する溶解度が約１０μｇ／ｍｌ未満であることが知られている）。
【００３３】
本発明の組成物には、経口、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、ＩＣＶ、経カテーテル動脈化学塞栓療法、槽内注射または注入、皮下注射、または埋め込み）、吸入スプレー、経鼻、経膣、経直腸、舌下、または局所投与経路により投与することができ、各投与経路に適切な、従来の無毒の薬学的に許容される担体、アジュバントおよび溶媒を含有する好適な投与単位製剤として単独でまたは一緒に製剤化され得るものが含まれる。
【００３４】
本発明の別の実施形態は、１種以上のガレート含有化合物のマトリックス中に可溶化された１種以上の水不溶性治療剤を含む組成物を提供し、組成物は微粒子、例えば、ポリマー微粒子に封入されている。微粒子は生分解性微粒子であっても、または非生分解性微粒子であってもよい。このような微粒子は、前述の送達手段で患者に送達することができ、微粒子から溶出することにより、または微粒子の生分解の結果として水不溶性治療剤の送達を可能にすることができる。
【００３５】
このような微粒子の製造に使用することができる非生分解性ポリマーとしては、酢酸セルロース、硝酸セルロース、シリコーン、ポリエチレンテレフタレート、ポリウレタン、ポリアミド、ポリエステル（例えば、ナイロン（Ｎｙｌｏｎ））、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリエーテルスルホン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、高分子量ポリエチレン、およびポリテトラフルオロエチレン、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。使用することができる生分解性ポリマーとしては、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、乳酸グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシブチレートバレレート、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３６】
特定の実施形態では、水不溶性治療剤とガレート含有化合物とを含有する組成物は、他の化合物、例えば、水不溶性治療剤が高い溶解度を示す乳化剤、油、トリグリセリドマトリックス、脂質、または他の溶解補助剤もしくは担体を含まない、または「実質的に含まない」。本実施形態に適用される場合、その他の化合物が水不溶性治療剤の溶解度を１パーセントを超えて変化させない限り、組成物はこのような化合物を実質的に含まないものと見なされる。他の実施形態では、その他の化合物は、水不溶性治療剤の溶解度を１０パーセント、５パーセントまたは２パーセントより大きく変化させない。
【００３７】
医療用デバイス
本開示の他の態様は、少なくとも１種のガレート含有化合物のマトリックス内に可溶化された少なくとも１種の水不溶性治療剤を含む放出可能な成分を組み込む医療用デバイス、ならびにこのような医療用デバイスの製造方法および使用方法に関する。特定の実施形態では、医療用デバイスは、上記で開示した組成物でコーティングされているか、または他の方法でそれを含有する。
【００３８】
一実施形態では、医療用デバイスは、ヒト患者または動物患者に一時的にまたは永久に埋め込まれるようなサイズおよび形状に作られた埋め込み型医療用デバイス構造を有する種々のデバイスのいずれかであってもよい。身体通路内に埋め込み可能な構造を有する医療用デバイスが使用されることが多い。身体通路は、例えば、消化器系、尿生殖器系、胆道系、または心血管系の通路であってもよい。例えば、中を血液が移動する、ヒト患者または動物患者の心血管系の脈管または腔に埋め込み可能なものを含む、心血管系に埋め込み可能なデバイス構造を備える医療用デバイスが好ましい。通路は、例えば、動脈または静脈などの管状の通路であってもよく、または心室もしくは心房などの比較的大きい腔であってもよい。心血管通路間または他の身体通路間にまたがるまたはそれらを架け渡す構造を備える埋め込み型医療用デバイスも考えられる。埋め込み型医療用デバイスは、心血管通路または他の身体通路内に全部埋め込まれるように構成されてもまたは部分的にしか埋め込まれないように構成されてもよい。他の実施形態は、ガレート含有化合物と水不溶性薬物との溶液または懸濁液を、他の医療用デバイス、例えば、以下に限定されるものではないが、腫瘍切除器具、外科手術器械、特殊な注射デバイス、アクセスカテーテル、ロボット手術システムなどと共に使用することを包含する。
【００３９】
放出可能な成分は医療用デバイスの構造中に組み込まれてもよい、および／またはデバイスの１つ以上の表面上のコーティング中に存在してもよい。例として、医療用デバイスは、カテーテル、ワイヤガイド、ステント、コイル、針、グラフト、フィルタ、バルーン、カッティングバルーン、スコアリングバルーン、滲出（灌流）バルーン、またはこれらの任意の組み合わせであってもまたはそれらを含んでもよい。他の実施形態では、デバイスは、水不溶性薬物とガレート含有化合物とを薬物の溶液または懸濁液として局所的に放出する固形物または半固形物である。このようなデバイスとしては、フィルム状、ペースト状、微粒子状およびナノ粒子状のポリマー材料が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
本明細書の幾つかの好ましい実施形態では、埋め込み型医療用デバイスは、バルーンカテーテル、例えば、血管形成術用バルーンカテーテル、滲出または注入バルーン、スコアリングバルーンカテーテル、またはカッティングバルーンカテーテルであるかまたはそれらを含む。
【００４１】
本明細書の他の実施形態では、埋め込み型医療用デバイスはステントであるかまたはそれを含む。このようなステントは、例えば、バルーン拡張型ステントなどの強制拡張型ステント、または自己拡張型ステントであってもよい。ステントは、本明細書に明記するものを含む多数の金属および合金のいずれか１種から製造することができる。ステントの構造は、埋め込み時に脈管壁と接触する外面と、脈管の管腔に面し、外面と概ね反対側となり得る内面とを有する好適な管腔内支持構造を提供するように様々な方法で形成することができる。例えば、ステントは、金網状構造、レーザーカットカニューレ、相互連結された個々の環、または別のパターンもしくは設計から製造することができる。前述の構成または他の構成では、ステントは、それぞれが脈管壁と接触する外面と脈管の管腔に面する内面とを有する複数のストラットを含むことができる。
【００４２】
特定の実施形態では、ステントは、１つ以上の自己拡張型「Ｚ−ステント」またはＧｉａｎｔｕｒｃｏステントの形態に構成されていてもよく、そのそれぞれが一連の屈曲セグメントにより相互連結された一連の実質的に直線状のセグメントを備えてもよい。屈曲セグメントは、鋭角の屈曲部または頂点を備えてもよい。Ｇｉａｎｔｕｒｃｏステントはジグザグ形に構成され、直線状のセグメントが互いに対して角度をなしており、屈曲セグメントにより連結されている。他の実施形態では、ステントは、一般に長手方向で隣接する一連のセグメントと、それらの間に配置されたある一定のパターンの連結セグメントとを備える溝付きの管から形成されていてもよい。このようなステントは、前述のように、バルーン拡張型などの強制拡張型であってもまたは自己拡張型であってもよい。このタイプの自己拡張型ステントは、弾性金属、好ましくは、超弾性金属合金、例えば、超弾性ニッケル−チタン（Ｎｉ−Ｔｉ）合金で製造することができ、例えば、Ｃｏｏｋ  Ｍｅｄｉｃａｌから市販されているＺＩＬＶＥＲ（登録商標）ニチノールステントがある。
【００４３】
前述のまたは本明細書の他の箇所に記載されている任意のステントは、本明細書に記載の放出可能な成分を担持するステント表面を、ステント表面で担持される唯一のコーティングとして、または放出可能な成分を含有する層の下および／または上に配置される１つ以上の追加のコーティングと組み合わせて有してもよい。また、放出可能な成分を担持しないステントの表面は、任意選択により裸であってもよく（コーティングされていなくてもよく）、または１つ以上の異なるコーティングを担持してもよい。さらに、ステントを送達用のバルーンカテーテルのバルーンに装着する場合、バルーンの表面は放出可能な成分および場合によっては本明細書に記載の他の層を担持してもよい、および／またはステントの表面は放出可能な成分および場合によっては本明細書に記載の他の層を担持してもよい。前述のおよび他の変形の実施は、本明細書の教示に鑑みて、当業者の技術範囲内となるであろう。
【００４４】
対象となる別のデバイス構造は、（特許文献１）および（特許文献２）に記載のステントなどのカバードステントであり、これらの文献は共にその内容が参照により本明細書に援用される。このようなデバイスは、脈管壁と接触している表面から生理活性物質を送達すると共に下流への灌流を維持することを可能にする。
【００４５】
組成物がデバイスの表面のコーティング中に存在する場合、組成物は、コーティングの５０重量パーセント超、７５重量パーセント超、９０重量パーセント超、９５重量パーセント超または９９重量パーセント超を構成してもよい。特定の実施形態では、コーティングは、水不溶性治療剤およびガレート含有化合物以外の材料を約５重量パーセント未満、２重量パーセント未満、１重量パーセント未満、０．５重量パーセント未満、０．１重量パーセント未満、０．０５重量パーセント未満または０．０１重量パーセント未満含む。他の実施形態では、コーティングは、水不溶性治療剤の放出速度を変化させるポリマーまたは他の非ポリマー担体などの材料を約５重量パーセント未満、２重量パーセント未満、１重量パーセント未満、０．５重量パーセント未満、０．１重量パーセント未満、０．０５重量パーセント未満または０．０１重量パーセント未満含む。
【００４６】
医療用デバイスと共に使用される好ましい水不溶性治療剤としては、水不溶性の増殖抑制剤、免疫抑制剤、および再狭窄抑制剤が挙げられる。特に好ましいのは、前述のものなどの水不溶性再狭窄抑制剤である。特定の好ましい実施形態では、パクリタキセルはデバイスと組み合わせて含まれる唯一の治療剤である。
【００４７】
水不溶性治療剤は、任意の好適なレベルでデバイスに組み込むことができる。典型的には、ステントまたはバルーンなどのデバイスにコーティングされるとき、水不溶性治療剤は、コーティング面１ｍｍ２当たり０．００１〜１０００μｇ、または１ｍｍ２当たり０．０１〜１０００μｇ、または１ｍｍ２当たり０．１〜１０００μｇ、または１ｍｍ２当たり０．１〜１００μｇ、特定の好ましい形態では、１ｍｍ２当たり０．１〜１０μｇ、または１ｍｍ２当たり０．５μｇ〜１ｍｍ２当たり３μｇのレベルで、または１ｍｍ２当たり０．５μｇ〜１ｍｍ２当たり２μｇの範囲のレベルで組み込まれる。２種以上の治療剤がコーティングに含まれる場合、前述のレベルは、全ての治療剤の合計重量に、または治療剤に個々に適用することができる。コーティングは、製造のばらつきまたは意図的な設計基準のため、コーティング部位により治療剤のレベルにばらつきがある可能性があることも分かるであろう。従って、本発明では、コーティングで被覆された領域全体にわたり治療剤のレベルが実質的に均一なコーティング、または、コーティングの一領域の治療剤のレベルがコーティングの別の領域で被覆された別の領域と比較してかなり異なるコーティングが考えられる。特定の好ましい実施形態では、パクリタキセルは、コーティング中の唯一の治療剤として、または１種以上の追加の治療剤と組み合わせて、１ｍｍ２当たり１μｇ〜１ｍｍ２当たり１０μｇの範囲、または１ｍｍ２当たり２μｇ〜１ｍｍ２当たり６μｇの範囲、または１ｍｍ２当たり０．５μｇ〜１ｍｍ２当たり３μｇの範囲、または１ｍｍ２当たり０．５μｇ〜１ｍｍ２当たり２μｇの範囲のレベルで組み込まれる。本発明の特に有利な埋め込み型医療用デバイスでは、このようなパクリタキセル含有コーティングは、例えば、本明細書に記載の任意のステントを含むステントの表面に、および／または、例えば、本明細書に記載の任意のバルーンカテーテルを含むバルーンカテーテルのバルーンの表面に担持される。
【００４８】
水不溶性治療剤は、典型的には治療有効量でデバイスに組み込まれる。これに関して、治療剤が再狭窄抑制剤である場合、再狭窄抑制剤は、埋め込み型医療用デバイスから、デバイスで治療される動脈、静脈または他の脈管もしくは通路の壁に治療剤が送達されるように埋め込み型医療用デバイス（例えば、バルーンまたはステント）が展開されるとき再狭窄を抑制するのに有効な量でコーティングに組み込まれることが分かるであろう。治療に有効となる治療剤のレベルは、使用される特定の治療剤、使用される埋め込み型医療用デバイス、埋め込み部位、治療される症状、治療剤を含むコーティングの組成、および他の可能な要因により変わることが分かるであろう。本明細書の開示に鑑みて日常的な実験を行うことにより、水不溶性治療剤の治療有効量の達成は当業者の技術範囲内となるであろう。
【００４９】
ガレート含有化合物は、可溶化された水不溶性治療剤を含有するガレート含有化合物のマトリックスを形成するのに有効な量でデバイスに含まれる。特定の実施形態では、デバイス中のガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比は、２００：１〜１０：１、または２００：１〜３０：１、または２００：１〜５０：１、または１００：１〜１０：１、または１００：１〜３０：１、または１００：１〜５０：１、または１：４０〜５００：１、または１：２０〜４００：１、または１：１０〜２００：１、または１：１〜２００：１、または１：４０〜２００：１、または１：２０〜２００：１、または１：１０〜５００：１の範囲である。２種以上のガレート含有化合物が存在する場合、上記範囲は、各個々のガレート含有化合物の重量対水不溶性治療剤の重量の比に、または存在するガレート含有化合物の全重量対水溶性治療剤の重量の比に適用することができる。
【００５０】
埋め込み型医療用デバイスをコーティングする層内または層中に放出可能な成分を含有する実施形態では、ガレート含有化合物は、埋め込まれたときに放出される水不溶性治療剤の量を、ガレート含有化合物が存在しないこと以外は同一のデバイスと比較して、１０パーセント、２０パーセント、３０パーセント、４０パーセント、５０パーセント、７５パーセント、１００パーセント、１２５パーセント、１５０パーセント、２００パーセント、３００パーセントまたは４００パーセント増加させることが認められる。
【００５１】
他の特定の実施形態では、ガレート含有化合物は、脈管壁を透過して患者の組織に入る水不溶性治療剤の送達を増加させることが認められる。ガレート含有化合物を含むデバイスから患者の組織に送達される水不溶性治療剤の量の増加は、組成物が配置されるまたはデバイスが埋め込まれる脈管の性質、ならびに脈管内の環境および埋め込み型デバイスの構成などの幾つかの要因に依存し得る。
【００５２】
しかし、脈管壁を通過して送達される水不溶性治療剤の量の増加は、埋め込み型デバイスを適切な脈管の断片に入れ、緩衝溶液中で一定時間インキュベートされるｅｘ  ｖｉｖｏアッセイで特徴付けることができる。１つのこのようなアッセイでは、デバイスを、例えば、ブタ尿管の断片に入れ、それをリン酸緩衝液生理食塩水緩衝液中で水和させる。尿管を密閉容器内で一定時間、例えば、５分間、３７℃でインキュベートする。インキュベートした後、尿管組織中に存在する水不溶性治療剤を、抽出溶液、例えば、酵素溶液、有機溶媒、有機／水性混合物、または酸性化混合物を用いて抽出する。使用する抽出溶液は、抽出される水不溶性治療剤に依存する。尿管中およびデバイス中に存在する水不溶性治療剤の量は、例えば、適切なＨＰＬＣ法を用いて測定される。
【００５３】
特定の実施形態では、特許請求されるデバイスは、このアッセイで測定する場合、送達される水不溶性治療剤の量を、ガレート含有化合物を含まないこと以外は同一のデバイスから同じ条件下で送達される水不溶性治療剤の量と比較して、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、７０％以上、１００％以上、１５０％以上または２００％以上増加させるのに十分なガレート含有化合物を含む。他の実施形態では、デバイスは、このアッセイで測定する場合、送達される水不溶性治療剤の量を１分間以内、５分間以内、１５分間以内、３０分間以内、６０分間以内、１２０分間以内、３００分間以内、５００分間以内、または１０００分間以内に５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、７０％以上、１００％以上、１５０％以上または２００％以上増加させるのに十分なガレート含有化合物を含む。さらに他の実施形態では、特許請求されるデバイスは、このアッセイで測定する場合、送達される水不溶性治療剤の量を１日間以内、５日間以内、１５日間以内、３０日間以内、６０日間以内または１２０日間以内に、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、７０％以上、１００％以上、１５０％以上または２００％以上増加させるのに十分な量のガレート含有化合物を含む。
【００５４】
特定の実施形態では、ガレート含有化合物は、埋め込み型医療用デバイスの埋め込み後約５分以下の時間で、治療有効量の水不溶性治療剤を患者の組織に送達するのに有効である。より好ましくは、このような時間は約３分以下、さらにより好ましくは約２分以下、最も好ましくは約１分以下、例えば、約２０秒〜約１分の範囲である。比較的迅速に送達するように構成されたこのような実施形態は、放出可能な成分が、一時的に埋め込み可能な医療用デバイス構造の表面、例えば、任意のバルーンカテーテルを含むバルーンカテーテルのバルーンの表面により、および本明細書に記載の任意のコーティング構成で担持される場合、とりわけ有利である。
【００５５】
放出可能な成分をコーティング層として含有する実施形態では、種々のコーティングパターンのいずれかを使用して医療用デバイスの材料塗膜を構成してもよい。コーティング層は、医療用デバイスの埋め込み可能な構造の表面に直接接着され、埋め込み可能な構造上の最外面となる、および／または埋め込み可能な構造上の全材料塗膜全体を構成することができる。他の実施形態では、医療用デバイスの埋め込み可能な構造に接着した全材料塗膜は、放出可能な成分を含む層の下に配置された１つ以上の異なるコーティング（例えば、医療用デバイスの表面に直接接着した、ポリマーコーティングもしくは他のプライマーコーティング、または異なる治療剤コーティングにおけるのと同様の）、放出可能な成分を含む層の上に配置された１つ以上の異なるコーティング（例えば、ポリマーコーティングまたは他の保護コーティングまたは拡散バリアコーティングにおけるのと同様の）、またはその両方を含むことができる。また、放出可能な成分を含む層に隣接する１つ以上の異なるコーティングが存在してもよい、および／または放出可能な成分を含む複数の層が埋め込み型医療用デバイスの互いに異なる位置で担持されてもよい。放出可能な成分を含む層は、埋め込み型医療用デバイスに（例えば、ステントに）画成されたウェル、溝、もしくは穴などの開口部に存在してもよく、または埋め込み型医療用デバイスまたは埋め込み型医療用デバイスの所定の表面（例えば、内面、外面もしくは側面）を部分的にコーティングしてもよく、もしくは完全にコーティングしてもよい。前述のおよび他の全デバイスコーティング構成を使用することができる。
【００５６】
放出可能な成分を含む層は、埋め込み型医療用デバイス構造の任意の好適な表面で担持することができる。放出可能な成分を含む層は、デバイスが埋め込まれたときに患者の組織と接触するように構成された埋め込み型医療用デバイスの一面または複数の面で、幾つかの実施形態では、それだけで担持することができる。例えば、幾つかの実施形態では、放出可能な成分を含む層は、バルーンが（通常は一時的に）埋め込まれたときに、またはステントが（通常は永久的に）埋め込まれたときに脈管壁と接触するように構成されているバルーンカテーテルのバルーンの表面で、またはステントの表面で担持される。特定の実施形態では、前述のように膨張して実質的に円筒状の外面となるバルーンカテーテルのバルーンの場合、放出可能な成分を含む層は、このような実質的に円筒状の外面で担持され、実質的に円筒状の表面を部分的にまたは完全に被覆する。前述のような外面を有するステントの場合、放出可能な成分を含む層は外面で担持され、外面を部分的にまたは完全に被覆することができる。
【００５７】
放出可能な成分を含む層および存在する他の任意のコーティング層は、コーティングされていないデバイスを、溶媒と、水不溶性治療剤と、ガレート含有化合物とを含有する溶液に浸漬することにより埋め込み型医療用デバイスの一部として組み込むことができる。その後、例えば、蒸発させることにより溶媒を除去してガレート含有化合物のマトリックス中に水不溶性治療化合物を含むコーティングが残るようにする。
【００５８】
放出可能な成分を含む層は、水不溶性治療剤とガレート含有化合物で全部構成されてもよく、または、例えば、生体安定性ポリマーを含んでもよく、この場合、放出可能な成分が放出される時、ポリマーはデバイス構造に付着したままとなる。生体安定性ポリマーの代わりにまたはそれに加えて、この層は生体吸収性ポリマーを含んでもよい。このようなポリマー層は、ポリマーマトリックス、例えば、本明細書に明記する好適なポリマーを使用して製造されるポリマーマトリックスを含むことができ、特定の形態では多孔質層であり、その細孔内に水不溶性治療剤とガレート含有化合物とを含む混合物を放出可能に含有する。
【００５９】
他の実施形態では、放出可能な成分を、マイクロスフェア、例えば、生体安定性または生分解性マイクロスフェアに組み込むことができる。このようなマイクロスフェアは、流体中に懸濁されてもよく、または埋め込み型デバイスの表面にコーティングされてもよく、もしくは埋め込み型デバイス内に含有されてもよい。
【００６０】
特定の態様では、好ましくは、放出可能な成分を担持するステントおよび／またはバルーンカテーテルを含む本明細書に記載のコーティングされた医療用デバイスは、身体通路の壁組織への水不溶性治療剤の放出を含む方法で任意の好適な身体通路を治療するように構成し、使用することができる。身体通路は、例えば、静脈、動脈、胆管、尿管、消化管の身体通路または部分であってもよい。本明細書に記載のコーティングされた医療用デバイスは、冠動脈、頸動脈、または、例として腎動脈もしくは腎静脈、腸骨動脈もしくは腸骨静脈、大腿動脈もしくは大腿静脈、膝窩動脈もしくは膝窩静脈、鎖骨下動脈もしくは鎖骨下静脈、頭蓋内動脈もしくは頭蓋内静脈を含む末梢動脈もしくは末梢静脈、大動脈、大静脈、または他のものを治療するのに使用することができる。好ましい実施形態では、コーティングされた医療用デバイスは、本明細書に明記するもののいずれかなどの身体通路の狭窄または再狭窄を治療または予防するが、本発明の他の実施形態では他の症状の治療が考えられる。特定の実施形態では、コーティングされた医療用デバイスは、末梢動脈または静脈の狭小化を治療するように構成され、使用される。
【００６１】
別の実施形態では、高い薬物放出性が可能となるように、ガレート含有化合物、例えば、ＥＧＣＧまたはタンニン酸は疎水性薬物と共にポリマー材料に封入される。このような方法により、好ましい埋め込み部位における薬物の高い取り込みも可能となる。ガレート含有化合物を、ポリマーマイクロスフェア中にパクリタキセルまたはドセタキセルのようなタキサン類と共に組み込むことができ、ＥＧＣＧの放出制御が認められた。
【００６２】
一実施形態では、ガレート含有化合物およびパクリタキセルまたはドセタキセルなどの薬物を内包するポリマーマイクロスフェアが身体内に注射され、そこで薬物が比較的ゆっくり放出されることが好ましい。例えば、マイクロスフェアは、関節リウマチまたは子宮筋腫などの疾患を治療するために関節内の空間に注射することができる。このような治療では、微粒子で血液供給を遮断することができ、ＥＧＣＧまたはタンニン酸により促進されるパクリタキセルまたはドセタキセルの放出は強力な増殖抑制療法（化学塞栓療法）となり得る。ポリマーブレンドは、ポリ乳酸、ポリグリコール酸またはポリカプロラクトン、ポリ酸無水物または共重合体（例えば、ＰＬＧＡ）などの疎水性ポリマーを含むことができる。ガレート含有化合物は、キトサン、ポリビニルアルコール、アルギネートおよびヒアルロン酸などの親水性ポリマーに組み込むこともできる。
【００６３】
別の実施形態では、疎水性薬物とガレート含有化合物とをポリマーマトリックス内に一緒に封入すると薬物の放出速度が速くなる。他の実施形態では、ポリマー−ガレート含有化合物−薬物の組み合わせは局所用のインプラント上にコーティングされる。
【００６４】
さらに他の実施形態では、消化管による吸収が悪い薬物（低溶解度などの理由のため、またはそれらが消化管内の薬物排出タンパク質の基質であるため）は、ガレート含有化合物と薬物との製剤を使用することにより経口利用可能となる。例えば、ＥＧＣＧは酸溶液中で安定であり、胃の酸環境の影響を受けない。１つのこのような実施形態では、ＥＧＣＧは消化管細胞内への薬物の取り込みを向上させ、薬物排出タンパク質が化合物と相互作用してそれらを排出し消化管内に戻し得る前に、薬物が細胞を通過して血流中に入ることを可能にする。
【００６５】
別の実施形態では、ガレート含有化合物−薬物の溶液は体内に直接注射され、必要な作用部位に薬物を好ましく局在化させることができる。その部位に局在化した後、同様に薬物の高い組織蓄積が起こり得る。例えば、癌、関節炎、網膜症もしくは乾癬などの血管原性疾患、または多発性硬化症などの神経疾患を治療するために、ドセタキセルとＥＧＣＧ（またはタンニン酸）との溶液を、膀胱、滑膜移行部、目、腫瘍、脳に皮下注入または注射することができる。これらの適用は、ＥＧＣＧおよびタンニン酸が薬物、例えば、タキサンの、細胞および組織への、例えば、膀胱内への、および腫瘍細胞内への取り込みを増加させるという知見により裏付けられる。あるいは、アムホテリシンとＥＧＣＧとの溶液を肺の真菌塊に直接注射することができる。あるいは、薬物を全身送達するために、溶液を腹腔の血流中に直接注射することができる。
【００６６】
さらに他の実施形態では、薬物の経皮送達を可能にするために、ガレート含有化合物と疎水性薬物とを含有するクリーム、ペースト、またはゲルを皮膚に塗布する。例えば、真菌感染またはリューシュマニア症を治療するために、薬物アムホテリシンをこのように塗布することができる。このような製剤の皮膚塗布を、疎水性薬物（例えば、アムホテレシン（ａｍｐｈｏｔｅｒｅｃｉｎ））とガレート含有化合物との全身製剤または経口製剤により増強することができる。
【００６７】
他の実施形態では、腎動脈内に挿入された時、カテーテルが薬物を動脈壁の中に放出し、その後、薬物が動脈壁を通過するように、ガレート含有化合物でコーティングされたカテーテル上に神経毒性薬物を使用する。塗布される薬物としては、タキサン、ビンカアルカロイド、白金製剤、ラパマイシンをベースにする薬物、ならびに神経毒性であることが知られている他の薬物が挙げられる。
【００６８】
別の実施形態では、コーティングしたカテーテルを高周波アブレーション器具と共に使用し、腎動脈内に挿入してその動脈の周囲の神経を焼灼する。同じ目的で、ＨＩＦＵまたは凍結療法などの他の方法を使用することができる。さらに別の実施形態では、マイクロニードル留置カテーテルを使用して、神経毒性薬物とガレート含有化合物とを含有する組成物を、腎動脈壁を通して注射する。このようなコーティングしたカテーテルシステムを使用して、かなりのレベルの神経毒性薬物を血管に送達し、薬物が血管壁を通過して神経束を含む周囲空間に移行することを可能にすることができる。
【００６９】
以下の実施例で本発明を説明する。本明細書に記載の実施例および実施形態は本発明を説明する目的で記載されているに過ぎず、本発明の範囲から逸脱することなく、それに鑑みた修正および変更が当業者に示唆される。
【実施例】
【００７０】
実施例１−ＥＧＣＧ濃度またはタンニン酸濃度によるアムホテリシンの溶解度、温度とｐＨの影響、および２４時間の時点での安定性。
【００７１】
アムホテリシンとＥＧＣＧまたはタンニン酸を、様々な薬物対ＥＧＣＧ比または薬物対タンニン酸比のアセトニトリル（ＥＧＣＧ）溶液またはメタノール（タンニン酸）溶液から乾燥させた。ＰＢＳ（ＥＧＣＧ）または水（タンニン酸）を添加し、最終溶液を０．２２ミクロンのフィルタで濾過して粒子状物質を除去した。ＨＰＬＣを用いて溶液の薬物濃度を分析した。
【００７２】
ＥＧＣＧは、ＥＧＣＧの最大濃度１ｍｌ当たり２００ｍｇまでアムホテリシンを可溶化させ、このときアムホテリシンの溶解度は１ｍｌ当たり約１８００μｇであった。溶液は２４時間安定であった（図１Ａ）。タンニン酸は、タンニン酸の最大濃度１ｍｌ当たり５００ｍｇまでアムホテリシンを可溶化させ、このときアムホテリシンの溶解度は約５７００μｇ／ｍｌであった。溶液は２４時間安定であった（図１（ｂ））。溶解度レベルに対する温度の影響が幾らかあり、２３℃と比較して３７℃と５０℃では共に、１００ｍｇ／ｍｌおよび２００ｍｇ／ｍｌで小幅な減少と、５００ｍｇ／ｍｌで大幅な減少があった。ｐＨは、タンニン酸溶液に対するアムホテリシンの溶解度に影響を及ぼさなかった（図１（ｃ））。
【００７３】
可溶化剤を含まないときの水に対するアムホテリシンの溶解度は約１〜１０μｇ／ｍｌである。しかし、ＥＧＣＧまたはタンニン酸が存在するとアムホテリシンの溶解度は著しく増加する。
【００７４】
実施例２．ＥＧＣＧ濃度またはタンニン酸濃度によるクルクミンの溶解度、温度の影響および溶液の２４時間安定性。
【００７５】
クルクミンとＥＧＣＧまたはタンニン酸を、様々な薬物対ＥＧＣＧ比または薬物対タンニン酸比のアセトニトリル（ＥＧＣＧ）溶液またはメタノール（タンニン酸）溶液から乾燥させた。ＰＢＳ（ＥＧＣＧ）または水（タンニン酸）を添加し、最終溶液を０．２２ミクロンのフィルタで濾過して粒子状物質を除去した。次いで、吸収分光法を用いて４５０ｎｍで溶液の薬物濃度を分析した。
【００７６】
ＥＧＣＧは、ＥＧＣＧの最大濃度１ｍｌ当たり２００ｍｇまでクルクミンを可溶化させ、このときのクルクミンの溶解度は約４７００μｇ／ｍｌであった。溶液は２４時間安定であった（図２Ａ）。タンニン酸は、５００ｍｇ／ｍｌのタンニン酸の最大濃度までクルクミンを可溶化させ、このときのクルクミンの溶解度は約１２０００μｇ／ｍｌであった。溶液は全て２４時間安定であったが、温度の影響を受け易く、３７℃または５０℃でクルクミンの溶解度は大きく低下した。
【００７７】
図２Ｂに示すように、可溶化剤を含まないときの水に対するクルクミンの溶解度は１μｇ／ｍｌ未満であるが、ＥＧＣＧまたはタンニン酸が存在するとこの薬物の溶解度は著しく増加する。
【００７８】
実施例３．ＥＧＣＧ濃度またはタンニン酸濃度によるパクリタキセルの溶解度、温度の影響および溶液の２４時間安定性。
【００７９】
パクリタキセルとＥＧＣＧまたはタンニン酸を、様々な薬物対ＥＧＣＧ比または薬物対タンニン酸比のアセトニトリル（ＥＧＣＧ）溶液またはメタノール（タンニン酸）溶液から乾燥させた。ＰＢＳ（ＥＧＣＧ）または水（タンニン酸）を添加し、最終溶液を０．２２ミクロンのフィルタで濾過して粒子状物質を除去し、ＨＰＬＣを用いて溶液の薬物濃度を分析した。
【００８０】
ＥＧＣＧは、ＥＧＣＧの最大濃度１ｍｌ当たり１７５ｍｇまでパクリタキセルを可溶化させ、このときのパクリタキセルの溶解度は約１０００μｇ／ｍｌであった。しかし、溶液は２４時間にわたり安定ではなかった（図３Ａ）。タンニン酸は、タンニン酸の最大濃度５００ｍｇ／ｍｌまでパクリタキセルを可溶化させ、このときのパクリタキセルの溶解度は約４８００μｇ／ｍｌであった。これらの溶液は２４時間安定であった（図３Ｂ）。ＥＧＣＧまたはタンニン酸の可溶化効果に対する温度の影響はなかった（図３ＣおよびＤ）。図３に示すように、可溶化剤を含まないときの水に対するパクリタキセルの溶解度は１μｇ／ｍｌであるが、ＥＧＣＧまたはタンニン酸が存在するとこの薬物の溶解度は大きく増加する。
【００８１】
実施例４．ＥＧＣＧ濃度またはタンニン酸濃度によるドセタキセルの溶解度、温度の影響および溶液の２４時間安定性。
【００８２】
ドセタキセルとＥＧＣＧまたはタンニン酸を、様々な薬物対ＥＧＣＧ比または薬物対タンニン酸比のアセトニトリル（ＥＧＣＧ）溶液またはメタノール（タンニン酸）溶液から乾燥させた。ＰＢＳ（ＥＧＣＧ）または水（タンニン酸）を添加し、最終溶液を０．２２ミクロンのフィルタで濾過して粒子状物質を除去し、ＨＰＬＣを用いて溶液の薬物濃度を分析した。
【００８３】
ＥＧＣＧは、ＥＧＣＧの最大濃度２００ｍｇ／ｍｌまでドセタキセルを可溶化させ、このときのドセタキセルの溶解度は約１５００μｇ／ｍｌであった。溶液は２４時間にわたり安定であった（図４Ａ）。タンニン酸は、タンニン酸の最大濃度５００ｍｇ／ｍｌまでパクリタキセルを可溶化させ、このときのパクリタキセルの溶解度は約４０００μｇ／ｍｌであった（図４Ｂ）。しかし、１５０ｍｇ／ｍｌを超えるタンニン酸濃度では、溶液は２４時間にわたり安定ではなかった。ＥＧＣＧまたはタンニン酸のどちらについても可溶化効果に対する温度の影響はなかった（図４ＣおよびＤ）。可溶化剤を含まないときの水に対するドセタキセルの溶解度は約５〜７μｇ／ｍｌである。しかし、ＥＧＣＧまたはタンニン酸が存在すると、この薬物の溶解度は著しく増加する。
【００８４】
実施例５−ＥＧＣＧ含有溶液に対する様々な疎水性薬剤の溶解度。
【００８５】
記載する溶媒にＥＧＣＧを５０ｍｇ／ｍｌ、および薬物を１ｍｌ当たり約２５０μｇになるように溶解し、窒素下、試験内で乾燥させた。水１ｍｌを添加した後、ボルテックスで撹拌した。顕微鏡下で溶液の粒子状物質を調べた。粒子状物質が存在しない場合、このプロセスをより高い薬物量で繰り返した。ナイスタチンおよびヘスペリジン以外、被検薬物は全て、記載の濃度で溶液中に残存した。
【００８６】
【表１】
0006270165.tif 000002
【００８７】
実施例６．低濃度のＥＧＣＧを用いたパクリタキセルの細胞内への取り込みの増加。
【００８８】
パクリタキセルをイヌ腎臓（ｍｄｃｋ）細胞および薬物耐性ｍｄｃｋ細胞（ｍｄｃｋ−ｍｄｒ）のみと、またはそれらと低濃度（１０〜１００μｇ／ｍｌ）のＥＧＣＧの存在下でインキュベートした。これらの実験では、パクリタキセルはｍｄｃｋ細胞中に拡散して約２００ｐｇ／ｍｇの細胞タンパク質のレベルを達成し、ｍｄｃｋ−ｍｄｒではこれより低いことが判明した（薬物耐性ポンプ、おそらくｐ−糖タンパク質による薬物排出のため）。しかし、パクリタキセルおよびＥＧＣＧと共に一緒にインキュベートした細胞では、５０μｇ／ｍｌのパクリタキセルでｍｄｃｋ細胞とｍｄｃｋ−ｍｄｒ細胞の両方とも２０００ｐｇ／ｍｇの高い濃度が達成された。
【００８９】
ｍｄｃｋ細胞およびｍｄｃｋ−ｍｄｒ細胞で内の薬物取り込みが１０倍増加したことから、ＥＧＣＧを用いたパクリタキセルと、細胞内への薬物の輸送補助流入との密接な関係が指摘される。この薬物取り込みの増加はＥＧＣＧと疎水性薬物との併用に関連する別の特有な特徴である。
【００９０】
実施例７：単層の細胞を介したドセタキセルの取り込みと輸送の増加。
【００９１】
ＭＤＣＫ細胞として知られるイヌ腎臓細胞は、イヌ腎臓由来の非癌増殖性細胞株である。これらの細胞のＭＤＲ誘導体は多剤耐性型である。ＭＤＣＫ細胞には薬物が蓄積し、細胞を殺すことができるが、ＭＤＲ細胞は薬物を排出させる薬物排出タンパク質を含有するため、これらの細胞を殺すのに十分な細胞内濃度を維持するために必要な薬物用量がずっと高くなることから、細胞株ＭＤＣＫおよびＭＤＣＫ−ＭＤＲは薬物耐性の分野で日常的に使用される。ＭＤＲ細胞内での薬物の細胞内濃度を増加させることができる薬剤は、薬物耐性を克服するのに、または排出タンパク質により保護された組織領域に薬物が入ること（例えば、消化管内または脳内への取り込み）を可能にするのに有用となり得る。
【００９２】
ＭＤＣＫ細胞をトランスウェル膜（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ：０．３ミクロン、直径１ｃｍ）当たり細胞１００００個となるように播種し、連続的な単層が存在するようになるまで１週間増殖させた。２５０μｇ／ｍｌの薬物（３Ｈドセタキセルをドープ、を担体（ｔｗｅｅｎ、ジブロック（２０００  ４０−６０）ＰＤＬＬＡ−ｍｅｐｅｇまたはＥＧＣＧ）と共に、いずれもｈａｎｋｓ緩衝液に溶解し、これを上部ウェルに添加し（０．４ｍｌ）、基部ウェルにはｈａｎｋｓ緩衝液１．２ｍｌを入れた。ウェルを３７℃で２時間インキュベートした。次いでトランスウェルを分解し、基部リザーバ内の（細胞を介して輸送された）薬物の量、または細胞内の（ｈａｎｋｓ緩衝液中で３回洗浄した後、フィルタを溶解することにより測定した）薬物の量を、液体シンチレーション計数により測定した。
【００９３】
両方の細胞株で、細胞をＥＧＣＧ−ドセタキセル溶液と共にインキュベートした場合、ｔｗｅｅｎまたはジブロック共重合体ミセル溶液と比較して、細胞内に蓄積したまたは細胞を介して輸送されたドセタキセルの量は増加した。これらの結果から、ＥＧＣＧにより細胞内でのドセタキセルの高い蓄積が可能となる（図５）ことが分かる。
【００９４】
実施例８．Ｃａｃｏ２細胞を介したクルクミンの輸送。
【００９５】
Ｃａｃｏ２細胞は、ヒト上皮結腸直腸腺癌細胞の連続的な細胞である。それらは薬物排出タンパク質を含有し、ＭＤＣＫ−ＭＤＲ細胞と同様に、即ち、薬物を排出させる能力を有する細胞内での薬物蓄積を測定するために使用することができる。
【００９６】
Ｃａｃｏ２細胞（ＡＴＣＣ，ＶＡ，ＵＳＡ）は、経口薬物アベイラビリティのモデルとして薬学全体で使用される増殖性消化管上皮細胞である。これらの細胞は、膜上の細胞培養で増殖することができ、それらは頂端側外表面（消化管管腔に相当）および毛細血管に隣接する細胞側に相当する基底側下表面と一列に並ぶ。ＥＧＣＧクルクミン溶液を膜上のこれらの細胞を収容するトランスウェルの上部に３時間入れたとき、多量のクルクミンがＣａｃｏ２細胞を通過した、またはＣａｃｏ２細胞内に蓄積した。
【００９７】
Ｃａｃｏ２細胞を０．３ｕｍのトランスウェル膜上に播種し、コンフルエントになるまで３日間増殖させる。次の数日間にわたり導電性電極で経細胞電気抵抗値を測定し、それが６００ｍｏｈｍに達した（密着結合が形成された）とき実験を開始した。ｐＨ７．４のＨａｎｋｓ緩衝液に溶解したＥＧＣＧ（１ｍｌ当たり２５ｍｇ）中にクルクミン（１ｍｌ当たり２５０μｇ）を含む溶液を上部ウェルに３時間添加した。細胞を介して輸送されたクルクミンを収容する下部リザーバを回収した。細胞内のクルクミンを含有するフィルタをＨａｎｋｓ緩衝液中で３回洗浄した後、アセトニトリル中で可溶化させて細胞内クルクミンを放出させた。次いで、ｕｖ−ｖｉｓ吸収分光法を用いて４３０ｎｍで、全ての溶液のクルクミン含有量を分析した。
【００９８】
図６は、ＥＧＣＧの存在下で、またＥＧＣＧの代わりにジブロック重合体（４０／６０  ＰＤＬＬＡ１３３０−２０００ｍｅｐｅｇを使用した場合の、細胞を介したクルクミンの輸送を示す。ジブロック共重合体により少量のクルクミンが細胞を通過し、それに入ることが可能となったが、ＥＧＣＧ溶液ではずっと多くのクルクミンを取り込み、細胞を介して輸送することが可能となった（図６）。この実施例から、疎水性薬物のＥＧＣＧ溶液を使用して薬物を経口利用可能にすることができることが明確に分かる。
【００９９】
実施例９．速溶性、薬物可溶化コーティングでのカテーテルのコーティング
【０１００】
ジブロック共重合体は自家製造した。簡潔には、メトキシポリエチレングリコール（ＭＥＰＥＧ分子量２０００）（Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ）を乳酸（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）と共に密封丸底フラスコに入れ、窒素下、油浴中で１４０℃に２４時間加熱した。このとき乳酸はＭＥＰＥＧのヒドロキシル鎖上で重合し、ジブロック共重合体を形成する。付加した乳酸の量を測定すると、ＭＥＰＥＧ２０００に結合した約１６６０の分子量のポリ乳酸鎖が得られ、最終分子量３６６０が得られた。これはゲル浸透クロマトグラフィーで確認され、立証された。
【０１０１】
このジブロック共重合体を疎水性薬物と共に、アセトニトリルなどの有機溶媒に溶解し、乾燥させると、水を添加した時、ジブロック共重合体が溶解して、ミセルコアに薬物が存在するミセルを形成することができる。これにより薬物の可溶化が可能となる。
【０１０２】
ＥＧＣＧ３０ｍｇ、またはタンニン酸１０ｍｇまたはジブロック共重合体（４０／６０ＰＤＬＬＡ１３３０−２０００ｍｅｐｅｇ）６ｍｇと、パクリタキセル３００μｇをエタノール４００ｕｌに溶解した。バルーンカテーテルを膨張させ、その水平軸に沿って回転させた。薬物／ＥＧＣＧ溶液をピペットで取り、一度に２５μｌを用いてバルーンにゆっくり塗布し、電気ドライヤーからの穏やかな熱で乾燥させた。カテーテルを終夜乾燥させた。ジブロック共重合体をＥＧＣＧと所定の比で混合し、最終重量３０ｍｇを得た。
【０１０３】
コーティングはバルーンに強力に結合していることが判明し、グローブで摩擦しても擦れ落ちなかった。バルーンは、コーティングの接着を損なうことなく何回も膨張／収縮させることができた。担体に対して１０％の薬物を含有するこれらのコーティングを水または５％ブドウ糖溶液に数秒間入れると、担体が溶解する前に担体中に微細な析出物が認められた。これらの析出物を分析（Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ，  Ｍａｌｖｅｒｎ）すると、１１０ｎｍのサイズを有することが判明した。ＰＢＳ中に残った場合、析出物は凝集してサイズが２μｍになった。しかし、ＰＢＳ中で湿らせた後、水またはブドウ糖に分散させると、それらは直径約１１０ｎｍのナノ粒子を形成した。
【０１０４】
比較的高い薬物対担体比でしかこれらの析出物は生じなかったが、このような薬物ナノ粒子は、組織への固体薬物の最適な送達形態を提供することができる。サイズがずっと大きい薬物析出物と比較して組織内への取り込みが改善される可能性があるため、これは、とりわけ動脈壁について当てはまる場合がある。幾つかのコーティングでは、ポリエチレングリコールまたはグリセリンまたはヒドロキシプロピルセルロースなどの賦形剤を添加した。これらのコーティングは、賦形剤を含まないコーティングが薬物像を形成するのと同様に機能したが、このコーティングは比較的柔軟性が高く、特定の用途に好ましい場合がある。
【０１０５】
実施例１０．バルーンカテーテル上のＥＧＣＧ担体コーティングからのパクリタキセル放出速度
【０１０６】
バルーンカテーテルを膨張させ、その水平軸に沿って回転させた。ＥＧＣＧ３０ｍｇおよびパクリタキセル３００ｍｇをエタノール４００ｕｌに溶解した。薬物／ＥＧＣＧ溶液をピペットで取り、一度に２５μｌを用いてバルーンにゆっくり塗布し、電気ドライヤーからの穏やかな熱で乾燥させた。次いで、カテーテルアセンブリを終夜乾燥させた。薬物放出を測定するために、カテーテルを膨張させ、ｐＨ７．４のＰＢＳ−アルブミン緩衝液５ｍｌに、軽く回転させて動かしながら特定の時間浸漬した。次いで、カテーテルを取り出し、第２の薬物放出時点ではＰＢＳ−アルブミン５ｍｌを収容する新しい管に入れた。ジクロロメタン１ｍｌをＰＢＳ各５ｍｌに添加し、管を振盪させた。内容物を沈降させ、上部液体を吸引除去した。ジクロロメメタンを乾燥させた後、固体をアセトニトリル／水  、６０／４０  ｖ／ｖに再溶解し、ＨＰＬＣ分析（ｃ１８カラム、アセトニトリル／メタノール／水  ５８／５／３７、流速１ｍｌ／分、２３２ｎｍで検出）により薬物を定量した。
【０１０７】
ジブロック共重合体０パーセント（即ち、ＥＧＣＧ単独）では、全てのパクリタキセルが１分で放出された。ジブロック共重合体１０パーセントおよびジブロック共重合体２０パーセントでは、カテーテルからのパクリタキセルの放出速度は僅かに遅かったが、２分以内に完了した。図７に見られるように、ジブロック共重合体を５０％添加すると放出速度が劇的に遅くなった。
【０１０８】
実施例１１．薬物およびＥＧＣＧでコーティングしたバルーンカテーテルから動脈組織内へのパクリタキセルの取り込み。
【０１０９】
ＥＧＣＧ３０ｍｇおよびパクリタキセル３００μｇを、３Ｈパクリタキセル１０μｌも含有するエタノール４００μｌに溶解したもので、バルーンカテーテルを実施例１０と同様にコーティングした。２〜３ｃｍの新しいラット大動脈片を２００μｌピペット先端に被せて、収縮したバルーンカテーテル上に供し、血管内へのバルーンの挿入を模倣した。次いで、バルーンを膨張させて、システムをＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ）の浴内に３７℃で２分間放置した。次いで、バルーンを収縮させ、ＨＢＳＳ３００μｌをピペットで取って動脈内に入れ、洗浄液を遠心管に回収した。この洗浄工程を３回繰り返した。操作者のグローブが湿っており、バルーンと接触した（従って、幾らかのＥＧＣＧ／薬物を吸収した）ため、グローブの指をＨＢＳＳ１００ｍｌ中で十分に洗浄した。
【０１１０】
大動脈組織を組織可溶化剤５００μｌに入れ、６０℃で４時間放置して消化させた。次いで、内容物をシンチレーション計数器に入れた。処置後、展開したカテーテルバルーンを観察した。バルーンの一部は展開されず（バルーンは大動脈内にぴったり入っており（ｔｉｇｈｔ）、十分に膨張せず）、折り目の中に極微量の赤みがかった色のＥＧＣＧ／薬物が認められた。カテーテルの残りの部分は、コーティングが全て取り除かれていることが認められた。次いで、カテーテルバルーンをアセトニトリル５ｍｌ中で膨張させて、溶解していないＥＧＣＧを回収し、シンチレーション計数により測定した。他の全ての画分（大動脈洗浄液とグローブ洗浄液も計数した。これらの４つの画分（大動脈、グローブ、カテーテル残留分および大動脈洗浄液）は全薬物に相当し、どの画分についても全シンチレーション計数を行い、適用された薬物の１００％となった。
【０１１１】
全パクリタキセルの５０％超が動脈に結合していることが判明し、バルーン展開後に２％しか動脈から洗い流されなかった（図８）。他の画分（カテーテル折り目の中の残留分およびグローブ洗浄液）は、その薬物が動脈壁に全く接触しなかったことから利用不可能な薬物と見なされたため、実際には重要ではなかった。それらの画分を無視すると、利用可能なパクリタキセルの約９５％が動脈により吸収され、動脈から洗い流されたのは５％未満であった。これらの結果からＥＧＣＧにより、２分間接触させた後、パクリタキセルが動脈に非常によく移行できるようになることが明確に分かる。
【０１１２】
実施例１２．薬物およびＥＧＣＧでコーティングしたバルーンカテーテルから動脈組織内へのパクリタキセル取り込みに対する超音波の効果。
【０１１３】
ＥＧＣＧ３０ｍｇとパクリタキセル３００ｕｇを、３Ｈパクリタキセル１０ｕｌも含有するエタノール４００ｕｌに溶解した。バルーンカテーテルを膨張させ、その水平軸に沿って回転させた。薬物／ＥＧＣＧ溶液をピペットで取り、一度に２５μｌを用いてバルーンにゆっくり塗布し、電気ドライヤーからの穏やかな熱で乾燥させた。２〜３ｃｍの新しいラット大動脈片を２００μｌピペット先端に被せて、収縮したバルーンカテーテル上に供し、血管内へのバルーンの挿入を模倣した。次いで、バルーンを膨張させて、システムをＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ）中、３７℃で２分間音波処理した（４ＭＨｚ、３０Ｗ／ｃｍ２）。次いで、バルーンを収縮させ、（ＨＢＳＳ）３００μｌをピペットで取って動脈内に入れ、洗浄液を遠心管に回収した。この洗浄工程を３回繰り返した。前記実施例と同様に試料を回収した。
【０１１４】
全パクリタキセルの５０％超が動脈に結合していることが判明し、バルーン展開後に動脈から洗い流されたのは２％だけであった（図９）。他の画分（カテーテル上の残留分およびグローブ洗浄液）は、その薬物が動脈壁に全く接触しなかったことから利用不可能な薬物と見なされたため、実際には重要ではなかった。それらの画分を無視すると、利用可能なパクリタキセルの約９５％が動脈により吸収され、動脈から洗い流されたのは５％未満であった。これらの結果からＥＧＣＧにより、２分間接触させた後、パクリタキセルが動脈に非常によく移行できるようになることが明確に分かる。
【０１１５】
実施例１３．薬物およびジブロック共重合体でコーティングしたバルーンカテーテルから動脈組織内へのパクリタキセル取り込み。
【０１１６】
バルーンカテーテルを膨張させ、その水平軸に沿って回転させた。薬物／ジブロック溶液をピペットで取り、一度に２５μｌを用いてバルーンにゆっくり塗布し、電気ドライヤーからの穏やかな熱で乾燥させた。溶液は、ジブロック共重合体（４０／６０  ｐｄｌｌａ．ｍｅｐｅｇ−２０００ｍｏｌ．ｗｔ．３３３３）６ｍｇおよびパクリタキセル３００ｕｇを、３Ｈパクリタキセル１０ｕｌも含有するエタノール４００ｕｌ中に含有した。２〜３ｃｍの新しいラット大動脈片を２００μｌピペット先端に被せて、収縮したバルーンカテーテル上に供し、血管内へのバルーンの挿入を模倣した。次いで、システムをＨａｎｋｓ緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ）中に３７℃で２分間浸漬した。この時点で、バルーンおよび処理し、パクリタキセル取り込みを実施例１１と同様に測定した。
【０１１７】
全パクリタキセルの約１０％が動脈に結合していることが判明し、バルーン展開後、動脈から洗い流されたのは２％であった（図１０）。グローブ洗浄液画分は、その薬物が動脈壁に全く接触しなかったことから利用不可能な薬物と見なされたため、実際には重要ではなかった。カテーテル上の残留分はかなり多かったが、その薬物は展開されていないバルーンの折り目の中の薬物であったかまたは溶解していないコーティングであったかどうかは不明である。ジブロック共重合体は好適なコーティングを形成せず、使用は比較的迅速に溶解する比較的薄い層に限られる可能性がある。
【０１１８】
実施例１４．薬物およびタンニン酸でコーティングしたバルーンカテーテルから動脈組織内へのパクリタキセル取り込み。
【０１１９】
タンニン酸３０ｍｇおよびパクリタキセル３００ｕｇを、３Ｈパクリタキセル１０ｕｌも含有するエタノール４００ｕｌに溶解した。バルーンカテーテルを膨張させ、その水平軸に沿って回転させた。薬物／タンニン酸溶液をピペットで取り、一度に２５μｌを用いてバルーンにゆっくり塗布し、電気ドライヤーからの穏やかな熱で乾燥させた。２〜３ｃｍの新しいラット大動脈片によるパクリタキセルの取り込みを、実施例１１に記載の手順を用いて測定した。
【０１２０】
全パクリタキセルの約４０％が動脈に結合していることが判明し、バルーン展開後、動脈から洗い流されたのは１％未満であった（図１１）。グローブ洗浄液画分は、その薬物が動脈壁に全く接触しなかったことから利用不可能な薬物と見なされたため、実際には重要ではなかった。カテーテル上の残留分は約２９％であったが、薬物は展開されていないバルーンの折り目の中の薬物であったかまたは溶解していないコーティングであったかどうかは不明である。組織内の量は薬物の最大画分である。カテーテルに付着した薬物とグローブに付着した薬物を無視すると、この量は組織に移行した利用可能な薬物の９５％を超え、タンニン酸はカテーテルから血管にドセタキセルを送達するための優れた溶媒であることが明確に分かる。
【０１２１】
実施例１５：ＨＵＶＥＣ細胞内でのドセタキセルの蓄積および超音波の効果。
【０１２２】
ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）および関連する培養培地は、Ｌｏｎｚａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｂａｓｅｌ，スイス国）から入手した。細胞は全て４８ウェルプレートの各培地に１ウェルまたはフィルタ当たり細胞５０００個の濃度で播種した。細胞を３日間平衡化させ、その時点でそれらは約８０％コンフルエントとなった。４８ウェルプレート中、１プレート当たり使用したのは２４ウェルだけであり、細胞を有するウェルが市松模様に見えるようにした。
【０１２３】
２日後、細胞は、薬物インキュベーションを、超音波処理と共にまたは超音波処理なしで行う準備が整っていた。薬物溶液（放射標識したドセタキセルを含む）を細胞に２時間塗布した（０．５ｍｌ）。次いで、幾つかの細胞を超音波処理した。簡潔には、４ＭＨｚ、出力密度３０Ｗ／ｃｍ２、バースト幅１０−ｓの超音波で１回細胞を処理した。
【０１２４】
超音波処理後、薬物溶液を直ぐに除去し、細胞を全てＨＢＳＳ５００ｕｌで３回洗浄した。細胞内に保持されたドセタキセルの量は、細胞を溶解緩衝液（３３％ＤＭＳＯを含有する２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００）２００ｕｌに溶解し、液体シンチレーション計数で定量することにより測定した。
【０１２５】
ＥＣＧＣ製剤からｈｕｖｅｃ細胞内へのドセタキセルの取り込みは、薬物のミセル製剤からの取り込みより約４倍高かった（図１２）。超音波の使用により、全ての製剤から細胞内への薬物の取り込みが増加した。
【０１２６】
実施例１６．ＥＧＣＧ製剤、タンニン酸製剤またはアムビゾーム製剤を用いたＣａｃｏ２細胞内へのアムホテレシンＢの取り込みおよび移行。
【０１２７】
Ｃａｃｏ２細胞を、０．３ｕｍのトランスウェル膜上に播種し、実施例９と同様に処理した。ｐＨ７．４のＨａｎｋｓ緩衝液に溶解したＥＧＣＧ（１ｍｌ当たり２５ｍｇ）中、ｐＨ７．４のＨａｎｋｓ緩衝液に溶解したタンニン酸（２５ｍｇ／ｍｌ）中、またはアムビゾーム中に、アムホテレシンＢを含む溶液（１ｍｌ当たり２５０ｕｇ）を上部ウェルに３時間添加した。下部リザーバを回収し、実施例８と同様に処理した。次いで、ｕｖ−ｖｉｓ吸収分光法を用いて４０７ｎｍで、全ての溶液のアムホテリシン含有量を分析した。
【０１２８】
アムホテリシンのアムビゾーム製剤では少量の薬物が細胞を透過し、それに入ることが可能であったが、ＥＧＣＧ溶液およびタンニン酸溶液ではずっと高レベルの薬物の細胞を介した取り込みおよび輸送が可能となった（図１３）。
【０１２９】
実施例１７：ＰＡＭＡＭデンドリマー架橋没食子酸化合物の製造。
【０１３０】
ＥＤＣおよびスルホ−ＮＨＳを用いた没食子酸のＧｏデンドリマーへの２段階カップリングのプロトコル。
【０１３１】
序論：Ｇｏ  ＰＡＭＡＭデンドリマー（Ｄｅｎｄｒｉｔｅｃｈ  Ｍｉｄｌａｎｄ  ＭＩ）は４つのアームを有し、これらはそれぞれ末端にアミン基を有する。この分子（分子量５１７）を４つのガレート分子上のカルボキシレートに、水性媒体中でカルボジイミド分子（ＥＤＣ）（エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド、Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、米国）を用いて結合させることができる。
【０１３２】
材料
Ａ．活性化緩衝液：水、ｐＨ６に調節
Ｃ．没食子酸４４０ｍｇ（Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）
Ｄ．スルホ−ＮＨＳ（製品番号２４５１０．Ｔｈｅｒｍｏ  ｆｉｓｈｅｒ）
Ｅ．ＥＤＣ（Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）
Ｆ．デンドリマー  Ｇ０．（Ｄｅｎｄｒｉｔｅｃｈ）２ｇ／１６ｍｌで１ｍｌ＝１２５ｍｇ
【０１３３】
方法
ＥＤＣ（約１．５Ｍ）５７３ｍｇおよびスルホ−ＮＨＳ（約２Ｍ）８６８ｍｇを没食子酸（１５％ＥＴＯＨ中１．３Ｍ、溶解）４４０ｍｇと共にｐＨ５〜６の水２ｍｌに添加し、ｐＨ４〜７で、室温で３０分間反応させた。これは、撹拌して没食子酸が溶液中に維持されるかどうかに依存した。試薬が溶解しなかった場合、さらに水を添加した。
【０１３４】
Ｇ０デンドリマー（１ｍｌ中１２０ｍＭまたは３ｍｌ中４０ｍＭ）１ｍｌを添加し、ｐＨを７〜８．５に調節した。２時間反応させた。反応混合物をカットオフ約５００の透析バッグに終夜入れて最終生成物を得た。反応スキームを図１４に示す。
【０１３５】
実施例１８．ＥＧＣＧフィルムまたはタンニン酸フィルム中の薬物、ＰＥＧまたはグリセリンの効果
ＥＧＣＧまたはタンニン酸中の薬物の薄膜は、エタノール溶液から流涎した。ＥＧＣＧまたはタンニン酸中の薬物をエタノールに最終総濃度が２０％ｗ／ｖになるように溶解し、ピペットを用いて繰り返し１０μｌの容量で点着し、点着間に乾燥させた。これにより薄膜が堆積し、乾燥した。幾つかの溶液は、ＥＧＣＧまたはタンニン酸に対して１０％または２０％ｗ／ｗのグリセリンまたはポリエチレングリコール３００を含有した。薄膜を乾燥させて、光学顕微鏡で薬物の析出を調べた。薬物の結晶を同定するためにフィルムを示差走査熱量測定（ＤＳＣ）で分析した。
【０１３６】
クルクミンは約５％ｗ／ｗで析出した。しかし、パクリタキセルおよびドセタキセルは、９０％の薬物添加量まで分子レベルで分散したままであった。ＤＳＣによりパクリタキセル結晶の存在を９０％の薬物添加量で確認した。ラパマイシンは５０％以上の薬物：ＥＧＣＧまたはタンニン酸レベルで溶液中に残存した（図１５）。ＰＥＧ３００またはグリセリンを１０％になるように添加してもこれらの値に顕著な影響はなかった。しかし、これらの薬剤をＥＧＣＧまたはタンニン酸に対して１０〜２０％ｗ／ｗ／になるように添加した後、フィルムは柔軟性が僅かに高くなった。
【０１３７】
パクリタキセルは約５％の添加量でポリマーフィルムから析出するため、これらのデータは意外であった。ＥＧＣＧフィルムまたはタンニン酸フィルム中の分子レベルの薬物のレベルが高いと、パクリタキセル、ドセタキセルまたはラパマイシンのような薬物を組織が利用可能な形態で（粒子状ではなく分子の形態で）デバイスの被膜中に維持する方法が得られる。
【０１３８】
実施例１９．疎水性ポリマー中の電界紡糸ＥＧＣＧ／薬物錯体
乳酸グリコール酸共重合体をテトラヒドロフラン：ジメチルホルムアミド、７５：２５に２０％ｗ／ｖになるように溶解した。ＰＬＧＡ溶液に対して３０％のＥＧＣＧまたはタンニン酸と、ＥＧＣＧまたはタンニン酸に対して２％ｗ／ｗのパクリタキセルまたはクルクミン。溶液をアルミニウム箔上に２００００ボルトで電界紡糸した。３時間後、ナノ繊維の微細なマットが紡糸された。顕微鏡検査で、このメッシュは性質が均質に見えた。
【０１３９】
実施例２０：ＥＧＣＧ濃度またはタンニン酸濃度によるラパマイシンの溶解度、温度とｐＨの影響、および２４時間の時点での安定性。
【０１４０】
ラパマイシンとＥＧＣＧまたはタンニン酸を、様々な薬物対ＥＧＣＧ比または薬物対タンニン酸比のアセトニトリル（またはタンニン酸ではメタノール）溶液から乾燥させた。ＰＢＳ（ＥＧＣＧ）または水（タンニン酸）を添加し、最終溶液を０．２２ｕｍのフィルタで濾過して粒子状物質を除去し、ＨＰＬＣを用いて溶液の薬物濃度を分析した。
【０１４１】
ＥＧＣＧは、ＥＧＣＧの最大濃度１ｍｌ当たり２００ｍｇまでラパマイシンを可溶化させ、このときのアムホテリシンの溶解度は約３００μｇ／ｍｌであった。溶液は２４時間安定であった（図１６（ａ））。溶解度レベルに対する温度の影響はほとんどなかった。タンニン酸は、タンニン酸の最大濃度１ｍｌ当たり５００ｍｇまでラパマイシンを可溶化させ、このときのアムホテリシンの溶解度は約１５００μｇ／ｍｌであった。溶液は２４時間安定であった（図１６（ｂ）。溶解度レベルに対する温度の影響はなかった。
【０１４２】
図１６に示すように、可溶化剤を含まないときの水に対するラパマイシンの溶解度は約２〜３μｇ／ｍｌであるが、ＥＧＣＧまたはタンニン酸が存在すると、この薬物の溶解度を非常に大きく増加させることができる。
【０１４３】
実施例２１．薬物およびＥＧＣＧでコーティングしたバルーンカテーテルから動脈組織内へのラパマイシン取り込み
【０１４４】
ＥＣＧＣ３０ｍｇおよびラパマイシン３００μｇをエタノール４００ｕｌに溶解したものでバルーンカテーテルをコーティングした。２〜３ｃｍの新しいラット大動脈片を２００μｌピペット先端に被せて、収縮したバルーンカテーテル上に供し、血管内へのバルーンの挿入を模倣した。次いで、バルーンを膨張させて、このシステムを３７℃で２分間ｈａｎｋｓ緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ）の浴中に放置した。この時点で、バルーンを収縮させ、ＨＢＳＳ３００μｌをピペットで取って動脈内に入れ、洗浄液を遠心管に回収した。この洗浄工程を３回繰り返した。操作者のグローブが湿っており、バルーンと接触した（従って、幾らかのＥＧＣＧ／薬物を吸収した）ため、グローブの指をＨＢＳＳ１００ｍｌ中で十分に洗浄した。大動脈組織をエタノール５００ｕｌに入れ、細い鋏で切断した後、ホモジナイズした（ｐｏｌｙｔｒｏｎ、目盛３で３０秒間）。処置後、展開したカテーテルバルーンを観察した。バルーンの一部は展開せず（バルーンは大動脈内にぴったり入っており、十分に膨張せず）、折り目の中に極微量の赤みがかった色のＥＧＣＧ／薬物が認められた。カテーテルの残りの部分は、コーティングが全て取り除かれていることが認められた。次いで、カテーテルバルーンをアセトニトリル５ｍｌ中で膨張させて、溶解していないｅｇｃｇを回収し、薬物をＨＰＬＣにより測定した。他の全ての画分（大動脈洗浄液とグローブ洗浄液）およびカテーテル抽出物をＨＰＬＣで分析した。これらの４つの画分（大動脈、グローブ、カテーテル残留分および大動脈洗浄液）が全薬物に相当し、全ＨＰＬＣ薬物量を測定すると、適用された薬物の１００％となった。
【０１４５】
結果：全パクリタキセルの５０％超が動脈に結合していることが判明し、バルーン展開後、動脈から洗い流されたのは２％未満であった（図１７）。他の画分（カテーテル折り目の中の残留分およびグローブ洗浄液）は、その薬物が動脈壁に全く接触しなかったことから利用不可能な薬物と見なされたため、実際には重要ではなかった。それらの画分を無視した場合、利用可能なパクリタキセルの約９５％超が動脈により吸収され、動脈から洗い流されたのは５％未満であった。これらの結果から、ＥＧＣＧにより、２分間接触させた後、パクリタキセルが動脈に非常によく移行できるようになることが明確に分かる。
【０１４６】
実施例２２．ＥＣＧＣまたはタンニン酸中でのフィナステリドの可溶化、ならびに、封入、およびフィナステリドのＥＧＣＧ溶液またはタンニン酸溶液中でインキュベートした後のＰＶＡおよびｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅｓからのフィナステリドの放出測定。
フィナステリドに対するＥＧＣＧまたはタンニン酸の可溶化効果。
【０１４７】
方法：様々な重量パーセントのフィナステリドとＥＧＣＧまたはタンニン酸とのエタノール溶液を窒素下で乾燥させた。水を添加し、乾燥物を懸濁／溶解させた。次いで、内容物を３０００×Ｇで遠心分離し、ガラスフィルタ（１ｕｍ）で濾過し、ＨＰＬＣでフィナステリド溶解度を測定した。ＮａＯＨを添加することにより、タンニン酸溶液のｐＨを７にした。ＥＧＣＧはｐＨにほとんど影響を及ぼさない（２００μｇ／ｍｌでｐＨ６に低下）ため、これらの溶液は調節しなかった。
【０１４８】
結果：ＥＧＣＧによりフィナステリドの溶解度は濃度依存的に増加した。１５０ｍｇ／ｍｌのＥＧＣＧでは、フィナステリドの溶解度は２５℃または３７℃で７５μｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌ超に向上し、溶液は２５℃で２４時間にわたり安定であった。タンニン酸でも類似の効果が認められ、２００ｍｇ／ｍｌのタンニン酸を用いるとフィナステリドの溶解度８〜１０ｍｇ／ｍｌが可能となった。
【０１４９】
方法：ＰＶＡフォーム塞栓用粒子（Ｃｏｏｋ．Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ  ＩＮ）サイズ１８０〜３００ｕｍ。２２０ｍｇのバイアルを２つに分割した。ＥＧＣＧ１５０ｍｇとフィナステリド１０ｍｇ、またはタンニン酸２５０ｍｇとフィナステリド１ｍｇをエタノールから一般的な皮膜として乾燥させ、水１ｍｌに可溶化させて、ＰＶＡ粒子１００ｍｇに添加した。溶液を３０分間混合した。この時点で、溶液からＥＧＣＧまたはタンニン酸の色（それぞれ桃色または褐色）は全て消失してＰＶＡに移ったことが認められ、ＰＶＡはこの時点でひどく着色していた。溶液を廃棄し、ＰＶＡを凍結乾燥した。ＥＧＣＧ製剤１０ｍｇまたはタンニン酸製剤５ｍｇをＰＢＳ（ｐＨ７．４）２ｍｌに添加し、フィナステリドの放出を２週間にわたり測定した。
【０１５０】
Ｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅｓ：シリンジ内容物（（Ｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅｓ  ５００−７００ｕｍ  Ｍｅｒｉｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓ．Ｊｏｒｄａｎ  ＵＴ）を２つに分割し、フィナステリドの水溶液（上記の乾燥フィルムから調製、ＥＧＣＧまたはタンニン酸３５ｍｇ中に１ｍｇ／ｍｌ）中で振盪しながら３０分間インキュベートした。この時点で、溶液からＥＧＣＧまたはタンニン酸の色（それぞれ橙色または褐色）が全て消失し、Ｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅｓに移ったことが認められ、Ｅｍｂｏｓｐｈｅｒｅｓはこの時点でひどく着色していなかった。溶液を廃棄した。次いで、得られた粒子（まだ湿っている）の２０％をＰＢＳ２ｍｌが入ったマイクロ遠心管に入れ、薬物放出を測定した。
【０１５１】
結果：製剤は全て、薬物を制御放出した。最速の放出が認められたのはタンニン酸／フィナステリド溶液と共にインキュベートしたＰＶＡであった（３日で１００％放出）が、他の塞栓用粒子は薬物を２週間にわたり放出した。（図１８）
【０１５２】
実施例２３．ＰＬＧＡマイクロスフェア＋／−ｅｇｃｇまたはタンニン酸からのフィナステリドの放出
直径約２００μｍのＰＬＧＡマイクロスフェアへのパクリタキセルとタンニン酸またはＥＧＣＧの封入
方法：本方法は、ポリマーＰＬＧＡ（通常、２０％ｗ／ｖ）と薬物（通常、ポリマーに対して５％ｗ／ｗ）とＥＧＣＧ（例えば、ポリマーに対して２０％ｗ／ｗ／）とのジクロロメタン（ＤＣＭ）（５ｍｌ）溶液をピペットで取り、２．５％ＰＶＡ水溶液１００ｍｌに４５０ｒｐｍで撹拌しながら入れる工程を含んだ。懸濁液を２時間撹拌し、マイクロスフェアを蒸留水中で４回洗浄した。次いで、マイクロスフェアを２日間減圧乾燥した。薬物の封入は、既知の重量のマイクロスフェアをジクロロメタン１ｍｌに溶解した後、アセトニトリル／水（６０：４０）１０ｍｌですぐに希釈することにより測定した。この溶液の上相および下相中の薬物またはＥＧＣＧの量は、ＨＰＬＣ法（移動相、アセトニトリル：水：メタノール、５８：３７：５。ｃ１８カラムで毎分１ｍｌの流量、２３２ｎｍで検出）を用いて測定した。
【０１５３】
結果：ＥＧＣＧとパクリタキセルの両方をＰＬＧＡマイクロスフェアに高効率（５０％超の効率）で封入した。マイクロスフェアの収率は良好（５０％超）であった。マイクロスフェアは直径約２００ミクロンであり、ＥＧＣＧがスフェアに封入された明確な証拠があり、スフェアは色が桃色（ＥＧＣＧの色）に見え、ＰＬＧＡマイクロスフェアでは、光学顕微鏡下でＥＧＣＧの小さい粒子を見ることができた。
【０１５４】
タンニン酸：水中油中水型エマルションと称される、代替の方法を使用した。この方法は、タンニン酸を少量（典型的には２００μｌ）の０．０５％Ｓｐａｎ８０水溶液に予め溶解し、この非混和性水相をＰＬＧＡ／パクリタキセル／ＤＣＭ相に添加し、チップ音波処理する工程を含んだ。これにより、Ｓｐａｎにより安定化されたＰＬＧＡ溶液中に水滴の一次エマルションが形成する。このエマルションをピペットで取ってＰＶＡ溶液に入れると、マイクロスフェアがうまく形成した。この方法を使用して、パクリタキセルとタンニン酸の添加量が両方とも高い（５０％超）マイクロスフェア（２００μｍ）を高収率（５０％超）で得た。マイクロスフェアの色は淡褐色であり、これはタンニン酸が封入されていることを示した。
【０１５５】
方法：これらの試験では、マイクロスフェア１０ｍｇをマイクロ遠心管内のリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４  １０ｍＭリン酸塩）２ｍｌに懸濁し、８ｒｐｍ、３７℃で混転した。次いで、管を１２０００×ｇで遠心分離し、ＨＰＬＣで薬物を分析するために上清を回収した。次いで、新しいＰＢＳ２ｍｌをマイクロスフェアの上に加え、それを３７℃のオーブンに戻し、混転しながら継続してインキュベートした。
【０１５６】
フィナステリド：ＰＬＧＡマイクロスフェアからのフィナステリドの放出速度を図１９に示す。製剤中にＥＧＣＧまたはタンニン酸が含まれなかった場合、フィナステリドはＰＬＧＡから非常にゆっくり放出しされ、３２日後に放出されていたのは、封入された薬物の７％だけであった。しかし、ＥＧＣＧまたはタンニン酸をマイクロスフェアに添加すると、薬物の放出速度が大きく向上し、これらのでは共に、最初の２０日間にわたりフィナステリドの一定した放出速度が得られた（薬物の約８０％が放出された）後、次の２０日間にわたり比較的遅い一定した放出が得られた。約４０日後に再度、放出速度が増加し、ついにマイクロスフェアは５０日目までに完全に破壊し、分解した。
【０１５７】
この試験の終了時、ポリマーと薬物との残留塊をＤＣＭに溶解し、薬物をアセトニトリル：水、６０：４０に抽出して残留薬物を測定した。残留薬物の量は、元の添加量の％として表す場合、ｐｌｇａ単独では（３１日の時点で）８９％、ｅｇｃｇでは１６％、タンニン酸では（共に５１日の時点で）８％であった。これらの結果は、ＰＬＧＡ単独のスフェア中にはほぼ全ての薬物が残存し、ＥＧＣＧ製剤とタンニン酸製剤ではポリマー中に薬物が少量しか残存しなかったという点で放出プロファイルとほぼ一致する。
【０１５８】
ＥＧＣＧまたはタンニン酸：ＰＬＧＡマイクロスフェアからのＥＧＣＧまたはタンニン酸の放出も測定した。ＥＧＣＧとタンニン酸は共に、１０日間にわたりそれぞれ約４５％および約６５％のレベルまで一定して放出した。その後、放出速度は非常に遅く、３１日までに検出不可能となった。
【０１５９】
これらのプロファイルにより、ＥＧＣＧまたはタンニン酸を含有するＰＬＧＡマイクロスフェアがフィナステリドの放出制御製剤として優れた品質を有することが立証される。３０日間にわたるＥＧＣＧまたはタンニン酸の連続放出により、これらの化合物の放出制御も幾らか可能となる。
【０１６０】
実施例２４：ＥＧＣＧ濃度またはタンニン酸濃度によるフィナステリドの溶解度；温度の影響および溶液の２４時間安定性。
【０１６１】
方法：薬物とＥＧＣＧまたはタンニン酸を、様々な薬物対ＥＧＣＧ比または薬物対タンニン酸比のアセトニトリル（タンニン酸ではメタノール）溶液から乾燥させた。ＰＢＳ（ＥＧＣＧ）または水（タンニン酸、ｐＨを７に調節）を添加し、最終溶液を０．２２ｕｍのフィルタで濾過して粒子状物質を除去し、ＨＰＬＣ法を用いて溶液の薬物濃度を分析した。
【０１６２】
結果：ＥＧＣＧは、ＥＧＣＧの最大濃度１ｍｌ当たり１５０ｍｇまでフィナステリドを可溶化させ、このときの薬物の溶解度は約１１０００μｇ／ｍｌであり、溶液は２４時間安定であった（図２０）。タンニン酸は、２００ｍｇ／ｍｌＥＧＣＧのタンニン酸の最大濃度までフィナステリドを可溶化させ、このときの薬物の溶解度は約１００００μｇ／ｍｌであった（図２１）。溶液は全て２４時間安定であり、温度の影響を受けなかった。
【０１６３】
実施例２５．ＥＧＣＧまたはタンニン酸を担体として含む溶液を用いたブタ膀胱組織内へのドセタキセルまたはパクリタキセルの取り込み。
【０１６４】
方法：新しいｅｘ  ｖｉｖｏブタ膀胱を直径２ｃｍの片に切断し、フランツ型拡散セルに装着した。トリチウム標識ドセタキセル溶液またはトリチウム標識パクリタキセルの溶液は、ＥＧＣＧまたはタンニン酸と薬物を少量のトリチウム標識薬物（Ｍｏｒａｖｅｋ  ＣＡ、１μＣｉ／μｌ）と共にエタノールに溶解し、乾燥することにより製造した。あるいは、ドセタキセルまたはパクリタキセルは、薬物の市販の製剤を希釈する（ドセタキセルにはｔｗｅｅｎ  ８０、およびパクリタキセルにはｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ことにより同じ薬物溶液濃度に調製した。次いで、溶液をｐＨ７．４のタイロード緩衝液で調製し、４００ｕｌを組織の尿路上皮側に２時間加えた。次いで、組織を凍結し、液体シンチレーション法により放射能計数を行うために凍結切断した。
【０１６５】
結果：実験１：５０ｍｇ／ｍｌのＥＧＣＧまたはタンニン酸中に２００μｇ／ｍｌのドセタキセルまたはパクリタキセルを含むものを用いると、それぞれ図２２Ａおよび図２２Ｂに示すように、高レベルの薬物が膀胱組織を透過できるようになる。この薬物透過レベルは、薬物のｔｗｅｅｎ製剤またはｃｒｅｍｏｐｈｏｒ製剤を用いて達成されるレベルをはるかに超える。
【０１６６】
ＥＧＣＧまたはタンニン酸を薬物担体として用いると、膀胱組織内への高レベルの薬物透過が可能となる。
【０１６７】
実施例２６．ＥＧＣＧまたはタンニンを含むメトキシポリエチレングリコールペーストを用いたブタ膀胱組織内へのパクリタキセルの取り込み。
【０１６８】
方法：新しいｅｘ  ｖｉｖｏブタ膀胱を直径２ｃｍの片に切断し、フランツ型拡散セルに装着した。メトキシポリエチレングリコール（ＭＥＰＥＧ  ３５０、Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ）５７重量％、タンニン酸またはｅｇｃｇ３８重量％、および薬物５重量％を３Ｈ（トリチウム）標識薬物（１ｕＣｉ／ｕｌ）１０ｕｌと共に含有する、トリチウム標識パクリタキセルを添加したポリマーペーストは、少量のエタノールに溶解することにより製造し、ブレンドしながら乾燥させた。ペースト１００ｍｇを膀胱組織の血管周囲側または尿路上皮側に塗布し、ｐＨ７．４のタイロード緩衝液２００ｕｌを添加した。組織を３７℃で２時間インキュベートした後、拡散セルを分解し、ペーストが残存しないように過剰のタイロードで組織を洗浄した後、組織を凍結し、液体シンチレーション法により放射能計数するために凍結切断した。
【０１６９】
結果：図２３に示すように、膀胱壁の尿路上皮側または血管周囲側に塗布したとき、ＥＧＣＧ添加製剤とタンニン酸添加製剤では共に、膀胱組織内へのパクリタキセルの透過が可能となった。データは、各塗布面からの距離として示し、尿路上皮データは尿路上皮表面から外側脂肪層（精嚢周囲表面）までの組織深度プロファイルを反映し、精嚢周囲データは逆方向である。
【０１７０】
実施例３０  ＥＧＣＧまたはタンニン酸をトリブロック共重合体またはジブロック共重合体−メトキシポリエチレングリコール中に含むペーストの精嚢周囲への塗布を用いた、ブタ膀胱組織内へのパクリタキセルまたはドセタキセルの取り込み
【０１７１】
方法：新しいｅｘ  ｖｉｖｏブタ膀胱を直径２ｃｍの片に切断し、フランツ型拡散セルに装着した。メトキシポリエチレングリコール（ＭＥＰＥＧ  ３５０、Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ）４５重量％、トリブロック共重合体またはジブロック共重合体３０重量％とタンニン酸またはｅｇｃｇ２５重量％、および薬物５重量％を３Ｈ（トリチウム）標識薬物（１μＣｉ／μｌ）１０μｌと共に含有する、トリチウム標識パクリタキセルまたはトリチウム標識ドセタキセルを添加したポリマーペーストは、少量のエタノールに溶解することにより製造し、ブレンドしながら乾燥させた。ジブロック共重合体の合成は実施例Ｘに記載の通りであり、分子量２０００のＭＥＰＥＧ分子と分子量１３３０のポリ乳酸とからなった。トリブロック共重合体は自家合成したものであり、（ポリカプロラクトン、ポリ乳酸、ポリエチレングリコール、３５／３５／３０の組成を有し、総分子量４６００である。トリブロックは、カプロラクトン（Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）乳酸（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびポリエチレングリコール（Ｓｉｇｍａ、分子量１３８０）の混合物を窒素下で１２０℃に終夜加熱した後、冷却し、ヘキサンまたは冷エタノール中で洗浄することにより合成した。ペースト１００ｍｇを膀胱組織の血管周囲側に塗布し、ｐＨ７．４のタイロード緩衝液２００ｕｌを添加した。組織を３７℃で２時間インキュベートした後、拡散セルを分解し、ペーストが残存しないように過剰のタイロードで組織を洗浄した後、組織を凍結し、液体シンチレーション法により放射能計数するために凍結切断した。
【０１７２】
結果：膀胱壁の精嚢周囲側に塗布したとき、ＥＧＣＧ添加トリブロック共重合体製剤とタンニン酸添加トリブロックコルポリマー製剤は共に、膀胱組織内へのパクリタキセルの透過とドセタキセルの透過を両方とも可能にした。図２４に、データを塗布面から尿路上皮側への距離として示す。図２５に示すように、ＥＧＣＧ添加ジブロック共重合体製剤とタンニン酸添加ジブロック共重合体ペーストは共に、膀胱壁の精嚢周囲側に塗布したとき、膀胱壁中へのパクリタキセルの透過を可能にした。
【０１７３】
１．表面を有する基部構造と、ガレート含有化合物のマトリックス内に可溶化された水不溶性治療剤を含む表面上のコーティングと、を含む医療用デバイス。
【０１７４】
２．ガレート含有化合物と水不溶性治療剤が、ガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比１：４０〜５００：１で存在する、請求項１に記載の医療用デバイス。
【０１７５】
３．コーティングが、治療剤の放出速度を変化させる追加のポリマー担体または非ポリマー担体を含まない、請求項１に記載の医療用デバイス。
【０１７６】
４．ガレート含有化合物がエピガロカテキンガレート、タンニン酸およびエピカテキンガレートからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１７７】
５．ガレート含有化合物が、デンドリマー、ポリマー、高分子または低分子などのガレート置換分子を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１７８】
６．ガレート含有化合物がタンニン酸である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１７９】
７．ガレート含有化合物がエピガロカテキンガレートである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１８０】
８．ガレート含有化合物と水不溶性治療剤が、ガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比３０：１〜５００：１で存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１８１】
９．水不溶性治療剤がガレート含有化合物のマトリックス内に含有され、水不溶性治療剤が、ガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比３０：１〜１００：１で存在する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１８２】
１０．埋め込み型医療用デバイスが拡張型デバイスである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１８３】
１１．拡張型デバイスがバルーンである、請求項１０に記載の医療用デバイス。
【０１８４】
１２．拡張型デバイスがステントである、請求項１０に記載の医療用デバイス。
【０１８５】
１３．医療用デバイスが、ステント、脈管用ステント、尿管用ステント、カテーテル、バルーン、バルーンカテーテル、ステントグラフト、ワイヤガイド、およびカニューレからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１８６】
１４．水不溶性治療剤が、免疫抑制剤、増殖抑制剤、微小管安定剤、再狭窄抑制剤、または哺乳類ラパマイシン標的阻害剤である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１８７】
１５．水不溶性治療剤がタキサン化合物である、請求項１４に記載の医療用デバイス。
【０１８８】
１６．タキサン化合物がパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項１５に記載の医療用デバイス。
【０１８９】
１７．治療剤がマクロライド系免疫抑制剤である、請求項１４に記載の医療用デバイス。
【０１９０】
１８．マクロライド系免疫抑制剤がシロリムス、ピメクロリムス、タクロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、ノボリムス、ミオリムス、テムシロリムス、デフォロリムス、またはバイオリムスである、請求項１７に記載の医療用デバイス。
【０１９１】
１９．コーティング層が基部構造の表面に直接接着している、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１９２】
２０．ガレート含有化合物が、コーティングからの水不溶性治療剤の放出速度を増加させるのに有効な量で存在する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１９３】
２１．コーティングが水不溶性治療剤とガレート含有化合物とから本質的になる、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１９４】
２２．ガレート含有化合物は、デバイスを静的条件下、３７℃で水溶液に浸漬したとき、デバイスからの水不溶性治療剤の放出速度を増加させるのに有効な量で存在する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医療用デバイス。
【０１９５】
２３．基部構造と、
ガレート含有化合物および水不溶性治療剤を含む組成物と、
を含む医療用デバイスであって、ガレート含有化合物と水不溶性治療剤が１：４０〜５００：１の重量比で存在し、組成物が基部構造に少なくとも部分的に組み込まれている、医療用デバイス。
【０１９６】
２４．基部構造がポリマー粒子またはポリマー材料を含む、請求項２３に記載の医療用デバイス。
【０１９７】
２５．水不溶性治療剤を患者の組織に局所的に送達する方法であって、患者の脈管壁を請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医療用デバイスと接触させる工程と、水不溶性治療剤を患者の組織に送達するのに十分な時間、デバイスを脈管壁と接触した状態に維持する工程とを含み、ガレート含有化合物が組織への生理活性物質の送達を向上させる、方法。
【０１９８】
２６．液体、水不溶性治療剤およびガレート含有化合物を含む流動性媒体を、埋め込み型医療用デバイス構造の表面に、または埋め込み型医療用デバイス構造により担持されたコーティング層の表面に塗布する工程と；媒体から液体を除去して、水不溶性治療剤およびガレート含有化合物を含むコーティング層を形成する工程と、
を含む、医療用デバイスの製造方法。
【０１９９】
２７．ガレート含有化合物がエピガロカテキンガレートである、請求項２６に記載の本方法。
【０２００】
２８．ガレート含有化合物がタンニン酸である、請求項２６に記載の本方法。
【０２０１】
２９．除去する工程が蒸発工程を含む、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の本方法。
【０２０２】
３０．埋め込み型医療用デバイスが拡張型デバイスである、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の本方法。
【０２０３】
３１．拡張型デバイスがバルーンである、請求項３０に記載の本方法。
【０２０４】
３２．バルーンが血管形成術用バルーンである、請求項３１に記載の本方法。
【０２０５】
３３．拡張型デバイスがステントである、請求項３０に記載の本方法。
【０２０６】
３４．水不溶性治療剤がタキサンである、請求項２６〜３３のいずれか一項に記載の本方法。
【０２０７】
３５．タキサンがパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項３４に記載の本方法。
【０２０８】
３６．水不溶性治療剤が哺乳類ラパマイシン標的阻害剤である、請求項２６〜３３のいずれか一項に記載の本方法。
【０２０９】
３７．哺乳類ラパマイシン標的阻害剤がマクロライド系免疫抑制剤である、請求項３６に記載の本方法。
【０２１０】
３８．水不溶性治療剤がガレート含有化合物に対して５００：１〜１：４０の範囲の重量比で流動性媒体中に存在する、請求項２６〜３７のいずれか一項に記載の本方法。
【０２１１】
３９．疾患に罹患しているまたは症状のある患者の治療方法であって、患者に請求項１〜２４のいずれか一項に記載の埋め込み型医療用デバイスを、治療有効量の水不溶性治療剤を患者の組織に送達するのに十分な時間埋め込む工程を含み、ガレート含有化合物が組織への水不溶性治療剤の送達を向上させる、方法。
【０２１２】
４０．ガレート含有化合物と水不溶性薬物が、薬物を後で放出することを可能にするマトリックスに封入され、マトリックスがポリマーマイクロスフェア、ナノ粒子、フィルムおよびペーストからなる群から選択される組成物を含む、請求項３９に記載の方法。
【０２１３】
４１．医療用デバイスが、ステント、脈管用ステント、尿管用ステント、カテーテル、バルーン、バルーンカテーテル、ステントグラフト、ワイヤガイド、塞栓用デバイスおよびカニューレからなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【０２１４】
４２．水不溶性治療剤が免疫抑制剤、増殖抑制剤、微小管安定剤、再狭窄抑制剤、または哺乳類ラパマイシン標的阻害剤である、請求項３９に記載の方法。
【０２１５】
４３．水不溶性治療剤がタキサンである、請求項４２に記載の方法。
【０２１６】
４４．タキサンがパクリタキセルである、請求項４３に記載の方法。
【０２１７】
４５．水不溶性治療剤がマクロライド系免疫抑制剤である、請求項４２に記載の方法。
【０２１８】
４６．マクロライド系免疫抑制剤がシロリムス、ピメクロリムス、タクロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、ノボリムス、ミオリムス、テムシロリムス、デフォロリムス、またはバイオリムスである、請求項４５に記載の方法。
【０２１９】
４７．疾患に罹患しているまたは症状のある患者の治療方法であって、治療有効量のガレート含有化合物と水不溶性治療剤とを含む組成物を投与する工程を含み、それらがガレート含有化合物対水不溶性治療剤の重量比３０：１〜５００：１で存在し、ガレート含有化合物が患者の組織への水不溶性治療剤の送達を向上させる、方法。
【０２２０】
特定の例示的実施形態を参照して、本発明を説明し、例証してきたが、本発明はこれらの例示的実施形態に限定されるものではない。以下の特許請求の範囲により定義される本発明の真の範囲および精神から逸脱することなく変更および修正を行い得ることが当業者には分かるであろう。従って、添付の特許請求の範囲およびその均等範囲に入る全てのこのような変更および修正は本発明に含まれるものとする。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
0006270165.tif 000004
【図１Ｃ】
0006270165.tif 000005
【図２Ａ】
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【図２ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６ａ】
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【図１６ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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