(57)【要約】本発明は、核酸の経皮送達のための処方物および関連法に関する。具体的には、本発明は、脂質およびアルコールを含む処方物で、核酸の効果的経皮送達を実現することが可能な処方物に関する。本処方物は、遺伝子治療および病気処置のために核酸を効果的に送達するのに使用することが可能である。一実施態様では、本発明の処方物は、皮膚障害の治療であって、皮膚に局在する標的細胞に核酸を送達することによる治療のために使用することが可能である。このような障害の例としては、ただしこれらに限定されないが、先天性爪肥厚、毛包角化症、乾癬、皮膚炎、他の、ケラチン過剰発現障害などが挙げられる。
2010516816.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸の皮膚送達のための組成物であって：
ａ）核酸；
ｂ）少なくとも一つの中性脂質；および
ｃ）アルコール
を含む、組成物。
【請求項２】
中性脂質は、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記中性脂質および前記エタノールが、処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の、中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり５０μｇから２０００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり７５μｇから１５００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、殺虫剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記殺虫剤が、塩化ベンゼトニウムである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、浸透促進剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第四アンモニウム塩が塩化ベンゼトニウムである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記核酸がＲＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＲＮＡが２本鎖である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
前記核酸がＤＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記アルコールがエタノールである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
対象に対し核酸を経皮的に送達する方法であって：
該対象の皮膚表面に、ある量の、核酸含有経皮処方物を塗布することを含み、該経皮処方物が、中性脂質類およびアルコールの混合物を含む、方法。
【請求項２５】
前記経皮処方物が、ペーストまたはクリームの形態である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記経皮処方物が、経皮パッチとして貼付される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記皮膚表面が、前記経皮処方物の適用後塞がれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記中性脂質および前記エタノールが、前記処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり、１００から１０００μｇの量で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり、約４００から８００μｇの量で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
前記組成物が、殺虫剤をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
前記殺虫剤が、塩化ベンゼトニウムである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物が浸透促進剤をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３８】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項４０】
前記アルコールがエタノールである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
対象に対し核酸を経皮的に送達するための経皮薬剤の調製における中性脂質およびアルコールの使用。
【請求項４２】
前記経皮薬剤が、ペーストまたはクリームの形態である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項４１に記載の使用。
【請求項４４】
前記中性脂質および前記アルコールが、処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項４１に記載の使用。
【請求項４５】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４６】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４７】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４８】
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、請求項４１に記載の使用。
【請求項４９】
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、請求項４１に記載の使用。
【請求項５０】
前記経皮薬剤が、殺虫剤をさらに含む、請求項４１に記載の使用。
【請求項５１】
前記経皮薬剤が、浸透促進剤をさらに含む、請求項４１に記載の使用。
【請求項５２】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項４１に記載の使用。
【請求項５４】
前記アルコールがエタノールである、請求項４１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの経皮送達に使用される処方物および方法に関する。この処方物および方法は、種々の病態および疾患を効果的に治療するために、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの、効果的経皮的送達を実現することが可能である。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子発現のコントロールは、種々の疾患または臨床状態に対し実行可能な処置と考えられる。遺伝子発現を追求する、一般的なアプローチは二つある。一つのアプローチ、遺伝子治療は、欠陥性突然変異対立遺伝子を機能的遺伝子によって補完することによって、遺伝子発現の、上記コントロールを実現することを目標とする。もう一つのアプローチ、アンチセンス治療法（ｓｉＲＮＡの使用を含む）は、標的遺伝子によって生産されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に結合し、それを不活性化して、その遺伝子を効果的に抑制、または「スイッチオフ」する、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、または化学的類縁体）鎖の合成および送達を含む。このアプローチとは無関係に、遺伝子発現に対する効果的コントロールの実現を阻む一つの共通のハードルが存在する。標的細胞に対する核酸の送達である。
【０００３】
そのため、細胞に核酸を送達するための効果的手段を見出すために研究が続けられている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、その関心を、核酸の経皮送達のための処方物に向ける。一実施態様では、核酸の皮膚送達のための組成物が提供される。この組成物は、ある量の核酸、少なくとも一つの中性脂質、およびアルコールを含む。
【０００５】
別の実施態様では、核酸の経皮送達のための方法は、ある量の核酸含有処方物を、皮膚表面に塗布することを含む。この核酸含有処方物は、核酸、少なくとも一つの中性脂質、およびアルコールを含む。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】局所的に塗布したルシフェラーゼリポーター遺伝子の、２４時間インキュベーション期間後における、マウスのインビボ画像を示す。ルシフェラーゼ発現プラスミドは、脂質／エタノール処方物の一部として、マウスの剃毛皮膚に局所的に塗布した。２４時間のインキュベーション期間後、ルシフェリンをＩＰ注入し、生きているマウスを、高感度、冷却ＬＣＤカメラによって画像化し、定量化した（赤は、最高のルシフェラーゼ発現である）。図１Ａは、２５〜５０μｇの蛍ルシフェラーゼプラスミドの投与を受けた４匹のマウスを示す。図１Ｂは、ルシフェラーゼ含有経皮処方物の用量反応を示し（上段左、中断左、中断右、下段左は、処方の一部として塗布された、ルシフェラーゼプラスミドの総量が７５、２０、５、および０μｇであった）；下段右では、処方物は、７５μｇのＤｓＲｅｄを含み、これは陰性コントロールとして用いた。上段右は、リン酸緩衝生理的食塩水に溶解したルシフェラーゼプラスミドコントロール２０μｇの皮内注入を示す。
【図２】マウスの子宮頸部に局所的に塗布したルシフェラーゼリポーター遺伝子の、マウスのインビボ画像を示す。ルシフェラーゼ発現プラスミド（２０μｇのｐＣＤＮＡ３．１ｆＬｕｃ）を、本発明の処方物（実施例３を参照）を用いて、マウスの子宮頸部に局所的に塗布した。２４時間後、ルシフェリンをＩＰ注入し、生きているマウスを高感度冷却ＬＣＤカメラを用いて撮像し、定量化した（赤は、最高ルシフェラーゼ発現である）。
【図３】本発明の経皮処方物の組織分布を示す。処方物は、剃毛マウスに対し局所的に塗布した。２４時間後、皮膚を、ＯＴＣ媒体において凍結し、マイクロトームによって薄切した。処方物を、蛍光顕微鏡によって可視化した（脂質成分の蛍光特性による）図３Ａ。蛍光の主要領域は毛嚢および表皮である。明視野画像を図３Ｂに示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明の特定の実施態様を開示し、説明する前に、本発明は、本明細書に開示される特定のプロセスおよび物質に限定されないことを理解しなければならない。なぜなら、それらはある程度変動する可能性があるからである。さらに、本明細書で使用される用語法は、特定の実施態様のみを記載する目的で使用されるもので、限定的であることを意図するものではないことを理解しなければならない。
【０００８】
本発明を説明し、その特許を主張するに当たり、下記の用語法を使用する。
【０００９】
単数を示す表現「一つの」および「前記」は、文脈が明瞭に別様に指示するのでない限り、複数参照を含む。したがって、例えば、「あるＲＮＡ配列」への参照は、一つ以上のそのようなＲＮＡ配列への参照を含み、「該遺伝子突然変異」への参照は、一つ以上のそのような遺伝子突然変異への参照を含む。
【００１０】
本明細書で用いる「対象」は、本発明の、核酸含有組成物の投与、または方法から利益を受ける可能性のある哺乳動物を指す。対象の例としては、ヒト、および他の哺乳動物、例えば、ウマ、ブタ、ウシ、イヌ、ネコ、ウサギ、および水性哺乳類が挙げられる。
【００１１】
「遺伝子」という用語は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む核酸を指す。
【００１２】
「核酸」という用語は、本発明の処方物と組み合わせて使用される場合、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの形を取る、核酸重合体を指す。
【００１３】
本明細書で用いる「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、相互交換的に使用され、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、およびそれらの修飾形のポリマーであって、一本鎖、または二本鎖として存在する、別の断片形、または、より大きな構築体の一成分の形状を取る修飾形ポリマーを指す。本発明の処方物において使用が可能なポリヌクレオチドとしては、該処方物の送達目標に応じて適宜に、ＤＮＡまたはＲＮＡの、センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが挙げられる。ＤＮＡまたはＲＮＡ分子は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはそのハイブリッド、または、ＲＮＡ分子、例えば、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡなどであってもよい。
【００１４】
本発明において使用されるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知のハイブリダイゼーション法を用いて取得することが可能である。ＤＮＡおよびＲＮＡ配列は、当該技術分野で周知の自動化核酸合成装置を用いて合成してもよい。ｓｈＲＮＡを含むＲＮＡを調製するには、当該技術分野で周知の方法によるインビトロ転写を用いることも可能である。ポリヌクレオチド混合物を生成するには、周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の使用が特に好ましい。ゲノム核酸は、当該技術分野で周知の手段によって調製してもよい。
【００１５】
本発明のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのバイオアベイラビリティーおよびハイブリダイゼーション特性を向上させるために、修飾されたヌクレオシド間リン酸バックボーンを含んでもよい。この結合は、ただしこれらに限定されないが、フォスフォジエステル、フォスフォロアニロテイエート、フォスフォロアニリデート、フォスフォルアミデート、フォスフォロチエート、フォスフォロジチエート、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。
【００１６】
オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、遺伝子構築体、または発現ベクターの一部であってもよい。「遺伝子構築体」または「発現ベクター」という用語は、標的タンパクをコードし、プロモーターなどの調節要素に動作可能的に連結される開始および終止シグナル、および標的細胞における発現を指令することが可能なポリアデニル化シグナルを含む、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子を指す。
【００１７】
本明細書で用いる「標的細胞（単数）」または「標的細胞（複数）」は、本発明の経皮処方物を用いて送達される核酸を受容する細胞を指す。
【００１８】
本明細書において、遺伝子発現に関連して用いられる「の抑制」または「の沈黙化」という用語は、標的遺伝子由来のタンパクレベルの消失、または少なくとも観察可能な減少を指す。
【００１９】
遺伝子配列に関連して「発現」という用語は、遺伝子の転写、および、適宜に、得られたｍＲＮＡ転写物の、タンパクへの翻訳を指す。
【００２０】
本明細書で用いる「有効量の」、または「治療的有効量の」核酸とは、意図する課業を実行し、意図する結果を実現するのに十分な量の核酸を指す。例えば、有効量のｓｉＲＮＡとは、ケラチン遺伝子の発現を沈黙化するのに十分な量であってもよい。様々な生物学的因子が、ある特定のＲＮＡ配列の、その意図する課業を実行する能力に対し影響を及ぼす可能性のあることが知られる。したがって、「有効量」、または「治療的有効量」は、ある場合には、そのような生物学的因子に依存する場合がある。さらに、治療作用の実現は、医師、または、他の医療担当の専門家によって、当該技術分野で公知の評価を用いて測定される場合のある一方で、治療に対する個別の変動および反応は、治療作用の実現をいく分主観的判断とする可能性のあることが認められる。有効量の決定は、製薬学および医学の技術分野における通常の技能範囲の中に十分納まる。
【００２１】
本明細書で用いる「処方物」および「組成物」という用語は、相互交換的に使用され、二つ以上の化合物、元素、または分子の混合物を指す。ある局面で、「処方物」および「組成物」という用語は、一つ以上のヌクレオチド配列の、担体または他の賦形剤との混合物を指すのに用いられてもよい。
【００２２】
「経皮」という用語は、経皮処方物が皮膚表面に投与される場合、皮膚表面を通過する薬剤の転送を促進する投与ルートを指す。
【００２３】
「皮膚」または「皮膚表面」という用語は、一層以上の表皮層を含む、対象の外皮を含むだけでなく、薬剤組成物が投与される可能性のある粘膜表面も含むことが意図される。粘膜表面の例としては、呼吸腔（鼻腔および肺腔を含む）、口腔（口腔および頬内腔）、膣腔、および直腸腔が挙げられる。したがって、「経皮」という用語は、「経粘膜」も包含する。
【００２４】
「促進」または「浸透促進」という用語は、薬剤が皮膚を通して浸透する速度を増すように、薬剤に対する、皮膚の透過性を増すことを意味する。したがって、「浸透促進剤」、または単純に「促進剤」は、このような浸透強化を実現する薬剤、または薬剤の混合物を指す。
【００２５】
「局所処方物」とは、薬剤が、皮膚表面に対する直接塗布のために導入され、それから有効量の該薬剤が放出される組成物を意味する。
【００２６】
本明細書で用いる「約」という用語は、ある数値範囲端点について、ある与えられた数値が、該端点よりも「少し上」または「少し下」の可能性があることを提示することによって、該端点に対し変動性を与えるために使用される。
【００２７】
本明細書における使用において、配列、化合物、処方物、送達機構、または他の項目も、都合のために一般的リストの中に提示される場合がある。しかしながら、これらのリストにおいて、そのリストの各メンバーが、あたかも独自の、特異なメンバーとして個別に特定されるかのように考えてはならない。したがって、このようなリストの、どの個別メンバーについても、単に、そうではないという指示が無いまま一般的グループの中にそれが提示されていることだけに基づいて、同じリストの、いずれかの他のメンバーと事実上等価であると見なす、ということをしてはならない。
【００２８】
濃度、量、およびその他の数値データは、本明細書では、範囲形式で表現または提示される場合がある。このような範囲形式は、単に、便利と短縮のために使用されるものであり、したがって、範囲の限界として明瞭に言及される数値だけでなく、その範囲内に包含される、個別数値または付属範囲も全て、あたかも各数値および付属範囲が明瞭に言及される場合と同様に、含むものと弾力的に解釈すべきものと理解しなければならない。具体例として挙げると、「約０．５から１０ｇ」という数値範囲は、約０．５ｇから約１０．０ｇの、明瞭に言及された数値だけでなく、その表示の範囲内の個別数値および付属範囲も含むものと解釈しなければならない。したがって、この数値範囲に含まれるのは、個別の数値、例えば、２、５、および７、および、付属範囲、例えば、２から８、４から６、などである。この同じ原理は、一数値のみを言及する範囲にも適用される。さらに、この解釈は、範囲の広さ、または記載される特徴とは無関係に適用されなければならない。
【００２９】
別様に定義されない限り、本明細書で用いる技術および科学用語は全て、本発明の属する技術分野において通常の技能を有する当業者において一般的に理解されるものと同じ意味を持つ。本明細書に記載されるものと同様であるか、または等価であれば、いずれの方法、デバイス、および材料であれ、本発明の実施または試験に使用することが可能であるが、下記に、代表的方法、デバイス、および材料を記載する。
【００３０】
本発明は、オリゴヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドの効果的経皮送達のための処方物、および関連方法に関する。本発明の処方物は、脂質およびエタノールを含むことも可能である。本処方物はさらに、抗微生物剤および／または浸透促進剤を含むことも可能である。
【００３１】
本発明の処方物は、治療される病気または障害、および標的細胞の性質に応じて、皮膚そのものか、またはその下層組織に対し核酸を効果的に送達するために使用することが可能である。一実施態様では、本発明の処方物は、皮膚障害の治療であって、皮膚に局在する標的細胞に核酸を送達することによる治療のために使用することが可能である。このような障害の例としては、ただしこれらに限定されないが、先天性爪肥厚、毛包角化症、乾癬、皮膚炎、他の、ケラチン過剰発現障害などが挙げられる。当業者であれば理解されるように、本処方物によって送達される核酸の性質および配列は、治療される障害または病気に応じて変動することが予想される。
【００３２】
本発明の処方物では、種々の脂質の使用が可能である。一実施態様では、脂質は中性脂質である。使用が可能な脂質の、非限定的例として、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸、および、それらの組み合わせが挙げられる。
【００３３】
本発明の一実施態様では、脂質およびアルコールは、本処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の、脂質対アルコール重量の比で存在する。別の実施態様では、脂質対アルコール重量比は、約１．８：１から約３．５：１である。さらに別の実施態様では、脂質・アルコール重量比は、約２：１から約３：１である。さらに別の実施態様では、脂質・アルコール重量比は、約２．５：１から約３：１である。理論に制限されるものではないが、本出願人らは、上記の、脂質対アルコール比は、本処方物における核酸の効果的経皮送達の実現の一端を担うと考える。前述の脂質対アルコール比はさらに、局所塗布に適切で、望ましい均質性を持つ処方物を生成する。
【００３４】
本発明の処方物に使用することが可能なアルコールの例としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物が挙げられる。一実施態様では、アルコールはエタノールである。
【００３５】
本発明において使用が可能な核酸の量または濃度は変動してよい。一局面では、本処方物において、約５０μｇ／ｍｌから約２０００μｇ／ｍｌ（容量は処方物の容量を指す）の核酸濃度を使用してよい。一実施態様では、処方物は、約７５μｇ／ｍｌから約１５００μｇ／ｍｌの核酸を含むことが可能である。さらに別の実施態様では、処方物は、約１００μｇ／ｍｌから約１０００μｇ／ｍｌの核酸を含むことが可能である。さらに別の実施態様では、処方物は、約４００μｇ／ｍｌから約８００μｇ／ｍｌの核酸を含むことが可能である。
【００３６】
本発明の処方物はさらに、必要に応じて、抗微生物化合物を含むことが可能である。一般に、抗微生物化合物は、それが本処方物の安定性および持続性に悪影響を及ぼさない限り、いずれのものであっても使用することが可能である。一実施態様では、抗微生物化合物は、第四アンモニウム塩、例えば、塩化ベンゼトニウムである。本発明の目的にとって、「第四アンモニウム塩」という用語は、窒素の上に正電荷および対イオンを有する、四価の窒素含有分子を指す。このような第四アンモニウム塩として、脂肪族および芳香族置換基が挙げられる。塩化ベンゼトニウムの外に、使用が可能な、他の第四アンモニウム塩としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、アルキル−、ジメチルベンゼンメタナミニウム塩；アシル−、ジメチルベンゼンメタナミニウム塩；混合アシル−／アルキル−、ジメチルベンゼンメタナミニウム塩；エチルベンジルドデシルジメチルアンモニウムクロリド、ドデシルベンジルトリメチルアンモニウムクロリド、ドデシルベンジルトリエタノールアンモニウムクロリド、塩化ベンゾキソニウム；メチルベンゼトニウムクロリド；フェノクチド；ドデカルボニウムクロリド；および、混合アルキル−／アシル−、アミドプロパルコニウム塩、またはそれらの混合物が挙げられる。他の、非第四アンモニウム塩抗微生物化合物も使用してよい。
【００３７】
抗微生物剤としてのその役割に加えて、ある局面において、第四アンモニウム塩、特に、塩化ベンゼトニウムは、核酸のための浸透促進剤として活動することも可能である。さらに、他の浸透促進剤としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル、グリセロールトリエステル、グリセロールジエステル、グリセロールモノエステル、トリアセチン、短鎖アルコール、尿素、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００３８】
本発明の処方物は、クリームとして塗布することが可能であるが、該処方物は、他の、様々の送達剤形として、例えば、ただしこれらに限定されないが、ゲル、ペースト、軟膏、およびパッチおよびスプレイとして処方することが可能である。本発明の処方物について使用することが可能な、一つのタイプの経皮パッチは、液体貯留システム（ＬＲＳ）型のパッチである。ＬＲＳパッチとして使用する場合、本発明の処方物は、不透支持体、および、皮膚接触透過膜、または、貯留内容物（すなわち、処方物）および皮膚の間の拡散性接触を実現する、膜接着性積層体を持つ貯留槽の中へ封じ込められるように処方することが可能である。着用のためには、剥離可能な開放ライナーが除かれ、パッチは、皮膚表面に接着される。ＬＲＳパッチは、経皮薬剤送達の技術分野において公知である。ＬＲＳ経皮パッチの非限定的例として、米国特許第４，８４９，２２４号、第４，９８３，３９５号に記載または参照されるものがある。なお、これらの特許の全体を、引用により本明細書に含める。
【００３９】
送達剤形に応じて、本発明の処方物はさらに、他の賦形剤、例えば、皮膚軟化剤、増粘剤、界面活性剤などを含んでもよい。一般に、核酸の送達における本処方物の有効性を妨げない限り、当該技術分野で公知の、いずれの賦形剤の使用も可能である。さらに、使用される賦形剤は、いずれのものであれ、核酸の分解を引き起こさないことが必須である。さらに、ある化合物は、処方物において複数の役割を果たすことが可能であることが認められる（例えば、ある化合物は、界面活性剤であり、かつ浸透促進剤である場合があり、あるいは、ある化合物は、皮膚軟化剤で、かつ界面活性剤である場合がある）。
【００４０】
本発明に使用が可能な増粘剤の例として、例えば、ただしこれらに限定されないが、コロイド状増粘剤、例えば、シリカ、ケイ酸アルミニウムマグネシウムなど；天然のポリマー物質、例えば、アルギン酸ナトリウム、キサンタンゴム、マルメロ種子抽出物、トラガカントゴム、でん粉など、半合成ポリマー物質、例えば、セルロースエーテル類（例えば、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、ポリビニールピロリドン、ポリビニールアルコール、グアゴム、ヒドロキシプロピルグアゴム、可溶性でん粉、陽イオンセルロース、陽イオングアなど、および合成ポリマー物質、例えば、カルボキシビニールポリマー、ポリビニールピロリドン、ポリビニールアルコール、ポリアクリル酸ポリマー、ポリアクリルアミドポリマー、ポリメタクリル酸ポリマー、ポリ酢酸ビニールポリマー、ポリ塩化ビニールポリマー、ポリ塩化ビニリデンポリマーが挙げられる。さらに本発明において有用なものは、親水性ゲル化剤、例えば、アクリル酸／アクリル酸エチルコポリマー、および、Ｂ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙによって、Ｃａｒｂｏｐｏｌ樹脂という商標の下で販売されるカルボキシビニールポリマーである。これらの樹脂は、０．７５％から２．００％の架橋剤、例えば、ポリアリルスクロース、またはポリアリルペンタエリスリトールによって架橋される、アクリル酸の、コロイド状水溶性ポリアルケニルポリエーテル架橋ポリマーから事実上成る。例としては、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９３４、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９４０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９５０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９８０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９５１、およびＣａｒｂｏｐｏｌ  ９８１が挙げられる。さらに、上記増粘剤および／またはゲル化剤の任意のもの同士の混合物も使用が可能である。
【００４１】
本発明において使用が可能な皮膚軟化剤の例としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、炭化水素油およびワックス；シリコン油；トリグリセリドエステル；アセトグリセリドエステル；エトキシル化グリセリド；アルキルエステル；アルケニルエステル；脂肪酸；脂肪アルコール；脂肪アルコールエーテル；エーテルエステル；ラノリンおよび誘導体；多価アルコール（ポリオール）、およびポリエーテル誘導体；多価アルコール（ポリオール）エステル；ワックスエステル；蜜蝋誘導体；植物ワックス；アミド；およびそれらの混合物が挙げられる。
【００４２】
本発明において使用が可能な界面活性剤の例としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、ポリエトキシル化脂肪酸、例えば、ＰＥＧ−脂肪酸モノエステル、例えば、ラウリン酸、オレイン酸、およびステアリン酸のエステル；脂肪酸ジエステル、例えば、ＰＥＧ脂肪酸ジエステル；アルコール−油エステル交換反応産物、例えば、ＰＥＧ−３５−ヒマシ油（Ｉｎｃｒｏｃａｓ−３５）、ＰＥＧ−４０水素添加ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０）、ＰＥＧ−２５トリオレエート（ＴＡＧＡＴ［Ｒ］ＴＯ）、ＰＥＧ−６０コーングリセリド（Ｃｒｏｖｏｌ  Ｍ７０）、ＰＥＧ−６０アーモンド油（Ｃｒｏｖｏｌ  Ａ７０）、ＰＥＧ−４０パーム核油（Ｃｒｏｖｏｌ  ＰＫ７０）、ＰＥＧ−５０ヒマシ油（Ｅｍａｌｅｘ  Ｃ−５０）、ＰＥＧ−５０水素添加ヒマシ油（Ｅｍａｌｅｘ  ＨＣ−５０）、ＰＥＧ−８カプリル酸／カプリン酸グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、およびＰＥＧ−６カプリル酸／カプリン酸グリセリド（Ｓｏｆｔｉｇｅｎ  ７６７）、ＰＥＧ−５水素添加ヒマシ油、ＰＥＧ−７水素添加ヒマシ油、ＰＥＧ−９水素添加ヒマシ油、ＰＥＧ−６コーン油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  ２１２５ＣＳ）、ＰＥＧ−６アーモンド油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９６６ＣＳ）、ＰＥＧ−６杏核油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９４４ＣＳ）、ＰＥＧ−６オリーブ油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９８０ＣＳ）、ＰＥＧ−６ピーナツ油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９６９ＣＳ）、ＰＥＧ−６水素添加パーム核油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  ２１３０ＢＳ）、ＰＥＧ−６パーム核油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］  ２１３０ＣＳ）、ＰＥＧ−６トリオレイン（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  ２７３５ＣＳ）、ＰＥＧ−８コーン油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］ＷＬ  ２６０９ＢＳ）、ＰＥＧ−２０コーングリセリド（Ｃｒｏｖｏｌ  Ｍ４０）、およびＰＥＧ−２０アーモンドグリセリド（Ｃｒｏｖｏｌ  Ａ４０）；ポリグリセル化脂肪酸、例えば、ポリグリセリルオレエート（Ｐｌｕｒｏｌ  Ｏｌｅｉｑｕｅ）、ポリグリセリル−２ジオレエート（Ｎｉｋｋｏｌ  ＤＧＤＯ）、およびポリグリセリル−１０トリオレエートが挙げられる。好ましい親水性界面活性剤としては、ポリグリセリル−１０ラウレート（Ｎｉｋｋｏｌ  Ｄｅｃａｇｌｙｎ  １−Ｌ）、ポリグリセリル−１０オレエート（Ｎｉｋｋｏｌ  Ｄｅｃａｇｌｙｎ  １−Ｏ）、およびポリグリセリル−１０  モノ、ジオレエート（Ｃａｐｒｏｌ［Ｒ］ＰＥＧ  ８６０）；プロピレングリコール脂肪酸エステル、例えば、プロピレングリコールモノラウレート（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ  ＦＣＣ）、プロピレングリコールリシノレエート（Ｐｒｏｐｙｍｕｌｓ）、プロピレングリコールモノオレエート（Ｍｙｖｅｒｏｌ  Ｐ−０６）、プロピレングリコールジカプリレート／ジカプレート（Ｃａｐｔｅｘ［Ｒ］２００）、およびプロピレングリコールジオクタノエート（Ｃａｐｔｅｘ［Ｒ］８００）；モノ−およびジグリセリド、例えば、グリセリルモノオレエート（Ｐｅｃｅｏｌ）、グリセリル１５リシノレエート、グリセリルラウレート、グリセリルジラウレート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＧＤＬ）、グリセリルジオレエート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＧＤＯ）、グリセリルモノ／ジオレエート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＧＭＯ−Ｋ）、グリセリルカプリレート／カプレート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＭＣＭ）、カプリル酸モノ／ジグリセリド（Ｉｍｗｉｔｏｒ［Ｒ］  ９８８）、およびモノ−およびジアセチル化モノグリセリド（Ｍｙｖａｃｅｔ［Ｒ］  ９−４５）；ステロールおよびステロール誘導体；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールアルキルエーテル；糖エステル；ポリエチレングリコールアルキルフェノール；ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；ソルビタン脂肪酸エステル、例えば、ソルビタンモノラウレート（Ａｒｌａｃｅｌ  ２０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ−４０）、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ−８０）、ソルビタンモノステアレート、およびソルビタントリステアレート；低級アルコール脂肪酸エステル；イオン性界面活性剤、例えば、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルサルコシン酸ナトリウム、ジオクチルスルフォコハク酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、ラウロイルカミチン、パルミトイルカミチン、およびミリストイルカミチン；非イオン化電離性界面活性剤；電離性界面活性剤；およびそれらの混合物が挙げられる。
【００４３】
本発明の処方物は、真皮組織に対し核酸を経皮的に送達するのに有効である。本処方物はさらに、他の経皮送達手段、例えば、ただしこれらに限定されないが、微小電気泳動、ニードルアレイ、超音波処理、封鎖、電気穿孔などの手段と組み合わせて効果的に使用することが可能である。このような技法は、十分、当業者の知識と能力の範囲内にある。
【００４４】
（実施例１）
核酸の経皮送達のための処方物
核酸の経皮送達のための処方物は、表１にしたがって調製される。
【００４５】
【表１】
2010516816.tif 000003
本処方物は、表１の成分を５０℃で活発に攪拌することによって調製され、均一な安定なクリームが得られる。本核酸混合物における核酸の負荷すなわち濃度は、所望の用途にしたがって変動することが可能であることに注意されたい。負荷値は、得られた処方物が、５０μｇ／ｍｌから約２０００μｇ／ｍｌの核酸濃度を含むようにすることが可能である。
【００４６】
（実施例２）
核酸を有する処方物
処方物を、実施例１にしたがって調製した。ただし、核酸混合物は、プラスミド発現ベクターｐＣＤＮＡ３．１ｆｌｕｃ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、得られる処方物が５００ｍｇ／ｍｌの核酸を含むのに十分な量として含んでいた。実施例１の場合と同様、処方物は、５０℃で活発に攪拌され、安定なクリームをもたらした。この調製処方物を４℃で保存した。
【００４７】
（実施例３）
マウスに対する核酸の経皮投与
核酸処方物は実施例２にしたがって調製した。この処方物の約１００μｌを、６−８週齢の、剃毛したＢａｌｂ／ｃマウスの背中に塗布した。１２、２４、４８、および９６時間のインキュベーション期間後、マウスにルシフェリン（３０ｍｇ／ｍｌのルシフェリン１００μｌ；体重１ｋｇ当たり１５０ｍｇ）をＩＰ注入した。１０分後、イソフルランを用いてマウスを麻酔し、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳインビボ撮像システムを用いて画像化した。この画像化の結果を図１Ａに示す。
【００４８】
（実施例４）
経皮核酸処方物の投与方策
実施例２にしたがって４種の核酸処方物を調製した。ただし、それぞれ（１００μｌ）に加えられるルシフェラーゼプラスミドの量を変動させた（処方物１〜４：７５、２０、５、および０μｇのルシフェラーゼ）。第５核酸処方物は、実施例２にしたがって調製した。ただし、加えた核酸は、７５μｇのＤｓＲｅｄであった（処方物５）。このＤｓＲｅｄは、陰性コントロールとして使用された。処方物１〜５を、それぞれ、マウスの剃毛皮膚に局所的に塗布し、２４時間後、各部位にルシフェリンを注入した。第６部位には、２０μｇのルシフェラーゼプラスミドの皮内注入の外、ルシフェリン注入を行った。１０分後、マウスをイソフルランで麻酔し、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳインビボ撮像システムを用いて画像化した。画像化の結果を図１Ｂに示す。
【００４９】
（実施例５）
マウス子宮頸部に対する核酸の経皮投与
核酸処方物を実施例２にしたがって調製した。約２０μｇのルシフェラーゼ発現プラスミドを含む、ある量の処方物を、マウスの子宮頸部に局所的に塗布した。２４時間のインキュベーション期間後、マウスにルシフェリンをＩＰ注入し、次いで、高感度冷却ＬＣＤカメラを用いて撮像した。次に、このルシフェラーゼ発現を定量化した（赤は、最高ルシフェラーゼ発現である）。画像化の結果を図２に示す。
【００５０】
（実施例６）
核酸経皮処方物の組織分布
実施例１の処方物のある量を、剃毛マウスに局所的に塗布した。２４時間後、皮膚をＯＴＣ媒体において凍結し、マイクロトームで薄切した。次に、これらの皮膚切片を、蛍光顕微鏡によって（処方物の脂質成分の蛍光特性を用いて）可視化した図３Ａ。皮膚切片の明視野画像を図３Ｂに示す。図３Ａにおいて、蛍光の主要領域は、毛嚢および表皮である。これらのデータは、本処方物が、表皮だけでなく毛嚢も簡単に浸透することを示す。
【００５１】
（実施例７）
核酸の経皮送達ローション処方物
核酸処方物を実施例１にしたがって調製する。ただし、処方物はさらに皮膚軟化剤を含む。本処方物は、皮膚の障害または病態の処置に特に有用である。核酸は、障害の直接的処置を実現し、一方、皮膚軟化剤は、障害の症状の処置を支援する。
【００５２】
上記実施例は、一つ以上の特定の運用において本発明の原理を例示するものであるが、形式、用法、および実行の詳細において数多くの改変が、発明能力を行使することなく、かつ、本発明の原理および概念から逸脱することなく、実行可能であることは当業者には明白であろう。したがって、本発明は、下記に記載される特許請求の範囲による以外には、限定されないことが意図される。
【図２】
2010516816.tif 000004
【図３Ａ】
2010516816.tif 000005
【図３Ｂ】
2010516816.tif 000006
【図１】
2010516816.tif 000007
【誤訳訂正書】
【提出日】平成22年3月8日(2010.3.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸の皮膚送達のための組成物であって：
ａ）核酸；
ｂ）少なくとも一つの中性脂質；および
ｃ）アルコール
を含む、組成物。
【請求項２】
中性脂質は、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記中性脂質および前記エタノールが、処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の、中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり５０μｇから２０００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり７５μｇから１５００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、殺生物剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記殺生物剤が、塩化ベンゼトニウムである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、浸透促進剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第四アンモニウム塩が塩化ベンゼトニウムである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記核酸がＲＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＲＮＡが２本鎖である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
前記核酸がＤＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記アルコールがエタノールである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
対象に対し核酸を経皮的に送達する方法であって：
該対象の皮膚表面に、ある量の、核酸含有経皮処方物を塗布することを含み、該経皮処方物が、中性脂質類およびアルコールの混合物を含む、方法。
【請求項２５】
前記経皮処方物が、ペーストまたはクリームの形態である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記経皮処方物が、経皮パッチとして貼付される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記皮膚表面が、前記経皮処方物の適用後塞がれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記中性脂質および前記エタノールが、前記処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり、１００から１０００μｇの量で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり、約４００から８００μｇの量で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
前記組成物が、殺生物剤をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
前記殺生物剤が、塩化ベンゼトニウムである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物が浸透促進剤をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３８】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項４０】
前記アルコールがエタノールである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
対象に対し核酸を経皮的に送達するための経皮薬剤の調製における中性脂質およびアルコールの使用。
【請求項４２】
前記経皮薬剤が、ペーストまたはクリームの形態である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項４１に記載の使用。
【請求項４４】
前記中性脂質および前記アルコールが、処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項４１に記載の使用。
【請求項４５】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４６】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４７】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４８】
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、請求項４１に記載の使用。
【請求項４９】
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、請求項４１に記載の使用。
【請求項５０】
前記経皮薬剤が、殺生物剤をさらに含む、請求項４１に記載の使用。
【請求項５１】
前記経皮薬剤が、浸透促進剤をさらに含む、請求項４１に記載の使用。
【請求項５２】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項４１に記載の使用。
【請求項５４】
前記アルコールがエタノールである、請求項４１に記載の使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの経皮送達に使用される処方物および方法に関する。この処方物および方法は、種々の病態および疾患を効果的に治療するために、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの、効果的経皮的送達を実現することが可能である。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
遺伝子発現のコントロールは、種々の疾患または臨床状態に対し潜在的に実行可能な処置と考えられる。遺伝子発現を追求する、一般的なアプローチは二つある。一つのアプローチ、遺伝子治療は、欠陥性突然変異対立遺伝子を機能的遺伝子によって補完することによって、遺伝子発現の、上記コントロールを実現することを目標とする。もう一つのアプローチ、アンチセンス治療法（ｓｉＲＮＡの使用を含む）は、標的遺伝子によって生産されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に結合し、それを不活性化して、その遺伝子を効果的に抑制、または「スイッチオフ」する、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、または化学的類縁体）鎖の合成および送達を含む。このアプローチとは無関係に、遺伝子発現に対する効果的コントロールの実現を阻む一つの共通のハードルが存在する。標的細胞に対する核酸の送達である。
【０００３】
そのため、細胞に核酸を送達するための効果的手段を見出すために研究が続けられている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の概要）
本発明は、その関心を、核酸の経皮送達のための処方物に向ける。一実施態様では、核酸の皮膚送達のための組成物が提供される。この組成物は、ある量の核酸、少なくとも一つの中性脂質、およびアルコールを含む。
【０００５】
別の実施態様では、核酸の経皮送達のための方法は、ある量の核酸含有処方物を、皮膚表面に塗布することを含む。この核酸含有処方物は、核酸、少なくとも一つの中性脂質、およびアルコールを含む。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】局所的に塗布したルシフェラーゼリポーター遺伝子の、２４時間インキュベーション期間後における、マウスのインビボ画像を示す。ルシフェラーゼ発現プラスミドは、脂質／エタノール処方物の一部として、マウスの剃毛皮膚に局所的に塗布した。２４時間のインキュベーション期間後、ルシフェリンをＩＰ注入し、生きているマウスを、高感度、冷却ＬＣＤカメラによって画像化し、定量化した（赤は、最高のルシフェラーゼ発現である）。図１Ａは、２５〜５０μｇの蛍ルシフェラーゼプラスミドを受けた４匹のマウスを示す。図１Ｂは、ルシフェラーゼ含有経皮処方物の用量反応を示し（上段左、中段左、中段右、下段左は、処方の一部として塗布された、ルシフェラーゼプラスミドの総量が７５、２０、５、および０μｇであった）；下段右では、処方物は、７５μｇのＤｓＲｅｄを含み、これは陰性コントロールとして用いた。上段右は、リン酸緩衝生理的食塩水に溶解したルシフェラーゼプラスミド２０μｇの皮内注入コントロールを示す。
【図２】マウスの子宮頸部に局所的に塗布したルシフェラーゼリポーター遺伝子の、マウスのインビボ画像を示す。ルシフェラーゼ発現プラスミド（２０μｇのｐＣＤＮＡ３．１ｆＬｕｃ）を、本発明の処方物（実施例３を参照）を用いて、マウスの子宮頸部に局所的に塗布した。２４時間後、ルシフェリンをＩＰ注入し、生きているマウスを高感度冷却ＬＣＤカメラを用いて画像化し、定量化した（赤は、最高ルシフェラーゼ発現である）。
【図３】本発明の経皮処方物の組織分布を示す。処方物は、剃毛マウスに対し局所的に塗布した。２４時間後、皮膚を、ＯＴＣ媒体において凍結し、マイクロトームによって薄切した。処方物を、蛍光顕微鏡によって可視化した（脂質成分の蛍光特性による）図３Ａ。蛍光の主要領域は毛嚢および表皮である。明視野画像を図３Ｂに示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
（発明の詳細な説明）
本発明の特定の実施態様を開示し、説明する前に、本発明は、本明細書に開示される特定のプロセスおよび物質に限定されないことを理解すべきである。なぜなら、それらはある程度変動する可能性があるからである。さらに、本明細書で使用される用語法は、特定の実施態様のみを記載する目的で使用されるもので、限定的であることを意図するものではないことを理解すべきである。
【０００８】
本発明を説明し、その特許を主張するに当たり、下記の用語法を使用する。
【０００９】
単数を示す表現「一つの」および「前記」は、文脈が明瞭に別様に指示するのでない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「ＲＮＡ配列」への言及は、そのようなＲＮＡ配列のうちの一つ以上への言及を含み、「該遺伝子突然変異」への言及は、そのような遺伝子突然変異のうちの一つ以上への言及を含む。
【００１０】
本明細書で用いる「対象」は、本発明の、核酸含有組成物の投与、または方法から利益を受ける可能性のある哺乳動物を指す。対象の例としては、ヒト、および他の哺乳動物、例えば、ウマ、ブタ、ウシ、イヌ、ネコ、ウサギ、および水性哺乳類が挙げられる。
【００１１】
「遺伝子」という用語は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む核酸を指す。
【００１２】
「核酸」という用語は、本発明の処方物と組み合わせて使用される場合、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの形を取る、核酸重合体を指す。
【００１３】
本明細書で用いる「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、相互交換的に使用され、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、およびそれらの修飾形のポリマーであって、一本鎖、または二本鎖として存在する、別の断片形、または、より大きな構築体の一成分の形状を取るポリマーを指す。本発明の処方物において使用が可能なポリヌクレオチドとしては、該処方物の所望の送達目標に応じて適宜に、ＤＮＡまたはＲＮＡの、センスおよびアンチセンスのオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが挙げられる。ＤＮＡまたはＲＮＡの分子は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはそのハイブリッド、または、ＲＮＡ分子、例えば、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡなどであってもよい。
【００１４】
本発明において使用されるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知のハイブリダイゼーション法を用いて取得することが可能である。ＤＮＡおよびＲＮＡの配列は、当該技術分野で周知の自動化核酸合成装置を用いて合成してもよい。ｓｈＲＮＡを含め、ＲＮＡを調製するには、当該技術分野で周知の方法を用いるインビトロ転写を用いることも可能である。ポリヌクレオチド混合物を生成するには、周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の使用が特に好ましい。ゲノム核酸は、当該技術分野で周知の手段によって調製してもよい。
【００１５】
本発明のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのバイオアベイラビリティーおよびハイブリダイゼーション特性を向上させるために、修飾されたヌクレオシド間リン酸バックボーンを含んでもよい。この結合は、ただしこれらに限定されないが、フォスフォジエステル、フォスフォロアニロテイエート、フォスフォロアニリデート、フォスフォルアミデート、フォスフォロチエート、フォスフォロジチエート、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。
【００１６】
オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、遺伝子構築体、または発現ベクターの一部であってもよい。「遺伝子構築体」または「発現ベクター」という用語は、標的タンパクをコードし、プロモーターなどの調節要素に動作可能的に連結される開始および終止シグナル、および標的細胞における発現を指令することが可能なポリアデニル化シグナルを含む、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含むＤＮＡまたはＲＮＡの分子を指す。
【００１７】
本明細書で用いる「標的細胞」（ｔａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌ）または「標的細胞」（ｔａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌｓ）は、本発明の経皮処方物を用いて送達される核酸を受容する細胞を指す。
【００１８】
本明細書において、遺伝子発現に関連して用いられる「の抑制」または「のサイレンシング」という用語は、標的遺伝子由来のタンパクレベルが存在しないこと、またはその少なくとも観察可能な減少を指す。
【００１９】
遺伝子配列に関連して「発現」という用語は、遺伝子の転写、および、適宜に、得られたｍＲＮＡ転写物の、タンパクへの翻訳を指す。
【００２０】
本明細書で用いる「有効量」、または「治療的有効量」の核酸とは、意図する課業を実行し、意図する結果を達成するのに十分な量の核酸を指す。例えば、ｓｉＲＮＡの有効量とは、ケラチン遺伝子の発現をサイレンシングするのに十分な量であってもよい。様々な生物学的因子が、ある特定のＲＮＡ配列の、その意図する課業を実行する能力に対し影響を及ぼす可能性のあることが知られる。したがって、「有効量」、または「治療的有効量」は、ある場合には、そのような生物学的因子に依存する場合がある。さらに、治療作用の達成は、医師、または、他の医療担当の専門家によって、当該技術分野で公知の評価を用いて測定される場合のある一方で、治療に対する個別の変動および反応は、治療作用の達成をいく分主観的判断とする可能性のあることが認められる。有効量の決定は、製薬学および医学の技術分野における通常の技能範囲の中に十分納まる。
【００２１】
本明細書で用いる「処方物」および「組成物」という用語は、相互交換的に使用され、二つ以上の化合物、要素、または分子の混合物を指す。ある局面で、「処方物」および「組成物」という用語は、一つ以上のヌクレオチド配列の、担体または他の賦形剤との混合物を指すのに用いられてもよい。
【００２２】
「経皮」という用語は、経皮処方物が皮膚表面に投与される場合、皮膚表面を通過する薬剤の転送を促進する投与ルートを指す。
【００２３】
「皮膚」または「皮膚表面」という用語は、表皮層のうちの一層以上を含む、対象の外皮を含むだけでなく、薬剤組成物が投与される可能性のある粘膜表面も含むことが意図される。粘膜表面の例としては、呼吸腔（鼻腔および肺腔を含む）、口腔（口腔および頬内腔）、膣腔、および直腸腔の粘膜が挙げられる。したがって、「経皮」という用語は、「経粘膜」も包含する。
【００２４】
「促進」または「浸透促進」という用語は、薬剤が皮膚を通して浸透する速度を増すように、薬剤に対する、皮膚の透過性を増すことを意味する。したがって、「浸透促進剤」、または単純に「促進剤」は、このような浸透促進を達成する薬剤、または薬剤の混合物を指す。
【００２５】
「局所処方物」とは、薬剤が、皮膚表面に対する直接塗布のために導入されることができ、それから有効量の該薬剤が放出される組成物を意味する。
【００２６】
本明細書で用いる「約」という用語は、ある数値範囲端点について、ある与えられた数値が、該端点よりも「少し上」または「少し下」の可能性があることを提示することによって、該端点に対し変動性を与えるために使用される。
【００２７】
本明細書における使用において、配列、化合物、処方物、送達機構、または他の項目も、都合のために一般的リストの中に提示される場合がある。しかしながら、これらのリストにおいて、そのリストの各メンバーが、あたかも独自の、特異なメンバーとして個別に特定されるかのように解釈すべきである。したがって、このようなリストの、どの個別メンバーについても、単に、そうではないという指示が無いまま共通のグループの中にそれが提示されていることだけに基づいて、同じリストの、いずれかの他のメンバーと事実上等価であると解釈すべきである。
【００２８】
濃度、量、およびその他の数値データは、本明細書では、範囲形式で表現または提示される場合がある。このような範囲形式は、単に、便利と短縮のために使用されるものであり、したがって、範囲の限界として明瞭に言及される数値を含むだけでなく、その範囲内に包含される、個別数値または部分領域も全て、あたかも各数値および部分領域が明瞭に言及される場合と同様に、含むものと弾力的に解釈すべきものと理解すべきである。具体例として挙げると、「約０．５から１０ｇ」という数値範囲は、約０．５ｇから約１０．０ｇの、明瞭に言及された数値だけでなく、その表示の範囲内の個別数値および付属範囲も含むものと解釈すべきである。したがって、この数値範囲に含まれるのは、個別の数値、例えば、２、５、および７、および、付属範囲、例えば、２から８、４から６、などである。この同じ原理は、一数値のみを言及する範囲にも適用される。さらに、この解釈は、範囲の広さ、または記載される特徴とは無関係に適用されなければならない。
【００２９】
別様に定義されない限り、本明細書で用いる技術および科学用語は全て、本発明の属する技術分野において通常の技能を有する当業者において一般的に理解されるものと同じ意味を持つ。本明細書に記載されるものと同様であるか、または等価であれば、いずれの方法、デバイス、および材料であれ、本発明の実施または試験に使用することが可能であるが、下記に、代表的方法、デバイス、および材料を記載する。
【００３０】
本発明は、オリゴヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドの効果的経皮送達のための処方物、および関連方法に関する。本発明の処方物は、脂質およびエタノールを含むことも可能である。本処方物はさらに、抗微生物剤および／または浸透促進剤を含むことも可能である。
【００３１】
本発明の処方物は、治療される病気または障害、および標的細胞の性質に応じて、皮膚そのものか、またはその下層組織に対し核酸を効果的に送達するために使用することが可能である。一実施態様では、本発明の処方物は、皮膚障害の治療であって、皮膚に局在する標的細胞に核酸を送達することによる治療のために使用することが可能である。このような障害の例としては、ただしこれらに限定されないが、先天性爪肥厚、毛包角化症、乾癬、皮膚炎、他の、ケラチン過剰発現障害などが挙げられる。当業者であれば理解されるように、本処方物によって送達される核酸の性質および配列は、治療される障害または病気に応じて変動することが予想される。
【００３２】
本発明の処方物では、種々の脂質の使用が可能である。一実施態様では、脂質は中性脂質である。使用が可能な脂質の、非限定的例として、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸、および、それらの組み合わせが挙げられる。
【００３３】
本発明の一実施態様では、脂質およびアルコールは、本処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の、脂質対アルコール重量の比で存在する。別の実施態様では、脂質対アルコール重量比は、約１．８：１から約３．５：１である。さらに別の実施態様では、脂質・アルコール重量比は、約２：１から約３：１である。さらに別の実施態様では、脂質・アルコール重量比は、約２．５：１から約３：１である。理論に制限されるものではないが、本出願人らは、上記の、脂質対アルコール比は、本処方物における核酸の効果的経皮送達の実現の一端を担うと考える。前述の脂質対アルコール比はさらに、局所塗布に適切で、望ましいコンシステンシーを持つ処方物を生成する。
【００３４】
本発明の処方物に使用することが可能なアルコールの例としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物が挙げられる。一実施態様では、アルコールはエタノールである。
【００３５】
本発明において使用が可能な核酸の量または濃度は変動してよい。一局面では、本処方物において、約５０μｇ／ｍｌから約２０００μｇ／ｍｌ（容量は処方物の容量を指す）の核酸濃度を使用してよい。一実施態様では、処方物は、約７５μｇ／ｍｌから約１５００μｇ／ｍｌの核酸を含むことが可能である。さらに別の実施態様では、処方物は、約１００μｇ／ｍｌから約１０００μｇ／ｍｌの核酸を含むことが可能である。さらに別の実施態様では、処方物は、約４００μｇ／ｍｌから約８００μｇ／ｍｌの核酸を含むことが可能である。
【００３６】
本発明の処方物はさらに、必要に応じて、抗微生物化合物を含むことが可能である。一般に、抗微生物化合物は、それが本処方物の安定性および持続性に悪影響を及ぼさない限り、いずれのものであっても使用することが可能である。一実施態様では、抗微生物化合物は、第四アンモニウム塩、例えば、塩化ベンゼトニウムである。本発明の目的にとって、「第四アンモニウム塩」という用語は、窒素の上に正電荷および対イオンを有する、四価の窒素含有分子を指す。このような第四アンモニウム塩として、脂肪族および芳香族置換基が挙げられる。塩化ベンゼトニウムの外に、使用が可能な、他の第四アンモニウム塩としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、アルキル−、ジメチルベンゼンメタナミニウム塩；アシル−、ジメチルベンゼンメタナミニウム塩；混合アシル−／アルキル−、ジメチルベンゼンメタナミニウム塩；エチルベンジルドデシルジメチルアンモニウムクロリド、ドデシルベンジルトリメチルアンモニウムクロリド、ドデシルベンジルトリエタノールアンモニウムクロリド、塩化ベンゾキソニウム；メチルベンゼトニウムクロリド；フェノクチド；ドデカルボニウムクロリド；および、混合アルキル−／アシル−、アミドプロパルコニウム塩、またはそれらの混合物が挙げられる。他の、非第四アンモニウム塩抗微生物化合物も使用してよい。
【００３７】
抗微生物剤としてのその役割に加えて、ある局面において、第四アンモニウム塩、特に、塩化ベンゼトニウムは、核酸のための浸透促進剤として活動することも可能である。さらに、他の浸透促進剤も使用され得、これらとしては、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル、グリセロールトリエステル、グリセロールジエステル、グリセロールモノエステル、トリアセチン、短鎖アルコール、尿素、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
本発明の処方物は、クリームとして塗布することが可能であるが、該処方物は、他の、様々の送達形態として、例えば、ただしこれらに限定されないが、ゲル、ペースト、軟膏、およびパッチおよびスプレイとして処方することが可能である。本発明の処方物とともに使用することが可能な、一つのタイプの経皮パッチは、液体貯留システム（ＬＲＳ）型のパッチである。ＬＲＳパッチにおいて使用する場合、本発明の処方物は、不透性の支持体、および、皮膚接触透過膜、または、貯留内容物（すなわち、処方物）および皮膚の間の拡散性接触を実現する、膜接着性積層体を持つ貯留槽の中へ封じ込められるように処方することが可能である。塗布のためには、剥離可能な開放ライナーが除かれ、パッチは、皮膚表面に接着される。ＬＲＳパッチは、経皮薬剤送達の技術分野において公知である。ＬＲＳ経皮パッチの非限定的例として、米国特許第４，８４９，２２４号、第４，９８３，３９５号に記載または参照されるものがある。なお、これらの特許の全体を、引用により本明細書に含める。
【００３９】
送達形態に応じて、本発明の処方物はさらに、他の賦形剤、例えば、皮膚軟化剤、増粘剤、界面活性剤などを含んでもよい。一般に、核酸の送達における本処方物の有効性を妨げない限り、当該技術分野で公知の、いずれの賦形剤の使用も可能である。さらに、使用される賦形剤は、いずれのものであれ、核酸の分解を引き起こさないことが必須である。さらに、ある化合物は、処方物において複数の役割を果たすことが可能であることが認められる（例えば、ある化合物は、界面活性剤であり、かつ浸透促進剤である場合があり、あるいは、ある化合物は、皮膚軟化剤で、かつ界面活性剤である場合がある）。
【００４０】
本発明に使用が可能な増粘剤の例として、例えば、ただしこれらに限定されないが、コロイド状増粘剤、例えば、シリカ、ケイ酸アルミニウムマグネシウムなど；天然のポリマー物質、例えば、アルギン酸ナトリウム、キサンタンゴム、マルメロ種子抽出物、トラガカントゴム、でん粉など、半合成ポリマー物質、例えば、セルロースエーテル類（例えば、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、ポリビニールピロリドン、ポリビニールアルコール、グアゴム、ヒドロキシプロピルグアゴム、可溶性でん粉、陽イオンセルロース、陽イオングアなど、および合成ポリマー物質、例えば、カルボキシビニールポリマー、ポリビニールピロリドン、ポリビニールアルコール、ポリアクリル酸ポリマー、ポリアクリルアミドポリマー、ポリメタクリル酸ポリマー、ポリ酢酸ビニールポリマー、ポリ塩化ビニールポリマー、ポリ塩化ビニリデンポリマーが挙げられる。さらに本発明において有用なものは、親水性ゲル化剤、例えば、アクリル酸／アクリル酸エチルコポリマー、および、Ｂ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙによって、Ｃａｒｂｏｐｏｌ樹脂という商標の下で販売されるカルボキシビニールポリマーである。これらの樹脂は、０．７５％から２．００％の架橋剤、例えば、ポリアリルスクロース、またはポリアリルペンタエリスリトールによって架橋される、アクリル酸の、コロイド状水溶性ポリアルケニルポリエーテル架橋ポリマーから本質的に成る。例としては、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９３４、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９４０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９５０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９８０、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９５１、およびＣａｒｂｏｐｏｌ  ９８１が挙げられる。さらに、上記増粘剤および／またはゲル化剤のいずれかの混合物も使用が可能である。
【００４１】
本発明において使用が可能な皮膚軟化剤の例としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、炭化水素油およびワックス；シリコーン油；トリグリセリドエステル；アセトグリセリドエステル；エトキシ化グリセリド；アルキルエステル；アルケニルエステル；脂肪酸；脂肪アルコール；脂肪アルコールエーテル；エーテルエステル；ラノリンおよび誘導体；多価アルコール（ポリオール）、およびポリエーテル誘導体；多価アルコール（ポリオール）エステル；ワックスエステル；蜜蝋誘導体；植物ワックス；アミド；およびそれらの混合物が挙げられる。
【００４２】
本発明において使用が可能な界面活性剤の例としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、ポリエトキシ化脂肪酸、例えば、ＰＥＧ−脂肪酸モノエステル、例えば、ラウリン酸、オレイン酸、およびステアリン酸のエステル；脂肪酸ジエステル、例えば、ＰＥＧ脂肪酸ジエステル；アルコール−油エステル交換反応産物、例えば、ＰＥＧ−３５−ヒマシ油（Ｉｎｃｒｏｃａｓ−３５）、ＰＥＧ−４０水素添加ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０）、ＰＥＧ−２５トリオレエート（ＴＡＧＡＴ［Ｒ］ＴＯ）、ＰＥＧ−６０コーングリセリド（Ｃｒｏｖｏｌ  Ｍ７０）、ＰＥＧ−６０アーモンド油（Ｃｒｏｖｏｌ  Ａ７０）、ＰＥＧ−４０パーム核油（Ｃｒｏｖｏｌ  ＰＫ７０）、ＰＥＧ−５０ヒマシ油（Ｅｍａｌｅｘ  Ｃ−５０）、ＰＥＧ−５０水素添加ヒマシ油（Ｅｍａｌｅｘ  ＨＣ−５０）、ＰＥＧ−８カプリル酸／カプリン酸グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、およびＰＥＧ−６カプリル酸／カプリン酸グリセリド（Ｓｏｆｔｉｇｅｎ  ７６７）、ＰＥＧ−５水素添加ヒマシ油、ＰＥＧ−７水素添加ヒマシ油、ＰＥＧ−９水素添加ヒマシ油、ＰＥＧ−６コーン油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  ２１２５ＣＳ）、ＰＥＧ−６アーモンド油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９６６ＣＳ）、ＰＥＧ−６杏核油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９４４ＣＳ）、ＰＥＧ−６オリーブ油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９８０ＣＳ）、ＰＥＧ−６ピーナツ油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  １９６９ＣＳ）、ＰＥＧ−６水素添加パーム核油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  ２１３０ＢＳ）、ＰＥＧ−６パーム核油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］  ２１３０ＣＳ）、ＰＥＧ−６トリオレイン（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］Ｍ  ２７３５ＣＳ）、ＰＥＧ−８コーン油（Ｌａｂｒａｆｉｌ［Ｒ］ＷＬ  ２６０９ＢＳ）、ＰＥＧ−２０コーングリセリド（Ｃｒｏｖｏｌ  Ｍ４０）、およびＰＥＧ−２０アーモンドグリセリド（Ｃｒｏｖｏｌ  Ａ４０）；ポリグリセル化脂肪酸、例えば、ポリグリセリルオレエート（Ｐｌｕｒｏｌ  Ｏｌｅｉｑｕｅ）、ポリグリセリル−２ジオレエート（Ｎｉｋｋｏｌ  ＤＧＤＯ）、およびポリグリセリル−１０トリオレエートが挙げられる。好ましい親水性界面活性剤としては、ポリグリセリル−１０ラウレート（Ｎｉｋｋｏｌ  Ｄｅｃａｇｌｙｎ  １−Ｌ）、ポリグリセリル−１０オレエート（Ｎｉｋｋｏｌ  Ｄｅｃａｇｌｙｎ  １−Ｏ）、およびポリグリセリル−１０  モノ、ジオレエート（Ｃａｐｒｏｌ［Ｒ］ＰＥＧ  ８６０）；プロピレングリコール脂肪酸エステル、例えば、プロピレングリコールモノラウレート（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ  ＦＣＣ）、プロピレングリコールリシノレエート（Ｐｒｏｐｙｍｕｌｓ）、プロピレングリコールモノオレエート（Ｍｙｖｅｒｏｌ  Ｐ−０６）、プロピレングリコールジカプリレート／ジカプレート（Ｃａｐｔｅｘ［Ｒ］２００）、およびプロピレングリコールジオクタノエート（Ｃａｐｔｅｘ［Ｒ］８００）；モノ−およびジグリセリド、例えば、グリセリルモノオレエート（Ｐｅｃｅｏｌ）、グリセリル１５リシノレエート、グリセリルラウレート、グリセリルジラウレート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＧＤＬ）、グリセリルジオレエート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＧＤＯ）、グリセリルモノ／ジオレエート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＧＭＯ−Ｋ）、グリセリルカプリレート／カプレート（Ｃａｐｍｕｌ［Ｒ］  ＭＣＭ）、カプリル酸モノ／ジグリセリド（Ｉｍｗｉｔｏｒ［Ｒ］  ９８８）、およびモノ−およびジアセチル化モノグリセリド（Ｍｙｖａｃｅｔ［Ｒ］  ９−４５）；ステロールおよびステロール誘導体；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールアルキルエーテル；糖エステル；ポリエチレングリコールアルキルフェノール；ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；ソルビタン脂肪酸エステル、例えば、ソルビタンモノラウレート（Ａｒｌａｃｅｌ  ２０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ−４０）、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ−８０）、ソルビタンモノステアレート、およびソルビタントリステアレート；低級アルコール脂肪酸エステル；イオン性界面活性剤、例えば、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルサルコシン酸ナトリウム、ジオクチルスルフォコハク酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、ラウロイルカミチン、パルミトイルカミチン、およびミリストイルカミチン；非イオン化電離性界面活性剤；電離性界面活性剤；およびそれらの混合物が挙げられる。
【００４３】
本発明の処方物は、皮膚組織に対し核酸を経皮的に送達するのに有効である。本処方物はさらに、他の経皮送達手段、例えば、ただしこれらに限定されないが、イオン導入法、ニードルアレイ、超音波処理、封鎖、電気穿孔などの手段と組み合わせて効果的に使用することが可能である。このような技法は、十分、当業者の知識と能力の範囲内にある。
【実施例】
【００４４】
（実施例１）
核酸の経皮送達のための処方物
核酸の経皮送達のための処方物は、表１にしたがって調製される。
【００４５】
【表１】
2010516816.tif 000008
本処方物は、表１の成分を５０℃で活発に攪拌することによって調製され、均一な安定なクリームが得られる。本核酸混合物における核酸の負荷すなわち濃度は、所望の用途にしたがって変動することが可能であることに注意されたい。負荷値は、得られた処方物が、５０μｇ／ｍｌから約２０００μｇ／ｍｌの核酸濃度を含むようにすることが可能である。
【００４６】
（実施例２）
核酸を有する処方物
処方物を、実施例１にしたがって調製した。ただし、核酸混合物は、プラスミド発現ベクターｐＣＤＮＡ３．１ｆｌｕｃ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、得られる処方物が５００ｍｇ／ｍｌの核酸を含むのに十分な量として含んでいた。実施例１の場合と同様、処方物は、５０℃で活発に攪拌され、安定なクリームをもたらした。この調製処方物を４℃で保存した。
【００４７】
（実施例３）
マウスに対する核酸の経皮投与
核酸処方物は実施例２にしたがって調製した。この処方物の約１００μｌを、６−８週齢の、剃毛したＢａｌｂ／ｃマウスの背中に塗布する。１２、２４、４８、および９６時間のインキュベーション期間後、マウスにルシフェリン（３０ｍｇ／ｍｌのルシフェリン１００μｌ；体重１ｋｇ当たり１５０ｍｇ）をＩＰ注入した。１０分後、イソフルランを用いてマウスを麻酔し、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳインビボ撮像システムを用いて画像化した。この画像化の結果を図１Ａに示す。
【００４８】
（実施例４）
経皮核酸処方物の投与方策
実施例２にしたがって４種の核酸処方物を調製した。ただし、それぞれ（１００μｌ）に加えられるルシフェラーゼプラスミドの量を変動させた（処方物１〜４：７５、２０、５、および０μｇのルシフェラーゼ）。第５核酸処方物は、実施例２にしたがって調製した。ただし、加えた核酸は、７５μｇのＤｓＲｅｄであった（処方物５）。このＤｓＲｅｄは、陰性コントロールとして使用された。処方物１〜５を、それぞれ、マウスの剃毛皮膚に局所的に塗布し、２４時間後、各部位にルシフェリンを注入した。第６部位には、２０μｇのルシフェラーゼプラスミドの皮内注入の外、ルシフェリン注入を行った。１０分後、マウスをイソフルランで麻酔し、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳインビボ撮像システムを用いて画像化した。画像化の結果を図１Ｂに示す。
【００４９】
（実施例５）
マウス子宮頸部に対する核酸の経皮投与
核酸処方物を実施例２にしたがって調製した。約２０μｇのルシフェラーゼ発現プラスミドを含む、ある量の処方物を、マウスの子宮頸部に局所的に塗布した。２４時間のインキュベーション期間後、マウスにルシフェリンをＩＰ注入し、次いで、高感度冷却ＬＣＤカメラを用いて撮像した。次に、このルシフェラーゼ発現を定量化した（赤は、最高ルシフェラーゼ発現である）。画像化の結果を図２に示す。
【００５０】
（実施例６）
核酸経皮処方物の組織分布
実施例１の処方物のある量を、剃毛マウスに局所的に塗布した。２４時間後、皮膚をＯＴＣ媒体において凍結し、マイクロトームで薄切した。次に、これらの皮膚切片を、蛍光顕微鏡によって（処方物の脂質成分の蛍光特性を用いて）可視化した図３Ａ。皮膚切片の明視野画像を図３Ｂに示す。図３Ａにおいて、蛍光の主要領域は、毛嚢および表皮である。これらのデータは、本処方物が、表皮だけでなく毛嚢も簡単に浸透することを示す。
【００５１】
（実施例７）
核酸の経皮送達ローション処方物
核酸処方物を実施例１にしたがって調製する。ただし、処方物はさらに皮膚軟化剤を含む。本処方物は、皮膚の障害または病態の処置に特に有用である。核酸は、障害の直接的処置を実現し、一方、皮膚軟化剤は、障害の症状の処置を支援する。
【００５２】
上記実施例は、一つ以上の特定の運用において本発明の原理を例示するものであるが、形式、用法、および実行の詳細において数多くの改変が、発明能力を行使することなく、かつ、本発明の原理および概念から逸脱することなく、実行可能であることは当業者には明白であろう。したがって、本発明は、下記に記載される特許請求の範囲による以外には、限定されないことが意図される。
【手続補正書】
【提出日】平成22年3月9日(2010.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸の皮膚送達のための組成物であって：
ａ）核酸；
ｂ）少なくとも一つの中性脂質；および
ｃ）アルコール
を含む、組成物。
【請求項２】
中性脂質は、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記中性脂質および前記アルコールが、前記組成物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の、中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり５０μｇから２０００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり７５μｇから１５００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、殺生物剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記殺生物剤が、塩化ベンゼトニウムである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、浸透促進剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第四アンモニウム塩が塩化ベンゼトニウムである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記核酸がＲＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＲＮＡが２本鎖である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
前記核酸がＤＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記アルコールがエタノールである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
対象に対し核酸を経皮的に送達するための経皮薬剤の調製における中性脂質およびアルコールの使用。
【請求項２５】
前記経皮薬剤が、ペーストまたはクリームの形態である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、請求項２４に記載の使用。
【請求項２７】
前記中性脂質および前記アルコールが、前記経皮薬剤において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、請求項２４に記載の使用。
【請求項２８】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、請求項２４に記載の使用。
【請求項２９】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、請求項２４に記載の使用。
【請求項３０】
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、請求項２４に記載の使用。
【請求項３１】
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、請求項２４に記載の使用。
【請求項３２】
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、請求項２４に記載の使用。
【請求項３３】
前記経皮薬剤が、殺生物剤をさらに含む、請求項２４に記載の使用。
【請求項３４】
前記経皮薬剤が、浸透促進剤をさらに含む、請求項２４に記載の使用。
【請求項３５】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、請求項２４に記載の使用。
【請求項３７】
前記アルコールがエタノールである、請求項２４に記載の使用。
【請求項３８】
前記経皮薬剤が、経皮パッチの形態である、請求項２４に記載の使用。
【請求項３９】
前記経皮薬剤が、皮膚表面へ適用されて皮膚表面を塞ぐように処方される、請求項２４に記載の使用。
【請求項４０】
前記殺生物剤が塩化ベンゼトニウムである、請求項３３に記載の使用。
【請求項４１】
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩である、請求項３４に記載の使用。
【請求項４２】
前記浸透促進剤が塩化ベンゼトニウムである、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記核酸がＲＮＡである、請求項２４に記載の使用。
【請求項４４】
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、請求項４３に記載の使用。
【請求項４６】
前記ＲＮＡが２本鎖である、請求項４３に記載の使用。
【請求項４７】
前記核酸がＤＮＡである、請求項４３に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
別の実施態様では、核酸の経皮送達のための方法は、ある量の核酸含有処方物を、皮膚表面に塗布することを含む。この核酸含有処方物は、核酸、少なくとも一つの中性脂質、およびアルコールを含む。
本発明の好ましい実施形態によれば、例えば以下の組成物などが提供される：
（項目１）
核酸の皮膚送達のための組成物であって：
ａ）核酸；
ｂ）少なくとも一つの中性脂質；および
ｃ）アルコール
を含む、組成物。
（項目２）
中性脂質は、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記中性脂質および前記エタノールが、処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の、中性脂質対アルコールの比で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目４）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、項目３に記載の組成物。
（項目５）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、項目３に記載の組成物。
（項目６）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、項目３に記載の組成物。
（項目７）
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり５０μｇから２０００μｇの量で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり７５μｇから１５００μｇの量で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記組成物が、殺生物剤をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
前記殺生物剤が、塩化ベンゼトニウムである、項目１２に記載の組成物。
（項目１３）
前記組成物が、浸透促進剤をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目１４）
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、項目１に記載の組成物。
（項目１５）
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩である、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
前記第四アンモニウム塩が塩化ベンゼトニウムである、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
前記核酸がＲＮＡである、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
前記ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
前記ＲＮＡがｓｈＲＮＡである、項目１７に記載の組成物。
（項目２０）
前記ＲＮＡが２本鎖である、項目１７に記載の組成物。
（項目２１）
前記核酸がＤＮＡである、項目１に記載の組成物。
（項目２２）
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、項目１に記載の組成物。
（項目２３）
前記アルコールがエタノールである、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
対象に対し核酸を経皮的に送達する方法であって：
該対象の皮膚表面に、ある量の、核酸含有経皮処方物を塗布することを含み、該経皮処方物が、中性脂質類およびアルコールの混合物を含む、方法。
（項目２５）
前記経皮処方物が、ペーストまたはクリームの形態である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記経皮処方物が、経皮パッチとして貼付される、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記皮膚表面が、前記経皮処方物の適用後塞がれる、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記中性脂質および前記エタノールが、前記処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、項目２４に記載の方法。
（項目３０）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、項目２４に記載の方法。
（項目３１）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、項目２４に記載の方法。
（項目３２）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、項目２４に記載の方法。
（項目３３）
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり、１００から１０００μｇの量で存在する、項目２４に記載の方法。
（項目３４）
前記核酸が、前記組成物全体の１ｍｌ当たり、約４００から８００μｇの量で存在する、項目２４に記載の方法。
（項目３５）
前記組成物が、殺生物剤をさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目３６）
前記殺生物剤が、塩化ベンゼトニウムである、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記組成物が浸透促進剤をさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目３８）
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、項目２４に記載の方法。
（項目４０）
前記アルコールがエタノールである、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
対象に対し核酸を経皮的に送達するための経皮薬剤の調製における中性脂質およびアルコールの使用。
（項目４２）
前記経皮薬剤が、ペーストまたはクリームの形態である、項目４１に記載の使用。
（項目４３）
前記中性脂質が、ホスファチジルコリン類、例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎグリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、および、１，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ステアリン酸、パルミチン酸類、および、それらの組み合わせから成る群から選ばれる、項目４１に記載の使用。
（項目４４）
前記中性脂質および前記アルコールが、処方物において、重量で約１．５：１から約４．５：０．５の中性脂質対アルコールの比で存在する、項目４１に記載の使用。
（項目４５）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約１．８：１から３．５：１である、項目４１に記載の使用。
（項目４６）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２：１から約３：１である、項目４１に記載の使用。
（項目４７）
中性脂質対アルコールの前記比が、重量で約２．５：１から約３：１である、項目４１に記載の使用。
（項目４８）
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり１００から１０００μｇの量で存在する、項目４１に記載の使用。
（項目４９）
前記核酸が、前記経皮薬剤において、組成物全体の１ｍｌ当たり約４００から８００μｇの量で存在する、項目４１に記載の使用。
（項目５０）
前記経皮薬剤が、殺生物剤をさらに含む、項目４１に記載の使用。
（項目５１）
前記経皮薬剤が、浸透促進剤をさらに含む、項目４１に記載の使用。
（項目５２）
前記浸透促進剤が、第四アンモニウム塩、脂肪酸類、脂肪酸エステル類、脂肪アルコール類、乳酸またはグリコール酸の脂肪酸エステル類、グリセロールトリエステル類、グリセロールジエステル類、グリセロールモノエステル類、トリアセチン、短鎖アルコール類、尿素、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、項目５１に記載の使用。
（項目５３）
前記アルコールが、低級アルコール類、エタノール、イソプロピルアルコール、プロパノール、ベンジルアルコール、メタノール、他のＣ４−Ｃ１０モノアルコール類、およびそれらの混合物から成る群から選ばれる、項目４１に記載の使用。
（項目５４）
前記アルコールがエタノールである、項目４１に記載の使用。
【国際調査報告】
2010516816.tif 000009
2010516816.tif 000010