(57)【要約】【課題】哺乳類、特にヒトの治療を目的とした改善された治療剤、より具体的には類似構造の既知の化合物と比べて高い活性の特異性、毒性の低下及び血中での改善された安定性を示す細胞毒素の開発に対する要望に対処すること。【解決手段】薬剤及びリガンドがペプチジル又は他のリンカーを介して結合された薬剤−リガンド抱合体、並びに薬剤−酵素切断可能な基質抱合体。これらの抱合体は、目的の活性部位に活性形態で選択的に送達され、次いで切断により活性薬剤を放出しうる強力な細胞毒素である。また、薬剤−リガンド抱合体を含有する組成物及びそれを用いて治療する方法。【選択図】図１
2010522693.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2010522693.tif 000176
（式中、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化２】
2010522693.tif 000177
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ２は自己犠牲リンカーであり、かつ
【化３】
2010522693.tif 000178
を含み、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９の各々は水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択され、かつｗは０〜４の整数であり；
ｏは１であり、
Ｌ４はリンカーメンバーであり；
ｐは０若しくは１であり；
Ｘ４は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化４】
2010522693.tif 000179
を含み、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３はＯＲ１１であり、Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１又は−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ１１は前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させる）
の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｄが構造：
【化５】
2010522693.tif 000180
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は置換アルキル基、未置換アルキル基、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９ＮＨＲ１０、及びＯＲ９からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；かつ
Ｒ２は水素、置換アルキル基又は未置換低級アルキル基である）
を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｄが構造：
【化６】
2010522693.tif 000181
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ１’は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり；かつ
Ｒ２’は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である）
を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
（ＡＡ１）ｃが腫瘍組織内で発現されるプロテアーゼにより切断可能なペプチド配列である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
前記プロテアーゼがリソソームプロテアーゼである、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
前記薬剤部分の直近に位置する（ＡＡ１）ｃ内の前記アミノ酸が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
（ＡＡ１）ｃが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号３）からなる群から選択されるペプチド配列である、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
（ＡＡ１）ｃがＶａｌ−Ｃｉｔ又はＶａｌ−Ｌｙｓである、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１７及びＲ１８が低級アルキル基である、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
ｗが０である、請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が
【化７】
2010522693.tif 000182
である、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
式
【化８】
2010522693.tif 000183
（式中、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化９】
2010522693.tif 000184
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ２は自己犠牲リンカーであり、
ｏは０若しくは１であり、
Ｌ４はリンカーメンバーであり；
ｐは０若しくは１であり；
Ｘ４は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化１０】
2010522693.tif 000185
を含み、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させ、かつ
【化１１】
2010522693.tif 000186
を含み、ｖは１〜６の整数であり、かつ
Ｒ２７、Ｒ２７’、Ｒ２８、及びＲ２８’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１又は−ＣＨ２−であり、
Ｘ１は離脱基である）
の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項１３】
Ｄが構造：
【化１２】
2010522693.tif 000187
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は置換アルキル基、未置換アルキル基、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９ＮＨＲ１０、及びＯＲ９からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；かつ
Ｒ２は水素、置換アルキル基又は未置換低級アルキル基である）
を有する、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
Ｄが構造：
【化１３】
2010522693.tif 000188
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ１’は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり；かつ
Ｒ２’は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である）
を有する、請求項１２記載の化合物。
【請求項１５】
（ＡＡ１）ｃが腫瘍組織内で発現されるプロテアーゼにより切断可能なペプチド配列である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１６】
前記プロテアーゼがリソソームプロテアーゼである、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
前記薬剤部分の直近に位置する（ＡＡ１）ｃ内の前記アミノ酸が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される、請求項１２記載の化合物。
【請求項１８】
（ＡＡ１）ｃが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号３）からなる群から選択されるペプチド配列である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１９】
（ＡＡ１）ｃがＶａｌ−Ｃｉｔ又はＶａｌ−Ｌｙｓである、請求項１２記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２７、Ｒ２７’、Ｒ２８、及びＲ２８’が独立して水素又は低級アルキル基である、請求項１２記載の化合物。
【請求項２１】
ｖが１又は２である、請求項１２記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ１５が水素又は低級アルキル基である、請求項１２記載の化合物。
【請求項２３】
前記化合物が
【化１４】
2010522693.tif 000189
であり、ｒは０〜２４の範囲内の整数である、請求項１２記載の化合物。
【請求項２４】
式
【化１５】
2010522693.tif 000190
（式中、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化１６】
2010522693.tif 000191
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ３は第一級若しくは第二級アミン基又はカルボキシル官能基を含むスペーサー基であり；Ｌ３が存在する場合、ｍは０であり、かつＬ３のアミン基はＤのペンダントカルボキシル官能基とアミド結合を形成するか又はＬ３のカルボキシル基はＤのペンダントアミン官能基とアミド結合を形成し；
ｏは０若しくは１であり、
Ｌ４はリンカーメンバーであり、Ｌ４は（ＡＡ１）ｃのＮ末端に直接結合される
【化１７】
2010522693.tif 000192
を含み、
Ｒ２０は水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり、
Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６、及びＲ２６’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；かつ
ｓ及びｔは独立して１〜６の整数であり；
ｐは１であり；
Ｘ４は、保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化１８】
2010522693.tif 000193
を含み、前記環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり、
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり、
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１５又はＲ１６の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させる）
の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２５】
Ｄが構造：
【化１９】
2010522693.tif 000194
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は置換アルキル基、未置換アルキル基、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９ＮＨＲ１０、及びＯＲ９からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；かつ
Ｒ２は水素、置換アルキル基又は未置換低級アルキル基である）
を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項２６】
Ｄが構造：
【化２０】
2010522693.tif 000195
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ１’は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり；かつ
Ｒ２’は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である）
を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項２７】
（ＡＡ１）ｃが腫瘍組織内で発現されるプロテアーゼにより切断可能なペプチド配列である、請求項２４記載の化合物。
【請求項２８】
前記プロテアーゼがリソソームプロテアーゼである、請求項２７記載の化合物。
【請求項２９】
前記薬剤部分の直近に位置する（ＡＡ１）ｃ内の前記アミノ酸が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される、請求項２４記載の化合物。
【請求項３０】
（ＡＡ１）ｃが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号３）からなる群から選択されるペプチド配列である、請求項２４記載の化合物。
【請求項３１】
（ＡＡ１）ｃがＶａｌ−Ｃｉｔ又はＶａｌ−Ｌｙｓである、請求項２４記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６、及びＲ２６’が独立して水素又は低級アルキル基である、請求項２４記載の化合物。
【請求項３３】
ｓ及びｔが独立して１又は２である、請求項２４記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ２０が水素又は低級アルキル基である、請求項２４記載の化合物。
【請求項３５】
前記化合物が
【化２１】
2010522693.tif 000196
であり、ｒは０〜２４の範囲内の整数である、請求項２４記載の化合物。
【請求項３６】
構造：
【化２２】
2010522693.tif 000197
（式中、Ｌ１は自己犠牲スペーサーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｘ２は切断可能な基質であり；かつ
Ｄは構造：
【化２３】
2010522693.tif 000198
を含み、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３は、それらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成され、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の少なくとも１つのメンバーは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＸ２に結合させ、かつ
【化２４】
2010522693.tif 000199
からなる群から選択され、
Ｒ３０、Ｒ３０’、Ｒ３１、及びＲ３１’は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；かつ
ｖは１〜６の整数である）
を有する化合物あるいはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項３７】
Ｄが構造：
【化２５】
2010522693.tif 000200
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は置換アルキル基、未置換アルキル基、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９ＮＨＲ１０、及びＯＲ９からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；かつ
Ｒ２は水素、置換アルキル基又は未置換低級アルキル基である）
を有する、請求項３６記載の化合物。
【請求項３８】
Ｄが構造：
【化２６】
2010522693.tif 000201
（式中、
ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ１’は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり；かつ
Ｒ２’は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である）
を有する、請求項３６記載の化合物。
【請求項３９】
Ｘ２が、β−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（配列番号２）又は
【化２７】
2010522693.tif 000202
を含む、請求項３６記載の化合物。
【請求項４０】
前記化合物が、
【化２８】
2010522693.tif 000203
から選択され、ＲはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである、請求項３６記載の化合物。
【請求項４１】
構造：
【化２９】
2010522693.tif 000204
（式中、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｚ及びＸは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−であり、
Ｘ１は離脱基であり；かつ
Ｒ５、Ｒ５’、及びＲ３２は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであり、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される）
を有する化合物あるいはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項４２】
前記化合物が、構造：
【化３０】
2010522693.tif 000205
（式中、
Ｒ１は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ１’は水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、
Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり；かつ
Ｒ２’は水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である）
を有する、請求項４１記載の化合物。
【請求項４３】
Ｒ３２が１つ以上の切断可能な基を含む、請求項４１記載の化合物。
【請求項４４】
前記１つ以上の切断可能な基が切断可能なリンカー及び切断可能な基質から選択される、請求項４３記載の化合物。
【請求項４５】
構造：
【化３１】
2010522693.tif 000206
（式中、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｚ及びＸは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、及びＲ３３は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され、
Ｒ３３は１つ以上の切断可能な基を含み；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基である）
を有する化合物あるいはその薬理学的に許容できる塩。
【請求項４６】
前記１つ以上の切断可能な基が切断可能なリンカー及び切断可能な基質から選択される、請求項４５記載の化合物。
【請求項４７】
【化３２】
2010522693.tif 000207
【化３３】
2010522693.tif 000208
【化３４】
2010522693.tif 000209
【化３５】
2010522693.tif 000210
から選択される化合物であって、ｒは０〜２４の範囲内の整数である、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００６年１２月２８日に出願された米国仮特許出願第６０／８８２４６１号明細書及び２００７年１１月３０日に出願された米国仮特許出願第６０／９９１３００号明細書の優先権を主張するものであり、それらの利益は米国特許法第１１９条により本明細書で主張され、それらの全開示内容を参照により本明細書中に援用する。
【０００２】
本発明は、薬剤及びリガンドに結合しかつインビボで切断されるリンカー及び切断可能な基質を提供する。リンカー及び切断可能な基質は、本発明の細胞毒素のプロドラッグ及び抱合体並びに他の診断及び治療部分の形成に用いられる。
【背景技術】
【０００３】
多数の治療剤、特に癌化学療法において特に有効なものは、インビボで急性毒性、特に骨髄毒性及び粘膜毒性、並びに慢性的な心毒性及び神経毒性を示すことが多い。かかる強力な毒性はその用途を制限しうる。より多数のより安全な特定の治療剤、特に抗腫瘍剤の開発は、腫瘍細胞に対するより高い有効性及びこれらの生成物の副作用（毒性、非腫瘍細胞の破壊など）の数及び重症度の低減にとって望ましい。一部の既存の治療剤に伴う別の困難は、血漿中でのその最適とはいえない安定性である。これらの化合物を安定化するための官能基の付加は、活性の有意な低下をもたらす。したがって、化合物を安定化する一方で許容可能な治療活性レベルを維持するための方法を特定することが望ましい。
【０００４】
より選択的な細胞毒性剤に対する探索が数十年にわたり非常に盛んに行われており、用量制限毒性（すなわち正常組織上での細胞毒素の望ましくない活性）は癌治療が奏功しないことの主因の一つである。例えば、ＣＣ−１０６５及びデュオカルマイシンは極めて強力な細胞毒素であることが知られている。
【０００５】
ＣＣ−１０６５は、１９８１年、Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏｍｐａｎｙにより最初にストレプトマイセス・ゼレンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｚｅｌｅｎｓｉｓ）から単離され（Ｈａｎｋａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３１：１２１１頁（１９７８年）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３３：９０２頁（１９８０年）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３４：１１１９頁（１９８１年））、インビトロ及び実験動物の双方で強力な抗腫瘍活性及び抗菌活性を有することが見出された（Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４２：９９９頁（１９８２年））。ＣＣ−１０６５は、好ましくは５’−ｄ（Ａ／ＧＮＴＴＡ）−３’及び５’−ｄ（ＡＡＡＡＡ）−３’の配列を有する小溝内部の二本鎖Ｂ−ＤＮＡに結合し（Ｓｗｅｎｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４２：２８２１頁（１９８２年））、３’−アデニンのＮ３位置を分子内に存在するそのＣＰＩ左側ユニットによりアルキル化する（Ｈｕｒｌｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２６：８４３頁（１９８４年））。ＣＣ−１０６５は、その強力かつ広範な抗腫瘍活性にもかかわらず、実験動物において遅発性死亡を引き起こすことからヒトへの使用は不可である。
【０００６】
ＣＣ−１０６５及びデュオカルマイシンの多数の類縁体及び誘導体は当該技術分野で公知である。これらの化合物のうち多くの構造、合成及び特性の探索についてはレビューがなされている。例えば、Ｂｏｇｅｒら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３５：１４３８頁（１９９６年）；及びＢｏｇｅｒら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９７：７８７頁（１９９７年）を参照のこと。
【０００７】
協和発酵工業のあるグループが、多数のＣＣ−１０６５誘導体を調製している。例えば、米国特許第５１０１０３８号明細書；米国特許第５６４１７８０号明細書；米国特許第５１８７１８６号明細書；米国特許第５０７００９２号明細書；米国特許第５７０３０８０号明細書；米国特許第５０７００９２号明細書；米国特許第５６４１７８０号明細書；米国特許第５１０１０３８号明細書；及び米国特許第５０８４４６８号明細書；並びに国際公開第９６／１０４０５号パンフレット及び欧州特許出願公開第０５３７５７５Ａ１号明細書を参照のこと。
【０００８】
Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｕｐｊｏｈｎ）もまた、ＣＣ−１０６５の誘導体の調製に積極的に取り組んでいる。例えば、米国特許第５７３９３５０号明細書；米国特許第４９７８７５７号明細書、米国特許第５３３２８３７号明細書及び米国特許第４９１２２２７号明細書を参照のこと。
【０００９】
研究ではまた、構造の特定の化学的又は酵素的修飾によりインビボで薬剤（活性治療化合物）に変換可能な化合物であるプロドラッグの形態の新しい治療剤の開発が注目されている。毒性を低下させることを目的として、この変換は好ましくは循環系又は非標的組織でなく活性部位又は標的組織に限られる。しかし、プロドラッグは、プロドラッグが患者の体内の所望の部位に達する前に、プロドラッグを分解又は活性化する酵素の存在に起因して、血中及び血清中で安定性が低いことにより多くが特徴づけられることから課題が多い。
【００１０】
Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂは、特定のリソソーム酵素切断可能な抗腫瘍剤抱合体について述べている。例えば、米国特許第６２１４３４５号明細書を参照のこと。この特許はアミノベンジルオキシカルボニルを提供する。
【００１１】
Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、薬剤送達剤中のｐ−アミノベンジルエーテルについての記載がある米国特許出願公開第２００３／００９６７４３号明細書及び米国特許出願公開第２００３／０１３０１８９号明細書を有する。これら出願中に記載のリンカーは、アミノベンジルエーテル組成物に限定される。
【００１２】
他のグループもまたリンカーについて記載している。例えばｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２、５２７７頁（１９９９年）；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３、３０９３頁（２０００年）；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６６、８８１５頁（２００１年）；国際公開第０２／０８３１８０号パンフレット；Ｃａｒｌら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２４、４７９頁（１９８１年）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｏｒｇ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８、３３４７頁（１９９８年）を参照のこと。これらのリンカーは、アミノベンジルエーテルスペーサー、伸長された電子カスケード（ｅｌｏｎｇａｔｅｄ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｃａｓｃａｄｅ）及び環化スペーサー系、環化除去（ｃｙｃｌｉｓａｔｉｏｎ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）スペーサー、例えばｗ−アミノアミノカルボニル、及びｐ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許第５１０１０３８号明細書
【特許文献２】米国特許第５６４１７８０号明細書
【特許文献３】米国特許第５１８７１８６号明細書
【特許文献４】米国特許第５０７００９２号明細書
【特許文献５】米国特許第５７０３０８０号明細書
【特許文献６】米国特許第５０７００９２号明細書
【特許文献７】米国特許第５６４１７８０号明細書
【特許文献８】米国特許第５１０１０３８号明細書
【特許文献９】米国特許第５０８４４６８号明細書
【特許文献１０】国際公開第９６／１０４０５号パンフレット
【特許文献１１】欧州特許出願公開第０５３７５７５Ａ１号明細書
【特許文献１２】米国特許第５７３９３５０号明細書
【特許文献１３】米国特許第４９７８７５７号明細書
【特許文献１４】米国特許第５３３２８３７号明細書
【特許文献１５】米国特許第４９１２２２７号明細書
【特許文献１６】米国特許第６２１４３４５号明細書
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００３／００９６７４３号明細書
【特許文献１８】米国特許出願公開第２００３／０１３０１８９号明細書
【特許文献１９】国際公開第０２／０８３１８０号パンフレット
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｈａｎｋａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３１：１２１１頁（１９７８）
【非特許文献２】Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３３：９０２頁（１９８０）
【非特許文献３】Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．３４：１１１９頁（１９８１）
【非特許文献４】Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４２：９９９頁（１９８２）
【非特許文献５】Ｓｗｅｎｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４２：２８２１頁（１９８２）
【非特許文献６】Ｈｕｒｌｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２６：８４３頁（１９８４）
【非特許文献７】Ｂｏｇｅｒら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３５：１４３８頁（１９９６）
【非特許文献８】Ｂｏｇｅｒら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９７：７８７頁（１９９７）
【非特許文献９】ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２、５２７７頁（１９９９）
【非特許文献１０】ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４３、３０９３頁（２０００）
【非特許文献１１】ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６６、８８１５頁（２００１）
【非特許文献１２】Ｃａｒｌら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２４、４７９頁（１９８１）
【非特許文献１３】Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｏｒｇ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８、３３４７頁（１９９８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
細胞毒素薬剤のインビボでの安定性を含む安定性は、依然として対処されるべき重要な課題である。更に、多数の化合物の毒性がその有用性を低下させることから、薬剤毒性が低下した組成物、例えば切断可能なプロドラッグの形成が必要とされる。したがって、当該技術分野における進歩にかかわらず、哺乳類、特にヒトの治療を目的とした改善された治療剤、より具体的には類似構造の既知の化合物と比べて高い活性の特異性、毒性の低下及び血中での改善された安定性を示す細胞毒素の開発に対する要望はあり続ける。本発明はこれらの要望に対処する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、薬剤及びリガンドがペプチジル又は他のリンカーを介して結合された薬剤−リガンド抱合体、並びに薬剤−酵素切断可能な基質抱合体に関する。これらの抱合体は、目的の活性部位に活性形態で選択的に送達され、次いで切断により活性薬剤を放出しうる強力な細胞毒素である。
【００１７】
一実施形態は、式
【化１】
2010522693.tif 000003
【００１８】
の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩であり、
式中、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化２】
2010522693.tif 000004
【００１９】
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ２は自己犠牲リンカーであり、かつ
【化３】
2010522693.tif 000005
【００２０】
を含み、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９の各々は水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択され、かつｗは０〜４の整数であり；
ｏは１であり、
Ｌ４はリンカーメンバーであり；
ｐは０若しくは１であり；
Ｘ４は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化４】
2010522693.tif 000006
【００２１】
を含み、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３はＯＲ１１であり、Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３は、それらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対は、それらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は、存在又は不在のいずれかの単結合であり、かつ存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ、
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合するＣＨ２−Ｘ１又は−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ１１は前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させる。
【００２２】
別の実施形態は、式
【化５】
2010522693.tif 000007
【００２３】
の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩であり、
式中
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化６】
2010522693.tif 000008
【００２４】
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ２は自己犠牲リンカーであり、
ｏは０若しくは１であり、
Ｌ４はリンカーメンバーであり；
ｐは０若しくは１であり；
Ｘ４は保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化７】
2010522693.tif 000009
【００２５】
を含み、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させ、かつ
【化８】
2010522693.tif 000010
【００２６】
を含み、ｖは１〜６の整数であり、かつ
Ｒ２７、Ｒ２７’、Ｒ２８、及びＲ２８’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１又は−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基である。
【００２７】
更に別の実施形態は、式
【化９】
2010522693.tif 000011
【００２８】
の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩であり、
式中、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化１０】
2010522693.tif 000012
【００２９】
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ３は第一級若しくは第二級アミンを含むスペーサー基又はカルボキシル官能基であり；Ｌ３が存在する場合、ｍは０であり、かつＬ３のアミン基はＤのペンダントカルボキシル官能基とアミド結合を形成するか又はＬ３のカルボキシル基はＤのペンダントアミン官能基とアミド結合を形成し；
ｏは０若しくは１であり、
Ｌ４はリンカーメンバーであり、Ｌ４は（ＡＡ１）ｃのＮ末端に直接結合される
【化１１】
2010522693.tif 000013
【００３０】
を含み、
Ｒ２０は水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり、
Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６、及びＲ２６’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；かつ
ｓ及びｔは独立して１〜６の整数であり；
ｐは１であり；
Ｘ４は、保護反応性官能基、非保護反応性官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化１２】
2010522693.tif 000014
【００３１】
を含み、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり、
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１又は−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１５又はＲ１６の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させる。
【００３２】
更なる実施形態は、構造：
【化１３】
2010522693.tif 000015
【００３３】
を有する化合物あるいはその薬理学的に許容できる塩であり、
Ｌ１は自己犠牲スペーサーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｘ２は切断可能な基質であり；かつ
Ｄは構造：
【化１４】
2010522693.tif 000016
【００３４】
を含み、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３は、それらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成され、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の少なくとも１つのメンバーは、前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＸ２に結合させ、かつ
【化１５】
2010522693.tif 000017
【００３５】
からなる群から選択され、
Ｒ３０、Ｒ３０’、Ｒ３１、及びＲ３１’は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；かつ
ｖは１〜６の整数である。
【００３６】
別の実施形態は、構造：
【化１６】
2010522693.tif 000018
【００３７】
を有する化合物あるいはその薬理学的に許容できる塩であり、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｚ及びＸは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらに結合する窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基であり；かつ
Ｒ５、Ｒ５’、及びＲ３２は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであり、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。
【００３８】
更なる実施形態は、構造：
【化１７】
2010522693.tif 000019
【００３９】
を有する化合物あるいはその薬理学的に許容できる塩であり、
環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｚ及びＸは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から独立して選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、及びＲ３３は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらに結合する炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらに結合する窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ３３は１つ以上の切断可能な基を含み；
Ｒ６は存在しないか又は単結合として存在し、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７は前記シクロプロピル環内でＲ６と結合されたＣＨ２−Ｘ１又は−ＣＨ２−であり、Ｘ１は離脱基である。
【００４０】
別の実施形態は、
【化１８】
2010522693.tif 000020
【化１９】
2010522693.tif 000021
【化２０】
2010522693.tif 000022
【化２１】
2010522693.tif 000023
【化２２】
2010522693.tif 000024
【００４１】
から選択される化合物であり、ｒは０〜２４の範囲内の整数である。
【００４２】
これらの化合物のいずれかを薬剤−リガンド抱合体として使用可能であるか又はそれを用いて薬剤−リガンド抱合体の形成が可能である。
【００４３】
更に別の態様では、本発明は医薬製剤に関する。かかる製剤は、典型的には本発明の複合化合物及び薬理学的に許容できる担体を含有する。
【００４４】
更なる態様では、本発明は、本発明の複合化合物を用いる方法に関する。例えば、本発明は、細胞を殺傷する方法を提供し、本発明の複合化合物は、細胞に細胞を殺傷するのに十分な量で投与される。好ましい実施形態では、細胞は腫瘍細胞である。別の実施形態では、本発明は、哺乳動物被験者における腫瘍の成長を遅延又は停止させる方法を提供し、本発明の複合化合物は被験者における腫瘍の成長を遅延又は停止させるのに十分な量で投与される。
【００４５】
本発明の他の態様、利点及び目的は、下記の詳細な説明の検討から明白となる。
【００４６】
本発明の非限定的でかつ非網羅的な実施形態が以下の図面を参照して記述される。図面においては、同じ参照数字は、他に規定されない限り、様々な図面全体にわたる同じ部分を示す。
【００４７】
本発明の理解を助けるため、以下の詳細な説明が参照され、それは添付の図面との関連で読まれるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】１回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図２】１回目のインビボ試験における腫瘍体積中央値対投与後日数のグラフである。
【図３】１回目のインビボ試験におけるパーセント体重変化中央値対投与後日数である。
【図４】２回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図５】２回目のインビボ試験における腫瘍体積中央値対投与後日数のグラフである。
【図６】２回目のインビボ試験におけるパーセント体重変化中央値対投与後日数のグラフである。
【図７】ＬＮＣａＰ及び７８６−Ｏ細胞における様々な抗体−毒素抱合体に適合させたロジスティック曲線及び得られたＥＣ５０値を含む。
【図８】３回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフを含む。
【図９】３回目のインビボ試験における体重変化中央値対投与後日数のグラフを含む。
【図１０】４回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフを含む。
【図１１】４回目のインビボ試験における体重変化中央値対投与後日数のグラフを含む。
【図１２】５回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図１３】６回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図１４】７回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図１５】８回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【図１６】９回目のインビボ試験における平均腫瘍体積対投与後日数のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
略語
「Ａｌａ」はアラニンを示す。
「Ｂｏｃ」はｔ−ブチルオキシカルボニルを示す。
「ＣＰＩ」はシクロプロパピロロインドールを示す。
「Ｃｂｚ」はカルボベンゾキシを示す。
「ＤＣＭ」はジクロロメタンを示す。
「ＤＤＱ」は２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを示す。
「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを示す。
「ＤＭＤＡ」はＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンを示す。
「ＲＢＦ」は丸底フラスコを示す。
「ＤＭＦ」はＮ，Ｂ−ジメチルホルムアミドを示す。
「ＨＡＴＵ」はＮ−［［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル］メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシドを示す。
記号「Ｅ」は酵素的に切断可能な基を示す。
「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドを示す。
「ＦＭＯＣ」は９−フルオレニルメチルオキシカルボニルを示す。
「ＨＯＡｔ」は７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを示す。
「Ｌｅｕ」はロイシンを示す。
「ＰＡＢＡ」はパラアミノ安息香酸を示す。
「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールを示す。
「ＤＢＵ」は１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデク−７−エンを示す。
「ＤＩＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを示す。
「ＰＭＢ」はパラメトキシベンジルを示す。
「ＴＢＡＦ」はテトラブチルアンモニウムフルオリドを示す。
「ＴＢＳＯ」はｔ−ブチルジメチルシリルエーテルを示す。
「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを示す。
「ＴＦＡ」はトリフルオロロ酢酸を示す。
「ＥＤＣ」は（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）を示す。
「ＴＢＴＵ」は（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）を示す。
「ＨＯＢＴ」はＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールを示す。
「Ｑ」という記号は、治療剤、診断剤又は検出可能な標識を示す。
定義
他に定義されない限り、本明細書で用いられるあらゆる科学技術用語は、一般に、本発明が属する当該技術分野における当業者による一般的理解と同様の意味を有する。一般に、本明細書で用いられる命名法、細胞培養、分子遺伝学、有機化学及び核酸化学における実験法及び下記のハイブリダイゼーションは周知であり、当該技術分野で一般に用いられるものである。核酸及びペプチド合成においては標準技術が用いられる。一般に、酵素反応及び精製ステップは製造業者の仕様に従って実施される。技術及び手順は、一般に、当該技術分野における従来の方法及び様々な一般の参考文献（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、２ｄ  ｅｄ．」（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）に従って実施され、それらは本明細書全体に提供される。本明細書で用いられる命名法、分析化学における実験法、及び下記の有機合成は、周知であり、当該技術分野で一般に用いられるものである。標準技術又はその改良は、化学合成及び化学分析において用いられる。
【００５０】
「治療剤」という用語は、治療有効量で存在する場合、哺乳動物に対する所望の治療効果をもたらす化合物を意味するものとする。癌の治療においては、治療剤がまた標的細胞に滲入可能であることが望ましい。
【００５１】
「細胞毒素」という用語は、癌細胞に対して細胞毒性を示すといった所望の効果を有する治療剤を意味するものとする。細胞毒性とは、その作用剤が細胞の成長を阻止するか又は細胞を殺傷することを意味する。典型的な細胞毒素の例として、限定はされないが、コンブレタスタチン、デュオカルマイシン、ＣＣ−１０６５抗腫瘍抗生物質、アントラサイクリン、及び関連化合物が挙げられる。他の細胞毒素として、マイコトキシン、リシン及びその類縁体、カリケアマイシン、ドキソルビシン及びマイタンシノイドが挙げられる。
【００５２】
「プロドラッグ」という用語及び「薬剤抱合体」という用語は、本明細書中で同義的に用いられる。双方とも、まだ複合形態である間には細胞に対して比較的無害であるが、標的インビボ又はその近傍に位置する諸条件、例えば酵素により薬理活性形態に選択的に分解される化合物を示す。
【００５３】
「マーカー」という用語は、腫瘍又は他の病状の特徴づけ、例えば、診断、腫瘍の進行、及び腫瘍細胞により分泌される因子のアッセイにおいて有用な化合物を意味するものとする。マーカーは、「診断剤」のサブセットであると考えられる。
【００５４】
酵素的切断との関連で用いられる「選択的」という用語は、リンカー部分の切断の速度がアミノ酸のランダム配列を有するペプチドの切断の速度よりも大きいことを意味する。
【００５５】
「標的化基」及び「標的化剤」という用語は、（１）結合対象の実体（例えば治療剤又はマーカー）を標的細胞、例えば特定のタイプの腫瘍細胞に誘導可能であるか、又は（２）標的組織、例えば腫瘍で選択的に活性化される部分を意味するものとする。標的化基又は標的化剤は小分子であり得、それは非ペプチド及びペプチドの双方を含むものとする。標的化基は高分子でもあり得、それは糖、レクチン、受容体、受容体のリガンド、ＢＳＡ、抗体などのタンパク質などを含む。本発明の好ましい実施形態では、標的化基は抗体又は抗体断片、より好ましくはモノクローナル抗体又はモノクローナル抗体断片である。
【００５６】
「自己犠牲スペーサー」という用語は、２つの化学的部分を通常は安定な三分子に共有結合させる能力がある二官能性化学的部分を示す。自己犠牲スペーサーは、第１の部分への結合が切断される場合、第２の部分から自発的に分離可能である。
【００５７】
「検出可能な標識」という用語は、検出可能な物理的又は化学的特性を有する部分を意味するものとする。
【００５８】
「切断可能な基」という用語は、インビボで不安定な部分を意味するものとする。好ましくは、「切断可能な基」は、マーカー又は治療剤を抱合体の残りから切断することによるマーカー又は治療剤の活性化を可能にする。機能的に定義されたリンカーは、好ましくは生物学的環境によりインビボで切断される。切断は、限定はされないが、例えば酵素、還元、ｐＨなどの任意のプロセスから生じうる。好ましくは、切断可能な基は所望の作用部位（治療作用又はマーカー活性の部位などにある標的細胞（例えば癌細胞）又は組織内又はその近傍の部位でありうる）で活性化が生じるように選択される。かかる切断は酵素的であり得、典型的な酵素的に切断可能な基は、天然アミノ酸又は天然アミノ酸で終結するペプチド配列を含み、そのカルボキシル末端でリンカーに結合される。切断速度の増加の度合いは本発明にとって重要でないが、切断可能なリンカーの好ましい例として、切断可能な基の少なくとも約１０％、最も好ましくは少なくとも約３５％が投与後２４時間以内に血流内で切断されるものが挙げられる。
【００５９】
「リガンド」という用語は、標的細胞又は組織上で受容体、基質、抗原決定基、又は他の結合部位と特異的に結合するか又は反応性に会合若しくは複合する任意の分子を意味する。リガンドの例として、抗体及びその断片（例えばモノクローナル抗体又はその断片）、酵素（例えば線維素溶解酵素）、生物学的応答修飾物質（例えばインターロイキン、インターフェロン、エリスロポエチン、又はコロニー刺激因子）、ペプチドホルモン、並びにその抗原結合断片が挙げられる。
【００６０】
「環化反応」という用語は、ペプチド、ヒドラジン、又はジスルフィドリンカーの環化に言及する場合、そのリンカーの環への環化を示し、薬剤−リガンド抱合体の分離を開始させる。この速度は実験室内で測定可能であり、環化は生成物の少なくとも９０％、９５％、若しくは１００％の形成時に完了する。
【００６１】
「ポリペプチド」「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書中で同義的に用いられ、アミノ酸残基のポリマーを示す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工の化学的模擬体（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）である場合のアミノ酸ポリマー、並びに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語はまた、「抗体」という用語を包含する。
【００６２】
「アミノ酸」という用語は、天然及び合成アミノ酸、並びに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類縁体及びアミノ酸模倣体を示す。天然アミノ酸は、遺伝コードによりコードされたもの、並びに後に修飾を受けたアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸塩、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類縁体は、天然アミノ酸と同じ塩基性化学構造、すなわち水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合されたα炭素を有する化合物を示す。かかる類縁体は、修飾Ｒ基（例えばノルロイシン）又は修飾ペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ塩基性化学構造を保持する。特に使用可能なアミノ酸はアルギニンに対する前駆体であるシトルリンであり、肝臓内での尿素の形成に関与する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を示す。「非天然アミノ酸」という用語は、上記の２０種の天然アミノ酸の「Ｄ」型の立体化学形態を示すように意図されている。更に、非天然アミノ酸という用語が天然アミノ酸の相同体及び天然アミノ酸の合成的修飾形態を含むと理解される。合成的修飾形態は、限定はされないが、最大で２個の炭素原子により短縮又は伸長されたアルキレン鎖を有するアミノ酸、場合により置換アリール基を含むアミノ酸、及びハロゲン化基、好ましくはハロゲン化アルキル及びアリール基からなるアミノ酸を含む。アミノ酸は、本発明のリンカー又は抱合体に結合される場合、アミノ酸のカルボン酸基がケト（Ｃ（Ｏ））基と置換されている場合の「アミノ酸側鎖」の形態である。したがって、例えばアラニン側鎖は−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ３などである。
【００６３】
アミノ酸及びペプチドは遮断基により保護されうる。遮断基は、アミノ酸又はペプチドのＮ末端を望ましくない反応から保護する原子又は化学的部分であり、薬剤−リガンド抱合体の合成の間に用いられうる。それは合成を通してＮ末端に結合された状態である必要があり、薬剤抱合体の合成の完了後にその除去を選択的に行う化学的又は他の条件により除去されうる。Ｎ末端の保護に適する遮断基は、ペプチド化学の技術分野で周知である。典型的な遮断基は、限定はされないが、水素、Ｄ−アミノ酸、及び塩化カルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）を含む。
【００６４】
「核酸」は、一本鎖又は二本鎖形態でのデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びそのポリマーを示す。この用語は、既知のヌクレオチド類縁体又は修飾骨格残基又は結合を有する核酸を包含し、それは合成、天然、及び非天然であり、参照核酸と同様の結合特性を有し、かつ参照ヌクレオチドと同様に代謝される。かかる類縁体の例として、限定はされないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００６５】
他に指定がない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的修飾変異体（例えば縮重コドン置換基）及び相補配列、並びに明確に示される配列を暗に包含する。具体的には、縮重コドン置換基は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基と置換された配列を生成することにより得られうる（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１頁（１９９１年）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８頁（１９８５年）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８頁（１９９４年））。核酸という用語は遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、及びポリヌクレオチドと同義的に用いられる。
【００６６】
結合として用いられるか又は結合に垂直に示される記号
【化２３】
2010522693.tif 000025
【００６７】
は、示される部分が固体支持体などの分子の残りに結合される点を示す。
【００６８】
「アルキル」という用語は、それ単独で又は別の置換基の一部として、他に明記しない限り、直鎖又は分岐鎖又は環状の炭化水素基、又はそれらの組み合わせを意味し、それは完全に飽和、単不飽和若しくはポリ不飽和の場合があり、かつ規定数の炭素原子を有する（すなわちＣ１〜Ｃ１０は１〜１０個の炭素を意味する）二価及び多価基を含みうる。飽和炭化水素基の例として、限定はされないが、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、シクロヘキシル基、（シクロヘキシル）メチル基、シクロプロピルメチル基などの基や、例えばｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基などの相同体及び異性体が挙げられる。不飽和アルキル基は１つ以上の二重結合又は三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例として、限定はされないが、ビニル基、２−プロペニル基、クロチル基、２−イソペンテニル基、２−（ブタジエニル）基、２，４−ペンタジエニル基、３−（１，４−ペンタジエニル）基、エチニル基、１−及び３−プロピニル基、３−ブチニル基、並びにより高級な相同体及び異性体が挙げられる。「アルキル」という用語はまた、他に明記しない限り、下記により詳細に定義されるアルキルの誘導体、例えば「ヘテロアルキル」を含むものとする。炭化水素基に限定されたアルキル基は「ホモアルキル」と称される。
【００６９】
単独での又は別の置換基の一部としての「アルキレン」という用語は、限定はされないが、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−として例示される、アルカンから誘導される二価基を意味し、下記に「ヘテロアルキレン」として記述される基を更に含む。典型的には、アルキル（又はアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有することになり、本発明では１０個以下の炭素原子を有する基が好ましい。「低級アルキル」又は「低級アルキレン」は、一般に８個以下の炭素原子を有する、鎖がより短いアルキル又はアルキレン基である。
【００７０】
単独での又は別の用語と組み合わせられた「ヘテロアルキル」という用語は、他に明記しない限り、安定な直鎖又は分岐鎖又は環状の炭化水素基、又はそれらの組み合わせを意味し、規定数の炭素原子とＯ、Ｎ、Ｓｉ、及びＳからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子からなり、窒素、炭素及び硫黄原子は場合により酸化され、窒素ヘテロ原子は場合により四級化されうる。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｓ、及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置又は分子の残りに結合されたアルキル基の位置に配置されうる。例として、限定はされないが、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、及び−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３が挙げられる。最大で２つのヘテロ原子、例えば−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３及び−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３などが連続しうる。同様に、単独での又は別の置換基の一部としての「ヘテロアルキレン」という用語は、限定はされないが−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−及び−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−として例示される、ヘテロアルキルから誘導される二価基を意味する。ヘテロアルキレン基においては、ヘテロ原子はまた鎖末端の一方又は両方を占有しうる（例えばアルキレンオキシ基、アルキレンジオキシ基、アルキレンアミノ基、アルキレンジアミノ基など）。「ヘテロアルキル」及び「ヘテロアルキレン」という用語は、ポリ（エチレングリコール）及びその誘導体を包含する（例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｃａｔａｌｏｇ、２００１年を参照）。更に、アルキレン及びヘテロアルキレン連結基においては、連結基の方向は連結基の式が記された方向を全く意味していない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’は−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’及び−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２の双方を表す。
【００７１】
「アルキル」又は「ヘテロアルキル」という用語と併用される「低級」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する部分を示す。
【００７２】
「アルコキシ」、「アルキルアミノ」、「アルキルスルホニル」及び「アルキルチオ」（又はチオアルコキシ）という用語は、それらの従来の意味で用いられ、それぞれ酸素原子、アミノ基、ＳＯ２基又は硫黄原子を介して分子の残りに結合されたアルキル基を示す。「アリールスルホニル」という用語はＳＯ２基を介して分子の残りに結合されたアリール基を示し、「スルフヒドリル」という用語はＳＨ基を示す。
【００７３】
一般に「アシル置換基」もまた上記の基から選択される。本明細書で用いられる「アシル置換基」という用語は、本発明の化合物の多環核に結合された基を示し、それに直接的又は間接的に結合されたカルボニル炭素の原子価を満たしている。
【００７４】
単独での又は別の用語と組み合わせられた「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」という用語は、他に明記しない限り、それぞれ置換若しくは未置換「アルキル」及び置換若しくは未置換「ヘテロアルキル」の環状バージョンを示す。更に、ヘテロシクロアルキルにおいては、ヘテロ原子が分子の残りに結合された複素環の位置を占有しうる。シクロアルキル基の例として、限定はされないが、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、１−シクロヘキセニル基、３−シクロヘキセニル基、シクロヘプチル基などが挙げられる。ヘテロシクロアルキル基の例として、限定はされないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）基、１−ピペリジニル基、２−ピペリジニル基、３−ピペリジニル基、４−モルホリニル基、３−モルホリニル基、テトラヒドロフラン−２−イル基、テトラヒドロフラン−３−イル基、テトラヒドロチエン−２−イル基、テトラヒドロチエン−３−イル基、１−ピペラジニル基、２−ピペラジニル基などが挙げられる。環状構造のヘテロ原子及び炭素原子は場合により酸化される。
【００７５】
単独での又は別の置換基の一部としての「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、他に明記しない限り、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を意味する。更に、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むものとする。例えば、「ハロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル」という用語は、限定はされないが、トリフルオロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、４−クロロブチル基、３−ブロモプロピル基などを含むものとする。
【００７６】
「アリール」という用語は、他に明記しない限り、置換若しくは未置換のポリ不飽和の芳香族炭化水素置換基を意味し、これは共に縮合されるか又は共有結合される単一環又は複数環（好ましくは１〜３つの環）であってもよい。「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するアリール基（又は環）を示し、窒素、炭素及び硫黄原子は場合により酸化され、かつ窒素原子は場合により四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残りに結合されうる。アリール及びヘテロアリール基の非限定例として、フェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、４−ビフェニル基、１−ピロリル基、２−ピロリル基、３−ピロリル基、３−ピラゾリル基、２−イミダゾリル基、４−イミダゾリル基、ピラジニル基、２−オキサゾリル基、４−オキサゾリル基、２−フェニル−４−オキサゾリル基、５−オキサゾリル基、３−イソオキサゾリル基、４−イソオキサゾリル基、５−イソオキサゾリル基、２−チアゾリル基、４−チアゾリル基、５−チアゾリル基、２−フリル基、３−フリル基、２−チエニル基、３−チエニル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−ピリミジル基、４−ピリミジル基、５−ベンゾチアゾリル基、プリニル基、２−ベンジミダゾリル基、５−インドリル基、１−イソキノリル基、５−イソキノリル基、２−キノキサリニル基、５−キノキサリニル基、３−キノリル基、及び６−キノリルが挙げられる。上記のアリール及びヘテロアリール環系の各々における置換基は、下記の許容できる置換基の群から選択される。「アリール」及び「ヘテロアリール」は、縮合されるか又はそれ以外ではアリール又はヘテロアリール系に結合された１つ以上の非芳香環系といった環系も包含する。
【００７７】
簡略化のため、「アリール」という用語は、他の用語（例えばアリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）と併用される場合、上で定義されたアリール及びヘテロアリール環の双方を含む。したがって、「アリールアルキル」という用語は、炭素原子（例えばメチレン基）が例えば酸素原子（例えばフェノキシメチル基、２−ピリジルオキシメチル基、３−（１−ナフチロキシ）プロピル基など）で置換されているアルキル基を含むアルキル基（例えばベンジル基、フェネチル基、ピリジルメチル基など）に結合されたアリール基といった基を含むものとする。
【００７８】
上記の各用語（例えば「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」及び「ヘテロアリール」）は、指定される基の置換及び未置換形態の双方を含む。基の各タイプにおける好ましい置換基は下記に提供される。
【００７９】
アルキル基及びヘテロアルキル基における置換基（アルキレン基、アルケニル基、ヘテロアルキレン基、ヘテロアルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、シクロアルケニル基、及びヘテロシクロアルケニル基とも称されることが多い基を含む）はそれぞれ一般に「アルキル置換基」及び「ヘテロアルキル置換基」と称され、限定はされないが、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ２から、０〜（２ｍ’＋１）（式中、ｍ’はかかる基内での炭素原子の総数である）の範囲の数で選択される種々の基のうちの１つ以上であってもよい。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’の各々は、好ましくは独立して、水素、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、例えば１〜３個のハロゲンで置換されたアリール、置換若しくは未置換アルキル基、アルコキシ又はチオアルコキシ基、又はアリールアルキル基を示す。本発明の化合物が例えば２つ以上のＲ基を含む場合、Ｒ基の各々はＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基の各々としてこれらの基の２つ以上が存在する場合に独立して選択される。Ｒ’及びＲ’’が同じ窒素原子に結合される場合、それらは窒素原子と結合し、５、６、若しくは７員環が形成されうる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、限定はされないが、１−ピロリジニル基及び４−モルホリニル基を含むものとする。置換基についての上の考察から、当業者は、「アルキル」という用語が水素基以外の基に結合された炭素原子を含む基、例えばハロアルキル基（例えば−ＣＦ３及び−ＣＨ２ＣＦ３）及びアシル基（例えば−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３など）を含むように意図されることを理解するであろう。
【００８０】
アルキル基について記述される置換基と同様、アリール置換基及びヘテロアリール置換基はそれぞれ、一般に「アリール置換基」及び「ヘテロアリール置換基」と称され、例えば、ハロゲン、ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ２、−Ｒ’、Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ基、並びにフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基から、０から芳香環系上の開放原子価（ｏｐｅｎ  ｖａｌｅｎｃｅ）の総数の範囲の数で選択され、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好ましくは水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル及びヘテロアルキル、未置換アリール及びヘテロアリール、（未置換アリール）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、並びに（未置換アリール）オキシ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立して選択される。本発明の化合物が例えば２つ以上のＲ基を含む場合、各Ｒ基はＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基の各々としてこれらの基の２つ以上が存在する場合に独立して選択される。
【００８１】
アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上のアリール置換基のうちの２つが、場合により、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）ｑ−Ｕ−（式中、Ｔ及びＵは独立してＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−又は単結合であり、かつｑは０〜３の整数である）の置換基と置換されうる。あるいは、アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つが、場合により式−Ａ（ＣＨ２）ｒＢ−（式中、Ａ及びＢは独立して−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−又は単結合であり、かつｒは１〜４の整数である）の置換基と置換されうる。そのように形成された新環の単結合のうちの１つが、場合により二重結合と置換されうる。あるいは、アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つが、場合により式（ＣＲＲ’）ｓ−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）ｄ−（式中、ｓ及びｄは独立して０〜３の整数であり、かつＸはＯ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、又は−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である）の置換基と置換されうる。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’及びＲ’’’は、好ましくは水素又は置換若しくは未置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択される。
【００８２】
本明細書で用いられる「ジホスフェート」という用語は、限定はされないが、２つのリン酸基を有するリン酸のエステルを含む。「トリホスフェート」という用語は、限定はされないが、３つのリン酸基を有するリン酸のエステルを含む。例えば、ジホスフェート基又はトリホスフェート基を有する特定の薬剤は、
【化２４】
2010522693.tif 000026
【００８３】
を含む。
【００８４】
本明細書で用いられる「ヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）及びケイ素（Ｓｉ）を含む。
【００８５】
記号「Ｒ」は、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクリル基から選択される置換基を表す一般的略語である。
【００８６】
本明細書で用いられる「薬理学的に許容できる担体」という用語は、化学剤の保有又は輸送に関与する、医薬品として許容される材料、組成物又は媒体、例えば液体又は固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又はカプセル化材料を意味する。薬理学的に許容できる担体は薬理学的に許容できる塩を含み、「薬理学的に許容できる塩」という用語は、本明細書中に記載の化合物上に見出される特定の置換基に依存し、比較的毒性のない酸又は塩基と共に調製された活性化合物の塩を含む。本発明の化合物が比較的酸性の機能性を有する場合、かかる化合物の中性形態を十分量の所望の塩基と適切に又は適切な不活性溶媒中で接触させることにより塩基付加塩が得られうる。薬理学的に許容できる塩基付加塩の例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、又はマグネシウム塩、又は類似塩が挙げられる。本発明の化合物が比較的塩基性の機能性を有する場合、かかる化合物の中性形態を十分量の所望の酸と適切に又は適切な不活性溶媒中で接触させることにより酸付加塩が得られうる。薬理学的に許容できる酸付加塩の例として、無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素、リン酸、リン酸一水素、リン酸二水素、硫酸、硫酸一水素、ヨウ化水素酸、又は亜リン酸などに由来する塩、並びに比較的非毒性の有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、琥珀酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などに由来する塩が挙げられる。アルギネートなどのアミノ酸の塩、及び有機酸様のグルクロン酸又はガラクツロン酸などの塩も含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７７年、６６、１−１９頁）。本発明の特定の特異的化合物は、塩基付加塩又は酸付加塩のいずれかへの化合物の変換を可能にする塩基性及び酸性の機能性の双方を有する。
【００８７】
化合物の中性形態は、好ましくは塩を塩基又は酸と接触させかつ親化合物を従来の方法で単離することにより再生される。化合物の親形態は特定の物理的特性、例えば極性溶媒中の溶解度において様々な塩形態と異なるが、それ以外では塩は本発明の目的における化合物の親形態に等価である。
【００８８】
本発明は、塩形態に加え、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書中に記載の化合物のプロドラッグは、生理的条件下で容易に化学的変化を受け、本発明の化合物を提供する化合物である。更に、プロドラッグは、インヴィトロ環境下での化学的又は生化学的方法により本発明の化合物に変換されうる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素又は化学試薬を有する経皮パッチ容器内に入れられる場合、本発明の化合物に徐々に変換されうる。
【００８９】
本発明の特定の化合物は、水和形態を含む、未溶媒和形態及び溶媒和形態で存在しうる。一般に、溶媒和形態は未溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明の特定の化合物は、多結晶又はアモルファス形態で存在しうる。一般に、全ての物理的形態は本発明で検討される用途において同等であり、本発明の範囲内に含まれるように意図されている。
【００９０】
本発明の特定の化合物は不斉炭素原子（光学的中心）又は二重結合を有し、ラセミ酸塩、ジアステレオマー、幾何異性体及び各異性体は本発明の範囲内に包含される。
【００９１】
本発明の化合物はまた、かかる化合物を構成する原子の１つ以上で天然にない比率の原子同位体を有しうる。例えば、化合物は、例えば三重水素（３Ｈ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）又は炭素１４（１４Ｃ）などの放射性同位体で放射性標識されうる。本発明の化合物のあらゆる同位体の変形例は、放射性の有無にかかわらず、本発明の範囲内に包含されるように意図されている。
【００９２】
「結合部分」又は「標的化基に結合するための部分」という用語は、リンカーに対する標的化基の結合を可能にする部分を示す。典型的な結合基の例として、限定はされないが、アルキル基、アミノアルキル基、アミノカルボニルアルキル基、カルボキシアルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルキルマレイミド基、アルキル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基、ポリ（エチレングリコール）マレイミド基及びポリ（エチレングリコール）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基（これらの全部が更に置換されうる）が挙げられる。リンカーはまた、実際には標的化基に付加された結合部分を有しうる。
【００９３】
本明細書で用いられる「離脱基」という用語は、反応において基質から切断される基質の一部を示す。
【００９４】
本明細書で記載の「抗体」という用語は、全抗体及び任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）又はその一本鎖を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖又はその抗原結合部分を含む糖タンパク質を示す。各重鎖は重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３という３つのドメインからなり、μ、δ、γ、α又はεアイソタイプであってもよい。各軽鎖は軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域はＣＬという１つのドメインからなり、κ又はλアイソタイプであってもよい。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域に更に再分化され、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が組み入れられうる。各ＶＨ及びＶＬは３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなり、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へ配列される。重鎖及び軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの宿主組織又は免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む因子への結合を媒介しうる。
【００９５】
本明細書で用いられる抗体の「抗体断片」又は「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を示す。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片により果たされうることが示されている。抗体の「抗体断片」又は「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含される結合断片の例として、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６頁）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖ断片の２つのドメインのＶＬ及びＶＨが別々の遺伝子でコードされるが、ＶＬ及びＶＨ領域が、それらの一価分子を形成するように対をなす場合の単一のタンパク質鎖としての作製を可能にする合成リンカーによる組換え方法を用いて連結されうる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばＢｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６頁、及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３頁を参照）。かかる一本鎖抗体は、抗体の「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含されるようにも意図されている。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を用いて得られ、断片における有用性が無傷抗体の場合と同様の方法でスクリーニングされる。
【００９６】
本明細書で用いられる「モノクローナル抗体」という用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を示す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。
【００９７】
モノクローナル又はポリクローナル抗体の調製においては、当該技術分野で公知の任意の技術が用いられうる（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７頁（１９７５年）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２頁（１９８３年）；Ｃｏｌｅら、７７−９６頁「ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ」、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５年）を参照）。
【００９８】
ポリクローナル抗体を産生するための方法は当業者に公知である。マウスの近交系（例えばＢＡＬＢ／Ｃマウス）又はウサギが、標準アジュバント、例えばフロインドアジュバントと標準免疫プロトコルを用い、タンパク質で免疫される。免疫原製剤に対する動物の免疫応答は、試験採血を行い、βサブユニットに対する反応性の力価を測定することにより監視される。免疫原に対して抗体の適度に高い力価が得られる場合、血液が動物から採取され、抗血清が調製される。タンパク質に反応性を示す抗体における濃縮のため、抗血清の更なる分画化が必要に応じて行われうる。
【００９９】
モノクローナル抗体は、当業者に周知の様々な技術により得られうる。つまり、所望の抗原で免疫された動物由来の脾臓細胞は、一般に骨髄腫細胞との融合により不死化される（Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９頁（１９７６年）を参照）。不死化の他の方法には、エプスタインバーウイルス、腫瘍遺伝子、又はレトロウイルスとの形質転換、あるいは当該技術分野で周知の他の方法が含まれる。
【０１００】
好ましい実施形態では、抗体はキメラ又はヒト化抗体である。本発明のキメラ又はヒト化抗体は、マウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製されうる。重鎖及び軽鎖の免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから得られ、標準の分子生物学技術を用いて非マウス（例えばヒト）免疫グロブリン配列を有するように改変されうる。例えば、キメラ抗体を作製するため、マウス可変領域は、当該技術分野で公知の方法を用いてヒト定常領域に結合されうる（例えばＣａｂｉｌｌｙらに交付された米国特許第４８１６５６７号明細書を参照）。ヒト化抗体を作製するため、マウスＣＤＲ領域は、当該技術分野で公知の方法を用いてヒトフレームワークに挿入されうる（例えば、Ｗｉｎｔｅｒに交付された米国特許第５２２５５３９号明細書、並びにＱｕｅｅｎらに交付された米国特許第５５３０１０１号明細書；米国特許第５５８５０８９号明細書；米国特許第５６９３７６２号明細書及び米国特許第６１８０３７０号明細書を参照）。
【０１０１】
別の好ましい実施形態では、抗体はヒト抗体である。かかるヒト抗体は、内因性マウス免疫グロブリン遺伝子が不活性化されかつ外因性ヒト免疫グロブリン遺伝子が導入されているトランスジェニック又はトランスクロモゾームマウスを免疫することにより産生されうる。かかるマウスは当該技術分野で公知である（例えば米国特許第５５４５８０６号明細書；米国特許第５５６９８２５号明細書；米国特許第５６２５１２６号明細書；米国特許第５６３３４２５号明細書；米国特許第５７８９６５０号明細書；米国特許第５８７７３９７号明細書；米国特許第５６６１０１６号明細書；米国特許第５８１４３１８号明細書；米国特許第５８７４２９９号明細書；及び米国特許第５７７０４２９号明細書（全てはＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙ）；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらの米国特許第５９３９５９８号明細書；米国特許第６０７５１８１号明細書；米国特許第６１１４５９８号明細書；米国特許第６１５０５８４号明細書及び米国特許第６１６２９６３号明細書；並びにＩｓｈｉｄａらの国際公開第０２／４３４７８号パンフレットを参照）。ヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を用いて調製されうる。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ法もまた当該技術分野で公知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５２２３４０９号明細書；米国特許第５４０３４８４号明細書；及び米国特許第５５７１６９８号明細書；Ｄｏｗｅｒらの米国特許第５４２７９０８号明細書及び米国特許第５５８０７１７号明細書；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの米国特許第５９６９１０８号明細書及び米国特許第６１７２１９７号明細書；並びにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらの米国特許第５８８５７９３号明細書；米国特許第６５２１４０４号明細書；米国特許第６５４４７３１号明細書；米国特許第６５５５３１３号明細書；米国特許第６５８２９１５号明細書及び米国特許第６５９３０８１号明細書を参照）。
【０１０２】
本明細書で用いられる「固体支持体」は、選択される溶媒系中に実質的に不溶性であるか又はそれが溶解可能な選択される溶媒系から（例えば沈殿により）容易に分離されうる材料を示す。本発明の実施に有用な固体支持体は、活性化されるか又は活性化可能であることにより選択される種の固体支持体への結合を可能にする基を含みうる。固体支持体はまた、本発明の１種又は２種以上の化合物が上部に結合される基板、例えばチップ、ウエーハ又はウェルであってもよい。
【０１０３】
本明細書で用いられる「反応性官能基」は、限定はされないが、オレフィン、アセチレン、アルコール、フェノール、エーテル、酸化物、ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、シアネート、イソシアネート、チオシアネート、イソチオシアネート、アミン、ヒドラジン、ヒドラゾン、ヒドラジド、ジアゾ、ジアゾニウム、ニトロ、ニトリル、メルカプタン、硫化物、ジスルフィド、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、スルフィン酸、アセタール、ケタール、無水物、スルフェート、スルフェン酸イソニトリル、アミジン、イミド、イミダート、ニトロン、ヒドロキシルアミン、オキシム、ヒドロキサム酸、チオヒドロキサム酸、アレン、オルトエステル、亜スルフェート、エナミン、イナミン、尿素、シュードウレア（ｐｓｅｕｄｏｕｒｅａｓ）、セミカルバジド、カルボジイミド、カルバメート、イミン、アジド、アゾ化合物、アゾキシ化合物、及びニトロソ化合物を含む基を示す。反応性官能基はまた、バイオコンジュゲート、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、マレイミドなどの調製に用いられるものを含む（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、１９９６年を参照）。これらの各官能基を調製するための方法は当該技術分野で周知であり、特定の目的へのその適用又はそのための修飾は当業者の能力の範囲内である（例えば、Ｓａｎｄｌｅｒ及びＫａｒｏ編、「ＯＲＧＡＮＩＣ  ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ  ＧＲＯＵＰ  ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＳ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、１９８９年を参照）。反応性官能基は保護又は非保護であってもよい。
【０１０４】
本発明の化合物は、単一の異性体（例えば光学異性体、シス−トランス異性体、位置異性体、ジアステレオマー）又は異性体の混合物として調製される。好ましい実施形態では、化合物は、実質的に単一の異性体として調製される。実質的に異性体的に純粋な化合物を調製する方法は当該技術分野で公知である。例えば、鏡像異性的に濃縮された混合物及び純粋な鏡像異性化合物は、キラル中心での立体化学が不変のままであるか又はその完全な反転をもたらす反応と組み合わせて鏡像異性的に純粋な合成中間体を用いることにより調製されうる。あるいは、合成経路の過程での最終生成物又は中間体は、単一の立体異性体に分解されうる。特定の立体中心を反転させるか又は不変状態にするための技術及び立体異性体の混合物を溶解するための技術は当該技術分野で周知であり、それは十分に当業者の選択能力及び特定の状況における適切な方法の範囲内にある。一般にはＦｕｒｎｉｓｓら（編）、「ＶＯＧＥＬ’Ｓ  ＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡ  ＯＦ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ５ＴＨ  ＥＤ．」、Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｌｔｄ．、Ｅｓｓｅｘ、１９９１年、８０９−８１６頁；及びＨｅｌｌｅｒ、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２３：１２８頁（１９９０年）を参照のこと。
【０１０５】
リンカー
本発明は、薬剤が化学リンカーを介してリガンドに連結された薬剤−リガンド抱合体を提供する。一部の実施形態では、リンカーはペプチジルリンカーであり、本明細書中で（Ｌ４）ｐ−Ｆ−（Ｌ１）ｍとして表される。他のリンカーは、ヒドラジン及びジスルフィドリンカーを含み、それぞれ本明細書中で（Ｌ４）ｐ−Ｈ−（Ｌ１）ｍ又は（Ｌ４）ｐ−Ｊ−（Ｌ１）ｍとして表される。本発明は、薬剤に結合されているようなリンカーに加え、本質的に任意の分子種への結合に適する切断可能なリンカーアームも提供する。本発明のリンカーアームの態様は、本明細書中でその治療部分への結合を参照することにより例示される。しかし、リンカーが限定はされないが診断剤、分析剤、生体分子、標的化剤、検出可能な標識などを含む多様な種に結合可能であることは当業者には容易に理解されるであろう。
【０１０６】
薬剤−リガンド抱合体におけるペプチジル及び他のリンカーの使用については、米国仮特許出願第６０／２９５１９６号明細書；米国仮特許出願第６０／２９５２５９号明細書；米国仮特許出願第６０／２９５３４２号明細書；米国仮特許出願第６０／３０４９０８号明細書；米国仮特許出願第６０／５７２６６７号明細書；米国仮特許出願第６０／６６１１７４号明細書；米国仮特許出願第６０／６６９８７１号明細書；米国仮特許出願第６０／７２０４９９号明細書；米国仮特許出願第６０／７３０８０４号明細書；及び米国仮特許出願第６０／７３５６５７号明細書及び米国特許出願第１０／１６０９７２号明細書；米国特許出願第１０／１６１２３４号明細書；米国特許出願第１１／１３４６８５号明細書；米国特許出願第１１／１３４８２６号明細書、米国特許出願第１１／３９８８５４号明細書及び米国特許第６９８９４５２号明細書、並びにＰＣＴ特許出願のＰＣＴ／ＵＳ２００６／３７７９３号明細書において記載され、これら全部は参照により本明細書中に援用される。
【０１０７】
一態様では、本発明は、治療剤及びマーカーに対する標的化基への結合に有用なリンカーに関する。別の態様では、本発明は、化合物に安定性をもたらすか、そのインビボでの毒性を低減するか、又はそれ以外ではその薬動力学、バイオアベイラビリティ及び／又は薬力学に好ましい作用をもたらすといったリンカーを提供する。かかる実施形態では、一旦薬剤がその作用部位に送達されると、リンカーが切断され活性薬剤が放出されることが一般に好ましい。したがって、本発明の一実施形態では、本発明のリンカーは、一旦治療剤又はマーカーから除去されると（活性化される間など）リンカーの存在の痕跡が全く残らないようにトレースレスである。
【０１０８】
本発明の別の実施形態では、リンカーは、治療作用又はマーカー活性の部位など、標的インビボ又はその近傍の部位でのその切断される能力により特徴づけられる。かかる切断は事実上酵素的であってもよい。この特徴は、治療剤又はマーカーの全身活性化の低減や、毒性及び全身性副作用の低減に役立つ。酵素的切断にとって好ましい切断可能な基は、ペプチド結合、エステル結合、及びジスルフィド結合を含む。他の実施形態では、リンカーはｐＨに感受性があり、ｐＨの変化を通じて切断される。
【０１０９】
本発明の重要な態様は、リンカーの切断速度を制御する能力である。速やかに切断されるリンカーが望ましい場合が多い。しかし、一部の実施形態では、より緩やかに切断されるリンカーが好ましい場合がある。例えば、徐放製剤又は速やかな放出成分と緩やかな放出成分の双方を有する製剤では、より緩やかに切断されるリンカーを提供することが有用であってもよい。国際公開第０２／０９６９１０号パンフレットは、ヒドラジンリンカーを有する数種の特異的リガンド−薬剤抱合体を提供する。しかし、リンカー組成物を要求される環化速度に応じて「調節する（ｔｕｎｅ）」見込みはなく、リガンドを記載の特定の化合物よりも緩やかな速度で薬剤から切断することが多数の薬剤−リンカー抱合体にとって好ましい。それに対し、本発明のヒドラジンリンカーが環化速度の非常に高速から非常に低速までの範囲を備えることにより、所望の環化速度に基づく特定のヒドラジンリンカーの選択が可能になる。例えば、切断時に単一の５員環を生成するヒドラジンリンカーの場合、非常に高速な環化が得られうる。細胞毒性物質の細胞への標的化送達にとって好ましい環化速度は、切断時にジェミナル（ｇｅｍｉｎａｌ）位置に２つのメチル基を有するリンカーから得られる２つの５員環又は単一の６員環のいずれかを生成するヒドラジンリンカーを用いて得られる。ｇｅｍ−ジメチル効果により、ジェミナル位置に２つのメチル基を有しない単一の６員環の場合と比べて環化反応の速度が加速されることが示されている。これは同環内に解放されている株から得られる。しかし時として、置換基は反応速度を高めるのではなく低下させうる。遅延の理由が立体障害に帰着されうることが多い。実施例２．４に示されるように、ｇｅｍジメチル置換により、ジェミナル炭素がＣＨ２である場合よりも極めて迅速な環化反応が生じうる。
【０１１０】
しかし、一部の実施形態ではより緩やかに切断されるリンカーが好ましい場合があることに着目することが重要である。例えば、徐放製剤又は速やかな放出及び緩やかな放出成分の双方を有する製剤では、より緩やかに切断されるリンカーを提供することが有用であってもよい。特定の実施形態では、低速の環化が、切断時にｇｅｍ−ジメチル置換基を有しない単一の６員環、又は単一の７員環を生成するヒドラジンリンカーを用いてなされる。
【０１１１】
リンカーはまた、治療剤又はマーカーを循環中での分解に対して安定化させるのに役立つ。この特徴は、かかる安定化の結果、結合された治療剤又はマーカーの循環半減期が延長されることから有意な効果をもたらす。リンカーはまた、結合された治療剤又はマーカーの活性を抱合体が循環中に比較的良性であるように弱めるのに役立ち、かつ、所望の作用部位での活性化後に望ましい効果を有し、例えば毒性を示す。治療剤抱合体においては、リンカーのこの特徴は同剤の治療指数を改善するのに役立つ。
【０１１２】
安定化基は、好ましくは、治療剤又はマーカーのクリアランス及び代謝を血液中又は非標的組織内に存在しうる酵素により制限するように選択され、更に同剤又はマーカーの細胞への輸送を制限するように選択される。安定化基は、同剤又はマーカーの分解を遮断するのに役立ち、また同剤又はマーカーの他の物理的特性をもたらすように作用しうる。安定化基はまた、同剤又はマーカーの安定性を製剤又は非製剤形態のいずれかで保存される間に改善しうる。
【０１１３】
望ましくは、安定化基は、治療剤又はマーカーのヒト血液中、３７℃で２時間の保存により試験される場合に同剤又はマーカーを分解から保護するのに役立ち、かつ所与のアッセイ条件下でヒト血液中に存在する酵素により、２０％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満及び更により好ましくは２％未満の同剤又はマーカーの切断をもたらす場合、治療剤又はマーカーの安定化に有用である。
【０１１４】
本発明は、これらのリンカーを有する抱合体にも関する。より詳細には、本発明は疾患の治療、特に癌化学療法に用いられうるプロドラッグに関する。詳細には、本明細書中に記載のリンカーの使用により、類似構造のプロドラッグと比べて、活性の高い特異性、低下した毒性、及び血中での改善された安定性を示すプロドラッグが提供される。
【０１１５】
本明細書中に記載の本発明のリンカーは、細胞毒素抱合体内部の種々の位置に存在しうる。
【０１１６】
したがって、インビボ、例えば血流中で、かかる基が欠如した構築物の速度よりも高い速度で切断されることになる、種々の基のいずれかをその鎖の一部として有しうるリンカーが提供される。リンカーアームと治療剤及び診断剤との抱合体も提供される。リンカーは、治療剤のプロドラッグ類縁体を形成しかつ治療剤又は診断剤を標的化剤、検出可能な標識、又は固体支持体に可逆的に連結するのに有用である。リンカーは、本発明の細胞毒素を含む抱合体に組み込まれうる。
【０１１７】
切断可能なペプチド、ヒドラジン、又はジスルフィド基に加え、１つ以上の自己犠牲リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）基Ｌ１が場合により細胞毒素と標的化剤の間に導入される。これらのリンカー基はまた、スペーサー基として記述され、少なくとも２つの反応官能基を有しうる。典型的には、スペーサー基の一方の化学官能基が治療剤の化学官能基、例えば細胞毒素に結合する間、スペーサー基の他方の化学官能基は標的化剤又は切断可能なリンカーの化学官能基に結合するように用いられる。スペーサー基の化学官能基の例として、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボニル基、カルボキシ基、アミノ基、ケトン基、及びメルカプト基が挙げられる。
【０１１８】
Ｌ１で表される自己犠牲リンカーは、一般に置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基又は置換若しくは未置換ヘテロアルキル基である。一実施形態では、アルキル又はアリール基は１〜２０個の炭素原子を含みうる。それらはまた、ポリエチレングリコール部分を含みうる。
【０１１９】
典型的なスペーサー基として、例えば、６−アミノヘキサノール、６−メルカプトヘキサノール、１０−ヒドロキシデカン酸、グリシン及び他のアミノ酸、１，６−ヘキサンジオール、β−アラニン、２−アミノエタノール、システアミン（２−アミノエタンチオール）、５−アミノペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、３−マレイミド安息香酸、フタリド、α−置換フタリド、カルボニル基、アミナールエステル、核酸、ペプチドなどが挙げられる。
【０１２０】
スペーサーは、更なる分子量及び化学官能基を細胞毒素−標的化剤抱合体に導入するのに役立ちうる。一般に、更なる分子量及び官能基は抱合体の血清半減期及び他の特性に作用することになる。したがって、スペーサー基の注意深い選択を通じ、ある範囲の血清半減期を有する細胞毒素抱合体が生成されうる。
【０１２１】
薬剤成分の直近に位置するスペーサーは、（Ｌ１）ｍ（式中、ｍは０、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）としても示される。複数のＬ１スペーサーが存在する場合、同一の又は異なるスペーサーのいずれかが用いられうる。Ｌ１は任意の自己犠牲的な基であってもよい。
【０１２２】
Ｌ４は好ましくは抱合体に同部分を有するリンカーを用いて溶解度の増大又は凝集特性の低下をもたらすか又は抱合体の加水分解速度を変化させるリンカー部分である。Ｌ４リンカーは自己犠牲的である必要がない。一実施形態では、Ｌ４部分は、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアルキル基、又は未置換ヘテロアルキルであり、これらのいずれかが直鎖状、分岐鎖状、又は環状であってもよい。置換基は、例えば、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、又はジアルキルアミノ基であってもよい。特定の実施形態では、Ｌ４は非環状部分を含む。別の実施形態では、Ｌ４は任意の正又は負に帯電したアミノ酸重合体、例えばポリリシン又はポリアルギニンを含む。Ｌ４はポリエチレングリコール部分などの重合体を含みうる。更に、Ｌ４リンカーは、例えば重合体成分と小さい化学的成分の双方を含みうる。
【０１２３】
好ましい実施形態では、Ｌ４はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む。Ｌ４のＰＥＧ部分は１〜５０単位の長さであってもよい。好ましくは、ＰＥＧは１〜１２の繰り返し単位、より好ましくは３〜１２の繰り返し単位、より好ましくは２〜６の繰り返し単位、又は更により好ましくは３〜５の繰り返し単位及び最も好ましくは４の繰り返し単位を有することになる。Ｌ４は、単にＰＥＧ部分からなりうるか、あるいは更なる置換若しくは未置換のアルキル又はヘテロアルキルも有しうる。ＰＥＧとＬ４部分の一部として結合し、抱合体の水溶性を高めることは有用である。更に、ＰＥＧ部分は薬剤と抗体との複合の間に生じうる凝集の程度を低下させる。
【０１２４】
一部の実施形態では、Ｌ４は、（ＡＡ１）ｃのＮ末端に直接結合される
【化２５】
2010522693.tif 000027
【０１２５】
を含む。Ｒ２０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーである。Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６、及びＲ２６’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され、かつｓ及びｔは独立して１〜６の整数である。好ましくは、Ｒ２０、Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６及びＲ２６’は疎水性である。一部の実施形態では、Ｒ２０は水素又はアルキル基（好ましくは未置換低級アルキル基）である。一部の実施形態では、Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６及びＲ２６’は、独立して水素又はアルキル基（好ましくは未置換Ｃ１〜Ｃ４アルキル基）である。一部の実施形態では、Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６及びＲ２６’は全てが水素である。一部の実施形態では、ｔは１でありかつｓは１又は２である。
【０１２６】
ペプチドリンカー（Ｆ）
上で考察のように、本発明のペプチジルリンカーは、一般式：（Ｌ４）ｐ−Ｆ−（Ｌ１）ｍ（式中、Ｆはペプチジル部分を含むリンカー部分を表す）により表されうる。一実施形態では、Ｆ部分は任意の追加の自己犠牲リンカーＬ２及びカルボニル基を含む。別の実施形態では、Ｆ部分はアミノ基及び任意のスペーサー基Ｌ３を含む。
【０１２７】
したがって、一実施形態では、ペプチジルリンカーを含む抱合体は、式４
【化２６】
2010522693.tif 000028
【０１２８】
の構造を含む。
【０１２９】
この実施形態では、Ｌ１は上記のような自己犠牲リンカーであり、かつ、Ｌ４は上記のように好ましくは溶解度の増大又は凝集特性の低下をもたらすかあるいは加水分解速度を変化させる部分である。Ｌ２は自己犠牲リンカーを表す。更に、ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６であり、かつｏ及びｐは独立して０若しくは１である。ＡＡ１は１種以上の天然アミノ酸及び／又は非天然α−アミノ酸を表し、ｃは１〜２０の範囲の整数である。一部の実施形態では、ｃは２〜５の範囲内であるか又は２若しくは３である。
【０１３０】
上記式４の本発明のペプチドリンカーにおいては、ＡＡ１は、そのアミノ末端で、Ｌ４に直接連結されるか、又はＬ４が不在の場合にはＸ４基（すなわち、標的化剤、検出可能な標識、保護反応官能基又は非保護反応官能基）に直接連結される。一部の実施形態では、Ｌ４が存在する場合、Ｌ４は（ＡＡ１）ｃのＮ末端に直接結合されたカルボン酸アシル基を含まない。したがって、これらの実施形態では、米国特許第６２１４３４５号明細書に記載のペプチドリンカーにおいて必要であるように、Ｌ４又はＸ４のいずれかとＡＡ１の間に直接カルボン酸アシル単位が必ずしも存在する必要がない。
【０１３１】
別の実施形態では、ペプチジルリンカーを含む抱合体は、式５：
【化２７】
2010522693.tif 000029
【０１３２】
の構造を含む。
【０１３３】
この実施形態では、Ｌ４は上記のように、好ましくは溶解度の増大又は凝集特性の低下をもたらすかあるいは加水分解速度を変化させる部分であり、Ｌ３は第一級若しくは第二級アミン基又はカルボキシル官能基を含むスペーサー基であり、かつＬ３のアミンがＤのペンダントカルボキシル官能基とアミド結合を形成するか、又はＬ３のカルボキシル基がＤのペンダントアミン官能基とアミド結合を形成し、かつｏ及びｐは独立して０又は１である。ＡＡ１は１種以上の天然アミノ酸及び／又は非天然α−アミノ酸を表し、ｃは１〜２０の整数である。この実施形態では、Ｌ１は存在しない（すなわち一般式中でｍは０である）。
【０１３４】
上記式５の本発明のペプチドリンカーにおいては、ＡＡ１は、そのアミノ末端で、Ｌ４に直接連結されるか、又はＬ４が不在の場合にはＸ４基（すなわち、標的化剤、検出可能な標識、保護反応官能基又は非保護反応官能基）に直接連結される。一部の実施形態では、Ｌ４が存在する場合、Ｌ４は（ＡＡ１）ｃのＮ末端に直接結合されたカルボン酸アシル基を含まない。したがって、これらの実施形態では、米国特許第６２１４３４５号明細書に記載のペプチドリンカーにおいて必要であるように、Ｌ４又はＸ４のいずれかとＡＡ１の間に直接カルボン酸アシル単位が必ずしも存在する必要がない。
【０１３５】
自己犠牲リンカーＬ２
自己犠牲リンカーＬ２は、２つの距離が離れた化学的部分を共に通常は安定なトリパーテート（ｔｒｉｐａｒｔａｔｅ）分子に共有結合可能な二機能の化学的部分であり、それにより酵素切断を用いてトリパーテート分子から前記距離が離れた化学的部分のうちの一方が放たれ、前記酵素切断後、分子の残りから自発的切断が生じ、前記距離が離れた化学的部分の他方が放たれる。本発明によると、自己犠牲スペーサーは、その一方の末端でペプチド部分に共有結合されかつその他方の末端で薬剤部分（その誘導化が薬理学的活性を阻害する）の化学反応性がある部位に共有結合されることで、距離が離れ、ペプチド部分及び薬剤部分を共に標的酵素の不在下で安定かつ薬理学的に不活性であるトリパーテート分子に共有結合させるが、それはスペーサー部分及びペプチド部分に共有結合することによりトリパーテート分子からのペプチド部分の放出をもたらす結合でかかる標的酵素により酵素的に切断可能である。次いで、かかる酵素切断は、スペーサー部分の自己犠牲的特徴を活性化し、スペーサー部分を薬剤部分に共有結合させることにより薬理活性形態での薬剤の放出をもたらす結合の自発切断を開始させることになる。
【０１３６】
自己犠牲リンカーＬ２は任意の自己犠牲的な基であってもよい。好ましくは、Ｌ２は、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、置換ヘテロシクロアルキル基、置換及び未置換アリール基、並びに置換及び未置換ヘテロアリールである。
【０１３７】
１つの特に好ましい自己犠牲スペーサーＬ２は、式６：
【化２８】
2010522693.tif 000030
【０１３８】
で表されうる。
【０１３９】
アミノベンジル基の芳香環は１つ以上の「Ｋ」基で置換されうる。「Ｋ」基は、通常では環構造の一部である４つの非置換炭素のうちの１つに結合される水素を置き換える芳香環上の置換基である。「Ｋ」基は単一の原子、例えばハロゲンでありうるか、又は多重原子基、例えばアルキル基、ヘテロアルキル基、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ハロアルキル基、及びシアノ基であってもよい。各Ｋは、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＲ２１ＣＯＲ２２、ＯＣＯＮＲ２１Ｒ２２、ＯＣＯＲ２１、及びＯＲ２１（式中、Ｒ２１及びＲ２２は独立して水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル及び未置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される）からなる群から独立して選択される。典型的なＫ置換基は、限定はされないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＮＨＣＯＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣＯＣＦ３及びメチルを含む。「Ｋａ」においては、ａは０、１、２、３、若しくは４の整数である。好ましい一実施形態では、ａは０である。
【０１４０】
上記の構造のエーテル酸素原子はカルボニル基に結合される。ＮＲ２４官能基から芳香環への系統は、アミンの官能基が５個の炭素（いずれも環を形成し、−ＣＨ２−Ｏ−基で置換されない）のいずれかに結合されうることを示す。好ましくは、ＸのＮＲ２４官能基は−ＣＨ２−Ｏ−基に対するパラ配位で芳香環に共有結合される。Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から選択されるメンバーである。特定の実施形態では、Ｒ２４は水素である。
【０１４１】
一実施形態では、本発明は、上記の式（４）のペプチドリンカーを提供し、Ｆは構造：
【化２９】
2010522693.tif 000031
【０１４２】
を含み、Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から選択される）を提供する。各Ｋは、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＲ２１ＣＯＲ２２、ＯＣＯＮＲ２１Ｒ２２、ＯＣＯＲ２１、及びＯＲ２１（式中、Ｒ２１及びＲ２２は独立して水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される）からなる群から独立して選択されるメンバーであり、かつａは０、１、２、３、若しくは４の整数である。
【０１４３】
別の実施形態では、上記式（４）のペプチドリンカーは、構造：
【化３０】
2010522693.tif 000032
【０１４４】
を含む−Ｆ−（Ｌ１）ｍ−を含み、各Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から独立して選択されるメンバーである。
【０１４５】
一部の実施形態では、自己犠牲スペーサーＬ１又はＬ２は、
【化３１】
2010522693.tif 000033
【０１４６】
を含み、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換のヘテロアルキル及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択され、かつｗは０〜４の整数である。一部の実施形態では、Ｒ１７及びＲ１８は独立して水素又はアルキル基（好ましくは未置換Ｃ１〜Ｃ４アルキル）である。好ましくは、Ｒ１７及びＲ１８はＣ１〜Ｃ４アルキル基、例えばメチル基又はエチル基である。一部の実施形態では、ｗは０である。任意の特定の理論に拘束されないが、この特定の自己犠牲スペーサーが比較的速やかに環化することが実験的に見出されている。
【０１４７】
一部の実施形態では、Ｌ１又はＬ２は、
【化３２】
2010522693.tif 000034
【０１４８】
を含む。
【０１４９】
スペーサー基Ｌ３
スペーサー基Ｌ３は第一級若しくは第二級アミン基又はカルボキシル官能基を含むように特徴づけられ、かつ、Ｌ３基のアミンがＤのペンダントカルボキシル官能基とアミド結合を形成するか、又はＬ３のカルボキシルがＤのペンダントアミン官能基とアミド結合を形成する。Ｌ３は、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、又は置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基からなる群から選択されうる。好ましい実施形態では、Ｌ３は芳香族性基を含む。より好ましくは、Ｌ３は安息香酸基、アニリン基又はインドール基を含む。−Ｌ３−ＮＨ−スペーサーとして機能しうる構造の非限定例として、
【化３３】
2010522693.tif 000035
【０１５０】
といった構造が挙げられ、ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、かつＲ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーである。
【０１５１】
Ｌ３を有する本発明のリンカーの切断時、Ｌ３部分は薬剤Ｄに結合されたままである。したがって、Ｌ３部分はＤに結合されたその存在がＤの活性を有意に変化させないように選択される。別の実施形態では、薬剤Ｄ自体の一部がＬ３スペーサーとして機能する。例えば、一実施形態では、薬剤Ｄは薬剤の一部がＬ３スペーサーとして機能するデュオカルマイシン誘導体である。かかる実施形態の非限定例として、ＮＨ２−（Ｌ３）−Ｄが
【化３４】
2010522693.tif 000036
【０１５２】
からなる群から選択される構造を有する場合が挙げられ、ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり、かつ各構造上のＮＨ２基は（ＡＡ１）ｃと反応して−（ＡＡ１）ｃ−ＮＨ−を形成する。
【０１５３】
ペプチド配列ＡＡ１
ＡＡ１基は、単一のアミノ酸又はアミド結合により結合された複数のアミノ酸を表す。アミノ酸は天然アミノ酸及び／又は非天然α−アミノ酸であってもよい。
【０１５４】
ペプチド配列（ＡＡ１）ｃは、機能的に、単一のアミノ酸（ｃ＝１の場合）又はアミド結合により互いに結合された複数のアミノ酸のアミド化残基である。本発明のペプチドは、生体系における目的の位置で酵素によるペプチドの酵素触媒化切断を誘導するように選択される。例えば、標的化剤を用いて細胞に標的化され、そしてその細胞により取り込まれる抱合体においては、例えばペプチドがリソソーム内でインビボで切断されるように１種以上のリソソームプロテアーゼにより切断されるペプチドが選択される。ペプチド内部のアミノ酸の数は１〜２０個の範囲でありうるが、より好ましくは（ＡＡ１）ｃを含む、２〜８個のアミノ酸、２〜６個のアミノ酸又は２、３若しくは４個のアミノ酸が存在することになる。特異的酵素により切断されやすいペプチド配列又は酵素のクラスは当該技術分野で周知である。
【０１５５】
血清、肝臓、腸管などにおける酵素により切断される多数のペプチド配列は、当該技術分野で既知である。本発明の典型的なペプチド配列は、プロテアーゼにより切断されるペプチド配列を含む。プロテアーゼ感受性配列の使用についてなされる考察の中心は、図示の簡素化を意図したものであり、本発明の範囲を限定することに役立つものではない。
【０１５６】
ペプチドを切断する酵素がプロテアーゼである場合、リンカーは一般にプロテアーゼに対する切断認識配列を有するペプチドを含む。プロテアーゼに対する切断認識配列は、タンパク質分解切断の間にプロテアーゼにより認識される特定のアミノ酸配列である。多数のプロテアーゼ切断部位が当該技術分野で既知であり、これら及び他の切断部位は、リンカー部分内に含まれうる。例えば、Ｍａｔａｙｏｓｈｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：９５４頁（１９９０年）；Ｄｕｎｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４１：２５４頁（１９９４年）；Ｓｅｉｄａｈら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：１７５頁（１９９４年）；Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：６１５頁（１９９４年）；Ｗｅｂｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：５９５頁（１９９４年）；Ｓｍｉｔｈら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：４１２頁（１９９４年）；Ｂｏｕｖｉｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４８：６１４頁（１９９５年）、Ｈａｒｄｙら、ｉｎ  Ａｍｉｌｏｉｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｇｉｎｇ，ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｍａｓｔｅｒｓら編、１９０−１９８頁（１９９４年）を参照のこと。
【０１５７】
ペプチド配列（ＡＡ１）ｃのアミノ酸は、腫瘍関連プロテアーゼなどの特定の分子による選択的酵素切断に対するその適合性に基づいて選択される。用いられるアミノ酸は天然又は非天然アミノ酸であってもよい。それらはＬ又はＤ配置であってもよい。一実施形態では、少なくとも３種の異なるアミノ酸が用いられる。別の実施形態では、２種のアミノ酸のみが用いられる。
【０１５８】
好ましい実施形態では、ペプチド配列（ＡＡ１）ｃはリソソームプロテアーゼにより切断されるその能力に基づいて選択され、その非限定例としてカテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、Ｌ及びＳが挙げられる。好ましくは、ペプチド配列（ＡＡ１）ｃはインビトロでカテプシンＢにより切断可能であり、それは当該技術分野で既知のインビトロでのプロテアーゼ切断アッセイを用いて試験されうる。
【０１５９】
別の実施形態では、ペプチド配列（ＡＡ１）ｃは、腫瘍関連プロテアーゼ、例えば腫瘍細胞近傍で細胞外に見出されるプロテアーゼにより切断されるその能力に基づいて選択され、その非限定例として、チメット（ｔｈｉｍｅｔ）オリゴペプチダーゼ（ＴＯＰ）及びＣＤ１０が挙げられる。ペプチドのＴＯＰ又はＣＤ１０により切断される能力は、当該技術分野で既知のインビトロでのプロテアーゼ切断アッセイを用いて試験されうる。
【０１６０】
本発明の抱合体での使用に適するペプチド配列の適例として、限定はされないが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ（配列番号１４）、Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ、並びにＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌが挙げられる。好ましいペプチド配列はＶａｌ−Ｃｉｔ及びＶａｌ−Ｌｙｓである。
【０１６１】
別の実施形態では、薬剤部分の直近に位置するアミノ酸は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される。更に別の実施形態では、薬剤部分の直近に位置するアミノ酸は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択される。
【０１６２】
プロテアーゼは癌転移に関与している。プロテアーゼウロキナーゼの合成の増大が、多数の癌内での転移能の増強と相関していた。ウロキナーゼは細胞外空間内に偏在するプラスミノゲンからプラスミンを活性化し、その活性化により転移性腫瘍細胞の浸潤を媒介する細胞外マトリックス内でタンパク質の分解が引き起こされうる。プラスミンはまたコラゲナーゼを活性化する故、毛細管及びリンパ系の周囲の基底膜内でのコラーゲンの分解を促進可能であり、それにより腫瘍細胞の標的組織への浸潤が可能になる（Ｄａｎｏら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．、４４：１３９頁（１９８５年））。したがって、ウロキナーゼにより切断されるペプチド配列のリンカーとしての使用は本発明の範囲内に含まれる。
【０１６３】
本発明は、トリプターゼによる切断に感受性があるペプチド配列の使用についても提供する。ヒトマスト細胞は、α、βＩ、βＩＩ、及びβＩＩＩと称される少なくとも４種の異なるトリプターゼを発現する。これらの酵素は血漿プロテアーゼ阻害剤により制御されることがなく、インビトロで数種の生理的基質を切断するだけである。セリンプロテアーゼのトリプターゼファミリーは、マスト細胞を含む種々のアレルギー性及び炎症性疾患に関与しており、その理由はこれらの障害を有する患者由来の体液中で見出されるトリプターゼレベルの上昇にある。しかし、疾患の病態生理におけるトリプターゼの正確な役割はいまだに明らかにされていない。トリプターゼの生物学的機能及び対応する生理学的結果の範囲は、それらの基質特異性により実質的に画定される。
【０１６４】
トリプターゼは、腫瘍転移及び浸潤に関連したプロテアーゼのチモーゲン形態であるプロウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）の強力な活性化因子である。細胞溢出及び移動において細胞外マトリックスの破壊をまねくプラスミノゲンカスケードの活性化は、Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＬｙｓのＰ４〜Ｐ１配列（配列番号４）のプロウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子のトリプターゼ活性化の機能でありうる（Ｓｔａｃｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６９（１３）：９４１６−９４１９頁（１９９４年））。血管透過性の調節に関与する神経ペプチドＶＩＰ（血管作動性腸管ペプチド）もまた主にＴｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号５）配列でトリプターゼにより切断される（Ｔａｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３：２７−３２頁（１９９０年））。Ｇタンパク質共役受容体ＰＡＲ−２をＳｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（配列番号６）配列でトリプターゼにより切断し活性化することで、線維芽細胞の増殖が促進されうる一方、トロンビン活性化受容体ＰＡＲ−１がＰｒｏ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号７）配列でトリプターゼにより不活性化される（Ｍｏｌｉｎｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７２（７）：４０４３−４０４９頁（１９９７年））。総合すれば、このエビデンスは、トリプターゼにおける疾患の結果としての組織リモデリングでの中心的役割を示唆する。これはいくつかのマスト細胞媒介性の障害において観察される重大な変化に合致する。慢性喘息及び他の長期の呼吸器疾患の１つの特質は、その生理的標的のトリプターゼ活性化の結果でありうる下層組織の線維化及び肥厚である。同様に、血管新生が種々の癌におけるマスト細胞密度、トリプターゼ活性及び予後不良に関連することを一連の報告が示している（Ｃｏｕｓｓｅｎｓら、Ｇｅｎｅ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３（１１）：１３８２−９７頁（１９９９年））；Ｔａｋａｎａｍｉら、Ｃａｎｃｅｒ  ８８（１２）：２６８６−９２頁（２０００年）；Ｔｏｔｈ−Ｊａｋａｔｉｃｓら、Ｈｕｍａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ３１（８）：９５５−９６０頁（２０００年）；Ｒｉｂａｔｔｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ８５（２）：１７１−５頁（２０００年））。
【０１６５】
特定のプロテアーゼが選択されたペプチド配列を切断するか否かを評価するための方法は当該技術分野で既知である。例えば、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）蛍光発生ペプチド基質の使用は、プロテアーゼ特異性を測定するための十分に確立された方法である（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｍ．ら（１９７７年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７８：４７−５１頁）。アニリド結合の特異的切断により蛍光発生ＡＭＣ脱離基が遊離し、各基質における切断速度の簡易な測定が可能になる。より最近では、ＡＭＣペプチド基質ライブラリのアレイ（Ｌｅｅ  Ｄ．ら（１９９９年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ９：１６６７−７２頁）及び位置走査ライブラリ（Ｒａｎｏ  Ｔ．Ａ．ら（１９９７年）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ４：１４９−５５頁）を用い、単一の実験での広範囲の基質のサンプリングによるプロテアーゼのＮ末端特異性の迅速なプロファイリングが行われている。したがって、当業者は、過度の実験に依存することなく、ペプチド配列のアレイを評価し、本発明におけるその有用性を判定することが容易にできる。
【０１６６】
本発明の薬剤−リガンド抱合体は、場合により２種以上のリンカーを有しうる。これらのリンカーは同じか又は異なる場合がある。例えば、ペプチジルリンカーを用いて薬剤のリガンドへの連結が可能であり、第２のペプチジルリンカーにより診断剤の抱合体への結合が可能である。追加のリンカーにおける他の使用として、分析剤、生体分子、標的化剤、及び検出可能な標識の薬剤−リガンド抱合体への連結が含まれる。
【０１６７】
また、例えば本発明の化合物の二量体、三量体、四量体及びより高級な相同体又はそれらの反応類縁体などの種を含む多価種である本発明の化合物は、本発明の範囲内に含まれる。多価種は、本発明の単一種又は２種以上の種から構築可能である。例えば、二量体構築物は「ホモ二量体」又は「ヘテロ二量体」であってもよい。更に、本発明の化合物又はその反応類縁体がオリゴマー又はポリマーフレームワーク（例えばポリリシン、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプンなど）に結合された多価構築物は本発明の範囲内に含まれる。フレームワークは、好ましくは多官能性である（すなわち本発明の化合物に結合するための一連の反応部位を有する）。更に、フレームワークは、本発明の単一種又は本発明の２種以上の種で誘導体化されうる。
【０１６８】
更に、本発明は、類似官能基でない類似化合物よりも高い水溶性を有する化合物が得られる官能化された化合物を含む。したがって、本明細書中に示される置換基のいずれかが水溶性を高めている類似基と置換されうる。例えば、水酸基をジオール又は第４級アミン、ヒドロキシアミン若しくは類似の水溶性がより高い部分を有するアミンと置換することは本発明の範囲内に含まれる。好ましい実施形態では、更なる水溶性が、本明細書中に示される化合物のイオンチャネルに対する活性にとって本質的でない部位での、親化合物の水溶性を高める部分との置換により与えられる。有機化合物の水溶性を高める方法は当該技術分野で既知である。かかる方法は、限定はされないが、常に帯電した部分、例えば第４級アンモニウム又は生理学的関連ｐＨで帯電した基、例えばカルボン酸、アミンで有機核を官能化するステップを含む。他の方法は、有機核にヒドロキシル又はアミンを有する基、例えばアルコール、ポリオール、ポリエーテルなどを付加するステップを含む。代表例は、限定はされないが、ポリリシン、ポリエチレンイミン、ポリ（エチレングリコール）及びポリ（プロピレングリコール）を含む。これらの化合物に適する官能化の化学反応及び戦略は当該技術分野で既知である。例えば、Ｄｕｎｎ  Ｒ．Ｌ．ら編、「ＰＯＬＹＭＥＲＩＣ  ＤＲＵＧＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  第４６９巻」、ワシントンＤ．Ｃ．（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９１年を参照のこと。
【０１６９】
ヒドラジンリンカー（Ｈ）
第２の実施形態では、本発明の抱合体はヒドラジン自己犠牲リンカーを含み、抱合体は構造：
【化３５】
2010522693.tif 000037
【０１７０】
を有し、Ｄ、Ｌ１、Ｌ４、及びＸ４は上で定義された通りであり、かつ本明細書中に更に記載され、かつＨは構造
【化３６】
2010522693.tif 000038
【０１７１】
を含むリンカーであり、ｎ１は１〜１０の整数であり、ｎ２は０、１、若しくは２であり、各Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から独立して選択されるメンバーであり、かつＩは結合（すなわち骨格の炭素と隣接窒素の間の結合）か又は
【化３７】
2010522693.tif 000039
【０１７２】
のいずれかであり、ｎ３が０である場合、ｎ２が０でないという条件でｎ３は０若しくは１であり、かつ
ｎ４は１、２、若しくは３であり、
Ｉが結合である場合、ｎ１は３でありかつｎ２は１であり、Ｄは
【化３８】
2010522693.tif 000040
【０１７３】
である可能性がなく、ＲはＭｅ又はＣＨ２−ＣＨ２−ＮＭｅ２である。
【０１７４】
一実施形態では、フェニル環上での置換はパラ置換である。好ましい実施形態では、ｎ１は２、３、若しくは４であるか又はｎ１は３である。好ましい実施形態では、ｎ２は１である。好ましい実施形態では、Ｉは結合（すなわち骨格の炭素と隣接窒素の間の結合）である。一態様では、ヒドラジンリンカーＨは、例えばｎ３が０でかつｎ４が２である場合、切断時に６員の自己犠牲リンカーを形成しうる。別の態様では、ヒドラジンリンカーＨは切断時に２つの５員の自己犠牲リンカーを形成しうる。更に他の態様では、切断時、Ｈは５員の自己犠牲リンカーを形成するか、Ｈは７員の自己犠牲リンカーを形成するか、又はＨは５員の自己犠牲リンカー及び６員の自己犠牲リンカーを形成する。切断の速度は、切断時に形成される環の大きさに影響される。したがって、望まれる切断の速度に依存して切断時に形成されるべき適切な大きさの環が選択されうる。
【０１７５】
５員のヒドラジンリンカー
一実施形態では、ヒドラジンリンカーは５員のヒドラジンリンカーを含み、Ｈは構造
【化３９】
2010522693.tif 000041
【０１７６】
を含む。
【０１７７】
好ましい実施形態では、ｎ１は２、３、若しくは４である。別の好ましい実施形態では、ｎ１は３である。
【０１７８】
上記の構造では、各Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から独立して選択されるメンバーである。一実施形態では、各Ｒ２４は水素又はＣ１〜Ｃ６アルキル基である。別の実施形態では、各Ｒ２４は独立して水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル基、より好ましくは水素又はＣＨ３である。別の実施形態では、少なくとも１つのＲ２４はメチル基である。別の実施形態では、各Ｒ２４はＨである。各Ｒ２４は、化合物の立体効果を調整しかつ溶解度を変化させるように選択される。
【０１７９】
５員のヒドラジンリンカーは、薬剤をリンカーから分離する１つ以上の環化反応を受ける可能性があり、例えば
【化４０】
2010522693.tif 000042
【０１８０】
で記述されうる。
【０１８１】
本発明の５員のリンカーを調製するための典型的な合成経路は、
【化４１】
2010522693.tif 000043
【０１８２】
である。
【０１８３】
Ｃｂｚで保護されたＤＭＤＡ  ｂは塩化チオニルを含有する溶液中の２，２−ジメチル−マロン酸ａと反応し、Ｃｂｚ−ＤＭＤＡ−２，２−ジメチルマロン酸ｃが形成される。化合物ｃはＥＤＣの存在下でＢｏｃ−Ｎ−メチルヒドラジンｄと反応し、ＤＭＤＡ−２，２−ジメチルマロニック（ｄｉｍｅｔｈｙｌｍａｌｏｎｉｃ）−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルヒドラジンが形成される。
【０１８４】
６員のヒドラジンリンカー
別の実施形態では、ヒドラジンリンカーは６員のヒドラジンリンカーを含み、Ｈは構造：
【化４２】
2010522693.tif 000044
【０１８５】
を含む。
【０１８６】
好ましい実施形態では、ｎ１は３である。上記構造では、各Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から独立して選択されるメンバーである。一実施形態では、各Ｒ２４は独立して水素又はＣ１〜Ｃ６アルキル基である。別の実施形態では、各Ｒ２４は独立して水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル基、より好ましくは水素又はＣＨ３である。別の実施形態では、少なくとも１つのＲ２４はメチル基である。別の実施形態では、各Ｒ２４は水素である。各Ｒ２４は、化合物の立体効果を調整しかつ溶解度を変化させるように選択される。好ましい実施形態では、Ｈは構造：
【化４３】
2010522693.tif 000045
【０１８７】
を含む。
【０１８８】
一実施形態では、Ｈはジェミナルジメチル置換を含む。上記構造の一実施形態では、各Ｒ２４は独立して水素又は置換若しくは未置換アルキルである。
【０１８９】
６員のヒドラジンリンカーは薬剤をリンカーから分離する環化反応を受けることになり、
【化４４】
2010522693.tif 000046
【０１９０】
のように記述されうる。
【０１９１】
本発明の６員のリンカーを調製するための典型的な合成経路は、
【化４５】
2010522693.tif 000047
【０１９２】
である。
【０１９３】
ジクロロメタンを含有する溶液中のＣｂｚで保護されたジメチルアラニンａはＨＯＡｔ及びＣＰＩと反応し、Ｃｂｚで保護されたジメチルアラニンヒドラジンｂが形成された。ヒドラジンｂはメタノールの作用により脱保護され、化合物ｃが形成される。
【０１９４】
他のヒドラジンリンカー
本発明が７員を有するリンカーを含む点が検討される。このリンカーであれば５員又は６員のリンカーと同程度に速やかに環化しない可能性が高いことになるが、これは一部の薬剤−リガンド抱合体にとって好ましい場合がある。同様に、ヒドラジンリンカーは２つの６員環を含むか、又はヒドラジンリンカーは１つの６員及び１つの５員の環化生成物を有しうる。５員及び７員のリンカー並びに６員及び７員のリンカーについても検討される。
【０１９５】
別のヒドラジン構造Ｈは、式
【化４６】
2010522693.tif 000048
【０１９６】
を有し、ｑは０、１、２、３、４、５若しくは６であり、かつ各Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から独立して選択されるメンバーである。このヒドラジン構造は５員環、６員環、又は７員環も形成し、追加成分の添加によって複数の環が形成される可能性がある。
【０１９７】
ジスルフィドリンカー（Ｊ）
更に別の実施形態では、リンカーは酵素的に切断可能なジスルフィド基を含む。一実施形態では、本発明は、式３：
【化４７】
2010522693.tif 000049
【０１９８】
による構造を有する細胞毒性薬剤−リガンド化合物を提供し、Ｄ、Ｌ１、Ｌ４、及びＸ４は上で定義された通りであり、かつ本明細書中に更に記載され、かつＪは構造：
【化４８】
2010522693.tif 000050
【０１９９】
を有する基を含むジスルフィドリンカーであり、
各Ｒ２４は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、及び未置換ヘテロアルキル基からなる群から独立して選択されるメンバーであり；
各Ｋは、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ２１Ｒ２２、ＮＲ２１ＣＯＲ２２、ＯＣＯＮＲ２１Ｒ２２、ＯＣＯＲ２１、及びＯＲ２１からなる群から独立して選択されるメンバーであり、
式中、
Ｒ２１及びＲ２２は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル及び未置換ヘテロシクロアルキルからなる群から独立して選択され；
ａは０、１、２、３、若しくは４の整数であり；並びに
ｄは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数である。
【０２００】
ジスルフィドリンカーの芳香環は１つ以上の「Ｋ」基と置換されうる。「Ｋ」基は、通常では環構造の一部である４つの非置換炭素のうちの１つに結合される水素を置換する芳香環上の置換基である。「Ｋ」基は、単一原子、例えばハロゲンでありうるか、又は多原子基、例えばアルキル基、ヘテロアルキル基、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ハロアルキル基、及びシアノ基であってもよい。典型的なＫ置換基は、限定はされないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＮＨＣＯＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣＯＣＦ３及びメチルを独立して含む。「Ｋａ」においては、ａは０、１、２、３、若しくは４の整数である。特定の実施形態では、ａは０である。
【０２０１】
好ましい実施形態では、リンカーは、式：
【化４９】
2010522693.tif 000051
【０２０２】
の酵素的に切断可能なジスルフィド基を含む。
【０２０３】
この実施形態では、Ｌ４、Ｘ４、ｐ、及びＲ２４の属性は上で定義された通りであり、かつｄは０、１、２、３、４、５若しくは６である。特定の実施形態では、ｄは１又は２である。
【０２０４】
より特異的なジスルフィドリンカーは下記の式で示される。
【化５０】
2010522693.tif 000052
【０２０５】
この実施形態の具体例は以下の通りである。
【化５１】
2010522693.tif 000053
【０２０６】
好ましくは、ｄは１若しくは２である。
【０２０７】
別のジスルフィドリンカーは下記の式で示される。
【化５２】
2010522693.tif 000054
【０２０８】
この実施形態の具体例は以下の通りである。
【化５３】
2010522693.tif 000055
【０２０９】
好ましくは、ｄは１又は２である。
【０２１０】
様々な実施形態では、ジスルフィドはアミンに対してオルトである。別の特定の実施形態では、ａは０である。好ましい実施形態では、Ｒ２４は水素及びＣＨ３から独立して選択される。
【０２１１】
本発明のジスルフィドリンカーを調製するための典型的な合成経路は以下の通りである。
【化５４】
2010522693.tif 000056
【０２１２】
３−メルカプトプロピオン酸ａの溶液はアルドリチオール−２と反応し、３−メチルベンゾチアゾリウムヨージドｂが形成される。３−メチルベンゾチアゾリウムヨージドｃは水酸化ナトリウムと反応し、化合物ｄが形成される。メタノールを含有する化合物ｄの溶液は更に化合物ｂと反応し、化合物ｅが形成される。化合物ｅは塩化アセチル及びメタノールの作用により脱保護され、化合物ｆが形成される。
【０２１３】
薬剤−切断可能な基質抱合体
本明細書中で「Ｄ」として示される薬剤は、本発明において、薬剤が切断可能な基質Ｘ２に場合により自己犠牲リンカーＬ１を介して結合される場合、薬剤−切断可能な基質抱合体の一部として提供されうる。この抱合体はプロドラッグであってもよい。薬剤は、典型的には所望の生物学的活性を有し、切断可能な基質に結合するための反応性官能基を有する。所望の生物学的活性は、ヒトなどの動物における疾患の診断、治癒、軽減、治療、又は予防を含む。好ましい反応性官能基は、第一級若しくは第二級アミン基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、カルボキシル基、アルデヒド基、及びケトン基を含む。より好ましい反応性官能基は、ヒドロキシル基、第一級若しくは第二級アミン基、スルフヒドリル基及びカルボン酸官能基を含む。更により好ましい反応性官能基は、ヒドロキシル基、第一級及び第二級アミン基並びにカルボン酸官能基を含む。薬剤は、典型的には少なくとも１つを有するが、２、３、４、５、６若しくは７以上の反応性官能基を有しうる。
【０２１４】
薬剤−切断可能な基質抱合体は、対応する薬剤が有効であるとする通常の目的として有効であるが、特定の利益がある場合に薬剤を所望の細胞（例えば腫瘍細胞）に輸送する能力故に、より高い有効性を有しうる。例えば、薬剤は腫瘍細胞の部位で腫瘍に特異的な切断可能な基質への複合により活性化されるように選択されうる。これらの腫瘍に特異的な薬剤−切断可能な基質抱合体は、切断可能な基質の特異性に起因する腫瘍特異性を有する。特異性は切断可能な基質が腫瘍インビボ又はその周囲で優先的に切断される場合に生じうる。例として、腫瘍に天然又は人為的に関連がある、腫瘍に特異的な酵素に対して高度に選択的な基質である抱合体が挙げられる。これらの酵素は、腫瘍近傍で細胞毒性レベルの遊離薬剤を生成するのに十分な量で腫瘍近傍に存在する。
【０２１５】
抗体特異的な酵素プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）と称される別のアプローチでは、酵素は腫瘍抗原に特異的な抗体に結合され、それにより酵素が腫瘍細胞の部位に誘導される。次いで、薬剤は腫瘍特異抗体に結合された酵素により切断可能な基質に複合される。したがって、これらの薬剤−切断可能な基質抱合体は、酵素の腫瘍特異抗体への結合を通じた酵素の腫瘍細胞の部位への局在化に起因する腫瘍特異性を有する。
【０２１６】
薬剤−切断可能な基質抱合体の１つの利点は対応する遊離薬剤よりも低い毒性を示しうることであり、それに加え、特異性が高まる結果として腫瘍部位に存在すべき抱合体のパーセントが高まることから、抱合体の特異性は用いられるべき全体濃度の遊離薬剤に対する低下を可能にしうる。
【０２１７】
一実施形態では、本発明は、式２：
【化５５】
2010522693.tif 000057
【０２１８】
に従う構造を有する細胞毒性薬剤−切断可能な基質化合物を提供する。
【０２１９】
記号Ｌ１は自己犠牲スペーサーを示し、ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数である。好ましくは、Ｍは０、１、若しくは２である。
【０２２０】
記号Ｘ２は切断可能な基質、好ましくは酵素切断可能な基質を示す。
【０２２１】
薬剤
本明細書中で「Ｄ」として示される薬剤は、本発明において、薬剤がリガンドにペプチジル又は他のリンカーのいずれかを介して結合される場合、薬剤−リガンド抱合体の一部として、又は切断可能な基質との抱合体として提供される。薬剤は、リガンドに結合するため、所望の生物学的活性を有し、かつ反応性官能基を有する必要がある。所望の生物学的活性は、ヒトなどの動物における疾患の診断、治癒、軽減、治療、又は予防を含む。したがって、「薬剤」という用語は、必要な反応性官能基を有する限り、公式の米国薬局方（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）、公式の米国ホメオパシー薬局方（Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）又は公式の国民医薬品集（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）、又はその任意の付録において薬剤として認識された化学物質を示す。典型的な薬剤は、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＤＡ）により維持された医師用卓上参考書（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）（ＰＤＲ）及びオレンジブック（Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ）において示される。新薬は継続的に発見されかつ開発されつつあり、本発明はこれらの新薬が本発明の薬剤−リガンド抱合体にも取り込まれうる点を提起している。
【０２２２】
好ましい反応性官能基は、第一級若しくは第二級アミン基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、カルボキシル基、アルデヒド基、及びケトン基を含む。より好ましい反応性官能基は、ヒドロキシル基、第一級若しくは第二級アミン基、スルフヒドリル基及びカルボン酸官能基を含む。更により好ましい官能基は、ヒドロキシル基、第一級及び第二級アミン基並びにカルボン酸官能基を含む。薬剤は、少なくとも１つを有する必要があるが、２、３、４、５、６若しくは７以上の反応性官能基を有しうる。更に、自己犠牲スペーサーＬ１は、薬剤の反応性官能基とペプチド又は他のリンカー又は切断可能な基質との間に取り込まれうる。
【０２２３】
薬剤−リガンド抱合体は、対応する薬剤が有効である場合の通常の目的のために有効であるが、特別の利益がある場合に薬剤を所望の細胞に輸送するという少なくとも一部のリガンドに固有の能力がある故に優れた有効性を有する。
【０２２４】
典型的な薬剤は、リガンドに結合するための官能基を有するタンパク質、ペプチド、及び小分子薬剤を含む。より具体的には、これらの薬剤として、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、チミジル酸シンターゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ切断剤、トポイソメラーゼ阻害剤、アントラサイクリンファミリーの薬剤、ビンカ薬、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオシド、プテリジンファミリーの薬剤、ダイネン（ｄｉｙｎｅｎｅｓ）、ポドフィロトキシン、分化誘発剤、及びタクソールなどの酵素阻害剤が挙げられる。
【０２２５】
本発明の好ましい薬剤は、癌治療に有用な細胞毒性薬、及び所望の生物学的活性、例えば毒素を有する他の小分子、タンパク質又はポリペプチドを含む。薬剤は、腫瘍に特異的なリガンドへの複合によって腫瘍細胞で活性化されるように選択されうる。これらの腫瘍に特異的な薬剤−リガンド抱合体は、リガンドの特異性に起因する腫瘍特異性を有する。この例として、腫瘍に特異的な酵素に対して高度に選択的な基質である薬剤−リガンド抱合体が挙げられ、この場合、これらの酵素は腫瘍近傍で細胞毒性レベルの遊離薬剤を生成するのに十分な量で腫瘍近傍に存在する。これらの腫瘍に特異的な薬剤−リガンド抱合体の１つの利点は、それらがヒト血清中の外来性プロテアーゼに対して安定である点である。薬剤−リガンド抱合体の別の利点は、それらが対応する遊離薬剤よりも毒性が低い点であり、それに加え、特異性が高まる結果として腫瘍部位に存在すべき抱合体のパーセントが高まる故、抱合体の特異性は用いられるべき全体濃度の遊離薬剤に対する低下を可能にしうる。
【０２２６】
細胞毒素
本発明において有用な細胞毒性薬として、例えば、デュオカルマイシン及びＣＣ−１０６５とそれらの類縁体（デュオカルマイシン及びＣＣ−１０６５のＣＢＩ（１，２，９，９ａ−テトラ−ヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）に基づく類縁体、ＭＣＢＩ（７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラ−ヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）に基づく類縁体及びＣＣＢＩ（７−シアノ−１，２，９，９ａ−テトラ−ヒドロシクロ−プロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］−インドール−４−オン）に基づく類縁体を含む）、ドキソルビシン及びモルホリノ−ドキソルビシン及びシアノモルホリノ−ドキソルビシンなどのドキソルビシン抱合体、ドラスタチン−１０などのドラスタチン、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン、メイタンシン類縁体、ＤＭ−１、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、ツブリシン、ジソラゾール、エポチロン、パクリタキセル、ドセタキセル、ＳＮ−３８、トポテカン、リゾキシン、エキノマイシン、コルヒチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エストラムスチン、セマドチン、エリュテロビン、メトトレキセイト、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、メルファラン、ロイロシン、ロイロシデイン（ｌｅｕｒｏｓｉｄｅｉｎｅ）、アクチノマイシン、ダウノルビシン及びダウノルビシン抱合体、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、カルミノマイシン、アミノプテリン、タリソマイシン、ポドフィロトキシン及びエトポシド又はリン酸エトポシドなどのポドフィロトキシン誘導体、ビンクリスチン、タクソール、タキソテールレチノイン酸、酪酸、Ｎ８−アセチルスペルミジン、カンプトテシン、及びそれらの類縁体が挙げられる。本明細書中に記載のリンカーへの複合における官能基を提供するため、他の公知の薬剤が修飾される場合がある。かかる化学修飾は当該技術分野で公知である。
【０２２７】
本発明において用いられる好ましい細胞毒素として、デュオカルマイシン、ＣＣ−１０６５、及びそのＣＣＢＩに基づく類縁体及びＭＣＢＩに基づく類縁体、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、ドラスタチン−１０、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン、ＤＭ−１、アウリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ、ツブリシンＡ、ジソラゾール、エポチロンＡ及びエポチロンＢが挙げられる。
【０２２８】
本発明の特に好ましい細胞毒素は、活性のある強力なデュオカルマイシン誘導体及びＣＣ−１０６５である。親物質は、その生物学的効果を、ＤＮＡの可逆で立体電子的に（ｓｔｅｒｅｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃａｌｌｙ）制御される配列に選択的なアルキル化を通じて誘導する特に強力な抗腫瘍抗生物質である（Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：４４９９頁（１９９０年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２：８９６１頁（１９９０年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：６６４５頁（１９９１年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：９８７２頁（１９９３年）；Ｂｏｇｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２：７５９頁（１９９２年））。デュオカルマイシンについての最初の開示後、デュオカルマイシンのＤＮＡアルキル化選択性及びその構造的起源の解明に多大な努力が注がれている。
【０２２９】
本発明の特に好ましい態様は、式７：
【化５６】
2010522693.tif 000058
【０２３０】
による構造を有する細胞毒性化合物を提供し、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーである。典型的な環系はフェニル及びピロールを含む。
【０２３１】
記号Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるか、又はＥ及びＧは、場合により結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成される。
【０２３２】
記号Ｘは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーを表す。Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーである。
【０２３３】
記号Ｒ３は、（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１から選択されるメンバーを表し、Ｒ１１は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２又はＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４である。記号Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリールを独立して表し、Ｒ１２及びＲ１３は、それらの結合対象である窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。Ｒ１２、Ｒ１３、又はＲ１４のうちの１つ以上は、その構造内部に切断可能な基を含みうる。
【０２３４】
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２（式中、ｎは１〜２０の整数である）から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対は、それらの結合対象の炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成される。Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基及び置換若しくは未置換ペプチジル基を独立して表し、Ｒ１５及びＲ１６は、それらの結合対象の窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。１つの典型的な構造がアニリンである。
【０２３５】
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５及びＲ１６は、場合によりそれらの構造内部に１つ以上の切断可能な基、例えば切断可能なリンカー又は切断可能な基質を有する。典型的な切断可能な基は、限定はされないが、ペプチド、アミノ酸、ヒドラジン、ジスルフィド、及びセファロスポリン誘導体を含む。
【０２３６】
一部の実施形態では、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５及びＲ１６の少なくとも１つを用い、本明細書中に記載のように、薬剤が本発明のリンカー又は酵素切断可能な基質、例えばＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合される。
【０２３７】
更なる典型的な実施形態では、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５及びＲ１６の少なくとも１つは化合物への複合に適する反応基を担持する。更なる典型的な実施形態では、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換アルキル基及び置換ヘテロアルキル基から独立して選択され、かつアルキル又はヘテロアルキル部分の遊離末端に反応官能基を有する。Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５及びＲ１６のうちの１つ以上は、別種、例えば標的化剤、検出可能な標識、固体支持体などに複合されうる。
【０２３８】
Ｒ６は、存在するか又は存在しない単結合である。Ｒ６が存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成される。Ｒ７はＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−である。Ｒ７が−ＣＨ２−である場合、それはシクロプロパン環の成分である。記号Ｘ１は、ハロゲン、例えばＣｌ、Ｂｒ若しくはＦなどの離脱基を表す。Ｒ６及びＲ７の結合は、化学価の原理に反しないように解釈される。
【０２３９】
Ｘ１は任意の離脱基であってもよい。有用な離脱基は、限定はされないが、ハロゲン、アジド、スルホン酸エステル（例えばアルキルスルホニル、アリールスルホニル）、オキソニウムイオン、アルキル過塩素酸エステル、アンモニオアルカンスルホン酸エステル、アルキルフルオロスルホン酸塩及びフッ素化物（例えばトリフレート、ノナフレート、トレシレート）などを含む。離脱基として有用な特定のハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒである。特定の一連の反応条件に適するこれら及び他の離脱基の選択は当業者の能力の範囲内である（例えば、Ｍａｒｃｈ  Ｊ．、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９２年；Ｓａｎｄｌｅｒ  ＳＲ、Ｋａｒｏ  Ｗ、「Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ」、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８３年；及びＷａｄｅ  ＬＧ、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９８０年を参照）。
【０２４０】
６員環内部の曲線は、環が１以上の不飽和度を有し、それは芳香族性でありうることを示す。したがって、下記などの環構造及びそれに関連する構造が、式（８）：
【化５７】
2010522693.tif 000059
【０２４１】
の範囲内に含まれる。
【０２４２】
一部の実施形態では、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、及びＲ５’の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させ、かつ
【化５８】
2010522693.tif 000060
【０２４３】
を含み、ｖは１〜６の整数であり；かつＲ２７、Ｒ２７’、Ｒ２８、及びＲ２８’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒ２７、Ｒ２７’、Ｒ２８、及びＲ２８’は全て水素である。一部の実施形態では、ｖは１〜３の整数（好ましくは１）である。この単位を用い、アリール置換基を薬剤から分離することで、多剤耐性のための基質である化合物の生成に対する抵抗又は回避がなされうる。
【０２４４】
一実施形態では、Ｒ１１は、自己環化することなく、薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させる部分Ｘ５を含む。部分Ｘ５は、好ましくは酵素を用いて切断可能であり、切断される場合、活性薬剤を提供する。例として、Ｒ１１は構造（右側が薬剤の残りに共役した状態）：
【化５９】
2010522693.tif 000061
【０２４５】
を有しうる。
【０２４６】
典型的な実施形態では、式７の環系Ａは、置換若しくは未置換フェニル環である。環系Ａは、本明細書中の定義セクションで示される１つ以上のアリール置換基で置換されうる。一部の実施形態では、フェニル環は、ＣＮ又はメトキシ部分で置換される。
【０２４７】
一部の実施形態では、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、及びＲ５’の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させ、かつＲ３はＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１から選択される。Ｒ１１は、ＳＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＡＡｎ、−Ｓｉ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（Ｏ）ＯＰｈＮＨ（ＡＡ）ｍ、
【化６０】
2010522693.tif 000062
【０２４８】
又は任意の他の糖若しくは糖の組み合わせ、
【化６１】
2010522693.tif 000063
【０２４９】
及びその薬理学的に許容できる塩から選択され、ｎは１〜１０の範囲内の任意の整数であり、ｍは１〜４の範囲内の任意の整数であり、ｐは１〜６の範囲内の任意の整数であり、かつＡＡは任意の天然又は非天然アミノ酸である。一部の実施形態では、ＡＡｎ又はＡＡｍはペプチドリンカー（Ｆ）における上記と同じアミノ酸配列から選択され、場合によりＲ４、Ｒ４’、Ｒ５、若しくはＲ５’のリンカー部分で用いられるアミノ酸配列と同じである。少なくとも一部の実施形態では、Ｒ３はインビボで切断可能であることで活性薬剤化合物がもたらされる。少なくとも一部の実施形態では、Ｒ３はインビボでの化合物の溶解度を増大させる。一部の実施形態では、血中での活性薬剤の濃度の低下速度はＲ３の切断速度よりも実質的に速いことで活性薬剤がもたらされる。これは、活性薬剤の毒性がプロドラッグ形態の毒性よりも実質的に高い場合、特に有用であってもよい。他の実施形態では、活性薬剤をもたらすためのＲ３の切断の速度は血中での活性薬剤の濃度の低下の速度よりも速い。
【０２５０】
別の典型的な実施形態では、本発明は、式９：
【化６２】
2010522693.tif 000064
【０２５１】
による構造を有する化合物を提供する。
【０２５２】
この実施形態では、置換基Ｒ３、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ６、Ｒ７及びＸの属性は式７における上記と実質的に同じであると共に、特定の実施形態において好ましい。記号Ｚは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から独立して選択されるメンバーである。記号Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーを表す。各Ｒ２３は独立して選択される。記号Ｒ１は、水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８若しくはＣＯ２Ｒ８を表す。Ｒ８は、置換アルキル基、未置換アルキル基、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９ＮＨＲ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーである。Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択される。Ｒ２は水素又は置換若しくは未置換低級アルキル基である。Ｒ２が置換アルキル基である場合、それはパーフルオロアルキル基、例えばＣＦ３以外であることが一般に好ましい。一実施形態では、Ｒ２は置換アルキル基であり、は置換基はハロゲンではない。別の実施形態では、Ｒ２は未置換アルキル基である。
【０２５３】
一部の実施形態では、Ｒ１はエステル部分、例えばＣＯ２ＣＨ３である。一部の実施形態では、Ｒ２は低級アルキル基であり、それは置換若しくは未置換であってもよい。好ましい低級アルキル基はＣＨ３である。一部の好ましい実施形態では、Ｒ１はＣＯ２ＣＨ３でありかつＲ２はＣＨ３である。
【０２５４】
一部の実施形態では、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、及びＲ５’は、水素、ハロゲン、ＮＨ２、ＯＭｅ、Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ２９）２及びＮＯ２から独立して選択されるメンバーである。各Ｒ２９は、独立して水素又は低級アルキル基（例えばメチル基）である。
【０２５５】
一部の実施形態では、薬剤は、離脱基Ｘ１がハロゲン、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、及びアジド基から選択されるメンバーであるように選択される。一部の実施形態では、Ｘ１はＦ、Ｃｌ、又はＢｒである。
【０２５６】
一部の実施形態では、ＺはＯ又はＮＨである。一部の実施形態では、ＸはＯである。
【０２５７】
更に別の典型的な実施形態では、本発明は、式１０又は１１：
【化６３】
2010522693.tif 000065
【０２５８】
による構造を有する化合物を提供する。
【０２５９】
式７のデュオカルマイシン類縁体の別の好ましい構造は、環系Ａが未置換若しくは置換フェニル環である場合の構造である。環系Ａがピロールである場合での式７の構造における上記の薬剤分子上の好ましい置換基はまた、環系Ａが未置換若しくは置換フェニル環である場合での好ましい置換基である。
【０２６０】
例えば、好ましい実施形態では、薬剤（Ｄ）は、構造（１２）：
【化６４】
2010522693.tif 000066
【０２６１】
を含む。
【０２６２】
この構造では、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｘは式７において上記の通りである。更に、ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーである。
【０２６３】
Ｒ１は、水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーである。
【０２６４】
Ｒ１’は、水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーである。
【０２６５】
Ｒ２は、水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり、かつＲ２’は、水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である。
【０２６６】
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５又はＲ１６の少なくとも１つは、薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させる。
【０２６７】
薬剤（Ｄ）の別の実施形態は構造（１３）を含み、Ｒ４及びＲ４’は結合し、ヘテロシクロアルキル：
【化６５】
2010522693.tif 000067
【０２６８】
が形成される。
【０２６９】
この構造では、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ６、Ｒ７、Ｘは式７において上記の通りである。更に、ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーである。
【０２７０】
Ｒ３２は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２から選択され、ｎは１〜２０の整数である。Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル及び置換若しくは未置換ペプチジルを独立して表し、Ｒ１５及びＲ１６はそれらの結合対象である窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。Ｒ３２は、場合により、その構造内部に１つ以上の切断可能な基、例えば切断可能なリンカー又は切断可能な基質を有する。典型的な切断可能な基は、限定はされないが、ペプチド、アミノ酸、ヒドラジン、ジスルフィド、及びセファロスポリン誘導体を含む。更に、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１５、及びＲ１６に対する本明細書中に記載の置換基の選択はＲ３２にも適用可能である。
【０２７１】
Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１６、又はＲ３２の少なくとも１つは、薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させる。少なくとも一部の実施形態では、Ｒ３２は薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させる。
【０２７２】
この化合物の好ましい一実施形態は、
【化６６】
2010522693.tif 000068
【０２７３】
である。
【０２７４】
Ｒ１は、水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、又はＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーである。
【０２７５】
Ｒ１’は、水素、置換若しくは未置換低級アルキル基、又はＣ（Ｏ）Ｒ８であり、Ｒ８はＮＲ９Ｒ１０及びＯＲ９から選択されるメンバーであり、Ｒ９及びＲ１０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアルキル基から独立して選択されるメンバーである。
【０２７６】
Ｒ２は、水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基又はシアノ基又はアルコキシ基であり、かつＲ２’は、水素、又は置換若しくは未置換低級アルキル基又は未置換ヘテロアルキル基である。
【０２７７】
更なる実施形態は、式：
【化６７】
2010522693.tif 000069
【０２７８】
を有する。
【０２７９】
この構造では、Ａ、Ｒ６、Ｒ７、Ｘ、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、及びＲ５’は式７において上記の通りである。更に、ＺはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり、Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーである。
【０２８０】
Ｒ３３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、並びにＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２から選択され、ｎは１〜２０の整数である。Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル及び置換若しくは未置換ペプチジルを独立して表し、Ｒ１５及びＲ１６はそれらの結合対象である窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成される。Ｒ３３は薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦ、Ｈ、Ｊ、若しくはＸ２に結合させる。
【０２８１】
好ましくは、Ａは置換若しくは未置換フェニル又は置換若しくは未置換ピロールである。更に、Ｒ１１に対する本明細書中に記載の置換基の選択はＲ３３にも適用可能である。
【０２８２】
リガンド
Ｘ４は保護反応官能基、非保護反応官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるリガンドを表す。好ましいリガンドは標的化剤、例えば抗体及びその断片である。
【０２８３】
一部の実施形態では、Ｘ４基はＲ２９、ＣＯＯＲ２９、Ｃ（Ｏ）ＮＲ２９、及びＣ（Ｏ）ＮＮＲ２９から選択されるメンバーとして記述可能であり、Ｒ２９は、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換ヘテロアリールから選択されるメンバーである。更に別の典型的な実施形態では、Ｒ２９は、Ｈ；ＯＨ；ＮＨＮＨ２；
【化６８】
2010522693.tif 000070
【０２８４】
から選択されるメンバーであり、
Ｒ３０は、反応性官能基で終結される置換若しくは未置換アルキル基、官能基で終結される置換若しくは未置換ヘテロアリールを示す。上記構造は、例えば標的化剤のアミノ酸の側鎖、例えば抗体と反応しうる反応性保護基として作用することで、標的化剤をリンカー−薬剤部分に結合させる。
【０２８５】
標的化剤
本発明のリンカーアーム及び細胞毒素は、ペイロードを身体の細胞、器官又は部位に選択的に送達する標的化剤に結合されうる。抗体（例えばキメラ、ヒト化及びヒト）、受容体に対するリガンド、レクチン、糖、抗体などの典型的な標的化剤は、当該技術分野で認識されており、本発明の実施において制限なしに有用である。他の標的化剤は、特異的な分子認識モチーフを含まない化合物のクラスを含み、細胞毒素に分子量を加えるポリ（エチレングリコール）、多糖、ポリアミノ酸などの高分子を含む。追加された分子量は、細胞毒素の薬物動態、例えば血清半減期に作用する。
【０２８６】
典型的な実施形態では、本発明は、生体分子、例えば抗体、受容体、ペプチド、レクチン、糖、核酸又はこれらの組み合わせである標的化剤と共に、細胞毒素、リンカー又は細胞毒素−リンカー抱合体を提供する。
【０２８７】
本発明の実施に有用な生体分子は、任意の供給源に由来しうる。生体分子は、天然供給源から単離されうるか、又は合成法により生成されうる。タンパク質は、天然タンパク質又は突然変異タンパク質であってもよい。突然変異は、化学的突然変異原、部位特異的突然変異誘発又は当業者に公知の突然変異を誘発する他の手段により生じうる。本発明の実施に有用なタンパク質として、例えば、酵素、抗原、抗体及び受容体が挙げられる。抗体はポリクローナル又はモノクローナルのいずれかでありうるが、最も好ましくはモノクローナルである。ペプチド及び核酸は、天然供給源から単離されうるか、又は本来的に全体的か又は部分的な合成であってもよい。
【０２８８】
好ましい実施形態では、標的化剤は、抗体又は抗体断片であり、それは目的の標的細胞上又は標的部位で発現される抗原に対するその特異性に基づいて選択される。多種多様な腫瘍に特異的であるか又は他の疾患に特異的な抗原が同定されており、かつそうした抗原に対する抗体が、かかる腫瘍又は他の疾患の治療において用いられているか又はその使用についての提案がなされている。当該技術分野で公知の抗体は、本発明の抱合体中、特に標的抗原が関連する疾患の治療において用いられうる。本発明の抗体−リンカー−薬剤抱合体の標的対象でありうる標的抗原（及びその関連疾患）の非限定例として、Ｈｅｒ２（乳癌）、ＣＤ２０（リンパ腫）、ＥＧＦＲ（固形腫瘍）、ＣＤ２２（非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫）、ＣＤ５２（慢性リンパ球性白血病）、ＣＤ３３（急性骨髄性白血病）、ＣＤ４（リンパ腫、自己免疫疾患、関節リウマチを含む）、ＣＤ３０（非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫）、Ｍｕｃ１８（メラノーマ）、インテグリン（固形腫瘍）、ＰＳＭＡ（前立腺癌、良性前立腺肥大）、ＣＥＡ（結腸直腸癌）、ＣＤ１１ａ（乾癬）、ＣＤ８０（乾癬）、ＣＤ２３（喘息）、ＣＤ４０Ｌ（免疫性血小板減少性紫斑病）、ＣＴＬＡ４（Ｔ細胞リンパ腫）及びＢＬｙｓ（全身性エリテマトーデスを含む自己免疫疾患）が挙げられる。
【０２８９】
認識部分がタンパク質又は抗体である場合の実施形態では、タンパク質は、表面又は自己組織化単分子層（ＳＡＭ）成分に結合されうるか又はタンパク質の表面上で使用可能な任意の反応性ペプチド残基により、スペーサーアームを介して結合されうる。好ましい実施形態では、反応基はアミン又はカルボン酸塩である。特に好ましい実施形態では、反応基はリジン残基のε−アミン基である。更に、これらの分子は、非特異的相互作用（例えば化学吸着、物理吸着）により、基質の表面又はＳＡＭ上に吸着されうる。
【０２９０】
抗体である認識部分を用い、薬剤、除草剤、殺虫剤、工業化学剤及び兵器用剤（ａｇｅｎｔｓ  ｏｆ  ｗａｒ）などのタンパク質、ペプチド、核酸、糖又は小分子である分析物の認識が可能である。特異的分子に対する抗体を産生する方法は、当業者に周知である。１９９２年９月１５日にＦｅｎｇらに交付された米国特許第５／１４７，７８６号明細書；１９９４年８月２日にＳｔａｎｋｅｒらに交付された米国特許第５／３３４，５２８号明細書；１９９７年１１月１１日にＡｌ−Ｂａｙａｔｉ、Ｍ．Ａ．Ｓ．に交付された米国特許第５／６８６，２３７号明細書；及び１９９６年１１月１２日にＨｏｅｓｓらに交付された米国特許第５／５７３，９２２号明細書を参照のこと。抗体を表面に結合させるための方法もまた当該技術分野で既知である。Ｄｅｌａｍａｒｃｈｅら、Ｌａｎｇｍｕｉｒ  １２：１９４４−１９４６頁（１９９６年）を参照のこと。
【０２９１】
標的化剤は、任意の使用可能な反応基により本発明のリンカーに結合されうる。例えば、ペプチドはアミン基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、又は水酸基を介して結合されうる。かかる基は、ペプチド末端又はペプチド鎖の内部部位に存在しうる。核酸は、塩基上の反応基（例えば環外アミン）又は糖部分上の使用可能な水酸基（例えば３’−若しくは５’−ヒドロキシル）を介して結合されうる。ペプチド鎖及び核酸鎖が１つ以上の部位で更に誘導体化され、適切な反応基の鎖上への結合が可能になりうる。Ｃｈｒｉｓｅｙら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４：３０３１−３０３９頁（１９９６年）を参照のこと。
【０２９２】
ペプチド又は核酸が完全又は部分的な合成分子である場合、反応基又はマスキングされた反応基が合成過程で取り込まれうる。ペプチド及び核酸の双方での反応基の取り込みに適する多数の誘導体化された単量体は当業者に公知である。例えば、「ＴＨＥ  ＰＥＰＴＩＤＥＳ：ＡＮＡＬＹＳＩＳ，ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」  Ｇｒｏｓｓ  Ｅ．及びＭｅｌｅｎｈｏｆｅｒ  Ｊ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０年）を参照のこと。多数の有用な単量体は市販されている（Ｂａｃｈｅｍ、Ｓｉｇｍａなど）。次いで、このマスキングされた基は合成後に脱マスキングされる可能性があり、その時点で本発明の化合物の成分との反応における使用が可能になる。
【０２９３】
典型的な核酸標的化剤は、アプタマー、アンチセンス化合物、及び三重らせんを形成する核酸を含む。典型的には、糖残基の水酸基、塩基残基由来のアミノ基、又はヌクレオチドのリン酸塩酸素（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｏｘｙｇｅｎ）が、ヌクレオチドに基づく標的化剤と細胞毒素との共役に必要な化学的機能性として用いられる。しかし、当業者は他の「非天然の」反応官能性が従来の技術により核酸に付与されうることを容易に理解するであろう。例えば、糖残基の水酸基は、当該技術分野で周知の技術を用いてメルカプト又はアミノ基に変換されうる。
【０２９４】
アプタマー（又は核酸抗体）は、特異的な分子標的に結合する一本鎖若しくは二本鎖ＤＮＡ又は一本鎖ＲＮＡ分子である。一般に、アプタマーは、分子標的、例えばタンパク質の作用を、血中を循環する標的のプールへの結合により阻害することで機能する。アプタマーは、化学的機能性を有することから本明細書に記載のように細胞毒素に共有結合しうる。
【０２９５】
小分子薬剤、代謝産物、共同因子、毒素、糖に基づく薬剤、ヌクレオチドに基づく薬剤、糖タンパク質などを含む多種多様な分子標的はアプタマーと共有結合ではないが特異的な結合を形成する能力があるが、一般に分子標的は、血清タンパク質、キニン、エイコサノイド、細胞表面分子などを含むタンパク質又はペプチドを含むことになる。アプタマーの例として、Ｇｉｌｅａｄ’ｓアンチトロンビン阻害剤ＧＳ５２２及びその誘導体が挙げられる（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．）。また、Ｍａｃａｙａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：３７４５−９頁（１９９３年）；Ｂｏｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３５５：５６４−５６６頁（１９９２年）及びＷａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１８９９−９０４頁（１９９３年）を参照のこと。
【０２９６】
所与の生体分子に特異的なアプタマーは、当該技術分野で公知の技術を用いて同定されうる。例えばＴｏｏｌｅら（１９９２年）ＰＣＴ公開の国際公開第９２／１４８４３号パンフレット；Ｔｕｅｒｋ及びＧｏｌｄ（１９９１年）ＰＣＴ公開の国際公開第９１／１９８１３号パンフレット；Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ及びＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎ（１９９２年）ＰＣＴ公開の国際公開第９２／０５２８５号パンフレット；並びにＥｌｌｉｎｇｔｏｎ及びＳｚｏｓｔａｋ、Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８頁（１９９０年）を参照のこと。つまり、これらの技術は、典型的には分子標的とオリゴヌクレオチドのランダム混合物との抱合体化を含む。アプタマー−分子標的抱合体は抱合体化していないオリゴヌクレオチドから分離される。アプタマーは、分離された抱合体から回収され、増幅される。このサイクルの反復により、分子標的に対して最高の親和性を有するアプタマー配列が同定される。
【０２９７】
遺伝子の不適切な発現から発症する疾患においては、かかる遺伝子の発現の特異的な阻止又は低下は理想的な治療法を示す。原理的に、特定の遺伝子産物の生成は、ｍＲＮＡ内の接近可能な配列、又は予備ｍＲＮＡプロセシングに必須である転写産物内の配列、又は遺伝子自体の内部の配列に相補的な一本鎖デオキシヌクレオチド又はリボデオキシヌクレオチドのハイブリダイゼーションにより阻害、低下又は遮断されうる。遺伝子制御におけるこのパラダイムは、アンチセンス又はアンチジーン阻害と称されることが多い。例えば本発明のアルキル剤の核酸への複合により、更なる有効性が得られる。
【０２９８】
アンチセンス化合物は、特定のタンパク質の生成に関与するｍＲＮＡに結合し、そのｍＲＮＡの生成を無効化又は阻止するように設計された核酸である。アンチセンス化合物は、アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ、一本鎖若しくは二本鎖のオリゴヌクレオチド又はその類縁体を含み、個々のｍＲＮＡ種に特異的にハイブリダイズし、ｍＲＮＡ種の転写及び／又はＲＮＡプロセシング、並びに／あるいはコードされたポリペプチドの翻訳を阻止することにより、コードされた各ポリペプチドの量の減少がもたらされうる（Ｃｈｉｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１０００６−１００１０頁（１９８９年）；Ｂｒｏｄｅｒら、Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．１１３：６０４−６１８頁（１９９０年）；Ｌｏｒｅａｕら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２７４：５３−５６頁（１９９０年）；Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇら、国際公開第９１／１１５３５号パンフレット；国際公開第９１／０９８６５号パンフレット；国際公開第９１／０４７５３号パンフレット；国際公開第９０／１３６４１号パンフレット；国際公開第９１／１３０８０号パンフレット、国際公開第９１／０６６２９号パンフレット、及び欧州特許第３８６５６３号明細書）。それらの優れた標的感受性及び選択性のため、アンチセンスオリゴヌクレオチドは治療剤、例えば本発明の細胞毒素の所望の分子標的への送達にとって有用である。
【０２９９】
他にも核酸が二本鎖ＤＮＡに三重らせんの形成を介して結合し、かつ転写及び／又はＤＮＡ合成を阻害しうるという報告がなされている。三重らせん化合物（三本鎖薬（ｔｒｉｐｌｅ  ｓｔｒａｎｄ  ｄｒｕｇ）とも称される）は、二本鎖ＤＮＡの配列に結合し、疾患原因遺伝子、例えばウイルス遺伝子、例えばＨＩＶ及び単純ヘルペスウイルス、並びに腫瘍遺伝子の転写を選択的に阻害する、すなわち細胞核でタンパク質の生成を停止させるように意図されているオリゴヌクレオチドである。これらの薬剤は、細胞のゲノム内で二本鎖ＤＮＡに直接結合し、三重らせんを形成し、細胞における標的タンパク質の生成を阻止する。例えばＰＣＴ公開の国際公開第９２／１０５９０号パンフレット、国際公開第９２／０９７０５号パンフレット、国際公開第９１／０６６２６号パンフレット、及び米国特許第５１７６９９６号明細書を参照のこと。したがって、本発明の細胞毒素はまた、三重らせんを形成する核酸配列に複合される。
【０３００】
核酸（例えばアンチセンス化合物及び三重らせん薬（ｔｒｉｐｌｅ  ｈｅｌｉｘ  ｄｒｕｇｓ））の部位特異性がリン酸ジエステル結合の修飾又はオリゴヌクレオチド末端の化学的修飾によって受ける作用は大きくない。その結果、これらの核酸は化学的に修飾可能であり、それにより全体的な結合安定性が高まり、化学的分解に対する安定性が高まり、オリゴヌクレオチドが細胞に輸送される速度が高まり、かつ分子に対する化学反応性が付与される。アンチセンス療法において有用な様々な核酸を作成するための一般的アプローチが、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｒｏｌら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８−９７６頁（１９８８年）及びＳｔｅｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：２６５９−２６６８頁（１９８８年）でレビューされている。したがって、典型的な実施形態では、本発明の細胞毒素は、リン酸ジエステル結合の修飾により核酸に複合される。
【０３０１】
更に、本発明の細胞毒素を担持するアプタマー、アンチセンス化合物及び三重らせん薬はまた、関連標的配列に対する特異的ハイブリダイゼーション又は同配列との関連性がオリゴヌクレオチドの機能特性として保持される限り、ヌクレオチド置換、付加、欠失、又は転位を含みうる。例えば、一部の実施形態では、ヌクレアーゼによる分解に対してその天然リン酸ジエステル対応物よりも耐性が高いことから、インビボでのより高い持続性及びより高い効力を有することが予想されるホスホロチオエート類縁体が用いられることになる（例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２５９−２６７頁（１９９０年）を参照）。オリゴヌクレオチドのホスホルアミデート誘導体はまた、相補的ポリヌクレオチドに結合しかつ共有結合されたリガンド種に対する更なる適合能を有することが知られ、本発明の方法に適しているであろう。例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６（１１）：４８３１頁（１９８８年）を参照のこと。
【０３０２】
一部の実施形態では、アプタマー、アンチセンス化合物及び三重らせん薬はＯ−メチルリボヌクレオチドを含むことになる（欧州特許第３６０６０９号明細書）。キメラオリゴヌクレオチドもまた用いられうる（Ｄａｇｌｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：４７５１頁（１９９０年））。一部の応用においては、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び三重らせんは、ポリアミド核酸（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１４９７頁（１９９１年）及びＰＣＴ公開の国際公開第９０／１５０６５号パンフレット）又は他のカチオン誘導体（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：４４７０−４４７１頁（１９８８年））を含みうる。他の応用では、１つ以上のリン酸ジエステル結合が、イソステリック（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）基、例えばＰＣＴ公開の国際公開第９２／０５１８６号パンフレット及び国際公開第９１／０６５５６号パンフレットに記載の２〜４原子長のヌクレオシド間（ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）結合、あるいはホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）基（Ｍａｔｔｅｕｃｃｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：７７６７−７７６８頁（１９９１年））又はアミド基（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１４９７−１５００頁（１９９１年））と置換されているオリゴヌクレオチドが用いられうる。
【０３０３】
更に、例えば糖又は塩基が化学的に修飾されたヌクレオチド類縁体は、本発明において用いられうる。プリン及びピリミジンの「類似」形態は一般に当該技術分野で公知であり、その多数は化学療法剤として用いられる。典型的であるが網羅的でないリストとして、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルシュードウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（β−Ｄ−ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ウィブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル，２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、シュードウラシル、キューオシン，２−チオシトシン、及び２，６−ジアミノプリンが挙げられる。更に、ハロゲン化塩基による従来の塩基。更に、塩基上の２’−フラノース位置は非帯電性の嵩高い基（ｂｕｌｋｙ  ｇｒｏｕｐ）の置換基を有しうる。非帯電性の嵩高い基の例として、分岐アルキル、糖及び分岐糖が挙げられる。
【０３０４】
末端修飾はまた、細胞毒素を核酸に複合させ、細胞種の特異性、薬物動態、核透過性、及びオリゴヌクレオチド医薬品における絶対細胞取り込み速度を改良するための有用な方法を提供する。例えば、反応基を含む、５’及び３’末端での多数の置換基は既知であり、それにより細胞毒素の共有結合が可能になる。例えば、「ＯＬＩＧＯＤＥＯＸＹＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ：ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ  ＯＦ  ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ」、（１９８９年）Ｃｏｈｅｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＲＯＳＰＥＣＴＳ  ＦＯＲ  ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＮＵＣＬＥＩＣ  ＡＣＩＤ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ  ＦＯＲ  ＣＡＮＣＥＲ  ＡＮＤ  ＡＩＤＳ」、（１９９１年）、Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ；「ＧＥＮＥ  ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮ：ＢＩＯＬＯＧＹ  ＯＦ  ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＲＮＡ  ＡＮＤ  ＤＮＡ」、（１９９２年）Ｅｒｉｃｋｓｏｎ及びＩｚａｎｔ編、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ；並びに「ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＲＮＡ  ＡＮＤ  ＤＮＡ」、（１９９２年）、Ｍｕｒｒａｙ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓを参照のこと。アンチセンス化合物に関する一般的方法については、「ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ  ＲＮＡ  ＡＮＤ  ＤＮＡ」、（１９８８年）、Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと。
【０３０５】
少なくとも１つの実施形態では、米国仮特許出願第６０／９５７，２７１号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載のように、抗体のＣ末端はシステイン残基の導入により修飾される。かかる修飾は、限定はされないが、完全長重鎖配列のＣ末端又はその近傍での既存のアミノ酸残基の置換、及びシステインを含有する延長部の完全長重鎖配列のＣ末端への導入を含む。一実施形態では、システインを含有する延長部は、アラニン−アラニン−システイン配列（Ｎ末端からＣ末端に向かって）を含む。
【０３０６】
少なくとも一部の実施形態では、かかるＣ末端システイン修飾体の存在により、化合物、例えば治療剤又はマーカー分子の複合における位置が提供される。特に、Ｃ末端システイン修飾に起因する反応性チオール基の存在を用い、上で詳述のリンカーを用いた化合物の複合が可能である。この方法での抗体のパートナー分子への複合は、結合の特異的部位全体にわたる制御の増大を可能にする。更に、Ｃ末端又はその近傍での結合部位の導入により、複合が抗体の機能特性との干渉を低減又は除去するように複合は最適化可能であり、それにより複合製剤の簡素化された分析及び品質制御が可能になる。
【０３０７】
検出可能な標識
本発明の化合物及び方法と併用される特定の標識又は検出可能な基は、本発明の化合物の活性又は有用性と有意に干渉することがない限り、一般に本発明の重要な態様ではない。検出可能な基は、検出可能な物理的又は化学的特性を有する任意の材料であってもよい。かかる検出可能な標識はイムノアッセイの分野で十分に開発されており、一般にかかる方法で有用な大部分の任意の標識が本発明に適用可能である。したがって、標識は、分光学的、光化学的、生物化学的、免疫化学的、電気的、光学的又は化学的手段により検出可能な任意の組成物である。本発明で有用な標識は、磁気ビーズ（例えばＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標））、蛍光色素（例えばフルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミンなど）、放射性標識（例えば３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、又は３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びＥＬＩＳＡで一般に用いられるその他のもの）、並びにコロイド状金又は着色ガラス又はプラスチックビーズ（例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）などの比色標識を含む。
【０３０８】
標識は、当該技術分野で周知の方法に従い、本発明の化合物に直接的又は間接的に共役されうる。上記のように、多種多様な標識の使用が可能であり、そこでの標識の選択は、要求される感受性、化合物との複合の容易性、安定性の要求、使用可能な器具類、及び使い捨ての設備（ｄｉｓｐｏｓａｌ  ｐｒｏｖｉｓｉｏｎ）に依存する。
【０３０９】
本発明の化合物が検出可能な標識に複合される場合、標識は好ましくは放射性同位体、蛍光物質、蛍光物質前駆体、発色団、酵素及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるメンバーである。様々な基を抗体に複合するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、抗体に複合されることが多い検出可能な標識は、酵素、例えば西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、及びグルコースオキシダーゼである。
【０３１０】
非放射性標識は間接的手段により結合されることが多い。一般に、リガンド分子（例えばビオチン）は抱合体の成分に共有結合される。次いで、リガンドは別の分子（例えばストレプトアビジン分子）に結合し、それは本質的に検出可能であるかあるいはシグナル系、例えば検出可能な酵素、蛍光化合物、又は化学発光化合物に共有結合される。
【０３１１】
本発明の抱合体の成分はまた、例えば酵素又はフルオロフォアとの複合により、シグナル生成化合物に直接複合されうる。標識としての目的の酵素は、主に加水分解酵素、特にホスファターゼ、エステラーゼ及びグリコシダーゼ、又はオキシドターゼ（ｏｘｉｄｏｔａｓｅｓ）、特にペルオキシダーゼとなる。蛍光化合物は、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどを含む。化学発光化合物は、ルシフェリン、及び２，３−ジヒドロフタラジンジオン、例えばルミノールを含む。使用可能な様々な標識又はシグナル生成系についてのレビューとしては、米国特許第４，３９１，９０４号明細書を参照のこと。
【０３１２】
標識を検出する手段は当業者に周知である。したがって、例えば、標識が放射性標識である場合、検出用手段はオートラジオグラフィーなどではシンチレーションカウンタ又は写真フィルムを含む。標識が蛍光標識である場合、それは蛍光色素を適切な光の波長で励起し、得られる蛍光を検出することで検出可能である。蛍光は、電荷結合素子（ＣＣＤ）又は光電子増倍管などの電子検出器の使用により、写真フィルムを用いて視覚的に検出可能である。同様に、酵素標識は、酵素に適する基質を提供し、得られた反応生成物を検出することにより検出可能である。最後に、簡素な比色標識は、単に標識に関連する色を観察することにより検出可能である。したがって、様々なディップスティックアッセイでは、複合された金がピンク色を呈することが多い一方、様々な複合ビーズがビーズの色を呈する。
【０３１３】
蛍光標識は取扱い上の注意がほとんど要求されないという利点を有し、高スループット画像化技術（コンピュータを含む集積システムにおける分析用の画像のデジタル化を含む光学分析）への適合性が高いことから、は好ましい。好ましい標識は、典型的には、標識における高い感受性、高い安定性、低いバックグラウンド、低い環境感受性及び高い特異性のうちの１つ以上で特徴づけられる。多数の蛍光標識が、ＳＩＧＭＡ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、ＣＬＯＮＴＥＣＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）、Ｃｈｅｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｃｏｒｐ．、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）、Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｃａ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ  Ａｎａｌｙｔｉｋａ（Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ（Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））、及びＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）、並びに当業者に既知の多数の他の市販元から市販されている。更に、当業者は、特定の用途に適するフルオロフォアの選択方法を理解し、市販品として容易に入手できない場合、必要なフルオロフォアを新規に合成するか又は市販の蛍光化合物を合成的に修飾し、所望の蛍光標識の入手に至ることができるであろう。
【０３１４】
小分子のフルオロフォアに加え、天然蛍光タンパク質及びかかるタンパク質の改変類縁体は本発明で有用である。かかるタンパク質として、例えば、刺胞動物の緑色蛍光タンパク質（Ｗａｒｄら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．３５：８０３−８０８頁（１９８２年）；Ｌｅｖｉｎｅら、Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、７２Ｂ：７７−８５頁（１９８２年））、ビブリオ・フィシェリ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｆｉｓｃｈｅｒｉ）株由来の黄色蛍光タンパク質（Ｂａｌｄｗｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９：５５０９−１５頁（１９９０年））、渦鞭毛藻のシンビオジニウム種（ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ  Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ  ｓｐ．）由来のペリジニン−クロロフィル（Ｍｏｒｒｉｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４：６７３：７７頁（１９９４年））、海洋シアノバクテリア、例えばシネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）由来のフィコビリンタンパク質、例えばフィコエリトリン及びフィコシアニン（Ｗｉｌｂａｎｋｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２２６−３５（１９９３年））などが挙げられる。
【０３１５】
一般に、細胞毒素と標的化剤（又は他の作用物質）、場合によりスペーサー基の間での結合の形成に先立ち、化学官能基の少なくとも１つが活性化されることになる。当業者は、ヒドロキシ、アミノ、及びカルボキシ基を含む種々の化学官能基が種々の標準の方法及び条件を用いて活性化されうることを理解するであろう。例えば、細胞毒素又は標的化剤の水酸基がホスゲンでの処理を通じて活性化され、対応するクロロぎ酸塩（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ）又はクロロぎ酸ｐ−ニトロフェニル（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ）が形成され、対応する炭酸塩が形成されうる。
【０３１６】
典型的な実施形態では、本発明ではカルボキシル官能基を含む標的化剤が使用される。カルボキシル基は、例えば対応するアシルハロゲン化物又は活性エステルへの変換により活性化されうる。この反応は、Ｍａｒｃｈ、上記、３８８−８９頁で例示のように種々の条件下で行われうる。典型的な実施形態では、ハロゲン化アシルは、カルボキシル含有基と塩化オキサリルとの反応を通じて調製される。活性化剤は細胞毒素又は細胞毒素−リンカーアーム抱合体と反応し、本発明の抱合体が形成される。当業者は、カルボキシル含有標的化剤の使用はあくまで例示であり、多数の他の官能基を有する作用物質が本発明のリンカーに複合されうることを理解するであろう。
【０３１７】
反応官能基：
例示の簡素化のため、以下の考察では本発明の細胞毒素と標的化剤との複合について着目される。その着目により本発明の一実施形態が例示され、その他は当業者により容易に推定される。本発明が単一の実施形態に関する考察に着目することによって限定されることは全く意図されていない。
【０３１８】
本発明の典型的な化合物は一般に置換若しくは未置換アルキル基又はヘテロアルキル鎖上に位置する反応官能基を担持することから、それらの別種への容易な結合が可能になる。反応基にとって好都合な位置は鎖の末端位置である。
【０３１９】
本発明の実施において有用な反応の反応基及びクラスは、一般にバイオコンジュゲート化学の技術分野で周知のものである。反応官能基は保護又は非保護の場合があり、基の保護性は有機合成の技術分野で既知の方法により変化しうる。反応性の細胞毒素類縁体の場合に使用可能な本発明の好ましい反応のクラスは比較的穏やかな条件下で進行するものである。これらは、限定はされないが、求核置換基（例えばアミン及びアルコールとハロゲン化アシル基、活性エステルとの反応）、求電子置換基（例えばエナミン反応）、並びに炭素−炭素及び炭素−ヘテロ原子の複数の結合の付加（例えばマイケル反応、ディールス−アルダー付加）を含む。これら及び他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８５年；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）、１９９６年、及びＦｅｅｎｅｙら、「Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｒｉｅｓ」、第１９８巻、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、ワシントンＤ．Ｃ．（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）、１９８２年において考察されている。
【０３２０】
典型的な反応タイプは、カルボキシル基と、限定はされないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族エステルを含むその様々な誘導体との反応を含む。水酸基は、エステル、エーテル、アルデヒドなどに変換されうる。ハロアルキル基は、例えば、アミン、カルボン酸アニオン、チオールアニオン、カルボアニオン、又はアルコキシドイオンとの反応により新種に変換される。求ジエン体（例えばマレイミド）基はディールス−アルダー付加に関与する。アルデヒド又はケトン基は、イミン、ヒドラゾン、セミカルバゾン若しくはオキシムに又はグリニャール付加又はアルキルリチウム付加のような機序を介して変換されうる。ハロゲン化スルホニルは例えばアミンと容易に反応し、スルホンアミドが形成される。アミン又はスルフヒドリル基は、例えばアシル化、アルキル化又は酸化される。アルケンは、付加環化、アシル化、マイケル付加などを用いて一連の新種に変換されうる。エポキシドは、アミン及びヒドロキシル化合物と容易に反応する。
【０３２１】
当業者は、これら結合の多数が種々の方法でかつ種々の条件を用いて生成可能であることを容易に理解するであろう。エステルの調製においては例えばＭａｒｃｈ、上記、１１５７頁を参照し；チオエステルにおいてはＭａｒｃｈ、上記、３６２−３６３頁、４９１頁、７２０−７２２頁、８２９頁、９４１頁、及び１１７２頁を参照し；炭酸塩においてはＭａｒｃｈ、上記、３４６−３４７頁を参照し；カルバメートにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１５６−５７頁を参照し；アミドにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１５２頁を参照し；尿素及びチオ尿素においてはＭａｒｃｈ、上記、１１７４頁を参照し；アセタール及びケタールにおいてはＧｒｅｅｎｅら、上記、１７８−２１０頁及びＭａｒｃｈ、上記、１１４６頁を参照し；アシルオキシアルキル誘導体においては「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ｔｏｐｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｋ．Ｂ．Ｓｌｏａｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９２年を参照し；エノールエステルにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１６０頁を参照し；Ｎ−スルホニルイミデートにおいてはＢｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３１：２０６６頁（１９８８年）を参照し；無水物においてはＭａｒｃｈ、上記、３５５−５６頁、６３６−３７頁、９９０−９１頁、及び１１５４頁を参照し；Ｎ−アシルアミドにおいてはＭａｒｃｈ、上記、３７９頁を参照し；Ｎ−マンニッヒ塩基においてはＭａｒｃｈ、上記、８００−０２頁及び８２８頁を参照し；ヒドロキシメチルケトンエステルにおいてはＰｅｔｒａｃｅｋら、Ａｎｎａｌｓ  ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、５０７：３５３−５４頁（１９８７年）を参照し；ジスルフィドにおいてはＭａｒｃｈ、上記、１１６０頁を参照し；かつホスホン酸エステル及びホスホンアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｍｉｄａｔｅ）においては。
【０３２２】
反応官能基は非保護であり、反応に関与又は干渉しないように選択されうる。あるいは、反応官能基は保護基の存在により反応への関与から保護されうる。当業者は、特定の官能基を選択された一連の反応条件への干渉から保護する方法を理解するであろう。有用な保護基の例として、Ｇｒｅｅｎｅら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年を参照のこと。
【０３２３】
典型的には、標的化剤は、その各化学官能基による標準の化学技術を用いて細胞毒素に共有結合される。場合により、リンカー又は作用物質は１つ以上のスペーサー基を介して作用物質に共役される。スペーサー基は、併用される場合、等しいか又は異なりうる。
【０３２４】
一般に細胞毒素と反応官能基、場合によりスペーサー基の間での結合の形成に先立ち、化学官能基の少なくとも１つが活性化されることになる。当業者は、ヒドロキシ、アミノ、及びカルボキシ基を含む種々の化学官能基が種々の標準の方法及び条件を用いて活性化されうることを理解するであろう。典型的な実施形態では、本発明は反応官能基としてカルボキシル官能基を含む。カルボキシル基は上記のように活性化されうる。
【０３２５】
切断可能な基質
本発明の切断可能な基質は「Ｘ２」として表される。好ましくは、切断可能な基質は酵素により切断されうる切断可能な酵素基質である。好ましくは、酵素は、治療されるべき腫瘍又は他の標的細胞と直接的又は間接的に優先的に結合される。酵素は、治療されるべき腫瘍又は他の標的細胞により生成されうる。例えば、切断可能な基質は、腫瘍又は他の標的細胞の近傍若しくは内部に見出される酵素により優先的に切断可能なペプチドであってもよい。更に又はその他として、酵素は、腫瘍細胞に特異的に結合する標的化剤、例えば腫瘍抗原に特異的な抗体に結合されうる。
【０３２６】
上記の薬剤への共役に適する酵素切断可能な基質の例として、ＰＣＴ特許出願公開の国際公開第００／３３８８８号パンフレット、国際公開第０１／９５９４３号パンフレット、国際公開第０１／９５９４５号パンフレット、国際公開第０２／００２６３号パンフレット、及び国際公開第０２／１００３５３号パンフレット（これらの全ては参照により本明細書中に援用される）は、切断可能なペプチドの薬剤への結合について開示している。ペプチドは、腫瘍に関連した酵素、例えばｔｒｏｕａｓｅ（チメットオリゴペプチダーゼなど）、ＣＤ１０（ネプリリシン）、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ２又はＭＭＰ９など）、ＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（ヘプシン、テスチシン、ＴＭＰＲＳＳ４、又はマトリプターゼ／ＭＴ−ＳＰ１など）、又はカテプシンにより切断可能である。この実施形態では、プロドラッグは、上記の薬剤、ペプチド、安定化基、また場合により薬剤とペプチドの間の連結基を含む。安定化基がペプチドの末端に結合されることで、プロドラッグが腫瘍又は他の標的細胞に到達するまで分解から保護される。適切な安定化基の例として、非アミノ酸、例えばコハク酸、ジグリコール酸、マレイン酸、ポリエチレングリコール、ピログルタミン酸、酢酸、ナフチルカルボン酸、テレフタル酸、及びグルタル酸誘導体；並びにアスパラギン酸のβ−カルボキシ基又はグルタミン酸のγ−カルボキシル基でのペプチドのＮ末端に結合された遺伝的にコードされないアミノ酸又はアスパラギン酸又はグルタミン酸が挙げられる。
【０３２７】
ペプチドは、典型的には３〜１２個（又はそれより多数）のアミノ酸を含む。特定のアミノ酸の選択は、少なくとも部分的にペプチドの切断に用いられる酵素、並びにインビボでのペプチドの安定性に依存することになる。適切な切断可能なペプチドの一例がβ−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（配列番号２）である。これが安定化基と結合することで、スクシニル−β−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（配列番号２）が形成されうる。適切な切断可能なペプチドの他の例が上記の参考文献にて提供される。
【０３２８】
一具体例として、ネプリリシン、中性エンドペプチターゼ（ＮＥＰ）、及び急性リンパ芽球性白血病共通抗原（ＣＡＬＬＡ）としても知られるＣＤ１０はＩＩ型細胞表面亜鉛依存性メタロプロテアーゼである。ＣＤ１０との使用に適する切断可能な基質として、ＬｅｕＡｌａＬｅｕ及びＩｌｅＡｌａＬｅｕが挙げられる。ＣＤ１０に対する他の既知の基質が最大で５０アミノ酸長のペプチドを含むが、基質が大きくなると触媒効率は低下することが多い。
【０３２９】
別の具体例はマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に基づく。おそらくは最良に特徴づけられたタンパク質分解酵素は腫瘍に関連し、腫瘍微小環境内でのＭＭＰの活性化には明らかな相関がある。特に、可溶性のマトリックス酵素ＭＭＰ２（ゼラチナーゼＡ）及びＭＭＰ９（ゼラチナーゼＢ）については徹底した試験が行われ、腫瘍成長を含む組織リモデリングの間に選択的に活性化されることが示されている。デキストランとメトトレキサートの抱合体については、ＭＭＰ２及びＭＭＰ９により切断されるように設計されたペプチド配列の設計及び試験が行われている（Ｃｈａｕら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１５：９３１−９４１頁（２００４年））；ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）及びドキソルビシン（Ｂａｅら、Ｄｒｕｇｓ  Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．２９：１５−２３頁（２００４年））、並びにアルブミン及びドキソルビシン（Ｋｒａｔｚら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１１：２００１−２００６頁（２００１年））。ＭＭＰとの使用に適する配列の例として、限定はされないが、ＰｒｏＶａｌＧｌｙＬｅｕＩｌｅＧｌｙ（配列番号８）、ＧｌｙＰｒｏＬｅｕＧｌｙＶａｌ（配列番号９）、ＧｌｙＰｒｏＬｅｕＧｌｙＩｌｅＡｌａＧｌｙＧｌｎ（配列番号１０）、ＰｒｏＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（配列番号１１）、ＧｌｙＰｒｏＬｅｕＧｌｙＭｅｔＬｅｕＳｅｒＧｌｎ（配列番号１２）、及びＧｌｙＰｒｏＬｅｕＧｌｙＬｅｕＴｒｐＡｌａＧｌｎ（配列番号１３）が挙げられる（例えば上記の参考文献並びにＫｌｉｎｅら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．１：９−２２頁（２００４年）及びＬｉｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：６０６１−６０６７頁（２０００年）を参照）。他の切断可能な基質の使用も可能である。
【０３３０】
更に別の例がＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼである。この酵素の基として、例えばヘプシン、テスチシン、及びＴＭＰＲＳＳ４が挙げられる。ＧｌｎＡｌａＡｒｇは（乳癌及び卵巣癌において過剰発現される）マトリプターゼ／ＭＴ−ＳＰ１の場合に有用な１つの基質配列であり、ＬｅｕＳｅｒＡｒｇは（前立腺癌及び一部の他の腫瘍タイプにおいて過剰発現される）ヘプシンの場合に有用である（例えば、Ｌｅｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３６７２０−３６７２５頁及びＫｕｒａｃｈｉ及びＹａｍａｍｏｔｏ、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒｏｅｏｌｙｔｉｃ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｖｏｌ．２」、第２版（Ｂａｒｒｅｔｔ  ＡＪ、Ｒａｗｌｉｎｇｓ  ＮＤ及びＷｏｅｓｓｎｅｒ  ＪＦ編）、１６９９−１７０２頁（２００４年）を参照）。他の切断可能な基質の使用も可能である。
【０３３１】
切断可能な基質配列の別のタイプとして、腫瘍又は細胞と結合状態になる切断可能な基質を切断する能力がある別の酵素の調製が含まれる。例えば、酵素が腫瘍特異抗体（又は腫瘍若しくは受容体リガンドなどの他の標的細胞に優先的に引き付けられる他の実体）に共役され、次いで酵素−抗体抱合体が患者に提供されうる。酵素−抗体抱合体は、腫瘍に関連した抗原に誘導され、結合される。次いで、薬剤−切断可能な基質抱合体がプロドラッグとして患者に提供される。薬剤は、薬剤−切断可能な基質抱合体が腫瘍と結合状態になっている酵素と、切断可能な基質が切断されかつ薬剤が遊離されるように相互作用する場合に、腫瘍の近傍でのみ放出される。例えば、米国特許第４９７５２７８号明細書；米国特許第５５８７１６１号明細書；米国特許第５６６０８２９号明細書；米国特許第５７７３４３５号明細書、及び米国特許第６１３２７２２号明細書（これらの全ては参照により本明細書中に援用される）はかかる配列を開示している。適切な酵素及び基質の例として、限定はされないが、β−ラクタマーゼ及びセファロスポリン誘導体、カルボキシペプチターゼＧ２及びグルタミン酸及びアスパラギン酸及び葉酸誘導体が挙げられる。
【０３３２】
一実施形態では、酵素−抗体抱合体は、目的の標的細胞上又は標的部位で発現される抗原に対するその特異性に基づいて選択される抗体又は抗体断片を含む。抗体についての考察が上記に与えられる。適切なセファロスポリン−切断可能な基質の一例が、
【化６９】
2010522693.tif 000071
【０３３３】
である。
【０３３４】
抱合体の例
本発明のリンカー及び切断可能な基質は、細胞毒素の作用物質としてのデュオカルマイシン又はＣＢＩ類縁体を有する抱合体内で用いられうる。本発明の抱合体の例が、下記に更に詳述される。他に指定がない限り、置換基は、細胞毒素、リンカー、及び切断可能な基質に関するセクションで上記のように定義される。
【０３３５】
Ａ．リンカー抱合体
適切な抱合体の一例が、式：
【化７０】
2010522693.tif 000072
【０３３６】
の化合物であり、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化７１】
2010522693.tif 000073
【０３３７】
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１種以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ２は自己犠牲リンカーでありかつ
【化７２】
2010522693.tif 000074
【０３３８】
を含み、
Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択され、
かつｗは０〜４の整数であり；
ｏは１であり；
Ｌ４はリンカーメンバーであり；
ｐは０若しくは１であり；
Ｘ４は保護反応官能基、非保護反応官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化７３】
2010522693.tif 000075
【０３３９】
を含み、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３はＯＲ１１であり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらの結合対象である窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在するか又は存在しない単結合であり、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７はＲ６と前記シクロプロピル環内でＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−で結合され、
Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ１１は前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させる。
【０３４０】
一部の実施形態では、薬剤は上記の構造（９）又は（１２）を有する。抱合体としての使用に適する化合物の一例として、
【化７４】
2010522693.tif 000076
【０３４１】
が挙げられる。
【０３４２】
抱合体のタイプの別の例が、式
【化７５】
2010522693.tif 000077
【０３４３】
の化合物であり、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり；
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｆは構造：
【化７６】
2010522693.tif 000078
【０３４４】
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１種以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ２は自己犠牲リンカーであり；
ｏは０若しくは１であり；
Ｌ４はリンカーメンバーであり；
ｐは０若しくは１であり；
Ｘ４は保護反応官能基、非保護反応官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり；かつ
Ｄは構造：
【化７７】
2010522693.tif 000079
【０３４５】
を含み、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらの結合対象である窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成され、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらの結合対象である窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させ、かつ
【化７８】
2010522693.tif 000080
【０３４６】
を含み、ｖは１〜６の整数であり；かつ
Ｒ２７、Ｒ２７’、Ｒ２８、及びＲ２８’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；
Ｒ６は存在するか又は存在しない単結合であり、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７はＲ６と前記シクロプロピル環内でＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−で結合され、
Ｘ１は離脱基である。
【０３４７】
一部の実施形態では、薬剤は上記の構造（９）又は（１２）を有する。抱合体としての使用に適する化合物の１つの具体例が、
【化７９】
2010522693.tif 000081
【０３４８】
であり、ｒは０〜２４の範囲内の整数である。
【０３４９】
適切な抱合体の別の例が、式
【化８０】
2010522693.tif 000082
【０３５０】
の化合物であり、
Ｌ１は自己犠牲リンカーであり、
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり、
Ｆは構造
【化８１】
2010522693.tif 000083
【０３５１】
を含むリンカーであり、
ＡＡ１は天然アミノ酸及び非天然α−アミノ酸からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーであり；
ｃは１〜２０の整数であり；
Ｌ３は第一級若しくは第二級アミンを含むスペーサー基又はカルボキシル官能基であり；Ｌ３が存在する場合、ｍは０でありかつＬ３のアミンがＤのペンダントカルボキシル官能基とアミド結合を形成するか、又はＬ３のカルボキシルがＤのペンダントアミン官能基とアミド結合を形成し；
ｏは０若しくは１であり；
Ｌ４はリンカーメンバーであり、Ｌ４は（ＡＡ１）ｃのＮ末端に直接結合された
【化８２】
2010522693.tif 000084
【０３５２】
を含み、
Ｒ２０は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり、
Ｒ２５、Ｒ２５’、Ｒ２６、及びＲ２６’の各々は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され、
かつｓ及びｔは独立して１〜６の整数であり；
ｐは１であり；
Ｘ４は保護反応官能基、非保護反応官能基、検出可能な標識、及び標的化剤からなる群から選択されるメンバーであり、かつ
Ｄは構造：
【化８３】
2010522693.tif 000085
【０３５３】
を含み、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらの結合対象である窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成され、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらの結合対象である窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在するか又は存在しない単結合であり、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７はＲ６と前記シクロプロピル環内でＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−で結合され、
Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ１５又はＲ１６のうちの少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＦに結合させる。
【０３５４】
一部の実施形態では、薬剤は上記の構造（９）又は（１２）を有する。抱合体としての使用に適する化合物の１つの具体例が、
【化８４】
2010522693.tif 000086
【０３５５】
であり、ｒは０〜２４の範囲内の整数である。
【０３５６】
抱合体としての使用に適する化合物の他の例として、
【化８５】
2010522693.tif 000087
【化８６】
2010522693.tif 000088
【化８７】
2010522693.tif 000089
【化８８】
2010522693.tif 000090
【０３５７】
が挙げられ、Ｒは
【化８９】
2010522693.tif 000091
【０３５８】
であり、かつｒは０〜２４の範囲内の整数である。
【０３５９】
抱合体はまた、構造（１３）、例えば化合物：
【化９０】
2010522693.tif 000092
【０３６０】
を有する薬剤を用いて形成可能であり、ｒは０〜２４の範囲内の整数である。
【０３６１】
Ａ．切断可能なリンカー抱合体
適切な抱合体の一例が、構造：
【化９１】
2010522693.tif 000093
【０３６２】
を有する化合物であり、
Ｌ１は自己犠牲スペーサーであり、
ｍは０、１、２、３、４、５若しくは６の整数であり；
Ｘ２は切断可能な基質であり；かつ
Ｄは構造：
【化９２】
2010522693.tif 000094
【０３６３】
を含み、環系Ａは、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択されるメンバーであり；
Ｅ及びＧは、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、ヘテロ原子、単結合から独立して選択されるメンバーであるか、又はＥ及びＧは結合し、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から選択される環系が形成され；
ＸはＯ、Ｓ及びＮＲ２３から選択されるメンバーであり；
Ｒ２３は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、及びアシル基から選択されるメンバーであり；
Ｒ３は（＝Ｏ）、ＳＲ１１、ＮＨＲ１１及びＯＲ１１からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１１は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換ヘテロアルキル基、未置換ヘテロアルキル基、モノホスフェート基、ジホスフェート基、トリホスフェート基、スルホネート基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ１２Ｒ１３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１２）２、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ１２Ｒ１３、ＳＲ１２及びＳｉＲ１２Ｒ１３Ｒ１４からなる群から選択されるメンバーであり、
Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基及び置換若しくは未置換アリール基から独立して選択されるメンバーであり、Ｒ１２及びＲ１３はそれらの結合対象である窒素又は炭素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成されてもよく；
Ｒ６は存在するか又は存在しない単結合であり、存在する場合、Ｒ６及びＲ７は結合し、シクロプロピル環が形成され；かつ
Ｒ７はＲ６と前記シクロプロピル環内でＣＨ２−Ｘ１若しくは−ＣＨ２−で結合され、Ｘ１は離脱基であり、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’は、水素、置換アルキル基、未置換アルキル基、置換アリール基、未置換アリール基、置換ヘテロアリール基、未置換ヘテロアリール基、置換ヘテロシクロアルキル基、未置換ヘテロシクロアルキル基、ハロゲン、ＮＯ２、ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＣ（Ｏ）Ｒ１５、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１５Ｒ１６、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１５、Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、ＳＲ１５、ＯＲ１５、ＣＲ１５＝ＮＲ１６、及びＯ（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２からなる群から独立して選択されるメンバーであるか、又はＲ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’の任意の隣接対はそれらの結合対象である炭素原子と共に結合し、４〜６員を有する置換若しくは未置換シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル環系が形成され、
ｎは１〜２０の整数であり；
Ｒ１５及びＲ１６は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基、及び置換若しくは未置換ペプチジル基から独立して選択され、Ｒ１５及びＲ１６はそれらの結合対象である窒素原子と共に任意に結合し、４〜６員を有し、任意に２つ以上のヘテロ原子を有する置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル環系が形成され、
Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ５及びＲ５’のメンバーうちの少なくとも１つは前記薬剤をＬ１（存在する場合）又はＸ２に結合させ、かつ
【化９３】
2010522693.tif 000095
【０３６４】
からなる群から選択され、
Ｒ３０、Ｒ３０’、Ｒ３１、及びＲ３１’は、水素、置換若しくは未置換アルキル基、置換若しくは未置換ヘテロアルキル基、置換若しくは未置換アリール基、置換若しくは未置換ヘテロアリール基、及び置換若しくは未置換ヘテロシクロアルキル基から独立して選択され；かつ
ｖは１〜６の整数である。
【０３６５】
適切な切断可能なリンカーの例として、β−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ及び
【化９４】
2010522693.tif 000096
【０３６６】
が挙げられる。
【０３６７】
一部の実施形態では、薬剤は上記の構造（９）又は（１２）を有する。化合物のタイプの例として、
【化９５】
2010522693.tif 000097
【０３６８】
が挙げられ、ＲはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。
【０３６９】
医薬製剤及び投与：
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明の化合物及び薬理学的に許容できる担体を含有する医薬製剤を提供する。
【０３７０】
付加塩又はその水和物などの薬理学的に許容できる担体を含む本明細書中に記載の化合物は、多種多様な投与の経路又は様式を用いて患者に送達されうる。投与の適切な経路は、限定はされないが、吸入、経皮、経口、直腸、経粘膜、腸、並びに筋肉内、皮下及び静脈内注射を含む非経口投与を含む。好ましくは、本発明の抱合体は非経口投与され、より好ましくは静脈内投与される。
【０３７１】
本明細書で用いられる「投与する」又は「投与」という用語は、化合物のその意図される作用部位への直接的及び間接的送達のためのあらゆる手段を包含するように意図されている。
【０３７２】
本明細書中に記載の化合物、又はその薬理学的に許容できる塩及び／又は水和物は、単独で、本発明の他の化合物との併用で、及び／又は他の治療剤と結合されたカクテルで投与されうる。当然のことながら、本発明の化合物と同時投与可能な治療剤の選択は、治療される病態に部分的に依存することになる。
【０３７３】
例えば、本発明の化合物は、自己誘導物質に依存する生物により誘発される病状を患う患者に投与される場合、疼痛、感染症及び一般的に疾患に関連する他の徴候や副作用の治療に用いられる作用物質を含有するカクテルで投与されうる。かかる作用物質として、例えば鎮痛薬、抗生物質などが挙げられる。
【０３７４】
化合物は、癌治療を受けている患者に投与される場合、抗癌剤及び／又は補助的薬効増強剤（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有するカクテルで投与されうる。化合物はまた、放射線療法の副作用を治療する作用物質、例えば制吐薬、放射線保護剤などを含有するカクテルで投与されうる。
【０３７５】
本発明の化合物と同時投与可能な補助的薬効増強剤として、例えば、三環系抗うつ薬（例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドクサピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピン及びマプロチリン）；非三環系及び抗うつ薬（例えば、セルトラリン、トラゾドン及びシタロプラム）；Ｃａ＋２拮抗薬（例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピン及びカロベリン）；アンフォテリシン；トリパラノール類縁体（例えばタモキシフェン）；抗不整脈薬（例えばキニジン）；抗高血圧薬（例えばレセルピン）；チオール枯渇剤（ｄｅｐｌｅｔｅｒ）（例えばブチオニン及びスルホキシミン）；並びにロイコボリンカルシウムが挙げられる。
【０３７６】
本発明の活性化合物はそれ自体で又は医薬組成物の形態で投与され、活性化合物は１種以上の薬理学的に許容できる担体、賦形剤又は希釈剤と混合される。本発明に従って用いられる医薬組成物は、典型的には、活性化合物の医薬的に使用可能な製剤への加工を促進する賦形剤及び助剤を含有する１種以上の生理学的に許容できる担体を用いて従来の方法で調合される。適切な製剤か否かは選択される投与の経路に依存している。
【０３７７】
経粘膜投与においては、浸透されるべき障壁に適する浸透剤が製剤中に用いられる。かかる浸透剤は、一般に当該技術分野で公知である。
【０３７８】
経口投与においては、化合物は、活性化合物を当該技術分野で周知の薬理学的に許容できる担体と結合させることにより容易に調合可能である。かかる担体により、治療対象の患者による経口摂取を目的とした、本発明の化合物をタブレット、ピル、ドラジェ、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして調合することが可能になる。経口使用のための医薬製剤は固体賦形剤として得られ、必要に応じて適切な助剤を添加後、場合により得られる混合物の粉砕及び顆粒の混合物の加工により、タブレット又はドラジェコア（ｄｒａｇｅｅ  ｃｏｒｅ）が得られうる。適切な賦形剤は、特に、乳糖、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含む糖などの充填剤；例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、ガムトラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース製剤である。必要に応じ、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩が添加されうる。
【０３７９】
ドラジェコアは適切なコーティング剤と共に提供される。この目的のため、濃縮糖溶液の使用が可能であり、それは場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、並びに適切な有機溶媒又は溶媒混合物を含有する。異なる組み合わせの活性化合物用量の同定又は特徴付けのため、染料又は色素がタブレット又はドラジェコーティングに添加されうる。
【０３８０】
経口使用可能な医薬製剤は、ゼラチン製の押し込み式カプセル、並びにゼラチン製の密封ソフトカプセル、及びグリセリン又はソルビトールなどの可塑剤を含む。押し込み式カプセルは、乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤、及び／又はタルク若しくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、また場合により安定化剤と混合された活性成分を含有しうる。ソフトカプセル中の活性化合物は、適切な液体、例えば脂肪油、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールに溶解又は懸濁されうる。更に、安定化剤が添加されうる。経口投与用のあらゆる製剤はかかる投与に適する用量である必要がある。
【０３８１】
口腔投与においては、組成物は従来の方法で調合されるタブレット又はロゼンジの形態をとりうる。
【０３８２】
吸入による投与においては、本発明に従って用いられる化合物は、便宜上、適切なプロペラント、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切な気体を用い、加圧パック又は噴霧器から出てくるエアロゾルスプレー状の形態で送達される。加圧エアロゾルの場合、用量単位は定量を送達するための弁を備えることにより測定されうる。吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）又は吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）において用いられる例えばゼラチン製のカプセル及びカートリッジの調合が可能であり、それらは化合物と乳糖又はデンプンなどの適切な粉末塩基との粉末混合物を含有する。
【０３８３】
化合物は、注射、例えばボーラス注射又は連続注入による非経口投与のために調合されうる。注射は、本発明の組成物において好ましい投与方法である。注射用製剤は、防腐剤が添加された、例えばアンプル内又は複数回用量容器内での単位剤形で提示されうる。組成物は、油性又は水性媒体中の懸濁液、溶液又はエマルジョンなどの形態をとる場合があり、かつ、添加可能な懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散剤などの製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩を含有しうる。
【０３８４】
非経口投与用の医薬製剤は、水溶性形態での活性化合物の水溶液を含む。更に、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射用懸濁液として調製されうる。適切な親油性溶媒又は媒体は、ゴマ油などの脂肪油、又は合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル又はトリグリセリド、又はリポソームを含む。水性注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランを含有しうる。場合により、懸濁液はまた、化合物の溶解度を高め、高度に濃縮された溶液の調製を可能にする適切な安定化剤又は作用物質を含有しうる。注射においては、本発明の作用物質は、水溶液、好ましくはハンクス溶液、リンガー液、又は生理食塩緩衝液などの生理的適合性緩衝液で調合されうる。
【０３８５】
あるいは、活性成分は、使用前に、適切な媒体、例えば無菌パイロジェンフリー水と構成するための粉末形態であってもよい。
【０３８６】
化合物はまた、例えばカカオバター又は他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含有する、坐剤又は持続性浣腸剤（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｅｎｅｍａ）などの直腸組成物で調合されうる。
【０３８７】
上記の製剤に加え、化合物はまたデポー調製物として調合されうる。かかる長期作用型製剤は、移植又は経皮的送達（例えば皮下又は筋肉内）、筋肉内注射又は経皮パッチにより投与されうる。したがって、例えば化合物は、適切な高分子又は疎水性物質（例えば許容範囲の油中エマルジョンとして）又はイオン交換樹脂で、あるいは難溶性誘導体、例えば難溶性塩として調合されうる。
【０３８８】
医薬組成物はまた、適切な固体又はゲル相担体又は賦形剤を含有しうる。かかる担体又は賦形剤の例として、限定はされないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。
【０３８９】
好ましい医薬組成物は、静脈内注射などの注射用に調合される組成物であり、医薬組成物の総重量を１００％の基準として、薬剤抱合体の約０．０１重量％〜約１００重量％を含む。薬剤抱合体は、抗体が特定の癌を標的化するように選択されている場合の抗体−細胞毒素抱合体であってもよい。
【０３９０】
ライブラリー：
また、細胞毒素、細胞毒素−リンカー及び細胞毒素の作用物質−リンカー抱合体、本発明のリンカー並びに本発明の細胞毒素−切断可能な基質のライブラリーも本発明の範囲内に含まれる。典型的なライブラリーは、少なくとも１０種の化合物、より好ましくは少なくとも１００種の化合物、更により好ましくは少なくとも１０００種の化合物、及び更により好ましくは少なくとも１００，０００種の化合物を含む。ライブラリーは、特定の特性、例えば細胞毒性、酵素又は他の切断試薬によるリンカー又は基質の切断について容易に探索される形態である。典型的な形態は、チップフォーマット、マイクロアレイなどを含む。
【０３９１】
パラレル又はコンビナトリアル合成は、全てが本明細書全体を通じて足場と称される共通の特徴を共有する多様な分子のライブラリーの生成というその主目的を有する。足場分子の各可変部分で異なる部分を置換することにより、ライブラリー内で探索可能な空間の大きさは増大する。諸理論及び現代医薬品化学では、占有空間の概念が、所与の生物学的標的に対する所与の化合物の有効性の判定における主な要素として提唱されている。標的化空間の大部分を探索する多様な分子のライブラリーを作成することにより、極めて有効なリード化合物を開発する見込みは劇的に高まる。
【０３９２】
パラレル合成は、一般に固相支持体、例えば高分子樹脂上で行われる。足場又は他の適切な中間体は、化学リンカーにより樹脂に切断可能に結合される。足場を粒子に結合される間に修飾するような反応が行われる。試薬及び／又は反応条件におけるばらつきにより、各ライブラリーの特質である構造的多様性がもたらされる。
【０３９３】
１９９０年以前には、「小」分子（２００〜１０００の分子量を有する非オリゴマー）のパラレル合成が試みられることはまれであった。例えば、Ｃａｍｐｓ．ら、Ａｎｎａｋｓ  ｄｅ  Ｑｕｉｍｉｃａ、７０：８４８頁（１９９０年）を参照のこと。最近、Ｅｌｌｍａｎｎは、数種のプロスタグランジン及びβターン模倣体と共に１１種のベンゾジアゼピン類縁体の固相支持されたパラレル（「コンビナトリアル」とも称される）合成について開示した。これらの開示は米国特許第５，２８８，５１４号明細書中に例示される。小分子のパラレル合成についての別の関連の開示が、米国特許第５，３２４，４８３号明細書中に見出されうる。この特許は１６の異なる足場の各々での４〜４０の化合物のパラレル合成について開示している。Ｃｈｅｎらはまた、有機合成法を適用し、ポリマー支持体についての多段階プロセスを用いて合成される非ペプチドライブラリーを開発している（Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１６：２６６１−２６６２頁（１９９４年））。
【０３９４】
一旦、独自の化合物のライブラリーが調製されると、免疫抱合体又は抗体のライブラリーの調製は、開始点としての自己誘導物質のライブラリー及び本明細書中に記載の方法を用いて調製されうる。
【０３９５】
キット：
別の態様では、本発明は、本発明の化合物又は組成物のうちの１種以上及び化合物又は組成物を用いるための指示書を有するキットを提供する。典型的な実施形態では、本発明は、本発明のリンカーアームを別の分子に複合するためのキットを提供する。キットは、リンカー、及びリンカーを特定の官能基に結合させるための指示書を含む。キットは、それに加えて、又はそれに代えて、細胞毒性薬、標的化剤、検出可能な標識、切断可能な基質、医薬塩又は緩衝液のうちの１つ以上を含みうる。キットはまた、容器、及び場合により１つ以上のバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、又は注射器を含みうる。キットにおける他の形式は当業者には明らかであると思われ、本発明の範囲内に含まれる。
【０３９６】
精製：
別の典型的な実施形態では、本発明は、切断可能な基質Ｘ２又はリガンドＸ４に結合する、本発明のリガンド−細胞毒素又は切断可能な基質−細胞毒素において分子標的を単離するための方法を提供する。本方法は、好ましくは、標的を含む細胞調製物を固定化化合物と接触させ、それにより受容体と固定化化合物との間で抱合体を形成するステップを含む。
【０３９７】
本発明の細胞毒素は、任意の当該技術分野で認められた手段により親和性支持体上に固定化されうる。あるいは、細胞毒素は本発明の切断可能な基質又はリンカーの１つ以上を用いて固定化されうる。
【０３９８】
更に別の典型的な実施形態では、本発明は親和性精製マトリックスを提供する。
【０３９９】
標的を単離するための本発明の方法は、典型的には１つ以上の親和性クロマトグラフィー技術を用いることになる。親和性クロマトグラフィーは、生体分子又は生体高分子などの種の効率的単離を、高度な選択性を備えた特定の化学的支持構造におけるその認識部位の利用により可能にする。文献については、親和性クロマトグラフィー支持体、架橋メンバー、リガンド及びその調製物並びに使用などの論題を含む親和性クロマトグラフィーのテーマに関する記事、モノグラフ、及び書籍が豊富に存在する。それらの参考文献の例として、Ｏｓｔｒｏｖｅ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：３５７−７１頁（１９９０年）；Ｆｅｒｍｅｎｔ、Ｂｉｏｅｎｇ．７０：１９９−２０９頁（１９９０年）。Ｈｕａｎｇら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．４９２：４３１−６９頁（１９８９年）；「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｂｙ  ｈｅｐａｒｉｎ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１８４：３３５−４５頁（１９８０年）；Ｆａｒｏｏｑｉ、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｅｎｇ．、４：４４１−２頁（１９７８年）；Ｎｉｓｈｉｋａｗａ、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、５（９）：５６４−７１頁（１９７５年）；Ｇｕｉｌｆｏｒｄら、「ＰＲＡＣＴ．ＨＩＧＨ  ＰＥＲＦＯＲＭ．ＬＩＱ．ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲ．」、Ｓｉｍｐｓｏｎ（編）、１９３−２０６頁（１９７６年）；Ｎｉｓｈｉｋａｗａ、Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｐ．Ｉｍｐｒｏｖ．Ｂｌｏｏｄ  Ｐｌａｓｍａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ、Ｓａｎｄｂｅｒｇ（編）、４２２−３５頁；（１９７７年）「Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅｓ」、Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．２５−３８頁（１９７７年）（１９７８発行）；及び「ＡＦＦＩＮＩＴＹ  ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ」、Ｄｅａｎら（編）、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ（１９８５年）が挙げられる。当業者は、本発明の材料を用いる特定の親和性クロマトグラフィー法の開発において十分な指針を有している。
【０４００】
本方法では、様々な化学的構造の親和性クロマトグラフィー媒体が支持体として用いられうる。例えば、アガロースゲル及び架橋アガロースゲルは、それらの親水性により非特異的結合が比較的少ないことから支持体材料として有用である。他の有用な支持体として、例えば、制御細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ）（ＣＰＧ）ビーズ、セルロース粒子、ポリアクリルアミドゲルビーズ、並びにデキストラン及びエピクロルヒドリンから作製されるＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）ゲルビーズが挙げられる。
【０４０１】
薬剤抱合体の使用方法：
本発明は、上記の組成物及び構築物に加え、本発明の化合物及び抱合体を用いて実施可能な多数の方法も提供する。本発明の薬剤−リガンド抱合体及び薬剤−切断可能な基質抱合体を用いるための方法は、腫瘍細胞又は癌細胞を殺傷するか又はその成長若しくは複製を阻害することで癌を治療し、前癌状態を治療し、自己免疫抗体を発現する細胞を殺傷するか又はその成長若しくは複製を阻害することで自己免疫疾患を治療し、感染病を治療し、腫瘍細胞又は癌細胞の増殖を予防することで癌を予防し、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防することで自己免疫疾患を予防し、かつ感染病を予防することを含む。これらの使用方法は、有効量の薬剤−リガンド抱合体又は薬剤−切断可能な基質抱合体を、それを必要とする哺乳動物又はヒトなどの動物に投与するステップを含む。一部の実施形態では、酵素は腫瘍又は標的細胞との結合状態を形成するように別々に投与される。
【０４０２】
本発明の薬剤−リガンド抱合体又は薬剤−切断可能な基質抱合体は、動物における、例えば癌、自己免疫疾患又は感染病の治療にとって有用である。対象に組成物を、薬理学的に許容できる方法で薬理学的に有効な量の本発明の組成物として提供することによって腫瘍を治療するための組成物及び方法が提供される。
【０４０３】
本発明は、動物における癌の治療及び腫瘍細胞又は癌細胞の増殖の阻害にとって特に有用である。癌又は前癌状態は、限定はされないが、腫瘍、転移、又は無制限の細胞成長により特徴づけられた任意の疾患を含み、本発明の薬剤−リガンド又は薬剤−切断可能な基質抱合体の投与により治療又は予防されうる。抱合体は薬剤を腫瘍細胞又は癌細胞に送達する。
【０４０４】
薬剤−リガンド抱合体を用いる一実施形態では、リガンドは癌細胞又は腫瘍細胞関連抗原と特異的に結合又は会合する。薬剤は、リガンドに接近していることから、例えば受容体媒介性エンドサイトーシスを通じて腫瘍細胞又は癌細胞の内部に取り込まれうる。抗原は、腫瘍細胞又は癌細胞に結合されうるか、又は腫瘍細胞又は癌細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質であってもよい。一旦、インビボ部でリンカーが腫瘍細胞又は癌細胞に関連したプロテアーゼにより加水分解的に切断されると、それにより薬剤が放出される。次いで、放出された薬剤は自由に拡散し、細胞毒性活性を誘発する。他の実施形態では、薬剤は、腫瘍細胞又は癌細胞の外部の薬剤−リガンド抱合体から切断された後、細胞に浸透する。
【０４０５】
リガンドは、例えば腫瘍細胞又は癌細胞、腫瘍細胞又は癌細胞の表面上に存在する腫瘍細胞又は癌細胞抗原、あるいは腫瘍細胞又は癌細胞に関連した細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍細胞又は癌細胞抗原に結合しうる。リガンドは、特定の腫瘍細胞又は癌細胞種に対して特異的に設計されうる。したがって、有効に治療可能な腫瘍又は癌のタイプは、リガンドの選択により改変されうる。
【０４０６】
薬剤−切断可能な基質抱合体を用いる一実施形態では、切断可能な基質は腫瘍又は他の標的細胞に関連した酵素（又は基質を切断しうる他の実体）により切断される。切断可能な基質は、一旦酵素と接触すると、酵素により切断され、それにより薬剤が放出される。次いで、放出された薬剤は自由に拡散し、細胞毒性活性を誘発する。切断可能な基質は、腫瘍又は標的細胞の内部又は外部で切断されうる。有効に治療可能な腫瘍又は癌のタイプは、切断可能な基質及び関連酵素の選択により改変されうる。
【０４０７】
抱合体により標的化可能な前癌状態の代表例として、限定はされないが、化生、過形成、異形成、結腸直腸ポリープ、日光角化症、日光口唇炎、ヒトパピローマウイルス、白板症、扁平苔癬及びボーエン病が挙げられる。
【０４０８】
抱合体によって標的化されうる癌又は腫瘍の代表例として、限定はされないが、肺癌、大腸癌、前立腺癌、リンパ腫、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、睾丸癌、ＣＮＳ癌、腎癌、腎臓癌、膵癌、胃癌、口腔癌、鼻腔癌、子宮頚癌及び白血病が挙げられる。抱合体中に用いられる特定のリガンド又は切断可能な基質が薬剤を薬剤で治療されるべき腫瘍組織に対して標的化するように選択されうることは、当業者は容易に理解するであろう。
【０４０９】
実施形態では、本発明は、細胞を殺傷する方法を提供する。本方法は、細胞に前記細胞を殺傷するのに十分な量の本発明の化合物を投与するステップを含む。典型的な実施形態では、化合物は細胞を担持する対象に投与される。更に典型的な実施形態では、投与は、細胞を含む腫瘍（例えば細胞は腫瘍細胞でありうる）の成長を遅延又は停止させるのに役立つ。成長を遅延させるための投与においては、細胞の成長の速度は投与前の成長の速度よりも少なくとも１０％低い必要がある。好ましくは、成長の速度は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％遅延されるか又は完全に停止することになる。
【０４１０】
有効用量：
本発明での使用に適する医薬組成物は、活性成分が治療有効量、すなわちその意図される目的を果たすための有効量で含有された組成物を含む。特定の用途にとって有効な実際の量は、特に治療される状態に依存することになる。有効量の決定は、特に本明細書中の詳細な開示を考慮すると、十分に当業者の能力の範囲内にある。
【０４１１】
本明細書中に記載の任意の化合物においては、治療有効量は最初に細胞培養アッセイから決定されうる。標的血漿濃度は、細胞成長又は分裂を阻害可能な活性化合物の濃度となる。好ましい実施形態では、細胞活性は少なくとも２５％阻害される。は細胞活性の少なくとも約５０％、７５％、若しくは更に９０％若しくはそれより高い阻害を誘発可能な活性化合物の標的血漿濃度が好ましい。患者における細胞活性の阻害のパーセントを監視し、得られる血漿薬剤濃度の適合性を評価することが可能であり、用量を高く又は低く調節することで所望の阻害のパーセントが得られうる。
【０４１２】
当該技術分野で周知のように、ヒトにおいて用いられる治療有効量はまた動物モデルから決定されうる。例えば、ヒトにおける用量を調合し、動物において有効であることが見出されている血中濃度が得られうる。ヒトにおける用量は、上記のように細胞阻害を監視し、用量を高く又は低く調節することにより調節されうる。
【０４１３】
治療有効量はまた、類似の薬理学的活性を示すことで知られる化合物におけるヒトデータから決定されうる。適用される用量は、投与化合物の既知の化合物に対する相対バイオアベイラビリティ及び効力に基づいて調節されうる。
【０４１４】
上記の方法及び当該技術分野で周知の他の方法に基づき、ヒトにおける最大有効性を得るために用量を調節することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０４１５】
局所投与の場合、投与化合物の全身血中濃度は特に重要なものとならない。かかる例では、化合物は意図される結果を得るのに有効な局所領域での濃度を得るように投与される。
【０４１６】
異常な細胞増殖に関連する疾患の予防及び／又は治療での使用においては、約０．００１μＭ〜２０μＭの投与化合物の血中濃度が好ましく、約０．０１μＭ〜５μＭが好ましい。
【０４１７】
本明細書中に記載の化合物の経口投与における患者への用量は、典型的には約１ｍｇ／日〜約１０，０００ｍｇ／日、より典型的には約１０ｍｇ／日〜約１，０００ｍｇ／日、及び最も典型的には約５０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日の範囲である。患者の体重について述べると、典型的用量は、約０．０１〜約１５０ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約０．１〜約１５ｍｇ／ｋｇ／日、及び最も典型的には約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば５ｍｇ／ｋｇ／日又は３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０４１８】
少なくとも一部の実施形態では、腫瘍成長を遅延させるか又は阻害する患者への用量は１μｍｏｌ／ｋｇ／日以下であってもよい。例えば、患者への用量は、薬剤又は薬剤抱合体、例えば抗体−薬剤抱合体の（薬剤のモルに言及すると）０．９、０．６、０．５、０．４５、０．３、０．２、０．１５、若しくは０．１μｍｏｌ／ｋｇ／日以下であってもよい。好ましくは、薬剤又は薬剤抱合体は、少なくとも５日間にわたり１日用量で投与される場合、腫瘍の成長を遅延させるか又は阻害する。少なくとも一部の実施形態では、腫瘍はＳＣＩＤマウスにおけるヒト型の腫瘍である。例として、ＳＣＩＤマウスはＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹから入手可能）であってもよい。
【０４１９】
他の投与様式においては、投与用量及び間隔を個別に調節することで、治療対象の特定の臨床徴候に対して有効な血漿レベルの投与化合物が提供されうる。例えば、一実施形態では、本発明に記載の化合物は、１日に複数回、かなりの高濃度で投与されうる。あるいは、本発明の化合物を最低限の有効濃度で投与しかつ投与頻度が減少した計画を用いることがより望ましい場合がある。これは各疾患の重症度に適合した治療計画を提供することになる。
【０４２０】
本明細書で提供される教示内容を用いると、実質的な毒性を誘発しないだけでなく特定の患者が示す臨床徴候の治療にとって全体的に有効である有効な治療計画を立てることが可能である。この計画は、化合物の効力、相対バイオアベイラビリティ、患者の体重、副作用の存在及び重症度、好ましい投与様式、並びに選択される作用物質の毒性特性などの要素の考察による活性化合物の慎重な選択を含む必要がある。
【０４２１】
本発明の化合物、組成物及び方法は、以下の実施例により更に例示される。これらの実施例は例示目的に提供され、特許請求される本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０４２２】
材料及び方法：
下記の実施例においては、他に指定のない限り、温度は摂氏温度（℃）で与えられ；操作は室温又は周囲温度（典型的には約１８〜２５℃の範囲）で実施され；溶媒の蒸発は最高６０℃の浴温、減圧下（典型的には４．５〜３０ｍｍＨｇ）でロータリーエバポレーターを用いて行われ；反応の経過は典型的にはＴＬＣに従い、反応時間はあくまで例示目的で提供され；融点は未補正であり；生成物は満足できる１Ｈ  ＮＭＲ及び／又は微量分析データを示し；収率はあくまで例示目的で提供され；かつ、ｍｐ（融点）、Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、ｍモル（ミリモル）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｍｉｎ（分）、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）及びｈ（時間）といった従来からの略語も用いられる。
【０４２３】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００ＭＨｚの分光計で測定し、それは指定された構造に一致した。化学シフトはテトラメチルシランからの１００万分の１（ｐｐｍ）の低磁場で報告された。エレクトロスプレー質量スペクトルをＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ  ３６５質量分析計で記録した。元素分析はＲｏｂｅｒｔｓｏｎ  Ｍｉｃｒｏｌｉｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＮＪにより行われた。フラッシュクロマトグラフィーにおけるシリカゲルはＥ．Ｍｅｒｃｋグレード（２３０〜４００メッシュ）であった。逆相分析ＨＰＬＣを、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μｍ  Ｃ−１８（２）  １５０ｍｍ×４．６ｍｍカラム又はＶａｒｉａｎ  Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ−ＭＶ  ０．１μｍ  Ｃ−１８  １５０ｍｍ×４．６ｍｍカラムを備えるＨＰ１１００又はＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１０機器のいずれかで行った。１ｍＬ／分の流速は、２５４ｎｍでのＵＶによる検出では、１５分間にわたる０％〜５０％の緩衝液Ｂ又は１０分間にわたる１０％〜１００％の緩衝液Ｂのいずれかの勾配の場合であった。緩衝液Ａ、２０ｍＭギ酸アンモニウム＋２０％アセトニトリル又はアセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸；緩衝液Ｂ、２０ｍＭギ酸アンモニウム＋８０％アセトニトリル又は０．１％水性トリフルオロ酢酸。逆相分取ＨＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐａｋ  １５μｍ  Ｃ−１８  ３００ｍｍ×７．８ｍｍカラムを備えるＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１５機器上で行った。
【０４２４】
実施例１
【化９６】
2010522693.tif 000098
【０４２５】
化合物１の合成：ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の２−ブロモエチルアミンブロミド（５ｇ、２４．４ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（８．５ｍＬ、４８．８ｍモル）及びクロロギ酸ベンジル（３．４８ｍＬ、２４．４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を、勾配として酢酸エチル／ヘキサン（３／７）の場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１をオイルとして得た（４ｇ、６４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ３．５４（ｂｓ，２Ｈ）、３．６１（ｂｓ，２Ｈ）、５．１２（ｓ，２Ｈ）、７．３６（ｍ，５Ｈ）。
【０４２６】
化合物２の合成：ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の化合物１（３．３４ｇ、１２．９９ｍモル）及びバリンｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．２７ｇ、１５．５９ｍモル）の溶液に、炭酸カリウム（５．３９ｇ、３８．９７ｍモル）及びヨウ化カリウム（２．５９ｇ、１５．５９ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を１００℃で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を、勾配として酢酸エチル／ヘキサン（２／８）の場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２をオイルとして得た（３．１２ｇ、６９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．９２（ｍ，６Ｈ）、１．４６（ｓ，９Ｈ）、１．８６（ｍ，１Ｈ）、２．５３（ｍ，１Ｈ）、２．８０（ｍ，２Ｈ）、３．１８（ｍ，１Ｈ）、３．３１（ｍ，１Ｈ）、５．１０（ｓ，２Ｈ）、５．２５（ｂｓ，１Ｈ）、７．３６（ｍ，５Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）２９６（Ｍ＋Ｈ−ｔブチル＋）、３５２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０４２７】
化合物３の合成：メタノール（３０ｍＬ）中、化合物２（３．４ｇ、９．７２ｍモル）及び活性炭上のパラジウム（２００ｍｇ）の溶液を、室温で水素大気圧下に置いた。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。パラジウムを濾過し、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物３をオイルとして得た（２．１ｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ０．９４（ｍ，６Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）、１．６３（ｂｓ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．４７（ｍ，１Ｈ）、２．７３（ｍ，２Ｈ）。
【０４２８】
化合物４の合成：ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の化合物３（２．１ｇ、９．７２ｍモル）の溶液に、ＦｍｏｃＯＳｕ（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（３．２８ｇ、９．７２ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を０℃で２時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残渣を、勾配として、１００％ジクロロメタン、その後にジクロロメタン中０．５％メタノール、最後にジクロロメタン中１％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物４を無色オイルとして得た（２．５５ｇ、６０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．０３（ｄ，３Ｈ）、１．１４（ｄ，３Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）、２．２８（ｍ，１Ｈ）、３．１４（ｍ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，２Ｈ）、３．８９（ｄ，１Ｈ）、４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．４４（ｍ，２Ｈ）、７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．４０（ｍ，２Ｈ）、７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）３８３（Ｍ＋Ｈ−ｔブチル＋）、４４０（Ｍ＋Ｈ＋）、４６２（Ｍ＋Ｎａ＋）、４７８（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４２９】
化合物５の合成：テトラヒドロフラン−水（３／１，８ｍＬ）中の化合物４（１７７ｍｇ、０．４ｍモル）の溶液にＨＣｌガスを５分間バブリングした。反応混合物を３７℃で一晩撹拌し、次いで混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物５を固体として得（１６８ｍｇ、９８％）、それを更に精製せずに次のステップで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．０４（ｄ，３Ｈ）、１．１４（ｄ，３Ｈ）、２．３２（ｍ，１Ｈ）、３．１８（ｍ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，２Ｈ）、３．９５（ｄ，１Ｈ）、４．２２（ｍ，１Ｈ）、４．４２（ｍ，２Ｈ）、７．２９（ｍ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，２Ｈ）、７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．７９（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）３８３（Ｍ＋Ｈ＋）、４０５（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【０４３０】
化合物６の合成：ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＮ−メチル−１，２−フェニレンジアミン（２ｍＬ、１７．６ｍモル）の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３．３２ｇ、１５．２ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、勾配としてヘキサン中３０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物６を無色オイルとして得た（１．１２ｇ、３２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４６（ｂｓ，９Ｈ）、３．１５（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｂｓ，２Ｈ）、６．７５（ｄ，２Ｈ）、７．０６（ｍ，２Ｈ）。
【０４３１】
化合物７の合成：ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の化合物６（７７７ｍｇ、３．０５ｍモル）の溶液に、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（８１１ｍｇ、３．６６ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（７９６μＬ、４．５７ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、勾配としてヘキサン中１０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物７を黄色固体として得た（１．１７ｇ、９４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４９（ｂｓ，９Ｈ）、２．４７及び２．６１（２ｂｓ，３Ｈ）、７．０５（ｂｄ，１Ｈ）、７．２７（ｍ，２Ｈ）、７．５６〜７．９２（ｍ，５Ｈ）。
【０４３２】
化合物８の合成：ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物７（３２６ｍｇ、０．８ｍモル）の溶液に炭酸カリウム（１６４ｍｇ、１．１９ｍモル）及びヨウ化メチル（１４８μＬ、２．３９ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、勾配としてヘキサン中１０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物８を黄色固体として得た（３７０ｍｇ、６５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．３５及び１．５２（２ｓ，９Ｈ）、３．１６及び３．２１（２ｓ，３Ｈ）、３．２６及び３．２９（２ｓ，３Ｈ）、６．９３（ｄ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．６（ｍ，２Ｈ）、７．６８〜７．８０（ｍ，４Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）４４４（Ｍ＋Ｎａ＋）、４６０（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４３３】
化合物９の合成：ジクロロメタン（５ｍＬ）中の化合物８（３５５ｍｇ、０．８５ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム／アンモニウム（２００ｍＬ）の間を分けた。有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮し、遊離アミン（化合物９）を白色固体として得た（２７０ｍｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２．６８（ｓ，３Ｈ）、３．３０（ｓ，３Ｈ）、６．５６（ｍ，２Ｈ）、６．８８（ｍ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．４８（ｍ，１Ｈ）、７．５７（ｍ，１Ｈ）、７．６５（ｍ，２Ｈ）。
【０４３４】
化合物１０の合成：ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の化合物９（２７０ｍｇ、０．８４ｍモル）の溶液に、トルエン中２Ｎホスゲン（４４０μＬ、２．５ｍモル）を０℃で添加した。混合物を３０分間撹拌し、乾燥するまで濃縮し、化合物１０を白色固体として得（２９７、９２％）、それを更に精製せずに次のステップで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ３．２５及び３．３０（２ｓ，３Ｈ）、３．３４及び３．４４（２ｓ，３Ｈ）、６．９８（ｍ，１Ｈ）、７．２５〜７．４０（ｍ，２Ｈ）、７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５５〜７．８０（ｍ，４Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）３８４（Ｍ＋Ｈ＋）、４０７（Ｍ＋Ｎａ＋）、４２２（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４３５】
化合物１１の合成：ＴＨＦ（３ｍＬ）中１０％ＤＭＦの溶液中の化合物１０（１２０ｍｇ、０．３１ｍモル）の溶液に、Ｂｏｃ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニルアミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル−カルバメート、２３８ｍｇ、０．６２ｍモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（７６ｍｇ、０．６２ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（５５μＬ、０．３１ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を６５℃で１０日間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１１を固体として得た（９０ｍｇ、４０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．４３（ｂｓ，９Ｈ）、１．５６〜１．７０（ｍ，３Ｈ）、１．７９（ｍ，１Ｈ）、３．０６〜３．２７（ｍ，８Ｈ）、４．１７（２ｍ，１Ｈ）、５．０４及び５．１７（２ｂｓ，２Ｈ）、６．８９及び６．９５（２ｄ，１Ｈ）、７．１５〜７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．３７〜７．７２（ｍ，８Ｈ）、７．８０（ｍ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）７２９（Ｍ＋Ｈ＋）、７５１（Ｍ＋Ｎａ＋）、７６７（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４３６】
化合物１２の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１１（８４ｍｇ、０．１１ｍモル）の溶液に、炭酸カリウム（４８ｍｇ、０．３３ｍモル）及びチオフェノール（６０μＬ、０．５５ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１２を固体として得た（５５ｍｇ、８７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．４４（ｂｓ，９Ｈ）、１．５６〜１．７０（ｍ，３Ｈ）、１．７８（ｍ，１Ｈ）、２．７６（ｂｓ，３Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，５Ｈ）、４．１７（ｂｓ，１Ｈ）、４．９９（ｂｓ，２Ｈ）、６．６２（ｍ，２Ｈ）、６．９３（ｍ，１Ｈ）、７．１５（ｍ，２Ｈ）、７．４０〜７．６０（ｍ，３Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、５６６（Ｍ＋Ｎａ＋）、５８１（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４３７】
化合物１３の合成：ジクロロメタン（３ｍＬ）中の化合物１２（６５ｍｇ、０．１２ｍモル）の溶液に、トルエン中２Ｎホスゲン（１８０μＬ、０．３６ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を０℃で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得（７２ｍｇ、１００％）、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４３８】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中５％Ｎ−メチルピロリドン中のオイル（７２ｍｇ、０．１２ｍモル）の溶液に、化合物１８（下記の実施例２を参照）（２５ｍｇ、０．０６ｍモル）及びＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２２ｍｇ、０．１８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１３をオイルとして得た（１５ｍｇ、３５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．４２（ｂｓ，９Ｈ）、１．４５〜１．８０（ｍ，４Ｈ）、２．９７（ｂｓ，６Ｈ）、３．１０〜３．３６（ｍ，７Ｈ）、３．５７（ｂｓ，３Ｈ）、３．９８（ｂｓ，１Ｈ）、４．１０〜４．３５（ｍ，４Ｈ）、４．５０〜４．７５（ｍ，３Ｈ）、５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、７．１６〜７．９５（ｍ，１６Ｈ）、８．２（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１０３４（Ｍ＋Ｈ＋）、１０５６（Ｍ＋Ｎａ＋）、１０７３（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４３９】
化合物１４の合成：ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物１３（１３ｍｇ、０．０１１ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４４０】
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のＴＦＡアミン塩（ＴＦＡ  ｓａｌｔｅｄ  ａｍｉｎｅ）の溶液に、化合物５（５ｍｇ、０．０１２ｍモル）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）（６ｍｇ、０．０１３ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（８μＬ、０．０４４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１４をオイルとして得た（９ｍｇ、５０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０３及び１．１０（２ｍ，６Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）、２．２０（ｍ，１Ｈ）、２．９９（ｓ，６Ｈ）、３．０４〜３．５０（ｍ，１１Ｈ）、３．６０（ｂｓ，３Ｈ）、３．８（ｂｓ，１Ｈ）、４．００（ｂｓ，１Ｈ）、４．２０〜４．４５（ｍ，６Ｈ）、４．５０〜４．７５（ｍ，４Ｈ）、５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、７．２０〜７．７０（ｍ，２２Ｈ）、７．７７（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｂｓ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１３００（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０４４１】
化合物１５の合成：ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の化合物１４（９ｍｇ、０．００６ｍモル）の溶液に、ピペリジン（６μＬ、０．０６ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４４２】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中１０％ＤＭＦの溶液中のオイルの溶液に、（Ｎ−｛ｙ−マレイミドブチルオキシ（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔｙｒｌｏｘｙ）｝スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）（３．５ｍｇ、０．０１２ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（２μＬ、０．０１２ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１５をオイルとして得た（６．５ｍｇ、７５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０４〜１．１３（ｍ，６Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．７５（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，３Ｈ）、２．２３（ｍ，３Ｈ）、２．９８及び３．０１（２ｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２５（ｍ，６Ｈ）、３．６０（ｍ，２Ｈ）、３．４５〜３．５５（ｍ，６Ｈ）、３．６４（ｔ，２Ｈ）、３．８０（ｍ，２Ｈ）、４．０５（ｍ，１Ｈ）、４．３５（ｂｓ，１Ｈ）、４．４１（ｍ，２Ｈ）、４．５５（ｍ，２Ｈ）、４．８０（ｍ，１Ｈ）、５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、６．７８（ｓ，２Ｈ）、７．２２（ｄｄ，２Ｈ）、７．３５〜７．６５（ｍ，１１Ｈ）、７．９０〜８．００（ｍ，３Ｈ）、７．７７（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｂｓ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１２４３（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０４４３】
実施例２
【化９７】
2010522693.tif 000099
【化９８】
2010522693.tif 000100
【０４４４】
化合物１６の合成：ＤＭＦ（４５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（２ｇ、３．９８ｍモル）の溶液に、ピペリジン（５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残渣を、勾配として、１００％ジクロロメタン、その後のジクロロメタン中１０％メタノール、最後にジクロロメタン中３０％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨを無色オイルとして得た（１ｇ、９０％）。
【０４４５】
ＤＭＦ（４ｍＬ）中のＨ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ（８０ｍｇ、０．２８ｍモル）の溶液に、化合物５（１００ｍｇ、０．２４ｍモル）（調製については実施例１を参照）、ＨＡＴＵ（１００ｍｇ、０．２６ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（１２５μＬ、０．８４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１６をオイルとして得た（１１９ｍｇ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０３〜１．１１（２ｄ，６Ｈ）、１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．７７（ｍ，１Ｈ）、１．８８（ｍ，１Ｈ）、２．２３（ｍ，１Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．４４（ｍ，２Ｈ）、３．８３（ｄ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．３９（ｍ，２Ｈ）、４．５４（ｂｓ，２Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、７．３０（ｍ，４Ｈ）、７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．６２（ｍ，２Ｈ）、７．７７（ｍ，２Ｈ）、８．８０（ｄ，１Ｈ）、１０．０５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、６４６（Ｍ＋Ｈ＋）、６６８（Ｍ＋Ｎａ＋）、６８４（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４４６】
化合物１７の合成：ジクロロメタン（４ｍＬ）中１０％ＮＭＰ中の化合物１６（１９０ｍｇ、０．２５ｍモル））の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１３１μＬ、０．７５ｍモル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１５ｍｇ、０．１２ｍモル）及びクロロギ酸４−ニトロフェニル（１０１ｍｇ、０．５ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１７をオイルとして得た（１５１ｍｇ、６５％）。（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０４〜１．１１（２ｄ、６Ｈ）、１．５９（ｍ、２Ｈ）、１．７９（ｍ、１Ｈ）、１．８９（ｍ、１Ｈ）、２．２４（ｍ、１Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ、４Ｈ）、３．４４（ｍ、２Ｈ）、３．８３（ｄ、１Ｈ）、４．２０（ｍ、１Ｈ）、４．３９（ｍ、２Ｈ）、４．６０（ｍ、１Ｈ）、５．２２（ｂｓ、１Ｈ）、７．２９（ｍ、２Ｈ）、７．３９（ｍ、４Ｈ）、７．６０（ｍ、４Ｈ）、７．７５（ｄ、２Ｈ）、８．８１（ｄ、１Ｈ）、１０．０５（ｓ、１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、８１１（Ｍ＋Ｈ＋）、８３３（Ｍ＋Ｎａ＋）、８４８（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４４７】
化合物１９の合成：ジクロロメタン（８ｍＬ）中４０％ＴＨＦ中の化合物１８（５０ｍｇ、０．１１ｍモル））の溶液に、クロロギ酸４−ニトロフェニル（８７ｍｇ、０．４３ｍモル）及びトリエチルアミン（８８μＬ、０．６４ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を室温に温めておき、一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルでの沈殿により単離後、濾過し、ＰＮＰＣ−１８を黄色固体として得た（６０ｍｇ、９０％）。
【０４４８】
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のＰＮＰＣ−１８（６０ｍｇ、０．０９５ｍモル）の溶液に、化合物Ｂｏｃ−ピペラジン（７１ｍｇ、０．３８ｍモル）及びトリエチルアミン（５３μＬ、０．３８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１８をオイルとして得た（７７ｍｇ、９０％）。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、６７８（Ｍ＋Ｈ＋）、７００（Ｍ＋Ｎａ＋）、７１６（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４４９】
化合物２０の合成：ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物１９（２８ｍｇ、０．０３５ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４５０】
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のオイルの溶液に、化合物１７（２８ｍｇ、０．０３５ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（１８μＬ、０．１０５ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２０をオイルとして得た（３６ｍｇ、７０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０３〜１．１０（２ｄ，６Ｈ）、１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．７７（ｍ，１Ｈ）、１．８７（ｍ，１Ｈ）、２．２３（ｍ，１Ｈ）、２．９７（ｂｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．３０〜３．８５（ｍ，１４Ｈ）、３．９７（ｍ，１Ｈ）、４．１９〜４．４１（ｍ，６Ｈ）、４．６０（ｍ，２Ｈ）、４．６９（ｍ，１Ｈ）、５．１１（ｂｓ，２Ｈ）、７．１６（ｄｄ，１Ｈ）、７．２７〜７．３８（ｍ，７Ｈ）、７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５１〜７．６３（ｍ，７Ｈ）、７．７６（ｄ，２Ｈ）、７．８５（ｄ，２Ｈ）、８．２４（ｂｓ，１Ｈ）、８．７９（ｄ，１Ｈ）、１０．００（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１２４８（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０４５１】
化合物２１の合成：ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物２０（３６ｍｇ、０．０２４ｍモル）の溶液に、ピペリジン（１２μＬ、０．１２ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４５２】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中１０％ＤＭＦ中のオイルの溶液に、ＭＡＬ−ＰＥＧ４−ＮＨエステル（１９ｍｇ、０．０３７ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（８．５μＬ、０．０４８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２１をオイルとして得た（２５ｍｇ、６２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０６〜１．１２（２ｄ，６Ｈ）、１．５９（ｍ，２Ｈ）、１．７８（ｍ，１Ｈ）、１．８９（ｍ，１Ｈ）、２．２４（ｍ，１Ｈ）、２．４４（ｔ，２Ｈ）、２．５０（ｔ，２Ｈ）、２．９９（ｂｓ，６Ｈ）、３．０５〜３．２０（ｍ，４Ｈ）、３．４６〜３．８５（ｍ，３４Ｈ）、３．９９（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｍ，１Ｈ）、４．３５（ｍ，２Ｈ）、４．５９〜４．７３（ｍ，３Ｈ）、５．１３（ｂｓ，２Ｈ）、６．７９（ｓ，２Ｈ）、７．１８（ｄｄ，１Ｈ）、７．３１（ｄ，１Ｈ）、７．３６（ｍ，２Ｈ）、７．４７（ｍ，１Ｈ）、７．５８（ｍ，５Ｈ）、７．８９（ｍ，２Ｈ）、８．２４（ｂｓ，１Ｈ）、８．７９（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１４２３（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０４５３】
化合物２２の合成：ＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物２０（２６ｍｇ、０．０１７ｍモル）の溶液に、ピペリジン（９μＬ、０．０８８ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４５４】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中１０％ＤＭＦ中のオイルの溶液に、ＧＭＢＳ（７．５ｍｇ、０．０２５ｍモル）及びジイソプロピルエチルアミン（６μＬ、０．０３４ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２２をオイルとして得た（１３ｍｇ、５２％）。δ１．０７〜１．１３（２ｄ、６Ｈ）、１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．７８（ｍ、１Ｈ）、１．９０（ｍ、３Ｈ）、２．２４（ｍ、３Ｈ）、３．００（ｂｓ、６Ｈ）、３．０５〜３．２４（ｍ、４Ｈ）、３．４２〜３．７４（ｍ、１６Ｈ）、３．７８〜３．９０（ｍ、４Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、４．３４（ｍ、１Ｈ）、４．３９（ｍ、２Ｈ）、４．６０（ｍ、１Ｈ）、４．８０（ｍ、２Ｈ）、５．１４（ｂｓ、２Ｈ）、６．８１（ｓ、２Ｈ）、７．２２（ｄｄ、１Ｈ）、７．３７（ｍ、３Ｈ）、７．５０（ｍ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、５Ｈ）、７．９２（ｍ、２Ｈ）、８．２４（ｂｓ、１Ｈ）、８．７９（ｄ、１Ｈ）、１０．０５（ｓ、１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、１１９１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０４５５】
実施例３
【化９９】
2010522693.tif 000101
【化１００】
2010522693.tif 000102
【０４５６】
化合物２３の合成：ジクロロメタン（１００ｍＬ）中５０％メタノール中の５−ニトロインドール−２カルボン酸エチル（２ｇ、８．５ｍモル）及び活性炭上のパラジウム（２００ｍｇ）の溶液を、室温で水素大気圧下に置いた。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。パラジウムを濾過し、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物２３を無色オイルとして得た（１．６８ｇ、９７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．３８（ｔ，３Ｈ）、４．３４（ｑ，２Ｈ）、６．８６（ｄｄ，１Ｈ）、６．９５（ｄ，１Ｈ）、６．９８（ｄ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ）。
【０４５７】
化合物２４の合成：ジクロロメタン（５ｍＬ）中の化合物２３（３００ｍｇ、１．４７ｍモル）の溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（３８５ｍｇ、１．７６ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を、勾配としてヘキサン中１０％酢酸エチルの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２４を白色固体として得た（２７２ｍｇ、６１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．３９（ｔ，３Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）、４．３７（ｑ，２Ｈ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、７．２３（ｄｄ，１Ｈ）、７．３４（ｄ，１Ｈ）、７．６８（ｂｓ，１Ｈ）。
【０４５８】
化合物２５の合成：エタノール（３ｍＬ）中の化合物２４（１００ｍｇ、０．３３ｍモル）の溶液に、水（１ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１２ｍｇ、０．４９ｍモル）の溶液を添加した。このようにして得た混合物を５０℃で室温で２時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得た。残渣を水に溶解し、１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化後、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、乾燥するまで濃縮し、化合物２５を無色オイルとして得た（８５ｍｇ、９２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５１（ｓ，９Ｈ）、７．０７（ｄ，１Ｈ）、７．２３（ｄｄ，１Ｈ）、７．３３（ｄ，１Ｈ）、７．６８（ｂｓ，１Ｈ）。
【０４５９】
化合物２６の合成：ジクロロメタン（３ｍＬ）中３０％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨ（２０６ｍｇ、０．５２ｍモル）の溶液に、ＥＤＣ（１２０ｍｇ、０．６２ｍモル）、ＨＯＢｔ（８４ｍｇ、０．６２ｍモル）及びｔｅｒｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１２０ｍｇ、０．６２ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を１０分間撹拌し、次いで塩化銅（８４ｍｇ、０．６２ｍモル）を混合物に添加した。混合物を一晩撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残渣を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２６を無色オイルとして得た（１８４ｍｇ、６２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５３〜１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．５７（ｓ，９Ｈ）、１．７１（ｍ，１Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｍ，１Ｈ）、３．１９（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，１Ｈ）、４．３８（ｍ，２Ｈ）、７．２８〜７．３９（ｍ，３Ｈ）、７．４９（ｍ，２Ｈ）、７．５６〜７．８６（ｍ，５Ｈ）、７．８９（ｍ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、５７３（Ｍ＋Ｈ＋）、５９５（Ｍ＋Ｎａ＋）、６１１（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４６０】
化合物２７の合成：ＤＭＦ（１８ｍＬ）中の化合物２６（１ｇ、１．７５ｍモル）の溶液に、ピペリジン（２ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残渣を、勾配として、１００％ジクロロメタン、その後にジクロロメタン中５％メタノール、最後にジクロロメタン中２０％メタノールの場合でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、無色オイルを得た（５６１ｍｇ、９２％）。
【０４６１】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のオイル（５６１ｍｇ、１．６ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（６７９μＬ、３．９ｍモル）、化合物５（５０９ｍｇ、１．３ｍモル）（調製については実施例１を参照）及びＨＡＴＵ（４９４ｍｇ、１．３ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を乾燥するまで濃縮し、次いで残渣を、勾配としてジクロロメタン中５％メタノールの場合にシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２７を無色オイルとして得た（６９１ｍｇ、６５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．３６（ｄｄ，６Ｈ）、１．５８〜１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．６（ｓ，９Ｈ）、１．７１（ｍ，１Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、２．００（ｍ，１Ｈ）、２．６５（ｍ，２Ｈ）、３．２〜３．３（ｍ，４Ｈ）、３．７０（ｍ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，２Ｈ）、４．３８（ｍ，２Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、７．２８〜７．３９（ｍ，４Ｈ）、７．６０〜７．７０（ｍ，４Ｈ）、７．８（ｄ，２Ｈ）、７．８９（ｄ，２Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、７１６（Ｍ＋Ｈ＋）、７３７（Ｍ＋Ｎａ＋）、７５３（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４６２】
化合物２８の合成：ＤＭＦ（９ｍＬ）中の化合物２７（３００ｍｇ、０．４５ｍモル）の溶液に、ピペリジン（１ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それをエーテル（２０ｍＬ）中にクラッシュアウトした（ｃｒａｓｈｅｄ  ｏｕｔ）。材料を濾過し、白色固体を得た（１８６ｍｇ、８４％）。
【０４６３】
ジクロロメタン（１ｍＬ）中の遊離アミン（３２ｍｇ、０．０６５ｍモル）の溶液に、ＭＡＬ−ＰＥＧ４−ＮＨエステル（５０ｍｇ、０．０９７ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２８をオイルとして得た（４７ｍｇ、９５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．１０及び１．１５（２ｄ，６Ｈ）、１．５８〜１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．６（ｓ，９Ｈ）、１．７５（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５（ｔ，２Ｈ）、３．１０〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．４５〜３．６５（ｍ，１６Ｈ）、３．７５（ｍ，４Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、６．８０（ｓ，２Ｈ）、７．６７（ｄ，２Ｈ）、７．９０（ｄ，２Ｈ）、８．８０（ｄ，１Ｈ）、１０．２０（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、８９１（Ｍ＋Ｈ＋）、９１３（Ｍ＋Ｎａ＋）、９２９（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４６４】
化合物２９の合成：ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物２８（４７ｍｇ、０．０６２ｍモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物２９をオイルとして得（４０ｍｇ、９２％）、それを更に精製せずに次のステップで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．１０及び１．１５（２ｄ，６Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５（ｔ，２Ｈ）、３．１０〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、３．３０（ｍ，２Ｈ）、３．４５〜３．６５（ｍ，１６Ｈ）、３．７５（ｍ，４Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、６．８０（ｓ，２Ｈ）、７．６７（ｄ，２Ｈ）、７．９５（ｄ，２Ｈ）、８．８０（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、８３６（Ｍ＋Ｈ＋）、８５８（Ｍ＋Ｎａ＋）、８７４（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４６５】
化合物３１の合成：ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中の３０（１００ｍｇ、０．２ｍモル）の溶液に、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）中の濃縮されたＨＢｒ溶液を室温で添加した。１時間後、Ｂｏｃの脱保護を完了した。沈殿した材料を濾過した（定量的収率）。次いで、ＴＦＡアミン塩をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。この溶液に、化合物２５（５５ｍｇ、０．２ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（１７３μＬ、１ｍモル）及びＨＡＴＵ（７９ｍｇ、０．２ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物３１を白色固体として得た（８６ｍｇ、５７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５４（ｓ，９Ｈ）、２．９１（ｓ，３Ｈ）、３．１０〜３．６０（ｍ，８Ｈ）、３．７２（ｍ，１Ｈ）、３．９７（ｍ，１Ｈ）、４．３０〜４．６０（ｍ，３Ｈ）、６．９４（ｂｓ，１Ｈ）、７．０５（ｍ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，１Ｈ）、７．４５（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，１Ｈ）、７．７５（ｂｓ，１Ｈ）、７．８６（ｄ，１Ｈ）、８．２３（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、５６２（Ｍ＋Ｈ−１００＋）、６０６（Ｍ＋Ｈ−５６＋）、６６２（Ｍ＋Ｈ＋）、６８５（Ｍ＋Ｎａ＋）、７０１（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４６６】
化合物３２の合成：ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中の化合物３１（３０ｍｇ、０．０３９ｍモル）の溶液に、アニソール（１００μＬ）及びトリフルオロ酢酸（０．４ｍＬ）を室温で添加した。このようにして得た混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、オイルを得、それを更に精製せずに次のステップで用いた。
【０４６７】
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のオイルの溶液に、化合物２９（３６ｍｇ、０．０３９ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（４０μＬ、０．２３ｍモル）及びＨＡＴＵ（１５ｍｇ、０．０３９ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物３２をオイルとして得た（３６ｍｇ、６０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０９及び１．１５（２ｄ，６Ｈ）、１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．８１（ｍ，１Ｈ）、１．９３（ｍ，１Ｈ）、２．２７（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５１（ｔ，２Ｈ）、２．９８（ｓ，３Ｈ）、３．１３〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、３．４７〜３．６２（ｍ，２４Ｈ）、３．７６（ｍ，４Ｈ）、３．８２（ｍ，１Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．５５〜４．７０（ｍ，４Ｈ）、６．７９（ｓ，２Ｈ）、７．０６（ｓ，１Ｈ）、７．３６（ｂｓ，１Ｈ）、７．４３〜７．５４（ｍ，２Ｈ）、７．７２〜７．８１（ｍ，３Ｈ）、７．９１（ｍ，３Ｈ）、８．０５（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）、８．８２（ｄ，１Ｈ）、１０．２５（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）、６９１（Ｍ＋２Ｈ＋）／２、１３８１（Ｍ＋Ｈ＋）、１４１９（Ｍ＋Ｋ＋）。
【０４６８】
実施例４
【化１０１】
2010522693.tif 000103
【０４６９】
化合物３の合成：塩化ブロモアセチル２（２４０μＬ、２．８６ｍモル）を、ジクロロメタン１０ｍＬ中のベンジル２−アミノエチルカルバメート１（５００ｍｇ、２．６ｍモル）及びＴＥＡ（８００μＬ、５．７ｍモル）の溶液に０℃で滴下添加した。反応混合物を２時間撹拌しておき、温度を徐々に室温まで高めた。溶媒を蒸発させた後、水系後処理（ａｑｕｅｏｕｓ  ｗｏｒｋ  ｕｐ）を行い、酢酸エチルで抽出した。有機層を１０％クエン酸、水及び飽和重炭酸ナトリウム及び塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、化合物３を得た（２６０ｍｇ、３２％の収率）。ＭＳ：Ｍ＋１＝３１５．３。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：７．３７ｐｐｍ（５Ｈ）、５．１１ｐｐｍ（２Ｈ）、３．８３ｐｐｍ（２Ｈ）、３．４０ｐｐｍ（４Ｈ）。
【化１０２】
2010522693.tif 000104
【０４７０】
化合物６の合成：１．５ｇのＦｍｏｃ−シトルリン５（０．００３８モル）、０．８８ｇのｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート４（０．００４５モル）、０．６ｇのＨＯＢｔ０．００４５モル）、０．６８ｇのＥＤＣ（０．００４３モル）及び触媒量の塩化銅を、ＤＣＭ／ＤＭＦ（２：１）の混合物９ｍＬ中で一晩撹拌させた。溶媒を除去し、生成物を、ＤＣＭ中５〜１０％ＭｅＯＨを用い、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物６を得た（１．５４ｇ、７１％の収率）。ＭＳ：Ｍ＋１＝５７３．９。
【化１０３】
2010522693.tif 000105
【０４７１】
化合物８の合成：化合物６、３００ｍｇ、０．６６ｍモルにおけるＦｍｏｃ保護基の脱保護を、ＤＭＦ中５％ピペリジンを用いて２０分間で行った。溶媒を蒸発させ、粗固体をジエチルエーテルですすぎ、２３０ｍｇの化合物７を得た（９９％の収率）。ＭＳ：Ｍ＋１＝３５２。
【０４７２】
２３０ｍｇの化合物７（０．６５ｍモル）を、ＤＣＭ中５〜１０％  ＭｅＯＨシリカゲル上での精製後、ＤＭＦ及びＤＣＭ中のＦｍｏｃ−バリン３３３ｍｇ（０．９８ｍモル）及びＥＤＣ（０．９８ｍモル）１８８ｍｇと反応させ、２４０ｍｇの化合物８を得た（５５％の収率）。ＭＳ：Ｍ＋１＝６７３。
【化１０４】
2010522693.tif 000106
【０４７３】
化合物１０の合成：５００ｍｇの化合物８（０．７５ｍモル）を、ＤＭＦ中ピペリジンを用いて脱保護し、化合物９を得、溶媒の除去後、それをジエチルエーテルですすいだ。化合物９を、追加精製なしに１２５ｍｇのＫＩ（０．７５ｍモル）及びトリエチルアミン３１３μＬの存在下で２３５ｍｇの３（０．７５ｍモル）と４０℃で２時間反応させた。粗反応混合物を濃縮し、逆相ＨＰＬＣにより精製し、５５．８％の収率で３００ｍｇの化合物１０を得た。ＭＳ：Ｍ［＋１］＝６８５。
【化１０５】
2010522693.tif 000107
【０４７４】
化合物１１の合成：化合物１０（３００ｍｇ）をＨＣＬ−ＥＡで３時間脱保護した。溶媒を蒸発させ、生成物を高真空下で乾燥し、化合物１１を得た。ＭＳ：Ｍ［＋１］＝６２８。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：１０．４５ｐｐｍ（１Ｈ）、８．８ｐｐｍ（１Ｈ）、８．５（１Ｈ）、７．８８ｐｐｍ（２Ｈ）、７．７５ｐｐｍ（２Ｈ）、７．３ｐｐｍ（５Ｈ）、６．１（１Ｈ）、５．５（２Ｈ）、４．９９（２Ｈ）、４．５ｐｐｍ（１Ｈ）、３．７〜３．４（３Ｈ）、３．２〜２．９（５Ｈ）、２．１６（１Ｈ）、１．４５（２Ｈ）、１．１（３Ｈ）、０．９２ｐｐｍ（３Ｈ）。
【化１０６】
2010522693.tif 000108
【０４７５】
化合物１４の合成：ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の化合物１２（４２ｍｇ、０．０９ｍモル）の溶液を２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に高真空下で４時間乾燥した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の残渣に対し、５−（アミノ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−インドール−２−カルボン酸（３９．２ｍｇ、０．１４ｍモル）及びＢＯＰ（７１ｍｇ、０．１６ｍモル）を添加後、ＤＩＰＥＡ（８３μＬ、０．４８ｍモル）を添加した。反応混合物を２５℃で２０分間撹拌し、シリカゲルの短いカラムを通過させた。溶媒を除去し、粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃで溶出し、化合物１４を得た（４９ｍｇ、８８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．６３（ｓ，１Ｈ）、９．１８（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．０９（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．７９（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．５３〜７．５８（ｍ，３Ｈ）、７．３９〜７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．２８〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．１１（ｓ，１Ｈ）、５．２９（ｓ，２Ｈ）、４．８０（ｔ，１Ｈ，１１．２Ｈｚ）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【化１０７】
2010522693.tif 000109
【０４７６】
化合物１５の合成：ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、１０ｍｌ）中の化合物１４（４９ｍｇ、０．０８ｍモル）及び１０％Ｐｄ−Ｃ（３５ｍｇ）の混合物を真空下で４０秒間脱気した。得られた混合物を水素雰囲気下に置き、２５℃で７時間撹拌した。反応混合物を、セライトを通して濾過した（ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２洗浄）。溶媒を真空下で除去した。シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＤＣＭ中２％ＭｅＯＨで溶出し、化合物１５を得た（４０．６ｍｇ、９７％）。１ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．５９（ｓ，１Ｈ）、１０．４３（ｓ，１Ｈ）、９．１８（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．９３（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７８（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２７〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｔ，１Ｈ，１１．２Ｈｚ）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【化１０８】
2010522693.tif 000110
【０４７７】
化合物１６の合成：ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）中、化合物１５（３６ｍｇ、０．０７ｍモル）、４−メチル−１−ピペラジンカルボニルクロリド塩酸塩（２０ｍｇ、０．１０ｍモル）、アリルアルコール（０．１ｍＬ）及び無水ピリジン（６３μｌ）の溶解混合物を室温で１６時間撹拌した。粗生成物に対し、溶媒を除去せずに、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ２Ｃｌ２中２％〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、化合物１６を得た（３２．４ｍｇ、７３％）。１ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．５９（ｓ，１Ｈ）、９．１８（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．９３（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７８（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２７〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｔ，１Ｈ，１１．２Ｈｚ）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、３．７７（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．４７（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．３７（ｂｒｓ，２Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）、２．３８（ｂｒｓ，２Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【化１０９】
2010522693.tif 000111
【０４７８】
化合物１７の合成：ＥｔＯＡｃ（４ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の化合物１６（３２ｍｇ、０．０５ｍモル）の溶液を２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に高真空下で４時間乾燥した。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の残渣に対し、化合物１１（４８．２ｍｇ、０．０７ｍモル）及びベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）（３４．５ｍｇ、０．０８ｍモル）を添加後、ＤＩＰＥＡ（６８μＬ）を添加し、反応混合物を２５℃で２５分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、生成物を、勾配として５分間の１０％アセトニトリル、１５分間の１０％〜５０％のアセトニトリルを用い、５０％アセトニトリルを５分間、５０％〜１００％のアセトニトリルを５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、化合物１７を得た（４２．１ｍｇ、６４％）。ＭＳ：Ｃ５８Ｈ６７ＢｒＮ１２Ｏ１０（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １１７１．４３  実測値  １１７２．４０。
【化１１０】
2010522693.tif 000112
【０４７９】
化合物１８の合成：ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の化合物１７（３３．６ｍｇ、０．０２５ｍモル）の溶液に、１０％Ｐｄ−Ｃ（２８ｍｇ）を添加し、混合物をＮ２下で脱気した。反応混合物をＨ２で洗い流し、次いで水素雰囲気下で撹拌した。反応終了時（４０分）、反応混合物を濾過し、濃縮し、化合物１８を得た（３１．５ｍｇ、９６％）。ＭＳ：Ｃ５０Ｈ６１ＢｒＮ１２Ｏ８（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １０３７．３９  実測値  １０３８．２０。
【化１１１】
2010522693.tif 000113
【０４８０】
化合物１９の合成：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物１８（３１．５ｍｇ、０．０２４ｍモル）の溶液に、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中のＭａｌ−ＰＥＧ４−ＮＨＳエステル（４２ｍｇ、０．０８ｍモル）を添加した。反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。最終生成物を、勾配として５分間の１０％アセトニトリル、１５分間の１０％〜５０％のアセトニトリルを用い、５０％アセトニトリルを５分間、５０％〜１００％のアセトニトリルを５分間維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（水／アセトニトリル中０．０１％ＴＦＡ）で溶出し、化合物１９を得た（２９．７ｍｇ、７７％）。ＭＳ：Ｃ６８Ｈ８７ＢｒＮ１４Ｏ１６  （Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １４３５．５６  実測値  １４３７．００。
【０４８１】
実施例５
【化１１２】
2010522693.tif 000114
【０４８２】
５４ｍｇ（０．１０７ｍモル）の化合物ＡをＨＢｒ−酢酸エチル中で３０分間撹拌し、溶媒を蒸発させ、化合物Ｂを得、それを高真空下で乾燥した。３３．３ｍｇ（０．０５３ｍモル）のＢを、ＤＭＦ１．５ｍＬ中ＥＤＣ２２．６ｍｇ（０．１１８ｍモル）の存在下で５−Ｂｏｃ−アミノインドール−２−カルボン酸２９．６ｍｇ（０．１０７ｍモル）と２時間反応させ、Ｃを得た。化合物Ｃを、シリカゲル・カラムクロマトグラフィー、５〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭにより精製し、２１ｍｇの化合物Ｃを得た（６０％の収率）。ＭＳ  Ｍ［＋１］＝６６２、Ｍ［＋Ｎａ］＝６８５、Ｍ［＋Ｋ］＝７０１。
【化１１３】
2010522693.tif 000115
【０４８３】
２１ｍｇ（０．０３２ｍモル）の化合物Ｃを、ＨＢｒ−酢酸エチルの溶液で３０分間処理し、溶媒を蒸発させ、残渣を高真空下で乾燥し、更に無水ＤＭＦ２ｍＬ中、１８．３ｍｇ（０．０５３ｍモル）のＨＡＴＵ、トリエチルアミン（０．６３ｍモル）１０μＬの存在下で１１．４ｍｇ（０．０３２ｍモル）のＢｏｃ−４−アミノ安息香酸と室温で４時間反応させた。溶媒を蒸発させ、逆相ＨＰＬＣにより精製し、１４ｍｇ（０．０１８ｍモル）の化合物Ｅを５６％の収率で得た。Ｍ［＋１］＝７８２。
【０４８４】
化合物ＥのＢｏｃ脱保護をＨＢｒ−酢酸エチル溶液中で行い、逆相ＨＰＬＣによる精製により、１２ｍｇの化合物Ｆを得た（９８％の収率）。Ｍ［＋１］＝６８１．８。
【０４８５】
実施例６
【化１１４】
2010522693.tif 000116
【０４８６】
化合物２：乾燥メタノール（２０ｍＬ）中のインドール−４−カルボキサルデヒド（１、５８３ｍｇ、４ｍモル）及びアジド酢酸メチル（４６０ｍｇ、４０ｍモル）の溶液に、メタノール中ナトリウムメトキシドを、Ｎ２下、−２５℃（ドライアイス／ＣＣｌ４）で滴下添加した（２５％ＮａＯＭｅ６．９ｍＬ、３２ｍモル）。反応混合物を０℃に温め、３．５時間撹拌した。反応混合物を水（１２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。結合抽出物を飽和水性ＮａＣｌ（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を真空下で除去し、２を得た（８９０ｍｇ、９１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２８（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４５（ｓ，１Ｈ）、７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ）、７．２６（ｓ，１Ｈ）、６．７３（ｂｒｓ，１Ｈ）、３．９６（ｓ，３Ｈ）。
【化１１５】
2010522693.tif 000117
【０４８７】
化合物３：乾燥キシレン（１００ｍＬ）中、メチル２−アジド−３−（１Ｈ−インドール−４−イル）アクリレート（２、８９０ｍｇ、３．６８ｍモル）の懸濁液をＮ２下で１時間還流させた。溶媒を真空下で除去し、残渣をシリカゲルのカラムを通過させ（３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）、３を得た（６６３ｍｇ、８５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．９７（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．３６（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２Ｈｚ）、７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．２６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、６．８２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）。
【化１１６】
2010522693.tif 000118
【０４８８】
化合物４：Ｎ２下、１５℃での氷酢酸（９ｍＬ）中のメチルピロロ［３，２−ｅ］インドール−２−カルボキシレート（３、６６３ｍｇ、３．１ｍモル）の溶液をシアノ水素化ホウ素ナトリウム（６００ｍｇ、９．５ｍモル）に添加し、反応混合物を２．５時間撹拌した（１３〜１８℃）。反応混合物を水（６０ｍＬ）に注ぎ、固体炭酸ナトリウムを注意深く添加してｐＨを８〜９にした。水性混合物をＥｔＯＡｃ（３×６０ｍＬ）で抽出し、結合抽出物を乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を真空下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により４を得た（５６２ｍｇ、８４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．８５（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．０４（ｓ，１Ｈ）、６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．６８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、３．２４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）。
【化１１７】
2010522693.tif 000119
【０４８９】
化合物５：乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）中のメチル１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（４、４５０ｍｇ、１．４２ｍモル）の溶液を、Ｎ２下、２５℃で二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６２１ｇ、２．８ｍモル）で処理した。反応混合物を１６時間撹拌し、次いで溶媒を真空下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により５を得た（５５１ｍｇ、８４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．７８（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２６（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、４．１２（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、１．５７（ｓ，９Ｈ）。
【化１１８】
2010522693.tif 000120
【０４９０】
化合物６：ＬｉＯＨの水溶液（４．０Ｍ溶液２．２ｍＬ、８．７ｍモル）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：２：１）６０ｍＬ中のメチル３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（５、５５１ｍｇ、１．７４ｍモル）のスラリーに添加し、反応混合物を２５℃で１４時間撹拌した。反応混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、次いで２Ｎ  ＨＣｌでｐＨを４に調節し、白色沈殿を得た。固体を濾過により回収し、水（１０ｍＬ）で洗浄した。高真空下で固体を乾燥し、６を得た（５２４ｍｇ、９９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．９３（ｂｒｓ，１Ｈ）、１１．６９（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．９１（ｓ，１Ｈ）、３．９６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、３．１８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、１．４８（ｓ，９Ｈ）。
【化１１９】
2010522693.tif 000121
【０４９１】
化合物９：ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の７（４８ｍｇ、０．１ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に高真空下で４時間乾燥した。残渣に、３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボン酸（６、３６．２４ｍｇ、０．１２ｍモル）を添加した。ＤＭＦ（３ｍｌ）中のＥＤＣ（２２．９ｍｇ、０．１２ｍモル）の溶液を添加し、反応混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を除去した。粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ２Ｃｌ２中３〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、９を得た（２６ｍｇ、４０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．６９（ｓ，１Ｈ）、８．１７（ｓ，１Ｈ）、８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．８１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．５９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、４．８７（ｔ，１Ｈ，１０Ｈｚ）、４．５４（ｄ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．４３（ｂｒｓ，１Ｈ）、３．８９〜４．０３（ｍ，４Ｈ）、３．７６（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．４６（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．２６（ｍ，２Ｈ）、２．４６（ｂｒｓ，２Ｈ）、２．３８（ｂｒｓ，２Ｈ）、２．２４（ｓ，３Ｈ）、１．４９（ｓ，９Ｈ）。
【化１２０】
2010522693.tif 000122
【０４９２】
化合物１０：ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の９（２６ｍｇ、０．０４ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に真空下で１４時間乾燥し、１０を得た（２７．７ｍｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０９（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｓ，１Ｈ）、８．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．４９〜７．５５（ｍ，２Ｈ）、７．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．３２（ｓ，１Ｈ）、４．９１（ｔ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．５４（ｄ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．４７（ｂｒｓ，１Ｈ）、３．８４〜３．９９（ｍ，４Ｈ）、３．２７〜３．５０（ｍ，１０Ｈ）、２．８８（ｓ，３Ｈ）。
【化１２１】
2010522693.tif 000123
【０４９３】
化合物１２：ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、１０ｍｌ）中の１１（２０ｍｇ、０．０５ｍモル）及び１０％Ｐｄ−Ｃ（１５ｍｇ）の溶液を真空下で４０秒間脱気した。得られた混合物を水素雰囲気下に置き、２５℃で７時間撹拌した。反応混合物を、セライトを通して濾過した（ＣＨ２Ｃｌ２洗浄）。溶媒を真空下で除去し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ（２／８）で溶出し、１２を得た（１５．４ｍｇ、９８％）。１ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３６（ｓ，１Ｈ）、８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．６１（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．４５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２６１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．０６（ｍ，４Ｈ）、３．７３（ｂｒｓ，１Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）。
【０４９４】
化合物１３：ＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）中４Ｎ  ＨＣｌ中の１２（１４ｍｇ、０．０４ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で３０〜４５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に高真空下で１４時間乾燥した。残渣に、３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボン酸（６、１５．１ｍｇ、０．０５ｍモル）を添加した。ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＥＤＣ（９．６ｍｇ、０．０５ｍモル）の溶液を添加し、反応混合物を２５℃で１５時間撹拌した。溶媒を除去した。粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ２Ｃｌ２中３〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、１３を得た（１８．６ｍｇ、８６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．４５（ｓ，１Ｈ）、８．３１（ｓ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．０２（ｓ，２Ｈ）、７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．４３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、６．８９（ｓ，１Ｈ）、４．７５（ｄ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．６４（ｔ，１Ｈ，８．８Ｈｚ）、４．１２（ｂｒｓ，２Ｈ）、４．０３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ）、３．４２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、３．２２〜３．３１（ｍ，２Ｈ）、１．６１（ｓ，９Ｈ）。
【化１２２】
2010522693.tif 000124
【０４９５】
化合物１４：ＤＭＦ（３ｍｌ）中の１３（１９ｍｇ、０．０４ｍモル）の溶液に、０〜５℃でのナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ７９μＬ中０．５Ｍ、０．０４ｍモル）を添加し、５分間撹拌した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、水性混合物をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。結合抽出物を乾燥した（ＭｇＳＯ４）。溶媒を真空下で除去し、粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ２Ｃｌ２中１０％ＭｅＯＨで溶出し、１４を得た（１５．３ｍｇ、８７％）。１ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．２４（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２、１．６Ｈｚ）、８．０２（ｓ，１Ｈ）、７．５４（ｔｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、７．４３（ｔｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６、１．６Ｈｚ）、７．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、７．２０（ｓ，１Ｈ）、６．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．８８（ｓ，１Ｈ）、４．４９（ｍ，２Ｈ）、４．１２（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．２６（ｍ，２Ｈ）、２．９２（ｍ，１Ｈ）、１．７６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．６１（ｓ，９Ｈ）。
【０４９６】
化合物１５：ＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）中４Ｎ  ＨＢｒ中の１４（６．４ｍｇ、０．０１３ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で３０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、更に高真空下で１４時間乾燥し、１５を得た（７．１ｍｇ、９９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．１６（ｓ，１Ｈ）、１０．４５（ｓ，１Ｈ）、８．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．９４（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．３４（ｍ，２Ｈ）、７．２７（ｓ，１Ｈ）、４．８１（ｔ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．４８（ｄ，１Ｈ，１０．８Ｈｚ）、４．２８（ｂｒｓ，１Ｈ）、３．７７〜３．９１（ｍ，４Ｈ）、３．４１〜３．４８（ｍ，２Ｈ）。
【化１２３】
2010522693.tif 000125
【０４９７】
化合物１６：化合物１０（０．０３３ｍモル、２ＨＢｒ塩）を、ＨＡＴＵ（２０ｍｇ、０．０５４ｍモル）及びＴＥＡ（１５〜２０μＬ）の存在下でＤＭＦ２．５ｍＬ中、実施例３の化合物２９（４５ｍｇ、０．０５４ｍモル）と５０分間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、１０ｍｇの化合物１６を得た（２１％の収率）。ＭＳ：１４０５．６、１４２７．８及び１４４４．６。
【化１２４】
2010522693.tif 000126
【０４９８】
化合物１９：化合物１０（２５ｍｇ、０．０３３ｍモル、２ＨＢｒ塩））を、ＨＡＴＵ（１６．５ｍｇ、０．０４３３ｍモル）及びＴＥＡ（１０〜１５μＬ）の存在下でＤＭＦ２．５ｍＬ中、実施例５の化合物Ｄ（２１．５ｍｇ、０．０４３ｍモル）と４５分間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、２５ｍｇの化合物１７を得た（７１％の収率）。ＭＳ：１０６７．０。化合物１７（０．０１８７ｍモル）をＤＭＦ（３ｍＬ）中の５％ピペリジンで４５分間脱保護した。溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテルで洗浄し、１８を得た（ＭＳ：８４５．２）。ＤＭＦ３ｍＬ中の０．００９３５ｍモルの１８の溶液に、ＤＣＭ１ｍＬ中のＭａｌ−ｄＰＥＧ４−ＮＨＳエステル（１０ｍｇ、０．０１９ｍモル）、その後にＴＥＡ（５μＬ）を添加した。３０分後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、５．２ｍｇの純粋な化合物１９を得た（ＭＳ：１２４３．２、１２６６．８及び１２８１．２）。
【０４９９】
実施例７
【化１２５】
2010522693.tif 000127
【０５００】
化合物１１：トルエンの溶液（１０ｍＬ）中の３（２３６ｍｇ、０．８６ｍモル）の溶液に、１−メチル−２−ピロリドン（５０２μＬ、５．１３ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を０℃に冷却した。次いで、トルエン（４ｍＬ）中の塩化チオニル（５０２μＬ、２．５８ｍモル）を添加し、得られた溶液を０℃で１０分間撹拌した。溶媒を除去し、生成物を更に精製せずに次のステップで直ちに用いた（２５２ｍｇ、１００％）。
【０５０１】
化合物１３：ジクロロメタン（３ｍＬ）中の１２（１３７ｍｇ、０．２７ｍモル）の溶液にＴＦＡ（６ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下でトルエンと共に２回同時蒸発させた。残渣（１７１ｍｇ、１００％）を更に精製せずに次のステップで直ちに用いた。
【０５０２】
化合物１４：ジクロロメタン（６ｍＬ）中の１３（１７１ｍｇ、０．２７ｍモル）の溶液に、ピリジン（０．６ｍｌ）及び１１（１５９ｍｇ、０．５４ｍモル）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を０℃で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１４を白色固体として得た（１５２ｍｇ、７２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５４（ｓ，９Ｈ）、２．９１（ｓ，３Ｈ）、３．００〜３．６０（ｍ，８Ｈ）、３．７２（ｍ，１Ｈ）、３．９９（ｍ，１Ｈ）、４．３１〜４．５０（ｍ，３Ｈ）、６．９４（ｓ，１Ｈ）、７．０５（ｍ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，１Ｈ）、７．４５（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，１Ｈ）、７．７５（ｓ，１Ｈ）、７．８６（ｄ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）５６３（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）＋、６０７（Ｍ＋Ｈ−５６）＋、６６３（Ｍ＋Ｈ）＋、６８６（Ｍ＋Ｎａ）＋、７０１（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５０３】
化合物１５：ジクロロメタン（２ｍＬ）中の１４（１９８ｍｇ、０．２５ｍモル）の溶液に、アニソール（０．２ｍＬ）及びＴＦＡ（０．８ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。残渣（２０１ｍｇ、１００％）を更に精製せずに次のステップで用いた。
【０５０４】
化合物１６：ＤＭＦ（３ｍＬ）中の１５（１４３ｍｇ、０．２５ｍモル）の溶液に、１０（１９７ｍｇ、０．２５ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（２１８μＬ、１．２５ｍモル）及びＨＡＴＵ（９５ｍｇ、０．２５ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１６を白色固体として得た（２５２ｍｇ、６９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０６（ｄ，３Ｈ）、１．１４（ｄ，３Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８１（ｍ，１Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．９１（ｓ，３Ｈ）、３．０５〜３．２５（ｍ，６Ｈ）、３．４０〜３．７０（ｍ，８Ｈ）、３．７０（ｄ，１Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、４．００（ｍ，１Ｈ）、４．１９（ｔ，１Ｈ）、４．３０〜４．５０（ｍ，５Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、７．０２（ｓ，１Ｈ）、７．２８〜７．５０（ｍ，８Ｈ）、７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．７０（ｄ，２Ｈ）、７．７６（ｄ，２Ｈ）、７．８７（ｍ，３Ｈ）、８．０３（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）１２０３（Ｍ＋Ｈ）＋、１２２７（Ｍ＋Ｎａ）＋、１２４３（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５０５】
化合物１７：一般的なＦｍｏｃの脱保護手順については、実施例３中の２８の調製を参照すること。１６（２３５ｍｇ、０．１６ｍモル）の脱保護により１６１ｍｇの１７を得た（９８％）。残渣を更に精製せずに次のステップで用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）９８３（Ｍ＋Ｈ）＋、１００５（Ｍ＋Ｎａ）＋、１０２１（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５０６】
化合物１８：ジクロロメタン（１ｍＬ）中２０％ＤＭＦ中の１７（４８ｍｇ、０．０４９ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（３４μＬ、０．１９ｍモル）及び４−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジル（２１ｍｇ、０．０７３ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物１８を白色固体として得た（３６ｍｇ、５３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．１０（ｄ，３Ｈ）、１．１５（ｄ，３Ｈ）、１．６１（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，１Ｈ）、１．９１（ｍ，３Ｈ）、２．２５（ｍ，３Ｈ）、３．０１（ｓ，３Ｈ）、３．１２〜３．２４（ｍ，６Ｈ）、３．４７〜３．６５（ｍ，１０Ｈ）、３．８４（ｄ，１Ｈ）、３．９０（ｄｄ，１Ｈ）、４．３４（ｍ，１Ｈ）、４．６２〜４．８０（ｍ，４Ｈ）、６．８２（ｓ，２Ｈ）、７．１７（ｓ，１Ｈ）、７．４６（ｄ，２Ｈ）、７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，１Ｈ）、７．７６（ｄ，２Ｈ）、７．９３（ｍ，４Ｈ）、８．０７（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）５７４（Ｍ＋２Ｈ／２）＋、１１４８（Ｍ＋Ｈ）＋、１１６８（Ｍ＋Ｎａ）＋、１１８６（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５０７】
実施例８
【化１２６】
2010522693.tif 000128
【０５０８】
化合物２１：メタノール及びジクロロメタン（２及び４ｍＬ）中の２０（５２０ｍｇ、１．２２ｍモル）及び活性炭（１００ｍｇ）上のパラジウムの溶液を室温で水素大気圧下に置いた。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。パラジウムを濾過し、得られた溶液を乾燥するまで濃縮し、灰色固体を得た（４００ｍｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５９（ｂｓ，９Ｈ）、３．５２（ｍ，１Ｈ）、３．８９〜４．００（ｍ，２Ｈ）、４．０７（ｍ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，１Ｈ）、７．２６（ｍ，１Ｈ）、７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５５（ｂｓ，１Ｈ）、７．６５（ｄ，１Ｈ）、８．１３（ｄ，１Ｈ）。
【０５０９】
化合物２２：ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の２１（４００ｍｇ、１．２０ｍモル）の溶液に、アリルアルコール（１ｍＬ）、ピリジン（１ｍＬ、１．２ｍモル）及び４−メチル−１−ピペラジンカルボニルクロリド（３６４ｍｇ、１．８ｍモル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２２を白色固体として得た（５０９ｍｇ、７２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．５０（ｓ，９Ｈ）、２．２１（ｓ，３Ｈ）、２．３６（ｓ，２Ｈ）、２．４２（ｓ，２Ｈ）、３．４２（ｓ，２Ｈ）、３．７８（ｓ，２Ｈ）、３．９０（ｍ，１Ｈ）、３．９８（ｍ，１Ｈ）、４．０８（ｍ，２Ｈ）、４．１４（ｍ，１Ｈ）、４．２２（ｍ，１Ｈ）、７．４２（ｔ，１Ｈ）、７．５８（ｔ，１Ｈ）、７．８２（ｄ，１Ｈ）、７．８８（ｍ，１Ｈ）、７．９２（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）、４６０（Ｍ＋Ｈ）＋、４８３（Ｍ＋Ｎａ）＋、４９９（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５１０】
化合物２３：ジクロロメタン（３ｍＬ）中の２２（２５０ｍｇ、０．４３ｍモル）の溶液にＴＦＡ（６ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下でトルエンと共に２回同時蒸発させた。残渣（２５６ｍｇ、１００％）を更に精製せずに次のステップで直ちに用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）３６０（Ｍ＋Ｈ）＋、３８３（Ｍ＋Ｎａ）＋、３９９（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５１１】
化合物２４：ジクロロメタン（８ｍＬ）中の２３（２５６ｍｇ、０．４３ｍモル）の溶液に、ピリジン（１．６ｍＬ）及び１１（２５２ｍｇ、０．８６ｍモル）（実施例７を参照）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を０℃で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２４を白色固体として得た（２１３ｍｇ、６７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５４（ｓ，９Ｈ）、２．８７（ｓ，３Ｈ）、３．００〜３．６０（ｍ，８Ｈ）、３．７９（ｍ，１Ｈ）、３．８９（ｍ，１Ｈ）、４．３１〜４．４８（ｍ，３Ｈ）、６．９１（ｓ，１Ｈ）、７．０８（ｍ，２Ｈ）、７．４３（ｍ，２Ｈ）、７．６５（ｄ，１Ｈ）、７．７４（ｓ，１Ｈ）、７．８４（ｄ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）５１８（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）＋、５６２（Ｍ＋Ｈ−５６）＋、６１９（Ｍ＋Ｈ）＋、６４１（Ｍ＋Ｎａ）＋、６５７（Ｍ＋Ｋ）＋。
【０５１２】
化合物２５：ジクロロメタン（２ｍＬ）中の２４（５０ｍｇ、０．０８ｍモル）の溶液に、アニソール（０．２ｍＬ）及びＴＦＡ（０．８ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。残渣（６０ｍｇ、１００％）を更に精製せずに次のステップで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ３．０１（ｓ，３Ｈ）、３．４０〜３．６０（ｂｓ，４Ｈ）、３．７９（ｍ，２Ｈ）、４．０２（ｍ，２Ｈ）、４．３２（ｍ，２Ｈ）、４．７３〜４．９０（ｍ，３Ｈ）、７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．５１（ｍ，１Ｈ）、７．６３（ｍ，２Ｈ）、７．７７（ｄ，１Ｈ）、７．９４（ｄ，１Ｈ）、８．３０（ｓ，１Ｈ）。
【０５１３】
化合物２６：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２５（６０ｍｇ、０．０８ｍモル）の溶液に、１０（５３ｍｇ、０．０８ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（５９μＬ、０．４ｍモル）及びＨＡＴＵ（２６ｍｇ、０．０８ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２６を白色固体として得た（６６ｍｇ、６９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０６（ｄ，３Ｈ）、１．１４（ｄ，３Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、１．９５（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．９５（ｓ，３Ｈ）、３．０５〜３．２５（ｍ，６Ｈ）、３．４０〜３．７０（ｍ，８Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、３．９０（ｍ，１Ｈ）、４．０６（ｍ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．３０〜４．７０（ｍ，６Ｈ）、７．０２（ｓ，１Ｈ）、７．２８〜７．５０（ｍ，８Ｈ）、７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．７０（ｄ，２Ｈ）、７．７６（ｍ，２Ｈ）、７．８７（ｍ，３Ｈ）、８．０３（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）５８０（Ｍ＋２Ｈ／２）＋、１１５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５１４】
化合物２７：一般的なＦｍｏｃの脱保護手順については、実施例３中の２８の調製を参照すること。２６（６６ｍｇ、０．０５ｍモル）の脱保護により４４ｍｇの２７を得た（９８％）。残渣を更に精製せずに次のステップで用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）９３７（Ｍ＋Ｈ）＋、９５９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５１５】
化合物２８：ジクロロメタン（１ｍＬ）中２０％ＤＭＦ中の２７（２３ｍｇ、０．０２４ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１６μＬ、０．０９ｍモル）及びＭＡＬ−ｄＰＥＧ４−ＮＨＳエステル（１８ｍｇ、０．０３６ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２８を白色固体として得た（２３ｍｇ、６０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０９（ｄ，３Ｈ）、１．１５（ｄ，３Ｈ）、１．６０（ｍ，２Ｈ）、１．８２（ｍ，１Ｈ）、１．９５（ｍ，１Ｈ）、２．３０（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｔ，２Ｈ）、２．５１（ｔ，２Ｈ）、２．９７（ｓ，３Ｈ）、３．１０〜３．２５（ｍ，６Ｈ）、３．４６〜３．７０（ｍ，２４Ｈ）、３．７５（ｔ，４Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、３．９０（ｍ，１ｈ）、４．１０（ｍ，１Ｈ）、４．５０〜４．７０（ｍ，４Ｈ）、６．７８（ｓ，２Ｈ）、７．０４（ｓ，１Ｈ）、７．３４（ｍ，２Ｈ）、７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．７１〜７．７９（ｍ，２Ｈ）、７．９０（ｍ，３Ｈ）、８．０４（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）６６８（Ｍ＋２Ｈ／２）＋。
【０５１６】
化合物２９：ジクロロメタン（１ｍＬ）中２０％ＤＭＦ中の２７（３１ｍｇ、０．０３３ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２２μＬ、０．１３ｍモル）及び４−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジル（１４ｍｇ、０．０４９ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製し、化合物２９を白色固体として得た（３２ｍｇ、５１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０９（ｄ，３Ｈ）、１．１５（ｄ，３Ｈ）、１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．８４（ｍ，１Ｈ）、１．９２（ｍ，３Ｈ）、２．２５（ｍ，３Ｈ）、２．９７（ｓ，３Ｈ）、３．１２〜３．２５（ｍ，６Ｈ）、３．３９〜３．６８（ｍ，１０Ｈ）、３．８５（ｄ，１Ｈ）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ）、４．０８（ｍ，１Ｈ）、４．５０〜４．６７（ｍ，４Ｈ）、６．８０（ｓ，２Ｈ）、７．０３（ｓ，１Ｈ）、７．３４（ｍ，２Ｈ）、７．４４（ｍ，１Ｈ）、７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．７２（ｄ，２Ｈ）、７．７７（ｄ，１Ｈ）、７．９０（ｍ，３Ｈ）、８．０４（ｓ，１Ｈ）、８．２５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）５５２（Ｍ＋２Ｈ／２）＋。
【０５１７】
実施例９
【化１２７】
2010522693.tif 000129
【０５１８】
ｔｅｒｔ−ブチル５−（４−アセチルベンズアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２）。４℃でのＤＭＦ（６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル５−アミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２２０ｍｇ、０．９４ｍモル）、４−アセチル安息香酸（１５５ｍｇ、０．９４ｍモル）及びＴＢＴＵ（３０３ｍｇ、０．９４ｍモル）の溶液をジイソプロピルエチルアミン（３２９μＬ、１．８９ｍモル）で処理し、０〜５℃で４０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物に対し、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行い、ＣＨ２Ｃｌ２中１％ＭｅＯＨで溶出し、２を得た（３５０ｍｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．６６（ｂｓ，１Ｈ）、１０．３４（ｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．０７（ｓ，４Ｈ）、７．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．０３（ｓ，１Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）、１．５６（ｓ，９Ｈ）。
【０５１９】
５−（４−アセチルベンズアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３）。塩化メチレン（４ｍＬ）中の２（３５０ｍｇ、０．９２ｍモル）の溶液をＴＦＡ（４ｍＬ）で処理し、室温で１５分間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を高真空下で更に乾燥し、３をほぼ定量的収率で生成した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．９２（ｂｓ，１Ｈ）、１１．７４（ｂｓ，１Ｈ）、１０．３３（ｓ，１Ｈ）、８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．０６（ｓ，４Ｈ）、７．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．０６（ｓ，１Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）。
【化１２８】
2010522693.tif 000130
【０５２０】
ｓｅｃｏ−ＣＢＩ−Ｂｏｃ（５）。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、１０ｍｌ）中の４（１００ｍｇ、０．２４ｍモル）及び１０％Ｐｄ−Ｃ（３５ｍｇ）の溶液を真空下で４０秒間脱気した。得られた混合物を水素雰囲気下に置き、２５℃で７時間撹拌した。反応混合物を、セライトを通して濾過した（ＣＨ２Ｃｌ２洗浄）。溶媒を真空下で除去した。シリカゲル上でのクロマトグラフィーを行い、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ（２／８）で溶出し、５を得た（７７ｍｇ、９８％）。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３６（ｓ，１Ｈ）、８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．６１（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．４５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２６１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．０６（ｍ，４Ｈ）、３．７３（ｍ，１Ｈ）、１．５２（ｓ，９Ｈ）。
【０５２１】
ｓｅｃｏ−ＣＢＩ（Ｃｌ）−インドール（６）。ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）中４Ｎ  ＨＣｌ中の５（３５ｍｇ、０．１ｍモル）の溶液を、窒素下、２５℃で３０〜４５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に高真空下で４時間乾燥した。残渣にＤＭＦ（５ｍＬ）中の５−（４−アセチルベンズアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３、１１７ｍｇ、０．４４ｍモル）及びＥＤＣを添加し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。溶媒を高真空下で除去した。シリカゲル上でのクロマトグラフィーを行い、２〜８％ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２で溶出し、６を得た（１１８．３ｍｇ、５０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．７３（ｓ，１Ｈ）、１０．４３（ｓ，１Ｈ）、１０．３６（ｓ，１Ｈ）、８．１８（ｓ，１Ｈ）、８．０８（ｓ，５Ｈ）、７．９２（ｓ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５１（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１９（ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、４．２２（ｍ，１Ｈ）、４．０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、３．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）。
【０５２２】
ｓｅｃｏ−ＣＢＩ（Ｂｒ）−インドール（７）。無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の６（３５．５ｍｇ、０．０６６ｍモル）の溶液に、６０％ＮａＨ（５．３ｍｇ、０．１３ｍモル）を０℃で添加し、１５〜３０分間撹拌した。溶媒を高真空下で除去した。粗生成物に対し、シリカゲル上でのクロマトグラフィーを行い、ＣＨ２Ｃｌ２中３％ＭｅＯＨで溶出し、シクロプロパンを得た（３１ｍｇ、９４％）。得られたシクロプロパンを酢酸エチル（３ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＢｒで処理し、反応混合物を１５分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。シリカゲル上でのクロマトグラフィーを行い、２〜８％ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２で溶出し、７を得た（３４．５ｍｇ、９６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．７３（ｓ，１Ｈ）、１０．４３（ｓ，１Ｈ）、１０．３６（ｓ，１Ｈ）、８．１８（ｓ，１Ｈ）、８．０８（ｓ，５Ｈ）、７．９２（ｓ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５１（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１９（ｓ，１Ｈ）、４．８０（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、４．２６（ｍ，１Ｈ）、４．０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、３．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）。
【０５２３】
カルバメート（８）。ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中の７（３４ｍｇ、０．０６ｍモル）、４−メチル−１−ピペラジン−カルボニルクロリド塩酸塩（１５．９ｍｇ、０．０８ｍモル）、アリルアルコール（８０μＬ）及び無水ピリジン（８０μＬ）の溶液を室温で１６時間撹拌した。粗生成物の精製をシリカゲル上で行い、それをＣＨ２Ｃｌ２中２％〜１０％ＭｅＯＨで溶出し、８を得た（４１．３ｍｇ、７８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．７３（ｓ，１Ｈ）、１０．３８（ｓ，１Ｈ）、８．１８（ｂｓ，２Ｈ）、８．０８（ｓ，４Ｈ）、８．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．５６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２４（ｓ，１Ｈ）、４．８９（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、４．４５（ｍ，１Ｈ）、３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、３．９１（ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ）、３．７７（ｂｓ，２Ｈ）、３．４７（ｂｓ，２Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）、２．４７（ｂｓ，２Ｈ）、２．４０（ｂｓ，２Ｈ）、２．２５（ｓ，３Ｈ）。
【０５２４】
化合物１０：乾燥塩化メチレン（２ｍＬ、分子ふるい上で予備乾燥）中５％酢酸中の８（１１．３５ｍｇ、０．０１６ｍモル）及び９（１７ｍｇ、０．０３２ｍモル）の溶液を２５℃で１０〜１５分間撹拌した。溶媒を除去し、更に高真空下で一晩乾燥した。ヒドラゾンの形成を、勾配として１０分（保持時間：６．９３分）の１０％〜１００％ギ酸アンモニウムを用い、分析ＨＰＬＣ２）（Ｎｏｖａ  Ｐａｋ  Ｃ１８、５μｍ、３．９×１５０ｍｍのカラム）により確認し、１ｍｌ／分（アセトニトリル／２０ｍＭのギ酸アンモニウム、ｐＨ７）で溶出した。最終的にヒドラゾン１０を、勾配として２０分間の１０％〜７０％アセトニトリルを用い、７０％アセトニトリルを３分間、７０％〜１００％アセトニトリルを７分間（保持時間：２６．１分）維持する場合、Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（ＳｙｍｍｅｔｒＰｒｅｐ  Ｃ１８、７μｍ、１９×１５０ｍｍのカラム）により精製し、１０ｍｌ／分（アセトニトリル／２０ｍＭのギ酸アンモニウム、ｐＨ７）で溶出し、１０を得た（１４．７ｍｇ、８２％）。ＭＳ：Ｃ５５Ｈ６２ＢｒＮ９Ｏ１２（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １１２１．０４  実測値  １１２１．１。
【０５２５】
実施例１０
【化１２９】
2010522693.tif 000131
【０５２６】
化合物（３）。ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＨＢｒ塩１（１２ｍｇ、０．０１６ｍモル）（実施例６の化合物１０を参照）及び２（２５ｍｇ、０．０３２ｍモル）の溶液をジイソプロピルエチルアミン（１１μＬ、０．０６４ｍモル）で処理し、窒素下、２５℃で４８時間撹拌した。溶媒を除去し、粗生成物をＰｒｅｐ  ＨＰＬＣにより精製し、３を得た（６．４ｍｇ、３０％）。ＭＳ：Ｃ６４Ｈ６７ＢｒＮ１０Ｏ１０（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １２１６．１８  実測値  １２１６．４０。
【０５２７】
化合物（４）。ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＴＦＡ塩３（６．４ｍｇ、４．９μモル）の溶液にピペリジン（５０μＬ）を添加し、反応混合物を窒素下、２５℃で１５分間撹拌した。溶媒を除去し、粗生成物をＰｒｅｐ  ＨＰＬＣにより精製し、４を得た（３．８ｍｇ、６６％）。ＭＳ：Ｃ６４Ｈ６７ＢｒＮ１０Ｏ１０（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  ９９４．９４  実測値  ９９４．８０。
【０５２８】
化合物（６）。ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＴＦＡ塩４（３．８ｍｇ、３．２μモル）の溶液に５（３．３ｍｇ、６．４μモル）及びピペリジン（１０μＬ）を添加し、反応混合物を窒素下、２５℃で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、粗生成物をＰｒｅｐ  ＨＰＬＣにより精製し、６を得た（３．４ｍｇ、７１％）。ＭＳ：Ｃ６７Ｈ８３ＢｒＮ１２Ｏ１６（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚの計算値  １３９３．３５  実測値  １３９３．６０。
【０５２９】
実施例１１
【化１３０】
2010522693.tif 000132
【０５３０】
化合物Ａ（０．０３３ｍモル、２ＨＢｒ塩）（実施例６の化合物１０を参照）を、ＨＡＴＵ（２０ｍｇ、０．０５４ｍモル）及びＴＥＡ（１５〜２０μＬ）の存在下でＤＭＦ２．５ｍＬ中の化合物Ｂ（４５ｍｇ、０．０５４ｍモル）と５０分間反応させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、１０ｍｇの化合物Ｃを得た（２１％の収率）。ＭＳ：１４０５．６、１４２７．８及び１４４４．６。
【０５３１】
実施例１２：
【化１３１】
2010522693.tif 000133
【０５３２】
２の合成：１．４４ｇ（０．０１５モル）の２−アミノエタノール（１）のＨＣｌ塩、５．０ｇ（０．０１８モル）のＦｍｏｃ−スクシンイミド（２）を、丸底フラスコ内のアセトニトリル２０ｍＬ及び１０％水性炭酸カリウム溶液２０ｍＬに溶解し、室温で３０分間撹拌した。反応物を１０％クエン酸溶液でクエンチし、濃縮し、アセトニトリルを除去した。水性層を酢酸エチル３０ｍＬで３回抽出し、有機層を２０ｍＬでの塩水で２回洗浄した。化合物は十分に純粋であったが、それを、ＤＣＭ中２〜５％ＭｅＯＨを用いてシリカゲル上で精製し、２．５ｇの２を６４％の収率で得た。
【０５３３】
３の合成：１．３ｇ（４．５８ｍモル）の２を、丸底フラスコ内、２．５ｇ（５．６ｍモル）のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬の存在下、ジクロロメタン５０ｍＬ中で２時間撹拌させた。粗反応混合物を、シリカゲル上で精製し、２０〜５０％の酢酸エチルで溶出し、１．０６ｇのアルデヒド３を８２％の収率で得た。ＭＳ＋１＝２８１．８。
【化１３２】
2010522693.tif 000134
【０５３４】
４の合成：１．５ｇ（３．７７ｍモル）のＦｍｏｃ−シトルリンを丸底フラスコ内のＤＭＦ３ｍＬに溶解し、それに０．８７ｇ（４．５ｍモル）のＥＤＣ０．６１ｇ（４．５ｍモル）のＨＯＢｔを添加した。次いで、ＤＣＭ６ｍＬを添加後、０．８８ｇ（４．５ｍモル）のｔ−ブチル−４−アミノ安息香酸及び触媒量の塩化銅を添加した。反応混合物を一晩撹拌させた。溶媒を蒸発させ、ＤＣＭ中５〜１０％ＭｅＯＨを用いてシリカゲル上で粗生成物を精製し、２ｇの４を９２％の収率で得た。Ｍ＋１＝５７４。
【化１３３】
2010522693.tif 000135
【０５３５】
５及び６の合成：２０５ｍｇ（０．３６ｍモル）の化合物４をＤＭＦ中２．５％ピペリジンの溶液３ｍｌで３０分間処理した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、ヘキサン（２０〜３０ｍＬ）で２回、次いでジエチルエーテル（２０〜３０ｍＬ）で２回すすいだ。遊離アミン５を高真空下で乾燥し、次のステップで更なる精製を全くせずに反応させた。Ｍ＋１＝３５２．２。
【０５３６】
１６７ｍｇ（０．４２ｍモル）のＦｍｏｃ−シトルリンをＤＭＦ６ｍＬに溶解した。１６０ｍｇ（０．４２ｍモル）のＨＡＴＵを添加した。上で調製した化合物５（０．３５ｍモル）をＤＭＦ２ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ−シトルリン及びＨＡＴＵの上記溶液に添加した。１４６μＬ（１．０５ｍモル）のトリエチルアミンを反応混合物に添加し、１．５時間撹拌させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、１９９ｍｇの化合物６を７８％の収率で得た。Ｍ＋１＝７３１．２、Ｍ＋Ｎａ＝７５３．４及びＭ＋Ｋ７６９．０。
【化１３４】
2010522693.tif 000136
【０５３７】
７及び８の合成：２８０ｍｇ（０．３８ｍモル）の化合物６を、化合物５の合成物に類似の２．５％ピペリジン３ｍＬ中で脱保護し、７を得た。Ｍ＋１＝５０９。
【０５３８】
化合物８を、上で調製した７での化合物３の還元アミノ化により合成した。０．３８ｍモルの化合物７を、丸底フラスコ内のメタノール６ｍＬに溶解し、氷浴上で０℃まで冷却後、２５０ｍｇ（３．０ｍモル）の酢酸ナトリウムを添加した。１２０ｍｇ（０．４３ｍモル）の化合物３を上記フラスコに添加し、得られた反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。次いで、６８ｍｇ（１．０ｍモル）のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応混合物を氷浴温度で２０分間、次いで室温で１時間撹拌させた。反応混合物を濃縮し、逆相ＨＰＬＣにより精製し、１５０ｍｇの所望の生成物８を５１％の収率で得た。Ｍ＋１＝７７４．４。
【化１３５】
2010522693.tif 000137
【０５３９】
酸９の合成：３３ｍｇ（０．０４５ｍモル）の８を、ＤＣＭ：ＴＦＡが２：１の混合物３ｍＬで２５分間処理した。溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテルで２回滴定し、エーテル層を捨てた。得られた酸９を高真空下で数時間乾燥し、次のステップまで維持した。ＭＳ＋１＝７１８。
【化１３６】
2010522693.tif 000138
【０５４０】
１１の合成：２０ｍｇの１０（０．０３２ｍモル）をＤＣＭ：ＴＦＡが２：１の混合物３ｍＬで５分間処理した。溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテルで２回滴定し、エーテル層を捨てた。得られたアミン１１のＴＦＡ塩を高真空下で数時間乾燥し、次のステップまで維持した。ＭＳ＋１＝５１９。
【化１３７】
2010522693.tif 000139
【０５４１】
１２の合成：上で調製されたアミン１１：２ＴＦＡをＤＭＦ３ｍＬに溶解し、酸９を有するフラスコに移した後、２０ｍｇ（０．０４５ｍモル）のＢＯＰ及びジイソプロピルアミン１００μＬを添加し、室温で２時間撹拌した。粗反応混合物を濃縮し、逆相ＨＰＬＣにより精製し、３５ｍｇの所望の化合物１２を８９％の収率で得た。ＭＳ＋１＝１２１７．６、ｍ／２ｚ＝６０９．２。
【化１３８】
2010522693.tif 000140
【０５４２】
１３及び最終化合物１４の合成：３５ｍｇ（０．０２９ｍモル）の１２を、ピペリジン１００μＬを含有するＤＭＦ４ｍＬで１５分間処理した。溶媒を蒸発させ、得られたアミン１３をヘキサン１０ｍＬで滴定後、ジエチルエーテル１０ｍＬで滴定し（２回）、高真空下で乾燥し、任意の更なる精製を行い、次のステップまで維持した。Ｍ＋１＝９９６．０、ｍ／２ｚ＝４９８。
【０５４３】
上で調製した０．０２９ｍモルの１３をＤＭＦ２ｍＬに溶解後、１７ｍｇ（０．０６ｍモル）の市販物質１５及びジイソプロピルアミン３２μＬを添加した。得られた反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗反応混合物をアセトニトリル及び０．１％ＴＦＡを含有する水を用いる逆相ＨＰＬＣにより精製し、２１ｍｇの１４（ＭＥＤ−２５００）をそのＴＦＡ塩として５２％の収率で得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝１１５９．４７、ｍ／２ｚ＝５８０．２。
【０５４４】
実施例１３：
【化１３９】
2010522693.tif 000141
【０５４５】
化合物２の合成：ジクロロメタン（３ｍＬ）中の１（３５０ｍｇ、０．８２ｍモル）の溶液にＴＦＡ（６ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下でトルエンと同時蒸発させた（２回）。残渣を更に精製せずに次のステップで用いた。ジクロロメタン（８ｍＬ）中のこのＢｏｃ脱保護材料（０．８２ｍモル）の溶液に、ピリジン（２ｍｌ）及び１０（０．９８ｍモル、下記参照）を０℃で添加した。このようにして得た混合物を０℃で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中の５％メタノールで溶出し、化合物２を白色のフォームとして得た（４１７ｍｇ、９０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５５（ｓ，９Ｈ）、３．４６（ｔ，１Ｈ）、３．９０（ｄｄ，１Ｈ）、４．１５（ｔ，１Ｈ）、４．６５（ｔ，１Ｈ）、４．８（ｄ，１Ｈ）、５．２７（ｍ，２Ｈ）、６．５５（ｂｓ，１Ｈ）、７．０３（ｄ，１Ｈ）、７．１８（ｄｄ，１Ｈ）、７．３４〜７．４１（ｍ，５Ｈ）、７．４３〜７．５６（ｍ，３Ｈ）、７．７０（ｄ，１Ｈ）、７．８５（ｂｓ，１Ｈ）、８．２０（ｓ，１Ｈ）、８．３４（ｄ，２Ｈ）、９．６５（ｂｓ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）５８２（Ｍ＋Ｈ）＋；６０４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５４６】
化合物３の合成：メタノール／ジクロロメタン（６ｍＬ）中、２（３１５ｍｇ、０．６ｍモル）及び活性炭上のパラジウム（１００ｍｇ）の溶液を室温で水素大気圧下に置いた。このようにして得た混合物を室温で一晩撹拌した。パラジウムを濾過し、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、化合物３を白色のフォームとして得た（１７５ｍｇ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．５２（ｓ，９Ｈ）、３．４６（ｔ，１Ｈ）、３．９０（ｄｄ，１Ｈ）、４．００（ｔ，１Ｈ）、４．５０〜４．６０（ｍ，２Ｈ）、６．９８（ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，１Ｈ）、７．３０〜７．４５（ｍ，４Ｈ）、７．６０（ｄ，１Ｈ）、７．７０（ｄ，１Ｈ）、７．８５（ｂｓ，１Ｈ）、８．２０（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）４３６（Ｍ＋Ｈ−５６）＋；４９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５４７】
化合物４の合成：ジクロロメタン（３ｍＬ）中の３（３５０ｍｇ）の溶液にＴＦＡ（３ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２０分間撹拌した。溶媒を真空下でトルエンと同時蒸発させ（２回）、化合物４を得た。固体を更に精製せずに次のステップで用いた。
【０５４８】
化合物５の合成：アセトニトリル（１０ｍＬ）中の４（３００ｍｇ、０．５９ｍモル）の懸濁液にＤＢＵ（４４０μＬ、２．９６ｍモル）を添加した。得られた溶液を３０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。反応混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、化合物５を黄色固体として得た（２００ｍｇ、９０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ３．５５（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｍ，２Ｈ）、４．４５（ｍ，２Ｈ）、５．４９（ｓ，１Ｈ）、６．８５（ｄｄ，１Ｈ）、６．９７〜７．０１（ｍ，２Ｈ）、７．１５（ｄ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ）、７．４０（ｔ，１Ｈ）、７．６０（ｔ，１Ｈ）、８．１０（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）３５６（Ｍ＋Ｈ）＋；３７９（Ｍ＋Ｎａ）＋；３９４（Ｍ＋Ｋ）＋。
【化１４０】
2010522693.tif 000142
【０５４９】
化合物１０の合成：エチル５−ニトロインドール−２−カルボキシレート（Ａｃｒｏｓ社製、１０ｇ、４２．７ｍモル）、無水メタノール（Ａｃｒｏｓ社製、１００ｍＬ）中の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０．２４ｇ、４６．９７ｍモル）の懸濁液に、パラジウム（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、活性炭上１０％、４００ｍｇ）を添加した。反応混合物をＨ２バルーン下、室温で３時間撹拌した。Ｈ２がもはや消費されていない時に反応を終了させた。反応混合物を濾過し、濾過物を濃縮し、高真空下で乾燥し、黄色残渣８を得、それを更に精製しなかった。メタノール（１５０ｍＬ）中の黄色残渣８の溶液に、水中のＬｉＯＨの溶液（１５０ｍＬ、０．５７Ｍ）を添加した。反応混合物を６０℃で一晩加熱した。ＨＰＬＣ分析に基づき、加水分解を終了させた。反応混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、真空下で濃縮し、メタノールを除去した。得られた溶液をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。水性層を、ＫＨＳＯ４溶液の添加によりｐＨ＝４に酸性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で再抽出した。有機層を組み合わせて、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空下で濃縮し、褐色固体９を得た（９．７ｇ、８２％）。９を更に精製せずに次のステップで用いた。無水ＤＣＭ（Ａｃｒｏｓ社製、６０ｍＬ）中の９（２．１６ｇ、７．８４ｍモル）及び１−メチル−２−ピロリドン（Ｆｌｕｋａ、５．０３ｍＬ、５２．３２ｍモル）の溶液に、ＳＯＣｌ２（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１．９ｍＬ、２６．１６ｍモル）を添加した。反応混合物を０℃で０．５時間及び室温で０．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、高真空下で一晩乾燥し、１０を得た。少量の１０をメタノール及びトリエチルアミンで処理し、メチルエステルが形成され、それをＨＰＬＣ分析に用い、塩化アセチルの形成が完了したことを確認した。
【化１４１】
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【０５５０】
化合物１４の合成：アセトニトリル（８０ｍＬ）及びＮａ２ＣＯ３（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１０％、８０ｍＬ）中の２−アミノエタノール塩酸塩（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、５ｇ、５１．２５ｍモル）の懸濁液に、Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（ＢａＣｈｅｍ、１７．２８ｇ、５１．２５ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を水（５００ｍＬ）で希釈し、粗生成物を濾過により回収した。固体をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解し、得られた有機層をＨＣｌ溶液（１％、２×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×１５０ｍＬ）及び塩水（１×１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、白色固体１３を得（１３．９ｇ、９５％）、それを更に精製せずに次のステップで用いた。無水ＤＣＭ（ＡＣＲＯＳ、１５０ｍＬ）中の１３（１３．９ｇ、４９．１２ｍモル）の溶液に、Ｄｅｓｓ−ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（２７．０８ｇ、６３．８５ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物をフラッシュカラムクロマトグラフ上に加え、ヘキサン中１０〜５０％ＥｔＯＡｃで精製し、白色固体１４を得た（１２．１ｇ）。
【化１４２】
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【化１４３】
2010522693.tif 000145
【０５５１】
化合物２２の合成：無水ＤＭＦ（Ａｃｒｏｓ社製、１００ｍＬ）中、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｌ−シトルリン（Ｆｌｕｋａ、１０ｇ、２５．１６ｍモル）、ｔｅｒｔ−ブチル４−アミノベンゾエート（Ｆｌｕｋａ、５．８４ｇ、３０．２ｍモル）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（Ｆｌｕｋａ、５．７９ｇ、３０．２ｍモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ、４．０８ｇ、３０．２ｍモル）の溶液に、ＣｕＣｌ２（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、４．０５ｇ、３０．２ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で一晩添加した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ及び水で後処理した（ｗｏｒｋｅｄ  ｕｐ）。有機層を塩水で洗浄し、濃縮し、褐色残渣１５を粗生成物として得た。無水ＤＭＦ（Ａｃｒｏｓ社製、１４０ｍＬ）中の上記粗生成物１５の溶液に、ピペリジン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、７ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、残渣を、ＤＣＭ中の０〜２０％メタノールを用いて１２０ｇのＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム上で精製した。所望の生成物をＤＣＭ中の１４％メタノールで溶出した。所望の生成物の画分を組み合わせて、高真空下で濃縮し、褐色固体１６を得た（７．３４ｇ、８３．３％）。無水ＤＭＦ（Ａｃｒｏｓ社製、１００ｍＬ）中の１６（６．６ｇ、１８．８６ｍモル）及び１−メチル−２−ピロリドン（Ｆｌｕｋａ、２５ｍＬ、１８８．６ｍモル）の溶液に、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＳｕ（ＢａＣｈｅｍ、８．２３ｇ、１８．８６ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物にピペリジン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、７ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析はＦｍｏｃ保護基が完全に除去されたことを示した。反応混合物を濃縮し、残渣を、ＤＣＭ中の０〜２０％メタノールを用いて１２０ｇのＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム上で精製した。所望の生成物の画分を組み合わせて、高真空下で濃縮し、黄色固体１８を得た（７．４ｇ、８７％）。無水メタノール（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１７５ｍモル）中の１８（７．４ｇ、１６．４８ｍモル）及び１４（４．６３ｇ、１６．４８ｍモル）の溶液に、酢酸ナトリウム（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、２０ｇ）を添加した。反応混合物を０℃で１．５時間撹拌した。この反応混合物に、ＮａＢＨ３ＣＮ（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１．５５ｇ、２４．７２ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ及び水で後処理した。有機層を組み合わせて、塩水で洗浄し、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中の０〜１０％メタノールを用いて１２０ｇのＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム上で精製した。所望の生成物の画分を組み合わせて、高真空下で濃縮し、褐色固体１９を得た（７．１ｇ、６０％）。
【０５５２】
無水ＤＭＦ（Ａｃｒｏｓ社製、１２０ｍＬ）中の１９（６．７ｇ、９．３８ｍモル）の溶液に、ピペリジン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、６ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、残渣をアセトニトリル及び水で凍結乾燥し、黄色固体２０を得、それを精製しなかった。
【０５５３】
無水ＤＭＦ（Ａｃｒｏｓ社製、５０ｍＬ）中の化合物２０（８．４０ｍモルと仮定）、マレイミド酪酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１．８５ｇ、１０．０８ｍモル）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾ−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、３．８３ｇ、１０．０８ｍモル）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を添加し、反応混合物のｐＨ値を８超に調節した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、残渣を、ＤＣＭ中１０〜２０％メタノールを用いて１２０ｇのＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム上で精製した。所望の生成物をＤＣＭ中１４〜１６％メタノールで溶出した。所望の生成物の画分を組み合わせて、高真空下で濃縮し、白色固体２１を得た（４．７ｇ、８５％）。無水ＤＣＭ（Ａｃｒｏｓ社製、３０ｍＬ）中の２１（４．７ｇ、７．１７ｍモル）の溶液に、ＴＦＡ（Ｆｉｓｈｅｒ、３０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、アセトニトリル及び水で凍結乾燥し、白色固体２２を得た（４．９ｇ、ＴＦＡ塩）。
【化１４４】
2010522693.tif 000146
【０５５４】
化合物２４の合成：無水ＤＭＦ（Ａｃｒｏｓ社製、１ｍＬ）中の２２（５０ｍｇ、０．０８３ｍモル）の溶液に、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾ−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、２８．４ｍｇ、０．０７５ｍモル）を添加した。反応混合物のｐＨ値を、ＤＩＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）の添加により８超に調節した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析は反応が完了したことを示した。４（６８．２ｍｇ、０．１４ｍモル）を添加し、反応混合物のｐＨ値をＤＩＥＡの添加により再び８超に調節した。反応混合物を室温で更に０．５時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析はカップリングが完了したことを示した。反応混合物を高真空下で濃縮し、残渣をＰＢＳ緩衝液（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ社製、ｐＨ＝７．４、１０ｍＬ）と共に０．５時間撹拌した。懸濁液を濾過し、回収した固体をメタノールに溶解した。得られた溶液をシリカゲルで濃縮し、スラリーを、ＤＣＭ中１０〜２０％メタノールを用いて４ｇのＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム上で精製した。適切な画分を濃縮し、アセトニトリル及び水で凍結乾燥し、白色粉末化合物２４を得た（４５ｍｇ、４５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．１０（ｄ，３Ｈ）、１．１５（ｄ，３Ｈ）、１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．８９〜１．９４（ｍ，４Ｈ）、２．２５（ｍ，３Ｈ）、３．８０（ｍ，２Ｈ）、３．５０（ｔ，２Ｈ）、３．６０（ｍ，３Ｈ）、３．８４（ｄ，１Ｈ）、４．００（ｄｄ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、４．７２（ｍ，２Ｈ）、６．８３（ｓ，２Ｈ）、７．１８（ｓ，１Ｈ）、７．３７（ｔ，２Ｈ）、７．５０（ｍ，３Ｈ）、７．７５〜７．８１（ｍ，３Ｈ）、７．９７（ｄ，２Ｈ）、８．０６（ｓ，１Ｈ）、８．２０（ｄ，１Ｈ）、８．８３（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）９７６（Ｍ＋Ｈ）＋、９９９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５５５】
化合物２３の合成：ＤＭＦ（６ｍＬ）中の２２（５００ｍｇ、０．７ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２５０μＬ、１．４ｍモル）及びＨＡＴＵ（２７９ｍｇ、０．７３ｍモル）を室温で添加した。このようにして得た混合物を３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中１５％メタノールで溶出し、所望の化合物を得た。この固体（８１ｍｇ）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）中２０％の１−メチル−２−ピロリドン中の５（４０ｍｇ、０．１１ｍモル）の溶液に室温で徐々に添加した。このようにして得た混合物を２時間撹拌した。所望の化合物をジクロロメタン６ｍｌの添加により沈殿させた。黄色固体を濾過し、乾燥することで、更に精製せずに次のステップで使用できた（８６ｍｇ、８２％）。それに対し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（２０ｍＭギ酸アンモニウム緩衝溶液、ｐＨ＝７及びアセトニトリル）により精製し、化合物２３を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．０２（ｄ，６Ｈ）、１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．７０（ｔ，１Ｈ）、１．７５〜１．９５（ｍ，５Ｈ）、２．０５（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｔ，３Ｈ）、３．８０（ｍ，２Ｈ）、３．１０〜３．３０（ｍ，４Ｈ）、３．３５（ｍ，２Ｈ）、３．５５（ｔ，２Ｈ）、４．５５（２ｓ，１Ｈ）、４．６０〜４．７０（ｍ，２Ｈ）、６．７７（ｓ，２Ｈ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、７．１５〜７．２０（ｍ，２Ｈ）、７．４０〜７．５０（ｍ，３Ｈ）、７．６０（ｍ，１Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）、７．９５（ｄ，１Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｄ，１Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ＋）９４０（Ｍ＋Ｈ）＋、９６２（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５５６】
実施例１４：
【化１４５】
2010522693.tif 000147
【０５５７】
化合物３の合成：氷酢酸（９．６ｍＬ）中の４−メトキシ−２−ナフチルアミン（２３０ｍｇ、１．３３ｍモル）及び水中の臭化水素酸（１６ｍＬ、４８％）の溶液をＮ２下で４時間還流させた。少量の試料（０．１ｍＬ）を酢酸エチル（０．５ｍＬ）で希釈し、次いで水（０．５ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．１ｍＬ）を添加した。有機層のＴＬＣ（２０：１のＤＣＭ／メタノール）は、出発原料を全く示さず、はるかに低い新しいスポット（Ｒｆ＝０．１）を示した。溶媒を減圧下で除去し、生成物を真空下で乾燥し、中間体４−ヒドロキシ−２−ナフチルアミンを得、それを全く精製せずに次のステップで用いた。ジオキサン（１０ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−２−ナフチルアミンの溶液に、ＴＥＡ（１ｍＬ）及び二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．１４９ｇ、５．２７ｍモル）を添加した。反応混合物をＮ２下で４時間還流させた。ＴＬＣ（４：１ヘキサン／酢酸エチル）は、出発原料を全く示さず、より高い新しいスポット（Ｒｆ＝０．５５）を示した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。水性層を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を組み合わせて、塩水で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−２−ナフチルアミンをオイルとして得た（２、８０％の収率）。アセトン（１０ｍＬ）中の化合物２の溶液に水中ＮａＯＨ溶液（１０ｍＬ、１Ｍ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（４：１のヘキサン／酢酸エチル）は、出発原料を全く示さず、より低い新しいスポットを示した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出し、水で洗浄した。水性層を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中１０〜２０％酢酸エチルを用いて１０ｇのシリカゲルカラム上で精製し、化合物３をオイルとして得た（１８１ｍｇ、５３％）。
【０５５８】
化合物４の合成：窒素雰囲気下での無水ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の化合物３（５ｇ、１９．３ｍモル）の溶液を、臭化ベンジル（４ｇ、２３．１モル）、炭酸カリウム（３．７ｇ、２７モル）及びヨウ化テトラブチルアンモニウム（７０ｍｇ、０．０１ｍモル）で処理した。反応混合物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。クロマトグラフ分離（４×１０ｃｍのＳｉＯ２、１０〜２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン勾配溶出）により、純粋化合物４（５．４８ｇ、８３％）をクリーム粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ、ｐｐｍ）８．２２（ｄ，１ＨＪ＝８．１Ｈｚ，Ｃ５−Ｈ）、７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｃ８−Ｈ）、７．３〜７．５（ｍ，８Ｈ，Ｃ１−Ｈ，Ｃ６−Ｈ，Ｃ７−Ｈ，ＣＨ２Ｃ６Ｈ５）、７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，Ｃ３−Ｈ）、６．６２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、５．２３（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）、１．５５（ｓ，９Ｈ，ＯＣ（ＣＨ３）３）。
【０５５９】
化合物５の合成：撹拌棒及びラバーセプタムを備える１０００ｍｌの丸底フラスコに、化合物４（１３ｇｍ、０．０３７２モル）及びＴＨＦ（３００ｍｌ）を組み合わせた。明黄色溶液を、窒素雰囲気下で、ドライアイス浴で−２０℃に冷却した。ｐ−トルエンスルホン酸（０．１０ｇｍ、０．０００５モル）を反応物に添加し、溶液を１０分間撹拌した。Ｎ−ヨードスクシンイミド（１０ｇｍ、０．０４４６モル）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解し、カニューレにより反応物に添加した（約１時間）。溶液は、氷浴内で２時間撹拌すると褐色を帯びた。氷浴を取り出し、窒素下で室温まで１．５時間かけて温めた。ＴＬＣ（２：１のヘキサン／ＤＣＭ）は、出発原料を全く示さず、より高い新しいスポットを示した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍｌ）でクエンチし、白色固体が形成された。溶液を１０分間撹拌後、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）を反応物に添加した。水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機層を組み合わせて、塩水（１００ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空下で暗赤褐色固体になるまで濃縮した。固体を、溶出剤として２：１のヘキサン／ＤＣＭを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物５を褐色固体として得た（１４ｇｍ、７９％）。
【０５６０】
化合物６の合成：撹拌棒及び窒素注入口を備える２５０ｍｌの丸底フラスコに、化合物５（８．４ｇｍ、０．０１７７モル）及び無水ＤＭＦ（１２５ｍｌ）を組み合わせた。黄色−オレンジ色の溶液を、窒素雰囲気下、氷／塩浴で０℃に冷却した。ＮａＨ（６０％、２．２２ｇｍ、０．０５５４モル）を一度に反応物に添加した。溶液が濁化し、ガスが形成された。反応物を氷浴内で１５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、溶液を更に１５分間撹拌した。シス／トランス−１，３−ジクロロプロペン（５．３ｍＬ、０．０５７１モル）を注射器で反応物に添加した。反応物は、窒素下、室温で３時間撹拌すると、暗褐色に変化した。ＴＬＣ（４：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）は、出発原料を全く示さず、より低い新しいスポットを示した。反応物を水（２５０ｍｌ）でクエンチした。水性層を酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出し、有機層を塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、褐色オイルを得た。生成物を、溶出剤として１：１のＤＣＭ／ヘキサンを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製し、（Ｅ／Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシ）−１−ヨードナフタレン−２−イル（３−クロロアリル）カルバメート（６）を黄色オイルとして得た（９ｇｍ、９３％）。
【０５６１】
化合物７の合成：撹拌棒、温度プローブ、還流冷却器及び窒素注入口を備える５００ｍｌの三首丸底フラスコに、化合物６（９ｇｍ、０．０１６４モル）、トルエン（２００ｍｌ）、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオニトリル）（０．１５ｇｍ、０．０００９モル）及び水素化トリブチルスズ（１．５ｍＬ、０．００５６モル）を（注射器により）組み合わせた。窒素を溶液に通して１５分間バブリングし、次いで反応物を窒素下で８０℃に加熱した。８０℃で１５分間加熱後、水素化トリブチルスズ（１．５ｍＬ、０．００５６モル）を注射器により反応物に添加した。更に１５分間加熱後、水素化トリブチルスズ（１．５ｍＬ、０．００５６モル）を注射器により反応物に添加した。更に１５分後、水素化トリブチルスズ（１．０ｍＬ、０．００３７モル）を注射器により反応物に添加した。添加した水素化トリブチルスズの全容量は５．５ｍＬ、０．０２０４モルであった。反応物を８０℃で３０分間加熱し、次いで室温になるまで冷却させた。ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）は、出発原料を全く示さず、より高い新しいスポットを示した。溶液を真空下で濃縮し、黄色オイルを得た。オイルを、溶出剤として１００％ヘキサン〜５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色固体を得た。固体をヘキサンから再結晶し（１００ｍＬ、４５℃で３０分間、冷蔵庫内で２時間冷却、濾過により回収、真空下で乾燥）、化合物７を白色固体として得た（４．１６ｇｍ、６０％の収率）。
【化１４６】
2010522693.tif 000148
【０５６２】
ラセミ化合物７をＤＣＭ（５０ｍｇ、１ｍｌ）に溶解した。次いで、溶液をヘキサン（９ｍｌ）で希釈した。次いで、溶液をＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤプレップカラム（１０ミクロン、２０×２５０ｍｍ）上に加え、ヘキサン／イソプロパノール（９９：１、１５ｍｌ／分）を用いて分離した。分析カラム（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ、０．４６×２５ｃｍ、２０ミクロン）から、１において１０．６分の保持時間が得られる（９９：１のヘキサン／ＩＰＡ、１ｍｌ／分、１５分の実行）。ＮＭＲ（１Ｈ、ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：ｄ１．６１（９Ｈ，ｓ，Ｃ−（ＣＨ３）３）；３．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２５Ｈｚ，ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ）；３．９〜４．０（２Ｈ，ｍ，Ｃｌ−ＣＨ２−ＣＨ）；４．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２６Ｈｚ，ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ）；４．２５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２）；５．２６（２Ｈ，ｓ，Ｏ−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ５）；７．２〜７．５（８Ｈ，ｍ，Ｏ−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ５，Ｃ１０Ｈ５）；７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２１Ｈｚ，Ｃ１０Ｈ５）；８．３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２１Ｈｚ，Ｃ１０Ｈ５）。
【０５６３】
実施例１５：
【化１４７】
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【０５６４】
化合物２の合成：ＤＣＭ（５ｍＬ）中５％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（２００ｍｇ、０．５９ｍモル）及びｔｅｒｔ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１１４ｍｇ、０．５９ｍモル）の溶液に、ＨＡＴＵ（２２４ｍｇ、０．５９ｍモル）を添加後、ジイソプロピルエチルアミン（４１０μＬ、２．３６ｍモル）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出した。得られた生成物をＤＭＦ中５％ピペリジンに溶解し、室温で１０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製し、２を得た（１４９ｍｇ、８７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，２Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）、３．５４（ｍ，１Ｈ）、２．３３（ｍ，１Ｈ）、２．１２（ｂｒ，２Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）、１．１０（ｍ，３Ｈ）、０．９４（ｍ，３Ｈ）。Ｃ１６Ｈ２４Ｎ２Ｏ３（ＭＳ：２９２．１８）、実測値  Ｍ＋１＝２９３．３１。
【化１４８】
2010522693.tif 000150
【０５６５】
化合物３の合成：ＤＣＭ（４ｍＬ）中５％ＤＭＦの溶液中の２（１４９ｍｇ、０．５１ｍモル）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（１５９ｍｇ、０．５１ｍモル）、ＨＡＴＵ（１９４ｍｇ、０．５１ｍモル）、及びジイソプロピルエチルアミン（３５５μＬ、２．０４ｍモル）の溶液を３０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出した。得られた生成物はＦｍｏｃ保護基の脱保護を直接受け、それはＤＭＦ中の５％ピペリジンにおいて室温で１０分間なされた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより精製し、３を得た（１４６ｍｇ、７９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．０９（ｂｒ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，２Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）、３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．５４（ｍ，１Ｈ）、２．３３（ｍ，１Ｈ）、２．２５（ｂｒ，２Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）、１．２９（ｄ，３Ｈ）、１．１２（ｍ，３Ｈ）、０．９６（ｍ，３Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２９Ｎ３Ｏ４（ＭＳ：３６３．２２）、実測値  Ｍ＋１＝２６４．０１。
【化１４９】
2010522693.tif 000151
【０５６６】
化合物５の合成：乾燥メタノール（５ｍＬ）中の化合物３（１４６ｍｇ、０．４ｍモル）及び酢酸ナトリウム（９８．４ｍｇ、１．２ｍモル）の溶液に、化合物４（１３５ｍｇ、０．４８ｍモル）を０〜５℃で添加した。反応混合物を２０分間撹拌し続けた。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（７６ｍｇ、１．２ｍモル）を上記溶液に添加した。得られた反応混合物を更に１０分間撹拌し、室温で１時間温めておいた。次いで、反応溶液を濃縮し、分取用ＨＰＬＣにより精製し、５を得た（２３０ｍｇ、７７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．０９（ｂｒ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，２Ｈ）、７．８４（ｄ，２Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，２Ｈ）、７．３８（ｍ，２Ｈ）、７．２８（ｍ，２Ｈ）、４．７３（ｄ，２Ｈ）、４．４５（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．５４（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｔ，２Ｈ）、２．８１（ｔ，２Ｈ）、２．３３（ｍ，１Ｈ）、２．２０〜２．２５（ｂｒ，２Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）、１．２９（ｄ，３Ｈ）、１．１３（ｍ，３Ｈ）、０．９２（ｍ，３Ｈ）。Ｃ３６Ｈ４４Ｎ４Ｏ６（ＭＳ：６２８．３３）、実測値  Ｍ＋１＝６２９．４５。
【化１５０】
2010522693.tif 000152
【０５６７】
化合物５の合成：５（７２ｍｇ、０．１１ｍモル）の溶液をＴＦＡ／ＤＣＭ（１：２、２ｍＬ）と１５分間組み合わせた。溶媒を真空下で蒸発させ、更に高真空下で乾燥し、次の反応に備えた（７６．８ｍｇ、９８．４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．５５（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．２（ｂｒｓ，１Ｈ）、８．０９（ｂｒ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，２Ｈ）、７．８４（ｄ，２Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，２Ｈ）、７．３８（ｍ，２Ｈ）、７．２８（ｍ，２Ｈ）、４．７３（ｄ，２Ｈ）、４．４５（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．５４（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｔ，２Ｈ）、２．８１（ｔ，２Ｈ）、２．３３（ｍ，１Ｈ）、２．２０〜２．２５（ｂｒ，２Ｈ）、１．２９（ｄ，３Ｈ）、１．１１（ｍ，３Ｈ）、０．９５（ｍ，３Ｈ）。Ｃ３２Ｈ３６Ｎ４Ｏ６（ＭＳ：５７２．２６）、実測値  Ｍ＋１＝５７３．３８。
【化１５１】
2010522693.tif 000153
【０５６８】
化合物８の合成：ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物７（２５ｍｇ、０．０３３ｍモル）、５及びＨＡＴＵ（１３ｍｇ、０．０３３ｍモル）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２３μＬ、０．１３ｍモル）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより直接精製し、８を得た（３３．３ｍｇ、７６％）。Ｃ６０Ｈ６２ＣｌＮ９Ｏ８（ＭＳ：１０７７．４４）、実測値  Ｍ＋１＝１０７８．３１。
【化１５２】
2010522693.tif 000154
【０５６９】
化合物１０の合成：化合物８（３３ｍｇ、０．０２５ｍモル）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５％ピペリジンを用いて室温で１０分間脱保護した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物をエーテルですすぎ（５ｍＬ×２）、更なる精製を行わなかった。得られた生成物を、ジイソプロピルエチルアミン（６．６μＬ、０．０３８ｍモル）及びＤＭＦ（１ｍＬ）の存在下で９（１１ｍｇ、０．０３８ｍモル）と３時間反応させた。反応混合物を濃縮し、分取用ＨＰＬＣにより精製し、１０を得た（２４ｍｇ、７５％）。Ｃ５３Ｈ５９ＣｌＮ１０Ｏ９（ＭＳ：１０１４．４２）、実測値  Ｍ＋１＝１０１５．０２。
【０５７０】
実施例１６：
【化１５３】
2010522693.tif 000155
【０５７１】
化合物２の合成：１ｇ（２．６６ｍモル）の１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロン酸メチル化合物（１）を、丸底フラスコ内のＤＭＦ１ｍＬ及びＴＨＦ４ｍＬに溶解した。ベンジルアミン４００μＬをフラスコに添加し、反応混合物を一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、生成物を、ヘキサン中１０％〜５０％酢酸エチルを用いてシリカゲル上で精製した。これにより、６００ｍｇの（２）を薄緑色オイルとして６７％の収率で得た。ＮＭＲ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．５（ｄ，１Ｈ）、δ５．３（ｍ，１Ｈ）、δ５．２８（ｍ，１Ｈ）、δ４．９（ｔ，１Ｈ）、δ４．７４（ｍ，１Ｈ）、δ４．３８（ｄ，１Ｈ）、δ３．６（ｓ，３Ｈ）、δ１．９９〜１．９６（３ｓ，９Ｈ）。
【０５７２】
化合物３の合成：６００ｍｇ（１．７９ｍモル）の化合物（２）を丸底フラスコ内の乾燥ジクロロメタンに溶解した。６６．５μＬ（０．４５ｍモル）のＤＢＵを添加後、１．２６ｍＬ（１２．７ｍモル）のトリクロロアセトニトリルを添加した。反応混合物を１〜２時間撹拌させた。反応を、リンモリブデン酸染色試薬を用いるＴＬＣにより監視した。反応終了後、溶媒を蒸発させ、生成物をシリカゲル上で精製した。シリカカラムにヘキサン中０．１％ＴＥＡを充填した。生成物をヘキサン中５％〜５０％酢酸エチルで溶出させ、６００ｍｇの化合物（３）を得た（７０％の収率）。Ｍ＋１＝４７７．０、Ｍ＋［Ｎａ］＝４９９．０、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．０８（ｓ，１Ｈ）、δ６．４８（ブロード，１Ｈ）、δ５．４３（ｔ，１Ｈ）、δ５．２０（ｍ，２Ｈ）、δ４．３２（ｄ，１Ｈ）、δ３．６３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ）、δ１．９８〜１．９６（９Ｈ，３×ＡｃＯ）。Ｃ１３ＮＭＲ（１００ＭＨＺ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７０．２、１７０．１、１６９．８、１６７．４、１５８．２、９２．３、９０．５、７０．５、６９．５、６８．９、５３．４８、２１．０、２０．８、２０．８。
【化１５４】
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【０５７３】
化合物５の合成：３４４ｍｇ（０．７２ｍモル）の化合物３及び２００ｍｇ（０．６ｍモル）の化合物４を、乾燥分子ふるいを有する丸底フラスコ内の無水ＤＣＭに溶解した。フラスコを−１０℃でのＮａＣｌ／氷浴上に置いた。３０μＬ（０．２４ｍモル）のトリフルオロホウ素ジエチルエーテラートを−１０℃で反応混合物に添加した。温度を−５℃まで徐々に上昇させ、この温度で１時間、次いで０℃で３０分間撹拌した。トリフルオロホウ素エーテラートの３当量２２６μＬ（１．８ｍモル）を０℃で添加し、温度を室温まで徐々に上昇させた。撹拌を２時間継続した。溶媒を蒸発させ、生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、２５０ｍｇ（０．４５ｍモル）の化合物（５）を得た（化合物４を基準として７５％の収率）。Ｍ＋１＝５５０．０。
【化１５５】
2010522693.tif 000157
【０５７４】
化合物７の合成：無水ＤＣＭ２ｍＬ中の２０ｍｇ（０．０７ｍモル）の化合物６の溶液に０℃で無水ＤＣＭ２ｍＬ中の３２ｍｇ（０．０４８ｍモル）の化合物５の溶液を添加後、０℃でピリジン４００μＬを添加した。反応混合物をこの温度で１５分間撹拌した。生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、３３ｍｇの化合物７を得た（８４％の収率）。Ｍ＋１＝８０８及びＭ＋［Ｎａ］＝８３０。
【化１５６】
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【０５７５】
化合物８の合成：化合物８を、そのＨＣｌ塩としてジオキサン中の４モルのＨＣｌ溶液で、又はそのＴＦＡ塩としてＤＣＭ中の３３％ＴＦＡ溶液で調製した。反応を終了までＨＰＬＣにより監視した。溶媒を蒸発させ、生成物を高真空下で一晩乾燥し、次のステップでそのまま用いた。Ｍ＋１＝７０８．２。
【化１５７】
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【０５７６】
化合物１０の合成：ＤＭＦ２ｍＬ中の３１ｍｇ（０．０４ｍモル）の化合物９を、丸底フラスコ内、１５．５ｍｇ（０．０４ｍモル）のＨＡＴＵ及びＤＩＰＥＡ（ｐＨが７．０であることを確認するのに十分な２１μＬ、０．１２ｍモル）で２０分間予備活性化した。次いで、ＤＭＦ１ｍＬ中の３０ｍｇ（０．０３６ｍモル）の化合物８のＴＦＡ塩の溶液を上記フラスコに添加後、１４μＬ（０．０８ｍモル）のＤＩＰＥＡを添加した。反応混合物を３時間撹拌しておいてから溶媒を蒸発させ、それを逆相ＨＰＬＣにより精製し、３１ｍｇの所望の化合物１０のＴＦＡ塩を５９％の収率で得た。Ｍ＋１＝１３４８．８。
【化１５８】
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【０５７７】
化合物１１の合成：３０ｍｇの化合物１０（０．０２ｍモル）をＭｅＯＨ溶液２．５ｍＬ中及び２Ｎ  ＮａＯＨ溶液４μＬ中で５時間撹拌することにより脱保護した。反応混合物を酢酸で中和し、逆相ＨＰＬＣを通過させ、１７ｍｇ（０．０１４ｍモル）の２通りの化合物１１のＴＦＡ塩を得た。Ｍ＋１＝９８６．６。
【化１５９】
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【０５７８】
化合物１２の合成：１７ｍｇの２通りの化合物１１のＴＦＡ塩（０．０１４ｍモル）を、ＤＭＦ３ｍＬ中及びＤＩＰＥＡ１２．２μＬ（０．０７ｍモル）中の５．１ｍｇ（０．０１８ｍモル）の市販の４−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルと１時間反応させた。溶媒を蒸発させ、１４ｍｇ（０．０１１ｍモル）の所望の化合物１２のＴＦＡ塩を、逆相Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣによる精製後に得た（７６％の収率）。Ｍ＋１＝１１５１．８。
【０５７９】
実施例１７：
【化１６０】
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【０５８０】
化合物２の合成：ＤＣＭ（５ｍＬ）中の５％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２００ｍｇ、０．３７ｍモル）及びｔｅｒ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１１４ｍｇ、０．５９ｍモル）の溶液にＨＡＴＵ（２２４ｍｇ、０．５９ｍモル）を添加後、ジイソプロピルエチルアミン（４１０μＬ、２．３６ｍモル）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出した。得られた生成物をＤＭＣ／ＴＦＡ（１：１、１０ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で９０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物をエーテルで沈殿させ、２を得た（２０６ｍｇ、８０％）。
【０５８１】
化合物４の合成：ＤＭＦ中の化合物２（２０．６ｍｇ）の溶液にＨＡＴＵ（１０．３ｍｇ）を添加し、得られた反応混合物を室温で１０分間撹拌後、３（２０ｍｇ）にジイソプロピルエチルアミン（２３μＬ）を室温で添加した。反応混合物を６０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより直接精製し、４を得た（２８ｍｇ、７６％）。
【０５８２】
化合物５の合成：化合物４（２８ｍｇ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５％ピペリジンを用いて室温で１０分間脱保護した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物をエーテルですすぎ（５ｍＬ×２）、更なる精製を行わなかった。得られた生成物を、ジイソプロピルエチルアミン（１２μＬ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）の存在下でＮ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート（１０ｍｇ）と３時間反応させた。反応混合物を濃縮し、分取用ＨＰＬＣにより精製し、５（１７ｍｇ）を得た。（ＭＳ：１１００）、実測値  Ｍ＋１＝１１０１。
【０５８３】
実施例１８：（配列番号１５に包含される実施例１８中のペプチド）
【化１６１】
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【０５８４】
化合物２の合成：ＤＣＭ（５ｍＬ）中の５％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＯＨ（配列番号１５）（２００ｍｇ、０．２７ｍモル）及びｔｅｒ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１１４ｍｇ、０．５９ｍモル）の溶液にＨＡＴＵ（２２４ｍｇ、０．５９ｍモル）を添加後、ジイソプロピルエチルアミン（４１０μＬ、２．３６ｍモル）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出した。得られた生成物をＤＭＣ／ＴＦＡ（１：１、１０ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で９０分間撹拌した。溶媒を真空下で撹拌し、粗生成物をエーテルで沈殿させ、２（１９０ｍｇ）を得た。
【０５８５】
化合物４の合成：ＤＭＦ中化合物２（４２ｍｇ、０．０４９ｍモル）の溶液にＨＡＴＵ（２０ｍｇ）を添加し、得られた反応混合物を室温で１０分間撹拌後、３（４０ｍｇ）にジイソプロピルエチルアミン（３５μＬ）を室温で添加した。反応混合物を６０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより直接精製し、４（３３ｍｇ）を得た。
【０５８６】
化合物５の合成：化合物４（３３ｍｇ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５％ピペリジンを用いて室温で１０分間脱保護した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物をエーテルですすぎ（５ｍＬ×２）、更なる精製を行わなかった。得られた生成物を、ジイソプロピルエチルアミン（１２μＬ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）の存在下でＮ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート（１０ｍｇ）と３時間反応させた。反応混合物を濃縮し、分取用ＨＰＬＣにより精製し、５（１５ｍｇ）を得た。（ＭＳ：１２９６）、実測値  Ｍ＋１＝１２９７。
【０５８７】
実施例１９：
【化１６２】
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【０５８８】
化合物２の合成：ＤＣＭ（５ｍＬ）中の５％ＤＭＦの溶液中のＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＡｓＮ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２００ｍｇ、０．３７ｍモル）及びｔｅｒ−ブチル−４−アミノベンゾエート（１１４ｍｇ、０．５９ｍモル）の溶液にＨＡＴＵ（２２４ｍｇ、０．５９ｍモル）を添加後、ジイソプロピルエチルアミン（４１０μＬ、２．３６ｍモル）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出した。得られた生成物をＤＭＣ／ＴＦＡ（１：１、１０ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で９０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物をエーテルで沈殿させ、２を得た（１９０ｍｇ、７２％）。
【０５８９】
化合物４の合成：ＤＭＦ中の化合物２（２０ｍｇ）の溶液にＨＡＴＵ（１３ｍｇ）を添加し、得られた反応混合物を室温で１０分間撹拌後、３（２５ｍｇ）にジイソプロピルエチルアミン（２２μＬ）を室温で添加した。反応混合物を６０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を分取用ＨＰＬＣにより直接精製し、４を得た（２１ｍｇ、６０％）。
【０５９０】
化合物５の合成：化合物４（２３ｍｇ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５％ピペリジンを用いて室温で１０分間脱保護した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物をエーテルですすぎ（５ｍＬ×２）、更なる精製を行わなかった。得られた生成物を、ジイソプロピルエチルアミン（１２μＬ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）の存在下でＮ−スクシンイミジル−６−マレイミドヘキサノエート（８ｍｇ）と３時間反応させた。反応混合物を濃縮し、分取用ＨＰＬＣにより精製し、５（１０ｍｇ）を得た。（ＭＳ：１１０１）、実測値  Ｍ＋１＝１１０２。
【０５９１】
実施例２０：抗体への薬剤−リンカー分子の複合
ヒドラゾンリンカーについて：本実施例では、（場合により他の基、例えばスペーサー、反応性官能基などを含む）本発明の薬剤−リンカー分子を標的化剤Ｘ４としての抗体に複合するための反応の条件及び方法について記載する。条件及び方法は、あくまで例示であって限定されるものではない。薬剤−リンカー分子を抗体に複合するための他のアプローチは当該技術分野で既知である。
【０５９２】
本明細書中に記載の複合方法は、抗体のリジンと２−イミノチオランとの反応、その後の薬剤−リンカー分子と活性マレイミド基との反応を介する、遊離チオール基の抗体への導入に基づく。最初に複合対象の抗体に対し、緩衝液を、５０ｍＭ  ＮａＣＬ、２ｍＭ  ＤＴＰＡ、ｐＨ８．０を含有するｐＨ８．０の０．１Ｍリン酸塩緩衝液に交換し、５〜１０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。チオール化を２−イミノチオランの抗体への添加により行った。添加対象の２−イミノチオランの量は予備実験で測定されたものであり、抗体間で異なる。予備実験では、漸増量の２−イミノチオランを抗体に添加し、抗体と共に室温で１時間インキュベート後、抗体をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを用いて脱塩し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．０にし、導入されたチオール基の数をジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）との反応により速やかに測定した。チオール基とＤＴＤＰとの反応の結果、チオジピリジンが遊離され、それを３２４ｎｍで監視した。０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度での試料を用いた。２８０ｎｍでの吸光度を用い、試料中でのタンパク質の濃度を正確に測定し、次いで一定分量の各試料（０．９ｍｌ）をＤＴＤＰ０．１ｍｌ（エタノール中、５ｍＭストック溶液）と共に室温で１０分間インキュベートした。緩衝液単独＋ＤＴＤＰのブランク試料も併せてインキュベートした。１０分後、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、存在するチオールの数を、チオジピリジンにおける消衰係数１９８００Ｍ−１を用いて定量した。
【０５９３】
典型的には、１抗体当たり３つのチオール基のチオール化レベルが望ましい。例えば、１つの特定の抗体の場合、１５倍モル過剰の２−イミノチオランの添加、次いで室温で１時間のインキュベーションによりこれを行った。したがって、複合対象の抗体を所望のモル比で２−イミノチオランと共にインキュベートし、次いで脱塩し、結合用緩衝液にした（５ｍＭグリシン、３％グリセリン及び２ｍＭ  ＤＴＰＡを含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．０）。チオール化材料を氷上で維持する間、導入されたチオールの数を上記のように定量した。
【０５９４】
導入されたチオールの数の検証後、活性マレイミド基を有する薬剤−リンカー分子を１チオール当たり３倍モル過剰で添加した。複合反応を、最終濃度として５％のエチレングリコールジメチルエーテルも含有する結合用緩衝液（又は適切な他の溶媒）中で行った。一般に、薬剤−リンカーストック溶液を９０％エチレングリコールジメチルエーテル、１０％ジメチルスルホキシドに溶解した。抗体への添加については、ストック溶液をチオール化抗体に直接添加し、それは最終濃度が５％になるように添加された十分なエチレングリコールジメチルエーテルを含有するか、又は最終濃度１０％のエチレングリコールジメチルエーテルを含有する結合用緩衝液で予備希釈後、等容量のチオール化抗体に添加した。
【０５９５】
複合反応物を混合しながら室温で２時間インキュベートした。インキュベーション後、反応混合物を１４０００ＲＰＭで１５分間遠心し、直ちに精製しない場合、ｐＨを７．２に調節した。抱合体の精製を、多数の方法を用いてクロマトグラフィーにより行った。抱合体は、５ｍＭグリシン、５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び３％グリセリンを含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．２で予備平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ２００カラム上でのサイズ排除クロマトグラフィーを用いて精製されうる。クロマトグラフィーを２８ｃｍ／ｈの線形流速で行った。抱合体を含有する画分を回収し、プールし、濃縮した。あるいは、精製はイオン交換クロマトグラフィーにより実施可能である。条件は抗体間で異なり、各々の場合に最適化される必要がある。例えば、抗体−薬剤複合反応混合物を、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、３％グリセリン、ｐＨ６．０で予備平衡化したＳＰ−セファローズカラムに適用した。抗体抱合体を、平衡化緩衝液中、０〜１Ｍ  ＮａＣｌの勾配を用いて溶出した。抱合体を含有する画分をプールし、ｐＨを７．２に調節し、試料を必要に応じて濃縮した。
【０５９６】
ペプチドリンカーについて：本実施例では、（場合により他の基、例えばスペーサー、反応性官能基などを含む）本発明の薬剤−リンカー分子を標的化剤Ｘ４としての抗体に複合するための反応の条件及び方法について記載する。条件及び方法は、あくまで例示であって限定されるものではない。薬剤−リンカー分子を抗体に複合するための他のアプローチは当該技術分野で既知である。
【０５９７】
本明細書中に記載の複合方法は、抗体のリジンと２−イミノチオランとの反応、その後の薬剤−リンカー分子と活性マレイミド基との反応を介する、遊離チオール基の抗体への導入に基づく。最初に複合対象の抗体に対し、緩衝液を、５０ｍＭ  ＮａＣＬ、２ｍＭ  ＤＴＰＡ、ｐＨ８．０を含有するｐＨ８．０の０．１Ｍリン酸塩緩衝液に交換し、５〜１０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。チオール化を２−イミノチオランの抗体への添加により行った。添加対象の２−イミノチオランの量は予備実験で測定されたものであり、抗体間で異なる。予備実験では、漸増量の２−イミノチオランを抗体に添加し、抗体と共に室温で１時間インキュベート後、抗体をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを用いて脱塩し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．０にし、導入されたチオール基の数をジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）との反応により速やかに測定した。チオール基とＤＴＤＰとの反応の結果、チオジピリジンが遊離され、それを３２４ｎｍで監視した。０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度での試料を用いた。２８０ｎｍでの吸光度を用い、試料中でのタンパク質の濃度を正確に測定し、次いで一定分量の各試料（０．９ｍｌ）をＤＴＤＰ０．１ｍｌ（エタノール中、５ｍＭストック溶液）と共に室温で１０分間インキュベートした。緩衝液単独＋ＤＴＤＰのブランク試料も併せてインキュベートした。１０分後、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、存在するチオールの数を、チオジピリジンにおける消衰係数１９８００Ｍ−１を用いて定量した。
【０５９８】
典型的には、１抗体当たり３つのチオール基のチオール化レベルが望ましい。例えば、１つの特定の抗体の場合、１５倍モル過剰の２−イミノチオランの添加、次いで室温で１時間のインキュベーションによりこれを行った。したがって、複合対象の抗体を所望のモル比で２−イミノチオランと共にインキュベートし、次いで脱塩し、結合用緩衝液にした（５ｍＭグリシン、０．５％ポビドン（１０ｋ）及び２ｍＭ  ＤＴＰＡを含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．０）。チオール化材料を氷上で維持する間、導入されたチオールの数を上記のように定量した。
【０５９９】
導入されたチオールの数の検証後、活性マレイミド基を有する薬剤−リンカー分子を１チオール当たり３倍モル過剰で添加した。複合反応を、最終濃度として５％のＤＭＳＯも含有する結合用緩衝液（又は適切な他の溶媒）中で行った。一般に、薬剤−リンカーストック溶液を１００％ジメチルスルホキシドに溶解した。抗体への添加については、ストック溶液をチオール化抗体に直接添加し、それは最終濃度が１０％になるように添加された十分なＤＭＳＯを含有するか、又は最終濃度１０％のＤＭＳＯを含有する結合用緩衝液で予備希釈後、等容量のチオール化抗体に添加した。
【０６００】
複合反応物を混合しながら室温で２時間インキュベートした。インキュベーション後、反応混合物を遠心し、０．２μｍのフィルタを通して濾過した。抱合体の精製を、多数の方法を用いてクロマトグラフィーにより行った。抱合体は、５ｍＭグリシン、５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び０．５％ポビドン（１０ｋ）を含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．２で予備平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ２００カラム上でのサイズ排除クロマトグラフィーを用いて精製されうる。クロマトグラフィーを２８ｃｍ／ｈの線形流速で行った。抱合体を含有する画分を回収し、プールし、濃縮した。あるいは、精製はイオン交換クロマトグラフィーにより可能である。条件は抗体間で異なり、各々の場合に最適化される必要がある。例えば、抗体−薬剤複合反応混合物を、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、０．５％ポビドン（１０ｋ）、ｐＨ５．５で予備平衡化したＳＰ−セファローズカラムに適用した。抗体抱合体を、ｐＨ５．５での平衡化緩衝液中、０〜１Ｍ  ＮａＣｌの勾配を用いて溶出した。抱合体を含有する関連画分をプールし、（５ｍＭグリシン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ及び０．５％ポビドン（１０ｋ）を含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．２を含有する）調製用緩衝液に対して透析した。
【０６０１】
実施例２１：インビボ試験
Ａ．化合物Ａ〜Ｇ
７８６−Ｏ（ＡＴＣＣ登録番号ＣＲＬ−１９３２）を、標準の実験方法を用いてインビトロで増殖した。６〜８週齢の雄ＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＹ）の右側腹に、マウス１匹当たりＰＢＳ／Ｍａｔｒｉｇｅｌ（１：１）０．２ｍｌ中、２５０万個の７８６−Ｏを皮下移植した。移植後、週２回、マウスを秤量し、その腫瘍について電子キャリパーを用いて三次元的に測定した。腫瘍体積を高さ×幅×長さとして計算した。平均２００ｍｍ３の腫瘍を有するマウスを治療群に無作為化した。０日目、マウスに対し、ＰＢＳ媒体、細胞毒素に複合されたアイソタイプ対照抗体又は細胞毒素に複合された抗ＣＤ７０  ＨｕＭＡｂ  ２Ｈ５を腹腔内投与した。各群はマウス７匹を有した。
【０６０２】
以下の細胞毒素について試験した。
【化１６３】
2010522693.tif 000165
【化１６４】
2010522693.tif 000166
【化１６５】
2010522693.tif 000167
【０６０３】
表１は、ｍモルの毒素（化合物Ａ〜Ｇ）に基づく投与群の概要である。
【０６０４】
【表１】
2010522693.tif 000168
【０６０５】
図１は平均腫瘍体積対投与後日数を示し、図２は腫瘍体積中央値対投与後日数を示す。これらの実験に基づく有効性は、以下の降順、すなわち化合物Ｄ＞化合物Ａ＞化合物Ｆ＞化合物Ｂ＞化合物Ｃ＞化合物Ｅ＞裸ＣＤ７０．１／化合物Ｇであると思われる。図３は、パーセント体重変化対投与後日数を示す。
【０６０６】
Ｂ．化合物Ａ、Ｆ、Ｈ〜Ｊ
７８６−Ｏ（ＡＴＣＣ寄託番号ＣＲＬ−１９３２）細胞を標準の実験法を用いてインビトロで展開した。６〜８週齢の雄ＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＹ）の右脇腹に、マウス１匹当たりＰＢＳ／マトリゲル（１：１）０．２ｍｌ中の２５０万個の７８６−Ｏを皮下移植した。移植後、週に２回、マウスを秤量し、その腫瘍を、電子キャリパーを用いて三次元的に測定した。腫瘍体積を高さ×幅×長さとして計算した。平均２００ｍｍ３の腫瘍を有するマウスを治療群に無作為化した。０日目、マウスに対し、ＰＢＳ媒体、細胞毒素と複合されたアイソタイプ対照抗体又は細胞毒素と複合された抗ＣＤ７０  ＨｕＭＡｂ  ２Ｈ５を腹腔内投与した。各群はマウス８匹を有した。
【０６０７】
以下の細胞毒素について試験した。
【化１６６】
2010522693.tif 000169
【化１６７】
2010522693.tif 000170
【０６０８】
表２は、ｍモルの細胞毒素（化合物Ａ、Ｆ、Ｈ〜Ｊ）に基づく投与群の概要である。
【０６０９】
【表２】
2010522693.tif 000171
【０６１０】
図４は平均腫瘍体積対投与後日数を示し、図５は腫瘍体積中央値対投与後日数を示す。これらの実験に基づく有効性は、以下の降順、すなわち化合物Ｊ／化合物Ｃ＞化合物Ｈ＞化合物Ｇ／化合物Ｉ＞裸ＣＤ７０．１であると思われる。図６は、パーセント体重変化対投与後日数を示す。
【０６１１】
実施例２２：
ＬＮＣａＰ及び７８６−Ｏ細胞上での腫瘍で活性化される活性
ＡＴＣＣから入手した接着細胞のＬＮＣａＰ（前立腺癌）及び７８６−Ｏ（腎細胞癌）を、ＡＴＣＣの使用説明書に従い、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ培地中で培養した。試験日に、細胞を、トリプシン溶液を有するプレートから取り出した。採取した細胞を洗浄し、ＬＮＣａＰ及び７８６−０細胞について、１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ中にそれぞれ０．２５若しくは０．１×１０６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。細胞懸濁液１００μｌを９６ウェルプレートに添加し、プレートを３時間インキュベートし、細胞を接着させた。このインキュベーション後、特異抗体−細胞毒素抱合体の３００ｎＭの細胞毒素（実施例２１の化合物Ｊ）からの１：３の連続希釈物を各ウェルに添加した。次いで、プレートを４８時間インキュベートし、１００μＣｉ／ｍｌの３Ｈ−チミジン１０μｌでパルスし、更に７２時間インキュベートした。プレートから９６ウェルのＨａｒｖｅｓｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて採取し、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  Ｃｏｕｎｔｅｒ上で計数した。４つのパラメータのロジスティック曲線を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用い、薬剤モル濃度の関数として３Ｈ−チミジン取り込みに適合させ、ＥＣ５０値を決定した。ロジスティック曲線を様々な抗体−細胞毒素抱合体に適合させ、ＬＮＣａＰ及び７８６−Ｏインビボでのそれらの得られたＥＣ５０値をそれぞれ図７で示す。
【０６１２】
ＳＣＩＤマウスにおけるＬＮＣａＰ／前立腺間質の共培養腫瘍に対する有効性
ＬＮＣａＰ異種移植片試験を以下のように行った。すなわち、各１２０ＣＢ１７．ＳＣＩＤマウスの脇腹領域に、ＰＢＳ／マトリゲル（１：１）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）０．２ｍｌ中に再懸濁した２００万個のＬＮＣａＰ細胞及び１００万個の前立腺間質細胞（カタログ番号ＣＣ−２５０８、Ｃａｍｂｒｅｘ  Ｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｉｎｃ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を皮下注射した。移植後、週１回、マウスを秤量し、その腫瘍を、電子キャリパーを用いて三次元的に測定した。腫瘍体積を高さ×幅×長さ／２として計算した。１日前、平均５０ｍｍ３の腫瘍を有するマウスを、マウス７匹からなる１６の治療群に無作為化し、０日目、マウスを、表１に記載の投与計画に従い、媒体、抗体又は抗体−細胞毒素抱合体で静脈内投与した。６２日目、試験を終了した。
【０６１３】
【表３】
2010522693.tif 000172
【０６１４】
図８は、試験された１６の異なる各群中のマウス７匹における腫瘍体積の増加中央値を示す。左上グラフに示されるように、抗ＲＧ−１及び抗ＥＤ−Ｂ裸抗体は腫瘍成長に対する阻害効果を全く有しなかった。抗ＰＳＭＡ裸抗体は一部、抗腫瘍成長効果を有した。しかし、この抗腫瘍効果は細胞毒素の抗ＰＳＭＡ抗体への複合時に著増した。内在化抗原に対する複合抗体の抗腫瘍活性と類似の抗腫瘍活性が、非内在化抗原に対して無力な従来の抗体が細胞毒素に複合される場合に認められた。これらの結果により、細胞毒素の抗腫瘍活性が非内在化抗原及びＰＳＭＡなどの内在化抗原に対する抗体により媒介されうることが確認される。
【０６１５】
図９は、試験対象の１６の異なる各群中のマウス７匹における体重変化中央値を示す。ＬＮＣａＰ腫瘍がマウスにおいて悪液質をもたらすことから、（無制御腫瘍成長をもたらす）無力な治療であれば体重減少の誘発が想定されることになる。この結果は、おそらくは腫瘍成長に起因し、媒体又は裸抗体で治療されたマウスで認められた。この試験で用いられるマウスモデルが免疫不全であることから、その場合、強力なＡＤＣＣ応答を介し、例えば裸抗ＰＳＭＡ抗体による治療に応答して腫瘍成長の制御が想定されないことになる。それに対し、抗体−薬剤抱合体で治療されたマウスは投与直後にその最低の体重を有し、これは試験した０．０３〜０．３の全ての用量が良好な耐性を示したことを示す。抱合体群におけるマウスの体重が増加したという事実は、腫瘍成長の制御に起因して悪液質が緩和されたことを示す。
【０６１６】
ＳＣＩＤマウスにおけるＬＮＣａＰ腫瘍に対する有効性
ＬＮＣａＰ異種移植片試験を以下のように行った。すなわち、各１２０ＣＢ１７．ＳＣＩＤマウスの脇腹領域に、ＰＢＳ／マトリゲル（１：１）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）０．２ｍｌ中に再懸濁した２５０万個のＬＮＣａＰ細胞を皮下注射した。移植後、週１回、マウスを秤量し、その腫瘍を、電子キャリパーを用いて三次元的に測定した。腫瘍体積を高さ×幅×長さ／２として計算した。１日前、平均８０ｍｍ３の腫瘍を有するマウスを、マウス７匹からなる１３の治療群に無作為化し、０日目、マウスを、表２に記載の投与計画に従い、媒体、抗体又は抗体−細胞毒素抱合体で静脈内治療した。５５日目、試験を終了した。
【０６１７】
【表４】
2010522693.tif 000173
【０６１８】
図１０は、試験対象の１３の異なる各群中のマウス８匹における腫瘍体積の平均増加を示す。ＬＮＣａＰ／間質モデルと同様、抗ＲＧ−１裸抗体は腫瘍成長に対する阻害効果を全く有しなかった。抗ＰＳＭＡ裸抗体は一部、抗腫瘍成長効果を有した。抗ＰＳＭＡ抗体の抗腫瘍効果は細胞毒素の複合時に著増した。同様であるが想定されない抗腫瘍活性が、非内在化抗ＲＧ−１抗体が細胞毒素に複合される場合に認められた。これらの結果により、細胞毒素の抗腫瘍活性が非内在化抗原に対する抗体により媒介されうることが更に確認される。
【０６１９】
図１１は、試験対象の１６の異なる各群中のマウス７匹における体重変化中央値を示す。上で指摘のように、ＬＮＣａＰ腫瘍はマウスにおいて悪液質をもたらす。更に、この悪液質により、おそらくは腫瘍成長の増大及び内在化抗体に対する強力なＡＤＣＣ応答を備える能力の欠如に起因し、媒体又は裸抗体で治療されたマウスにおいて体重減少がもたらされた。それに対し、抗体−薬剤抱合体で治療されたマウスは投与直後にその最低の体重を有し、これは試験した０．０３〜０．３の全ての用量が良好な耐性を示したことを示す。抱合体群におけるマウスの体重が増加したという事実は、腫瘍成長の制御に起因して悪液質が緩和されたことを示す。
【０６２０】
ＳＣＩＤマウスにおける大きいＬＮＣａＰ腫瘍に対する有効性
次いで、抗ＰＳＭＡ−細胞毒素の活性が、非常に大きいＬＮＣａＰ細胞腫瘍異種移植片を担持するＳＣＩＤマウスにおいて示された。ＬＮＣａＰ細胞（ＰＢＳ０．１ｍｌ＋マトリゲル／マウス０．１ｍｌ中、２５０万個）を雄ＳＣＩＤマウスに皮下移植し、腫瘍が３１０ｍｍ３の平均サイズに達した時、マウス８匹からなる群を、０．１若しくは０．３μｍｏｌ／ｋｇ体重でのいずれかの抗ＰＳＭＡ−細胞毒素の単回用量の腹腔内注射により治療した。更に、対照群に媒体単独を注射した。腫瘍体積及びマウスの体重を、試験を通じて記録し、それを投与後６０日間にわたって続けた。図１２に図示される結果は、抗ＰＳＭＡ−２４６０抱合体の単回用量がマウスにおいて非常に大きい腫瘍から開始する場合でさえ有効であることを示した。
【０６２１】
実施例２３．抗ＣＤ７０−細胞毒素によるインビボでの腫瘍成長阻害
本実施例は、腎癌の２つの異種移植片モデルにおける抗ＣＤ７０−細胞毒素の有効性を示す。細胞毒素抱合体は、以下の細胞毒素化合物に結合されたＣＤ７０抗体からなる。
【化１６８】
2010522693.tif 000174
【０６２２】
抗ＣＤ７０−サイトトキシンの活性がＡ４９８腫瘍異種移植片を担持するＳＣＩＤマウスにおいて示された。Ａ４９８細胞（マウス１匹当たりＰＢＳ０．１ｍｌ及びＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）０．１ｍｌ中５００万個）をＳＣＩＤマウスに皮下移植し、腫瘍が１１０ｍｍ３の平均サイズに達した時、マウス８匹からなる群を、０．１μｍｏｌ／ｋｇ体重での抗ＣＤ７０−サイトトキシンの単回投与の腹腔内注射により治療した。更に、対照群に媒体単独を注射した。腫瘍体積（ＬＷＨ／２）及びマウスの重量を、試験を通じて記録し、投与後約６０日間にわたって続けた。結果を図１３に示す。これらの結果は、抗ＣＤ７０−サイトトキシン抱合体が腎癌に対して有効であることを示す。
【０６２３】
Ｃａｋｉ−１細胞異種移植片に対する抗ＣＤ７０−サイトトキシンの活性を実証するため、マウス１匹当たりＰＢＳ０．１ｍｌ及びＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）０．１ｍｌ中、２５０万個のＣａｋｉ−１細胞をＳＣＩＤマウスに皮下移植し、腫瘍が１３０ｍｍ３の平均サイズに達した時、マウス８匹からなる群を、０．０３、０．１若しくは０．３μｍｏｌ／ｋｇ体重のいずれかでの抗ＣＤ７０−サイトトキシンの単回投与の腹腔内注射により治療した。更に、対照群に対し、媒体単独又は０．１及び０．３μｍｏｌ／ｋｇの用量でのサイトトキシンに結合されたアイソタイプ対照抗体のいずれかを注射した。腫瘍体積（ＬＷＨ／２）及びマウスの重量を、試験を通じて記録し、投与後６１日間にわたって続けた。結果を図１４に示す。これらの結果は、抗ＣＤ７０抗体単独及びアイソタイプ対照抱合体がこの実験において腫瘍の成長に対してほとんど効果を有しない一方、抗ＣＤ７０−細胞毒素で治療されたマウスが用量依存性の抗腫瘍有効性を明らかに示すことを示す。
【０６２４】
実施例２４．抗ＣＤ７０−細胞毒素によるインビボでの腫瘍成長阻害
本実施例は、ＳＣＩＤマウスにおける７８６−Ｏ細胞及びヌードラットにおけるＣａｋｉ−１細胞といった腎癌の２つの異種移植片モデルにおける抗ＣＤ７０−細胞毒素の有効性を示す。細胞毒素抱合体は、以下の細胞毒素化合物に結合されたＣＤ７０抗体からなる。
【化１６９】
2010522693.tif 000175
【０６２５】
抗ＣＤ７０−サイトトキシンの活性が７８６−Ｏ腫瘍異種移植片を担持するＳＣＩＤマウスにおいて示された。７８６−Ｏ細胞（マウス１匹当たりＰＢＳ０．１ｍｌ及びＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）０．１ｍｌ中２５０万個）をＳＣＩＤマウスに皮下移植し、腫瘍が１７０ｍｍ３の平均サイズに達した時、マウス６匹からなる群を、０．００５μｍｏｌ／ｋｇ体重での抗ＣＤ７０−サイトトキシンの単回投与の腹腔内注射により治療した。更に、対照群に媒体単独を注射した。腫瘍体積（ＬＷＨ／２）及びマウスの重量を、試験を通じて記録した。結果を図１５に示す。これらの結果は、抗ＣＤ７０−サイトトキシン抱合体が腎癌に対して有効であることを示す。
【０６２６】
有効性が複数の種において観察されうることを実証するため、ヌードラットにおける異種移植片モデルを試験した。このモデルでは、ヌードラットにＣａｋｉ−１細胞（ラット１匹当たり０．２ｍｌのＲＰＭＩ−１６４０中１０００万個）を皮下移植し、腫瘍が１００ｍｍ３の平均サイズに達した時、ラット群を０．３μｍｏｌ／ｋｇ体重での抗ＣＤ７０−サイトトキシンの単回投与の腹腔内注射により治療した。更に、対照群に対し、媒体単独、抗ＣＤ７０抗体単独又は単回用量として０．３μｍｏｌ／ｋｇ体重でのアイソタイプ対照抗体サイトトキシン抱合体を注射した。腫瘍体積（ＬＷ２／２）及びラットの重量を、試験を通じて記録した。結果を図１６に示す。これらの結果は、ＣＤ７０抗体単独が腫瘍成長に対する効果をほとんど有することなく、かつアイソタイプ対照抱合体が腫瘍成長に対する効果を全く示さないことを示す。しかし、抗ＣＤ７０−サイトトキシン抱合体は顕著な抗腫瘍効果を示す。腫瘍の緩解が得られた。したがって、抗ＣＤ７０−サイトトキシン抱合体は複数の種において抗腫瘍効果を示す。
【０６２７】
本明細書中に記載又は言及される特許出願、特許、出版物、及び他の公開文献の各々は、特許出願、特許、出版物、及び他の公開文献の各々が参照により援用されるように具体的かつ個別に示される場合と同程度に、その全体が参照により本明細書中に援用される。本特許出願はまた、米国仮特許出願第６０／８８２４６１号明細書を参照により本明細書中に援用する。
【０６２８】
本発明を、その特定の実施形態に関して記載したが、本発明の真の趣旨及び範囲や添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、様々な変化が施されかつ等価物が置換されうることは当業者により理解されるべきである。更に、多数の改良を行い、特定の条件、材料、組成物、プロセス、１つ又は複数のプロセスステップを本発明の目的、趣旨及び範囲に適合させることが可能である。かかる全ての変更は、本明細書に添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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