(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ギプス包帯で骨断片を固定し、続いて、水溶液を骨折領域中に導入する実験での骨組織の再生のための方法に用いられる水溶液であって、
前記水溶液は、ｐＨ７．３〜７．８であり、１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸１．８０〜２．０６ｇ／Ｌ、無水塩化カルシウム１．４４〜２．２２ｇ／Ｌ、硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物０．３０〜０．４０ｇ／Ｌ、及び塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物０．０３８〜０．０７６ｇ／Ｌを含み、
ここで、骨組織の負傷又は欠損部位で骨組織を再生するために要求される時間及び負傷した骨の通常の生理学的機能を回復するための時間を低減するために、該溶液の投与前に、３０℃〜１００℃にし、該温度で１〜４８時間維持し、そして冷却して室温まで戻される、前記水溶液。
【請求項２】
実験での骨組織再生のために用いられる水溶液の製造方法であって、
ｐＨ７．３〜７．８であり、１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸１．８０〜２．０６ｇ／Ｌ、無水塩化カルシウム１．４４〜２．２２ｇ／Ｌ、硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物０．３０〜０．４０ｇ／Ｌ、及び塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物０．０３８〜０．０７６ｇ／Ｌを含む水溶液を調製すること、並びに、
前記水溶液を、該溶液の投与前に、３０℃〜１００℃に加熱し、加熱された前記水溶液を、該温度で１〜４８時間維持し、冷却して室温まで戻すこと、
を含む、前記製造方法。
【請求項３】
前記水溶液の加熱の温度が、６０℃〜７０℃である請求項２記載の製造方法。
【請求項４】
加熱された前記水溶液を前記温度で維持する時間が、４〜６時間である請求項２又は請求項３記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種々の骨の負傷、特に骨折及び亀裂骨折の治療に関し、かつ内科及び獣医学的治療及び外科において使用できる。
【０００２】
負傷した骨断片をギプス包帯で固定し、そして続いて、１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸、塩化カルシウム及び硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）を含む水溶液を骨折領域に室温で導入する骨組織の再生方法は、当業者に公知である［１］。該方法の欠点は、比較的長い骨組織の再生時間である。
【０００３】
本発明の目的に最も近く関連する、累積的特徴及び達成した技術効果を含む方法は、ギプス包帯又はプラスチック包帯で負傷した骨断片を固定し、そして続いて、１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸１．８０〜２．０６ｇ／Ｌ、無水塩化カルシウム１．４４〜２．２２ｇ／Ｌ、硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物０．３０〜０．４０ｇ／Ｌ、及び塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物０．０３８〜０．０７６ｇ／Ｌを含むｐＨ７．３〜７．８を有する水溶液を骨折領域中に室温で導入することを含む実験で骨組織を再生するための方法である［２］。プロトタイプとしてとられる前記方法の欠点も、比較的長い骨組織の再生時間である。
【０００４】
本発明の目的は、さらに、損傷した又は骨折した骨組織の再生時間、及び負傷した骨の通常の生理学的機能を回復するために要求される時間を低減することである。
【０００５】
前記目的は、以下の方法で達せられる：実験における骨組織の再生のための現存する方法において、負傷した骨断片を、ギプス包帯又はプラスチック包帯で固定し、そして１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸１．８０〜２．０６ｇ／Ｌ、無水塩化カルシウム１．４４〜２．２２ｇ／Ｌ、硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物０．３０〜０．４０ｇ／Ｌ、及び塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物０．０３８〜０．０７６ｇ／Ｌを含むｐＨ７．３〜７．８を有する水溶液を骨折領域中に注入するが、しかしながら、骨折領域中へのそれらの注入前に、該溶液を３０℃〜１００℃にし、１〜４８時間該温度で維持し、そして室温まで戻す。本発明の前記方法を使用することは、プロトタイプ［２］において記載された方法と比較して、骨組織の再生の著しい加速、及び負傷した骨の通常の生理学的機能を回復するために要求される時間のさらなる減少（１５〜２０％だけ）をもたらす。
【０００６】
それらの全ての特徴が本発明の特徴と完全に一致している、実験における骨組織の再生のための方法は、これまでに前記文献において開示されていない。従って、本発明を、ロシア連邦特許法の第一基準、新規性に適合することを請求することができる。現存する方法［２］と比較して、実験において観察された負傷した骨の通常の生理学的機能の回復における著しい時間の減少は、プロトタイプ［２］の特徴と、変更した、すなわちそれらにおいて使用した溶液を特に前記３０℃〜１００℃の温度まで予め加熱し、そして続いて該溶液を前記温度で特に前記１〜４８時間にわたって維持する特徴との比較から推論することはできない。従って、請求した技術的溶液は、明らかに先行技術に従っておらず、従って、それは、ロシア連邦特許法の第二基準、進歩性にも適合する。本発明の請求した方法は、任意の特定の装置を必要とせず、かつ外来患者の設定においてでさえ容易に実現でき、従ってロシア連邦特許法の第三基準、産業上の利用可能性にも適合する。
【０００７】
実験における骨組織の再生のための請求した方法を、さらに、以下の例で例証できる。
【０００８】
例１（請求した溶液の製造）
１０００ｍｌの体積のフラスコを、１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸１．８０〜２．０６ｇ／Ｌ、無水塩化カルシウム１．４４〜２．２２ｇ／Ｌ、硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物０．３０〜０．４０ｇ／Ｌ、塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物０．０３８〜０．０７６ｇ／Ｌ、及び蒸留水９５０ｍｌで満たす。得られた混合物のｐＨを、任意の濃縮アルカリ溶液（例えば１０％水酸化ナトリウム水溶液）で７．３〜７．８にする。得られた溶液を、蒸留水で１０００ｍｌにし、３０℃〜１００℃まで加熱し、１〜４８時間その温度で維持し、そして室温（２０〜２５℃）まで冷却する。そして、得られた溶液を請求した方法で使用する。
【０００９】
例２
以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      １．８０
無水塩化カルシウム                        １．４４
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．３０
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０３８
を有する水溶液を、ｐＨ７．３で製造し、３０℃にし、その温度で４８時間維持し、そして室温まで冷却する。そして、麻酔下で、製造した溶液２ｍｌを、２分間にわたって、実験の１時間前に誘発させた下部の後脚骨折を有するＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃａｔの負傷させた骨に注入する。注入後に、骨折した部位を、ギプス包帯で固定し、又はプラスチック包帯で包帯し、そして負傷させた脚部分を、歩行機能が回復するまで維持する。負傷させた骨組織の再生を、放射線透過性合成Ｌｏｈｍａｎｎ＆Ｒａｕｓｃｈｅｒ Ｃｅｌｌａｃａｓｔ Ｘｔｒａ ｂａｎｔａｇｅを使用して、又は負傷部位の周りを特定の“窓”に切断してＸ線照射する。骨組織の再生時間は、視覚的に、負傷させた動物の挙動に基づいて（溶液を注入した時間から、負傷させた骨の±１２時間の精度での完全な歩行機能の回復の時間まで）測定する。この特定の場合の研究についての指標を表１において示す。
【００１０】
例３
例２の一般的手法に従うが、注入について、以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      １．９２
無水塩化カルシウム                        １．８８
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．３５
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０５５
を有し、ｐＨ７．５である水溶液であって、この水溶液を６０℃まで加熱し、そしてこの温度で６時間維持した水溶液２ｍｌを使用する。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１１】
例４
例２と同様であるが、注入について、以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      １．９２
無水塩化カルシウム                        １．８８
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．３５
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０５５
を有し、ｐＨ７．７である水溶液であって、この水溶液を７０℃まで加熱し、そしてこの温度で４時間維持した水溶液２ｍｌを使用する。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１２】
例５
例２の一般的手法に従うが、注入について、以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      ２．０６
無水塩化カルシウム                        ２．２０
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．４０
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０７６
を有し、ｐＨ７．８である水溶液であって、この水溶液を１００℃まで加熱し、そしてこの温度で１時間維持した水溶液２ｍｌを使用する。
【００１３】
例６
例２と同様であるが、注入について、以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      １．８０
無水塩化カルシウム                        １．４４
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．３０
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０３８
を有し、ｐＨ７．５である水溶液であって、この水溶液を７０℃まで加熱し、そしてこの温度で４時間維持した水溶液２ｍｌを使用する。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１４】
例７
例２と同様であるが、注入について、以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      １．８０
無水塩化カルシウム                        １．４４
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．３０
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０３８
を有し、ｐＨ７．８である水溶液であって、この水溶液を７０℃まで加熱し、そしてこの温度で４時間維持した水溶液２ｍｌを使用する。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１５】
例８（比較例）
例３と同様であるが、溶液はｐＨ７．０である。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１６】
例９（比較例）
例３と同様であるが、溶液はｐＨ８．０である。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１７】
例１０（比較例）
例５と同様であるが、溶液を例５において挙げた温度で０．５時間維持する。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１８】
例１１（比較例）
例２と同様であるが、溶液を例２において挙げた温度で６０時間維持する。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００１９】
例１２（［１］に類似）
例２の一般的手法に従うが、注入について、以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      ２．００
無水塩化カルシウム                        ２．２０
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．４０
を有し、ｐＨ８．０である水溶液２ｍｌを使用し、その溶液を３０℃まで加熱する工程及び該温度でその溶液を維持する工程を省く。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００２０】
例１３（プロトタイプとして［２］を使用）
例４と同様に、同様の組成の溶液及び同様のｐＨを使用するが、溶液を７０℃にする工程及び該温度でその溶液を維持する工程を省く。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００２１】
例１４（プロトタイプとして［２］を使用）
例４と同様に、同様の組成の溶液及び同様のｐＨを使用するが、溶液を７０℃まで加熱する工程及び該温度でその溶液を維持する工程を省く。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００２２】
例１５（プロトタイプとして［２］を使用）
例５と同様に、同様の組成の溶液及び同様のｐＨを使用するが、溶液を１００℃まで加熱する工程及び該温度でその溶液を維持する工程を省く。この場合の研究についての骨組織の再生時間を表１において示す。
【００２３】
【表１】
0006257593.tif 000002
【００２４】
例１６
以下の組成（ｇ／Ｌ）：
１−ヒドロキシエチリデンジホスホン酸      １．８０
無水塩化カルシウム                        １．４４
硝酸ガドリニウム（ＩＩＩ）六水和物        ０．３０
塩化ジスプロシウム（ＩＩＩ）六水和物      ０．０３８
を有する水溶液を、ｐＨ７．３で製造し、３０℃にし、そしてこの温度で４８時間維持し、その後室温まで冷却する。そして、麻酔下で、製造した溶液を、電気ドリルで直径で５ｍｍ穿孔することによって双方の大腿骨を負傷させた不特定の品種のウサギに、一般的な麻酔下で投与する。しかしながら、この実験において、前記溶液の１ｍｌを（例２におけるように２分間にわたって）１本の負傷させた大腿骨のみの負傷させた部位に注入する（２本目の類似の骨を対照として使用する）。注入後に、全ての損傷部位を、ギプス包帯で固定し、又はプラスチック包帯で包帯し、そして、例２と同様に、骨組織の再生についてＸ線照射する。骨組織の再生時間を、視覚的に、負傷させた動物の挙動に基づいて（溶液を注入した時間から、負傷させた骨の±１２時間の精度での完全な歩行機能の回復の時間まで）測定する。この特定の場合の研究についての指標を表２において示す。
【００２５】
例１７
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例３における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００２６】
例１８
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例４における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００２７】
例１９
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例５における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００２８】
例２０
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例６における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００２９】
例２１
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例７における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３０】
例２２（比較例）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例８における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３１】
例２３（比較例）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例９における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３２】
例２４（比較例）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例１０における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３３】
例２５（比較例）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例１１における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３４】
例２６（［１］に類似）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例１２における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３５】
例２７（プロトタイプ［２］）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例１３における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３６】
例２８（プロトタイプ［２］）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例１４における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３７】
例２９（プロトタイプ［２］）
例１６の一般的手法に従うが、注入について、例１５における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００３８】
例１６〜２９において記載した溶液での事前に損傷させた骨組織の再生時間、及び該溶液での損傷させていない骨組織の再生時間を比較するデータを、表２において示す。
【００３９】
【表２】
0006257593.tif 000003
【００４０】
例３０
例３の水溶液と同様の組成を有する水溶液を、同様の手法に従って製造する。麻酔下で、著しくずらした右前足の上腕骨骨折を誘発した６時間後に前記溶液２．５ｍｌを２分間にわたって野良犬（ｓｔｒａｙ ｍｕｔｔ）に投与する。注入後に、負傷部位を、ギプス包帯で固定し、又はプラスチック包帯で包帯する。骨組織の再生を、例２において記載したように実施する。骨組織の再生時間を、視覚的に、負傷させた動物の挙動に基づいて（溶液を注入した時間から、負傷させた骨の±１２時間の精度での完全な歩行機能の回復の時間まで）測定する。この特定の場合の研究についての指標を表３において示す。
【００４１】
例３１
例３０の一般的手法に従うが、注入について、例４における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００４２】
例３２（比較例）
例３０の一般的手法に従うが、注入について、例１０における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００４３】
例３３（比較例）
例３０の一般的手法に従うが、注入について、例１１における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００４４】
例３４（プロトタイプ［２］）
例３０の一般的手法に従うが、注入について、例１４における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００４５】
例３５（プロトタイプ［２］）
例３０の一般的手法に従うが、注入について、例１５における記載と同様の組成で及び同様の手法によって製造した水溶液を使用する。
【００４６】
例３０〜３５に記載の技術を使用した場合の骨組織の再生時間のデータを、表３において示す。
【００４７】
【表３】
0006257593.tif 000004
【００４８】
表１〜３におけるデータは、本発明の方法が、プロトタイプの方法［２］と比較して、負傷部位での骨組織の再生時間を著しく減少し（２０〜２５％）、かつその減少が、タイプに関係なく全ての負傷した動物において観察されたことを明らかに証明する。また、温度範囲（３０〜１００℃）、及びあらゆる該温度範囲での恒温時間（１〜４８時間）、並びに該溶液のｐＨ（７．３〜７．８）が重要であり、該範囲の下限又は上限の外での実施は、通常、骨組織の再生時間の増加をもたらす（特定の温度でより長く溶液を維持することは、より早期に得られる指標における実際の変化を示さず、従って、４８時間を越える時間の増加は、あらゆる有意な変化を実際に導かない）。再生した骨組織の強度の測定は、公知の技術［１，２］の方法又は本発明の再生方法を使用して観察した場合に、顕著な差異を示さなかった。負傷した骨組織の再生中の動物の血球数データ及びそれらの処理中の負傷した動物の本質的な状態（食欲、応答等）の観察は、注入について請求した溶液のあらゆる表現的毒性を示さず、また、注入のために該溶液を含む成分は、［３，４］により毒性がなかった。結論として、請求した溶液は、長い保管期間を有し、かつ長時間（少なくとも１年間）、それらの性能を失うことなく、シールした容器中で保管することができる。
【００４９】
0006257593.tif 000005