(57)【要約】  式（Ａ）のピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン化合物および薬学的に許容できるその塩。本発明の多置換ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン化合物は、Ｂ−Ｒａｆキナーゼ活性を選択的に阻害し、Ｂ−Ｒａｆキナーゼの仲介による障害の治療に有用である。    【化１】2010540451.tif 000045
2010540451.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ａの化合物
【化１】
2010540451.tif 000031
および薬学的に許容できるその塩
［式中、Ｒ１は、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員複素環またはヘテロアリール環、またはアリール環であり、各環は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ２は、少なくとも１個の置換基−ＯＲ８、それぞれが−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される多くとも４個の他の置換基で置換されているアリール環であり、
Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、炭素数３〜１０のシクロアルキル、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数３〜１０のシクロアルコキシ、炭素数１〜６のアルケン、炭素数１〜６のアルキン、アリール環、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる複素環およびヘテロアリール環からなる群からそれぞれ独立に選択され、各環は、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＯＣＦ３、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ７ＯＲ８、−ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、または−ＹＲ８からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ５は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数１〜８の分枝状アルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、または炭素数３〜７のシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ６は、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、および炭素原子数２〜６のアルキニルからなる群から選択される二価の基であり、
Ｒ７は、炭素原子数２〜６の二価のアルキル基であり、
Ｒ８は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、炭素数６〜１２のアリール、炭素数６〜１２の置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる置換ヘテロシクリル環および置換ヘテロアリール環からなる群から選択され、
ｍは、０〜２の整数であり、
Ｙは、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ６−、−Ｏ−、−ＯＲ６−、−Ｓ（Ｏ）ｍ−、または−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６−である］。
【請求項２】
Ｒ２が、一または二置換された単環式アリール環である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、フェノール、または−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５および−ＮＲ５Ｒ５からなる群から選択される置換基でさらに置換されているフェノールである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＣ１〜Ｃ６アルコキシフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５および−ＮＲ５Ｒ５からなる群から選択される置換基でさらに置換されているメトキシフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式Ａの化合物
【化２】
2010540451.tif 000032
および薬学的に許容できるその塩
［式中、Ｒ１は、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員複素環もしくはヘテロアリール環、またはアリール環であり、各環は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ２は、次式の二環式ヘテロアリール環
【化３】
2010540451.tif 000033
であり、
【化４】
2010540451.tif 000034
は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員ヘテロアリール環であり、
Ｈｅｔは、１〜２個の窒素原子を含んでいる６員ヘテロアリール環であり、どちらの二環式ヘテロアリール環も、それぞれが−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、炭素数３〜１０のシクロアルキル、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数３〜１０のシクロアルコキシ、炭素数１〜６のアルケン、炭素数１〜６のアルキン、アリール環、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる複素環およびヘテロアリール環からなる群からそれぞれ独立に選択され、各環は、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＯＣＦ３、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ７ＯＲ８、−ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、または−ＹＲ８からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ５は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数１〜８の分枝状アルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、または炭素数３〜７のシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ６は、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、および炭素原子数２〜６のアルキニルからなる群から選択される二価の基であり、
Ｒ７は、炭素原子数２〜６の二価のアルキル基であり、
Ｒ８は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、炭素数６〜１２のアリール、炭素数６〜１２の置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる置換ヘテロシクリル環および置換ヘテロアリール環からなる群から選択され、
ｍは、０〜２の整数であり、
Ｙは、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ６−、−Ｏ−、−ＯＲ６−、−Ｓ（Ｏ）ｍ−、または−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６−である］。
【請求項７】
Ｒ２が、インドリル、ベンゾイミダゾリル、およびインダゾリジルからなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１の式Ａの化合物の製造方法であって、（ａ）次式の置換アミノピラゾール
【化５】
2010540451.tif 000035
を、硝酸ナトリウムと強酸の水性溶媒中混合物と反応させるステップと、（ｂ）次式の置換β−ケト酸または置換β−ケトエステル
【化６】
2010540451.tif 000036
、および塩基をその混合物に加えるステップとを含む方法。
【請求項９】
ステップ（ｂ）において次式の置換β−ケトエステル
【化７】
2010540451.tif 000037
を加え、（ｃ）生成した次式のエステル
【化８】
2010540451.tif 000038
を、酸水溶液を使用して対応するカルボン酸に、または塩基水溶液を使用して対応するカルボン酸塩に加水分解するステップと、（ｄ）次式の化合物
【化９】
2010540451.tif 000039
を１５０℃以上の温度に加熱するステップとをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｂ）において次式の置換β−ケトエステル
【化１０】
2010540451.tif 000040
を加え、（ｃ）生成した次式のエステル
【化１１】
2010540451.tif 000041
を次式の対応するカルボン酸化合物
【化１２】
2010540451.tif 000042
に加水分解するステップと、（ｄ）そのカルボン酸化合物を置換アミンと反応させるステップとをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｂ）において次式の置換β−ケトスルホン
【化１３】
2010540451.tif 000043
および塩基を混合物に加え、（ｃ）生成した次式のスルホン
【化１４】
2010540451.tif 000044
［式中、Ｇは、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリールからなる群から選択される］を還元剤で還元する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１から７のいずれかに記載の化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
他のキナーゼ阻害性医薬組成物または化学療法薬と組み合わせた、請求項１から７のいずれかに記載の化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
哺乳動物に、キナーゼ阻害量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、哺乳動物においてキナーゼ活性を阻害する方法。
【請求項１５】
哺乳動物がヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
対象に、キナーゼ阻害量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、キナーゼ依存的な状態の治療方法。
【請求項１７】
患者に請求項１から７のいずれか一項の化合物を投与することによる、炎症または癌を含むＢ−Ｒａｆキナーゼ依存的な状態の治療方法。
【請求項１８】
癌が、乳房、腎臓、膀胱、口、喉頭、食道、胃、結腸、卵巣、肺、膵臓、皮膚、肝臓、前立腺、および脳腫瘍からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ３が、カルボン酸、カルボン酸のＣ１〜Ｃ６アルキルエステル、およびアリールスルホニル基から選択され、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４が請求項１で示した意味を有する、請求項１の式Ａの化合物を製造するための中間体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全体が参照により本明細書に援用される２００７年９月２０日出願の米国仮出願第６０／９９４，５８９号の優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、特定の細胞型の異常な増殖を抑制するのに有用な新たな複素環組成物に関する。本発明は、特定の置換ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン、対応する薬学的に許容できるその塩、ならびにそれらの調製法および使用法を対象とする。この置換ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンは、発癌性形態の受容体チロシンキナーゼであるＫ−ＲａｓおよびＢ−Ｒａｆキナーゼを含有する腫瘍細胞の増殖を抑制する。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ−Ｒａｆキナーゼは、分裂促進的シグナルおよび抗アポトーシスシグナルの伝達に関与する３種の知られているＲａｆ腫瘍性タンパク質キナーゼの１つである。Ｂ−Ｒａｆは、細胞増殖、ならびに細胞増殖および生存を制御する悪性変換経路活性化を仲介する、Ｒａｓによって調節されるキナーゼをコードする。Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ経路の活性化は、細胞表面から細胞核への事象のカスケードとなり、最終的に細胞増殖、アポトーシス、分化、および形質転換に影響を及ぼす。活性化状態のＢ−Ｒａｆ突然変異は、Ｄａｖｉｅｓ  Ｈ．ら（２００２年）、Ｎａｔｕｒｅ第４１７巻：９０６頁、およびＲａｊａｇｏｐａｌａｎ  Ｈ．ら（２００２年）、Ｎａｔｕｒｅ第４１８巻：９３４頁による報告のとおり、悪性黒色腫で６６％、結腸直腸の癌を含めた他の癌でもより少ない割合で見出されている。最近、Ｗａｎら（２００４年）、Ｃｅｌｌ第１１６巻：８５５〜８６７頁に記載のとおり、Ｂ−ｒａｆは様々なヒト癌で頻繁に突然変異することがわかっている。したがって、発癌性形態の受容体チロシンキナーゼであるＫ−ＲａｓおよびＢ−Ｒａｆキナーゼを含有する腫瘍細胞の増殖を抑制する化合物を同定し、特徴付けることが望ましい。米国特許第５，４７８，８２７号は、単純なテトラヒドロピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンの少数の例を記載しており、それらは、慢性炎症疾患（たとえば関節リウマチおよび骨関節炎）と関連付けられるインターロイキン１および腫瘍壊死因子の阻害剤として開示されている。しかし、ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンについての構造活性相関（ＳＡＲ）は記載されておらず、縮合複素環骨格の複数の位置で置換されている様々な官能基がピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンのＳＡＲにどのように影響を及ぼすかに関してはほとんど知られていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
Ｂ−Ｒａｆキナーゼ活性を選択的に阻害し、Ｂ−Ｒａｆキナーゼの仲介による障害を治療するのに有用な新たな化合物が求められている。本発明の多置換ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン組成物は、このいまだ対処されていない要求を満たし、その限りでないがたとえば大腸ポリープを含めて、哺乳動物における癌の治療において有用である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、本発明は、式Ａの化合物
【０００６】
【化１】
2010540451.tif 000003
および薬学的に許容できるその塩
［式中、Ｒ１は、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員複素環もしくはヘテロアリール環、またはアリール環であり、各環は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ２は、少なくとも１個の置換基−ＯＲ８、それぞれが−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される多くとも４個の他の置換基で置換されているアリール環であり、
Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、炭素数３〜１０のシクロアルキル、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数３〜１０のシクロアルコキシ、炭素数１〜６のアルケン、炭素数１〜６のアルキン、アリール環、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる複素環およびヘテロアリール環からなる群からそれぞれ独立に選択され、各環は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＯＣＦ３、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ７ＯＲ８、−ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、または−ＹＲ８からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ５は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数１〜８の分枝状アルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、または炭素数３〜７のシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ６は、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、および炭素原子数２〜６のアルキニルからなる群から選択される二価の基であり、
Ｒ７は、炭素原子数２〜６の二価アルキル基であり、
Ｒ８は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、炭素数６〜１２のアリール、炭素数６〜１２の置換アリール、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる置換ヘテロシクリル環および置換ヘテロアリール環からなる群から選択され、
ｍは、０〜２の整数であり、
Ｙは、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ６−、−Ｏ−、−ＯＲ６−、−Ｓ（Ｏ）ｍ−、または−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６−である］を提供する。
【０００７】
本発明はまた、Ｒ２が、次式の二環式ヘテロアリール環
【０００８】
【化２】
2010540451.tif 000004
であり、
【０００９】
【化３】
2010540451.tif 000005
は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員ヘテロアリール環であり、
Ｈｅｔは、１〜２個の窒素原子を含んでいる６員ヘテロアリール環であり、どちらの二環式ヘテロアリール環も、それぞれ−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される１〜４個の置換基で置換されており、Ｒ１〜８は上で規定したとおりである、式Ａの化合物および薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００１０】
本発明は、式Ａの化合物と薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物も提供する。本発明は、単独または他のキナーゼ阻害性医薬組成物もしくは化学療法薬と組み合わせた式Ａの化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物も提供する。
【００１１】
本発明は、式Ａの化合物
【００１２】
【化４】
2010540451.tif 000006
および薬学的に許容できるその塩の製造方法であって、（ａ）次式の置換アミノピラゾール
【００１３】
【化５】
2010540451.tif 000007
を、硝酸ナトリウムと強酸の水性溶媒中混合物と反応させるステップと、（ｂ）次式の置換β−ケト酸または置換β−ケトエステル
【００１４】
【化６】
2010540451.tif 000008
［式中、Ｒは、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリールから選択され、Ｒ１〜４は上で規定したとおりである］および塩基をその混合物に加えるステップとを含む方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、式Ａの化合物
【００１６】
【化７】
2010540451.tif 000009
および薬学的に許容できるその塩の製造方法であって、（ａ）次式の置換アミノピラゾール
【００１７】
【化８】
2010540451.tif 000010
を、硝酸ナトリウムと強酸の水性溶媒中混合物と反応させるステップと、（ｂ）次式の置換β−ケトエステル
【００１８】
【化９】
2010540451.tif 000011
および塩基をその混合物に加えるステップと、（ｃ）生成した次式のエステル
【００１９】
【化１０】
2010540451.tif 000012
を、酸水溶液を使用して対応するカルボン酸に、または塩基水溶液を使用して対応するカルボン酸塩に加水分解するステップと、（ｄ）次式の化合物
【００２０】
【化１１】
2010540451.tif 000013
［式中、ＲおよびＲ１〜４は上で規定したとおりである］を１５０℃以上の温度に加熱するステップとを含む方法も提供する。
【００２１】
本発明はまた、次式の化合物
【００２２】
【化１２】
2010540451.tif 000014
［式中、ＲおよびＲ１〜４は上で規定したとおりである］を置換アミンと反応させるステップを含む、式Ａの化合物の製造方法も提供する。
【００２３】
本発明はまた、式Ａの化合物
【００２４】
【化１３】
2010540451.tif 000015
および薬学的に許容できるその塩の製造方法であって、（ａ）次式の置換アミノピラゾール
【００２５】
【化１４】
2010540451.tif 000016
を、硝酸ナトリウムと強酸の水性溶媒中混合物と反応させるステップと、（ｂ）次式の置換β−ケトスルホン
【００２６】
【化１５】
2010540451.tif 000017
および塩基をその混合物に加えるステップと、（ｃ）生成した次式のスルホン
【００２７】
【化１６】
2010540451.tif 000018
［式中、Ｇは、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリールから選択され、Ｒ１〜４は上で規定したとおりである］を還元剤で還元するステップとを含む方法も提供する。
【００２８】
本発明はまた、細胞を式Ａの化合物と接触させることを含み、それによってこの化合物がＢ−ｒａｆキナーゼ活性を阻害する、細胞においてＢ−Ｒａｆキナーゼ活性を阻害する方法も提供する。
【００２９】
本発明はまた、患者に式Ａの化合物を投与することによる、Ｂ−Ｒａｆキナーゼ依存的な状態、特に炎症または癌の治療方法も提供する。
【００３０】
本発明は、患者に式Ａの化合物を投与することによる、Ｂ−Ｒａｆキナーゼと関連付けられる哺乳類疾患の治療方法を提供する。
【００３１】
本発明は、乳房、腎臓、膀胱、口、喉頭、食道、胃、結腸、卵巣、肺、膵臓、皮膚、肝臓、前立腺、および脳腫瘍からなる群から選択される癌の治療方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
定義
本発明のピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンに関して、以下の定義を使用する。別段の規定がない限り、用語「アリール」は、本明細書では、たとえば６〜２０個の炭素原子を有する芳香族の炭素環式部分を指し、単環（単環式）でも、または互いに縮合し、もしくは共有結合的に連結された多環であってもよく、環の少なくとも１つは芳香族である。規定する化学構造に共有結合的に連結されるのは、アリール部分の適切などの環位置でもよい。アリールの例としては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。アリール基は、任意選択で置換されていてもよい。アリール基は、他の任意選択の置換基に加え、オキソ置換基で置換されていてもよいが、環炭素原子の１つがカルボニル基の一部であるということである。
【００３３】
別段の規定がない限り、用語「ヘテロアリール」は、本明細書では、たとえば５〜２０個の環原子を有する芳香族の複素環系を意味し、単環でも、または互いに縮合し、もしくは共有結合的に連結された多環であってもよく、環の少なくとも１つは芳香族である。環は、窒素、酸素、または硫黄から選択される１個または複数のヘテロ原子、たとえば１〜３個のヘテロ原子を含んでいてもよく、窒素もしくは硫黄原子は酸化されていてもよく、または窒素原子は四級化されていてもよい。規定する化学構造に共有結合的に連結されるのは、ヘテロアリール部分の適切などの環位置でもよい。ヘテロアリールの例としては、２−ピリジルまたはインドール−１−イルが挙げられる。ヘテロアリール基は、任意選択で置換されていてもよい。ヘテロアリール基は、他の任意選択の置換基に加え、オキソ置換基で置換されていてもよいが、環炭素原子の１つがカルボニル基の一部であるということである。
【００３４】
用語「複素環式」、「複素環」、または「ヘテロシクリル」は、本明細書では、たとえば５〜７の環員を有するスピロ環式複素環系および架橋複素環系を含めて、飽和または部分的に不飽和の安定な単環式または多環式複素環系を指すのに区別なく使用することができる。複素環の環員は、炭素原子と、窒素、酸素、および硫黄原子から選択される１個または複数のヘテロ原子、たとえば１〜３個のヘテロ原子であり、窒素または硫黄原子は酸化されていてもよく、または窒素原子は四級化されていてもよい。複素環式基、複素環基、またはヘテロシクリル基は、任意選択で置換されていてもよい。複素環式基、複素環基、またはヘテロシクリル基は、他の任意選択の置換基に加え、オキソ置換基で置換されていてもよいが、環炭素原子の１つがカルボニル基の一部であるということである。複素環式基、複素環基、またはヘテロシクリル基は、１個または複数の縮合環を含んでいてもよい。
【００３５】
用語「二環式ヘテロアリール環」は、次式の環骨格
【００３６】
【化１７】
2010540451.tif 000019
を指す。記号
【００３７】
【化１８】
2010540451.tif 000020
は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員ヘテロアリール環を指す。用語「Ｈｅｔ」は、１〜２個の窒素原子を含んでいる６員ヘテロアリール環を指す。どちらの架橋二環式ヘテロアリール環も、それぞれ−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される１〜４個の置換基で置換されている。
【００３８】
本明細書では、用語「薬学的に許容できる担体」は、薬学的に許容できる希釈剤および医薬添加剤を包含する。
【００３９】
本明細書では、用語「個体」、「対象」、または「患者」は、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、最も好ましくはヒトを含めて、任意の動物を指すのに区別なく使用する。
【００４０】
好例となる実施形態によれば、本発明は、式Ａの化合物
【００４１】
【化１９】
2010540451.tif 000021
および薬学的に許容できるその塩
［式中、Ｒ１は、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員の複素環もしくはヘテロアリール環、またはアリール環であり、各環は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ２は、少なくとも１個の置換基−ＯＲ８、それぞれが−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−ＯＲ７ＯＲ５、−ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ５、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＯＲ５、−Ｒ６Ｎ（Ｒ５）Ｒ７ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−Ｒ６ＮＲ５Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される多くとも４個の他の置換基で置換されている単環式のアリール環であり、
Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、炭素数３〜１０のシクロアルキル、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数３〜１０のシクロアルコキシ、炭素数１〜６のアルケン、炭素数１〜６のアルキン、アリール環、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる複素環およびヘテロアリール環からなる群からそれぞれ独立に選択され、各環は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＯＣＦ３、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ７ＯＲ８、−ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｓ（Ｏ）ｍＲ８、−Ｒ６Ｓ（Ｏ）ｍＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＯＲ８、−Ｒ６ＯＲ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＯＲ８、−Ｒ６Ｎ（Ｒ８）Ｒ７ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｒ６ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８、または−ＹＲ８からなる群から選択される１〜４個の置換基で置換されており、
Ｒ５は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数１〜８の分枝状アルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、または炭素数３〜７のシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ６は、二価の基であり、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、および炭素原子数２〜６のアルキニルからなる群から選択され、
Ｒ７は、炭素原子数２〜６の二価のアルキル基であり、
Ｒ８は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数２〜６のアルケニル、炭素原子数２〜６のアルキニル、炭素数６〜１２のアリール、炭素数６〜１２の置換アリール、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる置換ヘテロシクリル環および置換ヘテロアリール環からなる群から選択され、
ｍは、０〜２の整数であり、
Ｙは、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｎ（Ｒ５）Ｒ６−、−Ｏ−、−ＯＲ６−、−Ｓ（Ｏ）ｍ−、または−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６−である］を提供する。
【００４２】
Ｒ１の適切な例として、たとえば、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、チオフェニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、キノリル、イソキノリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピロリジル（ｐｙｒｒｏｌｉｄｙｌ）、オキソラニル、チオラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、チアゾリル、トリアゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、およびモルホリニルが挙げられるがこの限りでない。複素環またはヘテロアリール環は、ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン環骨格に対して許容できるどの位置で置換されていてもよい。一実施形態によれば、Ｒ１は、２−ピリジニル、３−ピリジニル、４−ピリジニル、５−ピリジニル、６−ピリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、５−ピペリジニル、６−ピペリジニル、インドール−１イル、インドール−２−イル、およびインドール−３イルからなる群から選択される。
【００４３】
一実施形態によれば、Ｒ２は、フェノール、ハロゲン置換フェノール、アルコキシ置換フェニル、フェノキシ置換フェニル、ベンジルオキシ置換フェニル、メトキシ置換フェニル、ならびにアルコキシおよびハロゲンで置換されているフェニルからなる群から選択される。単環式アリール環は、ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン環骨格に対して許容できるどの位置で置換されていてもよい。一実施形態によれば、Ｒ２は、２−フェノール、３−フェノール、４−フェノール、４−クロロ−３−フェノール、３−クロロ−４−フェノール、３−クロロ−２−フェノール、２−メトキシフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、４−クロロ−３−メトキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロ−２−メトキシフェニル、２−（ベンジルオキシル）フェニル、３−（ベンジルオキシル）フェニル、および４−（ベンジルオキシル）フェニルからなる群から選択される。
【００４４】
別の実施形態によれば、Ｒ２は、次式の二環式ヘテロアリール環
【００４５】
【化２０】
2010540451.tif 000022
であり、
【００４６】
【化２１】
2010540451.tif 000023
は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでいる５〜７員ヘテロアリール環であり、
Ｈｅｔは、１〜２個の窒素原子を含んでいる６員ヘテロアリール環であり、どちらの架橋二環式ヘテロアリール環も、それぞれが−Ｆ、−Ｃｌ、Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＣＨＯ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ５、−ＮＲ５Ｒ５からなる群から独立して選択される１〜４個の置換基で置換されており、Ｒ１〜８は上で規定したとおりである。Ｒ２環の適切な例としては、インドリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ウシインドリル、ベンゾチアゾロニル、およびベンゾオキサゾロニルが挙げられるがこれに限らない。
【００４７】
一実施形態によれば、Ｒ３は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミド、Ｃ１〜Ｃ６置換複素環式アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換複素環式アミド、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルホニル、アリールスルホニル、およびヘテロアリールスルホニルからなる群から選択される。
【００４８】
一実施形態によれば、Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ハロゲン置換されたピリジニル、複素環置換されたピリジニル、ジアゼパニル置換されたピリジニル、ピペラジニル置換されたピリジニル、置換フェニル、ヘテロアリールスルホニル置換されたフェニル、ヘトロシクロスルホニル置換されたアリール、ヘトロシクロスルホニル置換されたフェニル、ビシクロアルキル、およびヘテロビシクロアルキルからなる群から選択される。ヘテロアリール、アリール、ビシクロアルキル、およびヘテロビシクロアルキル環は、ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン環骨格に対して許容できるどの位置で置換されていてもよい。
【００４９】
本発明の化合物は、（ａ）市販の出発材料、（ｂ）文献の手順に記載のとおりに調製することのできる既知の出発材料、または（ｃ）本明細書のスキームおよび実験手順に記載の新たな中間体から調製することができる。
【００５０】
反応は、用いる試薬および材料に相応しく、なされる変換に適する溶媒中で実施する。有機合成分野の技術者には、分子上に存在する様々な官能基が、企図する化学変換と一致していなければならないことは理解される。これには、合成ステップの順番についての判断が必要となる場合もある。
【００５１】
本発明の化合物は、実施例および以下の反応スキーム１〜４で例示するとおりに調製することができる。
【００５２】
スキーム１は、特定の置換アミノピラゾール中間体の合成について概略を述べるものである。
【００５３】
【化２２】
2010540451.tif 000024
【００５４】
スキーム１に関して、置換アセトニトリル２と置換エステル１の縮合反応を、その限りでないがナトリウムエトキシドなどの塩基の存在下、エタノールなどの適切な溶媒中で実施して、中間体３を得ることができる。続いて、中間体３を、エタノールなどの適切な溶媒中でヒドラジン水和物と反応させて、Ｒ１およびＲ２が本明細書で以前に規定したとおりであるアミノピラゾール５を得ることができる。特定の置換された中間体３については、まずオキシ塩化リンと、高めの温度、通常は還流温度で反応させて、中間体４を得ることが必要である。中間体４は、続いてエタノールなどの適切な溶媒中でヒドラジン水和物と反応させることにより、置換アミノピラゾール５に変換することができる。置換エステル１および置換アセトニトリル２は、市販品の供給元から入手し、または数多くの文献手順によって当業者の手で容易に調製することができる。
【００５５】
中間体５を、塩酸や硫酸などの強酸の存在下、水や、水／メタノールまたは水／エタノールなどのプロトン性溶媒中にて亜硝酸ナトリウムと反応させた後、置換βケト酸またはβケトエステル６（Ｒ＝水素、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリール）、およびその限りでないが酢酸ナトリウムなどの中和用塩基を加えると、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が本明細書で以前に規定したとおりである目的化合物７が得られる（スキーム２）。
【００５６】
【化２３】
2010540451.tif 000025
【００５７】
本発明の式Ａの化合物の追加の調製法を、以下スキーム３に記載するが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、本明細書で以前に規定したとおりである。中間体５を、塩酸や硫酸などの強酸の存在下、水や、水／メタノールまたは水／エタノールなどのプロトン性溶媒中で亜硝酸ナトリウムと反応させた後、置換β−ケトエステル６（Ｒ＝Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリール）、およびその限りでないが酢酸ナトリウムなどの中和用塩基を加えると、目的化合物９が得られる。中間体９のエステル残基を、その限りでないが硫酸などの酸水溶液、または水酸化ナトリウムの強塩基水溶液などによって加水分解して、中間体１０を得ることができる。中間体１０を、その限りでないがたとえば、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（商標）として入手可能な、ビフェニルオキシドとジフェニルオキシドの混合物などの適切な溶媒中にて１５０℃以上の温度で加熱すると、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４が本明細書で以前に規定したとおりである目的化合物１１が得られる。別法として、中間体１０を、様々な置換アミンＲ’Ｒ”ＮＨ（Ｒ’およびＲ”は、Ｈ、炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリールから独立して選択される）と反応させて、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４が本明細書で以前に規定したとおりである一連のアミド置換化合物１２を得ることもできる。
【００５８】
【化２４】
2010540451.tif 000026
【００５９】
本発明の式Ａの化合物の追加の調製法を以下スキーム４に記載するが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は本明細書で以前に規定したとおりである。中間体５を、塩酸や硫酸などの強酸の存在下、水や、水／メタノールまたは水／エタノールなどのプロトン性溶媒中で亜硝酸ナトリウムと反応させた後、置換β−ケトスルホン１３（Ｇ＝炭素原子数１〜６のアルキル、炭素数６〜１２のアリール、および炭素数６〜１２の置換アリール）、およびその限りでないが酢酸ナトリウムなどの中和用塩基を加えると、化合物１４が得られる。中間体１４のスルホン残基は、トリフェニルホスフィンや水素化トリブチルスズなどの様々な還元剤によって対応するスルフィドに還元することができる。スルホン１４を、ラネーニッケルやナトリウムアマルガムなどの適切な還元剤と反応させると、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４が本明細書で以前に規定したとおりである目的化合物１１が得られるはずである。
【００６０】
【化２５】
2010540451.tif 000027
【００６１】
本発明の方法によって調製される例示的な式Ａの化合物として、以下の化合物が挙げられる。
【００６２】
【表１】
2010540451.tif 000028
【００６３】
式Ａの化合物は、当業者に知られている方法、たとえば、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」、ＶＣＨ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、４１１〜４１５頁、１９８９年を使用して、無機または有機の塩として得ることができる。物理的化学的な安定性、流動性、吸湿性、および溶解性に基づき適切な塩形態を選択することは、当業者によく知られている。
【００６４】
酸の部分を有する式Ａの化合物の薬学的に許容できる塩は、有機および無機の塩基から生成することができる。たとえば、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属、または有機塩基、およびＮ−テトラブチルアンモニウム塩などのＮ−テトラアルキルアンモニウム塩と。同様に、本発明の化合物が塩基部分を含んでいるとき、塩は、有機および無機の酸から生成することができる。たとえば、塩は、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、および同様に知られている許容できる酸から生成することができる。薬学的に許容できる塩の適切な例としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））、ならびにカプロン酸塩、ラウリン酸塩、ミリスチン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、オレイン酸塩、リノール酸塩、およびリノレン酸塩などの脂肪酸の塩が挙げられるがこの限りでない。化合物は、その形態で投与されたときｉｎ−ｖｉｖｏで活性部分に変わるエステル、カルバマート、および他の従来のプロドラッグ形態の形で使用することもできる。
【００６５】
したがって、本発明は、有効量の式Ａの化合物を、薬学的に許容できる担体と組み合わせて、またはそれと一緒に含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１７版、Ａｌｆｏｎｏｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルヴェニア州イーストン（１９８５年）に記載のものなどの、許容できる薬学的な手順に従って調製する。薬学的に許容できる担体は、製剤中の他の成分と適合性があり、生物学的に許容できるものである。本明細書では、用語「有効量」とは、組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて、研究者、獣医師、医師、または他の臨床家が求める生物学的応答または医薬応答を誘発する活性化合物または医薬の量を指し、以下のうち１つまたは複数が挙げられる。すなわち、（１）疾患を予防する、たとえば、疾患、状態、または障害の素因があるかもしれないが、その疾患の病態または総体的症状をまだ経験または示していない個体において、疾患、状態、または障害を予防する量、（２）疾患を抑制する、たとえば、その疾患、状態、または障害の病態または総体的症状を経験または示している個体において疾患、状態、または障害を抑制する（すなわち、その病態および／または総体的症状のそれ以上の進展を阻止または緩慢化する）量、および（３）疾患を寛解させる、たとえば、その疾患、状態、または障害の病態または総体的症状を経験または示している個体において疾患、状態、または障害を寛解させる（すなわち、その病態および／または総体的症状を逆転させる）量。
【００６６】
標準の生物学的および薬理学的試験手順
標準の薬理学的試験手順において代表的な本発明の化合物を評価すると、本発明の化合物が有意な抗癌活性を有し、特にＢ−Ｒａｆキナーゼの阻害剤であることが示された。したがって、標準の薬理学的試験手順において示された活性から、本発明の化合物は抗悪性腫瘍薬として有用である。特に、これらの化合物は、乳房、腎臓、膀胱、口、喉頭、食道、胃、結腸、卵巣、肺、膵臓、肝臓、前立腺、および皮膚の腫瘍などの腫瘍を治療し、その成長を抑制し、または根絶するのに有用である。
【００６７】
Ｂ−Ｒａｆキナーゼ阻害剤の試験
式Ａの化合物を、発癌性形態の受容体チロシンキナーゼ、すなわちＫ−ＲａｓまたはＢ−Ｒａｆキナーゼを含有する腫瘍細胞の増殖を抑制するＢ−Ｒａｆキナーゼ阻害剤として試験した。
【００６８】
試薬：Ｓｆ９昆虫細胞中で産生されたＦｌａｇ／ＧＳＴ−タグをつけた組換え型ヒトＢ−Ｒａｆ、ヒト非活性Ｍｅｋ−１−ＧＳＴ（大腸菌中で産生された組換えタンパク質）、およびＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのホスホ−ＭＥＫ１特異的ポリクローナルＡｂ（カタログ番号９１２１）。
【００６９】
Ｂ−Ｒａｆ１キナーゼアッセイ手順：Ｂ−Ｒａｆ−１を使用して、ＧＳＴ−ＭＥＫ１をリン酸化する。ＭＥＫ１のリン酸化は、ＭＥＫ１上の２１７位および２２１位にある２個のセリン残基のリン酸化を検出するリン酸化型特異的抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのもの、カタログ番号９１２１）によって測定する。
【００７０】
本発明によれば、以下のキナーゼアッセイプロトコールを使用した。
Ｂ−Ｒａｆアッセイ保存液：
１．  アッセイ希釈緩衝液（ＡＤＢ）：２０ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．２、２５ｍＭのβ−グリセロールリン酸、５ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのジチオスレイトール、０．０１％のトリトンＸ１００
２．  マグネシウム／ＡＴＰカクテル：ＡＤＢ溶液（トリトンＸ１００抜き）プラス２００μＭの冷ＡＴＰおよび４０ｍＭの塩化マグネシウム
３．  活性キナーゼ：活性Ｂ−Ｒａｆ：アッセイポイントあたり０．２ｎＭで使用
４．  非活性ＧＳＴ−ＭＥＫ１：最終濃度２．８ｎＭで使用）
５．  ＴＢＳＴ−トリス（５０ｍＭ、ｐＨ７．５）、ＮａＣｌ（１５０ｍＭ）、Ｔｗｅｅｎ−２０（０．０５％）
６．  抗ＧＳＴ  Ａｂ（ＧＥ）
７．  抗ｐＭＥＫ  Ａｂ（Ｕｐｓｔａｔｅ）
８．  抗ウサギＡｂ／ユウロピウムコンジュゲート（Ｗａｌｌａｃ）
【００７１】
アッセイ手順：
１．  Ｂ−ＲａｆおよびＭｅｋを含有するＡＤＢを、アッセイにつき（すなわち、９６ウェルプレートのウェルあたり）２５μｌ加える。
２．  ０．２ｍＭのＡＴＰおよび４０ｍＭの塩化マグネシウムを含有するマグネシウム／ＡＴＰカクテル２５μｌを加える。
３．  時々振盪しながら室温で４５分間インキュベートする。
４．  この混合物を、抗ＧＳＴ  Ａｂでコートした９６ウェルプレート（ａ−ＧＳＴで一晩かけてコートしたＮｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂプレート）に移す。プレートは、使用前に新たにＴＢＳ−Ｔで３回洗浄する。
５．  低温室にて３０℃で終夜インキュベートする。
６．  ＴＢＳＴで３回洗浄し、Ａｎｔｉ−Ｐｈｏｓｐｈｏ  ＭＥＫ１（１：１０００、希釈度はロットによる）を加える。
７．  振盪培養器にて室温で６０分間インキュベートする。
８．  ＴＢＳＴで３回洗浄し、抗ウサギＡｂ／ユウロピウムコンジュゲート（Ｗａｌｌａｃ）（１：５００、希釈度はロットによる）を加える。
９．  プラットフォームシェーカーにおいて室温で６０分間インキュベートする。
１０．  プレートをＴＢＳ−Ｔで３回洗浄する。
１１．  １００ｕｌのＷａｌｌａｃ  Ｄｅｌｆｉａ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを加え、１０分間振盪する。
１２．  Ｗａｌｌａｃ  Ｖｉｃｔｏｒモデルプレートリーダーでプレートを読む。
１３．  データを収集し、一点測定およびＩＣ５０測定についてＥｘｃｅｌで分析する。Ｍａｌｌｏｎ  Ｒ，ら（２００１年）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第２９４巻：４８頁。
【００７２】
結果の分析：
一点アッセイで阻害度が＞８０％であった式Ａの化合物についてＩＣ５０測定を実施した。一点アッセイ−１０ｍｇ／ｍＬでの％阻害（％阻害＝１−式Ａの化合物で処理したサンプル／未処置の対照サンプル）。各化合物濃度について阻害％を求めた。ＩＣ５０測定−Ｂ−Ｒａｆアッセイは概して、半対数希釈で１μＭ〜３ｎＭまたは０．１ｕＭ〜３００ｐｍの化合物濃度で実施した。データをＥｘｃｅｌで分析し、Ｒａｄｉｓに移した。
【００７３】
式Ａの化合物についてのＩＣ５０データ
【００７４】
【表２】
2010540451.tif 000029
【００７５】
本発明の化合物は、未希釈で製剤してもよいし、または投与のために１種または複数の薬学的に許容できる担体と合わせてもよい。適切な担体としては、その限りでないが、たとえば、溶媒、希釈剤などが挙げられ、錠剤、カプセル剤、分散性粉末、顆粒、またはたとえば約０．０５〜５％の懸濁化剤を含有する懸濁液、たとえば約１０〜５０％の糖を含有するシロップ、およびたとえば約２０〜５０％のエタノールを含有するエリキシルなどのような形で経口的に、または等張性媒質中に約０．０５〜５％の懸濁化剤を含有する無菌の注射用溶液もしくは懸濁液の形で非経口的に投与することもできる。そのような医薬製剤は、担体と組み合わせて、たとえば約０．０５％から約９０％まで、より普通には約５重量％〜６０重量％の間の活性成分を含有してよい。
【００７６】
一部の実施形態では、製剤を経皮的に投与するが、これには、上皮組織および粘膜組織を含めた生体表面および生体管の内膜を通したすべての投与方法が含まれる。そのような投与は、ローション、クリーム、コロイド、フォーム、パッチ、懸濁液、または溶液の形でよい。
【００７７】
用いる活性成分の有効投与量は、用いる特定の化合物、投与方式、および治療対象となる状態の重症度に応じて様々でよい。しかし、一般に、本発明の化合物は、動物の体重１ｋｇあたり約０．５〜約１０００ｍｇの１日投与量で、場合により１日２〜４回に分けて、または持続放出形態で与えて投与すると、良好な結果が得られる。最も大型の哺乳動物では、合計１日投与量は、約１〜１０００ｍｇ、好ましくは約２〜５００ｍｇである。内用に適する剤形は、固体または液体の薬学的に許容できる担体との完全な混和物中に約０．５〜１０００ｍｇの活性化合物を含む。この投与計画は、最適な治療応答が得られるように調節することができる。たとえば、分割された数回分を毎日投与してもよいし、または治療状況の緊急性による必要に応じて用量を減らしてもよい。
【００７８】
本発明の化合物は、経口的に、ならびに静脈内、筋肉内、または皮下の経路によって投与することができる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、リン酸二カルシウム（ｄｉｃａｌｃｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、微結晶セルロース、スクロース、およびカオリンが挙げられ、液体担体としては、滅菌水、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、およびトウモロコシ油、ラッカセイ油、ゴマ油などの食用油が挙げられるが、活性成分の性質および所望の特定の投与形態に相応しいものである。着香剤、着色剤、保存剤、および酸化防止剤、たとえばビタミンＥ、アスコルビン酸、ＢＨＴ、ＢＨＡなどの、医薬組成物の調製で習慣的に用いられる佐剤を好都合に含めることもできる。
【００７９】
好ましい医薬組成物は、調製および投与の容易さという観点から、固体組成物、特に錠剤、および硬充填または液体充填カプセル剤である。化合物の経口投与は時に望ましい。
【００８０】
場合によっては、化合物をエアロゾルの形で気道に直接投与することが望ましいこともある。
【００８１】
本発明の化合物は、非経口的にまたは腹腔内に投与することもできる。遊離塩基または薬理学的に許容できる塩としての活性化合物の溶液または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合した水中で調製することができる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの油中混合物中で分散液を調製することもできる。通常の貯蔵および使用の条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐために保存剤を含有する。
【００８２】
注射への使用に適する薬学的形態として、無菌の水溶液または分散液、ならびに無菌の注射用溶液または分散液を即座に調製するための無菌粉末が挙げられる。すべての場合において、薬学的形態は、無菌でなければならず、易注射性が存在する程度に流体でなければならない。薬学的形態は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌や真菌などの微生物の汚染作用を防いで保存されなければならない。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、これらの適切な混合物、ならびに植物油を含有する溶媒または分散媒でよい。
【００８３】
癌治療では、本発明の化合物を、他の抗腫瘍性物質または放射線療法と組み合わせて投与することもできる。こうした他の物質または放射線治療は、本発明の化合物と同時に、または異なる時点で施すことができる。こうした組合せ型の治療では、相乗作用を実現し、有効性を向上させることができる。たとえば、本発明の化合物は、タキソールやビンブラスチンなどの有糸分裂阻害剤、シスプラチンやシクロホスアミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤、５−フルオロウラシルやヒドロキシウレアなどの代謝拮抗薬、アドリアマイシンやブレオマイシンなどのＤＮＡ干渉物質、エトポシドやカンプトセシンなどのトポイソメラーゼ阻害剤、アンジオスタチンなどの抗血管新生薬、およびタモキシフェンなどの抗エストロゲン剤と組み合わせて使用することができる。
【００８４】
本発明による使用では、化合物の「有効量」という用語は、そのような化合物をそのまま投与する、または体内で有効量の化合物を生成するプロドラッグ、誘導体、もしくは類似物を投与することのどちらかを意味する。
【００８５】
本発明の医薬組成物の投与方法は、特に限定されず、患者の年齢、性別、および症状に応じて、様々な製剤で投与することができる。たとえば、錠剤、丸剤、溶液、懸濁液、乳濁液、顆粒、およびカプセル剤を経口投与することができる。注射製剤は、静脈内に、個々に投与してもよいし、またはグルコース溶液やアミノ酸溶液などの注射輸液と混合してもよい。必要ならば、注射製剤は、筋肉内、皮内、皮下、または腹腔内に単独で投与する。坐剤を直腸に投与してもよい。
【００８６】
本発明による医薬組成物中に含まれる式Ａの化合物の量は、特に限定されないが、しかし、用量は、ターゲットとされる症状を治療し、寛解させ、または軽減するのに十分でなければならない。本発明による医薬組成物の投与量は、使用方法、患者の年齢、性別、および状態に応じて決まることになる。
【００８７】
本発明はまた、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ経路の腫瘍タンパク質キナーゼの追加の阻害剤を投与することをさらに含む阻害および治療の方法も提供する。
【００８８】
本発明の医薬組成物は、本発明の化合物を、単独で、または他の腫瘍性タンパク質キナーゼ阻害性化合物または化学療法薬と組み合わせて含んでよい。化学療法薬としては、エキセメスタン、フォルメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、ファドロゾール、パクリタキセルやドセタキセルなどのタキサンおよび誘導体、カプセル封入されたタキサン、ＣＰＴ−１１、カンプトセシン誘導体、アントラサイクリングリコシド類、たとえばドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、エトポシド、ナベルビン、ビンブラスチン、カルボプラチン、シスプラチン、エストラムスチン、セレコキシブ、タモキシフェン、ラロキシフェン、Ｓｕｇｅｎ  ＳＵ−５４１６、Ｓｕｇｅｎ  ＳＵ−６６６８、およびハーセプチンが挙げられるがこの限りでない。
【００８９】
本発明について説明してきたが、以下の非限定的な実施例によって本発明をさらに例示する。
【実施例】
【００９０】
４−［３−メトキシ−フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンを例とした、置換アミノピラゾール中間体を調製するための一般手順：
【００９１】
【化２６】
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ステップ１：無水ＥｔＯＨの溶液５ｍＬに、０．７３ｇ（３１．８４ｍｍｏｌ）のＮａ金属を（ヘキサンで鉱油を除去した後）加えた。溶液が透明になるまで（４５℃で１時間加熱する必要があった）混合物を撹拌した。３ｇ（２０．３８ｍｍｏｌ）の３−（メトキシフェニル）アセトニトリルおよび３．９ｇ（２８．６６ｍｍｏｌ）のイソニコチン酸メチルを２６ｍＬの無水ＥｔＯＨに混ぜた混合物を加え、得られる褐色の溶液を３時間加熱還流した。冷却した後、残渣を蒸発にかけ、シリカゲルクロマトグラフィー（９：１〜４：１  塩化メチレン／メタノール）によって精製して、１．７５ｇ（３４％）の２−（３−メトキシフェニル）−３−オキソ−３−ピリジン−４−イル−プロピオニトリル（Ｉ）を得た。
【００９２】
ステップ２：１．７ｇ（６．７４ｍｍｏｌ）の２−（３−メトキシフェニル）−３−オキソ−３−ピリジン−４−イル−プロピオニトリルと１７ｍＬのＰＯＣｌ３の混合物を８０℃で１８時間加熱した。冷却した後、ＰＯＣｌ３を蒸発させた。残渣にトルエンを加え、これを蒸発乾燥した。このステップを繰り返して、ＰＯＣｌ３を完全に除去した。氷および飽和炭酸水素ナトリウムを残渣に加えると、固体が析出し、１ｇの３−クロロ−２−（３−メトキシフェニル）−３−ピリジン−４−イル−アクリロニトリル（ＩＩ）が白色固体（５７％）として得られた。MS 271.1 [M+H].
【００９３】
ステップ３：１ｇ（３．６９ｍｍｏｌ）の３−クロロ−２−（３−メトキシフェニル）−３−ピリジン−４−イル−アクリロニトリルおよび０．９ｍＬ（１８．６ｍｍｏｌ）のヒドラジン水和物を３０ｍＬのエタノールに混ぜた混合物を、６．５時間加熱還流した。混合物を室温に冷まし、溶媒を蒸発によって除去した。炭酸水素ナトリウム水溶液を残渣に加えて撹拌し、得られる固体を濾過によって収集した。固体を水で洗浄し、次いで真空中で乾燥させて、０．９２ｇ（９４％）の４−［３−メトキシ−フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（ＩＩＩ）を得た。MS 267.2 [M+H].
【００９４】
アミノピラゾール中間体の４−［３−（ベンジルオキシ）フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン、４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−３−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン、および４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンは、４−［３−メトキシ−フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（ＩＩＩ）の方法によって合成した。
【００９５】
３−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェノール。４−（３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（３．０ｇ、１１．２７ｍｍｏｌ）とピリジン塩酸塩（６．０ｇ、５１．９２ｍｍｏｌ）の混合物を２０２℃で１時間加熱した。室温に冷却した後、混合物を水酸化アンモニウムと共に０．５時間撹拌し、次いで濾過した。固体を取っておき、濾液を蒸発乾燥して、固体残渣を得た。固体を合わせて１５％のメタノール塩化メチレン溶液で洗浄した。濾液を蒸発させると、未精製の残渣が得られ、これをシリカゲル（１２％のメタノール塩化メチレン溶液）によって精製して、２．２１ｇ（７８％）の３−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェノールをベージュ色の固体、融点１６２〜１６４℃として得た。MS: [M+H]+ 253.2.
【００９６】
５−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−クロロフェノール。５−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−クロロフェノールは、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンをピリジン塩酸塩と反応させることにより、３−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）フェノールの手順に従って調製した。シリカゲルクロマトグラフィーによって精製すると、５−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−クロロフェノールがベージュ色の固体として収率７７％で得られた。融点２７３〜２７４℃。MS: [M+H] 287.1.
【００９７】
（実施例１）
８−［３−（ベンジルオキシ）フェニル］−４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
４−［３−（ベンジルオキシ）フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）およびエタノール（１．５ｍＬ）を水（０．８ｍＬ）に溶かした冷（０〜５℃）溶液に、亜硝酸ナトリウム（０．１５ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）を水（１．５ｍＬ）に溶かした冷溶液を加え、３分間撹拌し、次いで、濃塩酸（０．３９ｍＬ）を水（０．２８ｍＬ）に溶かした冷溶液を加えた。得られる混合物を３分間撹拌し、３−シクロヘキシル−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステル（０．３１９ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のエタノール（０．３ｍＬ）溶液を加えた後、酢酸ナトリウム（０．３６ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）を加えた。得られる濃厚な混合物を（０〜５℃）で３０分間、次いで室温で４８時間撹拌した。固体が生成し、それから溶媒をデカントした後、高真空中で乾燥させた。固体をトルエン（５０ｍＬ）および触媒量のｐ−トルエンスルホン酸（０．０２ｇ）に懸濁させ、得られる混合物を（Ｄｅａｎ  Ｓｔａｒｋ装置を使用して）２時間加熱還流した。反応液を冷まし、溶媒を蒸発乾燥させて、暗色の油状物を得た。油状物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：９９〜２：９８  メタノール／塩化メチレン）によって精製して、０．５０１ｇ（６４％）の８−［３−（ベンジルオキシ）フェニル］−４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルを橙色の固体として得た。MS 534.3 [M+H].
【００９８】
（実施例２）
３−（４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノール
ステップ１：８−（３−ヒドロキシフェニル）−４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸
８−［３−（ベンジルオキシ）フェニル］−４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル（０．２２６ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（６ｍＬ）に溶かした冷（０〜５℃）溶液に、三臭化ホウ素の溶液（１Ｍの塩化メチレン溶液、１．２７ｍＬ、１．２７ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下し、得られる混合物を冷えた状態で３０分間撹拌した。混合物を氷冷水で失活させ、得られる赤色固体を濾過し、次いで真空乾燥して、０．２１０ｇの未精製の８−（３−ヒドロキシフェニル）−４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸を得、これをそれ以上精製せずに次のステップに進めた。
【００９９】
ステップ２：３−（４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノール
Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（１．５ｍＬ）の熱（２００〜２１０℃）溶液に、８−（３−ヒドロキシフェニル）−４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸（０．１２ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。混合物を室温に冷却し、溶媒をデカントして暗色の固体を得、これを真空乾燥した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：９９〜２：９８  メタノール／塩化メチレン）によって精製すると、０．０２３ｇ（２２％）の３−（４−シクロヘキシル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノールが黄色の固体として得られた。MS 372.3 [M+H].
【０１００】
（実施例３）
［８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン３−イル−（４−メチルピペラジン−１−イル）−メタノン］
ステップ１：ｔ−ブチル−８−［３−（メトキシフェニル］−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボキシラート
３−オキソブタン酸ｔ−ブチル（０．４２ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）を水（１．５ｍＬ）およびＨＣｌ（１．５ｍＬ）に溶かした溶液を０℃にした。この溶液を、４−（３−メトキシフェニル）−３−（ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（５１６ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびＮａＮＯ２（１４７ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を水（２．５ｍＬ）に懸濁させた０℃の懸濁液に加えた後、酢酸ナトリウム（５１６ｍｇ、６．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を８時間撹拌し、ｐＨを炭酸水素ナトリウム水溶液で約７に調整した。得られる固体を濾別し、水、次いでヘキサンで洗浄して、生成物（３３０ｍｇ）を収率４２％で得た。MS 418.3 [M+H].
【０１０１】
ステップ２：８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸
８−［３−（メトキシフェニル］−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸ｔ−ブチル（１．０ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）とギ酸（１８ｍＬ）の混合物を室温で４８時間かけて撹拌した。溶媒を蒸発乾燥し、残渣を２回トルエンからの再蒸発にかけた。固体をエーテルで摩砕し、濾過によって収集し、塩化メチレンで洗浄し、乾燥させて、８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸を黄色の固体、１６０〜１７０℃として得た。MS 362.2 [M+H].
【０１０２】
ステップ３：［８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン３−イル−（４−メチルピペラジン−１−イル）−メタノン
８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸（０．１５ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．２５ｍＬ、１．７９ｍｍｏｌ）、１−メチルピペラジン（０．２ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）、およびジエチルシアノホスホン酸（０．２ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）に混ぜた混合物を室温で終夜撹拌した。高真空を使用して溶媒を蒸発させ、残渣を水に溶解させ、１０％メタノール塩化メチレン溶液で抽出した。有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を蒸発させて、油状物を得た。未精製の油状物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（メタノール塩化メチレン溶液）によって精製して、２０ｍｇ（１１％）の［８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン３−イル−（４−メチルピペラジン−１−イル）−メタノンを黄色の固体として得た。MS 444.4 [M+H].
【０１０３】
（実施例４）
４−（６−ブロモ−ピリジン−３イル−）−８−（３−メトキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル
化合物４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル−）−８−（３−メトキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステルは、実施例１ステップ１の方法によって、４−［３−メトキシ−フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１．０ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）をエチル−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−３−オキソプロピオナート（１．０６ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）と反応させて調製した。未精製の泡沫を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２％メタノール塩化メチレン溶液）によって精製して、１．１３ｇ（５７％）の４−（６−ブロモ−ピリジン−３イル−）−８−（３−メトキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステルを橙色の固体、８６〜８８℃として得た。MS 531.2,[M+H], 533.2 [M+H].
【０１０４】
（実施例５）
３−［４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−フェノール
ステップ１：４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル−）−８−（３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸
化合物４−（６−ブロモ−ピリジン−３イル−）−８−（３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸は、４−（６−ブロモ−ピリジン−３イル−）−８−（３−メトキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル（０．８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）および三臭化ホウ素（１Ｍ塩化メチレン溶液、９．０ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１ステップ２の方法に従って調製した。粗生成物はそれ以上精製せずに次のステップで使用した。
【０１０５】
ステップ２：３−［４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−フェノール
化合物３−［４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−フェノールは、未精製の４−（６−ブロモ−ピリジン−３イル−）−８−（３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸（０．８７ｇ）のＤｏｗｔｈｅｒｍ（２５．０ｍＬ）溶液を１６５℃で３分間使用して、実施例２ステップ２についての上記方法に従って調製した。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（３％のメタノール塩化メチレン溶液）によって精製して、０．１２ｇの３−［４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−フェノールを橙色の固体として得た。MS 445.1,[M+H], 447.1 [M+H].
【０１０６】
（実施例６）
３−｛４−［６−（４−メチル−［１，４］ジアゼパン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝−フェノール
３−［４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−フェノール（０．０４ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、１−メチルホモピペラジン（０．０４ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）を１−メチル−２−ピロリジノン（０．５ｍＬ）に溶かした混合物を１００℃で１８時間加熱した。得られる生成物混合物を室温に冷却し、炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で希釈した。固体が得られ、これを濾過によって収集し、水で洗浄し、乾燥させた。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（勾配９５：５〜４：１の塩化メチレン／メタノール）によって精製して、０．４ｇの３−｛４−［６−（４−メチル−［１，４］ジアゼパン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝−フェノールを橙色の固体として得た。MS 479.3 [M+H].
【０１０７】
（実施例７）
３−｛４−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝−フェノール
化合物３−｛４−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝−フェノールは、３−［４−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−フェノールを１−メチルピペラジンと反応させることにより、実施例６についての方法に従って調製した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（勾配９５：５〜４：１の塩化メチレン／メタノール）によって精製して、３−｛４−［６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝−フェノールを橙色の固体として得た。MS 465.3 [M+H].
【０１０８】
（実施例８）
８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン
化合物８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンは、４−（３−メトキシフェニル）−３−（ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（５００ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびフェニルスルホニルアセトン（０．０４１ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９７：３の塩化メチレン／メタノールを溶離液とする）によって精製して、０．０５３ｇ（６１％）の８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンを黄色の固体として得た。MS 458.3 [M+H].
【０１０９】
（実施例９）
３−［４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノール
化合物３−［４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノールは、８−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン（０．０３３ｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）を三臭化ホウ素（１Ｍの塩化メチレン溶液、０．３５ｍＬ、０．３５ｍｍｏｌ）と反応させて、実施例２ステップ１の方法によって調製した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９５：５の塩化メチレン／メタノールを溶離液とする）によって精製して、０．０２１ｇ（６６％）の３−［４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノールを黄色の固体として得た。MS 444.3 [M+H].
【０１１０】
（実施例１０）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
実施例１０は、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンを３−シクロプロピル−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステルと反応させることにより、実施例１について述べた手順に従って調製した。MS (エレクトロスプレー): m/z 450.2 [M+H].
【０１１１】
（実施例１１）
４−（６−ブロモピリジン−３−イル）−８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
実施例１１は、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンをエチル−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）−３−オキソプロピオナートと反応させることにより、実施例１について述べた手順に従って調製した。MS (エレクトロスプレー): m/z 565.2 [M+H].
【０１１２】
（実施例１２）
８−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル
ステップ１：３−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステル
炭酸ジエチル（０．１８ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（０．０５７ｇ、１．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に混ぜた熱（７０℃）混合物に、１−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−エタノン（０．２ｇ、０．７ｍｍｏｌ）（ＵＳ５４５９１３１、参考実施例１５の方法によって合成）を１時間かけて少量ずつ加えた。得られる褐色の混合物を７０℃で２時間加熱した。冷却した後、混合物を氷水中に注ぎ、数滴の酢酸で中和し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を蒸発させて、油状物を得た。油状物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％のメタノール塩化メチレン溶液）によって精製すると、０．１１ｇ（４４％）の３−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステルが得られた。MS 355.3 [M+H].
【０１１３】
ステップ２：
８−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル。この酸エチルエステルは、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンを３−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステルと反応させることにより、実施例１について述べた手順に従って調製した。MS 648.3 [M+H].
【０１１４】
（実施例１３）
５−［４−（６−ブロモピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−２−クロロフェノール
実施例１３は、４−（６−ブロモピリジン−３−イル）−８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルおよび対応する試薬を使用して、実施例５ステップ１および２について述べた手順に従って調製した。MS (エレクトロスプレー): m/z 479.1 [M+H].
【０１１５】
（実施例１４）
２−クロロ−５−｛４−［６−（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）ピリジン−３−イル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝フェノール
実施例１４は、５−［４−（６−ブロモピリジン−３−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］−２−クロロフェノールを１−メチルホモピペラジンと反応させることにより、実施例６について述べた手順に従って調製する。MS (エレクトロスプレー): m/z 513.4 [M+H].
【０１１６】
（実施例１５）
２−クロロ−５−（４−｛３−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］フェニル｝−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノール
実施例１５は、８−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−フェニル］−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステルおよび対応する試薬を使用して、実施例５ステップ１および２について述べた手順に従って調製する。MS (エレクトロスプレー): m/z 562.3 [M+H].
【０１１７】
（実施例１６）
３−［８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル
ステップ１：３−シアノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル
トシルメチルイソシアニド（５ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）および３−オキソ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル（３．８ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）をジメトキシエタン（６０ｍＬ）およびエタノール（１．８５ｍＬ）に混ぜた混合物を、−１０℃で撹拌し、その間ｔ−ＢｕＯＫを、温度が＜５℃に保たれるように１時間かけて少量ずつ加えた。加え終えたなら、反応液を−１０℃で１時間撹拌し、次いで室温でさらに２時間撹拌した。次いで溶媒を減圧下で除去して、橙褐色の固体を得た。この固体に水（２００ｍＬ）を加え、得られる水性混合物をエーテル（４×、１５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を蒸発させて、褐色の油状物を得た。未精製の混合物を、３０％の酢酸エチルヘキサン溶液を使用しながらシリカカラムで精製して、３−シアノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル（２．４３ｇ、収率６０％）を得た。MS 209.2 [M+H].
【０１１８】
ステップ２：３−（２−ベンゼンスルホニル−アセチル）−８−アザ−ビシクロ［３．２，１］オクタン−８−カルボン酸エチルエステル
メチルフェニルスルホン（０．３５ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（７ｍＬ）に溶かした溶液を、窒素中にて０℃で冷却し、その後ｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍ）のヘキサン（３．０ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）溶液を滴下して処理した。これを加えると、黄色の沈殿が生成し始めた。０℃でもう１時間撹拌した後、混合物を、３−シアノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル（０．５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液で処理した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで室温に達するようにした。溶液を水で失活させた後、それをエーテルで抽出した。エーテル抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で蒸発させて、油状物を得た。この油状物を、１０ｍＬの１Ｎ塩酸およびジオキサンと共に１時間撹拌した。溶媒をもう一度蒸発させると、油状物が得られ、これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１％のメタノール塩化メチレン溶液）によって精製して、０．１４ｇ（１７％）の３−（２−ベンゼンスルホニル−アセチル）−８−アザ−ビシクロ［３．２，１］オクタン−８−カルボン酸エチルエステルを得た。MS 366.3 [M+H].
【０１１９】
ステップ３：３−［８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル
このカルボン酸エステルは、３−（２−ベンゼンスルホニル−アセチル）−８−アザ−ビシクロ［３．２，１］オクタン−８−カルボン酸エチルエステルを４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンおよび対応する試薬と反応させて、実施例１の方法によって調製した。MS 659.4 [M+H].
【０１２０】
（実施例１７）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［８−（エトキシカルボニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
ステップ１：３−アセチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル
臭化メチルマグネシウム（３５．４ｍＬ）の１．４Ｍ  ＴＨＦ／トルエン溶液を、３−シアノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル（２．４ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液に室温で加えた。反応液を３時間撹拌し、塩化アンモニウム（１００ｍＬ）で失活させた。次いで混合物をエーテル（４×、１００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を蒸発させて、３−アセチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチルを油状物として得た。MS 226.2 [M+H].
【０１２１】
ステップ２：３−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル
３−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチルは、３−アセチル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチルを対応する試薬と反応させて、実施例１２ステップ１の方法によって調製した。MS 298.3 [M+H].
【０１２２】
ステップ３：８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［８−（エトキシカルボニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
カルボン酸エステルは、３−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチルを４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンおよび対応する試薬と反応させて、実施例１の方法によって調製した。MS 591.4 [M+H].
【０１２３】
（実施例１８）
３−［８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸エチル
実施例１８は、８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［８−（エトキシカルボニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタ−３−イル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルおよび対応する試薬を使用して、実施例５ステップ１および２について述べた手順に従って調製した。MS 505.3 [M+H].
【０１２４】
（実施例１９）
２−クロロ−５−［４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノール
ステップ１．  １−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（フェニルスルホニル）エタノン）
１−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）エタノン（０．５ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのアセトニトリルに溶かした溶液に、［ヒドロキシ（トシルオキシ）ヨード］ベンゼン（１．１６６ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）を加え、得られる混合物を４０分間還流させた。室温に冷ました後、フェニルスルフィン酸ナトリウム（０．９７６ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）を加えてから、水４ｍＬを滴下した。混合物をさらに２時間還流させ、次いで７５ｍＬの塩化メチレンと３０ｍＬの水とに分配した。塩化メチレン層を真空中で濃縮し、粗生成物混合物を、シリカゲルクロマトグラフィー（３：１のヘキサン／酢酸エチルを溶離液とする）によって精製して、０．３２８ｇの１−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（フェニルスルホニル）エタノンを白色固体として得た。MS 309.1 [M+H].
【０１２５】
ステップ２．  ２−クロロ−５−［４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノール。化合物２−クロロ−５−［４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノールは、５−（３−アミノ−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−２−クロロフェノール（８０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、１−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（フェニルスルホニル）エタノン（９４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、および対応する試薬から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物は、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９８：２の塩化メチレン／メタノールを溶離液とする）によって精製して、１６ｍｇ（１０％）の２−クロロ−５−［４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノールを橙色の固体として得た。MS 588.3 [M+H].
【０１２６】
（実施例２０）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン
化合物８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンは、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１５０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、１−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（フェニルスルホニル）エタノン（１６９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、および対応する試薬から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９７：３の塩化メチレン／メタノールを溶離液とする）によって精製して、１２４ｍｇ（４１％）の８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−３−（フェニルスルホニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンを黄色の固体として得た。MS 602.3 [M+H].
【０１２７】
（実施例２１）
２−クロロ−５−（４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノール
ステップ１：８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
化合物８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルは、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．２００ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）をエチル−３−シクロプロピル−３−オキソプロピオナート（０．１２８ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と反応させて、実施例１の方法によって調製した。未精製の泡沫を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％のメタノール塩化メチレン溶液）によって精製して、０．１７４ｇ（５８％）の８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルをオレンジベージュ色の固体として得た。MS 450.0 [M+H].
【０１２８】
ステップ２：８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸
化合物８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸は、８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル（０．１７ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）および三臭化ホウ素（１Ｍの塩化メチレン溶液、４．６ｍＬ、４．６ｍｍｏｌ）を使用して、実施例２ステップ１についての方法に従って調製した。粗生成物をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。
【０１２９】
ステップ３：２−クロロ−５−（４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノール
Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（３ｍＬ）の熱（１６５℃）溶液に、８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸（０．１９ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。混合物を室温に冷却し、ヘキサンで希釈して、暗色の固体を沈殿させた。固体を濾過し、ＤＭＳＯに溶解し直し、ＨＰＬＣによって精製して、０．０１０ｇ（２．７％）の２−クロロ−５−（４−シクロプロピル−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル）フェノールをベージュ色の固体として得た。MS 364.2 [M+H].
【０１３０】
（実施例２２）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−ピペリジン−４−イル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
ステップ１：４−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル
４−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルは、４−アセチルピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル（２．１５ｇ、９．４６ｍｍｏｌ）を炭酸ジエチル（２．３ｍＬ、１９．０ｍｍｏｌ）と反応させることにより、実施例１２ステップ１について述べた手順に従って調製した。粗生成物を、９９．３：０．７〜９９：１の勾配の塩化メチレン／メタノールを溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１．１６ｇ（４１％）の４−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルを無色の油状物として得た。MS 300.3 [M+H].
【０１３１】
ステップ２：８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−ピペリジン−４−イル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
化合物８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−ピペリジン−４−イル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルは、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．９０６ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、４−（３−エトキシ−３−オキソプロパノイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル（０．９ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、および対応する試薬から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物を、９５：５〜８５：１５の勾配の塩化メチレン／メタノールを溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、０．７２２ｇ（５２％）の８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−ピペリジン−４−イル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルを黄色の固体として得た。MS 493.4 [M+H].
【０１３２】
（実施例２３）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−ピペリジン−４−イル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル（０．２４ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、ヨードエタン（０．０８ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）、および無水炭酸カリウムを２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに混ぜた混合物を、室温で３０分間撹拌した。混合物を水中に注ぎ、固体を濾過によって収集し、水で洗浄し、乾燥させた。粗生成物を、９７：３〜９２：８の勾配の塩化メチレン／メタノール）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、０．１５５ｇ（６０％）の８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルを黄色の固体として得た。MS 521.4 [M+H].
【０１３３】
（実施例２４）
２−クロロ−５−［４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノール
ステップ１：  ８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−（ピリジン−４−イル）ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸
化合物８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−（ピリジン−４−イル）ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸は、８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル（０．１１５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）および三臭化ホウ素（１Ｍ塩化メチレン溶液、２．５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例２ステップ１についての方法に従って調製した。粗生成物をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。
【０１３４】
ステップ２：２−クロロ−５−［４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノール
化合物２−クロロ−５−［４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノールは、未精製の８−（４−クロロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−（ピリジン−４−イル）ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸（０．１３ｇ）のＤｏｗｔｈｅｒｍ（２．５ｍＬ）溶液を１６５℃で３分間使用して、実施例５ステップ２についての上記方法に従って調製した。粗生成物を、９４：６〜８０：２０の勾配の塩化メチレン／メタノールを溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、９７ｍｇ（２ステップで８６％）の２−クロロ−５−［４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル］フェノールを黄色の固体として得た。MS 435.3 [M+H].
【０１３５】
（実施例２５）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
ステップ１．  ３−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−３−オキソプロパン酸エチル
炭酸ジエチル（２．２ｍＬ、１８．３ｍｍｏｌ）および６０％鉱油中水素化ナトリウム（０．７３３ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２４ｍＬ）に混ぜた熱（７０℃）混合物に、４−（４−メチルピペラジノ）アセトフェノン（２ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）を含有する１０ｍＬのテトラヒドロフランを１時間かけて加えた。得られる褐色の混合物を７０℃で２時間加熱した。冷却した後、混合物を、メタノールの滴下によって、次いで３０ｍＬの水で失活させた。混合物を酢酸で中和し、次いで炭酸水素ナトリウムでｐＨ８にし、３０ｍＬの酢酸エチルで５回抽出した。酢酸エチル抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を蒸発させて油状物を得た。油状物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２〜５％勾配のメタノール塩化メチレン溶液）によって精製すると、２．５ｇ（９４％）の３−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−３−オキソプロパン酸エチルが得られた。MS 291.2 [M+H].
【０１３６】
ステップ２．  ８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル。化合物８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルは、４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（３００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、３−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−３−オキソプロパン酸エチル（３３５ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）、および対応する試薬から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９８：２〜９５：５の勾配の塩化メチレン／メタノールを溶離液とする）によって精製して、１９７ｍｇ（３２％）の８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルを赤色の油状物として得た。MS 584.4 [M+H].
【０１３７】
（実施例２６）
２−クロロ−５−｛４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝フェノール
化合物２−クロロ−５−｛４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝は、８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルから、実施例５ステップ１および２の方法によって調製した。シリカゲルクロマトグラフィー（９８：２〜３：１勾配の塩化メチレン／メタノール）にかけた後、２−クロロ−５−｛４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝フェノールが、橙色の固体として、２ステップで４４％の収率で得られた。MS 498.3 [M+H].
【０１３８】
（実施例２７）
８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−フェニル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン
４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−５−ピリジン４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（０．０５ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）および濃塩酸（０．０８ｍＬ）を水（０．１７ｍＬ）に混ぜた氷冷（０〜５℃）混合物に、亜硝酸ナトリウム（１６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を水（０．０５ｍＬ）に溶かした冷溶液を加え、得られる混合物を３０分間撹拌した。これに、塩化メチレン（２ｍＬ）を加え、混合物を炭酸ナトリウムの飽和溶液でｐＨ８〜９に塩基性化し、次いで固体がすべて溶解するまで塩化メチレンをさらに加えた。層を分離した後、塩化メチレン抽出物を、ベンゾイルメチレントリフェニルホスホラン（６５．０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２ｍＬ）に溶かした冷（０〜５℃）溶液にそのまま加え、０〜５℃で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、３％のメタノール塩化メチレン溶液を溶離液とする分取シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、５２ｍｇ（７４％）の８−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−フェニル−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジンを橙色の固体として得た。MS 414.3,[M+H].
【０１３９】
（実施例２８）
８−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチル
化合物８−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルは、４−［３−メトキシ−フェニル］−５−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（２７９ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、３−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−３−オキソプロパン酸エチル（３３５ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）、および対応する試薬から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９８：２〜９５：５の勾配の塩化メチレン／メタノールを溶離液とする）によって精製して、２０１ｍｇ（３５％）の８−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルを赤橙色の固体として得た。MS 550.4 [M+H].
【０１４０】
（実施例２９）
３−｛４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝フェノール
化合物３−｛４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝フェノールは、８−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルから、実施例５ステップ１および２の方法によって調製した。シリカゲルクロマトグラフィー（９８：２〜９：１勾配の塩化メチレン／メタノール）にかけた後、３−｛４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−８−イル｝フェノールが、橙色の固体として、２ステップで５７％の収率で得られた。MS 464.4 [M+H].
【０１４１】
（実施例３０）
３−［８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド、トリフルオロ酢酸塩
ステップ１：３−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステル
３−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステルは、３−アセチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンスルホンアミド（０．３ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を炭酸ジエチル（０．３５ｍＬ、２．８９ｍｍｏｌ）と反応させることにより、実施例１２ステップ１について述べた手順に従って調製した。粗生成物を、２５％の酢酸エチルヘキサン溶液を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、０．１１ｇ（２８％）の３−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステルを無色の油状物として得た。MS 300.3 [M+H].
【０１４２】
ステップ２：４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル
４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステルは、４−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−３−ピリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（０．１０５ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、３−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−３−オキソ−プロピオン酸エチルエステル（０．１１ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、および対応する試薬から、実施例１の方法によって調製した。粗生成物は、３％のメタノール塩化メチレン溶液を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、８４．０ｍｇ（３９％）の４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステルを黄色の固体として得た。MS 577.2 [M+H].
【０１４３】
ステップ３：４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸
４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸は、４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸エチルエステル（０．０８ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および三臭化ホウ素（１Ｍの塩化メチレン溶液、３．５ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例２ステップ１の方法に従って調製した。粗生成物をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。
【０１４４】
ステップ４：３−［８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド、トリフルオロ酢酸塩
３−［８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミドは、未精製の４−（３−ジメチルスルファモイル−フェニル）−８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−７−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−３−カルボン酸（０．０６ｇ）のＤｏｗｔｈｅｒｍ（１．０ｍＬ）溶液を１６５℃で３分間使用して、実施例５ステップ２についての上記方法に従って調製した。粗生成物を、２％のメタノール塩化メチレン溶液を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって、次いで逆相ＨＰＬＣで精製して、２３ｍｇの３−［８−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−７−ピリジン−４−イルピラゾロ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンスルホンアミド（トリフルオロ酢酸塩）を黄色の固体として得た。MS 491.1,[M+H].
【国際調査報告】
2010540451.tif 000046
2010540451.tif 000047