(57)【要約】  本発明はノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ヘマグルチニン（ＨＡ）及び構造Ｍ２タンパク質を有するウイルスに対して阻害効果を示す新しいクラスの化合物を提供する。これらの化合物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）の複製因子の阻害剤としても有用である。本発明はまた、本発明の化合物を単独で、又は適切且つ薬学的に許容される担体を混合することで併せて含有する医薬組成物を記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式（Ｉ）：
【化１】
2010516658.tif 000025
（式中、Ｘは−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＣＨＦ−、−ＣＦ２−を表し、
環のＣ２とＣ３とは単結合又は二重結合で連結され、
Ｒ１は−ＯＨ、ハロゲン又は−Ｂ／部分を表すが、但し前記環のＣ２とＣ３とを連結する二重結合が存在する場合、Ｒ１は存在せず、
Ｒ２は−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は−ＮＨ−ＯＨであり、
Ｒ３は−ＮＨ２、−ＮＨＣＯ−ＣＨ３又は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＯＨであり、
Ｒ４は−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−Ｂ／部分、−ＣＨ２−Ｂ／部分又は−Ｂ／部分を表す）
の化合物であって、
前記−Ｂ／部分が：
【化２】
2010516658.tif 000026
（式中、Ｒ５は連結官能基−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−又は
【化３】
2010516658.tif 000027
を表し、
−Ｒ６は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ７は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ８は連結官能基−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＨ−又は−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ−を表す）
のいずれかを表す、化合物、並びにそれらの直鎖又は分岐Ｃ１〜４カルボキシルモノ又はポリエステル、付加塩、溶媒和物、その分割エナンチオマー及び精製ジアステレオマー。
【請求項２】
【化４】
2010516658.tif 000028
【化５】
2010516658.tif 000029
【化６】
2010516658.tif 000030
【化７】
2010516658.tif 000031
から成る群から選択される、−Ｂ／部分でのＣ７又はＣ８一置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
【化８】
2010516658.tif 000032
から成る群から選択される、−Ｂ／部分でのＣ２一置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
−Ｂ１／部分でのＣ２及びＣ８二置換化合物
【化９】
2010516658.tif 000033
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
−Ｂ２／部分でのＣ２及びＣ８二置換化合物
【化１０】
2010516658.tif 000034
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
【化１１】
2010516658.tif 000035
【化１２】
2010516658.tif 000036
から選択される、異なる−Ｂ１／部分又は−Ｂ２／部分でのＣ２及びＣ８二置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
薬学的に許容される担体中に請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその混合物を含む医薬組成物。
【請求項８】
ヘマグルチニン（ＨＡ）及び／又はノイラミニダーゼ（ＮＡ）及び／又はＭ２タンパク質含有ウイルスによって引き起こされるウイルス感染を治療する方法であって、治療に有効な量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を、かかる治療を必要とする宿主に任意の適切な投与経路で投与することを含む、方法。
【請求項９】
前記感染が、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス又はその突然変異体によるものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＲＮｍ及びＡＲＮポリメラーゼによって媒介される疾患又は状態を治療する方法であって、治療に有効な量のＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼを阻害する請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を、かかる治療を必要とする宿主に任意の適切な投与経路で投与することを含む、方法。
【請求項１１】
ＡＲＮｍ、ＡＲＮポリメラーゼ及び酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼの媒介による前記感染が、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）感染である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物を、治療に有効な量のＡ型及びＢ型のインフルエンザウイルス又はその突然変異体に対して活性を有する別の化合物と併用して投与することをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス又はその突然変異体に対して活性を有する前記化合物が、ザナミビル及び／又はオセルタミビルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物を、治療に有効な量のＣ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）又はその突然変異体に対して活性を有する別の化合物と併用して投与することをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ＨＶＣに対して活性を有する前記化合物が、単独の、又はリバビリンと併用した、インターフェロンα若しくはＰＥＧ化インターフェロンαである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
治療において使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記治療が、哺乳類におけるＨＡ又はＮＡ又はＭ２タンパク質の媒介によるウイルス感染の治療である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記治療が、哺乳類におけるＡＲＮｍ、ＡＲＮポリメラーゼ及び酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼの媒介によるＨＶＣの治療である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルス若しくはＢ型インフルエンザウイルスのいずれか、又はそれらのサブタイプ並びに別の株及び突然変異体によって引き起こされる、請求項１７又は１８に記載の化合物。
【請求項２０】
哺乳類におけるＨＡ又はＮＡ又はＭ２タンパク質の媒介によるウイルス感染の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
哺乳類におけるＡＲＮｍ、ＡＲＮポリメラーゼ及び酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼの媒介によるウイルス感染の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルス若しくはＢ型インフルエンザウイルス、又はそれらのサブタイプ並びに別の株及び突然変異体によって引き起こされる、請求項２０又は２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルス若しくはＢ型インフルエンザウイルス若しくはＣ型肝炎ウイルスのいずれか、又はそれらのサブタイプ並びに別の株及び突然変異体によって引き起こされる、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ノイラミニダーゼ（neuramininidase）（ＮＡ）、ヘマグルチニン（ＨＡ）、構造タンパク質Ｍ２及びヘマグルチニンエステラーゼ融合（ＨＥＦ）糖タンパク質の阻害剤として有用な新しいクラスの化合物；ウイルス感染の治療、予防又は改善に有用な該化合物を含有する医薬組成物；並びに該化合物及び組成物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスは、電子顕微鏡上で観察すると、直径が８０ｎｍ〜１２０ｎｍの球状の形態及び／又は線状の形を示すことが見出されている（非特許文献１）。ウイルス膜の最も代表的な特徴は、Ａ型及びＢ型のウイルスの場合には、ヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）に対応する放射状の突起が存在することであり（非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）、Ｃ型インフルエンザウイルスでは、３つの生物活性：受容体への結合（Ｈ）、受容体不活性化（Ｅ）及び融合（Ｆ）に関与するヘマグルチニンエステラーゼ融合（ＨＥＦ）糖タンパク質という名の糖タンパク質に対応する放射状の突起が存在することである（非特許文献５）。
【０００３】
第一世代の抗ウイルス製品（主にアダマンタン誘導体、同様にアマンタジン、リマンタジン（rimandadine）等）は、Ａ型インフルエンザウイルスのＭ２タンパク質イオンチャネルを遮断することにより作用すると考えられている。Ｍ２プロトンチャネルを介したＨ＋イオンの流入を遮断することにより、脱殻及び細胞質への遊離リボ核タンパク質の放出が阻害される。これはＡ型株のウイルスにおいてのみ起こり、Ｂ型株においては起こらない。
【０００４】
その後、抗ウイルス戦略は、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルスの表面上にキノコ型の突起として存在するヘマグルチニン（ＨＡ）又は酵素ノイラミニダーゼ（ＮＡ）のいずれかを阻害する、ザナミビル及びオセルタミビル等の第二世代の抗ウイルス剤の開発に向けられた。これらのタンパク質は標的細胞の膜表面に結合して、シアロ糖タンパク質及び糖脂質のシアル酸部分を開裂することにより感染する。さらに、酵素ノイラミニダーゼはウイルス複製の終了時に受容体からシアル酸を開裂して、ウイルス放出を可能にするために不可欠である。
【０００５】
対照的に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）に対抗する現在の戦略は、リバビリン（一リン酸として）を使用して、グアノシン一リン酸の合成を細胞内濃度を低下させることにより阻害することを含む。さらに、リバビリン（三リン酸として）は、ウイルスＡＲＮｍ及びＡＲＮポリメラーゼの合成を減少させることにより、酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼ（guanilyltranspherase）を阻害する。
【０００６】
薬剤耐性のインフルエンザ株、並びに特にＡ型ウイルスの連続した突然変異体及び耐性変異株又はその組み合わせの両方が伝染性であり、且つ完全に病原性であることを報告する国際的な刊行物は増加している。この点において、近年、科学者等はＡ型トリインフルエンザ（Ｈ５Ｎ１）ウイルスに世界的流行の発生の深刻な危険性があると説明している。
【０００７】
同様に、Ｃ型肝炎感染は世界中で非常によく見られ、したがってますます多くの患者に影響を及ぼす深刻な発病状態を示している。
【０００８】
上記を鑑みて、好ましくはウイルス複製に対して多重の複合した作用機序を呈する、改善された抗ウイルス化合物を開発する緊急の必要性がある。
【０００９】
Itzstein, M. von et al.の非特許文献６は、インフルエンザウイルス複製のシアリダーゼ系阻害剤の合理的設計を開示している。Colman, P.M. et al.の特許文献１（出願日：１９９２年４月３０日）、Itzstein, L. M. von et al.の特許文献２（出願日：１９９３年４月２８日）、及びItzstein, L. M. von et al.の特許文献３（出願日：１９９１年１０月３１日）は、ノイラミニダーゼを結合する化合物を開示しており、該化合物はｉｎ  ｖｉｖｏで抗ウイルス活性を示すと主張している。Bischofberger N. W. et al.の特許文献４（出願日：１９９６年２月２６日）は、ノイラミニダーゼ阻害剤として新規の化合物を開示している。
【００１０】
Babu Y.S., Chad P., Bantia S. et al.の非特許文献７、特許文献５（出願日：１９９９年７月８日）は、ノイラミニダーゼ阻害剤として有用な新規の置換化合物及び誘導体を開示している。
【００１１】
さらに、非特許文献８に記載されるように、慢性ＨＶＣ感染を治療するために、ヒト被験者においてリバビリン又はビラミジン等のプリンヌクレオシド類似体と、インターフェロンα２ｂ（又はＰＥＧ化インターフェロンα２ｂ）等のサイトカインとの同時投与を組み合わせることは一般的な医療行為である。実際に、リバビリン一リン酸（monophospahate）及びその誘導体がグアノシン一リン酸の合成及び細胞内濃縮を阻害する一方で、三リン酸塩がＲＮＡｍ−グアニリルトランスフェラーゼ（guanilyltransferase）を妨げると考えられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第９２／０６６９１号パンフレット（国際出願第ＰＣＴ／ＡＵ９０／００５０１号明細書）
【特許文献２】欧州特許第０５３９２０４号明細書（欧州特許出願公開第９２３０９６８４．６号明細書）
【特許文献３】国際公開第９１／１６３２０号パンフレット（国際出願第ＰＣＴ／ＡＵ９１／００１６１号明細書）
【特許文献４】米国特許第５，９５２，３７５号明細書（米国特許出願第０８／６０６，６２４号明細書）
【特許文献５】国際公開第９９／３３７８１号パンフレット（国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／２６８７１号明細書）
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Yoshinori Fujiyoshi et al. "Fine structure if influenza A virus observed by electron cryo-microscopy", The EMBO Journal 13(2), pages 318-26, 1994
【非特許文献２】Wilson I. A. et al. "Structure of the haemoagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 A resolution", Nature, 289, pages 366-73, 1981
【非特許文献３】Varghese J. N. et al. "Structure of the influenza virus glycoprotein antigen neuraminidase at 2.9 Aresolution", Nature, 303, pages 35-40, 1983
【非特許文献４】Colman P. M. et al. "Structure of the catalytic and antigenic sites in influenza virus neuraminidase", Nature, 303, pages 41-44, 1983
【非特許文献５】Herrier Georg, et al., "A synthetic sialic acid analogue is recognized by influenza C virus as a receptor but is resistant to the receptor-destroying enzyme", J. Biol. Chem., 2567 (8), pages 12501-12505, 1992
【非特許文献６】"Nature", 363 (6428), pages 418-423 (1993)
【非特許文献７】"Discovery of a novel, highly potent, orally active, and selective influenza neuraminidase inhibitor through structure-based drug design". J Med Chem, 43 (19): 3482 (2000)
【非特許文献８】Martindale 33. rd Ed. (2002) pages 639-43
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の一目的は、ウイルス、特にインフルエンザウイルス及び肝炎ウイルスに対して有意な阻害効果を示す新規の化合物を提供することである。新規の化合物は、より具体的にはウイルスノイラミニダーゼを妨げることにより、ウイルスにおける膜タンパク質ヘマグルチニン（ＨＡ）、Ｍ２等の構造タンパク質、及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）等の糖分解（glycolitic）酵素の複合的且つ選択的な阻害を与えるものである。新規の化合物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）に対する阻害活性を与えるものでもある。別の目的は、重度のウイルス感染に関与する最も一般的なウイルスのウイルス複製及び伝染プロセスの、現在使用されている抗ウイルス剤との交差耐性の全くない、改善された、より安価な阻害剤を提供することである。またさらなる目的は、本発明の新規の化合物、又は他の既知の抗ウイルス剤とのそれらの合理的な組み合わせを投与するための改善された方法を提供することである。付加的な目的は、上記用途に有用な医薬組成物を提供することである。
【００１５】
これら及び他の目的は、本発明全体を検討することで当業者に容易に明らかである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の第１の態様において、一般式（Ｉ）：
【００１７】
【化１】
2010516658.tif 000002
【００１８】
（式中、Ｘは−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＣＨＦ−、−ＣＦ２−を表し、
環のＣ２とＣ３とは単結合又は二重結合で連結され、
Ｒ１は−ＯＨ、ハロゲン又は−Ｂ／部分を表すが、但し上記環のＣ２とＣ３とを連結する二重結合が存在する場合、Ｒ１は存在せず、
Ｒ２は−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は−ＮＨ−ＯＨであり、
Ｒ３は−ＮＨ２、−ＮＨＣＯ−ＣＨ３又は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＯＨであり、
Ｒ４は−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−Ｂ／部分、−ＣＨ２−Ｂ／部分又は−Ｂ／部分を表す）
の化合物であって、
−Ｂ／部分が：
【００１９】
【化２】
2010516658.tif 000003
【００２０】
（式中、Ｒ５は連結官能基−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−又は
【００２１】
【化３】
2010516658.tif 000004
【００２２】
を表し、
−Ｒ６は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ７は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ８は連結官能基−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＨ−又は−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ−を表す）
を表す、化合物、並びにそれらのＣ１〜４カルボキシルモノ又はポリエステル、付加塩、溶媒和物、その分割エナンチオマー及び精製ジアステレオマーが本明細書中で提供される。
【００２３】
本発明の化合物を単独で、又は哺乳類、特にヒトに投与するのに適切な薬学的に許容される担体中で、他の活性薬剤と組み合わせて含有する医薬組成物も本発明に包含される。
【００２４】
本発明の別の実施の形態では、ノイラミニダーゼ及び／又はタンパク質Ｍ２の活性は、ノイラミニダーゼ及び／又はタンパク質Ｍ２を含有する疑いがある試料を、本発明の化合物又は組成物で処理する工程を含む方法により阻害され得る。
【００２５】
本発明の別の態様では、治療に有効な用量の本明細書中に記載される本発明による化合物を任意の適切な投与経路により宿主に投与することを含む、例えばインフルエンザウイルス又は肝炎ウイルスによって引き起こされるウイルス感染を宿主において治療又は予防する方法が提供される。
【００２６】
本発明の他の実施の形態では、本発明の化合物を合成するための新規の方法も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】化合物１のＦＴ−ＩＲ（フーリエ変換赤外分光）スペクトル（Ａ）と、出発中間体アマンタジンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）との比較を示す図である。
【図２】化合物４のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）と、出発中間体リマンタジンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）との比較を示す図である。
【図３】化合物８のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）と、出発中間体メマンチンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）との比較を示す図である。
【図４】化合物１０のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）と、出発中間体リバビリンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）との比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、以下の立体配置を有する構造式（Ｉ）：
【００２９】
【化４】
2010516658.tif 000005
【００３０】
（式中、Ｘは−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＣＨＦ−、−ＣＦ２−を表し、
環のＣ２とＣ３とは単結合又は二重結合で連結され、
Ｒ１は−ＯＨ、ハロゲン又は−Ｂ／部分を表すが、但し上記環のＣ２とＣ３とを連結する二重結合が存在する場合、Ｒ１は存在せず、
Ｒ２は−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は−ＮＨ−ＯＨであり、
Ｒ３は−ＮＨ２、−ＮＨＣＯ−ＣＨ３又は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＯＨであり、
Ｒ４は−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−Ｂ／部分、−ＣＨ２−Ｂ／部分又は−Ｂ／部分を表す）
の化合物であって、
−Ｂ／部分が：
【００３１】
【化５】
2010516658.tif 000006
【００３２】
（式中、Ｒ５は連結官能基−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−又は
【００３３】
【化６】
2010516658.tif 000007
【００３４】
を表し、
−Ｒ６は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ７は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ８は連結官能基−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＨ−又は−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ−を表す）
を表す、化合物に関する。
【００３５】
好ましい実施の形態では、Ｘはシアル酸環に特有の−Ｏ−を表すが（Ｃ１のカルボン酸は非置換のままである）、これはシアル酸環がウイルスのノイラミニダーゼ（neuraminadase）の誘引点（attraction point）であると考えられているためである。別のより好ましい実施の形態では、環のＣ２とＣ３は単結合又は二重結合のいずれかで連結されるが、ただし、二重結合の存在下ではＲ１は存在しない。別の典型的な実施の形態では、Ｒ１又はＲ４の少なくともいずれかは−Ｂ／部分での一置換であり得る。したがって、Ｒ１は好ましくは−ＯＨ、ハロゲン、又は典型的には−Ｂ／部分を表し、Ｒ４は−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−ＯＨ又は典型的な−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−Ｂ／部分のいずれかを表すが、ここで−Ｂ／部分は−Ｂ１／部分又は−Ｂ２／部分のいずれかであり得る。
【００３６】
典型的な−Ｂ１／部分を使用する場合、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス株のノイラミニダーゼ機構に対する特異的阻害が好ましくは誘発され、Ｍ２タンパク質イオンチャネル（Ａ型株にのみ存在する）の遮断も許容される。同様の阻害効果を達成するために−Ｂ２／部分を一置換誘導体に使用してもよい。別の適切な組み合わせでは、Ｒ１及びＲ４は同一であるか、又は異なって二置換であり得る。好ましい組み合わせでは、Ｒ１及びＲ４は共に−Ｂ２部分で置換され、得られる化合物はより選択的にＨＶＣ複製を阻害すると考えられる。
【００３７】
Ｒ１が−Ｂ１／部分又は−Ｂ２／部分のいずれかで置換され、且つＲ４が−Ｂ２／部分又は−Ｂ１／部分のいずれかで異なって表される場合、得られる阻害は、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス株の両方、並びに同様にＨＶＣに影響を及ぼし得ると考えられる。
【００３８】
さらに好ましい組み合わせでは、Ｒ２は−ＯＨであり、且つＲ３は−ＮＨＣＯ−ＣＨ３であり得る。Ｒ１又はＲ４が主構造（Ｉ）に連結する−Ｂ１／部分で同時に置換される別の好ましい実施の形態では、連結官能基Ｒ５は−ＮＨ−又は−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−であり、Ｒ６及びＲ７は好ましくは−Ｈ又は−ＣＨ３であり得る。Ｒ１又はＲ４が主構造（Ｉ）に連結する−Ｂ２／部分で表される場合、連結官能基Ｒ８は好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−であり得る。
【００３９】
また、本発明の化合物の直鎖又は分岐Ｃ１〜４カルボキシルモノ又はポリエステル、付加塩、溶媒和物、分割エナンチオマー及び精製ジアステレオマーも本発明に包含される。
【００４０】
本発明の別の実施の形態では、ノイラミニダーゼ及び／又はＭ２イオンチャネルの活性は、ノイラミニダーゼ及び／又はＭ２タンパク質を含有する疑いがあるウイルス試料を、本明細書中に記載されるような本発明の化合物又は組成物で処理することにより阻害又は遮断され得る。
【００４１】
別の態様では、本発明は、治療に有効な用量の本発明による化合物を、任意の適切な投与経路で宿主に投与することを含む、哺乳類宿主における、特にＡ型及びＢ型のインフルエンザウイルス株又はＨＶＣによるウイルス感染を治療又は予防する方法を対象とする。
【００４２】
別の実施の形態では、本発明の化合物を合成するための新規の方法も提供される。
【００４３】
本発明による化合物を単独で、又は例えば薬学的に許容される担体中で、本発明の別の化合物又は１つ又は複数の活性薬剤と組み合わせて含有し、例えば哺乳類への投与に適切な状態にした医薬組成物も本発明に包含される。
【００４４】
本発明のさらなる態様は、上記ウイルス疾患又は状態を治療又は予防する方法を含むが、該方法は、本発明の化合物若しくは医薬組成物又はその混合物を使用して哺乳類を処置することと、同様にかかるウイルス感染を阻害可能な治療に有効な用量の別の活性薬剤での同時又は代替の処置とを組み合わせることによるものである。
【００４５】
本発明の化合物を製造する方法も本発明に包含される。化合物は、当業者によく知られている適用可能な有機合成の技法のいずれかによって調製され得る。
【００４６】
本発明の好ましい化合物（Ｒ１がシアル酸環のＣ２に直接連結する（Ｘ＝−Ｏ−））の一般的な調製については、Tang et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 132: 474-80 (1985)により最初に記載され、Stoll et al., Biochem. J., 256: 661-4 (1988)及びScharzmann G. et al., Biochem., 22: 5041-9 (1983)により変更されたような還元的アミド化プロセスが好適であり得る。実際に、上記方法に従うことにより、シアル酸環のＣ２と−Ｂ／部分のアミノ基との間の共有結合性のアミン結合が確立され得る。
【００４７】
同様に、Ｒ４がシアル酸環のＣ６と直接連結する化合物（Ｘ＝−Ｏ−）等の本発明の他の好ましい化合物の一般的調製に関しては、以下の刊行物に記載される多くの既知の技法に従うことができる：Compendium of Organic Synthetic Methods (John Wiley & Sons, New York), Vol. 1, Ian T；Harrison and Shuye, Harrison, 1971；Vol.2, Ian T. Harrison and Shuyen Harrison, 1974；Vol. 3, Louis S. Hegedus and Leroy Wade, 1977；Vol. 4, Leroy G. Wade, jr., 1980；Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr. 1984；及びVol. 6, Michael B. Smith；並びにMarch, J., 2Advanced Organic Chemistry, Third Edition, (John Wiley & Sons, New York, 1985), Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficacy in modern Organic Chemistry。9 Volumes, Barry M. Trost, Editor-in-Chief (Pergamon Press, New York, 1993 printing)。
【００４８】
本発明の化合物を調製するための多数の例示的な方法を下記で提供するが、これらは適用可能な方法の範囲を限定すると意図されない。
【００４９】
概して、温度、反応時間、溶媒、作業（work up）手順等の反応条件は、実行する特定の反応に関して当該技術分野で一般的なものである。本明細書中で引用される資料と共に引用される参考資料は、かかる条件の詳細な説明を含む。例示的な方法としては、以下の一般的工程が本発明のＲ４置換化合物の一般的合成に適用可能であり得る。
【００５０】
しかし、当業者は、他の標準的手順が同じ物質を得るために利用可能であることを認識するであろう。
工程１−以下の構造の中間体１の調製：
【００５１】
【化７】
2010516658.tif 000008
【００５２】
メタノール中、Ｄｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）を用いて、２４時間〜４８時間の還流時間でシアル酸を攪拌しながら処理する。樹脂を濾過し、濾液を濃縮乾固すると、所望のジメチル置換体（substituted）（中間体１）が生じる。
工程２−以下の構造の中間体２の調製：
【００５３】
【化８】
2010516658.tif 000009
【００５４】
工程１から得られる固体を水酸化ナトリウム水溶液を用いて回収し、一般的には１時間〜３時間室温で攪拌する。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）樹脂を用いて、ｐＨ７．０〜７．５に調整する。濾過に続いて濾液を凍結乾燥すると、対応する非メチル化エステル（中間体２）が生じる。
工程３−以下の構造の中間体３及び中間体４の調製：
【００５５】
【化９】
2010516658.tif 000010
【００５６】
工程２から得られる中間体を、メタ過ヨウ素酸ナトリウム水溶液と、異なるモル比で（中間体３（低い比）又は中間体４（高い比）のいずれかが生じるように）、暗所で１時間反応させる。次に酢酸バリウムを沈殿物に添加し、濾過によって過剰のヨウ素酸塩及び過ヨウ素酸塩を除去する。濾液を次に凍結乾燥する。帯黄色の固体が得られる（中間体３又は中間体４）。
工程４−以下の構造の中間体５及び中間体６の調製：
【００５７】
【化１０】
2010516658.tif 000011
【００５８】
工程３から得られる中間体３又は中間体４を、別々に攪拌しながらギ酸水溶液に溶解し、８０℃で１時間加熱する。得られる溶液を個々に凍結乾燥する。それぞれ中間体６及び中間体５が得られる。
工程５−以下の例示的な反応スキームによる最終Ｒ４一置換化合物の調製：
【００５９】
【化１１】
2010516658.tif 000012
【００６０】
【化１２】
2010516658.tif 000013
【００６１】
工程４から得られる中間体５又は中間体６を各々別々に蒸留水を用いて回収し（選択した反応生成物は所望の−Ｂ／部分（−Ｂ１／部分又は−Ｂ２／部分のいずれか）を生じている）、反応混合物を４℃で一晩静置する。次に水素化ホウ素ナトリウムを添加し、反応混合物を室温で１時間静置する。各々の試料をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムで脱イオン化し、溶出液を別々に凍結乾燥すると、異なる本発明の最終化合物が生じる。
【００６２】
本発明の他の典型的なＲ４一置換（異なる−Ｂ／部分での）化合物は、例えばここに示すものであり、さらに実施例に記載する：
【００６３】
【化１３】
2010516658.tif 000014
【００６４】
【化１４】
2010516658.tif 000015
【００６５】
【化１５】
2010516658.tif 000016
【００６６】
【化１６】
2010516658.tif 000017
【００６７】
別の好ましい製造の実施の形態には、以下の反応工程の使用によるＲ１一置換化合物の合成が包含される：
工程１−Ｒ１一置換（−Ｂ／部分）化合物の調製
シアル酸をメタノールと水との異なる比（９：１の比が好適である）での混合物に溶解し、−Ｂ／部分を生じている反応生成物を軽く攪拌しながら添加する。水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、混合物を軽く攪拌しながら６０℃で２時間保持する。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換する。溶出液を凍結乾燥し、少量のメタノールを用いて回収して、濾紙に通す。残渣を取り出し、溶出液を乾燥させる。後半の操作を必要に応じて何度か（一般的には５回より多く）繰り返す。最後に得られる固体を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、所望の本発明のＲ１一置換（−Ｂ／部分での）化合物が生じる。
【００６８】
他の典型的な反応スキームは、以下のように示され得る：
【００６９】
【化１７】
2010516658.tif 000018
【００７０】
【化１８】
2010516658.tif 000019
【００７１】
別のさらに好ましい製造の実施の形態には、以下の一般的反応スキームを採用することによるＲ１及びＲ４二置換化合物の合成が包含される：
工程１−Ｒ１及びＲ４二置換（−Ｂ／部分）化合物の調製
以上に記載される製造スキーム（Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ）を組み合わせることにより、当業者は本発明の二置換化合物を生じさせることができる。
【００７２】
本発明の典型的な最終二置換（同一又は異なる−Ｂ／部分での）化合物をここに示す：
【００７３】
【化１９】
2010516658.tif 000020
【００７４】
【化２０】
2010516658.tif 000021
【００７５】
−Ｂ１／部分又は−Ｂ２／部分（各々、一般式（Ｉ）に示すＲ６、Ｒ７及びＲ８の他の可能な組み合わせをもたらす）のいずれかを生じている同一の反応生成物を使用することで、類似の本発明の二置換化合物を生じさせることが可能であることが当業者には明らかである。
【００７６】
【化２１】
2010516658.tif 000022
【００７７】
【化２２】
2010516658.tif 000023
【００７８】
同様に、−Ｂ１／部分と−Ｂ２／部分（各々、一般式（Ｉ）に示すＲ６、Ｒ７及びＲ８の他の可能な組み合わせをもたらす）とを組み合わせた異なる反応生成物を使用することで、類似の本発明の異なる二置換化合物を生じさせることが可能である。
【００７９】
また、典型的なレゾルシノール−ＨＣｌ方法（Svennerholm L. "Quantitative estimation of sialic acid. II. A colorimetric resorcinol-hydrochloric acid method." Biochem. Biophys. Acta, 24 (3),:604-611, 1957; Miettinen J. et al. "Use of butyl acetate in determination of sialic acid.", Acta Chem. Scand., 13, 856-858, 1959）及びＴＢＡ（２−チオバルビツール酸）方法（Warren L. "The thiobarbituric acid assay of sialic acids.", J. Biol. Chem., 234, 1971-5, 1959; Aminoff D. "Methods for the quantitative estimation of N-acetylneuraminic acid and their application to hydrolysates of sialomucoids.", Biochem. J., 81 (2), 384-392, 1961）の使用によるシアル酸の検出及び定量は、以下の理由により異なることは当業者には明らかである：レゾルシノール−ＨＣｌ方法は、遊離して存在する場合、及び例えばシアロ糖化合物のような他の糖と結合している場合のどちらでも、シアル酸及びその誘導体の検出及び定量が可能である。対照的に、ＴＢＡ方法は、２位の炭素原子（Ｃ２）と連結するヒドロキシル部分（Ｒ１＝−ＯＨ）が置換されていない場合にのみ、シアル酸及びその誘導体の検出及び定量が可能である。
【００８０】
本発明の化合物は、任意又は全ての不斉原子での濃縮又は分割光学異性体も包含する。ラセミ混合物及びジアステレオマー混合物の両方、並びにそれらのエナンチオマー又はジアステレオマーパートナーを実質的に含まない単離又は合成された個々の光学異性体は全て、本発明の範囲内である。ラセミ混合物は、よく知られた技法、例えば、光学活性付加物、例えば、酸又は塩基と形成されたジアステレオマー塩を分離し、続いて光学活性物質に再び変換することにより個々の実質的に光学的に純粋な異性体に分離される。大抵の場合、所望の光学異性体は、所望の出発材料の適切な立体異性体から始まる立体特異的反応により合成される。
【００８１】
本発明の組成物は、本明細書中の化合物の塩、特に、例えば無機の、又は好ましくは有機の酸又は塩基を含有する薬学的に許容される非毒性塩を任意で含む。化合物の水溶性塩が所望される場合、塩化が好ましい手順である。
【００８２】
本発明の別の態様は、ノイラミニダーゼ、例えばウイルスノイラミニダーゼを含有する疑いがある試料を本発明の化合物で処理する工程を含む、ノイラミニダーゼの活性を阻害する方法に関する。本発明の化合物は、ノイラミニダーゼの阻害剤として作用するか、かかる阻害剤の中間体として作用するか、又は下記に記載されるような他の実用性を有すると考えられている。実際に、阻害剤は、ノイラミニダーゼに特有の形状を有するノイラミニダーゼの表面上又はキャビティ中の位置に結合する。しかしながら、ノイラミニダーゼに結合する化合物は、様々な程度の可逆性で結合し得る。実質的に不可逆的に結合する化合物は、本発明の方法で使用するための理想的な候補である。ノイラミニダーゼを含有する有機体には、細菌（コレラ菌（Vibrio cholerae）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、及びアルトロバクター・シアロフィラス（Arthrobacter sialophilus）並びにウイルス（特に、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、変異コロナウイルス及び／又は改変コロナウイルス、ムンプスウイルス、ニューカッスル病ウイルス、家禽ペストウイルス、及びセンダイウイルス等のオルトミクソウイルス又はパラミクソウイルス）が含まれる。これらの有機体のいずれかから得られるか、又はいずれかに見られるノイラミニダーゼ活性の阻害は、本発明の範囲内である。本発明の化合物は、動物、例えばカモ、齧歯類、若しくはブタ、又はヒトにおけるかかる感染の治療又は予防にも有用である。
【００８３】
さらなる実施の形態では、本発明の化合物は、酵素活性を評価する従来の技法によってノイラミニダーゼに対する阻害活性についてスクリーニングされる。本発明の文脈中では、化合物は典型的にはｉｎ  ｖｉｔｒｏでのノイラミニダーゼの阻害について最初にスクリーニングされる。
【００８４】
本発明のさらなる態様は、Ａ型インフルエンザウイルス株等のＭ２タンパク質を含有する疑いがある試料を、本発明の化合物で処理する工程を含む、Ｍ２タンパク質イオンチャネルを介したＨ＋イオンの流入を遮断する方法、遊離リボ核タンパク質の脱殻及び細胞質への放出を阻害する方法に関する。実際に、本発明の化合物は、ウイルスＭ２タンパク質の機能を遮断することにより作用するとも考えられている。
【００８５】
本発明の別のさらなる態様は、疑わしい試料を本発明の化合物で処理することによりＨＶＣのＲＮＡｍ及びＲＮＡポリメラーゼ合成を遮断することを含む、グアノシン一リン酸及びＲＮＡｍ−グアニリルトランスフェラーゼの合成を阻害する方法に関する。
【００８６】
別の実施の形態では、本発明の異なって二置換された化合物は、ノイラミニダーゼ及びＭ２プロトンイオンチャネルの阻害剤として同時に作用すると考えられている。
【００８７】
本発明の化合物は、慣行に従って選択される従来の担体及び賦形剤を用いて製剤してもよい。錠剤は賦形剤、流動促進剤、増量剤、結合剤等を含有する。水性製剤は滅菌形態で調製されるが、経口投与以外の送達を目的とする場合、概して等張である。全ての製剤は、有名な（reknown）刊行物である"Handbook of Pharmaceutical Excipients" 4thEdition, Rowe R. C. et al., Pharmaceutical Press (2003)に記載されるような賦形剤を必要に応じて含有する。賦形剤には、アスコルビン酸及び他の抗酸化剤、ＥＤＴＡ等のキレート剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース等の炭水化物、ステアリン酸等が含まれる。
【００８８】
１つ又は複数の本発明の化合物（以下、活性成分とも称される）は、治療される状態に適切な任意の経路により投与され得る。適切な経路には、経口、直腸、経鼻、局所（口腔内及び舌下を含む）、膣内、並びに非経口（皮下、筋内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外を含む）等が含まれる。当然のことながら、好ましい経路は、例えば受容者の状態によって変化し得る。本発明の化合物の利点は、生体に経口的に利用可能であり、経口医薬品形態で投薬することができることである。該化合物を肺内又は鼻腔内の経路によって投与することも可能であるが、その必要はない。
【００８９】
本発明の活性成分を単独で投与することも可能であるが、医薬製剤として提供することが好適であり得る。動物用（veterinary）及びヒト用の両方であり得る本発明の製剤は、１つ又は複数の許容される担体及び任意で他の治療成分と共に、少なくとも１つの活性成分又は上記で定義されるような本発明の化合物を含む。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合し、且つその受容者にとって生理学的に無害であるという意味で「許容可能」でなければならない。
【００９０】
製剤には、前述の投与経路に適切なものが含まれる。製剤は単回投与形態で提供されるのが都合良く、薬学技術分野においてよく知られる方法のいずれかによって調製され得る。
【００９１】
技法及び製剤は概して、"Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishing Co., Easton, Pa., U.S.A.に見られる。かかる方法は、活性成分を１つ又は複数の副成分を構成する担体と合わせる工程を含む。概して、製剤は活性成分と液体担体若しくは微粉化した固体担体又はその両方と均一且つ密接に合わせた後、必要に応じて、生成物を所望のように成形することにより調製され得る。
【００９２】
経口投与に適切な本発明の製剤は、各々が所定の量の活性成分を含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤等の固体単位として；散剤若しくは顆粒剤として；水性の液体若しくは非水性の液体中の溶液若しくは懸濁液として；又は水中油型液体乳剤若しくは油中水型液体乳剤として調製され得る。活性成分は巨丸剤、舐剤又は糊状剤として提供してもよい。
【００９３】
錠剤は、必要に応じて１つ又は複数の副成分を用いて圧縮又は成形により作製される。圧縮錠剤は、適切な機械において活性成分を、必要に応じて結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と混合して、粉末又は顆粒等の易流動性の形態に圧縮することにより調製され得る。成形錠剤は、適切な機械において、不活性液体希釈剤にぬらした粉末活性成分の混合物を成形することにより作製され得る。錠剤は必要に応じてコーティング又は分割(scored)してもよく、必要に応じて錠剤からの活性成分の徐放又は制御放出を提供するように製剤される。
【００９４】
眼又は他の外部組織、例えば口腔及び皮膚の感染に対しては、製剤は好ましくは活性成分（複数可）を、例えば０．０７５％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）（０．１％〜２０％の範囲で、０．６％（ｗ／ｗ）、０．７％（ｗ／ｗ）等のような０．１％（ｗ／ｗ）単位の活性成分（複数可）を含む）、好ましくは０．２％（ｗ／ｗ）〜１５％（ｗ／ｗ）、最も好ましくは０．５％（ｗ／ｗ）〜１０％（ｗ／ｗ）の量で含有する局所軟膏又はクリームとして適用され得る。軟膏に製剤される場合、活性成分（複数可）は、パラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤と共に用いられ得る。代替的には、活性成分は水中油型クリーム基剤と共にクリームに製剤してもよい。
【００９５】
所望であれば、クリーム基剤の水性相は、例えば少なくとも３０％（ｗ／ｗ）の多価アルコール、すなわち２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコール（プロピレングリコール、ブタン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ  ４００を含む）及びその混合物等）を含んでいてもよい。また、局所製剤は望ましくは、皮膚又は他の患部を介した活性成分の吸収又は浸透を促進する化合物を含み得る。かかる皮膚浸透促進剤の例としては、ジメチルスルホキシド及び関連類似体が挙げられる。本発明の乳剤の油性相は、既知の方法で既知の成分から構成され得る。該相は乳化剤（エマルジェント（emulgent）としても知られる）のみを含んでいてもよいが、少なくとも１つの乳化剤と、脂肪若しくは油、又は脂肪及び油の両方との混合物を含むのが望ましい。好ましくは、安定剤として働く親油性乳化剤と共に親水性乳化剤が含まれる。油及び脂肪の両方が含まれているのも好ましい。乳化剤（複数可）は安定剤（複数可）と共に、又は安定剤を含まずに、いわゆる乳化ろうを構成し、該ろうは油及び脂肪と共に、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を構成する。
【００９６】
本発明の製剤に使用するのに適切なエマルジェント及び乳化安定剤には、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアレート及びラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。
【００９７】
製剤に適切な油又は脂肪の選択は、所望のコスメティック特性（cosmetic properties）を達成するという点に基づく。クリームは好ましくは、チューブ又は他の容器からの漏出を防ぐのに適切な稠度の、べとつかず、着色していない、水で落とせる製品であるべきである。ジイソアジペート、ステアリン酸イソセチル、ヤシ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシル、又はＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして知られる分岐鎖／エステルの混合物等の直鎖若しくは分岐鎖、一塩基若しくは二塩基のアルキルエステルが使用され得るが、最後の３つが好ましいエステルである。これらは所要の特性に応じて単独で、又は併用して使用してもよい。代替的には、白色軟パラフィン等の高融点脂質が使用される。
【００９８】
眼への局所投与に適切な製剤には、活性成分を適切な担体、特に活性成分の水性溶媒に溶解又は懸濁した点眼剤も含まれる。活性成分は好ましくは、かかる製剤中に０．５％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）、有利には０．５％（ｗ／ｗ）〜１０％（ｗ／ｗ）、特に約２．０％（ｗ／ｗ）の濃度で存在する。
【００９９】
口腔への局所投与に適切な製剤には、風味のある基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシア等の不活性基剤中に活性成分を含む香錠；並びに適切な液体担体中に活性成分を含む洗口剤が含まれる。
【０１００】
直腸投与に対する製剤は、例えばココアバター又はサリチル酸塩を含む適切な基剤を用いた坐薬として提供してもよい。
【０１０１】
肺内投与又は経鼻投与に適切な製剤は、０．１ミクロン〜５００ミクロンの範囲の粒径（０．１ミクロン〜５００ミクロンの範囲で、０．５ミクロン、１ミクロン、３０ミクロン、３５ミクロン等のようなミクロン単位の粒径を含む）を有するが、該製剤は鼻腔からの急速吸入、又は口腔からの吸入により、肺胞嚢へ到達するように投与される。適切な製剤には、活性成分の水性溶液又は油性溶液が含まれる。エアロゾル又は乾燥粉末の投与に適切な製剤は、従来の方法に従って調製され、下記に記載されるような、Ａ型又はＢ型のインフルエンザ感染の治療又は予防に従来使用される化合物等の他の治療薬と共に送達され得る。
【０１０２】
膣内投与に適切な製剤は、活性成分に加えて当該技術分野で適切であると知られている担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム（foams）又はスプレー状の製剤として提供してもよい。
【０１０３】
非経口投与に適切な製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、制菌剤、及び対象とする受容者の血液と製剤を等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の滅菌注射液；並びに懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液が含まれる。
【０１０４】
製剤は単回投与又は複数回投与用の容器、例えば密閉したアンプル及びバイアルに入れて提供してもよく、使用の直前に滅菌液体担体（溶媒）、例えば注射用水を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）条件において保管してもよい。即時調合される（Extemporaneous）注射液及び懸濁液は、前述した種類の滅菌粉末剤、顆粒剤及び錠剤から調製される。好ましい単回投与製剤は、本明細書中で上記に列挙したような１日用量又は１日副用量（daily sub-dose）単位、又はその適切な分割量の活性成分を含有するものである。
【０１０５】
上記で特に言及した成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類に関して当該技術分野で慣用される他の薬剤を含んでいてもよいことを理解されたい。例えば、経口投与に適切な製剤は香味剤を含んでいてもよい。
【０１０６】
本発明は動物用組成物をさらに提供するが、該組成物は、上記で定義されるような少なくとも１つの活性成分を、したがって動物用担体と共に含む。
【０１０７】
動物用担体は、組成物を投与する目的に有用な物質であり、固体、液体、又はそうでなければ獣医学技術分野において不活性又は許容され、活性成分と適合する気体状の物質であってもよい。これらの動物用組成物は経口的、非経口的に、又は任意の他の所望の経路により投与され得る。
【０１０８】
本発明の化合物は、活性成分として１つ又は複数の本発明の化合物を含有する制御放出医薬製剤（「制御放出製剤」）を提供するために使用してもよい。該製剤では、投与頻度を下げることを可能にするか、又は所与の活性成分の薬物動態プロファイル若しくは毒性プロファイルを改善するために、活性成分の放出が制御及び調節される。
【０１０９】
活性成分の有効量は、治療される状態の性質、毒性、化合物を予防的に（より低用量で）、又は活動性インフルエンザ感染に対して使用するか否か、送達の方法、及び医薬製剤に少なくとも依存し、臨床医により従来の用量増加研究を用いて求められる。
【０１１０】
有効量は、１日当たり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）であると期待することができる。典型的には、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）である。より典型的には、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約５ｍｇ／ｋｇ（体重）である。より典型的には、１日当たり約０．０５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約０．５ｍｇ／ｋｇ（体重）である。例えば、体重がおよそ７０ｋｇの成人のヒトの吸入に関する候補１日用量は、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは５ｍｇ〜５００ｍｇ超であり、単回投与又は複数回投与の形態をとり得る。被験者の病状により必要とされる場合には、治療に有効な１日用量をより高用量で投与してもよい。
【０１１１】
本発明の活性成分（又は化合物）はまた、他の活性成分と併用して使用される。かかる組み合わせは治療される状態、成分の交差反応性、及びその組み合わせの薬物特性（pharmacoproperties）に基づいて選択される。例えば、呼吸器系のウイルス感染、特にインフルエンザ感染を治療する場合、本発明の組成物は、抗ウイルス剤（アマンタジン（amantidine）、リマンタジン及びリバビリン等）、粘液溶解薬、去痰薬、気管支拡張薬、抗生物質、解熱薬、又は鎮痛剤と組み合わせられる。通常は、抗生物質、解熱薬、及び鎮痛剤が本発明の化合物と共に投与される。
【０１１２】
本発明は、当業者が以下の実施例の対象物を作製及び使用するのを可能にするのに十分なほど詳細に記載されている。以下の実施例の方法及び組成物の或る特定の変更を、本発明の範囲及び精神の中で為すことができるのは明らかである。本発明は、以下の例示的な実施形態、及び添付の図１〜図４に関してさらに記載される。
【実施例】
【０１１３】
実施例１
中間体１の調製
４０ｍｌの無水メタノールに溶解した２２５ｍｇのシアル酸（０．７３ｍｍｏｌ）を、０．５ｇのＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）樹脂に混合した。混合物を絶えず攪拌しながら４８時間還流した。レゾルシノール−ＨＣｌ及びチオバルビツール酸（ＴＢＡ）を用いた分析測定によって、２４時間及び４８時間に、それぞれ８５％及び９７％のシアル酸が中間体１に変換されたことが示された。次に樹脂を現行の濾紙で濾過し、溶出液をロータリエバポレータにより濃縮乾固すると、帯黄色の油性液体が生じた。油性液体を次に、少量（reduced volume of）のエチルエーテル：メタノール（３：１（ｗ／ｗ））混合物を用いて回収した。溶液を４℃で２４時間〜４８時間静置し、結晶性沈殿物を濾過により回収して、Ｐ２Ｏ５上で乾燥させた。１４５ｍｇの固体中間体１（分子量：３３７．４）を得た（収率：６０．０％）。
【０１１４】
得られた中間体１は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応に対して陽性であり（シアル酸と同じ強度）、ＴＢＡ反応に対して陰性であるという結果となった。
実施例２
中間体２の調製
１４５ｍｇの中間体１（０．４３ｍｍｏｌ）を１０．７ｍｌの０．０６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、室温で２時間〜３時間絶えず攪拌した。次に混合物を、Ｄｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）樹脂を用いてｐＨ７．０〜７．５に調整した。樹脂を濾過し、溶出液を凍結乾燥すると、帯白色の固体が生じた。１３２．６ｍｇの固体中間体２（分子量：３２３．３）を得た（収率：９５．０％）。
【０１１５】
得られた中間体２は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応に対して陽性であり（シアル酸と同じ強度）、ＴＢＡ反応に対して陰性であるという結果となった。
実施例３
中間体３の調製
１３２．６ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体２）を、４．３ｍｌの蒸留水に溶解した。次に１０．７ｍｌの分割量の０．０３８Ｍメタ過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）水溶液（０．４１ｍｍｏｌ）を添加し（モル比＝１：１）、溶液を暗所において室温で１時間絶えず攪拌しながら保持した。１２．８ｍｌの０．１Ｍ酢酸バリウム水溶液を混合物に添加し、過剰のヨウ素酸塩及び過ヨウ素酸塩を沈殿させた。混合物を現行の濾紙を使用して濾過した。溶出液を二酸化炭素を通気することにより飽和させ、過剰の酢酸バリウムを沈殿させた後、濾紙で濾過した。溶出液を凍結乾燥すると、淡黄色の固体が生じた。１０１．９ｍｇの固体中間体３（分子量：２９１．３）を回収した（収率：８５．０％）。
【０１１６】
得られた中間体３は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応に対して陽性であり（シアル酸と同じ強度）、ＴＢＡ反応に対して陰性であるという結果となった。
実施例４
中間体４の調製
１３２．６ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体２）を４．３ｍｌの蒸留水に溶解した。１０．７ｍｌの０．２Ｍメタ過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）水溶液（２．１４ｍｍｏｌ）（モル比＝１：５．２４）を溶液に添加し、絶えず攪拌しながら暗所において室温で１時間保持した。
【０１１７】
１２．８ｍｌの０．１Ｍ酢酸バリウム水溶液を混合物に添加し、過剰のヨウ素酸塩及び過ヨウ素酸塩を沈殿させた。混合物を現行の濾紙を使用して濾過した。溶出液を二酸化炭素を通気することにより飽和させ、過剰の酢酸バリウムを沈殿させた後、濾紙で濾過した。溶出液を凍結乾燥すると、淡黄色の固体が生じた。９１．４ｍｇの固体中間体４（分子量：２６１．２３）を回収した（収率：８５．０％）。
【０１１８】
得られた中間体４は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応に対して陽性であり（シアル酸と同じ強度）、ＴＢＡ反応に対して陰性であるという結果となった。
実施例５
中間体５の調製
９１．４３ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の凍結乾燥粉末中間体４を、２．０ｍｌの２．３ｍＭギ酸水溶液（ｐＨ：約４．０）に溶解した。溶液を８０℃に１時間加熱した。次に溶液を凍結乾燥した。
【０１１９】
７２．７６ｍｇの中間体５（分子量：２４７．２０）を得た（収率：８４．１％）。
【０１２０】
得られた中間体５はレゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例６
中間体６の調製
１０１．９６ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体中間体３を、２．０ｍｌの２．３ｍＭギ酸水溶液（ｐＨ：約４．０）に溶解した。溶液を８０℃に１時間加熱した。次に溶液を凍結乾燥した。
【０１２１】
９３．８３ｍｇの中間体６（分子量：２７７．２３）を得た（収率：９６．７％）。
【０１２２】
得られた中間体６はレゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例７
化合物１の調製
８４．０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体５）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、５１．４４２ｍｇのアマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）樹脂カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥固体を次に少量のメタノールを用いて回収し、溶出液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。最後に乾燥固体を少量の水を用いて回収した後、凍結乾燥すると、最終化合物１が生じた。
【０１２３】
１１０．５３ｍｇの化合物１（分子量：３８２．４５）を得た（収率：８５．０％）。
【０１２４】
回収した化合物１は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。図１に表した、出発中間体アマンタジンのＦＴ−ＩＲ（フーリエ変換赤外分光）スペクトル（Ｂ）と比較した、化合物１のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）は、以下の基準（references）を示す：ａ）アミドＩバンド：１６４０ｃｍ−１；ｂ）アミドＩＩバンド：１５５０ｃｍ−１；ｃ）第１級アミノ基：６００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１、１５９０ｃｍ−１〜６５０ｃｍ−１、３３３０ｃｍ−１〜３３８０ｃｍ−１；第２級アミノ基：７００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１；１６１５ｃｍ−１；３３００ｃｍ−１。
実施例８
化合物２の調製
９４．２６ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体６）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、８２．７ｍｇのリバビリン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）樹脂カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物（lyophilized）を次に少量のメタノールを用いて回収し、溶出液を再び乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。最後に乾燥固体を少量の水を用いて回収した後、凍結乾燥すると、固体（化合物２）が生じた。９４．０２ｍｇの固体化合物２（分子量：５０５．４）を回収した（収率：８９．０％）。
【０１２５】
回収した化合物２は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例９
化合物３の調製
９４．２６ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体６）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、５１．４４２ｍｇのアマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物を、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換するためにＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥固体を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥固体を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物３がもたらされた。１２２．０２ｍｇの固体化合物３（分子量：４１２．５）を回収した（収率：８７．０％）。
【０１２６】
回収した化合物３は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例１０
化合物４の調製
８４．０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体５）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、６０．９６２ｍｇのリマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥固体を次に少量のメタノールを用いて回収し、溶出液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返す。次に乾燥粉末を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物４が生じる。
【０１２７】
１２５．６１ｍｇの化合物４（分子量：４１０．５）を回収した（収率：９０．０％）。
【０１２８】
回収した化合物４は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。図２に表した、出発中間体リマンタジンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）と比較した、化合物４のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）は、以下の基準を示す：ａ）アミドＩバンド：１６４０ｃｍ−１；ｂ）アミドＩＩバンド：１５５０ｃｍ−１；ｃ）第１級アミノ基：６００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１、１５９０ｃｍ−１〜６５０ｃｍ−１、３３３０ｃｍ−１〜３３８０ｃｍ−１；第２級アミノ基：７００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１；１６１５ｃｍ−１；３３００ｃｍ−１。
実施例１１
化合物５の調製
９４．２６ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体６）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、６０．９６２ｍｇのリマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物を、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換するためにＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、溶出液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥固体を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物５が生じた。１３７．７９ｍｇの最終化合物５（分子量：４４０．５）を回収した（収率：９２．０％）。
【０１２９】
回収した化合物５は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例１２
化合物６の調製
８４．０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体５）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、７０．５ｍｇのソマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。濾液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥粉末を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物６が生じた。１２５．２６ｍｇの化合物６（分子量：４３８．６）を回収した（収率：８４．０％）。
【０１３０】
回収した化合物６は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例１３
化合物７の調製
９４．２６ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体６）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、６１．０ｍｇのソマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。次に溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥粉末を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物７が生じた。１３５．４３ｍｇの固体化合物７（分子量：４６８．６）を回収した（収率：８５．０％）。
【０１３１】
回収した化合物は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例１４
化合物８の調製
８４．０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体５）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、６１．０ｍｇのメマンチン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥粉末を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物８が生じた。１２９．８０ｍｇの固体化合物８（分子量：４１０．５）を回収した（収率：９３．０％）。
【０１３２】
回収した化合物は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。図３に表した、出発中間体メマンチンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）と比較した、化合物８のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）は、以下の基準を示す：ａ）アミドＩバンド：１６４０ｃｍ−１；ｂ）アミドＩＩバンド：１５５０ｃｍ−１；ｃ）第１級アミノ基：６００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１、１５９０ｃｍ−１〜６５０ｃｍ−１、３３３０ｃｍ−１〜３３８０ｃｍ−１；第２級アミノ基：７００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１；１６１５ｃｍ−１；３３００ｃｍ−１。
実施例１５
化合物９の調製
９４．２６ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体６）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、６１．０ｍｇのメマンチン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。次に溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥粉末を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物９が生じた。
【０１３３】
１３４．７９ｍｇの化合物９（分子量：４４０．５）を得た（収率：９０．０％）。
【０１３４】
回収した化合物９は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。
実施例１６
化合物１０の調製
８４．０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥固体（中間体５）を５．０ｍｌの蒸留水に溶解した。その後、８２．７ｍｇのリバビリン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。混合物をゆっくりと攪拌しながら４℃で一晩保持した。４０．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら室温で１時間保持した。次に混合物をＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通して、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも３回繰り返した。次に乾燥粉末を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると、最終化合物１０が生じた。１４０．６２ｍｇの化合物１０（分子量：４７５．４）を回収した（収率：８７．０％）。回収した化合物は、レゾルシノール−ＨＣｌ反応及びＴＢＡ反応の両方に対して陽性であった。図４に表した、出発中間体リバビリンのＦＴ−ＩＲスペクトル（Ｂ）と比較した、化合物１０のＦＴ−ＩＲスペクトル（Ａ）は、以下の基準を示す：ａ）アミドＩバンド：１６４０ｃｍ−１；ｂ）アミドＩＩバンド：１５５０ｃｍ−１；ｃ）第１級アミノ基：６００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１、１５９０ｃｍ−１〜６５０ｃｍ−１、３３３０ｃｍ−１〜３３８０ｃｍ−１；第２級アミノ基：７００ｃｍ−１〜８００ｃｍ−１；１６１５ｃｍ−１；３３００ｃｍ−１。
実施例１７
化合物１１の調製
１０２．５ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）の凍結乾燥中間体シアル酸を、５０．０ｍｌのメタノール：蒸留水（９：１、ｖ／ｖ）混合物に溶解した。その後、５１．４４２ｍｇのアマンタジン（０．３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと攪拌しながら添加した。１００．０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加した後、反応混合物を攪拌しながら６０℃で１時間保持した。次に混合物を、過剰の水素化ホウ素ナトリウムをホウ酸に変換するためにＤｏｗｅｘ  ５０（Ｈ＋）カラムに通した。溶出液を凍結乾燥した。凍結乾燥物を次に少量のメタノールに溶解し、濾液を乾燥させた。この操作を少なくとも５回繰り返した。次に乾燥固体を少量の水に溶解した後、凍結乾燥すると最終化合物１１が生じた。合計１３３．９０ｍｇの固体化合物１１（分子量：４４２．５）を回収した（収率：８９．０％）。回収した化合物はレゾルシノール−ＨＣｌ反応に対して陽性であり、ＴＢＡ反応に対して陰性であった。
実施例１８
Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス株に対する本発明の化合物の抗ウイルス活性評価。
目的及び研究計画
特に、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルスに対する化合物１及び化合物８のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性を、抗ウイルス活性を評価するための２つの化合物であるアマンタジン（adamantine）及びメマンチンと比較して、評価した。この研究に対して、２つのＡ型インフルエンザウイルス分離株及び単離Ｂ型ウイルス分離株を使用した。
材料及び方法
１−インフルエンザウイルスの増殖及び滴定
インフルエンザウイルスＡ／Ｈ３Ｎ２株（Ａ／パナマ／２００７／９９）、Ａ／Ｈ１Ｎ１株（Ａ／ニューカレドニア／２０／９９）、及びＢ型株（Ｂ／山東／７／９７）を有胚（embryonic）鶏卵に伝播させた。要するに、インフルエンザウイルス株を受精１１日目の鶏卵に尿膜経路により接種した。その後（Therefore）、卵を３７℃で３日間インキュベートして、尿膜腔液を回収し、続いて滴定した（titred）。
【０１３５】
この検定の測定はプラーク形成試験（Ｐｌａｑｕｅ  Ａｓｓａｙ、PA）により実行した。特に、段階希釈（１０−１〜１０−１１）した各々のウイルス分離株を、１２ウェルプレート中のＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓）細胞のコンフルエント単層に接種した。３７℃で１時間インキュベートした後、接種ウイルス（viral inoculate）を除去し、感染培地（１０μｇ／ｍｌのトリプシン、２％寒天を含有するＭＥＭ（最小必須培地））を添加した。３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした後、細胞の単層を５％グルタルアルデヒド溶液で固定し、寒天を除去した後、５％石炭酸フクシン溶液で染色した。
【０１３６】
プラークを目視で計数し、単離検定を１ｍｌ当たりのプラーク形成単位（ＰＦＵ）（ＰＦＵ／ｍｌ）の数値で表した。
２−アマンタジン及びメマンチンに対する化合物１及び化合物８の抗ウイルス活性の評価
２．１．分析用の化合物の調製
７２時間乾燥させた後の化合物１及び化合物８、並びに比較化合物のアマンタジン及びメマンチンを、滅菌蒸留水中で１０００μＭの濃度で適切に再構成させた。その後、各々の試験用化合物について、０．０１μＭ〜１００μＭの範囲で１０倍毎の段階希釈を実行した。
２．２．プラーク減少検定（ＰＲＡ）
１２ウェル（１×１０５細胞／ｍｌ）プレートにおいて増殖させたＭＤＣＫ細胞のコンフルエント単層を、各々の単離ウイルス（Ａ／パナマ／２００７／９９−Ｈ３Ｎ２、Ａ／ニューカレドニア／２０／９９−Ｈ１Ｎ１及びＢ／山東／７／９７）約５０ＰＦＵ／ｍｌに感染させた。ウイルスを吸着させるために、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、接種ウイルスを除去し、細胞の単層をＭＥＭ培養培地で２回洗った。重層培地（ＭＥＭ中１０μｇ／ｍｌのトリプシン、２％寒天）を、段階希釈した（０．０１μＭ〜１００μＭ）分析用化合物を含有する各々のウェルに添加した。試験を２重に実行し、同時に抗ウイルス化合物を含有しない反応対照を添加した。その後、細胞培養物を３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。続いて、細胞の単層を５％グルタルアルデヒド溶液を使用して固定し、寒天への浸透を促進するために、室温で少なくとも３時間インキュベートした。寒天を除去した後、細胞の単層を５％石炭酸フクシン溶液で染色した。プラークを目視で計数し、試験用化合物を含有しない対照に対するプラーク阻害の程度を算出した。このようにして、化合物を含有しない対照に対してプラーク数を５０％に低減するのに必要な化合物の濃度を求めた。
結果
化合物１及び化合物８、並びに対照化合物のアマンタジン及びメマンチンの抗ウイルス活性を、ＭＤＣＫ細胞を使用してプラーク減少検定（ＰＲＡ）により評価した。結果を表１に示す。
【０１３７】
化合物１は、Ａ型ウイルスＨ３Ｎ２に対してアマンタジンと同様の活性を示したが、Ａ型ウイルスＨ１Ｎ１に対する活性は１０倍低かった。Ｂ型インフルエンザウイルスに対する化合物１の抗ウイルス活性は、アマンタジン（＞１００μＭ）の活性よりも高い（＞１０倍）という結果となった。（表１）
化合物８は、分析されたＡ型インフルエンザウイルス（Ａ／Ｈ３Ｎ２及びＡ／Ｈ１Ｎ１）に対して、メマンチンのほぼ１０倍を上回る抗ウイルス活性を示した。試験した濃度範囲における化合物８のどの抗ウイルス活性も、Ｂ型インフルエンザウイルスに対するものであると証明されている（表１）。
【０１３８】
【表１】
2010516658.tif 000024
【０１３９】
結論：
したがって、このデータは、アマンタジンと比較したＢ型インフルエンザウイルスに対する化合物１の向上した抗ウイルス活性の証拠を提供する。アマンタジンは、Ａ型インフルエンザウイルスのみに存在し、Ｂ型インフルエンザウイルスには存在しないＭ２タンパク質イオンチャネルを遮断することにより作用するため、これは将来の研究の目的となる新規の作用機序となり得ることに留意されたい。
【０１４０】
化合物８は、Ａ型インフルエンザウイルスに対してメマンチンよりも１０倍高い抗ウイルス活性を示した。
【図１】
2010516658.tif 000037
【図２】
2010516658.tif 000038
【図３】
2010516658.tif 000039
【図４】
2010516658.tif 000040
【手続補正書】
【提出日】平成20年6月20日(2008.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式（Ｉ）：
【化１】
2010516658.tif 000041
（式中、Ｘは−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＣＨＦ−、−ＣＦ２−を表し、
環のＣ２とＣ３とは単結合又は二重結合で連結され、
Ｒ１は−ＯＨ、ハロゲン又は−Ｂ／部分を表すが、但し前記環のＣ２とＣ３とを連結する二重結合が存在する場合、Ｒ１は存在せず、
Ｒ２は−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は−ＮＨ−ＯＨであり、
Ｒ３は−ＮＨ２、−ＮＨＣＯ−ＣＨ３又は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＯＨであり、
Ｒ４は、Ｒ１が−ＯＨである場合を除いて−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−ＯＨであるか、又は−Ｂ／部分、又は−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−Ｂ／部分若しくは−ＣＨ２−Ｂ／部分を表す基のうちの１つのような、１個又は２個の炭素原子を有する直鎖アシル基（−Ｂ／部分でのＣ７又はＣ８一置換）である）
の化合物であって、
前記−Ｂ／部分がＲ１若しくはＲ４、又はＲ１及びＲ４に存在し、
前記−Ｂ／部分が：
【化２】
2010516658.tif 000042
（式中、Ｒ５は−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−又は
【化３】
2010516658.tif 000043
であり、
−Ｒ６は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ７は−Ｈ、−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５であり、
−Ｒ８は−ＮＨ−、−ＣＯ−ＮＨ−又は−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ−である）
のいずれかである、化合物、並びにそれらの直鎖又は分岐Ｃ１〜４カルボキシルモノ又はポリエステル、付加塩、溶媒和物、その分割エナンチオマー及び精製ジアステレオマー。
【請求項２】
【化４】
2010516658.tif 000044
【化５】
2010516658.tif 000045
【化６】
2010516658.tif 000046
【化７】
2010516658.tif 000047
から成る群から選択される、−Ｂ／部分でのＣ７又はＣ８一置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
【化８】
2010516658.tif 000048
から成る群から選択される、−Ｂ／部分でのＣ２一置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下のような、−Ｂ１／部分でのＣ２及びＣ８二置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【化９】
2010516658.tif 000049
【請求項５】
以下のような、−Ｂ２／部分でのＣ２及びＣ８二置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【化１０】
2010516658.tif 000050
【請求項６】
【化１１】
2010516658.tif 000051
【化１２】
2010516658.tif 000052
から成る群から選択される、異なる−Ｂ１／部分又は−Ｂ２／部分でのＣ２及びＣ８二置換化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
薬学的に許容される担体中に請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその混合物を含む医薬組成物。
【請求項８】
ヘマグルチニン（ＨＡ）及び／又はノイラミニダーゼ（ＮＡ）及び／又はＭ２タンパク質含有ウイルスによって引き起こされるウイルス感染の治療のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記感染が、Ａ型及びＢ型のインフルエンザウイルス又はその突然変異体によるものである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ヘマグルチニン（ＨＡ）及び／又はノイラミニダーゼ（ＮＡ）及び／又はＭ２タンパク質含有ウイルスによって引き起こされるウイルス感染の治療のための薬剤の製造における、治療に有効な量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
哺乳類におけるＡＲＮｍ、ＡＲＮポリメラーゼ及び酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼの媒介によるウイルス感染の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルス若しくはＢ型インフルエンザウイルス、又はそれらのサブタイプ並びに別の株及び突然変異体によるものである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルス若しくはＢ型インフルエンザウイルス若しくはＣ型肝炎ウイルスのいずれか、又はそれらのサブタイプ並びに別の株及び突然変異体によって引き起こされる、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
ＡＲＮｍ及びＡＲＮポリメラーゼによって媒介される疾患又は状態の治療のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼを阻害する化合物。
【請求項１５】
ＡＲＮｍ、ＡＲＮポリメラーゼ及び酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼの媒介による前記感染が、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）感染である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ヘマグルチニン（ＨＡ）及び／又はノイラミニダーゼ（ＮＡ）及び／又はＭ２タンパク質含有ウイルスによって引き起こされるウイルス感染の治療のための、Ａ型インフルエンザウイルス又はその突然変異体に対して活性を有する化合物と混合した、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
Ａ型インフルエンザウイルス又はその突然変異体に対して活性を有する前記化合物が、ザナミビル又はオセルタミビルである、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ＡＲＮｍ及びＡＲＮポリメラーゼによって媒介される疾患又は状態の治療のための、請求項１５に記載の化合物、及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＶＣ）又はその突然変異体に対して活性を有する化合物を含む医薬組成物。
【請求項１９】
ＨＶＣに対して活性を有する前記化合物が、単独の、又はリバビリンと併用した、インターフェロンα若しくはＰＥＧ化インターフェロンαである、請求項１８に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項２０】
治療において使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
前記治療が、哺乳類におけるＨＡ又はＮＡ又はＭ２タンパク質の媒介によるウイルス感染の治療である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記治療が、哺乳類におけるＡＲＮｍ、ＡＲＮポリメラーゼ及び酵素ＡＲＮｍ−グアニリルトランスフェラーゼの媒介によるＨＶＣの治療である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルス若しくはＢ型インフルエンザウイルス、又はそれらのサブタイプ並びに別の株及び突然変異体によって引き起こされる、請求項２１又は２２に記載の化合物。
【国際調査報告】
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