(57)【要約】  本発明は、化学式[Ｍ（Ａ）ｗ（Ｂ）ｘ（Ｃ）ｙ]ｍ（Ｘｚ）ｎからなるルテニウム及びオスミウムの複合体自体、並びに、電気化学バイオセンサにおける酸化還元メディエーターとしての前記化学式からなるルテニウム及びオスミウムの複合体の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学式１９
【化１９】
2010531976.tif 000020
の複合体の使用であって、
Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨＮＨ２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択されるか、又は、ＡはＮＣＳであり；
Ｂは、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ＷＲ１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
Ｒ及びＲ１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
Ｃは、Ｂ以外の配位子であり；かつ、
Ｘは、対イオンであり；
酸化還元メディエーターとしての［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２を除いて、配位原子の数は６である、使用。
【請求項２】
化学式１９の複合体における配位子Ａが、ＮＣＳ、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキノリン、置換ピリジル、及びそれらの異性体からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
化学式１９の複合体における配位子Ａが、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、及びそれらの異性体からなる群から選択されるか、又は、３個の窒素ヘテロ原子を有する５−又は６−員芳香環の配位子であるか、若しくは、該配位子を含むか、又は、グアニン若しくはアデニンである、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
化学式１９の複合体における配位子Ａが、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、及び、ハロゲンからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
化学式１９の複合体における配位子Ａが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、及び、プロピニルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
化学式１９の複合体における配位子Ｂが、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ｗＲ１を有した直鎖状であるか、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状である二座、三座、又は四座の配位子であって、ｗは整数１乃至３から選択される整数であり、ｖは３又は４であり、ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４であり、さらに、ｓは２又は３であり得る、請求項１乃至５のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７】
Ｂが、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
化学式１９の複合体における配位子Ｃが、アミン配位子、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、ピリジン、又は、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択される、請求項１乃至７のいずれか1項に記載の使用。
【請求項９】
化学式１９の複合体が、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ３）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）である、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
化学式１９の複合体が、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ６）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２である、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
バイオセンサにおける、請求項１乃至１０のいずれか1項に記載の化学式１９の複合体の使用。
【請求項１２】
分析物を測定する検出システムであって、
（ａ）前記分析物を含有する試料を、酵素、及び、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の化学式１９の酸化還元メディエーターを含有する溶液と接触させるステップ；
（ｂ）前記酵素を前記分析物に対して作用させる状況下で、前記接触させた試料をインキュベートするステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）のインキュベートした試料を、測定可能な信号において変化をもたらす状況にさらすステップ；及び
（ｄ）前記測定可能な信号を測定するステップ；
を含む検出システム。
【請求項１３】
以下の化学式２０による複合体であって、
【化２０】
2010531976.tif 000021
Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨＮＨ２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択され；
Ｂは、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ＷＲ１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
Ｒ及びＲ１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
Ｃは、Ａ又はＢ以外の配位子であり；かつ、
Ｘは、対イオンであり；
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２を除いて、配位原子の数は６である、複合体。
【請求項１４】
Ａが、請求項２乃至５のいずれか１項に記載のＡである、請求項１３に記載の複合体。
【請求項１５】
Ｂが、請求項６及び７のいずれか１項に記載のＢである、請求項１３又は１４に記載の複合体。
【請求項１６】
Ｃが、アミン配位子、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、ピリジン、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択される、請求項１３乃至１５のいずれか1項に記載の複合体。
【請求項１７】
［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ３）２である、請求項１３に記載の複合体。
【請求項１８】
［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ６）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２である、請求項１３に記載の複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のルテニウム・オスミウムの複合体、酸化還元メディエーターとしての、又は、バイオセンサにおけるルテニウム・オスミウムの複合体の使用に関する。特に、本発明は、酸化還元メディエーターとして、ルテニウム（ＩＩＩ）状態において３＋未満の全電荷をルテニウム含有種に対して有したルテニウム複合体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオセンサは、生化学的認識成分又はセンシング要素を物理的トランスデューサと組み合わせた分析用ツールである。バイオセンサは、パーソナルヘルスモニタリング、環境スクリーニング及びモニタリング、バイオプロセスモニタリング等さまざまな分野において、並びに、食品飲料産業内で幅広い用途を有している。バイオセンサは、分布された測定の便利さ及び設備、すなわち、関心点、又は、ポイントオブケアに対してアッセイをするという潜在能力を提供する。適切に設計され製造されたバイオセンサは、好都合に大量生産することができる。
【０００３】
生物学的なセンシング要素は、酵素、抗体、ＤＮＡ配列、又は、（例えば）反応を選択的に触媒するか、若しくは、結合事象を促進するのに役立つ微生物であり得る。選択性は、複合の試料マトリックス（例えば体液）におけるバイオセンサの作動を可能にする。トランスデューサは、生化学事象を測定可能な信号に変え、その結果、その事象を検出する手段を提供する。測定可能な信号は、酵素反応の産物若しくは基質の産生若しくは消費により生じたスペクトルの変化又は生化学的複合体形成と付随する質量変化であり得る。トランスデューサは、光吸収、蛍光、又は、屈折率を測定するよう光学ベースであり得る。トランスデューサは、結合反応に付随して起こる質量の変化を測定するよう質量ベースであり得る。トランスデューサは、エンタルピー（熱）又はアンペロメトリーの変化を測定するよう熱ベースであり得る。トランスデューサは、分析物／バイオ認識層の相互作用に付随して起こる電気特性の変化を測定するようインピーダンスベースであり得る。
【０００４】
酵素ベースのバイオセンサが、臨床、環境、農業、及び、バイオ技術の分野における分析物の検出に広く使用されている。それらのバイオセンサは、特異性、感受性を提供し、穏やかな状況下で作動する。ヒトの体液における臨床アッセイにおいて測定することができる分析物は、（例えば）グルコース、ラクテート、コレステロール、ビリルビン、及び、アミノ酸を含む。（血液等の）生体液におけるこれらの分析物のレベルは、疾患の診断及びモニタリングにとって重要である。しかし、ファウラント及び干渉に対するトランスデューサの脆弱性を含むバイオセンサの使用に付随して欠点が存在する。
【０００５】
一般的に酵素ベースのシステムを利用するセンサは、ポイントオブケアの装置、又は、店頭販売される装置として提供される。全コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ及びＬＤＬの濃度を（例えば）装置に試料を添加して１から５分以内に決定するために、それらのセンサを使用して、新鮮且つ未改変の全血指先穿刺試料を検査することができる。組み合わされたこれら４つのパラメータは、成人における心疾患のリスクに対して非常に優れた指標を与えるよう臨床的に証明してきた。高コレステロールが無症候性であることは周知で、成人はそれらのリスクを評価するよう検査するべきであるということが勧められる。それらのリスクが高いと判った場合、正しい食事管理のみによって、又は、治療薬の投与と組み合わせてそのリスクを有意に減らすことができる。
【０００６】
電気化学アッセイは、一般的に、少なくとも１つの測定電極若しくは作用電極及び１つの参照電極を含む２又は３個の電極を有した電池において行われる。３電極型において、第３の電極は対電極である。２電極型では、参照電極が対電極としても役に立つ。前記電極は、ポテンシオスタット等の回路を介して接続される。測定又は作用電極は、炭素又は金属の伝導体若しくは半導体である。
【０００７】
酵素ベースのバイオセンサの例において、分析物を検出するために電気化学アッセイが利用されている。その分析物と反応した酵素と相互作用するメディエーターの酸化状態における変化が使用される。メディエーターの酸化状態は、基質の追加後に酵素と相互作用するよう選ばれる。分析物は、酵素を介してメディエーターの化学量論濃度と反応する。これにより、メディエーターは（酵素反応に応じて）酸化又は還元され、この変化は、所与の電位で生じた電流を決定することによって、又は、所与の電流における電位を決定することによって測定することができる。
【０００８】
酵素ベースのバイオセンサのさらなる例において、作用電極まで通過した十分に大きな電圧により、酸化還元酵素は電気酸化又は電気還元される。酵素は、検出されることになる分析物、又は、分析物の産物に特異的である。酵素の代謝回転速度は、一般的に、検査液における分析物自体の濃度に、又は、その産物に（例えば直線的に）関連する。
【０００９】
酵素の電気酸化又は電気還元は、液体内又は電極上の酸化還元メディエーターの存在により促進されることが多い。酸化還元メディエーターは、一般的に、作用電極と酵素との電気通信に寄与する。酸化還元メディエーターは、電極と電解接触している分析されることになる流体に溶解することができる。有用な装置は、（例えば）酸化還元メディエーターを含むフィルム、及び、所望の分析物又はその産物に対して触媒的に特異的な酵素で電極を被覆することによって作製することができる。水に可溶性か又は不溶性であり得る拡散性の酸化還元メディエーターは、（例えば）酵素と電極との間で電子をシャトルすることによって機能する。酵素の基質が電気酸化された場合、酸化還元メディエーターは、基質により還元された酵素から電極まで電子を運ぶ。基質が電気還元された場合、酸化還元メディエーターは、電極から基質により酸化された酵素まで電子を運ぶ。
【００１０】
従来の酵素ベースの電気化学センサは、単量体のフェロセン、（例えばベンゾキノン等のキニーネ等）キノイド化合物、ニッケルシクラメート、及び、ルテニウムアミンを含む多くの酸化還元メディエーターを利用してきた。大部分に対して、これらの酸化還元メディエーターは、以下の：
検査液における酸化還元メディエーターの溶解性が低い、
酸化還元メディエーターの化学安定性、光安定性、熱安定性、又は、ｐＨ安定性が乏しい、
酸化還元メディエーターが、酵素若しくは電極、又は、その両方と十分な速度で電子を交換しない、
という制限のうち１又は複数の制限を有している。
【００１１】
さらに、これら酸化還元メディエーターのうち多くの酸化電位は非常に高いので、還元されたメディエーターが電極上で電気酸化される電位で、分析物以外の溶液の成分も電気酸化される。他の場合において、還元電位は非常に低いので、（例えば溶存酸素等の）溶液の成分も急速に電気還元される。結果として、前記メディエーターを利用するセンサは、十分に特異的ではない。
【００１２】
ルテニウムベースの複合体は、（例えば）コレステロール脱水素酵素を有する反応における酸化還元メディエーターとして以前から利用されてきた。例えば、[ＲｕＩＩ（ＮＨ３）６]２＋の種は、適した電位で平衡を保った電極において[ＲｕＩＩＩ（ＮＨ３）６]３＋に変わる。電流は、酵素反応を介して形成された[ＲｕＩＩ（ＮＨ３）６]２＋の種の量に比例する。しかし、[ＲｕＩＩＩ（ＮＨ３）６]３＋等の非常に荷電した種は、通常、酵素及び電極の表面上で負の電荷を持つグループとイオン対の形状にある複合体を（より多いかより少ない程度に）形成する。これは、分析工程に必要な反応の効果的且つ能率的発生を妨げる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
従って、測定された応答がより信頼できて安定しており、且つ、再生可能であるように、分析用混合物の成分を用いてより弱い複合体を形成するか、又は、何も形成しない酸化還元メディエーター、及び、電極を利用することが所望される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の第一の態様によると、以下の化学式１
【００１５】
【化１】
2010531976.tif 000002
の複合体の使用が提供されており、
Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨＮＨ２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択されるか、又は、ＡはＮＣＳであり；
Ｂは、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ＷＲ１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
Ｒ及びＲ１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
Ｃは、Ｂ以外の配位子であり；かつ、
Ｘは、対イオンであり；
酸化還元メディエーターとしての［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２を除いて、配位原子の数は６である。
【００１６】
本発明による使用の好ましい実施形態において、化学式１の複合体では：
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨＮＨ２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択され；さらに、
Ｃは、Ａ又はＢ以外の配位子である。
【００１７】
化学式１の複合体における配位子Ａは、ＮＣＳ、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキノリン、置換ピリジル（例えば、３−及び／又は４−置換ピリジル）並びにそれらの異性体からなる群から選択することができる。
【００１８】
化学式１の複合体における配位子Ａは、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、及びそれらの異性体からなる群から選択することができる。
【００１９】
化学式１の複合体における配位子Ａは、３個の窒素ヘテロ原子を有する５−又は６−員芳香環の配位子であるか、又は、該配位子を含む場合がある。化学式１の複合体における配位子Ａは、トリアジン又はトリアゾールであることが好ましい。
【００２０】
化学式１の複合体における配位子Ａは、グアニン又はアデニンであり得る。
【００２１】
化学式１の複合体における配位子Ａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６ジアルキルアミノ、及び、ヒドロキシルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。
【００２２】
化学式１の複合体における配位子Ａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、及び、ハロゲンからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。好ましくは、化学式１の複合体における配位子Ａは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、及び、プロピニルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される。
【００２３】
化学式１の複合体における配位子Ｂは、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ｒＲ１を有した直鎖状であり得るか、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状であり得る二座、三座、又は四座の配位子であって、ｒは整数１乃至３から選択される整数であり、ｖは３又は４であり、ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４であり、さらに、ｓは２又は３であり得る。
【００２４】
好ましくは、化学式１の複合体における配位子Ｂは、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖを有した環状の三座又は四座の配位子であって、ｖは３又は４である。
【００２５】
化学式１の複合体における配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。
【００２６】
化学式１の複合体における配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。
【００２７】
化学式１の複合体における好ましい配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンである。
【００２８】
化学式１の複合体における配位子Ｃは、アミン配位子（ＮＨ３等）、ＣＯ、ＣＮ、ＮＣＳ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、トロポロン、ピリジン、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択することができる。
【００２９】
化学式１の複合体における配位子Ｃは、アミン配位子（ＮＨ３等）、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、ピリジン、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択することができる。
【００３０】
化学式１の複合体における好ましい配位子Ｃは、ａｃａｃである。
【００３１】
化学式１の複合体における配位子Ａ、Ｂ、及びＣは二座であり得る。化学式１の複合体の形状は、シス又はトランスであり得る。
【００３２】
化学式１の複合体における金属の酸化状態は、２＋、３＋、又は４＋であり得る。化学式１の複合体における金属の酸化状態は、好ましくは３＋である。
【００３３】
配位子Ａ、Ｂ、及びＣは、化学式１の複合体上の全電荷が＋３、＋２、＋１、０、−１、−２、及び−３からなる群から選択されるように選択することができる。
【００３４】
化学式１の複合体における対イオンＸは、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、ＮＯ３−、ＮＨ４＋、ＮＲ４＋、ＰＦ６−、ＣＦ３ＳＯ３−、ＳＯ４２−、ＣｌＯ４−、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、又は、それらの組合せであり得る。
【００３５】
本発明による酸化還元メディエーターとして使用される化学式１の複合体は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ３）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）であり得る。
【００３６】
本発明による酸化還元メディエーターとして使用される化学式１の複合体は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ６）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２であり得る。
【００３７】
化学式１の複合体は、電気化学センサにおいて、本発明による酸化還元メディエーターとして使用することができる。前記電気化学センサは、微小帯電極を含むことができる。電気化学センサは、電気化学バイオセンサであり得る。電気化学センサを使用して、体液、環境試料、食物、飲料、獣医学試料、又は、薬における分析物を検出することができる。
【００３８】
化学式１の複合体は、６から１０というｐＨ、好ましくは７から９というｐＨで、本発明による酸化還元メディエーターとして使用することができる。
【００３９】
本発明の第２の態様によると、上記のバイオセンサにおいて規定された化学式１のルテニウム複合体の使用が提供される。
【００４０】
当該バイオセンサは、融和性のある生化学的分析物と共に使用することができる。該分析物は、生体液に存在し得る。分析物は、酵素、酵素基質、抗原、抗体、核酸配列、コレステロール、コレステロールエステル、リポ蛋白質、トリグリセリド、及び、微生物からなる群から選択することができる。
【００４１】
上記の化学式１の複合体を、（例えば）４個の試薬ウェルを有したストリップ及び共通の疑似参照からなるバイオセンサにおいて使用することができる。各ウェルは、管状の微小帯作用電極を有することができる。前記ストリップのセンシング成分を、少なくとも１つの酵素、及び、各ウェル内の検査試料における特異的な分析物と相互作用する能力を持つメディエーターを含む特別に調合された異なる試薬を乾燥させることによって提供することができる。異なる試薬を各ウェルに添加して乾燥させることができるため、１つの検査試料を使用して、多数の分析物の検査を完了することが可能である。ウェルの数は変更可能なため、特有の検査の数も変更可能である。例えば、１から６個のウェルを有するセンサを使用することができる。
【００４２】
上記の化学式１の複合体を、（例えば）一般的に作用微小電極を有した従来の微小電極及び参照電極からなるバイオセンサにおいて使用することができる。作用電極は、パラジウム、白金、金、又は炭素から作製することができる。対電極は、一般的に、炭素、Ａｇ／ＡｇＣｌ、Ａｇ／Ａｇ２ＳＯ４、パラジウム、金、白金、Ｃｕ／ＣｕＳＯ４、Ｈｇ／ＨｇＯ、Ｈｇ／ＨｇＣｌ２、Ｈｇ／ＨｇＳＯ４、又は、Ｚｎ／ＺｎＳＯ４であり得る。好ましくは、前記作用電極は、微小電極を形成するレセプタクルの壁内にある。本発明において使用することができる微小電極の例は、国際公開ＷＯＡ０３／０９７８６０号に開示されている。
【００４３】
本発明の第３の態様によると、分析物を測定する検出システムが提供され、当該システムは、
（ａ）前記分析物を含有する試料を、上記の化学式１による酸化還元メディエーターを含有する溶液と接触させるステップ；
（ｂ）酵素を前記分析物に対して作用させる状況下で、前記接触させた試料をインキュベートするステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）のインキュベートした試料を、測定可能な信号において変化をもたらす状況にさらすステップ；及び
（ｄ）前記測定可能な信号を測定するステップ；
を含む。
【００４４】
前記測定可能な信号は、電気化学、比色定量、熱、インピーダンス、容量性、又は、分光器の信号であり得る。測定可能な信号は、微小帯電極で測定された電気化学信号であり得る。電気化学信号は、電流測定の検出方法において微小帯電極を使用して検出することができる。
【００４５】
本発明の第４の態様によると、以下の化学式２
【００４６】
【化２】
2010531976.tif 000003
による複合体が提供され、
Ｍは、ルテニウム又はオスミウムであり、０、１、２、３、又は４の酸化状態を有し；
ｗ、ｘ、及びｙのそれぞれは、整数１乃至４から独立して選択される整数であり；
ｍは、整数−５乃至＋４から選択される整数であり；
ｎは、整数１乃至５から選択される整数であり；
ｚは、整数−２乃至＋１から選択される整数であり；
Ａは、任意選択で１乃至８個の置換基によって置換される窒素原子を１、２、又は３個有する５−又は６−員芳香環の単座配位子であり、前記置換基のそれぞれが、置換型若しくは非置換型のアルキル、アルケニル、又はアリール基、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨＮＨ２、−ＳＨ、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、アルコキシ、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アリールカルボキシアミド、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、アルコキシアミノ、及び、アルキルチオからなる群から選択され；
Ｂは、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ＷＲ１を有した直鎖状の、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状の二座、三座、四座、五座、又は六座の配位子であって、
ｗは、整数１乃至５から選択される整数であり、
ｖは、整数３乃至６から選択される整数であり、
ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４、５、又は６であり、
ｓは、２又は３のどちらかであり、さらに、
Ｒ及びＲ１のそれぞれは、独立して水素又はアルキルであり；
Ｃは、Ａ又はＢ以外の配位子であり；かつ、
Ｘは、対イオンであり；
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２を除いて、配位原子の数は６である。
【００４７】
前記配位子Ａは、ＮＣＳ、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソキノリン、置換ピリジル（例えば、３−及び／又は４−置換ピリジル）並びにそれらの異性体からなる群から選択することができる。
【００４８】
前記配位子Ａは、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、及びそれらの異性体からなる群から選択することができる。
【００４９】
前記配位子Ａは、３個の窒素ヘテロ原子を有する５−又は６−員芳香環の配位子であるか、又は、該配位子を含む場合がある。前記配位子Ａは、トリアジン又はトリアゾールであることが好ましい。
【００５０】
前記配位子Ａは、グアニン又はアデニンであり得る。
【００５１】
前記配位子Ａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６ジアルキルアミノ、及び、ヒドロキシルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。
【００５２】
前記配位子Ａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、及び、ハロゲンからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換することができる。好ましくは、前記配位子Ａは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、及び、プロピニルからなる群から選択された１又は複数の置換基によって置換される。
【００５３】
前記配位子Ｂは、化学式Ｒ１ＲＮ（Ｃ２Ｈ４ＮＲ）ｒＲ１を有した直鎖状であり得るか、又は、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖ、（ＲＮＣ２Ｈ４）ｐ（ＲＮＣ３Ｈ６）ｑ、若しくは、[（ＲＮＣ２Ｈ４）（ＲＮＣ３Ｈ６）]ｓを有した環状であり得る二座、三座、又は四座の配位子であって、ｒは整数１乃至３から選択される整数であり、ｖは３又は４であり、ｐ及びｑのそれぞれは、整数１乃至３から独立して選択される整数であり、それによって、ｐとｑの和は４であり、さらに、ｓは２又は３であり得る。
【００５４】
前記配位子Ｂは、化学式（ＲＮＣ２Ｈ４）ｖを有した環状の三座又は四座の配位子であって、ｖは３又は４であることが好ましい。
【００５５】
前記配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，４，８，１１−テトラメチル−１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。
【００５６】
前記配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン、１，１，４，７，１０，１０−ヘキサメチルトリエチレンテトラミン、１，２−ジメチルエチレンジアミン、又は、１，１，２，２−テトラメチルエチレンジアミンであり得る。
【００５７】
好ましい配位子Ｂは、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンである。
【００５８】
前記配位子Ｃは、アミン配位子（ＮＨ３又はＮＭｅ３等）、ＣＯ、ＣＮ、ハロゲン、アセチルアセトネート（ａｃａｃ）、３−ブロモ−アセチルアセトネート（Ｂｒａｃａｃ）、オキサレート、トロポロン、１，４，７−トリエチレンクラウンエーテル、及び、５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンからなる群から選択することができる。
【００５９】
好ましい配位子Ｃは、ａｃａｃである。
【００６０】
配位子Ａ、Ｂ、及びＣのそれぞれが二座である場合に、化学式２の複合体の形状は、シス又はトランスであり得る。
【００６１】
化学式２の複合体における金属の酸化状態は、２＋又は３＋であり得る。化学式２の複合体における金属の酸化状態は、好ましくは３＋である。
【００６２】
前記配位子Ａ及びＢは、化学式２の複合体上の全電荷が＋３、＋２、＋１、０、−１、−２、及び−３からなる群から選択されるように選択することができる。
【００６３】
前記対イオンＸは、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、ＮＯ３−、ＮＨ４＋、ＮＲ４＋、ＰＦ６−、ＣＦ３ＳＯ３−、ＳＯ４２−、ＣｌＯ４−、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、又は、それらの組合せであり得る。
【００６４】
本発明の第４の態様において、化学式２の複合体は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−メチルピリジン）］Ｃｌ２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−クロロピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソニコチンアミド）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）ピラジン］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（4−メトキシピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ジメチルアミノピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ピリジン）］（ＮＯ３）２、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３，４−ジメチルピリジン）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（３−ヒドロキシピリジン）］（ＮＯ３）２であり得る。
【００６５】
本発明の第４の態様において、化学式２の複合体は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＰＦ６）２、又は、［ＲｕＩＩＩ（１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン）（ａｃａｃ）（Ｎ−メチルイミダゾール）］（ＮＯ３）２であり得る。
【００６６】
化学式２の複合体において、前記金属は、所望によりルテニウム又はオスミウムであるよう選択することができる。ＲｕをＯｓに置換することにより、約＋４００ｍＶから＋６００ｍＶだけ複合体の作用電位が変わるということ、及び、メディエーターがＡｇ／ＡｇＣｌに対して−３００ｍＶから＋３００ｍＶという作用電気に達するまで金属の中心付近の前記配位子を変えることによって、前記作用電位をさらに（必要であれば逆方向に）微調整することができるということを当業者は正しく理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】シミュレートした同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ６）アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図２】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図３】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図４】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図５】８０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２を含有する総コレステロールアッセイに対して記録された、血漿総コレステロール（ＴＣ）濃度対酸化電流を示す図である。
【図６】８０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２を含有するトリグリセリドアッセイに対して記録された、血漿トリグリセリド（ＴＲＧ）濃度対酸化電流を示す図である。
【図７】４０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２、６ｍｇｍｌ−１のＴＮＡＤ、４ｍｇｍｌ−１のＰｄＲ、２２ｍｇｍｌ−１のコレステロール脱水素酵素、２３ｍｇｍｌ−１のリパーゼ、２％ｗｔ／ｖのＢＳＡ、０．１Ｍのスクロースモノカプレート、及び、０．１Ｍのネオマイシンを含有するＨＤＬアッセイに対して記録された、血漿高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）濃度対酸化電流を示す図である。
【図８】ＣＨ３ＣＮにおける［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］ＰＦ６のＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図９】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図１０】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図１１】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図１２】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、２ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２及び５ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図１３】１ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図１４】５０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２、及び、ＴＲＩＳ  ｐＨ９において３％  Ａｎａｍｅｇ−７、ＮＡＤ（９．６ｍｇ／ｍｌ）、ＰｄＲ（４．３ｍｇ／ｍｌ）、ＣｈＥ（３．３ｍｇ／ｍｌ）、ＣｈＤｈ（４２ｍｇ／ｍｌ）、Ａｎａｍｅｇ−７（３％）、ミオイノシトール（１５ｍｇ／ｍｌ）、エクトイン（１５ｍｇ／ｍｌ）を含有する総コレステロールセンサに対する酸化電流の血漿総コレステロール較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図１５】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＰｙ）］Ｃｌ２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図１６】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１．２５ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＰｙ）］Ｃｌ２及び１．２５ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図１７】異なる凍結乾燥した血清試料に対する酸化電流対総コレステロール（ＴＣ）濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図１８】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は拡大した同位体パターンを示す）。（ａ）[ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）]２＋の算出された同位体パターン、及び、（ｂ）[ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）]＋の算出された同位体パターンを示す図である。
【図１９】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図２０】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図２１】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図２２】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［Ｒｕ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｉｓｎａ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図２３】０．０６６ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［Ｒｕ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｉｓｎａ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図２４】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図２５】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ３）２アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は実験の及びシミュレートされた同位体パターンを示す）。
【図２６】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図２７】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図２８】異なる凍結乾燥した血清試料に対する酸化電流対総コレステロール（ＴＣ）濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図２９】作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。黒い線は、０．１ＭのＫＣｌ及び１０ｍＭのＮＡＤＨを含有する０．１ＭのＴｒｉｓ  ｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２に対するものであり、灰色の線は、２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを添加した後の同じ溶液である。
【図３０】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は拡大した同位体パターンを示す）。
【図３１】ＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）の緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した（＋０．１８ＶｖｓＳＣＥ）。
【図３２】作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。黒い線は、０．１ＭのＫＣｌ及び１０ｍＭのＮＡＤＨを含有する０．１ＭのＴｒｉｓ  ｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２に対するものであり、灰色の線は、２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを添加した後の同じ溶液である。
【図３３】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ＯＭｅ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図３４】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図３５】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図３６】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図３７】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図３８】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図３９】Ｈ２ＯにＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図３９Ａ】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図３９Ｂ】０．０３０ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図３９Ｃ】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図４０】実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２・Ｈ２ＯメタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図４１】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２・Ｈ２Ｏのサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図４２】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図４３】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図４４】実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ３）２・３Ｈ２ＯメタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図４５】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ３）２・３Ｈ２Ｏのサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図４６】作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。
【図４７】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図４８】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図４９】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図５０】作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。
【図５１】実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ピリジン）］ＰＦ６アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図５２】実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ピリジン）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図５３】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図５４】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図５５】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図５６】作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。
【図５７】実験の及びシミュレートされた同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図５８】ミリＱ水にＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．２０）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図５９】作用電極としてスタンダードなＯＢウェル電極及びオンチップＡｇ／ＡｇＣｌ対−参照電極を用いた、並びに、１００ｍＶｓ−１の走査速度を用いた２電極構成を使用して記録された、０．１ＭのＴｒｉｓｐＨ９緩衝剤における１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンメトリーを示す図である。
【図６０】１ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図６１】０．０３３ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ３）２及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図６２】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２−ｐｙ）］（ＣＦ３ＳＯ３）アセトンのＥＳＩ質量スペクトル（ポジティブモード）を示す図である。
【図６３】Ｈ２ＯにＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図６３Ａ】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図６３Ｂ】０．０３０ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図６３Ｃ】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図６４】［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ３）２メタノールのＥＳＩ−ＭＳ（ポジティブモード）を示す図である（挿入図は実験（上）及びシミュレートした（下）同位体パターンを示す）。
【図６５】Ｈ２ＯにＮａＨ２ＰＯ４（０．００５Ｍ）／Ｎａ２ＨＰＯ４（０．０９４Ｍ）を含有する緩衝剤（ｐＨ＝８．０５）における［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ３）２のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した（＋０．１８ＶｖｓＳＣＥ）。
【図６５Ａ】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴｒｉｓ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図６５Ｂ】０．０３０ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ３）２、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図６５Ｃ】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する１０ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ３）２溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図６６】同位体パターンを有した、［ＲｕＩＩＩ（ｔｍｃ）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）メタノールのＥＳＩ質量スペクトルを示す図である。
【図６７】０．１ＭのＴＦＡにおける［ＲｕＩＩＩ（ｔｍｃ）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）のサイクリックボルタンモグラムを示す図である。作用電極としてガラス状炭素、対電極として白金線、参照電極としてＳＣＥを使用した。＋０．１８ＶｖｓＳＣＥで、Ｋ３[Ｆｅ（ＣＮ）６]を内標準として使用した。
【図６７Ａ】１００ｍＶｓ−１の走査速度で記録された、０．３２ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、及び、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）からなる溶液におけるスタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップに対するサイクリックボルタンモグラムを示す図である。
【図６７Ｂ】０．０３０ｍｇｍｌ−１ＰｄＲの非存在下（黒）及び存在下（灰色）での、０．０１ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）、０．１ＭのＫＣｌ、１％ＣＨＡＰＳ、０．１ＭのＴＲＩＳ緩衝剤（ｐＨ９．０）、及び１ｍＭのＮＡＤＨからなる溶液のＵＶ吸収分光学を示す図である。
【図６７Ｃ】２．５ｍｇｍｌ−１ＰｄＲを含有する０．３２ｍＭの［ＲｕＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）２］（ＣｌＯ４）溶液に対する酸化電流対ＮＡＤＨ濃度の較正プロットを示す図である。Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって制御される、マルチプレクサー（ＭＸ４５２  Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｄｅｓｉｇｎ）に接続されたＡｕｔｏｌａｂ  ＰＧＳＴＡＴ１２ポテンシオスタット／ガルバノスタット（Ｅｃｏ  Ｃｈｅｍｉｅ社、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、スタンダードなＯｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓのスクリーンプリント炭素微小電極ストリップ上の作用電極に対して＋０．１５Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ参照）という酸化電位が印加された後に電流を記録した。
【図６８】各ＣＫに関して、時間に対してプロットされたセンサの応答を示す図である（実施例１７を参照）。
【図６９】クレアチニン濃度に対してプロットされたセンサの応答を示す図である（実施例１８を参照）。
【図７０】グルコース濃度に対してプロットされたセンサの応答を示す図である（実施例１９を参照）。
【図７１】スタンダードなグルコースの添加で唾液を検査した［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２グルコース混合体を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
「アルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、直鎖又は分岐状の飽和脂肪族炭化水素を含む。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、及び、シクロペンチルが挙げられる。他に明記しない限り、「アルキル」という用語は、アルキル基及びシクロアルキル基を含む。
【００６９】
「アルコキシ」という用語は、本明細書において使用される場合、アルキル基が酸素原子に結合した構造体を表している。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、及び、シクロペントキシが挙げられる。他に明記しない限り、「アルコキシ」という用語は、アルコキシ基及びシクロアルコキシ基を含む。
【００７０】
「アルケニル」という用語は、本明細書において使用される場合、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有した不飽和の直鎖又は分岐状の脂肪族炭化水素を表している。アルケニル基の例として、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−メチル−１−プロペニル、及び、シクロペンテニルが挙げられる。他に明記しない限り、「アルケニル」という用語は、アルケニル基及びシクロアルケニル基を含む。
【００７１】
「ａｃａｃ」という用語は、２，４−ペンタンジオンの共役塩基であるアセチルアセトネートアニオンを意味している。
【００７２】
「置換型の」官能基（例えば、置換型のアルキル、アルケニル、又はアルコキシ基）は、以下の：ハロゲン、アルコキシ、メルカプト、アリール、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、−ＯＨ、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルカノイルアミノ、ジアルカノイルアミノ、アリールカルボキサミド、ヒドラジノ、アルキルチオ、アルケニル、及び、反応性の基から選択される少なくとも１つの置換基を含む。
【００７３】
「反応性基」は分子の官能基であり、別の化合物と反応して、その別の化合物の少なくとも一部をその分子に結合させる能力を持つ官能基である。反応性基は、カルボキシ、活性エステル、スルホニルハライド、スルホン酸エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、エポキシド、アジリジン、ハライド、アルデヒド、ケトン、アミノ、アクリルアミド、チオール、アシルアジド、アシルハライド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アルキルハライド、イミダゾール、ピリジン、フェノール、アルキル、スルホネート、ハロトリアジン、イミドエステル、マレイミド、ヒドラジド、ヒドロキシ、及び、光反応アジドアリールの基を含む。当技術分野において理解されているように、活性エステルは、一般的に、スルホ、ニトロ、シアノ、又は、ハロ等の電子求引性基によって置換されたスクシンイミド、ベンゾトリアゾール、又は、アリールのエステルを含む。
【００７４】
「生体液」は、（例えば、血液、間質液、血漿、皮膚液（ｄｅｒｍａｌ  ｆｌｕｉｄ）、汗、唾液、及び涙等の）分析物を測定することができる体液又は体液誘導体である。
【００７５】
「電気化学センサ」は、電気化学的な酸化又は還元反応を介して試料内の分析物の存在を検出する又はその濃度若しくは量を測定するよう形成された装置である。一般的に、分析物の量又は濃度に関連づけることができる電気信号にこれらの反応を変換することができる。
【００７６】
「酸化還元メディエーター」は、分析物、又は、分析物により還元されたか若しくは分析物により酸化された酵素と電極との間で、直接若しくは１又は複数のさらなる電子伝達剤を介して電子を運ぶ電子伝達剤である。
【００７７】
電気化学電池は、２電極、３電極、４電極、又は多電極型であり得る。２電極型は、作用電極及び疑似参照電極を含む。３電極型は、作用電極、理想又は疑似参照電極、及び、別の対電極を含む。本明細書において使用される場合、疑似参照電極は、実質的に安定した参照電位を提供する能力を持つ電極である。２電極型では、疑似参照電極は対電極としても作用し、この場合、電流は、実質的に参照電位を乱すことなく通過する。本明細書において使用される場合、理想参照電極は、電流が通過しない理想非分極性電極である。
【００７８】
「測定可能な信号」という用語は、（電極電位、蛍光、スペクトル吸収、ルミネセンス、光散乱、ＮＭＲ、ＩＲ、質量分析、熱変化、又は、圧電変化等）容易に測定することができる信号を意味している。
【００７９】
「生化学的分析物」という用語は、（酵素、抗体、ＤＮＡ配列、又は微生物等）生体液内に存在し得るいかなる測定可能な化学的又は生化学的な物質も含む。
【００８０】
本発明によると、単座及び二座は、当技術分野においてその一般に受入れられている意味を有しており、すなわち、単座配位子は、１つの可能な配位原子を有する化学的部分又は基である。多座配位子は、２個以上の可能な配位原子を有する化学的部分又は基である。可能な配位原子の数は、（例えば二又は三等の）接頭辞により示される。
【００８１】
次に、本発明の実施形態が、以下の実施例によって、及び、付随の図を参考にしてのみ、非限定的な観念で記述される。
【００８２】
以下に続く実施例を通して、Ｌは、配位子１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンを示している。物質［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６は、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ：Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，３２，４９２５に従い調製される。実施例の全てが、０．１ＭのＫＣｌ及び１％のＣＨＡＰＳを使用する。
【実施例１】
【００８３】
（図１から７を参照）
【００８４】
【化３】
2010531976.tif 000004
[方法１]
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］ＰＦ６の調製
Ｎ−メチルイミダゾール（０．５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）に添加した。その溶液を、数個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、アセトン（１５ｍＬ）を添加し、次に、その溶液を濾過した。オレンジ色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（１００ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４５４．４、[Ｍ]＋。
【００８５】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］ＰＦ６（１００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除いた。次に、  [ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（１５００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。収量（５０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２７７．５、[Ｍ]２＋、ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．０９Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例２】
【００８６】
（図８〜１４を参照）
【００８７】
【化４】
2010531976.tif 000005
［ＲｕＩＩ（ＤＭＳＯ）４Ｃｌ２］の調製
三塩化ルテニウム三水和物（１．０ｇ）を、ジメチルスルホキシド（５ｍＬ）において５分間環流させた。容積をｉｎ  ｖａｃｕｏにおいて半分まで減らし、アセトン（２０ｍＬ）の添加により、黄色の沈殿物を生じた。単離した黄色の複合体を濾過し、アセトン及びエーテルで洗浄して真空乾燥させた。
【００８８】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）Ｃｌ３］の調製
ＲｕＩＩ（ＤＭＳＯ）４Ｃｌ２（１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）無水エタノール（２５ｍＬ）の混合物に、撹拌しながらＬ（０．８０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を１時間かけて６０°Ｃまで加熱し、透明な深い赤褐色の溶液を得た後、その溶液を２時間環流させた。回転による蒸発乾燥によって前記溶液を減圧下で取り除いた。赤オレンジ色の残留物を濃縮したＨＣｌで処理し、空気の存在下で環流しながら３０分間加熱した。オレンジ色の微結晶性の固体を濾過によって回収し、Ｈ２Ｏ、エタノール、及びジエチルエーテルで洗浄して空気乾燥させた。
【００８９】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６・Ｈ２Ｏの調製
固体のＲｕＩＩＩ（Ｌ）Ｃｌ３（２．０ｇ；５．０ｍｍｏｌ）を、外気温にて撹拌しながらナトリウム２，４−ペンタンジオネート（ａｃａｃ）（３．０ｇ；〜２４ｍｍｏｌ）水（６０ｍＬ）溶液に少量添加した。その混合物を、透明な赤色の溶液を得るまで３．５時間撹拌した。ＮａＰＦ６（２．０ｇ）Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）溶液の添加、及び、０°Ｃまでの冷却によって、オレンジ色の微結晶の沈殿を開始し、濾過によってその微結晶を回収し、ジエチルエーテルで洗浄して空気乾燥させた。
【００９０】
［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］ＰＦ６の調製
無水エタノール／ピリジン（５ｍＬ）に［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１０５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を含有する溶液（４：１、ｖ／ｖ）を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン雰囲気下で４時間環流させるよう加熱した。外気温への冷却後、赤色の微結晶質の沈殿物を濾過によって回収し、ジエチルエーテルで洗浄して空気乾燥させた。生成物をアセトン／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量：（９４ｍｇ、７９％）。ＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４５１、[Ｍ]２＋、ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝−０．１８Ｖ  ｖｓＣＨ３ＣＮにおける０．１ＭのＴＢＡＨのＦｃ＋／０。
【００９１】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（４２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）アセトン（１ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｙ）］ＰＦ６（９０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン溶液（３ｍＬ）に徐々に添加した。５分間の撹拌の後、固体の[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（３０４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加し、紫色の沈殿物を濾過して、アセトンに続きジエチルエーテルで洗浄した。その生成物をメタノール／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量：（６４ｍｇ、８７％）。ＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４５１．０、[Ｍ]＋；２２５．４、[Ｍ]２＋、ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝０．２Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．０５）におけるＮＨＥ。
【実施例３】
【００９２】
（図１５〜１７を参照）
【００９３】
【化５】
2010531976.tif 000006
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］ＰＦ６の調製
４−ピコリン（０．４ｇ、４ｍｍｏｌ）を［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）無水エタノール（１５ｍＬ）に添加した。その溶液を、２０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、その溶液を濾過し、次に、茶色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させて、その固体を濾過した後にジエチルエーテルで洗浄した。収量（２９０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４６５．２、[Ｍ]＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２０Ｈ３５Ｎ４Ｏ２ＰＦ５Ｒｕ：Ｃ，３９．４１；Ｈ，５．７９；Ｎ，９．１１。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．５３；Ｈ，５．８２；Ｎ，８．９８。
【００９４】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］（ＰＦ６）２の調製
（ＮＨ４）２[Ｃｅ（ＮＯ３）６]（１３４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］ＰＦ６（１２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。３分後、紫色の固体を濾過し、アセトンで洗浄した。その紫色の固体を、次に、脱イオン水（１０ｍＬ）において溶解し、その溶液を濾過し、ＮＨ４ＰＦ６（１３３ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオン水で洗浄した。収量（１０５ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３２．８、[Ｍ]２＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２０Ｈ３５Ｎ４Ｏ２Ｐ２Ｆ１２Ｒｕ：Ｃ，３１．８４；Ｈ，４．６８；Ｎ，７．４３。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３１．９０；Ｈ，４．６５；Ｎ，７．３２。
【００９５】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］（ＮＯ３）２・Ｈ２Ｏの調製
[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（２３０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅｐｙ）］（ＰＦ６）２（１４０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の紫色の溶液に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量（４０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３２．８、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．１８Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２０Ｈ３５Ｎ６Ｏ８Ｒｕ・Ｈ２Ｏ：Ｃ，３９．６０；Ｈ，６．１５；Ｎ，１３．８５。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．７２；Ｈ，６．０１；Ｎ，１３．９０。
【実施例４】
【００９６】
（図１８〜２１を参照）
【００９７】
【化６】
2010531976.tif 000007
［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］ＰＦ６の調製
［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）無水エタノール／３−クロロピリジン（５ｍＬ）（４：１、ｖ／ｖ）を含有する溶液を、１０個のＺｎアマルガムが存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、１５ｍＬのアセトンを添加し、次に、その溶液を濾過した。茶色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過した後、ジエチルエーテルで洗浄した。ＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４８５．３、[Ｍ]＋。収量：（１００ｍｇ）。
【００９８】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−Ｃｌｐｙ）］ＰＦ６（１１０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を含有する茶色のアセトン溶液（３ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除き、次に、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４８５．３、[Ｍ]＋；２４２．９、[Ｍ]２＋、ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．２７Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例５】
【００９９】
（図２２〜２３を参照）
【０１００】
【化７】
2010531976.tif 000008
［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＩＳＮＡ）］ＰＦ６の調製（ＩＳＮＡ＝イソニコチンアミド）
固体のイソニコチンアミド（１ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）の懸濁液に添加した。その混合物を、数個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、１５ｍＬのアセトンを添加し、次に、その溶液を濾過した。茶色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過した後、ジエチルエーテルで洗浄した。収量：１００ｍｇ。未加工の生成物を、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０１０１】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＩＳＮＡ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、撹拌しながら［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＩＳＮＡ）］ＰＦ６（１００ｍｇ）アセトン（３ｍＬ）の茶色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過し、次に、ｃａ０．５ｍＬまで濃縮し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）の添加を続けた。結果として生じた紫色の固体を濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解した。[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）アセトニトリル（２ｍＬ）の添加により、１日置いた後に黒紫色の水晶が生じた。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４９４．４、[Ｍ]＋；２４７．３、[Ｍ]２＋、ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．２８Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例６】
【０１０２】
（図２４〜２８を参照）
【０１０３】
【化８】
2010531976.tif 000009
［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］ＰＦ６の調製
ピラゾール（０．５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）に添加した。その溶液を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、アセトン（１５ｍＬ）を添加し、次に、その溶液を濾過した。オレンジ色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過した後、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（１３０ｍｇ）。
【０１０４】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（６０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ｐｚ）］ＰＦ６（１３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン溶液（７ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除いた。次に、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（０．３ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。収量（１００ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４３９．５、[Ｍ−Ｈ]＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．１４Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例７】
【０１０５】
（図２９〜３３を参照）
【０１０６】
【化９】
2010531976.tif 000010
［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＯ−ｐｙ）］ＰＦ６（１）の調製
４−メトキシピリジン（０．４ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１２０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）無水エタノール（５ｍＬ）に添加した。その溶液を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却の後、アセトン（１５ｍＬ）を添加し、次に、その溶液を濾過した。オレンジ色の固体を得るよう濾液を乾燥状態まで蒸発させ、その固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（１００ｍｇ）。
【０１０７】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（４−ＭｅＯ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（４５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を、ｌ（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）に徐々に添加した。３分後、紫色の溶液を濾過し、次に、ｃａ１ｍＬまで濃縮させた。Ｅｔ２Ｏ（３０ｍＬ）の添加により、紫色の固体が生じ、その固体を濾過してＥｔ２Ｏで洗浄した。その紫色の固体をアセトン（５ｍＬ）に溶解した。次に、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。結果として生じた紫色の沈殿物を濾過してアセトンで洗浄した。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２４０．８、  [Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．１６Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例８】
【０１０８】
（図３４〜３７を参照）
【０１０９】
【化１０】
2010531976.tif 000011
（方法２）
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ６）２の調製
ＮＨ４ＰＦ６（２００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）及び１−メチルイミダゾール（２００ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を含有する無水エタノール（５ｍＬ）溶液に添加した。その混合物を１時間環流させた。室温への冷却後、黒紫色の固体を濾過し、エタノール（３×５ｍＬ）で洗浄して、次に、空気乾燥させた。収量（１６０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２２７．４、[Ｍ]２＋。
【０１１０】
［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２の調製
[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩＩ（Ｌ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ６）２（１００ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）アセトン（８ｍＬ）に徐々に添加し、その混合物を３０分間そのままの状態で放置した。結果として生じた紫色の沈殿物を濾過し、アセトン（３×５ｍＬ）で洗浄した後、真空下で乾燥させた。収量（７０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２２７．３、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．０７Ｖ  ｖｓＮＨＥ。ＵＶ−Ｖｉｓ（Ｈ２Ｏ）：λｍａｘ［ｎｍ］（ε［ｍｏｌ−１ｄｍ３ｃｍ−１］）２８９（５１７５）、３１４ｓｈ（３９２０）、５８３（８５５）。
(実施例８Ａ)
【０１１１】
（図３８〜３９及び３９ａ〜ｃを参照）
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２の調製
最小量のアセトンに溶解した［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＰＦ６）２（２００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）に、激しく撹拌しながら正味のトリフリン酸（０．５ｍＬ）を添加した。次に、紫色の溶液を、ジエチルエーテル（４００ｍＬ）に液滴で添加した。紫色の沈殿物を濾過して真空下で乾燥させた。収量（１００ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２７７．５、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．０９Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例９】
【０１１２】
（図４０〜４３を参照）
【０１１３】
【化１１】
2010531976.tif 000012
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］ＰＦ６の調製
４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）無水エタノール（１０ｍＬ）に添加した。その溶液を、１０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、オレンジ色の固体を濾過し、アセトン／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量（１２０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝４９４．１、[Ｍ]＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２１Ｈ３８Ｎ５Ｏ２ＰＦ６Ｒｕ：Ｃ，３９．５０；Ｈ，６．００；Ｎ，１０．９７。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．７３；Ｈ，６．０５；Ｎ，１０．８１。
【０１１４】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］（ＮＯ３）２・Ｈ２Ｏの調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−Ｍｅ２Ｎ−ｐｙ）］ＰＦ６（１２０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）のオレンジ色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過して銀を取り除いた。次に、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量（８０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２４７．３、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．０７Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２１Ｈ３８Ｎ７Ｏ８Ｒｕ・１Ｈ２Ｏ：Ｃ，３９．６８；Ｈ，６．３４；Ｎ，１５．４２。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３９．９５；Ｈ，６．４０；Ｎ，１５．６１。
【実施例１０】
【０１１５】
（図４４〜４８を参照）
【０１１６】
【化１２】
2010531976.tif 000013
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］ＰＦ６の調製
４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（０．６ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（３００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）無水エタノール（４５ｍＬ）に添加した。その溶液を、３０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、その溶液を濾過し、次に、乾燥状態まで蒸発させた。茶色の固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。収量（２９０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝５０７．３、[Ｍ]＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２３Ｈ４１Ｎ４Ｏ２ＰＦ６Ｒｕ：Ｃ，４２．３９；Ｈ，６．３４；Ｎ，８．６０。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４２．５７；Ｈ，６．４０；Ｎ，８．６８。
【０１１７】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＰＦ６）２の調製
（ＮＨ４）２[Ｃｅ（ＮＯ３）６]（２０２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン）］ＰＦ６（２００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。３分後、紫色の固体を濾過し、アセトンで洗浄した。その紫色の固体を、次に、脱イオン水（１０ｍＬ）において溶解した。濾過した溶液に、ＮＨ４ＰＦ６（２００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオン水で洗浄した。収量（１５０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５３．７、[Ｍ]２＋。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２３Ｈ４１Ｎ４Ｏ２Ｐ２Ｆ１２Ｒｕ：Ｃ，３４．６８；Ｈ，５．１９；Ｎ，７．０３。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３４．９０；Ｈ，５．１４；Ｎ，７．０９。
【０１１８】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＮＯ３）２・３Ｈ２Ｏの調製
[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（１８３ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（４−ｔＢｕｐｙ）］（ＰＦ６）２（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の紫色の溶液に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄した後真空乾燥させた。収量（６５ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５３．７、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．１８Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ２３Ｈ４１Ｎ６Ｏ８Ｒｕ・３Ｈ２Ｏ：Ｃ，４０．３４；Ｈ，６．９２；Ｎ，１２．２７。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４０．４２；Ｈ，６．７２；Ｎ，１２．２９。
【実施例１１】
【０１１９】
（図４９及び５０を参照）
【０１２０】
【化１３】
2010531976.tif 000014
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］ＰＦ６の調製
イソキノリン（０．４ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）無水エタノール（３０ｍＬ）に添加した。その溶液を、２０個のＺｎアマルガム断片が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。結果として生じた茶色の溶液を冷却した後濾過した。濾液をｃａ１ｍＬまで濃縮させた。ジエチルエーテルを添加して茶色の沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した後に空気乾燥させた。収量（１９０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝５０１．３、[Ｍ]＋。
【０１２１】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＰＦ６）２の調製
（ＮＨ４）２[Ｃｅ（ＮＯ３）６]（１９４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］ＰＦ６（１９０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を含有するオレンジ色のアセトン（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。３分後、紫色の固体を濾過し、アセトンで洗浄した。その紫色の固体を、次に、１０ｍＬの脱イオン水において溶解し、その溶液を濾過した。ＮＨ４ＰＦ６（１９２ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）を添加して紫色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオン水で洗浄した。収量（１２０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５０．７、[Ｍ]２＋。
【０１２２】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＮＯ３）２の調製
[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（２７４ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（イソキノリン）］（ＰＦ６）２（２４０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）アセトン（８ｍＬ）の紫色の溶液に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量（１２０ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２５０．７、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．２１Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例１２】
【０１２３】
（図５１〜５６参照）
【０１２４】
【化１４】
2010531976.tif 000015
[ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＰＦ６）の調製
５ｍＬのＨ２Ｏにおける[ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）Ｃｌ３]（１２０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）とトロポロン（４７ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との黄色の混合物を、空気中で２時間環流させた。結果として生じる深緑の溶液を濾過し、ＮＨ４ＰＦ６（３２３ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を添加して緑の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオンしたＨ２Ｏで洗浄した。緑色の固体を１０ｍＬのエタノールにおいて懸濁し、ピリジン（４００μＬ、４．９５ｍｍｏｌ）を添加した。次に、その混合物を、数個の亜鉛アマルガム断片が存在する中アルゴン下で一晩環流させた。結果として生じる茶色の溶液を冷却し、茶色の沈殿物を濾過し、エタノールで洗浄した後に空気乾燥させた。収量：２６％、５２ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４７３．３、[Ｍ]＋。
【０１２５】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）アセトン（３ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（ｐｙ）］ＰＦ６（５２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の茶色のアセトン溶液（５ｍＬ）に徐々に添加した。茶色の溶液は直ちに緑色へと変化し、その混合物を暗闇の中３０分間撹拌した。溶液中の銀金属を遠心分離によって取り除き、次に、緑色の溶液をｃａ８０ｍＬのジエチルエーテルに徐々に添加した。濾過によって緑色の沈殿物を回収し、ジエチルエーテルで洗浄した。次に、その沈殿物を５ｍＬのアセトンにおいて溶解し、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（７７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を徐々に添加した。緑色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量８６％、４１ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２３６．８、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝０．２５Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例１３】
【０１２６】
（図５７〜６１を参照）
【０１２７】
【化１５】
2010531976.tif 000016
[ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＰＦ６）の調製
５ｍＬのＨ２Ｏにおける[ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）Ｃｌ３]（１２０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）とトロポロン（４７ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との黄色の混合物を、空気中で２時間環流させた。結果として生じる深緑の溶液を濾過し、ＮＨ４ＰＦ６（３２３ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を添加して緑色の沈殿物を生じ、その沈殿物を濾過して脱イオンしたＨ２Ｏで洗浄した。緑色の固体を１０ｍＬのエタノールにおいて懸濁し、４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（４００μＬ、２．７３ｍｍｏｌ）を添加した。次に、その混合物を、数個の亜鉛アマルガム断片が存在する中アルゴン下で一晩環流させた。結果として生じる茶色の溶液を冷却し、茶色の沈殿物を濾過し、エタノールで洗浄した後に空気乾燥させた。収量：９３％、２００ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５２９．３、[Ｍ]＋。
【０１２８】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ｐｙ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（９２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（トロポロン）（４−ｔ−ブチル−ｐｙ）］ＰＦ６（２００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の茶色のアセトン溶液（１０ｍＬ）に徐々に添加した。茶色の溶液は直ちに緑色へと変化し、その混合物を暗闇の中３０分間撹拌した。溶液中の銀金属を遠心分離によって取り除き、次に、緑色の溶液をｃａ８０ｍＬのジエチルエーテルに徐々に添加した。濾過によって緑色の沈殿物を回収し、ジエチルエーテルで洗浄した。次に、その沈殿物を５ｍＬのアセトンにおいて溶解し、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（２７１ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）アセトン（５ｍＬ）の溶液を徐々に添加した。緑色の沈殿物を濾過し、アセトンで洗浄して真空乾燥させた。収量：３３％、６５ｍｇ。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２６４．８、[Ｍ２＋]。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝０．２３Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例１４】
【０１２９】
（図６２〜６３及び６３ａ〜ｃを参照）
【０１３０】
【化１６】
2010531976.tif 000017
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］ＰＦ６の調製
３，４−ルチジン（０．３ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（３００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）無水エタノール（１０ｍＬ）に添加した。その溶液を、Ｚｎアマルガム（１０個の断片）が存在する中アルゴン下で２４時間環流させた。室温への冷却後、オレンジ色の固体を濾過し、アセトン／ジエチルエーテルから再結晶させた。収量（３００ｍｇ）。
【０１３１】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］（ＣＦ３ＳＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（１３５ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３，４−Ｍｅ２ｐｙ）］（ＰＦ６）（３００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）アセトン（１０ｍＬ）のオレンジ色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過し、ｃａ１ｍＬまで濃縮した。ジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加によって紫色の固体が生じ、その固体を回収してアセトン／ジエチルエーテルから再結晶した。収量（３００ｍｇ）。次に、紫色の固体（３００ｍｇ）を最小量のアセトンにおいて再溶解した後、激しく撹拌しながら正味のトリフリン酸（０．５ｍＬ）を添加した。次に、紫色の溶液を、ジエチルエーテル（５００ｍＬ）に徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過して真空下で乾燥させた。収量（１５０ｍｇ）。アセトンにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３９．７、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．１７Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例１５】
【０１３２】
（図６４〜６５及び６５ａ〜ｃを参照）
【０１３３】
【化１７】
2010531976.tif 000018
［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３ＯＨｐｙ）］（ＰＦ６）の調製
３−ヒドロキシピリジン（０．１ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（ＯＨ）］ＰＦ６（２００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）無水エタノール（１０ｍＬ）に添加した。その溶液を、Ｚｎアマルガム（１０個の断片）が存在する中アルゴン下で１６時間環流させた。室温への冷却後、オレンジ色の溶液を濾過し、ｃａ１ｍＬまで濃縮した。ジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加によってオレンジ色の固体が生じ、その固体を濾過してアセトン／ジエチルエーテルから再結晶した。収量（１６０ｍｇ）。
【０１３４】
［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＮＯ３）２の調製
ＡｇＣＦ３ＳＯ３（７０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を、［ＲｕＩＩ（Ｍｅ３ｔａｃｎ）（ａｃａｃ）（３−ＯＨｐｙ）］（ＰＦ６）（１６０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）アセトン（８ｍＬ）のオレンジ色の溶液に徐々に添加した。５分後、紫色の溶液を濾過し、ｃａ１ｍＬまで濃縮した。ジエチルエーテル（５０ｍＬ）の添加によって紫色の固体が生じ、その固体を濾過してアセトン／ジエチルエーテルから再結晶した。収量（１５０ｍｇ）。次に、紫色の固体（１５０ｍｇ）をアセトン（８ｍＬ）において再溶解した後、[ｎＢｕ４Ｎ]ＮＯ３（２００ｍｇ）アセトン（２ｍＬ）の溶液を徐々に添加した。紫色の沈殿物を濾過して真空下で乾燥させた。収量（１００ｍｇ）。メタノールにおけるＥＳＩ／ＭＳ（ポジティブモード）：ｍ／ｚ＝２３３．８、[Ｍ]２＋。ＲｕＩＩＩ／ＩＩのＥ１／２＝＋０．１４Ｖ  ｖｓ緩衝液（ｐＨ８．２０）におけるＮＨＥ。
【実施例１６】
【０１３５】
（図６６〜６７及び６７ａ〜ｃを参照）
【０１３６】
【化１８】
2010531976.tif 000019
［ＲｕＩＩＩ（ＴＭＣ）（ＮＣＳ）２］（ＣＩＯ４）の調製
紫色の固体を、文献に記載の方法に従い調製した（Ｃｈｅ，Ｃ．Ｍ．；Ｋｗｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．；Ｐｏｏｎ  Ｃ．Ｋ．Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８５，２４，１６０１−１６０２）。
【実施例１７】
【０１３７】
この実験の目的は、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２を用いたウェットテストによるクレアチンキナーゼ活性の測定を実証することであった。
【０１３８】
（酵素混合物）
酵素混合物を、以下の組成物：
０．１Ｍ  イミダゾール（酢酸（３７°Ｃ、ｐＨ７．１）で平衡化）
４０ｍＭ  ［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２
２０ｍＭ  ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
５ｍｇ／ｍｌ  ジアホラーゼ
５ｍｇ／ｍｌ  グルコース６−リン酸脱水素酵素
２０ｍｇ／ｍｌ  ヘキソキナーゼ
２０ｍＭ  Ｄ−グルコース
６．２５ｍＭ  アデノシン二リン酸（二ナトリウム塩）
３０ｍＭ  酢酸マグネシウム
５ｍＭ  ＥＤＴＡ（四ナトリウム塩）
を用いて調製した。
【０１３９】
（ＣＫ溶液）
凍結乾燥したヒト組換えＣＫ試料をＡｓａｈｉ  Ｋａｓｅｉ社から入手した。緩衝剤中貯蔵ＣＫ液を６３．９ｋＵ／Ｌで作製し、緩衝剤で希釈して、異なるＣＫ活性を有した試料を得た。ＣＫ試料の活性を、Ｓｐａｃｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｃｈｉａｐｐａｎｅｌｌｉ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．社）を用いて決定した。
【０１４０】
（ウェットテスト手順）
９．６μＬの酵素混合物をエッペンドルフに配置し、そこに１．２μＬのＣＫ試料及び１．２μＬのＮ−アセチルシステイン（２００ｍＭ）を添加した。そのエッペンドルフを３７°Ｃのヒートブロック上に３分間置き、Ｎ−アセチルシステインの存在下でＣＫをインキュベート、従って、ＣＫを活性化した。次に、その混合物を、３７°Ｃのクレアチンリン酸１．２μＬ（１０００ｍＭ）に添加した。
【０１４１】
次に、１２μＬの酵素／ＣＫ混合物を電極の上に直ちに配置し、Ａｕｔｏｌａｂ（ＰＧＳＴＡＴ１２）に結合されたマルチプレクサー（ＭＸ４５２、Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）を使用してクロノアンペロメトリー検査を開始した。
【０１４２】
酸化電流を、１５時点（０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４、１６８、１８２、及び１９６秒）にて０．１５Ｖで測定し、還元電流を、最後の時点（２１０秒）にて−０．４５Ｖで測定した。過度電流を１秒間測定した。各試料を二度検査した。
【０１４３】
（分析）
ＧＰＥＳソフトウェアからの出力値を、データをスプレッドシートに変換するＤａｔａＡｎａｌ２−１７プログラムを使用して分析した。次に、これらのデータをデータ分析のテンプレートに転送した。
【０１４４】
（結果）
各ＣＫ試料に関して、センサの応答を時間に対してプロットした（図６８を参照）。応答の初速度（１４〜２８秒という時間に対する電流の変化）を各試料に対して決定し、速度（ｎＡ／ｍｉｎ）ｖｓＣＫ活性（ｋＵ／Ｌ）のプロットを作製した。参照方法によって決定されるＣＫ活性に対する応答速度の一次従属性が存在した。
【実施例１８】
【０１４５】
この実験の目的は、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２を用いたウェットテストによるクレアチニンの測定を実証することであった。
【０１４６】
（酵素混合物）
酵素混合物を、以下の組成物：
０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ＨＣｌ（室温、ｐＨ７．１）で平衡化）
２０ｍＭ  ［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２
１０ｍＭ  ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
５ｍｇ／ｍｌ  ジアホラーゼ
８０ｍｇ／ｍｌ  サルコシン脱水素酵素
１２ｍｇ／ｍｌ  クレアチナーゼ
２４ｍｇ／ｍＬ  クレアチニナーゼ
を用いて調製した。
【０１４７】
（クレアチニン溶液）
緩衝剤中１０ｍＭのクレアチニンの貯蔵液を作製して緩衝剤で希釈し、異なる濃度のクレアチニンを有する試料を生じた。試料は、使用するまで氷上で保管した。
【０１４８】
（ウェットテスト手順）
１２μＬの酵素混合物をエッペンドルフに配置し、そのエッペンドルフを次に３７°Ｃのヒートブロック上に３分間置いた。次に、その混合物を１．２μｌのクレアチニン試料に添加し、その試料も３７°Ｃのヒートブロック上でインキュベートした。次に、１２μＬの酵素／クレアチニン混合物を電極の上に直ちに配置し、Ａｕｔｏｌａｂ（ＰＧＳＴＡＴ１２）に結合されたマルチプレクサー（ＭＸ４５２、Ｓｔｅｒｎｈａｇｅｎ  ｄｅｓｉｇｎ）を使用してクロノアンペロメトリー検査を開始した。
【０１４９】
酸化電流を、１５時点（０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４、１６８、１８２、及び１９６秒）にて０．１５Ｖで測定し、還元電流を、最後の時点（２１０秒）にて−０．４５Ｖで測定した。過度電流を１秒間測定した。各試料を二度検査した。
【０１５０】
（分析）
ＧＰＥＳソフトウェアからの出力値を、ＤａｔａＡｎａｌ２−１７プログラムを使用して分析した。次に、これらのデータをデータ分析のテンプレートに転送した。
【０１５１】
（結果）
センサの応答をクレアチニン濃度に対してプロットした。１９６秒という最後の時点でのクレアチニンに対する較正プロットに関して、スロープ及びインターセプトが図６９に与えられている。
【実施例１９】
【０１５２】
この実験の目的は、［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２を用いて調製した凍結乾燥したセンサを使用して、全血におけるグルコースの測定を実証することであった。
【０１５３】
（酵素混合物）
酵素混合物を、以下の組成物：
０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ＨＣｌ（室温、ｐＨ９．０）で平衡化）
１０％ｗ／ｖＫＣｌ
４０ｍＭ  ［ＲｕＩＩＩ（Ｍｅ３ＴＡＣＮ）（ａｃａｃ）（１−ＭｅＩｍ）］（ＮＯ３）２
１０ｍＭ  ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
４．２ｍｇ／ｍｌ  ＰｄＲ
１０ｍｇ／ｍｌ  グルコース脱水素酵素
を用いて調製した。
【０１５４】
（生成分配及び凍結乾燥）
０．４μＬ／ウェルの酵素混合物を、生成ディスペンサーを使用してセンサのウェル２内に分配した。３つの他の溶液を、他のウェル内に分配した。これらの溶液を使用した他のメディエーター及びこれらのセンサの応答は、ここでは報告されない。次に、分配されたセンサのシートを、乾燥凍結するためにＬＳ４０凍結乾燥機（Ｓｅｖｅｒｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）内に配置した。使用したプログラムは、Ｎｉｇｈｔ２であった。センサは、生産単位ＤＥＶ３４５を形成した。
【０１５５】
（全血試料）
新鮮な全血試料（Ｌｉヘパリン抗凝血剤）を入手したままの状態で使用した。この試料の一定分量を２９００ＲＣＦ（Ｌａｂｎｅｔ  １６１８）で５分間遠心分離し、Ｓｐａｃｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｃｈｉａｐｐａｎｅｌｌｉ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．社）を使用して血漿をグルコース濃度に対して検査した。そのグルコース濃度を、５．１ｍＭになるよう決定した。
【０１５６】
さらに、最初の全血試料の一定分量に１Ｍのグルコース溶液を加えて、より高いグルコース濃度を得た。各加えられた一定分量を遠心分離して、グルコース濃度に対して血漿を検査した。一定分量の遠心分離、脱脂した血清（Ｓｃｉｐａｃ、Ｓ１３９）との一部の血漿の置き換え、及び、試料を再構築するための転化によって、より低いグルコース濃度を有した全血試料を得た。
【０１５７】
（テスト手順）
２０μＬの全血試料を１つの電極あたり使用した。試料の添加後、Ｕｎｉｓｃａｎ  ｍｕｌｔｉ−ｐｏｔｅｎｔｉｏｓｔａｔを使用してクロノアンペロメトリー検査を開始した。酸化電流を、１５時点（０、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４、１６８、１８２、及び１９６秒）にて０．１５Ｖで測定し、還元電流を、最後の時点（２１０秒）にて−０．４５Ｖで測定した。過度電流を１秒間測定した。各試料を二度検査した。
【０１５８】
（分析）
ＧＰＥＳソフトウェアからの出力値を、ＤａｔａＡｎａｌ２−１７プログラムを使用して分析した。次に、これらのデータをデータ分析のテンプレートに転送した。
【０１５９】
（結果）
センサの応答をグルコース濃度に対してプロットした（図７０を参照）。９８秒にて、電流と全血グルコース濃度との間に良い相関関係を得た（勾配＝６５．７１ｎＡ／秒、インターセプト＝２７４．１８ｎＡ）。
【実施例２０】
【０１６０】
（グルコース）
この実施例では、実施例１９の全血を唾液と置き換えた。結果は、図７１に示されている。
【図１】
2010531976.tif 000022
【図２】
2010531976.tif 000023
【図３】
2010531976.tif 000024
【図４】
2010531976.tif 000025
【図５】
2010531976.tif 000026
【図６】
2010531976.tif 000027
【図７】
2010531976.tif 000028
【図８】
2010531976.tif 000029
【図９】
2010531976.tif 000030
【図１０】
2010531976.tif 000031
【図１１】
2010531976.tif 000032
【図１２】
2010531976.tif 000033
【図１３】
2010531976.tif 000034
【図１４】
2010531976.tif 000035
【図１５】
2010531976.tif 000036
【図１６】
2010531976.tif 000037
【図１７】
2010531976.tif 000038
【図１８】
2010531976.tif 000039
【図１８ａ）】
2010531976.tif 000040
【図１８ｂ）】
2010531976.tif 000041
【図１９】
2010531976.tif 000042
【図２０】
2010531976.tif 000043
【図２１】
2010531976.tif 000044
【図２２】
2010531976.tif 000045
【図２３】
2010531976.tif 000046
【図２４】
2010531976.tif 000047
【図２５】
2010531976.tif 000048
【図２６】
2010531976.tif 000049
【図２７】
2010531976.tif 000050
【図２８】
2010531976.tif 000051
【図２９】
2010531976.tif 000052
【図３０】
2010531976.tif 000053
【図３１】
2010531976.tif 000054
【図３２】
2010531976.tif 000055
【図３３】
2010531976.tif 000056
【図３４】
2010531976.tif 000057
【図３５】
2010531976.tif 000058
【図３６】
2010531976.tif 000059
【図３７】
2010531976.tif 000060
【図３８】
2010531976.tif 000061
【図３９】
2010531976.tif 000062
【図３９ａ】
2010531976.tif 000063
【図３９ｂ】
2010531976.tif 000064
【図３９ｃ】
2010531976.tif 000065
【図４０】
2010531976.tif 000066
【図４１】
2010531976.tif 000067
【図４２】
2010531976.tif 000068
【図４３】
2010531976.tif 000069
【図４４】
2010531976.tif 000070
【図４５】
2010531976.tif 000071
【図４６】
2010531976.tif 000072
【図４７】
2010531976.tif 000073
【図４８】
2010531976.tif 000074
【図４９】
2010531976.tif 000075
【図５０】
2010531976.tif 000076
【図５１】
2010531976.tif 000077
【図５２】
2010531976.tif 000078
【図５３】
2010531976.tif 000079
【図５４】
2010531976.tif 000080
【図５５】
2010531976.tif 000081
【図５６】
2010531976.tif 000082
【図５７】
2010531976.tif 000083
【図５８】
2010531976.tif 000084
【図５９】
2010531976.tif 000085
【図６０】
2010531976.tif 000086
【図６１】
2010531976.tif 000087
【図６２】
2010531976.tif 000088
【図６３】
2010531976.tif 000089
【図６３ａ】
2010531976.tif 000090
【図６３ｂ】
2010531976.tif 000091
【図６３ｃ】
2010531976.tif 000092
【図６４】
2010531976.tif 000093
【図６５】
2010531976.tif 000094
【図６５ａ】
2010531976.tif 000095
【図６５ｂ】
2010531976.tif 000096
【図６５ｃ】
2010531976.tif 000097
【図６６】
2010531976.tif 000098
【図６７】
2010531976.tif 000099
【図６７ａ】
2010531976.tif 000100
【図６７ｂ】
2010531976.tif 000101
【図６７ｃ】
2010531976.tif 000102
【図６８】
2010531976.tif 000103
【図６９】
2010531976.tif 000104
【図７０】
2010531976.tif 000105
【図７１】
2010531976.tif 000106
【国際調査報告】
2010531976.tif 000107
2010531976.tif 000108
2010531976.tif 000109
2010531976.tif 000110