(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
0006257876.tif 000011
〔式中、Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示し、Ｄ環部分が下記のａ； 
【化２】
0006257876.tif 000012
（式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基を示し、Ａｃはアセチル基を示す。）を示す。〕で表される化合物及びシミシフゴシドH-1から選ばれるシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを有効成分とするＶＥＧＦ産生促進剤。
【請求項２】
シクロアルタン型トリテルペノイドサポニンが、キンポウゲ科サラシナショウマ属植物由来のものである請求項１記載のＶＥＧＦ産生促進剤。
【請求項３】
シクロアルタン型トリテルペノイドサポニンが、7,8-ジデヒドロ-24-O-アセチルヒドロセングマノール-3-O-β-キシロシド又はシミシフゴシドH-1である請求項１記載のＶＥＧＦ産生促進剤。
【請求項４】
下記一般式（１）：
【化３】
0006257876.tif 000013
〔式中、Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示し、Ｄ環部分が下記のａ；
【化４】
0006257876.tif 000014
（式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基を示し、Ａｃはアセチル基を示す。）を示す。〕
で表される化合物及びシミシフゴシドH-1から選ばれるシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを有効成分とする髪質改善剤。
【請求項５】
シクロアルタン型トリテルペノイドサポニンが、キンポウゲ科サラシナショウマ属植物由来のものである請求項４記載の髪質改善剤。
【請求項６】
シクロアルタン型トリテルペノイドサポニンが、7,8-ジデヒドロ-24-O-アセチルヒドロセングマノール-3-O-β-キシロシド又はシミシフゴシドH-1である請求項４記載の髪質改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管内皮細胞増殖因子（Vascular Endothelial Growth Factor；ＶＥＧＦ）の産生を促進し得るＶＥＧＦ産生促進剤、髪質改善剤及び皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＶＥＧＦは、血管透過性因子として知られているが、最近の研究により、ヒト皮膚における主要な血管新生因子であることが報告され、創傷治癒、肌色改善、養毛・育毛等の研究分野で注目されている分子である。
【０００３】
正常な皮膚において、ＶＥＧＦは、表皮角化細胞により少量分泌され、真皮の微小血管内皮細胞上の特異的なレセプターに結合し、それによって内皮細胞の生存能力を確保することにより、上部の網状構造の血管を維持している。
【０００４】
炎症あるいは創傷治癒時に肥厚した表皮におけるＶＥＧＦは、非常に高く発現していて、真皮での血管の増加と栄養供給を導いていることが報告されている（非特許文献１）。また、毛髪の成長期では毛包周囲の血管が劇的に拡張していて、毛包の細胞でＶＥＧＦが発現しており、毛髪の退行期と休止期では、血管の退縮に伴いＶＥＧＦの発現が抑制されていることが報告されている（非特許文献２）。
さらに、ＶＥＧＦは血管の形成を促進することから、血流循環を促進して毛根に栄養を多く供給することや、毛髪のコルテックス細胞同士の接着に関係していることが報告されている。
特に、最近の研究では、ＶＥＧＦ発現量の低下と毛髪のハリコシの低下が相関していることが報告され、ＶＥＧＦ産生促進剤の毛髪化粧料への応用が着目されている（非特許文献５）。
【０００５】
従って、真皮での血管の増加と栄養供給に関与しているＶＥＧＦの産生を促進することは、創傷の回復・治癒に非常に有効である他、皮膚の新陳代謝の低下等によって生じるくすみや肌の透明感の低下といった肌色改善に有効である。また、毛髪・毛包の成長にも関与しているＶＥＧＦの産生を促進することは、毛髪の脱毛・薄毛、ハリコシの低下といった症状の防止や改善にも有効である。
【０００６】
このため、様々なＶＥＧＦ産生促進剤がこれまでに開発されている。例えば、大豆由来の調製物（特許文献１）、アミハナイグチ、シロヌメリイグチ、ハナイグチ、ウツロベニハナイグチ、アミタケ、キノボリイグチ、エゾウコギ、黄精、ゲンチアナ、センナ、トチュウ、ダイオウ、メリロート、ヨクイニン、クコの実、当帰、地黄、サンシシ、甘草、ニンジン、紅参、紫根、シンビジュームの各抽出物（特許文献２）、タコノキ属（Ｐａｎｄａｎｕｓ Ｌ.ｆ.）植物抽出物（特許文献３）、シイタケ、エチナシ、プルーン、モヤシ、アマチャヅルの各抽出物（特許文献４）等に、ＶＥＧＦ産生促進作用があることが報告されている。しかし、これらのＶＥＧＦ産生促進剤は副作用の点から配合が制限される場合があり、また有効量を配合すると着色や不快臭が発生する等の問題が生じる場合もあった。
【０００７】
一方、シクロアルタン型トリテルペノイド配糖体は、サラシナショウマ(Cimicifuga simplex)等のキンポウゲ科サラシナショウマ属植物からの単離報告があり、チミジン取り込み阻害作用（非特許文献３）、抗マラリア作用（非特許文献４）等の薬理作用があることが報告されている。
【０００８】
しかしながら、シクロアルタン型トリテルペノイド配糖体がＶＥＧＦ産生促進作用を有することは全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平１１−２８６４３２号公報
【特許文献２】特開２０００−２１２０５９号公報
【特許文献３】特開２００４−４３３９３号公報
【特許文献４】特開２００４−３５４４３号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Detmar M. The role of VEGF and thrombospondins in skin angiogenesis, J Dermatol Sci. 24(Suppl 1), S78-84, 2000
【非特許文献２】Yano K, Brown LF, Detmar M.Control of hair growth and follicle size by VEGF-mediated angiogenesis , J Clin Invest. 107(4), 409-17, 2001
【非特許文献３】松橋、草野  他  日本薬学会  第121年会要旨集第４分冊、ｐ54
【非特許文献４】Takahira M., Bio. Pharm. Bull., 21, 823-828(1998)
【非特許文献５】森脇、田口  フレグランスジャーナル２００７年１２月号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、ＶＥＧＦ産生促進作用を有し、医薬品若しくは化粧品、又はそれらの素材となり得る、ＶＥＧＦ産生促進剤、髪質改善剤、及び皮膚外用剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、ＶＥＧＦの産生を促進する物質について、研究を重ねた結果、特定のシクロアルタン型トリテルペノイド配糖体に優れたＶＥＧＦ産生促進作用があることを見出した。
【００１３】
すなわち、本発明は、以下の１）〜３）に係るものである。
１）下記一般式（１）：
【００１４】
【化１】
0006257876.tif 000002
【００１５】
〔式中、Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示し、Ｄ環部分が下記のａ〜ｆ；
【００１６】
【化２】
0006257876.tif 000003
【００１７】
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2は水素原子又はアセチル基を示し、Ｒ3は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ4は水素原子又は水酸基を示し、Ａｃはアセチル基を示す。）を示す。〕
で表されるシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを有効成分とするＶＥＧＦ産生促進剤。
２）下記一般式（１）：
【００１８】
【化３】
0006257876.tif 000004
【００１９】
〔式中、Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示し、Ｄ環部分が下記のａ〜ｆ；
【００２０】
【化４】
0006257876.tif 000005
【００２１】
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2は水素原子又はアセチル基を示し、Ｒ3は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ4は水素原子又は水酸基を示し、Ａｃはアセチル基を示す。）を示す。〕
で表されるシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを有効成分とする髪質改善剤。
３）下記一般式（１）：
【００２２】
【化５】
0006257876.tif 000006
【００２３】
〔式中、Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示し、Ｄ環部分が下記のａ〜ｆ；
【００２４】
【化６】
0006257876.tif 000007
【００２５】
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2は水素原子又はアセチル基を示し、Ｒ3は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ4は水素原子又は水酸基を示し、Ａｃはアセチル基を示す。）を示す。〕
で表されるシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを含有する皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００２６】
本発明によれば、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、創傷治癒、肌色改善、養毛・育毛、毛髪のハリコシの改善等に有用な医薬品、医薬部外品、化粧料等を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンは、ステロイド骨格のＤ環の種類により、以下の６つのタイプに分類される。
【００２８】
【化７】
0006257876.tif 000008
【００２９】
〔式中、Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示し、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2は水素原子又はアセチル基を示し、Ｒ3は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ4は水素原子又は水酸基を示し、Ａｃはアセチル基を示す。）を示す。〕
このうち、ＶＥＧＦ産生促進の点から、好適なシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンとしては、ヒドロセングマノールタイプ、シミゲノールタイプ及び１６，２３−ジケトタイプのものが好ましい。
Ｒはキシロース残基又はアラビノース残基を示すが、キシロース残基が好ましい。また、立体異性は、α−配位、β−配位の何れでも良いが、β−配位であるのが好ましい。
【００３０】
本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンとしては、より好適には、下記式で示される、7,8-Didehydro-24-O-acetylhydroshengmanol-3-O-β-xyloside（7,8-ジデヒドロ-24-O-アセチルヒドロセングマノール-3-O-β-キシロシド）、24-epi-7,8-Didehydrocimigenol-3-xyloside（24-エピ-7,8-ジデヒドロシミゲノール-3-キシロシド）又はCimicifugoside H-1（シミシフゴシドH-1）が挙げられる。
【００３１】
【化７】
0006257876.tif 000009
【００３２】
本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンは、植物体から抽出・精製することにより取得することができる。植物体からの抽出・精製は、例えば、キンポウゲ科サラシナショウマ属の植物、具体的には、Cimicifuga simplex（サラシナショウマ)、C. japonica（イヌショウマ、C. acerina（オオバショウマ）、C. dahurica（北升麻、フブキショウマ）、C. ｈeraclefolia（関升麻、オオミツバショウマ）、C. ｆoetida（西升麻、コウライショウマ）、Cimicifuga racemosa (ブラックコホシュ、アメリカショウマ）等の根から溶剤抽出して得られる抽出物を、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を用いて分離・精製することにより得ることができる。以下に、上記7,8-Didehydro-24-O-acetylhydroshengmanol-3-O-β-xyloside、24-epi-7,8-Didehydrocimigenol-3-xyloside及びCimicifugoside H-1の単離例を示す。
【００３３】
１）サラシナショウマ根（Cimicifuga simplex）細断物に99.5％エタノールを加え、攪拌抽出し、ろ過してサラシナショウマ抽出液を得る。
２）１）で得られたサラシナショウマ抽出液を、溶媒留去したのち、得られた固形物を酢酸エチル−水で液−液分配し、酢酸エチル層を濃縮して固形物を得る。
３）２）で得られた固形分をシリカゲルカラムに供し、ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒、続いてメタノールで溶出し、３画分を得る。
４）３）で得られたメタノール溶出画分を再度シリカゲルカラムに供し、クロロホルム−メタノール混合溶媒で溶出し、１２画分を得る。
５）４）で得られた１２画分を更にODS-HPLC（アセトニトリル−水混合溶媒）で分画し、24-epi-7,8-Didehydrocimigenol-3-xyloside、Cimicifugoside H-1、及び7,8-DidehydrO-24-O-acetylhydroshengmanol-3-O-β-xylosideを単離する。
【００３４】
尚、斯かる抽出・分画によれば、シクロアルタン型トリテルペノイドサポニンが、単独のみならず、数種の混合物として取得される場合があるが、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤においては、これらの何れをも用いることができる。
【００３５】
得られたシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンは、そのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、あるいは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、水・エタノール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００３６】
本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンは、後記実施例に示すように、ヒト表皮角化細胞におけるＶＥＧＦの産生を促進する作用を有することから、内皮細胞の生存能力の向上、血管新生促進等の効果を発揮し（Heidemarie Rossiter, Caterina Barresi, Johannes Pammer, Michael Rendl, Jody Haigh, Erwin F. Wagner, and Erwin Tschachler. Loss of Vascular Endothelial Growth Factor A Activity in Murine Epidermal Keratinocytes Delays Wound Healing and Inhibits Tumor Formation, Cancer research 64, 3508-3516, 2004）、創傷治癒、肌色改善、養毛・育毛、毛髪のハリコシ改善等に有用であると考えられる。
従って、本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンは、ＶＥＧＦ産生促進剤又は髪質改善剤として使用することができ、また、ＶＥＧＦ産生促進剤又は髪質改善剤を製造するために使用することができる。当該ＶＥＧＦ産生促進剤は、創傷治癒、肌色改善、養毛・育毛、毛髪のハリコシ改善等の効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品又は化粧料であってもよく、当該医薬品等に配合するための素材であってもよい。また、本発明において、「髪質改善」とは、毛髮の質を硬く及び／又は強くし、ハリやコシを付与する効果を意味するものであり、当該髪質改善剤は、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品又は化粧料であってもよく、当該医薬品等に配合するための素材であってもよい。
また、上記化粧品には、ＶＥＧＦの産生促進、肌色改善、養毛・育毛、髪質改善等をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した化粧料が包含される。
【００３７】
本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを含有する上記医薬品の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は静脈内注射、筋肉注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。これら医薬製剤として用いる場合の該製剤中の本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンの含有量は、一般的に０．００００１〜５０質量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜１０質量％とすることが好ましい。
上記医薬品の、成人１人当たりの１日の投与量は、シクロアルタン型トリテルペノイドサポニンとして、例えば０．０００３〜３０００ｍｇとすることが好ましく、０．００３〜３００ｍｇであることがより好ましい。
【００３９】
また、本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを含有する医薬部外品や化粧料としては、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料、頭皮頭髪用化粧料とすることができ、使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供することができる。このような種々の剤型の医薬部外品や化粧料は、本発明のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンを単独で、又は医薬部外品、皮膚化粧料、頭皮頭髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、植物抽出物、アルコール類等を適宜組み合わせることにより調製することができる。当該医薬部外品、化粧料中のシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンの含有量は、一般的に０．００００１〜１００質量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜７０質量％とすることが好ましい。
【実施例】
【００４０】
実施例１  サラシナショウマ根からのシクロアルタン型トリテルペノイドサポニンの調製
サラシナショウマ根（Cimicifuga simplex, 中国陝西省産）細断物70ｇに99.5％エタノール700mLを加え、室温で10日間抽出、ろ過して抽出液を得た。これを減圧濃縮し、溶媒を留去したのち、得られた固形物2.35gを酢酸エチル−水で液−液分配し、酢酸エチル層を濃縮して固形物1.86ｇを得た。これをシリカゲルカラムに供し、ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒、続いてメタノールで溶出し、3画分に取りまとめた。メタノール溶出画分(画分３、1.39g)のうち、0.9ｇを再度シリカゲルカラムに供し、クロロホルム−メタノール混合溶媒で溶出し、12画分（3a〜3ｌ）を得た。画分3e（0.1ｇ）をODS-HPLC（アセトニトリル−水混合溶媒）で分画し、8画分(3e-1〜8)にとりまとめ、画分3e-6中の成分を24-epi-7,8-Didehydrocimigenol-3-xyloside（8.6ｍｇ）として単離した。
同様に、画分3ｆ（0.17ｇ）をODS−HPLC(アセトニトリル−水混合溶媒)で分画し、10画分（3ｆ-1〜10）に取りまとめた。このうち、画分3ｆ-2をCimicifugoside H-1（7.9ｍｇ）、画分3ｆ-8を7,8-Didehydro-24-O-acetylhydroshengmanol-3-O-β-xyloside（5.5mg）として単離した。
【００４１】
実施例２  VEGFの産生に及ぼす作用
（１）材料および方法
試験には正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞(クラボウ：凍結NHEK(F) Lot.No.061130-902)を用いた。１穴あたり2×104cells/mLになるように細胞を6穴マイクロプレート3枚に播種した。培養にはDefined keratinocyte-SFM(SFM培地、ギブコ)を用い、2％CO2、37℃の条件化で培養した。細胞密度が50〜60％コンフルエントに達した後、培地を添加剤不含のDefined keratinocyte-SFM培地(SFM(−)培地)に交換した。細胞をSFM(-)培地に24時間馴化させた後、培地を実施例で取得したトリテルペノイドサポニンを任意の濃度で添加したSFM(−)培地に交換し試験を開始した。
なお、陰性コントロールとしては化合物無添加のSFM(−)培地を用いた。試験開始から16時間後、培地を回収し、培養上清中に分泌されたVEGFの量をELISAキット（Ｒ＆Ｄシステムズ）により定量した。コントロールにおけるVEGF産生量を1とし、これに対する相対値で評価を行った。
【００４２】
（２）結果
評価結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
0006257876.tif 000010
【００４４】
表１より、いずれの化合物も優れたVEGF産生促進効果を有することが示された。