(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の分析物を検知するための側方流動デバイスであって、該デバイスは：
サンプル圧縮機と；
試験領域と試験領域の上流にある転換領域とを含む試験ストリップであって、転換領域は、試験ストリップ上の側方流動を妨げる、試験ストリップと；
分析物及び標識のための第１の結合パートナーを含む接合体と；
分析物のための第２の結合パートナーと；
サンプルが側方流動デバイスに塗布されるサンプル塗布領域であって、サンプル塗布領域は、ｉ）検出領域の上流にある試験ストリップの上；ｉｉ）サンプル圧縮機の上；及びｉｉｉ）サンプルの採取のためのサンプル採取部を含むサンプル採取装置の上から成る群から選択された場所に位置する、サンプル塗布領域と
を含み；
接合体、第２の結合パートナー、及び接合体と第２の結合パートナーの両方から成る群から選択される構成要素は、側方流動デバイスの使用前に試験ストリップ上に置かれず；及び
サンプル圧縮機は、サンプル圧縮機の上に流れを転換し、且つ、転換領域の端部にて試験ストリップへ流れを戻すために、転換領域の上にブリッジを作成する
ことを特徴とする側方流動デバイス。
【請求項２】
サンプル塗布領域がサンプル採取装置上にある場合、サンプル採取装置は、サンプル圧縮機と、垂直な堆積物中の試験ストリップとの間に置かれる、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項３】
転換領域は、試験ストリップ上の横方向の流動を止める又は遅延する、物理的障壁を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項４】
物理的障壁はカプセル化した構成要素を含み、物理的障壁は溶出媒体の塗布後に溶解する、ことを特徴とする請求項３に記載の側方流動デバイス。
【請求項５】
転換領域は、試験ストリップ上の横方向の流動を止める又は遅延する、化学的障壁を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項６】
転換領域は、試験ストリップ上の横方向の流動を止める間隙を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項７】
サンプル圧縮機はパッドを含み、接合体又は第２の結合パートナーは側方流動デバイスの使用前にパッド上に置かれる、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項８】
サンプル圧縮機は、パッド上に置かれた第１の対照結合パートナーと、試験ストリップの対照領域において固定される第２の対照結合パートナーとを備える、パッドを含み、第１の対照結合パートナーは、第２の対照結合パートナーのための結合パートナーである、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項９】
側方流動デバイスは、陽性の結果が、分析物、第１の結合パートナー、及び第２の結合パートナーの間の複合物の形成を介して、試験領域における分析物の捕捉によってのみ達成されるように、形成される、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項１０】
試験領域は、特異的に分析物に結合する分子を含まない、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項１１】
第２の結合パートナーはタグを含み、試験領域はタグのための固定された結合パートナーを含む、ことを特徴とする請求項１に記載の側方流動デバイス。
【請求項１２】
試験ストリップとサンプル圧縮機とを含む側方流動デバイス上でサンプルのアッセイを実行する方法であって、該方法は：
ａ）側方流動デバイスの上にサンプルを置く工程；
ｂ）試験ストリップ上に転換領域を含むことにより試験ストリップ上の側方流動を妨げる工程；
ｃ）サンプル圧縮機を使用してデバイスに圧力を加えることにより、妨げられた流動をサンプル圧縮機へと転換する工程；及び
ｄ）転換領域の端部で試験ストリップに流動を戻す工程
を含む方法。
【請求項１３】
工程ａ）において、サンプルは、ｉ）検出領域の上流にある試験ストリップの上；ｉｉ）サンプル圧縮機の上；及び、ｉｉｉ）サンプルの採取のためのサンプル採取部を含むサンプル採取装置の上から成る群から選択される場所に置かれるサンプル塗布領域上に配される、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
サンプルがサンプル採取装置上に配される場合、サンプル採取装置は、サンプル圧縮機と、垂直な堆積物中の試験ストリップとの間に置かれる、ことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
工程ａ）は、垂直な堆積物上の分析物のための結合パートナーによりパッドを配する工程を更に含み、工程ｄ）において、結合パートナーの少なくとも一部は試験ストリップに移される、ことを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
転換領域は、試験ストリップ上の横方向の流動を止める又は遅延する、物理的障壁を含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
物的的障壁が少なくとも１つのカプセル化した構成要素を含み、カプセル化した構成要素を放出するため物理的障壁を溶解する工程を更に含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
転換領域は、試験ストリップ上の横方向の流動を止める間隙を含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
サンプル圧縮機は、第１の結合パートナー、第２の結合パートナー、及び第１の結合パートナーと第２の結合パートナーの両方から成る群から選択された構成要素を含む、ことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
サンプル中の分析物を検知するための側方流動デバイスであって、該デバイスは：
サンプル圧縮機と；
サンプルの採取のためのサンプル採取部を含むサンプル採取装置と；
サンプル塗布領域、試験領域、及び転換領域を含む試験ストリップであって、転換領域は、試験ストリップ上の側方流動を妨げる、試験ストリップと；
分析物及び標識のための第１の結合パートナーを含む接合体と；
分析物のための第２の結合パートナーと
を含み；
接合体、第２の結合パートナー、及び接合体と第２の結合パートナーの両方から成る群から選択される構成要素は、側方流動デバイスの使用前に試験ストリップ上に置かれず；
サンプル圧縮機、サンプル採取装置、及び試験ストリップは、圧縮によって試験ストリップにサンプルを塗布するために垂直な堆積物を形成し；
サンプル圧縮機は、転換領域の上にブリッジを作成すること、サンプル圧縮機の上に流動を転換すること、及び転換領域の端部にて流動を試験ストリップへと戻すことにより、流動を再開し；及び
サンプル採取装置は、サンプル圧縮機と、垂直な堆積物中の試験ストリップとの間に置かれる
ことを特徴とする側方流動デバイス。
【請求項２１】
試験ストリップを含む側方流動デバイス上でサンプルのアッセイを実行する方法であって、該方法は：
ａ）サンプル圧縮機と試験ストリップのサンプル塗布領域との間に、垂直な堆積物中にサンプルを備えるサンプル採取部を含むサンプル採取装置を配する工程；
ｂ）試験ストリップ上に転換領域を含むことにより試験ストリップ上の側方流動を妨げる工程；
ｃ）サンプル圧縮機を使用して垂直な堆積物に圧力を加えることにより、妨げられた流動をサンプル圧縮機へと転換する工程；及び
ｄ）転換領域の端部で試験ストリップに流動を戻す工程
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願への参照＞
本出願は、以下の係属中の特許出願からの優先権を主張するものである：
２０１３年３月７日出願の米国特許出願第１３／７８８，６１６号、表題「ＭＵＬＴＩＰＬＡＮＡＲ  ＬＡＴＥＲＡＬ  ＦＬＯＷ  ＡＳＳＡＹ  ＷＩＴＨ  ＤＩＶＥＲＴＩＮＧ  ＺＯＮＥ」；
２０１３年３月８日出願の米国特許出願第１３／７９０，１２５号、表題「ＭＥＴＨＯＤ  ＡＮＤ  ＤＥＶＩＣＥ  ＦＯＲ  ＣＯＭＢＩＮＥＤ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＶＩＲＡＬ  ＡＮＤ  ＢＡＣＴＥＲＩＡＬ  ＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳ」；
２０１３年３月８日出願の米国特許出願第１３／７９０，１６０号、表題「ＭＥＴＨＯＤ  ＡＮＤ  ＤＥＶＩＣＥ  ＦＯＲ  ＣＯＭＢＩＮＥＤ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＶＩＲＡＬ  ＡＮＤ  ＢＡＣＴＥＲＩＡＬ  ＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳ」。
【背景技術】
【０００２】
＜発明の分野＞
本発明はポイント・オブ・ケア検査の分野に関する。より具体的には、本発明は側方流動アッセイに関する。
【０００３】
＜関連技術の詳細＞
側方流動アッセイは、１つのアッセイストリップで様々な試薬と製造工程を組み合わせて、それにより標的分子の検出のための高感度且つ迅速な手段を提供する、アッセイの一部（ｓｕｂｓｅｔ）である。抗体に基づいた側方流動イムノアッセイは、多様な標的分析物に利用可能であり、サンドイッチ試験又は競合試験の原理のために設計され得る。一般的に、複数のエピトープを含む高分子量の分析物は、サンドイッチ形式で分析されるが、１つのエピトープのみを表す小分子は、競合アッセイによって検出される。最初の試験は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のために行なわれた。今日では、排卵をモニタリングするための、感染症の病原体を検出するための、薬物の乱用を分析するための、及び、人間生理学にとって重要な他の分析物を測定するための、商業上利用可能な試験が存在する。獣医試験、環境試験、および、製品のモニタリングのための商品も導入されている。
【０００４】
先行技術では、これらのアッセイにおける流動性の（ｍｏｂｉｌｅ）標識化された受容体（トレーサー又は本明細書では試験接合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）としても知られる）は、試験ストリップ上で乾燥されるか、（試験ストリップへの塗布の前にサンプルと予め混合可能となるように）外部の溶出液中に含有されるか、又は、溶出媒体の一部に含まれる。
【０００５】
１９９４年２月９日に公開された欧州特許公報ＥＰ０５８２２３１、表題「ＳＯＬＩＤ  ＰＨＡＳＥ  ＡＳＳＡＹ」は、対象の分析物を含み得るサンプルに接触する第１の部分を備えた多孔性の固体支持部を用いるアッセイを開示している。サンプルは固体支持部を通って流れ、分析物は、もし存在する場合、固体支持部上で可逆的に固定されたトレーサーに組み合わせる。サンプルとトレーサーは、最初は毛細管流動を介して（例えば、垂直に）第１の部分に対して垂直な方向に移動する。その後、トレーサーと分析物は、サンドイッチイムノアッセイ形式で分析物に結合する、固定化された結合剤を含む第２の部分に対して、毛細管流動によって材料を通って移動し続ける。第２の部分への移動は、トレーサーとサンプルが最初に移動する方向（例えば、側方に）に垂直な方角で生じる。サンプルとトレーサーの全ての移動は、デバイスを通る毛細管流動によって生じる。移動は垂直且つ側方に生じるが、流路は１つしか存在しない。サンプル、トレーサー、及び固定化された結合剤は全て同じ流路にある。
【０００６】
２００７年９月２７日に公開された米国特許公開第２００７／０２２４７０１号、表題「ＣＯＭＢＩＮＡＴＩＯＮ  ＶＥＲＴＩＣＡＬ  ＡＮＤ  ＬＡＴＥＲＡＬ  ＦＬＯＷ  ＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹ  ＤＥＶＩＣＥ」は、イムノアッセイデバイス、キット、及び、垂直な流動と側方の流動の組み合わせを用いて液体サンプル中の分析物の存在又は不在を測定する方法を開示している。デバイスは、結合剤の支持媒体と垂直に並置される標識化した受容体を含む、トレーサーパッドを備える。この公報で開示されたデバイスは複数に区分されるが、ＥＰ０５８２２３１と同様に、流路は１つしかない。サンプル、標識化された受容体、及び、結合剤の支持媒体は全て、同じ流路にある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
１つの好ましい実施形態において、サンプル中の分析物を検出するための側方流動デバイスは、サンプル圧縮機と試験ストリップとを備える。試験ストリップは、試験領域と、試験領域の上流にある転換領域（ｄｉｖｅｒｔｉｎｇ  ｚｏｎｅ）とを備え、転換領域は、試験ストリップ上の側方流動を妨げる。側方流動デバイスはまた、分析物と標識のための第１の結合パートナーを含む接合体、並びに分析物のための第２の結合パートナーを備える。サンプルが側方流動デバイスに塗布されるサンプル塗布領域は、次のものから成る群から選択された場所に位置する：ｉ）検出領域の上流にある試験ストリップの上；ｉｉ）サンプル圧縮機の上；及び、ｉｉｉ）サンプルの採取のためのサンプル採取部を含むサンプル採取装置の上。接合体、第２の結合パートナー、及び接合体と第２の結合パートナーの両方から成る群から選択される構成要素は、側方流動デバイスの使用前に試験ストリップ上に置かれない。サンプル圧縮機は、サンプル圧縮機の上に流動を転換し、且つ、転換領域の端部にて試験ストリップへ流動を戻すために、転換領域の上にブリッジ（ｂｒｉｄｇｅ）を作成する。幾つかの好ましい実施形態において、転換領域は間隙を含む。他の好ましい実施形態において、転換領域は障壁を含む。
【０００８】
別の好ましい実施形態において、方法は、試験ストリップとサンプル圧縮機とを備える側方流動デバイス上で、サンプルのアッセイを実行する。サンプルは側方流動デバイスの上に置かれ、側方流動は、試験ストリップ上に転換領域を含むことにより試験ストリップ上で妨げられる。妨げられた流動は、サンプル圧縮機を使用してデバイスに圧力を加えることによりサンプル圧縮機に転換され、流動は、転換領域の端部にて試験ストリップに戻る。幾つかの好ましい実施形態において、サンプルは、次のものから成る群から選択される場所に置かれるサンプル塗布領域上に置かれる：ｉ）検出領域の上流にある試験ストリップの上；ｉｉ）サンプル圧縮機の上；及び、ｉｉｉ）サンプルの採取のためのサンプル採取部を含むサンプル採取装置の上。
【０００９】
別の好ましい実施形態において、サンプル採取装置上にサンプルを移し、且つ、分析物の結合パートナーを側方流動デバイス中のサンプル塗布領域に移すために、サンプル圧縮機は、試験ストリップのサンプル塗布領域にてサンプル採取装置に圧力を加える。分析物の結合パートナーの少なくとも１つは、側方流動デバイスの使用前に試験ストリップ上に、又は溶出する溶液の中には置かれない。１つの好ましい実施形態において、試験ストリップは、デバイスを通る流動をサンプル圧縮機に転換する、障壁、間隙、又は、溝などの、通行不能な転換領域を備える。試験ストリップは、試験ストリップ上で分析物へと明確に結合する分子がない、一般的な試験ストリップでもよい。サンプル圧縮機は、サンプル圧縮機上で分析物へと明確に結合する分子がない、一般的なサンプル圧縮機でもよい。側方流動デバイスは強化要素も備えてもよく、これは、試験領域中の検出信号を増強させるために、分析物サンドイッチに結合する。
【００１０】
本発明の１つの実施形態において、分析物を検出するための側方流動デバイスは、サンプル圧縮機、サンプル採取部を含むサンプル採取装置、サンプル塗布領域を含む試験ストリップ、転換領域、試験領域、及び、分析物とラベルのための第１の結合パートナーを備える接合体、並びに分析物のための第２の結合パートナーを備える。接合体、第２の結合パートナー、又は接合体と第２の結合パートナーの両方は、側方流動デバイスの使用前に試験ストリップに置かれない。サンプル圧縮機、サンプル採取装置、及び試験ストリップは、圧縮によって試験ストリップにサンプルを塗布するために垂直な堆積物を形成する。サンプル圧縮機は好ましくは、側方流動デバイスの使用前にパッド上に置かれる接合体及び／又は第２の結合パートナーを含む、パッド／フリースを備える。幾つかの実施形態において、側方流動デバイスは、サンプル圧縮機パッド上に置かれた第１の対照結合パートナーと、試験ストリップの対照領域において固定される第２の対照結合パートナーとを備え、第１の対照結合パートナーは、第２の対照結合パートナーのための結合パートナーである。側方流動デバイスは好ましくは、陽性の結果が、第１の結合パートナーと第２の結合パートナーへの分析物の結合による、試験領域中の分析物の分離によってのみ達成されるように、形成される。試験領域は好ましくは、明確に分析物に結合する分子を含まない。好ましくは、第２の結合パートナーはタグを含み、試験領域はタグのための固定された結合パートナーを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】側方流動デバイス中の試験ストリップとサンプル採取装置を示す。
【図２Ａ】本発明の実施形態におけるサンプル圧縮機を示す。
【図２Ｂ】本発明の実施形態における別のサンプル圧縮機を示す。
【図２Ｃ】本発明の実施形態におけるサンプル採取装置を示す。
【図３Ａ】本発明の実施形態における側方流動試験ストリップを示す。
【図３Ｂ】本発明の実施形態における、分析物、接合体、及び固定された結合パートナーを含む、完全なサンドイッチを示す。
【図３Ｃ】本発明の実施形態において、図３Ａの試験ストリップ、サンプル採取装置、及びサンプル圧縮機を含む側方流動デバイスを示す。
【図４Ａ】本発明の実施形態における別の側方流動試験ストリップを示す。
【図４Ｂ】本発明の実施形態における、分析物、接合体、及び、タグ付けされた第２の結合パートナーを含む完全なサンドイッチを示す。
【図４Ｃ】本発明の実施形態における、図４Ａの試験ストリップ、サンプル採取装置、及びサンプル圧縮機を含む側方流動デバイスを示す。
【図５Ａ】本発明の実施形態における、また別の側方流動試験ストリップを示す。
【図５Ｂ】本発明の別の実施形態における、図５Ａの試験ストリップ、サンプル採取装置、及びサンプル圧縮機を含む側方流動デバイスを示す。
【図６Ａ】本発明の実施形態における別の側方流動試験ストリップを示す。
【図６Ｂ】本発明の別の実施形態における、図６Ａの試験ストリップ、サンプル採取装置、及びサンプル圧縮機を含む側方流動デバイスを示す。
【図７Ａ】試験領域が本発明の実施形態のサンプル塗布領域にあるという点を除いて、図３Ｃのデバイスに類似するデバイスを示す。
【図７Ｂ】試験領域が本発明の実施形態のサンプル塗布領域にあるという点を除いて、図４Ｃのデバイスに類似するデバイスを示す。
【図７Ｃ】試験領域が本発明の実施形態のサンプル塗布領域にあるという点を除いて、図５Ｂのデバイスに類似するデバイスを示す。
【図７Ｄ】試験領域が本発明の実施形態のサンプル塗布領域にあるという点を除いて、図６Ｂのデバイスに類似するデバイスを示す。
【図８Ａ】本発明の実施形態における側方流動デバイスを示す。
【図８Ｂ】本発明の実施形態における別の側方流動デバイスを示す。
【図９】本発明の実施形態における垂直な堆積物を示す。
【図１０】試験領域における先行技術の金の接合体サンドイッチ（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｓａｎｄｗｉｃｈ）を示す。
【図１１】本発明の実施形態における、試験領域での信号の強化を含むサンドイッチを示す。
【図１２】本発明の実施形態における、試験領域での堆積物を含むサンドイッチを示す。
【図１３】本発明の実施形態における、信号強化要素を備えた側方流動デバイスの概略的な分解立体図を示す。
【図１４】本発明の別の実施形態における側方流動デバイスを示す。
【図１５Ａ】本発明の実施形態において形成される堆積物を示す。
【図１５Ｂ】試験領域で固定化される図１５Ａの堆積物を示す。
【図１５Ｃ】対照領域で形成される複合物（ｃｏｍｐｌｅｘ）を示す。
【図１６】本発明の別の実施形態における側方流動デバイスを示す。
【図１７Ａ】本発明の実施形態において形成される堆積物を示す。
【図１７Ｂ】試験領域で固定された図１７Ａの堆積物を示す。
【図１８】本発明の別の実施形態における側方流動デバイスを示す。
【図１９Ａ】本発明の実施形態において形成される堆積物を示す。
【図１９Ｂ】試験領域で固定された図１９Ａの堆積物を示す。
【図２０Ａ】本発明の実施形態における側方流動試験ストリップを示す。
【図２０Ｂ】分析物と、標識化された接合体と、第２のタグ付けされた流動性の結合パートナーとの間で、好ましくは、試験線に到達する前に形成される「完全な」サンドイッチを示す。
【図２１Ａ】強化要素を備えた側方流動試験ストリップの別の実施形態を示す。
【図２１Ｂ】分析物の存在下で試験線に積み重ねられた複合物を示す。
【図２１Ｃ】追加の強化要素を備えた、試験線で積み重ねられた複合物を示す。
【図２２Ａ】本発明の実施形態における増幅源のカプセル化を示す。
【図２２Ｂ】本発明の実施形態における銀の顕色剤のカプセル化を示す。
【図２２Ｃ】本発明の実施形態における銀の塩と銀の顕色剤のカプセル化を示す。
【図２３Ａ】本発明の実施形態における第１の接合体のカプセル化を示す。
【図２３Ｂ】本発明の実施形態における第２の接合体（堆積する接合体）のカプセル化を示す。
【図２４Ａ】本発明の別の実施形態における、障壁を備える側方流動デバイスを示す。
【図２４Ｂ】圧縮後の図２４Ａの側方流動デバイスを示す。
【図２５Ａ】本発明の別の実施形態における、間隙を備える側方流動デバイスを示す。
【図２５Ｂ】圧縮後の図２５Ａの側方流動デバイスを示す。
【図２６Ａ】本発明の実施形態における、転換領域とサンプル圧縮機とを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図２６Ｂ】図２６Ａの側方流動デバイスの斜視図である。
【図２７Ａ】本発明の実施形態における、転換領域、サンプル圧縮機、仕切り紙を含むサンプル採取デバイス、及びクロマトグラフィ試験ストリップを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図２７Ｂ】図２７Ａの実施形態における試験ストリップのセクションの上から見下ろした図を示す。
【図２７Ｃ】図２７Ｂの実施形態において仕切り紙がサンプル塗布領域の上に置かれた後の、試験ストリップのセクションの上から見下ろした図を示す。
【図２８】本発明の実施形態における、転換領域、サンプル圧縮機、仕切り紙を含むサンプル採取デバイス、及びクロマトグラフィ試験ストリップを備えた側方流動デバイスを示す。
【図２９Ａ】本発明の別の実施形態における、障壁を備える側方流動デバイスを示す。
【図２９Ｂ】圧縮後の図２９Ａの側方流動デバイスを示す。
【図３０Ａ】本発明の別の実施形態における、間隙を備える側方流動デバイスを示す。
【図３０Ｂ】圧縮後の図３０Ａの側方流動デバイスを示す。
【図３１Ａ】本発明の別の実施形態における、障壁を備える側方流動デバイスを示す。
【図３１Ｂ】圧縮後の図３１Ａの側方流動デバイスを示す。
【図３２Ａ】本発明の別の実施形態における、間隙を備える側方流動デバイスを示す。
【図３２Ｂ】圧縮後の図３２Ａの側方流動デバイスを示す。
【図３３Ａ】本発明の実施形態における、転換領域とサンプル圧縮機とを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図３３Ｂ】図３３Ａの側方流動デバイスの斜視図である。
【図３４Ａ】本発明の実施形態における、転換領域とサンプル圧縮機とを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図３４Ｂ】図３４Ａの側方流動デバイスの斜視図である。
【図３５Ａ】本発明の別の実施形態における、障壁を備える側方流動デバイスを示す。
【図３５Ｂ】圧縮後の図３５Ａの側方流動デバイスを示す。
【図３６Ａ】本発明の別の実施形態における、間隙を備える側方流動デバイスを示す。
【図３６Ｂ】圧縮後の図３６Ａの側方流動デバイスを示す。
【図３７Ａ】本発明の実施形態における、転換領域とサンプル圧縮機とを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図３７Ｂ】図３７Ａの側方流動デバイスの斜視図である。
【図３８Ａ】本発明の実施形態における、転換領域、サンプル圧縮機、セパレータ用紙を含むサンプル採取デバイス、及びクロマトグラフィ試験ストリップを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図３８Ｂ】図３８Ａの実施形態における試験ストリップのセクションの上から見下ろした図を示す。
【図３８Ｃ】図３８Ｂの実施形態においてセパレータ用紙がサンプル塗布領域の上に置かれた後の、試験ストリップのセクションの上から見下ろした図を示す。
【図３９】本発明の実施形態における、転換領域、サンプル圧縮機、セパレータ用紙を含むサンプル採取デバイス、及びクロマトグラフィ試験ストリップを備えた側方流動デバイスを示す。
【図４０Ａ】本発明の別の実施形態における、障壁を備える側方流動デバイスを示す。
【図４０Ｂ】圧縮後の図４０Ａの側方流動デバイスを示す。
【図４１Ａ】本発明の別の実施形態における、間隙を備える側方流動デバイスを示す。
【図４１Ｂ】圧縮後の図４１Ａの側方流動デバイスを示す。
【図４２Ａ】本発明の別の実施形態における、障壁を備える側方流動デバイスを示す。
【図４２Ｂ】圧縮後の図４２Ａの側方流動デバイスを示す。
【図４３Ａ】本発明の別の実施形態における、間隙を備える側方流動デバイスを示す。
【図４３Ｂ】圧縮後の図４３Ａの側方流動デバイスを示す。
【図４４Ａ】本発明の実施形態における、転換領域とサンプル圧縮機とを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図４４Ｂ】図４４Ａの側方流動デバイスの斜視図である。
【図４５Ａ】本発明の実施形態における、転換領域とサンプル圧縮機とを備えた側方流動デバイスの側面図を示す。
【図４５Ｂ】図４５Ａの側方流動デバイスの斜視図である。
【図４６Ａ】本発明の実施形態において、２重の試験ストリップを備える完全に開いたサンプル分析デバイスを示し、同様に、平面にあるサンプル圧縮機上の接合領域とサンプル塗布領域は試験ストリップから分離される。
【図４６Ｂ】閉じられたハウジングの一部を備えた図４６Ａのサンプル分析装置を示すが、接合領域は、デバイスの左側で視認可能なままである。
【図４６Ｃ】試験を開始した後の、図４６Ａのサンプル分析装置を示す。
【図４７Ａ】本発明の実施形態における、ＭｘＡとＣＲＰの両方に陰性の検査結果を示す。
【図４７Ｂ】本発明の実施形態における、ＭｘＡに陽性の検査結果を示す。
【図４７Ｃ】本発明の実施形態における、ＭｘＡに陽性の検査結果を示す。
【図４７Ｄ】本発明の実施形態における、ＣＲＰに陽性の検査結果を示す。
【図４７Ｅ】本発明の実施形態における、ＣＲＰに陽性の検査結果を示す。
【図４７Ｆ】本発明の実施形態における、同時感染を示す、ＣＲＰとＭｘＡの両方に陽性の検査結果を示す。
【図４８Ａ】本発明の実施形態における、２重の試験ストリップを備える完全に開いたサンプル分析デバイスを示し、及び、平面にあるサンプル圧縮機上の接合領域は試験ストリップから分離される。
【図４８Ｂ】閉じられたハウジングの一部を備えた図４８のサンプル分析デバイスを示すが、接合領域は、デバイスの左側で視認可能なままである。
【図４８Ｃ】試験を開始した後の、図４８Ａのサンプル分析デバイスを示す。
【図４９】本発明の実施形態における、サンプル分析デバイスを使用するサンプル分析のためのキットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、サンプル中の分析物（標的としても知られる）を検出するための方法とデバイスに関し、分析されるサンプルはクロマトグラフィ担体に塗布される。ポイント・オブ・ケア検査のための複数面の構造において、問題になっている分析物の結合パートナーの１つを包含する接合体は、好ましくは、異なる面から送達される。分析物を包含するサンプルはソースから直接採取され、好ましくは、従来の処理、溶出、希釈、又は濃縮を経たものではない。接合体は、本明細書では圧縮機デバイスとも称されるサンプル圧縮機によってサンプルと接触するように作られる。圧縮は、固定化された接合体とサンプルを組み合わせるのに役立つ。好適な実施形態において、接合体を含むサンプル圧縮機は、好ましくは、サンプル分析デバイスから完全に分離している。サンプル圧縮機は試験ストリップ上の流路の一部ではない。結果として、サンプル分析デバイス（好ましくは、試験ストリップ）への接合体とサンプルの移動は、流動や毛細管現象ではなく、圧力を用いて始められる。サンプル圧縮機を適用した後、ランニングバッファー（ｒｕｎｎｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ）を塗布する前に、必要に応じて時間差があってもよい。サンプル塗布と、流動による試験の開始との間の時間差は、分析物の安定性に依存して、２４時間又は数日までである。実施形態に依存して、サンプル圧縮機、サンプル採取装置、及び１以上の外部の結合パートナーの任意の組み合わせを含む非試験ストリップ構成要素は、好ましくは、流動が始まるまでは試験ストリップに結合したままである。
【００１３】
幾つかの好ましい実施形態において、サンプル分析デバイスは、サンプル分析デバイスを通る流動を別個の平面に転換する、障壁、間隙、又は溝などの転換領域を備える。これは、サンプル圧縮機上の試薬と、サンプル分析デバイス上の試薬とサンプルの両方との間の相互作用を増加させる。加えて、サンプル圧縮機が「ブリッジ」を作成するために下げられるまで、障壁は流動を完全に遮断し、ブリッジは、圧縮機がある平面に流動を向けさせ、その後、障壁が途切れるサンプル分析デバイスに流動を戻す。液体が圧縮機を通って流れなければならないため、液体は移動するにつれて圧縮機パッド上に置かれる任意の試薬（接合体を含む）を採取する。
【００１４】
本発明の側方流動デバイスは、抗体を用いるイムノアッセイであるか、又は、抗体を用いない代わりに他の結合パートナー（核酸、ナノ粒子、リガンド及び受容体を含むがこれらに限定されない）を用いる非イムノアッセイであってもよい。
【００１５】
本発明のさらなる記載の前に、そして、本発明が更に容易に理解されるように、本発明に関連する特定の用語が本明細書で定義される。
【００１６】
本明細書で使用されるような用語「圧縮」は、サンプル圧縮機のパッド上のサンプル及び任意の構成要素を試験ストリップに塗布することを指す。サンプルと負領域がサンプル採取装置上に、又はサンプル圧縮機のパッド上にある実施形態において、パッド、サンプル採取装置の採取部、及び、サンプル塗布領域は、その３つの圧縮が試験ストリップへのサンプルの塗布の間に生じるように、好ましくは全て圧縮可能である。
【００１７】
本明細書で使用されるような用語「圧力」とは、物理的な圧力、より具体的には、サンプル採取装置のサンプルに対して、次に、試験ストリップのサンプル塗布領域に対して、サンプル圧縮機によってかけられる物理的な圧力のことを指す。サンプル採取装置のない実施形態において、圧力はサンプル圧縮機とストリップの構成要素との間にかけられる。本明細書で使用されているように、側方流動デバイスの機械的なバイアス又はユーザーによって供給される圧力は、サンプル圧縮機のパッド、サンプル採取装置の採取部、及び、試験ストリップのサンプル塗布領域を物理的に接触させることによって、サンプル圧縮機のパッド上のサンプルと任意の構成要素を試験ストリップに移動させる。この移動は好ましくは、垂直流動によっては生じない。他の実施形態において、圧力は、（接合試薬、対照試薬、及び／又はサンプル塗布領域の何れか又は全てを含み得る）サンプル圧縮機のパッド及び試験ストリップを物理的に接触させることにより、サンプル圧縮機のパッド上のサンプルと任意の構成要素を試験ストリップに移動させる。この移動は好ましくは、垂直流動によっては生じない。
【００１８】
本明細書で使用されるような用語「垂直の」と「垂直に」は、パッド又は媒体のような、デバイス中で利用される要素の長さと幅の寸法に対立するものとして、厚さ又は深さと平行な方向を指す。
【００１９】
本明細書で使用されるような用語「側方の」と「側方に」は、パッドと媒体のような、デバイス中で利用される要素の幅と深さの寸法に対立するものとして、長さと平行な方向を指す。
【００２０】
幾つかの実施形態において、試験ストリップの要素の多くはほぼ平面であり、垂直の寸法よりも大きな側方の寸法を有している。しかしながら、互いに対するこれらの寸法の大きさは、本発明の精神の範囲内で変更されてもよい。一般的に、「垂直な」、「垂直に」、「側方の」、及び、「側方に」との用語は、デバイスの要素の並置又は配向を指す。垂直に並置された要素について、このような要素の平面に垂直であり且つ交差する線は、他の垂直に並置される要素の平面に対してもほぼ垂直であり且つ交差する。
【００２１】
本明細書で使用されるような用語「流路」は、流動デバイスの使用中の該デバイス内の毛細管流動の経路を指す。従来の側方流動デバイス内の流路はデバイスの長さに沿って側方にある。本発明の好ましい実施形態において、側方流路は、転換領域によってサンプル圧縮機へと送達され、その後、転換領域の端部にて試験ストリップ上に戻される。
【００２２】
本明細書で使用されるような用語「標識」は、検知可能且つ好ましくは定量化可能な信号を提供するために使用される、蛍光タグなどの任意の原子又は分子を指す。標識の検知方法は、限定されないが、可視検知、蛍光、化学発光、放射能、比色法、重量測定、Ｘ線回折、Ｘ線による吸収、磁性、及び酵素活性を含む。可視スペクトル試験領域は、スペクトロメーターによって解釈されることで、定量化された試験結果をもたらしてもよい。
【００２３】
本明細書で使用されるような用語「インサイツの溶解（ｉｎ    ｓｉｔｕ    ｌｙｓｉｓ）」は、溶解動作が別の工程として行なわれないように、クロマトグラフィ試験ストリップ又は他の側方流動イムノアッセイデバイスなどのポイント・オブ・ケア検査デバイスに溶解剤を組み込むための技術を指す。
【００２４】
本明細書で使用されるような用語「領域」は、試験ストリップの任意の部分を指す。
領域の境界は、好ましくは、横方向に垂直な平面である。用語「領域」は用語「線」を包含し、「線」は幅よりもかなり小さな横方向の長さを有する領域を指す。
【００２５】
本明細書で定義されるような用語「カプセル化」及び「マイクロカプセル化」は、カプセルの内部にあるように、封入物中のアッセイの試薬又は構成要素を一時的に／非恒久的に包装する又は包むことを意味する。封入物は、適切な時間まで周辺環境から試薬又は構成要素を保護する。その後、材料は、破裂、溶解、融解、又は拡散を含む多様な手段によって、封入物壁を通って流出する。マイクロカプセル化において、封入物は１ミクロンから数ミリメートルまでの大きさで変動する。本明細書で使用されるような用語「カプセル化した」は、カプセル化又はマイクロカプセル化を受けたアッセイ構成要素又は試薬を指す。
【００２６】
本明細書で使用されるような用語「障壁」は、流動を妨害、遮断、又は妨げる物理構造又は化学的障壁を指す。障壁は代替的に、他の試薬（例えば銀又は堆積する試薬）の、更に遅い（遅延した）放出を可能にするために半透過性であってもよい。幾つかの実施形態において、障壁は、セファデックス、セファロース、又は酢酸セルロースなどの不活性の材料である。障壁は代替的に、天然の化学物質（例えば、カルシウム塩（例えば、ＣａＣｌ２又はＣａＳｏ４）、又は乾燥材に使用されるシリカゲルを含むがこれらに限定されない、吸湿材）であってもよい。乾燥剤の吸収能力は限定的であり（及び、異なる量を埋め込むことにより制御可能であり）、一旦その限界を超えると、液体はそれらの上に（又はそれらを通って）移動することができる。ヒドロゲルは別の例である。障壁は代替的に、水性のランニングバッファーを「受けつけない」、天然の疎水性であってもよい。本明細書に記載される側方流動デバイスにおいて、障壁は、側方平面で流動を遮断して、別の平面に転換させる。幾つかの好ましい実施形態において、障壁は、同じ平面で流動を妨げる不浸透性の膜である。他の好ましい実施形態において、流動を妨げる障壁は、２つの流動の流速を異なるものにする「半透過性」である。更にゆっくりとした流路は、時間が遅延した様式で新たな試薬を送達し得る。
【００２７】
本明細書で使用されるような用語「間隙」又は「溝」は、流動を妨害、遮断、又は妨げる開口部、亀裂、又は穴を指す。本明細書に記載される側方流動デバイスにおいて、間隙又は溝は、側方平面で流動を止めて、別の平面に転換させる。間隙又は溝の深さは、流動を完全に止める又は遮断するのに十分な深さである。
【００２８】
本発明の実施形態は、検出される分析物（標的）が試験ストリップの試験領域で固定化された結合パートナーに直接結合しない場合のアッセイを含む。その代わりに、分析物は好ましくは、ストリップ上の他の領域（又は、幾つかの実施形態のバッファー内）の１つ以上の分析物結合パートナーと相互作用する。分析物結合パートナーの少なくとも１つは、試験領域中の第２の固定化されたタグを備えた複合物を形成する第１のタグを含む。他の実施形態において、分析物は、試験ストリップの試験領域における固定された結合パートナーに直接結合する。
【００２９】
好ましい実施形態において、対照領域の結合パートナーはサンプル圧縮機に含まれる。この設計によって、サンプル圧縮機上の接合体領域が試験ストリップと接触するように適切に圧縮且つ製造されていない場合、いかなる対照領域もランニングバッファーの適切な流動によってさえも進行しない。したがって、陰性と陽性の試験サンプルの両方を含む対照領域が現れると、試験における手順制御が正しいことが示される。
【００３０】
本発明の幾つかの実施形態において、側方流動が始まると、試験ストリップはもはや、サンプル圧縮機とサンプル採取装置に圧縮接触していない。しかしながら、本発明の他の実施形態において、垂直な堆積物は、サンプル圧縮機とサンプル採取装置から試験ストリップへの移動を最大にするために、側方流動の間に維持される。また他の実施形態において、試験ストリップへのサンプルの塗布後に、サンプル採取装置が垂直な堆積物から取り除かれるが、サンプル圧縮機から試験ストリップへの移動を最大にするために、サンプル圧縮機は側方流動中に試験ストリップに接触した状態で維持される。転換領域を持つ実施形態において、側方流動が始まった時に試験ストリップはサンプル圧縮機との圧縮接触状態にあり、サンプル圧縮機は転換領域上にブリッジを作成する。
【００３１】
本発明は、例えば、病原体、酵素、免疫メディエーター、核酸、タンパク質、糖タンパク質、リポ多糖類、タンパク質付加体、腫瘍及び心臓のマーカー、及び／又は、限定されないが、ハプテンを含む低分子量化合物などの分析物の検出に高感度且つ迅速な方法を提供する。方法とデバイスは、ヒト及び動物（例えば、ペット又は家畜動物）の診断に適している。検出は、分析物の直接的な検出、及び／又は、試験される流体サンプル中に存在する分析物に対する抗体の検出を含んでもよい。好ましくは、方法は、複数の分析物の平行な測定を含む。病原体は、好ましくは、細菌、菌類（例えば、酵母菌又はカビ）、或いは寄生虫（例えば、アメーバ又は線虫）のような、ウイルス或いは微生物から選択される。免疫メディエーターは炎症カスケードの一部であり、限定されないが、抗体、増殖因子、補体、サイトカイン、リンホカイン、ケモキネス、インターフェロン及びインターフェロン誘導体、Ｃ反応性タンパク質、カルシトニン、アミロイド、接着分子、抗体、及び化学誘引成分を含む。低分子量化合物は、薬物又は化学分子又は複合物、及び、薬物又は化学分子によって形成された代謝物を含んでもよい。
【００３２】
検出は、標的（例えば、病原体）の直接的な検出、及び／又は、例えば、試験される流体サンプル中に存在する病原体などの標的に対する抗体の検出を含んでもよい。好ましくは、方法は、複数の標的の平行な測定を含む。
【００３３】
代替的に、所望の分析物は低分子量化合物であってもよい。好ましい実施形態において、検出される分析物は、ヘロイン又はメタンフェタミンなどの薬物分子である。他の好ましい実施形態において、低分子量化合物はハプテンなどの小分子である。
【００３４】
本発明は、複数の病原体、アレルゲン、免疫メディエーター、核酸、又は、単一のクロマトグラフィ担体上の低分子量化合物の検出も含む。サンプル分析デバイスは、複数の低分子量化合物、免疫メディエーター、核酸、タンパク質、又は病原体の同時検出を可能にするものであってもよい。サンプルは好ましくは流体であるが、部分的又は実質的に固体の乾燥物質又は乾燥質量が、本発明のデバイス及び方法におけるサンプルとして試験されてもよい。例えば、流体は、回復しつつある創傷などにおいて凍結又は硬化し、サンプル採取装置で採取され、その後、サンプル塗布領域へ移されもよい。サンプルは代替的に、性感染症に関して試験されるサンプルを採取する際などに水疱部位付近の体液によって湿った、水泡から擦り落ちた水泡の硬化した部分、又は、試験ストリップ上を流れるバッファーによって湿った、水泡から擦り落ちた水泡の硬化した部分であってもよい。サンプルは創傷又は水泡からの１つ以上の滲出液であってもよい。
【００３５】
身体サンプルは好ましくは、全血、血清、血漿、粘膜流体（口の、鼻の、膣の、肛門の、内耳の、及び眼球の空洞の）、脳脊髄液（ＣＳＦ）、涙液、ペニスの流体（ｐｅｎｉｌｅ  ｆｌｕｉｄ）、腺からの分泌物又は滲出液、或いは、病変又は水泡（例えば、皮膚の病変又は水泡）からの分泌物又は滲出液である。より好ましくは、サンプルは、口の、鼻の、眼球の、生殖器の、及び直腸の流体、並びに、皮膚の病変又は水泡からの分泌物或いは滲出液から選択される。
【００３６】
幾つかの実施形態において、サンプルに結合した液体の量は、圧縮下で、サンプル圧縮機のパッド上のサンプル及び／又は任意の接合体或いは第２の結合パートナーをサンプル塗布領域に移すのには不十分である。代わりに、ランニングバッファーは、試験ストリップのサンプル塗布領域に、サンプル及び／又は接合体或いは第２の結合パートナーを移すために必要とされる追加の流体を提供する。他の実施形態において、サンプル圧縮機のパッド上のサンプル及び／又は任意の接合体或いは第２の結合パートナーは、圧縮下でサンプル塗布領域に移される。代替的な実施形態において、ランニングバッファーは圧縮機を介して塗布されてもよい。転換領域を持つ実施形態において、ランニングバッファーは、存在する場合に、サンプル圧縮機に転換されると、サンプル圧縮機（接合試薬、対照試薬、及びサンプルを含む）及びサンプル採取装置の上の構成要素を採取する。
【００３７】
好ましい実施形態において、サンプルは、採取後に滴ったり流れたりしない流体である。代わりに、流体は、サンプルがサンプル採取装置で採取された後に垂直又は上下逆さまでさえも保持可能となり、サンプル採取装置に留まるように、凝結した塊である。例えば、目のサンプルが採取され、事前の処理にかけられない場合、サンプルは、主に表面張力によって垂直に又は上下逆さまに保持されたとしてもサンプル採取装置にとどまる。これは、サンプルがサンプル採取装置材料（例えば、サンプル採取装置フリース（ｆｌｅｅｃｅ））上で効果的に捕えられて包まれるためである。好ましい実施形態において、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）繊維などのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）繊維又はナイロン繊維が用いられる。なぜなら、結合が特異的又は永久的なものではなく、従って、これらの繊維は湿ると分析物を「放出」するからである。その現象は、湿気が穴の中で、及び表面張力によって保持されるように、ペーパータオルで優しく溢流（ｓｐｉｌｌ）をふき取ることに似ている。サンプル採取装置フリースに使用することができる他の材料は、限定されないが、ポリエステル、セルロース、レーヨン、アルギン酸カルシウム、マイクロキャピラリー及び／又はマイクロチャネルを含有するミクロ設計の機械的構造、又は、他の織物或いはメッシュを含む。ヒトの体液を採取するために無菌の採取装置材料が必要とされる実施形態において、殺菌することができ、且つ、生体適合性が承認されている材料が、好ましくは使用される。
【００３８】
その方法の重要な利点は、試験結果が診察期間内に、例えば、数分で提供されるということである。好ましくは、結果は、２０分までの時間で、より好ましくは１５分以内に提供される。サンプルが患者から得られると、試験は同様に２４乃至４８時間までに実行されてもよい。また、試験が非侵襲的であるため、患者にほとんど危険がかからない。したがって、最良の利用可能な処置を特定の病原体に適時適用することができる。先行技術方法よりも優れる更なる利点は、分析を行うには数マイクロリットルのサンプルしか必要とされないということである。サンプルは、好ましくは約０．１マイクロリットルから約１００マイクロリットル、より好ましくは約０．２マイクロリットルから約２０マイクロリットル、及び最も好ましくは約０．５マイクロリットルから約１５マイクロリットルである。
【００３９】
本発明は簡単な試験キットによって行なわれてもよい。試験キットの取り扱いは、追加の実験機器、試薬の更なる取り扱い、又は、器具を必要としない。本明細書に記載の本発明の別の重要な利点は、サンプルが分析デバイスに移される前には希釈を必要としないため、検出限界は一般的に現在利用可能な診断試験よりも１０乃至１００倍低いということである。従って、本発明の方法は先行技術の方法よりも高感度であり正確である。
【００４０】
分析物の第１の結合パートナー及び検知可能な標識を含む接合体と、分析物の第２の結合パートナーの両方が、サンプル圧縮機に置かれる場合、サンプル分析デバイスは任意の分析物について試験するために製造及び使用可能である。ユーザーは、所望の分析物を標的とした結合パートナーを包含する特定の圧縮機を選択する必要があるだけである。
【００４１】
本発明の実施形態の幾つかにおいて、体液サンプルは、採取デバイス又はスワブ材で非侵襲的に採取される。採取工程は好ましくは、試験される体液を含有する体の表面にわたってスワブ材を軽くこするか軽く叩くことを含む。好ましくは、スワブ材は無菌である。スワブ材は乾燥しているか、又は、採取工程の前に流体で事前に処理されてもよい。
【００４２】
他の実施形態において、血液などの体液サンプルはピペット又は他の採取デバイスで採取される。採取工程は好ましくは、例えばランセットを使用して血液を得ること、及びピペットで血液を採取することを含む。
【００４３】
好ましい実施形態において、スワブ材又はピペット中の血液の事前処理は行われず、サンプルは採取され、採取されたサンプルにはいかなる処理も行わずにサンプル分析デバイスに移される。採取デバイスを使ってサンプルを採取することによって、且つ、サンプルを抽出及び／又は希釈するなどの事前処理工程にサンプルをさらさないことによって、サンプルの分解は回避される。試験される分析物は、好ましくは、インタクト（ｉｎｔａｃｔ）のままであるか、又は、サンプル中の他の自然に発生する物質に囲まれるか又は混合されるその天然型（ｎａｔｉｖｅ  ｆｏｒｍ）のままである。
【００４４】
先行技術において、サンプルがバッファー中で抽出及び希釈されると、サンプルは大抵、もはやインタクトではない。これは、その安定性又は不安定性ゆえに、分析物の「構造」を変えることもある。採取デバイスを用いてサンプルを直接採取することによって、及び、そのサンプルを事前に処理しないことによって、サンプルの本来の性質が濃縮された形態で保存される。これにより、より少ない体積で高濃度のサンプルがもたらされるため、サンプルは試験の感度を上げる。加えて、サンプルを希釈することなく、出現する時間と試験領域の強度は、分析物の濃度に正比例する。スペクトロメーターを用いて、絶対的な数の定量化を得ることができる。加えて、サンプルを事前処理する必要がないため、試験はより簡単で、より迅速となり、それほど高価でなくなる。それによって、同様に、試験が医師、看護師、又は実験技術者によって臨床設定下で行なわれることが可能となる。結膜炎を検知するために使用される試験ストリップにおいて、試験の感度は超高感度なポリメラーゼ連鎖反応試験の感度に匹敵する。
【００４５】
先行技術の方法およびデバイスは事前処理を必要とした。事前処理が必要だと信じられていた理由のなかには、事前処理がより均質なサンプルをもたらすという迷信が含まれていた。別の理由は、濃縮したサンプルは結合アッセイを行なう前に緩衝化される必要があると信じられていたものであった。他の理由は、サンプルを洗浄する必要性、及び、非特異的な結合反応とそれによって偽陽性の試験結果を引き起こしかねない汚染粒子と物質を除去する必要性について記載していた。より大きな均質のサンプルが最も高感度で特異的なアッセイ試験結果を生み出すという一般化した考え方も、先行技術に存在した。
【００４６】
これに反して、サンプルを事前処理しないことで、ユーザーは不均質な高濃度サンプルを維持する。界面分極の材料原理によって記載されるように、不均質な誘電体材料には、不均質誘電体を構築する相のインターフェースで生じる電荷分布が存在する。「インタクトな」（無希釈又は未かく乱の）インビボの感染性の体液サンプルにおいて、電荷又は電荷担体は、不純物中心又は相界面での捕捉によって妨害される。この「インタクトな」サンプルの特徴は、空間電荷分極をもたらす二層コンデンサー効果を生み出す。「インタクトな」不均質な性質の特徴は、より高い結合効率と、それによるより高感度なアッセイをもたらす。
【００４７】
血液、涙、及び化膿性の滲出液を含む体液が、異なる採取装置フリース材料にどんな影響を及ぼすかについては、以前は知られていなかった。具体的には、分析物が他の細胞物質から効果的に放出され、サンプル採取装置からサンプル分析デバイスまで移されるかどうかは知られていなかった。
【００４８】
幾つかの実施形態において、サンプルの大きさは好ましくは数マイクロリットルである。（好ましくは、サンプルを処理することなく）サンプル塗布領域へサンプルを移した後、溶出媒体（ランニングバッファーとしても知られる）が加えられる。側方流動イムノアッセイを実行する先行技術の方法は、この洗浄工程を行うことができなかった。例えば、結膜炎などの眼の感染症に関して試験するために目のサンプルを採取する場合、サンプルの大きさは好ましくは３乃至１５マイクロリットルである。この例において、その後、１５０乃至２００マイクロリットルの溶出媒体が試験ストリップに加えられる。異なるアッセイシステムと比較して、この４０乃至５０倍の洗浄は、機械に依存したＥＬＩＳＡ試験で行なわれる洗浄に勝る。
【００４９】
サンプルを採取する１つの例において、緩やかな渦運動を用いて、無菌のスワブ材は、関心の体表面又は粘膜に適用され、体液中に含有される任意の病原体、低分子量化合物、及び／又は、免疫メディエーター、ペプチド、糖タンパク質、核酸、及び、アレルギーに関連する成分を捕らえることが可能となる。
【００５０】
スワブ材はサンプル分析デバイスから分離した部分であってもよい。その後、サンプルは、サンプルの少なくとも一部がスワブ材上にあるという条件下で、サンプル分析デバイスとサンプル圧縮機にスワブ材を接触させることによって移される。接合体がサンプル圧縮機上に置かれる実施形態における接合体の少なくとも一部、及び／又は、第２の結合パートナーがサンプル圧縮機上に置かれた実施形態における第２の結合パートナーの少なくとも一部は、圧力によってサンプル分析デバイスに移される。これは、スポンジから流体を絞るのと同様の現象である。この実施形態において、スワブ材は好ましくは、分析デバイス上のサンプル塗布領域と、サンプル圧縮機のパッド部分（好ましくは接合体及び／又は分析物のための第２の結合パートナーを含む）の両方に接触する。その後、サンプルと接合体はサンプル塗布領域へ移され、次に検出領域へ移動する。幾つかの実施形態において、スワブ材はサンプル分析デバイスとの接触位置において固定され、このデバイス内で、スワブ材のサンプル採取領域は分析デバイスのサンプル塗布領域に直接接触している。したがって、スワブ材及び／又は分析デバイスは、好ましくは、予め決められた位置において両方の部分間の固定接点を提供するための固定化手段を含む。代替的に、スワブ材はサンプル分析デバイスの一体化された部分であってもよく、その移動は、サンプル圧縮機を用いて圧力をかけることによって、接合体と同様にスワブ材上のサンプルの少なくとも一部を、サンプル塗布領域に渡すことを含む。幾つかの実施形態において、サンプル圧縮機は一体型のサンプル分析デバイスの一体化部分でもあり、ヒンジによってデバイスに接続されるのが好ましい。他の実施形態において、サンプル圧縮機はデバイスの残りの部分から離れている。
【００５１】
スワブ材からサンプル分析デバイス上のサンプル塗布領域へのサンプルの移動は、好ましくは直接的な移動である。即ちち、その移動はスワブ材上のサンプルの事前処理を伴わずに行われる。サンプル又はスワブ材の事前処理のない実施形態において、スワブ材フリースがストリップ上のフリースと直接接触する領域で、精密濾過が生じる。フリースの繊維がインターロックすることにより、格子又は物理的干渉が形成される。したがって、サンプル中に含有される更に大きな要素は、サンプル分析デバイス上で阻止され、溶出されない。接合体とサンプルがサンプル塗布領域を通って移動するにつれ、より小さな分析物が溶出される。同様に、粘膜流体からのサンプルを使用する場合、粘膜体液中の粘液の機械的破砕により、所望のサンプルと分析物が精製（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）される。
【００５２】
他の実施形態において、移動は、溶出媒体、例えば、バッファー又は水による、スワブ材からのサンプルの溶出を含む。溶出媒体は外部ソースから加えられてもよく、又は、例えば、分析デバイス内に容器として提供されてもよい。更に、移動は好ましくは、サンプル分析デバイス上の検出領域への流体のクロマトグラフィによる及び／又は毛細管による移動である。
【００５３】
他の実施形態において、血液などの体液サンプルはピペット又は他の採取デバイスで採取される。採取工程は好ましくは、例えばランセットを使用して血液を得ること、及びピペットで血液を採取することを含む。その後、血液は、サンプル分析デバイスに直接移される。この実施形態において、血液は好ましくは、サンプル圧縮機パッドに、又は、試験ストリップ上の転換領域の上流又は下流に移される。
【００５４】
スワブ材を伴う幾つかの好ましい実施形態において、スワブ材は、側方流動試験ストリップと、サンプル圧縮機（分析物のための第１の結合パートナー及び検知可能な標識、タグを含む分析物のための第２の結合パートナー、対照領域結合パートナー、又は、これらのいずれかの任意の組み合わせを含む接合体を含んでもよい）のパッド部分との間に置かれる。この工程によって、採取された標本は、試験ストリップ上に直接移される。試験ストリップは、好ましくは１つ又は複数の毛細管活性（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ａｃｔｉｖｅ）のフリース或いは膜を含む。
【００５５】
幾つかの好ましい実施形態において、サンプルはクロマトグラフィ試験ストリップに加えられ、そして、サンプルが加えられた後の別の工程として、接合体が加えられる。これらの実施形態において、接合体とサンプルは同時に加えられない。例えば、サンプルを含むサンプル採取装置は、試験ストリップのサンプル塗布領域に置かれる。サンプルの少なくとも幾つかが、この時試験ストリップに移される。その後、接合体を含有するサンプル圧縮機が加えられ、サンプル圧縮機はサンプル採取装置を圧縮する。これは、接合体の移動と同様に、試験ストリップ上へのサンプルの更なる移動を促進する。分析物が存在する場合、接合体がサンプルを圧縮し始めるや否や、サンプル中の分析物と複合物との間に複合物が形成されてもよい。流体サンプルとともに、複合物は、サンプル自体の流動性によって形成され始める。好ましい実施形態において、分析物のための第２の結合パートナーは、サンプル圧縮機上、又は、試験ストリップのサンプル塗布領域内のいずれかにもある。これらの実施形態において、バッファーが更に加えられる前に、第１の結合パートナーと、分析物と、第２の結合パートナーとの間に完全なサンドイッチが形成されてもよい。バッファーの追加は、複合物の形成と、その後の検出領域への構成要素の移動を強化する。複合物が圧縮中に形成される可能性があるため、サンプリングと試験の間に時間差があってもよい。分析物と接合体の間の反応は、好ましくは、バッファーが試験ストリップに加えられる前に始まる。サンプルと接合体が加えられる際と、バッファーが加えられる際の時間差は、２４時間までであるか、又は、更に長い場合もある。
【００５６】
検出工程は、サンプルの移動によって直接始められるか、又は、サンプル分析のために溶出媒体が適用されることを要求するかのいずれかである。幾つかの実施形態において、溶出媒体は単なる水道水である。他の実施形態において、溶出媒体はアルカリ性バッファーである。検出領域がサンプル塗布領域の下流の側方にある免疫化学的な試験ストリップである場合、選択された溶出媒体は検出領域の方へ移動し、それによって、採取デバイス内の接触部位を通過する。分析物と接合体は溶出媒体によって溶出され、それによって検出領域へと運ばれる。検出領域において、分析物は、例えば、免疫学的結合反応において、質的な方法によって、及び／又は、量的方法によって測定される。
【００５７】
試験ストリップは、１つの単一なクロマトグラフィ材料で、又は、好ましくは、同じ材料或いは異なる材料で作られると共に運搬体の裏当てに固定された複数の毛細管活性材料で作ることができる。これらの材料は、移動経路を形成するために互いに密接に接触しており、この経路に沿って、毛管力によって動かされた液体が開始領域から流れ、スワブと検出領域の接触部位を通って、ストリップのもう一方の端部にある廃棄物領域に向かう。
【００５８】
試験ストリップに好ましい幾つかの材料及び膜は、限定されないが、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）繊維などのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）繊維、ニトロセルロース、ポリエステル、ナイロン、酢酸セルロース、ヒドロゲル、ポリプロピレン、ガラス繊維、及び、これらの材料とその裏当ての組み合わせを含む。フリースと膜の特徴は、試験ストリップ又は採取デバイスの特定の範囲又は領域に使用される材料の種類に依存する。本明細書に記載されるように、試薬（試薬領域、捕捉領域、又は、本明細書に記載の他の領域の何れかにある試薬を含む）を流動させ、且つ、溶出媒体と共に移動させることを可能にする材料は、結合が特異的又は永久的ではないため、分析物と試薬が溶出媒体又は大量のサンプルに遭遇すると放出されるような、フリース材料又は繊維を含む。これらの材料の幾つかは、限定されないが、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）繊維などのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）繊維、ナイロン繊維、ポリエステル繊維、酢酸セルロース繊維、ポリプロピレン繊維、ガラス繊維、気泡、スポンジ、及び、他の織物並びにメッシュを含む。対照的に、（例えば、検出領域の試験領域と対照領域で固定化された試薬、及び、サンプル塗布領域の下流の捕捉領域で固定化された試薬を捕捉する実施形態における捕捉試薬を含む）特定の領域で試薬を固定化する材料は、限定されないが、ナイロンメッシュ中の個々の繊維がタンパク質などの試薬に永久的に結合するように化学的に処理されたニトロセルロース及びナイロンの繊維を含む。ストリップの異なる部分を製造するための幾つかの方法は、限定されないが、ストリップ上で材料に縞を付けること、噴霧すること、該材料を浸すこと、及び、乾燥させることを含む。
【００５９】
本発明の実施形態の多くにおいてニトロセルロースが検出領域のために使用される一方で、他の実施形態において、ナイロン又はポリエステルなどの中性膜が用いられてもよい。これらの実施形態において、ニュートラアビジン、抗体、及び抗原などのタンパク質、ナノ粒子、又は核酸は、直接固定化されない。その代わりに、これらは、膜に「堆積して」、隙間に保持される微粒子と結合する。
【００６０】
サンプル圧縮機のパッド部分に好ましい幾つかの材料は、限定されないが、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）繊維のようなポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）繊維、ナイロン繊維、ポリエステル繊維、酢酸セルロース繊維、ポリプロピレン繊維、ガラス繊維、フリース、気泡、スポンジ、及び、他の織物並びにメッシュを含む。
【００６１】
試験ストリップ材料は、好ましくは、膜中の細胞片（沈殿物など）のように微粒子状物質を濾過及び／又は保持する。加えて、サンプルの量が非常に小さいことが好ましいため、サンプルは材料内でとどまり、サンプルの真下を流れる溶出バッファーはサンプルに接触すると共にサンプルを移動させることで、サンプルが検出領域の試験領域に到達する前に、抽出、溶解、及び／又は濾過される。
【００６２】
更に、本発明のデバイス及び試験キットは、好ましくは本明細書に記載の方法を行う。
【００６３】
好ましい実施形態において、接合体はサンプル分析デバイスから離れたサンプル圧縮機に置かれる。接合体は好ましくは、検知可能な標識で標識化されるだけでなく、分析物のための第１の結合パートナーを含む。標識は好ましくは視認で及び／又は蛍光によって検知可能であるが、当該技術で知られている検知の任意の形態は、選択される標識に依存して使用されてもよい。転換領域を持つ幾つかの好ましい実施形態において、サンプルは、好ましくは接合体を重複させる場所においてサンプル圧縮機に適用される。
【００６４】
幾つかの実施形態において、接合体のための検知可能な標識は、コロイド金、有色ラテックスビーズ、蛍光性ナノ粒子、化学発光（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｉｓｃｅｎｔ）ナノ粒子、常磁性ナノ粒子、又はリン光性ナノ粒子であってもよい。
【００６５】
定量的な解釈は、試験領域の強度及び色相を観察することによって視覚的に行われる。目に見える赤色染料が標識として使用される例において、分析物の濃度が検出の下限と等しいか、わずかに大きい場合、試験領域をかすかに見ることができ、色相はピンクである。分析物の濃度が上がるにつれ、試験領域の強度はこれに応じて高まり、色相はピンクから明るい赤色に変わる。定量的な解釈は、可視スペクトル中で作動するスペクトロメーターを用いて進行される。試験領域の定量化を進行させるために、吸収測定又は反射率測定のいずれかが可視スペクトルで使用されてもよい。まず、１セットの特徴的な濃度の分析物が展開される。各々の濃度はサンプル塗布領域に適用され、試験が実行される。スペクトロメーターは、試験領域の吸収又は反射率のいずれかを測定するために使用される。標準曲線はスペクトロメーターの測定値から計算される。標準曲線は通常、線形（ｌｉｎｅａｒ）である。他の実施形態において、蛍光タグが使用される場合、類似するセットの既知の濃度の分析物が展開されてもよい。スペクトロメーターによって試験及び定量化される未知の濃度の分析物は、標準曲線上でプロットされる際に、ある濃度の分析物に関連づけられる値を生みだす。
【００６６】
目に見える標識は、限定されないが、コロイド金、有色ラテックスビーズ、セレニウム、又は炭素などの有色粒子を含む、肉眼で見える任意の標識であってもよい。幾つかの実施形態において、目に見えるタグも同様に蛍光要素でコーティングされてもよい。幾つかの実施形態において、蛍光要素は蛍光染料である。代替的に、好ましくは無色の蛍光ラテックスビーズ接合体の混合物は、コロイド金（可視スペクトル）接合体と、又は、側方流動イムノアッセイにおいて目に見える読み取り試験領域をもたらす接合体と混合されることによって、アッセイの感度を高め、且つ、真陽性と真陰性を視覚的に読み取るのに役立ってもよい。ナノ粒子が使用される実施形態において、使用されるナノ粒子は、限定されないが、セレニウム、炭素、及びコロイド金を含む。
【００６７】
幾つかの実施形態において、分析物のための第２の結合パートナーもサンプル圧縮機に置かれる。第２の結合パートナーは検知可能な標識ではなくタグを含む。第２の結合パートナーは、代替的に、試験ストリップのサンプル塗布領域内に、サンプル塗布領域の上流に、又は、サンプル塗布領域と検出領域との間の試験ストリップ上の任意の位置に、置かれもよい。分析物のための第２の結合パートナーが検出領域の上流に、又は、サンプル圧縮機上のいずれかにある実施形態では、検出領域は、第２の結合パートナーのタグ部分と結合する不動タグを含む。
【００６８】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナーはビオチンでタグ付けされる。第２の結合パートナー上のタグがビオチンである実施形態において、検出領域で固定化されたタグは好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナーは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付けされる。これらの実施形態において、検出領域で固定化されたタグは、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー上のタグはレクチンであってもよく、固定化されたタグはグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドが使用されてもよい。
【００６９】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機の接合体領域内及び／又はサンプル塗布領域内の、分析物のための特異的な結合パートナーは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は組み換え抗体、或いは、病原体に結合することができる抗体のフラグメントである。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、病原体、免疫メディエーター、ペプチド、糖タンパク質、又はアレルゲンに対する抗体に結合することができる抗原でもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。本発明の方法及びデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイにおいて、抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【００７０】
これらの実施形態の全てにおいて、分析物が存在する際のサンプル塗布領域で、接合物の第１の結合パートナー、分析物、及び、第２の結合パートナーの間で、完全な「サンドイッチ」が好ましくは生成される。代替的に、第１の結合パートナー又は第２の結合パートナーのどちらかが、サンプル塗布領域の下流に置かれる場合、完全な「サンドイッチ」はサンプル塗布領域と検出領域の間で形成されてもよい。その後、完全なサンドイッチは検出領域へ移動し、ここで、第２の結合パートナー上のタグが、検出領域において固定化されたタグと結合する。第２の結合パートナー上のタグと検出領域内の固定化されたタグとの間の複合物は、分析物が存在するかどうかにかかわらず生じることに留意する。しかしながら、分析物が存在し、且つ、（検知可能な標識を含む）接合体が分析物に結合した場合にのみ、複合物は検出可能である。
【００７１】
他の実施形態において、サンプル圧縮機上の、又は、検出領域の上流の試験ストリップ上のいずれかに分析物のための第２の結合パートナーを有する代わりに、分析物のための固定化された第２の結合パートナーが検出領域に置かれる。これらの実施形態において、複合物の第１の結合パートナーと、後に試験領域へ移動する分析物との間で、「サンドイッチ」の半分が形成され、その半分のサンドイッチは固定化された第２の結合パートナーに結合し、完全な「サンドイッチ」を完成させる。
【００７２】
デバイスは好ましくは、試験が正確に実行されたかどうかを示す対照領域も含む。好ましい実施形態において、対照領域結合パートナー、例えば、目に見える標識を備えた流動性の対照領域結合パートナーも、サンプル圧縮機に置かれる。対照領域で固定化された結合パートナーに結合する流動性の対照領域結合パートナーを、サンプル圧縮機に置くことによって、接合体の移動がサンプル圧縮機からサンプル分析デバイスのサンプル塗布領域までに生じたかどうかが示される。これは非常に有用な対照である。なぜなら、接合体は分析物の存在を検出するために移動される必要があるからである。
【００７３】
サンプルは、医師のオフィス又は緊急処置室で現在使用されているような標準のスワブ材によって得られてもよい。このスワブ材は、後に、サンプル圧縮機を用いてクロマトグラフィ試験ストリップのサンプル塗布領域に押しこまれる。
【００７４】
幾つかの好ましい実施形態において、ポイント・オブ・ケア検査デバイスの「外部」で細胞を溶解する代わりに、本発明は「インサイツでの溶解」を利用する。これらの実施形態において、本発明の方法及びデバイスは、インサイツでサンプル材料を溶解するために、本明細書に議論されるような側方流動アッセイ試験ストリップの、又は、当該技術で知られている他の側方流動アッセイデバイスの一部として、少なくとも１つの溶解剤を含む溶解領域を組み込む。加えて、捕捉領域はアッセイの精度を高めるために干渉物質を捕捉する。
【００７５】
サンプル負荷後に、輸送液体と共に移動するサンプルは溶解剤に遭遇する。溶解剤は、試験ストリップに予め負荷され、輸送液体によって溶出される。幾つかの好ましい実施形態において、溶解剤は試験ストリップ中で乾燥された。代替的に、溶解剤は、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ  ｄｒｙｉｎｇまたはｌｙｏｐｈｉｌｉｚｉｎｇ）によって予め乾かされ、その後、試験ストリップに予め負荷される。他の実施形態において、溶解剤は、試験ストリップ上で、吸収され、吸着され、埋め込まれ、又は捕捉されてもよい。好ましい実施形態において、サンプルがサンプル分析デバイスに移される際に溶解されるように、溶解剤は、サンプル塗布領域に、又は、サンプル塗布領域の上流に局在している。溶解剤は好ましくは、サンプル輸送液体において可溶性であるか又は混和性であり、溶解剤はサンプル輸送液体と接触すると、可溶化され且つ活性化される。その後、サンプル輸送液体は、溶液、又は懸濁液中の溶解剤と懸濁液中のサンプル成分との両方を含有する。サンプル中の任意の溶解の影響を受けやすい成分は、懸濁液中で溶解剤にさらされると、それ自体がインサイツで溶解される。その後、分析物は好ましくは、標識化された接合体と第２の結合パートナーとの両方に晒されることによって、検出領域に到達する前にサンドイッチを形成する。代替的に、溶解剤はランニングバッファーに含まれてもよい。
【００７６】
代替的に、溶解剤はサンプル圧縮工程の間に試験ストリップに導入されてもよい。１つの実施形態において、溶解剤はサンプル圧縮機のパッドに置かれる。代替的に、スワブ材が無菌である必要がない場合、溶解剤はサンプル採取装置のスワブ材上で乾燥されてもよい。そうでなければ、スワブ材は、溶解剤の溶解能力を損なわない滅菌技術を用いて溶解剤を追加した後に殺菌されてもよい。
【００７７】
試験ストリップに予め負荷された溶解剤の濃度は、好ましくは、０．００１％と５％重量／体積の間である。予め負荷される体積は、溶解剤がどこで予め負荷されるかに依存する。適切な範囲は、サンプル採取装置のフリース（サンプル塗布領域）に予め負荷される際は１〜１０マイクロリットル、又は、吸収パッドか試験ストリップ内の他の位置に予め負荷される際は５〜５０マイクロリットルである。理想的には、予め負荷した量は、サンプル採取装置のフリースに予め負荷された約３マイクロリットルであるか、又は、吸収パッド或いは試験ストリップ内の他の位置に予め負荷された約１０マイクロリットルでなければならない。
【００７８】
特定の溶解環境及び薬剤の選択は分析物とアッセイに依存する。ｐＨとイオン強度が、溶解する環境の鍵である。溶解剤によって確立されたｐＨに関して、４．０より下のｐＨは、材料、特にタンパク質を沈殿させる傾向にある。約１０．０以上の高いｐＨは、タンパク質及び細胞壁などの材料を溶解する傾向がある。したがって、約１０．０以上のｐＨは多くの用途に好ましい。代替的に、低いｐＨは核酸標的に好まれることがある。
【００７９】
溶解剤によって確立されたイオン強度に関して、高イオン強度と低イオン強度の両方は溶解のために使用されてよい。例えば、低イオン強度（低張）は赤血球を破壊する傾向がある。水自体は赤血球を溶解することができる。高イオン強度環境は、特定の細胞壁と細胞膜を破裂させるために使用されてもよい。
【００８０】
特定の溶解剤に関して、それらは、その特性：塩、両性及びカチオン性の剤、並びに、イオン性及び非イオン性の洗浄剤に基づいて、分類及び選択されてもよい。塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃ１）は赤血球を溶解する。限定されないが、高濃度の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）及び塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む他の塩は、特定の細胞壁及び細胞膜を破裂することがある。他の溶解剤は、Ｌｙｓｏ  ＰＣ、ＣＨＡＰＳ、及びＺｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔを含むがこれらに限定されない、両性の剤である。代替的に、Ｃ１６  ＴＡＢ及び塩化ベンザルコニウムを含むがこれらに限定されないカチオン性の剤は、溶解剤として使用されてもよい。イオン性及び非イオン性の両方の洗浄剤は、リポタンパク質と糖タンパク質などの細胞壁又は細胞膜成分を壊すか溶解するためにしばしば使用される。共通のイオン性洗浄剤は、ＳＤＳ、ＥＤＴＡ、コール酸、及びデオキシコール酸を含むが、これらに限定されない。イオン性洗浄剤は優れた可溶化剤である。抗体は、０．１％以下のＳＤＳ中でその活性を保持する。共通の非イオン性洗浄剤は、限定されないが、オクチルグルコシド、ジギトニン、Ｃ１２Ｅ８、ルブロール、トリトンＸ−１００、Ｎｏｎｉｏｄｅｔ    Ｐ−４０、Ｔｗｅｅｎ２０、及びＴｗｅｅｎ８０を含む。非イオン性洗浄剤と中性のイオン性洗浄剤は、より弱い変性剤であり、ウイルス表面タンパク質のような膜タンパク質を可溶化するためにしばしば使用される。追加の溶解剤は、尿素と酵素を含むがこれらに限定されない。異なる溶解剤の組み合わせは、溶解環境を最適化するために使用されてもよい。
【００８１】
界面活性剤は、一般的に湿潤剤として作用し、液体の表面張力を低下させる。その後、これによって、液体間の界面張力の低下による更に容易な拡散が可能となる。従って、界面活性剤は、抗原及び抗体又はリガンド及び受容体の自然な結合を干渉することができる。それ故、その濃度は各クラスの溶解剤について実験的に選択される。一旦溶解が生じれば、所望の結合反応が妨害されないことが大事である。一般的に、０．００１％の溶解剤の濃度が下限と考えられており、上限は約１％である。溶解剤の組み合わせが使用される場合、相加効果又は相乗効果がある。これは、使用される（ｒｕｎ）濃度の作用範囲を、約０．００１％から１％まで拡張する。最後に、幾つかの望ましくない非特異的な結合は、５％濃度のＴｗｅｅｎ２０で回避され得る。全ての場合、個々の試験ストリップのあらゆる位置に予め負荷された溶解剤の総量は、免疫検出に対する障害を溶解するのに十分なものでなければならず、試験ストリップの実際の作業を可能にするものでなければならない。
【００８２】
溶解剤はそれ自体では他のアッセイ検出器又は指示薬剤に干渉してはならず、故に、アッセイの実際の作業を阻むような程度まで他の任意のアッセイの相互作用及び反応に干渉してはならない。溶解剤は、ポイント・オブ・ケア検査で試験ストリップを使用する前に、製造、分配、及び貯蔵を可能にするための十分な有効期間を有していなければならない。
【００８３】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の側方流動デバイスは、サンプルを輸送する液体（バッファーであってもよい）と、サンプル圧縮機と、サンプルを流す毛細管特性を含む１つ又は複数のフリース材料或いは膜を含有するクロマトグラフィ試験ストリップとを含む。本発明のデバイス及び方法において、試験ストリップにサンプルを塗布する前に、サンプル中の細胞を溶解する必要はない。
【００８４】
幾つかの好ましい実施形態において、側方流動デバイスは、サンプル圧縮機と、少なくとも１つの転換領域を含むクロマトグラフィの試験ストリップとを含む。転換領域は、好ましくは、流動が生じている平面における流動を妨げる少なくとも１つの特徴を含む。転換領域は、障壁、間隙、溝、又はこれら特徴の任意の組み合わせを含んでもよい。障壁は、好ましくは、液体の流動が同じ平面において流動し続けるのを妨げる任意の材料で作られ得る、不浸透性の膜（又は実質的に不浸透性の膜）である。障壁のための幾つかの材料は、限定されないが、不活性材料、半透水性材料、プラスチック、炭化水素、金属、疎水性材料、セファデックス、セファロース、酢酸セルロース、吸湿材（例えばＣａＣｌ２、ＣａＳＯ４、又はシリカゲル）、又はヒドロゲルを含む。間隙又は溝は、流動を止めるのに十分な深さにまで及ぶ側方流動試験ストリップの平面における任意の切れ目である。１つの好ましい実施形態において、間隙は深さが約０．１ｍｍであるのが好ましい。
【００８５】
転換領域は、サンプル圧縮機がデバイスの残りと接触するまでの流動を遅延、又は完全に止めて、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機へと転換される。これにより、サンプル圧縮機上の試薬の採取が増加する。例えば、接合体がサンプル圧縮機上にある実施形態において、接合体の採取は転換領域を持つデバイスにおいて増加する。試験ストリップとサンプル圧縮機との間にサンドイッチされたサンプル採取装置を持つ実施形態において、流体はまた、強制的にサンプル採取装置（例えば、スワブ）を通過させられ、それにより、サンプルと接合体は、転換領域のない実施形態におけるよりも早く相互に作用する。流動は、転換領域の端部にある元の側方平面に推移して戻る。サンプル塗布領域と接合体の両方がサンプル圧縮機上にある実施形態において、サンプルと接合体の両方は、サンプル圧縮機に転換された時にランニングバッファーに遭遇し、１／２のサンドイッチ又は完全なサンドイッチ（分析物のための第２の結合パートナーがサンプル分析デバイス上に置かれる場所に依存する）が、分析物がサンプル中に存在する場合にランニングバッファーが試験ストリップに転換して戻る前に、形成される。転換領域とサンプル圧縮機を持つ実施形態は、速度を増加し、接合体とサンプルの間で更に優れた相互作用を可能にし、そして、より多くの接合体が流体の中へと入れられるので更なる感受性を可能にする。これらの実施形態において、流体全ては、好ましくは、接合体と相互に作用する。このことは、再配向のない圧縮機の実施形態よりも著しい改善であり、約２０−３０％の流体が接合体と相互に作用する。
【００８６】
幾つかの好ましい実施形態において、サンプル採取装置デバイスは、サンプル圧縮機と試験ストリップを含む堆積物の一部である、仕切り紙（例えば濾紙）である。仕切り紙は、好ましくは、サンプル採取装置としてスワブ材と代えられる。仕切り紙は、好ましくは、試験ストリップのニトロセルロースとは異なる材料、又は、障壁を持つ実施形態において、障壁の材料とは異なる材料で作られる。幾つかの好ましい実施形態において、仕切り紙は、限定されないが、グラシン紙、撥水剤でコーティングした材料、又はポリテトラフルオロエチレンでコーティングした材料（例えば、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）コーティング）で作られる。幾つかの実施形態において、仕切り紙は、ストリップの必須部分、例えば、ストリップ上のフラップである。これら実施形態において、液体サンプルは、点滴器又は別の付加機構によって加えられ得る。他の実施形態において、仕切り紙は、使用前にストリップとは分離されており、アッセイが行われている間の堆積物の構成要素の１つである。好ましくはこの種のサンプル採取装置デバイスを使用し得るサンプルの１つの例は、血液サンプル、血清サンプル、血漿サンプル、又は尿サンプルを含むが、これらに限定されない液体サンプルである。仕切り紙を使用する実施形態において、仕切り紙は、アッセイに有用な他の試薬、例えばインサイツの溶解材料を含有し得、或いは、干渉材料を捕えるための異なる空隙率を持ち得る。
【００８７】
幾つかの実施形態において、圧搾圧力は、展開領域を必要とすることなく流動を側方に阻害するのに十分なものである。しかし、幾つかのマトリックス、例えば、粘液などのより厚い流体を持つマトリックスにおいて、流動はサンプル採取装置の下でゆっくりと移動し、圧縮機と十分に相互に作用しない。展開領域を持つ実施形態は、これらのタイプのサンプルとマトリックスに対して特に有用である。しかし、転換領域は、任意のタイプの流体又は液体サンプルを持つ実施形態において使用され得る。
【００８８】
転換領域を持つ、又は転換領域を持たない他の代替的な実施形態において、ランニングのバッファーの圧縮又は追加の前に、サンプルは、クロマトグラフィ試験ストリップのサンプル塗布領域上に直接置かれ得る。例えば、液体サンプルでは、サンプルは、サンプル塗布領域上にピペットで移すことが可能である。他の例において、サンプルは、サンプル圧縮機上にピペットで移すことが可能である。
【００８９】
サンプル採取装置（例えば、スワブ又は仕切り紙）は、転換領域の上流に、転換領域の上に、転換領域の下流に、又は、転換領域の一部に重複して置かれてもよい。好ましい実施形態において、サンプル採取装置は、転換領域の上流、又はそこから下流に置かれる。スワブ材の採取部の長さは、採取されるサンプルの全てが試験ストリップの幅に接触しなければならないほどの長さでなくてはならない。幾つかの好ましい実施形態において、サンプル採取装置の採取部の長さは約２ｍｍ乃至５ｍｍである。より好ましい実施形態において、サンプル採取装置の採取部は約３乃至４ｍｍである。サンプル採取装置（ハンドル）の長さは特に重要ではない。しかし、幾つかの好ましい実施形態において、サンプル採取装置の長さは、身体の一部においてサンプル（例えば、喉、鼻−指節骨（ｎａｓａｌ−ｐｈａｒａｎｇｅａｌ）、又は膣のサンプル）を取る場所に依存して、約１０乃至１８センチメートル（４乃至７インチ）である。
【００９０】
サンプル採取装置がスワブ材である幾つかの実施形態において、スワブ材の採取部は、バッファー又は他の溶出媒体と相互に作用することが可能な１つの場所においてサンプルを濃縮するために、コンパクトである。コンパクトな採取部は、好ましくは、典型的な先行技術のスワブ材採取部の長さよりも短い。採取部が転換領域の上流にある、これら実施形態の幾つかにおいて、濃縮したサンプルは、バッファーと相互に作用し、且つ、流動が転換される時にサンプル圧縮機に移動することが出来る。同様に、採取部が下流にある場合、バッファー、及びサンプル圧縮機から採取した試薬（例えば、接合体）は、流動がクロマトグラフィ試験ストリップの上に戻るにつれて、濃縮したサンプルと相互に作用する。
【００９１】
転換領域を持つ幾つかの好ましい実施形態において、圧縮機は、ヒンジ又はフラップを介してクロマトグラフィ試験ストリップに一体的に付けられる（例えば、図８Ｂと２４を参照）。ヒンジを使用してサンプル圧縮機が正確に低下しない場合、サンプル圧縮機は、転換領域に決してブリッジを架けず（ｂｒｉｄｇｅｓ）、デバイスは機能を果たさない。圧縮が不足した結果、流動は、ストリップの端部に決して到達せず、対照線に陰性の結果が生じる。ヒンジが閉じている場合、流動は存在しない。そのため、このデバイスは組み込み制御を持つ。このことは、ヒンジのない実施形態においても真実である。サンプル圧縮機が垂直な堆積物又はサンプル分析デバイスに加えられると、圧縮が不十分である場合に、ブリッジは無く、結果として流動が無い。
【００９２】
障壁を含む転換領域を持つ幾つかの好ましい実施形態において、障壁は、カプセル化した構成要素を持つ障壁である。障壁は経時的に溶解して、カプセル化した構成要素を放出する。障壁は、カプセル化することが可能であるような、本明細書で考察される同じ試薬の何れか又は全てを含み得る。溶解する障壁は二重機能を実行する。他の障壁と同様に、それは、流動をサンプル圧縮機へと進める壁として作用する。加えて、それらをカプセル化することにより、特定の構成要素に時間の遅れが生じる。バッファーは障壁を溶解し、これら時間の遅れが生じた構成要素は、アッセイの他の構成要素が試験線に到達した後に、試験線を複雑なものにする。
【００９３】
図１はサンプル分析デバイス（試験ストリップ）（１）とサンプル採取装置（２）を示す。サンプル採取装置（２）は、当該技術分野で既知の任意の種類のサンプル採取装置（２）であってもよく、例えば、サンプル採取装置（２）はスワブ材であり得る。サンプル（２０）は、干渉粒子（５）（干渉タンパク質又は干渉遺伝子を含んでもよい）と他の干渉粒子、或いは細胞片（４）と同様に、分析物（３）を含んでもよい。サンプル分析デバイス（１）は、この図では、サンプル塗布領域（１８）の上流に接合体領域（８）を含んでいる。接合体領域（８）は、この図では、サンプル塗布領域（１８）の上流に示されているが、接合体領域（８）は代替的に、本発明の精神の範囲内で、サンプル塗布領域（１８）と重なるか、又は、サンプル塗布領域（１８）の下流にあってもよい。サンプル塗布領域（１８）は同様に精密濾過領域であり、この領域は好ましくは、サンプル（２０）中の細胞片と干渉粒子（４）を濾過して取り除く。
【００９４】
接合体領域（８）は好ましくは、分析物（３）及び検知可能な標識に結合する部分を含む流動性の接合体（１５）と、例えば、目に見える標識を含む対照領域抗体である、検知可能な標識を含む対照領域結合パートナー（１６）の両方を含む。幾つかの実施形態において、流動性の接合体は、目に見える標識を含む試験抗体接合体である。対照領域結合パートナー（１６）は、対照領域（１１）内で、そのための固定化された結合パートナーと結合し、試験が正しく行われたどうかを示す。分析物（３）がサンプル（２０）内に存在する場合、分析物は接合体（１５）と結合し、接合体（１５）−分析物（３）の複合物は、検出領域（１２）中の試験領域（１０）に移動する。その後、分析物（３）は、分析物（３）のための固定化された結合パートナー（１７）に結合することで、サンドイッチ型アッセイ中に完全な「サンドイッチ」を形成する。
【００９５】
サンプル分析デバイス上のサンプル採取装置（２）からサンプル塗布領域（１８）へのサンプルの移動は、好ましくは、直接的な移動であり、即ち、その移動はサンプル採取装置（２）上でサンプルの事前処理を伴わずに起こる。サンプル又はサンプル採取装置（２）の事前処理のない実施形態において、圧力（１４）が加えられ、サンプル採取装置のフリースがサンプル分析デバイス（１）上のフリースに直接接触する領域で、精密濾過が生じる。フリースの繊維がインターロックすることにより、格子又は物理的干渉が形成される。従って、サンプル中に含有されるより大きな要素、例えば、細胞片と干渉粒子（４）は阻止されて溶出されない。
【００９６】
サンプル塗布デバイス（１）は、好ましくは、１つ以上の捕捉試薬を含む遮断領域（９）を含んでいる。この遮断領域は、サンプル（２０）にある干渉タンパク質及び／又は遺伝子（５）を捕捉する。捕捉試薬が干渉物質と複数の手法で相互作用することで、干渉物質による分析物の検出への干渉を防ぐと、１つ以上の捕捉試薬による干渉物質（４）（５）の捕捉が生じる。遮断領域（９）が図１に示されている一方、捕捉試薬は、捕捉試薬を、溶出媒体中で移動させ、試薬と混合させて乾燥させ、サンプル塗布領域に組み込ませ、サンプル採取装置のフリース材料に組み込ませ、及び／又は、線又は領域のいずれかとして固定化材料（例えば、ニトロセルロース）上で固定化させることが可能な材料で作られた捕捉領域（９）に置かれてもよい。これらのいずれか、又は、これらの任意の組み合わせは、試験とサンプルマトリックスに依存して、本発明の実施形態で使用されてもよい。
【００９７】
サンプル分析デバイス（１）は随意に、接合体領域（８）とサンプル塗布領域（１８）の上流に吸収パッド（７）も含む。バッファーが加えられ、サンプル（２０）、接合体（１５）、及び、対照領域結合パートナー（１６）を含む試験の構成要素を溶出するために矢印（６）の方向に移動し、検出領域（１２）に至る。サンプル分析デバイス（１）は、好ましくは、デバイス（１）の下流端に廃棄物パッド（１３）も含む。サンプル分析デバイス（１）は、随意に裏当て（２３）も含んでもよい。
【００９８】
本発明のデバイス及び方法はサンプル圧縮機（３０）を含む。使用することが可能なサンプル圧縮機（３０）の幾つかの概略的な例が図２Ａと２Ｂに示される。サンプル圧縮機（３０）は好ましくは、ハンドル（３１）、伸張部分（３２）、及びパッド部分（３３）を含む。幾つかの設計において、サンプル圧縮機は、パッド部分（３３）が置かれた棚（ｌｅｄｇｅ）部分（３４）のような追加部分を含んでいる。具体例が図２Ａ及び２Ｂに示されているが、アッセイの１つ以上の構成要素とサンプルをサンプル分析デバイスに移動させるために圧力をかけることが可能な任意のサンプル圧縮機（３０）が、本発明の実施形態で使用可能である。好ましい実施形態において、接合体（３６）は接合体領域を形成するパッド（３３）上に予め負荷され、乾燥される。幾つかの好ましい実施形態において、対照領域で結合パートナーと複合することが可能な標識化された対照（６１）も、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に予め負荷され乾燥される。他の好ましい実施形態において、分析物のための第２の結合パートナー（３８）はパッド（３３）にある。接合体（３６）、第２の結合パートナー（３８）、又は対照領域結合パートナー（６１）の任意の組み合わせは、サンプル圧縮機（３０）のパッド部分（３３）上にあってもよい。
【００９９】
図２Ｃは、サンプル採取装置（３５）の例を示す。この実施例において、サンプル採取装置（３５）はスワブ材である。サンプル採取装置（３５）は好ましくはサンプル採取部（６０）を含み、好ましくはフリースタイプの材料で作られる。幾つかの実施形態において、サンプル採取装置（３５）は無菌である。
【０１００】
図３Ａ乃至３Ｃは、サンプル圧縮機（３０）、サンプル採取装置（３５）、及びサンプル分析デバイス（図中の試験ストリップ）を備えたシステムの１つの実施形態を示す。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。検出領域（５２）は好ましくは、対照領域（４６）と同様に、分析物（４０）のための固定化された結合パートナー（３８）を含む試験領域（４５）も含む。この実施形態において、接合体（３６）はサンプル圧縮機（３０）上にある。サンプル圧縮機（３０）からの、複合物（３６）の一部である第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成し、該サンドイッチは、その後、試験領域（４５）で固定化される第２の結合パートナー（３８）に輸送される。図３Ｂに示されているのは、分析物（４０）に結合する接合体（３６）の一部（３７）、分析物（４０）、及び、第２の結合パートナー（３８）の間に形成される完全なサンドイッチ（４２０）である。好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）中のその結合パートナーと複合物を形成する。先行技術で知られているように、試験ストリップ上又はバッファー中ではなく、サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）を含んでいることによって、この実施形態において、接合体（３６）と対照領域結合パートナー（６１）の両方を含むサンプル圧縮機（３０）上の構成要素が、サンプル分析デバイスに効率的に移され、従って、このシステムの適切な操作を保証するということをユーザーに確約することができる。
【０１０１】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。例えば、本発明の図３Ａ乃至３Ｃに示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ、及び、酵素基質結合アッセイで抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０１０２】
操作時、サンプルがサンプル塗布領域（４４）の上に直接あるように、サンプル採取装置（３５）が置かれる。幾つかの実施形態において、サンプル塗布領域（４４）上へのサンプル採取装置（３５）の配置は、サンプル圧縮機（３０）の配置と同時ではない。言いかえれば、これらの実施形態において、サンプル圧縮機（３０）が垂直な堆積物に加えられる前に、サンプルの幾つかはサンプル塗布領域（４４）に移される。
【０１０３】
サンプル圧縮機（３０）は、分析物（４０）（存在する場合）を含むサンプルと接合体（３６）をサンプル塗布領域（４４）上に移すための圧力を用いて、サンプル採取装置（３５）上に圧力（５１）をかける。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。移動が圧力によるものであって、流動又は毛細管現象ではないことに留意する。その後、バッファー（４３）が加えられることで、接合体（３６）−分析物（４０）の複合物（存在する場合）を検出領域（５２）に流動させることが可能となる。その後、試験領域（４５）内の固定化された結合パートナー（３８）は分析物と結合して、完全なサンドイッチを形成する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０１０４】
示されてはいないが、好ましくはサンプル塗布領域（４４）に重なるか又はその上流にある溶解領域が随意に存在してもよい。他の実施形態において、図１に関して議論された領域に類似した、捕捉試薬を含む遮断領域が存在してもよい。
【０１０５】
他の実施形態において、接合体領域は、「完全なサンドイッチ」を形成するために、サンプル中の分析物のための両方の結合パートナーを含むことができる。結合パートナーの１つは、好ましくは、ビオチン、アビジン、レクチン、グリコシル部分、特定のリガンド、又は、特異的な受容体のような適切なマーカーを有している。他の結合パートナーは、以下に言及されるような適切なナノ粒子に結合することができる。その後、完全なサンドイッチは試験領域で捕捉され、この試験領域で、限定されないが、ビオチンのためのアビジン、アビジンのためのビオチン、レクチンのためのグリコシル部分、グリコシル部分のためのレクチン、リガンドのための受容体、又は、受容体のためのリガンドを含む適切なマーカーの結合パートナーが固定化される。
【０１０６】
図２０Ａは、本発明の実施形態における試験ストリップの例を示す。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。この実施形態において、サンドイッチ（第１の結合パートナー（５１３）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（５１８））全体が、サンプル塗布領域（４４）において形成される。「完全なサンドイッチ」（５１４）は図２０Ｂに示される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（５１８）のタグ（５１９）と結合する、固定化されたタグ（５１１）を含んでいる。固定化されたタグ（５１０）は、分析物（４０）と直接結合せず、その代わりに、中間物を介して、分析物（４０）のための第２の結合パートナー（５１８）上のタグ（５１９）と結合する。
【０１０７】
この実施形態において、標識化された接合体（５０５）の一部である第１の結合パートナー（５１３）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。第２の結合パートナー（５１８）もタグ（５１９）を含む。この実施形態の第２の結合パートナー（５１８）は、好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）上で予め負荷されて乾燥され、その一方で、標識化された接合体（５０５）は好ましくは、サンプル塗布領域（４４）の上流の標識化された接合体領域（５１５）上で予め負荷されて乾燥される。代替的に、第２の結合パートナー（５１８）及び／又は標識化された接合体領域（５１５）は、サンプル塗布領域（４４）に重なって、サンプル塗布領域（４４）の上流、又は、サンプル塗布領域（４４）と検出領域（５２）の間を含むがこれらに限定されない、検出領域（５２）の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。１つの好ましい実施形態において、標識化された（５０９）接合体（５０５）の約７５−８０％は、サンプル塗布領域（サンプル塗布領域（４４）に重なる標識化された接合体（５０５）の約２０−２５％を含む）の上流にあり、第２の結合パートナー（５１８）の約７５−８０％は、サンプル塗布領域（４４）（サンプル塗布領域（４４）に重なる第２の結合パートナーの約２０−２５％を含む）の下流に位置する。好ましくはないが、他の実施形態において、サンプルが試験ストリップに加えられる前に、標識化された接合体（５０５）、第２の結合パートナー（５１８）、又は、その両方のいずれかはバッファー中に配されるか、又は、サンプルと予め混合されてもよい。また他の実施形態において、構成要素の何れか又は全ては、検出領域（５２）に重ねることができる。
【０１０８】
幾つかの実施形態において、第１の結合パートナー（５１３）と第２の結合パートナー（５１８）の両方は、分析物（４０）に対する異なる抗体である。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は、核酸である。図２０Ａに示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０１０９】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（５１８）は、ビオチンでタグ付け（５１９）される。第２の結合パートナー（５１８）上のタグ（５１９）がビオチンである実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５１１）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（５１８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（５１９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５１１）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（５１８）上のタグ（５１９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５１１）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０１１０】
操作時、サンプルがサンプル塗布領域（４４）上に直接あるように、サンプルを包含するサンプル採取装置が置かれる。好ましい実施形態において、サンプルは、試験ストリップへの塗布の前に事前処理されない。その代わりに、サンプルは依然として天然型のままである。
【０１１１】
サンプルは試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）へと移される。サンドイッチは、パンの第１の欠片として標識化された接合体（５０５）と、パンの第２の欠片として第２の結合パートナー（５１８）と、それらの間の分析物（４０）とによって形成され、３つの構成要素は流動（４３）の間に互いに接触している。標識化された接合体（５０５）−分析物（４０）（存在する場合）−第２の結合パートナー（５１８）の複合物（完全なサンドイッチ）は、検出領域（５２）に流動する。
その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５１１）はタグ（５１９）と結合する。標識化された接合体（５０５）が標識（５０９）を含んでいるので、形成される複合物は検知可能であり、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、好ましくは、対照領域（４６）の対照領域結合パートナーとその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）で検知可能な陽性結果をもたらす。
【０１１２】
示されてはいないが、好ましくはサンプル塗布領域（４４）で重なるか、又は、代替的に本発明の精神の範囲内で試験ストリップの他の部分にある溶解領域も随意に存在してもよい。
【０１１３】
タグを用いる幾つかの好ましい実施形態において、検出領域は、タグに対する抗体を含んでいる。抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は単一のドメイン抗体であってもよい。例えば、タグがビオチンである場合、抗ビオチン抗体は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンに代わって試験領域で固定化される。
【０１１４】
図４Ａ乃至４Ｃは、サンプル圧縮機（３０）、サンプル採取装置（３５）、及びサンプル分析デバイス（図中の試験ストリップ）を備えたシステムの実施形態の例を示す。図３Ａ乃至３Ｃと同様に、試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。この実施形態において、サンドイッチ（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））全体が、（好ましくはバッファーの追加前に）サンプル塗布領域（４４）において形成される。幾つかの実施形態において、サンプル塗布領域（４４）上へのサンプル採取装置（３５）の配置は、サンプル圧縮機（３０）の配置と同時ではない。言いかえれば、これらの実施形態において、サンプル圧縮機（３０）が垂直な堆積物に加えられる前に、サンプルの幾つかはサンプル塗布領域（４４）に移される。
【０１１５】
この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）も好ましくは、サンプル圧縮機のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。
【０１１６】
（図５Ａ−５Ｂ、６Ａ−６Ｂ、７Ｂ、７Ｃ、及び７Ｄの実施形態と同様に）この実施形態における接合体（３６）の結合パートナー（３７）、分析物（４０）、及び第２の結合パートナー（３８）の間で形成される完全なサンドイッチ（４２０）は、図４Ｂに示される。好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を含む対照領域結合パートナー（６１）（図３Ｃで示される）も含む。対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）中のその結合パートナーと複合物を形成する。先行技術で知られているように、試験ストリップ上又はバッファー中ではなく、サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）を含んでいることによって、接合体（６１）と対照領域結合パートナー（６１）の両方を含むサンプル圧縮機（３０）上の構成要素が、サンプル分析デバイスに効率的に移され、従って、このシステムの適切な操作を保証するということをユーザーに確約することができる。
【０１１７】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。例えば、本発明の図４Ａ乃至４Ｃに示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ、及び、酵素基質結合アッセイで抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０１１８】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０１１９】
操作時、サンプルがサンプル塗布領域（４４）の上に直接あるように、サンプル採取装置（３５）が置かれる。サンプル圧縮機（３０）は、サンプル採取装置（３５）に圧力（５１）をかける。圧力により、サンプル（存在する場合、分析物（４０）を含む）、接合体（３６）、及びタグ付けした第２の結合パートナー（３８）が、サンプル塗布領域（４４）に移る。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。移動が圧力によるものであって、流動又は毛細管現象ではないことに留意する。その後、バッファー（４３）が加えられることで、接合体（３６）−分析物（４０）（存在する場合）−第２の結合パートナー（３８）の複合物（完全なサンドイッチ）を検知領域（５２）に流動させることが可能となる。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０１２０】
示されてはいないが、好ましくはサンプル塗布領域（４４）に重なる溶解領域が随意に存在してもよい。他の実施形態において、図１に関して議論された領域に類似した、捕捉試薬を含む遮断領域が存在してもよい。
【０１２１】
別の実施形態において、分析物のための２つの結合パートナーは、「垂直なサンドイッチ」を達成するような方法で位置付けられ、該サンドイッチにおいて、サンプルは第２の平面から圧縮される接合体と結合し、ストリップの平面でストリップ上に置かれた他の結合パートナーと、同時に又は連続して結合することができる。したがって、サンプル中の分析物をサンドイッチすることは、ストリップの平面の上から送達された接合体からのパートナーと結合することによって、及び、材料を送達するサンプルより下のストリップの平面に置かれた第２の結合パートナーと結合することによって、なされる。
【０１２２】
図５Ａと５Ｂは、サンプル圧縮機（３０）、サンプル採取装置（３５）、及びサンプル分析デバイス（図の試験ストリップ）を備えたシステムの実施形態の別の例を示す。図３Ａ乃至３Ｃと同様に、試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。図４Ａ乃至４Ｃに示される実施形態と同様に、この実施形態において、サンドイッチ（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））全体が、サンプル塗布領域（４４）において形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷されて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。
【０１２３】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を含む対照領域結合パートナー（６１）（図３Ｃで示される）も含む。対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）中のその結合パートナーと複合物を形成する。先行技術で知られているように、試験ストリップ上又はバッファー中ではなく、サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）を含んでいることによって、接合体（６１）と対照領域結合パートナー（６１）の両方を含むサンプル圧縮機（３０）上の構成要素が、サンプル分析デバイスに効率的に移され、従って、このシステムの適切な操作を保証するということをユーザーに確約することができる。
【０１２４】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。例えば、本発明の図５Ａ乃至５Ｂに示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ、及び、酵素基質結合アッセイで抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０１２５】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０１２６】
操作時、サンプルがサンプル塗布領域（４４）の上に直接あるように、サンプル採取装置（３５）が置かれる。サンプル圧縮機（３０）は、（存在する場合、分析物（４０）を含む）サンプルと接合体（３６）をサンプル塗布領域（４４）上に移すための圧力を用いて、サンプル採取装置（３５）上に圧力（５１）をかける。「垂直な」サンドイッチは、上部ピースとしての接合体（３６）と、下部ピースとしての第２の結合パートナー（３８）と、それらの間の分析物（４０）とによって形成される。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。移動が圧力によるものであって、流動又は毛細管現象ではないことに留意する。その後、バッファー（４３）が加えられることで、接合体（３６）−分析物（４０）（存在する場合）−第２の結合パートナー（３８）の複合物（完全なサンドイッチ）を検知領域（５２）に流動させることが可能となる。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０１２７】
示されてはいないが、好ましくはサンプル塗布領域（４４）に重なるか又はその上流に置かれる溶解領域が随意に存在してもよい。他の実施形態において、図１に関して議論された領域に類似した、捕捉試薬を含む遮断領域が存在してもよい。
【０１２８】
図６Ａと６Ｂは本発明の別の実施形態を示し、サンプル圧縮機（３０）は、タグ（３９）と結び付いた、分析物（４０）のための第２の結合パートナー（３８）を含み、試験ストリップは、分析物（４０）のための第１の結合パートナー（３７）と検知可能な標識（４１）との両方を含む接合体（３６）、及び、試験領域（４５）中の第２の結合パートナー上のタグと結合する固定化されたタグ（５０）を含む。この実施形態は、「垂直な」サンドイッチが頂部片としての第２の結合パートナー（３８）と底部片としての接合体（３６）と、それらの間の分析物（４０）とによって形成されるという点を除けば、図５Ａと５Ｂに関して記載された実施形態と同様に作用する。代替的に、この実施形態における接合体（３６）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップの任意の場所に位置付けられてもよい。
【０１２９】
図７Ａ乃至７Ｄは、検出領域（５２）が図３Ｃ、４Ｃ、５Ｂ及び６Ｂのサンプル塗布領域（４４）に重なるという点を除けば、これらの図のそれぞれに類似している。これらの実施形態における検出領域は、好ましくは、ニトロセルロースで作られている。側方流動はこれらの実施形態中のアッセイを行うのに厳密には要求されないが、サンドイッチが試験領域で結合することができ、任意の結合されていない接合体が試験領域から洗い流されるように、少なくともわずかな量の流動が好ましい。１つの実施形態において、試験ストリップの端部に塗布されるランニングバッファーの代わりに、洗浄液が試験領域へと上から又は横から、例えば、水筒を用いて直接塗布されてもよい。１つの実施形態において、サンプル圧縮機とサンプル採取装置は、試験ストリップから垂直な堆積物を取り除くことなく試験領域を読むことができるように、十分に透明である。試験領域（４５）及び対照（４６）の両方がこれらの図のサンプル塗布領域内に示されているが、他の実施形態において、対照領域（４６）がサンプル塗布領域（４４）の下流にある一方で、試験領域（４５）はサンプル塗布領域（４４）に重なることができることに留意する。対照領域がサンプル塗布領域（４４）から側方に下流にあれば、流動を可能にするためにバッファーを加える必要がある。加えて、陽性の結果から信号を強化するために、バッファー（例えば、銀を含むバッファー）を加えることが望ましいこともある。
【０１３０】
サンプル圧縮機（３０）が分析物（４０）のための結合パートナー（３７）（３８）を両方とも含む際に、図８Ａで示されるような一般的な試験ストリップ（８０）が使用されてもよい。サンプル圧縮機（３０）とサンプル採取装置（３５）は、サンプル窓（８１）で一般的な試験ストリップ（８０）に移される。試験されている分析物（４０）に特異的な要素がサンプル圧縮機（３０）上にあるので、一般的な試験ストリップ（８０）の表示窓（８２）内の試験領域（８３）は、分析物（４０）のための第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）との複合物を形成するタグ（５０）さえ有していればよい。例えば、分析物（４０）のための第２の結合パートナー（３８）がビオチンでタグ付け（３９）される際、一般的な試験ストリップ（８０）の試験領域（８３）は、ビオチンのための結合パートナーであるアビジン（３９）を含む。一般的な試験ストリップ（８０）は、好ましくは、対照領域（８４）とハウジング（８５）も含む。図７Ａ乃至７Ｄの実施形態では、試験領域はサンプル窓（８１）に位置する。他の実施形態において、適切なマーカーは、試験領域において固定化された適切な核酸配列とハイブリッド形成することができるヌクレオチド配列であり得る。
【０１３１】
サンプル圧縮機とサンプル採取装置は、図１乃至８Ａでは別の実体として示されているが、サンプル圧縮機のパッド（３３）とサンプル採取装置のサンプル採取部（６０）は、本発明の精神の範囲内で単一要素の構成要素であってもよい。例えば、サンプルが、サンプル圧縮機パッドに患者をさらすことなく、サンプル採取部を用いて患者から採取可能となるように、そして、サンプル採取部とサンプル圧縮機パッドがその後、圧縮による試験ストリップのサンプル塗布領域への塗布のために接触可能となるように、サンプル採取装置は、カートリッジの一部として、回転自在に又は柔軟にサンプル圧縮機に接続されてもよい。サンプル採取装置は、試験用カセットに回転自在に又は柔軟に接続されてもよく、或いは、カートリッジとして挿入されてもよい。別の実施形態において、サンプルは、圧縮機及び／又は接合体を所定の位置に置く前に、試験ストリップ上に強制的に直接注入されてもよい。また別の実施形態において、サンプル採取装置は、外部のカートリッジ内で接合体と接触してもよく、該カートリッジは試験用カセットを折るか又は試験用カセットに挿入することで、試験ストリップに接触した材料をもたらす。別の実施形態において、サンプルは、サンプル圧縮機に適用されてもよい。
【０１３２】
幾つかの実施形態において、サンプル圧縮機（３０）は、図８Ｂに示されるように、ハウジング（８５）に回転自在に接続される。サンプル圧縮機（３０）が開いている際にはストリップの下流側に向かって回転するように、サンプル圧縮機（３０）のヒンジは示されているが、ハウジングは、サンプル圧縮機（３０）が本発明の精神の範囲内でいずれかの側に、又は、他の方向にヒンジで連結されるように設計可能である。サンプル採取装置（３５）のサンプル採取部（６０）は、ハウジング（８５）の横の挿入穴部（８８）とぴったりと合うように、横から挿入されるのが好ましい。しかし、サンプル採取装置（３５）は、ハウジングの設計に依存して任意の方向に挿入可能である。サンプル圧縮機（３０）は好ましくは、試験ストリップ（８０）のサンプル塗布領域に面するサンプル圧縮機の面に配置された、１つ以上のアッセイ構成要素を含む、パッド（図８Ｂでは目に見えない）を含む。圧縮圧力がサンプル圧縮機のパッドと、サンプル採取部と、サンプル塗布領域との垂直な堆積物に加えられることで、サンプルと１以上のアッセイ成分を試験ストリップのサンプル塗布領域に移すように、サンプル圧縮機（３０）はその後閉じられる。図８Ｂのデバイスの遠方の上流端でハウジングから突き出た吸収パッドがある一方で、吸収パッドの長さは変化してもよい。実際に、バッファーを上流端で加えることができる限り（例えば、ハウジング内の塗布窓を通って）、吸収パッドをハウジングの外部で著しく伸ばす必要はない。この実施形態において、サンプル圧縮機を失う可能性はなく、垂直な堆積物を形成する際に、サンプル塗布領域とサンプル圧縮機を位置合わせする必要はない。これらの実施形態の１つの利点は、サンプルの塗布と、試験領域への流動の実際の開始との間に、時間差を与えることが可能となるということである。言いかえれば、サンドイッチを予め作ることができ、その流動はずっと後で開始されてもよい。代替的に、パッド（３３）は、本発明の精神の範囲内でサンプル圧縮機から離れてもよい。パッドはサンプル採取装置に類似する結合パートナー塗布装置上にあってもよい。これらの実施形態において、サンプル塗布領域にサンプルを移すためにサンプル圧縮機によって圧力がかけられる際、結合パートナー塗布装置は、サンプル採取部とサンプル塗布領域に配されてもよい。
【０１３３】
図９は、試験ストリップのサンプル圧縮機（３０）、サンプル採取部（６０）を含むサンプル採取装置（３５）、塗布装置のパッド（６４）を含む結合パートナー塗布装置（６２）、及び、サンプル塗布領域（４４）を含む垂直な堆積物を示す。結合パートナー塗布装置（６２）は図９においてハンドルを含むが、結合パートナー塗布装置（６２）は代替的に単なるパッドであってもよい。サンプル圧縮機（３０）の棚部分（３４）は、サンプルを負荷したサンプル採取部（６０）と、サンプル中の試験される分析物のための少なくとも１つの結合パートナーを負荷した塗布装置パッド（６４）とに圧力を加える。圧力は好ましくは、サンプル採取部（６０）からサンプルの少なくとも一部を無理やり押し進めることによって塗布装置パッド（６４）を湿らせ、それによって結合パートナーの幾つかを固定化し、サンプルの少なくとも幾つかと結合パートナーの幾つかがサンプル塗布領域（４４）に移されるようになる。幾つかの実施形態において、この移動は希釈せずに生じる。しかし、少量のサンプル、又は、粘着性の或いは固体のサンプルを用いる実施形態において、追加の液体を用いることで試験ストリップへのサンプルと結合パートナーの移動を促進してもよい。幾つかの実施形態において、図９に示されるように、パッドは、本発明の精神の範囲内で追加の液体又はバッファーを供給するなどして移動を支援するのに使用されてもよいが、サンプル圧縮機にはパッドがない。幾つかの実施形態において、図９に示されるように、サンプル採取部（６０）は、垂直な堆積物におけるサンプル圧縮機（３０）と塗布装置パッド（６４）との間に置かれることによって、圧縮の間に結合パートナーを試験ストリップに移動させるのに役立つ。代替的に、塗布装置パッド（６４）は、本発明の精神の範囲内で、サンプル圧縮機（３０）とサンプル採取部（６０）との間に置かれてもよい。試験領域に到達する前に完全なサンドイッチが形成される実施形態において、２つの結合パートナー塗布装置（分析物の各結合パートナーにつき別の塗布装置）は、本発明の精神の範囲内で垂直な堆積物に任意の順で配されるサンプル採取部、第１の塗布装置パッド、及び第２の塗布器と共に使用されてもよい。代替的に、単一の結合パートナー塗布器は、分析物のための結合パートナーを両方とも含むことができる。他の実施形態において、サンプル、第１の結合パートナー、及び第２の結合パートナーは、本発明の精神の範囲内でサンプル圧縮機を用いて、任意の順で試験ストリップに連続して塗布されてもよい。
【０１３４】
側方流動デバイスの試験ストリップにサンプルを塗布する方法において、少なくとも１つの外部の結合パートナーは、試験ストリップのサンプル塗布領域に最初に配される。外部の結合パートナーは外部パッドに置かれてもよい。試験領域に到達する前に分析物と結合する２つの分析物結合パートナーが存在する実施形態において、分析物結合パートナーの１つ又は両方が加えられてもよい。サンプルを含むサンプル採取装置は、外部の結合パートナーとサンプル圧縮機の間の垂直な堆積物に配される。サンプル圧縮機は、外部の結合パートナーとサンプルの少なくとも一部とをサンプル塗布領域に移すために、サンプル採取装置に圧力を加える。代替的に、外部の結合パートナーがサンプル圧縮機によって追加及び圧縮され、その後に取り除かれることができ、その後、サンプル採取装置がサンプル塗布領域上に積み重ねられ、そこでサンプルは試験ストリップ上に圧縮される。別の代替的な実施形態において、少なくとも１つの外部の結合パートナーは、サンプル圧縮機とサンプル採取装置との間の垂直な堆積物に配される。代替的に、サンプル採取装置が加えられ圧縮され、それから取り除かれ、その後、外部の結合パートナーが試験ストリップ上に加えられて、圧縮される。他の実施形態において、サンプル採取装置は、第１の外部の結合パートナーと第２の外部の結合パートナーとの間の垂直な堆積物の中にあり、サンプル圧縮機はその垂直な堆積物に圧力を加える。これらの実施形態において、ストリップもサンプル圧縮機も特定の分析物結合パートナーを有していない。サンプル、分析物結合パートナー、及び、流動性の対照結合パートナーも、本発明の精神の範囲内で、任意の組み合わせで複数の工程においてサンプル塗布領域に塗布されてもよい。
【０１３５】
代替的に、本発明の側方流動デバイスにおいて、サンプル圧縮機は、所望の分析物に特異的な成分を含まない一般的なサンプル圧縮機であってもよい。１つの実施形態において、サンプル圧縮機は、アッセイの構成要素を包含していない。対照を含む実施形態において、サンプル圧縮機のパッドは、流動性の対照領域結合パートナーのみを含む。これらの実施形態において、１つ以上の結合パートナー塗布装置は、分析物のための少なくとも１つの結合パートナーを含み、サンプルがサンプル塗布領域に移される際に、サンプル圧縮機とサンプル採取装置とを含む垂直な堆積物の一部となる。サンプル、分析物結合パートナー、及び、流動性の対照結合パートナーも、本発明の精神の範囲内で、任意の組み合わせで複数の工程においてサンプル塗布領域に塗布されてもよい。
【０１３６】
本発明の別の実施形態において、サンプル圧縮機（３０）はサンプル採取装置としても機能し、サンプル圧縮機のパッド（３３）はサンプル採取部としても機能する。この実施形態において、接合体、第２の結合パートナー、対照領域結合パートナー、及び／又は、その３つの任意の組み合わせは、好ましくは、パッドがサンプル圧縮機アームに取り付けられるパッド（３３）の背面に置かれる。サンプルの採取が無菌で行われる必要がある実施形態において、サンプル圧縮機（３０）は好ましくは、サンプル採取装置としての使用前に放射線によって殺菌される。サンプルはその後、サンプルを獲得する間に患者が接合体又は第２の結合パートナーにさらされないように、パッドの前部を用いて採取される。サンプルが試験ストリップのサンプル塗布領域に塗布される際、サンプルが接合体又は第２の結合パートナーと混合し、その両方の少なくとも一部が試験ストリップ上に絞り出されるように、パッドが圧縮されるのが好ましい。他の実施形態において、採取されたサンプルは、アッセイを実行する前にサンプル採取装置（例えばピペット）からサンプル圧縮機のパッドまで移される。
【０１３７】
幾つかの実施形態において、本発明の側方流動デバイスは、内蔵型の、オンライン式の、又はインサイツの信号増幅システムも含んでもよい。サンプル増幅システムは、本発明の精神の範囲内で、サンプル圧縮機と組み合わせて、又は、サンプル圧縮機のない方法或いはデバイスで、使用されてもよい。コロイド金が接合体の検知可能な標識として使用される実施形態において、試験領域に結合する接合体のコロイド金の信号は、銀増感（ｓｉｌｖｅｒ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）によって更に増幅可能である。銀塩と銀の顕色剤の適切な製剤は、サンプル塗布の部位で、又は、その上流或いは下流で、乾燥させることができる。銀塩と顕色剤は、一緒に、互いに対して上流又は下流で、乾燥されるか、又は、サンプル塗布領域によって分離させることができる。他の実施形態において、銀塩及び／又は銀の顕色剤はカプセル化されることで、増強の時間遅延をもたらすことができ、それにより、銀増感が生じる前に試験線で完全なサンドイッチを形成することを可能にする。
【０１３８】
他の実施形態において、システムが追加の抗原を含む接合体と第２の接合体（好ましくは、抗原の特異的な結合パートナーを含むナノ粒子）とを含んでいる堆積物は、信号を増幅するために使用される。第２の接合体は、好ましくは標識も含む。第２の接合体において、結合パートナーは、第１の接合体中の粒子と同じ大きさか、これよりも小さいか、又は大きい粒子に結合されてもよい。幾つかの実施形態において、抗原と第２の接合体はカプセル化される。また他の実施形態において、銀増感と堆積強化（ｓｔａｃｋｉｎｇ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）の両方は同じ試験ストリップ上で使用されてもよい。堆積複合物と銀増感の要素は、一緒に、又は、互いに対して上流或いは下流にあり得る。これらの実施形態の好ましい特徴は、両方の「積み重ねられる」ナノ粒子及び／又は銀増感体（ｅｎｈａｎｃｅｒ）が、最初は接合体と接触しないが、接合体が試験領域に固定化されている間のみ接触するということである。したがって、更に優れた特異性が達成される。幾つかの実施形態において、銀増感要素及び／又は積み重ねられる増強要素の１つ又は両方はカプセル化されることで、信号の増幅の時間遅延をもたらすことができる。
【０１３９】
複合物が検出領域（５２）に到達する前に、分析物（４０）、第１の分析物結合パートナー（３７）、及び第２の分析物結合パートナー（３８）の間で「完全なサンドイッチ」が形成される幾つかの実施形態において（例えば、図４Ａ−４Ｃ、５Ａ−５Ｂ、及び６Ａ−６Ｂを参照）、接合体が検出領域（５２）に到達する前に銀塩及び／又は銀の顕色剤が完全なサンドイッチと相互に作用するように、銀増感又は他の増幅の信号はサンプル塗布領域（４４）の上流に配されてもよい。完全なサンドイッチを持つ他の実施形態において、検出領域（５２）に到達する前に完全なサンドイッチが形成され、銀塩／顕色剤へと移動するように、銀塩及び／又は銀の顕色剤は、サンプル塗布領域（４４）の下流に置かれる。
【０１４０】
図１０に示されるような先行技術において、試験領域（４５）に分析物（４０）と標識（４１）が一対一の対応で存在する。なぜなら、各々の分析物は、接合体（３６）上の１つの標識（４１）によって、１つの固定化された結合パートナー（３７）と１つの固定化された結合パートナー（３８）とに結合するからである。
【０１４１】
本発明の信号増幅システムにおいて、増幅源は、サンプル塗布領域、又は、その上流或いは下流を含む、試験ストリップのいかなる場所に位置してもよい。代替的に、増幅源は、バッファー中に、又は、サンプル圧縮機上に置かれてもよい。増幅要素の何れか又は全てがカプセル化されてもよい。
【０１４２】
図１１に示されるような幾つかの実施形態において、多数の接合体が試験領域内で結合した１つの分析物に付随するように、増幅源（７０）は接合体上に非特異的にそれ自体を堆積する。この実施形態において、増幅源は好ましくは１つ以上の銀塩であり、銀の顕色剤は、接合体の標識部分（４１）としてコロイド金を用いて、アッセイでの信号を強化するために使用されてもよい。銀塩と銀の顕色剤は、分析物の検出を強化する任意の方法で位置付けられるか導入されてもよい。コロイド金が接合体のための検知可能な標識として使用される実施形態において、試験領域内で結合した接合体のコロイド金の信号は、銀増感によって増幅させることができる。銀塩と銀の顕色剤の適切な製剤は、サンプル塗布の部位で、又は、その上流或いは下流で乾燥させることができる。銀塩と顕色剤は、一緒に、互いに対して上流又は下流で、乾燥させることができるか、又は、サンプル塗布領域によって分離させることができる。代替的に、銀塩及び／又は顕色剤は、バッファーの一部として含まれることができる。幾つかの好ましい実施形態において、銀塩及び／又は銀の顕色剤はカプセル化されてもよい。
【０１４３】
好ましい実施形態において、銀の塩と顕色剤の混合物は、サンプル塗布領域と試験領域の間の領域で乾かされる。この実施形態において、２つの結合パートナー（１つは金の接合体であり、もう１つはビオチンなどのマーカーで適切にタグ付けされる）間の分析物の完全なサンドイッチは、銀増感領域に移り、それらが捕捉される際に一緒に試験領域に移動する。銀増感は捕捉前に半サンドイッチに適用されてもよいが、銀増感は捕捉後に適用されるのが好ましい。なぜなら、それはさもなければ試験領域における結合に干渉する場合があるからである。銀の塩と顕色剤は、限定されないが、図３Ａ−３Ｃ、４Ａ−４Ｃ、５Ａ−５Ｂ、６Ａ−６Ｂ、及び７Ａ乃至７Ｄで示されるものを含む、本明細書に記載の実施形態の何れかにおいて使用されてもよい。
【０１４４】
また別の実施形態において、銀増感領域は、サンプル塗布材料の真下に直接位置する。上述されるような両方の結合パートナーを含む圧縮機は、完全なサンドイッチを形成し、全て１つの場所で銀の塩と顕色剤によって強化されるようになる。その後、この巨大な複合物は試験領域へと移動することができ、この試験領域において複合物は捕捉され得る。
【０１４５】
また別の実施形態において、銀増感は、ランニングバッファーに銀の塩と顕色剤を組み込むことによって達成される。他の実施形態において、銀塩及び／又は銀の顕色剤は、サンプル採取装置が無菌である必要がない状況下で、サンプル圧縮機又はサンプル採取装置に置かれてもよい。さもないと、サンプル採取装置は、例えば、銀塩及び／又は銀の顕色剤を損なわない放射線などの滅菌技術を用いて、銀塩及び／又は銀の顕色剤の追加後に殺菌されてもよい。
【０１４６】
また別の実施形態において、銀塩は、サンプル塗布領域に対する部位、上流、又は下流で乾燥され、銀の顕色剤は、別の工程として表示窓に加えることが可能である。
【０１４７】
銀増感を含む好ましい実施形態において、銀が光に敏感であるので、試験は上下逆さまに（カセットが使用される実施形態において、カセットをひっくり返して）実行されるか、又は、さもなければ、試験の完了前に周辺光から保護される。
【０１４８】
別の実施形態において、試験領域（８３）がある表示窓（８２）に銀の塩と顕色剤が一緒に又は別々に加えられる場合、銀増感は別の工程として達成される。表示窓領域（８２）がない場合、銀の塩と顕色剤は好ましくは、ストリップの試験領域（８３）に加えられる。これらの実施形態の幾つかにおいて、試験ストリップが使用後にまだ濡れているか、又は、乾燥されている間に、銀増感は試験ストリップに加えられる。これらの実施形態の幾つかにおいて、ストリップは任意のハウジングから取り除かれ、試験領域（８３）を包含するストリップの一部は切断されるか、又は、一緒に或いは別々に銀増感で処理される。
【０１４９】
１つの好ましい実施形態において、ストリップは、試験が行われた後に空気中で乾かされる。ストリップの適度な乾燥は、約２０〜３０分で達成されるが、環境条件に依存する。ストリップが乾いた後、試験領域（８３）がある表示窓領域（８２）に、一滴又は二滴の銀の塩と顕色剤が加えられる。表示窓領域（８２）がない場合、銀の塩と顕色剤は好ましくは、ストリップの試験領域（８３）に加えられる。これは感度を最小でも五倍高める。銀の塩と顕色剤は、一緒に又は別々に加えられてもよい。銀増感はほとんど瞬間的に生じ、その結果は更なる銀増感後の２〜３分以内に好ましくは読み取られる。結果が迅速に読み取られない場合、ストリップは黒くなり、背景は、結果として生じる灰色／黒色の試験線の読み取りを妨げる。洗浄液が表示窓（８２）／試験領域（８３）に加えられると、この背景の大部分は最小化される。感度は、携帯型の光学読み取り装置（例えば、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｄｕｎｅｄｉｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ）によって製造された小型のスペクトロメーター）を使用することで高められてもよい。携帯型の読み取り装置は、手で持てるサイズの小型のスペクトロメーターであり、これは、試験線と結合する標識化された複合物の吸光度又は反射率を測定する試験線の色強度を定量化する。試験線の定量化は標準曲線を用いて測定することができる。標準曲線を展開する際に、分析物濃度の様々な滴定が作成され、各々の滴定で読み取り装置の出力が記録される。読み取り装置は、試験の感度を５乃至１０倍にまで上げる。操作時、目に見える試験線を見る検出窓は、直接的な吸光度又は反射率の測定が可能となるように、スペクトロメーターの開口部に直接置かれるか、又は、その近くに置かれる。
【０１５０】
別の好ましい実施形態において、銀の塩及び／又は顕色剤の溶液は揮発性液体を含む。銀の塩と顕色剤は、単一の溶液に、又は、別の溶液として、一緒に作られることができる。室温で蒸発するか、又は、容易に蒸発して試験を妨げない任意の液体が使用可能である。揮発性溶媒は、第２の結合パートナー（１７）（図１を参照）、（３８）（図３Ａ−３Ｃ、及び７Ａを参照）、又は固定化されたタグ（５０）（図４Ａ−４Ｃ、５Ａ−５Ｂ、６Ａ−６Ｂ、及び７Ｂ−７Ｄを参照）が置かれる試験領域（８３）を構成する膜材料（例えば、ニトロセルロース）を溶かさないような方法で選択される。使用することができる揮発性液体の幾つかの例は、限定されないが、メタノール、イソプロピルアルコール、低濃度ベンゼン、及び低濃度アセトンを含んでいる。銀増感は、銀塩と、好ましくは本来は比較的有機の顕色剤とを有する。試験ストリップがまだ十分に湿っている際に、銀の塩と顕色剤の溶液は、試験領域（８３）が試験の最後（例えば、サンプルがストリップに加えられて約１０分後）に置かれる表示窓領域（８２）に加えられる。表示窓領域（８２）がない場合、銀の塩と顕色剤は好ましくは、ストリップの試験領域（８３）に加えられる。揮発性液体は、液体が加えられる領域（試験領域（８３））を「乾燥させる」。この実施形態において、ストリップ全体が適度に乾燥するのを待つ必要はない。この実施形態は、所望の領域（試験領域（８３））のみの「インサイツの」乾燥をもたらす。
【０１５１】
図１２に示されるような幾つかの実施形態において、増幅は「堆積」現象によるものであり、この現象では、第２の接合体（７４）はアッセイ中に形成された複合物の少なくとも一部の上に「堆積する」。これらの実施形態において、第１の接合体（７２）は、追加部分（７３）の結合パートナー（７６）が特異的に結合するこの追加部分（７３）を含み、第２の接合体（７４）は好ましくは標識（７８）も含む。例えば、第２の結合パートナー（３８）がアビジンタグ（３９）を含む場合、完全なサンドイッチは固定化されたビオチン（５０）によって試験領域で捕捉され、その後又は同時に、「堆積」接合体は、試験領域で固定化された完全なサンドイッチ上に蓄積するか、又は、堆積されて、より一層堆積された蓄積物とより優れた信号認識をもたらす。１つの実施形態において、第１の節体は分析物とトリＩｇＹの抗体に接合した金であり、第２の接合体は、ウサギの抗トリ抗原に接合した赤色ラテックスビーズである。
【０１５２】
好ましくは、「堆積」は、試験領域に到達する前に「完全なサンドイッチ」が形成される実施形態でのみ使用される。例えば、図４Ｃ、５Ｂ、６Ｂ、７Ｂ、７Ｃ、及び７Ｄにおいて、完全なサンドイッチはサンプル塗布領域で形成される。好ましい実施形態において、標識化された接合体上のマウス抗体は抗原に結合することで、第１の複合物を形成する。第１の複合物は、固定化されたビオチンで標識化されたポリクローナル抗体とすぐに結合することで、第２の複合物として完全なサンドイッチを形成する。その後、第２の複合物はビオチン標識を介してアビジンによって試験領域にて捕捉される。その後、遅らせて放出した抗マウス標識接合体は、試験領域内の第２の複合物中でマウス抗体に結合すると共に堆積する。抗マウス標識接合体は、好ましくは、分析物の複合物が形成された後に試験領域に到達するように置かれる。抗マウス標識接合体に好ましい幾つかの位置は、サンプル塗布領域内、サンプル塗布領域の上流、予め定められた期間の後にバッファーに加えられること、サンドイッチが形成された後に試験領域に塗布されること、又は、流路内であるがその放出を例えば２０〜３０秒遅らせるためにカプセル化することを含む。この実施形態において、堆積はアッセイの感度を３乃至５倍にまで高める。
【０１５３】
側方流動アッセイの全てで使用される金の接合体を含む本発明の実施形態において、標識化されて乾燥される抗トリＩｇＹ又は別の非特異的な免疫原性部分は、サンプル塗布領域から上流の試験ストリップ上で、又は、代替的にバッファー中で組み込まれる。サンプルが哺乳動物（例えば、ヒト）である場合、非特異的な免疫原性部分は、分析物の結合に干渉しないように、例えば、鳥、魚、又は植物などの非哺乳動物の生物からのものであるのが好ましい。その後、第２の接合体（例えば、抗トリＩｇＹ）はバッファーによって動かされる。第２の接合体の動きを遅らせることによって、完全なサンドイッチは、流動するとともに、流動性の第２の結合パートナーの場合、タグに固定化されたタグ（例えば、ビオチン−アビジン）を介して試験領域にて捕捉物と結合し始めることができる。完全なサンドイッチは試験領域で蓄積し、その後、第１の接合体（例えば、金）上で、第２の接合体（例えば、赤色ラテックスビーズ）と結合してこれを積み重ねる。この実施形態は更にアッセイの感度を３−５倍にまで高める。分析物のための第２の結合パートナーが試験領域で固定化される実施形態において、半サンドイッチは好ましくは試験領域へ移動し、その後、結合と堆積が起こる。
【０１５４】
図１１は非特異的な増幅を示し、図１２は特異的な増幅を示す。他の実施形態において、特異的な増幅と非特異的な増幅の両方の組み合わせは、信号を更に増幅するために使用可能である。例として、第１の増幅は、第２の接合体（７４）がアッセイ中に形成された複合物の少なくとも一部の上に「堆積する」、図１２に関して上に示されて議論されるような「堆積」現象によるものである。多数の接合体が、図１１に関して上に示され且つ議論された如く、試験領域中で結合した１つの分析物に付随するように、増幅源（７０）が接合体上に非特異的に堆積する場合、さらなる増幅が提供される。特異的及び非特異的な増幅の他の組み合わせは、代替的に使用可能である。
【０１５５】
堆積と信号の強化の別の実施形態において、強化は堆積部分に結合した酵素を使用して行なわれる。１つの例において、酵素は西洋ワサビペルオキシダーゼであり、ウサギ抗マウス抗体に結合する。西洋ワサビペルオキシダーゼは、弱い信号を増幅するためにしばしば使用されるが、弱い信号を強化する他の酵素が代替的に使用されてもよく、これは、限定されないが、アルカリフォスファターゼ、カタラーゼ、ウレアーゼ、及びグルコースオキシダーゼを含む。同様に、接合体又は中間物と結合する他の抗体が、代替的に使用可能である。この実施形態にはナノ粒子も微粒子もない。その代わりに、この実施形態は接合体の「可溶性の」形態を含んでいる。この酵素接合体が乾燥される位置は変化することがあり、それは、サンプル塗布領域の上流、下流、又はサンプル塗布領域に重なる位置であってもよい。サンプル圧縮機を含む実施形態において、酵素接合体は代替的にサンプル圧縮機上にあってもよい。酵素接合体は好ましくは、試験ストリップ上で乾燥されるが、固定化されない。酵素接合体は、単独で、又は、（好ましくはビオチン化された）抗体及び／又は金と接合した抗体で「サンドイッチ」を形成する他の構成要素と組み合わせて置かれ得る。
【０１５６】
図１４は、堆積部分に接合した酵素を含む検出器の実施形態を示す。対照領域（４６）は固定化された第１の対照結合パートナー（１１０）を含む。試験領域（４５）は、膜上の固定化された第１の試験領域結合パートナー（１０９）を含む。第２の試験領域結合パートナー（１０１）に接合した第１の分析物結合パートナー（１０２）は乾燥されるか、又は、さもなければ、サンプル塗布領域（４４）に組み込まれる（例えば、凍結乾燥される）。この図では示されていないが、第１の分析物結合パートナー（１０２）は、代替的に、サンプル塗布領域（４４）の上流又は下流に置くことができる。別の分析物結合パートナー（１０３）のための結合パートナー（１０７）は酵素（１０８）に結合して、サンプル塗布領域（４４）の上流に置かれる。代替的に、第２の分析物結合パートナー（１０３）のための結合パートナー（１０７）は、サンプル塗布領域（４４）と重なるか、又は、サンプル塗布領域（４４）の下流に置かれ得る。サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は好ましくは、第１の検知可能な標識（１０４）に結合した第２の分析物結合パートナー（１０３）が埋め込まれ、及び、対照として機能する第２の検知可能な標識（１０６）に接合した第２の対照結合パートナー（１０５）と好ましくは混合される。
【０１５７】
図１４は、試験ストリップ又はサンプル圧縮機（３０）上の特定の位置の異なる試薬を示しているが、試験ストリップ上の及び／又はサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）上の、第２の試験領域結合パートナー（１０１）と接合した第１の分析物結合パートナー（１０２）、第２の分析物結合パートナー（１０３）のための結合パートナー（１０７）、第１の検知可能な標識（１０４）と接合した第２の分析物結合パートナー、及び、第２の検知可能な標識（１０６）と接合した第２の対照結合パートナー（１０５）の各々のための他の位置も、同様に可能である。他の実施形態はサンプル圧縮機（３０）を必要としない。これらの実施形態において、試薬（１０１）、（１０２）、（１０３）、（１０４）、（１０５）、（１０６）、（１０７）、及び（１０８）は、試験ストリップ上の様々な位置、好ましくは、試験領域（４５）の上流に置かれる。
【０１５８】
サンプルはサンプルスワブ（３５）上で得られ、その後、（ハウジング及びサンプル窓を備えた実施形態において）サンプル窓（８１）を通ってサンプル塗布領域（４４）に、又は、そのままサンプル塗布領域（４４）上に配される。その後、サンプル圧縮機（３０）はサンプル塗布領域（４４）上で圧縮される。サンプル圧縮機（３０）の吸収性の先端は、サンプル圧縮機（３０）を取り除く前に、約１５−３０秒間、ランニングバッファー中に浸されるのが好ましい。図１５Ａと１５Ｂは、試薬と分析物の間で形成される異なる複合物を示す。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物は、第１の分析物結合パートナー（１０２）、及び、酵素（１０８）と結合した結合パートナー（１０７）と複合物を形成する第２の分析物結合パートナー（１０３）とで、複合物を形成する。
【０１５９】
分析物（４０）がサンプル中にない場合、第２の分析物結合パートナー（１０３）は、酵素（１０８）と接合した結合パートナー（１０７）と依然として複合物を形成するが、サンプル又は第１の分析物結合パートナー（１０２）とは複合物を形成しない。第２の試験領域結合パートナー（１０１）は、分析物（４０）がサンプル中にあるかどうかにかかわらず、試験領域（４５）内の第１の試験領域結合パートナー（１０９）と結合する。しかしながら、分析物が存在しない場合、試験線には何も見えない。その結果は約１０分で視覚的に読み取られる。目に見える試験線が目に見える対照線に沿って形成されると、その結果はサンプル中の高レベルの分析物を示している。１０分間の終わりに、試験線で目に見える線がない場合、酵素のための基質が１滴だけその試験線で加えられる。酵素基質の追加が目に見える信号をもたらす場合、その結果は弱陽性のサンプルを示す。対照線での目に見える線は、第２の検知可能な標識（１０６）と結合した第２の対照結合パートナー（１０５）が、対照領域（４６）で第１の対照結合パートナー（１１０）と結合したこと、及び、試験が正確に行われたことを示す。図１５Ｃは、対照領域で形成される複合物を示す。
【０１６０】
例として、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）検出器は、図１４に示されるように以下の部分を含む。対照領域（４６）は固定化されたウサギ抗トリＩｇＹ抗体（１１０）を含む。試験領域（４５）は、ニトロセルロース膜上に固定化されたニュートラアビジン（１０９）を含む。ビオチン化した（１０１）ポリクローナル抗体ＨＳＶ−１及び／又はＨＳＶ−２（１０２）は、サンプル塗布領域（４４）上で乾燥される。この図では示されていないが、抗ＨＳＶ−１／ＨＳＶ−２（１０２）は代替的に、サンプル塗布領域（４４）の上流又は下流で乾燥させることができる。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（１０８）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）（１０７）は、サンプル塗布領域（４４）の上流で乾燥される。代替的に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（１０８）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（１０７）は、サンプル塗布領域（４４）と重なるか、又は、サンプル塗布領域（４４）の下流に置くことができる。サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、好ましくは、コロイド金（１０４）と接合したマウスモノクローナル抗ｇＤ  １＆２（１０３）（単純ヘルペスウイルスの糖タンパク質Ｄに対するモノクローナル抗体）が埋め込まれ、対照として機能する青色で染色したラテックスビーズ（１０６）と接合したトリＩｇＹ（１０５）と混合される。
【０１６１】
サンプルはサンプルスワブ（３５）上で得られ、その後、（ハウジング及びサンプル窓を備えた実施形態において）サンプル窓（８１）を通ってサンプル塗布領域（４４）に、又は、そのままサンプル塗布領域（４４）上に配される。その後、サンプル圧縮機（３０）はサンプル塗布領域（４４）上で圧縮される。サンプル圧縮機（３０）の吸収性の先端は、サンプル圧縮機（３０）を取り除く前に、約１５−３０秒間、ランニングバッファー中に浸されるのが好ましい。図１５Ａと１５Ｂは、試薬と分析物の間で形成される異なる複合物を示す。ＨＳＶ（分析物（４０））がサンプル中にある場合、ＨＳＶは、ビオチン化した（１０１）ポリクローナル抗ＨＳＶｌ／２（１０２）と、ＨＲＰ（１０８）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（１０７）と複合物を形成するコロイド金（１０４）と接合したマウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２（１０３）とで、複合物を形成する。
【０１６２】
ＨＳＶがサンプル中にない場合、コロイド金（１０４）と接合したモノクローナル抗ｇＤ１＆２（１０３）は、ＨＲＰ（１０８）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（１０７）と依然として複合物を形成するが、サンプル、又はビオチン化した（１０１）ポリクローナル抗ＨＳＶｌ／２（１０２）とは複合物を形成しない。ビオチン化した（１０１）ポリクローナル抗ＨＳＶｌ／２（１０２）は、ＨＳＶがサンプル中にあるかどうかにかかわらず、試験領域（４５）内でニュートラアビジン（１０９）と結合する。しかし、ＨＳＶが存在しなければ、ビオチン化した（１０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ  １／２（１０２）は試験線では目に見えない。その結果は約１０分で視覚的に読み取られる。目に見える赤色の試験線が青色の対照線に沿って形成されると、その結果はサンプル中の高レベルのＨＳＶを示す。１０分間の終わりに、試験線で赤い線が目に見えない場合、酵素基質ＴＭＢＭ（又は、西洋ワサビペルオキシダーゼ用のための別の基質）の一滴が試験線で加えられる。ＴＭＢＭの追加が青／紫の試験線を結果として生じる場合、結果は弱い陽性サンプルを示す。対照線の青色線は、青色に染色したラテックスビーズ（１０６）と接合したトリＩｇＹ（１０５）が対照領域（４６）内のウサギ抗トリＩｇＹ（１１０）に結合したこと、及び、試験が正確に行われたことを示唆している。図１５Ｃは、対照領域で形成される複合物を示す。
【０１６３】
この実施形態において、ポイント・オブ・ケア検査は酵素結合のものになり、増幅は酵素と基質の量に依存し、時間と共に増加する。これは、コロイド金のようなナノ粒子、又は、ラテックスビーズのような微粒子に対して視覚的にタグ付けされた接合体では生じない。加えて、試験線の結果は、抗原−抗体イムノアッセイによるものではなく、ニュートラアビジンとビオチン間のような、リガンドと受容体の間の結合アッセイによるものである。試験線での結合は免疫学的結合によるものではなく、化学的結合によるものである。したがって、それは酵素結合イムノアッセイ法（ＥＬＩＳＡ又はＥＩＡ）ではない。その代わりに、サンプル圧縮機とともに使用される際、それは、酵素結合のクロモフィルトグラフィ（ｃｈｒｏｍｏｆｉｌｔｏｇｒａｐｈｙ）、又は、直接的な複数面の酵素クロモフィルトグラフィである。試験線に酵素基質を加えるという追加工程でも、試験を行なうことは依然として容易である。
【０１６４】
図１６、１７Ａ、及び１７Ｂに示される代替的な堆積の実施形態において、酵素は、接合体と堆積部分の両方の上で検知可能な標識に物理的に結合される。１つの例において、酵素は目に見えて検知可能なビーズ（例えば、赤色ラテックスビーズ）をコーティングし、ウサギ抗マウス抗体と接合される。西洋ワサビペルオキシダーゼは、弱い信号を増幅するためにしばしば使用されるが、弱い信号を強化する他の酵素が代替的に使用されてもよく、これは、限定されないが、アルカリフォスファターゼ、カタラーゼ、ウレアーゼ、及びグルコースオキシダーゼを含む。同様に、接合体又は中間物と結合する他の抗体が代替的に使用可能である。この実施形態にはナノ粒子も微粒子もない。その代わりに、この実施形態は接合体の「可溶性の」形態を含んでいる。この酵素接合体が乾燥される位置は変化することがあり、それは、サンプル塗布領域の上流、下流、又はサンプル塗布領域に重なる位置であってもよい。サンプル圧縮機を含む実施形態において、酵素接合体は代替的にサンプル圧縮機上にあってもよい。酵素接合体は好ましくは、試験ストリップ上で乾燥されるが、固定化されない。酵素は、単独で、又は、好ましくはビオチン化された抗体と「サンドイッチ」を形成する他の構成要素と組み合わせて置かれ得る。
【０１６５】
図１６は、接合体と堆積部分の両方の上で検知可能な標識に物理的に結合された酵素を含む検出器の実施形態を示す。対照領域（４６）は、図１４に示される検出器と類似した、固定化された第１の対照結合パートナー（１１０）を含む。試験領域（４５）は、膜上の固定化された第１の試験領域結合パートナー（２０９）を含む。第２の試験領域結合パートナー（２０１）に接合した第１の分析物結合パートナー（２０２）は乾燥されるか、又は、さもなければ、サンプル塗布領域（４４）に組み込まれる（例えば、凍結乾燥される）。この図では示されていないが、第１の分析物結合パートナー（２０２）は、代替的に、サンプル塗布領域（４４）の上流又は下流に置くことができる。
【０１６６】
酵素（２０８）と接合するとともに検知可能な標識（２１５）（これは酵素（２０８）とも接合する）と接合する第２の分析物結合パートナー（２０３）のための結合パートナー（２０７）は、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に好ましくは埋め込まれる。他の実施形態において、検知可能な標識（２１５）と接合した、第２の分析物結合パートナー（２０３）のための結合パートナー（２０７）のみが存在し、検知可能な標識も酵素（２０８）と接合している。幾つかの実施形態において、酵素（２０８）は、検知可能な標識（２１５）をコーティングすることによって検知可能な標識（２１５）に接合している。幾つかの実施形態において、酵素（２０８）と接合した結合パートナー（２０７）と、検知可能な標識（２１５）（これは酵素（２０８）とも接合している）と接合した結合パートナー（２０７）は、試験ストリップ上に置かれるか、サンプル塗布領域（４４）と重なるか、又は、サンプル塗布領域（４４）の上流又は下流に置かれることができる。サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）には好ましくは、酵素（２０８）でコーティングされた検知可能な標識（２０４）と接合した第２の分析物結合パートナー（２０３）が埋め込まれ、これは、対照として機能する検知可能な標識（１０６）（図１４に示される）と接合した第２の対照結合パートナー（１０５）と好ましくは混合されている。
【０１６７】
図１６は、試験ストリップ又はサンプル圧縮機（３０）上の特定の位置の異なる試薬を示しているが、試験ストリップ上の及び／又はサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）上の、第２の試験領域結合パートナー（２０１）と接合した第１の分析物結合パートナー（２０２）、酵素（２０８）と接合した結合パートナー（２０７）、酵素でコーティングした第１の検知可能な標識（２１５）と接合した結合パートナー（２０７）、及び、検知可能な標識（１０６）と接合した第２の対照結合パートナー（１０５）の各々のための他の位置も、同様に可能である。他の実施形態はサンプル圧縮機（３０）を必要としない。これらの実施形態において、試薬（２０１）、（２０２）、（２０３）、（２０４）、（１０５）、（１０６）、（２０７）２０８、及び（２１５）は、試験ストリップ上の様々な位置、好ましくは、試験領域（４５）の上流に置かれる。
【０１６８】
サンプルはサンプルスワブ（３５）上で得られ、その後、（ハウジング及びサンプル窓を備えた実施形態において）サンプル窓（８１）を通ってサンプル塗布領域（４４）に、又は、そのままサンプル塗布領域（４４）上に配される。その後、サンプル圧縮機（３０）はサンプル塗布領域（４４）上で圧縮される。サンプル圧縮機（３０）の吸収性の先端は、サンプル圧縮機（３０）を取り除く前に、約１５−３０秒間、ランニングバッファー中に浸されるのが好ましい。図１７Ａと１７Ｂは、試薬と分析物の間で形成される異なる複合物を示す。分析物（４０）がサンプルにある場合、それは、第１の分析物結合パートナー（２０２）と第２の分析物結合パートナー（２０３）とで複合物を形成する。第２の分析物結合パートナーはまた、結合パートナー（２０７）と複合物を形成する。
【０１６９】
分析物（４０）がサンプル中にない場合、第２の分析物結合パートナー（２０３）は、結合パートナー（２０７）と依然として複合物を形成するが、サンプル又は第１の分析物結合パートナー（２０２）とは複合物を形成しない。第２の試験領域結合パートナー（２０１）は、分析物（４０）がサンプル中にあるかどうかにかかわらず、試験領域（４５）内の第１の試験領域結合パートナー（２０９）と結合する。しかし、分析物（４０）が存在しない場合、第１の分析物結合パートナー（２０２）と接合されるとともに、第１の試験領域結合パートナー（２０９）と複合物を形成する、第２の試験領域結合パートナー（２０１）は、試験線では目に見えない。その結果は約１０分で視覚的に読み取られる。目に見える試験線が目に見える対照線に沿って形成されると、その結果はサンプル中の高レベルの分析物を示している。１０分間の終わりに、試験線に目に見える線がない場合、酵素基質が一滴だけ試験線で加えられる。酵素基質の追加が目に見える試験線をもたらす場合、その結果は弱陽性のサンプルを示す。対照線での目に見える線は、第２の対照結合パートナー（１０５）が、対照領域（４６）で第１の対照結合パートナー（１１０）と結合したこと、及び、試験が正確に行われたことを示す。対照線複合物は、図１５Ｃに示される。
【０１７０】
この実施形態において、酵素は、検知可能な標識（例えば、ラテックスビーズ）に物理的に結合され、検知可能な標識とともに移動する。したがって、特異性と背景の問題は改善される。高レベルの抗原では、陽性の結果は、目に見える線によって容易に目に見えて検知可能である。非常に低いレベルでは、酵素増幅された発色反応を得るために、酵素基質は結果窓に加えられる。酵素（２０８）と検知可能な酵素（２１５）を含む結合パートナー（２０７）を含む試薬の多くを、サンプル圧縮機上に置くことによって、これらの試薬はストリップ上にはなくなる。幾つかの好ましい実施形態において、第２の分析物結合パートナー（２０３）は、（酵素標識された結合パートナーを含む、又は、含まない）結合パートナー（２０７）と事前に混合され、サンプル圧縮機パッド内に埋め込まれることができる。これらの実施形態において、試験ストリップは、第１の試験領域結合パートナー（２０９）と結合する第２の試験領域結合パートナー（２０２）を含む。これによって、試験ストリップはイムノアッセイではなく結合アッセイとなる。
【０１７１】
例として、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）検出器は、図１６に示されるように以下の部分を含む。対照領域（４６）は、図１４に示される検出器と類似した、固定化されたウサギ抗トリＩｇＹ抗体（１１０）を含む。試験領域（４５）は、ニトロセルロース膜上に固定化されたニュートラアビジン（２０９）を含む。ビオチン化した（２０１）ポリクローナル抗体ＨＳＶ−１及び／又はＨＳＶ−２（２０２）は、サンプル塗布領域（４４）上で乾燥される。この図では示されていないが、抗ＨＳＶ−１／ＨＳＶ−２（２０２）は代替的に、サンプル塗布領域（４４）の上流又は下流で乾燥させることができる。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（２０８）と結合したウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）（２０７）は、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングした赤色ラテックスビーズ（２１５）に接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）を加え、及び、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に好ましくは埋め込まれる。他の実施形態において、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングされた赤色ラテックスビーズ（２１５）と結合したウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）のみがある。代替的に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（２０８）と結合したウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）と、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングされた赤色ラテックスビーズ（２１５）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）は、試験ストリップに置かれるか、サンプル塗布領域（４４）に重なるか、サンプル塗布領域（４４）の下流又は上流に置かれる。サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は好ましくは、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングされた赤色ラテックスビーズ（２０４）と接合したマウスモノクローナル抗ｇＤ  １＆２（２０３）（単純ヘルペスウイルスの糖タンパク質Ｄに対するモノクローナル抗体）が埋め込まれ、対照として機能する青色で染色したラテックスビーズ（１０６）（図１４に示される）と接合したトリＩｇＹ（１０５）と混合されている。
【０１７２】
サンプルはサンプルスワブ（３５）上で得られ、その後、（ハウジング及びサンプル窓を備えた実施形態において）サンプル窓（８１）を通ってサンプル塗布領域（４４）に、又は、そのままサンプル塗布領域（４４）上に配される。その後、サンプル圧縮機（３０）はサンプル塗布領域（４４）上で圧縮される。サンプル圧縮機（３０）の吸収性の先端は、サンプル圧縮機（３０）を取り除く前に、約１５−３０秒間、ランニングバッファー中に浸されるのが好ましい。図１７Ａと１７Ｂは、試薬と分析物の間で形成される異なる複合物を示す。ＨＳＶ（分析物（４０））がサンプル中にある場合、ＨＳＶは、ビオチン化した（２０１）ポリクローナル抗ＨＳＶｌ／２（２０２）と、赤色ラテックスビーズ（２０４）と接合したマウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２（２０３）と複合物を形成し、マウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２（２０３）は、ＨＲＰ（２０８）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）と、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングされた赤色ラテックスビーズ（２１５）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）とで複合物を形成する。
【０１７３】
ＨＳＶがサンプル中にない場合、赤色ラテックスビーズ（２０４）と接合したモノクローナル抗ｇＤ１＆２（２０３）は、ウサギ抗マウスＩｇＧ（２０７）と依然として複合物を形成するが、サンプル、又はビオチン化した（２０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ１／２（２０２）とは複合物を形成しない。ビオチン化した（２０１）ポリクローナル抗ＨＳＶｌ／２（２０２）は、ＨＳＶがサンプル中にあるかどうかにかかわらず、試験領域（４５）内でニュートラアビジン（２０９）と結合する。しかし、ＨＳＶが存在しなければ、ビオチン化した（２０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ１／２（２０２）は試験線では目に見えない。その結果は約１０分で視覚的に読み取られる。目に見える赤色の試験線が青色の対照線に沿って形成されると、その結果はサンプル中の高レベルのＨＳＶを示す。１０分間の終わりに、試験線で赤い線が目に見えない場合、酵素基質ＴＭＢＭ（又は、西洋ワサビペルオキシダーゼ用のための別の基質）の一滴が試験線で加えられる。ＴＭＢＭの追加が青／紫の試験線を結果として生じる場合、結果は弱い陽性サンプルを示す。対照線の青色線は、青色に染色したラテックスビーズ（１０６）と接合したトリＩｇＹ（１０５）が対照領域（４６）内のウサギ抗トリＩｇＹ（１１０）に結合したこと、及び、試験が正確に行われたことを示唆している。対照線複合物は、図１５Ｃに示される。
【０１７４】
この実施例において、ウサギ抗マウス抗体は、赤色ラテックスビーズにも接合した酵素と接合しており、追加のウサギ抗マウス抗体は同じビーズに直接接合される。酵素はビーズに物理的に結合され、ビーズとともに移動する。したがって、特異性と背景の問題は改善される。高レベルの抗原では、陽性の結果は、赤色線によって容易に目に見えて検知可能である。非常に低いレベルでは、酵素増幅された発色反応を得るために、酵素基質は結果窓に加えられる。
【０１７５】
サンプル圧縮機に（同じビーズ上で接合した酵素に沿って）赤いビーズと接合したウサギ抗マウス抗体を置くため、これらの試薬はストリップ上にない。幾つかの好ましい実施形態では、遊離型のマウスモノクローナル抗ｇＤ  １＆２は、（酵素標識化したウサギ抗マウスを含む又は含まない）ウサギ抗マウスで事前に混合され、サンプル圧縮機パッド内に埋め込まれることができる。これらの実施形態で、試験ストリップは、ニュートラアビジンと結合するビオチンを含む。これによって、試験ストリップはイムノアッセイではなく結合アッセイとなる。
【０１７６】
図１８、１９Ａ、及び１９Ｂは、本発明の別の堆積の実施形態を示す。この実施形態において、酵素は、堆積部分の検知可能な標識に接合され／物理的に結合され、分析物と結合する接合体は検知可能な標識を含んでいない。この実施形態はさらに特異性を高める。１つの例において、酵素は目に見えて検知可能なビーズ（例えば、赤色ラテックスビーズ）をコーティングし、ウサギ抗マウス抗体と接合される。西洋ワサビペルオキシダーゼは、弱い信号を増幅するためにしばしば使用されるが、弱い信号を強化する他の酵素が代替的に使用されてもよく、これは、限定されないが、アルカリフォスファターゼ、カタラーゼ、ウレアーゼ、及びグルコースオキシダーゼを含む。同様に、接合体又は中間物と結合する他の抗体が代替的に使用可能である。この実施形態にはナノ粒子も微粒子もない。その代わりに、この実施形態は接合体の「可溶性の」形態を含んでいる。この酵素接合体が乾燥される位置は変化することがあり、それは、サンプル塗布領域の上流、下流、又はサンプル塗布領域に重なる位置であってもよい。サンプル圧縮機を含む実施形態において、酵素接合体は代替的にサンプル圧縮機上にあってもよい。酵素接合体は好ましくは、試験ストリップ上で乾燥されるが、固定化されない。酵素は、単独で、又は、（好ましくはビオチン化された）抗体と「サンドイッチ」を形成する他の構成要素と組み合わせて置かれ得る。
【０１７７】
堆積部分の検知可能な標識と、検知可能な標識を含んでいない分析物と結合する接合体とに接合した／物理的に結合した酵素を含む検出器の実施形態は、図１８に示される。対照領域（４６）は、図１４に示される検出器と類似した、固定化された第１の対照結合パートナー（１１０）を含む。試験領域（４５）は、膜上の固定化された第１の試験領域結合パートナー（３０９）を含む。第２の試験領域結合パートナー（３０１）に接合した第１の分析物結合パートナー（３０２）は乾燥されるか、又は、さもなければ、サンプル塗布領域（４４）に組み込まれる（例えば、凍結乾燥される）。この図では示されていないが、第１の分析物結合パートナー（３０２）は、代替的に、サンプル塗布領域（４４）の上流又は下流に置くことができる。酵素（３０８）と接合体した第２の分析物結合パートナー（３０３）のための結合パートナー（３０７）と、酵素（３０８）にコーティングされたか、さもなければ結合した検知可能な標識（３１５）（例えば、ラテックスビーズ）と結合した結合パートナー（３０７）との混合物は、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）へ好ましくは埋め込まれる。他の実施形態において、（例えば、酵素コーティングラテックスビーズによって）酵素（３０８）とも接合している検知可能な標識（３１５）と接合した結合パートナー（３０７）のみがある。酵素と接合した結合パートナー（３０７）、及び酵素でコーティングされた検知可能な標識（３１５）に接合した結合パートナー（３０７）は、この図中のサンプル圧縮機（３０）上に示されているが、これらの構成要素は代替的に、試験ストリップ上に置かれ、サンプル塗布領域（４４）に重なっているか、サンプル塗布領域（４４）の下流又は上流に置かれ得る。サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）にも、好ましくは別の分析物結合パートナー（３０３）が埋め込まれる。前述の実施形態とは異なり、第２の分析物結合パートナー（３０３）は検知可能な標識又は酵素とは接合しない。幾つかの実施形態において、第２の分析物結合パートナー（３０３）は好ましくは、対照として機能する検知可能な標識（１０６）（図１４に示される）と接合した第２の対照結合パートナー（１０５）と混合されている。
【０１７８】
図１８は、試験ストリップ又はサンプル圧縮機（３０）上の特定の位置の異なる試薬を示しているが、試験ストリップ上の及び／又はサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）上の、第２の試験領域結合パートナー（３０１）と接合した第１の分析物結合パートナー（３０２）、酵素（３０８）と接合した第２の分析物結合パートナー（３０３）と、酵素（３０８）にコーティングされるかそうでなければ接合される検知可能な標識（３１５）と接合した結合パートナー（３０７）との混合物、及び、検知可能な標識（１０６）と接合した第２の対照結合パートナー（１０５）の各々のための他の位置も、同様に可能である。他の実施形態はサンプル圧縮機（３０）を必要としない。これらの実施形態において、試薬（３０１）、（３０２）、（３０３）、（３０４）、（１０５）、（１０６）、（３０７）３０８、及び（３１５）は、試験ストリップ上の様々な位置、好ましくは、試験領域（４５）の上流に置かれる。
【０１７９】
サンプルはサンプルスワブ（３５）上で得られ、その後、（ハウジング及びサンプル窓を備えた実施形態において）サンプル窓（８１）を通ってサンプル塗布領域（４４）に、又は、そのままサンプル塗布領域（４４）上に配される。その後、サンプル圧縮機（３０）はサンプル塗布領域（４４）上で圧縮される。サンプル圧縮機（３０）の吸収性の先端は、サンプル圧縮機（３０）を取り除く前に、約１５−３０秒間、ランニングバッファー中に浸されるのが好ましい。図１９Ａと１９Ｂは、試薬と分析物の間で形成される異なる複合物を示す。分析物（４０）がサンプルにある場合、それは、第１の分析物結合パートナー（３０２）と第２の分析物結合パートナー（３０３）とで複合物を形成する。第２の分析物結合パートナー（３０３）はまた、結合パートナー（３０７）と複合物を形成する。
【０１８０】
分析物（４０）がサンプル中にない場合、第２の分析物結合パートナー（３０３）は、結合パートナー（３０７）と依然として複合物を形成するが、サンプル又は第１の分析物結合パートナー（３０２）とは複合物を形成しない。第２の試験領域結合パートナー（３０１）は、分析物がサンプル中にあるかどうかにかかわらず、試験領域（４５）内の第１の試験領域結合パートナー（３０９）と結合する。しかしながら、分析物４０が存在しない場合、試験線にて結果として生じる複合物は見えない。その結果は約１０分で視覚的に読み取られる。目に見える試験線が目に見える対照線に沿って形成されると、その結果はサンプル中の高レベルの分析物（４０）を示している。１０分間の終わりに、試験線に目に見える線がない場合、酵素基質が一滴だけ試験線で加えられる。酵素基質の追加が目に見える試験線をもたらす場合、その結果は弱陽性のサンプルを示す。対照線での目に見える線は、第２の検知可能な標識（１０６）と結合した第の対照結合パートナー（１０５）が、対照領域（４６）で第１の対照結合パートナー（１１０）と結合したこと、及び、試験が正確に行われたことを示す。対照線複合物は、図１５Ｃに示される。
【０１８１】
この実施形態において、結合パートナー（３０７）は、検知可能な標識（３１５）（例えば、ラテックスビーズ）とも接合した酵素（３０８）と接合しており、追加の結合パートナー（３０７）は同じ検知可能な標識（３１５）に直接接合する。酵素は、検知可能な標識に物理的に結合され、検知可能な標識とともに移動する。したがって、特異性と背景の問題は改善される。高レベルの抗原では、陽性の結果は、目に見える線によって容易に目に見えて検知可能である。非常に低いレベルでは、酵素増幅された発色反応を得るために、酵素基質は結果窓に加えられる。
【０１８２】
サンプル圧縮機に結合パートナー（３０７）及びその他の構成要素（３０８と３１５）を置くと、これらの試薬がストリップ上にはなくなる。幾つかの好ましい実施形態において、第２の分析物結合パートナー（３０３）は、（酵素標識化された結合パートナー（３０７）を含む又は含まない）結合パートナー（３０７）と事前に混合され、サンプル圧縮機パッドに埋め込むことができる。これらの実施形態において、デバイスはビオチンとアビジンのような結合パートナーを含む。これによって、試験ストリップはイムノアッセイではなく結合アッセイとなる。
【０１８３】
例として、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）検出器は、図１８に示されるように以下の部分を含む。対照領域（４６）は、図１４に示される検出器と類似した、固定化されたウサギ抗トリＩｇＹ抗体（１１０）を含む。試験領域（４５）は、ニトロセルロース膜上に固定化されたニュートラアビジン（３０９）を含む。ビオチン化した（３０１）ポリクローナル抗体ＨＳＶ−１及び／又はＨＳＶ−２（３０２）は、サンプル塗布領域（４４）上で乾燥される。この図では示されていないが、抗ＨＳＶ−１／ＨＳＶ−２（３０２）は代替的に、サンプル塗布領域の上流又は下流に置くことができる。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（３０８）と結合したウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）（３０７）は、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングした赤色ラテックスビーズ（３１５）に接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）を加え、及び、サンプル圧縮機のパッド（３３）に好ましくは埋め込まれる。他の実施形態において、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングされた赤色ラテックスビーズ（３１５）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）のみがある。代替的に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（３０８）と結合したウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）と、西洋ワサビペルオキシダーゼ（３０８）でコーティングされた赤色ラテックスビーズと接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）は、試験ストリップに置かれるか、サンプル塗布領域（４４）に重なるか、サンプル塗布領域（４４）の下流又は上流に置かれる。サンプル圧縮機（３０）上のパッドにも、好ましくは遊離したマウスモノクローナル抗ｇＤ  １＆２（３０３）が埋め込まれている。前述の実施形態とは異なり、遊離したマウスモノクローナル抗体（３０３）は検知可能な標識又は酵素とは接合しない。遊離したマウスモノクローナル抗体（３０３）は、好ましくは、対照として機能する青色で染色したラテックスビーズ（図１４に示される）に接合したトリＩｇＹ（１０５）と混合される。
【０１８４】
サンプルはサンプルスワブ（３５）上で得られ、その後、（ハウジング及びサンプル窓を備えた実施形態において）サンプル窓（８１）を通ってサンプル塗布領域（４４）に、又は、そのままサンプル塗布領域（４４）上に配される。その後、サンプル圧縮機（３０）はサンプル塗布領域（４４）上で圧縮される。サンプル圧縮機（３０）の吸収性の先端は、サンプル圧縮機（３０）を取り除く前に、約１５−３０秒間、ランニングバッファー中に浸されるのが好ましい。図１９Ａと１９Ｂは、試薬と分析物の間で形成される異なる複合物を示す。ＨＳＶ（分析物（４０））がサンプルにある場合、ＨＳＶは、ビオチン化した（３０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ１／２（３０２）と、マウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２（３０３）と複合物を形成し、マウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２（３０３）は、ＨＲＰ（３０８）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）と、西洋ワサビペルオキシダーゼでコーティングされた赤色ラテックスビーズ（３１５）と接合したウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）とで複合物を形成する。
【０１８５】
ＨＳＶがサンプルにない場合、マウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２（３０３）は、ウサギ抗マウスＩｇＧ（３０７）と依然として複合物を形成するが、サンプル、又はビオチン化した（３０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ１／２（３０２）とは複合物を形成しない。ビオチン化した（３０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ１／２（２０２）は、ＨＳＶがサンプル中にあるかどうかにかかわらず、試験領域（４５）内でニュートラアビジン（３０９）と結合する。しかし、ＨＳＶが存在しなければ、ビオチン化した（３０１）ポリクローナル抗ＨＳＶ１／２（３０２）は試験線では目に見えない。その結果は約１０分で視覚的に読み取られる。目に見える赤色の試験線が青色の対照線に沿って形成されると、その結果はサンプル中の高レベルのＨＳＶを示す。１０分間の終わりに、試験線で赤い線が目に見えない場合、酵素基質ＴＭＢＭ（又は、西洋ワサビペルオキシダーゼ用のための別の基質）の一滴が試験線で加えられる。ＴＭＢＭの追加が青／紫の試験線を結果として生じる場合、結果は弱い陽性サンプルを示す。対照線の青色線は、青色に染色したラテックスビーズ（１０６）と接合したトリＩｇＹ（１０５）が対照領域（４６）内のウサギ抗トリＩｇＹ（１１０）に結合したこと、及び、試験が正確に行われたことを示唆している。対照線複合物は、図１５Ｃに示される。
【０１８６】
この実施例において、ウサギ抗マウス抗体は、赤色ラテックスビーズにも接合した酵素と接合しており、追加のウサギ抗マウス抗体は同じビーズに直接接合される。酵素はビーズに物理的に結合され、ビーズとともに移動する。したがって、特異性と背景の問題は改善される。高レベルの抗原では、陽性の結果は、赤色線によって容易に目に見えて検知可能である。非常に低いレベルでは、酵素増幅された発色反応を得るために、酵素基質は結果窓に加えられる。
【０１８７】
サンプル圧縮機に（同じビーズ上で接合した酵素に沿って）赤いビーズと接合したウサギ抗マウス抗体を置くため、これらの試薬はストリップ上にない。幾つかの好ましい実施形態において、遊離型のマウスモノクローナル抗ｇＤ１＆２は、（酵素標識化したウサギ抗マウスを含む又は含まない）ウサギ抗マウスで事前に混合され、サンプル圧縮機パッド内に埋め込まれることができる。これらの実施形態において、デバイスはビオチンとアビジンのような結合パートナーを含む。これによって、試験ストリップはイムノアッセイではなく結合アッセイとなる。
【０１８８】
幾つかの好ましい実施形態において、ニトロセルロースは遮断薬で「遮断され」、それによって反応の特異性は増加する。遮断薬の幾つかの例は、限定されないが、カゼイン及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む。ニトロセルロース膜を遮断する際は常に、ニトロセルロースの固有の電荷は中和され、したがって、どの追加のタンパク質も遮断された膜と結合することができない。加えて、クロマトグラフィの構造は変えられ、流動は、従来のクロマトグラフィの代わりに滑空流（ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｌｏｗ）又は摺動流（ｓｌｉｄｉｎｇ  ｆｌｏｗ）に好ましくは似ている。結果は独特のクロモフィルトグラフィ工程である。
【０１８９】
図２１Ａは、強化要素を含む側方流動試験ストリップの別の実施形態を示す。この実施形態は、好ましくは、分析物（４０）の代わりに種に特異的な標識化された結合パートナー（４０７）を含む。例として、分析物のための結合パートナー（４０２）がマウス抗体である場合、標識化された種に特異的な結合パートナー（４０７）は抗マウス抗体である。別の例として、分析物のための結合パートナー（４０２）がウサギ抗体である場合、標識化された種に特異的な結合パートナー（４０７）は抗ウサギ抗体である。当業者は、任意の種に特異的な結合パートナー（４０７）、又は、分析物（４０）には特異的でないが、分析物のための結合パートナー（４０２）に特異的な他の結合パートナーが、この実施形態で使用可能であることを理解するであろう。当業者は、交差反応を最小限にするために種を選ぶ方法も知るであろう。
【０１９０】
サンプル塗布領域（４４）は、分析物（４０）のための第１の結合パートナー（４０２）を含む。第１の結合パートナー（４０２）が検知可能な標識を含まないことに留意する。この実施形態において、第１の結合パートナー（４０２）の幾つかは、好ましくはタグ付けされ（４０１）、タグ（４０１）のための結合パートナー（４０９）は検知可能な標識で好ましくは標識化される。好ましい実施形態において、タグ付け（４０１）される第１の結合パートナー（４０２）の量は、試験中の第１の結合パートナー（４０２）の総量の１−１０％である。
【０１９１】
サンプル塗布領域（４４）は、（第１の結合パートナー（４０２）の種により第１の結合パートナー（４０２）と結合する（検知可能な標識（４１７）と接合した）標識化された種に特異的な結合パートナー（４０７）も含む。サンプル塗布領域（４４）は好ましくは、標識化された（４１５）の対照結合パートナー（４０５）を含む。分析物（４０）のための第１の結合パートナー（４０２）、目に見える標識（４１７）と種に特異的な結合パートナー（４０７）を含む接合体、及び、目に見える標識（４１５）と結合した対照接合体（４０５）がこの図のサンプル塗布領域（４４）内に示されているが、これらの構成要素の任意の組み合わせは、先の実施形態に述べられているように、試験ストリップ上の（サンプル塗布領域の上流、下流、又はこれに重なって）、厚いは、サンプル圧縮機（３０）上の任意の場所に置かれてもよい。
【０１９２】
試験領域（４５）は、分析物（４０）に対する固定化された第２の結合パートナー（４２７）を含む。対照領域（４６）は、対照結合パートナー（４０５）のための固定化された結合パートナー（４２０）を含む。試験領域（４５）と対照領域（４６）は、ニトロセルロース膜に好ましくは置かれる。
【０１９３】
分析物（４０）を含むサンプルが試験ストリップに加えられると、第１の結合パートナー（４０２）は分析物（４０）と結合し、「半サンドイッチ」を形成する。これは好ましくは試験ストリップ上の流動なく生じる。ランニングバッファーが塗布されると、それは「半サンドイッチ」を動かす。ランニングバッファーは種に特異的な結合パートナー（４０７）も動かす。流動中に、種に特異的な結合パートナー（４０７）は、半サンドイッチにおいて、第１の結合パートナー（４０２）と相互に作用してこれと結合する。第１の結合パートナー（４０２）の結合部位が複数あるため、分析物（４０）の検出を強化する凝集又は堆積の効果がある。試験領域（４５）において、今や凝集した複合物又は堆積した複合物の一部である分析物（４０）は、完全なサンドイッチを形成するために固定化された第２の結合パートナー（４２７）と結合する。結果は、試験領域（４５）に形成された、強化された目に見える信号である。対照結合パートナー（４０５）と固定化された対照結合パートナー（４２０）の間の結合は、検知可能な信号（４１５）をもたらす。
【０１９４】
分析物（４０）の存在下で、種に特異的な結合パートナー（４０７）と接合した検知可能な信号（４１７）は、複合物の一部であり、目に見えるはずである。目に見える試験線がユーザーによって「読み取」られる場合、試験は分析物（４０）の存在について陽性の結果として記録される。試験線が目に見えないかはっきりしない場合、その後、検知可能な標識（例えば、コロイド金又はラテックスビーズ）に接合したタグ（４０１）のためのタグ結合パートナー（４０９）を含む流体が一滴以上、試験領域（４５）に加えられる。タグ結合パートナー（４０９）は、第１の結合パートナー（４０２）上のタグ（４０１）に瞬間的に結合する。これは、分析物（４０）の存在下で試験線の可視性を著しく高める。分析物の不在下で、タグ結合パートナー（４０９）は消え、試験線は目に見えない。
【０１９５】
図２１Ｂは、分析物（４０）がサンプル中にある際の試験線で堆積された複合物を示す。図２１Ｃは、タグ（４０１）と（４０９）を加えて堆積された複合物を示す。
【０１９６】
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）を検知するための図２１Ａ乃至２１Ｃで示される実施形態の例において、サンプル塗布領域（４４）は、ビオチン化した（４０１）マウスＨＳＶ  ｇＤ１＆２（４０２）と同様に、（ＨＳＶに結合する）遊離型マウスＨＳＶ  ｇＤ  １＆２（４０２）を含んでいる。好ましい実施形態において、遊離型ＨＳＶ  ｇＤ１＆２（４０２）の約１−１０％はビオチン化（４０１）している。
【０１９７】
サンプル塗布領域（４４）は、同様に、赤色ラテックスビーズ（４１７）と接合したウサギ抗マウス抗体（４０７）、及び、青色ラテックスビーズ（４１５）と接合した対照トリＩｇＹ抗体（４０５）を含む。ウサギ抗マウス抗体（４０７）が分析物（４０）に特異的ではないことに留意する。その代わりに、それはマウスＨＳＶ  ｇＤ１＆２抗体（４０２）に特異的に結合する。上に議論されたように、ＨＳＶ  ｇＤ１＆２（４０２）、ビオチン化した（４０１）ＨＳＶ  ｇＤ１＆２（４０２）、赤色ラテックスビーズに接合したウサギ抗マウス抗体、青色ラテックスビーズに接合したトリＩｇＹ抗体、又は、これらの要素の任意の組み合わせのいずれかは、代替的に、サンプル塗布領域（４４）の上流、下流にあるか、又は、重なってもよく、或いは、サンプル圧縮機（３０）が使用される実施形態でサンプル圧縮機（３０）上に含まれてもよい。試験領域（４５）は、サンプル中にある際にＨＳＶ分析物（４０）に結合する、固定化されたウサギ抗ＨＳＶ（４２７）を含む。対照領域（４６）は固定化されたウサギ抗トリ／ウサギＩｇＧ（４２０）を含む。試験領域（４５）と対照領域（４６）は好ましくは、ニトロセルロース膜に置かれる。
【０１９８】
分析物（４０）を含むサンプルが試験ストリップに加えられると、ＨＳＶ  ｇＤ１＆２（４０２）は分析物（４０）に結合し、「半サンドイッチ」を形成する。これは、試験ストリップ上の流動なく生じる。ランニングバッファーが塗布されると、それは「半サンドイッチ」を動かす。ランニングバッファーはウサギ抗マウス抗体（４０７）も動かす。流動中に、ウサギ抗マウス抗体（４０７）は、半サンドイッチ内のＨＳＶ  ｇＤ１＆２（４０２）抗体と相互に作用して、これに結合する。マウス抗体（４０２）上に複数の結合部位があるため、分析物（４０）の検出を強化する凝集又は堆積の効果がある。試験領域（４５）において、今や凝集した複合物又は堆積した複合物の一部である、凝集した又は堆積した複合物分析物（４０）は、完全なサンドイッチを形成するために固定化されたウサギ抗−ＨＳＶ（４２７）と結合する。結果は、試験領域（４５）に形成された、強化された目に見える信号である。対照接合体トリＩｇＹ（４０５）と、固定化されたウサギ抗トリ／ウサギＩｇＧ（４２０）との間で結合が生じ、青色の検知可能な標識（４１５）をもたらす。
【０１９９】
分析物（４０）の存在下で、ウサギ抗マウス抗体（４０７）と接合した赤色ラテックスビーズ（４１７）は、複合物の一部であり、目に見えるはずである。目に見える試験線がユーザーによって「読み取」られる場合、試験は分析物（４０）の存在について陽性の結果として記録される。試験線が目に見えないかはっきりしない場合、コロイド金又はラテックスビーズに接合した（４０９）アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンを一滴、試験領域（４５）に加える。アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジン接合体（４０９）は、即座にＨＳＶ  ｇＤ１＆２抗体（４０２）上のビオチン（４０１）に結合する。これは、分析物（４０）の存在下で試験線の可視性を著しく高める。分析物の不在下で、アビジン、ストレプトアビジン、又はニュートラアビジン接合体（４０９）は消え、どの試験線も目に見えない。
【０２００】
幾つかの実施形態において、ニトロセルロース膜の代わりに、中性であるナイロン又はポリエステルのような膜を使用することができる。これらの実施形態において、ニュートラアビジン、抗体、及び抗原などのタンパク質は、直接固定化されない。その代わりに、これらは、膜に「堆積して」、隙間に保持される微粒子と接合する。中性膜の使用が特にこの実施形態に関して示されているが、本発明の他の実施形態において、これらの膜上に堆積した中性膜と微粒子を代替的に使用することができる。
【０２０１】
図１３は、本発明の側方流動デバイスの実施形態における銀増感と堆積の両方のための信号強化材料の幾つかの好ましい位置を示す。図１３は、検出領域の位置について２つの選択肢を概略的に示し、信号強化に特異的な要素のみが図で示されている。
【０２０２】
銀増感を含む実施形態において、銀塩（７０）は、好ましくは、サンプル塗布領域（４４）と試験領域（４５）の間の領域（９０）に位置することで、サンドイッチの少なくとも一部が銀塩結合の前に形成可能となる。代替的に、銀塩（７０）は、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）上に、サンプル塗布領域（４４）中に、サンプル塗布領域（４４）の上流の領域（９２）中に、ランニングバッファー（４３）中に、又は、アッセイが行われた後に直接試験領域（４５）上に配されてもよい。幾つかの実施形態において、銀の顕色剤（７１）もサンプル塗布領域と試験領域の間の領域（９０）に置かれる。他の実施形態において、銀の顕色剤（７１）は、サンプル塗布領域（４４）の上流の領域（９２）に、ランニングバッファー（４３）中に、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に、又は、アッセイが行われた後に直接試験領域（４５）上に置かれる。
【０２０３】
堆積にかかる実施形態において、第１の接合体（７２）は、サンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）上に、サンプル塗布領域（４４）中に、サンプル塗布領域（４４）の上流の領域（９２）中に、または、サンプル塗布領域から下流の領域（９０）中に置かれてもよい。代替的に、第１の接合体（７２）は、サンプル塗布領域の塗布の前に、サンプルと事前に混合されてもよく、この実施形態において、半サンドイッチはアッセイデバイスの外部で形成される。第２の接合体（７４）は好ましくは、サンプル塗布領域から下流の領域（９２）に置かれる。代替的に、第２の接合体（７４）はサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に置かれてもよい。代替的に、第２の接合体（７４）は、限定されないが、サンプル塗布領域の上流、接合体の上流を含む、第１の接合体（７２）への到達から遅れても可能な位置にあってもよく、又は、アッセイ開始後に一度、ランニングバッファー中や直接試験領域に加えられてもよい。好ましくはないが、第１の接合体（７２）又は第２の接合体（７４）の何れか又は両方は、代替的にランニングバッファー（４３）（図示せず）中に置かれてもよい。
【０２０４】
幾つかの実施形態において、信号の増幅は、１つ以上のカプセル化した時間遅延の構成要素を含んでもよい。例えば、銀増感構成要素（７０）（７１）の何れか又は両方は、図２２Ａ乃至２２Ｃに示されるようにカプセル化されてもよい。別の実施形態において、堆積接合体（７４）は、図２３Ｂに示されるようにカプセル化されてもよい。また別の実施形態において、堆積接合体（７４）と、銀増感構成要素（７０）（７１）の何れか又は両方は、何れもカプセル化されてもよい。図１１乃至２１に記載される信号強化要素の何れかがカプセル化されてもよい。他の実施形態において、側方流動アッセイの構成要素の何れかは、時間遅延を提供するためにカプセル化することができる。例えば、第１の接合体（７２）は、図２３Ａにおいてカプセル化されて示される。第１の接合体（７２）をカプセル化することは好ましくないが、この図は、時間遅延をもたらすために、アッセイの構成要素の何れかをカプセル化する可能性を表わす。
【０２０５】
カプセル化した構成要素は、好ましくは試験ストリップ上に噴霧又は乾燥されるが、試験ストリップ上の配置の他の方法も可能である。好ましい実施形態において、カプセル化した強化要素は試験ストリップに、又は、試験線のちょうど上流に配されるが、試験ストリップ上の他の場所も可能である。
【０２０６】
銀（７０）及び／又は顕色剤（７１）はカプセル化され、好ましくは乾燥形態で又は溶液中で側方流動デバイス上に配される。カプセル化した銀（７０）及び／又はカプセル化した顕色剤（７１）は、好ましくは、側方流動デバイスに埋め込まれるが、その上で固定化されない。カプセル化材料（６００）は、好ましくは約５分後に、ランニングバッファーによって溶解し、それにより、完全なサンドイッチが試験線に形成された後に銀を放出する。別の実施形態において、カプセル化するマトリックス（６００）は、プロテアーゼが作用し且つ開裂することが可能なペプチドなどの戦略的に置かれた「基質」を含有してもよく、故に、マトリックス中に穴を作る。これらプロテアーゼ又は「細胞溶解」薬剤は、ランニングバッファー中にあってもよい。プロテアーゼの代わりに、カプセル化するマトリックス（６００）をゆっくり蓄積し、選択的に破裂させる、塩などの細胞溶解剤がある。カプセル化した構成要素の放出（時限放出又は遅延放出）は、カプセル化材料（６００）の遅い溶解によるものか、又は、サンドイッチが完全に形成された又は形成されつつある試験線の方へとカプセル化した試薬又は粒子がゆっくりと流出且つ流動する、カプセル化するマトリックス（６００）中の「カクハン孔」によるものである。また、幾つかの実施形態において、時間遅延構成要素の幾つか又は全ては、サンドイッチ複合物が試験線に結合して固定化される前に、サンドイッチ複合物の上に「堆積する」。
【０２０７】
幾つかの実施形態において、銀（７０）と顕色剤（７１）の両方は、図２２Ｃに示されるように、共にカプセル化され得る。これら実施形態において、銀（７０）と顕色剤（７１）は好ましくは、カプセル化（６００）内で独立した小球のように分離する。小球は異なる速度で破裂する場合もある。故に、カプセル化（６００）が破裂する場合、１つの小球は銀塩（７０）を含み、別個の小球は顕色剤（７１）を含む。顕色剤（７１）を含む小球は、銀塩（７０）よりも遅い速度で破裂し、又はその逆の場合もある。類似法として、異なる色をつけたマーブル（ｍａｒｂｌｅｓ）を含むバルーンを想像する。バルーンは破裂して、異なる色をつけたマーブルが流出するのを可能にする。１つのタイプのマーブルは、銀塩と別のタイプのマーブルをカプセル化し、それらは、銀塩マーブルよりも遅い速度で破裂し、顕色剤をカプセル化する。他の実施形態において、銀と顕色剤は別個にカプセル化されるが（図２２Ａと２２Ｂを参照）、試験ストリップ上の同じ場所にある。また他の実施形態において、銀（７０）と顕色剤（７１）は、試験ストリップ上の異なる場所において別個にカプセル化される（図２２Ａと２２Ｂを参照）。他の実施形態において、銀（７０）（図２２Ａを参照）又は顕色剤（７１）（図２２Ｂを参照）の１つだけがカプセル化される。
【０２０８】
同様に、図２３Ｂに示されるように、堆積接合体（７４）はカプセル化され、乾燥形態で又は溶液中の側方流動デバイス上に配されてもよい。信号を増幅する（堆積を増加させる）ための抗体、抗原又は他の接合体を備えた実施形態において、二次的な堆積構造のためにこれらの構成要素のカプセル化を使用することができる。好ましい実施形態において、幾つかの実施例において抗体又は抗原である、これら構成要素は、好ましくは試験線でカプセル化されるが、代替的に試験ストリップ上の他の場所に置かれてもよい。
【０２０９】
試験ストリップの任意の構成要素、特に、限定されないが抗体、抗原、ペプチド、及び酵素を含む二次的な操作（信号の増幅など）を行うものは、本発明の精神の中でカプセル化することが可能である。加えて、強化要素のカプセル化は、本明細書に開示される実施形態の何れかと組み合わせて使用することが可能である。
【０２１０】
カプセル化とマイクロカプセル化の方法は、当該技術分野で既知である。幾つかのカプセル化方法は、限定されないが、遠心的な排出、震動のノズルコアによるカプセル化、噴霧乾燥又は流動浸漬などの物理的なカプセル化方法、又は、コアセルベーション、界面重合（界面重縮合又は界面架橋結合）、インサイツの重合、又はマトリックス重合などの化学的カプセル化方法を含む。
【０２１１】
幾つかの例として、銀（７０）、顕色剤（７１）、及び／又は堆積接合体（７４）は、カプセル、パール、マイクロビーズ、スフィア、結晶、及び粒子を含むがこれらに限定されない様々な形成された封入物の中でカプセル化されてもよい。好ましい実施形態において、ＬｉｐｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのカプセル化生成物が使用される（ＬｉｐｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（Ｖａｎｄａｌｉａ、ＯＨ））（例えば、Ｌｉｐｏｃｒｙｓｔａｌ（商標）カプセル化生成物、Ｌｉｐｏｓｐｈｅｒｅ（商標）カプセル化生成物、Ｌｉｐｏｐｅａｒｌ（商標）カプセル化生成物、Ｌｉｐｏｃａｐｓｕｌｅ（商標）カプセル化生成物、Ｌｉｐｏｂｅａｄ（商標）カプセル化生成物、及びＬｉｐｏｐａｒｔｉｃｌｅ（商標）カプセル化生成物）。
【０２１２】
幾つかの実施形態において、カプセル化に使用される材料（６００）は、限定されないがセルロース又はシリカを含む。セルロースはスポンジとして作用し、それにより、乾燥した又は湿った構成要素（銀など）がセルロースの上で乾燥され得る。これら実施形態は、銀（７０）、顕色剤（７１）、又は堆積接合体（７４）が、スフィア（６１０）又は別の形状内の溶液中でカプセル化されるものとは異なる。
【０２１３】
他の実施形態において、カプセル化に使用される材料は、限定されないが、コレステロールのエステル混合物、ポリマーマトリックス、アルギン酸塩マトリックス、寒天マトリックス、ゼラチンマトリックス、ポロキシメチレン（ｐｏｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌｅｎｅ）尿素（ＰＭＵ）、メトキシメチル・メチロール・メラミン（ＭＭＭ）、ラクトース、マンニトール、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はこれらの材料の任意の組み合わせを含む。Ｌｉｐｏｐａｒｔｉｃｌｅ（商標）製品を使用する実施形態において、材料は、シクロデキストリン、多孔性ナイロン、シリカベースの材料、又はセルロースを含むがこれらに限定されない基質においてカプセル化され、その後、別のカプセル化容器において更にカプセル化されてもよい。これら実施形態において、活性成分の例は、限定されないが、サリチル酸、トコフェロール、メントール、トリクロサン、エチルヘキシル、メトキシシンナマート、及び／又は蛍光増白剤を含む。幾つかの実施形態において、カプセル化容器は着色される。
【０２１４】
サンドイッチアッセイのような方法とデバイスが本明細書に記載されるが、本発明の方法とデバイスは競合アッセイにおいて等しく使用されてもよい。これらの競合アッセイにおいて、接合体は好ましくは、分析物の結合パートナーよりむしろ、標識に結合された分析物又は分析物アナログを含み、又は、代替的に、第２の結合パートナーは分析物又は分析物アナログと置きかえられる。その後、陽性試験結果は、試験ストリップの試験領域におけるラベルの存在の不足によって示される。
【０２１５】
図２４と２５は、本発明の好ましい実施形態において転換領域（５００）を備えた側方流動デバイスの実施形態を示す。
【０２１６】
図２４Ａと２４Ｂは、障壁（５１０）を含む転換領域（５００）を備えた実施形態を示す。システムは、サンプル圧縮機（３０）、サンプル採取装置（５３５）、及びサンプル分析デバイス（図において試験ストリップ）を含む。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、転換領域（５００）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。図２４Ａと２４Ｂに示されるように、幾つかの実施形態において、サンプル採取装置（５３５）の採取部（５６０）は、採取装置（５６０）上でサンプルを集中するようにコンパクトである。転換領域（５００）は障壁（５１０）を含む。他の実施形態において、前述の実施形態に示されるサンプル採取装置（３５）が使用され得る。障壁（５１０）は、好ましくは、液体の流動が同じ平面において流動し続けるのを妨げる任意の材料で作られ得る、不浸透性の膜（又は実質的に不浸透性の膜）である。障壁のための幾つかの材料は、限定されないが、プラスチック、炭化水素、又は金属を含む。
【０２１７】
この実施形態において、サンドイッチ（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））全体が、サンプル塗布領域（４４）において形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷されて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。同様に、サンプル塗布領域（４４）は、転換領域（５００）の上流、転換領域（５００）の下流、又は、転換領域（５００）に重なるか、又はその上にあってもよい。
【０２１８】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、試験が正確に行われると、対照領域（４６）中のその結合パートナーと複合物を形成する。
【０２１９】
転換領域（５００）は、サンプル圧縮機（３０）がデバイスの残りと接触するまでに流動を完全に止めて、図２４Ｂの点線（５２０）により示されるように、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機（３０）はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機（３０）へと転換される。これにより、サンプル圧縮機（３０）上の第１の結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）の採取が増加する。流動は、転換領域（５００）の端部にある元の側方平面に推移して戻る。
【０２２０】
他の実施形態において、対照領域結合パートナー（６１）は、試験ストリップ上に、例えば、サンプル塗布領域の上流に、サンプル塗布領域上に、又はサンプル塗布領域の下流に置かれ得る。対照領域結合パートナー（６１）を備える実施形態の何れかにおいて、サンプル圧縮機（３０）がブリッジを効率よく形成し、それにより流動が障壁（５１０）を通過し続け（代替的な平面においてサンプル圧縮機（３０）を通って移動するように）、その後に試験ストリップに戻らない限りは、対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）に到達しない。
【０２２１】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。図２４に示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素−基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０２２２】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０２２３】
操作時、サンプルがサンプル塗布領域（４４）の上に直接あるように、サンプル採取装置（５３５）が置かれる。転換領域（５００）中の障壁（５１０）は、試験ストリップ上の側方流動（４３）を止める。サンプル圧縮機（３０）が加えられると、サンプル圧縮機はサンプル採取装置（５３５）に圧力（５１）をかけて、障壁（５１０）の上にブリッジを作成する。流動は、別の平面においてサンプル圧縮機（３０）へと転換（５２０）される。溶出媒体、サンプル、又はバッファーがサンプル圧縮機（３０）を通って流動する場合、それは接合体（３６）の第１の分析物結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）を採取する。流動において移動する構成要素が所望のサンプルと相互に作用する障壁（５１０）の端部の後に試験ストリップに戻るにつれ、流動はサンプル採取装置（５３５）の採取部（５６０）を通って移動する。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物（４０）は、第１の分析物結合パートナー（３６）と第２の結合パートナー（３８）と結合し、頂部片としての接合体（３６）、底部片としての第２の結合パートナー（３８）、及びそれらの間に分析物（４０）を持つ、「垂直な」サンドイッチを作成する（図４Ｂを参照）。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０２２４】
図２４Ａと２４Ｂは、（図５Ａ乃至５Ｂに類似する）特定の構成における試薬を示すが、試薬は、代替的な構成、例えば、図２４に示される障壁を加えた図１、２、３、４、６、８、及び９に示される構成で、配されてもよい。加えて、図２２に示される実施形態は、本明細書に開示される強化要素又はカプセル化の実施形態の何れかと組み合わせて使用することが可能である。
【０２２５】
障壁は、図２４Ａと２４Ｂにおける試験ストリップの残りに対して特異的な長さとして示されるが、これら図は概略図である。障壁（５１０）は、流動を止めて、且つサンプル圧縮機（３０）に流動を再び始めさせることを要するのに十分な、試験ストリップ上の任意の長さでもよい。障壁（５１０）は、サンプル圧縮機（３０）の下流端部で側方の平面に流動を後ろに妨害するほど長くならないように設計される。
【０２２６】
１つの好ましい実施形態において、障壁（５１０）はカプセル化した構成要素を含む。これらの実施形態における障壁（５１０）は、（本明細書で議論されるように）経時的に溶解して、カプセル化した構成要素を放出する材料で作られる。障壁（５１０）は、カプセル化することが可能であるような、本明細書で考察された同じ試薬の何れか又は全てを含み得る。溶解する障壁（５１０）は二重機能を実行する。他の障壁（５１０）と同様に、それは、流動をサンプル圧縮機へと進める壁として作用する。加えて、それらをカプセル化することにより、特定の構成要素に時間の遅れが生じる。バッファー又は溶出媒体は、障壁（５１０）をゆっくりと溶解し、これら時間の遅れが生じた構成要素は、アッセイの他の構成要素が試験線に到達した後に、試験線を複雑なものにする。
【０２２７】
図２５Ａと２５Ｂは、間隙又は溝（５２５）を備えた転換領域（５００）を示す。システムは、サンプル圧縮機（３０）、サンプル採取装置（５３５）、及びサンプル分析デバイス（図において試験ストリップ）を含む。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、転換領域（５００）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。図２５Ａと２３Ｂに示されるように、幾つかの実施形態において、サンプル採取装置（５３５）の採取部（５６０）は、採取装置（５６０）上でサンプルを集中するようにコンパクトである。他の実施形態において、前述の実施形態に示されるサンプル採取装置（３５）が使用され得る。転換領域（５００）は間隙（５２５）を含む。間隙（５２５）は、試験ストリップに沿った流動を可能にする膜を取り除くことにより、流動を妨げる。
【０２２８】
この実施形態において、サンドイッチ（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））全体が、サンプル塗布領域（４４）において形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷されて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。同様に、サンプル塗布領域（４４）は、転換領域（５００）の上流、転換領域（５００）の下流、又は、転換領域（５００）に重なるか、又はその上にあってもよい。
【０２２９】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、試験が正確に行われると、対照領域（４６）中のその結合パートナー（１１０）と複合物を形成する。
【０２３０】
転換領域（５００）は、サンプル圧縮機（３０）がデバイスの残りと接触するまでに流動を完全に止めて、図２５Ｂの点線（５２０）により示されるように、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機（３０）はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機（３０）へと転換される。これにより、サンプル圧縮機（３０）上の第１の結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）の採取が増加する。流動は、転換領域（５００）の端部にある元の側方平面に推移して戻る。
【０２３１】
他の実施形態において、対照領域結合パートナー（６１）は、試験ストリップ上に、例えば、サンプル塗布領域（４４）の上流に、サンプル塗布領域（４４）上に、又はサンプル塗布領域（４４）の下流に置かれ得る。対照領域結合パートナー（６１）を備える実施形態の何れかにおいて、サンプル圧縮機（３０）がブリッジを効率よく形成し、それにより流動が間隙を通過し続け（代替的な平面においてサンプル圧縮機（３０）を通って移動するように）、その後に試験ストリップに戻らない限りは、対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）に到達しない。
【０２３２】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。図２３に示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０２３３】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０２３４】
操作時、サンプルがサンプル塗布領域（４４）の上に直接あるように、サンプル採取装置（５３５）が置かれる。転換領域（５００）中の間隙（５２５）は、試験ストリップ上の側方流動（４３）を止める。サンプル圧縮機（３０）が加えられると、サンプル圧縮機はサンプル採取装置（５３５）に圧力（５１）をかけて、間隙（５２５）の上にブリッジを作成する。流動は、別の平面においてサンプル圧縮機（３０）へと転換（５２０）される。溶出媒体、サンプル、又はバッファーがサンプル圧縮機（３０）を通って流動する場合、それは接合体（３６）の第１の分析物結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）を採取する。流動において移動する構成要素が所望のサンプルと相互に作用する間隙（５２５）の端部の後に試験ストリップに戻るにつれ、流動はサンプル採取装置（５３５）の採取部（５６０）を通って移動する。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物（４０）は、第１の分析物結合パートナー（３６）と第２の結合パートナー（３８）と結合し、頂部片としての接合体（３６）、底部片としての第２の結合パートナー（３８）、及びそれらの間に分析物（４０）を持つ、「垂直な」サンドイッチを作成する（図４Ｂを参照）。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０２３５】
図２５Ａと２５Ｂは、（図５Ａ乃至５Ｂに類似する）特定の構成における試薬を示すが、試薬は、代替的な構成、例えば、図２５に示される間隙を加えた図１、２、３、４、６、８、及び９に示される構成で、配されてもよい。加えて、図２５に示される実施形態は、本明細書に開示される強化要素又はカプセル化の実施形態の何れかと組み合わせて使用することが可能である。
【０２３６】
間隙（５２５）は、運搬体の裏当てへと下方に伸長するように図２５Ａと２５Ｂに示されるが、間隙（５２５）は、流動を止めるほど十分な深さでよい。他の実施形態において、間隙（５２５）は、不浸透性又は浸透性である障壁材料で満たされるか、又は部分的に満たされる。
【０２３７】
他の好ましい実施形態において、１より多くの障壁、１より多くの間隙、又は少なくとも１つの障壁と少なくとも１つの間隙との組み合わせは、転換領域を作り上げることもある。
【０２３８】
図２６Ａと２６Ｂは、本発明の別の実施形態においてヒンジ（８００）、転換領域（５００）、及びサンプル圧縮機（３０）を備えた側方流動デバイスを示す。ヒンジ（８００）は圧縮を容易にするが、この実施形態は、さもなくば、図２４と２５に記載される転換領域の実施形態と同様に機能する。この実施形態におけるヒンジ（８００）とサンプル圧縮機パッド（３３）は、本明細書に記載される実施形態の何れかと共に使用することが可能である。図８Ｂのヒンジ構成は代替的に、本発明の他の実施形態における転換領域（５００）と共に使用することが可能である。サンプル採取装置（５３５）はこれらの図において示されるが、サンプル採取装置（３５）は代替的に使用されることに留意されたい。
【０２３９】
図２７Ａ−２７Ｃは、本発明の実施形態における、転換領域、サンプル圧縮機、及び、仕切り紙を含むクロマトグラフィ試験ストリップを備えた側方流動デバイスを示す。この実施形態において、少なくとも１つの仕切り紙（７６０）は、クロマトグラフィ試験ストリップの一部である。図２７Ａ−２７Ｃに示されるデバイスは、クロマトグラフィ試験ストリップ上のサンプル塗布領域（４４）に隣接した位置に置かれる、少なくとも１つの仕切り紙（７６０）を含む。仕切り紙（７６０）へのサンプルの適用を容易にするために、仕切り紙は好ましくは、（同じ平面における）側方流動の経路に隣接して置かれる。図２７Ａは、装置の側面図を示す。そのため、仕切り紙（７６０）のみが目に見える。図２７Ｂは、サンプル塗布領域（４４）と、隣接する仕切り紙（７６０）の上から見下ろした図を示す。サンプルは仕切り紙（７６０）に加えられ、例えば、液体サンプルは、アッセイを実行する前に、ピペット又は別のサンプル添加デバイスにより加えられる。サンプル圧縮機（３０）による圧縮前に、仕切り紙（７６０）は、図２７Ｃに示されるように、側方流動経路のサンプル塗布領域（４４）上にひっくり返される。仕切り紙（７６０）は図２５において障壁（５１０）の下流に示されているが、仕切り紙（７６０）とサンプル塗布領域（４４）は随意に、障壁（５１０）の上流にあるか、或いは、代替的な実施形態において、障壁（５１０）の上、又はそれに重なっていてもよい。多数の仕切り紙（７６０）がある場合、それらはデバイスの異なる場所に置かれてもよい。デバイスの機能と構造は、さもなくば、図２５Ａと２５Ｂに示され且つ記載されるデバイスに類似する。
【０２４０】
図１−１８と２４−２５は、サンプル採取部（６０）、（５６０）を備えたスワブ材（３５）、（５３５）を示すが、他の実施形態において、サンプル採取デバイスは、図中に示されるスワブ材（３５）、（５３５）のサンプル採取部（６０）、（５６０）として、垂直な堆積物の同じ場所に配される、少なくとも１つの仕切り紙（６６０）である。例として、図２８に示されるデバイスは、スワブ材（３５）、（５３５）を仕切り紙（６６０）に置き換える。仕切り紙（６６０）とサンプル塗布領域（４４）が、図２８の障壁（５１０）の下流に示されるが、仕切り紙（６６０）は随意に、障壁（５１０）の上流に、又は、代替的な実施形態において、障壁（５１０）の上、又はそれに重なって、適用されてもよい。他の実施形態において、多数の仕切り紙が使用され、デバイスの異なる位置に置かれてもよい。この図中のこのデバイスは、さもなくば、図２４Ａと２４Ｂに記載され且つ示されるデバイスと同様に作動する。
【０２４１】
１以上の仕切り紙（６６０）又は（７６０）は、本明細書に記載される実施形態の何れかにおいてサンプル採取装置として使用されてもよい。
【０２４２】
図２９Ａと２９Ｂは、障壁（５１０）を含む転換領域（５００）を備えた別の実施形態を示す。システムは、サンプル圧縮機（３０）、及びサンプル分析デバイス（図において試験ストリップ）を含む。この実施形態において、サンプルは好ましくは、サンプル圧縮機（３０）に直接加えられる。分析物（４０）は、サンプルがサンプル圧縮機（３０）に加えられたことを示すため、サンプル圧縮機（３０）上で示される。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、転換領域（５００）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。この実施形態におけるサンプル塗布領域（４４）は、サンプルが最初に試験ストリップに遭遇する場所であるが、この実施形態におけるサンプルは、サンプル圧縮機（３０）に加えられ、ランニングバッファー中で試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）へと移動する。
【０２４３】
試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。転換領域（５００）は障壁（５１０）を含む。障壁（５１０）は、好ましくは、液体の流動が同じ平面において流動し続けるのを妨げる任意の材料で作られ得る、不浸透性の膜（又は実質的に不浸透性の膜）である。障壁のための幾つかの材料は、限定されないが、プラスチック、炭化水素、又は金属を含む。
【０２４４】
この実施形態において、サンドイッチの１／２（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０））は、サンプル圧縮機（３０）上で形成され始め、サンドイッチ全体（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））は、サンプルが試験領域（４５）に到達する前に形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷されて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。
【０２４５】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、試験が正確に行われると、対照領域（４６）中のその結合パートナー（１１０）と複合物を形成する。
【０２４６】
転換領域（５００）は、サンプル圧縮機（３０）がデバイスの残りと接触するまでに流動を完全に止めて、図２９Ｂの点線（５２０）により示されるように、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機（３０）はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機（３０）へと転換される。これにより、サンプル圧縮機（３０）上の第１の結合パートナー（３７）、サンプル、及び対照領域結合パートナー（６１）の採取が増加する。流動は、転換領域（５００）の端部にある元の側方平面に推移して戻る。
【０２４７】
他の実施形態において、対照領域結合パートナー（６１）は、試験ストリップ上に、例えば、サンプル塗布領域の上流に、サンプル塗布領域上に、又はサンプル塗布領域の下流に置かれ得る。対照領域結合パートナー（６１）を備える実施形態の何れかにおいて、サンプル圧縮機（３０）がブリッジを効率よく形成し、それにより流動が障壁（５１０）を通過し続け（代替的な平面においてサンプル圧縮機（３０）を通って移動するように）、その後に試験ストリップに戻らない限りは、対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）に到達しない。
【０２４８】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。図２９に示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０２４９】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０２５０】
操作時に、サンプルはサンプル圧縮機（３０）上に配される。転換領域（５００）中の転換領域（５１０）は、試験ストリップ上の側方流動（４３）を止める。サンプル圧縮機（３０）が加えられると、それは障壁（５１０）の上にブリッジを作成する。流動は、別の平面においてサンプル圧縮機（３０）へと転換（５２０）される。溶出媒体、サンプル、又はバッファーがサンプル圧縮機（３０）を通って流動する場合、それは、サンプル、接合体（３６）の第１の分析物結合パートナー（３７）、及び対照領域結合パートナー（６１）を採取する。流動は障壁（５１０）の端部の後に試験ストリップに戻る。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物（４０）は、第１の分析物結合パートナー（３６）と第２の結合パートナー（３８）と結合し、頂部片としての接合体（３６）、底部片としての第２の結合パートナー（３８）、及びそれらの間に分析物（４０）を持つ、「垂直な」サンドイッチを作成する。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０２５１】
障壁は、図２９Ａと２９Ｂにおける試験ストリップの残りに対して特異的な長さとして示されるが、これら図は概略図である。障壁（５１０）は、流動を止めて、且つサンプル圧縮機（３０）に流動を再び始めさせることを要するのに十分な、試験ストリップ上の任意の長さでもよい。障壁（５１０）は、サンプル圧縮機（３０）の下流端部で側方の平面に流動を後ろに妨害するほど長くならないように設計される。
【０２５２】
１つの好ましい実施形態において、障壁（５１０）はカプセル化した構成要素を含む。これらの実施形態における障壁（５１０）は、（本明細書で議論されるように）経時的に溶解して、カプセル化した構成要素を放出する材料で作られる。障壁（５１０）は、カプセル化することが可能であるような、本明細書で考察された同じ試薬の何れか又は全てを含み得る。溶解する障壁（５１０）は二重機能を実行する。他の障壁（５１０）と同様に、それは、流動をサンプル圧縮機へと進める壁として作用する。加えて、それらをカプセル化することにより、特定の構成要素に時間の遅れが生じる。バッファー又は溶出媒体は、障壁（５１０）をゆっくりと溶解し、これら時間の遅れが生じた構成要素は、アッセイの他の構成要素が試験線に到達した後に、試験線を複雑なものにする。
【０２５３】
図３０Ａと３０Ｂは、間隙又は溝（５２５）を備えた転換領域（５００）を示す。システムは、サンプル圧縮機（３０）、及びサンプル分析デバイス（図において試験ストリップ）を含む。この実施形態において、サンプルは好ましくは、サンプル圧縮機（３０）に直接加えられる。分析物（４０）は、サンプルがサンプル圧縮機（３０）に加えられたことを示すため、サンプル圧縮機（３０）上で示される。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、転換領域（５００）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。この実施形態におけるサンプル塗布領域（４４）は、サンプルが最初に試験ストリップに遭遇する場所であるが、この実施形態におけるサンプルは、サンプル圧縮機（３０）に加えられ、ランニングバッファー中で試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）へと移動する。
【０２５４】
試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。転換領域（５００）は間隙（５２５）を含む。間隙（５２５）は、試験ストリップに沿った流動を可能にする膜を取り除くことにより、流動を妨げる。
【０２５５】
この実施形態において、サンドイッチの１／２（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０））は、サンプル圧縮機（３０）上で形成され始め、サンドイッチ全体（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））は、サンプルが試験領域（４５）に到達する前に形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷されて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。
【０２５６】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、試験が正確に行われると、対照領域（４６）中のその結合パートナー（１１０）と複合物を形成する。
【０２５７】
転換領域（５００）は、サンプル圧縮機（３０）がデバイスの残りと接触するまでに流動を完全に止めて、図３０Ｂの点線（５２０）により示されるように、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機（３０）はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機（３０）へと転換される。これにより、サンプル圧縮機（３０）上のサンプル、第１の結合パートナー（３７）、及び対照領域結合パートナー（６１）の採取が増加する。流動は、転換領域（５００）の端部にある元の側方平面に推移して戻る。
【０２５８】
他の実施形態において、対照領域結合パートナー（６１）は、試験ストリップ上に、例えば、サンプル塗布領域（４４）の上流に、サンプル塗布領域（４４）上に、又はサンプル塗布領域（４４）の下流に置かれ得る。対照領域結合パートナー（６１）を備える実施形態の何れかにおいて、サンプル圧縮機（３０）がブリッジを効率よく形成し、それにより流動が間隙を通過し続け（代替的な平面においてサンプル圧縮機（３０）を通って移動するように）、その後に試験ストリップに戻らない限りは、対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）に到達しない。
【０２５９】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。図３０に示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０２６０】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０２６１】
操作時に、転換領域（５００）中の間隙（５２５）は、試験ストリップ上の側方流動（４３）を止める。サンプル圧縮機（３０）が加えられると、それは間隙（５２５）の上にブリッジを作成する。流動は、別の平面においてサンプル圧縮機（３０）へと転換（５２０）される。溶出媒体、サンプル、又はバッファーがサンプル圧縮機（３０）を通って流動する場合、それは、サンプル、接合体（３６）の第１の分析物結合パートナー（３７）、及び対照領域結合パートナー（６１）を採取する。流動は間隙（５２５）の端部の後に試験ストリップに戻る。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物（４０）は、第１の分析物結合パートナー（３６）と第２の結合パートナー（３８）と結合し、頂部片としての接合体（３６）、底部片としての第２の結合パートナー（３８）、及びそれらの間に分析物（４０）を持つ、「垂直な」サンドイッチを作成する。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０２６２】
間隙（５２５）は、運搬体の裏当てへと下方に伸長するように図３０Ａと３０Ｂに示されるが、間隙（５２５）は、流動を止めるほどの深さで十分である。他の実施形態において、間隙（５２５）は、不浸透性又は浸透性である障壁材料で満たされるか、又は部分的に満たされる。
【０２６３】
他の好ましい実施形態において、１より多くの障壁、１より多くの間隙、又は少なくとも１つの障壁と少なくとも１つの間隙との組み合わせは、転換領域を作り上げることもある。
【０２６４】
図３１Ａと３１Ｂは、障壁（５１０）を含む転換領域（５００）を備えた別の実施形態を示す。システムは、サンプル圧縮機（３０）、及びサンプル分析デバイス（図において試験ストリップ）を含む。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、転換領域（５００）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。
【０２６５】
転換領域（５００）は障壁（５１０）を含む。障壁（５１０）は、好ましくは、液体の流動が同じ平面において流動し続けるのを妨げる任意の材料で作られ得る、不浸透性の膜（又は実質的に不浸透性の膜）である。障壁のための幾つかの材料は、限定されないが、プラスチック、炭化水素、又は金属を含む。
【０２６６】
この実施形態において、サンプルは好ましくは、サンプル塗布領域（４４）に直接加えられる。分析物（４０）は、サンプルがサンプル塗布領域（４４）に加えられたことを示すため、サンプル塗布領域（４４）上で示される。サンドイッチ全体（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））は、サンプル塗布領域（４４）において形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷にされて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。同様に、サンプル塗布領域（４４）は、転換領域（５００）の上流、転換領域（５００）の下流、又は、転換領域（５００）に重なるか、又はその上にあってもよい。
【０２６７】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、試験が正確に行われると、対照領域（４６）中のその結合パートナー（１１０）と複合物を形成する。
【０２６８】
転換領域（５００）は、サンプル圧縮機（３０）がデバイスの残りと接触するまでに流動を完全に止めて、図３１Ｂの点線（５２０）により示されるように、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機（３０）はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機（３０）へと転換される。これにより、サンプル圧縮機（３０）上の第１の結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）の採取が増加する。流動は、転換領域（５００）の端部にある元の側方平面に推移して戻る。
【０２６９】
他の実施形態において、対照領域結合パートナー（６１）は、試験ストリップ上に、例えば、サンプル塗布領域の上流に、サンプル塗布領域上に、又はサンプル塗布領域の下流に置かれ得る。対照領域結合パートナー（６１）を備える実施形態の何れかにおいて、サンプル圧縮機（３０）がブリッジを効率よく形成し、それにより流動が障壁（５１０）を通過し続け（代替的な平面においてサンプル圧縮機（３０）を通って移動するように）、その後に試験ストリップに戻らない限りは、対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）に到達しない。
【０２７０】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。図３１に示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０２７１】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０２７２】
操作時に、サンプルはサンプル塗布領域（４４）上に配される。転換領域（５００）中の転換領域（５１０）は、試験ストリップ上の側方流動（４３）を止める。サンプル圧縮機（３０）が加えられると、サンプル圧縮機は試験ストリップに圧力（５１）をかけて、障壁（５１０）の上にブリッジを作成する。流動は、別の平面においてサンプル圧縮機（３０）へと転換（５２０）される。溶出媒体、サンプル、又はバッファーがサンプル圧縮機（３０）を通って流動する場合、それは接合体（３６）の第１の分析物結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）を採取する。流動は障壁（５１０）の端部の後に試験ストリップに戻り、そこでは、流動の中を移動する構成要素は所望のサンプルと相互に作用する。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物（４０）は、第１の分析物結合パートナー（３６）と第２の結合パートナー（３８）と結合し、頂部片としての接合体（３６）、底部片としての第２の結合パートナー（３８）、及びそれらの間に分析物（４０）を持つ、「垂直な」サンドイッチを作成する。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０２７３】
障壁は、図３１Ａと３１Ｂにおける試験ストリップの残りに対して特異的な長さとして示されるが、これら図は概略図である。障壁（５１０）は、流動を止めて、且つサンプル圧縮機（３０）に流動を再び始めさせることを要するのに十分な、試験ストリップ上の任意の長さでもよい。障壁（５１０）は、サンプル圧縮機（３０）の下流端部で側方の平面に流動を後ろに妨害するほど長くならないように設計される。
【０２７４】
１つの好ましい実施形態において、障壁（５１０）はカプセル化した構成要素を含む。これらの実施形態における障壁（５１０）は、（本明細書で議論されるように）経時的に溶解して、カプセル化した構成要素を放出する材料で作られる。障壁（５１０）は、カプセル化することが可能であるような、本明細書で考察された同じ試薬の何れか又は全てを含み得る。溶解する障壁（５１０）は二重機能を実行する。他の障壁（５１０）と同様に、それは、流動をサンプル圧縮機へと進める壁として作用する。加えて、それらをカプセル化することにより、特定の構成要素に時間の遅れが生じる。バッファー又は溶出媒体は、障壁（５１０）をゆっくりと溶解し、これら時間の遅れが生じた構成要素は、アッセイの他の構成要素が試験線に到達した後に、試験線を複雑なものにする。
【０２７５】
図３２Ａと３２Ｂは、間隙又は溝（５２５）を備えた転換領域（５００）を示す。システムは、サンプル圧縮機（３０）、及びサンプル分析デバイス（図において試験ストリップ）を含む。試験ストリップは好ましくは、吸収パッド（４２）、転換領域（５００）、サンプル塗布領域（４４）、検出領域（５２）、及び随意の廃棄物パッド（４７）を含む。試験ストリップは好ましくは、運搬体の裏当て（４８）も含む。転換領域（５００）は間隙（５２５）を含む。間隙（５２５）は、試験ストリップに沿った流動を可能にする膜を取り除くことにより、流動を妨げる。
【０２７６】
この実施形態において、サンプルは好ましくは、サンプル塗布領域（４４）に直接加えられる。分析物（４０）は、サンプルがサンプル塗布領域（４４）に加えられたことを示すため、サンプル塗布領域（４４）上で示される。サンドイッチ全体（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））は、サンプル塗布領域（４４）において形成される。この実施形態における試験領域（４５）は、第２の結合パートナー（３８）のタグ（３９）と結合する、固定化されたタグ（５０）を含んでいる。この実施形態において、接合体（３６）の一部であるとともに、好ましくはサンプル圧縮機（３０）のパッド（３３）に事前に負荷されて乾燥される第１の結合パートナー（３７）は、試験サンプル中の分析物（４０）と結合することで、半サンドイッチを形成する。この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は好ましくは、試験ストリップのサンプル塗布領域（４４）に事前に負荷にされて乾燥される。第２の結合パートナー（３８）はタグ（３９）も含む。代替的に、この実施形態の第２の結合パートナー（３８）は、サンプル塗布領域に重なって、サンプル塗布領域の上流、又は、サンプル塗布領域と検出領域の間を含むがこれらに限定されない、検出領域の上流の試験ストリップ上の任意の場所にも位置付けられてもよい。同様に、サンプル塗布領域（４４）は、転換領域（５００）の上流、転換領域（５００）の下流、又は、転換領域（５００）に重なるか、又はその上にあってもよい。
【０２７７】
好ましい実施形態において、サンプル圧縮機（３０）上のパッド（３３）は、検知可能な標識を備えた対照領域結合パートナー（６１）を含む。対照領域結合パートナー（６１）は、試験が正確に行われると、対照領域（４６）中のその結合パートナー（１１０）と複合物を形成する。
【０２７８】
転換領域（５００）は、サンプル圧縮機（３０）がデバイスの残りと接触するまでに流動を完全に止めて、図３２Ｂの点線（５２０）により示されるように、流体が流れることが可能なブリッジを作成する。サンプル圧縮機（３０）はブリッジとして作用し、流動を異なる平面に再び向ける。流動はサンプル圧縮機（３０）へと転換される。これにより、サンプル圧縮機（３０）上の第１の結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）の採取が増加する。流動は、転換領域（５００）の端部にある元の側方平面に推移して戻る。
【０２７９】
他の実施形態において、対照領域結合パートナー（６１）は、試験ストリップ上に、例えば、サンプル塗布領域（４４）の上流に、サンプル塗布領域（４４）上に、又はサンプル塗布領域（４４）の下流に置かれ得る。対照領域結合パートナー（６１）を備える実施形態の何れかにおいて、サンプル圧縮機（３０）がブリッジを効率よく形成し、それにより流動が間隙を通過し続け（代替的な平面においてサンプル圧縮機（３０）を通って移動するように）、その後に試験ストリップに戻らない限りは、対照領域結合パートナー（６１）は、対照領域（４６）に到達しない。
【０２８０】
１つの実施例において、第１の結合パートナー（３７）と第２の結合パートナー（３８）の両方は、分析物に対して異なる抗体である。対照領域結合パートナー（６１）は好ましくは抗体であり、対照領域におけるその結合パートナーは抗原である（或いは、逆の場合もある）。他の実施形態において、特異的な結合パートナーは、分析物に対する抗体に結合することができる抗原であってもよい。他の種類の結合パートナーは、アプタマー又は受容体のような生物有機高分子、ナノ粒子、又は核酸である。図３２に示されるデバイスは、任意の結合アッセイに使用することができ、例えば、リガンド受容体結合アッセイ及び酵素基質結合アッセイでの抗体／抗原又は核酸の使用を回避することができる。
【０２８１】
１つの好ましい実施形態において、第２の結合パートナー（３８）はビオチンでタグ付け（３９）される。第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）がビオチンである実施形態において、検出領域中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくは、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンである。他の実施形態において、第２の結合パートナー（３８）は、アビジン、ニュートラアビジン、又はストレプトアビジンでタグ付け（３９）される。これらの実施形態において、検出領域（５２）中の固定化されたタグ（５０）は、好ましくはビオチンである。代替的に、第２の結合パートナー（３８）上のタグ（３９）はレクチンであってもよく、固定化されたタグ（５０）はグリコシル部分であってもよい。例えば、幾つかの実施形態において、レクチンはエンドウレクチンであり、グリコシル部分は赤血球グリコシル単位である。第２の結合パートナーのタグと、固定化されたタグは、本発明の精神の範囲内で逆にされてもよい。例えば、グリコシル部分は、検出領域内の固定化されたレクチンタグを備えた第２の結合パートナー上のタグであってもよい。他の実施形態において、他の受容体及びリガンドがタグに使用されてもよい。
【０２８２】
操作時に、転換領域（５００）中の間隙（５２５）は、試験ストリップ上の側方流動（４３）を止める。サンプル圧縮機（３０）が加えられると、それは間隙（５２５）の上にブリッジを作成する。流動は、別の平面においてサンプル圧縮機（３０）へと転換（５２０）される。溶出媒体、サンプル、又はバッファーがサンプル圧縮機（３０）を通って流動する場合、それは接合体（３６）の第１の分析物結合パートナー（３７）と対照領域結合パートナー（６１）を採取する。流動は間隙（５２５）の端部の後に試験ストリップに戻り、そこでは、流動の中を移動する構成要素は所望のサンプルと相互に作用する。分析物（４０）がサンプル中にある場合、分析物（４０）は、第１の分析物結合パートナー（３６）と第２の結合パートナー（３８）と結合し、頂部片としての接合体（３６）、底部片としての第２の結合パートナー（３８）、及びそれらの間に分析物（４０）を持つ、「垂直な」サンドイッチを作成する（図４Ｂを参照）。サンプル圧縮機（３０）上に対照領域結合パートナー（６１）も存在する場合、対照領域結合パートナー（６１）も移される。その後、試験領域（４５）中の固定化されたタグ（５０）はタグ（３９）と結合する。接合体（３６）が標識（４１）を含むので、形成される複合物は検知可能であり、且つ、陽性の結果を示す。試験の適切な操作は、対照領域結合パートナー（６１）と対照領域（４６）におけるその固定化されたパートナーとの間の相互作用によって、対照領域（４６）において検知可能な陽性結果をもたらす。
【０２８３】
間隙（５２５）は、運搬体の裏当てへと下方に伸長するように図３２Ａと３２Ｂに示されるが、間隙（５２５）は、流動を止めるほどの深さで十分である。他の実施形態において、間隙（５２５）は、不浸透性又は浸透性である障壁材料で満たされるか、又は部分的に満たされる。
【０２８４】
他の好ましい実施形態において、１より多くの障壁、１より多くの間隙、又は少なくとも１つの障壁と少なくとも１つの間隙との組み合わせは、転換領域を作り上げることもある。
【０２８５】
図３３Ａと３３Ｂは、本発明の別の実施形態においてヒンジ（８００）、転換領域（５００）、及びサンプル圧縮機（３０）を備えた側方流動デバイスを示す。ヒンジ（８００）は圧縮を容易にするが、この実施形態は、さもなくば、図２９と３０に記載される転換領域の実施形態と同様に機能する。この実施形態におけるヒンジ（８００）とサンプル圧縮機パッド（３３）は、本明細書に記載される実施形態の何れかと共に使用することが可能である。図８Ｂのヒンジ構成は代替的に、本発明の他の実施形態における転換領域（５００）と共に使用することが可能である。
【０２８６】
図３４Ａと３４Ｂは、本発明の別の実施形態においてヒンジ（８００）、転換領域（５００）、及びサンプル圧縮機（３０）を備えた側方流動デバイスを示す。ヒンジ（８００）は圧縮を容易にするが、この実施形態は、さもなくば、図３１と３２に記載される転換領域の実施形態と同様に機能する。この実施形態におけるヒンジ（８００）とサンプル圧縮機パッド（３３）は、本明細書に記載される実施形態の何れかと共に使用することが可能である。図８Ｂのヒンジ構成は代替的に、本発明の他の実施形態における転換領域（５００）と共に使用することが可能である。
【０２８７】
図２４−３４は、試験領域の上流にある分析物のための結合パートナーを使用して記載され、標識（５０）は試験領域に固定化されるが、他の代替的な実施形態において、分析物のための第２の結合パートナー（３８）は、図２４−３４に記載される試験ストリップの構成の全てにおける試験領域において固定化することが可能である。これら実施形態において、サンドイッチの１／２（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０））のみが、サンプルが試験領域に到達する前に形成される。
【０２８８】
試験領域（４５）における第２の結合パートナー（３８）を備える実施形態は、図３５Ａと３５Ｂ、図３６Ａと３６Ｂ、図３７Ａと３７Ｂ、図３８、図３９、図４０Ａと４０Ｂ、図４１Ａと４１Ｂ、図４２Ａと４２Ｂ、図４３Ａと４３Ｂ、図４４Ａと４４Ｂ、及び図４５Ａ及び４５Ｂに示される。これらの実施形態は、標識（３９）も固定化した標識（５０）もなく、且つ第２の結合パートナー（３８）は試験領域４５において固定化されることを除き、図２４Ａと２４Ｂ、図２５Ａと２５Ｂ、図２６Ａと２６Ｂ、図２７Ａ乃至２７Ｃ、図２８、図２９、図３０Ａと３０Ｂ、図３１Ａと３１Ｂ、図３２Ａと３２Ｂ、図３３Ａと３３Ｂ、及び図３４Ａと３４Ｂそれぞれに示される実施形態に類似する。結果として、完全なサンドイッチ（第１の結合パートナー（３７）−分析物（４０）−第２の結合パートナー（３８））は、サンプルが試験領域（４５）に到達するまで形成されない。
【０２８９】
サンプル圧縮機（３０）を備えた他の実施形態において、サンプル圧縮機は、試験用の任意の試薬を含まず、そして、試験ストリップに圧力を与えるか又はその上に転換領域を作るためにのみ使用される。
【０２９０】
＜転換領域を使用する二峰性試験ストリップ＞
分離すると、ＭｘＡもＣＲＰのみも、ウイルス感染と細菌感染の両方の同定では敏感でなく且つ特異的ではない。ＣＲＰの低いカットオフ値は、細菌感染を検出するための高感度と低特異性を示す。ＣＲＰの高いカットオフ値は、細菌感染を検出するための低感度と高特異性を示す。ＭｘＡはウイルス感染の同定に特異的であるが、それは細菌感染に敏感ではない。低ＣＲＰ、高ＣＲＰ、及びＭｘＡのカットオフレベルを反映した医療決定点を含む結果の多重化したパターンは、ウイルス感染及び／又は細菌感染に対する免疫反応を同定するための、敏感且つ特異的な方法を提供する。
【０２９１】
多重化した側方流動イムノアッセイの１つの好ましい実施形態において、試験結果の指穿刺血液パターンは、約１０ｍｇ／Ｌの低ＣＲＰレベルのカットオフに対する血清等価、約８０ｍｇ／Ｌの高ＣＲＰレベルのカットオフに対する血清等価、及び約４０ｎｇ／ｍｌのＭｘＡカットオフを伴う、陽性の結果を示す。
【０２９２】
二峰性の２重の試験ストリップは、ヒトの細菌感染とウイルス感染を区別するためだけでなく、動物のための獣医学の適用においても使用することが可能である。ＣＲＰは種に依存して異なるので、種の間にＣＲＰに対する共通の抗体はない。それ故、獣医学の試験は、試験された特定の種に特異的なＣＲＰを含む必要がある。ＭｘＡは種の中で十分に保存され、そのため、獣医学の試験においてヒトＭｘＡを使用することが可能である。しかし、特定の種に対するＭｘＡは、特異性を更に増加させる試みのために代替的に使用することができる。本明細書に記載される二峰性の２重の試験ストリップを使用する獣医学の試験は、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、サル、チンパンジー、ヒヒ、又はオランウータンを含むがこれらに限定されない、特異的な種のために開発されてもよい。
【０２９３】
両方の試験ストリップ上に転換領域を備えた二峰性の２重の試験ストリップサンプル分析デバイスに好ましい１つの構成は、図４６Ａ乃至４６Ｃに示される。サンプル分析デバイス又は試験カード（８９９）は、２つの側（８３６）、（８３７）、及びスパイン（ｓｐｉｎｅ）、又はヒンジ部（８３１）を備える、開閉自在なハウジング（８３５）を含む。１つの好ましい実施形態において、試験カード（８９９）は、２つの側（８３６）と（８３７）が閉じられる場合、長さ約１１．５ｃｍ（Ｌ）×幅７ｃｍ（Ｗ）である。しかし、構成要素を全て収容する任意のサイズの試験カード（８９９）が使用されてもよい。ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）内に、２つの試験ストリップ（８１５）と（８２５）があり、それぞれ、受け取りパッド（８４５）、転換領域（８５０）、移動パッド（８５５）、及び検出領域（８０５）を含む。第１の側（８３６）は、吸収性パッド（８４０）と、好ましくは廃棄物パッド（８６０）も含む。第１の試験ストリップ（８１５）は、好ましくは、ＭｘＡ試験線（８０２）、低ＣＲＰ試験線（８０３）、及び対照線（８０４）を備えた検出領域（８０５）を含む。第２の試験ストリップ（８２５）は、好ましくは、高ＣＲＰ試験線（８２３）と対照線（８０４）を備えた検出領域（８０５）を含む。ハウジング（８３５）が閉じられると、試験線は全て、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の窓（８６５）を通じて目に見える。吸収性パッド（８４０）は好ましくは、側方流動を始めるためにランニングバッファーが加えられる、単一のパッドである。同様に、廃棄物パッド（８６０）は好ましくは、試験の終わりに過剰なランニングバッファーを採取する、単一のパッドである。しかし、他の実施形態において、各ストリップは、吸収性パッド（８４０）及び／又は廃棄物パッド（８６０）を別々に有することが可能である。
【０２９４】
ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）は３つの別個のセクション（８３８）、（８３９）、及び（８７０）を含む。中間部分、サンプル圧縮機、又はフラップ（８７０）は好ましくは、２つの接合体領域（８７２）と（８７４）を含み、各々は、少なくとも１つの分析物のための標識化した結合パートナーと標識化した対照を含む。窓（８４３）は、ハウジングの第２の側（８３７）の下部（８３８）に置かれ、それによりバッファーは、ハウジング（８３５）が閉じられる場合に吸収性パッド（８４０）に加えることができる。検出領域（８０５）のための視界窓（８６５）は、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３９）の上にある。
【０２９５】
ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３９）と下部（８３８）は各々、好ましくは、少なくとも１つのノブ、１以上の穴（８９５）と対になる栓（ｐｅｇ）又は突部（８７５）も含み、それにより、上部（８３８）と下部（８３９）は、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）の上に容易に固定される。好ましい実施形態において、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上の吸収性パッド（８４０）の側面に位置する２つの穴（８９５）と対になる、下部（８３８）上の２つの栓（８７５）と、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上の廃棄物パッド（８６０）の側面に位置する２つの穴（８９５）と対になる、上部（８３９）上の２つの栓（８７５）がある。他の実施形態において、穴（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）上にあり、栓（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上にある。また他の実施形態において、他の可逆的な固定機構が、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）にハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３８）及び／又は下部（８３９）を固定するために使用され得る。他の実施形態において、上部と下部のセクション（８３８）、（８３９）は、使用前に、例えば粘着剤を使用して恒久的に閉じられる。
【０２９６】
ハウジングの第２の側（８３７）の上にある、サンプル圧縮機としても知られるフラップ（８７０）は、２つの接合体領域（８７２）（８７４）と、２つのサンプル塗布領域（８７３）（８７６）を含み、容易に開閉可能である。フラップ（８７０）はまた、好ましくは、１以上の穴（８９５）と対になる、少なくとも１つのノブ、栓、又は突部（８７５）を含み、それにより、フラップ（８７０）は、サンプルがサンプル塗布領域（８７３）（８７６）に加えられた後、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）の上で容易に、正確に閉じられる。他の実施形態において、穴（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）上にあり、栓（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上にある。また他の実施形態において、他の可逆的な固定機構が、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）にフラップ（８７０）を固定するために使用され得る。
【０２９７】
接合体領域（８７２）（８７４）、及びサンプル塗布領域（８７３）（８７６）は、好ましくは重なる。好ましい実施形態において、接合体領域（８７２）（８７４）は、サンプル接合体と対照接合体における色素により色を付けられ、サンプルはフラップ（８７０）の色を付けた部分に直接配される。１つの好ましい実施形態において、第１の試験ストリップ（８１５）に使用される接合体領域（８７２）は、赤色色素で標識化されるＭｘＡ結合パートナー、黒色色素で標識化される低ＣＲＰ結合パートナー、及び青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。この実施形態において、接合体領域（８７２）は紫色がかったように見える。他の接合体領域（８７４）は、黒色色素で標識化した高ＣＲＰ結合パートナーと、青色色素で標識化した対照結合パートナーを含む。この実施形態において、接合体領域（８７４）は青みを帯びているように見える。
【０２９８】
転換領域（８５０）は、好ましくは、側方流動を妨げて、ランニングバッファーを、接合体領域（８７２）（８７４）とサンプル塗布領域（８７３）（８７６）を含むフラップ（８７０）に転換する、間隙又は障壁を含む。
【０２９９】
操作時に、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３８）と下部（８３９）は、好ましくは、栓（８７５）を穴（８９５）に固定することにより、使用前に嵌められて閉じられる（ｓｎａｐｐｅｄ  ｃｌｏｓｅｄ）。サンプル分析デバイス、又は試験カード（８９９）は好ましくは平面上に配される。フラップ（８７０）が既に開かれていない場合、ユーザーはそれを開き、サンプル塗布領域（８７３）（８７６）にアクセスする。試験される血液サンプルは患者から得られる。サンプルは、当該技術分野で既知の任意の手順により得られる。好ましい実施形態において、５μｌの血液サンプルが、サンプル塗布領域（８７３）（８７６）の各々に加えられ、その後、フラップ（８７０）は閉じられる。５μｌのサンプルの各々は、好ましくは、他のものとは別に採取される。血液サンプルは、好ましくは、任意の事前処理なしで、デバイス（８９９）に直接加えられる。
【０３００】
サンプル圧縮機又はフラップ（８７０）が正しく閉じられたことを確認するために、圧力は、好ましくは、栓（８７５）を閉じた状態にするために栓（８７５）の上のハウジング（８３５）に適用される。フラップ（８７０）の上部は、試験を適切に実行するために、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の残りの頂部と同じ高さである必要がある。ランニングバッファーは、側方流動（８８５）を開始する吸収性パッド（８４０）に加えられる。好ましい実施形態において、ランニングバッファーは、血液サンプルを溶解し、サンプル中に細胞内のＭｘＡを露出するために、１以上の溶解剤（例えば洗浄剤）を含む。ランニングバッファーが転換領域（８５０）に到達すると、それはフラップ（８７０）に転換される。それは、接合体領域（８７２）（８７４）を通って移動し、サンプル中のＭｘＡ結合パートナーとＭｘＡ、サンプル中の低ＣＲＰ結合パートナーと低レベルのＣＲＰ、サンプル中の高ＣＲＰ結合パートナーと高レベルのＣＲＰの間に形成される任意の複合物、同様に対照接合体を採取する。
【０３０１】
接合体領域（８７２）（８７４）が側方流動試験ストリップ（８１５）、（８２５）に転換領域（８５０）を作成するので、ここでサンプルを含むランニングバッファー、接合体、及び上述の複合物は、その後、移動パッド（８５５）に、及び、試験ストリップ（８１５）（８２５）の各々の上の検出領域（８０５）に移動する。ＭｘＡがサンプル中にある場合、第１の試験ストリップ（８１５）上のＭｘＡ試験線（８０２）は赤くなる。ＣＲＰの閾値低レベルがサンプル中に有る場合、第１の試験ストリップ（８１５）上の低ＣＲＰ試験線（８０３）は黒くなる。ＣＲＰの閾値高レベルがサンプル中に有る場合、第２の試験ストリップ（８２５）上の高ＣＲＰ試験線（８２３）は黒くなる。試験が正確に実行されれば、第１のストリップ（８１５）と第２の試験ストリップ（８２５）の両方の上の対照線（８０４）は青くなる。好ましい実施形態において、検出のレベルは、ＭｘＡについては４０ｎｇ／ｍｌ、第１の試験ストリップ（８１５）上の低ＣＲＰについては１０ｍｇ／Ｌ、及び第２の試験ストリップ（８２５）上の高ＣＲＰについては８０ｍｇ／Ｌである。試験の結果は、約５−２０分後、好ましくは約１０分以内に視認できるはずである。
【０３０２】
対照結合パートナーが、サンプル圧縮機又はフラップ（８７０）の上にあり、試験ストリップ（８１５）（８２５）のどちらかの上には無いので、この構成に対して真の手順の対照がある。フラップ（８７０）が適切に閉じていない場合、検出領域（８０５）には何も現れず、試験が不適切に行われたことを示す。
【０３０３】
図４７Ａ乃至４７Ｆは、隣り合う２つの試験ストリップ（８１５）（８２５）を備える図４６Ａ乃至４６Ｃに示されるデバイス（８９９）を使用する試験結果を示し、第１の試験ストリップ（８１５）はＭｘＡと低レベルのＣＲＰ両方の存在について試験し、第２の試験ストリップ（８２５）は高レベルのＣＲＰについて試験する。
【０３０４】
図４７Ａは、第１の試験ストリップ（８１５）上のＭｘＡ試験線（８０２）の陰性結果及び低ＣＲＰ試験線（８０３）の陰性結果、同様に、第２の試験ストリップ（８２５）上の高ＣＲＰ試験線（８２３）の陰性結果を示す。より具体的には、側方流動アッセイ（８９９）の検出領域（８０５）において唯一視認できる線は、２つの青色の対照線（８０４）である。この結果は、サンプルがウイルス感染と細菌感染の両方に陰性であることを示す。
【０３０５】
図４７Ｂと４７Ｃはウイルス感染に陽性である。図４７Ｂにおいて、２つの青色の対照線（８０４）と赤色のＭｘＡ線（８０２）の存在は、ウイルス感染を示す。図４７Ｃにおいて、２つの青色の対照線（８０４）と赤色のＭｘＡ線（８０２）の存在は、ウイルス感染を示す。図４７Ｃには黒色の低ＣＲＰ線（８０３）もあるので、細菌の同時感染の可能性があるが、高ＣＲＰ線（８２３）は欠如している。
【０３０６】
図４７Ｄと４７Ｅは細菌感染に陽性である。図４７Ｄにおいて、２つの青色の対照線（８０４）と黒色の低ＣＲＰ線（８０３）の存在は、細菌感染を示す。図４７Ｅにおいて、２つの青色の対照線（８０４）、黒色の低ＣＲＰ線（８０３）、及び黒色の高ＣＲＰ線（８２３）の存在も、細菌感染を示す。ＭｘＡ線は図４７Ｄと４７Ｅの両方において欠如しており、ウイルス感染の欠如を示す。
【０３０７】
図４７Ｆは同時感染（細菌感染とウイルス感染の両方）を示す。２つの青色の対照線（８０４）、赤色のＭｘＡ線（８０２）、黒色の低ＣＲＰ線（８０３）、及び黒色の高ＣＲＰ線（８２３）の存在は、ウイルス感染と細菌感染の両方の存在を示す。
【０３０８】
二峰性の２重の試験ストリップサンプル分析デバイス（１０００）に好ましい別の構成は、図４８Ａ乃至４８Ｃに示される。この構成（１０００）は、図４６Ａ乃至４６Ｃに示される構成（８９９）に類似するが、サンプル塗布領域（１０７３）と（１０７６）は、転換領域（８５０）の下流にある試験ストリップ（１０１５）、（１０２５）の各々に置かれる。サンプル分析デバイス又は試験カード（１０００）は、２つの側（８３６）、（８３７）、及びスパイン、又はヒンジ部（８３１）と持つ、開閉自在なハウジング（８３５）を含む。１つの好ましい実施形態において、試験カード（１０００）は、２つの側（８３６）と（８３７）が閉じられる場合、長さ約１１．５ｃｍ（Ｌ）×幅７ｃｍ（Ｗ）である。しかし、構成要素を全て収容する任意のサイズの試験カード（１０００）が使用されてもよい。ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）内に、２つの試験ストリップ（１０１５）と（１０２５）があり、それぞれ、受け取りパッド（８４５）、転換領域（８５０）、移動パッド（１０５５）、及び検出領域（８０５）を含む。第１の側（８３６）は、吸収性パッド（８４０）と、好ましくは廃棄物パッド（８６０）も含む。第１の試験ストリップ（１０１５）は、好ましくは、ＭｘＡ試験線（８０２）、低ＣＲＰ試験線（８０３）、及び対照線（８０４）を備えた検出領域（８０５）を含む。第２の試験ストリップ（１０２５）は、好ましくは、高ＣＲＰ試験線（８２３）と対照線（８０４）を備えた検出領域（８０５）を含む。ハウジング（８３５）が閉じられると、試験線は全て、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の窓（８６５）を通じて目に見える。吸収性パッド（８４０）は好ましくは、側方流動を始めるためにランニングバッファーが加えられる、単一のパッドである。同様に、廃棄物パッド（８６０）は好ましくは、試験の終わりに過剰なランニングバッファーを採取する、単一のパッドである。しかし、他の実施形態において、各ストリップは、吸収性パッド（８４０）及び／又は廃棄物パッド（８６０）を別々に有することが可能である。
【０３０９】
ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）は３つの別個のセクション（８３８）、（８３９）、及び（１０７０）を含む。中間部分、又はサンプル圧縮機としても知られるフラップ（１０７０）は好ましくは、２つの接合体領域（８７２）と（８７４）を含み、各々は、少なくとも１つの分析物のための標識化した結合パートナーと標識化した対照を含む。窓（８４３）は、ハウジングの第２の側（８３７）の下部（８３８）に置かれ、それによりバッファーは、ハウジング（８３５）が閉じられる場合に加えられ得る。検出領域（８０５）のための視界窓（８６５）は、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３９）の上にある。
【０３１０】
ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３９）と下部（８３８）は各々、好ましくは、少なくとも１つのノブ、１以上の穴（８９５）と対になる栓（ｐｅｇ）又は突部（８７５）も含み、それにより、上部（８３８）と下部（８３９）は、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）の上に容易に固定される。好ましい実施形態において、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上の吸収性パッド（８４０）の側面に位置する２つの穴（８９５）と対になる、下部（８３８）上の２つの栓（８７５）と、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上の廃棄物パッド（８６０）の側面に位置する２つの穴（８９５）と対になる、上部（８３９）上の２つの栓（８７５）がある。他の実施形態において、穴（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）上にあり、栓（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上にある。また他の実施形態において、他の可逆的な固定機構が、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）にハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３８）及び／又は下部（８３９）を固定するために使用され得る。他の実施形態において、上部と下部のセクション（８３８）、（８３９）は、使用前に、例えば粘着剤によって恒久的に閉じられる。
【０３１１】
ハウジングの第２の側（８３７）のフラップ（１０７０）は、２つの接合体領域（８７２）（８７４）を含み、容易に開閉自在である。フラップ（１０７０）はまた、好ましくは、１以上の穴（８９５）と対になる、少なくとも１つのノブ、栓、又は突部（８７５）を含み、それにより、フラップ（１０７０）は、試験ストリップ（１０１５）（１０２５）のサンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）にサンプルが加えられた後、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）の上で容易に正確に閉じられる。他の実施形態において、穴（８９５）は、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）上にあり、栓（８７５）は、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）上にある。また他の実施形態において、他の可逆的な固定機構が、ハウジング（８３５）の第１の側（８３６）にフラップ（１０７０）を固定するために使用され得る。
【０３１２】
好ましい実施形態において、接合体領域（８７２）（８７４）は、サンプル接合体と対照接合体における色素により色を付けられる。１つの好ましい実施形態において、第１の試験ストリップ（１０１５）に使用される接合体領域（８７２）は、赤色色素で標識化されるＭｘＡ結合パートナー、黒色色素で標識化される低ＣＲＰ結合パートナー、及び青色色素で標識化される対照結合パートナーを含む。この実施形態において、接合体領域（８７２）は紫色がかったように見える。他の接合体領域（８７４）は、黒色色素で標識化した高ＣＲＰ結合パートナーと、青色色素で標識化した対照結合パートナーを含む。この実施形態において、接合体領域（８７４）は青みを帯びているように見える。
【０３１３】
好ましくは間隙又は障壁を含む転換領域（８５０）は、側方流動を妨げて、ランニングバッファーを、接合体領域（８７２）（８７４）を含むフラップ（１０７０）に転換する。
【０３１４】
操作時に、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の上部（８３８）と下部（８３９）は、好ましくは、栓（８７５）を穴（８９５）に固定することにより、使用前に嵌められて閉じられる。サンプル分析デバイス、又は試験カード（１０００）は好ましくは平面上に配される。フラップ（１０７０）が既に開かれていない場合、ユーザーはそれを開き、サンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）にアクセスする。サンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）は、移動パッド（１０５５）の任意の部分に置かれてもよい。試験される血液サンプルは患者から得られる。サンプルは、当該技術分野で既知の任意の手順により得られる。好ましい実施形態において、５μｌの血液サンプルが、サンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）の各々に加えられ、その後、フラップ（１０７０）は閉じられる。５μｌのサンプルの各々は、好ましくは、他のものとは別に採取される。血液は、好ましくは、任意の事前処理なしで、デバイス（１０００）に直接加えられる。好ましい実施形態において、矢印（１００２）又は（図４８Ａに示される）他の指標、例えば「ここでサンプルを加える」との語は、試験ストリップ（１０１５）と（１０２５）にサンプルを配置する場所をユーザーに示す。
【０３１５】
フラップ（１０７０）が正しく閉じられたことを確認するために、圧力は、好ましくは、栓（８７５）を閉じた状態にするために栓（８７５）の上のハウジング（８３５）に適用される。フラップ（１０７０）の上部は、試験を適切に実行するために、ハウジング（８３５）の第２の側（８３７）の残りの頂部と同じ高さである必要がある。ランニングバッファーは、側方流動（８８５）を開始する吸収性パッド（８４０）に加えられる。好ましい実施形態において、ランニングバッファーは、血液サンプルを溶解し、サンプル中に細胞内のＭｘＡを露出するために、１以上の溶解剤（例えば洗浄剤）を含む。ランニングバッファーが転換領域（８５０）に到達すると、それはフラップ（１０７０）に転換される。それは、接合体領域（８７２）（８７４）を通って移動し、ＭｘＡ結合パートナー、低ＣＲＰ結合パートナー、及び高ＣＲＰ結合パートナー、同様に対照接合体を採取する。
【０３１６】
接合体領域（８７２）（８７４）が側方流動試験ストリップ（１０１５）、（１０２５）に転換領域（８５０）を作成するので、ここで接合体を含むランニングバッファーは、その後、サンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）を含む移動パッド（１０５５）に、及び、試験ストリップ（１０１５）（１０２５）の各々の上の検出領域（８０５）に移動する。ＭｘＡがサンプル中にある場合、第１の試験ストリップ（１０１５）上のＭｘＡ試験線（８０２）は赤くなる。ＣＲＰの閾値低レベルがサンプル中に有る場合、第１の試験ストリップ（１０１５）上の低ＣＲＰ試験線（８０３）は黒くなる。ＣＲＰの閾値高レベルがサンプル中に有る場合、第２の試験ストリップ（１０２５）上の高ＣＲＰ試験線（８２３）は黒くなる。好ましい実施形態において、検出のレベルは、ＭｘＡについては４０ｎｇ／ｍｌ、第１の試験ストリップ（１０１５）上の低ＣＲＰについては１０ｍｇ／Ｌ、及び第２の試験ストリップ（１０２５）上の高ＣＲＰについては８０ｍｇ／Ｌである。試験の結果は、約５−２０分後、好ましくは約１０分以内に視認できるはずである。試験が正確に実行されれば、第１のストリップ（１０１５）と第２の試験ストリップ（１０２５）の両方の上の対照線（８０４）は青くなる。
【０３１７】
対照結合パートナーが、フラップ（１０７０）の上にあり、試験ストリップ（１０１５）（１０２５）のどちらかの上には無いので、この構成に対する手順制御は正しい。フラップ（１０７０）が適切に閉じていない場合、検出領域（８０５）には何も現れず、試験が不適切に行われたことを示す。
【０３１８】
代替的な実施形態において、サンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）は、転換領域（８５０）の前に、受け取りパッド（８４５）の上に置かれる。この実施形態において、ランニングバッファーは、サンプル塗布領域（１０７３）（１０７６）を通って移動し、その後、フラップ（１０７０）に転換される。
【０３１９】
図４６Ａ乃至４６Ｃと４８Ａ乃至４８Ｃに示される構成の好ましい実施形態において、約１．２ｍｌより多くのランニングバッファーが、吸収性パッド（８４０）に置かれる。１．０ｍｌ未満が、転換領域（８５０）が間隙である実施形態に加えられる場合、間隙が約１．０ｍｌを保持するので、バッファーは間隙で止められる（ｇｅｔｓ  ｓｔａｌｌｅｄ）。
【０３２０】
図４９に示されるように、１つの好ましい実施形態において、キット（１１００）は、サンプル分析デバイス（８００）（１０００）、ランセット（１１０２）、１以上のピペット（１１０１）、及びランニングバッファー（１１０３）を含む。ランセット（１１０２）は皮膚穿刺を行うために使用され、１以上のピペット（１１０１）は穿刺部位から血液を採取するために使用される。好ましい実施形態において、５μｌの血液は、第１のピペット（１１０１）から第１の接合体領域（８７２）へ移され、別の５μｌの血液は第２ピペット（１１０１）から移されて第２の接合体領域（８７４）に加えられる。図４６Ａ乃至４６Ｃと４８Ａ乃至４８Ｃに記載されるように、フラップ（８７０）は閉じられ、ランニングバッファー（１１０３）は吸収性パッド（８４０）に加えられる。
【０３２１】
サンプル圧縮機（３０）を備えた他の実施形態において、サンプル圧縮機は、試験用の任意の試薬を含まず、そして、試験ストリップに圧力を与えるか又はその上に転換領域を作るためにのみ使用される。
【０３２２】
サンドイッチアッセイのような方法とデバイスが本明細書に記載されるが、本発明の方法とデバイスは競合アッセイにおいて等しく使用されてもよい。これらの競合アッセイにおいて、接合体は好ましくは、分析物の結合パートナーよりむしろ、分析物又は分析物アナログを含み、又は、代替的に、第２の結合パートナーは分析物又は分析物アナログと置きかえられる。その後、陽性試験結果は、試験ストリップの試験領域におけるラベルの存在の不足によって示される。
【０３２３】
従って、本明細書に記載された本発明の実施形態が、本発明の原理の用途の単なる実例であることを、理解されたい。図示された実施形態の詳細に対する、本明細書における言及は、それ自体が本発明に不可欠とみなされる特徴を挙げる、特許請求の範囲を制限するようには意図されていない。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３９】
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【図４０Ａ】
0006293797.tif 000079
【図４０Ｂ】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
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【図４６Ｃ】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４７Ｃ】
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【図４７Ｄ】
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【図４７Ｅ】
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【図４７Ｆ】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ｂ】
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【図４８Ｃ】
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【図４９】
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