(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＴＩＮＧと結合しＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を誘導する環状プリンジヌクレオチドと、
ＧＭ−ＣＳＦを発現し分泌する不活化腫瘍細胞と
を含む組成物。
【請求項２】
薬学的に許容される添加剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記不活化腫瘍細胞がＣＣＬ２０、ＣＣＬ３、ＩＬ−１２ｐ７０もしくはＦＬＴ−３リガンドから選択される１つまたは複数のサイトカインをさらに発現し分泌する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
１つまたは複数のＣＴＬＡ−４アンタゴニストおよびＴＬＲ−４アゴニストをさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記腫瘍細胞が、放射線処理によって不活性化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記環状プリンジヌクロチド（ｄｉｎｕｃｌｏｔｉｄｅ）が、ｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ジＧＭＰ、ｃ−ジＩＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＩＭＰおよびｃ−ＧＭＰ−ＩＭＰまたはその組合せからなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記プリンジヌクロチド（ｄｉｎｕｃｌｏｔｉｄｅ）が、１つまたは複数の脂質とともに製剤化されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記１つまたは複数の脂質がジギトニンを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記１つまたは複数の脂質がリポソームを形成する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
１つまたは複数のアジュバントをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記１つまたは複数のアジュバントがＣｐＧおよび／またはモノホスホリル脂質Ａを含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
個体において癌に対する免疫応答を誘導する方法における使用のための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、
前記不活化腫瘍細胞または異なる腫瘍細胞の混合物が前記個体の癌と型が一致する、
組成物。
【請求項１３】
前記不活化腫瘍細胞または異なる腫瘍細胞の混合物が、１つまたは複数の同種腫瘍細胞系である、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記不活化腫瘍細胞が自己腫瘍細胞である、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記腫瘍細胞が、結腸直腸癌細胞、気道消化器扁平上皮癌細胞、肺癌細胞、脳癌細胞、肝臓癌細胞、胃癌細胞、肉腫細胞、白血病細胞、リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、卵巣癌細胞、子宮癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、前立腺癌細胞、膵臓癌細胞および腎臓癌細胞からなる群より選択される、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１２年６月８日に出願された米国特許仮出願第６１／６５７，５７４号の優先権を主張するものであり、上述出願は表、図面および請求項を含めその全体が本明細書に組み込まれるものとする。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景に関する以下の考察は、単に読者が本発明を理解するのを補助するために提供されるものであり、本発明の先行技術を記載または構成することが認められているものではない。
【０００３】
ヒト免疫系は一般に、「自然免疫」および「適応免疫」と呼ばれる２つの部門に分けることができる。免疫系の自然部門には主として、補体系およびケモカイン／サイトカイン系を含めた多数の可溶性因子ならびに肥満細胞、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）およびナチュラルキラー細胞を含めた多数の特殊化した細胞型を介した初期の炎症性応答が関与する。これに対して、適応免疫部門には、抗原に対する免疫記憶にきわめて重要な役割を果たすＣＤ８＋細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞応答とともに遅れて始まり、より長く持続する抗体応答が関与する。免疫系の３つ目の部門は、γδＴ細胞および限られたＴ細胞受容体レパートリーを有するＮＫＴ細胞およびＭＡＩＴ細胞などのＴ細胞が関与するものであると考えることができる。
【０００４】
抗原に対する効果的な免疫応答には、抗原提示細胞（ＡＰＣ）が適切なＭＨＣ背景で抗原を処理してＴ細胞に提示し、次いでこれにより、細胞傷害性Ｔ細胞およびヘルパーＴ細胞のいずれかのＴ細胞刺激が生じなければならない。抗原提示後、ＡＰＣおよびＴ細胞の両方における共刺激分子の相互作用が成功しなければならず、これが成功しなければ活性化が中断される。多くの腫瘍モデルではＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２が効果的な炎症誘発性分子としての役割を果たす。例えば、ＧＭ−ＣＳＦは骨髄系前駆細胞の増殖および樹状細胞（ＤＣ）への分化を誘導するが、Ｔ細胞の活性化に必要な効果的な抗原提示細胞への成熟を活性化するにはほかにもシグナルが必要である。効果的な免疫療法の障害としては、しかるべき大きさおよび機能の細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞の誘導を制限し得る標的抗原に対する寛容性、生じたＴ細胞の悪性細胞の諸部位への輸送不良および誘導されたＴ細胞応答の持続不良が挙げられる。
【０００５】
腫瘍細胞残屑を貪食するＤＣが主要組織適合複合体（ＭＨＣ）提示の材料を処理し、共刺激分子の発現をアップレギュレートし、所属リンパ節に移動して、腫瘍特異的リンパ細胞を刺激する。この経路によって、腫瘍関連抗原に反応するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖および活性化がもたらされる。実際、患者の血液、リンパ組織および悪性病変にこのような細胞が検出されることがある。
【０００６】
免疫回避の基礎となる機序についての新たな洞察が、直接的にまたは免疫チェックポイント阻害剤をはじめとする治療法との併用によって間接的に治療的ワクチン接種の効力を増強する併用治療レジメンとともに、効果的な抗腫瘍免疫を誘導するワクチン開発の基礎としての役割を果たしてきた。
【０００７】
腫瘍に対して効果的な免疫応答を生じさせるため、ＧＭ−ＣＳＦを分泌するよう遺伝子を改変した腫瘍細胞が様々な戦略に用いられてきたが、無作為化比較対照試験ではサイトカイン全身投与により直接的な抗癌応答が誘導されたことはない。患者の皮下に注射した放射線照射ＧＭ−ＣＳＦ分泌腫瘍細胞がＤＣ、マクロファージおよび顆粒球を含む局所応答を刺激することが示されている。ＡＰＣが多数蓄積したことは、このモデルにおけるＧＭ−ＣＳＦの１つの機能が腫瘍抗原提示の増大を引き起こしたことを示唆している。さらに、腫瘍細胞ワクチンが患者に安全であることが示されている。しかし、この方法の臨床効果は未だ明らかにされていない。
【０００８】
感染との関連では、Ｔｏｌｌ様受容体（「ＴＬＲ」）アゴニストによって樹状細胞活性化が免疫原性になることが示されているのに対して、ＴＬＲシグナル伝達が欠如すると寛容性がもたらされ得る。これらの研究から推測されるのは、限局性のＴＬＲ刺激を組合せワクチンの一部として与えると抗腫瘍応答を増強し得るということである。国際公開第２０１１１３９７６９号には、ＴＬＲ４刺激と組み合わせたＧＭ−ＣＳＦ分泌腫瘍細胞（ＧＶＡＸ）ワクチンの製剤および使用が記載されており、これがいくつかのマウスモデルに抗腫瘍効果をもたらすことが報告されている。しかし、ヒトにおけるその効果は依然として明らかにされていない。
【０００９】
従来の治療法に抵抗性を示し得る癌などの疾患を治療する免疫学的戦略のための改善された組成物および方法が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の目的は、癌治療のための併用療法を提供することである。
【００１１】
第一の態様では、本発明は、インターフェロン遺伝子刺激因子（「ＳＴＩＮＧ」）と結合しＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を誘導する１つまたは複数の環状プリンジヌクレオチド（「ＣＤＮ」）と、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現し分泌する不活化腫瘍細胞とを含む、組成物を提供する。
【００１２】
のちに記載する通り、本発明には多数のＣＤＮが使用される。好ましい環状プリンジヌクロチド（ｄｉｎｕｃｌｏｔｉｄｅｓ）としては、特に限定されないが、１つまたは複数のｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ジＧＭＰ、ｃ−ジＩＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＩＭＰ、ｃ−ＧＭＰ−ＩＭＰおよびその類似体が挙げられる。ここに挙げたものは限定することを意図するものではない。
【００１３】
同様に、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカイン含む好ましい共刺激物質としては、特に限定されないが、１つまたは複数のＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ４０リガンド、ＩＬ−１２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ２０およびＣＣＬ２１が挙げられる。ここに挙げたものは限定することを意図するものではない。
【００１４】
本発明の組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバントおよび媒体を含有する製剤の形で様々な非経口および非経口以外の経路により、必要とする患者に投与することができる。好ましい経路は非経口経路であり、このようなものとして、特に限定されないが、１つまたは複数の皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、真皮内、髄腔内および硬膜外投与が挙げられる。特に好ましいのは皮下投与による投与である。好ましい医薬組成物は、水性乳剤または水中油型乳剤として製剤化されたものである。
【００１５】
本発明の組成物は、１つまたは複数の追加の薬学的に活性な成分、例えばアジュバント、ジギトニン、リポソームなどの脂質、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１経路アンタゴニスト、ＰＤ−１経路遮断剤、自然免疫を誘導する不活化細菌（例えば、不活化または弱毒化リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ））、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して自然免疫活性化を仲介する組成物、（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）、レチノイン酸誘導遺伝子に基づく（ＲＩＧ）−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）、病原関連分子パターン（「ＰＡＭＰ」）、化学療法剤などを含むか、これらとともに投与することができる。
【００１６】
のちに記載する通り、１つまたは複数の脂質とともに製剤化した環状プリンジヌクロチド（ｄｉｎｕｃｌｏｔｉｄｅｓ）は、改善された樹状細胞活性化作用を含めた改善された特性を示し得る。したがって、本発明はほかにも、１つまたは複数のＣＤＮと１つまたは複数の脂質とを含む組成物に関する。ある好ましい実施形態では、１つまたは複数のＣＤＮをジギトニン、リポソーム製剤および／または水中油型乳剤とともに製剤化する。本発明のこれらの製剤は、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現し分泌する不活化腫瘍細胞なしで投与することができ、ある実施形態では、ＣＤＮと１つまたは複数の脂質との製剤を１つまたは複数のこのような細胞系とともに提供する。
【００１７】
関連する態様では、本発明は、個体において癌に対する免疫応答を誘導する方法に関する。この方法は、必要とする個体に本発明による組成物を投与することを含み、ここで、不活化腫瘍細胞または異なる腫瘍細胞の混合物は個体の癌と型が一致するものである。
【００１８】
ある実施形態では、不活化腫瘍細胞または異なる腫瘍細胞の混合物は、同種腫瘍細胞もしくは自己腫瘍細胞またはこの２つの混合物である。
【００１９】
本発明の方法は、結腸直腸癌、気道消化器扁平上皮癌、肺癌、脳癌、肝臓癌、胃癌、肉腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、子宮癌、乳癌、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌および腎臓癌の治療を受けている患者を対象とし得る。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】環状プリンジヌクレオチド（「ＣＤＮ」）によって仲介されるシグナル伝達を示す図である。２つのプリンヌクレオシドが標準的なビス−（３’，５’）結合またはｃ［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］に代表される非標準的な２’，５’および３’，５’結合によるリン酸架橋によって二者択一的に結合したＣＤＮ（例えば、ｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ジＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ）。標準的なＣＤＮまたは非標準的なＣＤＮが、細胞質受容体ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）と結合してＴＢＫ−１／ＩＲＦ−３経路を介したシグナル伝達を活性化し、ＩＦＮ受容体との結合とそれに続くシグナル伝達を介したＤＣのオートクリンおよびパラクリン活性化を引き起こすことにより、ＮＦ−ｋＢ依存性炎症誘発性サイトカインおよびＩＦＮ−βの両方の産生を誘導する。
【図２Ａ】ＨＩＶ  Ｇａｇに対する、ＣＤＮをアジュバントとするＴ細胞応答を示す図である。
【図２Ｂ】マウスに図に示されるワクチン組成で免疫感作を実施した後のＰＢＭＣにおける一次および二次ＯＶＡ特異的ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞応答を示す図である。
【図２Ｃ】モデル抗原としてＯＶＡを用いたＣＤＮをアジュバントとするワクチンにより誘導された免疫応答を示す図である。
【図３Ａ】ＧＶＡＸ／ＣＤＮ組合せワクチン（「Ｓｔｉｎｇｖａｘ」と呼ばれる）に応答したＢ１６黒色腫の成長阻害を示す図である。
【図３Ｂ】ＧＶＡＸ／ＣＤＮ組合せワクチンに応答したＴＲＡＭＰ−ＧＭ細胞および骨髄由来マクロファージにおけるインターフェロン−β誘導を示す図である。
【図４】ＧＶＡＸ／ＣＤＮ組合せワクチンに応答したＢ１６黒色腫の成長阻害の濃度依存性を示す図である。
【図５】ＧＶＡＸ／ＣＤＮ組合せワクチンに応答したＢ１６黒色腫腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を示す図である。
【図６】ＧＶＡＸ／ＣＤＮ組合せワクチンに応答した成熟インターフェロンγ産生脾臓ＤＣ（ＣＤ１１ｃ＋細胞）の誘導を示す図である。
【図７】共刺激分子の発現によって評価した、ＣＤＮ治療時のヒト樹状細胞の誘導を示す図である。
【図８】１５例の独立したドナーから単離した培養ヒト末梢血単核球における、環状ジ−ＧＭＰ（ＣＤＧ）、インターフェロン刺激性ＤＮＡ（ＩＳＤ）およびポリイノシン−シトシン（ポリＩ：Ｃ）を含めた様々な自然免疫活性化因子による刺激後のＩＦＮ−α発現を示す図である。
【図９】「ＳＴＩＮＧＶＡＸ」の作用の相乗的機序を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
去勢抵抗性転移性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の治療にＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）がＦＤＡに承認されたことにより、能動的癌免疫療法の治療領域としての有効性が認められ、この分野が再び活気づいた。しかし、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）は、自己樹状細胞（ＤＣ）ベースのワクチンとして実用性に欠け、複雑で高価なものであり、有意であるがわずかな生存利益しか得られない。改善された癌ワクチンは、少なくともＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）と同程度の効果が得られることに加えて、より実用的で、好ましくは客観的効果を導くものでなければならない。この方向に向かう第一段階が、ＰＳＡおよび３つの共刺激分子（Ｂ７．１、ＩＣＡＭ−１およびＬｆａ−３）をコードする組換えポックスウイルスをベースとするワクチン、ＰｒｏｓｔＶａｃ  ＶＦである。ＰｒｏｓｔＶａｃ  ＶＦは、ｍＣＲＰＣの男性患者を対象にした無作為化第２相試験で全生存率を上昇させることが示されたが、生存利益はｐ＜０．０５の統計的有意性に達しておらず、現時点では第３相有効性試験で評価中である。これらのワクチンは、正常な前立腺組織および前立腺癌の両方によって発現される単一の抗原を用いるものである。抗原欠損変異体による悪影響、腫瘍関連抗原発現プロファイルにおける患者間差またはＭＨＣハプロタイプの差といった単一ＴＡＡワクチン接種戦略に関するあらゆる問題の可能性を低減するには、治療的ワクチン接種戦略により多発性癌抗原を標的化するのが望ましい。
【００２２】
本発明は、ＤＣ増殖因子、ＧＭ−ＣＳＦを大量に分泌するよう遺伝子操作された放射線照射同種ヒト腫瘍細胞系とともに製剤化した、近年発見されたＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）として知られる細胞質受容体を介してＤＣを活性化する小分子免疫刺激因子、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）に依存する、新規できわめて能動的な併用療法に関する。この併用療法により、強力なＤＣ活性化刺激剤（ＣＤＮ）と一体になった、複数の腫瘍関連抗原、ＤＣ動員および増殖（ＧＭ−ＣＳＦ）の理想的な相乗効果を得ることができる。
【００２３】
ＣＤＮ、すなわち環状ジ−ＡＭＰ（リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）によって産生される）およびその類似体、環状ジ−ＧＭＰ（レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）によって産生される）は、ＳＴＩＮＧとして知られるＰＲＲ（病原体認識受容体）と結合するＰＡＭＰ（病原関連分子パターン）として宿主細胞により認識される。ＳＴＩＮＧは宿主哺乳動物細胞の細胞質中にあるアダプタータンパク質であり、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）−ＩＲＦ３シグナル伝達系を活性化することにより、自然免疫を強力に活性化するＩＦＮ−βをはじめとするＩＲＦ−３依存性遺伝子産物を誘導する。ＳＴＩＮＧは現在、細胞内病原体による感染を感知し、これに応答してＩＦＮ−βの産生を誘導して、病原体特異的抗体と同様に抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方からなる適応性の防御的病原体特異的免疫応答を発生させる、宿主細胞質の監視経路の成分であると認識されている。
【００２４】
定義
本明細書でヒト、哺乳動物、哺乳動物対象、動物、獣医学対象、プラセボ対象、研究対象、実験対象、細胞、組織、器官または生体液に関して使用される「投与」は、外来性のリガンド、試薬、プラセボ、小分子、医薬品、治療剤、診断剤または組成物と対象、細胞、組織、器官または生体液などとの接触を非限定的に指す。「投与」は、例えば、治療法、薬物動態学的方法、診断法、研究法、プラセボ法および実験法を指す場合がある。細胞の治療は試薬と細胞との接触のほかにも、試薬と液体との接触を包含し、この場合、その液体は細胞と接触している。「投与」はこのほか、試薬、診断剤、結合組成物または別の細胞による、例えば細胞のインビボおよびエクスビボ治療を包含する。「〜とともに投与する」は、２つ以上の薬剤を単一組成物として投与することを意味するものではない。単一組成物としての投与が本発明により考慮されるが、このような薬剤は単一の対象に別個の投与として送達され得るものであり、このような投与は、同じ時間でも異なる時間でも実施され得るものであり、また同じ投与経路によっても異なる投与経路によっても実施され得るものである。
【００２５】
「精製（された）」および「単離（された）」は、特定の種が組成物中に存在する種の少なくとも５０重量％を占め、より多くの場合には少なくとも６０重量％を占め、典型的には少なくとも７０重量％を占め、より典型的には少なくとも７５重量％を占め、最も典型的には少なくとも８０重量％を占め、通常は少なくとも８５重量％を占め、より通常には少なくとも９０重量％を占め、最も通常には少なくとも９５重量％を占め、従来通りでは少なくとも９８重量％またはそれ以上を占めることを意味する。水、緩衝剤、塩、界面活性剤、還元剤、プロテアーゼ阻害剤、安定剤（アルブミンなどの添加タンパク質を含む）および添加剤の重量は一般に、純度の決定には用いられない。
【００２６】
リガンド／受容体、核酸／相補的核酸、抗体／抗原またはその他の結合対（例えば、サイトカインとサイトカイン受容体）（本明細書ではそれぞれ一般に、「標的生体分子」または「標的」と呼ぶ）に言及する場合、「特異的に」または「選択的に」結合するとは、タンパク質をはじめとする生物製剤の不均一な集団における標的の存在に関連する結合反応を意味するものである。特異的結合は、例えば、考慮される方法の結合化合物、核酸リガンド、抗体または抗体の抗原結合部位に由来する結合組成物が、非標的分子との親和性よりも多くの場合は少なくとも２５％大きい、より多くの場合は少なくとも５０％大きい、最も多くの場合は少なくとも１００％大きい（２倍の）、通常は少なくとも１０倍の、より通常には少なくとも２０倍の、最も通常には少なくとも１００倍の親和性でその標的と結合することを意味し得る。
【００２７】
「リガンド」は、標的生体分子と結合する小分子、核酸、ペプチド、ポリペプチド、糖類、多糖類、グリカン、糖タンパク質、糖脂質またはその組合せを指す。このようなリガンドは受容体のアゴニストまたはアンタゴニストであり得るが、リガンドはほかにも、アゴニストでもアンタゴニストでもなく、アゴニスト特性もアンタゴニスト特性も有さない結合物質を包含する。リガンドのその関連標的との特異的結合は「親和性」で表されることが多い。好ましい実施形態では、本発明のリガンドは約１０４Ｍ−１〜約１０８Ｍ−１の親和性で結合する。親和性はＫｄ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ（ｋｏｆｆは解離速度定数であり、Ｋｏｎは結合速度定数であり、Ｋｄは平衡定数である）として計算される。
【００２８】
様々な濃度（ｃ）における標識リガンドの結合画分（ｒ）を測定することにより、平衡状態での親和性を求めることができる。スキャッチャードの式：ｒ／ｃ＝Ｋ（ｎ−ｒ）（式中、ｒ＝平衡状態での結合リガンドのモル数／受容体のモル数；ｃ＝平衡状態での遊離リガンド濃度；Ｋ＝平衡結合定数；およびｎ＝受容体分子当たりのリガンド結合部位数）を用いてデータのグラフを描く。グラフ解析によりｒ／ｃをＹ軸に、ｒをＸ軸にプロットして、スキャッチャードプロットを作成する。スキャッチャード解析による親和性の測定は当該技術分野で周知である。例えば、ｖａｎ  Ｅｒｐら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  １２：４２５−４３，１９９１；ＮｅｌｓｏｎおよびＧｒｉｓｗｏｌｄ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．２７：６５−８，１９８８を参照されたい。別法では、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）により親和性を測定することができる。典型的なＩＴＣ実験では、リガンドの溶液をその関連標的の溶液に滴定する。この２つが相互作用したときに放出される熱（ΔＨ）を経時的にモニターする。リガンドをＩＴＣセルに連続的に滴定するにつれて、吸収または放出される熱の量が結合量と正比例するようになる。系が飽和に達すると、希釈熱のみが観察されるまで熱シグナルが減少する。次いで、注入ごとの熱のプロットからセル内のリガンドと結合パートナーの比に対する結合曲線が得られる。この結合曲線をしかるべき結合モデルで解析してＫＢ、ｎおよびΔＨを求める。ただし、ＫＢ＝１／Ｋｄである。
【００２９】
本明細書で使用される「対象」は、ヒトまたは非ヒト生物体を指す。したがって、本明細書に記載される方法および組成物はヒト疾患にも獣医学疾患にも適用可能である。ある特定の実施形態では、対象は「患者」、すなわち、生存し疾患または病態に対する医療を受けているヒトである。これには、疾患が確定されておらず、病理の徴候を検討中の者が含まれる。本発明の組成物および方法によって標的化されている特定の癌の診断が既に下されている対象が好適である。本明細書に記載される組成物による治療に好適な癌としては、特に限定されないが、前立腺癌、腎臓癌、黒色腫、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌。結腸癌、頭頸部癌、肺癌および乳癌が挙げられる。
【００３０】
「治療有効量」は、患者利益を示す、すなわち、治療する病態の症状の軽減、予防または改善をもたらすのに十分な試薬または医薬組成物の量と定義される。薬剤または医薬組成物が診断剤を含む場合、「診断有効量」は、シグナル、画像またはその他の診断パラメータを得るのに十分な量と定義される。医薬製剤の有効量は、個体の感受性の程度、個体の年齢、性別および体重ならびに個体の特異体質反応などの因子によって異なるものとなる。「有効量」は、医学的状態もしくは障害の症状もしくは徴候またはその原因過程を改善する、元の状態に戻す、緩和する、予防するまたは診断することができる量を非限定的に包含する。別途に、明確にまたは文脈により特に指定されない限り、「有効量」は病態を改善するのに十分な最小量に限定されない。
【００３１】
「治療」または「治療すること」（病態または疾患に関して）とは、有益なまたは所望の臨床結果を含めた結果、好ましくは臨床結果を得るための方法のことである。本発明の目的のため、疾患に関する有益なまたは所望の結果には、特に限定されないが、以下に挙げるもののうちの１つまたは複数が含まれる：疾患の予防、疾患に関連する病態の改善、疾患の治癒、疾患重症度の軽減、疾患進行の遅延、疾患に関連する１つまたは複数の症状の軽減、疾患に罹患している者の生活の質の向上および／または生存期間の延長。同様に、本発明の目的のため、病態に関する有益なまたは所望の結果には、特に限定されないが、以下に挙げるもののうちの１つまたは複数が含まれる：病態の予防、病態の改善、病態の治癒、病態の重症度の軽減、病態進行の遅延、病態に関連する１つまたは複数の症状の軽減、病態に罹患している者の生活の質の向上および／または生存期間の延長。例えば、本明細書に記載される組成物を癌の治療に使用する実施形態では、有益なまたは所望の結果には、特に限定されないが、以下に挙げるもののうちの１つまたは複数が含まれる：新生細胞もしくは癌性細胞の増殖の減少（もしくはこれらの細胞の破壊）、癌にみられる新生細胞の転移の減少、腫瘍の大きさの縮小、癌による症状の軽減、癌に罹患している者の生活の質の向上、疾患を治療するのに必要な他の薬剤の投与量の減少、癌進行の遅延および／または癌を有する患者の生存期間の延長。文脈に応じて、対象の「治療」は、対象が治療を必要とする、例えば、対象が試薬の投与によって改善が期待される障害を含む状況にあることを意味する場合がある。
【００３２】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、１つもしくは複数の免疫グロブリン遺伝子またはそのフラグメントに由来するか、これをモデルにして作製されるか、これによってコードされ、抗原またはエピトープと特異的に結合することができる、ペプチドまたはポリペプチドを指す。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第３版，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ編，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９３）；Ｗｉｌｓｏｎ（１９９４）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７５：２６７−２７３；Ｙａｒｍｕｓｈ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５：８５−９７を参照されたい。抗体という用語には、抗原と結合する能力を保持する抗原結合部分、すなわち「抗原結合部位」（例えば、フラグメント、サブ配列、相補性決定領域（ＣＤＲ））が含まれ、このような抗原結合部分としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体単腕のＶＬおよびＶＨからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。「抗体」という用語にはこのほか、一本鎖抗体が参照により含まれる。
【００３３】
免疫調節細胞系
「不活化腫瘍細胞」は、細胞が分裂しないよう処理されている腫瘍細胞（患者に対して「自己」または「同種」のいずれか）を意味する。本発明の目的のため、このような細胞にはその免疫原性および代謝活性を維持させる。癌治療の一部として、このような腫瘍細胞は患者内で発現される導入遺伝子を発現するよう遺伝子を改変する。したがって、本発明の組成物またはワクチンは、治療を受けている患者に対して自己または同種の新生細胞（例えば、腫瘍細胞）を含み、最も好ましくは患者を冒している腫瘍細胞と同じ一般型の腫瘍細胞である。例えば、黒色腫に罹患している患者には通常、黒色腫由来の遺伝子改変細胞を投与する。本発明に使用する腫瘍細胞を不活性化する方法、例えば放射線照射の使用などは当該技術分野で周知である。
【００３４】
本発明の不活化腫瘍細胞は、１つまたは複数の共刺激分子または共刺激物質とともに患者に投与する。好ましい共刺激物質は、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを含む。このような共刺激物質を評価する方法は文献において周知である。ＤＣの誘導および成熟は通常、刺激後のＣＤ８０およびＣＤ８６などの特定の膜分子の発現増加ならびに／またはＩＬ−１２およびＩ型インターフェロンなどの炎症誘発性サイトカインの分泌によって評価される。
【００３５】
好ましい実施形態では、不活化腫瘍細胞自体を樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現し分泌するよう改変する。本発明は、例示的な意味でＧＭ−ＣＳＦの使用に関して記載されている。したがって、例として述べると、腫瘍細胞は、米国特許第５，６３７，４８３号、同第５，９０４，９２０号、同第６，２７７，３６８号および同第６，３５０，４４５号ならびに米国特許出願公開第２０１００１５０９４６号（それぞれ参照により本明細書に明示的に組み込まれる）に記載される通り、ＧＭ−ＣＳＦをコードする導入遺伝子を発現し得る。膵臓癌の治療のためのＧＭ−ＣＳＦ発現遺伝子改変癌細胞または「サイトカイン発現細胞ワクチン」が米国特許第６，０３３，６７４号および同第５，９８５，２９０号に記載されており、上記明細書はともに参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【００３６】
このような不活化腫瘍細胞および／またはバイスタンダー細胞によってＧＭ−ＣＳＦの代わりにまたはＧＭ−ＣＳＦとともに発現し得るその他の適切なサイトカインとしては、特に限定されないが、１つまたは複数のＣＤ４０リガンド、ＩＬ−１２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ２０およびＣＣＬ２１が挙げられる。ここに挙げたものは限定することを意図するものではない。
【００３７】
対象に投与する不活化腫瘍細胞が１つまたは複数の目的とするサイトカインを発現するのが好ましいが、腫瘍細胞系に樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現し分泌する不活化バイスタンダー細胞系が伴ってもよい。バイスタンダー細胞系は、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激するサイトカインをすべて供給するものであっても、あるいは不活化腫瘍細胞によって発現され分泌される、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激するサイトカインを補うものであってもよい。例として、免疫調節サイトカインを発現するバイスタンダー細胞系が米国特許第６，４６４，９７３号および同第８，０１２，４６９号、Ｄｅｓｓｕｒｅａｕｌｔら，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１４：８６９−８４，２００７ならびにＥａｇｅｒおよびＮｅｍｕｎａｉｔｉｓ，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１２：１８−２７，２００５に開示されており、上記文献はそれぞれ、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【００３８】
「顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）ポリペプチド」は、免疫調節活性を有し、ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＡＡＡ５２１２２と少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性を有するサイトカインまたはそのフラグメントを意味する。
【００３９】
環状プリンジヌクレオチド
本明細書に記載される通り、上に挙げたような共刺激物質にはもう一つ、ＳＴＩＮＧと結合しＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を誘導する環状プリンジヌクレオチドがある。これ以外に含まれ得る共刺激分子についてはのちに記載する。
【００４０】
原核細胞および真核細胞はともに、細胞シグナル伝達ならびに細胞内および細胞間のコミュニケーションに様々な小分子を用いる。ｃＧＭＰ、ｃＡＭＰなどのような環状ヌクレオチドには原核細胞および真核細胞において調節活性および開始活性があることが知られている。真核細胞とは異なり、原核細胞はほかにも、調節分子として環状プリンジヌクレオチドを用いる。原核生物では、２つのＧＴＰ分子の縮合が酵素ジグアニル酸シクラーゼ（ＤＧＣ）により触媒されてｃ−ｄｉＧＭＰが生じ、これが細菌の重要な調節因子となる。
【００４１】
近年の研究では、環状ジ−ＧＭＰまたはその類似体がほかにも、哺乳動物において、患者の免疫応答または炎症性応答を刺激または増強し得る、あるいはアジュバントとしての役割を果たすことによってワクチンに対する免疫応答を増強し得ることが示唆されている。細胞質内で病原体由来のＤＮＡが検出されるには、ＴＡＮＫ結合キナーゼ１（ＴＢＫ１）およびその下流の転写因子、ＩＦＮ−調節因子３（ＩＲＦ３）を介したシグナル伝達が必要である。ＳＴＩＮＧ（ＩＦＮ遺伝子刺激因子；ＭＩＴＡ、ＥＲＩＳ、ＭＰＹＳおよびＴＭＥＭ１７３としても知られる）と呼ばれる膜貫通タンパク質がこれらの環状プリンジヌクレオチドのシグナル伝達受容体として機能し、ＴＢＫ１−ＩＲＦ３シグナル伝達系およびＳＴＩＮＧ依存性Ｉ型インターフェロン応答の刺激を引き起こす。例えば、図１を参照されたい。Ｂｕｒｄｅｔｔｅら（Ｎａｔｕｒｅ  ４７８：５１５−１８，２０１１）は、ＳＴＩＮＧが環状ジグアニル酸一リン酸とは直接結合するが、他の無関係なヌクレオチドまたは核酸とは結合しないことを示した。
【００４２】
本発明に使用するのに適した環状プリンジヌクレオチドについては、例えば、米国特許第７，７０９４５８号および同第７，５９２，３２６号；国際公開第２００７／０５４２７９号；ならびにＹａｎら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．１８：５６３１（２００８）にある程度詳細に記載されており、上記文献はそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。好ましい環状プリンジヌクロチド（ｄｉｎｕｃｌｏｔｉｄｅｓ）としては、特に限定されないが、ｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ジＧＭＰ、ｃ−ジＩＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＩＭＰおよびｃ−ＧＭＰ−ＩＭＰならびに特に限定されないが、ホスホロチオアート類似体を含めたその類似体が挙げられる。
【００４３】
アジュバント
上記不活化腫瘍細胞（１つまたは複数）および環状プリンジヌクロチド（ｄｉｎｕｃｌｏｔｉｄｅ）（１つまたは複数）に加えて、本発明の組成物は、アジュバント性を有することを理由に、不活化腫瘍細胞（１つまたは複数）上に存在する癌抗原に応答する免疫系を刺激するよう作用し得る１つまたは複数の追加の物質をさらに含み得る。このようなアジュバントとしては、特に限定されないが、脂質、リポソーム、自然免疫を誘導する不活性化細菌（例えば、不活化または弱毒化リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ））、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して自然免疫活性化を仲介する組成物、（ＮＯＤ）−様受容体（ＮＬＲ）、レチノイン酸誘導遺伝子に基づく（ＲＩＧ）−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）および／またはＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）が挙げられる。ＰＡＭＰの例としては、リポタンパク質、リポポリペプチド、ペプチドグリカン、ザイモサン、リポ多糖類、ナイセリアポリン、フラジェリン、プロフィリン、ガラクトセラミド、ムラミルジペプチドが挙げられる。ペプチドグリカン、リポタンパク質およびリポテイコ酸はグラム陽性の細胞壁成分である。リポ多糖類はほとんどの細胞によって発現され、ＭＰＬがその一例である。フラジェリンは、病原性細菌および共生細菌によって分泌される細菌鞭毛の構造成分を指す。α−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性化因子である。ムラミルジペプチドは全細菌に共通する生物活性ペプチドグリカンモチーフである。ここに挙げたものは限定することを意図するものではない。好ましいアジュバント組成物についてはのちに記載する。
【００４４】
ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１経路アンタゴニスト
ＣＴＬＡ−４は適応免疫応答の重要な負の調節因子であると考えられている。活性化Ｔ細胞がＣＴＬＡ−４をアップレギュレートし、これがＣＤ２８よりも高い親和性で抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６と結合することによりＴ−細胞刺激、ＩＬ−２遺伝子発現およびＴ細胞増殖を阻害する。ＣＴＬＡ４遮断の抗腫瘍効果が結腸癌、転移性前立腺癌および転移性黒色腫のマウスモデルで観察されている。
【００４５】
イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（商標））およびトレメリムマブは、ヒトＣＴＬＡ４と結合し、そのＣＤ８０およびＣＤ８６との相互作用を阻害するヒト化モノクローナル抗体である。イピリムマブおよびトレメリムマブを用いた第１相および第２相試験では、癌患者における臨床活性が示されている。同様の戦略の標的となり得るその他の負の免疫調節因子としては、プログラム細胞死１、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター、トランスフォーミング増殖因子β、インターロイキン−１０および血管内皮増殖因子が挙げられる。
【００４６】
ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞上に発現する、適応免疫応答のもう一つの負の調節因子である。ＰＤ−１はＢ７−Ｈ１およびＢ７−ＤＣと結合し、ＰＤ−１の結合によりＴ細胞活性化が抑制される。ＰＤ−１経路遮断には抗腫瘍効果のあることが示されている。ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＫ３４７５、ＣＴ−０１１、ＡＭＰ−２２４およびＭＤＸ−１１０６が文献に報告されており、これらは本発明に使用し得るＰＤ−１経路遮断剤の例である。
【００４７】
ＴＬＲアゴニスト
本明細書で使用される「Ｔｏｌｌ様受容体」（または「ＴＬＲ」）という用語は、微生物生成物を感知し、かつ／または適応免疫応答を開始させる、タンパク質のＴｏｌｌ様受容体ファミリーのメンバーまたはそのフラグメントを指す。一実施形態では、ＴＬＲが樹状細胞（ＤＣ）を活性化する。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、最初は微生物病原体を認識する自然免疫系のセンサーとして認識されていたパターン認識受容体のファミリーである。ＴＬＲは、ロイシンリッチリピートの外部ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ＴＩＲ（Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ）ドメインを含む保存された膜貫通分子のファミリーを含む。ＴＬＲは、多くの場合「ＰＡＭＰ」（病原関連分子パターン）と呼ばれる、微生物の独特な構造を認識する。リガンドがＴＬＲと結合すると、炎症および免疫に関与する諸因子の産生を誘導する細胞内シグナル伝達経路のカスケードが起動する。
【００４８】
ヒトでは１０種類のＴＬＲが同定されている。細胞表面に発現するＴＬＲにはＴＬＲ−１、−２、−４、−５および−６があり、一方、ＴＬＲ−３、−７／８および−９はＥＲ区画に発現する。独特なＴＬＲ発現パターンに基づいてヒト樹状細胞サブセットを同定することができる。例として述べると、骨髄系または「従来の」ＤＣ（ｍＤＣ）サブセットが刺激を受けるとＴＬＲ１〜８を発現し、活性化マーカー（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩ、ＣＣＲ７）のカスケード、炎症誘発性サイトカインおよびケモカインが産生される。この刺激とそれによる発現の結果が抗原特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の初回抗原刺激となる。これらのＤＣは抗原を取り込む能力が増強され、その抗原をしかるべき形でＴ細胞に提示する。これに対して、形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）サブセットが活性化されるとＴＬＲ７およびＴＬＲ９のみを発現し、その結果、ＮＫ細胞およびＴ細胞が活性化される。死につつある腫瘍細胞がＤＣの機能に悪影響を及ぼすことがあるため、癌治療に対する免疫療法的アプローチでは、抗腫瘍免疫の初回刺激にＴＬＲアゴニストによるＤＣの活性化が有益であり得ることが提案されている。このほか、放射線照射および化学療法を用いる乳癌の治療が成功を収めるにはＴＬＲ４活性化が必要であることが提案されている。
【００４９】
当該技術分野で公知であり、本発明に使用されるＴＬＲアゴニストとしては、特に限定されないが、以下のものが挙げられる：
Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＴＬＲ−１／２アゴニスト；
ＣＦＡ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＭＡＬＰ２、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＦＳＬ−１、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ポリリボシン酸：ポリリボシチジル酸（ポリＩ：Ｃ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリアデノシン−ポリウリジル酸（ポリＡＵ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで安定化したポリイノシン−ポリシチジル酸（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、ＴＬＲ−３アゴニスト；
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、ＴＬＲ−４アゴニスト；
ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニスト；
細菌フラジェリン、ＴＬＲ−５アゴニスト；
シアリル−Ｔｎ（ＳＴｎ）、多数のヒト癌細胞上のＭＵＣ１ムチンに付随する炭水化物、ＴＬＲ−４アゴニスト；
イミキモド、ＴＬＲ−７アゴニスト；
レシキモド、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；
ロキソリビン、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；および
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）、ＴＬＲ−９アゴニスト。
【００５０】
ＴＬＲアゴニストは、そのアジュバント性から、他のワクチン、アジュバントおよび／または免疫調節物質と組み合わせて使用するのが好ましく、また様々な組合せで組み合わせることができる。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される、ＳＴＩＮＧと結合しＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を誘導する環状プリンジヌクレオチドならびに樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現し分泌する不活化腫瘍細胞を、治療目的で１つまたは複数のＴＬＲアゴニストとともに投与することができる。
【００５１】
脂質およびリポソーム
リポソームは１層（「一枚膜」）または複数の層（「多重膜」）のリン脂質から形成される小胞である。リン脂質構成成分が両親媒性であることから、リポソームは通常、親水性の外面を示し親水性のコアを封入している親水性の層を含む。リポソームの親水性／疎水性成分の組込みにおける融通性、無毒性、生分解性、生体適合性、アジュバント性、細胞性免疫の誘導、徐放の特性およびマクロファージによる迅速な取込みにより、リポソームは抗原送達の魅力的な候補となっている。
【００５２】
国際公開第２０１０／１０４８３３号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）には、以下のものを含むリポソーム調製物が記載されている：
ａ）水性媒体；
ｂ）（ｉ）ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）と、
（ｉｉ）ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（「ＤＭＴＡＰ」）またはＤＭＰＧおよびＤＭＴＡＰの両方と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのステロール誘導体とを含む、
リポソーム；ならびに
ｃ）前記少なくとも１つのステロール誘導体の１％〜１００％と共有結合した１つまたは複数の免疫原性ポリペプチド（１つまたは複数）または炭水化物（１つまたは複数）。
【００５３】
本明細書ではＶｅｓｉＶａｘ（登録商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）と呼ばれ、上記「免疫原性ポリペプチド（１つまたは複数）または炭水化物（１つまたは複数）」を含むまたは含まないこのようなリポソーム製剤は、１つまたは複数の追加の成分、例えばペプチドグリカン、リポペプチド、リポ多糖類、モノホスホリル脂質Ａ、リポテイコ酸、レシキモド、イミキモド、フラジェリン、非メチル化ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド、ベータ−ガラクトシルセラミド、ムラミルジペプチド、全トランス型レチノイン酸、二本鎖ウイルスＲＮＡ、熱ショックタンパク質、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド、カチオン性界面活性剤、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパンおよびｎｏｄ様受容体アゴニストなどを含有し得る。これらのリポソーム製剤は、本発明による１つまたは複数の環状プリンジヌクレオチドの送達に用いることができる点で有利である。
【００５４】
さらに、上述リポソーム製剤では免疫原性ポリペプチドまたは炭水化物をリポソームに結合させるアンカーとして「ステロイド誘導体」が用いられるのに対して、ステロイドは単にコレステロールなどの非共役ステロイドとして与えられる場合がある。
【００５５】
脂質混合物からリポソームを調製するのに適する方法は当該技術分野で周知である。例えば、ＢａｓｕおよびＢａｓｕ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００２；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，第３版，Ｉｎｆｏｒｍａ  ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ，２００６を参照されたい。好ましい方法としては、そこに記載されている押出法、ホモジナイゼーション法および超音波処理法が挙げられる。本発明に使用するリポソームを調製する例示的な方法は、脂質混合物を乾燥させた後、水性媒体中での水和および超音波処理を実施してリポソームを形成することを含む方法であり、国際公開第２０１０／１０４８３３号に記載されている。
【００５６】
ある特定の実施形態では、リポソームを特定の平均サイズの範囲内になるよう作製する。リポソームのサイズは、例えば、予め選択された細孔径を有する膜からリポソームを含む水性媒体を押し出し、膜を通過する材料を収集することによって選択することができる。好ましい実施形態では、実質的に直径が５０〜５００ｎｍ、より好ましくは実質的に直径が５０〜２００ｎｍ、最も好ましくは実質的に直径が５０〜１５０ｎｍになるようリポソームを選択する。本明細書においてこの文脈で使用される「実質的に」という用語は、リポソームの少なくとも７５％、より好ましくは８０％、最も好ましくは少なくとも９０％が指定された範囲内にあることを意味する。
【００５７】
本発明に使用し得るその他の脂質および脂質様アジュバントとしては、水中油型（ｏ／ｗ）乳剤（例えば、Ｍｕｄｅｒｈｗａら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．８８：１３３２−９（１９９９）を参照されたい）、ＶｅｓｉＶａｘ（登録商標）ＴＬＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、ジギトニン（例えば、米国特許第５，６９８，４３２号を参照されたい）およびグルコピラノシル脂質（例えば、米国特許出願公開第２０１００３１０６０２号を参照されたい）が挙げられる。
【００５８】
化学療法剤
さらなる実施形態では、この方法は、患者の腫瘍に対する追加の治療として有効量の１つまたは複数の化学療法剤を対象に投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の化学療法剤は、酢酸アビラテロン、アルトレタミン、アンヒドロビンブラスチン、アウリスタチン、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢＭＳ１８４４７６、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、ブレオマイシン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリ−１−Ｌプロリン−ｔ−ブチルアミド、カケクチン、セマドチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビン−カロイコブラスチン、ドセタキソル、ドキセタキセル、シクロホスファミド、カルボプラチン、カルムスチン、シスプラチン、クリプトフィシン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン  ドラスタチン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エトポシド、５‐フルオロウラシル、フィナステリド、フルタミド、ヒドロキシウレアおよびヒドロキシウレアタキサン、イホスファミド、リアロゾール、ロニダミン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ＭＤＶ３１００、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルファラン、イセチオン酸ミボブリン、リゾキシン、セルテネフ、ストレプトゾシン、マイトマイシン、メトトレキサート、タキサン、ニルタミド、オナプリストン、パクリタキセル、プレドニムスチン、プロカルバジン、ＲＰＲ１０９８８１、リン酸ストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、タモキシフェン、タソネルミン、タキソール、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンデシンならびにビンフルニンから選択される。
【００５９】
医薬組成物
本明細書で使用される「医薬品」という用語は、疾患の治癒、治療または予防に使用することを目的とし、処方医薬品または一般用医薬品として米国食品医薬品局（または米国以外のこれに相当する機関）による承認手続きを必要とする化学物質を指す。このような組成物の製剤化および投与の技術に関する詳細はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２１版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）ならびにＮｉｅｌｌｏｕｄおよびＭａｒｔｉ−Ｍｅｓｔｒｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ：第２版（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）にみることができる。
【００６０】
本開示の目的には、医薬組成物を薬学的に許容される担体、補助剤および媒体を含有する製剤の形で経口的手段、非経口的手段、吸入スプレーによる手段、局所的手段または直腸内手段を含めた様々な手段により投与することができる。ここで使用される非経口という用語には、特に限定されないが、様々な注入技術による皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、真皮内、髄腔内および硬膜外注射が含まれる。本明細書で使用される動脈内注射および静脈内注射にはカテーテルを介した投与が含まれる。このほか、冠動脈ステントおよび冠動脈リザーバーを介した投与が考慮される。本明細書で使用される経口という用語には、特に限定されないが、経口摂取または舌下もしくはバッカル経路による送達が含まれる。経口投与には液体飲料、エネルギーバーおよび丸剤が含まれる。
【００６１】
医薬組成物は目的とする投与方法に適した任意の形態であり得る。経口使用に用いる場合、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性もしくは油性懸濁剤、分散性散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬カプセルもしくは軟カプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤を調製し得る。経口使用を目的とする組成物は、医薬組成物を製造するための当該技術分野で公知の任意の方法に従って調製することができ、このような組成物は、味の良い製剤にするために甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤を含めた１つまたは複数の薬剤を含有し得る。錠剤の製造に適した無毒性の薬学的に許容される添加剤と混合した薬剤化合物を含有する錠剤が許容される。このような添加剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；トウモロコシデンプンまたはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴムなどの結合剤；およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどの滑沢剤であり得る。錠剤はコーティングしなくてもよく、また消化管での崩壊および吸収を遅延させ、かつ／または長時間にわたって作用を持続させるよう腸溶性コーティング、結腸溶性コーティングまたはマイクロカプセル化を含めた既知の技術によってコーティングしてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質を単独でまたはロウとともに使用し得る。
【００６２】
経口使用のための製剤はほかにも、薬剤化合物を不活性固体希釈剤、例えばリン酸カルシウムもしくはカオリンと混合した硬ゼラチンカプセル剤あるいは有効成分を水またはラッカセイ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油などの油性媒体と混合した軟ゼラチンカプセル剤として提供してもよい。
【００６３】
医薬組成物を水性懸濁液の製造に適した添加剤と混合した水性懸濁液として製剤化してもよい。このような添加剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントゴムおよびアラビアゴムなどの懸濁化剤ならびに天然に存在するリン脂質（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）などの分散剤および湿潤剤が挙げられる。水性懸濁液はほかにも、ｐ−ヒドロキシ−安息香酸エチルまたはｐ−ヒドロキシ−安息香酸ｎ−プロピルなどの１つまたは複数の保存剤、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の着香剤およびスクロースまたはサッカリンなどの１つまたは複数の甘味剤を含有し得る。
【００６４】
油性懸濁剤は、有効成分をラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油などの植物油または流動パラフィンなどの鉱油に懸濁させることによって製剤化することができる。経口懸濁剤はミツロウ、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含有し得る。上に記載したような甘味剤および着香剤を加えて、味の良い経口製剤にしてもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を添加することによって保存することができる。
【００６５】
水の添加による水性懸濁液の調製に適した本開示の分散性散剤および顆粒剤は、有効成分を分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１つまたは複数の保存剤と混合したものである。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、上に開示したものによって例示されている。このほか追加の添加剤、例えば甘味料、香味料および着色剤が存在していてもよい。
【００６６】
本開示の医薬組成物はこのほか、水中油型乳剤であってもよい。油相はオリーブ油もしくはラッカセイ油などの植物油、流動パラフィンなどの鉱油またはその混合物であり得る。適切な乳化剤としては、アラビアゴムおよびトラガントゴムなどの天然に存在するゴム、ダイズレシチンなどの天然に存在するリン脂質、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されるソルビタンモノオレアートなどのエステルまたは部分エステルならびにこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートなどが挙げられる。乳剤はこのほか、甘味料および着香剤を含有し得る。
【００６７】
グリセロール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味剤とともにシロップ剤およびエリキシル剤を製剤化してもよい。このような製剤はほかにも、粘滑剤、保存剤、香味料または着色剤を含有し得る。
【００６８】
本開示の医薬組成物は、無菌注射用水性懸濁液または油性懸濁液などの無菌注射用製剤の形態であってもよい。この懸濁液は、既知の技術に従って、上に挙げた適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化することができる。無菌注射用製剤はこのほか、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒の溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタン−ジオールの溶液であってもよく、また凍結乾燥粉末として調製してもよい。使用し得る許容される媒体および溶媒には水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌不揮発性油を従来通りに溶媒または懸濁媒として使用し得る。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含めた任意の無刺激性の不揮発性油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も同様に注射用液の調製に使用することができる。
【００６９】
担体物質と組み合わせて単一剤形を作製し得る有効成分の量は、治療する宿主および具体的な投与形式によって異なる。例えば、ヒトへの経口投与を目的とする持続放出製剤は、全組成物の約５〜約９５％で変化し得るしかるべき好都合な量の担体物質と組み合わせた約２０〜５００ｍｇの活性物質を含有し得る。投与量を容易に測定できる医薬組成物を調製するのが好ましい。通常、全身的に投与する有効量は約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇであり、例えば、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）の年齢および体重、治療が必要な正確な病態およびその重症度、投与経路を含めた多数の因子によって決まり、最終的には治療に当たる医師または獣医の判断により決定される。しかし、任意の特定の患者に対する具体的な投与レベルは、当業者に十分理解される通り、使用する具体的な化合物の活性、治療する個体の年齢、体重、全般的健康状態、性別および食餌；投与の時間および経路；排泄速度；これまでに投与された他の薬物；ならびに治療を受ける具体的な病態の重症度を含めた様々な因子によって決まることが理解されよう。
【００７０】
上述の通り、経口投与に適した本開示の製剤は、それぞれが所定量の有効成分を粉末もしくは顆粒剤として；水もしくは非水性液体の溶液もしくは懸濁液として、または水中油型乳液もしくは油中水型乳液として含有するカプセル剤、カシェ剤または錠剤などの個別の単位として提供することができる。医薬組成物はほかにも、巨丸剤、舐剤またはパスタ剤として投与することができる。
【００７１】
錠剤は、任意選択で１つまたは複数の補助成分とともに、圧縮または成形によって作製することができる。圧縮錠剤は、適切な機械で、有効成分を任意選択で結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルエチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）界面活性剤または分散剤と混合した粉末または顆粒剤などの自由流動性の形成に圧縮することによって、調製することができる。成形錠剤は、適切な機械で、不活性液体希釈剤で湿潤させた粉末化化合物の混合物を用いて、作製することができる。錠剤に任意選択でコーティングまたは刻み目を施してもよく、また錠剤中の有効成分の緩徐な放出または制御された放出がもたらさせるよう、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを所望の放出プロファイルが得られる様々な割合で用いて錠剤を製剤化してもよい。任意選択で、胃以外の消化管の部分で放出されるよう錠剤に腸溶性または直腸溶性コーティングを施してもよい。これは特に、式１の化合物が酸加水分解を受けやすい場合、この化合物に有利である。
【００７２】
口腔内への局所投与に適した製剤としては、風味を付けた基剤、通常はスクロースとアラビアゴムまたはトラガント中に有効成分を含むトローチ剤；ゼラチンとグリセリンまたはスクロースとアラビアゴムなどの不活性な基剤中に有効成分を含む香錠剤；および適切な液体担体中に有効成分を含む口腔洗浄剤が挙げられる。
【００７３】
経直腸投与用の製剤は、例えばカカオ脂またはサリチル酸塩を含む適切な基剤を用いた坐剤として提供することができる。
【００７４】
経膣投与に適した製剤は、有効成分に加えて当該技術分野で適切であることが知られている担体などを含有する膣坐剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、パスタ剤、泡状剤またはスプレー製剤として提供することができる。
【００７５】
非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤および製剤を目的とする受液者の血液と等張にする溶質を含有し得る水性または非水性等張無菌注射溶液；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性また非水性無菌懸濁液が挙げられる。製剤は単位用量または複数用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルに入れて提供することができ、使用直前に無菌液体担体、例えば注射用水の添加だけが必要な凍結乾燥した状態で保管することができる。注射溶液および懸濁液は既に記載されているような無菌の粉末剤、顆粒剤および錠剤から調製することができる。
【００７６】
本明細書で使用される薬学的に許容される塩としては、特に限定されないが、酢酸塩、ピリジン塩、アンモニウム塩、ピペラジン塩、ジエチルアミン塩、ニコチンアミド塩、ギ酸塩、尿素塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、リチウム塩、ケイ皮酸塩、メチルアミノ塩、メタンスルホン酸塩、ピクリン酸塩、酒石酸塩、トリメチルアミノ塩、ジメチルアミノ塩およびトリス（ヒドキシメチル（ｈｙｄｏｘｙｍｅｔｈｙｌ））アミノメタンが挙げられる。そのほかの薬学的に許容される塩は当業者に公知である。
【００７７】
特定の患者に対する有効量は治療する病態、患者の全般的な健康状態、投与経路および投与量ならびに副作用の程度などの因子によって決まる。治療および診断方法の指針が利用可能である（例えば、Ｍａｙｎａｒｄら（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照されたい）。
【００７８】
有効量は１回の投与で投与することができるが、１回の投与に限定されない。したがって、投与は２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、２０回またはそれ以上の医薬組成物の投与であり得る。本発明の方法で医薬組成物を２回以上投与する場合、投与に１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分またはそれ以上の時間間隔、約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間などの間隔を空け得る。時間数という文脈では、「約」という用語はプラスマイナス３０分以内の任意の時間間隔を意味する。このほか投与には１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日およびその組合せの時間間隔を空け得る。本発明は等しい時間を空ける投与間隔に限定されるのではなく、等しくない間隔での投与を包含する。
【００７９】
例えば、１回／週、２回／週、３回／週、４回／週、５回／週、６回／週、７回／週、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎の投与スケジュールを本発明に用いることができる。投与スケジュールは、例えば、合計１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月および１２か月の期間にわたる投与を包含する。
【００８０】
上記投与スケジュールの周期が提供される。周期を例えば、約７日毎；１４日毎；２１日毎；２８日毎；３５日毎；４２日毎；４９日毎；５６日毎；６３日毎；７０日毎；などで反復し得る。周期の間に無投与期間を設けてもよく、この場合、その期間は例えば、約７日；１４日；２１日；２８日；３５日；４２日；４９日；５６日；６３日；７０日；などであり得る。この関連では、「約」という用語は、プラスマイナス１日、プラスマイナス２日、プラスマイナス３日、プラスマイナス４日、プラスマイナス５日、プラスマイナス６日またはプラスマイナス７日を意味する。
【００８１】
追加の治療剤との共投与の方法は当該技術分野で周知である（Ｈａｒｄｍａｎら（編）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第１０版，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＰｏｏｌｅおよびＰｅｔｅｒｓｏｎ（編）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；ＣｈａｂｎｅｒおよびＬｏｎｇｏ（編）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ）。
【００８２】
上述の通り、本発明の組成物は非経口または経腸送達用の医薬組成物として製剤化するのが好ましい。動物に投与するための典型的な医薬組成物は、薬学的に許容される水溶液などの媒体、塩、保存剤、緩衝剤などを含めた無毒性添加剤を含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１５版，Ｅａｓｔｏｎ編，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，ｐｐ１４０５−１４１２および１４６１−１４８７（１９７５）；Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ＸＩＶ，第１４版，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９７５）を参照されたい。非水性溶媒の例にはプロピレングリコール、ポリエチレングリコール，植物油およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルがある。水性担体としては、水、アルコール／水溶液、生理食塩水、非経口媒体、例えば塩化ナトリウム、リンゲルブドウ糖などが挙げられる。静脈内媒体としては、水分および栄養補充液が挙げられる。保存剤としては抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスが挙げられる。医薬組成物のｐＨおよび様々な成分の正確な濃度は当該技術分野のルーチンの技術に従って調整する。
【００８３】
特定のワクチンの反復投与（同種追加免疫）には体液性応答を強化する効果があることが示されている。このような方法は、ベクターに対する事前の免疫が堅固な抗原提示およびしかるべき炎症性シグナルの発生を損なうことがあるため、細胞性免疫を強化するのに効果的ではない場合がある。この問題を回避する１つの方法が、異なる抗原送達システム（異種追加免疫）を用いるワクチンの連続投与である。異種追加免疫レジメンでは、少なくとも１回の初回免疫または追加免疫の送達は、本明細書に記載される不活化腫瘍細胞／環状プリンジヌクレオチド組成物の送達を含む。このレジメンの異種部門は、以下に挙げる戦略を１つまたは複数用いる抗原の送達を含み得る：
目的とする抗原を含み、何らかの変性条件で処理して病原性の侵入力を備えるのに無効または非効率的にされた粒子の不活化細菌またはウイルス；
通常は病原体もしくは病原体を含む組織試料またはその組換え型の細胞培養物から精製された天然に産生される抗原である精製抗原；
対象の宿主細胞で抗原を発現および／または分泌するよう組換え操作された生ウイルスまたは生細菌送達ベクター。この戦略は、ウイルスまたは細菌ベクターを非病原性および無毒性に弱毒化すること（例えば、遺伝子工学により）依存するものである。
抗原を負荷した細胞または抗原をコードする核酸を含む組成物をトランスフェクトした細胞を含む、樹状細胞（ＤＣ）ベクター（例えば、去勢抵抗性転移性前立腺癌の治療のためのＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）ベクター；
リポソーム抗原送達媒体；ならびに
遺伝子銃、エレクトロポレーション、細菌ゴースト、マイクロスフェア、微粒子、リポソーム、ポリカチオンナノ粒子などにより投与され得る裸のＤＮＡベクターおよび裸のＲＮＡベクター。
【００８４】
初回免疫ワクチンおよび追加免疫ワクチンは、以下に挙げる経路のいずれか１つまたは組合せによって投与することができる。一態様では、初回免疫ワクチンと追加免疫ワクチンを同じ経路で投与する。別の態様では、初回免疫ワクチンと追加免疫ワクチンを異なる経路で投与する。「異なる経路」という用語は、特に限定されないが、異なる身体部位、例えば、経口、非経口、経腸、非経口、経直腸、節内（リンパ節）、静脈内、動脈、皮下、筋肉内、腫瘍内、腫瘍周囲、腫瘍内、注入、粘膜、経鼻、脳脊髄腔または脳脊髄液内などの部位ならびに異なる形式、例えば、経口、静脈内および筋肉内によるものを包含する。
【００８５】
初回免疫または追加免疫ワクチンの有効量は１回の投与で投与することができるが、１回の投与に限定されない。したがって、投与は２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、２０回またはそれ以上のワクチンであり得る。本発明の方法でワクチンを２回以上投与する場合、投与に１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分またはそれ以上の時間間隔、約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間などの間隔を空け得る。時間数という文脈では、「約」という用語はプラスマイナス３０分以内の任意の時間間隔を意味する。このほか投与には１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日およびその組合せの時間間隔を空け得る。本発明は等しい時間を空ける投与間隔に限定されるのではなく、等しくない間隔での投与、単に非限定的な例を挙げれば、例えば、第１日、第４日、第７日および第２５日の投与からなる初回免疫スケジュールでの投与などを包含する。
【００８６】
参考文献
１．Ｋａｎｔｏｆｆ  ＰＷ，Ｈｉｇａｎｏ  ＣＳ，Ｓｈｏｒｅ  ＮＤ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１０；３６３：４１１−２２．
２．Ｄｒａｎｏｆｆ  Ｇ，Ｊａｆｆｅｅ  Ｅ，Ｌａｚｅｎｂｙ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｔｏ  ｓｅｃｒｅｔｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｐｏｔｅｎｔ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １９９３；９０：３５３９−４３．
３．Ｍｅｌｌｍａｎ  Ｉ，Ｃｏｕｋｏｓ  Ｇ，Ｄｒａｎｏｆｆ  Ｇ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｅｓ  ｏｆ  ａｇｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；４８０：４８０−９．
４．Ｌｕｔｚ  Ｅ，Ｙｅｏ  ＣＪ，Ｌｉｌｌｅｍｏｅ  ＫＤ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｌｅｔｈａｌｌｙ  ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｆｏｒ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｓａｆｅｔｙ，ｅｆｆｉｃａｃｙ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ２０１１；２５３：３２８−３５．
５．Ｌｅ  ＤＴ，Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ，Ｊａｆｆｅｅ  ＥＭ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  ２０１０；１６：３０４−１０．
６．Ｗｉｔｔｅ  ＣＥ，Ａｒｃｈｅｒ  ＫＡ，Ｒａｅ  ＣＳ，Ｓａｕｅｒ  ＪＤ，Ｗｏｏｄｗａｒｄ  ＪＪ，Ｐｏｒｔｎｏｙ  ＤＡ．Ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｂｙ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１２；１１３：１３５−５６．
７．Ｗｏｏｄｗａｒｄ  ＪＪ，Ｉａｖａｒｏｎｅ  ＡＴ，Ｐｏｒｔｎｏｙ  ＤＡ．ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｂｙ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ａ  ｈｏｓｔ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１０；３２８：１７０３−５．
８．Ｂｕｒｄｅｔｔｅ  ＤＬ，Ｍｏｎｒｏｅ  ＫＭ，Ｓｏｔｅｌｏ−Ｔｒｏｈａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．ＳＴＩＮＧ  ｉｓ  ａ  ｄｉｒｅｃｔ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｅｎｓｏｒ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉ−ＧＭＰ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；４７８：５１５−８．
９．Ｊｅｍａｌ  Ａ，Ｓｉｅｇｅｌ  Ｒ，Ｘｕ  Ｊ，Ｗａｒｄ  Ｅ．Ｃａｎｃｅｒ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１０．ＣＡ：ａ  ｃａｎｃｅｒ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ  ２０１０；６０：２７７−３００．
１０．Ｄｉ  Ｌｏｒｅｎｚｏ  Ｇ，Ｂｕｏｎｅｒｂａ  Ｃ，Ｋａｎｔｏｆｆ  ＰＷ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１１；８：５５１−６１．
１１．Ｔｏｐａｌｉａｎ  ＳＬ，Ｗｅｉｎｅｒ  ＧＪ，Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｏｍｅｓ  ｏｆ  Ａｇｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１１．
１２．Ｂｌａｎｋｅｎｓｔｅｉｎ  Ｔ，Ｃｏｕｌｉｅ  ＰＧ，Ｇｉｌｂｏａ  Ｅ，Ｊａｆｆｅｅ  ＥＭ．Ｔｈｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１２．
１３．Ｐａｒｄｏｌｌ  Ｄ．Ｔｈｅ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１２；１２：２５３−６４．
１４．Ｇｕｌｌｅｙ  ＪＬ，Ａｒｌｅｎ  ＰＭ，Ｍａｄａｎ  ＲＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ  ａ  ｐｏｘｖｉｒａｌ−ｂａｓｅｄ  ＰＳＡ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃａｓｔｒａｔｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：ＣＩＩ  ２０１０；５９：６６３−７４．
１５．Ｋａｎｔｏｆｆ  ＰＷ，Ｓｃｈｕｅｔｚ  ＴＪ，Ｂｌｕｍｅｎｓｔｅｉｎ  ＢＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｘｖｉｒａｌ−ｂａｓｅｄ  ＰＳＡ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１０；２８：１０９９−１０５．
１６．Ｂａｒｂｅｒ  ＧＮ．ＳＴＩＮＧ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１１；１２：９２９−３０．
１７．Ｉｓｈｉｋａｗａ  Ｈ，Ｂａｒｂｅｒ  ＧＮ．Ｔｈｅ  ＳＴＩＮＧ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＤＮＡ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ：ＣＭＬＳ  ２０１１；６８：１１５７−６５．
１８．Ｃｒｉｍｍｉｎｓ  ＧＴ，Ｈｅｒｓｋｏｖｉｔｓ  ＡＡ，Ｒｅｈｄｅｒ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ａ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ２００８．
１９．Ｌｅｂｅｒ  ＪＨ，Ｃｒｉｍｍｉｎｓ  ＧＴ，Ｒａｇｈａｖａｎ  Ｓ，Ｍｅｙｅｒ−Ｍｏｒｓｅ  ＮＰ，Ｃｏｘ  ＪＳ，Ｐｏｒｔｎｏｙ  ＤＡ．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＴＬＲ−ａｎｄ  ＮＬＲ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ａｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎ．ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  ２００８；４：ｅ６．
２０．Ｏ’Ｒｉｏｒｄａｎ  Ｍ，Ｙｉ  ＣＨ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ  Ｒ，Ｌｅｅ  ＫＤ，Ｐｏｒｔｎｏｙ  ＤＡ．Ｉｎｎａｔｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｂｙ  ａ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ２００２；９９：１３８６１−６．
２１．Ｓｕｎ  ＪＣ，Ｂｅｖａｎ  ＭＪ．Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｏｒｙ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｈｅｌｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００３；３００：３３９−４２．
２２．Ｂａｈｊａｔ  ＫＳ，Ｌｉｕ  Ｗ，Ｌｅｍｍｅｎｓ  ＥＥ，ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ＣＤ８＋Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｏｔｅｎｃｙ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎ；２００５．
２３．Ｂａｈｊａｔ  ＫＳ，Ｌｉｕ  Ｗ，Ｌｅｍｍｅｎｓ  ＥＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  Ｅｎｔｒｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ＣＤ８＋−Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｐｏｔｅｎｃｙ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００６；７４：６３８７−９７．
２４．Ｒｅｅｄ  ＳＧ，Ｂｅｒｔｈｏｌｅｔ  Ｓ，Ｃｏｌｅｒ  ＲＮ，Ｆｒｉｅｄｅ  Ｍ．Ｎｅｗ  ｈｏｒｉｚｏｎｓ  ｉｎ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００９；３０：２３−３２．
２５．Ｄｕｂｅｎｓｋｙ  ＴＷ，Ｊｒ．，Ｒｅｅｄ  ＳＧ．Ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１０；２２：１５５−６１．
２６．Ａｈｍｅｄ  ＳＳ，Ｐｌｏｔｋｉｎ  ＳＡ，Ｂｌａｃｋ  Ｓ，Ｃｏｆｆｍａｎ  ＲＬ．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１１；３：９３ｒｖ２．
２７．Ｏｌｓｏｎ  Ｋ，Ｍａｃｉａｓ  Ｐ，Ｈｕｔｔｏｎ  Ｓ，Ｅｒｎｓｔ  ＷＡ，Ｆｕｊｉｉ  Ｇ，Ａｄｌｅｒ−Ｍｏｏｒｅ  ＪＰ．Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｇＤ  ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ（ｇＤ１−３０６）ｖａｃｃｉｎｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＨＳＶ２  ｇｅｎｉｔａｌ  ｏｒ  ｒｅｃｔａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｅｍａｌｅ  ａｎｄ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ．Ｖａｃｃｉｎｅ  ２００９；２８：５４８−６０．
２８．Ａｄｌｅｒ−Ｍｏｏｒｅ  Ｊ，Ｍｕｎｏｚ  Ｍ，Ｋｉｍ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｕｒｉｎｅ  Ｔｈ２  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  Ｍ２ｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖａｃｃｉｎｅ．Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０１１；２９：４４６０−８．
２９．Ｄｒａｋｅ  ＣＧ，Ｄｏｏｄｙ  ＡＤ，Ｍｉｈａｌｙｏ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｄｒｏｇｅｎ  ａｂｌａｔｉｏｎ  ｍｉｔｉｇａｔｅｓ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  ａ  ｐｒｏｓｔａｔｅ／ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２００５；７：２３９−４９．
３０．Ａｎｔｏｎａｒａｋｉｓ  ＥＳ，Ｄｒａｋｅ  ＣＧ．Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ：ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１２．
３１．Ｂｒａｈｍｅｒ  ＪＲ，Ｄｒａｋｅ  ＣＧ，Ｗｏｌｌｎｅｒ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ａｇｅｎｔ  ａｎｔｉ−ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１（ＭＤＸ−１１０６）ｉｎ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ：ｓａｆｅｔｙ，ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１０；２８：３１６７−７５．
３２．Ｈｏｄｉ  ＦＳ，Ｏ’Ｄａｙ  ＳＪ，ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  ＤＦ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｗｉｔｈ  ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１０；３６３：７１１−２３．
３３．Ｐａｒｄｏｌｌ  Ｄ，Ｄｒａｋｅ  Ｃ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｅａｒｎｓ  ｉｔｓ  ｓｐｏｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｎｋｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１２；２０９：２０１−９．
３４．Ｔａｎｎｏｃｋ  ＩＦ，ｄｅ  Ｗｉｔ  Ｒ，Ｂｅｒｒｙ  ＷＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｐｌｕｓ  ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ  ｏｒ  ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｐｌｕｓ  ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００４；３５１：１５０２−１２．
３５．Ｋａｓｔｅｎｍｕｌｌｅｒ  Ｋ，Ｗｉｌｌｅ−Ｒｅｅｃｅ  Ｕ，Ｌｉｎｄｓａｙ  ＲＷ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ＴＬＲ７／８  ａｇｏｎｉｓｔ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｔｙｐｅ  Ｉ  ＩＦＮ，ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ＤＣ  ｓｕｂｓｅｔｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ２０１１；１２１：１７８２−９６．
３６．Ｃｏｆｆｍａｎ  ＲＬ，Ｓｈｅｒ  Ａ，Ｓｅｄｅｒ  ＲＡ．Ｖａｃｃｉｎｅ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ：ｐｕｔｔｉｎｇ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｗｏｒｋ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１０；３３：４９２−５０３．
３７．Ｋａｓｔｕｒｉ  ＳＰ，Ｓｋｏｕｎｔｚｏｕ  Ｉ，Ａｌｂｒｅｃｈｔ  ＲＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍａｇｎｉｔｕｄｅ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；４７０：５４３−７．
３８．Ｅｉｎｓｔｅｉｎ  ＭＨ，Ｂａｒｏｎ  Ｍ，Ｌｅｖｉｎ  ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｅｒｖａｒｉｘ  ａｎｄ  Ｇａｒｄａｓｉｌ  ｈｕｍａｎ  ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｗｏｍｅｎ  ａｇｅｄ  １８−４５  ｙｅａｒｓ．Ｈｕｍａｎ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２００９；５：７０５−１９．
３９．ｖａｎ  Ｅｌｓａｓ  Ａ，Ｓｕｔｍｕｌｌｅｒ  ＲＰＭ，Ｈｕｒｗｉｔｚ  ＡＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｍｅｃｈｎａｉｓｍｓ  ｏｆ  ａ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ−４  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｂ１６  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｖａｃｃｉｎｅ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００１；１９４：４８１−９．
４０．Ｃｕｒｒａｎ  ＭＡ，Ａｌｌｉｓｏｎ  ＪＰ．Ｔｕｍｏｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｆｌｔ３  ｌｉｇａｎｄ  ｓｙｎｅｒｇｉｚｅ  ｗｉｔｈ  ｃｔｌａ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｔｏ  ｒｅｊｅｃｔ  ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔｅｄ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００９；６９：７７４７−５５．
４１．Ｗａｉｔｚ  Ｒ，Ｓｏｌｏｍｏｎ  ＳＢ，Ｐｅｔｒｅ  ＥＮ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｂｙ  ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ  ｃｒｙｏａｂｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉ−ＣＴＬＡ−４  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１２；７２：４３０−９．
４２．Ｆａｓｓｏ  Ｍ，Ｗａｉｔｚ  Ｒ，Ｈｏｕ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．ＳＰＡＳ−１（ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）／ＳＨ３ＧＬＢ２：Ａ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ２００８；１０５：３５０９−１４．
４３．Ｈｕｒｗｉｔｚ  ＡＡ，Ｆｏｓｔｅｒ  ＢＡ，Ａｌｌｉｓｏｎ  ＪＰ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＮＭ，Ｋｗｏｎ  ＥＤ．Ｔｈｅ  ＴＲＡＭＰ  ｍｏｕｓｅ  ａｓ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｊｏｈｎ  Ｅ  Ｃｏｌｉｇａｎ［ｅｔ  ａｌ］２００１；Ｃｈａｐｔｅｒ  ２０：Ｕｎｉｔ  ２０  ５．
４４．Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ＪＭ，Ｂｕｉ  ＭＨ，Ｈａｎ  ＫＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｏｖｅｌ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｃａｒｂｏｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒａｓｅ  ＩＸ  ｆｕｓｉｏｎ  ｇｅｎｅ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ：ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３；９：１９０６−１６．
４５．Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ＭＶ，Ｍａｒｉｓ  ＣＨ，Ｈｉｐｋｉｓｓ  ＥＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＰＤ−１  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ，Ｂ７−Ｈ１，ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｆａｔｅ  ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ  ２００７；１１０：１８６−９２．
４６．Ｌｅ  ＤＴ，Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔ  ＤＧ，Ｎｉｒ−Ｐａｚ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｌｉｖｅ−ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｖａｃｃｉｎｅ（ＡＮＺ−１００）ａｎｄ  ａ  ｌｉｖｅ−ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ（ＣＲＳ−２０７）ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ：ｐｈａｓｅ  ｉ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ：ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１２；１８：８５８−６８．
４７．Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔ  ＤＧ，Ｇｉｅｄｌｉｎ  ＭＡ，Ｌｅｏｎｇ  ＭＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ−ｂａｓｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｔｈａｔ  ｓｅｇｒｅｇａｔｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｆｒｏｍ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ２００４；１０１：１３８３２−７．
４８．Ｂａｈｊａｔ  ＫＳ，Ｐｒｅｌｌ  ＲＡ，Ａｌｌｅｎ  ＨＥ，ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｈｅｐａｔｉｃ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｌｉｖｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００７；１７９：７３７６−８４．
【００８７】
実施例
以下の実施例は本発明を説明する役割を果たすものである。これらの実施例は、本発明の範囲を限定することを一切意図するものではない。
【００８８】
実施例１
広範なレパートリーのＴＡＡに対する免疫を刺激する１つの方法が「ＧＶＡＸ」であり、これはＤＣの動員、分化および成熟を刺激する主要なサイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦを分泌するよう遺伝子操作された同種ヒト腫瘍細胞系に基づくワクチンである。ＧＶＡＸワクチンは、いくつかの癌適応における複数の臨床試験の基礎を形成しているものであり、安全性および優れた耐容性が示され、またいくつかの臨床的有用性が得られることが示されている。ｍＣＲＰＣを有する男性において前立腺ＧＶＡＸ免疫療法（Ｇ）とセタキセル／プレドニゾン（Ｄ＋Ｐ）とを比較した第３相試験が、初期の事前に計画されていない無益性解析から、この試験が所定の全生存率改善の主要評価項目を満たす確率が３０％未満であることが明らかになったため、試験依頼者によって早期に中止された。しかし、試験対象の６００例を超える患者に対して継続された追跡および解析では、約２１か月目にＧ治療群のカプラン・マイヤー生存曲線がＤ＋Ｐ治療群のものに交差し上回ることが明らかになった。さらに、治療前のハラビィノモグラムによる予測生存期間が１８か月を上回る患者にＧＶＡＸによる治療を実施した場合、化学療法に比して２．５か月の生存有益性がみられ、長期生存例の「テール」が３０％であった。これらの結果から、ＧＶＡＸ前立腺免疫療法により化学療法を上回る生存有益性が得らることが示され、これはプラセボに比して約２か月の生存有益性に相当することを示すものである。
【００８９】
ＭｙＤ８８依存性経路およびＴＲＩＦ依存性経路を介してシグナルを伝達するＴＬＲ標的化アジュバントを個別に用いると通常、ＣＤ８  Ｔ細胞の免疫性の誘導が不十分になるため、本発明者らは、細胞質ＳＴＩＮＧ受容体を介してシグナルを伝達するＣＤＮが、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ拘束免疫の両方の初回免疫を促進するかどうかを評価した。ＣＤＮはワクチン組換えタンパク質Ａｇ、ＨＩＶ  ＧａｇまたはＯＶＡに特異的なＴｈ１  ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の両方の初回免疫を誘導した。図２に示される投与量レベルで２％水中油型アジュバント（Ａｄｄａｖａｘ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）およびＣＤＮとともに製剤化したＨＩＶ  Ｇａｇタンパク質５μｇを３週間置きに２回、Ｂａｌｂ／ｃマウスの尾基部の皮下に（ｓ．ｃ．）ワクチン接種した。
【００９０】
図２Ａに示される通り、ＣＤＮをアジュバントとするＨＩＶ  Ｇａｇワクチンは多機能性Ａｇ特異的Ｔｈ１  ＣＤ４  Ｔ細胞応答を誘導する。追加免疫後５日目、Ｉ−Ａｄ拘束ＨＩＶ  Ｇａｇエピトープによる刺激後にＩＦＮ−γ、ＩＬ−２およびＴＮＦ−α陽性脾細胞の細胞内サイトカインの染色によって二次ＣＤ４  Ｔ細胞応答を測定した。バーは個々のマウスを表す。図４Ｂに示される通り、ＶｅｓｉＶａｘ（登録商標）リポソームを用いたＣＤＮの製剤により、ＣＤＮ依存性ワクチンに誘導されるＴ細胞応答の大きさが増大する。
【００９１】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス５匹からなるグループに図２に示されるワクチン組成で皮下免疫感作を実施した後、ＰＢＭＣにおける一次（１）および二次（２）ＯＶＡ特異的ＣＤ４  Ｔ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞応答をＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴにより測定し、その結果を図２Ｃに示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウス５匹からなるグループに３週間間隔で３回、図示されるワクチンによる皮下免疫感作または５×１０６ＣＦＵの静脈内投与による免疫感作を実施した。追加免疫の４週間後、マウスにＶＶ−ＯＶＡ  ５×１０５ＰＦＵの抗原投与を実施し、その５日後、卵巣を採取して処理し、プラークアッセイによりＶＶ−ＯＶＡを定量化した。
【００９２】
図に示される通り、ワクチン効力は製剤によって左右され、本発明者らの最初の結果は、ＶｅｓｉＶａｘ（登録商標）リポソームを用いた製剤が、おそらく細胞質ゾルへの効率的なワクチン送達から、最適であったことを示している。ＣＤＮをアジュバントとするＯＶＡをワクチン接種したマウスがワクシニアウイルスによる抗原刺激によって完全に防御されたことは注目に値する。ＨＢＳＳを投与した陰性対照群との比較では、この防御のレベルは４ｌｏｇを上回るものであった。ＣＤＮをアジュバントとするワクチンによって得られた防御のレベルは、ＭＰＬをアジュバントとするＯＶＡ（ヒトＭＰＬの投与量５０μｇを用いた）またはリステリア−ＯＶＡワクチンを上回るものであった。
【００９３】
図７は、ＣＤ８０およびＣＤ８６などの共刺激分子の発現によって評価した、ＣＤＮ治療時のヒト樹状細胞の誘導を図示している。この実験では、ＰＢＭＣからＣＤ１４＋単球を単離しＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４の存在下で培養した。６日目、図示される通り、１０５個のＤＣを１００ｎｇ／ＭＬ  ＬＰＳ、２０μＭ  ＣＤＮ（ｃ−ジＡＭＰ）；リポソーム（ＶｅｓｉＶａｘ（登録商標））３６９μｇまたはリポソーム／ＣＤＮで処置した。図示される共刺激分子は４８時間後にフローサイトメトリーによって検出されたものである。図からわかる通り、リポソームにより、ＣＤＮが樹状細胞成熟を誘導する能力が実質的に向上する。
【００９４】
実施例２
Ｂ１６黒色腫腫瘍モデルは侵襲性で免疫原性が弱く、放射線照射したＧＭ−ＣＳＦ分泌Ｂ１６黒色腫腫瘍細胞（Ｂ１６−ＧＭ）による治療的ワクチン接種は、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１などの免疫チェックポイントの遮断と組み合わせない限り効果が認められていない。この実施例では、本発明者らは、腫瘍が触知可能になり確立されたＢ１６腫瘍細胞移植後７日目にＳＴＩＮＧＶＡＸ（ジギトニンとともに製剤化し、放射線照射Ｂ１６−ＧＭとインキュベートしたＣＤＮ）の単回注射を実施したところ、確立された触知可能なＢ１６腫瘍の成長が有意に阻害されたことを示す。
【００９５】
Ｂ１６黒色腫細胞５×１０４個をＣ５７ＢＬ／６マウスの足蹠に接種し、７日目に腫瘍が触知可能であれば、図３に示されるワクチンをマウスの反対側の大腿に１回皮下注射した。注射には毎回以下の量のワクチン成分を用いた：放射線照射Ｂ１６  ＧＭ−ＣＳＦ（ＧＶＡＸ）、細胞１．５×１０６個；ＣＤＮ単独、２０ｎｇ；ジギトニン、１０μｇ／ｍＬ。放射線照射Ｂ１６  ＧＭ−ＣＳＦとＣＤＮおよびジギトニンとを２０℃で３０分間インキュベートしＰＢＳで３回洗浄することによりＳＴＩＮＧＶＡＸを調製し、得られた組成物をＰＢＳ  ２００μＬに再懸濁させた後、注射した。製剤の情報に関してはほかにも、Ｗｏｏｄｗａｒｄら，Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｏｎｌｉｎｅ  ｍａｔｅｒｉａｌ  ２７  Ｍａｙ  ２０１０  ｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１１８９８０１を参照されたい。腫瘍成長を毎日測定した。ＳＴＩＮＧＶＡＸにより成長がＲｘ無しのグループよりも有意に阻害された（Ｐ＜０．０１）。図３Ａに示される通り、いずれかの成分単独による治療では、未治療対照マウスと比較して腫瘍成長に対する影響が全く認められなかったことから、腫瘍阻害はＢ１６−ＧＭとＣＤＮとの組合せによるものであった。さらに、ＳＴＩＮＧＶＡＸで治療した担腫瘍マウスでは、Ｂ１６腫瘍に発現する内在性レトロウイルス特異的Ａｇであるｐ１５Ｅに特異的なＣＤ８  Ｔ細胞応答が、Ｂ１６−ＧＭ治療マウスに比して増強された（データ不掲載）。
【００９６】
これらのデータから、ＳＴＩＮＧ標的化ＣＤＮと放射線照射ＧＭ分泌腫瘍細胞ワクチンとの間の相乗効果には、ＣＤＮ依存性のＩＦＮ−β誘導によりＧＭ−ＣＳＦ分化ＤＣの活性化が生じて強い「シグナル３」が生成され、その結果、より効果的な抗腫瘍Ｔ細胞応答が生じる必要があると考えられる。このような理由で、本発明者らは、ＣＤＮがＴＲＡＭＰ−ＧＭ細胞のＩＦＮ−β産生を直接誘導し得るかどうかを明らかにした。図３Ｂに示される通り、ＣＤＮをジギトニンとともに製剤化すると、ＴＲＡＭＰ−ＧＭおよび初代マクロファージの両方にＩＦＮ−β発現が誘導されたが、機能的ＳＴＩＮＧタンパク質が欠損したゴールデンチケット（ｇｔ）マウス由来のマクロファージには誘導されなかった。
【００９７】
図４は、ＳＴＩＮＧ標的化ＣＤＮ／ＧＶＡＸの組合せによって示される治療利益の用量依存性を示している。この実験では、Ｂ１６黒色腫細胞５×１０４個をＣ５７ＢＬ／６マウスの足蹠に接種した。６日目に腫瘍が触知できたら、ＧＶＡＸ（Ｂ１６  ＧＭ−ＣＳＦ（ＧＶＡＸ）、細胞１．５×１０６個）またはＣＤＮ／ＧＶＡＸの組合せを反対側の大腿に２ｎｇ  ＣＤＮ／マウス、２０ｎｇ  ＣＤＮ／マウスまたは２００ｎｇ  ＣＤＮ／マウスで皮下注射した。組合せ治療の場合、ＣＤＮをジギトニンとともに１０μｇ／ｍＬで３０分間、２０℃で製剤化した後、上記の通りに注射する前にＰＢＳで４回洗浄して、組み込まれなかったＣＤＮを除去した。１治療群当たり計２０匹のマウスについて腫瘍体積を毎日測定した。図に示される通り、抗腫瘍応答は、ＣＤＮの濃度が２ｎｇ／マウスから２０ｎｇ／マウスまで増加するにつれて増大したが、投与量を２００ｎｇ／ｍＬまで増加させるとそれ以上増大が観察されなかった。
【００９８】
図５は、ＣＤＮ／ＧＶＡＸの組合せに対する相乗的な抗腫瘍応答のさらなる証拠を示している。この図では、マウスからＢ１６黒色腫細胞を採取し、免疫組織化学用に細胞をスライド上に固定した。フルオレセイン標識した抗ＣＤ８抗体を用いて腫瘍内へのＣＲ８＋Ｔ細胞浸潤を可視化した。ＤＡＰＩを用いて腫瘍細胞の核を対比染色した。図に示される４つのパネルは、未治療Ｂ１６黒色腫細胞（Ａ）ならびにＣＤＮ（Ｂ）、ＧＶＡＸ（Ｃ）およびＣＤＮ／ＧＶＡＸ（Ｄ）で治療した細胞である。図からわかる通り、ＣＤＮ／ＧＶＡＸでは、ＣＤＮまたはＧＶＡＸのいずれか単独に比してＣＤ＊＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤の実質的な向上が観察される。
【００９９】
同様に図６は、ＣＤＮ／ＧＶＡＸによる成熟インターフェロンγ産生脾臓ＤＣ（ＣＤ１１ｃ＋細胞）の誘導がＣＤＮまたはＧＶＡＸのいずれか単独に比して向上したことを示している。この実験では、上記の通りにマウスを治療し、１群当たり２匹のマウスから脾臓を採取した。全脾細胞を採取し、抗ＣＤ１１ｃおよび抗ＩＦＮａコンジュゲートで染色した。治療（未治療Ｂ１６、ＣＤＮ、ＣＤＮ＋ジギトニン、ＧＶＡＸおよびＣＤＮ／ＧＶＡＸ＋ジギトニン）が図に示されている。
【０１００】
実施例３
図９は、放射線照射ＧＭ−ＣＳＦ発現同種腫瘍細胞とともに製剤化したＳＴＩＮＧ活性化環状プリンジヌクレオチドの「ＳＴＩＮＧＶＡＸ」（ＧＶＡＸ；ＳＴＩＮＧ＋ＧＶＡＸ＝ＳＴＩＮＧＶＡＸ）の作用の相乗的機序を図示している。ＧＶＡＸ腫瘍細胞ワクチンにより、免疫系に対して複数の腫瘍関連抗原の偏りのない提示がもたらされる。ＧＶＡＸによって産生されたＧＭ−ＣＳＦが注射部位に樹状細胞（ＤＣ）を動員する。ＣＤＮが動員されたＤＣを活性化し、これにより強力な抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞が活性化または抗原刺激され、腫瘍まで移動してこれを殺滅し、その結果、臨床的有用性がもたらされる。ＳＴＩＮＧＶＡＸは、ＧＭ−ＣＳＦに動員されたＤＣの集積所としての役割を果たすことによって腫瘍応答を増強し得る、あるいはオートクリンシグナル伝達を介して、ＧＭ−ＣＳＦに動員されたＤＣを協働して活性化するＴＢＫ−１／ＩＲＦ−３依存性のＩＦＮ−βおよびＮＦ−κＢ炎症誘発性サイトカインをともに発現し得る。
【０１０１】
ＳＴＩＮＧＶＡＸの抗腫瘍効果が増大する機序は、ＣＤＮがＳＴＩＮＧと直接結合してこの受容体の構造変化が引き起こされ、ＴＢＫ−１／ＩＲＦ−３系を介したシグナル伝達ならびにＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βを含めた１型インターフェロン（ＩＦＮ）の活性化が生じるによって仲介される、自然免疫の活性化によるものであると考えられる。ＧＶＡＸ腫瘍細胞ワクチンによって産生されたＧＭ−ＣＳＦが樹状細胞（ＤＣ）を注射部位に動員する。ＣＤＮが動員されたＤＣを活性化し、これにより強力な抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞が活性化または抗原刺激され、腫瘍まで移動してこれを殺滅し、その結果、臨床的有用性がもたらされる。
【０１０２】
ＣＤＮが自然免疫を活性化する効力の特徴としてＩＦＮ−αのレベルを決定するため、１５例の独立したヒトドナーから単離した初代ヒトＰＢＭＣ  １×１０６個を９６ウェルＵ字底プレート中、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅトランスフェクション試薬（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて５０μＭのｃ−ジＧＭＰ（ＣＤＧ）、１μｇ／ｍＬのインターフェロン刺激性ＤＮＡ（ＩＳＤ）または４μｇ／ｍＬのポリ（Ｉ：Ｃ）とともにインキュベートして、これらの分子をＰＢＭＣに移入した。ＩＳＤ（インターフェロン刺激性ＤＮＡ）はＴＬＲ非依存性であり（Ｓｔｅｔｓｔｏｎ，Ｄ．Ｂ．ら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２４，９３−１０３，Ｊａｎｕａｒｙ  ２００６）ｃＧＡＳを介してシグナルを伝達するため、ＳＴＩＮＧ依存性であるのに対して、ポリ（Ｉ：Ｃ）はＴＬＲ３経路およびＲＩＧ−Ｉ経路の両方を介してシグナルを伝達することができるため、ＳＴＩＮＧ非依存性である。３０分後、細胞を洗浄し、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。２４時間のインキュベーション後、サイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によりＩＦＮ−αレベルを決定した（図８）。これらの結果は、環状ジ−ＧＭＰが複数の独立したドナーから調製したヒト白血球の自然免疫を活性化し、これによりＳＴＩＮＧＶＡＸの作用機序を支持することを示している。
【０１０３】
当業者であれば、本発明が、目的を達成し上記の結果および利点ならびに本発明に内在する結果および利点を得るのに十分に適合することが容易に理解される。本明細書に記載される具体例は、好ましい実施形態の代表的なものであり、また例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０１０４】
本発明は、その適用が以下の説明に記載されるまたは図面に図示される構成の詳細および構成要素の配置に限定されないことを理解するべきである。本発明は、記載されるもの以外の実施形態が可能であり、かつ様々な方法で実践および実施することが可能である。また、本明細書で使用される表現および用語ならびに要約は説明を目的とするものであり、限定するものとして見なされるべきではないことを理解するべきである。
【０１０５】
したがって、当業者には、本開示が基づく概念を、本発明のいくつかの目的を実施するための他の構造、方法およびシステムを設計するための基礎として容易に用い得ることが理解されよう。したがって、特許請求の範囲は、本発明の趣旨および範囲を逸脱しない限りこのような同等の構成を含むものと見されることが重要である。
【０１０６】
本発明は、当業者がこれを作製し使用するのに十分詳細に説明および例示されているが、様々な代替、修正および改良が本発明の趣旨と範囲から逸脱することなく明らかになるはずである。本明細書に記載される具体例は好ましい実施形態の代表的なものであり、また例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の修正および他の用途が当業者には思いつくであろう。このような修正は本発明の趣旨に包含され、請求項の範囲によって定められる。
【０１０７】
当業者であれば、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明に様々な置換および修正を施し得ることが容易にわかるであろう。
【０１０８】
本明細書で言及される特許および刊行物はすべて、本発明に関連する技術分野の当業者のレベルを示すものである。特許および刊行物は、個々の刊行物がそれぞれ具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示された場合と同様に参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０９】
本明細書に実例として適切に説明される本発明は、本明細書に具体的に開示されていない任意の１つまたは複数の要素、１つまたは複数の制限の非存在下で実施し得るものである。したがって、例えば、本明細書の各場合において、「〜を含む」、「〜から実質的になる」および「〜からなる」という用語はいずれも、他の２つの用語のいずれとも置き換えることができる。用いられている用語および語句は、説明のための表現として使用されるものであって、限定のための表現として使用されるものではなく、またこのような用語および語句の使用には、図示および説明される特徴またはその一部分のいずれの均等物も排除する意図はないが、特許請求される本発明の範囲内において様々な修正が可能であることが認識される。したがって、本発明は好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の修正および変形が当業者によって用いられ得ること、またこのような修正および変形が、添付の特許請求の範囲により定められる本発明の範囲内にあると見なされることが理解されるべきである。
【０１１０】
その他の実施形態は以下の特許請求の範囲において明記される。
【図１】
0006257607.tif 000002
【図２Ａ】
0006257607.tif 000003
【図２Ｂ】
0006257607.tif 000004
【図２Ｃ】
0006257607.tif 000005
【図３Ａ】
0006257607.tif 000006
【図３Ｂ】
0006257607.tif 000007
【図４】
0006257607.tif 000008
【図５Ａ】
0006257607.tif 000009
【図５Ｂ】
0006257607.tif 000010
【図５Ｃ】
0006257607.tif 000011
【図５Ｄ】
0006257607.tif 000012
【図６】
0006257607.tif 000013
【図７】
0006257607.tif 000014
【図８】
0006257607.tif 000015
【図９】
0006257607.tif 000016