(57)【要約】  本発明は、同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物および癲癇、気分障害および痛みを含むある障害の治療におけるかかる組成物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物。
【請求項２】
同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、その少なくとも１つが治療用量以下である組成物。
【請求項３】
治療において用いるための請求項１または２記載の医薬組成物。
【請求項４】
癲癇、気分障害または痛みの治療において用いるための請求項１または２記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物に関する。さらに、本発明は、癲癇、気分障害および痛みを含むある種の障害の治療におけるかかる組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
サブスタンスＰは、神経伝達物質および神経調節物質として機能する単鎖ポリペプチドである。これはタキキニン神経ペプチドファミリーに属する。中枢神経系において、サブスタンスＰは、気分障害、不安、ストレス、強化、ニューロン新生、呼吸リズム、神経毒性、吐き気／嘔吐および痛みの調節に関連する。サブスタンスＰの内因性受容体は、ニューロキニン１受容体（ＮＫ１受容体）である。アプレピタント（ＥｍｅｎｄＴＭ）を含む多くのＮＫ１受容体アンタゴニストが知られており、急性および遅発性化学療法誘発吐き気および嘔吐の防止および術後の吐き気および嘔吐の防止において用いるために販売されている。ＮＫ１受容体アンタゴニストの他の可能性ある用途は、不安およびうつ病、痛み、炎症性疾患、過活動膀胱、睡眠障害、アレルギー性障害、ＣＮＳ障害、皮膚障害、咳および胃腸障害の治療を含む。
【０００３】
電位依存性ナトリウムチャンネルは、ニューロン体にて通常開始され、神経軸索に沿って末端まで伝達される電気的脱分極の波である活動電位の開始段階に関与する。末端にて、活動電位は、カルシウム流入および神経伝達物質の放出を引き起こす。ラモトリジンおよびカルバムアゼピンなどのあるナトリウムチャンネルブロッカーは、癲癇の治療に用いられる。この場合、電位依存性ナトリウムチャンネルの部分的阻害がニューロン興奮性を減少させ、かつ、発作伝搬を減少させる。これらの薬物の重要な特徴は、それらの使用依存性作用メカニズムである。該薬物は、チャンネルが開いた後迅速に採用されるチャンネルの不活性配置を安定化すると考えられている。この不活性状態は、再活性化されるようにチャンネルがその休止（閉じた）状態に戻る前の不応期を提供する。結果として、使用依存性ナトリウムチャンネルブロッカーは、例えば、疼痛性刺激に応答して、高周波数でのニューロンの発火を遅らせ、例えば、発作の間に起こりうる長期のニューロンの脱分極の間に、反復性発火を防ぐのに役立つ。例えば、心臓において、低周波数で引き起こされた活動電位は、これらの薬物によって有意に影響を受けないが、十分に高い濃度のこれらの薬物は、各々、チャンネルの休止状態または開口状態を遮断することができるので、安全限界は各ケースで異なる。
【０００４】
使用依存的に電位依存性ナトリウムチャンネルを遮断する薬物はまた、躁または鬱の症状を減少させるか、または気分安定剤として、気分エピソードの出現を防ぐために、双極性障害の治療においても使用される。臨床的および前臨床的証拠もまた、使用依存性ナトリウムチャンネルブロッカーが統合失調症の症状を減少させるのに役立つことを示唆する。これらの精神医学的障害における効力は、一部、過剰なグルタメート放出の減少に由来しうると仮定される。グルタメート放出の減少は、前頭葉などの重要な脳領域における使用依存性ナトリウムチャンネル阻害の結果であると考えられる。しかしながら、電位依存性カルシウムチャンネルとの相互作用もまた、これらの薬物の効力に寄与しうる。
【０００５】
ラモトリジンは、米国において双極性障害の患者の気分エピソードの防止用として示されている有効な抗痙攣剤である。しかしながら、この薬剤の効果は、急に発症した場合に、発疹を防ぐために４〜６週の用量漸増の必要性により制限される。加えて、ラモトリジンおよび他のナトリウムチャンネル遮断剤は、ＣＮＳ副作用の発現の理由から効果を達成するための調査を行うことができる用量範囲に限定される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、単独投与した場合に、個々の成分に関して改善された臨床効果を可能にする新規医薬組成物を同定することである。
さらなる本発明の目的は、新規医薬組成物を同定することである。改善された許容性を達成するため、すなわち副作用を現象させるための、少用量の活性成分の使用を可能にする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明による解決法は、同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
一の具体例において、本発明による解決法は、同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、これらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物を提供する。
【０００９】
かくして、本発明の第１の態様において、同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
一の具体例において、本発明は、同時または連続投与用組み合わせ製剤としての、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、それらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物を提供する。
【００１１】
本発明の医薬組成物は、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含み、それらの少なくとも１つは、１またはそれ以上の医薬上許容される担体または賦形剤および他の任意の治療剤と組み合わせて、治療用量以下で用いられうる。担体は、処方の他の成分と適合し、受容者に悪影響を及ぼさないという意味で許容されなければならない。組成物の個々の成分が別個に投与される場合、これらは一般的に、各々の医薬組成物として提供される。以下、組成物への言及は、限定するものではないが、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤、またはその１つの成分だけを含む組成物を意味する。
【００１２】
治療用量以下とは、単独で投与した場合に患者に十分な臨床効果を与えるのに必要な量以下の薬剤用量を意味する。
【００１３】
さらなる態様において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みを患っているヒトまたは動物対象の治療方法であって、該対象に有効量のＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００１４】
他の具体例において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みを患っているヒトまたは動物対象の治療方法であって、該患者に、有効量のＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、それらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物を投与する方法を提供する。
【００１５】
本発明のさらなる態様において、治療に用いるための、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
さらなる具体例において、本発明は、治療において用いるための、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、それらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物を提供する。
【００１７】
一の態様において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みの治療に用いるための、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
本発明の他の具体例において、癲癇、気分障害または痛みの治療に用いるための、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、それらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物を提供する。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みの治療用の医薬の製造における、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物の使用を提供する。
【００２０】
他の具体例において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みの治療用の医薬の製造における、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、それらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物の使用を提供する。
【００２１】
さらなる態様において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みの治療のための、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物の使用を提供する。
【００２２】
さらなる具体例において、本発明は、癲癇、気分障害または痛みの治療のための、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物およびナトリウムチャンネル遮断剤を含む医薬組成物であって、それらの少なくとも１つが治療用量以下である組成物の使用を提供する。
【００２３】
本発明において、癲癇なる用語は、発作性障害および癲癇症候群を含むことを意図する。下記する癲癇および発作の種々の型：部分的に発生する発作（置換側頭葉癲癇、新皮質癲癇およびラスムセン）、全身性発作、レノックス・ガストー症候群の発作（緊張性、無緊張性、ミオクローヌス、非定型欠伸および全身の強直間代性）、欠神発作症候群および若年性ミオクローヌス癲癇は、本発明の一部として包含される
【００２４】
本発明の医薬組成物はまた、抗痙攣剤での治療および／または予防が可能な障害、例えば、外傷後癲癇を包含する癲癇、強迫障害（ＯＣＤ）、睡眠障害（概日リズム障害、不眠およびナルコレプシーを包含する）、チック（例えば、ジル・ドラ・トゥレット症候群）、運動失調、筋肉固縮（痙性）、および顎関節機能不全の治療および／または予防において有用でありうる。
【００２５】
本発明の医薬組成物の投与により治療されうるさらなる疾患または症状は、精神障害、気分障害および痛みを含むリストから選択される。
【００２６】
本発明において、本明細書にて用いられる精神医学的兆候を記載する用語は、アメリカ精神病医学会（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）によって出版された精神障害の診断および統計学的マニュアル（ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）第４版（ＤＳＭ−ＩＶ）および／または国際疾患分類（ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）第１０版（ＩＣＤ−１０）において分類されている。本明細書に記載する障害の種々のサブタイプは、本発明の一部として包含される。リストの後ろの括弧内の数字は、ＤＳＭ−ＩＶにおける分類コードを意味する。
【００２７】
本発明において、「精神障害」なる用語は以下のものを含む：
ｉ）統合失調症（サブタイプ妄想型（２９５．３０）、解体型（２９５．１０）、緊張型（２９５．２０）、鑑別不能（ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ）型（２９５．９０）および残遺型（２９５．６０）を包含する）；統合失調症様障害（２９５．４０）；統合失調性感情障害（２９５．７０）（サブタイプ双極型および抑鬱型を包含する）；妄想障害（２９７．１）（サブタイプ恋愛（Ｅｒｏｔｏｍａｎｉｃ）型、誇大（Ｇｒａｄｉｏｓｅ）型、嫉妬（Ｊｅａｌｏｕｓ）型、迫害（Ｐｅｒｓｅｃｕｔｏｒｙ）型、身体（Ｓｏｍａｔｉｃ）型、混合（Ｍｉｘｅｄ）型および不特定（Ｕｎｓｐｅｃｉｆｉｅｄ）型を包含する）；短期精神障害（２９８．８）；感応性精神障害（２９７．３）；一般的病状に起因する精神障害（妄想を伴うサブタイプおよび幻覚を伴うサブタイプを包含する）；物質誘導性精神障害（妄想を伴う（２９３．８１）および幻覚を伴う（２９３．８２）サブタイプを包含する）；および不特定の精神障害（２９８．９）。
【００２８】
本発明において、「気分障害」なる用語は以下のものを含む：
ｉ）抑鬱および気分障害（大鬱病エピソード、躁病エピソード、混合エピソードおよび軽躁エピソードを包含する）；抑鬱性障害（大鬱病性障害、気分変調性障害（３００．４）、不特定の抑鬱性障害（３１１）を包含する）；双極性障害（Ｉ型双極性障害、ＩＩ型双極性障害（軽躁エピソードを伴う再発性大鬱病エピソード）（２９６．８９）、気分循環性障害（３０１．１３）および不特定の双極性障害（２９６．８０）を包含する）；他の気分障害（鬱病性特徴、大鬱病様エピソード、躁病性特徴および混合性特徴を伴うサブタイプを包含する一般的病状に起因する気分障害（２９３．８３）を包含する）；物質誘導性気分障害（鬱病性特徴、躁病性特徴および混合性特徴を伴うサブタイプを包含する）；および不特定の気分障害（２９６．９０）。
「気分障害」なる用語はまた、癲癇患者における気分障害も含む。
【００２９】
本発明において、「痛み」なる用語は以下のものを含む：慢性炎症性疼痛（例えば、関節リウマチ、骨関節炎、リウマチ様脊椎炎、通風性関節炎および若年性関節炎に関連する疼痛）；筋骨格痛；腰痛および頸痛；捻挫および緊張；ニューロパシー痛；交感神経依存性疼痛；筋炎；癌および線維筋痛に関連した疼痛；偏頭痛に関連した疼痛；群発性頭痛および慢性日常性頭痛に関連した疼痛；インフルエンザまたは他のウイルス感染、例えば、感冒に関連した疼痛；リウマチ熱；機能的腸障害、例えば、非潰瘍性消化不良、非心臓性胸痛および過敏性腸症候群に関連した疼痛；心筋虚血に関連した疼痛；術後疼痛；頭痛；歯痛；月経困難症；神経痛；線維筋痛症候群；複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳタイプＩおよびＩＩ）；神経因性疼痛症候群（糖尿病性ニューロパシー；化学療法誘発神経痛；坐骨神経痛；非特異的腰痛；多発性硬化症痛み；ＨＩＶ−関連ニューロパシー；ヘルペス後神経痛；三叉神経痛を含む）；および身体外傷、切断術、癌、毒または慢性炎症性症状による痛み。
【００３０】
一の具体例において、本発明の医薬組成物の投与により治療することができる「気分障害」は、双極性障害である。
【００３１】
当然のことながら、本発明では、「治療」なる語は、予防、再発予防および症状（軽度、中程度または重篤のいずれも）の抑制または緩和ならびに確立された病状の治療にまで及ぶ。
【００３２】
一の具体例において、上記に定義した本発明の医薬組成物は、ホスフェニトイン（ＣｅｒｅｂｙｘＴＭ、ＰｒｏｄｉｌａｎｔｉｎＴＭ、Ｐｒｏ−ＥｐａｎｕｔｉｎＴＭまたはＣｅｒｅｎｅｕＴＭ）；オキシカルバゼピン（ＴｒｉｌｅｐｔａｌＴＭ、ＯｘｒａｔｅＴＭまたはＷｏｃｋｈａｒｄｔＴＭ）；フェニトイン；カルバゼピン（Ｃａｒｂａｔｒｏｌ、ＥｑｕｅｔｒｏＴＭ）；リドカイン（ＡＬＧＲＸ−３２６８）；サフィナミド（ＮＷ−１０１５）；ラルフィナミド（ＮＷ−１０２９）；３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−プロリナミド、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００３３】
さらなる具体例において、上記に定義した本発明の医薬組成物は、ホスフェニトイン（ＣｅｒｅｂｙｘＴＭ、ＰｒｏｄｉｌａｎｔｉｎＴＭ、Ｐｒｏ−ＥｐａｎｕｔｉｎＴＭまたはＣｅｒｅｎｅｕＴＭ）、オキシカルバゼピン（ＴｒｉｌｅｐｔａｌＴＭ、ＯｘｒａｔｅＴＭまたはＷｏｃｋｈａｒｄｔＴＭ）、フェニトイン、カルバゼピン（Ｃａｒｂａｔｒｏｌ、ＥｑｕｅｔｒｏＴＭ）、リドカイン（ＡＬＧＲＸ−３２６８）、サフィナミド（ＮＷ−１０１５）およびラルフィナミド（ＮＷ−１０２９）から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００３４】
さらなる具体例において、上記に定義した本発明の医薬組成物は：
３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン；
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン；
（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン；
（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン；
５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−プロリナミド；
およびその医薬上許容される塩または溶媒和物からなる群から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００３５】
さらなる具体例において、上記に定義した本発明の医薬組成物は：
３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン；
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン；
および医薬上許容される塩または溶媒和物から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００３６】
さらなる具体例において、上記に定義した本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物であるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００３７】
化合物３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンならびにその医薬上許容される塩および溶媒和物は、ＥＰ００２１１２１Ｂおよび米国特許第４，６０２，０１７号に記載されている。これらは出典明示により本明細書に組み入れる。化合物３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンならびに医薬上許容される塩および溶媒和物は、ＥＰ００２１１２１ＢおよびＵＳ４，６０２，０１７に記載の方法により調製することができる。
【００３８】
他の具体例において、上記に定義した本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物であるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００３９】
化合物Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンならびにその医薬上許容される塩および溶媒和物は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／９３１７（１９９７年３月１３日公開）に記載されている。これらは出典明示により本明細書に組み入れる。化合物Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンならびにその医薬上許容される塩および溶媒和物は、ＷＯ９７／９３１７に記載の方法により調製することができる。
【００４０】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は、治療用量以下で：ホスフェニトイン（ＣｅｒｅｂｙｘＴＭ、ＰｒｏｄｉｌａｎｔｉｎＴＭ、Ｐｒｏ−ＥｐａｎｕｔｉｎＴＭまたはＣｅｒｅｎｅｕＴＭ）；オキシカルバゼピン（ＴｒｉｌｅｐｔａｌＴＭ、ＯｘｒａｔｅＴＭまたはＷｏｃｋｈａｒｄｔＴＭ）；フェニトイン；カルバゼピン（Ｃａｒｂａｔｒｏｌ、ＥｑｕｅｔｒｏＴＭ）；リドカイン（ＡＬＧＲＸ−３２６８）；サフィナミド（ＮＷ−１０１５）；ラルフィナミド（ＮＷ−１０２９）；３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−プロリナミド、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を含む。
【００４１】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は：ホスフェニトイン（ＣｅｒｅｂｙｘＴＭ、ＰｒｏｄｉｌａｎｔｉｎＴＭ、Ｐｒｏ−ＥｐａｎｕｔｉｎＴＭまたはＣｅｒｅｎｅｕＴＭ）；オキシカルバゼピン（ＴｒｉｌｅｐｔａｌＴＭ、ＯｘｒａｔｅＴＭまたはＷｏｃｋｈａｒｄｔＴＭ）；フェニトイン；カルバゼピン（Ｃａｒｂａｔｒｏｌ、ＥｑｕｅｔｒｏＴＭ）；リドカイン（ＡＬＧＲＸ−３２６８）；サフィナミド（ＮＷ−１０１５）；ラルフィナミド（ＮＷ−１０２９）；３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−プロリナミド、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物からなる群から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を、治療用量以下で含む。
【００４２】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は：ホスフェニトイン（ＣｅｒｅｂｙｘＴＭ、ＰｒｏｄｉｌａｎｔｉｎＴＭ、Ｐｒｏ−ＥｐａｎｕｔｉｎＴＭまたはＣｅｒｅｎｅｕＴＭ）；オキシカルバゼピン（ＴｒｉｌｅｐｔａｌＴＭ、ＯｘｒａｔｅＴＭまたはＷｏｃｋｈａｒｄｔＴＭ）；フェニトイン；カルバゼピン（Ｃａｒｂａｔｒｏｌ、ＥｑｕｅｔｒｏＴＭ）；リドカイン（ＡＬＧＲＸ−３２６８）；サフィナミド（ＮＷ−１０１５）；ラルフィナミド（ＮＷ−１０２９）；３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−プロリナミド、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物；および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物からなる群から選択されるナトリウムチャンネル遮断剤を含み；かかるＮＫ１受容体アンタゴニストおよびナトリウムチャンネル遮断剤化合物は両方とも治療用量以下で投与される。
【００４３】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む。
【００４４】
さらなる具体例において、本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を治療用量以下で、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む。
【００４５】
他の具体例において、本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を治療用量以下で含む。
【００４６】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む。
【００４７】
他の具体例において、本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を治療用量以下で、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む。
【００４８】
さらなる具体例において、本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を治療用量以下で含む。
【００４９】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンおよび［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン二塩酸塩を含む。
【００５０】
さらなる具体例において、本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンを治療用量以下で、および［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン二塩酸塩を含む。
【００５１】
他の具体例において、本発明の医薬組成物は、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンおよび［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン二塩酸塩を治療用量以下で含む。
【００５２】
一の具体例において、本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンおよび［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン二塩酸塩を含む。
【００５３】
他の具体例において、本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンおよび［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン二塩酸塩を治療用量以下で含む。
【００５４】
さらなる具体例において、本発明の医薬組成物は、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンおよび［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミン二塩酸塩を治療用量以下で含む。
【００５５】
一の具体例において、癲癇、気分障害または痛みを患っているヒトまたは動物対象の治療方法であって、該対象に有効量の上記した医薬組成物のいずれか１つを投与することを含む方法を提供する。
【００５６】
他の具体例において、上記した医薬組成物のいずれか１つを、治療において用いるために提供する。
【００５７】
さらなる具体例において、上記した医薬組成物のいずれか１つは、癲癇、気分障害または痛みの治療において用いるために提供される。
【００５８】
さらなる具体例において、癲癇、気分障害または痛みの治療のための上記した医薬組成物のいずれか１つの使用を提供する。
【００５９】
塩基性中心を含む、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンの医薬上許容される塩またはナトリウムチャンネル遮断剤の医薬上許容される塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸およびリン酸などの無機酸と、カルボン酸と、または有機スルホン酸と共に形成される非毒性酸付加塩である。例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、硫酸塩または重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩またはリン酸水素塩、酢酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、糖酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、イセチオン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、カンシル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩が包含される。適当な医薬塩の概説に関しては、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ，Ｓｃｉ．，６６，１−１９，１９７７；Ｐ  Ｌ  Ｇｏｕｌｄ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３（１９８６），２０１−２１７およびＢｉｇｈｌｅｙら、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９６，Ｖｏｌｕｍｅ  １３，ｐａｇｅ  ４５３−４９７を参照のこと。
【００６０】
有機化学の分野における当業者には、多くの有機化合物が、溶媒中で反応し、または溶媒から沈澱もしくは結晶化する、その溶媒と共に複合体を形成することができることが明らかであろう。これらの複合体は、「溶媒和物」として知られている。例えば、水との複合体は、「水和物」として知られている。ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、あるいはナトリウムチャンネル遮断剤の医薬上許容される溶媒和物は、本発明の範囲内である。
【００６１】
本発明の付加的な治療法は、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を、ナトリウムチャンネル遮断剤と一緒に、同時に体内に有効なレベルの化合物を提供するいずれかの方法で投与することにより行われる。組成物の化合物は、同じまたは別個の剤形で同時に、あるいは連続して投与してもよいことは明らかだろう。また、組成物の化合物は、同時にまたは連続して提供された場合であっても、単独で、または複数回、または組み合わせて投与してもよいことは明らかだろう。
【００６２】
気分障害、精神障害、癲癇または痛みの治療として有効であるための本発明の医薬組成物の量は、もちろん変化するものであり、最終的には医師の判断による。考えられる因子は、投与経路および処方の性質、対象哺乳動物の体重、年齢および全身状態ならびに治療すべき症状の性質および重症度が含まれる。
【００６３】
特記しない限り、すべての成分の重量は、薬剤そのものに対して計算した。所望の投与量は、好ましくは、１、２、３、４、５、６回またはそれ以上のサブ投与量として、１日にわたって適当な間隔で投与してもよい。
【００６４】
気分障害、精神障害、癲癇または痛みの治療に用いるための上記した本発明の医薬組成物は、有利には、単一の剤形の医薬組成物として提供される。かくして、両方の化合物を含む医薬組成物は、本発明の重要な具体例である。かかる組成物は、医薬上許容される、例えば、経口的に用いられうる医薬組成物であるいずれの物理的形態であってもよい。かかる補助医薬組成物は、有効量の各々の化合物を含み、有効量は、投与される化合物の１日の投与量に関連する。各々の補助投与ユニットは、すべての化合物の１日の投与量を含有してもよく、または１日の投与量の一部、例えば投与量の１／３を含有してもよい。別法として、個々の投与ユニットは、一の化合物の全体用量および他の化合物の用量の一部を含有してもよい。かかる場合において、患者は、一の組み合わせ投与ユニットおよび１〜３個の他の化合物のみを含有するユニットを１日に与えられるだろう。個々の投与ユニットに含有されるべき個々の薬剤の量は、治療のために選択された薬剤固有の性質に依存しうる。
【００６５】
気分障害、精神障害、癲癇または痛みの治療に用いられる上記した本発明の医薬組成物は、経口、直腸、鼻腔、局所（経皮、バッカルおよび舌下を含む）、膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与に適したものを含む。組成物は、有利には、単位剤形で提供され、当該分野でよく知られた方法により調製される。かかる方法は、本発明のさらなる特徴を示し、活性成分と、１つまたはそれ以上の補助的な成分を構成する担体とを合わせる行程を含む。一般的には、組成物は、均一および密接に、活性成分と液体担体または微粉化固体担体または両方と合わせ、ついで、要すれば、製品に成形することにより調製される。
【００６６】
経口投与に適した本発明の医薬組成物は、別個のユニットとして、例えば各々、予め計量した量の活性成分を含むカプセル、カプレット、サッシェまたは錠剤として；散剤または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；または水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョンとして提供してもよい。活性成分はまた、ボーラス、舐剤またはペーストとして提供してもよい。
【００６７】
錠剤は、任意に１つまたはそれ以上の補助成分と一緒に、圧搾または成形することにより製造することができる。圧縮錠剤は、適当な機器で、活性成分を自由流動形態、例えば粉末または顆粒形態で、所望により、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、スターチグリコーレートナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性または分散剤と混合して圧縮することにより調製することができる。成形した錠剤は、湿った粉末化合物と不活性液体希釈剤の混合物を適当な機器で成形することにより製造することができる。錠剤は、所望により、コートまたは分割されていてもよく、所望の放出特性を提供するために種々の割合で例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて活性成分を遅延または制御放出のために処方されてもよい。錠剤は、所望により、胃以外の消化管の一部で放出するように、腸溶コーティングを施して提供してもよい。
【００６８】
口への局所投与に適した医薬組成物は、フレーバー基剤、通常シュークロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリンまたはシュークロースおよびアカシア中に活性成分を含むトローチ；および適当な液体担体中に活性成分を含むマウスウォッシュを含む。直腸投与用の組成物は、例えば、ココアバターまたはポリエチレングリコールを含む適当な塩基を用いて坐剤として提供してもよい。
経皮イオン導入デバイスの手段を用いる局所投与も可能である。
【００６９】
膣内投与に適した医薬組成物は、活性成分に加え、当該分野で適当であることが知られている担体を含む、錠剤、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡またはスプレー組成物として提供されうる。
【００７０】
担体が固体である直腸投与に適した医薬組成物は、最も好ましくは、単位投与坐剤として提供される。適当な担体は、ココアバターおよび当該分野で慣用的に用いられる他の物質を含む。坐剤は、有利には、活性組み合わせと軟化または融解担体とを混合し、ついで、冷却し、鋳型で成形することにより形成することができる。
【００７１】
非経口投与に適した医薬組成物は、酸化防止剤、緩衝剤、保存剤および、処方を受容者の血液と等張性にする溶質を含みうる、水性および非水性等張滅菌注射溶液；および懸濁化剤および増粘剤を含みうる水性および非水性滅菌懸濁液；およびリポソームまたは化合物が血液成分または１もしくはそれ以上の臓器を標的とするように設計された他の微粒子システムを含む。処方は、単位投与量または複数回投与量密封容器、例えばアンプルおよびバイアルで提供され、使用直前に、滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で貯蔵してもよい。即時注射溶液および懸濁液は、上記したような滅菌散剤、顆粒および錠剤から調製することができる。
【００７２】
上記した成分に加え、本発明の組成物は、処方のタイプにおける課題を考慮して当該分野で慣用的な他の薬剤を含みうることは理解されるべきである。例えば、経口投与に適したものは、甘味剤、増粘剤およびフレーバー剤のようなさらなる薬剤を含みうる。
【００７３】
２つの活性成分を含む本発明の医薬組成物は、製薬工業においてよく知られた慣用的な技術により調製することができる。かくして、例えば、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンおよび［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物は、別個に各々の活性成分の処方に関して上記したような適当な賦形剤と混合することができる。錠剤は、例えば、かかる混合物を直接圧搾するか、または他の慣用的な方法により調製することができる。二層錠剤は、慣用的な方法に従って調製することができる。かくして、例えば、２つの混合物を、２つの充填箇所を有する適当な打錠機において別個に圧搾することにより調製することができる。カプセルは、適当な充填機を用いて、適当な賦形剤と一緒に混合物をゼラチンカプセルに充填することにより調製することができる。経口または直腸投与用の制御放出形態は、制御放出形態に関連する慣用的な方法で処方することができる。
【００７４】
医薬組成物は、単一パッケージで全治療行程を含む「患者用パック」、通常はブリスターパックで患者に提供される。患者用パックは、伝統的な処方では通常含まれていない、患者用パックに含まれている添付文書を患者が常に入手可能であるという点で、薬剤師が大量の供給物の中から患者のための分の医薬品を取り分けるという伝統的な処方よりも有利である。添付文書を含むことは、医師の指示への患者のコンプライアンスを改善することが示されており、したがって、一般的により治療を成功に導く。
【００７５】
本発明の正確な使用を患者に説明する添付文書を含む、単一の患者用パックまたは各々の処方の患者用パックによる本発明の医薬組成物の投与が、本発明の望ましいさらなる特徴であることは理解できるだろう。
【００７６】
本発明のさらなる態様により、ＮＫ１受容体アンタゴニスト［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（２Ｓ−フェニル−ピペリジン−３Ｓ−イル）−アミンまたはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物、およびナトリウムチャンネル遮断剤および本発明の組成物の使用に関する添付文書を含む、複数、例えば二重包装品または三重包装品を提供する。
【実施例】
【００７７】
実験データ
下記表に用いる省略記号を示す：
【表１】
2010516731.tif 000002
【００７８】
中間体１
［２Ｓ］−フェニル−ピペリジン−［３Ｓ］−イルアミン
［２Ｓ］−フェニル−ピペリジン−［３Ｓ］−イルアミン［２Ｓ，３Ｓ］−ビス（４−メチル−ベンゾイルオキシ）−コハク酸塩（１：１）（６．９ｇ）を濃０．８８０アンモニア水溶液（１００ｍｌ）中に溶解し、数分間振盪させた。塩基性溶液をクロロホルムで抽出し（３×１５０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して、［２Ｓ］−フェニル−ピペリジン−［３Ｓ］−イルアミン（１．８５ｇ）を無色の油として得た。
［α］２０Ｄ（ＨＣｌ塩）＝＋６５．４８°（Ｃ＝０．００６ｇ／ｍｌ）
１ＨＮＭＲ（ＨＣｌ塩，Ｄ２Ｏ）δ２．０５（ｍ，２Ｈ），２．３０（ｍ，２Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｍ，１Ｈ），４．１６（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），４．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ），７．４５（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｍ，３Ｈ）
【００７９】
少量の試料の遊離塩基（５０ｍｇ）が、キラルＨＰＬＣ分析によれば、そのトリフルオロアセチルアナログとして誘導体化していた。試料をアセトニトリル（４ｍｌ）中に溶解し、１−（トリフルオロアセチル）イミダゾール（０．４ｍｌ）で処理した。溶液を６５℃で１時間撹拌し、減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン（５ｍｌ）中に溶解した。有機層を希硫酸（２ｍｌ）で洗浄し、ついで、有機層を濃縮し、ＨＰＬＣカラムに注入するために、ヘキサン−イソプロピルアルコール（９８：２）中に溶解した。
キラルＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｃｅｌ−ＯＤ−Ｈカラム、ロット番号０９−０２−２０７０９、ヘキサン−イソプロピルアルコール９８：２で溶出、流速１ｍｌ／分、検出ｕｖ２３０ｎｍ、温度４０℃）保持時間１２．９３分。
【００８０】
中間体２
２−ヒドロキシ−５−テトラゾール−１−イル−ベンズアルデヒド
４−テトラゾール−１−イル−フェノール（０．０１ｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸（２０ｍｌ）およびヘキサメチレンテトラミン（０．０４ｍｏｌ）中溶液を、７０℃で１８時間加熱し、室温に冷却し、２Ｎの硫酸（５０ｍｌ）でクエンチした。混合物を酢酸エチルで抽出し（３×１００ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮して残渣を得、これをＦＣＣ（ジクロロメタン／メタノール（９：１））により精製して、標題化合物を３０％の収率で得た。
Ｔ．ｌ．ｃ．（ジクロロメタン／メタノール（９：１））Ｒｆ０．６
【００８１】
中間体３を、中間体２に記載のものと類似の方法で調製した：
中間体３
２−ヒドロキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンズアルデヒド
４−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−フェノール（４５ｍｍｏｌ）から、標題化合物（８．８ｇ）を淡黄色固体として得た。
Ｔ．ｌ．ｃ．（ヘキサン／エーテル（２：１））Ｒｆ０．３６
【００８２】
中間体４
２−メトキシ−５−テトラゾール−１−イル−ベンズアルデヒド
２−ヒドロキシ−５−テトラゾール−１−イル−ベンズアルデヒド（２．６３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍｌ）中溶液に、炭酸カリウム（３．９５ｍｍｏｌ）およびヨウドメタン（３．９５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素雰囲気下で２時間撹拌した。混合物を水（１００ｍｌ）に注ぎ、形成した白色固体を濾過して、標題化合物を６７％の収率で得た。
Ｔ．ｌ．ｃ．（エーテル）Ｒｆ０．４５
【００８３】
中間体５を、中間体４に記載のものと類似の方法で調製した：
中間体５
２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンズアルデヒド
２−ヒドロキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンズアルデヒド（１．５６ｍｍｏｌ）から標題化合物黄色固体として得た（０．４８ｇ）。
Ｔ．ｌ．ｃ．（エーテル／ヘキサン（２：１））Ｒｆ０．３８
【００８４】
代表的なＮＫ１アンタゴニスト実施例６（ＥＮＫ６）
［２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル）−ベンジル］−（［２Ｓ，３Ｓ］−２−フェニル−ピペリジン−３−イル）−アミン二塩酸塩
［２Ｓ］−フェニル−ピペリジン−［３Ｓ］−イルアミン（１．１４ｍｍｏｌ）、２−メトキシ−５−（５−トリフルオロメチル−テトラゾール−１−イル−ベンズアルデヒド（１．２ｍｍｏｌ）、トリアセトキシボロヒドリドナトリウム（２．３７ｍｍｏｌ）および酢酸（３滴）のジクロロメタン（２５ｍｌ）中混合物を、窒素雰囲気下２３℃で６４時間撹拌した。２Ｎの炭酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した（３×２５ｍｌ）。合した抽出物を、飽和ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。ＦＣＣによりジクロロメタン／エタノール／アンモニア（４００：１０：１→１００：１０：１）を用いて精製して、無色の粘性油を得た。これをメタノール（１０ｍｌ）に溶解し、２Ｎエーテル性塩化水素（約１０ｍｌ）で処理した。減圧下で蒸発させ、酢酸ｉ−プロピルでトリチュレートして、標題化合物を白色固体として得た（２１０ｍｇ）。
Ｔ．ｌ．ｃ．（ジクロロメタン／エタノール／アンモニア（２００：１０：１））Ｒｆ０．３９
旋光度（ｃＯ．ＯＯ３ｇ／ｍｌ．水）＋５０．３５°
【００８５】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例７（ＥＮａ７）
３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジン
ラモトリジン、３，５−ジアミノ−６−（２，３−ジクロロフェニル）−１，２，４−トリアジンは、米国特許第４，６０２，０１７号およびＥＰ００２１１２１に開示されている。ラモトリジンを含む製品は、商標名ＬＡＭＩＣＴＡＬＴＭで、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅグループから市販されている。
【００８６】
中間体６
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル（２Ｓ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化１】
2010516731.tif 000003
市販の５−オキソ−Ｌ−プロリン酸メチル（２０ｇ、１４０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍｌ）中溶液に、トリエチルアミン（１９．６ｍｌ、１４０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１７．２ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を、ついで、ＢＯＣ２Ｏ（６１ｇ、２８０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）中溶液を滴下した。得られた赤色混合物を室温にて２時間撹拌した。ついで、溶媒を減圧下で除去し、粗物質を、シクロヘキサン／酢酸エチル（７：３〜４：６）で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して（ヘキサン／ジエチルエーテル  １：１でトリチュレートした後）、標題化合物を白色固体として得た（３２．４ｇ、９６％）；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝６５：３５）：０．２１；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．６２（ｄｄ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），２．６８−２．５８（ｍ，１Ｈ），２．５２−２．４５（ｍ，１Ｈ），２．３７−２．２７（ｍ，１Ｈ），２．０８−１．９７（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）。
【００８７】
中間体７
（２Ｓ）−２−（｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）−５−オキソ−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝ペンタン酸メチル
【化２】
2010516731.tif 000004
ｎ−ブチルリチウムのヘキサン（０．８８ｍｌ、１．４ｍｍｏｌ）中１．６Ｍ溶液を、市販の１−ブロモ−４−［（フェニルメチル）オキシ］ベンゼン（３９０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２ｍｌ）中溶液に、窒素雰囲気下−７８℃で滴下した。得られた懸濁液を、−７８℃で４０分間撹拌し、ついで、これを、１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル（２Ｓ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（３００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）の予め−７８℃に冷却した乾燥ＴＨＦ（２．４ｍｌ）中溶液に加えた。混合物を−７８℃で４０分間、−４０℃で１時間撹拌し、ついで、−４０℃で飽和塩化アンモニウム水溶液で処理した。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて粗物質を得、これを、シクロヘキサン／酢酸エチル（９５：５）で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を白色固体として得た（１７０ｍｇ、３２％）；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝８：２）：０．３０；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．９５（ｄ，２Ｈ），７．５０−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．０３（ｄ，２Ｈ），５．２０（ｂｓ，１Ｈ），５．１５（ｓ，２Ｈ），４．４５−４．３５（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．１５−２．９５（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．２６（ｍ，１Ｈ），２．１６−２．０２（ｍ，１Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【００８８】
中間体８：
（２Ｓ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル
【化３】
2010516731.tif 000005
（２Ｓ）−２−（｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）−５−オキソ−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝ペンタン酸メチル（３２３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（４ｍｌ）中溶液に、窒素雰囲気下０℃で、トリフルオロ酢酸（１ｍｌ）を滴下した。得られた淡桃色溶液を、１時間にわたって室温に加温し、ついで、減圧下で蒸発させ、標題化合物（Ｄ７、２９１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ、９１％）を緑油として得、これをさらに精製することなく次の工程に用いた；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：３．６９分；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：３１０［ＭＨ＋］，Ｃ１９Ｈ１９ＮＯ３として３０９。
【００８９】
中間体９：（５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン酸メチル
中間体１０：（５Ｓ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン酸メチル
【化４】
2010516731.tif 000006
（２Ｓ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル（１３．７ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍｌ）中溶液に、ＰｔＯ２（２４０ｍｇ）を加え、混合物を水素雰囲気下（２気圧）で６時間処理した。ついで、触媒を濾過し、溶媒を減圧下で除去して赤色油を得、これを酢酸エチル中に溶解し、ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。得られた粗物質を、シクロヘキサン／酢酸エチル（９：１〜８：２）で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して標題化合物を得た：
【００９０】
中間体９，４．１５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ、Ｙ＝４１％．ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：３１２［ＭＨ＋］．Ｃ１９Ｈ２１ＮＯ３として３１１。Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：３．８０分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝７：３）：０．１８．１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．４０（ｄ，２Ｈ）；７．３５（ｔ，２Ｈ）；７．３３（ｄ，２Ｈ）；７．２９（ｔ，１Ｈ）；６．９３（ｄ，２Ｈ）；５．０３（ｓ，２Ｈ）；４．２３（ｄｄ，１Ｈ）；４．００（ｄｄ，１Ｈ）；３．７１−３．７９（ｍ，３Ｈ）；２．１８−２．３０（ｍ，１Ｈ）；２．０９−２．１８（ｍ，２Ｈ）；１．６７−１．７８（ｍ，１Ｈ）。Ｃ２のプロトンとＣ５のプロトン間のＮＯＥが観察できた。
【００９１】
中間体１０，０．６ｇ、１．９ｍｍｏｌ，Ｙ＝６％．ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：３１２［ＭＨ＋］．Ｃ１９Ｈ２１ＮＯ３として３１１；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：３．７３分。Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝７：３）：０．３２；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．４０（ｄ，２Ｈ）；７．３５（ｔ，２Ｈ）；７．２９（ｄ，２Ｈ）；７．２８（ｔ，１Ｈ）；６．９１（ｄ，２Ｈ）；４．９７−５．０７（ｍ，２Ｈ）；４．２９（ｄｄ，１Ｈ）；４．０９（ｄｄ，１Ｈ）；３．７１−３．７５（ｍ，３Ｈ）；２．２９−２．４２（ｍ，１Ｈ）；２．０９−２．２０（ｍ，１Ｈ）；１．９０−２．０２（ｍ，１Ｈ）；１．６９−１．８２（ｍ，１Ｈ）。Ｃ２のプロトンとＣ５のプロトン間のＮＯＥが観察できた。
【００９２】
中間体１１：（５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン
中間体１２：（５Ｒ）−１−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン
【化５】
2010516731.tif 000007
（５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン酸メチル（１２０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．３ｍｌ）中溶液に、水（１．１ｍｌ）中に溶解したＬｉＯＨ一水和物（２６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、ついで、メタノール（１．１ｍｌ）を加えた。得られた溶液を室温にて２．５時間撹拌し、ついで、−１８℃で一晩撹拌した。ついで、有機溶媒を減圧下で蒸発させ、温度を３８℃に保持し、酸性中間体を含有する水性残渣（Ｒｔ（ＨＰＬＣ）＝３．６３分、ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：２９８［ＭＨ＋］；Ｃ１８Ｈ１９ＮＯ３として２９７）を、ＴＨＦ（１．１ｍｌ）中のＢＯＣ２Ｏ（１６８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温にて３．５時間撹拌した。有機溶媒を蒸発させて、塩基性水溶液を１ＮのＨＣｌ水溶液で０℃でｐＨ＝３に酸性化し、この酸性水溶液を酢酸エチルで抽出した（２×１０ｍｌ）。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて固体を得、これをｎ−ヘキサン（３×６ｍｌ）でトリチュレートして、標題化合物を白色粉末として得た（１３７ｍｇ、２行程で９０％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：５．８１分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝１：１）：０．３４；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４２０［Ｍ＋Ｎａ＋］；Ｃ２３Ｈ２７ＮＯ５として３９７；ＭＳ：（ＥＳ／−）ｍ／ｚ：３９６［Ｍ−Ｈ］Ｃ２３Ｈ２７ＮＯ５として３９７；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．５−７．３（ｍ，５Ｈ），７．１０（ｂｍ，２Ｈ），６．９０（ｄ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），４．６５（ｂｍ，１Ｈ），４．５０（ｂｍ，１Ｈ），２．５８（ｂｍ，１Ｈ），２．３１（ｂｍ，１Ｈ），２．１１−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．１６（ｓ，９Ｈ）。
【００９３】
中間体１３：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１−ピロリジンカルボキシレート
【化６】
2010516731.tif 000008
（５Ｒ）−１−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン（１．４４ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（１．２６ｍｌ、７．２４ｍｍｏｌ）、ついで、ＴＢＴＵ（１．２３ｇ、３．９８ｍｍｏｌ）を加え、２０分後、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（１．１５ｍｌ、５．４３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温にて２時間撹拌し、ついで、これを５％ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍｌ）で処理し、さらに３０分間撹拌した。得られた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相をブライン／氷で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、無色油を得た。この粗物質を、シクロヘキサン／酢酸エチル（７：３〜５：５）で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．２５ｇ、８７％）を得た；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：５．５１分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝１：１）：０．２９．ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４１９［Ｍ＋Ｎａ＋］；Ｃ２３Ｈ２８Ｎ２Ｏ４として３９６。
【００９４】
中間体１４：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ピロリジンカルボキシレート
【化７】
2010516731.tif 000009
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１−ピロリジンカルボキシレート（１．２ｇ、３．０２ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍｌ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ１０％ｗｔ（２１０ｍｇ）を加え、混合物を水素雰囲気下（１ａｔｍ）で６時間撹拌した。触媒を濾過し、溶媒を減圧下で除去して、標題化合物を白色固体として得た（８７０ｍｇ、９４％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：３．６１分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝１：１）：０．１８；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：３２９［Ｍ＋Ｎａ＋］。Ｃ１６Ｈ２２Ｎ２Ｏ４として３０６；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ） δｐｐｍ：９．１５（ｂｓ，１Ｈ）；７．４０（ｂｍ，２Ｈ）；７．３０（ｓ，１Ｈ）；６．９０（ｓ，１Ｈ）；６．６５（ｄ，２Ｈ）；４．５０−４．８０（ｍ，１Ｈ）；４．０５−４．２８（ｍ，１Ｈ）；２．０７−２．２４（ｍ，１Ｈ）；１．９５−２．０７（ｍ，１Ｈ）；１．６０−１．８９（ｍ，２Ｈ）；１．００−１．４５（ｍ，９Ｈ）。
【００９５】
中間体１５：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１−ピロリジンカルボキシレート
【化８】
2010516731.tif 000010
１−（ブロモメチル）−２−フルオロベンゼン（３０μｌ、０．２２０ｍｍｏｌ）を、１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−ピロリジンカルボキシレート（４５ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍｌ）中溶液に加えた。混合物を一晩室温にて撹拌した。反応を終えたことがＴＬＣにより示された後、酢酸エチルおよび水を加えた。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。粗物質を、シクロヘキサン／酢酸エチル（７：３〜６：４）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た（５１ｍｇ、８５％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：５．５６分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝１：１）：０．２８；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．５６−７．４８（ｍ，１Ｈ）；７．３７−７．２８（ｍ，１Ｈ）；７．２４−７．０６（ｍ，５Ｈ）；６．９３（ｄ，２Ｈ）；５．４５−５．３７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）；５．１５（ｓ，２Ｈ）；４．７３−４．６０（ｍ，１Ｈ）；４．５３−４．４５（ｍ，１Ｈ）；２．５８−２．４８（ｍ，１Ｈ）；２．３４−２．２５（ｍ，１Ｈ）；２．０９−１．９３（ｍ，２Ｈ）；１．２８−１．１３（ｂｒ．ｓ，９Ｈ）。
【００９６】
中間体１６：
１−［（４−ブロモフェノキシ）メチル］−２−フルオロベンゼン
【化９】
2010516731.tif 000011
プロシージャ１：４−ブロモフェノール（５０２．０８ｇ）のアセトン（７３２２ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５７０ｇ）、ついで、臭化ベンジル（５２３ｇ）を加えた。混合物を２時間加熱還流した。反応混合物を２５℃で冷却し、濾過し、濾過ケークをＭＴＢＥ（１０４６ｍＬ）で洗浄した。合した濾液を濃縮して、１０００ｍＬおよびＭＴＢＥ（４１８４ｍＬ）を加えた。混合物を１ＭのＮａＯＨ水溶液（１４６４ｍＬ）で、ついで、ブライン（１３００ｍＬ）で洗浄し、有機相を濃縮して、乾燥した。ＴＨＦ（１３００ｍＬ）を加え、溶媒を減圧下で除去して、標題化合物を得た（９０２．１ｇ）；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５４（ｔｄ，１Ｈ）；７．４６（ｄ，２Ｈ）；７．４２（ｍ，１Ｈ）；７．２３（ｍ，２Ｈ）；７．０１（ｄ，２Ｈ）；５．１３（ｓ，２Ｈ）。
【００９７】
プロシージャ２：４−ブロモフェノール（１９．２２ｇ、１１１ｍｍｏｌ）、オルトフルオロ臭化ベンジル（２０ｇ、１０５．８ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２１．９ｇ、１５８．４ｍｍｏｌ）のアセトン（２８０ｍｌ）中撹拌混合物を、６時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、濾過し、固体をＴＢＭＥ（４０ｍｌ）で洗浄した。合した濾液および洗浄液を減圧下で濃縮して、約４０ｍｌの最終容量にした。得られた溶液をＴＢＭＥ（１６０ｍｌ）で希釈し、１Ｍ水酸化ナトリウムおよびブラインで洗浄し、ついで、減圧下で濃縮して油を得、ゆっくりと固体化して標題化合物を得た（２８．９ｇ）。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ３−ｄ）．δ（ｐｐｍ）：５．１０（ｓ，２Ｈ），６．８６（ｍ，２Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｍ，１Ｈ）
【００９８】
中間体１７：
（２Ｓ）−２−（｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−５−オキソペンタン酸メチル
【化１０】
2010516731.tif 000012
プロシージャ１：金属マグネシウム（９０ｇ）の乾燥ＴＨＦ（６００ｍＬ）中撹拌懸濁液に、窒素雰囲気下室温にて、ヨウ素（０．３ｇ）を加えた。混合物を内部温度６４＋／−２℃に加熱した。１−［（４−ブロモフェノキシ）メチル］−２−フルオロベンゼン（６９３ｇ）のＴＨＦ（１５００ｍＬ）中溶液を、２バッチで加えた。最終的に、４５ｍＬを加えた。ついで、残った溶液（１４５５ｍＬ）を滴下した。添加後、反応物を１時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却した。この反応混合物を、ゆっくりと、市販の１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  （２Ｓ）−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（３００ｇ）の−６０℃に冷却したＴＨＦ（１５００ｍＬ）中溶液に、内部温度を−６０℃に保ちながら加えた。２時間で添加を完了した。反応混合物を、添加後さらに１５分間撹拌した。イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）を、温度を−６０℃に維持しながら滴下した。飽和塩化アンモニウム水溶液／飽和塩化ナトリウム水溶液（２／１；９００ｍＬ）の混合物を、−５０℃に保持しながら加えた。水（６００ｍＬ）を加えて、黄色沈殿物を溶解させた。有機相を分離し、１３％ＮａＣｌ水溶液（６００ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮して、乾燥した。ＥｔＯＡｃ（１５００ｍＬ）を加え、溶液を減圧下で蒸発させて、水を除去した。残渣を、シクロヘキサン／酢酸エチル（９０：１０〜８：２）で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して標題化合物を得た（２８７ｇ）；１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．９３（ｄ，２Ｈ）；７．５７（ｔｄ，１Ｈ）；７．４４（ｍ，１Ｈ）；７．２７（ｍ，３Ｈ）；７．１４（ｄ，２Ｈ）；５．２４（ｓ，２Ｈ）；４．０４（ｍ，１Ｈ）；３．６１（ｓ，３Ｈ）；３．０３（ｍ，２Ｈ）；１．９４（ｍ，２Ｈ）；１．３８（ｓ，９Ｈ）。
【００９９】
プロシージャ２：削ったマグネシウム（１２．７９ｇ．５３３ｍｏｌ）、微量のヨウ素および１，２−ジブロモエタンのＴＨＦ（８６．ｍｌ）中懸濁液に、７０−７５℃で、（４−ブロモフェニル（２−フルオロフェニル）メチルエーテル）（１００ｇ、３５５．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２１６．２５ｍｌ）中溶液を、約２時間にわたって加えた。混合物を７０−７５℃でさらに２時間加熱し、ついで、室温に冷却して、グリニャール試薬の溶液を得た。１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ）−５−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（４３．２５ｇ、１７７．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２１６．２５ｍｌ）中の溶液を、−６０℃に冷却し、グリニャール試薬の溶液を１時間にわたって加え、ついで、混合物を３時間−６０℃で撹拌した。イソプロパノール（４３．２５ｍｌ）を添加し、ついで、飽和塩化アンモニウム水溶液（８６．５ｍｌ）およびブライン（４３．２５ｍｌ）で洗浄し、ついで、混合物を室温に加温した。水（１７３ｍｌ）および５０％酢酸（５０ｍｌ）でｐＨ６−７にし、ついで、酢酸エチル（１２９．７ｍｌ）を加えた。層を分離し、水性酢酸エチルで抽出した（２×１２９．７ｍｌ）。合した有機層をブラインで洗浄し、ついで、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサン（２１６．２ｍｌ）と撹拌し、ついで、固体を濾過し、ヘキサンで洗浄した。得られた固体に、イソプロパノール（４３２．５ｍｌ）を加え、混合物を４５℃で１５分間撹拌し、ついで、５−１０℃に冷却し、２時間撹拌した。固体を濾過し、イソプロパノールで洗浄し、乾燥して、標題化合物を固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ３−ｄ）：δ（ｐｐｍ）：１．４２（ｓ，９Ｈ）；２．０４（ｍ，１Ｈ）；２．２８（ｍ，１Ｈ）；３．０３（ｍ，２Ｈ）；３．７４（ｓ，３Ｈ）；４．３７（ｍ，１Ｈ）；５．１９（ｂ，１Ｈ）；５．２０（ｓ，２Ｈ）；７．０２（ｄ，２Ｈ）；７．１１（ｔ，１Ｈ）；７．１７（ｔ，１Ｈ）；７．３３（ｍ，１Ｈ）；７．４８（ｔ，１Ｈ）；７．９４（ｄ，２Ｈ）
【０１００】
中間体１８：
（２Ｓ）−５−｛４−［（２−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル
【化１１】
2010516731.tif 000013
プロシージャ１：（２Ｓ）−２−（｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−５−オキソペンタン酸メチル（２４３ｇ）の乾燥ＤＣＭ（２４３０ｍＬ）中溶液に、０℃で、ＴＦＡ（４６１ｍＬ）を滴下した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した。溶媒および過剰のＴＦＡを減圧下で除去し、得られた暗色油をＥｔＯＡｃ（２×１２１５ｍＬ）と揮発させ、減圧下で一晩静置した。標題化合物（３９２ｇ）を赤色油として得、さらに精製することなく次の工程に用いた；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：８．１６（ｍ，２Ｈ）；７．６０（ｔｄ，１Ｈ）；７．４６（ｍ，１Ｈ）；７．３４（ｍ，２Ｈ）；７．２７（ｍ，２Ｈ）；５．３２（ｓ，２Ｈ）；５．２５（ｍ，１Ｈ）；３．７７（ｓ，３Ｈ）；３．５７（ｍ，２Ｈ）；２．６０（ｍ，１Ｈ）；２．３４（ｍ，１Ｈ）。
【０１０１】
プロシージャ２：（２Ｓ）−２−（｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝アミノ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−５−オキソペンタン酸メチル（４６ｇ、１０３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４３７ｍｌ）中溶液を、トリフルオロ酢酸（８７．４ｍｌ）で、０−５℃で処理し、ついで、室温に加温し、３時間撹拌した。溶液を０〜５℃に冷却し、水酸化ナトリウム溶液を最終的に約ｐＨ７にした。水層を分離し、ＤＣＭ（１３ｍｌ）で抽出し、ついで、合した有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ついで、減圧下で濃縮して、標題化合物を固体として得た（３３．３ｇ）。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ３−ｄ）：δ（ｐｐｍ）：２．３５（ｍ，２Ｈ）；２．９５（ｍ，１Ｈ）；３．１２（ｍ，１Ｈ）；３．７８（ｓ，３Ｈ）；４．８９（ｄｄ，１Ｈ）；５．１８（ｓ，２Ｈ）；７．００（ｄ，２Ｈ）；７．１０（ｍ，１Ｈ）；７．１６（ｍ，１Ｈ）；７．２９（ｍ，１Ｈ）；７．５（ｔ，１Ｈ）；７．８５（ｄ，２Ｈ）
【０１０２】
中間体１９：
（５Ｒ）−５−｛４−［（２−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン酸メチル
【化１２】
2010516731.tif 000014
プロシージャ１：（２Ｓ）−５−｛４−［（２−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル（３９２ｇ）をＥｔＯＡｃ（３１６０ｍＬ）中に、水素化容器中で溶解した。５％炭素担持白金（エンゲルハルトコード４４３７９、水分含量約５０％、１５．８ｇ）を加え、反応物を２ａｔｍの水素ガスで満たして、反応混合物を約１．５時間撹拌した。反応容器を減圧し、触媒をセライトにより濾過し、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍｌ、ついで、さらに２００ｍＬ）で洗浄した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６００ｍＬ）を濾液に加え、ついで、１３％ｗ／ｗＮａ２ＣＯ３水溶液（ｐＨ＝９まで、１０００ｍＬ）を得た。混合物を１０分間撹拌し、相を分離した。水相を除去し、ついで、有機層をブライン（６００ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を濃縮して、乾燥し、残渣を、シクロヘキサン／酢酸エチル（１：１）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１３３ｇ）を得た；１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５５（ｄｔ，１Ｈ）；７．４１（ｍ，１Ｈ）；７．３４（ｍ，２Ｈ）；７．２３（ｍ，２Ｈ）；６．９７（ｍ，２Ｈ）；５．１２（ｓ，２Ｈ）；４．０９（ｄｄ，１Ｈ）；３．８３（ｄｄ，１Ｈ）；３．６６（ｓ，３Ｈ）；２．９７（ｂｓ，１Ｈ）；２．０４（ｍ，２Ｈ）；１．９４（ｍ，１Ｈ）；１．５２（ｍ，１Ｈ）。
【０１０３】
プロシージャ２：（２Ｓ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル（３４ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２７２ｍｌ）中溶液を、オートクレーブ中に置き、トリフルオロ酢酸（７．２ｍｌ）で処理した。５％炭素担持白金触媒（１．７ｇ）をゆっくりと酢酸エチル（６８ｍｌ）と一緒に移し、反応物を、５０ｐｓｉ水素圧下室温にて５時間撹拌した。混合物をＨｙｆｌｏにより濾過し、酢酸エチル（２７２ｍｌ）で洗浄し、ついで、濾液を炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ついで、減圧下で濃縮し、残渣を乾燥して、標題化合物を粗油として得た（また、アンチ異性体を含む）。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ３−ｄ）：δ（ｐｐｍ）：１．７（ｍ，１Ｈ）；２．１８（ｍ，４Ｈ）；３．７５（ｓ，３Ｈ）；３．９１（ｍ，１Ｈ）；４．１５（ｍ，１Ｈ）；５．１３（ｓ，２Ｈ）；６．９６（ｄ，２Ｈ）；７．０７（ｍ，１Ｈ）；７．１５（ｍ，１Ｈ）；７．３０（ｍ，１Ｈ）；７．３８（ｄ，２Ｈ）；７．５（ｔ，１Ｈ）
【０１０４】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例８（ＥＮａ８）
（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド
【化１３】
2010516731.tif 000015
プロシージャ１：（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリン酸メチル（３２．５ｇ、９８．６ｍｍｏｌ）のメタノール（６５ｍｌ）中溶液を、０−１０℃に冷却した。アンモニアのメタノール（約１１．２Ｍ）中溶液を、１１時間にわたって４分割で加えた（１７５．４ｍｌ、４３．８ｍｌ、４３．８ｍｌ．４３．８ｍｌ）。ついで、反応物を１５−２０℃で２２時間撹拌した。アンモニアおよびメタノールを減圧下で除去し、ついで、トルエン（６５ｍｌ）を加え、混合物を６０−６５℃に加熱して溶液を得、これを減圧下で濃縮し、残渣を６０℃で乾燥した。トルエン（１３０ｍｌ）およびメタノール（０．３２ｍｌ）を残渣に加え、混合物を７０−７５℃に加熱した。ついで、得られた溶液を１５−２０℃に冷却し、１時間撹拌した。固体を濾過し、トルエンで洗浄し、４５−５０℃で乾燥して、標題化合物（２１．８ｇ）を固体として得た。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．３９（ｍ，１Ｈ）；１．８４（ｍ，１Ｈ）；２．０４（ｍ，２Ｈ）；３．５４（ｍ，１Ｈ）；４．０９（ｍ，１Ｈ）；５．１２（ｓ，２Ｈ）；６．９６（ｄ，２Ｈ）；７．１５（ｍ，１Ｈ）；７．２５（ｍ，２Ｈ）；７．３４（ｄ，２Ｈ）；７．４１（ｍ，２Ｈ）；７．５５（ｔ，１Ｈ）
【０１０５】
プロシージャ２：（５Ｒ）−５−｛４−［（２−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−プロリン酸メチル（１２７ｇ）をＭｅＯＨ（１０１６ｍＬ）中７ＮのＮＨ３溶液に加え、混合物を室温にて２４時間撹拌した。さらに、ＭｅＯＨ（６３ｍＬ）中の７ＮのＮＨ３溶液を加え、混合物をさらに１５時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＭｅＯＨ（６３５ｍＬ）を加えた。溶液を蒸発させて、乾燥し、得られた白色固体を減圧下で週末の間静置した。白色固体を、ＭＴＢＥ／トルエン  １：１（２５４ｍＬ）混合物中に２０℃で懸濁させ、１時間撹拌した。懸濁液を濾過し、固体をＭＴＢＥ（２５４ｍＬ）で洗浄した。白色固体を、減圧下で一晩４０℃で乾燥し、１２２．４ｇの物質を得た。この物質を、ＭＴＢＥ／トルエン  １：１（２４５ｍＬ）中に再び懸濁させ、室温にて１時間撹拌した。混合物を濾過し、固体をＭＴＢＥ（２４５ｍＬ）で洗浄した。得られた白色固体を、減圧下４０℃で一晩乾燥して、標題化合物を得た（１０９ｇ）。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５４（ｔｄ，１Ｈ）；７．４１（ｍ，１Ｈ）；７．３８（ｍ，２Ｈ）；７．３４（ｄ，２Ｈ）；７．２４（ｍ，２Ｈ）；７．１３（ｂｓ，１Ｈ）；６．９６（ｄ，２Ｈ）；５．１２（ｓ，２Ｈ）；４．０９（ｄｄ，１Ｈ）；３．５５（ｄｄ，１Ｈ）；３．２４（ｂｓ，１Ｈ）；２．０７（ｍ，１Ｈ）；２．００（ｍ，１Ｈ）；１．８５（ｍ，１Ｈ）；１．４０（ｍ，１Ｈ）
【０１０６】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例９（ＥＮａ９）：
（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド塩酸塩
【化１４】
2010516731.tif 000016
プロシージャ１：１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１−ピロリジンカルボン酸メチル（５１ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（０．９ｍｌ）およびメタノール（１ｍｌ）の混合物中の溶液に、アセチルクロライド（２８μｌ、２．５当量）を０℃で加えた。混合物を１．５時間振盪し、ゆっくりと室温に加温した。溶媒を蒸発させた後、残渣を、ジエチルエーテルでトリチュレートして、標題化合物を白色固体として得た（４２ｍｇ、定量）；キラルＨＰＬＣ：カラム：ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ  １０ｕｍ、２５０×４．６ｍｍ；移動相：Ａ：ｎ−ヘキサン；Ｂ：エタノール；勾配：等張性３０％Ｂ；流速：０．８ｍｌ／分；ＵＶ波長域：２００−４００ｎｍ；分析時間：２２分；保持時間：１２．０分。［α］Ｄ＝−３０．５°。ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：３１５［ＭＨ＋］，Ｃ１８Ｈ１９ＦＮ２Ｏ２として３１４；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１０．１９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．１３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．６０−７．７７（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｄｔ，１Ｈ），７．４３（ｄ，２Ｈ），７．３４−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｄ，１Ｈ），７．１８（ｄｄ，１Ｈ），７．０５（ｄ，２Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），４．４９−４．６０（ｍ，１Ｈ），４．１９−４．２８（ｍ，１Ｈ），２．１７−２．３８（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．１６（ｍ，１Ｈ），１．９２−２．０３（ｍ，１Ｈ）。
【０１０７】
プロシージャ２：（（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド）（１０９ｇ）をＤＣＭ（６５４ｍＬ）中に溶解し、Ｅｔ２Ｏ（６５４ｍＬ）を室温にて加えた。Ｅｔ２Ｏ（３８０．４ｍＬ）中ＨＣｌの１Ｎを室温にて滴下した。懸濁液を０℃に冷却し、この温度で１時間撹拌した。固体を濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し（２×３２７ｍＬ）、減圧下４０℃で一晩乾燥して、標題化合物の形態１結晶を得た（１２１．２４ｇ）。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１０．７２（ｂｓ，１Ｈ）；８．１０（ｂｓ，１Ｈ）；８．０８（ｓ，１Ｈ）；７．７２（ｓ，１Ｈ）；７．５６（ｔｄ，１Ｈ）；７．４９（ｄ，２Ｈ）；７．４３（ｑｄ，１Ｈ）；７．２５（ｍ，２Ｈ）；７．１０（ｄ，２Ｈ）；５．１７（ｓ，２Ｈ）；４．６１（ｄｄ，１Ｈ）；４．３０（ｄｄ，１Ｈ）；２．３２（ｍ，２Ｈ）；２．１６（ｍ，１Ｈ）；２．０２（ｍ，１Ｈ）
【０１０８】
プロシージャ３：（（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド）（１０ｇ、３１．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍｌ）中に溶解し、チャコール（１ｇ）と撹拌し、ついで、濾過し、ＤＣＭ（３０ｍｌ）で洗浄した。残渣を減圧下で濃縮し、約２０ｍｌのＤＣＭを除去した。エーテル（６０ｍｌ）を加え、ついで、エーテル（０．８４Ｎ、４０ｍｌ）中ＨＣｌの溶液を加え、ついで、混合物を２０−２５℃で３０分間撹拌し、ついで、０−５℃で冷却し、２時間撹拌した。固体を濾過し、エーテルで洗浄し、ついで、室温にて乾燥して、標題化合物の形態１結晶を得た（１０．２５ｇ）。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：２．０４（ｍ，１Ｈ）；２．１８（ｍ，１Ｈ）；２．３２（ｍ，２Ｈ）；４．３４（ｍ，１Ｈ）；４．６４（ｍ，１Ｈ）；５．１８（ｓ，２Ｈ）；７．１０（ｄ，２Ｈ）；７．２５（ｍ，２Ｈ）；７．４０−７．６０（ｍ，４Ｈ）；７．７７（ｓ，１Ｈ）；８．２４（ｓ，１Ｈ）；１１．０３（ｂ，１Ｈ）
【０１０９】
プロシージャ４：丸底フラスコにおいて、（（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド）（１．４ｇ、４．４５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１４ｍｌ）およびＭｅＯＨ（２．５ｍｌ）中溶液を、０℃で、ジエチルエーテル（１．１当量、４．８９ｍｌ）中ＨＣｌの１Ｍで処理した。すぐに沈殿が生じ、混合物を０℃で１時間撹拌した。ついで、混合物を乾燥ジエチルエーテル（１０ｍｌ）で希釈し、ついで、Ｇｏｏｃｈフィルター（気孔率４、直径５ｃｍ）で濾過した。ケークを、フィルター上で乾燥ジエチルエーテル（２×２０ｍｌ）で洗浄し、かくして得られた白色固体を丸底フラスコに移し、減圧下４０℃で２時間乾燥させて、ついで、室温にて１８時間乾燥させた。標題化合物の結晶の形態１である白色固体を得た（１．５１ｇ）。
【０１１０】
プロシージャ５：（（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド）（２５ｇ、７９．５ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（７５０ｍｌ）中に溶解し、チャコール（２．５ｇ）と撹拌し、ついで、濾過し、酢酸エチル（１２５ｍｌ）で洗浄した。濾液に、洗浄液、ＨＣｌのエーテル中溶液（１Ｎ、１０３ｍｌ）を３０分にわたって、２０−２５℃で加え、混合物を２０〜２５℃で３０分間撹拌し、ついで、０−５℃に冷却し、２時間撹拌した。固体を濾過し、酢酸エチル（２×７０ｍｌ）で洗浄し、ついで、室温にて乾燥して、標題化合物の形態１結晶を得た（２５．５ｇ）。
【０１１１】
実施例９の標題化合物の形態１の固有ピークおよび識別ピークを同定し、下記表に示す：
【表２】
2010516731.tif 000017
融点：２３０℃
【０１１２】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例１０（ＥＮａ１０）：
（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミドメタンスルホネート
【化１５】
2010516731.tif 000018
ＥｔＯＡｃ（６ｍｌ）を、（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリナミド（３００ｍｇ）に加え、これを６０℃で１時間加熱して化合物を溶解した。ついで、メタンスルホン酸（６５μｌ、１．０５当量）を溶液に加え、酸を加えるとすぐに溶液は曇った。ついで、これを温度サイクル（０−４０℃）に２日間付した。化合物を濾過により単離して白色固体として得、ＥｔＯＡｃで洗浄し、減圧下４０℃で週末の間乾燥して、３３５ｍｇの標題化合物を得た。
融点：１９２℃
【０１１３】
中間体２０
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ，５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化１６】
2010516731.tif 000019
（５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−Ｌ−ピロリン酸メチル（２．６ｇ、８．３５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍｌ）中溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．０ｇ、９．１８ｍｍｏｌ）を加えた。室温にて１時間撹拌した後、混合物を蒸発させ、残渣を、シクロヘキサン／酢酸エチル（９：１〜８５：１５）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３．２９ｇ、９６％）を白色泡沫体として得た；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：６．５５分；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４３４［Ｍ＋Ｎａ＋］，３１２［Ｍ−ＢＯＣ］；Ｃ２４Ｈ２９ＮＯ５として４１１；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．５２−７．４３（ｍ，４Ｈ）；７．４３−７．３７（ｍ，２Ｈ）；７．３７−７．３０（ｍ，１Ｈ）；６．９６（ｄ，２Ｈ）；５．０９および５．０６（ｓ，ｓ，２Ｈ）；４．９９−４．９３および４．５２−４．４４（ｍ，ｍ，１Ｈ）；４．７６−４．６８および４．３９−４．３２（ｍ，ｍ，１Ｈ）；３．８２（ｓ，３Ｈ）；２．３６−２．２６（ｍ，１Ｈ）；２．２６−２．１５（ｍ，１Ｈ）；２．１２−２．０１（ｍ，１Ｈ）；２．０１−１．８８（ｍ，１Ｈ）；１．４２および１．１７（ｓ，ｓ，９Ｈ）
【０１１４】
参考例２１：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−２−メチル−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１−ピロリジンカルボキシレート
【化１７】
2010516731.tif 000020
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ，５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（１．５２ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２７ｍｌ）中溶液に、−７８℃で、ＬｉＨＭＤＳ（４．０ｍｌ、４．０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を加えた。混合物を−２０℃に加温し、この温度で４０分間撹拌した。ついで、混合物を再び−７８℃に冷却し、ヨウ化メチル（３．１５ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をさらに３０分間同じ温度で撹拌した。処理した後、有機層を蒸発させた。粗物質を、シクロヘキサンおよび酢酸エチル（１：０〜９：１）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た（１．２３ｇ、７８％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：６．７６分；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４４８［Ｍ＋Ｎａ＋］；Ｃ２５Ｈ３１ＮＯ５として４２５；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．４５−７．３８（ｍ，４Ｈ）；７．３５（ｔ，２Ｈ）；７．２９（ｔ，１Ｈ）；６．９０（ｄ，２Ｈ）；５．０４および５．０１（ｓ，ｓ，２Ｈ）；４．９８および４．７９（ｄ，ｄ，１Ｈ）；３．７９（ｓ，３Ｈ）；２．５０−２．３５（ｍ，１Ｈ）；２．３４−２．２２（ｍ，１Ｈ）；１．８７−１．７３（ｍ，２Ｈ）；１．５８および１．５５（ｓ，ｓ，３Ｈ）；１．３７および１．０９（ｓ，ｓ，９Ｈ）。メチル基およびＣ５のプロトン間のＮＯＥを観測できた。
【０１１５】
中間体２２
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（シアノメチル）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化１８】
2010516731.tif 000021
参考例２１に記載のものと類似のプロシージャを用い、粗１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ，５Ｒ）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（３．２５ｇ、７．８９ｍｍｏｌ）およびブロモアセトニトリル（３．３ｍｌ、４０ｍｌのＴＨＦ中４７．３８ｍｍｏｌ）を用いて、標題化合物を調製した（２．７１ｇ、７６％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：６．４分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝７：３）：０．４０；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４７３［Ｍ＋Ｎａ＋］；Ｃ２６Ｈ３０Ｎ２Ｏ５として４５０；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．４６−７．２４（ｍ，７Ｈ）；６．９４（ｄ，２Ｈ）；５．１１（ｓ，２Ｈ）；４．９４−４．７８（ｍ，１Ｈ）；３．７８（ｓ，３Ｈ）；３．３３（ｄ，１Ｈ）；３．２２（ｄ，１Ｈ）；２．６６−２．５２（ｍ，１Ｈ）；２．４２−２．２９（ｍ，１Ｈ）；２．２９−２．１６（ｍ，１Ｈ）；１．９２−１．７７（ｍ，１Ｈ）；１．３８−０．９７（ｂｒ．ｓ，９Ｈ）；芳香族プロトンとメチルエステル間のＮＯＥが観測できた。
【０１１６】
中間体２３：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート
【化１９】
2010516731.tif 000022
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（シアノメチル）−５−｛４−［（フェニルメチル）オキシ］フェニル｝−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（２．７ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍｌ）中溶液に、ラネーニッケル（水中スラリー）を加え、混合物を、水素雰囲気下（７気圧）で１４時間撹拌した。触媒を濾過し、溶媒を減圧下で除去し、固体残渣をトルエン（３×２０ｍｌ）で処理し、減圧下で乾燥した。得られた乾燥白色固体をメタノール（４０ｍｌ）中で５時間、環化が完了するまで還流した。溶媒を減圧下で除去し、粗物質を、ジクロロメタン／メタノール（９５：５〜９０：１０）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を白色固体として得た（１．３５ｇ、６８％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：３．９１分；Ｒｆ（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）：０．４１；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：６６５［２Ｍ＋Ｎａ＋］，３５５［Ｍ＋Ｎａ＋］；Ｃ１８Ｈ２４Ｎ２Ｏ４として３３２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：９．１１（ｓ，１Ｈ）；７．７６および７．６６（ｓ，ｓ，１Ｈ）；７．４３（ｄｄ，２Ｈ）；６．６６（ｄｄ，２Ｈ）；４．８１−４．７０（ｍ，１Ｈ）；３．２９−３．２０（ｍ，１Ｈ）；３．１９−３．０９（ｍ，１Ｈ）；２．４７−２．２０（ｍ，２Ｈ）；２．０８−１．８５（ｍ，２Ｈ）；１．８４−１．７４（ｍ，１Ｈ）；１．６８−１．５２（ｍ，１Ｈ）；１．３３および１．０８（ｓ，ｓ，９Ｈ）
【０１１７】
参考例２４：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−メチル−１−ピロリジンカルボキシレート
【化２０】
2010516731.tif 000023
１，１−ジメチルエチル  （２Ｓ，５Ｒ）−２−（アミノカルボニル）−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチル−１−ピロリジンカルボキシレート（３００ｍｇ、０．９３６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１９４ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（４ｍｌ）中溶液に、１−（ブロモメチル）−２−フルオロベンゼン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｌｔｄ．）（１７０μｌ、１．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を一晩室温にて撹拌した。反応の完了がＴＬＣにより示された後、酢酸エチルおよび水を加えた。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、濾過し、蒸発させた。粗物質を、シクロヘキサン／酢酸エチル（８：２〜７：３）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た（３０６ｍｇ、７２％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：５．８８分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝１：１）：０．５１；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．６０−７．４９（ｔ，２Ｈ）；７．４６−７．３２（ｍ，２Ｈ）；７．２９−７．１５（ｍ，３Ｈ）；７．１３−７．０２（ｍ，１Ｈ）；６．９８−６．８８（ｍ，２Ｈ）；５．１１（ｓ，２Ｈ）；４．８７−４．６２（ｍ，１Ｈ）；２．４１−２．１６（ｍ，２Ｈ）；１．７８−１．６４（ｍ，１Ｈ）；１．６４−１．５６（ｍ，１Ｈ）；１．５２（ｓ，３Ｈ）；１．３２および１．０３（ｓ，ｓ，９Ｈ）
【０１１８】
中間体２５：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート
【化２１】
2010516731.tif 000024
方法ａ）：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート（８５０ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）および２−フルオロ臭化ベンジル（０．５ｍｌ、３．８３ｍｍｏｌ）から出発して、参考例４２に記載のものと同様のプロシージャを用いて標題化合物を調製した；Ｒｆ（ＨＰＬＣ）：５．７２分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝３：７）：０．４５；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４６３［Ｍ＋Ｎａ＋］。Ｃ２５Ｈ２９ＦＮ２Ｏ４として４４０；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．６１（ｄ，２Ｈ）；７．５６−７．４９（ｍ，１Ｈ）；７．３５−７．２８（ｍ，１Ｈ）；７．２０−７．１３（ｍ，１Ｈ）；７．１２−７．０５（ｍ，１Ｈ）；７．００−６．９４（ｄｄ，２Ｈ）；５．６４および５．６１（ｓ，ｓ，１Ｈ）；５．１４および５．１２（ｓ，ｓ，２Ｈ）；５．０８および４．８８（ｄ，ｄ，１Ｈ）；３．５８−３．４０（ｍ，１Ｈ）；３．３８−３．２４（ｍ，１Ｈ）；２．８２−２．５６（ｍ，１Ｈ）；２．４３−２．２１（ｍ，２Ｈ）；２．１５−２．００（ｍ，１Ｈ）；１．９５−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．４５および１．１７（ｓ，ｓ，９Ｈ）
【０１１９】
方法ｂ）：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（シアノメチル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（５１．３ｇ）のＭｅＯＨ（約５００ｍＬ）中溶液に、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（１３．０４ｇ）を加えた。得られた紫色溶液をＮａＢＨ４の３つのバッチ（それぞれ、８．２９ｇ、８．２９ｇおよび４．１４５ｇ；発熱）に、３０分毎に加えた。反応混合物を常温に冷却し、濾過し、得られた溶液を一晩加熱還流した。ついで、混合物を冷却し、濾過した。ＮＨ４Ｃｌ飽和溶液（５１３ｍＬ）を加え、減圧下でＭｅＯＨを蒸発させた。水相をＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）で抽出し、合した有機相を蒸発させて、乾燥し、粗物質を、シクロヘキサンおよび酢酸エチル（１：１，４：６，３：７）を用いるシリカゲルパッドのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（２２．１ｇ）を白色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ３−ｄ）δ（ｐｐｍ）：７．６１（ｍ，２Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｍ，２Ｈ），５．５８（ｓ，１Ｈ），５．１４（ｍ，２Ｈ），５．０４−４．８６（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．４２（ｍ，１Ｈ），３．３２（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．５８（ｍ，１Ｈ），２．３２（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｍ，１Ｈ），１．９３−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ），１．１７（ｓ，６Ｈ）
【０１２０】
中間体２６：
１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート
【化２２】
2010516731.tif 000025
１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート（７０ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１ｍｌ）中溶液に、０℃で、鉱油中ＮａＨ６０％ｗｔ分散液（１０ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）を加え；室温にて１５分間撹拌した後、ヨウドメタン（３０μｌ、０．４７７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温にて２．５時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、水（４ｍｌ）および酢酸エチル（１０ｍｌ）を加え、有機層を氷冷ブラインで洗浄し（３×１０ｍｌ），Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させた。粗物質を、シクロヘキサン／酢酸エチル（７：３）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を白色固体として得た（６３ｍｇ、８８％）；Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：５．９９分；Ｒｆ（シクロヘキサン：酢酸エチル＝１：１）：０．２８；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４７７［Ｍ＋Ｎａ＋］；Ｃ２６Ｈ３１ＦＮ２Ｏ４として４５４．１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．６６（ｄ，２Ｈ）；７．５６−７．４９（ｍ，１Ｈ）；７．３５−７．２５（ｍ，１Ｈ）；７．２０−７．１３（ｍ，１Ｈ）；７．１２−７．０４（ｍ，１Ｈ）；６．９７（ｄｄ，２Ｈ）；５．１４および５．１２（ｓ，ｓ，２Ｈ）；５．０２および４．８８（ｄ，ｄ，１Ｈ）；３．５２−３．４５および３．４１−３．２２（ｍ，ｍ，２Ｈ）；２．９６および２．９２（ｓ，ｓ，３Ｈ）；２．６７−２．５６および２．５３−２．４２（ｍ，ｍ，１Ｈ）；２．４０−２．２２（ｍ，２Ｈ）；２．０８−１．７９（ｍ，２Ｈ）；１．７７−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．４０および１．１６（ｓ，ｓ，９Ｈ）。
【０１２１】
中間体２８：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化２３】
2010516731.tif 000026
（５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−Ｌ−プロリン酸メチル（１７５ｇ）をＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボネート（１２７．５ｇ）のＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）中溶液を、約０℃に温度を保持しながら約１時間にわたって加えた。ついで、温度を２５℃にし、反応物を２５℃で２時間撹拌した。２８％ｗ／ｗラセミリンゴ酸（３５０ｍＬ）を加え、混合物を約１０分間撹拌した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（７００ｍＬ）で洗浄した。水相のｐＨは約８であった。有機相を濃縮して、小量をシクロヘキサン（３×３５０ｍＬ）で揮散させて、標題化合物を得た（２４０．８ｇ）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．５４（ｍ，１Ｈ）；７．５０（ｄ，２Ｈ）；７．３３（ｍ，１Ｈ）；７．１８（ｄｔ，１Ｈ）；７．１１（ｍ，１Ｈ）；６．９８（ｄ，２Ｈ）；５．１６（２ｓ，２Ｈ）；４．９７−４．４６（２ｂｍ，１Ｈ）；４．７３−４．３７（２ｔ，１Ｈ）；３．８３（ｓ，３Ｈ）；２．３２（ｍ，１Ｈ）；２．２１（ｍ，１Ｈ）；２．０８（ｍ，１Ｈ）；１．９６（ｍ，１Ｈ）；１．４３−１．１８（２ｂｓ，９Ｈ）
【０１２２】
中間体２９：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−（２−プロパン−１−イル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化２４】
2010516731.tif 000027
上記の粗１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレートを、２つのバッチに分けた。最初の１つ（１００ｇ）を乾燥ＴＨＦ（１０００ｍＬ）中に溶解し、ついで、臭化アリル（４２．２５ｇ）を加え、最終的に、混合物を−３０℃に冷却した。ＴＨＦ中１ＭのＬｉＨＭＤＳ（４３９ｍＬ）を約１．５時間で、約−３０℃に温度を保持しながら滴下した。水（１００ｍＬ）を加え、温度を０℃にした。飽和ＮＨ４Ｃｌ（５００ｍＬ）を、ついで、水（４００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を加えた。反応物を２５℃に加温し、水層を除去した。有機層を濃縮して、約７００ｍＬにし、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、標題化合物を油として得た（１１９．８ｇ）。第２のバッチ（１３５ｇ）を、乾燥ＴＨＦ（１３５０ｍＬ），臭化アリル（５７．０４ｇ）およびＴＨＦ中の１ＭのＬｉＨＭＤＳ（４７１．５ｍＬ）を用いて同様に反応させた。処理後、標題化合物を油として単離した（１７９ｇ）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５３（ｍ，１Ｈ）；７．３９（ｍ，３Ｈ）；７．２２（ｍ，２Ｈ）；６．９５（ｍ，２Ｈ）；５．８２（ｍ，１Ｈ）；５．１２（ｍ，４Ｈ）；４．８０−４．５９（２ｍ，１Ｈ）；３．７４−３．７１（２ｓ，３Ｈ）；３．０１−１．５２（ｍ，６Ｈ）；１．２９−０．９８（２ｓ，９Ｈ）
【０１２３】
中間体３０：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化２５】
2010516731.tif 000028
反応を、上記行程から得られた１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−（２−プロパン−１−イル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレートの２つのバッチで行った。最初のバッチ（１１９．８ｇ）を１０／１アセトン／水の混合物（１２００ｍＬ）中に溶解した。Ｋ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（４．７ｇ）を、ついで、数分後にＮＭＯ（４１．４ｇ）を加えた。混合物を７．５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１２００ｍＬ）で処理し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１２００ｍＬ）、ついで、飽和ＮａＨＣＯ３（１２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、セライト／活性チャコールパッドで濾過し、濃縮して低容量にした。ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を加え、溶液をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を加え、ＣＵＮＯフィルターで濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮して、乾燥して、標題化合物を得た（１３５ｇ）。第２のバッチ（１７９ｇ）を１０／１アセトン／水の混合物（１８００ｍＬ）中に溶解した。Ｋ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（５．５ｇ）を、ついで、数分後ＮＭＯ（５６．８ｇ）を加えた。混合物を一晩室温にて撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）で処理し、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２×９００ｍＬ）、ついで、飽和ＮａＨＣＯ３（９００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、セライトパッドで濾過し、濃縮して低容量にして、標題化合物を得た（２５０ｇ）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５４（ｍ，１Ｈ）；７．４０（ｍ，３Ｈ）；７．２２（ｍ，２Ｈ）；６．９５（ｍ，２Ｈ）；５．１１（ｍ，２Ｈ）；４．９５−４．２５（ｍ，３Ｈ）；３．７０（ｂｍ，３Ｈ）；３．５０−３．１０（ｍ，３Ｈ）；２．５０−１．５０（ｍ，６Ｈ）；１．３０−０．９５（４ｂｓ，９Ｈ）
【０１２４】
中間体３１：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−（２−オキソエチル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化２６】
2010516731.tif 000029
プロシージャ１：反応を、上記行程から得られた１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレートの２つの別個のバッチで行った。第１のバッチ（１３５ｇ）を、１０／１アセトン／水の混合物（２０００ｍＬ）に溶解し、ＮａＩＯ４（７４．５４ｇ）を加えた。溶液が褐色から黄色に変わり、懸濁液を形成した。混合物を一晩２５℃で撹拌した。さらにＮａＩＯ４（２×５．７３ｇ）を加え、さらに２４時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）、ついで、水（１０００ｍＬ）を加えた。混合した後、水相を除去した。有機相を濃縮して黄色油を得、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）と揮散させて、標題化合物を得た（１０９ｇ）。第２のバッチ（２５０ｇ）を１０／１アセトン／水の混合物（１９００ｍＬ）中に溶解し、ＮａＩＯ４（１０６ｇ）を加えた。溶液が褐色から黄色に変わり、懸濁液を形成した。混合物を６時間撹拌し、ついで、さらにＮａＩＯ４（８．１５ｇ）を加え、一晩撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）、ついで、水（２０００ｍＬ）を撹拌した。混合した後、水相を除去した。有機相を濃縮して黄色油を得、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と揮散させて、標題化合物を得た（１８０ｇ）。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：９．７２（ｍ，１Ｈ）；７．５６（ｍ，１Ｈ）；７．４２（ｍ，３Ｈ）；７．２４（ｍ，２Ｈ）；６．９９（ｍ，２Ｈ）；５．１４（ｍ，２Ｈ）４．９０−４．７９（２ｍ，１Ｈ）；３．８０−３．７７（２ｓ，３Ｈ）；３．０２（ｍ，１Ｈ）；２．８３（ｍ，１Ｈ）；２．５５−１．５５（ｍ，４Ｈ）；１．３２−１．０３（２ｓ，９Ｈ）
【０１２５】
プロシージャ２：１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−（２−プロパン−１−イル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（１５ｇ）のメタノール（２００ｍｌ）中溶液を、−１０℃に冷却した。オゾンガスを２時間溶液に通し、ついで、混合物を０〜５℃に加温した。ジメチルスルフィド（７．０４ｍｌ）を加え、混合物を１時間０〜５℃で撹拌し、ついで、室温にて３時間撹拌した。混合物を減圧下３５−５０℃で乾燥して、残渣を得た。これを水（４５ｍｌ）で処理し、ついで、ＤＣＭ（２×３７．５ｍｌ）で抽出した。合した抽出物を、６０−１２０メッシュシリカゲル（４５ｇ、ＤＣＭ（７５ｍｌ）および１０％シュウ酸（６ｍｌ）と４時間撹拌した。混合物を濾過し、ＤＣＭ（７５ｍｌ）で洗浄した。合した濾液を、水（７５ｍｌ）および１０％炭酸水素ナトリウム（７５ｍｌ）および水（７５ｍｌ）で洗浄した。ついで、溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、ついで、減圧下で乾燥して、標題化合物を黄褐色粘性塊として得た（１２．７ｇ）。
【０１２６】
中間体３２：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−［２−（メチルアミノ）エチル］−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化２７】
2010516731.tif 000030
反応を、上記行程から得られた１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−（２−オキソエチル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレートの２つの別個のバッチ（Ｉ４８、プロシージャ１）で行った。第１のバッチ（１０９ｇ）をＭｅＯＨ（４４０ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＨ中ＭｅＮＨ２の２Ｍ溶液（３４７ｍＬ）を加えた。ＡｃＯＨ（１１ｍＬ）を加えた。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（４９ｇ）を１０分後に滴下した。さらに、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１４．７ｇ）を２５℃で滴下した。反応混合物を、２８％のリンゴ酸水溶液（２００ｍＬ）、ついで、ＡｃＯＥｔ（１０００ｍＬ）でクエンチした。Ｋ２ＣＯ３を約ｐＨ９になるまで加えた。有機相を濃縮して、乾燥し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）中に再び溶解し、２０％クエン酸（４×３００ｍＬ）で抽出した。合した水相をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で処理し、固体Ｋ２ＣＯ３を約ｐＨ９になるまで加えた。相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥して、標題化合物を得た（８０ｇ）。第２のバッチ（１８０ｇ）をＭｅＯＨ（６２８ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＯＨ中ＭｅＮＨ２の２Ｍ溶液（３００ｍＬ）を加えた。ＡｃＯＨ（３１ｍＬ）を加えた。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（７８．８ｇ）を１０分後に０℃で滴下した。反応混合物を、飽和ＮＨ４Ｃｌ（８９０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（８９０ｍＬ）でクエンチした。相を分離し、水性をＥｔＯＡｃ（４×３００ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、乾燥し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）中に再び溶解し、２０％クエン酸（６×１５０ｍＬ）で抽出した。合した水相をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で処理し、固体Ｋ２ＣＯ３を、ｐＨ８／９になるまで加えた。相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥して、標題化合物を得た（７８ｇ）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５５（ｍ，１Ｈ）；７．４２（ｍ，３Ｈ）；７．２５（ｍ，２Ｈ）；６．９８（ｍ，２Ｈ）；５．１４（ｍ，２Ｈ）；４．８５−４．６９（２ｍ，１Ｈ）；３．７５−３．７３（２ｓ，３Ｈ）；２．３６（ｂｓ，３Ｈ）２．８０−２．２５（ｍ，２Ｈ）；２．２０−２．００（ｍ，３Ｈ）；１．７０（ｍ，１Ｈ）；１．３２−１．００（２ｓ，９Ｈ）
【０１２７】
中間体３３：
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（シアノメチル）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
【化２８】
2010516731.tif 000031
予め−６５℃に冷却した１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｓ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（４５ｇ）の乾燥ＴＨＦ（４５０ｍＬ）中溶液に、ＴＨＦ中の１ＭのＬｉＨＭＤＳ（１１５ｍＬ）を滴下した。得られた溶液を−３５℃で３０分間撹拌した。ついで、混合物を−６５℃に冷却し、ブロモアセトニトリル（２２ｍＬ）の乾燥ＴＨＦ（１８０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物をさらに３０分間同じ温度で撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液（６７５ｍＬ）でクエンチし、ＴＨＦを減圧下で蒸発させて、粗混合物をＥｔＯＡｃ（２×６７５ｍＬ）で抽出した。有機層を蒸発させて、粗物質を、シクロヘキサンおよび酢酸エチル（８：２）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（５１．３ｇ）を黄色粘性油として得た。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ）δ（ｐｐｍ）：７．５３（ｔ，１Ｈ），７．４３（ｄ，２Ｈ），７．２９−７．３７（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｔ，１Ｈ），７．０７−７．１３（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｄ，２Ｈ），５．１６（ｓ，２Ｈ），４．８８−４．９５（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．５２（ｄ，１Ｈ），３．１５（ｄ，１Ｈ），２．５７−２．７０（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．５０（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．３４（ｍ，１Ｈ），１．９２−２．０６（ｍ，１Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）
【０１２８】
中間体３４
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−［２−（メチルアミノ）エチル］−１，２−ピロリジンジカルボキシレートおよび１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート
【化２９】
2010516731.tif 000032
１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−（２−オキソエチル）−１，２−ピロリジンジカルボキシレート（Ｉ４８、９．５ｇ）のメタノール（３８ｍｌ）中溶液を、５−１０℃に冷却した。メタノール中メチルアミン（１２．７ｇの２４．７％溶液）を加え、混合物を１時間５−１０℃で撹拌した。酢酸（７．６ｍｌ）を、ｐＨが約７になるまで加え、ついで、温度を２０〜２５℃にした。トリアセトキシボロヒドリドナトリウム（６．４ｇ）を１時間にわたって加え、ついで、混合物を２０〜２５℃でさらに２時間撹拌した。メタノールを減圧下で希釈し、ついで、混合物を酢酸エチル（５０ｍｌ）および水（５０ｍｌ）で処理した。層を分離し、水層を再び酢酸エチルで抽出した（２５ｍｌ）。合した酢酸エチル溶液を、２８％クエン酸溶液（４×５０ｍｌ）で抽出し、ついで、合した水層を３０％炭酸ナトリウム溶液（１５０ｍｌ）で処理し、酢酸エチルをｐＨ９にした。水層を再び酢酸エチル（２５ｍｌ）で抽出し、ついで、合した酢酸エチル溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて、標題化合物を化合物１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレートを含有する粗物質（６．６ｇ）として得た。
ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：４５５［ＭＨ＋］（環化生成物）
【０１２９】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例１１（ＥＮａ１１）：
（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン
【化３０】
2010516731.tif 000033
プロシージャ１：反応を、中間体４９のプロシージャで得られた１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−［２−（メチルアミノ）エチル］−１，２−ピロリジンジカルボキシレートの２つの別個のバッチで行った。
第１のバッチ（８０ｇ）をＭｅＯＨ（３２０ｍＬ）中に溶解し、ＩＰＡ（１６０ｍＬ）中の５−６ＮのＨＣｌを加え、混合物を一晩２５℃で撹拌した。反応物を添加の間０℃に冷却しながら、１３％ＮＨ３水溶液（２００ｍＬ）を変換が完了するまで加えた。ＥｔＯＡｃ（３２０ｍＬ）、水（１６０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３飽和溶液（２４０ｍＬ）を加え、相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（６×８０ｍＬ）で抽出し、有機相を濃縮して、約４００ｍＬをブライン（１２０ｍＬ）で洗浄し、これをＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で逆抽出した。合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥して、粗物質を得た（５０ｇ）。
第２のバッチ（８１ｇ）をＭｅＯＨ（３２４ｍＬ）中に溶解し、ＩＰＡ中５−６ＮのＨＣｌ（１６２ｍＬ）を加え、混合物を一晩２５℃で撹拌した。さらに、ＩＰＡ中５−６ＮのＨＣｌ（２０ｍＬ）を加え、さらに６時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１６０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を、ついで、固体ＮａＨＣＯ３を約ｐＨ８まで加えた。相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で逆抽出した。合した有機相を濃縮して、約４００ｍＬにした。ＤＣＭ（３００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）を加え、相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥して、粗物質を得た（６７ｇ）。ＤＣＭ（１３５ｍＬ）を加え、一晩室温にて撹拌し、ついで、３時間加熱還流して、ついで、室温に冷却した。環化が不完全だったので、メタノール中２ＭのＮＨ３（１２．５ｍＬ）を加え、ついで、１３％ＮＨ３水溶液を加え、少なくとも２時間撹拌し、環化を完了させた。ブライン（１００ｍＬ）を加え、相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥して、粗物質（５８ｇ）を得た。
２個の粗物質を合し、クロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ２５／１）により精製して、標題化合物を得た（８５ｇ）。
１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７．５６（ｄｔ，１Ｈ）；７．４１（ｍ，３Ｈ）；７．２５（ｔ，１Ｈ）；７．２３（ｔ，１Ｈ）；６．９７（ｄ，２Ｈ）；５．１２（ｓ，２Ｈ）；４．１８（ｍ，１Ｈ）；３．２８（ｍ，１Ｈ）；３．２１（ｍ，１Ｈ）；２．７７（ｓ，３Ｈ）；２．５０（ｂｓ，１Ｈ）；２．１２（ｍ，１Ｈ）；２．０１（ｍ，１Ｈ）；１．９２（ｍ，１Ｈ）；１．７２（ｍ，２Ｈ）
【０１３０】
プロシージャ２：１−（１，１−ジメチルエチル）  ２−メチル  （２Ｒ，５Ｒ）−５−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−２−［２−（メチルアミノ）エチル］−１，２−ピロリジンジカルボキシレートおよび１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート（５．８ｇ）を、ＭｅＯＨ（２３．２ｍＬ）中に溶解し、ＩＰＡ中ＨＣｌ（１４．３％溶液，１７．７ｇ）を加え、混合物を２５℃で２４時間撹拌した。１３％ＮＨ３水溶液（１４．５ｍｌ）および混合物を４時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）および水（４０ｍＬ）を合し、相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ）で抽出し、ついで、合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させて、乾燥して、粗物質（５．５２ｇ）を得た。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ〜９：１  ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）により精製して、標題化合物を得た（２．１ｇ）。
【０１３１】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例１２（ＥＮａ１２）：
（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン４−メチルベンゼンスルホネート
【化３１】
2010516731.tif 000034
化合物（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン塩酸塩（５７．２ｇ）を、ＥｔＯＡｃ（２８６ｍＬ）中に懸濁し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２２９ｍＬ）を加えた。層を分離し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。塩を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３×５７ｍＬ）で洗浄した。
溶媒を減圧下で蒸発させ、粗物質をアセトン（２×１７１ｍＬ）で揮散させて、５２．７ｇの（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オンを得た。この化合物をアセトン（５２０ｍＬ）中に溶解し、溶液を４０℃に加熱した。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２７．８４ｇ）のアセトン（２６０ｍＬ）中溶液を、３０分間加えた。約５０ｍＬのこの溶液を添加した後に固体が沈殿した。混合物を４０℃で４．５時間撹拌し、ついで、室温に冷却した。固体を回収し、アセトン（３×２３０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で１６時間乾燥し、標題化合物の形態１結晶を得た（７０．１ｇ）。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：９．９０（ｂｓ，１Ｈ）；８．９１（ｂｓ，１Ｈ）；７．５５（ｍ，３Ｈ）；７．４８（ｍ，２Ｈ）；７．４３（ｍ，１Ｈ）；７．２５（ｍ，２Ｈ）；７．１１（ｍ，４Ｈ）；５．１８（ｓ，２Ｈ）；４．７３（ｄｄ，１Ｈ）；３．４１（ｍ，２Ｈ）；２．８２（ｓ，３Ｈ）；２．３６（ｍ，５Ｈ）；２．２９（ｓ，３Ｈ）；２．１１（ｍ，１Ｈ）
【０１３２】
実施例１２の標題化合物の形態１の固有ピークおよび識別ピークを同定し、下記表に示す：
【表３】
2010516731.tif 000035
融点：２３３℃
【０１３３】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例１３（ＥＮａ１３）：
（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン塩酸塩
【化３２】
2010516731.tif 000036
プロシージャ１：１，１−ジメチルエチル  （２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−６−オキソ−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−１−カルボキシレート（６１ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１ｍｌ）およびメタノール（０．１ｍｌ）中混合物に、０℃で、塩化アセチル（６０μｌ、０．８０６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ガム状固体をＥｔ２Ｏ（３×２ｍｌ）で処理して、白色固体を得た（５３ｍｇ）。Ｒｔ（ＨＰＬＣ）：３．７２分；ＭＳ：（ＥＳ／＋）ｍ／ｚ：３５５［ＭＨ＋］；Ｃ２１Ｈ２３ＦＮ２Ｏ２として３５４；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１０．５８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．８７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．５９−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．４７−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．３１−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｄ，２Ｈ），５．１７（ｓ，２Ｈ），４．８０−４．６６（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．３７（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｓ，３Ｈ），２．５９−２．２３（ｍ，５Ｈ），２．１３−２．０３（ｍ，１Ｈ）。
【０１３４】
プロシージャ２：上記粗（２Ｒ，５Ｒ）−２−（４−｛［（２−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−７−メチル−１，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−６−オン（７５．８５ｇ）を、Ｅｔ２Ｏ（２×１５０ｍＬ）と揮散させ、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中に溶解し、ＩＰＡ中５−６ＭのＨＣｌ（７６ｍＬ）を室温にて加えた。溶媒および過剰のＨＣｌを蒸発させて、ついで、Ｅｔ２Ｏ（２×７６ｍＬ）およびＤＣＭ（２×７６ｍＬ）と揮散させて、泡沫体を得た。泡沫体をＥｔ２Ｏ（６００ｍＬ）およびＤＣＭ（７６ｍＬ）中に懸濁させ、一晩室温にて撹拌した。最終的に、固体を回収し、Ｅｔ２Ｏ／ＤＣＭ  ８／１混合物（３×７６ｍＬ）で洗浄し、減圧下４０℃で一晩乾燥させて、標題化合物を得た（７９ｇ）。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１０．５８（ｂｓ，１Ｈ）；８．８７（ｂｓ，１Ｈ）；７．５５（ｍ，３Ｈ）；７．４３（ｍ，１Ｈ）；７．２５（ｍ，２Ｈ）；７．１１（ｄ，２Ｈ）；５．１７（ｓ，２Ｈ）；４．７３（ｍ，１Ｈ）；３．４０（ｍ，２Ｈ）；２．８１（ｓ，３Ｈ）；２．６０−２．２０（ｍ，５Ｈ）；２．０８（ｍ，１Ｈ）
【０１３５】
中間体３５
２−（２，３−ジクロロフェニル）−３−エトキシ−４−フルオロ−２−ブテンニトリル
２，３−ジクロロフェニルアセトニトリル（４５ｋｇ、２４１．９ｍｏｌ）のメタノール（９０リットル）中懸濁液に、３０％ｗ／ｗナトリウムメトキシドのメタノール溶液（１１３．５ｋｇ、６３０．６ｍｏｌ）、ついで、フルオロ酢酸エチル（２９．７ｋｇ、２８０．１ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を一晩撹拌し、生成物を水（３５０リットル）中塩酸（６３．７ｋｇ、６４８ｍｏｌ）から沈殿させた。スラリーを濾過し、固体を酢酸エチル中に溶解し、ブライン溶液で洗浄した。酢酸エチル（１００リットル）を減圧蒸留により除去した。ＤＭＦ（７０リットル）を加え、蒸留を続けて残った酢酸エチルを除去した。
得られたＤＭＦ中のエノールに炭酸カリウム（２０ｋｇ、１４５ｍｏｌ）を１０分にわたって加えた。カリウムエノレートのアルキル化を、ヨウ化エチル（３７．７ｋｇ、２４１．９ｍｏｌ）を用いて７０℃で１．２５時間で行った。反応混合物を、トルエン（１４０リットル）および水（７５リットル）間で分配し、トルエン相を水（５０リットル）で洗浄した。トルエン（７５リットル）を、蒸留により除去して、粗生成物をトルエン溶液として得た。
【０１３６】
中間体３６
（＋／−）２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン
グアニジン塩酸塩（２５．４ｋｇ、２６６ｍｏｌ）のメタノール（６０リットル）中溶液に、３０％ｗ／ｗナトリウムメトキシドのメタノール中溶液（４９．２ｋｇ、２７３．３ｍｏｌ）を加えた。懸濁液を５５℃±２℃に加熱した。２−（２，３−ジクロロフェニル）−３−エトキシ−４−フルオロ−２−ブテンニトリルのトルエン溶液を、４５分間にわたって加え、得られた混合物を４時間煮沸し、ついで、冷却して水（２３０リットル）中でクエンチした。固体沈殿物を、メタノール（２５リットル）で５回洗浄して、ラセミ体を灰白色固体として得た（２６．３ｋｇ、２，３−ジクロロフェニルアセトニトリルから３８％収率）。
【０１３７】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例１４（ＥＮａ１４）：
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン
プロシージャ１：
フラスコ中のラセミ（＋／−）２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン（０．８００６ｇ）に、（−）−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸・Ｈ２Ｏ（１．０４９０ｇ）を加えた。無水エタノール（２７．７ｍｌ）を加え、混合物を加温し、得られた溶液を一晩静置した。ついで、母液を白色結晶性固体からデカントし、これを形成した。固体を減圧オーブン中５０℃で一晩乾燥した。得られた結晶性物質（０．９５３４ｇ）の収率は約５２％であった。
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン（「Ｒ（−）エナンチオマー」）とＳ（＋）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン（「Ｓ（＋）エナンチオマー」）の比は８１：１９であった。
最初の溶解行程１で得られた結晶性物質（０．８７９６ｇ）を、加温条件下で、無水エタノール（３６ｍｌ）中に溶解した。溶液を一晩冷却した。母液をデカントした。得られた白色結晶性固体を、減圧オーブン中５０℃で一晩乾燥した；収率（０．６１１１ｇ）６９％。Ｒ（−）エナンチオマーとＳ（＋）エナンチオマーの比は９４：６％であった。
行程２からの再結晶物質（０．５２２７ｇ）を、加温条件下で無水エタノール（２５ｍｌ）中に溶解した。得られた溶液を一晩冷却した。ついで、母液をデカントした。残った白色固体をエタノール（１ｍｌ）で洗浄し、減圧オーブン中５０℃で一晩乾燥した；収率（０．３９７ｇ）７６％。Ｒ（−）エナンチオマーとＳ（＋）エナンチオマーの比は９９．８：０．２であった。
行程３からの結晶性塩を、２ＭのＮａＯＨ溶液で塩基性化した。かくして、蒸留水を塩に加えた。得られたスラリーを室温にて撹拌した。ついで、２ＭのＮａＯＨを、ｐＨ１２が維持されるまで加えた。得られた懸濁液を１時間静置した。ついで、固体を濾過し、水で洗浄した。湿った固体を減圧下５０℃で乾燥して、白色固体を得た。
【０１３８】
プロシージャ２：
フラスコ中のラセミ（＋／−）２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジン（７８．８３ｇ）に、（−）−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸・Ｈ２Ｏ（１０３．２７ｇ）を加え、ついで、無水エタノール（２７２７ｍｌ）を加えた。混合物を全ての固体が溶液となるまで加熱還流した。溶液を１８時間にわたって室温に冷却した。形成した白色固体を濾過し、減圧下で３時間５０℃で乾燥した。乾燥した固体を、無水エタノールから２回（２×１５００ｍｌ）再結晶した。得られた白色結晶性固体を、減圧下５０℃で６時間乾燥した。得られた乾燥結晶性物質（２２ｇ）のＲ（−）エナンチオマーとＳ（＋）エナンチオマーの比は、＞９９：１であった。
再結晶からの母液を減圧下で濃縮し、ついで、２ＭのＮａＯＨ（水溶液）で処理して、塩を塩基性にした。かくして、水（１００ｍｌ）を塩（９８ｇ）に加え、ついで、２ＭのＮａＯＨ溶液（２５０ｍｌ）を５０ｍｌに分けて加え、この間懸濁液を強く撹拌した。懸濁液を２時間ｐＨ１２に保持した。白色固体を濾過し、ｐＨ７が維持されるまで水（５×５０ｍｌ）で洗浄した。固体を減圧下５０℃で４時間乾燥して、遊離塩基（３９ｇ）を得た。乾燥遊離塩基のＲ（−）エナンチオマーとＳ（＋）エナンチオマーの比は、３０：７０であった。
ついで、Ｓ（＋）エナンチオマーに富む遊離塩基を再利用して、ラセミ化した。かくして、トルエン（５００ｍｌ）を遊離塩基（３９ｇ）に加える。混合物を２４時間加熱還流し、ついで、室温に冷却した。褐色固体を濾過し、これを減圧下５０℃で３時間加熱した。得られた乾燥物質（３３ｇ）のＲ（−）エナンチオマー：Ｓ（＋）エナンチオマーの比は、５０：５０であった。
ついで、このラセミ体を行程１に付して、さらに＞９９％エナンチオマー純度のＲ（−）エナンチオマーを得た。合した塩を２ＭのＮａＯＨ溶液で塩基性化した。かくして、蒸留（２５０ｍｌ）を塩（８６．６ｇ）に加え、スラリーを室温にて撹拌した。ついで、２ＭのＮａＯＨ（１５４ｍｌ）を、５０ｍｌ部分で加え、ついで、２部分を、ｐＨ１２を保持されるまで加えた。得られた懸濁液を１時間静置し、ついで、固体を濾過し、水（７×１００ｍｌ）で洗浄した。湿った固体を、減圧下５０℃で乾燥して、このバッチで、淡黄色固体を得た（３７．９ｇ）。しかしながら、他のバッチは、白色固体であった。Ｒ（−）エナンチオマーとＳ（＋）エナンチオマーの比は、９９．７：０．３であった。
光学純度＝９９．２％
【０１３９】
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンのプロパティ
１．  化学／物理化学的特性
見た目：白色固体
融点：２１５−２１６℃
分子式：Ｃ１１Ｈ９Ｃｌ２ＦＮ４
分子量：２８７．１３
旋光度：［α］２５．５Ｄ  ＝  −５６．７５’（ｃ＝０．５３，ＥｔＯＨ）
［α］２５．５Ｈｇ５４６  ＝  −７２．０７’（ｃ＝０．５３，ＥｔＯＨ）
旋光度
Ｓ（＋）エナンチオマー：［α］２５．５Ｄ＝＋５９．２０’（ｃ＝０．５２，ＥｔＯＨ）
［α］２５．５Ｈｇ５４６＝＋７０．００’（ｃ＝０．５２，ＥｔＯＨ）
ＮＭＲデータ：
７．６５（ｄｄ，１Ｈ，４’）；７．３９（ｔ，１Ｈ，５’）；７．２３（ｄｄ，１Ｈ，６’）；６．１５（ｓ，２Ｈ，２−ＮＨ２）；５．９８（ｓ，２Ｈ，４−ＮＨ２）；４．８８（カルテット（ｑ），１Ｈ，ＣＨ２Ｆ）；４．６４（ｑ，１Ｈ，ＣＨ２Ｆ）
【０１４０】
代表的なＮａチャンネル遮断剤実施例１５（ＥＮａ１５）：
Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンメタンスルホネート
メタンスルホン酸（０．１５８ｍｌ、０．２３４ｇ、２．３９×１０−３ｍｏｌ）を、Ｒ（−）−２，４−ジアミノ−５−（２，３−ジクロロフェニル）−６−フルオロメチルピリミジンの乾燥エーテル（２１ｍｌ）中懸濁液に加えた。得られた混合物を室温にて２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、乾燥エーテル（５ｍｌ）でよく洗浄し、吸引乾燥し、減圧下で室温にて乾燥した。
収率    ０．９１１ｇ（９３％）
Ｍ．ｐ．    ２４５−２４７℃
【０１４１】
生物学的アッセイ
ＮＫ１受容体アンタゴニストとしての化合物の能力は、Ｒｕｐｎｉａｋ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｅｕｒ．Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４に記載されているジャービル・フット・タッピングモデル（ｇｅｒｂｉｌｌ  ｆｏｏｔ  ｔａｐｐｉｎｇ  ｍｏｄｅｌ）を使用して測定できる。
【０１４２】
化合物は、経口で投与され、４時間後、ＮＫ１アゴニスト（例えば、デルタ−アミノバレリル６［Ｐｒｏ９，Ｍｅ−Ｌｅｕ１０］−サブスタンスＰ（７−１１））（５μＬ中３ｐｍｏｌ  ｉｃｖ）を、動物の脳室に直接注入した。ＮＫ１アゴニスト（例えば、デルタ−アミノバレリル６［Ｐｒｏ９，Ｍｅ−Ｌｅｕ１０］−サブスタンスＰ（７−１１））により誘発される後足タッピングの持続時間は、連続して３分間ストップウォッチを使用して記録した。ＮＫ１アゴニスト（例えば、デルタ−アミノバレリル６［Ｐｒｏ９，Ｍｅ−Ｌｅｕ１０］−サブスタンスＰ（７−１１））により誘発される５０％のタッピング阻害に必要とされる、ｍｇ／ｋｇとして表される試験化合物の投与量は、ＥＤ５０値として示される。別法として、化合物は、皮下または腹腔内投与できる。
【０１４３】
本発明の化合物の電位依存性ナトリウムチャネルサブタイプＮａＶ１．３を変調する能力は、下記のアッセイによって決定されうる。
【０１４４】
細胞生物学
ｈＮａＶ１．３チャネルを発現している安定な細胞系統は、リポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）トランスフェクション法を用いて、ＣＨＯ細胞をｐＣＩＮ５−ｈＮａｖ１．３ベクターでトランスフェクトすることによって作成された。ｐＣＩＮ５は、ＣＭＶプロモーターの下流でネオマイシン選択性マーカーｃＤＮＡに連結している組み換えｃＤＮＡによって（詳細は、Ｃｈｅｎ  ＹＨ，Ｄａｌｅ  ＴＪ，Ｒｏｍａｎｏｓ  ＭＡ，Ｗｈｉｔａｋｅｒ  ＷＲ，Ｘｉｅ  ＸＭ，Ｃｌａｒｅ  ＪＪ．Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  ｓｏｄｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０００  Ｄｅｃ；１２，４２８１−９参照のこと）、全てのネオマイシン耐性細胞を組み換え蛋白を発現するようにする哺乳動物細胞系統の作成のためのビシストロンベクターである（Ｒｅｅｓ  Ｓ．，Ｃｏｏｔｅ  Ｊ．，Ｓｔａｂｌｅ  Ｊ．，Ｇｏｏｄｓｏｎ  Ｓ．，Ｈａｒｒｉｓ  Ｓ．＆Ｌｅｅ  Ｍ．Ｇ．（１９９６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２０，１０２−１１２参照）。細胞を、１０％胎仔ウシ血清、１％Ｌ−グルタミン、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％非必須アミノ酸、２％Ｈ−Ｔサプリメントおよび１％Ｇ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有するＩｓｃｏｖｅ修飾Ｄｕｌｂｅｃｃｏ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養し、空気中５％ＣＯ２を含有する湿潤環境において３７℃で維持した。細胞を継代および採取のために、Ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＴ１７５培養フラスコから遊離させた。
【０１４５】
細胞調製
細胞をＴ７５フラスコ中、６０〜９５％密集度まで生育させた。生育培地を除去し、１．５ｍｌの温めた（３７℃）Ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１５０４０−０６６）で６分間インキュベートすることによって、細胞を浮上させた。浮上した細胞を１０ｍｌのＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１４０４０−１３３）中に懸濁した。ついで、細胞懸濁を１０ｍｌ遠心管に入れ、７００ｒｐｍで２分間遠心分離した。遠心分離後、上清を除去し、細胞ペレットを３ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁した。
【０１４６】
電気生理学
ＩｏｎＷｏｒｋｓＨＴ平面アレイ電気生理学テクノロジー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．）を用いて、室温（２１〜２３℃）で電流を記録した。刺激プロトコールおよびデータ取得は、マイクロコンピューター（Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ  ４）を用いて行った。平面電極ホール抵抗（Ｒｐ）を決定するために、１０ｍＶ、１６０ｍｓ電位差を各ホールに与えた。これらの測定は、細胞添加前に実施した。細胞添加後、細胞内アクセスを達成するための抗生物質（アンフォテリシン）循環の前に、シール試験を行った。全ての実験において、１６０ｍｓ過分極（１０ｍＶ）プレパルス２００ｍｓを与えることによってリーク・サブトラクションを実施した後に、リーク・コンダクタンスを測定するための試験パルスを与えた。−９０ｍＶの保持電位から０ｍＶへの段階的試験パルスを２０ｍｓ間与え、１０Ｈｚの周波数で１０回繰り返した。全実験において、試験パルスプロトコールは、化合物の不在下（プレリード（ｐｒｅ−ｒｅａｄ））および存在下（ポストリード（ｐｏｓｔ−ｒｅａｄ））において行った。プレリードおよびポストリードは、化合物添加、続いて、３〜３．５分インキュベーションによって隔てられた。
【０１４７】
溶液および薬物
細胞内溶液は、下記のものを含有していた（ｍＭ単位）：グルコン酸Ｋ  １００、ＫＣｌ  ４０ｍＭ、ＭｇＣｌ２  ３．２、ＥＧＴＡ  ３、ＨＥＰＥＳ  ５、ｐＨ７．２５に調整。アンフォテリシンは、３０ｍｇ／ｍｌストック溶液として調製され、最終的な使用時の濃度０．１ｍｇ／ｍｌに内部バッファー溶液で希釈された。外部溶液は、ＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり、下記のものを含有していた（ｍＭ単位）：ＣａＣｌ２  ０．９０、ＫＣｌ  ２．６７、Ｋ３ＰＯ４  １．４７、ＭｇＣｌ２  ０．５０、ＮａＣｌ  １３８、Ｎａ３ＰＯ４  ８．１０、ｐＨ７．４。化合物は、ＤＭＳＯ中、１０ｍＭストック溶液として調製され、ついで、１：３連続希釈を行った。最終的に、化合物は、外部溶液中に１：１００で希釈され、その結果、最終ＤＭＳＯ濃度は１％であった。
【０１４８】
データ分析
記録を分析し、さらなる分析から不適当な細胞を排除するために、化合物の不在下におけるシール抵抗（＞４０ＭΩ）およびピーク電流振幅（＞２００ｐＡ）の両方を用いてフィルターにかけた。薬物添加前および薬物添加後間の対の比較を用いて、各化合物の阻害効果を決定した。第１の脱分極パルスによって導かれる電流を５０％阻害するのに必要な化合物の濃度（緊張性（ｔｏｎｉｃ）ｐＩＣ５０）は、Ｈｉｌｌ方程式を濃度応答データに当て嵌めることによって決定された。さらに、化合物の使用依存性阻害特性は、第１０の脱分極パルス対第１の脱分極パルスにおける化合物の効果を評価することによって決定された。第１パルスに対する第１０パルスの比は、薬物の不在下および存在下で計算され、％使用依存性阻害が計算された。データは、緊張性ｐＩＣ５０と同じ方程式に当て嵌め、１５％阻害をもたらす濃度（使用依存性ｐＵＤ１５）を計算した。
【０１４９】
臨床前実験
ラットＭＥＳＴモデル
実験準備
この研究は、ｔｈｅ  Ｈｏｍｅ  Ｏｆｆｉｃｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｐｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎｉｍａｌｓ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）Ａｃｔ  １９８６およびＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ倫理規範に従って行った。雄のＣＤラット（１００−１４５ｇ）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，ＵＫから入手した。動物を、グループで収容し（ケージあたり６匹）、食餌（標準齧歯類食；Ｈａｒｌａｎ，ＵＫ）および水に自由にアクセス可能にし、１２時間明／暗サイクルに置いた（０７００ｈでの光）。すべてのケースで、ＧＳＫへの到着と試験の間を少なくとも１週間おいた。
【０１５０】
実験プロトコール
動物に、適当な投与量、経路および予備処理時間で試験化合物を投与し、ホームケージに戻した。試験は、住居用に用いられたものとは別個の部屋で行った。試験は、０．３秒の間隔で一定の電流（５０Ｈｚ、正弦波）を提供し、１〜３００ｍＡ間で完全に調節可能であるＨｕｇｏ  Ｓａｃｈｓ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｋ刺激装置を用いて緊張性後肢伸筋発作の閾値を測定することを含む。刺激を、角膜電極により与えた（Ｓｔｅａｎ  ＴＯ，Ａｔｋｉｎｓ  ＡＲ，Ｈｅｉｄｂｒｅｄｅｒ  ＣＡ，Ｑｕｉｎｎ  ＬＰ，Ｔｒａｉｌ  ＢＫ，Ｕｐｔｏｎ  Ｎ．（２００５）Ｂｒ  ＪＰｈａｒｍａｃｏｌ．１４４（５）：６２８−３５）。発作閾値を、Ｋｉｍｂａｌｌらの「アップ・アンド・ダウン」法（１９５７）（Ｋｉｍｂａｌｌ  ＡＷ，Ｂｕｒｎｅｔｔ  ＷＴ  Ｊｒ，Ｄｏｈｅｒｔｙ  ＤＧ．（１９５７）  Ｒａｄｉａｔ  Ｒｅｓ．７（１）：１−１２）を用いて測定した。各々のグループで最初に試験した動物を、発作を引き起こす閾値に近いと思われる電流で刺激した。緊張性発作が誘発されない場合、グループの次の動物には、５ｍＡ高い刺激を与えた。緊張性発作が誘発された場合、次の動物には５ｍＡ低い刺激を与えた。これを対照（ビヒクル）群のすべての動物で繰り返した。ナトリウムチャンネル遮断剤で処理されたグループでは、１０〜３０ｍＡのステップを用いた。
サテライトアニマル（ｎ＝３／グループ）は、試験群として同じ薬剤または組み合わせを受け、投与後適当な期間で処分した。血液および脳サンプルがこれらの区分における薬剤濃度の分析に供された。
【０１５１】
薬剤および物質
全ての投与量は塩基として計算した。ＥＮａ９およびＥＮａ１３を、２％ｖ／ｖＤＭＳＯ／セイラインビヒクル中１ｍｌ／ｋｇで、試験の３０分前に皮下（ｓ．ｃ．）投与した。ＥＮａ７およびＥＮａ１４を、１％ｗ／ｖメチルセルロース／水ビヒクル中２ｍｌ／ｋｇで、試験の６０分前に経口（ｐ．ｏ．）投与した。化合物ＥＮＫ６を、試験の６０分前に腹腔内（ｉ．ｐ．）で、または試験の１５分前にｓ．ｃ．経路で投与した。両方の場合において、ＥＮＫ６はセイラインに溶かした。
【０１５２】
データ分析
発作の誘発を、各々の動物に対して在る（＋）または無し（０）のいずれかでスコアするオール・オア・ナッシング効果として測定した。個々の処理群のデータを、各々用いた電流レベルでの＋および０の数で記録し、ついで、この情報を、Ｋｉｍｂａｌｌらの方法（１９５７）に従って、ＣＣ５０値（５０％の動物が発作行動を示すのに必要とされる電流）＋標準誤差を計算するのに用いた。薬剤効果を、ＣＣ５０における％変化として計算した。薬剤処理群と適当なビヒクル処理群間の有意差を、Ｌｉｔｃｈｆｉｅｌｄ  ａｎｄ  Ｗｉｌｃｏｘｏｎの方法（１９４９）に従って評価した。ナトリウムチャンネル遮断剤単独またはＥＮＫ６との組み合わせ間の違いの統計学的有意性を、スチューデント試験を用いて評価した。
【０１５３】
ＥＮａ９／ＥＮＫ６組み合わせ
ＥＮａ９は、３ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．の投与量で、ＭＥＳＴにおいて発作閾値の小さいが有意な増加が示された一方、低用量の１ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．では、不活性であった。ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、単独で投与した場合、発作閾値に影響を与えなかった。しかしながら、ＥＮＫ６の存在下で、ＥＮａ９は、低用量の１ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．で有意に発作閾値を増加させ（ＣＣ５０（ｍＡ）の１３３％増加）、３ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．では有意に大きな増加を示した（ＣＣ５０（ｍＡ）の３２３％増加）（図１）。
【０１５４】
図１
【化３３】
2010516731.tif 000037
【０１５５】
図１：ラットＭＥＳＴモデルにおけるＥＮａ９およびＥＮＫ６の効果。ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ、６０分ｐｔｔ）；ＥＮａ９（１．０および３．０ｍｇ／ｋｇ、ｓｃ、３０分ｐｔｔ）。＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対応するビヒクル、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験。＃＃＃ｐ＜０．００１Ｖｓ対応するビヒクル／ＥＮａ９群、ｔ−試験。
【０１５６】
ＥＮａ９の血中および脳内濃度の上昇は、ＥＮＫ６の存在下で観察されず（表１）、これは、ＰＫ相互作用によりＰＤ効果の増加が説明されないことを示唆している。
【表４】
2010516731.tif 000038
【０１５７】
表１：サテライト動物（＊ｎ＝１を除いてグループあたりｎ＝２）におけるＥＮａ９およびＥＮＫ６の血中および脳内濃度。曝露における小さい差異は、動物間差異内である。
【０１５８】
ＥＮａ１３／ＥＮＫ６組み合わせ
ＥＮａ１３は、３ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．の投与量で、発作閾値の強く有意な増加を与えることが見出された一方、低用量の１ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃでは不活性であった。ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は、単独で投与した場合、発作閾値に効果を与えなかった。ＥＮＫ６が存在する場合、ＥＮａ１３は、１ｍｇ／ｋｇで発作閾値を有意に増加し（ＣＣ５０（ｍＡ）の１１８％）、また、３ｍｇ／ｋｇで発作閾値を有意に増加した（ＣＣ５０（ｍＡ）の１２９％）（図２）。
【０１５９】
図２
【化３４】
2010516731.tif 000039
【０１６０】
図２：ラットＭＥＳＴモデルにおけるＥＮａ１３およびＥＮＫ６の効果。ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ、６０分ｐｔｔ）；ＧＳＫ１０６１４３６Ａ（１．０＆３．０ｍｇ／ｋｇ、ｓｃ、３０分ｐｔｔ）。＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対応するビヒクル、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験；＃＃＃ｐ＜０．００１Ｖｓ対応するビヒクル／’ＥＮａ１３、ｔ−試験。
【０１６１】
ＥＮａ１３の濃度の上昇は、ＮＫ１アンタゴニストの存在下で観察されず（表１）、これは、ＰＫ相互作用によりＰＤ効果の増加が説明されないことを示唆している。
【表５】
2010516731.tif 000040
【０１６２】
表１：サテライト動物（＊ｎ＝１を除いてグループあたりｎ＝２）におけるＥＮａ９およびＥＮＫ６の血中および脳内濃度。曝露における小さい差異は、動物間差異内である。
表２：サテライト動物（＊ｎ＝１を除いてグループあたりｎ＝２）におけるＥＮａ１３およびＥＮＫ６の血中および脳内濃度。ナトリウムチャンネル遮断剤の濃度の差異は、動物間差異内である。
【０１６３】
ＥＮａ７／ＥＮＫ６組み合わせ
ＥＮａ７を、ラットに試験の６０分前に経口投与し、一方、ＥＮＫ６を試験の１５分前に皮下投与した。サテライト動物に同時に投与し、２つの薬剤の血中および脳内濃度を評価した。ラモトリジンは、１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の投与量ならびに３ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の投与量で試験した。１０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．のＥＮＫ６を用いる第１および３０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．のＥＮＫ６を用いる第２の２つの独立した試験を行った。各々の実験において、ＥＮＫ６は単独では発作閾値に影響を与えなかったが、予想されたように、ＥＮａ７単独は、１ｍｇ／ｋｇで、発作閾値を少しだけ上昇させるか、全く上昇させず、より高い投与量の３ｍｇ／ｋｇでは、発作閾値は１２８−２０５％有意に上昇した。ＥＮＫ６の存在下で、ラモトリジンは、１ｍｇ／ｋｇの投与量で有利に発作閾値を増加させ（第１の実験でＣＣ５０（ｍＡ）の６１％増加、第２の実験でＣＣ５０（ｍＡ）の１４５％増加）、３ｍｇ／ｋｇの投与量で閾値をほぼ最大限に増加させた（第２の実験でＣＣ５０（ｍＡ）の２３３％増加）（図３および４）。サテライト動物で測定したＥＮａ７の血中および脳内濃度を、表３および４に示す。
【０１６４】
図３
【化３５】
2010516731.tif 000041
【０１６５】
図３：ラットＭＥＳＴモデルにおけるＥＮａ７およびＥＮＫ６（１０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．）の効果。ＥＮＫ６（１０ｍｇ／ｋｇ、ｓｃ、１５分ｐｔｔ）；Ｅｎａ７（１および３ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、６０分ｐｔｔ）。垂直の矢は、ＣＣ５０値が測定されなかったが、１８０ｍＡよりも大きいことを示す（＞７８０％増加）。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対応するビヒクル、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験。＃＃ｐ＜０．０１Ｖｓ対応するビヒクル／ＥＮａ７群ｔ−試験。
【０１６６】
図４
【化３６】
2010516731.tif 000042
【０１６７】
図４：ラットＭＥＳＴモデルにおけるＥＮａ７およびＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．）の効果。ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ、ｓｃ、１５分ｐｔｔ）；Ｅｎａ７（１および３ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、６０分ｐｔｔ）。＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対応するビヒクル、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験。＃＃＃ｐ＜０．００１Ｖｓ対応するビヒクル／ＥＮａ７群、ｔ−試験。
【０１６８】
サテライト動物で測定したＥＮａ７の血中および脳内濃度を、表３および４に示す。
【表６】
2010516731.tif 000043
【０１６９】
表３：サテライト動物（＊ｎ＝１を除いてグループあたりｎ＝２〜３）における、ＥＮａ７およびＥＮＫ６の血中および脳内濃度。ナトリウムチャンネル遮断剤の濃度の差異は、動物間差異内である。
【０１７０】
【表７】
2010516731.tif 000044
【０１７１】
表４：サテライト動物（＊ｎ＝１を除いてグループあたりｎ＝２）における、ＥＮａ７およびＥＮＫ６の血中および脳内濃度。ナトリウムチャンネル遮断剤の濃度の差異は、動物間差異内である。
【０１７２】
ＥＮａ１５＋ＥＮＫ６
ＥＮａ１５を、試験の６０分前にラットに経口投与し、ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ）を試験の１５分前に皮下投与した。サテライト動物に同時に投与して、２つの薬剤の血中および脳内濃度を評価した。ＥＮａ１５は、０．３ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の投与量、ならびに、１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の投与量で評価した。ＥＮＫ６単独では、発作閾値に影響を与えなかった。ＥＮａ１５単独は、０．３ｍｇ／ｋｇで、発作閾値を増加させなかった一方、より高い投与量の１ｍｇ／ｋｇは、発作閾値を２９２％で有意に増加させた。ＥＮＫ６の存在下で、ＥＮａ１５は、不活性であった０．３ｍｇ／ｋｇの投与量で発作閾値を有意に増加させ（ＣＣ５０（ｍＡ）の１７６％増加）、１ｍｇ／ｋｇで閾値を有意に増加した（ＣＣ５０（ｍＡ）の５１％増加）（図５）。
【０１７３】
図５
【化３７】
2010516731.tif 000045
【０１７４】
図５：ラットＭＥＳＴモデルでのＥＮａ１５およびＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．）の影響。ＥＮＫ６（３０ｍｇ／ｋｇ、ｓｃ、１５分ｐｔｔ）；ＥＮａ１５（０．３および１ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、６０分ｐｔｔ）。＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対応するビヒクル、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験。＃＃＃ｐ＜０．００１Ｖｓ対応するビヒクル／ＥＮａ１５群、ｔ−試験。
【０１７５】
痛みに対する炎症性過敏性のＦＣＡ（完全フロイントアジュバント）モデル
この一連の試験は、ナトリウムチャンネル化合物（ＥＮａ７）およびＮＫ１アンタゴニスト（ＥＮＫ６）の組み合わせが、痛みに対する炎症性過敏性のＦＣＡモデルにおいて相乗効果を示すことを証明する：
ａ）ＥＮａ７単独およびＥＮＫ６単独のＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果を試験した；この試験の目的は、組み合わせ試験のためのＥＤ２０投与量を決定することである；
ｂ）ついで、ＦＣＡ誘発過敏性におけるＥＮａ７およびＥＮＫ６の組み合わせ（ＥＤ２０投与量）を評価する；
ｃ）ＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性における固定用量比（１：１．２５）でのＥＮａ７およびＥＮＫ６の組み合わせを評価する。
【０１７６】
ａ）ＥＮａ７単独およびＥＮＫ６単独での、ＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果
方法
ナイーブ体重負荷値を取得した。痛みへの過敏性を、ラット・インキャパシタンス・テスター（Ｌｉｎｔｏｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて測定した。この装置は、１年に１回点検されており、定期的に較正されている。
ついで、すべてのラットに、１００ｕｌのＦＣＡ（完全フロイントアジュバント）を左の後足に足底内注射した。ＦＣＡは、使用１５分前に超音波処理した。
ＦＣＡの投与から約２３時間後、投与前体重負荷値を取得した。ついで、すべての動物を、ＦＣＡウィンドウに従って、投与量を順位付け、ランダム化した（投与前グラムの差異−ナイーブグラムの差異）。３０ｇ未満のＦＣＡウィンドウを有するラットは、試験から除外した。
ついで、動物に、順位付けおよびランダム化に応じて適切に、ビヒクル（１％メチルセルロース）ｓ．ｃまたはＥＮＫ６  ０．１−３ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃまたはＥＮａ７  ０．１−３ｍｇ／ｋｇｐ．ｏ．  Ｃｅｌｅｂｒｅｘ  １０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．（正の対照）を投与した。
動物を、投与後１時間で体重負荷装置で評価した。
試験はブラインドであり、ラテン方格法を用いるＦＣＡウインドウによりランダム化した。
逆転％を、ナイーブ、投与前および投与後の値を用いて以下のように計算した：逆転％＝［（投与前−投与後）／（投与前−ナイーブ）］ｘ１００
グラフおよびＥＤ５０を、Ｐｒｉｓｍ４を用いて適宜計算した。
統計学的分析を、ＡＮＯＶＡを用いて行い、ついで、統計パッケージＳｔａｔｉｓｔｉｃａ６．１を用いて最小二乗平均を計算した。
投与応答曲線から、組み合わせ試験のためのＥＤ２０を決定した。
【０１７７】
結果
−ＥＮａ７単独でのＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果
ＥＮａ７（０．１−３．０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ、）は、０．３５のＥＤ５０（０．１４−０．５９）ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．で、ＦＣＡ誘発過敏性の用量依存性逆転を生じた。ＥＤ２０は０．２ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．であった（図６）。
図６
【化３８】
2010516731.tif 000046
【０１７８】
−ＥＮＫ６単独でのＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果
ＥＮＫ６（０．１−３．０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）は、０．４０のＥＤ５０（０．２３−０．６８）ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．で、ＦＣＡ誘発過敏性の用量依存性逆転を生じた。ＥＤ２０を計算すると０．０８ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．であった（図７）。
【０１７９】
図７
【化３９】
2010516731.tif 000047
したがって、固定用量比を１．２５：１であると計算した。この比を固定用量比試験の投与量を計算するのに用いた。
【０１８０】
ｂ）ＥＮａ７およびＥＮＫ６の組み合わせ（ＥＤ２０投与量）のＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果
方法
ナイーブ体重負荷値を取得した。痛みへの過敏性を、ラット・インキャパシタンス・テスター（Ｌｉｎｔｏｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて測定した。この装置は、１年に１回点検されており、定期的に較正されている。
ついで、すべてのラットに、１００ｕｌのＦＣＡ（完全フロイントアジュバント）を左の後足に足底内注射した。ＦＣＡは、使用１５分前に超音波処理した。
ＦＣＡの投与から約２３時間後、投与前体重負荷値を取得した。ついで、すべての動物を、ＦＣＡウィンドウに従って、投与量を順位付け、ランダム化した（投与前グラムの差異−ナイーブグラムの差異）。３０ｇ未満のＦＣＡウィンドウを有するラットは、試験から除外した。
ついで、動物に、ビヒクルｐ．ｏ．またはＥＮａ７０．１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．と一緒にビヒクルを投与した。ついで、３０分後、順位付けおよびランダム化に応じて、ビヒクルまたはＥＮＫ６０．０８ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．を投与した。グループの詳細は表５を参照のこと。
動物を、投与後１時間で体重負荷装置で評価した。
試験はブラインドであり、ラテン方格法を用いるＦＣＡウインドウによりランダム化した。
逆転％を、ナイーブ、投与前および投与後の値を用いて以下のように計算した：逆転％＝［（投与前−投与後）／（投与前−ナイーブ）］ｘ１００
統計学的分析を、ＡＮＯＶＡを用いて行い、ついで、統計パッケージＳｔａｔｉｓｔｉｃａ６．１を用いて最小二乗平均を計算した。
投与応答曲線から、組み合わせ試験のためのＥＤ２０を決定した。
ＥＤ５０およびＥＤ２０値およびグラフを、ｐｒｉｓｍ５を用いて計算した。
【０１８１】
【表８】
2010516731.tif 000048
【０１８２】
結果
−ＥＮａ７およびＥＮＫ６組み合わせ（ＥＤ２０投与量）のＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果
組み合わせ試験では、ＥＮａ７の０．１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．およびＥＮＫ６の０．０８ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．（ＥＤ２０投与量）を用いた；組み合わせでは、ＦＣＡ誘発過敏性の著しい逆転が生じ、少なくとも相加的であった（図８）。
【０１８３】
図８
【化４０】
2010516731.tif 000049
【０１８４】
ｃ）固定用量比での、ＥＮａ７／ＥＮＫ６組み合わせ試験方法（１：１．２５）
ナイーブ体重負荷値を取得した。痛みへの過敏性を、ラット・インキャパシタンス・テスター（Ｌｉｎｔｏｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて測定した。この装置は、１年に１回点検されており、定期的に較正されている。
ついで、すべてのラットに、１００ｕｌのＦＣＡ（完全フロイントアジュバント）を左の後足に足底内注射した。ＦＣＡは、使用１５分前に超音波処理した。
ＦＣＡの投与から約２３時間後、投与前体重負荷値を取得した。
ついで、すべての動物を、ＦＣＡウィンドウに従って、投与量を順位付け、ランダム化した（投与前グラムの差異−ナイーブグラムの差異）。３０ｇ未満のＦＣＡウィンドウを有するラットは、試験から除外した。
ついで、動物に、順位付けおよびランダム化に応じて、１．２５：１の固定用量比で、以下のものを投与した（表６）。
【０１８５】
【表９】
2010516731.tif 000050
【０１８６】
動物を、投与後１時間で体重負荷装置で評価した。
試験はブラインドであり、ラテン方格法を用いるＦＣＡウインドウによりランダム化した。
逆転％を、ナイーブ、投与前および投与後の値を用いて以下のように計算した：逆転％＝［（投与前−投与後）／（投与前−ナイーブ）］ｘ１００
データを、Ｐａｕｌ  Ｌｌｏｙｄにより開発された、エクセルでのＦＣＡ  ｍａｃｒｏ  ｗｒｉｔｔｅｎを用いて（ｖｅｒｓｉｏｎ１．５）分析した。グラフおよびＥＤ５０Ｐｒｉｓｍ５を用いて適宜計算した。
統計学的分析を、ＡＮＯＶＡを用いて行い、ついで、統計パッケージＳｔａｔｉｓｔｉｃａ６．１を用いて最小二乗平均を計算した。
【０１８７】
結果
−ＥＮａ７およびＥＮＫ６（固定用量比１．２５：１）でのＦＣＡ誘発の痛みへの過敏性に対する効果
ＥＮａ７およびＥＮＫ６の組み合わせは、ＦＣＡ誘発過敏性の用量依存逆転を生じた。Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａを用いるデータ分析により、この効果が高度に相乗的であることが示された（図９）。
【０１８８】
図９
【化４１】
2010516731.tif 000051
【０１８９】
結果の要約：
ＥＮＫ６では、ＦＣＡ誘発過敏性の用量依存性逆転を生じた。ＥＤ２０を計算して、約０．０８ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．であった。
ＥＮａ７では、ＦＣＡ誘発過敏性の用量依存性逆転を生じた。ＥＤ２０を計算して約０．１ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．であった。
ＥＤ２０のＥＮａ７およびＥＮＫ６は、ＦＣＡ誘発過敏性に有意な影響を与えなかった。
ＥＮａ７およびＥＮＫ６の組み合わせでは、ＦＣＡ誘発過敏性の非常に著しい逆転を生じ、これはＣｅｌｅｂｒｅｘと有意な差がなかった；効果は少なくとも相加的であった。
固定用量比は１．２５である；固定用量比試験は、ＥＮａ７をＮＫ１アンタゴニストＥＮＫ６と組み合わせた場合に、高度に有意な相乗効果があることを示した。
かくして、データは、ＥＮＫ６と組み合わせたＥＮａ７が、高い相乗効果があることを示している。
【国際調査報告】
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