(57)【要約】  本発明は、Ｂ細胞除去抗体と組み合わせたＣＨＫ１阻害剤の投与を含んでなる、Ｂ細胞リンパ腫及び白血病が含まれる血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍を治療するための療法を一部開示する。さらに本発明には、ＣＨＫ１阻害剤の投与を含んでなる癌治療に抵抗性である、Ｂ細胞リンパ腫及び白血病が含まれる血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍を治療することが含まれる。【選択図】図１−１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液系腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法。
【請求項２】
血液系腫瘍が慢性リンパ球性白血病である、請求項１の方法。
【請求項３】
Ｂ細胞除去抗体が抗ＣＤ２０抗体である、請求項１又は２の方法。
【請求項４】
前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項１〜３の方法。
【請求項５】
Ｂ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法。
【請求項６】
Ｂ細胞除去抗体が抗ＣＤ２０抗体である、請求項５の方法。
【請求項７】
前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項５〜６の方法。
【請求項８】
ＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性である血液系腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法。
【請求項９】
血液系腫瘍が慢性リンパ球性白血病である、請求項８の方法。
【請求項１０】
Ｂ細胞除去抗体が抗ＣＤ２０抗体である、請求項８又は９の方法。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項８〜１０の方法。
【請求項１２】
前記ＤＮＡ傷害剤がフルダラビンである、請求項８〜１１の方法。
【請求項１３】
ＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性であるＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法。
【請求項１４】
ＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性であるＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法。
【請求項１５】
Ｂ細胞除去抗体が抗ＣＤ２０抗体である、請求項１３の方法。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項１３及び１５の方法。
【請求項１７】
前記ＤＮＡ傷害剤がフルダラビンである、請求項１３〜１６の方法。
【請求項１８】
ＣＨＫ１阻害剤が、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１〜１．５２からなる群より選択される化合物である、請求項１〜１７のいずれかの方法。
【請求項１９】
ＣＨＫ１阻害剤が、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１又は式１．２の化合物である、請求項１〜１７のいずれかの方法。
【請求項２０】
血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍の治療のためのＢ細胞除去抗体との組合せ療法に使用の医薬品の製造における、ＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２１】
血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍がフルダラビンでの治療に抵抗性である、請求項２０に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２２】
血液系腫瘍が慢性リンパ球性白血病である、請求項２０〜２１に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２３】
Ｂ細胞除去抗体が抗ＣＤ２０抗体である、請求項２０〜２２に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２４】
抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項２３に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２５】
ＣＨＫ１阻害剤が、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１〜１．５２からなる群より選択される、請求項２０〜２４に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２６】
ＣＨＫ１阻害剤が、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１又は式１．２の化合物である、請求項２０〜２４に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２７】
血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍がＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性である、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍の治療用医薬品の製造における、ＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２８】
血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍がフルダラビンでの治療に抵抗性である、請求項２７に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項２９】
血液系腫瘍が慢性リンパ球性白血病である、請求項２７〜２８に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項３０】
Ｂ細胞除去抗体が抗ＣＤ２０抗体である、請求項２７〜２９に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項３１】
抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブである、請求項３０に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項３２】
ＣＨＫ１阻害剤が、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１〜１．５２からなる群より選択される、請求項２７〜３１に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【請求項３３】
ＣＨＫ１阻害剤が、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１又は式１．２の化合物である、請求項２７〜３１に記載のＣＨＫ１阻害剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ細胞リンパ腫及び白血病が含まれる血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍を治療するための療法を開示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
化学療法と放射線曝露は、現行では、癌の治療の主要な選択肢であるが、これら両方のアプローチの治療有用性は、正常組織に対する深刻な副作用と癌細胞抵抗性の頻繁な発現によって厳しく制限されている。故に、それらに関連した毒性を高めないやり方で癌治療薬の効力を高めることがきわめて望ましい。ある事例では、増強される効力を達成する１つのやり方は、抗癌剤を組み合わせて利用することによるが、ここでは前記組合せが、それぞれの医薬品単独で見られるものより優れた治療効果を引き起こす。
【０００３】
組み合わされた治療方式は、リンパ腫患者が含まれる、Ｂ細胞関連腫瘍又は血液系腫瘍に罹患している患者に利用可能な療法へ加えられるものであろうし、潜在的には、再発率を減少させるか、又はこれらの患者で時々見られる特別な抗癌剤への抵抗性を克服する可能性さえある。例えば、１つの可能なシナリオでは、ある医薬品が、組合せ療法の他の医薬品に対する悪性細胞（例、Ｂリンパ腫細胞）の感受性を高めるように作用する可能性がある。他のシナリオでは、抗癌剤の組合せが、相加的、又はさらに相乗的な治療効果を有するかもしれない。
【０００４】
血液系腫瘍を治療するために使用される１つの特別な治療薬剤は、ＲＩＴＵＸＩＮ（登録商標）（リツキシマブ）（ＩＤＥＣファーマシューティカルズ社、マサチューセッツ州ケンブリッジ；ジェネンテク、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）である。リツキシマブは、Ｂ細胞リンパ腫、そして特に非ホジキンリンパ腫の治療のために開発された新世代のモノクローナル抗体の１つである。リツキシマブは、マウスの軽鎖及び重鎖可変領域とヒトのγ１重鎖及びκ軽鎖定常領域のある、遺伝子工学処理された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。リツキシマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０抗原へ結合して、それが補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）と抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が関与すると考えられている機序によりＢ細胞の溶解をもたらすことによって作用する。リツキシマブとＤＮＡ傷害剤、フルダラビンを使用する、組み合わせた免疫化学療法は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の患者にやや有望であることを示した（Schultz et al., Blood, Nov. 1, 2002 100(9): 3115-3120）。
【０００５】
フルダラビンのようなＤＮＡ傷害剤はまた、細胞周期における重要な調節成分であるチェックポイント１キナーゼの阻害剤（ＣＨＫ１阻害剤）との組合せにおける使用が提起されてきた（例えば、Prudhomme, Recent Patents on Anti-Cancer Drug Discovery, 2006, 1: 55 を参照のこと）。個々の細胞は、その染色体の正確なコピーを作製してから、それらを別々の細胞へ分離させることによって複製する。このＤＮＡ複製、染色体分離、及び分裂の周期は、この諸段階の順序を維持して、各段階が正確に行われることを確実にする、細胞内部の機序によって調節されている。これらのプロセスの鍵となるのが細胞周期チェックポイントであり（Hartwell et al., Science, Nov 3, 1989, 246(4930): 629-34）、ここでは細胞が停止して、その周期を有糸分裂へ続行する前にＤＮＡ修復機序が作動するための時間を確実にもつことができる。細胞周期には、２つのそのようなチェックポイントがある−ｐ５３によって調節されるＧ１／ＳチェックポイントとＳｅｒ／Ｔｈｒキナーゼチェックポイントキナーゼ１（ＣＨＫ１）によって監視されるＧ２／Ｍチェックポイントである。これらのチェックポイントにより誘導される細胞周期停止は、放射線又は化学療法より生じる傷害を細胞が克服することを可能にするきわめて重要な機序であるので、新規薬剤によるそれらの廃止は、ＤＮＡ傷害療法に対する腫瘍細胞の感受性を高めるはずである。Ｇ２／Ｍチェックポイントを廃止させる化合物の設計への１つのアプローチは、重要なＧ２／Ｍ調節キナーゼ、ＣＨＫ１の阻害剤を開発することであり、このアプローチは、数多くの概念実証試験において奏効することが示されてきた（Koniaras et al., Oncogene, 2001, 20:7453; Luo et al., Neoplasia, 2001, 3:411; Busby et al., Cancer Res., 2000, 60:2108; Jackson et al., Cancer Res., 2000, 60:566）。
【０００６】
いくつかのＣＨＫ１阻害剤が同定されている。これらの化合物には、アミノピラゾール、インダゾール、三環系化合物、尿素、カルバメート、ジアゼピノン、ピリミジン、ベンズイミダゾール、キノロン、及び大環状化合物が含まれる（例えば、Prudhomme, Michelle, Novel checkpoint 1 inhibitors（新規チェックポイント１阻害剤）, Recent Patents on Anti-Cancer Drug Discovery  (2006), 1(1), 55-68;  Tao, Zhi-Fu; Lin, Nan-Horng, Chk1 inhibitors for novel cancer treatment（新たな癌治療のためのＣｈｋ１阻害剤）, Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2006), 6(4), 377-388; Kawabe, Takumi, G2 checkpoint abrogators as anticancer drugs（抗癌薬としてのＧ２チェックポイント廃止剤）, Molecular Cancer Therapeutics  (2004), 3(4), 513-519;  Prudhomme, Michelle, Combining DNA damaging agents and checkpoint 1 inhibitors（ＤＮＡ傷害剤とチェックポイント１阻害剤を組み合わせること）, Current Medicinal Chemistry: Anti-Cancer Agents (2004), 4(5),  435-438）。ＷＯ０３０２９２４１とＷＯ０３０２８７３１には、それぞれ２−ウレイドチオフェン化合物と３−ウレイドチオフェン化合物がＣＨＫ１阻害剤として記載されている。さらに、ＷＯ２００４／０８１００８には、縮合トリアゾロンがＣＨＫ１阻害剤として記載されている。ＣＨＫ１阻害剤にはまた、ＷＯ２００５／０１６９０９に開示されるチオフェンカルボキサミド；ＷＯ２００５／０６６１６３に開示されるチオフェンカルボキサミド；及び、ＷＯ２００６／１０６３２６に記載される置換複素環が含まれる。
【０００７】
従って、本明細書では、ＣＨＫ１阻害剤とＢ細胞除去抗体の組合せが血液系腫瘍又は他のＢ細胞関連腫瘍を治療するのに有用であろうことが考慮される。本明細書ではまた、Ｂ細胞除去抗体と組み合わせたＣＨＫ１阻害剤が、癌治療薬、例えば、ＤＮＡ傷害剤（限定されないが、フルダラビンが含まれる）に抵抗性である血液系疾患又は他のＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者を治療するのに有用であり得ることが考慮される。
【０００８】
本明細書では、ＣＨＫ１阻害剤が、癌治療薬、例えば、ＤＮＡ傷害剤（限定されないが、フルダラビンが含まれる）に抵抗性である血液系疾患又は他のＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者を治療するのに有用であり得ることがさらに考慮される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第一の側面において、本発明は、血液系腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法を提供する。関連した側面において、血液系腫瘍は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。別の関連した側面において、Ｂ細胞除去抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。別の関連した側面において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。
【００１０】
別の側面において、本発明は、Ｂ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法を提供する。関連した側面において、Ｂ細胞除去抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。別の関連した側面において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。
【００１１】
さらなる側面において、本発明は、ＤＮＡ傷害剤での治療が含まれる癌治療に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法を提供する。関連した側面において、血液系腫瘍は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。別の関連した側面において、Ｂ細胞除去抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。別の関連した側面において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。別の関連した側面において、ＤＮＡ傷害剤は、フルダラビンである。
【００１２】
なおさらなる側面において、本発明は、ＤＮＡ傷害剤での治療が含まれる癌治療薬に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を単一の薬剤として投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法を提供する。関連した側面において、血液系腫瘍は、ＣＬＬ又はＡＭＬである。別の関連した側面において、ＤＮＡ傷害剤は、フルダラビンである。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１−１】図１ａ、図１ｂは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−２】図１ｃ、図１ｄは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−３】図１ｅ、図１ｆは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−４】図１ｇ、図１ｈは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−５】図１ｉ、図１ｊは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−６】図１ｋ、図１ｌは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−７】図１ｍ、図１ｎは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−８】図１ｏ、図１ｐは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【図１−９】図１ｑは、ＣＨＫ１阻害剤（■）、シタラビン（○）、又はＣＨＫ１阻害剤とシタラビンの組合せ（●）で治療したＡＭＬ患者試料からの結果の折れ線グラフを示す。
【００１４】
発明の詳細な説明
本明細書に使用するように、「医薬的に許容される」は、妥当な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比と釣り合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題又は合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織との接触した使用に適している、化合物、材料、組成物、及び／又は剤形に言及するために本明細書で利用する。
【００１５】
本明細書に使用するように、「医薬的に許容される塩」は、親化合物がその酸性又は塩基性の塩を作製することによって修飾されている、開示化合物の誘導体へ言及する。医薬的に許容される塩の例には、限定されないが、アミンのような塩基性残基の鉱酸塩又は有機酸塩；カルボン酸のような酸性残基のアルカリ塩又は有機塩；等が含まれる。医薬的に許容される塩には、例えば、無毒性の無機酸又は有機酸より生成される、親化合物の慣用の無毒性塩又は四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、そのような慣用の無毒性塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、等のような無機酸より誘導されるもの；並びに、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、及びイセチオン酸のような有機酸より製造される塩が含まれる。医薬的に許容される塩は、塩基性又は酸性の部分を含有する親化合物より、慣用の化学的方法によって合成することができる。
【００１６】
化合物、抗体、又は他の医薬物質の投与に関して、本明細書に使用するように、用語「〜と連続的に」は、別の化合物、抗体、又は他の医薬物質の投与の前又は後を意味する。
【００１７】
本明細書での「Ｂ細胞表面マーカー」又は「Ｂ細胞標的」又は「Ｂ細胞抗原」は、それへ結合するアンタゴニストで標的指向され得る、Ｂ細胞の表面上で発現される抗原である。例示のＢ細胞表面マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５、及びＣＤ８６白血球表面マーカーが含まれる。特に注目されるＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比べて、Ｂ細胞上で選択的に発現されて、前駆体Ｂ細胞と成熟Ｂ細胞の両方で発現される場合がある。１つの態様において、そのマーカーは、幹細胞段階から形質細胞への最終分化の直前の時点に至る系統の分化全体を通してＢ細胞上に見出される、ＣＤ２０又はＣＤ１９のようなものである。
【００１８】
「ＣＤ２０」抗原は、末梢血又はリンパ系器官由来のＢ細胞の９０％以上の表面に見出される、３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は、初期のプレＢ細胞発生の間に発現されて、形質細胞分化まで存続する。ＣＤ２０は、正常Ｂ細胞と悪性Ｂ細胞の両方に存在する。文献におけるＣＤ２０の他の名称には、「Ｂリンパ球限定抗原」及び「Ｂｐ３５」が含まれる。ＣＤ２０抗原は、例えば、Clark et al. PNAS (USA) 82:1766 (1985) に記載されている。
【００１９】
「Ｂ細胞除去抗体」は、血液系の悪性細胞、例えば発癌性Ｂ細胞の表面上の受容体又は他の標的へ結合して、それらが結合するときに、例えばアポトーシスを誘導することによって、その破壊又は除去に媒介する抗体として定義される。そのような抗体には、限定されないが、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ３７、抗ＣＤ４０、抗ＣＤ５２抗体が含まれる。抗ＣＤ２０抗体の例は、ＲＩＴＵＸＩＮ（登録商標）（リツキシマブ）である。Ｂ細胞除去抗体にはまた、他の機序を介してＢ細胞を破壊する抗体が含まれる。例えば、これらには、Ｂ細胞表面へ結合して致死量の放射線を送達することによって腫瘍細胞の破壊を促進する放射標識抗体が含まれる。これらには、１３１Ｉ−Ｌｙｍ−１（抗ＨＬＡ−Ｄ）、１３１Ｉ−トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｙ−９０，Ｉｎ−１１１  ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））、及び９０Ｙ−エプラツズマブが含まれる。そのような抗体は、毒素へコンジュゲートした抗体と同様に、本明細書に開示されるＣＨＫ１阻害剤と併用して使用してもよく、当業者には馴染みであろう。
【００２０】
「ＣＨＫ１阻害剤」は、チェックポイント１キナーゼ及び／又はチェックポイント２キナーゼの活性を阻害し得るいずれの化合物又は物質を意味する。本発明に有用なＣＨＫ１阻害剤は、当該技術分野で知られているもの、例えば、上記に言及したもの、例えば、Prudhomme, Michelle, Novel checkpoint 1 inhibitors（新規チェックポイント１阻害剤）, Recent Patents on Anti-Cancer Drug Discovery  (2006), 1(1), 55-68;  Tao, Zhi-Fu; Lin, Nan-Horng, Chk1 inhibitors for novel cancer treatment（新たな癌治療のためのＣｈｋ１阻害剤）, Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2006), 6(4), 377-388; Kawabe, Takumi, G2 checkpoint abrogators as anticancer drugs（抗癌薬としてのＧ２チェックポイント廃止剤）, Molecular Cancer Therapeutics  (2004), 3(4), 513-519; Prudhomme, Michelle, Combining DNA damaging agents and checkpoint 1 inhibitors（ＤＮＡ傷害剤とチェックポイント１阻害剤を組み合わせること）, Current Medicinal Chemistry: Anti-Cancer Agents (2004), 4(5), 435-438）に記載されるもの；ＷＯ０３０２９２４１とＷＯ０３０２８７３１にそれぞれ記載される２−ウレイドチオフェン化合物と３−ウレイドチオフェン化合物；ＷＯ２００４／０８１００８にＣＨＫ１阻害剤として記載される縮合トリアゾロン；ＷＯ２００５／０１６９０９に開示されるチオフェンカルボキサミド；ＷＯ２００５／０６６１６３に記載されるチオフェンカルボキサミド；及び、ＷＯ２００６／１０６３２６に開示される置換複素環のいずれでもよい。
【００２１】
ＣＨＫ１阻害剤は、特別な幾何又は立体異性型で存在する場合がある。本発明は、ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ異性体、Ｒ及びＳ−エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、これらのラセミ混合物、並びにこれらの他の混合物を含めて、そのようなすべての化合物を考慮する。また、本明細書において考察するＣＨＫ１阻害剤は、遊離型でも、塩型（例えば、酸付加塩として）でも存在してよい。本明細書において、他に示さなければ、本明細書に開示される化合物には、いずれの形態（例えば、遊離型又は酸付加塩型、又は該化合物が酸性置換基を含有する場合は、塩基付加塩型）の化合物が含まれると理解される。本明細書に開示される化合物は、医薬品としての使用に企図されるので、医薬的に許容される塩が好ましい。
【００２２】
「ＤＮＡ傷害剤」は、細胞が殺されるか又は増殖が妨げられるようにＤＮＡを傷害する化合物又は物質を意味する。ＤＮＡ傷害剤には、限定されないが、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、及びミトザントロン、並びに、メトトレキセート、フルダラビン、及びシタラビンが含まれる。
【００２３】
「血液系腫瘍」には、血流；骨髄；並びに、肝臓、脾臓、及びリンパ節が含まれるリンパ系にある細胞に関連したいずれの悪性腫瘍が含まれる。その例には、Ｂ及びＴ細胞リンパ腫、白血病が含まれ、限定されないが、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、Ｔ又はＢ前リンパ球性白血病、濾胞性ＮＨＬ、びまん性大細胞性Ｂ細胞ＮＨＬ、末梢Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、Ｂ又はＴ細胞リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ワルデンシュトローム型マクログロブリン血症又はリンパ形質細胞性リンパ腫、慢性白血球性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、リンパ球性白血病、単球性白血病、骨髄性白血病、及び前骨髄球性白血病が含まれる。当業者には、これらの病理学的状態が異なる／変化する分類体系により異なる名称をしばしばもつ場合があることが明らかなはずである。
【００２４】
「Ｂ細胞関連腫瘍」は、本明細書において、固形の非血液系（非リンパ系）腫瘍、即ち、Ｂ細胞の関与がある（ここでＢ細胞は、「抗腫瘍（protumor）」応答に関与する）非血液系腫瘍を意味する。例えば、Ｂ細胞は、発癌状態をともかくも促進又は維持することによって、そのような悪性腫瘍に抗する身体の免疫防御系を妨げることにどういうわけか関与する。そのようなものとしてＢ細胞は関与するものの、それ自体は癌性細胞ではない。それに関して、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ０２０８６４Ａ１は、リツキシマブが含まれる、Ｂ細胞を標的とする抗体を使用する固形の非リンパ系腫瘍の治療について記載する。そこでは、この治療法が、進行した結直腸癌、肺癌、及び肝臓癌の患者においても、顕著な抗腫瘍応答をもたらすことが報告された。Ｂ細胞関連の固形腫瘍は、典型的には直径が少なくとも０．５ｍｍ、より典型的には直径が少なくとも１．０ｍｍである、触知可能な腫瘍であり得る。その例には、結直腸癌、肝臓癌、乳癌、肺癌、頭頚部癌、胃癌、精巣癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮癌、他が含まれる。これらの癌は、初期段階（前癌）、中期（ステージＩ及びＩＩ）、又は進行性でもよく、転移した固形腫瘍も含まれる。これらの固形腫瘍は、好ましくは、Ｂ細胞が抗腫瘍応答を誘発する、即ち、腫瘍の発生、維持、又は転移にＢ細胞の存在が関与する癌である。
【００２５】
本明細書に使用するように、癌治療薬に「抵抗性」である血液系疾患又は他のＢ細胞関連腫瘍は、限定されないがＤＮＡ傷害剤、例えばフルダラビンでの治療が含まれる、他の抗癌剤での治療に難治性又は抵抗性である疾患を意味する。この疾患は、一時は他の抗癌剤、例えばＤＮＡ傷害剤へ応答したことがあっても、そのような治療に対して現在は抵抗性なのである。
【００２６】
「Ｂ細胞アンタゴニスト」は、Ｂ細胞表面マーカーへ結合するとすぐに、哺乳動物中のＢ細胞を破壊又は除去する、及び／又は、例えば、Ｂ細胞により誘発される体液性反応を抑えるか又は妨げることによって、１以上のＢ細胞機能に干渉する分子である。このアンタゴニストは、好ましくは、それで治療された哺乳動物においてＢ細胞を除去する（即ち、循環Ｂ細胞レベルを低下させる）ことができる。そのような除去は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害、及び／又はＢ細胞死の誘導（例えば、アポトーシスによる）のような様々な機序を介して達成されてよい。本発明の範囲内に含まれるアンタゴニストには、Ｂ細胞マーカーへ結合して、細胞傷害剤とコンジュゲート又は縮合していてもよい、抗体、合成又はネイティブ配列ペプチド、及び低分子アンタゴニストが含まれる。好ましいアンタゴニストは、抗体、より好ましくはＢ細胞除去抗体を含む。
【００２７】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞（例、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識して、その後で標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性の反応を意味する。注目の分子のＡＤＣＣ活性を評価するには、米国特許第５，５００，３６２号又は米国特許第５，８２１，３３７号に記載のような in vitro ＡＤＣＣアッセイを実施してよい。そのようなアッセイに有用なエフェクタ細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）とナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は追加的には、注目の分子のＡＤＣＣ活性は、in vivo において、例えば、Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998) に開示されるような動物モデルにおいて評価してよい。
【００２８】
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、標的を補体の存在下に溶解する、分子の能力を意味する。補体活性化経路は、コグネイト抗原と複合化した分子（例、抗体）への補体系の第一成分（Ｃｌｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するには、例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996) に記載されるようなＣＤＣアッセイを実施してよい。
【００２９】
用語「抗体」は、本明細書において最も広い意味で使用されて、具体的には、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体より生成される多重特異性抗体（例、二重特異性抗体）、並びに、所望の生物活性を明示する限りの抗体断片が含まれる。抗体は、当業者により慣用の方法を使用して産生され得る。
【００３０】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書に使用するように、実質的に均質な抗体の集団より得られる抗体を意味し、即ち、この集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る可能な天然に存在する突然変異を除けば同一である。モノクローナル抗体は、きわめて特異的であり、単一の抗原性部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる様々な抗体が典型的には含まれる、慣用の（ポリクローナル）抗体調製とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンが混入していないハイブリドーマ培養物によってそれらが合成されるという点で有利である。修飾語の「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団より入手されるものとしての抗体の特徴を示すものであり、ある特別な方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈してはならない。例えば、本発明に従って使用すべきモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature, 256:495 (1975) によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製してもよいし、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製してもよい。「モノクローナル 抗体」はまた、例えば、Clackson et al., Nature, 352:624-628  (1991) と Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991) に記載の技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーより単離してよい。本明細書のモノクローナル抗体には、具体的には、限定されないが、「キメラ」又は「ヒト化」形態が含まれる。
【００３１】
ＣＤ２０抗原へ結合する抗体の例には：「リツキシマブ」（「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」）である「Ｃ２Ｂ８」（米国特許第５，７３６，１３７号、特に参照により本明細書に組み込まれる）；「Ｙ２Ｂ８」と明記されるイットリウム−［９０］−標識化２１３８マウス抗体（米国特許第５，７３６，１３７号、特に参照により本明細書に組み込まれる）；１３１１で任意選択的に標識化されて「１３１１−Ｂ１」抗体（ＢＥＸＸＡＲＴＭ（登録商標））を産生するマウスＩｇＧ２ａ「１３１」（米国特許第５，５９５，７２１号、特に参照により本明細書に組み込まれる）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Press et al. Blood 69(2): 584-591 (1987)）；「キメラ２Ｈ７」抗体（米国特許第５，６７７，１８０号、特に参照により本明細書に組み込まれる）；並びに、International Leukocyte Typing Workshop（国際白血球タイピングワークショップ）（「Leukocyte Typing III（白血球タイピングＩＩＩ）」McMichael 監修、440頁、オックスフォード大学出版局 (1987) 中、Valentine et al）より利用可能なモノクローナル抗体のＬ２７、Ｇ２８−２、９３−１１３３、Ｂ−Ｃ１、又はＮＵ−Ｂ２が含まれる。
【００３２】
本明細書の用語「リツキシマブ」又は「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」は、米国特許第５，７３６，１３７号（特に参照により本明細書に組み込まれる）においてＣＤ２０抗原に対して向けられて、「Ｃ２Ｂ８」と明記される、遺伝子工学処理されたキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体を意味する。この抗体は、マウスの軽鎖及び重鎖可変領域配列とヒトの定常領域配列を含有するＩｇＧ，κ−免疫グロブリンである。リツキシマブは、ＣＤ２０抗原に対してほぼ８．０ｎＭの結合親和性を有する。これは、例えば、ジェネンテク（カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）より入手可能である。
【００３３】
単語「治療する」、「治療」及び「治療すること」には、疾患の予防及び治療又はその症状の改善、並びに疾患の原因の治療が含まれると理解されたい。治療を必要とする人々には、治療されるべき疾患又は障害がすでにある人々、並びに疾患又は障害を予防すべき人々、治療への抵抗性を示す患者、又は再発し易い患者が含まれる。従って、患者は、疾患又は障害を有すると診断されていても、疾患への素因があるか又はそれに罹り易いか又は再発し易くてもよく、あるいは治療に抵抗性である。
【００３４】
表現「治療有効量」は、本明細書に考察する血液系腫瘍又は他のＢ細胞関連腫瘍の治療又は予防、又はその症状の改善に有効な医薬物質（例えば、本明細書に開示する阻害性化合物、及び／又はＢ細胞除去抗体）の量を意味する。
【００３５】
上記に考察したように、本明細書に詳しく開示される化合物が含まれるＣＨＫ１阻害剤は、本明細書において以下に詳しく記載する本発明の方法に従えば、Ｂ細胞除去抗体、特にＢ細胞除去抗ＣＤ２０抗体、特にリツキシマブとの組合せ療法において、ＤＮＡ傷害剤又は他の形態の癌治療薬に抵抗性であり得るものが含まれる、血液系腫瘍と他のＢ細胞関連腫瘍の治療に有用であると考慮される。
【００３６】
本明細書に開示する方法は、少なくとも１つの他の化学療法剤の投与の前に、それと同時に、又はその後で患者へ投与することができて（例えば、本発明では、３及びさらに多数の薬剤の組合せが考慮される）、悪性細胞によってしばしば明示される化学療法剤への抵抗性を回避する、減らす、又は克服するのに有用であり得る。患者には、化学療法又は他の癌治療法の後で再発した可能性がある患者、又はその悪性腫瘍又は腫瘍が化学療法や他の癌治療法に抵抗性である患者が含まれる。事実、Ｂ細胞の抵抗性がしばしば明らかになるのは、患者が療法剤での初期治療の後で再発したか又はそれに対して抵抗性であってからのことなので、本発明の方法には、Ｂ細胞リンパ腫又は白血病のような血液系腫瘍があって、化学療法又は他の癌治療法の後で再発したか又はそれへの抵抗性が実証された患者を治療することがしばしば含まれる。例えば、ＣＬＬに罹患している人々には、フルダラビンへの抵抗性が頻繁に見られるので、本明細書では、本発明の方法がそのような個体を治療するのに有用であろうと考慮される。加えて、本明細書に開示する組合せ療法はまた、新たに血液系腫瘍と診断された患者において、再発の可能性を減らして、療法への応答の長さ及び期間を増やすために、他の療法と併用して、又は他の療法の前又は後で使用してよい。
【００３７】
本発明の方法は、多種多様な血液系腫瘍、具体的には、限定されないが、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度び慢性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度非切れ込み小細胞ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ及びワルデンシュトローム型マクログロブリン血症、慢性白血球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、単球性白血病、骨髄性白血病、及び前骨髄球性白血病が含まれるＢ細胞リンパ腫及び白血病を治療するのに適している。上記に考察したように、当業者には、これらのリンパ腫が、例えば、異なる分類体系（例えば、特定の悪性腫瘍の細胞学又は「攻撃性」のレベルに基づく）の存在のために異なる名称で知られる場合があることがわかっている。本明細書において先に考察したように、標的指向すべき特別な疾患は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。
【００３８】
本発明の方法には、固形の非リンパ系腫瘍のようなＢ細胞関連腫瘍を治療するための方法が含まれる。この方法では、ＣＨＫ１阻害剤とＢ細胞除去抗体、例えばリツキシマブを固形腫瘍部位へ、例えば腫瘍部位の近傍での注射又はそれへの直接の注射によって、例えば腫瘍近傍の静脈での静脈内注射によって、同時に又は連続的に（例えば、前又は後に）固形腫瘍部位へ投与してよい。
【００３９】
本発明にまた含まれるのは、開示される方法を達成するためのキットである。本発明によるキットは、少なくとも１つのＣＨＫ１阻害剤と少なくとも１つのＢ細胞除去抗体を含み、これらは、医薬的に許容される担体と容易に混合又は再懸濁させて、簡便にも患者へ注射することができる。
【００４０】
本明細書に開示される化合物は、そのいずれも当業者に馴染みである様々なやり方で、例えば、舌下、筋肉内、皮下、局所、鼻腔内、腹腔内、胸内、静脈内、硬膜外、鞘内、脳室内に、関節への注射で、又は適切な場合は経口的に（典型的には、抗体の投与では禁忌である）投与してよい。
【００４１】
投与量は、投与の経路、疾患の重症度、患者の年齢及び体重、並びに特定の患者に最も適したものとして個別の方式と投与量レベルを決定するときに担当医が通常考慮する他の要因に依存するものである。加えて、医薬組成物は、単位剤形であり得る。そのような形態において、組成物は、適正量の有効成分を含有する単位用量へ分割される。単位剤形は、包装された調製物であり得て、このパッケージは、離散量の調製物、例えば、小包装の錠剤、カプセル剤、及びバイアル又はアンプル中の散剤を含有する。この単位剤形はまた、カプセル剤、カシェ剤、又は錠剤そのものであってもよく、それは、これらパッケージ形態のいずれかの適正数であり得る。
【００４２】
一般に、具体的には本明細書に開示されるものが含まれるＣＨＫ１阻害剤に関しては、例えば、上記に示したような疾患の治療への満足すべき結果は、約０．０１〜２．０ｍｇ／ｋｇのオーダーの投与量で得られることが示されている。それ故、より大型の動物、例えばヒトでは、指定の１日投与量は、約０．７５〜１０００ｍｇの範囲であり得る。
【００４３】
患者と疾患の程度に依存して、抗Ｂ細胞標的結合抗体（例、Ｂ細胞除去抗体）、例えばリツキシマブは、０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、そして最も好ましくは約０．４〜２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の投与量で投与してよい。ＣＨＫ１阻害剤との組合せ療法の方式では、Ｂリンパ腫細胞の増殖ポテンシャルが抑えられる可能性があるので、有効な投与量はより低くてよい。Ｂ細胞除去抗体の有効量は、組合せ療法に利用するＣＨＫ１阻害剤とその量に依存して、当業者には明らかであろう。
【００４４】
本明細書に開示される化合物及び抗体より医薬組成物を調製するために、不活性な医薬的に許容される担体は、固体でも液体でもよい。固形調製物には、散剤、錠剤、分散可能な顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、及び坐剤が含まれる。用語「組成物」には、有効成分（他の担体と一緒か又は一緒でない）が担体に囲まれることによりそれと結合しているカプセル剤を提供する、担体としての被包化材料と有効成分の製剤が含まれると企図される。同様に、カシェ剤が含まれる。錠剤、散剤、カシェ剤、及びカプセル剤は、経口投与に適した固体剤形として使用することができる。
【００４５】
固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、又は錠剤崩壊剤としても作用する１以上の物質であってよく；それはまた、被包化材料であってもよい。
【００４６】
散剤において、担体は、微細化した有効成分と混合される、微細化した固形物であってよい。錠剤において、有効成分は、必要な結合特性を有する担体と好適な比率で混合して、所望される形状及び大きさに圧縮してよい。
【００４７】
坐剤組成物を調製するには、脂肪酸グリセリドとココア脂の混合物のような低温融解性ワックスをはじめに融かして、例えば撹拌によって、有効成分をその中に分散させる。次いで、この融けた均質の混合物を慣用の大きさの型へ注いで、そのまま冷やして固まらせる。
【００４８】
好適な担体には、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、乳糖、糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低温融解性ワックス、ココア脂、等が含まれる。
【００４９】
液状組成物には、溶液剤、懸濁液剤、及び乳剤が含まれる。非経口投与に適した液体調製物の例としては、有効成分の滅菌水溶液剤又は水−プロピレングリコール溶液剤に言及してよい。液体組成物はまた、水性ポリエチレングリコール溶液中の溶液に製剤化することができる。経口投与用の水溶液剤は、有効成分を水に溶かして好適な着色剤、香味剤、安定化剤、及び濃化剤を所望に応じて加えることによって調製することができる。経口使用のための水性懸濁液剤は、微細化した有効成分を、天然合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及び医薬製剤技術の分野で知られている他の懸濁剤と一緒に水に分散させることによって作製することができる。
【００５０】
本発明の方法に使用のＣＨＫ１阻害剤には、遊離型、又は該化合物の医薬的に許容される塩の形態、又は該化合物又は塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態の化合物が含まれる。本発明ではどのＣＨＫ１阻害剤を使用してもよく、これらには、例えば、上述のＣＨＫ１阻害剤が含まれる。特に、ＣＨＫ１阻害剤には、ＷＯ２００５／０６６１６３に開示されるチオフェンカルボキサミドが含まれる。これらのＣＨＫ１阻害剤は、限定されないが、ＷＯ２００５／０６６１６３（この内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に詳しく記載された合成の方法が含まれる、有機合成の当業者によく知られたいくつかの方法で製造することができる。ＣＨＫ１阻害剤として注目されるチオフェンカルボキサミドには、式（Ｉ）：
【００５１】
【化１】
2010525046.tif 000003
【００５２】
［式中：Ｘは、ＮＨ、Ｓ、及びＯより選択され；
Ｙは、ＣＨ又はＮより選択され；
Ｒ１は、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、−ＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、及びヘテロシクリルより選択され、但し、Ｒ１は、チエニルではなく；そしてここでＲ１は、１以上の炭素上で、１以上のＲ９により置換されていてもよく；そしてここで前記Ｒ１が−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ１０より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ２とＲ３は、それぞれ独立して、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、−ＳＯ２ＮＲ１６Ｒ１７、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ４、及び−ＮＨＣ（＝ＮＲ８）ＮＨ２より選択され；
Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、−ＮＲ１１Ｒ１２、ベンジル、Ｃ１−６アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、メルカプト、ＣＨＯ、−ＣＯアリール、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２アリール、−ＣＯ２ＮＲ３０Ｒ３１、−Ｓアルキル、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓアリール、−ＳＯアリール、−ＳＯ２アリール、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１、及び−（Ｃ１−６アルキル）ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され、ここでＲ４は、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ１５により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、その窒素は、Ｒ１４より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ６とＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、（Ｃ１−３アルキル）ＮＲ１１Ｒ１２、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、シクロアルキル、及び少なくとも１つの窒素原子を含有する５、６、又は７員ヘテロシクリル環より選択され、但し、Ｒ６とＲ７は、両方がＨであることはなく；あるいは、Ｒ６とＲ７は、それらが付くＮと一緒に複素環式環を形成し；ここでＲ６とＲ７は、互いに独立して、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ１８により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ１９より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ８は、シアノ、イソシアノ、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２−アリール；−ＳＯ２シクロアルキル、−ＳＯ２シクロアルケニル、−ＳＯ２ヘテロシクリル、及びＣＦ３より選択され；ここでＲ８は、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ２３により置換されていてもよく；
Ｒ９、Ｒ１５、Ｒ１８、Ｒ２３、Ｒ２４、及びＲ３３は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＲ３０Ｒ３１、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され；ここでＲ９、Ｒ１５、Ｒ１８、Ｒ２３、Ｒ２４、及びＲ３３は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２０により、そしてＮＨ又はＮＨ２を含有するいずれの部分の窒素上でＲ２１により置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１４、Ｒ１９、Ｒ２５、及びＲ３４は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＲ３０Ｒ３１、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され；ここで、Ｒ１０、Ｒ１４、Ｒ１９、Ｒ２５、及びＲ３４は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２２により、そしてＮＨ又はＮＨ２を含有するいずれの部分の窒素上でＲ２３により置換されていてもよく；
Ｒ１１とＲ１２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリルより独立して選択され；あるいは、Ｒ１１とＲ１２は、それらが付くＮと一緒に複素環式環を形成し；ここでＲ１１とＲ１２は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ３３により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ３４より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ１６とＲ１７は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、Ｃ１−６アルコキシ、ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、（Ｃ１−３アルキル）ＮＲ１１Ｒ１２、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、シクロアルキル、アリール、又は少なくとも１つの窒素原子を含有する５、６、又は７員ヘテロシクリル環より選択され、但し、Ｒ１６とＲ１７は、両方がＨであることはなく；あるいは、Ｒ１６とＲ１７は、それらが付くＮと一緒に、置換されていてもよい複素環式環を形成し；ここでＲ１６とＲ１７は、互いに独立して、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ２４により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ２５より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ２０、Ｒ２２、及びＲ３２は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＲ３０Ｒ３１、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され；ここで、Ｒ２０、Ｒ２１、及びＲ３２は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２６により、そしてＮＨ又はＮＨ２を含有するいずれの部分の窒素上でＲ２７により置換されていてもよく；
Ｒ２１、Ｒ２３、及びＲ３５は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＲ３０Ｒ３１、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され；ここで、Ｒ２１、Ｒ２３、及びＲ３５は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２８により、そしてＮＨを含有するいずれの部分の窒素上でＲ２９により置換されていてもよく；
Ｒ２６とＲ２８は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＲ３０Ｒ３１、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され；
Ｒ２７とＲ２９は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＲ３０Ｒ３１、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ３０Ｒ３１より選択され；
Ｒ３０とＲ３１は、それぞれ独立して、ハロゲン、ニトロ、−ＮＨ２、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ１１Ｒ１２、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＨＣＯアルキル、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ３０Ｒ３１、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２（アリール）、−ＣＯ２（ＮＲ３０Ｒ３１）、メルカプト、−Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２ＮＲ１１Ｒ１２より選択され；ここでＲ３０とＲ３１は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ３２により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−又はＮＨ２部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ３５より選択される基により置換されていてもよい］に示すような上述のＷＯ２００５／０６６１６３の化合物、又はその医薬的に許容される塩が含まれる；
但し、ＸがＳであり；ＹがＣＨであり；Ｒ２がＣ（＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７であり、そしてＲ３がＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＲ４である場合；そのときＲ１は、
【００５３】
【化２】
2010525046.tif 000004
【００５４】
［式中、Ｒ５は、Ｈ、置換されていてもよいカルボシクリル、又は置換されていてもよいＣ１−６アルキルより選択される］であり得ない；さらなる条件として、前記化合物は：
５−メチル−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（１−エチル−ピペリジン−３−イル）−アミド；
［３−（（Ｓ）−３−アミノ−アゼパン−１−カルボニル）−５−エチル−チオフェン−２−イル］−尿素；
２−モルホリン−４−イル−４−ウレイド−チアゾール−５−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
２−メチル−５−ウレイド−オキサゾール−４−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
５−（４−クロロ−フェニル）−３−｛３−［（Ｒ）−１−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−ピペリジン−３−イル］−ウレイド｝−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；又は
Ｎ−（３−｛［（３Ｓ）−３−アミノアゼパン−１−イル］カルボニル｝−５−ピリジン−２−イル−２−チエニル）尿素ではない。
【００５５】
特に注目される式（Ｉ）の化合物には、以下が含まれる：
１．１：５−（３−フルオロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．２：５−フェニル−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．３：５−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．４：５−（４−フルオロ−フェニル）−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．５：５−（４−クロロ−フェニル）−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．６：５−（３−クロロ−フェニル）−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．７：５−［４−（ピペリジン−１−カルボニル）−フェニル］−２−ウレイド−チオフェン−３−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．８：５−（４−シアノ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．９：５−［４−（ピペリジン−１−カルボニル）−フェニル］−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１０：５−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１１：５−（３−クロロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１２：５−（２，３−ジフルオロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１３：５−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１４：５−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１５：５−フェニル−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド；
１．１６：５−（４−クロロ−フェニル）−３−ウレイド−チオフェン−２−カルボン酸（Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミド。
【００５６】
追加のＣＨＫ１阻害剤には、ＷＯ２００６／１０６３２６に開示される式（ＩＩ）：
【００５７】
【化３】
2010525046.tif 000005
【００５８】
［式中：
ＡとＤは、それぞれ独立して、Ｎ、ＣＨ、Ｓ、Ｏ、及びＮＲ４より選択され；
Ｌは、ＮＲ５、Ｏ、及びＳより選択され；
ＸとＹは、それぞれ独立して、Ｎ及びＣＨより選択され；
Ｒ１は、シアノ、ハロ；Ｃ１−６アルキル、−ＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ＯＲ６；−ＣＯカルボシクリル、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９、及び−（Ｃ１−６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２であり、ｙは、独立して、１又は２である）；そしてここでＲ１は、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ９により置換されていてもよく；そしてここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ１０より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ２は、（Ｃ１−３アルキル）ＮＲ７Ｒ８、少なくとも１つの窒素原子を含有する４〜７員ヘテロシクリル環、−ＣＯカルボシクリル、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−ＣＯ２ヘテロシクリル、−ＣＯ２ＮＲ２８Ｒ２９、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）ｘシクロアルケニル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９、及び−（Ｃ１−６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２であり、ｙは、独立して、１又は２である）、そしてここでＲ２は、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ１３により置換されていてもよく；そしてさらにここで、ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ１４より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ３は、Ｈ、ベンジル、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ＯＲ６、ＣＨＯ、−ＣＯカルボシクリル、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９、及び−（Ｃ１−６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２であり、ｙは、独立して、１又は２である）、そしてここでＲ３は、１以上の炭素原子上で、１以上のＲ１５により置換されていてもよく；そしてここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、その窒素は、Ｒ１６より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−３アルキル、シクロプロピル、及びＣＦ３より選択され；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、及びＯＲ６より選択され；ここでＲ５は、炭素上で、１以上のＲ１７により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ１８より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、及びヘテロシクリルより選択され；ここでＲ６は、炭素上で、１以上のＲ１９により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ２４より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ７とＲ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、及びヘテロシクリルより独立して選択され；ここでＲ７とＲ８は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２０により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ２１より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ１１とＲ１２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリルより独立して選択され、ここでＲ１１とＲ１２は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ３２により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ３３より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ９、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ３２、及びＲ３４は、それぞれ独立して、ハロ、ニトロ、−ＮＲ２８Ｒ２９、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏカルボシクリル、−Ｏヘテロシクリル、−Ｏアリール、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣＯカルボシクリル、−ＮＨＣＯ（ヘテロシクリル）、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯシクロアルケニル、−ＣＯアリール、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−ＣＯ２ヘテロシクリル、−ＯＣ（Ｏ）（ＮＲ２８Ｒ２９）、メルカプト、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、及び−Ｓ（Ｏ）ｘＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２である）、ここでＲ９、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ３２、及びＲ３４は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２２により置換されていてもよく、そしてここでヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ２３より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１４、Ｒ１６、Ｒ１８、Ｒ２１、Ｒ２４、Ｒ３３、及びＲ３５は、それぞれ独立して、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏカルボシクリル、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯカルボシクリル−ＣＯアリール、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−ＣＯ２ヘテロシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、及び−Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２であり、ｙは、独立して、１又は２である）、ここでＲ１０、Ｒ１４、Ｒ１６、Ｒ１８、Ｒ２１、Ｒ２４、Ｒ３３、及びＲ３５は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ２５により置換されていてもよく、そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ２６より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ２２とＲ２５は、それぞれ独立して、ハロ、ニトロ、−ＮＲ２８Ｒ２９、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏカルボシクリル、−Ｏヘテロシクリル、−Ｏアリール、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣＯカルボシクリル、−ＮＨＣＯ（ヘテロシクリル）、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯシクロアルケニル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−ＯＣ（Ｏ）（ＮＲ２８Ｒ２９）、メルカプト、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、及び−Ｓ（Ｏ）ｘＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２である）、ここでＲ２２とＲ２５は、炭素上で１以上のＲ３６により置換されていてもよく、そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ２７より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ２３とＲ２６は、それぞれ独立して、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏカルボシクリル、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯシクロアルケニル、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、及び−Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２であり、ｙは、独立して、１又は２である）、ここでＲ２３とＲ２６は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ３０により置換されていてもよく、そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−部分を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ３１より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ２８とＲ２９は、それぞれ独立して、Ｈ、アミノ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏアリール、−ＯＣＯアルキル、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯシクロアルケニル、−ＳＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）より選択され、ここでＲ２８とＲ２９は、互いに独立して、炭素上で１以上のＲ３４により置換されていてもよく；そしてここで前記ヘテロシクリルが−ＮＨ−を含有するならば、前記部分の窒素は、Ｒ３５より選択される基により置換されていてもよく；
Ｒ３０とＲ３６は、それぞれ独立して、ハロ、ニトロ、−ＮＲ２８Ｒ２９、シアノ、イソシアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ケト（＝Ｏ）、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏカルボシクリル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−ＮＨＣＨＯ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＨＯ、−ＮＨＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣＯカルボシクリル、−ＮＨＣＯ（ヘテロシクリル）、−ＮＨＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）；−ＮＨＣＯ２Ｈ、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、カルボキシ、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯシクロアルケニル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−ＯＣ（Ｏ）（ＮＲ２８Ｒ２９）、メルカプト、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、及び−Ｓ（Ｏ）ｘＮＲ２８Ｒ２９より選択され（ここでｘは、独立して、０〜２である）；
Ｒ２７とＲ３１は、それぞれ独立して、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、−Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｏカルボシクリル、−（Ｃ１−６アルキル）−Ｏ−（Ｃ１−６アルキル）、−アミジノ、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＲ２８Ｒ２９、−ＣＯ（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯヘテロシクリル、−ＣＯシクロアルキル、−ＣＯシクロアルケニル、−ＣＯ２（Ｃ１−６アルキル）、−ＣＯ２カルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｘカルボシクリル、−Ｓ（Ｏ）ｘヘテロシクリル、及び−Ｓ（Ｏ）ｙＮＲ２８Ｒ２９より選択される（ここでｘは、独立して、０〜２であり、ｙは、独立して、１又は２である）］の置換複素環、又はその医薬的に許容される塩が含まれる。
【００５９】
特に注目される式（ＩＩ）の化合物には、以下が含まれる：
１．１７：２−フェニル−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．１８：４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．１９：２−（３−フルオロフェニル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２０：４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−２−（２−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２１：２−（４−フルオロフェニル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２２：２−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２３：２−（１−ベンジル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２４：４−｛メチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２５：２−（３−フルオロフェニル）−４−｛メチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２６：２−（４−フルオロフェニル）−４−｛メチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２７：４−｛メチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２８：４−｛［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．２９：２−（３−フルオロフェニル）−４−｛［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３０：４−｛［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３１：２−（４−フルオロフェニル）−４−｛［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３２：４−｛［（２Ｒ，３Ｓ）−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３３：４−｛［（２Ｒ，３Ｓ）−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３４：４−｛メチル［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３５：４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３６：４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−（３−フルオロフェニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３７：４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３８：４−［（６−メチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．３９：４−［（６−メチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．４０：２−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル｝−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．４１：４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−２−［４−（ピペリジン−１−イルメチル）フェニル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．４２：２−［４−（モルホリン−４−イルメチル）フェニル］−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．４３：２−（４−クロロフェニル）−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド；
１．４４：２−（４−フルオロフェニル）−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド；
１．４５：２−フェニル−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド；
１．４６：２−（３−フルオロフェニル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド；
１．４７：２−（４−クロロフェニル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド；
１．４８：２−（４−フルオロフェニル）−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド；
１．４９：４−｛エチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．５０：４−｛エチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−（３−チエニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．５１：４−［（ｔｒａｎｓ−２−エチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド；
１．５２：４−［（ｃｉｓ−２−エチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド。
【００６０】
式１．１７〜１．５２の化合物は、限定されないが、ＷＯ２００６／１０６３２６に記載されるものと本明細書で下記に提供するものが含まれる、有機合成の技術分野の当業者によく知られた数多くのやり方で製造することができる。
【００６１】
式１．１７、２−フェニル−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドは、下記に記載するように製造することができる：
工程１：
（２Ｚ）−３−シアノ−３−（２−チエニル）アクリル酸。２−チエニルアセトニトリル（２４．８ｇ，０．２０モル）のＭｅＯＨ（３００ｍＬ）撹拌溶液へグリオキシル酸一水和物（１８．５ｇ，０．２０モル）と炭酸カリウム（２５．５ｇ，０．２０モル）を加える。この反応スラリーを窒素雰囲気下に置いて、加熱して還流させる。２時間後、この反応混合物を室温へ冷やして、生成物を濾過により得る。濾過ケークを多量のＭｅＯＨで洗浄してから、真空オーブン中で一晩乾燥させて、４３．１ｇ（９９％）の表題化合物を白い結晶性のカリウム塩として得る。
【００６２】
工程２：
塩化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（２−チエニル）アクリロイル。１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の塩化オキサリル（２．６ｍＬ，３０ミリモル）の撹拌溶液へ２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶かした（２Ｚ）−３−シアノ−３−（２−チエニル）アクリル酸カリウム塩（２．２ｇ，１２．３ミリモル）の溶液を加える。粘稠な不均質の反応混合物を容易に撹拌することができるまで、追加量のＣＨ２Ｃｌ２を加える。この反応物を室温で約１時間撹拌する。固形物を濾過により取り出して、十分量のＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する。濾液と洗液を合わせて真空で濃縮して、２．０ｇの表題化合物を得て、これを次の工程に使用する。
【００６３】
工程３：
アジ化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（２−チエニル）アクリロイル。ジオキサン／水の５０：５０混合物（２０ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（２．０ｇ，３０ミリモル）の迅速撹拌懸濁液へ１０ｍＬのジオキサンに溶かした塩化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（２−チエニル）アクリロイル（２．０ｇ，１２．３ミリモル）の溶液を０℃で加える。この反応物を０℃で３０分間撹拌してから、さらに１〜２時間撹拌後、そのまま室温へ達せしめる。次いで、この反応物を約１００ｍＬの水へ加える。生成する沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブン中で一晩乾燥させて、表題のアジド（２．０ｇ）を白い固形物として得て、これをさらに精製せずに次の工程に使用する。
【００６４】
工程４：
４−オキソ−４，５−ジヒドロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル。ジフェニルエーテル（２６０ｍＬ）及びＢｕ３Ｎ（５３ｍＬ）の混合物を窒素流下に２１０℃まで加熱する。ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中のアジ化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（２−チエニル）アクリロイル（１５．０ｇ，７３．５ミリモル）のスラリーを２時間にわたり滴下する（Ｎ２ガスの激しい発生）。添加が完了した後で、この反応物を２１０℃でさらに１０分間撹拌してから、この反応物をそのまま室温へ、次いで氷浴において冷やす。ヘキサン（５００ｍＬ）を加えて、沈殿を吸引下に濾過して取り、多量のヘキサンで洗浄する。得られた固形物を真空オーブン中で一晩（加熱せずに）乾燥させて、表題化合物（９．８９ｇ，７６％）を薄褐色の固形物として得る。
【００６５】
工程５：
２−ブロモ−４−オキソ−４，５−ジヒドロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル。ＤＭＦ／酢酸の５０：５０混合物（２０ｍＬ）中の４−オキソ−４，５−ジヒドロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル（０．８ｇ，４．５ミリモル）の溶液にＮ−ブロモスクシンイミド（１．６ｇ，９ミリモル）を入れる。この黒ずんだ反応混合物を８０℃まで１２時間加熱する。室温へ冷却後、この反応物を約１００ｍＬの水へ撹拌しながら加える。この濁った溶液のｐＨを飽和ＮａＨＣＯ３で９〜１０へ調整する。生成物を濾過により得て、水で洗浄して、真空オーブン中で乾燥させる（１．１ｇ，１００％）。
【００６６】
工程６：
２−ブロモ−４−クロロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル。ＰＯＣｌ３（１０ｍＬ）に溶かした２−ブロモ−４−オキソ−４，５−ジヒドロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル（１．１ｇ，４．５ミリモル）の溶液を加熱して一晩還流させる。室温へ冷却後、この反応物を真空で濃縮乾固させる。この固形物を約５０〜１００ｍＬの水にゆっくりかつ慎重に懸濁させる。生成物を濾過により得て、水、飽和ＮａＨＣＯ３、水での洗浄と真空オーブンでの乾燥を続ける（１．０ｇ，８３％）。
【００６７】
工程７：
（３Ｓ）−３−［（７−シアノ−２−ブロモチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。２−ブロモ−４−クロロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル（０．４８ｇ，１．７６ミリモル）及び（３Ｓ）−３−アミノピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．４０ｇ，２．０ミリモル）のＮＭＰ（５ｍＬ）撹拌溶液へ炭酸カリウム（０．５ｇ，３．５２ミリモル）を加える。この不均質な混合物を８０℃まで２時間加熱し、室温へ冷やしてから、約５０ｍＬの水へ加える。生成物（８８０ｍｇ）を濾過により単離して、乾燥させる。表題化合物を、ＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；３０〜５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）を使用してさらに精製して、０．５４ｇ（７０％）を淡黄色の結晶性固形物として得る。
【００６８】
工程８：
（３Ｓ）−３−｛［７−シアノ−２−（フェニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。（３Ｓ）−３−［（７−シアノ−２−ブロモチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．１８ｇ．０．４１ミリモル）、フェニルボロン酸（０．０７６ｇ，０．６２ミリモル）、パラジウム（０）テトラキストリフェニルホスフィン（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）、（０．１０ｇ，０．０６２ミリモル）、及び炭酸セシウム（０．４１ｇ，１．２５ミリモル）の混合物を水（１ｍＬ）とジオキサン（３ｍＬ）に溶かす。この反応混合物を窒素雰囲気下に８０℃で１時間撹拌してから、そのまま室温へ冷やす。水はピペットで除いて、ジオキサンを真空で除去する。残渣をＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；３０〜６０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、表題化合物（１４０ｍｇ，７８％）を得る。
【００６９】
工程９：
２−フェニル−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド。（３Ｓ）−３−｛［７−シアノ−２−（フェニル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８０ｍｇ，０．１８ミリモル）及び１２Ｎ  ＨＣｌ（濃塩酸、４ｍＬ）の溶液を２４時間撹拌する。水（１０〜２０ｍＬ）を加えて、溶液のｐＨを飽和ＮａＨＣＯ３で１０〜１１へ調整する。この物質を濾過により単離して、少量の冷水で洗浄する。この物質を乾燥させてから、ＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；ＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２；２：１０：８８）により精製して、表題化合物（２４ｍｇ，３８％）を得る。
【００７０】
式１．１８〜１．２３は、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、式１．１７に類似したやり方で作製することができる。
【００７１】
式１．２４の化合物、４−｛メチル［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドは、工程７の出発材料として（３Ｓ）−３−（メチルアミノ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（合成法は下記に記載する）を使用すること以外は、式１．１７に類似したやり方で製造することができる：
（３Ｓ）−３−（メチルアミノ）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。３オングストローム分子篩いを含有する２０ｍｌ乾燥ＭｅＯＨ中のホルムアルデヒド（３７％水溶液；０．３７ｍｌ，４．７ミリモル）の溶液へ（３Ｓ）−３−アミノピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０ｇ，５ミリモル）を加える。この反応物をＮ２下に室温で約３０時間撹拌してから、ＮａＢＨ４（３０４ｍｇ，８ミリモル）を固形物として加える。この反応物を室温で一晩撹拌してから、１Ｎ  ＮａＯＨ（約１０ｍｌ）でクエンチする。相を分離させて、残る水層をエーテル（３×）で抽出する。合わせた有機層を水と塩水で洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、無色のオイル（１．０４ｇ，１００％）を得る。
【００７２】
式１．２５〜１．２７は、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、式１．２４に類似したやり方で作製することができる。
【００７３】
式１．２８、４−｛［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドは、工程７の出発材料としてｔｒａｎｓ−３−アミノ−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（合成法は下記に記載する）を使用すること以外は、式１．１７に類似したやり方で製造することができる：
（（１Ｓ）−１−アセチル−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル。Ｎ５−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−オルニチン（３６．６ｇ，１００ミリモル）を含有する、磁気撹拌子と滴下漏斗を取り付けた三つ首フラスコへ乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）を加える。滴下漏斗にＭｅＬｉ（エーテル中１．６Ｍ；２７５ｍＬ；４４０ミリモル）を入れ、引き続き、０℃へ冷やした反応混合物へこれをゆっくり（２０分にわたり）加える。次いで、この溶液を室温へ温める。さらに５時間撹拌後、この反応物を、撹拌した氷／水混合物上へ注ぐことによってクエンチする。この水性混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出する。次いで、合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、黄色いオイル（６．０ｇ，９８％）を得る。ＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；２５〜６０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用する精製の後で、生成物（５．２ｇ，１４％）を澄明なオイルとして単離する。
【００７４】
［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル。（（１Ｓ）−１−アセチル−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．９ｇ，１０．７ミリモル）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）撹拌溶液へ１０％  Ｐｄ／Ｃ（０．１ミリモル）を加える。この不均質な混合物を大気圧で３日間（又は４０ｐｓｉで一晩）水素化する。珪藻土に通す濾過と濾液の蒸発の後で生成物を澄明なオイルとして単離して表題化合物（２．３ｇ；１００％）を得て、これを精製せずに次の工程に使用する。
【００７５】
ｔｒａｎｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル。０℃へ冷やしたＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）に溶かした［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．３ｇ，１０．７ミリモル）及びジイソプロピルエチルアミン（２．１ｍＬ，１２ミリモル）の撹拌溶液へクロロギ酸ベンジル（１．７ｍＬ，１２ミリモル）を加える。次いで、この反応混合物を室温へ温めて、さらに１時間撹拌する。次いで、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌと塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、黄色いオイルを得る。ＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；１０〜４０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用する精製の後で、表題化合物（ｔｒａｎｓジアステレオマー）（１．８ｇ）を結晶性の固形物として単離する。ｃｉｓジアステレオマー、ｃｉｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（１．３ｇ）も純粋に単離される。
【００７６】
ｔｒａｎｓ−３−アミノ−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル。ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かしたｔｒａｎｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（１．８ｇ，５．２ミリモル）の溶液へＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ；２０ｍＬ）を加える。室温で１時間撹拌後、この反応物を真空で濃縮し、ＭｅＯＨに再び溶かしてから、真空で濃縮して、表題化合物の塩酸塩（１．４６ｇ，１００％）を澄明な結晶性固形物として得る。
【００７７】
式１．２９〜１．３１の化合物は、工程７の出発材料としてｃｉｓ−３−アミノ−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（下記に記載する）を使用すること以外は、式１．１７に類似したやり方で製造することができる：
ｃｉｓ−３−アミノ−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル。ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かしたｃｉｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（１．２ｇ，３．４ミリモル）の溶液へＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ；２０ｍＬ）を加える。室温で１時間撹拌後、この反応物を真空で濃縮し、ＭｅＯＨに再び溶かしてから、真空で濃縮して、表題化合物の塩酸塩（０．９７ｇ，１００％）を澄明な結晶性固形物として得る。
【００７８】
式１．３２は、式１．２８の化合物のキラル分取用ＨＰＬＣ分離によって製造することができる。
【００７９】
式１．３３は、式１．３０の化合物のキラル分取用ＨＰＬＣ分離によって製造することができる。
【００８０】
式１．３４、４−｛メチル［ｔｒａｎｓ−２−メチルピペリジン−３−イル］アミノ｝−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドは、工程７の出発材料としてｔｒａｎｓ−２−メチル−３−（メチルアミノ）ピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（合成法は下記に記載する）を使用すること以外は、式１．１７に類似したやり方で製造することができる：
ｔｒａｎｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル。ｔｒａｎｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（０．１０ｇ，０．２９ミリモル）の１０ｍＬ乾燥ＴＨＦ溶液へＮ２雰囲気下に水素化ナトリウム（鉱油中６０％；８ｍｇ，０．３２ミリモル）を加える。この溶液を３０分間撹拌してから、ヨウ化メチル（０．０１７ｍＬ，０．２８７ミリモル）を加える。この反応混合物を２時間撹拌し、１０ｍＬのＭｅＯＨをゆっくり加えて、この反応物をクエンチする。内容物を真空濃縮し、残渣を３０ｍＬ  ＣＨ２Ｃｌ２に溶かして、水（２×）で洗浄する。有機層を真空濃縮して０．１６ｇの表題生成物を得る。
【００８１】
ｔｒａｎｓ−２−メチル−３−（メチルアミノ）ピペリジン−１−カルボン酸ベンジル。ＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶かしたｔｒａｎｓ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］−２−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（０．１６ｇ０．４５ミリモル）の溶液へＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ；４ｍＬ）を加える。室温で２時間撹拌後、この反応物を真空で濃縮し、ＭｅＯＨに再び溶かしてから真空で濃縮して、表題化合物の塩酸塩（０．１２ｇ）を油状の結晶性固形物として得る。
【００８２】
式１．３５、４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドは、以下のように製造することができる：
２，６−ジメチルピペリジン−３−アミン。２，６−ジメチルピリジン−３−アミン（２．０８ｇ，１７．０ミリモル）を含有する高圧容器へ水と１２Ｎ  ＨＣｌ（それぞれ１０ｍＬ）に続いて酸化白金（ＩＶ）（５００ｍｇ，２．２０ミリモル）を窒素下に加える。次いで、この高圧容器を減圧下に脱気して、Ｐａｒｒ水素化装置上に５０ｐｓｉで４８時間置く。この混合物を窒素下に脱気し、珪藻土のベッド上で濾過して、多量のＭｅＯＨで濯ぐ。採取した濾液を真空で濃縮して表題化合物を得て、これを異性体の混合物として次の反応に直接使用する。
【００８３】
２−ブロモ−４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル。ＮＭＰ（１０ｍＬ）に溶かした２，６−ジメチルピペリジン−３−アミン（１．２３ｇ，４．５０ミリモル）へ炭酸カリウム（１．８７ｇ，１３．５ミリモル）と２−ブロモ−４−クロロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル（１．２３ｇ，４．５０ミリモル）を加える。生じる混合物を８０℃まで加熱して、１２時間か又はＬＣＭＳが生成物への完全な変換を示すまで撹拌する。次いで、この混合物を水（１００ｍＬ）で希釈して、生じる固形物を濾過し、水（２０ｍＬ）で洗浄して、減圧で８時間まで乾燥させる。
【００８４】
４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル。２−ブロモ−４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリル（４００ｍｇ，１．０９ミリモル）、フェニルボロン酸（２００ｍｇ，１．６４ミリモル）、炭酸セシウム（１．０６ｇ，３．２７ミリモル）、及びジオキサン／水（２ｍＬ／１ｍＬ）を含有する溶液へＰｄ（ＰＰｈ３）４（１２６ｍｇ，０．１０９ミリモル）を加える。この反応物を８０℃まで１時間加熱して、この時点で反応物を室温へ冷やし、濾過し、シリカゲルクロマトグラフィー（１００％  ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／３％  ＮＨ４ＯＨ）を使用して精製して、表題化合物を得る。
【００８５】
４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド。４−［（２，６−ジメチルピペリジン−３−イル）アミノ］−２−フェニルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボニトリルを含有するフラスコへ５．００ｍＬの１２Ｎ  ＨＣｌを加える。この反応混合物を室温で撹拌して、ＬＣＭＳによりモニターする。追加の１２Ｎ  ＨＣｌを１２時間ごとに加えて、所望の生成物への完全な変換を得る。完了時に、この反応混合物をＭｅＯＨで希釈し、減圧で濃縮して生成物を得て、これを分取用ＨＰＬＣ（５％〜９５％  Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ／０．１％  ＴＦＡ）により精製して、表題化合物を異性体の混合物として得る。
【００８６】
式１．３６〜１．３９の化合物は、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、式１．３５に類似したやり方で製造することができる。
【００８７】
化合物、２−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル｝−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドは、以下のように製造することができる：
（３Ｓ）−３−｛［７−シアノ−２−（３−ホルミルフェニル）−１−ベンゾチエン−４−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。（３Ｓ）−３−［（７−シアノ−２−ブロモチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５００ｍｇ，１．１ミリモル）、３−ホルミルフェニルボロン酸（２５７ｍｇ，１．７ミリモル）、炭酸セシウム（１．１２ｇ，３．４ミリモル）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（１９８ｍｇ，０．１７ミリモル）の混合物をジオキサン（８．２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２．７ｍＬ）において８０℃まで加熱する。３０分後、この溶液を室温へ冷やし、水層をピペットにより除いて、この溶液を真空で濃縮する。残渣をＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；２０〜５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、表題化合物（１８５ｍｇ，３５％）を得る。
【００８８】
（３Ｓ）−３−［（７−シアノ−２−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル｝−１−ベンゾチエン−４−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。（３Ｓ）−３−｛［７−シアノ−２−（３−ホルミルフェニル）−１−ベンゾチエン−４−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５０ｍｇ，０．１１ミリモル）及びジメチルアミン（ＴＨＦ中２Ｍ溶液の０．５４ｍＬ，１．１ミリモル）の溶液をエチレングリコールジメチルエーテル（０．５４ｍＬ）中に室温で撹拌する。酢酸（２滴）に続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（９２ｍｇ，０．４３ミリモル）を加える。この溶液を８０℃まで３０分間加熱する。次いで、この溶液を室温へ冷やす。水（２滴）に続いて１Ｍ  ＮａＯＨ（１ｍＬ）を加える。生成物をＥｔＯＡｃで抽出する。有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮して表題化合物を得て、これを次の工程に直接使用する。
【００８９】
２−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル｝−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミド。（３Ｓ）−３−［（７−シアノ−２−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル｝−１−ベンゾチエン−４−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを１２Ｍ  ＨＣｌ（４ｍＬ）に溶かして、室温に１７時間保つ。この溶液を真空で濃縮し、ＭｅＯＨと共沸させて、表題化合物（４８ｍｇ，９８％）を塩酸塩として得る。
【００９０】
式１．４０〜１．４２の化合物は、当業者には知られている適正な材料より、２−｛３−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル｝−４−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドに類似したやり方で製造することができる。
【００９１】
化合物、２−（３−フルオロフェニル）−７−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボキサミドは、以下のように製造することができる：
（２Ｚ）−３−シアノ−３−（３−チエニル）アクリル酸。３−チオフェンアセトニトリル（１６６ミリモル）へグリオキシル酸（１７４ミリモル）、ＭｅＯＨ（３３２ｍＬ）、及び炭酸カリウム（１７４ミリモル）を加える。生じる混合物を加熱して３時間還流させ、室温への冷却を続ける。生じる固形物を濾過し、ＭｅＯＨで濯ぎ、真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物（２６．６ｇ，収率９０％）を得る。
【００９２】
塩化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（３−チエニル）アクリロイル。塩化オキサリル（２７．３ｍＬ，３１３ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（５７ｍＬ）溶液へ（２Ｚ）−３−シアノ−３−（３−チエニル）アクリル酸（２６．６ｇ，１４９ミリモル）を少量ずつ加える。生じる溶液を、ＬＣＭＳがこの反応の完了を示すまで、室温で撹拌する。次いで、この反応混合物を濾過して、ＣＨ２Ｃｌ２で濯ぐ。濾液を採取し、減圧で濃縮し、真空で乾燥させて表題化合物（１８．５ｇ，収率６３％）を黄色い固形物として得て、これを次の反応に直接使用する。
【００９３】
アジ化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（３−チエニル）アクリロイル。ジオキサン／水の１：１混合物（２３ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（１２．２ｇ，１８７ミリモル）の溶液へ３３ｍＬジオキサン中の塩化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（３−チエニル）アクリロイル（１８．５ｇ，９３．５ミリモル）を０℃で加える。この反応物を０℃で１５分間撹拌し、この反応物を室温へ温めることを続ける。ほぼ１．５時間後、この反応物へ水（１００ｍＬ）を加えて、生じる固形物を濾過し、真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物（１５．１ｇ，収率８２％）を得る。
【００９４】
７−オキソ−６，７−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボニトリル。フェニルエーテル（２２４ｍＬ）及びトリブチルアミン（５３．０ｍＬ）の溶液へほぼ１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のアジ化（２Ｚ）−３−シアノ−３−（３−チエニル）アクリロイルを２３０℃で滴下する。この混合物を２３０℃で３０分間撹拌し、室温へ冷やし、５００ｍＬヘキサンの添加を続けると、黄色がかった固形物を得る。生じる固形物をヘキサンで洗浄し、真空で乾燥させて、表題化合物（４．６１ｇ，収率４４％）を得る。
【００９５】
２−ブロモ−７−オキソ−６，７−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボニトリル。７−オキソ−６，７−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボニトリル（２．３０ｇ，１３．１ミリモル）の１／１  酢酸／ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液へＮ−ブロモスクシンイミド（１１．６ｇ，６５．３ミリモル）を加える。この反応混合物を８０℃まで１時間加熱する。この溶液を室温へ冷やして、１００ｍＬの水で希釈する。次いで、この反応物を飽和重炭酸ナトリウムで中和し、生じる固形物の濾過を続けて、これを真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物（３．２０ｇ，収率９６％）を得る。
【００９６】
２−ブロモ−７−クロロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボニトリル。２−ブロモ−７−オキソ−６，７−ジヒドロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボニトリル（３．２０ｇ，１２．５ミリモル）へ４５．０ｍＬのオキシ塩化リンを加える。この反応物を加熱して一晩還流させると、その後でＬＣＭＳは、反応が完了していることを示した。次いで、この反応物を室温へ冷やして、揮発物質を減圧で除去する。生じる残渣へほぼ２００ｍＬの水を加える。この黒い固形物を濾過し、多量の水で濯ぎ、真空で乾燥させて、表題化合物（２．８０ｇ，収率８２％）を得る。
【００９７】
（３Ｓ）−３−［（２−ブロモ−４−シアノチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−７−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。２−ブロモ−７−クロロチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボニトリル（２．８０ｇ，１０．２ミリモル）のＮＭＰ（１０．０ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（４．２３ｇ，３０．６ミリモル）と（３Ｓ）−３−アミノピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４．９２ｇ，２４．６ミリモル）を加える。この反応混合物を、反応が完了していることをＬＣＭＳが示すまで、１３０℃まで加熱する。次いで、この反応混合物を室温へ冷やして、ほぼ１００ｍＬの水を加える。生じる固形物を濾過し、真空乾燥させて、表題化合物を得る。
【００９８】
（３Ｓ）−３−｛［４−シアノ−２−（３−フルオロフェニル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−７−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。（３Ｓ）−３−［（２−ブロモ−４−シアノチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−７−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４２８ｍｇ，０．９７９ミリモル）へ炭酸セシウム（９５７ｍｇ，２．９４ミリモル）、３−フルオロフェニルボロン酸（２０６ｍｇ，１．４７ミリモル）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１１３ｍｇ，０．０９７９ミリモル）、及びジオキサン／水（４ｍＬ／２ｍＬ）を加える。この反応物を８０℃まで１時間加熱し、この時点で反応物を室温へ冷やし、濾過し、シリカゲルクロマトグラフィー（１００％ヘキサン〜１００％  ＥｔＯＡｃ）を使用して精製して、表題化合物（２４１ｍｇ，収率５４％）を得る。
【００９９】
２−（３−フルオロフェニル）−７−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボキサミド。（３Ｓ）−３−｛［４−シアノ−２−（３−フルオロフェニル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−７−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを含有するフラスコへほぼ２．００ｍＬのＰＰＡを加える。この反応混合物を１１０℃で１２時間撹拌する。この反応混合物を１０．０ｍＬの水で希釈して、６Ｎ  ＮａＯＨで塩基性のｐＨとする。次いで、この混合物をＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）に続いてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１，４×１００ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧で濃縮して生成物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー（１００％  ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／３％  ＮＨ４ＯＨ）により精製して、表題化合物を得る。
【０１００】
式１．４３及び１．４４の化合物は、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、２−（３−フルオロフェニル）−７−［（３Ｓ）−ピペリジン−３−イルアミノ］チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−４−カルボキサミドに類似したやり方で製造することができる。
【０１０１】
化合物、２−フェニル−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミドは、以下のように製造することができる：
２−アミノ−４−ニトロ安息香酸メチル。２−アミノ−４−ニトロ安息香酸（２４ｇ，０．１３２モル）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）溶液へ塩化チオニル（９６ｍＬ）をゆっくり加える。生じる溶液を一晩還流させる。冷却してすぐに、結晶性の生成物（２２．９ｇ，８８％）を濾過により単離して、高真空で乾燥させる。
【０１０２】
４−ニトロ−２−フェニル−１Ｈ−インドール−７−カルボン酸。−１５℃へ冷やした２−アミノ−４−ニトロ安息香酸メチル（２．２ｇ，１１．２ミリモル）及びアセトフェノン（２．８ｇ，２３．３ミリモル）のＤＭＳＯ（３０ｍＬ）溶液へ固形のＫＯｔＢｕ（２．７ｇ，２４ミリモル）を加える。２０分間、そしてさらに室温で２時間撹拌後、この反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（２００ｍＬ）でクエンチしてから、室温でさらに１時間撹拌する。赤い沈殿を濾過し、水で洗浄し、高真空で乾燥させて、表題化合物（２．８５ｇ，９０％）を得る。
【０１０３】
４−ニトロ−２−フェニル−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド。４−ニトロ−２−フェニル−１Ｈ−インドール−７−カルボン酸（０．６０ｇ，２．１ミリモル）及びＮ−メチルモルホリン（２．３ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液へ−１５℃でクロロギ酸イソブチル（０．５ｍＬ，３．８ミリモル）を加える。１時間撹拌後、この反応混合物にＮＨ３（ｇ）を泡立てて１０〜１５分間通してから、室温でさらに１時間撹拌する。溶媒を除去後、残渣をＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；５０〜１００％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、生成物（０．５０ｇ，８５％）を濃黄色の固形物として得る。
【０１０４】
４−アミノ−２−フェニル−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド。ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に溶かした４−ニトロ−２−フェニル−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド（０．５０ｇ，１７．８ミリモル）の窒素パージ撹拌溶液へ１０％  Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加える。生じる不均質な混合物にＨ２（ｇ）バルーンを取り付ける。室温で一晩撹拌後、この反応物を濾過する（０．４５μ，Ｔｅｆｌｏｎ）。濾液を真空で濃縮して、表題化合物（０．３５ｇ，８０％）を淡黄色の固形物として得る。
【０１０５】
３−｛［７−（アミノカルボニル）−２−フェニル−１Ｈ−インドール−４−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル。ＡｃＯＨ（１５ｍＬ）に溶かした４−アミノ−２−フェニル−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド（０．６０ｇ，２．４ミリモル）及び３−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６ｇ，２．８ミリモル）の溶液へＮａ２ＳＯ４を加える。この混合物を室温で１時間撹拌してから、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１．５ｇ，７．２ミリモル）をゆっくり入れる。この反応物を室温で１時間撹拌する。この混合物をＥｔＯＡｃと水で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、１Ｎ  ＨＣｌ、及び飽和ＮａＣｌで洗浄する。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、真空で濃縮する。残渣をＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；５０〜８０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、表題生成物（０．３ｇ，３０％）を黄褐色の固形物として得る。LCMS (ES, M+H = 435; M-H = 433)。
【０１０６】
２−フェニル−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド。３−｛［７−（アミノカルボニル）−２−フェニル−１Ｈ−インドール−４−イル］アミノ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．１５ｇ，０．３５ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）撹拌溶液にジオキサン中４．０Ｎ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）を入れる。この反応物を室温で２時間撹拌してから真空で濃縮して、塩酸塩を得る。残渣をＭｅＯＨ中２．０Ｎ  ＮＨ３（１０ｍＬ）で希釈して、真空で濃縮する。残渣をＭＰＬＣ（ＳｉＯ２；１０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／１．５％  ＮＨ４ＯＨ〜２０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／３％  ＮＨ４ＯＨ）により精製して、表題化合物（９０ｍｇ，７８％）をオフホワイトの固形物として得る。
【０１０７】
式１．４５の化合物は、化合物、２−フェニル−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミドのキラル分取用ＨＰＬＣ分離によって製造することができる。
【０１０８】
化合物、２−（３−フルオロフェニル）−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミドは、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、式１．４３及び１．４４の化合物に類似したやり方で製造することができる。
【０１０９】
式１．４６の化合物は、２−（３−フルオロフェニル）−４−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミドのキラル分取用ＨＰＬＣ分離によって製造することができる。
【０１１０】
式１．４７の化合物は、式１．４３のキラル分取用ＨＰＬＣ分離によって製造することができる。
【０１１１】
式１．４８の化合物は、式１．４４のキラル分取用ＨＰＬＣ分離によって製造することができる。
【０１１２】
式１．４９及び１．５０の化合物は、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、式１．２４に類似したやり方で作製することができる。
【０１１３】
式１．５１及び１．５２の化合物は、当業者に知られた適正な出発材料を使用して、式１．２８〜１．３１に類似したやり方で作製することができる。
【０１１４】
本明細書に記載のすべての化合物の医薬的に許容される塩に加えて、該化合物又は塩の医薬的に許容される溶媒和物も本発明の範囲内に含まれる。
【０１１５】
本明細書では、本明細書に開示する化合物には、その原子の１以上が同じ元素の放射性同位体である化合物が含まれると考慮される。これには、限定されないが、本明細書に考察される放射標識Ｂ細胞除去抗体を含めてよい。
【０１１６】
本明細書で具体的に考慮されるように、本発明には、以下の方法が含まれる：
血液系腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法１）；
慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を抗ＣＤ２０抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法２）；
慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をリツキシマブと同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法３）；
Ｂ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法４）；
Ｂ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を抗ＣＤ２０抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法５）；
Ｂ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をリツキシマブと同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法６）；
癌治療薬に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法７）；
癌治療薬に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法８）；
ＤＮＡ傷害剤での癌治療薬に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法９）；
ＤＮＡ傷害剤での癌治療に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法１０）；
フルダラビンでの治療に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法１１）；
フルダラビンでの治療に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤を抗ＣＤ２０抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法１２）；
フルダラビンでの治療に抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤をリツキシマブと同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法（方法１３）。
【０１１７】
このように、本明細書では、本発明の方法には、血液系腫瘍（ＣＬＬが含まれる）又はＢ細胞関連腫瘍（癌治療薬に抵抗性である、例えば、ＤＮＡ傷害剤、例えばフルダラビンに抵抗性である血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍が含まれる）に罹患している患者へ治療有効量のＣＨＫ１阻害剤（限定されないが、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、本明細書に定義される式１．１〜１．５２の化合物が含まれる）をＢ細胞除去抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ）と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる方法が含まれると考慮される。
【０１１８】
加えて、別の態様において、本発明には、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態であるＣＨＫ１阻害剤の、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍の治療のためのＢ細胞除去抗体との組合せ療法に使用の医薬品の製造における使用が含まれる。１つの態様において、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍は、癌治療薬に抵抗性である、例えば、ＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性である。１つの態様において、ＤＮＡ傷害剤は、フルダラビンである。１つの態様において、血液系腫瘍は、ＣＬＬである。別の態様において、Ｂ細胞除去抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。別の態様において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。別の態様において、ＣＨＫ１阻害剤は、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、本明細書に定義されるような式１．１〜１．５２からなる群より選択される。
【０１１９】
別の態様において、本発明には、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態であるＣＨＫ１阻害剤の、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍の治療のためのＢ細胞除去抗体との組合せ療法に使用への使用が含まれる。１つの態様において、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍は、癌治療薬に抵抗性である、例えば、ＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性である。別の態様において、ＤＮＡ傷害剤は、フルダラビンである。１つの態様において、血液系腫瘍は、ＣＬＬである。別の態様において、Ｂ細胞除去抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。別の態様において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。別の態様において、該化合物は、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１〜１．５２からなる群より選択される。
【０１２０】
別の態様において、本発明には、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍に罹患している患者へ、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態であるＣＨＫ１阻害剤の治療有効量をＢ細胞除去抗体と同時又は連続的に（例えば、その前又は後に）投与することを含んでなる、前記患者を治療するための方法が含まれる。１つの態様において、血液系腫瘍又はＢ細胞関連腫瘍は、癌治療薬に抵抗性である、例えば、ＤＮＡ傷害剤での治療に抵抗性である。別の態様において、ＤＮＡ傷害剤は、フルダラビンである。１つの態様において、血液系腫瘍は、ＣＬＬである。別の態様において、Ｂ細胞除去抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。別の態様において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。別の態様において、該化合物は、遊離型又は医薬的に許容される塩型、又は該化合物又はその塩の医薬的に許容される溶媒和物の形態である、式１．１〜１．５２からなる群より選択される。
【０１２１】
加えて、本明細書にさらに考慮されるように、本発明には、以下の方法が含まれる：
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法１；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法２；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法３；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法４；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法５；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法６；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法７；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法８；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法９；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法１０；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法１１；
化合物が式１．１〜１．５２の化合物である方法１２。
【０１２２】
ＣＨＫ１阻害剤（本明細書に具体的に開示されるものが含まれる）とＢ細胞除去抗体（例えば、抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブ）を医薬的に許容される担体又は希釈剤との組合せ又は会合において含んでなる医薬組成物も、本明細書に記載する方法又は使用における使用のために十分考慮される。
【０１２３】
本明細書に記載の発明は、記載される特別な方法論、プロトコール、及び試薬に限定されない（これらが変動し得るので）と考慮される。また、本明細書に使用する用語は、特別な態様を記載する目的だけのものであり、本発明の範囲を決して制限することを企図しないと理解されたい。
【０１２４】
他に定義されなければ、本明細書に使用するすべての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書の記載に類似しているか又は同等であるいずれの方法及び材料も本発明の実施又は検討に使用し得るが、本明細書では、好ましい方法、デバイス、及び材料について記載する。本明細書に言及するすべての出版物が、本発明に関連して使用される可能性がある、当該出版物において報告される材料及び方法論を記載して開示する目的のために、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１２５】
実施例１：チェックポイント１キナーゼ阻害剤への曝露時にＣＬＬ腫瘍の生存能力が低下することの実証
Ａ．in vitro 試験：
慢性Ｂ細胞白血病細胞系（ＪＶＭ２及びＭｅｃ１）（American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ），バージニア州マナッサス）を９６ウェルプレートにプレート培養して、２４時間後に増加濃度のＣＨＫ１阻害剤（式１．１）で処理した。４８時間の処理後、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）蛍光細胞生存能力アッセイ（プロメガ、ウィスコンシン州マジソン）を使用して、細胞の生存能力を測定した。Ｍｅｃ１とＪＶＭ２について計算されるＧＩ５０がそれぞれ０．０７９μＭと０．０１３μＭである、強力な阻害活性を観測した。
【０１２６】
Ｂ．ex vivo 試験：
ＣＬＬ患者より血液試料（１０ｍｌ）を採取して、氷上に置いた。次いで、全血をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈して（２〜３倍希釈）、５０ｍｌコニカル管中の１２ｍｌ  Ficoll-paque（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，マサチューセッツ州ウェストバラ）の上に注意深く重ねた。次いで、試料を室温で間断なく３５００ｒｐｍで３５分間遠心分離させた。血漿を除去し、単核細胞を含有する不透明な中間相を採取して、清浄なコニカル遠心管へ入れた。次いで、１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）入りＰＢＳで細胞を２回洗浄した。最終洗浄に続き、細胞を５〜１０ｍｌのＲＰＭＩ  １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ニューヨーク州グランドアイランド）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）培地に再懸濁させた。次いで、細胞をトリパンブルー排除法により計数して、生存能力と純度を評価した。
【０１２７】
次いで、細胞を９６ウェルプレートへプレート培養（１Ｘ１０５細胞／ウェル）して、薬物フリー培地において一晩インキュベートした。翌朝、フルダラビン（１、３、及び１０μＭ）、ゲンシタビン（０．１及び１μＭ）、式１．１のＣＨＫ１阻害剤（０．０１、０．１、及び０．５μＭ）、又はフルダラビン及びＣＨＫ１阻害剤、又はゲンシタビン及びＣＨＫ１阻害剤の組合せで細胞を処理した。加えて、細胞を単剤の８点滴定（ＣＨＫ１阻害剤は、０．１ｎＭ〜５００ｎＭ；フルダラビンは、０．１μＭ〜３０μＭ、及びゲンシタビンは、０．０１μＭ〜１０μＭ）で処理して、ＩＣ５０を決定した。４８時間の処理の後で、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）蛍光細胞生存能力アッセイ（プロメガ、ウィスコンシン州マジソン）を使用して、細胞生存能力を測定した。データは、これまで治療を受けたことのない新たに診断された患者がフルダラビン（ＩＣ５０＝０．５６）へは反応するが、ゲンシタビンやＣＨＫ１阻害剤には反応しないことを示した。フルダラビンとＣＨＫ１阻害剤の組合せでは、拮抗作用を認めなかった。対照的に、１週前にリツキシマブ治療を受けた再発患者より単離した腫瘍細胞は、ＣＨＫ１阻害剤（式１．１）に反応した（ＩＣ５０＝１１ｎＭ）が、フルダラビン（ＩＣ５０＝５．１μＭ）やゲンシタビンには反応しなかった。組合せの群では、拮抗作用を認めなかった。
【０１２８】
実施例２：ＣＨＫ１阻害に反応するＣＬＬ患者試料において、リン−ＣＨＫ１が増加していることの実証
ＣＬＬ患者より血液試料（１０ｍｌ）を採取して、氷上に置いた。次いで、全血をＰＢＳで希釈して（２〜３倍希釈）、５０ｍｌコニカル管中の１２ｍｌ  Ｆｉｃｏｌｌの上に注意深く重ねた。次いで、試料を室温で間断なく３５００ｒｐｍで３５分間遠心分離させた。血漿を除去し、単核細胞を含有する不透明な中間相を採取して、清浄なコニカル遠心管へ入れた。次いで、１％  ＦＢＳ入りＰＢＳで細胞を２回洗浄した。最終洗浄に続き、細胞を５〜１０ｍｌのＲＰＭＩ  １６４０＋１０％  ＦＣＳ培地に再懸濁させる。次いで、細胞をトリパンブルー排除法により計数して、生存能力と純度を評価する。
【０１２９】
次いで、細胞を１２ウェルプレートへプレート培養して、薬物フリー培地において一晩インキュベートする。次いで、単離した細胞を、担体、０．１μＭゲンシタビン、３及び１０μＭフルダラビン、０．１、０．２５、及び０．５μＭ  ＣＨＫ１阻害剤（式１．１）と、記載の用量でのＣＨＫ１阻害剤とゲンシタビン又はフルダラビンの組合せで処理する。５時間の処理に続き、細胞をＰｈｏｓｐｈｏｓａｆｅ抽出試薬（Ｎｏｖａｇｅｎ，カリフォルニア州サンディエゴ）中で採取する。次いで、溶解液を調製して、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ、イリノイ州ロックフォード）によりタンパク濃度を定量する。次いで、ＥＬＩＳＡアッセイを以下のように実施して、リン−ＣＨＫ１レベルを定量する。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートへ全ＣＨＫ１抗体（Ａｂｃａｍ，マサチューセッツ州ケンブリッジ）を加えて、４℃で一晩インキュベートする。次いで、プレートをＰＢＳＴ（０．２％  Ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝化生理食塩水）で３回洗浄して、３％  ＢＳＡを含有するＰＢＳＴで３時間ブロックする。次いで、実験用ＣＬＬ細胞溶解液（４μｇ）又は対照と標準溶解液の希釈系列（標準曲線）を加えて、２時間インキュベートする。次いで、プレートを上記に記載のように３回洗浄して、抗リン−ＣＨＫ１抗体を室温で３時間インキュベートする。次いで、プレートを上記のように洗浄して、Ｌａｎｃｅ＿Ｅｕ抗ウサギ抗体（Perkin Elmer Life Science，マサチューセッツ州ボストン）とともに室温で１時間インキュベートする。次いで、プレートを上記のように洗浄し、ＤＥＬＰＦＩＡ増強溶液（Perkin Elmer Life Science，マサチューセッツ州ボストン）とともに室温で５分間振り混ぜながらインキュベートして、３４０ｎｍの励起と６１５ｎｍの発光、４００μｓの遅延、４００μｓのウィンドウ、及び１０００μｓのサイクルを伴う時間分解蛍光測定法でＥｕｒｏｐｉｕｍプログラムを使用して、Ｖｉｃｔｏｒ２（Perkin Elmer Life and Analytical Science，コネティカット州シェルトン）で読み取る。次いで、データを標準曲線に基づいて相対量へ変換する。ＣＨＫ１阻害剤へ反応しなかった患者からの試料は、検出不能なレベルのリン−ＣＨＫ１を有して、実際に反応した患者からの試料は、バックグラウンドより有意に高い（ｐ＞０．０２）ホスホ−ＣＨＫ１のレベルを有することがわかる。
【０１３０】
実施例３：ＡＭＬ患者試料のＣＨＫ１阻害剤に対する単剤感受性の実証
急性骨髄性白血病の患者９名からの骨髄単核細胞を Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配（English et al.「Single-Step Separation of Red Blood Cells. Granulocytes and Mononuclear Leucocytes on Discontinuous Density Gradients of Ficoll-Hypaque（赤血球の１工程分離法：Ficoll-Hypaque の不連続密度勾配上の顆粒球及び単核白血球）」Journal of Immunological Methods, 5: 249-252, 1974）での沈降によって単離した。ブラストの百分率を決定するのに染色するためのアリコートを取り出した後で、２０％熱不活性化ウシ胎児血清、５０ユニット／ｍｌのペニシリンＧ、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、及び２ｍＭグルタミンを含有する１ｍｌの改良ダルベッコ培地（培地Ａ）に１×１０６個の細胞を含有する反復アリコートを希釈剤（０．２％ジメチルスルホキシド）、増加濃度のシタラビン単独（２５〜３００ｎＭ）、増加濃度のＣＨＫ−１阻害剤（式１．１）（３０〜３００ｎＭ）、又は１００ｎＭのＣＨＫ−１阻害剤（式１．１）の存在下での増加濃度のシタラビンで処理した。５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２を含有する加湿雰囲気での３７℃で４８時間のインキュベーションに続いて、細胞を１００×ｇ、５分間で沈降させ、洗浄し、薬物フリーの培地Ａに再懸濁させる。次いで、３×１０５個の細胞を含有する同一２検体アリコートを、幹細胞因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポエチン、インターロイキン−３、及びインターロイキン−６を含有する１．５ｍｌのメチルセルロース培地と混合して、グリッド入り３５ｍｍ培養皿においてプレート培養した。３７℃で１４日のインキュベーションに続き、確立された判定基準（Eaves, C and Lambie, K.「Atlas of human hematopoietic colonies（ヒト造血細胞コロニー図版）」バンクーバー：StemCell Technologies 社、1995）を使用して、５０個以上の細胞を含有するコロニーを倒立顕微鏡で記録した。
【０１３１】
結果を図１（ａ〜ｑ）に示す。（■）の線グラフは、ＣＨＫ１阻害剤で治療したＡＭＬ患者の試料からの結果であり；（●）の線グラフは、ＣＨＫ１阻害剤及びシタラビンで治療したＡＭＬ患者の試料からの結果であり；そして、（○）の線グラフは、シタラビンで治療したＡＭＬ患者の試料からの結果である。患者試料１からの結果を図１ａ及び１ｂに示し；患者試料２からの結果を図１ｃ及び１ｄに示し；患者試料３からの結果を図１ｅ及び１ｆに示し；患者試料４からの結果を図１ｇ及び１ｈに示し；患者試料５からの結果を図１ｉ及び１ｊに示し；患者試料６からの結果を図１ｋ及び１ｌに示し；患者試料７からの結果を図１ｍ及び１ｎ（きわめて低いコロニー数）に示し；患者試料８からの結果を図１ｏ及び１ｐ（対照は、低い細胞カウントを有した）に示し；そして、患者試料９からの結果を図１ｑに示す。９つの試料のうち４つ（１ｂ、１ｄ、１ｆ、及び１ｏ）がＣＨＫ１単剤感受性を示した。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図１−７】
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【図１−８】
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【図１−９】
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【国際調査報告】
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