(57)【要約】  高濃縮インスリン溶液及び製薬組成物、その調製方法及びその使用を記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール及び／又はｍ−クレゾールを含有し、インスリン濃度が１２ｍＭを超える水溶液。
【請求項２】
インスリン濃度が２０ｍＭを超える、請求項１に記載の水溶液。
【請求項３】
亜鉛を基本的に含まない、請求項１又は２に記載の水溶液。
【請求項４】
フェノール類成分を基本的に含まない、請求項１から３のずれか一に記載の水溶液。
【請求項５】
ｐＨが６．５から９．０の範囲にある、請求項１から４の何れか一に記載の水溶液。
【請求項６】
塩濃度が０．１５Ｍ未満である、請求項１から５の何れか一に記載の水溶液。
【請求項７】
塩を基本的に含まない、請求項１から６の何れか一に記載の水溶液。
【請求項８】
インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分、場合によって一又は複数の賦形剤を含有する製薬組成物。
【請求項９】
インスリン濃度が１２ｍＭを超える、請求項８に記載の製薬組成物。
【請求項１０】
インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製する方法であって、 
ａ) インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含むインスリンないしはインスリンの結晶をＨ２Ｏに懸濁又は溶解させる、 
ｂ) ｐＨを測定する、 
ｃ) ｐＨがｐＨ６．５未満又は９．０を超える場合にはｐＨをｐＨ６．５から９．０に調整する、そして、 
ｄ) 場合によってインスリンを凍結乾燥又は噴霧乾燥させ、その後Ｈ２Ｏにインスリンを再溶解させ、
インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含むインスリンを含有し、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるか、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５から９．０である水溶性インスリン溶液を得る
ことを含む方法。
【請求項１１】
高血糖、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満、高血圧、内臓脂肪症候群、異脂肪血症、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の循環系疾患、アルツハイマー病などのＣＮＳ疾患、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害及び胃潰瘍からなる群から選択される疾患又は障害の治療方法であって、治療を必要とする被検体に、請求項１から９の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項１２】
医薬として使用するための、請求項１から９の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物。
【請求項１３】
高血糖、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満、高血圧、内臓脂肪症候群、異脂肪血症、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の循環系疾患、アルツハイマー病などのＣＮＳ疾患、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害及び胃潰瘍の治療又は予防のための医薬の調製のための、請求項１から９の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の一つの目的は、高濃縮のインスリン溶液及び組成物、その調製の方法、並びにその使用を提供することである。したがって、本発明は、胃腸管を介した吸収及び経口投与を含むがこれらに限らず様々な代替的経路に適切な投与形態の開発に適する高濃縮のインスリン水溶液を提供する。
【背景技術】
【０００２】
１型及び２型糖尿病の治療では、典型的に、常習的な注射を必要とする皮下(ｓｃ)投与手段によりインスリンが治療上効率的に投与されている。注射が与えるかもしれない不快を減少させるために、投与のいくつかの代替的な非侵襲性の手段が従来調査されている。しかしながら、インスリンの皮下投与のこのような代替法は、ごく最近利用できるようになっているだけである。これらは、吸入用インスリン(噴霧用乾燥粉の吸入によってされる肺投与手段によるインスリンの全身運搬)、そして、口腔に液体インスリン組成物を直接噴霧することによってされる口腔インスリン運搬(口腔でのインスリンの吸収による全身インスリン運搬)に限られている。これらの代替インスリン投与形態の市販の製品は、それぞれＥｘｕｂｅｒａ(登録商標)及びＯｒａ-Ｌｙｎ(登録商標)との商品名で登録されている。
特に、経口法は非常に関心が高まっている。他の因子もあるが、経口投与手段は最も簡便で、最もなじみのある投与手段であるので後者の試みがなされている。しかしながら、インスリンの経口投与は、克服されていないいくつかの重大な障害と関係している。
【０００３】
皮下注射のために造られる通常の治療上有用なインスリン溶液は、１００Ｕ／ｍｌ又は３．５ｍｇ／ｍｌの濃度を上回らない。注入ポンプのためのインスリン溶液(Hoechstのヒトの半合成インスリン、Ｇｅｎａｐｏｌ安定化、４００Ｕ／ｍｌ)や吸入のための濃縮インスリン溶液(AerX insulin blister １５００Ｕ／ｍｌ；Diabetes Tech Therapeut (2002), vol. 4, page 499)のような特定の目的がなければ、濃縮インスリン溶液は、フェノール及び亜鉛又はこれらの組合せの存在下において中性ｐＨ及び酸性の状態で記載されている(欧州特許第１１１７１１４号Ａ２及びここに援用される参考文献)。 
酸性ｐＨのブタインスリンの高濃縮溶液は、Diabetes Care (1981), volume 4, page 266において記述される。しかしながら、組成物中のインスリンは、アミド分解及び重合作用のために安定でない。酸性ｐＨとともにこれにより、更なる加工及び、経口投与手段を含むがこれに限らず代替的な投与手段に適する投与形態を開発するための組成物の適性が減少する。 
【０００４】
中性のｐＨでは、天然の(すなわちヒト又は動物の)インスリンは、インスリン六量体につき２−４の亜鉛イオン、０．１−０．５％ｗ／ｖフェノール及び５−１５０ｍＭ 塩化ナトリウムの存在によりその物理的安定性が増加する。中性のｐＨの亜鉛を含有する安定性ブタインスリン溶液は、６ｍＭ以下の濃度のブタインスリンにて造られている(Brange and Havelund in Artificial Systems for Insulin Delivery, Brunetti et al. eds. Raven Press 1983)。
一又は複数の添加物を全く含まないかもしくは極微量に含む安定な高濃縮のインスリン溶液、特に亜鉛イオン及び／又はフェノールを全く含まないかもしくは極微量に含む安定な高濃縮のインスリン溶液は、胃腸管などの他の経路を介するインスリンの運搬のためのその後の加工に特に有用である。したがって、６．５−９．０の範囲のｐＨを有し、亜鉛及び／又はフェノールを全く含まないかもしくは極微量含む高濃縮のインスリン溶液の必要性がある。 
【発明の概要】
【０００５】
本発明の一つの目的は、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含む水溶液であり、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるものを提供することである。
ある態様では、本発明に係る水溶液は、６．５から９．０の範囲のｐＨを有する。
インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分、場合によって一又は複数の賦形剤を含む薬学的組成物も本発明によって得られる。
ある態様では、インスリンの濃度が１２ｍＭを超える薬学的組成物は、本発明に従って得られる。
さらに、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含有する水性インスリン溶液であって、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるものの調製方法が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】安定かつ高濃縮の亜鉛及びフェノールを含まないインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)溶液を絶食させたＳＰＲＤラット(ｎ＝２)の十二指腸へ直接注射投与した後の血中グルコースの減少。
【図２】ｐｏｌｏｘａｍｅｒ界面活性剤と混合した安定かつ高濃縮の亜鉛及びフェノールを含まないインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)を絶食させたＳＰＲＤラット(ｎ＝３)の回腸へ直接注射投与した後の血中グルコースの減少。
【図３】安定かつ高濃縮の亜鉛及びフェノールを含まないインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)マイクロエマルジョンを絶食させたＳＰＲＤラット(ｎ＝２−４)の回腸へ直接注射投与した後の血中グルコースの減少。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
（発明の説明）
本発明は、経口投与を目的とするインスリン組成物のような代替インスリン投与形態の加工に同様に有用である固有のインスリン薬学的組成物の製造を可能にするインスリン水溶液に関する。
高濃縮の溶液から得られる凍結乾燥粉ないしは粒子は一般に、凍結乾燥した懸濁物から得る粉ないしは粒子よりも均一である。 
薬剤吸収の熱力学的駆動力は、他にもあるが、吸収の側近くに溶解される薬剤と血液との間の濃度勾配によるものであることが知られている。 
インスリンは直接溶解され、酸性水性インスリン溶液となるが、溶液中のインスリン分子の細動や化学的悪化を避けるために非酸性水溶液にインスリンを溶解するのが良い。
安定した非酸性インスリン水溶液を得るために、従来から、インスリン六量体当たり２以上の亜鉛イオンがインスリン溶液に添加されている。あるいは、インスリン組成物Ａｐｉｄｒａから知られているように、界面活性剤は同じ安定性効果を得るために加えられている。Ｄｅｔｅｍｉｒなどのいくつかのインスリン誘導体のために、亜鉛を添加しても、インスリンの溶解性が増している。
本発明の一つの目的は、高濃縮の非酸性インスリン溶液及び組成物、その調製方法、及びその使用を提供することである。したがって、本発明は、胃腸管を介した吸収及び経口投与を含むがこれらに限らず様々な代替的経路に適切な投与形態の開発に適する高濃縮のインスリン水溶液を提供する。
驚くべきことに、本発明者等は、安定なインスリン溶液が例外的に高いインスリン濃度で調製されうることを発見した。 
【０００８】
以下は、本明細書中の至る所にさらに記載される態様の非限定的な例である。
本発明の態様１では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール及び／又はｍ−クレゾールを含有する水溶液であって、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるものが得られる。 
態様２。インスリン濃度が１５ｍＭを超える、態様１に記載の水溶液。
態様３。インスリン濃度が２０ｍＭを超える、態様２に記載の水溶液。
態様４。インスリン濃度が２５ｍＭを超える、態様３に記載の水溶液。
態様５。インスリン濃度が３０ｍＭを超える、態様４に記載の水溶液。
態様６。インスリン濃度が１２ｍＭから６０ｍＭの範囲にある、態様１に記載の水溶液。
態様７。インスリン濃度が１２ｍＭから５５ｍＭ範囲の範囲にある、態様６に記載の水溶液。
態様８。インスリン濃度が１２ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様７に記載の水溶液。
態様９。インスリン濃度が１５ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様８に記載の水溶液。
態様１０。インスリン濃度が２０ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様９に記載の水溶液。
態様１１。インスリン濃度が２５ｍＭから６０ｍＭの範囲にある、態様６に記載の水溶液。
態様１２。インスリン濃度が２５ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様１１に記載の水溶液。
態様１３。インスリン濃度が３０ｍＭから６０ｍＭの範囲にある、態様１１に記載の水溶液。
態様１４。インスリン濃度が３０ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様１３に記載の水溶液。
【０００９】
態様１５。亜鉛含量がインスリン六量体につき１以下の亜鉛イオンである、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様１６。亜鉛を基本的に含まない、態様１５に記載の水溶液。
態様１７。フェノール類成分の濃度が６０ｍＭ未満である、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様１８。フェノール類成分の濃度が４０ｍＭ未満である、態様１７に記載の水溶液。
態様１９。フェノール類成分の濃度が２０ｍＭ未満である、態様１８に記載の水溶液。
態様２０。フェノール類成分を基本的に含まない、態様１９に記載の水溶液。
態様２１。亜鉛を基本的に含まず、フェノール類成分を基本的に含まない、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様２２。ｐＨが６．５から９．０の範囲にある、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様２３。ｐＨが６．５から８．５の範囲にある、態様２２に記載の水溶液。 
態様２４。ｐＨが７．０から８．５の範囲にある、態様２３に記載の水溶液。 
態様２５。塩濃度が０．５Ｍ未満である、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様２６。塩濃度が０．３Ｍ未満である態様２５に記載の水溶液。
態様２７。塩濃度が０．１５Ｍ未満である、態様２６に記載の水溶液。
態様２８。塩を基本的に含まない、態様２７に記載の水溶液。
態様２９。塩化ナトリウムを基本的に含まない、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
【００１０】
態様３０。インスリンがヒトインスリン、インスリン類似体及びインスリン誘導体からなる群から選択される、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様３１。インスリンがヒトインスリン及びインスリンの類似体からなる群から選択される、態様３０に記載の水溶液。
態様３２。インスリンが、
ヒトインスリン；
インスリンの位置Ｂ２８のアミノ酸残基がＰｒｏ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ又はＡｌａであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＬｙｓ又はＰｒｏであり、そして場合によって、位置Ｂ３０のアミノ酸残基が欠失しているインスリン類似体；
ｄｅｓ(Ｂ２８−Ｂ３０)ヒトインスリン、ｄｅｓ(Ｂ２７)ヒトインスリン又はｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン；
位置Ｂ３のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＧｌｕ又はＡｓｐであるインスリン類似体； 
位置Ａ１４のアミノ酸がＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ及びＨｉｓからなる群から選択され、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、そして、場合によって一又は複数の更なる突然変異を更に含むインスリン類似体；
インスリン類似体であって、
・位置Ａ８のアミノ酸はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ａ１２のアミノ酸はＧｌｕ又はＡｓｐであり、及び／又は、位置Ａ１３のアミノ酸はＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり、及び／又は、位置Ａ１４のアミノ酸はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ又はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ａ１５のアミノ酸はＧｌｕ又はＡｓｐであり；そして、
・位置Ｂ１のアミノ酸はＧｌｕであり、及び／又は、位置Ｂ１６のアミノ酸はＧｌｕ又はＨｉｓであり、そして、又は、位置Ｂ２５のアミノ酸はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ｂ２６のアミノ酸はＨｉｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ又はＴｈｒであり、及び／又は、位置Ｂ２７のアミノ酸はＨｉｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ又はＡｒｇであり、及び／又は、位置Ｂ２８のアミノ酸はＨｉｓ、Ｇｌｙ又はＡｓｐであり；そして、
場合によって一又は複数の更なる突然変異を更に含むもの；及び
位置Ａ１４のアミノ酸がＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ及びＨｉｓからなる群から選択されるインスリン類似体であって；インスリン類似体のＢ鎖が親インスリンと比べて少なくとも２つの突然変異を含み、この２以上の突然変異が、位置Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９及びＢ３０のアミノ酸の欠失の形態、又は位置Ｂ３０のアミノ酸の欠失と位置Ｂ２５のＨｉｓへのアミノ酸置換、Ｂ２６のＧｌｙ又はＧｌｕへのアミノ酸置換、Ｂ２７のＧｌｙ又はＬｙｓへのアミノ酸置換及びＢ２８のＡｓｐ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ又はＧｌｕへのアミノ酸置換から選択されるアミノ酸の置換との組合せの形態で存在するもの
からなる群から選択される、態様３１に記載の水溶液。
態様３３。インスリンが、
ヒトインスリン；
ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；
ＡｓｐＢ２８,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＬｙｓＢ３,ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン；
ＬｙｓＢ２８,ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ２７,ｄｅｓＢ２８,ｄｅｓＢ２９,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＧｌｕＢ１,ＧｌｕＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；及びＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＧｌｕＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される、態様３２に記載の水溶液。
【００１１】
態様３４。界面活性剤の濃度が６０ｍＭ未満である、前の態様の何れか一に記載の水溶液。
態様３５。界面活性剤の濃度が４０ｍＭ未満である、態様３４に記載の水溶液。
態様３６。界面活性剤の濃度が２０ｍＭ未満である、態様３５に記載の水溶液。
態様３７。界面活性剤を基本的に含まない、態様３６に記載の水溶液。
【００１２】
態様３８。インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール及び／又はｍ−クレゾール、場合によって一又は複数の賦形剤を含有する製薬組成物。
態様３９。インスリン濃度が１２ｍＭを超える、態様３８に記載の製薬組成物。 
態様４０。インスリン濃度が１５ｍＭを超える、態様３９に記載の製薬組成物。
態様４１。インスリン濃度が２０ｍＭを超える、態様４０に記載の製薬組成物。
態様４２。インスリン濃度が２５ｍＭを超える、態様４１に記載の製薬組成物。
態様４３。インスリン濃度が３０ｍＭを超える、態様４２に記載の製薬組成物。
態様４４。インスリン濃度が１２ｍＭから６０ｍＭの範囲にある、態様３９に記載の製薬組成物。
態様４５。インスリン濃度が１２ｍＭから５５ｍＭ範囲の範囲にある、態様４４に記載の製薬組成物。
態様４６。インスリン濃度が１２ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様４５に記載の製薬組成物。
態様４７。インスリン濃度が１５ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様４６に記載の製薬組成物。
態様４８。インスリン濃度が２０ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様４７に記載の製薬組成物。
態様４９。インスリン濃度が２５ｍＭから６０ｍＭの範囲にある、態様４４に記載の製薬組成物。
態様５０。インスリン濃度が２５ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様４９に記載の製薬組成物。
態様５１。インスリン濃度が３０ｍＭから６０ｍＭの範囲にある、態様４９に記載の製薬組成物。
態様５２。インスリン濃度が３０ｍＭから５０ｍＭの範囲にある、態様５１に記載の製薬組成物。
【００１３】
態様５３。亜鉛含量がインスリン六量体につき１以下の亜鉛イオンである、態様３８−５２の何れか一に記載の製薬組成物。
態様５４。亜鉛を基本的に含まない、態様５３に記載の製薬組成物。
態様５５。フェノール類成分の濃度が６０ｍＭ未満である、態様３８−５４の何れか一に記載の製薬組成物。
態様５６。フェノール類成分の濃度が４０ｍＭ未満である、態様５５に記載の製薬組成物。
態様５７。フェノール類成分の濃度が２０ｍＭ未満である、態様５６に記載の製薬組成物。
態様５８。フェノール類成分を基本的に含まない、態様５７に記載の製薬組成物。
態様５９。亜鉛を基本的に含まず、フェノール類成分を基本的に含まない、態様３８−５８の何れか一に記載の製薬組成物。
態様６０。ｐＨが６．５から９．０の範囲にある、態様３８−５９の何れか一に記載の製薬組成物。 
態様６１。ｐＨが６．５から８．５の範囲にある、態様６０に記載の製薬組成物。 
態様６２。ｐＨが７．０から８．５の範囲にある、態様６１に記載の製薬組成物。
態様６３。塩濃度が０．５Ｍ未満である、態様３８−６２の何れか一に記載の製薬組成物。
態様６４。塩濃度が０．３Ｍ未満である態様６３に記載の製薬組成物。
態様６５。塩濃度が０．１５Ｍ未満である、態様６４に記載の製薬組成物。
態様６６。塩を基本的に含まない、態様６５に記載の製薬組成物。
【００１４】
態様６７。インスリンがヒトインスリン、インスリン類似体及びインスリン誘導体からなる群から選択される、態様３８−６６の何れか一に記載の製薬組成物。
態様６８。インスリンがヒトインスリン及びインスリン類似体からなる群から選択される、態様６７に記載の製薬組成物。
態様６９。インスリンが、
ヒトインスリン；
インスリンの位置Ｂ２８のアミノ酸残基がＰｒｏ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ又はＡｌａであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＬｙｓ又はＰｒｏであり、そして場合によって、位置Ｂ３０のアミノ酸残基が欠失しているインスリン類似体；
ｄｅｓ(Ｂ２８−Ｂ３０)ヒトインスリン、ｄｅｓ(Ｂ２７)ヒトインスリン又はｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン；
位置Ｂ３のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＧｌｕ又はＡｓｐであるインスリン類似体； 
位置Ａ１４のアミノ酸がＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ及びＨｉｓからなる群から選択され、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、そして、場合によって一又は複数の更なる突然変異を更に含むインスリン類似体；
インスリン類似体であって、
・位置Ａ８のアミノ酸がＨｉｓであり、及び／又は、位置Ａ１２のアミノ酸がＧｌｕ又はＡｓｐであり、及び／又は、位置Ａ１３のアミノ酸がＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり、及び／又は、位置Ａ１４のアミノ酸がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ又はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ａ１５のアミノ酸がＧｌｕ又はＡｓｐであり；そして、
・位置Ｂ１のアミノ酸がＧｌｕであり、及び／又は、位置Ｂ１６のアミノ酸がＧｌｕ又はＨｉｓであり、そして、又は、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、及び／又は、位置Ｂ２６のアミノ酸がＨｉｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ又はＴｈｒであり、及び／又は、位置Ｂ２７のアミノ酸がＨｉｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ又はＡｒｇであり、及び／又は、位置Ｂ２８のアミノ酸がＨｉｓ、Ｇｌｙ又はＡｓｐであり；そして、
場合によって一又は複数の更なる突然変異を更に含むもの；及び
位置Ａ１４のアミノ酸がＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ及びＨｉｓからなる群から選択されるインスリン類似体であって；インスリン類似体のＢ鎖が親インスリンと比べて少なくとも２つの突然変異を含み、この２以上の突然変異が、位置Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９及びＢ３０のアミノ酸の欠失の形態で、又は位置Ｂ３０のアミノ酸の欠失と位置Ｂ２５のＨｉｓへのアミノ酸置換、Ｂ２６のＧｌｙ又はＧｌｕへのアミノ酸置換、Ｂ２７のＧｌｙ又はＬｙｓへのアミノ酸置換及びＢ２８のＡｓｐ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ又はＧｌｕへのアミノ酸置換から選択されるアミノ酸の置換との組合せの形態で存在するもの
からなる群から選択される、態様６８に記載の製薬組成物。
態様７０。インスリンが、
ヒトインスリン；
ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；
ＡｓｐＢ２８,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＬｙｓＢ３,ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン；
ＬｙｓＢ２８,ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン； 
ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ２７,ｄｅｓＢ２８,ｄｅｓＢ２９,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＧｌｕＢ１,ＧｌｕＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；及びＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＧｌｕＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される、態様６９に記載の製薬組成物。
【００１５】
態様７１。界面活性剤の濃度が４０ｍＭ未満である、態様３８−７０の何れか一に記載の製薬組成物。
態様７２。界面活性剤の濃度が２０ｍＭ未満である、態様７１に記載の製薬組成物。
態様７３。界面活性剤を基本的に含まない、態様７２に記載の製薬組成物。
【００１６】
態様７４。インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製する方法であって、 
ａ) インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含有するインスリンないしはインスリンの結晶をＨ２Ｏに懸濁又は溶解させる、 
ｂ) ｐＨを測定する、 
ｃ) ｐＨがｐＨ６．５未満又は９．０を超える場合にはｐＨをｐＨ６．５から９．０に調整する、そして、 
ｄ) 場合によってインスリンを凍結乾燥又は噴霧乾燥させ、その後Ｈ２Ｏにインスリンを再溶解させ、インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含むインスリンを含有し、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるか、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５から９．０である水溶性インスリン溶液を得る
ことを含む方法。
態様７５。インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製する方法であって、インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含有するインスリンないしはインスリンの結晶をＨ２Ｏに懸濁又は溶解させ、ｐＨを測定し、場合によって、ｐＨがｐＨ６．５未満又は９．０を超える場合にはｐＨをｐＨ６．５から９．０に調整し、さらに場合によって、インスリンを凍結乾燥又は噴霧乾燥させ、その後Ｈ２Ｏにインスリンを再溶解させ、インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含むインスリンを含有し、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるか、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５から９．０である水溶性インスリン溶液を得ることを含む方法。
態様７６。
ａ．インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含有するインスリン、あるいは、インスリン六量体につき１未満の亜鉛イオンを含有するインスリン、あるいは基本的に亜鉛を持たないインスリンをＨ２Ｏに懸濁して、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える懸濁液を得る、
ｂ．ｐＨ６．５から９．０にｐＨを調整することによって溶液を得ることを含む、態様７４又は７５に記載の、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製するための方法。
態様７７。
ａ．インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含有するインスリン、あるいは、インスリン六量体につき１未満の亜鉛イオンを含有するインスリン、あるいは基本的に亜鉛を持たないインスリンの最小限量をＨ２Ｏに溶解させて、インスリン濃度が１２ｍＭ未満である溶液を得る、
ｂ．ｐＨ６．５から９．０にｐＨを調整する、
ｃ．該溶液を凍結乾燥又は噴霧乾燥させる、そして
ｄ．ｐＨを調整することなく、凍結乾燥させた生成物をＨ２Ｏに再溶解させ、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５から９．０の間である溶液を得る
ことを含む、態様７４又は７５に記載の、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製するための方法。
態様７８。
ａ．インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含有するインスリン、あるいは、インスリン六量体につき１未満の亜鉛イオンを含有するインスリン、あるいは基本的に亜鉛を持たないインスリンの結晶をＨ２Ｏに溶解させて、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５と９．０の間である溶液を得る、
ことを含む、態様７４又は７５に記載の、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製するための方法。
【００１７】
態様７９。高血糖、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満、高血圧、内臓脂肪症候群、異脂肪血症、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の循環系疾患、アルツハイマー病などのＣＮＳ疾患、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害及び胃潰瘍からなる群から選択される疾患又は障害の治療方法であって、
治療を必要とする被検体に、態様１から７３の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物の有効量を投与することを含む方法。
態様８０。医薬としての使用のための態様１から７３の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物。
態様８１。高血糖、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満、高血圧、内臓脂肪症候群、異脂肪血症、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病及び他の循環系疾患、アルツハイマー病などのＣＮＳ疾患、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害及び胃潰瘍の治療又は予防のための医薬としての使用のための、態様１から７３の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物。
態様８２。２型糖尿病の疾患進行を遅らせるか又は予防するための医薬としての使用のための、態様１から７３の何れか一に記載の水溶液又は製薬組成物。
【００１８】
本明細書中で用いられる「インスリン」は、ヒトインスリン、インスリン類似体又はインスリン誘導体を意味する。
本明細書中で用いられる「インスリン類似体」は、形式的にヒトインスリンの構造から誘導されうる分子構造を有するポリペプチドを意味する。したがって、動物のインスリンはヒトインスリン類似体になる。類似体の構造は、例えば天然のインスリン中に生じる少なくとも一のアミノ酸残基を欠失させるか及び／又は置換させる、及び／又は、少なくとも一のアミノ酸残基を挿入させるか及び／又は付加させることによって誘導されうる。挿入、付加及び／又は置換されたアミノ酸残基は、典型的にコードアミノ酸残基である。
本発明によるインスリン類似体は、インスリンのＡ鎖及び／又はＢ鎖に一又は複数の突然変異を含むヒトインスリンないしはその類似体であってもよい。 
ある実施態様では、本発明のインスリン類似体は親インスリンと比較して８未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。ある実施態様では、インスリン類似体は親インスリンと比較して７未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。ある実施態様では、インスリン類似体は親インスリンと比較して６未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。他の実施態様では、インスリン類似体は親インスリンと比較して５未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。他の実施態様では、インスリン類似体は親インスリンと比較して４未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。他の実施態様では、インスリン類似体は親インスリンと比較して３未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。他の実施態様では、インスリン類似体は親インスリンと比較して２未満の修飾(置換、欠失、付加)を含む。
インスリン類似体の例は、Ｂ鎖の位置２８のＰｒｏがＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ又はＡｌａに変異しているものである。他の態様では、位置Ｂ２９のＬｙｓがＰｒｏ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異する。さらに、位置Ｂ３のＡｓｎが、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐに変異してもよい。さらに、インスリン類似体の例は、欠失類似体、例えばヒトインスリンのＢ３０アミノ酸が欠失している類似体(ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン)、ヒトインスリンのＢ１アミノ酸が欠失しているインスリン類似体(ｄｅｓ(Ｂ１)ヒトインスリン)、ｄｅｓ(Ｂ２８−Ｂ３０)ヒトインスリン及びｄｅｓ(Ｂ２７)ヒトインスリンである。上記の突然変異の組合せを含むインスリン類似体は、インスリンの類似体及びインスリンの類似体の実施例であるＡ鎖及び／又はＢ鎖がＮ末端伸展を有するインスリン類似体、及びＡ鎖及び／又はＢ鎖がＣ末端伸展を有するインスリン類似体もインスリン類似体の例である。位置Ａ１４のアミノ酸がＧｌｕ又はＨｉｓであり、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、場合によってさらに一又は複数の付加的な突然変異を含むインスリン類似体も、本発明のインスリン類似体の例である。
【００１９】
本明細書中で用いる「インスリン誘導体」は、例えばインスリン骨格の一又は複数の位置でのグアニル化、サクシニル化、アセチル化又はカルバモイル化によって、化学的に修飾されているインスリン類似体又は天然に生じるインスリン を意味する。
一態様では、本発明のインスリンは、ヒトインスリン又はインスリン類似体である。
更なる態様では、本発明のインスリンは、ヒトインスリン；インスリンの位置Ｂ２８のアミノ酸残基がＰｒｏ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ又はＡｌａであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＬｙｓ又はＰｒｏであり、そして場合によって、位置Ｂ３０のアミノ酸残基が欠失しているインスリン類似体；ｄｅｓ(Ｂ２８−Ｂ３０)ヒトインスリン、ｄｅｓ(Ｂ２７)ヒトインスリン又はｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン；位置Ｂ３のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＧｌｕ又はＡｓｐであるインスリン類似体；そして、位置Ａ１４のアミノ酸がＧｌｕ又はＨｉｓであり、位置Ｂ２５のアミノ酸がＨｉｓであり、そして、場合によって一又は複数の更なる突然変異を更に含むインスリン類似体；インスリン類似体であって、
・位置Ａ８のアミノ酸はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ａ１２のアミノ酸はＧｌｕ又はＡｓｐであり、及び／又は、位置Ａ１３のアミノ酸はＨｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり、及び／又は、位置Ａ１４のアミノ酸はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ又はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ａ１５のアミノ酸はＧｌｕ又はＡｓｐであり；そして、
・位置Ｂ１のアミノ酸はＧｌｕであり、及び／又は、位置Ｂ１６のアミノ酸はＧｌｕ又はＨｉｓであり、そして、又は、位置Ｂ２５のアミノ酸はＨｉｓであり、及び／又は、位置Ｂ２６のアミノ酸はＨｉｓ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ又はＴｈｒであり、及び／又は、位置Ｂ２７のアミノ酸はＨｉｓ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ又はＡｒｇであり、及び／又は、位置Ｂ２８のアミノ酸はＨｉｓ、Ｇｌｙ又はＡｓｐであり；そして、
場合によって一又は複数の更なる突然変異を更に含むもの；及び
位置Ａ１４のアミノ酸がＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ及びＨｉｓからなる群から選択されるインスリン類似体であって；インスリン類似体のＢ鎖が親インスリンと比べて少なくとも２つの突然変異を含み、この２以上の突然変異が、位置Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９及びＢ３０のアミノ酸の欠失の形態、又は位置Ｂ３０のアミノ酸の欠失と位置Ｂ２５のＨｉｓへのアミノ酸置換、Ｂ２６のＧｌｙ又はＧｌｕへのアミノ酸置換、Ｂ２７のＧｌｙ又はＬｙｓへのアミノ酸置換及びＢ２８のＡｓｐ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ又はＧｌｕへのアミノ酸置換から選択されるアミノ酸の置換との組合せの形態で存在するもの
からなる群から選択される。
【００２０】
より更なる態様では、本発明のインスリンは、ヒトインスリン；ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＬｙｓＢ３,ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン；ＬｙｓＢ２８,ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ２５ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＤｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ２７,ｄｅｓＢ２８,ｄｅｓＢ２９,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ１４,ＨｉｓＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＧｌｕＢ１,ＧｌｕＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ＧｌｕＢ２７,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；そして、ＨｉｓＡ８,ＧｌｕＡ１４,ＧｌｕＢ１６,ＨｉｓＢ２５,ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００２１】
本発明の安定なインスリン溶液又は組成物は、すべての構成成分が室温で、完全に溶解される溶液又は組成物として理解されるものであり、すなわち溶液又は組成物中において全く沈殿物がない。
本発明の水溶液は、１２ｍＭを上回る濃度を有する。一態様では、水溶液中のインスリン濃度は１５ｍＭを超え、他の態様ではインスリン濃度は２０ｍＭを超え、他の態様ではインスリン濃度は２５ｍＭを超え、更なる態様ではインスリン濃度は３０ｍＭを超え、更なる態様ではインスリン濃度は３５ｍＭを超え、更なる態様ではインスリン濃度は４０ｍＭを超える。本発明の一態様では、インスリン濃度は、インスリン濃度が５５ｍＭ、ある本発明の別の態様において、インスリン濃度が５０ｍＭ、ある本発明の更に別の態様の６０ｍＭ未満である。本発明の一態様では、インスリン濃度は１２ｍＭから６０ｍＭの範囲にあり、他の態様では、溶液中のインスリン濃度は１２ｍＭから５５ｍＭの間にあり、更なる態様では濃度は１２ｍＭから５０ｍＭの範囲にあり、より更なる態様ではインスリン濃度は１５ｍＭから５０ｍＭの間にあり、より更なる態様では、インスリン濃度は２０ｍＭから５０ｍＭの間にある。 
【００２２】
本発明の製薬組成物は１２ｍＭを上回る濃度を有する。ある態様では、製薬組成物中のインスリン濃度は１５ｍＭを超え、他の態様では、インスリン濃度は２０ｍＭを超え、更なる態様では、インスリン濃度は３０ｍＭを超え、さらに他の態様ではインスリン濃度は４０ｍＭを超える。本発明の一態様では、インスリン濃度は１２ｍＭから６０ｍＭの範囲にあり、他の態様では、溶液中のインスリン濃度は１２ｍＭから５５ｍＭの間にあり、更なる態様では濃度は１２ｍＭから５０ｍＭの範囲にあり、より更なる態様ではインスリン濃度は１５ｍＭから５０ｍＭの間にあり、より更なる態様では、インスリン濃度は２０ｍＭから５０ｍＭの間にある。 
本発明の水溶液又は製薬組成物は、少量の亜鉛及び／又はフェノールの構成成分を含んでいてもよい。 
【００２３】
現在市販されるほとんどの商業的なインスリン及びインスリン類似体組成物は、インスリンの安定性を上げるため、またフィブリル化、すなわち原繊維形成のリスクを最小化するために、亜鉛を含む。これら組成物中の亜鉛の量は通常、インスリン六量体につき２、３又は４の亜鉛イオンである。 
発明者等は、本発明の高濃度のインスリンを含む水溶液又は製薬組成物が極僅かな量の亜鉛を含むか実質的に亜鉛を含んでいなくてもよいことを発見した。
本発明の一態様では、水溶液又は製薬組成物は、インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含む。本発明の他の態様では、水溶液又は製薬組成物は、インスリン六量体につき１以下の亜鉛イオンを含む。本発明のより更なる態様では、水溶液又は製薬組成物は、基本的に亜鉛を含んでいない。 
【００２４】
本発明の水溶液又は製薬組成物は少量のフェノール類成分を含んでいるか、又は全く含んでいなくてもよい。本明細書中で用いる「フェノール化合物」なる用語は、微生物汚染から守るために溶液や組成物に添加されることが多い、フェノールないしは例えばｍ−クレゾール、ｍ−パラベン及びフェノールなどのフェノール様分子を意味する。 
本発明の一態様では、水溶液又は製薬組成物は、６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含む。他の態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は、４０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は２０ｍＭ以下のフェノール類成分を含む。まだ更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は、フェノール類成分を基本的に含んでいない。
本発明の一態様では、水溶液又は製薬組成物は、６０ｍＭ以下のフェノール及び／又はｍ−クレゾールを含む。他の態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は４０ｍＭ以下のフェノール及び／又はｍ−クレゾールを含み、更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は２０ｍＭ以下のフェノール及び／又はｍ−クレゾールを含む。より更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は、フェノール及び／又はｍ−クレゾールを基本的に含んでいない。
本発明の一態様では、水溶液又は製薬組成物は、６０ｍＭ以下のフェノールを含む。他の態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は４０ｍＭ以下のフェノールを含み、更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は２０ｍＭ以下のフェノールを含む。より更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は、フェノールを基本的に含んでいない。
一態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は、亜鉛及びフェノール類成分を基本的に含んでいない。他の態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物は、亜鉛及びフェノールを基本的に含んでいない。
ある態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物の塩濃度は０．５Ｍ未満である。更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物の塩濃度は０．３Ｍ未満である。更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物の塩濃度は０．１５Ｍ未満である。より更なる態様では、本発明の水溶液は基本的に塩を含まない。なお更なる態様では、本発明の製薬組成物は基本的に塩を含まない。
【００２５】
この文脈において、特定の構成成分を「基本的に含まない」なる用語は、特定の構成成分を全く含まないか、又は極微量に含む溶液又は組成物を意味する。インスリン溶液又は組成物を生成する過程の何れかの段階において積極的に加えられない場合であっても例えば極微量の亜鉛がインスリン溶液又は組成物中に存在しうることが知られている。本発明の一態様では、亜鉛を基本的に含まない水溶液又は製薬組成物は、０．１%、０．０５%又は０．０３%未満の微量の亜鉛を含む水溶液又は製薬組成物として理解される。本発明の更なる態様では、亜鉛を基本的に含まない水溶液又は製薬組成物は、亜鉛を含んでいない水溶液又は製薬組成物として理解される。本発明の一態様では、フェノールを基本的に含まない水溶液又は製薬組成物は、０．１%、０．０５%又は０．０３%未満の微量のフェノールを含む水溶液又は製薬組成物として理解される。本発明の更なる態様では、フェノールを基本的に含まない水溶液又は製薬組成物は、フェノールを含んでいない水溶液又は製薬組成物として理解される。
本発明の水溶液又は製薬組成物は、およそ６．５からおよそ９．０のｐＨ範囲であってもよい。一態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物のｐＨは６．５から８．５の間であり、更なる態様では、本発明の水溶液又は製薬組成物のｐＨは７．０から８．５ の間である。
高濃縮の中性の亜鉛及びフェノールを含まないインスリン水溶液又は組成物は血中グルコースレベルを良好な程度に減らしていることが明らかにされた。一態様では、本発明の高濃縮の中性の亜鉛及びフェノールを含まないインスリン組成物は、定式化されてない高濃縮のインスリン溶液より、血中グルコースレベルを良好な程度に減らしている。更なる態様では、本発明の濃縮された中性の亜鉛及びフェノールを含まないインスリン組成物を含むマイクロエマルジョンは、定式化されてない高濃縮のインスリン溶液より、血中グルコースレベルを良好な程度に減らしている。
【００２６】
インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性のインスリン溶液を調製する方法も本発明に包含される。
このような方法は実施例においてさらに記述され、インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含有するインスリンないしはインスリンの結晶をＨ２Ｏに懸濁又は溶解させ、ｐＨを測定し、場合によって、ｐＨがｐＨ６．５未満又は９．０を超える場合にはｐＨを調整し、さらに場合によって、インスリンを凍結乾燥又は噴霧乾燥させ、その後Ｈ２Ｏにインスリンを再溶解させ、インスリン六量体につき２未満の亜鉛イオンを含むインスリンを含有し、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるか、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５から９．０である水溶性インスリン溶液を得ることを含みうる。 
【００２７】
一態様では、本発明の水溶性のインスリン溶液の調製方法は、亜鉛を含有しないインスリンあるいは亜鉛を含有しないインスリンの結晶をＨ２Ｏに懸濁又は溶解し、ｐＨを測定して場合によってはｐＨを調整し、さらに場合によって、インスリンを凍結乾燥又は噴霧乾燥させ、その後Ｈ２Ｏにインスリンを再溶解させて、基本的に亜鉛を含まない水溶性インスリン溶液であって、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５から９．０である溶液を得ることを含む。
一態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法が得られる。
一態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が１５ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法が得られる。
一態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が２０ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法が得られる。
一態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が２５ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法が得られる。
一態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が３０ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法が得られる。
一態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が３５ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法が得られる。
【００２８】
他の態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法であって、
ａ．亜鉛を含まないインスリンをＨ２Ｏに懸濁して、インスリン濃度が１２ｍＭを超える懸濁液を得る、そして、
ｂ．ｐＨを６．５から９．０に調整して、溶液を得る工程を含む方法が得られる。
更なる態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法であって、
ａ．亜鉛を含まないインスリンの最小限量をＨ２Ｏに溶解させて、インスリン濃度が１２ｍＭ未満である溶液を得る、
ｂ．ｐＨ６．５から９．０にｐＨを調整する、
ｃ．該溶液を凍結乾燥又は噴霧乾燥させる、そして、
ｄ．ｐＨを調整することなく、凍結乾燥させた生成物をＨ２Ｏに再溶解させ、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える溶液を得る
工程を含む方法が得られる。
さらに他の態様では、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える水溶性インスリン溶液の調製方法であって、
ａ．亜鉛を含まないインスリンの結晶をＨ２Ｏに溶解させて、インスリン濃度が１２ｍＭを超えるかあるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超え、ｐＨが６．５と９．０の間である溶液を得る工程を含む方法が得られる。
【００２９】
経粘膜送達に適する組成物を調整するための、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える溶液の使用もまた本発明に包含される。前記組成物により、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン及び６０ｍＭ以下のフェノール類成分を含んだまま、経粘膜経路によるインスリンの摂取のために、ｐＨ６．５から９．０で十分なインスリンの溶液濃度が可能となる。
【００３０】
製薬組成物
本発明の製薬組成物は、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン、６０ｍＭ以下のフェノール類成分及び場合によって一又は複数の賦形剤を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超えるインスリン溶液から調製される組成物である。一態様では、本発明の製薬組成物は、インスリン、インスリン六量体当たり２未満の亜鉛イオン、６０ｍＭ以下のフェノール類成分及び場合によって一又は複数の賦形剤を含み、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える組成物である。
【００３１】
本発明の他の目的は、インスリン濃度が１２ｍＭを超える、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える、本発明のインスリン溶液から調製されるインスリンを含有し、６．５から９．０のｐＨを有する製薬組成物を提供することである。組成物は、当業者に公知のプロテアーゼインヒビター(類)、緩衝系、バッファー系、防腐剤(類)、等張化剤(類)、キレート剤(類)、安定剤及び界面活性剤をさらに含有してよい。本発明の一態様では、製薬組成物は水性組成物であり、すなわち組成物は水分を含有している。このような組成物は一般的に溶液又は懸濁液である。本発明の更なる態様では、製薬組成物は水溶液である。「水溶性組成物」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水分を含有する組成物と定義される。同様に「水溶液」なる用語も、少なくとも５０％ｗ／ｗの水分を含有する溶液と定義され、「水性懸濁液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水分を含有する懸濁液と定義される。
他の態様では、製薬組成物は凍結乾燥された組成物であり、医師又は患者は、使用前に溶媒及び／又は希釈液を添加する。 
他の態様では、製薬組成物は、何ら事前に溶解することなく使用準備が整った乾燥した組成物(例えば凍結乾燥又は噴霧乾燥)である。
更なる態様では、本発明は、１２ｍＭ以上、あるいは１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ又は３５ｍＭを超える濃度で存在するインスリンの溶液から調製される、本発明のインスリンの水溶液又は懸濁液とバッファとを含有する、６．５から９．０のｐＨを有する製薬組成物に関する。 
【００３２】
経口使用を意図した組成物は、任意の公知の方法に従い調製されてよく、このような組成物は、製薬的に上品かつ美味な調製物を提供するために、甘味料、香料、着色剤、及び防腐剤からなる群から選択される、一又は複数の薬剤を含有していてもよい。錠剤は、錠剤の製造に適切な、無毒で製薬的に許容可能な賦形剤との混合物に、活性成分を含有せしめたものであってよい。錠剤はコートされていなくてもよく、又は崩壊もしくは治療的に活性なポリペプチドの放出を遅延化するために、公知の技術によりコートされてもよい。
本発明の経口的に投与される組成物は、薬化学でよく知られている方法に従い、調製及び投与されてよく、Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版. (A. Osol編, 1985)が参照される。 
【００３３】
本発明の一態様では、本発明の製薬組成物は、錠剤及びカプセルなどの固形用量形状によって投与されてもよい。錠剤は、乾式造粒法によって、直接圧縮又は溶融造粒法によって調製されてもよい。この発明のための錠剤は、従来の成形技術を利用して調製されてもよい。
経口使用のための組成物は、硬質又は軟質なゼラチンカプセルとしても提供されてよく、ここで活性成分は、不活性な固体状希釈剤、例えばマンニトール、マルトデキストリン、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、カオリン、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウムと混合されており、又は軟質なゼラチンカプセルの場合は、活性成分は水又は油性媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィン、又はオリブ油と混合されている。
この発明のカプセルは、従来からの方法を使用して調製されてよい。製造のための一般的方法は、治療的に活性なペプチド、アルギン酸塩、水溶性の希釈剤、親水性バインダー、場合によっては錠剤分解物質の一部を混合することを含む。ついで、この混合物を、親水性バインバーの水溶液又は親水性バインダーと界面活性剤との水溶液を用いて造粒し、必要であるならば挽く。顆粒を乾燥させ、所望の大きさに小さくする。任意の他の成分、例えば滑剤を顆粒に添加し、混合する。ついで、従来からのカプセル充填機を使用し、得られた混合物を適切なサイズの殻の固いゼラチンカプセルに充填する。
【００３４】
本発明の組成物は、プロテアーゼインヒビター、例えばＥＤＴＡ(エチレンジアミン四酢酸)及びベンズアミジン塩酸塩をさらに含んでもよいが、セリンプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、システインプロテアーゼ及びメタロプロテアーゼのプロテアーゼインヒビターのような他の市販のプロテアーゼインヒビターも使われてもよい。 
本発明の製薬組成物の投与は、頬側、経口、心室及び腸管経路投与による、治療を必要とする患者への投与であってもよい。 
本発明の組成物は、様々な用量形態、例えば溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、多重エマルジョン、軟膏、シロップ、ドロップ、ゲル類、錠剤、被覆錠剤、舌下錠、速溶解性頬側錠剤、カプセル、例えば硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセルで投与されてもよい。 
本発明の組成物は、さらにインスリン化合物の安定性を強化し、生物学的利用能を増やし、可溶性を増やし、副作用を減少させ、当業者に周知の時間療法を行い、患者の遵守又はこれらのいずれか組合せを増やすために、例えば、共有結合的、疎水性及び静電的な相互作用、薬剤担体、薬物送達システム及び高度な薬物送達システムにより、混合されても接着されてもよい。
「安定化された組成物」なる用語は、物理的安定性が増加、化学的安定性が増加、又は物理的及び化学的安定性が増加した組成物を指す。 
【００３５】
水性懸濁物は、水性懸濁物の製造に適した賦形剤と混合してインスリンを含みうる。このような賦形剤は、沈澱防止剤、分散剤又は湿潤剤である。また、水性懸濁物は、一又は複数の着色剤、一又は複数の香料、及び一又は複数の甘味料、例えばスクロース又はサッカリンを含有してもよい。
油性懸濁物は、植物性油、例えばラッカセイ油、オリブ油、ゴマ油又はココナツ油、又は鉱物性油、例えば流動パラフィンに活性成分を懸濁させることにより製剤化されうる。油性懸濁物は、増粘剤、例えばミツロウ、固形パラフィン、又はセチルアルコールを含みうる。甘味料、及び香料を添加し、口に合う経口製剤が提供される。製剤は、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸を添加することにより保存されうる。
水の添加による水性懸濁物の調製に適した分散パウダー及び顆粒は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤、及び一又は複数の保存料と活性化合物を混合することにより提供される。付加的な賦形剤、例えば甘味料、香料及び着色剤もまた存在しうる。
【００３６】
本発明のインスリンを含有する製薬組成物はまた水中油型エマルションの形態であってもよい。油相は、植物性油又は鉱物性油、又はそれらの混合物でありうる。エマルジョンは適切な乳化剤、甘味料及び香料を含みうる。
シロップ及びエリキシルは、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール又はスクロースとで処方してもよい。このような組成物は、また、粘滑剤、防腐剤及び香味及び着色剤を含有してもよい。 
本発明の更なる態様では、組成物は浸透促進剤を更に含む。一般的に、浸透促進剤は、膜インテグリティを可逆的に変化させることにより、高分子の傍細胞及び経細胞輸送を増加させる。 
【００３７】
本発明の更なる態様では、組成物は粘膜付着性ポリマーを更に含む。胃腸管の粘膜への薬剤送達系の密接した接触は、粘膜接着ポリマーの使用により得ることができる。膜への投与形態の密着した接触は、送達系と吸着膜との間の経路で、治療的に活性なポリペプチドの酵素的分解が回避可能なため、有利であるように思われる。さらに、受動的な薬剤の取込みのための駆動力を表す吸着膜における段階的濃度勾配を提供することができる。 
本発明のさらなる態様では、組成物は、酵素障壁をさらに回避し、治療的に活性なポリペプチドの送達を達成するために、タンパク質分解酵素(群)のインヒビター、例えばアミノペプチダーゼインヒビター、アマスタチン(amastatin)、ベスタチン、ボロロイシン、及びピューロマイシンをさらに含有する。プロテアーゼインヒビターの例は、グリコール酸ナトリウム、メシル酸カモスタット、バシトラシン、ダイズトリプシンインヒビター及びアプロチニンである。
封入及びカプセル化は、酵素分解に対して、保護を含む送達特性を最適にするために、治療的に活性なポリペプチドの薬剤送達系に使用される技術である。封入又はカプセル化は、ポリマー薬剤送達系の形態、例えばハイドロゲル及びナノカプセル／ミクロスフィア、及び脂質薬剤送達系、例えばリポソーム及びマイクロエマルションとすることもできる。
【００３８】
この発明の溶液及び組成物が、様々な疾患の治療において用いられてもよい。
一態様では、本発明は、高血糖、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満、高血圧、内臓脂肪症候群、異脂肪血症、β-細胞アポトーシス、β-細胞欠乏症、心筋梗塞、炎症性腸症候群、消化不良、認知障害、例えば認識促進、神経防護作用、アテローム性動脈硬化、冠状動脈性心臓病及び他の循環器系障害の治療のための医薬の調製における、本発明の溶液又は組成物の使用に関する。
本発明の別の態様では、本発明による溶液又は組成物は、２型糖尿病の疾患進行を遅延させるか予防するための医薬の調製のために用いられる。
【００３９】
本発明は以下の実施例によってさらに説明するが、この実施例は保護範囲を制限するものと解されるものではない。前述の説明及び以下の実施例において開示した特徴は、別々でもいずれかを組み合わせてでも、多様な形態の本発明を理解するための材料である。
【実施例】
【００４０】
実施例１  インスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)の１６ｍＭ以下の溶液の調製
２１６ｍｇの等電性沈殿Ｚｎを含まない[Ｂ２８-Ａｓｐ]ヒトインスリン(インスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標))を２ｍｌの蒸留水に溶解し、ｐＨを２Ｎ水酸化ナトリウム溶液にて７．４に慎重に調整した。混合物をローター攪拌機にて穏やかに撹拌し、終夜立たせておき、１６ｍＭ以下のインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)溶液(２７００ＩＵ／ｍｌ以下)を得た。溶液１とする。絶食させたＳＰＲＤラットの十二指腸に、蒸留水との比較で溶液を与え(０．４ｍｌ／ｋｇ、ｎ＝２)、血中グルコースの変化を図１に示す。
【００４１】
実施例２  ６０ｍＭのインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)の粘性溶液の調製
１ｍｇの等電性沈殿Ｚｎを含まない[Ｂ２８-Ａｓｐ]ヒトインスリン(インスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標))を１００ｍｌの水に溶解し、ｐＨを２Ｎ水酸化ナトリウムにて７．４に調整した。結果として生じた溶液を凍結乾燥した。
７２０ｍｇの凍結乾燥したインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)を１．３ｍｌの蒸留水に溶解し、混合物をローター攪拌機にて穏やかに撹拌し、６０ｍＭのインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)の粘性溶液を得た。
【００４２】
実施例３  ３６ｍＭのヒトインスリン溶液の調製
４２０ｍｇの結晶化したＺｎを含まないヒトインスリンを１．６ｍｌの蒸留水に溶解し、完全に溶解するまで穏やかに撹拌し続けた。体積は、最終的に水にて２．０ｍｌに調整した。この結果、ｐＨ８の３６ｍＭのヒトインスリン溶液(６０００ＩＵ／ｍｌ)が得られた。
【００４３】
実施例４  亜鉛及びフェノールを含まないインスリンＡｓｐａｒｔ(登録商標)溶液１を用いた、界面活性剤ベースの組成物Ａ−Ｄの調製
組成物Ａ：３．７ｍＭ インスリンａｓｐａｒｔ(２１．５ｍｇ／ｍｌ)
ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７及びインスリンａｓｐａｒｔの混合物を以下のように調製した。１．０６５ｍｌのインスリンａｓｐａｒｔ溶液(１５．６ｍＭ、実施例１に記載のように調製される)と３．４３５ｍｌのＭＱ Ｈ２Ｏを、３８．８３ｍｇの粉ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８と５８．３７ｍｇの粉ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７の混合物に加えた。混合物を回転テーブル上で回転させて混合させたままにした。結果として生じる組成物Ａを完全に透明にし、沈降することなく室温で安定であることが示された。
【００４４】
組成物Ｂ：５ｍＭ インスリンａｓｐａｒｔ(２９ｍｇ／ｍｌ)
ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７及びインスリンａｓｐａｒｔの混合物を以下のように調製した。１ｍｌのインスリンａｓｐａｒｔ５．３５ｍＭを、４４．９４ｍｇのｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８及び６７．４１ｍｇのｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７の混合粉末に加えた。混合物を回転テーブル上で回転させて混合させたままにした。結果として生じる組成物Ｂを完全に透明にし、沈降することなく室温で安定であることが示された。
【００４５】
組成物Ｃ：１０．３ｍＭ インスリンａｓｐａｒｔ(５９．７ｍｇ／ｍｌ)
ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７及びインスリンａｓｐａｒｔの混合物を以下のように調製した。０．５ｍｌのインスリンａｓｐａｒｔ溶液Ｂ１及び０．３７５ｍｌのＭＱ Ｈ２Ｏを、７６．７ｍｇのｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８及び１１４．６２ｍｇのｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７の混合粉末に加えた。混合物を回転テーブル上で回転させて混合させたままにした。結果として生じる溶液組成物Ｃを完全に透明にし、沈降することなく室温で安定であることが示された。
【００４６】
組成物Ｄ：１８ｍＭ インスリンａｓｐａｒｔ(１０４．４ｍｇ／ｍｌ) 
ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７及びインスリンａｓｐａｒｔの混合物を以下のように調製した。２ｍｌのインスリンａｓｐａｒｔ １８ｍＭを、３０２．４ｍｇのｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８及び４５３．６ｍｇのｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７の混合粉末に加えた。混合物を回転テーブル上で回転させて混合させたままにした。結果として生じる溶液組成物Ｄを完全に透明にし、沈降することなく室温で安定であることが示された。
【００４７】
実施例５  高濃縮の亜鉛及びフェノールを含まないインスリンａｓｐａｒｔ含有マイクロエマルジョンの調製
先の実施例のいずれを用いて、高濃縮の亜鉛及びフェノールを含まないインスリン含有マイクロエマルジョンを得てもよい。
組成物Ｅ：
例として、実施例１に記載内容を基に、中性(ｐＨ７．４)の亜鉛及びフェノールを含まない高濃縮のインスリン含有マイクロエマルジョンを調製することができる。１４．８ｍＭの原液は、トリエタノールアミンバッファ中の亜鉛及びフェノールを含まないインスリンを溶解させて、ＮａＯＨを用いてｐＨを調整することによって調製した。
高濃縮の亜鉛及びフェノールを含まない中性(ｐＨ７．４)のインスリンａｓｐａｒｔ溶液の組成物と使用についてはいくらか異なるが、Ritschel (W.A. Ritschel Microemulsions for Improved Absorption from the Gastrointestinal Tract. Meth Find Exp Clin Pharmacol 1991, 13: 205-220)]に記載の手順に従って、２１．５ｍｇ／ｍｌのインスリンａｓｐａｒｔを含有するマイクロエマルジョンは、以下を用いて調製した。
１０００ｍｇのｃｅｔｉｏｌ Ｖ
１６４７．０５ｍｇのｌａｂｒａｓｏｌ
２３５２．９５ｍｇのｐｌｕｒｏｌ  ｉｓｏｓｔｅａｒｉｑｕｅ
１．６６７ｍｌの８５．８ｍｇ／ｍｌ 亜鉛及びフェノールを含まないインスリンａｓｐａｒｔ溶液(ｐＨ７．４) 
インスリンを除くすべての成分を４０℃で５分間、その後回転テーブルの上で１０分間混合した後、試料を３０分間置いた。次いで、亜鉛及びフェノールを含まないインスリンａｓｐａｒｔを加え、２分間にわたって手でバイアルをゆっくりと回転及びねじることにより混合した。
【００４８】
実施例６  ラットの胃腸管への組成物Ａの投与
組成物Ａ、すなわち実施例４によって調製した２１．５ｍｇ／ｍｌの亜鉛及びフェノールを含まないインスリンａｓｐａｒｔ(ｐＨ７．４)を、糖尿病でないＳＰＲＤラットの腸管に直接投与することによって回腸に投与し、血中グルコースを４時間モニターした。結果を図２に示す。
【００４９】
実施例７  ラットの胃腸管への組成物Ｅの投与
組成物Ｅ、すなわち実施例５によって調製した２１．５ｍｇ／ｍｌの亜鉛及びフェノールを含まないインスリンａｓｐａｒｔ(ｐＨ７．４)を、糖尿病でないＳＰＲＤラットの腸管に直接投与することによって回腸に投与し、血中グルコースを４時間モニターした。結果を図３に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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