(57)【要約】  フラビウイルス感染症、特にHLV感染症の治療に有用な、実質的に単一の鏡像異性体の形態の3-ホスホインドール化合物を提供する。3-ホスホインドール化合物を単独か、又は一つ若しくは複数の抗ウイルス剤と合わせて含む医薬組成物、その調製方法、及びこれらの化合物を取り込んだ医薬品の製造方法も提供する。その3-ホスホインドール化合物は、式(A)又は(B)の化合物、及び薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物又はエステルからなる。式中、Xは、水素;アリール又はヘテロシクリル;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、Yは、水素、-R、-O-R、-NH-R又は-NRRであり、Zは、-OR、-NHR、-NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、R1は、水素、アシル、-S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、各R4'、R5'、R6'及びR7'は、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、ハロゲン、-CN、-CF3、-OR、-NHR、-NRR又は-NO2であり、nは、0、1又は2であり、各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又はヘテロシクリルである。2010504978.tif 000129【選択図】図１Ｂ
2010504978.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(A)の純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物若しくはエステル
【化１】
2010504978.tif 000125
(式中、
Xは、水素;アリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yは、水素、-R、-O-R、-NH-R又は-NRRであり、
Zは、-OR、-NHR、-NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R1は、水素、アシル、-S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
各R4'、R5'、R6'及びR7'は、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、複素環、ハロゲン、-CN、-CF3、-OR、-NHR、-NRR又は-NO2であり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又は複素環である)。
【請求項２】
Xが、アリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yが、-R、-O-R、-NH-R又は-NRRである、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
各R4'及びR5'が、独立に、水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'が水素であり、
R1が水素又は-S(O)n-Rであり、
Yが、水素、-R又は-O-Rであり、
Zが、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nが1又は2であり、
各Rが、独立に、水素又はアルキルである、
請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
式(C)による、請求項1〜3のいずれかに記載の化合物
【化２】
2010504978.tif 000126
(式中、各R2"、R3"、R4"、R5"及びR6"は、独立に、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換アルキル又は置換若しくは非置換C2〜6アルケニルである)。
【請求項５】
各R3"及びR5"が、独立に、CN若しくはハロゲンで任意選択で置換されていてよいアルキル又はC2〜6アルケニルであり、R2"、R4"及びR6"が水素である、請求項4に記載の化合物。
【請求項６】
R1が水素であり、
Yが-O-Rであり、
Zが、アミド、カルボキシル又はカルボニルである、
請求項5に記載の化合物。
【請求項７】
(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項1に記載の化合物。
【請求項８】
(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項1に記載の化合物。
【請求項９】
式(B)による純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物若しくはエステル
【化３】
2010504978.tif 000127
(式中、
Xは、水素;アリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yは、水素、-R、-O-R、-NH-R又は-NRRであり、
Zは、-OR、-NHR、-NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R1は、水素、アシル、-S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
各R4'、R5'、R6'及びR7'は、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、複素環、ハロゲン、-CN、-CF3、-OR、-NHR、-NRR又は-NO2であり、
nは1又は2であり、
各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又は複素環である)。
【請求項１０】
Xが、アリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yが、-R、-O-R、-NH-R又は-NRRである、
請求項9に記載の化合物。
【請求項１１】
各R4'及びR5'が、独立に、水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'が水素であり、
R1が水素又は-S(O)n-Rであり、
Yが、水素、-R又は-O-Rであり、
Zが、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nが1又は2であり、
各Rが、独立に、水素又はアルキルである、
請求項9に記載の化合物。
【請求項１２】
式(D)による請求項9〜11のいずれかに記載の化合物
【化４】
2010504978.tif 000128
(式中、各R2"、R3"、R4"、R5"及びR6"は、独立に、水素、ハロゲン、置換若しくは非置換アルキル又は置換若しくは非置換C2〜6アルケニルである)。
【請求項１３】
各R3"及びR5"が、独立に、CN若しくはハロゲンで任意選択で置換されていてよいアルキル又はC2〜6アルケニルであり、R2"、R4"及びR6"が水素である、請求項12に記載の化合物。
【請求項１４】
R1が水素であり、
Yが-O-Rであり、
Zが、アミド、カルボキシル又はカルボニルである、
請求項13に記載の化合物。
【請求項１５】
(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(R)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項9に記載の化合物。
【請求項１６】
(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(R)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項9に記載の化合物。
【請求項１７】
鏡像異性的に純粋である、請求項1〜16のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８】
その反対の鏡像異性体が実質的に存在しない、請求項1〜16のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９】
少なくとも80重量%、90重量%、95重量%又は99重量%の指定された鏡像異性体を含む、請求項1〜16のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】
薬学的に許容される塩、エステル又は中性形態である請求項1〜16のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１】
請求項1〜20のいずれかに記載の化合物、及び薬学的担体、賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項２２】
前記化合物が、(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル;又は(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項21に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
任意選択でカプセル剤又は錠剤である、薬学的に許容される経口剤形である、請求項22に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記化合物が、鏡像異性的に純粋である、請求項23に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
請求項1〜20のいずれかに記載の化合物及び第二の抗HIV剤を含む医薬組成物。
【請求項２６】
任意選択で(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル又は(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルである請求項1〜20のいずれかに記載の化合物を、アンプレナビル、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトロナビル、ホスアンプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、ブレカニビル若しくはGS-8374から任意選択で選択されるプロテアーゼ阻害剤;又はエルビテグラビル、GSK-364735若しくはラルテグラビルから任意選択で選択されるインテグラーゼ阻害剤である第二の抗HIV剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項２７】
有効量の請求項1〜20のいずれかに記載の化合物を、HIV感染症の治療を必要とする対象に投与することを含むHIV感染症の治療方法。
【請求項２８】
前記化合物が、(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル;又は(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物が、任意選択でカプセル剤又は錠剤である薬学的に許容される経口の剤形で存在する、請求項27に記載の方法。
【請求項３０】
前記化合物が鏡像異性的に純粋である、請求項27に記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物を、対象に、少なくとも第二の抗HIV剤と併用投与又は交互投与することをさらに含む、請求項27又は28に記載の方法。
【請求項３２】
前記第二の抗HIV剤が、
アンプレナビル、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトロナビル、ホスアンプレナビル、ダルナビル、アタザナビル及びネルフィナビルから任意選択で選択されるプロテアーゼ阻害剤;
ラミブジン、エムトリシタビン、アバカビル、ザルシタビン、ジドブジン、テノホビル、ジダノシン及びスタブジンから任意選択で選択されるヌクレオシド又はヌクレオチド逆転写酵素阻害剤;
デラビルジン、エファビレンツ及びネビラピンから任意選択で選択される非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤;
アトリプラ、コンビビル、トリジビル及びツルバダから任意選択で選択される固定用量合剤;並びに
マラビロック及びエンフビルチドから任意選択で選択される融合阻害剤又はCCR5共受容体アンタゴニストから任意選択で選択される侵入阻害剤
から選択される、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
前記第二の抗HIV剤が、
アムドキソビル、アプリシタビン及びエルブシタビンから任意選択で選択されるヌクレオシド逆転写酵素阻害剤;
任意選択でブレカニビル又はGS-8374であるプロテアーゼ阻害剤;
アプラビロック、PRO2000及びビクリビロックから任意選択で選択されるCCR5受容体アンタゴニスト;
任意選択でエトラビリン、リルピビリン又はカラノライドAである非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤;
任意選択でベビリマットである成熟阻害剤;並びに
任意選択でエルビテグラビル、GSK-364735又はラルテグラビルであるインテグラーゼ阻害剤
から選択される、請求項31に記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物が、エンテカビル;ラミブジン;インターフェロンα-2b若しくはペグインターフェロンα-2aを含むインターフェロン;アデホビルジピボキシル;又はテルビブジンから任意選択で選択してもよい抗HBV剤と併用投与又は交互投与される、請求項27又は28に記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物が、エムトリシチビン、クレブジン、テノホビル、バルトルシタビン、アムドキソビル、LB80380、レモホビル及びラシビルから任意選択で選択してもよい抗HBV剤と併用投与又は交互投与される、請求項27又は28に記載の方法。
【請求項３６】
前記第二の抗HIV剤が、アンプレナビル、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトロナビル、ホスアンプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、ブレカニビル若しくはGS-8374から任意選択で選択されるプロテアーゼ阻害剤;又はエルビテグラビル、GSK-364735若しくはラルテグラビルから任意選択で選択されるインテグラーゼ阻害剤である、請求項31に記載の方法。
【請求項３７】
前記化合物がシトクロムP450の活性を調節する、請求項27又は28に記載の方法。
【請求項３８】
前記化合物が第二の抗HIV剤のP450代謝を阻害する、請求項37に記載の方法。
【請求項３９】
前記化合物が、任意選択で1日に1回、経口投与される、請求項27又は28に記載の方法。
【請求項４０】
前記化合物が、対象のHCV感染症の治療又は予防に有効な第二の化合物と併用して投与される、請求項27又は28に記載の方法。
【請求項４１】
HIV感染症の予防を必要とする対象に有効量の請求項1〜20のいずれかに記載の化合物を投与することを含む、HIV感染症を予防する方法。
【請求項４２】
HIVに感染した細胞を請求項1〜20のいずれかに記載の化合物と接触させるステップを含む、HIV複製を阻害する方法。
【請求項４３】
前記化合物が、(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル;又は(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルである、請求項に42に記載の方法。
【請求項４４】
治療における請求項1〜20のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項４５】
HIV感染症に付随する症状を治療、予防、改善又は管理するための医薬品の製造における、請求項1〜20のいずれかに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス複製を阻害するのに有用である鏡像異性的に純粋なホスホインドール化合物を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ウイルス複製を阻害するのに有用である純粋なS-ホスホインドール化合物を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ウイルス複製を阻害するのに有用である純粋なR-ホスホインドール化合物を提供する。上記化合物の薬学的に許容される塩、誘導体及び類似体、上記化合物を含む医薬組成物、上記化合物を例えばHIV感染症の治療又は予防において使用する方法、及び上記化合物の調製方法をさらに提供する。
【背景技術】
【０００２】
インドール、ヌクレオシド及びその類似体は、ヒトを含む哺乳動物におけるウイルス感染症の治療に有用性のあるものとして当業界で知られている。哺乳動物に感染するウイルスであって、且つ、インドール、ヌクレオシド又はその類似体若しくは誘導体を含む医薬組成物を投与することによって治療可能なウイルスには、これらに限定されないが、HCVを含むヘパシウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、牛ウイルス性下痢ウイルス(BVDV)、古典的ブタコレラウイルス(豚コレラウイルスとしても知られているCSFV)及びヒツジのボーダー病ウイルス(BDV)などのペスチウイルス、並びに、デング出血熱ウイルス(DHF又はDENV)、黄熱病ウイルス(YFV)、ウエストナイルウイルス(WNV)、ショック症候群及び日本脳炎ウイルスのようなフラビウイルスが含まれる(Moennig等、Adv.Vir.Res.1992年、41:53〜98頁;Meyers,G.and Thiel,H-J.、Adv.In Viral Res.、1996年、47:53〜118頁;Moennig等、Adv.Vir.Res.1992年、41:53〜98頁;S.B.Halstead、Rev.Infect.Dis.、1984年、6:251〜64頁;S.B.Halstead、Science、1988年、239:476〜81頁;T.P.Monath、New Engl.J.Med.、1988年、319:641〜3頁)。
【０００３】
インドール
ある種のインドール類似体や誘導体はヒト免疫不全ウイルス(HIV)による感染症の治療に用いられている。
【０００４】
例えば、Williams等は、Merck社の米国特許第5,527,819号においてHIV感染症の治療のための置換インドールを教示している。‘819特許に開示されている化合物は、以下の広範にわたる構造式(III)によって包括的に表される大分類の化合物を含む:
【化１】
2010504978.tif 000003
【０００５】
(式中、可変部X、Y、Z、R及びR6は広い範囲で定義され、約100個の化合物を包含する)
示されている大部分の例では、YはSO2であり、Zは-C(O)NH2であり、Rは任意選択で置換されたフェニルである。
【０００６】
Merck & Co.に譲渡されているGreenlee等の米国特許第5,124,327号は、任意選択で置換されたスルホニルフェニルインドール化合物の一部類を開示している。これらの化合物は逆転写酵素阻害剤として活性であり、したがってHIV感染症及びAIDSの治療に有用であるとされている。
【０００７】
Idenix Pharmaceuticals,Ltd.の米国特許第6,710,068号は、インドール官能基のフェニル環若しくはベンジル環のいずれか又はその両方の環上で水素以外の少なくとも二つの部分で置換されているフェニルインドールの一部類を開示している。その置換基は、フェニル環上に位置する場合、一般に3"及び5"位に担持され、インドール部分のベンジル環上に位置する場合、4'及び5'位;5'及び6'位又は5'及び7'位に担持される。PCT公開番号WO02/083126も参照されたい。
【０００８】
Idenix PharmaceuticalsのPCT公開番号WO2004/014364は、高い抗HIV活性を有するさらに別の部類のフェニルインドールを開示している。その先行化合物と同様に、これらの化合物は、インドール官能基のフェニル環若しくはベンゾ環のいずれか又はその両方の環上で水素以外の少なくとも二つの部分で置換されている。さらに、これらの化合物は、その化合物のインドール基上の位置2(式(III)で「Z」と上記に示した位置)にカルボキサミド官能基を有する複数の置換基を取り込んでいる。
【０００９】
Idenix Pharmaceuticalsはさらに別の部類のフェニルインドール化合物を開示しており、これらは、HIV及び/又はAIDSの治療に有用なホスホ-フェニルインドールである(米国特許番号2006/0074054及びWO06/054182)。
【００１０】
Bristol Myers Squibbは、HIV及び/又はAIDSの治療のための様々な任意選択で置換されたインドール、アザインドール、ピペラジン及びピロリジンを開示している、多くの特許、公開特許出願及びPCT公開特許の譲受人である。Kadow等の米国公開番号2004/0006090;Regueiro-Ren等の米国公開番号2004/0063746;Wang等の米国公開番号2003/0096825;Kadow等の米国公開番号2003/0236277;及びKadow等のWO03/068221を参照されたい。
【００１１】
SmithKline Beecham S.P.AのWO01/02388は、HIV、AIDS、骨粗しょう症、癌及びアルツハイマー病の治療に有用な、カルバミル置換基で任意選択で置換されたフェニルインドールを開示している。
【００１２】
Warner-Lambert CompanyはHIVの治療のための様々なインドール-チアゼピノン、オキサゼピノン、ジアゼピノン、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン及びインドール-2-カルボキサミドを開示している(Boschelli等の米国特許第5,424,329号;米国特許第5,565,446号;Connor等の米国特許第5,703,069号;及びWarner-Lambert CompanyのWO96/29077を参照されたい)。
【００１３】
Shinogi & Co.は、抗HIV薬物として有用なウイルスインテグラーゼ阻害剤である任意選択で置換されたインドール誘導体を開示している(Fujishita等の米国特許公開番号2002/0019434;Fujishita等の米国特許第6,716,605号;及びFujishita等の米国特許第6,506,787号)。
【００１４】
Kleinschroth等の米国特許第5,945,440号は、癌、ウイルス性疾患(HIVを含む)、心臓病及び血管疾患、気管支肺疾患、炎症性障害、中枢神経系の変性疾患並びに他の疾患を含む様々な疾患の治療のためのインドロカルバゾールアミドの一部類を開示している。
【００１５】
Gunasekera等は米国特許第4,866,084号において、HSV(単純ヘルペスウイルス)を含む抗ウイルス活性及び抗腫瘍活性を有するビスインドールアルカロイドを教示している。Dykstra等の米国特許第5,935,982号は、レトロウイルス感染症、特にHIVに対して特異的な有用性をもつ別の部類のビスインドールを報告している。
【００１６】
Matsunaga等は米国特許第5,852,011号(1998年12月22日)において、ヘテロアリール官能基及びアミド官能基で置換されたインドール誘導体の一部類を開示している。これらの化合物は一般に抗腫瘍性、抗ウイルス性及び抗菌性の特性を有するとされている。
【００１７】
Dykstra等は米国特許第5,935,982号において、ビスインドールの一部類を開示しており、具体的にはレトロウイルス感染症、特にHIVによる感染症を治療するためのその使用を提示している。
【００１８】
Domagala等は米国特許第5,929,114号(1999年7月27日)において、インドール誘導体を含むアリールチオ及びビチオビスアリールアミド化合物の部類を開示しており、これらは、抗菌及び抗ウイルス活性を有すると報告されている。
【００１９】
Pevear等は米国特許第5,830,894号(1998年11月3日)において、抗ペスチウイルス活性、最も顕著にはBVDV活性を有すると報告されているトリアジノインドール誘導体の一部類を開示している。
【００２０】
インドールはHIV以外の疾患の治療に用いられている。Farina等の米国特許第5,981,525号は、破骨細胞H+-アデノシントリホスファターゼを阻害する、したがって骨吸収を低減するその能力に基づいた、骨粗しょう症の治療に有用なインドールの複合配置体(complex array)を開示している。同じくFarina等の米国特許第6,025,390号は、これも骨粗しょう症に治療に有用な複素環式芳香族ペンタジエン酸誘導体と称されるインドール誘導体の別のグループを教示している。Houpis等の米国特許第5,489,685号は、HIVの治療に有用なフロ(2,3-b)ピリジンカルボン酸エステルの一連の化合物を開示している。
【００２１】
HIV感染症が、世界的な流行病のレベルに至り、感染した宿主に対して悲劇的な影響を及ぼすという事実に照らせば、これらのウイルス感染症を治療するために、宿主に対する毒性の小さい新規の有効な薬剤を提供することが依然として強く求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明の目的は、HIVに感染した宿主の治療又はAIDS関連症状の治療のための化合物、使用方法及び組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
したがって、本発明は、それを必要とする宿主のウイルス感染症、例えばHIV感染症の治療又は予防に有用である鏡像異性的に純粋な化合物を提供する。さらに、その化合物を含む医薬組成物、治療又は予防のための化合物の使用方法及び化合物の調製方法を提供する。
【００２４】
以下の例で示すように、キラルホスホインドール化合物の活性の多くは、一つの鏡像異性体又は立体異性体にある。さらに、本明細書で提供する特定の化合物は、野生型及び非ヌクレオシド逆転写酵素型の阻害剤(NNRTI)耐性HIVのインビトロでの強力且つ選択的な阻害剤である。本明細書で提供する特定の化合物は、エファビレンツなどの現在の治療法と比べて、HIV耐性の進行に対する、より高い遺伝的障壁を提供することができる。
【００２５】
一態様では、本発明は、それを必要とする宿主のHIV感染症などのウイルス感染症の治療又は予防のための純粋なS-ホスホインドール化合物及びその使用方法を提供する。
【００２６】
一態様では、本発明は、それを必要とする宿主のHIV感染症などのウイルス感染症の治療又は予防のための純粋なR-ホスホインドール化合物及びその使用方法を提供する。
【００２７】
一態様では、本発明は、式(A)による純粋なホスホインドール化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化２】
2010504978.tif 000004
【００２８】
(式中、例えば、
Xは、水素;置換されていても置換されていなくてもよく、二環式、三環式若しくはスピロ構造を含むことができるアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRであり、
ZはOR、NHR、NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R1は、水素、アシル、S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R4'、R5'、R6'及びR7'のそれぞれは、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、複素環、ハロゲン、CN、CF3、OR、NHR、NRR若しくはNO2であり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又は複素環である)。
【００２９】
式(A)による特定の実施形態では、Xはアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRである。
【００３０】
他の態様では、本発明は、式(B)による純粋なホスホインドール化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化３】
2010504978.tif 000005
【００３１】
(式中、例えば、
Xは、水素;置換されていても置換されていなくてもよく、二環式、三環式若しくはスピロ構造を含むことができるアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRであり、
ZはOR、NHR、NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R1は、水素、アシル、S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R4'、R5'、R6'及びR7'のそれぞれは、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、複素環、ハロゲン、CN、CF3、OR、NHR、NRR若しくはNO2であり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又は複素環である)。
【００３２】
式(B)による特定の実施形態では、Xはアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRである。
【００３３】
他の態様では、本発明は、その化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、エステル及びプロドラッグを提供する。
【００３４】
他の態様では、本明細書で提供する化合物、及び一つ若しくは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３５】
他の態様では、本発明は、本明細書で示す化合物又は医薬組成物を投与することによって、それを必要とする宿主のHIV感染症を治療又は予防する方法を提供する。
【００３６】
他の態様では、本発明は、治療又は処置のために、式(A)又は式(B)の化合物を経口で投与する方法を提供する。以下の例で示すように、式(A)の特定の化合物は、好都合な薬物動態による経口的バイオアベイラビリティを有している。
【００３７】
他の態様では、本発明は、シトクロムP450を阻害する方法を提供する。以下の例で示すように、本明細書で示す特定の化合物は、シトクロムP450 3A4、シトクロムP450 2C8及びシトクロムP450 2C9を含む一つ又は複数のシトクロムP450を阻害するのに有効である。したがって、本発明は、シトクロムP450を阻害するための本明細書で提供する化合物を使用する方法を提供する。その方法は、シトクロムP450を、シトクロムP450を阻害するのに有効な量の式(A)の化合物などの本発明で開示する化合物と接触させるステップを含む。
【００３８】
他の態様では、本発明は、シトクロムP450によって代謝される薬物の薬物動態を調節する方法を提供する。その方法は、本明細書で示す化合物と薬物を併用投与又は交互投与するステップを含む。その薬物は、シトクロムP450によって代謝されることが当業者に知られている、任意の薬学的に許容される分子であってよい。特定の実施形態では、シトクロムP450はシトクロムP450 3A4、シトクロムP450 2C8又はシトクロムP450 2C9である。
【００３９】
本明細書で提供する化合物は単独か、或いは一つ若しくは複数の抗ウイルス剤と併用投与又は交互投与することができる。その化合物又は組成物はまた、HIV-抗原陽性であるか又はHIVウイルスに曝されている人である抗HIV抗体を含む個体において、臨床的疾患の進行を予防的に阻止するか又は遅延させるのに用いることもできる。
【００４０】
他の態様では、B型肝炎感染症の治療に有効な一つ又は複数の薬剤と併用して本明細書で開示する純粋な化合物を投与することを含む、HIVとB型肝炎に重感染した宿主を治療するための組成物及び方法を提供する。他の態様では、C型肝炎感染症の治療のための治療に有効な一つ若しくは複数の薬剤と併用して本明細書で開示する純粋な化合物を投与することを含む、HIVとC型肝炎に重感染した宿主を治療するための組成物及び方法を提供する。
【００４１】
他の態様では、鏡像異性的に純粋なホスホインドール化合物、純粋なS-ホスホインドール化合物、純粋なR-ホスホインドール化合物、式(A)による純粋な化合物、及び式(B)による純粋な化合物を含む本明細書で示す化合物の調製方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１Ａ】図1Aは、式Iの3-ホスホインドール化合物でのK103N/Y181C HIV逆転写酵素の結晶構造を示す図である。
【図１Ｂ】図1Bは、式Iの3-ホスホインドール化合物でのK103N/Y181C HIV逆転写酵素の結晶構造の概略図である。
【図２Ａ】図2Aは、化合物IIIの分子結晶構造を示す図である。
【図２Ｂ】図2Bは、化合物IIIの分子結晶構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
哺乳動物におけるウイルス感染症、特にHIV感染症を治療するための物質の組成物、使用方法及び医薬組成物を提供する。具体的には、宿主のHIV感染症を含む感染症の治療又は予防のための純粋な3-ホスホインドール化合物、これらの化合物を含む組成物、及び化合物又は組成物の使用方法を提供する。さらに、本発明は、純粋な3-ホスホインドールを調製するための方法を提供する。
【００４４】
定義
本明細書で用いる「純粋な」という用語は、キラル化合物に適用される場合、その反対の鏡像異性体を実質的に含まない(即ち、鏡像異性的に過剰である)キラル化合物の鏡像異性体を指す。例えば、純粋な「R」型の化合物には「S」型の化合物が実質的に存在しておらず、したがって、鏡像異性的に「S」型が過剰である。「鏡像異性的に純粋な」又は「純粋な鏡像異性体」という用語は、化合物が、過剰な鏡像異性体、例えば75重量%超、80重量%超、85重量%超、90重量%超、91重量%超、92重量%超、93重量%超、94重量%超、95重量%超、96重量%超、97重量%超、98重量%超、98.5重量%超、99重量%超、99.2重量%超、99.5重量%超、99.6重量%超、99.7重量%超、99.8重量%又は99.9重量%超の鏡像異性体を含むことを表す。特定の実施形態では、その重量は化合物の全量、即ち化合物のすべての鏡像異性体に対するものである。特定の実施形態では、一つの鏡像異性体は、30〜80%過剰であっても、30〜70%、30〜60%、30%、35%、40%、45%、50%、55%若しくは60%過剰であっても、また、その間のいずれかの%過剰であってもよい。
【００４５】
別段の指定のない限り、本明細書で用いる「鏡像異性的に純粋な(S)-ホスホインドール」又は「(S)-ホスホインドール」という用語は、例えば、少なくとも約80重量%の(S)-ホスホインドールとせいぜい約20重量%の(R)-ホスホインドール、少なくとも約90重量%の(S)-ホスホインドールとせいぜい約10重量%の(R)-ホスホインドール、少なくとも約95重量%の(S)-ホスホインドールとせいぜい約5重量%の(R)-ホスホインドール、少なくとも約99重量%の(S)-ホスホインドールとせいぜい約1重量%の(R)-ホスホインドール、又は少なくとも約99.9重量%の(S)-ホスホインドールとせいぜい約0.1重量%の(R)-ホスホインドールを指す。特定の実施形態では、その重量は、化合物の全量、即ち両方又はすべての化合物の鏡像異性体に対するものである。
【００４６】
「鏡像異性的に純粋な(R)-ホスホインドール」という用語は、例えば、少なくとも約80重量%の(R)-ホスホインドールとせいぜい約20重量%の(S)-ホスホインドール、少なくとも約90重量%の(R)-ホスホインドールとせいぜい約10重量%の(S)-ホスホインドール、少なくとも約95重量%の(R)-ホスホインドールとせいぜい約5重量%の(S)-ホスホインドール、少なくとも約99重量%の(R)-ホスホインドールとせいぜい約1重量%の(S)-ホスホインドール、少なくとも約99.9重量%の(R)-ホスホインドール、又は少なくとも約0.1重量%の(S)-ホスホインドールを指す。特定の実施形態では、その重量はホスホインドールの全量、即ち両方又はすべてのホスホインドールの鏡像異性体に対するものである。
【００４７】
本明細書で提供する組成物では、鏡像異性的に純粋なホスホインドール又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグは、他の活性又は不活性成分と共に存在することができる。例えば、鏡像異性的に純粋な(S)-ホスホインドールを含む医薬組成物は、例えば約90%の賦形剤と約10%の鏡像異性的に純粋な(S)-ホスホインドールを含むことができる。特定の実施形態では、そうした組成物における鏡像異性的に純粋な(S)-ホスホインドールは、例えば少なくとも約99.9重量%の(S)-ホスホインドールとせいぜい約0.1重量%の(R)-ホスホインドールを含むことができる。特定の実施形態では、その活性成分は、わずかな担体、賦形剤又は希釈剤と共に処方するかそれらなしで処方することができる。
【００４８】
本明細書で範囲に言及される場合それはいつでも、独立に且つ別個にその範囲のすべてのメンバーを含む。非限定的な例としては、例えば「C1〜C10アルキル」という用語は、独立にそのグループの各メンバーを含むものとし、したがって例えば、C1〜C10アルキルは、直鎖、分鎖、及び適切な場合、環状のC1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9及びC10アルキル官能基を含む。同様に、別の非限定的な例としては、1〜10%は、独立に、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%及び10%、並びにそうした1〜2%、2〜3%等のその間の範囲を含む。
【００４９】
本明細書で用いる「キラル」という用語は、その鏡像に重ね合わせることができない特性を有する化合物を含む。
【００５０】
「単離された」という用語は、少なくとも85若しくは90重量%、95%、98%、99%又は100重量%の化合物を含む組成物を含む。
【００５１】
本明細書で用いる「アルキル」という用語は、別段の指定のない限り、一般にC1〜10の飽和の直鎖、分鎖若しくは環状の第一級、第二級又は第三級炭化水素を含み、具体的には、これらに限定されないが、メチル、CF3、CCl3、CFCl2、CF2Cl、エチル、CH2CF3、CF2CF3、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、t-ブチル、ペンチル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、3-メチルペンチル、2,2-ジメチルブチル及び2,3-ジメチルブチルを含む。この用語は、置換と非置換両方のアルキル基を含み、具体的にはハロゲン化アルキル基、より具体的にはフッ素化アルキル基を含む。アルキル基を置換できる部分の非限定的な例は、当業界で知られているように、例えば、Greene等によって「有機合成化学における保護基(Protected Groups in Organic Synthesis)」、John Wiley and Sons、2nd Ed.、1991年に教示されているように、必要に応じて保護されるか又は保護されないで、ハロゲン(フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード)、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルフェート、ホスホン酸、ホスフェート又はホスホネートからなる群から選択される。
【００５２】
本明細書で用いる「低級アルキル」という用語は、別段の指定のない限り、置換と非置換両方の部分を含む、C1〜6飽和の直鎖、分鎖、又は適切な場合、環状(例えば、シクロプロピル)アルキル基を指す。
【００５３】
「アルキルアミノ」又は「アリールアミノ」という用語は、一個若しくは二個のアルキル又はアリール置換基をそれぞれ有するアミノ基を指す。本出願では、別段の具体的言及のない限り、アルキルが適切な部分である場合、それは、置換されるか置換されていない低級アルキルである。
【００５４】
本明細書で用いる「ニトロ」という用語は-NO2を意味し、「スルフヒドリル」という用語は-SHを意味し、「スルホニル」という用語は-SO2を意味する。
【００５５】
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、少なくとも一つの飽和C-C結合が二重結合又は三重結合で置き換えられている置換と非置換両方の形態を含むアルキル部分を含む。したがってC2〜6アルケニルは、ビニル、アリル、1-プロペニル、2-プロペニル、1-ブテニル、2-ブテニル、3-ブテニル、1-ペンテニル、2-ペンテニル、3-ペンテニル、4-ペンテニル、1-ヘキセニル、2-ヘキセニル、3-ヘキセニル、4-ヘキセニル又は5-ヘキセニルであってよい。同様に、C2〜6アルキニルは、エチニル、1-プロピニル、2-プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、3-ブチニル、1-ペンチニル、2-ペンチニル、3-ペンチニル、4-ペンチニル、1-ヘキシニル、2-ヘキシニル、3-ヘキシニル、4-ヘキシニル又は5-ヘキシニルであってよい。
【００５６】
「アルキレン」という用語は、式-(CH2)n-(「n」は1〜10の任意の整数であってよい)の飽和した直鎖、二価アルキル基を含む。
【００５７】
「アルキル」、「アルコキシ」、「アルケニル」、「アルキニル」等は直鎖と分鎖の両方の基を含む。しかし、「プロピル」などの個別の基への言及はその直鎖基だけを包含し、他方、「イソプロピル」などの分鎖異性体は、そのように具体的な用語で称される。
【００５８】
本明細書で用いる「保護された」という用語は、別段の定義のない限り、そのさらなる反応を防止するか又は他の目的のために、酸素、窒素、イオウ又はリン原子上に加えられる基を指す。多種多様の酸素、窒素、イオウ又はリンの保護基が有機合成分野の技術者に知られている。
【００５９】
本明細書で用いる「アリール」という用語は、別段の指定のない限り、各環内の最大で8員の安定な任意の単環式、二環式又は三環式炭素環を指し、その少なくとも一つの環はヒュッケル(Huckel)の4n+2則で定義される芳香族、特にフェニル、ビフェニル又はナフチルである。この用語は置換と非置換両方の部分を含む。アリール基は、当業界で知られているように、例えば、Greene等の「有機合成化学における保護基(Protected Groups in Organic Synthesis)」、John Wiley & Sons、3rd Ed.、1999年に教示されているように、必要に応じて保護されるか又は保護されないで、これらに限定されないが、ハロゲン(フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード)、ヒドロキシル、アミノ、アジド、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルフェート、ホスホン酸、ホスフェート又はホスホネートからなる群から選択される一つ若しくは複数の部分を含む記載されている任意の部分で置換されていてよい。
【００６０】
「アルカリール」又は「アルキルアリール」という用語は、アリール置換基を有するアルキル基、又は本明細書で定義するアリール基を介して分子と結合しているアルキル基を指す。「アラルキル」又は「アリールアルキル」という用語は、アルキル置換基で置換されているか、又は本明細書で定義するアルキル基を介して分子と結合しているアリール基を指す。
【００６１】
「シクロアルキル」という用語は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含むC3〜8の環を含む。
【００６２】
「アルコキシ」という用語は、結合した酸素基を有する直鎖若しくは分鎖アルキル基を意味し、そのアルキル基は指定された数の炭素、又はこの範囲内の任意の数の炭素を有する。例えば、「-O-アルキル」、C1〜4アルコキシ、メトキシ等である。
【００６３】
本明細書で用いる「ハロ」という用語は、任意の数のハロゲン族を指す。具体的に含まれるものはフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードである。
【００６４】
「アシル」又は「O結合エステル」という用語は、式C(O)R'の基を含む。但し、R'は、直鎖、分鎖若しくは環状アルキル(低級アルキルを含む)、アミノ酸のカルボン酸残基、フェニル、ヘテロアリール、アルカリールを含むアリール、ベンジルを含むアラルキル、メトキシメチルを含むアルコキシアルキル、フェノキシメチルなどのアリールオキシアルキル;又は、置換アルキル(低級アルキルを含む)、クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード、C1〜C4アルキル若しくはC1〜C4アルコキシで任意選択で置換されたフェニルを含むアリール、メタンスルホニルを含むアルキル若しくはアラルキルスルホニルなどのスルホネートエステル、モノ、ジ若しくはトリリン酸エステル、トリチル若しくはモノメトキシ-トリチル、置換ベンジル、アルカリール、ベンジルを含むアラルキル、メトキシメチルを含むアルコキシアルキル、フェノキシメチルなどのアリールオキシアルキルである。エステル中のアリール基はフェニル基を含むことが最適である。非限定的な実施形態では、アシル基には、アセチル、トリフルオロアセチル、メチルアセチル、シクロプロピルアセチル、シクロプロピルカルボキシ、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、ネオ-ヘプタノイル、フェニルアセチル、2-アセトキシ-2-フェニルアセチル、ジフェニルアセチル、α-メトキシ-α-トリフルオロメチル-フェニルアセチル、ブロモアセチル、2-ニトロ-ベンゼンアセチル、4-クロロ-ベンゼンアセチル、2-クロロ-2,2-ジフェニルアセチル、2-クロロ-2-フェニルアセチル、トリメチルアセチル、クロロジフルオロアセチル、ペルフルオロアセチル、フルオロアセチル、ブロモジフルオロアセチル、メトキシアセチル、2-チオフェンアセチル、クロロスルホニルアセチル、3-メトキシフェニルアセチル、フェノキシアセチル、tert-ブチルアセチル、トリクロロアセチル、モノクロロ-アセチル、ジクロロアセチル、7H-ドデカフルオロ-ヘプタノイル、ペルフルオロ-ヘプタノイル、7H-ドデカ-フルオロヘプタノイル、7-クロロドデカフルオロ-ヘプタノイル、7-クロロ-ドデカフルオロ-ヘプタノイル、7H-ドデカフルオロヘプタノイル、7H-ドデカ-フルオロヘプタノイル、ノナ-フルオロ-3,6-ジオキサ-ヘプタノイル、ノナフルオロ-3,6-ジオキサヘプタノイル、ペルフルオロヘプタノイル、メトキシベンゾイル、メチル3-アミノ-5-フェニルチオフェン-2-カルボキシル、3,6-ジクロロ-2-メトキシ-ベンゾイル、4-(1,1,2,2-テトラフルオロ-エトキシ)-ベンゾイル、2-ブロモ-プロピオニル、ω-アミノカプリル、デカノイル、n-ペンタデカノイル、ステアリル、3-シクロペンチル-プロピオニル、1-ベンゼン-カルボキシル、O-アセチルマンデリル、ピバロイルアセチル、1-アダマンタン-カルボキシル、シクロヘキサン-カルボキシル、2,6-ピリジンジカルボキシル、シクロプロパン-カルボキシル、シクロブタン-カルボキシル、ペルフルオロシクロヘキシルカルボキシル、4-メチルベンゾイル、クロロメチルイソオキサゾリルカルボニル、ペルフルオロシクロヘキシルカルボキシル、クロトニル、1-メチル-1H-インダゾール-3-カルボニル、2-プロペニル、イソバレリル、1-ピロリジンカルボニル、4-フェニルベンゾイルが含まれる。
【００６５】
「アシルアミノ」という用語は、「-N(R')-C(=O)-R'」の構造を有する基を含む。但し、各R'は独立に上記定義通りである。
【００６６】
「カルボニル」という用語は、「-C(=O)-X-R'」又は「X-C(=O)-R'」の構造の基を含む。但し、XはO、S又は結合であり、各Rは独立に上記定義通りである。
【００６７】
「ヘテロ原子」という用語は、複素環化合物の構造中に炭素又は水素以外の原子を含み、その非限定的な例は窒素、酸素、イオウ、リン又はホウ素である。
【００６８】
本明細書で用いる「複素環」又は「複素環(の)」という用語は、注記されている場合を除いて、炭素原子と、これらに限定されないがO、S、N及びPを含む1〜4個のヘテロ原子からなるヘテロアリールを含み、その窒素及びイオウヘテロ原子は任意選択で酸化されていてよく、且つ/又はその窒素ヘテロ原子は四級化されていてよく、上記に特定した複素環のいずれかがベンゼン環と縮合している任意の二環の基を含む、飽和されているか若しくは飽和されていない安定な5〜7員の単環式又は安定な8〜11員の二環式複素環を含む。複素環は、安定な構造の生成をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子と結合していてよい。ヘテロ芳香族環は、望ましい場合、部分的又は完全に水素化されていてよい。例えば、ピリジンの代わりにジヒドロピリジンを用いることができる。ヘテロアリール上の官能性酸素及び窒素基は、必要であるか又は望むなら、保護されていてよい。酸素又は窒素のための適切な保護基には、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、t-ブチルジメチルシリル、t-ブチルジフェニルシリル、トリチル、置換トリチル、アルキル、メタンスルホニル、p-トルエンスルホニル又はアセチル及びプロピオニルなどのアシル基が含まれる。
【００６９】
ヘテロアリール及び複素環基の非限定的な例には、フリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル、トリアジニル、チアジニル、オキサゾリル、プリニル、カルバゾリル、キノリニル、ピラゾリル、モルホリニル、ベンズイミダゾリルなどが含まれる。ヘテロ芳香族及び複素環部分のいずれかは、当業界で知られているように、例えば、Greene等、「有機合成化学における保護基(Protected Groups in Organic Synthesis)」、John Wiley and Sons、Third Ed.、1999年に教示されているように、必要に応じて保護されるか又は保護されないで、一つ又は複数のヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、ヘテロシクリル、ハロ、カルボキシ、アシル、アシルオキシ、アミド、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルフェート、ホスホン酸、ホスフェート又はホスホネートでの置換を含む、アリールについて上記したように任意選択で置換されていてよい。
【００７０】
本明細書で用いる「アミノ」という用語は、別段の指定のない限り、構造「-NR2」で表される部分を含み、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及び/又はスルホニル基で任意選択で置換された第一級、第二級及び第三級アミンを含む。したがって、R2は二個の水素原子、二つのアルキル部分又は一個の水素及び一つのアルキル部分を表すことができる。
【００７１】
「アミノ酸」又は「アミノ酸残基」という用語は、天然由来及び合成のα、β、γ又はδアミノ酸を含み、それらには、これらに限定されないが、タンパク質に見られるアミノ酸、即ちグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、リジン、アルギニン及びヒスチジンが含まれる。一実施形態では、アミノ酸は、L型構造であるが、D型構造も用いることができる。或いは、アミノ酸は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリプトファニル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、トレオニニル、システイニル、チロシニル、アスパラギニル、グルタミニル、アスパルトイル、グルタロイル、リジニル、アルギニニル、ヒスチジニル、β-アラニル、β-バリニル、β-ロイシニル、β-イソロイシニル、β-プロリニル、β-フェニルアラニニル、β-トリプトファニル、β-メチオニニル、β-グリシニル、β-セリニル、β-トレオニニル、β-システイニル、β-チロシニル、β-アスパラギニル、β-グルタミニル、β-アスパルトイル、β-グルタロイル、β-リジニル、β-アルギニニル又はβ-ヒスチジニルの誘導体であってよい。アミノ酸という用語を用いる場合、それは、D型構造及びL型構造でのα、β、γ又はδ-グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プラリン(praline)、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、リジン、アルギニン及びヒスチジンのエステルのそれぞれの具体的且つ独立した開示であるものとする。
【００７２】
本明細書で用いる「アミド」という用語はアミノ-置換カルボニルを含み、「アミジノ」という用語は構造「-C(=NH)-NH2」を有する基を意味する。
【００７３】
特定のイオウ及びリンを含有する用語は、以下の構造的意味を有する。即ち、「スルホネート」は構造「-S(=O)(=O)-OR'」の基を含み、「サルフェート」は構造「O-S(=O)(=O)-OR'」の基を含み、「スルホンアミド」は構造「N(R')-S(=O)(=O)-R'」の基を含み、「スルファモイル」は構造「-S(=O)(=O)-N(R')(R')」の基を含み、「ホスホリル」は構造「-P(=O)-OR'」の基を含み、「ホスホロアミデート」は構造「Q-P(NR1R2)(=O)-OR'」の基を含む。但し、各R'は独立に上記定義通りである。
【００７４】
本明細書で用いる「宿主」という用語は、細胞株、及び動物、場合によってはヒトを含む、その中でウイルスが複製することができる単細胞又は多細胞生物を指す。或いは、宿主は、本発明の化合物によってその複製又は機能を変えることができるHIVウイルスゲノムの一部を担持していてよい。宿主という用語は、具体的には、感染した細胞、HIVゲノムのすべて又は一部を形質移入された細胞、及び動物、特に霊長類(チンパンジーを含む)及びヒトを指す。本発明のほとんどの動物への適用において、宿主はヒト患者である。しかし、適応症によっては、獣医学的適用も明らかに本発明の実施形態によって包含される(チンパンジーなど)。
【００７５】
「置換(された)」という用語は、例えばハロ、ヒドロキシル、チオ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ニトロ、シアノ、アジド、アミノ、カルボキシアミド等の一つ又は複数の指名された置換基による複数度の置換を含む。複数の置換基の可能性がある場合、化合物は、開示又は特許請求された置換基の一つ若しくは複数によって、互いに独立に且つ単一若しくは複数で置換されていてよい。
【００７６】
化合物
特定の実施形態では、本発明は、式(A)による純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化４】
2010504978.tif 000006
【００７７】
(式中、例えば、
Xは、水素;置換されていても置換されていなくてもよく、二環式、三環式若しくはスピロ構造を含むことができるアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRであり、
ZはOR、NHR、NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R1は、水素、アシル、S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R4'、R5'、R6'及びR7'のそれぞれは、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、複素環、ハロゲン、CN、CF3、OR、NHR、NRR又はNO2であり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又は複素環である)。
【００７８】
式(A)による特定の実施形態では、Xはアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、Yは、水素、R、O-R、NH-R、又はNRRである。
【００７９】
式(A)による特定の実施形態では、R4'及びR5'は独立に水素又はハロゲンであり、X、Y、Z、R1、R6'、R7'及びRは上記定義通りである。
【００８０】
式(A)による特定の実施形態では、
R4'及びR5'のそれぞれは独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素又はS(O)n-Rであり、
Yは、水素、R又はO-Rであり、
Xは任意選択で置換されたアリールであり、
Zはカルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは独立に水素又はアルキルである。
【００８１】
特定の実施形態では、本発明は、式(C)による純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化５】
2010504978.tif 000007
【００８２】
(式中、R2"、R3"、R4"、R5"及びR6"は、独立に、水素、ハロゲン、アルキル又はC2〜6アルケニルであり、
R4'及びR5'は独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素又はS(O)n-Rであり、
Yは、水素、R又はO-Rであり、
Zはカルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは独立に水素又はアルキルである)。
【００８３】
式(C)の特定の実施形態では、
R3"及びR5"は、独立に、そのそれぞれが独立にCN若しくはハロゲンで任意選択で置換されていてよいアルキル又はC2〜6アルケニルであり、
R2"、R4"及びR6"は水素であり、
R4'及びR5'のそれぞれは独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素又はS(O)n-Rであり、
Yは、水素、R又はO-Rであり、
Zはカルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは独立に水素又はアルキルである。
【００８４】
式(C)による特定の実施形態では、
R3"及びR5"は、独立に、そのそれぞれが独立にCN若しくはハロゲンで任意選択で置換されていてよいアルキル又はC2〜6アルケニルであり、
R2"、R4"及びR6"は水素であり、
R4'及びR5'のそれぞれは独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素であり、
YはO-Rであり、
Zはアミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
各Rは独立に水素又はアルキルである。
【００８５】
一実施形態では、純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化６】
2010504978.tif 000008
【００８６】
(式中、リン原子での絶対配置はS型である)。
【００８７】
化合物Iの化学名は(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルであり、実験式は431.39の分子量を有するC20H16ClFN3O3Pである。
【００８８】
一実施形態では、純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化７】
2010504978.tif 000009
【００８９】
(式中、リン原子での絶対配置はS型である)。
【００９０】
化合物IIIの化学名は(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルであり、実験式は413.79の分子量を有するC20H17ClN3O3Pである。
【００９１】
一実施形態では、(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル;及び
(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルからなる群から選択される純粋な化合物、
又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する。
【００９２】
特定の実施形態では、本発明は、式(B)による純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化８】
2010504978.tif 000010
【００９３】
(式中、例えば、
Xは、水素;置換されていても置換されていなくてもよく、二環式、三環式若しくはスピロ構造を含むことができるアリール又は複素環;C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、
Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRであり、
ZはOR、NHR、NRR、カルボキシアミド、アミド、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R1は、水素、アシル、S(O)n-R、カルボキシル、カルボニル又はアミノ酸残基であり、
R4'、R5'、R6'及びR7'のそれぞれは、独立に、水素、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール、複素環、ハロゲン、CN、CF3、OR、NHR、NRR又はNO2であり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは、独立に、水素、アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、アリール又は複素環である)。
【００９４】
式(B)による特定の実施形態では、Xは、水素;アリール又は複素環、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル又はアルキルであり、Yは、水素、R、O-R、NH-R又はNRRである。
【００９５】
式(B)による特定の実施形態では、R4'及びR5'は独立に水素又はハロゲンであり、X、Y、Z、R1、R6'、R7'及びRは上記定義通りである。
【００９６】
式(B)による特定の実施形態では、
R4'及びR5'はそれぞれ独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素又はS(O)n-Rであり、
Yは、水素、R又はO-Rであり、
Zはカルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは独立に水素又はアルキルである。
【００９７】
特定の実施形態では、本発明は、式(D)による純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化９】
2010504978.tif 000011
【００９８】
(式中、R2"、R3"、R4"、R5"及びR6"は、独立に、水素、ハロゲン、アルキル又はC2〜6アルケニルであり、
R4'及びR5'は独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素又はS(O)n-Rであり、
Yは、水素、R又はO-Rであり、
Zはカルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは独立に水素又はアルキルである)。
【００９９】
式(D)の特定の実施形態では、
R3"及びR5"は、独立に、CN若しくはハロゲンで任意選択で置換されていてよいアルキル又はC2〜6アルケニルであり、
R2"、R4"及びR6"は水素であり、
R4'及びR5'のそれぞれは独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素又はS(O)n-Rであり、
Yは、水素、R又はO-Rであり、
Zはカルボキシアミド、アミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
nは、0、1又は2であり、
各Rは独立に水素又はアルキルである。
【０１００】
式(D)の特定の実施形態では、
R3"及びR5"は、独立に、CN又はハロゲンで任意選択で置換されていてよいアルキル又はC2〜6アルケニルであり、
R2"、R4"及びR6"は水素であり、
R4'及びR5'のそれぞれは独立に水素又はハロゲンであり、
R6'及びR7'は水素であり、
R1は水素であり、
YはO-Rであり、
Zはアミド、カルボキシル又はカルボニルであり、
各Rは独立に水素又はアルキルである。
【０１０１】
一実施形態では、純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化１０】
2010504978.tif 000012
【０１０２】
(式中、リン原子での絶対配置はR型である)。
【０１０３】
一実施形態では、純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する：
【化１１】
2010504978.tif 000013
【０１０４】
(式中、リン原子での絶対配置はR型である)。
【０１０５】
一実施形態では、(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(R)-ホスフィン酸メチルエステル;及び
(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(R)-ホスフィン酸メチルエステル
からなる群から選択される純粋な化合物、又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグを提供する。
【０１０６】
特定の実施形態では、(A)〜(D)又は(I)〜(IV)による化合物は、鏡像異性的に純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物、エステル若しくはプロドラッグである。特定の実施形態では、(A)〜(D)又は(I)〜(IV)による化合物は、鏡像異性的に純粋な化合物又は薬学的に許容されるその塩である。特定の実施形態では、鏡像異性的に純粋な化合物は、少なくとも約80重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約20重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体、少なくとも約90重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約10重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体、少なくとも約95重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約5重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体、少なくとも約96.6重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約3.4重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体、少なくとも約97重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約3重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体、少なくとも約99重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約1重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体、或いは少なくとも約99.9重量%の指定された鏡像異性体とせいぜい約0.1重量%の他方の鏡像異性体又は他の立体異性体を含む。特定の実施形態では、重量は化合物の全量に対するものである。
【０１０７】
レシピエントに投与されると直接又は間接に本明細書で提供する化合物を提供するか、或いはそれ自体所望の活性を示す塩、エステル又はプロドラッグとして与えることができる化合物も提供する。
【０１０８】
薬学的に許容される塩、プロドラッグ、立体異性体及び互変異性体
本明細書で提供する化合物は、レシピエントに投与されると直接又は間接に親化合物を提供することができるか、或いはそれ自体の活性を示す任意の塩又はプロドラッグとして投与することができる。非限定的な例は薬学的に又は生理学的に許容される塩である。「薬学的に又は生理学的に許容される塩若しくはプロドラッグ」という語句は、本明細書を通して、患者に投与されると本発明の活性化合物を提供する、化合物の薬学的に許容される任意の形態(エステル、アミド、エステルの塩、アミドの塩又は関連する基など)を記述するのに用いられる。このような改変は、場合によっては、化合物の生物学的活性に影響を及ぼし、親化合物より以上の活性を増大させる可能性がある。
【０１０９】
「薬学的に許容される塩」という用語は、その化合物が薬学的に許容される対イオンを担持し、その塩が本明細書で特定する化合物の所望の生物学的活性を保持するが、望ましくない毒物学的影響は最少である化合物の状態を指す。そうした塩は、本発明の化合物の非毒性で治療的に有用な形態である。本明細書に含まれる化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない影響又は毒物学的な影響をわずかな程度しか示さないか、又はそれをまったく示さない任意の塩は本発明に包含されるものとする。薬学的に許容される塩には、薬学的に許容される有機又は無機の酸及び塩基から誘導されるものが含まれる。薬学的に許容されない酸及び塩基も、例えば、対象化合物の合成及び/又は精製において本明細書で使用される。したがって、「塩」はすべて本明細書に包含されるものとする。
【０１１０】
薬学的に許容される塩には、薬学的に許容される無機又は有機の塩基及び酸から誘導されるものが含まれ、それらには、トシル酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α-ケトグルタル酸塩、α-グリセロリン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、ピルビン酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、サリチル酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、硝酸塩、重炭酸塩、臭化水素酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、炭酸塩及びリン酸塩が含まれる。具体的な実施形態は、一塩酸塩又は二塩酸塩である。適切な塩には、カリウム及びナトリウムなどのアルカリ金属、カルシウム及びマグネシウムなどのアルカリ土類金属、並びに薬剤技術分野で周知の他の多くの酸から誘導されるものが含まれる。薬学的に許容されるプロドラッグは、宿主において代謝されて、例えば加水分解又は酸化されて、本発明の化合物を生成する化合物を指す。プロドラッグの典型的な例には、これらに限定されないが、エステル又はアシル部分を含む、活性化合物の官能性部分上に生物学的に不安定な保護基を有する化合物が含まれる。プロドラッグには、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、水酸化、脱水酸化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、ホスホリル化、脱ホスホリル化されて活性化合物を生成することができる化合物が含まれる。
【０１１１】
薬学的に許容される塩は、当業界で知られている標準的な手順を用いて、例えばアミンなどの十分に塩基性である化合物を適切な酸と反応させて生理学的に許容されるアニオンを生成させることによって得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属(カリウム、ナトリウム若しくはリチウムなど)又はアルカリ土類金属(カルシウムなど)塩も作製することができる。
【０１１２】
適切な塩の非限定的な例には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、重炭酸、炭酸などの無機酸から誘導されるもの;並びに、例えば、ギ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、マロン酸、アスコルビン酸、クエン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、トシル酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、α-ケトグルタル酸、α-グリセロリン酸及びポリガラクツロン酸などの有機酸で形成される塩が含まれる。適切な塩には、リチウム、カリウム及びナトリウムなどのアルカリ金属、カルシウム及びマグネシウムなどのアルカリ土類金属、並びに薬剤技術分野の技術者によく知られている他の塩基から誘導されるものが含まれる。他の適切な塩には、亜鉛、ビスマス、バリウム若しくはアルミニウムなどの金属カチオンから誘導されるか、又はアンモニア、N,N-ジベンジルエチレン-ジアミン、D-グルコサミン、テトラエチルアンモニウム若しくはエチレンジアミンなどのアミンから形成されるカチオンを有するものが含まれる。さらに、適切な塩には、例えば亜鉛タンニン酸塩などの酸と塩基の組合せから誘導されるものが含まれる。
【０１１３】
薬学的に許容されるプロドラッグは、宿主において代謝されて(即ち、例えば加水分解され又は酸化されて)本発明の化合物を生成する化合物を指す。プロドラッグの典型的な例には、活性化合物の官能性部分上に生物学的に不安定な保護基を有する化合物が含まれる。プロドラッグには、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、水酸化、脱水酸化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、ホスホリル化、脱ホスホリル化されて活性化合物を生成することができる化合物が含まれる。
【０１１４】
一実施形態では、本明細書で提供する化合物は、HIVに対して抗ウイルス活性を有するか代謝されてそうした活性を示す化合物になる。
【０１１５】
治療方法
一実施形態では、抗ウイルス的に有効量の、式A〜Dの化合物若しくは化合物I-IV又は薬学的に許容されるその塩、エステル若しくはプロドラッグを含む、本明細書で示す化合物を投与することを含む、宿主のHIV感染症の治療又は予防する方法を提供する。化合物は薬学的に許容される担体又は希釈剤と混合することができる。
【０１１６】
他の主要な実施形態では、宿主のHIV感染症の治療又は予防における、薬学的に許容される担体又は希釈剤と任意選択で混合された、式A〜Dの化合物若しくは化合物I〜IV又は薬学的に許容されるその塩、エステル若しくはプロドラッグを含む本明細書で開示する化合物の使用を提供する。
【０１１７】
宿主のHIV感染症の治療又は予防のための医薬品の製造における、薬学的に許容される担体又は希釈剤と任意選択で混合した、本明細書で示す化合物又は薬学的に許容されるその塩、エステル若しくはプロドラッグの使用も提供する。
【０１１８】
一実施形態では、薬学的に許容される担体と任意選択で混合した、実質的に一つの鏡像異性体又は薬学的に許容されるその塩、エステル若しくはプロドラッグの形態である3-ホスホインドール化合物を、それを必要とする宿主に投与することを含む宿主のHIV感染症を治療又は予防する方法を提供する。一実施形態では、3-ホスホインドールは式Aからなる。他の実施形態では、その化合物は式Bからなる。一実施形態では、3-ホスホインドールは式Cからなる。一実施形態では、3-ホスホインドールは式Dからなる。一実施形態では、3-ホスホインドールは式Iからなり、リンでの絶対立体配置はS型である。他の実施形態では、3-ホスホインドールはR型絶対立体配置を有する式IIからなる。他の実施形態では、3-ホスホインドールはS型絶対立体配置を有する式IIIからなってよい。他の実施形態では、3-ホスホインドールは式IVで表される。
【０１１９】
他の実施形態では、血液中の抗HIV抗体力価を測定することによって宿主を診断することができる。他の実施形態では、化合物を、宿主のAIDS(後天性免疫不全症候群)の症状を軽減又は予防するために投与する。さらに他の実施形態では、本明細書で開示する化合物を、HIVに感染する恐れのある宿主に投与する。
【０１２０】
他の実施形態では、活性化合物は薬物耐性形のHIVに対する活性を示し、したがって、現在認可されている抗ウイルス療法に対して低い交差耐性を示す。「薬物耐性形のHIVに対する活性」という語句は、化合物(又はそのプロドラッグ若しくは薬学的に許容される塩)が、例えば約50、25、10又は1マイクロモル未満の濃度のEC50で変異株に対して活性であることを意味する。一実施形態では、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NNRTI)は、約5、2.5、1又は0.1マイクロモル未満のHIV変異株に対するEC50(モル濃度で)を示す。非限定的な一実施形態では、HIV変異株は、リジン103→アスパラギン及び/又はチロシン181→システインで逆転写酵素変異を有する。
【０１２１】
本明細書で提供する化合物は、標準的なスクリーニング方法によって、インビトロで逆転写酵素活性を阻害する能力について評価することができる。特定の任意の化合物によって示される様々な活性は、本明細書で説明するアッセイで、又は抗HIV化合物の技術分野の技術者に知られている他の確認アッセイで化合物を評価することによって判断する。化合物は10〜15μM未満のEC50を示すことができる。
【０１２２】
一実施形態では、3-ホスホインドールの効能は、HIV特異的酵素結合免疫吸着剤アッセイ、p24ELISAで測定する。この迅速で高感度のアッセイにおいて、薬効はHIV p24抗原の阻害率%で表す。特定の実験に有用な関連実施形態では、抗HIV化合物の効能は、本明細書でより具体的に示す方法によって、インビトロでのウイルスのプラーク数を50%減少させるのに必要な化合物の濃度(即ち、化合物のEC50)を測定する「プラーク減少アッセイ」で判定する。いくつかの実施形態では、化合物はインビトロで15未満又は10マイクロモル未満〜ナノモル量のEC50を示す。
【０１２３】
併用療法又は交互療法
特定の実施形態では、インドール化合物を、一つ若しくは複数の他の抗HIV剤と併用投与するか、且つ/又はそれと交互に投与する。他の実施形態では、二つ以上の抗HIV剤の投与はHIVの阻害に相乗効果をもたらす。他の実施形態では、併用投与及び/又は交互投与して、二つ以上のそうした薬剤の投与を行うと、HIV複製を阻害するのに相加効果をもたらす。
【０１２４】
特定の実施形態では、インドール化合物を、一つ若しくは複数の抗HBV剤又は一つ若しくは複数の抗HCV剤と併用投与するか、且つ/又はそれと交互に投与する。例えば、特定の実施形態では、インドール化合物を、HBVの治療に有効な薬剤と併用して、HIVとHBVに重感染した宿主に投与することができる。HBVの治療に有効な薬剤は、当業者に知られている任意の薬剤であってよい。そうした薬剤の例を本明細書で記載する。特定の実施形態では、インドール化合物を、HCVの治療に有効な薬剤と併用して、HIVとHCVに重感染した宿主に投与することができる。HCVの治療のために有効な薬剤は、当業者に知られている任意の薬剤であってよい。
【０１２５】
特定の実施形態では、インドール化合物を、シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝される一つ若しくは複数の薬剤と併用投与するか、且つ/又はそれと交互に投与する。その薬剤は、シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝されることが当業者に知られている任意の薬剤であってよい。そうした薬剤の例を本明細書で記載する。特定の実施形態では、シトクロムP450はシトクロムP450 3A4、シトクロムP450 2C8又はシトクロムP450 2C9である。
【０１２６】
併用療法では、有効投薬量の二つ以上の薬剤を一緒に投与するが、他方、交互療法の際は、有効投薬量の各薬剤を逐次投与する。投薬量は、薬物の吸収、不活性化及び排出速度、並びに当業者に知られている他の因子に依存することになる。投薬値は、緩和される状態の重篤度によっても変わることになる。任意の特定の個体について、具体的な投薬レジメン及びスケジュールは、個体の必要性、及び組成物の投与を管理又は監督する責任者の専門的な判断に適合するように時間とともに調整しなければならない。
【０１２７】
薬物耐性は、ウイルス複製周期で用いられる酵素をコード化する遺伝子の突然変異によって、最も典型的に発生する。主薬物によって選択されたものとは異なる変異を誘発する第二、また多分第三の抗ウイルス性化合物と併用して、且つ/又はそれと交互にその化合物を投与することによって、抗HIV薬物の効能を持続させるか、増大させるか又は回復させることができることが実証されている。そうした薬物併用投与は同時に、任意の単一薬物及び任意の付随毒性作用に対する耐性の可能性を低減させる。或いは、そうした併用療法又は交互療法によって薬物の薬物動態、生体内分布又は他のパラメーターを変えることができる。例えば、薬物の組合せの使用によって、単剤治療として投与するときに必要とされるものより低い用量で、その組合せに個々の薬物が含まれるようにすることができる。同様に、ウイルスライフサイクルの異なるステージを標的とする薬物を組み合わせて投与すると、その効果が高められる可能性がある。さらに、薬物の組合せの使用は、抗ウイルス活性を依然として発出しながら、単一薬物による望ましくない副作用を低下又は排除することができる。概して、ウイルスに対して多重且つ同時の圧力をかけるので、併用療法は一般に交互療法より好ましい。
【０１２８】
HCV用薬剤
慢性肝炎の治療のためのインターフェロン(IFN)は、ここ十年近く市販されており、HCVに対して現在用いられている承認済み治療法の基礎をなしている。IFNは、ウイルス感染症に応答する免疫細胞によって産生される糖タンパク質である。これらは、HCVを含む複数のウイルスの複製を阻害し、C型肝炎感染症のための単一治療として用いた場合、IFNは、血清HCV-RNAを検出不能なレベルに抑制できることもある。また、IFNは血清アミノトランスフェラーゼレベルを正常化させることもできる。残念ながら、IFNの効果は一時的なものであり、HCVに慢性的に感染した患者の8〜9%だけにしか持続的応答が起こらない(Gary L.Davis、Gastroenterology、2000年、118:S104〜S114頁)。しかし、ほとんどの患者は、重いインフルエンザ様の症状、体重減少及び活力やスタミナの欠乏を引き起こす、インターフェロン治療を我慢しなければならない困難を伴う。
【０１２９】
多くの特許は、インターフェロンをベースとした治療法を用いる、HCVを含むフラビウイルス科ウイルス(Flaviviridae)治療を開示している。例えば、Blatt等の米国特許第5,980,884号は、コンセンサスインターフェロンを用いた、HCVに苦しむ患者の再治療方法を開示している。Bazer等の米国特許第5,942,223号は、ヒツジ又はウシインターフェロン-τを用いた抗HCV治療を開示している。Alber等の米国特許第5,928,636号は、HCVを含む感染症の治療のためのインターロイキン-12及びインターフェロン-αの併用療法を開示している。Chretien等の米国特許第5,849,696号は、HCVを治療するために単独で、又はインターフェロンと併用投与してサイモシンを使用することを開示している。Valtuena等の米国特許第5,830,455号は、インターフェロン及び遊離基スカベンジャーを使用する併用投与HCV治療を教示している。Imakawaの米国特許第5,738,845号は、HCVを治療するためのヒトインターフェロン-τタンパク質の使用を教示している。HCVのための他のインターフェロンをベースとした治療がTesta等の米国特許第5,676,942号及びBlatt等の米国特許第5,372,808号に記載されている。例えば、すべてHoffmann-LaRoche,Inc.のものである米国特許第5,747,646号;5,792,834号;及び5,834,594号;EnzonのPCT WO99/32139及びWO99/32140;Schering CorporationのWO95/13090、米国特許第5,738,846号及び5,711,944号;並びにGlue等の米国特許第5,908,621号などの多くの特許も、ペグ化された形態のインターフェロン及びその使用を開示している。
【０１３０】
インターフェロンα-2a及びインターフェロンα-2bは、HCVの治療のための単剤治療法として現在承認されている。RocheのROFERON(登録商標)-Aはインターフェロンα-2aの組み換え型である。Rocheのペガシス(PEGASYS)(登録商標)はインターフェロンα-2aのペグ化された形態又はポリエチレングリコール改変形態である。Schering Corporationのイントロン(INTRON)(登録商標)Aはインターフェロンα-2bの組み換え型であり、Schering Corporationのペグイントロン(PEG-INTRON)(登録商標)はペグ化された形態のインターフェロンα-2bである。
【０１３１】
他の形態のインターフェロンα並びにインターフェロンβ、γ、τ及びωは現在HCVの治療のための開発段階にある。その例には、InterMuneによるインターフェロンアルファコン-1のインフェルゲン(INFERGEN);Viragenによる天然インターフェロンのオムニフェロン(OMNIFERON);Human Genome Sciencesによるアルバフェロン(ALBUFERON);Ares-Seronoによるインターフェロンβ-1aのREBIF;BioMedicineによるωインターフェロン;Amarillo Biosciencesによる経口型インターフェロンAlpha;及びInterMuneによるインターフェロンγ、τ及びγ1-bが含まれる。
【０１３２】
リバビリン(1-β-D-リボフラノシル-1-1,2,4-トリアゾリル-3-カルボキサミド)は、ビラゾール(Virazole)(The Merck Index、11th Ed.、1989年、Editor:Budavari,S.、Merck & Co.,Inc.、Rahway、NJ;1304頁)の商品名で市販されている広範囲の抗ウイルス性のヌクレオシド類似体を含む合成の非インターフェロンである。米国特許第3,798,209号及びRE29,835号を参照されたい。リバビリンは、構造的にグアノシンに類似しており、フラビウイルス科ウイルスを含む複数のDNA及びRNAウイルスに対してインビトロでの活性を有している(Gary L.Davis、2000年、Gastroenterology、118:S104〜S114頁)。
【０１３３】
リバビリンは、40%の患者において血清アミノトランスフェラーゼレベルを正常値に低下させるが、HCV-RNAの血清レベルは低下させない(Gary L.Davis、2000年、Gastroenterology、118:S104〜S114頁)。したがって、リバビリン単独では、ウイルスのRNAレベルを低下させるのに有効ではない。さらに、リバビリンは高い毒性を有しており、貧血を誘発することが知られている。HCVに対する単剤治療は承認されていないが、HCVの治療のためにインターフェロンα-2a又はインターフェロンα-2bと併用投与することが承認されている。
【０１３４】
慢性C型肝炎に対する現在の標準的な対処方法は、αインターフェロンとリバビリンを用いる併用療法である。研究によれば、HCVを有する患者はより多くが、ペグ化されていないインターフェロンαを用いた併用療法より、ペグ化されたインターフェロン-α/リバビリン併用療法に応答することが確認されている。しかし、単剤治療と同様、併用投与治療の際に、溶血反応、インフルエンザ様の症状、貧血及び疲労を含む顕著な副作用が現れる(Gary L.Davis、2000年、Gastroenterology、118:S104〜S114頁)。
【０１３５】
ペグイントロン(登録商標)(ペグインターフェロンα-2b)及びREBETOL(登録商標)(リビバリン(Ribivarin)、USP)カプセル剤を用いた併用療法がSchering Corporationから得られる。Schering Corporationのレベトール(REBETOL)(登録商標)とイントロン(登録商標)A(Schering Corporationの組み換え型インターフェロンα-2b)の併用投与も承認されている。Rocheのペガシス(登録商標)(ペグ化されたインターフェロンα-2a)及びコペガス(COPEGUS)(登録商標)(リバビリン)もHCV感染症の治療用に承認されている。
【０１３６】
すべてSchering CorporationからのものであるPCT WO99/59621、WO00/37110、WO01/81359、WO02/32414及びWO03/024461は、HCV感染症の治療のためのペグ化されたインターフェロンαとリバビリンの併用療法の使用を開示している。すべてHoffmann-LaRoche,Inc.からのものであるPCT WO99/15194、WO99/64016及びWO00/24355も、HCV感染症治療のためのペグ化されたインターフェロンαとリバビリンの併用投与を開示している。
【０１３７】
フラビウイルス科ウイルス感染症、特にヘパシウイルスHCVによる感染症を治療するための新規な抗ウイルス剤の開発が進められている。プロテアーゼ、ヘリカーゼ及びポリメラーゼのようなHCV誘導酵素の特異的な阻害剤が研究されている。HCV複製におけるステップ(複数)で阻害する薬物も検討されており、それらには、RNAからのHCV抗原の産生を阻止する薬物(IRES阻害剤)、HCVタンパク質の通常のプロセシングを防止する薬物(グリコシル化阻害剤)、その受容体を阻止することなどによるHCVの細胞内への侵入を阻止する薬物、及びウイルス感染症によって引き起こされる細胞傷害を阻止する非特異的細胞保護剤が含まれる。さらに、C型肝炎ウイルスによる感染症を治療するための分子的アプローチが検討されている。例えば、特異的ウイルスRNA分子を破壊する酵素であるリボザイム、及びウイルスRNAと結合してそれを阻害するDNAの小さい相補的セグメントであるアンチセンスオリゴヌクレオチドの研究がなされている。HCV治療の総説は、Bymock等、Antiviral Chemistry & Chemotherapy、2000年、11:2及びDe Francesco等、Antiviral Res.、2003年、58:1〜16頁に見ることができる。
【０１３８】
フラビウイルス科ウイルス感染症及びC型肝炎感染症を治療するために開発されている他の部類の薬物には特に以下のものが含まれる。
【０１３９】
1)プロテアーゼ阻害剤:
a.基質をベースとしたNS3プロテアーゼ阻害剤は、Attwood等によるWO98/22496及びドイツ特許第19914474号;Attwood等によるAntiviral Chemistry and Chemotherapy、1999年、10:259〜273頁;並びにTung等によるWO98/17679(これは、αケトアミド及びヒドラジノ尿素を含む)に開示されている;
b.ボロン酸又はホスホネートのような求電子試薬が末端となっている基質阻害剤はLlinas-Brunet等によるWO99/07734によって示されている;
c.2,4,6-トリヒドロキシ3-ニトロ-ベンズアミド誘導体、RD3-4082及びRD3-4078などの基質をベースとしていないNS3プロテアーゼ阻害剤(前者はアミド上で14-炭素鎖で置換されており、後者はパラ-フェノキシフェニル基を有する)は、Sudo等によるBiochemical and Biophysical Res.Comm.、1997年、238:643〜7頁及びAntiviral Chemistry and Chemotherapy、1998年、9:186頁によって示されている;
d.Sch 68631、フェナントレンキノンはChu等によるTetrahedron Letters、1996年、37:7229〜32頁に開示されており、真菌ペニシリウムグリセオフルバム(Penicillium griseofulvum)から単離されたSch 351633は、Chu等によるBioorganic and Medicinal Chem.Lett.、9:1949〜52頁に開示されている;
e.Qasim等、Biochemistry、1997年、36:1598〜1607頁に開示されている、ストレプトマイセスグリセウス(S.griseus)プロテアーゼA及びB、α-キモトリプシン、キマーゼ並びにサブチリシンのようないくつかのセリンプロテアーゼに対してナノモルレベルの効能の阻害を示すヒルから単離される巨大分子Eglinc;
f.Spruce等の米国特許第6,004,933号に開示されているようなHCVエンドペプチダーゼ2を阻害するためのシステインプロテアーゼ阻害剤;
g.Zhang等の米国特許第5,990,276号に示されているプロテアーゼ及び/又は共同因子によって利用される基質のサブシーケンスであるC型肝炎ウイルスNS3プロテアーゼ又はNS4A共同因子の合成阻害剤;
h.Reyes等の米国特許第5,538,865号に開示されているようなHCVを治療するための制限酵素;
i.Corvas International,Inc.のWO02/008251並びにSchering CorporationのWO02/08187及びWO02/008256に示されているようなHCVのNS3セリンプロテアーゼ阻害剤などのペプチド;
j.米国特許第6,534,523号;同第6,410,531号;並びにBoehringer Ingelheimの同第6,420,380号及びBristol Myers SquibbのWO02/060926に開示されているようなHCVトリペプチド阻害剤;
k.Schering CorporationによるWO02/48172によって教示されているHCVのセリンプロテアーゼ阻害剤のようなジアリールペプチド;
l.Schering CorporationのWO02/08198及びBristol Myers SquibbのWO02/48157に開示されているHCVのNS3セリンプロテアーゼ阻害剤のようなイミダゾリジノン;並びに
m.Vertex PharmaceuticalsのWO98/17679及びBristol Myers SquibbのWO02/48116によって教示されているHCVプロテアーゼ阻害剤。
【０１４０】
2)Sudo等によるAntiviral Res.、1996年、32:9〜18頁に示されているようなNS3/4A融合タンパク質及びNS5A/5B基質を用いた逆相HPLCアッセイにおいて関連する阻害を示すチアゾリジン誘導体、特に長アルキル鎖で置換された縮合シンナモイル部分を有する化合物RD4 6205、RD4 6193及びRD-1-6250;
3)Kakiuchi等、J.EBS Letters、421:217〜220頁及びTakeshita等、Analytical Biochemistry、1997年、247:242〜46頁に開示されているようなチアゾリジン及びベンズアニリド;
4)Diana等による米国特許第5,633,358号及びWO97/36554に開示されているようなヘリカーゼ阻害剤;
5)R.Ferrari等、J.Virology、1999年、73:1649〜54頁によって示されているようなヌクレオチドポリメラーゼ阻害剤及びグリオトキシン;
6)V.Lohmann等、Virology、1998年、249:108〜118頁によって示されているセルレニン、天然産物;
7)M.Alt等、Hepatology、1995年、22:707〜717頁によって示されているフラビウイルス科ウイルスSの5'非コード化(NCR)における配列伸展に対して相補的であるアンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド(S-ODN);
8)M.Alt等、Archives of Virology、1997年、142:589〜599頁;Galderisi等、J.of Cellular Physiology、1999年、181:251〜257頁;によって示されているようなHCV RNAのコアのコード領域に位置する、NCR及びヌクレオチド371〜388の3'末端を含むヌクレオチド326〜348;
9)Ikeda等、日本国特許第08268890号及びY.Kai等、日本国特許第10101591号に開示されているようなIRES独立性翻訳の阻害剤;
10)D.D.Maccjak等、Hepatology、1999年、30:要約番号995;Barber等による米国特許第6,043,077号;並びにDraper等による米国特許第5,869,253号及び5,610,054;によって示されているようなヌクレアーゼ耐性リボザイムなどのリボザイム、
11)Idenix PharmaceuticalsのWO01/92282、WO01/90121米国特許第6,812,219号及び同第6,914,054号によって示されているようなフラビウイルス、ペスチウイルス、及びヘパシウイルスの治療における分鎖ヌクレオシドの使用を含むヌクレオシド類似体。そこでは、単独か又は他の抗ウイルス剤、任意選択の薬学的に許容される担体と共に投与される、有効量の生物学的に活性な1'、2'、3'又は4'-分鎖β-D若しくはβ-Lヌクレオシド又は薬学的に許容されるその塩若しくは誘導体を投与することを含む、ヒト及び他の宿主動物におけるC型肝炎、ペスチウイルス及び/又はフラビウイルス感染症の治療のための方法が開示されている。ヌクレオシド類似体は、BioChem Pharma,Inc.(現在はShire Biochem,Inc.)のWO01/32153及びWO01/60315;Merck & Co.,Inc.による出願のWO02/057425及びWO02/057287;RocheによるWO02/18404;Pharmasset,Ltd.からのWO01/79246、WO02/32920及びWO02/48165;並びにEmory UniversityのWO99/43691にも記載されている。口頭でのセッションV、Hepatitis C Virus、Flaviviridae、16th International Conference on Antiviral Research、2003年4月27日、Savannah、GAにおいて、HCVの阻害のための2'-修飾ヌクレオシドがEldrup等によって説明されている;HCV RNA複製の有力な阻害剤としてのヌクレオシド類似体が、Bhar等(p.A75)によって教示されている。彼らは、2'-修飾ヌクレオシドが、細胞をベースにしたレプリコンアッセイにおいて強い阻害活性を示すことを報告している;HCV RNA複製に対する2'-修飾ヌクレオシドの影響がOlsen等によって報告されている(p.A76)。
【０１４１】
12)フラビウイルス科ウイルス感染症及びC型肝炎感染症を治療するために開発されている種々の化合物には、特に:Gold等の米国特許第6,034,134号に記載されているような1-アミノ-アルキルシクロヘキサン;Chojkier等の米国特許第5,922,757号のアルキル脂質、ビタミンE及び他の抗酸化物質;Ozeki等の米国特許第5,846,964号に示されているようなスクアレン、アマンタジン及び胆汁酸;Diana等の米国特許第5,830,905号に見られるようなN-(ホスホノアセチル)-L-アスパラギン酸及びピペリジン;Diana等の米国特許第5,633,388号に開示されているようなベンゼンジカルボキサミド;Wang等の米国特許第5,496,546号に記載されているようなポリアデニル酸誘導体;Yarchaon等の米国特許第5,026,687号に見られるような2',3'-ジデオキシイノシン;Colacino等の米国特許第5,891,874号に示されているようなベンズイミダゾール;並びにTsai等の米国特許第5,837,257号及びOmer等の米国特許第5,725,859号に示されているような植物抽出物が含まれる。
【０１４２】
13)Schering Ploughによるインターロイキン-10;InterneuronによるIP-501;Vertexによるメリメポジブ(Merimepodib)(VX-497);Endo Labs Solvayによるアマンタジン(登録商標)(Symmetrel);RPIによるヘプタザイム(HEPTAZYME)(登録商標);Idun PharmaceuticalsによるIDN-6556;XTLによるXTL-002;ChironによるHCV/MF59;NABIによるシバシル(CIVACIR)(登録商標)(C型肝炎免疫グロブリン);ICN/Ribapharmによるレボビリン(LEVOVIRIN)(登録商標);ICN/Ribapharm(Valeant)によるビラミジン(VIRAMIDINE)(登録商標);Sci Cloneによるザダキシン(ZADAXIN)(登録商標)(サイモシンα-1);Sci Cloneによるサイモシン+ペグ化されたインターフェロン;Maximによるセプレン(CEPLENE)(登録商標)(ヒスタミン二塩酸塩);Vertex/Eli LillyによるVX950/LY570310;Isis Pharmaceutical/ElanによるISIS14803;AKROS PharmaによるJTK003;Boehringer IngelheimによるBILN-2061;Rocheによるセルセプト(ミコフェノール酸モフェチル);TularikによるT67(β-チューブリン阻害剤);InnogeneticsによるE2を対象とした治療ワクチン;Fujisawa Healthcare,Inc.によるFK788;IdB1016(Siliphos、経口シリビン-ホスファチジルコリンフィトサム);ViroPharma/WyethによるRNA複製阻害剤VP50406;Intercell及びEpimmune/Genencorによる治療ワクチン;AnadysによるIRES阻害剤;AnadysによるANA245及びANA246;Avantによる免疫治療「セラポア(Therapore)」;Bristol Myers Squibb/Axys及びCorvas/Scheringによるプロテアーゼ阻害剤;Vertexによるヘリカーゼ阻害剤;Trimerisによる融合阻害剤;CellExSysによるT細胞治療;Biocrystによるポリメラーゼ阻害剤;PTC Therapeuticsによる標的化RNAケミストリー;Immtech,Internationalによるジカチオン(Dication);Agouron and Chiron/Medivirによるプロテアーゼ阻害剤;AVI BioPharma and Hybridonによるアンチセンス治療法;Aethlon Medicalによるヘモピュリファイアー(hemopurifier);Merixによる治療ワクチン;Tripepによる「クロンバック(Chron-VacC)」、治療ワクチン;United TherapeuticsによるUT231B;Genelabs Technologiesによるプロテアーゼ、ヘリカーゼ及びポリメラーゼ阻害剤;ImmusolによるIRES阻害剤;Rigel PharmaceuticalsによるR803;InterMuneによるインフェルゲン(登録商標)(インターフェロンアルファコン-1);Viragenによるオムニフェロン(登録商標)(天然インターフェロン);Human Genome SciencesによるALBUFERON(登録商標);Ares-Seronoによるレビフ(REBIF)(登録商標)(インターフェロンβ-1a);BioMedicineによるωインターフェロン;Amarillo Biosciencesによる経口インターフェロンΑ;InterMuneによるインターフェロンγ、τ及びγ-1b;Valeantによるコンセンサスインターフェロン;Onyx Pharmaceuticalsによるネクサバール;Progen IndustriesによるPI-88;BioAlliance Pharmaによるドキソルビシントランスドラッグ(transdrug);Jenken BiosciencesによるJBK-122;Idenixによるヴァロピシタビン(Valopicitabine);VGX PharmaceuticalsによるVGX-410C;Migenixによるセルゴシビル;Bioenvisionによるサーブス(Suvus);Viragenによるマルチフェロン(Multiferon);Intarciaによるωインターフェロン;InnogeneticsによるINNO0101(E1);PfizerによるPF-03491390;Flamel Technologiesによるメドゥーサインターフェロン;IntercellによるIC41;ScheringによるSCH503034;GlaxoSmithKlineによるG126270;PharmexaによるGV1001;RocheによるR1626;Maxygen/Roche;Pharmasset/RocheによるR7128;Nautilus Biotechによるベレロフォン(Belerofon);Romarkによるアリニア(Alinia);Peregrineによるバビツキシマブ;Amarillo Biosciencesによる経口インターフェロンα;NovelosによるNOV-205;GlobeImmuneによるCGI5005;ViroPharma/WyethによるHCV-796;Chiron/NorvartisによるHCV/MF59;Transition TherapeuticsによるEMZ702;BiopharmaによるAVI-4065;ANADYSによるANA975;Antipodean Pharmaceuticals,IncによるMitoQ;Achillion PharmaceuticalsによるACH-0137171;RocheによるR1626;XTLによるXTL-2125;XTLによるXTL-6865;Biolex Therapeutics/OctoPlusによるBLX-883;DEBIOによるDEBIO-025;及びUnited TherapeuticsによるUT-231B;を含む、C型肝炎ウイルスを治療するために現在前臨床又は臨床開発の段階にある化合物、並びに、
14)Idenix PharmaceuticalsのWO00/09531及びWO01/96353に開示されているようなHBVの治療のための2'-デオキシ-β-L-ヌクレオシド及びその3'-プロドラッグを含む他の形態の肝炎を治療するために先に記されているヌクレオシドプロドラッグ;及びBeauchampの米国特許第4,957,924号に示されているようなアシクロビルの治療用エステルである。
【０１４３】
本明細書で開示する化合物と併用投与するか且つ/又はそれと交互投与するのに用いることができる抗ウイルス剤の他の例には、これらに限定されないが、VX-950及びインターフェロンなどの薬剤が含まれる。使用できるインターフェロンには、Schering-Plough社のαインターフェロン-2b製品、イントロン(登録商標)A及びペグイントロン(商標);並びにHoffman La Roche社のコペガサス(Co-Pegasus)及びペガシス(ペグ化されたインターフェロンα-2a)が含まれる。
【０１４４】
B型肝炎用薬剤
B型肝炎用薬剤は、それを必要とする宿主のB型肝炎感染症を治療するのに有効である当業者に知られている任意の薬剤であってよい。特定の実施形態では、B型肝炎用薬剤は、インターフェロン-α(イントロンA、Schering-Plough)、ペグ化されたインターフェロン(ペガシス、Roche)、ラミブジン(エピビル-HBV、ゼフィックス又はヘプトジン(Heptodin)、Glaxo-Smithkline)、アデホビルジピボキシル(adefovir dipivoxil)(Hepsera、Gilead)、エンテカビル(entecavir)(バラクルード、Bristol-Myers-Squibb)、テルビブジン(telbivudine)(Tyzeka又はSebivo、Idenix)又はHBV免疫グロブリン(HyperHEP S/D、Talecris;Nabi-HBV、Nabi;Hepa Gam B、Cangene)である。
【０１４５】
特定の実施形態では、B型肝炎用薬剤は、FTC(エムトリシタビン、Gilead)、L-FMAU(クレブジン(Clevudine)、Pharmasset;レボビル(Levovir)、Bukwang)、テノホビル(tenofovir)(ビリアード、Gilead)、モノバル(monoval)LdC(バルトルシタビン(Valtorcitabine)、Idenix)、DAPD(アムドキソビル、RFS Pharm LLC)、Ana380(LB80380、Anadys)、レモホビル(remofovir)(Pradefovir、Schering-Plough)、ラシビル(racivir)(RCV、Pharmasset)、BAM-205(NOV-205、Novelos)、XTL-001(HepeX-B、XTL Biopharm、Cubist)、ニトキサニド(nitoxanide)(アリニア、Romark Labs)、UT231-B(United Therapeutics)、Bay41-4109(Bayer)、EHT899(Enzo Biochem)、サイモシンα-1(ザダキシン(Zadaxin)、SciClone)、Hi-8HBV(Oxxon)、eiRNA(HepX、Nucleonics)、HepaVaxx B(Virexx)、HBVコア抗原ワクチン(Emergent Europe)又はSpecifEx-HepB(Chromos)である。
【０１４６】
他の抗ウイルス剤
本明細書の背景技術において説明したウイルス治療はどれも、本明細書で説明する化合物と併用投与するか又はそれと交互投与して使用することができる。非限定的な例には、a)プロテアーゼ阻害剤;b)チアゾリジン誘導体;c)ヘリカーゼ阻害剤;d)ベンズアニリド;e)フェナントレンキノン;f)ポリメラーゼ阻害剤及びグリオトキシン;g)アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド(S-ODN);h)IRES依存性翻訳の阻害剤;i)リボザイム;j)ヌクレオシド類似体;k)Idenix PharmaceuticalsによるWO01/90121、WO01/92282、WO04/00300、WO04/002999及びWO04/002422に記載されている二置換ヌクレオシド類似体;l)2'-フルオロヌクレオシド類似体;m)1-NH2-アルキルシクロヘキサン;n)アルキル脂質;o)ビタミンE及び他の抗酸化物質;p)スクアレン、アマンタジン及び胆汁酸;q)N-(ホスホノアセチル)-L-アスパラギン酸;r)ベンゼンジカルボキサミド;s)ポリアデニル酸誘導体;t)ベンズイミダゾール;u)2',3'-ジデオキシイノシン;v)植物抽出物;w)ピペリジン;並びにx)リバビリン及びインターフェロンのファミリーを含むペスチウイルス、フラビウイルス及び/又はヘパシウイルスの治療のための、現在、前臨床開発又は臨床開発段階にある、他の化合物が含まれる。
【０１４７】
HIVの治療のための第二の抗ウイルス剤は、例えば、プロテアーゼ阻害剤、HIV-インテグラーゼ阻害剤、ケモカイン阻害剤又は逆転写酵素阻害剤(「RTI」)であってよい。後者の逆転写酵素阻害剤(「RTI」)は、合成ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(「NRTI」)であっても非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(「NNRTI」)であってもよい。他の実施形態では、第二又は第三の化合物はピロホスフェート類似体又は融合結合(fusion-binding)阻害剤であってよい。インビトロ及びインビボで特定の抗ウイルス性化合物について収集した耐性データをまとめたリストが、Schinazi等、薬剤耐性に関連するレトロウイルス遺伝子における突然変異(Mutations in retroviral genes associated with drug resistance)、International Antiviral News、1997年、5(8)に記載されている。
【０１４８】
特定の実施形態では、インドール化合物は、FTC(2',3'-ジデオキシ-3'-チア-5-フルオロシチジン);141W94(アンプレナビル、Glaxo Wellcome,Inc.);ビラミューン(Viramune)(ネビラピン);レスクリプター(Rescriptor)(デラビルジン);DMP-266(エファビレンツ);DDI(2',3'-ジデオキシイノシン);3TC(3'-チア-2',3'-ジデオキシシチジン);DDC(2',3'-ジデオキシシチジン)、アバカビル(1592U89)(これは(1S,4R)-4-[(2-アミノ-6-シクロプロピルアミノ)-9H-プリン-9-イル]-2-シクロペンテン-1-メタノールスクシネートである)、テノホビル(Tenofovir)DF(ビリアード(ビリアード))、D4T又はAZTと併用して、且つ/又はそれと交互に投与される。
【０１４９】
本明細書で開示する化合物と併用して、且つ/又はそれと交互に使用できる抗ウイルス剤の他の例には、これらに限定されないが、ホスカルネット;カルボビル;アシクロビル;インターフェロン;エンフビルチドなどの融合阻害剤;並びにβ-D-ジオキソラニルグアニン(DXG)、β-D-ジオキソラニル-2,6-ジアミノプリン(DAPD)及びβ-D-ジオキソラニル-6-クロロプリン(ACP)などのβ-D-ジオキソランヌクレオシドが含まれる。使用できるインターフェロンには、Schering-Plough社のαインターフェロン-2b製品、イントロン(登録商標)A及びペグイントロン(商標);並びにHoffman La Roche社のコペガサス及びペガシス(ペグ化されたインターフェロンα-2a)が含まれる。3-ホスホインドールと併用して投与できるものには、エプジコム(ABC+3TC)、トリジビル(Trizivir)(ABC+3TC+AZT)、ツルバダ(Truvada)(FTC+ビリアード)及びコンビビル(Combivir)(AZT+3TC)が含まれる。
【０１５０】
本明細書で開示する化合物と併用して、且つ/又はそれと交互に使用できるプロテアーゼ阻害剤の例には、これらに限定されないが、インジナビル({1(1S,2R),5(S)}-2,3,5-トリデオキシ-N-(2,3-ジヒドロ-2-ヒドロキシ-1H-インデン-1-イル)-5-[2-[[(1,1-ジメチルエチル)アミノ]カルボニル]-4-(3-ピリジニルメチル)-1-ピペラジニル]-2-(フェニルメチル)-D-エリトロ-ペントアミドサルフェート;Merck & Co.,Inc.);ネルフィナビル(Agouron);リトナビル(Abbott Labs)、サキナビル(Roche);アンプレナビル;アタザナビル;ホスアンプレナビル;カレトラ;及びDMP-450{[4R-4(r-a,5-a,6-b,7-6)-ヘキサヒドロ-5,6-ビス(ヒドロキシ)-1,3-ビス(3-アミノ)-フェニル]メチル-4,7-ビス(フェニルメチル)-2H-1,3-ジアゼピン-2-オン}-ビスメシラート(Triangle Pharmaceuticals,Inc.)が含まれる。
【０１５１】
その抗ウイルス特性を増大させるためにホスホインドールと併用投与するか又はそれと交互投与することができる他の化合物には、(1S,4R)-4-[2-アミノ-6-シクロプロピルアミノ-9H-プリン-9-イル]-2-シクロペンテン-1-メタノールスクシネート(GlaxoSmithKlineからの1592U89、カルボビル類似体);BILA1906(N-{1S-[[[3-[2S-{(1,1-ジメチルエチル)アミノ]カルボニル}-4R-]3-ピリンジニルメチル)チオ]-1-ピペリジニル]-2R-ヒドロキシ-1S-フェニルメチル)プロピル]-アミノ]カルボニル]-2-メチルプロピル}-2-キノリンカルボキサミド)(Bio Mega/Boehringer Ingelheim);BILA2185(N-(1,1-ジメチルエチル)-1-[2S-[[[2-2,6-ジメチルフェノキシ]-1-オキソエチル]アミノ]-2R-ヒドロキシ-4-フェニルブチル]4R-ピリジニルチオ-2-ピペリジン-カルボキサミド)(Bio Mega/Boehringer Ingelheim);BM+51.0836(トリアゾロイソ-インドリノン誘導体)及びBMS186,318(アミノジオール誘導体HIV-1プロテアーゼ阻害剤)(Bristol-Myers Squibb);d4API(9-[2,5-ジヒドロ-5-(ホスホノメトキシ)-2-フラニル]-アデニン)(Gilead);HBY097(S-4-イソプロポキシカルボニル-6-メトキシ-3-[メチルチオ-メチル]-3,4-ジヒドロキノキサリン-2(1H)-チオン);HEPT(1-[(2-ヒドロキシ-エトキシ)メチル]6-[フェニルチオ]-チミン);KNI-272((2S,3S)-3-アミノ-2-ヒドロキシ-4-フェニル酪酸含有トリペプチド);L-697,593(5-エチル-6-メチル-3-(2-フタルイミド-エチル)ピリジン-2(1H)-オン);L-732,524(ヒドロキシ-アミノペンタンアミドHIV-1、プロテアーゼ阻害剤)(Merck & Co.);L-697,661(3-{[(-4,7-ジクロロ1,3-ベンゾオキサゾール-2-イル)メチル]アミノ}-5-エチル-6-メチル-ピリジン-2(1H)-オン);L-FDDC((-)-β-L-5-フルオロ-2',3'-ジデオキシシチジン);L-FDOC((-)-β-L-5-フルオロ-ジオキソランシトシン);PFA(ホスホノホルメート;「ホスカルネット」;Astra);PMEA(9-(2-ホスホニルメトキシエチル)アデニン)(Gilead);PMPA((R)-9-(2-ホスホニルメトキシ-プロピル)-アデニン)(Gilead);Ro31-8959(ヒドロキシエチルアミン誘導体HIV-1プロテアーゼ阻害剤)(Roche);RPI-3121(ペプチジルプロテアーゼ阻害剤、1-[(3S)-3-(n-α-ベンジルオキシ-カルボニル)-1-アスパラギニル)-アミノ-2-ヒドロキシ-4-フェニルブチリル]-n-tert-ブチル-1-プロリンアミド);2720(6-クロロ-3,3-ジメチル4-(イソプロペニルオキシカルボニル)-3,4-ジヒドロ-キノキサリン-2(1H)チオン);SC-52151(ヒドロキシエチル尿素イソスタープロテアーゼ阻害剤)(G.D.Searle);SC-55389A(ヒドロキシエチル-尿素イソスタープロテアーゼ阻害剤(G.D.Searle);TIBO R82150((+)-(5S)-4,5,6,7-テトラヒドロ-5-メチル-6-(3-メチル-2-ブテニル)-イミダゾ-[4,5,1-jk]-[1,4]-ベンゾジアゼピン-2(1H)-チオン)(Janssen Pharmaceuticals);TIBO82913((+)-(5S)-4,5,6,7-テトラヒドロ-9-クロロ-5-メチル-6-(3-メチル-2-ブテニル)イミダゾ[4,5,1-jk]-[1,4]-ベンゾ-ジアゼピン-2(1H)-チオン(Janssen Pharmaceuticals);TSAO-m3T([2',5'-ビス-O-(tert-ブチルジメチルシリル)-3'-スピロ-5'-(4'-アミノ-1',2'-オキサチオール-2',2'-ジオキシド)]-β-D-ペントフラノシル-N3-メチル-チミン);U90152(1-[3-[(1-メチルエチル-アミノ]2-ピリジニル]-4-[[5-[(メチルスルホニル)-アミノ]-1H-インドール-2-イル]-カルボニル]-ピペラジン);UC(チオ-カルボキシアニリド誘導体)(Uniroyal);UC-781(N-[4-クロロ-3-(3-メチル-2-ブテニルオキシ)フェニル]-2-メチル-3-フランカルボチオアミド);UC-82(N-[4-クロロ-3-(3-メチル-2-ブテニルオキシ)フェニル]-2-メチル-3-チオフェンカルボチオアミド);VB11,328(ヒドロキシエチル-スルホンアミドプロテアーゼ阻害剤)(Vertex/Glaxo Wellcome);XM323(環状尿素プロテアーゼ阻害剤)(Dupont Merck);及びペンシクロビルが含まれる。さらに他の実施形態では、本発明のインドール化合物は、プロテアーゼ阻害剤LG1350と併用して投与される。
【０１５２】
以下の薬物は、本発明の化合物と併用して、且つ/又はそれと交互に使用することができる。
【表１】
2010504978.tif 000014
2010504978.tif 000015
2010504978.tif 000016
2010504978.tif 000017
【０１５３】
3-ホスホインドールと併用して、且つ/又はそれと交互に使用することができる他の薬物には以下のものが含まれる。
【表２】
2010504978.tif 000018
【０１５４】
以下の薬物は、本発明の化合物と併用して、且つ/又はそれと交互に使用することができる。
【表３】
2010504978.tif 000019
2010504978.tif 000020
【０１５５】
HIV感染症とAIDSの合併症の治療のためのFDAによる治験薬(Investigational New Drug)(IND)として進めることが許可されている製品を用いることができる。以下の薬物は、本発明の化合物と併用して、且つ/又はそれと交互に使用することができる。
【０１５６】
・  標準的な形の治療に耐えられないAIDS患者のニューモシスティスカリニ肺炎の治療のためのグルコン酸トリメトレキサート。
【０１５７】
・  AIDS患者のサイトメガロウイルス性網膜炎を治療するためのガンシクロビル。
【０１５８】
・  AIDS患者のニューモシスティスカリニ肺炎を予防するためのエアロゾル化されたペンタミジン。
【０１５９】
・  ジドブジン関連貧血を治療するためのエリトロポイエチン。
【０１６０】
・  トリメトプリム-スルファメトキサゾールに耐えられないか又はそれに応答しないニューモシスティスカリニ肺炎を有するAIDS患者を治療するためのアトバクオン。
【０１６１】
・  AIDS患者のマイコバクテリウムアビウムコンプレックス菌血症に対する予防のためのリファブチン。
【０１６２】
・  治療したのにもかかわらず進行している再発性サイトメガロウイルス(CMV)網膜炎を有するHIV感染患者のためのビスタイド(Vistide)静脈内シドフォビル(Hoffmann-La Roche)。
【０１６３】
・  AIDS関連の消耗(Serono Laboratories)を治療するためのセロスティム(哺乳動物由来の組み換えヒト成長ホルモン)。
【０１６４】
特定の実施形態では、本明細書で開示する化合物は、一つ、二つ又はそれ以上の他の抗HIV剤と併用投与するか又はそれと交互投与することができる。一下位実施形態では、追加の薬剤は、
アンプレナビル、チプラナビル、インジナビル、サキナビル(サキナビルメシラートを含む)、ロピナビル、リトナビル、ホスアンプレナビル、ダルナビル、アタザナビル(硫酸塩を含む)及びネルフィナビル(メシラート塩を含む)から任意選択で選択されるプロテアーゼ阻害剤;
ラミブジン、エムトリシタビン、アバカビル、ザルシタビン、ジドブジン、テノホビル(テノホビルジソプロキシルフマレートを含む)、ジダノシン及びスタブジンから任意選択で選択されるヌクレオシド又はヌクレオチド逆転写酵素阻害剤;
デラビルジン、エファビレンツ及びネビラピンから任意選択で選択される非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤;
アトリプラ、コンビビル、トリジビル及びツルバダから任意選択で選択される固定用量合剤;
マラビロック及びエンフビルチドから任意選択で選択される侵入阻害剤(融合阻害剤又はCCR5共受容体アンタゴニストなど);並びに
ラルテグラビル(MK-0518)又はエルビテグラビル(GS-9137)などのインテグラーゼ阻害剤から選択される。
【０１６５】
追加の抗HIV剤を用いる場合、それは、塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグの形態、多形体、鏡像異性体など他の形態であってもよい。追加の抗HIV剤は:
アムドキソビル、アプリシタビン(apricitabine)及びエルブシタビンから任意選択で選択されるヌクレオシド逆転写酵素阻害剤;
ブレカニビル(brecanivir)又はGS-8374であってよいプロテアーゼ阻害剤;
アプラビロック、PRO2000及びビクリビロックから任意選択で選択されるCCR5受容体アンタゴニスト;
エトラビリン(TMC-125)、リルピビリン(TMC-278)又はカラノライドAであってよい非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤;
エルビテグラビル、GSK-364735又はラルテグラビルであってよいインテグラーゼ阻害剤;
ベビリマット(Bevirimat)(PA457)であってよい成熟阻害剤;
ヒドロキシ尿素などの細胞阻害剤;
ビクリビロック又はTNX-355などの侵入阻害剤;並びに
イムニチン(Immunitin)(α-エピブロミド(epibromide))、プロロイキン(IL-2)、レミューン(HIV-1イムノゲン)、BAY50-4798又はIR103などの免疫をベースとした阻害剤から選択することもできる。
【０１６６】
シトクロムP450によって代謝される薬剤
特定の実施形態では、本明細書で提供する化合物を、シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝される薬学的に許容される薬剤と併用投与するか又はそれと交互投与することができる。有用なシトクロムP450モノオキシゲナーゼの例には、シトクロムP450 2C8、シトクロムP450 2C9及びシトクロムP450 3A4が含まれる。特定の実施形態では、本明細書で提供する純粋な化合物は、シトクロムP450モノオキシゲナーゼを阻害し、それによって、併用投与薬剤の薬物動態を改善することができる。特定の実施形態では、阻害されるP450アイソザイムはCYP3A4である。特定の実施形態では、リトナビルブースターを必要とすることなく、ホスホインドール化合物を第二の抗HIV化合物と併用投与する。特定の実施形態では、ホスホインドール化合物を、アタザナビル、ホスアンプレナビル、ダルナビル、インジナビル、ロピナビル、ネルフィナビル、サキナビル、チプラナビル(Tipranavir)又はエンフビルチドの一つ又は複数と併用投与する。
【０１６７】
特定の実施形態では、ホスホインドール化合物を、一種若しくは複数のヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及び/又は一種若しくは複数のインテグラーゼ阻害剤との併用療法で投与する。
【０１６８】
シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝される薬学的に許容される薬剤は、当業者に知られているか又は当業者に確認されている任意の薬剤であってよい。シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝される化合物の非限定的な例には、これらに限定されないが、パクリタキセル、トルセミド、アモジアキン、セリバスタチン及びレパグリニド(シトクロムP450 2C8);特定のNSAID(例えば、ジクロフェナク、イブプロフェン、ロルノキシカム、メロキシカム、S-ナプロキセン、ピロキシカム、スプロフェン)、特定の経口血糖降下薬(例えば、トルブタミド、グリピジド)、特定のアンジオテンシンII遮断薬(例えば、ロサルタン、イルベサルタン)、特定のスルホニル尿素(例えば、グリブリド、グリベンクラミド、グリピジド、グリメピリド、トルブタミド、アミトリプチリン)、セレコクシブ、フルオキセチン、フルバスタチングリブリド、ナテグリニド、フェニトイン、ロシグリタゾン、タモキシフェン、トルセミド、S-ワルファリン(シトクロムP450 2C9);特定のマクロライド系抗生物質(例えば、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、テリスロマイシン)、特定の不整脈治療剤(例えば、キニジン)、特定のベンゾジアゼピン(例えば、アルプラゾラム、ジアゼパム、ミダゾラム、トリアゾラム)特定の免疫調節剤(シクロスポリン、タクロリムス)、特定のHIV抗ウイルス剤(例えば、インジナビル、ネルフィナビル、リトナビル、サキナビル)、特定の運動促進剤(例えば、シサプリド)、特定の抗ヒスタミン剤(例えば、アステミゾール、クロルフェニラミン、テルフェニジン)、特定のカルシウムチャンネル遮断薬(例えば、アムロジピン、ジルチアゼム、フェロジピン、レルカニジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ベラパミル)、特定のHMGCoAレダクターゼ阻害剤(例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン)、特定のステロイド(エストラジオール、ヒドロコルチゾン、プロゲステロン、テストステロン)、アルフェンタニル、アプレピタント、アリピプラゾール、ブスピロン、カフェルゴット、カフェイン⇒TMU、シロスタゾール、コカイン、コデイン-N-脱メチル化、ダプソーン、デキサメタゾン、デキストロメトルファン、ドセタキセル、ドンペリドン、エプレレノン、フェンタニル、フィナステライド、グリーベック(gleevec)、ハロペリドール、イリノテカ、LAAM、リドカイン、メタドン、ナテグリニド、オダネストロン(odanestron)、ピモジド、プロプラノロール、クエチアピン、キニーネ、リスペリドン、NOTロスバスタチン、サルメテロール、シルデナフィル、シロリム、タモキシフェン、タクソール、テルフェナジン、トラゾドン、ビンクリスチン、ザレプロン、ジプラシドン、ゾルピデム(シトクロムP450 3A4)が含まれる。特定の実施形態では、本発明は、シトクロムP450によって代謝されるHIV抗ウイルス剤(例えば、インジナビル、ネルフィナビル、リトナビル、サキナビル)と併用投与するか又はそれと交互投与する方法を提供する。
【０１６９】
シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝される他の化合物の例には、これらに限定されないが、CCR5阻害剤(例えば、PRO-140、ビクリビロック若しくはSCH-417,690及びマラビロック又はUK-427,857)、インテグラーゼ阻害剤(例えば、JTK-303/GS-9137、6-(3-クロロ-2-フルオロベンジル)-1-[(2S)-1-ヒドロキシ-3-メチルブタン-2-イル]-7-メトキシ-4-オキソ-1,4-ジヒドロキノリン-3-カルボン酸、MK-0518、5-(1,1-ジオキシド-1,2-チアジナン-2-イル)-N-(4-フルオロベンジル)-8-ヒドロキシ-1,6-ナフチリジン-7-カルボキサミド、及び米国特許第6,924,282号、同第6,921,759号、同第6,919,351号、同第6,841,558号、同第6,541,515号、同第6,403,347号、同第6,395,743号、同第6,380,249号、同第6,306,891号、同第6,271,402号、同第6,262,055号、同第6,245,806号、同第6,124,327号、同第6,110,716号、同第5,939,414号、同第5,858,738号、同第5,759,842号、同第7,176,220号及び同第7,112,600号に記載されているもの(その内容全体を参照により本明細書に組み込む)、プロテアーゼ阻害剤(例えば、サキナビル、インジナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ロピナビル、リトナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、チプラナビル、アンプレナビル及びダルナビル)、融合阻害剤(例えば、エンフルビチド(enfurvitide))、成熟阻害剤(例えば、ベビリマット又はPA-457)並びにヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(例えば、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エノフォビル(enofovir)、エムトリシタビン、コンビビル、トリジビル、ツルバダ及びエプジコム)が含まれる。
【０１７０】
シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝される他の化合物の例には、これらに限定されないが、リトナビル、免疫抑制剤のシクロスポリン、FK-506及びラパマイシン、化学療法剤のタクソール及びタキソテール、抗生物質クラリスロマイシン並びにHIVプロテアーゼ阻害剤のA-77003、A-80987、MK-639、サキナビル、VX-478、AG1343、DMP-323、XM-450、BILA2011BS、BILA1096BS、BILA2185BS、BMS186,318、LB71262、SC-52151、SC-629(N,N-ジメチルグリシル-N-(2-ヒドロキシ-3-(((4-メトキシフェニル)スルホニル)(2-メチルプロピル)アミノ)-1-(フェニルメチル)プロピル)-3-メチル-L-バリンアミド)、KNI-272、CGP53437、CGP57813及びU-103017が含まれる。
【０１７１】
特定の実施形態では、シトクロムP450モノオキシゲナーゼによって代謝されるHIVプロテアーゼ阻害剤(又は薬学的に許容されるその塩)の薬物動態を改善するための方法を提供する。その方法は、HIVプロテアーゼ阻害剤を、本明細書で示す化合物と併用投与するか又はそれと交互投与することを含む。そうした併用投与又は交互投与は、ヒトにおけるHIVプロテアーゼを阻害するのに有用であり、ヒトのHIV感染症又はAIDSの阻害、治療又は予防にも有用である。HIVプロテアーゼ阻害剤は、当業者に知られている任意のHIVプロテアーゼ阻害剤であってよい。特定の実施形態では、HIVプロテアーゼ阻害剤は、アンプレナビル(アゲネラーゼ、GlaxoSmithkline)、チプラナビル(アプティバス、Boehringer Ingelheim)、インジナビル(クリキシバン、Merck)、サキナビル(フォートベイス、Hoffmann-La Roche)、サキナビルメシラート(インビラーゼ、Hoffmann-La Roche)、ロピナビル及びリトナビル(カレトラ、GlaxoSmithkline)、リトナビル(ノービア、Abott)、ダルナビル(プリジスタ、Tibotec)、アタザナビルサルフェート(レイアタッツ)若しくはネルフィナビルメシラート(ビラセプト、Agouron)又はその組合せである。
【０１７２】
特定の下位実施形態では、本明細書で開示する化合物を、潜在的に第二の薬剤の代謝を改善することができる一つ、二つ又はそれ以上の他のプロテアーゼ阻害剤又はインテグラーゼ阻害剤抗HIV剤と併用投与するか又はそれと交互投与することができる。一下位実施形態では、その追加の薬剤は:
アンプレナビル、チプラナビル、インジナビル、サキナビル(サキナビルメシラートを含む)、ロピナビル、リトナビル、ホスアンプレナビル、ダルナビル、アタザナビル(硫酸塩を含む)、ネルフィナビル(メシラート塩を含む)、ブレカニビル又はGS-8374から任意選択で選択されるプロテアーゼ阻害剤;及び
ラルテグラビル(MK-0518)又はエルビテグラビル(GS-9137)又はGSK-364735などのインテグラーゼ阻害剤から選択される。
【０１７３】
一般に、交互療法の際には、有効投薬量の各薬剤を逐次的に投与する。併用療法の際には、有効投薬量の二つ以上の薬剤を一緒に投与する。投与される投薬量は、各薬物についての吸収、生体内分布、代謝及び排出速度、並びに当業者に周知の他の因子などの因子に依存する。投薬量は、緩和させる状態の重篤度、薬物を受け入れる対象の年齢、体重及び全身的な身体状態によって変わることに留意されたい。さらに、どの具体的な対象についても、具体的な投薬レジメン及びスケジュールは、薬物に対する対象の反応、対象の要求及びその組成物投与の管理又は監督者の専門的判断によって時間とともに調整すべきであることを理解されたい。例えばD4T、DDI及び3TC、2'-分鎖ヌクレオシド又はネルフィナビル及びインジナビルのようなプロテアーゼ阻害剤などのヌクレオシド誘導体を含む化合物についての適切な投薬量範囲の例は、科学文献や医師用卓上参考書(Physicians' Desk Reference)に見ることができる。本発明の化合物の有効投薬量について、提案されている範囲は指針にすぎず、本発明の範囲又は使用を限定するものではない。
【０１７４】
開示した併用投与及び交互投与レジメンは、例えば、AIDS関連症候群(ARC)、持続性全身性リンパ節腫(PGL)、AIDS関連神経学的状態、抗HIV抗体ポジション及びHIV-陽性状態、カポジ肉腫、血小板減少性紫斑病並びに日和見感染症などのレトロウイルス感染症及び他の関連の状態を治療及び予防するのに有用である。さらにこれらの化合物又は処方物は、抗HIV抗体若しくはHIV-抗原陽性であるか、又はHIVに曝されている個体の臨床的疾患の進行を予防的に阻止するか又は遅延させるのに用いることができる。
【０１７５】
アッセイ
本明細書で提供する化合物は、当業者により適切であると考えられている任意のアッセイによって、HIV又はHIV感染症に対する活性をアッセイすることができる。そうしたアッセイの例には、この節で説明するもの及び以下の実施例に示すものが含まれる。
【０１７６】
抗ウイルス活性を判断するための細胞培養系
増幅産物検出スキーム
異種検出法:例えば、サザンブロット法は異種検出の技術である。サザンブロット法では、サイズ及び電荷によって増幅産物を分離するのに電気泳動法を用いる。サイズ分画産物を、拡散、真空化又は電子ブロッティングにより膜又はフィルターへ移動させる。標識化した検出プローブを、溶液中の膜結合標的とハイブリッド形成させ、フィルターを洗浄してハイブリッド形成されていないプローブをすべて除去し、その膜上のハイブリッド形成されたプローブを、当業界で知られている種々の方法のいずれかにより検出する。
【０１７７】
他のタイプの異種検出法は、酵素結合免疫吸着剤アッセイ(ELISA)による増幅産物の特異的捕獲を基にしたものである。PCRで用いられる一つの方法には、一つのプライマーをビオチンなどのハプテン又はリガンドで標識化し、増幅させた後、抗体又はストレプトアビジンでコーティングしたマイクロプレートでそれを捕獲する方法である。その他のプライマーを、フルオレセインなどのレポーターで標識化し、西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)接合体などの抗フルオレセイン抗体を加えて検出を行う。この種の方法は、規定された対象の増幅産物とハイブリッド形成する検出プローブを用いる方法と比べてそれほど特異的なものではない。
【０１７８】
LCxプローブシステム(Abbott Laboratories、Abbott Park、IL)及びAmplicor HIV-1試験(Roche Molecular Systems,Inc.、Pleasanton、CA)は、異種検出法を用いるシステムである。LCxシステムでは、ハプテン標識化されたオリゴヌクレオチドは、リガーゼ連鎖反応における熱サイクルをプローブする。捕獲ハプテンか又は検出ハプテンのいずれかは、四つのプライマーオリゴヌクレオチドのそれぞれと共有結合する。増幅させると、各増幅産物(アンプリコン)は一つの捕獲ハプテンと一つの検出ハプテンを有する。増幅が完了したら、LCxシステム装置は反応物を新しいウェルに移し、そこで抗体コーティングした微粒子は捕獲ハプテンと結合する。次いで各微粒子をガラス繊維充てん材に不可逆的に結合させる。洗浄工程にかけて、検出ハプテンだけを含有するプローブを微粒子からすべて除去する。LCx装置は、検出ハプテンと結合するアルカリ性ホスファターゼ(AP)-抗体接合体を加える。APのための蛍光発生基質は4-メチルウンベリフェリルである。APによる4-メチルウンベリフェリルの脱ホスホリル化によって、それを蛍光性の4-メチルウンベリフェロンに転換させる。
【０１７９】
Amplicor HIV-1試験ではELISAフォーマットを使用する。PCRで増幅させた後、アンプリコンを化学的に変性させる。アンプリコン特異性オリゴヌクレオチドプローブは、コーティングしたマイクロプレート上で、変性したストランドを捕獲する。作業者は、洗浄工程で、取り込まれていないプライマーとハイブリッド形成されていない物質をすべて洗い落し、次いで、アビジン-HRP接合体を各ウェルに加える。接合体は、プレート上に捕獲されたビオチン標識化したアンプリコンと結合する。次に、作業者は3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン(TMB)と発色性HRP基質を加える。過酸化水素が存在すると、HRPはTMBを酸化する。そのシグナルを比色分析で測定する。
【０１８０】
同種検出法:ハイブリッド形成されている検出プローブと非ハイブリッド形成されていない検出プローブは、同種検出システムでは物理的に分離されないので、これらの方法は、異種法よりステップ数が少なくて済み、したがって汚染される傾向が少ない。蛍光性及び化学発光性の標識の同種検出法を用いる市販のキットには、TaqManシステム(Applied Biosystems、Foster City、CA)、BDプローブTecETシステム(Becton Dickinson、Franklin Lakes、NJ)、QPCRシステム5000(Perkin-Elmer Corp.、Norwalk、CT)及びハイブリッド形成保護アッセイ(Gen-Probe,Inc.、San Diego、CA)がある。
【０１８１】
TaqManシステムはアンプリコンをリアルタイムで検出する。アンプリコンの内部領域とハイブリッド形成する検出プローブは、その5'末端でのフルオレセインなどのドナーフルオロプローブ、及びその3'末端でのローダミンのようなクエンチャー部分を含む。クエンチャーとフルオロフォアの両方が同一オリゴヌクレオチド上にある場合、ドナー蛍光が阻害される。増幅の際、プローブは標的と結合する。Taqポリメラーゼは、置換ストランドを合成する際に、検出プローブを置換し、切断する。検出プローブの切断により、クエンチャーからフルオロフォアが分離される結果となり、ドナー蛍光シグナルの増大がもたらされる。増幅の各サイクルの間、この過程は繰り返される。アンプリコンの量が増大するとともに、蛍光性シグナルの量は増大する。
【０１８２】
分子ビーコンもクエンチャーとフルオロフォアを使用する。ビーコンは、標的アンプリコンに対して相補的であるが、各末端で短いひと続き(約5ヌクレオチド)の相補オリゴヌクレオチドを含むプローブである。ビーコンの5'末端及び3'末端は、フルオロフォアとクエンチャーでそれぞれ標識化される。ビーコンが標的とハイブリッド形成していない場合、ヘアピン構造が形成され、フルオロフォアとクエンチャーの接触がもたらされ、蛍光性が消失することになる。そのループ領域は、アンプリコンと相補的な領域を含む。標的にハイブリッド形成されると、ヘアピン構造が開いて、クエンチャーとフルオロフォアは分離し、蛍光性シグナルを増進させる。蛍光光度計で、このシグナルをリアルタイムで測定する。
【０１８３】
BDProbe TecETシステムでは、TaqManと分子ビーコンの側面を組み合わせたリアルタイム検出法を用いる。プローブはヘアピンループ構造を有しており、フルオレセイン標識とローダミン標識を備えている。しかし、このシステムでは、標的分子と相補的な領域はループ内には存在せず、ローダミン標識に対して領域3'にある。標的に対して相補的な配列を含む代わりに、一本鎖ループは、制限酵素BsoBIのための制限部位を含む。一本鎖配列は酵素のための基質ではない。フルオレセイン標識とローダミン標識は、増幅の前はそれぞれ近接しており、これはフルオレセイン蛍光をクエンチする。ストランド置換増幅はプローブを二本鎖分子に転換させる。BsoBI制限酵素は分子を切断させ、標識の分離と蛍光シグナルの増大をもたらすことができる。
【０１８４】
QPCRシステム5000にはルテニウム標識を備えた電気化学発光が用いられる。ビオチン化されたプライマーを使用する。増幅させた後、ビオチン産物を、ストレプトアビジンコーティングした常磁性ビーズ上に捕獲する。吸引によりビーズを電気化学フローセルに移し、電極の表面に磁気的に保持させる。電気的な刺激を与えると、ルテニウム標識化したプローブは光を発する。
【０１８５】
ハイブリッド形成保護アッセイを、Gen-Probeの非増幅PACEアッセイ、並びに増幅した結核菌(M.tuberculosis)及びトラコーマ病原体(C.trachomatis)アッセイにおいて用いる。HPAにおける検出オリゴヌクレオチドプローブは、リンカーアームによって、化学発光性アクリジニウムエステル(AE)で標識化される。ハイブリッド形成は、増幅が行われるその同じ管の中で、60℃で15分間行う。ハイブリッド形成の後に加えられた、弱塩基性の緩衝液である選択試薬は、ハイブリッド形成されていないすべてのプローブ上のAEを加水分解し、それを非化学発光性にする。ハイブリッド形成されたプローブ上のAEは二重らせんの副溝内で折り畳まれ、そによって、選択試薬による加水分解からそれ自体を保護する。AEは、過酸化水素とそれに続く水酸化ナトリウムによる加水分解によって化学発光性シグナルを発する。ルミノメーターで化学発光性シグナルを2秒間(「ライトオフ」と称される時間)記録し、放出された光子を相対光単位(RLU)で示す。
【０１８６】
増幅産物を検出するためにプローブを使用するすべての手法において、検出プローブの設計は非常に重要である。優れた検出プローブは、特異的増幅産物とだけハイブリッドを形成し、非特異的産物とはハイブリッド形成しない。検出手法を最適化するのに重要なその他の課題には、プローブの標識化や試料処理能力の最適化が含まれる。
【０１８７】
標識化法及びレポーター分子。検出プローブは複数の異なった仕方で標識化することができる。プローブ中に32P又は35Sを酵素的に取り込む方法は、同位体標識化のための最も一般的な方法である。ハイブリッド形成及び洗浄に続いて、オートラジオグラフィー膜上でシグナルを検出する。
【０１８８】
非放射性の検出を行うために、プローブを、様々な分子を用いて酵素的に標識化することができる。ビオチンを酵素的に取り込み、次いで、5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルホスフェート(BCIP)やニトロブルーテトラゾリウム(NBT)のようなAP基質を用いて、ストレプトアビジン接合化したアルカリ性ホスファターゼでそれを検出することができる。Lumi-Phos530又はLumi-Phos Plus(Lumigen、Southfield、MI)などの化学発光性基質も、APとともに用いることができる。さらに、ジゴキシゲニン-11-dUTPをDNA又はRNA酵素的に取り込むことができ、抗ジゴキシゲニンAP接合体を比色検出法又は化学発光検出法で使用することができる。
【０１８９】
アクリジニウムエステルのような化学発光性部分を含む多くの他のタイプのレポーター分子が存在する。多くの蛍光性部分も利用することができる。トリス(2,2'-ビピリジン)ルテニウム(II)などの電気化学発光性化合物も使用することができる。上記及び同様の技術のさらなる考察は、Schiff等、Semin.Liver Dis.、1999年、19:Suppl.1:3〜15頁)に見ることができる。
【０１９０】
カニクイザルでの生物学的利用能アッセイ
検討を開始する前1週間以内に、カニクイザルに、常在式(chronic)静脈カテーテルと皮下静脈内投与のポート(VAP)を外科的に埋め込んで血液採取を容易にし、血液学及び血清化学的な評価を含む理学的検査を施し、体重を記録する。各サル(合計6匹)に、静脈内ボーラス(3サル、IV)か又は経口経管栄養法(3サル、PO)によって5mg/mLの投薬濃度で、10mg/kgの用量レベルで各用量の活性化合物を施す。投薬前に、各投薬シリンジを計量して、投与される処方物の量を重量測定法により決定する。尿試料を、指定された間隔で(投薬前約18〜0時間、投薬後0〜4、4〜8及び8〜12時間)パンキャッチ(pan catch)により採取し、処理する。慢性静脈カテーテル及びVAPを介して、又は慢性静脈カテーテル手法が不可能である場合には末梢血管から、血液試料も採取する(投薬前、投薬後0.25、0.5、1、2、3、6、8、12及び24時間)。血液と尿の試料を、最高濃度(C最大)、最高濃度に達したときの時間(T最大)、濃度曲線下面積(AUC)、投薬濃度の半減期(T1/2)、クリアランス(CL)、定常状態での体積及び分布(Vss)並びに生物学的利用能(F)について、LC/MSにより分析する。
【０１９１】
骨髄毒性アッセイ
健常なボランティアからヒト骨髄細胞を採取し、Sommadossi J-P、Carlisle R.「正常ヒト造血系前駆細胞についてのインビトロでの3'-アジド-3'-デオキシチミジン及び9-(1,3-ジヒドロキシ-2-プロポキシメチル)グアニンの毒性(Toxicity of 3'-azido-3'-deoxythymidine and 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanine for normal human hematopoietic progenitor cells in vitro)」、Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1987年;31:452〜454頁;及びSommadossi J-P、Schinazi RF、Chu CK、Xie M-Y.「正常ヒト骨髄前駆細胞中での2',3'-ジデオキシ-3'-チアジアジンの(-)-及び(+)-鏡像異性体の細胞毒性の比較(Comparison of cytotoxicity of the(-)-and(+)-enantiomer of 2',3'-dideoxy-3'-thiacytidine in normal human bone marrow progenitor cells)」、Biochemical Pharmacology 1992年;44:1921〜1925頁によって先に記載されているFicoll-Hypaque勾配遠心分離により、単核個体群を分離する。CFU-GM及びBFU-Eについての培養アッセイを、二層軟寒天法又はメチルセルロース法を用いて実施する。薬物を組織培養媒体中に希釈し、ろ過する。空気中に5%CO2の湿気のある環境下、37℃で14〜18日後、倒立顕微鏡を用いて、50個を超える細胞のコロニーの数をカウントする。結果を、溶媒対照培養液と比較した、薬物の存在下でのコロニー生成の阻害率として示す。
【０１９２】
細胞毒性アッセイ
細胞を、5×103及び5×104/ウェルの割合で96-ウェルプレートに、湿気のあるCO2(5%)環境下、37℃で成長培地中に終夜播種する。次いで薬物の連続希釈液を含む新規な成長培地を加える。4日間インキュベーションした後、培養液を50%TCA中で固定し、スルホローダミンBで染色する。550nmで光学密度を読み取る。細胞毒性濃度を、細胞の数を50%減少させるのに必要な濃度(CC50)で表す。
【０１９３】
細胞保護アッセイ(CPA)
このアッセイは、Baginski,S.G.;Pevear,D.C.;Seipel,M.;Sun,S.C.C.;Benetatos,C.A.;Chunduru,S.K.;Rice,C.M.and M.S.Collett「ペスチウイルス抗ウイルス性化合物の作用機序(Mechanism of action of a pestivirus antiviral compound)」、PNAS USA 2000年、97(14)、7981〜7986頁に記載されているようにして実行する。MDBK細胞(ATCC)を、使用24時間前に、96-ウェル培養プレートに播種する(ウェル当たり4,000個の細胞)。細胞当たり0.02のプラーク形成単位(PFU)の感染多重度(MOI)で、BVDV(菌株NADL、ATCC)に感染させた後、試験化合物の連続希釈液を、感染した細胞と感染していない細胞の両方に、成長培地中に0.5%DMSOの最終濃度で加える。各希釈液を4通りで試験する。実験を通しての連続細胞増殖を確実にし、且つ、感染4日後、未治療対照において90%を超えるウイルス誘発細胞破壊を達成できるように、細胞密度とウイルス接種菌液を調節する。4日後、プレートを50%TCAで固定し、スルホローダミンBで染色する。ウェルの光学密度を、550nmでマイクロプレートリーダーで読む。50%有効濃度(EC50)値は、ウイルスの細胞変性作用の50%低減を実現する化合物濃度と定義される。
【０１９４】
プラーク減少アッセイ
各化合物について、プラーク減少アッセイにより、2通りの24-ウェルプレートで有効濃度を測定する。細胞単層を100PFU/ウェルのウイルスで感染させる。次いで、2%の不活性化血清及び0.75%のメチルセルロースで補充したMEM中の試験化合物の連続希釈液をその単層に加える。培養液を、37℃で3日間さらにインキュベートし、次いで50%エタノール及び0.8%クリスタルバイオレットで固定し、洗浄して空気乾燥する。次いで、プラークをカウントして90%のウイルス抑制を得るための濃度を決定する。
【０１９５】
HIVの薬物耐性菌に対する生物学的活性
一実施形態では、抗HIV化合物の効能を、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド(MTT)の還元を含む、高感度の迅速自動アッセイによってインビトロで測定する。例えばT-4細胞株、MT-4などの、HIV感染症に高度に許容的で選択的であるHIV形質転換した細胞株を、標的細胞株として選択する(Koyanagi等、Int.J.Cancer、1985年、36:445〜451頁)。分光光度法により評価される、その場での3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニル-テトラゾリウムブロミド(MTT)の還元は、モック感染細胞とHIV-感染した細胞の両方の生存率を測定する標準的なものである。HIV誘発細胞変性作用の阻害はエンドポイントの働きをする。50%の細胞毒性濃度(μMでのCC50)は、モック感染対照試料の吸収を50%減少させる化合物の濃度と定義される。抗HIV化合物の効能を次式(%で表す)により算出する:
(ODHIV試験化合物)-(OD対照)/(ODモック感染細胞)-(OD対照)
ここで、(ODHIV試験化合物)はHIV感染した細胞における一定量の試験化合物について測定した光学密度であり、(OD対照)は未治療のHIV感染した対照細胞について測定した光学密度であり、(ODモック感染細胞)は未治療の対照モック感染細胞について測定した光学密度である。光学密度値は通常540nmで評価する。上記式によって、50%保護を提供する抗HIV試験化合物の投薬量は50%阻害濃度(μMでのIC50)と定義される。選択指数(SI)はCC50とIC50の比と定義される。
【０１９６】
他の実施形態では、p24ELISAアッセイを、抗HIV化合物の効能を測定するために用いる。ウイルス複製免疫アッセイにより、存在するp24ウイルスカプシド(コア)抗原の量が測定される。このアッセイは、例えばCoulter Corporation/Immunotech,Inc.(登録商標)(Westbrook、MI)などの業者から市販されている。
【０１９７】
さらに他の実施形態は、ウイルス複製の量を、ホモポリマーポリrAを用いて測定する逆転写酵素アッセイ:シンチレーション計数法により、トリチウム化されたチミジソ一リン酸の細胞内への取り込みを定量化するオリゴdTテンプレートプライマーシステム(Southern Research Institute、University of Alabama、Birmingham、AL);免疫蛍光性、化学発光性又は比色エンドポイントを有するCEM-SS、HeLa-CD4又はHeLa-CD4-LTR-b-ガラクトシダーゼ細胞を用いる合胞体阻害アッセイ;並びに、インジケーター細胞株と、化学発光、比色又は顕微鏡的評価による定量化を用いる付着及び融合阻害アッセイ(Southern Research Institute、University of Alabama、Birmingham、AL)を含む。
【０１９８】
一実施形態では、本発明のインドール化合物は、本発明の化合物が、約50、25、10又は1μM濃度未満のHIV変異株でEC50(モル濃度で)を示すという点で、他の非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NNRTI)との交差耐性を示さない。典型的な実施形態では、NNRTIは、約5、2.5、1又は0.1μM濃度未満のHIV変異株でEC50を示す。HIVの薬物耐性菌に対する交差耐性の程度は、標的変異した、即ち薬物耐性のあるウイルスにおける、所望のオキソピリミジン化合物のEC50を評価することによって測定される。
【０１９９】
医薬組成物
ウイルスに感染するか又は本明細書で述べる任意の他の状態になっているヒトを含む宿主を、その患者に、任意選択で薬学的に許容される担体又は希釈剤の存在下、有効量の活性化合物又は薬学的に許容されるその塩若しくはプロドラッグを投与することによって治療することができる。その化合物は、他の治療薬及び/又は薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と併用して又は交互に、それを必要とする対象に投与することができる。一実施形態では、HIVに感染した対象を、薬学的に許容される担体又は希釈剤の存在下、有効量の本明細書で開示する化合物又はその塩、プロドラッグ、立体異性体若しくは互変異性体をその対象に投与することによって治療することができる。多重の薬剤耐性を有する対象のためには、ホスホインドール化合物を単独か、又は一種若しくは複数の他の治療薬と併用して投与する。活性化合物は、任意の適切な経路、例えば経口、非経口、腸内、静脈内、皮内、皮下、経皮、経皮、鼻腔内、局所で、又は吸入治療により投与することができ、それは固体、液体又は蒸気の形態であってよい。
【０２００】
一実施形態では、例えば、治療を受ける患者において重篤な毒性作用を引き起こすことなくウイルス感染症を阻害するために、活性化合物を、治療有効量の活性化合物を患者に送達するのに十分な量の、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤中に含ませる。「阻害量」とは、例えば本明細書で参照したものなどのアッセイで測定して、ウイルス複製を停止させるのに十分な活性成分量を含む。
【０２０１】
典型的な化合物用量は、1日当たり約1〜約50mg/kg、約1〜約20mg/kgレシピエント体重、より好ましくは1日当たり約0.1〜約100mg/kgレシピエント体重の範囲である。より低い投薬量、例えば1日当たり約0.5〜100mg、0.5〜10mg又は0.5〜5mg/kg体重の用量を用いることができる。さらに低い用量も有用であり、その範囲は、1日当たり約0.1〜0.5mg/kgレシピエント体重を含むことができる。薬学的に許容される誘導体の有効投薬量の範囲は、送達される親インドール誘導体化合物の重量をベースとして算出される。誘導体化合物自体が活性を示す場合、その有効投薬量は、誘導体の重量を用いて上記のようにするか、又は当業者に知られている他の手段によって推定することができる。
【０２０２】
化合物は、これらに限定されないが、単位剤形当たり約7〜3000mg、約70〜1400mg又は約25〜1000mgの活性成分を含む、適切な任意の剤形の単位で好都合に投与される。例えば、50、100、200、250、300、400、500、600、700、800、900又は1000mgの一つ又は複数の剤形を含む約50〜1000mgの経口投薬量が通常好都合である。より低い投薬量、例えば例えば約10〜100又は1〜50mgが好ましい。0.1〜50mg、0.1〜20mg又は0.1〜10mgの用量も考えられる。さらに、非経口経路、例えば注入又は吸入による投与の場合、より低い用量を用いることができる。
【０２０３】
活性成分は一度に投与することができ、また、時間間隔をおいて投与できるより少ない複数用量に分割することができる。正確な投薬量及び治療期間は治療される疾患に応じて変わり、既知の試験プロトコルを用いて実験的に、又はインビボ若しくはインビトロでの試験データの外挿によって決めることができることを理解されよう。濃度及び投薬値は、緩和される状態の重篤度によっても変わることに留意されたい。さらに、任意の特定の対象について、具体的な投薬レジメンは、個別の必要性、及び組成物の投与を管理又は監督する責任者の専門的な判断によって時間とともに調整しなければならず、且つ、本明細書で示す濃度範囲は例にすぎず、本明細書で提供する組成物の範囲又は実施面を限定しようとするものではないことを理解されたい。
【０２０４】
特定の実施形態では、本明細書で提供する化合物又は組成物は、1日1回の単一用量として、又は、好ましくは1日を通して分割用量で投与することができる。特定の実施形態では、化合物又は組成物を1日当たり4回投与する。特定の実施形態では、化合物又は組成物を1日当たり3回投与する。特定の実施形態では、化合物又は組成物を1日当たり2回投与する。特定の実施形態では、化合物又は組成物を1日当たり1回投与する。
【０２０５】
一実施形態では、活性成分を、約0.02〜70μM又は約0.5〜10μMの活性化合物のピーク血漿濃度が達成されるように投与する。例えば、これは、任意選択で生理食塩水中の活性成分の0.1〜5%溶液の静脈注射で実施するか、又は、活性成分のボーラスとして投与することができる。任意の特定の対象について、具体的な投薬レジメンを、個別の必要性に適合するように時間とともに調整しなければならず、それは薬物の吸収、不活性化及び排出速度に応じて変わることを理解されよう。ここに示した濃度は例にすぎず、特許請求する組成物の範囲又は実施面を限定しようとするものではない。活性成分はすべて一度に投与することができ、また、複数のより少ない用量に分割して時間間隔を変えて投与することもできる。
【０２０６】
活性化合物を投与する一つの方式は経口投与である。経口化合物は通常不活性な希釈剤又は食べられる担体を含む。これらは、ゼラチンカプセルに封入するか、圧縮して錠剤にするか、又は液体形態で送達することができる。経口治療投与のためには、活性化合物を、賦形剤と混ぜ合わせるか又は固体分散体若しくは固溶体として処方し、錠剤、トローチ剤又はカプセル剤の形態で使用することができる。「固体分散体」という用語は、一つの成分が他の成分全体にほぼ均一に分散している少なくとも二つの成分を含む固体状態を意味する。「固溶体」ということは、化学的及び物理的に混ざり合って均一な生成物を形成している少なくとも二つの成分を含む固体状態を意味する。適切な液媒体と接触させると、より簡単に溶液を形成し、それによって薬物の生物学的利用能が増大するので、固溶体は一般に固体分散体より優れている。薬学的に適合性のある結合剤及び/又は補助材料も、この組成物の一部として含めることができる。
【０２０７】
錠剤、丸薬、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分又は同様の性質の化合物、即ち、微結晶性セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンなどの結合剤;デンプン又はラクトースなどの賦形剤;アルギン酸、プリモゲル(Primogel)又はトウモロコシデンプンなどの崩壊剤;ステアリン酸マグネシウム又はステロート(Sterote)などの滑剤;コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤;サッカリンのスクロースのような甘味剤;並びにペパーミント、サルチル酸メチル又はオレンジ香味料などの香味剤のいずれかを含むことができる。投薬単位形態がカプセルである場合、それは、上記種類のいずれかの材料に加えて、脂肪油などの液状担体を含むことができる。さらに、投薬単位形態は、例えば糖、シェラック又は他の腸溶性薬剤のコーティングなどの、投薬単位の物理的形態を改変する様々な他の材料を含むことができる。
【０２０８】
化合物は、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハース剤、チューインガム剤などの成分として投与することができる。シロップ剤は、活性化合物に加えて、甘味剤としてスのクロース、保存剤、染料、着色剤及び香味剤を含むことができる。
【０２０９】
活性化合物又はその薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグは、所望の作用を損なわない他の活性材料、或いは抗生物質、抗真菌剤、抗炎症、プロテアーゼ阻害剤、又は他のヌクレオシド若しくは非ヌクレオシド抗ウイルス剤などの所望の作用を補う材料と混合することができる。非経口、皮内、皮下又は局所施用のために用いられる液剤又は懸濁剤は以下の成分、即ち:注射用の水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒などの滅菌性希釈剤;ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤;アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化物質;エチレンジアミンテトラ酢酸などのキレート剤;酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤、並びに塩化ナトリウム又はデキストロースなどの等張性の調節剤を含む。非経口製剤は通常は滅菌水を含むことになり、アンプル、使い捨てシリンジ又はガラス若しくはプラスチックでできた複数用量バイアル中に含めることができる。
【０２１０】
静脈内で投与する場合、具体的な担体は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)、グルコース溶液又はグルコースと生理食塩水を含む混合溶液である。一実施形態では、活性化合物を、インプラント及び/又はマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤などの、化合物が体外へ急速に排除されるのを保護する担体と合わせて調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを用いることができる。そうした材料はAlza Corporationから市販されており、また、当業者に周知の方法で調製することができる。例えばパッチ又は軟膏の使用によるなどの経皮的投与の場合、それに伴う担体は、皮膚に無害な浸透促進剤及び/又は適切な湿潤剤を含むことができる。所望の投与経路が吸入又は吹送である場合、本発明の組成物は、経口及び/又は鼻腔を通して送達できる液剤、懸濁剤又は乾燥粉剤の形態の化合物を含む。
【０２１１】
ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染細胞に標的化されたリポソームを含むリポソーム懸濁剤も、薬学的に許容される担体として一般的なものである。これらは、例えば、米国特許第4,522,811号(その全体を参照により本明細書に組み込む)記載されているような当業者に周知の方法で調製することができる。例えば、リポソーム製剤は、ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン及びコレステロールなどの適切な脂質を無機溶媒に溶解させ、この溶媒を後で蒸発させて、容器表面上に乾燥脂質の薄膜を後に残すことによって調製することができる。次いで、活性化合物又はその塩若しくはプロドラッグの水溶液をその容器に導入する。容器を旋回させてその側部から脂質物質を放出させ、脂質凝集体を分散させ、それによってリポソーム懸濁液を形成する。
【０２１２】
活性化合物の調製方法
ホスホインドールの合成のための概略スキームの例をスキーム1に示す。
【化１２】
2010504978.tif 000021
【０２１３】
この合成は、適切なリチオ化種、例えばn-ブチルリチウムを用いたN-保護インドール1で処理し、続いて適切なリン求電子試薬、例えばジエチルクロロホスファイトにより処理してP(III)中間体を生成し、これを酸性条件下で部分的に加水分解してH-ホスフィネート2を得ることを含む。ステップiiはインドールH-ホスフィネート2とヨードシンナモニトリル11との間のパラジウム触媒によるカップリング反応からなる。エチルからメチルへのエステル交換、続く、例えば水酸化リチウム又はカリウムt-ブトキシドを用いた水-テトラヒドロフラン中、5℃でのカルボン酸エステルとN-保護基の両方の加水分解によりインドール酸5に至る。キラル塩基を用いた5の鏡像異性体のキラル分割、続くアミド生成によって最終化合物7を得る。
【０２１４】
ホスホインドールの合成のための第二の概略スキームの例をスキーム2に示す。
【化１３】
2010504978.tif 000022
【０２１５】
この合成は、穏やかなパラジウム触媒反応条件下で、N-保護インドール1をメチルホスフィネートで処理してインドールH-ホスフィネート2を得ることを含む。ステップiiはインドールH-ホスフィネート2とヨードシンナモニトリル11との間のパラジウム触媒によるカップリング反応からなる。例えば水酸化リチウム又はカリウムt-ブトキシドを用いた水-テトラヒドロフラン中、5℃でのカルボン酸エステルとN-保護基の両方の加水分解によりインドール酸5に至る。キラル塩基を用いた5の鏡像異性体のキラル分割、続くアミド生成によって最終化合物7を得る。
【０２１６】
ホスホインドールの合成のための代替経路の例をスキーム3に示す。
【化１４】
2010504978.tif 000023
【０２１７】
代替の合成法は、適切な溶媒中、穏やかな温度で、パラジウム触媒、リガンド、塩基を用いてN-保護インドール1をアリールH-ホスフィネート13とカップリングしてホスホインドール4を得ることを含む。アリールH-ホスフィネート13の生成をスキーム4に示す。例えば水酸化リチウム又はカリウムt-ブトキシドを用いた水-テトラヒドロフラン中、5℃でのカルボン酸エステルとN-保護基の両方の加水分解によりインドール酸5に至る。キラル塩基を用いた5の鏡像異性体のキラル分割、続くアミド生成によって最終化合物7を得る。
【０２１８】
ヨードシンナモニトリル及びシンナモニトリルH-ホスフィネートの合成例をスキーム4に示す。
【化１５】
2010504978.tif 000024
【０２１９】
ヨードシンナモニトリル11はジブロモトルエン8から調製することができる。9のモノ-アルデヒド生成は、例えばn-ブチルリチウム及びn-ブチルマグネシウムクロリドを用いたモノ-リチオ化、続く、N,N-ジメチルホルムアミドを用いた処理によって実施される。例えばジエチルシアノメチルホスホネート及び水素化ナトリウムを用いたアルデヒド9に対するウィッティヒホルナーエモンズ(Wittig-Horner-Emmons)反応が進行すると主にトランス異性体が得られ、結晶化によりこれをさらに濃縮してブロモシンナモニトリル10が得られる。次いでヨウ素化を行って所望の中間体11を得る。
【０２２０】
任意選択で、ヨードシンナモニトリル11は、1.アニリニウム次亜リン酸塩とのカップリング、続くエステル化によるか、又は、2.アルキルホスフィネートを用いた直接のパラジウムカップリングによってアリールH-ホスフィネート13に転換させることができる。さらに、エチルアリールH-ホスフィネート14をエステル交換してメチルH-ホスフィネート13を得ることができる。
【０２２１】
3-ホスホインドールは、米国特許出願公開番号2006/0074054(その全体を参照により本明細書に組み込む)に記載されている手法を含む当業者に周知の技術によって調製することができる。
【０２２２】
インドールホスフィネートを調製するための他の概略合成法を以下のスキームで示す。この合成は、インドール1から出発し、これを3-ハロゲン化及びN-保護(又はN-保護及び3-ハロゲン化)して保護インドール3を得る。保護基(「PG」)は、フェニルスルホニル、tert-ブチルカルバメート(Boc)、ベンジルカルバメート(Cbz)、ベンゾイル、ベンジル、パラメトキシベンジル又は他の置換ベンジル、tert-ブチルジメチルシリル、tert-ブチルジフェニルシリル又は任意のN-1インドール保護であってよい。後者の3に、例えばn-ブチルリチウムとのハロゲン-金属交換を施し、次いでジエチルクロロホスファイトと反応させて、酸性加水分解の後、H-ホスフィネート4を生成するか、或いは次亜リン酸エステルとのパラジウム触媒反応を施して同じ生成物4を生成する。次いで、インドールH-ホスフィネート4に、アリールハライドとの別のパラジウム触媒反応を施してインドール3-ホスフィネート5を生成する。Rがメチル基とは異なる場合、メタノール中のアンモニアで4をエステル交換してH-ホスフィネートインドールカルボキサミド6を生成する。この化合物にもアリールハライドとのパラジウム触媒反応を施して最終化合物7を生成する。
【化１６】
2010504978.tif 000025
【０２２３】
クロスカップリング反応のための適切なパラジウム触媒には、単独か、或いは当業者に知られているトリフェニルホスフィン、ジフェニルホスフィノフェロセン、ジフェニルホスフィノプロパン若しくはアニルホスフィン又はジホスフィン配位子などの配位子と会合した形で用いられる、例えば:パラジウムテトラキス(トリフェニルホスフィン)、酢酸パラジウム、プロピオン酸パラジウム、パラジウムジアセトニトリルジクロリド、ジパラジウムトリス(ジベンジリデンアセトン)(Pd2dba3)、パラジウムN-複素環カルベン(NHC)又は当業者に知られている任意の他のパラジウム触媒が含まれる。パラジウム触媒クロスカップリング反応のための適切な溶媒には、例えば、DMF、アセトニトリル、NMP、ジオキサン、メタノール、THF、トルエンが含まれる。パラジウム触媒クロスカップリング反応のための適切な塩基には、例えば、Et3N、ジイソプロピルアミン、K2CO3、Na2CO3、NaHCO3、Cs2CO3、N-メチルモルホリン、DABCO、DBUが含まれる。
【０２２４】
他の実施形態では、3-ホスホインドールは、以下のスキームに示すように、H-アリールホスフィネートを3-ヨードインドールと反応させることによって調製することができる。3-ヨードインドールは、当業者に知られているヨウ素化試薬を用いたインドールのヨウ素化により調製することができる。任意選択で、3-ヨードインドールの窒素原子は、当業者が適切であると考える任意の保護基で保護することができる。H-アリールホスフィネートとの反応によって3-ホスホインドール化合物が得られる。このスキームでは、PGは保護基を表す。保護基は、当業者に知られている任意の技術によって取り外すことができる。
【化１７】
2010504978.tif 000026
【０２２５】
鏡像異性的に純粋な3-ホスホインドールの調製
実質的に一つの鏡像異性体の形態の3-ホスホインドールの調製は、適切な任意の方法で調製された3-ホスホインドールのラセミ混合物の分割によるか、又はキラル出発原料、試薬若しくは触媒からのキラル合成によって実施することができる。これらの化合物は、本明細書で記載する技術の一つ、又は必要に応じてそうした技術を組み合わせて調製することができる。例えば、キラル合成を、化学分割と組み合わせて、所望の化学的及び立体異性体的純度の3-ホスホインドールの鏡像異性体を調製することができる。さらに、3-ホスホインドールの立体異性体は、キラル固相を用いクロマトグラフィーにより分離することができる。3-ホスホインドールの立体異性体のジアステレオマー誘導体をクロマトグラフ分離することも考えられる。
【０２２６】
キラル化合物の混合物を分割するためには、当業者が適切であると考える任意の方法、例えば、キラル化合物でのイオン性ジアステレオマー塩(又は配位錯体)の生成及び分別結晶化又は他の方法による分離、キラル誘導試薬を用いたジアステレオマー化合物の生成、ジアステレオマーの分離及び純粋な鏡像異性体への転換、並びに超臨界クロマトグラフィー及び酵素的加水分解を含む様々な充てん材を用いるキラル条件下での直接的な鏡像異性体の分離を用いることができる。例えば、Eliel & Wilen、1994年、Stereochemistry of Organic Compounds、John Wiley & Sons,Inc.、New York(1994年);Lochmuller、1975年、J.Chromatogr.、113:(3)283〜302頁を参照されたい。
【０２２７】
例えば、ジアステレオマー塩は、例えばシンコニジン、ブルシン、キニーネ、エフェドリン、ストリキニーネ、α-メチル-β-フェニルエチルアミン(アンフェタミン)などの鏡像異性的に純粋なキラル塩基と本明細書で提供する化合物の反応によって生成させることができる。特定の実施形態では、ジアステレオマー塩はシンコニジンなどのアルカロイドとの反応によって生成させることができる。ジアステレオマー塩は、例えば、分別結晶化又はイオンクロマトグラフィーで分離させることができる。或いは、分割しようとするキラル化合物の混合物を、キラル化合物の一つの鏡像異性体と反応させてジアステレオマーの対を生成させることができる。例えば、ジアステレオマー化合物は、本発明の化合物を、例えばメンチル誘導体などの鏡像異性的に純粋なキラル誘導試薬と反応させ、続いてジアステレオマーを分離し、加水分解して鏡像異性的に濃縮された遊離化合物を生成させることができる。或いは、キラル化合物の混合物を、キラル固定相を用いたクロマトグラフィーにより分離することができる。例えば、Chiral Liquid Chromatography、W.J.Lough、Ed.Chapman and Hall、New York、(1989年);Okamoto、1990年、J.Chromatogr.513:375〜378頁を参照されたい。
【０２２８】
特定の実施形態では、本発明は、ラセミ混合物をキラル試薬と反応させ、続いて得られた生成物を回収し、本発明の化合物に転換させることによって本発明の化合物を作製する方法を提供する。特定の実施形態では、ラセミ形態の化合物をシンコニジンなどのキラル試薬と反応させるステップと、反応生成物を回収するステップと、その化合物を式A〜Dのいずれかの化合物に転換させるステップとを含む式A〜Dのいずれかの化合物を調製する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、化合物Iの2-カルボキシル誘導体のラセミ体を(-)-シンコニジンと接触させるステップと、反応生成物を回収するステップと、例えば、酸で化合物Iに転換させ、続いてアミドを生成させるステップとを含む化合物Iを作製する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、化合物IIの2-カルボキシル誘導体のラセミ体を(+)-シンコニンと接触させるステップと、反応生成物を回収するステップと、例えば、酸で化合物IIに転換させ、続いてアミドを生成させるステップとを含む化合物IIを作製する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、化合物IIIの2-カルボキシル誘導体のラセミ体を(-)-シンコニジンと接触させるステップと、反応生成物を回収するステップと、例えば、酸で化合物IIIに転換させ、続いてアミドを生成させるステップとを含む化合物IIIを作製する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、化合物IVの2-カルボキシル誘導体のラセミ体を(+)-シンコニンと接触させるステップと、反応生成物を回収するステップと、例えば、酸で化合物IVに転換させ、続いてアミドを生成させるステップとを含む化合物IVを作製する方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、エフェドリン及びエフェドリン半水和物などの他のキラル試薬を用いる代替の方法を提供する。
【０２２９】
特定の実施形態では、本発明は、その反対の鏡像異性体を再循環させることによって本明細書で提供する化合物を作製する方法を提供する。そうした実施形態では、ラセミ混合物を本明細書に記載する技術で分割する。所望の鏡像異性体を得るのに加えて、反対の鏡像異性体を再循環して所望の鏡像異性体の収率を高めることができる。例えば、式Bの化合物を再循環して式Aの化合物を得ることができ、またその逆も可能である。式Dの化合物を再循環して式Cの化合物を得ることができ、またその逆も可能である。再循環反応においては、化合物を、その化合物をラセミ化することができる試薬と接触させる。例えば、特定の実施形態では、本明細書で提供するホスホインドール化合物を、そのホスホ基と反応することができるラセミ化試薬と接触させる。特定の実施形態では、ラセミ化試薬は、例えば酸、塩基又はハロゲン化試薬である。特定の実施形態では、ラセミ化試薬は、例えば塩化オキサリルである。ラセミ化試薬と接触させた後、鏡像異性体は、本明細書で記載する任意の技術によって分割することができる。特定の実施形態では、化合物IIを再循環させて化合物Iを得ることができる。特定の実施形態では、化合物IVを再循環させて化合物IIIを得ることができる。そうした方法の例を以下に示す。
【０２３０】
以下に示す方法は、これらの技術の非限定的な例として、式A〜D又は化合物I〜IVの鏡像異性的に純粋な3-ホスホインドールの合成を示す。
【０２３１】
1.動的速度論的分割(DKR)
速度論的分割では、ラセミ混合物S(SR及びSS)から出発し、一つの鏡像異性体が優先的に反応して50%の最大理論収率で生成物PRを得る。速度論的分割と同時にラセミ化を行うことができる場合、理論的に100%のラセミ混合物を鏡像異性体に転換させることができる(スキーム7)。この方法は動的速度論的分割(DKR)として知られている。
【化１８】
2010504978.tif 000027
【０２３２】
標準的な速度論的分割に伴う問題は、最大理論収率が50%しか可能でなく、相当量の未転換基体からの所望生成物の分離が必要であるということである。効率的なDKRのためには、いくつかの特定の要件がある(Strauss,U.T.;Felfer,U.;Faber,K.Tetrahedron:Asymmetry 1999年、10、107):
1.高いエナンチオ選択性を確実にするために、速度論的分割は不可逆的でなければならない。
【０２３３】
2.鏡像異性体比(E=kR/kS)は、少なくとも約20より大きくなければならない。
【０２３４】
3.SRの減少を避けるために、ラセミ化(krac)の比は、速い鏡像異性体(kR)の反応速度以上でなければならない。
【０２３５】
4.選択性がほどほどでしかない場合、kracは、約10程度の係数で、kRより大きくなければならない。
【０２３６】
5.基体鏡像異性体を伴う自発的反応並びに生成物のラセミ化があってはならない。
【化１９】
2010504978.tif 000028
【０２３７】
一実施形態では、鏡像異性的に純粋な3-ホスホインドールの合成、アリールハライドと反応させるための鏡像異性体間のキラル識別は、パラジウム触媒の成分であるキラルホスフィンを用いて行われ、化合物4'(スキーム8)を優先的に生成することになる。このパラジウムカップリング反応は、3-ホスホインドールのラセミ混合物の調製のための上記スキームのパラジウムカップリング反応を変型したものである。キラルホスフィン配位子は、置換3-ホスホインドール4'への3-ホスホインドール3'の転換において、必要な反応選択率及び反応速度をもたらす適切な任意の配位子であってよい。キラルホスフィン配位子は、単座配位子であっても二座配位子であってもよい。キラルホスフィン配位子の非限定的な例には、P-キラルフェロセニルホスフィン、(R)-(+)-BINAP、(S)-(-)-BINAP、(R,R)-CHIRAPHOS及び(S,S)-CHIRAPHOSが含まれる。
【化２０】
2010504978.tif 000029
【０２３８】
他の実施形態では、キラル識別は、キラル基を3-ホスホインドールのラセミ混合物に付加し、非キラルパラジウム触媒系と異なる速度で反応するジアステレオマーの混合物を生成させることによって導入することができる(スキーム9)。第二のキラル中心は、置換基R3、基Z又は保護基PGの成分として加えることができる。キラル基は限定されるものではなく、妥当な速度の反応で所望の選択率をもたらす任意の基を用いることができる。この反応においてR3として用いることができるキラル基の非限定的な一例には、キラルアルコール、例えば(+)又は(-)-メントールが含まれる。スキーム9において基Z又はPGとして用いることができる基の他の非限定的な例には、キラルエステル又はキラルスルホンが含まれる。
【０２３９】
R3がキラル(R*)である場合、標的3-ホスホインドールに転換させるために、トリアルキルオキソニウム塩を用い、続いて酸性開裂で立体配置を転換させる、JOC 1975年、1523〜1525頁に記載の条件により、キラル部分R*を取り外すことができる(スキーム10)。
【化２１】
2010504978.tif 000030
【０２４０】
同じDKRプロセスを、クロスカップリング反応において、ラセミアリールH-ホスフィネート及びブロモインドールでも用いることができる(スキーム11)。
【化２２】
2010504978.tif 000031
【０２４１】
具体的なDKRスキーム
スキーム12に示すDKRプロセスの以下の非限定的例では、Pd触媒は酢酸パラジウムであり、キラルホスフィンは(R)-1-[(S)-2-ジ-2-フリルホスフィノ)-フェロセニル]エチルジ-(2-メチルフェニル)ホスフィンであり、塩基はジイソプロピルエチルアミンであり、溶媒はアセトニトリルである。100℃で加熱後、40%の鏡像異性体過剰で主化合物が得られる。
【化２３】
2010504978.tif 000032
【０２４２】
2.3-ホスホインドールの化学的分割
3-ホスホインドール遊離酸の分割はキラル塩基を用いる化学的分割によって行うことができる。キラル塩基は、3-ホスホインドールの二つの鏡像異性体のうちの一つの遊離酸に対して選択性を示し、それによって鏡像異性体を分割する手段が提供される。以下の実施例で説明するように、式I/IIの3-ホスホインドールの2-カルボキシル誘導体の化学的分割は1に対して、(-)-シンコニジン2(スキーム13、必要な鏡像異性体を得るため。キラルHPLC分析による最初の溶出異性体)及び(+)-シンコニン3(これは、望まない鏡像異性体をろ液から除去させるのに用いることができる。キラルHPLC分析による第二の溶出異性体)を用いて実施することができる。望まない鏡像異性体をラセミ化してより多くの物質を得ることができる。
【０２４３】
以下のスキームに示すような、キラルα-メチル置換ベンジルアミンを用いるストラテジーも適用することができる。インドール1を3位でハロゲン化し、次いでエステル官能基を加水分解してインドール3を得る。次いで、キラル(ここでキラリティーはS又はRと定義される)α-メチル置換(又は非置換)ベンジルアミンを、「ペプチド型」カップリング反応によって、インドール3のカルボキシル官能基に導入する。或いは、酸3を塩素化試薬で処理し、次いでキラルα-メチル置換(又は非置換)ベンジルアミンを加えることによる、酸塩化物の生成によって4を調製することができる。次いで中間体4にパラジウム触媒反応を施してジアストレオマーの5aと5bの混合物を得る。5aと5bの混合物はシリカゲルか又は再結晶化で分離することができる。次いで5a(リンに対してSPキラリティー)に開裂反応を施して位置2のキラル部分を取り外し、純粋な(SP)-鏡像異性体6を得る。5bは、開裂(例えばTMSBrで)によりホスフィン酸に転換させることによって再循環させ、次いで再エステル化して5aと5bの混合物を得、次いでジアストレオマーを再分離することができる。
【化２４】
2010504978.tif 000033
【０２４４】
実施例
【実施例１】
【０２４５】
この実施例では、化合物III及び化合物Iの調製法を説明する。
【化２５】
2010504978.tif 000034
【０２４６】
7から8への反応:
アルゴン雰囲気下でインドール7(1当量)を加えたフラスコに、ヨウ素(1.98当量)、固体水酸化カリウム(1当量)及び無水DMF(4.5mL/ミリモル)を加えた。反応混合物を3時間攪拌し、次いで水を加え、スラリーをろ紙でろ過し、固体を減圧下で乾燥し、水の中で数回摩砕/ろ過し、減圧下で乾燥して3-ヨードインドール8を得た。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.45(t,3H)、4.50(q,2H)、7.20〜7.40(m,2H)、7.55(s,1H)、9.40(br s,1H)。
【０２４７】
8から9への反応:
ジクロロメタン(3.5mL/ミリモル)中でのインドール8(1当量)の攪拌溶液に、窒素雰囲気下で、ジ-tert-ブチルジカーボネート(1.8当量)及び4-ジメチルアミノピリジン(2当量)を加えた。反応混合物を18時間攪拌し、次いでリン酸緩衝液(pH=7)を加え、ジクロロメタンで抽出した。一緒にした有機層を(Na2SO4)乾燥し、減圧下で濃縮した。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液:石油エーテル/EtOAc:1/1)で精製してN-Boc-保護インドール9を得た。淡黄色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.34(t,J=8.0Hz,3H)、1.56(s,9H)、4.35(q,J=8.0Hz,2H)、7.46(d,J=4.0Hz,1H)、7.55(dd,J=12.0及び4.0Hz,1H)、8.0(d,J=12.0Hz,1H)、MS(ES-)m/z=448(M-H)。
【０２４８】
反応9から10:
N2で脱ガスしたDMF、N-Boc3-ヨードインドール9(1当量)、H-アリールホスフィネート11(1.1当量)、トリエチルアミン(2当量)及びPd2dba3(0.2当量)の攪拌溶液を、TLC又はHPLC分析で判断して反応が終了するまで70℃又は90℃で加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:8/2)で精製してインドールホスフィネート10(いくらかの脱保護インドールも含む)を得た。白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.26(t,J=7.1Hz,3H)、1.58(s,9H)、2.35(s,3H)、3.70(d,J=11.5Hz,3H)、4.29(m,2H)、6.53(d,J=16.8Hz,1H)、7.53(dd,J=9.0及び2.2Hz,1H)、7.65(d,J=13.3Hz,1H)、7.70(d,J=16.8Hz,1H)、7.76(s,1H)、7.84(d,J=13.3Hz,1H)、7.92(d,J=2.2Hz,1H)、8.06(d,J=9.0Hz,1H)、MS(ES+)m/z=543(MH+)。
【０２４９】
12から13への反応:
ヨードアリール12(1当量)、ジメチルホルムアミド(1ml/ミリモル)、トリエチルアミン(3当量)及びアニリニウム次亜リン酸塩*(1.25当量)を圧力管に入れ、N2で15分間脱ガスした。次いで、パラジウムテトラキスを加え、この混合物を85℃で終夜攪拌した。
【０２５０】
溶媒を蒸発させ、水を加えた(pH=5〜6)。混合物をNaHCO3でpH=8まで塩基性化し、ジエチルエーテルで抽出した。水層をHCl 1NでpH=1まで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機層を乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して化合物#13を得た。
【０２５１】
アニリニウム塩をMontchamp等(J.Am.Chem.Soc.、2001年、123、510〜511頁)の手順で合成した。
【０２５２】
灰白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ6.54(d,J=16.8Hz,1H)、7.46(d,J=549.8Hz,1H)、7.57(d,J=13.6Hz,1H)、7.71(m,3H)、31P NMR(d6-DMSO,121.49MHz)δ15.56、MS(ES-)m/z=208。
【０２５３】
13から11への反応:
ピリジン(1当量)を、強力に攪拌されている、ジクロロメタン(2ml/ミリモル)中のアルキルクロロホルメート(1当量)及びアリールホスフィン酸12(1当量)の溶液に室温で注意深く加えた。沸騰が停止したら、溶液を15分間還流させ、次いで室温に冷却した。その溶液を0.1M塩酸(1ml/ミリモル)に注加し、有機層を分離した。水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した後、溶媒を真空下で除去して化合物#11を得た。白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ2.40(s,3H)、3.71(d,J=12.2Hz,3H)、6.58(d,J=16.8Hz,1H)、7.52(d,J=576,0Hz,1H)、7.63(d,J=14.0Hz,1H)、7.71(d,J=16.8Hz,1H)、7.80(m,2H)、MS(ES-)m/z=222。
【化２６】
2010504978.tif 000035
2010504978.tif 000036
【０２５４】
7から8への反応:
アルゴン雰囲気下、ジメチルホルムアミド(4.4mL/ミリモル)中でのインドール7(1.0当量)の攪拌溶液にヨウ素(1.98当量)及び水酸化カリウム(1.0当量)を加えた。反応混合物を3時間攪拌した。水(8.8ml/ミリモル)を加えて反応混合物をクエンチし、沈殿した生成物をろ過し、乾燥した。この固形物を再度反応条件(アルゴン雰囲気下で、ジメチルホルムアミド(4.4mL/ミリモル)、ヨウ素(0.4当量)及び水酸化カリウム(0.2当量)、1時間攪拌)にかけて、残る出発原料を転換させた。水(8.8ml/ミリモル)を加えて反応混合物をクエンチし、沈殿した生成物をろ過し、乾燥して3-ヨードインドール8を得た。ベージュ色の固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.39(t,J=7.2Hz,3H)、4.40(q,J=7.2Hz,2H)、7.35〜7.42(m,2H)、12.66(s,1H)、19F NMR(d6-DMSO,376MHz)δ-126.87、MS(ESI-)m/z=366.13(M-H)-100%、368.15(M-H)-35%。
【０２５５】
8から9への反応:
窒素雰囲気下、ジクロロメタン(3.5mL/ミリモル)中でのインドール8(1当量)の攪拌溶液にジ-tert-ブチルジカーボネート(1.8当量)及び4-ジメチルアミノピリジン(2当量)を加えた。反応混合物を18時間攪拌し、次いでリン酸緩衝液(pH=7)を加え、ジクロロメタンで抽出した。一緒にした有機層を乾燥し(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:1/1)で精製してN-Boc-保護インドール9を得た。白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.35(t,J=7.1Hz,3H)、1.57(s,9H)、4.39(q,J=7.1Hz,2H)、7.64(dd,J=7.3及び9.1Hz,1H)、7.90(d,J=9.1Hz,1H)、19F NMR(d6-DMSO,377MHz)δ-126.9、MS(ESI、El+)m/z=490(M+Na+)。
【０２５６】
9から10への反応:
N2で脱ガスしたDMF、N-Boc3-ヨードインドール9(1当量)、H-アリールホスフィネート11(1.1当量)、トリエチルアミン(2当量)及びPd2dba3(0.2当量)の攪拌溶液を、TLC又はHPLC分析で判断して反応が終了するまで70℃又は90℃で加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:8/2)で精製してインドールホスフィネート10(いくらかの脱保護インドールも含む)を得た。白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.34(t,J=7.1Hz,3H)、1.62(s,9H)、2.35(s,3H)、3.66(d,J=11.6Hz,3H)、4.37(q,J=7.1Hz,2H)、6.51(d,J=16.7Hz,1H)、7.58〜7.65(m,2H)、7.69〜7.77(m,3H)、7.94(d,J=9.5Hz,1H)、19F NMR(d6-DMSO,377MHz)δ-116.0(s,.1F)、31P NMR(d6-DMSO,162MHz)δ23.42(s,1P)、MS(ESI、El+)m/z=561(M+H+)。
【０２５７】
12から13への反応::
ヨードアリール12(1当量)、ジメチルホルムアミド(1ml/ミリモル)、トリエチルアミン(3当量)及びアニリニウム次亜リン酸塩*(1.25当量)を圧力管に入れ、N2で15分間脱ガスした。次いで、パラジウムテトラキスを加え、この混合物を85℃で終夜攪拌した。
【０２５８】
溶媒を蒸発させ、水を加えた(pH=5〜6)。混合物をNaHCO3でpH=8まで塩基性化し、ジエチルエーテルで抽出した。水層をHCl 1NでpH=1まで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機層を乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して化合物#13を得た。
【０２５９】
アニリニウム塩をMontchamp等(J.Am.Chem.Soc.、2001年、123、510〜511頁)の手順で合成した。
【０２６０】
灰白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ6.54(d,J=16.8Hz,1H)、7.46(d,J=549.8Hz,1H)、7.57(d,J=13.6Hz,1H)、7.71(m,3H)、31P NMR(d6-DMSO,121.49MHz)δ15.56、MS(ES-)m/z=208。
【０２６１】
13から11への反応:
ピリジン(1当量)を、強力に攪拌されている、ジクロロメタン(2ml/ミリモル)中のアルキルクロロホルメート(1当量)及びアリールホスフィン酸13(1当量)の溶液に室温で注意深く加えた。沸騰が停止したら、溶液を15分間還流させ、次いで室温に冷却した。その溶液を0.1M塩酸(1ml/ミリモル)に注加し、有機層を分離した。水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した後、溶媒を真空下で除去して化合物#11を得た。白色固体。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ2.40(s,3H)、3.71(d,J=12.2Hz,3H)、6.58(d,J=16.8Hz,1H)、7.52(d,J=576,0Hz,1H)、7.63(d,J=14.0Hz,1H)、7.71(d,J=16.8Hz,1H)、7.80(m,2H)、MS(ES-)m/z=222。
【０２６２】
この実施例の特定の化合物を以下のスキーム及び方法で調製した。
【化２７】
2010504978.tif 000037
【化２８】
2010504978.tif 000038
【０２６３】
方法AD
アルゴン雰囲気下で、インドール10(1当量)を加えたフラスコに、ヨウ素(1.98当量)、固体水酸化カリウム(1当量)及び無水DMF(4.5mL/ミリモル)を加えた。反応混合物を3時間攪拌し、次いで水を加え、スラリーをろ紙でろ過し、固体を減圧下で乾燥し、水の中で数回摩砕/ろ過し、減圧下で乾燥して3-ヨードインドール61を得た。
【０２６４】
方法AE
窒素雰囲気下、ジクロロメタン(3.5mL/ミリモル)中でのインドール10(1当量)の攪拌溶液にジ-tert-ブチルジカーボネート(1.8当量)及び4-ジメチルアミノピリジン(2当量)を加えた。反応混合物を18時間攪拌し、次いでリン酸緩衝液(pH=7)を加え、ジクロロメタンで抽出した。一緒にした有機層を乾燥し(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:1/1)で精製してN-Boc-保護インドール62aを得た。
【０２６５】
方法AF
窒素雰囲気下、O℃(氷浴)に冷却したDMF(3.5mL/ミリモル)中でのインドール10(1当量)の攪拌溶液に、水素化ナトリウム(1.2当量)を滴下した。ガスの発生が停止するまで反応混合物を15分間攪拌し、4-メトキシベンジルクロリドを滴下した。反応混合物を18時間攪拌し、次いで0℃で少量の水を加えた。反応媒体を水/リン酸緩衝液(pH=7)で希釈した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を水で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:98/2〜1/1)で精製してN-p-メトキシベンジル-保護インドール62bを得た。
【０２６６】
方法AG
N2雰囲気下でのDMF(2ml/ミリモル)中のエチルインドール-2-カルボキシレート10(1当量)の攪拌冷却(約0℃に)溶液に、NaH(オイル中に60%、1.2当量)を滴下した。ガスの発生が停まったら、ベンゼンスルホニルクロリド(1.2当量)を加えた。反応混合物を約1時間(TLCで監視、溶離液:ジクロロメタン)攪拌し、次いで少量の水を注意深く加え、DMFを蒸発させた。粗製残留物を酢酸エチル中に溶解させ、水とブラインで洗浄した。乾燥し、溶媒を蒸発させた後、化合物を、シリカゲルを用いてクロマトグラフィー(溶離液::C6H12/EtOAc9/1〜7/3)で精製してN-フェニルスルホニルインドール62cを得た。
【０２６７】
方法AH
窒素雰囲気下、THF(3.5mL/ミリモル)中でのインドール10(1当量)の攪拌溶液にカリウムtert-ブトキシド(1.5当量)を加えた。反応混合物を15分間攪拌し、次いで塩化ベンゾイル(1.2当量)を加えた。反応混合物を18時間攪拌し、次いで水を加えた。THFを減圧下で蒸発させ、水層を酢酸エチルで3回抽出した。一緒にした有機層を乾燥し(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:3/1)で精製してN-Bz-保護インドール62dを得た。
【０２６８】
方法AI
N2で脱ガスしたDMF、N-保護3-ヨードインドール62(1当量)、H-アリールホスフィネート23(R=Me又はEt)(1.1当量)、トリエチルアミン(2当量)及びPd2dba3(0.2当量)の攪拌溶液を、TLC又はHPLC分析で判断して反応が終了するまで70℃又は90℃で加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::典型的には石油エーテル/EtOAc:8/2)で精製してインドールホスフィネート63を得た(PG=Bocである場合、Boc保護化合物と脱保護インドール化合物の混合物が得られることに留意されたい)。
【０２６９】
方法AJ
窒素雰囲気下でのTHF(5mL/ミリモル)中のブロモインドール11(1当量)の-90℃の冷却溶液(アセトン/液体窒素浴)に温度を約-90℃に保持しながら、n-ブチルリチウム(ヘキサン中に2.5M、1.1当量)を滴下した。添加が終了したら、同じ温度で反応媒体を5分間攪拌し、クロロジエチルホスファイト(1当量)を滴下した。反応物を-20℃まで加温し、次いで少量のブラインで迅速に洗浄した。次いで直ちに有機層をHCl 0.5Mの攪拌溶液に加え、混合物を1時間攪拌した。デカンテーションした後、水層をEtOAcで数回抽出した。一緒にした有機層を乾燥し(Na2SO4)、次いで減圧下で濃縮し、油性残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::DCM/EtOAc:95/5)で精製してインドール3-H-ホスフィネート64を得た。
【０２７０】
方法AL
N2雰囲気下、脱ガスしたアセトニトリル中のインドール3-H-ホスフィネート64又は65の溶液に、3-ヨード-5-メチル-シンナモニトリル(1.1当量)、Et3N(1当量)及びパラジウムテトラキス(トリフェニルホスフィン)(0.2当量)を加えた。反応が完了するまで(HPLCで監視して)、反応物を100℃で加熱した。反応物を冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させた。次いで粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィーで精製して3-H-ホスフィネート63又は66を得た。
【０２７１】
方法AM
圧力管中で、インドール3-H-ホスフィネート64(1当量)をメタノールに溶解させ、その溶液を0℃に冷却し、次いでアンモニアで飽和させた。次いで反応物を減圧下、50℃で18時間加熱した。冷却した後、溶媒を蒸発させた。水を加え、EtOAcで抽出した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、真空下で蒸発させた。残留物をアセトニトリル中で摩砕し、ろ過した後、3-H-ホスフィネートインドールカルボキサミド65を得た。
【０２７２】
中間体62b:
エチル1-(4-メトキシベンジル)-5-クロロ-3-ヨード-1H-インドール-2-カルボキシレート。
【化２９】
2010504978.tif 000039
【０２７３】
中間体62bを方法AFにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.33(t,J=7.1Hz,3H)、3.67(s,3H)、4.35(q,J=7.1Hz,2H)、5.73(s,2H)、6.82(d,J=8.7Hz,2H)、6.97(d,)、7.40(J=8.9及び2.1Hz,1H)、7.45(d,J=2.1Hz,1H)、7.72(d,J=8.9Hz,1H)。
【０２７４】
中間体62c:
エチル1-フェニルスルホニル-5-クロロ-3-ヨード-1H-インドール-2-カルボキシレート。
【化３０】
2010504978.tif 000040
【０２７５】
中間体62cを方法AGにより合成した。1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.40(t,3H)、4.50(br q,2H)、7.45(s,1H)、7.52〜7.80(m,4H)、8.00(m,3H)。MS(ESI、El-)m/z=488(M-H+)。
【０２７６】
中間体62d:
エチル1-ベンゾイル-5-クロロ-3-ヨード-1H-インドール-2-カルボキシレート。
【化３１】
2010504978.tif 000041
【０２７７】
中間体62dを方法AHにより合成した。淡黄色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.03(t,J=9.4Hz,3H)、3.88(q,J=9.4Hz,2H)、7.52〜7.71(m,8H)。MS(ESI、El+)m/z=476(M+Na+)、MS(ES-)m/z=452。
【０２７８】
中間体62e
メチル1-フェニルスルホニル-5-クロロ-4-フルオロ-3-ヨード-1H-インドール-2-カルボキシレート。
【化３２】
2010504978.tif 000042
【０２７９】
中間体62eを方法AGにより合成した。ベージュ色の固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.41(t,J=7.2Hz,3H)、4.51(q,J=7.2Hz,2H)、7.63〜7.71(m,3H)、7.78〜7.82(m,1H)、7.89〜7.91(d,1H)、8.00〜8.03(m,2H)、19F NMR(d6-DMSO,376MHz)δ-125.60(d,1F)。MS(ESI-)m/z=506.12(M-H)-30%、380.21(M-I)-100%、382.21(M-I)-35%。
【０２８０】
中間体62h:
メチル1-(4-メトキシベンジル)-4-フルオロ-5-クロロ-3-ヨード-1H-インドール-2-カルボキシレート。
【化３３】
2010504978.tif 000043
【０２８１】
中間体62hを方法AFにより合成した。
【０２８２】
白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.31(t,J=7.1Hz,3H)、3.67(s,3H)、4.34(q,J=7.1Hz,2H)、5.68(s,2H)、6.82(d,J=8.6Hz,2H)、6.96(d,J=8.6Hz,2H)、7.45(dd,J=7.0及び9.2Hz,1H)、7.59(d,J=8.8Hz,1H)、19F NMR(d6-DMSO,377MHz)δ-126.1(s,1F)。MS(ESI、El+)m/z=487。
【０２８３】
化合物63b:
1-ベンゼンスルホニル-5-クロロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル]ホスフィノイル-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化３４】
2010504978.tif 000044
【０２８４】
化合物63bを方法AIにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.33(t,J=7.1Hz,3H)、2.65(s,3H)、3.69(d,J=11.7Hz,3H)、4.41(m,2H)、6.52(d,J=16.7Hz,1H)、7.53(dd,J=9.0及び2.2Hz,1H)、7.62(d,J=13.6Hz,1H)、7.60〜7.71(m,3H)、7.76〜7.81(m,3H)、7.85(d,J=2.2Hz,1H)、8.04〜8.09(m,3H)。MS(ES+)m/z=583(MH+)
化合物63c:
1-(4-メトキシベンジル)-5-クロロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル]ホスフィノイル-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化３５】
2010504978.tif 000045
【０２８５】
化合物63cを方法AIにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-アセトン400MHz)δ1.18(t,J=7.1Hz,3H)、2.39(s,3H)、3.74(s,3H)、3.76(d,J=11.4Hz,3H)、4.26(m,2H)、5.63(s,2H)、6.35(d,J=16.8Hz,1H)、6.86(d,J=8.6Hz,2H)、7.14(d,J=8.6Hz,2H)、7.35(dd,J=9.0及び2.2Hz,1H)、7.61(d,J=16.8Hz,1H)、7.67(dd,J=8.9及び1.9Hz,1H)、7.69(s,1H)、7.75(d,J=13.2Hz,1H)、7.91(d,J=13.2Hz,1H)、8.24(d,J=2.2Hz,1H)。MS(ES+)m/z=563(MH+)。
【０２８６】
化合物63f:
1-(tert-ブチルカルバメート)-5-クロロ-4-フルオロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル-5-メチルフェニル]ホスフィノイル)-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化３６】
2010504978.tif 000046
【０２８７】
化合物63fを方法AIにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.34(t,J=7.1Hz,3H)、1.62(s,9H)、2.35(s,3H)、3.66(d,J=11.6Hz,3H)、4.37(q,J=7.1Hz,2H)、6.51(d,J=16.7Hz,1H)、7.58〜7.65(m,2H)、7.69〜7.77(m,3H)、7.94(d,J=9.5Hz,1H)、19F NMR(d6-DMSO,377MHz)δ-116.0(s,.1F)、31P NMR(d6-DMSO,162MHz)δ23.42δ(s,1P)。MS(ESI、El+)m/z=561(M+H+)。
【０２８８】
化合物63g:
5-クロロ-4-フルオロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル]ホスフィノイル-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化３７】
2010504978.tif 000047
【０２８９】
化合物63gを方法AIにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.24(t,J=7.1Hz,3H)、2.35(s,3H)、3.58(d,J=11.6Hz,3H)、4.24(q,J=7.2Hz,2H)、6.49(d,J=16.7Hz,1H)、7.38〜7.82(m,6H)、13.19(bs,1H)、19F NMR(d6-DMSO,376MHz)δ-115.0(s,1F)、31P NMR(d6-DMSO,162MHz)δ25.24(s,1P)。MS(ESI、El+)m/z=461(M+H+)。
【０２９０】
化合物63h:
1-(4-メトキシベンジル)-5-クロロ-4-フルオロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル-5-メチルフェニル]ホスフィノイル)-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化３８】
2010504978.tif 000048
【０２９１】
化合物63hを方法AIにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.20(t,J=7.1Hz,3H)、2.35(s,3H)、3.61(d,J=11.6Hz,3H)、3.70(s,3H)、4.28(q,J=7.1Hz,2H)、5.43(d,J=16.2Hz,1H)、5.48(d,J=16.2Hz,1H)、6.48(d,J=16.7Hz,1H)、6.88(d,J=8.7Hz,2H)、7.12(d,J=8.7Hz,2H)、7.46(dd,J=6.8及び8.8Hz,1H)、7.55〜7.79(m,5H)、19F NMR(d6-DMSO,377MHz)δ-116.7(s,1F)、31P NMR(d6-DMSO,162MHz)δ24.55(s,1P)。MS(ESI、El+)m/z=581(M+H+)。
【０２９２】
中間体64a:
1-ベンゼンスルホニル-5-クロロ-3-エトキシヒドロゲノホスフィニル-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化３９】
2010504978.tif 000049
【０２９３】
中間体64aを方法AJにより合成した。淡黄色粘性油状物、1H NMR(d6-DMSO,300MHz)δ1.25(t,J=7.2Hz,3H)、1.37(t,J=7.2Hz,3H)、4.1(m,2H)、4.46(q,J=7.2Hz,3H)、7.58(dd,J=9.0及び2.1Hz,1H)、7.71(m,2H)、7.80(d,J=609.6Hz,1H)、7.83(m,1H)、7.97(d,J=2.1Hz,1H)、8.11(m,3H)、31P NMR(d6-DMSO,162MHz)δ13.43。MS(ES+)m/z=456(MH+)。
【０２９４】
中間体64b:
1-ベンゼンスルホニル-5-クロロ-4-フルオロ-3-エトキシヒドロゲノホスフィニル-1H-インドール-2-カルボン酸メチルエステル。
【化４０】
2010504978.tif 000050
【０２９５】
中間体64bを方法AJにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,300MHz)δ1.20(t,J=6.9Hz,3H)、3.99(s,3H)、4.03(m,2H)、4.10(m,2H)、7.70(m,4H)、7.71(m,2H)、7.79(dd,J=616.8及び4.8Hz,1H)、7.84(m,1H)、7.96(m,1H)、31P NMR(d6-DMSO,121.49MHz)δ12.42(JP-F=12.6Hz)。MS(ES+)m/z=460(MH+)。
【０２９６】
化合物63f:
5-クロロ-3-[エチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル]ホスフィノイル-1H-インドール-2-カルボン酸エチルエステル。
【化４１】
2010504978.tif 000051
【０２９７】
化合物63fを方法ALにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.09(t,J=7.1Hz,3H)、1.26(t,J=7.0Hz,3H)、2.34(s,3H)、3.99(m,2H)、4.16(m,2H)、6.48(d,J=16.5Hz,1H)、7.39(dd,J=8.8及び2.2Hz,1H)、7.59(m,2H)、7.71(m,3H)、8.39(d,J=2.2Hz,1H)、12.93(brs,1H)。MS(ES+)m/z=597(MH+)。
【０２９８】
中間体65a:
-5-クロロ-3-メトキシヒドロゲノホスフィニル-1H-インドール-2-カルボキサミド。
【化４２】
2010504978.tif 000052
【０２９９】
中間体65aを方法AMにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,300MHz)δ3.71(d,J=12.6Hz,3H)、7.35(dd,J=8.7及び2.1Hz 1H)、7.60(dd,J=8.7及び1.8Hz 1H)、7.85(d,J=2.1Hz 1H)、7.99(dd,J=616.8及び5.4Hz 1H)、8.00(brs,1H)、9.28(brs,1H)、12.71(brs,1H)、31P NMR(d6-DMSO,121.49MHz)δ22.38。MS(ES-)m/z=271(M-H)。
【０３００】
中間体65b:
5-クロロ-4-フルオロ-3-メトキシヒドロゲノホスフィニル-1H-インドール-2-カルボキサミド。
【化４３】
2010504978.tif 000053
【０３０１】
中間体65bを方法AMにより合成した。白色固体、1H NMR(d6-DMSO,300MHz)δ3.72(d,J=13.2Hz,3H)、7.45(m,2H)、7.99(dd,J=616.8及び5.4Hz 1H)、8.08(brs,1H)、9.96(brs,1H)、13.0(brs,1H)、31P NMR(d6-DMSO,121.49MHz)δ22.79(dd,J=28.8及び4.6Hz)。MS(ES-)m/z=289(M-H)。
【０３０２】
化合物66a:
5-クロロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル]ホスフィノイル-1H-インドール-2-カルボキサミド。
【化４４】
2010504978.tif 000054
【０３０３】
化合物66aを方法ALにより合成した。白色固体、1H NMR(CDCl3,300MHz)δ2.40(s,3H)、3.88(d,J=11.7Hz,3H)、5.89(d,J=16.5Hz,1H)、5.97(brs,1H)、7.33〜7.67(m,7H)、10.46(s,1H)、10.89(brs,1H)、31P NMR(CDCl3,121.49MHz)δ31.54。MS(ES+)m/z=414(MH+)。
【０３０４】
化合物66b:
5-クロロ-4-フルオロ-3-[メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル]ホスフィノイル-1H-インドール-2-カルボキサミド。
【化４５】
2010504978.tif 000055
【０３０５】
化合物66bを方法ALにより合成した。白色固体、1H NMR(CDCl3,300MHz)δ2.42(s,3H)、3.88(d,J=12.0Hz,3H)、6.38(d,J=16.5Hz,1H)、7.20(brs,1H)、7.42(dd,J=8.8及び6.7Hz,1H)、7.61〜7.66(m,2H)、7.74(m,2H)、7.89(m,1H)、11.24(s,1H)、12.07(brs,1H)、31P NMR(CDCl3,121.49MHz)δ30.29,19F NMR(d6-DMSO,282.4MHz)δ-115.0。MS(ES+)m/z=432(MH+)。
【化４６】
2010504978.tif 000056
【０３０６】
窒素雰囲気下でのDMF(7mL/ミリモル)中の3-ヨード-5-クロロインドール2-カルボン酸(1当量)の溶液に、HOBt(1当量)、(R)又は(S)-α-メチル-p-メトキシベンジルアミン(1当量)を加え、最後にEDCl(1当量)を加えた。反応媒体を18時間攪拌し、次いで水を加えた。沈殿した固体をろ過し、水で濯ぎ、EtOAcで可溶化させてNa2SO4で乾燥し、減圧下で蒸発させた。粗製残留物を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:95/5〜8/2)で精製してインドール4a又は4bを得た。
【０３０７】
4a:5-クロロ-3-ヨード-N-((S)-1-(4-メトキシフェニル)エチル)-1H-インドール-2-カルボキサミド。灰白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.48(d,J=7.0Hz,3H)、3.73(s,3H)、5.10(m,1H)、6.90(d,J=8.8Hz,2H)、7.27(dd,J=8.7及び2.0Hz,1H)、7.35〜7.38(m,3H)、7.45(d,J=8.7Hz,1H)、8.37(d,J=7.6Hz,1H)、12.15(brs,1H)、MS(ES+)m/z=455(MH+)。
【０３０８】
4b:5-クロロ-3-ヨード-N-((R)-1-(4-メトキシフェニル)エチル)-1H-インドール-2-カルボキサミド:白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.48(d,J=7.0Hz,3H)、3.73(s,3H)、5.10(m,1H)、6.90(d,J=8.8Hz,2H)、7.27(dd,J=8.7及び2.1Hz,1H)、7.35〜7.38(m,3H)、7.45(d,J=8.7Hz,1H)、8.37(d,J=7.7Hz,1H)、12.20(brs,1H)、MS(ES+)m/z=455(MH+)。
【化４７】
2010504978.tif 000057
【０３０９】
N2で脱ガスしたDMF、3-ヨードインドール4b(1当量)、H-アリールホスフィネート#11(1.1当量)、トリエチルアミン(2当量)及びPd2dba3(0.2当量)の攪拌溶液を、TLC又はHPLC分析で判断して反応が終了するまで70℃で加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。得られたジアステレオ異性体を、シリカゲルを用いてフラッシュクロマトグラフィー(溶離液::石油エーテル/EtOAc:9/1〜1/1)で分離してホスフィネート5c及び5dを順次得た。
【０３１０】
5c:(SP)-メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル(2-((R)-1-(4-メトキシフェニル)エチルカルバモイル)-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-3-ホスフィネート:白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.48(d,J=6.8Hz,3H)、2.24(s,3H)、3.73(s,3H)、3.75(d,J=11.8Hz,3H)、5.14(m,1H)、6.52(d,J=16.8Hz,1H)、6.91(d,J=8.5Hz,2H)、7.30(dd,J=8.5及び2.1Hz,1H)、7.36(d,J=8.5Hz,2H)、7.56(dd,J=8.8及び1.5Hz,1H)、7.61(m,2H)、7.48(dd,J=2.2及び8.9Hz,1H)、7.70(d,J=16.8Hz,1H)、7.77(s,1H)、7.80(d,J=13.0Hz,1H)、11.12(d,J=6.8Hz,1H)、12.76(brs,1H)、MS(ES+)m/z=548(M+H+)。
【０３１１】
5d:(RP)-メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル(2-((R)-1-(4-メトキシフェニル)エチルカルバモイル)-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-3-ホスフィネート:白色固体、1H NMR(d6-DMSO,400MHz)δ1.48(d,J=7.1Hz,3H)、2.24(s,3H)、3.72(s,3H)、3.79(d,J=11.5Hz,3H)、5.14(m,1H)、6.42(d,J=16.5Hz,1H)、6.85(d,J=8.5Hz,2H)、、7.31(dd,J=2.1及び8.8Hz,1H)、7.34(d,J=8.5Hz,2H)、7.44(d,J=13.2Hz,1H)、7.58(m,2H)、7.70(m,3H)、11.11(brs,1H)、12.77(brs,1H)、MS(ES+)m/z=548(M+H+)。
【０３１２】
化合物(SP)-66a:
窒素雰囲気下、-15℃(NaCl/氷浴)に冷却した、アセトニトリル中の(SP)-5c(1当量)の溶液に、次いで水の中の硝酸セリウムアンモニウム(7.5当量)を滴下した。反応物をこの温度で30分間攪拌した。反応媒体をEtOAc及び水で希釈した。有機層を水、次いでブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、減圧下で蒸発させた。粗製試料のキラルHPLCは、化合物の一つだけの鏡像異性体66a:(S)-メチル3-((E)-2-シアノビニル)-5-メチルフェニル(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-3-ホスフィネートだけの存在を示した。分析データは上記に示した。
【０３１３】
或いは、上記したようにH-アリールホスフィネートでパラジウムカップリングする前に、インドール4をN-保護することができる。N-保護ジアストレオマーを分離した後、任意選択で純粋なカルボキサミド6を、インドールN-保護基及びキラル部分の逐次的除去によって得ることができる。
【実施例２】
【０３１４】
式I/IIの3-ホスホインドールの2-カルボキシル誘導体の化学的分割を、280.82gの1について、(-)-シンコニジン2(スキーム15、所要の鏡像異性体を得るため。キラルHPLC分析による第一の溶出異性体)及び(+)-シンコニン3(ろ液から望まない鏡像異性体を除去するために用いることができる。キラルHPLC分析による第二の溶出異性体)を用いて実施した。
【化４８】
2010504978.tif 000058
【０３１５】
1.280.82gスケールのラセミ酸についての最初の分割
第一の分割:(-)-シンコニジン2を用いる
シールしたフラスコ中で、インドール1の遊離酸(280.83g、675.61モル、スキーム15)をアセトン(4.2L)に懸濁させ、室温で攪拌した。(-)-シンコニジン2(198.89g、675.61ミリモル)を一括添加し、1時間後、透明溶液が得られた。さらに1時間後、白色固体の沈殿が観察され、懸濁液を室温でさらに2時間(合計4時間)攪拌した。この後、沈殿した固体をろ別し、アセトン(200mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して198.5gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=96:4)及び308.4gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=20:80)を得た。
【０３１６】
塩の酸開裂
部分的に分割された、インドール1の塩(198.5g、キラルHPLC分析による純度96:4)を酢酸エチル(3L)と1N HCl(3L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(2L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して、部分的に分割された酸を灰白色固体(107.34g、キラルHPLC分析による純度、比=95:5)として得た。
【０３１７】
第二の分割:(-)-シンコニジン2を用いる
シールしたフラスコ中で、部分的に分割された酸インドール1(107.34g、258.78ミリモル、キラルHPLC分析による純度、比=95:5)をアセトン(1.07L)に懸濁させ、室温で攪拌した。(-)-シンコニジン2(76.18g、258.78ミリモル)を一括添加し、1時間後、透明溶液が得られた。さらに1時間後、白色固体の沈殿が観察され、懸濁液を室温でさらに2時間(合計4時間)攪拌した。この後、沈殿した固体をろ別し、アセトン(200mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して199.07gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=98.6:1.4)及び13.83gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=55:45)を得た。
【０３１８】
塩の酸開裂
分割された塩(199.07g、キラルHPLC分析による純度、比=98.6:1.4)を酢酸エチル(3L)と1N HCl(3L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(2L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して、分割された酸を灰白色固体(98.08g、キラルHPLC分析による純度、比=98.6:1.4)として得た。
【０３１９】
1H NMR(d6-DMSO,400MHz):δ2.33(3H,s,Ar-CH3)、3.70(3H,d,J 11.72Hz,P-OCH3)、6.50(1H,d,J 16.84Hz,CH=CHCN)、7.34(1H,dd,J 1.95Hz,J 8.79Hz)、7.57(1H,d,J 8.56Hz)、7.62〜7.79(3H,m)、7.82〜7.85(1H,m又はd,J 13.43Hz)、7.98(1H,m)、13.02(1H,s,CO2H)、14.36(1H,br-s,NH);31P NMR(d6-DMSO,161.8MHz):δ33.42;m/z(ES+)415(M+H)+。
【０３２０】
回収
したがって、98.08gの所要の酸鏡像異性体が単離された(280.83gのラセミ酸からの利用可能な酸鏡像異性体140.42gに対して70%の回収率)。一緒にした二つの分割体4のろ液からのさらなる322.25gの塩(308.4g+13.85g)を、さらに処理してより多くの所要鏡像異性体を回収した。
【０３２１】
2.ろ液からの回収
塩の酸開裂
部分的に分割された塩4(322.25g)を一緒にして、酢酸エチル(4.8L)と1N HCl(4.8L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した(スキーム16)。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(4L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して部分的に分割された酸を灰白色固体(169.75g、キラルHPLC分析による純度、比=22:78)として得た。
【化４９】
2010504978.tif 000059
【０３２２】
第一の分割:(+)-シンコニン3を使用
シールしたフラスコ中で、部分的に分割された酸インドール(169.75g、409.25モル、キラルHPLC分析による純度、比=22:78)をアセトン(3.06L)に懸濁させ、室温で攪拌した。(+)-シンコニン3(120.48g、409.25ミリモル)を一括添加し、1時間後、透明溶液が得られた。5分後、白色固体の急速な沈殿が観察された。懸濁液が粘性であったため、アセトン(1.14L-用いたアセトンの合計体積=4.2L)を追加して、反応混合物を室温でさらに3時間(合計4時間)攪拌した。この後、沈殿した固体をろ別し、アセトン(150mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して324.2gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=4.5:95.5)及び80.71gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=77:23)を得た。
【０３２３】
望まない鏡像異性体を得るための塩の酸開裂
部分的に分割された塩(324.2g、キラルHPLC分析による純度、比=4.5:95.5)を酢酸エチル(4.8L)と1N HCl(4.8L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(3L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して、分割された酸を灰白色固体(122.14g、キラルHPLC分析による純度、比=3.5:96.5)として得た。
【０３２４】
1H NMR(d6-DMSO,400MHz):δ2.33(3H,s,Ar-CH3)、3.70(3H,d,J 11.72Hz,P-OCH3)、6.50(1H,d,J 16.84Hz,CH=CHCN)、7.34(1H,dd,J 1.95Hz,J 8.79Hz)、7.57(1H,d,J 8.56Hz)、7.62〜7.79(3H,m)、7.82〜7.85(1H,m又はd,J 13.43Hz)、7.98(1H,m)、13.02(1H,s,CO2H)、14.36(1H,br-s,NH);31P NMR(d6-DMSO,161.8MHz):δ33.42 m/z(ES+)415(M+H)+。
【０３２５】
ろ液から所要の鏡像異性体を得るための塩の酸開裂
部分的に分割された塩(80.71g、キラルHPLC分析による純度、比=77:23)を酢酸エチル(1.21L)と1N HCl(1.21L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(1L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して、部分的に分割された酸を灰白色固体(46.97g、キラルHPLC分析による純度、比=77:23)として得た。
【０３２６】
第二の分割:(-)-シンコニジン2を使用
シールしたフラスコ中で、部分的に分割された酸インドール(46.97g、113.24ミリモル、キラルHPLC分析による純度、比=77:23)をアセトン(470mL)に懸濁させ室温で攪拌した。(-)-シンコニジン2(33.34g、113.24ミリモル)を一括添加し、1時間後、透明溶液を得た。さらに1時間後、白色固体の沈殿が観察され、懸濁液を室温でさらに2時間(合計4時間)攪拌した。沈殿した固体をろ別し、アセトン(100mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して48.5gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=97.5:2.5)及び33.7gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=39:61)を得た。
【０３２７】
ろ液から所要の鏡像異性体を得るための塩の酸開裂
部分的に分割された塩(48.5g、キラルHPLC分析による純度、比=97.5:2.5)を酢酸エチル(728mL)と1N HCl(728mL)の混合液に懸濁させ、室温で3時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(700mL)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して分割された酸を灰白色固体(25.87g、キラルHPLC分析による純度、比=97.4:2.6)として得た。
【０３２８】
1H NMR(d6-DMSO,400MHz):δ2.33(3H,s,Ar-CH3)、3.70(3H,d,J 11.72Hz,P-OCH3)、6.50(1H,d,J 16.84Hz,CH=CHCN)、7.34(1H,dd,J 1.95Hz,J 8.79Hz)、7.57(1H,d,J 8.56Hz)、7.62〜7.79(3H,m)、7.82〜7.85(1H,m又はd,J 13.43Hz)、7.98(1H,m)、13.02(1H,s,CO2H)、14.36(1H,br-s,NH);31P NMR(d6-DMSO,161.8MHz):δ33.42;m/z(ES+)415(M+H)+。
【０３２９】
回収
したがって、ろ液から25.87gの所要の鏡像異性体が回収された。
【０３３０】
所要の酸鏡像異性体の全回収量:-
98.08g+25.87g=123.95g(280.83gのラセミ酸から可能な140.42gのうちの)=88%の収率。
【実施例３】
【０３３１】
式III/IVの3-ホスホインドールの化学的分割
式III/IVの遊離酸インドールの分割をここまで、(-)-シンコニジン2を用いて432.6gの5について実施した。このプロセスを以下のスキーム17に示す。
【化５０】
2010504978.tif 000060
【０３３２】
実験手順
1.432.6gスケールのラセミ酸に対する最初の分割
分割:(-)-シンコニジン2を使用
シールしたフラスコ中で、遊離酸インドール5(432.6g、1.0モル)をアセトン(7.79L)に懸濁させ、室温で攪拌した。(-)-シンコニジン2(294.39g、1.0モル)を一括添加し、懸濁液を室温で4時間攪拌した。この後、固体(沈殿は観察されず、このスケールでは懸濁状態は常に維持された)をろ過により単離し、アセトン(300mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して343.2gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=98:2)及び420.52gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=9:91)を得た。
【０３３３】
塩の酸開裂
部分的に分割されたインドール5の塩(343.2g、キラルHPLC分析による純度98:2)を酢酸エチル(5.2L)と1N HCl(5.2L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(2.7L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して分割された酸を灰白色固体(145.44g、キラルHPLC分析による純度、比=98.4:1.6)として得た。
【０３３４】
1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.35(3H,s,Ar-CH3)、3.78(3H,d,POCH3)、6.52(1H,d,CH=CHCN)、7.46(2H,d,Ar-H)、7.66(1H,d,CH=CHCN)、7.69,7.81(2H,2×d,H-6,H-7)、7.77(1H,s,Ar-H)、13.63(1H,s,N-H)、15.70(1H,br-s,COOH);31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):36.44(1P,s);19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-114.27(1F,s);m/z(ESI+):433.0(MH+、100%)、435.0(MH+、35%)。
【０３３５】
回収
したがって、145.44gの所要の酸鏡像異性体が単離された(432.6gのラセミ酸からの216.3gの利用可能な酸鏡像異性体に対して68%の回収率)。ろ液からのさらなる420.52gの塩を、さらに処理してより多くの所要鏡像異性体を回収した。
【０３３６】
2.ろ液からの回収
塩の酸開裂
部分的に分割して一緒にした塩4(420.52g)を、酢酸エチル(6.31L)と1N HCl(6.31L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した(スキーム18)。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(3L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して部分的に分割された酸を灰白色固体(222.7g、キラルHPLC分析による純度、比=9:91)として得た。
【化５１】
2010504978.tif 000061
【０３３７】
第一の分割:(+)-シンコニン3を使用
シールしたフラスコ中で、部分的に分割された酸インドール(222.7g、409.25モル、キラルHPLC分析による純度、比=9:91)をアセトン(4.38L)に懸濁させ、室温で攪拌した。(+)-シンコニン3(120.48g、409.25ミリモル)を一括添加し、1時間後、透明溶液が得られた。5分後、白色固体の急速な沈殿が観察された。懸濁液が粘性であったため、アセトン(0.5L用いたアセトンの合計体積=4.88L)を追加して、反応混合物を室温でさらに3時間(合計4時間)攪拌した。この後、沈殿した固体をろ別し、アセトン(400mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して360.6gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=3:97)及び58.32gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=84:12)を得た。
【０３３８】
望まない鏡像異性体を得るための塩の酸開裂
部分的に分割された塩(360.6g、キラルHPLC分析による純度、比=3:97)をジクロロメタン(5.4L)と1N HCl(5L)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層をジクロロメタン(2L)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して分割された酸を灰白色固体(210.0g、キラルHPLC分析による純度、比=2:98)として得た。
【０３３９】
1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.35(3H,s,Ar-CH3)、3.78(3H,d,POCH3)、6.52(1H,d,CH=CHCN)、7.46(2H,d,Ar-H)、7.66(1H,d,CH=CHCN)、7.69、7.81(2H,2×d,H-6,H-7)、7.77(1H,s,Ar-H)、13.63(1H,s,N-H)、15.70(1H,br-s,COOH);31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):36.44(1P,s);19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-114.27(1F,s);m/z(ESI+):433.0(MH+、100%)、435.0(MH+、35%)。
【０３４０】
ろ液から所要の鏡像異性体を得るための塩の酸開裂
部分的に分割された塩(58.32g、キラルHPLC分析による純度、比=84:12)をジクロロメタン(875mL)と1N HCl(875mL)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層をジクロロメタン(400mL)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して部分的に分割された酸を灰白色固体(36.65g、キラルHPLC分析による純度、比=88:12)として得た。
【０３４１】
第二の分割:(-)-シンコニジン2を使用
シールしたフラスコ中で、部分的に分割された酸インドール(36.65g、85.0ミリモル、キラルHPLC分析による純度、比=88:12)をアセトン(367mL)に懸濁させ、室温で攪拌した。(-)-シンコニジン2(25.02g、85.0ミリモル)を一括添加し、1時間後、透明溶液が得られた。さらに1時間後、白色固体の沈殿が観察され、懸濁液を室温でさらに2時間(合計4時間)攪拌した。沈殿した固体をろ別し、アセトン(100mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して24.92gの固体(キラルHPLC分析による純度、比=99:1)及び36.65gのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=49:51)を得た。
【０３４２】
ろ液から所要の鏡像異性体を得るための塩の酸開裂
部分的に分割された塩(24.92g、キラルHPLC分析による純度、比=99:1)をジクロロメタン(374mL)と1N HCl(374mL)の混合液に懸濁させ、室温で2時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗に移し、層を分離させた。水層をジクロロメタン(200mL)でさらに抽出し、生成物を含む有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して分割された酸を灰白色固体(13.02g、キラルHPLC分析による純度、比=99:1)として得た。
【０３４３】
1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.35(3H,s,Ar-CH3)、3.78(3H,d,POCH3)、6.52(1H,d,CH=CHCN)、7.46(2H,d,Ar-H)、7.66(1H,d,CH=CHCN)、7.69、7.81(2H,2×d,H-6,H-7)、7.77(1H,s,Ar-H)、13.63(1H,s,N-H)、15.70(1H,br-s,COOH);31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):36.44(1P,s);19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-114.27(1F,s);m/z(ESI+):433.0(MH+、100%)、435.0(MH+、35%)。
【０３４４】
回収
したがって、ろ液から13.02gの所要鏡像異性体が回収された。
【０３４５】
所要の酸鏡像異性体の全回収量:-
145.44g+13.02g=158.46g(432.6gのラセミ酸から可能な216.3gのうちの)=73%の収率。
【０３４６】
3-ホスホインドール6の遊離酸の分割を、95%EtOH(スキーム19)中の(1R,2S)-エフェドリン7及び(1S,2R)-エフェドリン半水和物8を用いて、1.02gの化合物において実施した。この分割の考え方は、シンコニジン塩基を用いる上記の分割と同じである。
【化５２】
2010504978.tif 000062
【実施例４】
【０３４７】
1.第一の分割:(1R,2S)-(-)-エフェドリン7を使用
シールしたフラスコ中で、遊離酸3-ホスホインドール6(1.2g、3.17ミリモル)を95%エタノール(12mL)に懸濁させ、室温で攪拌した。(1R,2S)-(-)-エフェドリン7(0.52g、3.17ミリモル)を一括添加し、5分間攪拌した後、透明溶液が得られた。さらに5分後、白色固体の急速な沈殿が観察され、室温で攪拌を3時間続行した。この後、沈殿した固体をろ別し、95%エタノール(2mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して558mgの沈殿固体(キラルHPLC分析による純度、比=14:86)及び706mgのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=74:26)を得た。
【０３４８】
第二の分割
シールしたフラスコ中で、6の部分的に分割された塩(558mg、キラルHPLC分析による純度14:86)を95%エタノール(12mL)に懸濁させ、室温で3時間攪拌した。この後、固体をろ過により単離し、95%エタノール(2mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して236mgの固体(キラルHPLC分析による純度、比=1:99)及び197mgのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=25:75)を得た。
【０３４９】
塩の酸開裂
6の分割された塩(236mg、キラルHPLC分析による純度1:99)を酢酸エチル(7mL)と1N HCl(7mL)の混合液に懸濁させ、室温で3時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗(フラスコからその混合物を移すのに追加の酢酸エチル(3mL)及び1N HCl(3mL)を要した)に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(2×6mL)でさらに抽出し、有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して分割された酸を白色固体(106mg、キラルHPLC分析による純度、比=1:99、[α]D=-59.1°)として得た。
【０３５０】
1H NMR(d6-DMSO,400MHz):δ2.27(6H,s,2×Ar-CH3)、3.71(3H,d,J 11.72Hz,P-OCH3)、7.2〜7.30(1H,m)、7.35〜7.45(m,3H)、7.57〜7.6(m,1H)、7.78〜7.79(m,1H)、12.99(1H,s,CO2H)、14.73(1H,br-s,NH);31P NMR(d6-DMSO,161.8MHz):δ35.41;m/z(ES+)378(M+H)+。
【０３５１】
2.第一の分割:(1S,2R)-(+)-エフェドリン8を使用
シールしたフラスコ中で、遊離酸インドール6(1.2g、3.17ミリモル)を95%エタノール(12mL)に懸濁させ、室温で攪拌した。(1S,2R)-(+)-エフェドリン8(0.55g、3.17ミリモル)を一括添加し、5分後に透明溶液が得られた。5分後、白色固体の急速な沈殿が観察され、攪拌を室温で3時間続行した。この後、沈殿した固体をろ別し、95%エタノール(0.5mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して618mgの沈殿固体(キラルHPLC分析による純度、比=94:6)及び840mgのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=25:75)を得た。
【０３５２】
第二の分割
シールしたフラスコ中で、部分的に分割された塩(618mg、キラルHPLC分析による純度94:6)を95%エタノール(12mL)に懸濁させ、室温で3時間攪拌した。この後、固体をろ過により単離し、95%エタノール(0.5mL)で洗浄した。ろ液を真空下で濃縮し、沈殿した固体とろ液からの残留物の両方を真空下で終夜乾燥して250mgの固体(キラルHPLC分析による純度、比=100:0)及び127mgのろ液(キラルHPLC分析による純度、比=85:15)を得た。
【０３５３】
塩の酸開裂
6の分割された塩(250mg、キラルHPLC分析による純度100:0)を酢酸エチル(7mL)と1N HCl(7mL)の混合液に懸濁させ、室温で3時間強力に攪拌した。この後、反応混合物を漏斗(フラスコからその混合物を移すのに追加の酢酸エチル(3mL)及び1N HCl(3mL)を要した)に移し、層を分離させた。水層を酢酸エチル(2×6mL)でさらに抽出し、有機性抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して分割された酸を白色固体(108mg、キラルHPLC分析による純度、比=100:0、[α]D=+59.2°)として得た。
【０３５４】
1H NMR(d6-DMSO,400MHz):δ2.27(6H,s,2×Ar-CH3)、3.71(3H,d,J 11.72Hz,P-OCH3)、7.2〜7.30(1H,m)、7.35〜7.45(m,3H)、7.57〜7.6(m,1H)、7.78〜7.79(m,1H)、12.99(1H,s,CO2H)、14.73(1H,br-s,NH);31P NMR(d6-DMSO,161.8MHz):δ35.41;m/z(ES+)378(M+H)+。
【０３５５】
回収
(1R,2S)-エフェドリン7又は(1S,2R)-エフェドリン半水和物8を用いてラセミ酸6からの総合回収率は18%である。プロセスの最適化は行っていない。
【実施例５】
【０３５６】
3-ホスホインドールのキラル合成
キラル中心が完全に保持されるか又は完全に逆転している、光学的に純粋な中間体を用いた合成。この場合、クロスカップリングに使用する塩基(例えば、Et3N)は、出発のH-Pホスフィネートのラセミ化が起こるほどには強くない(DKRプロセスとは対照的に)。クロスカップリング反応は、立体配置を維持しながら進行する。トリアルキルオキソニウム塩を用いたメンチルホスフィネートの開裂、続く酸性処理は、立体配置の逆転を伴って進行する(J.Org.Chem 1975年、1523〜1525頁)。この方法をスキーム20に示す。
【化５３】
2010504978.tif 000063
【０３５７】
メンチルホスフィネート化合物の調製は、アリールハライド又はトリフラートから二つのステップで実施される(スキーム21)。第一のステップは、Montchamp等、J.Am.Chem.Soc.2001年、123:510〜511頁及びMontchamp等、J.Organomet.Chem.2002年、643〜644:154〜163頁の研究などに記載されている方法によるH-ホスフィン酸の調製である。第二のステップは、Tetrahedron Lett.2003年、781〜783頁に記載されているものなどのヒューイット(Hewitt)反応である。
【化５４】
2010504978.tif 000064
【０３５８】
メンチルホスフィネートを合成する第二のアプローチは、やはりアリールハライドから出発して、文献から得られる方法でジクロロホスファイトを生成する(スキーム22)。次いで、J.Am.Chem.Soc.1967年、90、3459〜3465頁に記載されているようにして(-)又は(+)-メントールの攻撃により、メンチルホスフィネートをジアステレオマー混合物として得る。
【化５５】
2010504978.tif 000065
【０３５９】
ジアストレオマーの分離は、J.Am.Chem.Soc.1970年、92、5809〜5810頁、Heteroatom Chemistry 1995年、6、365〜70頁、Russ.J.Gen.Chem.2005年、75、656〜657頁に記載されている条件を用いるか、又はそれに適合させた結晶化によって実施される(スキーム23)。
【化５６】
2010504978.tif 000066
【０３６０】
スキーム24及び25は、このアプローチを用いた式I及びIIIの3-ホスホインドールのキラル合成を示す。
【化５７】
2010504978.tif 000067
【化５８】
2010504978.tif 000068
【０３６１】
鏡像異性体の分析的分離のためのキラルHPLC分析条件は以下の通りである。
【０３６２】
カラム:DAICEL CHIRALPAK(登録商標)AD-H 5um、250×4.6mm I.D.
移動相A:メタノール
移動相B:IPA+0.05重量%TFA
アイソクラチック:A/B(25/75)
流速:0.4ml/分
検出:PDA最大プロット210〜400nm
鏡像異性体1 RT=13.4分;鏡像異性体2 RT=19.6分。
【０３６３】
分取方法:
2gのラセミ混合物の注入(IM403):
カラム:DAICEL CHIRALPAK(登録商標)AD 20um、260×50mm I.D.
移動相:50エタノール/50メタノール/0.1ジエチルアミン(体積/体積/体積)
流速:120ml/分
検出:UV320nm
鏡像異性体1 RT=7.0分;鏡像異性体2 RT=25.3分。
【０３６４】
鏡像異性的に純粋な3-ホスホインドールを合成する別のアプローチをスキーム49及び50に示す。
【０３６５】
予測された保持又は逆転が完遂されたか、又はジアステレオマーの混合物が認められるかどうかを確認するために、31P NMR及びHPLCによって各ステップについての立体制御効率の判定を行わなければならない。最も影響を受けるステップは、加熱を要するボラン脱保護と思われる。この段階のため、鏡像異性体の過剰さの測定に、キラル分析用HPLCカラムの使用が必要である。
【０３６６】
リンでの立体配置が各ステップで100%制御されている場合、選択される化学的経路よっては、単一の前駆体4でも二つの異なる鏡像異性体8又は12をもたらす可能性がある。
【実施例６】
【０３６７】
ジアステレオマー中間体の分割
鏡像異性的に純粋な3-ホスホインドールの調製のための他の方法は、キラル試薬を用いたインドールの官能化によるジアステレオマーの調製によるものである。ジアステレオマー性3-ホスホインドールを調製するためのキラルアミノ酸の使用をスキーム26に示す。α-アミノ酸炭素でのS-キラリティーは不変である。合成は以下のようにして実施する。
【化５９】
2010504978.tif 000069
【０３６８】
標準的シリカカラムを用いて二つのジアステレオマーを分離する。
【０３６９】
このストラテジーは、例えば鏡像異性的に純粋なベンジルアミンを用いて他のジアステレオマー性アミドを調製するために、或いは、ジアステレオマー分離した後、開裂して分離された鏡像異性体をもたらす可能性のあるアミドではなくジアステレオマー性エステルを調製するのに適用することができる。このアプローチを以下のスキーム27に示す。
【化６０】
2010504978.tif 000070
【実施例７】
【０３７０】
【化６１】
2010504978.tif 000071
【０３７１】
化合物Iの調製
【化６２】
2010504978.tif 000072
【０３７２】
パートA:3-ブロモ-インドール中間体の合成
【化６３】
2010504978.tif 000073
【０３７３】
オーバーヘッドスターラー、還流冷却器、加熱マントル、温度調節器、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた5Lの四ッ口丸底フラスコに、4-クロロ-3-フルオロアニリン(250.3g、1.719モル)を加えた。そのフラスコにn-ヘプタン(2000ml)及びジ-t-ブチル-ジカーボネート(450.3g、2.064モル)をチャージした。混合物をアルゴン雰囲気下、室温で15分間攪拌し、固体の大部分を溶解させた。アルゴン雰囲気下で、混合物を4時間還流加熱した(注意:CO2ガスの発生)。HPLC法試験20(THF:MeCN1:1)による反応混合物の分析によって、出発原料(Rt 4.57分)が、一つの生成物(Rt 6.17分)に完全に転換していることが示された。
【０３７４】
反応物を50〜55℃に冷却し、2分割して3Lの一口RBFに移した。真空下、45℃で合計1500mlの留分を濃縮除去して白色結晶を有する桃色の溶液を得た。このスラリーを攪拌しながら1.5時間で室温に冷却た。フラスコを4℃で15時間保持した後、真空下で結晶をろ過し、冷n-ヘプタン(400ml)で洗浄した。
【０３７５】
真空下、35℃で7時間乾燥した後、非常に微細な化合物102の白色結晶を得た(393.1g、93%収率)。化合物102:C11H13ClFNO2 245.68gモル-1。HPLC分析(試験20、MeCN):Rt6.16分;99%純度@254nm。m.p.:103〜104℃。1H NMRδH(400MHz,CDCl3):1.51(9H,s,3×CH3)、6.56(1H,br-s,N-H)、6.94、7.25、7.35(3×1H,3×m,3×Ar-H)。
【化６４】
2010504978.tif 000074
【０３７６】
オーバーヘッドスターラー、内温用プローブ、500ml添加漏斗及びアルゴン取り入れ口を備えた3Lの四ッ口丸底フラスコに、化合物102(80.2g、0.326モル)を加えた。無水テトラヒドロフラン(640ml)をフラスコにチャージし、反応の間、内温が常時-80℃<T<-75℃であることを確認しながら、ドライアイス浴と液体窒素を用いて冷却した。n-ブチルリチウム(405ml、1.011モル)を、アルゴンを満たした漏斗にカニューレで移し、液が跳ねるのを最小限に保ちながらこれを2時間かけてその溶液に滴下した。40分間熟成した後、無水テトラヒドロフラン中のヨウ素(289.9g、1.142モル)の溶液(430ml+100ml濯ぎ液)を、内温が-80℃<T<-75℃であることを確認しながら3時間かけて、冷反応混合物に滴下した。反応混合物を14時間かけて徐々に-30℃に加温し、続いて、HPLC法試験20(NaHSO3水溶液でクエンチし、MeCNで希釈し、次いでMeCN層をMeOHで希釈した試料)による分析によって、出発原料(Rt 6.17分、1.6%@254nm)がほぼ完全に一つの生成物(Rt 6.73分)に転換していることが示された。
【０３７７】
T<-10℃に保ちながら、NH4Cl(160mlの水に41.6g)の溶液を徐々に加え、続いてNaHSO3(560mlの水に184.8g)の溶液を加えた。クエンチした混合物を、1.5時間、攪拌しながら10℃に加温した。
【０３７８】
その混合物を一口フラスコに移した後、1370mlのTHF留分を除去し、水(500ml)を加えた。混合液を4℃で15時間強力に攪拌し、ろ過した。水(400ml)で洗浄した後、ベージュ色の固体を無色のろ液として得た。HPLCによればこれは生成物を含んでいなかった。
【０３７９】
固体を熱(65℃)エタノール(700ml)に溶解させ、熱時ろ過して不溶性物質を除去した(3.5g、HPLCによれば生成物は存在せず)。得られたろ液を真空下で、45℃で150mlまで濃縮した。その時点で固形物が沈殿し始めた。水(32ml)を混合物に滴下し、次いでこれを1.5時間かけて徐々に4℃に冷却した。真空下でろ過し、4℃エタノール:水2:1(250ml)で洗浄し、真空下、40℃で乾燥して化合物103を淡黄色固体(114.1g、94%収率)として得た。化合物103:C11H12ClFINO2 371.57gモル-1。HPLC分析(試験20、MeOH):Rt 6.73分;99%純度@272nm。m.p.:66〜67℃。1H NMRδH(400MHz,CDCl3):1.45(9H,s,3×CH3)、7.27(1H,dd,Ar-H)、7.55(1H,t,Ar-H)、8.70(1H,s,CON-H)。13C NMRδC(100MHz,CDCl3):28.04(C(CH3)3)、79.73(C(CH3)3)、86.23、86.49(C-I)、115.11、115.32(C-Cl)、122.35、122.38(C-N)、129.89(C-H)、140.99、141.02(C-H)、152.94(C=O)、155.47、157.87(C-F)。
【化６５】
2010504978.tif 000075
【０３８０】
オーバーヘッドスターラー、還流冷却器、水浴、250ml添加漏斗、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた3Lの四ッ口丸底フラスコに、化合物103(110.0g、0.296モル)を加えた。エタノール(900ml)をフラスコにチャージし、5℃に冷却した。内温を15℃より下に保持しながら塩酸(37%、145.9ml)を滴下した。
【０３８１】
混合物を2時間かけて50〜55℃に加温し、次いでHPLC法試験20(MeOH)により分析して、出発原料(Rt 6.73分)が、一つの生成物(Rt 5.44分)へ完全に転換していることが示された。反応物を5℃に冷却し、15℃より下に保持して、監視しながらpHが中性になるまでNaOH(1000ml水に80.0g、865mlを加えた)の溶液を徐々に加えた。混合物を一口フラスコに移し、4℃で15時間貯蔵した。
【０３８２】
合計970mlの留分を真空下、35℃で濃縮除去して、沈殿した固体を有する無色溶液を得た。スラリーを1時間かけて4℃に冷却し、次いで固体を真空下でろ過し、4℃のエタノール:水1:4(200ml)で洗浄した。真空下、35℃で72時間かけて乾燥した後、純度の低い化合物104(80g、99%収率、254nmで95%純度)を得た。
【０３８３】
固体を熱(60℃)エタノール(450ml)に溶解させ、熱時ろ過して微細な不溶性物質を除去した。得られたろ液を真空下、35℃で175mlまで濃縮し、次にその混合物に水(70ml)を3〜4時間かけて滴下し、これを4℃に徐冷し、さらに0.5時間攪拌した。真空下でろ過し、4℃エタノール:水3:2(100ml)で洗浄し、真空下、35℃で乾燥して化合物104をオレンジ色の針状物として(70.5g、88%収率、98%純度@272nm)得た。母液から、第二の収量分を淡黄色固体(272nmで4.6g、5%、98%の純度)として得た。合わせた収率=93%。化合物104:C6H4ClFIN 271.45gモル-1。HPLC分析(試験20、MeCN):Rt 5.44分;98%純度@272nm。m.p.:80.5〜81℃。ESI+ve:m/z 271.9[M+H]+65%;312.9[M+MeCN+H]+100%。1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):5.69(2H,s,2×N-H)、6.55(1H,d,Ar-H)、7.18(1H,t,Ar-H)。13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):70.97、71.24(C-I)、104.03、104.25(C-Cl)、110.14、110.17(C-H)、129.90(C-H)、150.09、150.14(C-N)、155.45、157.82(C-F)。19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-91.60(1F,d)
【化６６】
2010504978.tif 000076
【０３８４】
オーバーヘッドスターラー、還流冷却器、加熱マントル、温度調節器、250ml添加漏斗、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた2Lの四ッ口丸底フラスコに、化合物104(74.5g、0.275モル)を加えた。フラスコにN,N-ジメチルホルムアミド(575ml)を室温でチャージした。DABCO(95.5g、0.851モル)を一括添加すると、内温は15℃に低下した。混合物を20分間攪拌して溶解させ、その溶液中にアルゴンを10分間激しくバブリングさせて脱ガスした。その茶色の溶液にピルビン酸(57.33ml、0.824モル)を10分かけて加えた。内温は36℃に上昇した。溶液を再度アルゴンで10分間脱ガスし、酢酸パラジウム(678mg、0.0030モル)を一括添加した。
【０３８５】
混合物を100℃で3時間加熱し、その後、HPLC法試験20(MeCN、ろ過した)による分析によって、出発原料(Rt 5.44分)が、一つの生成物(Rt 3.64分)に完全に転換していることが示された。反応物を15時間かけて室温に、続いて5℃に冷却した。10℃より下に保持した状態で、pH=3.5になるまで「pH」を監視しながら、塩酸の溶液(1.15N、575ml、次いで0.115N、280ml)を徐々に加えた。溶液から黄褐色固体が沈殿した。この混合物を5℃でさらに0.5時間攪拌した。固体を真空下でろ過し、10℃の水(3×200ml)で洗浄した。真空下、40℃で36時間かけて乾燥した後、化合物105(55.9g、95%収率)を得た。化合物105:C9H5ClFNO2 213.59gモル-1HPLC分析(試験20、MeCN):Rt 3.63分;99%純度@272nm ESI -ve:m/z212.1[M-H]-10%;168.1[M-COOH]-100% 1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):7.10、7.11(1H,d,Ar-H)、7.25〜7.32(2H,m,2×Ar-H)、12.30、13.33(2×1H,2×s,N-H,COO-H)13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):102.45(C-3)、108.76、108.92(C-9)、110.20、110.24(C-6)、116.88、117.09(C-5)、125.46(C-7)、130.34(C-2)、137.90、138.00(C-8)、149.76、152.25(C-4)、162.12(C=O)19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-121.35(1F,d)。
【化６７】
2010504978.tif 000077
【０３８６】
オーバーヘッドスターラー、添加漏斗、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた5Lの四ッ口丸底フラスコに、化合物105(55.9g、0.262モル)を加えた。フラスコに、N,N-ジメチルホルムアミド(695ml)をアルゴン雰囲気下、室温でチャージし、20分間攪拌して褐色溶液を得た。カルボニルジイミダゾール(51.0g、0.314モル)を一括添加して茶色の懸濁液を得た。混合物をアルゴン雰囲気下、室温で1時間攪拌し、その後、HPLC法試験20(Meエステルを得るためのMeOH、ろ過した)による分析によって、出発原料(Rt 3.64分、0.5%)が、不完全にしか主生成物(Rt 5.48分)と中間体(Rt 4.77分)に転換していないことが示された。追加のカルボニルジイミダゾール(0.43g、0.0026モル)及びN,N-ジメチルホルムアミド(45ml)を加え、反応物をさらに2時間攪拌し、その後、HPLC法試験20(Meエステルを得るためのMeOH、ろ過した)による分析によって、出発原料(Rt 3.64分)が、生成物(Rt 5.48分)に完全に転換していることが示された。メタノール(297ml、7.34モル)を、アルゴン雰囲気下、24℃で攪拌反応混合物に加えて濁った茶色の懸濁液を得た。3時間後、HPLC法試験20(MeCN、ろ過した)による分析によって、一つの生成物(Rt 5.48分)が示された。氷浴で反応混合物を冷却し、内温を15〜20℃に保持しながら0.5時間かけて水(2000ml)を加えると黄褐色固体が沈殿した。固体を真空下でろ過し、5℃水(2×400ml)で洗浄した。空気乾燥した後、固体をジクロロメタン(800ml)及び酢酸エチル(1600ml)に取り、無水硫酸ナトリウム(400g)で乾燥した。セライト(Celite)でろ過し、ジクロロメタン(1000ml)で溶出させて透明なオレンジ色の溶液を得た。その溶液を真空下、30℃で濃縮すると、残留酢酸エチル(160ml)中の結晶のスラリーがもたらされた。スラリーを、氷浴で15分かけて5℃に冷却した。真空下でろ過し、4℃酢酸エチル:n-ヘプタン1:1(2×100ml)、次いで1:3(100ml)で洗浄し、真空下、35℃で乾燥して化合物6を細長い白色針状物として得た(37.3g、63%収率、99%純度@272nm)。母液から第二の収量分を、それほど白くない針状物として得た(5.3g、9%、272nmで98%の純度)。合わせた収率=72%。化合物106:C10H7ClFNO2 227.62gモル-1 HPLC分析(試験20、MeCN):Rt 5.48分;99%純度@272nm。
【０３８７】
m.p.:216.5〜218℃ 1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):3.88(3H,s,CH3)、7.16(1H,s,Ar-H)、7.27〜7.35(2H,m,2×Ar-H)、12.48(1H,s,N-H)13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):52.15(CO2CH3)、102.90(C-3)、108.97、109.12(C-9)、110.27、110.31(C-6)、116.77、116.98(C-5)、125.84(C-7)、128.82(C-2)、138.00、138.09(C-8)、149.77、152.26(C-4)、161.05(C=O)19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-121.11(1F,d)。
【化６８】
2010504978.tif 000078
【０３８８】
オーバーヘッドスターラー、氷浴、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた2Lの四ッ口丸底フラスコに、化合物106(46.5g、0.204モル)を加えた。フラスコに、無水N,N-ジメチルホルムアミド(450ml)をアルゴン雰囲気下、室温でチャージし、攪拌してオレンジ色の溶液を得た。内温を5℃より低く保持しながら、水素化ナトリウム(95%、7.30g、0.290モル)を45分かけて分割添加した。それ以上のガスの発生は認められなかった。内温を10℃より低く保持しながら、フェニルスルホニルクロリド(35.8ml、0.280モル)を15分かけて滴下した。反応物を1時間攪拌し、その後、HPLC法試験20(MeCN)による分析によって、出発原料(Rt 5.48分、272nmで4%)が、不完全にしか生成物(Rt 6.42分)に転換していないことが示された。水素化ナトリウム(95%、1.1g)とフェニルスルホニルクロリド(4.0ml)の追加分を加え、混合物をさらに1.5時間攪拌した。HPLC法試験20(MeCN)による分析によって、不完全にしか出発原料(Rt 5.48分、272nmで3%)が、生成物(Rt 6.43分)に転換していないことが示された。内温を20℃より低く保持しながら、水(770ml)を25分かけて徐々に加えて反応を仕上げると、黄色固体が沈殿してきた。固体を真空下でろ過し、5℃の水(770ml)で洗浄し、37℃で15時間乾燥した。固体をエタノール(700ml)に取り、攪拌しながら1時間で55℃に加温した。熱懸濁液を真空下、40℃で濃縮して350mlの留分を除去し、0.5時間で5℃に冷却した。真空下でろ過し、4℃エタノール(150ml)で洗浄し、真空下、40℃で乾燥して化合物107を淡黄色固体(68.5g、91%収率)として得た。化合物107:C16H11ClFNO4S 367.78gモル-1 HPLC分析(試験20、MeCN):Rt 6.43分;98%純度@272nm m.p.:163℃膨張し、166〜167℃で溶融。
【０３８９】
1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):3.88(3H,s,CH3)、7.51(1H,s,Ar-H)、7.62〜7.68(3H,m,3×Ar-H)、7.77(1H,t,Ar-H)、7.92(1H,d,Ar-H)、8.04(2H,d,Ar-H)13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):53.21(CO2CH3)、110.60(C-3)、112.30、112.34(C-6)、114.02、114.17(C-9)、117.93、118.14(C-5)、127.14(2×Ar-C)、128.78(C-7)、129.85(2×Ar-C)、132.29(C-2)、135.24(C-パラ)、136.82(C-イプソ)、136.88、136.96(C-8)、149.37、151.89(C-4)、160.51(C=O)19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-119.42(1F,d)。
【化６９】
2010504978.tif 000079
【０３９０】
オーバーヘッドスターラー、添加漏斗、氷浴、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた2Lの四ッ口丸底フラスコに、化合物107(68.4g、0.186モル)を加えた。フラスコに無水ジクロロメタン(685ml)を、アルゴン雰囲気下室温でチャージし、攪拌して部分懸濁液を得た。内温を10℃より低く保持しながら、臭素(11.5ml、0.223モル)を20分間かけて滴下して深紅色の混合物を得た。反応混合物を1時間かけて室温にし、その後、HPLC法試験20(NaHSO3水溶液でクエンチし、MeOHで希釈し、次いでMeOHろ過し、MeCNで希釈した試料)による分析によって、不完全にしか出発原料(Rt 6.43分、78%@272nm)が主生成物(Rt 6.76分)に転換していないことが示された。その後6時間かけて追加の臭素(12.4ml)を分割添加し、反応物を14時間室温で攪拌した。その時点で、HPLC法試験20(NaHSO3水溶液でクエンチし、MeOHで希釈し、次いでMeOHろ過し、MeCNで希釈した試料)による分析によって、出発原料(Rt 6.43分)が、一つの主生成物(Rt 6.76分)に完全に転換していることが示された。T<15℃に保持しながら、NaHSO3(400mlの水に132g)の溶液を30分間かけて滴下して反応物をクエンチした。層を分離し、有機層を重炭酸ナトリウム飽和水溶液(400ml×2)で洗浄した。水層をジクロロメタン(400ml)で抽出し、一緒にした有機層を水(1000ml)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム(500g)で乾燥した。ろ過し、真空下、28℃で濃縮して粗製の黄色固体(78g)を得た。この固体を、熱エタノール(650ml)中、50℃で1時間摩砕した。熱懸濁液を真空下、40℃で濃縮して450mlの留分を除去し、次いで0.5時間で5℃に冷却した。真空下でろ過し、4℃エタノール(150ml)で洗浄し、真空下、25℃で乾燥して化合物108を淡黄色粉末(72.6g、88%収率、272nmで93%純度)として得た。この固体を、50℃で1時間かけて熱酢酸エチル(500ml)に溶解した。エタノール(200ml)を50℃で徐々に加え、15分間攪拌した。沈殿が始まり、熱懸濁液を真空下、40℃で濃縮して475mlの留分を除去し、次いで0.5時間で5℃に冷却した。真空下でろ過し、4℃エタノール(150ml)で洗浄し、真空下25℃で乾燥して化合物108、メチル3-ブロモ-5-クロロ-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホニル-インドール-2-カルボキシレートを淡黄色粉末(57.4g、69%収率、272nmで97%の純度)として得た。母液から第二の生成物を黄色固体(9.6g、12%)として得た。合わせた収率=81%。メチル3-ブロモ-5-クロロ-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホニル-インドール-2-カルボキシレート化合物108:C16H10BrClFNO4S 446.68gモル-1 HPLC分析(試験20、MeCN):Rt 6.76分;97%純度@272nm ESI+ve:m/z447.8[M+H]+90%;464.8[M+NH4]+100%。
【０３９１】
ESI-ve:m/z445.9[M-H]-100% 1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):3.99(3H,s,CH3)、7.66(3H,t,3×Ar-H)、7.78(1H,t,Ar-H)、7.90(1H,d,Ar-H)、7.98(2H,d,2×Ar-H)13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):53.88(CO2CH3)、96.66(C-3)、111.87、111.90(C-6)、115.36、115.51(C-9)、117.29、117.45(C-5)、127.16(2×Ar-C)、129.40(C-7)、130.15(2×Ar-C)、130.45(C-2)、134.63、134.69(C-8)、135.46(C-パラ)、135.81(C-イプソ)、149.31、151.85(C-4)、160.30(C=O)19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-124.00(1F,d)。
【０３９２】
パートB:化合物Iの合成
【化７０】
2010504978.tif 000080
【０３９３】
適切な反応器に、化合物201(57g、0.12モル)及びテトラヒドロフラン(570ml)をチャージした。得られた溶液を、LN2/IPAスラッシュバスを用いて、窒素雰囲気下で-90℃〜-100℃に冷却し、次いでn-ブチルリチウム(ヘキサン中に2.5M、52ml、0.13モル)を10分かけて加えて処理した。これに10分かけてジエチルクロロホスファイト(20.5g、0.13モル)を加えた。HPLC(方法001、RT=17.7分)では約70%の生成物が示され、出発原料は示されなかった。次いで反応物を酢酸エチル(570ml)で希釈し、-40℃に加温した。次いでこの混合物を塩酸(0.5M、400ml)で処理し、周囲温度に加温し、30分間攪拌した。得られた層を分離し、その水溶液を酢酸エチル(500ml)で抽出した。有機物を一緒にし、ブライン(500ml)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して油状物を得た。不純物と溶媒のため、78%HPLC AUC(方法20、RT=5.6分)>100%の収率。そのまま次のステップで用いた。C-2-メチルエステルのデータ:#2x:C18H16ClFNO6PS 459.81gモル-1 m/z(ESI+):460.0(MH+、100%)、462.0(MH+、35%)。
【０３９４】
化合物203
適切な反応器に、化合物202(56g、0.10モルと推定)、ヨードシンナモニトリル(27g、0.10モル)、トリエチルアミン(17ml、0.12モル)及びトルエン(475ml)をチャージした。得られた混合物を、周囲温度で窒素流を10分間スパージングして脱ガスし、その後、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(6.0g、0.005モル)を加えた。混合物を、さらに5分間スパージングし、次いで80℃で2時間加熱した。HPLC(方法20、RT=6.2分)により、反応が完了していることが示された。混合物を周囲温度に冷却し、セライトでろ過し、酢酸エチル(1000ml)で洗浄した。一緒にした有機物をブライン(2×500ml)で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、170mlの体積に濃縮した。濃縮物を0℃に冷却し、1時間攪拌した。その間に、生成物が結晶化してきた。固体をろ過し、ヘキサン:トルエン(2:1、150ml)で洗浄した。乾燥して54gを得た。HPLC AUC85%(方法20)。
【０３９５】
次いで粗製の固体を、塩化メチレン中の25%酢酸エチルで溶出させてカラムクロマトグラフィーにより精製した。純粋な画分を集め、一緒にして化合物203、41gを得た。67%収率、96%HPLC AUC(方法試験20、RT=6.2分)。
【０３９６】
C-2-エチルエステルのデータ:#3:C29H25ClFN2O6PS 615.01gモル-1 1H NMRδH(400MHz,CDCl3):1.35(3H,t,PO2CH2CH3)、1.52(3H,t,CO2CH2CH3)、2.40(3H,s,Ar-CH3)、4.08〜4.20(2H,m,PO2CH2CH3)、4.61(2H,q,CO2CH2CH3)、5.90(1H,d,CH=CHCN)、7.33〜7.37(3H,m,2×Ar-H,CH=CHCN)、7.55(2H,a-t,2×Ar-H)、7.67(1H,a-t,Ar-H)、7.74〜7.79(3H,m,3×Ar-H)、8.13(2H,d,2×Ar-H)。
【０３９７】
C-2-メチルエステルのデータ:#3x:C28H23ClFN2O6PS 600.98gモル-1
m/z(ESI+):601.1(MH+、100%)、603.0(MH+、35%)1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):1.18(3H,t,CH3CH2OP)、2.34(3H,s,Ar-CH3)、4.02(5H,m,CH3CH2OP,CO2CH3)、6.47(1H,d,CH=CHCN)、7.54(1H,d,Ar-H)、7.62(1H,t,Ar-H)、7.72(1H,d,CH=CHCN)、7.70〜7.76(4H,m,4×Ar-H)、7.82(1H,t,Ar-H)、7.91(1H,d,Ar-H)、8.13(2H,d,2×Ar-H)。複数のδC値は、F及び/又はPのため、炭素シグナルが分割されていることを示している。13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):15.97、16.03(CH3CH2OP)、20.79(Ar-CH3)、53.88(CO2CH3)、61.73、61.79(CH3CH2OP)、98.39(CH=CHCN)、107.50、107.54(C)、108.95、108.99(C)、111.37、111.42(C)、115.47、115.63(C)、116.82、116.91、117.01、117.10(C)、118.43(CN)、127.44(SO2Ph,2×Cオルト)、127.91、128.02(C-H)、128.67(C-H)、130.27(SO2Ph,2×Cメタ)、131.21、131.41(C-H)、132.68(C)、133.29、133.40(C-H)、134.12、134.27(C)、134.55、134.63、134.72(C)、135.49(SO2Ph,Cイプソ)、136.09(SO2Ph,Cパラ)、139.10、139.25(C)、149.06、151.60(C-4)、149.51(CH=CHCN)、161.10(C=O)。19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-112.36(1F,d)。31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):23.49(1P,s)。
【０３９８】
化合物204
適切な反応器に、化合物203(41g、0.067モル)及び塩化メチレン(175ml)をチャージした。得られた溶液を0℃に冷却し、ブロモトリメチルシラン(46g、0.30モル)を15分かけて加えて処理した。次いで反応物を1.5時間かけて40℃に加温した。HPLC(方法20、RT=4.3分)により、反応が完了していることが示された。過剰のTMSBrを真空下で(40〜45℃)ストリッピングし、得られた粘着性の固体をDCM(200ml)に再懸濁させ、0℃に冷却した。塩化オキサリル(12ml、0.13モル)を15分間かけて加え、続いてN,N-ジメチルホルムアミド(1.0ml)を加えた。どちらも0℃で加えた。DMFを添加している間、ガス発生が認められた。周囲温度で1時間後、HPLC(方法20、RT=6.0分、注入する前にメタノールでクエンチした試料)により、反応が完了していることが示された。溶媒を再度ストリッピングして残留する塩化オキサリルを除去し、その混合物を塩化メチレン(100ml)に再懸濁させた。溶液を0℃〜5℃に冷却し、次いでメタノール(300ml)で処理し、周囲温度に加温した。2時間後、HPLCにより、反応が完了していることが示された(HPLC法20、RT=6.0分)。溶媒をストリッピングし、粗製の固体をそのまま次のステップで使用した。化合物204 48g、HPLC AUC91%、>100%収率(溶媒及び不純物のため)。
【０３９９】
C-2-エチルエステルのデータ:204:C28H23ClFN2O6PS 600.98gモル-1 1H NMRδH(400MHz,CDCl3):1.53(3H,t,CO2CH2CH3)、2.40(3H,s,Ar-CH3)、3.79(3H,d,POCH3)、4.61(2H,q,CO2CH2CH3)、5.90(1H,d,CH=CHCN)、7.33〜7.37(3H,m,2×Ar-H,CH=CHCN)、7.55(2H,a-t,2×Ar-H)、7.67(1H,a-t,Ar-H)、7.73〜7.79(3H,m,3×Ar-H)、8.13(2H,d,2×Ar-H)。
【０４００】
C-2-メチルエステルのデータ:204x:C27H21ClFN2O6PS 586.96gモル-1m/z(ESI+):587.1(MH+、100%)、589.0(MH+、35%)1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.33(3H,s,Ar-CH3)、3.66(3H,d,POCH3)、4.02(3H,s,CO2CH3)、6.47(1H,d,CH=CHCN)、7.53(1H,d,Ar-H)、7.61(1H,dd,Ar-H)、7.70(1H,d,CH=CHCN)、7.68〜7.76(4H,m,4×Ar-H)、7.82(1H,t,Ar-H)、7.90(1H,d,Ar-H)、8.13(2H,d,2×Ar-H)。複数のδC値は、F及び/又はPのため、炭素シグナルが分割されていることを示している。13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):20.81(Ar-CH3)、52.07、52.13(CH3OP)、53.99(CO2CH3)、98.46(CH=CHCN)、106.99(C)、108.41(C)、111.45(C-H)、115.51、115.67(C)、116.77、116.86、117.07(C)、118.48(CN)、127.51(SO2Ph,2×Cオルト)、127.92、128.04(C-H)、128.71(C-H)、130.32(SO2Ph,2×Cメタ)、131.56(C-H)、132.20(C)、133.35、133.46(C-H)、134.19、134.34(C)、134.55、134.63、134.72(C)、135.47(SO2Ph,Cイプソ)、136.16(SO2Ph,Cパラ)、139.20、139.35、139.39、139.54(C)、149.09、151.63(C-4)、149.51(CH=CHCN)、161.15(C=O)。19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-113.93(1F,d)。31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):25.42(1P,s)。
【０４０１】
化合物205
適切な反応器に、化合物204(48g、約0.072モル)及びテトラヒドロフラン(800ml)をチャージした。次いで得られた溶液を5℃に冷却し、水酸化リチウム一水和物(12g、028モル)及び水(180ml)を15分かけて加えて処理した。反応を周囲温度に加温した。その間に、色は薄くなった。終夜攪拌した後、HPLCにより、反応が完了していることが示された(方法試験20、生成物RT=4.5、主要不純物RT=3.7)。反応物を5℃に冷却し、塩酸(5N、300ml)で酸性化した。過剰THFを減圧下で蒸発させて除去し、得られた粘着性の固体をアセトン(200ml)にスラリー化した。混合物を40℃で30分かけて加温し、次いで静置して周囲温度に冷却した。固体を2時間で顆粒化させ、ろ過し、アセトン/水(2:1、100ml)で洗浄した。乾燥して化合物205、21gを得た。67%の収率。HPLC AUC93%(方法試験20)。これをそのまま次のステップで使用した。
【０４０２】
化合物206(キラル分割)
適切な反応器に、化合物205(432.6g、1.0モル)及びアセトン(7.79L)をチャージした。(-)-シンコニジン(294.39g、1.0モル)を一括添加し、得られた懸濁液を4時間攪拌した。固体をろ過により単離し、アセトン(300ml)で洗浄し、真空下で乾燥した後、343.2gの塩を得た。キラルHPLC分析比=98:2。
【０４０３】
この塩を酢酸エチル(5.2L)と1N HCl(5.2L)の混合液に懸濁させ、周囲温度で2時間強力に攪拌した。この後、層を分離した。水層を酢酸エチル(2.7L)でさらに抽出し、有機性抽出物を一緒にして硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して分割された化合物206を白色固体として得た。145.44g、68%の総括収率。キラルHPLC分析、比=98.4:1.6。そのまま次のステップで用いた。#6:C20H15ClFN2O4P 432.77gモル-1 m/z(ESI+):433.0(MH+、100%)、435.0(MH+、35%)。
【０４０４】
1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.35(3H,s,Ar-CH3)、3.78(3H,d,POCH3)、6.52(1H,d,CH=CHCN)、7.46(2H,d,Ar-H)、7.66(1H,d,CH=CHCN)、7.69、7.81(2H,2×d,H-6,H-7)、7.77(1H,s,Ar-H)、13.63(1H,s,N-H)、15.70(1H,br-s,COOH)。19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-114.27(1F,s)。31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):36.44(1P,s)。
【０４０５】
化合物I
適切な反応器に、化合物206(0.63g、0.0014モル)及び1,2-ジメトキシエタン(10ml)をチャージした。混合物を、1,1-カルボニルジイミダゾール(0.47g、0.0028モル)を一括添加して処理し、これを、ガス発生が停止するまで(約1.5時間)周囲温度で攪拌した。次いで溶液を5℃に冷却し、アンモニアガスを5分間スパージングした。周囲温度で1時間後、HPLC(方法20、生成物RT=5.0分)により、反応が完了していることが示された。10gの粉砕した氷を加えて反応物をクエンチし、減圧下で濃縮してDMEを除去した。得られたスラリーを5℃で1時間攪拌して生成物を顆粒化した。固体をろ過し、乾燥して純粋な化合物I((2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル)を得た。0.56g、89%の収率。HPLC(方法20)化学的純度98.5%。キラル純度97%。
【０４０６】
適切な反応器に、化合物206(10g、0.024モル)及び1,2-ジメトキシエタン(150ml)をチャージした。混合物を、1,1-カルボニルジイミダゾール(7.8g、0.048モル)を一括添加して処理し、これを、ガス発生が停止するまで周囲温度で攪拌した。次いで溶液を5℃に冷却し、アンモニアガスを5分間スパージングした。1時間後、HPLC(方法20、生成物RT=5.0分)により、反応が完了していることが示された。100gの粉砕した氷を加えて反応物をクエンチし、減圧下で濃縮してDMEを除去した。得られた油状の固形物(水の中)をメタノール(20ml)で希釈し、5℃で1時間攪拌して生成物を顆粒化した。固体をろ過し、乾燥して純粋な化合物I((2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル)を得た。9.8g、98%の収率。
【０４０７】
HPLC(方法20)化学的純度99.5%。キラル純度94.3%。白色固体。
【０４０８】
化合物I:C20H16ClFN3O3P 431.78gモル-1 m/z(ESI+):432.1(MH+、100%)、434.0(MH+、35%)ν最大(KBrディスク)(cm-1)1619.0(アミドI)、1672.5(アミドII)、2218.4(CN)、3063.0、3286.0(N-H)[α]D20:+33.42(c、CHCl3中に10.04mg ml-1)m.p.:177℃キラキラ光る、181℃で軟化、183〜185℃溶融 元素分析:C20H17ClN3O3P 計算値C 55.63%、H 3.73%、N 9.73%、Cl 8.21%、F 4.40%、P 7.17%。結果C 55.56%、H 3.74%、N 9.72%、Cl 8.24%、F 4.21%、P 7.11% 1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.32(3H,s,Ar-CH3)、3.70(3H,d,CH3OP)、6.49(1H,d,CH=CHCN)、7.37(1H,dd,H-6)、7.43(1H,dd,H-7)、7.54(1H,d,H-6')、7.66(1H,d,CH=CHCN)、7.69(1H,d,H-2')、7.73(1H,s,H-4')、8.05、10.63(2×1H,2×s,NH2)、13.02(1H,s,N-H)複数のδC値は、F及び/又はPのため、炭素シグナルが分割されていることを示している。13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):20.77(Ar-CH3)、51.70、51.76(CH3OP)、96.03、96.07、97.52、97.56(C-3)、98.29(CH=CHCN)、110.70(C-7)、111.66、111.83(C-5)、118.04、118.13、118.22、118.32(C-9)、118.56(CN)、125.84(C-6)、127.11,127.22(C-2')、131.05(C-4')、132.57、132.67(C-6')、132.96、134.50(C-1')、134.03、134.18(C-3')、136.40、136.51、136.61(C-8)、138.95、139.10(C-5')、141.71、141.91(C-2)、149.19、151.70(C-4)、149.65(CH=CHCN)、160.46(C=O)。19F NMRδF(376MHz,d6-DMSO):-113.11(1F,d)。31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):33.39(1P,s)。
【実施例８】
【０４０９】
【化７１】
2010504978.tif 000081
【化７２】
2010504978.tif 000082
【０４１０】
適切な反応器に、化合物301(100g、0.23モル)及びテトラヒドロフラン(1L)をチャージした。得られた溶液を、LN2/IPAスラッシュバスを用いて、窒素雰囲気下で-90℃〜-100℃に冷却し、次いでn-ブチルリチウム(ヘキサン中に2.5M、99ml、0.25モル)を10分かけて加えて処理した。これに10分かけてジエチルクロロホスファイト(37.1g、0.24モル)を加えた。HPLC(方法001、RT=18.9分)では約85%の生成物が示され、出発原料は示されなかった。反応物を酢酸エチル(1L)で希釈し、-40℃に加温した。次いでこの混合物を塩酸(0.5M、590ml)で処理し、周囲温度に加温し、30分間攪拌した。得られた層を分離し、その水溶液を酢酸エチル(500ml)で抽出した。有機物を一緒にし、ブライン(500ml)で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して油状物を得た。不純物と溶媒のため、88%HPLC AUC(方法20、RT=5.8分)115g、>100%収率であった。これをそのまま次のステップで用いた。
【０４１１】
化合物303
適切な反応器に、化合物302(111g、0.18モルと推定される)、ヨードシンナモニトリル(47.1g、0.175モル)、トリエチルアミン(29.3ml、0.21モル)及びトルエン(800ml)をチャージした。得られた混合物を、周囲温度で窒素流を10分間スパージングして脱ガスし、その後、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(10.1g、0.0088モル)を加えた。混合物を、さらに5分間スパージングし、次いで80℃で2時間加熱した。HPLC(方法20、RT=6.5分)により、反応が完了していることが示された。混合物を周囲温度に冷却し、セライトでろ過し、酢酸エチル(400ml)で洗浄した。一緒にした有機物をブライン(2×500ml)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し濃縮して350mlの体積にした。濃縮物を0℃に冷却し、1時間攪拌した。その間に生成物が沈殿してきた。固体をろ過し、ヘキサン:トルエン(2:1、150ml)で洗浄した。乾燥して95gを得た。90%収率、HPLC AUC98%(方法20)。これをそのまま次の反応で使用した。
【０４１２】
303:C29H26ClN2O6PS 597.02gモル-1 m/z(ESI+):597.0(MH+、100%)、599.0(MH+、35%)1H NMRδH(400MHz,CDCl3):1.38、1.48(2×3H,2×t,COOCH2CH3,POOCH2CH3)、2.41(3H,s,Ar-CH3)、4.09〜4.16(2H,m,POOCH2CH3)、4.52(2H,q,COOCH2CH3)、5.93(1H,d,CH=CHCN)、7.33〜7.38(3H,m,CH=CHCN,2×Ar-H)、7.52(2H,t,2×Ar-H)、7.64(1H,t,Ar-H)、7.74、7.77(2×1H,2×d,2×Ar-H)、7.85(1H,d,Ar-H)、7.94(1H,dd,Ar-H)、8.08(2H,d,2×Ar-H)1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):1.26、1.33(2×3H,2×t,COOCH2CH3,POOCH2CH3)、2.34(3H,s,Ar-CH3)、3.95〜4.10(2H,m,POOCH2CH3)、4.40(2H,q,COOCH2CH3)、6.52(1H,d,CH=CHCN)、7.52(1H,dd,Ar-H)、7.60〜7.84(8H,m,CH=CHCN,7×Ar-H)、8.07(3×1H,m,3×Ar-H)。
【０４１３】
化合物304
適切な反応器に、化合物303(537g、0.90モル)及び塩化メチレン(2.0L)をチャージした。得られた溶液を0℃に冷却し、ブロモトリメチルシラン(450g、2.9モル)を15分かけて加えて処理した。次いで反応物を1.5時間かけて40℃に加温した。HPLC(方法20、RT=4.4分)により、反応が完了していることが示された。過剰のTMSBrを真空下で(40〜45℃)ストリッピングし、得られた粘着性の固体をDCM(2.5L)に再懸濁させ、0℃に冷却した。塩化オキサリル(156ml、1.8モル)を15分間かけて加え、続いてN,N-ジメチルホルムアミド(13.7ml、0.18モル)を加えた。どちらも0℃で加えた。DMFを添加している間、ガス発生が認められた。1時間後、HPLC(方法20、RT=6.2分、注入する前に無水メタノールでクエンチした試料)により、反応が完了していることが示された。溶媒を再度ストリッピングして残留する塩化オキサリルを除去し、次いで混合物を0℃〜5℃で冷メタノール(3.0L)に再懸濁させ、周囲温度に加温した。2時間後、HPLCにより、反応が完了していることが示された(HPLC法20、RT=6.2分)。溶液を1.5Lの体積まで濃縮し、得られた薄いスラリーを0℃に冷却し、重炭酸ナトリウム(126g、3L水)の水溶液で希釈した。5℃で2時間後、生成物をろ過し、冷水/メタノール(2:1、1.5L)で洗浄し、次いで乾燥して500gの化合物304を得た。HPLC(方法20)純度92%であった。これをそのまま使用した。
【０４１４】
化合物305
適切な反応器に、化合物304(約280g、0.48モル)及びテトラヒドロフラン(2.8L)をチャージした。次いで得られた溶液を5℃に冷却し、水酸化リチウム一水和物(45g、1.07モル)を一括添加して処理した。反応物を周囲温度に加温し、その間に、色は薄くなり、白色沈殿物が生成した。終夜攪拌した後、HPLCによって、反応が不完全であることが示された(方法20、生成物RT=4.3、部分的に脱保護RT=5.1、主要不純物RT=3.8)。さらに10%LiOH-H2Oを追加したが、10時間後でも、部分的に脱保護された中間体が5%残留しており、3.8分での不純物ピークは約25%に増大した。反応物を5℃に冷却し、塩酸(5N、280ml)で酸性化し、次いで酢酸エチル(2L)で希釈した。層を分離し、水溶液を酢酸エチル(500ml)で抽出した。一緒にした有機物をブライン(1L)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮して粗製の油状固形物、化合物305を得た。約300g、HPLC AUC57%。
【０４１５】
粗製生成物を40℃でアセトニトリル(1.2L)に取り、生成物を水(1.2L)で摩砕した。得られたスラリーを5℃に冷却し、これを30分間顆粒化し、その後、生成物をろ過し、ACN:H2O(1:1、100ml)で洗浄した。約103g、HPLCで88%。次いで生成物を360ml ACNから40℃で再結晶化させ、360mlの水で同様に処理した。ろ過、洗浄し、乾燥して75gの化合物305を得た。HPLC AUC97%。これをそのまま次のステップで使用した。
【０４１６】
化合物306(キラル分割)
適切な反応器に、化合物305(280g、0.66モル)及びアセトン(4.2L)をチャージした。次いで得られた薄いスラリーを、(-)-シンコニジン(199g、0.66モル)を一括添加して処理した。1時間後、溶液が形成され、さらに1時間後、白色固体が沈殿してきた。この混合物をさらに2時間(合計4時間)攪拌し、その後、固体をろ過し、アセトン(200ml)で洗浄し、乾燥して199gの粗製の化合物306シンコニジン塩を得た。HPLCは96:4の異性体比を示した。
【０４１７】
次いで粗製の塩を酢酸エチル(3L)及び塩酸(1N、3L)にスラリー化した。二相の溶液を周囲温度2時間強力に攪拌した。層を分離し、水溶液を酢酸エチル(3L)で抽出した。有機物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して遊離塩基化合物306、107gを得た。キラルHPLCによれば95:5。
【０４１８】
次いで粗製の化合物306をアセトン(1.07L)に懸濁させ、(-)-シンコニジン(76g、0.26モル)で処理した。合計4時間攪拌した後(上記と同様)、固体をろ過し、アセトン(200ml)で洗浄し乾燥して199gの塩を得た。HPLC98.6:1.4。
【０４１９】
塩を、酢酸エチル(3L)及び塩酸(1N、3L)に溶解させた。二相の溶液を周囲温度で2時間攪拌した。層を分離し、水溶液を酢酸エチル(2L)で抽出した。有機物を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して遊離塩基化合物306、98gを得た。キラルHPLCによれば98.6:1.4。所望異性体の70%回収率、ラセミ化合物306からは35%収率。#6:C20H16ClN2O4P 414.78gモル-1 m/z(ESI+):415.1(MH+、100%)、417.0(MH+、35%)[α]D25:-47.51(c、EtOAc中に10.66mg ml-1)。
【０４２０】
[反対の鏡像異性体[α]D25:+47.26(c、EtOAc中に9.60mg ml-1)]1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.33(3H,s,Ar-CH3)、3.71(3H,d,CH3OP)、6.50(1H,d,CH=CHCN)、7.36(1H,dd,H-6)、7.57(1H,d,H-7)、7.66〜7.71(2H,m,H-4,Ar-Hオルト)、7.67(1H,d,CH=CHCN)、7.84(1H,d,Ar-Hオルト)、7.98(1H,s,Ar-Hパラ)、12.97(1H,s,N-H)、14.38(1H,br-s,COOH)複数のδC値は、Pのため、炭素シグナルが分割されていることを示している。13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):20.68(Ar-CH3)、51.70(CH3OP)、98.15(CH=CHCN)、102.33、103.85、114.98、120.91(3×C)、118.47(CN)、125.39(C)、126.78(C)、127.74、127.86(C-Hオルト)、129.78、129.88(C)、131.25(C)、132.06(C)、133.44、133.55(C)、133.89、134.05(C)、134.62、134.75(C)、135.47、135.66(C)、138.78、138.91(C)、149.62(CH=CHCN)、160.40(C=O)31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):33.50(1P,s)。
【０４２１】
化合物III
適切な反応器に、化合物306(0.63g、0.0014モル)及び1,2-ジメトキシエタン(10ml)をチャージした。混合物を、1,1-カルボニルジイミダゾール(0.47g、0.0028モル)を一括添加して処理し、これを、ガス発生が停止するまで(約1.5時間)周囲温度で攪拌した。次いで溶液を5℃に冷却し、アンモニアガスを5分間スパージングした。周囲温度で1時間後、HPLC(方法20、生成物RT=5.0分)により、反応が完了していることが示された。10gの粉砕した氷を加えて反応物をクエンチし、減圧下で濃縮してDMEを除去した。得られたスラリーを5℃で1時間攪拌して生成物を顆粒化した。固体をろ過し、乾燥して純粋な化合物III((2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル)を白色固体0.56gとして得た。89%の収率。HPLC(方法20)化学的純度98.5%。キラル純度97%。
【０４２２】
適切な反応器に、化合物306(10g、0.024モル)及び1,2-ジメトキシエタン(150ml)をチャージした。混合物を、1,1-カルボニルジイミダゾール(7.8g、0.048モル)を一括添加して処理し、これを、ガス発生が停止するまで周囲温度で攪拌した。次いで溶液を5℃に冷却し、アンモニアガスを5分間スパージングした。1時間後、HPLC(方法20、生成物RT=5.0分)により、反応が完了していることが示された。100gの粉砕した氷を加えて反応物をクエンチし、減圧下で濃縮してDMEを除去した。得られた油状固形物(水の中の)をメタノール(20ml)で希釈し、5℃で1時間攪拌して生成物を顆粒化した。固体をろ過し、乾燥して純粋な化合物III((2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル)を得た。9.8g、98%の収率。HPLC(方法20)化学的純度99.5%。キラル純度94.3%。化合物III:C20H17ClN3O3P 413.79gモル-1 m/z(ESI+):414.1(MH+、100%)、416.1(MH+、35%)νmax(KBrディスク)(cm-1)1620.0(アミドI)、1670.6(アミドII)、2218.7(CN)、3125.5、3291.9(N-H)[α]D20:-75.08(c、CHCl3中に9.04mgml-1)m.p.:144〜148℃不透明半固体へ転移、209〜210℃溶融、元素分析:C20H17ClN3O3P、計算値C 58.05%、H 4.14%、N 10.15%、Cl 8.57%、P 7.49%。結果C 58.13%、H 4.08%、N 10.16%、Cl 8.69%、P 7.44% 1H NMRδH(400MHz,d6-DMSO):2.32(3H,s,Ar-CH3)、3.74(3H,d,CH3OP)、6.52(1H,d,CH=CHCN)、7.30(1H,dd,H-6)、7.53〜7.58(3H,m,H-4,H-7,H-6')、7.68(1H,d,CH=CHCN)、7.73(1H,s,H-4')、7.75(1H,d,H-2')、8.02、10.15(2×1H,2×s,NH2)、12.80(1H,s,N-H)複数のδC値は、Pのため、炭素シグナルが分割されていることを示している。13C NMRδC(100MHz,d6-DMSO):20.77(Ar-CH3)、51.75、51.81(CH3OP)、98.39、98.91(C-3)、98.44(CH=CHCN)、115.05(C-7)、118.53(CN)、119.96(C-4)、124.73(C-6)、126.68(C-5)、127.15、127.26(C-2')、129.25、129.35(C-9)、131.37(C-4')、132.45、134.04(C-1')、132.69、132.80(C-6')、133.92(C-8)、134.30、134.44(C-3')、139.33、139.46(C-5')、139.96、140.17(C-2)、149.55(CH=CHCN)、160.65(C=O)31P NMRδP(162MHz,d6-DMSO):33.72(1P,s)。
【実施例９】
【０４２３】
化合物I-2-カルボン酸2(PR)のR鏡像異性体の再循環
【化７３】
2010504978.tif 000083
【０４２４】
無水DCM(300ml)中の出発鏡像異性体2(PR)(50.0g、120.8ミリモル)の冷却溶液(0〜5℃)に、塩化オキサリル(15.2ml、174.2ミリモル、1.5当量)を5分かけて滴下した。シリンジを用いて無水DMF(1.43ml、18.5ミリモル)を2分間かけて加えた。ガスの発生が認められた。得られた黄色の溶液をアルゴン雰囲気下、0〜5℃で攪拌しながら保持した。60分後、メタノールでクエンチした反応物の一定分量のHPLC分析により、出発酸化合物の10%だけが未反応であることが示された。さらに10分間攪拌した後、反応混合物を冷DCM(0〜5℃)(300ml)で希釈した。希釈混合液を急いで添加漏斗に移し、7分かけてNaOHの攪拌水溶液(1N、695ml)に加えた。添加が完了した時点で、クエンチした混合物の温度は(NaOH水溶液の出発温度の26.5℃から)33℃に上昇した。さらに3分間連続的に攪拌した後、液の上層をデカントした。下層(沈殿した塩を含む)を、減圧下で濃縮してDCMを除去した。残留物をアセトン(300ml)に取り、1N HCl(合計275mlを加えた)でpH4に酸性化した。得られた混合物を室温で30分間攪拌した。固体生成物をろ取し、その固体を1:1アセトン/脱塩(DI)水(100ml)で洗浄した。得られた固体を真空乾燥器で45℃で18時間かけて乾燥した。この第一の純収量分は=31.4gであった。化学的純度=HPLC(AUC)により98.4%。キラルHPLCの結果、2(PS)(51.7%)と2(PR)(47.5%)の混合物であることが示された。1H-NMRスペクトルにより、DCMを痕跡量しか含まない、きれいな生成物が示された。
【０４２５】
第一収集生成物の母液からの第二収集生成物の回収:母液に二つの層が存在していた。層を分離した。上層をDCM(400ml)で抽出した。第一収集母液の下層(茶色の油状物、HPLCによれば主に生成物)をトルエン(30ml)に取り、1N HCl(5ml)とブライン(15ml)の混合液で洗浄した。トルエン層をDCM抽出物と一緒にし、DI水(400ml)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去した。第二収集物質を減圧下で16時間乾燥した。純量=15.1g。HPLC(AUC)による化学的純度=90%。キラルHPLCの結果、2(PS)(91.4%)と2(PR)(8.6%)の混合物であることが示された。1H-NMRスペクトルにより、残留トルエン(5.3重量%)及び痕跡量の不純物を含む主生成物が示された。遊離酸の合計回収率(二つの鏡像異性体の混合物)=92%。
【０４２６】
化合物III-2-カルボン酸1(PR)のR鏡像異性体の再循環:
【化７４】
2010504978.tif 000084
【０４２７】
無水DCM(300ml)中の出発鏡像異性体1(PR)(50.0g、120.8ミリモル)の不透明な冷却(0〜5℃)溶液に、塩化オキサリル(15.7ml、180ミリモル、1.5当量)を5分かけて滴下した。2分かけて無水DMF(1.45ml、18.8ミリモル)をシリンジで加えた。ガスの発生が認められた。得られた黄色の溶液を、アルゴン雰囲気下、0〜5℃で攪拌しながら30分間保持した。次いで反応混合物をDCM(300ml)で希釈し、急ぎ添加漏斗に移した。希釈反応混合物をNaOHの攪拌水溶液(1N、725ml)に6分かけて加えた。添加が完了した時点で、クエンチした混合物の温度は(NaOH水溶液の出発温度の24.5℃から)33℃に上昇した。さらに5分間連続的に攪拌した後、クエンチした混合物を氷浴上に置いた。2分かけて添加漏斗で1N HCl(365ml)を加えた。得られた酸性化混合物(pH=2)を5分間攪拌した。分離漏斗を用いて層分離した。水溶液をDCM(200ml×2)でさらに抽出した。有機層とDCM抽出物を一緒にした。脱塩水(200ml)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下でDCMを除去した。粗生成物を真空乾燥器で42時間かけて乾燥した。純量=52.4g。HPLC(AUC)で化学的純度>97%。キラルHPLC結果により、1(PS)(64.1%)と1(PR)(35.9%)の混合物であることが示された。1H-NMRスペクトルにより、残留DCM(4.3重量%)及び痕跡量のDMFを含む、きれいな主生成物が示された。遊離酸(二つの鏡像異性体の混合物)の回収率=100%。
【実施例１０】
【０４２８】
ヨードシンナモニトリルの調製
【化７５】
2010504978.tif 000085
【０４２９】
3-ブロモ-5-メチル-ベンズアルデヒド(3)
オーバーヘッドスターラー、一つの250ml添加漏斗と一つの1L添加漏斗、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた3Lの四ッ口丸底フラスコに、無水トルエン(365ml)を加えた。内温を-15℃付近に保持するために、フラスコを氷/メタノール浴に浸漬させた。アルゴン雰囲気下、中程度の攪拌速度で、n-ブチルリチウム(ヘキサン中に2.5M、232ml、0.581モル)を、シリンジでフラスコに加えた。n-ブチルマグネシウムクロリド(THF中に2.0M、145ml、0.290モル、淡褐色溶液)を、アルゴン雰囲気下、シリンジで250ml添加漏斗に加えた。この溶液を22分かけて滴下した。その間に、内温は-16℃から-13℃へ上昇し、混合液は透明から不透明な淡黄色に変化した。溶液を-13℃で0.5時間さらに攪拌した。
【０４３０】
無水トルエン(1458ml)中の3,5-ジブロモトルエン(196g、0.784mol;Aldrich)の溶液を、アルゴン雰囲気下で2Lの一口丸底フラスコ中に調製した。この淡黄色の溶液を2分割して1L添加漏斗に移した。この溶液を50分かけて滴下した。その間、内温を-13℃〜-17℃の範囲に保持した。混合物は、濃い不透明な茶橙色になった。この懸濁液を、アルゴン雰囲気下、-13℃〜-17℃でさらに2.75時間攪拌した。2時間後HPLC試料を取り、2滴のメタノールを加え、続いて、減圧下で溶媒を除去して調製した。HPLC法試験20では、残留する出発原料(Rt 6.64分)と中間体の混合物(Rt 4.94分、6.15分、7.40分)は認められなかった。この懸濁液を「混合物A」と標記した。
【０４３１】
3,5-ジブロモトルエン添加の際、シリンジを用いて、オーバーヘッドスターラー、1L添加漏斗、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた5Lの四ッ口丸底フラスコに、無水N,N-ジメチルホルムアミド(78.7ml、1.016モル)を加えた。内温を-15℃付近に保持するために、フラスコを氷/メタノール浴に浸漬させた。アルゴン雰囲気下、中程度の攪拌速度で、シリンジで無水トルエン(91ml)をフラスコに加えた。この溶液を「混合物B」と標記した。
【０４３２】
混合物Aを、混合物Bを含む5Lフラスコの1L添加漏斗に2分割して(2×950ml)移した。過度な熱流入を避けるために、添加漏斗をアルミニウムホイルで包んだ。38分かけて混合物Aを滴下した。その間、内部反応温度を-16℃〜-12℃に保持した。反応液はオレンジ色の溶液になった。溶液をアルゴン雰囲気下、-13℃〜-16℃でさらに1時間攪拌した。その後、減圧下でトルエンを除去し、MeOHに溶解させ、不溶性物質をろ別してHPLC試料を調製した。HPLC法試験20により、一つの主生成物(Rt 5.42分)が示された。
【０４３３】
反応は完結していて、いつでもクエンチできる状態のようであった。
【０４３４】
1Lの円錐形フラスコ中に水(650ml)とクエン酸(341.54g)で調製した溶液を、内温を0℃より低く保持しながら、50mlに分けて、反応混合物に20分かけて徐々に加えた。この黄色の溶液を0℃でさらに20分間攪拌した。
【０４３５】
この後、クエンチした反応混合物を4Lの分離漏斗に移し、2層を分離した。有機層を水(650ml)と飽和ブライン(550ml)で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウム(500g)を加えて乾燥した。乾燥剤を真空ろ過により除去した。乾燥した有機層を2分割して3Lの丸底フラスコに移し、溶媒を高真空下、35℃で除去した。赤橙色の低粘性油状物3-ブロモ-5-メチル-ベンズアルデヒド(159.1g、102%収率)を得た。C8H7BrO 199.04gモル-1;HPLC:Rt 5.42分;96%純度@272nm; 1H NMRδH(400MHz,CDCl3):2.41(3H,s,CH3)、7.58、7.60、7.81(3×1H,3×s,3×Ar-H)、9.92(1H,s,CHO);13C NMRδC(100MHz,CDCl3):21.17(CH3)、123.27(C-3)、129.15、129.93(C-2,C-6)、138.06(C-1)、138.11(C-4)、141.33(C-5)、191.20(CHO)。
【０４３６】
3-ブロモ-5-メチル-シンナモニトリル(4)
オーバーヘッドスターラー、250ml添加漏斗、内温用プローブ及びアルゴン取り入れ口を備えた5Lの四ッ口丸底フラスコに、水素化ナトリウム(鉱油中に60%分散液、39.2g、0.980モル)を加えた。無水テトラヒドロフラン(2.6L)をアルゴン雰囲気下でフラスコに加え、中程度の速度で攪拌を開始して白色の不透明懸濁液を得た。ジエチルシアノメチルホスホネート(152.1ml、0.941モル、若干粘性の淡黄色液体)をアルゴン雰囲気下で250ml添加漏斗に入れた。56分かけて上記ホスホネートを滴下した。その間に、内温は21℃から29℃に上昇し、混合物は、不透明さのより弱まった(less opaque)、非常に淡い黄色の懸濁液になった。溶液をさらに1時間攪拌した。その間に、内温は29℃から22℃に低下し、混合液は淡黄色の透明溶液になった。
【０４３７】
3-ブロモ-5-メチル-ベンズアルデヒド(159g、0.784モル、定量的と見なす、赤色の油状物)をその3Lの丸底フラスコから250ml添加漏斗に注加しながら移した。フラスコを無水テトラヒドロフラン(3×5ml)で濯いだ。濯いだ3回分の無水テトラヒドロフラン液も添加漏斗に注加し、次いでこの漏斗をアルゴンでフラッシュした。アルゴン雰囲気下で71分かけてアルデヒドを滴下した。その間に、内温は20℃から33℃に上昇し、混合液は濃いオレンジ色の溶液になった。
【０４３８】
溶液をさらに2時間攪拌した。その間に、内温は32℃から19℃に低下した。THFで希釈して1時間で暗褐色のHPLC試料を調製した。HPLC法試験20によって、出発原料(Rt 5.42分)が、E:Z異性体の10:1の混合物(272nm、Rt 5.76分Z;Rt 5.83分E)である一つの主生成物に完全に転換していることが示された。
【０４３９】
塩酸(6N、21.66ml)及び水(2578.33ml)を4Lの円錐形フラスコ中で混合して0.05M HClの水溶液(2.6L)を得た。
【０４４０】
反応混合物をtert-ブチルメチルエーテル(0.5L)で希釈し、0.05M HCl水溶液(0.5L)でクエンチすると、内温は22℃に上昇した。部分的にクエンチした反応混合物を22L分離漏斗に移した。反応容器からの残留物を、tert-ブチルメチルエーテル(1.5L)、0.05M HCl水溶液(1.0L)、tert-ブチルメチルエーテル(2.0L)、0.05M HCl水溶液(1.1L)、tert-ブチルメチルエーテル(1.2L)で順次濯ぎながら分離漏斗に移した。これらの層を30秒攪拌し、一定期間ごとにガスを逃がし、水層を分離して22Lのフラスコに入れた。有機層を水(2.0L)で洗浄し、水層を一緒にした。有機層を無水硫酸ナトリウム(500g)で10分間乾燥し、次いで乾燥剤を真空下でろ別した。溶媒を減圧下で除去して淡黄色固体を得た。これを真空下30℃で終夜乾燥した。得られた粗製物質(200.2g)は、黄色粉末状の若干粘着性のある固体であった。
【０４４１】
内温用プローブ、500ml添加漏斗及びオーバーヘッドスターラーを備えた2Lの三ッ口丸底フラスコ中の粗製の黄色固体(200g)を、水浴に50℃で浸漬させてメタノール(700ml)に溶解した。溶解すると黄色固体は赤橙色の溶液になった。水浴を取り外し、水(250ml)を500ml添加漏斗に入れた。中程度の攪拌速度で3時間かけて水を滴下した。その間に、内温は50℃から25℃に低下した。5分後、50mlの水を加えると、赤橙色の溶液から黄色固体が沈殿し始めた。溶液中のE:Z異性体比を判定するためにHPLCで一定期間ごとに母液をチェックした。250mlの水を加えた後、E:Z比は1:1.2であり、好都合であると判断された。懸濁液を氷浴中で10分間冷却した。内温は17℃に低下した。次いで減圧下で3L焼結ガラス漏斗によりろ過した。得られた固体を冷メタノール:水溶液(1:1、2×50ml、5〜10℃)で洗浄した。固体を真空乾燥器中、35℃で恒量になるまで乾燥した。淡黄色固体、3-ブロモ-5-メチル-シンナモニトリル(144.1g、83%収率)を得た。しかし、プロトン及び炭素NMRスペクトルにより、この物質は、除去されていない鉱油で汚染されていることが確認された。3-ブロモ-5-メチル-シンナモニトリル:C10H8BrN 222.08gモル-1;HPLC:E-異性体Rt 5.83分;97%純度@272nm。Z-異性体Rt 5.76分;約1.7% @272nm;1H NMRδH(400MHz,CDCl3):2.36(3H,s,CH3)、5.86(1H,d,JH,H 16.7,CH=CHCN)、7.17(1H,s,Ar-H)、7.28(1H,d,JH,H 16.7,CH=CHCN)、7.39(2×1H,s,2×Ar-H);13C NMRδC(100MHz,CDCl3):21.23(CH3)、97.86(CH=CHCN)、117.89(CN)、123.19(C-3)、127.03、127.38(C-4,C-6)、134.85(C-2)、135.38(C-1)、141.16(C-5)、149.31(CH=CHCN)。
【０４４２】
3-ヨード-5-メチル-シンナモニトリル(1)
3個の500mlねじぶた付きのシール型の加圧式フラスコ(A、B及びCと標記)に個々にマグネチックスタ-ラーを取り付け、115℃に加熱した油浴上に置いた。各フラスコに別々に;3-ブロモ-5-メチル-シンナモニトリル(3×47.5g、3×0.214モル);m-キシレン(3×171ml)を順次加えてオレンジ色の溶液を得、ジエチレングリコールジメチルエーテル(3×43ml);ヨウ化ナトリウム(3×64.12g、3×0.428モル);ヨウ化銅(I)(3×4.08g、3×0.0214モル);最後にN,N'-ジメチルエチレンジアミン(3×4.60ml、3×0.0427モル)を順次加えた。その時点で色は濃い黒緑色になった。各フラスコのねじ込み型頭頂部をm-キシレン(3×1ml)で濯いだ。固くなった不溶性の固体ヨウ化ナトリウムをスパチュラでかき混ぜた。その間に、溶液は脱ガスされた。各フラスコ中の溶液にアルゴンを定常的に流して10分間バブリングさせた。
【０４４３】
3個のフラスコをアルゴン雰囲気下でシールし、それぞれ中程度の攪拌速度を保ちながら、そのフラスコをそれぞれの115℃の油浴に降ろした。反応物を、防爆壁(blastshield)で隔てて115℃で14時間終夜攪拌した。
【０４４４】
その後、フラスコCの攪拌が停まっていることが認められた。開ける前に、フラスコを空気中で5分間冷却した。減圧下でm-キシレンを除去し、MeCNに溶解して、三つの反応液のHPLC試料を調製した。HPLC法試験20で分析を実施した;
フラスコA:主生成物(Rt 5.97分)、2.5%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４４５】
フラスコB:主生成物(Rt 5.97分)、1.0%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４４６】
フラスコC:主生成物(Rt 5.97分)、20%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４４７】
それぞれの反応混合物中にアルゴンを定常的に流して10分間バブリングさせて、三つのすべてのフラスコを脱ガスした。三つのフラスコをアルゴン雰囲気下でシールし、それぞれ中程度の攪拌速度を保ちながら、そのフラスコをそれぞれの120℃の油浴に降ろした。反応物を、防爆壁で隔てて120℃で2時間攪拌した。
【０４４８】
その後、開ける前にフラスコを空気中で5分間冷却した。減圧下でm-キシレンを除去し、MeCNに溶解して、三つの反応液のHPLC試料を調製した。HPLC法試験20で分析を実施した;
フラスコA:主生成物(Rt 5.97分)、1.9%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４４９】
フラスコB:主生成物(Rt 5.97分)、0.9%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４５０】
フラスコC:主生成物(Rt 5.97分)、7.5%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４５１】
反応液A及びBは(反応が)完了していると見られ、これを室温に冷却した。フラスコCの反応混合物中にアルゴンを定常的に流して10分間バブリングさせて再度脱ガスした。フラスコをアルゴン雰囲気下でシールし、中程度の攪拌速度を保ちながら、そのフラスコを125℃の油浴に降ろした。反応物を、防爆壁で隔てて125℃で4時間攪拌した。
【０４５２】
その後、開ける前にフラスコCを空気中で5分間冷却した。減圧下でm-キシレンを除去し、MeCNに溶解して、反応液のHPLC試料を調製した。HPLC法試験20で分析を実施した;
フラスコC:主生成物(Rt 5.97分)、2.0%出発原料(Rt 5.83分)。
【０４５３】
反応液Cは(反応が)完了していると見られ、これを室温に冷却した。
【０４５４】
フラスコAをtert-ブチルメチルエーテル(2×150ml)で希釈し、tert-ブチルメチルエーテルで予め洗浄したセライト(1.5L)を含む3L焼結ガラス漏斗を用いて、混合物を真空下でろ過して不溶性物質を除去した。フラスコB及びCを同様に希釈し、同じセライト焼結漏斗でろ過して、三つのろ液A、B及びCを12L円錐形フラスコで一緒にした。フラスコを濯ぎ、tert-ブチルメチルエーテル(3L)でセライトを溶出させた。
【０４５５】
一緒にしたろ液を、tert-ブチルメチルエーテルで予め洗浄した新しいセライト(1.5L)を備えたきれいな3L焼結ガラス漏斗で、真空下でろ過して残留する濁った微粒子を除去した。tert-ブチルメチルエーテル(4L)で溶出させた。得られた透明な赤茶色のろ液は4℃で48時間しても安定であった。
【０４５６】
ろ液を減圧下、40℃で濃縮し、次いで高沸点溶媒を高真空下、45℃で除去した。メタノール(2×50ml)で共蒸発させて粗製の茶色の固体(203g)を得た。
【０４５７】
53℃で水浴に浸漬させて、内温用プローブ、500ml添加漏斗及びオーバーヘッドスターラーを備えた2Lの三ッ口丸底フラスコ中の粗製の茶色の固体(200g)をメタノール(700ml)に溶解した。溶解すると、茶色の固体は赤褐色溶液になった。水浴を取り外し、水(300ml)を500ml添加漏斗に入れた。中程度の攪拌速度で、3時間かけて水を滴下した。その間に、内温は50℃から24℃に低下した。10分後、80mlの水を加えると赤褐色溶液から黄茶色の固体が沈殿し始めた。HPLCによって一定期間ごとに母液をチェックして、なお溶液中にあるE:Z異性体の比を判定した。300mlの水を加えた後、E:Z比は1:1.1であり、好都合であると判断された。懸濁液を14時間かけて冷却し、内温を4℃に低下させ、次いで減圧下で3L焼結ガラス漏斗でろ過した。得られた固体を冷メタノール:水溶液(1:4、100ml、次いで200ml、5℃)で洗浄した。固体を真空乾燥器中、35℃で恒量になるまで乾燥した。淡茶色の固体、3-ヨード-5-メチル-シンナモニトリル(149.4g、86%収率)を得た。しかし、プロトン及び炭素NMRスペクトルにより、この物質は、除去されていない鉱油で汚染されていることが確認された。
【０４５８】
2L円錐形フラスコ中で、若干粘着性の茶色の固体(148.8g)をアセトニトリル(1.5L)に溶解させて、鉱油の不溶性油滴を有する濃い橙褐色溶液を得た。この混合物をろ紙(Whatman、541)を用いて重力下でろ過し、大部分の鉱油(10.6g)を除去した。ろ液を4L分離漏斗に移し、ヘプタン(0.5L)で洗浄した。ヘプタン層をアセトニトリル(250ml)で抽出し、減圧下で濃縮して追加の鉱油(3.2g)を得た。アセトニトリル層を一緒にし、減圧下で濃縮し、真空乾燥器中、35℃で乾燥して3-ヨード-5-メチル-シンナモニトリル(132.5g、77%収率)を薄茶色の固体として得た。プロトン及び炭素NMRスペクトルにより、この物質には鉱油がまったく残存していないことが確認された。3-ヨード-5-メチル-シンナモニトリル:C10H8IN 269.08gモル-1;M.P.:98℃軟化、99〜100℃溶融;HPLC(アセトニトリル):E-異性体Rt 5.97分;97%純度@272nm(3-ブロモ-5-メチル-シンナモニトリル、E-異性体Rt 5.83分;約1.4% @272nm);1H NMRδH(400MHz,CDCl3):2.33(3H,s,CH3)、5.85(1H,d,JH,H 16.7,CH=CHCN)、7.20(1H,s,Ar-H)、7.25(1H,d,JH,H 16.7,CH=CHCN)、7.59、7.60(2×1H,2×s,2×Ar-H);13C NMRδC(100MHz,CDCl3):21.09(CH3)、94.93(C-3)、97.70(CH=CHCN)、117.91(CN)、127.61(C-6)、133.37(C-2)、135.44(C-1)、140.81(C-4)、141.15(C-5)、149.18(CH=CHCN)。
【実施例１１】
【０４５９】
化合物III(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステルの絶対配置
5mgの化合物IIIを50mlのアニソールに懸濁させた。2日後に、単結晶X線分析に適した結晶が形成された。その結晶は、P21の空間群及びa=13.0983Å、b=10.9625Å、c=16.4266Å、α=90°、β=103.6063°及びγ=90°の単位セル寸法を有する単斜晶型であった。この結晶において、非対称単位は、化合物IIIの独立した二つの分子(分子A及び分子B)と、単一の部分占有する(約86%)溶媒としてのアニソールの分子を含んでいた。フラック(Flack)パラメーターは分子Aについては-0.04(7)、分子Bについては1.04(7)と判定された。上記判定を基にすると、絶対立体配置が与えられており、P1AとP1Bの両方でのキラル中心はS構造である。図2AにP1Aでの立体配置を含む分子Aの図を示し、図2BにP1Bでの立体配置を含む分子Bの図を示す。
【実施例１２】
【０４６０】
化合物I、(2-カルバモイル-5-クロロ-4-フルオロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル)及び化合物III、(2-カルバモイル-5-クロロ-1H-インドール-3-イル)-[3-((E)-2-シアノ-ビニル)-5-メチル-フェニル]-(S)-ホスフィン酸メチルエステル)の薬理
以下の表は、試験する薬物の耐性分析を含むアッセイにおける、化合物I及びIIIの鏡像異性的に純粋な3-ホスホインドールのインビトロでの抗HIV活性を示す。表1は変異HIV-1逆転写酵素のパネルに対する化合物の活性を示す。化合物I及び化合物IIIの3-ホスホインドール化合物の抗ウイルス活性を、様々なウイルスでの対照化合物EFV(エファビレンツ、6-クロロ-4-シクロプロピルエチニル-4-トリフルオロメチル-1,4-ジヒドロ-2H-3,1-ベンゾオキサジノン-2-オン)の活性と比較する。
【０４６１】
表1に示すように、化合物Iは、0.366±0.251μM(野生型RT)〜1.411±0.873μM(K103N/Y181C)の範囲の平均50%阻害濃度(IC50)値で、HIV-1逆転写(RT)酵素(サブタイプB、BH10株)を阻害する。同様に、化合物IIIのIC50は0.343±0.083μM(野生型RT)〜1.614±0.279μM(K103N/Y181C)の範囲である。表5に見られるように、化合物I及び化合物IIIは、ヒトポリメラーゼα(IC50≧145μM)、β(IC50≧422μM)又はγ(IC50≧60μM)に対して阻害性がなかった。これは、試験化合物の選択性を示している。化合物I及びHIV RT K103N/Y181C二重変異体についての結晶学的研究により、化合物Iが酵素中の既知の疎水性NNRTIポケットと結合していることが明らかにされている。
【０４６２】
MT-4細胞及びサブタイプB HIV-1(BH-10株)を用いたHIV-1細胞培養アッセイでは、化合物I及び化合物IIIは、それぞれ1nM及び1.2nMの平均50%有効濃度(EC50)値でHIV産生を阻害した(表6を参照されたい)。ヒトPBMCで実施したアッセイでは、化合物I及び化合物IIIは0.4nM(BH-10株)又は1.5nM(NL4-3株)の平均EC50でHIV-1産生を阻害した。五つの異なる宿主ヒト細胞株における三つの異なるHIV-1ウイルス株に対して、化合物Iについて測定されたEC50は0.5〜2.0nMの範囲であり、化合物IIIについては0.5〜1.7nMの範囲であった。化合物I及び化合物IIIは、それぞれ0.25〜3.2nM及び0.2〜2.14nMの効能の範囲で、九つの異なるHIV-1サブタイプのパネルに対して活性であった。化合物I及び化合物IIIの活性は、α-1酸糖タンパク質及び45%ヒト血清の存在下で、それぞれ24.8及び19.5の倍率で低下した。
【０４６３】
六つのヒトHIV-1宿主細胞株における4日間の細胞毒性試験では、化合物I及び化合物IIIは、それぞれ16.6〜32.9μMから14.8〜50.0μMの平均50%細胞毒性濃度(CC50)値を示した。PBMCでは、52.6(化合物I)及び66.9μM(化合物III)のCC50値が測定された。HeLa、HuH7及びHepG2細胞株における9〜12日間の試験では、化合物I及び化合物IIIのCC50値は23.5〜31.5μMの範囲であった。MT-4細胞で測定されたCC50/EC50比を基にして、化合物III及び化合物Iについて、>22,000及び>18,000の選択指数(SI)値がそれぞれ算出された。
【０４６４】
様々な細胞株及びHIV-1株を用いた交差耐性試験では、化合物I及び化合物IIIは、K103N、Y181C又はK103N/Y181C変異体を含むNNRTI耐性ウイルスに対して良好な効能を保持したが(それぞれのEC50値は4.5未満及び14.5nM未満に保持された)、EFVは、特に二重変異体に対して相当な耐性を示した(36〜116nMのEC50値)。
【０４６５】
化合物I及び化合物IIIの耐性プロファイルを、Monogram BioSciences(以前のViroLogic)により実施する試験におけるウイルスの三つの異なるパネル、即ち、低位から中位のEFV耐性ウイルスのスクリーニングパネル;8つの高度にEFVの耐性ウイルスのパネル、及び一重、二重及び三重のNNRTI耐性変異体を有する40のNNRTI耐性ウイルスを含む64のウイルスの広範囲のパネルを用いてさらに詳細に試験した。化合物I及び化合物IIIは、NRTI及びPI変異を含む変異体のサブパネルに対して非常に活性であった。化合物I及び化合物IIIは、二重及び三重変異体を有するウイルスを含む本質的にはすべてのEFV耐性ウイルスに対して、EFVより優れていた。化合物Iは、二重及び三重変異体を有するEFV耐性ウイルスに対して、化合物IIIより2〜3倍高い効能を有していた。
【０４６６】
一連のインビトロでの相互作用検討では、化合物I及び化合物IIIと、病院でのHIV-1治療に承認されている7NRTI又は6PIとの間に負の相互作用は認められなかった。
【表４】
2010504978.tif 000086
2010504978.tif 000087
2010504978.tif 000088
【０４６７】
HIV RT酵素に対するインビトロでの抗ウイルス活性
表1に示すように、インビトロでのHIV逆転写酵素(RT)アッセイのパネルを用いて、HIV RTに対する化合物I、化合物III及びEFVの活性プロファイルを測定した。これらの検討では、K103N及びY181C置換を単独で又は組み合わせて有するNNRTI耐性の部位特異的な変異酵素の標準的パネルとともに、HIVサブタイプB(BH-10株)から誘導された野生型HIV RT酵素を用いた。
【０４６８】
インビトロで試験すると、化合物Iは、0.366±0.251μM(野生型RT)〜1.411±0.873μM(K103N/Y181C)の範囲のIC50値でHIV逆転写を阻害した。同様に、化合物III誘導IC50は0.343±0.083μM(野生型RT)〜1.614±0.279μM(K103N/Y181C)の範囲であった。EFVは、Y181C酵素に対しては野生型の活性を示すが、K103N及びK103N/Y181C変異酵素に対しては著しく損なわれた活性を示す、期待されたインビトロでの阻害プロファイルをもたらした。
【表５】
2010504978.tif 000089
【０４６９】
表2に示す倍率-耐性データから、異なるウイルスに対する試験薬剤及び比較薬剤の相対的活性をみることができる。
【表６】
2010504978.tif 000090
【０４７０】
表1〜4に示す、酵素の50%を阻止するのに要する算出薬物濃度(IC50)及びデータを、界面活性剤の存在下(これはIC50値を増大させる)で測定したが、界面活性剤の非存在下では、概ね、より低い値が得られた。
【０４７１】
追加の突然変異HIV RT酵素に対するインビトロでの抗ウイルス活性
化合物I及びIIIを、一般的NNRTI耐性突然変異を有するRT酵素の幅広いパネルに対して試験した。効能データを表3に示し、その対応する倍率変化を表4にまとめる。検討結果を以下にまとめる。
【表７】
2010504978.tif 000091
【０４７２】
データから分かるように、化合物III及び化合物Iは、コドン100、106、184及び134で置換されたHIV RT酵素に対してインビトロで相当な効能を保持している。コドン108、138及び188での突然変異について、やや有意の(only significant)効能の損失が見られる。
【表８】
2010504978.tif 000092
【０４７３】
全体として、化合物I及びIIIは0.5±0.2〜15.50±6.8の範囲の倍率変化を与えた。
【０４７４】
ヒトDNAポリメラーゼα、β及びγに対する影響
他のウイルスポリメラーゼと同様に、HIV RTは、通常の核DNA及びミトコンドリアDNAの合成及び修復に関与する細胞DNAポリメラーゼと、限られた構造的相同性を共有している。このことは、HIV RTの阻害剤が、細胞ポリメラーゼを阻害し、それによって細胞毒性をもたらす形式的な可能性を提起している。具体的には、ポリメラーゼγの阻害はミトコンドリア毒性をもたらす可能性がある。化合物I及び化合物IIIが、細胞DNAポリメラーゼを阻害する能力は、インビトロでの標準的アッセイを用いて評価する(表5)。
【０４７５】
インビトロでの試験では、化合物III、化合物I及びEFVは、ヒト細胞のDNAポリメラーゼα又はβに対して、100〜>450μMの範囲の濃度で、IC50に達しなかった。同様に、予備的データ(n=1)により、化合物I及びEFVのIC50は、インビトロでヒトDNAポリメラーゼγ活性に対して>100μMであるが、化合物IIIは、この酵素に対して60.1μMのIC50を有していることが示された。
【表９】
2010504978.tif 000093
【０４７６】
HIV RTへの結合の直接的実証
化合物I及びIIIと共結晶化したK103N/Y181C二重変異体HIV RT(活性アッセイで用いたものと同じBH-10株酵素)の構造決定を実施した。
【０４７７】
NNRTIは一般には小さいものであり、RTの触媒部位に近接して位置する疎水性ポケットに対して強い親和性を有している。阻害剤の結合は酵素の柔軟性を制限し、適切なDNA合成を妨げる(Clavel and Hance、HIV drug resistance.N Engl J Med;350:1023〜35頁(2004年))。
【０４７８】
化合物Iの存在下でのK103N/Y181C突然変異タンパク質の結晶化を行った。組み換え型HIV-1 K103N/Y181C RTタンパク質を化合物Iの存在下で濃縮し、これを、連続的結晶ミクロ播種実験で使用して、X線データ収集をするのに十分なサイズのタンパク質結晶を得た。単結晶をX線回折及び模型製作のために用いた。3Åで、概略図は、HIV-1 RTのNNRTIポケットと結合した化合物Iを示している。
【０４７９】
酵素的に活性なK103N/Y181C HIV-1二重変異体酵素と共錯体化している化合物IのX線結晶構造を図1Aに示し、概略図を図1Bに示す。構造は、承認されている薬物のエファビレンツ(Bacheler等、J Virol;75:4999〜5008頁(2001年))と似た形で、HIV RTのNNRTIポケットと結合している化合物Iを示す。化合物Iのインドール環が、HIV-1 RTのコドン101及び103に非常に近接しているのを見ることができる。
【０４８０】
細胞の活性
この節では、細胞培養系における、HIV-1及びHIV-2に対する化合物I及び化合物IIIの抗ウイルス活性プロファイルをまとめる。複数のHIV株及びHIV複製を支えるヒト細胞型を用いて、これらの活性を、多様なアッセイと評価項目で測定した。
【実施例１３】
【０４８１】
HIV-1 BH10株に対する活性
用いた標準的なHIV細胞をベースにしたアッセイは、p24 ELISAリードアウトを用いたMT-4細胞での4日間アッセイである。基本的にはDevine D、Mathews N、Kinchington D(2000年)、Antiviral Meth and Prot.Human Press Inc.、Totowa、NJ.185〜199頁に記載のようにして、IDX12899のインビトロでの抗HIV-1活性(EC50値)を、標準的な細胞をベースにした薬物感受性アッセイ(DSA)で判定した。HIV-1試験ウイルスはサブタイプB、BH10株由来のものである。標準的試験パネルには、野生型ウイルス、並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C部位特異的変異誘導体を含めた。このアッセイによるデータを以下の表6にまとめる。野生型BH10ウイルスに対して、化合物I、化合物III及びEFVの阻害活性は、すべて凡そ1nMのEC50であり、近似していた。対照値は、従来報告されている結果(Young等、1995年、Antimicrob Agents Chemother:39(12):2602〜5頁;Andries等、2004年、Antimicrob Agents Chemother;48(12):4680〜6頁;Janssen等、2004年、J Med Chem;48(6):1901〜9頁;Boone 2006年、Curr.Opin Investig Drugs;7(2):128〜35頁)及びPhenoScreen(商標)アッセイを使って得られる結果とよく一致していた。
【表１０】
2010504978.tif 000094
【０４８２】
変異ウイルスに対して、EFVは期待された抗ウイルス性のプロファイルを示した。これは、Y181Cウイルス増殖(EC50=2.5nM)を効果的に阻害したが、K103N又はY181C/K103N変異ウイルスに対してはそれほど活性ではなかった(41〜42nMの平均EC50値)。
【０４８３】
表7にまとめた対応する倍率-耐性値から、突然変異ウイルスに対する様々な試験品目の活性は明らかである。五つの化合物はすべて、Y181C突然変異に対して同じように低い活性を示した(2.3〜3.7の範囲の平均倍率シフト)。K103Nウイルスに対してEFVは平均34.3倍のシフトを示したが、残る化合物の活性はほとんど変わらなかった(0.8〜1.2倍)。
【表１１】
2010504978.tif 000095
【０４８４】
化合物の活性については、細胞変性作用(CPE)を基にした様々なアッセイリードアウトを用いて、同じウイルス及び細胞型でも評価した。このアッセイは、カプシドタンパク質産生ではなくHIV-1感染の後の細胞生存率を測定するものであり、また、これはアッセイ装置及びその実行に関して標準的アッセイとは異なっており、したがって、後者の方法で得られる結果の有用な裏付けを提供するものである。五つの独立した実験からのデータを以下の表8にまとめる。
【表１２】
2010504978.tif 000096
【表１３】
2010504978.tif 000097
【０４８５】
CPEアッセイでは、サブナノモルの平均EC50値(0.1〜0.7nMの範囲)で示されるように、WT BH10ウイルスの複製は、化合物I、化合物III及びEFVによって強力に阻害された。
【０４８６】
Y181C、K103N及びK103N/Y181C BH10パネルウイルスは、0.1から最大で6.6nMの範囲の平均EC50値で化合物I、化合物IIIによって効果的に阻害された。予想されたように、EFVはY181Cウイルス増殖を効果的に阻害したが、他の突然変異ウイルスに対しては著しく活性が低かった(EC50値41〜53nM)。対照値は、従来報告されている結果(Young等、1995年、Antimicrob Agents Chemother:39(12):2602〜5頁;Andries等、2004年、Antimicrob Agents Chemother;48(12):4680〜6頁;Janssen等、2004年、J Med Chem;48(6):1901〜9頁;Boone 2006年、Curr.Opin Investig Drugs;7(2):128〜35頁)とよく一致していた。
【０４８７】
BH10 WT株と比較した倍率変化に関して、化合物I、化合物III及びEFVは、Y181C変異体に対して2.7〜11.9倍の範囲の増大を示したが、化合物I及び化合物IIIは、K103N突然変異に対して変化を示さなかった(<1.8倍)。K103N/Y181C変異体は、より大きい変異性と12.7(化合物I)及び55.6(化合物III)の倍率変化を示した。EFVはK103N及びK103N/Y181C突然変異に対して、それぞれ66.8〜88.0の平均倍率シフトをそれぞれ示した。
【０４８８】
HIV-1 NL4-3株に対する活性
化合物I及び化合物IIIの活性を、NL4-3骨格を有するサブタイプB HIV-1ウイルスを用いた、細胞をベースにしたアッセイでも判定した。NL4-3ウイルスの標準的パネル(w.t.、Y181C、K103N及びK103N/Y181C)を、ELISAリードアウトを用いた上記BH-10ウイルスパネルで説明したのと同様の試験化合物でアッセイした。これらのアッセイの結果を以下の表10にまとめる。
【０４８９】
この検討結果は、BH10ウイルスについて得られた結果にほぼ匹敵するものである。NL4-3バックグラウンドでは、化合物は、w.t.NL4-3ウイルス(0.7〜2.3nMの範囲のEC50)及びY181Cウイルス(0.7〜2.3nMの範囲のEC50)に対して効能を有している。
【表１４】
2010504978.tif 000098
【表１５】
2010504978.tif 000099
【０４９０】
MT-2細胞におけるHIV-1臨床分離株に対する活性
次に、比較薬物と一緒に、二つのMT-2細胞株適応HIV-1臨床分離株に対する化合物I及び化合物IIIの抗ウイルス性の効能を測定した。Y181C(#3350)及びK103N/Y181C(#5054)を発現する臨床分離株突然変異からなるウイルス試験パネルを、感受性WTウイルスと比較した。データを以下の表12にまとめる。
【表１６】
2010504978.tif 000100
【表１７】
2010504978.tif 000101
【０４９１】
ヒトPBMCにおけるHIV-1株に対する活性
次いで、化合物I、化合物III及び比較薬剤の抗ウイルス活性を、末梢血単核細胞細胞(PBMC)のHIV-1パネルに対して測定した。全ウイルスパネルは、二つのNNRTI-感受性WTウイルス(BH10及びNL4-3)とともに、K103N(#4937及び#5002)及びK103N/Y181C(#5004)ウイルスを発現する三つの臨床分離株突然変異を含むものであった。五つの独立したデータセットからの結果を以下の表14にまとめる。
【表１８】
2010504978.tif 000102
【０４９２】
五つの化合物はすべて、PBMCでのwt BH10ウイルスに対して、0.4〜0.9nMのEC50値で著しく高い効能を有していた。これらの薬剤は、同じ細胞でのNL4-3ウイルスに対して一般に2〜4の倍率で効果が低い。化合物I及び化合物IIIは、わずか1〜2の倍率の活性損失で(BH10ウイルスに対して)、K103Nウイルスの複製を効果的に阻害したが、K103N/Y181C分離株に対しては6〜22の倍率で阻害性がより低かった。これに対して、EFVは、一重及び二重変異体分離株に対してそれぞれ、ほぼ40〜70の倍率でより低い活性を示した。対照品目及び試験品目の値は、従来報告されている結果(Young等、1995年、Antimicrob Agents Chemother:39(12):2602〜5頁;Andries等、2004年、Antimicrob Agents Chemother;48(12):4680〜6頁;Janssen等、2004年、J Med Chem;48(6):1901〜9頁)、及びこの節で報告した他の値とよく一致していた。
【０４９３】
CPEアッセイによるMT-4細胞のHIV-1 IIIBウイルスに対する活性
次に、以下にまとめたように、試験品目を、HIV-1 IIIB実験室培養した突然変異のパネルに対してプロファイリングした。抗ウイルス性の効能を、CPEアッセイにより、細胞生存率について、MTSリードアウトを用いて判定した。このアッセイで試験したウイルスには、標準的IIIB w.t.、並びに培養物選択したY181C及びY181C/K103Nウイルスを含めた。但し、通常のK103Nは、以下でさらに説明する選択K103R/V179D/P225H三重変異体ウイルスで置き換えた。平均した効能データを表15に示す。
【表１９】
2010504978.tif 000103
【表２０】
2010504978.tif 000104
【０４９４】
W.T.IIIBウイルスは、0.0004±0.0002〜0.0017±0.0004の範囲の平均EC50値(μMで)を有する五つのすべての薬物によって効果的に阻害された。
【０４９５】
培養物選択IIIB Y181Cウイルスの複製も、0.0021±0.0003〜0.0120±0.0026の範囲の平均EC50値(μMで)を有する各薬物によって効果的に阻害された。これらの値は、本節全体にわたって示す他の結果とよく合致している。
【０４９６】
0.0026±0.0004〜0.0099±0.0016の範囲の平均EC50値(μMで)で示されるように、IIIB K103N/Y181Cウイルスは化合物I及び化合物IIIによって概ね効果的に阻害された。しかし、EFVは、0.1120±0.0330の平均EC50値(μMで)で示されるように、その効果ははるかに劣っていた。
【０４９７】
K103R/V179D/P225H三重変異体IIIBウイルスは、より変動の大きい結果と、EFVに対するずっと高い耐性を示したが、化合物I及び化合物IIIに対しては相対的に感受性を保持していた。平均EC50値(μMで)は、0.0100±0.0015(化合物I)、0.0250±0.0060(化合物III)及び>1.0(EFV)であった。K103R突然変異RT酵素は、NNRTI耐性ではないことに留意されたい(データは示さず)。
【０４９８】
IIIB突然変異パネルに対する薬物感受性における倍率変化に関しては、化合物I、化合物III及びEFVの平均倍率-耐性値はY181Cウイルスに対して概ね小さい変化であった(2.9±0.8〜7.7±2.8倍)。K103N/Y181C突然変異に対する倍率-耐性はより変動が大きいが、本節全般で見られる変化の範囲内であった。倍率変化は4.8±1.6(化合物I)及び19.5±4.3(化合物III)であった。K103R/V179D/P225H突然変異についての平均倍率-耐性値は:11.1±4.1(化合物I)、53.5±12.8(化合物III)及び>711.7±255.3(EFV)であった。
【０４９９】
まとめると、IIIBウイルスCPEアッセイでのこれらの試験は、K103R/V179D/P225H三重変異体ウイルスを除いて、本節の他のところで示した結果を概ね確認するものである。化合物Iは、この突然変異(EC50=10nM)に対して最も活性があり、次は、ほどほどの活性(EC50=21〜25nM)を有する化合物IIIであり、EFVはほぼ不活性であった(EC50>1000nM)。K103R/V179D/P225H突然変異遺伝子型パターンは臨床試料では一般に確認されていないが、K103R/V179Dの組合せは、三つの承認済みNNRTIすべてに対して感受性の大幅な低下もたらすことが知られている(Harrigan等、2005年、AIDS;19:549〜54頁;Parkin等、2006年、Antimicrob Agents Chemother;50(1):351〜4頁)。
【０５００】
異なるヒト細胞株における様々なHIV-1株に対する活性
化合物I、化合物III及び対照薬物のウイルス及び宿主細胞依存性を、三つの異なるサブタイプB野生型HIV-1株と五つの異なる細胞株について、薬物感受性アッセイでさらに試験した。用いたHIV-1株はBH10、NL4-3及びIIIBであり、細胞株は、U-937細胞(組織球性リンパ腫から誘導されたヒト単球);MOLT-4細胞(ヒトTリンパ芽球性白血病細胞株);H-9細胞(ヒトリンパ芽球性T細胞);並びにMT-2及びMT-4ヒト白血病T細胞であった。
【０５０１】
三つの独立した実験による平均EC50値及び標準偏差を以下の表17にまとめる。この検討の実験条件下で、化合物I、化合物III及びEFVは、試験した各野生型ウイルスと宿主細胞の組合せにわたって、その効能はほとんど変わることなく保持した。示された活性は0.4〜3.2nMの範囲であった。
【表２１】
2010504978.tif 000105
【０５０２】
ウイルス株及び細胞型のそれぞれにわたり、薬物のそれぞれについて得られた平均活性の範囲を表の最後の行にまとめる。化合物I及び化合物IIIは、三つのHIV-1株並びに形態学的に区別できるヒトT及び単球細胞株にわたってインビトロでの強力な抗ウイルス活性(0.5〜2nMの範囲)を示した。五つの化合物はすべてほぼ同程度の活性を示した。
【０５０３】
異なるHIV-1サブタイプのパネルに対する活性
すべての主要なHIV-1サブタイプ又はクレード(A、B、C、D、F1、G、H、AE及びAG)を包含するサブタイプパネルに対して、試験化合物及び対照化合物の活性を試験した。このパネルは、臨床分離株Monogram BioSciencesの広範なライブラリー(以前はViroLogics)から選択された64のウイルスパネルの一部であった。そのパネルのサブタイプのそれぞれは、多くの配列類似点を共有するが、いくつかの重要な違いも有しており、したがって、本検討に含まれる薬物の一つ又は複数に対して異なった応答をする二つの区別できるウイルスを表す。
【０５０４】
試験品目、化合物I、化合物III及び対照薬物EFVのPhenoSense(商標)試験から、九つの異なるHIV-1サブタイプ(A、B、C、D、F1、G、H、AE、AG)を含むサブタイプパネル(18のウイルス)に対する化合物I、化合物III及びEFVの活性はすべて、野生型の活性値の2倍以内であった(データは示さず)。
【０５０５】
異なるサブタイプの中では、全般的効能の範囲は、化合物I、0.25〜3.20nM;化合物III=0.2〜2.14nM;;EFV=0.40〜3.10nMであった。驚くことではないが、効能の範囲は、サブタイプ内においてより、サブタイプにまたがる場合の方が若干大きい(10〜11倍)が、この変動はまさに二つの分離株に起因しており:第二のサブタイプC HIV-1分離株は全般的に、試験した薬物のすべてに対して感受性は最も低く、逆に、二つのサブタイプH分離株は、薬物のすべてに対して感受性が非常に高いようである(EC50値、0.17〜0.55nM)。しかし、これらのウイルスもそれぞれ42%及び10%という低い複製能を有しており、これは、明らかな過感受性に寄与している可能性がある。残りのサブタイプウイルスは、一般に、効能においてCNDO参考菌株から<2.5倍の発散を示した。
【０５０６】
H9細胞におけるHIV-2RODに対する活性
化合物I及び化合物IIIに対する、H9細胞のHIV2型RODの感受性を、対照としてのジドブジン(AZT)に対して測定した。平均したデータを二つの独立した抗ウイルス活性実験から得た。これを表18に示す。
【０５０７】
化合物I及び化合物IIIは、最も高いアッセイ濃度(1.25μM)でもHIV-2 ROD複製を抑制することができなかったが、AZT対照は、公表されている値(Witvrouw等、2004年、Antiviral Therapy 9:57〜65頁)に匹敵する活性(0.1619±0.0767μM)を示した。
【表２２】
2010504978.tif 000106
【０５０８】
ヒト血清及びα-1酸糖タンパク質の存在下でのHIV-1に対する活性に対する活性
これまでの検討では、10%ウシ胎仔血清(FBS)の存在下の細胞培養で増殖したHIV-1に対する各薬物のEC50を測定した。試験品目についての血清調整EC50を推定するために、45%ヒト血清若しくは1mg/mLのα-1酸糖タンパク質の存在下、又はその両方の存在下で、さらなる実験を実施した。三つ〜七つの抗ウイルス活性実験による平均結果を表19に示す。
【表２３】
2010504978.tif 000107
【表２４】
2010504978.tif 000108
【０５０９】
五つの薬物は、10%FBSの存在下、予想された効能で、1.0〜1.6nMの範囲のEC50値でWTウイルスの複製を阻害した。1mg/mLのAAGを加えると、各薬物について、概ね2〜3の倍率で薬物効能を低下させ、平均EC50値を2〜5nMの範囲にシフトさせる。
【０５１０】
五つの薬物の効能は、45%ヒト血清(HS)によって大きく低下し、11.5〜21.9nMの平均EC50値及び8.4〜17.0倍の倍率シフトをもたらした。培養実験における45%HS+AAGの存在によって、より変動の大きい結果と、19.0(化合物I)、32.6(化合物III、及び11.6(EFV)の平均EC50値(nMで)が得られた。対照において得られた値は、公表されている結果(Young等、1995年、Antimicrob.Agents Chemother:39(12):2602〜5頁;Andries等、2004年、Antimicrob.Agents Chemother;48(12):4680〜6頁;Janssen等、2004年、J.Med.Chem.;48(6):1901〜9頁;Boone 2006年、Curr.Opin Investig Drugs;7(2):128〜35頁)とよく一致していた。対応する平均倍率変化は19.5(化合物I)、24.8(化合物III)及び5.4(EFV)であった。
【０５１１】
まとめると、化合物I及び化合物IIIについて、AAG単独ではそれほどのタンパク質結合相互作用は見られなかった(<3の倍率変化)。HS又はHS+AAGで、EC50の中等度の上昇(16〜25倍率変化)が推定された。全体として、データは、化合物I及び化合物IIIではEFVより若干タンパク質結合が高いことを示唆している。
【実施例１４】
【０５１２】
インビトロでの細胞毒性
化合物I及び化合物IIIの細胞毒性を評価するために、細胞の増殖を用いる従来の細胞をベースにしたアッセイを用いた。3日から12日間でのこれらの細胞毒性試験では、(i)インビトロでのHIV-1ウイルスの感染に対して感受性が高いか(例えば、一次血中単球;MT-2及びMT-4白血病T細胞)、又は(ii)インビトロでの薬物誘発による細胞毒性を評価するのに一般に用いられる(例えば、HepG2、HuH7又はHeLa)(Divi RL、Haverkos KJ、Humsi JA等(2006年)、「ジドブジンに長期間暴露された培養ヒト細胞におけるミトコンドリア病理の形態学的及び分子的経過(Morphological and molecular course of mitochondrial pathology in cultured human cells exposed long-term to zidovudine)」、Environ Mol Mutagen;47)、ヒト細胞株に焦点をあてた。細胞生存率は標準的MTT法又はMTS染色法で測定した。
【０５１３】
PBMC細胞における細胞毒性作用
試験品目のインビトロでの細胞毒性を、刺激を受けたヒト一次血中単核細胞(PBMC)での四つの独立した実験で評価した。PBMCを、0.005μM〜100μMの濃度で3日間、対照薬物EFVと一緒に化合物I及び化合物IIIに曝露した。細胞生存率をMTT染色法により判定した。結果を、細胞生存率を50%低下させる平均有効薬物濃度(CC50)で表した。
【０５１４】
試験品目について、PBMCにおいて測定した平均CC50値(μMで)は、化合物I=52.6±15.2、化合物III=66.9±19.6であった。対照品目については、測定平均CC50値(μMで)はEFV=70.9±7.6であった。
【０５１５】
HIV-1ヒト宿主細胞における細胞の細胞毒性
次に、試験品目、化合物I及び化合物III及び対照薬物EFVのインビトロでの細胞変性作用を、以下の六つのHIV-1感受性ヒト宿主細胞株:U-937細胞(組織球性リンパ腫から誘導されたヒト単球);MOLT-4細胞(ヒトTリンパ芽球性白血病細胞株);H9細胞(ヒトリンパ芽球性T細胞);IM9細胞(ヒトBリンパ芽球性細胞株);並びにMT-2及びMT-4ヒト白血病T細胞で試験した。
【０５１６】
4日間の薬物曝露に続いて、MTS染色法により細胞生存率を測定し、CC50値を判定した。薬物濃度は0.005μM〜100μMの範囲であった。三つの独立した実験(別段の指定のない限り)による結果を以下の表21にまとめる。
【表２５】
2010504978.tif 000109
【０５１７】
試験品目、化合物I及び化合物III及び対照化合物は、六つのヒトHIV-1感受性宿主細胞株において測定可能なインビトロでの細胞毒性を示した。細胞型に応じて、化合物Iでは16.6〜32.9μMの範囲の平均CC50値であり、これに対して化合物IIIでは14.8〜50.0μM(表21)であった。これは、EFVの平均CC50範囲(23.2〜51.0μM)と類似していた。
【０５１８】
六つの細胞株のうち、化合物I及び化合物IIIについては、MOLT-4細胞株が細胞毒性に対して最も感受性が高かった。EFVは、U937及びMT-2細胞において最も高い細胞毒性を示した。
【実施例１５】
【０５１９】
HIV-1に対する化合物I及び化合物IIIの選択指数
上記データから、MT-4細胞でのCC50とEC50の比を基にして、選択指数(SI)値を計算することができる(本検討で用いる標準的アッセイ)。
【０５２０】
MT-4T細胞での化合物IのCC50は27μMであり、EC50は1.2nMであり、したがってSI>22,000となった。化合物IIIのCC50は18.6μMであり、EC50は1.0nMであり、>18,000のSIとなった。同様に、対照薬物の選択指数はEFV=37,000と推定された。これらの値は、従来報告されているSI値(Young等、1995年、Antimicrob Agents Chemother:39(12):2602〜5頁;Andries等、2004年、Antimicrob Agents Chemother;48(12):4680〜6頁;Janssen等、2004年、J Med Chem;48(6):1901〜9頁;Boone 2006年、Curr.Opin Investig Drugs;7(2):128〜35頁)とよく一致していた。
【０５２１】
PBMCにおいて得られた細胞毒性及び活性のデータを用いて、化合物I及び化合物IIIについて>100,000のSI値を算出することができた。
【０５２２】
他のヒト細胞型におけるより長期の細胞毒性
最後に、MTS生存率染色法によって、試験品目の他のヒト細胞株におけるインビトロでの細胞毒性を毒物学的関連でHuH7及びHepG2肝細胞(Knowles等、1980年、Science;209(25):497〜9頁)並びにHeLa上皮細胞(Gey等、1952年、Cancer Research;12:264〜5頁)で測定した。細胞を、(0.005〜100μM)の薬物濃度範囲で9日間(HeLa)又は12日間(HuH7、HepG2)繰り返し処理した。三つから五つの独立した実験により得られた平均CC50値及び標準偏差を以下の表22にまとめる。
【表２６】
2010504978.tif 000110
【０５２３】
このより長期の細胞毒性試験において観察された傾向は、これまでの検討で見られた傾向を反映している。一般に、化合物I及び化合物IIIは三つの細胞株において、23〜32μMの範囲で同じようなCC50値をもたらした。EFVはやはり、これらの化合物のうちで最も小さい細胞毒性であった(CC50範囲48〜81μM)。
【実施例１６】
【０５２４】
インビトロでの比較データ
上記の標準的BH10 HIV細胞をベースにしたアッセイで、化合物I及びIII、対応する鏡像異性体(即ち、化合物II及びIV)及び対応するラセミ化合物を評価した。標準的試験パネルは、野生型ウイルス、並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C部位特異的変異誘導体を含んだ。
【０５２５】
以下の表に、化合物I、化合物II及びその対応するラセミ化合物についてのデータを示す。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、ラセミ化合物は2.4〜6.2nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、化合物Iは0.6〜3.5nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C及びK103N変異ウイルスに対して、化合物IIは129〜920nMのEC50を有していた。
【表２７】
2010504978.tif 000111
【０５２６】
化合物III、化合物IV及びその対応するラセミ化合物についてのデータを以下の表に示す。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、ラセミ化合物は1.6〜24.4nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、化合物IIIは0.6〜23.1nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、化合物IVは89.2〜824nMのEC50を有していた。
【表２８】
2010504978.tif 000112
【０５２７】
上記表に示すように、これらのアッセイでは、ラセミ混合物の活性の全部ではないがほとんどは、S鏡像異性体化合物I及びIIIの範囲内にある。
【０５２８】
細胞保護アッセイ
細胞保護アッセイで、化合物I及びIII、対応する鏡像異性体(即ち、化合物II及びIV)及び対応するラセミ化合物を評価した。標準的試験パネルは、野生型ウイルス、並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C部位特異的変異誘導体を含む。
【０５２９】
試験化合物を15mMでDMSOに溶解し、次いで、培地RPMI 1640+2g/L NaHCO3+1%カナマイシン溶液100×(10000μg/mL)+10% FCS+/-1、2%DMSO中に希釈した。
【０５３０】
MT-4細胞(供給源:NIHカタログ番号120)を96-ウェル細胞培養プレート(50μL中、ウェル当たり1×104細胞)上に播種した。
【０５３１】
50μL(0.29μM〜75μM)中への試験化合物の連続2倍希釈液を、完全培養基(RPMI、10%ウシ胎仔血清、ペニシリン-ストレプトマイシン)中の細胞に加え、90%の細胞変性作用を与える希釈度で、細胞を20μLの分量のHIV懸濁液(HIV-1株BH10野生型並びに耐性ウイルスY181C、K103N及びY181C/K103N)に感染させた。アッセイにおける最終DMSO濃度は120μL中に0.5%であった。次いで、細胞培養を37℃/5%CO2で4日間インキュベートした。次いで、CellTiter96AQueous One Solution Cell Proliferationアッセイ(Promega)を用いて細胞生存率を測定した。簡単に述べると、One Solution試薬を培養ウェル(20μL/ウェル)に直接加え、5時間インキュベートし、Sunrise Tecan分光光度計を用いて492nmで吸収度を記録した。
【０５３２】
EC50値を、Tecan Magellanソフトウェアを用いた四つのパラメーターに基づくS字形非線形回帰分析を用いて、阻害率対濃度のデータから決定した。
【０５３３】
化合物I、化合物II及びその対応するラセミ化合物についてのデータを以下の表に示す。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、ラセミ化合物は1.5〜7.0nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、化合物Iは0.26〜3.5nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C及びK103N変異ウイルスに対して、化合物IIIは62〜1000nM超のEC50を有していた。
【表２９】
2010504978.tif 000113
【０５３４】
化合物III及びその対応するラセミ化合物についてのデータを以下の表に示す。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、ラセミ化合物は0.2〜9.0nMのEC50を有していた。野生型BH10ウイルス並びにY181C、K103N及びK103N/Y181C変異ウイルスに対して、化合物IIIは0.14〜6.6nMのEC50を有していた。
【表３０】
2010504978.tif 000114
【０５３５】
シトクロムP450結合、阻害及び誘発
化合物I及びIII、対応する鏡像異性体(即ち、化合物II及びIV)並びに対応するラセミ化合物を、シトクロムP450結合についてのアッセイで評価した。
【０５３６】
阻害試験により、化合物I及びIIIが、ヒト肝ミクロソームタンパク質のCYP450アイソザイムの触媒的活性を阻害する可能性の評価を実施した。ヒト肝ミクロソームによるCYP450特異的プローブ基質の代謝産物生成速度を、化合物I又はIIIの存在下又は非存在下で測定した。直接阻害、並びに作用機序ベースの阻害即ちMBIとも称される時間依存性阻害についても評価した。最初の試験では、著しい阻害(IC50<10μM)が認められた場合、IC50値を決定し、続いてki又はkinact及びMBIについてのkiを測定した。さらに、阻害のタイプも評価した。
【０５３７】
化合物を、蛍光基質を有する組み換え型ヒトミクロソームタンパク質を用いてアッセイした。特定の代謝産物を検出するように設定された適切な励起、及び発光波長セットを用いてフュージョンプレートリーダー(Fusion plate reader)でシグナルを測定した。
【表３１】
2010504978.tif 000115
【０５３８】
CYP2C9阻害を、発光性CYP450基質ルシフェリン-HをCYP2C9及びNADPH再生系でインキュベートして実施した。ルミネッセンスを、フュージョンプレートリーダーを用いて測定した。
【表３２】
2010504978.tif 000116
【０５３９】
シトクロムP450アイソザイム阻害の酵素速度論的検討を、ヒト肝ミクロソームを用いて実施した。プールしたヒト肝ミクロソームによるCYP450特異的プローブ基質の代謝産物生成速度を、標準的阻害剤又は化合物I若しくはIIIの存在下(0、0.01、0.1、1、10及び50μM)又は非存在下で実施した。ミクロソームでのCYP450酵素の阻害(上記した濃度で)に対する、化合物I又はIIIプレインキュベーション(30分間)の影響を評価することによって、時間依存性阻害も検討した。阻害率が50%より高いレベルに達した場合、直接阻害と時間依存性阻害の両方についてのIC50値を測定した。さらに、Ki値及び阻害のタイプを試験することにより、化合物I又はIIIによるCYP2C8及びCYP2C9の直接阻害を試験(0、1、3、6、9及び12μMの濃度で)した。
【０５４０】
CYP2C8及びCYP2C9の直接阻害についてのKi値に加えて、化合物I又は化合物IIIによるCYP3A4(テストステロン及びミダゾラム)の時間依存性阻害についてのkinact及びKI値を測定した。CYP3A4(ミダゾラム及びテストステロン)について、0、0.0125、0.125、1.25、12.5及び62.5μMで化合物I及び化合物IIIを、ヒト肝ミクロソーム及びNADPHで37℃で0、1、5、10、20及び30分間プレインキュベートした。対照インキュベーションは、NADPH及び陽性対照阻害剤の存在なしでプレインキュベートされた、単一濃度での試験品目を含んだ。有効性が確認されているLC-MS/M法により代謝産物の生成を監視し、kinact及びKI値に加えて残留活性%を判定した。
【０５４１】
化合物Iは、CYP1A2、CYP2B6、CYP2D6及びCYP2C19(IC50=10.2μM)に対して限られた阻害率(IC50>20μM)を示し、CYP2C8、CYP2C9及びCYP3A4に対して顕著な阻害率(IC50<10μM)を示した。化合物Iは、それぞれ1.1及び1.4μMのki値でCYP2C8及びCYP2C9の競合阻害を示した。CYP3A4は複数の結合部位を有するので、阻害は一般に、二つの構造的に関連性のないプローブ基質、テストステロン及びミダゾラムを用いて評価される。化合物Iは、それぞれ0.14及び0.18μMのki値でCYP3A4-テストステロン及びCYP3A4-ミダゾラムに対する顕著な作用機序ベースの阻害を示した。
【表３３】
2010504978.tif 000117
【０５４２】
化合物IIIは、CYP1A2、CYP2B6、CYP2D6に対して限られた阻害率(IC50>20μM)を示し、CYP2C19に対してほどほどの阻害率(IC50=10.2μM)を示し、CYP2C8、CYP2C9及びCYP3A4に対して顕著な阻害率(IC50<10μM)を示した。化合物IIIは、それぞれ0.66及び0.93μMのki値でCYP2C8及びCYP2Cの競合阻害を示した。CYP3A4は複数の結合部位を有するので、阻害は一般に、二つの構造的に関連性のないプローブ基質、テストステロン及びミダゾラムを用いて評価される。化合物IIIは、それぞれ0.21及び0.06μMのki値でCYP3A4-テストステロン及びCYP3A4-ミダゾラムに対する顕著な作用機序ベースの阻害を示した。
【表３４】
2010504978.tif 000118
【０５４３】
インビトロでのCYP3A4のための誘発の可能性をDPX2細胞でスクリーニングした。DPX2細胞株は、ヒトプレグナンx受容体(PXR)、及びCYP3A4のエンハンサー領域を含むレポーター遺伝子ベクターで形質転換されたヒト肝細胞の癌腫細胞株(HepG2)の誘導体である。インビトロでのCYP1A2のための誘発の可能性をCYP1A2-DRE細胞でスクリーニングした。CYP1A2-DRE細胞株は、ダイオキシ応答エレメント(DRE)及びCYP1A2プロモーターエレメントを含むレポーター遺伝子で安定的に形質転換されたHepG2細胞である。CYP3A4誘発の程度は、試験品目で得られたPXRの活性化を、リファンピシン(強力な誘導因子)、ミフェプリストン(中程度の誘導因子)及びアンドロスタノール(弱い誘導因子)で得られた活性化と比較することによって判定した。CYP1A2誘発の程度は、試験品目で得られたアリール炭化水素受容体(AhR)の活性化を、TCDD(強力な誘導因子)、オメプラゾール(中程度の誘導因子)及び2-アセチルアミノフルオレン(弱い誘導因子)で得られた活性化と比較することによって判定した。
【表３５】
2010504978.tif 000119
【０５４４】
上記に示すように、化合物I及びIIIはCYP3A4及びCYP1A2の中程度の誘導因子である。
【０５４５】
インビトロでの血漿タンパク質結合
ラット、イヌ、サル及びヒトの血漿における化合物I及び化合物IIIのインビトロでの血漿タンパク質結合を平衡透析で判定した。ラット、イヌ、サル及びヒトの血漿を用いて、タンパク質結合を平衡透析により評価した。試料を、LC-MS/MS検出部を備えたHPLCでアッセイした。すべての種及び両方の化合物について、血漿タンパク質結合は高いもの(>99%)であった。
【表３６】
2010504978.tif 000120
【実施例１７】
【０５４６】
インビトロでのシトクロムP450阻害
他の薬剤と併用した化合物I及び化合物IIIの効果
化合物I及び化合物III、並びにHIVに対して活性なNRTI及びPIの部類の化合物を含むインビトロでの薬物-薬物間の相互作用検討を実施した。
【０５４７】
試験品目の抗ウイルス活性に対する各抗レトロウイルス薬物のインビトロでの効果を、インビボで見られるタンパク質結合条件下で起こる相互作用のよりよい予測を得るための、45%ヒト血清(HS)で実施する標準的薬物感受性アッセイ(DSA)を用いて、MT-4ヒトT細胞の野生型HIV-1ウイルス感染について3通り試験した。化合物I又は化合物IIIを、単独か又は各NRTI若しくはPIと併用して用量設定した。
【０５４８】
化合物I又は化合物IIIの効能に対する各NRTI又はPIの影響を、二つの異なる薬物濃度、「低い」(1×)及び「高い」(5×)濃度で試験した。各化合物に用いる高い濃度は、45%HSの存在下でなお測定可能な阻害値が確実に得られるようにするために実施したパイロット実験によって判定した。
【０５４９】
これらのインビトロでの薬物-薬物相互作用の試験は、異なる薬剤間の相乗効果の可能性を試験するのではなく、主に、異なる部類のHIV薬物間の負の相互作用の可能性を試験することに力を注いだ。
【０５５０】
まとめると、これらのインビトロでの実験において、試験した七つのHIV NRTI薬物又は六つのHIV PI薬物のどれも、HIVに対して、化合物I又は化合物IIIとの測定可能な負の相互作用又はアンタゴニスト相互作用を示さなかった。
【実施例１８】
【０５５１】
代謝
化合物I及びIIIの代謝をラット、イヌ、サル及びヒトの細胞で評価し、シトクロムP450の阻害をヒト肝ミクロソームで評価した。
【０５５２】
方法
新規な肝細胞をコラーゲンコーティングしたプレートの上に蒔き、1μMの試験化合物を最大2時間曝露した。組織培養基を、LC/MS検出法により化合物の消失についてアッセイした。表23の値は五つから七つのドナーからの独立した実験を表す。
【０５５３】
CYP450活性の阻害を、化合物I又はIIIの濃度を変えながら、ヒト肝ミクロソームによるCYP450特異性基質の代謝の変化を監視することによって判定した。2C8のプローブ基質はパクリタキセルであり、2C9のプローブ基質はジクロフェナクであり、3A4のプローブ基質はミダゾラム及びテストステロンであった。二つの基質を、酵素上の複数の結合部位に起因する3A4相互作用を評価するために用いた。
【０５５４】
結果
【表３７】
2010504978.tif 000121
【０５５５】
上記表に示すように、化合物Iと化合物IIIはどちらも、ヒト肝細胞において限られたインビトロでの代謝を示した。
【表３８】
2010504978.tif 000122
【０５５６】
上記表に示すように、化合物Iと化合物IIIはどちらも、CYP2C8及びCYP2C9の競合阻害を示した。さらに、化合物Iと化合物IIIはどちらも、CYP3A4の作用機序ベースの阻害を示した。作用機序ベースの阻害は、酵素と反応性の代謝性中間体との間の共有結合に関連する、酵素活性の時間依存的損失を特徴とする。新規な酵素が酵素活性を回復する必要があるので、作用機序ベースの阻害はCYP450誘発にも関連する。CYP 2D6、1A2、2B6及び2C19の阻害は認められなかった。
【０５５７】
化合物I及びIIIと対応するラセミ化合物の代謝
すべての種について、肝ミクロソームを用いてインビトロでの代謝を評価した。化合物を1μMで、最大で1時間、肝ミクロソームでインキュベートした。記載した合計インキュベーション時間を超える半減期は外挿した値である。LC-MS/MS検出法により、親化合物の消失について抽出物をアッセイした。
【０５５８】
データは、一つの独立した実験がなされたことを示している。
【表３９】
2010504978.tif 000123
【０５５９】
上記に示すように、純粋な鏡像異性体化合物I及びIIIは、その対応する鏡像異性体と比較して、肝ミクロソームにおいて相当に短い半減期を有している。
【実施例１９】
【０５６０】
インビボでの薬物動態学
ラット(化合物IIIのみ)、イヌ及びサルにおいて、化合物I及びIIIの薬物動態を評価した。
【０５６１】
方法
ポリエチレングリコール400(PEG400)中か、又は10%エタノール(EtOH)、10%ジメチルアセタミン(DMA)及び80%PEG400の混合液中の化合物を、示した用量レベルで、すべての動物に経口又は静脈内での単回投与で施した。感度の高い特異的LC-MS/MS法を用いて血漿濃度データを得た。毒性試験からの薬物動態データは、性差、変動及び曝露の側面を含んでいる。
【０５６２】
0(投与前)、投与後、5(IVのみ)、10、20、30分、1、2、4、6、8、12(POのみ)及び24時間で、ヘパリン化チューブに血液試料(1.5〜2.5mL)を採取した。血漿を分離し、分析するときまで-70℃で保存した。
【０５６３】
ラット、イヌ及びサルPK試験からの血漿試料及び排せつ物内の標識化していない化合物I及び化合物IIIの濃度を、タンデム質量分析検出(LC-MS/MS)部を備えた高速液体クロマトグラフ(HPLC)によって特定した。
【０５６４】
ラット(化合物IIIのみ)、イヌ及びサルでの静脈内及び経口での単回投与に続く、親化合物のAUC値の比較によって、薬物動態での絶対的な経口生物学的利用能を測定した。
【０５６５】
予備的なPK試験による、両方の化合物(5mg/kg)の経口生物学的利用能は、ラット(化合物IIIのみ)で38%、イヌで4〜9%、サルで42〜58%であった。ラットでの化合物IIIの生物学的利用能はイヌの場合より高く、サルに匹敵していたが、ラットは、イヌ及びサルと比べてずっと低い血漿AUC曝露を有していた。
【０５６６】
絶対的生物学的利用能を、5mg/kgでのサルの試験からの両方の化合物についても推定した。化合物IIIの絶対的生物学的利用能はオスで42%であり、メスで76%であった。これは、全身曝露での性差の可能性を示唆している。平均AUC1値を用いて計算した化合物Iの生物学的利用能は、オスで54%、メスで61%であった。しかし、1匹の動物における吸収は遅く、投与後8時間でも血漿濃度はまだ増大しているようであったため、オスについての値は過小評価されている可能性がある。AUC値を基にし、且つ、AUCを計算することができなかったこの動物を除くと、オスでの生物学的利用能は75%であった。
【０５６７】
5mg/kgの経口投与に続く、投与後24時間での血漿濃度は、化合物IIIで12ng/mLであり、化合物Iで17.9ng/mLであった。サルにおける5mg/kgの経口投与量は、約100mgのヒトへの投与量と同等(体表面積ベースで)である(産業用指針:健康な成人ボランティアにおける治療のための最初の臨床試験での最大安全開始用量の推定(Guidance for Industry:Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)、米国保健社会福祉省食品医薬品局(U.S.Department of Health and Human Services、Food and Drug Administration)、医薬品評価研究センター(Center for Drug Evaluation and Research)、2005年7月を参照されたい)。投与後24時間での化合物のこのレベルは、1日1回の投与を支持するものである。
【表４０】
2010504978.tif 000124
【実施例２０】
【０５６８】
毒物学的検討
化合物I及びIIIの潜在的毒性を、ラットとサルについてインビボで評価した。
【０５６９】
方法
SDラットとカニクイザルに、経口胃管栄養法によって、化合物I若しくは化合物III、又はGLPによる投与媒体(68% Capmul PG-8、20% PEG400、2% Tween20及び10% Labrasol)を1日1回14日間投与した。用いたのは、10匹のオスラット及び10匹のメスラットと、3匹のオスザル及び3匹のメスザルであった。ラットとサルに、0、50、150若しくは500mg/kg/日の化合物I又は、0、50、150、450mg/kg/日の化合物IIIを投与した。
【０５７０】
毒性を、臨床的観察、体重、飼料消費及び臨床病理(血液学、凝固及び血清化学)を用いて評価した。
【０５７１】
すべての動物について総合的な検視及び肉眼的病理学検査を実施し、組織学的評価用に、選択した臓器及び組織を集めた。
【０５７２】
すべての試料について、ヘマトクリット値、ヘモグロビン濃度、赤血球数、全白血球数及び血小板数の測定を実施した。白血球の差別的及び形態的評価を実施した。
【０５７３】
臨床生化学測定には、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、アスパラギン酸塩アミノトランスフェラーゼ(AST)、γ-グルタミルトランスペプチターゼ(GGT)及びアルカリ性ホスファターゼ(ALP)の活性、並びに、血中尿素窒素(BUN)、クレアチニン、全タンパク質、アルブミン、グロブリン、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、全ビリルビンの濃度及び電解質レベル(Na、K、P、Cl、Ca)が含まれる。
【０５７４】
尿試料(サルのみ)を、肉眼及び顕微鏡で評価し、pH、ビリルビン、グルコース、タンパク質、ケトン、血液、ウロビリノーゲン、亜硝酸塩、白血球及び比重について試験した。
【０５７５】
結果
化合物I又は化合物IIIを投与しても、飼料消費又は体重差に対する影響は認められなかった。治療に関連した臨床所見は観察されず、血液学的パラメーター若しくは血清化学パラメーター又は検尿所見における毒物学的に有意な変化は認められなかった。
【０５７６】
化合物III治療したラット(メスのみ)及びサルにおける中程度用量及び高用量での肝重量の増大を除いて、臓器重量に対する(絶対的又は相対的)毒物学的に有意な影響はなかった。しかし、これらの肝臓は顕微鏡的には特に注目すべきものはなかった。
【０５７７】
化合物I及び化合物III治療ラットでは、低用量の化合物III治療メスを除いて、すべてのグループにおいて、軽度から中等度の甲状腺濾胞細胞肥大/過形成が認められた。循環甲状腺ホルモン及びTSHのレベルの試験は行わなかったので、甲状腺機能に対する影響は評価することができなかった。
【０５７８】
ラット又はサルにおいて、他の肉眼的病変、顕微鏡的所見又は組織病理所見は認められなかった。
【０５７９】
本明細書で引用したすべての出版物及び特許出願を、あたかも各個別の出版物又は特許出願が具体的且つ個別的に参照により本明細書に組み込まれていると示されているかのように、参照により本明細書に組み込む。本発明を具体的な実施形態を参照して説明してきた。上記発明を、明瞭に理解されるように図及び例によって少し詳しく説明してきたが、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲を逸脱することなく、ある種の変更及び修正を加えることができることは、本発明の教示に照らせば当業者にはすぐに明らかであろう。本発明の変更形態及び修正形態は、本発明の上記詳細説明から、当業者には明らかであろう。
【図１Ａ】
2010504978.tif 000130
【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【国際調査報告】
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