(57)【要約】  ＴＰＯ模倣薬としてのヒドロキシ−１−アゾ−ベンゼン誘導体の新規な製造方法が発明される。その新規な方法に用いられる新規な中間体も発明される。その新規な方法により製造される化合物を含む医薬組成物も発明される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2010525072.tif 000023
Ｉ
［式中、Ｚは−ＣＯＯＨまたはテトラゾールを意味する］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（１）式ＩＩ：
【化２】
2010525072.tif 000024
ＩＩ
［式中、ＸはＣｌ、ＢｒまたはＩであり、ＹはＮＯ２またはＮＨ２であり、Ｒはアルキルまたは置換されているアルキルを意味する］
で示される化合物を、溶媒中にてボロン酸と反応させ、式ＩＩＩ：
【化３】
2010525072.tif 000025
ＩＩＩ
［式中、ＹはＮＨ２またはＮＯ２であり、Ｇは置換されているアリールを意味する］
で示される化合物を形成する工程；
（２）式ＩＩＩの化合物を式Ｉの化合物に変換する工程；および、その後、その医薬上許容される塩を形成してもよい工程を含む、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法に従って大規模で製造される、式Ｉの化合物。
【請求項３】
ＸがＢｒであり、ＹがＮＯ２であり、Ｒがｔ−ブチルであり、Ｚがテトラゾールである、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ＸがＢｒであり、ＹがＮＯ２であり、Ｒがｔ−ブチルであり、ＺがＣＯＯＨである、請求項１記載の方法。
【請求項５】
ＹがＮＯ２またはＮＨ２であり、Ｇが、
【化４】
2010525072.tif 000026
である、請求項１の方法に従って大規模で調製される際の式ＩＩＩの化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血小板産生および巨核球形成のプロモータとして有用である、トロンボポエチン（ＴＰＯ）模倣薬の製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
巨核球は、循環血小板の産生に関与する、骨髄誘導の細胞である。巨核球は、大抵の種で、骨髄細胞の＜０．２５％を占めるが、その体積は典型的な骨髄細胞の＞１０倍である。Kuterら、Proc. Natl. Acad. USA 91: 11104-11108（1994）を参照のこと。巨核球は核内分裂として知られる工程を経て、それにより核を複製するが、細胞分裂を経ることなく、それによりポリープ状細胞が形成される。血小板の数の減少に応答して、核内分裂速度が速まり、高次倍数性巨核球が形成され、巨核球の数が３倍まで増加するかもしれない。Harker、J. Clin. Invest. 47: 458-465（1968）を参照のこと。反対に、血小板の数の増加に対して、核内分裂速度が遅くなり、低次倍数性巨核球が形成され、巨核球の数が５０％まで減少するかもしらない。
【０００３】
循環血小板塊が核内分裂速度および骨髄巨核球の数を調節するとする、確かな生理学的フィードバック機構は解っていない。このフィードバックループの媒介に関連する循環血栓形成因子は、現在では、トロンボポエチン（ＴＰＯ）であると考えられている。さらに詳細には、ＴＰＯは血小板減少症の関与する症状の主たる体液性調節剤であることが解っている。例えば、Metcalf、Nature 369: 519-520（1994）を参照のこと。いくつかの研究にて、ＴＰＯが血小板の数を増加させ、血小板の大きさを大きくし、そして同位体の受容動物の血小板への導入を促進することが明らかにされた。具体的には、ＴＰＯは以下の数通りの経路にて：（１）ＴＰＯは巨核球の大きさおよび数の増加をもたらす；（２）ＴＰＯは巨核球における倍数性の形態のＤＮＡの含量の増加をもたらす；（３）ＴＰＯは巨核球核内分裂を増加させる；（４）ＴＰＯは巨核球の成熟の増加をもたらす；および（５）ＴＰＯは、骨髄におけるアセチルコリンエステラーゼ陽性の小細胞の形態での、前駆細胞の割合の増加をもたらす；それらの経路にて巨核球形成に影響を及ぼすと考えられる。
【０００４】
血小板（トロンボサイト）は血液凝固に不可欠であり、この数がかなり少ないと、患者は壊滅的な出血から死亡する危険があり、ＴＰＯは種々の出血性障害、例えば主として血小板異常に起因する疾患の診断および処理の両方に効果的に適用できる可能性がある（Harkerら、Blood 91: 4427-4433（1998）を参照のこと）。ＴＰＯを用いる臨床試験を進めるうちに、ＴＰＯを患者に安全に投与しうることが解った（Basserら、Blood89: 3118-3128（1997）；Fanucchiら、New Engl. J. Med. 336: 404-409（1997）を参照のこと）。加えて、最近の研究で、血小板減少症、特に癌またはリンパ腫の処理としての化学療法、放射線治療または骨髄移植がもたらす血小板減少症の処理にてＴＰＯ療法の効能を予測するための基準が提供された。（Harker、Curr. Opin. Hematol. 6: 127-134（1999）を参照のこと）。
【０００５】
ＴＰＯをコードする遺伝子がクローン化され、かつ特徴付けられた。Kuterら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 11104-11108（1994）；Barlyら、Cell 77: 1117-1124（1994）；Kaushanskyら、Nature 369: 568-571（１９９４）；Wendlingら、Nature 369: 571-574（1994）；およびSauvageら、Nature 369: 533-538（1994）を参照のこと。トロンボポエチンは、見かけの分子量が２５ｋＤａと３１ｋＤａで、共通のＮ−末端アミノ酸配列を有する、少なくとも２つの形態の糖タンパクである。Baatout、Haemostasis 27: 1-8（1997）；Kaushansky、New Encl. J. Med. 339: 746-754（1998）を参照のこと。トロンボポエチンは潜在的なＡｒｇ−Ａｒｇ切断部位により分離される２つの異なる領域を有するようである。アミノ末端領域はヒトおよびマウスにて高度に保存されており、エリスロポエチンならびにインターフェロン−αおよびインターフェロン−βとでいくらか相同性がある。カルボキシ末端領域は大きな種相違性を示す。
【０００６】
ヒトＴＰＯ受容体（ＴＰＯ−Ｒ；ｃ−ｍｐｌとしても知られている）についてのＤＮＡ配列およびそれによりコードされるペプチド配列が記載されている。（Vigonら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 5640-5644（1992）を参照のこと）。ＴＰＯ−Ｒは、ヘマトポエチン成長因子受容体ファミリーの、Ｎ−末端部の保存Ｃ残基についてのものを含む、細胞外ドメインの共通の構造デザイン、および膜透過領域の付近にあるＷＳＸＷＳモチーフにより特徴付けられるファミリーの構成員である。この受容体が造血において機能的役割を果たすとの証拠として、その発現がマウスでの脾臓、骨髄または胎児肝臓に制限され（Souyriら、Cell 63: 1137-1147（1990）を参照のこと）およびヒトでの巨核球、血小板およびＣＤ３４＋細胞に制限される（Methiaら、Blood 82: 1395-1401（1993）を参照のこと）との観察が挙げられる。ＴＰＯ−Ｒについての巨核球形成の鍵となるレギュレーターとしてのさらなる証拠として、ＣＤ３４＋細胞のＴＰＯ−Ｒ  ＲＮＡに対してアンチセンスの合成オリゴヌクレオチドへの曝露が、赤血球または骨髄コロニーの形成に影響を及ぼすことなく、巨核球コロニーの出現を有意に阻害するという事実がある。ある研究員たちは、該受容体がＧ−ＣＳＦおよびエリスロポエチンについての受容体での状況と同様に、ホモ二量体として機能すると主張する。（Alexanderら、EMBO J. 14: 5569-5578（1995）を参照のこと）。
【０００７】
血小板減少症を患っている患者における血小板濃度の回復の遅さは深刻な問題であり、血小板新生を促進しうる血液成長因子アゴニストについての調査に緊急性を付与するものである（Kuter、Seminars in Hematology, 37: Supp 4: 41-49（2000）を参照のこと）。
ＴＰＯ模倣薬として作用することで、血小板減少症を治療しうる化合物を提供することが望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＷＯ０１／８９４５７Ａ２はＴＰＯ模倣薬としての特定のヒドロキシ−１−アゾ−ベンゼン誘導体およびこれら化合物の製造法を記載する。本発明においてはヒドロキシ−１−アゾ−ベンゼン誘導体を製造する新規な方法が開示される。本発明は、複数の問題のある変形が回避されるため、ＷＯ０１／８９４５７Ａ２に記載の方法よりも優れた利点を示すものである。本発明は、毒性が強くかつ揮発性の副生成物としてのブロモメタンを形成するアニソールのジメチル化を、潜在的に有害なニトロ化を、および困難な塩化アリールの水素化分解を回避するものである。出発物質の２−ニトロフェノールおよび３−シアノボロン酸は容易に入手可能である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明はＴＰＯ模倣薬としての有用性を有するヒドロキシ−１−アゾ−ベンゼン誘導体を製造する新規な方法に関する。本発明はまた、該新規な方法にて用いられる新規な中間体に関する。
【００１０】
本発明は、式Ｉ：
【化１】
2010525072.tif 000002
（Ｉ）
［式中、Ｚは−ＣＯＯＨまたはテトラゾール−イルを意味する］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（１）式ＩＩ：
【化２】
2010525072.tif 000003
ＩＩ
［式中、ＸはＣｌ、Ｂｒ、Ｉまたはボロン酸とのカップリングに適する基であり、ＹはＮＯ２またはＮＨ２であり、Ｒはアルキルまたは置換されているアルキルを意味する］
で示される化合物を、溶媒中にてボロン酸と反応させ、式ＩＩＩ：
【化３】
2010525072.tif 000004
ＩＩＩ
［式中、ＹはＮＨ２またはＮＯ２であり、Ｇは置換されているアリールを意味する］
で示される化合物を形成する工程；
（２）式ＩＩＩの化合物を式Ｉの化合物に変換する工程；および、その後、所望によりその医薬上許容される塩を形成する工程を含む、方法に関する。
【００１１】
本発明はまた、式Ｉ：
【化４】
2010525072.tif 000005
（Ｉ）
［式中、Ｚはテトラゾール−イルを意味する］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（１）式ＩＩ：
【化５】
2010525072.tif 000006
ＩＩ
［式中、ＸはＢｒであり、ＹはＮＯ２であり、Ｒはアルキルまたは置換されているアルキルを意味する］
で示される化合物を、溶媒中にてボロン酸と反応させ、式ＩＩＩ：
【化６】
2010525072.tif 000007
ＩＩＩ
［式中、ＹはＮＯ２であり、Ｇは置換されているアリールを意味する］
で示される化合物を形成する工程；
（２）式ＩＩＩの化合物を式Ｉの化合物に変換する工程；および、その後、所望によりその医薬上許容される塩を形成する工程を含む、方法に関する。
【００１２】
本発明はまた、式Ｉ：
【化７】
2010525072.tif 000008
（Ｉ）
［式中、Ｚはテトラゾール−イルを意味する］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩、その水和物、溶媒和物またはプロドラッグの製法であって、
（１）式ＩＩ：
【化８】
2010525072.tif 000009
ＩＩ
［式中、ＸはＢｒであり、ＹはＮＯ２であり、Ｒはｔ−ブチルを意味する］
で示される化合物を、溶媒中にてボロン酸と反応させ、式ＩＩＩ：
【化９】
2010525072.tif 000010
ＩＩＩ
［式中、ＹはＮＯ２であり、Ｇは置換されているアリールを意味する］
で示される化合物を形成する工程；
（２）式ＩＩＩの化合物を式Ｉの化合物に変換する工程；および、その後、所望によりその医薬上許容される塩を形成する工程を含む、方法に関する。
【００１３】
本発明はまた、式Ｉ：
【化１０】
2010525072.tif 000011
（Ｉ）
［式中、Ｚは−ＣＯＯＨを意味する］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（１）式ＩＩ：
【化１１】
2010525072.tif 000012
ＩＩ
［式中、ＸはＢｒであり、ＹはＮＯ２であり、Ｒはアルキルまたは置換されているアルキルを意味する］
で示される化合物を、溶媒中にてボロン酸と反応させ、式ＩＩＩ：
【化１２】
2010525072.tif 000013
ＩＩＩ
［式中、ＹはＮＯ２であり、Ｇは置換されているアリールを意味する］
で示される化合物を形成する工程；
（２）式ＩＩＩの化合物を式Ｉの化合物に変換する工程；および、その後、所望によりその医薬上許容される塩を形成する工程を含む、方法に関する。
【００１４】
本発明はまた、式Ｉ：
【化１３】
2010525072.tif 000014
（Ｉ）
［式中、Ｚは−ＣＯＯＨを意味する］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩、その水和物、溶媒和物またはプロドラッグの製法であって、
（１）式ＩＩ：
【化１４】
2010525072.tif 000015
ＩＩ
［式中、ＸはＢｒであり、ＹはＮＯ２であり、Ｒはｔ−ブチルを意味する］
で示される化合物を、溶媒中にてボロン酸と反応させ、式ＩＩＩ：
【化１５】
2010525072.tif 000016
ＩＩＩ
［式中、ＹはＮＯ２であり、Ｇは置換されているアリールを意味する］
で示される化合物を形成する工程；
（２）式ＩＩＩの化合物を式Ｉの化合物に変換する工程；および、その後、所望によりその医薬上許容される塩を形成する工程を含む、方法に関する。
【００１５】
本発明はまた、大規模の新規な方法により調製される式Ｉの化合物に関する。大きな工業的規模にて調製される化合物は実質的に純粋な出発物質を必要とし、独特な不純物特性をもたらすことが多い。
【００１６】
本明細書にて用いる「ボロン酸とのカップリングに適する基」なる語は、一の分子に取り付けられると、該分子がボロン酸との触媒反応を受け、結合を形成する官能基を意味する。
【００１７】
本明細書にて用いる「大規模」なる語は、５０グラムより多くの生成物、好ましくは１０キログラムより多くの生成物を生成する一連の反応の規模を意味する。本明細書にて用いる「溶媒」なる語は、有機溶媒、無機溶媒または適当な割合の有機溶媒と無機溶媒の混合液を意味する。
【００１８】
本明細書にて用いる「置換されている」なる語は、特記しない限り、特定の化学的部分が、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アミノ、トリフルオロメチル、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ（ここで、ｎは０ないし６である）、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、アミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、シアノ、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アシルアミノ、アリールアミノ、ニトロ、オキシ、−ＣＯ２Ｒ５０、および−ＣＯＮＲ５５Ｒ６０（ここで、Ｒ５０、Ｒ５５およびＲ６０は、各々独立して、水素およびアルキルより選択される）からなる群より選択される、１個または複数の置換基、適当には１ないし５個の置換基、適当には１ないし３個の置換基を有することを意味する。
【００１９】
本明細書にて用いる「ボロン酸」なる語は、以下の式：
【化１６】
2010525072.tif 000017
［式中、芳香族環は所望により置換されていてもよい］
で示される化合物を意味する。
【００２０】
Ｚが−ＣＯＯＨである場合、適当には、塩はビス−モノエタノールアミンである。Ｚがテトラゾール−イルである場合、適当には塩はコリンである。
【００２１】
反応式
【化１７】
2010525072.tif 000018
【００２２】
実施例
２−ブロモ−６−ニトロフェノールｔ−ブチルアミン塩
【化１８】
2010525072.tif 000019
ＮＢＳ（２．５６ｇ、１４．４ミリモル）のクロロホルム（７０ｍｌ）中懸濁液に、ｔ−ブチルアミン（１．５０ｍｌ、１４．４ミリモル）を添加した。得られた溶液を０−５℃に冷却し、ついで２−ニトロフェノール（４．００ｇ、２８．８ミリモル）／クロロホルム（３５ｍｌ）を１０分間にわたって添加した。得られたスラリーを１時間攪拌し、ついで生成物を濾過し、クロロホルム（２０ｍｌ）で洗浄した。生成物を明橙色固体として得た。収量＝３．０３ｇ、７３％；δＨ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）１．２５（９Ｈ，ｓ）、５．８５（１Ｈ，ｔ）、７．４５（１Ｈ，ｄ）、７．６５（１Ｈ，ｄ）および７．９（３Ｈ，ｂｒｓ）。
【００２３】
【化１９】
2010525072.tif 000020
２’−ヒドロキシ−３’−ニトロ−３−ビフェニルカルボニトリル
２−ブロモ−６−ニトロフェノールｔ−ブチルアミン塩（１．５０ｇ、５．２０ミリモル）および炭酸ナトリウム（０．６６ｇ、６．２ミリモル）のメタノール（１２ｍｌ）および水（０．４８ｍｌ）中混合物に、トリスジベンジリジンアセトンジパラジウム（０）（９４ｍｇ、０．１０３ミリモル）およびトリｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレート（５２ｍｇ、０．１７９ミリモル）をアルゴン下にて添加した。該混合物を還流温度（６０℃）で３０分間加熱し、その後で３−シアノボロン酸（０．８３ｇ、５．６８ミリモル）／メタノール（１２ｍｌ）および水（０．４８ｍｌ）をアルゴン下にて１時間にわたって添加した。該反応物を還流温度で４時間維持した。この時間の後で、酢酸（１５ｍｌ）を添加し、溶媒（１７ｍｌ）を留去させた。ついで、水（１５ｍｌ）を５０−７０℃にて５分間にわたって加えた。得られたスラリーを室温に冷却し、生成物を濾過し、水（２０ｍｌ）で洗浄し、吸引して乾燥させた。生成物を褐色固体（０．９８ｇ、７９％）として得た；；δＨ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）７．５８（１Ｈ，ｔ）、７．５８（１Ｈ，ｔ）、７．７５（１Ｈ，ｄｄ）、７．９０（２Ｈ，ｍ）、８．０１（１Ｈ，ｓ）、８．０７（１Ｈ，ｄｄ）および１０．７（３Ｈ，ｂｒｓ）。
【００２４】
【化２０】
2010525072.tif 000021
３−ニトロ−３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２−ビフェニロール
ＳＢ−８１７２５０（１．００ｇ、４．１７ミリモル）のトルエン（１０ｍｌ）中懸濁液に、ジブチルチンオキシド（１０４ｍｇ、０．４２ミリモル）を加え、つづいてトリメチルシリルアジド（１．２０ｍｌ、９．１４ミリモル）を添加した。反応混合物を還流温度で２０時間加熱した。この時間の経過後、トルエン（１０ｍｌ）およびメタノール（１６７μｌ）を５０−６０℃で添加した。ついで、該反応混合物を室温に冷却した。暗色の微細な懸濁液を１時間攪拌し、ついで濾過した。生成物をトルエン（４ｍｌ）で洗浄し、ついで吸引して乾燥させ、暗褐色固体として得た（０．７５ｇ、６４％）；δＨ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）７．０５（１Ｈ，ｓ）、７．６０−７．７２（３Ｈ，ｍ）、８．０２（２Ｈ，ｄ）および８．１７（１Ｈ，ｓ）。
【００２５】
【化２１】
2010525072.tif 000022
（４Ｚ）−１−（３，４−ジメチルフェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４，５−ジオン４−｛［２−ヒドロキシ−３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−３−ビフェニルイル］ヒドラゾン｝
ついで、３−ニトロ−３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−２−ビフェニロールを、ＷＯ０１／８９４５７Ａ２に記載の経路Ａを用いて、（４Ｚ）−１−（３，４−ジメチルフェニル）−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４，５−ジオン４−｛［２−ヒドロキシ−３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−３−ビフェニルイル］ヒドラゾン｝に変換した。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態を上記にて説明するが、本発明は本明細書に開示されている指示それ自体に限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲内にあるすべての修飾する権利も留保されるものである。
【国際調査報告】
2010525072.tif 000027