(57)【要約】  本発明は、肺動脈高血圧症を治療するための、式(I)：2010531299.tif 000041の一酸化窒素放出性スタチンの使用に関する。【選択図】なし
2010531299.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺動脈高血圧症の治療用医薬を製造するための、式(I)：
【化１】
2010531299.tif 000017
［一般式(I)において、
Rは、
【化２−１】
2010531299.tif 000018
【化２−２】
2010531299.tif 000019
であり；
Xは、-O-、-S-、-NH-または-NHR'-（ここで、R'は1〜10の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル、好ましくはCH3である）であり；
Yは、次の意味を有する2価の基である：
a)
− 直鎖状または分枝鎖状のC1-C20-アルキレン、好ましくは2〜5の炭素原子を有するアルキレン；
− 環が側鎖T（ここで、Tは1〜10の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル、好ましくはCH3である）で置換されていてもよい、シクロアルキレン環中に5〜7の炭素原子を有するシクロアルキレン；
b)
【化３】
2010531299.tif 000020
（ここで、nは0〜20の整数であり、n1は1〜20の整数である）；
c)
【化４】
2010531299.tif 000021
（ここで、nは0〜20の整数であり、n1は1〜20の整数である）；
d)
【化５】
2010531299.tif 000022
（ここで、n1は前記で定義されたとおりであり、n2は0〜2の整数であり；
X1=-OCO-または-COO-であり、R2はHまたはCH3である）；
e)
【化６】
2010531299.tif 000023
（ここで、n1、n2、R2およびX1は前記で定義されたとおりであり；
Y1は-CH2-CH2-または-CH=CH-(CH2)n2-である）；
f)
【化７】
2010531299.tif 000024
（ここで、n1およびR2は前記で定義されたとおりであり、R3はHまたはCOCH3である）；
但し、Yがb)〜f)に記載された2価の基から選択されるとき、-ONO2基は-CH2基に結合している；
g)
【化８】
2010531299.tif 000025
（ここで、X2は-O-または-S-であり、n3は1〜6、好ましくは1〜4の整数であり、R2は前記で定義されたとおりである）；
h)
【化９】
2010531299.tif 000026
（ここで、
n4は0〜10の整数であり；
n5は1〜10の整数であり；
R4、R5、R6、R7は同一または異なって、Hまたは直鎖状もしくは分枝鎖状のC1-C4-アルキルであり、好ましくはR4、R5、R6、R7はHであり；
ここで、-ONO2基は、
【化１０】
2010531299.tif 000027
（ここで、n5は上記で定義されたとおりである）
に結合している；
Y2は、窒素、酸素、硫黄から選択される1以上のヘテロ原子を含む、5または6員の飽和、不飽和または芳香族のヘテロ環であり、次の：
【化１１】
2010531299.tif 000028
から選択される）］
の一酸化窒素放出性スタチンまたはその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体の使用。
【請求項２】
式(I)の化合物が、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
フルバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
プラバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
セリバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
アトルバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、および
ロスバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル
からなる群から選択される、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
肺動脈高血圧症の治療に使用するための、式(I)：
【化１２】
2010531299.tif 000029
［一般式(I)において、
Rは、
【化１３−１】
2010531299.tif 000030
【化１３−２】
2010531299.tif 000031
であり；
Xは、-O-、-S-、-NH-または-NHR'-（ここで、R'は1〜10の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル、好ましくはCH3である）であり；
Yは、次の意味を有する2価の基である：
a)
− 直鎖状または分枝鎖状のC1-C20-アルキレン、好ましくは2〜5の炭素原子を有するアルキレン；
− 環が側鎖T（ここで、Tは1〜10の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル、好ましくはCH3である）で置換されていてもよい、シクロアルキレン環中に5〜7の炭素原子を有するシクロアルキレン；
b)
【化１４】
2010531299.tif 000032
（ここで、nは0〜20の整数であり、n1は1〜20の整数である）；
c)
【化１５】
2010531299.tif 000033
（ここで、nは0〜20の整数であり、n1は1〜20の整数である）；
d)
【化１６】
2010531299.tif 000034
（ここで、n1は前記で定義されたとおりであり、n2は0〜2の整数であり；
X1=-OCO-または-COO-であり、R2はHまたはCH3である）；
e)
【化１７】
2010531299.tif 000035
（ここで、n1、n2、R2およびX1は前記で定義されたとおりであり；
Y1は-CH2-CH2-または-CH=CH-(CH2)n2-である）；
f)
【化１８】
2010531299.tif 000036
（ここで、n1およびR2は前記で定義されたとおりであり、R3はHまたはCOCH3である）；
但し、Yがb)〜f)に記載された2価の基から選択されるとき、-ONO2基は-CH2基に結合している；
g)
【化１９】
2010531299.tif 000037
（ここで、X2は-O-または-S-であり、n3は1〜6、好ましくは1〜4の整数であり、R2は前記で定義されたとおりである）；
h)
【化２０】
2010531299.tif 000038
（ここで、
n4は0〜10の整数であり；
n5は1〜10の整数であり；
R4、R5、R6、R7は同一または異なって、Hまたは直鎖状もしくは分枝鎖状のC1-C4-アルキルであり、好ましくはR4、R5、R6、R7はHであり；
ここで、-ONO2基は、
【化２１】
2010531299.tif 000039
（ここで、n5は上記で定義されたとおりである）
に結合している；
Y2は、窒素、酸素、硫黄から選択される1以上のヘテロ原子を含む、5または6員の飽和、不飽和または芳香族のヘテロ環であり、次の：
【化２２】
2010531299.tif 000040
から選択される）］
の一酸化窒素放出性スタチンまたはそれらの医薬的に許容される塩もしくは立体異性体。
【請求項４】
肺動脈高血圧症の治療に使用するための、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
フルバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
プラバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
セリバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
アトルバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、および
ロスバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル
からなる群から選択される式(I)の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺動脈高血圧症を治療するための一酸化窒素放出性スタチンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肺動脈高血圧症(PAH)は、右心不全および早死を引き起こす内皮の機能障害である肺動脈抵抗性の増加、および末端の肺動脈のリモデリングにより特徴付けられる進行性疾患である。肺血管の構造的変化は、末端の肺動脈平滑筋細胞(PASMCs)の増殖とアポトーシスの間の不均衡の結果であると考えられる。PAHにおける肺動脈のリモデリングの根底にある作用機序は多元的であり、異常なエンドセリン-1(ET-1)、セロトニン、トランスフォーミング成長因子(TGF-β1)および血小板由来増殖因子(PDGF)のシグナリングならびにアポトーシスに対する抵抗を含んでいる(Runo JR. et al., The Lancet 2003, 361:1533-1544)。
【０００３】
さらに、エラスターゼならびにマトリックスメタロプロレテイナーゼMMP-2およびMMP-9のような蛋白質分解酵素が、高血圧の肺血管壁中の細胞の遊走、増殖およびアポトーシスに関係している(Frisdal E. et al., Eur Respir J 2001, 18:838-845; Lepetit H. et al., Eur Respir J 2005, 25:834-842)。
【０００４】
3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-コエンザイムA(HMG-CoA)還元酵素阻害剤（スタチン）が、コレステロール低下以上に、抗増殖、抗血栓、抗炎症および抗酸化剤作用のような有益な心血管作用を示すことは十分に認識されている。
【０００５】
しかしながら、スタチンは、例えば胃腸障害、肝炎、膵炎、筋障害および横紋筋融解のような副作用を示すことも知られている(Martindale, The complete drug reference, 第33版, 969)。
【０００６】
WO 2004/105754は、より広い薬理活性と忍容性の増加の両方の点で、スタチンそのものに比べて改善された全体的なプロファイルを示す、スタチンの新規なニトロ誘導体を開示している。特に、該特許出願は、急性冠動脈症候群、脳卒中、末梢虚血のような末梢血管疾患、糖尿病患者の血管合併症、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマーおよびパーキンソン病のような神経変性疾患ならびに多発性硬化症のような自己免疫疾患の治療および／または予防に用いられる、抗炎症、抗血栓および抗血小板活性を有する化合物としてスタチンのニトロ誘導体を記載している。
【発明の概要】
【０００７】
一酸化窒素放出性スタチンが、肺動脈高血圧症の治療に用いることができることを、今ここに驚くべきことに見出した。
【０００８】
それゆえに、本発明の目的物は、肺動脈高血圧症の治療における、一般式(I)
【化１】
2010531299.tif 000003
のNO-放出性スタチンまたはその医薬的に許容される塩もしくは立体異性体の使用である、ここで、
【０００９】
Rは、
【化２−１】
2010531299.tif 000004
【化２−２】
2010531299.tif 000005
であり；
【００１０】
Xは、-O-、-S-、-NH-または-NHR'-（ここで、R'は1〜10の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル、好ましくはCH3である）であり；
Yは、次の意味を有する2価の基である：
a)
− 直鎖状または分枝鎖状のC1-C20-アルキレン、好ましくは2〜5の炭素原子を有するアルキレン；
− 環が側鎖T（ここで、Tは1〜10の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル、好ましくはCH3である）で置換されていてもよい、シクロアルキレン環中に5〜7の炭素原子を有するシクロアルキレン；
【００１１】
b)
【化３】
2010531299.tif 000006
（ここで、nは0〜20の整数であり、n1は1〜20の整数である）；
c)
【化４】
2010531299.tif 000007
（ここで、nは0〜20の整数であり、n1は1〜20の整数である）；
【００１２】
d)
【化５】
2010531299.tif 000008
（ここで、n1は前記で定義されたとおりであり、n2は0〜2の整数であり；
X1=-OCO-または-COO-であり、R2はHまたはCH3である）；
【００１３】
e)
【化６】
2010531299.tif 000009
（ここで、n1、n2、R2およびX1は前記で定義されたとおりであり；
Y1は-CH2-CH2-または-CH=CH-(CH2)n2-である）；
【００１４】
f)
【化７】
2010531299.tif 000010
（ここで、n1およびR2は前記で定義されたとおりであり、R3はHまたはCOCH3である）；
但し、Yがb)〜f)に記載された2価の基から選択されるとき、-ONO2基は-CH2基に結合している；
【００１５】
g)
【化８】
2010531299.tif 000011
（ここで、X2は-O-または-S-であり、n3は1〜6、好ましくは1〜4の整数であり、R2は前記で定義されたとおりである）；
【００１６】
h)
【化９】
2010531299.tif 000012
（ここで、
n4は0〜10の整数であり；
n5は1〜10の整数であり；
R4、R5、R6、R7は同一または異なって、Hまたは直鎖状もしくは分枝鎖状のC1-C4-アルキルであり、好ましくはR4、R5、R6、R7はHであり；
【００１７】
ここで、-ONO2基は、
【化１０】
2010531299.tif 000013
（ここで、n5は上記で定義されたとおりである）
に結合している；
Y2は、窒素、酸素、硫黄から選択される1以上のヘテロ原子を含む、5または6員の飽和、不飽和または芳香族のヘテロ環であり、次の：
【００１８】
【化１１】
2010531299.tif 000014
から選択される）。
【００１９】
本発明による好ましい化合物は次のものである：
フルバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
フルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
【００２０】
フルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
フルバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
フルバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
【００２１】
プラバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
プラバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
【００２２】
プラバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
プラバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
プラバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
【００２３】
セリバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
セリバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
【００２４】
セリバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
セリバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
セリバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
【００２５】
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
アトルバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
【００２６】
アトルバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
アトルバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、
アトルバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル、
【００２７】
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)ベンジルエステル、
ロスバスタチン 4-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
【００２８】
ロスバスタチン 3-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 2-(ニトロオキシメチル)フェニルエステル、
ロスバスタチン 2-[2'-(ニトロオキシ)エチルオキシ]エチルエステル、および
ロスバスタチン 2-メトキシ-4-[[4'-(ニトロオキシ)ブチル]トランス-2-プロペノイルオキシ]フェノールエステル。
【００２９】
式(I)のNO-放出性スタチンの一般的合成はWO 2004/105754に記載されている。
【００３０】
ヒトPASMCsにおけるNO-放出性プラバスタチンの効果
DNA合成における効果
DNA合成は、以前に記載されているように、24時間での[3H-メチル]-チミジン組み込みにより測定した。
ヒト肺動脈平滑筋細胞(PASMCs)を、10％ウシ胎仔血清(FBS)を含むダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)に、5×104細胞／ウエルの濃度で48-ウエルプレートに播種した。細胞を一晩付着するままにし、約80〜90％コンフレントの単層を得、次いで、血清フリーのDMEM中、毎日交換して48時間静止した。続いて細胞を、0.25μCi/ウエル[3H-メチル]-チミジン(GE Healthcare, Little Chalfont, Buck's, UK)を含む新しい培地中でインキュベートし、組み換えヒト血小板由来増殖因子-BB(PDGF)(5 ng/ml)の存在および非存在中、定められた濃度でプラバスタチンおよびNO-放出性プラバスタチン(WO 2004/105754の実施例1)で処理した。処理当たり4〜6の反復を分析し、[3H-メチル]-チミジン取り込みを液体シンチレーション分析(2200CA TRI-CARB, United Technologies Packard, Pangbourne, UK)により測定した。
表1に示されるように、プラバスタチンとは異なって、NO-放出性誘導体はDNA合成を阻害する。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
TGF-β1-刺激ET-1放出への効果
PASMCsからのエンドセリン-1(ET-1)放出を化学発光イムノアッセイ系を用いる馴化培地(QuantiGlo(商標), R&D Systems, UK)中で測定した。細胞を、10％FBSを含むDMEM中、24ウエルプレート(ウエル当たり5×104細胞)中でコンフレントになるまで増殖させ、24時間血清を枯渇させ、その後、トランスフォーミング成長因子-β1(TGF-β1)(10 ng/ml)で刺激ならびにプラバスタチンおよびNO-放出性プラバスタチン(WO 2004/105754の実施例1)で処理した。
【００３３】
放出実験は、メバロン酸(MVA)、ファルネシルピロホスフェート(FPP)、ゲラニルゲラニルピロホスフェート(GGPP)ならびにゲラニルゲラニル転移酵素阻害剤(GGTI-2133)、ファルネシル転移酵素阻害剤(FTI-277)およびRhoキナーゼ阻害剤(Y27632)の存在下でも行なわれた。MMP-9の産生は、腫瘍壊死因子-α(TNF-α)(10 ng/ml)とホルボール 12-ミリステート(myrisate) 13-アセテート(0.1μM)の2つの刺激により誘導され、Biotrack(商標) ELISA-ベースのイムノアッセイを用いる馴化培地(GE Healthcare, UK)中で測定された。
【００３４】
TGF-β1(10 ng/ml)の存在下、PASMCsによるET-1産生は、コントロールの血清枯渇細胞と比較して、顕著に増加した。表2に報告した結果は、本発明の化合物は、ET-1放出を阻害するのに効果的であることを示している。逆に、フラバスタチンは効果がなかった。
【００３５】
【表２】
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【国際調査報告】
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