(57)【要約】制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養物への分化を刺激または増加させる方法、および免疫反応、炎症、または炎症反応を低下または減少させる方法が提供される。方法は、特に、血液細胞もしくはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞への分化を刺激または増加させるために十分な量のＴＧＦ−βもしくはＴＧＦ−β類似体およびレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に、接触させるステップを含む。制御性Ｔ細胞の培養物は、例えば、培養物中の全細胞数の３０％以上に相当する培養物等、制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現するＴ細胞を含む。
2010531138.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
制御性Ｔ細胞への分化を刺激または増加させる方法であって、血液細胞もしくはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞への分化を刺激または増加させるために十分な量のＴＧＦ−βもしくはＴＧＦ−β類似体およびレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む、方法。
【請求項２】
前記レチノイン酸受容体作動薬は、ビタミンＡ、またはビタミンＡ誘導体、類似体、もしくは代謝産物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ビタミンＡ代謝産物は、レチノイン酸、またはレチノイン酸誘導体、類似体、もしくは異性体を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記レチノイン酸誘導体は、エステルまたはアミドを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記レチノイン酸誘導体は、フェンレチニドまたはレチンアルデヒドを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記レチノイン酸類似体は、９−シス−レチノイン酸、１３−シス−レチノイン酸、またはオールトランス−レチノイン酸を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記レチノイン酸異性体は、アロチノイドを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記アロチノイドは、アダパレンまたはタザロテンを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬は、レチナール、またはレチナール誘導体、立体異性体、類似体、または代謝産物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記レチナール誘導体、立体異性体、類似体、または代謝産物は、オールトランス、１３−シス、１１−シス、９−シス、７−シス、１１，１３−シス、もしくは９，１３−シス−ビタミンＡアルデヒド、または水和物、ヘミアセタール、もしくはアセタール体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記レチナール誘導体、立体異性体、類似体、または代謝産物は、レチナール水和物、レチナールメチルヘミアセタール、レチナールエチルヘミアセタール、レチナールプロピルヘミアセタール、レチナールイソプロピルヘミアセタール、レチナールブチルヘミアセタール、レチナールペンチルヘミアセタール、レチナールオクチルヘミアセタール、レチナールベンジルヘミアセタール、レチナールジメチルアセタール、レチナールジエチルアセタール、レチナールジプロピルアセタール、レチナールジイソプロピルアセタール、レチナールジブチルアセタール、レチナールジペンチルアセタール、レチナールジオクチルアセタール、レチナールジベンジルアセタール、レチナールプロピレングリコールヘミアセタールもしくはアセタール、レチナール１，２−Ｏ−イソプロピリデングリセリルヘミアセタールもしくはアセタール、レチナール３−アリルオキシ−１，２−プロパンジオールヘミアセタールもしくはアセタール、レチナールフィチルヘミアセタール、レチナールジフィチルアセタール、レチナールドデシルヘミアセタール、またはレチナールジドデシルアセタールである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記レチナール誘導体は、５，６−ジオキソ−５，６−セコ−レチナール、５，６−ジヒドロ−５，６−エポキシ−レチナール、または４−オキソレチナールである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記血液細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
Ｔ細胞は、前記血液細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記血液細胞または前記Ｔ細胞は、哺乳類の細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記血液細胞または前記Ｔ細胞は、ヒトの細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記血液細胞または前記Ｔ細胞は、試験管内または生体内で接触される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
試験管内、生体外、または生体内で制御性Ｔ細胞を増殖または拡張させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ＴＧＦ−β作動薬に前記血液細胞または前記Ｔ細胞を接触させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ＩＬ−２に前記血液細胞または前記Ｔ細胞を接触させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｔ細胞は、未処理Ｔ細胞または活性化Ｔ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記活性化Ｔ細胞は、未処理Ｔ細胞と比較して、ＣＤ４４の発現の増加およびＣＤ４５の発現の低下を示すと特徴付けられるＴ細胞を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
単離または精製された集団または複数の制御性Ｔ細胞であって、制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する、制御性Ｔ細胞。
【請求項２４】
制御性Ｔ細胞と関連した前記マーカーの発現の増加は、未処理、活性化、またはエフェクターＴ細胞内のマーカーの発現よりも大きい、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞。
【請求項２５】
制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する制御性Ｔ細胞の試験管内培養物であって、前記制御性Ｔ細胞は、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を用いずに、血液細胞のＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体との接触後の培養物中の制御性Ｔ細胞の量を上回る量で前記培養物中に存在するか、または前記制御性Ｔ細胞は、レチノイン酸受容体作動薬を用いずに、血液細胞のＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体との接触後の培養物中の制御性Ｔ細胞の量を上回る量で前記培養物中に存在する、制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する制御性Ｔ細胞の試験管内培養物。
【請求項２６】
制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する制御性Ｔ細胞の試験管内培養物であって、前記制御性Ｔ細胞は、精製、単離、または増殖によって前記培養物中の制御性Ｔ細胞数が増加することなく、前記培養物中に存在する全細胞数の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％超に相当する、制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する制御性Ｔ細胞の試験管内培養物。
【請求項２７】
前記培養物中の前記制御性Ｔ細胞数は、精製、単離、または増殖によって増加していない、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項２８】
前記制御性Ｔ細胞は、血液細胞またはＴ細胞のＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体およびレチノイン酸受容体作動薬との接触によって、あるいは、血液細胞またはＴ細胞のＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体およびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬との接触によって産生される、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項２９】
制御性Ｔ細胞と関連した前記マーカーは、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、またはＣＴＬＡ４のうちの１つ以上である、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３０】
制御性Ｔ細胞と関連した前記マーカーは、Ｆｏｘｐ３、ＣＣＲ９、およびα４β７を含む、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３１】
制御性Ｔ細胞と関連した前記マーカーは、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、およびα４β７を含む、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３２】
前記制御性Ｔ細胞の少なくとも一部は、対象への導入または投与後に分化状態を維持するか、または生存するか、もしくは増殖する、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３３】
前記制御性Ｔ細胞の少なくとも一部は、対象への導入または投与後に制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現するか、生存するか、もしくは増殖する、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３４】
前記制御性Ｔ細胞の少なくとも一部は、対象への導入または投与後にＦｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、またはＣＴＬＡ４マーカーの発現を維持するか、生存するか、もしくは増殖する、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３５】
前記Ｔ細胞の少なくとも一部は、対象への導入または投与後に、少なくとも約８時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日間以上、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上、分化状態を維持するか、または制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３６】
前記Ｔ細胞の少なくとも一部は、対象への導入または投与後に、制御性Ｔ細胞と関連した機能を有する、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３７】
制御性Ｔ細胞と関連した前記機能は、免疫反応、炎症、または炎症反応の阻害または抑制である、請求項３６に記載の制御性Ｔ細胞。
【請求項３８】
前記制御性Ｔ細胞は、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を用いずに、ＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体との血液細胞の接触によって産生される制御性Ｔ細胞よりも、対象への導入または投与後に大きい制御性Ｔ細胞機能を提供するか、またはレチノイン酸受容体作動薬を用いずに、ＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体との血液細胞の接触によって産生される制御性Ｔ細胞よりも、対象への導入または投与後に大きい制御性Ｔ細胞機能を提供する、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物。
【請求項３９】
制御性Ｔ細胞機能は、対象における免疫反応、炎症、または炎症反応の、より大きい阻害または抑制を含む、請求項３８に記載の複数の制御性Ｔ細胞。
【請求項４０】
請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物を含む医薬製剤、および薬学的または生物学的に許容される担体または賦形剤。
【請求項４１】
請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物を含むキットであって、細胞の生存の維持に関する、または対象への導入または投与に関する使用説明書を含む、キット。
【請求項４２】
制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる方法であって、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む、方法。
【請求項４３】
細胞を抗原または抗ＣＤ３抗体に接触させるステップをさらに含む、請求項１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗原は、自己抗原である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
活性化またはエフェクターＴ細胞への分化を阻害または減少させる方法であって、Ｔ細胞を、活性化またはエフェクターＴ細胞への分化を阻害または減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む、方法。
【請求項４６】
ＴＨ−１７＋エフェクター細胞数を減少させる方法であって、ＴＨ−１７＋エフェクター細胞を、ＴＨ−１７＋エフェクター細胞数を減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む、方法。
【請求項４７】
前記レチノイン酸受容体作動薬は、ビタミンＡ、またはビタミンＡ誘導体、類似体、もしくは代謝産物である、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬は、レチナール、またはレチナール誘導体、立体異性体、類似体、もしくは代謝産物である、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４９】
制御性Ｔ細胞を必要とする対象を治療する方法であって、請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項５０】
前記制御性Ｔ細胞は、同一または異なる対象の細胞から採取または抽出されたか、あるいは同一または異なる対象から採取または抽出された細胞から産生された、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記対象は、望ましくない、異常な、または病的な適応免疫反応を有しているか、またはその危険性がある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象は、望ましくない、異常な、または病的な急性または慢性免疫反応を有しているか、またはその危険性がある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記対象は、急性もしくは慢性炎症反応、急性もしくは慢性炎症、または自己免疫疾患を有しているか、またはその危険性がある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記対象は、移植拒絶反応または移植片対宿主病を有しているか、またはその危険性がある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
前記対象は、同種幹細胞移植、骨髄移植、または臓器もしくは組織移植を受けるか、またはその可能性がある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象は、多発性硬化症（ＭＳ）、１型もしくは２型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬性関節炎、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、腸炎、クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、セリアック病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球癆、突発性血小板減少症、多発性軟骨炎、多発性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、肝炎、慢性活動性肝炎、スティーブンジョンソン症候群、突発性スプルー、扁平苔癬、グレーブス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、多腺性自己免疫症候群、免疫介在性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、ギランバレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、または骨髄異形成症候群を有しているか、またはその危険性がある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象は、哺乳動物である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象は、ヒトである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５９】
対象における免疫反応、炎症、または炎症反応を低下または減少させる方法であって、前記対象における前記免疫反応、炎症、または炎症反応を低下または減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項６０】
前記レチノイン酸受容体作動薬は、ビタミンＡ、またはビタミンＡ誘導体、類似体、もしくは代謝産物である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ビタミンＡ代謝産物は、レチノイン酸、またはレチノイン酸誘導体、類似体、もしくは異性体を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記レチノイン酸誘導体は、エステルまたはアミドを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記レチノイン酸誘導体は、フェンレチニドまたはレチンアルデヒドを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記レチノイン酸類似体は、９−シス−レチノイン酸、１３−シス−レチノイン酸、またはオールトランス−レチノイン酸を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前記レチノイン酸異性体は、アロチノイドを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記アロチノイドは、アダパレンまたはタザロテンを含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記作動薬は、レチナール、またはレチナール誘導体、立体異性体、類似体、もしくは代謝産物である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６８】
前記レチナール誘導体、立体異性体、類似体、もしくは代謝産物は、オールトランス、１３−シス、１１−シス、９−シス、７−シス、１１，１３−シス、もしくは９，１３−シス−ビタミンＡアルデヒド、または水和物、ヘミアセタール、もしくはアセタール体である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記レチナール誘導体、立体異性体、類似体、もしくは代謝産物は、レチナール水和物、レチナールメチルヘミアセタール、レチナールエチルヘミアセタール、レチナールプロピルヘミアセタール、レチナールイソプロピルヘミアセタール、レチナールブチルヘミアセタール、レチナールペンチルヘミアセタール、レチナールオクチルヘミアセタール、レチナールベンジルヘミアセタール、レチナールジメチルアセタール、レチナールジエチルアセタール、レチナールジプロピルアセタール、レチナールジイソプロピルアセタール、レチナールジブチルアセタール、レチナールジペンチルアセタール、レチナールジオクチルアセタール、レチナールジベンジルアセタール、レチナールプロピレングリコールヘミアセタールもしくはアセタール、レチナール１，２−Ｏ−イソプロピリデングリセリルヘミアセタールもしくはアセタール、レチナール３−アリルオキシ−１，２−プロパンジオールヘミアセタールもしくはアセタール、レチナールフィチルヘミアセタール、レチナールジフィチルアセタール、レチナールドデシルヘミアセタール、またはレチナールジドデシルアセタールである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記レチナール誘導体は、５，６−ジオキソ−５，６−セコ−レチナール、５，６−ジヒドロ−５，６−エポキシ−レチナール、または４−オキソレチナールである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記対象は、骨格関節または消化管における免疫反応、炎症、または炎症反応の治療を受ける、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
前記対象に対して、前記レチノイン酸受容体作動薬は、骨格関節または消化管に投与される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
前記対象は、多発性硬化症（ＭＳ）、１型もしくは２型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬性関節炎、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、腸炎、クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、セリアック病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球癆、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、多発性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、肝炎、慢性活動性肝炎、スティーブンジョンソン症候群、突発性スプルー、扁平苔癬、グレーブス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、多腺性自己免疫症候群、免疫介在性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、ギランバレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、または骨髄異形成症候群を有しているか、またはその危険性がある、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、または請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の量は、レチノイン酸の生理学的量と近似的に等しい、請求項５９に記載の方法。
【請求項７６】
前記対象におけるレチノイン酸受容体作動薬またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の血清濃度は、約１ｘ１０−９Ｍ〜約５ｘ１０−５Ｍである、請求項５９に記載の方法。
【請求項７７】
前記対象におけるレチノイン酸受容体作動薬またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の血清濃度は、約１ｘ１０−９Ｍより少ない、請求項５９に記載の方法。
【請求項７８】
投与されるレチノイン酸受容体作動薬またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の量は、約１０ｍｇ〜１２００ｍｇの範囲である、請求項５９に記載の方法。
【請求項７９】
投与されるレチノイン酸受容体作動薬またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の量は、約５０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲である、請求項５９に記載の方法。
【請求項８０】
樹状細胞の培養物であって、前記樹状細胞は、制御性樹状細胞への分化を刺激または増加させるレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬で処理される、樹状細胞の培養物。
【請求項８１】
樹状細胞の培養物であって、前記樹状細胞は、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬、および抗原で処理される、樹状細胞の培養物。
【請求項８２】
前記樹状細胞は、脾臓樹状細胞、粘膜樹状細胞、血液、末梢血液細胞、骨髄単球由来樹状細胞、または誘導性樹状細胞を含む、請求項８０または８１に記載の培養物。
【請求項８３】
前記誘導性樹状細胞は、ＣＤ３４＋前駆細胞派生樹状細胞を含む、請求項８２に記載の培養物。
【請求項８４】
前記樹状細胞は、ＣＤ８−樹状細胞またはＣＤ４−／ＣＤ８−樹状細胞を含む、請求項８０または８１に記載の培養物。
【請求項８５】
レチノイン酸を産生する樹状細胞を産生する方法であって、樹状細胞を、接触した樹状細胞によってレチノイン酸の産生を増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む、方法。
【請求項８６】
前記樹状細胞は、脾臓樹状細胞、粘膜樹状細胞、血液、末梢血液細胞、骨髄単球由来樹状細胞、または誘導性樹状細胞を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８７】
前記誘導性樹状細胞は、ＣＤ３４＋前駆細胞派生樹状細胞を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記樹状細胞は、ＣＤ８−樹状細胞またはＣＤ４−／ＣＤ８−樹状細胞を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８９】
前記接触した樹状細胞は、レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＲＡＬＤＨ２）の発現の増加を示す、請求項８３に記載の方法。
【請求項９０】
前記樹状細胞は、試験管内または生体内で接触させられる、請求項８３に記載の方法。
【請求項９１】
対象における抗原に対する免疫反応を低下または抑制する方法であって、前記抗原に対する前記免疫反応を低下または抑制する量の請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物、または請求項８０もしくは８１に記載の培養物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項９２】
前記細胞または細胞培養物は、前記細胞または細胞培養物が投与される前記対象と同一の対象から採取または抽出された、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象は、望ましくない、異常な、または病的な適応免疫反応を有しているか、またはその危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
前記対象は、望ましくない、異常な、または病的な急性または慢性免疫反応を有しているか、またはその危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９５】
前記対象は、急性または慢性炎症反応を有しているか、またはその危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９６】
前記対象は、急性または慢性炎症を有しているか、またはその危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９７】
前記対象は、自己免疫疾患を有しているか、またはその危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９８】
前記対象は、移植拒絶反応または移植片対宿主病を有しているか、またはその危険性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項９９】
前記対象は、同種幹細胞移植、骨髄移植、または臓器もしくは組織移植を受けるか、またはその可能性がある、請求項９１に記載の方法。
【請求項１００】
前記抗原は、自己抗原を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗原は、免疫反応が望ましくない非自己抗原を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項１０２】
対象における細胞、組織、または臓器に対する免疫反応を低下または抑制する方法であって、前記細胞、組織、または臓器に対する前記免疫反応を低下または抑制する量の請求項２３に記載の制御性Ｔ細胞、請求項２５もしくは２６に記載の制御性Ｔ細胞の培養物、または請求項８０もしくは８１に記載の培養物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０３】
前記細胞、組織、または臓器は、前記細胞または細胞培養物が投与される前記対象とは異なる、ドナー対象からの移植である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記細胞または細胞培養物は、前記培養物が投与される対象に対して自己である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
細胞内のＩＬ−１７発現または産生を低下または抑制する方法であって、細胞を、前記細胞内のＩＬ−１７発現または産生を低下または抑制する量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む、方法。
【請求項１０６】
前記作動薬は、レチナール、またはレチナール誘導体、立体異性体、類似体、もしくは代謝産物である、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０８】
前記細胞は、試験管内または生体内で接触させられる、請求項１０５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府支援
本研究は、国立衛生研究所助成金番号ＲＯ１  ＡＩ０５０２６５−０６からの助成金によって一部支援された。政府は、本発明の一定の権利を有する。
【０００２】
関連出願
本願は、２００７年６月１３日出願の米国特許出願第６０／９４３，８２９号、２００７年８月１３日出願の米国特許出願第６０／９５５，５８５号、および２００８年３月３日出願の米国特許出願第６１／０３３，２８２号の優先権の利益を主張し、それらは、参照によって本明細書に明示的に組み込まれる。
【０００３】
技術分野
本発明は、制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養、ならびに免疫反応、炎症、または炎症反応を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止する方法、特に、抗原、細胞、組織、または臓器に対する免疫反応を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止する方法に関する。本発明はまた、制御性Ｔ細胞、樹状細胞、制御性Ｔ細胞の培養物、樹状細胞の培養物、ならびに制御性Ｔ細胞および樹状細胞（例えば、レチノイン酸を産生する樹状細胞）を産生または増加させる方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
導入
ヘルパーＴ細胞は、明確なサイトカインプロファイルの産生を通して免疫系において重要な機能を果たす。Ｔヘルパー−１（Ｔｈ−１）およびＴｈ−２細胞に加えて、ＩＬ−１７および他のサイトカインによって特徴付けられ、現在ＴＨ−１７細胞と呼ばれる、極性エフェクターＴ細胞の第３のサブセットは、いくつかの自己免疫状態の病因と関連する。サイトカイン、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）は、未処理Ｔ細胞を、自己免疫および炎症を阻害することができる制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞に変換する。ＴＧＦ−βは、Ｔｈ−１およびＴｈ−２細胞分化のサプレッサーであり、Ｔ細胞の、制御性表現型を有するＴ細胞、いわゆるＴｒｅｇ細胞への変換を駆動する。Ｔｈ−１およびＴｈ−２細胞の抑制と対照的に、樹状細胞（ＤＣ）およびＴＧＦ−βによる未処理Ｔ細胞の試験管内活性化は、ＩＬ−６を含む炎症性サイトカインと共に、ＴＨ−１７細胞の分化をもたらす。これらの観察は、ＴＧＦ−βの存在下でのＤＣによるＴ細胞のプライミングが、反対の免疫結果をもたらす可能性があることを示す。
【０００５】
ビタミンＡ代謝産物、レチノイン酸（ＲＡ）は、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ生成を促進する一方で、ＴＨ−１７分化を抑制することができる、ＴＧＦ−βで促進される免疫偏向の主要な調節因子である。ＲＡを生成するためにビタミンＡを分解するそれらの能力が独特である粘膜樹状細胞（ＤＣ）は、ＴＧＦ−βの存在下で、脾臓ＤＣよりもはるかに高い頻度でＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞を誘発することができる。反対に、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βの両方の存在下で、脾臓ＤＣが、Ｔ細胞を産生する高いレベルのＩＬ−１７を誘発した一方で、粘膜ＤＣは、これらの細胞を誘発するには非効率的であった。ＲＡ受容体拮抗薬および外因性ＲＡを使用すると、Ｔｒｅｇ対ＴＨ−１７細胞を誘発する粘膜ＤＣの分化能力は、それらのＲＡ−産生に依存していた。
【０００６】
レチノイン酸の２つの生理学的アイソフォーム（オールトランスおよび９−シス）は、生物学的機能の観点から最も良好に特徴付けられるが、レチノールおよびレチナール（ＲＡＬ）の両方は、非効率的にではあるが、腸管ホーミング分子を誘発することができると報告されている。ＲＡＬはまた、ＴＨ−１７分化を阻害し、同時に、ＴＧＦ−β媒介性Ｆｏｘｐ３誘発を増強することができる。ＲＡと同様に、ＲＡＬもまた、ＴＨ−１７−細胞分化に関与する、レチノイン酸オーファン受容体ＲＯＲｇ−ｔを直接的に（無ＡＰＣ系）阻害した。同様ではあるが、ＲＡＬの機能は、それをＲＡと区別するいくつかの特性を有するように思われる。ＤＣ／Ｔ細胞共培養物に添加される時、ＲＡＬが、ＭＬＮ  ＤＣ（ＭＤＣ）あるいは脾臓ＤＣ（ＳＤＣ）で培養されたＣＤ４細胞からのＩＬ−１７  産生を抑制する一方で、ＲＡＬによるＦｏｘｐ３の誘発の増加が、主にＭＤＣ培養物において観察された。これらの結果は、この系において、Ｆｏｘｐ３誘発が、我々が前駆体を添加した時のＲＡ産生の増加に起因した可能性があることを示す。この考えと一致して、ＲＡＲ拮抗薬ＬＥ１３５の添加は、Ｆｏｘｐ３誘発を逆にしたが、ＩＬ−１７産生は逆にしなかった。
【０００７】
ＲＡは、ＲＡＲ−ＲＡＲホモ二量体およびＲＡＲ−ＲＸＲヘテロ二量体の両方と結合することができるが、ＲＡＬは、ＲＡＲと結合しない。代わりに、ＲＡＬは、ＲＸＲ、および興味深いことに核内受容体ＰＰＡＲ−γ（ペルオキシソーム増殖活性化受容体γに対する）の両方と結合することが示されている。核内受容体のこのファミリーは、免疫系において多くの役割を果たすと考えられている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ビタミンＡ代謝産物、レチノイン酸（ＲＡ）は、炎症性ＴＨ−１７細胞のＩＬ−６で促進された誘発を阻害し、抗炎症性Ｔｒｅｇ分化を促進することができる、ＴＧＦ−β依存性免疫反応の主要な調節因子である。したがって、一般的な代謝産物は、炎症性免疫と抗炎症性免疫との間のバランスを調節することができる。
【０００９】
本発明に従って、試験管内、生体外、および生体内で御性Ｔ細胞への分化を刺激または増加させる方法が提供される。一実施形態では、方法は、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞への分化を刺激または増加させるのに十分な量のＴＧＦ−βもしくはＴＧＦ−β類似体およびレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。別の実施形態では、方法は、任意選択で、精製、単離、または増殖によって制御性Ｔ細胞数が増加することなく、培養物中に存在する全細胞数の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％超に相当するように、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞数を増加させるのに十分な量のＴＧＦ−βもしくはＴＧＦ−β類似体およびレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。特定の態様では、Ｔ制御性細胞は、マーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、またはＣＴＬＡ４）を発現する。さらなる特定の態様では、接触されるＴ細胞は、未処理Ｔ細胞または活性化Ｔ細胞を含む。
【００１０】
本発明に従って、単離または精製された集団または複数の制御性Ｔ細胞が提供され、ここで、制御性Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現する（例えば、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、またはＣＴＬＡ４）。一実施形態では、制御性Ｔ細胞は、未処理、活性化、またはエフェクターＴ細胞におけるマーカーの発現と比較して、制御性Ｔ細胞と関連したマーカー（例えば、ＣＤ４４）の発現の増加を示す。
【００１１】
本発明に従って、制御性Ｔ細胞と関連したマーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、またはＣＴＬＡ４）を発現する制御性Ｔ細胞の培養物（例えば、試験管内および生体外）がさらに提供される。一実施形態では、制御性Ｔ細胞は、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を用いずに、血液細胞をＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体と接触させた後の培養物中に存在する制御性Ｔ細胞の量を上回る量で培養物中に存在する。別の実施形態では、制御性Ｔ細胞は、レチノイン酸受容体作動薬を用いずに、血液細胞をＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β類似体と接触させた後の培養物中の制御性Ｔ細胞の量を上回る量で培養物中に存在する。さらなる実施形態では、制御性Ｔ細胞の培養物中で、制御性Ｔ細胞は、精製、単離、または増殖によって培養物中の制御性Ｔ細胞数が増加することなく、培養物中に存在する全細胞数の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％超に相当する。特定の態様では、制御性Ｔ細胞の少なくとも一部は、対象への導入または投与後の一定期間（例えば、少なくとも約８時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日間以上、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上）、制御性Ｔ細胞と関連したマーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、またはＣＴＬＡ４）を発現するか、制御性Ｔ細胞と関連した機能を有するか、分化状態を維持するか、または生存するか、もしくは増殖する。
【００１２】
本発明に従って、試験管内、生体外、および生体内で制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップ、および抗原（例えば、自己抗原）または抗ＣＤ３抗体に血液細胞またはＴ細胞を接触させるステップを含む。別の実施形態では、方法は、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。
【００１３】
本発明に従って、活性化またはエフェクターＴ細胞への分化を阻害または減少させる方法、およびＴＨ−１７＋エフェクター細胞数を減少させる方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、Ｔ細胞を、活性化またはエフェクターＴ細胞への分化を阻害または減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。一実施形態では、方法は、ＴＨ−１７＋エフェクター細胞を、ＴＨ−１７＋エフェクター細胞数を減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。
【００１４】
本発明に従って、試験管内、生体外、および生体内でレチノイン酸を産生する樹状細胞を産生する方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、樹状細胞を、接触した樹状細胞によるレチノイン酸の産生を増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。特定の態様では、樹状細胞には、脾臓樹状細胞、粘膜樹状細胞、血液、末梢血液細胞、骨髄単球由来樹状細胞、または誘導性樹状細胞（例えば、ＣＤ３４＋前駆細胞派生樹状細胞）、ＣＤ８−樹状細胞、もしくはＣＤ４−／ＣＤ８−樹状細胞が含まれる。
【００１５】
本発明に従って、樹状細胞の培養物（例えば、試験管内および生体外）がさらに提供される。一実施形態では、樹状細胞は、制御性樹状細胞への分化を刺激するかまたは増加させる、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬で処理されている。別の実施形態では、樹状細胞は、制御性樹状細胞への分化を刺激するかまたは増加させる、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬、および抗原で処理されている。特定の態様では、樹状細胞には、脾臓樹状細胞、粘膜樹状細胞、血液、末梢血液細胞、骨髄単球由来樹状細胞、または誘導性樹状細胞（例えば、ＣＤ３４＋前駆細胞派生樹状細胞）、ＣＤ８−樹状細胞、もしくはＣＤ４−／ＣＤ８−樹状細胞が含まれる。
【００１６】
本発明に従って、医薬製剤およびキットがさらに提供される。種々の実施形態では、医薬製剤には、薬学的または生物学的に許容される担体または賦形剤における制御性Ｔ細胞、単離および精製された制御性Ｔ細胞、集団または複数の制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養物、樹状細胞、ならびにレチノイン酸を産生する樹状細胞が含まれる。種々の実施形態では、キットには、制御性Ｔ細胞、単離および精製された制御性Ｔ細胞、集団または複数の制御性Ｔ細胞、および制御性Ｔ細胞の培養物が含まれる。
【００１７】
本発明に従って、制御性Ｔ細胞または樹状細胞（生体外および生体内）を必要とする対象を治療する方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、制御性Ｔ細胞、単離および精製された制御性Ｔ細胞、集団または複数の制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養物、樹状細胞、またはレチノイン酸を産生する樹状細胞を対象に投与するステップを含む。特定の態様では、細胞は、同一または異なる対象の細胞から採取または抽出されるか、あるいは、同一または異なる対象から採取または抽出された細胞から産生される。さらなる特定の態様では、対象は、望ましくない、異常な、または病的な（急性または慢性）免疫反応（例えば、適応免疫反応）、炎症反応、炎症、および自己免疫疾患を有しているか、またはその危険性があるか、あるいは移植もしくは移植片拒絶反応、または移植片対宿主病を有しているか、またはその危険性がある。
【００１８】
本発明に従って、対象における急性または慢性のいずれかの免疫反応（例えば、適応免疫反応）、炎症、または炎症反応を低下または減少させる方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、対象における免疫反応、炎症、または炎症反応を低下または減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を対象に投与するステップを含む。
【００１９】
本発明に従って、対象における抗原（自己抗原または非自己抗原）、細胞、組織、または臓器に対する免疫反応を低下または抑制する方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、対象における抗原（自己抗原または非自己抗原）、細胞、組織、または臓器に対する免疫反応を低下または抑制する量の制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養物、樹状細胞、樹状細胞の培養物を対象に投与するステップを含む。
【００２０】
本発明に従って、試験管内、生体外、および生体内で、細胞内のＩＬ−１７発現または産生を低下または抑制する方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、細胞を、細胞内のＩＬ−１７発現または産生を低下または抑制する量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させる方法を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１Ａ〜１Ｅ：Ａ）ＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ遺伝子導入マウスからの開口型ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋脾臓細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ染色を示す。ＣＤ４＋ＣＤ２５−細胞は、ＯＶＡｐおよびＭＬＮまたは脾臓（ＳＰＬ）ＤＣで、ならびに示された場合は、外因性サイトカインおよびＬＥ１３５またはオールトランス−レチノイン酸（ＲＡ）で刺激された。Ｂ）１Ａからの、および９−シス−レチノイン酸（９−シス）での培養上清のＩＬ−１７  ＥＬＩＳＡを示す（平均±ＳＤ）。Ｃ）開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋細胞の細胞内ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ染色を示す。全ＣＤ８＋脾臓Ｔ細胞は、α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣ、ならびに示されたサイトカインおよびＲＡで刺激された。Ｄ）α−ＣＤ３εおよびα−ＣＤ２８で刺激されたＣＤ４  Ｔ細胞におけるＰＣＲによって数回分析されたＲＯＲγｔ  ｍＲＮＡを示す。示された場合、サイトカインを含むＩＬ−１７（ＩＬ−１７条件）（黒）、またはこれらのサイトカイン＋ＲＡ（白）が含まれた（平均±ＳＤ）。４つの研究からの代表的なデータ。Ｅ）リステリア菌の経口感染の５日後の小腸固有層からのＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞内ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ染色を示す。データは１群当たり３〜４匹のマウスを代表する。
【図２】図２Ａ〜２Ｄ：Ａ）可溶性α−ＣＤ３、照射脾臓細胞、ならびに示されるように添加されたサイトカインおよびＲＡで刺激された、多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色を示す。Ｂ）関連ＯＶＡｐ、ソート脾臓ＣＤ１１ｃ＋ＤＣ、ならびに示されるように添加されたサイトカインおよび９−シスＲＡ（１００ｎＭ）で刺激され、ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋細胞に開口したＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色を示す。Ｃ）関連ＯＶＡｐおよび脾臓ＣＤ１１ｃ＋ＤＣで、ならびに示されたサイトカインを用いて、もしくは用いずに（なし）、ＲＡを用いて、もしくは用いずに刺激されたＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色を示す。Ｄ）抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで、ならびに外因性サイトカインを用いずに（なし）、または示されたサイトカイン（ＩＬ−１７条件：ＴＧＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α）で、およびＲＡを用いて、もしくは用いずに刺激され、ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞に開口した多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色を示す。３つの研究からの代表的なデータ。
【図３】図３Ａ〜３Ｅ：Ａ）ＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ遺伝子導入マウスからの開口型ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋細胞のＦｏｘｐ３および表面ＣＤ１０３に対する細胞内染色を示す。ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞は、ＯＶＡｐおよびＭＬＮまたはＳＰＬ  ＤＣ、ならびに示されるように、ＴＧＦ−β１およびＬＥ１３５またはＲＡで刺激された。Ｂ）ＤＣの代わりに脾臓ＡＰＣであることを除いて、上記のように刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ  ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞の細胞内Ｆｏｘｐ３およびＣＴＬＡ−４染色を示す。Ｃ）ＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ遺伝子導入マウスからのＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＯＶＡｐおよび脾臓ＤＣで、ならびにＴＧＦ−β１およびＲＡで刺激されたことを示す。Ｆｏｘｐ３に対する開口型ＴＣＲβ＋細胞の細胞内染色が示される。Ｄ）ＣＤ１０３、α４β７、およびＣＣＲ９に対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞表面染色を示す。ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞は、可溶性α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣ、さらに、ＴＧＦ−β１、ＲＡ、またはＴＧＦ−β１およびＲＡで刺激された。イソタイプ対照は、単灰色ヒストグラムで示される。３つの研究からの代表的なデータ。Ｅ）リステリア菌の経口感染の５日後の小腸固有層からのＣＤ４＋ＴＣＲβ＋リンパ球（左のパネル）、または未処理対照（右のパネル）におけるＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋細胞の割合を示す。＊Ｐ＜０．０５（Ｓｔｕｄｅｎｔ  Ｔ検定）。
【図４】図４Ａ〜４Ｄ：Ａ）種々の組織から単離されたＴＣＲβ＋開口型Ｔ細胞によるＦｏｘｐ３およびＣＤ４発現の細胞内染色を示す。ｓＬＰＬおよびｌＬＰＬは、小腸および大腸固有層リンパ球をそれぞれ示し、ＰＬＮは、末梢リンパ節を示す。数値は、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団におけるＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞の割合の平均±ＳＥＭを表す。Ｂ）開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ２５またはＣＤ１０３に対する細胞内Ｆｏｘｐ３染色および表面染色を示す。下のパネルにおいて、数値は、Ｆｏｘｐ３＋集団におけるＣＤ１０３＋細胞の割合を示す。５匹のマウスが各研究のために分析された。Ｃ）３日間、関連ＯＶＡｐおよび照射脾臓ＡＰＣで、ならびに示されたサイトカインを用いずに（なし）、および用いて、およびＲＡを用いずに、および用いて刺激されたＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＣＴＬＡ−４に対する細胞内染色、ならびにＣＤ２５に対する表面染色を示す。比較のために、同一条件下で刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４＋ＣＤ２５−細胞も示される。Ｄ）ヒストグラムは、ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋細胞に開口し、３、４、および５日間（Ｃ）に記載される条件下で刺激されたＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋細胞の染色を表す。単灰色−なし、灰色線−ＲＡ、点線−ＴＧＦ−β、黒線−ＴＧＦ−ｂ＋ＲＡ。２つの研究からの代表的なデータ。
【図５】図５Ａ〜５Ｄ：Ａ）関連ＯＶＡｐ、ソート脾臓ＣＤ１１ｃ＋ＤＣで、ならびに外因性サイトカインを用いずに（なし）、または示されたサイトカインを用いて、およびＲＡまたは９−シスＲＡ（両方１００ｎＭで）を用いずに、および用いて刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＣＤ１０３に対する細胞内染色を示す。ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋細胞に開口する。４つの研究からの代表的なデータ。Ｂ）可溶性α−ＣＤ３ε、照射脾臓細胞で、および外因性サイトカインを用いずに（なし）、またはＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３で、およびＲＡを用いずに、または用いて刺激された未処理多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＣＤ４染色の細胞内染色を示す。２つの研究からの代表的なデータ。Ｃ）リステリア菌の経口感染の５日後のマウスの脾臓から単離された全ＣＤ４＋ＴＣＲβ＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋リンパ球の割合を示す。各群は、賦形剤、ＲＡ、またはＬＥ５４０の２回の腹腔内注射（０および２日目）を受けた。賦形剤、ＲＡ、またはＬＥ５４０での２週間の強制投与を受けた未処理マウスのデータが右側に示される（平均±ＳＤ）。Ｄ）５Ａに記載されるものと同一の条件下で刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４  Ｔ細胞のＦｏｘｐ３に対する細胞内染色を示す。２つの研究の代表的なデータ。
【図６】図６Ａ〜６Ｅ：Ａ）α−ＣＤ３ε単体（なし）またはＴＧＦ−β１およびＲＡで、試験管内で刺激された２．５ｘ１０５個のＣＤ４＋Ｔ細胞と５ｘ１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ細胞の共移植の６〜７週間後のＲＡＧ−１-／-マウスの遠位結腸のヘマトキシリンおよびエオシン染色を示す。原倍率４０Ｘ。各群における４匹のマウスからの代表的なデータ。Ｂ）添加なし（四角）、ＴＧＦ−β１（三角）、またはＴＧＦ−β１およびＲＡ（菱形）を用いて、２．５ｘ１０５個のα−ＣＤ３εで刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞と５ｘ１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ細胞の移植後のＲＡＧ−１-／-マウスの体重を示す。１群当たり４匹の動物の平均±ＳＤ重量が示される。データは３つの研究を代表する。Ｃ）６Ｂにおける群の組織学的スコアを示す。Ｄ）示されたサイトカインを用いて、可溶性α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣで初期に刺激された未処理ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋のＦｏｘｐ３細胞内染色を示す。細胞は、ＩＬ−２を用いて２日間そのまま置かれ、分析前に外因性サイトカインの非存在下で再刺激された。Ｅ）６Ｄに記載されるように、しかしＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の存在下で初期に刺激され、そのまま置かれ、示された条件下で再刺激された未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞のＩＬ−１７に対する細胞内染色を示す。開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞におけるＩＬ−１７＋細胞の割合が図示される。３つの研究からの代表的なデータ。
【図７】図７：α−ＣＤ３ε単体またはＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β１およびＲＡと合わせて、試験管内で刺激された２．５ｘ１０５個のＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｌｙ５．１＋）と合わせた５ｘ１０５個のＬｙ５．２＋（Ｌｙ５．１−）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ細胞の移植の６〜７週間後の、ＲＡＧ−／−レシピエントマウスから単離された大腸からのＩＥＬのＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する細胞内染色を示す。ＣＤ４＋リンパ球に開口する。１群当たり３〜４匹のマウスを用いた２つの研究からの代表的なデータ。
【図８】図８Ａ〜８Ｅ：Ａ）ＣＦＳＥ標識未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞が、α−ＣＤ３ε、脾臓ＡＰＣ、示されたサイトカイン、および示されるように、ＲＡで刺激されたことを示す。ＩＬ−１７分化を駆動するために、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１−β、ＴＧＦ−β、およびＩＬ−６を使用した。Ｆｏｘｐ３およびＩＬ−１７に対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色が図示される。Ｂ）示された条件下で、可溶性α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣで刺激されたＣＤ８＋Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＩＬ−１７に対する細胞内染色を示す。Ｃ）およびＤ）Ｂ７．１／２−／−ＩＬ−２＋／＋またはＢ７．１／２−／−ＩＬ−２−／−マウスからの未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ１０３（Ｃ）、ならびに細胞内ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ（Ｄ）に対するＦｏｘｐ３および表面染色に対する細胞内染色を示す。細胞は、可溶性α−ＣＤ３ε、脾臓ＡＰＣ、ならびに示されたサイトカイン、ＲＡ、および／またはＩＬ−２に対する遮断抗体（２０μｇ／ｍｌ）で刺激され、ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞に開口した。Ｅ）８Ｃおよび８Ｄにおける培養上清におけるＩＬ−１７に対するＥＬＩＳＡを示す（平均±ＳＤ）。２つの研究の代表的なデータ。
【図９】図９Ａ〜９Ｃ：Ａ）可溶性α−ＣＤ３ε、照射脾臓ＡＰＣ、およびＴＧＦ−β（５ｎｇ／ｍｌ）で、またはそれらと合わせて示された濃度のＩＬ−６およびＲＡで刺激され、ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞に開口した多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＩＬ−１７に対する細胞内染色を示す。Ｂ）可溶性α−ＣＤ３ε、照射脾臓ＡＰＣで、および示されたサイトカインおよび／またはＲＡ（１００ｎＭ）および／または遮断抗ＩＬ−２抗体（２０μｇ／ｍｌ）を用いずに（なし）、または用いて刺激されたＣ５７ＢＬ／６マウスからの全ＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する細胞内染色を示す。Ｃ）示された条件を有する９Ｂに記載されるように設定された培養上清におけるＩＬ−１７に対するＥＬＩＳＡを示す。２つの研究の代表的なデータ。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｂ：ソート全脾臓ＣＤ１１ｃ＋ＤＣ（Ａ）、またはＣＤ４、ＣＤ８、もしくは形質細胞様ＤＣを発現する小集団においてソートされたＣＤ１１ｃ＋ＤＣ（Ｂ）による、ＲＡＬＤＨ酵素アイソフォーム１、２、および３（Ａ）、ＲＡＬＤＨ２のみ（Ｂ）に対する、ｑＰＣＲによって測定されるようなｍＲＮＡの発現を示す。
【図１１】図１１：レチナールが、Ｔｒｅｇ分化を増強することを示す。
【図１２】図１２：レチナールが、ＴＨ−１７分化のサプレッサーであることを示す。
【図１３】図１３：シトラールによるＲＡＬＤＨ活性の阻害が、ＴＨ−１７分化に対するＲＡＬ効果を逆にしないことを示す。
【図１４】図１４：示された条件下でのＩＬ−１７レベルを示す。
【図１５】図１５：示された条件下でのＦｏｘｐおよびＲＯＲγの相対的発現を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、特に、試験管内、生体外、または生体内で、制御性Ｔ細胞への分化を活性化する、刺激する、増加させる、誘発する、増強する、または促進する方法を提供する。一実施形態では、方法は、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞への分化を活性化する、刺激する、増加させる、誘発する、増強する、または促進するのに十分な量のＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、もしくは類似体）およびレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させる方法を含む。
【００２３】
本発明はまた、特に、制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる方法を提供する。一実施形態では、方法は、血液細胞またはＴ細胞を、制御性Ｔ細胞を産生するか、または制御性Ｔ細胞数を増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。特定の態様では、細胞は、抗原（例えば、自己抗原）または抗ＣＤ３抗体に接触させられる。さらなる特定の態様では、細胞は、ＩＬ−２にさらに接触させられるか、ＩＬ−２に接触させられない。
【００２４】
抗原の非存在下または存在下で産生される制御性Ｔ細胞は、対象に抗原に対する寛容性を提供するために使用することができる。したがって、自己抗原等の抗原に対する望ましくない、または異常な免疫反応を起こしているか、またはその危険性がある対象は、対象に抗原寛容性を提供するために、制御性Ｔ細胞を投与することができる。
【００２５】
制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」と略され、またサプレッサーＴ細胞としても知られる）は、免疫ホメオスタシスおよび自己抗原に対する寛容性を維持するために、免疫系のある特定の  炎症性成分の活性化を抑制する。制御性Ｔ細胞内の遺伝子の欠損は、種々の自己免疫疾患をもたらす。
【００２６】
制御性Ｔ細胞は、ある特定のマーカーのより多いまたは少ない発現によって特徴付けることができる。例えば、制御性Ｔ細胞は、他のＴ細胞型（例えば、未処理、活性化、またはエフェクターＴ細胞）と比較して、ある特定のマーカー（例えば、ＣＤ４５）をより少なく発現する一方で、ある特定のマーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３（フォークヘッドボックスｐ３）、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＩＬ−２受容体、ＣＴＬＡ−４（細胞毒性Ｔ−リンパ球関連分子−４）、ＣＤ８等）を発現する。
【００２７】
Ｔ細胞は、例えば、未処理、活性化エフェクター（細胞毒性、ヘルパー）、または記憶Ｔ細胞、およびＮＫ  Ｔ細胞をさらに含む。未処理、活性化、およびエフェクター（細胞毒性、ヘルパー）、または記憶Ｔ細胞およびＮＫ  Ｔ細胞は、ある特定の細胞マーカーのより多いまたは少ない発現によって特徴付けることができる。例えば、活性化エフェクターＴ細胞は、Ｆｏｘｐ３を検出可能な程度に発現しない。
【００２８】
Ｔ細胞はまた、混合集団または複数の細胞、あるいはＴ細胞を含む細胞のある特定のサブタイプをその中で豊富にする細胞を含む。したがって、Ｔ細胞は、１つ以上の異なるＴ細胞型（例えば、制御性、未処理、活性化エフェクター（細胞毒性、ヘルパー）、記憶Ｔ細胞、ＮＫ細胞等）、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、赤血球等を含むことができる。
【００２９】
未処理Ｔ細胞または活性化エフェクターＴ細胞は、試験管内、生体外、または生体内でのレチノイン酸受容体作動薬との接触、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬との接触によって、制御性Ｔ細胞に変換することができる。したがって、本発明の方法は、活性化またはエフェクターＴ細胞（例えば、ＴＨ−１７＋細胞）を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するステップ、ならびに試験管内、生体外、および生体内で活性化またはエフェクターＴ細胞（例えば、ＴＨ−１７＋細胞）数を減少させる、または低下させるステップを含む。
【００３０】
本発明に従って、特に、活性化またはエフェクターＴ細胞への分化を阻害または減少させる方法、エフェクターＴ細胞（例えば、ＴＨ−１７＋細胞）数を低下させる方法がさらに提供される。一実施形態では、方法は、Ｔ細胞を、活性化またはエフェクターＴ細胞への分化を阻害または減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。別の実施形態では、方法は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＴＨ−１７＋細胞）を、エフェクターＴ細胞（例えば、ＴＨ−１７＋細胞）数を低下させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。さらなる特定の態様では、細胞は、ＩＬ−２にさらに接触させられるか、ＩＬ−２に接触させられない。
【００３１】
ＴＧＦ−β、ならびにＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、および類似体は、本発明に従って有用である。ＴＧＦ−βアイソフォームの限定されない例には、例えば、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β１，２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β２，３、ＴＧＦ−β４、およびＴＧＦ−β５が含まれる。ＴＧＦ−β誘導体の限定されない例は、例えば。ＴＧＦ−β類似体の限定されない例は、例えば。さらなるＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、および類似体は、当業者には既知であろう。
【００３２】
ＴＧＦβ受容体は、ＴＧＦ−β受容体Ｉ（５３ｋＤａ）およびＴＧＦ−β受容体ＩＩ（７０／８０ｋＤａ）を含む。したがって、ＴＧＦ−βは、ＴＧＦ−β受容体作動薬と呼ばれる、ＴＧＦ−β受容体と結合し、ＴＧＦ−βと同様の作動薬活性を有する分子で置換することができる。
【００３３】
「調節する」という用語は、例えば、活性または発現を刺激する、増加させる、誘発する、増強する、もしくは促進するための、または活性、機能、もしくは発現を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するための、活性、機能、または発現の任意の変化を意味する。
【００３４】
作動薬とは、試験管内、生体外、または生体内で活性または発現を刺激する、増加させる、誘発する、増強する、もしくは促進するものをいう。拮抗薬は、試験管内、生体外、または生体内で、活性、機能、または発現を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するものをいう。
【００３５】
レチノイン酸受容体作動薬は、試験管内、生体外、または生体内で、レチノイン酸受容体の活性または機能を活性化する、刺激する、誘発する、増強する、または促進する任意の分子を含む。組成物および方法に適用できるレチノイン酸受容体作動薬の限定されない例には、ビタミンＡ、ならびにビタミンＡ誘導体、類似体、および代謝産物が含まれる。ビタミンＡ代謝産物の限定されない例には、レチノイン酸、ならびにレチノイン酸誘導体、類似体、および異性体が含まれる。レチノイン酸受容体誘導体の限定されない例には、フェンレチニドおよびレチンアルデヒド等のエステルおよびアミドが含まれる。レチノイン酸受容体類似体の限定されない例には、９−シス−レチノイン酸、１３−シス−レチノイン酸、およびオールトランス−レチノイン酸が含まれる。レチノイン酸受容体異性体の限定されない例には、アダパレンおよびタザロテン等のアロチノイドが含まれる。
【００３６】
レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬は、試験管内、生体外、または生体内で、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）の活性または機能を活性化する、刺激する、誘発する、増強する、増加させる、または促進する任意の分子を含む。組成物および方法に適合できるレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の限定されない例は、レチナール、ならびにレチナール誘導体、立体異性体、類似体、および代謝産物である。レチナール誘導体、立体異性体、類似体、および代謝産物の限定されない例は、オールトランス、１３−シス、１１−シス、９−シス、７−シス、１１，１３−シス、９，１３−シス−ビタミンＡアルデヒド、ならびに水和物、ヘミアセタール、およびアセタール体である。レチナール誘導体の限定されない例には、立体異性体、類似体、および代謝産物、例えば、レチナール水和物、レチナールメチルヘミアセタール、レチナールエチルヘミアセタール、レチナールプロピルヘミアセタール、レチナールイソプロピルヘミアセタール、レチナールブチルヘミアセタール、レチナールペンチルヘミアセタール、レチナールオクチルヘミアセタール、レチナールベンジルヘミアセタール、レチナールジメチルアセタール、レチナールジエチルアセタール、レチナールジプロピルアセタール、レチナールジイソプロピルアセタール、レチナールジブチルアセタール、レチナールジペンチルアセタール、レチナールジオクチルアセタール、レチナールジベンジルアセタール、レチナールプロピレングリコールヘミアセタールもしくはアセタール、レチナール１，２−Ｏ−イソプロピリデングリセリルヘミアセタールもしくはアセタール、レチナール３−アリルオキシ−１，２−プロパンジオールヘミアセタールもしくはアセタール、レチナールフィチルヘミアセタール、レチナールジフィチルアセタール、レチナールドデシルヘミアセタール、およびレチナールジドデシルアセタール等が含まれる。レチナール誘導体のさらなる限定されない例は、５，６−ジオキソ−５，６−セコ−レチナール、５，６−ジヒドロ−５，６−エポキシ−レチナール、および４−オキソレチナールである。
【００３７】
「接触する」または「接触」という用語は、１つの物質（例えば、血液細胞またはＴ細胞または樹状細胞）ともう１つの物質（例えば、ＴＧＦ−β、レチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）作動薬、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬）との間の直接的物理的接触もしくは相互作用、または間接的接触もしくは相互作用を意味する。間接的接触または相互作用の一実施例は、中間物との結合であり、それは次に、参照された物質と結合する。したがって、例えば、ＴＧＦ−βまたはレチノイン酸は、次に細胞（例えば、ＴＧＦ−βまたはレチノイン酸受容体作動薬を介して）と接触または相互作用する物質と接触または相互作用（例えば、結合）する。したがって、血液細胞またはＴ細胞と接触する分子は、細胞と物理的に接触または相互作用する場合もあれば、しない場合もあるが、次に細胞と接触または相互作用する中間分子と結合する場合がある。
【００３８】
血液細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、全血、または血液細胞内に１つ以上の細胞型を含む細胞のサブセットもしくは集団を含む。サブセットは、例えば、リンパ球（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー、またはＮＫ細胞）、および単球（例えば、マクロファージ、樹状細胞）を含む。
【００３９】
血液細胞は、哺乳類細胞等の動物細胞であってもよい。哺乳類細胞には、霊長類細胞（例えば、ヒト、類人猿、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク等）、飼育動物細胞（イヌおよびネコ）、家畜動物細胞（ニワトリ、アヒル、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、ならびに実験動物細胞（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）が含まれる。
【００４０】
血液細胞およびＴ細胞は、対象から直接採取されるか、または例えば、対象から採取された親細胞の１つ以上の細胞倍加からの子孫細胞等、対象から採取された細胞から抽出されてもよい。したがって、例えば、血液またはＴ細胞は、保存または冷凍された細胞から抽出されても、または細胞の培養物から抽出されてもよい。対象からの血液細胞またはＴ細胞は、発明の方法に従って処理することができ、必要に応じてさらに操作、増殖、または保存（例えば、冷凍）することができる。処理された細胞および細胞培養物は、例えば、本明細書に記載されるような処理方法を達成するために、同一対象（自己移植）または異なる対象（同種からの対象、すなわち、同種移植、または異種、すなわち異種移植等）に任意選択で再導入し戻すことができる。
【００４１】
本発明はまた、特に、Ｔ細胞の試験管内および生体外培養物を提供する。一実施形態では、制御性Ｔ細胞と関連したマーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、ＣＴＬＡ４等のうちの１つ以上）を発現する制御性Ｔ細胞の培養物が提供される。別の実施形態では、制御性Ｔ細胞の培養物中で、制御性Ｔ細胞は、培養物中に存在する全細胞数の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％超に相当する。特定の態様では、制御性Ｔ細胞は、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を用いずに（すなわち、外因性の非存在下で）血液細胞のＴＧＦ−βとの接触後の培養物中の制御性Ｔ細胞の量を上回る量で培養物中に存在する。別の特定の態様では、制御性Ｔ細胞は、レチノイン酸受容体作動薬を用いずに、血液細胞のＴＧＦ−βとの接触後の培養物中の制御性Ｔ細胞の量を上回る量で培養物中に存在する。さらなる特定の態様では、制御性Ｔ細胞の培養物中で、制御性Ｔ細胞は、精製、単離、または増殖によって培養物中の制御性Ｔ細胞数が増加することなく、培養物中に存在する全細胞数の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％超に相当する。さらなる特定の態様では、制御性Ｔ細胞の培養物中で、制御性Ｔ細胞は、未処理または活性化Ｔ細胞の分化（例えば、エフェクターＴヘルパー細胞の制御性Ｔ細胞への変換）によって制御性Ｔ細胞数を増加させることによって、培養物中に存在する全細胞数の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％超に相当する。そのような細胞は、本発明の方法に従って産生することができる。
【００４２】
Ｔ細胞の試験管内および生体外培養物は、制御性Ｔ細胞の少なくとも一部が、ある一定の期間、または対象への導入または投与後に生体内で、分化状態を維持するか、または生存するか、もしくは増殖する、Ｔ細胞を含む。Ｔ細胞の試験管内および生体外培養物はまた、制御性Ｔ細胞の少なくとも一部が、ある一定の期間、または対象への導入または投与後に生体内で、制御性Ｔ細胞と関連したマーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３、ＣＤ１０３、ＣＣＲ９、α４β７、ＣＤ２５、ＣＴＬＡ４等）を発現するか、生存するか、もしくは増殖する、Ｔ細胞を含む。Ｔ細胞の試験管内および生体外培養物は、制御性Ｔ細胞の少なくとも一部が、ある一定の期間、または生体内での対象への導入または投与後に、制御性Ｔ細胞と関連した機能を有する（例えば、免疫反応、炎症、または炎症反応、特定の組織または臓器等に対する向性を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止する）、Ｔ細胞をさらに含む。特定の態様では、Ｔ細胞の試験管内または生体外培養物は、少なくとも約８時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日以上、もしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上にわたって、または対象への導入または投与後に生体内で少なくとも約８時間、１２，時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、もしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日以上、もしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上にわたって、分化状態を維持するか、制御性Ｔ細胞と関連したマーカーを発現するか、または制御性Ｔ細胞と関連した機能を有するＴ細胞の少なくとも一部を含む。
【００４３】
そのような制御性Ｔ細胞の培養物は、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止することができる。したがって、種々の実施形態では、制御性Ｔ細胞は、特に、そのような制御性Ｔ細胞の非存在下と比べて、ある一定の期間（例えば、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日以上、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上）、対象における免疫反応、炎症、または炎症反応の、増加した、または上回る、阻害、低下、または抑制を提供する。さらなる種々の実施形態では、制御性Ｔ細胞はまた、特に、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の非存在下でのＴＧＦ−βとの血液細胞の接触によって産生される制御性Ｔ細胞と比べて、対象への導入または投与後、ある一定の期間（例えば、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日以上、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上）、上回る制御性Ｔ細胞機能、またはレチノイン酸受容体作動薬の非存在下でのＴＧＦ−βとの血液細胞の接触によって産生される制御性Ｔ細胞と比べて、対象への導入または投与後、ある一定の期間（例えば、８時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０日以上、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２１、２４、２７、３０週間以上）、上回る制御性Ｔ細胞機能を提供することができる。
【００４４】
本発明は、特に、樹状細胞の培養物をさらに提供する。一実施形態では、樹状細胞の培養物（例えば、ＣＤ８−またはＣＤ４−／ＣＤ８−）は、制御性樹状細胞への分化を刺激または増加させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬で処理される。別の実施形態では、樹状細胞の培養物（例えば、ＣＤ８−またはＣＤ４−／ＣＤ８−）は、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬、および抗原で処理される。特定の態様では、樹状細胞の培養物は、さらに接触されるか、または抗原で処理される。
【００４５】
本発明は、特に、レチノイン酸を産生する樹状細胞を産生する方法をさらに提供する。一実施形態では、方法は、樹状細胞を、接触している樹状細胞によってレチノイン酸の産生が増加する量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。
【００４６】
樹状細胞には、脾臓樹状細胞、粘膜樹状細胞、血液、末梢血液細胞、骨髄樹状細胞、単球由来樹状細胞、または例えば、ＣＤ３４＋前駆細胞派生樹状細胞を含む、誘導性樹状細胞が含まれる。樹状細胞には、ＣＤ８−樹状細胞およびＣＤ４−／ＣＤ８−樹状細胞が含まれる。接触した樹状細胞は、外因性レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬と接触していない樹状細胞と比較して、増加した、または刺激されたレチンアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＲＡＬＤＨ２）の発現を示し得る。
【００４７】
樹状細胞は、対象から採取するか、または例えば、対象から採取された親細胞の１つ以上の細胞倍加の子孫細胞等、対象から採取された細胞から抽出することができる。したがって、例えば、樹状細胞は、保存または冷凍された細胞からであってもよく、または細胞の培養物から抽出されてもよい。樹状細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ）細胞（例えば、Ｙａｍａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ２００７／０６９６６６）から誘導することができる。本発明に従って処理された樹状細胞は、必要に応じてさらに操作、増殖、または保存（例えば、冷凍）することができる。処理された細胞および細胞培養物は、例えば、本明細書に記載されるような処理方法を達成するために、同一対象（自己移植）または異なる対象（同種からの対象、すなわち、同種移植、または異種、すなわち異種移植等）に任意選択で再導入し戻すことができる。
【００４８】
ここで使用される接触および処理は、溶液中、固相内、培養物中、試験管内、生体外、細胞、臓器、または組織内、および生体内での接触および処理を含む。生体内での接触および処理は、投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）、投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、または送達と呼ぶことができる。したがって、方法の実施形態は、試験管内（溶液中、固相内、または培養物中）、生体外、および生体内での接触、処理、投与、および送達の方法を含む。
【００４９】
方法は、特に、例えば、Ｔ細胞増殖、分化、もしくは発生、またはＴ細胞機能もしくは活性を調節することができる。本発明に従って調節することができるＴ細胞機能および活性には、例えば、Ｔ細胞の細胞毒性、特定の組織または臓器に対するＴ細胞向性、Ｔ細胞サイトカイン、ケモカインもしくはマーカー発現もしくは分泌、またはＴ細胞サイトカインもしくはケモカイン受容体発現もしくは分泌が含まれる。
【００５０】
例えば、処理方法を含む、方法の実施形態は、生体外または生体内での制御性Ｔ細胞、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、もしくは類似体）、レチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬、または樹状細胞の投与またはそれらへの接触による処理に潜在的に適している、任意の生理学的条件、疾患、病気、疾病、およびそれらの症状または病状の処理に適用できる。したがって、方法の実施形態は、概して、制御性Ｔ細胞、ＴＧＦ−β、レチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を必要とするか、またはそれらから恩恵を受け得る対象、および望ましくない、および異常な免疫反応（例えば、急性または慢性炎症、炎症反応、および自己免疫疾患）等、特定の生理学的条件、疾患、病気、疾病、ならびにそれらの症状および病状を有する対象の処理を含む。
【００５１】
したがって、本発明は、特に、制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞の培養物に反応し得る、Ｔ制御性細胞分化もしくは産生、樹状細胞の培養、樹状細胞分化もしくは産生の増加、刺激、誘発、増強、または促進に反応し得る、または生体外または生体内で、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、もしくは類似体）、レチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に反応し得る、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状を治療するための組成物および方法をさらに提供する。一実施形態では、方法は、対象を治療するのに十分な量のＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、もしくは類似体）およびレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を投与するステップを含む。別の実施形態では、方法は、対象を治療するのに十分な量の制御性Ｔ細胞を投与するステップを含む。さらなる実施形態では、方法は、対象を治療するのに十分な量の樹状細胞を投与するステップを含む。
【００５２】
方法の実施形態は、生理学的条件、疾患、病気、および疾病によって引き起こされる、またはそれらと関連した生理学的条件、疾患、病気、疾病、および症状または病状を治療するステップを含む。特定の実施形態では、方法は、例えば、制御性Ｔ細胞、樹状細胞、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、類似体、もしくは誘導体）、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）作動薬を投与するか、または生体外または生体内でそれらに接触させるステップを含む。したがって、例えば、制御性Ｔ細胞、樹状細胞、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、類似体、もしくは誘導体）、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）作動薬を投与するか、またはそれらに接触させることによって対象を治療するステップもまた含まれる。
【００５３】
「治療」という用語は、対象への接触または投与を指す。治療に関連して使用される「治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、治療が、生理学的条件、疾患、病気、または疾病を有しているかまたはその危険性がある、あるいは、有益な効果が提供されることが望ましい生理学的条件、疾患、病気、または疾病と関連した、またはそれらによって引き起こされる１つ以上の症状または病状を示す対象に対して行われることを意味する。したがって、治療的処置方法は、客観的または主観的（自覚）効果または利益、例えば、生理学的条件、疾患、病気、または疾病と関連した、またはそれらによって引き起こされる１つ以上の症状または病状の改善を提供することを目的とする。
【００５４】
「予防法」およびその文法上の変化形は、既知の、または罹患した生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状に先立つ、対象への接触、投与、または生体内送達を指す。予防状態は、対象が、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状を有しているかわからない状態を含む。そのような方法において、制御性Ｔ細胞、樹状細胞、レチノイン酸受容体作動薬、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−βアイソフォーム、誘導体、もしくは類似体）、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）作動薬との接触、それらの投与、生体外または生体内送達の効果は、生理学的条件、疾患、病気、または疾病によって引き起こされるか、またはそれらと関連した生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状もしくは病状の発症の可能性または感受性を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止することであり得る。
【００５５】
いかなる治療または療法に対しても典型的であるように、異なる対象は、治療に対して異なる反応を示し、一部は、特定の治療方法に対して反応しないか、または所望よりも小さく反応する場合がある。例えば、反応性の変動性によって、全ての対象が、与えられた治療または治療方法に反応するとは限らない。
【００５６】
限定されない生理学的条件、疾患、病気、疾病、および症状または病状は、制御性Ｔ細胞または樹状細胞（抗原特異的または抗原非特異的）の不十分な、不足した、減少した、または低下した数、活性、または分化によって引き起こされるか、またはそれらと関連し得る。したがって、方法の実施形態は、概して、制御性Ｔ細胞または樹状細胞を必要とする対象、および不十分な数、活性、もしくは分化、不足した、減少した、または低下した数、活性、もしくは分化、または制御性Ｔ細胞もしくは樹状細胞の損失によって引き起こされるか、またはそれらをもたらす、任意の生理学的条件、疾患、病気、疾病、それらの症状もしくは病状の治療を含む。
【００５７】
さらなる限定されない例には、活性化もしくはエフェクターＴ細胞または樹状細胞（抗原特異的または抗原非特異的）の望ましくない数または活性によって引き起こされる、生理学的条件、疾患、病気、疾病、およびそれらの症状および病状が含まれる。したがって、方法の実施形態は、概して、減少した、低下した、阻害された、抑制された、遅延した、停止された、制限された、制御された、排除された、除去された、遮断された、または防止された活性化もしくはエフェクターＴ細胞または樹状細胞を必要とするか、またはそれらから恩恵を受け得る対象、ならびに活性化もしくはエフェクターＴ細胞または樹状細胞の望ましくない数または活性、あるいは増加した、増強された、刺激された、促進された、または誘発された数または活性によって引き起こされるか、またはそれらをもたらす、任意の生理学的条件、疾患、病気、疾病、その症状または病状の治療を含む。
【００５８】
本発明は、特に、対象における免疫反応、炎症、または炎症反応を低下または減少させる方法をさらに提供する。一実施形態では、方法は、対象における免疫反応、炎症、または炎症反応を低下または減少させる量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を、対象に接触させる、または投与するステップを含む。
【００５９】
方法の実施形態は、望ましくない、および異常な免疫反応、炎症、炎症反応、免疫障害、および免疫病によって引き起こされるか、またはそれらと関連した生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状もしくは病状の治療を含む。種々の実施形態では、方法は、望ましくない、または異常な炎症反応および炎症免疫障害および免疫病の慢性および急性型を治療するステップと、制御性、エフェクター、または活性化Ｔ細胞等の、リンパ球の望ましくない、または異常な増殖、生存、分化、死、または活性の慢性および急性型を治療するステップを含む。例示的な方法では、対象は、Ｔ制御性細胞、樹状細胞、ＴＧＦ−β（ＴＧＦ  β受容体作動薬）、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬のうちの１つ以上に接触させられるか、それらを投与される。
【００６０】
ここで使用される「免疫反応、炎症、または炎症反応」は、任意の免疫反応、炎症、もしくは炎症反応、または活性もしくは機能を指す。望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応は、所望よりも大きいもしくは小さいか、または生理学的に正常である。望ましくない免疫反応、炎症、または炎症反応は、望ましくない、または不適切である正常な反応、機能、または活性であり得る。したがって、異常でないとしても、望ましくない、または不適切であると見なされる正常な免疫反応、炎症、および炎症反応は、これらの用語の意味の中に含まれる。望ましくない免疫反応、炎症、または炎症反応はまた、異常な反応、機能、または活性であり得る。異常な免疫反応、炎症、または炎症反応は非正常である。望ましくない、不適切な、異常な、または非正常な免疫反応、炎症、および炎症反応は、慢性または急性のいずれかの体液性、細胞性、またはそれらの組み合わせであり得る。
【００６１】
望ましくない、異常な、または非正常な免疫反応の限定されない例は、例えば、自己免疫状態、疾患、病気、または疾病の場合に、免疫反応が過敏性である場合である。望ましくない、異常な、または非正常な免疫反応の別の例は、免疫反応が、任意の組織または臓器において、全身的に、局部的に、または局所的に、急性または慢性免疫反応、炎症、または炎症反応をもたらす場合である。望ましくない、異常な、または非正常な免疫反応のさらに別の例は、免疫反応が、移植拒絶反応または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の場合に細胞、組織、または臓器移植等に見られるような、細胞、組織、または臓器の破壊をもたらす場合である。望ましくない、異常な、または非正常な免疫反応のさらに別の例は、免疫反応が、抗原に対する反応が所望よりも大きいか、または異常である、自己もしくは非自己抗原、細胞、臓器、または組織に対する場合である。
【００６２】
「免疫障害」および「免疫病」という用語は、所望よりも大きい（例えば、自己免疫）、もしくは小さい（例えば、免疫不全）、あるいは非正常である免疫機能または活性を意味する。免疫障害および免疫病は、疾患または疾病に応じて、異なる生理学的症状または異常によって特徴付けることができる。
【００６３】
方法の実施形態が適用される免疫障害および免疫病の特定の限定されない例には、自己免疫疾患および免疫不全が含まれる。したがって、自己免疫状態、疾患、病気、疾病、または症状を治療するための方法の実施形態が提供される。
【００６４】
自己免疫疾患は、概して、免疫系の望ましくない、異常な、または異常に増加した、または不適切な反応、活性、または機能として特徴付けられる。本発明に従って治療可能な、限定されない例示的自己免疫疾患には、多発性硬化症（ＭＳ）、１型もしくは２型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬性関節炎、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、腸炎、消化管の炎症性疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、セリアック病、および他の消化管炎症性疾患）、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球癆、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、多発性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、肝炎、慢性活動性肝炎、スティーブンジョンソン症候群、突発性スプルー、扁平苔癬、グレーブス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、多腺性自己免疫症候群、免疫介在性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、ギランバレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、および骨髄異形成症候群が含まれる。
【００６５】
方法が適用される免疫条件、疾患、病気、疾病、および症状のさらなる例には、慢性および急性炎症および炎症反応が含まれる。炎症および炎症反応は、概して、望ましくない、異常な、もしくは異常に増加した、もしくは不適切な炎症反応、または炎症を引き起こすか、または炎症と関連した免疫系の活性または機能として特徴付けられる。
【００６６】
本発明に従って治療可能な例示的な炎症反応および炎症には、Ｔ細胞（例えば、活性化エフェクターＴ細胞または制御性Ｔ細胞）抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）またはＢ細胞の増殖、生存、分化、死、または活性によって引き起こされる、またはそれらと関連した炎症反応および炎症が含まれる。方法（例えば、治療）は、免疫反応、炎症、もしくは炎症反応の症状または特徴の発生、進行、重症度、頻度、もしくは持続時間を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するステップを含む。全身、局部的、または局所的レベルにおいて、免疫反応、炎症、または炎症反応は、概して、腫れ、痛み、頭痛、熱、吐き気、骨格関節の硬直もしくは運動性の欠乏、発疹、発赤もしくは他の変色、または組織もしくは細胞損傷によって特徴づけられる。細胞レベルにおいて、免疫反応、炎症、または炎症反応は、領域の細胞湿潤、抗体の産生（たとえば、自己抗体）の産生、炎症性サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、インターフェロン、もしくはインターロイキンの産生、細胞成長および成熟因子（例えば、分化因子）、細胞増殖、細胞分化、細胞蓄積もしくは移動、ならびに細胞、組織、または臓器損傷のうちの１つ以上によって特徴付けられる。方法の実施形態は、全身、局部的、または局所的レベル、ならびに細胞レベルでの治療を含む。
【００６７】
細胞性または体液性免疫によって仲介される、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応は、複数の細胞、組織、または臓器、あるいは特に１つの細胞型、組織型、または臓器のいずれかに対して、直接的または間接的に細胞、組織または臓器損傷を引き起こし得る。損傷を示し得る例示的な組織および臓器には、表皮もしくは粘膜組織、腸管、腸（小腸および大腸）、膵臓、胸腺、肝臓、腎臓、脾臓、皮膚、または骨格関節（例えば、膝、足首、腰、肩、手首、指、足指、または肘）が含まれる。治療は、細胞、組織、または臓器損傷の進行または悪化の減少、低下、阻害、制限、抑制、遅延、停止、制限、制御、排除、除去、遮断、または防止をもたらし得る。
【００６８】
限定されない生理学的条件は、移植および移植片をさらに含む。「移植」または「移植片」およびそれらの文法上の変化形は、体の一部から同一対象の同一または異なる部分（自己）への、または一個人または動物から別の個人または動物（同種のヒトまたは動物）への細胞、組織、または臓器のグラフト、インプラント、または移植を意味する。したがって、移植された細胞、組織、または臓器は、自己、同種移植片、または異種移植片であってもよい。例示的な移植細胞には、神経系細胞、成体幹細胞および胚幹細胞、ならびに骨髄が含まれる。例示的な移植組織には、皮膚、血管、筋肉、眼が含まれる。例示的な移植臓器には、心臓、肺、肝臓、および腎臓が含まれる。用語はまた、例えば、形質転換細胞、組織、および臓器が、対象（例えば、ヒトまたは動物）から採取または抽出され、次いで、同一（自己）または異なる対象（例えば、同種のヒトまたは動物）に再導入される、生体外遺伝子治療によって、遺伝子操作された細胞、組織、および臓器を含む。
【００６９】
したがって、本発明の方法は、対象における移植もしくは移植片拒絶反応および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を低下させる、減少させる、阻害する、制限する、抑制する、制御する、防止する、または遮断するステップを含む。例えば、治療は、移植された、もしくはグラフトされた細胞、組織、もしくは臓器、またはＧＶＨＤにあるような対象の細胞、組織、もしくは臓器への損傷の低下、減少、阻害、制限、抑制、制御、防止、または遮断をもたらすことができる。そのような治療方法は、対象における細胞、組織、または臓器の移植またはグラフトの前、それと同時、その直後、またはその後に実行することができる。
【００７０】
方法の実施形態はまた、抗原、細胞、臓器、または組織に対する寛容性を増加させる、刺激する、増強する、促進する、および誘発するための治療を含む。そのような治療方法は、抗原、細胞、臓器、または組織、例えば、急性または慢性炎症反応、炎症、または自己免疫状態または自己免疫病をもたらすか、それらに寄与する自己抗原、細胞、臓器、または組織等に対する、望ましくない、または異常な免疫反応を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するために実行することができる。そのような治療方法はまた、抗原、例えば、非自己抗原、細胞、臓器、または組織（例えば、同種異系移植片、細胞、組織、または臓器移植）等に対する望ましくない、または異常な免疫反応を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するために実行することができる。
【００７１】
したがって、本発明は、特に、対象における抗原、細胞、組織、または臓器に対する免疫反応を低下または抑制する方法をさらに提供する。一実施形態では、方法は、対象における抗原、細胞、組織、または臓器に対する免疫反応を低下または抑制する量の制御性Ｔ細胞または樹状細胞を、対象に投与するステップを含む。特定の態様では、方法は、望ましくない、異常な、または病的な適応免疫反応、急性もしくは慢性免疫反応、急性もしくは慢性炎症反応もしくは炎症、自己免疫状態もしくは自己免疫病、移植片もしくは移植拒絶反応（例えば、幹細胞移植、骨髄移植、または臓器もしくは組織移植）、または移植片対宿主病を有しているか、またはその危険性がある対象を治療する。
【００７２】
方法の実施形態は、細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞等のＴ細胞）内のＩＬ−１７発現または産生を低下または抑制するステップをさらに含む。一実施形態では、方法は、細胞を、細胞内のＩＬ−１７発現または産生を低下または抑制する量のレチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬に接触させるステップを含む。特定の態様では、細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞等のＴ細胞）は、試験管内または生体内で接触させられる。
【００７３】
ここで使用されるように、生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状との間の関係、および生理学的条件、疾患、病気、疾病、症状の効果または結果に関連して使用される場合の「と関連した」という用語は、効果または結果が、生理学的条件、疾患、病気、疾病によって引き起こされるか、または生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の二次的効果または結果であることを意味する。したがって、対象において存在する症状は、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の直接的な結果であり得るか、またはそれらによって引き起こされ得るか、あるいは生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の間接的な結果であり得る。例えば、発生するある特定の生理学的条件、疾患、病気、疾病、ならびに症状および病状は、対象における望ましくない、または異常な  免疫反応、炎症、または炎症反応の間接的な効果であり得る。
【００７４】
本発明の方法は、生理学的条件、疾患、病気、疾病、症状の１つ以上の症状、病状、もしくは副作用、あるいは生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の効果または結果を含む。対象において存在する症状、病状、または副作用は、生理学的条件、疾患、病気、または疾病の直接的な結果であり得る、またはそれらによって引き起こされ得るか、あるいは少なくとも部分的に、生理学的条件、疾患、病気、または疾病に反応または応答する対象（例えば、免疫学的反応）等、二次的または後続効果に起因し得る。そのような二次的効果は、条件、疾患、病気、疾病、または症状と関連していると考えられる。
【００７５】
方法の実施形態は、対象の生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状における有益な効果または改善を生み出すか、またはもたらすことができる。したがって、方法の実施形態は、特に、対象に対して有益な効果をもたらす治療方法を含む。有益な効果または改善の一実施例は、制御性Ｔ細胞の数、制御性Ｔ細胞への分化、制御性Ｔ細胞の増殖または活性を刺激する、増加させる、誘発する、増強する、または促進するステップである。有益な効果または改善の別の実施例は、活性化またはエフェクターＴ細胞の数、活性化またはエフェクターＴ細胞への分化、活性化またはエフェクターＴ細胞の増殖または活性を低下させる、減少させる、阻害する、制限する、抑制する、制御する、遅延させる、排除する、防止する、または遮断するステップである。有益な効果または改善のさらなる実施例は、レチノイン酸産生樹状細胞等の樹状細胞の数、樹状細胞への分化、樹状細胞の増殖または活性を刺激する、増加させる、誘発する、増強する、または促進するステップである。有益な効果または改善のさらなる実施例は、細胞によるＩＬ−１７発現または産生を低下させる、減少させる、阻害する、制限する、抑制する、制御する、遅延させる、排除する、防止する、または遮断するステップである。さらなる有益な効果は、対象における望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応の発症、進行、重症度、持続時間、頻度、または可能性を低下させる、減少させる、阻害する、制限する、抑制する、制御する、遅延させる、排除する、緩和する、防止する、または遮断するステップを含む。
【００７６】
有益な効果または改善のさらなる限定されない実施例は、そのように治療された対象が、生理学的条件、疾患、病気、または疾病の１つ以上の症状または有害作用を示す可能性、感受性、または確率を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止するステップを含む。種々の生理学的条件、疾患、病気、および疾病（例えば、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応、自己免疫疾患または障害）によって引き起こされるか、またはそれらと関連した症状が本明細書に記載され、当業者には既知であり得、したがって、いかなる有害症状、病状、または生理学的もしくは心理学的反応における改善も、種々の治療実施形態に含まれる。
【００７７】
治療実施形態はまた、治療のために使用される別の薬物または薬剤等の、別の治療の必要性、投与量、または頻度を低下させる、または除去することを含む。例えば、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応を有しているか、またはその可能性がある対象は、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応のための別の治療をもはや必要としないか、またはそれほど必要としない場合がある。
【００７８】
有益な効果または改善を提供する治療方法または療法は、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応、あるいは任意の特定の生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の完全除去をもたらす必要はない。むしろ、有益な効果または改善は、治療された対象の生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状における、任意の客観的な測定可能または検出可能な効果、あるいは任意の主観的な利益または改善であってもよい。したがって、有益な効果または改善は、生理学的条件、疾患、病気、疾病、もしくはそれらの症状の根本原因もしくは結果、または生理学的条件、疾患、病気、疾病、もしくはそれらの症状の逆転を含む、生理学的条件、疾患、病気、疾病、もしくはそれらの症状の発生、頻度、重症度、進行、または持続期間の主観的または客観的な低下を含む。有益な効果または改善を提供する治療は、「緩和する」が同義語として使用され、したがって、生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状と関連した任意の、または全ての有害症状または合併症の完全除去である必要はないが、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状において、客観的または主観的に測定可能または検出可能な任意の効果、利益、または改善である。したがって、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の、進行または悪化を低下させる、阻害する、減少させる、除去する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、防止する、または遮断することは、満足のいく転帰である。
【００７９】
したがって、対象における望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応を安定させることは、有益な効果と考えられる。例えば、制御性Ｔ細胞は、望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応を安定させ得る。樹状細胞は、腫瘍または癌等の過剰増殖性症状または疾患を安定させ得る。したがって、治療は、短い、または長い持続期間（時間、日、週、月、年、または回復するまで）にわたって、対象の状態の漸進的な改善、あるいは生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの有害症状もしくは病状の部分的低下もしくは安定化がある場合に達成される。
【００８０】
方法の実施形態では、さらなる組成物または方法ステップが含まれ得る。一実施形態では、方法は、試験管内、生体外、または生体内で制御性Ｔ細胞または  樹状細胞を増殖または拡張させるステップをさらに含む。別の実施形態では、方法は、試験管内、生体外、または生体内で、血液細胞またはＴ細胞をＴＧＦ−β作動薬に接触させるステップをさらに含む。さらなる実施形態では、方法は、試験管内、生体外、または生体内で、血液細胞またはＴ細胞をインターロイキン−２（ＩＬ−２）に接触させるステップを含むか、または血液細胞またはＴ細胞をＩＬ−２に接触させるステップを除外する。別の実施形態では、方法は、対象に、制御性Ｔ細胞、樹状細胞、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−β受容体作動薬）、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬を投与するステップをさらに含む。
【００８１】
所望の転帰がある方法、例えば、対象に対して有益な効果または改善を提供する治療方法または療法の実施形態では、組成物、例えば、制御性Ｔ細胞、樹状細胞、ＴＧＦ−β（またはＴＧＦ−β受容体作動薬）、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬等は、十分な量または有効な量で投与することができる。ここで使用される「十分な量（ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｍｏｕｎｔ）」もしくは「有効な量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」、または「十分な量（ａｍｏｕｎｔ  ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ）」もしくは「有効な量（ａｍｏｕｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ）」は、単回または複数回投与で、単独で、または１つ以上の他の化合物、治療、薬剤（例えば、薬物）、または治療計画と組み合わせて、任意の程度の、または任意の期間または持続期間（例えば、分、時間、日、月、年、または回復するまで）にわたる長期間または短期間の、検出可能な、測定可能な、または所望の主観的または客観的転帰を、所与の対象に提供する量を指す。
【００８２】
したがって、「十分な量」または「有効な量」は、発症を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止すること、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの有害症状もしくは病状の進行または悪化を減少させる、低下させる、阻害する、抑制する、遅延させる、停止させる、制限する、制御する、排除する、除去する、遮断する、または防止すること、または生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状の重症度、頻度、持続期間、感受性、または可能性を低下させる、軽減する、緩和する、または和らげることを含む。加えて、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状からの対象の回復を早めることは、十分な量または有効な量と考えられる。種々の有益な効果ならびに治療および予防効果の兆候が本明細書に記載され、当業者には既知であろう。
【００８３】
同様に十分かつ有効であると考えられる量、頻度、または持続期間は、別の化合物、薬剤、治療、または治療計画の量、頻度、または持続期間の除去または低下をもたらすものである。例えば、治療方法は、生体内での接触、投与、または送達が、生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状を治療するために、別の化合物、薬剤、治療、または治療計画の使用の量、頻度、または持続期間をより少なくする場合、有益な効果または治療効果を有すると考えられる。
【００８４】
十分な量または有効な量は、単回投与で提供することができるが、そうしなくてもよく、単独で（すなわち、第２の薬物、薬剤、治療、または治療計画を用いず）、または別の化合物、薬剤、治療、または治療計画と組み合わせて投与することができるが、そうしなくてもよい。加えて、十分な量または有効な量は、そのような用量に加えた投与のさらなる用量、量、頻度、または持続期間、あるいはさらなる化合物、薬剤、治療、または治療計画が、所与の対象において有効または十分となるように含まれ得るため、第２の化合物、薬剤、治療、または治療計画を用いずに単回投与または複数回投与で与えられる場合に、十分または有効である必要はない。
【００８５】
十分な量または有効な量は、あらゆる対象、およびまた所与の群または集団における対象の大部分において有効である必要はない。したがって、十分な量または有効な量は、群または一般集団ではなく、特定の対象における十分性または有効性を意味する。そのような方法に対して典型的であるように、一部の対象は、他の対象と比較して、方法の実施形態に対してより大きいまたは小さい反応を示す。
【００８６】
治療または療法に関して典型的であるように、異なる対象は、治療に対して異なる反応を示し、一部は、特定の治療プロトコル、計画、プロセスに対して全く反応しない場合があるか、または所望よりも小さく反応する場合がある。したがって、十分な量または有効な量は、治療される疾患（例えば、疾病、疾患、病気、または症状もしくは病状の種類または重症度）、望ましい治療効果、ならびに個々の対象（例えば、対象、性別、年齢等におけるバイオアベイラビリティ）、および遺伝的可変性および後成的可変性に基づく、治療に対する対象の反応（例えば、薬理ゲノム学）に少なくとも部分的に依存する。
【００８７】
望ましい、有益な、付加的な、相乗的な、または補完的な活性または効果を有するいかなる化合物、薬剤、治療、または他の治療計画も、方法の実施形態と組み合わせて、または方法の実施形態に加えて製剤化または使用することができる。したがって、方法の実施形態は、いかなる他の組成物、治療、プロトコル、または治療計画を含む、さらなる治療、プロトコル、および療法を含む。種々の態様では、化合物、薬剤、治療、または治療計画は、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状に対する予防、それらの治療、それらに対する感受性の減少、それらによって引き起こされるか、またはそれらと関連した関連疾患の治療を対象に提供することが目的である。
【００８８】
したがって、組成物ならびに試験管内、生体外、および生体内の方法の実施形態は、他の薬剤または治療または方法ステップと組み合わせることができる。種々の実施形態では、薬剤または治療は、抗炎症薬もしくは治療、または免疫抑制剤もしくは治療を含む。
【００８９】
方法の実施形態に有用な抗炎症薬は、サイトカインおよびケモカインを含む。特定のサイトカインの限定されない例には、ＩＬ−４およびＩＬ−１０等の抗炎症性サイトカインが含まれる。抗サイトカインおよび抗ケモカイン、例えば、炎症性サイトカイン、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、増殖因子、例えば、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子等と結合する抗体等を採用することができる。炎症の治療に有用な薬剤のさらなる限定されない例には、抗体、例えば、抗ＩｇＥ（例えば、ｒｈｕＭＡｂ−Ｅ２５オマリズマブ）、−ＩｇＡおよび−ＩｇＧ抗体、受容体、ならびに受容体リガンド等が含まれる。
【００９０】
方法の実施形態に含まれる薬剤および治療のさらなる限定されない例には、免疫抑制剤、例えば、コルチコステロイド（ステロイド受容体作動薬）、例えば、ブデソニド、プレドニゾン、フルニソリド、フルニソリドハイドロフルオロアルカン、エストロゲン、プロゲステロン、デキサメタゾン、およびロテプレドノール等、β−作動薬（例えば、短時間または長時間作用型）、例えば、バンブテロール、ホルモテロール、サルメテロール、アルブテロール等、抗コリン作用薬、例えば、臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウム、クロモリン、およびカルシウムチャネル遮断薬等、抗ヒスタミン剤、例えば、テルフェナジン、アステミゾール、ヒドロキシジン、クロルフェニラミン、トリペレナミン、セチリジン、デスロラタジン、ミゾラスチン、フェキソフェナジン、塩酸オロパタジン、ノルアステミゾール、レボセチリジン、レボカバスチン、アゼラスチン、エバスチン、およびロラタジン等、抗ロイコトリエン（例えば、抗システイニルロイコトリエン（ＣｙｓＬＴｓ））、例えば、オキサトミド、モンテルカスト、ザフィルルカスト、およびジロートン等、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ４サブタイプ）、例えば、イブジラスト、シロミラスト、ＢＡＹ１９−８００４、テオフィリン（例えば、持続放出）、および他のキサンチン誘導体（例えば、ドキソフィリン）等、トロンボキサン拮抗薬、例えば、セラトロダスト、塩酸オザグレル、およびラマトロバン等、プロスタグランジン拮抗薬、例えば、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブおよびロフェコキシブ）、アスピリン等、ならびにカリウムチャネル開口薬が含まれる。
【００９１】
「対象」および「患者」という用語は、本明細書で同じ意味で使用され、動物、典型的には哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク、テナガザル）、飼育動物（イヌおよびネコ）、家畜および牧場動物（ニワトリ、アヒル、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）、研究および実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）およびヒト等を指す。動物モデルには、例えば、生体内有効性を研究するための疾患モデル動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、および非ヒト霊長類等）が含まれる。特定の限定されない例には、マウス結腸炎モデル（例えば、実施例９を参照）、狼瘡に対する自己免疫（ＢＸＳＢ）のマウスモデル、多発性硬化症に対する実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、関節リウマチ、および炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病に対するＮＯＤマウス、関節リウマチ等に対するコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、免疫抑制（ヌードマウス）が含まれる。対象には、自然発生的または非自然発生的な突然変異、または非ヒト遺伝子操作（例えば、遺伝子導入またはノックアウト）動物が含まれる。
【００９２】
対象は、いかなる年齢であってもよい。ヒト対象には、例えば、１から５歳、５歳から１０歳、および１０歳から１８歳の間の新生児、乳児、小児、十代のような子供、１８歳から６０歳の間の成人、ならびに例えば、６０歳から６５歳、６５歳から７０歳、および７０歳から１００歳の間の高齢者が含まれる。
【００９３】
対象には、治療を必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）が含まれ、すなわち、彼らは客観的または主観的に治療（例えば、制御性Ｔ細胞治療）からの恩恵を受ける可能性が高いと思われる。そのような対象には、例えば、慢性または急性の望ましくない、または異常な免疫反応（例えば、病的な適応免疫反応）、炎症、または炎症反応（例えば、自己免疫状態または自己免疫病）を有する動物が含まれる。対象には、慢性または急性の望ましくない、または異常な免疫反応（例えば、病的な適応免疫反応）、炎症、または炎症反応（例えば、自己免疫状態または自己免疫病）を有する危険性がある対象も含まれる。種々の方法の実施形態によって対象に提供される種々の利益または改善は、種々の生理学的条件、疾患、病気、疾病、ならびにそれらの症状および病状に関して、本明細書に記載されるか、あるいは当業者に既知であろう。
【００９４】
限定されない候補対象には、多発性硬化症（ＭＳ）、１型もしくは２型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬性関節炎、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、腸炎、クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、セリアック病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球癆、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、多発性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、肝炎、慢性活動性肝炎、スティーブンジョンソン症候群、突発性スプルー、扁平苔癬、グレーブス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、多腺性自己免疫症候群、免疫介在性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、ギランバレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、原発性胆汁性肝硬変、および骨髄異形成症候群を有しているか、またはその危険性がある対象が含まれる。
【００９５】
対象には、細胞移植（例えば、成体幹細胞もしくは胚幹細胞、または骨髄）、組織または臓器移植（例えば、肝臓、腎臓、心臓、肺、静脈または動脈、隔膜）、または移植片（例えば、皮膚または筋肉）を受ける対象または候補がさらに含まれる。そのような対象は、移植拒絶反応または移植片対宿主疾病（ＧＶＨＤ）にあるように、移植細胞、組織、または臓器の破壊をもたらす望ましくない、または異常な免疫反応を示す可能性がある。方法の実施形態に従ったそのような対象の治療は、移植細胞、組織、もしくは臓器の損傷もしくは拒絶反応、またはＧＶＨＤの、減少、低下、阻害、抑制、遅延、停止、制限、制御、排除、除去、遮断、または防止をもたらすことができる。
【００９６】
「危険性がある」対象には、危険因子を原因とする望ましくない、または異常な免疫反応、炎症、または炎症反応と関連した、危険因子を有する対象が含まれる。危険因子には、性別、生活スタイル（食生活、喫煙）、職業、環境因子（アレルゲン暴露）、家族歴（自己免疫疾患または障害、ＭＳ、糖尿病等）、遺伝的素因等が含まれる。したがって、危険性がある対象は、生活スタイル、職業、環境因子、家族歴、および遺伝子検査によって同定することができる。自己免疫疾患に対する感受性は、ＭＨＣ遺伝子型と関連している場合が多い。例えば、糖尿病においては、ＨＬＡ−ＤＲ３およびＨＬＡ−ＤＲ４との関連がある。
【００９７】
実施形態は、投与、生体内送達、または接触に有用な医薬組成物または製剤を含む。医薬組成物および製剤には、対象への投与のための担体または賦形剤が含まれる。
【００９８】
ここで使用される「薬学的に許容される」および「生理学的に許容される」という用語は、１つ以上の投与経路、生体内送達、または接触に好適な、生物学的に適合した製剤、気体、液体、もしくは固体、またはそれらの混合物を意味する。製剤は、その中の活性成分の活性を破壊しない、またはいかなる予防または治療効果または利益をはるかに上回る有害副作用を誘発しないという点で適合性を有する。
【００９９】
そのような製剤には、薬剤投与または生体内接触もしくは送達に適合する溶媒（水性または非水性）、溶液（水性または非水性）、エマルジョン（例えば、水中油または油中水）、懸濁液、シロップ、エリキシル、分散および  懸濁媒体、コーティング、等張剤および吸収促進または遅延剤が含まれる。  水性または非水性溶媒、溶液、および懸濁液には、懸濁化剤および増粘剤が含まれる。そのような薬学的に許容される担体には、錠剤（コーティングされている、またはコーティングされていない）、カプセル（硬または軟）、マイクロビーズ、粉末、顆粒、および結晶が含まれる。補助活性化合物（例えば、防腐剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、および抗真菌薬）もまた、組成物に組み込むことができる。
【０１００】
製剤は、便宜上、単位剤形として調製または提供されてもよい。調製技術は、活性成分と医薬担体または賦形剤との結合を含む。概して、製剤は、活性成分を液体担体、もしくは微粉化された固体担体、またはその両方と均一かつ密接に結合させ、次いで、必要な場合、生成物を成形することによって調製される。例えば、錠剤は、圧縮または鋳型成形によって製造されてもよい。圧縮錠剤は、任意選択で結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤、または分散剤と混合される、粉末または顆粒等の自由流動形態の阻害剤（例えば、拮抗薬）または活性剤（例えば、作動薬）等の、活性成分発現または活性を好適な機械で圧縮することによって調製されてもよい。鋳型成形された錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤された粉末化合物の混合物を好適な器具で鋳型成形することによって生成されてもよい。錠剤は、任意選択でコーティングまたは分割されてもよく、その中の活性成分の持続放出または制御放出を提供するように製剤化されてもよい。
【０１０１】
共溶媒およびアジュバントが製剤に添加されてもよい。共溶媒の限定されない例には、ヒドロキシル基または他の極性基、例えば、アルコール、例えば、イソプロピルアルコール等、グリコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコールエーテル等、グリセロール、ポリオキシエチレンアルコール、およびポリオキシエチレン脂肪酸エステルが含まれる。アジュバントには、例えば、界面活性剤、例えば、大豆レシチン、およびオレイン酸等、ソルビタンエステル、例えば、ソルビタントリオレアート等、ならびにポリビニルピロリドンが含まれる。
【０１０２】
補助活性化合物（例えば、抗菌剤、抗ウイルス薬、および抗真菌等のバイオサイドおよびバイオスタットを含む、防腐剤、酸化防止剤、抗細菌薬）もまた、組成物に組み込むことができる。防腐剤および他の添加剤には、  例えば、抗細菌剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガス（例えば、窒素）が含まれる。したがって、医薬組成物は、防腐剤、抗細菌薬、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスを含んでもよい。
【０１０３】
防腐剤は、細菌増殖を阻害するために、または活性成分の安定性を増加させ、それによって医薬製剤の保存期限を延長するために使用することができる。好適な防腐剤は当技術分野で既知であり、例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、塩化ベンザルコニウム、または安息香酸、または安息香酸塩、例えば、安息香酸ナトリウム等が含まれる。酸化防止剤には、例えば、アスコルビン酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、トコフェロール、および同様のビタミンまたはプロビタミンが含まれる。
【０１０４】
抗細菌薬または化合物は、病原性または非病原性微生物による汚染、またはそれらの成長、感染性、複製、増殖、再生を直接的または間接的に阻害する、減少させる、遅延させる、停止させる、除去する、阻止する、抑制する、または防止する。抗細菌剤のクラスには、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生虫剤が含まれる。抗細菌剤には、微生物による汚染、またはそれらの成長、感染性、複製、増殖、再生を殺滅または破壊するか（殺菌性）、あるいは阻害する（静菌性）薬剤および化合物が含まれる。
【０１０５】
例示的な抗菌剤（抗生物質）には、ペニシリン（例えば、ペニシリンＧ、アンピシリン、メチシリン、オキサシリン、およびアモキシシリン）、セファロスポリン（例えば、セファドロキシル、セフォラニド、セフォタキシム、およびセフトリアキソン）、テトラサイクリン（例えば、ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリン、ミノサイクリン、およびテトラサイクリン）、アミノグリコシド（例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、ネチルミシン、パロモマイシン、およびトブラマイシン）、マクロライド（例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、およびエリスロマイシン）、フルオロキノロン（例えば、シプロフロキサシン、ロメフロキサシン、およびノルフロキサシン）、ならびにクロラムフェニコール、クリンダマイシン、サイクロセリン、イソニアジド、リファンピン、バンコマイシン、アズトレオナム、クラブラン酸、イミペネム、ポリミキシン、バシトラシン、アンフォテリシン、およびナイスタチンを含む他の抗生物質が含まれる。
【０１０６】
抗ウイルス剤の特定の限定されないクラスには、逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、チミジンキナーゼ阻害剤、糖または糖タンパク合成阻害剤、構造タンパク質合成阻害剤、ヌクレオシド類似体、およびウイルス成熟阻害剤が含まれる。特定の抗ウイルス剤の限定されない例には、上記に記載されるもの、ならびにネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ジドブジン（ＡＺＴ）、スタブジン（ｄ４Ｔ）、ラミブジン（３ＴＣ）、ディダノシン（ＤＤＩ）、ザルシタビン（ｄｄＣ）、アバカビル、アシクロビル、ペンシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、１，−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３  カルボキサミド、９−＞２−ヒドロキシ−エトキシメチルグアニン、アダマンタンアミン、５−ヨード−２′−デオキシウリジン、トリフルオロチミジン、インターフェロン、およびアデニンアラビノシドが含まれる。
【０１０７】
例示的な抗真菌剤には、安息香酸、ウンデシレンアルカノールアミド、シクロピロクスオラミン、ポリエン、イミダゾール、アリルアミン、チカルバメート、アンフォテリシンＢ、ブチルパラベン、クリンダマイシン、エコナキソール（ｅｃｏｎａｘｏｌｅ）、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、ケトコナゾール、エルビオール、エコナゾール、エコナキソール（ｅｃｏｎａｘｏｌｅ）、イトラコナゾール、イソコナゾール、ミコナゾール、スルコナゾール、クロトリマゾール、エニルコナゾール、オキシコナゾール、チオコナゾール、テルコナゾール、ブトコナゾール、チアベンダゾール、ボリコナゾール、サペルコナゾール、セルタコナゾール、フェンチコナゾール、ポサコナゾール、ビホナゾール、フルコナゾール、フルトリマゾール、ナイスタチン、ピマリシン、アンフォテリシンＢ、フルシトシン、ナタマイシン、トルナフタート、マフェニド、ダプソン、カスポファンギン、アクトフニコン、グリセオフルビン、ヨウ化カリウム、ゲンチアナバイオレット、シクロピロクス、シクロピロクスオラミン、ハロプロジン、ケトコナゾール、ウンデシレナート、スルファジアジン銀、ウンデシレン酸、ウンデシレンアルカノールアミド、および石炭酸フクシン等の薬剤が含まれる。
【０１０８】
医薬組成物は、特定の投与経路に適合するように任意選択で製剤化することができる。したがって、医薬組成物には、生体外または生体内で局所的に、局部的に、または全身的に、種々の経路により投与および送達するのに好適な担体（賦形剤、希釈剤、賦形剤、または充填剤）が含まれる。
【０１０９】
接触または生体外もしくは生体内送達のための例示的な投与経路には、吸入、呼吸、挿管、肺内滴下、経口（頬、舌下、粘膜）、肺内、直腸、膣内、子宮内、皮内、局所、皮膚、非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、眼内、気管内、および硬膜外）、鼻内、髄腔内、関節内、腔内，経皮、イオントフォレーシス、点眼、眼（例えば、角膜）、腺内、臓器内、リンパ管内が含まれる。
【０１１０】
非経口投与に好適な製剤には、化合物の水性または非水性溶液、懸濁液、またはエマルションが含まれ、それは懸濁化剤および増粘剤を含んでもよく、その調製は、典型的に無菌であり、対象とする受容者の血液と等張であり得る。水性担体の限定されない例示的な実施例には、水、生理食塩水（塩化ナトリウム溶液）、デキストロース（例えば、リンゲルデキストロース）、乳酸リンゲル、フルクトース、エタノール、動物油、植物油、または合成油が含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えば、オリーブ油等、および注入可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルである。静脈内賦形剤には、流体および栄養補充剤、電解質補充剤（リンゲルデキストロースに基づくもの等）が含まれる。
【０１１１】
経粘膜投与に対して、浸透剤を医薬組成物に含むことができる。浸透剤は、当技術分野で既知であり、例えば、経粘膜投与に対して、洗浄剤、胆汁塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。
【０１１２】
本発明の組成物および方法に適した医薬製剤および送達システムは、当技術分野で既知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２００３）２０ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）１８ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（１９９６）１２ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，  ＮＪ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（１９９３），  Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｉｎｃ．，  Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，  Ｐａ．、Ａｎｓｅｌ  ａｎｄ  Ｓｔｏｋｌｏｓａ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（２００１）１１ｔｈ  ｅｄ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  ＭＤ、およびＰｏｚｎａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８０），  Ｒ．  Ｌ．  Ｊｕｌｉａｎｏ，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  Ｎ．Ｙ．，  ｐｐ．  ２５３−３１５を参照）。
【０１１３】
医薬製剤を含む実施形態は、投与の簡略化および投与量の均一性のために単位剤形で包装することができる。ここで使用される「単位剤形」は、治療または投与のための単一の投与量として好適な物理的に別個の単位を意味する。各単位は、任意選択で医薬担体（賦形剤、希釈剤、賦形剤、または充填剤）と共に所定量の化合物を含有し、１つ以上の用量で投与される場合、所望の効果を生み出すように計算される（例えば、所望の効果または利益）。単位剤形は、投与された化合物（例えば、作動薬）または細胞（例えば、制御性Ｔ細胞）の１日用量もしくは単位、１日サブ用量、またはそれらの適切な一部を含有することができる。単位剤形はまた、例えば、フリーズドライまたは凍結乾燥状態の組成物を含み得るカプセル、トローチ、カシェ剤、ドロップ、錠剤、アンプル、およびバイアルを含む。例えば、滅菌液体担体は、投与または生体内送達の前に添加することができる。単位剤形は、例えば、その中に液体組成物が配置されたアンプルおよびバイアルをさらに含む。個々の単位剤形は、複数用量キット又は容器内に含むことができる。医薬製剤は、投与の簡略化および投与量の均一性のために単位剤形で包装することができる。
【０１１４】
方法の実施形態は、単回ボーラスまたは複数回投与としていかなる頻度、例えば、１時間、１日、１週間、１ヵ月、もしくは１年に、または１から１０日間の間、１から１０週間の間、１から１０ヵ月の間に、あるいは適切な期間に、１、２、３、４、５回、またはそれ以上の試験管内、生体外、および生体内での接触または投与を含む。例示的な頻度は、典型的に、１日、１週間、または１ヶ月に１〜７回、１〜５回、１〜３回、１〜２回、または１回である。接触、投与、生体外または生体内送達の時間は、治療される生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状によって決定することができる。例えば、ある特定の量は、慢性または急性の望ましくない、異常な、または病的な免疫反応（例えば、適応）例えば、炎症もしくは自己免疫疾患、または移植拒絶反応の症状または病状の発症と実質的に同時に、またはその約１〜６０分、１〜６０時間、１〜６０日間以内に対象に投与することができる。
【０１１５】
方法は、試験管内、生体外、または生体内での接触または投与を含む。方法の実施形態は、いかなる経路による全身、局部的、または局所的投与を介して実行されてもよい。方法の実施形態は、罹患細胞、または罹患組織もしくは臓器への投与を含む。特定の態様では、投与は、骨格関節または消化管に対する。
【０１１６】
対象は、単回投与（例えば、ボーラス）または複数回投与（例えば、分割量／定量で）で投与されてもよく、それは、本明細書に記載され、当技術分野で既知の種々の考慮事項に従って、より多くまたはより少なくなるように調節することができる。用量は、治療される生理学的条件、疾患、病気、疾病または症状、治療が行われる生理学的条件、疾患、病気、疾病または症状の発症、進行、重症度、頻度、持続期間、可能性、または感受性、所望の臨床的エンドポイント、前治療、同時治療、または後続治療、対象の全般的健康、年齢、性別、または人種、バイオアベイラビリティ、考えられる有害な全身的、局部的、または局所的副作用、対象における他の疾患または疾病の存在、および当業者によって理解される他の要因（例えば、病歴または家族歴）に応じて変化してもよい。投与量、頻度、または持続期間は、所望の臨床転帰または有益な効果、生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状の状態、治療または療法の任意の有害副作用等によって示されるように、増加または減少してもよい。例えば、一度制御または特定のエンドポイントが達成されると、例えば、投与量、頻度、または持続期間は減少させることができる。当業者は、治療に対して十分または有効な量を提供するために必要とされる用量、頻度、および時間に影響を及ぼし得る要因を十分に理解するであろう。
【０１１７】
治療的処置に対して、方法は、対象が生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状を示してすぐ、実質上典型的には、０〜７２時間後または０〜７２日後以内に実行される。予防的治療に対して、方法は、生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状もしくは病状の予想された、または考えられる兆候の直前、あるいは０〜７２時間もしくは０〜７２日前、または０〜４週間前、例えば、１〜３日もしくは１〜３時間前に実行される。
【０１１８】
用量は、現在既存の治療プロトコル、または生理学的範囲内、もしくは範囲に近いが範囲外の量に基づくことができる。例えば、レチノイン酸、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬は、対象において生理学的（例えば、血清中）量（例えば、レチノイン酸）、またはほぼその量になるように投与することができる。特定の実施形態では、レチノイン酸受容体作動薬、またはレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）もしくはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の量は、レチノイン酸の生理学的量と近似的に等しい。さらなる特定の実施形態では、投与されるレチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の量は、対象における量が、約１ｘ１０−９Ｍから約５ｘ１０−５Ｍになるような量である。さらなる特定の実施形態では、投与されるレチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）作動薬、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の量は、対象における量が、約１ｘ１０−９Ｍ未満になるような量である。
【０１１９】
用量は、例えば、動物疾病モデルを使用するか、任意選択でヒト臨床研究において実験的であることができる。初期研究用量は、霊長類等の動物研究、および予防または治療効果または利益を達成するために投与される化合物の量に基づくことができる。
【０１２０】
用量は、対象集団に応じて調節することができ、概して、１時間、１日、１週間、１ヵ月、または１年に２、３、４回、またはそれ以上で、対象体重の約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００または２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００、５０，０００〜１００，０００ｐｇ／ｋｇの範囲内、約０．１〜１ｕｇ／ｋｇ、１〜１０ｕｇ／ｋｇ、１０〜２５ｕｇ／ｋｇ、２５〜５０ｕｇ／ｋｇ、５０〜１００ｕｇ／ｋｇ，１００〜５００ｕｇ／ｋｇ、５００〜１，０００ｕｇ／ｋｇ、１〜５ｍｇ／ｋｇ、５〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、２０〜５０ｍｇ／ｋｇ、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、１００〜２５０ｍｇ／ｋｇ、２５０〜５００ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以上の範囲内である。当然、用量は、必要に応じて、例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上の時間、日、週、月、年等、所与の期間にわたって、例えば、対象体重の０．００００１ｍｇ／ｋｇから対象体重の約１０，０００．０ｍｇ／ｋｇ、対象体重の約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ等、より多くまたはより少なくすることができる。投与されるレチノイン酸受容体作動薬、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）作動薬、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）作動薬の例示的な用量は、約１０ｍｇ〜１２００ｍｇ、または約５０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲内である。
【０１２１】
細胞に基づいた治療方法に対して、用量は、約１００，０００〜約１０億個の細胞に及ぶことができる。例示的な用量は、約５００，０００〜約５億個の細胞、または約１〜１億個の間の細胞、または約１〜１千万個の間の細胞に及ぶ細胞量であることができる。
【０１２２】
本発明は、特に、好適な包装材料に包装される、制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養物、樹状細胞、樹状細胞の培養物、それらの混合組成物、およびそれらの医薬組成物／製剤を含むキットを提供する。一実施形態では、キットは、包装材料、制御性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞の培養物、樹状細胞、または樹状細胞の培養物、および使用説明書を含む。種々の態様では、使用説明書は、本明細書に記載されるような試験管内、生体外、または生体内での方法に関する。
【０１２３】
「包装材料」という用語は、キットの１つ以上の構成要素を収納する物理的構造を指す。包装材料は、構成要素を無菌に維持することができ、そのような目的で一般的に使用される材料で構成されることができる（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、フォイル、アンプル、バイアル、チューブ等）。キットは、複数の構成要素、例えば、２つ以上の制御性Ｔ細胞培養物を含有することができる。
【０１２４】
キットは、任意選択で、構成要素の説明（種類、量、用量等）、試験管内、生体内、または生体外での使用に関する使用説明書、およびその中のいかなる他の構成要素を含む、ラベルまたは挿入物を含む。ラベルまたは挿入物は、「印刷物」、例えば、紙もしくはボール紙、または構成要素とは別に、もしくはそれに貼り付けられたキットまたはパッキング材料（例えば、箱）、またはアンプルに取り付けられた、キット構成要素を含有するチューブまたはバイアルを含む。ラベルまたは挿入物は、コンピュータ可読媒体、例えば、ディスク（例えば、フロッピー（登録商標）ディスク、ハードディスク、ＺＩＰディスク）、光ディスク、例えば、ＣＤ−もしくはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、または電気記憶媒体、例えば、ＲＡＭおよびＲＯＭ、もしくはこれらのハイブリッド、例えば、磁気／光学式記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体、またはメモリ式カード等をさらに含むことができる。
【０１２５】
ラベルまたは挿入物は、その中の１つ以上の構成要素、用量、作用機構を含む活性成分の臨床薬理学、薬物動態、および薬力学の識別情報を含むことができる。ラベルまたは挿入物は、製造者、ロット番号、製造場所および日付、使用期限を識別する情報を含むことができる。
【０１２６】
ラベルまたは挿入物は、細胞の生存を維持するための情報、キットの構成要素が使用され得る生理学的条件、疾患、病気、疾病、または症状に関する情報を含むことができる。ラベルまたは挿入物は、臨床医または対象が、本明細書に記載されるように、試験管内、生体外、または生体内での方法（例えば、治療）にキットの構成要素のうちの１つ以上を使用するための使用説明書を含むことができる。使用説明書は、投与の量、頻度、または持続期間、および本明細書に記載される方法、治療プロトコル、または予防もしくは治療計画のいずれかを実行するための使用説明書を含むことができる。
【０１２７】
ラベルまたは挿入物はまた、予防または治療効果または利益等、キットの構成要素が提供し得る、任意の所望の効果もしくは利益、または有害副作用に関する情報をも含むことができる。例えば、ラベルまたは挿入物は、生理学的条件、疾患、病気、疾病、またはそれらの症状もしくは病状の発症、重症度、持続期間、進行、頻度、または可能性の減少、低下、阻害、抑制、遅延、停止、制限、制御、排除、除去、遮断、または防止に関する説明を提供し得る。
【０１２８】
ラベルまたは挿入物は、考えられる有害副作用に関する情報をさらに含むことができる。ラベルまたは挿入物は、対象が、特定のキットの構成要素の使用を停止する、または減らすべき状態または条件に関する、臨床医または対象への警告をさらに含むことができる。有害副作用はまた、対象が、治療と不適合であり得る１つ以上の他の薬を服用していた、これから服用する、または現在服用している場合、あるいは、対象が、治療と不適合であり得る別の治療プロトコルまたは治療計画を受けていた、これから受ける、または現在受けている場合にも起こり得るため、ラベルまたは挿入物は、そのような副作用または不適合性に関する情報を含み得る。
【０１２９】
発明キットは、本発明の化合物を含有する医薬製剤において緩衝剤、または防腐剤もしくは安定化剤をさらに含むことができる。キットの各構成要素は、個々の容器に封入することができ、種々の容器の全てを１つのパッケージ内に入れることができる。発明キットは、冷蔵用に設計することができる。
【０１３０】
発明キットは、本発明の方法を実行するための、または生体外または生体内で、対象に制御性Ｔ細胞または樹状細胞を投与するためのデバイス等の構成要素をさらに含むことができる。デバイスは、注射器、ＩＶバッグもしくはボトル、または体外もしくは埋め込み型デバイス等の送達デバイスであることができる。
【０１３１】
別段の定めがない限り、本明細書に使用される全ての専門用語および科学用語は、本発明が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料を、本発明の実践または検査に使用することができるが、好適な方法および材料は、本明細書に記載される。
【０１３２】
本明細書に挙げられる全ての出版物、特許、および他の参考文献は、参照することによってその全体が組み込まれる。矛盾がある場合は、定義を含む本明細書が優先される。
【０１３３】
ここで使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に他のことを指示さない限り複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「制御性Ｔ細胞」または「制御性Ｔ細胞培養物」への言及は、複数の制御性Ｔ細胞および培養物を含み、「症状」または「病状」への言及は、複数の症状または病状（例えば、有害または望ましくない）をふくむ。当然、これは、適切な用語を使用して、本発明のある特定の実施形態を、特定の症状または病状、特定の条件、疾患、疾病、または病気、特定の対象、治療方法等に制限することを除外する。
【０１３４】
本発明は、概して、多数の実施形態を説明するために、肯定的な用語を使用して本明細書に開示される。本発明はまた、物質もしくは材料、方法ステップおよび条件、プロトコル、手順、アッセイ、または分析等、特定の内容が全体的にもしくは部分的に除外される実施形態を含む。したがって、本発明は、概して、本発明が含まないものの観点からは本明細書で表現されていないが、本発明に明示的に含まれない態様が、明示的または本質的に本明細書に開示される。
【０１３５】
本発明の多くの実施形態が記載されてきた。それにもかかわらず、種々の修正が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われてもよいことが理解されるであろう。したがって、以下の実施例は、請求項に記載される発明の範囲を制限するのではなく、例示することを目的とする。
【実施例】
【０１３６】
実施例１
本実施例は、種々の材料および方法の説明を含む。
【０１３７】
マウス
Ｃ５７ＢＬ／６  ＣＤ４５．１（Ｌｙ５．１）およびＣＤ４５．２（Ｌｙ５．２）、ＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ−遺伝子導入（Ｃ５７ＢＬ／６背景）、ＲＡＧ１−／−（Ｃ５７ＢＬ／６背景）、Ｂ７．１／２ダブルノックアウト（Ｃ５７ＢＬ／６背景）、ならびにＩＬ−２−／−（Ｃ５７ＢＬ／６背景）マウスをＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＵＳＡ）から購入した。Ｂ７．１／２−ＩＬ−２トリプルノックアウトマウスを得るために、Ｂ７．１／２−／−およびＩＬ−２−／−マウスを我々の動物施設で交配した。ＯＴ−ＩＩ  ＣＤ９０．１  ＴＣＲ遺伝子導入マウス（Ｃ５７ＢＬ／６背景）。マウスを特定病原体未感染条件下で維持し、ＲＡＧ１−／−マウスコロニーからの歩哨マウスをヘリコバクター種およびシトロバクターローデンチウムに対して陰性であるか試験した。７〜１２週齢のマウスを使用した。動物の世話および実験は、ＮＩＨガイドラインと一致し、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。
【０１３８】
抗体
ＦＩＴＣ、ＰＥ、ＰＥ−Ｃｙ５、ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、またはＡＰＣと共役するような、以下のマウス抗体をＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＡ）から購入した。α４β７（ＬＰＡＭ−１）、ＣＤ４（Ｌ３Ｔ４）、ＣＤ８（５３−６．７）、ＣＤ１１ｂ（ＭＩ／７０）、ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３）、ＣＤ２５（ＰＣ６１）、ＣＤ４５Ｒ（ＲＡ３−６Ｂ２）、ＣＤ４５ＲＢ（１６Ａ）、ＣＤ４５．１またはＬｙ５．１（Ａ２０）、ＣＤ４５．２またはＬｙ５．２（１０４）、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ（ＸＭＧ１．２）、ＮＫ１．１（ＰＫ１３６）、ＴＣＲα２（Ｂ２０．１）、ＴＣＲβ５（ＭＲ９−４）、ＴＣＲβ鎖（Ｈ５７−５９７）、ＴＥＲ−１１９、およびイソタイプ対照。抗マウスＩＬ−２（ＪＥＳ６−１Ａ１２）、ＣＤ１０３またはαＥβ７（２Ｅ７）、ＣＣＲ９（ＣＷ１９９）、ＣＴＬＡ−４（ＵＣ１０）、およびＦｏｘｐ３（ＦＪＫ−１６Ｓ）を、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）から購入した。Ｆｃ受容体遮断に使用する抗マウスＣＤ１６／３２を、我々の研究所において単離および精製した。
【０１３９】
Ｔ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、および樹状細胞（ＤＣ）単離
ＣＤ４＋  ＣＤ２５−Ｔ細胞単離のために、脾臓を取り出し、細胞単一懸濁液中に裂き、７０μｍの細胞濾過器（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  ＵＳＡ）を通して濾過した。１／２００希釈での特異的ビオチン−共役ｍＡｂ（抗ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２５、ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）、ＮＫ１．１、およびＴＥＲ１１９）および抗ビオチン電磁マイクロビーズ（１脾臓当たり２５〜４０μｌ）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，  ＵＳＡ）との混合物を用いたインキュベーション後の陰性選択によって、ＣＤ４＋  ＣＤ２５−Ｔ細胞を単離した。
【０１４０】
ＣＤ８＋Ｔ細胞単離のために、脾臓細胞を除去し、製造者のプロトコル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，  ＵＳＡ）に従って、ＣＤ８Ｔ細胞単離キットを使用して単離した。Ｔ細胞を枯渇させるために、ＣＤ９０．２（Ｔｈｙ１．２）電磁マイクロビーズを使用した陰性選択によって、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓からＡＰＣを単離した（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）。ＲＢＣ溶解バッファ（Ｓｉｇｍａ，  ＵＳＡ）を使用して、脾臓細胞懸濁液中の赤血球（ＲＢＣ）を除去し、細胞を３０００ラドで照射した。
【０１４１】
樹状細胞単離のために、脾臓およびＭＬＮを切り刻み、室温で３０分間、Ｄ型コラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ，ＵＳＡ）によって消化した。消化された組織を、さらに５分間、５ｍＭのＥＤＴＡで処理し、７０μｍの細胞濾過器を通して濾した。続いて、製造者のプロトコル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，  ＵＳＡ）に従って、抗ＣＤ１１ｃマイクロビーズを使用した陽性選択によって、ＣＤ１１ｃ＋細胞を濃縮した。濃縮集団をＣＤ４５−ＡＰＣ、ＣＤ１１ｃ−ＰＥ、Ｉ−Ａｂ−ＦＩＴＣ、およびＴＣＲ  βで染色し、ＦＡＣＳ−ＤＩＶＡセルソーター（ＵＳＡ）を使用して、フローサイトメトリによって、ＴＣＲβ−ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋Ｉ−Ａｂ＋に対して分類した。
【０１４２】
試験管内Ｔ細胞刺激
樹状細胞−Ｔ細胞培養物に使用される培地は、１０％加熱不活性化ＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および５ｍＭのβ−メルカプトエタノール（全てＳｉｇｍａ，  ＵＳＡ）が補充されたイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）（Ｇｉｂｃｏ，  ＵＳＡ）であった。残りの培養物において、ＩＭＤＭと同一の方法で補充されたＲＭＰＩ（Ｇｉｂｃｏ，  ＵＳＡ）を使用した。樹状細胞−Ｔ細胞培養物に対して、２ｘ１０４個の樹状細胞および１ｘ１０５個のＴ細胞を２００μｌの体積（９６ウェルプレート）で培養した。照射ＡＰＣ−Ｔ細胞培養物に対して、５ｘ１０５個のＡＰＣおよび１ｘ１０５個のＴ細胞を９６ウェルプレートにおいて２００μｌの体積で培養した（４８ウェルプレートにおいて１ウェル当たり２ｘ１０６個のＡＰＣおよび０．５ｘ１０６個のＴ細胞）。多クローン性ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞を、１μｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ３ε（４５−２Ｃ１１）、固定化抗ＣＤ３ε（５μｇ／ｍｌ）、および２μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（ＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＵＳＡ）（図１Ｄ）、または製造者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＵＳＡ）に従って、マウスＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ細胞エクスパンダビーズで刺激した（図２Ｄ）。図４Ａに示される研究については、未処理ＣＤ４＋細胞（ＣＤ２５−ＣＤ４４ｌｏｗＣＤ６２Ｌ＋）の分類後、細胞をＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ中で２回洗浄し、数を数え、ＰＢＳ−０．１％ＢＳＡ中１ｍｌ当たり５−１０ｘ１０６個の細胞の濃度で、２μＭのＣＦＳＥ（カルボキシフルオセイン二酢酸サクシニミジルエステル）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  ＵＳＡ）で標識した。図３ＤおよびＥに記載される研究については、上述のように刺激された培養物において３日半後に、細胞を洗浄し、ｒｍＩＬ−２（１００ｕ／ｍｌ）を用いて２日間置き、洗浄し、分析前にさらに３日間にわたって、１μｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ３εおよび特定のサイトカインで再刺激した。
【０１４３】
使用した外因性サイトカインは、ＩＬ−２（２００ｕ／ｍｌ）、ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＴＧＦ−β１（５ｎｇ／ｍｌ）、５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−β２またはＴＧＦ−β３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＵＳＡ）、ＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍｌ）、およびＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍｌ）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，  ＵＳＡ）であった。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ−遺伝子導入Ｔ細胞によってそれぞれ認識された、ＭＨＣ−Ｉ（ＯＶＡ２５７−２６４）およびＭＨＣ−ＩＩ（ＯＶＡ３２３−３３９）制限ＯＶＡペプチドを、Ａｂｇｅｎｔ  Ｉｎｃ．（ＵＳＡ）によって合成し、１ｎＭ（ＯＴ−Ｉ  ＯＶＡｐ）または１μＭ（ＯＴ−ＩＩ  ＯＶＡｐ）で使用した。
【０１４４】
オールトランス−レチノイン酸（ＲＡ）および９−シス−レチノイン酸（９−シスＲＡ）をＳｉｇｍａ（ＵＳＡ）から購入し、ＤＭＳＯ（１０ｍＭ）に溶解し、−２０℃で保管し、遮光し、１００ｎＭの濃度で使用した。レチノイド酸受容体拮抗薬ＬＥ１３５をエタノール（１０ｍＭ）に溶解し、１μＭの濃度で培養物に添加した。レチノイド酸受容体拮抗薬ＬＥ５４０（Ｗａｋｏ，  Ｊａｐａｎ）をＤＭＳＯ（１ｍＭ）に溶解し、１μＭの濃度で培養物に添加した。
【０１４５】
リステリア菌感染
リステリア菌（株  ＷＴ  ＬＭＯＶＡ）を使用した。マウスを５ｘ１０８ＣＦＵのリステリアモノサイトゲネスに経口感染（強制）させた。マウスは、感染の同日および２日後に賦形剤、ＲＡ、またはＬＥ５４０の腹腔内注射を受けた。分析のために、感染の５日後にマウスを屠殺した。
【０１４６】
オールトランス−レチノイン酸（ＲＡ）をＳｉｇｍａ（ＵＳＡ）から購入し、１：１のＤＭＳＯ＋大豆油（腹腔内注射に対して３ｍｇ／ｍｌ）または大豆油のみ（強制経口投与に対して６ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、−２０℃で保管し、遮光し、３００μｇ／マウスで使用した。レチノイド酸受容体拮抗薬ＬＥ５４０（Ｗａｋｏ，  Ｊａｐａｎ）を１：１のＤＭＳＯ＋大豆油（０．５ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、−２０℃で保管し、遮光し、１００μｇ／マウスで使用した。１日おきに、２週間の間隔で、未処理マウスは、賦形剤、ＲＡ、またはＬＥ５４０のいずれかの強制経口投与を受けた。
【０１４７】
実験的結腸炎モデル
脾臓を供与マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）から取り出し、ＨＢＳＳ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＵＳＡ）中の細胞単一懸濁液に裂いた。細胞懸濁液を７０μｍの細胞濾過器を通して濾過し、続いて、製造者のプロトコル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，  ＵＳＡ）に従って、抗ＣＤ４（Ｌ３Ｔ４）電磁マイクロビーズを使用した陽性選択によって、ＣＤ４＋細胞を濃縮した。ＣＤ４＋−濃縮細胞を２回洗浄し、ＰＥ−Ｃｙ５−共役抗ＣＤ４およびＰＥ−共役抗ＣＤ４５ＲＢ抗体で染色した。染色後、細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ−ＤＩＶＡセルソーターを使用して、フローサイトメトリによって、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈＴ細胞集団を分類した。精製ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ未処理Ｔ細胞を２回洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁し、ＲＡＧ−／−レシピエントマウスに注入した。受容者に、２００μｌのＰＢＳ中の５ｘ１０５個の細胞を静脈内注射した。共移植研究（図６および７）のために、Ｃ５７ＢＬ／６  Ｌｙ５．１マウスからの０．５ｘ１０６個のソートＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ細胞、およびＣ５７ＢＬ／６マウスからの２ｘ１０６個の照射脾臓ＡＰＣを含有する４８ウェルプレートを使用して、ＣＤ４  Ｔ細胞の試験管内状態調整を行った。これらの細胞を上述のように刺激し、３．５日後、ＣＤ４電磁マイクロビーズを使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。ＲＡＧ−／−受容者に、２００μｌのＰＢＳ中の、Ｃ５７ＢＬ／６  Ｌｙ５．１から新鮮な状態で単離した５ｘ１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ細胞、および２．５ｘ１０５個の試験管内状態に調整されたＣＤ４＋  Ｔ細胞を静脈内注射した。体重減少、猫背の様子、毛の立毛、および下痢を含む疾病の兆候に関して、移植マウスを定期的に監視した。
【０１４８】
移植後の対応する時点において、組織学的分析のために、罹患動物を屠殺した。大腸の遠位部および近位部から採取した３〜５ｍｍの組織サンプルを４％のホルマリンで固定した。後に、固定した組織をパラフィンに埋め込み、３μｍの断面を準備し、ヘマトキシリン−エオシンで染色した。重症度の評価をするために、以前に記載されたスコアリングシステム［Ａｒａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８，  ３４６４（１９９７）］を使用して、盲検法で、病理学者が炎症サンプルをコード化およびスコアリングした。疾病の重症度を表すために、スコアを平均化した。より高いスコア（最大で１４）は、より大きい病状を示す。
【０１４９】
肝臓、上皮内、および固有層リンパ球の調製
以前に記載されたように［Ｙ．  Ｋｉｎｊｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７，  ９７８（２００６）］、３７．５％の等張パーコール（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  ＵＳＡ）を使用して、肝臓リンパ球を単離した。以前に記載されたように［Ａｒａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８，  ３４６４（１９９７）］、腸リンパ球を単離および調製した。簡潔に、小腸および大腸を除去し、５％のＦＣＳを含有する冷却ＨＢＳＳ培地中に置いた。腸間膜から腸を慎重に取り除き、糞便内容物から洗い流した。腸を縦方向に切開し、次いで、１ｃｍの大きさに切った。２％ＦＣＳおよび１ｍＭのＤＴＴ（Ｓｉｇｍａ，  ＵＳＡ）で補充された、２５ｍｌの予熱したＨＢＳＳを含有する２５０ｍｌの三角フラスコに、腸組織を移し、３７℃で４０分間、２００ｒｐｍで振盪した。組織懸濁液をステンレス製のふるいを通して５０ｍｌの円錐管に移し、４℃で１０分間、１２００ｒｐｍの遠心分離によって、細胞を沈降させた。細胞ペレットを完全ＨＢＳＳ中に再懸濁し、不連続の４０／７０％のパーコール勾配上で層状に重ね、３０分間２０００ｒｐｍで遠心分離した。４０／７０％の界面からの細胞を採取し、洗浄し、完全ＲＰＭＩ培地中に再懸濁した。これらの精製細胞は、上皮内リンパ球（ＩＥＬ）集団を構成した。固有層リンパ球（ＬＰＬ）を単離するために、ステンレス製のふるいにある残りの腸組織を細かく刻み、円錐管に移した。細かく刻まれた片を、１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ，  ＵＳＡ）を含有する２０ｍｌの完全ＲＰＭＩ中に再懸濁し、３７℃で４０分間、２００ｒｐｍで振盪した。組織懸濁液を採取し、７０μｍの細胞濾過器を通過させ、１２００ｒｐｍの遠心分離によって、細胞を沈降させた。次いで、細胞を再懸濁し、４０／７０％パーコール勾配上に層状に重ね、ＩＥＬ調製に関して上記に記載されるように処理した。
【０１５０】
フローサイトメトリ分析および細胞内サイトカイン染色
脾臓、末梢リンパ節（ＰＬＮ）、およびＭＬＮを除去し、次いで、０μｍの細胞濾過器を通して濾し、ＲＢＣ溶解バッファを使用して、細胞懸濁液中のＲＢＣを除去した。肝臓単核細胞、ＩＥＬ、およびＬＰＬを上記に記載されるように単離した。染色前に、細胞を洗浄し、１ｘＰＢＳ、２％のＢＳＡ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０１％ＮａＮ３を含有する染色緩衝液中に再懸濁した。非特異的染色を阻止するために、２．４Ｇ２抗ＣＤ１６／３２抗体を添加した。細胞表面マーカーに対する抗体を添加し、細胞を氷上で２５分間インキュベートした。染色後に、細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ＵＳＡ）で同日に分析するか、または１％のパラホルムアルデヒドおよび０．０１％のＮａＮ３を含有するＰＢＳ中に固定し、後に分析した。細胞内サイトカイン染色のために、試験管内培養物から採取した細胞または単離ＩＥＬを、３７℃で、組織培養インキュベータにおいて、５０ｎｇ／ｍｌ  ＰＭＡ、７５０ｎｇ／ｍｌのイオノマイシン（両方とも、Ｓｉｇｍａ，  ＵＳＡ）、および１０μｇ／ｍｌのブレフェルジンＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＵＳＡ）で、４〜５時間インキュベートした。蛍光標識抗体の対応するカクテルで、２５分間、表面染色を実行した。表面染色後、Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ溶液（ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット−ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，  ＵＳＡ）中に細胞を再懸濁し、製造者のプロトコルに従って、細胞内サイトカイン染色を実行した。
【０１５１】
Ｆｏｘｐ３染色のために、図８Ｂおよび９Ａを除いて、ＰＭＡ／イオノマイシンでの刺激を実行しなかった。これらの場合において、ＰＭＡ／Ｉｏｎでのインキュベーションの時間は、３．５時間に減少した。ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのＦｏｘｐ３−染色キットプロトコルの通り、細胞内Ｆｏｘｐ３染色を実行した。
ＥＬＩＳＡによるサイトカインの検出
細胞の試験管内刺激の後、培養上清中のＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７をＥＬＩＳＡによって定量化した。ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７のＥＬＩＳＡのためのＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７、ならびに組み換えサイトカイン標準に対する捕捉および検出抗体を、ＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＵＳＡ）から購入した。
【０１５２】
ＲＮＡ単離およびリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
ＲＯＲγ−Ｔ  ｍＲＮＡ発現の分析のために、基本的に、Ｉｖａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  ［Ｉｖａｎｏｖ，  ＩＩ  ｅｔ  ａｌ．，  細胞  １２６，  １１２１（２００６）］によって記載されるように、未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞を精製した。簡潔に、抗ＣＤ４電磁マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）およびＭＡＣＳカラムを使用して、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓からＣＤ４＋Ｔ細胞を精製した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を抗ＣＤ２５−ＰＥ、抗ＣＤ４−ＰＥＣｙ５、抗ＣＤ６２Ｌ−ＦＩＴＣ、および抗ＣＤ４４−ＡＰＣで染色した。ＦＡＣＳ−ＤＩＶＡセルソーターを使用して、フローサイトメトリによって、ＣＤ４＋ＣＤ２５−ＣＤ４４ｌｏｗＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞集団を分類した（＞９９％純度）。上述のように分類されたＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈＴ細胞集団を使用して、いくつかの研究も実行した。
【０１５３】
異なる時点において、細胞を採取し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、ＴＲＩＺｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＵＳＡ）中に再懸濁した。次いで、サンプルを冷凍し、後の利用のために−８０℃で保存した。ＲＮＡ単離のために、全組織を均質化し、クロロホルムでの沈殿およびイソプロパノールでの抽出によって、ＲＮＡをＤＮＡおよびタンパク質から分離した。製造者によって提供された使用説明書に従って、スーパースクリプトＩＩシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＵＳＡ）を使用して、全ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。続いて、ＳＹＢＲグリーン（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  ＵＳＡ）および以下のマウスプライマを使用して、ｃＤＮＡをリアルタイムＰＣＲの対象にさせた。ＲＯＲγｔ順方向：５’−ＣＣＧＣＴＧＡＧＡＧＧＧＣＴＴＣＡＣ−３’、ＲＯＲγｔ逆方向：５’−ＴＧＣＡＧＧＡＧＴＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＡＣＡ−３’、Ｌ３２順方向、５’−ＧＡＡＡＣＴＧＧＣＧＧＡＡＡＣＣＣＡ−３’、およびＬ３２逆方向、５’ＧＧＡＴＣＴＧＧＣＣＣＴＴＧＡＡＣＣＴＴ−３’。遺伝子発現をＬ３２に標準化した。データを収集し、ｉＣｙｃｌｅｒ  Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  ＵＳＡ）で分析した。
【０１５４】
実施例２
本実施例は、Ｔｈ−１７分化の駆動における消化管関連樹状細胞および末梢樹状細胞の能力を比較する研究を含む。
【０１５５】
図１Ａに示されるように、ＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ遺伝子導入マウスからの開口型ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋脾臓細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ染色を実行した。ＯＶＡｐおよびＭＬＮまたは脾臓（ＳＰＬ）樹状細胞、ならびに示された場合は、外因性サイトカインおよびＬＥ１３５またはオールトランス−レチノイン酸（ＲＡ）で、ＣＤ４＋ＣＤ２５−細胞を刺激した。図２Ａに示されるように、照射脾臓細胞、ならびに添加されたサイトカインおよびＲＡで、可溶性α−ＣＤ３で刺激された多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色を実行した。ＯＶＡペプチド（ＯＶＡｐ）特異的、ＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ遺伝子導入ＣＤ４  Ｔ細胞（図１Ａ）、またはα−ＣＤ３刺激多クローン性ＣＤ４  Ｔ細胞（図２Ａ）を刺激するために、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）樹状細胞および脾臓樹状細胞を使用した。ＩＬ−６およびＴＧＦ−βの存在下で、ＭＬＮ樹状細胞は、Ｔｈ−１７分化を誘発する能力が、脾臓のそれらの能力と比較して低下することを示した。
【０１５６】
実施例３
本実施例は、ＲＡがＴＨ−１７細胞の分化を抑制することを示す研究を含む。
【０１５７】
Ｔｈ−１７分化を駆動するためのＭＬＮ樹状細胞能力の低下が、ＲＡによっても制御され得るかどうかを研究するために、Ｔｈ−１７分化を促進する条件下で、Ｔ細胞の試験管内活性化の間、ＲＡ受容体（ＲＡＲ）拮抗薬、ＬＥ１３５［Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４，  １５３６０（１９９９）］を含んだ。
【０１５８】
図１Ａおよび２Ａ（上述）に表される研究に加えて、関連ＯＶＡｐ、ソート脾臓ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞、ならびに示されたように、添加されたサイトカインおよび９−シスＲＡ（１００ｎＭ）で刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色も実行し、ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋細胞に開口した（図２Ｂ）。これらの研究において、Ｔｈ−１７分化を媒介するＭＬＮ樹状細胞の相対的非効率性は逆になり、それらが、脾臓樹状細胞と同様のレベルでＴ細胞を感作するようになった。比較すると、培養物へのオールトランスＲＡの添加は、脾臓樹状細胞によるＴｈ−１７分化を阻害し（図１Ａ、１Ｂ、および図２Ａ中）、ビタミンＡ代謝産物、９−シスＲＡの培養物への添加もまた、脾臓樹状細胞によるＴｈ−１７分化を阻害したことがわかった（図２Ｂ）。
【０１５９】
関連ＯＶＡｐおよび脾臓ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞で、ならびに示されたサイトカインを用いずに（なし）、または用いて、ＲＡを用いずに、または用いて刺激されたＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色を実行した（図２Ｃ）。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで、ならびに外因性サイトカインを用いずに（なし）、または示されたサイトカインを用いて（ＩＬ−１７条件：ＴＧＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α）、およびＲＡを用いて、または用いずに刺激された多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色も実行し、ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞に開口した（図２Ｄ）。
【０１６０】
図１Ｃに示されるように、開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋細胞の細胞内ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ染色を実行した。α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣで、示されたサイトカインで、全ＣＤ８＋脾臓Ｔ細胞を刺激した（なし、ＴＧＦ−β＋ＩＬ−６、ならびにＴＧＦ−β＋ＩＬ−６およびＲＡ）。ＣＤ４＋ＴＨ−１７細胞に加えて、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の存在下で活性化されたＷＴ（図１Ｃ）またはＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋（図２Ｃ中で上述）細胞毒性ＣＤ８＋Ｔリンパ球もまた、ＩＬ−１７＋Ｔ細胞を生成し、またＲＡが、この場合もやはり、これを阻害することができたことが観察された。本研究は、Ｔ細胞が、それらのエフェクター表現型にかかわらず、ＩＬ−１７＋細胞になることができ、またＲＡがＩＬ−１７発現を特に抑制することを示した。
【０１６１】
ＴＨ−１７細胞は、ＩＬ−１およびＴＮＦ−α等のさらなるサイトカインが培養条件に含まれる場合、樹状細胞の非存在下でも生成することができる。そのようなＡＰＣフリー条件下で、ＲＡは、ＩＬ−１７＋Ｔ細胞の生成も阻害し、ＲＡが、Ｔ細胞を直接標的にすることを明示する（図２Ｄ中で上述）。ＲＯＲγｔは、ＴＨ−１７細胞の遺伝子転写に関与してきたオーファン核内受容体である［Ｉｖａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  １２６，  １１２１（２００６）］。ＲＡがＲＯＲγｔを制御するかどうかを決定するために、ＣＤ４  Ｔ細胞をＴｈ−１７培養条件下で、ＲＡを用いて、または用いずに活性化した。
【０１６２】
図１Ｄに示されるように、α−ＣＤ３εおよびα−ＣＤ２８で刺激されたＣＤ４  Ｔ細胞において、ＰＣＲによってＲＯＲγｔ  ｍＲＮＡを数回分析した。示された所では、サイトカインを含むＩＬ−１７（黒で示されるＩＬ−１７条件）、またはこれらのサイトカイン＋ＲＡ（白で示される）が含まれた（平均±ＳＤ）。結果は、炎症性サイトカインの存在下で、ＴＧＦ−βは高レベルのＲＯＲγｔを誘発し、一方で、添加されたＲＡは、その発現を大幅に低下させたことを示す（図１Ｄ）。
【０１６３】
生体内研究
生体内でのＴｈ−１７発生に対するＲＡの明らかな抑制効果を研究するために、マウスにリステリア菌（Ｌｍ）を経口感染させ、ＲＡまたはＲＡＲ阻害剤（ＬＥ５４０）で処理した。図１Ｅに示されるように、リステリア菌の経口感染の５日後に、小腸固有層からのＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞内ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ染色を実行した。データは、１群当たり３〜４匹のマウスを代表する。ＲＡを受容した動物において、Ｔｈ−１７粘膜Ｔ細胞の測定可能な低下が見られ、一方で、ＲＡＲ阻害剤で処理されたマウスは、対照と比較して何の明らかな差も示さなかった（図１Ｅ）。集合的に、これらの研究は、ＲＡが、試験管内および生体内でのＴｈ−１７発生に拮抗するように作用し、またこれは、ＲＯＲγｔの低下を介してＴ細胞に直接作用するように思われることを示唆する。
【０１６４】
実施例４
本実施例は、ＲＡが、ＴＧＦ−β依存性ＴｒｅｇおよびＴＨ−１７細胞の相互分化を調節することを示す研究を含む。
【０１６５】
ＭＬＮ樹状細胞のＴｈ−１７分化促進の非効率性、およびＴＨ−１７細胞またはＴｒｅｇのいずれかへの相互ＴＧＦ−β依存的変換は、粘膜樹状細胞が、増強したＴＧＦ−β依存性Ｔｒｅｇ分化を駆動し得るかどうかを決定するための研究をもたらした。ＴＧＦ−β依存性Ｔｒｅｇは、フォークヘッド−ウィングドヘリックス転写因子、Ｆｏｘｐ３の発現によって同定されることが報告されており［（Ｆｏｎｔｅｎｏｔ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４，  ３３０（２００３）；  Ｈｏｒｉ，  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９９，  １０５７（２００３）；  Ｋｈａｔｔｒｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４，  ３３７（２００３）；  Ｍｕｃｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１５，  １９２３（２００５）］、ＴＧＦ−βおよびＯＶＡｐの存在下で脾臓またはＭＬＮ樹状細胞で培養されたＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４細胞におけるＦｏｘｐ３誘発が研究された。図３Ａに示されるように、ＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ遺伝子導入マウスからの開口型ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋細胞のＦｏｘｐ３および表面ＣＤ１０３に対する細胞内染色を実行した。加えて、ＯＶＡｐおよびＭＬＮまたはＳＰＬ樹状細胞、ならびに示されるように、ＴＧＦ−β１およびＬＥ１３５またはＲＡで、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を刺激した。脾臓樹状細胞で見られるＴｈ−１７分化とは対照的に、ＭＬＮ樹状細胞は、より高い頻度でＦｏｘｐ３＋細胞を誘発することができた（図３Ａ）。ＲＡＲ阻害剤の存在下で、ＭＬＮ樹状細胞によるＴＧＦ−β依存性Ｆｏｘｐ３誘発は低下したが、ＲＡの添加によって増強された（図３Ａ）。
【０１６６】
加えて、異なる組織から単離された全ＣＤ４  Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３＋  ＣＤ４  Ｔ細胞の頻度を分析した。図４Ａに示されるように、種々の組織から単離されたＴＣＲβ＋開口型Ｔ細胞によるＦｏｘｐ３およびＣＤ４発現の細胞内染色を実行した。ｓＬＰＬおよびｌＬＰＬは、小腸および大腸固有層リンパ球をそれぞれ示し、ＰＬＮは、末梢リンパ節を示す。数値は、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団におけるＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞の割合の平均±ＳＥＭを表す。図４Ｂに示されるように、開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ２５またはＣＤ１０３に対して、細胞内Ｆｏｘｐ３染色および表面染色を実行した。下のパネルにおいて、数値は、Ｆｏｘｐ３＋集団におけるＣＤ１０３＋細胞の割合を示す。各研究に対して５匹のマウスを分析した。この分析は、他のＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットと比較して、小腸および大腸ＣＤ４＋固有層リンパ球（ＬＰＬ）が、より多くのＦｏｘｐ３＋細胞を一貫して有したことを示した（図４Ａ）。組織にかかわらず、大部分のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４細胞は、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）α鎖、ＣＤ２５（図４Ｂ）も発現したが、腸組織におけるＦｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋ＣＤ４＋細胞の大部分は、多くの粘膜Ｔ細胞によって発現されたαＥインテグリンサブユニット、ＣＤ１０３も共発現した（図３Ｂ）。ＬＰ  Ｔリンパ球におけるＦｏｘｐ３＋細胞の頻度の増加は、粘膜樹状細胞によるプライミングが、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの末梢分化を支持し得ることを示唆した。
【０１６７】
Ｆｏｘｐ３の発現に加えて、末梢に生成されたＴｒｅｇは、それらの機能分化の一部としてＣＴＬＡ−４も誘発する。外因性ＲＡおよびＴＧＦ−βの相乗効果が、ＣＴＬＡ−４の発現も制御するかどうかを検査するために、ＲＡおよび／またはＴＧＦ−βの存在下で刺激された未処理ＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４Ｔ細胞の試験管内培養の間の異なる時点で、ＣＴＬＡ−４発現を分析した。これを研究するために、樹状細胞の代わりに脾臓ＡＰＣであることを除いて（図３Ｂ）、図３Ａにあるように刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ  ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞（上述）の細胞内Ｆｏｘｐ３およびＣＴＬＡ−４染色を実行した。
【０１６８】
図３Ｂに示されるように、Ｆｏｘｐ３−およびＦｏｘｐ３＋活性化細胞に対するＣＴＬＡ−４の誘発は、ＴＧＦ−βおよびＲＡの存在下で遅延した（図３Ｂ）。後の時点において、ＴＧＦ−βおよびＲＡで培養された細胞の大部分は、ＣＴＬＡ−４およびＦｏｘｐ３＋の両方であった（図３Ｂ）。これらの研究は、ＴＧＦ−βおよびＲＡの相乗効果が、エフェクター細胞上の早期ＣＴＬＡ−４発現を阻害するが、代わりに、Ｆｏｘｐ３系列に関与した細胞によるＣＴＬＡ−４の後期発現を可能にすることを示す。
【０１６９】
考察されるように、ＲＡは、ほとんどのＴＧＦ−β生成Ｆｏｘｐ３＋細胞上にＴｒｅｇによって典型的に発現される細胞表面受容体、ＣＴＬＡ−４の発現を促進した（図３Ｂ）。ＯＶＡｐおよび脾臓樹状細胞で、ならびにＴＧＦ−β１およびＲＡで、ＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ遺伝子導入マウスからのＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激し、Ｆｏｘｐ３に対する開口型ＴＣＲβ＋細胞の細胞内染色を実行した（図３Ｃ）。３日間、関連ＯＶＡｐおよび照射脾臓ＡＰＣで、ならびに示されたサイトカインを用いずに（なし）、および用いて、およびＲＡを用いずに、および用いて刺激されたＯＴ−Ｉ  ＴＣＲ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＣＴＬＡ−４に対する細胞内染色、ならびにＣＤ２５に対する表面染色を実行した（図４Ｃ）。比較のために、同一条件下で刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４＋ＣＤ２５−細胞も図４Ｃに示される。ヒストグラムは、ＴＣＲβ＋ＣＤ８＋細胞に開口し、３、４、および５日間、図面の簡単な説明（図４Ｄ）において上記に記載されるように刺激されたＯＴ−Ｉ  ＣＤ８＋細胞の染色を表す。単灰色−なし、灰色線−ＲＡ、点線−ＴＧＦ−β、黒線−ＴＧＦ−ｂ＋ＲＡ。ＴＧＦ−ｂ依存性Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞分化に対するＲＡの相乗効果もまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞で明らかであり（図３Ｃ）、Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞分化のＲＡ媒介増加が、ＣＤ２５＋ＣＤ４＋Ｔｒｅｇに限定されない可能性があることを示した（図４Ｃおよび４Ｄ）。これらの研究は、ＣＤ４  Ｔ細胞ではなく、ＲＡで処理されたＣＤ８  Ｔ細胞が、ＴＧＦ−βおよびＲＡの存在下で試験管内活性化によるＣＤ２５発現を下方制御することを示す。
【０１７０】
一方で、ＴＧＦ−βおよびＲＡは、ＣＤ４  Ｔ細胞に関して記載されるのと同様に、ＣＤ８細胞上のＣＤ１０３発現を上方制御するために相乗作用を与える。ＣＤ２５の下方制御は、ほぼ例外なく、Ｆｏｘｐ３陰性細胞（活性化ＣＤ８  Ｔ細胞の大部分）上で起こる。しかしながら、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ８細胞（多クローン性またはＴＣＲ−遺伝子導入）は、高レベルのＣＤ２５＋およびＣＴＬＡ−４を発現する。ＣＤ２５−ＣＤ８  Ｔ細胞が、ＣＤ８＋ＩＥＬの生体内でのＩＬ−１５依存と同様に、ＩＬ−２の代わりにＩＬ−１５に依存するようになることが考えられる。全体的に、これらのデータは、ＲＡがＴＧＦ−β依存性ＴｒｅｇおよびＴＨ−１７細胞の相互分化を制御することを示す。
【０１７１】
実施例５
本実施例は、ＲＡおよびＴＧＦ−βの組み合わせが、異なるホーミング能力を有する細胞集団をもたらすことを示す研究を含む。
【０１７２】
粘膜樹状細胞由来のＲＡもまた、［Ｉｗａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２１，  ５２７（２００４）］に報告されるように小腸へのホーミングに特異的な、インテグリンα４β７およびＣＣＲ９を含む、腸ホーミング受容体の誘発を媒介することが報告されており、一方で、ＴＧＦ−βは、αＥβ７インテグリンのαＥサブユニット、ＣＤ１０３の誘発を促進することが報告されている［Ｈａｄｌｅｙ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５９，  ３７４８（１９９７）］。ＴＧＦ−βおよびＲＡが、これらの受容体を誘発するために相乗作用を与え得るかどうかを決定するために、研究を実行した。
【０１７３】
ＣＤ１０３、α４β７、およびＣＣＲ９に対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞表面染色を実行した。可溶性α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣ、さらにＴＧＦ−β１、ＲＡ、またはＴＧＦ−β１およびＲＡで、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を刺激した。イソタイプ対照は、単灰色ヒストグラムで示され、３つの研究からの代表的なデータが、図３Ｄに示される。相乗作用と一致して、ＲＡは、ＴＧＦ−β媒介ＣＤ１０３発現を大幅に増強したが、対照的に、ＴＧＦ−βは、ＲＡ誘発性ＣＣＲ９に部分的に拮抗した（図３Ｄ）。これらの結果は、ＲＡおよびＴＧＦ−βの組み合わせが、異なるホーミング能力を有する小腸およびＣＣＲ９−Ｆｏｘｐ３＋細胞に対する向性を示すＣＣＲ９＋Ｔｒｅｇをもたらすことを示す。
【０１７４】
実施例６
本実施例は、生体内でのＲＡの影響を決定するための研究からのデータを含む。
【０１７５】
リステリア菌（Ｌｍ）感染マウスをＲＡまたはＲＡＲ阻害剤で処理した。図３Ｅは、リステリア菌の経口感染の５日後の小腸固有層からのＣＤ４＋ＴＣＲβ＋リンパ球におけるＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋細胞の割合（左のパネル）、または未処理対照（右のパネル）を示す。＊Ｐ＜０．０５（Ｓｔｕｄｅｎｔ  Ｔ検定）。ＲＡ単体では、生体内でＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの分化を測定可能な程度に増強することが認められなかったが、ＲＡＲの阻害は、Ｌｍ接種マウスにおける粘膜Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞数を著しく減少させた（図３Ｅ）。
【０１７６】
図５Ｃは、リステリア菌の経口感染の５日後のマウスの脾臓から単離された全ＣＤ４＋ＴＣＲβ＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋リンパ球の割合を示す。各群は、賦形剤、ＲＡ、またはＬＥ５４０の腹腔内注射を２回（０および２日目）受けた。賦形剤、ＲＡ、またはＬＥ５４０の強制経口投与処理を２週間受けた未処理マウスのデータは、右側に示される（平均±ＳＤ）。（図５Ｃ）に示されるように、脾臓Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４細胞に対するＲＡまたはＲＡＲの効果は観察されなかった。単体ではなくＴＧＦ−βと組み合わせたＲＡが、試験管内でのＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞の分化を駆動することができるという発見（図２Ａ）は、ＴＧＦ−βが、生体内での外因性ＲＡによって誘発されるＴｒｅｇ分化の欠如における制限因子であり得ることを示す（図５Ｄ）。
【０１７７】
実施例７
本実施例は、レチノイン酸が、ＴＧＦ−β媒介Ｆｏｘｐ３誘発を増強することを示す研究を含む。
【０１７８】
細胞内染色を以下のように実行した。（図５Ａ）関連ＯＶＡｐ、ソート脾臓ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞で、ならびに外因性サイトカインを用いずに（なし）、または示されたサイトカインを用いて、およびＲＡまたは９−シスＲＡ（両方１００ｎＭで）を用いずに、または用いて刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＴＣＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＣＤ１０３に対する細胞内染色。ＴＣＲ  Ｖβ５＋ＣＤ４＋細胞に開口する。（図５Ｂ）可溶性α−ＣＤ３ε、照射脾臓細胞で、および外因性サイトカインを用いずに（なし）、またはＴＧＦ−β２もしくはＴＧＦ−β３で、およびＲＡを用いずに、または用いて刺激された未処理多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−脾臓Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＣＤ４染色の細胞内染色。このデータは、他の関連ビタミンＡ誘導体、９−シスＲＡが、試験管内で生成されたＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇに対して同様の増加作用を有し（図５Ａ）、ＲＡが、増強したＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞分化を誘発するために、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、またはＴＧＦ−β３アイソフォームと同等に相乗作用を与えたことを示した（図５Ｂ）。
【０１７９】
加えて、図５Ａに関して記載されるものと同一条件で刺激されたＯＴ−ＩＩ  ＣＤ４  Ｔ細胞のＦｏｘｐ３に対する細胞内染色を実行し、代表的なデータが図５Ｄに示される。少量のＴＧＦ−β（０．５ｎｇ／ｍｌ、または通常の濃度よりも１０倍少ない）の存在下で、ＲＡは、ＴＣＲ−遺伝子導入ＣＤ４細胞におけるＴＧＦ−β依存性Ｆｏｘｐ３誘発をなお増強するが、全体のＦｏｘｐ３誘発は、大幅に減少し、ＴＧＦ−βがこのＴｒｅｇ分化における決定的および制限因子であることを確認した（５Ｄ）。
【０１８０】
実施例８
本実施例は、ＴＧＦ−β＋ＲＡ試験管内分化Ｔｒｅｇが、生体内で調節する共移植研究を含む。
【０１８１】
試験管内で生成されたＦｏｘｐ３＋ＣＤ４  Ｔ細胞が、生体内でエフェクターＴ細胞を抑制する働きをし得るかどうかを検査するために、異なる条件下ですでに培養されたＣＤ４  Ｔ細胞と組み合わせて、免疫不全マウスにおける結腸炎を誘発する未処理ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ４  Ｔ細胞を使用して、共移植研究を実行した［Ｉｚｃｕｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２１２，  ２５６（２００６）］。図６（Ａ〜Ｅ）に示されるように、（Ａ）α−ＣＤ３ε単体（なし）またはＴＧＦ−β１およびＲＡで、試験管内で刺激された２．５ｘ１０５個のＣＤ４＋Ｔ細胞と５ｘ１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ細胞の共移植の６〜７週間後のＲＡＧ−１-／-マウスの遠位結腸のヘマトキシリンおよびエオシン染色を、原倍率４０Ｘで実行し、代表的なデータは、各群における４匹のマウスからである。（Ｂ）添加なし（四角）、ＴＧＦ−β１（三角）、またはＴＧＦ−β１およびＲＡ（菱形）を用いて、２．５ｘ１０５個のα−ＣＤ３εで刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞と５ｘ１０５個のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ細胞の移植後のＲＡＧ−１-／-マウスの体重。１群当たり４匹の動物の平均±ＳＤ重量が示される。データは３つの研究を代表する。（Ｃ）（Ｂ）に示される群の組織学的スコア。（Ｄ）可溶性α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣで、および示されたサイトカインで、初期に刺激された未処理ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋のＦｏｘｐ３細胞内染色。細胞は、ＩＬ−２を用いて２日間そのまま置かれ、分析前に外因性サイトカインの非存在下で再刺激された。（Ｅ）（Ｄ）に記載されるように、しかしＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の存在下で初期に刺激され、そのまま置かれ、示された条件下で再刺激された未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞のＩＬ−１７に対する細胞内染色。開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞におけるＩＬ−１７＋細胞の割合が図示される。
【０１８２】
未処理ＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ４細胞と組み合わせた、サイトカイン状態調整なしで活性化されたＣＤ４  Ｔ細胞を受けたマウスは、重度の結腸炎を発症した（図６）。対照的に、ＴＧＦ−βの存在下で活性化されたＣＤ４  Ｔ細胞を共移植された受容者は、部分的に疾病から守られ、ＴＧＦ−βおよびＲＡの両方の存在下で試験管内において活性化された未処理Ｔ細胞およびＣＤ４  Ｔ細胞を共移植されたマウスは、疾病の明らかな兆候を示さなかった（図６）。
【０１８３】
加えて、α−ＣＤ３ε単体またはＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β１およびＲＡと合わせて、試験管内で刺激された２．５ｘ１０５個のＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｌｙ５．１＋）と合わせた５ｘ１０５個のＬｙ５．２＋（Ｌｙ５．１−）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉ細胞の移植の６〜７週間後の、ＲＡＧ−／−レシピエントマウスから単離された大腸からのＩＥＬのＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対して、細胞内染色を実行した。ＣＤ４＋リンパ球に開口する。ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γを産生したこれらの動物から単離された粘膜ＣＤ４  Ｔ細胞はより少なかった（図７）。これらの結果は、ＲＡおよびＴＧＦ−βで試験管内において生成されたＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞が、測定可能な  制御能力を有し、生体内での移植による炎症を制御することができることを示唆する。加えて、ＴＧＦ−β単体によって試験管内で生成されたＴｒｅｇが、再刺激によってＦｏｘｐ３発現を失う一方で、ＲＡ＋ＴＧＦ−β分化Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞の大部分は、再刺激後もＦｏｘｐ３＋を残し、ＲＡが、安定したＴｒｅｇ系列の分化を駆動することを示す（図６Ｄに示されるように）。反対に、ＲＡおよびＴＧＦ−βがまた、二次培養物中の関与したＴＨ−１７細胞を抑制した一方で、ＴＧＦ−β単体は抑制しなかった（図６Ｅ）。
【０１８４】
実施例９
本実施例は、ＩＬ−６およびＲＡによる相互ＴＧＦ−β依存性Ｔ細胞分化の研究を含む。
【０１８５】
ＲＡが、ＩＬ−６の活性を妨げるかどうかを確認するために、ＩＬ−６と合わせたＲＡの存在下でのＴＧＦ−β依存性Ｔ細胞分化を分析した。図８Ａは、ＣＦＳＥ標識未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞が、α−ＣＤ３ε、脾臓ＡＰＣ、示されたサイトカイン、および示されるように、ＲＡで刺激されたことを示す。ＩＬ−１７分化を駆動するために、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１−β、ＴＧＦ−β、およびＩＬ−６を使用した。Ｆｏｘｐ３およびＩＬ−１７に対する開口型ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞の細胞内染色が図示される。図８Ｂは、示された条件下で、可溶性α−ＣＤ３εおよび脾臓ＡＰＣで刺激されたＣＤ８＋Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＩＬ−１７に対する細胞内染色を示す。そうでなければＴＧＦ−β依存性Ｔｈ−１７分化を促進する条件下で、ＲＡで培養されたＣＤ４（図８Ａ）またはＣＤ８（図８Ｂ）Ｔ細胞は、Ｔｈ−１７分化の減少を伴ってＦｏｘｐ３＋細胞に変換された。
【０１８６】
加えて、可溶性α−ＣＤ３ε、照射脾臓ＡＰＣ、およびＴＧＦ−β（５ｎｇ／ｍｌ）で刺激された多クローン性ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞のＦｏｘｐ３およびＩＬ−１７に対する細胞内染色を、示された濃度のＩＬ−６およびＲＡなしで、またはそれらと合わせて実行した。ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞に開口した（図９Ａ）。結果は、ＩＬ−６に対するＲＡの拮抗作用が、用量依存的であったことを示し（図９Ａ）、生理学的条件下で、ＲＡで駆動されたＴＧＦ−β依存性Ｔｒｅｇ分化が、ＩＬ−６で促進されたＴＧＦ−β依存性Ｔｈ−１７生成に優先し得ることを示す。
【０１８７】
実施例１０
本実施例は、ＩＬ−２の非存在下での試験管内におけるＴ細胞分化に対するＲＡ媒介効果の研究を含む。
【０１８８】
ＩＬ−２は、ＴＧＦ−β依存性Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞の産生に必要である［Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７８，  ４０２２（２００７）］。近年、外から添加されたＩＬ−２もまた、Ｔｈ−１７分化を抑制することが報告された［Ｌａｕｒｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２６，  ３７１（２００７）］。Ｔ細胞極性化のＲＡ媒介調節が、ＩＬ−２シグナリングを必要としたかどうかを決定するために、抗ＩＬ−２またはＩＬ−２−／−Ｔ細胞を使用して、ＩＬ−２の非存在下で、試験管内でのＴ細胞分化に対するＲＡ媒介効果を検査した。
【０１８９】
図８Ｃおよび８Ｄに示されるように、以下を実行した。Ｂ７．１／２−／−ＩＬ−２＋／＋またはＢ７．１／２−／−ＩＬ−２−／−マウスからの未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ１０３（Ｃ）、または細胞内ＩＬ−１７およびＩＦＮ−γ（Ｄ）に対するＦｏｘｐ３および表面染色に対する細胞内染色。細胞は、可溶性α−ＣＤ３ε、脾臓ＡＰＣ、ならびに示されたサイトカイン、ＲＡ、および／またはＩＬ−２に対する遮断抗体（２０μｇ／ｍｌ）で刺激され、ＴＣＲβ＋ＣＤ４＋細胞に開口した。図８Ｅに示されるように、（Ｃ）および（Ｄ）の培養上清におけるＩＬ−１７に対するＥＬＩＳＡ（平均±ＳＤ）を実行した。
【０１９０】
図９Ｂおよび９Ｃに示されるように、以下も実行した。（Ｂ）可溶性α−ＣＤ３ε、照射脾臓ＡＰＣで、および示されたサイトカインｓおよび／またはＲＡ（１００ｎＭ）および／または遮断抗ＩＬ−２抗体（２０μｇ／ｍｌ）を用いずに（なし）、または用いて刺激されたＣ５７ＢＬ／６マウスからの全ＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ−１７およびＩＦＮ−γに対する細胞内染色。（Ｃ）図９Ｂに記載されるように示された条件で設定された培養上清におけるＩＬ−１７に対するＥＬＩＳＡ。
【０１９１】
これらの研究において、Ｆｏｘｐ３＋細胞の分化を駆動するためのＲＡの効果の増大、およびＴＧＦ−β依存性Ｔｈ−１７分化に対するＲＡの阻害効果は、大部分ＩＬ−２に依存していた（図８Ｃ、８Ｄ、８Ｅ、ならびに９Ｂおよび９Ｃ）。ＲＡ媒介性調節は、ＲＡおよび外因性ＩＬ−２と合わせて添加された時に、ＴＧＦ−β依存性Ｔ細胞分化の相互調節を駆動するために相乗作用を与えたが、外から添加されたＩＬ−２を必要としなかった（図８）。しかしながら、ＲＡおよび外因性ＩＬ−２で制御された分化は、ＩＬ−２で駆動されたＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの大部分がＣＤ１０３−であったのに対して、ＲＡ媒介ＴＧＦ−β依存性Ｆｏｘｐ３分化が、主にＣＤ１０３＋Ｔｒｅｇを生成したという点で、はっきりと異なるように思われた（図８Ｃ）。反対に、ＲＡが、Ｌ−１７サイトカイン  分泌を測定可能な程度に減少させ、一方で、外因性ＩＬ−２が減少させなかったことから、ＴＨ−１７細胞を抑制するＲＡおよびＩＬ−２の機構は、いくつかの違いを有するようにも思われた（図８Ｅ）。これらの研究は、集合的に、外因性ＩＬ−２およびＲＡの両方が、それらの制御機能、ＴＧＦ−βとの協調、およびさらなる下流機構に対して初期ＩＬ−２シグナリングを必要とするが、それらは、非常に異なる場合があることを示す。
【０１９２】
転写因子、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ３／ＲＯＲγｔは、Ｆｏｘｐ３およびＩＬ−１７の転写にそれぞれ関与することが報告されている［（Ｉｖａｎｏｖ，  ＩＩ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  １２６，  １１２１（２００６）；  Ｘ．  Ｏ．  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（２００７）；  Ａ．  Ｌａｕｒｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２６，  ３７１（２００７）］。ＲＯＲγｔは、ＲＡＲとの強い相同性、ならびに転写活性化因子およびレプレッサとの関連で両方の機能を示す（Ｗｉｎｏｔｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  １０９（２００２））。ＳＴＡＴ３／ＲＯＲγｔと同様に、ＳＴＡＴ５およびＲＡＲもまた関連しており、それらは、物理的に相互作用し、協調的転写活性を促進するために、重複ＤＮＡ結合部位と結合することができる［（Ｓｉ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １００，  ４４０１（２００２）］。加えて、ＲＡＲおよびＳＴＡＴ５は、ＲＡによって放出することができる同一リプレッサ、ＳＭＲＴと結合する［（Ｎａｋａｊｉｍａ  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｅｍｂｏ  ２０，  ６８３６（２００１）］。さらに、ＲＡはまた、ＴＧＦ−β受容体シグナリングの下流で作用するＳｍａｄと、および／またはＣＤ１０３誘発に関与し、ＴＧＦ−β媒介性シグナリングにおいて協調するために、Ｓｍａｄと物理的に相互作用する転写因子Ｒｕｎｘ３と相乗作用を与え得る［（Ｗｏｏｌｆ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ（２００６）］。
【０１９３】
Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ分化を促進する一方で、ＴＧＦ−β依存性Ｔｈ−１７生成を阻害するＲＡの相互活性は、ＴＧＦ−βが、炎症性および抗炎症性免疫の両方を調節するための自己調整機構を提供し得る。この制御能力は、腸に対して特定の関連性を有し、そこでは、効率的な免疫防御が、粘膜関門の完全性の維持と同時に起こらなければならない。
【０１９４】
ビタミンＡ欠乏は、免疫機能障害および死亡率の増加を引き起こす［Ａ．  Ｓｏｍｍｅｒ，  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １６７，  １００３（１９９３）］。本研究は、ＲＡ媒介効果が、生体内で重要であり得るという証拠を提供してきた。副生理学的レベルのＲＡの免疫病理特徴が、抗炎症性Ｔｒｅｇを犠牲にして、炎症性ＴＨ−１７細胞を支持する不均衡なＴＧＦ−β機能に部分的に起因し得ることが考えられる。
【０１９５】
実施例１１
本実施例は、ＲＡＬＤＨアイソフォーム発現の研究を含む。
【０１９６】
図１０に示されるように、ソート全脾臓ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（１０Ａ）、またはＣＤ４、ＣＤ８、もしくは形質細胞様樹状細胞を発現する小集団において分類されたＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（１０Ｂ）による、ＲＡＬＤＨ酵素アイソフォーム１、２、および３（１０Ａ）、またはＲＡＬＤＨ２のみ（１０Ｂ）に対して、ｑＰＣＲによってｍＲＮＡの発現を測定した。分類後、培地のみ（なし）、異なるサイトカイン（ＴＧＦ−β、ｍｉｘ＝ＩＬ−１＋ＩＬ−６＋ＴＮＦ−α、Ｔｍｉｘ＝ＴＧＦ−β＋ｍｉｘ、ＴＲ＝ＴＧＦ−β＋ＲＡまたはレチノイン酸（ＲＡ））の存在下で１８時間インキュベートし、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを生成した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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