(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
開口部と、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部と、を備えた容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であり、前記液体試薬組成物は閉鎖した区画に配置され、前記液体試薬組成物のｐＨは６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置と、を含み、
前記試料採取部は、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっており、
前記試料採取装置は、前記液体試薬組成物と接触したとき、前記液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む、キット。
【請求項２】
開口部と、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部と、を備えた容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であり、前記液体試薬組成物は閉鎖した区画に配置され、前記液体試薬組成物のｐＨは６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置と、を含み、
前記試料採取部は、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっており、
前記試料採取装置は、前記液体試薬組成物と接触したとき、前記液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む、器具。
【請求項３】
前記液体試薬組成物はルシフェラーゼ酵素を更に含み、当該ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなる、請求項１に記載のキット。
【請求項４】
前記液体試薬組成物はルシフェラーゼ酵素を更に含み、当該ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなる、請求項２に記載の器具。
【請求項５】
所定量の液体試料を取得するために試料採取装置を用いるステップであって、
前記試料採取装置は、試料採取部を含み、
前記試料採取部は、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっており、
前記試料採取装置は、６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触したとき、前記液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含み、
前記液体試薬組成物は、ルシフェリンを含む、ステップと、
反応混合物を形成するために、容器中で前記所定量の試料及び前記ｐＨ調整試薬を液体試薬組成物と接触させるステップと、
前記反応混合物から放出された光を検出するためにルミノメーターを用いるステップであって、
前記容器は、前記ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部を含む、ステップと、を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年７月６日出願の米国特許仮出願第６１／６６８，５２０号の利益を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
試料採取プログラムは、食品飲料産業で、クリティカルな原料、中間材料、完成品、及び加工環境をモニターするために用いられる。定期的な試料採取及び検査により、品質保証担当者はごく初期の段階で、微生物等の望ましくない物質を検出し、設備及び／又は製品の続いて起こる汚染を防止するための処置をとることができる。不必要な物質を検出するために、様々な検査を実施することができる。そのような検査の例としては、残留化学物質検査（例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）生物発光検査、及びタンパク質比色検査）、培養方法、遺伝子検査（例えば、ＰＣＲ）、免疫診断検査、及び生物発光検査が挙げられる。
【０００３】
試料採取装置は、典型的に環境検査のための表面試料を採取するために使用される。市販の試料採取装置としては、スポンジ、スワブ等の吸収装置が挙げられる。更に、試料採取装置のいくつかは、所定量の液体試料を採取することができる。
【０００４】
ＡＴＰは、試料中の微生物の有無を検出するために、日常的に用いられる。ＡＴＰの分解から生成された化学エネルギーが光エネルギーに変換される。この反応で消費されたＡＴＰの分子それぞれが、光の光子を１つ生成する。この発光出力は、ルミノメーターで定量化することができる。試料中にＡＴＰが存在することは、微生物が存在する直接的な指標（即ち、ＡＴＰは微生物に由来する）である可能性がある、又はＡＴＰは、微生物が存在する間接的な指標（即ち、ＡＴＰは、植物質又は動物質に由来し、微生物の成長を助ける栄養素が試料中に存在する可能性があることを示す）である可能性がある。更に、試料中のＡＴＰの有無は、食品、飲料、他の産業の加工、ヘルスケア（例えば、内視鏡）、並びに、冷却水及び処理水等用における洗浄工程の有効性を評価するために、及び／又は殺生物剤による処理が、微生物のレベルを下げるのに有効であったかどうか判断するために、日常的に用いられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本開示は、概して、ルシフェラーゼ酵素を用いた試料中のＡＴＰの検出に関する。特に、本開示は、ｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む、多目的の試料採取装置に関する。ｐＨ調整試薬は、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と接触したとき、ｐＨ変化を引き起こす能力がある。このｐＨ変化は、実質的に定常状態の発光反応の達成を、低いｐＨにおける達成よりも短い期間で、促進させることができる。驚いたことに、試料採取装置を液体試料と接触させることができ、乾式被膜が液体試料中で可溶であっても、有効量のｐＨ調整試薬が、試料採取装置上に、及び／又は試料採取装置中に保持されて、有効量が、上述のｐＨ変化が達成される液体試薬組成物に移されることができる。更に、試料採取装置は所定量の液体試料を取得し、それによって、操作者が液体試料中のＡＴＰの量を検出し、必要に応じて、定量化することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、本開示はキットを提供する。キットは、開口部と、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部と、を備えた容器と、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と、試料採取部を有する試料採取装置と、を含むことができる。液体試薬組成物は、閉鎖した区画に配置されることができる。液体試薬組成物のｐＨは、約６．８以下である。試料採取装置の試料採取部は、実質的に繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっている。試料採取装置は、液体試薬組成物と接触したとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含むことができる。
【０００７】
別の態様では、本開示は器具を提供する。器具は、開口部と、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部と、を備えた容器と、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と、試料採取部を有する試料採取装置と、を含むことができる。液体試薬組成物は、閉鎖した区画に配置されることができる。液体試薬組成物のｐＨは、約６．８以下である。試料採取部は、実質的に繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっている。装置の試料採取部は、液体試薬組成物と接触したとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む。
【０００８】
上述のキット又は器具の任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、水溶性の試薬を含むことができる。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、試料採取部は、較正済みループを含むことができる。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、閉鎖した区画は、脆弱な壁を含むことができる。いくつかの実施形態では、脆弱な壁は、開口部とキュベット部との間で容器に配置されることができる。キット又は器具のいくつかの実施形態では、試料採取装置は、閉鎖した区画を含み、試料採取装置は、更に、流動性組成物を容器から選択的に解放する構造を含む。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、試料採取部は、発泡材料を含むことができる。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝液成分を含むことができる。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、１つ以上の窪みに被覆されることができる。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、被膜は、更に、有効量の細胞抽出剤を含むことができる。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなり得る。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、被膜は、任意に、有効量のリン酸緩衝液成分を含まない。キット又は器具の任意の上述の実施形態では、所定量は、約０．０１ｍＬ〜約０．２５ｍＬであり得る。
【０００９】
更に別の態様では、本開示は、方法を提供する。方法は、所定量の液体試料を取得するために試料採取装置を用いるステップと、反応混合物を形成するために、容器中で所定量の試料を液体試薬組成物と接触させるステップと、反応混合物から放出された光を検出するためにルミノメーターを用いるステップと、を含むことができる。試料採取装置は、試料採取部を含む。試料採取部は、１つ以上の窪みに所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっている。１つ以上の窪みは、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない。装置の試料採取部は、約６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触したとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含むことができる乾式被膜を含む。液体試薬組成物は、ルシフェリンを含む。容器は、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部を含む。
【００１０】
上述の方法の任意の実施形態では、方法は、更に、容器中で所定量の試料及び液体試薬組成物を撹拌するステップを含むことができる。方法の任意の上述の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、ルシフェラーゼ酵素を含むことができる。方法の任意の上述の実施形態では、ルシフェラーゼ酵素活性は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなり得る。方法の任意の上述の実施形態では、試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１０℃〜３５℃（両端の値を含む）の範囲内の温度で、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることを含むことができる。方法の任意の上述の実施形態では、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させた後、実質的に定常状態の量の光が、２０秒未満で組成物から放出される。
【００１１】
用語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で、特定の利益をもたらすことができる、本発明の実施形態を指す。しかしながら、同じ、又は他の状況下において他の実施形態が好ましい場合もある。更に、１つ以上の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用ではないことを意味するものではなく、本発明の範囲から他の実施形態を除外することを目的としたものではない。
【００１２】
用語「含む（comprise）」及びこの変形は、これらの用語が現れる明細書及び請求項を制限する意図を持たない。
【００１３】
本明細書で使用するとき、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」、及び「１つ以上の」は、互換可能に使用される。したがって、例えば、細胞抽出剤は、「１つ以上の」細胞抽出剤を意味すると解釈できる。
【００１４】
用語「及び／又は」は、列挙された要素の１つ又は全てを、若しくは列挙された要素の任意の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００１５】
また本明細書では、端点による数値範囲の記載は、その範囲に含まれるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む）。
【００１６】
上記の本発明の課題を解決するための手段は、本発明の開示されるそれぞれの実施形態又は本発明のすべての実施を説明することを目的としたものではない。以下の説明は、例示的な実施形態をより具体的に例示するものである。本出願の全体を通じて幾つかの箇所で、実施例のリストによって指針が与えられるが、これらの実施例は異なる組み合わせで使用することができる。いずれの場合も、記載される列挙は、あくまで代表的な群としてのみの役割を果たすものであって、排他的な列挙として解釈するべきではない。
【００１７】
これらの実施形態及び他の実施形態の更なる詳細を、添付の図面及び以下の説明文に記載する。他の特徴、目的、及び利点は、説明文及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本開示による試料採取装置の１つの実施形態の側面図である。
【図１ａ】図１の試料採取装置の試料採取部の詳細側面図である。
【図２】本開示による試料採取装置の別の実施形態の側面図である。
【図３】本開示による試料採取装置のもう１つの別の実施形態の側面図である。
【図４】本開示による器具の１つの実施形態の部分断面の分解立体図である。
【図５】図４の器具が組み立てられ、試料採取装置及び容器が互いに対して第１の操作位置にあるのを示す、部分断面の側面図である。
【図６】図４の器具が組み立てられ、試料採取装置及び容器が互いに対して第２の操作位置にあるのを示す、部分断面の側面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本開示の何らかの実施形態が詳細に説明される前に、本発明はその用途で、以下の説明に記載される又は以下の図面に示される構成の詳細及び構成要素の配置に限定されないことを理解すべきである。本発明には他の実施形態が可能であり、本発明は様々な方法で実施又は実行することが可能である。また、本明細書で使用する語法及び専門用語は、説明を目的としたものであり、限定ものとして見なされるべきでない点は理解されるべきである。「含む（including）」、「備える（comprising）」、又は「有する（having）」、及びこれらの変化形は、その後に列記される要素及びそれらの均等物、並びに更なる要素を包含することを意味する。別段の指定又は限定がない限り、用語「接続された」及び「結合された」並びにその変化形は、広義で使用され、直接的及び間接的な接続及び結合の両方を包含する。更に、「接続される」及び「結合される」は、物理的又は機械的な接続若しくは結合に限定されない。本開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態が利用されてもよく、構造的又は論理的な変更がなされてもよいことを理解すべきである。更に、「前方」、「後方」、「上」、「下」といった用語は、各要素の互いに対する関係を説明するためにのみ用いられるものであり、装置の特定の向きを説明すること、装置に必要とされる若しくは求められる向きを指示又は示唆すること、又は本明細書に記載される発明が、使用時にどのように使用、装着、表示、又は配置されるかを特定することを目的とするものでは決してない。
【００２０】
本開示は、一般に、試料中の有機残渣及び／又は細胞からＡＴＰを検出する器具及び方法に関する。本開示によれば、細胞からのＡＴＰは、ＡＴＰを放出させるために試料を細胞抽出剤と接触させ、ルシフェリンの存在下で放出されたＡＴＰがルシフェラーゼ酵素活性と反応し、その結果、測定可能な光が生成されることが関与する、酵素反応を用いて、放出されたＡＴＰを検出することによって検出される。
【００２１】
特に、本開示は、１）所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持することができる、２）液体試料を用いて、乾燥した再水和可能な有効量のｐＨ調整試薬を再水和することができる、並びに、３）ルシフェラーゼの触媒作用による発光反応を促進させるために、液体試料及び有効量のｐＨ調整試薬を容器に送達することができる、ようになっている試料採取装置を備えた器具及び／又はキットを提供する。有利には、本開示は、ルシフェリンを含む水溶液混合物を長時間貯蔵し、発光タイプのルシフェラーゼ酵素活性に必要なラグタイムを短縮するために混合物のｐＨを即座に調整して、ＡＴＰ及びルシフェリンの存在下で、特に、低温（例えば、２０℃未満の温度）で、安定した発光出力（例えば、最大発光出力）を得るために用いることができる、キット及び器具を提供する。
【００２２】
図１は、本開示による器具、キット及び／又は方法で用いることができる、試料採取装置の一実施形態を示す。試料採取装置１００は、操作部２０、及び試料採取部３０を含む。例示した実施形態では、試料採取部３０は、任意のステム１５によって、操作部２０に連結される。典型的には、試料採取装置１００は、対応する容器（図示せず）に受容される形状及び寸法をなす。操作部２０は、当該技術分野において周知の工程を用いて、様々な材料（例えば、木、金属、プラスチック、ガラス）から作られることができ、操作部２０は、試料採取装置１００が、使用中に、掴まれる及び／又は操作されることができる位置として機能する。必要に応じて、操作部は、試料採取装置１００を、手で掴む、又は機械的に把持するのを容易にするように、形作られた、及び／又は非平滑化されたハンドル２４を含む。必要に応じて、試料採取装置１００は、更に、突き刺し先端４０を含むことができる。
【００２３】
試料採取部３０は、試料源から液体試料を取得し（毛細血管圧によって）、保持することができる、少なくとも１つの窪みを画定する、任意の好適な構造を含んでもよい。一実施形態では、試料採取部３０は、一つの窪みを画定する。他の実施形態では、試料採取部３０は、流体連通していない複数の窪みを含む。試料採取部３０が、窪みを１つ含む、又は複数含むに関係なく、試料採取部３０は、所定の最大試料量を保持するように設計される。最大試料量は、例えば、試料を用いて行なわれる試験の所望の感度に基づいて、選択されてもよい。
【００２４】
図１は、複数の窪み３２を含む、試料採取部３０の一実施形態を示す。図１ａは、図１の試料採取部３０の詳細図を示す。例示した実施形態では、窪み３２は、試料採取装置１００を取り巻くぎざぎざからなる。１つ以上の窪み用に、様々な設計コンフィギュレーションを用いて所定量を達成することができることが、当業者には認知されよう。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ  ２００９／１３４５０９号は、所定量の液体試料を取得し、保持するのに適している窪みを含む、様々な試料獲得装置を開示している。
【００２５】
別の実施形態では、本開示の試料採取装置の試料採取部は、発泡材料で形成された複数の窪みを含んでもよい。環境表面から試料を取得するための発泡物品（例えば、スポンジ、ハンドルに装着されたスポンジ）は、当技術分野で周知である。図２は、発泡材料を含む試料採取部３０を含む試料採取装置１００’を示す。発泡材料は、液体試料を取得し、保持することができる個々の小室又は空所を含む。本開示の試料採取装置で使用される好適な発泡材料としては、例えば、ウレタン発泡材、ポリエチレン発泡材、及びポリスチレン発泡材が挙げられる。いくつかの実施形態では、発泡体は、ポリマーの表面をより親水性にするために、処理されてもよい（例えば、コロナ処理、又は電子ビーム処理）。発泡材料は、材料（例えば、接着剤、機械的ファスナー等）、及び当技術分野で周知である工程を用いて、ステム１５及び／又は操作部２０に連結されることができる。
【００２６】
図３は、本開示による試料採取装置１００”の別の他の実施形態を示す。この実施形態では、試料採取部３０は、試料液体の所定量を取得して、保持するように構成された較正済みループ３４を含む。較正済みループは当技術分野で周知であり、様々な形状をとってもよく、例えば、円形（図３に示されているように）、又は長円形が挙げられる。必要に応じて、本開示による任意の試料採取装置は、更に、本開示によるｐＨ調整試薬を含む被膜を配置することができる被膜領域を含んでもよい。被膜を塗布することができる被膜領域３６を含む、試料採取装置１００”の実施形態が図３に示される。被膜は、本開示による液体試薬組成物と接触した（例えば、混合された）とき、初期のｐＨが６．８以下である液体試薬組成物のｐＨを、調整後ｐＨ  ６．９以上に、好ましくは、調整後約７．２〜８．０のｐＨに、より好ましくは、調整後約７．２〜７．８のｐＨに調整する、有効量のｐＨ調整試薬を含むことができる。更に、図３に示されているのは、ハンドル２４を含む操作部２０、ステム１５、及び突き刺し先端４０である。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、水溶性の試薬であり得る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、試料採取部３０は、約４５ダイン／センチメートル（ダイン／ｃｍ）〜約７２ダイン／ｃｍなど、約２０ダイン／ｃｍ〜約８２ダイン／ｃｍの範囲で界面エネルギーを有する材料から作られる。いくつかの実施形態では、試料採取部３０の材料は、水の界面エネルギー、又は約７２ダイン／ｃｍに近い界面エネルギーを有するように選択される。試料は、いくつかの従来の医療用スワブの場合のように、吸収によってではなく、界面エネルギーによって、試料採取部３０内に保持されるので、試料は、繊維状の先端を含む従来の医療用スワブと比べて、試料採取部３０から取り出すのがより簡単である可能性がある。即ち、試料採取部３０から試料の液体、及び／又は液体に懸濁した粒子を取り除くのに必要なエネルギーがより少なくて済む可能性がある。場合によっては、大きな割合の試料粒子が、機械的ボルテクサーの助けなしで、試料採取部３０から取り除かれるが、試料採取部３０から試料を溶出させるのに機械的ボルテクサーが利用されてもよい。
【００２８】
一般に、試料採取部３０は、所望の試料獲得特性を達成する材料からなり、それは、採取した試料の種類に依存し得る（例えば、液体試料によっては、液体の表面張力に影響を及ぼす、溶解した、又は懸濁した固体を含む場合がある）。試料採取部３０が試料を獲得し保持する能力に影響を与え得る材料の性質としては、例えば、界面エネルギーが挙げられる。例えば、前述したように、試料を、毛管力によって、試料採取部３０によって画定された１つ以上の窪みに引き入れるために、特定の界面エネルギーを有する材料が選択されてもよい。試料採取部が作製される材料の他の特性としては、試料に対する実質的な不活性、又は、例えば、試料が試料採取部３０から放たれた際にルシフェラーゼ酵素活性に影響を与え得る化学物質又は他の汚染物質の比較的低い溶出速度が挙げられる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、試料採取部３０は、必ずしも所望の試料獲得特性を含んでいない母材、及び、親水性表面、疎水性表面、正電荷表面、又は負電荷表面に所望の試料獲得特性を達成させる材料を含む外層（例えば、被膜）を含んでもよい。例えば、無機被膜（例えば、シリカ被膜）、又は有機被膜（例えば、ポリアクリレート等のポリマー被膜）は、試料採取部３０に親水性の特性を与えることができる。試料採取部３０を形成する材料の界面エネルギー（又は、表面張力）特性は、更に、非限定的な例として、処理される材料が放電、又はコロナ、電子ビーム処理に曝されるコロナ処理のような物理的処理の助けを用いて達成されてもよい。
【００３０】
いくつかの実施形態では、試料採取部３０は、少なくとも部分的に比較的剛性のポリマー（例えば、ナイロン、ポリスルフホン、ポリカーボネート、又はこれらの組み合わせ）で形成されてもよく、又はシリコーンなどのより順応性のポリマーを用いて形成されてもよい。試料採取部３０用の材料の例としては、キャスティング、輪郭押出成形、成形（例えば、射出成形）又はエンボス加工に好適な任意の熱可塑性材料、例えば、ポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ビニル、ポリメタクリル酸メチル、ポリカーボネート、ナイロン等が挙げられるが、これらに制限されない。他の実施形態では、試料採取部３０は、好適な材料のシートを所望の窪み構造に成形する、又はエンボス加工することによって、形成されてもよい。
【００３１】
本開示の試料採取装置は、乾式被膜を含む。任意の実施形態では、乾式被膜は、装置の試料採取部上に及び／又は試料採取部中（例えば、窪みの中）に配置されることができ、その結果、装置が液体試料に浸漬されるとき、被膜が液体試料と接触する。任意の実施形態では、乾式被膜の少なくとも一部分は、試料採取装置の別の部分（例えば、ステム、突き刺し先端）に配置されることができる。乾式被膜は、本開示による液体試薬組成物と接触した（例えば、混合された）とき、液体試薬組成物のｐＨを変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、水溶性の試薬を含む。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、７．０以上のｐＫａ、好ましくは７．２以上のｐＫａを有する緩衝液（例えば、ｐＨ調整試薬は、塩基又は共役酸を含む）の成分を含む。ｐＨ調整試薬は、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに制限されない、好適な緩衝液成分をそれぞれ含む。いくつかの実施形態では、被膜は、リン酸エステルを含む有効量のｐＨ調整試薬を含まない。液体試薬組成物のｐＨを初期のｐＨ  ６．８以下から調整後ｐＨ  ６．９以上に変えるのに有効なリン酸エステルの量を含むｐＨ調整試薬は、更に、ルシフェラーゼ酵素活性を少なくとも部分的に阻害するのに十分であり得る。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、金属塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）を含む。
【００３２】
任意の実施形態では、被膜は、更に、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に阻害しない細胞溶解試薬を含むことができる。好適な細胞溶解試薬の例としては、クロルヘキシジンジグルコン酸、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、リゾチーム、リソフスタフィン、バクテリオファージ溶解素、第四アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム）、セチルトリメチルアンモニウムクロリド（ＣＴＡＢ）、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＤＴＡＢ）、ＴＷＥＥＮ  ２０、ＴＷＥＥＮ  ８０、及びこれらの任意の２つ以上の組み合わせが挙げられるが、これらに制限されない。
【００３３】
試料採取装置に被覆されるｐＨ調整試薬の量は、６．８以下の初期（即ち、ｐＨ調整試薬と接触する前の）ｐＨから、約６．９以上の調整後ｐＨ（ｐＨ調整試薬と接触した後）に液体試薬組成物のｐＨを変えるのに十分であるべきである。好ましくは、試料採取装置に被覆されるｐＨ調整試薬の量は、初期のｐＨ  ６．８以下から、約７．２以上のｐＨに液体試薬組成物のｐＨを変えるのに十分であるべきである。
【００３４】
被膜は、任意の好適な被膜方法を用いて、試料採取装置に塗布されることができる。任意の実施形態では、被膜は、最初に、液体被膜として（即ち、ｐＨ調整試薬が、例えば、水等の溶媒に溶解されている、又は懸濁されている）試料採取装置に塗布されることができる。溶媒は、その後乾燥させられ、実質的に乾燥したｐＨ調整試薬を試料採取装置に残す。任意の実施形態では、液体被膜は、試料採取装置（例えば、試料採取装置の試料採取部）をｐＨ調整試薬を含む液体に浸漬することにより塗布される。被膜液に浸漬されている間、試料採取装置を撹拌させて、試料採取部の１つ以上の窪みの中に被膜液が移動するのを促進させることができる。装置が被覆された後、被覆された部分は、ｐＨ調整試薬及び／又は細胞溶解試薬を実質的に分解させることなく溶媒を蒸発させるのに十分な条件下（例えば、周囲温度、又は周囲以上の（暖かい）温度）で乾燥させる（例えば、空気流、熱対流炉などで）ことができる。
【００３５】
本開示のキット及び器具は、更に、容器を含む。容器は、試料を本明細書に記述される液体試薬組成物と接触させる器として機能する。容器は、開口部を含み、試料採取装置の少なくとも一部分（例えば、試料採取部）を受容するように構成される（例えば、形状及び寸法をなす）。図４は、本開示による容器を備える器具の一実施形態の部分断面の分解組立図を示す。器具１０００は、本明細書に記載される任意の実施形態による、ハンドル２４及び試料採取部３０を備えた操作部２０を含む試料採取装置１００を含む。器具１０００は、更に、図４に断面図で示された容器２００を含む。
【００３６】
容器は、少なくとも１つの壁５０及び開口部５２を含み、開口部は、試料採取装置１００を受容するように構成される。以下で論じられるように、図４に例示する実施形態で示された開口部５２を備えた器具１０００は、試料採取装置１００全体を受容する形状及び寸法をなす。容器は、更に、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部５４を含む。典型的には、容器２００のキュベット部５４又は容器２００全体を、ルミノメーターの相補形状の受容区画内に置くことによって、キュベット部５４はルミノメーターに操作上連結される。キュベット部５４は、ルシフェラーゼ酵素によって触媒された反応の生成物として放出される光がキュベット部５４を通って伝播するのを可能にする、光伝播可能な材料（例えば、ガラス、又は高分子材料、例えば、ポリエチレン（poyethylene）、ポリプロピレン、ポリカーボネート、又はポリスチレン等）から作られる。
【００３７】
容器２００は、例えば、当該技術分野において周知の押出成形工程及び／又は成形工程を用いて、単一物品（図示せず）として作られてもよい。あるいは、図４に例示する実施形態の円筒形状のスリーブ５６及びキュベット５５などの容器２００の部分は、別々に作られて、好適な手段（例えば、接着剤、ヒートシール工程、音波溶接、及び／又はスリーブ５６とキュベット５５を一緒に圧入する）を用いて一緒に連結されてもよい。スリーブ５６は、例えば、ポリプロピレン、又はポリエチレンなどのプラスチックポリマーを用いて、成形又は押出成形工程によって作られてもよい。キュベット５５は、立方体、立方形、円筒状、円錐形、円錐台形、他の好適な幾何学的形状、及びこれらの組み合わせなど、様々な幾何学的形状に形成されることができる。好ましくは、キュベット５５の壁は、キュベット５５に入る及び／又はキュベット５５から出る光（例えば、可視光）が通過できるように構成される。任意に、容器は、更に薄板６０を含んでもよい。薄板６０は、キュベット５５をスリーブ５６と一緒にしっかりと保持することができる。薄板６０は、例えば、紙又はプラスチックフィルムから作ることができ、ラベルとして用いられてもよい。
【００３８】
本開示のキット及び器具は、更に、液体試薬組成物（図４〜６に示される液体試薬組成物７０）を含む。液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ；好ましくは、発光タイプのルシフェラーゼ；及びＡＴＰ源の存在下で、発光反応を促進させるのに十分な濃度（例えば、０．３〜０．４ｍｇ／Ｌのルシフェリン）でルシフェリンを含む。本開示の方法では、ＡＴＰ源は、本明細書に開示される試料、又は事前定義された量又は濃度のＡＴＰを含有する溶液（即ち、陽性対照、又はＡＴＰ基準）であり得る。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、水溶液を含むことができる。本開示の器具又はキットで用いられる液体試薬組成物は、６．８以下の初期（即ち、ｐＨ調整試薬と接触する前の）ｐＨを有する。好ましくは、液体試薬組成物は、６．４以下の初期（即ち、ｐＨ調整試薬と接触する前の）ｐＨを有する。
【００３９】
任意の実施形態では、液体試薬組成物は、任意に、緩衝剤を含んでもよい。好適な緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨをｐＨ  ６．８以下に、好ましくはｐＨ  ６．４以下に、保つのに有効であるｐＫａを有する。Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）は、好適な緩衝剤の非限定的な例である。緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨを有効に保つだけ十分に高く、なおかつ、試料採取装置の試料採取部に被覆されたｐＨ調整試薬によって媒介された液体試薬組成物のｐＨが変わるのを実質的に阻止しないだけ十分に低い量（例えば、ｐＨ  ６．４〜６．８の液体試薬組成物４２５マイクロリットル中に約１６ｍＭのＡＤＡ）で、液体試薬組成物中に存在すべきである。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、ルシフェラーゼ酵素を含んでもよい。任意の実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなり得る。ルシフェラーゼ酵素は、例えば、約９ｍｇ／Ｌの濃度で、液体試薬組成物中に存在することができる。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、マグネシウムイオン源（例えば、二酢酸マグネシウム四水和物）を含むことができる。マグネシウムイオン源は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるときにルシフェラーゼ酵素活性と実質的に干渉しない濃度（例えば、約３ｍＭ）で存在することができる。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）を含むことができる。理論に束縛されるものではないが、タンパク質は、長期貯蔵中にルシフェラーゼ酵素を安定させる、及び／又はルシフェラーゼ酵素がプロテアーゼ酵素活性の影響を受けにくくする可能性がある。タンパク質は、作用濃度において、液体試薬組成物が液体試料と混合されるときにルシフェラーゼ酵素活性と実質的に干渉してはならない。タンパク質は、例えば、約０．０４６重量パーセントの濃度で、液体試薬組成物中に存在し得る。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、防腐剤（例えば、０．０４６重量パーセントのアジ化ナトリウム）を、液体試薬組成物が液体試料と混合されるときにルシフェラーゼ酵素活性と実質的に干渉しない濃度で、更に含むことができる。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含んでもよい。理論に束縛されるものではないが、ＥＤＴＡは、液体試薬組成物中の防腐剤として作用することができ、更に、液体試薬組成物及び／又液体試料中に存在するイオンをキレート化するように作用する場合がある。
【００４０】
任意の実施形態では、液体試薬組成物は、閉鎖した区画に配置されることができる。いくつかの実施形態では、閉鎖した区画は、脆弱な壁を含む。図４に例示する実施形態では、容器は、更に、区画６７を形成するキュベット５５の近位に配置された耐液体性の脆弱な壁６５を含む。脆弱な壁６５は、例えば、プラスチックフィルム、金属箔、又は金属被覆プラスチックフィルムなど、耐水性材料から作ることができる。接着剤、ヒートシール、音波溶接、又は当該技術分野において周知の他の手段によって脆弱な壁６５をキュベット５５及び／又はスリーブ５６に連結させて耐液体性の密封を形成し、液体試薬組成物７０を区画６７内に保持することができる。
【００４１】
別の実施形態（図示せず）では、液体試薬組成物は、容器内に配置された脆弱なアンプル（例えば、ガラス又は重合体のアンプル）内に配置されてもよい。アンプルを砕くのに十分な力で容器を圧搾することによって、又は試料採取装置（例えば、試料採取装置の突き刺し先端）をアンプルを砕くのに十分な力でアンプルに押し付けることによって、液体試薬組成物を脆弱なアンプルから放つことができる。
【００４２】
更なる実施形態（図示せず）では、液体試薬組成物は、試料採取装置に配置された区画に配置されてもよい。Ｎａｓｏｎ（米国特許第５，２６６，２６６号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、中空のステムと、作動可能弁を備えた液体収容閉鎖区画と、を含むスワブ装置を開示しており、この作動可能弁は、スワブの少なくとも一部分がその中に配置された管の中に液体を送達するように、液体を中空のステムに放つ。本開示の任意の試料採取装置は、Ｎａｓｏｎの中空のステム及び試薬室を含むように変更されてもよい。試薬室は、本開示の液体試薬組成物を含むことができ、液体試薬組成物は、Ｎａｓｏｎによって説明された技法を用いて本開示の容器に移送することができる。液体試薬組成物は、本開示による試料採取装置を用いて液体試料が獲得される前又は後に、容器に移すことができる。反応（例えば、化学反応及び／又は酵素反応）で用いられる液体試薬組成物を一時的に貯蔵する他の区画は、当技術分野で周知であり、そのような区画は、本開示の液体試薬組成物を一時的に収容するために用いることができることを当業者は理解するであろう。そのような区画の非限定的な例は、米国特許第７，３９９，９８４号、米国特許第６，５４８，０１８号、米国特許第５，９６５，４５３号、及び米国特許第６，５２４，５３０号に見ることができ、当該特許は全て参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００４３】
本開示はキットを提供する。キットは、本明細書に記述される方法に従って、例えば、液体試料中のＡＴＰの有無を検出するために用いられてもよい。任意の実施形態では、キットは、本明細書に開示される方法の実施形態を開示する指示を含んでもよい。
【００４４】
本開示のキットは、本明細書に開示される任意の実施形態による容器を含む。容器は、開口部、及びルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部を含む。本開示のキットは、更に、本明細書に開示される任意の実施形態によるルシフェリンを含む液体試薬組成物を含む。液体試薬組成物の初期ｐＨ（即ち、本開示のｐＨ調整試薬と接触する前）は、約６．８以下のｐＨ、好ましくは、約６．４以下のｐＨである。本開示のキットは、更に、本明細書に開示される任意の実施形態による試料採取部及び操作部を有する試料採取装置を含む。液体試薬組成物は、本明細書に開示されるように、容器又は試料採取装置に配置された、閉鎖した区画に配置される。試料採取装置の試料採取部は、本明細書に説明されるように、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっている。試料採取装置の試料採取部は、液体試薬組成物と接触した（例えば、混合された）とき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、好ましくは約７．２〜８．０のｐＨに、より好ましくは約７．２〜７．８のｐＨに変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、水溶性の試薬を含む。
【００４５】
本開示のキット及び器具は、液体試料中のＡＴＰの有無を検出する方法で用いることができる。試料中にＡＴＰが存在することは、試料中に、有機残渣及び／又は微生物（例えば、病原微生物）が存在する可能性を示し得る。更に、試料中のＡＴＰの量は、試料中の微生物の相対数の指標になり得る。したがって、試料の単位量当たりのＡＴＰ量を割り出すことができるように、所定量の試料を試験することは望ましい。試料の単位量当たりのＡＴＰ量は、試料が、特定用途（例えば、食品又は飲料生産）で使用するのに許容可能であるかどうか、洗浄工程が、有機残渣を除去するのに有効であったかどうか、及び／又は殺生物剤処理が、微生物の数を低減するのに有効であったかどうかを判断するために、所定値と比較され得る。
【００４６】
一実施形態では、方法は、所定量の液体試料を得るために試料採取装置を用いること、反応混合物を形成するために、容器中で所定量の試料を液体試薬組成物と接触させること、及び反応混合物から放出された光を検出するためにルミノメーターを用いることを含む。所定量の液体試料は、約１０マイクロリットル〜約２５０マイクロリットルであり得る。いくつかの実施形態では、所定量の液体試料は、約１００マイクロリットル〜約２００マイクロリットルであり得る。いくつかの実施形態では、所定量の液体試料は、約１２５マイクロリットル〜約１７５マイクロリットルであり得る。
【００４７】
試料は液体を含む。液体は水を含んでもよい。試料は、更に、液体中に溶解された、分散された、及び／又は懸濁された固体を含んでもよい。好適な試料の非限定的な例としては、定置洗浄（ＣＩＰ）洗浄水試料、工程及び冷却水試料、及び内視鏡洗浄水試料が挙げられる。
【００４８】
本開示の方法で用いられる試料採取装置は、本明細書に開示された任意の試料採取装置であり得る。試料採取装置は、試料採取部、及び操作部を含む。試料採取部は、１つ以上の窪みに所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっている。１つ以上の窪みは、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない。装置の試料採取部は、初期のｐＨ  ６．８以下を有する液体試薬組成物と接触した（例えば、混合された）とき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に調整する、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む。
【００４９】
本開示の方法で用いられる液体試薬組成物は、ルシフェリン（例えば、ホタルルシフェリン）を含む。ルシフェリンは、ルシフェラーゼ酵素活性による酸化を経て、オキシルシフェリン及び光を生成する化合物である。ルシフェリン化合物は、ｐＨ  ６．８を超える液体溶液中に長時間に貯蔵されたとき、不安定になり得る。したがって、本開示の方法で用いられる液体試薬組成物は、６．８以下の初期ｐＨを有する。好ましくは、液体試薬組成物は、６．４以下の初期ｐＨを有する。
【００５０】
任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、ルシフェラーゼ酵素を含んでもよい。好ましい実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する、組み換えルシフェラーゼ酵素を含む。いくつかの実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する、組み換えルシフェラーゼ酵素からなる。
【００５１】
任意の実施形態では、液体試薬組成物は、任意に、緩衝剤を含んでもよい。緩衝剤は、ルシフェリンを含有する液体溶液を貯蔵するのに好適であるｐＨ（例えば≦６．８）に液体試薬組成物を維持するために用いることができる。Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）は、好適な緩衝剤の非限定的な例である。緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨを有効に保つだけ十分に高く、なおかつ、試料採取装置の試料採取部に被覆されたｐＨ調整試薬によって媒介された液体試薬組成物のｐＨの変化を実質的に阻止しないだけ十分に低い量（例えば、ｐＨ  ６．４〜６．８の液体試薬組成物４２５マイクロリットル中に約１６ｍＭのＡＤＡ）で、液体試薬組成物中に存在すべきである。
【００５２】
本開示の方法で用いられる容器は、キュベット部を含む。キュベット部は、ルシフェラーゼ酵素によって触媒された反応の生成物として放出される光がキュベット部を通って伝播するのを可能にする。キュベット部は、ルミノメーターに操作上連結されるようになっている（例えば、形状及び寸法をなす）。いくつかの実施形態では、反応混合物から放出された光を検出するためにルミノメーターを用いることは、液体試料中のＡＴＰの有無を検出することを含む。いくつかの実施形態では、反応混合物から放出された光を検出するためにルミノメーターを用いることは、液体試料中に存在するＡＴＰの量（例えば、相対量、又は絶対量）を測定することを含む。
【００５３】
反応混合物を形成するために、容器中で所定量の試料を液体試薬組成物と接触させることは、容器中で試料採取装置の試料採取部を液体試薬組成物と接触させることを含む。接触は、例えば、試料採取装置の少なくとも一部分を、好ましくは、試料採取部全体を液体試薬組成物に浸漬することによって達成されてもよい。接触は、反応混合物を形成する（例えば、液体試料の少なくとも一部分が液体試薬組成物中に拡散することによって）。液体試薬組成物に既に存在しない場合、ルシフェラーゼを反応混合物に加えることができる。このようにして、ＡＴＰが液体試料に存在する場合、ＡＴＰは、ルシフェラーゼ酵素によって触媒された発光反応を促進させることができる。発光反応は、上述のルミノメーターで検出することができる。
【００５４】
図５及び６は、反応混合物を形成するために、容器中で所定量の試料を液体試薬組成物と接触させる過程の１つの実施形態を例示する。試料採取装置１００を用いて所定量の液体試料を得た後、試料採取装置を容器２００に挿入する。図５は、容器中のステム１５及び試料採取部３０を備えた試料採取装置１００を示す。この配置では、試料採取装置１００及び容器２００は、互いに対して第１の操作位置に置かれており、器具１０００は、液体試料を区画６７にある液体試薬組成物７０と接触させる準備が整っている。試料採取装置１００のハンドル２４に対して手で又は機械的に圧力を加えることで、突き刺し先端４０は、脆弱な壁６５を貫通するまで区画６７の方へ付勢され、図６に示されているように、試料採取部３０に付随する液体試料（図示せず）を液体試薬組成物７０と接触させる。図６に例示する実施形態では、試料採取装置１００及び容器２００は、互いに対して第２の操作位置に置かれる。この実施形態では、試料採取装置１００は、容器２００に完全に挿入されており、料採取装置の試料採取部３０は、液体試薬組成物７０と接触している。
【００５５】
任意の実施形態では、反応混合物を形成するために、容器中で所定量の試料を液体試薬組成物と接触させることは、更に、容器中で試料及び液体試薬組成物を撹拌するステップを含むことができる。撹拌は、例えば、旋回動作、振り子状動作で容器を急速に振ることによって、又は容器を振動させる機械と容器を接触させることによって、手作業で、又は機械的に行われてもよい。
【００５６】
容器のキュベット部は、ルシフェラーゼ酵素活性から生じる発光を検出するために、ルミノメーターに操作上連結される。市販のルミノメーターは、本開示の方法の任意の実施形態で用いるのに適している。好適なルミノメーターの非限定的な例は、３Ｍ（商標）Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）ＮＧ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から市販）である。典型的には、キュベットは、容器の一部（例えば、キュベット部）又は容器全体をルミノメーターの対応する受容区画内に置くことにより、操作上連結される。キュベット部は、反応混合物が形成される前又は後に、ルミノメーターに操作上連結されてもよい。典型的には、反応混合物が形成された後、キュベット部はルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後５秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後１０秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後１５秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後２０秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後３０秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後４５秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後６０秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後９０秒までに、ルミノメーターに操作上連結される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物の形成後２分までに、ルミノメーターに操作上連結される。好ましくは、キュベットは、反応混合物の形成後、約５〜１０秒以内に、ルミノメーターに操作上連結される。
【００５７】
キュベット部がルミノメーターに操作上連結された後、発光がルミノメーターによってモニターされる。反応混合物が形成された後、反応が比較的安定した発光量に達するのに時間がかかる場合がある。この現象は、表４〜９のデータによって示される。発光が比較的安定したプラトーに達する期間は、表１１に要約されるように、反応の温度に反比例する。
【００５８】
方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ及びＡＴＰ源の存在下で、発光反応を促進するのに十分な濃度のルシフェリン（例えば、約０．３〜０．４ｍｇ／Ｌのルシフェリン）を含む。本開示の方法では、ＡＴＰ源は、本明細書に開示される液体試料、又は事前定義された量又は濃度のＡＴＰを含有する溶液（即ち、陽性対照、又はＡＴＰ基準）であり得る。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、水溶液を含むことができる。本開示の器具又はキットで用いられる液体試薬組成物は、６．８以下の初期（即ち、本開示のｐＨ調整試薬と接触する前の）ｐＨを有する。好ましくは、液体試薬組成物は、６．４以下の初期ｐＨを有する。
【００５９】
方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、任意に、緩衝剤を含んでもよい。好適な緩衝剤は、液体試薬組成物の初期ｐＨをｐＨ  ６．８以下に、好ましくはｐＨ  ６．４以下に保つのに有効であるｐＫａを有する。Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）は、好適な緩衝剤の非限定的な例である。緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨを有効に保つだけ十分に高く、なおかつ、試料採取装置の試料採取部に被覆されたｐＨ調整試薬によって媒介された液体試薬組成物のｐＨの変化を実質的に阻止しないだけ十分に低い量（例えば、ｐＨ  ６．４〜６．８の液体試薬組成物４２５マイクロリットル中に約１６ｍＭのＡＤＡ）で、液体試薬組成物中に存在すべきである。方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、ルシフェラーゼ酵素を含んでもよい。方法の任意の実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなり得る。ルシフェラーゼ酵素は、例えば、約９ｍｇ／Ｌの濃度で、液体試薬組成物中に存在することができる。方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、マグネシウムイオン源（例えば、二酢酸マグネシウム四水和物）を含むことができる。マグネシウムイオン源は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるときにルシフェラーゼ酵素活性と実質的に干渉しない濃度（例えば、約３ｍＭ）で存在することができる。方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、更に、タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）を含むことができる。タンパク質は、例えば、約０．０４６重量パーセントの濃度で、液体試薬組成物中に存在し得る。方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、液体試料と混合されるときにルシフェラーゼ酵素活性と実質的に干渉しない濃度で、防腐剤（例えば、０．０４６重量パーセントのアジ化ナトリウム）を更に含むことができる。
【００６０】
本開示の方法の任意の実施形態では、液体試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、特定の温度（例えば、周囲温度）で、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることを含む。一般に、接触が低温で起こるとき、発光反応が比較的安定した発光量に達するためには、より長い期間が必要である。逆に、接触が高温で起こるとき、発光反応が比較的安定した発光量に達するためには、より短い期間が必要である。本開示の方法の任意の実施形態では、液体試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１０℃〜３５℃（両端の値を含む）の範囲内の温度で、液体試料を液体試薬組成物と接触させることを含む。好ましくは、液体試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１５℃〜３０℃（両端の値を含む）の範囲内の温度で、液体試料を液体試薬組成物と接触させることを含む。
【００６１】
方法の任意の実施形態では、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させた後、実質的に定常状態の量の光が、一定期間後に組成物から放出される。上述のように期間は、接触が起こる温度の影響を受け得る。本開示の任意の実施形態では、実質的に定常状態の量の光が、２５秒未満で組成物から放出される（例えば、接触が約１０℃〜約２０℃の温度で起こるとき）。本開示の任意の実施形態では、実質的に定常状態の量の光が、約２２秒以下で組成物から放出される（例えば、接触が約１０℃〜約２０℃の温度で起こるとき）。いくつかの実施形態では、実質的に定常状態の量の光が、２０秒未満で組成物から放出される（例えば、接触が約１４℃〜約２０℃の温度で起こるとき）。いくつかの実施形態では、実質的に定常状態の量の光が、約１０秒以下で組成物から放出される（例えば、接触が約２０℃の温度で起こるとき）。
【００６２】
本発明の方法は、ＡＴＰ及び本開示による液体試薬組成物を含む試料と接触しているルシフェラーゼ酵素が、実質的に定常状態である発光反応を触媒するために必要な時間を、実質的に減少させる。表１１（下記）は、反応が実質的に定常状態の発光に達するための平均所要時間が、１０℃〜２０℃（両端の値を含む）の範囲の温度で、本開示の方法によって約３倍減少することを示す。
【００６３】
実施形態
実施形態Ａは、
開口部と、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部と、を備えた容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であり、液体試薬組成物は閉鎖した区画に配置され、液体試薬組成物のｐＨは約６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部及び操作部を有する試料採取装置と、を含み、
試料採取部は、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっており、
試料採取装置の試料採取部は、液体試薬組成物と接触したとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む、キットである。
【００６４】
実施形態Ｂは、
開口部と、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部と、を備えた容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であり、液体試薬組成物は閉鎖した区画に配置され、液体試薬組成物のｐＨは約６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部及び操作部を有する試料採取装置と、を含み、
試料採取部は、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっており、
試料採取装置は、液体試薬組成物と接触したとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に調整する、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含む、器具である。
【００６５】
実施形態Ｃは、実施形態Ａのキット又は実施形態Ｂの器具であって、乾式被膜は、試料採取装置の試料採取部に配置される。
【００６６】
実施形態Ｄは、実施形態Ａ〜Ｃの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、ｐＨ調整試薬は、水溶性の試薬を含む。
【００６７】
実施形態Ｅは、実施形態Ａ〜Ｄの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、試料採取部は、較正済みループを含む。
【００６８】
実施形態Ｆは、実施形態Ａ〜Ｅの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、閉鎖した区画は、脆弱な壁を含む。
【００６９】
実施形態Ｇは、実施形態Ｆのキット又は器具であって、脆弱な壁は、開口部とキュベット部との間で容器に配置される。
【００７０】
実施形態Ｈは、実施形態Ａのキット又は実施形態Ｂの器具であって、試料採取装置は、閉鎖した区画を含み、試料採取装置は、更に、流動性組成物を容器から選択的に解放する構造を含む。
【００７１】
実施形態Ｉは、実施形態Ａ〜Ｈの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、試料採取部は、発泡材料を含む。
【００７２】
実施形態Ｊは、実施形態Ａ〜Ｉの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、ｐＨ調整試薬は、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝液成分を含む。
【００７３】
実施形態Ｋは、実施形態Ａ〜Ｊの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、ｐＨ調整試薬は、１つ以上の窪みに被覆される。
【００７４】
実施形態Ｌは、実施形態Ａ〜Ｋの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、被膜は、更に、有効量の細胞抽出剤を含む。
【００７５】
実施形態Ｍは、実施形態Ａ〜Ｌの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、ルシフェラーゼ酵素は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなる。
【００７６】
実施形態Ｎは、実施形態Ａ〜Ｍの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、被膜は、有効量のリン酸緩衝液成分を含まない。
【００７７】
実施形態Ｏは、実施形態Ａ〜Ｎの実施形態のうちの任意の１つのキット又は器具であって、所定量は、約０．０１ｍＬ〜約０．２５ｍＬである。
【００７８】
実施形態Ｐは、
所定量の液体試料を取得するために試料採取装置を用いるステップであって、
試料採取装置は、試料採取部、及び操作部を含み、
試料採取部は、実質的に複数の繊維間の空間によって形成されない１つ以上の窪みに、所定量の液体試料を獲得し解放可能に保持するようになっており、
試料採取装置は、約６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触したとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える、有効量のｐＨ調整試薬を含む乾式被膜を含み、
液体試薬組成物は、ルシフェリンを含む、ステップと、
反応混合物を形成するために、容器中で所定量の試料及びｐＨ調整試を液体試薬組成物と接触させるステップと、
反応混合物から放出された光を検出するためにルミノメーターを用いるステップであって、
容器は、ルミノメーターに操作上連結されるようになっているキュベット部を含む、ステップと、を含む方法である。
【００７９】
実施形態Ｑは、実施形態Ｐの方法であって、容器中で所定量の試料と液体試薬組成物とを撹拌するステップを更に含む。
【００８０】
実施形態Ｒは、実施形態Ｐ又は実施形態Ｑの方法であって、液体試薬組成物は、更に、ルシフェラーゼ酵素を含む。
【００８１】
実施形態Ｓは、実施形態Ｒの方法であって、ルシフェラーゼ酵素活性は、本質的に、温度、イオン性洗剤、及び還元剤のばらつきに対して、対応する非組み換えルシフェラーゼ酵素より感度が低いルシフェラーゼ活性を有する組み換えルシフェラーゼ酵素からなる。
【００８２】
実施形態Ｔは、実施形態Ｐ〜Ｓのうちの任意の１つの方法であって、試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１０℃〜３５℃（両端の値を含む）の範囲内の温度で、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることを含む。
【００８３】
実施形態Ｕは、実施形態Ｐ〜Ｔのうちの任意の１つの方法であって、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させた後、実質的に定常状態の量の光が、２０秒未満で組成物から放出される。
【００８４】
本発明の目的及び利点は、以下の実施例によって更に例示されるが、これらの実施例において列挙された特定の材料及びその量は、他の諸条件及び詳細と同様に本発明を過度に制限するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８５】
被配合物：
被膜配合物１及び２は、表１及び２に列挙された成分から溶液として調製された。被膜配合物１のｐＨは約８．５、被膜配合物２のｐＨは約７．２であった。
【００８６】
【表１】
0006257614.tif 000002
【００８７】
【表２】
0006257614.tif 000003
【００８８】
液体試薬組成物：
次の実施例で用いられた液体試薬組成物は、ルシフェリン及びルシフェラーゼ酵素を含む。実施例１〜３で用いられた液体試薬組成物は、表３に列挙された成分からの溶液として調製された。配合物のｐＨは、約６．４であった。各容器の密封されたキュベット部に含まれた液体試薬組成物の総量は、約４２５マイクロリットルであった。
【００８９】
【表３】
0006257614.tif 000004
【００９０】
比較例１〜３で用いられた液体試薬組成物は、液体試薬組成物のｐＨを６．４から６．８に調整するためのｐＨ調整試薬として、水酸化ナトリウム（４Ｎ）が加えられたことを除けば、表２に列挙されたものと同じであった。
【００９１】
ＡＴＰ試験器具の調製：
図１Ａに記載した設計に類似した器具を用いた。試料採取装置の操作部を、ポリプロピレン／ＴＰＥ配合物から作製した。試料採取装置のステム及び試料採取部を、アセタール樹脂を用いて作製した（即ち、単一部分として成形した）。試料採取装置は約１６７ｍｍの全長を有し、操作部の長さは約５０．５ｍｍに及び、ステムの長さは約８９．５ｍｍに及び、試料採取リング要素の長さは約２７ｍｍに及んだ。試料採取部の窪みを、ステムから少なくとも約１０ｍｍ離して位置決めした。窪みは、試料採取部を囲んで離間して配置した１１つのぎざぎざ（深さおよそ０．３〜０．４ｍｍ）からなった。窪みは、各窪み間を約０．８５ｍｍ離間させて、試料採取装置の試料採取部に約１４．６ｍｍの距離にわたって離間して配置した。鋭い円錐形に形作られた先端（長さ約２．４ｍｍ）を、図１Ａに示すように、試料採取部の端部のステムとは反対側に配置した。
【００９２】
３Ｍ  Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）Ｗａｔｅｒ  ＡＴＰ試験装置を、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から入手した。各試験装置のホイル密封された区画に位置する冷凍乾燥された酵素のペレットを、容器から取り出し、容器のキュベット部の液体を、表３に記載する液体試薬組成物４２５マイクロリットルと取り替えた。更に、試料採取装置の試料採取部を、表１及び２に記載する被膜配合物のうちの１つで被覆した。試料採取装置は、試料採取装置の操作部を持ち、窪みのすべてが被膜溶液に浸漬される地点まで装置の反対端を被膜溶液に浸漬することによって被覆した。装置を被膜溶液から引き上げた後、およそ１４５マイクロリットルの被膜溶液が試料採取装置上に留まった。温風を用いて、試料採取装置上の被膜を乾燥させた。
【００９３】
（実施例１）
上述のＡＴＰ試験器具を用いた。試料採取装置の試料採取部は、被膜配合物１で被覆され、上述のように乾燥させた。試料採取装置をＡＴＰ試験器具から取り出し、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販される５×１０−９Ｍのアデノシン三リン酸（triphophate）（ＡＴＰ）１０ｍＬを含むバイアルに浸漬した。試料採取部がＡＴＰ溶液に浸されている間、試料採取装置をバイアルの側面で軽く叩くことで、窪みから気泡を追い出し、試料液体の事前定義された量が獲得し易いようにした。約１〜３秒の浸漬後、試料採取装置をバイアルから素早く取り出し、容器に再挿入した。試料採取装置は、約１４５マイクロリットルのＡＴＰ溶液を保持した。試料採取装置を、第１の操作位置から第２の操作位置に移動させるために、試料採取装置のハンドルを押した。試料採取装置が容器中で移動することによって、脆弱な密封が破壊され、試料採取部は液体試薬組成物と直接接触した状態で位置付けられた。容器を垂直位に保持し、激しく左右（振り子運動）に１０秒間振とうした。容器を振とうした後、器具のキュベット部をＣｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）ＮＧ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から市販）に直ちに挿入し、測定値を相対発光量（ＲＬＵ）で記録した。ＲＬＵ測定値を７０秒間およそ１０秒毎に得た。これは、前の読み取り後、直ちにルミノメーターに新しい読み取りを開始させることによって行われた。機器が新しい読み取りをそれぞれ取得し、提示するのにおよそ１０秒を要するので、約１０秒毎にＲＬＵ測定値を得ることになった。試験はすべて、１０℃で人工気候室で行なわれた。材料及び設備はすべて、試験に先立って人工気候室で平衡化した。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表４に示す。
【００９４】
試料採取装置を、第１の操作位置から第２の操作位置に移動させることは、キュベットの液体試薬組成物のｐＨを約６．４のｐＨから約７．２のｐＨに上昇させる結果になった。
【００９５】
比較例１
試料採取装置が被膜配合物２で被覆されたこと、及び、液体試薬組成物のｐＨが６．８であったことを除いて、実施例１と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間１０秒毎に得た。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表５に示す。
【００９６】
【表４】
0006257614.tif 000005
【００９７】
【表５】
0006257614.tif 000006
【００９８】
（実施例２）
試験が１４℃で行なわれたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表６に示す。
【００９９】
比較例２
試料採取装置は被膜配合物２で被覆され、液体試薬組成物のｐＨは６．８であったことを除いて、実施例２と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間１０秒毎に得た。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表７に示す。
【０１００】
【表６】
0006257614.tif 000007
【０１０１】
【表７】
0006257614.tif 000008
【０１０２】
（実施例３）
試験が２０℃で行なわれたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表８に示す。
【０１０３】
比較例３
試料採取装置は被膜配合物２で被覆され、液体試薬組成物のｐＨは６．８であったことを除いて、実施例３と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間１０秒毎に得た。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表９に示す。
【０１０４】
【表８】
0006257614.tif 000009
【０１０５】
【表９】
0006257614.tif 000010
【０１０６】
（実施例４）
実施例１〜３及び対応する比較例１〜３の被験試料の、第１の時点（１０秒）と第２の時点（２０秒）との間のＲＬＵ測定値のパーセント増加を、以下の数式を用いて計算した：
ＲＬＵの％増加＝｛［（２０秒時のＲＬＵ）−（１０秒時のＲＬＵ）］／（１０秒時のＲＬＵ）｝×１００
【０１０７】
ＲＬＵ測定値の平均増加パーセント（ｎ＝５）を表１０に示す。
【０１０８】
【表１０】
0006257614.tif 000011
【０１０９】
（実施例５）
実施例１〜３及び対応する比較例１〜３の被験試料の最大ＲＬＵ測定値に達する平均時間（ｎ＝５）が決定した。結果を表１１に記す。
【０１１０】
【表１１】
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【０１１１】
本明細書に引用するすべての特許、特許出願、及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体を、参照により援用する。本出願の開示内容と参照によって本明細書に組み込まれるいずれかの文書の開示内容との間になんらかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示内容が適用されるものとする。上記の詳細な説明及び実施例は、あくまで理解を助ける明確さのために示したものである。これらによって不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、示され記載された厳密な詳細事項に限定されるべきではないが、それは当業者には明らかな変形が、特許請求の範囲において規定された本発明の範囲に包含されるからである。
【０１１２】
全ての見出しは、読者の利便性のためであり、指定のない限り、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用するべきではない。
【０１１３】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な改変を行うことが可能である。これら及び他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１】
0006257614.tif 000013
【図１ａ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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