(57)【要約】  本発明は、植物ステビアレバウディアナ（Stevia rebaudiana）の配糖体を含む混合物からのレバウディオサイドＡの精製方法を提供する。本発明方法は、レバウディオサイドＡ濃度が典型的にはかなり低下した粗製ステビア出発組成物から高度に精製されたレバウディオサイドＡ組成物を調製するのに有用である。高度に精製されたレバウディオサイドＡ組成物は、食品、飲料、医薬、キャンディー、チューインガム等のごとき食用または咀嚼可能な組成物におけるノンカロリー甘味料として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）レバウディオサイドＡ；ならびに、レバウディオサイドＢ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤ、レバウディオサイドＥ、レバウディオサイドＦ、ステビオサイドおよびズルコシドの１以上を含む配糖体出発組成物を供し；
（ｂ）（ｉ）低級アルコールおよび水の混合物、または（ｉｉ）低級カルボン酸および水の混合物を含む溶媒中の配糖体出発組成物を溶解することにより配糖体溶液を形成し；次いで
（ｃ）少なくとも一部分のレバウディオサイドＡが、精製レバウディオサイドＡ組成物の形態で配糖体溶液から結晶化させるのに有効な量において、貧溶媒を工程（ｂ）の配糖体溶液に添加する工程を含む、配糖体の混合物からレバウディオサイドＡを精製することを特徴とする方法。
【請求項２】
方法が、レバウディオサイドＡを含む結晶を配糖体溶液に添加することにより、工程（ｃ）の配糖体溶液に種結晶を入れる工程をさらに含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
方法が、バッチ晶析プロセスとして行われることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
方法が、連続的な晶析プロセスとして行われることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
配糖体出発組成物が約４０重量％以上のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
配糖体出発組成物が、約４０重量％〜約８０重量％のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
配糖体出発組成物が、約６０重量％以下のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項８】
配糖体出発組成物が、約４０重量％〜約６０重量％のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
低級アルコールがＣ１〜Ｃ３アルコールを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】
Ｃ１〜Ｃ３アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノールまたはその混合物から選択されることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１１】
Ｃ１〜Ｃ３アルコールがエタノールであることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１２】
溶媒が、約３０重量％〜約７０重量％のＣ１〜Ｃ３アルコールおよび約３０重量％〜約７０重量％の水を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１３】
溶媒が、約４０重量％〜約６０重量％のＣ１〜Ｃ３アルコールおよび約４０重量％〜約６０重量％の水を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】
溶媒が、約４５重量％〜約５５重量％のＣ１〜Ｃ３アルコールおよび約４５重量％〜約５５重量％の水を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１５】
貧溶媒がＣ１〜Ｃ３アルコールまたはその混合物を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１６】
貧溶媒がメタノール、エタノール、ｉ−プロパノール、ｎ−プロパノール、アセトン、酢酸エチルまたはその混合物を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１７】
溶媒がエタノールおよび水を含み；貧溶媒がエタノールを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１８】
溶媒がエタノールおよび水を含み、貧溶媒がメタノールを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１９】
低級カルボン酸が、酢酸、ギ酸、プロピオン酸またはその混合物を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項２０】
貧溶媒の質量−対−配糖体溶液の質量が、約０.５０：１〜約９：１の範囲にあることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項２１】
貧溶媒の質量−対−配糖体溶液の質量が、約１：１〜３：１の範囲にあることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項２２】
配糖体溶液が、約１５重量％〜約５０重量％の出発組成物；および約５０重量％〜約８５重量％の溶媒を含むことを特徴とする請求項１の方法。
【請求項２３】
濾過により精製レバウディオサイドＡ組成物を回収する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項２４】
精製レバウディオサイドＡ組成物をＣ１〜Ｃ３アルコールまたはその混合物で洗浄する工程をさらに含む請求項１記載の方法。
【請求項２５】
アルコールがエタノールであることを特徴とする請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
アルコールはメタノールであることを特徴とする請求項２３記載の方法。
【請求項２７】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約９０重量％以上のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項２８】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約９５重量％以上のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項２９】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約９７重量％以上のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３０】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約９８重量％以上のレバウディオサイドＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３１】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約２.５重量％以下のレバウディオサイドＢを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３２】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約２重量％以下のレバウディオサイドＢを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３３】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約１重量％以下のレバウディオサイドＤを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３４】
精製レバウディオサイドＡ組成物が、約０.５重量％以下のレバウディオサイドＤを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３５】
貧溶媒が、配糖体溶液に単回添加で添加されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３６】
貧溶媒が、複数添加で配糖体溶液に添加されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３７】
貧溶媒が配糖体溶液に連続的に添加されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３８】
配糖体溶液および貧溶媒が、約１５℃〜約２５℃の範囲の温度であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３９】
配糖体溶液を形成する工程が、溶媒を約６０℃〜約７０℃の範囲の温度に加熱することを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４０】
方法が配糖体溶液を冷却する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４１】
配糖体溶液を冷却する工程が、（ｉ）貧溶媒の添加前；（ｉｉ）貧溶媒の添加と同時に；（ｉｉｉ）貧溶媒の添加後；またはそのいずれかの組合せで生じることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
配糖体溶液が、約０℃〜約−１０℃の範囲の温度に冷却されることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
配糖体溶液が、約１℃／分〜約５℃／分の範囲の速度で冷却されることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４４】
（ａ）レバウディオサイドＡおよびステビオサイドを含む配糖体組成物を供し；
（ｂ）（ｉ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物；または（ｉｉ）低級カルボン酸および水の混合物を含む溶媒に配糖体組成物を溶解することにより配糖体溶液を形成し；次いで
（ｃ）少なくとも一部分のステビオサイドが、配糖体溶液から結晶するのに有効な量で貧溶媒を工程（ｂ）の配糖体溶液に添加して、それにより、レバウディオサイドＡ中で富化した配糖体溶液組成物を形成する工程を含む、溶媒／貧溶媒晶析を用いてステビオサイドの選択的結晶化によりレバウディオサイドＡ中で配糖体組成物を富化する方法。
【請求項４５】
さらに、（ｄ）工程（ｃ）の配糖体溶液から富化した配糖体組成物を回収する工程を含むことを特徴とする請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
さらに、（ｅ）Ｃ１〜Ｃ３アルコールおよび水を含む溶媒に工程（ｄ）の甘味配糖体組成物を溶解することにより、配糖体溶液を形成し；次いで
（ｆ）精製レバウディオサイドＡ組成物の形態で配糖体溶液から少なくとも一部分のレバウディオサイドＡを結晶化するのに有効な量で、貧溶媒を工程（ｅ）の配糖体溶液に添加する工程を含むことを特徴とする請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
（ａ）レバウディオサイドＡおよびステビオサイドを含む配糖体組成物を供し；
（ｂ）（ｉ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物、または（ｉｉ）低級カルボン酸および水の混合物を含む溶媒に配糖体組成物を溶解することにより配糖体溶液の形成し；次いで
（ｃ）少なくとも一部分のステビオサイドを配糖体溶液から結晶化するのに有効な量で、貧溶媒を工程（ｂ）の配糖体溶液に添加し、それにより、精製ステビオサイド結晶を形成する工程を含む、溶媒／貧溶媒晶析を用いてステビオサイドを結晶化させる方法。
【請求項４８】
（ａ）レバウディオサイドＡおよびレバウディオサイドＤを含む固体を供し；次いで
（ｂ）固体をＣ１〜Ｃ３アルコールで洗浄して、固形組成物から少なくとも一部分のレバウディオサイドＤを取り出す工程を含む、固体組成物から少なくとも一部分のレバウディオサイドＤを取り出すためのレバウディオサイドＡおよびレバウディオサイドＤを含む固体を洗浄する方法。
【請求項４９】
Ｃ１〜Ｃ３アルコールが、メタノール、エタノールおよびプロパノールよりなる群から選択されることを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
Ｃ１〜Ｃ３アルコールが、メタノールであることを特徴とする請求項４８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本特許出願は、溶媒／貧溶媒晶析を用いる精製レバウディオサイドＡ組成物の製法（METHOD OF PRODUCING PURIFIED REBAUDIOSIDE A COMPOSITIONS USING SOLVENT/ANTISOLVENT CRYSTALLIZATION）と題する２００７年１月２２日付けで出願されたシリアル番号６０／８８１,７９８を有する米国仮特許出願、ならびに溶媒／貧溶媒晶析を用いる精製レバウディオサイドＡ組成物の製法（METHOD OF PRODUCING PURIFIED REBAUDIOSIDE A COMPOSITIONS USING SOLVENT/ANTISOLVENT CRYSTALLIZATION）と題する２００７年１２月１９日付けで出願されたシリアル番号６１／００８,１６３を有する米国仮特許出願の優先権を主張し、ここに出典明示してそれらの米国仮特許出願の全てを本願明細書の一部とみなす。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、溶媒／貧溶媒晶析を用いる植物ステビアレバウディアナ（Stevia rebaudiana）の粗抽出物からのレバウディオサイドＡの精製に関する。
【背景技術】
【０００３】
種ステビアレバウディアナ（「ステビア」）は、ノンカロリーの甘味料としての潜在性を有するステビアのある種の自然発生の甘味配糖体の精製に指向されるかなりの研究開発努力の対象となっている。ステビアから抽出し得る甘味配糖体は、６つのレバウディオサイド（すなわち、レバウディオサイドＡ〜Ｆ）、ステビオサイド（野生型ステビアからの抽出物中の優勢な配糖体）、ズルコシド（dulcoside）およびステレビン（sterebin）を含む。
【０００４】
レバウディオサイドＡは、ステビアの最も甘い味覚の配糖体であり、スクロースのおよそ２５０〜４５０倍の甘味を有する。その好都合の甘味プロフィール、規制承認、顧客の受入れおよび最小に苦い後味のために、それらの配糖体のうち、レバウディオサイドＡがノンカロリーの甘味料の使用に最も望ましいことが一般的に認められている。
【０００５】
種々の方法が、ステビア抽出物を含有する粗製レバウディオサイドＡからのレバウディオサイドＡの精製につき報告されている。
【０００６】
日本公開昭５６−１２１４５４号は、高純度でかつ結晶化により生じたステビオサイドおよびレバウディオサイドＡの分離方法を報告する。その方法において、ステビオサイドおよびレバウディオサイドＡの混合物は、従来のプロセスにより、ステビアレバウディアナ・ベルトニ（Stevia rebaudiana Bertoni）の葉および茎から抽出される。その抽出物はエタノールの≧７０％の水溶液中に溶解され、レバウディオサイドＡはその溶液から選択的に結晶化される。
【０００７】
日本特許第６３１７３５３１号は、ステビアレバウディアナ植物からの甘味配糖体の抽出方法を記載する。プロセスの第１工程は、ステビアレバウディアナ植物から甘味配糖体の流体溶液を抽出することである。第２に、甘味配糖体の流体溶液は無極性の多孔性樹脂を通過させ、水溶性有機溶媒、好ましくはメタノールで溶出される。第３に、溶出された溶液は濃縮、乾燥されて、粉末物質を与える。この手順は、甘味配糖体の混合物を単離するが、レバウディオサイドＡのごとき単一の純粋な甘味配糖体を単離しない。
【０００８】
米国特許出願公開第２００６／００８３８３８号（Jacksonら）は、商業的に入手可能なステビアレバウディアナ出発物質からレバウディオサイドＡを単離および精製する方法を報告する。この方法は、（１）選択されたＥｔＯＨ溶媒を処方するためのＥｔＯＨ処方段階、（２）ステビア出発物質を用いる第１の還流段階、および還流された混合物または撹拌洗浄混合物から単離された濃縮水を用いる所望によるさらなる還流段階、（３）所望による１以上の撹拌洗浄段階、および（４）エタノール精製および乾燥段階を含む。低品質ステビア出発物質を用いる具体例において、第２の還流段階は、レバウディオサイドＡ最終生産物の純度を最大化するように、撹拌洗浄段階前に典型的に加えられる。報告された方法において、ＥｔＯＨ処方段階は還流工程で使用される所望の還流溶媒を処方するために実施される。典型的には、還流溶媒は、エタノールおよび水の混合物であり、約５容量％〜１５容量％水である。そのプロセスは、約８９℃〜９０℃の温度にて約１時間典型的に行われる１以上のエネルギー集中的な還流を含む。その方法は、報告によれば、１００％純粋な水溶性レバウディオサイドＡを生じる。
【０００９】
米国特許第５,９６２,６７８号（Payzantら）は、ステビアレバウディアナ植物からの選択された甘味配糖体の抽出方法を報告する。報告された方法において、甘味配糖体はステビア植物から抽出され、処理されて、複数工程プロセスにおいて個々の成分を得る。最初に、ステビア植物を処理して混合した甘味配糖体を含有する流体溶液を抽出する。一連のイオン交換樹脂を用いることにより、純粋でない非甘味配糖体は混合された甘味配糖体から分離され、それを乾燥させる。依然として不純物を含むこれらの乾燥された甘味配糖体を混合し、次いで、無水メタノールのごとき水溶性有機溶媒に溶解して溶液を形成する。その溶液を還流し、冷却して、第１の甘味配糖体成分を沈殿させる。典型的にはステビオサイドであるこの第１の甘味配糖体成分は、濾過によって回収でき、第２の成分につき記載された方法によりさらに精製し得る。
【００１０】
第１の沈殿した甘味配糖体の結晶化からの濾液は、加熱によって濾液を濃縮することにより処理して、第２の甘味配糖体成分を得ることができる。溶液を冷却するに際して、第２の甘味配糖体成分を沈殿させて、回収できる。この第２の甘味配糖体成分は、典型的にはレバウディオサイドＡである。それは、所望により少量の水を含有し得るメタノールのごとき水溶性有機溶媒中にそれを溶解させることによりさらに精製できる。その溶液を加熱、還流して、最終的に冷却して、高純度の第２の甘味配糖体成分を沈殿させる。沈殿物は濾過により回収できる。この精製プロセスは、所望の純度の最終的に結晶化した固体が得られるまで、繰り返すことができる。この方法は、９０％以上または９５％以上のレバウディオサイドＡ純度レベルを報告する。
【００１１】
米国特許第４,３６１,６９７号（Dobbersteinら）は、ステビアレバウディアナ植物からジテルペン配糖体を回収するプロセスを報告する。プロセスは、順次、中間極性の第１の溶媒での植物材料を抽出して、配糖体の液体クロマトグラフ分離に干渉する傾向にある植物材料を抽出し、次いで、高極性の第２の溶媒で抽出して、配糖体を抽出し、次いで、ケイ素原子を介して無機質支持体に共有結合した酸素含有有機固定相の充填を有する液体クロマトグラフィーカラムにそれらを導入することにより抽出された配糖体をクロマトグラフィー分離する工程を含む。配糖体は、第１の溶媒より高いが、第２の溶媒より低い極性の溶媒で溶出される。
【００１２】
米国特許第４,８９２,９３８号（Giovanetto）は、抽出および精製によって、ステビアレバウディアナ・ベルトニの乾燥した植物材料からステビオサイドを回収する方法を報告する。抽出物は室温〜約６５℃の温度の水中での処理を通じて得られ、撹拌および引き続いて濾過および遠心分離を行う。この抽出物は、水酸化カルシウムで処理され、それに際して、沈殿物が濾過または遠心分離により得られる。この沈殿物は、強酸性イオン交換樹脂、引き続いて弱塩基性イオン交換樹脂で処理し、濾過、次いで乾燥させる。
【００１３】
米国特許第４,０８２,８５８号（DuBois）は、ステビアレバウディアナ植物の葉からのレバウディオサイドＡの回収のための方法を報告する。最終的な精製は、液体クロマトグラフィーに引き続いての水および１〜３個の炭素原子を有するアルカノール、好ましくはメタノールでの最初の抽出によって達成される。また、水を初期溶媒として用いることもでき、この段階でのそれらの好ましい溶媒は１〜４個の炭素原子を有する液体ハロアルカンであることが開示されている。好ましい第２の溶媒は１〜３個の炭素原子を有するアルカノールであるが、好ましい第３の溶媒は１〜４個の炭素原子を有するアルカノールおよび、所望による少量の水である。
【００１４】
米国特許出願２００６／０１３４２９２号（Abelyanら）は、ステビアレバウディアナ植物材料から甘味配糖体を回収するプロセスを報告する。乾燥および粉末化した葉は、ペクチナーゼ、セルラーゼおよびα−アミラーゼの存在下、水で処理される。かかる酵素の使用は、抽出速度をかなり増加させることが報告され、精製の次の段階を促す。得られた抽出物は、水酸化カルシウムでの処理および限外濾過を用いて精製される。透過物は、ベントナイトを充填したカラムを通過させ、真空下でシロップ状態まで濃縮される。エタノールでの処理は混合物から実際に純粋なレバウディオサイドＡを分離することを可能にする。高純度でのレバウディオサイドＡは８８〜９５％のエタノールで結晶を洗浄後に得られる。
【００１５】
米国特許第５,９７２,１２０号（Kutowyら）は、カラム抽出に続いての濾過による精製によってステビアレバウディアナ・ベルトニからの甘味化合物の抽出のプロセスを報告する。抽出は、０℃〜２５℃の範囲の温度である。好ましくは、微量濾過の前処理工程を用いて、抽出物を清澄にする。精製は、限外濾過に続いてナノ濾過による。濾過条件を制御して、甘味化合物の回収を最適化する。
【００１６】
他の技術は、味の素に付与された日本公開第５６１２１４５４号；第５６１２１４５５号；第５２０６２３００号；および第５６１２１４５３号、ならびにHailin Stevia Rebaudium Sugarに付与された中国公開第１２４３８３５号に報告されたものを含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
レバウディオサイドＡをステビアレバウディアナ（「ステビア」）から精製するための利用可能な技術および方法における改善が所望される。特に、加熱もしくは冷却工程またはエネルギー集中的な還流についての必要性なくして室温にて行い得る方法が所望される。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、植物ステビアレバウディアナ（「ステビア」）の配糖体を含む混合物からレバウディオサイドＡを精製する方法を提供する。本発明方法は、レバウディオサイドＡ濃度において典型的にかなり低い粗製ステビア出発組成物から高度に純粋なレバウディオサイドＡ組成物を調製するのに有用である。高度に純粋なレバウディオサイドＡ組成物は、食品、飲料、医薬、キャンディー、チューインガム等のごとき食用または咀嚼可能な組成物中のノンカロリー甘味料として有用である。
【００１９】
有利には、いくらかの具体例において、本発明方法は、エネルギー集中的な還流、加熱および／または冷却工程についての必要性なくして、室温または室温付近で完全に行い得る。加えて、本発明方法は、高純度レバウディオサイドＡ組成物を提供するためにクロマトグラフ分離を必要としない。しかしながら、本発明のいくらかの具体例において、本方法は、所望のレベルの純度を達成するようにレバウディオサイドＡ組成物を精製するための（ｉ）加熱、（ｉｉ）冷却および（ｉｉｉ）クロマトカラム分離の１以上を含み得る。
【００２０】
１つの態様において、本発明方法は、
（ａ）レバウディオサイドＡならびに、レバウディオサイドＢ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤ、レバウディオサイドＥ、レバウディオサイドＦ、ステビオサイドおよびズルコシドの１以上を含むステビア出発組成物を供し；
（ｂ）（ｉ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物、または（ｉｉ）低級カルボン酸（例えば、酢酸）および水の混合物を含む溶媒中のステビア出発組成物を溶解することにより配糖体溶液を形成し；次いで
（ｃ）少なくとも一部分のレバウディオサイドＡが、ステビア出発組成物より高い純度レベルを有する精製レバウディオサイドＡ組成物の形態で配糖体溶液から結晶化させるのに有効な量において、貧溶媒を工程（ｂ）の配糖体溶液に添加する工程を含む。
【００２１】
多数の具体例において、ステビア出発組成物は約４０重量％以上のレバウディオサイドＡを含む。例えば、ステビア出発組成物は、約４０％〜約８０重量％のレバウディオサイドＡまたは約４０％〜約６０重量％のレバウディオサイドＡを含み得る。
【００２２】
ステビア出発組成物は、配糖体組成物を形成するための（ｉ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物；または（ｉｉ）低級カルボン酸（例えば、酢酸）および水の混合物を含む溶媒組成物中に溶解される。有用な低級アルコールの例は、メタノール、エタノールおよびプロパノール（ｎ−プロパノールおよびｉ−プロパノール）を含む。多数の具体例において、溶媒組成物は、低級アルコールおよび水の混合物を含み、低級アルコール部分は約３０％〜約７０重量％の溶媒組成物を含み、水部分は約３０重量％〜約７０重量％の溶媒組成物を含む。典型的な具体例において、溶媒組成物は、約５０重量％のエタノールおよび５０重量％の水を含む。また、低級カルボン酸（例えば、酢酸）および水の溶媒組成物を用い得る。溶媒として用いた場合、低級カルボン酸は、約３０重量％〜約９０重量％の範囲の量で典型的には存在し、水は約１０重量％〜約７０重量％の範囲の量で典型的には存在する。より典型的には、低級カルボン酸は約５０重量％〜約９０重量％の範囲の量で存在し、水は、約１０％〜約５０重量％の範囲の量で存在する。
【００２３】
溶解限度未満のいずれの量も用い得るが、ステビア出発組成物は溶媒組成物中で典型的に溶解されて、約１５重量％〜約５０重量％のステビア出発組成物および約５０重量％〜約８５重量％の溶媒組成物を含む配糖体溶液を提供する。例えば、典型的な配糖体溶液は、約３０重量％で溶解したステビア出発組成物および約７０重量％の溶媒組成物を含み、ここに、約５０％の溶媒組成物はエタノールであり、約５０％の溶媒組成物は水である。
【００２４】
溶媒組成物中のステビア出発組成物の溶解後に、有効量の貧溶媒をレバウディオサイドＡの結晶化を始めるために配糖体溶液に添加する。貧溶媒は、レバウディオサイドＡ濃度が過飽和される（すなわち、その溶解限度を超えるように）得られた溶液でのレバウディオサイドＡの平衡溶解度を変更するように機能する。レバウディオサイドＡがその平衡溶解度の限度を超えるために、レバウディオサイドＡは、レバウディオサイドＡ結晶の形態で溶媒組成物から結晶化する。
【００２５】
低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物が溶媒として用いられる場合、貧溶媒は典型的にはＣ１〜Ｃ３アルコールのごとき低級アルコールを含む。代表的な例は、メタノール、エタノール、プロパノール（例えば、ｎ−プロパノールおよびｉ−プロパノール）、アセトンおよび酢酸エチルを含む。貧溶媒は、溶媒中で用いた同一のＣ１〜Ｃ３アルコールであってもよく、それは異なるＣ１〜Ｃ３アルコールであってもよい。例えば、溶媒はエタノールおよび水を含むこともでき、貧溶媒はメタノールを含み得る。低級カルボン酸および水が溶媒として用いられる場合、有用な貧溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール（例えば、ｎ−プロパノールおよびｉ−プロパノール）、アセトンおよび酢酸エチルを含む。
【００２６】
溶媒組成物の質量に対して、貧溶媒の質量は典型的には、約０.５：１〜約９：１、より典型的には約２：１〜約３：１の範囲にある。
【００２７】
貧溶媒は、単回添加（すなわち、全体量の貧溶媒の単回の添加）で添加でき、または、それは複数添加で添加でき、各々は、合計必要量の貧溶媒の一部分を供する。貧溶媒のより遅い速度での添加または複数の小添加は、貧溶媒が単回添加で加えられた場合よりも高純度のレバウディオサイドＡ組成物を提供し得る。
【００２８】
貧溶媒の添加後、得られた組成物は、レバウディオサイドＡの結晶化が発生するようにほぼ室温にて典型的には撹拌される。所望により、溶液は、非常に純粋なレバウディオサイドＡを含む種結晶の添加により種結晶を入れ得る。典型的には、結晶化は貧溶媒の添加後約２４時間以内に生じる。一般則として、結晶化のための時間は、レバウディオサイドＡ出発組成物の純度が増加するにつれて減少する。例えば、出発組成物がレバウディオサイドＡ中で比較的純粋（例えば、８０％のＲｅｂ.  Ａ）であるならば、結晶化は１時間未満がかかり得る。多数の具体例において、結晶化は約１〜４時間かかる。
【００２９】
結晶化後、精製されたレバウディオサイドＡは、濾過または遠心分離のごとき公知技術を用いて回収できる。回収後、精製レバウディオサイドＡ結晶は、低級アルコール、例えば、メタノール、エタノールで洗浄することによりさらに精製できる。
【００３０】
多数の具体例において、本発明方法は、約９０重量％以上のレバウディオサイドＡ、例えば、約９５重量％以上のレバウディオサイドＡ、約９６重量％以上、約９７重量％以上、または約９８.５重量％以上のレバウディオサイドＡを生成する。多数の具体例において、本発明方法は、約２.５重量％以下のレバウディオサイドＢ、例えば、約２重量％以下のレバウディオサイドＢまたは約１重量％以下のレバウディオサイドＢを含む精製レバウディオサイドＡ組成物を生成する。多数の具体例において、本発明方法は、約１重量％以下のレバウディオサイドＤ、例えば、約０.５重量％以下のレバウディオサイドＤを含む精製レバウディオサイドＡ組成物を生成する。レバウディオサイドＡ、ＢおよびＤの最終レベルは、典型的には初期供給物質中に存在するこれらの材料の量に依存するであろう。
【００３１】
さらにもう一つの態様において、本発明は、固形組成物から少なくとも一部分のレバウディオサイドＤを取り出すためのレバウディオサイドＡおよびレバウディオサイドＤを含む固体を洗浄する方法を提供する。その方法は、（ａ）レバウディオサイドＡおよびレバウディオサイドＤを含む固体を供し；次いで、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ３アルコールで固体を洗浄して固形組成物から少なくとも一部分のレバウディオサイドＤを取り出す工程を含む。溶媒の例は、メタノール、エタノールおよびプロパノールのごときＣ１〜Ｃ３アルコールを含む。多数の具体例において、メタノールはレバウディオサイドＤの低減のために好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、貧溶媒としてメタノールを用いるエタノール／水の溶媒からの結晶化により生成されたレバウディオサイドＡ結晶についてのＸ線回折パターンである。
【図２】図２は、貧溶媒としてメタノールを用いるエタノール／水の溶媒からの結晶化により生成されたレバウディオサイドＡ結晶の光学顕微鏡像である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
１つの態様において、本発明は、レバウディオサイドＡを含む組成物を精製する方法を提供する。本発明方法を用いて、食物、飲料、医薬、キャンディー、チューインガム等のごとき食用または咀嚼可能な組成物中で低カロリーの甘味料として適当である高度に純粋なレバウディオサイドＡ組成物を調製し得る。
【００３４】
１つの態様において、本発明は、配糖体の混合物からレバウディオサイドＡを精製する方法を提供する。この方法は、
（ａ）レバウディオサイドＡならびに、レバウディオサイドＢ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤ、レバウディオサイドＥ、レバウディオサイドＦ、ステビオサイドおよびズルコシドの１以上を含むステビア出発組成物を供し；
（ｂ）（ｉ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物、または（ｉｉ）低級カルボン酸（例えば、酢酸）および水の混合物を含む溶媒中の配糖体出発組成物を溶解することにより配糖体溶液を形成し；次いで
（ｃ）少なくとも一部分のレバウディオサイドＡが、精製レバウディオサイドＡ組成物の形態で配糖体溶液から結晶化させるのに有効な量において、貧溶媒を工程（ｂ）の配糖体溶液に添加する工程を含む。
【００３５】
工程（ａ）：
本発明方法は、高度に純粋なレバウディオサイドＡ組成物を形成するために、レバウディオサイドＡを含む出発組成物を精製するのに有用である。典型的には、出発組成物は、脂肪および／または他の化合物）の抽出のごとき前処理で所望により先行された水または溶媒−水溶液を用いるステビア葉部からのジテルペン配糖体の抽出のごとき公知の技術を用いて、ステビアレバウディアナ植物から誘導される。前処理操作は、（例えば、凝固剤、吸着剤および／または溶媒抽出を用いて）清澄化および脱色工程を含むこともでき、イオン交換による灰分回収を所望により含み得る。この後、さらなる精製は選択吸着、溶媒処理または組合せにより達成し得る。最終的には、出発物質は結晶化により精製し、次いで乾燥し得る。有用な出発組成物はレバウディオサイドＡを含み、また、レバウディオサイドＢ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤ、レバウディオサイドＥ、レバウディオサイドＦ、ステビオサイドおよびズルコシドのごとき１以上の他の配糖体も含む。
【００３６】
多数の具体例において、出発組成物は約４０重量％以上のレバウディオサイドＡ、例えば、約４０重量％〜約９５重量％のレバウディオサイドＡを含む。また、ステビオサイドは、出発組成物に典型的には存在する。いくらかの具体例において、ステビオサイドは出発組成物の約４０重量％まで存在する。出発組成物中に存在し得る他の配糖体は、例えば、レバウディオサイドＢ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤおよびレバウディオサイドＦを含む。典型的な出発組成物は、例えば、約８重量％以下のレバウディオサイドＢ、約１０重量％以下のレバウディオサイドＣ、約２重量％以下のレバウディオサイドＦ、約１重量％以下のズルコシドおよび約４重量％以下のレバウディオサイドＤを含む。また、レバウディオサイドＥは、出発組成物に存在し得る。
【００３７】
有利には、本発明方法を用いて、低純度レベルのレバウディオサイドＡを有する出発組成物からレバウディオサイドＡを精製し得る。例えば、本発明方法は、約６０重量％未満のレバウディオサイドＡ、例えば、約４０重量％〜約６０重量％のレバウディオサイドＡを有する出発組成物から精製レバウディオサイドＡを生成し得る。
【００３８】
工程（ｂ）：
本発明方法において、出発組成物を溶液を形成させるために溶媒組成物に溶解する。典型的には、出発組成物は、出発組成物を溶媒組成物に溶解させるために溶媒組成物に添加され、溶媒組成物は撹拌される。また、出発組成物は、経時的に相対的に一定速度で溶媒組成物に添加できるか、あるいはそれは、１以上の区別される添加で添加し得る。典型的には、出発組成物は、ほぼ室温、例えば、約２０℃〜約２５℃にて溶媒組成物に溶解される。また、出発組成物の溶解を支援するためにいくらか溶媒組成物をわずかに加熱することは本発明の範囲内にある。例えば、溶媒組成物を約２０℃〜約７０℃の範囲、より典型的には、約６０℃〜約７０℃の範囲にある温度まで加熱し得る。
【００３９】
有用な溶媒組成物は、（ｉ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水の混合物；または（ｉｉ）低級カルボン酸および水の混合物を含む。低級アルコールの例は、メタノール、エタノールおよびプロパノール（例えば、ｎ−プロパノールおよびｉ−プロパノール）を含む。また、２以上のアルコールおよび水の混合物を用い得る。多数の具体例において、溶媒組成物は、溶媒組成物の全重量に基づいて、約２０重量％〜約８０重量％の低級アルコールおよび約２０重量％〜約８０重量％の水を含む。より典型的には、溶媒組成物は、約３０重量％〜約７０重量％の低級アルコールおよび約３０重量％〜約７０重量％の水を含む。典型的な具体例において、溶媒組成物は、約４０重量％〜約６０重量％の低級アルコールおよび約４０重量％〜約６０重量％の水、または約４５重量％〜約５５重量％の低級アルコールおよび約４５重量％〜約５５重量％の水を含む。典型的な具体例において、出発組成物は約５０重量％のエタノールおよび約５０重量％の水を含む。
【００４０】
低級カルボン酸の例は、他の低級カルボン酸も用い得るが、酢酸、ギ酸およびプロピオン酸を含む。溶媒として用いた場合、低級カルボン酸は、約３０重量％〜約９０重量％の範囲にある量で典型的には存在し、水は、約１０重量％〜約７０重量％の範囲にある量で典型的に存在する。より典型的には、低級カルボン酸は、約５０重量％〜約９０重量％の範囲の量で存在し、水は、約１０重量％〜約５０重量％の範囲の量で存在する。典型的な具体例において、溶媒組成物は５０重量％の酢酸および５０重量％の水である。
【００４１】
溶媒組成物は、レバウディオサイドＡ出発組成物の添加に先立ち、個々の成分を一緒に混合することにより典型的には調製される。しかしながら、また、溶媒組成物の１つの成分にレバウディオサイドＡ出発組成物を溶解し、次いで、第２の成分を添加して溶媒組成物を構成することは可能である。
【００４２】
溶媒組成物に出発組成物を溶解するに際して、得られた配糖体溶液は典型的には、出発組成物の約１５重量％〜約５０重量％で溶解された固体および約５０重量％〜約８５重量％の溶媒を含む。いくらかの具体例において、配糖体溶液は、約３０重量％〜約５０重量％で溶解された固体および約５０重量％〜約７０重量％の溶媒を含む。
【００４３】
工程（ｃ）： 
次いで、配糖体溶液の形成後に、有効量の貧溶媒はレバウディオサイドＡの結晶化を誘導するために配糖体溶液に添加される。有効量の貧溶媒の添加に際して、得られた配糖体溶液（貧溶媒を含む）は、レバウディオサイドＡの溶解限度を超え、それにより、配糖体溶液からレバウディオサイドＡを結晶化させる。配糖体溶液に存在し得る他の配糖体が、それらの溶解限度より下のままであるので、レバウディオサイドＡは、溶液から優先的に結晶化する。
【００４４】
有用な貧溶媒は、配糖体溶液中のレバウディオサイドＡの溶解限度を改変するのに有効な物質を含む。より詳細には、有効な貧溶媒は、配糖体溶液において混和性であり、溶液の比誘電率を低下させることにより水の溶媒和の力を減少できる。典型的には、貧溶媒は、水混和性である流体であり、水より典型的には低極性である流体である。貧溶媒の代表例は、メタノール、エタノールおよびプロパノール（ｎ−プロパノールおよびｉ−プロパノール）のごとき低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）を含む。また、アセトンおよび酢酸エチルは有用である。貧溶媒は溶媒組成物に存在する同一低級アルコールであり得るか、またはそれは異なる低級アルコールであり得る。
【００４５】
本発明方法において、貧溶媒は、配糖体組成物に存在する少なくとも一部分のレバウディオサイドＡの結晶化を誘導するような有効量で配糖体溶液に添加される。必要な貧溶媒の量は、例えば、溶媒組成物の性質、出発物質の組成、組成物に存在するレバウディオサイドＡの量、溶液中の他の配糖体不純物の量、結晶化温度および溶解温度を含めた種々の因子に依存し得る。典型的には、配糖体溶液中の溶媒の質量に対して添加される溶媒の質量は、約０.５：１〜約９：１の範囲にある。より典型的には、、配糖体溶液の質量に対する貧溶媒の質量は、約２：１〜約３：１の範囲にある。
【００４６】
レバウディオサイドＡの結晶化は、バッチ晶析プロセスまたは連続的晶析プロセスのいずれかを用いて実施し得る。バッチプロセスにおいて、出発組成物、溶媒および貧溶媒のすべては、結晶化が生じる場合に単一容器に添加される。結晶を採取後、プロセスを繰り返すことができる。連続的晶析において、供給配糖体の混合物は溶媒溶液で溶解される。得られた混合物は、晶析容器に連続的に送り込まれる。同時に、貧溶媒は、溶媒および溶質混合物と混合した場合に所望の最終の貧溶媒濃度を生じる量で晶析容器に連続的に送り込まれる。結晶化はこの容器中で生じ、それは、種結晶の連続的な存在によりバッチ容器中よりも典型的には高率である。生成物スラリーは、溶媒および貧溶媒の流入の和に等しい速度にて容器から連続的に汲み出され、かくして、晶析装置中で定容量を維持する。生成物スラリーは濾過または遠心分離され、次いで、乾燥させて、最終生産物を提供する。プロセスに用いた溶媒は、蒸留によって回収し得る。結晶化の終りでの溶解された溶質は回収でき、再生して供給するか、別々に用いることができる。
【００４７】
貧溶媒を１つの添加にて配糖体溶液に添加し得る（すなわち、単回添加にて全量を添加する）か、またはそれを複数添加にて添加し得る。いくらかの具体例において、貧溶媒は、経時的に一定の添加速度にて配糖体溶液に添加される。配糖体溶液への貧溶媒の添加速度は、形成されるレバウディオサイドＡ結晶の純度に影響し得る。例えば、単回添加での貧溶媒の添加は、レバウディオサイドＡを配糖体溶液から急速に結晶化させ、その結果、貧溶媒が経時的にゆっくりまたは複数の少添加で配糖体溶液に添加されるならば形成されるものより純度が低いレバウディオサイドＡ結晶を生じる。
【００４８】
典型的には、貧溶媒は、双方の材料をほぼ室温、例えば、約２０±５℃に維持しつつ、配糖体溶液に添加される。貧溶媒の添加後に、得られた配糖体溶液は、ほぼ室温にて、穏やか〜中程度の撹拌を行う結果、レバウディオサイドＡが配糖体溶液から結晶化する。典型的には、レバウディオサイドＡは貧溶媒の添加後約２４時間以内に結晶化する。レバウディオサイドＡ出発物質の純度が減少するにつれ、結晶化の速度は典型的には減少する。
【００４９】
いくらかの具体例において、本発明方法は、配糖体溶液からのレバウディオサイドＡの結晶化を促すための配糖体溶液を冷却する工程をさらに含む。配糖体溶液は、貧溶媒の添加に先立って、貧溶媒の添加と同時に、または貧溶媒の添加に引き続いて冷却し得る。また、前記の組合せも実施し得る。配糖体溶液は、レバウディオサイドＡの結晶化を促すのに有用ないずれの温度にも冷却し得る。いくらかの具体例において、配糖体溶液は、約０℃〜約−１０℃の温度に冷却される。冷却速度は、いずれの有用な速度であってもよいが、典型的には、約１℃／分〜約５℃／分の範囲である。
【００５０】
いくらかの具体例において、溶液は結晶化を促し、結晶化したレバウディオサイドＡの純度を高めるために種結晶を入れられる。種結晶を入れることは、少量の高度に純粋なレバウディオサイドＡ（例えば、全重量に基づいて負荷された約０.２重量％〜約１０重量％の種）を溶液に添加することにより典型的に達成される。
【００５１】
結晶化後に、精製レバウディオサイドＡは、よく知られた技術および材料を用いる濾過により取り出すことができる。いくらかの具体例において、精製レバウディオサイドＡ結晶は、メタノール、エタノールまたはプロパノール（ｎ−プロパノールまたはｉ−プロパノール）のごとき低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）、またはその混合物を用いて洗浄される。低級アルコールでの洗浄は、溶媒に溶解されたいずれかの配糖体と共に残存溶媒を除去するのに有効であり得る。典型的には、湿ったフィルターケーキの液体部分にある配糖体は、湿ったフィルターケーキの固体部分中のものよりレバウディオサイドＡ組成においてより低い。洗浄は配糖体を取り出し、それにより、一旦フィルターケーキが乾燥したならば全レバウディオサイドＡ濃度が増加する。加えて、その洗浄は優先的に望ましくない配糖体を除去し得る（例えば、Ｒｅｂ.Ａ結晶からＲｅｂ.ＢおよびＲｅｂ.Ｄを除去する）。
【００５２】
本発明の方法を用いて、精製レバウディオサイドＡ組成物を生成し得る。いくらかの具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約９０重量％以上のレバウディオサイドＡを含む。他の具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約９５重量％以上のレバウディオサイドＡを含む。さらに他の具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約９７重量％以上のレバウディオサイドＡを含む。さらに他の具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約９８重量％以上のレバウディオサイドＡ、または約９９重量％以上のレバウディオサイドＡを含む。多数の具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約２.５重量％以下のレバウディオサイドＢ、または約２重量％以下のレバウディオサイドＢを含む。多数の具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約１重量％以下のレバウディオサイドＤ、または約０.５重量％以下のレバウディオサイドＤを含む。多数の具体例において、精製レバウディオサイドＡ組成物は、約０.１重量％以下のステビオサイドを含む。
【００５３】
本発明の精製レバウディオサイドＡ組成物は、食物、飲料、医薬、タバコ、調合薬およびパーソナルケア製品の単独の甘味料として用いることができ、かかる生成物中の他の甘味料と（すなわち、「共同甘味料」として）混合できる。１を超える甘味料を典型的に用いて、特定の味プロフィールおよび／または物理的性質を得る。かかる甘味料は従来の甘味料（ショ糖、テンサイ糖、ハチミツ、シロップおよび他の「天然の」甘味料）および高強度甘味料（シクラマート、サッカリン、スクラロース、アスパルテーム、ステビアおよび他の化学的に生成したおよび／または天然の高強度甘味料）を含む。
【００５４】
もう一つの態様において、本発明は、溶媒／貧溶媒晶析を用いるステビオサイドを結晶化させる方法を提供する。レバウディオサイドＡおよびステビオサイドを含む配糖体組成物からのステビオサイドの結晶化は、精製ステビオサイド組成物を形成し、また、出発組成物に対してレバウディオサイドＡにおいて富化した溶解された配糖体組成物を提供するために有用であり得る。一旦レバウディオサイドＡが富化される（例えば、約２０重量％〜約５０重量％のレバウディオサイドＡ）ならば、富化レバウディオサイドＡ組成物は、精製レバウディオサイドＡ組成物を形成するために前記プロセス中で出発物質として用い得る。
【００５５】
多数の具体例において、溶媒／貧溶媒晶析によるステビオサイドの沈殿方法は：
（ａ）レバウディオサイドＡおよびステビオサイドを含む配糖体組成物を供し（他の配糖体も典型的に存在する）；
（ｂ）低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコールおよび水）を含む溶媒に配糖体組成物を溶解することにより、配糖体溶液を形成し；次いで
（ｃ）少なくとも一部分のステビオサイドが、配糖体溶液から結晶させるのに有効な量において工程（ｂ）の配糖体溶液に貧溶媒を添加して、それにより、工程（ｂ）の配糖体溶液に対してレバウディオサイドＡ中で富化した配糖体組成物を形成する工程を含む。
【００５６】
いくらかの具体例において、方法は、さらに、
（ｄ）結晶化したステビオサイドを濾過し、工程（ｃ）の配糖体溶液からのレバウディオサイドＡ中で富化した組成物の回収し；
（ｅ）  低級アルコール（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコール）および水を含む溶媒において工程（ｄ）の富化した配糖体組成物を溶解することにより、第２の配糖体溶液を形成し；次いで
（ｆ）精製レバウディオサイドＡ組成物の形態の甘味配糖体溶液から少なくとも一部分のレバウディオサイドＡを結晶化させるのに有効な量において工程（ｅ）の甘味配糖体溶液に貧溶媒を添加する工程を含み得る。
本発明は、今や以下の非制限の実施例を参照して記載されるであろう。
【００５７】
実施例
出発物質
表１は、実施例の全体にわたって用いた種々の出発物質組成物をリストする。
【００５８】
【表１】
2010516764.tif 000002
【００５９】
実施例１
【００６０】
実施例１
最初に、出発組成物７０ ＲＡ８０（表１参照）を５０重量％のエタノールおよび５０重量％の水を含む溶媒組成物中に３０重量％にて溶解した。得られた溶液を室温にて一晩平衡させた。平衡後に、貧溶媒メタノールを、結晶化を引き起こすために表２に示した量で甘味配糖体組成物に添加した。貧溶媒の添加後、結晶化は、室温で一晩進行させた。結晶化後、溶液を濾過し、得られたフィルターケーキを２重量のエタノールで洗浄した。次いで、フィルターケーキおよび上澄み試料を乾燥し、乾燥ケーキをＨＰＬＣにより分析して、配糖体組成を決定した。結果を表２に報告する。
【００６１】
【表２】
2010516764.tif 000003
＊  その他＝Ｒｅｂ.ＡおよびＲｅｂ.Ｂ間のピークの和、それはＲｅｂ.Ｄおよびステビオールビオシドを含むと考えられる。
【００６２】
実施例２
最初に、表３に同定された出発物質は、５０重量％のエタノールおよび５０重量％の水を含む溶媒組成物に３０重量％にて溶解した。得られた溶液は、室温で一晩平衡させた。平衡後、２容の貧溶媒を結晶化を引き起こすために甘味配糖体組成物に添加した。貧溶媒の添加後、結晶化は、室温で一晩進行させた。２容の貧溶媒の添加は、８０％のＲｅｂ.Ａ出発組成物中で結晶化を生じることが観察されたが、６０％または４０％のＲｅｂ.Ａ出発組成物から調製した甘味配糖体組成物においては結晶化しなかった。さらなる容積の貧溶媒を６０％および４０％のＲｅｂ.Ａ出発組成物から調製された配糖体組成物に添加した。さらなる容積のエタノール貧溶媒は、６０％のＲｅｂ.Ａで調製した３つの試料の２つに結晶化を生じさせた。さらなる容積のエタノール貧溶媒は、４０％のＲｅｂ.Ａで調製した試料のいずれにも結晶化を生じさせなかった。さらなる容積のメタノール貧溶媒は、４０％のＲｅｂ.Ａで調製された３つの試料のすべてに、および６０％のＲｅｂ.Ａで調製された３つの試料のすべてに結晶化を発生させた。結晶化後、溶液を濾過し、得られたフィルターケーキを２容のエタノールで洗浄した。次いで、フィルターケーキを乾燥させ、次いで乾燥ケーキをＨＰＬＣにより分析して、配糖体組成物を決定した。結果を表３に報告する。
【００６３】
【表３】
2010516764.tif 000004
＊  その他＝Ｒｅｂ.ＡおよびＲｅｂ.Ｂ間のピークの和、それはＲｅｂ.Ｄおよびステビオールビオシドを含むと考えられる。
【００６４】
実施例３
ＲＡ２０（表１参照）を、５０％エタノールおよび５０％水の溶液に溶解して、３０重量％のＲＡ２０を含む溶液を生成した。溶液を３重量のメタノールで希釈し、濾過し、２重量のメタノールで洗浄した。結晶は５６重量％の元来の物質を構成し、ステビオサイドが富化した。濾液は、物質のバランスを構成し、Ｒｅｂ.Ａが富化した。得られた結晶および濾液の純度を表４に供する。
【００６５】
【表４】
2010516764.tif 000005
＊  その他＝Ｒｅｂ.ＡおよびＲｅｂ.Ｂ間のピークの和、それはＲｅｂ.Ｄおよびステビオールビオシドを含むと考えられる。
【００６６】
実施例４
約６０重量％のＲｅｂ.Ａを含有するステビオール配糖体の原料を６５重量％エタノールおよび３５重量％水を含有する溶媒に溶解して、５６重量％のステビオール配糖体を含有する溶液を生成した。溶液を全ての配糖体が溶解する約７０℃まで加熱した。溶媒の最終組成が８９.３重量％のエタノールとなるように、１００％のエタノールを貧溶媒として添加した。エタノールの添加と同時に、溶液を室温まで約２時間ゆっくり冷却した。得られた結晶を溶液から濾過し、２ケーキ重量の９５％エタノールで洗浄して、乾燥させた。フィルターケーキは乾量ベースで、９５〜９７重量％のＲｅｂＡを含有した。溶液中の約７５％のレバウディオサイドＡを結晶化において回収した。
【００６７】
実施例５
約８０重量％のＲｅｂＡを含有するステビオール配糖体の原料を８５重量％のエタノールおよび１５重量％の水を含有する溶媒に溶解させて、１５重量％のステビオール配糖体を含有する溶液を生成した。溶液は、その点で全ての配糖体が溶解する約７０℃まで加熱した。溶媒の最終組成が８９.３重量％のエタノールとなるように、１００％のエタノールを貧溶媒として添加した。エタノールの添加と同時に、溶液を室温まで約２時間ゆっくり冷却した。得られた結晶を溶液から濾過し、２ケーキ重量の９５％エタノールで洗浄し、乾燥させた。フィルターケーキは、乾燥ベースで９４〜９５重量％のＲｅｂＡを含有した。溶液中の９５％を超えるレバウディオサイドＡを、結晶化において回収した。
【００６８】
本発明の他の実施態様は、本願明細書の考察に際して、または本願明細書に示された本発明の実施から当業者に明白になるであろう。本願明細書に記載された具体例に関する変形は、この説明を読むと関連技術の当業者に明らかになるであろう。発明者らは、当業者が、必要に応じてかかる変形を用いることを期待し、本願明細書に特に記載される以外でも実施される発明を意図する。従って、本発明は、適用可能な法律により可能になるような特許請求の範囲に記載された対象の全ての改良および等価物を含む。本願明細書に引用された特許、特許文献および刊行物の全てが、個々に組込まれるかのようにここに出典明示して本明細書の一部とみなす。
【図１】
2010516764.tif 000006
【図２】
2010516764.tif 000007
【国際調査報告】
2010516764.tif 000008
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