(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩、互変異性体、溶媒和物、若しくは多形：
【化１】
0006298998.tif 000033
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキル、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルであり、これらのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜６アルキル、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、及びニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよく、
Ｒ２は、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、及びニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよいＣ１〜８アルキルである。
【請求項２】
Ｒ２が、ブチル又はペンチルであり、
Ｒ１が、Ｃ１〜６アルキル、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルであり、これらのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜６アルキル、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、及びニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよい、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がヒドロキシルで置換されたＣ１〜８アルキルであり、Ｒ１が置換又は非置換のアリールアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がアリールアルキルであり、
Ｒ２が、ヒドロキシルで置換されたＣ１〜８アルキルであるか、又はいずれかの立体化学的配置の以下の例：
【化２】
0006298998.tif 000034
のうちの１つである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＣＨ３であり、
Ｒ２が、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、及びニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよいＣ１〜８アルキルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がヘテロアリールアルキルであり、
Ｒ２が、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、及びニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよいＣ１〜８アルキルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
【化３】
0006298998.tif 000035
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、互変異性体、溶媒和物、若しくは多形を、１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤、又は担体と一緒に含む、医薬組成物。
【請求項９】
ウイルス感染、免疫又は炎症性疾患の治療において使用するための、請求項８に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス感染の治療における、１，２，４−トリアジン誘導体、その調製方法、医薬組成物、及びその使用に関する。
【０００２】
本発明は、トル様受容体（ＴＬＲ）の調節、又はアゴニズムが含まれる、ウイルス感染、免疫又は炎症性疾患の治療における１，２，４−トリアジン誘導体の使用に関する。トル様受容体は、細胞外のロイシンの豊富なドメイン及び保存領域を含有する細胞質拡張によって特徴付けられる、主要な膜貫通タンパク質である。先天性免疫系は、特定の種類の免疫細胞の細胞表面上に発現したこれらのＴＬＲを介して、病原体関連分子パターンを認識することができる。異質な病原体の認識は、サイトカインの産生及び食細胞上の共刺激分子の上方調節を活性化する。これは、Ｔ細胞挙動の調節をもたらす。
【背景技術】
【０００３】
ほとんどの哺乳類種は、１０から１５種類のトル様受容体を有していると推定されている。１３個のＴＬＲ（ＴＬＲ１からＴＬＲ１３と呼ばれる）がヒトとマウスで一緒に同定され、これらの多くと同等の形態が他の哺乳類種で見つかっている。しかし、ヒトにおいて見つけられた特定のＴＬＲの同等物が、全ての哺乳類に存在するわけではない。例えば、ヒトにおけるＴＬＲ１０に類似するタンパク質をコードする遺伝子がマウスに存在するが、過去にレトロウイルスによっていくつかの点で損傷を受けたと考えられる。一方、マウスは、ヒトには表れていないＴＬＲ１１、１２、及び１３を発現する。その他の哺乳類が、ヒトにおいて見つけられていないＴＬＲを発現するかもしれない。その他の非哺乳類種は、トラフグ（Ｔａｋｉｆｕｇｕ  ｐｕｆｆｅｒｆｉｓｈ）において見つけられるＴＬＲ１４で示される、哺乳類と異なるＴＬＲを有することができる。これは、ヒトの先天性免疫のモデルとして実験動物を使用する方法を複雑にする。
【０００４】
ＴＬＲのレビューのために、以下の雑誌の記事を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３〜３８，２００３；Ａｋｉｒａ，  Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，  Ｋ．，  ａｎｄ  Ｋａｉｓｈｏ，  Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５〜３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，  Ｒ．  Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２〜５２０，２００４。
【０００５】
国際公開第２００６／１１７６７０号におけるプリン誘導体、国際公開第９８／０１４４８号及び国際公開第９９／２８３２１号におけるアデニン誘導体、並びに国際公開第２００９／０６７０８１号におけるピリミジンなどのトル様受容体上で活性を示す化合物が過去に記載されてきた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００６／１１７６７０号
【特許文献２】国際公開第９８／０１４４８号
【特許文献３】国際公開第９９／２８３２１号
【特許文献４】国際公開第２００９／０６７０８１号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３〜３８，２００３
【非特許文献２】Ａｋｉｒａ，  Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，  Ｋ．，  ａｎｄ  Ｋａｉｓｈｏ，  Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５〜３７６，２００３
【非特許文献３】Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，  Ｒ．  Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２〜５２０，２００４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、従来技術の化合物と比較して、好ましい選択性、高い有効性、高い代謝安定性、及び改善された安全プロファイルを有する、新規なトル様受容体調節剤への強い要求が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によると、式（Ｉ）の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩、互変異性体、溶媒和物、若しくは多形が提供される：
【００１０】
【化１】
0006298998.tif 000002
【００１１】
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキル、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルであり、これらのそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜６アルキル、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、又はニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよい。
【００１２】
Ｒ２は、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、又はニトリルから独立に選択される１つ以上の置換基で場合によって置換されていてもよいＣ１〜８アルキルである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
第一の実施形態において、本発明は、Ｒ２がブチル又はペンチルであり、Ｒ１が上で特定したとおりである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１４】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｒ２がヒドロキシルで置換されたＣ１〜８アルキルであり、Ｒ１が置換又は非置換のアリールアルキル基である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００１５】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｒ１がアリールアルキルであり、Ｒ２がヒドロキシルで置換されたＣ１〜８アルキルであるか、又はいずれかの立体化学的配置の以下の例のうちの１つである、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００１６】
【化２】
0006298998.tif 000003
【００１７】
さらに、本発明は、Ｒ１がＣＨ３であり、Ｒ２が上で特定したとおりである、式（Ｉ）の化合物も提供する。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、Ｒ１がヘテロアリールアルキルであり、Ｒ２が上で特定したとおりである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物、及びその医薬的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、又は多形は、医薬として、特にトル様受容体（特にＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８）の活性の調節剤としての活性を有する。
【００２０】
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、若しくは多形を、１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤、又は担体と一緒に含む、医薬組成物を提供する。
【００２１】
さらに、本発明による式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、若しくは多形、或いは前記式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、若しくは多形を含む医薬組成物は、医薬として使用することができる。
【００２２】
したがって、本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、若しくは多形、或いは前記式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩、溶媒和物、若しくは多形を含む医薬組成物が、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８の調節が含まれる疾患の治療において使用することができることである。
【００２３】
用語「アルキル」は、特定の数の炭素原子を含有する、直鎖又は分枝鎖の飽和脂肪族炭化水素を表す。
【００２４】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を表す。
【００２５】
用語「アルケニル」は、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる、上で定義したアルキルを表す。
【００２６】
用語「アルキニル」は、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる、上で定義したアルキルを表す。
【００２７】
用語「シクロアルキル」は、特定の数の炭素原子を含有する、炭素環を表す。
【００２８】
用語「アリール」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから、特にＮ及びＯから選択される１つ又は２つのヘテロ原子を場合によって含む、芳香族環構造を意味する。前記芳香族環構造は、４、５、６、又は７個の環原子を有していてもよい。特に、前記芳香族環構造は、５又は６個の環原子を有していてもよい。
【００２９】
用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから、特にＮ及びＯから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む、用語「アリール」に対して定義した芳香族環構造を意味する。
【００３０】
用語「二環式複素環」は、２つの縮合した芳香族環から構成される、用語「アリール」に対して定義した芳香族環構造を意味する。それぞれの環は、場合によって、Ｎ、Ｏ、及びＳから、特にＮ及びＯから選択されるヘテロ原子から構成される。
【００３１】
用語「アリールアルキル」は、アルキル基で場合によって置換されていてもよい、用語「アリール」に対して定義した芳香族環構造を意味する。
【００３２】
用語「ヘテロアリールアルキル」は、アルキル基で場合によって置換されていてもよい、用語「ヘテロアリール」に対して定義した芳香族環構造を意味する。
【００３３】
用語「アルコキシ」は、酸素に単結合したアルキル（炭素と水素の鎖）基、例えばメトキシ基又はエトキシ基を表す。
【００３４】
「複素環」は、飽和した又は部分的に飽和しており、エチルオキシド、テトラヒドロフラン、ジオキサン又はその他の環式エーテルを含む分子を表す。窒素含有複素環には、例えばアゼチジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジンなどが含まれる。その他の複素環には、例えば、チオモルホリン、ジオキソリニル、及び環式スルホンが含まれる。
【００３５】
「ヘテロアリール」基は、本来芳香族である複素環式基である。これらは、Ｎ、Ｏ又はＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する、単環式、二環式、又は多環式である。ヘテロアリール基は、例えば、イミダゾリル、イソオキサゾリル、フリル、オキサゾリル、ピロリル、ピリドニル、ピリジル、ピリダジニル、又はピラジニルであり得る。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容可能な塩には、その酸付加塩及び塩基性塩が含まれる。好適な酸付加塩は、非毒性の塩を形成する酸から形成される。好適な塩基性塩は、非毒性の塩を形成する塩基から形成される。
【００３７】
本発明の化合物は、非溶媒和及び溶媒和の形態で存在してもよい。用語「溶媒和」は、本明細書において、本発明の化合物と１つ以上の医薬的に許容可能な溶媒分子、例えばエタノールとを含む分子複合体を記載するために使用される。
【００３８】
用語「多形」は、本発明の化合物が、１つを超える形態又は結晶構造で存在する能力を表す。
【００３９】
本発明の化合物は、結晶形又は非晶質生成物として投与されてもよい。これらは、例えば、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、又は蒸発乾燥などの方法によって、固体の塊（ｐｌｕｇ）、粉末、又はフィルムとして得られてもよい。これらは単独で、又は１つ以上の他の本発明の化合物と組み合わせて、又は１つ以上の他の薬物と組み合わせて投与されてもよい。一般的に、これらは１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤を伴って製剤として投与される。用語「賦形剤」は、本明細書において、本発明の化合物以外の任意の成分を記載するために使用される。賦形剤の選択は、投与の特定の態様、溶解性及び安定性への賦形剤の影響、及び剤形の性質などの要因に大きく依存する。
【００４０】
本発明の化合物又はその任意のサブグループは、投与の目的のために、様々な医薬形態に製剤化されてもよい。適切な組成物として、全身に薬物を投与するために通常用いられる、引用された全ての組成物が引用されてもよい。本発明の医薬組成物を調製するために、場合によって塩の形態で、有効量の特定の化合物を活性成分として、投与に望ましい調製物の形態に依存する、広範な形態をとる医薬的に許容可能な担体との密接な混合物に組み合わせる。これらの医薬組成物は、望ましくは、例えば経口、直腸、又は経皮投与に好適な単一の剤形である。例えば、経口剤形に組成物を調製する場合、任意の通常の医薬媒体、例えば、懸濁液、シロップ、エリキシル、エマルション、及び溶液などの経口液体調製物の場合、水、グリコール、油、アルコールなど；又は粉末、丸薬、カプセル、及び錠剤の場合、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの固体の担体を用いてもよい。投与のしやすさによって、錠剤及びカプセルが最も有利な経口投与剤形を表しており、固体の医薬担体が明らかに用いられる。使用する前にすぐに液体の形態に変換することができる固体の形態の調製物も含まれる。経皮投与に好適な組成物において、担体は、場合によって、浸透促進剤及び／又は好適な湿潤剤を、場合によって少ない割合で任意の性質の好適な添加剤と組み合わせて含んでもよく、添加剤は皮膚に大きく有害な効果を生じない。前記添加剤は、皮膚への投与を促進し、及び／又は所望の組成物を調製するために役立ち得る。これらの組成物は、様々な方法、例えば経皮貼布として、染み（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、軟膏として投与されてもよい。本発明の化合物は、当分野でこの方法で投与するために用いられる方法及び製剤によって、吸入又は通気によって投与されてもよい。したがって、一般的に、本発明の化合物は、溶液、懸濁液、又は乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。
【００４１】
投与しやすさ及び用量の均一性のために、単位剤形で前述の医薬組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書において使用される場合、単位剤形は、単位用量として好適な物理的に別々の単位を表し、それぞれの単位は、必要な医薬担体とともに所望の治療効果をもたらすために計算された、所定の量の活性成分を含有する。このような単位剤形の例は、錠剤（分割錠剤又はコートされた錠剤を含む）、カプセル、丸薬、粉末、パケット、ウエハ、座薬、注射可能な溶液又は懸濁液など、及びその分割された複数である。
【００４２】
感染症の当業者は、以下に示す試験結果から有効量を決定することができるだろう。一般的に、有効な日々の量は、０．０１ｍｇ／体重ｋｇから５０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは０．１ｍｇ／体重ｋｇから１０ｍｇ／体重ｋｇであると考えられる。必要な用量を、一日を通して適切な間隔で２回、３回、４回、又はそれ以上のサブ用量として投与することも適切である。前記サブ用量は、例えば、単位剤形あたり１から１０００ｍｇ、特に５から２００ｍｇの活性成分を含有する単位剤形として製剤化されてもよい。
【００４３】
正確な投与の用量及び頻度は、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、年齢、体重及び特定の患者の一般的な物理的条件、並びにその他の投薬に依存し、個々は当業者によく知られているとおり摂取されてもよい。さらに、有効量は、治療される対象の応答によって、及び／又は本発明の化合物を処方する医者の評価によって低下又は増加してもよいことは明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は指針に過ぎず、あらゆる範囲において本発明の範囲又は使用を限定することを意図しない。
【実施例】
【００４４】
式（Ｉ）の化合物の調製
２の調製
【００４５】
【化３】
0006298998.tif 000004
【００４６】
Ｈ２Ｏ（３２０ｍＬ）中の１（２０ｇ、１７６．９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、室温でＢｒ２（２４ｍＬ、４６６．８ｍｍｏｌ、２．６当量）を加えた。混合物を６０℃で１５時間撹拌し、続けて室温でＮＨ４ＯＨ（５０ｍＬ）を加えた。その後、ＨＣｌ（６Ｎ水溶液）をｐＨ＝５までゆっくりと加え、混合物を酢酸エチル（３×８００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で濃縮して２（１６ｇ）を得た。
【００４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  ｐｐｍ  １２．５６（ｍ，１Ｈ）、１２．３１（ｍ，１Ｈ）
【００４８】
３の調製
【００４９】
【化４】
0006298998.tif 000005
【００５０】
ＰＯＣｌ３（８０ｍＬ）中の２（１６ｇ、８３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＰＣｌ５（３６．１ｇ、１７３．４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジエチルアニリン（３５ｍＬ、２２１．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１２０℃で５時間撹拌し、その後過剰の溶媒を減圧下で除去した。残渣の３（８０ｇ）を、さらなる精製なしに次の工程で直接使用した。
【００５１】
４の調製
【００５２】
【化５】
0006298998.tif 000006
【００５３】
中間体４を、バレルアルデヒドの代わりにブチルアルデヒドを用いて９の調製に従って合成した。
【００５４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ｐｐｍ  ８．０７（ｓ，３Ｈ）、４．８５（ｂｒ，１Ｈ）、３．５７〜３．４５（ｍ，２Ｈ）、３．１４〜３．１２（ｍ，１Ｈ）、１．７０〜１．６４（ｍ，２Ｈ）、１．５６〜１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．３８〜１．３０（ｍ，２Ｈ）、０．９０〜０．８０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）
【００５５】
５の調製
【００５６】
【化６】
0006298998.tif 000007
【００５７】
ＣＨ２ＣＬ２（３００ｍＬ）中の３（８０ｇ粗生成物、８２．８ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、室温で４（１２．８ｇ、８２．８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３４．７ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５時間撹拌した。反応物を水（４００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、その後乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去した。残渣を石油エーテルと酢酸エチル勾配を使用するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーで精製した。最も優れた画分を溜め、溶媒を減圧下で除去して５（３ｇ）を得た。
【００５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  ｐｐｍ  ６．８５（ｄ，１Ｈ）、４．３５（ｍ，１Ｈ）、３．８３（ｍ，２Ｈ）、２．０（ｍ，１Ｈ）、１．７１（ｍ，３Ｈ）、１．３８（ｍ，２Ｈ）、０．９８（ｔ，３Ｈ）
【００５９】
６の調製
【００６０】
【化７】
0006298998.tif 000008
【００６１】
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の５（３ｇ、１１．３２ｍｍｏｌ、１当量）及びＮＨ４ＯＨ（２０ｍＬ）を密封されたチューブ内に入れ、１００℃に１８時間加熱した。室温まで冷却した後、反応物を水で希釈し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２とＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ勾配を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。最も優れた画分を溜め、濾液の溶媒を減圧下で除去して６を得た（１．５７ｇ）。
【００６２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  ｐｐｍ  ５．６５（ｄ，１Ｈ）、５．２０（ｂｒｓ、２Ｈ）、４．３５（ｍ，１Ｈ）、３．６５（ｍ，２Ｈ）、２．０（ｍ，１Ｈ）、１．６０（ｍ，３Ｈ）、１．４５（ｍ，２Ｈ）、０．９３（ｔ，３Ｈ）
【００６３】
８の調製
【００６４】
【化８】
0006298998.tif 000009
【００６５】
ジオキサン（４８ｍＬ）中の６（１．２ｇ、４．９ｍｍｏｌ）、７（４．１３ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）及びｔ−ＢｕＯＫ（１．６ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロウェーブ中の１２０℃で１時間撹拌した。溶液の固体を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を水（調節剤として０．０５％のＮＨ３水溶液を含有）とアセトニトリルの勾配を使用する分取高速液体クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム）で精製した。所望の画分を溜め、溶媒を減圧下で除去して８（１００ｍｇ）を得た。
【００６６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）：  ｐｐｍ  ８．５６（ｄ，１Ｈ）、７．７３（ｄ，１Ｈ）、５．６９（ｓ，２Ｈ）、４．５４（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｓ，３Ｈ）、４．０６（ｓ，３Ｈ）、３．６５（ｍ，２Ｈ）、１．７５（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）、０．９４（ｔ，３Ｈ）
【００６７】
９の調製の全体
【００６８】
【化９】
0006298998.tif 000010
【００６９】
中間体９ａの調製
【００７０】
【化１０】
0006298998.tif 000011
【００７１】
ＴＨＦ（１Ｌ）中のバレルアルデヒド（４３ｇ、５００ｍｍｏｌ）の溶液に、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチレン）トリフェニルホスホラン（２００ｇ、５３２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を石油エーテルで希釈し、濾過した。濾液の溶媒を減圧下で除去し、残渣を石油エーテルと石油エーテル中の３％酢酸エチルの勾配を使用するシリカクロマトグラフィーで精製して、無色の油として９ａ（９０ｇ）を得た。
【００７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  ｐｐｍ  ６．８１〜６．７７（ｍ，１Ｈ）、５．６８〜５．６４（ｔｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．１１〜２．０９（ｍ，２Ｈ）、１．４０６（ｓ，９Ｈ）、１．３８〜１．２６（ｍ，４Ｈ）、０．８５〜０．８１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
【００７３】
化合物９ｂの調製
【００７４】
【化１１】
0006298998.tif 000012
【００７５】
ＴＨＦ（８００ｍＬ）中の（Ｓ）−（−）−Ｎ−ベンジル−１−フェニルエチルアミン（１６５ｇ、７８１ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、ｎ−ブチルリチウム（２９０ｍＬ、７２５ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、その後ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の９ａ（９０ｇ、４８８．４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を−７８℃で２時間撹拌した。混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチし、室温まで温めた。生成物を酢酸エチルと水とで分配した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去した。残渣を石油エーテル中の５％酢酸エチルで溶離するカラムクロマトグラフィーで精製して、無色の油９ｂ（１３２ｇ）を得た。
【００７６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  ｐｐｍ  ７．３６〜７．１６（ｍ，１０Ｈ）、３．７５〜３．７０（ｍ，２Ｈ）、３．４３〜３．３９（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．３３〜３．１５（ｍ，１Ｈ）、１．８６〜１．８０（ｍ，２Ｈ）、１．４７〜１．３７（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｓ，９Ｈ）、１．２６〜１．１７（ｍ，７Ｈ）、０．８３〜０．７９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
【００７７】
９ｃの調製
【００７８】
【化１２】
0006298998.tif 000013
【００７９】
９ｂ（１３０ｇ、３２８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５Ｌ）中に溶解し、ＬｉＡｌＨ４（２０ｇ、５２６ｍｍｏｌ）を少量０℃で加えた。得られた混合物を同じ温度で２時間撹拌し、その後室温まで温めた。混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチした。生成物を酢酸エチルと水で分配した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥し、蒸発させた。組み合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、固体を濾過により除去し、濃縮して粗生成物９ｃ（１００ｇ）を得て、これをさらなる精製なしで次の工程で使用した。
【００８０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：  ｐｐｍ  ７．３３〜７．１４（ｍ，１０Ｈ）、３．９１〜３．８６（ｍ，１Ｈ）、３．８０〜３．７７（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．６３〜３．６０（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４３〜３．４２（ｍ，１Ｈ）、３．１５〜３．１０（ｍ，１Ｈ），２．７０〜２．６３（ｍ，２Ｈ）、１．６５〜１．２８（ｍ，１０Ｈ）、０．８９〜０．８１（ｍ，３Ｈ）
【００８１】
９の調製
【００８２】
【化１３】
0006298998.tif 000014
【００８３】
９ｃ（３８ｇ、１１６．７５ｍｍｏｌ）及びメタノール（２００ｍＬ）中の１０％Ｐｄ／Ｃの溶液を、５０℃で２４時間、５０ｐｓｉ水素下で水素化した。反応混合物を濾過し、溶媒を蒸発させて９を得た。
【００８４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ｐｐｍ  ８．０４（ｓ，３Ｈ）、３．６０〜３．４９（ｍ，２Ｈ）、３．１６〜３．１５（ｍ，１Ｈ）、１．７１〜１．６７（ｍ，２Ｈ）、１．６０〜１．５５（ｍ，２Ｈ）、１．３３〜１．２６（ｍ，４Ｈ）、０．９０〜０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）
【００８５】
１０の調製
【００８６】
【化１４】
0006298998.tif 000015
【００８７】
ＣＨ２Ｃｌ２（５４ｍＬ）中の３（２１．６ｇ粗生成物、２２．１ｍｍｏｌ）の撹拌された溶液に、室温で９（２．９ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９．２ｍｌ、６６．３ｍｍｏｌ）を加えた。その後、混合物を同じ温度で終夜撹拌した。反応物を水（２００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を水とブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で濃縮した。粗生成物を石油エーテルと酢酸エチルの勾配を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。最も優れた画分を溜め、溶媒を減圧下で除去して１０（０．９１ｇ）を得た。
【００８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  ｐｐｍ  ６．７１（ｄ，１Ｈ）、４．３６（ｍ，１Ｈ）、３．８３（ｍ，２Ｈ）、２．０４（ｍ，２Ｈ）、１．７０（ｍ，２Ｈ）、１．３５（ｍ，４Ｈ）、０．９２（ｔ，３Ｈ）
【００８９】
１１の調製
【００９０】
【化１５】
0006298998.tif 000016
【００９１】
ＴＨＦ（７ｍＬ）中の１０（０．９１ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１当量）及び水酸化アンモニウム（７ｍＬ）を、密閉されたチューブに入れ、１１０℃に１２時間加熱した。室温まで冷却した後、反応物を水で希釈し、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタン中の１０％メタノールを使用する分取薄層シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１７０ｍｇの１１を得た。
【００９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  ｐｐｍ  ５．６７（ｄ，１Ｈ）、５．２９（ｄ，２Ｈ）、４．１７（ｍ，１Ｈ）、３．６６（ｍ，２Ｈ）、２．５１（ｂｒｓ，１Ｈ）、１．８８（ｍ，１Ｈ）、１．５５（ｍ，３Ｈ）、１．２５（ｍ，４Ｈ）、０．８３（ｔ，３Ｈ）
【００９３】
１２の調製
【００９４】
【化１６】
0006298998.tif 000017
【００９５】
ＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中の１１（１７０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）及びナトリウムメトキシド（６９ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の混合物を、撹拌しながらマイクロウェーブ中で１００℃に１時間加熱した。固体を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（カラムＣ１８、０．０５％ＨＣｌを含有する、水とアセトニトリルの勾配を使用）で精製した。最も優れた画分を溜め、真空下で濃縮して１２を得た。
【００９６】
ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２５６（Ｍ＋Ｈ）
【００９７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）  ｐｐｍ  ４．４９（ｍ，１Ｈ）、４．０２（ｓ，３Ｈ）、３．６３（ｍ，２Ｈ）、１．８４（ｍ，２Ｈ）、１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．３３（ｍ，４Ｈ）、０．９３（ｔ，３Ｈ）
【００９８】
１３の調製
【００９９】
【化１７】
0006298998.tif 000018
【０１００】
中間体１３を、５を調製する方法に従って調製した。
【０１０１】
１４の調製
【０１０２】
【化１８】
0006298998.tif 000019
【０１０３】
中間体１４を、６を調製する方法に従って調製した。
【０１０４】
１５の調製
【０１０５】
【化１９】
0006298998.tif 000020
【０１０６】
密閉されたチューブ内で、無水ＴＨＦ（１ｍＬ）中の１４（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（０．５２ｍＬ、５ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（８１４．５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で２４時間撹拌した。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を水及びブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を石油エーテルと酢酸エチルの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、黄色の油である１５を得た（６７．７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）。
【０１０７】
１６の調製
【０１０８】
【化２０】
0006298998.tif 000021
【０１０９】
１６を、１５を調製する方法に従って調製した。
【０１１０】
【表１Ａ】
0006298998.tif 000022
【表１Ｂ】
0006298998.tif 000023
【表１Ｃ】
0006298998.tif 000024
【表１Ｄ】
0006298998.tif 000025
【０１１１】
分析方法
全ての化合物を、以下のＬＣ−ＭＳ法に従うＬＣ−ＭＳによって特徴付けした。
【０１１２】
【表２】
0006298998.tif 000026
【０１１３】
方法Ｂ
０．３４３ｍＬ／分の流速を有するＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ（架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ）の逆相ＵＰＬＣ。２つの移動相（移動相Ａ：９５％の７ｍＭ酢酸アンモニウム／５％のアセトニトリル；移動相Ｂ：１００％のアセトニトリル）を使用して、８４．２％のＡ及び１５．８％のＢ（０．４９分間保持）から１０．５％のＡ及び８９．５％のＢの勾配条件に２．１８分で動作させ、１．９４分間保持し、０．７３分で最初の条件に戻し、０．７３分間保持した。２μＬの注入体積を使用した。コーン電圧は、正及び負イオン化モードで２０Ｖであった。質量スペクトルを、０．１秒の走査間遅延を使用して０．２秒で１００から１０００まで走査して取得した。
【０１１４】
【表３】
0006298998.tif 000027
【０１１５】
【表４】
0006298998.tif 000028
【０１１６】
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
（生物学的アッセイの説明）
ＴＬＲ７及びＴＬＲ８の活性の評価
ヒトＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８を活性化させる化合物の能力を、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８発現ベクター及びＮＦＫＢ−ｌｕｃレポーター構築で一時的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を使用する細胞レポーターアッセイ（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ａｓｓａｙ）で評価した。
【０１１７】
簡潔には、ＨＥＫ２９３細胞を培地（１０％のＦＣＳ及び２ｍＭのグルタミンを補ったＤＭＥＭ）で成長させた。１０ｃｍのディッシュ中の細胞のトランスフェクションのために、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで分離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７又はＴＬＲ８プラスミド（７５０ｎｇ）、ＮＦＫＢ−ｌｕｃプラスミド（３７５ｎｇ）及びトランスフェクション試薬のミックスでトランスフェクトし、５％のＣＯ２加湿雰囲気下、３７℃で終夜培養した。その後、トランスフェクトした細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで分離し、ＰＢＳ中で洗浄し、１．６７×１０５細胞／ｍＬの密度に培地を再懸濁した。その後、３０マイクロリットルの細胞を、４％のＤＭＳＯ中の１０μＬの化合物が既に存在する３８４ウェルプレート内でそれぞれのウェルに分注した。続けて３７℃、５％のＣＯ２で６時間培養し、ルシフェラーゼ活性を、それぞれのウェルに１５μＬのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加えることによって測定し、読み出しをＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で行った。用量反応曲線を４回行った測定から生成した。アッセイの標準偏差より少なくとも２倍の効果を誘起する濃度として定義される、それぞれの化合物の最小有効濃度（ＬＥＣ）の値を測定した。
【０１１８】
化合物の毒性を、３８４ウェルプレートにＣＭＶ−ＴＬＲ７構築のみ（１．６７×１０５細胞／ｍＬ）でトランスフェクトした、ウェルごとに３０μＬの細胞を有する同様の希釈系列を使用して並行して測定した。細胞の生存能力を、ウェルごとに１５μＬのＡＴＰ  ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加えることによって、３７℃、５％のＣＯ２で６時間培養した後に測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読んだ。データをＣＣ５０として報告した。
【０１１９】
並行して、ＮＦＫＢ−ｌｕｃレポーター構築のみ（１．６７×１０５細胞／ｍＬ）でトランスフェクトした、ウェルごとに３０μＬの細胞を有する、化合物の同様の希釈系列を使用した（４％のＤＭＳＯ中の１０μＬの化合物）。３７℃、５％のＣＯ２で６時間培養した後、ルシフェラーゼの活性を、それぞれのウェルに１５μｌのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加えることによって測定し、読み出しをＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で行った。カウンタースクリーン（ｃｏｕｎｔｅｒｓｃｒｅｅｎ）データをＬＥＣとして報告する。
【０１２０】
ＩＳＲＥプロモータ成分の活性化
ＩＦＮ−Ｉを誘起する化合物の可能性を、ＰＢＭＣからの調節された媒体によるインターフェロン活性化応答配列（ＩＳＲＥ）の活性化を測定することによって評価した。配列ＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＣＴのＩＳＲＥ配列は、ＳＴＡＴ１−ＳＴＡＴ２−ＩＲＦ９転写因子に高い応答性を有し、その受容体ＩＦＮＡＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＰＴ３３７２−５Ｗ）にＩＦＮ−Ｉが結合した際に活性化される。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（ｒｅｆ．６３１９１３）からのプラスミドｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃは、５コピーのこのＩＳＲＥ配列、続けて蛍ルシフェラーゼＯＲＦを含有する。ｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃで安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９７細胞株（ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ）を、調節されたＰＢＭＣ細胞培養媒体のプロファイルに定着させた。
【０１２１】
簡潔には、ＰＢＭＣを、標準Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離手順を使用して、少なくとも２人のドナーの軟膜から調製した。単離したＰＢＭＣを１０％のヒトＡＢ血清を補ったＲＰＭＩ媒体に再懸濁し、２×１０５の細胞／ウェルを、化合物を含有する３８４ウェルプレートに分注した（７０μＬの合計体積）。終夜培養した後、１０μＬの上清を、３０μＬ中５×１０３のＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞／ウェルを含有する３８４ウェルプレート（前日に仕上げた）に移動した。２４時間培養した後、ＩＳＲＥ配列の活性化を、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用するルシフェラーゼ活性を分析することによって測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定した。ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞へのそれぞれの化合物の刺激活性を、アッセイの標準偏差より少なくとも２倍のルシフェラーゼ活性をもたらす、ＰＢＭＣに適用された化合物の濃度として定義されるＬＥＣ値として報告した。同様に、ＬＥＣは、所定の量のＰＢＭＣ培養媒体の移動に対するＩＳＲＥ活性化の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を、標準対照化合物として使用した。
【０１２２】
【表５Ａ】
0006298998.tif 000029
【表５Ｂ】
0006298998.tif 000030
【表５Ｃ】
0006298998.tif 000031
【表５Ｄ】
0006298998.tif 000032
【０１２３】
全ての化合物は、最も高い試験濃度までで毒性を示さなかった。全ての化合物は、上記のＨＥＫ  ２９３  ＮＦ−ｋＢカウンタースクリーンアッセイにおいて、活性（ＬＥＣ＞２５μＭ）を示さなかった。