(57)【要約】  本発明は、ｎが１以上の整数であり；Ｒｂおよび各Ｒｎが独立に水素原子、Ｃ１−Ｃ６アリールアルキル基またはＣ１−Ｃ６アルキル基（アリール基、−ＣＯＯＨ、Ｃ１−Ｃ６−ＣＯＯ−（アルキル）、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、ヘテロアリール、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）（ＮＨ２）、Ｃ１−Ｃ６−Ｓ−（アルキル）、−ＯＨまたはフェノールで置換されている、または置換されてない）であり；ＲａがＮ−保護基であり；ＲｃがＯＲｄ基であり、ここで、ＲｄはＣ１−Ｃ６アルキル基または−ＮＲｅＲｆ基であり、ここで、ＲｅおよびＲｆは独立にＮ−保護基である、式（Ｉ）の化合物の合成方法に関する。2010522144.tif 000041
2010522144.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（Ｉ）：
【化１】
2010522144.tif 000024
［式中、
ｎは、１以上の整数であり、好ましくは１〜１００を含み、より好ましくは１〜５０を含み、さらにより好ましくは１または２であり；
Ｒｂおよび各Ｒｎは、互いに独立に水素原子、アリール（Ｃ１−Ｃ６アルキル）基またはＣ１−Ｃ６アルキル基（アリール基、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、ヘテロアリール、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）（ＮＨ２）、−Ｓ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＯＨまたはフェノールで置換されている、または置換されてない）を表し、ここでＮＨ２、ＮＨ、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＳＨの官能基は、有利には１以上の同一または異なるＮ−保護基またはＯ−保護基で保護され、かつ、Ｒａとは異なり；
Ｒａは、Ｎ−保護基を表し；
Ｒｃは、−ＯＲｄ基を表し、ここで、ＲｄはＣ１−Ｃ６アルキル基または−ＮＲｅＲｆ基を表し、ここで、ＲｅおよびＲｆは互いに独立にＮ−保護基を表す］
の化合物を合成する方法であって、下記工程：
（ａ）塩基の存在下で、いずれの溶媒も用いずに、下式（ＩＩ）：
【化２】
2010522144.tif 000025
（式中、ＲａおよびＲｂは先に定義した通りである）
の化合物と、下式（ＩＩＩ）：
【化３】
2010522144.tif 000026
（式中、ｎ、ＲｎおよびＲｃは先に定義した通りである）
の化合物ならびにその薬学上許容される塩、好ましくは、塩化物、酢酸塩およびトリフルオロ酢酸塩とを反応させること
を含んでなる、方法。
【請求項２】
ｎが１であり、
工程（ａ）が、塩基の存在下で、いずれの溶媒も用いずに、式（ＩＩ）の化合物と下式（ＩＩＩ−１）：
【化４】
2010522144.tif 000027
（式中、Ｒ１およびＲｃは先に定義した通りである）
の化合物とを反応させて、下式（Ｉ−１）：
【化５】
2010522144.tif 000028
（式中、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｎは先に定義した通りである）
の化合物を得ることからなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）が、ボールミルの手段により行われる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
塩基が、炭酸塩、特に、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムおよび炭酸水素セシウム、ならびに炭酸ナトリウム、炭酸カリウムおよび炭酸セシウムからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
Ｒｂおよび各Ｒｎが、水素、−ＣＨ３、ベンジル基、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨＣＨ３Ｃ２Ｈ５、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（ＮＨ）（ＮＨ２）、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、イミダゾリルメチル、プロピル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、インドール−２−イルメチル、ｐ−メチルフェノール、イソプロピル基からなる群から独立に選択され、これらの基のＮＨ２、ＮＨ、ＣＯＯＨ、ＳＨおよびＯＨ官能基が、有利には１以上の同一または異なるＯ−保護基および／またはＮ−保護基で保護され、かつ、Ｒａとは異なる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
Ｒａ、ＲｅおよびＲｆが、互いに独立に、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ニトロ−ベラトリルオキシカルボニルからなる群から選択され；
Ｒｂが、イソプロピル、ベンジルおよび−ＣＨ２ＣＯＯｔ−Ｂｕからなる群から選択され；
各Ｒｎが、互いに独立に、メチル、ベンジルおよび−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２からなる群から選択され；
Ｒｄが、メチルおよびテルチオブチルからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
化合物（ＩＩ）が、下式（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）および（ＩＩ−ｃ）の化合物：
【化６】
2010522144.tif 000029
からなる群から選択され；
化合物（ＩＩＩ）が、下式（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）および（ＩＩＩ−ｅ）の化合物：
【化７】
2010522144.tif 000030
からなる群から選択される、請求項２〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
式（ＩＩ）の化合物が、下式（ＩＩ−２）：
【化８】
2010522144.tif 000031
（式中、Ｒａは請求項１に定義した通りである）
を有し、
式（ＩＩＩ）の化合物が、下式（ＩＩＩ−２）：
【化９】
2010522144.tif 000032
を有し、かつ、
式（Ｉ）の化合物が、下式（Ｉ−２）：
【化１０】
2010522144.tif 000033
（式中、Ｒａは請求項１に定義した通りである）
を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
式（ＩＩ−２）の化合物が、下記の一連の工程：
１）下式（ＩＶ）：
【化１１】
2010522144.tif 000034
の化合物のアミン基をＮ−保護基Ｒａで保護して、下式（Ｖ）：
【化１２】
2010522144.tif 000035
の化合物を形成させること：
２）式（Ｖ）の化合物を、塩基の存在下でハロゲン化ベンジルと反応させて、下式（ＶＩ）：
【化１３】
2010522144.tif 000036
（式中、Ｒａは先に定義した通りである）
の化合物を得ること；
３）式（ＶＩ）の化合物のアミン基をＮ−保護基Ｒｇで保護して、下式（ＶＩＩ）：
【化１４】
2010522144.tif 000037
（式中、ＲａおよびＲｇは先に定義した通りである）
の化合物を形成させること；
４）式（ＶＩＩ）の化合物を、下式（ＶＩＩＩ）：
【化１５】
2010522144.tif 000038
（式中、ＲａおよびＲｇは先に定義した通りである）
の化合物へと還元すること；
５）式（ＶＩＩＩ）の化合物を、ＤＭＦおよび塩化オキサリルとの反応により、式（ＩＩ−２）の化合物へと環化すること
を含んでなる方法により製造される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＲａおよびＲｇが、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
更に以下の一連の工程：
（ｂ）工程（ａ）で得られた式（Ｉ−２）の化合物と酸とを反応させて、下式（Ｉ−３）：
【化１６】
2010522144.tif 000039
の化合物を形成させること；
（ｃ）式（Ｉ−３）の化合物と塩基とを反応させて、下式（Ｉ−４）：
【化１７】
2010522144.tif 000040
の化合物を形成させること
を含んでなる、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、いずれの溶媒も用いずにペプチドを合成する方法に関する。
【０００２】
ペプチドは、それらの高い治療指数と低い毒性のため、これまで薬学上有効な成分と考えられてきた。それらのバイオアベイラビリティを高める新規な投与系の進展のために、治療用ペプチドの市場はこの先何年かで急速に発展すると思われる。
【０００３】
しかし、これらの化合物を合成するための有効な方法の必要性は常にある。十分確立されている生産手順（溶液中、固相、組換えによる）にもかかわらず、合成、特に固相支持体上での合成、に必要な大量の溶媒に伴う多くの開発上の問題がなお存在する（大きなペプチドでは２，０００〜５，０００ｋｇ）。
【０００４】
現在の環境問題が深刻なため、「グリーン化学」の分野がますます広がっている。代替原料および無毒な試薬の使用、天然プロセスの使用、代替溶媒の使用、より安全な化学製品の設計、他の反応条件の開発、エネルギー消費の最小化など、この課題のいくつかの分野が出現している。
【０００５】
特に有効な分野は、揮発性有機溶媒または塩素系溶媒に取って代わるよう、また、溶媒廃棄物を処理または再循環する問題を解決するために、水性、イオン性、フッ素系または超臨界液などの代替溶媒にある。
【０００６】
別のアプローチは、溶媒の不在下で化学反応を起こすことからなる。固体の混合または粉砕などの技術が有効であることが分かっている。しかしながらやはり、これらの生体分子の重要性にもかかわらず、ペプチドまたはアミノ酸合成などの分野へこれらの技術は適用されてない。
【０００７】
本発明者らは、驚くべきことに、いずれの溶媒も用いない条件下でペプチドを合成するための新規な経路を見出した。
【０００８】
驚くべきことに、本発明者らは、ウレタンにより保護されたアミノ酸のカルボキシ無水物（ウレタン保護Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ））とアミノ酸またはアミノエステルとのカップリングを達成し、しかもこれらの化合物は全て、室温のボールミル（ball milling）条件下で固体の形態のままである。
【０００９】
より具体的には、本発明は、下式（Ｉ）：
【化１】
2010522144.tif 000003
［式中、
ｎは、１以上の整数であり、有利には１〜１００を含み、より有利には１〜５０を含み、さらにより有利には１または２に等しく；
Ｒｂおよび各Ｒｎは、互いに独立に水素原子、アリール（Ｃ１−Ｃ６アルキル）基またはＣ１−Ｃ６アルキル基（アリール基、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＣＯＮＨ２、−ＳＨ、ヘテロアリール、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）（ＮＨ２）、−Ｓ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＯＨまたはフェノール基で置換されている、または置換されていない）を表し、−ＣＯＯＨ、ＮＨ２、ＯＨ、ＳＨおよびＮＨの基は所望により１以上の同一または異なるＮ−保護基またはＯ−保護基で保護され、かつ、Ｒａとは異なり；有利にはこれらのＮ−保護基またはＯ−保護基はＲａ基を除去するための条件下で安定であり；
ＲａはＮ−保護基を表し；
Ｒｃは−ＯＲｄ基を表し、ここで、ＲｄはＣ１−Ｃ６アルキル基または−ＮＲｅＲｆ基を表し、ここで、ＲｅおよびＲｆは互いに独立にＮ−保護基を表す］
の化合物を合成する方法であって、
（ａ）塩基の存在下で、溶媒を用いずに、下式（ＩＩ）：
【化２】
2010522144.tif 000004
（式中、ＲａおよびＲｂは先に定義した通りである）
の化合物と下式（ＩＩＩ）：
【化３】
2010522144.tif 000005
（式中、ｎ、ＲｎおよびＲｃは先に定義した通りである）
の化合物ならびにその薬学上許容される塩、好ましくは、塩化物、酢酸塩およびトリフルオロ酢酸塩とを反応させることからなる工程、を含むことを特徴とする方法に関する。
【００１０】
本発明の意味において、「溶媒を用いない」とは、反応が溶媒の不在下で起こることを意味する。本発明による溶媒は、試薬を可溶化するが、反応には直接関与しない製品である。よって、本発明の範囲内で、塩基は溶媒ではない。
【００１１】
さらに、本発明による方法では、使用される試薬は全て固体状態である。これは特に式ＩＩおよび式ＩＩＩの化合物ならびに塩基の場合である。よって、この反応は固体状態で起こり、溶液中で起こるのではない。有利には、これらの試薬は、ボールミルにより得られるような微粉砕された固体状である。
【００１２】
この種の反応の利点は、溶媒の使用を抑制すること（グリーン化学）だけでなく、反応、処理の適用を促進し、極めて純粋な生成物を取得可能とすることでもある。
【００１３】
本発明の意味において「Ｃ１−Ｃ６アルキル基」とは、１〜６個の炭素原子を有する任意の直鎖または分枝アルキル基、特に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル基を意味する。有利には、これはメチルまたはｔ−ブチル基である。
【００１４】
本発明の意味において「アリール基」とは、５〜８個の炭素原子を有する１以上の芳香環（並んで配置されても縮合していてもよい）を意味する。特に、アリール基は単環式または二環式基、好ましくは、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチルまたはインダニル基である。有利には、これはフェニル基である。
【００１５】
本発明の意味において「ヘテロアリール基」とは、例えば硫黄、窒素または酸素原子などの１または２個のヘテロ原子を含む３〜９原子を有する任意の炭化水素芳香族基を意味する。本発明によるヘテロアリール基は、１または２個の縮合環または並んで配置された環を伴って形成していてもよい。ヘテロアリール基の例はフリル、イソキサジル、ピリジル、ピリミジル、ベンズイミダゾール、ベンズオキサゾール、ベンゾチアゾール基である。
【００１６】
本発明の意味において「Ｎ−保護基」とは、Greene, "Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981))およびHarrisonら "Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1-8 (J. Wiley & Sons, 1971-1996)に記載されているＮ−保護基など、ＮＨ２基を望まない反応から保護する任意の置換基を意味する。Ｎ−保護基には、カルバメート、アミド、Ｎ−アルキル化誘導体、アミノアセタール誘導体、Ｎ−ベンジル化誘導体、イミン誘導体、エナミン誘導体およびＮ−ヘテロ原子誘導体が含まれる。特に、Ｎ−保護基には、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、フェニルスルホニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジル−オキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル（ｔｒｏｃ）、アリルオキシカルボニル（ａｌｌｏｃ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ｆｍｏｃ）、トリフルオロアセチル基、ベンジルカルバメート（置換型または非置換型）などが含まれる。Ｎ−保護基としては、ｂｏｃまたはｃｂｚのいずれかが、比較的除去が容易なために使用に有利である（例えば、ｂｏｃの場合には例えばトリフルオロ酢酸または酢酸エチル中の塩酸などの中程度の酸を用い、あるいはｃｂｚの場合には触媒的水素化による）。有利には、これはｂｏｃ基である。
【００１７】
本発明の意味において「Ｏ−保護基」とは、Greene, "Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981))およびHarrisonら "Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1-8 (J. Wiley & Sons, 1971-1996)に記載されているＯ−保護基など、ヒドロキシル基またはカルボキシル基、すなわち反応性酸素原子を望まない反応から保護する任意の置換基を意味する。Ｏ−保護基には、メチルまたはアルキルエーテル（置換型または非置換型）、例えば、メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、ｔ−ブチル、ベンジルおよびトリフェニルメチル、ベンジルエーテル（置換型または非置換型）、テトラヒドロピラニルエーテル、アリルエーテル、置換エチル（例えば２，２，２−トリクロロエチル）、エーテル、シリルエーテルまたはアルキルシリルエーテル（例えばトリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリルおよびｔ−ブチルジフェニルシリル）、複素環式エーテル、ならびにヒドロキシル基と、例えばｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルまたはメチルなどのカルボン酸、炭酸塩、特に、炭酸ベンジルまたは炭酸ハロアルキル、酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩などとの反応により生成されるエステルが含まれる。有利には、これはベンジル基である。
【００１８】
次に、式Ｉの化合物を、その−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＮＨおよび−ＣＯＯＨ官能基が保護されてないペプチドを得るために、脱保護することができる。
【００１９】
本発明の有利な実施形態では、ｎは１に等しく、工程（ａ）は、塩基の存在下で溶媒を用いずに式（ＩＩ）の化合物を下式（ＩＩＩ−１）：
【化４】
2010522144.tif 000006
（式中、Ｒ１およびＲｃは先に定義した通りである）
の化合物と反応させて、下式（Ｉ−１）：
【化５】
2010522144.tif 000007
（式中、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｎは先に定義した通りである）
の化合物を得ることからなる。
【００２０】
工程（ａ）は有利にはボールミルの手段により行う。
【００２１】
式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の新しく調製された出発生成物から工程（ａ）を行うのが特に有利である。
【００２２】
塩基は固体塩基であり、有利には、炭酸塩、特に、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムおよび炭酸水素セシウム、ならびに炭酸ナトリウム、炭酸カリウムおよび炭酸セシウムからなる群から選択される。有利には、これは炭酸水素ナトリウムである。
【００２３】
Ｒｂ置換基および各Ｒｎ置換基は、水素、−ＣＨ３、ベンジル基、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨＣＨ３Ｃ２Ｈ５、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（ＮＨ）（ＮＨ２）、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、イミダゾリルメチル、プロピル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、インドール−２−イルメチル、ｐ−メチルフェノール、イソプロピル基からなる群から独立に選択される。先に示したように、これらの基のＮＨ２、ＮＨ、ＣＯＯＨ、ＳＨおよびＯＨ官能基は有利には１以上の同一または異なるＯ保護基および／またはＮ−保護基で保護され、かつ、Ｒａとは異なる。
【００２４】
有利には、これらのＮ−保護基および／またはＯ−保護基は、Ｒａ基を除去するための条件下で安定である。
【００２５】
本発明の有利な実施形態では、
Ｒａ、ＲｅおよびＲｆは、互いに独立に、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ニトロ−ベラトリルオキシカルボニルからなる群から選択され、かつ／または
Ｒｂは、イソプロピル、ベンジルおよび−ＣＨ２ＣＯＯｔ−Ｂｕからなる群から選択され、かつ／または
各Ｒｎは、互いに独立に、メチル、ベンジルおよび−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２からなる群から選択され、かつ／または
Ｒｄは、メチルおよびテルチオブチルからなる群から選択される。
【００２６】
本発明の有利な実施形態では、化合物（ＩＩ）は、下式（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）および（ＩＩ−ｃ）：
【化６】
2010522144.tif 000008
の化合物からなる群から選択され、
化合物（ＩＩＩ）は、下式（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）および（ＩＩＩ−ｅ）：
【化７】
2010522144.tif 000009
の化合物からなる群から選択される。
【００２７】
本発明の別の有利な実施形態では、
式（ＩＩ）の化合物は下式（ＩＩ−２）：
【化８】
2010522144.tif 000010
（式中、Ｒａは先に定義した通りである）
を有し、
式（ＩＩＩ）の化合物は下式（ＩＩＩ−２）：
【化９】
2010522144.tif 000011
を有し、かつ、
式（Ｉ）の化合物は下式（Ｉ−２）：
【化１０】
2010522144.tif 000012
（式中、Ｒａは先に定義した通りである）
を有する。
【００２８】
式（ＩＩ−２）の化合物は、以下の一連の工程：
１）下式（ＩＶ）：
【化１１】
2010522144.tif 000013
の化合物のアミン基をＮ−保護基Ｒａで保護して下式（Ｖ）：
【化１２】
2010522144.tif 000014
の化合物を形成させること；
２）式（Ｖ）の化合物を、塩基、有利には炭酸セシウムの存在下でハロゲン化ベンジルと反応させて、下式（ＶＩ）：
【化１３】
2010522144.tif 000015
（式中、Ｒａは先に定義した通りである）
の化合物を得ること；
３）式（ＶＩ）の化合物のアミン基をＮ−保護基Ｒｇで保護して、下式（ＶＩＩ）：
【化１４】
2010522144.tif 000016
（式中、ＲａおよびＲｇは先に定義した通りである）
の化合物を形成させること；
４）式（ＶＩＩ）の化合物を下式（ＶＩＩＩ）：
【化１５】
2010522144.tif 000017
（式中、ＲａおよびＲｇは先に定義した通りである）
の化合物へと還元すること；
５）式（ＶＩＩＩ）の化合物を、ＤＭＦおよび塩化オキサリルとの反応により式（ＩＩ−２）の化合物へと環化すること
を含んでなる方法により製造することができる。
【００２９】
置換基ＲａおよびＲｇは有利にはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを表す。
【００３０】
有利な実施形態では、本方法は、更に一連の下記工程：
（ｂ）工程（ａ）で得られた式（Ｉ−２）の化合物を酸、有利には塩酸ガス、と反応させて、下式（Ｉ−３）：
【化１６】
2010522144.tif 000018
の化合物を形成させること；
（ｃ）式（Ｉ−３）の化合物を塩基、有利には炭酸水素ナトリウム、と反応させて、下式（Ｉ−４）：
【化１７】
2010522144.tif 000019
の化合物を形成させること
を含んでなる。
【００３１】
以下、限定されるものではないが、下記の実施例により本発明を説明する。
【実施例】
【００３２】
実施例１：ジペプチドの合成
本発明者らは、以下の式：
【化１８】
2010522144.tif 000020
に従い、いずれの溶媒も用いずに、ＵＮＣＡとアミノ酸誘導体との反応を行ってジペプチドを形成させた。
【００３３】
この反応を、スチールボールの入った焼入れスチールタンク内、ＮａＨＣＯ３（１．５当量）の存在下、種々のアミノ酸（１当量）とのＢｏｃ−Ｖａｌ−ＮＣＡ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＮＣＡおよびＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＮＣＡ（１当量）カップリングで試験した。タンクは３０Ｈｚの頻度で１時間攪拌した。反応媒体を分析したところ、唯一ジペプチドの存在が検出された。これらの結果を種々のＵＮＣＡおよびアミノ酸誘導体とともに表１に示す。
【表１】
2010522144.tif 000021
【００３４】
種々のＵＮＣＡ誘導体は同じ反応特性を示さない。全ての場合で、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＮＣＡは、ジペプチドの形成に関して定量的に変換され、一方、両場合においてＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＮＣＡはやや低い収率であった。
【００３５】
最良の結果は新しく調製された出発物質（ＵＮＣＡまたはアミノエステルのいずれか）で得られたことを特に述べておくべきであろう。そうでない場合には、反応は不完全となし、ＵＮＣＡの加水分解が見られた。
【００３６】
実施例２：アスパルテームの合成
アスパルテーム、またはα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン−メチルエステルは、サッカロースよりもおよそ１５０倍甘い栄養甘味料である。これは商業上魅力的なジペプチドであるが、溶媒の存在下でも不在下でもＵＮＣＡからは未だ製造されていない。
【００３７】
本発明者らは、いずれの溶媒も用いないボールミルにより、Ｈ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ．ＨＣｌ（ＩＩＩ−ｅ）から、およびＢｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＮＣＡ（ＩＩ−ａ）からの工程において、保護されたアスパルテームを得た。
【００３８】
酸性条件下で同じ時間で切断可能であることから、保護基Ｂｏｃおよびｔ−Ｂｕを選択した。さらにいずれの溶媒の使用を避けるため、保護基の除去にはＨＣｌガスを用いた。
【００３９】
２．１．Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＮＣＡ（ＩＩ−ａ）の製造
この方法は、アミン官能基を保護するＢｏｃを１つ含む主鎖を有する遊離カルボン酸の環化からなり、従って、まず、（Ｂｏｃ）２−Ａｓｐ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（ＶＩＩ−ａ）の製造を必要とする。これは、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（Ｖ−ａ）のα−カルボン酸をベンジルエステル（ＶＩ（ａ））へとエステル化した後、ＤＭＡＰの存在下でＢｏｃ２Ｏと反応させて、２つのＢｏｃ基で保護されたアミノ化合物（ＶＩＩ−ａ）を得、その後、水素化によりこのベンジルエステル基を脱保護して（ＶＩＩＩ−ａ）を得ることにより達成した。
【化１９】
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【００４０】
以下の工程は、Ｖｉｌｓｍｅｉｅｒ塩で保護したアミノ酸（ＶＩＩＩ−ａ）の環化からなった。最良の結果は、アセトニトリル中でＤＭＦおよび塩化オキサリルの塩を形成することにより得られた。化合物（ＩＩ−ａ）が９０％の収率で得られた。
【００４１】
２．２．アスパルテームの製造
ジペプチドを製造するための上記の手順をアスパルテームの製造に適用した。
【化２０】
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【００４２】
Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＮＣＡ（ＩＩ−ａ）およびＨ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ．ＨＣｌ（ＩＩＩ−ｅ）で出発し、ボールミル１時間後にジペプチド（Ｉ−ａ）が得られた。
【００４３】
次に、これをそのまま、溶媒の不在下で２時間、ＨＣｌガスと反応させて、保護基Ｂｏｃおよびｔ−Ｂｕを除去し、塩酸型のアスパルテームを得た。これらの保護基Ｂｏｃおよびｔ−Ｂｕの除去にだけは揮発性二次生成物が生じることを述べておく。両工程の収率は定量的であったことも述べておかなければならない。
【００４４】
この塩酸塩を水に溶かし、Ｎａ２ＣＯ３水溶液でｐＨを５．２に調整した。得られたアスパルテームが沈殿した。これを濾過し、真空乾燥させて、４０％収率で固体を得た。
【００４５】
よって、いずれの有機溶媒も用いずに、いずれの有機二次生成物もなく、アスパルテームが純粋な形態で得られた。精製工程は、水から沈殿させて固体アスパルテームを得ることだけであった。
【国際調査報告】
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