(57)【要約】  本発明は、治療が必要な対象に対し薬理シャペロンを投与するための投薬計画を提供する。この投薬計画は、リソソーム蓄積障害などの不適切なタンパク質の誤った折畳みによって引き起こされる障害を治療するために使用可能である。
2010525084.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質の誤った折畳みに関連する疾患の治療のために、治療が必要な患者に対し薬理シャペロンを投与する方法であって、約４日〜約１０日間１日１回約７５〜３００ｍｇの日用量を経口投与するステップと、それに続いて約３日〜約８日おきに１回約７５〜２２５ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項２】
投与される日用量が約１２５〜２２５ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
日用量が約５日〜約８日間１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
投与される維持用量が、約１２５ｍｇ〜約１７５ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
維持用量が約４日〜約７日おきに１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
投与される日用量が約１５０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
日用量が約７日間１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
投与される維持用量が約１５０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
維持用量が約４日おきに１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
維持用量が約７日おきに１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約５日〜約８日間１日１回約１２５〜２２５ｍｇの日用量を経口投与するステップと、それに続いて約４〜７日おきに１回約１２５〜１７５ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項１２】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約７日間１日１回約１５０ｍｇの日用量を経口投与するステップと、それに続いて約４日おきに１回約１５０ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項１３】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約７日間１日１回約１５０ｍｇの日用量を経口投与するステップと、それに続いて約７日おきに１回約１５０ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項１４】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約４日〜約１４日間１日１回約７５〜３００ｍｇの最初の日用量を経口投与するステップと、それに続いて１日に約２５〜約５０ｍｇの間の維持日用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項１５】
投与される最初の日用量が約１２５〜２２５ｍｇである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
最初の日用量が、約５日〜約１０日間１日１回投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
投与される最初の日用量が約１５０ｍｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
維持日用量が約７日間１日１回投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
維持日用量が約２５ｍｇである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約２〜３日おきに約７５〜約３００ｍｇの間の用量を経口投与するステップを含む方法。
【請求項２１】
投与されるイソファゴミン用量が約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇの間である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２２】
投与されるイソファゴミンの用量が約１５０ｍｇである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２３】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約５日〜約１０日間１日１回約１２５〜２２５ｍｇの最初の日用量を経口投与するステップと、それに続いて約２５〜約５０ｍｇの間の維持日用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項２４】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約７日間１日１回約１５０ｍｇの最初の日用量を経口投与するステップと、それに続いて約２５〜約５０ｍｇの間の維持日用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項２５】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約３日おきに１５０ｍｇの用量を経口投与するステップを含む方法。
【請求項２６】
投与されるイソファゴミン塩が酒石酸イソファゴミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
投与されるイソファゴミン塩が酒石酸イソファゴミンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２８】
投与されるイソファゴミン塩が酒石酸イソファゴミンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
投与されるイソファゴミン塩が酒石酸イソファゴミンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
投与されるイソファゴミン塩が酒石酸イソファゴミンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
投与されるイソファゴミン塩が酒石酸イソファゴミンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
ファブリー病の治療のために、治療が必要な患者に対し１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約４日〜約１０日間１日１回約２００〜約５００ｍｇの日用量を経口投与するステップと、それに続いて約２日〜約３日おきに１回約７５〜２２５ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項３３】
投与される日用量が約２５０〜３００ｍｇである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
日用量が約５日〜約８日間１日１回投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
投与される維持用量が、約７５ｍｇ〜約２２５ｍｇである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
投与される日用量が約２５０ｍｇである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
日用量が約７日間１日１回投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
投与される維持用量が、約１００〜２００ｍｇである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
維持用量が、約２日おきに１回投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
投与される維持用量が約１５０ｍｇである、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対してイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約４日〜約１０日間１日１回約７５〜３００ｍｇの日用量を経口投与するステップと、それに続いて約２〜８日の期間１日１回約７５〜３５０ｍｇの維持用量を経口投与し、その後実質的に等しい長さの休薬期間が続くステップとを含む方法。
【請求項４２】
約１００〜約２００ｍｇの用量が約７日間１日１回経口投与され、その後３日間１日１回約２００〜２５０ｍｇの維持用量が経口投与され、次に実質的に等しい長さの休薬期間が続く、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
約１５０ｍｇの用量が約７日間１日１回経口投与され、その後３日間１日１回約２２５ｍｇの維持用量が経口投与され、次に実質的に等しい長さの休薬期間が続く、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
約１００〜約２００ｍｇの用量が約７日間１日１回経口投与され、その後７日間１日１回約２００〜２５０ｍｇの維持用量が経口投与され、次に実質的に等しい長さの休薬期間が続く、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
約１５０ｍｇの用量が約７日間１日１回経口投与され、その後７日間１日１回約２２５ｍｇの維持用量が経口投与され、次に実質的に等しい長さの休薬期間が続く、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
ファブリー病の治療のために、治療が必要な患者に対し１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約５日〜約８日間１日１回約２５０〜３００ｍｇの最初の日用量を経口投与するステップと、それに続いて２〜３日おきに約１回約１００〜２００ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項４７】
ファブリー病の治療のために、治療が必要な患者に対し１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約７日間１日１回約２５０ｍｇの最初の日用量を経口投与するステップと、それに続いて２日おきに約１回約１５０ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項４８】
ファブリー病の治療のために、治療が必要な患者に対し１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約７日間１日１回約２５０ｍｇの最初の日用量を経口投与するステップと、それに続いて毎日約１回約２５〜５０ｍｇの維持用量を経口投与するステップとを含む方法。
【請求項４９】
ファブリー病の治療のために、治療が必要な患者に対し１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約２〜３日おきに約５０〜３００ｍｇの間の１−デオキシガラクトノジリマイシンを経口投与するステップを含む方法。
【請求項５０】
２〜３日おきに約１２５〜約２２５ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンが投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
約５０ｍｇ、１５０ｍｇまたは２５０ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンが２日おきに投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
ファブリー病の治療のために治療が必要な患者に対し１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約２〜８日の期間１日１回約１００〜１０００ｍｇの日用量を経口投与し、その後実質的に等しい長さの休薬期間が続くステップを含む方法。
【請求項５３】
日用量が約１５０〜６００ｍｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
日用量が約２５０ｍｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
日用量が約５００ｍｇである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
日用量が３日間投与される、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
投与される１−デオキシガラクトノジリマイシン塩が１−デオキシガラクトノジリマイシン塩酸塩である、請求項４６〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
特異的薬理シャペロンを用いたリソソーム蓄積症治療のための投薬計画であって、特異的薬理シャペロンが、この疾病において欠損している酵素に対する競合阻害物質であり、リソソーム内の酵素蓄積速度が最大になる血漿濃度を提供する最初の日用量を一定の期間投与するステップと、それに続いてリソソーム内の阻害物質の解離を可能にする維持用量を残りの治療期間中、間隔をとって投与するステップとを含む投薬計画。
【請求項５９】
最初の日用量が、一定期間にわたりＥＣ５０を超える血漿濃度を提供するものである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
維持用量が、一定期間にわたりＩＣ５０を下回る血漿濃度を提供するものである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
最初の日用量が１日用量である請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
維持用量が１日用量でない、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ａ１４３Ｔミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項６４】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｔ４１Ｉミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項６５】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ａ９７Ｖミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項６６】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｍ５１Ｋミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項６７】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｇ３２８Ａミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項６８】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｓ２７６Ｇミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項６９】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｌ３００Ｐミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７０】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｒ２５９Ｒミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７１】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｒ３０１Ｑミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７２】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｎ２１５Ｓミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７３】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｐ２０５Ｔミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７４】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｆ２５９Ｃミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７５】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｒ１１２Ｃミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７６】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｒ１１２Ｈミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７７】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｎ２１５Ｓミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７８】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｐ４０９Ａミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項７９】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｍ２９６Ｉミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項８０】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩を有効量投与するステップを含む、Ｓ２３５Ｃミスセンス突然変異を有する対象におけるファブリー病の治療方法。
【請求項８１】
１−デオキシガラクトノジリマイシンが送達される、請求項５７〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
１−デオキシガラクトノジリマイシン塩酸塩が投与される、請求項５７〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
１−デオキシガラクトノジリマイシンまたはその薬学的に許容できる塩が、本出願の明細書または請求項中に記載されている投薬量計画を介して投与される、請求項５７〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
ポンペ病治療のために治療が必要な患者に対し１−デオキシノジリマイシンまたはその薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、約２〜８日の期間１日１回約１０００〜１００００ｍｇの日用量を経口投与し、その後実質的に等しい長さの休薬期間が続くステップを含む方法。
【請求項８５】
日用量が約２０００〜６０００ｍｇである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８６】
日用量が約２５００ｍｇである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８７】
日用量が約５０００ｍｇである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８８】
日用量が３日間投与される、請求項７８〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
日用量が７日間投与される、請求項７８〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
誤って折畳まれたタンパク質に関連する疾患の治療のために、治療が必要な患者に対し薬理シャペロンを投与する方法であって、約１〜７日間１日１回約７５〜３００ｍｇの最初の日用量を経口投与し、その後は、用量が一切投与されない約１〜１０日の最初の休薬期間が続くステップと、それに続いて約１〜１０日間１日１回約７５〜３００ｍｇの間の維持日用量を経口投与し、その後に用量が一切投与されない１〜８日の間の第２の休薬期間が続くステップとを含む方法。
【請求項９１】
投与される日用量が約１２５〜２２５ｍｇである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
投与される日用量が約２２５ｍｇである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９３】
日用量が約５〜８日間１日１回投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
日用量が約７日間１日１回投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
最初の休薬期間が約２〜８日である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
最初の休薬期間が約７日である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
投与される維持用量が約１２５〜２７５ｍｇである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９８】
投与される維持用量が約２２５ｍｇである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９９】
維持用量が約４〜７日間１日１回投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項１００】
維持用量が約３日間１日１回投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０１】
第２の休薬期間が約２〜８日である、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０２】
第２の休薬期間が約４日である、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０３】
維持用量および第２の休薬期間が約１週間〜約３０週間の間の期間にわたって反復される、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０４】
維持用量および第２の休薬期間が、約２２週間の期間にわたり反復される、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０５】
誤って折畳まれたタンパク質に関連する疾患の治療のために、治療が必要な患者に対し薬理シャペロンを投与する方法であって、約１〜７日間１日１回約７５〜３００ｍｇの最初の日用量を経口投与し、その後に用量が一切投与されない約１〜１０日の休薬期間が続くステップを含む方法。
【請求項１０６】
投与される日用量が約１２５〜２２５ｍｇである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０７】
投与される日用量が約２２５ｍｇである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０８】
日用量が約５〜８日間１日１回投与される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０９】
日用量が約７日間１日１回投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１１０】
休薬期間が約２〜８日である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１１１】
休薬期間が約７日である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１１２】
日用量と休薬期間が約１週間〜約３０週間の間の期間にわたり反復される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１１３】
日用量と休薬期間が約２４週間の期間にわたり反復される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１１４】
患者が、投薬量の投与の前後約０．５〜２４時間の間の期間、食物を摂取しない、請求項１〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
患者が、投薬量の投与の前後約１〜１２時間の間の期間、食物を摂取しない、請求項１〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
患者が、投薬量投与の前後約２時間の期間、食物を摂取しない、請求項１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年４月２６日出願の米国仮特許出願第６０／９１４，２８８号明細書、２００７年１２月１８日出願の米国仮特許出願第６１／０１４，７４４号明細書、および２００８年２月１２日出願の米国仮特許出願第６１／０２８，１０５号明細書の利益を主張する。これらの出願の各々の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、リソソーム蓄積症治療のための薬理シャペロンとして小分子競合阻害物質を使用するための投薬計画およびその論理的根拠を提供する。
【背景技術】
【０００３】
人体内では細胞機能のほぼすべての面にタンパク質が関与している。タンパク質は、適切に機能するために、折畳まれ、特異的な３次元形状へと捩じられるアミノ酸の線形文字列である。一部のヒト疾患は、タンパク質の安定性を低下させ、それが適切に折畳まれるのを妨げ得るタンパク質のアミノ酸配列の変化を引き起こす突然変異の結果としてもたらされる。安定性がさらに低いかまたは誤って折畳まれたタンパク質の産生に導く遺伝的突然変異の大部分は、ミスセンス突然変異と呼ばれる。これらの突然変異によって、タンパク質内の単一のアミノ酸と別のアミノ酸の置換が起きる。このエラーのため、ミスセンス突然変異は生物活性レベルが低下したタンパク質を生じることが多い。ミスセンス突然変異に加えて、生物活性が低下したタンパク質を生じる可能性のあるその他のタイプの突然変異も存在する。
【０００４】
タンパク質は一般に、小胞体またはＥＲとして公知の特定の細胞領域内で折畳まれる。細胞は、タンパク質輸送と一般に呼ばれているプロセスである、ＥＲから細胞内の適切な目的地までの移動の前に、タンパク質がその正確な３次元形状へと確実に折畳まれるようにする品質制御機構を有している。誤って折畳まれたタンパク質は、当初ＥＲ内に保持された後に該品質制御機構によって除去される場合がある。場合によっては、誤って折畳まれたタンパク質は除去される前にＥＲ内に蓄積し得る。
【０００５】
誤って折畳まれたタンパク質のＥＲ内での保持はその適切な輸送を中断し、結果として生じた低下した生物活性によって細胞機能障害、そして最終的には疾病に導かれ得る。さらに、誤って折畳まれたタンパク質のＥＲ内での蓄積は、細胞に対しさまざまなタイプのストレスを導くかもしれず、これも同様に細胞機能不全および疾病に寄与する可能性がある。
【０００６】
リソソーム蓄積症（ＬＳＤ）は、リソソーム酵素をコードする遺伝子内の突然変異に起因するリソソーム酵素の欠損によって特徴付けられる。その結果、脂質、炭水化物および多糖類を含むこれらの酵素の基質が病的に蓄積される。これまでに知られているＬＳＤは約５０あり、これにはゴーシェ病、ファブリー病、ポンペ病、テイ・サックス病およびムコ多糖症（ＭＰＳ）が含まれる。大部分のＬＳＤは常染色体劣性形質として受け継がれるが、ファブリー病およびＭＰＳＩＩを有する男性は、疾病遺伝子がＸ染色体上にコードされることから、半接合体である。大部分のＬＳＤについて、対症的管理の域を超えて利用できる治療は全く存在しない。ゴーシェ、ファブリー、ポンペおよびＭＰＳＩおよびＶＩを含めたいくつかのＬＳＤについて、組換え型酵素を用いた酵素補充療法（ＥＲＴ）が利用可能である。ゴーシェ病については、限定的な状況下で、基質還元療法（ＳＲＴ）も利用可能である。ＳＲＴでは、グルコシルセラミド（ＧＤ基質）の合成に必要とされる酵素の小分子阻害物質が利用される。ＳＲＴの最終目的は、基質の生産を削減し、病的蓄積を削減することにある。
【０００７】
各ＬＳＤに関連して数多くの異なる突然変異体遺伝子型が存在するが、最も一般的な突然変異のいくつかを含めた突然変異の一部は、比較的安定性の低い酵素の産生を導く可能性のあるミスセンス突然変異である。これらの比較的安定性の低い酵素は時としてＥＲ関連分解経路によって早期に分解される。その結果、リソソーム内の酵素が欠損し、基質が病的に蓄積する。かかる突然変異酵素は、時として関係する技術分野で「折畳み突然変異体」または「立体構造突然変異体」と呼ばれる。
【０００８】
ＬＳＤと関連する酵素の小分子阻害物質の結合が突然変異酵素および対応する野生型酵素の両方の安定性を増大させ得る、ということが以前に示された（全て参照により本明細書に援用されている特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５および特許文献６を参照のこと）。特に、いくつかの標的リソソーム酵素のための特異的な選択性競合阻害物質であるグルコースおよびガラクトースの小分子誘導体の投与は、試験管内で細胞内の酵素の安定性を効果的に増大させて、リソソームへの酵素の輸送を増大させることが発見された。したがって、リソソーム内の酵素量を増大させることにより、酵素基質の加水分解が増大するものと予想される。この戦略の背後にある原初の理論は次のようなものであった。すなわち、突然変異酵素タンパク質はＥＲ内で不安定であることから（非特許文献１）、酵素タンパク質は正常な輸送経路（ＥＲ→ゴルジ体→エンドソーム→リソソーム）内で遅延され、早期に分解される。したがって、突然変異酵素に結合しその安定性を増大させる化合物は、酵素のための「シャペロン」として役立ち、ＥＲから退出してリソソームまで移動できる量を増大させ得る。さらに、一部の野生型タンパク質の折畳みおよび輸送は不完全であり、一部の野生型タンパク質の最高７０％が場合によってはその最終的細胞部位に到着する前に分解されていることから、野生型酵素を安定化させかつＥＲを退出しリソソームまで輸送され得る酵素の量を増大させるためにシャペロンを使用することが可能である。
【０００９】
一部の酵素阻害物質は酵素の触媒中心（「活性部位」）に特異的に結合し、その結果として試験管内で酵素立体構造を安定化させるものとして知られていることから、幾分か逆説的ではあるが、これらの阻害物質は、ＥＲからの退出、リソソームへの輸送、加水分解活性の回復を助けることのできる有効なシャペロンであることが提案された。これらの特異的薬理シャペロンは、酵素の活性部位の中に特異的に結合したことから、「活性部位特異的シャペロン（ＡＳＳＣ）」または「特異的薬理シャペロン」と呼称された。小分子は経口投与が可能で、タンパク質に基づく療法と比べて優れた生体内分布を有し得ることから、薬理シャペロン療法はＥＲＴを超える潜在的な利点を有する。
【００１０】
現在、ファブリー病、ゴーシェ病およびポンペ病について、３つの薬理シャペロンがヒト臨床試験中である。シャペロンはこれらの疾病において欠損している酵素の競合阻害物質であることから、細胞酵素活性を純増させるもののすでに欠損している酵素を持続的に阻害する結果とならない適切な投薬計画を策定しなければならない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第６，２７４，５９７号明細書
【特許文献２】米国特許第６，５８３，１５８号明細書
【特許文献３】米国特許第６，５８９，９６４号明細書
【特許文献４】米国特許第６，５９９，９１９号明細書
【特許文献５】米国特許第６，９１６，８２９号明細書
【特許文献６】米国特許第７，１４１，５８２号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ishii et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1996; 220: 812-815)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、誤って折畳まれたタンパク質に関連する疾病（例えば、リソソーム蓄積傷害）および本明細書中に記載されている薬理シャペロンで治療できるまたは改善できる疾病を治療するための、特異的薬理シャペロンを投与するための投薬計画を提供する。
【００１４】
具体的実施形態においては、投薬計画は、ゴーシェ病の治療のための患者に対するイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩の投与のために提供する。
【００１５】
１つの実施形態においては、約４日〜約１０日間１日１回約７５ｍｇ〜約３００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、イソファゴミン）が経口投与され、その後、約３日〜約８日おきに１回約７５〜２２５ｍｇの薬理シャペロンの維持用量が経口投与される。
【００１６】
さらなる実施形態では、投与される薬理シャペロンの日用量は、約１２５〜２２５ｍｇ／日（例えば、約１５０ｍｇ／日）であり、約５日〜約８日間（例えば、約７日間）投与される。
【００１７】
さらなる実施形態においては、投与される薬理シャペロン（例えば、イソファゴミン）の維持用量は約１２５ｍｇ〜約１７５ｍｇであり、約４〜７日おきに投与される。さらにもう１つの実施形態においては、投与される維持用量は約１５０ｍｇであり、これは４日おきに投与される。代替的な一実施形態においては、投与される維持用量は約１５０ｍｇであり、この用量は７日おきに投与される。
【００１８】
具体的な一実施形態においては、本発明は、約７日間、１日１回、約１５０ｍｇのイソファゴミンを経口投与し、その後７日おきに約１回、約１５０ｍｇのイソファゴミンの維持用量を経口投与することによる、ゴーシェ病の治療のために患者に対しイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩を投与する方法を提供する。
【００１９】
本発明は同様に、約２〜３日おきに約７５ｍｇ〜約３００ｍｇの間を経口投与することによる、ゴーシェ病の治療のために治療が必要な患者に対しイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩を投与する方法も提供する。
【００２０】
一実施形態においては、投与されるイソファゴミンの用量は、約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇの間である。別の実施形態においては、投与されるイソファゴミンの用量は約１５０ｍｇである。具体的な一実施形態においては、約１５０ｍｇの酒石酸イソファゴミンが約３日おきに投与される。
【００２１】
本発明の特定の一実施形態において、投与されるイソファゴミン塩は酒石酸イソファゴミンである。
【００２２】
一実施形態においては、約７５〜約３００ｍｇの薬理シャペロンが約４日〜約１０日間、１日１回、経口投与され、次に約１日〜約１０日間薬理シャペロンが投与されない最初の休薬期間が続き、その後約１日〜約８日おきに１回、約７５〜３００ｍｇの薬理シャペロンの維持用量が投与され、次に約１日〜約１０日間薬理シャペロンが投与されない第２の休薬期間が続く。
【００２３】
さらなる実施形態においては、投与される日用量は約１２５〜２２５ｍｇ／日であり、約５日〜約８日間投与される。さらにもう１つの実施形態において、投与される日用量は約２２５ｍｇ／日であり、約７日間投与される。
【００２４】
さらなる実施形態においては、薬理シャペロンが投与されない最初の休薬期間は約２日〜約８日である。具体的実施形態においては、薬理シャペロンが投与されない最初の休薬期間は約７日である。
【００２５】
さらなる実施形態において、投与される維持用量は約１２５ｍｇ〜約２７５ｍｇであり、約４〜７日間、１日１回投与される。さらにもう１つの実施形態において、投与される維持用量は約２２５ｍｇであり、この用量は約３日間、１日１回投与される。
【００２６】
一変形実施形態において、いかなる維持用量も投与されない。
【００２７】
さらなる実施形態においては、薬理シャペロンが投与されない第２の休薬期間は約２日〜約８日である。具体的実施形態においては、薬理シャペロンが投与されない第２の休薬期間は約４日である。一変形実施形態では、いかなる薬理シャペロンも投与されない第２の休薬期間は存在しない。
【００２８】
さらなる実施形態において、日用量および最初の休薬期間は、約１週間〜約３０週間、または約５週間〜約２５週間の期間にわたり行われる。
【００２９】
さらなる実施形態において、日用量および最初の休薬期間は約５週間〜約２５週間の期間にわたり行われる。
【００３０】
具体的な実施形態において、日用量および最初の休薬期間は、約２４週間の期間にわたり行われる。
【００３１】
一変形実施形態において、日用量および最初の休薬期間は、約２週間の期間にわたり行われる。
【００３２】
さらなる実施形態において、維持用量および第２の休薬期間は約１週間〜約３０週間の期間にわたり行われる。
【００３３】
さらなる実施形態において、日用量および最初の休薬期間は、約５週間〜約２５週間の期間にわたり行われる。
【００３４】
具体的実施形態において、維持用量および第２の休薬期間は、約２２週間の期間にわたり行われる。
【００３５】
さらにもう１つの実施形態において、患者は、薬理シャペロン投与前後の約０．５〜約２４時間の間または約１時間〜約１２時間（例えば、約２時間）の期間、食物を一切摂取しない（すなわち絶食する）。
【００３６】
さらなる実施形態において、薬理シャペロンはイソファゴミンまたはその薬理学的に許容できる塩（例えば、酒石酸イソファゴミン）である。
【００３７】
具体的な一実施形態において、本発明は、約７日間、１日１回、約２２５ｍｇのイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩を経口投与し、次に約７日間イソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩が一切投与されない最初の休薬期間が続き、その後、約３日間、１日１回、約２２５ｍｇのイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩の維持用量を経口投与し、次に約４日間イソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩が全く投与されない第２の休薬期間が続くことによる、ゴーシェ病の治療のために患者に対してイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、維持用量および第２の休薬期間が２２週間の期間反復する方法を提供する。
【００３８】
別の具体的実施形態において、本発明は、約７日間、１日１回、約２２５ｍｇのイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩を経口投与し、次に約７日間イソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩が一切投与されない休薬期間が続くことによる、ゴーシェ病の治療のために患者に対してイソファゴミンまたは薬理学的に許容できる塩を投与する方法であって、日用量の投与および休薬期間が２４週間の期間反復する方法を提供する。
【００３９】
本発明の特定の一実施形態において、投与されるイソファゴミン塩は酒石酸イソファゴミンである。
【００４０】
本発明は同様に、ファブリー病の治療のための１−デオキシガラクトノジリマイシンの投与を目的とする具体的な投薬計画も提供する。
【００４１】
本発明の一実施形態において、ＤＧＪ塩酸塩は、約４日〜約１０日間、または約５日〜約８日間、または約７日間、毎日経口投与され、その後約２日おき〜約３日おきに維持用量が投与される。
【００４２】
この実施形態において、日用量は１日約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、または１日約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、または１日約２５０ｍｇの範囲内である。
【００４３】
以上の実施形態において、２〜３日おきに投与される維持用量は、約７５ｍｇ〜約２２５ｍｇまたは約１００ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲内にあり、または具体的実施形態において約１５０ｍｇである。
【００４４】
別の実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、約４〜約１４日間または約５〜約１０日間、また特定の実施形態において約７日間毎日、１日約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、または１日約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲内または１日約２５０ｍｇの用量で投与される。
【００４５】
４〜１４日の期間の後、１日あたり約２５〜５０ｍｇの範囲内または約２５ｍｇの維持日用量が投与される。
【００４６】
別の実施形態において、約２〜３日おきの間隔投薬が企図されている。この実施形態では、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇの間の１−デオキシガラクトノジリマイシンが各々の間隔で、または約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇが各々の間隔で、または約１５０ｍｇが各々の間隔で投与される。具体的実施形態において、ＤＧＪ塩酸塩が２日おきに５０ｍｇ、１５０ｍｇまたは２５０ｍｇで投与される。
【００４７】
さらなる実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは２週間、１日あたり５０ｍｇが経口投与され、その後２週間、１日あたり２００ｍｇが投与され、その後２週間、１日あたり５００ｍｇが投与され、その後治療の持続期間中、１日あたり５０ｍｇが投与される。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】健常なヒトボランティアに対する酒石酸イソファゴミン投与後の血漿ＰＫ結果を示す。
【図２】健常なヒトボランティアに対する酒石酸イソファゴミン投与後の薬力学的結果を示す。
【図３Ａ】１５０ｍｇのＩＦＧを毎日投与した後２８日間にわたるＥＣ５０およびＩＣ５０より高いおよび低い薬物血漿濃度のコンピュータ内モデリングの結果を示す。
【図３Ｂ】２５ｍｇのＩＦＧを毎日投与した後２８日間にわたるＥＣ５０およびＩＣ５０より高いおよび低い薬物血漿濃度のコンピュータ内モデリングの結果を示す。
【図３Ｃ】１５０ｍｇのＩＦＧを４日おきに投与した後２８日間にわたるＥＣ５０およびＩＣ５０より高いおよび低い薬物血漿濃度のコンピュータ内モデリングの結果を示す。
【図４】５日間異なる濃度のＩＦＧで治療した後の細胞溶解物内で人工的基質を用いて測定されたＧＣａｓｅ活性の試験管内増加を示す。
【図４Ａ】５日間異なる濃度のＩＦＧで治療した後の細胞溶解物内で人工的基質を用いて測定された線維芽細胞内のＧＣａｓｅ活性の試験管内増加を示す。
【図４Ｂ】５日間異なる濃度のＩＦＧで治療した後の細胞溶解物内で人工的基質を用いて測定されたリンパ芽球内のＧＣａｓｅ活性の試験管内増加を示す。
【図４Ｃ】５日間異なる濃度のＩＦＧで治療した後の細胞溶解物内で人工的基質を用いて測定されたマクロファージ内のＧＣａｓｅ活性の試験管内増加を示す。
【図５Ａ】２日または３日おきに１５０ｍｇのＩＦＧを投与した後のＧＣａｓｅ蓄積速度のコンピュータ内モデリングの結果を示す。
【図５Ｂ】７日間毎日１５０ｍｇのＩＦＧを投与し次に３日または４日おきに１５０ｍｇを投与した後の推定血漿ＰＫ結果を示す。
【図５Ｃ】３日おきに１５０ｍｇのＩＦＧを毎日投与しその後４日間「無投薬」にした予想結果を示し、同様に４日おきに１５０ｍｇのＩＧＦを毎日投与しその後３日間「無投薬」にした予想結果も示す。
【図６】１日おきに１５０ｍｇのＤＧＪを投与した後のそれぞれＥＣ５０およびＩＣ５０より高いおよび低い薬物血漿濃度のコンピュータ内モデリングの結果を示す。
【図７】２つの具体的投薬計画にしたがってＤＧＪで治療された１１人のファブリー病患者からの結果を示す。
【図８】実施例６内に記載されている４つの投薬計画を要約した表である。
【図９】特定のミスセンス突然変異を有する男性患者８人についての白血球内α−ＧＡＬ活性のグラフである。
【図１０】特定のミスセンス突然変異を有する男性患者９人についての白血球内α−ＧＡＬ活性のグラフである。
【図１１】実施例６に記載されている投薬計画についての応答の要約である。
【図１２】実施例６中で指定された３つのグループについての白血球内α−ＧＡＬ活性増加を実証するグラフである。
【図１３】実施例６中で指定された３つのグループについての腎組織内α−ＧＡＬ活性増加を実証するグラフである。
【図１４】実施例６に記載されている通りのベースラインからの尿中ＧＬ−３変化を要約した表である。
【図１５Ａ】実施例６に記載されている通りの特定の細胞型におけるＧＬ−３組織学を要約する表である。
【図１５Ｂ】実施例６に記載されている通りの特定の細胞型におけるＧＬ−３組織学を要約する表である。
【図１６】実施例６に記載されている通りのＧＬ−３腎生検を要約した表である。
【図１７Ａ】実施例６に記載されている通りの４８週目以降におけるｅＧＦＲレベルを実証するグラフである。
【図１７Ｂ】実施例６に記載されている通りの４８週目以降におけるｅＧＦＲレベルを実証するグラフである。
【図１８】実施例６に記載されている通りの駆出率を実証するグラフである。
【図１９】自己申告されたファブリー症候を要約した表である
【図２０】実施例６に記載されている通りの女性患者についてのベースラインからの尿ＧＬ−３変化を要約した表である。
【図２１】女性における腎生検ＧＬ−３データを要約した表である。
【図２２】女性の自己申告のファブリー症候を要約した表である。
【図２３】実施例７に記載されている通りの正常なマウスＧＡＡ活性に対するＤＮＪの効果を実証する表である。
【図２４】実施例８に記載されている通りの皮膚、心臓および腎臓におけるＦＬＡおよびＧＬ−３結果を実証するグラフである。
【図２５】実施例８に記載されている通りの尿細管断面および心臓断面の写真である。
【図２６】実施例８に記載されている通りのさまざまなミスセンス突然変異についてのＧＬＡに対するＤＧＪの効果のグラフである。
【図２７】実施例９に記載されている通りの大腿骨および骨髄中のＧｃａｓｅレベルを実証するグラフである。
【図２８】実施例１０に記載されている通りのさまざまな組織内における経時的な酒石酸ＩＦＧを実証するグラフである。
【図２９】実施例１１に記載されている投薬計画にしたがってＤＧＪを４週間投与した後のラットの皮膚、腎臓、心臓および血漿試料中のＧＬ−３の量を比較するグラフである。
【図３０】ＧＬ−３の減少を視覚的に利用することを目的とした、実施例１１に記載されている投薬計画にしたがってＤＧＪを４週間投与した後に免疫組織学的染色を受けた皮膚、心臓および腎臓試料の写真である。
【図３１】実施例１２に記載されている投薬計画にしたがってＤＧＪを４週間投与した後のラットの皮膚、心臓および腎臓試料内のＧＬＡおよびＧＬ−３レベルのグラフである。
【図３２】実施例１３に記載されている通りのＤＧＪの使用中止後０日目から７日目のラットの皮膚、心臓および腎臓資料中のＧＬＡ活性のグラフである。
【図３３】５０ｍｇおよび１５０ｍｇのＤＧＪを１日２回７日間投与している間、および実施例１４に記載されている通りの７日間の休薬期間中の、健常な雄におけるＧＬＡ活性のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、１つ以上の誤って折畳まれたタンパク質に関連するまたはこれによって引き起こされる疾病、例えば、リソソーム蓄積障害の治療のための、特異的薬理シャペロンの投与を目的とする投薬計画を提供する。本出願で記述されている投薬計画は、パーキンソン病およびアルツハイマー病を含めた（ただしこれらに限定されない）薬理シャペロンの使用により、治療または改善され得るあらゆる疾病または身体条件を治療するためにも使用してよい。例えば、イソファゴミンおよび１−デオキシガラクトノジリマイシンの具体的な投薬計画がそれぞれゴーシェ病およびファブリー病の治療のために提供され、薬理シャペロンが実行可能な１つの治療選択肢であるその他の疾病向けの投薬計画を予測するために使用可能なコンピュータ内（in silico）モデルが提供されている。
【００５０】
定義
「ゴーシェ病」とは、１型、２型、および３型ゴーシェ病を意味する。
【００５１】
「ファブリー病」とは、古典的ファブリー病、遅発性ファブリー病を意味し、およびα−ガラクトシダーゼＡをコードする遺伝子内に突然変異を有する半接合の女性を意味する。
【００５２】
「ポンペ病」または「グリコーゲン蓄積症ＩＩ型」には、幼児期発症、非古典的幼児期発症および成人発症型疾患が含まれる。
【００５３】
本明細書中で使用される「薬理シャペロン」または時として「特異的薬理シャペロン」（「ＳＰＣ」）という用語は、１つのタンパク質、例えば、酵素に特異的に結合し、（ｉ）タンパク質の安定した分子立体構造を誘発し；（ｉｉ）ＥＲから別の細胞位置、好ましくは未変性細胞位置までのタンパク質の輸送を促進する、すなわちタンパク質のＥＲ関連分解を防止する；（ｉｉｉ）不安定なタンパク質の凝集を防止する；（ｉｖ）タンパク質に対し少なくとも部分的な野生型機能および／または活性を回復させるまたは増大させる；かつ／またはタンパク質を収容する細胞の表現型または機能を改善する、という効果のうちの１つ以上を有する分子を意味する。したがって、薬理シャペロンは、標的タンパク質に結合し、タンパク質の安定化、輸送、非凝集化をもたらし、かつ／またはタンパク質の活性を増大させる分子である。本明細書で使用される通り、この用語はＢｉＰなどの内因性シャペロンを意味せず、「化学シャペロン」と呼ばれることもあるグリセロール、ＤＭＳＯまたは重水などの非特異的シャペロン活性を実証した非特異的作用物質も意味しない（Welch et al.，Cell Stress and Chaperones 1996; 1(2):109-115; Welch et al., Journal of Bioenergetics and Biomembranes 1997; 29(5):491-502; U.S. Patent No. 5,900,360; U.S. Patent No. 6,270,954; and U.S. Patent No. 6,541,195を参照のこと）。
【００５４】
さまざまな実施形態において、「薬理シャペロン」または「特異的薬理シャペロン」（「ＳＰＣ」）には、酵素またはその他のタンパク質に対して競合的に結合する活性部位特異的シャペロンのみが含まれる。しかしながら、別段の記述がないかぎり、「薬理シャペロン」または「特異的薬理シャペロン」（「ＳＰＣ」）は、活性部位に加えて部域内で酵素を結合するシャペロンを包含し、かつ競合的および非競合的の両方の形で結合するシャペロンも包含するものと理解される。
【００５５】
別段の規定のないかぎり、薬理シャペロンの投与に対するすべての言及は、経口投与を意味するものとする。薬理シャペロンの投与量に対するすべての言及は、薬理シャペロンの経口投与量を意味するものとする。
【００５６】
本明細書で使用される「タンパク質活性を増強させる」または「タンパク質活性を増大させる」という用語は、そのタンパク質に特異的な薬理シャペロンと接触させられた細胞内の安定した立体構造をとるポリペプチドの量を、そのタンパク質に特異的な薬理シャペロンと接触させられていない細胞（好ましくは、例えば、より早い時期にある、同じ細胞型または同じ細胞）内の量と比べて増大させることを意味する。一実施形態において、細胞は、ＥＲ内のポリペプチドの折畳みおよび／またはプロセッシングに関して欠損しているポリペプチドをコードする突然変異ポリヌクレオチドを発現しない。別の実施形態において、細胞は、立体構造突然変異体などの、ポリペプチドをコードする突然変異ポリヌクレオチドを発現しない。したがって、上述の用語は、そのタンパク質に特異的な薬理シャペロンと接触させられた細胞内の未変性位置までの野生型ポリペプチドの輸送効率を、そのタンパク質に特異的な薬理シャペロンと接触させられていない細胞（好ましくは、対照としての、例えば、より早い時期にある、同じ細胞または同じく細胞型）内の野生型ポリペプチドの輸送効率と比べて増大させることも同様に意味する。
【００５７】
「Ｖｍａｘ」という用語は、酵素触媒反応の最大初期速度、すなわち、飽和基質レベルにおける速度を意味する。「Ｋｍ」という用語は、Ｖｍａｘの１／２を達成するのに必要とされる基質濃度である。
【００５８】
「ＡＵＣ」という用語は、所与の薬物に対する身体の経時的総曝露量を評価するための数学的計算を表わす。投薬後の血中濃度をプロットするグラフにおいては、薬物濃度変数がｙ軸にあり、時間がｘ軸にある。指定された時間的間隔についてのｘ軸と薬物濃度曲線の間の面積がＡＵＣである。ＡＵＣは、投薬予定を立てる指針としておよび体内の異なる薬物アベイラビリティーを比較するために使用される。
【００５９】
「Ｃｍａｘ」という用語は、投薬後に達成された最大血漿濃度を表わす。
【００６０】
「Ｔｍａｘ」という用語は、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）に至るまでの時間を表わす。
【００６１】
「Ｋｉ」という用語は、酵素−阻害物質複合体の解離定数、すなわち最大酵素活性の２分の１を阻害するのに必要とされる濃度を意味する。低いＫｉは、酵素に対する薬物の高い結合親和力が存在することを意味する。
【００６２】
「ＥＣ５０」という用語は、ベースラインと最大値の間の中間で所望の応答を誘発する一薬物の濃度、すなわち、その最大効果の５０％が見られる濃度を意味する。本発明によると、ＥＣ５０は、１組の具体的条件下で、観察された最大の酵素活性増加の半分が発生する濃度である。
【００６３】
「ＩＣ５０」という用語は、細胞中における５０％の試験管内（in vitro）の酵素阻害に必要とされる一薬物の濃度を表している。
【００６４】
「治療上有効な用量」および「有効量」という用語は、治療応答を得るのに充分である特異的薬理シャペロンの量を意味する。治療応答とは、前述の症候および代理臨床マーカーを含む療法に対する有効な応答としてユーザー（例えば、臨床医）が認識するあらゆる応答であってよい。したがって治療応答は、一般的に、例えば、ゴーシェ病などの疾患または障害について当該技術分野において公知のものといった、例えば、ゴーシェ病などの疾患または障害の１つ以上の症候の改善である。
【００６５】
ゴーシェ病のための代理マーカーの改善の限定的意味のない例は、参照により本明細書に援用されている米国特許出願第６０／９１１，６９９号明細書の中で開示されており、ＧＣａｓｅレベルまたは活性の増大；ＥＲからリソソームへのＧＣａｓｅの輸送の増大；脂質をもったマクロファージ（「ゴーシェマクロファージ」）の存在の減少；キトトリオシダーゼのレベルの低下；肝臓酵素のレベルの低下；肺ケモカインＰＡＲＣ／ＣＣＬ１８のレベルの低下；血漿α−シヌクラインのレベルの低下；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）および総酸性ホスファターゼのレベルの低下；脾腫および肝腫張の減少、（骨減少症、渙散性病変、病的骨折、慢性骨痛、急性骨クリーゼ、骨梗塞、骨壊死および骨格変形を含めた）骨合併症の改善、貧血症、血小板減少症、白血球減少症、高ガンマグロブリン血症などの免疫学的欠陥の改善、脾臓内のＴリンパ球の量の増加、Ｂ細胞過剰増殖および形質細胞増加症の減少、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１７、ＭＩＰ−１αおよびＶＥＧＦを含めた炎症性サイトカインのレベルの低下、好中球定化性の改善；肺高血圧の減少；および骨特異的アルカリホスファターゼのレベルの低下、神経学的症候、例えば、水平注視、ミオクローヌス運動、角膜混濁、運動失調、認知症、痙性の改善；発作、聴覚障害；認識機能障害および神経変性の改善が含まれる。
【００６６】
ファブリー病のための代理マーカーの改善の限定的意味のない例としては、細胞（例えば、線維芽細胞）および組織内のα−ＧＡＬのレベルまたは活性の増大；ＧＬ−３蓄積の減少；ホモシステインおよび血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）の血漿濃度の減少；心筋細胞および弁線維芽細胞内部のＧＬ−３蓄積の減少；（特に左心室の）心臓肥大の削減、弁閉鎖不全および不整脈の改善；タンパク尿の改善；ＣＴＨ、ラクトシルセラミド、セラミドといった脂質の尿中濃度の低下、およびグルコシルセラミドおよびスフィンゴミエリンの尿中濃度の上昇（Fuller et al.，Clinical Chemistry. 2005; 51: 688-694）；糸球体上皮細胞中の積層封入体（ゼブラ小体）の不在；腎機能の改善；発汗低下の緩和；角化血管腫の不在；および高周波感音難聴、進行性難聴、突発性難聴または耳鳴りなどの聴覚異常の改善がある。神経学的症候の改善としては、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）または卒中の予防；および肢端感覚異常（末端部のほてりまたはうずき）として現われる神経因性疼痛の改善が含まれる。
【００６７】
ポンペ病のための代理マーカーの改善の限定的意味のない例としては、α−グルコシダーゼの増加、グリコーゲン蓄積の減少、低血圧症の減少、運動耐容性を含めた筋肉機能および可動性の改善、巨大舌の減少、心肥大および肝脾腫大症の縮小、呼吸機能の改善、嚥下、吸込みまたは摂食の改善、および睡眠時無呼吸の改善が含まれる。
【００６８】
「薬学的に許容できる」という語句は、生理学的に許容可能であり、ヒトに投与された場合に典型的には、望ましくない反応を生成しない分子的実体および組成物を意味する。好ましくは、本明細書で使用されている「薬学的に許容できる」という用語は、連邦または州政府の規制機関により承認されていることまたは、動物、より詳細にはヒトにおける使用のために米国薬局方またはその他の一般的に認知された薬局方の中に列挙されていることを意味する。「担体」という用語は、化合物を投与する場合に用いられる希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを意味する。かかる薬学的担体は、水および油などの無菌の液体であり得る。特に注射用溶液用の担体として、好ましくは、水または水溶液食塩溶液およびデキストロースおよびグリセロール水溶液が利用される。適切な薬学的担体は、"Remington's Pharmaceutical Sciences" by E.W. Martin, 18th Editionの中に記載されている。
【００６９】
イソファゴミン（ＩＦＧ）は、化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−ピペリジン−３，４−ジオールを意味する。イソファゴミンは、米国特許第５，８６３，９０３号明細書および５，８４４，１０２号明細書の中に記載されている。酒石酸イソファゴミンは、最近になって、参照により本明細書に援用されている米国特許出願第１１／７５２，６５８号明細書中に記載され、ＣＡＳ番号９１９３６４−５６−０が割当てられた。イソファゴミンを、さまざまな有機および無機酸で作られたその他の酸付加塩の形で調製してもよい。かかる塩には、塩化水素、臭化水素、メタンスルホン酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、マレイン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびさまざまなその他の酸を用いて形成されるもの（例えば、硝酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩など）が含まれる。かかる塩は、当業者にとって公知の通りに形成され得る。イソファゴミンは同様に、ナトリウム、カリウムおよびリチウムなどのアルカリ金属を用いて、カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属を用いて、ジシクロヘキシルアミン、トリブチルアミン、ピリジンなどの有機塩基およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸と共に結晶を形成してもよい。かかる結晶は、当業者にとって公知の通りに形成され得る。
【００７０】
ゴーシェ病のためのその他の潜在的シャペロンは、共に２００４年１１月１２日出願の係属中の米国特許出願第１０／９８８，４２８号明細書および１０／９８８，４２７号明細書中に記述されている。かかる化合物には、グルコイミダゾール（５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｓ）−５−ヒドロキシメチル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピリジン−６，７，８−トリオール）が含まれる。
【００７１】
「１−デオキシガラクトノジリマイシン」（ＤＧＪ）は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピペルジン−３，４，５−トリオールを意味する。この用語は、遊離塩基と任意の塩形態の両方を含む。ＤＧＪの塩酸塩は塩酸ミガラスタットとして知られている。α−ＧＡＬについてのその他のシャペロンは、Ｆａｎらに対する米国特許第６，２７４，５９７号明細書、６，７７４，１３５号明細書および６，５９９，９１９号明細書の中で記述されており、α−３，４−ジ−エピ−ホモノジリマイシン、４−エピ−ファゴミン、およびα−アロ−ホモノジリマイシン、Ｎ−メチル−デオキシガラクトノジリマイシン、β−１−Ｃ−ブチル−デオキシガラクトノジリマイシン、およびα−ガラクト−ホモノジリマイシン、カリステジンＡ３、カリステジンＢ２、Ｎ−メチル−カリステジンＡ３、およびＮ−メチル−カリステジンＢ２を含む。
【００７２】
「１−デオキシノジリマイシン」（ＤＮＪ）は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン−３，４，５−トリオールを意味する。この用語には、遊離塩基および任意の塩形態の両方、特に塩酸塩が含まれる。
【００７３】
「実質的に等しい長さ」という用語は、所与の期間の少なくとも±１日以内である期間を意味する。例えば、３日とは、４日に比べ実質的に等しい長さであり、逆も同様である。かくして、３日間の毎日の投薬および４日の休薬期間を求める以下の実施形態は、一定期間中の毎日の投薬とそれに続く実質的に等しい長さの休薬期間の一例とみなされる。
【００７４】
実質的に等しい長さは、等しい持続時間も包含する。かくして、７日間は、７日と実質的に等しい長さである。かくして、７日間の毎日の投薬と７日間の休薬期間を求める以下の実施形態は、一定の期間の毎日の投薬とそれに続く実質的に等しい長さの休薬期間の一例とみなされる。
【００７５】
本出願中に記載されている投薬計画は主としてリソソーム蓄積症に関して記述されているが、誤って折畳まれたタンパク質により引き起こされるかまたは悪化させられるその他の身体条件を本明細書中に記載された投薬計画を用いて治療してもよいということがわかる。同様に、限定的な意味なくアルツハイマー病およびパーキンソン病を含めた本出願中に記載されている薬理シャペロンによって治療または改善され得るあらゆる疾病または身体条件を、本出願の投薬計画を用いて治療してよい。
【００７６】
「約」および「およそ」という用語は、一般に、測定の性質または精度から許容可能な程度の測定数量についての誤差を意味する。典型的には、例示的な誤差の程度は所与の値または値範囲の２０パーセント（％）以内、好ましくは１０％以内、そしてより好ましくは５％以内である。或いは、特に生体系において、「約」および「およそ」という用語は、所与の値の好ましくは５倍、より好ましくは２倍という範囲内にある平均値を意味し得る。本明細書中で示されている数値的数量は、特に明記しないかぎり近似であり、これは、明示的に記載されていない場合に「約」または「およそ」という用語が暗示され得る、ということを意味している。
【００７７】
ゴーシェ病
ゴーシェ病（ＧＤ）は、主要代謝酵素β−グルコセレブロシダーゼ（ＧＣａｓｅ）の活性低下によって引き起こされるリソソーム蓄積障害である。ＧＣａｓｅ活性の低下により、肝臓、骨髄および脾臓の細胞、特にマクロファージ内のリソソームの内部にグルコセレブロシドと呼ばれるスフィンゴ糖脂質が蓄積されることになる。ＧＤ患者は、血液学的徴候、例えば、貧血症および血小板減少症ならびに肝脾腫大症、骨格機能障害、そして場合によっては神経学的機能障害を示す。症候、重症度、そして発症年令は、一部には疾病に内在する突然変異に左右される。ＧＢＡ遺伝子内において２００超の突然変異が同定されているが、大部分の患者において発見されている突然変異は４つである。これらの突然変異のうちの２つ、すなわちＮ３７０ＳおよびＬ４４４Ｐは、ゴーシェ集団の９０％超において発見されるアミノ酸置換である。他の２つの突然変異（８４ｉｎｓＧおよびＩＶＳ２）は、それぞれＤＮＡの挿入および欠失突然変異である。
【００７８】
臨床的観点から見て、ＧＤは３つの亜型すなわち、１型（非神経障害性）、２型（小児急性神経障害性）、および３型（亜急性神経障害性）に分類された。１型疾患は、Ｎ３７０Ｓ突然変異に関連することが極めて多く、３型疾患は、Ｌ４４４Ｐ突然変異を担持する患者に存在することが非常に多い。最も一般的な亜型である１型ゴーシェ病を患う患者は、広範囲の症候を示す。これらの症候には、脾腫、肝腫張、貧血症、血小板減少症、（骨減少症、渙散性病変、病的骨折、慢性骨痛、急性骨クリーゼ、骨梗塞、骨壊死および骨格変形を含めた）骨合併症、そして少数の患者においては間質性肺疾患および肺高血圧が含まれる。２型ＧＤは幼年期に出現し、広範囲内臓障害を伴う急速な神経変性経過を特徴とする。発育障害および咽頭けいれんを原因とする喘鳴が一般に観察され、進行性精神運動変性を原因として生後２〜３年以内に死亡する。３型ＧＤは、就学年令前後に現われ、異常な眼球運動、運動失調、発作および認知症などの神経学的症候に加えて内臓障害および骨障害を特徴とする。神経学的症候は通常、後年に現われ、患者は多くの場合３０才代または４０才代まで生き延びる。３つの型の間の最も顕著な差異は、１型には存在せず２型と３型には存在する神経学的障害である。疾病の進行速度は１型において緩慢、２型において急速、そして３．５型においては中庸である。
【００７９】
ＧＤのための現行の治療選択肢には、酵素補充療法（ＥＲＴ）および基質還元療法（ＳＲＴ）が含まれる。これらの療法は、主要な血液学的欠陥に対応し、大部分の患者において臓器体積を削減することが示されてきた。しかしながら、いずれも、ゴーシェ病の神経学的症候または骨格症候を治療するものとして承認されていない。
【００８０】
ラットとサルにおいて実施された非臨床毒物試験は、薬理シャペロン酒石酸イソファゴミン（ＩＦＧ）を用いた反復的投薬が一般に安全でかつ優れた耐容性を有することを示した。ＩＦＧは、ミスセンス突然変異の結果として折畳み安定性の低いＧＣａｓｅの選択的薬理シャペロンとして機能するイミノ糖である。現行のデータは、ＩＦＧが小胞体内のＧＣａｓｅの突然変異体形態を安定化させ、リソソームへの酵素の適切な輸送を促進することによって作用し得るということを示唆している（Steet et al.，PNAS 2006; 103: 13813-18; Lieberman et al., Nature Chem Biol. 2007.;3(2):101-7）。リソソーム中では、薬理シャペロンが酵素から解離した場合に、酵素はＧＣａｓｅ基質であるグルコシルセラミド（ＧｌｃＣｅｒ）の破壊の触媒としてのその正常な機能を実施することができる。試験により、ＩＦＧを用いた治療が、試験管内でのＧＣａｓｅ全細胞酵素レベルを増大させ、ＧＤ患者の線維芽細胞内でリソソームへのＧＣａｓｅ輸送を増大させ、かつ組織ＧＣａｓｅ活性を増大させ、ＧＤのマウスモデル内でキチナーゼおよび免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の血漿レベルを低下させる、ということが示された。これらの結果は、患者における早期臨床試験の結果と共に、ＧＢＡ遺伝子内のミスセンス突然変異の結果としてのＧＤを患う患者における酒石酸ＩＦＧの使用を強力に支持するものである。
【００８１】
ファブリー病
ファブリー病は、リソソーム酵素α−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧＡＬ）の欠損の結果としてのリソソーム蓄積障害である。症候は、腎不全そして心臓発作および卒中の危険性の増大を含め、重篤で衰弱性のものであり得る。ファブリー病患者におけるα−ＧＡＬの欠損は、遺伝性の遺伝子突然変異によって引き起こされる。これらの突然変異のいくつかは、α−ＧＡＬのアミノ酸配列の変化を引き起こし、その結果、その正しい３次元形状へ折畳まれない安定性の低いα−ＧＡＬが生産される可能性がある。患者の細胞内で生産されるα−ＧＡＬは、多くの場合、生物活性レベルに対する潜在力を多少保持しているものの、細胞の品質管理機序は、小胞体つまりＥＲ内の誤って折畳まれたα−ＧＡＬが分解および除去のため細胞の別の部分まで最終的に移動させられるまでそれらを認識し保持する。したがって、α−ＧＡＬは、通常ＧＬ−３を破壊することになるリソソームまで移動することがほとんどまたは全く無い。このため、細胞内にＧＬ−３が蓄積することになり、これがファブリー病の症候の原因であると考えられている。さらに、ＥＲ内の誤って折畳まれたα−ＧＡＬ酵素の蓄積は、細胞に対するストレスおよび炎症様の応答を導き、これが細胞の機能不全および疾病に寄与し得る。
【００８２】
ファブリー病の臨床的徴候は、広い重症度範囲にわたり、患者の残留α−ＧＡＬレベルとおおまかな相関関係を有する。現在治療されている患者の大部分は、古典的ファブリー病患者と呼ばれ、その大部分が男性である。これらの患者は、腎臓、心臓および脳を含めたさまざまな臓器の疾患を経験しており、疾患の症候は最初に青春期に現われ、典型的には４０才または５０才代で死亡するまで重症度が進行する。近年の数多くの研究が、通常は最初に成人期に現われる心機能または腎機能障害および卒中などの一連のファブリー病症候を有する未診断の男女が数多く存在するということを示唆している。遅発性ファブリー病と呼ばれるこのタイプのファブリー病を患う個体は、古典的ファブリー病患者の比べて高い残留α−ＧＡＬレベルを有する傾向にある。遅発性ファブリー病を患う個体は典型的に、当初成人期に疾患症候を経験し、多くの場合、左心室の肥大または進行性腎不全などの単一の臓器に集中した疾患症候を有する。さらに、遅発性ファブリー病は同様に、原因不明の卒中の形でも存在し得る。
【００８３】
ＧＣａｓｅに対するＩＦＧと同様、ＤＧＪはα−ＧＡＬの活性部位内に結合し、その活性を試験管内および生体内で増大させることが示されてきた（実施例５を参照のこと）。
【００８４】
薬理シャペロンについての投薬上の考慮事項
本発明によると、試験管内および生体内評価によって同定されるある種の観察可能な因子に左右される単純化されたモデルを用いて、投薬が決定される。かかる因子には、血漿および組織内の候補薬理シャペロンの薬物動態、リソソーム内の酵素蓄積速度；酵素代謝回転（リソソーム内の半減期）；および試験管内で決定される酵素に対する薬物の結合親和力が含まれる。投薬計画をモデリングするために以上のパラメータを使用する論理的根拠は、以下で記述するように動物における前臨床試験、およびヒトにおける第Ｉ相および第ＩＩ相試験ならびに試験管内試験の後に酒石酸イソファゴミンを用いて決定された。
【００８５】
【表１】
2010525084.tif 000003
【００８６】
酒石酸ＩＦＧの薬物動態学および薬物力学。
ＧＣａｓｅのための候補シャペロンであるＩＦＧの安全性を評価するための健常な成人の対象における第Ｉ相試験においては、最高３００ｍｇの単回用量および７日間最高２２５ｍｇ／日の反復用量が、無作為化２重盲検プラセボ対照試験において経口投与された。複数回用量試験においては、８人の対象（１コホートあたり６人が被験薬、２人がプラセボ）からなる３つのコホートが、７日間の無治療安全性評価期間を伴って、７日間２５、７５または２２５ｍｇのＩＦＧまたはプラセボの１日経口用量を受けた。１日目の初期薬物投与の前、（５、６および７日目の）第５、６、７の用量（Ｃｍｉｎの決定用）の前そして第１（１日目）および第７（７日目）の用量後０．５、１、１．５、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１５、１８および２４時間の時点で、薬物動態分析の目的で血液試料を収集した。さらに、最後の用量（９日目）の４８時間後に単一の血液試料を収集し、ＩＦＧの存在について検定した。さらに、薬物力学的測定のためすなわちＷＢＣ  ＧＣａｓｅレベルの分析のために、１日目、３日目、５日目および７日目の投薬の前および９日目、１４日目および２１日目の再受診の際に、血液試料を収集した。
【００８７】
複数回用量試験では、７日間の経口投与の後、薬物動態挙動は、用量に伴って線形であることがわかり、予想外のＩＦＧ蓄積はなかった。平均血漿レベル（Ｔｍａｘ）は、約３．４時間でピークに達し（ＳＥＭ：０．６時間）、血漿除去半減期は約１４時間であった（ＳＥＭ：２時間）（図１）。
【００８８】
重要なことに、ＩＦＧを受けた健常な対象は、ほとんどの場合、治療７日目をピークとして７日間の治療期間中、白血球内のＧＣａｓｅレベルの用量依存性増加を示し、その後、薬物の除去時から酵素レベルがより漸進的に減少し、最後の用量から１４日目までにほぼベースラインレベルまでの復帰を示した（図２）。達成された酵素レベルの最大の増加は、ベースラインレベルのおよそ３．５倍であった。７日間でＧＣａｓｅ蓄積の最大速度に達した最低の日用量は約７５ｍｇであった。
【００８９】
上述の複数回用量試験および試験管内細胞ベース検定（健常なヒトの皮膚線維芽細胞）からの結果に基づき、ＩＦＧのＰＫおよびＰＤ特性に関し以下の観察がなされた。
【００９０】
【表２】
2010525084.tif 000004
【００９１】
高い酵素レベルの長期維持
ＩＦＧなどの薬理シャペロンは意図された標的酵素の強力な阻害物質であることから、標的酵素が持続的に阻害されるのを防止するために「ピーク」と「トラフ」が関与する投薬計画が必要となるということが仮定された。したがって、日用量投薬に対立するものとしての非日用量投薬が必要になると思われ、この場合の最終目的は、当初（細胞酵素活性検定により試験管内で決定される）細胞ＥＣ５０より高い薬物の血漿濃度を一定期間中達成して、リソソームに輸送される酵素の量を最大にし、その後（５．２というリソソームｐＨで細胞溶解物を用いて試験管内で決定される）ＩＣ５０より低く薬物の濃度が下降する一定期間が続くようにすることにある。したがって、（ｉ）ＥＣ５０より高い血漿濃度を達成すると共に（ｉｉ）血漿濃度をＩＣ５０より低く下降させるような投薬計画を推定するために一部のＰＫおよびＰＤパラメータを使用できる単純なモデルが考案された。
【００９２】
簡単に言うと、ＩＦＧの指数関数的末端除去半減期に基づく、異なる投薬計画を用いて経時的血漿濃度を推定するために、上述のパラメータが使用された。これに続いて、結果として得られた血漿濃度がＥＣ５０を超えるかまたはＩＣ５０を下回るか否かそしてそれはどれほどの時間持続するのかが判定された。
【００９３】
ＩＣ５０およびＥＣ５０についての考慮事項
以上のことに基づき、１５０ｍｇのＩＦＧが１日１回投与された投薬計画の結果として、血漿濃度はＧＣａｓｅについての観察されたＥＣ５０に到達するかまたはこれを超え、かくして有意な期間シャペロニング（ＥＲからリソソームまでの輸送）が促進されることが判定された。しかしながら、この日用量では、蓄積された基質の最大代謝回転のために必要とされるＩＣ５０未満までのＧＣａｓｅの血漿濃度下降は予想されない（図３Ａ）。したがって、この投薬計画は、基質のクリアランスを可能にし得ないことから、試験管内で最適な応答を提供しない可能性がある。
【００９４】
用量（Ｃｍａｘ）についての考慮事項
（２８日間）１日１回ＩＦＧの用量を２５ｍｇまで低下させることで、ＥＣ５０を超える時間が削減されると予想されるが、それでもＩＣ５０を下回る濃度は得られない（図３Ｂ）。したがって、濃度が一定期間ＩＣ５０未満に低く下降できるようにしながらＥＣ５０を超える時間を最大限にするためには、用量が高くなるのに合わせてより長い間隔を用いるべきであるということが提案された。
【００９５】
投薬間隔についての考慮事項
以上のことを考えると、４日おきに１５０ｍｇのＩＦＧを（２８日間）投与すると、ほぼ等しい期間にわたりＥＣ５０を超える血漿濃度およびＩＣ５０を下回る血漿濃度が得られるものと予測される（図３Ｃ）。経験的に、ゴーシェ病患者由来の線維芽細胞、リンパ芽球およびマクロファージ内の最大シャペロニング（Ｅｍａｘ）が約１０〜１００μＭのＩＦＧ範囲内で発生と判定された（図４）。したがって「ＥＣ５０を超える」時限中のＧＣａｓｅ蓄積速度は、ＣｍａｘがＥｍａｘに近づくにつれて増大することが予想される。
【００９６】
初期酵素集積期
したがって、単純化したモデルを用いて、初期期間中に１日用量のＩＦＧを投与することでリソソームへのＧＣａｓｅ輸送量を最大限にするという最終目的が達成されること、すなわちこの用量によりＥＣ５０を超えるシャペロンの血漿濃度が得られることが発見された。この期間中、この用量は、酵素に対する特異的結合を可能にし、その安定性を増大し、酵素からリソソームまでの輸送および局在化を誘発する。この初期用量を、「初期酵素集積期」と呼ぶ。
【００９７】
ＩＦＧがＧＣａｓｅの合成速度に対しいかなる効果ももたないと仮定して、ＥＲからリソソームまで輸送された酵素の量とリソソーム内のその代謝回転速度に起因して失われた酵素の量の間の差異により、ＧＣａｓｅの蓄積すなわち「集積」速度が決定される。その結果リソソーム中のＧＣａｓｅレベルは、リソソームまで輸送されたＧＣａｓｅの量が代謝回転に起因して失われた酵素の量を超えない場合に増大し、一方ＧＣａｓｅのリソソームレベルは、リソソームまで輸送された酵素の量が代謝回転に起因して失われた酵素の量に置き換わるのに充分でない場合に減少する。リソソームに輸送されたＧＣａｓｅの量は（ＥＲ中の）ＩＦＧの濃度に左右されることから、リソソームＧＣａｓｅレベルの純変化は、ＩＦＧ濃度の関数となる。血漿および組織内でＧＣａｓｅの蓄積を引き起こすのに充分な濃度が達成される場合、蓄積速度は、ピーク（時として組織、細胞およびＥＲ内への進入に関連する時間のずれに起因してＣｍａｘの後）の間その最大値にあり、トラフ（時としてＣｍｉｎの後）の間最小値にある。したがって用量ＣｍａｘとＣｍｉｎの間の時間は、任意の所与の投薬間隔についてのＧＣａｓｅレベルの純変化を決定する。
【００９８】
本発明者らのモデルは、ピーク中の輸送およびトラフの間の基質代謝回転を最大にする投薬計画が結果として、ピークとトラフの両方の間の輸送に有利に作用する投薬計画よりも低いＧＣａｓｅ蓄積レベルをもたらすことを予測している。したがって所与の用量について、ＧＣａｓｅの蓄積速度は、用量間の間隔が短縮されるにつれて増大し、投薬間隔の長さが一定に保たれた場合、用量が増大するにつれて蓄積速度も同様に増大する（Ｃｍａｘ＜Ｅｍａｘの場合）。このことを考慮に入れて、本発明者らのモデルは、投薬間隔全体を通して輸送に有利に作用する投薬計画を投与することにより比較的短い期間（１〜２週間）で酵素レベルを集積させることができる、輸送および基質代謝回転を交互に最大化するピークとトラフを提供する投薬計画へと切り換えることによって、高くなったＧＣａｓｅレベルを維持することができる、ということを予測する。
【００９９】
或いは、初期「集積」期（長さ数日）を反復し、「無投薬」期（これも長さ数日）でこれを分離することも可能である。
【０１００】
以上のことは、野生ＧＣａｓｅ酵素とＩＦＧの相互作用に基づいて計算されたものである、ということに留意すべきである。しかしながら、ゴーシェ病を患う患者は、野生型酵素を有しておらず、かくして酵素代謝回転速度、酵素活性の残留レベル、酵素に対するＩＦＧの相対的親和力そして最大蓄積速度を生成する用量は、各々の突然変異について野生型のものとは異なる。例えば、ゴーシェ病において最も一般的な突然変異はＮ３７０Ｓである。この突然変異体は、野生型に比べて低いＩＦＧ親和力を有するが、半減期は野生型のものに類似している（Steet et al., PNAS 2006）。したがって、Ｎ３７０Ｓ代謝回転速度およびＧＣａｓｅ最大蓄積速度を生み出す用量は、野生型酵素と比べたＰＫおよびＰＤパラメータの差に基づいて推定可能である。
【０１０１】
【表３】
2010525084.tif 000005
【０１０２】
以上のことから、Ｎ３７０Ｓ突然変異を有するゴーシェ病患者に対して投与すべきＩＦＧについてのいくつかの投薬計画が（上述のパラメータを用いて）コンピュータ内でモデリングされた。具体的には、投薬計画は以下の通りであった：
１．  初期酵素集積期無しの２つの異なる維持投薬計画
ａ．  ３日おきに１５０ｍｇのＩＦＧ投与（図５Ａ）、
ｂ．  ４日おきに１５０ｍｇのＩＦＧ投与（図５Ａ）、
２．  初期酵素集積期とそれに続く２つの異なる維持投薬計画
ａ．  ７日間毎日１５０ｍｇのＩＦＧ投与とそれに続く４日おきに１５０ｍｇのＩＦＧ投与（図５Ｂ）、
ｂ．  ７日間毎日１５０ｍｇのＩＦＧ投与とそれに続く７日おきに１５０ｍｇのＩＦＧ投与（図５Ｂ）、
３．  「無投薬」期により分離された反復的酵素集積期
ａ．  ４日間毎日１５０ｍｇのＩＦＧ投与とそれに続くＩＦＧ投与無しの３日間（図５Ｃ）、
ｂ．  ３日間毎日１５０ｍｇのＩＦＧ投与とそれに続くＩＦＧ投与無しの４日間（図５Ｃ）。
【０１０３】
結果は図５に表示されている。初期酵素集積期無しの２日おきの投薬により、持続可能な最大ＧＣａｓｅ活性までの増大が得られるが、より長い時間にわたるものと推定されている。これは、薬理シャペロンを毎日投与することで有害な副作用を示し初期酵素集積期に耐容できない人にとって有益であるかもしれない。
【０１０４】
第２の投薬計画は、初期酵素集積期中にリソソーム内のＧＣａｓｅの蓄積速度を増大させ、この速度は維持期の間約５０日にわたり維持されるかまたは漸進的に低減するものと予想されている。この場合リソソーム内のＧＣａｓｅの再蓄積すなわち最大シャペロニングを可能にするために約３５〜４０日おきに後続する酵素集積期を企図する必要があるかもしれない。
【０１０５】
第３の投薬計画は、反復的酵素集積期（３〜４日）の間にリソソーム内のＧＣａｓｅ蓄積速度を増大させる一方で、介在する「無投薬」期（３〜４日）の間にシャペロンの解離および基質還元のための最大酵素活性期間を可能にすることが予想される。
【０１０６】
当業者であればわかるように、異なる突然変異を有する患者の治療に向けた用量および投薬間隔の最適化は、次のような突然変異酵素の特異的特性によって決定される：
１．  突然変異酵素の半減期：一部の突然変異では、Ｎ３７０Ｓ  ＧＣａｓｅよりも短い半減期を有し得る酵素が得られることから、これらの突然変異体にはさらに短い投薬間隔が必要とされるかもしれない。
２．  シャペロンの組織半減期：血漿半減期よりも長い組織半減期を有するシャペロンについては、各用量間により長い間隔が必要とされるかもしれない。
３．  ＥＣ５０／ＩＣ５０：異なる突然変異酵素は、ＩＦＧに対する親和力が低減している可能性があり、したがって用量の増加（必要に応じてＥＣ５０およびＩＣ５０を調整すること）が必要であるかもしれない。
４．  突然変異体のタイプ：数多くの患者が２つの異なる突然変異対立遺伝子（複合へテロ接合体）を有する可能性がある。両方の突然変異がＩＦＧに対し応答性をもつと考えられる場合には、両方の突然変異にとって最適である投薬計画を選択すべきである。用量の最適化は、最高のＥＣ５０に基づいていなければならず、一方投薬間隔または無投薬期の長さを選択する場合には最短の半減期を考慮に入れるべきである。さらに最適化の優先度は、ＧＣａｓｅ活性の合計増加に対し最大の寄与を提供すると予想されている突然変異体に与えられるべきである。
【０１０７】
ファブリー病のためのモデル投薬計画に適用される論理的根拠
上述のモデルは、その他の酵素のためのその他の特異的薬理シャペロンのための投薬計画を推定する上でも容易に応用可能である。先に記した通り、１−デオキシガラクトノジリマイシン塩酸塩（ＤＧＪ）をファブリー病治療のためのα−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧａｌＡ）用シャペロンとして使用することは臨床的試験において評価されつつある。
【０１０８】
複数回用量第Ｉ相試験が実施され、これは、８人の対象からなる２つのグループに分けられた合計１６人の健常なボランティアで構成されていた。各グループ内の６人の対象がＤＧＪを受け、２人はプラセボを受けた。１つのグループ内の全ての対象がプラセボまたは５０ｍｇを１日２回７日間受け、もう一方のグループ内の全ての対象はプラセボまたは１５０ｍｇを１日２回７日間受けた。対象は、試験の開始時点、７日間の治療後の７日目（Ｄａｙ７）、そして７日間の休薬期間後の１４日目（Ｄａｙ１４）に評価された。
【０１０９】
複数回用量第Ｉ相試験からのデータは、７日間ＤＧＪの投与を受けた健常なボランティアの白血球中のα−ＧＡＬレベルの用量依存的増加を示した。最高の用量レベルでα−ＧＡＬレベルのおよそ２倍の増加が存在し、この増加は、最後の用量から少なくとも７日間維持された。
【０１１０】
ＤＧＪおよび野生型α−ＧＡＬを用いた試験管内および生体内での動物および第Ｉ相試験の結果は、（１５０ｍｇのＤＧＪ塩酸塩を経口投与した後に）次のＰＫおよびＰＤ情報を生成した：
【０１１１】
【表４】
2010525084.tif 000006
【０１１２】
ＤＧＪはＩＦＧよりもはるかに短い血漿半減期を有することから、最適維持用量は、初期酵素集積期後のＩＦＧのものよりも短くなる可能性が高い。一例として、２８日間１日おきに１５０ｍｇのＤＧＪを投与するとその用量が投与される日に約１６時間の間血漿濃度がＥＣ５０を超え、残りの８時間の間ＩＣ５０を下回ると予測されている（図６)。薬物が一切投与されない２日目には、血漿濃度は、再び薬物が投与される翌日になるまで、ＩＣ５０を下回ると予想される（図６）。このパターンは、治療期間全体にわたり続行する。
【０１１３】
ゴーシェ病、ファブリー病およびポンペ病のための具体的投薬計画
以下の投薬計画は、ゴーシェ病、ファブリー病およびポンペ病向けに具体的に提供されているが、これらを、以下で記述する薬理シャペロンでの治療に適しているあらゆるリソソーム蓄積障害の治療のために使用することも可能である。
【０１１４】
ゴーシェ病
本発明の一実施形態においては、初期酵素集積（投入）期または薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が毎日経口投与される投薬計画の第１期は、約４日〜約１０日間、または約５日〜約８日間または約７日間である。
【０１１５】
この実施形態においては、日用量は薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）１日あたり約７５ｍｇ〜約３００ｍｇ、または約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇの範囲内かまたは約１５０ｍｇである。或いは、薬理シャペロン２２５ｍｇという１日用量を投与することもできる。
【０１１６】
第１期の完了後、維持期が開始される。
【０１１７】
１つの変形実施形態において、第１期の後で維持期の前に最初の休薬期間が実施される。
【０１１８】
１つの実施形態において、最初の休薬期間の間、第１期由来の薬理シャペロンの投与は約１〜１０日の間の期間中または約２〜８日、または約７日間停止される。
【０１１９】
別の実施形態において、第１期および休薬期間は、約１週間〜約３０週間の期間中、または約２週間〜約２５週間、または約２週間、または約２４週間持続し得る。
【０１２０】
１つの実施形態において、維持期の間の投薬間隔は、約２日おき〜約８日おきである。別の実施形態においては、この間隔は約４日おき〜約７日おきである。第３の実施形態では、この間隔は約７日おきである。
【０１２１】
これらの実施形態において、維持期の間に投与される用量（維持用量）は約７５ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲内であるかまたは１つの態様では一用量あたり約１５０ｍｇの薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）、または別の態様においては、一用量あたり２２５ｍｇである。これらの投薬量は上述の間隔毎に１回投与される。
【０１２２】
或いは、維持期は、一定の期間にわたる毎日の投与からなる。１つの実施形態においては、維持期は１〜８日、または約４〜７日、または約３日、または約７日の期間そしてそれに続く実質的に等しい長さの第２の「休薬期間」であり得る。例えば、維持期は、約７５ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約１２５ｍｇ〜約２７５ｍｇまたは２２５ｍｇの薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）の１日３回の投薬量とそれに続く約１〜１０日の間、または約２〜８日の間、または４日間の休薬期間つまり薬理シャペロンが一切投与されない期間で構成されていてよい。
【０１２３】
さらなる実施形態において、維持期および休薬期間は、約１週と約３０週の間または約２週間と約２５週間の間、または約２２週間の期間持続し得る。
【０１２４】
もう１つの変形実施形態において、維持期および第２の休薬期間が一切存在しない可能性がある。
【０１２５】
別の実施形態において、患者は、約０．５時間と約２４時間の間または約１時間と約１２時間の間または約２時間の期間の薬理シャペロンの投与の前後に、全く食物を摂取しない（すなわち「絶食する」）。
【０１２６】
１つの具体的例において、１５０ｍｇの酒石酸ＩＦＧが７日間毎日投与される（酵素集積期）。この７日間の後、３日間毎日２２５ｍｇの酒石酸ＩＦＧが投与され（投薬３日）、その後４日間の休薬期間が続く（休薬４日）。この投薬３日／休薬４日の投薬計画は無期限に反復される。
【０１２７】
別の具体的例において、１５０ｍｇの酒石酸ＩＦＧが７日間毎日投与される。この７日間の後、７日間毎日２２５ｍｇが投与され（投薬７日）、その後７日間の休薬期間が続く（休薬７日）。この投薬７日／休薬７日の投薬計画は、無期限に反復される。
【０１２８】
別の具体的例では、２２５ｍｇの酒石酸ＩＦＧが７日間毎日投与され（投薬７日）、その後７日間の休薬期間が続く（休薬７日）。この投薬７日／休薬７日の投薬計画は２４週間反復される。
【０１２９】
別の具体的例において、２２５ｍｇの酒石酸ＩＦＧが７日間毎日投与され（投薬７日）、その後７日間の休薬期間が続く（休薬７日）。次に２２５ｍｇの酒石酸ＩＦＧが維持期の間３日間毎日投与され（投薬３日）、その後４日間の第２の休薬期間が続く（休薬４日）。投薬３日／休薬４日の投薬計画は２２週間反復される。
【０１３０】
本発明の別の態様においては、初期酵素集積期の間に投与される用量の後、低い血漿濃度を持続させることが望ましいかもしれない。この実施形態においては、酵素レベルの上昇を得ることのできる用量と、それに続く、酵素がひとたびリソソーム内にある場合にシャペロンの解離を可能にするのと同時にＥＲを退出する酵素のレベルを高く持続させることのできる維持用量向けの低い日用量とで、初期酵素集積期が想定されている。
【０１３１】
この実施形態では、初期酵素集積期、または薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が毎日経口投与される投薬計画の第１期は、約４日〜約１４日、または約５日〜約１０日、または約７日間であり、投入用量は１日あたり約７５ｍｇ〜約３００ｍｇ、または約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇ、または約１５０ｍｇである。
【０１３２】
第１期の完了の後、維持期が開始され、そこでは、日用量は薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）約２５〜５０ｍｇまたは約２５ｍｇに削減される。
【０１３３】
本発明の第３の態様において、約２〜３日おきの間隔投薬が企図されている。この実施形態においては、約７５ｍｇ〜約３００ｍｇの間の薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が各間隔で投与されるか、または約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇが各間隔で投与されるかまたは約１５０ｍｇが各間隔で投与される。
【０１３４】
以上の実施形態の全てについて、維持期中の間隔が２日ではなく３日である場合、より高い用量を投与するのがさらに有効である。
【０１３５】
或いは、投薬計画は具体的な期間全体にわたり一定量の薬理シャペロンを投与することからなり得る。例えば、一定量の薬理シャペロンを１日２回、１日１回、３日おきに１回、４日おきに１回、毎週１回、２週間に１回、または一ヵ月に１回投与してもよい。このサイクルは無期限に反復されてよい。
【０１３６】
一実施形態において、約１０ｍｇ〜約２００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が毎日投与される。例えば、１０ｍｇ、または２５ｍｇ、または５０ｍｇ、または７５ｍｇ、または１００ｍｇまたは１２５ｍｇまたは１５０ｍｇまたは１７５ｍｇまたは２００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が毎日投与される。
【０１３７】
具体的な一実施形態において、１日２５ｍｇの酒石酸ＩＦＧが投与される。別の具体的実施形態では、１日１５０ｍｇの酒石酸ＩＦＧが投与される。
【０１３８】
代替的な一実施形態において、約１０ｍｇ〜約４００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が３日おきに１回、４日おきに１回、或いは一週間に１回投与される。例えば、１０ｍｇ、または２５ｍｇまたは５０ｍｇ、または７５ｍｇ、または１００ｍｇまたは１２５ｍｇまたは１５０ｍｇまたは１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、または４００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、酒石酸ＩＦＧ）が、３日おきに１回、４日おきに１回、または一週間に１回投与される。
【０１３９】
具体的な一実施形態において、１５０ｍｇの酒石酸ＩＦＧが４日に１回経口投与される。別の実施形態においては、１日あたり１５０ｍｇの酒石酸ＩＦＧが１週間に１回経口投与される。
【０１４０】
ファブリー病
本発明の一実施形態において、初期酵素集積（投入）相、または薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）が毎日経口投与される投薬計画の第１期は、約４日〜約１０日、または約５日〜約８日、または約７日間である。
【０１４１】
この実施形態において、第１期の間の薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）の日用量は、１日あたり約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、または１日あたり約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲内、または１日あたり約２５０ｍｇである。これらのレベルは、逐次漸増的に徐々に達成されてよい。例えば、薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）の用量は、一定期間（例えば、２週間）２５ｍｇで開始され、その後一定期間（例えば、２週間）１００ｍｇまで増量され、その後、残る集積期の間に投与される最高の用量まで増量されてよい。
【０１４２】
或いは、集積期の間に投与される最大量を最初に、すなわち逐次漸増投薬量無しで投与してもよい。
【０１４３】
第１期の完了後、維持期が開始される。一実施形態において、維持期の期間中の投薬間隔は、約２日おき〜約３日おきである。別の実施形態では、この間隔は約２日おきからである。
【０１４４】
これらの実施形態において、維持用量は一用量あたり約７５ｍｇ〜約２２５ｍｇ、または一用量あたり約１００ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲内にあり、具体的実施形態では一用量あたり約１５０ｍｇである。
【０１４５】
別の実施形態において、初期酵素集積期の後、定常状態の低い血漿濃度を持続させることが望ましいかもしれない。この実施形態において、酵素レベルの最大の上昇を得ることのできる用量と、それに続いて、酵素がひとたびリソソーム内にある場合にシャペロンの解離を可能にするのと同時にＥＲを退出する酵素のレベルを高く持続させることのできるはるかに低い日用量とで、初期酵素集積期が想定されている。
【０１４６】
この実施形態では、初期酵素集積期、または薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）が毎日経口投与される投薬計画の第１期は、約４日〜約１４日、または約５日〜約１０日、または具体的な実施形態においては約７日間であり、薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）の投入用量は１日あたり約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、または約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、または約２５０ｍｇであってよい。
【０１４７】
或いは、第１期は、約２週間〜約１２週間の期間、約４週間〜約８週間（例えば、約６週間）持続してよい。薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）の投入用量は、１日あたり約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、または１日あたり約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲内、または１日あたり約２５０ｍｇであってよい。
【０１４８】
上述の通り、集積期中のこれらの投薬量は逐次漸増的に達成されてもよいし、または集積期中に投与される最大量を最初に投与してもよい。
【０１４９】
第１期の完了後、日用量の削減が開始される。この実施形態においては、日用量は約２５〜５０ｍｇまで、または約２５ｍｇまで削減される。これが維持用量である。
【０１５０】
具体的な一実施形態において、集積期は、ＤＧＪ塩酸塩が２５ｍｇ／日で２週間、１００ｍｇ／日で２週間、そして２５０ｍｇ／日で２週間の経口投与、それに続くＤＧＪ塩酸塩が２５ｍｇ／日での期間（例えば、２４週間）、とそれに続く５０ｍｇ／日の経口投与の一定期間（例えば、６６週間）で構成されている。
【０１５１】
本発明の第３の態様において、約２〜３日おきの間隔投薬が企図されている。この実施形態において、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの間の薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪ塩酸塩）が各間隔で投与されるか、または約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇが各間隔で投与されるかまたは約１５０ｍｇが各間隔で投与される。具体的実施形態において、ＤＧＪ塩酸塩は２日おきに５０ｍｇ、１５０ｍｇまたは２５０ｍｇで投与される。
【０１５２】
以上の実施形態の全てについて、間隔が２日ではなく３日である場合、より高い間隔投薬を投与するのがさらに有効である。
【０１５３】
上述のＩＦＧの場合と同様に、患者が初期酵素集積期中に投与される用量を耐容できず、この期の無い間隔投薬ではＥＣ５０以上の血漿濃度を達成できない場合、より漸進的な「投入」期間とそれに続く低い維持日用量が適切であるかもしれない。例えば、一実施形態において、ＤＧＪは、２週間１日あたり５０ｍｇ投与され、その後２週間１日あたり２００ｍｇ投与され、その後２週間１日あたり５００ｍｇ投与され、かつその後治療の持続期間中１日あたり５０ｍｇ投与される。
【０１５４】
さまざまな実施形態において、酵素集積期の間、投薬量を上昇させてよい。例えば、１日毎について、２５、１００および２５０ｍｇの逐次漸増投薬量を、すなわち１日目に２５ｍｇ、２日目に１００ｍｇそして３日目に２５０ｍｇを投与してよい。かかる実施形態は、酵素集積期の間に対象をより高い投薬量にゆっくりと順応させるために使用してよい。或いは、酵素集積期中の投薬量は、この相の持続時間全体を通して恒常であってもよい。
【０１５５】
一実施形態において、１〜７日の期間中、１日１回、１日あたり約７５ｍｇ〜約８００ｍｇの薬理シャペロンまたは約１２５ｍｇ〜約６００ｍｇ、または約２５０ｍｇまたは５００ｍｇが投与され、その後、等しいまたは実質的に等しい長さの休薬期間が続く。例えば、投薬計画は、薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪまたはＤＧＪ塩酸塩）の１日投薬量を受ける連続３日間とそれに続く投薬量を受けない連続４日間；または１日投薬量を受ける連続４日間とそれに続く投薬量を受けない連続３日間で構成されていてよい。
【０１５６】
具体的な一例において、ファブリー病のための投薬計画は、連続３日間１日１回２５０ｍｇまたは５００ｍｇのＤＧＪ塩酸塩の経口投与とそれに続く薬理シャペロン（すなわち、ＤＧＪ塩酸塩）を摂取しない４日間を必要とする可能性がある。或いは、投薬計画は、連続７日間１日１回２５０または５００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、ＤＧＪまたはＤＧＪ塩酸塩）とそれに続く薬理シャペロンを摂取しない７日間で構成されていてよい。
【０１５７】
或いは、１〜７日間１日あたり約７５ｍｇ〜約３００ｍｇ、または約１２５ｍｇ〜約２２５ｍｇ、または１５０ｍｇを投与し、その後長さが不等な休薬期間が続いてもよい。例えば、投薬計画は、投薬量を受ける１日とそれに続く投薬量を受けない連続６日間；１日投薬量を受ける連続２日間とそれに続く投薬量を受けない連続５日間；１日投薬量を受ける連続５日間とそれに続く投薬量を受けない連続２日間；または１日投薬量を受ける連続６日間とそれに続く投薬量を受けない１日を必要とする可能性がある。
【０１５８】
ポンペ病
一実施形態において、１〜７日の期間中１日１回１日あたり約１０００ｍｇ〜約８０００ｍｇの薬理シャペロン（例えば、ＤＮＪ）、または約２０００ｍｇ〜約６０００ｍｇ、または２５００ｍｇまたは５０００ｍｇの薬理シャペロンが経口投与され、その後等しいまたは実質的に等しい長さの休薬期間が続く。例えば、投薬計画は、３日または４日の「投薬」（薬理シャペロンの毎日投与）とそれに続く４日または３日の「休薬」（薬理シャペロンの投与無し）で構成されていてよい。或いは、投薬計画は、投薬７日と休薬７日で構成されてもよい。
【０１５９】
具体的な一実施形態において、２５００ｍｇのＤＮＪ（その薬学的に許容できる塩を含む）が連続３日間毎日経口投与され、その後薬理シャペロンを投与しない連続４日間が続く。一変形実施形態において、５０００ｍｇのＤＮＪ（その薬学的に許容できる塩を含む）が連続３日間毎日経口投与され、その後薬理シャペロンを投与しない連続４日間が続く。一変形実施形態において、５０００ｍｇのＤＮＪ（その薬学的に許容できる塩を含む）が、連続７日間毎日経口投与され、その後薬理シャペロンを投与しない連続７日間が続く。
【０１６０】
上述の投薬量は、逐次漸増的に達成してもよい。例えば、最初のサイクル（すなわち、最初の３日または最初の７日）における投薬量は、５００ｍｇ、第２のサイクル中は１０００ｍｇ、第３のサイクル中は２５００ｍｇ、そして第４のサイクル中は５０００ｍｇであってよい。
【０１６１】
当業者であれば、各々の酵素および候補シャペロンについて具体的なＰＫおよびＰＤに基づいて、その他のリソソーム蓄積症を治療するためリソソーム酵素の競合阻害物質であるその他の薬理シャペロン用の適切な投薬計画を推定するのにこの戦略を応用することができる。
【０１６２】
調合および投与
イソファゴミンは、例えば、錠剤、カプセルまたは液剤の形での経口投与または注射用無菌水溶液の形での投与を含めたあらゆる投与経路に適した形で投与可能である。それは、任意には即効、遅延、修正、持続、パルス型、または制御型放出の用途のため任意には着香および着色剤を伴って錠剤、カプセル、胚珠剤（ｏｖｕｌｅ）、エリキシル剤、溶液または懸濁液、ジェル、シロップ、うがい薬または使用前に水またはその他の適切なビヒクルを用いて構成するための乾燥粉末の形で経口投与され得る。錠剤、カプセル、口中錠、トローチ、丸薬、ボーラス剤、粉末、ペースト、顆粒、弾丸状カプセル、またはプレミックス調合物などの固体組成物も使用してよい。経口用途向けの固体または液体組成物は、当該技術分野において周知の方法にしたがって調製可能である。かかる組成物は同様に、固体または液体形態でありうる１つ以上の薬学的に許容できる担体および賦形剤も含有していてよい。化合物を経口投与向けに調合する場合、錠剤またはカプセルは、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容できる賦形剤を用いて従来の手段により調製可能である。錠剤は、当該技術分野において周知の方法によりコーティングされてよい。
【０１６３】
薬学的に許容できる賦形剤には、微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウムおよびグリシン、崩壊剤、例えば、デンプン（好ましくはトウモロコシ、ジャガイモまたはタピオカデンプン）、グリコール酸ナトリウムデンプン、クロスカルメロースナトリウムおよび一部の複合ケイ酸塩、および造粒結合剤、例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルエチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン、およびアカシアも含まれる。さらに、潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリルおよびタルクが含まれてもよい。
【０１６４】
ゼラチンカプセル中の充填材として類似のタイプの固体組成物も利用してよい。この点において好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖または高分子量のポリエチレングリコールが含まれる。水溶液および／またはエリキシル剤のためには、作用物質をさまざまな乳化剤および／または懸濁剤および希釈剤、例えば、水、エタノール、プロピレングリコールおよびグリセリンおよびそれらの組合せと組合せてよい。
【０１６５】
経口投与のための液体調製物は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液などの形をとっていてもよいし、または使用前に水または別の適切なビヒクル（例えば、エタノールまたはグリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール、それらの好適な混合物、ならびに植物油）と共に構成するための乾燥製品としての形態をとっていてもよい。このような液体調製物は、懸濁剤（例えば、水、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用油）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコールまたは分留植物油）；および防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの薬学的に許容できる添加剤を用いて、従来の手段によって調製されてよい。経口投与向けの調製物は、セラミド特異的グルコシルトランスフェラーゼ阻害物質の制御放出または持続放出を提供するように適切に調合され得る。
【０１６６】
適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散の場合には所要粒径の維持、および界面活性剤の使用などによって維持可能である。微生物の作用の予防は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ベンジルアルコール、ソルビン酸などといったさまざまな抗細菌および抗真菌剤により得ることができる。多くの場合において、例えば、糖または塩化ナトリウムなどの等張剤を含み入れることが合理的である。注射用組成物の長時間吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンといった吸収を遅延させる剤の組成物で使用することによって得ることができる。
【０１６７】
非経口／注射可能（例えば、静脈内ボーラス注入または輸液によるかまたは筋内、皮下または髄腔内経路を介した）用途に適したイソファゴミンの医薬調合物には、一般に、無菌水溶液または無菌注射用溶液または分散の即席調合用の分散または無菌粉末が含まれる。酒石酸イソファゴミンは、必要に応じて防腐剤を加えて、単位用量形態、アンプルまたはその他の単位用量の容器または複数回用量の容器の形態をとっていてもよい。注射用組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンの形をとってよく、懸濁剤、安定剤、可溶化剤および／または分散剤などの調合剤を含有していてよい。或いは、活性成分は、使用前に例えば無菌で発熱物質を含まない水といった適切なビヒクルで再構成するための無菌粉末形態であってもよい。全ての場合において、形態は無菌でなくてはならず、容易に注射針を通過する流動性を有していなければならない。それは、製造および保管条件下で安定していなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。無菌条件下での適切な非経口調合物の調製は、当業者にとって周知である標準的な薬学的技術により容易に達成される。
【０１６８】
無菌注射溶液は、必要に応じて以上で列挙したその他の成分のさまざまなものと共に適切な溶媒中に所要量でイソファゴミンを取込み、その後ろ過または最終滅菌を行なうことによって調製される。一般に、分散剤は、以上に列挙したその他の所要成分および基本的分散媒質を含有する無菌ビヒクル中にさまざまな滅菌済み活性成分を取込むことによって調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、事前に滅菌ろ過した溶液から、活性成分に任意の付加的な所望の成分が加わった粉末を生成する真空乾燥および凍結乾燥技術である。
【０１６９】
防腐剤、安定剤、染料さらには着香剤を、医薬組成物中に提供してもよい。防腐剤の例としては、安息香酸ナトリウム、アスコルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが含まれる。酸化防止剤および懸濁剤も使用してよい。
【０１７０】
製剤中に含み入れてよいさらなる薬学的に許容できる担体は、緩衝液、例えば、クエン酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、および重炭酸塩緩衝液、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質、例えば、血清アルブミン、コラーゲンおよびゼラチン；塩、例えば、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡおよび塩化ナトリウム；リポソーム；ポリビニルピロリドン；糖、例えば、デキストラン、マンニトール、ソルビトール、およびグリセロール；プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ−４０００、ＰＥＧ−６０００）；グリセロール、グリシンまたはその他のアミノ酸および脂質である。製剤と共に使用するための緩衝系としては、クエン酸塩、酢酸塩、重炭酸塩、およびリン酸塩緩衝液が含まれる。リン酸塩緩衝液が好ましい実施形態である。
【０１７１】
調合物は同様に、非イオン洗浄剤も含有し得る。好ましい非イオン洗浄剤としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−１１４、ノニデットＰ−４０、オクチル−α−グルコシド、オクチル−β−グルコシド、ブリッジ３５、プルロニック、およびトゥイーン２０が含まれる。
【０１７２】
投与（送出）経路としては、経口（例えば、錠剤、カプセルとしてかまたは摂取可能溶液として）、局所、粘膜（例えば、吸入用の鼻腔用スプレーまたはエアロゾルとして）、鼻腔、非経口（例えば、注射剤形）、胃腸、髄腔内、腹腔内、筋内、静脈内、子宮内、眼内、皮内、頭蓋内、気管内、腔内、脳室内、脳内、皮下、眼科的（硝子体内または前房内）、経皮、直腸、口腔、硬膜外および舌下のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０１７３】
イソファゴミンの上述の非経口製剤の投与は、調製物の定期的なボーラス注入によるものであってよく、または、体外貯蔵器（例えば、静注用バッグ）または体内貯蔵器（例えば、生体侵食性移植片）からの静脈内または腹腔内投与によって投与されてよい。例えば、各々参照により本明細書に援用されている米国特許第４，４０７，９５７号明細書および同第５，７９８，１１３号明細書を参照のこと。肺内送達の方法および器具は、例えば、各々参照により本明細書に援用されている米国特許第５，６５４，００７号明細書、同第５，７８０，０１４号明細書および同第５，８１４，６０７号明細書の中に記載されている。その他の有用な非経口送達系としては、エチレン酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な輸液系、ポンプ送達、カプセル化細胞送達、リポソーム送達、針送達型注射、無針注射、ネブライザ、エアロゾル化装置、電気穿孔、および経皮パッチが含まれる。無針注射装置は、参照により本明細書に援用されている米国特許第５，８７９，３２７号明細書；同第５，５２０，６３９号明細書；同第５，８４６，２３３号明細書および同第５，７０４，９１１号明細書の中に記載されている。上述の製剤のいずれもこれらの方法を用いて投与可能である。さらに、詰め替え可能なペン型注射器および無針注射装置などの患者に便利なように設計されたさまざまな装置を本明細書中で論述されている本発明の製剤について使用してよい。
【０１７４】
具体的な一実施形態において、酒石酸イソファゴミンは、賦形剤としてラクトースおよびステアリン酸マグネシウムを伴う粉末充填型カプセルとして投与される。
【０１７５】
併用療法
医薬組成物は、候補化合物（薬理シャペロン）と組合せてその他の生物活性ある物質を含んでいてよく、またはその他の生物活性物質と組合せて投与されてもよい、かかる併用療法としては、Ｃｅｒｅｚｙｍｅ（登録商標）、Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）、Ａｌｄｕｒａｚｙｍｅ（登録商標）、Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）およびＲｅｐｌａｇａｌ（登録商標）などの補充酵素との組合せ；Ｚａｖｅｓｃａ（登録商標）または参照により本明細書に援用されている米国特許第６，９１６，８０２号明細書および６，０５１，５９８号明細書などに開示されている分子などの基質還元療法（基質抑制療法としても公知である）との組合せ；およびＧＣａｓｅのための遺伝子を含む遺伝子療法ベクターまたは細胞との組合せが含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【実施例】
【０１７６】
実施例１：酒石酸イソファゴミンを用いたゴーシェ病の治療のための投薬計画
試験の主要な目標は、１型ＧＤを患う患者における経口投与型酒石酸ＩＦＧの２つの投薬計画の安全性、耐容性および薬力学を評価することにある。以上で記した通り、１型ＧＤにおいて一般的な突然変異はＮ３７０Ｓである。
【０１７７】
これは、酒石酸イソファゴミンの安全性および耐容性を査定するための第２相無作為化２用量グループ非盲検試験である。試験は、１８才〜６５才の間の年令の１型ＧＤを患う未治療患者において実施される。およそ１６人の患者が登録される。
【０１７８】
この試験は、７日のスクリーニング期間とそれに続く対象適格判定無作為化、２４週の治療期間とそれに続く１４日のフォローアップ期間で構成される。
【０１７９】
来診は、７日目（±３日）、１日目（±３日）、７日目（±３日）、１４日目（±３日）、２８日目（±３日）、５６日目（±３日）、８４日目（±３日）、１１２日目（±３日）、１４０日目（±３日）、１６８日目（±３日）、および１８２日目（±３日）に予定される。１日目以降で試験完了前に試験から対象が撤退する場合、その対象には１６８日目（来診１０）に予定されている全ての手順を受けるように促される。
【０１８０】
１日目に患者を等しい割合で以下の２つのグループのうちの一方に無作為化する：
１．  酒石酸イソファゴミン、１週間毎日経口で１５０ｍｇとその後２３週間４日おきに１５０ｍｇ
２．  酒石酸イソファゴミン、１週間毎日経口で１５０ｍｇとその後２３週間７日おきに１５０ｍｇ。
【０１８１】
酒石酸ＩＦＧは、２５ｍｇのカプセルで投与される。食物効果が予想されることから、薬物投与の前後２時間、患者は食物を摂取しない。
【０１８２】
試験の二次的目標は、１型ゴーシェ病を患う未治療患者において経口投与された酒石酸イソファゴミンの２つの用量グループの薬力学的効果を査定することにある。評価される二次的評価項目は以下の通りである：
・  白血球中のβ−グルコセレブロシダーゼ（ＧＣａｓｅ）レベル
・  白血球中のグルコセレブロシド（ＧｌｃＣｅｒ）レベル
・  血漿中のα−シヌクラインレベル
・  血漿中の血漿（ＢＡＰ）活性中の骨特異的アルカリホスファターゼ活性
・  血漿中のキトトリオシダーゼ活性
・  血漿中のインターロイキン８レベル
・  血漿中のインターロイキン１７レベル
・  血漿中のマクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）レベル
・  血漿中の肺および活性化調節ケモカイン（ＰＡＲＣ）活性
・  血漿中の酒石酸塩耐性酸ホスファターゼ５ｂ（ＴＲＡＣＰ５ｂ）活性、
・  血漿中の血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）レベル、
・  ベースラインからの肝臓体積変化、
・  ベースラインからの脾臓体積変化、
・  ベースラインからのヘモグロビンレベルの変化、
・  ベースラインからのヘマトクリットレベルの変化、
・  ベースラインからの血小板数の変化、
・  ベースラインからの左または右大腿骨の骨ミネラル密度の変化、
・  ベースラインからの脊椎の骨ミネラル密度の変化、
・  ベースラインからの左または右大腿骨のＸ線写真所見の変化
・  ベースラインからの脊椎のＸ線写真所見の変化。
【０１８３】
ベースライン後の薬力学パラメータを、９５％の信頼性レベルで対応ある両側ｔ検定手順によりベースライン値と比較する。薬力学パラメータの値に対する治療の効果を判定するために、分散モデルの反復的測定分析を行なう。この分析モデルでは、遺伝子型および遺伝子型内部の対象が無作為効果であり、治療、来診および来診と治療（ｖｉｓｉｔ−ｂｙ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の相互作用が固定効果であり、ベースライン値が共変量である。異なる時点間の共分散構造をモデリングするために、自己回帰モデルを使用する。治療の比較は、５％の有意性レベルで査定される。さらに、治療の差異についての９５％信頼区間が設けられる。
【０１８４】
ＩＦＧを用いたこれらの投入／間隔投薬計画の一方または両方が、ゴーシェ病を治療するために治療上有効であると予想される。この投薬計画に応答するものと予想された一部の遺伝子型としてはＮ３７０Ｓ／Ｎ３７０Ｓ、Ｎ３７０Ｓ／Ｌ４４４Ｐ、Ｎ３７０Ｓ／８４ｉｎｓＧ、Ｎ３７０Ｓ／Ｒ１６３Ｘ、Ｎ３７０Ｓ／Ｙ２１２Ｈ、Ｌ４４４Ｐ／ｄｅｌ１３６Ｔ、Ｌ４４４Ｐ／Ｆ２１６Ｙ、Ｌ４４４Ｐ／Ｌ１７４Ｆ、Ｇ２０２Ｒ／Ｒ４６３Ｃ、Ｌ４４４Ｐ／Ｌ４４４Ｐ、およびＫ７９Ｎ／錯体Ｂエクソン９／１０（タイプ３ＧＤ）が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０１８５】
実施例２：酒石酸イソファゴミンを用いたゴーシェ病治療のための投薬計画
試験の主要な目標は、１型ＧＤを患う患者における経口投与型酒石酸ＩＦＧの１つの投薬計画の安全性、耐容性および薬力学を評価することにある。
【０１８６】
これは、酒石酸イソファゴミンの安全性および耐容性を査定するための第２相無作為化２用量グループ非盲検試験である。試験は、１８才〜６５才の間の年令の１型ＧＤを患う患者において実施される。およそ１６人の患者が登録される。
【０１８７】
来診は、７日目（±３日）、１日目（±３日）、７日目（±３日）、１４日目（±３日）、２８日目（±３日）、５６日目（±３日）、８４日目（±３日）、１１２日目（±３日）、１４０日目（±３日）、１６８日目（±３日）、および１８２日目（±３日）に予定される。１日目以降で試験完了前に試験から対象が撤退する場合、その対象には１６８日目（来診１０）に予定されている全ての手順を受けるように促される。
【０１８８】
この試験は、７日のスクリーニング期間とそれに続く対象適格判定無作為化、２４週の治療期間とそれに続く１４日のフォローアップ期間で構成される。
【０１８９】
１日目に対象を、プラセボグループまたは全治療期間にわたり３日おきに経口で１５０ｍｇの酒石酸イソファゴミンのグループに等しい割合で無作為化する。酒石酸ＩＦＧは、２５ｍｇ入りカプセルで投与される。食物効果が予想されることから、患者は、薬物投与の前後２時間絶食する。
【０１９０】
二次的目標の評価は、実施例１について以上で概説した通りに実施される。
【０１９１】
この投薬計画はゴーシェ病を治療するために治療上有効であるものと予想される。
【０１９２】
実施例３：安全性、耐容性および薬物動態およびα−ガラクトシダーゼＡ酵素活性に対する影響を評価するための単回用量ＤＧＪの投与
この実施例は、健常なボランティアにおける安全性、耐容性、薬物動態およびα−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧＡＬ）酵素活性に対するＤＧＪの影響を評価するためのＤＧＪの１日２回の経口用量の無作為化された２重盲検プラセボ対照第Ｉｂ相試験について記述している。
【０１９３】
試験の設計および持続時間
この試験は、経口投与後のＤＧＪの経口投与後のＤＧＪの安全性、耐容性、薬物動態およびα−ＧＡＬ酵素活性に対する影響を評価するためのヒト初回投与、単一施設、第Ｉｂ相、無作為化、２重盲検、１日２回用量、プラセボ対照試験であった。この試験では、７日間の追訪を伴って連続７日間経口投与された、５０または１５０ｍｇ１日２回の用量をＤＧＪまたはプラセボを受けた８人の対象（６人が被験薬で２人がプラセボ）からなる２つのグループをテストした。対象は、投薬の１４時間前から投薬終了２４時間後まで、治療施設内に収容された。食事を予定表により制御し、薬物投与後４時間は対象が自由に行動できるようにした。
【０１９４】
薬物動態パラメータを１日目と７日目の血漿中ＤＧＪについて計算した。さらに、尿中に排泄された（投薬から１２時間後）ＤＧＪの累積百分率を計算した。投薬開始前、そして試験開始後１００時間、１５０時間そして３３６時間目にも、白血球（ＷＢＣ）中のα−ＧＡＬ活性を計算した。
【０１９５】
試験対象集団
対象は、一般社会人からなり、施設に収容されたことのない１９才以上５０才以下の年令の健常な非喫煙男性ボランティアであった。
【０１９６】
安全性および耐容性の査定
バイタルサイン、臨床検査パラメータ（血清化学、血液学および尿検査）、ＥＣＧ、身体検査を評価することによっておよび治療期間中の有害事象を記録することによって安全性を判定した。
【０１９７】
薬物動態試料採取
投薬の前およびその後０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１および１２時間の時点でＥＤＴＡの入った血液収集試験管内に血液試料（各１０ｍＬ）を収集した。血液試料を氷浴中で冷却し、可能なかぎり早く冷却下で遠心分離した。血漿試料を２つのアリコートに分割し、検定中２０±１０℃で保管した。試験の終了時に、全ての試料を分析のためＭＤＳ  Ｐｈａｒｍａ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｉｎｃｏｌｎ）に移送した。１日目と７日目にＤＧＪ投与後の最初の１２時間の腎クリアランスを判定するためにＤＧＪを分析する目的で各対象から完全な尿排出量を収集した。
【０１９８】
ＷＢＣα−ＧＡＬ酵素活性試料採取
投薬前およびその後１００時間、１５０時間および３３６時間の時点で抽出されたＥＤＴＡおよびＷＢＣを含有する血液収集試験管内に、血液試料（各１０ｍＬ）を収集した。上述の通りに試料を処理し、Desnick, R.J. (ed) Enzyme therapy in genetic diseases. Vol 2. Alan R Liss, New York, pp 17-32.の中で記述されている通りに、ＷＢＣα−ＧＡＬ酵素活性レベルを決定した。統計的分析。臨床検査評価、身体検査、有害事象、ＥＣＧ監視およびバイタルサイン査定を含む安全性データを、治療グループおよび収集時点別にまとめた。定量的安全性データならびにベースラインとの差異について、記述統計データ（算術平均、標準偏差、中央値、最小および最大値）を計算した。定性的安全性データの分類のために、頻度計数値をコンパイルした。さらに、正常範囲外シフトを記載したシフト表を、臨床検査結果について提供した。身体検査の結果およびＥＣＧについても、正常−異常シフト表を提示した。
【０１９９】
ＭｅｄＤＲＡ７．０バージョンディクショナリを用いて有害事象をコード化し、有害事象を報告している対象の数および報告された有害事象の数について治療別にまとめた。報告者用語、コード化された用語、治療グループ、重症度そして治療との関係を含めた対象別有害事象データリストを提供した。治療別に、併用薬および病歴を列挙した。
【０２００】
記述統計データ（算術平均、標準偏差、変動係数、試料サイズ、最小値、最大値および中央値）を用いて、治療グループ別に薬物動態パラメータをまとめた。
【０２０１】
結果
プラセボで治療された対象はいずれもＡＥを有さず、５０ｍｇ１日２回または１５０ｍｇ１日２回のＤＧＪを受けたいかなる対象もＡＥを示さなかった。５０ｍｇ１日２回および１５０ｍｇ１日２回で用量が投与された場合、健常な男性対象のこのグループにとって、ＤＧＪは安全で充分な耐容性があると思われた。
【０２０２】
臨床試験において正常範囲からの偏差が投薬後に発生したが、いずれも臨床的に有意であるとは判断されなかった。試験全体を通して調査されたいずれのパラメータにも、臨床的に関連性ある平均データシフトは全く存在しなかった。いずれのバイタルサイン、ＥＣＧまたは身体検査パラメータにも、臨床的に関連性ある異常は全く発生しなかった。
【０２０３】
薬物動態評価
以下の表は、試験中に得られた薬物動態データをまとめている。
【０２０４】
【表５】
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【０２０５】
ＤＧＪの薬物動態特性は全ての対象および全ての用量レベルにおいて充分に示された。平均して、全ての用量レベルについておよそ３時間でピーク濃度が発生した。ＤＧＪのＣｍａｘは、用量を５０ｍｇから１５０ｍｇまで増大させた場合に用量に比例して増加した。
【０２０６】
平均除去半減期（ｔ１／２）は、１日目の５０ｍｇと１５０ｍｇの用量レベルにおいて同程度であった（２．５時間対２．４時間）。
【０２０７】
投薬後１２時間の期間にわたって排泄されたＤＧＪの平均百分率は、１日目でそれぞれ５０ｍｇおよび１５０ｍｇの用量レベルで１６％と４２％であり、７日目にはそれぞれ４８％と６０％まで増大した。
【０２０８】
α−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧＡＬ）酵素活性
試験中に得たα−ＧＡＬ酵素活性データは、図１に示されている。ＤＧＪは、５０ｍｇ１日２回又は１５０ｍｇ１日２回の投薬量で対象におけるＷＢＣα−ＧＡＬ酵素活性を阻害しなかった。その上、ＤＧＪは、健常なボランティアにおけるＷＢＣα−ＧＡＬ活性増加の用量依存的傾向を作り出した。α−ＧＡＬ酵素レベルは、プラセボ、５０ｍｇ１日２回のＤＧＪおよび１５０ｍｇ１日２回のＤＧＪが投与された対象のＷＢＣで測定した。プラセボは、ＷＢＣα−ＧＡＬ酵素レベルに全く影響を及ぼさなかった。プラセボに応答した酵素レベルの変動は、臨床的に有意なものではなかった。５０ｍｇ１日２回および１５０ｍｇ１日２回のＤＧＪは共に、正規化されたＷＢＣα−ＧＡＬ酵素レベルを増加させた。５０ｍｇ１日２回のＤＧＪに応答して、ＷＢＣα−ＧＡＬ酵素活性は、それぞれ投薬後１００時間、１５０時間および３３６時間で投薬前レベルの１２０％、１３０％および１４５％まで増大した。１５０ｍｇ１日２回のＤＧＪに応答して、ＷＢＣα−ＧＡＬ酵素活性は、それぞれ投薬後１００時間、１５０時間および３３６時間で、投薬前レベルの１５０％、１８５％および１８５％まで増大した。
【０２０９】
実施例４：ＤＧＪ塩酸塩を用いたファブリー病治療のための投薬計画
この実施例は、ファブリー病患者の治療のために企図されているＤＧＪを用いた投薬計画について記述している。
【０２１０】
登録患者
（遺伝子型によって確認された）α−ＧＡＬ中の公知のミスセンス突然変異を有するファブリー病患者；最高６ヵ月間ＥＲＴを中止する意志のある、現在ＥＲＴ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標））を受けている患者；またはこれまでＥＲＴ治療を受けたことのない新たに診断された患者。
【０２１１】
試験の設計
患者には、２５０ｍｇ／日の用量で７日間ＤＧＪ塩酸塩またはプラセボを経口投与する。これが初期酵素集積期である。第１期の完了後、維持期が開始され、１日おきに１５０ｍｇの維持用量でＤＧＪまたはプラセボを投与する。
【０２１２】
ＧＬ−３沈着物
ベースライン、３ヵ月および６ヵ月の時点で、皮膚、腎臓および心臓の生検を実施し、皮膚線維芽細胞、心筋細胞およびさまざまな腎細胞内のＧＬ−３沈着物について評価する。ＧＬ−３のクリアランスが全ての細胞において観察されることが予想されている。従来のＥＲＴによる治療では心筋細胞または腎有足細胞または皮膚組織内のクリアランスは、示されなかった（ただし、ＥＲＴ６ヵ月目および１８ヵ月目での尿沈渣の変化は、酵素補充により腎組織内のスフィンゴ糖脂質の蓄積のクリアランスがあったことを示唆していた：Clin Chim Acta. 2005;360(1-2):103-7)）。
【０２１３】
α−ＧＡＬ活性
さらに、生検から得た分画された組織内および（ベースラインでおよび毎月収集される血液からの）血液白血球および血漿内で、α−ＧＡＬ活性を査定する。単独療法としてまたはＥＲＴと組合せたＤＧＪ治療は、白血球、線維芽細胞および血漿中で、ベースラインよりも約２倍〜約１０倍、α−ＧＡＬ活性を増大させるものと予想されている。同様に、ＥＲＴ治療で実証されなかったα−ＧＡＬ活性の増加が組織内で観察されることも予想されている。
【０２１４】
尿検査
α−ＧＡＬおよびＧＬ−３についてベースラインおよび毎月、尿と尿沈渣を分析する。さらに、ＣＴＨ、ラクトシルセラミド、セラミドなどのその他の脂質の異常な存在およびグルコシルセラミドおよびスフィンゴミエリンの異常な減少または不在も同様に評価される。
【０２１５】
腎疾患の状態を監視するためにアルブミン（タンパク尿）およびクレアチンを含めたタンパク質の存在についても、尿を分析する。
【０２１６】
ＤＧＪ治療はタンパク尿を減少させ、ＧＬ−３沈渣を減少させると予想されている。
【０２１７】
心臓解析
心臓形態（例えば、左心室肥大）および心臓機能（例えば、うっ血性心不全、虚血、梗塞、不整脈）を査定するために、上述の生検に加えて、ひずみ速度評価を伴うＭＲＩおよび心エコー図を、ベースライン、３ヵ月目および６ヵ月目に実施する。その他の治療では、左心室肥大の直接的減少または左心室駆出の増大が実証されたことはない。（腎不全に関連する）高血圧が出血性脳卒中のリスクを増大し得ることから、高血圧も同様に評価した。
【０２１８】
あらゆる導通異常、不整脈、脚ブロックまたは頻脈または徐脈の改善を分析するため、ベースラインおよび診察毎に、心電図を実施する。以前の治療は、これらの症候を呈する患者において改善を示さなかった。
【０２１９】
腎臓解析
ＧＬ−３のクリアランスについて光学顕微鏡および電子顕微鏡を用いて、腎有足細胞を評価する。
【０２２０】
脳解析
虚血性卒中の原因となり得る虚血領域の削減について査定するため、ベースラインおよび試験の終了時点で、ＭＲＩおよびＭＲＡを実施する。ＤＧＪによるＧＬ−３集積の削減は、卒中の罹患率を低減させることが予想されている。補充酵素は、血液脳関門を横断できないことから、ＥＲＴで脳虚血の改善が達成されたことは全く無い。
【０２２１】
眼科
眼科検査は、白内障などの角膜および水晶体混濁の減少を査定するために実施される。
【０２２２】
神経因性疼痛
肢端感覚異常の減少を評価するために、ベースラインにおいておよび毎月の診察毎に患者に対し主観的な患者アンケート調査を行なう。これは、末梢神経細胞の微小血管系内のＧＬ−３クリアランスの証拠であり得る。
【０２２３】
神経障害
末梢神経障害を評価するためには、定量的官能試験（ＣＡＳＥ試験）を使用する。
【０２２４】
発汗減少
エクリン汗腺に連結されている小神経線維を査定する定量的発汗刺激性軸索反射試験（ＱＳＡＲＴ）を用いて、汗腺を評価する。汗腺の改善は発汗増加と相関関係を有するはずであり、同様に、末梢神経細胞の微小血管系内のＧＬ−３クリアランスの証拠でもあり得る。この分析は、ベースラインおよび３ヵ月目および６ヵ月目で実施される。
【０２２５】
この投薬計画はファブリー病を治療するために治療上有効であるものと予想される。ＤＧＪでの治療に応答することが予想されるいくつかの特異的ミスセンス突然変異としては、Ｌ３２Ｐ、Ｎ３４Ｓ、Ｔ４１Ｌ、Ｍ５１Ｋ、Ｅ５９Ｋ、Ｅ６６Ｑ、Ｉ９１Ｔ、Ａ９７Ｖ、Ｒ１００Ｋ、Ｒ１１２Ｃ、Ｒ１１２Ｈ、Ｆ１１３Ｌ、Ｇ１３２Ｒ、Ａ１４３Ｔ、Ｇ１４４Ｖ、Ｓ１４８Ｎ、Ｄ１７０Ｖ、Ｃ１７２Ｙ、Ｇ１８３Ｄ、Ｐ２０５Ｔ、Ｙ２０７Ｓ、Ｙ２０７Ｃ、Ｎ２１５Ｓ、Ｒ２２７Ｘ、Ｒ２２７Ｑ、Ａ２２８Ｐ、Ｓ２３５Ｃ、Ｄ２４４Ｎ、Ｐ２５９Ｒ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６４Ａ、Ｇ２７１Ｃ、Ｓ２７６Ｇ、Ｑ２７９Ｅ、Ｍ２８４Ｔ、Ｗ２８７Ｃ、Ｉ２８９Ｆ、Ｆ２９５Ｃ、Ｍ２９６Ｉ、Ｍ２９６Ｖ、Ｌ３００Ｐ、Ｒ３０１Ｑ、Ｖ３１６Ｅ、Ｎ３２０Ｙ、Ｇ３２５Ｄ、Ｇ３２８Ａ、Ｒ３４２Ｑ、Ｒ３５６Ｗ、Ｅ３５８Ａ、Ｅ３５８Ｋ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｈ、およびＰ４０９Ａが含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０２２６】
実施例５：ＤＧＪ塩酸塩を用いたファブリー病治療のための投薬計画
この実施例は、ファブリー病患者におけるＤＧＪの第ＩＩ相試験について記述している。
【０２２７】
患者の登録
公知のα−ＧＡＬ内ミスセンス突然変異（遺伝子型によって確認されたもの）を有するファブリー病患者；現在ＥＲＴ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標））を受けており、最高６ヵ月間ＥＲＴを中止する意志のある患者；またはＥＲＴでの治療を全く受けたことのない新たに診断された患者。
【０２２８】
試験の設計
試験内の８人の患者に６週間にわたり１日２回２５、１００そして２５０ｍｇという逐次漸増用量を与え、その後試験の残りの期間について５０ｍｇ／日の用量を与えた。試験内の３人の患者に、全試験期間にわたり１日おきに１５０ｍｇのＤＧＪを与えた。
【０２２９】
実施例４について記述されたものと同じ代理マーカーの一部を試験の間監視する。
【０２３０】
結果
α−ＧＡＬ活性
少なくとも１２週間ＤＧＪで治療した最初の１１人の患者から得られるデータは、ＤＧＪが、１１人の患者のうちの１０人においてファブリー病で欠損している酵素の活性の増加を導くということを示唆している。試験中の８人の患者が、６週間にわたって２５、１００そして次に２５０ｍｇ１日２回の逐次漸増用量を受け、その後試験の残りの期間５０ｍｇ／日を受けた（黒丸で表わされている）（図７）。試験中、３人の患者は、試験全体を通して１日おきに１５０ｍｇのＤＧＪを受けた（黒丸で表わされている）。表中の正常の百分率を計算する目的で、複数回用量第Ｉ相試験の１５人の健常なボランティアの白血球中のα−ＧＡＬのレベルの平均を使用し正常なα−ＧＡＬのレベルを導出した。１１人の患者は、１０の異なる遺伝子突然変異を示し、ゼロから正常の３０％までの範囲にあるα−ＧＡＬのベースラインレベルを有していた。
【０２３１】
ＧＬ−３レベル
腎臓のＧＬ−３レベルは第三者専門機関によって電子顕微鏡検査法を用いて査定された。これまで２人の患者について入手されたデータは、１２週間の治療の後１人の患者の腎臓の多数の細胞型においてＧＬ−３の減少が見られることを示した（メサンギウム細胞および糸球体内皮および遠位尿細管の細胞）。２人目の患者は、２４週間の治療後に同じ腎細胞型の中でＧＬ−３レベルの減少を示したが、これらの減少は、患者のベースラインにおけるＧＬ−３のレベルが比較的低いことから、それ単独で決定的なものではなかった。両方の患者共、間質毛細血管の細胞を含めたその他の腎細胞型の中のＧＬ−３レベルの減少を示したが、これらの減少は治療後でさえ１単位未満であった。これらの初期結果は、欠陥あるヒトα−ＧＡＬを生産するマウスに対するＡｍｉｇａｌの経口投与後に観察されたＧＬ−３の減少と一貫性を有するものである。
【０２３２】
光学および電子顕微鏡法によって査定される通りのベースラインでのおよび治療後の皮膚ＧＬ−３レベルが、１０人の患者について入手できた。７人の患者が、治療前後の両方において正常または正常に近い皮膚ＧＬ−３レベルを有していた。その他の３人の患者についての結果は、経時的な変動を伴って、一部の皮膚細胞型におけるＧＬ−３の減少とその他の皮膚細胞型におけるＧＬ−３の増加の証拠を示していたことから、解釈が困難であった。
【０２３３】
実施例６
ＤＧＪ塩酸塩を用いたファブリー病治療のための投薬計画
この実施例は、ファブリー病患者におけるＤＧＪ（１−デオキシガラクトノジリマイシンの試験について記述する。
【０２３４】
患者の登録
α−ＧＡＬ内に公知のミスセンス突然変異を伴う（遺伝子型で確認）１８人の男性および９人の女性ファブリー病患者が登録された。（男性患者の１人は試験を完了しなかった）。これらの患者のうち１３人がＥＲＴの治療を受けておらず、一方１４人は以前にＥＲＴ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標））を受けていたが、試験に先立ち２１〜２７４日間ＥＲＴを中断していた。この試験に登録した患者のファブリー病は、ファブリー遺伝子内の以下のミスセンス突然変異の１つによって引き起こされた：Ａ１４３Ｔ、Ｔ４１１、Ａ９７Ｖ、Ｍ５１Ｋ、Ｇ３２８Ａ、Ｓ２７６Ｇ、Ｌ３００Ｐ、Ｌ４１５Ｐ、Ｐ２５９Ｒ、Ｒ３０１Ｑ、Ｎ２１５Ｓ、Ｐ２０５Ｔ、Ｆ２９５Ｃ、Ｃ９４Ｓ、またはＲ１１２Ｃ。
【０２３５】
試験の設計
試験内の９人の男性（１人の男性は試験を完了しなかった）に、６週間（各投薬レベルで２週間）１日２回２５、１００そして次に２５０ｍｇの逐次漸増用量を与え、その後１日２回２５ｍｇを６週間与えるかまたは試験の残りの期間５０ｍｇ／日を与えた（グループＡ）。４人の男性患者に１２週間単回１５０ｍｇのＱ．Ｏ．Ｄを与え（グループＢ）、一方５人の男性患者に２４週間１５０ｍｇのＱ．Ｏ．Ｄ．を与えた（グループＣ）。最後に９人の女性患者を無作為化し、１２週間５０、１５０または２５０ｍｇのＱ．Ｏ．Ｄという３つの投薬量のうちの１つを与えた（グループＤ）（図８）。
【０２３６】
α−ＧＡＬ活性
患者の白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）（白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ；ＷＢＣ）中のα−Ｇａｌの酵素活性を、１５人の健常なボランティアの白血球中の平均α−Ｇａｌ活性の百分率として測定した。生検材料から得た分割組織中、および白血球および血漿（ベースラインでそして毎月収集する血液由来のもの）の中でα−ＧＡＬ活性を査定した。
【０２３７】
ＧＬ−３被着物
ベースライン、治療後１２週間および２４週間目に腎正検を行ない、さまざまな腎細胞の中のＧＬ−３被着物について評価した。組織内のＧＬ−３の存在を組織学的にならびに質量分析法を使用して検査した。腎生検材料の光学顕微鏡分析を実施し、そこでは、参照により本明細書に援用されているKidney International, Vol. 62 (2002), pp. 1933-1946内で実施されている分類分析に類似した形で、組織内のＧＬ−３の蓄積を分類した。細胞は、ＧＬ−３蓄積（「０」）無し；軽度ＧＬ−３蓄積有り（「１」）；中度ＧＬ−３蓄積有り（「２」）；または重度ＧＬ−３蓄積有り（「３」）として分類された。
【０２３８】
尿検査
尿は、ＧＬ−３についてベースラインで、および２〜６週間おきに周期的に分析された。
【０２３９】
心臓分析
上述の生検に加えて、ひずみ速度評価を伴うＭＲＩ、心電図および心エコー図をベースラインにおいて、そして試験全体を通して周期的に実施し、心臓形態（例えば、左心室肥大）および心機能（例えば、駆出率および伝導／調律異常）を査定した。
【０２４０】
腎臓分析
糸球体ろ過率（ＧＦＲ）を用いて、腎機能を評価した。
【０２４１】
神経障害性疼痛
特に肢端感覚異常の減少を評価するための１２週間または２４週間の治療の終了時における症候の患者自己申告変化。これは、末梢神経細胞の微小血管系内のＧＬ−３のクリアランスの証拠となり得る。
【０２４２】
結果
男性患者
α−ＧＡＬ活性
グループＡのプロトコルによる治療を受ける８人の男性患者からのα−Ｇａｌ活性データが図９に示されている。患者は、治療後に正常なα−ＧＡ１活性の３％超であった酵素活性の絶対的増加を示し、さらに、かかる増加が突然変異体の治療前α−ＧＡＬ活性レベルに比べて３３％を超えた場合、患者を「高度」応答者として分類した。同じく突然変異体の治療前α−ＧＡＬ活性レベルに比べて３３％よりも大きい、正常なα−ＧＡＬ活性の１〜３％より大きい絶対増加を示した場合に、患者を「中度」の応答者として分類した。
【０２４３】
プロトコルグループＢおよびグループＣに従った治療を受けた９人の男性患者からのデータが、図１０に示されている。「高度」応答者は、治療１２週目までに正常な酵素活性の約８％に対するα−Ｇａｌ活性の増加を特徴としていた。「中度」応答者は、治療後２４週目までに正常な酵素活性の約１．５％までのα−Ｇａｌ活性の増加を示した患者であった。「非」応答者は、治療中正常な酵素活性の１％を超えるα−Ｇａｌ活性の増加を示したことのない患者であった。
【０２４４】
試験には１１人の「高度」応答者が存在し、一方４人の患者は「中度」応答者であり、２人の患者は「非」応答者であった。「高度」応答者のうち、６人の患者は、試験の開始前に正常な酵素活性の３％を超える残留α−Ｇａｌ活性を有しており、一方高度応答者のうち５人および中度および非応答者の全てが、正常レベルの３％未満の残留α−Ｇａｌ活性を示した（図１１）。
【０２４５】
図１２および１３に示されている通り、１１人の「高度」応答者は、各患者の治療前後の活性レベルを比較した場合、ＷＢＣα−Ｇａｌ活性の平均６３０％の増加を示した。高度応答者のうち６人は同様に、腎臓α−Ｇａｌ活性の平均１０９０％の増加を示した。４人の「中度」応答者は全て、治療中に白血球α−Ｇａｌ活性の平均１７０％の増加を示し、１人の「中度」応答者は平均１００％の腎臓α−Ｇａｌ活性の増加を示した。「非」応答者はいずれも、治療後に白血球または腎臓のα−Ｇａｌ活性のいずれにおいても全体的増加を全く示さなかった。
【０２４６】
ＧＬ−３の尿検査
治療を受けた患者の尿中のＧＬ−３は、主として腎臓から流出した尿細管細胞から得られたものである。高いＧＬ−３レベルが全てのファブリー病患者において検出可能である。「高度」応答者としての特徴を示す男性患者において、患者は治療後尿中ＧＬ−３レベルの３８％の平均減少を示し、１１人の高度応答者のうちの８人に１０％超の減少が見られた。「中度」応答者および「非」応答者は両者共治療後尿中ＧＬ−３の全体的増加を示したが、中度グループ内の１人の患者は、治療後１０％超のＧＬ−３レベルの減少を示した（図１４）。
【０２４７】
腎臓分析
組織学的分析および質量分光分析を用いて腎臓ＧＬ−３レベルを査定した。腎生検材料を、「高度」応答者のうち４人、「中度」応答者のうちの２人、そして「非」応答者のうちの２人において検査した。間質毛細管、遠位尿細管および有足細胞という３つの異なる腎細胞型において、ＧＬ−３の蓄積を検査した。高度応答者に関しては、１人の患者は、間質毛細管ＧＬ−３の減少を示し、１人の患者には、間質毛細管ＧＬ−３の検出不能の変化が見られ、１つの患者には間質毛細管ＧＬ−３の変化が全く見られなかった。遠位尿細管に関しては、高度応答者のうち３人にＧＬ−３の減少が見られ、１人の高度応答者にＧＬ−３の増加が見られた。有足細胞の治療後のＧＬ−３レベルについては、４人の高度応答者全員にＧＬ−３レベルの変化が全く見られなかった（図１５Ａを参照）。
【０２４８】
腎生検材料の全体的ＧＬ−３レベルに関しては、高度応答者のうちの２人は治療後ＧＬ−３の減少を示し、一方２人の高度応答者はＧＬ−３レベルの変化を全く示さなかった。中度応答者については、２人の患者がＧＬ−３レベルの減少を示した。１人の非応答者が、ＧＬ−３レベルの減少を示し、一方１人の非応答患者がＧＬ−３の増加を示した（図１５Ｂ参照）。
【０２４９】
さらに、尿検査においてわかったように、腎生検材料の質量分光分析から、高度応答者に治療後腎ＧＬ−３レベルの平均減少（２８％）が見られ、高度応答者のうち３人が１０％超の減少を示すことが明らかになった（図１６）。
【０２５０】
腎機能は、糸球体ろ過率（ＧＦＲ）を用いて測定された（年令、性別および人種について調整された血清クレアチニンを用いてＧＦＲを推定するために、ＭＤＲＤ等式を使用した）。全ファブリー病患者のおよそ半数が異常に低いＧＦＲ（９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２未満）を有している。自然史を研究すると、ファブリー病患者が、年令および腎臓疾患病期に応じて１年に約５〜１５単位の速度でＧＦＲの漸進的減退を示すということが示唆されている。図１７Ａ−Ｂに示されているように、高度応答者は平均ｅＧＥＲを全治療手順の間９０〜１２０ｍｌ／分／１．７３ｍ２の正常なｅＧＦＲ範囲内に維持した（図１７Ａ）が、一方未治療の個体の予測平均ｅＧＦＲは、９０ｍｌ／分／１．７３ｍ２より低く減退し続けるものと見込まれている（図１７Ｂ）。
【０２５１】
心機能
治療に先立ち、全ての患者のうち約半数が、治療に先立つベースラインにおいておよび治療後の最後の来診（最後の来診は試験が始まってから１２〜２４週後であった）においてＦＣＧを介して査定された通り伝導／リズム異常を有していた（データ示さず）。「高度」応答者のうち３人が、治療に先立ち異常に高い左心室質量を有していた。これらの患者のうち１人が１２週間の治療後に左心室質量の８％の減少を示し、一方２人が４８週間の治療後も左心室質量の変化を全く示さなかった（データ示さず）。左心室質量の減少および維持は両方共、ファブリー病患者が典型的には経時的に左心室質量の増大を示すことから、興味深いことである。その上、高度応答者のうちの３人は、治療の前に異常な駆出率を提示していたが、患者の２人は治療後に正常範囲（＞５５％）内の駆出率を示した（図１８）。
【０２５２】
自己申告分析
患者は、１２週または２４週の治療期間の終了時に、そして延長１２週おきに、ファブリー病に関連する肢端感覚異常などの症候の変化を自己申告した。「高度」応答者のうち７人は、胃腸機能の改善および疼痛の軽減；歩行、運転および睡眠の能力の増大；および発汗の改善を申告した。高度応答者のうちの２人は、ファブリー症候の変化を全く申告しなかった。「中度」および「非」応答者のうち、１人は疼痛の持続と共に発汗の増大を申告し、３人はファブリー症候の変化を全く申告しなかった（図１９）。
【０２５３】
女性患者
女性の細胞内のＸ染色体が不活性であるため、突然変異ファブリー遺伝子を発現する組織試料内の罹患した細胞の表現型は、試料中の健常な細胞により隠される。したがって、罹患した細胞内で予想される酵素応答を査定するため、女性患者が示した各々の突然変異を構築し、試験管内でテストした。かくして、試験管内分析に基づいて、異なる突然変異を「予想される高度応答者」および「予想される非応答者」として分類した。患者のうち５人は予想される高度応答者として分類され、一方４人の患者は予想される非応答者として分類された（データ示さず）。
【０２５４】
α−ＧＡＬ活性
試験において治療された女性患者９人は全員、グループＤの治療プロトコルによる治療の後ＷＢＣ α−Ｇａｌ活性の増加を示した（治療前のベースライン酵素レベルに比べ１４６％の平均的増加）（データ示さず）。
【０２５５】
ＧＬ−３の尿検査
「予想される高度」応答者として特徴づけされた女性患者においては、患者は、治療の後尿中ＧＬ−３レベルの２０％の平均減少を示し、一方５人の予想される高度応答者のうちの３人に１０％超の減少が見られた。「非」応答者は治療後尿中ＧＬ−３レベルの全体的増加を示したが、１人の患者は、治療後１０％超のＧＬ−３減少を示した（図２０）。
【０２５６】
腎臓分析
尿検査において観察された結果と同様、「予想される高度」応答者からの腎生検材料の質量分光分析は、治療後、腎臓ＧＬ−３レベルの平均減少（２０％）を示し、ここで５人の予想される高度応答者のうち２人は、治療後１０％超の減少を提示した（図２１）。
【０２５７】
自己申告分析
患者は、１２週または２４週の治療期間の終了時に、そして延長１２週おきに、ファブリー病に関連する肢端感覚異常などの症候の変化を自己申告した。「予想される高度」応答者のうち４人は、疼痛の軽減；歩行、運転および睡眠の能力の増大；および発汗の改善を申告した。予想される高度応答者のうちの１人は、ファブリー症候の変化を全く申告しなかった。「非」応答者のうち、１人は疼痛の軽減を申告し、一方３人はファブリー症候の変化を全く申告しないか、または不安症、うつ病または睡眠困難といった症候の出現を申告した（図２２）。
【０２５８】
実施例７：１−デオキシノジリマイシンを用いたポンペ病の治療
マウスに対して１００ｍｇ／ｋｇの１−デオキシノジリマイシンを２８日間無制限に投与する。心臓内のα−グルコシダーゼ活性（ＧＡＡ）が、全組織溶解物（左）についてかつ免疫沈降ＧＡＡに基づいて（右）図２３に示されている。このデータは１−デオキシノジリマイシンに応答した腓腹筋分析からの予備結果と類似であるように思われる。
【０２５９】
１−デオキシノジリマイシンは、将来の臨床試験において利用されるレベルよりもはるかに高いと現段階で考えられている用量で、ラットおよびサルにおける短期安全性試験において充分に耐容性があることが示された。例えば、１−デオキシノジリマイシンは最高６００ｍｇの単回用量で安全かつ充分な耐容性を示すように思われる。２週間１日最高２グラムの反復用量。薬物を投与された患者における全ての有害事象は、重症度が軽度または中度であり、試験薬物に確実に関係するまたはおそらく関係するとみなされるものは全くなかった。１−デオキシノジリマイシンは、およそ４〜８時間の血漿中最終半減期で高い経口生物学的利用能を有すると考えられている。
【０２６０】
１−デオキシノジリマイシンに対するＧＡＡ応答が、単離されたばかりの白血球において判定される。ＧＡＡ応答は、患者由来の細胞系列、皮膚線維芽細胞およびＥＢＶで形質転換されたリンパ芽球においても判定される。遺伝子型情報を確認するためには、ＤＮＡ配列決定を実施する。患者体内の尿中血糖類レベルも査定される。臨床試験において監視するべく疾病の潜在的マーカーを同定するために、血漿サイトカインおよびケモカインが測定される。
【０２６１】
実施例８：ＤＧＪ（１−デオキシガラクトノジリマイシン塩酸塩）がα−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧＡＬ）の活性を増加させる。
この実施例は、ミスセンスファブリー突然変異を発現するＤＧＪ（１−デオキシガラクトノジリマイシン）遺伝子導入マウスの試験について記述する。この実施例は同様に、さまざまなファブリーミスセンス突然変異を発現する細胞系列に対するＤＧＪの影響の試験についても記述する。
【０２６２】
Ｒ３０１Ｑファブリーミスセンス突然変異を発現する遺伝子導入マウスに、４週間１００ｍｇ／ｋｇの割合で無制限にＤＧＪを投与した。ＤＧＪでの治療の後、治療を受けた動物の皮膚、肝臓および腎臓から生検材料を採取した。ＧＬ−３の濃度と同様、組織生検材料中のα−ＧＡＬ発現を測定した。図２４に示されているように、ＤＧＪでの治療の後、皮膚、心臓および腎臓内でα−ＧＡＬ発現が増大した。さらに、試料採取した組織内のＧＬ−３の濃度は、ＤＧＪ治療の後減少した。その上、図２５に示されている通り、腎管切片および心臓切片の組織学検査は、ＧＬ−３凝集体の存在がＤＧＪでの治療後に削減されることを示した。
【０２６３】
細胞系列は、７５ファブリーミスセンス突然変異の１つを発現するように構築された。ＤＧＪを各細胞系列に投与し、ＤＧＪが突然変異酵素の活性を増加させたか否かを判定するためにα−ＧＡＬ活性を測定した。図２６に示されている通り、ＤＧＪは、７５のうち４７の細胞系列（６３％）においてα−ＧＡＬ活性を増強させた。さらに「古典的」ファブリー病に関連するファブリーミスセンス突然変異を発現する５７の細胞系列のうち、３４の細胞系列（６０％）が治療後酵素活性の増加を示した。７５のうち２０の細胞系列が遅発性ファブリー病に対応するミスセンス突然変異を発現した。これら２０の細胞系列のうち、１９（９５％）が治療後のα−ＧＡＬ活性の増加を示した。
【０２６４】
実施例９：正常なマウスにおける骨および骨髄内の酒石酸イソファゴミンによるＧＣａｓｅ応答
正常なマウスに対して、１００ｍｇ／ｋｇの酒石酸イソファゴミンの単回用量を投与した。試験グループおよび未治療の対照グループの両方について、大腿骨内および骨髄でＧＣａｓｅ活性（Ｆ４６０／μｇのタンパク質）を測定した。結果は図２７に示されている。
【０２６５】
実施例１０：ラットにおける薬物動態／組織分布
イソファゴミン６００ｍｇ／ｋｇの単回用量を経口（ＰＯ）強制飼養を介してラットに投与した。血漿、肝臓、脾臓および脳組織中のイソファゴミン濃度（μＭ）を、投薬時点（ｔ＝０）から投薬後４８時間に至るまで規則的時間間隔をおいて逐次漸増させた。結果は図２８に示されている。
【０２６６】
全ての組織は、１５分以内で約４００μＭのＧＣａｓｅ増強ＥＣ５０を上回るイソファゴミンレベルを達成した。イソファゴミンレベルは肝臓および血漿中で４８時間後にＧＣＡＳＥ Ｋｉ値を下回るまで低下している；脾臓および脳組織は、より低速のクリアランスを示した。
【０２６７】
実施例１１：雄のＨＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯマウスにおけるＤＧＪ投薬計画の比較
８週令の雄ｈＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯマウスを、毎日（休薬期間無し）または「比較的低い頻度で」（投薬４日／休薬３日）、飲料水に入れた３００ｍｇ／ｋｇのＤＧＪを用いて４週間治療した。皮膚、心臓、腎臓および血漿から溶解物を調製した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（組織重量１ｇあたりのｍｇ単位または血漿１ｍＬあたりのｍｇ単位で表現）により、ＧＬ−３レベルを測定した。結果は、図２９に示されている。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳデータは、組織ならびに血漿中のＤＧＪ投薬頻度が比較的低い状態で、ＧＬ−３レベルのより大きな削減を示した（＊ｐ＜０．０５対未治療；＃ｐ＜０．０５毎日対より低頻度、ｔ検定）。各棒は、１グループあたり１０〜１６匹のマウスの平均±ＳＥＭを表わす。
【０２６８】
モノクローナル抗ＧＬ−３抗体を用いた免疫組織化学染色（核はメチルグリーンで対比染色）も実施した。結果は、図３０に示されており、皮膚（血管壁の平滑筋細胞および線維芽細胞）、心臓（血管壁の平滑筋細胞）および腎臓（遠位尿細管上皮細胞）内において暗赤色／褐色斑点（黒色矢印）としてＧＬ−３シグナルを示す。毎日および「比較的低頻度」の両方のＤＧＪ治療が、各組織内のＧＬ−３信号の量および強度を削減した（２０分の１）。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳと同様に、比較的低頻度のＤＧＪ投薬で、各組織内により大きいＧＬ−３の削減が見られた。示されているデータは、１グループあたり７〜８匹のマウスからの代表的写真である。
【０２６９】
実施例１２：雄のＨＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯマウスにおけるＤＧＪ投薬量の比較
８週令の雄のｈＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯマウスを４週間、飲料水中のＤＧＪ３、１０、３０、１００または３００ｍｇ／ｋｇ／日で治療した。皮膚、心臓および腎臓由来の組織溶解物を調製し、ＧＬＡ活性（基質として４−ＭＵＧを使用、１時間タンパク質１ｍｇあたりのｎｍｏｌ数で表現）、ＧＬＡタンパク質（抗ヒトＧＬＡ抗体での５０ｍｇの組織溶解物の免疫ブロット法を使用）そしてＧＬ−３レベル（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用、組織重量１ｇあたりのｍｇ単位で表現）についてテストした。結果は図３１に示されている。ＤＧＪ治療の後、ＧＬＡ活性（＊ｐ＜０．０５対未治療、ＡＮＯＶＡ）およびＧＬＡタンパク質（挿入図、ＧＬＡは約４５ＫＤのバンドとして延在）の有意かつ用量依存性の増大およびＧＬ−３レベル（＊ｐ＜０．０５対未治療ＡＮＯＶＡ）の有意な減少が見られた。ウエスタンブロット内の各レーンは、各グループに属する１匹のマウスを表わす。
【０２７０】
実施例１３：雄のＨＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯマウスにおけるＤＧＪおよび上昇したＨＲ３０１Ｑ  ＧＬＡの半減期の判定
４週間１００ｍｇ／ｋｇ／日のＤＧＪ（飲料水）をｈＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯの雄マウスに投薬し、その後７日の休薬期間（飲料水中にＤＧＪ無し）を設けることにより、上昇したｈＲ３０１Ｑ  ＧＬＡおよびＤＧＪの半減期を推定した。ＤＧＬの使用中止後０、１、３、５および７日目にマウスを安楽死させ、４−ＭＵＧを用いてＧＬＡレベル（皮膚、心臓および腎臓内、実線）を測定した。同時に、ＬＣ−ＭＳ／ＭＣにより、ＤＧＪ濃度を測定した（皮膚、心臓および腎臓内、破線）。結果は図３２に示されている。
【０２７１】
指数関数的減衰曲線を用いて、上昇した組織ｈＲ３０１Ｑ  ＧＬＡレベルの半減期を２〜２．５日として推定し、一方、ＤＧＪの半減期は６〜７時間で推定した。各データ点は、１グループあたり６〜７匹のマウスの平均±ＳＥＭを表わす。
【０２７２】
実施例１４：雄のＨＲ３０１Ｑ  ＧＬＡ  Ｔｇ／ＫＯマウスにおけるＤＧＪおよび高まったＨＲ３０１Ｑ  ＧＬＡの半減期の判定
健常な男性ボランティアに対してＤＧＪを経口投与（７日間１日２回５０ｍｇおよび１５０ｍｇ；治療グループはｎ＝６、全てのプラセボはｎ＝４）したところ、白血球溶解物中で４−ＭＵＧによって測定される通りＧＬＡレベルが増大する結果となった。ＤＧＪは経口的に利用可能であり、全ての用量で一般的に充分耐容され、いずれの治療グループにおいても、重大な有害事象は全く発生しなかった。データを、各グループの投薬前値に正規化した（投薬前値は、それぞれプラセボ、５０ｍｇおよび１５０ｍｇについて１時間タンパク質１ｍｇあたり２４．６、２３．３および１４．１ｎｍｏｌｅｓである）。結果は図３３に示されている。
【０２７３】
本発明は、本明細書中に記載された具体的実施形態によってその範囲が限定されるものではない。実際、以上の記述および添付図面から当業者には、本明細書に記載されているものに加えて本発明のさまざまな修正が明らかになる。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に包含されるものである。
【０２７４】
さらに、全ての値は近似値であり、説明のために提供されるものであることを理解されたい。
【０２７５】
本出願全体を通して特許、特許出願、公報、製品関連文書およびプロトコルが引用されているが、その開示は、あらゆる目的のために全体が参照により本明細書に援用されている。
【図１】
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【図２】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６−１】
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【図２６−２】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【国際調査報告】
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