(57)【要約】  本発明は、一又は複数のメラノコルチン受容体タイプを調節するのに効果的である新規ペプチド化合物、治療におけるその化合物の使用、それを必要とする患者への化合物の投与を含む治療方法、及び医薬の製造における化合物の使用に関する。本発明の化合物は、肥満症並びに肥満に関連した様々な疾患又は症状の治療に関連して特に興味深い。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I：
Ｒ１-Ｒ２-Ｃ(＝Ｏ)-Ｒ３-Ｓ１-Ｚ１-Ｚ２-Ｚ３-Ｚ４-Ｚ５-Ｚ６-ｃ[Ｘ１-Ｘ２-Ｘ３-Ａｒｇ-Ｘ４-Ｘ５]-Ｚ７-Ｒ４          [I]
このとき、
Ｒ１は、テトラゾール-５-イル又はカルボキシを表す；
Ｒ２は、直鎖状、分枝状及び／又は環状Ｃ６-２０アルキル、Ｃ６-２０アルケニル又はＣ６-２０アルキニルで、ハロゲン、ヒドロキシ及びアリールから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよいものを表し；
Ｒ３は、存在しないかあるいは-ＮＨ-Ｓ(=Ｏ)２-(ＣＨ２)３-５-Ｃ(=Ｏ)-又は天然ないし非天然のアミノ酸由来の一ないし二のアミノ酸残基を有し少なくとも一のカルボキシ基を含むペプチド断片を表し；
Ｓ１は、存在しないかあるいは４-アミノ酪酸残基、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、又は次の式IIa-IIh；
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)-    [IIa]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)]２-    [IIb]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)]３-５-    [IIc]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ(＝Ｏ)-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)]１-３-    [IId]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)]１-３-    [IIe]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)]１-３-    [IIf]
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]２-１２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)-    [IIg]
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]４-１２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)-    [IIh]
の一つに記載のグリコールエーテル系構造を表し；
Ｚ１は、存在しないかあるいは天然ないしは非天然のアミノ酸由来の１から４つのアミノ酸残基を含むペプチド断片を表し； 
Ｚ２は、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ又はＤ-Ｈｙｐを表し；
Ｚ３は、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ又はＤ-Ｈｙｐを表し；
Ｚ４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β-Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ｄ-Ｈｙｐ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ｄ-ホモＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｄ-Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、２-ＰｙＡｌａ、Ｄ-２-ＰｙＡｌａ、３-ＰｙＡｌａ、Ｄ-３-ＰｙＡｌａ、４-ＰｙＡｌａ、Ｄ-４-ＰｙＡｌａ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、ホモＡｒｇ、Ｄ-ホモ-Ａｒｇ、Ａｒｇ、Ｄ-Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄ-Ｌｙｓ、Ｄａｂ、Ｄ-Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｄ-Ｄａｐ、Ｏｒｎ又はＤ-Ｏｒｎを表し；
Ｚ５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、２-ＰｙＡｌａ、３-ＰｙＡｌａ、４-ＰｙＡｌａ、Ｈｉｓ、ホモＡｒｇ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄａｂ、Ｄａｐ又はＯｒｎを表し；
式IのＺ６は、Ｌｙｓ、Ｄ-Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ-Ａｒｇ、ホモＡｒｇ、Ｄ-ホモＡｒｇ、Ｐｈｅ、Ｄ-Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｄ-Ｔｙｒ、Ｔｒｐ又はＤ-Ｔｒｐを表し；
Ｘ１は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、ホモＣｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐを表し；
Ｘ２は、Ｈｉｓ、Ｃｉｔ、Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｃｇｌ、Ｃｈａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ｔＢｕＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｍｅｔ、Ｍｅｔ(Ｏ)、Ｍｅｔ(Ｏ２)、Ｇｌｎ、Ｇｌｎ(アルキル)、Ｇｌｎ(アリール)、Ａｓｎ、Ａｓｎ(アルキル)、Ａｓｎ(アリール)、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ｔｉｃ、Ａｚｅ、Ｐｉｐ、２-ＰｙＡｌａ、３-ＰｙＡｌａ、４-ＰｙＡｌａ、(２-チエニル)アラニン、３-(チエニル)アラニン、(４-チアゾリル)Ａｌａ、(２-フリル)アラニン、(３-フリル)アラニン又はＰｈｅを表し、このＰｈｅのフェニル部分上の一又は複数の水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、ベンゾイル、メチル、トリフロロメチル、アミノ、及びシアノから選択される置換基によって独立して置換されていてもよく；
Ｘ３はＤ-Ｐｈｅを表し、ここで、Ｄ-Ｐｈｅ中のフェニル部分上の一又は複数の水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、メチル、トリフルオロメチル及びシアノから選択される置換基によって独立して置換されていてもよく；
Ｘ４は、Ｔｒｐ、２-Ｎａｌ、(３-ベンゾ[ｂ]チエニル)アラニン又は(Ｓ)-２,３,４,９-テトラヒドロ-１Ｈ-β-カルボリン-３-カルボン酸を表し；
Ｘ５は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、ホモＣｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐを表し；
ここで、Ｘ１及びＸ５は結合して、共に独立してＣｙｓ又はホモＣｙｓであるＸ１及びＸ５から誘導されるジスルフィド架橋を介して、又はＸ１の側鎖中のカルボン酸とＸ５の側鎖中のアミノ基との間で形成されたアミド結合を介して、又はＸ５の側鎖中のカルボン酸とＸ１の側鎖中のアミノ基との間で形成されたアミド結合を介して、式Iの化合物を環状にし；
Ｚ７は、存在しないかあるいは天然ないしは非天然のアミノ酸由来の１から３のアミノ酸残基を含むペプチド断片を表し；  
Ｒ４はＯＲ'又はＮ(Ｒ')２を表し、ここで、各Ｒ'は独立して水素を表すか、又は一又は複数のアミノないしヒドロキシで置換されていてもよいＣ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル又はＣ２-６アルキニルを表す、
化合物及び、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ及び溶媒和物。
【請求項２】
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｓｅｒ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；
2010516653.tif 000022
{２-[２-(２-{２-[２-(１７-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｄａｐ-Ｐｈｅ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-Ｇｌｎ-Ｄ-Ｓｅｒ-ＮＨ２；
2010516653.tif 000023
[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{４-[１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル]ブタノイルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ａｒｇ-Ｄ-Ｔｙｒ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；
2010516653.tif 000024
(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-２-(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイルアミノ]-エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｄ-Ｓｅｒ-Ａｒｇ-Ｈｉｓ-ホモＡｒｇ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｐｒｏ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；及び
2010516653.tif 000025
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｇｌｙ-Ｄ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；
2010516653.tif 000026
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＩＧＴから２型糖尿病への進行を遅延させる方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項４】
インスリン非依存性２型糖尿病からインスリン依存性２型糖尿病への進行を遅延させる方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項５】
肥満を治療し又は体重過剰を予防する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項６】
食欲の調節方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項７】
満腹感を誘導する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項８】
首尾良く減量した後の体重増加を防止する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項９】
体重過剰又は肥満に関する疾患又は状態を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１０】
過食症を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。 
【請求項１１】
アテローム性動脈硬化、高血圧、糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害及び早死にのリスクから選択される疾患又は状態を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１２】
肥満患者における２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害及び早死にのリスクから選択される疾患又は状態を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、請求項１又は２に記載の化合物の有効量を、それを必要とする肥満患者に投与することを含む方法。
【請求項１３】
前記の更なる治療的に活性な化合物が、糖尿病薬、高脂血症治療薬、抗肥満薬、血圧降下薬及び糖尿病から生じるか糖尿病に伴う合併症の治療薬から選択される、請求項３から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
治療に使用するための請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１又は２に記載の化合物を含有してなる医薬組成物。
【請求項１６】
ＩＧＴから２型糖尿病への進行を遅延させるため；インスリン非依存性２型糖尿病からインスリン依存性２型糖尿病への進行を遅延させるため；肥満を治療するかまたは体重過剰を予防するため；食欲を調節するため；満腹感を誘導するため；首尾良く減量した後の体重増加を防止するため；エネルギー消費を増加させるため；体重過剰又は肥満に関する疾患又は状態を治療するため；過食症を治療するため；アテローム性動脈硬化、高血圧、２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害又は早死にのリスクを治療するため；または、肥満患者における２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害及び早死にのリスクから選択される疾患又は状態を治療するための医薬の製造における請求項１又は２に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一又は複数のメラノコルチン受容体に特異的で長時間にわたる活性を奏する新規なペプチド、該ペプチドの治療での使用、該ペプチドの患者への投与を含む治療方法、及び医薬の製造における該ペプチドの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、例えばアテローム性動脈硬化、高血圧及び２型糖尿病（非インスリン依存性糖尿病(ＮＩＤＤＭ)）、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、及び骨関節炎並びに様々な悪性腫瘍のような非常に一般的な多くの病気の進行に対するよく知られた危険因子である。肥満はまた運動性低下やクオリティ・オブ・ライフの減少を通してかなりの問題を引き起こす。肥満の発生とそれによるこれらの疾患もまた先進工業世界全体で増加しつつある。ほんの僅かな薬物治療のみが現在利用できる。すなわち、シブトラミン（Abbot；セロトニン作動性及びノルアドレナリン機序を介して作用）、オルリスタット（Roche Pharm；腸からの脂肪摂取を減少）及びアコンプリア（リモナバント；Sanofi-Aventis；ＣＢ１内在性カンナビノイド受容体拮抗薬；２００６年６月にＥＵで承認）である。しかしながら、肥満の治療及び／又は食欲制御の手段を見付けることは、深刻で致命的でさえもありうる一般的な病気の危険因子としての重要な作用のため、肥満の治療に有用な医薬化合物が尚必要とされている。
【０００３】
肥満という用語は、過剰の脂肪組織を意味する。この文脈において、肥満は、健康リスクをもたらすあらゆる度合いの過剰脂肪蓄積として最もよく表される。正常と肥満体の個体の間の区別は、おおよそのものに過ぎないが、肥満により生じる健康リスクは脂肪蓄積の増加と恐らく連続する。しかしながら、本発明の文脈において、２５を越えるボディー・マス・インデックス（体格指数）（ＢＭＩ＝キログラム体重をメートル身長の二乗で除算したもの）が肥満体とみなされることになる。
【０００４】
軽い肥満でさえ、早死に、糖尿病、高血圧、アテローム性動脈硬化、胆嚢疾患及びある種の癌のリスクを増加させる。工業化された西洋世界では、肥満の有病率は、過去数十年間で有意に増加した。肥満の高い有病率とその健康上の影響のために、その治療は、公衆衛生上の高い優先事項であるべきである。
エネルギー摂取がエネルギー消費を越える時、過剰カロリーが脂肪組織に貯蔵され、もしこの正の正味バランスが長期にわたれば肥満が生じる。すなわち、体重バランスには二つの要素があり、何れかの側（取り込みもしくは消費）での異常が肥満につながり得る。
【０００５】
プロ-オピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）は、メラノサイト刺激ホルモン（α-ＭＳＨ）及びアドレノコルチコトロピン（ＡＣＴＨ）を含むβ-エンドルフィン及びメラノコルチンペプチドの前駆体である。ＰＯＭＣは、視床下部のニューロン、下垂体、メラノサイトを含む幾つかの末梢及び中枢組織で発現される。ＰＯＭＣ前駆体は、異なった組織で異なったプロセシングを受け、発現部位に応じて異なったメラノコルチンペプチドの発現に至る。下垂体の前葉においては、主にＡＣＴＨが産生されるが、中葉及び視床下部ニューロンでは、主要ペプチドはα-ＭＳＨ、β-ＭＳＨ、デスアセチル-α-ＭＳＨ及びβ-エンドルフィンである。ＡＣＴＨ及びα-ＭＳＨを含むメラノコルチンペプチドの幾つかのものは、脳室内注射によってラットに投与した場合、食欲抑制活性を有することが実証されている[Vergoni等, European Journal of Pharmacology 179, 347-355(1990)]。食欲抑制効果はまた人工の環状α-ＭＳＨアナログのＭＴ-１１で得られている。
【０００６】
５つのメラノコルチン受容体サブタイプのファミリーが同定されている（ＭＣ１、ＭＣ２、ＭＣ３、ＭＣ４及びＭＣ５とも呼ばれるメラノコルチン受容体１-５）。ＭＣ１、ＭＣ２及びＭＣ５は主として末梢組織で発現する一方、ＭＣ３及びＭＣ４は主として中枢において発現する；しかしながらＭＣ３は幾つかの末梢組織でも発現する。エネルギー恒常性に関与していることに加えて、ＭＣ３レセプターは幾つかの炎症疾患に関与していることがまた示されている。ＭＣ３アゴニストはそのような病気、例えば痛風性関節炎に対してポジティブな効果を有している場合がある。ＭＣ５は主に末梢に発現し、外分泌液及び炎症に関連していることが示唆されている。ＭＣ４は、ＭＣ４ノックアウトマウスが肥満を発症ことから、体重の調節及び摂食行動に関与していることが示されている[Huzar等, Cell 88, 131-141 (1997)]。更に、マウス脳内における内因的に生じたＭＣ３及びＭＣ４アンタゴニスト（アグーチ遺伝子関連ペプチドＡＧＲＰ）の過剰発現又はアグーチタンパク質（ＭＣ１、ＭＣ３及びＭＣ４アンタゴニスト）の異所中枢的発現の何れの研究でも、これら２つのアンタゴニストの過剰発現により肥満症の発症に至ることが実証されている[Kleibig等, PNAS 92, 4728-4732(1995)]。更に、ＡＧＲＰのＣ末端断片を脳室内注射することで摂食が増え、食物摂取に対するα-ＭＳＨの阻害効果に拮抗するようになる。
【０００７】
ヒトにおいて、おそらくＭＣ４のフレームシフト変異による肥満症を持つファミリーの幾つかの症例が記載されている[例えば、Yeo等, Nature Genetics 20, 111-112(1998)；Vaisse等, Nature Genetics 20, 113-114(1998)を参照]。ＭＣ４受容体をコードしている遺伝子の突然変異は最も豊富な単一遺伝子の肥満原因であると思われる[Farooqi等, New England Journal of Medicine 384, 1085-1095 (2003)]。
まとめると、ＭＣ４アゴニストは食欲抑制薬及び／又はエネルギー消費増大薬となり得、肥満症又は肥満関連疾患の治療、並びにＭＣ４の活性化により改善されうる他の病気、疾患又は病状の治療に有用でありうる。
ＭＣ４アンタゴニストは、悪液質又は拒食症の治療、及び虚弱で高齢の患者における消耗(waisting)の治療に有用でありうる。更に、ＭＣ４アンタゴニストは、慢性疼痛、ニューロパシー及び神経性炎症の治療に使用しうる。
【０００８】
数多くの特許出願がメラノコルチン受容体調節因子として様々なクラスの非ペプチド性低分子を開示している；その例は国際公開第０３／００９８５０号、同第０３／００７９４９号及び同第０２／０８１４４３号である。
メラノコルチン受容体調節因子としてのペプチドの使用は、多くの特許文献、例えば国際公開第０３／００６６２０号、米国特許第５７３１４０８号及び国際公開第９８／２７１１３号に開示されている。Ｈａｄｌｅｙ[Pigment Cell Res., 4, 180-185, (1991)]は脂肪酸に結合した特定のメラニン親和性ペプチドの長期の効果を報告しており、長期化は、結合された脂肪酸によって引き起こされている可逆的作用から不可逆的作用への調節因子の変換によってなされる。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者等は、驚くべきことに、特定のペプチドコンジュゲートが一又は複数のメラノコルチンレセプター、すなわちＭＣ１、ＭＣ２、ＭＣ３、ＭＣ４又はＭＣ５に対して高い変更効果を有することを発見した。したがって、第一の実施態様(実施態様１)では、本発明は、以下の式Iの化合物(特にメラノコルチン受容体アゴニスト又はアンタゴニストとして作用する化合物)に関する：
Ｒ１-Ｒ２-Ｃ(＝Ｏ)-Ｒ３-Ｓ１-Ｚ１-Ｚ２-Ｚ３-Ｚ４-Ｚ５-Ｚ６-ｃ[Ｘ１-Ｘ２-Ｘ３-Ａｒｇ-Ｘ４-Ｘ５]-Ｚ７-Ｒ４          [I]
このとき、
Ｒ１は、テトラゾール-５-イル又はカルボキシを表す；
Ｒ２は、直鎖状、分枝状及び／又は環状Ｃ６-２０アルキル、Ｃ６-２０アルケニル又はＣ６-２０アルキニルで、ハロゲン、ヒドロキシ及びアリールから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよいものを表し；
Ｒ３は、存在しないかあるいは-ＮＨ-Ｓ(=Ｏ)２-(ＣＨ２)３-５-Ｃ(=Ｏ)-又は天然ないし非天然のアミノ酸由来の一ないし二のアミノ酸残基を有し少なくとも一のカルボキシ基を含むペプチド断片を表し；
Ｓ１は、存在しないかあるいは４-アミノ酪酸残基、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、又は次の式IIa-IIh；
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)-    [IIa]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)]２-    [IIb]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)]３-５-    [IIc]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ(＝Ｏ)-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)]１-３-    [IId]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ(=Ｏ)-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)]１-３-    [IIe]
-[ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)]１-３-    [IIf]
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]２-１２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)-    [IIg]
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]４-１２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)-    [IIh]
の一つに記載のグリコールエーテル系構造を表し；
Ｚ１は、存在しないかあるいは天然ないしは非天然のアミノ酸由来の１から４つのアミノ酸残基を含むペプチド断片を表し； 
Ｚ２は、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ又はＤ-Ｈｙｐを表し；
Ｚ３は、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ又はＤ-Ｈｙｐを表し；
Ｚ４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β-Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ｄ-Ｈｙｐ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ｄ-ホモＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｄ-Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、２-ＰｙＡｌａ、Ｄ-２-ＰｙＡｌａ、３-ＰｙＡｌａ、Ｄ-３-ＰｙＡｌａ、４-ＰｙＡｌａ、Ｄ-４-ＰｙＡｌａ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、ホモＡｒｇ、Ｄ-ホモ-Ａｒｇ、Ａｒｇ、Ｄ-Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄ-Ｌｙｓ、Ｄａｂ、Ｄ-Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｄ-Ｄａｐ、Ｏｒｎ又はＤ-Ｏｒｎを表し；
Ｚ５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、２-ＰｙＡｌａ、３-ＰｙＡｌａ、４-ＰｙＡｌａ、Ｈｉｓ、ホモＡｒｇ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄａｂ、Ｄａｐ又はＯｒｎを表し；
式IのＺ６は、Ｌｙｓ、Ｄ-Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｄ-Ａｒｇ、ホモＡｒｇ、Ｄ-ホモＡｒｇ、Ｐｈｅ、Ｄ-Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｄ-Ｔｙｒ、Ｔｒｐ又はＤ-Ｔｒｐを表し；
Ｘ１は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、ホモＣｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐを表し；
Ｘ２は、Ｈｉｓ、Ｃｉｔ、Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｃｇｌ、Ｃｈａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ｔＢｕＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｍｅｔ、Ｍｅｔ(Ｏ)、Ｍｅｔ(Ｏ２)、Ｇｌｎ、Ｇｌｎ(アルキル)、Ｇｌｎ(アリール)、Ａｓｎ、Ａｓｎ(アルキル)、Ａｓｎ(アリール)、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｈｙｐ、Ｔｉｃ、Ａｚｅ、Ｐｉｐ、２-ＰｙＡｌａ、３-ＰｙＡｌａ、４-ＰｙＡｌａ、(２-チエニル)アラニン、３-(チエニル)アラニン、(４-チアゾリル)Ａｌａ、(２-フリル)アラニン、(３-フリル)アラニン又はＰｈｅを表し、このＰｈｅのフェニル部分上の一又は複数の水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、ベンゾイル、メチル、トリフロロメチル、アミノ、及びシアノから選択される置換基によって独立して置換されていてもよく；
Ｘ３はＤ-Ｐｈｅを表し、ここで、Ｄ-Ｐｈｅ中のフェニル部分上の一又は複数の水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、メチル、トリフルオロメチル及びシアノから選択される置換基によって独立して置換されていてもよく；
Ｘ４は、Ｔｒｐ、２-Ｎａｌ、(３-ベンゾ[ｂ]チエニル)アラニン又は(Ｓ)-２,３,４,９-テトラヒドロ-１Ｈ-β-カルボリン-３-カルボン酸を表し；
Ｘ５は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、ホモＣｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐを表し；
ここで、Ｘ１及びＸ５は結合して、共に独立してＣｙｓ又はホモＣｙｓであるＸ１及びＸ５から誘導されるジスルフィド架橋を介して、又はＸ１の側鎖中のカルボン酸とＸ５の側鎖中のアミノ基との間で形成されたアミド結合を介して、又はＸ５の側鎖中のカルボン酸とＸ１の側鎖中のアミノ基との間で形成されたアミド結合を介して、式Iの化合物を環状にし；
Ｚ７は、存在しないかあるいは天然ないしは非天然のアミノ酸由来の１から３のアミノ酸残基を含むペプチド断片を表し；  
Ｒ４はＯＲ'又はＮ(Ｒ')２を表し、ここで、各Ｒ'は独立して水素を表すか、又は一又は複数のアミノないしヒドロキシで置換されていてもよいＣ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル又はＣ２-６アルキニルを表す、
化合物及び、その薬学的に許容可能な塩、そのプロドラッグ及び溶媒和物。
本発明は、さらに、治療における本発明の化合物の使用、本発明の化合物を含有する医薬組成物、そして、医薬の製造における本発明の化合物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（定義）
例えばＣｘ−ｙアルキル（例えばＣ６−２０アルキル）におけるような、基の名前の前の種類「Ｃｘ−ｙ」の接頭辞の使用は、ｘ〜ｙの炭素原子を有する標記された種類の基を示す。
ここで使用される「アルキル」なる用語は、直鎖状、分枝状及び／又は環状の、飽和した一価の炭化水素基を意味する。
ここで使用される「アルケニル」なる用語は、少なくとも一つの炭素-炭素二重結合を含む直鎖状、分枝状及び／又は環状の一価炭化水素基を意味する。
ここで使用される「アルキニル」なる用語は、少なくとも一つの炭素-炭素三重結合を含む直鎖状、分枝状及び／又は環状の一価炭化水素基を意味し、それは場合によっては一又は複数の炭素-炭素二重結合をまた含みうる。
ここで使用される「アルコキシ」なる用語は、Ｒ'が上に示したアルキルである式-ＯＲ'の基を示すことを意図している。
【００１１】
本発明の文脈において、「アリール」なる用語は炭素環式芳香族環基又は環の少なくとも一つが芳香族性である縮合芳香族環系を示すことを意図している。
「ハロゲン」なる用語は元素周期律表の第７族のメンバーを示すことを意図しており、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素（それぞれフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨード置換基に対応）を含む。
「テトラゾール-５-イル」なる用語は１Ｈ-テトラゾール-５-イル又は２Ｈ-テトラゾール-５-イルを示すことを意図している。
本文脈において、例外を特に示さない限り、３文字アミノ酸コードに基づくペプチド命名法の一般的規則が適用される。簡単に述べると、アミノ酸の中心部分は３文字コード（例えばＡｌａ、Ｌｙｓ）によって表され、Ｄ-立体構造が３文字コードの前に「Ｄ-」を付して（例えばＤ-Ａｌａ、Ｄ-Ｌｙｓ）特に示されない限り、Ｌ-立体構造が仮定される。アミノ基での置換基は一水素原子を置換し、その名前が３文字コードの前に置かれる一方、Ｃ末端置換基はカルボン酸ヒドロキシ基を置換し、その名前は３文字コードの後に現れる。例えば、「アセチル-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-ＮＨ２」は、ＣＨ３-Ｃ(=Ｏ)-ＮＨ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)-ＮＨ-ＣＨ２-Ｃ(=Ｏ)-ＮＨ２を表す。特段示さない限り、側鎖に更なるアミノ又はカルボキシ基を持つアミノ酸（例えばＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ等々）は、Ｎ-２（α-窒素）原子とＣ-１（Ｃ=Ｏ）炭素原子とで形成されるアミド結合によってその隣接する基に連結される。
【００１２】
二つのアミノ酸が架橋されると言われる場合、二つの各アミノ酸の側鎖中の官能基が反応して共有結合を形成したことを示すものである。
本文脈において、「アゴニスト」なる用語は、当該受容体タイプを活性化させる物質（リガンド）を示すものである。
本文脈において、「アンタゴニスト」なる用語は、アゴニストの効果を阻止し、中和し又は反対の作用をする物質（リガンド）を示すものである。
より詳細には、受容体リガンドは次の通りに分類することができる：
受容体を活性化させる受容体アゴニスト；部分的アゴニストはまた受容体を活性化させるが、完全アゴニストよりも低い効力のものである。部分的アゴニストは受容体部分的アンタゴニストとして挙動し、完全アゴニストの効果を部分的に阻害する。
アゴニストの作用を阻止するが受容体構成的活性に影響を及ぼさない受容体ニュートラルアンタゴニスト。
アゴニストの作用を阻止し、同時に受容体構成的活性を弱める受容体インバースアゴニスト。完全インバースアゴニストは受容体構成的活性を完全に弱める；部分的インバースアゴニストは受容体構成的活性をより少ない度合いまで弱める。
ここで使用される場合、「アンタゴニスト」なる用語はニュートラルアンタゴニスト及び部分的アンタゴニスト、並びにインバースアゴニストを含む。「アゴニスト」なる用語は完全アゴニスト並びに部分的アゴニストを含む。
【００１３】
本文脈において、「薬学的に許容される塩」という用語は患者に有害ではない塩を意味するものである。そのような塩には、薬学的に許容される酸付加塩、薬学的に許容される金属塩、アンモニウム及びアルキル化アンモニウム塩が含まれる。酸付加塩には、無機酸並びに有機酸の塩が含まれる。適切な無機酸の代表例には、塩酸、臭素酸、ヨウ素酸、リン酸、硫酸及び硝酸等々が含まれる。適切な有機酸の代表例には、蟻酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ケイ皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモン酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ-アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ-トルエンスルホン酸等々が含まれる。薬学的に許容される無機もしくは有機酸付加塩の更なる例には、出典明示によりここに援用されるJ. Pharm. Sci. (1977) 66, 2に列挙された薬学的に許容される塩が含まれる。関連する金属塩の例には、リチウム、ナトリウム、カリウム及びマグネシウム塩等々が含まれる。アルキル化アンモニウム塩の例には、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ヒドロキシエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ブチルアンモニウム及びテトラメチルアンモニウム塩等々が含まれる。
【００１４】
ここで使用される場合、化合物の「治療的有効量」なる用語は、所定の疾患及び／又はその合併症の臨床的徴候を治癒し、緩和し又は部分的に抑止するのに十分な量を言う。これを達成するために十分な量は「治療的有効量」と定義する。それぞれの目的に対する有効量は疾患又は傷害の重症度並びに患者の体重及び一般的症状に依存するであろう。適切な投薬量の決定は、常套的な実験を使用し、値のマトリックスを作成し、マトリックス中の異なった点を試験することによって達成することができ、これは全て、経験ある医師又は獣医の通常の技量の範囲内であると理解される。
【００１５】
ここで用いられる「治療」、「治療する」なる用語及びその他の変化形は、病気又は疾患のような症状と闘う目的での、患者の管理及び世話を意味する。その用語は、患者が罹患している所定の疾患の治療の全範囲を含むことを意図するものであり、例えば、その徴候もしくは合併症を緩和するため、病気、疾患もしくは状態の進行を遅らせるため、病気、疾患もしくは状態を治癒もしくは除くため、及び／又は症状を予防するための当該活性化合物の投与が含まれ、ここで予防は病気、症状、又は疾患と闘う目的での患者の管理及び世話であると理解されるべきであり、徴候又は合併症の発症を防ぐための当該活性化合物の投与が含まれる。治療される患者は、好ましくは哺乳類、特にヒトであるが、他の動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ又はブタの治療も本発明の範囲にある。
ここで使用される場合、「溶媒和物」なる用語は、溶質（この場合には、本発明に係る化合物）と溶媒により形成される定まった化学量論の複合体である。溶媒には、例を挙げると、水、エタノール、又は酢酸が含まれうる。
【００１６】
本文脈で使用されるアミノ酸略号は次の意味を有している：
2010516653.tif 000002
2010516653.tif 000003
2010516653.tif 000004
2010516653.tif 000005
2010516653.tif 000006
2010516653.tif 000007
2010516653.tif 000008
【００１７】
Ｄ-で始まり３文字コードが続くアミノ酸略号、例えばＤ-Ｓｅｒ、Ｄ-Ｈｉｓ等々は、対応するアミノ酸のＤ-エナンチオマー、例えばＤ-セリン、Ｄ-ヒスチジン等々のことである。
【００１８】
（発明の記載）
本発明の化合物の更なる実施態様の中から以下を挙げる： 
２．
Ｒ２は、直鎖のＣ１２-２０アルキル、Ｃ１２-２０アルケニル又はＣ１２-２０アルキニルを表し、一又は複数のヒドロキシによって場合によって置換されてもよく；
Ｒ３は、存在しないかあるいは-ＮＨ-Ｓ(＝Ｏ)２-(ＣＨ２)３-５-Ｃ(＝Ｏ)−、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、γ-Ｇｌｕ、Ｄ-γ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、β-Ａｓｐ、Ｄ-β-Ａｓｐ、Ｇｌｙ-γ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ｄ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-γ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ｄ-γ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ａｓｐ、Ｔｒｘ-Ｄ-Ａｓｐ、Ｔｒｘ-β-Ａｓｐ又はＴｒｘ-Ｄ-β-Ａｓｐを表し； 
Ｓ１は、存在しないかあるいは式IIa-IIhのうちの一に記載のグリコールエーテルベースの構造を表し；
Ｚ１は、存在しないかあるいはＧｌｙ、β-Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ又はＤ-Ｈｙｐから選択される１から４のアミノ酸残基を含むペプチド断片を表し；
Ｘ１は、Ｇｌｕ又はＡｓｐを表し；
Ｘ２は、Ｈｙｐ、Ｐｒｏ、Ａｚｅ又はＰｉｐを表し；
Ｘ３は、Ｄ-Ｐｈｅを表し；
Ｘ４は、Ｔｒｐを表し；
Ｘ５は、Ｌｙｓ又はＯｒｎを表し；
Ｚ７は存在せず；そして、
Ｒ４は、ＯＲ'又はＮ(Ｒ')２を表し、各々のＲ'はそれぞれ水素又はＣ１-３アルキルを表す、実施態様１に記載の化合物；
【００１９】
３．Ｒ１-Ｒ２が１２-(テトラゾール-５-イル)ドデシル、１３-(テトラゾール-５-イル)トリデシル、１４-(テトラゾール-５-イル)テトラデシル、１５-(テトラゾール-５-イル)ペンタデシル、１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデシル、１７-(テトラゾール-５-イル)ヘプタデシル、１８-(テトラゾール-５-イル)オクタデシル又は１９-(テトラゾール-５-イル)ノナデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
４．Ｒ１-Ｒ２が１４-(テトラゾール-５-イル)テトラデシル、１５-(テトラゾール-５-イル)ペンタデシル、１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデシル又は１７-(テトラゾール-５-イル)ヘプタデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
５．Ｒ１-Ｒ２が１５-(テトラゾール-５-イル)ペンタデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
６．Ｒ１-Ｒ２が１９-(テトラゾール-５-イル)ノナデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
７．Ｒ１-Ｒ２が１２-カルボキシ-ドデシル、１３-カルボキシトリデシル、１４-カルボキシテトラデシル、１５-カルボキシペンタデシル、１６-カルボキシ-ヘキサデシル、１７-カルボキシヘプタデシル、１８-カルボキシオクタデシル又は１９-カルボキシノナデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
８．Ｒ１-Ｒ２が１４-カルボキシ-テトラデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
９．Ｒ１-Ｒ２が１６-カルボキシ-ヘキサデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
１０．Ｒ１-Ｒ２が１８-カルボキシ-オクタデシルを表す、実施態様１又は２に記載の化合物；
【００２０】
１１．Ｒ３が存在しない、実施態様１から１０のいずれか一に記載の化合物；
１２．Ｒ３が、-ＮＨ-Ｓ(＝Ｏ)２-(ＣＨ２)３-５-Ｃ(＝Ｏ)-、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、γ-Ｇｌｕ、Ｄ-γ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、β-Ａｓｐ、Ｄ-β-Ａｓｐ、Ｇｌｙ-γ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ｄ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-γ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ｄ-γ-Ｇｌｕ、Ｔｒｘ-Ａｓｐ、Ｔｒｘ-Ｄ-Ａｓｐ、Ｔｒｘ-β-Ａｓｐ又はＴｒｘ-Ｄ-β-Ａｓｐを表す、実施態様１から１０のいずれか一に記載の化合物。
１３．Ｒ３が、-ＮＨ-Ｓ(＝Ｏ)２-(ＣＨ２)３-Ｃ(＝Ｏ)-を表す、実施態様１から１０のいずれか一に記載の化合物；
１４．Ｒ３がＴｒｘ-γ-Ｇｌｕを表す、実施態様１から１０のいずれか一に記載の化合物；
１５．Ｓ１が存在しない、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物；
１６．Ｓ１が式IIa-IIhのいずれか一に記載の構造を表す、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物。
１７．Ｓ１が式IIaに記載の構造を表す、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物；
１８．Ｓ１が式IIbに記載の構造を表す、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物；
１９．Ｓ１が式IIcに記載の構造を表す、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物；
２０．Ｓ１が式IIg又はIIhに記載の構造を表す、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物；
２１．Ｓ１が、 
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]１１-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)−又は
-ＨＮ-ＣＨ２-ＣＨ２-[Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２]１１-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ(＝Ｏ)-
を表す、実施態様１から１４のいずれか一に記載の化合物；
【００２１】
２２．Ｚ１が存在しない、実施態様１から２１のいずれか一に記載の化合物；
２３．Ｚ１が、Ｇｌｙ、β-Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｄ-Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｄ-Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｄ-Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｄ-Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ-Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ-Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｄ-Ｐｒｏ、Ｈｙｐ又はＤ-Ｈｙｐを表す、実施態様１から２１のいずれか一に記載の化合物。
２４．Ｚ１がＧｌｙを表す、実施態様１から２１のいずれか一に記載の化合物；
２５．Ｚ１がＧｌｙ-Ｄ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｓｅｒを表す、実施態様１から２１のいずれか一に記載の化合物；
２６．Ｚ２がＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ又はＨｉｓを表す、実施態様１から２５のいずれか一に記載の化合物；
２７．Ｚ２がＳｅｒ又はＴｈｒを表す、実施態様１から２５のいずれか一に記載の化合物；
２８．Ｚ３がＧｌｎ、Ｄ-Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｄ-Ａｓｎ、Ｓｅｒ又はＤ-Ｓｅｒを表す、実施態様１から２７のいずれか一に記載の化合物；
２９．Ｚ３がＧｌｎを表す、実施態様１から２７のいずれか一に記載の化合物；
３０．Ｚ４がＳｅｒ、ホモＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、ホモＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐを表す、実施態様１から２９のいずれか一に記載の化合物；
３１．Ｚ４がＨｉｓを表す、実施態様１から２９のいずれか一に記載の化合物；
【００２２】
３２．Ｚ５がＳｅｒ、ホモＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐを表す、実施態様１から３１のいずれか一に記載の化合物；
３３．Ｚ５がＳｅｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｄａｐ又はＤａｂを表す、実施態様１から３１のいずれか一に記載の化合物；
３４．Ｚ５がＳｅｒを表す、実施態様１から３１のいずれか一に記載の化合物；
３５．Ｚ５がＤａｐを表す、実施態様１から３１のいずれか一に記載の化合物；
３６．Ｚ５がＡｒｇを表す、実施態様１から３１のいずれか一に記載の化合物；
３７．Ｚ６がＬｙｓ、Ａｒｇ又はホモＡｒｇを表す、実施態様１から３６のいずれか一に記載の化合物；
３８．Ｚ６がＤ-Ｌｙｓ、Ｄ-Ａｒｇ又はＤ-ホモＡｒｇを表す、実施態様１から３６のいずれか一に記載の化合物；
３９．Ｚ６がＰｈｅ、Ｔｙｒ又はＴｒｐを表す、実施態様１から３６のいずれか一に記載の化合物；
４０．Ｚ６がＤ-Ｐｈｅ、Ｄ-Ｔｙｒ又はＤ-Ｔｒｐを表す、実施態様１から３６のいずれか一に記載の化合物；
４１．Ｚ６がＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｄ-Ｐｈｅ又はＤ-Ｔｙｒを表す、実施態様１から３６のいずれか一に記載の化合物；
【００２３】
４２．Ｘ２がＰｒｏを表す、実施態様１から４１のいずれか一に記載の化合物；
４３．Ｘ２がＨｙｐを表す、実施態様１から４１のいずれか一に記載の化合物；
４４．Ｘ１がＧｌｕであり、Ｘ３がＤ-Ｐｈｅであり、Ｘ４がＴｒｐであり、Ｘ５がＬｙｓである、実施態様１から４３のいずれか一に記載の化合物；
４５．Ｘ１がＡｓｐであり、Ｘ３がＤ-Ｐｈｅであり、Ｘ４がＴｒｐであり、Ｘ５がＬｙｓである、実施態様１から４３のいずれか一に記載の化合物；
４６．Ｒ４がＮＨ２である、実施態様１から４５のいずれか一に記載の化合物；
４７．Ｒ４がＯＨである、実施態様１から４５のいずれか一に記載の化合物；
【００２４】
４８．以下の化合物(これらのそれぞれは独立して本発明の化合物の実施態様を構成する)からなる群から選択される、実施態様１に記載の化合物：
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｓｅｒ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；
2010516653.tif 000009
{２-[２-(２-{２-[２-(１７-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｄａｐ-Ｐｈｅ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-Ｇｌｎ-Ｄ-Ｓｅｒ-ＮＨ２；
2010516653.tif 000010
[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{４-[１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル]ブタノイルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ａｒｇ-Ｄ-Ｔｙｒ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；
2010516653.tif 000011
(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-２-(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイルアミノ]-エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｄ-Ｓｅｒ-Ａｒｇ-Ｈｉｓ-ホモＡｒｇ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｐｒｏ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；及び
2010516653.tif 000012
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｇｌｙ-Ｄ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２；
2010516653.tif 000013
【００２５】
本発明はまた上に概要を示した本発明の化合物の二以上の実施態様の組合せを包含する。
本発明の一側面では、本発明の化合物はメラノコルチン受容体のアゴニスト、特にＭＣ４のアゴニストである。本発明の他の側面では、ＭＣ４の選択的アゴニストである。この文脈で、選択性は、ＭＣ１、ＭＣ３及び／又はＭＣ５に関して化合物の活性との関連で理解されなければならない。化合物が、ＭＣ１、ＭＣ３及び／又はＭＣ５アゴニストとしてよりもＭＣ４アゴニストとして有意により強力である場合、化合物は選択的ＭＣ４アゴニストであると判断される。ＭＣ１、ＭＣ３、ＭＣ５及びＭＣ４に対する化合物の結合親和性は、それぞれ「アッセイＩＶ」（ＭＣ１）、「アッセイＶＩＩＩ」（ＭＣ３）及び「アッセイＩＸ」（ＭＣ５）として以下に記載されたＭＣ１、ＭＣ３又はＭＣ５結合アッセイからのＩＣ５０を、「アッセイＶ」（ＭＣ４）として以下に記載されたＭＣ４結合アッセイからのＩＣ５０と比較することによって決定されうる。化合物が、ＭＣ１に対してよりもＭＣ４に対して１０倍以上、例えば５０倍以上、例えば１００倍以上強力である場合、ＭＣ１に対して選択的ＭＣ４アゴニストであると判断される。ＭＣ３、ＭＣ４及びＭＣ５に対する化合物のアゴニスト能は、「アッセイＩＩ」（ＭＣ３及びＭＣ５）、「アッセイＸ」（ＭＣ３）及び「アッセイＩＩＩ」（ＭＣ４）に記載されたような機能アッセイで決定されうる。化合物が、ＭＣ３に対してよりもＭＣ４に対して１０倍以上、例えば５０倍以上、例えば１００倍以上強力である場合、ＭＣ３に対して選択的ＭＣ４アゴニストであると判断される。化合物が、ＭＣ５に対してよりもＭＣ４に対して１０倍以上、例えば５０倍以上、例えば１００倍以上強力である場合、ＭＣ５に対して選択的ＭＣ４アゴニストであると判断される。特定の側面では、本発明の化合物は、ＭＣ１に対して、ＭＣ３に対して、ＭＣ５に対して、ＭＣ１及びＭＣ３に対して、ＭＣ１及びＭＣ５に対して、ＭＣ３及びＭＣ５に対して又はＭＣ１、ＭＣ３及びＭＣ５に対して選択的ＭＣ４アゴニストである。
【００２６】
本発明の他の側面では、本発明の化合物は選択的ＭＣ４アゴニスト及びＭＣ３アンタゴニストである。この文脈で、化合物は、それが上で検討されたようにＭＣ１及びＭＣ５に対して選択的ＭＣ４アゴニストであり、「アッセイＩＩ」に記載されたようにして決定してＭＣ３をアンタゴナイズするならば、選択的ＭＣ４アゴニスト及びＭＣ３アンタゴニストであると判断される。後者のアッセイでは、１００ｎＭ未満、例えば１０ｎＭ未満、例えば５ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満のＩＣ５０値を示す化合物はＭＣ３アンタゴニストであると判断される。
本発明の更なる側面では、本発明の化合物は選択的ＭＣ３アゴニスト及び選択的ＭＣ４アゴニストの双方である。この文脈では、化合物は、ＭＣ１及びＭＣ５に対するアゴニストとしてよりもＭＣ３及びＭＣ４に対するアゴニストとして有意により強力であるならば、選択的ＭＣ３及びＭＣ４アゴニストであると判断される。ＭＣ１及びＭＣ３に対する化合物の選択性は、「アッセイＩＶ」に記載されたＭＣ１に対して決定される結合親和性を、「アッセイＩＩＩ」に記載されたようにして決定されたＭＣ３に対する結合親和性と比較することによって決定することができる。化合物の結合親和性が、ＭＣ１に対してよりもＭＣ３に対して１０倍以上、例えば５０倍以上、例えば１００倍よりも大きい場合、ＭＣ１に対して選択的ＭＣ３アゴニストであると判断される。ＭＣ３及びＭＣ５に対する化合物の選択性は、「アッセイＩＩ」に記載されたようにして決定される効能を比較することによって決定することができる。化合物が、ＭＣ５に対してよりもＭＣ３に対して１０倍以上、例えば５０倍以上、例えば１００倍以上強力である場合、ＭＣ５に対して選択的ＭＣ３アゴニストであると判断される。ＭＣ３及びＭＣ５に対する化合物のＭＣ４選択性は、上で検討したようにして決定される。
【００２７】
本発明の化合物は持続的な効果を及ぼす。すなわち、生物活性を示す期間は長くなる。化合物が、「アッセイＩ」においてベヒクル処置コントロール動物群における２４時間から４８時間のある期間の間の食物摂取と比較して、試験動物における同じ期間の間の食物摂取を有意に低減させる場合に、効果は持続されていると定義される。あるいは、持続する効果は、間接的なアルブミン結合アッセイにおいて評価され、このアッセイでは、卵白アルブミンの存在下での結合について決定されるＫｉを、ＨＳＡの存在下で決定されるＥＣ５０値と比較する(好適なアッセイ手順の記載については薬理学的方法の項目のアッセイＶＩＩを参照のこと(以下参照))。
本発明の化合物はメラノコルチンレセプターを調整するので、メラノコルチンレセプター活性の調節によって治療されうる疾患又は状態の治療に特に適していると考えられている。特に、本発明の化合物は、ＭＣ４の活性化による疾患又は状態の治療に適していると考えられている。
【００２８】
本発明の更なる態様又は実施態様の中から以下を挙げる：
４９．ＩＧＴから２型糖尿病への進行を遅延させる方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物(上記参照)の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５０．インスリン非依存性２型糖尿病からインスリン依存性２型糖尿病への進行を遅延させる方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５１．肥満を治療し又は体重過剰を予防する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５２．食欲の調節方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５３．満腹感を誘導する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５４．首尾良く減量した後の体重増加を防止する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５５．エネルギー消費を増加させる方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【００２９】
本発明のなお更なる態様又は実施態様は以下の通りである：
５６．体重過剰又は肥満に関する疾患又は状態を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５７．過食症を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法；
５８．アテローム性動脈硬化、高血圧、糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害及び早死にのリスクから選択される疾患又は状態を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
特に、本発明の化合物は、肥満であるか太りすぎの患者の疾患の治療に適しうる。したがって、本発明のなお更なる態様又は実施態様は以下に関する：
５９．肥満患者における２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害及び早死にのリスクから選択される疾患又は状態を治療する方法において、場合によっては一又は複数の更なる治療的に活性な化合物と組み合わせて、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を、それを必要とする肥満患者に投与することを含む方法。
【００３０】
本発明の更なる他の態様又は実施態様は以下に関する：
６０．前記の更なる治療的に活性な化合物が、糖尿病薬、高脂血症治療薬、抗肥満薬、血圧降下薬及び糖尿病から生じるか糖尿病に伴う合併症の治療薬から選択される、実施態様４９から５９の何れか一項に記載の方法(上記参照)；
６１．実施態様１から４８のいずれか一に記載の前記化合物が、およそ０．０５ｍｇからおよそ１０００ｍｇの前記化合物を含有する単位用量形態で前記患者に投与される、実施態様４９から５９のいずれか一に記載の方法；
６２．被検体においてＭＣ４を活性化する方法であって、実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物の有効量を該被検体に投与することを含む方法；
６３．実施態様１から４８のいずれか一に記載の前記化合物が非経口的に又は舌下的に投与される、実施態様４９から６２のいずれか一に記載の方法；
６４．治療に用いられる実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物。
【００３１】
本発明の他の態様又は実施態様は以下に関する：
６５．実施態様１から４８のいずれか一に記載の化合物を含有してなる医薬組成物。このような医薬組成物における本発明の化合物は、一又は複数の更なる治療的に活性な化合物ないしは物質と組み合わせて、および／または一又は複数の薬学的に許容可能な担体ないしは賦形剤と共に場合によって存在してもよい。本発明の医薬組成物は、およそ０．０５ｍｇからおよそ１０００ｍｇ、例えばおよそ０．１ｍｇからおよそ５００ｍｇ、例としておよそ０．５ｍｇからおよそ２００ｍｇの本発明の化合物を含む単位用量の形態であるのが最適であるかもしれない。
【００３２】
本発明の更なる他の態様又は実施態様は以下に関する： 
６６．ＩＧＴから２型糖尿病への進行を遅延させるため；インスリン非依存性２型糖尿病からインスリン依存性２型糖尿病への進行を遅延させるため；肥満を治療するかまたは体重過剰を予防するため；食欲を調節するため；満腹感を誘導するため；首尾良く減量した後の体重増加を防止するため；エネルギー消費を増加させるため；体重過剰又は肥満に関する疾患又は状態を治療するため；過食症を治療するため；アテローム性動脈硬化、高血圧、２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害又は早死にのリスクを治療するため；または、肥満患者における２型糖尿病、耐糖能障害(ＩＧＴ)、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性機能障害及び早死にのリスクから選択される疾患又は状態を治療するための医薬の製造における実施例１から４８のいずれか一に記載の化合物の使用。
ＭＣ４アゴニストとして作用する本発明の化合物は、インシュリン感受性、薬物乱用(利益系を調整することによる)、及び出血性ショックに対してポジティブな影響を及ぼしうる。さらに、ＭＣ３およびＭＣ４のアゴニストは解熱作用を有し、何れも末梢神経再生に関与することが示唆されている。また、ＭＣ４アゴニストは、ストレス反応を低減することが知られている。薬物乱用の治療、出血性ショックの治療又は出血性ショックの予防、及びストレス反応の低減に加えて、本発明の化合物は、アルコール濫用の治療、脳卒中の治療、虚血の治療、神経系損傷に対する保護にも価値があるかもしれない。
すでに示したように、先に開示した治療法又は示唆のすべてにおいて、本発明の化合物は単独で投与されてもよい。しかしながら、一又は複数の更なる治療的に活性な薬剤、物質ないしは化合物と組み合わせて、順次又は連続して投与されてもよい。
【００３３】
本発明に係る方法において用いられる場合、本発明の化合物の典型的な用量は、１日当たり約０．００１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日当たり約０．０１から約５０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば１日当たり約０．０５から約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で、１〜３回の投薬のように一又は複数の用量で投与される。正確な投与量は、投与の頻度及び形式、治療される対象の性別、年齢、体重及び全身状態、治療される症状の性質及び重症度、治療される任意の随伴性疾患並びに当業者にとって明白な他の因子に依存する。
本発明の化合物は、簡便には、当業者によく知られている技術を使用して単位投薬形態で処方されうる。１日当たり１から３回のような１日当たり一又は複数回の経口投与のための典型的な単位投薬形態は、０．０５から約１０００ｍｇ、好ましくは約０．１から約５００ｍｇ、より好ましくは約０．５ｍｇから約２００ｍｇの本発明の化合物を好適には含みうる。
【００３４】
本発明の化合物は、例えば１日一回よりも長い間隔での投与によく適合していると思われる化合物を含む。よって、本発明の適切に製剤化された化合物は、例えばここに開示された経路の一つのような適切な投与経路によって、例えば毎週２回又は毎週一回の投与に適しうる。
上に記載したように、本発明の化合物は一又は複数の更なる治療的に活性な化合物又は物質と組み合わされて投与され又は適用され、適切な更なる化合物又は物質は、例えば抗糖尿病薬、高脂血症治療薬、抗肥満薬、血圧降下薬及び糖尿病から生じるか糖尿病に伴う合併症の治療剤から選択することができる。
【００３５】
適切な抗糖尿病薬には、インスリン、インスリン誘導体又は類似体、ＧＬＰ-１（グルカゴン様ペプチド-１）誘導体又は類似体[例えば国際公開第９８／０８８７１号(ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ)（ここに出典明示により援用する）に開示されているもの]、又は他のＧＬＰ-１類似体、例えばバイエッタ(exenatide；Eli Lilly/Amylin)、アミリン、アミリン類似体(例えばSymlinTM/Pramlintide)並びに経口的に活性な血糖降下薬が含まれる。
適切な経口活性の血糖降下薬には、イミダゾリン類、スルホニル尿素類、ビグアニド類、メグリチニド類、オキサジアゾリジンジオン類、チアゾリジンジオン類、インスリン抵抗性改善薬、α-グルコシダーゼ阻害剤、膵臓β細胞のＡＴＰ依存性カリウムチャンネルに作用する薬剤、例えば、国際公開第９７／２６２６５号、同第９９／０３８６１号及び同第００／３７４７４号(ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ)(これらは出典明示によりここに援用する)に開示されているもののようなカリウムチャンネル開口薬；例えばオルミチグリニド(ormitiglinide)のようなカリウムチャンネル開口薬；カリウムチャンネル遮断薬、例えばナテグリニド又はＢＴＳ-６７５８２；グルカゴンアンタゴニスト、例えば国際公開第９９／０１４２３号及び同第００／３９０８８号(ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ及びAgouron Pharmaceuticals, Inc.)(全て出典明示によりここに援用する)に開示されているもの；ＧＬＰ-１アゴニスト、例えば国際公開第００／４２０２６号(ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ及びAgouron Pharmaceuticals, Inc.)(出典明示によりここに援用する)に開示されているもの；アミリンアゴニスト；ＤＰＰ-ＩＶ(ジペプチジルペプチダーゼ-ＩＶ)阻害剤；ＰＴＰアーゼ(タンパク質チロシンホスファターゼ)阻害剤；グルコキナーゼ活性化剤、例えばホフマンラロシュの国際公開第０２／０８２０９号に記載のもの；グルコース新生及び／又はグリコーゲン分解の刺激に関連する肝酵素の阻害剤；グルコース取り込みモジュレーター；ＧＳＫ-３(グリコーゲンシンターゼキナーゼ-３)阻害剤；脂質代謝を改変する化合物、例えば抗高脂血薬及び抗脂血薬；食物摂取を低下させる化合物；並びにＰＰＡＲ(ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体)アゴニスト及びＲＸＲ(レチノイドＸ受容体)アゴニスト、例えばＡＬＲＴ-２６８、ＬＧ-１２６８又はＬＧ-１０６９が含まれる。
【００３６】
適切な更なる治療的に活性な物質の他の例には、インスリン又はインスリン類似体；スルホニル尿素、例えばトルブタミド、クロルプロパミド、トラザミド、グリベンクラミド、グリピジド、グリメピリド、グリカジド又はグリブリド；ビグアニド、例えばメトホルミン；メグリチニド、例えばレパグリニド又はセナグリニド／ナテグリニドが含まれる。
適切な更なる治療的に活性な物質の更なる例には、チアゾリジンジオンインスリン抵抗性改善薬、例えばトログリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、イサグリタゾン(isaglitazone)、ダルグリタゾン、エングリタゾン、ＣＳ-０１１／ＣＩ-１０３７又はＴ１７４、あるいは国際公開第９７／４１０９７号（ＤＲＦ-２３４４）、同第９７／４１１１９号、同第９７／４１１２０号、同第００／４１１２１号及び同第９８／４５２９２号(Dr. Reddy's Research Foundation)(これらの全てを出典明示によりここに援用する)に開示されている化合物が含まれる。
【００３７】
適切な更なる治療的に活性な物質の更なる例には、インスリン抵抗性改善薬、例えばＧＩ２６２５７０、ＹＭ-４４０、ＭＣＣ-５５５、ＪＴＴ-５０１、ＡＲ-Ｈ０３９２４２、ＫＲＰ-２９７、ＧＷ-４０９５４４、ＣＲＥ-１６３３６、ＡＲ-Ｈ０４９０２０、ＬＹ５１０９２９、ＭＢＸ-１０２、ＣＬＸ-０９４０、ＧＷ-５０１５１６及び国際公開第９９／１９３１３号（ＮＮ６２２／ＤＲＦ-２７２５）、同第００／５０４１４号、同第００／６３１９１号、同第００／６３１９２号、同第００／６３１９３号(Dr. Reddy's Research Foundation)及び国際公開第００／２３４２５号、同第００／２３４１５号、同第００／２３４５１号、同第００／２３４４５号、同第００／２３４１７号、同第００／２３４１６号、同第００／６３１５３号、同第００／６３１９６号、同第００／６３２０９号、同第００／６３１９０号及び同第００／６３１８９号(ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ)（これらの全てを出典明示によりここに援用する）が含まれる。
【００３８】
適切な更なる治療的に活性な物質のまた更なる例には、
α-グルコシダーゼ阻害剤、例えばボグリボース、エミグリテート、ミグリトール又はアカルボース；
グリコーゲン・ホスホリラーゼ阻害剤、例えば国際公開第９７／０９０４０号（ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ）に記載された化合物；
グルコキナーゼ活性化剤；
膵臓β細胞のＡＴＰ依存性カリウムチャンネルに作用する薬剤、例えばトルブタミド、グリベンクラミド、グリピジド、グリカジド、ＢＴＳ-６７５８２又はレパグリニド；
が含まれる。
他の適した更なる治療的に活性な物質には、抗高脂血症薬及び抗脂血薬、例えばコレスチルアミン、コレスチポール、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、プルブコール又はデキストロチロキシンが含まれる。
【００３９】
更なる治療的に活性な物質として適している更なる薬剤には、抗肥満薬及び食欲調節剤が含まれる。そのような物質は、ＣＡＲＴ(コカインアンフェタミン調節転写)アゴニスト、ＮＰＹ(神経ペプチドＹ)アンタゴニスト、ＭＣ３(メラノコルチン受容体３)アゴニスト、ＭＣ３アンタゴニスト、ＭＣ４(メラノコルチン４)アゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、ＴＮＦ(腫瘍壊死因子)アゴニスト、ＣＲＦ(コルチコトロピン放出因子)アゴニスト、ＣＲＦ ＢＰ(コルチコトロピン放出因子結合タンパク質)アンタゴニスト、ウロコルチンアゴニスト、β３アドレナリン作動性アゴニスト、例えばＣＬ-３１６２４３、ＡＪ-９６７７、ＧＷ-０６０４、ＬＹ３６２８８４、ＬＹ３７７２６７又はＡＺ-４０１４０、ＭＣ１(メラノコルチン受容体１)アゴニスト、ＭＣＨ(メラノサイト集中ホルモン)アンタゴニスト、ＣＣＫ(コレシストキニン)アゴニスト、セロトニン再摂取インヒビター（例えばフルオキセチン、セロザット又はシタロプラム）、セロトニン及びノルエピネフェリン再摂取インヒビター、５ＨＴ(セロトニン)アゴニスト、ボンベシンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、成長ホルモン、成長因子、例えばプロラクチン又は胎盤ラクトゲン、成長ホルモン放出化合物、ＴＲＨ(チロトロピン放出ホルモン)アゴニスト、ＵＣＰ２又は３(脱共役タンパク質２又は３)モジュレーター、化学脱共役剤、レプチンアゴニスト、ＤＡ(ドーパミン)アゴニスト(ブロモクリプチン、ドプレキシン)、リパーゼ／アミラーゼインヒビター、ＰＰＡＲモジュレーター、ＲＸＲモジュレーター、ＴＲβアゴニスト、アドレナリン作動性ＣＮＳ刺激薬、ＡＧＲＰ(アグーチ関連タンパク質)インヒビター、ヒスタミンＨ３受容体アンタゴニスト、例えば国際公開第００／４２０２３号、同第００／６３２０８号及び同第００／６４８８４号（その全ての内容を出典明示によりここに援用する）に開示されているもの、エキセンジン(exendin)-４、ＧＬＰ-１アゴニスト、毛様体神経栄養因子、アミリン類似体、ペプチドＹＹ３−３６(ＰＹＹ３-３６)(Batterham et al, Nature 418, 650-654 (2002))、ＰＹＹ３-３６類似体、ＮＰＹ Ｙ２レセプターアゴニスト、ＮＰＹ Ｙ４レセプターアゴニスト及びＮＰＹ Ｙ２及びＮＰＹ Ｙ４アゴニストの組み合わせとして作用する物質からなる群から選択することができる。
更なる適切な抗肥満薬は、ブプロピオン（抗うつ薬）、トピラメート（抗けいれん薬）、エコピパム(ecopipam)（ドーパミンＤ１／Ｄ５アンタゴニスト）、及びナルトレキソン（オピオイドアンタゴニスト)である。
【００４０】
本発明の化合物との組合せで更なる治療的に活性な物質として本発明の方法に使用される適した抗肥満薬の実施態様はレプチン及びレプチンの類似体又は誘導体である。
適切な抗肥満薬の更なる実施態様はセロトニン及びノルエピネフリン再摂取阻害剤、例えばシブトラミンである。
適切な抗肥満薬の他の実施態様はリパーゼ阻害剤、例えばオルリスタットである。
適切な抗肥満薬のまた更なる実施態様は、アドレナリン作動性ＣＮＳ刺激薬、例えばデキサアンフェタミン、アンフェタミン、フェンテルミン、マジンドール、フェンジメトラジン、ジエチルプロピオン、フェンフルラミン又はデキシフェンフルラミンである。
適切な更なる治療的に活性な化合物の他の例には降圧剤が含まれる。降圧剤の例は、アルプレノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、プロプラノロール及びメトプロノールなどのβ遮断薬、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、キナプリル及びラミプリルなどのＡＣＥ（アンギオテンシン転換酵素）阻害剤、ニフェジピン、フェロジピン、ニカルジピン、イスラジピン、ニモジピン、ジルチアゼム及びベラパミルなどのカルシウムチャンネル遮断薬、並びにドキサゾシン、ウラピジル、プラゾシン及びテトラゾシンなどのα遮断薬である。
【００４１】
本発明の使用及び方法のある実施態様では、本発明の化合物は、一を越える上述の適切な更なる治療的に活性な化合物又は物質と組み合わせて、例えば、メトホルミン及びグリブリドのようなスルホニル尿素；スルホニル尿素とアカルボース；ナテグリニドとメトホルミン；アカルボースとメトホルミン；スルホニル尿素、メトホルミン及びトログリタゾン；インスリンとスルホニル尿素；インスリンとメトホルミン；インスリン、メトホルミン及びスルホニル尿素；インスリンとトログリタゾン；インスリンとロバスタチン等々と組み合わせて、投与され又は適用されうる。
【００４２】
肥満又は過剰体重の治療又は予防、すなわち過剰脂肪症の軽減又は予防のために、場合によって上掲に開示した一又は複数の更なる治療的に活性な化合物又は物質と組み合わせた、特に、本発明の投与の場合、体重欠失を達成又は体重増加を予防するために外科的なインターベンションと組み合わせて、例えば肥満外科インターベンションと組み合わせて、投与を行うことに関する。頻繁に用いられる肥満外科的な技術の例には、以下が含まれるが、これらに限定されるものではない：
胃の一部を一括りにして小さい胃となりうる嚢を作り、新しい胃とする垂直帯胃形成術(「胃ステープル」としても知られる)； 
新しい胃とするための小さい胃となりうる嚢を患者によって大きさを調節することができるエラストメリック(例えばシリコーン)バンドを用いて形成する、例えば調節可能な胃バンドシステム(例えばスウェーデンのＡｄｊｕｓｔａｂｌｅ Ｇａｓｔｒｉｃ Ｂａｎｄ(ＳＡＧＢ)、ＬＡＰ-ＢＡＮＤＴＭ又はＭＩＤｂａｎｄＴＭ)を用いた胃結束；及び、
胃バイパス手術、例えば小さい胃嚢がホッチキス装置を用いて形成され、遠位性小腸に連結される「Ｒｏｕｘ-ｅｎ-Ｙ」バイパス(小腸の上部がＹ形の配位で再び付着する)。
本発明の前後関係において使用される、「肥満外科」なる用語及びその変形(例えば「体重損失手術」、「体重損失外科的インターベンション」「体重損失外科的手技」、「肥満外科的インターベンション」、「肥満外科的手技」など)の範囲内にある他の技術は、胃バルーン手術であり、この手術では、風船に似ている膨張可能な装置が胃に導入され、膨らまされるものであり、胃内の利用可能な容量を減少し、食物摂取の間、通常より早い段階で患者に満腹感を感じさせることによって患者の食物摂取を減少させることを目的とする。 
【００４３】
上述のすべての技術は、原則として可逆性である。文脈に関連して用いられる更なる、不可逆的な、それゆえに概してあまり用いられない技術の非限定的な例には、胆すい消化回避術およびスリーブ胃切除(後者は、また、十二指腸スイッチと連動して使用されてもよい)が含まれ、いずれも胃の実質部分の外科的切除を伴う。
本発明の化合物の投与(場合によって上掲に開示した一又は複数の更なる治療的に活性な化合物又は物質と組み合わせたもの)は、問題の肥満外科インターベンションを行う前の一定期間および／または、行った後の一定期間の間行ってもよい。多くの場合、肥満外科インターベンションを行った後に、本発明の化合物の投与を始めることが好ましい。
【００４４】
（薬学的組成物）
既に述べたように、本発明の一側面は本発明の化合物を含有する薬学的組成物（製剤）を提供する。そのような製剤の適切な実施態様はしばしば１０−３ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌ、例えば１０−１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で本発明の化合物を含む。本発明のそのような製剤のｐＨは典型的には２．０〜１０．０の範囲である。製剤はバッファー系、保存料、等張剤、キレート剤、安定剤及び／又は界面活性剤を更に含有しうる。本発明の一実施態様では、薬学的製剤は水性製剤、すなわち水を含有する製剤であり、本文脈において「水性製剤」なる用語は、少なくとも５０％(ｗ／ｗ)の水を含有する製剤を示すものと通常はとることができる。そのような製剤は典型的には溶液又は懸濁液である。水溶液の形態の本発明の水性製剤は通常は少なくとも５０％(ｗ／ｗ)の水を含有する。同様に、水性懸濁液の形態の本発明の水性製剤は通常は少なくとも５０％(ｗ／ｗ)の水を含有する。
【００４５】
他の実施態様では、本発明の薬学的組成物（製剤）は、使用前に溶媒及び／又は希釈剤を添加することによって医師又は患者によって再構成されるためフリーズドライ（つまり凍結乾燥）製剤でありうる。
更なる実施態様では、本発明の薬学的組成物（製剤）は事前の溶解の必要がない使用準備が整った乾燥製剤（例えば凍結乾燥又はスプレードライ）でありうる。
更なる態様では、本発明は、本発明の化合物とバッファーの水溶液を含有する薬学的組成物（製剤）に関し、ここで本発明の化合物は０．１−１００ｍｇ／ｍｌ又はそれ以上の濃度で存在しており、該製剤は約２．０から約１０．０のｐＨを有している。
【００４６】
本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９及び１０．０からなるリストから選択される値を有している。
【００４７】
更なる実施態様では、本発明の緩衝された薬学的組成物中のバッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン（ＴＲＩＳ）、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸及びアスパラギン酸からなる群から選択される一又は複数のバッファー物質を含みうる。これらの特定のバッファーの各一が本発明の別の実施態様を構成する。
【００４８】
他の実施態様では、本発明の薬学的組成物は薬学的に許容可能な保存料、例えばフェノール、ｏ-クレゾール、ｍ-クレゾール、ｐ-クレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ-ヒドロキシ安息香酸プロピル、２-フェノキシエタノール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸ブチル、２-フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、チメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネシン（３ｐ-クロルフェノキシプロパン-１,２-ジオール）からなる群から選択される一又は複数の保存料を含有しうる。これらの特定の保存料の各一が本発明の別の実施態様を構成する。本発明の更なる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のこのような薬学的組成物のまた更なる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度、又は１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。薬学的組成物中における保存料の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20版, 2000が参照される。
【００４９】
本発明の更なる実施態様では、製剤は、通常は得られた最終液体製剤が等浸透圧又は実質的に等浸透圧になるように、等張剤、つまり本発明の液体製剤（特に水性製剤）又は再構成された凍結乾燥製剤の緊張力（浸透圧）を所望のレベルに調節する目的で加えられる物質を更に含有する。適切な等張剤は、塩（例えば塩化ナトリウム）、糖及び糖アルコール（例えばマンニトール）、アミノ酸（例えばグリシン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン又はスレオニン）、アルジトール[例えばグリセロール（グリセリン）、１,２-プロパンジオール（プロピレングリコール）、１,３-プロパンジオール、１,３-ブタンジオール]、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００）及びそれらの混合物からなる群から選択されうる。
例えばフルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンブン、ヒドロキシエチルデンプン又はカルボキシメチルセルロース-Ｎａを含む単糖類、二糖類、又は多糖類、又は水溶性グルカン類のような任意の糖を使用することができる；一実施態様では、スクロースを用いることができる。糖アルコール（単糖類、二糖類、オリゴ糖類又は多糖類から誘導されるポリオール）には、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールが含まれる。一実施態様では、用いられる糖アルコールはマンニトールである。上述の糖類又は糖アルコールは個々に又は組み合わせて使用することができる。糖又は糖アルコールが液体組成物（製剤）中で可溶性であり、本発明の方法を使用して達成される安定化効果に悪影響を及ぼさない限り、使用される量に決まった制限はない。一実施態様では、糖又は糖アルコールの濃度は約１ｍｇ／ｍｌと約１５０ｍｇ／ｍｌの間である。
【００５０】
更なる実施態様では、等張剤は１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌ、例えば１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍｌ、又は２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。上に特に挙げた等張剤の何れかを含む本発明の薬学的組成物は本発明の一実施態様を構成する。薬学的組成物中における等張剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20版, 2000が参照される。
本発明の薬学的組成物（製剤）のまた更なる実施態様では、製剤はキレート剤を更に含有する。適切なキレート剤は、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、アスパラギン酸の塩、及びそれらの混合物から選択されうる。キレート剤の濃度は、適切には０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの範囲、例えば０．１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌ又は２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌである。上に特に挙げたキレート剤の何れかを含む本発明の薬学的組成物は本発明の一実施態様を構成する。薬学的組成物中におけるキレート剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20版, 2000が参照される。
【００５１】
本発明の薬学的組成物（製剤）の他の実施態様では、製剤は安定剤を更に含有する。薬学的組成物中における安定剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20版, 2000が参照される。
より詳細には、本発明の特に有用な組成物には、液体薬学的製剤として貯蔵中に変性産物の形成をおそらくは示すオリゴ-又はポリペプチドをその治療的活性成分が含む安定化液体薬学的組成物が含まれる。「凝集体形成」とは、可溶性のままでありうるオリゴマー、あるいはオリゴ-又はポリペプチド分子間の物理的相互作用の結果として、溶液から沈殿する大きな可視できる凝集体の形成を意味する。「貯蔵中」とは、ひとたび調製された液体薬学的組成物又は製剤が通常は直ぐには患者に投与されないことを言う。むしろ調製後に、液体形態か、凍結状態か、又は後で液体形態もしくは患者への投与に適した他の形態へ再構成するための乾燥形態の何れかで貯蔵するために包装される。「乾燥形態」とは、液体薬学的組成物又は製剤が、フリーズドライ（つまり凍結乾燥；例えばWilliams及びPolli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59）、スプレードライ[例えばMasters(1991), Spray-Drying Handbook (5版; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp.491-676；Broadhead等 (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206；及びMumenthaler等(1994) Pharm. Res. 11:12-20を参照]、又はエアードライ[例えばCarpenter及びCrowe(1988) Cryobiology 25:459-470；及びRoser (1991) Biopharm. 4:47-53を参照]によって乾燥されると得られる製品を意味する。液体薬学的組成物の貯蔵中におけるオリゴ-又はポリペプチドの凝集体の形成はそのペプチドの生物学的活性に悪影響を及ぼし得、薬学的組成物の治療効果を消失させる。更に、凝集体形成は、オリゴ-又はポリペプチド含有薬学的組成物を輸液システムを使用して投与する場合、管類、膜又はポンプの詰まりのような、他の問題を生じうる。
【００５２】
本発明の薬学的組成物は組成物の貯蔵の間のオリゴ-又はポリペプチドによる凝集体形成を減少させるのに十分な量のアミノ酸塩基を更に含みうる。「アミノ酸塩基」とは、アミノ酸又はアミノ酸の組合せのことであり、任意の与えられたアミノ酸はその遊離塩基形態又はその塩形態で存在する。アミノ酸の組合せが使用される場合、アミノ酸の全てがその遊離塩基形態で存在し得、全てはその塩形態で存在し得、あるいは幾つかがその塩基形態で存在し得る一方、他のものはその塩形態で存在する。一実施態様では、本発明の組成物を調製する際に使用するアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸のような荷電側鎖を担持しているものである。特定のアミノ酸（例えばメチオニン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン又はスレオニン、及びそれらの混合物）の任意の立体異性体（つまりＬ、Ｄ、又はその混合体）又はこれら立体異性体の組み合わせは、特定のアミノ酸がその遊離塩基形態又はその塩形態の何れかで存在している限り、本発明の薬学的組成物中に存在しうる。一実施態様では、アミノ酸のＬ立体異性体が使用される。本発明の組成物はまたこれらのアミノ酸の類似体と共に製剤化されうる。「アミノ酸類似体」とは、本発明の液体薬学的組成物の貯蔵中におけるオリゴ-又はポリペプチドによる凝集体形成を減少させるという所望の効果をもたらす天然に生じるアミノ酸の誘導体のことである。適切なアルギニン類似体には、例えばアミノグアニジン、オルニチン及びＮ-モノエチルＬ-アルギニンが含まれる。適切なメチオニン類似体には、エチオニン及びブチオニンが含まれ、適切なシステイン類似体にはＳ-メチル-Ｌシステインが含まれる。アミノ酸自体の場合と同様に、アミノ酸類似体はその遊離の塩基形態又はその塩形態で本発明の組成物中に導入される。本発明の更なる実施態様では、アミノ酸又はアミノ酸類似体は、オリゴ-又はポリペプチドの凝集を防止又は遅延させるのに十分な濃度で導入される。
【００５３】
本発明の特定の実施態様では、治療剤として作用するオリゴ-又はポリペプチドが酸化を受けやすい少なくとも一のメチオニン残基を含むペプチドである場合、メチオニン（又は他の含硫アミノ酸又はアミノ酸類似体）を本発明の組成物中に導入してメチオニン残基がメチオニンスルホキシドへ酸化するのを阻害することができる。この文脈における「阻害する」なる用語は、メチオニンが酸化された種の経時的な蓄積の最小化を意味する。メチオニンの酸化を阻害することはオリゴ-又はポリペプチドをその正しい分子形態により維持することになる。メチオニンの任意の立体異性体（Ｌ又はＤ）又はその組み合わせを使用することができる。付加される量は、メチオニンスルホキシドの量が規制機関に受け入れられるようにメチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量でなければならない。典型的には、これは、メチオニンがスルホキシド化されるオリゴ-又はポリペプチドの形態がせいぜい約１０％以下から約３０％以下存在していることを意味する。一般に、これは、メチオニン残基に加えられるメチオニンの比が約１：１から約１０００：１、例えば１０：１から約１００：１の範囲になるようにメチオニンを導入することによって達成することができる。
【００５４】
本発明の更なる実施態様では、製剤は高分子量ポリマー及び低分子量化合物から選択される安定剤を更に含有する。よって、例えば、安定剤はポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシ／ヒドロキシセルロース又はその誘導体（例えばＨＰＣ、ＨＰＣ-ＳＬ、ＨＰＣ-Ｌ又はＨＰＭＣ）、シクロデキストリン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２-メチルチオエタノールのような硫黄含有物質、及び様々な塩（例えば塩化ナトリウム）のような物質から選択されうる。特に上に上げた安定剤の何れかを含む本発明の薬学的組成物は本発明の一実施態様を構成する。
本発明の薬学的組成物はまたその中の治療的に活性なオリゴ-又はポリペプチドの安定性を更に向上させる更なる安定剤を含有しうる。本発明の文脈において特に興味がある安定剤には、限定するものではないが、メチオニンの酸化からポリペプチドを保護するメチオニン及びＥＤＴＡと、凍結融解又は機械的せん断に伴う凝集又は変性からポリペプチドを保護する界面活性剤、特に非イオン性界面活性剤が含まれる。
【００５５】
よって、本発明の更なる実施態様では、薬学的製剤は界面活性剤、特に非イオン性界面活性剤を含有する。その例には、エトキシル化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレンブロックポリマー（例えばプルロニック(登録商標)Ｆ６８、ポロキサマー１８８及び４０７、トリトンＸ-１００のようなポロキサマー類）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン及びポリエチレン誘導体、例えばアルキル化及びアルコキシル化誘導体（トゥイーン類、例えばＴｗｅｅｎ-２０、Ｔｗｅｅｎ-４０、Ｔｗｅｅｎ-８０及びＢｒｉｊ-３５）、そのモノグリセリド又はそのエトキシル化誘導体、ジグリセリド又はそのポリオキシエチレン誘導体、アルコール、グリセロール、レクチン及びリン脂質（例えばホスファチジル-セリン、ホスファチジル-コリン、ホスファチジル-エタノールアミン、ホスファチジル-イノシトール、ジホスファチジル-グリセロール、スフィンゴミエリン）、リン脂質誘導体（例えばジパルミトイルホスファチジン酸）及びリゾリン脂質誘導体（例えばパルミトイルリゾホスファチジル-Ｌ-セリン及びエタノールアミン、コリン、セリンもしくはスレオニンの１-アシル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスフェートエステル）並びにリゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルキル、アルキルエステル及びアルキルエーテル誘導体、例えばリゾホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及び極性頭部基、つまり、コリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、正荷電ＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リゾホスファチジルセリン及びリゾホスファチジルスレオニンの修飾体、及びグリセロリン脂質（例えばケファリン）、グリセロ糖脂質（例えばガラクトピラノシド）、スフィンゴ糖脂質（例えばセラミド、ガングリオシド）、ドデシルホスホコリン、ニワトリ卵白リゾレシチン、フシジン酸誘導体（例えばタウロ-ジヒドロフシジン酸ナトリウム等々）、長鎖脂肪酸（例えばオレイン酸及びカプリル酸）及びその塩、アシルカルニチン及び誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンのＮα-アシル化誘導体、又はリジンもしくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンと中性又は酸性アミノ酸の任意の組合せを含むジペプチドのＮα-アシル化誘導体、中性アミノ酸と二つの荷電アミノ酸の任意の組合せを含むトリペプチドのＮα-アシル化誘導体、ＤＳＳ（ドキュセート・ナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７-１１-７］）、ドキュセート・カルシウム、ＣＡＳ登録番号［１２８-４９-４］、ドキュセート・カリウム、ＣＡＳ登録番号［７４９１-０９-０］、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム）、カプリル酸ナトリウム、コール酸又はその誘導体、胆汁酸及びその塩及びグリシンもしくはタウリンコンジュゲート、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ-ヘキサデシル-Ｎ,Ｎ-ジメチル-３-アンモニオ-１-プロパン��ルホネート、アニオン性（アルキル-アリール-スルホネート）一価界面活性剤、両性イオン性界面活性剤（例えばＮ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホネート類、３-コールアミド-１-プロピルジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホネート、カチオン性界面活性剤（第４級アンモニウム塩基）（例えば臭化セチル-トリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム）、非イオン性界面活性剤（例えばドデシルβ-Ｄ-グルコピラノシド）、ポロキサミン（例えばテトロニックス(Tetronic's)）（これは、プロピレンオキシドとエチレンオキシドをエチレンジアミンに連続付加して誘導される四官能基ブロック共重合体である）が含まれる。界面活性剤はまたイミダゾリン誘導体及びその混合物からも選択されうる。上に特に述べた界面活性剤の各一を含む本発明の薬学的組成物は本発明の一実施態様を構成する。
薬学的組成物中における界面活性剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20版, 2000が参照される。
【００５６】
更なる成分が本発明の薬学的組成物（製剤）中に存在することもありうる。そのような更なる成分には、例えば湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ゼラチン又は他のタンパク質）及び双性イオン（例えばベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンもしくはヒスチジンのようなアミノ酸）が含まれうる。そのような更なる成分は、当然ながら、本発明の薬学的製剤の全体の安定性に悪影響を及ぼしてはならない。
本発明に係る化合物を含む薬学的組成物は、そのような治療を必要とする患者の幾つかの部位に投与され得、例えば局所的部位（例えば皮膚及び粘膜部位）、吸収をバイパスする部位（例えば動脈、静脈、心臓への投与を経由して）、及び吸収を含む部位（例えば皮膚、皮下、筋肉又は腹部へ）への投与である。
【００５７】
本発明に係る薬学的組成物のそれを必要とする患者への投与は、幾つかの投与経路を介してなされうる。これらの経路には、例えば舌、舌下、頬、口、経口、胃及び腸、鼻、肺（例えば細気管支及び肺胞又はそれらを組合せたもの）、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼（例えば結膜を介して）、尿管、及び非経口が含まれる。
本発明の組成物は、様々な投薬形態、例えば溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、多相エマルション、フォーム、膏薬、ペースト、プラスター、軟膏、錠剤、コート錠剤、リンス、カプセル（例えば硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル）、坐薬、直腸用カプセル、ドロップ、ゲル、スプレー、パウダー、エアゾール、吸入剤、点眼剤、眼軟膏、眼用リンス、膣用ペッサリー、膣用リング、膣用軟膏、注射液、インサイツ形質転換溶液（例えばインサイツゲル化、インサイツセット用、インサイツ沈殿、インサイツ結晶化のもの）、輸液又は移植片として投与されうる。
【００５８】
本発明の組成物は、本発明の化合物の安定性を更に高め、生物学的利用能を増加させ、溶解度を高め、副作用を低減させ、当業者によく知られている時間療法を達成し、また患者のコンプライアンスを高め、又はそれらの任意の組合せのために、例えば共有的、疎水的及び静電気的相互作用を介して、薬剤担体、薬剤デリバリー系及び先端薬剤デリバリー系に更に配合され、又は結合されうる。担体、薬剤デリバリー系及び先進薬剤デリバリー系の例には、限定されるものではないが、ポリマー、例えばセルロース及び誘導体；多糖類、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体；ポリ(ビニルアルコール)；アクリレート及びメタクリレートポリマー；ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそれらのブロックコポリマー；ポリエチレングリコール；担体タンパク質、例えばアルブミン；ゲル、例えばサーモゲル化系、例えば当業者によく知られているブロックコポリマー系；ミセル；リポソーム；ミクロスフィア；ナノ粒子；液晶及びそれらの分散液；脂質-水系における相挙動の当業者によく知られているＬ２相とそのディスパージョン；ポリマーミセル；多相エマルション（自己乳化、自己-マイクロ乳化）；シクロデキストリン及びその誘導体；及びデンドリマーが含まれる。
【００５９】
本発明の組成物は、全ての装置が当業者によく知られたものである、例えば定量吸入器、乾燥パウダー吸入器又はネブライザーを使用し、本発明の化合物を肺に投与するための固形物、半固形物、パウダー及び溶液の製剤に有用である。
本発明の組成物は、制御された放出性、徐放性、延長、遅延又は持続放出薬物デリバリー系の製剤に特に有用である。よって、本発明の組成物は、当業者によく知られている非経口用の制御放出及び徐放系（双方の系は、必要とされる投与数を何倍も低下させる)の製剤に価値がある。
特に価値があるのは、皮下投与される制御放出及び徐放系である。本発明の範囲を限定するものではないが、有用な制御放出系及び組成物の例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマーミセル、ミクロスフィア、ナノ粒子を含むものである。
【００６０】
本発明の組成物に有用な徐放系の製造方法は、限定されるものではないが、結晶化、凝縮、共結晶化、沈殿、共沈殿、乳化、分散、高圧ホモジナイズ、カプセル化、スプレー乾燥、マイクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、ミクロスフィアを製造するための溶媒蒸発、押出及び超臨界プロセスを含む。一般的には、Handbook of Pharmaceutical Controlled Release(Wise, D.L.編 Marcel Dekker, New York, 2000)及びDrug and the Pharmaceutical Sciences vol.99：Protein Composition and Delivery(MacNally, E.J.編 Marcel Dekker, New York, 2000)を参照のこと。
非経口投与は、シリンジ、場合によってはペン状器具による皮下、筋肉内、腹膜内又は静脈内注射によって実施することができる。あるいは、非経口投与は輸液ポンプにより実施することができる。さらなる選択肢は、鼻用又は肺用スプレーの形態での（典型的には水性）溶液又は懸濁液である本発明の組成物の投与である。また更なる選択肢としては、本発明の薬学的組成物を（例えば針のない注射、又はイオン導入パッチのようなパッチによる）経皮投与又は経粘膜（例えば口腔）投与に適合させることもできる。
【００６１】
「安定化された製剤」なる用語は、物理的な安定性が増し、化学的な安定性が増し、又は物理的及び化学的安定性が増した製剤を意味する。オリゴ-又はポリペプチドを含む製剤の文脈における「物理的安定性」という用語は、熱機械的ストレスへの暴露及び／又は疎水性表面及び界面のような不安定化している界面及び表面との相互作用の結果としての生物学的に不活性な及び／又は不溶性の凝集体を形成するペプチドの傾向を意味する。タンパク質水性組成物の物理的安定性は、適切な容器（例えばカートリッジ又はバイアル）中に満たした製剤を機械的／物理的ストレス（例えば攪拌）に様々な時間の間、異なった温度で暴露した後に視覚検査及び／又は濁度測定によって評価される。製剤の視覚検査は暗い背景中において鋭く集光された光下で実施される。製剤の濁りは例えば濁度を０から３の尺度（濁りを示さない製剤が視覚スコア０に相当し、昼光で可視できる濁りを示す製剤は視覚スコア３に相当する）でランク付けすることにより特徴付けされる。製剤は、通常は、昼光下で可視できる濁りを示す場合に凝集に対して物理的に不安定であると分類される。あるいは、製剤の濁りは当業者によく知られている簡単な濁度測定によって評価することができる。水性オリゴ-又はポリペプチド製剤の物理的安定性はペプチドの立体構造状態の分光学的薬剤又はプローブを使用してまた評価することができる。プローブは好ましくはオリゴ-又はポリペプチドの非天然配座異性体に優先的に結合する小分子である。この種の小分子分光学的プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴはアミロイド線維の検出に広く使用されている蛍光染料である。線維と、おそらくは他の立体配置もまた存在すると、チオフラビンＴが約４５０ｎｍで新たな励起極大を引き起こし、線維形態に結合したとき約４８２ｎｍで増強した発光を生じる。未結合のチオフラビンＴは本質的には該当の波長で非蛍光である。
【００６２】
天然から非天然状態までのペプチド構造における変化のプローブとして、他の小分子を使用することができる。例えば、ポリペプチドの露出した疎水性パッチに優先的に結合する「疎水性パッチ」プローブである。疎水性パッチは、一般には、その天然状態のポリペプチドの３次構造内に埋められているが、ポリペプチドがアンフォールドされ又は変性が始まると、露出するようになる。このような小分子の分光学的プローブの例は、芳香族の疎水性染料、例えばアントラセン、アクリジン、フェナントロリン等である。他の分光学的プローブはアミノ酸の金属錯体、例えば疎水性アミノ酸、例えばフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン等のコバルト錯体である。
【００６３】
ここで使用される薬学的製剤の「化学的安定性」という用語は、元の分子と比較して潜在的に低い生物学的能力及び／又は潜在的に増加した免疫原性を持つ化学的変性産物の形成に至るオリゴ-又はポリペプチド構造中の化学共有結合変化を意味する。出発分子のタイプと性質及びそれがさらされる環境に応じて、様々な化学的変性産物が形成されうる。最も可能性が高いことは化学的変性を完全には避けることができないことであり、当業者にはよく知られているように、化学的変性産物の量が徐々に増加することがオリゴ-又はポリペプチド製剤の貯蔵や使用中にしばしば見られる。よく遭遇する変性プロセスは脱アミド化であり、これはグルタミニル又はアスパラギニル残基中の側鎖アミド基が加水分解されて遊離のカルボン酸を形成するプロセスである。他の変性経路は、アミド基転移及び／又はジスルフィド相互作用を通して二以上の出発物質分子が互いに共有結合し、共有結合した二量体、オリゴマー又は多量体変性産物の形成に至る高分子量転換産物の形成を含む（例えば、Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahem. T. J. & Manning M. C., Plenum Press, New York 1992を参照）。（例えばメチオニン残基の）酸化は化学的変性の他の変形例として挙げることができる。製剤の化学的安定性は、異なった環境条件への暴露後に様々な時点において化学的変性産物の量を測定することによって評価することができる（変性産物の形成は例えば温度の上昇によってしばしば加速され得る）。それぞれ個々の変性産物の量は、様々なクロマトグラフィー法（例えばＳＥＣ-ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ-ＨＰＬＣ）を使用して分子サイズ及び／又は電荷に応じて変性産物を分離することによりしばしば決定される。
【００６４】
よって、上に概説したように、「安定化製剤」は増加した物理的安定性、増加した化学的安定性、又は増加した物理的及び化学的安定性を有する製剤を意味する。一般に、薬学的組成物（製剤）は、有効期限に達するまで（推奨された使用及び貯蔵条件に応じた）使用及び貯蔵中は安定でなければならない。
本発明の薬学的組成物（製剤）は、２週間を越える使用の間と２年を越える貯蔵の間、より好ましくは４週間を越える使用の間と２年を越える貯蔵の間、望ましくは４週間を越える使用の間と３年を越える貯蔵の間、最も好ましくは６週間を越える使用の間と３年を越える貯蔵の間、安定しているべきである。
【００６５】
ここで引用される刊行物、特許出願及び特許を含む全ての文献を、あたかも各文献が個々にかつ特に出典明示により援用されることが示され、その全体がここに記載されている場合と同じ程度にその全体が出典明示により（法が許容する最大の範囲で）ここに援用される。
表題及び副題は便宜のためのみにここで使用され、決して本発明を限定するものと解釈してはいけない。
本明細書における任意のかつ全ての例、又は例を示す表現（「for instance」、「for example」、「e.g.」、「such as」を含む）の使用は、発明をより良好に例証するためだけのものであり、特段示されていない限り、本発明の範囲に対する限定をもたらすものではない。明細書中の如何なる表現も、請求項に記載していない要素が発明の実施に必須であることを示していると解釈してはいけない。
ここでの特許文献の引用及び援用は便宜のためにのみなすもので、そのような特許文献の有効性、特許性及び／又は権利行使可能性についての見解を何ら反映するものではない。
本発明は、適用可能な法が許容する限り、ここに添付される特許請求の範囲に記載された主題事項のあらゆる変形態様及び均等態様を含む。
【実施例】
【００６６】
用いられる略号リスト
ＡｃＯＨ      酢酸
ＢＳＡ        ウシ血清アルブミン
ＤＢＵ        １,８-ジアザビシクロ[５.４.０]ウンデカ-７-エン(１,５-５)
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ＤＩＣ        ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ    エチルジイソプロピルアミン
ＤＭＡＰ      ４-Ｎ,Ｎ-ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥＭ      ダルベッコ変更イーグル培地
ＤＭＦ        Ｎ,Ｎ-ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＥＧＴＡ      １,２-ジ(２-アミノエトキシ)エタン-Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'-テトラ酢酸
ＦＣＳ        仔ウシ血清
Ｆｍｏｃ      ９-フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＨＥＰＥＳ    ２-[４-(２-ヒドロキシエチル)-ピペラジン-１-イル]-エタンスルホン酸
ＨＯＡｔ      １-ヒドロキシ-７-アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ      １-ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＳＡ        ヒト血清アルブミン
ＩＢＭＸ      ３-イソブチル-１-メチルキサンチン
ＭＣ１        メラノコルチン受容体サブタイプ１(メラノコルチン受容体１とも標記)
ＭＣ２        メラノコルチン受容体サブタイプ２(メラノコルチン受容体２とも標記)
ＭＣ３        メラノコルチン受容体サブタイプ３(メラノコルチン受容体３とも標記)
ＭＣ４        メラノコルチン受容体サブタイプ４(メラノコルチン受容体４とも標記)
ＭＣ５        メラノコルチン受容体サブタイプ５(メラノコルチン受容体５とも標記)
ＭｅＣＮ      アセトニトリル
ＭｅＯＨ      メタノール
ｍｉｎ        分
α-ＭＳＨ     メラノサイト刺激ホルモンのα型
ＭＴＸ        メトトレキセート
ＮＥｔ３      トリエチルアミン
ＮＭＰ        Ｎ-メチルピロリドン
ＰＢＳ        リン酸緩衝生理食塩水
ＰＥＩ        ポリエチレンイミン
ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ      ペニシリン／ストレプトマイシン
ＰｙＢＯＰ    ヘキサフルオロリン酸(ベンゾトリアゾール-１-イルオキシ)トリピロリジノ-ホスホニウム
【００６７】
本発明の全ての化合物は、標準的なカップリング及び脱保護工程を使用して当業者により合成され得る。ペプチド合成のための標準的な略号を含む全ての必要なツール及び合成法の記載は「The Fine Art Of Solid Phase Synthesis」(2002/3 Catalogue、Novabiochem)に見出すことができる。非標準的手順及び特別な構成要素の合成は以下に記載する。
【００６８】
環化工程を含む合成手順の典型的な例は次の通りである：
実施例１：
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｓｅｒ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２
2010516653.tif 000014
【００６９】
実施例１に対する工程Ａ：保護されたペプチド樹脂Ｆｍｏｃ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ(ｔＢｕ)-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ(Ｐｂｆ)-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ-Ｒｉｎｋリンカー-ポリスチレン
合成は、ＭｕｌｔｉＳｙｎｔｈＴｅｃｈ合成機を用いて行った。Ｆｍｏｃ-ＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂(７．０４２ｇ、５．０ｍｍｏｌ；４-(２',４'-ジメトキシフェニル-Ｆｍｏｃ-アミノメチル)-フェノキシアセトアミドノルロイシルアミノメチルポリスチレン樹脂；２００−４００ｍｅｓｈ；０．７１ｍｍｏｌ／ｇ；Novabiochem 01-64-0038)を、フリットおよびドレインコックを有する５００ｍｌのガラス反応器に満たした。ＮＭＰ(９０ｍｌ)にて１５分かけて樹脂を処理した。
【００７０】
Ｆｍｏｃの除去：  樹脂を、ＮＭＰ(９０ｍｌ)中２０％ピペリジン溶液にて５分間処理した。液体を濾過した。樹脂を、ＮＭＰ(９０ｍｌ)中２０％ピペリジン溶液にて１５分間処理した。液体を濾過し、樹脂をＮＭＰ(７×９０ｍｌ)にて洗浄した。
Ｆｍｏｃ-Ｌｙｓ(Ｍｔｔ)-ＯＨでのアシル化：  別個のフラスコにおいて、Ｆｍｏｃ-アミノ酸(９．３７２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ)をＮＭＰ(２０ｍｌ)、ＤＣＭ(３５ｍｌ)及びＮＭＰ中の１-ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)の１Ｍ溶液(１５．０ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ)と混合した。得られた透明な溶液に、ＤＩＣ(２．３３７ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ)を素早く加え、その後、溶液を直ぐに振とうした。その溶液を蓋をしたフラスコ中に１０分置き、その後樹脂に加えた。樹脂を２０分間振とうした。エチルジイソプロピルアミン(ＤＩＰＥＡ)(１．２８４ｍｌ、７．５ｍｍｏｌ)を加え、混合物を１８時間振とうした。液体を濾過し、樹脂をＮＭＰ(５×９０ｍｌ)にて洗浄した。
Ｆｍｏｃの除去：  上記の通りである。
Ｆｍｏｃ-Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)-ＯＨでのアシル化：  別個のフラスコにおいて、Ｆｍｏｃ-アミノ酸(１５．０ｍｍｏｌ)をＮＭＰ(２０ｍｌ)、ＤＣＭ(３５ｍｌ)及びＮＭＰ中の１-ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)の１Ｍ溶液(１５．０ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ)と混合した。得られた透明な溶液に、ＤＩＣ(２．３３７ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ)を素早く加え、その後、溶液を直ぐに振とうした。その溶液を蓋をしたフラスコ中に２５分置き、その後樹脂に加えた。樹脂を１時間振とうした。液体を濾過し、樹脂をＮＭＰ(５×９０ｍｌ)にて洗浄した。
同様な方法で、次のアミノ酸を樹脂に連続的に結合させた：  Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ(Ｐｂｆ)-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｄ-Ｐｈｅ-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｈｙｐ(ｔＢｕ)-ＯＨおよびＦｍｏｃ-Ｇｌｕ(２-フェニルイソプロピルオキシ)-ＯＨ。Ｆｍｏｃ-Ｇｌｕ(２-フェニルイソプロピルオキシ)-ＯＨとのカップリングは、ＨＯＢｔの代わりにＨＯＡｔと、ＤＩＰＥＡ(ＨＯＡｔエステル形成後に７．５ｍｍｏｌ添加)を使用して実施した。得られたＦｍｏｃ保護樹脂をＤＣＭで十分に洗浄した。
Ｌｙｓ及びＧｌｕの選択的側鎖脱保護：  樹脂を、ＤＣＭ(７５ｍｌ)中の２％ＴＦＡ及び３％トリイソプロピルシランの溶液と共に１０分間振とうし、液体を濾過した。この手順をさらに８回繰り返した。樹脂を、ＤＣＭ(４×９０ｍｌ)、ＤＣＭ中の１０％ＤＩＰＥＡ(２×９０ｍｌ)及びＤＣＭ(６×９０ｍｌ)にて洗浄した。
ＧｌｕでのＬｙｓの側鎖環化：  異なるフラスコにおいて、ＰｙＢＯＰ(７．８０６ｇ＝１５．０ｍｍｏｌ)を、１ＭのＨＯＢｔ-ＮＭＰ溶液(１５．０ｍｌ＝１５．０ｍｍｏｌ)、ＤＣＭ(３８ｍｌ)及びＮＭＰ(２３ｍｌ)と混合した。この溶液を樹脂に加え、ついでＤＩＰＥＡ(５．１３６ｍｌ＝３０．０ｍｍｏｌ)を加えた。樹脂を１５時間振とうした。液体を濾過し、樹脂をＮＭＰ(５×９０ｍｌ)およびＤＣＭ(７×９０ｍｌ)にて洗浄した。
これにより１３．６９ｇの樹脂が得られたが、これは完全な反応を仮定した場合の０．３７ｍｍｏｌ／ｇの推定最大負荷に相当する。
【００７１】
実施例１のための工程Ｂ： 
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｓｅｒ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２
フリットとドレインコックを有する５０ｍｌのガラス反応器に、樹脂Ｆｍｏｃ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ(ｔＢｕ)-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ(Ｐｂｆ)-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ-Ｒｉｎｋリンカー-ポリスチレン(０．６７６ｇ、理論的には０．２５ｍｍｏｌ、上に記載した工程Ａから入手可能)を添加する。その樹脂をＮＭＰ(１０ｍｌ)にて１５分間処置する。
Ｆｍｏｃの除去：  樹脂を、ＮＭＰ(１０ｍｌ)中２０％のピペリジン溶液にて５分間処置する。液体を濾過する。樹脂を、ＮＭＰ(１０ｍｌ)中２０％のピペリジン溶液にて１５分間処置した。液体を濾過し、樹脂をＮＭＰ(７×１０ｍｌ)にて洗浄する。
Ｆｍｏｃ-Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)-ＯＨでのアシル化：  別個のガラスバイアルにおいて、Ｆｍｏｃ-アミノ酸(０．９ｍｍｏｌ)をＮＭＰ(１．１ｍｌ)、ＤＣＭ(２．０ｍｌ)及び１ＭのＨＯＢｔ-ＮＭＰ溶液(０．９ｍｌ、０．９ｍｍｏｌ)と混合する。得られた透明な溶液に、ＤＩＣ(０．１４０ｍｌ、０．９ｍｍｏｌ)を素早く加え、その後、溶液を直ぐに振とうする。その溶液を蓋をしたバイアル中に１０分放置し、ついで樹脂に加える。混合物を１時間振とうする。液体を濾過し、樹脂をＮＭＰ／ＤＣＭ １：１(５×１０ｍｌ)で洗浄する。
同様にして、次のカルボン酸を樹脂に連続的に結合させる：  Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ(ｔＢｕ)-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｈｉｓ(Ｔｒｔ)-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ(ｔＢｕ)-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-Ｇｌｙ-ＯＨ-ＯＨ、Ｆｍｏｃ-８-アミノ-３,６-ジオキサ-オクタン酸および１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカン酸(後述する合成手順によって利用できる)。最後に、樹脂を、ＮＭＰ／ＤＣＭ １：１(５×１０ｍｌ)、ＤＣＭ(５×１０ｍｌ)、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ２：１(２×１０ｍｌ)、及びＤＣＭ(５×１０ｍｌ)にて洗浄する。
【００７２】
樹脂からの開裂：  樹脂を、ＤＣＭ(９ｍｌ)、トリイソプロピルシラン(０．５ｍｌ)及び２-メルカプトエタノール(０．５ｍｌ)から調製した予混合溶液(１０ｍｌ)にて洗浄する。濾過後、樹脂を、ＴＦＡ(９ｍｌ)、トリイソプロピルシラン(０．５ｍｌ)及び２-メルカプトエタノール(０．５ｍｌ)から調製した予混合溶液(１０ｍｌ)とともに２．５時間振とうする。混合物を濾過し、濾過物をフラスコに集める。樹脂をＤＣＭ／ＴＦＡ ２:１(１５ｍｌ)にて洗浄し、濾過物を集める。組み合わせた濾過物を減圧下にて濃縮する。
エーテルでの沈殿：  残留物をジエチルエーテル(４０ｍｌ)で処理して固形沈殿物を得る。エーテル相を遠心分離後に除去する。固形残留物を再びジエチルエーテル(２×４０ｍｌ)にて洗浄する。遠心分離をし、エーテル相を除去した後、残りのジエチルエーテルを除くために固形残留物を一晩静置する。
精製：  粗ペプチドを、アセトニトリル(５ｍｌ)、酢酸(０．５ｍｌ)および水(１４ｍｌ)の混合物に溶解する。この溶液を少なくとも１時間静置し、Ｇｉｌｓｏｎ分取ＨＰＬＣ装置に注入する。溶出を、例えば２５％から４５％のアセトニトリルの勾配で水／０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリルを用いて実施する。溶出液をそれぞれ５ｍｌ(ピーク画分)又は１２ｍｌ(非ピーク画分)の画分として集める。関連する画分を分析ＨＰＬＣによって調べる。純粋な標的ペプチドを含む画分を混合し、減圧下で濃縮して無色溶液を得る。得られた透明な溶液を分析し(ＨＰＬＣ、ＬＣＭＳ)、生成物を、化学発光窒素特異的ＨＰＬＣ検出器(Ａｎｔｅｋ８０６０  ＨＰＬＣ-ＣＬＮＤ)によって定量化する。生成物をガラスバイアルに分配する。そのバイアルにミリポアガラス繊維前置フィルターを被せた。３日の凍結乾燥によってペプチドトリフルオロ酢酸を白色固形物として得る。
実施例１の化合物と同様な方法で得ることができる本発明の更なる化合物の実施例は以下の実施例２−５である： 
【００７３】
実施例２
{２-[２-(２-{２-[２-(１７-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｄａｐ-Ｐｈｅ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-Ｇｌｎ-Ｄ-Ｓｅｒ-ＮＨ２
2010516653.tif 000015
【００７４】
実施例３
[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{４-[１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル]ブタノイルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ａｒｇ-Ｄ-Ｔｙｒ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２
2010516653.tif 000016
この化合物は、構成要素４-(Ｎ-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイル)-スルファモイル)酪酸を使用して調製した。
構成要素の合成は以下に記載する。
【００７５】
実施例４
(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-２-(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｄ-Ｓｅｒ-Ａｒｇ-Ｈｉｓ-ホモＡｒｇ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｐｒｏ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２
2010516653.tif 000017
【００７６】
実施例５
{２-[２-(１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル-Ｇｌｙ-Ｓｅｒ-Ｇｌｎ-Ｈｉｓ-Ｇｌｙ-Ｄ-Ｌｙｓ-ｃ[Ｇｌｕ-Ｈｙｐ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｌｙｓ]-ＮＨ２
2010516653.tif 000018
【００７７】
１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカン酸の調製
2010516653.tif 000019
１６-ブロモヘキサデカン酸（２６．８３ｇ、８０ｍｍｏｌ）を、メタノール（１６０ｍｌ）とトルエン（３０ｍｌ）の混合物に懸濁させた。ポリマー結合アレーンスルホン酸（１．５ｇ；マクロポーラスポリスチレンビーズ；「Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５」；Ｆｌｕｋａ０６４２３）及びトリメチルオルトギ酸塩（１７．５ｍｌ、１６０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、９０℃の油浴温度で６時間還流させた。反応混合物を室温に一晩放置した後、濾過した。得られた濾液を減圧下で濃縮して粗１６-ブロモヘキサデカン酸メチルエステルを褐色の液体として得た。
【００７８】
粗メチルエステル（８０ｍｍｏｌ）に、ＮＭＰ（１４０ｍｌ）及びシアン化ナトリウム（９．４１ｇ、１９２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を１５５℃で２時間撹拌した。室温まで冷却した後、得られた暗褐色の懸濁液を水（５５０ｍｌ）で処理した。３７％の濃塩酸水溶液（５ｍｌ、およそ６０ｍｍｏｌ、致死のＨＣＮガスに注意）及び氷を加えてｐＨ９の懸濁液を得た。懸濁液を４０分放置した後、濾過した。得られた濾過ケーキを水（２×１２５ｍｌ）で洗浄し、ティッシュペーパーで２０時間乾燥させ、主として所望のニトリルからなるが対応する臭化アルキル（重クロロホルム中での１Ｈ ＮＭＲによっておよそ２０％）を尚も含んでいる褐色の固形物を得た。反応を繰り返すために、残留物を、新らたに粉末化されたシアン化ナトリウム（６．２７ｇ、１２８ｍｍｏｌ）及びＮＭＰ（１００ｍｌ）と混合した。得られた暗褐色の懸濁液を１１０℃の油浴温度で５時間撹拌した後、室温に一晩放置した。混合物を水（４００ｍｌ）と３７％の濃塩酸水溶液（２．５ｍｌ、およそ３０ｍｍｏｌ、致死のＨＣＮガスに注意）の混合物で処理して、ｐＨ１１の懸濁液が得られた。氷を加え、懸濁液を４５分間放置した後、濾過した。得られた濾過ケーキを水（２×１２５ｍｌ）で洗浄し、ティッシュペーパーで一晩乾燥させて、オフホワイトのペースト状残留物を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲによれば、この生成物は、微少量の１６-シアノヘキサデカン酸、水及びＮＭＰと共に、所望の１６-シアノヘキサデカン酸メチルエステルであった。
【００７９】
粗ニトリル、新たに粉末化したアジ化ナトリウム（２０．８０ｇ、３２０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン塩酸塩（２２．１９ｇ、１６０ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（２００ｍｌ）に懸濁させ、１５０℃の油浴温度で１８時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却させ、ついでビーカーに注いだ。水（５００ｍｌ）及び３７％の水性ＨＣｌ（４２ｍｌ、およそ５００ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を撹拌し、４０分放置し、ついで濾過した。得られた濾液ケーキを水（２５０ｍｌ）で洗浄し、フィルターで３日間乾燥させて、オフホワイトのペースト状残留物を得た。
この生成物を、ＭｅＯＨ（１８０ｍｌ）及び水性ＮａＯＨ（１１．２ｇ、２８０ｍｍｏｌ、５０ｍｌの水に溶解）の混合物に懸濁させた。混合物を８５℃の油浴温度で３時間半撹拌した。油浴を除去した。温かい溶液に、水（５０ｍｌ）を加えた。得られたくすんだ液体をビーカーに注ぎ、水（４００ｍｌ）及び３７％の水性ＨＣｌ（３０ｍｌ、およそ３６０ｍｍｏｌ）の混合物と共に撹拌した。氷の添加後、得られた懸濁液（およそ８００ｍｌ）を５０分放置し、ついで濾過した。得られた濾過ケーキを水（５００ｍｌ）で洗浄して白色の湿った固形物を得た。
この生成物（尚湿っている）をＭｅＣＮ（５５０ｍｌ、一晩結晶化）から再結晶させた。得られた沈殿物を濾過によって集め、ＭｅＣＮ（２×１００ｍｌ）及び石油エーテル（１００ｍｌ）で洗浄し、ティッシュペーパーで２４時間乾燥させて、表題化合物を黄色がかった固形物として得た。得られた濾液を再び濾過し、得られた固形物をＭｅＣＮ（２×１００ｍｌ）で洗浄し、ティッシュペーパーで２３時間乾燥させて褐色固形物として表題化合物を得た。１９．７１ｇ（７６％収率）の１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカン酸が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６)δ＝１．２３(ｍ、２２Ｈ)、１．４７(ｍ、２Ｈ)、１．６７(ｍ、２Ｈ)、２．１８(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．８５(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)。
【００８０】
４-(１６-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)酪酸の調製
2010516653.tif 000020
１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカン酸（６．４９ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）及びカルボニルジイミダゾール（３．３４ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を混合した。ＤＭＦ（１１０ｍｌ）を添加し、得られた乳白色の混合物を２時間撹拌した。ついで、ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の(４-スルファモイル)酪酸メチルエステル（３．６２ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、ついでＤＢＵ（６．５７ｍｌ、４４．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を１８時間撹拌し、ついで０．１Ｍの水性ＨＣｌ（８７０ｍｌ）に注いで白色沈殿物を得た。残留物質を反応フラスコから酸性懸濁液中にＭｅＯＨ（５ｍｌ）で洗浄した。ｐＨ４−５の得られた懸濁液を２時間半放置し、ついで濾過した。濾過ケーキを０．０１Ｍの水性ＨＣｌ（１７０ｍｌ）及び水（２８０ｍｌ）で洗浄して、オフホワイトの湿った固形物を得た。この生成物（尚湿っている）をＭｅＣＮ（３００ｍｌ、一晩結晶化）から再結晶させた。得られた沈殿物を濾過によって集め、ＭｅＣＮ（８０ｍｌ）で洗浄し、ティッシュペーパーで乾燥させて、５．９５ｇ（６１％収率）の４-(１６-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)酪酸メチルエステルをオフホワイトの固形物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６)δ＝１．２３(ｍ、２２Ｈ)、１．４９(ｍ、２Ｈ)、１．６７(ｍ、２Ｈ)、１．８８(ｍ、２Ｈ)、２．２５(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．４８(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．８５(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、３．３９(ｍ、２Ｈ)、３．５９(ｓ、３Ｈ)。
【００８１】
メチルエステル（５．９５ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）に懸濁させた。１Ｍの水性ＮａＯＨ（４３ｍｌ、４３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１９時間撹拌した。その溶液を０．５Ｍの水性ＨＣｌ（１００ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）で注意しながら酸性化した。水（５０ｍｌ）を加えた。得られた白色懸濁液を４５分間放置し、ついで濾過した。濾過ケーキを水（２００ｍｌ）で洗浄し、ついでＭｅＣＮ（２００ｍｌ、油浴、熱いとき黄色がかった溶液、一晩結晶化）から再結晶化させた。得られた沈殿物を濾過によって集め、ＭｅＣＮ（１００ｍｌ）で洗浄し、ティッシュペーパーで乾燥させて白色固形物として表題化合物を得た。５．１０ｇ（２工程にわたって５４％収率）の４-(１６-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)酪酸を得た。
１Ｈ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６)δ＝１．２３(ｍ、２０Ｈ)、１．４９(ｍ、２Ｈ)、１．６７(ｍ、２Ｈ)、１．８５(ｍ、２Ｈ)、２．２５(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．３８(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．８５(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、３．３８(ｍ、３．３５ｐｐｍの水のピークと部分的にオーバーラップ)、１２．２３(ｂｒｏａｄ ｓ、１Ｈ)。
【００８２】
ヘキサデカン二酸モノｔｅｒｔ-ブチルエステル、オクタデカン二酸モノｔｅｒｔ-ブチルエステル及びイコサン二酸モノｔｅｒｔ-ブチルエステルの調製
これら化合物は、文献：U. Widmer, Synthesis 1983, 135に報告された一般的手順に従ってヘキサデカン二酸とジメチルホルムアミド-ジ-ｔｅｒｔ-ブチルアセタールから調製した。
【００８３】
１６-(３-カルボキシ-プロパン-１-スルホニルアミノ)-１６-オキソ-ヘキサデカン酸ｔｅｒｔ-ブチルエステルの調製
2010516653.tif 000021
ヘキサデカン二酸モノ-ｔｅｒｔ-ブチルエステル（５．１４ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍｌ）及びＭｅＣＮ（３０ｍｌ）に溶解させた。カルボニルジイミダゾール（２．５１ｇ、１５．４５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間撹拌した。ＤＣＭ（３０ｍｌ）中の(４-スルファモイル)酪酸メチルエステル（２．７２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）を加え、次にＤＢＵ（２．６９ｍｌ、１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩撹拌し、ついで減圧下で濃縮した。得られた残留物を０．２Ｍの水性クエン酸塩バッファーｐＨ４．５（バッファーの調製：０．２ｍｏｌのクエン酸と０．３５ｍｏｌのＮａＯＨを１リットルの水に溶解）で処理した。２０分後、得られた沈殿物を濾過によって集め、水（１５０ｍｌ）で洗浄した。
この生成物をＭｅＯＨ（７０ｍｌ）及びＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した。１Ｍの水性ＮａＯＨ（１３ｍｌ、１３ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、混合物を撹拌した。４０分後、１Ｍの水性ＮａＯＨ（１４．３ｍｌ、１４．３ｍｍｏｌ）の新たな少量をゆっくり加えた。混合物を一晩撹拌し、ついで水（１５０ｍｌ）と０．２Ｍの水性クエン酸塩バッファーｐＨ４．５（１５０ｍｌ）の混合物に注いだ。１時間後、得られた沈殿物を濾過によって集め、水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて、表題粗化合物を得た。アセトン（３００ｍｌ）からの再結晶化により２．４４ｇ（３３％収率）の１６-(３-カルボキシ-プロパン-１-スルホニルアミノ)-１６-オキソ-ヘキサデカン酸ｔｅｒｔ-ブチルエステルを得た。
１Ｈ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６)δ＝１．２３(ｍ、２０Ｈ)、１．３９(ｓ、９Ｈ)、１．４８(ｍ、４Ｈ)、１．８４(ｍ、２Ｈ)、２．１６(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．２４(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、２．３８(ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ)、３．３７(ｍ、３．３３ｐｐｍの水のピークと部分的にオーバーラップ)。
【００８４】
（薬理学的方法）
アッセイ（Ｉ）−不断給餌ラットモデルを使用するＭＣ４類似体での食欲に対する効能試験の実験プロトコル
Ｍ＆Ｂブリーディング・アンド・リサーチセンターＡ／Ｓ、ＤｅｎｍａｒｋからのＴＡＣ：ＳＰＲＤ＠ｍｏｌラット又はＷｉｓｔａｒラットを実験に使用した。ラットは実験の開始の際には体重２００−２５０ｇであった。ラットは体重１８０−２００ｇで実験開始の少なくとも１０−１４日前に届いた。各用量の化合物を８匹のラット群において試験する。８匹のラットのビヒクル群を試験の各セットに含めた。
動物が届いたとき、それらを、光が日中にはなく夜の間にあることを意味する昼／夜逆転相（午前７時３０分に消灯し午後７時３０分に明かりをつける）で個々に飼育した。ラットは通常は光が除かれると食物摂取を開始し、夜の間にその一日分の食物摂取の大部分を食べるので、これは、食物摂取の開始時間を、明かりが消灯されている７：３０ａｍへの変更をなす。１０−１４日の順化期間の間、ラットは食物と水を自由に摂れる。この期間の間、動物は少なくとも３回処理される。実験はラットのホームケージ中で実施する。投薬の直前に、ラットは体重によって様々な処置群（ｎ＝８）にランダム化する。それらに、体重に応じて、７：００ａｍと７：４５ａｍの間に、１−３ｍｇ／ｋｇ溶液を腹腔内（ｉｐ）、経口（ｐｏ）又は皮下（ｓｃ）投与によって投薬する。投薬の時間を各群について記録する。投薬後、ラットはホームケージに戻し、そこで、ラットはついで食物と水を入手できる。食物消費を７時間の間毎時間、ついで２４時間後、そして時折４８時間後に、個々に記録する。実験期間の終わりに、動物を安楽死させる。
個々のデータはマイクロソフトエクセルシートに記録する。異常値は、異常値に対するＧｒｕｂｂｓ統計評価試験を適用した後、除外し、結果はＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍプログラムを使用してグラフによって表す。
【００８５】
アッセイ（ＩＩ）−ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎＴＭｃＡＭＰ検出キットを使用するメラノコルチン受容体３及び５（ＭＣ３及びＭＣ５）ｃＡＭＰ機能アッセイ
ＭＣ３及びＭＣ５受容体に対するｃＡＭＰアッセイを、ＭＣ３及びＭＣ５受容体をそれぞれ安定して発現する細胞（ＨＥＫ２９３又はＢＨＫ細胞の何れか）で実施する。受容体はＰＣＲによってｃＤＮＡからクローニングし、ｐｃＤＮＡ３発現ベクター中に挿入する。安定なクローンを１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を使用して選択する。
およそ８０−９０％のコンフルエンスの細胞をＢＳで３回洗浄し、Ｖｅｒｓｅｎｅでプレートから持ち上げ、ＰＢＳで希釈する。ついで、それらを１３００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を除く。細胞を刺激バッファー（５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のオボアルブミン、０．００５％のＴｗｅｅｎＴＭ２０及び０．５ｍＭのＩＢＭＸ、ｐＨ７．４）で２回洗浄し、１×１０６又は２×１０６細胞／ｍｌの最終濃度まで刺激バッファーに再懸濁させる。２５μｌの細胞懸濁液を、細胞懸濁液を、２５μｌの試験化合物又は参照化合物（全て刺激バッファーに希釈）を含むマイクロタイタープレートに加える。プレートを低振盪速度に設定したプレート振盪器で室温（ＲＴ）にて３０分インキュベートする。反応を、抗ｃＡＭＰと共に２５μｌのアクセプタービーズを加え、２分後に溶解バッファー中のビオチン化ｃＡＭＰと共にウェル当たり５０μｌのドナービーズを加えて、停止させる。ついで、プレートをプラスチックでシールし、３０分振盪し、一晩放置した後、ＡｌｐｈａＴＭマイクロプレートリーダーで計数する。
ＥＣ５０値は、ＷｉｎｄｏｗｓＴＭプログラムＧｒａｐｈＰａｄＴＭＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、ＵＳＡ）を使用して、用量／応答曲線（最小６点）の非線形回帰分析によって計算する。全ての結果はｎＭで表す。
ＭＣ３機能ｃＡＭＰアッセイにおけるアンタゴニスト活性の測定では、ＭＣ３受容体を３ｎＭのα-ＭＳＨで刺激し、潜在的なアンタゴニストの量を増加させることによって阻害する。アンタゴニストに対するＩＣ５０値はＭＣ３の刺激を５０％阻害する濃度として定義される。
【００８６】
アッセイ（ＩＩＩ）−メラノコルチン受容体４（ＭＣ４）ｃＡＭＰアッセイ
ＭＣ４受容体を発現するＢＨＫ細胞を、潜在的なＭＣ４アゴニストで刺激し、ｃＡＭＰの刺激度合いを、Ｆｌａｓｈ Ｐｌａｔｅ(登録商標)ｃＡＭＰアッセイ（ＮＥＮＴＭライフサイエンスプロダクツ・カタログ番号ＳＭＰ００４）を使用して測定する。
ＭＣ４受容体発現ＢＨＫ細胞は、ＭＣ４受容体をコードするｃＤＮＡをＢＨＫ５７０／ＫＺ１０-２０-４８中にトランスフェクトし、ＭＣ４受容体を発現する安定なクローンを選択することによって、産生する。ＭＣ４受容体ｃＤＮＡ、並びにＭＣ４受容体を発現するＣＨＯ細胞株はＥｕｒｏｓｃｒｅｅｎＴＭから購入できる。細胞はＤＭＥＭ、１０％のＦＣＳ、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８、２５０ｎＭのＭＴＸ及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン中で増殖させる。
およそ８０−９０％のコンフルエンスの細胞をＰＢＳで３回洗浄し、Ｖｅｒｓｅｎｅでプレートから持ち上げ、ＰＢＳで希釈する。ついで、それらを１３００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を除く。細胞を刺激バッファーで２回洗浄し、０．７５×１０６細胞／ｍｌの最終濃度まで刺激バッファーに再懸濁させる（その消費：９６ウェルマイクロタイタープレート当たり７ｍｌ）。５０μｌの細胞懸濁液を、５０μｌの試験化合物又は参照化合物（全てＨ２Ｏに希釈）を含むＦｌａｓｈ Ｐｌａｔｅに加える。混合物を５分間振盪し、ついで室温に２５分間放置する。反応を、ウェル当たり１００μｌのＤｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ＝１１ｍｌのＤｅｔｅｃｔｉｏｎバッファー＋１００μｌ(〜２μＣｉ)のｃＡＭＰ[１２５Ｉ]トレーサー）を加えて停止させる。ついで、プレートをプラスチックでシールし、３０分振盪し、一晩（又は２時間）放置し、ついでＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒ(２分／ウェル)で計数する。アッセイ手順及びバッファーは一般にはＦｌａｓｈ Ｐｌａｔｅキットプロトコル(Ｆｌａｓｈ Ｐｌａｔｅ(登録商標)ｃＡＭＰアッセイ(ＮＥＮＴＭライフサイエンスプロダクツカタログ番号ＳＭＰ００４))に記載されている通りである。しかしながら、ｃＡＭＰ標準は０．１％のＨＳＡ及び０．００５％のＴｗｅｅｎＴＭ２０に希釈するが、刺激バッファーには希釈しない。
ＥＣ５０値は、ＷｉｎｄｏｗｓＴＭプログラムＧｒａｐｈＰａｄＴＭＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、ＵＳＡ）を使用して、用量／応答曲線（最小６点）の非線形回帰分析によって計算する。全ての結果はｎＭで表す。
【００８７】
アッセイ（ＩＶ）−メラノコルチン受容体１（ＭＣ１）結合アッセイ
ＭＣ１受容体結合アッセイを、ＭＣ１受容体を安定して発現するＢＨＫ細胞膜で実施する。アッセイは２５０μｌの全容量：２５μｌの１２５ＮＤＰ-α-ＭＳＨ（最終濃度で２２ｐＭ）、２５μｌの試験化合物／コントロール及び２００μｌの細胞膜（３５μｇ／ｍｌ）で実施する。試験化合物をＤＭＳＯに溶解させる。放射標識リガンド、膜及び試験化合物をバッファー：２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＳＯ４、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＨＳＡ及び０．００５％のＴｗｅｅｎＴＭ２０に希釈する。あるいは、ＨＳＡはオボアルブミンで置換されうる。試料をＧｒｅｉｎｅｒマイクロタイタープレート中で３０℃にて９０分インキュベートし、０．５％のＰＥＩに６０分前もって湿らせたＧＦ／Ｂフィルターで分離し、ＮａＣｌ（０．９％）で２−３回洗浄した後、濾過によって未結合の放射標識リガンドから結合物を分離する。濾過後、フィルターを氷冷０．９％ＮａＣｌで１０回洗浄する。フィルターを５０℃で３０分乾燥させ、シールし、３０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ０(Ｐａｃｋａｒｄ、カタログ番号６０１３６１６)を各ウェルに加える。プレートをＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒ（１分／ウェル）で計数する。
データはＷｉｎｄｏｗｓＴＭプログラムＧｒａｐｈＰａｄＴＭＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、ＵＳＡ）を使用して、結合曲線の非線形回帰分析によって分析する。
【００８８】
アッセイ（Ｖ）−メラノコルチン受容体４（ＭＣ４）結合アッセイ
ヒトＭＣ４受容体を発現する組換えＢＨＫ細胞に対するインビトロ１２５ＮＤＰ-α-ＭＳＨ結合（濾過分析）
該アッセイは５ｍｌのミニソーブバイアル(Ｓａｒｓｔｅｄｔ番号５５５２６)又は９６ウェルのフィルタープレート(ミリポアＭＡＤＶＮ６５５０)において、（Ｗｉｋｂｅｒｇ教授、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎから得た）ヒトＭＣ４受容体を発現するＢＨＫ細胞を使用して実施する。ＢＨＫ細胞膜をアッセイまで−８０℃に維持し、更なる準備なしに該細胞膜懸濁液の希釈物でアッセイを直接実施する。懸濁液を、最大１０％の特異的結合を得るように、つまりおよそ５０−１００倍希釈まで、希釈する。アッセイを２００μｌの全容量で実施する：つまり５０μｌの細胞懸濁液、５０μｌの１２５ＮＤＰ-α-ＭＳＨ（最終濃度で≒７９ｐＭ）、５０μｌの試験化合物及び５０μｌの結合バッファー（ｐＨ７）を混合し、２５℃で２時間インキュベートする［結合バッファー：２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＳＯ４、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０２％のバシトラシン、０．００５％のＴｗｅｅｎＴＭ２０及び０．１％のＨＳＡ又は、別に、０．１％オボアルブミン（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ａ-５５０３）］。試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、結合バッファーで希釈する。放射標識リガンドと膜を結合バッファーで希釈する。インキュベーションを５ｍｌの氷冷０．９％ＮａＣｌでの希釈によって停止させ、ついで０．５％のポリエチレンイミンで１時間、前処理したＷｈａｔｍａｎのＧＦ／Ｃフィルターでの迅速に濾過した。フィルターを３×５ｍｌの氷冷ＮａＣｌで洗浄する。フィルターに保持した放射能をＣｏｂｒａＩＩ自動ガンマカウンターで計数した。
データは、ＷｉｎｄｏｗｓＴＭプログラムＧｒａｐｈＰａｄＴＭＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、ＵＳＡ）を使用して、結合曲線の非線形回帰分析によって分析する。
【００８９】
アッセイ（ＶＩ）−エネルギー消費の評価
Ｍ＆Ｂブリーディング・アンド・リサーチセンターＡ／Ｓ、ＤｅｎｍａｒｋからのＴＡＣ：ＳＰＲＤラット又はＷｉｓｔａｒラットを実験に使用した。少なくとも一週間の順応化後、ラットを個々にメタボリックチャンバー（Ｏｘｙｍａｘシステム、Columbus Instruments, Columbus, Ohio, USA；システムは毎日調整）に配した。測定の間、動物は水は自由に飲めるが、チャンバーには食物は与えられない。昼／夜サイクルは１２時間：１２時間で、明かりは６：００にスイッチを入れた。動物がチャンバーでおよそ２時間費やした後（つまり、ベースラインエネルギー消費に達したとき）、試験化合物又はビヒクルを投与（経口、腹腔内又は皮下）し、試験化合物の作用時間を確立するために記録を続ける。各動物のデータ（酸素消費、二酸化炭素生成及び流量）を１０−１８分毎に全体で２２時間（２時間の適応化（ベースライン）と２０時間の測定）集める。流入空気中のＯ２及びＣＯ２含有量の変化の訂正を各１０−１８分のサイクルで行う。
酸素消費と二酸化炭素生成、及び動物毎に熱に対してメタボリック体重[(ｋｇ体重)０．７５]当たりのデータを計算する。酸素消費(ＶＯ２)は興味のある主要なエネルギー消費パラメータと見なされる。
【００９０】
アッセイ（ＶＩＩ）−アルブミンへの結合の評価
試験化合物を機能アッセイ（アッセイＩＩＩ）及び結合アッセイ（アッセイＶ）で試験する。ここで、アッセイＩＩＩはＨＳＡを含み、アッセイＶはオボアルブミンを含む。ＥＣ５０値はアッセイＩＩＩから決定され、Ｋｉ値はアッセイＶから決定する。ついで、比ＥＣ５０／Ｋｉを計算する。
アルブミン結合がない場合には、比ＥＣ５０／Ｋｉは１又はそれ以下である。アルブミンへの結合が強くなればなるほど、比は高くなる；アルブミン結合試験化合物では、比ＥＣ５０／Ｋｉはよって≧１、例えば≧１０、例えば≧１００である。
【００９１】
アッセイ(ＶＩＩＩ)−メラノコルチンレセプター３(ＭＣ３)結合アッセイ
ＭＣ３レセプター結合アッセイは、ヒトＭＣ３レセプターを安定して発現するＢＨＫ細胞膜において実施する。ヒトＭＣ３レセプターは、ＰＣＲによってクローニングし、ｐｃＤＮＡ３発現ベクターにサブクローニングする。ヒトＭＣ３レセプターを安定して発現する細胞は、ＢＨＫ細胞に発現ベクターを形質移入し、ＭＣ３クローンについて選別するＧ４１８を用いて生成される。ＢＨＫ ＭＣ３クローンは、ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＣＳ、１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＤＭＥＭ中で３７℃、５％ＣＯ２にて培養する。
結合は、以下のようにして調製される膜調製物において実施する： 
ＰＢＳにて細胞を洗い流し、ベルセンとともにおよそ５分間インキュベートした後に回収する。ＰＢＳにて細胞を洗浄し、細胞懸濁液を２８００×Ｇで１０分間遠心分離する。ペレットは２０ｍｌのバッファ(２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７.２＋５ｍＭ ＥＤＴＡ＋１ｍｇ／ｍｌ Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ(Sigma B-0125))に再懸濁し、ガラステフロンホモジェナイザーにて１０回、低速でホモジナイズする。細胞懸濁液は、４１００×Ｇにて４℃で２０分間遠心分離する。ペレットはバッファに再懸濁し、膜はバッファ中１ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度に希釈し、等分して、使用まで−８０℃で保存する。
アッセイは１００μｌの容量で行う。２５μｌの試験化合物、２５μｌの１２５Ｉ-ＮＤＰ-α-ＭＳＨ(およそ６００００ｃｐｍ／ウェル〜終濃度０．２５ｎＭ)および５０μｌの膜(３０μｇ／ウェル)の順で混合し、Ｃｏｓｔａｒ丸底ウェルマイクロタイタープレート(カタログ番号３３６５)中でインキュベートする。試験化合物はＤＭＳＯ又はＨ２Ｏに溶解する。ラジオリガンド、膜および試験化合物は、バッファ；(２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１ｍＭ ＣａＣｌ２、５ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１％卵白アルブミン(Sigma Ａ-5503)、０．００５％Ｔｗｅｅｎ-２０および５％ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン９７％(Ａｃｒｏｓ有機物、コード２９７５６１０００)に希釈する。アッセイ混合物は２０〜２５℃で１時間インキュベートする。Ｐａｃｋａｒｄ ｈａｒｖｅｓｔｅｒ ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ １９６の濾過によってインキュベートを終える。０．５％ポリエチレンイミンにて１時間前処理したパッカードＵｎｉｆｉｌｔｅｒ-９６のＧＦ／Ｂフィルターにて急速濾過を行う。フィルターは氷冷０．９％ＮａＣｌにて８〜１０回洗浄する。プレートは５５℃で３０分間空気乾燥させ、５０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ０(Packard)を加える。フィルターに保持される放射能はパッカードＴｏｐＣｏｕｎｔ.ＮＸＴを使用して計数する。
結果；  ＩＣ５０値は、ウインドウプログラムGraphPad Prism, GraphPad software, USAを用いた結合曲線(最低６点)の非線形回帰分析によって算出される。Ｋｉ-値は、Ｃｈｅｎｇ-Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式[Y-C. Cheng and W.H. Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22 (1973) pp. 3099-3108]に従って算出した。
【００９２】
アッセイ(ＩＸ)−メラノコルチンレセプター５(ＭＣ５)結合アッセイ 
ＭＣ５レセプター結合アッセイは、ヒトＭＣ５レセプターを安定して発現するＢＨＫ細胞膜において実施する。ヒトＭＣ５レセプターは、ＰＣＲによってクローニングし、ｐｃＤＮＡ３発現ベクターにサブクローニングする。ヒトＭＣ５レセプターを安定して発現する細胞は、ＢＨＫ細胞に発現ベクターを形質移入し、ＭＣ５クローンについて選別するＧ４１８を用いて生成される。ＢＨＫ ＭＣ５クローンは、ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＣＳ、１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＤＭＥＭ中で３７℃、５％ＣＯ２にて培養する。
結合は、以下のようにして調製される膜調製物において実施する： 
ＰＢＳにて細胞を洗い流し、ベルセンとともにおよそ５分間インキュベートした後に回収する。ＰＢＳにて細胞を洗浄し、細胞懸濁液を２８００×Ｇで１０分間遠心分離する。ペレットは２０ｍｌのバッファ(２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７.２＋５ｍＭ ＥＤＴＡ＋１ｍｇ／ｍｌ Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ (Sigma B-0125))に再懸濁し、ガラステフロンホモジェナイザーにて１０回、低速でホモジナイズする。細胞懸濁液は、４１００×Ｇにて４℃で２０分間遠心分離する。ペレットはバッファに再懸濁し、膜はバッファ中１ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度に希釈し、等分して、使用まで−８０℃で保存する。
アッセイは１００μｌの容量で行う。２５μｌの試験化合物、２５μｌの１２５Ｉ-ＮＤＰ-α-ＭＳＨ(およそ６００００ｃｐｍ／ウェル〜終濃度０．２５ｎＭ)および５０μｌの膜(３０μｇ／ウェル)の順で混合し、Ｃｏｓｔａｒ丸底ウェルマイクロタイタープレート(カタログ番号３３６５)中でインキュベートする：試験化合物はＤＭＳＯ又はＨ２Ｏに溶解する。ラジオリガンド、膜および試験化合物は、バッファ；(２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１ｍＭ ＣａＣｌ２、５ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１％卵白アルブミン(Sigma Ａ-5503)、０．００５％Ｔｗｅｅｎ-２０および５％ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン(９７％、Ａｃｒｏｓ有機物、コード２９７５６１０００)に希釈する。アッセイ混合物は２０〜２５℃で１時間インキュベートする。Ｐａｃｋａｒｄ ｈａｒｖｅｓｔｅｒ ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ １９６の濾過によってインキュベートを終える。０．５％ポリエチレンイミンにて１時間前処理したパッカードＵｎｉｆｉｌｔｅｒ-９６のＧＦ／Ｂフィルターにて急速濾過を行う。フィルターは氷冷０．９％ＮａＣｌにて８〜１０回洗浄する。プレートは５５℃で３０分間空気乾燥させ、５０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ０(Packard)を加える。フィルターに保持される放射能はパッカードＴｏｐＣｏｕｎｔ.ＮＸＴを使用して計数する。
結果：  ＩＣ５０値は、ウインドウプログラムGraphPad Prism, GraphPad software, USAを用いた結合曲線(最低６点)の非線形回帰分析によって算出される。Ｋｉ-値は、Ｃｈｅｎｇ-Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式[Y-C. Cheng and W.H. Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22 (1973) pp. 3099-3108]に従って算出した。 
【００９３】
アッセイ(Ｘ)−ＦｌａｓｈＰｌａｔｅ(登録商標)ｃＡＭＰ検出キットを用いたメラノコルチンレセプター３(ＭＣ３) ｃＡＭＰ機能アッセイ
ＭＣ３を含有しているＢＨＫ細胞を、潜在的なＭＣ３アゴニストにて刺激し、ｃＡＭＰの刺激の程度は、ＦｌａｓｈＰｌａｔｅ(登録商標)ｃＡＭＰアッセイ(カタログ番号ＳＭＰ００４、ＮＥＮＴＭ Life Science Products)を用いて測定する。
ＢＨＫ／ｈＭＣ３クローン５細胞：  細胞は、ＢＨＫ５７０にＭＣ３レセプターをコードするｃＤＮＡを形質移入し、ｈＭＣ３レセプターを発現する安定クローンを選別することによって作出する。細胞はＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８および１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で生育させる。
およそ８０〜９０％の集密度の細胞をＰＢＳにて洗浄し、ベルセンにてプレートから離し、ＰＢＳにて希釈する。１３００ｒｐｍにて５分間遠心分離した後、上清を取り除き、細胞を刺激バッファに再懸濁し、２×１０６細胞／ｍｌの終濃度にする。５０μｌの細胞懸濁液を５０μｌのＤＭＳＯ中に試験化合物又は比較化合物(すべてＤＭＳＯに溶解し、０．１％ＨＳＡ(Sigma A-1887)及び０．００５％ツイーン２０に希釈する)を含むＦｌａｓｈｐｌａｔｅに加える。混合物を５分間振とうし、その後室温に２５分間置く。１００μｌのＤｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｍｉｘプロウェル(検出Ｍｉｘ＝１１ｍｌの検出バッファ＋１００μｌ(〜２μＣｉ) ｃＡＭＰ[１２５Ｉ]トレーサー)にて反応を止める。次いで、プレートをプラスチックにて密封し、３０分間振とうし、終夜(又は２時間)静置し、その後Ｔｏｐｃｏｕｎｔｅｒ、２分／ウェルにて計数する(通常は、キットのプロトコールに記載されているアッセイ手順に従う点に注意する；しかしながら、ｃＡＭＰ標準物質は、刺激バッファでなく、０．１％ＨＳＡおよび０．００５％ツイーン２０に希釈される)。
結果：  ＥＣ５０値は、ウインドウプログラムGraphPad Prism, GraphPad software, USAを用いた用量−反応曲線(最低６点)の非線形回帰分析によって算出される。結果をｎＭで表す。Ｅｍａｘ値は、ｈＭＣ３ｃＡＭＰアッセイにおけるＮＤＰ-α-ＭＳＨ最大刺激の％(最大のＮＤＰ-α-ＭＳＨ刺激＝１００％)として算出される。
【国際調査報告】
2010516653.tif 000027
2010516653.tif 000028
2010516653.tif 000029
2010516653.tif 000030
2010516653.tif 000031