(57)【要約】  細菌メチオニルシンテターゼ（ＭｅｔＲＳ）の阻害剤である、鏡像異性過剰の新規化合物を開示する。該化合物の調製法、ならびに抗細菌剤としての、療法における該化合物の使用、および特にクロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染に関する療法における該化合物の使用もまた開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）：
【化１】
2010504986.tif 000027
式中：
Ｘは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＣＨ２からなる群より選択され；
ｎは１、２または３であり；
＊は不斉炭素原子を示し、ここで、ｎが２または３である場合、＊はＲ立体配置であり；ｎが１であり、そしてＸがＣＨ２である場合、＊はＲ立体配置であり；そしてｎが１であり、そしてＸが、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２からなる群より選択される場合、＊はＳ立体配置であり；
Ｒ１は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシ、または（Ｃ１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキルオキシ、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイルならびに複素環より独立に選択され；
ｍは、０、１、２、３または４であり；
ｐは、０、１、２または３であり；
Ｒ２は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシ、または（Ｃ１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキルオキシ、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイルならびに複素環より独立に選択され；そして
Ｚ１がＳである場合、Ｚ２およびＺ３はＣＨであり；そしてＺ２がＳである場合、Ｚ１およびＺ３はＣＨであり；そしてＺ３がＳである場合、Ｚ１およびＺ２はＣＨである
の光学活性化合物。
【請求項２】
式（ＩＩＩ）：
【化２】
2010504986.tif 000028
を有する請求項１の光学活性化合物。
【請求項３】
（Ｒ１）ｍが６，８置換であり、そして同じ置換基または異なる置換基であってもよく、置換基が臭素、塩素、ヨウ素およびスルファンからなる群より選択される、請求項２の光学活性化合物。
【請求項４】
式（ＩＶ）：
【化３】
2010504986.tif 000029
を有する請求項１の光学活性化合物。
【請求項５】
（Ｒ１）ｍが６，８置換であり、そして同じ置換基または異なる置換基であってもよく、置換基が臭素、塩素、ヨウ素およびスルファンからなる群より選択される、請求項４の光学活性化合物。
【請求項６】
式（Ｖ）：
【化４】
2010504986.tif 000030
を有する請求項１の光学活性化合物。
【請求項７】
（Ｒ１）ｍが５，７置換であり、そして同じ置換基または異なる置換基であってもよく、置換基が臭素、塩素、ヨウ素およびスルファンからなる群より選択される、請求項６の光学活性化合物。
【請求項８】
５−［３−（（Ｒ）（−）−５，７−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−ｌ−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
５−［３−（（Ｒ）（＋）−８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
５−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
５−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
２−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−ｌＨ−キノリン−４−オン；および
５−［３−（（Ｓ）−５，７−ジブロモ−ベンゾフラン−３イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン
からなる群より選択される、請求項１の光学活性化合物。
【請求項９】
請求項１の化合物の塩。
【請求項１０】
薬学的に許容されうる塩である、請求項９の塩。
【請求項１１】
細菌感染の治療に使用するための請求項１におけるような化合物。
【請求項１２】
ヒトにおいて細菌感染を治療するための方法であって、感染の治療に有効な量の請求項１の化合物をヒトに投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１３】
ヒトにおいて細菌感染を治療するための薬学的組成物であって、前記細菌の増殖を減少させるような有効量の請求項１の化合物を含み、調製物が、薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤をさらに含む、前記薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［０００１］本発明は、細菌メチオニルｔＲＮＡシンテターゼ（ＭｅｔＲＳ）を阻害する二環芳香族複素環化合物の新規鏡像異性体に、そして該異性体の調製プロセス、および抗細菌剤としての、療法における該異性体の使用に関する。さらに、本発明は、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に基づく感染および疾患の治療におけるこれらの鏡像異性化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
［０００２］抗細菌剤の検索は、「微生物」がヒト疾患を引き起こすことがわかった１８００年代後期に始まった。前世紀の間、科学者らは、多くの細菌株をターゲティングし、そして阻害するのに有用な多様な薬剤を開発した。特に、抗生物質として知られる抗細菌剤が開発され、そして大部分の既知の細菌感染を治療するため、先進工業国の間で一般的に使用されている。元来、ペニシリンのような抗生物質は、細菌細胞壁の構築に関与する酵素であるトランスペプチダーゼの作用を遮断することによって、細菌の複製を阻害した。しかし、過度の使用および多くの細菌株の耐性適応のため、多くの抗生物質は、感染を治療する際の有効性のある程度またはすべてを失った。新規分子増殖機構をターゲットとする一連の抗細菌剤は、抗生物質耐性のさらなる増進を回避するのに有用であろう。１つのこうしたターゲットは、ｔＲＮＡシンテターゼである。
【０００３】
［０００３］ｔＲＮＡシンテターゼは、タンパク質生合成に関与するため、その阻害は細胞増殖の中断につながると予期されうる。したがって、例えば、化合物、ムピロシンは、イソロイシルｔＲＮＡシンテターゼの阻害剤であることが示されている。ムピロシンは、生物、蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）によって産生され、そしてＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅによって市販される製品Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）中の活性成分として用いられる抗細菌剤である。各ｔＲＮＡシンテターゼは、薬剤発見のための別個のターゲットに相当する。哺乳動物細胞よりも細菌細胞に対して選択的であるｔＲＮＡシンテターゼ阻害剤は、抗細菌剤として用いられる潜在的可能性を有するため、療法的にかなり興味深い。
【０００４】
［０００４］グラム陽性生物である黄色ブドウ球菌（Ｓ．  ａｕｒｅｕｓ）中のｔＲＮＡシンテターゼ遺伝子の配列が最近決定され（例えば、黄色ブドウ球菌ＭｅｔＲＳに関する、欧州特許出願第９７３００３１７．１号、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍを参照されたい）、それによって、阻害剤を同定するプロセスが補助された。さらに、他の病原性細菌、例えばグラム陰性生物、インフルエンザ菌（Ｈ．  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）のｔＲＮＡシンテターゼ遺伝子の配列もまた公表されている（Ｒ．Ｄ．  Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６９，  ４９６−５１２，  １９９５）。
【０００５】
［０００５］ＭｅｔＲＳに対する阻害活性に関して、そして抗細菌剤としての能力に関して、いくつかの化合物が最近開示されている。特に、Ｊａｒｖｅｓｔらは、ある程度のＭｅｔＲＳ阻害を示した多様な二環芳香族複素環化合物を記載し、これには、左側テトラヒドロキノリン化合物のＲ立体配置を持つ鏡像異性体である、１つの特定の化合物が含まれる（Ｂｉｏｏｒｇ．  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  １４（２００４）３９３７−３９４１）。
【０００６】
［０００６］１つの特に興味深い細菌ターゲットは、生物、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ディフィシレ）である。Ｃ．ディフィシレは、より流行している感染性病原体となりつつあり、健康な個体の１〜３パーセントが、この生物のキャリアーである（Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ＆  Ｐｅｒｌ，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ  Ｍｅｄ．，  ３５３，  ２５０３−２５０５，  ２００５；  Ｃｌａｂｏｔｓら，  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．，  １６６，  ５６１−５６７，  １９９２；  ＭｃＦａｒｌａｎｄら，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３２０，  ２０４−２１０，  １９８９）。感染および疾患のリスクは、免疫不全の高齢者、そして特に、医療の場、例えば老人ホーム、病院、診療所などにいる高齢者において、ますます一般的になりつつある。Ｃ．ディフィシレの治療に有望であることが示された慣用的な抗細菌薬剤はほとんどなく、実際、Ｃ．ディフィシレ関連下痢（ＣＤＡＤ）の治療に関して、ＦＤＡによって認可されているのは、バンコマイシンのみである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】欧州特許出願第９７３００３１７．１号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｒ．Ｄ．  Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６９，  ４９６−５１２，  １９９５
【非特許文献２】Ｊａｒｖｅｓｔら，  Ｂｉｏｏｒｇ．  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  １４（２００４）３９３７−３９４１
【非特許文献３】Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ＆  Ｐｅｒｌ，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ  Ｍｅｄ．，  ３５３，  ２５０３−２５０５，  ２００５
【非特許文献４】Ｃｌａｂｏｔｓら，  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｄｉｓ．，  １６６，  ５６１−５６７，  １９９２
【非特許文献５】ＭｃＦａｒｌａｎｄら，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３２０，  ２０４−２１０，  １９８９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
こうしたものとして、当該技術分野には、Ｃ．ディフィシレに基づく感染の治療、特に、慣用的な抗生物質治療、そしてしたがって抗生物質耐性を回避する治療に対して、さらなるアプローチを得る必要がある。
【００１０】
［０００７］この背景に対して、本発明が発見された。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
［０００８］本発明は、細菌メチオニルｔＲＮＡシンテターゼ（ＭｅｔＲＳ）の強力な阻害剤である新規化合物を提供する。本発明の化合物は、多くのグラム陽性およびグラム陰性細菌に対して、抗細菌剤として、広い適用可能性を有することが示されている。ＭｅｔＲＳ阻害剤は、グラム陽性生物に対して最適の活性を有し、そしてグラム陰性生物に対してはるかにより弱い活性を有する。特に、本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレに対して驚くほど強力な抗細菌活性を有することが示されている。
【００１２】
［０００９］本発明の化合物は、細菌ＭｅｔＲＳの予期せぬそして強力な阻害を示す、新規二環芳香族複素環鏡像異性体である。これらの化合物は、哺乳動物ＭｅｔＲＳの阻害をほとんどまたはまったく示さない。本発明の化合物は、抗細菌剤として、療法において使用するためのものである。特に、本発明の化合物は、グラム陽性細菌、そして特にＣ．ディフィシレに対して、驚くほど強い有効性を示した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
［００１０］本発明は、式（Ｉ）：
【００１４】
【化１】
2010504986.tif 000002
【００１５】
式中：
［００１１］Ａｒは右側（ＲＨＳ）置換基であり、そして置換または非置換アリールまたはヘテロアリール基を有し；
［００１２］Ｘは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＣＨ２からなる群より選択され；
［００１３］ｎは１、２または３であり；
［００１４］＊は不斉炭素原子を示し、ここで、ｎが２または３である場合、＊はＲ立体配置であり；ｎが１であり、そしてＸがＣＨ２である場合、＊はＲ立体配置であり；そしてｎが１であり、そしてＸが、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２からなる群より選択される場合、＊はＳ立体配置であり；
［００１５］ｍは、０、１、２、３、または４であり；そして
［００１６］Ｒ１は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシ、または（Ｃ１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキルオキシ、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイルならびに複素環より独立に選択される
の化合物を提供する。
【００１６】
［００１７］本発明の好ましい態様は、式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）：
【００１７】
【化２】
2010504986.tif 000003
【００１８】
式中：
［００１８］Ｘは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＣＨ２からなる群より選択され；
［００１９］ｎは１、２または３であり；
［００２０］＊は不斉炭素原子を示し、ここで、ｎが２または３である場合、＊はＲ立体配置であり；ｎが１であり、そしてＸがＣＨ２である場合、＊はＲ立体配置であり；そしてｎが１であり、そしてＸが、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２からなる群より選択される場合、＊はＳ立体配置であり；
［００２１］Ｒ１は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシ、または（Ｃ１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキルオキシ、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイルならびに複素環より独立に選択され；
［００２２］ｍは、０、１、２、３または４であり；
［００２３］ｐは、０、１、２または３であり；
［００２４］Ｒ２は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシ、または（Ｃ１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキルオキシ、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイルならびに複素環より独立に選択され；そして
［００２５］Ｚ１がＳである場合、Ｚ２およびＺ３はＣＨであり；Ｚ２がＳである場合、Ｚ１およびＺ３はＣＨであり；そしてＺ３がＳである場合、Ｚ１およびＺ２はＣＨである
の化合物である。
【００１９】
［００２６］式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）の化合物は、キラル非ラセミ体であり、そしてそのＲまたはＳ立体配置で、非常に鏡像異性体過剰で単離可能である。いくつかの態様において、式（ＩＩ）の化合物は、少なくとも６０％、鏡像異性体過剰のＲ鏡像異性体またはＳ鏡像異性体を有し、そして鏡像異性的に純粋であることも可能であり、この場合、実質的に１００％の化合物が単一の鏡像異性体である（旋光度、キラルＨＰＬＣによって測定した際、または重量／重量に基づいて測定した際）。好ましい態様において、本発明の鏡像異性化合物は、Ｒ立体配置またはＳ立体配置のいずれかを有する。
【００２０】
［００２７］式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）の化合物の好ましい群は、式の左側（ＬＨＳ）が式（ＩＩＩ）および式（ＩＶ）に示される通りであり、そして式の右側（ＲＨＳ）（またはＡｒ）がチエノピリドン基（式ＩＩＩ）またはキノロン基（式ＩＶ）のいずれかであるものである：
【００２１】
【化３】
2010504986.tif 000004
【００２２】
式中：
［００２８］Ｘは式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義される。
【００２３】
［００２９］Ｒ１は式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義される。より好ましい態様において、（Ｒ１）ｍは、同じ置換基または異なる置換基であってもよい環上の６，８置換としてさらに定義されてもよく、そして好ましくは臭素、塩素、ヨウ素およびスルファンである；
［００３０］ｍは式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義され；
［００３１］Ｒ２は式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義され；そして
［００３２］ｐは式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義される。
【００２４】
［００３３］上述のように、式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）はアステリスク（＊）で印を付けた不斉炭素原子によって特徴付けられる。この炭素を取り巻く結合は、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）の化合物において、Ｒ立体配置を生じさせる。式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）の化合物は、典型的には、キラル非ラセミ体であり、そしてＲ鏡像異性体の非常に鏡像異性体過剰で単離可能である。いくつかの態様において、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）のいずれかの化合物は、少なくとも６０％、Ｒ鏡像異性体を有し、そして鏡像異性的に純粋であることも可能であり、この場合、実質的に１００％の化合物がＲ立体配置にある（旋光度、キラルＨＰＬＣ、または重量によって測定した際）。好ましい態様において、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）を有する化合物は、Ｒ立体配置にある。
【００２５】
［００３４］式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）の化合物の別の好ましい群は、式のＬＨＳがジヒドロベンゾフラン基であり、そして式のＲＨＳがチエノピリドン基であるものである（式Ｖ）：
【００２６】
【化４】
2010504986.tif 000005
【００２７】
式中：
［００３５］Ｒ１は式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義される。より好ましい態様において、（Ｒ１）ｍは、同じ置換基または異なる置換基であってもよい環上の５，７置換としてさらに定義されてもよく、そして好ましくは臭素、塩素、ヨウ素およびスルファンである；
［００３６］ｍは式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義され；
［００３７］Ｒ２は式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）におけるように定義され；そして
［００３８］上述のように、式（Ｖ）はアステリスク（＊）で印を付けた不斉炭素原子によって特徴付けられる。この炭素を取り巻く結合は、Ｓ立体配置を生じさせる。式（Ｖ）の化合物は、典型的には、キラル非ラセミ体であり、そしてＳ鏡像異性体が非常に鏡像異性体過剰で単離可能である。いくつかの態様において、式（Ｖ）の化合物は、少なくとも６０％、Ｓ鏡像異性体を有し、そして鏡像異性的に純粋であることも可能であり、この場合、実質的に１００％の化合物がＳ立体配置にある（旋光度または重量によって測定した際）。好ましい態様において、式（Ｖ）を有する化合物は、Ｓ立体配置にある。
【００２８】
［００３９］本発明のいくつかの好ましい化合物には、実施例１〜１２の化合物が含まれる。特に、本発明の好ましい化合物には、式ＶＩ〜ＸＩの化合物が含まれる（以下に示すもの、そして表１を参照されたい）
５−［３−（（Ｒ）（−）−５，７−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−ｌ−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＶＩ）；
５−［３−（（Ｒ）（＋）−８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＶＩＩ）；
５−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＶＩＩＩ）；
５−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＩＸ）；
２−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−ｌＨ−キノリン−４−オン（式Ｘ）；
５−［３−（（Ｓ）−５，７−ジブロモ−ベンゾフラン−３イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＸＩ）：
［００４０］表１は、本明細書に記載する化合物の要約を提供し、ＬＨＳ（左側）およびＲＨＳ（右側）官能性を示す：
【００２９】
【表１−１】
2010504986.tif 000006
【００３０】
【表１−２】
2010504986.tif 000007
【００３１】
【表１−３】
2010504986.tif 000008
【００３２】
【表１−４】
2010504986.tif 000009
【００３３】
［００４１］無機酸および有機酸から塩を形成してもよい。式（Ｉ〜ＸＩ）の化合物の薬学的に許容されうる塩を形成可能な、適切な無機酸および有機酸の代表的な例には、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、パモン酸、コハク酸、ビスメチレン−サリチル酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イタコン酸、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、シクロヘキシルスルファミン酸、リン酸および硝酸が含まれる。
【００３４】
［００４２］本明細書において、用語「アルキル」、および「アルコキシ」などの類似の用語には、すべての直鎖および分枝鎖異性体が含まれる。その代表的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが含まれる。
【００３５】
［００４３］本明細書において、用語「アルケニル」および「アルキニル」には、すべての直鎖および分枝鎖異性体が含まれる。その代表的な例には、ビニル、エチニルおよび１−プロピニルが含まれる。
【００３６】
［００４４］アルキルおよびアルケニル基の好ましい置換基には、例えば、そして別に定義しない限り、ハロゲン、シアノ、アジド、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、カルバモイル、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイル、スルホ、スルファモイル、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルスルファモイル、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、ウレイド、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニルアミノ、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミノ、アリール、複素環、ヒドロキシ、（Ｃ１−６）アルコキシ、アシルオキシ、オキソ、アシル、２−チエノイル、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、ヒドロキシイミノ、（Ｃ１−６）アルコキシイミノ、ヒドラジノ、ヒドラゾノ、ベンゾヒドロキシモイル、グアニジノ、アミジノおよびイミノアルキルアミノが含まれる。
【００３７】
［００４５］本明細書において、用語「アリール」には、別に定義しない限り、５つまでの、好ましくは３つまでの置換基によって場合によって置換された、フェニルまたはナフチルが含まれる。
【００３８】
［００４６］置換される場合、アリール基は４つまでの置換基を有してもよい。アリール基の好ましい置換基には、例えば、そして別に定義しない限り、ハロゲン、シアノ、（Ｃ１−６）アルキル、モノからペルフルオロ（Ｃ１−３）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ１−６）アルコキシ、（Ｃ２−６）アルケノキシ、アリールＣ（１−６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−６）アルキル、ヒドロキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、（Ｃ１−６）アルケニルオキシカルボニル、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル（Ｃ１−６）アルキル、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−６）アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ（Ｃ１−６）アルキルオキシ、（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル（Ｃ１−６）アルコキシ、（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）−アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ１−６）アルキルカルバモイル、ならびに複素環が含まれる。
【００３９】
［００４７］本明細書において、用語「ヘテロアリール」には、環中に、酸素、窒素および硫黄より選択される、４つまでのヘテロ原子を含む、単環または縮合環が含まれる。好ましくは、ヘテロアリール環は、４〜７、好ましくは５〜６の環原子を含む。縮合ヘテロアリール環系には、炭素環が含まれてもよく、そして１つの複素環を含みさえすればよい。
【００４０】
［００４８］本明細書において、用語「複素環」には、環中に、酸素、窒素および硫黄より選択される、４つまでのヘテロ原子を含む、芳香族および非芳香族単環または縮合環が含まれる。適切には、複素環は、４〜７、好ましくは５〜６の環原子を含む。縮合複素環系には、炭素環が含まれてもよく、そして１つの複素環を含みさえすればよい。
【００４１】
［００４９］置換される場合、ヘテロアリールまたは複素環基は、３つまでの置換基を有してもよい。好ましい置換基には、アリール基に関して先に言及したもの、ならびにオキソが含まれる。
【００４２】
［００５０］本明細書において、用語「ハロゲン」および「ハロ」には、それぞれ、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素、ならびにフルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが含まれる。
【００４３】
［００５１］本明細書において、用語「鏡像異性体」は、掌性が異なり、そして鏡像異性関係を有すると言われる、２つの化合物のうちの１つを指す。一方の鏡像異性体を他方に変換するためには、結合を破壊しそして再形成するか、または平面配置を通じて、分子を変形させることが必要である。鏡像異性体は、鏡像異性体の一方の立体配置が、他方の鏡像異性体立体配置よりも、過剰に存在する場合、鏡像異性過剰にあると言われる。鏡像異性過剰は、重量／重量に基づいて、または混合物の純旋光度によって、測定可能である。
【００４４】
［００５２］本明細書において、用語「（Ｒ）」または「Ｒ」および「（Ｓ）」または「Ｓ」は、当業者に周知の命名法に基づき、例えば、Ｒ立体配置は、化合物の実際の配置に基づき、典型的にはＣａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ優先規則を用いて型を分類する（Ｓｍｉｔｈ  Ｍ．Ｂ．，  Ｍａｒｃｈ，  Ｊ，  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  第５版，  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  ＮＹ，  ２００１，  ｐ１３９−１４１）。本明細書の上記に記載したように、本発明の化合物は、Ｒ立体配置またはＳ立体配置を有すると性質決定されている。
【００４５】
［００５３］本発明記載の化合物は、実質的に純粋な形、例えば少なくとも５０％純粋、適切には少なくとも６０％純粋、好適には少なくとも７５％純粋、好ましくは少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、特に少なくとも９８％純粋で提供され、すべての割合は、重量／重量として計算されている。本発明記載の化合物のすべての不純なまたはより純粋でない型は、例えば、薬学的使用に適した、同じ化合物または関連化合物（例えば対応する誘導体）のより純粋な型の調製に使用可能である。
【００４６】
［００５４］式（Ｉ）〜（ＸＩ）の化合物は、本明細書記載の方法によって、または本明細書において、以下に援用される先行技術に記載される方法によって、調製可能である。
【００４７】
［００５５］１つの態様において、本発明の鏡像異性濃縮化合物は、プロセスＩに示すようなキラル分離によって調製可能である。
【００４８】
プロセスＩ
【００４９】
【化５】
2010504986.tif 000010
【００５０】
［００５６］望ましい化合物は、２００７年９月１１日に出願された、「Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｔｈｉｅｎｏｐｙｒｉｄｏｎｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」と題される、米国特許出願第１１／８５３，３１４号に記載される方法にしたがったラセミ混合物として調製された。次いで、キラル固定相クロマトグラフィーを介して、ラセミ体を分離した。キラル分離を容易にする手段として、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）などのカルバメート官能性に、ラセミ体を変換した。化合物のラセミ混合物は、ＴＨＦ中の水素化ナトリウムおよびＢｏｃ無水物を含む、既知の条件下で、Ｂｏｃ保護された（プロセス１のカルバメート形成）。次いで、Ｂｏｃ保護されたラセミ混合物を、分離用キラルクロマトグラフィー（ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）によって単一の鏡像異性体に分離し、そして鏡像異性体を単離した（プロセス１のキラル分離を参照されたい）。次いで、分離した鏡像異性体を脱保護して（プロセス１のカルバメート除去を参照されたい）、非常に鏡像異性濃縮型で、最終化合物を得る。
【００５１】
［００５７］１つの態様において、プロセスＩＩに示すような触媒的不斉合成を介して、本発明の鏡像異性濃縮化合物を調製してもよい。
【００５２】
プロセスＩＩ
【００５３】
【化６】
2010504986.tif 000011
【００５４】
［００５８］ケトンをアルコールに触媒的不斉移動水素化し、その後、中間体アジドを通じてアミンに変換することによって、鏡像異性濃縮型として、望ましい化合物を調製した。還元アミン化および保護基の除去によって、最終化合物を得た。
【００５５】
［００５９］本発明の化合物は、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、例えば黄色ブドウ球菌オックスフォード株（Ｓ．  ａｕｒｅｕｓ  Ｏｘｆｏｒｄ）、および表皮ブドウ球菌（Ｓ．  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）などのスタフィロコッカス属の凝固酵素陰性株；連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、例えば化膿性連鎖球菌（Ｓ．  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ１９６１５および肺炎連鎖球菌（Ｓ．  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｒ６；クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、例えばＣ．ディフィシレ、ならびに腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）、例えばフェカリス菌（Ｅ．  ｆａｅｃａｌｉｓ）１およびフェシウム菌（Ｅ．  ｆａｅｃｉｕｍ）などのグラム陽性生物を含む、ある範囲の重要な病原性細菌に対して活性である。好ましくは、本発明の化合物はまた、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、例えばインフルエンザ菌Ｑ１；モラクセラ属（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）、例えばカタル球菌（Ｍ．  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）１５０２；ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、例えばピロリ菌（Ｈ．  ｐｙｌｏｒｉ）ＡＴＣＣ７００８２４；および大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）ＤＣ０などのグラム陰性生物に対してもまた活性である。本発明の最も好ましい化合物は、生物、Ｃ．ディフィシレ、黄色ブドウ球菌、肺炎連鎖球菌、フェカリス菌、フェシウム菌、インフルエンザ菌、ピロリ菌、およびカタル球菌に対して活性であろう。
【００５６】
［００６０］さらに、本発明の化合物は、他の抗細菌剤、例えばβ−ラクタム抗生物質、例えばメチシリン、マクロライド、アミノグリコシド、オキサゾリジノン、およびリンコサミドなどに耐性である（多剤耐性を含む）、黄色ブドウ球菌、および表皮ブドウ球菌などのスタフィロコッカス属の凝固酵素陰性株などのスタフィロコッカス属生物に対して活性である。
【００５７】
［００６１］本発明の化合物はまた、バンコマイシン耐性株を含む、フェカリス菌の株に対しても活性であり、そしてしたがって、ＶＲＥ生物に関連する感染を治療する際に有用である。さらに、本発明の化合物は、ムピロシンに耐性であるスタフィロコッカス属生物の処置に有用である。
【００５８】
［００６２］本発明の化合物は、クロストリジウム・ディフィシレを含むクロストリジウム属に対して特に強力、すなわち活性である。したがって、本発明の化合物を用いて、Ｃ．ディフィシレに関連する感染、例えば偽膜性大腸炎、中毒性巨大結腸（ｍｅｇａｃｏｌｉｎ）、および他の抗生物質関連下痢（ＡＡＤ）を治療することも可能である。
【００５９】
［００６３］しかし、本発明の化合物は、哺乳動物細胞に対しては活性でない。これによって、病原性細菌に対して活性が高く、そして哺乳動物細胞に対して活性が低いかまたは活性がない、最適な組み合わせが提供され、哺乳動物治療において、これらの化合物を使用することが可能になる。
【００６０】
［００６４］治療可能な細菌感染には、胃腸管感染、呼吸管感染、中耳炎、髄膜炎、心内膜炎、ヒトにおける皮膚および軟組織感染、ウシにおける乳腺炎、ならびにまた、ブタおよびウシなどの農場動物における呼吸器感染が含まれる。
【００６１】
［００６５］したがって、さらなる側面において、本発明は、ヒトまたは非ヒト動物における細菌感染を治療する方法であって、本明細書に先に定義したような式（Ｉ）〜（ＸＩ）の化合物の療法的有効量を、こうした療法が必要なヒトまたは非ヒト動物に投与する工程を含む、前記方法を提供する。本発明の化合物を、他の既知の抗細菌剤と組み合わせてもよいし、または一緒に組み合わせてもよく、例えば式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の組み合わせを有する治療も可能である。グラム陽性およびグラム陰性細菌両方に対する活性を含む、広い範囲の抗細菌活性を有する本発明の化合物が、市中感染の経験的治療のため、地域社会で非常に役立つであろうことが認識されるであろう。相対的に、より限定された範囲、例えばグラム陽性細菌に対する活性を持つ本発明の化合物は、原因病原性生物が同定されている状況において、用いられる可能性がより高い。
【００６２】
［００６６］本発明は、薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤と一緒に、式（Ｉ）〜（ＸＩ）の化合物を含む、薬学的組成物を提供する。
【００６３】
［００６７］本発明はさらに、薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤と一緒に、式（Ｉ）〜（ＸＩ）の化合物の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。例えば、本発明の薬学的組成物には、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせて、式（ＶＩＩ）の化合物および式（ＩＸ）の化合物が含まれてもよい。
【００６４】
［００６８］本発明はまた、哺乳動物において、特にヒトにおいて、そして家畜動物において、細菌感染を治療する方法であって、式（Ｉ）〜（ＸＩ）の化合物、または本発明記載の組成物を、その必要がある患者に投与する工程を含む、前記方法も提供する。いくつかの態様において、細菌感染は、クロストリジウム属に基づく感染であり、そしてしばしば、クロストリジウム・ディフィシレ感染である。
【００６５】
［００６９］本発明は、細菌感染の治療において使用するための薬剤組成物の調製における、式（Ｉ）〜（ＸＩ）の化合物の使用をさらに提供する。
【００６６】
［００７０］本発明記載の化合物および組成物は、他の抗生物質から類推して、ヒトまたは獣医学的薬剤において使用するための、任意の好適な方法で投与するために、配合可能である。
【００６７】
［００７１］本発明記載の化合物および組成物を、任意の経路、例えば経口、局所、非経口、または直腸によって投与するために配合してもよい。組成物は、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、ロゼンジ、クリーム、座薬、軟膏、ジェル、ローション、シロップ、あるいは経口使用のために、または注射もしくは注入による非経口投与のために無菌型で配合可能な液体調製物、例えば溶液または懸濁物の形で調製されてもよい。
【００６８】
［００７２］経口投与のための錠剤およびカプセルは、単位投薬型であってもよく、そして例えば結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、またはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、スクロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤化（ｔａｂｌｅｔｔｉｎｇ）潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン；薬学的に許容されうる湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含む、慣用的な賦形剤を含有してもよい。通常の薬学的実施に周知の方法にしたがって、錠剤をコーティングしてもよい。
【００６９】
［００７３］経口液体調製物は、例えば、水性または油性懸濁物、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形であってもよいし、あるいは水または別の適切なビヒクルで、使用前に再構成するための乾燥製品として提示されてもよい。こうした液体調製物は、例えば懸濁剤、例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化食用油脂；乳化剤、例えばレシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油脂を含んでもよい）、例えばアーモンド油、油性エステル（例えばグリセリン）、プロピレングリコール、またはエチルアルコール；保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸；ならびに望ましい場合、慣用的なフレーバーおよび着色剤を含む、慣用的な添加剤を含有してもよい。
【００７０】
［００７４］局所投与を意図される本発明記載の組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、目の軟膏、点眼剤、点耳剤、浸透性包帯材、およびエアロゾルの形であってもよく、そして例えば保存剤、薬剤浸透を補助する溶媒、ならびに軟膏、ゲル、およびクリーム中の皮膚軟化剤を含む、適切な慣用的添加剤を含有してもよい。こうした局所配合物はまた、適合する慣用的キャリアー、例えばクリームまたは軟膏基剤、およびローションのためのエタノールまたはオレイルアルコールも含有してもよい。こうしたキャリアーは、配合物重量の約１％〜約９８％を構成してもよく；より一般的には配合物重量の約８０％までを構成するであろう。
【００７１】
［００７５］本発明記載の組成物を座薬として配合してもよく、座薬は、慣用的な座薬基剤、例えばココアバターまたは他のグリセリドを含有してもよい。
【００７２】
［００７６］非経口投与を意図される本発明記載の組成物は、好適に、液体単位投薬型中にあってもよく、化合物、および水が好ましい無菌ビヒクルを利用して、該投薬型を調製してもよい。化合物は、用いるビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁されてもまたは溶解されてもいずれでもよい。溶液を調製する際、化合物を注射用水中に溶解し、そして適切なバイアルまたはアンプル内に充填する前にフィルター滅菌し、次いで密封してもよい。好適には、例えば局所麻酔剤、保存剤、および緩衝剤を含む、慣用的な添加物をビヒクル中に溶解してもよい。溶液の安定性を増進するため、バイアル内に充填した後、組成物を凍結してもよく、そして真空下で水を除去してもよい；次いで、生じた凍結乾燥粉末をバイアル中に密封してもよく、そして使用前に液体を再構成するため、注射用水の付随バイアルを供給してもよい。溶解する代わりにビヒクル中に化合物を懸濁し、そして滅菌が、ろ過によっては達成不能であることを除いて、実質的に同じ方式で、非経口懸濁物を調製してもよい。代わりに、無菌ビヒクル中に懸濁する前に、酸化エチレンに曝露することによって、化合物を滅菌してもよい。好適には、化合物の均一な分布を促進するため、こうした懸濁物中には、界面活性剤または湿潤剤が含まれる。
【００７３】
［００７７］本発明記載の化合物または組成物を、適切に、抗細菌的に有効な量で患者に投与してもよい。いくつかの場合、本発明記載の化合物および組成物は、クロストリジウム属感染、そして特にクロストリジウム・ディフィシレ感染した患者を治療するのに有効な量で投与される。
【００７４】
［００７８］本発明記載の組成物は、適切には、投与法に応じて、本発明記載の化合物を重量０．１％〜、好ましくは重量１０〜６０％（組成物の総重量に基づいて）含有してもよい。
【００７５】
［００７９］本発明記載の化合物は、適切には、１．０〜１００ｍｇ／体重ｋｇの一日投薬量で患者に投与可能である。成人（およそ７０ｋｇ体重）に関しては、５０〜３０００ｍｇ、例えば約１５００ｍｇの本発明記載の化合物を毎日投与してもよい。適切には、成人のための投薬量は、１日あたり、５〜４０ｍｇ／ｋｇである。しかし、通常の臨床診療にしたがって、より高いまたはより低い投薬量を用いてもよい。
【００７６】
［００８０］本発明記載の組成物を単位投薬型で提示する際、各単位用量は、適切には、２５〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇの本発明記載の化合物を含んでもよい。
【実施例】
【００７７】
［００８１］例示目的のためにのみ、以下の実施例を提供し、そしてこれらは本発明の範囲を限定することを意図されない。
【００７８】
実施例１：合成法（キラル分離および触媒的不斉合成）
［００８２］以下の実施例および実験は、本発明を作製し、そして用いる方式およびプロセスを記載し、そして限定ではなく例示である。本明細書に記載するように、または化学業に存在することが知られる多様なプロセスによって、本発明の化合物、その塩、およびその中間体を調製するかまたは製造してもよい。
【００７９】
プロセス１：キラル分離を介した合成：
プロセスＩ
【００８０】
【化７】
2010504986.tif 000012
【００８１】
方法Ａ：
（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イル）−［３−（７−オキソ−４，７−ジヒドロ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−イルアミノ）−プロピル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製
【００８２】
【化８】
2010504986.tif 000013
【００８３】
［００８３］２００７年９月１１日に出願された、「Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｔｈｉｅｎｏｐｙｒｉｄｏｎｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」と題される、米国特許出願第１１／８５３，３１４号に記載される方法にしたがったラセミ混合物として、５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンを調製し、そしてテトラヒドロフラン（０．０２Ｍ）および１．５当量の水素化ナトリウム（ミネラルオイル中、６０％懸濁物として）と合わせた。反応を室温で３０分間攪拌させ、そして１．０４当量のＢｏｃ無水物を、部分に分けて（ｐｏｒｔｉｏｎ−ｗｉｓｅ）添加した。添加完了後、反応を一晩攪拌させた。溶媒を除去し、そしてシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、未精製物質を精製し、酢酸エチルおよびヘキサンの０〜１００％勾配で溶出して、黄色油として表題化合物を得た。
【００８４】
方法Ｂ：
［００８４］分離用キラルクロマトグラフィー（ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）によって、上述のラセミ混合物を単一の鏡像異性体に分離した。（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イル）−［３−（７−オキソ−４，７−ジヒドロ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−イルアミノ）−プロピル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルに関して、３００ｍｇの第一の（Ｒ−（＋）−鏡像異性体（式ＩＸ））および第二の（Ｓ−（−）−鏡像異性体）溶出鏡像異性体バッチが単離され、どちらもｅ．ｅ．＞９９％であった。
【００８５】
分離用ＨＰＬＣ条件
カラム：  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ；  ２５０ｘ２０ｍｍ；  Ｄｉａｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＬＴＤ
溶出剤：  ヘプタン／ＥｔＯＨ（９０／１０）
流速：  ６．０ｍｌ／分
ＵＶ：  ２５６ｎｍ
試料：  ５０ｍｇ／ｍｌ
注入体積：  ５００μｌ
保持時間：  Ｒ−（＋）−鏡像異性体、〜３７分。
【００８６】
Ｓ−（−）−鏡像異性体、〜４７分。
【００８７】
分析用ＨＰＬＣ条件
カラム：  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ；  １５０ｘ４．６ｍｍ；  Ｄｉａｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＬＴＤ
溶出剤：  ヘプタン／ＩＰＡ（９０／１０）
流速：  ０．５ｍｌ／分
ＵＶ：  ２５６、３２８ｎｍ
試料：  〜１ｍｇ／ｍｌ
注入体積：  ２０μｌ
保持時間：  Ｒ−（＋）−鏡像異性体、〜４１分。
【００８８】
Ｓ−（−）−鏡像異性体、〜４６分。
【００８９】
方法Ｃ：
［００８５］方法Ａと同様に調製したｔｅｒｔ−ブチル６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−４−イル（３−（７−オキソ−４，７−ジヒドロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−イルアミノ）プロピル）カルバメートのラセミ混合物を、分離用キラルクロマトグラフィー（ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）によって、単一鏡像異性体に分離した。１１３ｍｇの第一の溶出鏡像異性体バッチ（式ＶＩＩＩ、Ｒ−（＋）−鏡像異性体、ｅ．ｅ．＞９９％）および７０ｍｇの第二の溶出鏡像異性体バッチ（Ｓ−（−）−鏡像異性体、ｅ．ｅ．８５％）が単離された。この第二の溶出鏡像異性体を第二の分離実行によってさらに精製して、ｅ．ｅ．＞９９％で、５．５ｍｇのこの鏡像異性体を得た。
【００９０】
分離用ＨＰＬＣ条件
カラム：  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ；  ２５０ｘ２０ｍｍ；  Ｄｉａｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＬＴＤ
溶出剤：  ヘプタン／ＥｔＯＨ／Ｅｔ２ＮＨ（９５／５／０．２％）
流速：  １０ｍｌ／分
ＵＶ：  ２５６、３２８ｎｍ
試料：  ８５ｍｇ／ｍｌ
注入体積：  ８０μｌ
分析用ＨＰＬＣ条件
カラム：  Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ  １５０ｘ４．６ｍｍ；  Ｄｉａｃｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＬＴＤ
溶出剤：  ヘプタン／ＩＰＡ（９０／１０）
流速：  ０．５ｍｌ／分
ＵＶ：  ２５６、３２８ｎｍ
試料：  〜１ｍｇ／ｍｌ
注入体積：  ２０μｌ
保持時間：  Ｒ−（＋）−鏡像異性体、〜４１分。
【００９１】
Ｓ−（−）−鏡像異性体、〜４６分。
【００９２】
方法Ｄ：
［００８６］（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イル）−［３−（７−オキソ−４，７−ジヒドロ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−イルアミノ）−プロピル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、ジオキサン中の４．０Ｍ  ＨＣｌ中に取り、そして一晩攪拌させて、その間に、産物は溶液から油として出てきた（ｏｉｌｅｄ  ｏｕｔ  ｏｆ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）。ジオキサンのほぼ半量を蒸発によって除去し、そして残りを数時間攪拌した。産物は、オフホワイト固体として溶液から沈殿した（真空ろ過によってこの固体を単離し、そして真空下で乾燥させて、オフホワイト固体としての表題化合物を得た）。
【００９３】
方法Ｅ：
［００８７］（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イル）−［３−（７−オキソ−４，７−ジヒドロ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−５−イルアミノ）−プロピル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをＨＣｌ（ＴＨＦ中の濃ＨＣｌで調製した４．０Ｍ溶液）で処理した。これを一晩攪拌させた。溶媒を蒸発によって除去し、そして生じた白色固体をエーテルとともに攪拌した。真空ろ過によって固体を単離した。固体を単離し、そして真空下で乾燥させて、白色固体として表題化合物を得た（真空ろ過によってこの固体を単離し、そして真空下で乾燥させて、オフホワイト固体として表題化合物を得た）。
【００９４】
プロセスＩＩ：不斉還元を介した合成
プロセスＩＩ
【００９５】
【化９】
2010504986.tif 000014
【００９６】
５−（３−オキソプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエートＨＣｌ塩の調製、化合物７の例
中間体、２，２−ジメチル−５−（メチルスルファニル−チオフェン−３−イルアミノ−メチレン）−［１，３］ジオキサン−４，６−ジオンの調製
［００８８］３−チオフェンイソチオシアネート（４７２．５ｇ、３．３４ｍｏｌ）を,、ジメチルスルホキシド（１．９Ｌ）中の２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（４３３．２ｇ、３．００６ｍｏｌ）と混合した。反応温度を２０℃未満に維持しながら、トリエチルアミン（５１６ｍＬ、３．６７ｍｏｌ）を１３０分間に渡って１滴ずつ添加した。添加後、生じた混合物を室温で１６時間攪拌した。反応温度を２０℃未満に維持しながら、ヨードメタン（４２６．７ｇ、３．００６ｍｏｌ）を７０分間に渡ってゆっくり添加した。完全に添加した後、混合物を室温で１時間攪拌した。温度を３０℃未満に維持しながら、薄い水性塩酸溶液（３７％ＨＣｌの４６ｍＬを含有する水４．８Ｌ）をゆっくり添加して、産物を沈殿させた。混合物を２時間攪拌した。固体をろ過し、そして水でリンスした。生じた湿った固体をＥｔＯＨ（６Ｌ）中に懸濁し、そして次いで、減圧下で、溶媒を除去した。生じたスラリーを沸騰中のメタノール（４．０Ｌ）に溶解し、そして脱色木炭（Ｎｏｒｉｔブランド、１３０ｇ）で処理し、そして４０分間、還流下に維持した。熱い溶液をＣｅｌｉｔｅ５４３のパッドでろ過し、そしてフィルターケーキを沸騰中のメタノール（１Ｌ）でリンスした。ろ液を室温で２４時間静置した。固体をろ過し、そして乾燥させて、中間体、２，２−ジメチル−５−（メチルスルファニル−チオフェン−３−イルアミノ−メチレン）−［１，３］ジオキサン−４，６−ジオンの薄茶の結晶４０８．４ｇ（４５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．７６（ｓ，  ６Ｈ），  ２．３８（ｓ，  ３Ｈ），  ７．０９（ｄ，  １ＨＪ＝５  Ｈｚ），  ７．２５（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝３．２  Ｈｚ），  ７．３８（ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝３．２，  ５  Ｈｚ），  １２．７（ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）。
【００９７】
中間体、５−（（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）（チオフェン−３−イルアミノ）メチレン）−２，２−ジメチル−ｌ，３−ジオキサン−４，６−ジオンの調製
［００８９］水槽で、反応温度を２５℃未満に維持しながら、３，３−ジエトキシプロピルアミン（２１０．７ｇ、１．４３ｍｏｌ）を、部分で、ジクロロメタン（１．７Ｌ）およびメタノール（０．３６Ｌ）中の２，２−ジメチル−５−（メチルスルファニル−チオフェン−３−イルアミノ−メチレン）−［１，３］ジオキサン−４，６−ジオン（４０７．３ｇ、１．３６ｍｏｌ）の溶液に添加した。室温で１．５時間攪拌した後、反応混合物をジクロロメタン（０．８Ｌ）で希釈した。有機層を分離し、そして水性塩化アンモニウム溶液（４００ｍＬ、２００ｍＬの飽和ＮＨ４Ｃｌおよび２００ｍＬの水で作製）、塩水（３００ｍＬ）で洗浄し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥させた。減圧下で反応混合物を濃縮してダーク油を得た。キシレン（５００ｍｌ）を添加して、そして減圧下で混合物を濃縮して、中間体、５−（（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）（チオフェン−３−イルアミノ）メチレン）−２，２−ジメチル−ｌ，３−ジオキサン−４，６−ジオンを得た。生じたダーク油をさらに精製せずに、次の工程に直接用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．６５（ｍ，  ６Ｈ），  １．７３（ｓ，  ６Ｈ），  １．７８（ｍ，  ２Ｈ），  ２．９８（ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ＝６．４  Ｈｚ），  ３．４５（ｍ，  ２Ｈ），  ３．６０（ｍ，  ２Ｈ），  ４．５０（ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２  Ｈｚ），  ６．９８（ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１．６，  ５．２  Ｈｚ），  ７．０５（ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝１．２，  ３．２  Ｈｚ），  ７．３３（ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝３．２，  ５．２  Ｈｚ），  １０．２（ｓ，  １Ｈ），  １１．３（ｓ，  １Ｈ）。
【００９８】
中間体、５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）−７−オキソ−４，７−ジヒドロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸の調製
［００９０］５−（（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）（チオフェン−３−イルアミノ）メチレン）−２，２−ジメチル−ｌ，３−ジオキサン−４，６−ジオン（１．６２ｍｏｌ）を、キシレン（２．４Ｌ）中のヘキサメチルジシラザン（１．０８Ｌ、５．１８ｍｏｌ）の溶液中に懸濁し、そして還流下で２４時間加熱した。室温に冷却した後、減圧下で混合物を濃縮して、ダーク油を得た。ダーク油をメタノール（０．５Ｌ）で注意深く処理して、茶色固体を形成し、その後、エチルエーテル（１．６Ｌ）を添加した。生じた固体をろ過し、そしてＭｅＯＨ／エーテル（１：３）（０．８Ｌ）で洗浄した。真空下で固体を乾燥させて、ベージュ固体として、４３２．２ｇ（７８％）の望ましい中間体、５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）−７−オキソ−４，７−ジヒドロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ  ｄ６）  δ  １．０９（ｍ，  ６Ｈ），  １．９１（ｍ，  ２Ｈ），  ３．４０（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５８（ｍ，  ２Ｈ），  ４．０６（ｓ，  １Ｈ），  ４．６０（ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２  Ｈｚ），  ７．２８（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝４．８  Ｈｚ），  ８．０５（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝４．８  Ｈｚ），  ９．９４（ｍ，  １Ｈ），  １１．８（ｓ，  １Ｈ）。
【００９９】
中間体、ナトリウム５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オレエートの調製
［００９１］５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）−７−オキソ−４，７−ジヒドロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸（４３２ｇ、１．２７ｍｏｌ）を、ナトリウムメトキシド（９５％純粋、７５．８ｇ、１．３３ｍｏｌ）と混合し、そしてキシレン（２Ｌ）中に懸濁した。生じた混合物を、還流下で２時間加熱した。反応混合物を攪拌しながら、漸次、室温に冷却して、淡茶色固体を得た。ろ過によって固体を収集し、そしてトルエンで洗浄し、そして真空下、５０〜６０℃で４８時間乾燥させて、望ましい中間体、ナトリウム５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オレエート（固体）を得た。この未精製産物をさらに精製せずに、次の工程に用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ  ｄ６）  δ  １．０８（ｍ，  ６Ｈ），  １．７２（ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  ３．１５（ｍ，  ２Ｈ），  ４．５５（ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝６  Ｈｚ），  ６．２２（ｓ，  １Ｈ），  ６．９８（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２  Ｈｚ），  ７．５３（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．２  Ｈｚ）。
【０１００】
中間体、５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−  ７−イルベンゾエートの調製
［００９２］ナトリウム５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オレエート（４４５．７ｇ、１．４０ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２．８Ｌ）中に懸濁した。安息香酸無水物（３３２．９ｇ、１．４７ｍｏｌ）を、室温で、部分で添加した。添加後、反応混合物を室温で３時間攪拌した。混合物を酢酸エチル（６Ｌ）で希釈した。生じた有機溶液を水（６Ｌ）で洗浄した。分離した水性層を酢酸エチル（２Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そしてろ過した。減圧下で溶媒を除去し、そして真空下で乾燥させて、ダーク油として、望ましい中間体、５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエートを得た。この産物をさらに精製せずに、次の工程に用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．０９（ｍ，  ６Ｈ），  １．９９（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５０（ｍ，  ４Ｈ），  ３．７０（ｍ，  ２Ｈ），  ４．６０（ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．６  Ｈｚ），  ７．３０（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝４．８  Ｈｚ），  ７．５５（ｍ，  ３Ｈ），  ７．６７（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝４．８  Ｈｚ），  ８．２４（ｍ，  ２Ｈ）。
【０１０１】
表題化合物、５−（３−オキソプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエートＨＣｌ塩の調製、化合物７の例
［００９３］上記由来の未精製５−（３，３−ジエトキシプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエート（６７７．３ｇ、１．６８ｍｏｌ）を３．０ＬのＴＨＦに溶解した。次いで、氷水槽で反応温度を２０℃未満に維持しながら、１２Ｎ  ＨＣｌ（１．６８ｍｏｌ、０．１４Ｌ）を１滴ずつ添加した。５分間攪拌した後、固体が沈殿した。生じた混合物を室温で１時間攪拌し、その後、酢酸エチル（２．０Ｌ）を添加した。混合物を３０分間攪拌した。固体をろ過し、酢酸エチルでリンスし（２５０ｍｌｘ２）、そして次いで、減圧下、５５℃で乾燥させて、淡茶色固体として、表題化合物、５−（３−オキソプロピルアミノ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエートＨＣｌ塩を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ  ｄ６）  δ  ２．２０（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５６（ｍ，  ２Ｈ），  ６．３１（ｔ，  １Ｈ，  Ｊ＝３．６  ＮＨｚ），  ７．８３−７．８７（ｍ，  ２Ｈ），  ７．９６（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝６．０  Ｈｚ），  ８．１６−８．２０（ｍ，  ２Ｈ），  ８．３５（ｄ，  １Ｈ，  Ｊ＝５．６  Ｈｚ），  １０．２０（ｓ，  １Ｈ）。
【０１０２】
方法Ｆ：
６，８−ジブロモ−クロマン−４（Ｓ）−オールの調製
［００９４］アセトニトリル中の６，８−ジブロモクロマン−４−オン（０．３Ｍ）および５／２  ギ酸／トリエチルアミン（体積３０％）を含有する混合物に、（ｌＳ，２Ｓ）−（＋）−Ｎ−ｐ−トシル−ｌ，２−ジフェニルエチレンジアミン（１ｍｏｌ％）およびジクロロ（ｐ−シメン）−ルテニウム（ＩＩ）二量体（０．５ｍｏｌ％）を添加した。２４時間攪拌した後、反応を酢酸エチルで希釈し、そして塩水／重炭酸ナトリウム（１：１）で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮して、黄褐色固体として表題化合物を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５９（ｄ，ｌＨ），  ７．４１（ｄ，  １Ｈ），  ４．７８（ＡＢｑ，  １Ｈ），  ４．３８（ｍ，  ２Ｈ），  ２，０８（ｍ，  ２Ｈ），  １．９１（ｄ，  １Ｈ）。
【０１０３】
方法Ｇ：
４（Ｒ）−アジド−６，８−ジブロモ−クロマンの調製
［００９５］テトラヒドロフラン（０．１７Ｍ）中に６，８−ジブロモ−クロマン−４（Ｓ）−オールを含有する溶液および１．２当量のジフェニルホスホリルアジドを、室温で１５分間攪拌した。溶液を１０℃に冷却して、そして２．５当量のｌ，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エンを添加した。混合物を、漸次、室温に温めながら攪拌して、そして４８時間維持した。混合物を酢酸エチルで希釈し、そして塩水、その後、水で洗浄した。有機相を濃縮して、黄褐色油として、表題化合物を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．６５（ｄ，  １Ｈ），  ７．３２（ｄ，  １Ｈ），  ４．５７（ｔ，  １Ｈ），  ４．４３（ｍ，  １Ｈ），  ４．３１（ｍ，  １Ｈ），  ２．１８（ｍ，  １Ｈ），  ２．０８（ｍ，  １Ｈ）。
【０１０４】
方法Ｈ：
６，８−ジブロモ−クロマン−４（Ｒ）−イルアミン塩酸塩の調製
［００９６］テトラヒドロフラン（０．１６Ｍ）中の４（Ｒ）−アジド−６，８−ジブロモ−クロマンの氷冷溶液に、１．２当量のトリメチルホスフィンを添加した。混合物を室温に温め、そして１６時間維持した。混合物の濃縮によって、未精製アミンを得た。これをアセトニトリル（０．２０Ｍ）に溶解し、そして２当量の塩酸を添加した。混合物を１６時間攪拌し、そして固体をろ過し、アセトニトリルで洗浄し、そして乾燥させて、オフホワイト固体として、表題化合物を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ７．７５（ｄ，  １Ｈ），  ７．６０（ｄｄ，  １Ｈ），  ４．６２（ｔ，  １Ｈ），  ４．４０（ｍ，  ２Ｈ），  ２．４０（ｍ，  １Ｈ），  ２．２０（ｍ，  １Ｈ）。
【０１０５】
方法Ｉ：
５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミン）プロピルアミノ］−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエートの調製
［００９７］５−（３−オキソプロピルアミン）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエート塩酸塩を、テトラヒドロフラン（０．３５Ｍ）中の１当量の６，８−ジブロモ−クロマン−４（Ｒ）−イルアミン塩酸塩と混合し、その後、３当量のトリエチルアミンを添加した。１時間攪拌した後、１．３当量のトリアセトキシホウ化水素ナトリウムを添加し、そして混合物を２時間攪拌した。反応を酢酸エチルで希釈し、そして水性重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ろ過し、溶媒を除去し、そしてジクロロメタン中の０〜１０％メタノールで溶出させるカラムクロマトグラフィーによって未精製産物を精製して、茶色油として、表題化合物を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．２４（ｍ，  ２Ｈ），  ７．７０（ｍ，  １Ｈ），  ７．５６（ｍ，  ３Ｈ），  ７．５０（ｄ，  １Ｈ），  ７．４０（ｄ，  １Ｈ），  ７．２４（ｄ，  １Ｈ），  ６．５８（ｍ，  １Ｈ），  ４．３４（ｍ，  ２Ｈ），  ３．７７（ｔ，  １Ｈ），  ３．５６（ｍ，  ２Ｈ），  ２．８５（ｍ，  ２Ｈ），  ２．０（ｍ，  ２Ｈ）
方法Ｊ：
５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミン）プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩の調製
［００９８］酢酸エチル（２．５Ｍ）およびテトラヒドロフラン（１．２Ｍ）中、５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミン）プロピルアミノ］−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルベンゾエートを含有する溶液に、メタノール中の２Ｍアンモニア２．５当量を添加した。２４時間攪拌した後、混合物を酢酸エチルで希釈し、そして固体をろ過し、酢酸エチルでリンスし、そして乾燥させた。ジクロロメタン中の０〜１０％アンモニア／メタノールで溶出させるカラムクロマトグラフィーによって、未精製物質を精製して、遊離塩基として、表題化合物を得た。これを無水エタノール（０．４Ｍ）に溶解し、そして３当量の４Ｎ塩酸を添加した。混合物を７５℃に加熱し、そして脱色木炭で処理した。生じた混合物をＣｅｌｉｔｅのパッドでろ過し、そしてろ過ベッドを温かいエタノール／４Ｎ塩酸でリンスした。無色固体が形成されるまで、ろ液を室温で１６時間攪拌した。固体をろ過し、エタノール／２Ｎ塩酸でリンスし、そして真空下、９５〜１００℃で乾燥させて、オフホワイト固体として、ターゲット化合物を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０４（ｄ，  １Ｈ），  ７．７７（ｓ，  １Ｈ），  ７．７１（ｓ，  １Ｈ），  ７．４５（ｄ，  １Ｈ），  ６．２６（ｓ，  １Ｈ），  ４．６２（ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ），  ４．５２−４．３８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５９（ｔ，  ２Ｈ），  ３．４１（ｍ，  １Ｈ），  ３．２８（ｍ，  １Ｈ），  ２．４１（ｍ，  ２Ｈ），  ２．１８（ｍ，  ２Ｈ）。
【０１０６】
実施例２：  ５−［３−（（Ｒ）（＋）６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（式ＩＸ、本発明の化合物）の合成
［００９９］プロセスＩ（方法Ａ、ＢおよびＤ）に記載するような合成反応を用いて、表題化合物を調製し、そして第一の溶出鏡像異性体として単離した。あるいは、プロセスＩＩ（方法Ｆ〜Ｊ）にしたがって、表題化合物を調製した。表題化合物は、どちらの場合も、オフホワイト固体として単離された。
【０１０７】
【化１０】
2010504986.tif 000015
【０１０８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０４（ｄ，  １Ｈ），  ７．７７（ｓ，  １Ｈ），  ７．７１（ｓ，  １Ｈ），  ７．４５（ｄ，  １Ｈ），  ６．２６（ｓ，  １Ｈ），  ４．６２（ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ），  ４．５２−４．３８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５９（ｔ，  ２Ｈ），  ３．４１（ｍ，  １Ｈ），  ３．２８（ｍ，  １Ｈ），  ２．４１（ｍ，  ２Ｈ），  ２．１８（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５１４（Ｍ＋ｌ）。旋光度：  ［α］５８９＝＋２３．０６（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５０３ｍＭ、２０℃）。
【０１０９】
［００１００］５−［３−（（Ｒ）（＋）６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（式ＩＸ）およびクロストリジウム・ディフィシレＭｅｔＲＳの共結晶を成長させた。共結晶のＸ線回折は１．７２Å解像度パターンを提供した。化合物ＩＸの三次元構造は、明らかにＲ絶対配置と指定された。
【０１１０】
実施例３：  ５−［３−（（Ｓ）（−）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（比較化合物）の合成
［００１０１］プロセス１（方法Ａ、ＢおよびＤ）に記載するような合成反応を用いて、表題化合物を調製し、そして第二の溶出鏡像異性体として単離した。あるいは、方法Ｆにおいて、（ｌＲ，２Ｒ）−（−）−Ｎ−ｐ−トシル−ｌ，２−ジフェニルエチレンジアミン（１ｍｏｌ％）およびジクロロ（ｐ−シメン）−ルテニウム（ＩＩ）二量体を使用し、その後、方法Ｇ〜Ｊを用いる、プロセスＩＩにしたがって、表題化合物を調製した。表題化合物は、どちらの場合も、オフホワイト固体として単離された。
【０１１１】
【化１１】
2010504986.tif 000016
【０１１２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０４（ｄ，  １Ｈ），  ７．７７（ｓ，  １Ｈ），  ７．７１（ｓ，  １Ｈ），  ７．４５（ｄ，  １Ｈ），  ６．２６（ｓ，  １Ｈ），  ４．６２（ｂｒ，  ｔ，  ４．５２−４．３８（ｍ  ２Ｈ），  ３．５９（ｔ，  ２Ｈ），  ３．４１（ｍ，  １Ｈ），  ３．２７（ｍ，  １Ｈ），  ２．４１（ｍ，  ２Ｈ），  ２．１７（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５１４（Ｍ＋ｌ）。旋光度：  ［α］５８９＝−２１．７０（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５０７ｍＭ、２０℃）。
【０１１３】
実施例４：  ５−［３−（（Ｒ）（＋）−８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（式ＶＩＩ、本発明の化合物）の合成
［００１０２］実施例１（方法Ａ、ＢおよびＤ）に記載するような合成反応を用いて、表題化合物を調製し、そして第一の溶出鏡像異性体として単離した：
【０１１４】
【化１２】
2010504986.tif 000017
【０１１５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０５（ｄ，  １Ｈ），  ７．６６（ｓ，  １Ｈ），  ７．５６（ｓ，  １Ｈ），  ７．４３（ｄ，  １Ｈ），  ６．２５（ｓ，  １Ｈ），  ４．６２（ｔ，  １Ｈ），  ４．５２−４．３８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５８（ｔ，  ２Ｈ），  ３．３９（ｍ，  １Ｈ），  ３．２９（ｍ，  １Ｈ），  ２．４１（ｍ，  ２Ｈ），  ２．１７（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ４７０（Ｍ＋ｌ）。旋光度：  ［α］５８９＝＋３６．８６（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５１０ｍＭ、２０℃）。
【０１１６】
実施例５：  ５−［３−（（Ｓ）（−）−８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（比較化合物）の合成
［００１０３］プロセス１（方法Ａ、ＢおよびＤ）に記載するような合成反応を用いて、表題化合物を調製し、そして第二の溶出鏡像異性体として単離した：
【０１１７】
【化１３】
2010504986.tif 000018
【０１１８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０５（ｄ，  １Ｈ），  ７．６６（ｓ，  １Ｈ），  ７．５９（ｓ，  １Ｈ），  ７．４５（ｄ，  １Ｈ），  ６．２６（ｓ，  １Ｈ），  ４．６３（ｔ，  １Ｈ），  ４．５２−４．３８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．５７（ｔ，  ２Ｈ），  ３．４１（ｍ，  １Ｈ），  ３．３０（ｍ，  １Ｈ），  ２．４２（ｍ  ２Ｈ），  ２．１８（ｍ  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ４７０（Ｍ＋１）。旋光度：  ［α］５８９＝−３５．２４（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５００ｍＭ、２０℃）。
【０１１９】
実施例６：  ２−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−ｌＨ−キノリン−４−オン二塩酸塩（式Ｘ、本発明の化合物）の合成
［００１０４］実施例１（方法Ａ、ＢおよびＤ）に記載するような合成反応を用いて、以下の化合物を調製し、そして第一の溶出鏡像異性体として単離した：
【０１２０】
【化１４】
2010504986.tif 000019
【０１２１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．１０（ｄ，  １Ｈ），  ７．９０（ｂｒ，  １Ｈ），  ７．７８−７．７５（ｍ，  ３Ｈ），  ７．４８（ｔ，  １Ｈ），  ６．３８（ｓ，  １Ｈ），  ４．６５（ｔ，  １Ｈ），  ４．４８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．７０（ｍ，  ２Ｈ），  ３．４４（ｍ，  １Ｈ），  ３．３１（ｍ，  １Ｈ），  ２．４８（ｍ，  １Ｈ），  ２．４０（ｍ，  １Ｈ），  ２．２３（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５０８（Ｍ＋１）。旋光度：  ［α］５８９＝＋２３．２２（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５００  ｍＭ、２０℃）．
実施例７：  ２−［３−（（Ｓ）（−）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−ｌＨ−キノリン−４−オン二塩酸塩（比較化合物）の合成
［００１０５］実施例１（方法Ａ、ＢおよびＤ）に記載するような合成反応を用いて、以下の化合物を調製し、そして第二の溶出鏡像異性体として単離した：
【０１２２】
【化１５】
2010504986.tif 000020
【０１２３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．１０（ｄ，  １Ｈ），  ７．９０（ｂｒ，  １Ｈ），  ７．７８−７．７５（ｍ，  ３Ｈ），  ７．４８（ｔ，  １Ｈ），  ６．３８（ｓ，  １Ｈ），  ４．６５（ｔ，  １Ｈ），  ４．４８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．７０（ｍ，  ２Ｈ），  ３．４４（ｍ，  １Ｈ），  ３．３１（ｍ，  １Ｈ），  ２．４８（ｍ，  １Ｈ），  ２．４０（ｍ，  １Ｈ），  ２．２３（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５０８（Ｍ＋１）。旋光度：  ［α］５８９＝−２４．５１（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５０６ｍＭ、２０℃）。
【０１２４】
実施例８：  ５−［３−（（Ｒ）（＋）−６，８−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−  プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン三塩酸塩（式ＶＩＩＩ、本発明の化合物）の合成
［００１０６］実施例１（方法Ａ、ＣおよびＥ）に記載するような合成反応を用いて、以下の化合物を調製し、そして第一の溶出鏡像異性体として単離した。あるいは、プロセスＩＩ（方法Ｆ〜Ｊ）にしたがって、表題化合物を調製した。表題化合物は、どちらの場合も、オフホワイト固体として単離された。
【０１２５】
【化１６】
2010504986.tif 000021
【０１２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０５（ｄ，  １Ｈ），  ７．５８（ｓ，  １Ｈ），  ７．４４（ｄ，  １Ｈ），  ７．４２（ｓ，  １Ｈ），  ６．２５（ｓ，  １Ｈ），  ４．４８（ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ），  ３．６３−３．５３（ｍ，  ４Ｈ），  ３．３８（ｍ，  １Ｈ），  ３．２１（ｍ，  １Ｈ），  ２．４３（ｍ，  １Ｈ），  ２．１４（ｍ，  ２Ｈ），  ２．０７（ｍ，  １Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５１３（Ｍ＋ｌ）。旋光度：  ［α］５８９＝＋７２．２６（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．５０７ｍＭ、２０℃）。
【０１２７】
実施例９：  ５−［３−（（Ｓ）（−）−６，８−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン三塩酸塩（比較化合物）の合成
［００１０７］実施例１（方法Ａ、ＣおよびＥ）に記載するような合成反応を用いて、以下の化合物を調製し、そして第二の溶出鏡像異性体として単離した。あるいは、方法Ｆにおいて、（ｌＲ，２Ｒ）−（−）−Ｎ−ｐ−トシル−ｌ，２−ジフェニルエチレンジアミン（１ｍｏｌ％）およびジクロロ（ｐ−シメン）−ルテニウム（ＩＩ）二量体を使用し、その後、方法Ｇ〜Ｊを用いる、プロセスＩＩにしたがって、表題化合物を調製した。表題化合物は、どちらの場合も、オフホワイト固体として単離された。
【０１２８】
【化１７】
2010504986.tif 000022
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ８．０４（ｄ，  １Ｈ），  ７．５８  ｓ，  １Ｈ），  ７．４３（ｄ，  １Ｈ），  ７．４２（ｓ，  １Ｈ），  ６．２３（ｓ，  １Ｈ），  ４．４８（ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ），  ３．６３−３．５２（ｍ，  ４Ｈ），  ３．３７（ｍ，  １Ｈ），  ３．２２（ｍ，  １Ｈ），  ２．４２（ｍ，  １Ｈ），  ２．２０−２．００（ｍ，  ３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５１３（Ｍ＋ｌ）。
【０１３０】
実施例１０：  ５−［３−（（Ｒ）−５，７−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−ｌ−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＶＩ、本発明の化合物）
［００１０８］プロセスＩＩ（方法Ｆ〜Ｊ）にしたがって、表題化合物を調製した。オフホワイト固体として、表題化合物を単離した。
【０１３１】
【化１８】
2010504986.tif 000023
【０１３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ７．６８（ｄ，  １Ｈ），  ７．５９（ｄ，  ２Ｈ），  ７．００（ｄ，ｌＨ），  ５．５７（ｓ，  １Ｈ），  ３．８０（ｔ，  １Ｈ），  ３．３２（ｔ，  ２Ｈ），  ２．７６（ｍ，  ３Ｈ），  ２．６１（ｍ，  １Ｈ），  １．９７（ｍ，  １Ｈ），  １．８６（ｍ，  ４Ｈ），  １．７２（ｍ，  １Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５１２（Ｍ＋ｌ）。旋光度：  ［α］５８９＝−２２．３０（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．８７０ｍＭ、２０℃）。
【０１３３】
実施例１１：  ５−［３−（（Ｓ）−５，７−ジブロモ−２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＸＩ、本発明の化合物）
［００１０９］プロセスＩＩ（方法Ｆ〜Ｊ）にしたがって、表題化合物を調製した。オフホワイト固体として、表題化合物を単離した。
【０１３４】
【化１９】
2010504986.tif 000024
【０１３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ７．６９（ｄ，  １Ｈ），  ７．４６（ｄ，  ２Ｈ），  ７．０６（ｄ，  １Ｈ），  ５．５４（ｓ，  １Ｈ），  ４．６０（ｍ，  ２Ｈ），  ４．４７（ｍ，  １Ｈ），  ３．３０（ｍ，  ２Ｈ），  ２．７３（ｍ，  １Ｈ），  ２．６１（ｍ，  １Ｈ），  １．８０（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５００（Ｍ＋ｌ）。旋光度：  ［α］５８９＝−１．９３（ｃ＝ＭｅＯＨ中、０．７２５ｍＭ、２０℃）。
【０１３６】
実施例１２：  ５−［３−（（Ｒ）−５，７−ジブロモ−２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（比較化合物）
［００１１０］方法Ｆにおいて、（ｌＲ，２Ｒ）−（−）−Ｎ−ｐ−トシル−ｌ，２−ジフェニルエチレンジアミン（１ｍｏｌ％）およびジクロロ（ｐ−シメン）−ルテニウム（ＩＩ）二量体を使用し、その後、方法Ｇ〜Ｊを用いる、プロセスＩＩにしたがって、表題化合物を調製した。オフホワイト固体として、表題化合物を単離した。
【０１３７】
【化２０】
2010504986.tif 000025
【０１３８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  δ  ７．７０（ｄ，  １Ｈ），  ７．４８（ｄ，  ２Ｈ），  ７．０６（ｄ，  １Ｈ），  ５．５６（ｓ，  １Ｈ），  ４．６３（ｍ，  ２Ｈ），  ４．５０（ｄｄ，  １Ｈ），  ３．３０（ｍ，  ２Ｈ），  ２．７５（ｍ，  １Ｈ），  ２．６３（ｍ，  １Ｈ），  １．８１（ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：  Ｍ／Ｚ  ５００（Ｍ＋ｌ）。
【０１３９】
実施例１３：ＭｅｔＲＳの発現および精製
［００１１１］以下の実施例は、実施例１４および１５に示す機能アッセイにおいて有用な、Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳの発現および精製を例示する。
【０１４０】
［００１１２］過剰産生ベクターのクローニング：  Ｎ末端で６Ｈｉｓタグ化されたＣ．ディフィシレＭｅｔＲＳを増幅し、そしてｐＥＴｃｏｃｏ−２にクローニングした。以下のプライマーを用いて、ゲノムＤＮＡからＤＮＡを増幅した：  ５’−ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＧＣＡＡＡＣＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＴＧＴＡＡＣ−３’（順方向）（配列番号１）、５’−ＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＴＴＣＴＡＣＴＡＡＣＧＡＡＣＣＴＣＧＧＡＴＣＣ−３’（逆方向）（配列番号２）。増幅されたＤＮＡを、ＳｐｈｌおよびＨｉｎｄＩＩＩ制限エンドヌクレアーゼで処理し、消化後にこれらの酵素を熱不活化した。断片をエタノール沈殿させ、そして同じ酵素に加えてエビ（ｓｈｒｉｍｐ）アルカリホスファターゼで処理しておいたｐＥＴｃｏｃｏ−２ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）と合わせた。断片を連結し、そして連結混合物を、コンピテントＤＨ１０大腸菌に形質転換した。形質転換体を、５０ｕｇ／ｍｌアンピシリンとともに、グルコースを加えたＦ培地上にプレーティングした。グルコース中の増殖は、複製因子Ｔｒｆ  Ａの発現を駆動するｐＢＡＤプロモーターの抑制状態を維持し、したがって、低コピー数が維持された。両方向で、挿入物を配列決定することによって、生じた発現クローン、ｐＥＴｃｏｃｏ−Ｃｄｉｆｆ−ＭＲＳを確認した。
【０１４１】
［００１１３］Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳの精製。発現ベクター、ｐＥＴｃｏｃｏ−Ｃｄｉｆｆ−ＭＲＳを、Ｒｏｓｅｔｔａ  ＤＥ３発現株に形質転換し、そしてこれを用いて、１０ｕｇ／ｍＬクロラムフェニコール、５０ｕｇ／ｍＬアンピシリン、０．２％グルコースを補った４リットルのＦ培地に接種した。ＯＤ  ０．６６で、１ｍＭ  ＩＰＴＧを用いて培養を誘導した。誘導４時間後、細胞を採取した（収量＝３８ｇ細胞ペレット）。−２０℃で保存しておいたＴｒｉｓ−スクロース中の凍結細胞（３９ｇ細胞）の１：１懸濁物７８ｇを、あらかじめ４５℃に温めておいた１０７．２５ｍｌのＴｒｉｓ−スクロース緩衝液に添加することによって、ペレットにした細胞を溶解した（２．７５ｍｌ／細胞ｇ）。攪拌混合物に、１．９５ｍｌの０．５Ｍ  １，４−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）（０．０５ｍｌ／細胞ｇ）および９．７５ｍｌの溶解緩衝液（ｐＨ  ７．５に調整したＴｒｉｓ−スクロース中の２Ｍ  ＮａＣｌ、０．３Ｍスペルミジン）（０．２５ｍｌ／細胞ｇ）を添加した。スラリーのｐＨをｐＨ試験紙で試験し、そして５０ｍｌの２Ｍ  Ｔｒｉｓ塩基を添加することによって、ｐＨ  ８．０に調整した。２０ｍｌのＴｒｉｓ−スクロース緩衝液中で、リゾチーム（１１７ｍｇ）を添加した（３ｍｇリゾチーム／細胞ｇ）。スラリーを遠心ボトルに分配し、そして４℃で１時間インキュベーションした後、３７℃で４分間インキュベーションした。遠心分離（２３，０００ｘｇ、６０分間、４℃）によって、不溶性細胞構成要素を除去した。回収した上清（１９２ｍｌ）は分画Ｉを構成した。装填緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．５、１０％グリセロール、４０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ６．８、および７ｍＭベータメルカプトエタノール）中で平衡化させた１５ｍＬ  Ｎｉ−ＮＴＡカラム上に、分画Ｉを装填した。１０カラム体積の洗浄緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．５、１０％グリセロール、８００ｍＭ  ＫＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ６．８、および７ｍＭベータメルカプトエタノール）でカラムを洗浄した。０．５ｍＬ／分の洗浄緩衝液から溶出緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．５、１０％グリセロール、４０ｍＭ  ＫＣｌ、２５０ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ６．８、および７ｍＭベータメルカプトエタノール）の１０カラム体積勾配でタンパク質を溶出させて、３ｍＬ分画を収集した。分画を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってタンパク質に関して分析した。Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳ  ｔＲＮＡチャージングアッセイにおいて、分画をアッセイした。ピーク活性を含有する分画をプールして、分画ＩＩ（１．３ｍｇ／ｍｌで６０ｍｇ）を形成した。分画ＩＩは、比活性３．２ｘ１０５単位／ｍｇを有した。クーマシーブルーで染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの濃度測定に基づいて、純度は９７％より高いと概算された。
【０１４２】
実施例１４：鏡像異性化合物は、Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳの強力な阻害剤である
［００１１４］本発明の化合物をアッセイして、ＭｅｔＲＳを阻害する能力を決定した。アッセイを以下のように行った：
反応混合物（１ｍｌあたり）
【０１４３】
【表２】
2010504986.tif 000026
【０１４４】
［００１１５］２０μｌの適切に希釈した純粋な酵素（阻害剤とあらかじめインキュベーションしたもの）を２５μｌの反応混合物に、室温で１０分間添加することによって、各反応を開始した。ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）ＳＰＡビーズ（０．８３３ｍｇ／ｍｌ）を含有する、１５０μｌの１６７ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ  ２．１５を添加することによって、反応を終結させる。ビーズへの放射標識産物の結合によって、同位体が十分に近接して、トリチウムから放射線照射されて、ビーズ内のシンチラントが励起することが可能になる。いかなる未結合放射標識も、このエネルギー移動を可能にするほどシンチラントに十分に近接せず、したがって、シグナルはまったく生成されない。反応終結後、プレートをＭｉｓｔｒａｌ  ３０００Ｅプレート遠心分離装置中、２５００ｒｐｍで５分間回転させる（あるいは１時間静置させる）。９６ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ）中で、アッセイを行う。ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ  ９６ウェルカウンター）上でプレートを計測する。
【０１４５】
試薬
［００１１６］混合大腸菌ＭＲＥ  ６００  ｔＲＮＡおよびＡＴＰをＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍより購入し、Ｌ−［メチル−３Ｈ］メチオニンおよびホスホジエステラーゼ・シンチレーション近接（ＳＰＡ）ビーズをＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈより購入し、そして他の試薬をＳｉｇｍａより購入した。
【０１４６】
結果
［００１１７］すべてＲ鏡像異性体である本発明の純粋な鏡像異性体（実施例２、４、６、８、１０）、および（実施例１１）Ｓ鏡像異性体は、ある範囲で、クロストリジウム・ディフィシレＭｅｔＲＳを非常に強力に阻害した（Ｋｉ＝１５〜２５ｐＭ）。すべて、哺乳動物酵素に関して、非常に選択的であった（ラットＭｅｔＲＳをまったく阻害しなかった）。これらの実施例のラセミ混合物は、純粋な鏡像異性体よりも、およそ５０％低い活性を有した。
【０１４７】
［００１１８］比較すると、すべてＳ鏡像異性体である反対の立体配置異性体（実施例３、５、７、９）、および（実施例１２）Ｒ鏡像異性体は、ある範囲で、クロストリジウム・ディフィシレＭｅｔＲＳを非常に弱くしか阻害しなかった（Ｋｉ＝２４，０００〜８０，０００ｐＭ）。これは、反対の立体配置の異性体間での、予期されぬ劇的な活性の相違である。さらに、このデータは、本発明の化合物が、Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳの阻害に向かう、強い選択性を示すが、哺乳動物ＭｅｔＲＳに向かう阻害活性をほとんどまたはまったく持たないことを示す。ＭｅｔＲＳ阻害剤は、メチオニンの競合的阻害剤およびＡＴＰの非競合的阻害剤である。
【０１４８】
実施例１５：鏡像異性化合物は、Ｃ．ディフィシレに対する強力な抗細菌活性を有する
［００１１９］本発明の化合物（式（ＶＩ）〜（ＸＩ））を、Ｃ．ディフィシレ増殖を阻害する能力に関してもまたアッセイした。ＣＬＳＩにしたがった標準的なアガーに基づくアッセイを用いて、ＭＩＣ９０（Ｃ．ディフィシレの９０％の増殖を阻害するのに必要な最小阻害濃度）を決定した。
【０１４９】
［００１２０］生物：  Ｃ．ディフィシレの非反復臨床単離体コレクションに対する抗細菌活性に関して、すべての化合物を試験した。２０％グリセロールを補ったＢｒｕｃｅｌｌａブロス中で、生物を凍結保存した。冷凍庫から生物を取り出し、そしてＣＤＣアガー上で２回継代培養して、純度および増殖を確実にした。嫌気性条件下で、プレートを少なくとも２４時間インキュベーションした。形態；黄色、ガラス粉末の質感および特徴的な臭いに関して細菌コロニーを調べた。試験した対照生物は、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ  ２５２８５であった。
【０１５０】
［００１２１］抗微生物感受性試験：  ＣＬＳＩ指針（ＣＬＳＩ、Ｍ１１−Ａ２）にしたがって、ビタミンＫ１、ヘミンおよび５％ヒツジ溶解血（ｌａｋｅｄ  ｓｈｅｅｐ  ｂｌｏｏｄ）を補充したＢｒｕｃｅｌｌａアガー上、アガー希釈法によって、抗微生物感受性試験を行った。試験化合物を連続希釈して、そして融解した補充Ｂｒｕｃｅｌｌａアガーに添加した。各抗微生物プレートシリーズの接種前および後に、薬剤不含プレートに接種し、そしてこれらを増殖対照として用いた。薬剤プレート２セットの後に、薬剤不含プレート上、嫌気性／好気性増殖対照を実行した。細菌コロニーをＢｒｕｃｅｌｌａブロス中に懸濁して、０．５  ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準のものと等しい濁度にして、そして１０５ＣＦＵ／スポットを送達するＳｔｅｅｒｓレプリケーターで、プレートに適用した。嫌気性条件下で、プレートを３５℃で２４時間インキュベーションした後、結果を読み取った。最小阻害濃度（ＭＩＣ）は、増殖を完全に阻害するか、または薬剤不含増殖対照のものに比較して、増殖の見かけに顕著な減少を引き起こす濃度であった。
【０１５１】
［００１２２］結果：すべてＲ鏡像異性体である本発明の純粋な鏡像異性体（実施例２、４、６、８、１０）、および（実施例１１）Ｓ鏡像異性体は、クロストリジウム・ディフィシレに対して、非常に強力な抗細菌活性を有した（ＭＩＣ９０＝０．２５μｇ／ｍｌ〜４．０μｇ／ｍｌ）。これらの実施例のラセミ混合物は、純粋な鏡像異性体よりも、およそ５０％低い活性を有した（ＭＩＣ９０＝０．５０μｇ／ｍｌ〜８．０μｇ／ｍｌ）。
【０１５２】
［００１２３］比較すると、すべてＳ鏡像異性体である反対の立体配置の異性体（実施例３、５、７、９）、および（実施例１２）Ｒ鏡像異性体は、クロストリジウム・ディフィシレに対して、非常に弱い抗細菌活性を有した（ＭＩＣ９０＝＞８．０μｇ／ｍｌ〜＞３２．０μｇ／ｍｌ）。
【０１５３】
［００１２４］これらの結果は、典型的にはおよそ０．２５〜１．０μｇ／ｍｌの、Ｃ．ディフィシレに対する本発明の純粋な鏡像異性化合物の強力な活性を示す。さらに、ＩＣ５０データは、本発明の化合物が、Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳに特異的であり、哺乳動物ＭｅｔＲＳに対してはほとんどまたはまったく活性を示さないことを示す。ＭｅｔＲＳ阻害剤化合物は、正常な腸フロラに害を加えずに、Ｃ．ディフィシレおよびグラム陽性細菌に対して強力な活性を示す。
【０１５４】
［００１２５］これらの実施例中のデータは、反対の立体配置の異性体（実施例３、５、７、９、１２）の非常に弱い活性に比較した際の、実施例２、４、６、８、１０に関しては純粋なＲ鏡像異性体の、そしてＳ鏡像異性体、実施例１１の、強力で、そして予期せぬ抗細菌有効性を例示する。
【０１５５】
実施例１６：本発明の化合物は、他の細菌に対して強力な抗細菌活性を有する
［００１２６］一団のグラム陽性細菌に対する抗細菌活性に関して、本発明の化合物（実施例２、４、６、８、１０、および１１）を試験した。ＣＬＳＩレファレンス・ブロス微量希釈法を用いて、グラム陽性好気性細菌に対して、化合物を試験した。黄色ブドウ球菌、フェカリス菌、フェシウム菌、化膿性連鎖球菌、表皮ブドウ球菌およびＳ．ヘモリチクス（Ｓ．  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）に対してデータを得た。試験した化合物は、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌および化膿性連鎖球菌の耐性株を含めて、＜０．００８〜８μｇ／ｍｌのＭＩＣ範囲で、すべての単離体に対して、強力な抗細菌活性を示した。標準的なＣＬＳＩ指針アガー希釈法を用いて、ヘリコバクター、ピロリ菌に対してもまたデータを得て、そしてこの結果は、本発明の化合物が、ピロリ菌に対して活性であることを示す。
【０１５６】
［００１２７］データは、他のグラム陽性細菌、例えば、黄色ブドウ球菌、フェカリス菌、フェシウム菌、化膿性連鎖球菌、表皮ブドウ球菌、およびＳ．ヘモリチクスに対して、そしてグラム陰性細菌、ピロリ菌に対して、抗細菌剤として、本発明の化合物を用いる有用性を例示した。
【０１５７】
実施例１７：本発明の化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験中、強い療法的有用性を示す：
［００１２８］動物研究を実行して、Ｃ．ディフィシレ感染の治療に関するＭｅｔＲＳ阻害剤の効能を決定した。試験したＭｅｔＲＳ阻害剤は、５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（ラセミ混合物およびＲ鏡像異性体両方）および５−［３−（（Ｒ）−８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンであった。２−［３−｛３，５−ジブロモ−２−［２−（４−メチル−チアゾール−５−イル）−エトキシ］−ベンジルアミノ｝−プロピルアミノ］−１Ｈ−キノリン−４−オンもまた試験した。
【０１５８】
［００１２９］慣用的な抗生物質、バンコマイシンで治療したＣ．ディフィシレ感染ハムスターに結果を比較した。感染したハムスターを、５〜５０ｍｇ／ｋｇのＭｅｔＲＳ阻害剤の溶液または懸濁物いずれか、あるいは２．５、５または２５ｍｇ／ｋｇのバンコマイシンで治療した。群あたり８匹のハムスターであり、実験の最終終点は生存であった。死亡したハムスターのＧＩ状態を調べた。
【０１５９】
［００１３０］研究に関するデータは、対照ハムスター（Ｃ．ディフィシレに感染したが、まったく治療を受けていない）が３〜４日以内に死亡することを示した。ＭｅｔＲＳ阻害剤で治療したハムスターは、生存の有意な増加を示し、しばしば、研究終了時まで、典型的には２８日以上生存した。これらの結果は、バンコマイシン治療を用いて得た結果と類似であるかまたはそれより優れていた。５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンが最適な効能を示した。５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンは、バンコマイシンより優れた効能を示し、バンコマイシンでは０〜１０％生存であったのに比較して、第２８日で、＞６０％生存が観察された（５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ）。生存動物は、健康なＧＩ外観および組織病理を有した。ＭｅｔＲＳ阻害剤の経口投与後、ハムスターでは、低い全身曝露および生物学的利用能が観察された。
【０１６０】
［００１３１］本実施例中のデータは、本発明の化合物が、Ｃ．ディフィシレに感染した動物を治療する能力において、バンコマイシンに匹敵するかまたはそれより優れていることを例示する。
【０１６１】
実施例１８：本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレの毒素産生に影響を及ぼす：
［００１３２］Ｃ．ディフィシレの病原性は、細胞外毒素ＡおよびＢを産生する能力と関連する。高毒素産生株は、最近の高死亡率の突発の原因である。対照的に、毒素を産生しない単離体は、非病原性である。毒素産生は、活性タンパク質合成を必要とするため、タンパク質合成機構の阻害は、新規毒素産生を抑制すると予期される。したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣ．ディフィシレ毒素産生に対する影響に関して、ＭｅｔＲＳ阻害剤を評価した。
【０１６２】
方法：
［００１３３］Ｃ．ディフィシレ株ＡＴＣＣ４３２５５をＣＤＣ嫌気性菌アガー（Ｒｅｍｅｌ、カンザス州レネクサ）上で嫌気的に増殖させ、そして維持した。増殖に対する抗細菌剤の影響を試験するため、１０６ＣＦＵ／ｍＬの最初の接種物を用いて、９６ウェル・ブレイン・ハート・インフュージョン（ＢＨＩ）ブロス培養中で３５℃で４０時間、細胞を嫌気的に増殖させた。Ｃ．ディフィシレ細胞が高密度の際の、毒素産生に対する抗細菌剤の影響を試験するため、９６ウェル・ブレイン・ハート・インフュージョン（ＢＨＩ）ブロス培養中で３５℃で２４時間、細胞を嫌気的に増殖させた。次いで、消費した培地を、０．０１５〜１６μｇ／ｍＬの濃度範囲でＭｅｔＲＳ阻害剤および対照剤を含有する新鮮なブロスと交換した。４日後、５９５ｎｍでの光学密度測定によって、そしてＣＤＣ嫌気性菌アガー上での培養によって、それぞれ、増殖および細胞生存度を監視した。培養上清を収集し、そして抗毒素Ａモノクローナル抗体（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、コロラド州センテニアル）を用いたＥＬＩＦＡ（酵素連結免疫フローアッセイ）によって毒素Ａを検出した。
【０１６３】
結果：
［００１３４］ＭｅｔＲＳ阻害剤、５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンおよび５−［３−｛３，５−ジブロモ−２−［２−（４−メチル−チアゾール−５−イル）−エトキシ］−ベンジルアミノ｝−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンは、ブロス中、０．２５μｇ／ｍＬ以上の濃度で、Ｃ．ディフィシレの増殖を防止した。
【０１６４】
［００１３５］高細胞密度の４日目の静止期培養物における毒素産生は、０．２５μｇ／ｍＬ程度の低い濃度で、４つの異なるＭｅｔＲＳ阻害剤（５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン、５−［３−｛３，５−ジブロモ−２−［２−（４−メチル−チアゾール−５−イル）−エトキシ］−ベンジルアミノ｝−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン、Ｒ−（＋）−５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩、５−［３−（６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン三塩酸塩）によって阻害された。対照的に、毒素産生を阻害するには、はるかにより高い濃度（４〜＞１６μｇ／ｍＬ）の比較剤（メトロニダゾール、バンコマイシン、レボフロキサシン）が必要であった。
【０１６５】
結論：
［００１３６］ＭｅｔＲＳ阻害剤は、ブロス培養中、Ｃ．ディフィシレの増殖および毒素産生の両方に阻害効果を示す。さらに、毒素産生は、静止期培養中で、効果的に遮断された。静菌性のＭｅｔＲＳ阻害剤による毒素産生のこの抑制の結果として、Ｃ．ディフィシレは、本質的に非毒素産生性となり、そしてしたがって非病原性となる。この効果は、その作用様式が、細菌が活発に増殖することを必要としない、ＭｅｔＲＳ阻害剤などの、タンパク質合成阻害剤に特有である。
【０１６６】
実施例１９：本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレにおける胞子産生に影響を及ぼす：
［００１３７］Ｃ．ディフィシレは、加熱、乾燥、および殺菌剤などの多くの洗浄剤に耐性である胞子を形成する能力に関してよく知られている生物である。環境中に存在する胞子は、疾患を引き起こす生物の貯蔵庫として働きうる。Ｃ．ディフィシレ感染は、しばしば、胞子の摂取によって開始され、この胞子が、ＧＩ管で出芽してＣＤＡＤを引き起こす。ＣＤＡＤ治療後、腸に胞子が保持されることもまた、再発疾患の主な原因であると考えられる。Ｃ．ディフィシレが胞子を産生する能力または胞子の出芽が減少すると、この疾患の治療の重要な前進に相当しうる。胞子コートは、主にタンパク質で構成され、胞子コートの生成にはタンパク質合成が必要であり、そして活性タンパク質合成の阻害は、この生物において、胞子産生に影響を及ぼすと予期される。したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣ．ディフィシレ胞子産生に対するその影響に関して、ＭｅｔＲＳ阻害剤を評価した。
【０１６７】
方法：
［００１３８］ＢＩ／ＮＡＰ１遺伝子型に属する、２つの最近の突発単離体を含む、Ｃ．ディフィシレの４つの臨床単離体の胞子形成に対する影響に関して、ＭｅｔＲＳ阻害剤を評価した。Ｃ．ディフィシレ株を補充Ｂｒｕｃｅｌｌａ血上で２４〜４８時間増殖させ、そしてコロニーを生理食塩水中に懸濁して、０．５  ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準と等しい濁度を達成した。０．０６〜２μｇ／ｍＬの範囲の濃度でＭｅｔＲＳ阻害剤を含有する５％ヒツジ溶解血を含む、新鮮な補充Ｂｒｕｃｅｌｌａアガープレート表面上に、Ｃ．ディフィシレ懸濁物（１０μＬ）をスプレッドし、そして３５℃で９６時間、嫌気的にインキュベーションした。ＭｅｔＲＳ含有プレートに接種するのに用いたものと同じ細胞懸濁物のアリコットを、生菌数用にもまたプレーティングし、そしてさらに２５０μＬアリコットを、２５０μＬの無水エタノールで、室温で１時間処理して、植物性（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ）細胞を除去し、そして胞子を数えることを可能にした。化合物の存在下で９６時間インキュベーションした後の４つのすべての株に関して、胞子対総細胞の比を再び決定し、そしてこれを用いて、胞子形成率に対する薬剤不含対照とＭｅｔＲＳ阻害剤の効果を比較した。
【０１６８】
結果：
［００１３９］４つのＣ．ディフィシレ株のうち３つが、測定可能な数の胞子を産生し、そしてこれらを上述のように評価した。５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（式ＩＸ、実施例２）ですべての株を処理すると、すべての株において、０．２５ｘＭＩＣ（＜２％胞子）および０．５ｘＭＩＣ（＜１％胞子）で、胞子産生の減少が示された。これは、メトロニダゾールでの処理後に得た結果とは顕著に対照的であり、メトロニダゾールの場合、試験したすべての株は、薬剤のＭＩＣ濃度未満に曝露した後、胞子産生の顕著な増加（１００％までの胞子）を示す。バンコマイシンでの処理は、２つの株では類似の胞子産生増加を誘導したが、１つの株では誘導せず、この株では胞子数は低いままであった。
【０１６９】
結論：
［００１４０］ＭＩＣ未満（０．２５および０．５ｘＭＩＣ）の５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンは、Ｃ．ディフィシレの植物性細胞が胞子を形成するのを防止する際に有効であった。これらのデータは、５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンが、突発を防止し、そして環境におけるＣ．ディフィシレ胞子の広い蔓延と相関づけられている再発率を減少させる際に有用な役割を有する可能性もあることを示唆する。
【０１７０】
［００１４１］本発明は、いくつかの態様に言及して、特に示され、そして記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示する多様な態様に、形式および詳細の変化を作製してもよく、そして本明細書に開示する多様な態様は、請求項の範囲に対する限定として働くようには意図されないことを、当業者は理解するであろう。
【国際調査報告】
2010504986.tif 000031