(57)【要約】患者においてＮＦｋＢ  ＤＮＡ結合活性を減少させるための化合物、組成物および方法が本願明細書で提示される。当該方法は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの種々の胃腸疾患を低下、緩和または治療するために、治療上有効量の本願の化合物または組成物を投与することを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式Ｉａの化合物：
【化１】
2010531845.tif 000026
（式中、
Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲ１３−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−および−ＯＰＯ（ＯＨ）−からなる群から選択され、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
各Ｒ３およびＲ４は独立に、水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、
各Ｒ９およびＲ１２は独立に、水素、（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、−ＳＯ３Ｒ１３、−ＰＯ３Ｒ１３、（Ｃ１〜３）アルコキシからなる群から選択され、各アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールは置換もしくは非置換であるか、または
前記フェニル環において隣接して置換される場合のＲ１１およびＲ１２は、一緒になって任意に置換された複素環式環を形成し、
Ｒ１０は水素または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
各Ｒ１３は独立に水素または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）
またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｒ１１およびＲ１２が一緒になって、任意に置換された複素環式環を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１１およびＲ１２が一緒になって、アセトニジル−４−オンを形成する、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１１が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１０であり、Ｒ１２およびＲ１０の各々が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式Ｉの化合物：
【化２】
2010531845.tif 000027
（式中、
Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は独立に、水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
各Ｒ３およびＲ４は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ７は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
Ｒ８は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
Ｒ９は、水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシからなる群から選択され、
各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）
またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項６】
Ｒ７およびＲ８が水素であり、ｃが１または２である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
ａおよびｂがともに０であり、ｃが１または２である、請求項５または請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ９が水素である、請求項５から請求項７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ９が水素であり、ａおよびｂがともに０である、請求項５から請求項８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記ヒドロキシルを有する薬物が、抗炎症薬、抗癌剤、造影剤、ワクチン、抗原、抗感染症薬、ペプチド、アンチセンス分子およびタンパク質からなる群から選択される、請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記ヒドロキシルを有する薬物が抗炎症薬である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記抗炎症薬がステロイドである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記ステロイドが、それぞれ２１位、１１位および１７位でエステル化されたヒドロコルチゾン、デキサメサゾン、ブデソニド、ならびにプレドニゾロンからなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記ヒドロキシルを有する薬物が、ニトロイミダゾール、キノリン（例えばナリジクス酸）、フルオロキノロン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、アミノグリコシド、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシンおよびアプラマイシン、ロイコボリン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキセート、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブおよびインフリキシマブからなる群から選択される、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１５】
任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式ＩＩの化合物：
【化３】
2010531845.tif 000028
（式中、
Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は、独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
各Ｒ３およびＲ４は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ７は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
Ｒ８は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）
またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１６】
Ｒ７およびＲ８が水素であり、ｃが１または２である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
ａおよびｂがともに０であり、ｃが１または２である、請求項１５または請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ７およびＲ８が水素であり、ａおよびｂがともに０である、請求項１５から請求項１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記ヒドロキシルを有する薬物が、抗炎症薬、抗癌剤、造影剤、ワクチン、抗原、抗感染症薬、ペプチド、アンチセンス分子およびタンパク質からなる群から選択される、請求項１５から請求項１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
前記ヒドロキシルを有する薬物が抗炎症薬である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
前記抗炎症薬がステロイドである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記ステロイドが、それぞれ２１位、１１位および１７位でエステル化されたヒドロコルチゾン、デキサメサゾン、ブデソニド、およびプレドニゾロンからなる群から選択される、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
前記ヒドロキシルを有する薬物が、ニトロイミダゾール、キノリン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、アプラマイシン、ロイコボリン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキセート、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブおよびインフリキシマブからなる群から選択される、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２４】
任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式ＩＩＩの化合物：
【化４】
2010531845.tif 000029
（式中、
Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、
Ｒ５およびＲ６は独立に水素であるか、または独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ７は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
Ｒ８は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルである）
またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項２５】
Ｒ５およびＲ６が水素である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々水素である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２７】
前記ヒドロキシルを有する薬物が、抗炎症薬、抗癌剤、造影剤、ワクチン、抗原、抗感染症薬、ペプチド、アンチセンス分子およびタンパク質からなる群から選択される、請求項２４から請求項２６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
前記ヒドロキシルを有する薬物が抗炎症薬である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
前記抗炎症薬がステロイドである、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
前記ステロイドが、それぞれ２１位、１１位および１７位でエステル化されたヒドロコルチゾン、デキサメサゾン、ブデソニド、ならびにプレドニゾロンからなる群から選択される、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ａが、ニトロイミダゾール、キノリン、フルオロキノロン、アミノグリコシド、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシンおよびアプラマイシン、ロイコボリン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキセート、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブおよびインフリキシマブからなる群から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３２】
前記化合物が、
【化５】
2010531845.tif 000030
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３３】
前記化合物が、
【化６】
2010531845.tif 000031
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３４】
治療上有効量の請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容できる賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項３５】
患者においてＮＦκＢ  ＤＮＡ結合活性を減少させる方法であって、前記患者に治療上有効量の請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３６】
前記治療上有効量が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を低下、緩和または治療するために有効である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記治療上有効量が潰瘍性大腸炎またはクローン病を低下、緩和または治療するために有効である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に、治療上有効量の請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３９】
クローン病または潰瘍性大腸炎の治療方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に、治療上有効量の請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４０】
投与される化合物または組成物の量が寛解を維持するために有効である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
５ＡＳＡ−５ＡＳＡが投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
急性潰瘍性大腸炎を低下、緩和または治療する方法であって、治療上有効量の５ＡＳＡ−ステロイドを投与することを含み、前記ステロイドは、それぞれ２１位、１１位および１７位でエステル化されたヒドロコルチゾン、デキサメサゾン、ブデソニド、またはプレドニゾロンである、方法。
【請求項４３】
前記ステロイドがプレドニゾロンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
コラーゲン形成大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、ベーチェット症候群、感染性大腸炎、または非定型大腸炎を治療する方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に、治療上有効量の請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４５】
アメーバ症、クロストリジウム・ディフィシル感染症、偽膜性大腸炎、憩室炎、胃腸炎、胃腸癌、または過敏性大腸症候群（ＩＢＳ）を治療する方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に、治療上有効量の請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４６】
哺乳動物における炎症状態を治療または緩和する方法であって、有効量のＣＯＸ２阻害剤を結腸に送達することを含み、前記ＣＯＸ２阻害剤は、請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物のヒドロキシルを有する薬物の残基である、方法。
【請求項４７】
哺乳動物における胃腸癌を治療する方法であって、有効量のＣＯＸ２阻害剤を前記結腸に送達することを含み、前記ＣＯＸ２阻害剤は、請求項１から請求項３３のいずれか１項に記載の化合物または組成物のヒドロキシルを有する薬物の残基である、方法。
【請求項４８】
任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式Ｉａの化合物：
【化７】
2010531845.tif 000032
（式中、
Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、
Ｚは、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲ１３−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−および−ＯＰＯ（ＯＨ）−からなる群から選択され、
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は、独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
各Ｒ３およびＲ４は、独立に水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、
各Ｒ９およびＲ１２は、独立に水素、（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、−ＳＯ３Ｒ１３、−ＰＯ３Ｒ１３、（Ｃ１〜３）アルコキシからなる群から選択され、各アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールは置換もしくは非置換であるか、または
前記フェニル環において隣接して置換される場合のＲ１１およびＲ１２は、一緒になって任意に置換された複素環式環を形成し、
Ｒ１０は水素または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
各Ｒ１３は独立に水素または（Ｃ１〜３）アルキルであり、
各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）
またはその薬学的に許容できる塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年６月２９日出願の、発明の名称「胃腸疾患の治療のための標的指向化プロドラッグ（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）」の米国仮出願第６０／９４７，１０４号の利益を主張する。この米国仮出願の開示は、その全体を本願明細書に援用する。
【０００２】
本願は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの炎症性疾患（これに限定されない）を含めた胃腸疾患の治療のために使用することができる化合物および医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
薬物の標的指向化は、特定の臓器、組織または細胞集団への薬物の送達と定義されてもよい（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ、２００１）。まだその初期段階にあるが、この分野は、全身性の影響または副作用を低下させつつ薬物治療の有効性を増強するという可能性を与える。このアプローチの有望さおよび進行中の努力にもかかわらず、これまで成功例はほとんどない。これは、一部は、薬物輸送および可能性のある標的化ベクターの発現の基礎となる基本的要因の理解が限られていることが原因である。化学薬物の標的指向化は、化学薬物を標的組織で蓄積させる（通常は、生物可逆的な）薬物構造の緻密な改変を含み、プロドラッグからの部位特異的放出は、体内の別のところには存在しない化学的条件または酵素による条件によって誘発される。
【０００４】
結腸は、薬物標的指向化アプローチの有効性にとっては重要な課題である。なぜなら、結腸内の条件は、胃腸管（ＧＩ）系の別のところで一般的な条件にほぼ類似しており、胃腸管にわたる管腔のｐＨ勾配は、厳密に化学的な有効な局所的な薬物放出にとってはあまりに緩やかである（Ｂａｕｅｒ、２００１）からである。他方、結腸は、結腸自体の病態（炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および結腸癌など）の治療のため、およびオピオイド薬物治療を伴う慢性の便秘の軽減のために重要な薬物標的である。この結腸は、胃腸管の他の領域から吸収されないかまたは十二指腸プロテアーゼの存在下ではあまりに不安定でありそこでは放出されないペプチドおよびタンパク質薬物にとっての入口となり得る部位としても重要である（Ｓａｆｆｒａｎ、１９８６；Ｂａｉ、１９９５年）。
【０００５】
結腸と、部位特異的薬物放出のためのベクターとして利用され得る小腸との１つの重要な差異は、前者のふさふさしたミクロフローラである。ヒトの胃腸管系は、合計生体個体数が１０１４生物にもなる４００〜５００種の細菌にとっての生息地である。これは、ヒトの身体を構成する１０１３個の真核生物細胞と比べると、驚くべきことである。胃腸管は、胃から小腸を通って下りていくにつれて着実に増加する細菌濃度勾配を有し、続いて結腸で大きく増加する。小腸での細菌濃度は、典型的には１０３〜１０４ＣＦＵ  ｍｌ−１であるが、他方、結腸における濃度は１０１１〜１０１２ＣＦＵ  ｍｌ−１であり、便の乾燥重量の１／３は細菌からなる（ＭｏｏｒｅおよびＨｏｌｄｅｍａｎ、１９７４および１９７５；ＳｉｍｏｎおよびＧｏｒｂａｃｈ、１９８４）。これらの生物は、小腸から入ってくる未消化の物質（特に多糖）を発酵することによってそのエネルギー必要量を満たし、この目的のために、巧妙な多種の酵素（アゾレダクターゼ、グルコシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−キシロシダーゼ、ニトロレダクターゼ、ガラクトシダーゼおよびデアミナーゼなど）を進化させた（Ｓｃｈｅｌｉｎｅ、１９７３）。
【０００６】
細菌性酵素発現のこの突然の増加は、薬物、特にＩＢＤの治療用薬物を結腸に標的指向化する手段として研究されてきた。これらの努力の１つの成功した成果は、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）１というアゾ系プロドラッグの開発であった（スキーム１）。このプロドラッグは、その親水性および極性のために胃腸管系を無傷で通過し、その後、結腸ミクロフローラと関連したアゾレダクターゼによるアゾリンカーの還元の際に、その５−アミノサリチル酸「ペイロード」を放出する。イプサリジド（ｉｐｓａｌｉｚｉｄｅ）、バルサラジド２（Ｃｈａｎら、１９８３）、スルファサラジン（原型）およびオルサラジン（ｏｌｓａｌａｚｉｄｅ）３（Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙら、１９８２）などのこの着想に基づくいくつかの薬物は、ＩＢＤの治療のために臨床で使用されている（Ｇｒｅｅｎ、１９９８）。
【化１】
2010531845.tif 000002
【０００７】
抗炎症性ステロイドなどの他の薬物の種類の、結腸への標的指向化は、あまり成功していない（ＳｉｎｈａおよびＫｕｍｒｉａ、２００１）。逆説的ではあるが、これらの場合に適切な系の必要性はより差し迫っている。何故なら、ステロイドが胃および小腸から容易に吸収されることに起因して経口投与される場合には、ステロイドは多種の全身への副作用を有するからである。慢性炎症性腸疾患は、２つの主要な障害、つまり潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む。これらの状態はともに、下痢、体重減少および重篤になる可能性がありかつ生命を危うくする合併症の形態での重大な病的状態を生じる。欧州での発病率は最高８０万人／年と見積もられるが（Ｌｏｇａｎ、１９９８）、米国での絶対的発病率は約１００万人と考えられており、年間１５〜３０，０００の新しい症例が報告されている（ＤｉＰｉｒｉｏおよびＢｏｗｄｅｎ、１９９７）。それゆえ、ＩＢＤの根元的な病因を解明して新しい療法を開発するため、および既存の薬物療法を改善するためにも、多大な努力がなされてきたことは驚くことではない。これらの努力は、５−ＡＳＡ誘導体およびステロイドに限られていた。
【０００８】
［０００１］ステロイドを結腸へと標的指向化するための努力は、特に多い。研究されてきた技術としては、生分解性ポリマー（Ｂａｓｉｔ、２０００）、徐放系、ｐＨ感受性材料を用いたコーティング、胃腸での圧力制御放出（Ｈｕら、１９９８）および化学薬物標的指向化が挙げられる。
【化２】
2010531845.tif 000003
【０００９】
後者の種類に属するアプローチは、細菌性多糖類プロセッシング酵素のための基質として作用し得る親水性担体をステロイドに結合することを中心に展開してきた（スキーム２）。研究された担体の例としては、グリコシド（例えば４、特許文献１〜７）；グルクロニド（Ｈａｅｂｅｒｌｉｎ、１９９３；Ｃｕｉ、１９９４）；ポリ−（Ｌ−アスパラギン酸）誘導体（Ｌｅｏｐｏｌｄ、１９９５）；α、βおよびγ−シクロデキストリン接合体（Ｙａｎｏ、２００２）；ポリマー接合体（例えば５、ＭｃＬｅｏｄら、１９９４）が挙げられる。これらの設計のいくつかは有望であるが、それらは、これまで限られた成功しか経験していない。これは、一部には、胃腸管の中でのグリコシダーゼの広範な分布に起因し（部位非特異的放出を生じる；ＳｉｎｈａおよびＫｕｍｒｉａ、２００１）、および一部の例では、結腸の中での緩慢な放出特性による（いくつかの多糖については最高１２時間；Ｙａｎｇ、２００２）。アゾレダクターゼアプローチの使用の成功は、これまでは、一級芳香族アミンを有する薬物（５−ＡＳＡなど）に制限されていた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｆｒｉｅｎｄ  Ｄ．Ｒ．およびＣｈａｎｇ  Ｇ．Ｗ．、「Ｄｒｕｇ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｃｏｌｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８５年、第２８巻、５１〜５７頁
【非特許文献２】Ｆｅｄｏｒａｋ  Ｒ．Ｎ．、Ｃｕｉ  Ｎ．、Ｆｒｉｅｎｄ  Ｄ．Ｒ．、Ｍａｄｓｅｎ  Ｋ．Ｌ．、Ｅｍｐｅｙ  Ｌ．Ｒ．、「Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｏｌｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｓｏｄｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔ  ｃｏｌｉｔｉｓ」、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９９５年、第２６９巻（２  Ｐｔ  ｌ）：Ｇ２１０−８頁、ＰＭＩＤ：７６５３５６０
【非特許文献３】Ｆｅｄｏｒａｋ  Ｒ．Ｎ．、Ｈａｅｂｅｒｌｉｎ  Ｂ．、Ｅｍｐｅｙ  Ｌ．Ｒ．、Ｃｕｉ  Ｎ．、Ｎｏｌｅｎ  Ｈ．  ３ｒｄ、Ｊｅｗｅｌｌ  Ｌ．Ｄ．、Ｆｒｉｅｎｄ  ＤＲ．、「Ｃｏｌｏｎｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｒｏｍ  ａ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ａｄｒｅｎａｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１９９５年、第１０８巻、第６号、１６８８−９９頁、ＰＭＩＤ：７７６８３７３
【非特許文献４】Ｆｒｉｅｎｄ  Ｄ．Ｒ．、Ｃｈｏｗ  Ｊ．Ｊ．、Ｃｈａｎｇ  Ｇ．Ｗ．、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ−ｂａｓｅｄ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｌｉｖ．１９９０年、第６巻、第４号、３１１−８頁、ＰＭＩＤ：２０８３０３０
【非特許文献５】ＭｃＬｅｏｄ  ＡＤ、Ｆｅｄｏｒａｋ  ＲＮ、Ｆｒｉｅｎｄ  ＤＲ、Ｔｏｚｅｒ  ＴＮ、Ｃｕｉ  Ｎ．、「Ａ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｎｏｒｍａｌ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ａｄｒｅｎａｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１９９４年、第１０６巻、第２号、４０５−１３頁、ＰＭＩＤ：  ７５０７８７３
【非特許文献６】Ｎｏｌｅｎ  Ｈ．  ３ｒｄ、Ｆｅｄｏｒａｋ  Ｒ．Ｎ．、Ｆｒｉｅｎｄ  Ｄ．Ｒ．、「Ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ：  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ」、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．  １９９５年、第８４巻、第６号、６７７−８１頁ＰＭＩＤ：  ７５６２４０３
【非特許文献７】Ｔｏｚｅｒ  Ｔ．Ｎ．、Ｒｉｇｏｄ  Ｊ．、ＭｃＬｅｏｄ  Ａ．Ｄ．、Ｇｕｎｇｏｎ  Ｒ．、Ｈｏａｇ  Ｍ．Ｋ．、Ｆｒｉｅｎｄ  Ｄ．Ｒ．、「Ｃｏｌｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｒｏｍ  ａ  ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ」、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．、１９９１年、第８巻、第４号、４４５−５４頁、ＰＭＩＤ：１８７１０３８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
ヒドロキシルを有する化合物を結腸へと薬物標的指向化するための新規な戦略が本願明細書で提示される。ヒドロキシルを有する薬物を結腸へと標的指向化するための本発明の戦略は、グリコシダーゼ標的指向化アプローチの設計上の欠陥を克服するために設計された。ヒドロキシルを有する薬物の部位特異的送達を成し遂げるための１つの方法は、スキーム３に図式的に提示されている。１つの態様では、この薬物は、抗炎症薬、抗癌剤、造影剤（特に結腸疾患の撮像で使用されるもの）；ワクチン、抗原，、抗感染症薬、ペプチド、アンチセンス分子およびタンパク質を含む群から選択される。
【００１２】
本願の１つの態様では、当該方法は、ＩＢＤのマウスモデルにおける候補化合物の抗炎症性効果の評価を提供する。別の態様では、当該方法は、アゾ化合物の胃腸管透過性およびそれらが胃腸管を通る能力への洞察を提供する。
【００１３】
本願では、本発明者らは、本願明細書に開示されるプロドラッグなどの化合物、および患者においてＮＦκＢ  ＤＮＡ結合活性を減少させるための選択的薬剤として有効である組成物に対する必要性を見出した。１つの態様では、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を含めた種々の胃腸疾患を低下、緩和または治療するために有効な化合物または組成物の治療上有効量を投与することを含む方法が提供される。
【００１４】
１つの態様では、この薬物はエステル基を介して担体基に連結され、この担体基はアゾ結合によって第２の担体基へと接続される。この担体基は、アゾ基に直接取り付けられていてもよく、または間接的にアゾ基に取り付けられていてもよい。本願明細書で提示されるように、この担体基は、胃および腸上部からの吸収を最大限抑制するように設計される。この方法は、結腸でのアゾリンカーの選択的還元を利用する。この選択的還元により、薬物ペイロード（ステロイドなど）を遊離させる環化（ラクタム化など）を後に受ける化学的に不安定な、潜在性プロドラッグが放出される。特定の化合物では、この環化反応は実質的に自発的である。この設計の全体的効果は、上記薬物を担体基に繋ぐ生物学的に安定または堅牢なエステル基を、結腸の中でのみ見出される条件下で化学的に不安定なものにすることである。
【００１５】
一般的に、本願のプロドラッグは「担体−薬物」と呼ばれる。この「担体」は、５−ＡＳＡまたはパラ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）などの化合物を含むことができる。この担体が治療効果を有する場合（５−ＡＳＡなど）、このプロドラッグは、一般的に「ミューチュアルプロドラッグ（ｍｕｔｕａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇ）」と呼ばれる。かかるミューチュアルプロドラッグは、本願明細書では５−ＡＳＡ−薬物と呼ぶことができ、この薬物は、本願明細書に開示される治療薬を含めた任意の適切な治療薬であることができる。かかるミューチュアルプロドラッグとしては、５−ＡＳＡ−シプロフロキサシン、５−ＡＳＡ−ベバシズマブ、５−ＡＳＡ−プレドニゾロン、５−ＡＳＡ−５−ＡＳＡなどを挙げることができるが、これらに限定されない。この担体が治療効果を有しない場合（ＰＡＢＡなど）、上記化合物は、単に「プロドラッグ」と呼ぶことができる。かかるプロドラッグは、本願明細書でＰＡＢＡ−薬物（例えばＰＡＢＡ−シプロフロキサシン、ＰＡＢＡ−ベバシズマブ、ＰＡＢＡ−プレドニゾロン、ＰＡＢＡ−５−ＡＳＡなど）と呼ばれ得る。
【化３】
2010531845.tif 000004
【００１６】
当該プロドラッグの物理化学的特徴は、置換基Ｓ１およびＳ２を含めた当該化合物の性質を変えることによって、結腸に至る胃腸の透過のために最適化することができ、その際、本願明細書に開示されるようにアリール環上の置換基Ｓ１およびＳ２の１以上が用いられてもよいことが見出された。
【００１７】
アゾ結合の還元は、容易に進行する。なぜなら、この還元は、イプサラジド（担体基がｐ−アミノ馬尿酸である）、バルサラジド（ｂａｌｓａｌｚｉｄｅ）（ｐ−アミノベンゾイル−β−アラニン担体）、スルファサラジン（スルファピリジン担体）、立体的にかさ高いＰＡＦ拮抗薬（Ｃａｒｃｅｌｌｅｒら、２００１）、９−アミノカンプトテシン（ａｍｉｎｏｃａｍｐｈｏｔｈｅｃｉｎ）（Ｓａｋｕｍａら、２００１）および５−ＡＳＡ−Ｎ−メタクリルアミド、アクリロイルオキシエチルおよびアクリロイルアミドコポリマー（例えばＶａｎ  ｄｅｎ  Ｍｏｏｔｅｒら、１９９４）のように多様な基質を効率よく還元するそれらの能力によって証明されるように、基質に対する、結腸に存在するアゾレダクターゼのごちゃ混ぜ状態に基づくからである。腸に膨大なミクロフローラが存在することから、遠位小腸における−６７±９０から右結腸における−４１５±７２まで酸化還元電位の変化が引き起こされる（Ｗｉｌｄｉｎｇら  １９９４）。アゾ薬物の放出における酵素による還元および化学還元の相対的寄与は十分には理解されていない。
【００１８】
環化または閉環は、アミン基（アニリンアミノ基など）の、エステルへの求核的攻撃に依存する。かかるエステルの一例はステロイド系エステルである。アニリンは（脂肪族アミンと比べて）低い求核性を有するが、分子内配置の高い有効モル濃度は十分に速い閉環を促すであろう。ほぼ同等の条件における、アニリンによるエステルの分子内アミノリシスに関する報告が記載されている。Ｋｉｒｂｙら（１９７９）は、メチル  ３−（２−アミノフェニル）プロピオネートの自発的環化を研究し、中性（ほぼ結腸のｐＨ）および３９℃で、この反応は２×１０−４ｓｅｃ−１の見かけの一次速度定数（これは、５７分の一次半減期に対応する）で進行することを見出した。ＦｉｆｅおよびＤｕｄｄｙ（１９８３）は、メチル  （２−アミノフェニル）アセテートおよびトリフルオロエチル  （２−アミノフェニル）アセテートの閉環（インドロンを与える）が、わずかに塩基性の条件下（ｐＨ  ７〜８）で同様の反応速度論に従うことを報告した。これらの半減期は、滞留時間はかなり延びる傾向にある結腸での薬物放出のために理想的である。
【００１９】
本願の化合物のエステル結合は、胃腸管中で見出される条件下で非常に安定である。胃腸管の管腔におけるエステラーゼ活性は、限られた数の基質、一般的には芳香族アミノ酸のエステルに対する残留エステラーゼ活性を呈する膵臓セリンプロテアーゼに限定される。例えば、ステロイドの２１−エステル（番号付与については上記のスキーム２を参照）は、模擬腸液モデルの中で堅牢であることが示されている。例えばＦｌｅｉｓｈｅｒら（１９８６）は、ラット腸内灌流液中でのヒドロコルチゾン−２１−コハク酸エステルの加水分解について０．００３ｍｉｎ−１の一次速度定数を報告した。この数字は１２時間という半減期に対応し、これは予想される結腸への通過時間よりも著しく長い。Ｊｈｕｎｊｈｕｎｗａｌａ（１９８１）は、ｐＨ  ７（４５℃）で２４時間後にヒドロコルチゾン−２１−コハク酸エステルの５％未満が消失することを報告している。
【００２０】
胃腸での吸収は分子量、親油性および極性によって変化し、一般に極性の親水性分子はあまり良好には吸収されない。Ｓ１によって表される置換基を含む担体基における変形の可能性の中には、例えば、担体（５−ＡＳＡが挙げられるが、これに限定されない）およびステロイドを連結するアゾ結合があり、これにより薬物（ステロイドなど）のミューチュアルプロドラッグが生成される。かかるミューチュアルプロドラッグは、質量、極性および親水性に起因して、腸を通過するための理想的なまたは好ましい物理化学的特徴をもたらし得る。
【００２１】
本願で開示される立体的にかさ高いステロイド系エステルは、ヒドロコルチゾン−２１−コハク酸エステルよりもはるかに、加水分解に対して不安定ではない（Ｊｈｕｎｊｈｕｎｗａｌａ、１９８１を参照）。さらに、このエステルは、ステロイド核上のいくつかの異なるヒドロキシル基のうちの１つで結合されていてもよい。例えば、本願明細書で提案されるいかなる理論によっても拘束されないが、非常にかさ高い１１βアキシャルヒドロキシル基に位置するこれらのエステルは（スキーム２）、２１−エステルよりも安定である。
【００２２】
本願は、結腸を標的とする薬物（抗炎症性ステロイドなど）を放出するための２工程プロセスに関与することができる新規な系および化合物を開示する。本願は、ステロイド系化合物（例えばヒドロコルチゾン、デキサメサゾンまたはブデソニドのエステル類）、ニトロイミダゾール（例えばメトロニダゾール）、抗生物質、（例えばナリジクス酸などのキノリン、シプロフロキサシンまたはレボフロキサシンなどのフルオロキノロン、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシンおよびアプラマイシンなどのアミノグリコシド）、化学療法薬（例えばロイコボリン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキセート）、および抗体、（例えばベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ）を含めた様々な化合物およびそれらの誘導体の合成を開示する。本願はさらに、閉環反応速度論の測定、酵素および腸内潅流液を使用する腸内安定性についてのインビトロスクリーニング、結腸細菌の存在下でのインビトロ薬物放出、および適切な動物モデルにおける治療有効性、例えば、抗炎症性有効性を開示する。１つの態様では、抗炎症性ステロイドであるヒドロコルチゾン、デキサメサゾンおよびブデソニドの２１位、１１位および１７位での一連のエステルがプロドラッグとして調製される。別の態様では、本願は、当該アミノエステルの種々のアゾ誘導体の合成を開示する。
【００２３】
以下のスキームは、抗腫瘍薬（アントラマイシン、サンサルバミド誘導体、カペシタビン）、ＣＯＸ−２阻害剤（レスベラトロール、クルクミン、メロキシカム、テノキシカム、ピロキシカム）、抗生物質製剤（メトロニダゾール）、免疫抑制剤（シクロスポリン）、および本願で調製され用いられてもよい化学保護作用薬（ＵＲＳＯ）を含めた、代表的な生物活性のある薬剤および薬物を提示する。
【化４−１】
2010531845.tif 000005
【化４−２】
2010531845.tif 000006
【００２４】
別の態様では、アミノ中間体化合物の閉環速度の測定または評価のための分析方法が提供される。閉環速度を評価するため、および担体基（アニリン誘導体など）における置換に起因する共鳴効果に対する閉環速度の依存性を測定するための方法もまた、本願明細書で提示される。本願のさらに別の態様では、水系条件下での（ｐＨ  １〜８での）、膵臓セリンプロテアーゼ（インビトロ）および腸に存在する他の酵素の存在下での、ならびにラット腸液の存在下での化合物の安定性を測定するための方法が提供される。
【００２５】
別の態様では、インビトロでのミクロフローラの存在下でのこれらの化合物の還元速度を評価するための方法が提供される。さらに別の態様では、結腸炎症のマウスモデルを使用して上記化合物のインビボ有効性を評価するための方法が提供される。別の態様では、ラット灌流モデルを使用して本願明細書で提示される化合物の透過性を測定するための方法が提供される。この方法により、胃腸管を通る透過の評価が可能になる。結腸標的指向化の可能性のために、無視できるほどの透過性を有する化合物が用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ｐＨ  ８（３７℃）における、プロドラッグＡの濃度  対  時間のグラフである。
【図２】ｐＨ  ８（３７℃）における、プロドラッグＡ濃度の自然対数  対  時間のグラフである。
【図３】ｐＨ  ７．４（３７℃）における、プロドラッグＡの濃度  対  時間のグラフである。
【図４】ｐＨ  ７．４（３７℃）における、プロドラッグＡ濃度の自然対数  対  時間のグラフである。
【図５】プロドラッグの消失ならびにコルチゾンおよびキノロンの出現を示す、ｐＨ  ９（３７℃）におけるアミノプロドラッグＢのラクタム化のプロファイルである。
【図６】ｐＨ  ９（３７℃）における、アミノプロドラッグＢ濃度の自然対数  対  時間のグラフである。
【図７】ｐＨ  ８（３７℃）における、アミノプロドラッグＢのラクタム化のプロファイルである。
【図８】ｐＨ  ８における、アミノプロドラッグＢの濃度の自然対数  対  時間のグラフである。
【図９】プロドラッグの消失ならびにヒドロコルチゾンおよびキノロンの出現を示す、ｐＨ  ９（３７℃）のＰＢＳにおけるアミノプロドラッグＢのラクタム化のプロファイルである。
【図１０】ｐＨ  ７．４（３７℃）における、アミノプロドラッグＢの濃度の自然対数のグラフである。
【図１１】健康なマウス（未処置）および５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したデキストラン硫酸ナトリウムにより誘導された大腸炎（ＤＳＳ誘導大腸炎）マウスの体重減少の割合（％）のプロファイルである。
【図１２】５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したＤＳＳ誘導大腸炎マウスの結腸部分から得た疾患活動性指数（ＤＡＩ）スコアのプロファイルである。
【図１３】５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したＤＳＳ誘導大腸炎マウスの結腸長さのプロファイルである。
【図１４】健康なマウス（未処置）および５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したＤＳＳ誘導大腸炎マウスの胸腺重量体重比（Ｔ／ＢＷ）のプロファイルである。
【図１５】図１１に提示されたデータの再プロットおよび再解析を示す。図１１は、スチューデントのｔ−検定を使用してデータセットを比較した。この図では、データセットは、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてテューキーのポスト検定（Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ  ｔｅｓｔ）を使用して比較されている。それはまた、３つの吹き出しのグラフに示されるように、このデータを４〜６日目に統計的に比較する。ＤＳＳを投与されたすべてのマウスは、健康な対照と比較して、有意に体重を減少させた。しかしながら、マウスがプレドニゾロンまたはミューチュアルプロドラッグ２のいずれかで処置された場合、この体重減少は、溶媒のみの対照と比べて減少した。プレドニゾロンを投与された群とミューチュアルプロドラッグ２を投与された群との間には統計学的差異はなかった。
【図１６】上記の統計的方法を使用する、図１２に提示されたデータの再プロットおよび再解析を示す。ＤＳＳを投与されたすべてのマウスは、未処置のマウスと比べて、大腸炎の臨床徴候を示した。この疾患の重症度は、溶媒だけを投与されたマウスと比べて、プレドニゾロンを投与されたマウスまたはミューチュアルプロドラッグ２を投与されたマウスでは有意に低下した。ミューチュアルプロドラッグ２を投与された群とプレドニゾロンを投与された群との間には統計学的差異はなかった。
【図１７】上記の統計的方法を使用する、図１３に提示されたデータの再プロットおよび再解析である。結腸短縮は、大腸炎の重症度についての臨床的読み出し情報である。ＤＳＳを投与されたすべてのマウスは結腸の短縮を示した。ミューチュアルプロドラッグ２またはプレドニゾロンのいずれかで処置されたマウスは、溶媒だけで処置されたマウスよりも、有意に少ない短縮を示した。ミューチュアルプロドラッグ２で処置した群とプレドニゾロンで処置した群との間には統計学的差異はなかった。
【図１８】胸腺重量：最終体重を示すさらなるデータとともに、上記の統計的方法を使用する、図１４の再プロットおよび再解析を示す。対照実験では、未処置  対  溶媒処置マウスにおいては、胸腺重量  対  最初の体重または  対  最終体重には有意差は認められなかった。予想されるように、プレドニゾロン処置群は、溶媒処置マウスと比べて、Ｔ／ＢＷ比の有意な低下を示した。対照的に、ミューチュアルプロドラッグ２処置群におけるＴ／ＢＷ比は、溶媒処置群のＴ／ＢＷ比とは統計的に異なっていなかった。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
（方法）
以下の方法は、アミノエステルのアゾ誘導体を含む、２１位、１１位および１７位での抗炎症性ステロイドであるヒドロコルチゾン、デキサメサゾンおよびブデソニドの一連のエステルの調製を説明する。
【００２８】
（閉環反応速度論化合物）
１つの具体的な例では、合成アプローチは、デキサメサゾンについて以下に概略が示される（スキーム４）。２−ニトロケイ皮酸は、接触還元によってアミノフェニルプロピオネートに還元され、そして直ちにＢＯＣ無水物で処理される。２１位の最も露出されているステロイド系ヒドロキシル基は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド／ジメチルアミノピリジンを使用して選択的にアシル化される（Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９８５）。このＢＯＣ保護は、無水ＨＣｌをジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液に吹き込むことによって除去することができ、アニリン６がＨＣｌ塩として回収される。この塩は、必要とされる時まで−８０℃で保存される。メチル  ３−（２−アミノフェニル）プロピオネートは、−２０℃で保存していてさえも自発的に閉環する（Ｋｉｒｂｙら、１９７９）。
【化５】
2010531845.tif 000007
スキーム４：（ｉ）Ｚｎ末、次いでＰｔＯ２、ＭｅＯＨ；（ｉｉ）ＢＯＣ２Ｏ、（ｉｉｉ）ステロイド、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ；（ｉｖ）ＨＣｌガス／ＤＣＭ。
【００２９】
ステロイド系アミノフェニルアセテートエステルは、（ｏ−ニトロフェニル酢酸）を使用するエステル化、続くメタノール中でＺｎ末を使用してニトロ基を還元することにより得てもよく、上記のとおり、塩酸塩が生成する。閉環に対する共鳴効果／立体効果を評価するのに適した化合物は、同様にして得られる。従って、例えば、異性体のステロイド系２１−メトキシ−アミノフェニルアセテート７および８は、３−メトキシフェニル酢酸の２−ニトロ化、続くエステル化および還元を経由して得てもよい（スキーム５）。ケイ皮酸シリーズは、同様にして（メトキシケイ皮酸のニトロ化、還元、ＢＯＣ保護、エステル化および脱保護）得てもよい。アミノ基に対してオルトおよびパラのメトキシ基は、ラクタム化に対する立体的影響と電子的影響とを判別するために使用してもよい。
【化６】
2010531845.tif 000008
スキーム５：（ｉ）ＨＮＯ３、ＡＣ２Ｏ（ｉｉ）ステロイド、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ；（ｉｉｉ）Ｚｎ末、ＭｅＯＨ。
【００３０】
［０００２］より込み合った１１−ヒドロキシル基は、１７α−ＯＨおよび２１−ＯＨ基の保護（Ｓｌｏａｎら、１９７８）、その後のより過酷な条件下でのアシル化（または、フェニル酢酸塩化物を使用することによる（Ｓｐｒａｔｔら、１９８５））、続く還元および脱保護によって扱われて、１１−フェニルアセテートを与えてもよい。
【化７】
2010531845.tif 000009
スキーム６：（ｉ）アセトン、ＴｓＯＨ、熱（ｉｉ）２−ニトロフェニル酢酸、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ；（ｉｉｉ）Ｈ３Ｏ＋；（ｉｖ）Ｚｎ、ＭｅＯＨ。
【００３１】
本願のアゾプロドラッグは、アゾ結合単位との、ステロイドのエステル化によって得てもよい。例えば、５−ＡＳＡ−ステロイドミューチュアルプロドラッグ９、５−ＡＳＡ−デキサメサゾン（スキーム４）は、化合物１０とのデキサメサゾンのエステル化、続くサリチル酸エステルの脱保護によって得てもよい。腸内透過性を実証するために、同様に，多くのアゾ担体接合体を生成してもよい。
【化８】
2010531845.tif 000010
スキーム７：（ｉ）ＮａＮＯ２、ＨＣｌ、次いでｔｅｒｔ−ブチルサリチル酸。
【００３２】
（環化反応速度論）
環化の反応速度論は、適宜ＵＶ、ＨＰＬＣまたはＮＭＲを使用してモニターしてよい。ステロイド系プロピオネートエステルの自発的環化のキノロン生成物は３４０ｎｍにλｍａｘを有し、このため、それらの測定がエステル出発物質およびステロイド系生成物の存在下で可能になる。コルチコステロイドは、一般に２４０〜２５０ｎｍの領域にλｍａｘ値を有する。あるいは、この反応は緩衝化Ｄ２Ｏ中で１Ｈ  ＮＭＲによってモニターされてもよい。リアルタイム分析が好ましいが、この反応は環化を抑制するために冷却された迅速なショートカラムＨＰＬＣ（ＲＴ＜１分）によってモニターされてもよい。特定の態様では、この反応は、アセテートシリーズおよびプロピオネートシリーズの両方について、１１位および２１位の両方において５〜８のｐＨ範囲でモニターされてもよい。これらの化合物およびその誘導体の最適な治療活性を決定するために、アニリノ環上の置換の効果も、この方法を使用して決定されてもよい。
【００３３】
（腸内安定性）
候補アゾ化合物の相対的安定性は、ある範囲の精製された膵臓エンドペプチダーゼ（カルボキシペプチダーゼなど）の存在下で、インビトロで評価することができる（Ｇｉｌｍｅｒら、２００２）。最大の安定性を呈する化合物は、ラット腸内灌流液モデルでの評価のために選択されてもよい（Ｆｒｉｅｎｄら、１９８５；Ｙａｎｏら、２００２）。バイオリソーシーズ社（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＴＣＤ）（アイルランド）から入手したラットの胃腸管の一部は、軽く洗浄され、適切なｐＨで緩衝化されてもよい。上記化合物がインキュベーションされて、ある間隔でアリコートが抜き取られてもよい。これらのマトリクスが複雑な性質を有するため、残留する薬物は逆相ＨＰＬＣによって測定されてもよい。半減期は、ミカエリス−メンテン反応速度論を使用して測定してよい。選択された化合物の腸内安定性特性は、腸内ホモジネートおよびヒトＣＡＣＯ−２細胞ホモジネートを使用して、さらに探索されてもよい。
【００３４】
（インビトロでの結腸細菌によるアゾ還元）
候補化合物のアゾ結合の、還元を受ける感受性は、市販のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）培養液（Ａｚａｄ  Ｋｈａｎら、１９８３）（この生物は、結腸細菌に対して類似のアゾレダクターゼを発現する）を接種した培地を用いる単純なインビトロでの細菌による分解モデルを使用して評価されてもよい。この培地には、補酵素ＮＡＤＰＨおよびＦＡＤが添加されてもよい。還元はさらに、ＣＯ２を飽和させたラットまたはモルモットの結腸灌流液を使用して、検討されてもよい（例えばＹａｎｏ、２００２を参照）。
【００３５】
（抗炎症性活性）
インビボでの当該プロドラッグの有効性は、動物モデルで評価されてもよい。急性のマウスのデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）によって誘導された大腸炎において、ＮＦκＢ  ＤＮＡ結合活性は増大し、観察される炎症症状はヒト炎症性腸疾患／大腸炎で認められる炎症症状と似ている（Ｏｋａｙａｓｕら、１９９０）。
【００３６】
ｂａｌｂ／ｃマウスは、この実験のために使用するのに適した株である。なぜなら、ｂａｌｂ／ｃマウスは、経口ＤＳＳに感受性があり、大腸炎を生じることが公知であるからである（Ｅｇｇｅｒら、２０００）。動物が成熟しており、体重が同程度であることを確実にするために、６〜８週齢の雌のマウスが使用されてもよい。Ｅ（誤差の自由度（ｅｒｒｏｒ  ｄｅｇｒｅｅｓ  ｏｆ  ｆｒｅｅｄｏｍ））＝Ｎ（実験単位の数）−Ｔ（処置数）の資源方程式法、および全部で２１群を用いることに基づき、１群あたり３動物が適切なサンプルサイズと考えられる（Ｅ＝４２）（Ｆｅｓｔｉｎｇら、２００２）。１２群のマウスは、７日間のあいだ蒸留水中の２．５％  ＤＳＳを自由に投与されてもよい。以前の実験では、この濃度のＤＳＳが、軽度の体重減少または等級ＩＩＩの病変（これは、広範な粘膜破壊を表す）を伴う軽度の大腸炎を誘導するのに十分であると示されている（Ｅｇｇｅｒら、２０００）。残りの９つの対照群は蒸留水だけを投与されてもよい。その後、マウスは、経口投与によって、プロドラッグを用いて処置されてよい。ＤＳＳを投与された群のうちの８つは、２つの異なる量のプロドラッグを連続１〜４日間、１日２回投与されることになる。マウスは、最後の用量が投与されてから１時間後に頚椎脱臼によって屠殺されてもよい。誘導された大腸炎から自然に回復するマウスについての対照として、ＤＳＳ処置群は、４日間の各々の日に、プロドラッグ処置マウスが屠殺されるとの同時に、屠殺されてもよい。水だけを投与されることになる対照マウスは、ＤＳＳ処置動物と同用量のプロドラッグを投与されてもよい。１つの対照群は、未処置のまま置かれてもよい。
【００３７】
腸は、組織学的検討およびＲＮＡ抽出のために取り出されてもよく、それゆえ、切開，組織学的検査およびＲＮＡ抽出手法を実行するために、さらに３匹の未処置のマウスが必要とされる。結腸の切片は、１０％亜鉛−ホルマリン中で固定され、パラフィン中に包埋されてもよい。横断面は、通常どおりヘマトキシリンおよびエオシンを用いて染色されてもよい。粘膜損傷の重症度は０−ＩＩＩの尺度で等級付けされる：等級０：正常；等級Ｉ：歪みおよび／または腺の下方１／３の破壊；等級ＩＩ：びらん／腺の下方２／３の破壊または表面の上皮が残ったすべての腺の喪失；等級ＩＩＩ、すべての腺の喪失（Ｅｇｇｅｒら、２０００；Ｆｅｓｔｉｎｇら、２００２；Ｅｇｇｅｒら、１９９７）。ＤＳＳ誘導大腸炎においては上方制御されるＮＦκＢ依存性炎症促進性のサイトカインＩＬ−ＩおよびＴＮＦ−αのレベルを測定するために、抽出されたＲＮＡに対して逆転写ＰＣＲが行われてもよい（Ｅｇｇｅｒら、２０００）。これらの研究から得られる結果によって、必要に応じて、異なる濃度のプロドラッグおよび異なる用量数を用いてこの実験が繰り返されてもよい。
【００３８】
（胃腸管透過性評価）
上記プロドラッグは、吸収プロセスから排除され、従って結腸へと通過することができるように設計された。さらなる評価のための化合物は、それらの透過性特性が低いことに基づいて選択されてもよい。当該化合物の胃腸管挙動は、まずめくれ上がった腸の嚢を使用して評価されてもよく（ＷｉｌｓｏｎおよびＷｉｓｅｍａｎ、１９５４）、このめくれ上がった腸の嚢は、インビトロのバリア（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂａｒｒｉｅｒ）および下記の腸灌流モデルを通る薬物移動の直接の評価および比較を可能にする。
【００３９】
（インビボモデル：単回通過灌流（Ｓｉｎｇｌｅ  Ｐａｓｓ  Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）：腸内灌流）
これは、基本的に、当該管腔からの薬物の欠乏がモニターされる単離された腸ループモデルである（Ｋｏｍｉｙａら、１９８０）。この腸は麻酔された動物の中の原位置に留まっているため、正常機能が乱される程度は可能な限り小さい。内臓の血流量は自然に変わるものであり、麻酔下では減少するという点で、このモデルには限界がある。この動物の正中切開によって、腸の回腸の中央部分２０〜４０ｃｍが優しく露出される。カニューレ挿入を容易にするための接近しやすさおよび適切な脈管構造のために、この部分が選択される。隣接部分への腸間膜のアーチ形構造が結紮される。腸が切断され、灌流のためにＴｙｇｏｎチューブがカニューレ挿入される。腸間膜静脈が、適切なサイズのサイラスティックチューブまたはポリエチレンチューブでカニューレ挿入され、静脈血が、ヘパリン処置された（またはこれと同等）、較正された遠心管の中に採取される。等張性リン酸緩衝液を用いて３７℃で腸管腔を優しく洗浄した後、薬物溶液がそのセグメントの近位部分へ灌流され、０．２ｍｌ／分でそのセグメントを流され、そしてその管腔セグメントの遠位端で集められる。歯科用ゴムのダム（ｄｅｎｔａｌ  ｒｕｂｂｅｒ  ｄａｍ）に覆われているその腸を覆っているガーゼに暖かい（３７℃）生理食塩水を頻繁に施用することによって、単離された腸は温かくかつ湿った状態に保たれる。調製物を３７℃に維持するために、小さいランプも使用される。当該薬物は、定期的な間隔で灌流液を集めながら、１２０分間まで腸に通して灌流される。灌流液は分析され、灌流液からの薬物消失が実験の時間的経過にわたってモニターされる。
【００４０】
（本願の実施形態および態様）
上記の１つの特定の態様では、上記実験は、ＩＢＤで使用される２つの主な療法の新規なミューチュアルプロドラッグを含めた抗炎症性ステロイドで結腸を標的指向化する手段としての当該方法の評価を提供する。
【００４１】
本願の別の態様では、いくつかの新しい群のアニリンおよびアゾ担体を有する新規なステロイド系エステルの合成方法を提供する。この方法は、模擬的な生理的条件下でのアミノフェニルアセテートおよびプロピオネートエステルの環化反応速度論の包括的な研究、および閉環反応速度論に対する電子的および立体的な環置換効果に関する洞察を提供する。加えて、この方法は、２１および１１−コルチコステロイドエステルの水中での安定性、酵素に対する安定性、および腸内での安定性の判定を提供する。さらに別の態様では、この方法は、ステロイドアザ接合体の還元速度の測定、およびステロイドおよび環置換効果への依存性の判定を可能にする。
【００４２】
１つの実施形態では、任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体式の混合物の形態にある、Ｉａの化合物：
【化９】
2010531845.tif 000011
（式中、Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、Ｚは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲ１３−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−および−ＯＰＯ（ＯＨ）−からなる群から選択され、各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、各Ｒ３およびＲ４は独立に、水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、Ｒ１１は、水素、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０からなる群から選択され、各Ｒ９およびＲ１２は独立に、水素、（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、−ＳＯ３Ｒ１３、−ＰＯ３Ｒ１３、（Ｃ１〜３）アルコキシからなる群から選択され、各アルキル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールは置換もしくは非置換であるか、またはＲ１１およびＲ１２は、フェニル環において隣接して置換している場合は、一緒になって任意に置換された複素環式環を形成し、Ｒ１０は、水素または（Ｃ１〜３）アルキルであり、各Ｒ１３は独立に水素または（Ｃ１〜３）アルキルであり、各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）、またはその薬学的に許容できる塩が提供される。１つの変形例では、Ｒ１１およびＲ１２は一緒になって任意に置換された複素環式環を形成する。別の変形例では、Ｒ１１およびＲ１２は一緒になってアセトニジル−４−オンを形成する。さらに別の変形例では、Ｒ１１はＣ（Ｏ）Ｏ−Ｒ１０であり、Ｒ１２およびＲ１０の各々は水素である。
【００４３】
別の実施形態では、任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式Ｉの化合物：
【化１０】
2010531845.tif 000012
（式中、Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は独立に、水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、各Ｒ３およびＲ４は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、Ｒ７は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、Ｒ８は水素であるかまたは（Ｃ１〜３）アルキルであり、Ｒ９は、水素、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシからなる群から選択され、各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）またはその薬学的に許容できる塩が提供される。１つの変形例では、Ｒ７およびＲ８は水素であり、ｃは１または２である。別の変形例では、およびｂはともに０であり、ｃは１または２である。さらに別の変形例では、Ｒ９は水素であり、別の変形例では、Ｒ７およびＲ８は水素であり、Ｒ９は水素であり、ａおよびｂはともに０である。
【００４４】
別の実施形態では、任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式ＩＩの化合物：
【化１１】
2010531845.tif 000013
（式中、Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、各Ｒ３およびＲ４は独立に水素であるか、または各々独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、アミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、Ｒ７は水素であるか、または（Ｃ１〜３）アルキルであり、Ｒ８は水素であるかまたは（Ｃ１〜３）アルキルであり、各ａ、ｂおよびｃは独立に０、１または２である）またはその薬学的に許容できる塩が提供される。１つの変形例では、Ｒ７およびＲ８は水素であり、ｃは１または２であり、別の実施形態では、ａおよびｂはともに０であり、ｃは１または２である。さらに別の変形例では、Ｒ７およびＲ８は水素であり、ａおよびｂはともに０である。
【００４５】
さらに別の実施形態では、任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体の混合物の形態にある、式ＩＩＩの化合物：
【化１２】
2010531845.tif 000014
（式中、Ａは水素であるか、またはヒドロキシルを有する薬物の残基であり、Ｒ５およびＲ６は独立に水素であるかまたは独立に、各々置換もしくは非置換の（Ｃ１〜３）アルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル、（Ｃ３〜１０）シクロアルキル（Ｃ１〜３）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１〜３）アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１〜３）アルコキシ、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシからなる群から選択され、Ｒ７は水素でるかまたは（Ｃ１〜３）アルキルであり、Ｒ８は水素であるかまたは（Ｃ１〜３）アルキルである）またはその薬学的に許容できる塩が提供される。１つの変形例では、Ｒ５およびＲ６は水素であり、別の実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は各々水素である。別の変形例では、Ｒ７およびＲ８は各々（Ｃ１〜３）アルキルである。
【００４６】
上記の実施形態、変形例および態様の各々についての本願の１つの態様では、開示される化合物のいずれものＡまたはヒドロキシルを有する薬物は、抗炎症薬、抗癌剤、造影剤、ワクチン、抗原、抗感染症薬、ペプチド、アンチセンス分子およびタンパク質からなる群から選択される。１つの変形例では、このヒドロキシルを有する薬物は抗炎症薬である。別の変形例では、この抗炎症薬はステロイドである。さらに別の変形例では、このステロイドは、それぞれ２１位、１１位および１７位でエステル化されたヒドロコルチゾン、デキサメサゾン、ブデソニド、ならびにプレドニゾロンからなる群から選択される。
【００４７】
上記の実施形態の各々、その態様および変形例の１つの変形例では、Ｒ１１およびアゾ基（すなわち、−Ｎ＝Ｎ−）を含むリンカーは、当該フェニル環上で１，４−二置換されている（すなわち、パラ）。別の変形例では、Ｒ１２はＨである。上記のもののさらに別の変形例では、ａは０であるか、またはａおよびｂはともに０である。上記のものの別の変形例では、Ｒ９はＨである。
【００４８】
本願の別の態様では、開示される化合物のいずれものＡまたはヒドロキシルを有する薬物は、ニトロイミダゾール、キノリン（ナリジクス酸など）、フルオロキノロン（シプロフロキサシンまたはレボフロキサシンなど）、アミノグリコシド（アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシンおよびアプラマイシンなど）、ロイコボリン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキセート、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブおよびインフリキシマブからなる群から選択される。上記のものの特定の変形例では、この薬物は、アミンを有する薬物（すなわち、アミン基をする薬物）（セレコキシブなど）、またはチオールを有する薬物である。
【００４９】
１つの態様では、本願の化合物は、
【化１３−１】
2010531845.tif 000015
【化１３−２】
2010531845.tif 000016
からなる群から選択される。
【００５０】
１つの態様では、本願明細書で提示される開示される化合物のいずれかの治療上有効量と、薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。
【００５１】
１つの実施形態では、患者においてＮＦκＢ  ＤＮＡ結合活性を減少させる方法であって、本願のいずれかの化合物または組成物の治療上有効量を当該患者に投与することを含む方法が提供される。１つの変形例では、この治療上有効量は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を低下、緩和または治療するために有効である。別の変形例では、この治療上有効量は、潰瘍性大腸炎またはクローン病を低下、緩和または治療するために有効である。
【００５２】
１つの態様では、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する方法であって、本願のいずれかの化合物または組成物の治療上有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。別の態様では、クローン病または潰瘍性大腸炎を治療する方法であって、本願のいずれかの化合物または組成物の治療上有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。上記のものの１つの変形例では、投与される化合物または組成物の量は寛解を維持するために十分な量である。上記の方法の別の変形例では、５ＡＳＡ−５ＡＳＡが投与される。
【００５３】
別の態様では、急性潰瘍性大腸炎を低下、緩和または治療する方法であって、治療上有効量の５ＡＳＡ−ステロイドを投与することを含み、ステロイドは、それぞれ２１位、１１位および１７位でエステル化されたヒドロコルチゾン、デキサメサゾン、ブデソニド、またはプレドニゾロンである方法が提供される。１つの変形例では、このステロイドはプレドニゾロンである。
【００５４】
別の実施形態では、コラーゲン形成大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎（Ｉｓｃｈａｅｍｉｃ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、便流変更性大腸炎（Ｄｉｖｅｒｓｉｏｎ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、ベーチェット症候群、感染性大腸炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、または非定型大腸炎（Ｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）を治療する方法であって、本願のいずれかの化合物または組成物の治療上有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。別の態様では、アメーバ症、クロストリジウム・ディフィシル感染症、偽膜性大腸炎、憩室炎、胃腸炎、胃腸癌、または過敏性大腸症候群（ＩＢＳ）を治療する方法であって、本願のいずれかの化合物または組成物の治療上有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。
【００５５】
別の実施形態では、哺乳動物における炎症状態を治療または緩和する方法であって、有効量のＣＯＸ２阻害剤を結腸に送達することを含み、このＣＯＸ２阻害剤は本願明細書で提示される化合物または組成物のいずれかのヒドロキシルを有する薬物の残基である、方法が提供される。別の実施形態では、哺乳動物における胃腸癌を治療する方法であって、有効量のＣＯＸ２阻害剤を結腸に送達することを含み、このＣＯＸ２阻害剤は本願明細書で提示される化合物または組成物のいずれかのヒドロキシルを有する薬物の残基である、方法が提供される。
【００５６】
上記の実施形態、態様および変形例には、アミノ酸の塩（アルギン酸塩など）、グルコン酸塩、およびガラクツロン酸塩も包含される。本願の化合物のいくつかは分子内塩または双性イオンを形成してもよい。本願の化合物のいくつかは溶媒和されていない形態および溶媒和されている形態（水和されている形態を含む）で存在することができ、これらは本願の範囲内にあることが意図されている。薬学的に許容できる賦形剤と、本願の少なくとも１つの化合物の治療上有効量とを含む医薬組成物も提供される。
【００５７】
本願の化合物、またはその誘導体の医薬組成物は、非経口投与用の溶液または凍結乾燥された粉末として配合されてもよい。粉末は、使用に先立って適切な希釈剤または他の薬学的に許容できる担体の添加によって再構成されてもよい。液体配合物は、一般に緩衝化された、等張性の水溶液である。適切な希釈剤の例は、通常の等張性食塩水溶液、水中の５％  デキストロースまたは緩衝化された酢酸ナトリウムまたは酢酸アンモニウム溶液である。かかる配合物は、非経口投与に特に適しているが、経口投与用に使用されてもよい。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、またはクエン酸ナトリウムなどの賦形剤も加えられてよい。あるいは、これらの化合物は、経口投与用に、封入されていてもよいし、錠剤化されていてもよいし、またはエマルションまたはシロップの中で調製されてもよい。薬学的に許容できる固体または液体の担体は、当該組成物を増強もしくは安定化するために、または組成物の調製を容易にするために加えられてよい。液体担体としては、シロップ、落花生油、オリーブ油、グリセリン、生理食塩水、アルコールまたは水が挙げられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム、二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天またはゼラチンが挙げられる。この担体は、単独のまたはワックスを伴うグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの徐放性物質をも含んでいてよい。固体担体の量は様々であるが、好ましくは、投薬単位あたり約２０ｍｇ〜約１ｇであってよい。医薬調剤は、錠剤形態については製粉、混合、造粒、および必要な場合には圧縮を、または硬ゼラチンカプセル剤形態については製粉、混合、および充填を伴う、薬学の従来の手法に従って製造される。液体担体が使用される場合、その調剤は、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または水系もしくは非水系の懸濁剤の形態であってもよい。かかる液体配合物は、経口により直接投与されてもよいし、または軟ゼラチンカプセル剤の中へと充填されてもよい。これらの投与方法の各々に適した配合物は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａに見出され得る。
【００５８】
１つの変形例では、任意に単一の立体異性体の形態、または立体異性体式の混合物の形態にある、上記化合物、またはその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００５９】
（定義）
本願明細書において明確に特段の注記がない限り、使用される用語の定義は、有機合成および薬科学の技術分野で使用される標準的な定義である。
【００６０】
「アルキル」基は、任意に鎖中の炭素原子の間に酸素、窒素または硫黄原子が挿入されているかまたは示されたとおりの炭素原子の鎖を有する直鎖、分枝鎖、飽和または不飽和の脂肪族基である。例えば、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキルは、１〜１０個の炭素原子の鎖を有するアルキル基含み、これには、例えば、基メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１，３−ブタジエニル、ペンタ−１，３−ジエニルなどが含まれる。アルキル基は、例えば、−（ＣＲ１Ｒ２）ａ−基（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立に水素であるか、または独立に、本願明細書で提示されるように置換され、例えば、ａは０、１または２である）として表されてもよい。
【００６１】
例えば「アリールアルキル」として表される、アリール基などの別の基とともに言及されるアルキルは、アルキル基（例えば、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキルにおけるように）および／もしくはアリール基に示された原子数を有する直鎖、分枝鎖、飽和または不飽和の二価の脂肪族基であることが意図されている。または、原子が示されていない場合は、このアルキルは、このアリールとアルキル基との間の結合を意味する。かかる基の非排他的な例としては、ベンジル、フェニルエチルなどが挙げられる。
【００６２】
「アルキレン」基は、アルキル基の中に示された原子数を有する直鎖、分枝鎖、飽和または不飽和の二価の脂肪族基；例えば、−（Ｃ１−Ｃ３）アルキレン−または−（Ｃ１−Ｃ３）アルキレニル−である。
【００６３】
「アリール」基は、環の中に５〜８個の原子を有する単環式または二環式の芳香族炭化水素基、例えばフェニルである。この単環式アリール基は、典型的には５〜７員環であり、二環式アリール基は典型的には７〜８員環である。
【００６４】
用語「ヘテロアリール」は、本願明細書で使用する場合、例えば、約３〜約３０個の原子、好ましくは約６〜約１８個の原子、より好ましくは約６〜約１４個の原子、最も好ましくは約６〜約１０個の原子および１〜３個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含むアリール基を意味する。かかる基の例としては、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チオフラニル、チアゾリル、イソチアゾリル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、キノリニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアゾリルおよびベンゾトリアゾリルが挙げられる。
【００６５】
モノシクリル基またはポリシクリル基などの「シクリル」には、単環式のシクロアルキル、または直鎖状に縮合した、角度をつけて縮合したもしくは架橋したポリシクロアルキル、またはこれらの組合せが含まれる。かかるシクリル基は、ヘテロシクリル類似体を含むことが意図されている。シクリル基は、飽和、部分飽和または芳香族であってもよい。
【００６６】
「ハロゲン」または「ハロ」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００６７】
「ヘテロシクリル」または「複素環」は、その環を形成する原子のうちの１以上がＮ、ＯまたはＳであるヘテロ原子である、シクロアルキル基である。シクロアルキルは、飽和、部分飽和または芳香族であってもよい。ヘテロシクリルの非排他的な例としては、ピペリジル、４−モルホリル、４−ピペラジニル、ピロリジニル、１，４−ジアザペルヒドロエピニル（ｄｉａｚａｐｅｒｈｙｄｒｏｅｐｉｎｙｌ）、アセトニジル−４−オン、１，３−ジオキサニル、チオフェニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラニルなどが挙げられる。
【００６８】
用語「アルコキシ」には、二価の酸素に結合した直鎖または分枝状のアルキル基が含まれる。このアルキル基は、これまでに定義されたとおりである。かかる置換基の例としては、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシなどが挙げられる。用語「アルコキシアルキル」は、１以上のアルコキシ基で置換されたアルキル基を指す。用語「ヘテロアリールオキシ」は、１以上のアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基を指す。用語「アリールオキシ」は、酸素に結合したアリール基、例えばフェニル−Ｏ−などを指す。
【００６９】
本願明細書で使用する場合、二価の基が本願明細書に記載されるように基−Ｚ−として、または例えば下記に示すように一般的に−Ａ−Ｂ−によって表される場合、下記の２つの構造で記述されるような可能な順列の両方で結合されていてもよい基を表すことも意図されている。
【化１４】
2010531845.tif 000017
【００７０】
例えば、例として基「−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）−」などの二価の基が提示された場合、その基は、二価の基−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）−および同様に二価の基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３−の両方を含むことも意図されている。
【００７１】
「ヒドロキシルを有する薬物」は、ヒドロキシル（すなわち、−ＯＨ）基で官能化されているか、または置換されている薬物または生物活性化合物を意味する。従って、ヒドロキシルを有する薬物の残基は、ヒドロキシル基を除いた当該薬物または生物活性化合物の構成要素である。本願で用いられる薬物には、抗炎症薬、抗癌剤、造影剤（特に、結腸の疾患の撮像で使用されるもの）；ワクチン、抗原、抗感染症薬、ペプチド、アンチセンス分子、およびタンパク質を含めてもよい。かかる薬物としては、ステロイド系化合物（例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメサゾンまたはブデソニドのエステル類）、ニトロイミダゾール（例えばメトロニダゾール）、抗生物質、（例えば、ナリジクス酸などのキノリン、シプロフロキサシンおよびレボフロキサシンなどのフルオロキノロン）、化学療法薬（例えばロイコボリン、トポテカン）、および抗体、（例えばベバシズマブ、セツキシマブおよびパニツムマブ）を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００７２】
「薬学的に許容できる塩」は、一般に所望の薬理学的活性を有すると考えられ、安全、無毒であると考えられ、かつ獣医学およびヒトでの薬理学的用途に対して許容できる塩組成物を意味する。かかる塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸と形成される酸付加塩；または酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸、サリチル酸など有機酸と形成される酸付加塩が挙げられる。
【００７３】
本願明細書で使用する場合の「プロドラッグ」は、体内で、特に結腸において変換または分解して本発明の生物活性化合物（例えば、上記中間体アニリンまたは上記ラクタムおよび上記活性薬物）を生成することができる生体前駆体（ｂｉｏｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）または薬学的に許容できる化合物を意味する。特に、本願の化合物は、ミクロフローラのアゾレダクターゼなどのインビボアゾレダクターゼによって還元されてもよい。
【００７４】
「治療上有効量」は、本願明細書に列挙される生物学的効果のいずれかをもたらす薬物量を意味する。治療上有効量はまた、化合物／薬剤もしくはプロドラッグの１以上の生物活性特性のレベルの目に見える変化を支えるのに有用なまたは支えることができる、本願明細書に開示される化合物／薬剤もしくはプロドラッグを含む組成物の量、あるいは有益な効果を与えるのに十分な投薬量をも意味する。かかる有益な効果は、レシピエントまたは患者についての症状の改善を含み得る。特定の態様では、この治療上有効量は、疾患の治癒または治療（ｃｕｒｉｎｇ）に関連していてもよい。当該技術分野で公知のとおり、治療上有効量を決定するために多くの考慮事項が考慮されてもよい。かかる考慮事項の例は、例えばＧｉｌｍａｎ、Ａ．Ｇ．ら、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（１９９０）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９９０）に見出すことができる。
【００７５】
「置換もしくは非置換の」または「任意に置換された」は、例えばアルキル、アリール、ヘテロシクリル、（Ｃ１−Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクリル（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１−Ｃ８）アルキルなどの基が、明確に特段の注記がない限り、非置換であってもよいし、またはハロ、ニトロ、トリフルオロメチル（−ＣＦ３）、トリフルオロメトキシ、メトキシ、カルボキシ、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＳＭｅ、シアノなどの基から選択される１つ、２つまたは３つの置換基によって置換されていてもよいことを意味する。
【実施例】
【００７６】
本願の例示となる化合物の調製のために以下の手順を用いることができる。これらの化合物を調製する際に使用される出発物質および試薬は、シグマアルドリッチケミカル社（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）（ウィスコンシン州ミルウォーキー）、バッケム（Ｂａｃｈｅｍ）（カリフォルニア州、トランス）などの商業的供給業者から入手可能であるか、またはＦｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第１〜１７巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９９１；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、第１〜５巻および補遺、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、第１〜４０巻、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．，１９９１；Ｍａｒｃｈ  Ｊ．：Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；およびＬａｒｏｃｋ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９などの参考文献に記載される手順に従って、当該技術分野の当業者に周知の方法によって調製されるかのいずれかである。
【００７７】
ある場合には、保護基が導入されて最終的に除去されてもよい。アミノ、ヒドロキシ、およびカルボキシ基に対する適切な保護基は、Ｇｒｅｅｎｅら、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１に記載されている。標準的な有機化学反応は、例えばＬａｒｏｃｋ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９に記載されるような多くの異なる試薬を使用して、成し遂げることができる。
【００７８】
１つの変形例では、本願の化合物は、下記のスキーム８〜１１に概略を示した工程によって合成することができる。これらのスキームは、当該プロドラッグの異なる同族体の調製を示す。
【００７９】
（一般的な実験手順）
未補正の融点はＳｔｕａｒｔ（登録商標）  ｍｅｌｔｉｎｇ  ｐｏｉｎｔ  ＳＭＰ１１融点装置を使用して得た。赤外（ＩＲ）スペクトルは、パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎｇ  Ｅｌｍｅｒ）２０５  ＦＴ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｐａｒａｇｏｎ  １０００分光計を使用して得た。バンド位置はｃｍ−１単位で提示した。固体試料は、ＫＢｒディスクによって得た。油状物はＮａＣｌプレート上での無溶媒膜として分析した。ＵＶ分光法はＣａｒｙ  ３Ｅ  ＵＶ−ＶＩＳ分光光度計で行った。１Ｈおよび１３Ｃスペクトルは、２７℃で、ＣＤＣｌ３中またはＣＤ３ＯＤ中（テトラメチルシランを内部標準とする）のいずれかで、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＤＰＸ  ４００ＭＨｚ  ＦＴ  ＮＭＲ分光計（４００．１３ＭＨｚ  １Ｈ、１００．１６ＭＨｚ  １３Ｃ）で記録した。ＣＤＣｌ３については、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、０．００  δのＴＭＳピークに対して帰属し、１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは７７．００ｐｐｍのＣＤＣｌ３三重線の中央に対して帰属した。ＣＤ３ＯＤについては、１Ｈおよび１３Ｃ  スペクトルは、それぞれ３．３０  δおよび４９．００ｐｐｍのＣＤ３ＯＤの多重線の中央のピークに対して帰属した。結合定数はヘルツ（Ｈｚ）単位で記録した。１Ｈ  ＮＭＲの帰属について、化学シフトは、シフト値（プロトン数，吸収の説明（ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線），当てはまる場合には結合定数（１つまたは複数個）、プロトン源の帰属）で報告する。ＬＲＭＳは、トリニティー・カレッジ（Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ）の化学科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）のマイクロマス（ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）質量分析計（ＥＩモード）で行った。フラッシュクロマトグラフィはメルク（Ｍｅｒｃｋ）  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  粒径０．０４０〜０．０６３ｍｍ上で行い、Ｒｆ値を引用する薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）はシリカゲル  メルク（Ｍｅｒｃｋ）  Ｆ−２５４プレート上で行った。化合物は、２５４ｎｍでの吸光度および／またはバニリン染色によって視覚的に検出した。
【化１５】
2010531845.tif 000018
ｉ）Ｐｄ／Ｃ  １０％、Ｈ２、酢酸エチル、ｉｉ）オキソン、ｉｉｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、Ｔｅｒｔ−ブタノール、ｉｖ）Ｐｄ／Ｃ  １０％、Ｈ２、Ｖ）ＡｃＯＨ
【化１６】
2010531845.tif 000019
ｖｉ）ＤＩＡＤ、Ｐｈ３Ｐ、ＴＨＦ、ｖｉｉ）ＴＦＡ
【００８０】
２−ニトロソフェニル酢酸
酢酸エチル１００ｍＬ中の２−ニトロフェニル酢酸（５ｇ、０．０２７６ｍｏｌ）の溶液に、パラジウム−チャコ−ル（１０％）を触媒量（５％、０．２５ｇ）だけ加えた。この反応混合物を、水素雰囲気下、室温で２時間撹拌し、その後、ＴＬＣ分析から反応の完結が判明した（酢酸エチル−ジクロロメタン  ４０：６０）。反応混合物を濾過助剤上で濾過してパラジウム−チャコ−ル（１０％）を除去し、溶媒を減圧下で除去した。粗製２−アミノフェニルプロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ）を蒸留水５０ｍＬおよびジクロロメタン５０ｍＬに溶解した。オキソン（登録商標）２当量（３３．９ｇ、０．０５５２ｍｏｌ）を蒸留水５０ｍＬに溶解し、この反応混合物に加えた。この時点でこの反応液はｐＨ＝４であったため、２−ニトロソフェニル酢酸は、生成するや否や、有機層へと移された。２時間後、反応混合物を分液漏斗に移した。有機層を集め、水相を２×２５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機相を集め、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、４．２１ｇの生成物を暗色油状物として得た。この粗製混合物を、ジクロロメタン：酢酸エチル（７０：３０）を使用してフラッシュカラムにかけ、３．４８ｇの生成物を褐色の結晶（７０％）として得た：ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１６９１．８６（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：９．００（１Ｈ，ｓ，ＣＯＯＨ），７．２４（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．５４および７．５３Ｈｚ），７．０４（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．５３および７．５３Ｈｚ），６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．５３Ｈｚ），３．５７（２Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１７８．０２（Ｃ，Ｃ−８，Ｃ＝Ｏ），１４１．８６（Ｃ，Ｃ−１），１２７．５０（ＣＨ，Ｃ−４），１２４．７７（Ｃ，Ｃ−２），１２４．１５（ＣＨ，Ｃ−３），１２２．０５（ＣＨ，Ｃ−５），１０９．５０（ＣＨ，Ｃ−６），３５．８４（ＣＨ２，Ｃ−７）。
【００８１】
５−（２−カルボキシメチル−フェニルアゾ）−２−ヒドロキシ安息香酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
氷酢酸（２０ｍＬ）中の２−ニトロソフェニル酢酸（１．０ｇ、０．００６１ｍｏｌ）の溶液に、氷酢酸（２０ｍＬ）中の５−アミノサリチル酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．２６ｇ、０．００６１ｍｏｌ）の別の溶液を１５分間にわたって滴下した。ＴＬＣ、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）による完結まで、反応液を４８時間撹拌したままにした。溶媒を減圧下で除去し、生成物を黒色油状物として得た。ジクロロメタンを移動相として使用して、これをフラッシュカラムにかけ、１．４９ｇの生成物を橙色の結晶（６９％）として得た：融点：１０８〜１１０℃。ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４３４．５１ｃｍ−１、１７１４．１４ｃｍ−１、１６７０．３９ｃｍ−１、１５８７．０５ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１１．４９（１Ｈ，ｓ），８．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．４８Ｈｚ），７．９５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ９および２．４８Ｈｚ），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．０４Ｈｚ），７．４０（３Ｈ，ｍ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．０４Ｈｚ），４．１０（２Ｈ，ｓ），１．６４（９Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１７７．０５（Ｃ，Ｃ−８，Ｃ＝Ｏ），１６９．１４（Ｃ，Ｃ−１５，Ｃ＝Ｏ），１６３．８３（Ｃ，Ｃ−１２），１４９．４０（Ｃ，Ｃ−２），１４４．８４（Ｃ，Ｃ−９），１３３．２６（ＣＨ，Ｃ−１），１３１．０１（ＣＨ，Ｃ−５），１３０．４９（ＣＨ，Ｃ−６），１２７．８２（ＣＨ，Ｃ−１０），１２７．６２（ＣＨ，Ｃ−４），１２７．２６（ＣＨ，Ｃ−１４），１１７．９９（ＣＨ，Ｃ−１３），１１５．５３（ＣＨ，Ｃ−３），１１３．３２（Ｃ，Ｃ−１１），８３．２４（Ｃ，Ｃ−１６），３７．４０（ＣＨ２，Ｃ−７），２７．６９（３×ＣＨ３，Ｃ−１７）。
【００８２】
ｔｅｒｔ−ブチルエステルで保護されたミューチュアルプロドラッグ１
反応温度が４０℃に到達した後、乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の５−（２−カルボキシメチル−フェニルアゾ）−２−ヒドロキシ安息香酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．４０ｇ、０．００１１ｍｏｌ）、プレドニゾロン（１．１当量、１．１８ｇ、０．００１３ｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３当量、０．８８ｇ、０．００３３ｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート  ９５％（ＤＩＡＤ）を、１２分間にわたって滴下した（３当量、０．６６ｍＬ、０．００３３ｍｏｌ）。反応液を４０℃で１時間撹拌し、反応液を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ分析（ジクロロメタン）は完結を示した。溶媒を減圧下で除去し、生成物を橙色の油状物として得た。これをジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）を使用してフラッシュカラムにかけ、このカラム後、トリフェニルホスフィンオキシドは除去されたが、生成物０．３３ｇを橙色の結晶（４３％）として得るために第２のフラッシュカラムが必要であった（ヘキサン（２００ｍＬ）、ヘキサン：酢酸エチル（７０：３０））：融点：１２４〜１２６℃。ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４３６．２９ｃｍ−１、１７２６．１７ｃｍ−１、１６５９．６１ｃｍ−１、１６１６．０９ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１１．４９（１Ｈ，ｓ），８．４４（１Ｈ，ｓ），８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ），７．４０（３Ｈ，ｍ），７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １０．０４），７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９Ｈｚ），６．２５（１Ｈ，ｓ），５．９８（１Ｈ，ｓ），４．２７（２Ｈ，ｓ），２．６８〜０．８４（プレドニゾロンエンベロープ，１９Ｈ），１．６７（９Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：２０４．４０（Ｃ，Ｃ−２０，Ｃ＝Ｏ），１８６．２６（Ｃ，Ｃ−３，Ｃ＝Ｏ），１７１．３６（Ｃ，Ｃ−２２，Ｃ＝Ｏ），１７０．１０（Ｃ，Ｃ−５），１６９．０９（Ｃ，Ｃ−１３，Ｃ＝Ｏ），１６３．８５（Ｃ，Ｃ−１０’），１５６．２５（ＣＨ，Ｃ−１），１４９．５３（Ｃ，Ｃ−２’），１４５．０７（Ｃ，Ｃ−７’），１３３．２５（Ｃ，Ｃ−１’），１３０．９８（ＣＨ，Ｃ−５’），１３０．５３（ＣＨ，Ｃ−６’），１２９．８９（ＣＨ，Ｃ−８’），１２７．８５（ＣＨ，Ｃ−２），１２７．１７（ＣＨ，Ｃ−４’），１２５．５２（ＣＨ，Ｃ−１２’），１２１．７９（ＣＨ，Ｃ−４），１１８．１４（ＣＨ，Ｃ−１１’），１１５．１４（ＣＨ，Ｃ−３’），１１３．２６（Ｃ，Ｃ−９’），８９．１７（Ｃ，Ｃ−１７），８３．３０（Ｃ，Ｃ−１４’），６９．５１（ＣＨ，Ｃ−１１），６７．９８（ＣＨ２，Ｃ−２１），５４．８６（ＣＨ，Ｃ−９），５０．８６（ＣＨ，Ｃ−１４），４７．２６（Ｃ，Ｃ−１３），４３．６８（Ｃ，Ｃ−１０），３８．８５（ＣＨ２，Ｃ−１２），３６．４４（ＣＨ２，Ｃ−２３），３３．９２（ＣＨ２，Ｃ−６），３３．５８（ＣＨ２，Ｃ−７），３１．５６（ＣＨ２，Ｃ−１６），３０．７１（ＣＨ，Ｃ−８），２７．７８（３×ＣＨ３，Ｃ−１５’），２３．３６（ＣＨ２，Ｃ−１５），２０．５６（ＣＨ３，Ｃ−１９），１６．３７（ＣＨ３，Ｃ−１８）。
【００８３】
ミューチュアルプロドラッグ１（５−｛２−２［２（１１，１７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチル−１０，１３−ジメチル−３−オキソ−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−２−オキソ−エトキシカルボニルメチル］フェニルアゾ｝−２−ヒドロキシ−安息香酸）
ジクロロメタン（１ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルエステルで保護されたミューチュアルプロドラッグ１（０．１ｇ、０．０００１５５ｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、反応液を室温で４時間放置した。ＴＬＣ分析、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）は完結を示し、窒素を使用して溶媒およびトリフルオロ酢酸を吹き飛ばし（ｂｌｏｗ  ｏｆｆ）、生成物を橙色の油状物として得た。この粗生成物をジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）を使用してフラッシュカラムにかけ、０．０７８ｇの生成物を橙色の結晶（７８％）として得た。融点：１５４〜１５６℃。ＭＳ：６６５．２５０３  算出した質量６６５．２４７５。ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４３６．４０ｃｍ−１、１６５４．６２ｃｍ−１、１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．４８（１Ｈ，ｓ），８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．０４Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ），７．４６（４Ｈ，ｍ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９Ｈｚ），６．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １０Ｈｚ），６．００（１Ｈ，ｓ），５．０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５６Ｈｚ），４．３５（１Ｈ，ｓ），４．３１（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５２Ｈｚ），２．６８−０．８（プレドニゾロンエンベロープ，１９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＭｅＯＤ）：２０５．１８（Ｃ，Ｃ−２０，Ｃ＝Ｏ），１８７．１５（Ｃ，Ｃ−３，Ｃ＝Ｏ），１７２．９９（Ｃ，Ｃ−２２，Ｃ＝Ｏ），１７１．８２（Ｃ，Ｃ−５），１６４．１１（Ｃ，Ｃ−１３，Ｃ＝Ｏ），１５８．３８（Ｃ，Ｃ−１０），１５６．３５（ＣＨ，Ｃ−１），１４９．６２（Ｃ，Ｃ−２），１４４．９３（Ｃ，Ｃ−７），１３３．４９（Ｃ，Ｃ−１），１３３．３６（ＣＨ，Ｃ−５），１３０．９０（ＣＨ，Ｃ−６），１２９．９７（ＣＨ，Ｃ−８），１２７．３９（ＣＨ，Ｃ−２），１２７．０７（ＣＨ，Ｃ−４），１２６．２０（ＣＨ，Ｃ−１２），１２５．８８（ＣＨ，Ｃ−４），１２０．５７（ＣＨ，Ｃ−１１），１１７．０１（ＣＨ，Ｃ−３），１１４．６４（Ｃ，Ｃ−９），８８．７５（Ｃ，Ｃ−１７），６８．９１（ＣＨ，Ｃ−１１），６７．９５（ＣＨ２，Ｃ−２１），５５．４０（ＣＨ，Ｃ−９），５０．９１（ＣＨ，Ｃ−１４），ＭｅＯＤの残留ピークがＣのピークを覆い隠していた，Ｃ−１３，４４．１９（Ｃ，Ｃ−１０），３８．１９（ＣＨ２，Ｃ−１２），３６．０９（ＣＨ２，Ｃ−２３），３３．７０（ＣＨ２，Ｃ−６），３２．７５（ＣＨ２，Ｃ−７），３１．３１（ＣＨ２，Ｃ−１６），２７．６６（ＣＨ，Ｃ−８），２２．９５（ＣＨ２，Ｃ−１５），１９．７２（ＣＨ３，Ｃ−１９），１５．３６（ＣＨ３，Ｃ−１８）。
【化１７】
2010531845.tif 000020
ｉ）Ｐｄ／Ｃ  １０％、Ｈ２、２％ＮａＯＨ、ｉｉ）オキソン、ｉｉｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、Ｔｅｒｔ−ブタノール、ｉｖ）Ｐｄ／Ｃ  １０％、Ｈ２、ｖ）ＡｃＯＨ
【化１８】
2010531845.tif 000021
【００８４】
２−ニトロソフェニルプロピオン酸
水１００ｍＬおよび２当量の２％  ＮａＯＨ（１０３ｍＬ）中の２−ニトロケイ皮酸（５ｇ、０．０２５９ｍｏｌ）の溶液に、パラジウム−チャコ−ル（１０％）を触媒量（５％、０．２５ｇ）加えた。この反応混合物を水素雰囲気下、室温で４８時間撹拌し、その後、ＴＬＣ分析から反応の完結が判明した（酢酸エチル）。反応混合物を濾過助剤上で濾過してパラジウム−チャコ−ル（１０％）を除去し、溶媒を減圧下で除去した。この粗製２−アミノフェニルプロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ）を蒸留水５０ｍＬおよびジクロロメタン５０ｍＬに溶解した。オキソン（登録商標）２当量（３１．８ｇ、０．０５１８ｍｏｌ）を蒸留水５０ｍＬに溶解し、この反応混合物に加えた。この時点で、反応液はｐＨ＝４であったため、２−ニトロソフェニルプロピオン酸は、生成するや否や、有機層へと移された。２時間後、反応混合物を分液漏斗に移し、有機層を集め、水相を２×２５ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機相を集め、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、４．１２ｇの生成物を暗色油状物として得た。この粗製混合物をジクロロメタン：酢酸エチル（７０：３０）を使用してフラッシュカラムにかけ、３．４８ｇの生成物を褐色の結晶（６７％）として得た：融点：１１２〜１１４℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１６９９．２９（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ），７．５７（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．０４Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｍ），３．２４（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ），２．８１（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１７７．９６（Ｃ，Ｃ−９，Ｃ＝Ｏ），１７０．９１（Ｃ，Ｃ−２），１３２．８８（ＣＨ，Ｃ−５），１３１．７０（ＣＨ，Ｃ−６），１３１．６３（Ｃ，Ｃ−１），１２７．３０（ＣＨ，Ｃ−４），１２４．５６（ＣＨ，Ｃ−３），３４．０９（ＣＨ２，Ｃ−８），２７．６１（ＣＨ２，Ｃ−７）。
【００８５】
５−ニトロサリチル酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（６．２ｇ、０．０３０ｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、これを、乾燥ｔｅｒｔ−ブタノール（１２５ｍＬ）中の５−ニトロサリチル酸（５ｇ、０．０２７３ｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（３．３ｇ、０．０２７３ｍｏｌ）の撹拌溶液に３０分間にわたって滴下した。この混合物を一晩撹拌し、濾過して、生成したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を除去し、溶媒を減圧下で除去し、生成物を黄色油状物として得た。これを、ジクロロメタン：酢酸エチル（９０：１０）を使用してフラッシュカラムにかけ、５．２９ｇの生成物を淡黄色の結晶（８１％）として得た：融点：５８〜６０℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４１７．０６ｃｍ−１、２１１８．３５ｃｍ−１、１７１５．８８ｃｍ−１、１６７３．７７ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１１．７３（１Ｈ，ｓ），８．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．５２Ｈｚ），８．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ９および２．４８Ｈｚ），７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．０４Ｈｚ），１．６１（９Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１６８．０１（Ｃ，Ｃ−２），１６６．０９（Ｃ，Ｃ−７，Ｃ＝Ｏ），１３９．２４（Ｃ，Ｃ−５），１２９．５４（ＣＨ，Ｃ−４），１２６．１９（ＣＨ，Ｃ−６），１１７．９８（ＣＨ，Ｃ−３），１１２．９５（Ｃ，Ｃ−１），８４．４５（Ｃ，Ｃ−８），２７．５７（３×ＣＨ３，Ｃ−９）。
【００８６】
５−アミノサリチル酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
酢酸エチル（１００ｍＬ）中の５−ニトロサリチル酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４．２１ｇ、０．０１７６ｍｏｌ）の溶液に、パラジウム−チャコ−ル（１０％）を触媒量（０．４１ｇ、１０％）加えた。この反応液を、水素雰囲気下で３時間撹拌した。この時点で、ＴＬＣ分析（ジクロロメタン：酢酸エチル  ６０：４０）は反応の完結を示した。この反応混合物を濾過助剤上で濾過してパラジウム−チャコ−ル（１０％）を除去し、溶媒を減圧下で除去し、３．２ｇの生成物を淡緑色結晶（８６％）として得た：融点：４８〜５０℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３３７２．９２ｃｍ−１、１６６８．１６ｃｍ−１、１４９０．７２ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１０．４９（１Ｈ，ｓ），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．５２Ｈｚ），６．８（２Ｈ，ｍ），３．５（２Ｈ，ＮＨ２），１．６１（９Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１６９．１３（Ｃ，Ｃ−７），１５４．４４（Ｃ，Ｃ−２），１３７．６３（Ｃ，Ｃ−５），１２３．３０（ＣＨ，Ｃ−４），１１７．５７（ＣＨ，Ｃ−３），１１４．７１（ＣＨ，Ｃ−６），１１３．２４（Ｃ，Ｃ−２），８２．１２（Ｃ，Ｃ−８），２７．７４（３×ＣＨ３，Ｃ−９）。
【００８７】
５−［２−（２−カルボキシ−エチル）フェニルアゾ］−２−ヒドロキシ−安息香酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ｔ−Ｂｕ−アゾ−２）
氷酢酸（２０ｍＬ）中の２−ニトロソケイ皮酸（１．２７ｇ、０．００６３ｍｏｌ）の溶液に、氷酢酸（２０ｍＬ）中の５−アミノサリチル酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．３２ｇ、０．００６３ｍｏｌ）の別の溶液を１５分間にわたって滴下した。ＴＬＣ、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）による完結まで、反応液を４８時間撹拌したままにした。溶媒を減圧下で除去し、生成物を黒色油状物として得た。これを、ジクロロメタンを移動相として使用してフラッシュカラムにかけ、１．６８ｇの標記の化合物を橙色の結晶（７２％）として得た：融点：８６〜８８℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１７００．６６ｃｍ−１、１６６５．８７ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１１．５２（１Ｈ，ｓ），８．４６（１Ｈ，ｓ），８．０８（１Ｈ，ｓ），７．７２（１Ｈ，ｓ），７．４２（３Ｈ，ｍ），７．１３（１Ｈ，ｓ），３．４８（２Ｈ，ｓ），２．８２（２Ｈ，ｓ），１．７０（９Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１７９．００（Ｃ，Ｃ−９，Ｃ＝Ｏ），１６９．１８（Ｃ，Ｃ−１６，Ｃ＝Ｏ），１６３．７９（Ｃ，Ｃ−１３），１４９．５７（Ｃ，Ｃ−２），１４５．０９（Ｃ，Ｃ−１０），１３９．２１（Ｃ，Ｃ−１），１３０．５４（ＣＨ，Ｃ−５），１３０．０８（ＣＨ，Ｃ−６），１２７．６５（ＣＨ，Ｃ−１１），１２７．０８（ＣＨ，Ｃ−４），１２６．９７（ＣＨ，Ｃ−１５），１１８．１０（ＣＨ，Ｃ−１４），１１５．０７（ＣＨ，Ｃ−３），１１３．４０（Ｃ，Ｃ−１２），８３．２１（Ｃ，Ｃ−１７），３５．６８（ＣＨ２，Ｃ−８），２７．７４（ＣＨ３，Ｃ−１８），２６．５４（ＣＨ２，Ｃ−７）。
【００８８】
ｔｅｒｔ−ブチルで保護されたミューチュアルプロドラッグ２
反応温度が４０℃に到達した後、乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のアゾ化合物２（１．２１ｇ、０．００３３ｍｏｌ）、プレドニゾロン（１．１当量、１．１８ｇ、０．００３３ｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３当量、２．５９ｇ、０．００９９ｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＡＤを１２分間にわたって滴下した（３当量、１．９ｍＬ、０．００９９ｍｏｌ）。反応液を４０℃で１時間撹拌し、反応液を窒素雰囲気下、室温で一晩放置すると、ＴＬＣ分析（ジクロロメタン）は完結を示した。溶媒を減圧下で除去し、生成物を橙色の油状物として得た。これを、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）を使用してフラッシュカラムにかけ、このカラム後、トリフェニルホスフィンオキシドは除去され、生成物１．６０ｇを橙色の結晶（４０％）として得るためには、第２のフラッシュカラム、ヘキサン（２００ｍＬ）、ヘキサン：酢酸エチル（７０：３０）が必要であった：融点：１１６〜１１８℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４３５．９４ｃｍ−１、１７２４．５３ｃｍ−１、１６５８．４９ｃｍ−１、１６１５．４９ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２Ｈｚ），８．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ８．５２および２Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．０４Ｈｚ），７．４４（３Ｈ，ｍ），７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．５２Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５２Ｈｚ），６．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １０．０４Ｈｚ），６．０１（１Ｈ，ｓ），５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５６Ｈｚ），４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５６Ｈｚ），４．３９（１Ｈ，ｓ），３．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ９．５２），２．８２（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．０４Ｈｚ），２．６６−０．９（プレドニゾロンエンベロープ，１９Ｈ），１．６９（９Ｈ，ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：２０４．８３（Ｃ，Ｃ−２０，Ｃ＝Ｏ），１８６．４６（Ｃ，Ｃ−３，Ｃ＝Ｏ），１７２．５１（Ｃ，Ｃ−２２，Ｃ＝Ｏ），１７０．７３（Ｃ，Ｃ−５），１６９．０８（Ｃ，Ｃ−１３，Ｃ＝Ｏ），１６３．７３（Ｃ，Ｃ−１０），１５６．７７（ＣＨ，Ｃ−１），１４９．４８（Ｃ，Ｃ−２），１４５．０９（Ｃ，Ｃ−７），１３９．３１（Ｃ，Ｃ−１），１３０．５５（ＣＨ，Ｃ−５），１３０．００（ＣＨ，Ｃ−６），１２９．２６（ＣＨ，Ｃ−８），１２７．０４（ＣＨ，Ｃ−２），１２６．９１（ＣＨ，Ｃ−４），１２５．７２（ＣＨ，Ｃ−１２），１２１．６５（ＣＨ，Ｃ−４），１１８．１８（ＣＨ，Ｃ−１１），１１４．９９（ＣＨ，Ｃ−３），１１３．２９（Ｃ，Ｃ−９），８９．２０（Ｃ，Ｃ−１７），８３．２７（Ｃ，Ｃ−１４），６９．５６（ＣＨ，Ｃ−１１），６７．７４（ＣＨ２，Ｃ−２１），５４．９０（ＣＨ，Ｃ−９），５０．８７（ＣＨ，Ｃ−１４），４７．２２（Ｃ，Ｃ−１３），４３．８４（Ｃ，Ｃ−１０），３８．９６（ＣＨ２，Ｃ−１２），３５．４５（ＣＨ２，Ｃ−２３），３３．８３（ＣＨ２，Ｃ−６），３３．５９（ＣＨ２，Ｃ−７），３１．６１（ＣＨ２，Ｃ−１６），３０．７３（ＣＨ，Ｃ−８），２７．７５（３×ＣＨ３，Ｃ−１５），２６．６６（ＣＨ２，Ｃ−２４），２３．４１（ＣＨ２，Ｃ−１５），２０．５４（ＣＨ３，Ｃ−１９），１６．４２（ＣＨ３��Ｃ−１８）。
【００８９】
ミューチュアルプロドラッグ２（５−（２−｛２［２−（１１，１７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチル−１０，１３−ジメチル−３−オキソ−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−２−オキソ−エトキシカルボニル］エチル｝−フェニルアゾ｝−２−ヒドロキシ−安息香酸）
ジクロロメタン（３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルアゾ２（０．９ｇ、０．００１２６ｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸３（ｍＬ）を加え、反応液を室温で４時間放置した。ＴＬＣ分析、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）は完結を示し、窒素を使用して溶媒およびトリフルオロ酢酸を吹き飛ばし、生成物を橙色の油状物として得た。この粗生成物を、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）を使用してフラッシュカラムにかけ、０．７ｇの生成物を橙色の結晶（８４％）として得た。融点：１７６〜１７８℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４３７．１９ｃｍ−１、１７１８．０６ｃｍ−１、１６５４．２３ｃｍ−１、１５８７．９３ｃｍ−１。ＭＳ  １Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．５５（１Ｈ，ｓ），８．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ６．０４および１．４８Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ５．２８Ｈｚ），７．５０（１Ｈ，６．７６Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，４．５２Ｈｚ），７．４１（１Ｈ，ｍ），７．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ４．７６Ｈｚ），６．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ６．７６および１Ｈｚ），６．０２（１Ｈ，ｓ），４．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ２９．８４Ｈｚ），４．４１（１Ｈ，ｓ），３．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ５．０４Ｈｚ），２．８５（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ５Ｈｚ），２．６７−０−９３（プレドニゾロンエンベロープ，１９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＭｅＯＤ）：２０５．３７（Ｃ，Ｃ−２０，Ｃ＝Ｏ），１８７．１７（Ｃ，Ｃ−３，Ｃ＝Ｏ），１７３．０５（Ｃ，Ｃ−２２，Ｃ＝Ｏ），１７２．０５（Ｃ，Ｃ−５），１６４．０３（Ｃ，Ｃ−１３，Ｃ＝Ｏ），１６１．３３（Ｃ，Ｃ−１０），１５８．４１（ＣＨ，Ｃ−１），１４９．６２（Ｃ，Ｃ−２），１４４．９３（Ｃ，Ｃ−７），１３９．１２（Ｃ，Ｃ−１），１２９．８５（ＣＨ，Ｃ−６），１２８．６３（ＣＨ，Ｃ−８），１２６．４７（ＣＨ，Ｃ−２），１２５．９３（ＣＨ，Ｃ−４），１２４．５４（ＣＨ，Ｃ−１２），１２０．６１（ＣＨ，Ｃ−４），１１７．６５（ＣＨ，Ｃ−１１），１１６．８０（ＣＨ，Ｃ−３），１１４．５１（Ｃ，Ｃ−９），８８．７１（Ｃ，Ｃ−１７），６８．９３（ＣＨ，Ｃ−１１），６７．４８（ＣＨ２，Ｃ−２１），５５．４５（ＣＨ，Ｃ−９），５０．９４（ＣＨ，Ｃ−１４），ＭｅＯＤの残留ピークがＣのピークを覆い隠していた，Ｃ−１３，４４．２３（Ｃ，Ｃ−１０），３８．３７（ＣＨ２，Ｃ−１２），３５．１９（ＣＨ２，Ｃ−２３），３３．７２（ＣＨ２，Ｃ−６），３２．７９（ＣＨ２，Ｃ−７），３１．３３（ＣＨ２，Ｃ−１６），３０．７８（ＣＨ，Ｃ−８），２６．２６（ＣＨ２，Ｃ−２４），２２．９７（ＣＨ２，Ｃ−１５），１９．７３（ＣＨ３，Ｃ−１９），１５．４５（ＣＨ３，Ｃ−１８）。
【化１９】
2010531845.tif 000022
ｉ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２、ＮａＯＨ  ２Ｎ中；ｉｉ）ＤＣＭ／Ｈ２Ｏ中、オキソン；ｉｉｉ）ＴＦＡ、ＴＦＡＡ中のアセトン、還流、８時間；ｉｖ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２  ＥＡ中、室温；ｖ：ＡｃＯＨ。
【化２０】
2010531845.tif 000023
ｖｉ：Ｐｈ３Ｐ、ＴＨＦ中のＤＩＡＤ。
【００９０】
５−ニトロサリチル酸  ダイオキシン−４−オン
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を備えた５００ｍｌの丸底フラスコに５−ニトロサリチル酸（２０ｇ、１０９．２ｍｍｏｌ）を入れ、２００ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、次いで無水トリフルオロ酢酸（４５．５４ｍｌ、３２７．７ｍｍｏｌ）および乾燥アセトン（１６．０４ｍｌ、２１８．４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、２時間還流させたままにした。反応が８時間以内で完結するまで、さらに８．０２ｍｌの乾燥アセトンを、毎時間（１時間あたり１当量）、沸騰している溶液に滴下した。次いで、減圧下、約５５℃のバス温度でこの反応液を濃縮し、トルエンを加え、３回除去してあらゆるトリフルオロ酢酸の痕跡を除去し、最終的に固体残渣を真空下、４５℃で１時間乾燥した。この粗製の褐色がかった固体をアセトン−石油エーテル（１：４）の混合物から２回再結晶し、２０．５ｇのオフホワイトの（ｗｈｉｔｅ  ｏｆｆ）結晶（８４．１％）を得た（あるいは、小スケールで使用する場合には、アセトン−石油エーテル（１：４）またはジクロロメタンを移動相として使用するフラッシュクロマトグラフィを使用して生成物を精製することができる）：融点９２〜９４℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１７３８．９２（Ｃ＝Ｏ）、１６１６．２３および７４５．９４（ＮＯ２）ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．５１Ｈｚ），８．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ６．５２および３．０１Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．５３Ｈｚ），１．８０（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１５９．８２（Ｃ，Ｃ−７，Ｃ＝Ｏ），１５８．５０（Ｃ，Ｃ−４），１４２．３３（Ｃ，Ｃ−１），１３０．７９（ＣＨ，Ｃ−６），１２５．５７（ＣＨ，Ｃ−２），１１８．０９（ＣＨ，Ｃ−５），１１２．９３（Ｃ，Ｃ−３），１０７．３６（Ｃ，Ｃ−８），２５．４５（ＣＨ３，Ｃ−９およびＣ−１０）。
【００９１】
アセトニドで保護された５−アミノサリチル酸
室温の酢酸エチル（３０ｍｌ）中の５−ニトロサリチル酸  ダイオキシン−４−オン（２ｇ、８．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、パラジウム−活性炭（１０％）（０．５ｇ）を加えた。反応がジクロロメタンを移動相とするＴＬＣにより完結するまで、この混合物を水素雰囲気下で撹拌した。このパラジウムを濾過助剤に通して濾過し、溶媒を減圧下で除去し、１．４４ｇの生成物を黄色結晶（８３．２％）として得た：融点１２２〜１２４℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：１７１０．３７（Ｃ＝Ｏ）、３４６９．０２および１３２４．２２（ＮＨ２）ｃｍ−１。ＭＳ：２１６．０６１６（Ｍ＋＋２３）、１９４．０８１４（Ｍ＋＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：７．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ３．０１Ｈｚ），６．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ５．５２および３．０１Ｈｚ），６．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．０４Ｈｚ），３．６１（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），１．６９（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１６１．１６（Ｃ，Ｃ−７，Ｃ＝Ｏ），１４８．１５（Ｃ，Ｃ−４），１４１．３６（Ｃ，Ｃ−１），１２３．３８（ＣＨ，Ｃ−６），１１７．４１（ＣＨ，Ｃ−２），１１３．５４（ＣＨ，Ｃ−５），１１３．５１（Ｃ，Ｃ−３），１０５．７５（Ｃ，Ｃ−８），２５．２０（ＣＨ３，Ｃ−９およびＣ−１０）。
【００９２】
２−（２，２−ジメチル−４−オキソ−４Ｈ−ベンゾ［１，３］ダイオキシン−６−イルアゾ）−フェニル］−酢酸（アセトニドで保護された担体）
氷酢酸（２５ｍｌ）中の２−ニトロソフェニル酢酸（０．５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、氷酢酸（２５ｍｌ）中の５−アミノサリチル酸  ダイオキシン−４−オン（０．４２ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）の別の溶液を加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で４８時間激しく撹拌し、ジクロロメタン−酢酸エチル（５０：５０）を移動相として使用してＴＬＣにより反応の完結をチェックした。溶媒を減圧下で除去し、トルエンを２回加え、あらゆる酢酸の痕跡を除去し、橙色の粗生成物を得た。これを、ジクロロメタン−酢酸エチル（７０：３０）を移動相として使用するフラッシュクロマトグラフィによって精製し、０．７８ｇの生成物を橙色の結晶（８９％）として得た：融点１２４〜１２６℃、ＩＲＶｍａｘ（ＫＢｒ）：１７３４．８４および１６９８．１８（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１。ＭＳ：３６３．０９５０（Ｍ＋＋２３）。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．５１Ｈｚ），８．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ８．５４および２．５１Ｈｚ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．５３Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．５７Ｈｚ），７．４３（２Ｈ，ｍ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．０３Ｈｚ），４．１６（ｓ，２Ｈ），１．８０（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１７７．６７（Ｃ，Ｃ−８，Ｃ＝Ｏ），１６０．４２（Ｃ，Ｃ−１５，Ｃ＝Ｏ），１５７．８５（Ｃ，Ｃ−１２），１４９．６６（Ｃ，Ｃ−１），１４７．８６（Ｃ，Ｃ−９），１３３．７８（Ｃ，Ｃ−２），１３１．５５（ＣＨ，Ｃ−４），１３１．４５（ＣＨ，Ｃ−３），１２８．９３（ＣＨ，Ｃ−５），１２８．３９（ＣＨ，Ｃ−１４），１２６．６４（ＣＨ，Ｃ−１０），１１８．１４（ＣＨ，Ｃ−６），１１６．０７（ＣＨ，Ｃ−１３），１１３．６１（Ｃ，Ｃ−１１），１０６．９０（Ｃ，Ｃ−１６），３７．２８（ＣＨ２，Ｃ−７），２５．８６（ＣＨ３，Ｃ−１７およびＣ−１８）。
【００９３】
アセトニドで保護されたミューチュアルプロドラッグ１
乾燥テトラヒドロフラン（３０ｍｌ）中の２−（２，２−ジメチル−４−オキソ−４Ｈ−ベンゾ［１，３］ダイオキシン−６−イルアゾ）−フェニル］−酢酸（１ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でプレドニゾロン（２．２３ｇ、６．１９ｍｍｏｌ）を加え、次いでトリフェニルホスフィン（４．１１ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で撹拌し、温度を４０℃まで上昇させた。この時点で、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート  ９５％（ＤＩＡＤ）（３．２ｍｌ、１５．５ｍｍｏｌ）を１２分間にわたって滴下した。この混合物を２時間にわたって撹拌し、揮発物を減圧下で除去し、生成物を粗製黒色油状物として得た。２．２１ｇの純粋な生成物を橙色の結晶（６３％）として得るためには、２つのフラッシュクロマトグラフィカラム（ジクロロメタン−酢酸エチル  １：１およびヘキサン−酢酸エチル８０：２０）が必要であった。融点１３６〜１３８℃、ＩＲＶｍａｘ（ＫＢｒ）：１６５５．５６（Ｃ＝Ｏ）、１７２４．４５（Ｃ＝Ｏ）、３４６２．９４（Ｏ−Ｈ）ｃｍ−１。ＭＳ  ７０５．２７８４（Ｍ＋＋２３）。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．０１Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ９．０３および２．５１Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．０３Ｈｚ），７．４３（２Ｈ，ｍ），７．３８（１Ｈ，ｍ），７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １０．０４Ｈｚ），７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５３Ｈｚ），６．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １０．０４Ｈｚ），５．９５（１Ｈ，ｓ），５．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５６Ｈｚ），４．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５７Ｈｚ），４．３１（１Ｈ，ｓ），４．２２（２Ｈ，ｓ），２．６４−０．８４プレドニゾロンエンベロープ，１９Ｈ），１．７５（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：２０４．６７（Ｃ，Ｃ−２０，Ｃ＝Ｏ），１８６．３６（Ｃ，Ｃ−３，Ｃ＝Ｏ），１７１．３５（Ｃ，Ｃ−２２，Ｃ＝Ｏ），１７０．５３（Ｃ，Ｃ−１３，Ｃ＝Ｏ），１６０．４６（Ｃ，Ｃ−５），１５７．３０（Ｃ，Ｃ−１０’），１５６．６７（ＣＨ，Ｃ−１），１４９．２４（Ｃ，Ｃ−２’），１４７．６４（Ｃ，Ｃ−７’），１３４．０４（Ｃ，Ｃ−１’），１３１．６６（ＣＨ，Ｃ−６’），１３１．２８（ＣＨ，Ｃ−１２’），１３１．２２（ＣＨ，Ｃ−４’），１２７．８８（ＣＨ，Ｃ−２），１２７．００（ＣＨ，Ｃ−５’），１２３．３５（ＣＨ，Ｃ−８’），１２１．６５（ＣＨ，Ｃ−４），１１７．６７（ＣＨ，Ｃ−１１’），１１５．２４（ＣＨ，Ｃ−３’），１１３．１７（Ｃ，Ｃ−９’），１０６．５９（Ｃ，Ｃ−１４’），８９．１８（Ｃ，Ｃ−１７），６９．４４（ＣＨ，Ｃ−１１），６８．１９（ＣＨ２，Ｃ−２１），５４．８８（ＣＨ，Ｃ−９），５０．８４（ＣＨ，Ｃ−１４），４７．１５（Ｃ，Ｃ−１３），４３．８０（Ｃ，Ｃ−１０），３８．６５（ＣＨ２，Ｃ−１２），３７．０２（ＣＨ２，Ｃ−２３），３３．７０（ＣＨ２，Ｃ−６），３３．６１（ＣＨ２，Ｃ−７），３１．５７（ＣＨ２，Ｃ−１６），３０．７６（ＣＨ，Ｃ−８），２５．４１（ＣＨ３，Ｃ−１５’およびＣ−１６’），２３．３９（ＣＨ２，Ｃ−１５），１６．２４（ＣＨ３，Ｃ−１９），１４．８１（ＣＨ３，Ｃ−１８）。
【００９４】
２−（２，２−ジメチル−４−オキソ−４Ｈ−ベンゾ［１，２］ダイオキシン−６−イルアゾ）−フェニル］−プロピオン酸
氷酢酸（４０ｍｌ）中の２−ニトロソフェニルプロピオン酸（１ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、氷酢酸（４０ｍｌ）中の５−アミノサリチル酸  ダイオキシン−４−オン（０．９ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）の別の溶液を加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で４８時間激しく撹拌し、反応の完結をジクロロメタン−酢酸エチル（５０：５０）と移動相として使用するＴＬＣによりチェックした。溶媒を減圧下で除去し、トルエンを２回加えてあらゆる酢酸の痕跡を除去し、橙色の粗生成物を得た。これを、ジクロロメタン−酢酸エチル（７０：３０）と移動相として使用するフラッシュクロマトグラフィによって精製し、１．１７ｇの生成物を橙色の結晶（６８％）として得た：融点１０８〜１１０℃、ＩＲＶｍａｘ（ＫＢｒ）：１７０３．４８および１７４０．０４（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１。ＭＳ  ３７７．１１０２（Ｍ＋＋２３）。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２Ｈｚ），８．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ６．５２および２．５１Ｈｚ），７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．５３Ｈｚ），７．４３（２Ｈ，ｍ），７．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．０３Ｈｚ），３．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．０３および７．５３Ｈｚ），２．７９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．０３および７．５３Ｈｚ），１．８１（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：１７６．９７（Ｃ，Ｃ−９，Ｃ＝Ｏ），１６０．１１（Ｃ，Ｃ−１６，Ｃ＝Ｏ），１５７．３７（Ｃ，Ｃ−１３），１４９．３９（Ｃ，Ｃ−１），１４７．６４（Ｃ，Ｃ−１０），１３９．８０（Ｃ，Ｃ−２），１３１．１６（ＣＨ，Ｃ−４），１３０．１５（ＣＨ，Ｃ−３），１２９．０１（ＣＨ，Ｃ−５），１２６．９９（ＣＨ，Ｃ−１５），１２５．６０（ＣＨ，Ｃ−１１），１１７．７５（ＣＨ，Ｃ−６），１１５．２０（ＣＨ，Ｃ−１４），１１３．３２（Ｃ，Ｃ−１２），１０６．５１（Ｃ，Ｃ−１７），３５．４６（ＣＨ２，Ｃ−８），２６．４３（ＣＨ２，Ｃ−７），２５．４８（ＣＨ３，Ｃ−１７およびＣ−１８）。
【００９５】
アセトニドで保護されたミューチュアルプロドラッグ２
乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中の２−（２，２−ジメチル−４−オキソ−４Ｈ−ベンゾ［１，２］ダイオキシン−６−イルアゾ）−フェニル］−プロピオン酸（０．２ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でプレドニゾロン（０．２ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加え、次いでトリフェニルホスフィン（０．４４ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を窒素雰囲気下で撹拌し、温度を４０℃まで上昇させた。この時点でジイソプロピルアゾジカルボキシレート  ９５％（ＤＩＡＤ）（０．３５ｍｌ、１．６８ｍｍｏｌ）を１２分間にわたって滴下した。この混合物を２時間にわたって撹拌し、揮発分を減圧下で除去し、生成物を粗製黒色油状物として得た。０．２６ｇの純粋な生成物を橙色の結晶（６８％）として得るためには、２つのフラッシュクロマトグラフィカラム（ジクロロメタン−酢酸エチル  １：１およびヘキサン−酢酸エチル８０：２０）が必要であった。融点１３０〜１３２℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３４３７．１３、１７４３．９１、１６５６．４８、１６１５．３１ｃｍ−１。１Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：８．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ２．０１Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ８．５３および２．０１Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．０３Ｈｚ），７．３８（２Ｈ，ｍ），７．２８（２Ｈ，ｍ），７．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５４Ｈｚ），６．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １０．０３Ｈｚ），５．９７（１Ｈ，ｓ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５７Ｈｚ），４．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５６Ｈｚ），４．４２（１Ｈ，ｓ），３．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ６．５２），２．７９（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．０３Ｈｚ），２．６８−０．９１（プレドニゾロンエンベロープ，１９Ｈ），１．７５（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ３）：２０４．９２（Ｃ，Ｃ−２０，Ｃ＝Ｏ），１８６．４４（Ｃ，Ｃ−３，Ｃ＝Ｏ），１７２．３７（Ｃ，Ｃ−２２，Ｃ＝Ｏ），１７０．６８（Ｃ，Ｃ−１３，Ｃ＝Ｏ），１６０．４５（Ｃ，Ｃ−５），１５７．２５（Ｃ，Ｃ−１０’），１５６．７９（ＣＨ，Ｃ−１），１４９．１４（Ｃ，Ｃ−２’），１４７．６１（Ｃ，Ｃ−７’），１３９．９９（Ｃ，Ｃ−１’），１３１．２３（ＣＨ，Ｃ−６’），１３１．００（ＣＨ，Ｃ−１２’），１３０．０５（ＣＨ，Ｃ−４’），１２７．０２（ＣＨ，Ｃ−２），１２６．９３（ＣＨ，Ｃ−５’），１２３．７４（ＣＨ，Ｃ−８’），１２１．６４（ＣＨ，Ｃ−４），１１７．７７（ＣＨ，Ｃ−１１’），１１５．１６（ＣＨ，Ｃ−３’），１１３．１８（Ｃ，Ｃ−９’），１０６．５７（Ｃ，Ｃ−１４’），８９．１８（Ｃ，Ｃ−１７），６９．５４（ＣＨ，Ｃ−１１），６７．７７（ＣＨ２，Ｃ−２１），５４．９２（ＣＨ，Ｃ−９），５０．８８（ＣＨ，Ｃ−１４），４７．１４（Ｃ，Ｃ−１３），４３．８６（Ｃ，Ｃ−１０），３８．８５（ＣＨ２，Ｃ−１２），３５．８９（ＣＨ２，Ｃ−２３），３３．７５（ＣＨ２，Ｃ−６），３３．６１（ＣＨ２，Ｃ−７），３１．６２（ＣＨ２，Ｃ−１６），３０．７８（ＣＨ，Ｃ−８），２６．９３（ＣＨ３，Ｃ−１５’およびＣ−１６’），２５．４２（ＣＨ２，Ｃ−２４），２３．４５（ＣＨ２，Ｃ−１５），１６．３５（ＣＨ３，Ｃ−１９），１４．８１（ＣＨ３，Ｃ−１８）。
【化２１】
2010531845.tif 000024
ｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ中、３時間、室温；ｉｉ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２、酢酸エチル中  ２時間、室温；ｉｉｉ）ＨＣｌ、ＮａＮＯ２、３０分、−５℃；ｉｖ）ＡｃＯＮａ、ＮＨ４ＯＨ、室温、１時間；ｖ）；ＮａＯＨ  ２Ｎ、ＥｔＯＨ、２４時間、室温；ｖｉ）ＤＩＡＤ、Ｐｈ３Ｐ、乾燥ＴＨＦ中、２４時間。
【００９６】
２−ニトロフェニル酢酸  メチルエステル
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の２−ニトロフェニル酢酸（５ｇ、０．０２７６ｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（１当量、３．３７ｇ）を加え、次いでＤＣＣ（１当量、５．６３ｇ）を加え、最後にメタノール（５当量、５．５８ｍＬ）を加えた。この反応混合物を２〜３時間撹拌し、ＴＬＣによって反応がいつ完結したかが示された。このあと、この反応液を濾過して生成したＤＣＵを除去し、濾液を０．１Ｎ  ＨＣｌ（２×２５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×２５ｍＬ）および水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。この粗製エステルをフラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ：ＥＡ  ６０：４０）によって精製し、生成物を黄色油状物４．８ｇ（９０％）として得た：１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣ１３），δ：７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８Ｈｚ），７．４（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２Ｈｚ），７．３（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．６Ｈｚ），７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．６Ｈｚ），３．８９（２Ｈ，ｓ），３．５９（３Ｈ，ｓ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１７０．３（Ｃ＝Ｏ，Ｃ−８），１４８．２（Ｃ−１），１３３．０（Ｃ−４），１３２．８（Ｃ−３），１２９．２（Ｃ−２），１２８．０（Ｃ−５），１２４．５（Ｃ−６），５１．４（Ｃ−９），３８．８（Ｃ−７）。
【００９７】
２−アミノフェニル酢酸  メチルエステル
２−ニトロフェニル酸メチルエステル（１ｇ、５．１３ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＥＡに溶解し、０．３ｇのＰｄ／Ｃ  １０％をこの溶液に懸濁させ、この反応混合物を室温で水素雰囲気下に置いた。２時間後、この反応はＴＬＣ分析（ＤＣＭ：ＥＡ  ６０；４０）によれば完結しており、Ｐｄ／Ｃ  １０％を濾過によって除去し、溶媒を減圧によって除去し、無色の油状物０．６７ｇ（６７％）を得た。
【００９８】
２−（４−ヒドロキシ−フェニルアゾ）−フェニル−酢酸  メチルエステル
濃ＨＣｌ（９ｍＬ）を含む水（４０ｍＬ）に２−アミノフェニル酸メチルエステル（３ｇ、０．０１８ｍｏｌ）を溶解し、この溶液を氷／アセトン浴中で−５℃まで冷却し、そのあと１ｍＬの水中の亜硝酸ナトリウム（１．３２ｇ、０．０１９ｍｏｌ）を滴下した。その時点で、ジアゾニウム塩が生成し、この溶液は淡黄色を帯びた。一匙の尿素を加えて過剰の亜硝酸ナトリウム（酸化剤）を中和し、５分後にこのジアゾニウム塩溶液を、−５℃の水（４０ｍＬ）中のフェノール（１．６８ｇ、０．０１８ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（２．８８ｇ、０．０３６ｍｏｌ）およびアンモニア溶液（５ｍＬ）の溶液へと滴下した。添加終了後、氷酢酸（当量、５ｍＬ）を加え、この反応混合物を濾過した。濾過ケーキをＥＡに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去し、生成物をフラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ  １００ｍＬ、ＤＣＭ：ＥＡ  ８０：２０）によって精製し、２．７ｇ（５６％）を得た：融点１５８〜１６０℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３２２１．８４（ＯＨ）、１６９５．４８（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン）δ：９．１４（１Ｈ，ｓ），７．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５０Ｈｚ），７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ８Ｈｚ），７．４５（３Ｈ，ｍ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ），７．０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５０Ｈｚ），４．１６（２Ｈ，ｓ），３．６２（３Ｈ，ｓ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン）δ：２０４．９１（Ｃ＝Ｏ，アセトン），１７１．２２（Ｃ＝Ｏ，Ｃ−８），１６０．２９（Ｃ，Ｃ−４’），１４９．６４（ｃ，Ｃ−２），１４６．２０（Ｃ，Ｃ−１’），１３４．１３（ＣＨ，Ｃ−６），１３１．１３（ＣＨ，Ｃ−５），１２９．９７（Ｃ，Ｃ−１），１２７．４２（ＣＨ，Ｃ−４），１２４．６５（ＣＨ，Ｃ−３，Ｃ−６’，Ｃ−２’），１１５．３８（ＣＨ，Ｃ−５’），１１４．７３（ＣＨ，Ｃ−３’），５０．６５（ＣＨ３，Ｃ−９），３６．４１（ＣＨ２，Ｃ−７），２８．５２（アセトン，ＣＨ３）。
【００９９】
２−（４−ヒドロキシ−フェニルアゾ）−フェニル−酢酸
上記エステル（０．２６６ｇ、１ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で１０ｍＬのエタノールに溶解し、２Ｎ  ＮａＯＨ（２ｍＬ）をこの混合物に加え、光を遮断して一晩撹拌した。この反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ溶液に注ぎ込み、ＥＡで抽出した。この有機相を水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、生成物をＥＡ：ｎ−ヘキサンを用いて再結晶し、生成物を橙色の結晶、０．２ｇ（７０％）として得た：融点１３８〜１４０℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｒ）：３２８０．０４（ＯＨ）、１７２１．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６５５．９０（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ１。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン）δ：１０．７１（１Ｈ，ｓ），９．１３（１Ｈ，ｓ），７．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５２Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．５２Ｈｚ），７．４５（３Ｈ，ｍ，Ｊ  ８．０４Ｈｚ），７．０１（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５２Ｈｚ），４．１６（２Ｈ，ｓ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン）δ：２０４．９２（Ｃ＝Ｏ，アセトン），１７１．６５（Ｃ＝Ｏ，Ｃ−８），１６０．２０（Ｃ，Ｃ−４’），１４９．７３（Ｃ，Ｃ−２），１３４．４９（Ｃ，Ｃ−１’），１３１．１８（ＣＨ，Ｃ−５），１２９．９１（ＣＨ，Ｃ−６，Ｃ−１），１２７．２８（ＣＨ，Ｃ−４），１２４．６９（ＣＨ，Ｃ−３，Ｃ−６’，Ｃ−２’），１１５．３２，（ＣＨ，Ｃ−５’）１１４．６３（ＣＨ，Ｃ−３’），３６．２３（ＣＨ２，Ｃ−７），２８．５１（アセトン，ＣＨ３）。
【０１００】
［２−（４−ヒドロキシ−フェニルアゾ）−フェニル］酢酸  ２−（１１，１７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチル−３  オキソ−２，３，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−２−オキソ−エチルエステル  フェノールアゾプロドラッグ
上記アゾ担体（０．５ｇ、０．００１９ｍｏｌ，）を、乾燥ＴＨＦ中のヒドロコルチゾン（０．３４ｇ、０．０００９ｍｏｌ，）およびトリフェニルホスフィン（０．７４ｇ、０．００２８ｍｏｌ）の溶液に加え、窒素雰囲気下で温度を４０℃まで上昇させ、激しく撹拌しながらジイソプロピルアゾジカルボキシレート  ９５％（ＤＩＡＤ）（０．５７ｇ、０．００２８ｍｏｌ）を１２分間にわたって滴下した。この混合物を４０℃で１時間にわたって撹拌し、反応液を窒素雰囲気下、室温で一晩放置した。揮発物を減圧下で除去し、生成物を橙色の油状物として得た。これを、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）を使用してフラッシュカラムにかけ、このカラム後、トリフェニルホスフィンオキシドは除去され、このアゾプロドラッグ０．２３ｇを橙色の結晶（４２％）として得るためには、第２のフラッシュカラム、ヘキサン（２００ｍＬ）、ヘキサン：酢酸エチル（７０：３０）が必要であった：融点１２２〜１２４℃、ＩＲｖｍａｘ（ＫＢｖ）：３４３７．１３（ＯＨ）、１７２１．０７（Ｃ＝Ｏ）、１６５５．９０（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ−１。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５３Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．０３），７．３３（３Ｈ，ｍ），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ８．５３Ｈｚ），５．５９（１Ｈ，ｓ），４．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．５７Ｈｚ），４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １７．０６Ｈｚ），４．１８（２Ｈ，ｓ），２．６０−０．７７（ヒドロコルチゾンエンベロープ，２４Ｈ）。
【０１０１】
（分子内ラクタム化反応速度研究）
インビボでの当該プロドラッグからのステロイドの放出は、アゾレダクターゼ活性アミノステロイド生成物の環化で決まる。コルチゾンＡおよびＢのアミノ誘導体の環化速度を、残留する化合物を、コルチゾンの生成とともにＨＰＬＣによって測定することにより種々のｐＨ値および３７℃の水溶液中でモニターした。
【化２２】
2010531845.tif 000025
【０１０２】
消失についての一次速度定数は、残留するエステルの自然対数  対  時間のプロットから得ることができる。半減期は算出することができる（Ｔ１／２＝０．６９３／ｋｏｂｓ）。プロドラッグＡの算出した半減期は２．２時間であり、プロドラッグＢの算出した半減期は１．４時間であった。
【０１０３】
（生物学的研究）
（材料および方法）
プレドニゾロンおよびＤＳＳは、シグマ−アルドリッチラボラトリーズ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から購入した。
【０１０４】
ＢＡＬＢ／ｃ株マウスを、生物資源部門（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｕｎｉｔ）（トリニティ・カレッジ・ダブリン（Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｄｕｂｌｉｎ））から入手した。マウスを、陽圧下の個別換気およびフィルター付きケージ（テクニプラスト（Ｔｅｃｎｉｐｌａｓｔ）、英国、Ｎｏｔｈａｎｔｓ）で飼育した。食物および水は自由に取らせた。すべての動物実験は、アイルランド保健児童省（Ｉｒｉｓｈ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ）の規則を遵守して行い、トリニティー・カレッジ生物資源部門（Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）倫理審査委員会によって承認された。
【０１０５】
（統計解析）
すべてのインビボでの実験は、１群あたり６匹のマウスを用いて行った。群間の差異は、スチューデントのｔ−検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）によって解析した。大腸炎スコアは、マン−ホイットニー検定によって解析した。０．０５未満のＰ値（Ｐ値＜０．０５）を有意であると見なした。ＤＩＡ、Ｃ／ＢおよびＴ／Ｂ  ＭＰＯについての結果は、平均±標準誤差として表した。
【０１０６】
（炎症性腸疾患モデルマウスの調製）
ＤＳＳ（３５〜５０，０００ｋＤａ；エムピー・バイオメディカルズ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）、オハイオ州）をマウスの飲用水に溶解した。新しいＤＳＳ溶液を１日おきに与えた。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、５％  ＤＳＳに６日間曝露した。このマウスを、病的状態について毎日チェックし、重量を記録した。大腸炎の誘導は、体重減少、便中の血液および、剖検の際には、結腸の長さによって判定した。便中の血液は、Ｈｅｍｄｅｔｅｃｔ潜血検出キット（ディプロ（Ｄｉｐｒｏ）、オーストリア共和国）を使用して検出した。
【０１０７】
大腸炎の誘導を数量化するために、ＤＳＳ誘導大腸炎の以前の研究（Ｃｏｏｐｅｒ  １９９３）に基づいて、疾患活動性指数（ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ、ＤＡＩ）を決定した。ＤＡＩは、体重減少、潜血および便の粘稠度／下痢に基づき、各マウスについて毎日算出した。各パラメータに対して１〜４のスコアを与えた。最大ＤＡＩスコアは１２である。スコア０、体重減少なし、正常便、血液なし；スコア１、１〜３％  体重減少；スコア２、３〜６％  体重減少、軟便、便中に血液が見える；スコア３、６〜９％  体重減少；スコア４、＜９％  体重減少、下痢、おびただしい出血（ｂｒｅｅｄｉｎｇ）。軟便は、取り扱うと容易にペースト状になる便の形成として定義した。下痢は、便の形成がないこととして定義した。おびただしい出血は、便中のかなりの血液を伴う、肛門の周りの毛の上の新鮮血として定義した。
【０１０８】
（結腸の組織学的検査）
剖検では、結腸の長さを測定し、結腸の１ｃｍの部分を１０％ホルムアルデヒド−生理食塩水中で固定した。ＨおよびＥで染色した部分を、以前の研究（Ｓｉｅｇｍｕｎｄ  ２００１）から変更したスコア化システムに基づいて等級付けした。組織学的検査のスコア化は、盲検方式で行った。炎症細胞の浸潤および組織の損傷の複合スコアは、以下のようにして決定した：細胞浸潤：スコア０、ＬＰに時おり炎症細胞がある；１、主に陰窩基底部においてＬＰ中での浸潤の増大；２、粘膜の中へと広がる炎症性浸潤の集密；３、浸潤の貫壁性拡大。組織の損傷：スコア０、粘膜損傷なし；１、大きな領域における部分的な（５０％までの）陰窩の喪失；２、大きな領域における部分的〜全体（５０〜１００％）陰窩の喪失、上皮は無傷；３、大きな領域における陰窩の全喪失および上皮の喪失。
【０１０９】
（薬物有効性）
重量が約１８〜２０グラムのＤＳＳ誘導大腸炎マウスに、５％  ＤＳＳ水を自由に取らせ、１％溶液のクレモホア（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）および水懸濁液中のエタノール中の、１００μＬのプレドニゾロンおよびプロドラッグ２（マウスの体重１Ｋｇあたり５ｍｇのプレドニゾロンと等価である）を１日に２回（１２時間ごと）大腸炎マウスに経口投与した。プレドニゾロンおよびプロドラッグ処置の６日後、このマウスを頸椎脱臼によって屠殺した。遠位結腸部分および胸腺を取り出し、洗浄して結腸の内容物を取り除いた。
【０１１０】
１ｃｍの遠位結腸部分および胸腺の新鮮重を測定し、体重に対する遠位結腸重量および胸腺重量の比（それぞれＣ／ＢおよびＴ／Ｂ）を得た。結腸検体の損傷を、材料および方法で記載したようにしてスコア化した。ミエロペルオキシダーゼ活性（ＭＰＯ）について分析するまで、この遠位セグメントを液体窒素によって凍結し−８０℃で保存した。
【０１１１】
（結果）
抗炎症性効果を、健康なマウスと、未処置のマウスと、プレドニゾロン処置マウスと、プロドラッグ処置マウスとの間での遠位結腸長さの比較によって検討した。ＩＢＤは、結腸の短縮を引き起こす。従って、抗炎症性効果、より少ない損傷が結腸組織上で観察され、より少ない還元遠位結腸長さについての原因であった。
【０１１２】
血流中のステロイドの濃度の上昇が胸腺の活性の抑制、およびその結果としてのその重量の減少を誘発するという事実に起因して、全身性の副作用を、健康なマウスと、未処置のマウスと、プレドニゾロン処置マウスと、プロドラッグ処置マウスとの間での胸腺重量および体重比の比較（Ｈｉｄｅｋｉ  Ｙａｎｏ  ２００２）によって検討した。
【０１１３】
５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したＤＳＳ誘導大腸炎マウスの結腸部分からのＤＡＩスコアのプロファイルである図１３に示すように、出血の客観的評価および体重減少スコアは、溶媒対照群では閾値に向かって増加したが、処置群ではそうではなかった。
【０１１４】
５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したＤＳＳ誘導大腸炎マウスの結腸長さのプロファイルである図１４に示すように、プロドラッグ２群は、ＰＲＥＤ（Ｐ＜０．０２４３）群よりも有意に長い結腸を有していた（Ｐ値は、結腸長さの差  対  溶媒群に対するスチューデントのｔ−検定である）。
【０１１５】
健康なマウス（未処置）および５ｍｇ／Ｋｇの投薬量で処置したＤＳＳ誘導大腸炎マウスの胸腺重量体重比（Ｔ：ＢＷ）のプロファイルである図１５に示すように、ＰＲＥＤ群は、未処置のマウスに対して有意な胸腺：ＢＷ比の減少を有していた（Ｐ＜０．０５）。プロドラッグ処置群における平均の胸腺重量は、未処置のマウスと統計的な差異はなかった。
【０１１６】
（参考文献）
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【０１２６】
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【０１３１】
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【０１３２】
本願全体にわたって引用されたすべての文献の開示全体は、参照により本願明細書に援用したものとする。
【０１３３】
本願明細書に記載される幅広い本発明の着想から逸脱することなく、変更が上記の実施形態に対してなされ得るということを、当業者は理解するであろう。それゆえ、本発明は開示された特定の実施形態および態様に限定されず、本発明は、添付の特許請求の範囲によって画定される本発明の趣旨および範囲の内に入るすべての変更態様に及ぶことが意図されているということは理解される。そのすべての可能な変形例における上記の要素のあらゆる組み合わせは、本願明細書でそうではないと示されていない限り、またはあきらかに文脈と矛盾しない限り、本発明によって包含される。
【図１】
2010531845.tif 000033
【図２】
2010531845.tif 000034
【図３】
2010531845.tif 000035
【図４】
2010531845.tif 000036
【図５】
2010531845.tif 000037
【図６】
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【図７】
2010531845.tif 000039
【図８】
2010531845.tif 000040
【図９】
2010531845.tif 000041
【図１０】
2010531845.tif 000042
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
2010531845.tif 000045
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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2010531845.tif 000052
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