(57)【要約】  カンナビジオールおよび酢酸グラチラマーの組み合わせと医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンナビジオールおよび酢酸グラチラマーの組み合わせと医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２】
前記担体が経鼻投与に適する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記担体が液体担体である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記担体が、水、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよびリン脂質を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
３０重量％以上の水、１２〜３０重量％のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび０．２〜１０％のベシクル構造にされたリン脂質を含んでなる担体中に、酢酸グラチラマーおよびカンナビジオールの組み合わせを含む、請求項４に記載の鼻内投与に適した医薬組成物。
【請求項６】
Ｃ２〜Ｃ４アルコールがエタノールである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
１以上の水混和性ポリオールをさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
多発性硬化症の治療のための経鼻投与または非経口投与可能な組成物の製造における、酢酸グラチラマーおよび医薬的に許容される担体と組み合わせてのカンナビジオールの使用。
【請求項９】
前記担体が、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含む、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物中のリン脂質および１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％の範囲であり、前記組成物の水の含量が３０重量％以上である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
Ｃ２〜Ｃ４アルコールがエタノールである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が１以上の水混和性ポリオールをさらに含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
ジアゼパムおよびフェンタニルからなる群から選択される少なくとも１の有効成分とジクロフェナクとの組み合わせおよび担体を含んでなる、鼻内投与用の医薬組成物であって、当該担体が、３０重量％以上の水、１２〜３０重量％のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび０．２〜１０％のベシクル構造にされたリン脂質を含む、上記医薬組成物。
【請求項１４】
Ｃ２〜Ｃ４アルコールがエタノールである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
１以上の水混和性ポリオールをさらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
疼痛治療のための経鼻投与可能な組成物の製造における、ジアゼパムおよびフェンタニルからなる群から選択される少なくとも１の有効成分、ジクロフェナクならびに医薬的に許容される担体の使用であって、当該担体が、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含み、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％の範囲であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上である、上記使用。
。
【請求項１７】
前記組成物中に存在するＣ２〜Ｃ４アルコールがエタノールである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記組成物が１以上の水混和性ポリオールをさらに含む、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
治療的有効量のブロチゾラムまたはその医薬的に許容される塩、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含んでなる、不眠症治療のための医薬組成物であって、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上であり、当該組成物中でリン脂質がベシクルを形成している、上記医薬組成物。
【請求項２０】
不眠症治療のための経鼻投与可能な組成物の製造における、ブロチゾラム、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水の使用であって、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上である、上記使用。
【請求項２１】
治療的有効量のプレドニゾロンまたはその医薬的に許容される誘導体または塩、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含む医薬組成物であって、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上であり、当該組成物中でリン脂質がベシクルを形成している、上記医薬組成物。
【請求項２２】
鼻内投与に適する組成物の製造における、プレドニゾロン、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水の使用であって、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上であり、当該組成物中でリン脂質がベシクルを形成している、上記使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
液体媒体と水混和性有機溶媒との組み合わせを含む水性媒体による生物活性物質の皮膚および細胞膜へのデリバリー（送達）が、本技術分野において記載されてきている。
【背景技術】
【０００２】
例えば、特許文献１には、リン脂質およびエタノールを含む水性輸送システム（これらの成分の重量比は４０：１〜１：２０）が記載されている。
特許文献２には、リン脂質、エタノールおよび水を含んでなる溶液（それぞれの重量比は１０：１６：７４）が記載されている。
【０００３】
特許文献３、特許文献４および特許文献５には、エタノール存在下でベシクル（エソソーム）を含む水性組成物が記載されている。
特許文献６には、鎮痙剤の経鼻粘膜への投与に適した担体が記載されている。この担体の有機溶媒含量が比較的高いようである（３０〜６０％のエタノール、３０〜６０％のプロピレングリコール）。
【０００４】
特許文献７には、活性物質の鼻内投与に適したベシクル組成物の製造における、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水の使用が記載されており、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度は、それぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％の範囲であり、当該組成物の水の含量は３０重量％以上である。記載を通して、材料の濃度は、組成物の全重量に対して示されている。
【０００５】
特許文献８には、多発性硬化症の治療のためのカンナビジオールの使用が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＥＰ１５８４４１
【特許文献２】米国特許第５７１１９６５号
【特許文献３】米国特許第５５４０９３４号
【特許文献４】米国特許第５７１６６３８号
【特許文献５】ＷＯ０３／０００１７４
【特許文献６】米国特許第６６２７２１１号
【特許文献７】ＷＯ２００７／０４３０５７
【特許文献８】米国特許第６４１０５８８号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、カンナビジオールと酢酸グラチラマーとの組み合わせおよび医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。好ましくは、本発明の担体は経鼻投与または非経口投与に適する。したがって、本発明の担体は、液体形態（粘性液体を含む）または半固体（例えば、ゲル、クリーム）であってもよい。これについては、水、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよびリン脂質を含む担体が特に適していることを見出した。カンナビジオールおよび酢酸グラチラマーは、好ましくは、相乗的に有効な量で組成物中に含まれる。さらに具体的には、カンナビジオールおよび酢酸グラチラマーの濃度は、それぞれ０．５〜４０％および０．５〜３０％の範囲にある。
【０００８】
最も好ましくは、本発明は、酢酸グラチラマーとカンナビジオールとの組み合わせ、ならびに、３０重量％以上の水、１２〜３０重量％のＣ２〜Ｃ４アルコールおよびベシクル構造にされた０．２〜１０％のリン脂質を含む担体を含んでなる、鼻内投与に適した医薬組成物に関する。Ｃ２〜Ｃ４アルコールは、好ましくはエタノールである。好ましくは、本発明の組成物は、１〜３０重量％の範囲の濃度でポリオール、より具体的には、プロピレングリコールをさらに含む。カンナビジオールおよび酢酸グラチラマーを含む本発明の組成物は、多発性硬化症の治療に適する。
【０００９】
また、本発明は、多発性硬化症の治療のための経鼻投与または非経口投与可能な組成物の製造における、カンナビジオール、酢酸グラチラマーおよび医薬的に許容される担体の使用に関し、好ましくは、当該担体が、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含み、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％の範囲であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上である。好ましくは、Ｃ２〜Ｃ４アルコールはエタノールであり、本発明の組成物はプロピレングリコールなどのポリオールをさらに含んでもよい。
【００１０】
また、本発明は、ジアゼパムおよびフェンタニルからなる群から選択される少なくとも１の有効成分とジクロフェナクとの組み合わせ、および、３０重量％以上の水、１２〜３０重量％のＣ２〜Ｃ４アルコール、０．２〜１０％のベシクル構造にされたリン脂質を含む担体を含んでなる、鼻内投与のための医薬組成物に関する。好ましくは、当該組成物は、ポリオール、より具体的には、プロピレングリコールを、１〜３０重量％の範囲の濃度でさらに含んでもよい。
【００１１】
また、本発明は、疼痛治療のための経鼻投与可能な組成物の製造における、ジアゼパムおよびフェンタニルからなる群から選択される少なくとも１の有効成分、ジクロフェナクおよび医薬的に許容される担体の使用に関し、好ましくは、当該担体がリン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含み、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％の範囲であり、本発明の組成物の水の含量が３０重量％以上である。好ましくは、Ｃ２〜Ｃ４アルコールはエタノールであり、当該組成物はプロピレングリコールなどのポリオールをさらに含んでもよい。
【００１２】
他の側面において、本発明は、治療的有効量のブロチゾラムまたはその医薬的に許容される塩、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含んでなる、不眠症治療のための医薬組成物に関し、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上であり、当該組成物中でリン脂質がベシクルを形成している。好ましくは、Ｃ２〜Ｃ４アルコールはエタノールであり、本発明の組成物はプロピレングリコールなどのポリオールをさらに含んでもよい。また、本発明は、鼻内投与に適した組成物の製造における、ブロチゾラム、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水の使用に関し、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上である。好ましくは、Ｃ２〜Ｃ４アルコールはエタノールであり、当該組成物はプロピレングリコールなどのポリオールをさらに含んでもよい。
【００１３】
他の側面において、本発明は、治療的有効量のプレドニゾロンまたはその医薬的に許容される誘導体または塩、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水を含んでなる医薬組成物に関し、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上であり、当該組成物中でリン脂質がベシクルを形成している。好ましくは、Ｃ２〜Ｃ４アルコールはエタノールであり、本発明の組成物はプロピレングリコールなどのポリオールをさらに含んでもよい。また、本発明は、鼻内投与に適する組成物の製造における、プレドニゾロン、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコールおよび水の使用に関し、当該組成物中のリン脂質および１以上のアルコールの濃度がそれぞれ０．２〜１０重量％および１２〜３０重量％であり、当該組成物の水の含量が３０重量％以上である。この組成物は、多発性硬化症の治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１Ａ〜Ｂは、ペントバルビトンナトリウム（４０ｍｇ／ｋｇ）による睡眠導入５分前にブロチゾラム（薬剤投与量：０．２５ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇ）を経鼻投与した後のマウスの反応潜時（図１Ａ）および総睡眠時間（図１Ｂ）を、薬剤水溶液（穏当な投与量）の経口投与、および、未処置のコントロールに対して示す棒グラフである。
【図２】図２は、プレドニゾロン組成物（投与量：３ｍｇ／Ｋｇ動物）を予防的に鼻内投与した際のミエリンオリゴデンドロサイト糖蛋白（ＭＯＧペプチド）（ｎ＝６）によって誘導される実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の臨床症状を、薬剤水溶液（穏当な投与量）の皮下投与、および、未処置のコントロールに対して示すグラフである。
【図３】図３は、プレドニゾロン組成物（投与量：５．７ｍｇ／Ｋｇ動物および１３．７ｍｇ／Ｋｇ動物）を鼻内投与した際のＭＯＧペプチドによって誘導されるＥＡＥの臨床症状を、薬剤水溶液（１３．７ｍｇ／ｋｇ）の皮下投与、および、未処置のコントロールに対して示すグラフである。
【図４】図４は、ジアゼパムおよび／またはジクロフェナクのアマルガム組成物を経鼻投与した後のマウスライジング試験の結果を、未処置のコントロールに対して示す棒グラフである。
【図５】図５は、ＣＢＤおよびＧＡを鼻内投与した後のＥＡＥの臨床症状を、ＣＢＤおよびＧＡの皮下投与、および、未処置のコントロールに対して示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の組成物の製造における使用に適したリン脂質として、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、水酸化ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＰＧ）およびホスファチジルイノシトール（ＰＬ）が挙げられる。本発明に従って用いることができるリン脂質の化学構造は、参照により本明細書に含まれるＵＳ４６１４７３０に記載されている。好ましくは、リン脂質は、０．５〜５重量％の濃度で本発明の組成物に含まれる。
【００１６】
本明細書で使用するＣ２〜Ｃ４アルコールとの用語は、２、３または４の炭素原子を含むアルカノールをいう。本発明によって用いられるアルコールは、具体的には、エタノール、１−プロパノール、イソプロピルアルコールおよびｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含む（より前者が特に好ましい）。鼻内ドラッグデリバリー媒体としての使用が本発明で予定されているエタノールの濃度は、１５〜２７重量％の範囲である。アルコールとリン脂質の重量比は２：１以上であり、より好ましくは５：１以上である。
【００１７】
本発明の特に好ましい態様によると、本発明の組成物は、１以上の水混和性ポリオール、特にグリコール（エチレングリコールなどの１，２−ジオールおよびプロピレングリコール；後者が特に好ましい）を、好ましくは５〜２０重量％の濃度でさらに含む。
【００１８】
本発明の組成物は、種々の成分、すなわち、水、リン脂質、１以上のＣ２〜Ｃ４アルコール（可能であれば、１以上のポリオールも）および有効成分を、ベシクルを形成させる条件下で一緒に混合することにより製造してもよい。より具体的には、本発明の組成物は、リン脂質をアルコール（またはアルコール／グリコール混合物中）へ溶解させ、水溶液の形態または固体形態のいずれかで有効成分を添加し、さらに水を添加することにより簡便に製造し得る。本発明の組成物の製造は、典型的には室温下または好ましくは５０℃以下に昇温下で、好ましくは撹拌しながら行われる。
【００１９】
あるいは、可能であれば加熱しながら、アルコールを任意にポリオール（例えば、エタノールおよびプロピレングリコールの混合物）と一緒に水中のリン脂質および有効成分に撹拌下で添加して分散剤を製造する。
【００２０】
また、カプセル化した有効成分をその中に含む凍結乾燥した脂質ベシクルを最初に製造した後、水、Ｃ２〜Ｃ４アルコールおよび任意のポリオールの混合物中で同じものを分散させることもできる。
【００２１】
本発明の組成物が、界面活性剤、保存剤、増粘剤、共溶媒、接着剤、抗酸化剤、緩衝剤、粘性および吸着を強化する物質、製剤のｐＨおよび浸透圧を調製可能な物質などの本技術分野で周知の賦形剤をさらに含有してもよいことに留意すべきである。
【００２２】
本発明に使用し得る好ましい界面活性剤として、イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤または両性界面活性剤が挙げれる。より具体的には、親水性界面活性剤（例えば、Tweens、Tween 80、Myrj、Brjs、Labrasolなど）または親油性界面活性剤（例えば、Span 20、Span 60、Myrj、Arlacel 83など）を、好ましくは０〜２５重量％の範囲の濃度で好適に使用できる。
【００２３】
本発明の製剤に使用可能な好ましい保存剤として、例えば、ベンジルアルコール、パラベン、クロロブタノール、ベンザルコニウム塩およびその組み合わせが挙げられる。抗酸化物のいくつかの例として、トコフェノール、ブチルヒドロキシトルエン、メタ重亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム、パルミチン酸アスコルビルなどが挙げられる。 これれらの保存剤および抗酸化剤は、約０．００１％から最大約５％（ｗ／ｗ）の濃度で製剤中に存在してよい。
【００２４】
緩衝剤に関しては、経鼻デリバリーシステムは、本発明の製剤を約７．０のｐＨに維持する緩衝剤を含んでもよい。具体的な緩衝剤は、使用する具体的な経鼻デリバリーシステム、同様に具体的な活性分子の選択に応じて、もちろん変更できる。本発明における使用に適した緩衝剤として、例えば、酢酸、クエン酸、プロラミン、炭酸塩およびリン酸塩の緩衝剤およびその組み合わせが挙げられる。本発明の医薬製剤は、ｐＨ調整剤を含んでもよい。
【００２５】
増粘剤に関しては、医薬的に許容される増粘剤を使用して、本発明の製剤の粘性を所望のレベルに維持することができる。本発明の組成物に添加できる増粘剤として、例えば、メチルセルロース、キサンタンガム、トラガカント、接着剤、グアーガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサン、ポリ（アクリレート）などの粘膜接着性ポリマー系、セルロース誘導体、ヒアルロン酸誘導体、キチン、コラーゲン、ペクチン、デンプン、ポリ（エチレングリコール）、硫酸化多糖類、カラギナン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ペクチンおよびその組み合わせが挙げられる。増粘剤の望ましい濃度は、選択された増粘剤、および所望の粘性によって決まるであろう。
【００２６】
また、本発明の組成物は、カルボポール、アルギン酸、スクレログルカン、セルロース誘導体、デンプン、アルブミン、プルロニックジェル、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−セファデックス、ポリカルボフィル、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、デンプン、ゼラチン、コラーゲンなどのゲル形成または生体接着性化合物を含んでもよい。また、本発明の組成物は、ｗ／ｏクリーム、ｏ／ｗクリーム、親水性軟膏または親油性軟膏、ゲル、他の半固体ベース中に含んでもよい。本発明の組成物は、ピペッター、専用装置、エバポレーター、ベポライザー（vaporizator）などを使用し、小滴（drop）、ミスト、エアロゾル、滴下物（instillation）として鼻腔まで送達できる。
【００２７】
また、本発明の製剤は、粘膜の乾燥の軽減または防止および粘膜の炎症防止のために、耐性強化剤（tolerance enhancer）などの物質を含んでもよい。
本発明の組成物は、液体、噴霧、エアロゾル、噴霧器（nebulizer）または半固形製剤として鼻腔に適用できる。半固形製剤は、ゲル、ｗ／ｏもしくはｏ／ｗクリームまたは親水性／親油性軟膏をベースにしてよい。本発明の組成物は、分子状に分散した（溶解、可溶化など）活性物質または活性物質の微粒子／微結晶を含んでもよい。本発明の組成物は、鼻スプレー、定量スプレー、スクイーズボトル、液体点滴、使い捨て点滴（１回投与）、噴霧器、単位投与アンプルを用いたカートリッジシステム、単回投与ポンプ、２回投与ポンプ、複数回投与ポンプまたは他のいずれの装置からも投与できる。例えば、本発明の組成物は、「Remington's Pharmaceutical Sciences」（第１６版）の８３章および９２章に詳細に記載されているように、噴霧またはエアロゾル装置／コンテナに貯蔵し、噴霧またはエアロゾル装置／コンテナから送達してもよい。
【００２８】
噴霧装置に関して、単回（単位）投与システムまたは複数回投与システムの両方を使用できることに留意すべきである。典型的には、噴霧装置は、ボトルおよびポンプを含み、このような装置は、様々なところから市場において入手可能である。典型的には、単回噴霧作動で投与される液体の量は、５〜２５０μｌ／各鼻孔／単回投与の範囲であり、製剤中の有効成分の濃度は、鼻孔への１回以上の噴霧が投薬計画に沿うように容易に調製できる。
【００２９】
また、カンナビジオールおよび酢酸グラチラマーを含む上記組成物が、非経口的（例えば、静脈注射により）にも適用できることに留意すべきである。
カンナビジオールは、２−［３−メチル−６−（ｌ−メチルエテニル）−２−シクロヘキセン−ｌ−イル］−５−ペンチル−ｌ，３−ベンゼンジオールである。（−）体のカンナビジオールの合成法は、例えば、「HeIv. Chim. Acta」（T. Petrzilka等、52、1102 、1969）、「Z. Naturforsch.」（H. J. Kurth等、36B、275、1981）に記載されており、（＋）体のカンナビジオールの合成法は、例えば、「J. Am. Chem. Soc.」（R. Mechoulam, Y. Gaoni、87、3273、1965）に記載されている。カンナビジオールは、１０〜４００ｍｇの１日投与量で投与してもよい。
【００３０】
典型的には、酢酸グラチラマーは、１〜６０ｍｇの１日投与量で投与される。酢酸グラチラマーは、それぞれ約４．６：１．５：３．６：１．０のモル比のアラニン、グルタミン酸、リジンおよびチロシンで構成されるポリペプチドの混合物であり、ここで、４つのアミノ酸は化学重合により合成され、生成物の平均分子量は、約４０００〜約１３，０００ダルトンである。対応するモル分率は、アラニンは約０．４２７、グルタミン酸は約０．１４１、リジンは約０．３３７、チロシンは約０．０９３であり、約＋／−１０変動し得る。酢酸グラチラマーの合成法は、例えば、ＵＳ７０４９３９９に記載されている。典型的には、酢酸グラチラマーは、２０ｍｇの１日投与量で、皮下（ＳＣ）注入により投与される。
【００３１】
ジクロフェナクは、２−（２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）フェニル）酢酸である。ジクロフェナクの合成法は、例えば、米国特許第３５５８６９０号（A. Sallman、R. Pfister、1971）に記載されている。典型的には、ジクロフェナク２５〜１５０ｍｇの１日投与量で投与される。
【００３２】
ジアゼパムは、７−クロロ−１，３−ジヒドロ−１−メチル−５−フェニル−２Ｈ−１，４−ベンゾ−ジアゼピン−２−オンである。ジアゼパムの合成法は、例えば、「キナゾリンおよび１，４−ベンゾヂアゼピン、ＩＩＩ置換２−アミノ−５−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン  ４−オキシド（Quinazolines and 1 ,4-benzodiazepines III substituted 2-amino-5-phenyl-3H-1,4-benzodiazepine 4-oxides.）」（Sternbach LH, Reeder E、Keller OおよびMetlesics W.、J Org Chem、26、4488-4497、1961）に記載されている。典型的には、ジアゼパムは、０．２〜１００ｍｇの１日投与量で投与される。フェンタニルは、Ｎ−（ｌ−フェネチル−４−ピペリジル）−Ｎ−フェニル−プロパンアミドである。典型的には、フェンタニルは、１００〜４００ｍｇの１日投与量で投与される。その製造は、例えば、「J. Chem. Res.」（Gupta, P. K 等、2005、7、452-453）および「Def. Res. Dev. Establ.」（Gwalior 474 002、India, Eng.）に記載されている。
【００３３】
ブロチゾラムは、８−ブロモ−６−（ｏ−クロロフェニル）−ｌ−メチル−４Ｈ−ｓ−トリアゾロ［３，４ｃ］チエノ［２，３ｅ］ｌ，４−ジアゼピンである。その合成法は、例えば、特開昭５１−８０８９９（米国特許第４０９４９８４号）に記載されている。典型的には、ブロチゾラムは、０．０１〜１ｍｇの１日投与量で投与される。
【００３４】
プレドニゾロンは、１１，１７−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オンである。プレドニゾロンの合成法は、例えば、「１８−ヒドロキシル化されたコルチゾールおよびプレドニゾロン、ステロイドの簡易合成（Convenient synthesis of 18-hydroxylated Cortisol and Prednisolone. Steroids.）」（Kurosawa T、Ikegawa S、Chiba H、Ito Y、Nakagawa S、Kobayashi K、Tohma M、1992 Sep、57(9)、426-9）に記載されている。典型的には、プレドニゾロンは、５〜６０ｍｇの１日投与量で投与される。
【００３５】
本明細書で用いられるように、経鼻的投与または経鼻投与には、鼻の鼻孔から哺乳動物の鼻道または鼻腔の粘膜へ組成物を投与することが含まれる。このような製剤は、任意の新型または旧型の装置を用いて、例えば、鼻内噴霧、鼻内吸入器、点鼻剤、エアロゾル、推進剤（propellant）、加圧分散（pressured dispersion）、水性エアロゾル、噴霧器、鼻懸濁液、滴下物、鼻ゲル、鼻軟膏および鼻クリームにより投与できる。また、本発明の組成物の投与は、組成物を含む鼻タンポンまたは鼻スポンジを用いることによっても行うことができる。
【００３６】
本明細書で特定される活性化合物が、医薬的に許容される塩、ラセミ体および分離されたエナンチオマーの形態であってもよいことに留意すべきである。
【実施例】
【００３７】
参考例１：酢酸グラチラマー（ＧＡ）を含有する本発明の経鼻組成物
【００３８】
【表１】
2010522741.tif 000002
【００３９】
最終組成物は１２ｍｇ／ｍＬのＧＡを含有する。
参考例２：皮下（ＳＣ）投与に用いるＧＡ溶液（コントロール溶液）
【００４０】
【表２】
2010522741.tif 000003
【００４１】
参考例３：ジアゼパム経鼻組成物（低投与量）
【００４２】
【表３】
2010522741.tif 000004
【００４３】
参考例４：ジアゼパム経鼻組成物（高投与量）
【００４４】
【表４】
2010522741.tif 000005
【００４５】
上記の製剤を以下のように製造した。リン脂質をエタノールに溶解させ、プロピレングリコールをこの溶液に加えた後に、ビタミンＥを添加して混合した。つぎに、ジアゼパムを混合物に添加した。Heidolph オーバーヘッド攪拌機（Overhead Stirrer）を用いて撹拌しながら、水をゆっくり添加した。この組成物をさらに１５分間撹拌した。最終組成物は６．２５ｍｇ／ｍＬのＧＡを含有する。
【００４６】
参考例５：酢酸グラチラマー（ＧＡ）を含有する発明の経鼻組成物
【００４７】
【表５】
2010522741.tif 000006
【００４８】
１０グラムの上記製剤を以下のように製造した。０．５ｇの大豆リン脂質を１．５ｇのエタノールに溶解させ、２ｇのプロピレングリコールをこの溶液に添加した後に、ビタミンＥを添加して５分間混合した。つぎに、Heidolph オーバーヘッド攪拌機を用いて撹拌しながら、２０ｍｇ／ｍＬのＧＡを含有するＧＡ水溶液をゆっくり添加した。この組成物をさらに１５分間撹拌した。最終組成物は１２ｍｇ／ｍＬのＧＡを含有する。
【００４９】
参考例６：皮下（ＳＣ）投与に用いるＧＡ溶液（コントロール溶液）
・コパキソン（登録商標）注入（２０ｍｇ／ｍＬ）１８０μｌ
・標準生理食塩水〜３０００μｌ
参考例７：経鼻投与に用いるＧＡ溶液（コントロール溶液）
【００５０】
【表６】
2010522741.tif 000007
【００５１】
実施例１：ブロチゾラム（催眠／睡眠作用）経鼻組成物
【００５２】
【表７】
2010522741.tif 000008
【００５３】
製剤を上記方法に従って製造した。最終製剤は、０．２５ｍｇ／ｇのブロチゾラムを含有する。
ヒトにおけるブロチゾラムの投与量は、睡眠前の１回投与あたり０．０１〜約１ｍｇ、好ましくは約０．０５〜約０．３ｍｇである。
【００５４】
実施例２：本発明の組成物の経鼻投与後のブロチゾラムのマウス催眠（睡眠）作用（実施例１の組成物の試験）
ペントバルビトンで誘導したマウスの睡眠評価を利用する以下の実験プロトコルにより、上記ブロチゾラム含有組成物の鼻内投与の有効性を試験した。以下の試験において、ペントバルビトンによる治療および正向反射の消失の後の時間（分）を睡眠潜時とし、正向反射の消失と正向反射の回復との間の時間を睡眠時間とした。このモデルは、ラットおよびマウスにおける薬剤の催眠／鎮静作用の評価に広く使用されている（Avoka等、J. Ethnopharmacol、2006、103、166-75）。
【００５５】
実験プロトコル
本実験を、６〜７週齢のメスＣ５７Ｂ１／６マウスで行った。
以下の動物グループを使用した（ｎ＝４）：
・グループ１：  ０．２５ｍｇ／Ｋｇ動物（１８μｌ／マウス）の投与量でのブロチゾラム組成物の鼻内投与。実施例１の組成物９μｌを各鼻孔に投与した。
・グループ２：  ０．２５ｍｇ／ｋｇ動物（１８μｌ／マウス）の投与量でのブロチゾラムの経口投与。
・グループ３：  水で経口投与される未処置のコントロール動物。
【００５６】
これらの動物に上記組成物を投与し、５分後にフェノバルビタールナトリウム−ＳＰ（４０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を注入した。正向反射の消失の発現（onset）と正向反射の消失の期間を、反応潜時および総睡眠時間（ＴＳＴ）としてそれぞれ記録した。
【００５７】
図１にこの実験の結果を示す。ブロチゾラムの経鼻治療により、たった５分前のペントバルビトン投与で、反応潜時が有意に短縮され、ペントバルビトンで導入した睡眠のＴＳＴが有意に延長されたようだった。コントロールと比較して、経口のブロチゾラムは両パラメータに有意な効果を有さなかった。
【００５８】
多発性硬化症の治療および予防のための製剤
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル（多発性硬化症の動物モデル）で発症した神経学的症状の予防および治療のための製剤の使用における、本発明の経鼻担体の効果が示された。
【００５９】
多発性硬化症の予防
実施例３：コルチコステロイドを含有する本発明の経鼻組成物
【００６０】
【表８】
2010522741.tif 000009
【００６１】
上記実施例に記載した方法で、この組成物を製造した。最終組成物は、２．５ｍｇ／ｍＬのプレドニゾロンを含有する。
実施例４：皮下（ＳＣ）投与のためのプレドニゾロン溶液（コントロール溶液）
【００６２】
【表９】
2010522741.tif 000010
【００６３】
プレドニゾロンを、ＰＥＧ４００および生理食塩水の混合物に溶解させた。０．５ｍｇ／ｍＬのプレドニゾロンを含有する透明溶液を得た。
実施例５：コルチコステロイド経鼻製剤のＥＡＥ予防効果
マウスのＥＡＥは、ヒトの多発性硬化症の許容モデル（accepted model）である。
【００６４】
ＥＡＥの誘導
既に公開されたプロトコル（Kataoka H等、Cell MoI Immunol、2005）を若干修正したものにより、６〜７週齢のメスＣ５７Ｂ１／６マウス（重量：１７〜１８ｇ）においてＥＡＥを誘導した。この手順により、完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）中でミコバクテリアと混合したミエリンオリゴデンドロサイト糖蛋白（ＭＯＧ３５−５５）ペプチドによりマウスを免疫化し、その直後および４８時間後に百日咳毒素を注入した。
【００６５】
臨床評価は、以下のＥＡＥ基準スコアに基づいて行われる。
【００６６】
【表１０】
2010522741.tif 000011
【００６７】
以下の実験グループ（各６匹の動物を有する）を用いた。
・グループ１：  ３ｍｇ／Ｋｇ動物（０．０５ｍｇ／２０μｌ／マウス）の投与量でのプレドニゾロン組成物（実施例３）の予防的鼻内投与。１０μｌの組成物を、ＥＡＥ誘導後１〜４日に１日２回各鼻孔に投与し、その後、１．５ｍｇ／ｋｇ（０．０２５ｍｇ／１０μｌ／マウス、５μｌ／norise）を実験終了まで１日１回投与した。
・グループ２：  予防的皮下投与。プレドニゾロン３ｍｇ／ｋｇ（０．０５ｍｇ／１００μｌ／マウス）、実施例４の溶液をコントロールとして皮下投与。この溶液を、ＥＡＥ誘導後１〜４日に１日２回皮下注入し、その後、１．５ｍｇ／ｋｇ（０．０２５ｍｇ／５０μｌ／マウス）を、実験終了まで１日１回ＳＣ投与した。
・グループ３：  コントロール（未処置）
図２の結果は、同じ薬剤投与量を含む溶液のＳＣ投与と比較して、プレドニゾロン（実施例３）を含有する本発明の組成物の鼻内投与により、ＥＡＥの発症（development）が効率的に抑えられることを示す。
【００６８】
多発性硬化症の治療
実施例６：コルチコステロイドを含有する本発明の経鼻組成物
【００６９】
【表１１】
2010522741.tif 000012
【００７０】
本発明の組成物を、上記実施例に記載された方法で製造した。最終組成物は５ｍｇ／ｍＬのプレドニゾロンを含有する。
実施例７：コルチコステロイドを含有する本発明の経鼻組成物
【００７１】
【表１２】
2010522741.tif 000013
【００７２】
本発明の組成物を、上記実施例に記載された方法で製造した。この経鼻組成物は１０〜１２０ｍｇ／ｍＬのプレドニゾロンを含有する。
本発明の組成物は、小滴、斑点（nebulation）、噴霧、装置、脳への経鼻デリバリーのための専用装置で投与できる。
【００７３】
ヒトの投与量：  プレドニゾロンの初回投与量は、１日２ｍｇ〜６０ｍｇであってよい。この初回投与量は、十分な反応があるまで維持または調製すべきである。
本発明の経鼻組成物は、毎日または隔日または週１回、１〜４回投与される。
【００７４】
実施例８：ＥＡＥの治療におけるＧＡおよびプレドニゾロンの革新的製剤の効果
実施例５に記載のプロトコルにしたがい、体重１６．８４±１．２３ｇ、６〜７週齢のメスＣ５７Ｂ１／６マウスにおいてＥＡＥを誘導した。
【００７５】
コントロールに対する本発明の経鼻組成物を用いたＥＡＥ治療
〜１１日目から始まり（個々のマウスにおいて臨床スコアＥＡＥ≧０．５を発症してから治療を開始した）この研究の終了まで、この組成物を１日１回投与した。
【００７６】
４つの実験グループ（各６匹の動物を有する）用いた。
・グループ１：  ５．７ｍｇ／Ｋｇ動物（０．１ｍｇ／２０μｌ／マウス）の投与量でのプレドニゾロン組成物（実施例６）の鼻内投与。１０μｌの組成物を１日１回各鼻孔に投与した。
・グループ２：  １３．７ｍｇ／Ｋｇ動物（２４０ｍｃｇ／２０μｌ／マウス）の投与量でのＧＡ組成物（参考例１）の鼻内投与。１０μｌの組成物を１日１回各鼻孔に投与した。
・グループ３：  投与量１３．７ｍｇ／ｋｇでのＧＡコントロール溶液（参考例２）の皮下投与。２００μｌの溶液を１日１回マウスに投与した（２４０μｇ  ＧＡ／動物／日）。
・グループ４：  コントロール（未処置）
図３は、この実験で得られた結果を示すプロットである。この結果は、本発明（実施例６）の組成物のプレドニゾロンの鼻内投与が、ＥＡＥ（多発性硬化症モデル）を有効に治療することを示す。例えば、２２日〜実験最終日において、以下のＥＡＥスコアはプラトーであった。
・グループ１（鼻内プレドニゾロン新規組成物）〜０．４
・グループ２（鼻内ＧＡ対照組成物）〜０．５から０
・グループ３（皮下ＧＡ対照溶液）〜１．５
・グループ４（未処置のコントロール）〜３
ジアゼパムおよびジクロフェナク混合組成物の鼻内投与による疼痛治療
実施例９：ジアゼパム（低投与量）およびジクロフェナクのアマルガム経鼻組成物
【００７７】
【表１３】
2010522741.tif 000014
【００７８】
上記製剤を以下のように製造した。リン脂質をエタノールに溶解させ、プロピレングリコールをこの溶液に添加した後、ビタミンＥを添加して混合した。その後、ジアゼパムこの混合物に添加した後、ジクロフェナクナトリウムを添加してさらに１０分撹拌した。Heidolph オーバーヘッド攪拌機（Overhead Stirrer）を用いて撹拌しながら、水をゆっくり添加した。この組成物をさらに１５分間撹拌した。最終組成物は６．２５ｍｇ／ｍＬのジアゼパムを含有する。
【００７９】
実施例１０：ジアゼパムおよびジクロフェナクの経鼻アマルガム組成物
【００８０】
【表１４】
2010522741.tif 000015
【００８１】
実施例１１：鎮静剤（opiates）および抗炎症剤を含有する組成物
【００８２】
【表１５】
2010522741.tif 000016
【００８３】
フェンタニルの推奨投与量は、１０〜３００（ｍｃｇ／各投与）の範囲である。
ジクロフェナクの推奨投与量は、０．０５〜１００（ｍｇ／各投与）の範囲である。
実施例１２：ジアゼパムおよびジクロフェナク経鼻組成物のマウス鎮痛効果試験
ジクロフェナク−ジアゼパムおよびジアゼパム含有組成物（実施例９および参考例３〜４でそれぞれ詳細に示した組成物）の鼻内投与による鎮痛効果を試験した。
【００８４】
メスＣ７５／ＢＬマウス（８〜９週齢）を用いてこの実験を行った。
以下の実験グループ（各４匹の動物を有する）を用いた。
・グループ１：  参考例３で得られたジアゼパム低投与量組成物の鼻内投与。
・グループ２：  参考例４で得られたジアゼパム高投与量組成物の鼻内投与。
・グループ３：  参考例９で得られた、低投与量のジアゼパムおよびジクロフェナクを含有するジアゼパムおよびジクロフェナク組成物の鼻内投与。
【００８５】
結果を未処置のコントロール動物と比較した。
酢酸希釈液の腹腔内注入は、激痛に似た、侵害受容の（nociceptive）ステレオタイプ行動（ライジング）を誘導する。このモデルは、抗疼痛剤の鎮痛（抗侵害受容）効果の評価に広く用いられている。
【００８６】
イソフルラン（登録商標）麻酔の下でマウスを治療した。治療の３０分後、３グループの全マウスに、酢酸０．６％（１０ｍｌ／ｋｇ）を腹腔内投与し、滑らかな平面床のケージに個別に収容した。
【００８７】
酢酸の注入後１０分間、身もだえ（writhe）の回数を計測することにより痛覚抑制効果を記録した。身もだえは、腹部収縮および少なくとも１の後肢のストレッチにより示される。
【００８８】
図４の結果から、実施例９で得られたジクロフェナクおよびジアゼパムの経鼻組成物の投与が、酢酸溶液の注入で誘導された疼痛を完全に減少させたことが明らかである。本発明の組成物は、同じ低投与量を投与したジアゼパム、および、２倍の高投与量を投与したジアゼパムの効果をも大幅に上回った。これらの結果から、組み合わせ組成物の使用により薬剤投与量を低下できることが推測される。
【００８９】
酢酸グラチラマー（ＧＡ）およびカンナビジオール（ＣＢＤ）混合組成物の鼻内投与を用いた多発性硬化症治療
実施例１３：ＧＡおよびＣＢＤ（カンナビジオール）を含有する本発明の経鼻組成物
【００９０】
【表１６】
2010522741.tif 000017
【００９１】
本発明の組成物を、上記方法で製造した。
最終組成物は、１１．２ｍｇ／ｍＬのＧＡおよび４０ｍｇ／ｍＬのＣＢＤを含有する。
実施例１４：ＧＡおよびＣＢＤを含有する本発明の経鼻組成物
【００９２】
【表１７】
2010522741.tif 000018
【００９３】
本発明の組成物を、上記方法で製造した。
最終組成物は、１１．２ｍｇ／ｍＬのＧＡおよび２０ｍｇ／ｍＬのＣＢＤを含有する。
実施例１５：ＧＡおよびＣＢＤを含有する本発明の経鼻組成物
【００９４】
【表１８】
2010522741.tif 000019
【００９５】
最終組成物は、１１．８ｍｇ／ｍＬのＧＡおよび１２ｍｇ／ｍＬのＣＢＤを含有する。
実施例１６：ＧＡおよびＣＢＤを含有する本発明の経鼻組成物
【００９６】
【表１９】
2010522741.tif 000020
【００９７】
本発明の組成物を、上記実施例に記載した方法で製造した。リン脂質／エタノール／プロピレングリコール相にＣＢＤを混合／溶解させた。ＧＡを水溶液として添加した。
本発明のＧＡ溶液は、緩衝剤、グリコール、ポリグリコール、クエン酸エステルなどの可溶化剤、炭水化物、マンニトール、糖アルコール、塩、安定化剤、抗酸化剤（ＢＨＡ、ＢＨＴ、硫化物、トコフェノール、アスコルビン酸誘導体）を含有できる。
【００９８】
本発明の経鼻組成物は、５〜１００ｍｇ／ｍＬのＧＡおよび１〜１００ｍｇ／ｍＬのＣＢＤを含有する。
本発明の組成物は、小滴、斑点、噴霧、装置、脳への経鼻デリバリーのための専用装置で投与できる。
・ヒトのＧＡ投与量：  ０．５〜８０ｍｇのＧＡが必要に応じて投与される。
・ヒトのＧＡ投与量：  ０．５〜８０ｍｇのＧＡが必要に応じて投与される。
・ヒトのＣＢＤ投与量：  ０．１〜５００ｍｇのＧＡが必要に応じて投与される。
【００９９】
本発明の経鼻組成物は、毎日または隔日または週１回投与される。
実施例１７：鼻内におけるＧＡ−ＣＢＤの組み合わせを用いた実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の治療（ニューロン再生の証拠）
マウスのＥＡＥは、ヒトの多発性硬化症の許容されるモデルである。
【０１００】
ＥＡＥの誘導
既に公開されたプロトコル（Kataoka H等、Cell MoI Immunol、2005）を若干修正したものにより、６〜７週齢のメスＣ５７Ｂ１／６マウス（重量：１７〜１８ｇ）においてＥＡＥが誘導された。この手順により、完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）中でミコバクテリアと混合したミエリンオリゴデンドロサイト糖蛋白（ＭＯＧ３５−５５）ペプチドによりマウスを免疫化し、その直後および４８時間後に百日咳毒素を注入した。
【０１０１】
臨床評価は、ＥＡＥ基準スコアに基づいて行われる（詳細は実施例５参照）。
以下の実験グループ（各６匹の動物を有する）を用いた。
〜１１日目から始まり（個々のマウスにおいて臨床スコアＥＡＥ≧０．５を発症してから治療を開始した）この研究の終了まで、１日１回すべての治療グループのマウスにこの組成物を投与した。
【０１０２】
４つの実験グループを用いた。
・グループ１：  ＧＡ−ＣＢＤ組成物の鼻内投与。
６．８ｍｇのＧＡ／Ｋｇ動物および２４．４５ｍｇのＣＢＤ／Ｋｇ動物（１０μｌ／マウス）の投与量の実施例１３の組成物を、ＥＡＥの発症から最初の３日間投与した。
【０１０３】
さらに、６．８ｍｇのＧＡ／Ｋｇ動物および１２．２ｍｇのＣＢＤ／Ｋｇ動物（１０μｌ／マウス）の投与量の実施例１４の組成物を、実験終了まで投与した。組成物を１日１回投与した。
【０１０４】
実験の最後にマウスを犠牲にし、ニューロン分析のために脳を取り出した。
・グループ２：  ＧＡ投与量６．８ｍｇ／Ｋｇ動物（１２０ｍｃｇ／１０μｌ／マウス）のＧＡ組成物（参考例５）の鼻内投与。組成物を１日１回投与した。
・グループ３：  ＧＡ投与量６．８ｍｇ／ｋｇのＧＡコントロール溶液（参考例６）の皮下投与。１００μｌの溶液を１日１回マウスに投与した（１２０μｇＧＡ／動物／日）。
・グループ４：  コントロール（未処置）
２匹のマウスに、脳のニューロンを分化させるＤＮＡに組み込むチミジンアナログであるＢｒＤＵ（５−Ｂｒ−２’−デオキシウリジン）を５０ｍｇ／Ｋｇ、２０日目から実験の最終日まで毎日腹腔内注入した。
【０１０５】
実験の最後にマウスを犠牲にし、ニューロン分析のために脳を取り出した。
図５の結果は、低投与量のＧＡおよびＣＢＤを含有する複合組成物の鼻内投与は、同じ投与量のＧＡ単独鼻内投与または同じ投与量のＧＡ皮下投与よりも、マウスのＥＡＥの治療にさらに有効であることを示す。
【０１０６】
実験の最後（２６日目）に、以下のＥＡＥスコアが得られた。
・グループ１（鼻内、ＧＡ−ＣＢＤ組成物）〜０．５
・グループ２（鼻内、ＧＡ組成物）〜２
・グループ３（皮下、ＧＡコントロール溶液）〜３．４
・グループ４（未処置のコントロール）〜３
ＧＡ−ＣＢＤ（グループ１から）を用いて鼻内に施したマウスの組織断片にのみ、活性ニューロンの高度な再生が見られた。
【０１０７】
実施例１８：マウスのＥＡＥにおける、ＧＡ−ＣＢＤ組成物を用いた鼻内治療の効果
（未処置のコントロール動物およびＧＡ水溶液を用いて投与された動物における再生）
治療
実施例５に記載したように、メスＣ５７Ｂ１／６においてＥＡＥを誘導した。
【０１０８】
本発明の担体中ではないＧＡ溶液の経鼻投与がＥＡＥモデルにおいて有効かどうかを試験するために、この実験を実行した。
〜１１日目から始まり（個々のマウスにおいて臨床スコアＥＡＥ≧０．５を発症してから治療を開始した）この研究の終了まで、この組成物を１日１回投与した。
【０１０９】
以下の実験グループ（各６匹の動物を有する）を用いた。
・グループ１：  １３．７ｍｇ／Ｋｇ動物（２４０ｍｃｇ／２０μｌ／マウス）の高投与量でのＧＡ水性コントロール（参考例７）の鼻内投与。組成物１０μｌを各鼻孔に１日１回投与した。
・グループ２：  コントロール（未処置）
この結果から、水溶液からのＧＡの鼻内投与がＥＡＥ（多発性硬化症モデル）に効果がなかったこと、未処置のマウスと相違しなかったことがわかる。
【０１１０】
ＥＡＥ誘導から１６日後から、以下の治療スケジュール計画にしたがって動物を４つの新しいグループに再分類した。
・グループ１Ａ：  ＧＡ水溶液を鼻内に施していたグループの２匹に対して、実施例１５の組成物を鼻内に施した。
・グループ１Ｂ：  ＧＡ水溶液を鼻内に施していたグループの２匹に対して、何も処置せず。
・グループ２Ａ：  未処置の３匹のマウスに対して、未処置のまま。
・グループ２Ｂ：  未処置の１匹のマウスについて、実施例１５の組成物を鼻内に施す。
【０１１１】
表４に実施例１８の実験結果を示す。ＧＡおよびＣＢＤの組み合わせを用いて治療された１６日目以降のマウスの場合、条件の再生を示すＥＡＥスコアの低下が見られることが、この結果から示された。グループ１Ａの２２日目における平均スコアが、１スコアの低下（３から２へ）を示す２であり、１Ａの２２日目における平均スコアが、１スコアの低下（３から２へ）を示す２であり、グループ２Ｂにおける低下は、４から２への２スコアであった。未処置マウスの両グループ１Ｂおよび２Ａにおいて、スコアは実質的に同じであった。
【０１１２】
【表２０】
2010522741.tif 000021
【０１１３】
実施例１９：ＥＡＥマウスモデルで経鼻投与および皮下投与された、酢酸グラチラマーおよびカンナビジオール（ＧＡ＆ＣＢＤ）の新規組合せ薬の治療有効性
本実験を、６〜７週齢のメスＣ５７Ｂ１／６マウスで行った。
【０１１４】
完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）中で０．１ｍｌ（５ｍｇのミコバクテリア）と混合したＭＯＧ３５−５５ペプチドによりマウスを免疫化した。０．２ｍｌの量の混合物を各マウスの尾の根元に注入した。その直後および４８時間後に０．１ｍｌの量の百日咳毒素（２００ｎｇ／マウス）を注入した。臨床評価を、以下の基準（ＥＡＥスコア、実施例５参照）に基づいて行った。
【０１１５】
以下の製剤を製造した。
【０１１６】
【表２１】
2010522741.tif 000022
【０１１７】
この組成物をさらに１５分間撹拌した。最終組成物は１２ｍｇ／ｍＬのＧＡおよび１２ｍｇ／ｍＬのＣＢＤを含有する。
【０１１８】
【表２２】
2010522741.tif 000023
【０１１９】
最終組成物は２．４ｍｇ／ｍＬのＧＡおよび２．４ｍｇ／ｍＬのＣＢＤを含有する。
以下の実験グループ（各グループが５匹の動物を有する）を作った。
・グループＡ（鼻内、酢酸グラチラマーおよびＣＢＤ、製剤Ａ）：  それぞれ５匹のマウスに投与、１日１回、１０μｌの製剤Ａの組み合わせ（ＧＡ＆ＣＢＤ酢酸グラチラマー：６．８ｍｇ／ｋｇ、ＣＢＤ：６．７ｍｇ／ｋｇ）。個々のマウスが臨床スコアＥＡＥ≧０．５となった際に治療を開始し、研究の終了まで行った。
・グループＢ（皮下、酢酸グラチラマーおよびＣＢＤ、製剤Ｂ）：  それぞれ５匹のマウスを入手、１日１回、５０μｌの製剤Ｂの組み合わせ（ＧＡ＆ＣＢＤ酢酸グラチラマー：６．８ｍｇ／ｋｇ、ＣＢＤ：６．７ｍｇ／ｋｇ）。個々のマウスが臨床スコアＥＡＥ≧０．５となった際に治療を開始し、研究の終了まで行った。
・グループＣ（コントロール、未処置）：  未処置マウス
【０１２０】
【表２３】
2010522741.tif 000024
【０１２１】
上記の表および図５は、ＣＢＤおよびＧＡの鼻内投与、ＣＢＤおよびＧＡの皮下投与に続くＥＡＥの臨床症状を未処置のコントロールに対して表し、複合薬剤の経鼻投与および皮下投与の両方が、コントロールの病気マウスに対して病気の減少において統計的に有意な効果を示した。＊Ｐ＜０．０５（製剤Ａ  ｖｓ  コントロール）、＊＊Ｐ＜０．０５（製剤Ｂ  ｖｓ  コントロール）であり、経鼻投与が最も有効な治療であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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