(57)【要約】  本発明は、治療用天然産物、特に尿路障害を治療及び予防するのに有効な植物抽出物と、前記抽出物を入手するための方法を開示する。特に、本発明は、非水溶性残渣を実質的に含まず、有効なα１アドレナリン受容体遮断活性を示す、Opuntia ficus-indica（大型宝剣）花の水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）を開示する。さらに開示するのは、この抽出物を調製する方法と、α１アドレナリン受容体及び／又は５αレダクターゼを阻害する方法、並びに、それらに関連した尿路障害のような医学的症状を治療する方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
非水溶性残渣を実質的に含まず、有効なα１アドレナリン受容体遮断活性を示す、Opuntia ficus-indica花の水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）、その成分（ＮＡＢＩＡ画分）、又はその成分のあらゆる組合せ。
【請求項２】
請求項１の抽出物であって、その５０ｇの試料へ５０ｍｌの水を加え、それらを室温で少なくとも２時間混合して、入手した溶液を混合の開始より２４時間観察するときに澄明な水溶液を生成する、前記抽出物。
【請求項３】
エタノール抽出物、メタノール抽出物、又はプロパノール抽出物、及びこれらのあらゆる水溶液である、請求項１のＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項４】
非選択的なα１アドレナリン受容体遮断活性を示す、請求項１〜３のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項５】
１０７ｎｇ／ｍｌ未満であるα１ブロッカー半最大阻害濃度（α１  ＩＣ５０）を特徴とする、請求項４のＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項６】
１０６ｎｇ／ｍｌ以下であるα１  ＩＣ５０を特徴とする、請求項５のＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項７】
α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）アドレナリン受容体のいずれかに選択的なα１遮断活性を示す、請求項１〜３のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項８】
５αレダクターゼ阻害活性をさらに示す、請求項１〜７のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項９】
ＮＡＢＩＡ画分である、請求項１の抽出物。
【請求項１０】
前記成分が、ＮＡＢＩＡ画分Ｄ、ＮＡＢＩＡ画分Ｆ、ＮＡＢＩＡ画分Ｇ、又はこれらのあらゆる組合せからなる群より選択される、請求項９のＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項１１】
液体形態（液状ＮＡＢＩＡ抽出物）である、請求項１〜１０のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項１２】
固体形態（乾燥ＮＡＢＩＡ抽出物）である、請求項１〜１０のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物と医薬的に許容される担体を含んでなる植物療法（phytotherapeutical）製剤。
【請求項１４】
錠剤、丸剤、分散液剤、サシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、エアゾール剤、軟又は硬ゼラチンカプセル剤、注射溶液剤又は懸濁液剤、軟膏剤、クリーム剤、又はローション剤より選択される剤形である、請求項１３の植物療法製剤。
【請求項１５】
前記剤形が３ｍｇ抽出物〜１０００ｍｇ抽出物を含んでなるカプセル剤である、請求項１４の植物療法製剤。
【請求項１６】
前記剤形が１人１日あたり１００ｍｇ抽出物〜１０００ｍｇ抽出物を含んでなるカプセル剤である、請求項１５の植物療法製剤。
【請求項１７】
前記担体が液体担体である、請求項１３の植物療法製剤。
【請求項１８】
前記液体担体が、水、アルコール、生理食塩水、オイル、及び果汁からなる群より選択される、請求項１７の植物療法製剤。
【請求項１９】
前記担体が固体担体である、請求項１３の植物療法製剤。
【請求項２０】
前記固体担体が、マルトデキストリン、デキストリン、二酸化シリコン、デンプン、ゴム、及びハイドロコロイドからなる群より選択される、請求項１９の植物療法製剤。
【請求項２１】
少なくとも１つの医薬的に許容される添加剤をさらに含んでなる、請求項１３〜２０のいずれかの植物療法製剤。
【請求項２２】
前記添加剤が、崩壊剤、湿潤剤、甘味剤、保存剤、及び／又は香味剤からなる群より選択される、請求項２１の植物療法製剤。
【請求項２３】
包装材料に包装されて、前記包装材料の中又は上の印字で尿路障害（ＵＴＤ）の治療における使用が特定される、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの植物療法製剤。
【請求項２４】
前記ＵＴＤが、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、及び前立腺癌からなる群より選択される、請求項２３の抽出物又は製剤。
【請求項２５】
包装材料に包装されて、前記包装材料の中又は上の印字でα１アドレナリン受容体活性を阻害することにおける使用が特定される、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの植物療法製剤。
【請求項２６】
前記α１アドレナリン受容体阻害が非選択的な阻害である、請求項２５の抽出物又は製剤。
【請求項２７】
前記α１アドレナリン受容体阻害が、α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）アドレナリン受容体のいずれかの選択的な阻害である、請求項２５の抽出物又は製剤。
【請求項２８】
包装材料に包装されて、前記包装材料の中又は上の印字で５αレダクターゼ酵素活性を阻害することにおける使用が特定される、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの植物療法製剤。
【請求項２９】
治療活性薬剤をさらに含んでなる、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの植物療法製剤。
【請求項３０】
尿路障害（ＵＴＤ）を治療及び予防する方法であって、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それにより前記ＵＴＤを治療することを含んでなる、前記方法。
【請求項３１】
前記ＵＴＤが、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、又は前立腺癌からなる群より選択される、請求項３０の方法。
【請求項３２】
α１アドレナリン受容体活性を阻害するための方法であって、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それにより前記α１アドレナリン受容体活性を阻害することを含んでなる、前記方法。
【請求項３３】
α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）受容体活性のいずれかを選択的に阻害するための方法であって、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それによりα１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）受容体活性のいずれかを特異的に阻害することを含んでなる、前記方法。
【請求項３４】
５αレダクターゼ酵素活性を阻害するための方法であって、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それにより前記５αレダクターゼ酵素活性を阻害することを含んでなる、前記方法。
【請求項３５】
α１アドレナリン受容体活性と５αレダクターゼ酵素活性をともに阻害するための方法であって、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物又は請求項１３〜２２のいずれかの製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それにより前記α１アドレナリン受容体活性と前記５αレダクターゼ酵素活性を阻害することを含んでなる、前記方法。
【請求項３６】
前記製剤又は前記ＮＡＢＩＡ抽出物を経口投与する、請求項３０〜３５のいずれかの方法。
【請求項３７】
前記製剤又は前記ＮＡＢＩＡ抽出物を非経口投与する、請求項３０〜３５のいずれかの方法。
【請求項３８】
前記対象がヒト対象者である、請求項３０〜３７のいずれかの方法。
【請求項３９】
前記製剤又は前記ＮＡＢＩＡ抽出物を３．０ｍｇ抽出物／日〜約１０００ｍｇ抽出物／日の間の１日用量で投与する、請求項３８の方法。
【請求項４０】
前記１日用量が約１００ｍｇ抽出物／日〜約５００ｍｇ抽出物／日の範囲である、請求項３９の方法。
【請求項４１】
前記１日用量が約２００ｍｇ抽出物／日〜約３００ｍｇ抽出物／日の範囲である、請求項４０の方法。
【請求項４２】
請求項１〜８のいずれかの Opuntia ficus-indica 花の澄明な水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）を調製するための方法であって：
ａ）自然乾燥の Opuntia ficus-indica（ＯＦＩ）花を入手する工程；
ｂ）前記ＯＦＩ花を破砕及び粉砕してＯＦＩ花の粉末を入手する工程；
ｃ）前記粉末をアルコール溶媒中に室温で抽出して、一次抽出物を含有する一次抽出溶液と使用済み（exhausted）花を入手する工程；
ｄ）前記使用済み花を前記一次抽出物より分離させる工程；
ｅ）前記一次抽出溶液よりあらゆるアルコール溶媒を蒸発させて二次抽出物を入手する工程；
ｆ）前記二次抽出物よりあらゆる非水溶性残渣を沈殿させる工程；及び
ｇ）前記二次抽出物より前記非水溶性残渣を分離させて、あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まない、Opuntia ficus-indica 花の澄明な水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）を入手する工程を含んでなる、前記方法。
【請求項４３】
前記非水溶性残渣を前記二次抽出物より前記沈殿させる工程を室温で実施する、請求項４２の方法。
【請求項４４】
前記非水溶性残渣を前記二次抽出物より前記沈殿させる工程を冷却下で実施する、請求項４２の方法。
【請求項４５】
前記沈殿させる工程を一晩実施する、請求項４３〜４４のいずれかの方法。
【請求項４６】
前記アルコール溶媒が、メタノール、エタノール、又はプロパノール、及びそのあらゆる水溶液より選択される、請求項４２の方法。
【請求項４７】
工程（ｅ）に続き、前記二次抽出物をアルコール溶媒より少なくとも１回さらに抽出し、その後、前記アルコール溶媒の蒸発させる、請求項４２の方法。
【請求項４８】
工程（ｆ）に先立って、前記二次抽出物へ水を加える、請求項４２の方法。
【請求項４９】
前記非水溶性残渣を前記二次抽出物より沈殿させる工程に先立って、前記二次抽出物を５０℃より高く加熱する、請求項４２〜４８のいずれかの方法。
【請求項５０】
前記二次抽出物を８０℃より高く加熱する、請求項４９の方法。
【請求項５１】
請求項９のＮＡＢＩＡ画分を調製するための方法であって、請求項４２に従ってＮＡＢＩＡ抽出物を調製し、前記ＮＡＢＩＡ抽出物の選択的な精製を実施して、前記ＮＡＢＩＡ抽出物の分離した画分を入手することを含んでなる、前記方法。
【請求項５２】
前記選択的な精製が、クロマトグラフィー分離、選択沈殿、又は選択溶媒抽出からなる群より選択される、請求項５１の方法。
【請求項５３】
請求項１３〜２２のいずれかの製剤を調製するための方法であって、請求項１〜１２のいずれかのＮＡＢＩＡ抽出物へ医薬的に許容される担体を加えることを含んでなる、前記方法。
【請求項５４】
少なくとも１つの医薬的に許容される添加剤を加えることをさらに含んでなる、請求項５３の方法。
【請求項５５】
請求項１の抽出物の、尿路障害（ＵＴＤ）の治療用医薬品の製造における使用。
【請求項５６】
前記ＵＴＤが、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、又は前立腺癌からなる群より選択される、請求項５５の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療用天然産物の分野に、特に尿路障害を治療及び予防するのに有効な植物抽出物と、前記抽出物を入手するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
尿路障害、特に良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）と前立腺癌は、５０歳以上の男性の比較的高い割合に罹患して、７０歳以上の男性のほぼ７０％で観察される。
【０００３】
ＢＰＨは、進行性の状態であり、排尿頻度の増加、夜間頻尿、弱い尿流、放尿開始の躊躇い又は遅れ、及び排尿不全が含まれる、一連の下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）をもたらす。ＢＰＨの慢性的な結果には、膀胱平滑筋の肥大、非代償性膀胱、尿路感染症の発症増加、尿結石形成、及び腎不全を含めることができる。女性も不安定な膀胱収縮によりＬＵＴＳを発症する場合があることが注目されている。
【０００４】
この障害は異質であり、ホルモン因子、増殖因子、基質−上皮の相互作用、及び老化によって引き起こされる可能性がある。
【０００５】
ＢＰＨの治療選択肢には、生活様式の改善、デバイス、外科手術、薬理学及び植物療法的な介入が含まれる。最近まで、未治療ＢＰＨのリスクは、明確化することが難しかった。しかしながら、今や疫学データは、前立腺サイズとリスクの間の明らかな相関性を実証している。
【０００６】
ＢＰＨの治療に一般に使用されている２群の薬理組成物がある：
ａ）αアンタゴニスト（「αアドレナリンアンタゴニスト」とも呼ばれる）、これは、アドレナリン経路を介して作用して、ＢＰＨの症状を緩和するのに有効であり得るが、前立腺サイズは変化させない。αアンタゴニストは、α１又はα２アドレナリン受容体のいずれか一方に選択的であり得るか、又はそれは、非選択的であり得て、アンタゴニスト活性をα１とα２の両方で示す。ＢＰＨの症状の治療についてＦＤＡにより承認された３つの最も有名な合成薬剤のα１アドレナリンアンタゴニストは、テラゾシン（Ｈｙｔｒｉｎ（登録商標））、ドキサゾシン（Ｃａｒｄｕｒａ（登録商標））、及びタムスロシン（Ｆｌｏｍａｘ（登録商標））である。
【０００７】
ｂ）５αレダクターゼ阻害剤：前立腺に存在して、テストステロンをジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）へ変換する酵素、５αレダクターゼ（特にＩＩ型）を阻害する。５αレダクターゼ阻害剤は、ホルモンの機序を介して作用して、前立腺容量を減らすことが示されている。ＩＩ型５αレダクターゼの例示の競合的及び特異的な阻害剤は、フィナステリド（Ｐｒｏｓｃａｒ（登録商標））である。フィナステリドの有用性は、インポテンス、リビドー減少、射精障害が含まれる多数の望まれない副作用によりやや制限されてきた。さらに、フィナステリドは、ＢＰＨの患者において、たとえ前立腺癌の存在時でも、血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）レベルのほぼ５０％の減少を引き起こす。この血清ＰＳＡレベルの低下作用は、前立腺癌の腫瘍マーカーとしてのその有用性を不明瞭にする場合がある。
【０００８】
今日の証拠は、中等度〜重症の症状とより小さな前立腺（３０ｃｃ以下の推定量又は１．４ｎｇ／ｍｌ以下の血清ＰＳＡ）のある患者がα１アドレナリンアンタゴニストでの単独療法より利益を得る可能性が高いのに対して、同等の症状とより大きな前立腺（３０ｃｃを超える推定量又は１，４ｎｇ／ｍｌより高い血清ＰＳＡ）のある患者は、閉塞の動的要素を緩和するα１アドレナリンアンタゴニスト（例えば、テラゾシン）と前立腺サイズを減らすことによって閉塞の機械的要素に対処する５αレダクターゼ阻害剤（例えば、フィナステリド）の組合せ療法より、より持続的な結果を導く可能性があることを示唆する。
【０００９】
植物療法剤（植物抽出物としても知られる）は、ＢＰＨに関連した症状の治療への天然の代用品として示唆されてきた。ＢＰＨのために処方されるより一般的な植物抽出物のいくつかは：Serenoa repens［セレノアレペンズ］（Saw Palmetto Berry：ソーパルメットベリー）、Pygeum africanum［ピジウムアフリカーナ］（Plum Bark：プラム樹皮）、及び Cucurbita pepo［ペポカボチャ］（Pumpkin Seed：カボチャ種子）より得られる。しかしながら、最近、それらの効力は、疑問視されている（例えば、The New England Journal of Medicine, Vol. 354 (6):557-566 (2006) 中の「Saw Palmetto for Benign Prostatic Hyperplasia（良性前立腺肥大症へのソーパルメット）」S. Bent et al., を参照のこと）。
【００１０】
Opuntica ficus-indica（ＯＦＩ）は、他にはノパルサボテン又はウチワサボテンとして知られ、サボテン（Cactaceae）科の中で最も一般的で広汎な属である Opuntia（オプンチア）属に属する。それは、火傷、浮腫、消化不良、及び気管支喘息を治療するための民間療法として広く使用されてきた。すべてのサボテン種と同じように、ＯＦＩ植物は、形態学的に、根、幹（葉状枝）、果実、及び花へ分割することができる。
【００１１】
この植物の医薬使用に関する研究のほとんどは、葉状枝と果実に関して行われてきて、ＯＦＩの花の医学使用についてはほとんど検討されてこなかった。
【００１２】
日本特許公開公報番号：１００５９９９５（Shikei et al へ）は、ＯＦＩ花のメタノール抽出に続く複雑な系列のクロマトグラフィー精製工程により特異的なフラボノイド誘導体を単離して、この方法によって得られる特異的なバイオフラボノイドのイソラムネチン３−ｏ−ロビニビオシドが５αレダクターゼの阻害剤として役立つ可能性があることをさらに実証した。この方法は、複雑かつ高価で、工業上の観点からは採用できないだけでなく、Shikei は、αブロッカー活性を発揮する何らの抽出物についても示さないだけでなく、さらに、αブロッカー活性を阻害する方法、及び／又はこれらの抽出物のいずれかを使用することによってＢＰＨに罹患しているヒトを治療する方法も示していない。
【００１３】
別の in vitro 研究（Jonas A et al., Urol. Res. 1998; 26: 265-270）は、長時間の高温還流の下で入手した、ＯＦＩ花のジクロロメタン、エタノール、又はメタノール抽出物が５αレダクターゼ活性を阻害することによって前立腺肥大を治療するのに役立つ可能性があることを示唆した。しかしながら、Jonas et al. は、上記の条件の下でαブロッカー活性を発揮する何らの抽出物についても示さず、有機及び／又はワックス不純物のない、水溶性の有効な抽出物を提供せず、そしてさらに、αブロッカー活性を阻害する方法、及び／又はこれらの抽出物のいずれかを使用することによってＢＰＨに罹患しているヒトを治療する方法も示していない。
【００１４】
従って、これらの天然産物がαブロッカー活性を有することを主張する教示はまだない。特に、ＯＦＩの花又はその成分のいずれかについてのαブロッカー活性に関する教示はまだない。さらに、実質的に水溶性で、体内で改善されたバイオアベイラビリティを有する可能性がある療法上活性なＯＦＩの花の抽出物は、存在していない。
【００１５】
従って、天然の治療用、好ましくは水溶性の組成物とα１アドレナリン受容体を阻害するための方法への、そしてさらには、先行技術の組成物及び方法の副作用を有さず、ＢＰＨに罹患しているヒトの治療に有効に使用することに適していて臨床試験で実証される、α１アドレナリン受容体と５αレダクターゼの活性をともに阻害するための天然の治療用組成物への待望久しいニーズがある。
【発明の概要】
【００１６】
本発明の１つの側面により、非水溶性残渣を実質的に含まず、有効なα１アドレナリン受容体遮断活性を示す、Opuntia ficus-indica（大型宝剣）花の水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）、その成分（ＮＡＢＩＡ画分）、又はその成分のあらゆる組合せを提供する。
【００１７】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、この抽出物は、その抽出物の５０ｇの試料へ５０ｍｌの水を加え、それらを室温で少なくとも２時間混合して、入手した溶液を混合の開始より２４時間観察するときに澄明な水溶液を生成する。
【００１８】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、抽出物は、エタノール抽出物、メタノール抽出物、又はプロパノール抽出物、及びこれらのあらゆる水溶液である。
【００１９】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載の抽出物は、非選択的なα１アドレナリン受容体遮断活性を示す。好ましくは、この抽出物は、１０７ｎｇ／ｍｌ未満であるα１ブロッカー半最大阻害濃度（α１  ＩＣ５０）、より好ましくは、１０６ｎｇ／ｍｌ以下であるα１  ＩＣ５０を特徴とする。
【００２０】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物は、α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）アドレナリン受容体のいずれにも選択的なα１遮断活性を示す。
【００２１】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物は、５αレダクターゼ阻害活性をさらに示す。
【００２２】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、ＮＡＢＩＡ抽出物は、ＮＡＢＩＡ画分であり、好ましくは、ＮＡＢＩＡ画分Ｄ、ＮＡＢＩＡ画分Ｆ、ＮＡＢＩＡ画分Ｇ、又はこれらのあらゆる組合せからなる群より選択される抽出成分である。
【００２３】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載の抽出物は、液体形態（液状ＮＡＢＩＡ抽出物）である。
【００２４】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載の抽出物は、固体形態（乾燥ＮＡＢＩＡ抽出物）である。
【００２５】
本発明の別の側面により、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物と医薬的に許容される担体を含んでなる植物療法製剤を提供する。
【００２６】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、本製剤は、錠剤、丸剤、分散液剤、サシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、エアゾール剤、軟又は硬ゼラチンカプセル剤、注射溶液剤又は懸濁液剤、軟膏剤、クリーム剤、又はローション剤より選択される剤形である。
【００２７】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本剤形は、３ｍｇ抽出物〜１０００ｍｇ抽出物を含んでなるカプセル剤、好ましくは、１人１日あたり１００ｍｇ抽出物〜１０００ｍｇ抽出物を含んでなるカプセル剤である。
【００２８】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、担体は、液体担体であり、好ましくは、この液体担体は、水、アルコール、生理食塩水、オイル、及び果汁からなる群より選択される。
【００２９】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、担体は、固体担体であり、好ましくは、固体担体は、マルトデキストリン、デキストリン、二酸化シリコン、デンプン、ゴム、及びハイドロコロイドからなる群より選択される。
【００３０】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本製剤は、少なくとも１つの医薬的に許容される添加剤をさらに含む。この添加剤は、好ましくは、崩壊剤、湿潤剤、甘味剤、保存剤、及び／又は香味剤からなる群より選択される。
【００３１】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の植物療法製剤は、包装材料に包装されて、その包装材料の中又は上の印字で尿路障害（ＵＴＤ）の治療における使用が特定される。好ましくは、ＵＴＤは、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、及び前立腺癌からなる群より選択される。
【００３２】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の植物療法製剤は、包装材料に包装されて、その包装材料の中又は上の印字でα１アドレナリン受容体活性を阻害することにおける使用が特定される。α１アドレナリン受容体阻害は、非選択的な阻害であっても、α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）アドレナリン受容体のいずれにも選択的な阻害であってもよい。
【００３３】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の植物療法製剤は、包装材料に包装されて、その包装材料の中又は上の印字で５αレダクターゼ酵素活性を阻害することにおける使用が特定される。
【００３４】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の植物療法製剤は、治療活性薬剤をさらに含む。
【００３５】
本発明のなお別の側面により、尿路障害（ＵＴＤ）を治療及び予防する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それによりＵＴＤを治療することを含んでなる。
【００３６】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、ＵＴＤは、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、又は前立腺癌からなる群より選択される。
【００３７】
本発明のなお別の側面により、α１アドレナリン受容体活性を阻害するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それによりα１アドレナリン受容体活性を阻害することを含んでなる。
【００３８】
本発明の追加の側面により、α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）受容体活性のいずれかを選択的に阻害するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それによりα１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）受容体活性のいずれかを特異的に阻害することを含んでなる。
【００３９】
本発明のなお追加の側面により、５αレダクターゼ酵素活性を阻害するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それにより５αレダクターゼ酵素活性を阻害することを含んでなる。
【００４０】
本発明のなお追加の側面により、α１アドレナリン受容体活性と５αレダクターゼ酵素活性をともに阻害するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は本明細書に記載の製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与して、それによりα１アドレナリン受容体活性と５αレダクターゼ酵素活性を阻害することを含んでなる。
【００４１】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、該製剤又はＮＡＢＩＡ抽出物は、経口投与する。
【００４２】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、該製剤又はＮＡＢＩＡ抽出物は、非経口投与する。
【００４３】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、対象は、ヒトの対象者である。
【００４４】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、該製剤又はＮＡＢＩＡ抽出物は、３．０ｍｇ抽出物／日〜約１０００ｍｇ抽出物／日の間の１日用量で、好ましくは約１００ｍｇ抽出物／日〜約５００ｍｇ抽出物／日の範囲の１日用量で、より好ましくは約２００ｍｇ抽出物／日〜約３００ｍｇ抽出物／日の範囲の１日用量で投与する。
【００４５】
本発明のなお追加の側面により、本明細書に記載の Opuntia ficus-indica 花の澄明な水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）を調製するための方法を提供し、該方法は：
ａ）自然乾燥の Opuntia ficus-indica（ＯＦＩ）花を入手する工程；
ｂ）このＯＦＩ花を破砕及び粉砕してＯＦＩ花の粉末を入手する工程；
ｃ）この粉末をアルコール溶媒中に室温で抽出して、一次抽出物を含有する一次抽出溶液と使用済み（exhausted）花を入手する工程；
ｄ）この使用済み花を一次抽出物より分離させる工程；
ｅ）この一次抽出溶液よりあらゆるアルコール溶媒を蒸発させて二次抽出物を入手する工程；
ｆ）この二次抽出物よりあらゆる非水溶性残渣を沈殿させる工程；及び
ｇ）この二次抽出物よりあらゆる非水溶性残渣を分離させて、Opuntia ficus-indica 花の澄明な水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）を入手する工程を含んでなる。
【００４６】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、非水溶性残渣を二次抽出物より沈殿させる工程は、室温で実施する。
【００４７】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、非水溶性残渣を二次抽出物より沈殿させる工程は、冷却下で実施する。
【００４８】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、非水溶性残渣を二次抽出物より沈殿させる工程は、一晩実施する。
【００４９】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、アルコール溶媒は、メタノール、エタノール、又はプロパノール、及びそのあらゆる水溶液より選択される。
【００５０】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、工程（ｅ）に続き、二次抽出物は、アルコール溶媒より少なくとも１回さらに抽出し、その後、アルコール溶媒は留去される。
【００５１】
記載の好ましい態様におけるなおさらなる特徴によれば、工程（ｆ）に先立って、二次抽出物へ水を加える。
【００５２】
本発明のなお追加の側面により、非水溶性残渣を二次抽出物より沈殿させる工程に先立って、二次抽出物を５０℃より高く、好ましくは８０℃より高く加熱する方法を提供する。
【００５３】
本発明のさらなる側面により、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ画分を調製するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のようなＮＡＢＩＡ抽出物を調製し、ＮＡＢＩＡ抽出物の選択的な精製を実施して、ＮＡＢＩＡ抽出物の分離した画分を入手することを含んでなる。
【００５４】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、選択的な精製は、クロマトグラフィー分離、選択沈殿、又は選択溶媒抽出からなる群より選択される。
【００５５】
本発明のさらなる側面により、本明細書に記載の抽出物の、尿路障害（ＵＴＤ）の治療用医薬品の製造における使用を提供する。
【００５６】
下記に記載の本発明の好ましい態様におけるさらなる特徴によれば、ＵＴＤは、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、又は前立腺癌からなる群より選択される
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１は、ＮＡＢＩＡマルトデキストリンカプセル剤及びＮＡＢＩＡ抽出物の４０℃及び５０℃で３ヶ月の期間にわたる乾燥時損失（％）を示すグラフである。
【図２】図２は、ＮＡＢＩＡマルトデキストリンカプセル剤及びＮＡＢＩＡバッチの４０℃及び５０℃で３ヶ月の期間にわたる総フラボノイド含量（％）を示すグラフである。
【図３】図３は、ヒト包皮線維芽細胞モデルにおいて異なる濃度のＮＡＢＩＡ  Ｄ、Ｇ、及びＦ画分により誘導される５αレダクターゼ阻害（％）をフィナステリド、ソーパルメット（Saw Palmetto）、及び阻害剤なし（陰性対照、１００％）と比較して図示する棒グラフである。
【図４】図４は、ＮＡＢＩＡマルトデキストリンカプセル剤及びＮＡＢＩＡ抽出物の３ヶ月の期間にわたるα１特異的な阻害を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
本発明は、治療用天然産物、特に、尿路障害を治療及び予防するのに有効な植物抽出物と、前記抽出物を入手するための方法を開示する。本発明はさらに、上記の組成物を含有する製剤、その調製、及び尿路障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【００５９】
上記に詳述したように、尿路障害の治療選択肢には、２群の薬理組成物：αアドレナリンアンタゴニスト（特に、α１アドレナリンアンタゴニスト。これは、ＢＰＨの症状を緩和するが、前立腺サイズは変化させない）と５αレダクターゼ阻害剤（これは、前立腺容量を減らすが、インポテンス、リビドー減少、及び射精障害のような多数の望まれない副作用を引き起こす場合がある）が含まれる。
【００６０】
植物療法剤は、症候性ＢＰＨの治療への天然代替品として示唆されてきたが、その効力に関しては矛盾する見解があり、天然のαブロッカー活性を有することが判明した天然抽出物はまだない。従って、合成のαアドレナリンアンタゴニストに対する天然代替品はまだない。
【００６１】
さらに、尿路障害を効果的に治療するために、５αレダクターゼとα１アドレナリンアンタゴニストをともに阻害して、少なくとも１つの合成治療剤を使用する必要性を回避する可能性がある「完全に天然の」治療用組成物はない。
【００６２】
上記にさらに詳述したように、Opuntica ficus-indica（ＯＦＩ）は、ごく一般的で広汎なサボテン属であり、いくつかの既知の治療効果を有する。先のセクションより理解し得るように、αブロッカー全般として、特にα１ブロッカーとして何らかの効果を有することが見出されたＯＦＩ抽出物は、これまでにない。さらに、ＯＦＩ花の抽出物が調製されたことはあるが、非水溶性残渣を実質的に含まないものが調製されたことはない。
【００６３】
今回、本発明者は、実証されたα１アドレナリン受容体阻害作用を有して、ヒト対象者での in vivo 臨床試験において、ＢＰＨのような尿路障害を治療することにも成功した、ＯＦＩ花の水溶性アルコール抽出物を成功裡に単離及び調製した。この抽出物は、あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まないように調製されたので、治療薬剤として特に適していて、改善されたバイオアベイラビリティを有する。
【００６４】
従って、本発明の１つの側面により、非水溶性残渣を実質的に含まず、有効なα１アドレナリン受容体遮断活性を示す、Opuntia ficus-indica 花の水溶性アルコール抽出物（ＮＡＢＩＡ抽出物）、その成分（ＮＡＢＩＡ画分）、又はその成分のあらゆる組合せを提供する。
【００６５】
本明細書に使用するように、用語「水溶性」は、少なくとも約１０重量％、そして好ましくは、少なくとも約２０重量％のレベルでの水中溶解度を意味するが、典型的には、水性の植物抽出物は、ずっと高い水中溶解度を有する場合がある。
【００６６】
さらに、用語「水溶性」は、固体と液体の両方の抽出物に言及することになっているので、一般的には水に混和する液体に言及して、分離相の形成をもたらすことなく水へ加えることができる液体を意味する用語「水混和性」も含まれる。
【００６７】
本明細書に使用する用語「抽出物」は、植物又は植物部分の源より入手される物質又は組成物を意味し、その物質又は組成物は、植物の外側で見出されても（即ち、滲出液）、植物又は植物部分の内側であるが、その細胞の外側で見出されても、植物の細胞の内側に見出されてもよい。当該技術分野で理解されるように、その物質又は組成物を植物又は食物部分より入手するには、化学及び／又は物理処理が必要とされる場合がある。本発明の抽出物は、ＯＦＩ花より入手する。
【００６８】
この抽出物は、実施例５（in vitro 実験）及び実施例７（ヒト対象者に対する in vivo 実験）において実証されるように、有効なα１アドレナリン受容体遮断活性を示したが、そのような活性が植物抽出物に見出されたのは初めてのことであり、さらに、植物抽出物を効果的に使用してα１受容体活性を阻害して、一般的な尿路障害であるＢＰＨに罹患しているヒトを有効に治療したのも、初めてのことであった。
【００６９】
句「α１アドレナリン受容体遮断活性」又は「α１遮断」又は「α１阻害」には、α１アドレナリン受容体に有効に作用するか又はそれへ結合して、治療効果をもたらすあらゆる能力が含まれる。
【００７０】
従って、句「α１アドレナリンアゴニスト」又は「α１ブロッカー」には、α１アドレナリン受容体に作用するか又はそれへ結合するのに有効で治療効果をもたらす、抽出物内部のあらゆる化学物質（chemical entities）、例えば、抽出物画分、特定の化合物、イオン、複合体、等が含まれる。
【００７１】
α１阻害は、当該技術分野で知られている多数の方法によって測定することができて、そのいくつかについては、下記の方法のセクションで記載する。αブロッカー活性を特徴付ける１つのやり方は、半最大阻害濃度（ＩＣ５０）数値による。これは、薬理学的研究において使用される濃度の尺度であり、その標的（この場合は、α１アドレナリン受容体）の５０％阻害に必要とされる阻害剤の濃度を表す。
【００７２】
あるいは、阻害のパーセントは、例えば、下記の表３及び表４に示すように、しばしば合成のα１ブロッカーと比較される活性の尺度としても使用される。
【００７３】
今回、本発明の抽出物は、α１受容体を非特異的にも特異的にも阻害し得ることが見出された。
【００７４】
本明細書に使用するように、用語「特異的に」、「特異的」、「選択的に」、及び「選択的」は、交換可能的に使用される。例えば、実施例５の表２は、いくつかの化合物の非特異的なα１阻害を比較する。そこに示すように、ＢＰＨ治療に使用する一般的な天然産物、ソーパルメットは、約３×１０１０ｎｇ／ｍｌのα１  ＩＣ５０を有するが、一般的な合成αブロッカーであるテラゾシンより８オーダー大きい値である。どの実践的な目的にしても、そのような高い値は、α１ブロッカー活性の非存在を表す。対照的に、本発明の抽出物は、今日使用されている最も有効な合成αブロッカーと十分比較可能である、１０３ｎｇ／ｍｌと同じくらい低いα１  ＩＣ５０を有した。
【００７５】
従って、本発明の好ましい態様によれば、本抽出物の非特異的なα１阻害活性は、１０７ｎｇ／ｍｌ未満であるα１ブロッカーの半最大阻害濃度（ＩＣ５０）によって特徴付けることができる。好ましくは、該抽出物は、１０６ｎｇ／ｍｌ以下であるＩＣ５０によって、より好ましくは、１０５ｎｇ／ｍｌ未満、なおさらには１０４ｎｇ／ｍｌ未満であるα１  ＩＣ５０によって特徴付けられる。
【００７６】
以下の実施例５の表４に示すように、本発明者は、驚くべきことに、ＮＡＢＩＡ抽出物が特異的なα１受容体も成功裡に遮断することを見出した。例えば、５０μｇ／ｍｌの濃度で、ＮＡＢＩＡ抽出物は、ＷＢ４１０１対照とプラゾシン対照とそれぞれ比較して、９９％のα１Ａ及びα１Ｂ阻害を示す一方、同じ濃度で、該抽出物は、プラゾシン対照と比較して、１０３％のα１Ｃ阻害を示した。３００μｇ／ｍｌの濃度でも、同様の結果が得られた。
【００７７】
故に、本発明の好ましい態様により、α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）アドレナリン受容体のいずれにも選択的なα１遮断活性を示すＮＡＢＩＡ抽出物を提供する。
【００７８】
今回さらに、本発明者は、ＮＡＢＩＡ抽出物の画分Ｄ、Ｆ、及びＧが５αレダクターゼ酵素の活性を元の活性の約１０％まで低下させたことを示す図３に見られるように、ＮＡＢＩＡ抽出物が５αレダクターゼ阻害効果も示すことを期せずして見出した。実施例２に従って入手したＮＡＢＩＡ抽出物についても同様の結果が得られた。
【００７９】
従って、本発明の好ましい態様によれば、本発明の抽出物は、５αレダクターゼ阻害活性をさらに示して、それ故に、α１遮断活性と５αレダクターゼ阻害をともに有して、それにより、これら両方の効果を１つの完全な天然産物において提供する最初の天然抽出物となる。
【００８０】
アルコールのような、多様なやや極性の流体を使用して、ＯＦＩのような植物より、有効な材料を抽出することができる。このように、本発明の抽出物は、メタノール、エタノール、及びイソプロパノールのような一般アルコールとそのあらゆる水溶液からのＯＦＩ花の抽出によって入手されるアルコール抽出物である。
【００８１】
例えば、Jonas（1998，同上）と日本特許公開公報番号１００５９９９５にあるように、当該技術分野では、ＯＦＩ花のアルコール抽出物がいくつかすでに調製されているが、今回、本発明者は、抽出物があらゆる非水溶性残渣を実質的に含まないようにそれを入手する特別な方法を考案した。
【００８２】
本明細書に使用するように、句「あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まない」は、これら非水溶性残渣の目に見える沈殿を防ぐのに十分低いレベルを意味する。
【００８３】
下記の実施例セクションにおいて詳述するように、本発明者が考案した方法は、あらゆる非水溶性残渣がすでに除去された、澄明で黒い液体又は半液体抽出物をもたらして、この抽出物への水の添加は、その澄明性に不利な影響を与えない。乾燥したとき、この抽出物は、水に容易に再溶解して、同じ澄明な溶液が得られた。この水溶性抽出物の澄明性は、長期の貯蔵期間の後でも維持されて、抽出物のどの個別画分でも示されたことに注目されたい。
【００８４】
従って、本発明の好ましい態様によれば、あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まない水溶性抽出物は、水中に置かれるときに、澄明な溶液に見えるものである。例えば、特定のＯＦＩアルコール抽出物が水溶性であって、あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まないかどうかを検査するには、該抽出物の５０グラムの試料へ５０ｍｌの水を加え、それらを室温で少なくとも２時間混合して、入手した溶液を混合の開始より２４時間の時点で観察することができる。そのような条件の下で入手した澄明な溶液により、非水溶性残渣のその中での存在を否定することができる。
【００８５】
ＯＦＩ抽出物の中にある非水溶性残渣の例には、ワックス、油状化合物、及び他の有機物質を含めてよい。
【００８６】
そのような抽出物を得るために、本発明者は、今回、いくつかの手段を採った。
【００８７】
第一に、最初のアルコール抽出段階は、乾燥及び粉砕させたＯＦＩ花に対して、比較的低い温度で、好ましくはほぼ室温で実施して、ワックスやオイルのような、さほどアルコールに溶けない物質のアルコール中での溶解を防いで、一次抽出物を入手した。好ましくは、アルコール溶媒は、メタノール、エタノール、又はプロパノールより選択した。この方法の任意選択の特徴として、この一次抽出物を入手するために使用するアルコール抽出物は、好ましくは、水性アルコール溶媒を（実施例２のように）使用することによるか、又は１００％アルコール溶媒を（実施例１のように）使用することによって、水を含有する。
【００８８】
どちらのやり方でも、すべてのアルコール溶媒を一次抽出物より完全に蒸発させて、すでにやや水溶性である二次抽出物を入手する。
【００８９】
さらに本発明者は、この二次抽出物をあらゆる残留非水溶性物質の沈殿を高める条件の下に、例えば、約４〜１０℃への冷却下に、又は室温で少なくとも数時間保つならば、前記二次抽出物に残っているあらゆる残渣を沈殿させてから、それらを分離させて、あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まないで、α１ブロッカー活性を示す、上記に記載のような水溶性アルコール抽出物を入手することが可能であることを見出した。
【００９０】
従って、本発明の別の側面により、本明細書に記載の Opuntia ficus-indica 花の澄明な水溶性アルコール抽出物を調製するための方法を提供し、ここでこの方法は：
ａ）自然乾燥の Opuntia ficus-indica（ＯＦＩ）花を入手する工程；
ｂ）このＯＦＩ花を破砕及び粉砕してＯＦＩ花の粉末を入手する工程；
ｃ）この粉末をアルコール溶媒中に室温で抽出して、一次抽出物を含有する一次抽出溶液と使用済み（exhausted）花を入手する工程；
ｄ）この使用済み花を一次抽出物より分離させる工程；
ｅ）この一次抽出溶液よりあらゆるアルコール溶媒を蒸発させて二次抽出物を入手する工程；
ｆ）この二次抽出物よりあらゆる非水溶性残渣を沈殿させる工程；及び
ｇ）この二次抽出物より非水溶性残渣を分離させて、あらゆる非水溶性残渣を実質的に含まない、Opuntia ficus-indica 花の澄明な水溶性アルコール抽出物を入手する工程を含む。この抽出物をＮＡＢＩＡ抽出物と呼ぶ。
【００９１】
本発明者により選好的に見出されたように、二次抽出物より非水溶性残渣を沈殿させる工程は、室温で、又は冷却下に実施する。本発明の好ましい態様によれば、この工程は、一晩実施する。
【００９２】
述べられる場合、用語「室温」は、１５〜３０℃の温度を意味して、用語「一晩」は、８〜１８時間の時間を意味する。当業者が理解するように、より長い沈殿時間が可能である。本明細書に使用する用語「冷却」は、室温より低くて、好ましくは、約４℃〜約１５℃、より好ましくは、約４℃〜約１０℃の範囲の温度に言及する。
【００９３】
本発明者は、二次抽出物より非水溶性残渣を沈殿させる工程に先立って、非水溶性残渣のその沈殿に先立つ完全な溶解を確実にするために、二次抽出物を５０℃より高く、そしてなお８０℃より高く加熱してよいことをさらに見出した。
【００９４】
なおさらに、本明細書に記載の沈殿を高めるために、沈殿に先立って、二次抽出物へ水を加えてもよい。
【００９５】
示唆した方法における抽出物の比較的低い収率（花の乾燥重量に対して５％と２０％の間）は、ＯＦＩ花の中の有効成分を成功裡に単離して、それにより天然産物にはまだ見出されていない、独自のα１ブロッカー活性を示す抽出物を入手する、本発明者の能力を実証するものであることに留意すべきである。
【００９６】
さらに、本発明者は、本明細書に開示する方法に従って入手したＯＦＩ抽出物は、さらに精製して、なお追加の成分へ分離し得ることを示した。例示の精製法には、クロマトグラフィー分離、選択沈殿、又は選択溶媒抽出を含めてよい。
【００９７】
追加の精製を介して入手した抽出物画分は、その生物活性に従ってさらに分類することができて、それ故に、抽出物の特定の活性画分の選択が可能になることを見出した。
【００９８】
従って、本発明のなお別の好ましい態様によれば、本発明の用語「抽出物」には、これらの成分も本明細書に記載のようなα１ブロッカー活性を示す限りにおいて、この抽出物の別々の成分、又はこれら成分の２以上の組み合わせも含まれる。
【００９９】
以下に続く実施例セクションに示したように、ＯＦＩ花のクロマトグラフィー分離画分がα１遮断活性を示す画分を３つだけ生じることを見出した。これらの画分を、ＮＡＢＩＡ画分Ｄ、ＮＡＢＩＡ画分Ｆ、及びＮＡＢＩＡ画分Ｇと呼び、同じα１ブロッカー活性を示して、上記に記載のように、あらゆる非水溶性抽出物を実質的に含まない澄明な水溶性抽出物としても現れる、１つのＮＡＢＩＡ抽出物へ最終的には組み合わせた。
【０１００】
従って、本発明の好ましい態様により、特定のＮＡＢＩＡ画分Ｄ、Ｆ、及びＧとそのあらゆる組合せを提供する。
【０１０１】
表１からは、これらの画分が一連のポリフェノール及びフラボノイド（この中には同定されたものもある）を含有するように見えるが、抽出物の内部、又は抽出物画分の内部にあるどの化学化合物がα１ブロッカー活性の原因であるかを述べることは困難である。ある特定の理論に束縛されずに言えば、ＮＡＢＩＡが典型的には約２％〜約９０％のポリフェノール及びフラボノイドを含むことが見出された。
【０１０２】
さらに本発明者は、最初の抽出を（実施例２にあるように）水性アルコール溶媒で実施することによって、クロマトグラフィー分離のような追加の精製を実施することなく、第一の方法（実施例１）によって得られるＮＡＢＩＡと同じα１ブロッカー活性と同じ化学的特徴を有する水溶性アルコール抽出物を容易に入手することが可能であることを示したが、これは、経済的及び工業的な観点から明らかに好ましい。
【０１０３】
本明細書に記載の方法によって入手されるＮＡＢＩＡ抽出物は、最初は液体形態として入手されて、これを液状ＮＡＢＩＡ抽出物と呼ぶ。
【０１０４】
しかしながら、慣用の乾燥法によって追加の乾燥工程を実施して、ＮＡＢＩＡ抽出物を固体形態で入手してよく、これを乾燥ＮＡＢＩＡ抽出物と呼ぶ。
【０１０５】
液状ＮＡＢＩＡ抽出物も乾燥ＮＡＢＩＡ抽出物もきわめて安定していて、α１ブロッカー活性に関して、並びに水分保持に関して、室温と５０℃の両方で少なくとも３ヶ月の間安定であると証明されることが見出された。しかしながら、さらにより長い貯蔵寿命が求められるならば、この抽出物へ保存剤を加えることが必要であるかもしれない。
【０１０６】
本明細書に記載の抽出物は、植物療法製剤の一部を形成してもよく、そのために本明細書に記載の抽出物へ医薬的に許容される担体を加える。
【０１０７】
従って、本発明の追加の側面により、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物と医薬的に許容される担体を含んでなる植物療法製剤を提供する。
【０１０８】
本明細書に使用するように、用語「担体」は、固体又は液体の充填剤、希釈剤、又は被包化物質を意味する。担体として作用し得る物質のいくつかの例は、乳糖、ブドウ糖、及びショ糖のような糖；トウモロコシデンプン又はジャガイモデンプンのようなデンプン；セルロースと、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、酢酸セルロースのようなその誘導体；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ステアリン酸；ステアリン酸マグネシウム；硫酸カルシウム；落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、とうもろこし油、及び食物（broma）油のような植物油；プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールのようなポリオール；寒天、アルギン酸；発熱物質非含有水；等張生理食塩水；エチルアルコール、及びリン酸緩衝溶液、並びに、製剤の調製に使用する他の無毒の適合物質である。
【０１０９】
好ましくは、担体は、水、アルコール、生理食塩水、オイル、及び果汁のような液体担体であっても、あるいはそれは、マルトデキストリン、デキストリン、二酸化シリコン、デンプン、ゴム、及びハイドロコロイドからなる群より選択される担体のような固体担体であってもよい。時には、担体の組合せを使用してよく、例えば、固体担体としてのマルトデキストリン又はアラビアゴムを液体担体としての植物油と一緒に使用する。
【０１１０】
好適な担体（複数であってもよい）を選択することによって、植物療法製剤は、求められるどの剤形でも設計してよい。例示の剤形には、錠剤、丸剤、分散液剤、サシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、エアゾール剤、軟又は硬ゼラチンカプセル剤、注射溶液剤又は懸濁液剤、軟膏剤、クリーム剤、又はローション剤が含まれる。
【０１１１】
これらの多様な剤形を入手するためには、ある追加の添加剤が必要とされる場合がある。例えば、崩壊剤、湿潤剤、甘味剤、保存剤、及び／又は香味剤からなる群より選択される少なくとも１つの医薬的に許容される添加剤が必要とされる場合がある。
【０１１２】
本発明者は、本明細書に記載の製剤がきわめて安定していることも示した。例えば、本発明の好ましい態様によるＯＦＩ抽出物を含有するマルトデキストリンカプセル剤が室温と５０℃の両方で少なくとも３ヶ月の間安定であることを示した。
【０１１３】
本明細書に記載の抽出物及び製剤は、α１アドレナリン受容体活性を有効に阻害して、５αレダクターゼ酵素活性も阻害したので、これらの抽出物及び製剤が尿路障害（ＵＴＤ）の治療及び予防にきわめて適していることは明らかである。
【０１１４】
従って、本発明の別の側面により、包装材料に包装されて、前記包装材料の中又は上の印字で尿路障害（ＵＴＤ）の治療における使用が特定される、本明細書に記載の植物療法製剤又は抽出物を提供する。ＵＴＤは、下部尿路症候群（ＬＵＴＳ）、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、及び前立腺癌からなる群より選択される。
【０１１５】
本発明の方法、抽出物、及び製剤は、限定されないが、尿路障害、特にＢＰＨ及び前立腺癌に関連した治療活性へ主に向けられるが、それらは、酵素５αレダクターゼ及び／又はα１アドレナリン受容体の活性が関与する他の障害の治療活性に有効であるかもしれない。本発明の治療法及び組成物は、酵素５αレダクターゼ及び／又はα１アドレナリン受容体の活性が関与する障害を予防するのに有効であることが見出されている。故に、本記載を通して、用語「治療」には、予防活性も含まれる。
【０１１６】
従って、包装材料に包装されて、前記包装材料の中又は上の印字でα１アドレナリン受容体活性を阻害することにおける使用が特定される、本明細書に記載の植物療法製剤又は抽出物を提供する。この阻害は、非選択的であっても、α１Ａ（α１Ａ）、α１Ｂ（α１Ｂ）、又はα１Ｄ（α１Ｄ）アドレナリン受容体のいずれにも選択的であってもよい。
【０１１７】
なおさらに、包装材料に包装されて、前記包装材料の中又は上の印字で５αレダクターゼ酵素活性を阻害することにおける使用が特定される、本明細書に記載の植物療法製剤又は抽出物を提供する。
【０１１８】
当然ながら、本明細書に記載の植物療法製剤又は抽出物は、上記に記載のように、包装されて、いくつかの同時使用が特定されてよい。
【０１１９】
以下の実施例セクションに記載するように、今回、臨床試験において、本発明のＮＡＢＩＡ抽出物を使用して、ＢＰＨに罹患しているヒト患者を成功裡に治療する療法製剤が調製されることを見出した：この患者の７５％で、ＮＡＢＩＡ治療方式を使用することによって症状の明瞭な改善が達成された。
【０１２０】
従って、本発明の別の側面において、本明細書に記載の抽出物のいずれかの、ＵＴＤの治療用医薬品の製造における使用を提供する。
【０１２１】
従って、本発明のなお別の側面により、ＵＴＤを治療及び予防する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与することを含んでなる。さらに、特異的かつ非特異的なα１アドレナリン受容体活性、及び／又は５αレダクターゼ酵素活性を阻害するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＮＡＢＩＡ抽出物又は製剤の治療有効量をそれを必要とする対象へ投与することを含んでなる。
【０１２２】
用語「治療有効量」は、組織、系、動物、又はヒトの訴求される生物学的又は医学的応答を引き起こす抽出物の量を意味する。本発明の場合、製剤又は抽出物の治療有効量は、α１アドレナリン受容体活性の阻害、及び／又は５αレダクターゼ酵素活性の阻害を引き起こすような量である。
【０１２３】
治療有効量は、治療に対するＵＴＤ応答に関して、例えば、国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）、最大尿流率（Ｑｍａｘ）、平均尿流率（Ｑａｖｇ）、及び尿流時間／排尿時間のような一般的な指標を使用して評価して記載してよい。
【０１２４】
投与する剤形、１日投与量、及び治療の期間は、前立腺容積とその疾患の症状重症度、患者の全般状態及び年齢、各成分の効力、及び他の因子を考慮に容れて、担当医が決定する。
【０１２５】
一般に、本発明の抽出物及び製剤の治療有効量は、７０〜１００キログラムの間の体重があるヒト対象者では、１日用量が約３．０ｍｇ抽出物／日〜約１０００ｍｇ抽出物／日の範囲で選択されると考えられている。好ましくは、１日用量は、約１００ｍｇ抽出物／日〜約５００ｍｇ抽出物／日、より好ましくは、約２００ｍｇ抽出物／日〜約５００ｍｇ抽出物／日、より好ましくは、約２００ｍｇ抽出物／日〜約３００ｍｇ抽出物／日の範囲である。
【０１２６】
天然の５αレダクターゼ阻害剤と天然のα１ブロッカーの治療有効量の本発明に準じた使用は、夜間頻尿、排尿困難（hesitancy）、弱い尿流、等が含まれるＢＰＨの不都合な症状を有効に治療する。さらに、ＮＡＢＩＡ抽出物の治療有効量の使用は、上記に記載のように、該抽出物のα１アドレナリン阻害特性がＢＰＨの症状を緩和して、該抽出物の５αレダクターゼ阻害特性がＢＰＨによって引き起こされる患者の前立腺の容量を減らすという、二元的な効果を達成する。
【０１２７】
使用する特定の剤形に依存して、本明細書に記載の抽出物又は製剤は、どのようなやり方でも投与してよく；最も好ましくは、それは、経口又は非経口で、例えば、経皮、皮下、静脈内、又は筋肉内の投与により投与する。
【０１２８】
本発明の方法の実践において、組成物及び剤形は、持続放出調製物が含まれる、丸剤、錠剤、カプセル剤、又は散剤のような通常の固体形態のいずれでも経口投与してよい。
【０１２９】
本明細書において、そして特許請求項において使用する用語「単位剤形」は、単回又は頻回の投与量でヒトへ投与される、物理的に分離した単位を意味し、各単位は、所定量の活性材料（ＮＡＢＩＡ）、即ち、ＮＡＢＩＡ又は、タンパク質、炭水化物、及び脂肪酸と組み合わせたＮＡＢＩＡ、及び／又はソーパルメットのような他の植物抽出物と組み合わせたＮＡＢＩＡを上記のいずれも１以上の担体と一緒に含有する。活性材料の量は、１以上のそのような単位の投与時に所望の治療効果をもたらすように計算されたものである。当然ながら、正確な治療レベルは、治療されるヒト対象者の病歴に依存すると理解される。正確な治療レベルは、当業者に知られた他の要因の中でも特に、年齢、サイズ、状態の重症度、及び化合物の投与の予測期間のような要因を考慮に容れて、不当な実験をせずに当業者が決定することができる。
【０１３０】
単位１日投与量は、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（本明細書に使用する「ｍｇ／ｋｇ」の指定単位は、キログラムの体重あたりのＮＡＢＩＡ、及び／又はタンパク質、炭水化物、及び脂肪酸と組み合わせたＮＡＢＩＡ、及び／又はソーパルメットのような他の植物抽出物と組み合わせたＮＡＢＩＡのｍｇを意味する）、好ましくは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約２〜２０ｍｇ／ｋｇに及んでよい。その用量は、前述の有益な効果を達成するためのどの簡便な投薬スケジュールでも投与してよい。例えば、その用量は、１日につき１、２、３、４、５回、又はそれ以上で服用してよい。好ましくは、１〜３回の用量を毎日服用する。最も好ましくは、その用量は、食事の時間に服用する。投与量は、丸剤、錠剤、及びカプセル剤のようなどの好適な単位剤形でも経口投与してよい。好ましいのは、ゼラチン製のカプセル剤である。
【０１３１】
本発明の好ましい態様によれば、好ましい剤形は、１人１日あたり３ｍｇ抽出物〜１０００ｍｇ抽出物を含んでなる、好ましくは、１人１日あたり１００ｍｇ抽出物〜１０００ｍｇ抽出物を含んでなるカプセル剤である。
【０１３２】
経口的に使用し得る他の調製物には、ゼラチン製のプッシュフィットカプセル剤、並びにゼラチンとグリセロール又はソルビトールのような可塑剤より作製される密封軟カプセル剤が含まれる。プッシュフィットカプセル剤は、活性化合物を顆粒剤の形態で含有し得て、それは、乳糖のような充填剤、デンプンのような結合剤、及び／又はタルク又はステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、並びに、任意選択的に安定化剤とともに混合してよい。軟カプセル剤において、活性化合物は、好ましくは、脂肪オイル又は流動パラフィンのような好適な液体において、溶解又は懸濁している。さらに、安定化剤を加えてよい。
【０１３３】
粉末剤形は、本発明の組成物を好適な粉末サイズへ粉砕して、食用炭水化物材料（例えば、デンプン）のような、同様に粉砕した希釈医薬担体と混合することによって調製する。甘味剤、香味剤、保存剤、分散剤、及び着色剤も存在してよい。
【０１３４】
カプセル剤は、粉末混合物を上記のように調製して、成型済みのゼラチン鞘に充填することによって作製する。この粉末混合物へ充填操作の前にアジュバントとしてタルク、ステアリン酸マグネシウム、及びステアリン酸カルシウムのような滑沢剤を加えてよく；流動特性を改善するためにコロイド状シリカのような滑動剤を加えてよく；カプセル剤が摂取されるときに医薬品のアベイラビリティを改善するために崩壊剤又は可溶化剤を加えてよい。
【０１３５】
錠剤は、粉末混合物を調製し、造粒又は圧延し、滑沢剤及び崩壊剤を加えて、錠剤へ圧縮することによって作製する。好適に粉砕した本発明の組成物をデンプン、ショ糖、カオリン、リン酸二カルシウム、等のような希釈剤又は基剤と混合することによって粉末混合物を調製する。この粉末混合物は、シロップ、デンプンペースト、アカシア粘液、又はセルロース又はポリマー材料のような溶液剤といった結合剤で湿らせて、篩いに強制通過させることによって造粒することができる。造粒に代わるやり方として、粉末混合物は、打錠機に通過させて、生じる不完全に形成されたスラグを砕いて顆粒とすることができる。顆粒は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、又は鉱油の添加によって、錠剤成形型への付着を防ぐために滑沢化してよい。次いで、この滑沢化した混合物を錠剤へ圧縮する。有効成分は、自由流動性の不活性担体と組み合わせて、造粒又は圧延の工程を通すことなく直接錠剤へ圧縮してもよい。シェラックのシーリングコート、糖又はポリマー材料のコーティング、及びワックスのポリッシュコーティングからなる保護コーティングを施すことができる。例えば、識別化のために、又は有効用量の組合せを特徴づけるために、錠剤へ染料又は色素を加えてよい。錠剤形態において、担体は、全組成物の約０．１〜９９．９重量％を含む。
【０１３６】
当業者には、限定的であることを企図しない以下の実施例を検討すれば、本発明の追加の目的、利点、及び新規の特徴が明らかになろう。さらに、本明細書において詳述されて以下の特許請求項において特許請求されるような本発明の様々な態様および側面のそれぞれには、以下の実施例における実験的裏付けがある。
【実施例】
【０１３７】
これから、上記の記載とともに本発明を非限定的な形式で例証する、以下の実施例が参考になる。
【０１３８】
産物の調製
材料と分析法：
すべての試薬、溶媒、及び出発材料は、他に示さなければ、シグマ、フルカ（Fluka）、アルドリッチ、及びメルクのような既知のベンダーより購入した。
【０１３９】
Ofer と呼ばれる特定の植物変異株を有する南イスラエルにある野原より Opuntia ficus-indica（L．）Miller（OFI）の乾燥花を入手した。植物は、雑種でもトランスジェニックでもなかった。この植物を野原に数日自然乾燥させた後で回収して、専門の植物学者が真菌や他の潜在疾患について目視検査した。
【０１４０】
乾燥した花弁を手で切り取って、慣用のハンマーミルを使用して粉砕した。
【０１４１】
クロマトグラフィー分離は、直径４．５ｃｍを有する１００ｃｍシリカゲル（７０〜２３０メッシュ、６０Ａ（オングストローム）粒子、アルドリッチカタログ番号：２８，８６２−４）カラムを使用して実施した。カラムの予備洗浄は、ヘキサンを使用して実施した。分離は、１．７〜２．０ｍｌ／分の流速を使用して、大気圧で行った。以下のようにフィンガープリント分析を使用して、異なる画分について特性決定した。
【０１４２】
総フラボノイド含量（％）は、ＵＶ−ＶＩＳ分光光度計：ＨＰ８４５３を４１０ｎｍの波長で使用して測定した。
【０１４３】
総フェノール含量は、フォリン−デニス（チオカルト）法に従って、ＵＶ−ＶＩＳ分光光度計：ＨＰ８４５３を７６０ｎｍの波長で使用して測定した。
【０１４４】
ヒューレット・パッカード（Hewlett Packard）５８９０／５９７０  ＧＣ／ＭＳシステムを使用して、ＧＣ−ＭＳを使用して揮発成分含量を定量した。
【０１４５】
ＵＶ／ＶＩＳ検出器：Ｌ−４２５０とＨＰ−ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアを取り付けた、Merck-Hitachi Intelligent Pump 製のＨＰＬＣシステム（モデルＬ６２００Ａ）を使用して、ＨＰＬＣを使用して画分フィンガープリントを定量した。
【０１４６】
使用したＨＰＬＣカラムは、Ｐｕｒｏｓｐｈｅｒ  Ｓｔａｒ，ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ  ２５０−４より入手した、Ｍｅｒｃｋ  １．５０３５９ＲＰ−１８（ｅ），５μｍであった。
【０１４７】
ＡＯＡＣ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ９３５．２９によって水分損失を測定した。
【０１４８】
実施例１
ＯＦＩ花の抽出物の調製−ルートＡ
自然乾燥した Opuntia ficus-indica（ＯＦＩ）の生花（１００グラム）を切り取って、ハンマーミルに粉砕して、粗粉末を得た。次いで、この粉末を、使用する溶媒の全量が３リットルになるように、１：１０、１：１０、１：５、１：５（ｗ／ｖ）比を使用して、メタノール１００％によって段階的に抽出した。抽出の全体時間は、室温で９時間であった。使用済み植物を濾過した後で、すべての抽出物を１つの溶液へ合わせて、真空（２０〜３０ミリバール）下に４０℃までで蒸留して、乾燥残渣（１５〜１７グラム、収率１５〜１７％）を得て、これをメタノール（５０〜７０ｍｌ）に再び溶かして、４℃に一晩置いた。次いで、Ｃｅｌｉｔｅのような濾過補助材料を添加したＷｈａｔｍａｎペーパーフィルター＃１を通す濾過によって、残留抽出物よりあらゆる残留ワックス及び／又は脂肪の残渣を除去した。
【０１４９】
クロマトグラフィー分離用に処理した抽出物を調製するために、濾液を６０グラムのシリカゲルと混合して、一定の重量が得られるまで真空で乾燥させた。最後に、同じシリカゲル（乾燥抽出物−シリカゲルの比  １：１０（ｗ／ｗ））と以下の溶出液を使用して、クロマトグラフィー分離を行った：
ａ）  ｎ−ヘキサン１００％、全量−１０００ｍｌ、
ｂ）  ｎ−ヘキサン−クロロホルム  ５：１（ｖ／ｖ）、全量−２０００ｍｌ
ｃ）  ｎ−ヘキサン−クロロホルム  １：１（ｖ／ｖ）、全量−２０００ｍｌ
ｄ）  ｎ−ヘキサン−クロロホルム  １：５（ｖ／ｖ）、全量−２０００ｍｌ
ｅ）  クロロホルム１００％、全量−２０００ｍｌ
ｆ）  クロロホルム−メタノール  ２０：１（ｖ／ｖ）、全量−２０００ｍｌ
ｇ）  クロロホルム−メタノール  １０：１（ｖ／ｖ）、全量−２０００ｍｌ
ｈ）  クロロホルム−メタノール  ５：１（ｖ／ｖ）、全量−２４００ｍｌ、それぞれ１００ｍｌの２４画分（１〜２４と番号付けて、この工程の最後の１０画分を採取する）
ｉ）  クロロホルム−メタノール  １：１（ｖ／ｖ）、全量−２０００ｍｌ（それぞれ１００ｍｌの２０画分（２５〜４４と番号付けて、この工程の最初の１０画分を採取する）。
【０１５０】
分離の間、すべての画分をＴＬＣによりモニタリングした。工程ａ）〜ｇ）で入手した画分を捨てた。工程ｈ）及びｉ）の２０画分について、真空での蒸発を行った。これらの画分について、所望の生物活性をスクリーニングすると、工程ｉ）の最初の５画分がそれを示した。それらの化学物質含量と生物活性に従ってこれらの画分を合わせて、Ｎａｂｉａ  Ｄ（収率３．９％、クロマトグラフィー分離前の抽出物に基づいて計算した）、Ｅ（１２．３％）、及びＧ（１４．６％）と呼ぶ画分を得た。この生物活性画分の化学組成を以下の表１に提示する：
表１
【０１５１】
【表１】
2010522740.tif 000002
【０１５２】
画分Ｄ、Ｅ、及びＧを再び合わせてその自然比を達成し、それにより澄明で黒い水溶性の液体抽出物を維持して、これを「ＮＡＢＩＡ」と名付けた。
【０１５３】
実施例２
ＯＦＩ花の抽出物の調製−ルートＢ
自然乾燥したＯＦＩ生花（１０００グラム）を切り取って粉砕して、ほぼ２ｍｍより小さい乾燥ＯＦＩ花の粒子を入手して、室温で３〜５時間の間のエタノール（８０％，６容量、６リットル）からの抽出を続けた。この使用済み植物を濾過した後で、エタノール抽出物を８０℃未満で蒸発させ、溶媒量を約５０倍減らして、水溶性で重い流動性の（thick-flowing）黒い液体残渣（３００グラムの３０〜４０％乾燥重量水溶液）を得た。その中のあらゆるワックス又は有機不純物の分離を引き起こすために、水（３００ｍｌ）を加えてから、抽出物を１０℃〜２５℃の間で一晩冷やした（抽出物は、冷やす前に、約８０℃まで約４時間加熱してもよい）。沈殿したワックス及び／又は脂肪のあらゆる不純物を濾過により、及び／又はセライトに通過させることにより除去して、実施例１に従って入手した「ＮＡＢＩＡ」と同じ化学指紋を有するので、やはりＮＡＢＩＡと名付けた、澄明で黒い水溶性液体抽出物を得た。このＮＡＢＩＡ抽出物は、そのまま使用しても、乾燥させて自由流動性の粉末として使用しても、カプセル剤、錠剤、及び他の投与形態の一部を形成するようにさらに処理してもよい。
【０１５４】
実施例３
ＯＦＩカプセル剤の調製
実施例１又は２に従って入手した澄明な黒い水溶性液体ＯＦＩ抽出物（１００グラム）へ水（３００グラム）を加えて、得られる水溶液をマルトデキストリン（３０グラム）及び／又はアラビアゴム（３０グラム）と７０℃で２０分間混合してから、スプレー乾燥させて、自由流動性の粉末（６０グラム、収率９３％）とした。
【０１５５】
この粉末（６０グラム）をハードシェルカプセルへ充填した。被包化の前にこの粉末へオリーブオイルやソーパルメットオイルのような別の植物オイル（２０〜５０グラム）を任意選択的に加えた。
【０１５６】
最終産物のハーブ抽出物比（ＨＥＲ）は、元の乾燥花の重量につき１：５〜１：２０の抽出重量に及び、それ故に、この抽出法の効率を表す。このバッチ間の一貫性は、制御された製造手順によって、プロセス制御手順において、そして標準的な分析法及びバイオアッセイによって維持された。
【０１５７】
このカプセル剤は、図１及び２に見られるように、水分保持とフラボノイド含量に関して少なくとも３ヶ月の期間にわたり安定であると証明された。
【０１５８】
活性アッセイ
材料と実験法：
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）は、Calbiochem より入手した。
【０１５９】
フィナステリド−ＭＳＤ（Ｐｒｏ−ＣｕｒｅＴＭ）は、メルクより入手した。
【０１６０】
テラゾシン、プラゾシン、ＷＢ４１０１、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ショ糖、ＥＤＴＡは、シグマより入手した。
【０１６１】
テストステロン、Ｔｗｅｅｎ−８０、及びフェントラミンは、フルカより入手した。
【０１６２】
［１，２，６，７，−３Ｈ（Ｎ）］テストステロンと［Ｈ３］プラゾシンは、デュポンより入手した。
【０１６３】
５αレダクターゼを含有する粗製の酵素抽出物は、病院の外科手術により得られるヒトの肥大前立腺組織より単離した。
【０１６４】
ダルベッコ改良イーグル培地、胎仔ウシ血清（１０％）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、硫酸ゲンタマイシン、及びアンホテリシンＢは、Biological Industries（イスラエル）より入手した。
【０１６５】
フィルターマニホルドは、ファルマシアより入手した。
【０１６６】
ガラス繊維フィルターは、Ｗｈａｔｍａｎ（ＧＦ／Ｃ）より入手した。
【０１６７】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、メルクより入手したＴＬＣプレート−ＣＭ（シリカゲル６０  Ｆ２５４）を使用して実施した。
【０１６８】
液体シンチレーション計測は、Ｒａｃｂｅｔａ  １２０９を使用して実施した。
【０１６９】
ホモジェナイゼーションは、ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸＴ  ２５ホモジェナイザーを使用して行った。
【０１７０】
動物：雌性ウィスターラットを Technion vivarium より入手した。
【０１７１】
５αレダクターゼアッセイ用の線維芽細胞培養物の調製：７５ｃｍ２プラスチックフラスコ（コーニング、ニューヨーク）中の、グルコース４５００ｍｇ／ｌを含有して、胎仔ウシ血清（１０％）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、硫酸ゲンタマイシン（５０ｍｇ／ｍｌ）、及びアンホテリシンＢ（２．５ｍｇ／ｍｌ）を含むダルベッコ改良イーグル培地において、線維芽細胞を増殖させた。この培養物を、コンフルエントになるまで、５％  ＣＯ２雰囲気において３７℃でインキュベートした。線維芽細胞培養物をトリプシン処理によって継代培養して、第３〜１８の継代数の間で使用した。
【０１７２】
αアドレナリン受容体ブロッカーアッセイ用の膜調製
α１及びα２アンタゴニスト活性は、いくつかの慣用の in vitro アッセイを使用して定量することができる。好適なアッセイには、以下のように、ラット脳幹膜を利用する、米国特許第５，３４０，８１４号に開示されるものが含まれる。
【０１７３】
雌性ウィスターラット（１８０〜２００グラム）を斬首して、その脳を速やかに取り出した。大脳皮質を、トリス−ＨＣｌ（５ｍＭ）、ショ糖（２５０ｍＭ）、及びＥＤＴＡ（１ｍＭ）を含有する１０容量（ｗ／ｖ）の氷冷緩衝液（ｐＨ７．５）において、ホモジェナイザーを使用してホモジェナイズした。このホモジェネートを１０００ｇで１０分間遠心分離し、ペレットを捨てて、上清を５０，０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離した。最終ペレットをアッセイ緩衝液に再懸濁させて、後の使用のために−７０℃で保存した。すべての膜調製手順は、４℃で行った。
【０１７４】
α１アドレナリン受容体ブロッカー結合アッセイ：
αアドレナリン受容体ブロッカー活性について評価するために、Catret M et al. 1998 (Catret M., Anselmi E., Ivorra M. D., Elloriaga M., Tur R., D'Ocon M. P.「Alpha-adrenoceptor interaction of tetrandrine and isotetrandrine in the rat: functional and binding assays（テトランドリン及びイソテトランドリンのラットにおけるαアドレナリン受容体相互作用：機能及び結合アッセイ）」J Pharm Pharmacol. 1998 Nov; 50 (11): 1267-73）に従って、ＥＤＴＡ（０．５ｍＭ）及び［Ｈ３］プラゾシン（４ｎＭ）を含有するトリス−ＨＣｌ緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ７．４）中でインキュベートした希釈膜の試料において、いくつかの濃度の指定薬剤の非存在及び存在下で［Ｈ３］プラゾシンの結合を測定した。インキュベーション容量は、２００μｌ（１５０μｇタンパク質／管）であった。アッセイ管を２５℃で９０分間インキュベートしてから、ガラス繊維フィルターを使用するフィルターマニホルドを使用する迅速真空濾過によって、結合反応を終了させた。次いで、このフィルターを、Ｔｗｅｅｎ−８０（０．１％，２０ｍｌ）を添加した氷冷トリスＨＣｌ−ＥＤＴＡ緩衝液（５０ｍＭ）（ｐＨ７．４）で洗浄した。液体シンチレーション計測によって、フィルターへ結合した放射活性を定量した。非特異的な結合は、フェントラミン（１０μＭ）の存在下での結合として定義した。阻害は、ＩＣ５０の観点で定義した。
【０１７５】
５αレダクターゼスクリーニングアッセイ：肝臓ミクロソーム画分（５αレダクターゼを含有する）、テストステロン、及び試験化合物を含有する系においてニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）を分解させることによって、５αレダクターゼ活性についてアッセイした。Sun Zu-Yue et al. (1998) (Sun Zu-Yue, Zheng Wei-Jun, Feng Jie, Tu Zeng-Hong「A convenient and rapid method to study enzymatic kinetics of steroid 5-alpha-reductase inhibitors（ステロイド５αレダクターゼ阻害剤の酵素反応速度論を研究するための簡便で迅速な方法）」Indian Journal of Pharmacology 1998; 30: 257-262）に従って、やや改良して（ここでは、生産性を倍加するために分光光学計としてＥＬＩＳＡリーダーを使用した）、ＮＡＤＰＨ分解（５αレダクターゼ活性に比例する）を３４０ｎｍで分光光学的に測定した。このモデルでは、陽性対照としてフィナステリドを使用した。各抽出物について３つの異なる濃度でアッセイして、各検査を少なくとも６回繰り返した。
【０１７６】
ＩＩ型５αレダクターゼアッセイ：ＮＡＤＰＨを含有する酵素混合物中の［１，２，６，７，−３Ｈ（Ｎ）］テストステロンの還元によって、ＩＩ型５αレダクターゼ活性を試験物質の有無でアッセイした。Brooks JR et al (1981) (Brooks J. R., Baptista E.M., Berman C., Ham E.A., Hichens M., Johnston D.B.R., Arth G.E.「Response of rat ventral prostate to a new and nowel 5-alpha-reductase inhibitor（ラット腹側前立腺の新規５αレダクターゼ阻害剤に対する応答）」Endocrinology, 109 830-836, 1981）に従って、反応混合物よりステロイドを抽出して、ＴＬＣによって分離させた。ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の放射活性を液体シンチレーション計測によって定量した。
【０１７７】
５αレダクターゼ：ヒト包皮線維芽細胞アッセイ：Evans et al. (1995) (B.A.J. Evans, K. Griffiths and M.S. Morton「Inhibition of 5-alpha-reductase in genital skin fibroblasts and prostate tissue by dietary lignans and isoflavonoids（生殖器皮膚線維芽細胞及び前立腺組織における５αレダクターゼの食事由来リグナン及びイソフラボノイドによる阻害）」Journal of Endocrinology (1995) 147, 295-302) に従って、培養線維芽細胞中の５αレダクターゼ活性を測定した。細胞を、［１，２，６，７，−３Ｈ（Ｎ）］テストステロンを含有する無血清培地とともにｐＨ７．０で５時間インキュベートした。インキュベーションに続き、インキュベーション培地のアリコートを酢酸エチルで２回抽出してから、先に記載のように（Brooks JR et al (1981), 同上）ＴＬＣにより分析した。このバイオアッセイでは、５αレダクターゼによって触媒される反応の産物であるジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を測定して、阻害剤を含まない反応において得られるＤＨＴの量を陰性対照（１００％活性又は０％阻害）として使用した。様々な阻害剤を含む反応において得られるＤＨＴの量を陰性対照の百分率として計算した。
【０１７８】
バイオアッセイ活性の結果
実施例４
５αレダクターゼ阻害
異なるＯＦＩの抽出物及び画分について、ヒト包皮線維芽細胞モデルにおいて５αレダクターゼ阻害活性を試験して、５αレダクターゼアクチベータ〜強い５αレダクターゼ阻害剤に及ぶ多種多様な結果を示した。
【０１７９】
抽出物画分のＤ、Ｆ、及びＧと実施例２に従って入手したＮＡＢＩＡでは、阻害剤として最も有望な結果を得た。図３に見られるように、ＮＡＢＩＡ抽出物の画分Ｄ、Ｆ、及びＧは、５αレダクターゼ酵素の活性を元の活性の約１０％まで低下させた。
【０１８０】
実施例５
α１アドレナリン受容体阻害
実施例１に従って調製したいくつかの抽出物及び画分についてα１アドレナリン受容体阻害を測定して、合成のαブロッカーと、ＢＰＨを治療するために通常使用される天然源、ソーパルメットと比較した。この結果を以下の表２に示す。
【０１８１】
表２
【０１８２】
【表２】
2010522740.tif 000003
【０１８３】
表２は、ＢＰＨの治療に通常使用される天然産物であるソーパルメットがα１遮断活性をほとんど示さなかったのに対して、ＮＡＢＩＡ画分のＤ及びＦが４〜５オーダーの大きさで、より有意に活性であったことを示す。実施例２の方法に従って入手したＮＡＢＩＡ抽出物からも同様の結果を得た。
【０１８４】
以下の表３は、様々な画分及び抽出物のα１ブロッカー活性を示す。
【０１８５】
表３
【０１８６】
【表３】
2010522740.tif 000004
【０１８７】
さらに、実施例２に従って入手したＮＡＢＩＡ抽出物は、以下の表４と図４に見られるように、α１Ａ（α１Ａ）、１Ｂ（α１Ｂ）、及び１Ｄ（α１Ｄ）についてα１選択的な活性を有することが示された。
【０１８８】
表４
【０１８９】
【表４】
2010522740.tif 000005
【０１９０】
さらに、この生物学的なα１阻害は、図４に見られるように、薬局方基準に従った加速安定性試験の条件下で影響を受けなかった。
【０１９１】
in vivo 実験
材料と実験法：
毒性試験に関する指令８８／３２０／ＥＥＣに従ってＧＬＰ認証された Harlan Biotech Israel 社において毒性試験を行った。
【０１９２】
アルフゾシン（ＢＰＨ治療用の標準αブロッカー）は、サノフィ・アヴェンティスより入手した。
【０１９３】
ペルミクソン（permixon：ＢＰＨ治療用の天然抽出物）は、Pierre Fabre Medicament より入手した。
【０１９４】
国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）は、http://www.cpcn.org/ipss.pdf において定義され、０〜３５ポイントに及ぶ。
【０１９５】
Ｑｍａｘは、最大尿流率（ｍｌ／秒）として定義される。
【０１９６】
臨床試験−ＮＡＢＩＡの短期効力について、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）により引き起こされる下部尿路症状（ＬＵＴＳ）を有する１５名の患者に対して実施した二重盲検プラセボ対照臨床試験の１６週後に評価した。この試験は、イスラエルのＺｆａｔ病院において、泌尿器科長、Oscar Kotliroff 博士（主任研究者）の監督下で行った。以下の表６に従ってＢＰＨと診断された男性を含むように患者を選択した：
表６
【０１９７】
【表５】
2010522740.tif 000006
【０１９８】
国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）、最大尿流率（Ｑｍａｘ）、平均尿流率（Ｑａｖｇ）、及び尿流時間／排尿時間を使用して、主観的及び客観的な臨床変数を評価した。この試験結果を、通常使用される合成医薬品：フィナステリド（ＢＰＨ治療用５αレダクターゼ阻害剤の最高基準薬として）、アルフゾシン（ＢＰＨ治療用αブロッカーの最高基準薬として）、及びペルミクソン（ＢＰＨ治療用天然抽出物の最高基準薬として）が含まれる、「Meta-analysis of clinical trials of sereona repens（sereona repens の臨床試験のメタ分析）」（Boyle, 2004）と比較した。
【０１９９】
患者は、２５０ｍｇ／日（１つの２５０ｍｇカプセル剤）の開始用量のＮＡＢＩＡを６週間服用して、第７週から第１６週までは、５００ｍｇ／日（１日につき２つの２５０ｍｇカプセル剤）へ増量した。
【０２００】
実施例６
毒性試験の結果
急性経口毒性：ラットの急性毒性等級法を画分：ＮＡＢＩＡ−Ｄ、ＮＡＢＩＡ−Ｅ、ＮＡＢＩＡ−Ｇ、及びその天然の組合せ（ＮＡＢＩＡ）について、３００ｍｇ／ｋｇ、２０００ｍｇ／ｋｇ、及び５０００ｍｇ／ｋｇの濃度で行った。
【０２０１】
この哺乳動物の毒性試験は、ＮＡＢＩＡ画分、又はその組合せが、高用量（５０００ｍｇ／ｋｇ）でも毒性を生じないことを示した。
【０２０２】
肝臓及び皮膚が含まれる関連臓器について行った一般病理観察には異常がなかった。肝臓の組織病理学では、特異所見なしと評価された。
【０２０３】
実施例７
ＮＡＢＩＡ臨床試験の結果
ＮＡＢＩＡで治療された患者の７５％において、試験期間全体を通して、すべての臨床変数がベースラインに優る有意な持続性の改善を示した。さらに、ＮＡＢＩＡは、十分に忍容されることがわかった：総合医師検診と臨床検査は、ヒト臨床試験の試験期間において、どんな種類の副作用も観察しなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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