(57)【要約】本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。１つの実施態様においては、本発明は、当該医薬組成物を投与することにより、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法を提供する。別の実施態様においては、本発明はまた、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる医薬組成物も提供する。別の実施態様においては、本発明は、当該医薬組成物を投与することにより、癌を治療する方法を提供する。本発明は、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる結晶性組成物、及びその製造法を提供する。【図２】2010504968.tif 000018
2010504968.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な量のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤及びキレート化可能な金属化合物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。
【請求項２】
前記キレート化可能な金属化合物が、鉄又は亜鉛を含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、又はその薬学的に許容される塩、又はその水和物若しくは溶媒和物である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
請求項１の医薬組成物を患者に投与する工程を含んでなる、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法。
【請求項５】
治療上有効な量のＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物とを、患者に同時投与する工程を含んでなる、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法。
【請求項６】
前記キレート化可能な金属化合物が、鉄又は亜鉛を含んでなる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、又はその薬学的に許容される塩、又はその水和物若しくは溶媒和物である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
治療上有効な量の鉄ＳＡＨＡキレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。
【請求項９】
前記鉄対ＳＡＨＡの化学量論比が１：３である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記鉄ＳＡＨＡキレート錯体が結晶性であり、かつ、８．８、１４．５、及び２１．８度２θにおける特徴的なピークを包含する、銅Ｋα照射を用いたＸ線回折粉末パターンによって特徴づけられる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記鉄キレート錯体が結晶性であり、かつ、８．８、１３．３、１４．５、２０．３、２１．８、及び２４．６度２θにおける特徴的なピークを包含する、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記鉄キレート錯体が結晶性であり、かつ、８．８、１３．３、１４．５、１８．５、２０．３、２１．８、２４．６、２５．８、及び３３．３度２θにおける特徴的なピークを包含する、銅Ｋα照射を用いたＸ線回折パターンによって特徴づけられる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
治療上有効な量の亜鉛ＳＡＨＡキレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
治療上有効な量の金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物を、患者に投与する工程を含んでなる、癌を治療する方法。
【請求項１５】
前記キレート錯体を、有機溶媒、又は有機溶媒と水との混合物中で、結晶化する工程を含んでなる、結晶性金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を得る方法。
【請求項１６】
キレート化可能な金属化合物及び塩基を、反応媒体中で、ＨＤＡＣ阻害剤に添加する工程を含んでなる、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を得る方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。１つの実施態様においては、本発明は、当該医薬組成物を投与することにより、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法を提供する。別の実施態様においては、本発明はまた、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる医薬組成物も提供する。別の実施態様においては、本発明は、当該医薬組成物を投与することにより、癌を治療する方法を提供する。本発明は、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる結晶性組成物、及びその製造法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
本出願全体を通して、種々の出版物がカッコ内のアラビア数字により参照されている。これらの出版物の完全な引用は、本明細書末尾に見出すことができよう。
【０００３】
癌は、これにおいて細胞集団が、通常は増殖及び分化を支配している調節メカニズムに対し、程度の差こそあれ、反応しなくなってきた疾患である。長年にわたり、癌の化学療法的処置には二つの主要な方策が存在してきた：ａ）性ホルモンの産生又は末梢作用を妨害することにより、ホルモン依存性の腫瘍細胞増殖を阻止すること；及びｂ）癌細胞を、新生細胞及び正常細胞の双方の集団を損傷する細胞傷害物質に対し暴露すること。
【０００４】
癌療法はまた、新生細胞の最終分化を誘導することによっても試みられている（１）。細胞培養モデルでは、分化は、細胞をサイクリックＡＭＰ及びレチノイン酸（２，３）、アクラルビシン、及び他のアントラサイクリン類（４）を含む多様な刺激に暴露することによって報告されてきた。
【０００５】
腫瘍学の分野における多くの進歩にもかかわらず、大多数の固形腫瘍は進行期では不治のままである。細胞傷害の療法が、殆どの症例において用いられるが、それはしばしば患者に対し、有意な臨床上の利益なしに重大な病的状態を引き起こす。進行した悪性病変を治療及び管理するための、より毒性が低くかつ特異性の高い薬剤が探究されている。
【０００６】
腫瘍性形質転換が必ずしも癌細胞の分化する能力を破壊しないという有り余るほどの証拠がある（１，５，６）。通常の増殖調節因子に対して反応せず、その分化のプログラムの発現中でブロックされているように見え、そしてなお、分化しかつ複製を中止するべく誘導し得る、腫瘍細胞の多くの例がある。いくつかの比較的単純な極性化合物（５，７−９）、ビタミンＤ及びレチノイン酸の誘導体（１０−１２）、ステロイドホルモン（１３）、増殖因子（６，１４）、プロテアーゼ（１５，１６）、発癌プロモーター（１７，１８）、及び、ＤＮＡ又はＲＮＡ合成の阻害剤（４，１９−２４）を含む種々の薬剤は、多様な形質転換細胞系及び初代ヒト腫瘍移植片を、さらに分化した特性を発現するために、誘導可能である。
【０００７】
スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）のようなヒストン脱アセチル化酵素阻害剤は、このクラスの薬剤に属し、腫瘍細胞の増殖停止、分化、及び／又はアポトーシスを誘導する能力をもつ（２５）。これらの化合物は、動物における腫瘍増殖の阻害に有効な用量では毒性をもたないように見えることから、新生細胞が悪性になる能力に固有のメカニズムに向けて標的化される（２６）。ヒストンアセチル化及び脱アセチル化が、それによって転写調節が細胞において達成されるメカニズムであることには、いくつかの系列の証拠がある（２７）。こうした効果は、ヌクレオソーム中のコイルしたＤＮＡに対するヒストンタンパク質の親和性を変えることによる、クロマチンの構造変化を通して起こると考えられている。ヌクレオソームにおいて同定されてきたヒストンには、５つのタイプがある（Ｈ１、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、及びＨ４と呼ばれる）。各ヌクレオソームは、ヌクレオソーム構造の外部において単独で存在するＨ１を除き、そのコア内に、各ヒストンタイプを２つずつ含有している。ヒストンタンパク質が低アセチル化されているとき、ヒストンには、ＤＮＡリン酸骨格に対する、より大きい親和性があると考えられている。この親和性が、ＤＮＡをヒストンへ強く結合されるようにし、ＤＮＡが転写調節エレメント及びその装置部分にアクセスできないようにする。アセチル化状態の調節は、２つの酵素複合体、ヒストンアセチル基転移酵素（ＨＡＴ）及びヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の間の、活性のバランスを通して起こる。低アセチル化状態は、結合したＤＮＡの転写を阻害すると考えられている。この低アセチル化状態は、ＨＤＡＣ酵素を含む大きい多タンパク質複合体により触媒される。特に、ＨＤＡＣは、クロマチンコアヒストンからのアセチル基の除去を触媒することが示されてきた。
【０００８】
ＳＡＨＡ（ゾリンザ（ＺＯＬＩＮＡ）ＴＭ（ボリノスタット））は、癌を治療すること、新生細胞の最終分化を選択的に誘導すること、細胞増殖停止を誘導すること、及び／又はアポトーシスを誘導することのために有用であることが示されてきた。ＳＡＨＡによるＨＤＡＣの阻害は、Ｘ線結晶学研究によって示されたように、酵素の触媒部位との直接的な相互作用を介して起こると考えられる（２８）。ＨＤＡＣ阻害の結果は、ゲノムに対し全体的な影響をもつのではなく、むしろゲノムの小さいサブセットに影響を及ぼすにすぎないと考えられる（２９）。ＨＤＡＣ阻害剤と共に培養された悪性細胞系を用いたＤＮＡマイクロアレイにより提供された証拠は、その産物が改変されている限られた数（１〜２％）の遺伝子があることを示している。例えば、培養中にＨＤＡＣ阻害剤で処理された細胞は、サイクリン依存キナーゼ阻害因子ｐ２１の一定した誘導を示す（３０）。このタンパク質は、細胞周期停止において重要な役割を果たす。ＨＤＡＣ阻害剤は、ｐ２１遺伝子の領域において、ヒストンの高アセチル化状態を伝播することにより、ｐ２１の転写速度を増大し、それにより当該遺伝子を転写装置へアクセス可能にすると考えられている。その発現がＨＤＡＣ阻害剤に影響されない遺伝子は、局部的に結合したヒストンのアセチル化において変化を示すことはない（３１）。
【発明の概要】
【０００９】
発明の要旨
本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属錯体を含んでなる医薬組成物を提供する。１つの実施態様においては、本発明は、当該医薬組成物を投与することにより、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法を提供する。別の実施態様においては、本発明はまた、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる医薬組成物も提供する。別の実施態様においては、本発明は、当該医薬組成物を投与することにより、癌を治療する方法を提供する。本発明は、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる結晶性組成物、及びその製造法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】参照カプセルロットからのＳＡＨＡの溶解プロフィールを示す図であり、該カプセルは、有効成分ＳＡＨＡ１００ｍｇ及び賦形剤を含有する。
【図２】結晶性鉄ＳＡＨＡキレート錯体のＸ線ディフラクトグラムを示す図である。
【図３】シーメンスＤ５００自動粉末回折器（Ｓｉｅｍａｎｓ  Ｄ５００  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ）で測定されたＳＡＨＡのＸ線ディフラクトグラムを示す図であり、図３−Ａ−Ｅは、Ｉ−Ｖ型（Ｆｏｒｍ  Ｉ−Ｖ）ＳＡＨＡである。
【図４】Ｘ’ＰＥＲＴ  Ｐｒｏフィリップス（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ）Ｘ線回折器で測定されたＩ型（Ｆｏｒｍ  Ｉ）ＳＡＨＡのＸ線ディフラクトグラムを示す図である。
【００１１】
発明の詳細な記載
用語「薬学的に許容される担体」は、薬剤の投与に適合する任意の及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤などを包含することを意図している。好適な担体は、参考として本明細書に含まれている、この分野における標準的な参考テキスト、「レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンセズ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）レミントンの薬学」」の最新版に記載されている。リポソーム及び非水性ビヒクル、例えば固定油もまた使用してよい。薬学的活性物質用にかかる媒質及び薬剤を用いることは、当該技術分野において周知である。任意の通常の媒質及び薬剤が本発明組成物に不適合でない限り、当該組成物におけるそれらの使用が期待される。補足的な活性化合物もまた、当該組成物中に取り入れてもよい。
【００１２】
用語「ｆ２」又は「Ｆ２」は、数式１に示された、参照インビトロ溶解プロフィールに対する新規インビトロ溶解プロフィールの、ポイント・バイ・ポイントの比較により測定された類似係数を指す。
【００１３】
【数１】
2010504968.tif 000003
【００１４】
Ｒｔは、参照についての、各時点（ｔ）において溶解された化合物のパーセントを指す。Ｔｔは、試験サンプルについての、各時点（ｔ）において溶解された化合物のパーセントを指す。ｎは、計算に用いた時点の数を指す。５０以上のｆ２値は、類似したインビトロの溶解速度を反映するものとみなされる。
【００１５】
本発明では、当該医薬組成物の全ＳＡＨＡのインビトロの溶解速度又はプロフィールは、実施例４の工程及び条件に従って、全医薬組成物から測定される。１つの実施態様においては、インビトロの溶解速度又はプロフィールは、らせん型シンカーを具備したＵＳＰ溶解装置（Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）ＩＩ（クオリティ・ラボ・アクセサリーズ社（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｌａｂ  Ａｃｃｅｓｓｏｒｉｅｓ  Ｌ．Ｌ．Ｃ．）、ニュージャージー州マンビル）を使用することにより、９００ｍＬの２．０％ツイーン（ＴＣＩアメリカ、オレゴン州ポートランド）中で、３７±０．５℃の温度において、パドルを１００ｒｐｍで回転させて測定する。全医薬組成物は、全ＳＡＨＡ及びキレート化可能な金属化合物と、もし当該医薬組成物がカプセルシェルをもつ場合には、担体、賦形剤、希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、結合剤、又は以下の医薬組成物のセクションにおいて記載された任意の追加の薬剤とを包含し、測定はこれらの成分を用いて行なう。
【００１６】
用語「約」は、量の文脈において用いる場合、特定の量の±１０％を指す。
【００１７】
本発明では、Ｘ線回折パターンについては、キャリブレーション、サンプル、又はインスツルメンテーションに依存して、２θのピークは一方向に±０．３度（誤差）までシフトしてもよい。例えば、Ｘ線回折パターンの全てのピークは、＋０．３度まで、又は−０．３度までシフトする。この誤差以内のＸ線回折パターン又はピークを、同一又は実質的に類似しているとみなす。
【００１８】
ＨＤＡＣ阻害剤及びキレート化可能な金属化合物を含んでなる医薬組成物
１つの実施態様においては、治療上有効な量のヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤及びキレート化可能な金属錯体と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物を提供する。当該医薬組成物は、患者へ投与された場合、インビボにおいて金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を形成してもよい。
【００１９】
１つの実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤は、ヒドロキサム酸誘導体である。別の実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤は、金属結合性（すなわち、鉄又は亜鉛）リガンド、例えばカルボニル基、ヒドロキシル基、アミノ基、チオール基、アミド基、及び既知のＨＤＡＣ阻害剤において見られる他の基（例えばベンズアミド）を有する。１つの実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤は、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、又はその薬学的に許容される塩、又はその水和物若しくは溶媒和物である。別の実施態様においては、当該医薬組成物中の全ＳＡＨＡは、図１に示した参照溶解プロフィールに比較して、少なくとも５０ないし１００の類似係数（ｆ２）をもつ、インビトロの溶解プロフィールを有する。１つの実施態様においては、ｆ２は５６ないし１００である。１つの実施態様においては、ｆ２は６０ないし１００である。１つの実施態様においては、ｆ２は６５ないし１００である。別の実施態様においては、ｆ２は８０ないし１００である。さらなる実施態様においては、当該医薬組成物は単一のカプセルであり、これにおいて、ＳＡＨＡの量は約１００ｍｇである。
【００２０】
１つの実施態様においては、当該医薬組成物中の全ＳＡＨＡは、インビトロで、１０分間で４３−６３％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、そして６０分間では７７−９７％が溶解される。１つの実施態様においては、当該医薬組成物中の全ＳＡＨＡは、インビトロで、１５分間で５２−７２％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、そして４５分間では７３−９３％が溶解される。別の実施態様においては、当該医薬組成物中の全ＳＡＨＡは、インビトロで、１０分間で４３−６３％が溶解され、１５分間で５２−７２％が溶解され、２０分間で５８−７８％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、４５分間で７３−９３％が溶解され、そして６０分間では７７−９７％が溶解される。１つの実施態様においては、当該医薬組成物中の全ＳＡＨＡは、インビトロで、１０分間で４６−６０％が溶解され、１５分間で５５−６９％が溶解され、２０分間で６１−７５％が溶解され、３０分間で６９−８３％が溶解され、４５分間で７６−９０％が溶解され、そして６０分間では８０−９４％が溶解される。１つの実施態様においては、１５分間で全ＳＡＨＡの少なくとも４５％であるが７５％以下が溶解され、６０分間では全ＳＡＨＡの少なくとも７５％が溶解される。
【００２１】
ＨＤＡＣ阻害剤又はキレート化可能な金属化合物は、アモルファス型であってもよい。ＨＤＡＣ阻害剤又はキレート化可能な金属化合物は、超微粉砕されてもよく、或いは、凝塊形成されるか、微粒子状の顆粒、粉末、油、油性懸濁液、又は任意の他の固体の状態であってもよい。
【００２２】
１つの特定の実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤は、結晶性スベロイルアニリドヒドロキサム酸である。１つの実施態様においては、結晶性ＳＡＨＡは、Ｉ型ＳＡＨＡであり、図３−Ａに示されたものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴づけられる。別の実施態様においては、結晶性ＳＡＨＡは、Ｉ型ＳＡＨＡであり、図４に示されたものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴づけられる。１つの実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンにより特徴づけられる。別の実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、約９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０、及び４３．３度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンにより特徴づけられる。１つの実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、及び２８．０度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンにより特徴づけられる。別の実施態様においては、Ｉ型スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、約９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、及び２８．０度２θにおける特徴的なピークを含む、Ｘ線粉末回折パターンによって特徴づけられ、これにおいて、Ｘ線粉末回折は、銅Ｘ線源を用いて測定され；かつパーキン・エルマーＤＳＣ６インスツルメント（Ｐｅｒｋｉｎｓ  Ｅｌｍｅｒ  ＤＳＣ６  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）により測定された、約１６４．４±２．０に単一の最大値をもつ示差走査熱量測定（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）（ＤＳＣ）サーモグラムによってさらに特徴づけられる。別の実施態様においては、Ｉ型スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、約９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、及び２８．０度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ約１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、Ｘ線粉末回折パターンによって特徴づけられ、これにおいて、Ｘ線粉末回折は銅Ｘ線源を用いて測定される。さらなる実施態様においては、Ｉ型スベロイルアニリドヒドロキサム酸は、銅Ｘ線源の使用による、９．１、１０．８、１２．３、１７．２、１９．２、１９．８、２３．７、２４．１、２５．７、２６．８及び２７．７度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにピークを欠く、Ｘ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００２３】
１つの実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。別の実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０、４３．３度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。さらなる実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、約＜８．７、１０．０−１０．２、１３．４−１４．０、１５．０−１５．２、１７．５−１９．０、２０．１−２０．３、２１．１−２１．３、２２．０−２２．２２、２２．７−２３．０、２５．０−２５．５、２６．０−２６．２、及び２７．４−２７．６度２θにおいて、少なくとも１つのピークを欠くことによってさらに特徴づけられる。
【００２４】
別の実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、パーキン・エルマーＤＳＣ６インスツルメントにより測定された、約１６４．４±２．０に単一の最大値をもつ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによってさらに特徴づけられる。１つの実施態様においては、Ｉ型ＳＡＨＡは、ａ＝１０．９Å、ｂ＝７．９Å、ｃ＝１６．４Å、α＝９０°、β＝９７．８°、γ＝９０°の単位セルパラメータ、空間群Ｐ２１／ｎを有する。
【００２５】
１つの特定の実施態様においては、結晶性スベロイルアニリドヒドロキサム酸はＩＶ型ＳＡＨＡであり、約８．８、９．３、１１．０、１２．４、１７．４、１９．４、１９．９、２２．４、２２．９、２３．８３、２４．２、２４．８、２５．８、２７．０、２７．８、２８．４度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００２６】
１つの実施態様においては、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、１５分間で全ＳＡＨＡの少なくとも４５％であるが７５％以下が溶解され、６０分間では全ＳＡＨＡの少なくとも７５％が溶解されること、によって特徴づけられるインビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００２７】
１つの実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて、全ＳＡＨＡは、１５分間で全ＳＡＨＡの少なくとも４５％であるが７５％以下が溶解され、６０分間では全ＳＡＨＡの少なくとも７５％が溶解されること、によって特徴づけられるインビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、及び２８．０度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられ、ここで、当該Ｘ線回折は、銅Ｘ線源を用いて測定され；そして、パーキン・エルマーＤＳＣ６インスツルメントにより測定された、約１６４．４±２．０に単一の最大値をもつ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによってさらに特徴づけられる。
【００２８】
１つの実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、１５分間で全ＳＡＨＡの少なくとも４５％であるが７５％以下が溶解され、６０分間では全ＳＡＨＡの少なくとも７５％が溶解されること、によって特徴づけられるインビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、銅Ｘ線源の使用による、９．１、１０．８、１２．３、１７．２、１９．２、１９．８、２３．７、２４．１、２５．７、２６．８及び２７．７度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００２９】
別の実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、図１に示した参照溶解プロフィールに比較して少なくとも５０ないし１００の類似係数（ｆ２）をもつ、インビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００３０】
別の実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、図１に示した参照溶解プロフィールに比較して少なくとも５０ないし１００の類似係数（ｆ２）をもつ、インビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、及び２８．０度２θにおける特徴的なピークを含む銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末解析パターンによって特徴づけられ、これにおいてＸ線回折は、銅Ｘ線源を用いて測定され；そして、パーキン・エルマーＤＳＣ６インスツルメントにより測定された、約１６４．４±２．０に単一の最大値をもつ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによってさらに特徴づけられる。
【００３１】
別の実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、図１に示した参照溶解プロフィールに比較して少なくとも５０ないし１００の類似係数（ｆ２）をもつ、インビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、銅Ｘ線源の使用による、９．１、１０．８、１２．３、１７．２、１９．２、１９．８、２３．７、２４．１、２５．７、２６．８及び２７．７度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００３２】
さらなる実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、１０分間で４３−６３％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、そして６０分間では７７−９７％が溶解されることを特徴とするインビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００３３】
さらなる実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、１０分間で４３−６３％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、そして６０分間では７７−９７％が溶解されることを特徴とするインビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、及び２８．０度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられ、ここで、当該Ｘ線回折は、銅Ｘ線源を用いて測定され；そして、パーキン・エルマーＤＳＣ６インスツルメントにより測定された、約１６４．４±２．０に単一の最大値をもつ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによってさらに特徴づけられる。
【００３４】
さらなる実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、１０分間で４３−６３％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、そして６０分間では７７−９７％が溶解されることを特徴とするインビトロの溶解プロフィールを有しており、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ、銅Ｘ線源の使用による、９．１、１０．８、１２．３、１７．２、１９．２、１９．８、２３．７、２４．１、２５．７、２６．８及び２７．７度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００３５】
さらなる実施態様においては、本発明は、約１００ｍｇのスベロイルアニリドヒドロキサム酸と、キレート化可能な金属化合物とを含んでなる単一のカプセルを提供し、これにおいて全ＳＡＨＡは、１０分間で４３−６３％が溶解され、３０分間で６６−８６％が溶解され、そして６０分間では７７−９７％が溶解されることを特徴とするインビトロの溶解プロフィールを有し、これにおいて、ＳＡＨＡは結晶性であり、かつ９．０、９．４、１７．５、１９．４、２０．０、２４．０、２４．４、２４．８、２５．０、２８．０度２θにおける特徴的なピークを含み、かつ１３．４−１４．０及び２２．７−２３．０度２θにおいてピークを欠く、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００３６】
１つの実施態様においては、キレート化可能な金属化合物は鉄を含んでなる。当該鉄化合物は、患者に対しバイオアベイラブルであり、ｉｎ  ｓｉｔｕにおいて鉄ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を形成する任意の形態、例えば、タブレット又はカプセル型といった医薬組成物の形態であってもよい。１つの実施態様においては、当該鉄化合物は、グルコン酸第一鉄、グルコン酸第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、フマル酸第一鉄、フマル酸第二鉄、鉄アミノ酸キレート、又はビスグリシン第一鉄の形態にある鉄サプリメントである。当該鉄サプリメントはまた、他のビタミン及びミネラルを含有してもよい。別の実施態様においては、当該医薬組成物中のＨＤＡＣ阻害剤及び鉄は、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１か、又は２：１の化学量比である。１つの実施態様においては、当該医薬組成物は、約１００ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の鉄サプリメントとを含んでなる。別の実施態様においては、当該医薬組成物は、約１５０ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の鉄サプリメントとを含んでなる。さらなる実施態様においては、当該医薬組成物は、約２００ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の鉄サプリメントとを含んでなる。別の実施態様においては、当該医薬組成物は、約５０ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の鉄サプリメントとを含んでなる。１つの実施態様においては、キレート化可能な金属化合物は亜鉛を含んでなる。当該亜鉛化合物は、患者に対しバイオアベイラブルであり、かつｉｎ  ｓｉｔｕにおいて亜鉛ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を形成する任意の形態、例えば、タブレット又はカプセル形態といった医薬組成物の形態であってもよい。１つの実施態様においては、当該亜鉛化合物は、グルコン酸亜鉛、ピコリン酸亜鉛、クエン酸亜鉛、亜鉛アミノ酸キレート、又は酸化亜鉛の形態にある亜鉛サプリメントである。当該亜鉛サプリメントはまた、他のビタミン及びミネラルを含有してもよい。別の実施態様においては、当該医薬組成物中のＳＡＨＡ及び亜鉛は、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１か、又は２：１のＳＡＨＡ対亜鉛の化学量比である。１つの実施態様においては、当該医薬組成物は、約１００ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の亜鉛サプリメントとを含んでなる。別の実施態様においては、当該医薬組成物は、約１５０ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の亜鉛サプリメントとを含んでなる。さらなる実施態様においては、当該医薬組成物は、約２００ｍｇのＳＡＨＡと、約１ないし１０モル当量の亜鉛サプリメントとを含んでなる。
【００３７】
金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる医薬組成物
１つの実施態様においては、本発明は、治療上有効な量の金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体か、又はその水和物若しくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる、医薬組成物を提供する。
【００３８】
当該金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体は、アモルファス型であってもよい。当該金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体は、結晶性であるか、超微粉砕されてもよく、或いは、凝塊形成されるか、微粒子状の顆粒、粉末、油、油性懸濁液、又は任意の他の固体の状態であってもよい。当該金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物は、任意の結晶性の形態であってもよい。１つの実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤はヒドロキサム酸誘導体である。１つの実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤はＳＡＨＡである。
【００３９】
１つの実施態様においては、本発明は、治療上有効な量の鉄ＳＡＨＡキレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる、医薬組成物を提供する。１つの実施態様においては、鉄とＳＡＨＡの比は、１：３、１：２、又は１：１である。
【００４０】
１つの実施態様においては、鉄ＳＡＨＡキレート錯体は結晶性であり、図２に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴づけられる。別の実施態様においては、鉄ＳＡＨＡキレート錯体は８．８、１４．５、及び２１．８度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。さらなる実施態様においては、鉄ＳＡＨＡキレート錯体は、８．８、１３．３、１４．５、２０．３、２１．８、及び２４．６度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。さらなる実施態様においては、鉄ＳＡＨＡキレート錯体は、８．８、１３．３、１４．５、１８．５、２０．３、２１．８、２４．６、２５．８、及び３３．３度２θにおける特徴的なピークを含む、銅Ｋα照射を用いたＸ線粉末回折パターンによって特徴づけられる。
【００４１】
別の実施態様においては、本発明はまた、治療上有効な量の亜鉛ＳＡＨＡキレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる、医薬組成物も提供する。１つの実施態様においては、亜鉛とＳＡＨＡの比は、１：３、１：２、又は１：１である。
【００４２】
本発明はまた、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体又はＳＡＨＡの、水和物若しくは溶媒和物を含んでなる、医薬組成物も包含する。用語「水和物」は、制限なく、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物などを包含する。
【００４３】
医薬組成物
当該医薬組成物中の薬学的に許容される担体は、固形粒子の形態であってもよい。例えば、ゴム、デンプン、糖、セルロース物質、アクリラート、又はそれらの混合物といった、一般に担体又は希釈剤として使用される任意の不活性な賦形剤を、本発明の製剤において使用してもよい。１つの実施態様においては、希釈剤は微結晶セルロースである。本発明組成物（例えば、ＨＤＡＣ阻害剤；キレート化可能な金属化合物；ＨＤＡＣ阻害剤及びキレート化可能な金属化合物；又は金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体）はさらに、崩壊剤（例えば、クロスカルメロースナトリウム）及び潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）を含んでなってもよく、加えて、結合剤、緩衝剤、プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤、可溶化剤、可塑剤、乳化剤、安定化剤、増粘剤、甘味剤、被膜剤、又はそれらの任意の組合せの中から選ばれる１種以上の添加剤を含んでなってもよい。さらに、本発明組成物は、制御放出又は即時放出製剤の形態であってもよい。
【００４４】
１つの実施態様においては、本明細書に記載の医薬組成物は、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムをさらに含んでなってもよい。製剤における、本発明組成物及び種々の賦形剤の百分率は、異なってもよい。例えば、当該医薬組成物は、重量で、約２０と９０％の間、約５０−８０％の間、又は約６０−７０％の間の本発明組成物を含んでなってもよい。さらに、当該医薬組成物は、重量で、約１０と７０％の間、約２０−４０％の間、約２５−３５％の間の微結晶セルロースを、担体又は希釈剤として含んでなってもよい。さらに、当該医薬組成物は、重量で、約１と３０％の間、約１−１０％の間、約２−５％の間のクロスカルメロースナトリウムを、崩壊剤として含んでなってもよい。さらに、当該医薬組成物は、重量で、約０．１−５％の間、又は約０．５−１．５％の間のステアリン酸マグネシウムを、潤滑剤として含んでなってもよい。
【００４５】
１つの実施態様においては、当該医薬組成物は、約５０−８０重量％の本発明組成物；約２０−４０重量％の微結晶セルロース；約１−１０重量％のクロスカルメロースナトリウム；及び約０．１−５重量％のステアリン酸マグネシウムである。別の実施態様においては、本発明の当該医薬組成物は、約６０−７０重量％の本発明組成物；約２５−３５重量％の微結晶セルロース；約２−５重量％のクロスカルメロースナトリウム；及び約０．５−１．５重量％のステアリン酸マグネシウムである。１つの実施態様においては、記載された医薬組成物は、約５０−２００ｍｇ又は５０−６００ｍｇのＩ型ＳＡＨＡを含んでなる。
【００４６】
本発明の１つの特定の実施態様は、ゼラチンカプセル中に含有された、本発明組成物と、微結晶セルロース、ＮＦ（アビセル（Ａｖｉｃｅｌ）Ｐｈ  １０１）、クロスカルメロースナトリウム、ＮＦ（アクジゾル（ＡＣ−Ｄｉ−Ｓｏｌ））及びステアリン酸マグネシウム、ＮＦを含んでなる、固形製剤である。さらなる実施態様は、約１００ｍｇの本発明組成物、約４４．３ｍｇの微結晶セルロース、約４．５ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、約１．２ｍｇのステアリン酸マグネシウムを含んでなる、医薬組成物である。
【００４７】
１つの実施態様においては、当該医薬組成物は経口的に投与され、したがって経口投与に適した形態、すなわち、固体又は液体の形態として製剤化される。適当な固形経口製剤は、例えば、タブレット、カプセル、ピル、顆粒、ペレットなどを包含する。好適な液体経口製剤は、例えば、エマルジョン、油などを包含する。本発明の１つの実施態様においては、当該組成物はカプセル中に製剤される。この実施態様によれば、本発明の医薬組成物は、本発明組成物及び不活性な担体又は希釈剤に加えて、硬ゼラチンカプセルを含んでなる。
【００４８】
固形の担体／希釈剤は、制限なく、ゴム、デンプン（例えば、コーンスターチ、α−デンプン）、糖（例えば、ラクトース、マンニトール、スクロース、デキストロース）、セルロース物質（例えば、微結晶セルロース）、アクリラート（例えば、ポリメチルアクリラート）、炭酸カルシウム、酸化マグネシウム、タルク、又はそれらの混合物を包含する。
【００４９】
液体製剤用には、薬学的に許容される担体は、非水性の溶液、懸濁液、エマルジョン、又は油でよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及び注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルである。油の例は、石油、動物、植物、又は合成起源のもの、例えば、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱物油、オリーブ油、ヒマワリ油、及び魚肝油である。懸濁液はまた、以下の成分：固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、を含有してもよい。
【００５０】
加えて、当該医薬組成物はさらに、結合剤（例えば、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアーガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン）、崩壊剤（例えば、コーンスターチ、バレイショデンプン、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアーガム、デンプングリコール酸ナトリウム、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、洗浄剤（例えば、ツイーン２０、ツイーン８０、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８、胆汁酸塩）、プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、浸透増強剤、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、流動促進剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ナトリウムメタバイスルファイト、ブチル化ヒドロキシアニソール）、安定化剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増粘剤（例えば、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアーガム）、甘味剤（例えば、スクロース、アスパルテーム、クエン酸）、着香剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、又はオレンジ香料）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動化剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例えば、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例えば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、ポリマーコーティング（例えば、ポロキサマー又はポロキサミン）、コーティング及び被膜剤（例えばエチルセルロース、アクリラート、ポリメタクリラート）、及び／又はアジュバントを含んでなってもよい。
【００５１】
１つの実施態様においては、本発明組成物は、移植片及びマイクロカプセル化された送達系を含む、制御放出製剤のように、身体からの迅速な消失に対し当該組成物を保護することができる担体を用いて調製される。生分解性の生物適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及び、ポリ乳酸を使用してもよい。かかる製剤の調製のための方法は、当業者には明らかであろう。当該物質はまた、アルザ・コーポレーション（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びノバ・ファーマシューティカルズ・インク（Ｎｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）から市販されている。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞へ標的化されたリポソームを含む）もまた、薬学的に許容される担体として使用してもよい。これらは、当業者に周知の方法、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載された方法に従って調製してもよい。
【００５２】
活性成分を含有する医薬組成物の調製は、当該技術分野において充分に理解されており、例えば、混合、造粒、又はタブレット形成プロセスによる。経口投与用には、活性薬剤は、この目的のための慣例的な添加剤、例えば、ビヒクル、安定化剤、又は不活性な希釈剤と混合され、慣例的な方法により、投与用に好適な形態、例えば、上記に詳述された、錠剤、コートされた錠剤、硬又は軟ゼラチンカプセル、水性、アルコール性、又は油性の溶液などへ転換される。
【００５３】
１つの実施態様においては、経口用組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のため、単位剤形に製剤される。本明細書に使用された単位剤形は、治療されるべき患者のための単位服用量として好適な、物理的に別個の単位を指し；各単位は、所望の治療効果を生じるべく計算された、予め決められた量の本発明組成物を、必要な医薬担体と共に含有する。本発明の単位剤形に関する仕様は、本発明組成物の固有の特性及び達成されるべき特定の治療効果と、かかる活性化合物を個体の治療のために調剤する技術における固有の限界とによって指示され、かつ直接的に依存する。ある実施態様においては、用量単位は、約６００ｍｇ、５５０ｍｇ、５００ｍｇ、４５０ｍｇ、４００ｍｇ、３５０ｍｇ、３００ｍｇ、２５０ｍｇ、２００ｍｇ、１５０ｍｇ、１１０ｍｇ、１０５ｍｇ、１００ｍｇ、９５ｍｇ、９０ｍｇ、８５ｍｇ、８０ｍｇ、７５ｍｇ、７０ｍｇ、６５ｍｇ、６０ｍｇ、５５ｍｇ、５０ｍｇ、４５ｍｇ、又は４０ｍｇの本発明組成物を含有する。１つの実施態様においては、本発明組成物の量は、約１００ｍｇである。
【００５４】
当該医薬組成物は、容器、パック、又はディスペンサー内に、投与のための説明書と一緒に含まれてよい。１つの実施態様においては、当該医薬組成物は単一のカプセルであり、これにおいて本発明組成物の量は、約１００ｍｇである。１つの実施態様においては、当該医薬組成物は２カプセルであり、これにおいて各カプセルは、約５０ｍｇの本発明組成物を含有する。
【００５５】
金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を得る方法及び結晶化
本発明はまた、キレート化可能な金属化合物及び塩基を、反応媒体中で、ＨＤＡＣ阻害剤に添加する工程を含んでなる、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を得る方法も提供する。１つの実施態様においては、当該反応媒体は、有機溶媒、又は有機溶媒と水との混合物である。１つの実施態様においては、有機溶媒はエタノールである。１つの実施態様においては、キレート化可能な金属化合物は、鉄又は亜鉛を含んでなる。もう１つの実施態様においては、キレート化可能な金属化合物、塩基、及びＨＤＡＣ阻害剤は、反応媒体に可溶性である。１つの実施態様においては、塩基はＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン又はナトリウムエトキシドである。１つの実施態様においては、キレート化可能な金属化合物は、塩化第二鉄又は塩化亜鉛である。
【００５６】
本発明はまた、当該キレート錯体を、有機溶媒中で、又は有機溶媒と水との混合物中で、結晶化する工程を含んでなる、結晶性金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を得る方法も提供する。１つの実施態様においては、当該金属は亜鉛又は鉄である。
【００５７】
１つの特定の実施態様においては、結晶性金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体は、有機溶媒から結晶化される。当該有機溶媒は、メタノール、エタノール、又はイソプロパノールといったアルコールであってもよい。１つの実施態様においては、当該有機溶媒は、メタノール、エタノール、アセトニトリル、イソプロパノール、及び酢酸のうちの１種以上である。１つの実施態様においては、当該有機溶媒はエタノールである。１つの特定の実施態様においては、反応媒体において使用される有機溶媒は、結晶化におけるものと同一である。
【００５８】
別の実施態様においては、有機溶媒と水との混合物は、約１−９９％の有機溶媒と、約９９−１％の水とを含んでなる。別の実施態様においては、当該混合物は、４０−９９％のエタノールと、６０−１％の水とを含んでなる。１つの実施態様においては、当該混合物は、約１５−８５％の有機溶媒と、約１−１５％の水とを含んでなる。１つの特定の実施態様においては、当該混合物は、約８５％の有機溶媒と約１５％の水とを含んでなる。別の特定の実施態様においては、当該混合物は、１：１の、エタノール及び水を含んでなる。なお別の特定の実施態様においては、当該混合物は、９：１の、エタノール及び水を含んでなる。ここで記載された有機溶媒と水との比又は百分率は、体積によるものである。
【００５９】
１つの特定の実施態様においては、当該有機溶媒はアルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノールなど）である。しかしながら、当業者には、本明細書に記載の結晶化又は反応が、有機合成の当業者によって容易に選択されてよい任意の適当な溶媒又は溶媒混合物中で行なってもよいことが明白であるべきである。かかる適当な有機溶媒は、本明細書で用いる場合、単なる例として、かつ制限なく、塩素化溶媒、炭化水素溶媒、エーテル溶媒、極性プロトン性溶媒、及び極性非プロトン性溶媒を包含してもよい。適当なハロゲン化溶媒は、制限なく、四塩化炭素、ブロモジクロロメタン、ジブロモクロロメタン、ブロモホルム、クロホルム、ブロモクロロメタン、ジブロモメタン、塩化ブチル、ジクロロメタン、テトラクロロエチレン、トリクロロエチレン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、２−クロロプロパン、ヘキサフルオロベンゼン、１，２，４−トリクロロベンゼン、ｏ−ジクロロベンゼン、クロロベンゼン、フルオロベンゼン、フルオロトリクロロメタン、クロロトリフルオロメタン、ブロモトリフルオロメタン、四フッ化炭素、ジクロロフルオロメタン、クロロジフルオロメタン、トリフルオロメタン、１，２−ジクロロテトラフルオロエタン、及びヘキサフルオロエタンを包含する。適当な炭化水素溶媒は、制限なく、ベンゼン、シクロヘキサン、ペンタン、ヘキサン、トルエン、シクロヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、エチルベンゼン、ｍ−、ｏ−、又はｐ−キシレン、オクタン、インダン、ノナンを包含する。適当なエーテル溶媒は、制限なく、ジメトキシメタン、テトラヒドロフラン、１，３−ジオキサン、１，４−ジオキサン、フラン、ジエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、トリエチレングリコールジイソプロピルエーテル、アニソール、又はｔ−ブチルメチルエーテルを包含する。
【００６０】
適当な極性プロトン性溶媒は、制限なく、メタノール、エタノール、２−ニトロエタノール、２−フルオロエタノール、２，２，２−トリフルオロエタノール、エチレングリコール、１−プロパノール、２−プロパノール、２−メトキシエタノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｉ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、２−エトキエシエタノール、ジエチレングリコール、１−、２−、又は３−ペンタノール、ネオ−ペンチルアルコール、ｔ−ペンチルアルコール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、シクロヘキサノール、ベンジルアルコール、フェノール、及びグリセロールを包含する。適当な極性非プロトン性溶媒は、制限なく、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ホルムアミド、Ｎ−メチルアセトアミド、Ｎ−メチルホルムアミド、アセトニトリル（ＡＣＮ）、ジメチルスルホキシド、プロピオニトリル、ギ酸エチル、酢酸メチル、ヘキサクロロアセトン、アセトン、エチルメチルケトン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｔ−ブチル、スルホラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、ニトロメタン、ニトロベンゼン、ヘキサメチルホスホラミドを包含する。
【００６１】
治療の方法
ヒドロキサム酸誘導体のような、金属結合ドメインをもつＨＤＡＣ阻害剤は、いくつかの内在性の塩、例えば鉄及び亜鉛を封鎖することができる。これらの塩は、長期間の健康及び生存のため、生体系に必要とされる。さらに、鉄のようなキレート化可能な塩は、酵素及びタンパク質、例えば：リポキシゲナーゼ、Ｐ−４５０スーパーファミリーの酵素、モノアミンオキシダーゼ、ヘム、及びその他多数により、正常な機能を維持するために必要とされる。
【００６２】
亜鉛は、細胞分裂及び成長にとり不可欠であり、ＤＮＡの形成を支援する。亜鉛はまた、インスリンの適切な機能化を支援するためにも重要であり、免疫系の健康にも関与している。亜鉛の欠乏は、腸粘膜委縮、貧血、下痢、水及び栄養素の吸収の減少（脱水及び食欲不振）、味覚障害、脱毛、胸腺委縮、精巣委縮；高血糖症、血清グルコース増加、クレアチン増加、腎機能不全、障害、又は不全を引き起こし得る。
【００６３】
臨床上の有害事象又は副作用、例えば下痢、疲労、悪心、血小板減少症、食欲不振、味覚異常、体重減少、筋痙攣、脱毛、貧血、血中クレアチン増加、嘔吐、悪寒は、ＳＡＨＡについて、癌患者の治療中に観察されてきており、そのいくつかは、ＳＡＨＡの金属結合ドメインによるこれらのイオンの封鎖の結果としての、鉄又は亜鉛の欠乏と関連づけられてよい。ＳＡＨＡの前臨床期毒性は、全ての動物種における、体重減少又は食欲不振、免疫抑制（白血球減少、リンパ球減少、胸腺委縮）；ラットにおける血小板減少；イヌにおける胃腸毒性（粘膜委縮、急性炎、壊死、多発性損傷）、脱水、電解質損失、精巣委縮を包含する。
【００６４】
同様に、他の亜鉛キレート化剤は、ＨＤＡＣ阻害剤と同様の毒性又は副作用を共有する。例えば、リソスタット（Ｌｉｔｈｏｓｔａｔ）（アセトヒドロキサム酸）は、悪心、嘔吐、食欲不振、疲労、倦怠感、網状赤血球増加、貧血、血小板減少、白血球減少、及び頭痛といった副作用を引き起こす。デスフェリオキサミン（Ｄｅｓｆｅｒｒｉｏｘａｍｉｎｅ）（デスフェリプロン）は、疲労、骨髄委縮、胸腺委縮、及び好中球減少といった副作用を引き起こす。
【００６５】
従って、ＨＤＡＣ阻害剤と、キレート化可能な金属化合物、例えば鉄又は亜鉛との同時投与／同時配合は、鉄、亜鉛、及び他のキレート化可能な塩の貯蔵の可用性を維持する上で有益であり、かつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を除去するであろう。同時投与及び同時配合に加えて、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体の前形成が、同様な効果をもつであろうと考えられる。
【００６６】
したがって、１つの実施態様においては、本発明は、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法であって、治療上有効な量のＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物とを、患者に同時投与する工程を含んでなる該方法を提供する。別の実施態様においては、本発明はまた、治療上有効な量のＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物とを、患者に同時投与する工程を含んでなる、癌の治療及びＨＤＡＣ阻害剤の副作用の軽減用の、医薬の調製のためのＨＤＡＣ阻害剤の使用も提供する。１つの実施態様においては、当該キレート化可能な金属化合物は、患者に対し毎日投与される。別の実施態様においては、当該キレート化可能な金属化合物は、ＨＤＡＣ阻害剤投与の前又は後に投与される。別の実施態様においては、当該キレート化可能な金属化合物は、ＨＤＡＣ阻害剤と同時に投与される。さらなる実施態様においては、本発明は、キットであって、少なくとも１種の薬学的に有効な単位用量のＨＤＡＣ阻害剤と、キレート化可能な金属化合物及びＨＤＡＣ阻害剤を同時投与することにより癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減するための使用説明書とを含んでなる、該キットを提供する。ＳＡＨＡ、その薬学的に許容される塩、又はその水和物の、薬学的に有効な単位用量は、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、又は６００ｍｇであってもよい。キレート化可能な金属化合物は、医薬組成物、例えば、ビタミンサプリメント、又はミネラルサプリメントの形態であってよく、これはまた、他のビタミン及びミネラルも含んでなってよい。
【００６７】
別の実施態様においては、本発明はまた、癌を治療しかつＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する方法であって、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物とを含んでなる医薬組成物を患者に投与する工程を含んでなる、該方法も提供する。別の実施態様においては、本発明は、癌の治療及びＨＤＡＣ阻害剤の副作用の軽減用の、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物とを含んでなる、医薬の調製のための使用を提供する。さらなる実施態様においては、本発明は、癌の治療及びＨＤＡＣ阻害剤の副作用の軽減における使用のための、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物とを含んでなる医薬組成物を提供する。１つの実施態様においては、当該キレート化可能な金属化合物は、鉄又は亜鉛を含んでなる。別の実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤は、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）である。
【００６８】
１つの実施態様においては、当該副作用は、悪心、嘔吐、下痢、食欲不振、腸粘膜委縮、又は胃腸毒性である。別の実施態様においては、当該副作用は、貧血、疲労、又は血小板減少である。さらなる実施態様においては、当該副作用は、悪心、嘔吐、下痢、食欲不振、腸粘膜委縮、胃腸障害、疲労、又は血小板減少である。
【００６９】
さらなる実施態様においては、本発明はさらに、治療上有効な量の金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物を、患者に投与する工程を含んでなる、癌を治療する方法を提供する。別の実施態様においては、本発明は、癌の治療用の、治療上有効な量の金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物を含んでなる、医薬の調製のための使用を提供する。さらなる実施態様においては、本発明は、癌の治療における使用のための、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００７０】
本発明はさらに、上記の実施態様に記載の、治療上有効な量の亜鉛又は鉄ＳＡＨＡキレート錯体、又はその水和物若しくは溶媒和物を、患者に投与する工程を含んでなる、癌を治療する方法を提供する。
【００７１】
１つの実施態様においては、本発明の方法は、癌をもつヒト患者の治療用である。しかしながら、この方法はまた、他の哺乳類における癌の治療においても有効であることが有望である。癌は、制限なく、新生細胞の増殖により引き起こされる任意の癌、例えば、肺癌、急性リンパ性白血病、ホジキンリンパ腫、非ポジキンリンパ腫、膀胱黒色腫、腎癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、又は結腸直腸癌を包含する。本発明によれば、当該医薬組成物は、制限なく、固形腫瘍（例えば、頭頸部、肺、乳房、結腸、前立腺、膀胱、直腸、脳、胃組織、骨、卵巣、甲状腺、又は子宮内膜の腫瘍）、血液学的悪性疾患（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）、癌腫（例えば、膀胱癌、腎癌、乳癌、結腸直腸癌）、神経芽細胞腫、又は黒色腫を含む、広く多様な癌の治療において使用してもよい。これらの癌の制限しない例は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、Ｔ細胞リンパ腫又は白血病、例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、非皮膚性末梢Ｔ細胞リンパ腫、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス関連リンパ腫（ＨＴＬＶ）、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、並びに急性リンパ性白血病、急性非リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、中皮腫、小児固形腫瘍、脳神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経膠腫、ウィルムス腫瘍、骨癌及び柔組織肉腫、成人の一般的な固形腫瘍、例えば頭頸部癌（例えば口腔癌、喉頭癌、及び食道癌）、尿生殖器癌（例えば、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、子宮癌、卵巣癌、精巣癌、直腸及び結腸癌）、肺癌（例えば、扁平上皮細胞癌及び腺癌を含む、小細胞癌及び非小細胞肺癌）、乳癌、膵臓癌、黒色腫及び他の皮膚癌、基底細胞癌、転移性皮膚癌、潰瘍性及び乳頭型双方の扁平上皮細胞癌、胃癌、脳腫瘍、肝臓癌、副腎癌、腎臓癌、甲状腺癌、髄様癌、骨肉腫、軟組織肉腫、ユーイング肉腫、細網細胞肉腫、及びカポジ肉腫を包含する。また、本明細書に記載の任意の癌の小児型も包含される。
【００７２】
投与の方法
本明細書に記載の全ての方法において、当該医薬組成物をゼラチンカプセルにおいて経口投与してもよい。当該組成物は、本明細書に記載の方法に従って、毎日１回、毎日２回、又は毎日３回、単位用量で投与してもよい。
【００７３】
毎日投与は、その後、数日間ないし数年間にわたり連続的に反復される。経口治療は、１週間から患者の生涯にわたり、継続してもよい。１つの実施態様においては、投与は、５日間連続して行ない、その後に、患者はさらなる投与が必要かどうかを決定するべく評価されてもよい。投与は、連続的又は間欠的であってよく、すなわち、数日間の連続した治療の後に休止期を続けてもよい。
【００７４】
本発明組成物は、２５ないし４０００ｍｇ／ｍ２の間、例えば、約２５ないし１０００ｍｇ、５０ないし１０００ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇなどの合計１日用量で経口投与してもよい。典型的には、当該組成物は、４００ｍｇまでを患者に投与する場合、単回用量として投与する。より高い合計用量（すなわち、４００ｍｇよりも多い）については、総量を多数回に分割し、例えば、１日２回、１日３回など、又は、等間隔で１日中にわたる。例えば、２回分（各々が、例えば５００ｍｇ）を、１２時間あけて投与して、１０００ｍｇの合計用量を１日で達成してもよい。
【００７５】
１つの実施態様においては、ＳＡＨＡは、２００ｍｇの合計１日用量で患者に投与される。別の実施態様においては、ＳＡＨＡは、４００ｍｇの合計１日用量で患者に投与される。別の実施態様においては、ＳＡＨＡは、６００ｍｇの合計１日用量で患者に投与される。
【００７６】
１つの実施態様においては、患者に投与されるＨＤＡＣ阻害剤の量は、管理不能の毒性を患者に引き起こすこととなる量よりも少ない。ある実施態様においては、患者に投与されるＨＤＡＣ阻害剤の量は、患者の血漿中の化合物の濃度を、当該化合物の毒性レベル以上にさせる量よりも少ない。１つの実施態様においては、患者の血漿中のＨＤＡＣ阻害剤の濃度は、約１０ｎＭと約５０００ｎＭとの間に維持される。本発明の実施において、患者に投与されるべきＨＤＡＣ阻害剤の最適量は、使用される特定の化合物と、治療される癌のタイプとに依存するであろう。
【００７７】
ヒストン脱アセチル化酵素及びヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）は、当該用語が本明細書に使用される場合、ヌクレオソームコアヒストンのアミノ末端テールにおけるリジン残基からのアセチル基除去を触媒する酵素である。例えば、ＨＤＡＣは、ヒストンアセチル基転移酵素（ＨＡＴ）と一緒に、ヒストンのアセチル化状態を調節する。ヒストンアセチル化は、遺伝子発現に影響を及ぼし、そしてＨＤＡＣの阻害剤、例えば、ヒドロキサム酸ベースのハイブリッド極性化合物、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、形質転換細胞の増殖停止、分化、及び／又はアポトーシスをインビトロにおいて誘導し、かつ腫瘍増殖をインビボにおいて阻害する。ＨＤＡＣは、構造上の相同性に基づき、３つのクラスに分類可能である。クラスＩ・ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ１、２、３、及び８）は、酵母ＲＰＤ３タンパク質に類似性をもち、核に局在し、かつ転写コレプレッサーと会合した複合体中に検出される。クラスＩＩ・ＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ４、５、６、７、及び９）は、酵母ＨＤＡ１タンパク質に類似しており、そして核及び細胞質の双方に細胞内局在性を有する。クラスＩ及びＩＩの双方のＨＤＡＣは、ヒドロキサム酸ベースＨＤＡＣ阻害剤、例えばＳＡＨＡにより阻害される。クラスＩＩＩ・ＨＤＡＣは、酵母ＳＩＲ２タンパク質に関連しているＮＡＤ依存性酵素からなる、構造的に離れたクラスを構成しており、そしてヒドロキサム酸ベースＨＤＡＣ阻害剤によって阻害されない。
【００７８】
ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤又はＨＤＡＣ阻害剤は、当該用語が本明細書に使用される場合、ヒストンの脱アセチル化をインビボ、インビトロ、又はその双方において阻害することが可能な化合物である。そういうものとして、ＨＤＡＣ阻害剤は、少なくとも１つのヒストン脱アセチル化酵素の活性を阻害する。少なくとも１つのヒストンの脱アセチル化の阻害の結果として、アセチル化されたヒストンの増加を生じ、アセチル化ヒストンの蓄積が、ＨＤＡＣ阻害剤の活性の評価のための好適な生物学的マーカーである。それ故、アセチル化ヒストンの蓄積についてアッセイし得る方法は、興味の化合物のＨＤＡＣ阻害活性を測定するために使用してもよい。ヒストン脱アセチル化酵素活性を阻害し得る化合物はまた、他の基質と結合してもよく、例えば、酵素のような他の生物活性分子を阻害してもよいことが理解される。また、本発明化合物は、上記に示された任意のヒストン脱アセチル化酵素か、又は任意の他のヒストン脱アセチル化酵素を阻害可能であることも理解される。
【００７９】
例えば、ＨＤＡＣ阻害剤を受けている患者においては、末梢単核細胞並びに、ＨＤＡＣ阻害剤で処理された組織における、アセチル化ヒストンの蓄積が、適当なコントロールに対して測定可能である。
【００８０】
特定の化合物のＨＤＡＣ阻害活性は、インビトロにおいて、例えば、少なくとも１つのヒストン脱アセチル化酵素の阻害を示す酵素アッセイを用いて測定してもよい。さらに、特定の組成物で処理された細胞における、アセチル化ヒストンの蓄積の測定が、１つの化合物のＨＤＡＣ阻害活性の決定要因であってもよい。
【００８１】
アセチル化ヒストンの蓄積に関するアッセイは、文献において周知である。例えば、マークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）ら著、「ジャーナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュート（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．）」、２０００年、第９２巻、ｐ．１２１０−１２１５；バトラー（Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．）ら著、「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）」、２０００年、第６０巻、ｐ．５１６５−５１７０；リコン（Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．）ら著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ）」、１９９８年、第９５巻、ｐ．３００３−３００７、及びヨシダ（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．）ら著、「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）」、１９９０年、第２６５巻、ｐ．１７１７４−１７１７９参照。
【００８２】
例えば、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤化合物の活性を測定するための酵素アッセイは、以下のように行なってよい。手短に言えば、アフィニティ精製されたヒトエピトープをタグされた（Ｆｌａｇ）ＨＤＡＣ１に対するＨＤＡＣ阻害剤化合物の効果は、当該酵素標品を、基質不在下に、氷上で約２０分間、指定された量の阻害剤化合物と共にインキュベートすることによりアッセイしてもよい。基質（［３Ｈ］アセチル標識されたマウス赤白血病細胞由来のヒストン）を添加してよく、サンプルは、全量３０μＬ中で、３７℃において２０分間インキュベートしてよい。反応は、次に停止してよく、放出されたアセタートを抽出してよく、かつ放射能放出の量をシンチレーションカウンティングにより測定する。ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤化合物の活性を測定するために有用な別のアッセイは、バイオモル・リサーチ・ラボラトリーズ・インク（ＢＩＯＭＯＬ（登録商標）  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ペンシルベニア州、プリマス・ミーティング（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ）から市販されている「ＨＤＡＣフルオレセント・アクティビティ・アッセイ（ＨＤＡＣ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）；ドラッグ・ディスカバリー・キット（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｋｉｔ）−ＡＫ−５００」である。
【００８３】
インビボの研究は、以下のように行ってもよい。動物、例えば、マウスに、ＨＤＡＣ阻害剤化合物を腹腔内に注射してもよい。選択された組織、例えば脳、脾臓、肝臓などは、投与後の予め決められた時間に単離してもよい。ヒストンは、本質的に、ヨシダ（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．）ら、「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」、１９９０年、第２６５巻、ｐ．１７１７４−１７１７９、によって記載されたように、組織から単離してもよい。等量のヒストン（約１μｇ）が、１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動してもよく、ハイボンド（Ｈｙｂｏｎｄ）−Ｐフィルタ（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）より市販）へ移してもよい。フィルタは、３％ミルクでブロックしてもよく、精製されたウサギポリクローナル抗アセチル化ヒストンＨ４抗体（αＡｃ−Ｈ４）及び、抗アセチル化ヒストンＨ３抗体（αＡｃ−Ｈ３）（アップステート・バイオテクノロジー・インク（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｉｇｙ，Ｉｎｃ．））を用いてプローブしてもよい。アセチル化ヒストンのレベルは、西洋ワサビペルオキシダーをコンジュゲートしたヤギ抗ウサギ抗体（１：５０００）と、スーパーシグナル（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ）化学発光基質（ピアース（Ｐｉｅｒｃｅ））とを用いて可視化してもよい。ヒストンタンパク質用の負荷のコントロールとして、平行したゲルを流し、クーマシー・ブルー（ＣＢ）で染色してもよい。
【００８４】
さらに、ヒドロキサム酸ベースのＨＤＡＣ阻害剤は、ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の発現をアップレギュレートすることが示されてきた。ｐ２１ＷＡＦ１タンパク質は、標準的な方法を用いて、様々な形質転換細胞において、ＨＤＡＣ阻害剤との培養の２時間以内に誘導される。ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子の誘導は、この遺伝子のクロマチン領域におけるアセチル化ヒストンの蓄積と関連づけられている。それ故、ｐ２１ＷＡＦ１の誘導は、形質転換細胞においてＨＤＡＣ阻害剤により引き起こされる、Ｇ１細胞周期停止に関与していると認識してもよい。
【００８５】
典型的には、ＨＤＡＣ阻害剤は、５つの大まかなクラス：１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；及び５）求電子ケトン、に分類される。
【００８６】
従って、本発明は、その広い範囲の中に、ヒストン脱アセチル化酵素の阻害、新生細胞の最終分化の誘導、及び／又は腫瘍内の腫瘍細胞の分化の誘導において使用するための、１）ヒドロキサム酸誘導体；２）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）；３）環状テトラペプチド；４）ベンズアミド；及び５）求電子ケトン；及び／又は、ヒストン脱アセチル化酵素を阻害することができる任意の他のクラスの化合物である、ＨＤＡＣ阻害剤を含んでなる組成物を包含する。
【００８７】
かかるＨＤＡＣ阻害剤の例は、制限なく以下を包含する：
Ａ．  ヒドロキサム酸誘導体、例えば、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）（リコン（Ｒｉｃｈｏｎ）ら著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９９８年、第９５巻、ｐ．３００３−３００７）；ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキシアミド（ＣＢＨＡ）（リコン（Ｒｉｃｈｏｎ）ら、上記）；ピロキサミド；トリコスタチン類似体、例えば、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）及びトリコスタチンＣ（コーゲ（Ｋｏｇｈｅ）ら著、「バイオケミカル・ファーマコロジー（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）」、１９９８年、第５６巻、ｐ．１３５９−１３６４）；サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）（アンドリュース（Ａｎｄｒｅｗｓ）ら著、「インタナショナル・ジャーナル・フォー・パラジトロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ）」、２０００年、第３０巻、ｐ．７６１−７６８）；スベロイルビスヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）（米国特許第５，６０８，１０８号）；アゼラインビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ）（アンドリュース（Ａｎｄｒｅｗｓ）ら、上記）；アゼライン−１−ヒドロキサマート−９−アニリド（ＡＡＨＡ）（キウ（Ｑｉｕ）ら著、「モレキュラー・バイオロジー・オブ・ザ・セル（Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ）」、２０００年、第１１巻、ｐ．２０６９−２０８３）；６−（３−クロロフェニルウレイド）カプロンヒドロキサム酸（３Ｃｌ−ＵＣＨＡ）；オキサムフラチン［（２Ｅ）−５−［３−［（フェニルスルホニル）アミノフェニル］−ペント−２−エン−４−イノヒドロキサム酸］（キム（Ｋｉｍ）ら著、「オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）」、１９９９年、第１８巻、ｐ．２４６１  ２４７０）；Ａ−１６１９０６、スクリプタイド（Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）（スー（Ｓｕ）ら著、「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、２０００年、第６０巻、ｐ．３１３７−３１４２）；ＰＸＤ−１０１（プロリフィックス（Ｐｒｏｌｉｆｉｘ））；ＬＡＱ−８２４；ＣＨＡＰ；ＭＷ２７９６（アンドリュース（Ａｎｄｒｅｗｓ）ら、上記）；ＭＷ２９９６（アンドリュース（Ａｎｄｒｅｗｓ）ら、上記）；又は米国特許第５，３６９，１０８、５，９３２，６１６、５，７００，８１１、６，０８７，３６７、及び６，５１１，９９０号に開示された任意のヒドロキサム酸。
Ｂ．環状テトラペプチド、例えばトラポキシンＡ（ＴＰＸ）−環状テトラペプチド（シクロ−（Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシデカノイル））（キジマ（Ｋｉｊｉｍａ）ら著、「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」、１９９３年、第２６８巻、ｐ．２２４２９−２２４３５；ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８、デプシペプチド）（ナカジマ（Ｎａｋａｊｉｍａ）ら著、「エクスペリメンタル・セル・リサーチ（Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．）」、１９９８年、第２４１巻、ｐ．１２６−１３３）；ＦＲ２２５４９７環状テトラペプチド（モリ（Ｈ．Ｍｏｒｉ）ら、ＰＣＴ出願ＷＯ  ００／０８０４８（２０００年２月１７日））；アピシジン環状テトラペプチド［シクロ（Ｎ−Ｏ−メチル−Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−イソロイシニル−Ｄ−ピペコリニル−Ｌ−２−アミノ−８−オキソデカノイル）］（ダーキン−ラトレー（Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙ）ら著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９９６年、第９３巻、ｐ．１３１４３  １３１４７）；アピシジンＩａ、アピシジンＩｂ、アピシジンＩｃ、アピシジンＩＩａ、及びアピシジンＩＩｂ（ダルスキ（Ｐ．Ｄｕｌｓｋｉ）ら、ＰＣＴ出願ＷＯ  ９７／１１３６６）；ＣＨＡＰ、ＨＣ−トキシン環状テトラペプチド（ボッシュ（Ｂｏｓｃｈ）ら著、「ザ・プラント・セル（Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ）」、１９９５年、第７巻、ｐ．１９４１−１９５０）；ＷＦ２７０８２  環状テトラペプチド（ＰＣＴ出願ＷＯ  ９８／４８８２５）；及びクラミドシン（ボッシュ（Ｂｏｓｃｈ）ら、上記）。
Ｃ．短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）誘導体、例えば、酪酸ナトリウム（カズンズ（Ｃｏｕｓｅｎｓ）ら著、「ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」、１９７９年、２５４巻、ｐ．１７１６−１７２３）；イソバレレート（マクベイン（ＭａｃＢａｉｎ）ら著、「バイオケミカル・ファーマコロジー」、１９９７年、第５３巻、ｐ．１３５７−１３６８）；吉草酸塩（マクベイン（ＭａｃＢａｉｎ）ら、上記）；４−フェニルブチラート（４−ＰＢＡ）（リー及びタルシヤン（Ｌｅａ＆Ｔｕｌｓｙａｎ）著、「アンチキャンサー・リサーチ（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、１９９５年、第１５巻、ｐ．８７９−８７３）；フェニルブチラート（ＰＢ）（ワン（Ｗａｎｇ）ら著、「キャンサー・リサーチ」、１９９９年、第５９巻、ｐ．２７６６−２７９９）；プロピオン酸塩（マクベイン（ＭａｃＢａｉｎ）ら、上記）；ブチルアミド（リー及びタルシヤン、上記）；イソブチルアミド（リー及びタルシヤン、上記）；酢酸フェニル（リー及びタルシヤン、上記）；  ３−ブロモプロピオナート（リー及びタルシヤン、上記）；トリブチリン（グアン（Ｇｕａｎ）ら著、「キャンサー・リサーチ」、２０００年、第６０巻、ｐ．７４９−７５５）；バルプロ酸及びバルプロエート。
Ｄ．ベンズアミド誘導体、例えば、ＣＩ−９９４；ＭＳ−２７−２７５［Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド］（サイトウ（Ｓａｉｔｏ）ら著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９９９年、第９６巻、ｐ．４５９２−４５９７）；及び、ＭＳ−２７−２７５の３’−アミノ誘導体（サイトウ（Ｓａｉｔｏ）ら、上記）。
Ｅ．求電子ケトン誘導体、例えば、トリフルオロメチルケトン（フレイ（Ｆｒｅｙ）ら著、「バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー・レターズ（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．）」、２００２年、第１２巻、ｐ．３４４３−３４４７；米国特許第６，５１１，９９０号）、及びα−ケトアミド、例えば、Ｎ−メチル−α−ケトアミド。
Ｆ．他のＨＤＡＣ阻害剤、例えばデプデシン（クウォン（Ｋｗｏｎ）ら著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（ＰＮＡＳ）」、１９９８年、第９５巻、ｐ．３３５６−３３６１）。
【００８８】
１つの実施態様においては、ヒドロキサム酸ベースのＨＤＡＣ阻害剤は、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ｍ−カルボキシケイ皮酸ビスヒドロキサム酸塩（ＣＢＨＡ）、及びピロキサミドである。ＳＡＨＡは、ヒストン脱アセチル化酵素の触媒ポケットにおいて、直接的に結合することが示されてきた。ＳＡＨＡは、培養にある形質転換細胞の、細胞周期停止、分化、及び／又はアポトーシスを誘導し、かつげっ歯類における腫瘍増殖を阻害する。ＳＡＨＡは、固形腫瘍及び血液癌の双方における、これらの効果の誘導に有効である。ＳＡＨＡは、動物に対し何ら毒性なしに、動物の腫瘍増殖を阻害するのに有効であることが示されてきた。ＳＡＨＡ誘導性の腫瘍増殖の阻害は、腫瘍におけるアセチル化ヒストンの蓄積と関係づけられる。ＳＡＨＡは、ラットにおいて発癌物質に誘導された（Ｎ−メチルニトロソ尿素）乳腺腫瘍の、発生及び持続的増殖を阻害するのに有効である。ＳＡＨＡは、１３０日に及ぶ研究の間、ラットに対し、その食餌中に投与された。したがって、ＳＡＨＡは非毒性であり、経口活性のある抗腫瘍剤であり、その作用メカニズムは、ヒストン脱アセチル化酵素活性の阻害を包含する。もう１つの実施態様においては、ＨＤＡＣ阻害剤は、米国特許第５，３６９，１０８、５，９３２，６１６、５，７００，８１１、６，０８７，３６７、及び６，５１１，９９０号に開示されたものである。
【００８９】
併用療法
本発明の方法はまた、最初に抗腫瘍剤を患者に投与して、該患者の新生細胞を抗腫瘍剤に対し抵抗性にさせ、その後に、かかる細胞の最終分化、細胞増殖停止、及び／又はアポトーシスを選択的に誘導するために有効な、有効量の任意の本発明組成物を投与することを含んでなってもよい。
【００９０】
抗腫瘍剤は、数多の化学療法剤の１種であってよく、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ホルモン剤、抗生物質、コルヒチン、ビンカアルカロイド、Ｌ−アスパラギナーゼ、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、ニトロソ尿素、又はイミダゾールカルボキシアミドでよい。適当な薬剤は、チューブリンの脱重合を促進する薬剤である。１つの実施態様においては、抗腫瘍剤は、コルヒチン又はビンカアルカロイド；ビンブラスチン又はビンクリスチンである。抗腫瘍剤がビンクリスチンである実施態様においては、細胞は、好ましくは、約５ｍｇ／ｍｌの濃度において、ビンクリスチンに抵抗性であるように処置される。細胞を処置してそれらを抗腫瘍剤に対し抵抗性にすることは、当該細胞を当該薬剤と、少なくとも３ないし５日間にわたり接触させることによりもたらされてよい。得られた細胞を、上記の任意の化合物と接触させることは、前記に記載のように行なわれる。上記の化学療法剤に加えて、当該化合物はまた、放射線療法と一緒に投与されてもよい。
【００９１】
アルキル化剤
アルキル化剤は、求核性残基、例えば、ＤＮＡ産生用のヌクレオチド前駆体上の化学的実体と反応する。それらは、これらのヌクレオチドをアルキル化すること、及びそのＤＮＡへの集合を阻害することにより、細胞分裂のプロセスに影響を及ぼす。
【００９２】
アルキル化剤の例は、制限なく、ビスクロロエチルアミン（ナイトロジェンマスタード、例えば、クロランブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード）、アジリジン（例えば、チオテパ）、アルキルアルコンスルホナート（例えば、ブスルファン）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン）、非古典的アルキル化剤（アルトレタミン、デカルバジン、及びプロカルバジン）、白金化合物（カルボプラチン及びシスプラチン）を包含する。これらの化合物は、リン酸基、アミノ基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、カルボキシル基、及びイミダゾール基と反応する。
【００９３】
生理的条件下では、これらの薬剤はイオン化して正に帯電したイオンを生じ、それが、感受性の核酸及びタンパク質に結合して、細胞周期停止及び／又は細胞死をもたらす。アルキル化剤は、それらが細胞周期の特定の相とは無関係にその活性を及ぼすことから、細胞周期相非特異的な薬剤である。ナイトロジェンマスタード及びアルキルアルコンスルホナートは、Ｇ１又はＭ期にある細胞に対し、最も有効である。ニトロソ尿素、ナイトロジェンマスタード、及びアジリジンは、Ｇ１及びＳ期からＭ期への進行を害する。シャブナー及びコリンズ（Ｃｈａｂｎｅｒ  ＆  Ｃｏｌｌｉｎｓ）編、「癌化学療法：理論と実践（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）」、１９９０年、ＪＢリピンコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、フィラデルフィア）。
【００９４】
アルキル化剤は、広く多様な新生物疾患に対し活性があり、白血病及びリンパ腫、並びに固形腫瘍の治療において有意な活性がある。臨床的には、この群の薬剤は、急性及び慢性白血病；ホジキン病；非ホジキンリンパ腫；多発性骨髄腫；原発性脳腫瘍；乳房、卵巣、精巣、肺、膀胱、子宮頸部、頭部及び頸部の癌腫、及び悪性黒色腫の治療において日常的に使用されている。
【００９５】
全てのアルキル化剤に共通の主毒性は、骨髄抑制である。さらに、重症度の異なる胃腸管副作用が共通して起こり、様々な臓器毒性が特定の化合物に付随する。ブラック及びリビングストン（Ｂｌａｃｋ  ＆  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ）著、「ドラッグズ（Ｄｒｕｇｓ）」、１９９０年、第３９巻、ｐ．４８９−５０１及び第３９巻、ｐ．６５２−６７３．
【００９６】
抗生物質
抗生物質（例えば、細胞傷害抗生物質）は、ＤＮＡ又はＲＮＡ合成を直接的に阻害することにより作用し、かつ細胞周期全体を通じて有効である。抗生剤の例は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びアントラセンジオン）、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカトマイシンを包含する。これらの抗生剤は、種々の細胞成分を標的化することにより、細胞増殖を妨害する。例えば、アントラサイクリンは、一般に、転写活性ＤＮＡの領域において、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩの作用を妨害し、そのことがＤＮＡ鎖の切断をもたらすと考えられている。
【００９７】
ブレオマイシンは、一般に、鉄をキレート化して活性化された錯体を形成し、これが次にＤＮＡの塩基に結合して、鎖切断及び細胞死を引き起こすと考えられている。
【００９８】
抗生剤は、乳房、肺、胃、及び甲状腺の癌腫、リンパ腫、骨髄性白血病、骨髄腫、及び肉腫を含む、ある範囲の新生物性疾患全体にわたり、治療薬として使用されてきた。この群内でのアントラサイクリンの主要毒性は、骨髄抑制、特に顆粒球減少である。顆粒球減少には、しばしば粘膜炎が付随しており、その重症度は、骨髄抑制の程度と相互関係がある。また、アントラサイクリンの高用量の投与に付随した、著しい心臓毒性もある。
【００９９】
代謝拮抗剤
抗代謝剤（すなわち、代謝拮抗剤）は、癌細胞の生理学及び増殖にとり不可欠な代謝プロセスを妨害する一群の薬剤である。活発に増殖している癌細胞は、多量の核酸、タンパク質、脂質、及び他の生命維持に不可欠な細胞構成成分の継続した合成を必要とする。
【０１００】
多くの代謝拮抗剤は、プリン又はピリミジンヌクレオシドの合成を阻害し、或いはＤＮＡ複製の酵素を阻害する。ある代謝拮抗剤はまた、リボヌクレオシド及びＲＮＡの合成、及び／又は、アミノ酸代謝及びタンパク質合成も同様に妨害する。生命維持に不可欠な細胞構成成分の合成を妨害することにより、代謝拮抗剤は癌細胞の増殖を遅らせるか、又は停止することができる。抗代謝剤の例は、制限なく、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロキシウリジン（５−ＦＵｄＲ）、メトトレキセート、ロイコボリン、ヒドロキシ尿素、チオグアニン（６−ＴＧ）、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、シタラビン、ペントスタチン、フルダラビンリン酸塩、クラドリビン（２−ＣＤＡ）、アスパラギナーゼ、及びゲムシタビンを包含する。
【０１０１】
抗代謝剤は、結腸、直腸、乳房、肝臓、胃、及び膵臓の癌腫、悪性黒色腫、急性及び慢性白血病、及びヘアリー細胞白血病を含む、いくつかの一般的な形態の癌を治療するために広く用いられてきた。抗代謝治療の副作用の多くは、有糸分裂の活発な組織、例えば、骨髄又は胃腸粘における、細胞増殖の抑制からの結果として生じる。これらの薬剤を処置された患者は、共通して、骨髄抑制、口内炎、下痢、及び脱毛を経験する。チャン及びグレム（Ｃｈｅｎ  ＆  Ｇｒｅｍ）著、「カレント・オピニオン・イン・オンコロジー（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．）」、１９９２年、第４巻、ｐ．１０８９−１０９８．
【０１０２】
ホルモン剤
ホルモン剤は、その標的臓器の増殖及び発生を調節する一群の薬剤である。殆どのホルモン剤は、性ステロイド及び、その誘導体及び類似体、例えば、エストロゲン、プロゲストゲン、アンチエストロゲン、アンドロゲン、アンチアンドロゲン、及びプロゲスチンである。これらのホルモン剤は、性ステロイドの受容体のアンタゴニストとしての役目を果たしてよく、受容体の発現及び生命維持に不可欠な遺伝子の転写をダウンレギュレートする。かかるホルモン剤の例は、合成エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロール）、アンチエストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、フルオキシメステロール（ｆｌｕｏｘｙｍｅｓｔｅｒｏｌ）、及びラロキシフェン）、アンチアンドロゲン（ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アミノグルテチミド、アナストロゾール、及びテトラゾール）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）類似体、ケトコナゾール、酢酸ゴセレリン、ロイプロリド、酢酸メゲストロール、及びミフェプリストンである。
【０１０３】
ホルモン剤は、乳癌、前立腺癌、黒色腫、及び髄膜腫を治療するために使用される。ホルモンの主要な作用は、ステロイド受容体により仲介されることから、受容体ポジティブな乳癌の６０％がファーストラインのホルモン療法に対し応答性であり、受容体ネガティブな腫瘍の１０％未満が応答性である。ホルモン剤に付随する主要な副作用は、発赤である。しばしば起こる症状発現は、骨痛の急激な増加、皮膚損傷周辺の紅斑、及び、誘導性の高カルシウム血症である。
【０１０４】
特に、プロゲストゲンは、子宮内膜癌を治療するために使用されるが、その理由は、これらの癌が、プロゲストゲンにより妨害されない高レベルのエストロゲンに暴露されている婦人に発生するからである。
【０１０５】
アンチアンドロゲンは、ホルモン依存性である前立腺癌の治療用に主として使用される。それらは、テストステロンのレベルを低減し、それにより腫瘍の増殖を阻害するために使用される。
【０１０６】
乳癌のホルモン治療は、腫瘍性の乳房細胞において、エストロゲン受容体のエストロゲン依存性の活性化レベルを低減することを包含する。アンチエストロゲンは、エストロゲン受容体に結合することによって作用し、そしてコアクチベーターの動員を防止し、したがって、エストロゲンシグナルを阻害する。
【０１０７】
ＬＨＲＨ類似体は、前立腺癌の治療において、テストステロンのレベルを低下させるべく使用され、それにより腫瘍の増殖を低減する。
【０１０８】
アロマターゼ阻害剤は、ホルモン合成に必要な酵素を阻害することにより作用する。閉経後の婦人では、エストロゲンの主要供給源は、アロマターゼによるアンドロステンジオンの転換を介するものである。
【０１０９】
植物由来の薬剤
植物由来の薬剤は、植物から由来するか、又は当該薬剤の分子構造に基づき修飾された、一群の薬剤である。それらは、細胞分裂に不可欠な細胞成分の集合を妨害することにより、細胞複製を阻害する。
【０１１０】
植物由来の薬剤の例は、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビンゾリジン（ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ）、及びビノレルビン）、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド（ＶＰ−１６）及びテニポシド（ＶＭ−２６））、タキサン（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）を包含する。これらの植物由来の薬剤は、一般に、抗有糸分裂剤として作用し、チューブリンに結合して有糸分裂を阻害する。ポドフィロトキシン、例えばエトポシドは、トポイソメラーゼＩＩと相互作用することによりＤＮＡ合成を妨害し、ＤＮＡ鎖切断をもたらすと考えられている。
【０１１１】
植物由来の薬剤は、多くの形態の癌を治療するために使用される。例えば、ビンクリスチンは、白血病、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、及び小児腫瘍神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、及びウィルムス腫瘍の治療において使用される。ビンブラスチンは、リンパ腫、精巣癌、腎細胞癌、菌状息肉腫、及びカポジ肉腫に対し使用される。ドキセタキセルは、進行した乳癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、及び卵巣癌に対し、有望な活性を示してきた。
【０１１２】
エトポシドは、広範囲の新生物に対し活性があり、そのうちの小細胞肺癌、精巣癌、及びＮＳＣＬＣは、最も応答性である。
【０１１３】
植物由来の薬剤は、治療されている患者に対し、著しい副作用を引き起こす。ビンカアルカロイドは、様々なスペクトルの臨床毒性を示す。ビンカアルカロイドの副作用は、神経毒性、改変された血小板機能、骨髄抑制、及び白血球減少を包含する。パクリタキセルは、他の造血細胞系の相対的なスペアリングを伴う、用量制限性の好中球減少を引き起こす。エピポフィロトキシン（ｅｐｉｐｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎｓ）の主毒性は、血液性（好中球減少及び血小板減少）である。
【０１１４】
他の副作用は、一過性の肝酵素異常、脱毛、アレルギー性反応、及び末梢神経障害を包含する。
【０１１５】
生物学的薬剤
生物学的薬剤は、単独で、又は化学療法及び／又は放射線療法と併用して用いた場合、癌／腫瘍の退縮を誘発する一群の生体分子である。生物学的薬剤の例は、免疫調節タンパク質、例えばサイトカイン、腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体、腫瘍抑制遺伝子、及び癌ワクチンを包含する。
【０１１６】
サイトカインは、強い免疫調節活性をもつ。いくつかのサイトカイン、例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２、アルデスロイキン）、及びインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）は、抗腫瘍活性を示し、かつ転移性腎細胞癌及び転移性悪性黒色腫をもつ患者の治療用に承認されてきた。ＩＬ−２は、Ｔ細胞介在性の免疫応答の中心である、Ｔ細胞増殖因子である。ある患者に対するＩＬ−２の選択的な抗腫瘍作用は、自己と非自己との間を区別する、細胞介在性の免疫応答の結果であると考えられている。
【０１１７】
インターフェロン−αは、重複する活性をもつ、２３種を超える関連するサブタイプを包含する。ＩＦＮ−αは、多くの固形及び血液性の悪性腫瘍に対し、実証された活性を有しており、後者は特に感受性であると考えられる。
【０１１８】
インターフェロンの例は、インターフェロン−α、インターフェロン−β（線維芽細胞インターフェロン）、及びインターフェロン−γ（線維芽細胞インターフェロン）を包含する。他のサイトカインの例は、エリスロポエチン（エポエチン−α）、顆粒球−ＣＳＦ（フィルグラスチム）、及び顆粒球、マクロファージ−ＣＦＳ（サルグラモスチム）を包含する。サイトカイン以外の他の免疫調節剤は、カルメット−ゲラン桿菌（ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）、レバミソール、及びオクトレオチド（天然産ホルモン、ソマトスタチンの作用を模倣した持続性のオクタペプチド）を包含する。
【０１１９】
さらに、抗癌治療は、腫瘍ワクチン接種アプローチにおいて使用される抗体及び試薬を用いた、免疫療法による処置を含んでもよい。この療法クラスにおける主剤は、抗体であり、単独か、又は例えば、癌細胞に対する毒又は化学療法剤／細胞傷害剤を含むものである。腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体は、腫瘍により発現された抗原、好ましくは腫瘍特異抗原に対し誘起された抗体である。例えば、モノクローナル抗体（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））（トラツズマブ）は、転移性乳癌を含むいくつかの乳房腫瘍において過剰発現される、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）に対して発揮される。ＨＥＲ２タンパク質の過剰発現は、臨床においては、より進行性の疾患及びさらなる予後不良に関連づけられる。ハーセプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））は、その腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する、転移性乳癌患者の治療用の単剤として使用されている。
【０１２０】
腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体のもう１つの例は、リツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））（リツキシマブ）であり、これは、リンパ腫細胞ＣＤ２０に対して発揮され、正常及び悪性の、ＣＤ２０＋の前Ｂ及び成熟Ｂ細胞を選択的に除去する。
【０１２１】
リツキサンは、単剤として、再発又は難治性の低悪性度又は濾胞性の、ＣＤ２０＋の、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の治療用に使用される。ミエロターグ（ＭＹＥＬＯＴＡＲＧ（（登録商標））（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）及びキャンパス（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）））（アレムツズマブ）は、使用してもよい、腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体のさらなる例である。
【０１２２】
腫瘍抑制遺伝子は、細胞増殖及び分裂周期を阻害するべく機能する遺伝子であり、したがって、新生物の発生を妨害する。腫瘍抑制遺伝子における突然変異は、細胞に阻害シグナルのネットワークの１つ以上の成分を無視させ、細胞周期チェックポイントを克服させ、結果として、抑制された細胞増殖癌を高率で生じる。腫瘍抑制遺伝子の例は、Ｄｕｐ−４、ＮＦ−１、ＮＦ−２、ＲＢ、ｐ５３、ＷＴ１、ＢＲＣＡ１、及びＢＲＣＡ２を包含する。
【０１２３】
ＤＰＣ４は、膵臓癌に関係し、かつ細胞分裂を阻害する細胞質経路に関与している。ＮＦ−１は、細胞質の阻害タンパク質、Ｒａｓを阻害するタンパク質をコードしている。ＮＦ−１は、神経系の神経線維腫及び褐色細胞腫、及び骨髄性白血病に関与している。ＮＦ−２は、神経系の髄膜腫、神経鞘腫、及び上衣細胞腫に関与する核タンパク質をコードしている。ＲＢは、細胞周期の主な阻害剤である、核タンパク質、ｐＲＢタンパク質をコードする。ＲＢは、網膜芽細胞腫、並びに骨癌、膀胱癌、小細胞肺癌、及び乳癌に関与する。Ｐ５３は、細胞分裂を調節し、かつアポトーシスを誘導し得る、ｐ５３タンパク質をコードする。ｐ５３の突然変異及び／又は反応低下は、広範囲の癌において見出される。ＷＴＩは、腎臓のウィルムス腫瘍に関与する。ＢＲＣＡ１は、乳癌及び卵巣癌に関与し、ＢＲＣＡ２は、乳癌に関与する。腫瘍抑制遺伝子は、その腫瘍抑制機能をそこで発揮する、腫瘍細胞内に転移可能である。
【０１２４】
癌ワクチンは、身体に腫瘍に対する特異的な免疫応答を誘導する一群の薬剤である。研究及び開発中、及び臨床試験中の殆どの癌ワクチンは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＡＡは、腫瘍細胞上に存在し、かつ正常細胞上には相対的にないか、又は減少している構造物（すなわち、タンパク質、酵素、又は炭水化物）である。腫瘍細胞に対し明らかに特有であることで、ＴＡＡは、免疫系が認識しかつその破壊を引き起こすための、標的を提供する。ＴＡＡの例は、ガングリオシド（ＧＭ２）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、胎児性癌抗原（ＣＥＡ）（結腸癌及び他の腺癌、例えば、乳癌、肺癌、胃癌、及び膵臓癌により産生される）、黒色腫関連抗原（ＭＡＲＴ−１、ｇａｐ１００、ＭＡＧＥ１，３  チロシナーゼ）、パピローマウイルスＥ６及びＥ７フラグメント、自己腫瘍細胞及び異種腫瘍細胞の全細胞又は部分／溶解物を包含する。
【０１２５】
他の療法
癌を治療ために用いられた伝統的な細胞傷害及びホルモン療法に加えて、最近の開発により、癌を治療するための付加的な療法が導入されてきた。例えば、多くの形態の遺伝子療法が、前臨床又は臨床試験中である。
【０１２６】
加えて、腫瘍の脈管新生（血管新生）の阻害に基づくアプローチが、現在開発中である。このコンセプトの目的は、新たに構築された腫瘍血管系により供給される、栄養及び酸素の補給から、腫瘍を遮断することである。
【０１２７】
さらに、癌療法はまた、新生細胞の最終分化を誘導することによっても試みられている。適当な分化剤は、任意の１つ以上の下記の参考文献に開示された化合物を包含する。
ａ）極性化合物（マークス（Ｍａｒｋｓ）ら著（１９８７年）；フレンド（Ｆｒｉｅｎｄ，Ｃ．）、シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｗ）、ホランド（Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｊ．Ｗ．）、及びサトー（Ｓａｔｏ，Ｔ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７１年、第６８巻、ｐ．３７８−３８２；タナカ（Ｔａｎａｋａ，Ｍ．）、レビー（Ｌｅｖｙ，Ｊ．）、テラダ（Ｔｅｒａｄａ，Ｍ．）、ブレスロー（Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ．）、リフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、及びマークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７５年、第７２巻、ｐ．１００３−１００６；ルービン（Ｒｅｕｂｅｎ，Ｒ．Ｃ．）、ワイフ（Ｗｉｆｅ，Ｒ．Ｌ．）、ブレスロー（Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ．）、リフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、及びマークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７６年、第７３巻、ｐ．８６２−８６６）；
ｂ）ビタミンＤ誘導体及びレチノイン酸（アベ（Ａｂｅ，Ｅ）、ミヤウラ（Ｍｉｙａｕｒａ，Ｃ．）、サカガミ（Ｓａｋａｇａｍｉ，Ｈ．）、タケダ（Ｔａｋｅｄａ，Ｍ．）、コンノ（Ｋｏｎｎｏ，Ｋ．）、ヤマザキ（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｔ．）、ヨシカ（Ｙｏｓｈｉｋａ，Ｓ．）、及びスダ（Ｓｕｄａ，Ｔ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９８１年、第７８巻、ｐ．４９９０−４９９４；シュワルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．Ｌ．）、スノディ（Ｓｎｏｄｄｙ，Ｊ．Ｒ．）、クロイター（Ｋｒｅｕｔｔｅｒ，Ｄ．）、ラスムセン（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，Ｈ．）、及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ディ・アメリカン・アソシエーション・フォー・キャンサー・リサーチ（Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）」、１９８３年、第２４巻、ｐ．１８；タネナガ（Ｔａｎｅｎａｇａ，Ｋ．）、ホズミ（Ｈｏｚｕｍｉ，Ｍ．）、及びサカガミ（Ｓａｋａｇａｍｉ，Ｙ．）著、「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）」、１９８０年、第４０巻、ｐ．９１４−９１９）；
ｃ）ステロイドホルモン（ロテム（Ｌｏｔｅｍ，Ｊ．）及びサクス（Ｓａｃｈｓ，Ｌ．）著、「インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）」、１９７５年、第１５巻、ｐ．７３１−７４０）；
ｄ）増殖因子（サクス（Ｓａｃｈｓ，Ｌ．）著、「ネイチャー（ロンドン）（Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ．））」、１９７８年、第２７４巻、ｐ．５３５、メトカーフ（Ｍｅｔｃａｌｆ，Ｄ．）著、「サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）」、１９８５年、第２２９巻、ｐ．１６−２２）；
ｅ）プロテアーゼ（シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｗ）、シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｂ．Ｍ．）、及びワクスマン（Ｗａｘｍａｎ，Ｓ．）、「エクスペリメンタル・ヘマトロジー（Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）」、１９８３年、第１１巻、ｐ．４９０−４９８；シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｗ）、シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｂ．Ｍ．）、及びワクスマン（Ｗａｘｍａｎ，Ｓ．）、「バイオケミストリー・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．）」、１９８２年、第１０９巻、ｐ．３４８−３５４）；
ｆ）腫瘍プロモータ（フーバーマン（Ｈｕｂｅｒｍａｎ，Ｅ．）及びカラハム（Ｃａｌｌａｈａｍ，Ｍ．Ｆ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７９年、第７６巻、ｐ．１２９３−１２９７；ロテム（Ｌｏｔｔｅｍ，Ｊ．）及びサクス（Ｓａｃｈｓ，Ｌ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７９年、第７６巻、ｐ．５１５８−５１６２）；及び
ｇ）ＤＮＡ又はＲＮＡ合成の阻害剤（シュワルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．Ｌ）及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８２年、第４２巻、ｐ．２６５１−２６５５、テラダ（Ｔｅｒａｄａ，Ｍ．）、エプナー（Ｅｐｎｅｒ，Ｅ．）、ナデル（Ｎｕｄｅｌ，Ｕ．）、サーモン（Ｓａｌｍｏｎ，Ｊ．）、フィバク（Ｆｉｂａｃｈ，Ｅ．）、リフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、及びマークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７８年、第７５巻、ｐ．２７９５−２７９９；モーリン（Ｍｏｒｉｎ，Ｍ．Ｊ．）及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８４年、第４４巻、ｐ．２８０７−２８１２；シュワルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．Ｌ）、ブラウン（Ｂｒｏｗｎ，Ｂ．Ｊ．）、ニーレンバーグ（Ｎｉｅｒｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．）、マーシュ（Ｍａｒｓｈ，Ｊ．Ｃ．）、及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８３年、第４３巻、ｐ．２７２５−２７３０；スガオ（Ｓｕｇａｏ，Ｈ．）、フルサワ（Ｆｕｒｕｓａｗａ，Ｍ．）、カワグチ（Ｋａｗａｇｕｃｎｉ，Ｔ．）、及びイカワ（Ｉｋａｗａ，Ｙ．）著、「ビブリオテカ・ヘマトロジカ（Ｂｉｂｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）」、１９７３年、第３９巻、ｐ．９４３−９５４；エバート（Ｅｂｅｒｔ，Ｐ．Ｓ．）、ウォーズ（Ｗａｒｓ，Ｉ．）、及びブエル（Ｂｕｅｌｌ，Ｄ．Ｎ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９７６年、第３６巻、ｐ．１８０９−１８１３；ハヤシ（Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．）、オカベ（Ｏｋａｂｅ，Ｊ．）、及びホズミ（Ｈｏｚｕｍｉ，Ｍ．）著、「ガン（Ｇａｎｎ）」、１９７９年、第７０巻、ｐ．２３５−２３８）。
【０１２８】
本発明の医薬組成物と、上記記載の任意の抗ガン剤との併用、及びその使用は、本発明の範囲内である。
【０１２９】
本発明は、以下の実験の詳細のセクションの実施例において例示される。このセクションは、本発明を理解する上で助けとなるべく説明されるものであり、以降に続くクレームにおいて示された本発明を、いかなる方法においても制限するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１３０】
実験の詳細のセクション
実施例１−Ｉ型ＳＡＨＡの製造
工程１  ８−アニリノ−８−オキソオクタン酸；スベラニリン酸（化合物３）
スベリン酸（化合物１、１７４．２ｇ、１．０ｍｏｌ）、アニリン（化合物２、８５．８−９４．９ｇ）、及びトルエン（０．１−０．２Ｌ）を合わせ、加熱還流し、最低６０時間還流する。還流下で、１０％の水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ≧１１に調整することにより、反応をクエンチする。水性相を分離する。有機相を、トルエン（０．１１−０．１３Ｌ）及び水（０．３−０．４Ｌ）と合わせ、そして水性層を分離する。抽出物からの水性層と、トルエン（０．１１−０．１３Ｌ）とを合わせ、静置し、そして次に分離する。水性層を、６０−７０℃において、トルエン（０．２−０．３Ｌ）で２回抽出する。水性層を、必要に応じた塩酸及び１０％水酸化ナトリウム溶液を用いて、２０−３０℃においてｐＨ５．８−６．２に調節する。バッチを濾過し、冷水（０．２−０．３Ｌ）で洗浄し、次に冷イソプロパノールで洗浄する。ウェットケークを、最高６５℃で真空下に乾燥し、スベラニリン酸を得る。
【０１３１】
工程２  メチル８−アニリノ−８−オキソオクタノアート；メチルスベラニラート（化合物４）
スベラニリン酸（化合物３、２４９．３ｇ、１．０ｍｏｌ）及びメタノール（０．４−０．５Ｌ）を合わせ、４５−５５℃に加熱する。塩酸を用いて、ｐＨを≦２に調整し、反応が終了するまでバッチ温度を４５−５５℃に維持する。脱イオン水（０．１−０．２Ｌ）で反応をクエンチする。バッチを２５−３０℃に冷却し、種晶を加えて結晶化を誘導し、次いで０−１０℃に冷却する。バッチを濾過し、ケークを、５０：５０（ｖ／ｖ）のメタノール／水の溶液（０．２８−０．３４Ｌ）を用いて、０−１０℃において洗浄する。ウェットケークを、最高４６℃で真空下に乾燥し、メチルスベラニラートを得る。
【０１３２】
工程３  Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’−フェニルオクタンジアミド；ボリノスタット（化合物５）
メチルスベラニラート（化合物４、２６３．３ｇ、１．０ｍｏｌ）及び２Ｍのヒドロキシルアミン遊離塩基溶液（０．８−１．０Ｌ）を合わせる。バッチを最高２０℃に維持しながら、見かけのｐＨを、必要に応じたメタノール中のナトリウムメトキシドを用いて≧１０．５に調整する。バッチを最高２０℃に、かつ見かけのｐＨを、必要に応じたメタノール中のナトリウムメトキシドを用いて≧１０．５に、維持しながら、バッチを熟成させる。熟成の間に、ヒドロキシルアミン遊離塩基溶液（０．５−０．６Ｌ）を添加し、反応が終了するまで、バッチを最高２０℃に、かつ見かけのｐＨを≧１０．５に維持する。バッチ温度を２０−３５℃の間に維持しながら、バッチに対し水（０．９−１．１Ｌ）を添加することにより、反応をクエンチし、そしてバッチの水分含量を３５−４５％に調整する。必要に応じた氷酢酸及び炭酸ナトリウムを用いて、ｐＨを８．８−９．２に調整する。バッチを、５−１０時間にわたり、０−１０℃に冷却する。バッチを濾過し、ケークを、５５：４５（ｖ／ｖ）のメタノール／水（０．４５−０．６Ｌ）を用いて、０−１０℃において洗浄する。ウェットケークを、水分含量が≦３５％になるまで真空条件下とする。
【０１３３】
ボリノスタット粗生成物（２６４．３２ｇ、１．０ｍｏｌ）のウェットケーク（ｗｅｔｃａｋｅ）を、変性エタノール（１３０８−１５９９ｇ）及び水（１６７−２０４ｇ）と合わせる。このスラリーに対し、ヒドロキシルアミン塩酸塩（＞９ミリ当量）及び、メタノール中のナトリウムメトキシド（＞９ミリ当量）を添加し、そしてバッチを７０−８０℃に加熱する。溶液を濾過し、次いで、徐々に０−１０℃に冷却することにより結晶化させる。バッチを濾過し、冷やした４：１（ｖ／ｖ）の変性エタノール／水で、ケークを洗浄する。ウェットケークを、真空下に最高４５℃で乾燥する。
【０１３４】
工程４  Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’−フェニルオクタンジアミド−ボリノスタット−微細（ウェットミル）（化合物６）
ボリノスタット（化合物５、２６４．３ｇ、１．０ｍｏｌ）を、５０：５０（ｖ／ｖ）のエタノール／水の溶液中（最少２．８Ｌ）でスラリー化する。ボリノスタットスラリーを、バッチ温度を７−３０℃に維持しながら、平均サイズ２５−４５μｍまでウェットミルする。最終的なスラリーを濾過し、ウェットケークを、０−４０℃の水（最少０．８Ｌ）で洗浄する。ウェットケークを、最大水分含量が０．２％（ｗ／ｗ）になるまで、最高５５℃で真空下に乾燥し、ボリノスタット−微細薬剤物質を得る。
【０１３５】
工程５  Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’−フェニルオクタンジアミド  −ボリノスタット−粗粒（化合物７）
ボリノスタット（化合物５、２６４．３ｇ、１．０ｍｏｌ）を、５０：５０（ｖ／ｖ）のエタノール／水の溶液中（４．９−５．５Ｌ）でスラリー化する。このスラリーを、最小１５ｐｓｉｇの圧力下に、６５−７０℃に加熱して溶解し、次に６０−６４℃に冷却する。晶種スラリーを、バッチ温度を維持しながらバッチ内に移す。このバッチを、６１−６３℃において、最低２時間熟成させる。ジャケット温度を調節することにより、三段階でバッチを冷却する：（１）０．３５−０．７８℃／時間で５５℃まで、（２）０．８３−２．００℃／時間で４５℃まで、及び（３）２．００−４．４４℃／時間で−５ないし２５℃まで。最終的なスラリーは、−５ないし２５℃において、約１時間熟成し、次いで濾過する。ウェットケークを水（最少０．８Ｌ）で洗浄する。ウェットケークを、最高５５℃で真空下に乾燥し、ボリノスタット−粗粒薬剤物質を得る。
【０１３６】
当該種晶スラリーは、ボリノスタット−微細ドライケーク（９７．８−１１６．３ｇ、０．３７−０．４４ｍｏｌ）と、５０：５０（ｖ／ｖ）のエタノール／水の溶液（１．０−１．２Ｌ）とを合わせることにより調製する。この種晶スラリーを、最小１５ｐｓｉｇの圧力下で、６２−６６℃に加熱し、約０．５時間熟成し、次いで６０−６４℃に冷却する。
【０１３７】
実施例２−ＳＡＨＡ結晶のパウダーブレンディング
パウダーブレンディング
３０％のボリノスタット−微細結晶を、７０％のボリノスタット−粗粒結晶とブレンドする。２５．０ＫｇのブレンドしたＳＡＨＡ多形Ｉ（Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ  Ｉ；Ｉ型）結晶を、まず、３０メッシュスクリーン（６００μｍ）を通して篩った。得られたＳＡＨＡ、１１．１Ｋｇの微結晶セルロース（アビセル（Ａｖｉｃｅｌ）ＰＨ−１０１）、及び１．１３Ｋｇのクロスカルメロースナトリウムを、１４１．６ＬのＶ−ブレンダー、１１３Ｌのトートブレンダー、又は別の匹敵するサイズ及びタイプのブレンダーに投入した。Ｖ−ブレンダーについては、得られた材料を、約２５ｒｐｍで約８分間、均一に混合した。トートブレンダーについては、得られた材料を、約１２ｒｐｍで約１７分間、均一に混合した。
【０１３８】
パウダーブレンド滑沢化
２９３．０ｇのステアリン酸マグネシウム（植物性グレード）を、３０メッシュスクリーン（６００μｍ）を通して篩い、そして、ブレンドした粉末混合物と共に、Ｖ−ブレンダーに投入した。得られた混合物を、約２５ｒｐｍで約８分間、均一にブレンドした。２９３．０ｇのステアリン酸マグネシウム（植物性グレード）はまた、６０メッシュスクリーン（２５０μｍ）を通して篩い、そして、ブレンドした粉末混合物と共に、トートブレンダーに投入した。得られた混合物を、約１２ｒｐｍで約１７分間、均一にブレンドした。
【０１３９】
表１は、カプセル中の原材料の物理的性質を要約する。
【０１４０】
【表１】
2010504968.tif 000004
【０１４１】
実施例３−ＳＡＨＡカプセルの封入
カプセル封入／重量選別
滑沢化した粉末混合物を、Ｈ＆Ｋカプセル充填機、研磨されたタンピングピン又は窒化クロム被覆されたタンピングピン、及び、サイズ「３」カプセルを用いて、所望の重さにカプセル封入した。充填されたカプセルは、カプセルポリッシャーを用いて研磨し、その後に、重量選別機を用いて、適切な重量制限範囲に重量選別した。表２は、カプセル充填機の設定を要約する。
【０１４２】
【表２】
2010504968.tif 000005
【０１４３】
最終的なＳＡＨＡカプセル組成物を、表３に例示する。カプセルは、目標カプセル重量の±１０％の、カプセル重量変動の許容限度を用いて重量選別した。典型的なバッチにおけるカプセル重量の変動は、目標カプセル重量の±４％である。
【０１４４】
【表３】
2010504968.tif 000006
【０１４５】
実施例４−ＳＡＨＡ含有カプセルの溶解速度の測定
硬ゼラチンカプセルからの、ＳＡＨＡの溶解速度は、ＵＳＰ溶解装置（Ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）ＩＩ（ＶＫ７０００、バリアン・インク（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．）ノースカロライナ州ケアリー）を用いて評価する。各カプセルを、らせん型シンカー（クオリティ・ラボ・アクセサリーズ社（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｌａｂ  Ａｃｃｅｓｓｏｒｉｅｓ  Ｌ．Ｌ．Ｃ．）、ニュージャージー州マンビル）内に置き、９００ｍＬの２．０％ツイーン（ＴＣＩアメリカ、オレゴン州ポートランド）を含有する容器へ、３７±０．５℃の温度において送り出す。パドルを１００ｒｐｍで回転させ、３５μｍのフルフローフィルター（バリアン・インク、ノースカロライナ州ケアリー）を具備したオートサンプラー（ＶＫ８０００、バリアン・インク、ノースカロライナ州ケアリー）により、特定の時間間隔で試料を引いた。
【０１４６】
続いてサンプルを、高速液体クロマトグラフィー（アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）１１００シリーズ、アジレント・テクノロジーズ・インク（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ）、デラウェアー州ウィルミントン）によりアッセイした。クロマトグラフィー分析は、フェノメネックス・ルナ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ）Ｃ８（２）（１００×４．６ｍｍ）５μｍ粒子サイズカラム、１：１のメタノール／０．１％トリフルオロ酢酸（試薬グレード、フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ））の移動相、及び、検出波長２４２ｎｍを用いて行なった。
【０１４７】
実施例５−ＳＡＨＡのＸ線粉末回折分析
Ｘ線粉末回折分析を、実施例１に従って得られたＩ型ＳＡＨＡ、及び、下記の表４に詳述した方法により調製したＩＩ−Ｖ型ＳＡＨＡについて行なった。
【０１４８】
【表４】
2010504968.tif 000007
【０１４９】
Ｘ線回折分析：
サンプルは、製造業者の指示に従って、標準操作手順（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）ＥＱ−２７，Ｒｅｖ．１２に従って操作される、シーメンスＤ５００自動粉末回折器（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５００  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ）（機器ＩＤ番号ＬＤ−３０１−４）において分析した。回折器は、グラファイトモノクロメーターと、５０ｋＶ、４０ｍＡで操作されるＣｕ（λ＝１．５４Ａ）のＸ線源とを具備している。２−シータキャリブレーションは、ＮＢＳ製マイカ標準（ＳＲＭ６７５）を用いて行なう。サンプルは、以下の機器パラメータを用いて分析した：
測定範囲：                  ４−４０  ２シータ
ステップ幅：                ０．０５Å
ステップ当たりの測定時間：  １．２秒間
【０１５０】
サンプル調製は、製造業者の指示に従い、標準操作手順ＭＩＣ−７，Ｒｅｖ．２（３．１．２項）に従って、ゼロバックグラウンド・サンプルプレート（＃１）を用いて行なった。サンプルは、均一性を確保するため、軽い乳鉢及び乳棒の粉砕の後に加工した。
【０１５１】
図３−Ａ−Ｅは、Ｉ−Ｖ型ＳＡＨＡのＸ線ディフラクトグラムを描いている。Ｘ線ディフラクトグラムについての対応するデータを、以下の表５−９に示す：
【０１５２】
【表５】
2010504968.tif 000008
【０１５３】
【表６】
2010504968.tif 000009
【０１５４】
【表７】
2010504968.tif 000010
【０１５５】
【表８】
2010504968.tif 000011
【０１５６】
【表９】
2010504968.tif 000012
【０１５７】
Ｉ型ＳＡＨＡのＸ線粉末回折パターンはまた、Ｘ’ＰＥＲＴ  Ｐｒｏ  フィリップス（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ）Ｘ線回折器を用いて、銅Ｋα照射（波長１．５４２Å）により収集された。顕著な２θの位置を、格子面間隔（ｄ−ｓｐａｃｉｎｇ）と共に、表５Ａに要約する。
【０１５８】
【表１０】
2010504968.tif 000013
【０１５９】
実施例６−鉄ＳＡＨＡ金属キレート錯体の調製
化学反応スキーム
【０１６０】
【化１】
2010504968.tif 000014
【０１６１】
実験
室温において、ＳＡＨＡ（１．０ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）及びエタノール（１０．０ｍＬ）を、エレンマイヤーフラスコに加え、次いで、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６６ｍＬ、３．７８ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら滴下添加した。得られたスラリーに対し、エタノール中の塩化第二鉄（１０．０ｍＬのエタノール中、０．２０５ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物は、塩化第二鉄溶液が添加されると、直ちに濃い赤色を呈した。エタノール（５．０ｍＬ）を用いて、残りの塩化第二鉄溶液を反応フラスコ内へ洗い流した。室温で５分間の攪拌の後に、反応混合物は透明な暗赤色の溶液になった。この反応混合物を、室温で１６時間攪拌した。この時間の後、暗橙色の沈澱が観察された。橙色の固体を濾過により収集し、エタノール（３×３．０ｍＬ）で洗浄した。濾液は、無色であった。橙色の固体を、２４時間乾燥した（質量１．０２ｇ、収率９６％）。
【０１６２】
分析
Ｃ、Ｈ、Ｎ、及びＦｅ含量についての元素分析を、以下の表１０に示す：
【０１６３】
【表１１】
2010504968.tif 000015
【０１６４】
元素分析の結果は、上記に示した提案された構造と良好に一致する。
【０１６５】
実施例７−鉄ＳＡＨＡキレート錯体のＸ線粉末回折分析
結晶性鉄ＳＡＨＡキレート錯体のＸ線粉末回折パターン（図２）は、ＰＷ３０４０／６０コンソールを備えた、フィリップス・アナリティカル（Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ）Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯＸ線回折システム上で作成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ  ＬＥＦ  Ｘ線管Ｋ−アルファ照射を、線源として使用した。結晶性鉄ＳＡＨＡキレート錯体は、８．８、１４．５、及び２１．８度（２θ）においてキャラクタライズ可能である。結晶性鉄ＳＡＨＡキレート錯体は、さらに、１３．３、２０．３、及び２４．６度（２θ）においてキャラクタライズされる。この錯体に起因すると思われる付加的なピークが、１８．５、２５．８、及び３３．３度（２θ）において観察される。
【０１６６】
実施例８−患者研究
癌をもつ患者に、金属ＨＤＡＣ阻害剤キレート錯体を含んでなる医薬組成物、又は、ＨＤＡＣ阻害剤とキレート化可能な金属化合物を含んでなる医薬組成物を投与する。患者の副作用を記録し、そしてＨＤＡＣ阻害剤を投与された患者の副作用と比較する。
【０１６７】
皮膚Ｔ細胞リンパ腫又は末梢Ｔ細胞リンパ腫のいずれかをもつ患者に、当該医薬組成物を毎日１回継続して投与し、これにおいて、投与されるＳＡＨＡの量は４００ｍｇである。皮膚Ｔ細胞リンパ腫又は末梢Ｔ細胞リンパ腫のいずれかをもつ患者に、当該医薬組成物を１日２回、週３ないし５日投与し、これにおいては、投与毎のＳＡＨＡの投与量は３００ｍｇである。進行した白血病及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の患者には、３週間のコースで、当該医薬組成物を１日３回（ｔｉｄ）、１４日間にわたり経口的に（ｐｏ）投与し、続いて１週間休止し、これにおいて、投与毎のＳＡＨＡの投与量は１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、又は２５０ｍｇである。
【０１６８】
癌の患者に、ＨＤＡＣ阻害剤と、キレート化可能な金属化合物とを同時投与する。患者の副作用を記録し、そしてＨＤＡＣ阻害剤のみを投与された患者の副作用と比較する。
【０１６９】
皮膚Ｔ細胞リンパ腫又は末梢Ｔ細胞リンパ腫のいずれかをもつ患者に、経口的に、ＳＡＨＡを、継続して１日１回４００ｍｇ、又は１日２回３００ｍｇにて週３ないし５日と、毎日の鉄又は亜鉛のサプリメントとを同時投与する。進行した白血病及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の患者には、３週間のコースで、経口的に（ｐｏ）、ＳＡＨＡを１日３回（ｔｉｄ）、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、又は２５０ｍｇにて１４日間当量投与し、続いて１週間休止し、かつ、鉄又は亜鉛のサプリメントを毎日投与する。血液癌及び固形腫瘍を含む、進行した癌の患者には、経口的に、ＳＡＨＡを１日１回４００又は５００ｍｇ毎日、１日２回２００又は３００ｍｇ毎日、１日２回３００ｍｇ又は４００ｍｇを間欠的に週３日、或いは、１日３回１００ｍｇ（２週間）を、そして、鉄又は亜鉛のサプリメントを毎日投与する。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、又は中皮腫の患者には、経口的に、ＳＡＨＡ３００ｍｇを１日２回で週に３日、そして鉄又は亜鉛のサプリメントを毎日投与する。投与される鉄又は亜鉛の量は、患者毎に異なることが予測され、金属の過剰負荷を介した毒性を引き起こすことなく、ＨＤＡＣ阻害剤誘導性の毒性を軽減するために必要な量となるであろう。
【０１７０】
実施例９−ボリノスタット介在性の副作用に対する亜鉛補足の効果
マウスにおけるボリノスタットの最大耐性量（ＭＴＤ）が亜鉛補足により増加し得るかどうかを試験するため、マウス（ＣＤ１  ｎｕ／ｎｕ  雌、６−８週齢、チャールズ・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））に、ビヒクル、１５０ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤ）、又は３００ｍｇ／ｋｇの、ビヒクル中のボリノスタットを投与する（表１１）。マウスに、０．５、１、又は５モル当量（ボリノスタットに対して）の塩化亜鉛を与える。これは、１５０ｍｇ／ｋｇのボリノスタット群で、３８．５、７７、及び３８５ｍｇ／ｋｇのＺｎＣｌ２用量に相当する。
【０１７１】
非腫瘍マウスによる最初の実験は、ボリノスタット／Ｚｎの組合せのＭＴＤを確立するために使用される。もしＭＴＤのシフトが示されれば、マウスを用いたその後の実験は、ＨＣＴ１１６結腸癌皮下（ｓ．ｑ．）異種移植を確立して、腫瘍増殖に対する改変されたＭＴＤの役割（有効性）を評価するために使用される。
【０１７２】
【表１２】
2010504968.tif 000016
【０１７３】
ボリノスタット（１０μｌ／ｇにてＩＰ投与）用のビヒクルは、１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯ（シグマ、カタログ＃：Ｄ８４１８）、４５％（ｖ／ｖ）のＰＥＧ―４００、及び４５％の水を含有する。ビヒクル中のボリノスタット（１０μｌ／ｇにてＩＰ投与）は、化合物を秤量すること（当該化合物を製剤するに先立ち、各ビヒクル成分を３７℃に予加熱する）、終体積の１／１０の１００％ＤＭＳＯを添加すること、透明な溶液になるまで超音波処理すること、５０％ＰＥＧ−４００（水中）を所望の終体積まで添加すること、超音波処理すること、及び、常に３７℃に維持することにより調製する。ＺｎＣｌ２は、無菌のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に溶解する。
【０１７４】
体重及び生存を、毒性の指標としてモニターする。群内に、平均２０％を超える平均体重減少を生じる結果となる用量を、非耐性とみなすものとする。同様に、群当たり２匹を超える処置関連の死を生じる結果となる用量を、非耐性とみなすものとする。腫瘍動物については、処置に応じた腫瘍サイズを、週２−３回のキャリパー測定器により測定する。
【０１７５】
【表１３】
2010504968.tif 000017
【０１７６】
後眼窩採血：イソフルラン麻酔下に、０．２ｍＬの血液を、後眼窩採血により採取する。血液を血清へ加工する（抗凝固剤の添加なし）。
心臓穿刺：ＣＯ２麻酔下での、終末の心臓穿刺により、血液全量を収集する。血液を血清へ加工する（抗凝固剤の添加なし）。
【０１７７】
全血算（ＣＢＣ）
ボリノスタット処置は、血小板及びリンパ球を含む、ある血液集団の数の減少と関連づけられてきた。マウスからのＣＢＣを、処置前（ベースライン）及び処置中（７日目）、及び処置後（１４日目）にモニターする。少量（＜５０μｌ）の血液をＲＯ出血により得て、サブセットをアドヴィア（Ａｄｖｉａ）１２０検査装置（シーメンス・メディカル（Ｓｅｉｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ））によりカウントする。
【０１７８】
解剖及び組織採取
腫瘍動物については、異種移植腫瘍を除去し、秤量し、部分を急速冷凍するか、又はホルマリン緩衝液中で固定する。固定した腫瘍材料を、パラフィン包埋切片として加工し、免疫組織化学分析に供する。これらは、増殖（Ｋｉ−６７、ＢｒｄＵ）、アポトーシス（カスパーゼ−３）、及び種々のヒストン（Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４）のアセチル化に関するアッセイを包含する。凍結材料からのヒストンタンパク質は、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着法）により、ヒストンアセチル化の変化をアッセイするべく使用する。マウスはまた、全身解剖に供する。
【０１７９】
本発明は、その実施態様に関連して特に示されかつ記載されてきたが、当業者には、記載された本発明の意味から離れることなく、形態及び詳細における種々の変更が行われてもよいことが理解されるであろう。むしろ、本発明の範囲は、クレイムにより定義される。
【０１８０】
参考文献
１．スポーン（Ｓｐｏｒｎ，Ｍ．Ｂ．）、ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｂ．）、及びドリスコール（Ｄｒｉｓｃｏｌｌ，Ｊ．Ｓ．）著、「キャンサー：プリンシプルズ・アンド・プラクティス・オブ・オンコロジー（Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）（癌：腫瘍学の原理とプラクティス）」、ヘルマン（Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｓ．）、ローゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．）、及びデビータ（ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．Ｊｒ．）編、第２版、リピンコット（（Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、フィラデルフィア）、１９８５年、ｐ．４９．
２．ブレイトマン（Ｂｒｅｉｔｍａｎ，Ｔ．Ｒ．）、セロニック（Ｓｅｌｏｎｉｃｋ，Ｓ．Ｅ．）、及びコリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）」、１９８０年、第７７巻、ｐ．２９３６−２９４０．
３．オルソン（Ｏｌｓｓｏｎ，Ｉ．Ｌ．）及びブレイトマン（Ｂｒｅｉｔｍａｎ，Ｔ．Ｒ．）著、「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）」、１９８２年、第４２巻、ｐ．３９２４−３９２７．
４．シュワルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．Ｌ）及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８２年、第４２巻、ｐ．２６５１−２６５５．
５．マークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）、シェフェリー（Ｓｈｅｆｆｅｒｙ，Ｍ．）、及びリフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８７年、第４７巻、ｐ．６５９．
６．サクス（Ｓａｃｈｓ，Ｌ．）著、「ネイチャー（ロンドン）（Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ．））」、１９７８年、第２７４巻、ｐ．５３５．
７．フレンド（Ｆｒｉｅｎｄ，Ｃ．）、シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｗ）、ホランド（Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｊ．Ｗ．）、及びサトー（Ｓａｔｏ，Ｔ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７１年、第６８巻、ｐ．３７８−３８２．
８．タナカ（Ｔａｎａｋａ，Ｍ．）、レビー（Ｌｅｖｙ，Ｊ．）、テラダ（Ｔｅｒａｄａ，Ｍ．）、ブレスロー（Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ．）、リフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、及びマークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７５年、第７２巻、ｐ．１００３−１００６．
９．ルービン（Ｒｅｕｂｅｎ，Ｒ．Ｃ．）、ワイフ（Ｗｉｆｅ，Ｒ．Ｌ．）、ブレスロー（Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ．）、リフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、及びマークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７６年、第７３巻、ｐ．８６２−８６６．
１０．アベ（Ａｂｅ，Ｅ）、ミヤウラ（Ｍｉｙａｕｒａ，Ｃ．）、サカガミ（Ｓａｋａｇａｍｉ，Ｈ．）、タケダ（Ｔａｋｅｄａ，Ｍ．）、コンノ（Ｋｏｎｎｏ，Ｋ．）、ヤマザキ（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｔ．）、ヨシカ（Ｙｏｓｈｉｋａ，Ｓ．）、及びスダ（Ｓｕｄａ，Ｔ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９８１年、第７８巻、ｐ．４９９０−４９９４．
１１．シュワルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．Ｌ．）、スノディ（Ｓｎｏｄｄｙ，Ｊ．Ｒ．）、クロイター（Ｋｒｅｕｔｔｅｒ，Ｄ．）、ラスムセン（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，Ｈ．）、及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ディ・アメリカン・アソシエーション・フォー・キャンサー・リサーチ（Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）」、１９８３年、第２４巻、ｐ．１８．
１２．タネナガ（Ｔａｎｅｎａｇａ，Ｋ．）、ホズミ（Ｈｏｚｕｍｉ，Ｍ．）、及びサカガミ（Ｓａｋａｇａｍｉ，Ｙ．）著、「キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）」、１９８０年、第４０巻、ｐ．９１４−９１９．
１３．ロテム（Ｌｏｔｅｍ，Ｊ．）及びサクス（Ｓａｃｈｓ，Ｌ．）著、「インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ）」、１９７５年、第１５巻、ｐ．７３１−７４０）．
１４．メトカーフ（Ｍｅｔｃａｌｆ，Ｄ．）著、「サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）」、１９８５年、第２２９巻、ｐ．１６−２２．
１５．シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｗ）、シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｂ．Ｍ．）、及びワクスマン（Ｗａｘｍａｎ，Ｓ．）、「エクスペリメンタル・ヘマトロジー（Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）」、１９８３年、第１１巻、ｐ．４９０−４９８．
１６．シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｗ）、シェア（Ｓｃｈｅｒ，Ｂ．Ｍ．）、及びワクスマン（Ｗａｘｍａｎ，Ｓ．）、「バイオケミストリー・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．）」、１９８２年、第１０９巻、ｐ．３４８−３５４．
１７．フーバーマン（Ｈｕｂｅｒｍａｎ，Ｅ．）及びカラハム（Ｃａｌｌａｈａｍ，Ｍ．Ｆ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７９年、第７６巻、ｐ．１２９３−１２９７。
１８．ロテム（Ｌｏｔｔｅｍ，Ｊ．）及びサクス（Ｓａｃｈｓ，Ｌ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７９年、第７６巻、ｐ．５１５８−５１６２）．
１９．テラダ（Ｔｅｒａｄａ，Ｍ．）、エプナー（Ｅｐｎｅｒ，Ｅ．）、ナデル（Ｎｕｄｅｌ，Ｕ．）、サーモン（Ｓａｌｍｏｎ，Ｊ．）、フィバク（Ｆｉｂａｃｈ，Ｅ．）、リフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、及びマークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ、ＵＳＡ」、１９７８年、第７５巻、ｐ．２７９５−２７９９．
２０．モーリン（Ｍｏｒｉｎ，Ｍ．Ｊ．）及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８４年、第４４巻、ｐ．２８０７−２８１２．
２１．シュワルツ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．Ｌ．）、ブラウン（Ｂｒｏｗｎ，Ｂ．Ｊ．）、ニーレンバーグ（Ｎｉｅｒｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．）、マーシュ（Ｍａｒｓｈ，Ｊ．Ｃ．）、及びサルトレリ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｃ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９８３年、第４３巻、ｐ．２７２５−２７３０．
２２．スガノ（Ｓｕｇａｎｏ，Ｈ．）、フルサワ（Ｆｕｒｕｓａｗａ，Ｍ．）、カワグチ（Ｋａｗａｇｕｃｎｉ，Ｔ．）、及びイカワ（Ｉｋａｗａ，Ｙ．）著、「ビブリオテカ・ヘマトロジカ（Ｂｉｂｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）」、１９７３年、第３９巻、ｐ．９４３−９５４．
２３．エバート（Ｅｂｅｒｔ，Ｐ．Ｓ．）、ウォーズ（Ｗａｒｓ，Ｉ．）、及びブエル（Ｂｕｅｌｌ，Ｄ．Ｎ．）著、「キャンサー・リサーチ」、１９７６年、第３６巻、ｐ．１８０９−１８１３．
２４．ハヤシ（Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．）、オカベ（Ｏｋａｂｅ，Ｊ．）、及びホズミ（Ｈｏｚｕｍｉ，Ｍ．）著、「ガン（Ｇａｎｎ）」、１９７９年、第７０巻、ｐ．２３５−２３８）．
２５．リコン（Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．）、ウェブ（Ｗｅｂｂ，Ｙ．）、マージャー（Ｍｅｒｇｅｒ，Ｒ．）ら著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（ＰＮＡＳ）」、１９９６年、第９３巻、ｐ．５７０５−５７０８）．
２６．コーエン（Ｃｏｈｅｎ，Ｌ．Ａ）、アミン（Ａｍｉｎ，Ｓ．）、マークス（Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．）、及びリフキンド（Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．）、デサイ（Ｄｅｓａｉ，Ｄ．）、及びリコン（Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．）著、「アンチキャンサー・リサーチ（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、１９９９年、第１９巻、ｐ．４９９９−５００６．
２７．グルンステイン（Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ，Ｍ）著、「ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）」、１９９７年、第３８９巻、ｐ．３４９−５２．
２８フィニン（Ｆｉｎｎｉｎ，Ｍ．Ｓ．）、ドニギアン（Ｄｏｎｉｇｉａｎ，Ｊ．Ｒ．）、コーエン（Ｃｏｈｅｎ，Ａ．）ら著、「ネイチャー」、１９９９年、第４０１巻、ｐ．１８８−１９３．
２９．ファン・リント（Ｖａｎ  Ｌｉｎｔ，Ｃ．）、エミリアニ（Ｅｍｉｌｉａｎｉ，Ｓ．）、ヴェルディン（Ｖｅｒｄｉｎ，Ｅ．）著、「ジーン・エクスプレッション（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」、１９９６年、第５巻、ｐ．２４５−５３．
３０．アーチャ（Ａｒｃｈｅｒ，Ｓ．）、シューフェン（Ｓｈｕｆｅｎ，Ｍ．）、シェイ（Ｓｈｅｉ，Ａ．）、ホディン（Ｈｏｄｉｎ，Ｒ．）著、「プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ」、１９９８年、第９５巻、ｐ．６７９１−９６）。
３１．ドレッセル（Ｄｒｅｓｓｅｌ，Ｕ）、レンカビッツ（Ｒｅｎｋａｗｉｔｚ，Ｒ．）、バニアフマド（Ｂａｎｉａｈｍａｄ，Ａ．）著、「アンチキャンサー・リサーチ」、２０００年、第２０巻、第２Ａ号、ｐ．１０１７−２２」．
３２．パーカー（Ｐａｒｋｅｒ）、ビグルー（Ｖｉｇｏｒｏｕｘ）、リード（Ｒｅｅｄ）著、「ＡＩＣｈＥジャーナル（ＡＩＣｈＥ  Ｊ．）」、２０００年、ｐ．１２９０−９９．
３３．ヌーネス（Ｎｕｎｅｚ）、エスピエル（Ｅｓｐｉｅｌｌ）著、「ケミカル・エンジニアリング・サイエンス（Ｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ｓｃｉ．）」、１９８６年、ｐ．２０７５−８３．
３４．レベンスピエル（Ｏ．Ｌｅｖｅｎｓｐｉｅｌ）著、「ケミカル・リアクション・エンジニアリング（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）（化学反応工学）」、第２版、ｐ．３７３．
３５．バーニ（Ｍ．Ｖａｎｎｉ）著、「ジャーナル・オブ・コロイド・アンド・インターフェース・サイエンス（Ｊ．ｏｆ  Ｃｏｌｌｏｉｄ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉ．）」、２０００年、ｐ．１４３−１６０．
３６．ヒル（Ｐ．Ｊ．Ｈｉｌｌ）及びング（Ｋ．Ｍ．Ｎｇ）著、「ＡＩＣｈＥジャーナル」、１９９５年、ｐ．１２０４−１２１６．
【図１】
2010504968.tif 000019
【図２】
2010504968.tif 000020
【図３−Ａ】
2010504968.tif 000021
【図３−Ｂ】
2010504968.tif 000022
【図３−Ｃ】
2010504968.tif 000023
【図３−Ｄ】
2010504968.tif 000024
【図３−Ｅ】
2010504968.tif 000025
【国際調査報告】
2010504968.tif 000026